(57)【要約】  本明細書に提供されるのは、例えば、基底細胞癌を含むヘッジホッグ関連疾患を治療するための、抗ＬＧＲ５抗体を使用する方法である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＬＧＲ５抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体においてヘッジホッグ関連疾患を治療する方法。
【請求項２】
抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、個体においてヘッジホッグ関連疾患を治療する方法。
【請求項３】
抗ＬＧＲ５抗体及びヘッジホッグ経路の阻害剤の各量が、ヘッジホッグ経路の阻害剤単独を用いた治療と比較して、治療に対する応答の時間を増加させ、及び／又は、再発及び／又は耐性の発症を遅延させるために有効である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
個体におけるヘッジホッグ経路の阻害剤を含む、ヘッジホッグ関連疾患の治療の有効性を増加させる方法であって、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、方法。
【請求項５】
個体においてヘッジホッグ関連疾患を治療する方法であって、治療が個体に抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を投与することを含み、かつ、治療が抗ＬＧＲ５抗体を含まずに（非存在下で）、ヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を投与することを含む標準的治療と比較して増加した有効性を有する、方法。
【請求項６】
抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、個体におけるヘッジホッグ関連疾患の再発及び／又はヘッジホッグ経路の阻害剤に対する耐性の発症を遅延させ、及び／又は予防する方法。
【請求項７】
抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、ヘッジホッグ関連疾患を有する個体において、ヘッジホッグ経路の阻害剤に対する感受性を増加させる方法。
【請求項８】
抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、ヘッジホッグ関連疾患を有する個体において、ヘッジホッグ経路の阻害剤に対する感受性の期間を延長する方法。
【請求項９】
抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、ヘッジホッグ関連疾患を有する個体において、ヘッジホッグ経路の阻害剤に対する反応持続期間を延長する方法。
【請求項１０】
抗ＬＧＲ５抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
抗ＬＧＲ５抗体が、配列番号６７のアミノ酸２２−３２３の中又は配列番号６７のアミノ酸２２−１２３の中のエピトープに結合し、≦５ｎＭの親和性でＬＧＲ５に結合する、請求項１から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
抗ＬＧＲ５抗体が、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である、請求項１から１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
抗ＬＧＲ５抗体が、配列番号６７のヒトＬＧＲ５に結合する抗体断片である、請求項１から１２の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
抗ＬＧＲ５抗体が、
ａ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；並びに
ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、請求項１から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
抗ＬＧＲ５抗体が、
ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；並びに
ｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む、請求項１から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１６】
抗ＬＧＲ５抗体が、
ａ）配列番号６のＶＨ配列及び配列番号５のＶＬ配列；
ｂ）配列番号８のＶＨ配列及び配列番号７のＶＬ配列；
ｃ）配列番号１０のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；
ｄ）配列番号１２のＶＨ配列及び配列番号１１のＶＬ配列；
ｅ）配列番号１４のＶＨ配列及び配列番号１３のＶＬ配列；
ｆ）配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号１５のＶＬ配列；
ｇ）配列番号１８のＶＨ配列及び配列番号１７のＶＬ配列；
ｈ）配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列；又は
ｉ）配列番号２６のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列
を含む、請求項１から１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１７】
抗ＬＧＲ５抗体が、細胞傷害性薬物にコンジュゲートしている、請求項１から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
抗ＬＧＲ５抗体が、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、
（ａ）Ａｂは抗ＬＧＲ５抗体であり；
（ｂ）Ｌはリンカーであり；
（ｃ）Ｄはマイタンシノイド、オーリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、及びネモルビシン誘導体から選択される薬物であり、
（ｄ）ｐは１−８の範囲に及ぶ
請求項１から１７の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
Ｄがオーリスタチンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｄが式ＤＥ
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を有し、
式中、Ｒ２及びＲ６は各々メチルであり、Ｒ３及びＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ５はＨ、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８は、ＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ及びＨから独立に選択され；Ｒ９はＨであり；かつＲ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
薬物がＭＭＡＥである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
Ｄが式Ａ：
2016537399.tif 000061
のピロロベンゾジアゼピンであり、
式中、点線は、Ｃ１とＣ２の間又はＣ２とＣ３の間の二重結合の任意選択的な存在を示し；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから独立に選択され、任意選択的にハロ又はジハロから更に選択されてもよく、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ及びハロから独立に選択され；
Ｒ６及びＲ９は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立に選択され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立に選択され；
Ｑは、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立に選択され；
Ｒ１１は、Ｈ又はＲの何れかであり、又は、ＱがＯの場合は、ＳＯ３Ｍであり、ここでＭは金属カチオンであり；
Ｒ及びＲ’は、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル及びＣ５−２０アリール基からそれぞれ独立に選択され、及び任意選択的に、ＮＲＲ’基に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と共に、置換されていてもよい４、５、６又は７員のヘテロ環を形成し；
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７について定義される通りであり；
Ｒ”は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１つ又は複数のヘテロ原子及び／又は置換されていてもよい芳香族環によって離断されてもよく；
Ｘ及びＸ’は、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立に選択される、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
Ｄが構造：
2016537399.tif 000062
を有し、
式中、ｎは０又は１である、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
Ｄが、
2016537399.tif 000063
から選択される構造を有し、
式中、ＲＥ及びＲＥ”は、Ｈ又はＲＤから各々独立に選択され、ここで、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから独立に選択され；
式中、Ａｒ１及びＡｒ２は、各々独立に置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり；
式中、ｎは０又は１である、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
Ｄが式Ｂ：
2016537399.tif 000064
のピロロベンゾジアゼピンであり、
式中、水平波線はリンカーへの共有結合部位を示し；
ＲＶ１及びＲＶ２は、Ｈ、メチル、エチル、フェニル、フルオロ−置換フェニル、及びＣ５−６ヘテロシクリルから独立して選択され；
ｎは０又は１である、
請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
Ｄがネモルビシン誘導体である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
Ｄが、
2016537399.tif 000065
から選択される構造を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
リンカーが、プロテアーゼにより切断可能である、請求項１８から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項２９】
リンカーが、ｖａｌ−ｃｉｔジペプチド又はＰｈｅ−Ｌｙｓジペプチドを含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
リンカーが、酸に不安定である、請求項１８から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項３１】
リンカーが、ヒドラゾンを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
式：
2016537399.tif 000066
式中、Ｓは硫黄原子である、
を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３３】
式：
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を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３４】
2016537399.tif 000068
2016537399.tif 000069
から選択される式を有する、請求項１８に記載の方法。
【請求項３５】
ｐが２−５の範囲に及ぶ、請求項１８から３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
ヘッジホッグ経路の阻害剤が、スムーズンド受容体のアンタゴニストである、請求項１から３５の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
スムーズンド受容体のアンタゴニストが、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミド又はその塩である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
スムーズンド受容体のアンタゴニストが、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミドである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
スムーズンド受容体のアンタゴニストが、ビスモデギブである、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
ヘッジホッグ関連疾患が、がんである、請求項１から３９の何れか一項に記載の方法。
【請求項４１】
がんが基底細胞癌である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
基底細胞癌が、局所進行性又は転移性基底細胞癌である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
がんが髄芽腫である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
ヘッジホッグ関連疾患が、ＬＧＲ５陽性である、請求項４０から４３の何れか一項に記載の方法。
【請求項４５】
ヘッジホッグ経路の阻害剤が、抗ＬＧＲ５抗体と併用して投与される、請求項１から４４の何れか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ヘッジホッグ経路の阻害剤が、抗ＬＧＲ５抗体と別個に、逐次的に、又は同時に投与される、請求項１から４４の何れか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この特許出願は、内容が本明細書にその全体が参考として援用される２０１３年９月１７日出願された仮米国特許出願第６１／８７９０８９号に対して３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９の元での利益を主張する。
【０００２】
配列表
本出願は、ＥＦＳ−Ｗｅｂ経由で提出された配列表を含み、その全体が本明細書中で参照することにより援用される。２０１４年９月３日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ５７０６Ｒ１−ＷＯ＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと命名され、大きさは５１３９１バイトである。
【０００３】
本明細書に提供されるのは、例えば、ヘッジホッグ関連疾患を治療するための、抗ＬＧＲ５抗体を使用する方法である。
【背景技術】
【０００４】
癌生物学において出現するテーマの一つは、継続的な腫瘍増殖のための特定のシグナル伝達経路への癌サブタイプの依存性である。例えば、ヘッジホッグ（Ｈｈ）シグナル伝達経路を活性化する変異は、ヒトの全ての癌死のうち最大で２５％を占める膵臓癌、前立腺癌、及び小細胞肺癌とともに基底細胞癌（ＢＣＣが）及び髄芽腫を含む種々の癌の増殖を駆動する（Epstein, Nat. Rev. Cancer 8:743-754 (2008)）。ＢＣＣは、世界で最も高頻度に見られる癌であり、全米国市民の半数近くが退職する前にこの癌を発症する可能性がある（ＮＣＩ ２０１０）。Ｈｈ経路の構成要素及びそれらの機能的役割を同定する２０年にわたる広範な研究は、最近、局所進行型又は転移性ＢＣＣの治療のためのＦＤＡ承認Ｈｈ経路アンタゴニスト・ビスモデギブに最近至った。ビスモデギブは有効であるが、全ての腫瘍細胞がこの薬物に感受性ではなく、更なる耐性が発生する可能性がある。
【０００５】
ヒトＬＧＲ５は、９０７アミノ酸のタンパク質であり、そのうち〜５４０アミノ酸が、アミノ末端シグナル配列の切断後に細胞外空間にあると予測される。ＬＧＲ５は、外部ドメインに１７の不完全なロイシンリッチリピートモチーフ、及びロイシンリッチリピートと第一膜貫通ドメインとの間に位置するシステインに富む領域を含む。
【０００６】
概要
本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体を使用する方法である。例えば、本明細書に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体においてヘッジホッグ関連疾患を治療する方法である。例えば、本明細書に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体において基底細胞癌を治療する方法である。
【０００７】
また本明細書に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、個体においてヘッジホッグ関連疾患を治療する方法である。例えば、抗ＬＧＲ５抗体及びヘッジホッグ経路の阻害剤の各量は、ヘッジホッグ経路の阻害剤単独を用いた治療と比較して、治療に対する応答の時間を増加させ、及び／又は、再発及び／又は耐性の発症を遅延させるために有効である。
【０００８】
本明細書中に提供されるのは、個体におけるヘッジホッグ経路の阻害剤を含む、ヘッジホッグ関連疾患の治療の有効性を増加させる方法であり、該方法は、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む。
【０００９】
本明細書に更に提供されるのは、個体においてヘッジホッグ関連疾患を治療する方法であり、ここで治療は個体に抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を投与することを含み、かつ治療は、抗ＬＧＲ５抗体を含まずに（非存在下で）、ヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を投与することを含む標準的治療と比較して増加した有効性を有する。
【００１０】
