(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
Ｒ1Ｒ2Ｎ−ＣＨＸ−ＣＯ−Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｅ−Ｋ          Ｉ
［式中、
Ｒ1はメチルであり；
Ｒ2はメチルであり；
Ａはバリル基であり；
ＢはＮ−メチル−バリル基であり；
ＸはＣ2-5−アルキルであり；かつ
ＫがＣ1-4アルコキシの場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅはアゼチジン−２−カルボニル基であり、
Ｋが−ＮＨ2の場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅはアゼチジン−２−カルボニル基であり、
さらに、Ｋが−ＮＨ2の場合、Ｄは３，４−デヒドロプロリル基であり、Ｅは３，４−デヒドロプロリル基であり、
ＫがーＮＨ−Ｃ1〜12-アルキルの場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅは３−メチルプロリル基であり、
Ｋが−ＮＨ−（ＣＨ2）y−フェニル基（ｙ＝１）の場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅはアゼチジン−２−カルボニル基であり、
さらに、Ｋが−ＮＨ−（ＣＨ2）y−フェニル基（ｙ＝１）の場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅは３，４−デヒドロプロリル基である］の新規ペプチド及び生理学的に認容性の酸との塩。
【請求項２】
医学において、特に腫瘍疾患の治療のために使用するための式Ｉの化合物又はその塩。
【請求項３】
薬学的に認容性の担体及び治療上有効な量の請求項１記載の化合物からなる医薬組成物。
【請求項４】
腫瘍を患う哺乳動物（人を除く）に、請求項１に記載した式Ｉの化合物を腫瘍抑制量で投与することよりなる、哺乳動物（人を除く）の腫瘍の治療法。
【請求項５】
ペプチド化学で公知の方法で製造することを特徴とする、請求項１記載の式Ｉの化合物の製法。
【発明の詳細な説明】
海洋由来様ドラスタチン（dolastatin）−１０（ＵＳ ４８１６４４４）及びドラスタチン−１５（ＥＰ−Ａ−３９８５５８）から単離されたペプチドが有効な細胞成長阻止活性を示すことは公知である（Biochem.Pharmacology 40,no.8,1859-64,1990；J.Natl.Cancer Inst.85,483-88,1993及びこの中で引用された文献、参照）。生体内での、腫瘍システム中での実験における興味深い結果に基づき、これら天然物質の更なる前臨床学的評価付けが、癌患者における臨床学的研究を開始するために現在進められている。しかしながら、これらの天然生成物は水性溶剤中への溶解性が乏しいこと、及び合成のために必要なブロックの製造のために費用がかかるという欠点を有する。
本発明は、腫瘍疾患の治療のために、ドラスタチン−１５に比較して改良された治療効果を示す、新規ペプチド及びその誘導体を提供する。更に、本発明による化合物は以下に詳細に記載するように簡単に製造することができる。
本発明の化合物は式Ｉ：
Ｒ1Ｒ2Ｎ−ＣＨＸ−ＣＯ−Ａ−Ｂ−Ｄ−Ｅ−Ｋ            Ｉ
［式中、
Ｒ1はメチルであり；
Ｒ2はメチルであり；
Ａはバリル基であり；
ＢはＮ−メチル−バリル基であり；
ＸはＣ2-5−アルキルであり；かつ
ＫがＣ1-4アルコキシの場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅはアゼチジン−２−カルボニル基であり、
Ｋが−ＮＨ2の場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅはアゼチジン−２−カルボニル基であり、
さらに、Ｋが−ＮＨ2の場合、Ｄは３，４−デヒドロプロリル基であり、Ｅは３，４−デヒドロプロリル基であり、
Ｋが−ＮＨ−Ｃ1〜12-アルキルの場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅは３−メチルプロリル基であり、
Ｋが−ＮＨ−（ＣＨ2）y−フェニル基（ｙ＝１）の場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅはアゼチジン−２−カルボニル基であり、
さらに、Ｋが−ＮＨ−（ＣＨ2）y−フェニル基（ｙ＝１）の場合、Ｄはプロリル基であり、Ｅは３，４−デヒドロプロリル基である］の新規ペプチド及び生理学的に認容性の酸との塩を包含する。本発明は式Ｉの化合物の製法、該化合物を薬学的に認容性の担体とともに含有する医薬組成物、及び哺乳動物中の癌を治療するためのその使用法をも提供する。
特にＫはＣ1-4アルコキシ、ベンジルオキシ又は式Ｒ5−Ｎ−Ｒ6のアミノ部分であるのがよく、ここでＲ5は水素、又はヒドロキシ、又はＣ1-4アルコキシ、又はベンジルオキシ（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、Ｃ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい、置換基２つまでで置換されていてよい）、又はフェニルオキシ（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、Ｃ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい、置換基２つまでで置換されていてよい）であり；
Ｒ6は水素、又はＣ1-12−アルキル（これは、フッ素原子１つ以上で置換されていてよい）、又は−Ｃ（ＣＨ3）2ＣＮ、又はＣ（ＣＨ3）2ＣＣＨ、又はＣ（ＣＨ3）2Ｃ＝ＣＨ2、又は−Ｃ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＯＨ、又は−Ｃ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ、又は−（ＣＨ2）v−Ｃ3-7−シクロアルキル（v＝０、１又は２）（これはメチル基で置換されていてよい）、又はノルエフェドリル、又はノルプソイド−エフェドリル、又はキノリル、又はピラジル、又はアダマンチル、又は−ＣＨ2−ベンズイミダゾリル、又は−ＣＨ2−アダマンチル、又はα−メチル−ベンジル、又はα−ジメチルベンジル、又は−（ＣＨ2）v−フェニル（v＝０、１、２、又は３；これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−（ＣＨ2）m−ナフチル（m＝０又は１；これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−（ＣＨ2）w−ベンズヒドリル（w＝０、１、又は２；これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はビフェニル（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はピリジル（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はピコリル（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−ＣＨ2−ＣＨ2−ピリジル（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はベンゾチアゾリル（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯ��ｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はベンゾイソチアゾリル（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はベンゾピラゾリル（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-7−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はベンゾオキサゾリル（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−（ＣＨ2）m−フルオレニル（m＝０又は１；これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又はピリミジル（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−（ＣＨ2）m−インダニル（m＝０又は１；これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、Ｎ（ＣＨ3）2、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）y−ＣＨ3（y＝０、１、２、３、４、又は５）、又は−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）y−ＣＨ2ＣＨ3（y＝０、１、２、３、４、又は５）、又は−ＮＨ−Ｃ6Ｈ5（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−ＮＣＨ3−Ｃ6Ｈ5（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−ＮＨ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は−ＮＣＨ3−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5（これは相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、ハロゲン、環を形成してもよいＣ1-4−アルキル、シアノ、ヒドロキシ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、又はＣＯＯＮＨ2であってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、又は置換基２個までで置換されていてよい五員環ヘテロアリール基、ここでこの置換基は相互に独立して、ＣＦ3、ニトロ、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、Ｃ1-4−アルコキシ、チオメチル、チオエチル、ピコリル、アセチル、Ｃ3-6−シクロアルキル、チオフェニル、−ＣＨ2−ＣＯＯＥｔ、ヘテロ環とビシクロ系を形成するＣ3-4−アルキレン基、フェニル（これは相互に独立して、ニトロ、ＣＦ3、ＣＮ、ハロゲン、又はＣ1-4−アルキルであってよい置換基２つまでで置換されていてよい）、ベンジル（これは相互に独立して、ニトロ、ＣＦ3、ハロゲン、Ｃ1-4−アルキル、Ｃ1-4−アルキルスルホニル、シアノ、ヒドロキシ、Ｃ1-4−ジアルキルアミノであってよい置換基２つまでで置換されていてよい）である、又はＣＨＲ7−五員環ヘテロアリール（これは相互に独立してＣＦ3、ニトロ、シアノ、ハロゲン、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｉＰｒ、ＣＯＮＨ2、Ｃ1-4−アルキル、Ｃ1-4−アルコキシ、フェニル、ベンジル、ナフチル、又はＣ1-4−アルキルスルホニルであってよい置換基２つまでで置換されていてよい［Ｒ7＝水素、直鎖又は分枝鎖Ｃ1-5−アルキル、ベンジル］）である。
−ＣＨＲ7−五員環ヘテロアリールは例えば次の基の１つによって示すことができる：
0004221062.tif 000002
五員環ヘテロアリールは次の基により表すこともできる：
0004221062.tif 000003
0004221062.tif 000004
Ｒ5−Ｎ−Ｒ6は一緒になって次の群から選択された構造を形成していてもよい：
0004221062.tif 000005
置換基Ｒ1、Ｒ2、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｘが次の意味を有する式Ｉの化合物が有利である：
Ｒ1はメチル又はエチルであり；
Ｒ2は水素、メチル又はエチルであり；
Ａはバリル、イソロイシル、２−ｔ−ブチルグリシル基であり；
ＢはＮ−メチル−バリル、−イソロイシル又は−２−ｔ−ブチルグリシル基であり；
Ｄはプロリル、３，４−デヒドロプロリル、４−フルオロプロリル、３−メチルプロリル又はチアゾリジン−４−カルボニル基であり；
Ｅは３，４−デヒドロプロリル、４−フルオロプロリル、３−メチルプロリル、又はアゼチジン−２−カルボニル基であり；
Ｘは−ＣＨ（ＣＨ3）2、−Ｃ（ＣＨ3）3、又は−ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ3である。
Ｋの有利な意味は次のものである：
