(57)【要約】本発明は、安定化したペメトレキセド製剤に関し、より詳しくは、抗酸化剤としてアセチルシステインを含み、緩衝剤としてクエン酸ナトリウムを含む安定化したペメトレキセド製剤に関する。また、本発明は、密封された容器に入れられた、活性成分としてペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩を含むペメトレキセド製剤であり、前記容器内のヘッドスペース内の酸素量が３ｖ／ｖ％以下であるペメトレキセド製剤に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性成分としてペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン及びクエン酸ナトリウムを含むペメトレキセド製剤。
【請求項２】
前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比が、１〜３０：０．１５〜２．０：１．０〜１５．０である、請求項１に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項３】
前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比が、１〜３０：１．５：１．０〜１５．０である請求項２に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項４】
前記製剤が、溶液状態で保存可能な液状製剤である、請求項１に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項５】
前記製剤が、即時使用できるように（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）密封された容器に入れられた注射用液状製剤である、請求項１に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項６】
密封された容器に入れられた、活性成分としてペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩を含むペメトレキセド製剤であって、前記製剤は、前記容器内のヘッドスペース内の酸素量が、前記ヘッドスペースの体積に対して３ｖ／ｖ％以下であるペメトレキセド製剤。
【請求項７】
前記製剤が、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン及びクエン酸ナトリウムをさらに含む、請求項６に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項８】
前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比が、１〜３０：０．１５〜２．０：１．０〜１５．０である、請求項７に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項９】
前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比が、１〜３０：１．５：１．０〜１５．０である、請求項８に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項１０】
前記製剤が、溶液状態で保存可能な液状製剤である、請求項６に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項１１】
前記製剤が、即時使用できるように（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）密封された容器に入れられた注射用液状製剤である、請求項６に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項１２】
前記製剤が、前記容器内のヘッドスペース内の酸素を不活性ガスに置換して酸素量を調節したものである、請求項６に記載のペメトレキセド製剤。
【請求項１３】
前記不活性ガスは、窒素またはアルゴンである請求項１２に記載のペメトレキセド製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安定化したペメトレキセド製剤に関し、より詳しくは、抗酸化剤としてアセチルシステインを含み、緩衝剤としてクエン酸ナトリウムを含む安定化したペメトレキセド製剤及びその製造方法に関する。また、本発明は、密封された容器に入れられた、活性成分としてペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩を含むペメトレキセド製剤であり、前記容器内のヘッドスペース内の酸素量が３ｖ／ｖ％以下であるペメトレキセド製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
特定の抗葉酸活性を有することが公知となっている化合物は、がんの治療のための化学療法剤としてよく知られている。特許文献１には、ペメトレキセドを含む特定の置換されたピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン基剤の抗葉酸塩誘導体の製造方法が記載されており、特許文献２には、一連の４−ヒドロキシピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−Ｌ−グルタミン酸誘導体が公知となっている。
