【手続補正書】
【提出日】平成24年11月22日(2012.11.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スルファターゼおよびホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を共発現する哺乳動物細胞により生産されたスルファターゼを含む組成物であって、該スルファターゼが、ＦＧＥの非存在下において同じ哺乳動物細胞により生産される対照スルファターゼと比較して活性型スルファターゼの比が上昇している、組成物。
【請求項２】
全スルファターゼに対する活性型スルファターゼの比が、ＦＧＥの非存在下において生産された対照スルファターゼと比べて少なくとも５％上昇している、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
全スルファターゼに対する活性型スルファターゼの比が、ＦＧＥの非存在下において生産された対照スルファターゼと比べて少なくとも１０％上昇している、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
全スルファターゼに対する活性型スルファターゼの比が、ＦＧＥの非存在下において生産された対照スルファターゼと比べて少なくとも２０％上昇している、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記哺乳動物細胞が、ＦＧＥを過剰発現する、請求項１〜４のいずれか一項記載の組成物。
【請求項６】
前記哺乳動物細胞が、外因性ＦＧＥを活性化することにより、ＦＧＥを過剰発現する、請求項５記載の組成物。
【請求項７】
前記哺乳動物細胞が、外因性ＦＧＥを過剰発現することにより、ＦＧＥを過剰発現する、請求項５記載の組成物。
【請求項８】
野生型細胞と比べて増加したCα-ホルミルグリシン生成活性を有する哺乳動物細胞により生産されたスルファターゼを含む組成物であって、該スルファターゼが、野生型細胞により生産される対照スルファターゼと比べてスルファターゼによるホルミルグリシンの形成が増加している、組成物。
【請求項９】
前記哺乳動物細胞が、活性型内因性ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を含む、請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
前記哺乳動物細胞が、外因性ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を含む、請求項８記載の組成物。
【請求項１１】
前記スルファターゼが、イズロン酸2-スルファターゼ、スルファミダーゼ、N-アセチルガラクトサミン6-スルファターゼ、N-アセチルグルコサミン6-スルファターゼ、アリールスルファターゼA、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼC、アリールスルファターゼD、アリールスルファターゼE、アリールスルファターゼF、アリールスルファターゼG、HSulf-1、HSulf-2、HSulf-3、HSulf-4、HSulf-5およびHSulf-6からなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１２】
前記スルファターゼがイズロン酸2-スルファターゼである、請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
前記イズロン酸2-スルファターゼが配列番号：７記載の配列を含む、請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
前記スルファターゼがアリールスルファターゼAである、請求項１１記載の組成物。
【請求項１５】
前記哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞である、請求項１〜１４のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１６】
前記哺乳動物細胞がヒト細胞である、請求項１〜１４のいずれか一項記載の組成物。
【請求項１７】
対象においてスルファターゼ欠損症を治療するための薬学的組成物であって、該組成物が、スルファターゼおよびホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を共発現する哺乳動物細胞により生産されたスルファターゼを含み、ここで、該スルファターゼが、ＦＧＥの非存在下において同じ哺乳動物細胞により生産される対照スルファターゼと比較して活性型スルファターゼの比が上昇している、組成物。
【請求項１８】
対象においてスルファターゼ欠損症を治療するための薬学的組成物であって、該組成物が、野生型細胞と比べて増加したCα-ホルミルグリシン生成活性を有する哺乳動物細胞により生産されたスルファターゼを含み、ここで、該スルファターゼが、野生型細胞により生産される対照スルファターゼと比べてスルファターゼによるホルミルグリシンの形成が増加している、組成物。
【請求項１９】
前記スルファターゼ欠損症が、ムコ多糖症II（MPS II；ハンター症侯群）、ムコ多糖症IIIA（MPS IIIA；サンフィリポ症候群A）、ムコ多糖症VIII（MPS VIII）、ムコ多糖症IVA（MPS IVA；モルキオ症候群A）、ムコ多糖症VI（MPS VI；マロトー-ラミー症候群）、異染性ロイコジストロフィー（MLD）、X連鎖性劣性点状軟骨異形成症1、およびX連鎖性魚鱗癬（ステロイドスルファターゼ欠損症）からなる群から選択される、請求項１７または１８記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
前記スルファターゼ欠損症が、ムコ多糖症II（MPS II；ハンター症侯群）である、請求項１９記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