また本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、個体におけるヘッジホッグ関連疾患の再発及び／又はヘッジホッグ経路の阻害剤に対する耐性の発症を遅延させ、及び／又は予防する方法である。また本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、ヘッジホッグ関連疾患を有する個体において、ヘッジホッグ経路の阻害剤に対する感受性の期間を延長する方法である。本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、ヘッジホッグ関連疾患を有する個体において、ヘッジホッグ経路の阻害剤に対する反応持続期間を延長する方法である。
【００１１】
本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、ヘッジホッグ関連疾患を有する個体において、ヘッジホッグ経路の阻害剤に対する感受性を増加させる方法である。
【００１２】
方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、配列番号６７のアミノ酸２２−３２３の中又は配列番号６７のアミノ酸２２−１２３の中のエピトープに結合し、≦５ｎＭの親和性でＬＧＲ５に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、モノクローナル抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ヒト、ヒト化、又はキメラ抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、配列番号６７のヒトＬＧＲ５に結合する抗体断片である。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ｗｎｔ経路シグナル伝達を有意には阻害しない。
【００１３】
方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ａ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；並びにｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１４】
方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；並びにｂ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１５】
方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ａ）配列番号６のＶＨ配列及び配列番号５のＶＬ配列；ｂ）配列番号８のＶＨ配列及び配列番号７のＶＬ配列；ｃ）配列番号１０のＶＨ配列及び配列番号９のＶＬ配列；ｄ）配列番号１２のＶＨ配列及び配列番号１１のＶＬ配列；ｅ）配列番号１４のＶＨ配列及び配列番号１３のＶＬ配列；ｆ）配列番号１６のＶＨ配列及び配列番号１５のＶＬ配列；ｇ）配列番号１８のＶＨ配列及び配列番号１７のＶＬ配列；ｈ）配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列；又はｉ）配列番号２６のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む。
【００１６】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、細胞傷害性剤にコンジュゲートしている。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、（ａ）Ａｂは抗ＬＧＲ５抗体であり；（ｂ）Ｌはリンカーであり；（ｃ）Ｄはマイタンシノイド、オーリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、及びネモルビシン誘導体から選択される薬物であり、（ｄ）ｐは１−８の範囲に及ぶ。
【００１７】
幾つかの実施態様において、Ｄはオーリスタチンである。幾つかの実施態様において、Ｄは式ＤＥ
2016537399.tif 000003
を有し
式中、Ｒ２及びＲ６は各々メチルであり、Ｒ３及びＲ４は各々イソプロピルであり、Ｒ５はＨ、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８はＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ及びＨから独立に選択され；Ｒ９はＨであり；かつＲ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである。幾つかの実施態様において、薬物はＭＭＡＥである。幾つかの実施態様において、Ｄは、式Ａ：
2016537399.tif 000004
のピロロベンゾジアゼピンであり：
式中、点線は、Ｃ１とＣ２の間又はＣ２とＣ３の間の二重結合の任意選択的な存在を示し、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから独立に選択され、任意選択的にハロ又はジハロから更に選択されてもよく、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ及びハロから独立に選択され、Ｒ６及びＲ９は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立に選択され、Ｒ７は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立に選択され、Ｑは、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立に選択され、Ｒ１１は、Ｈ又はＲの何れかであり、又は、ＱがＯの場合は、ＳＯ３Ｍであり、ここでＭは金属カチオンであり、Ｒ及びＲ’は、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル及びＣ５−２０アリール基からそれぞれ独立に選択され、及び任意選択的に、ＮＲＲ’基に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と共に、置換されていてもよい４、５、６又は７員のヘテロ環を形成し、Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７について定義される通りであり、Ｒ”は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１つ又は複数のヘテロ原子及び／又は置換されていてもよい芳香族環によって離断されてもよく、Ｘ及びＸ’は、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立に選択される。幾つかの実施態様において、Ｄは構造：
2016537399.tif 000005
を有し
式中、ｎは０又は１である。幾つかの実施態様において、Ｄは、
2016537399.tif 000006
から選択される構造を有し、
式中、ＲＥ及びＲＥ”は、Ｈ又はＲＤから各々独立に選択され、ここで、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから独立に選択され；式中、Ａｒ１及びＡｒ２は、各々独立に置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり；式中、ｎは０又は１である。幾つかの実施態様において、Ｄは、式Ｂ：
2016537399.tif 000007
のピロロベンゾジアゼピンであり、
式中、水平波線はリンカーへの共有結合部位を示し；
ＲＶ１及びＲＶ２は、Ｈ、メチル、エチル、フェニル、フルオロ−置換フェニル、及びＣ５−６ヘテロシクリルから独立して選択され；ｎは０又は１である。幾つかの実施態様において、Ｄはネモルビシン誘導体である。幾つかの実施態様において、Ｄは、
2016537399.tif 000008
から選択される構造を有する。
【００１８】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、リンカーは、プロテアーゼにより切断可能である。幾つかの実施態様において、リンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔジペプチド又はＰｈｅ−Ｌｙｓジペプチドを含む。何れかの方法の幾つかの実施態様において、リンカーは、酸に不安定である。幾つかの実施態様において、リンカーは、ヒドラゾンを含む。
【００１９】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、式：
2016537399.tif 000009
式中、Ｓは硫黄原子である、
を有する。
【００２０】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、式：
2016537399.tif 000010
を有する。
【００２１】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、
2016537399.tif 000011
2016537399.tif 000012
からなる群から選択される式を有する。
【００２２】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、ｐは２−５の範囲に及ぶ。
【００２３】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、スムーズンドのアンタゴニストである。何れかの方法の幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、スムーズンドのシクロパミン−競合的アンタゴニストである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミド又はその塩である。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミドである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、ビスモデギブである。
【００２４】
任意の方法の幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患はがんである。幾つかの実施態様において、がんは基底細胞癌である。幾つかの実施態様において、基底細胞癌は、局所進行性又は転移性基底細胞癌である。幾つかの実施態様において、がんは髄芽腫である。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患はＬＧＲ５陽性である。
【００２５】
何れかの方法の幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、抗ＬＧＲ５抗体と併用して投与される。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、抗ＬＧＲ５抗体と別個に、逐次的に、又は同時に投与される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
本特許又は出願ファイルは、カラーで作成された少なくとも一の図面が含まれる。カラー図面（複数）を含む本特許又は特許出願公報のコピーは、請求及び必要な料金の支払いに応じて特許庁により提供されるであろう。
【図１】図１は、対照マウス（Ａ−Ｂ）と比較した、Ｋ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌマウス（Ｃ−Ｄ）で観察された広範な基底細胞癌を示す。
【図２】図２は、未治療対照Ｋ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌマウス（Ａ）と比較した、ＧＤＣ−０４４９（ビスモデギブ）による治療を受けたＫ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌマウス（Ｂ）における広範な腫瘍退縮を示す。（Ｃ−Ｄ）に示されるように、５６日間、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０４４９を１日２回経口による処置後の動物Ｋ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌマウスにおいて、残存病変がなお観察される。
【図３】図３は、（Ａ）未処置のＫ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌマウスにおけるＬｇｒ５の発現、及び（Ｂ）２８日間、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０４４９を１日２回経口による処置後のＫ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌマウスにおけるＬｇｒ５の発現を示す。（Ｃ−Ｄ）は、対照（５ｄ生理食塩水）（Ｃ）及びＤＴ処置型（５ｄ）（Ｄ）において、Ｋ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌ；Ｌｇｒ５ＤＴＲ．ＥＧＦＰマウスにおけるＤＴＲ媒介切除の効果を示す。ＤＡＰＩは青で、ＧＦＰは緑で、アポトーシスマーカー、ＣＣ３は、赤で示されている。
【図４】図４（Ａ−Ｂ）は、３８日間、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０４４９を１日２回経口による処置後のＫ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌ；Ｌｇｒ５ＤＴＲ．ＥＧＦＰマウスにおける腫瘍退縮を示す。（Ｃ−Ｆ）は、２８日間、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０４４９を１日２回経口による処置、その後８日間、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０４４９を１日２回経口＋ＤＴによる処置後のＫ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌ；Ｌｇｒ５ＤＴＲ．ＥＧＦＰマウスにおける増強された腫瘍退縮を示す。（Ｇ−Ｈ）は、２８日間、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０４４９を１日２回経口による処置、その後８日間、７５ｍｇ／ｋｇのＧＤＣ−０４４９を１日２回経口＋ＤＴによる処置は、Ｋ１４−ＣｒｅＥＲ；Ｐｔｃｈ１ｆｌ／ｆｌ；ｐ５３ｆｌ／ｆｌ；Ｌｇｒ５ＤＴＲ．ＥＧＦＰにおいて、残存する表在性基底細胞癌を有意に減少／除去することを示す。ＤＡＰＩ ＤＮＡ染色は青色である。（Ｇ）ケラチン５染色は赤である。（Ｈ）アポトーシスマーカー、ＣＣ３は、赤色である。
【００２７】
詳細な説明
定義
本明細書で用いられる用語「ヘッジホッグ」は、ソニック（ｓｏｎｉｃ）、インディアン（ｉｎｄｉａｎ）、デザート（ｄｅｓｅｒｔ）、及びｔｉｇｇｙ ｗｉｎｋｌｅを含むヘッジホッグファミリーの任意のメンバーを指す。この用語は、タンパク質又は遺伝子を示すために使用され得る。この用語はまた、異なる動物種におけるホモログ／オルソログ配列を記載するために使用される。
【００２８】
本明細書で用いる用語「ヘッジホッグ（Ｈｈ）シグナル伝達経路」及び「ヘッジホッグ（Ｈｈ）シグナル伝達」は、交換可能に使用され、ヘッジホッグ、パッチト（Ｐｔｃｈ）、スムーズンド（Ｓｍｏ）及びＧｌｉなどのシグナル伝達カスケードの種々のメンバーによって通常媒介される事象の連鎖を指す。ヘッジホッグ経路は、ヘッジホッグタンパク質の非存在下においてさえも、下流成分を活性化することによって活性化することができる。ほんの一例として、Ｓｍｏの過剰発現はヘッジホッグの非存在下で経路を活性化する。Ｈｈシグナル伝達成分又はＨｈシグナル伝達経路のメンバーは、Ｈｈシグナル伝達経路に関与する遺伝子産物を指す。Ｈｈシグナル伝達成分は、しばしば物質的又は実質的に、細胞／組織におけるＨｈシグナルの伝達に影響を与え、典型的には下流遺伝子発現レベルの程度の変化及び／又は表現型の変化をもたらすＨｈシグナル伝達成分は、それらの生物学的機能に依存して、下流の遺伝子活性化／発現の最終的な結果に影響を与えるものであり、正及び負の調節因子に分けることができる。正の調節因子は、Ｈｈシグナルの伝達に正に（ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）影響を与え、すなわち、Ｈｈが存在する場合、下流の生物学的事象を刺激するＨｈシグナル伝達成分である。例としては、ヘッジホッグ、Ｓｍｏ、及びＧｌｉを含む。負の調節因子は、Ｈｈシグナルの伝達に負に（ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ）影響を与え、すなわち、Ｈｈが存在する場合、下流の生物学的事象を阻害するＨｈシグナル伝達成分である。例としては（これらに限定されないが）、Ｐｔｃｈ及びＳｕＦｕを含む。
【００２９】
用語「ヘッジホッグシグナル伝達アンタゴニスト（複数可）」、「Ｈｈシグナル伝達のアンタゴニスト」及び「Ｈｈシグナル伝達経路の阻害剤」は、本明細書中で使用される場合、互換的に使用され、正のＨｈシグナル伝達成分（ヘッジホッグ、Ｐｔｃｈ、又はＧｌｉなど）の生物学的活性を阻害する又はＨｈシグナル伝達成分の発現を下方制御する薬剤を指す。それらはまた、Ｈｈシグナル伝達成分の負の調節因子を上方制御する薬剤を含む。ヘッジホッグシグナル伝達アンタゴニストは、（限定されないが）ソニック（ｓｏｎｉｃ）、インディアン（ｉｎｄｉａｎ）、デザート（ｄｅｓｅｒｔ）ヘッジホッグ、スムーズンド、ｐｔｃｈ−１、ｐｔｃｈ−２、ｇｌｉ−１、ｇｌｉ−２、ｇｌｉ−３などを含むヘッジホッグ経路内の遺伝子の何れかによってコードされるタンパク質を対象としている。例えば、Ｈｈシグナル伝達経路の阻害剤は、Ｈｈによって媒介される生物学的活性を部分的又は完全にブロックし、阻害し、又は中和する任意の分子を指す。阻害剤の例には、抗体；リガンド抗体；小分子アンタゴニスト；アンチセンス及び阻害性ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ）分子を含む。特定の実施態様において、阻害剤は、約１０００ｎＭ以下の結合親和性（解離定数）を有する。別の実施態様において、阻害剤は、約１００ｎＭ以下の結合親和性を有する。別の実施態様において、阻害剤は、約５０ｎＭ以下の結合親和性を有する。特定の実施態様において、阻害剤は、１０００ｎＭ以下のＩＣ５０でＨｈシグナル伝達を阻害する。別の実施態様において、阻害剤は、５００ｎＭ以下のＩＣ５０でＨｈシグナル伝達を阻害する。別の実施態様において、阻害剤は、５０ｎＭ以下のＩＣ５０でＨｈシグナル伝達を阻害する。特定の実施態様において、アンタゴニストは、一以上のＨｈ経路成分の発現レベル又は生物学的活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上減少させ又は阻害する。幾つかの実施態様において、Ｈｈシグナル伝達の阻害剤は、スムーズンドのアンタゴニストである。
【００３０】