【０００３】
ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）は、５−置換ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンであり、非小細胞肺がん（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ）をはじめとする様々ながん種で葉酸（ｆｏｌａｔｅ）の代謝過程に関与する代謝物質の活性を抑制し、抗がん効能を示す多重標的抗葉酸剤（ｍｕｌｔｉｔａｒｇｅｔｅｄ  ａｎｔｉｆｏｌａｔｅ）である。
【０００４】
ペメトレキセドは、葉酸の細胞内の主要な移動通路である還元型葉酸キャリア（ｒｅｄｕｃｅｄ  ｆｏｌａｔｅ  ｃａｒｒｉｅｒ、ＲＦＣ）を通じて細胞内に流入された後、ホリルポリグルタミン酸シンテターゼ（ｆｏｌｙｌｐｏｌｙｇｌｕｔａｍａｔｅ  ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ、ＦＰＧＳ）によりポリグルタミン酸塩（ｐｏｌｙｇｌｕｔａｍａｔｅ）誘導体として活性化され、チミジル酸シンターゼ（ｔｈｙｍｉｄｙｌａｔｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ、ＴＳ）とジヒドロ葉酸レダクターゼ（ｄｉｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ、ＤＨＦＲ）を標的とすることが知られている。
【０００５】
現在、ペメトレキセドは、アリムタ（ＡＬＩＭＴＡ）という商品名で開発され、悪性胸膜中皮腫の治療及び非小細胞肺がんの治療薬として市販されている（非特許文献１を参照）。アリムタは、投与前に再構成されなければならない凍結乾燥製剤の形態、すなわち、患者に投与する時、０．９％の塩化ナトリウム溶液で再構成し、最終的に０．９％の塩化ナトリウム溶液で希釈（０．２５ｍｇ／ｍｌの最終濃度）されなければならない凍結乾燥粉末（１００または５００ｍｇ）の形態の剤形で市販されている。
【０００６】
凍結乾燥粉末の形態の製剤は、製造過程が複雑であり、工程コストが多くかかる。また、凍結乾燥製剤の再構成の際、微生物による汚染の危険性があり、薬物の調製に関与する薬剤師、医師、看護師などが細胞破壊物質にさらされる可能性の高い製剤である。したがって、ペメトレキセドのような細胞毒性の抗がん剤の場合、凍結乾燥剤形よりは長期的に保管可能であるものの、即時使用可能な（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）液状製剤の開発が必要である。
【０００７】
多くの場合、液状製剤の問題は、保存期間中の不安定性である。このような不安定性により多数の注射剤が注射直前に溶解させて使用する凍結乾燥製剤の形態で使用される。凍結乾燥剤形で提供され始めたペメトレキセドまたはその薬理学的に許容される塩の場合にも、水溶液に製造すると、未知の類縁物質が増加し、常温で長期間保管することができないという安定性の問題を抱えている。このような安定性の問題により、現在、臨床で引き続き凍結乾燥の剤形で使用されているのが実情である。
【０００８】
前記の欠点を克服するために、いくつかの製剤が提案された。たとえば、特許文献３及び４では、有効治療量のペメトレキセド、有効量の抗酸化剤及び薬剤学上許容される賦形剤を含む安定したペメトレキセド溶液製剤としてモノチオグリセロール、Ｌ−システイン及びチオグリコール酸からなる群から選択された抗酸化剤を含むペメトレキセド液状製剤が報告されている。
【０００９】
しかし、前記特許の問題点として、２５℃での長期安定性試験を行う際に沈殿が生じるなどの問題点が発生することにより、所望の期間ほどには安定性を担保することができないという事実が報告されており（特許文献５）、現在まで長期保管に安定的なペメトレキセド液状製剤が実験的、若しくは商業的に実現されていない。実際、本発明者らが、前記言及された抗酸化剤であるＬ−システインを用いてペメトレキセドを含む液状製剤の製造後、安定性試験を行った結果、苛酷条件２週間の時点から変色などの性状の変化、類縁物質の増加、及びｐＨの低下などの問題が生じることを確認することができた。本発明者らは、また、アスコルビン酸、チオ硫酸ナトリウム、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、ＥＤＴＡ、Ｌ−メチオニン、アセチルシステインなど６０種余りの安定化剤を用いてペメトレキセド含有液状製剤を製造したが、これらはいずれも安定性において不適合であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】米国特許第５，３４４，９３２号明細書
【特許文献２】欧州特許出願公開第０４３３４２６号明細書
【特許文献３】米国特許第６，６８６，３６５号明細書
【特許文献４】韓国公開特許第２００２−００８１２９３号公報
【特許文献５】国際公開第ＷＯ２０１２／０１５８１０号
【特許文献６】韓国登録特許第１０−０７７４３６６号公報
【特許文献７】韓国公開特許第１０−２００７−００２８３３１号公報