−ＯＣ（ＣＨ3）3、−ＮＨ2、−ＮＨ−Ｃ1-12−アルキル、−ＮＨ−Ｃ3-8−シクロアルキル、−ＮＨ−［３，３，０］−ビシクロオクチル、ノルエフェドリル、ノルプソイドエフェドリル、−ＮＨ−キノリル、−ＮＨ−ピラジル、−ＮＨ−ＣＨ2−ベンズイミダゾリル、−ＮＨ−アダマンチル、−ＮＨ−ＣＨ2−アダマンチル、−ＮＨ−ＣＨ（ＣＨ3）−フェニル、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ3）2−フェニル、−Ｎ（Ｃ1-4−アルコキシ）Ｃ1-4−アルキル、−Ｎ（Ｃ1-4−アルコキシ）−ＣＨ2−フェニル、−Ｎ（Ｃ1-4−アルコキシ）−フェニル、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＢｚｌ、−ＮＨ−（ＣＨ2）v−フェニル（v＝０、１、２、又は３）、−ＮＨ−（ＣＨ2）m−ナフチル（m＝０又は１）、−ＮＨ−（ＣＨ2）w−ベンズヒドリル（w＝０、１又は２）、−ＮＨ−ビフェニル、−ＮＨ−ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ2−ピリジル、−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−ピリジル、−ＮＨ−ベンゾチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾイソチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾピラゾリル、−ＮＨ−ベンゾオキサゾリル、−ＮＨ−（ＣＨ2）m−フルオレニル（m＝０又は１）、−ＮＨ−ピリミジル、−ＮＨ−（ＣＨ2）m−インダニル（m＝０又は１）、−ＮＨ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）y−ＣＨ3（y＝０、１、２、３、４、又は５）、−ＮＨ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）y−ＣＨ2ＣＨ3（y＝０、１、２、３、４、又は５）、−ＮＨ−（五員環ヘテロアリール）（第７〜９頁参照）−ＮＨ−ＣＨＲ7−五員環ヘテロアリール［Ｒ7＝水素、直鎖又は分枝鎖Ｃ1-5アルキル、ベンジル］（第６頁参照）；又はＫは次のものを表す、
0004221062.tif 000006
より有利なＫは次のものを表す：
−ＮＨＣＨ3、−ＮＨＣＨ2ＣＨ3、−ＮＨ（ＣＨ2）2ＣＨ3、−ＮＨ（ＣＨ2）3ＣＨ3、−ＮＨ（ＣＨ2）4ＣＨ3、−ＮＨ（ＣＨ2）5ＣＨ3、−ＮＨ（ＣＨ2）6ＣＨ3、−ＮＨ（ＣＨ2）7ＣＨ3、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ3、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−ＮＨＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3）2、−ＮＨＣ（ＣＨ3）3、−ＮＨＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（ＣＨ3）3、−ＮＨ−シクロプロピル、−ＮＨ−シクロブチル、−ＮＨ−シクロペンチル、−ＮＨ−シクロヘキシル、−ＮＨ−シクロヘプチル、−ＮＨ−シクロオクチル、−ＮＨ−ビシクロ［３，３，０］オクチル、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣＨ2ＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣＨ（ＣＨ3）2、−Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）ＯＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）ＯＣＨ2ＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ（ＣＨ3）2）ＯＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣＨ2Ｃ6Ｈ5、−Ｎ（ＯＣＨ3）ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣ6Ｈ5、−ＮＨ−ＣＨ2−Ｃ6Ｈ5、−ＮＨ（ＣＨ2）2Ｃ6Ｈ5、−ＮＨ（ＣＨ2）3Ｃ6Ｈ5、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）Ｃ6Ｈ5、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2Ｃ6Ｈ5、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＣＨ3、−ＮＨＣ（ＣＨ3）（ＣＨ2ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ（ＯＨ）Ｃ6Ｈ5、−ＮＨＣＨ2−シクロヘキシル、−ＮＨ−ＣＨ2ＣＦ3、−ＮＨＣＨ（ＣＨ2Ｆ）2、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ、−ＮＨ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2ＣＨ2ＣＨ3、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＮ、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＣＨ、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2Ｃ＝ＣＨ2、ノルエフェドリル、ノルプソイドエフェドリル、−ＮＨ−キノリル、−ＮＨ−ピラジル、−ＮＨ−アダマンチル（１）、−ＮＨ−アダマンチル（２）、−ＮＨ−ＣＨ2−アダマンチル、−ＮＨ−ＣＨ2−ナフチル、−ＮＨ−ベンズヒドリル、−ＮＨ−ビフェニル、−ＮＨ−ピリジル、−ＮＨ−ピコリル、−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−ピリジル、−ＮＨ−ベンゾチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾイソチアゾリル、−ＮＨ−ベンゾピラゾリル、−ＮＨ−ベンゾオキサゾリル、−ＮＨ−フルオレニル、−ＮＨ−ピリミジル、−ＮＨ−チアゾリル（２）、−ＮＨ−イソオキサゾリル（３）、−ＮＨ−ＣＨ2−フラニル（２）、−ＮＨ−（３−メチル）イソオキサゾリル（５）、−ＮＨ−（３−メチル）イソチアゾリル（５）、−ＮＨ−（２−トリフルオロメチル）−チアジアゾリル（５）、−ＯＣ（ＣＨ3）3、−ＮＨ−ＣＨ2−（４−メチル）チアゾリル（２）、−ＮＨ−ＣＨ2−チエニル（２）、−ＮＨ−ＣＨ2−（５−メチル）チエニル（２）、−ＮＨ−（２−メチル）−チアジアゾリル（５）、−ＮＨ−（２−シクロプロピル）チアジアゾリル（５）であるか、又はＫは