本明細書で使用される用語「ヘッジホッグ関連障害（複数可）」、又は「ヘッジホッグ関連障害（複数可）」は、ヘッジホッグ経路の破壊又は異常に関連する疾患及び障害、並びに正常であるが望ましくない、ヘッジホッグ経路の活性化に関連する成長状態に関連する障害を含む。「ヘッジホッグ関連障害」は、限定されないが、腫瘍形成、がん、新生組織形成、悪性過増殖性障害、及び非悪性過増殖性障害を含む。「ヘッジホッグ関連障害」はまた、良性前立腺肥大症、乾癬、滲出型黄斑変性症、骨粗しょう症、不要な毛髪成長を含む。
【００３１】
本明細書で用いる「実質的に同一」なる用語は、当業者が、２つの値の間の差異が、その値（例えばＫｄ値又は発現）によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、わずかに又は全く生物学的及び／又は統計学的有意性がないと考慮するであろうほどに、２つの数値の間の十分高度な類似性を意味する。前記２つの値の間の差異は、参照／比較値に応じて、例えば約５０％以下、約４０％以下、約３０％以下、約２０％以下、及び／又は約１０％以下である。
【００３２】
本明細書で用いる「実質的に異なる」なる句は、当業者が、２つの値の間の差異が、その値（例えばＫｄ値）によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、統計学的有意であると考慮するような、２つの数値の間の十分高度な差異を意味する。前記２つの値の間の差異は、参照／比較分子の値に応じて、例えば約１０％より大きく、約２０％より大きく、約３０％より大きく、約４０％より大きく、及び／又は約５０％より大きい。
【００３３】
本明細書において、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下で定義するように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それらの同じアミノ酸配列を含んでいてもよいし、アミノ酸配列変化を含んでいてもよい。幾つかの実施態様では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
【００３４】
「親和性」は、分子（例えば抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）の間の非共有相互作用を合計した力を指す。別段指示がない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、結合ペアのメンバー（例えば抗体と抗原）の間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載のものを含めた、当技術分野で知られている慣用法によって測定することができる。結合親和性の測定に関する具体的な例示的及び代表的な実施態様を以下に記載する。
【００３５】
「親和性成熟」抗体は、変更を有さない親抗体と比較して、１つ又は複数の高頻度可変領域（ＨＶＲ）中に１つ又は複数の変更を有し、そうした変更が抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす、抗体を指す。
【００３６】
用語「抗ＬＧＲ５抗体」及び「ＬＧＲ５に結合する抗体」は、抗体が、ＬＧＲ５のターゲティングにおいて、診断薬及び／又は治療薬として有用であるように、十分な親和性を有してＬＧＲ５を結合することができる抗体を指す。一実施態様では、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される無関係の非ＬＧＲ５タンパク質への抗ＬＧＲ５抗体の結合の程度は、ＬＧＲ５に対する抗体の結合の約１０％未満である。ある種の実施態様では、ＬＧＲ５に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある種の実施態様では、抗ＬＧＲ５抗体は、様々な種のＬＧＲ５の間で保存されている、ＬＧＲ５のエピトープに結合する。
【００３７】
本明細書では、用語「抗体」は、本明細書において広義で使用され、これらに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及び抗体断片を含めた様々な抗体構造を、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、包含する。
【００３８】
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、これらに限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００３９】
基準抗体として「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、その抗原への基準抗体の結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、逆に、競合アッセイにおいて、基準抗体は、その抗原への抗体の結合を５０％以上ブロックする。例示的な競合アッセイを本明細書で提供する。
【００４０】
用語「がん」及び「癌」は、典型的には無秩序な細胞成長／増殖を特徴とする、哺乳動物の生理的条件を指すか又は説明する。がんの例としては、これらに限定されないが、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫及び白血病が挙げられる。そうしたがんのより特定の例としては、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頚がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、ヘパトーム、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、小腸がん、子宮内膜癌又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝癌、白血病及び他のリンパ増殖性障害、並びに様々なタイプの頭頚部がんが含まれ得る。
【００４１】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部は特定の供給源又は種に由来するが、重鎖及び／又は軽鎖の残部は異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。
【００４２】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、それらの幾つかは更にサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に分類される。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００４３】
本明細書で使用する場合、用語「細胞傷害剤」は、細胞機能を阻害若しくは妨害する及び／又は細胞死若しくは細胞破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害剤としては、これらに限定されないが、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位元素）；化学療法剤又は化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）；成長阻害剤；酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素；抗生物質；毒素、例えば、細菌、真菌、植物又は動物起源の小分子毒素又は酵素的に活性な毒素（それらの断片及び／又は変異体を含む）；並びに以下に開示する様々な抗腫瘍性又は抗がん性の薬剤が挙げられる。
【００４４】
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプによって異なる、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の上方制御、並びにＢ細胞活性化が挙げられる。
【００４５】
薬剤、例えば薬学的製剤の「有効量」は、所望の治療的又は予防的な結果を達成するのに必要な投薬量及び期間での有効な量を指す。
【００４６】
用語「エピトープ」は、抗体が結合する、抗原分子上の特定の部位を指す。
【００４７】
本明細書では、用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するのに使用される。この用語には、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域が含まれる。一実施態様では、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで延びる。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても、存在しなくてもよい。本明細書で別段の指定がない限り、Ｆｃ領域又は定常領域のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１に記載されているような、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００４８】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、高頻度可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン、すなわちＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４から成る。したがって、ＨＶＲ配列及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（又はＶＬ）中の次の配列、ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４に出現する。
【００４９】
用語「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書では、互換的に使用されて、天然の抗体構造と実質的に類似している構造を有する、又は本明細書で定義したＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００５０】
用語「ＬＧＲ５のグリコシル化形態」は、糖鎖残基の付加により翻訳後修飾されるＬＧＲ５の天然に生じる形態を指す。
【００５１】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞系統」及び「宿主細胞培養」は、互換的に使用されて、外来性の核酸が導入された細胞（そうした細胞の後代を含む）を指す。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これには、初代形質転換細胞、及び継代数とは関係なく、それに由来する後代が含まれる。後代は、核酸の内容が親細胞と完全に同一でなくてもよく、変異を含んでいてもよい。元の形質転換細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異後代は、本明細書に含まれる。
【００５２】
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞によって産生される、又はヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体をコードする配列を利用する非ヒトの供給源に由来する抗体のものに対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体の本定義は、非ヒトの抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【００５３】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨのフレームワーク配列の選択において、最も一般的に存在するアミノ酸残基に相当するフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１）、１−３巻と同様のサブグループである。一実施態様では、ＶＬについては、サブグループは、上述のＫａｂａｔらと同様のサブグループカッパＩである。一実施態様では、ＶＨについては、サブグループは、上述のＫａｂａｔらと同様のサブグループＩＩＩである。
【００５４】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある種の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、及び典型的には２つの可変ドメインのすべてを実質的に含み、すべて又は実質的にすべてのＨＶＲ（例えばＣＤＲ）は、非ヒト抗体のものに対応し、すべて又は実質的にすべのＦＲは、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化された抗体を指す。
【００５５】
本明細書で使用する場合、用語「高頻度可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が高頻度可変性である、及び／又は構造的に定められたループ（「高頻度可変ループ」）を形成する、各抗体可変ドメイン領域を指す。一般に、天然の４鎖抗体は、６つのＨＶＲ、すなわちＶＨ中の３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ中の３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。ＨＶＲは、一般に、高頻度可変ループ由来及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、配列変動性が最も高く、及び／又は抗原の認識に関与する。例示的な高頻度可変ループは、アミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）及び９６−１０１（Ｈ３）で生じる（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． １９６：９０１−９１７（１９８７））。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５及びＨ３の９５−１０２のアミノ酸残基で生じる（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ （１９９１））。ＶＨ中のＣＤＲ１を除いては、ＣＤＲは、一般に、高頻度可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原と接触する残基である、「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型ＣＤＲ又はａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲ領域内に含まれる。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８及びＨ３の９５−１０２で生じる（Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）。別段指示がない限り、可変ドメインのＨＶＲ残基及び他の残基（例えばＦＲ残基）は、本明細書では、上述のＫａｂａｔらに従って番号付けする。
【００５６】
「イムノコンジュゲート」は、これに限定されないが、細胞傷害剤を含めた、１つ又は複数の異種分子（複数可）にコンジュゲートした抗体である。
【００５７】
「個体」又は「被験体」は哺乳動物である。哺乳動物としては、これらに限定されないが、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられる。ある種の実施態様では、個体又は被験体はヒトである。
【００５８】
「単離」抗体は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。幾つかの実施態様では、抗体は、例えば電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）によって測定した時に９５％を越える又は９９％の純度に精製される。抗体純度の評価方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００５９】
「単離された核酸」は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸としては、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子が挙げられるが、核酸分子は、染色体外に、又はその天然の染色体上の位置とは異なる染色体上の位置にも存在する。
【００６０】
「抗ＬＧＲ５抗体をコードする単離核酸」は、抗体の軽鎖及び重鎖（又はその断片）をコードする１種又は複数の核酸分子を指す。これには、単一のベクター又は別々のベクター中のそうした核酸分子（複数可）が含まれ、そうした核酸分子（複数可）は、宿主細胞の１か所又は複数の位置に存在する。
【００６１】
本明細書で使用する場合、用語「ＬＧＲ５」は、細胞におけるＬＧＲ５の前駆タンパク質のプロセシングによって生じる、任意の天然の成熟ＬＧＲ５を指す。この用語には、別段指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル又はアカゲザル）などの哺乳動物並びにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含めた任意の脊椎動物供給源由来のＬＧＲ５が含まれる。この用語には、天然に存在するＬＧＲ５の変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体も含まれる。シグナル配列（アミノ酸１−２１）を有する例示的なヒトＬＧＲ５の前駆タンパク質のアミノ酸配列を配列番号６７に示す。典型的な成熟ヒトＬＧＲ５のアミノ酸配列。
【００６２】
用語「ＬＧＲ５陽性のがん」は、その表面でＬＧＲ５を発現する細胞を含むがんを指す。細胞が表面でＬＧＲ５を発現するかどうかの測定においては、ＬＧＲ５ ｍＲＮＡの発現が、細胞表面でのＬＧＲ５発現と相関すると考えられる。幾つかの実施態様では、ＬＧＲ５ ｍＲＮＡの発現は、インサイツハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲ（定量的ＲＴ−ＰＣＲを含む）から選択される方法によって測定する。あるいは、細胞表面でのＬＧＲ５の発現は、例えば、ＬＧＲ５に対する抗体を使用して、例えば免疫組織化学、ＦＡＣＳなどの方法において測定することができる。
【００６３】
用語「ＬＧＲ５陽性細胞」は、その表面にＬＧＲ５を発現するがん細胞を指す。
【００６４】