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、６０ｔｈ  ｅｄ．，ｐｐ．１７２２−１７２８（２００６）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明者らは、ペメトレキセド液状製剤の安定性の問題を克服するために研究を重ねた結果、抗酸化剤としてのアセチルシステインと緩衝剤としてのクエン酸ナトリウムを共に使用する場合、類縁物質であるペメトレキセド異性体（ｉｓｏｍｅｒ）及び未知の類縁物質の発生を効果的に減少させるか、または排除することができ、沈殿が形成されていない澄んだ溶液の状態で保存期間中に高い安定性が維持されるペメトレキセド製剤を製造することができることを確認することにより本発明を完成した。また、本発明者らは、前記製剤を大量生産する場合、容器上部の空きスペース、すなわち、ヘッドスペース内の酸素量を制御することにより、製剤の安定性を担保できることを確認し、本発明を完成した。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の目的は、安定化したペメトレキセド製剤を提供することにある。
【発明の効果】
【００１４】
本発明は、商業的に製造が容易であり、凍結乾燥または再構成の際に伴う微生物の汚染を防止することができ、投薬の利便性及び安定性が強化されたペメトレキセド製剤を提供することができる。また、抗酸化剤としてアセチルシステインと緩衝剤としてクエン酸ナトリウムを共に含有することにより、従来のペメトレキセド含有注射用液状製剤に比較して変色または沈殿物の発生などの性状の異常がなく、基準に適合した安定化したペメトレキセド製剤を提供することができる。また、本発明は、ヘッドスペース内の酸素量を、制御方式でヘッドスペース内で発生可能な酸化を防止することにより、より安定したペメトレキセド製剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】従来のペメトレキセド含有注射用液状製剤（比較例１、比較例１２、及び比較例１４）と本発明に係るペメトレキセド含有注射用液状製剤（実施例１１）の苛酷条件４週間の安定性（６０℃／８０％）の性状を比較したものである。この際、比較のために注射用水の性状も共に示した。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
前記課題を解決するために、本発明は、活性成分としてペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン及びクエン酸ナトリウムを含むペメトレキセド製剤を提供する。
【００１７】
本発明において、前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比は、１〜３０：０．１５〜２．０：１．０〜１５．０であってもよい。
【００１８】
好ましくは、前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比は、１〜３０：１．５：１．０〜１５．０であってもよい。
【００１９】
本発明において、前記製剤は、溶液状態で保存可能な液状製剤であってもよい。
本発明において、前記製剤は、即時使用できるように（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）密封された容器に入れられた注射用液状製剤であってもよい。
【００２０】
しかし、本発明の構成は、必ずしも注射用液状製剤に限定されず、当業者の常識または関連技術分野において通常適用される方法に応じて構成することができる他の液状製剤及び非液状製剤を含む。
【００２１】
また、本発明は、密封された容器に入れられた、活性成分としてペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩を含むペメトレキセド製剤であり、前記製剤は、前記容器内のヘッドスペース内の酸素量が３体積％以下であるペメトレキセド製剤を提供する。
【００２２】
本発明において、前記製剤は、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン及びクエン酸ナトリウムをさらに含むことが好ましい。
本発明において、前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比は、１〜３０：０．１５〜２．０：１．０〜１５．０であってもよい。
【００２３】
好ましくは、前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比は、１〜３０：１．５：１．０〜１５．０であってもよい。
【００２４】
本発明において、前記製剤は、溶液状態で保存可能な液状製剤であってもよい。
本発明において、前記製剤は、即時使用できるように（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）密封された容器に入れられた注射用液状製剤であってもよい。
【００２５】
本発明において、前記製剤は、前記容器内のヘッドスペース内の酸素を不活性ガスに置換して酸素量を３体積％以下に調節したものであってもよい。
本発明において、前記不活性ガスは、窒素またはアルゴンであってもよく、それに限定されるものではない。
【００２６】
以下で、本発明を詳しく説明する。