0004221062.tif 000007
である。
これらの例は、本発明を明らかにするためのものであり、限定するものではない。
式ＩのペプチドはＬ−アミノ酸からなるが、ＦはＤ−アミノ酸であってもよい。
新規化合物は生理学的に認容性の酸との塩であってもよい：例えば塩酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、ギ酸、マレイン酸、フマール酸、リンゴ酸、コハク酸、マロン酸、硫酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ピルビン酸、ムチン酸、安息香酸、グルクロン酸、蓚酸、アスコルビン酸及びアセチルグリシンである。
新規化合物は、ペプチド化学において公知の方法で製造することができる。こうして、このペプチドは連続的にアミノ酸から、又は好適な小さなペプチドフラグメントを結合することにより、組み立てることができる。連続的な組立において、Ｃ−末端で出発し、ペプチド鎖はその都度１個のアミノ酸で段階的に延長する。フラグメント結合においては、異なる長さのフラグメントを一緒に結合させることが可能であり、かつ言い換えるとこのフラグメントは、アミノ酸から連続的に組み立てることにより、又はそれ自体をフラグメント結合することにより、得ることができる。
連続的な組立においても、更にフラグメントでの結合においても、アミド結合を形成することよりユニットを結合することが必要である。このために、酵素的及び化学的方法が好適である。
アミド結合を形成するための化学的方法の詳細はミュラー（Mueller,Methoden der organischen Chenie Vol.XV/2,pp1-364,Thieme Verlag,Stuttgart,1974）；スチュワート、ヤング（Stewart,Young,Solid Phase Peptide Synthesis,pp31-34,71-82,Pierce Chemical Company,Rockford,1984）；ボダンスキー、クラウスナー、オンデッチ（Bodanszky,Klausner,Ondetti,Peptide Synthesis,pp85-128,John Wiley & Sons,New York,1976）及びその他のペプチド化学における標準的な文献において、詳細に記載されている。特に有利であるのは、アジド法、対称及び混合無水物法、その場で製造されるか又は予め形成された活性エステル、アミノ酸のウレタン保護されたＮ−カルボキシ無水物の使用、及び結合試薬／アクチベーターを使用するアミド結合の形成、特にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ）、ｎ−プロパンホスホン酸無水物（ＰＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）−アミドホスホリル クロリド（ＢＯＰ−Ｃｌ）、ブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢｒｏｐ）、ジフェニルホスホリル アジド（ＤＰＰＡ）、カストロ（Castro）の試薬（ＢＯＰ、ＰｙＢｏｐ）、Ｏ−ベンゾトリアゾリル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム塩（ＨＢＴＵ）、Ｏ−アザベンゾトリアゾリル−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウム塩（ＨＡＴＵ）、ジエチルホスホリル シアニド（ＤＥＰＣＮ）、２，５−ジフェニル−２，３−ジヒドロ−３−オキソ−４−ヒドロキシチオフェン ジオキシド（Steglichの試薬；ＨＯＴＤＯ）及び１，１′−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である。結合試薬は単独で、又は添加物、例えばＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）又は２−ヒドロキシピリジンと組み合わせて適用することができる。
この際、通常酵素的ペプチド合成においては保護基なしで済ますことも可能であるのに対して、アミド結合の形成にかかわらない反応性基の可逆的な保護は、化学合成において両方の成分に必要である。３個の常用の保護基を使用する方法が化学的ペプチド合成にとって有利である：ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）及び９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）法。それぞれの場合において同一であるのは、連鎖延長ユニットのα−アミノ基上の保護基である。アミノ酸保護基の詳細はミュラー（Mueller,Methoden der organischen Chemie Vol.XV/1,pp20-906,Thieme Verlag,Stuttgart,1974）により、記載されている。ペプチド鎖を組み立てるために適用されるユニットは、溶液中で又は懸濁液中で、又はメリフィールド（Merrifield in J.Amer.Chem.Soc.85（1963）2149）により記載された方法と同様な方法で反応させることができる。特に有利な方法は、ペプチドをＺ、Ｂｏｃ又はＦｍｏｃ保護基法を用いて、連続的に又はフラグメント結合で組み立てる方法である。
このメリフィールド法において、反応成分の１つは不溶性のポリマー支持体（以降、樹脂とも呼ぶ）に結合している。これは、典型的にペプチドがＢｏｃ又はＦｍｏｃ保護基法を用いてポリマー支持体上に連続的に組み立てられ、成長するペプチドが不溶性樹脂粒子にＣ末端で共有結合していることを必要とする（図１及び図２参照）。この方法は濾過により試薬及び副生成物を除去することを可能とし、かつこうして中間生成物の再結晶を必要としない。
保護されたアミノ酸は任意のポリマーに結合していてよく、このポリマーは使用される溶剤中に不溶性であるだけでなく、濾過を容易にする安定な物理的な形態を有していなければならない。このポリマーは、最初の保護されたアミノ酸が共有結合によりこれに堅固に結合することのできる官能基を有していなければならない。この目的に好適であるポリマーは非常に幅広い、例えば、セルロース、ポリビニルアルコール、ポリメタクリレート、スルホン化ポリスチレン、クロルメチル化スチレン／ジビニルベンゼンコポリマー（メリフィールド樹脂）、４−メチルベンジルヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨＡ−樹脂）、フェニルアセトアミドメチル樹脂（Ｐａｍ−樹脂）、ｐ−ベンジルオキシ−ベンジル−アルコール−樹脂、ベンズヒドリル−アミン−樹脂（ＢＨＡ−樹脂）、４−（ヒドロキシメチル）−ベンゾイルオキシ−メチル−樹脂、ブライポール（Breipohl）等の樹脂（Tetrahedron Letters 28（1987）565;BACHEMより提供）、４−（２，４−ジメトキシフェニルアミノメチル）フェノキシ−樹脂（Novabiochemより提供）又はｏ−クロロトリチル−樹脂（Biohellasより提供）である。