本明細書で使用する場合、用語「モノクローナル抗体」は、例えば天然に存在する変異を含む又はモノクローナル抗体調製物の産生の間に生じる、あり得る変異体抗体（そうした変異体は、一般に少量存在している）を除いては、実質的に均一な抗体の集団（すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一である及び／又は同じエピトープに結合する）から得られる抗体を指す。様々な決定基（エピトープ）に対する様々な抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原の単一決定基に対するものである。したがって、修飾語句「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られたという抗体の性質を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきでない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、これらに限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン座のすべて又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含めた種々の手法によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのそうした方法及び他の例示的方法は、本明細書に記載されている。
【００６５】
「ネイキッド抗体（ｎａｋｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、異種部分（例えば細胞傷害性部分）又は放射標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、薬学的製剤に存在してもよい。
【００６６】
「天然の抗体」は、多様な構造を有する、天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然のＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合した２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を有する。同様にＮ末端からＣ末端に、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプのうちの１つに帰属させることができる。
【００６７】
用語「添付文書」は、治療用製品の商業的なパッケージに慣例上含まれ、そうした治療用製品の使用に関する、適応症、用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌及び／又は注意についての情報を含む、説明書を指すのに使用される。
【００６８】
基準ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じて最大の配列同一性パーセントを得るためにギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部としてみなさない、基準ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当技術分野の範囲内の様々な方法で、例えば、公的に利用可能なコンピュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者なら、比較する配列の全長にわたる最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含めて、配列を整列させるための適切なパラメーターを決定することができる。しかし、本明細書においては、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して得られる。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作製され、ソースコードは、米国著作権庁、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９に使用者用書類と共に提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であり、又はソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、使用するために、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含めたＵＮＩＸオペレーティングシステムでコンパイルする必要がある。すべての配列比較パラメーターはＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更しない。
【００６９】
ＡＬＩＧＮ−２をアミノ酸配列の比較に用いる場合は、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、又は所与のアミノ酸配列Ｂに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいはこれは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、又は所与のアミノ酸配列Ｂに対する特定のアミノ酸配列同一性％を有する又は含む所与のアミノ酸配列Ａと表現することができる）は、以下のように計算される。
分数Ｘ／Ｙの１００倍
式中、Ｘは、ＡとＢのプログラムのアライメントにおいて、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、同一一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合は、ＢへのＡのアミノ酸配列同一性％は、ＡへのＢのアミノ酸配列同一性％に等しくないであろうことが理解されよう。別段記載のない限り、本明細書で使用するすべてのアミノ酸配列同一性％値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落に記載されているように得られる。
【００７０】
用語「薬学的製剤」は、その中に含まれる活性成分の生物活性を有効にするような形態であって、製剤を投与することになる被験体にとって許容されない毒性を有する追加的な構成成分を含まない調製物を指す。
【００７１】
「薬学的に許容可能な担体」は、被験体に非中毒性である、薬学的製剤中の活性成分以外の処方成分を指す。薬学的に許容可能な担体としては、これらに限定はされないが、緩衝液、賦形剤、安定化剤又は防腐剤が挙げられる。
【００７２】
本明細書で使用する場合、「治療」（及び「治療する」又は「治療すること」などのその文法的バリエーション）は、治療される個体の自然経過を変化させようとする臨床的介入を指し、予防のため又は臨床病理の過程において行うことができる。治療の望ましい効果としては、これらに限定されないが、疾患の出現又は再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接又は間接的な病理学的帰結の低減、転移の予防、疾患進行速度の低下、病態の回復又は緩和、及び寛解又は改善した予後が挙げられる。幾つかの実施態様では、本発明の抗体は、疾患の発生を遅延させる又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
【００７３】
用語「併用して」は、二以上の治療薬の投与を指し、それらの個々の治療作用が時間的に重なるように、十分時間的に近接して与えるために本明細書において使用される。従って、併用投与とは、一以上の薬剤投与が、一以上の他の薬剤の投与を中止した後に、継続する場合の投与レジメンを含む。幾つかの実施態様において、併用投与は、併用して、逐次に、及び／又は同時にである。
【００７４】
「減少させる又は阻害する」とは、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又はそれ以上の減少を引き起こす能力を指す。減少させる又は阻害するとは、治療する疾患の症状、転移の存在又は大きさ、又は原発腫瘍のサイズを指しうる。
【００７５】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する、抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、一般に、各ドメインが、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの高頻度可変領域（ＨＶＲ）を含む、類似した構造を有する（例えば、Ｋｉｎｄｔら、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ第６版、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、ｐ９１（２００７）を参照されたい）。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を与えるのに十分であり得る。更に、抗原に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを使用して、それぞれ相補的なＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングし、特定の抗原を結合する抗体を単離することができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００７６】
本明細書で使用する場合、用語「ベクター」は、それに連結された別の核酸を伝搬することができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造物としてのベクター及びそれが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある種のベクターは、作動可能に連結された核酸の発現を指令することができる。そうしたベクターを、本明細書では、「発現ベクター」と称する。
【００７７】
「アルキル」は、ノルマル、第２級、第３級、又は環状の炭素原子を含むＣ１−Ｃ１８炭化水素である。例は、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３である。
【００７８】
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ１−Ｃ８アルキル」は、１から８個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝の、飽和又は不飽和の炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ８アルキル」基としては、これらに限定されないが、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチル、−ｎ−オクチル、−ｎ−ノニル及び−ｎ−デシルが挙げられ、一方で、分枝Ｃ１−Ｃ８アルキルとしては、これらに限定されないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、２−メチルブチルが挙げられ、不飽和Ｃ１−Ｃ８アルキルとしては、これらに限定されないが、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、−３−メチル−１ブチニルが挙げられる。Ｃ１−Ｃ８アルキル基は、無置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立に選択される）を含めた、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
【００７９】
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ１−Ｃ１２アルキル」は、１から１２個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝の、飽和又は不飽和の炭化水素を指す。Ｃ１−Ｃ１２アルキル基は、無置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立に選択される）を含めた、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
【００８０】
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ１−Ｃ６アルキル」は、１から６個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝の、飽和又は不飽和の炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ６アルキル」基としては、これらに限定されないが、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル及び−ｎ−ヘキシルが挙げられ、一方で、分枝Ｃ１−Ｃ６アルキルとしては、これらに限定されないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル及び２−メチルブチルが挙げられ、不飽和Ｃ１−Ｃ６アルキルとしては、これらに限定されないが、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及び−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、及び３−ヘキシルが挙げられる。Ｃ１−Ｃ６アルキル基は、Ｃ１−Ｃ８アルキル基について上で述べるように、無置換でもよいし、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
【００８１】
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ１−Ｃ４アルキル」は、１から４個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝の、飽和又は不飽和の炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ４アルキル」基としては、これらに限定されないが、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチルが挙げられ、一方で、分枝Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、これらに限定されないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチルが挙げられ、不飽和Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、これらに限定されないが、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル及び−イソブチレニルが挙げられる。Ｃ１−Ｃ４アルキル基は、Ｃ１−Ｃ８アルキル基について上で述べるように、無置換でもよいし、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
【００８２】
「アルコキシ」は、酸素に単結合したアルキル基である。例示的アルコキシ基としては、これらに限定されないが、メトキシ（−ＯＣＨ３）及びエトキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ３）が挙げられる。「Ｃ１−Ｃ５アルコキシ」は、１から５個の炭素原子を有するアルコキシ基である。アルコキシ基は、アルキル基について上で述べたように、無置換でもよいし、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
【００８３】
「アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する、ノルマル、第２級、第３級又は環状の炭素原子を含む、Ｃ２−Ｃ１８炭化水素である。例としては、これらに限定されないが、エチレン又はビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）及び５−ヘキセニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）が挙げられる。「Ｃ２−Ｃ８アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する、２から８個のノルマル、第２級、第３級又は環状の炭素原子を含む、炭化水素である。
【００８４】
「アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する、ノルマル、第２級、第３級又は環状の炭素原子を含む、Ｃ２−Ｃ１８炭化水素である。例としては、これらに限定されないが、アセチレン（−Ｃ≡ＣＨ）及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。「Ｃ２−Ｃ８アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する、２から８個のノルマル、第２級、第３級又は環状の炭素原子を含む、炭化水素である。
【００８５】
「アルキレン」は、飽和した、分枝又は直鎖又は環状の、１−１８個の炭素原子の炭化水素基であって、親アルカンの同じ又は２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除去することによって得られる一価のラジカル中心を２つ有する炭化水素基を指す。典型的なアルキレン基としては、これらに限定されないが、メチレン（−ＣＨ２−）１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）などが挙げられる。
【００８６】
「Ｃ１−Ｃ１０アルキレン」は、式−（ＣＨ２）１−１０−の直鎖の飽和炭化水素基である。Ｃ１−Ｃ１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オシチレン（ｏｃｙｔｙｌｅｎｅ）、ノニレン及びデカレンが挙げられる。
【００８７】
「アルケニレン」は、不飽和の、分枝又は直鎖又は環状の、２−１８個の炭素原子の炭化水素基であって、親アルケンの同じ又は２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除去することによって得られる一価のラジカル中心を２つ有する炭化水素基を指す。典型的なアルケニレン基としては、これに限定されないが、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）が挙げられる。
【００８８】
「アルキニレン」は、不飽和の、分枝又は直鎖又は環状の、２−１８個の炭素原子の炭化水素基であって、親アルキンの同じ又は２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除去することによって得られる一価のラジカル中心を２つ有する炭化水素基を指す。典型的なアルキニレン基としては、これらに限定されないが、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）及び４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）が挙げられる。
【００８９】