一般的に、製剤の安定化を目的として使用されている抗酸化剤としては、非常に多様な種類があり、その具体例としては、パラヒドロキシ安息香酸エステル誘導体（ｐａｒａｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｅｓｔｅｒ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）、アルコール（ａｌｃｏｈｏｌｓ）、フェノール誘導体（ｐｈｅｎｏｌ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ）、チメロサール（ｔｈｉｍｅｒｏｓａｌ）、無水酢酸（ａｃｅｔｉｃ  ａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、カルボン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）、ラウリル硫酸（ｌａｕｒｙｌ  ｓｕｌｆａｔｅ）、抗酸化剤（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ）、硫化化合物（ｓｕｌｆｉｄｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）、亜硫酸塩（ｓｕｌｆｉｔｅ）、シスチン（ｃｙｓｔｉｎｅ）、システイン（ｃｙｓｔｅｉｎ）、システアミン（ｃｙｓｔｅａｍｉｎｅ）、アミノ酸（ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ）、アスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ  ａｃｉｄ）などの有機酸（ｏｒｇａｎｉｃ  ａｃｉｄｓ）、レチノール（ｒｅｔｉｎｏｌ）、トコフェロール（ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）、ブチルヒドロキシアニソール（ｂｕｔｙｌａｔｅｄ  ｈｙｄｒｏｘｙａｎｉｓｏｌｅ）などがある。
【００２７】
また、特許文献６には、パクリタキセルの抗酸化剤としてＮ−アセチルアミノ酸が提示されており、特許文献７には、モノチオグリセロール、エチレンジアミン四酢酸がジクロフェナク組成物の抗酸化剤として開示されている。
【００２８】
本発明では、前記抗酸化剤を対象に注射剤形のペメトレキセド製剤の安定化実験を行った。その結果、前記のような一般的な抗酸化剤は、特に、注射剤形において主成分ではなく賦形剤（抗酸化剤）として使用される場合、１日の使用量に制限があり、抗酸化剤の単独では安定性が向上しないという問題があることを確認した。また、通常の注射剤に多数使用されるアスコルビン酸、乳酸などを使用した場合、これらの注射剤溶液が部分的に変色及び／または沈殿を引き起こすなどの酸不安定を示すことを確認した（実験例１及び実験例２）。
【００２９】
しかし、驚くべきことに、本発明の発明者らは、ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩を有効成分とする組成物にアセチルシステインとクエン酸ナトリウムを共に使用した場合、苛酷（６０℃／８０％）安定性の条件で４週間有効成分は実質的に変更されず、変色または沈殿物が発生せず、基準に適合した安定性を有することを見出した（実験例１及び実験例２）。アセチルシステインとクエン酸ナトリウムは、いずれも一般的に使用され、単価が安く商業性に優れた長所もある。
【００３０】
本発明のペメトレキセド製剤は、活性成分としてペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩を含む。本発明に係る前記ペメトレキセドは薬理学的に有効であるか、または体内における化学的または酵素的方法により薬理的に有効な薬物を含み、具体的には、前記ペメトレキセド薬物自体、その薬学的に許容される塩を使用してもよい。
【００３１】
本発明で使用される用語「ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）」とは、５−置換ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンの名称を有する化合物であり、具体的には、下記化学式（１）で表され、非小細胞肺がん、悪性胸膜中皮腫をはじめとする様々ながん種で抗がん効果を示す多重標的抗葉酸剤を意味する。
【００３２】
【化１】
2016518404.tif 000003
【００３３】
前記ペメトレキセドは、非小細胞肺がん、悪性胸膜中皮腫をはじめとする様々ながん種で葉酸代謝過程に関与する代謝物質の活性を抑制して抗がん効果を示す。
本発明で使用される用語「薬学的に許容される塩」とは、当該技術分野において通常の方法により製造された塩を意味し、このような製造方法は、当業者に公知となっている。具体的には、前記の薬学的に許容される塩は、薬理学的または生理学的に許容される下記無機酸と有機酸及び塩基から誘導された塩を含むが、それに限定されない。適切な酸の例としては、塩酸、臭素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などを含むことができる。適切な塩基から誘導された塩は、アルカリ金属、例えば、ナトリウム、またはカリウム、アルカリ土類金属、例えば、マグネシウムを含むことができ、それに限定されない。
【００３４】
本発明で使用される用語「アセチルシステイン」とは、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（Ｎ−Ａｃｅｔｙｌ−Ｌ−Ｃｙｓｔｅｉｎｅ、ＮＡＣ、Ｃ５Ｈ９ＮＯ３Ｓ、ＣＡＳ  ｎｕｍｂｅｒ  ６１６−９１−１）の名称を有する化合物であり、本発明のペメトレキセド製剤において抗酸化剤として使用される化合物を意味する。本発明では、「アセチルシステイン」と「Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン」が相互に混用される。