溶液中でのペプチド合成に好適であるのは、反応条件下に不活性である全ての溶剤である、特に水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）及び該溶剤の混合物である。ポリマー支持体上でのペプチド合成は、使用されるアミノ酸誘導体が可溶性である全ての不活性有機溶剤中で実施することができる。しかしながら、有利な溶剤は付加的に樹脂膨潤特性を有する溶剤、例えばＤＭＦ、ＤＣＭ、ＮＭＰ、アセトニトリル及びＤＭＳＯ、及びこれらの溶剤の混合物である。合成が完了した後、このペプチドをポリマー支持体から開裂分離する。種々の樹脂型がどのような条件下に開裂分離可能であるかは、文献中に記載されている。最も通常に使用される開裂条件は、酸触媒及びパラジウム触媒された、特に液体無水フッ化水素中で、無水トリフルオロメタンスルホン酸中で、希釈又は濃トリフルオロ酢酸中での開裂、モルホリンのような弱塩基の存在下でのＴＨＦ又はＴＨＦ−ＤＣＭ混合物中でのパラジウム触媒開裂、又は酢酸−ジクロロメタントリフルオロエタノール混合物中での開裂である。選択した保護基により、これらの保護基は開裂条件下に保持されるか又は同様に開裂除去される。ある一定の誘導体化反応を実施しなければならないとき、ペプチドの部分的な脱保護も価値がある。Ｎ−末端でジアルキル化したペプチドは、ａ）溶液中又はポリマー支持体上で、好適なＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ酸を結合させることにより、ｂ）ＤＭＦ／１％酢酸中でＮａＣＮＢＨ3及び好適なアルデヒド又はケトンとともに樹脂結合ペプチドを還元的にアルキル化することにより、ｃ）アルデヒド又はケトン及びＰｄ／Ｃの存在下に、溶液中でペプチドを水素化することにより、製造することができる。
本発明において開示されている種々の非天然由来のアミノ酸は市販されているか、又は市販の材料から公知法を用いて合成することができる。アゼチジン−２−カルボン酸、３−メチル−Ｌ−プロリン、５−メチル−Ｌ−プロリン、及びＢｏｃ−又はＦｍｏｃ−保護３，４−デヒドロプロリンは市販されている出発材料である（ACROS,NOVABIOCHEM,BACHEM）。シス−及びトランス−４−フルオロプロリンはパナシック等（N.Panasik,E.S.Eberhardt,A.S.Edison,D.R.Powell,R.T.Raines,Int.J.Peptide Protein Res.44,1994,262-269）により記載された方法でヒドロキシプロリンから製造することができる。
本発明の化合物は、哺乳動物（人を除く）にこの化合物を投与することにより、固体腫瘍（例えば、肺の腫瘍、胸部、結腸、前立腺、膀胱、直腸、又は子宮の腫瘍）又は血液学的癌（例えば、白血病、リンパ腫）を阻止又は他の方法で治療するために使用することができる。
この新規化合物の特別な利点はドラスタチン−１５に比較して酵素分解に対してより抵抗性である。
投与は薬学的、有利に腫瘍学的薬剤に関して常用の任意の手段で実施することができ、これは経口及び非経口、例えば皮下、静脈内、筋肉内及び腹腔内適用を含む。
この化合物は単独で、又は所望の投与経路に好適な薬学的に認容性の担体と共に、一般式Ｉの化合物を含有する医薬組成物の形で投与することもできる。そのような医薬組成物は組合せ製品であってもよい、即ち他の治療活性成分を含有してもよい。
哺乳動物（人を除く）に適用すべき用量は活性成分の効果的腫瘍阻止量を含有しており、これは適用した個別の化合物の生物学的活性；投与法；患者の年齢、健康状態及び体重；症状の性質及び程度；治療の頻度；他の治療の適用；及び所望の効果を含む、通常のファクターに依存する。典型的な日用量は経口投与の場合体重１ｋｇあたり約０．５〜５０ｍｇであり、非経口投与の場合は約０．０５〜２０ｍｇである。
新規化合物は従来の固体又は液体投与剤形で投与することができる、例えば非被覆又は（膜）被覆錠剤、カプセル、粉末、顆粒、座薬又は溶液。これらは常用の方法で製造される。この目的のために、活性物質を従来の医薬助剤、例えば錠剤結合剤、充填剤、保存剤、錠剤崩壊剤、流動調節剤、可塑剤、湿潤剤、分散剤、乳化剤、溶剤、持続放出組成物、抗酸化剤及び／又は噴射ガス（H.Sucker et al.:Pharmazeutische Technologie,Thieme-Verlag,Stuttgart,1978参照）と一緒に加工することができる。投与剤形は活性物質１〜９０重量％を通常含有する。
次の実施例は、本発明を詳細に説明することを意図する。蛋白質を構成するアミノ酸は実施例において公知の三文字記号を用いて省略した。他の使用した省略形は、Ｍｅ2Ｖａｌ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルバリン、ＭｅＶａｌ＝Ｎ−メチルバリンである。
Ａ． 一般的方法
Ｉ． 請求項１で請求されたペプチドは前記のように、標準Ｚ−及びＢｏｃ−法を用いて、標準的な溶液合成法によって合成するか、又はＢｏｃ及びＦｍｏｃ保護基法を用いて標準固相合成法により合成する。
ａ）  Ｆｍｏｃ保護基法に関する合成サイクル
１． ＤＭＦ洗浄      １×１分
２． ＤＭＦ中２０％ピペリジン      １×４分
３． ＤＭＦ中２０％ピペリジン      １×１６分
４． ＤＭＦ洗浄      ５×１分
５． 前活性化保護アミノ酸の添加（ＤＭＦ中、ＴＢＴＵ１当量及びＤＩＰＥＡ５当量での活性化）；
ペプチド結合      １×６１分
６． ＤＭＦ洗浄      ３×１分
７． 変換が不完全の場合、結合工程の反復（５．に戻る）
８． ＤＭＦ中の１０％酢酸無水物      １×８分
９． ＤＭＦ洗浄      ３×１分
１０．２に戻る
ＢＯＰ−Ｃｌ及びＰｙＢｒｏｐはＮ−メチルアミノ酸に続くアミノ酸の結合のための試薬として使用された。反応時間は二重の結合を含めて相応して増大した。溶液合成法においては縮合剤として、Ｂｏｃ−保護アミノ酸ＮＣＡ’ｓ（Ｎ−カルボキシ無水物）、Ｚ−保護アミノ酸ＮＣＡ’ｓ（Ｎ−カルボキシ無水物）の使用も、塩化ピバロイルの使用もそれぞれ、このタイプの結合にとって最も有利である。
ＩＩ． Ｎ末端の還元アルキル化