「アリール」は、炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例としては、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。炭素環式芳香族基又はヘテロ環式芳香族基は、無置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立に選択される）を含めた１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
【００９０】
「Ｃ５−Ｃ２０アリール」は、炭素環式芳香族環中に５から２０個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ２０アリール基の例としては、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。Ｃ５−Ｃ２０アリール基は、アリール基について上で述べたように、置換されていても、無置換でもよい。「Ｃ５−Ｃ１４アリール」は、炭素環式芳香族環中に５から１４個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ１４アリール基の例としては、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。Ｃ５−Ｃ１４アリール基は、アリール基について上で述べたように、置換されていても、無置換でもよい。
【００９１】
「アリーレン」は、共有結合を２つ有するアリール基であり、以下の構造：
2016537399.tif 000013
で示すように、オルソ、メタ又はパラ配置で存在することができ、
フェニル基は、無置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立に選択される）を含めた４つまでの基で置換されていてもよい。
【００９２】
「アリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端又はｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つがアリール基で置き換えられている、非環式のアルキル基を指す。典型的なアリールアルキル基としては、これらに限定されないが、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどが挙げられる。アリールアルキル基は６から２０個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基（アルカニル、アルケニル又はアルキニル基を含む）のアルキル部分、は、１から６個の炭素原子であり、アリール部分は５から１４個の炭素原子である。
【００９３】
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端又はｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つがヘテロアリール基で置き換えられている、非環式のアルキル基を指す。典型的なヘテロアリールアルキル基は、これらに限定されないが、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチルなどが挙げられる。ヘテロアリールアルキル基は、６から２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基（アルカニル、アルケニル又はアルキニル基を含む）のアルキル部分は１から６個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分は、５から１４個の炭素原子、並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３から７環員（２から６個の炭素原子）を有する単環でもよいし、７から１０環員（４から９個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子）を有する二環でもよく、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］又は［６，６］系でもよい。
【００９４】
「置換されたアルキル」、「置換されたアリール」、及び「置換されたアリールアルキル」は、１つ又は複数の水素原子が、それぞれ独立に置換基で置き換えられた、アルキル、アリール及びアリールアルキルをそれぞれ意味する。典型的な置換基としては、これらに限定されないが、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ−３、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２が挙げられ、式中、各Ｘは独立に、ハロゲン：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩであり、各Ｒは独立に、−Ｈ、Ｃ２−Ｃ１８アルキル、Ｃ６−Ｃ２０アリール、Ｃ３−Ｃ１４ヘテロ環、保護基又はプロドラッグ部分である。上記のアルキレン、アルケニレン及びアルキニレン基も、同様に置換されていてもよい。
【００９５】
「ヘテロアリール」及び「ヘテロ環」は、１つ又は複数の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素及び硫黄である環系を指す。ヘテロ環基は、３から２０個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子を含む。ヘテロ環は、３から７環員（２から６個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子）を有する単環でもよいし、７から１０環員（４から９個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子）を有する二環でもよく、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］又は［６，６］系でもよい。
【００９６】
例示的なヘテロ環は、例えば、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．、「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９６８）、特に１、３、４、６、７及び９章；「Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９５０年から現在まで）、特に１３、１４、１６、１９及び２８巻；並びにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。
【００９７】
ヘテロ環の例としては、限定ではなく例として、ピリジル、ジヒドロピリジル（ｄｉｈｙｄｒｏｙｐｙｒｉｄｙｌ）、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ｂｉｓ−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ｂｉｓ−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル（ｐｈｅｎｏｘａｔｈｉｎｙｌ）、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナンスロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソオキサゾリル、オキシインドリル、ベンゾキサゾリニル、及びイサチノイルが挙げられる。
【００９８】
限定ではなく例として、炭素結合ヘテロ環は、ピリジンの２、３、４、５若しくは６位、ピリダジンの３、４、５若しくは６位、ピリミジンの２、４、５若しくは６位、ピラジンの２、３、５若しくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール若しくはテトラヒドロピロールの２、３、４若しくは５位、オキサゾール、イミダゾール若しくはチアゾールの２、４、若しくは５位、イソオキサゾール、ピラゾール若しくはイソチアゾールの３、４、若しくは５位、アジリジンの２若しくは３位、アゼチジンの２、３若しくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７若しくは８位、又はイソキノリンの１、３、４、５、６、７若しくは８位で結合する。更により典型的には、炭素結合ヘテロ環としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル又は５−チアゾリルが挙げられる。
【００９９】
限定ではなく例として、窒素結合ヘテロ環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール又はイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾール又はβ−カルボリンの９位で結合する。更により典型的には、窒素結合ヘテロ環としては、１−アジリジル、１−アゼテジル、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル及び１−ピペリジニルが挙げられる。
【０１００】
「Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環」は、１から４個の環炭素原子が、Ｏ、Ｓ及びＮからなる群からのヘテロ原子に独立に置き換えられている芳香族又は非芳香族のＣ３−Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環の代表的な例としては、これらに限定されないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル及びテトラゾリルが挙げられる。Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環は、無置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立に選択される）を含めた７個までの基で置換されていてもよい。
【０１０１】
「Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ」は、ヘテロ環基の水素原子の１つが結合で置き換えられている、上記で定義したＣ３−Ｃ８ヘテロ環基を指す。Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロは、無置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立に選択される）を含めた６個までの基で置換されていてもよい。
【０１０２】
「Ｃ３−Ｃ２０ヘテロ環」は、１から４個の環炭素原子がＯ、Ｓ及びＮからなる群からのヘテロ原子で独立に置き換えられている、芳香族又は非芳香族のＣ３−Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３−Ｃ２０ヘテロ環は、無置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立に選択される）を含めた７個までの基で置換されていてもよい。
【０１０３】
「Ｃ３−Ｃ２０ヘテロシクロ」は、ヘテロ環基の水素原子の１つが結合で置き換えられている、上記で定義したＣ３−Ｃ２０ヘテロ環基を指す。
【０１０４】
「炭素環」は、単環として３から７個の炭素原子、又は二環として７から１２個の炭素原子を有する、飽和環又は不飽和環を意味する。単環式炭素環は、３から６個の環原子、更により典型的には５又は６個の環原子を有する。二環式炭素環は、例えばビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］若しくは［６，６］系として配置された７から１２個の環原子、又はビシクロ［５，６］若しくは［６，６］系として配置された９若しくは１０個の環原子を有する。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペント−１−エニル、１−シクロペント−２−エニル、１−シクロペント−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘプチル及びシクロオクチルが挙げられる。
【０１０５】
「Ｃ３−Ｃ８炭素環」は、３、４、５、６、７又は８員の飽和又は不飽和の非芳香族炭素環である。代表的なＣ３−Ｃ８炭素環は、これらに限定されないが、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチル及び−シクロオクタジエニルが挙げられる。Ｃ３−Ｃ８炭素環基は、無置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立に選択される）を含めた１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
【０１０６】
「Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ」は、炭素環基の水素原子の１つが結合で置き換えられている、上記で定義したＣ３−Ｃ８炭素環基を指す。
【０１０７】
「リンカー」は、薬物部分に抗体を共有結合させる共有結合又は原子鎖を含む化学物質部分を指す。様々な実施態様では、リンカーは、２価の基、例えばアルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイル、部分、例えば−（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ−、アルキルオキシ（例えばポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）及びアルキルアミノ（例えばポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の反復単位；並びにコハク酸エステル、スクシンアミド、ジグリコールエステル、マロン酸エステル及びカプロアミドを含めた、二酸エステル及びアミドを含む。様々な実施態様では、リンカーは、バリン、フェニルアラニン、リジン及びホモリジンなどの１つ又は複数のアミノ酸残基を含むことができる。
【０１０８】
用語「キラル」は、鏡像パートナーの重ね合わせができない特性を有する分子を指し、一方で用語「アキラル」は、その鏡像パートナーに重ね合わせることができる分子を指す。
【０１０９】
用語「立体異性体」は、同一の化学構造を有するが、原子又は基の空間配置に関して異なる化合物を指す。
【０１１０】
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラリティー中心を有し、その分子が互いの鏡像でない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、様々な物理的特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性及び反応性を有する。ジアステレオマー混合物は、電気泳動及びクロマトグラフィーなどの高分解能の分析法の下で分離することができる。
【０１１１】
「鏡像異性体」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。
【０１１２】
本明細書で使用する立体化学の定義及び慣例は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；並びにＥｌｉｅｌ，Ｅ．及びＷｉｌｅｎ，Ｓ．、Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学的活性型で存在し、すなわちこれらは、平面偏光面を回転させる能力を有する。光学的活性化合物の記載では、接頭辞Ｄ及びＬ又はＲ及びＳは、そのキラル中心（複数可）に関する分子の絶対配置を表示するのに使用される。接頭辞ｄ及びｌ又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の徴候を示すのに用いられ、（−）又は１は、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）又はｄが前に付けられた化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、これらが互いの鏡像であることを除いては、同一である。特定の立体異性体は、鏡像異性体と称される場合もあり、そうした異性体の混合物は、鏡像異性混合物と呼ばれることが多い。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と称され、これは、化学反応又は化学過程において立体選択又は立体特異性がなかった場合に生じ得る。用語「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」は、光学活性のない２つ鏡像異性種の等モル混合物を指す。
【０１１３】
「脱離基」は、別の官能基によって置換され得る官能基を指す。ある種の脱離基は当技術分野でよく知られており、例としては、これらに限定されないが、ハライド（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、メタンスルホニル（メシル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフレート）及びトリフルオロメチルスルホネートが挙げられる。
【０１１４】
用語「保護基」は、化合物の他の官能基を反応させている間、特定の官能基性をブロック又は保護するのに一般に用いられる置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物のアミノ官能基性をブロック又は保護する、アミノ基に結合した置換基である。適切なアミノ保護基としては、これらに限定されないが、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。保護基及びその使用の概説については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１又はそれ以降の版を参照されたい。
【０１１５】
治療方法
Ａ．治療方法
本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体を使用する方法である。例えば、本明細書に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体においてヘッジホッグ関連疾患を治療する方法である。例えば、本明細書に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量を個体に投与することを含む、個体において基底細胞癌を治療する方法である。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗ＬＧＲ５抗体である（イムノコンジュゲートとも呼ぶ）。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ｗｎｔ経路シグナル伝達を有意には阻害しない。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は、基底細胞癌（「ＢＣＣ」）である。幾つかの実施態様において、基底細胞癌は、局所進行性ＢＣＣ又は転移性ＢＣＣである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は髄芽腫である。