【００３５】
抗酸化剤としてアセチルシステインは、米国薬局方（ＵＳ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ  ３５−Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ  １０、ｐ２０６９を参照）に記述されている。アセチルシステインは、飲食物に含有されているアミノ酸であるＬ−システインの前駆体であり、システインは酸化されて不溶性物質に容易に変性するのに対し、アセチルシステインは安定しているので容易に変性せず、経口投与または静脈投与が可能な物質である。
【００３６】
本発明で使用される用語「クエン酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）」とは、クエン酸のナトリウム塩であり、本発明のペメトレキセド製剤において緩衝剤として使用される化合物を意味する。
【００３７】
本発明は、抗酸化剤としてアセチルシステインを、緩衝剤としてクエン酸ナトリウムを共に使用することにより、１℃〜３０℃の温度でペメトレキセドを薬学的に長期間安定的に保管することのできるペメトレキセド製剤を提供することができるという特徴がある。
【００３８】
本発明において、前記ペメトレキセド製剤は、ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩：Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン：クエン酸ナトリウムの濃度比が１〜３０：０．１５〜２．０：１．０〜１５．０である場合に好ましく、特に前記濃度比が１〜３０：１．５：１．０〜１５．０である場合にさらに好ましい。この時、それぞれの濃度の単位はｍｇ／ｍＬである。前記濃度比と相違するペメトレキセド製剤は、保存期間が経過するにつれて、類縁物質の生成が適合基準以上に増加することが分かった（実験例１）。
【００３９】
本発明において、前記ペメトレキセド製剤は、薬学的に許容可能な担体及びｐＨ調整剤を含むことができる。
本発明において、前記ペメトレキセド製剤は、好ましくは溶液状態で保存可能な液状製剤であってもよく、さらに好ましくは即時使用できるように（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）密封された容器に入れられた注射用液状製剤であってもよい。
【００４０】
本発明において、前記ペメトレキセド製剤が注射用液状製剤である場合、薬剤学的に許容可能な担体は、注射用水である。
本発明において、ペメトレキセド注射用液状製剤のｐＨは、好ましくは、約６．０〜８．０、さらに好ましくは約７．２〜７．８であってもよい。溶液のｐＨは、塩酸などの酸、または水酸化ナトリウムのような塩基を用いて調節することが可能である。
【００４１】
本発明のペメトレキセド製剤は、前記のようなアセチルシステイン、クエン酸ナトリウム以外に、他の添加剤を含まなくてもよいが、薬剤学的に許容可能な賦形剤をさらに含むことができる。薬剤学的に許容可能な賦形剤としては、ラクトース、デキストロース、シクロデキストリン及びその誘導体、スクロース、グリセロール、炭酸ナトリウムなど公知の添加剤を挙げることができ、好ましい賦形剤としては、塩化ナトリウム及びマンニトールなどが挙げられる。
【００４２】
また、本発明は、ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン及びクエン酸ナトリウムを混合するステップを含む、安定化したペメトレキセド製剤の製造方法を提供する。
【００４３】
本発明において、前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比は、１〜３０：０．１５〜２．０：１．０〜１５．０で混合することができる。
【００４４】
好ましくは、前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの濃度比は、１〜３０：１．５：１．０〜１５．０で混合することができる。
【００４５】
本発明の製剤を製造する際、低酸素条件を維持するために窒素またはアルゴンなどの不活性ガスを用いてパージした後、滅菌ろ過する。
また、本発明の安定化したペメトレキセド製剤は、この技術分野において知られている適切な容器に包装することができる。例えば、適切な容器は、ガラスバイアル、ガラスびん、カートリッジ、プレフィルドシリンジ及びこれに類似したものであってもよく、好ましくはガラスバイアルである。
【００４６】
本発明のペメトレキセド注射用液状製剤は、事前に洗浄滅菌した容器に入れて分配し、前記容器に適した栓の表面がペメトレキセド注射用液状製剤に不活性であるテフロン（登録商標）栓で密封する。このとき、必要な場合、前記注射用液状製剤及び栓との間の空間を不活性ガスで満たす。クリンパーを用いて栓を付着させた後、必要に応じて注射用液状製剤が充填されたバイアルは、加熱滅菌する。
【００４７】
また、本発明は、密封された容器に入れられた、活性成分としてペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩を含むペメトレキセド製剤であり、前記容器内のヘッドスペース内の酸素量を３ｖ／ｖ％以下に制御したペメトレキセド製剤を提供する。