ＡＩａにおけるように製造したペプチド樹脂をＮ末端で脱保護し（ＡＩａ中の工程２〜４）、次いで３倍モル過剰のアルデヒド又はケトンと、ＤＭＦ／１％酢酸中で、ＮａＣＮＢＨ3３当量を添加して、反応させた。反応の完了後（カイザー（Kaiser）テスト・マイナス）、この樹脂を水、イソプロパノール、ＤＭＦ及びジクロロメタンで数回洗浄した。
溶液中での還元アルキル化は、例えばＮａＣＮＢＨ3又は水素−Ｐｄ／Ｃを用いて、Ｎ−末端脱保護ペプチド、ペプチドフラグメント、又はアミノ酸と相応するアルデヒド又はケトンとの反応により達せられる。
ＩＩＩ． Ｉｂ及びＩＩにおけるようにして得られたペプチド−樹脂の処理
ペプチド−樹脂を減圧下に乾燥し、次いでＴＦＡ／水混合物（９５：５）で１．５時間処理した（Wade,Tregear,Howard Florey Fmoc Workshop Manual,Melbourne 1985）。次いで、この樹脂を濾別し、ＴＦＡ及びＤＣＭで洗浄した。濾液及び洗浄液を濃縮し、かつペプチドをジエチルエーテルを添加することにより沈殿させた。氷浴中で冷却後、沈殿を濾別し、かつ３０％酢酸中に取り込み、凍結乾燥した。
ＩＶ． ｏ−クロロトリチル−樹脂（Biohellasが提供）を使用するとき、酢酸／トリフルオロエタノール／ジクロロメタン（１：１：３）混合物中のペプチド−樹脂の懸濁液を、室温で１時間撹拌する。次いで、この樹脂を吸引濾別し、開裂溶液で完全に洗浄する。合した濾液を真空中で濃縮し、エーテルで処理する。沈殿した固体を、濾過又は遠心分離により分離し、ジエチルエーテルで洗浄し、かつ減圧下に乾燥する。
Ｖ． ペプチドの精製及び特徴付け
精製はゲルクロマトグラフィー（SEPHADEX G-10,G-15/10% HOAc,SEPHADEX LH20/MeOH）及び／又は中圧クロマトグラフィー（固定相：HD-SIL C-8,20-45μ,100Å；移動層：A=0.1%TFA/水、B=0.1%TFA/MeOHでの傾斜溶液）又は分取ＨＰＬＣ（固定相：Water Delta-Pak C-18,15μ,100Å；移動層：A=0.1%TFA/水、B=0.1%TFA/MeOHでの傾斜溶液）により実施した。
生じた生成物の純度は、分析ＨＰＬＣ（固定相：100 2.1mm VYDAC C-18,300Å；移動層：アセトニトリル−水傾斜溶液、０．１％ＴＦＡで緩衝、４０℃）で決定した。特徴付けは高速原子衝撃質量分析及びＮＭＲ分析で実施した。
Ｂ． 個別の方法
実施例１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）
Ｍｅ2Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｌ−アゼチジニル−２−カルボキサミド
Ｆｍｏｃ−ＲＩＮＫ−樹脂（置換０．４６ｍｍｏｌ／ｇ）０．５３ｇ、バッチの量０．２５ｍｍｏｌに相当する、をＡＩａにおけると同様にして、それぞれ０．４ｍｍｏｌの
Ｆｍｏｃ−Ｌ−アゼチジン−２−カルボン酸、
Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ、
と反応させた。
Ｎ−メチルアミノ酸に続くアミノ酸は結合試薬としてＰｙＢｒｏｐで二重の結合で、結合した。反復合成サイクルが終了した後、このペプチド−樹脂をＮ−末端脱保護（ＡＩａ中の工程２〜４）処理し、及びＡＩＩにおけると同様に水性ホルムアルデヒド溶液と更に反応させ、次いで減圧下に乾燥した。生じた樹脂をＡＩＩＩにおける様に、ＴＦＡ開裂に晒した。粗生成物を分取中圧クロマトグラフィーにより精製し、所望の純粋なペプチド５ｍｇが得られた（１０分かけてＡ１０−４０％；２００分かけてＡ４０−９０％）。この化合物を高速原子衝撃質量分析で特徴付けした（［Ｍ＋Ｈ］+＝５３７．３７）。
実施例２  （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）
Ｍｅ2Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−３，４−デヒドロプロリルベンジルアミド
ａ）Ｚ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ
Ｚ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ６６．２５ｇ（２５０ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン２５０ｍｌ中に溶かした。トリエチルアミン３６．４１ｍｌ（２６２．５ｍｍｏｌ）を添加した後、反応混合物を−２５℃に冷却し、かつ塩化ピバロイル３２．２７ｍｌ（２６２．５ｍｍｏｌ）を添加した。ジクロロメタン２５０ｍｌ中のＨ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ ｘＨＣｌ ４１．８９ｇ（２５０ｍｍｏｌ）を０℃でトリエチルアミン３６．４１ｍｌ（２６２．５ｍｍｏｌ）で中和し、２．５時間撹拌した後、反応混合物中に添加した。撹拌を更に−２５℃で２時間継続し、かつ室温で一夜放置した。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×）及び飽和ＮａＣｌ溶液で、完全に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、かつ蒸発乾固した。残分（９１．２４ｇ）を石油エーテルと共に一夜撹拌し、かつ濾過した。生成物６２．３ｇが得られた。
ｂ）Ｈ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ
Ｚ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ４８．９ｇ（１３０ｍｍｏｌ）をメタノール４９０ｍｌ中に溶かした。濃塩酸１０．９ｍｌ（１３０ｍｍｏｌ）及び１０％パラジウム／木炭２．４３ｇを添加した後、反応混合物を水素化した。濾過及び蒸発乾固により、生成物３６．４３ｇが得られた。
ｃ）Ｚ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ
Ｈ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ１８．１ｇ（６５ｍｍｏｌ）、Ｚ−Ｖａｌ−Ｎ−カルボン酸無水物２１．６ｇ（７８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン２２．８（１３０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１１０ｍｌ中で、４０℃で２日間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた後、ジクロロメタンを添加し、かつ有機相を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×）及び飽和ＮａＣｌ溶液で、完全に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、かつ蒸発乾固した。生成物（２９．３ｇ）が粘稠油状物質として得られた。