【０１１６】
また本明細書に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、個体においてヘッジホッグ関連疾患を治療する方法である。例えば、抗ＬＧＲ５抗体及びヘッジホッグ経路の阻害剤の各量は、ヘッジホッグ経路の阻害剤単独を用いた治療と比較して、治療に対する応答の時間を増加させ、及び／又は、再発及び／又は耐性の発症を遅延させるために有効である。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、スムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、シクロパミン競合性のスムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミド又はその塩である。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミドである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、ビスモデギブである。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗ＬＧＲ５抗体である（イムノコンジュゲートとも呼ぶ）。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ｗｎｔ経路シグナル伝達を有意には阻害しない。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は、基底細胞癌（「ＢＣＣ」）である。幾つかの実施態様において、基底細胞癌は、局所進行性ＢＣＣ又は転移性ＢＣＣである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は髄芽腫である。
【０１１７】
本明細書中に提供されるのは、個体におけるヘッジホッグ経路の阻害剤を含む、ヘッジホッグ関連疾患の治療の有効性を増加させる方法であり、該方法は、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、スムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、シクロパミン競合性のスムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミド又はその塩である。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミドである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、ビスモデギブである。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗ＬＧＲ５抗体である（イムノコンジュゲートとも呼ぶ）。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ｗｎｔ経路シグナル伝達を有意には阻害しない。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は、基底細胞癌（「ＢＣＣ」）である。幾つかの実施態様において、基底細胞癌は、局所進行性ＢＣＣ又は転移性ＢＣＣである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は髄芽腫である。
【０１１８】
本明細書に更に提供されるのは、個体においてヘッジホッグ関連疾患を治療する方法であり、ここで治療は個体に抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を投与することを含み、かつ治療は、抗ＬＧＲ５抗体を含まずに（非存在下で）、ヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を投与することを含む標準的治療と比較して増加した有効性を有する。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、スムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、シクロパミン競合性のスムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミド又はその塩である。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミドである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、ビスモデギブである。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗ＬＧＲ５抗体である（イムノコンジュゲートとも呼ぶ）。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ｗｎｔ経路シグナル伝達を有意には阻害しない。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は、基底細胞癌（「ＢＣＣ」）である。幾つかの実施態様において、基底細胞癌は、局所進行性ＢＣＣ又は転移性ＢＣＣである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は髄芽腫である。
【０１１９】
また本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、個体におけるヘッジホッグ関連疾患の再発及び／又はヘッジホッグ経路の阻害剤に対する耐性の発症を遅延させ、及び／又は予防する方法である。また本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、ヘッジホッグ関連疾患を有する個体において、ヘッジホッグ経路の阻害剤に対する感受性の期間を延長する方法である。本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、ヘッジホッグ関連疾患を有する個体において、ヘッジホッグ経路の阻害剤に対する反応持続期間を延長する方法である。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、スムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、シクロパミン競合性のスムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミド又はその塩である。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミドである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、ビスモデギブである。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗ＬＧＲ５抗体である（イムノコンジュゲートとも呼ぶ）。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ｗｎｔ経路シグナル伝達を有意には阻害しない。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は、基底細胞癌（「ＢＣＣ」）である。幾つかの実施態様において、基底細胞癌は、局所進行性ＢＣＣ又は転移性ＢＣＣである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は髄芽腫である。
【０１２０】
本明細書中に提供されるのは、抗ＬＧＲ５抗体の有効量及びヘッジホッグ経路の阻害剤の有効量を個体に投与することを含む、ヘッジホッグ関連疾患を有する個体において、ヘッジホッグ経路の阻害剤に対する感受性を増加させる方法である。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、スムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、シクロパミン競合性のスムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミド又はその塩である。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミドである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、ビスモデギブである。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、細胞傷害剤にコンジュゲートされた抗ＬＧＲ５抗体である（イムノコンジュゲートとも呼ぶ）。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ｗｎｔ経路シグナル伝達を有意には阻害しない。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は、基底細胞癌（「ＢＣＣ」）である。幾つかの実施態様において、基底細胞癌は、局所進行性ＢＣＣ又は転移性ＢＣＣである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ関連疾患は髄芽腫である。
【０１２１】
本明細書において使用される場合、治療に対する耐性を有するがんは、治療に対して応答性でない及び／又は有意な応答（例えば、部分応答及び／又は完全な応答）を生成する能力が低下したがんを含む。耐性は、治療法の過程で生じる獲得耐性であってよい。幾つかの実施態様において、獲得薬物耐性は、一過性及び／又は可逆的薬物耐性である。治療に対する一過性及び／又は可逆的薬物耐性は、薬物耐性が治療法の中断後に治療に対する感受性を回復することが可能であることを含む。幾つかの実施態様において、獲得耐性は恒久的耐性である。治療に対する恒久的耐性は、薬物耐性を付与する遺伝子変化を含む。
【０１２２】
本明細書において使用される場合、治療に対する感受性を有するがんは、治療に対して応答性である及び／又は有意な応答（例えば、部分応答及び／又は完全応答）を生成することのできるがんを含む。
【０１２３】
治療に対する獲得耐性及び／又は感受性の維持を評価することを決定する方法は当該分野で知られている。幾つかの実施態様において、耐性は、薬物耐性固執者（ｐｅｒｓｉｓｔｅｒ）及び／又は薬剤耐性拡大固執者におけるＩＣ５０、ＥＣ５０又は腫瘍増殖の減少の変化によって示されてもよい。幾つかの実施態様において、変化は、約５０％、１００％、及び／又は２００％の何れかよりも大きい。加えて、耐性の獲得及び／又は感受性の維持の変化は、例として、治療に対する応答、応答の持続時間、及び／又は進行までの時間、例えば、部分応答と完全応答を評価することによりインビボで評価され得る。耐性の獲得及び／又は感受性の維持の変化は、個体の集団における、治療に対する応答、応答の持続時間、及び／又は進行までの時間、例えば、部分応答と完全応答の数に基づいても良い。
【０１２４】
幾つかの実施態様において、がんはＬＧＲ５陽性である。試料中の種々のバイオマーカーの存在は、幾つかの方法論によって分析することができ、このうちの多くは、当該技術分野で知られ、当業者によって理解されており、免疫組織化学（「ＩＨＣ」）、ウェスタンブロット分析、免疫沈降、分子結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＦＡ、蛍光標識細胞分取（「ＦＡＣＳ」）、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ、プロテオミクス、定量血液系アッセイ（例として血清ＥＬＩＳＡ）、生化学酵素活性アッセイ、インサイツハイブリダイゼーション、サザン分析、ノーザン分析、全ゲノム配列決定、定量リアルタイムＰＣＲ（「ｑＲＴ−ＰＣＲ」）及び例えば、分岐鎖ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡ等の他の増幅型の検出法を含む、ポリメラーゼ連鎖反応（「ＰＣＲ」）、ＲＮＡ−Ｓｅｑ、ＦＩＳＨ、マイクロアレイ分析、遺伝子発現プロファイリング、及び／又は遺伝子発現の連鎖解析（「ＳＡＧＥ」）、ならびにタンパク質、遺伝子、及び／又は組織アレイ分析によって行うことができる多種多様なアッセイのうちの任意のものが含まれるが、これらに限定されない。遺伝子及び遺伝子産物の状態の評価のための典型的なプロトコルは、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９５，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｔｓ ２（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、４（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、１５（Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ）、及び１８（ＰＣＲ Ａｎａｌｙｓｉｓ）に見出される。Ｒｕｌｅｓ Ｂａｓｅｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ又はＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（「ＭＳＤ」）から利用可能なもの等の、マルチプレックス免疫測定法もまた使用され得る。
【０１２５】
体外での細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを使用してアッセイされてもよい。そのアッセイは、代謝的に活性な細胞を示す、存在するＡＴＰの定量に基づいて、培養物中の生存細胞の数を決定する。Ｃｒｏｕｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７号を参照されたい。アッセイは、自動化高処理スクリーニング（ＨＴＳ）を受けやすくする、９６ウェル又は３８４ウェル形式で行われてもよい。Ｃｒｅｅ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを伴う。これは、細胞溶解及びルシフェラーゼ反応によって生み出される発光シグナルの生成をもたらす。発光シグナルは、培養物中に存在する生存細胞の数に直接比例する、存在するＡＴＰの量に比例する。データは、ルミノメーター又はＣＣＤカメラ画像化デバイスによって記録することができる。発光出力は、相対発光量（ＲＬＵ）として表される。
【０１２６】
更なる態様において、本発明は、ＬＧＲ５陽性がんを治療するための方法を提供する。一実施態様において、本方法は、ＬＧＲ５陽性がんを有する個体にイムノコンジュゲートを含む抗ＬＧＲ５抗体の有効量を投与することを含む。かかる実施態様において、本方法は、以下に説明するように、少なくとも一の追加の治療剤の有効量を個体に投与することを更に含む。
【０１２７】
幾つかの実施態様において、ＬｇＲ５陽性がんは、「０」（腫瘍細胞の９０％超における非常に弱い又はゼロの染色に対応する）を超える抗ＬｇＲ５免疫組織化学（ＩＨＣ）又はインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコアを受けるがんである。別の実施態様において、ＬｇＲ５陽性がんは、１＋、２＋、又は３＋レベルでＬｇＲ５を発現する。幾つかの実施態様において、ＬｇＲ５陽性がんは、ＬｇＲ５ ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、ＬｇＲ５を発現するがんである。幾つかの実施態様において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０１２８】
上の実施態様のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
【０１２９】
更なる態様において、本発明は、例えば、上の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供されるイムノコンジュゲートを含む抗ＬｇＲ５抗体のいずれかを含む、医薬製剤を提供する。一実施態様において、医薬製剤は、本明細書に提供されるイムノコンジュゲートを含む抗ＬｇＲ５抗体のいずれかと薬学的に許容可能な担体を含む。別の実施態様において、医薬製剤は、本明細書に提供されるイムノコンジュゲートを含む抗ＬｇＲ５抗体のいずれかと、例えば、下に記載されるような、少なくとも一の追加の治療剤とを含む。
【０１３０】
イムノコンジュゲートを含む抗体は、治療法において、単独で、又は他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、イムノコンジュゲートを含む抗体は、少なくとも一の追加の治療剤と同時投与されてもよい。
【０１３１】
上述のかかる併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じ又は別個の製剤中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、イムノコンジュゲートを含む抗体の投与は、追加の治療剤及び／又はアジュバントの投与の前、それと同時、及び／又はその後に生じ得る。イムノコンジュゲートを含む抗体はまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０１３２】
イムノコンジュゲートを含む抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所両方のために所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が含まれる。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。限定されないが、様々な時間点にわたる、単一又は複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含む様々な投与スケジュールが本明細書で考えられている。
【０１３３】
イムノコンジュゲートを含む抗体は良好な医療行為に合致した方法で処方され、投与され、投薬される。この観点において考慮すべき要因は、治療すべき特定の障害、治療すべき特定の哺乳類、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程及び医療従事者が知る他の要因を包含する。イムノコンジュゲートを含む抗体は、必要ではないが任意で、問題となる障害の予防又は治療のために、現在使用中の一又は複数の薬剤ともに処方される。そのような他の薬剤の有効量は製剤中に存在するイムノコンジュゲートを含む抗体の量、障害又は治療の種類及び上記した他の要因に依存する。これらは一般的には本明細書に記載されるのと同じ用量及び投与経路において、又は、本明細書に記載された用量の１％から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路により使用される。