【００４８】
本発明で使用される用語「ヘッドスペース（ｈｅａｄｓｐａｃｅ）」とは、密封された容器においてペメトレキセド製剤が充填されて残った上部空間を意味する。前記ヘッドスペースの体積は、使用される容器の内部体積全体、充電されるペメトレキセドの量に応じて変化しうる。
【００４９】
本発明において使用される用語「ヘッドスペース内の酸素量」とは、ヘッドスペース全体の体積のうち酸素が占める体積の割合（％）を意味する。したがって、酸素量の単位を表す％単位は体積（ｖ／ｖ）％を意味する。
【００５０】
本発明において、ヘッドスペース内の酸素量は３ｖ／ｖ％以下、すなわち０ｖ／ｖ％〜３ｖ／ｖ％であってもよく、具体的には、０．００１ｖ／ｖ％〜３ｖ／ｖ％であってもよい。一具現例において、ヘッドスペース内の酸素量は３ｖ／ｖ％であってもよい。
【００５１】
本発明において使用可能な容器は、前述の通りであり、好ましくはガラスバイアルである。
本発明において、前記製剤は、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン及びクエン酸ナトリウムをさらに含むことが好ましい。このとき、前記ペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、及びクエン酸ナトリウムの好ましい濃度比は、前述の通りである。
【００５２】
本発明において、前記製剤は、好ましくは溶液状態で保存可能な液状の製剤であってもよく、特に、即時使用できるように（ｒｅａｄｙ−ｔｏ−ｕｓｅ）密封された容器に入れられた注射用液状製剤であってもよい。
【００５３】
本発明において、前記容器におけるヘッドスペース内の酸素量の制御は、ヘッドスペース内の酸素を不活性ガスに置換することにより行うことができる。前記不活性ガスは、窒素またはアルゴンであってもよいが、これに限定されるものではない。
【００５４】
本発明では、密封された容器に入れられた、活性成分としてペメトレキセドまたはその薬学的に許容される塩を含むペメトレキセド製剤が、特に、大量工程の際、容器内のヘッドスペース中の酸素により類縁物質が生成される問題を最小限に抑えるために、ヘッドスペース内の酸素量を３ｖ／ｖ％以下に制御することにより、製剤の安定性をさらに向上させることができた（実験例１、表１０）。
【００５５】
本発明では、前記のように、ヘッドスペース内の酸素量を制御する方法、具体的には、酸素を窒素に置換する方法でヘッドスペース内で起こりうる酸化を防止することができる。本発明によれば、現在広く利用されている自動化システムを用いて安価で安定化されたペメトレキセド含有注射剤を商業レベルにスケールアップして大量生産することができる。
【実施例】
【００５６】
以下、実施例により本発明の構成及び効果をさらに詳しく説明する。これらの実施例は、単に本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらの実施例により制限されるものではない。
【００５７】
実施例１〜１４：抗酸化剤としてアセチルシステイン、緩衝剤としてクエン酸ナトリウムをそれぞれ異なる含量で含むペメトレキセド含有注射溶液の製造
注射用水１００ｍｌにＤ−マンニトール２．５ｇを溶解させた後、下記表１の濃度でアセチルシステインとクエン酸ナトリウムを順次加えて完全に溶解させた。これに、ペメトレキセド２．５ｇを徐々に添加し（実施例１４は、ペメトレキセド３．０ｇを徐々に添加する）、溶液が透明になるまで攪拌した後、塩酸または水酸化ナトリウム水溶液を用いて下記表１のｐＨに合わせた。この溶液を無菌室で滅菌された０．２２μｍのろ過器で無菌ろ過した。得られた溶液を洗浄、滅菌された密封可能な容器に窒素を用いてパージした後、充填した。
【００５８】
得られたペメトレキセド含有注射溶液の成分及びｐＨは、下記表１に示される通りである。
【００５９】
【表１】
2016518404.tif 000004
【００６０】
実施例１５〜１６：ｐＨの変化に応じた本発明のペメトレキセド含有注射溶液の製造
注射用水１００ｍｌにＤ−マンニトール２．５ｇを溶解させた後、表２の濃度でアセチルシステインとクエン酸ナトリウムを順次加えて完全に溶解させた。これにペメトレキセド２．５ｇを徐々に添加し、溶液が透明になるまで攪拌した後、塩酸または水酸化ナトリウム水溶液を用いて下記表２のｐＨに合わせた。この溶液を無菌室で滅菌された０．２２μｍのろ過器（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｆｉｌｔｅｒ）で無菌ろ過した。得られた溶液を洗浄、滅菌された密封可能な容器に窒素を用いてパージした後、充填した。
【００６１】
得られたペメトレキセド含有注射溶液の成分及びｐＨは、下記表２に示す通りである。
【００６２】
【表２】
2016518404.tif 000005
【００６３】
実施例１７〜２０：ヘッドスペース内の酸素量に応じたペメトレキセド含有注射溶液の製造
注射用水１００ｍｌにＤ−マンニトール２．５ｇを溶解させた後、下記表３の濃度でアセチルシステインとクエン酸ナトリウムを順次加えて完全に溶解させた。これにペメトレキセド２．５ｇを徐々に添加し、溶液が透明になるまで攪拌した後、塩酸または水酸化ナトリウム水溶液を用いて下記表３のｐＨに合わせた。
【００６４】