前記スルファターゼ欠損症が、異染性ロイコジストロフィー（MLD）である、請求項１９記載の薬学的組成物。
【請求項２２】
前記スルファターゼ欠損症が、ムコ多糖症IIIA（MPS IIIA；サンフィリポ症候群A）である、請求項１９記載の薬学的組成物。
【請求項２３】
前記スルファターゼが、イズロン酸2-スルファターゼ、スルファミダーゼ、N-アセチルガラクトサミン6-スルファターゼ、N-アセチルグルコサミン6-スルファターゼ、アリールスルファターゼA、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼC、アリールスルファターゼD、アリールスルファターゼE、アリールスルファターゼF、アリールスルファターゼG、HSulf-1、HSulf-2、HSulf-3、HSulf-4、HSulf-5およびHSulf-6からなる群から選択される、請求項１７または１８記載の薬学的組成物。
【請求項２４】
前記スルファターゼがイズロン酸2-スルファターゼである、請求項２３記載の組成物。
【請求項２５】
前記スルファターゼがアリールスルファターゼAである、請求項２３記載の組成物。
【請求項２６】
（ｉ）スルファターゼ、および
（ｉｉ）ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）
を共発現するスルファターゼ産生細胞であって、該細胞が、野生型細胞と比べて増加したCα-ホルミルグリシン生成活性を有することにより、細胞により生産される全スルファターゼに対する活性型スルファターゼの比が増加している、細胞。
【請求項２７】
前記細胞が、外因性ＦＧＥを含む、請求項２６記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項２８】
前記細胞が、活性型内因性ＦＧＥを含む、請求項２６記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項２９】
前記ＦＧＥが、配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４、配列番号：２、５、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、および７８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２６〜２８のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３０】
前記ＦＧＥが、配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４を含む、請求項２９記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３１】
前記ＦＧＥが、配列番号：２記載のアミノ酸配列を含む、請求項２９記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３２】
前記細胞により生産される全スルファターゼに対する活性型スルファターゼの比が、ＦＧＥの非存在下における比に対して少なくとも５％高い、請求項２６〜３１のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３３】
前記細胞により生産される全スルファターゼに対する活性型スルファターゼの比が、ＦＧＥの非存在下における比に対して少なくとも１０％高い、請求項２６〜３２のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３４】
前記細胞により生産される全スルファターゼに対する活性型スルファターゼの比が、ＦＧＥの非存在下における比に対して少なくとも２０％高い、請求項２６〜３３のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３５】
前記スルファターゼが、イズロン酸2-スルファターゼ、スルファミダーゼ、N-アセチルガラクトサミン6-スルファターゼ、N-アセチルグルコサミン6-スルファターゼ、アリールスルファターゼA、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼC、アリールスルファターゼD、アリールスルファターゼE、アリールスルファターゼF、アリールスルファターゼG、HSulf-1、HSulf-2、HSulf-3、HSulf-4、HSulf-5およびHSulf-6からなる群から選択される、請求項２６〜３４のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３６】
前記スルファターゼが、内因性スルファターゼである、請求項２６〜３５のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３７】
前記スルファターゼが、外因性スルファターゼである、請求項２６〜３５のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３８】
前記ＦＧＥが、活性型内因性ＦＧＥである、請求項２６〜３７のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項３９】
前記ＦＧＥが、外因性ＦＧＥである、請求項２６〜３７のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項４０】
前記細胞が哺乳動物細胞である、請求項２６〜３９のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項４１】
前記哺乳動物細胞がヒト細胞である、請求項４０記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項４２】