【０１３４】
疾患の予防又は治療のために、イムノコンジュゲートを含む抗体の適切な投薬量（単独で又は一以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用されるとき）は、治療対象の疾患の種類、抗体又は免疫複合体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体又は免疫複合体が予防目的又は治療目的で投与されるかどうか、以前の治療法、患者の病歴及び抗体又は免疫複合体への反応、ならびに主治医の裁量に依存するであろう。イムノコンジュゲートを含む抗体は、患者に、１回で、又は一連の治療にわたって、好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によってであれ、又は持続注入によってであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）のイムノコンジュゲートを含む抗体が、患者への投与のための初回の候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。病態に応じて数日間又はより長い日数にわたる反復投与について、治療は、一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるであろう。イムノコンジュゲートを含む抗体の１つの例となる投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。故に、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はそれらの任意の組み合わせ）の１回以上の用量が患者に投与されてもよい。かかる用量は、断続的に、例えば、毎週又は３週間毎に（例えば、患者が抗体の約２〜約２０回、又は例えば、約６回用量を受容するように）投与されてもよい。初回よりも高い負荷用量、続いて１回以上のより低い用量が投与されてもよい。しかしながら、他の投薬レジメンが有用であってもよい。この治療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。
【０１３５】
上の製剤又は治療方法のうちのいずれも、イムノコンジュゲート及び抗ＬｇＲ５抗体の両方を使用して行われ得ることが理解される。
【０１３６】
Ｂ．本明細書に記載される方法において使用のための抗ＬＧＲ５抗体
本明細書中で提供されるのは、本明細書に記載される方法において使用のための抗ＬＧＲ５抗体である。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ＬＧＲ５に結合する。ＬＧＲ５では、例えば、活発に循環する腸管幹細胞の表面に見出される７回膜貫通型タンパク質である。
【０１３７】
本明細書に記載される方法において有用な抗ＬＧＲ５抗体は、限定されないが、本明細書にその全体が参考として援用される、米国特許出願公開第２０１０／０２７５２８０号、米国特許出願公開第２０１１／０１７６９９、米国特許第８１５８７５７号、米国特許第８１５８７５８号、国際公開第２０１３／０６７０５４号、国際公開第２０１３／０６７０５５号、国際公開第２０１３／０６７０５７号、国際公開第２０１３／０６７０６０号、及びＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３４６２９に記載される抗ＬＧＲ５抗体を含む。
【０１３８】
シグナル配列（アミノ酸１−２１）を含む、例示的な天然に存在するヒトＬＧＲ５前駆体タンパク質配列は配列番号６７に与えられ、対応する成熟ＬＧＲ５タンパク質配列（配列番号６７のアミノ酸２２−９０７に対応する）。
【０１３９】
ある実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、以下の特性の少なくとも一以上を、任意の組み合わせで有する：（ａ）配列番号６７のアミノ酸２２−５５５内のエピトープに結合する；（ｂ）≦５ｎＭ、又は≦４ｎＭ、又は≦３ｎＭ、又は≦２ｎＭ、又は≦１ｎＭ、及び必要に応じて≧０．０００１ｎＭ、又は≧０．００１ｎＭ、又は≧０．０１ｎＭの親和性でＬＧＲ５に結合する；（ｃ）ＬＧＲ５へのＲ−スポンジン（ＲＳＰＯ）の結合を有意に妨害しない；（ｄ）β−カテニンシグナル伝達を有意に妨害しない；（ｅ）ＬＧＲ５シグナル伝達のＲＳＰＯ活性化を有意に妨害しない；（ｆ）カスパーゼ３切断を活性化する；（ｇ）ヒト及びげっ歯類のＬＧＲ５の両方を認識する；（ｈ）げっ歯類ＬＧＲ５でなくヒトＬＧＲ５を認識する；（ｉ）非コンジュゲート形態で腫瘍増殖を有意に阻害しない；及び（ｊ）幹細胞の分化を誘導しない。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、８Ｅ１１及びそのヒト化バージョン、例えばｈｕ８Ｅ１１．ｖ２；ＹＷ３５３；２Ｈ６；及び３Ｇ１２である。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５である。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒト、カニクイザル、マウス、及びラットＬＧＲ５から選択される。
【０１４０】
（ａ）配列番号６７のアミノ酸２２−５５５内のエピトープに結合する。
抗ＬＧＲ５抗体がＬＧＲ５上のエピトープに結合するかどうかを決定する方法は当技術分野で知られている。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープ（例えば、配列番号６７のアミノ酸２２−５５５内）への抗ＬＧＲ５抗体の結合は、２９３細胞においてＮ及びＣ末端欠失を有するＬＧＲ５を発現させ、切断されたポリペプチドへの抗体のＦＡＣＳ結合により試験することにより決定され得る。幾つかの実施態様において、２９３細胞で発現された完全長ＬＧＲ５に対する結合に比べて切断されたポリペプチドへの抗体の結合の実質的減少（≧７０％の減少）又は消失は、抗体がその切断されたポリペプチドに結合しないことを示している。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５である。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５又はカニクイザルＬＧＲ５である。
【０１４１】
幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のロイシンリッチＮ末端ドメイン（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基２２−６６）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５の一以上のロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基６７−４４６；ＬＧＲ５のＬＲＲｓ１−１６）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ１（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基６７−９０）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ２（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基９１−１１２）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ３（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基１１５−１３６）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ４（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基１３９−１６０）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ５（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基１６３−１８４）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ６（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基１８７−２０８）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ７（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基２１１−２３２）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ８（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基２３５−２５６）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ９（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基２５８−２７９）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ１０（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基２８２−３０３）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ１１（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基３０６−３２８）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ１２（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基３２９−３５０）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ１３（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基３５３−３７４）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ１４（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基３７５−３９６）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ１５（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基３９９−４２０）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＧＲ５のＬＲＲ１６（例えば、配列番号６７のアミノ酸残基４２３−４４６）を含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、ＬＲＲ１からＬＲＲ１１、ＬＲＲ２からＬＲＲ１１、ＬＲＲ３からＬＲＲ１１、ＬＬＲ１からＬＬＲ３、ＬＬＲ２からＬＬＲ３、ＬＬＲ２からＬＬＲ８、ＬＬＲ３からＬＬ７、又はＬＬＲ４からＬＬＲ６の何れかを含む。
【０１４２】
幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、配列番号６７のアミノ酸２２−５５５内のエピトープを含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、配列番号６７のアミノ酸２２−４２４内のエピトープを含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、配列番号６７のアミノ酸２２−１２３内のエピトープを含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、配列番号６７のアミノ酸２２−３２３内のエピトープを含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、配列番号６７のアミノ酸３２４−５５５内のエピトープを含む。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のエピトープは、配列番号６７のアミノ酸３２４−４２４内のエピトープを含む。  
【０１４３】
本明細書に記載される態様及び実施態様は、態様及び実施態様「からなる」及び／又は「から本質的になる」ことを含む。
【０１４４】
（ｂ）≦５ｎＭ、又は≦４ｎＭ、又は≦３ｎＭ、又は≦２ｎＭ、又は≦１ｎＭ、及び必要に応じて≧０．０００１ｎＭ、又は≧０．００１ｎＭ、又は≧０．０１ｎＭの親和性でＬＧＲ５に結合する。
結合親和性を決定する方法が当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様において、結合親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイによって、決定され得る。具体的には、幾つかの実施態様において、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して、表面プラズモン共鳴アッセイによって測定され得る。ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）研究グレードＣＭ５チップが、供給業者の説明書に従って、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）試薬で活性化され得る。ヤギ抗ヒトＦｃ ＩｇＧが、各フローセルにおいて約１０，０００応答単位（ＲＵ）を得るようにチップに結合され得る。未反応の結合基が１Ｍエタノールアミンでブロックされ得る。カイネティクス測定については、抗ＬＧＲ５抗体が、約３００ＲＵを得るように捕獲され得る。ヒトＬＧＲ５ ＥＣＤ（例えば、バキュロウイルス系で発現させたＨｉｓ−Ｆｃに融合したアミノ酸２２−２５７（又は２２−５５５などの類似断片）、又はＣＨＯ細胞から発現させたＦｃに融合したアミノ酸２２−５５８（又は２２−５５５などの類似断片）；１２５ｎＭから０．４９ｎＭ）の２倍階段希釈物が、ＨＢＳ−Ｐ緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０）に、３０μｌ／分の流速で２５℃で注入され得る。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）が、１：１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）評価ソフトウェア３．２版）を使用して計算され得る。平衡解離定数（Ｋｄ）がｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出され得る。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって、オンレート（ｏｎ−ｒａｔｅ）が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合は、ストップフロー装備分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを有する８０００−シリーズＳＬＭ−Ａｍｉｎｃｏ（登録商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定される、漸増濃度の抗原の存在下において、ＰＢＳ、ｐＨ７．２に入れた２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の２５℃での蛍光発光強度（励起＝２９５ｎＭ；発光＝３４０ｎＭ、１６ｎＭバンドパス）の増大又は低下を測定する蛍光クエンチング法を使用して、オンレート（ｏｎ−ｒａｔｅ）を決定され得る。
【０１４５】
幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、約≦５ｎＭ、又は≦４ｎＭ、又は≦３ｎＭ、又は≦２ｎＭ、又は≦１ｎＭの何れかの親和性でＬＧＲ５に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、約≦５の親和性でＬＧＲ５に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、約≦４ｎＭの親和性でＬＧＲ５に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、約≦３ｎＭの親和性でＬＧＲ５に結合する。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、約≦２ｎＭの親和性でＬＧＲ５に結合する。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５である。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５又はカニクイザルＬＧＲ５である。
【０１４６】
当業者によって理解されるように、本明細書において「約（およそ）」値又はパラメーターという場合、その値又はパラメーター自体を対象とする実施態様を含む（記載する）。例えば、「約（およそ）Ｘ」との記載には「Ｘ」の記載が含まれる。
【０１４７】
（ｃ）ＬＧＲ５へのＲ−スポンジン（ＲＳＰＯ）の結合を有意に妨害しない。
ＬＧＲ５へのＲＳＰＯの結合を妨害する抗ＬＧＲ５抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５へのＲ−スポンジン（ＲＳＰＯ）の結合を有意に妨害する抗ＬＧＲ５抗体の能力は、フローサイトメトリーによって決定され得る。幾つかの実施態様において、例えば、ＬＧＲ５を発現する２９３細胞は、抗ＬＧＲ５抗体の存在下又は非存在下で、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及び／又はＲＳＰＯ４などの蛍光標識ＲＳＰＯと接触させられ得る。２９３細胞へのＲＳＰＯの結合は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を用いて検出され得る。幾つかの実施態様において、対照抗体の存在下でのＲＳＰＯの結合に比べて、約２５％未満の抗ＬＧＲ５抗体の存在下におけるＲＳＰＯ結合の減少は、抗ＬＧＲ５抗体がＬＧＲ５へのＲＳＰＯの結合を有意に妨害しないことを示している。
【０１４８】
幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５へのＲ−スポンジン（ＲＳＰＯ）の結合を有意に妨害する抗ＬＧＲ５抗体の能力は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイによって決定され得る。幾つかの実施態様において、例えば、ＬＧＲ５の細胞外ドメインは、例えば、本明細書に記載されるように、ＣＭ５チップ上に固定化されることができ、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及び／又はＲＳＰＯ４などのＲＳＰＯの固定化ＬＧＲ５への結合が、抗ＬＧＲ５抗体の存在下及び非存在下で決定され得る。幾つかの実施態様において、対照抗体の存在下でのＲＳＰＯの結合に比べて、約２５％未満の、抗ＬＧＲ５抗体の存在下におけるＲＳＰＯ結合の減少は、抗ＬＧＲ５抗体がＬＧＲ５へのＲＳＰＯの結合を有意に妨害しないことを示している。