この溶液を無菌室で滅菌された０．２２μｍのろ過器で無菌ろ過した。得られた溶液を洗浄、滅菌された密封可能な容器に窒素を用いて表３のヘッドスペースの酸素量になるようにパージした後、充填した。
【００６５】
得られたペメトレキセド含有注射溶液の成分及びヘッドスペース酸素量は下記表３に示す通りである。
【００６６】
【表３】
2016518404.tif 000006
【００６７】
比較例１〜８：抗酸化剤の種類に応じたペメトレキセド注射溶液の製造
下記の表４の組成及び含量で、実施例１と同様の方法でペメトレキセド含有溶液を製造した。比較例１は、抗酸化剤を加えずにメインの注射用水のみを担体として含有した溶液とした。
【００６８】
【表４】
2016518404.tif 000007
【００６９】
比較例９〜１４：抗酸化剤の種類及び緩衝剤添加の有無によるペメトレキセド注射溶液の製造
下記の表５の組成及び含量で、実施例１と同様の方法でペメトレキセド含有溶液を製造した。
【００７０】
【表５】
2016518404.tif 000008
【００７１】
比較例１５〜１７：緩衝剤の種類に応じたペメトレキセド注射溶液の製造
下記表６の組成及び含量で、実施例１と同様の方法でペメトレキセド含有溶液を製造した。
【００７２】
【表６】
2016518404.tif 000009
【００７３】
実験例：安定性試験
前記実施例１〜２０と、比較例１〜１７で製造した組成物に対し、苛酷条件（６０℃／８０％）で４週間安定性試験を行った。このうち実施例１１及び比較例１、１２、１４に対しては、加速条件（４０℃／７０％）でも４か月間の安定性試験を行った。安定性の評価は、水溶液中に残存するペメトレキセドの含量及び類縁物質の含量を高速液体クロマトグラフ法を用いて下記表７に記載された条件下において測定することにより行った。
【００７４】
【表７】
2016518404.tif 000010
【００７５】
実験例１：苛酷安定性試験（６０℃／８０％、４週の安定性の評価）
前記のように、苛酷安定性試験の結果を下記表８〜１３に示した。
また、前記で製造したペメトレキセド含有注射用液状製剤のうち、本発明に係るペメトレキセド含有注射用液状製剤として実施例１１の製剤と、従来のペメトレキセド含有注射液状製剤として比較例１、比較例１２、及び比較例１４の製剤の苛酷条件４週間の安定性（６０℃／８０％）の性状を比較した様子を、図１に示した。ここで、比較のために注射用水の性状も共に示した。
【００７６】
【表８】
2016518404.tif 000011
2016518404.tif 000012
2016518404.tif 000013
【００７７】
前記表８の結果から確認できるように、抗酸化剤として１．５ｍｇ／ｍＬのアセチルシステインと緩衝剤として１〜１５ｍｇ／ｍＬのクエン酸ナトリウムを共に含む場合は、苛酷条件４週間の安定性試験の期間中に、個々の類縁物質が０．２％以下、総類縁物質が１．０％以下と、優れた安定性を示した（実施例９〜１２）。
【００７８】
また、アセチルシステインの濃度が１．０〜１．５ｍｇ／ｍＬであるとき、クエン酸ナトリウムの濃度が２．０ｍｇ／ｍＬである場合、個々の類縁物質が０．２％以下、総類縁物質が１．０％以下で、優れた安定性を示したが（実施例８及び１０）、アセチルシステインの濃度がこれより低くなると、類縁物質は、基準に適合するものの、性状の変化（変色）が生じることを確認することができた（実施例１〜２）。
【００７９】
また、アセチルシステインの濃度が２．０ｍｇ／ｍＬ、クエン酸ナトリウムの濃度が５．０ｍｇ／ｍＬである場合、類縁物質は基準に適合するものの、性状の変化（変色）が発生することを確認することができた（実施例１３）。
【００８０】
また、アセチルシステインの濃度が０．５ｍｇ／ｍＬ、クエン酸ナトリウムの濃度が１．０〜５．０ｍｇ／ｍＬである場合、類縁物質は基準に適合するものの、性状の変化（変色）が発生することを確認することができた（実施例３〜７）。
【００８１】
【表９】
2016518404.tif 000014
【００８２】
前記表９の結果から確認できるように、抗酸化剤としてアセチルシステインと緩衝剤としてクエン酸ナトリウムを共に含む場合、ｐＨの変化にもかかわらず、苛酷条件４週間安定性試験の期間中に、個々の類縁物質が０．２％以下、総類縁物質が１．０％以下と、優れた安定性を示した。
【００８３】
【表１０】
2016518404.tif 000015
【００８４】
前記製剤を商業化のために大量生産した場合、類縁物質の主生成原因である酸素の接触の機会が多くなることがある。これを防止するために、工程上、酸素の残留量を制御することにより製剤の安定性を担保することができた。
【００８５】
前記表１０の結果から確認できるように、抗酸化剤としてアセチルシステインを、緩衝剤としてクエン酸ナトリウムを共に含む場合は、ヘッドスペースの酸素量を通常の製造レベル（実施例１１）よりヘッドスペースの酸素量を制御したとき、総類縁物質が減少し、安定性の面で優れることを示した（実施例１７〜１８）。特に、ヘッドスペース内の酸素量が３ｖ／ｖ％以下に制御された場合、苛酷条件４週間安定性試験の期間中に、個々の類縁物質が０．２％以下、総類縁物質が１．０％以下と、優れた安定性を示した（実施例１７）。
【００８６】
抗酸化剤を添加していない場合であっても、ヘッドスペース内の酸素量を制御していない場合（比較例１）よりヘッドスペース内の酸素量を３ｖ／ｖ％以下に管理することにより、苛酷条件２週間まで安定性が確保されることを確認した（実施例１９）。これにより、ヘッドスペース内の酸素量を制御することが製剤安定性の改善に寄与することが分かったが、抗酸化剤及び緩衝剤を添加した場合（実施例１７及び１８）に、さらに完全な安定性が確保された。