ｄ）Ｈ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ
Ｚ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ２９．３ｇ（６１．６ｍｍｏｌ）をメタノール２３０ｍｌ中に溶かした。１０％パラジウム／木炭１．１５ｇを添加した後、反応混合物を水素化した。濾過及び蒸発乾固により、生成物２１．９６ｇが得られた。
ｅ）Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ
Ｚ−Ｖａｌ−ＯＨ１５．２９ｇ（６１ｍｍｏｌ）及びＨ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ２１．９６ｇ（６１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン６１０ｍｌ中に溶かし、０℃に冷却した。Ｎ−メチルモルホリン８．１６ｍｌ（７３．２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ２．７７ｇ（２０．３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ １１．７４ｇ（６１ｍｍｏｌ）の添加後、反応混合物を室温で一夜撹拌し、ジクロロメタンで希釈し、かつ飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×）及び飽和ＮａＣｌ溶液で、完全に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、かつ蒸発乾固することにより、生成物３１．９６ｇが得られた。
ｆ）Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｏｍｅ３１．９６ｇ（５７ｍｍｏｌ）をメタノール２５０ｍｌ中に溶かし、かつ１Ｍ ＬｉＯＨ水溶液１０２．６ｍｌ（１０２．６ｍｍｏｌ）を添加した。室温で２４時間撹拌した後、水を添加し、減圧下にメタノールを蒸発させた。この水相を酢酸エチルで３回抽出し、４℃でｐＨ２に調節し、かつ酢酸エチルで３回抽出した。合した有機抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、かつ溶剤を減圧下に蒸発させると、白色固体３０．６ｇが得られた。
ｇ）Ｍｅ2Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｎ，Ｎ−ジメチル化テトラペプチド酸は、Ｚ−保護テトラペプチド酸から、Ｚ保護基の水素化及び引き続く水素化混合物へのホルムアルデヒド水溶液の添加により製造され、所望の生成物がほとんど定量的に得られた。
ｈ）Ｍｅ2Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−３，４−デヒドロプロリンメチルエステル
Ｍｅ2Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ３．３８ｇ（７．２７ｍｍｏｌ）及び３，４−デヒドロプロリンメチルエステルヒドロクロリド０．９２５ｇ（７．２７ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン７５ｍｌ中に溶かした。Ｎ−メチルモルホリン０．９７５ｍｌ（８．７２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ０．３３２ｇ（２．４３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ １．４ｇ（７．２７ｍｍｏｌ）を４℃で添加した。室温で一夜撹拌した後、ジクロロメタンを添加し、かつ有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回、水で１回洗浄した。有機相を５％クエン酸水溶液で抽出した。酸性の水相のｐＨを１Ｎ ＮａＯＨでｐＨ８とし、ジクロロメタンで４回抽出した。硫酸ナトリウム上で乾燥し、かつ減圧下に蒸発させると、ペンタペプチドメチルエステル２．８２ｇが得られた。
ｋ）Ｍｅ2Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−３，４−デヒドロプロリンベンジルアミド
メタノール２０ｍｌ中のペンタペプチドメチルエステルを含有するデヒドロプロリン２．０ｇを室温で１Ｎ ＬｉＯＨ溶液４．６ｍｌで処理した。この反応が完結した後（ｔｌｃコントロール）、水を添加し、メタノールを蒸発させ、かつこの化合物を水から凍結乾燥した。得られた白色粉末をジクロロメタン３６ｍｌ中に溶かし、ベンジルアミン０．３８８ｍｌ（３．５５ｍｍｏｌ）を添加した。Ｎ−メチルモルホリン０．４７６ｍｌ（４．２６ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ０．１６３ｇ（１．１９ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ ０．６８４ｇ（３．５５ｍｍｏｌ）を４℃で添加した後、この反応混合物を室温で一夜撹拌した。ジクロロメタンを添加し、かつ有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回、水で１回洗浄した。有機相を５％クエン酸水溶液で２回抽出した。酸性の水相を５Ｎ ＮａＯＨでｐＨ９とし、ジクロロメタンで４回抽出した。硫酸ナトリウム上で乾燥し、かつ減圧下に溶剤を蒸発させると、粗ペンタペプチドベンジルアミド６００ｍｇが得られた。この粗ペプチドの３００ｍｇを中圧液体クロマトグラフィーにより（５分間０-１０％、１０分間１０-２５％、４５０分間２５-９０％）精製することにより、分析上純粋な生成物９２ｍｇが得られた。更に、この化合物を高速原子衝撃質量分析により特徴付けした（［Ｍ＋Ｈ］+＝６３９．４）。
次の化合物を製造した。これは実施例１及び２と同様にして製造することができた。
0004221062.tif 000008
0004221062.tif 000009
合成した新規化合物のＭＳ−特徴付けに関する例を次の表に記載した。
0004221062.tif 000010