前記哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞である、請求項４０記載のスルファターゼ産生細胞。
【請求項４３】
請求項２６〜４２のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞により生産されたスルファターゼ。
【請求項４４】
請求項４３記載のスルファターゼを含む薬学的組成物。
【請求項４５】
請求項２６〜４２のいずれか一項記載のスルファターゼ産生細胞を培養するステップを含む、活性型スルファターゼを生産する方法。
【請求項４６】
スルファターゼ欠損症を治療するのに用いるための薬剤を調製するためのポリペプチドであって、該ポリペプチドが、Cα-ホルミルグリシン生成活性を有し、かつ、
ａ）配列番号：２、５、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、および７８、ならびに配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４からなる群から選択される配列を有するか、
ｂ）配列番号：２記載の配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するか、
ｃ）前記ａ）もしくはｂ）記載のポリペプチドに対して１もしくは複数の保存的アミノ酸変異を有するか、
ｄ）前記ａ）に記載のポリペプチドのフラグメントであるか、または
ｅ）前記ａ）もしくはｂ）のいずれかの融合タンパク質である、
ポリペプチド。
【請求項４７】
前記ｂ）における配列同一性が、少なくとも７５％である、請求項４６記載のポリペプチド。
【請求項４８】
前記ｂ）における配列同一性が、少なくとも９５％である、請求項４６記載のポリペプチド。
【請求項４９】
前記ＦＧＥが、Cα-ホルミルグリシン生成活性を有し、かつ、以下：
（ｉ）ＧＦＲモチーフ、
（ｉｉ）ＲＶＸＸＧＧ（Ａ）Ｓモチーフ、
（ｉｉｉ）３つのアルギニンを含むヘプタマー、および
（ｉｖ）３つのシステイン残基
のうちの少なくとも１つを含むサブドメイン３を有する、請求項４６〜４８のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項５０】
請求項４６〜４９のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする核酸または該核酸を含むベクター。
【請求項５１】
前記ベクターがウイルスベクターである、請求項５０記載の核酸。
【請求項５２】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、またはレトロウイルスからの核酸配列を含む、請求項５１記載の核酸。
【請求項５３】
前記核酸が、遺伝子発現調節配列に機能的に結合している、請求項５０〜５２のいずれか一項記載の核酸。
【請求項５４】
前記遺伝子発現調節配列が、哺乳動物またはウイルスプロモーターである、請求項５３記載の核酸。
【請求項５５】
請求項４６〜４９のいずれか一項記載のポリペプチドおよびスルファターゼを含む組成物またはキット。
【請求項５６】
請求項５０〜５４のいずれか一項記載の核酸を含む組成物またはキット。
【請求項５７】
前記組成物またはキットが、スルファターゼをコードする核酸をさらに含む、請求項５６記載の組成物またはキット
【請求項５８】
前記スルファターゼが、イズロン酸2-スルファターゼ、スルファミダーゼ、N-アセチルガラクトサミン6-スルファターゼ、N-アセチルグルコサミン6-スルファターゼ、アリールスルファターゼA、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼC、アリールスルファターゼD、アリールスルファターゼE、アリールスルファターゼF、アリールスルファターゼG、HSulf-1、HSulf-2、HSulf-3、HSulf-4、HSulf-5およびHSulf-6からなる群から選択される、請求項５５または５７記載の組成物またはキット。
【請求項５９】
前記スルファターゼをコードする核酸が、別個のベクターによりコードされる、請求項５７または５８記載の組成物またはキット。
【請求項６０】
ホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）を用いてアルデヒド基を導入するよう基質を修飾するステップを含む方法。
【請求項６１】
前記基質が、X-X-X-P-S-R（配列番号：３２）の配列を含むスルファターゼである、請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
前記アルデヒド基がチオメチル基から置き換わる、請求項６０または６１記載の方法。
【請求項６３】
前記配列が、L-C-X-P-S-R、L-S-X-P-S-R、V-C-X-P-S-R、およびV-S-X-P-S-Rからなる群から選択される、請求項６１記載の方法。
【請求項６４】
前記システインまたはセリンが酸化されている、請求項６３記載の方法。
【請求項６５】
前記ＦＧＥがポリペプチドとして供され、さらに、該ポリペプチドが、Cα-ホルミルグリシン生成活性を有し、かつ、
ａ）配列番号：２、５、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、および７８、ならびに配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４からなる群から選択される配列を有するか、
ｂ）配列番号：２記載の配列と少なくとも５０％の配列同一性を有するか、
ｃ）前記ａ）もしくはｂ）記載のポリペプチドに対して１もしくは複数の保存的アミノ酸変異を有するか、
ｄ）前記ａ）に記載のポリペプチドのフラグメントであるか、または
ｅ）前記ａ）もしくはｂ）のいずれかの融合タンパク質である、
請求項６０〜６４のいずれか一項記載の方法。