【００８７】
【表１１】
2016518404.tif 000016
【００８８】
前記表１１の結果から確認できるように、従来の一般に用いられる抗酸化剤を含む場合、苛酷条件での安定性試験期間中に沈殿や変色などの性状変化や個々の類縁物質が０．２％以上、総類縁物質が１．０％以上増加することが観察された。これにより、一般に用いられる抗酸化剤を使用してペメトレキセドを含む注射溶液を製造した場合、類縁物質や性状の変化などの面で安定性が不適合を示すことが分かった。
【００８９】
前記表１１の結果から確認できるように、一般に用いられる従来の抗酸化剤を含む場合、苛酷条件での安定性試験期間中に沈殿や変色などの性状変化や個々の類縁物質が０．２％以上、総類縁物質が１．０％以上増加することが観察された。これにより、一般に用いられる抗酸化剤を使用してペメトレキセドを含む注射溶液を製造した場合、類縁物質や性状の変化などの面で安定性が不適合を示すことが分かった。
【００９０】
【表１２】
2016518404.tif 000017
2016518404.tif 000018
【００９１】
前記表１２の結果から確認できるように、抗酸化剤としてアセチルシステインを、緩衝剤としてクエン酸ナトリウムを共に含む場合、好ましくは、アセチルシステインの濃度が１．５ｍｇ／ｍＬであり、クエン酸ナトリウムの濃度が５．０ｍｇ／ｍＬである場合、苛酷条件４週間安定性試験の期間中に、個々の類縁物質が０．２％以下、総類縁物質が１．０％以下で、優れた安定性を示すことが分かった（実施例１１）。
【００９２】
一方、緩衝剤であるクエン酸ナトリウムのみを含む場合、苛酷条件２週間から溶液の色が濃黄色に変化することを顕著に観察することができた（比較例９及び１０）。また、抗酸化剤であるＬ−システインとアセチルシステインのみを含む場合でも、苛酷条件２週間目から溶液の色が微黄色に変わることをはっきりと観察することができ、苛酷条件４週間の期間中にｐＨが顕著に低くなることが観察された（比較例１１、及び比較例１２〜１４）。即ち、アセチルシステイン、またはクエン酸ナトリウムのみの単独使用とは異なり、両者を結合使用することにより、類縁物質の安定性が顕著に改善されることが分かった。
【００９３】
また、Ｌ−システインのみを含む比較例１３及び１４の場合、苛酷条件２週間目から卵が腐ったような臭いの異臭感が発生したが、本発明に係る構成では、このような異臭感が発生しないという改善も確認された。
【００９４】
【表１３】
2016518404.tif 000019
【００９５】
前記表１３の結果から確認できるように、抗酸化剤としてアセチルシステインを含み、緩衝剤として一般に用いられるいくつかの緩衝剤を使用した場合の安定性の結果を比較して見たとき、クエン酸ナトリウムを除いた残りの緩衝剤を使用した場合、初期から性状の変化（変色）や、個々の類縁物質が０．２％以上、総類縁物質が１．０％以上増加することを観察することができた。
【００９６】
したがって、ペメトレキセドを含む注射溶液を製造する場合、抗酸化剤としてアセチルシステインと緩衝剤としてクエン酸ナトリウムを共に使用した場合のみが最も優れた安定性の結果を示すことが分かった。
【００９７】
実験例２：加速安定性試験（４０℃／７０％、４か月の安定性の評価）
前記のように、加速安定性試験を行った結果を下記表１４に示した。
【００９８】
【表１４】
2016518404.tif 000020
【００９９】
前記表１４の結果から確認できるように、抗酸化剤を加えずに注射用水のみを担体として使用して製造した比較例１の場合、加速条件２か月目から溶液の性状が黄色に変わり、４か月目には類縁物質が、個々の類縁物質０．２％以上、総類縁物質１％以上で不適合であることが分かった。しかし、抗酸化剤としてアセチルシステインを、緩衝剤としてクエン酸ナトリウムを共に含む実施例１１の場合、加速条件６か月の安定性試験の期間中に、個々の類縁物質が０．２％以下、総類縁物質が１．０％以下で、優れた安定性を示した。
【０１００】
一方、抗酸化剤であるアセチルシステインのみを含む場合でも、加速条件４か月目から溶液の色が黄色に変化したり、個々の類縁物質が０．２％以上と不適合であることが分かった（比較例１２）。
【０１０１】
また、Ｌ−システインのみを含む比較例１４の場合、類縁物質は基準に適合したが、苛酷安定性の結果と同様に、加速条件４か月目から卵が腐ったような臭いの異臭感が発生したが、本発明に係る構成、すなわち、実施例１１では、このような異臭感が発生しなかった。
【図１】
2016518404.tif 000021
【手続補正書】
【提出日】平成27年11月6日(2015.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
【表２】
2016518404.tif 000022
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
【表３】
2016518404.tif 000023
【国際調査報告】
2016518404.tif 000024
2016518404.tif 000025
2016518404.tif 000026
2016518404.tif 000027
2016518404.tif 000028
2016518404.tif 000029