実施例１及び２により製造した化合物の配列の同定：
化合物の番号                        配列ＩＤ番号
１−３２、３５−６３、８８−９２        １
３３                                    ２
３４                                    ３
６４−７２                              ４
７３−８７                              ５
包括的に記号Ｘａａは次の意味を有する：
0004221062.tif 000011
0004221062.tif 000012
0004221062.tif 000013
0004221062.tif 000014
0004221062.tif 000015
0004221062.tif 000016
0004221062.tif 000017
0004221062.tif 000018
0004221062.tif 000019
0004221062.tif 000020
0004221062.tif 000021
0004221062.tif 000022
本発明の化合物は従来の方法により抗癌活性を効力検定することができ、例としてその方法を以下に記載する。
Ａ.試験管内法
細胞毒性を付着細胞列に関する標準法、たとえばマイクロ培養テトラゾリウムアッセイ（ＭＴＴ）を用いて測定した。このアッセイの詳細は公開されている（Alley,MC et al,Cancer Research 48:589-601,1988）。指数関数的に成長する腫瘍細胞の培養、例えばＨＴ−２９結腸癌又はＬＸ−１肺腫瘍をマイクロタイタープレート培養を作るために使用した。細胞を９６穴プレート中の１穴あたり細胞５０００〜２００００個を播種し（培地１５０μｌ中）、かつ３７℃で一夜培養した。試験化合物を添加し、１０倍希釈で１０-4〜１０-10Ｍで変化させる。次いで、細胞を４８時間インキュベートする。次いで、各穴中の成長可能な細胞の数を決定するために、ＭＴＴ色素を添加する（食塩水中の３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド溶液３ｍｇ／ｍｌの５０μｌ）。この混合物を３７℃で５時間インキュベートし、次いで２５％ＳＤＳ、ｐＨ２５０μｌを各穴中に添加する。一夜インキュベートした後、５５０ｎｍでの各穴の吸光度をＥＬＩＳＡ読みとり装置を用いて読みとる。複製した穴からのデータの平均+/- ＳＤに関する値を、式Ｔ／Ｃ％（処理した成長細胞／コントロール成長細胞（％））を用いて、計算した。
処理細胞のＯＤ／コントロール細胞のＯＤ×１００＝Ｔ／Ｃ％
成長抑制５０％を示すＴ／Ｃを与える、試験化合物の濃度をＩＣ50値として示した。
例の化合物              ＩＣ50［Ｍ］
１                      ６×１０-6
２                      １×１０-9
６１                    ２×１０-8
６４                    ２×１０-8
８８                    ４×１０-8
８９                    ６×１０-8
Ｂ.生体内法
更に、本発明の化合物を臨床上の有用性を示す生体内活性に関して、前臨床アッセイにおいて試験した。そのようなアッセイは、この分野においては十分に公知である、腫瘍組織、有利にヒト由来の腫瘍組織が移植された（異種移植）ヌードマウスで実施した。試験化合物は、異種移植を受けたマウスへの投与による、その抗腫瘍効果に関して評価された。
更に詳細には、無胸腺ヌードマウス中で成長したヒト乳房腫瘍（ＭＸ−１）を、約５０ｍｇの大きさの腫瘍片を用いて、新しい受容マウスに移植した。移植日を０日として示した。６〜１０日後に、各投与量ごとに５〜１０匹のマウスの群で、静脈内注射で投与することにより、試験化合物でマウスを処理した。１日おきに３週間の間、１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重で投与した。腫瘍の直径及び体重を週に２回測定した。腫瘍容積をバーニアー・キャリパースで測定した直径及び式：
（長さ×幅2）／２＝腫瘍容積、ｍｍ3
を用いて計算した。
平均腫瘍容積を各処理群に関して計算し、未処理コントロール腫瘍に比較して、各群に関してＴ／Ｃ価を決定した。
新規化合物は良好な腫瘍抑制特性を有する。
配列リスト
（1）一般的情報:
（i）出願人:
（A）名称:BASF アクチエンゲゼルシャフト
（B）町:カール-ボッシュ-シュトラーセ 38
（C）市:ルードウイッヒスハーフェン
（E）国:ドイツ連邦共和国
（F）郵便コード（ZIP）:D-67056
（G）電話:0621/6048526
（H）テレファックス:0621/6043123
（I）テレックス:1762175170
（ii）発明の名称:新規ペプチド、その製法及び使用
（iii）配列の数:5
（iv）コンピューター読み取り可能形:
（A）媒体型:ディスケット、3.5インチ、２ＤＤ
（B）コンピューター:IBM ＡＴコンパチブル、80286プロセッサー
（C）オペレーティング  システム:MS-DOS バージョン5.0
（D）ソフトウエア:ワードパーフェクト
（2）SEQ ID NO:1に関する情報:
（i）配列特徴:
（A）長さ:5アミノ酸
（B）型:アミノ酸
（D）トポロジー:直鎖状
（ii）配列の種類:ペプチド
（xi）配列:SEQ ID NO:1:
0004221062.tif 000023
（2）SEQ ID NO:2に関する情報:
（i）配列特徴:
（A）長さ:5アミノ酸
（B）型:アミノ酸
（D）トポロジー:直鎖状
（ii）配列の種類:ペプチド
（xi）配列:SEQ ID NO:2:
0004221062.tif 000024
（2）SEQ ID NO:3に関する情報:
（i）配列特徴:
（A）長さ:5アミノ酸
（B）型:アミノ酸
（D）トポロジー:直鎖状
（ii）配列の種類:ペプチド
（xi）配列:SEQ ID NO:3:
0004221062.tif 000025
（2）SEQ ID NO:4に関する情報:
（i）配列特徴:
（A）長さ:5アミノ酸
（B）型:アミノ酸
（D）トポロジー:直鎖状
（ii）配列の種類:ペプチド
（xi）配列:SEQ ID NO:4:
0004221062.tif 000026
（2）SEQ ID NO:5に関する情報:
（i）配列特徴:
（A）長さ:6アミノ酸
（B）型:アミノ酸
（D）トポロジー:直鎖状
（ii）配列の種類:ペプチド
（xi）配列:SEQ ID NO:5:
0004221062.tif 000027