【請求項６６】
前記ＦＧＥが、請求項６５記載のポリペプチドをコードする核酸として供される、請求項６０〜６４のいずれか一項記載の方法。
【請求項６７】
前記修飾された基質が、担体と組み合わされる、請求項６０〜６６のいずれか一項記載の方法。
【請求項６８】
スルファターゼ欠損症のための遺伝子治療のための組成物であって、配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含み、ここで、該ＦＧＥがCα-ホルミルグリシン生成活性を有する、組成物。
【請求項６９】
前記ＦＧＥが、配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項６８記載の組成物。
【請求項７０】
前記ＦＧＥが、配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４のアミノ酸配列を含む、請求項６８記載の組成物。
【請求項７１】
前記組成物が、システイン型スルファターゼをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項６８記載の組成物。
【請求項７２】
前記システイン型スルファターゼをコードするポリペプチドが、別個のベクターによりコードされる、請求項７１記載の組成物。
【請求項７３】
前記システイン型スルファターゼが、イズロン酸2-スルファターゼ、スルファミダーゼ、N-アセチルガラクトサミン6-スルファターゼ、N-アセチルグルコサミン6-スルファターゼ、アリールスルファターゼA、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼC、アリールスルファターゼD、アリールスルファターゼE、アリールスルファターゼF、アリールスルファターゼG、HSulf-1、HSulf-2、HSulf-3、HSulf-4、HSulf-5およびHSulf-6からなる群から選択される、請求項７１記載の組成物。
【請求項７４】
前記ベクターがウイルスベクターである、請求項６８記載の組成物。
【請求項７５】
前記ウイルスベクターが、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、またはレトロウイルスからの核酸配列を含む、請求項７４記載の組成物。
【請求項７６】
前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルスからの核酸配列を含む、請求項７５記載の組成物。
【請求項７７】
前記ＦＧＥをコードするポリペプチドが、遺伝子発現調節配列に機能的に結合している、請求項６８記載の組成物。
【請求項７８】
前記遺伝子発現調節配列が、哺乳動物またはウイルスプロモーターである、請求項７７記載の組成物。
【請求項７９】
前記スルファターゼ欠損症が、ムコ多糖症II（MPS II；ハンター症侯群）、ムコ多糖症IIIA（MPS IIIA；サンフィリポ症候群A）、ムコ多糖症VIII（MPS VIII）、ムコ多糖症IVA（MPS IVA；モルキオ症候群A）、ムコ多糖症VI（MPS VI；マロトー-ラミー症候群）、異染性ロイコジストロフィー（MLD）、X連鎖性劣性点状軟骨異形成症1、およびX連鎖性魚鱗癬（ステロイドスルファターゼ欠損症）からなる群から選択される、請求項６８記載の組成物。
【請求項８０】
前記スルファターゼ欠損症が、ムコ多糖症IIIA（MPS IIIA；サンフィリポ症候群A）である、請求項７９記載の組成物。
【請求項８１】
前記スルファターゼ欠損症が、ムコ多糖症II（MPS II；ハンター症侯群）である、請求項７９記載の組成物。
【請求項８２】
前記スルファターゼ欠損症が、異染性ロイコジストロフィー（MLD）である、請求項７９記載の組成物。
【請求項８３】
配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）をコードするポリヌクレオチドを含む遺伝子治療ベクターであって、該ＦＧＥがCα-ホルミルグリシン生成活性を有する、遺伝子治療ベクター。
【請求項８４】
前記ＦＧＥが、配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８３記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項８５】
前記ＦＧＥをコードするポリペプチドが、遺伝子発現調節配列に機能的に結合している、請求項８３記載の遺伝子治療ベクター。
【請求項８６】
前記遺伝子発現調節配列が、哺乳動物またはウイルスプロモーターである、請求項８５記載の組成物。
【請求項８７】
配列番号：２のアミノ酸３４〜３７４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むホルミルグリシン生成酵素（ＦＧＥ）をコードするポリヌクレオチドを含む遺伝子治療ベクターで形質導入された細胞であって、該ＦＧＥがCα-ホルミルグリシン生成活性を有する、細胞。
【請求項８８】
前記細胞が初代細胞である、請求項８７記載の細胞。
【請求項８９】
前記細胞が二次細胞である、請求項８７記載の細胞。
【請求項９０】
前記細胞が、線維芽細胞、ケラチノサイト、上皮細胞、内皮細胞、グリア細胞、神経細胞、血液細胞、リンパ球、骨髄細胞、筋細胞、およびこれらの前駆細胞からなる群から選択される、請求項８７記載の細胞。
【請求項９１】
前記ベクターが細胞のゲノムに組み込まれる、請求項８７記載の細胞。
【請求項９２】
前記ベクターが、染色体外で機能する、請求項８７記載の細胞。
【請求項９３】
前記ＦＧＥをコードするポリペプチドが、遺伝子発現調節配列に機能的に結合している、請求項８７記載の細胞。
【請求項９４】
前記遺伝子発現調節配列が、哺乳動物またはウイルスプロモーターである、請求項９３記載の細胞。
【請求項９５】
前記哺乳動物プロモーターが、前記細胞の内因性プロモーターである、請求項９４記載の細胞。