【０１４９】
幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯは、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及びＲＳＰＯ４から選択される。幾つかの実施態様において、抗体は、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、又は約１０％未満、結合を妨害する。幾つかの実施態様において、抗体は、ＬＧＲ５へのＲＳＰＯの結合を検出可能に妨害しない。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５である。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５又はカニクイザルＬＧＲ５である。
【０１５０】
（ｄ）β−カテニンシグナル伝達を有意に妨害しない。
ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達を妨害する抗ＬＧＲ５抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様において、ｗｎｔ／β−カテニンシグナル伝達を有意に妨害する抗ＬＧＲ５抗体の能力は、レポーター遺伝子アッセイを使用して決定され得る。幾つかの実施態様において、ｗｎｔ／β−カテニン応答性プロモーター（例えば、多量体化ＴＣＦ／ＬＥＦ ＤＮＡ結合部位を含むプロモーター）の制御下で、レポーター遺伝子を含むレポーターコンストラクト（例えば、ルシフェラーゼ遺伝子など）をＬＧＲ５を発現する細胞にトランスフェクトすることができる。次いで、細胞を、抗ＬＧＲ５抗体の存在下及び非存在下で、Ｗｎｔ３ａなどのＷｎｔリガンド、及びＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及び／又はＲＳＰＯ４などのＲＳＰＯと接触させ、ルシフェラーゼ発現が測定される。幾つかの実施態様において、対照抗体の存在下でのルシフェラーゼ発現に比べて、約２５％未満の、抗体の存在下におけるルシフェラーゼ発現の減少は、抗ＬＧＲ５抗体がβカテニンシグナル伝達を有意に妨害しないことを示している。
【０１５１】
幾つかの実施態様において、抗体は、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、又は約１０％未満、βカテニンシグナル伝達を妨害する。幾つかの実施態様において、抗体は、β−カテニンシグナル伝達を検出可能に妨害しない。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５である。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５又はカニクイザルＬＧＲ５である。
【０１５２】
（ｅ）ＬＧＲ５シグナル伝達のＲＳＰＯ活性化を有意に妨害しない。
ＬＧＲ５のＲＳＰＯ活性化を妨害する抗ＬＧＲ５抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５のＲＳＰＯ活性化を有意に妨害する抗ＬＧＲ５抗体の能力は、レポーター遺伝子アッセイを使用して決定され得る。幾つかの実施態様において、β−カテニン応答性プロモーター（例えば、多量体化ＴＣＦ／ＬＥＦ ＤＮＡ結合部位を含むプロモーター）の制御下で、レポーター遺伝子を含むレポーターコンストラクト（例えば、ルシフェラーゼ遺伝子など）をＬＧＲ５を発現する細胞にトランスフェクトすることができる。次いで細胞は、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及び／又はＲＳＰＯ４などのＲＳＰＯの存在下及び非存在下で、Ｗｎｔ３ａなどのＷｎｔリガンドと接触させられ、ＬＧＲ５シグナル伝達の活性化が、ＲＳＰＯの存在下におけるルシフェラーゼ発現の増加として測定され得る。ＬＧＲ５シグナル伝達の活性化は、抗ＬＧＲ５抗体の存在下及び非存在下で測定され得る。幾つかの実施態様において、細胞を対照抗体と対比して抗ＬＧＲ５抗体と接触させた場合に、約２５％未満の、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及び／又はＲＳＰＯ４の存在下におけるＬＧＲ５シグナル伝達の活性化の減少は、抗ＬＧＲ５抗体が、ＬＧＲ５シグナル伝達のＲＳＰＯ活性化を有意に妨害しないことを示している。
【０１５３】
幾つかの実施態様において、ＲＳＰＯは、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及びＲＳＰＯ４から選択される。幾つかの実施態様において、抗体は、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、又は約１０％未満、ＬＧＲ５シグナル伝達のＲＳＰＯ活性化を妨害する。幾つかの実施態様において、抗体は、ＬＧＲ５シグナル伝達のＲＳＰＯ活性化を検出可能に妨害しない。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５である。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５はヒトＬＧＲ５又はカニクイザルＬＧＲ５である。
【０１５４】
（ｆ）カスパーゼ３切断を活性化する。
カスパーゼ３切断を活性化する抗ＬＧＲ５抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様において、カスパーゼ３切断を活性化する抗ＬＧＲ５抗体の能力は、げっ歯類異種移植モデルにおいて決定され得る。幾つかの実施態様において、切断されたカスペース３の存在は、例えば、抗ＬＧＲ５抗体を投与された腫瘍形成モデルマウスから収集されたホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織において、腫瘍領域の関数として測定され得る。切断されたカスペース３の存在は、幾つかの実施態様において、免疫組織化学を使用して決定され得る。更に、幾つかの実施態様において、カスパーゼ３切断は、陽性腫瘍領域のパーセントとして決定され得る。
【０１５５】
幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は少なくとも約１００％の何れかだけ、カスペース３陽性腫瘍領域のパーセンテージを増加させる。
【０１５６】
（ｇ）ヒト及びげっ歯類のＬＧＲ５の両方を認識する。
ヒト及びげっ歯類ＬＧＲ５に結合する抗ＬＧＲ５抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様において、ヒト及びげっ歯類ＬＧＲ５ポリペプチドは２９３細胞中で発現され、ＬＧＲ５を発現する２９３細胞への抗体の結合はＦＡＣＳによって試験される。幾つかの実施態様において、げっ歯類ＬＧＲ５は、マウス又はラットＬＧＲ５である。幾つかの実施態様において、げっ歯類ＬＧＲ５はマウスＬＧＲ５である。
【０１５７】
（ｈ）げっ歯類ＬＧＲ５でなくヒトＬＧＲ５を認識する。
げっ歯類ＬＧＲ５でなくヒトＬＧＲ５に結合する抗ＬＧＲ５抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様において、ヒト及びげっ歯類ＬＧＲ５ポリペプチドは２９３細胞中で発現され、ＬＧＲ５を発現する２９３細胞への抗体の結合はＦＡＣＳによって試験される。幾つかの実施態様において、げっ歯類ＬＧＲ５は、マウス又はラットＬＧＲ５である。幾つかの実施態様において、げっ歯類ＬＧＲ５はマウスＬＧＲ５である。
【０１５８】
（ｉ）非コンジュゲート形態で腫瘍増殖を有意に阻害しない。
非コンジュゲート形態で腫瘍増殖を阻害する抗ＬＧＲ５抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。異種移植モデル又はマウスｌの腫瘍形成モデルにおける腫瘍増殖の阻害は、ビヒクル対照又は対照抗体に対して決定される。
【０１５９】
幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、又は約１０％未満、その非コンジュゲート形態で腫瘍増殖を阻害する。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、その非コンジュゲート形態で腫瘍増殖を検出可能に阻害しない。
【０１６０】
（ｊ）幹細胞の分化を誘導しない
幹細胞の分化を誘導する抗ＬＧＲ５抗体の能力を決定する方法は当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様において、幹細胞の分化は、ＬＧＲ５を発現する小腸における高速サイクリング幹細胞である陰窩基底部円柱細胞（ＣＢＣ）の、抗ＬＧＲ５抗体の存在下及び非存在下での、例えば、腸細胞、杯細胞、及び／又は腸内分泌細胞への分化能力を決定することによりアッセイされ得る。幾つかの実施態様において、対照抗体もまたＣＢＣの集団の約２５％未満で幹細胞分化を誘導する条件下で、ＣＢＣの集団の約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、又は約１０％未満の何れかが、抗ＬＧＲ５抗体の存在下で分化する場合、抗ＬＧＲ５抗体は、幹細胞の分化を誘導しないと考えられる。
【０１６１】
幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体イムノコンジュゲートは、幹細胞の分化を誘導していない一次機構を介して腫瘍増殖を阻害する。幾つかの係る実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体イムノコンジュゲートは、イムノコンジュゲート中の抗体にコンジュゲートした細胞傷害剤を介して媒介された細胞傷害活性を介して腫瘍増殖を阻害する。
【０１６２】
例示的な抗ＬＧＲ５抗体
幾つかの実施態様において、本明細書中で提供されるのは、
例示的で、しかし非限定的である、本明細書に記載される方法において使用のための抗ＬＧＲ５抗体である。方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、（ａ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２：（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；及び（ｄ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１：（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２：及び（ｆ）及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む。
【０１６３】
方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ａ）（ｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン；及び／又は（ｂ）（ｉ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。
【０１６４】
幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、上記実施態様の何れかに記載のＨＶＲを含み、更に、配列番号４０から４３から選択される重鎖フレームワークＦＲ３配列を含む。幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、上記実施態様の何れかに記載のＨＶＲを含み、更に、配列番号４１の重鎖フレームワークＦＲ３配列を含む。幾つかの係る実施態様において、重鎖可変ドメインフレームワークは、配列番号４０から４３から選択されるＦＲ３配列を有する改変されたヒトＶＨ１フレームワークである。幾つかの係る実施態様において、重鎖可変ドメインフレームワークは、配列番号４１のＦＲ３配列を有する改変されたヒトＶＨ１フレームワークである。
【０１６５】
幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、上記実施態様の何れかに記載のＨＶＲを含み、更に、配列番号３６の軽鎖フレームワークＦＲ３配列を含む。幾つかの係る実施態様において、重鎖可変ドメインフレームワークは、配列番号３６のＦＲ３配列を有する改変されたＶＬカッパＩＶコンセンサス（ＶＬＫＩＶ）フレームワークである。
【０１６６】
別の態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、上記に提供される実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に提供される実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号６及び配列番号５のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号８及び配列番号７のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１０及び配列番号９のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１２及び配列番号１１のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１４及び配列番号１３のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１６及び配列番号１５のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号１８及び配列番号１７のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２０及び配列番号１９のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１６７】
一態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、（ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２：（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；及び（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１：（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２：及び（ｆ）及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む。
【０１６８】
別の態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ａ）（ｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン；及び／又は（ｂ）（ｉ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。
【０１６９】
別の態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、（ａ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号５９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１７０】
その他の態様において、抗ＬＧＲ５抗体が提供され、該抗体は、上記に提供される実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に提供される実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２６及び配列番号２５のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１７１】
幾つかの実施態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、（ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２：（ｃ）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；及び（ｄ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１：（ｅ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２：及び（ｆ）及び配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む。
【０１７２】
別の態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ａ）（ｉ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン；及び／又は（ｂ）（ｉ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。
【０１７３】
別の態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、上記に提供される実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に提供される実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２２及び配列番号２１のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１７４】
幾つかの実施態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、（ａ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２：（ｃ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；及び（ｄ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１：（ｅ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２：及び（ｆ）及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも一、二、三、四、五、又は六のＨＶＲを含む。
【０１７５】
別の態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、ａ）（ｉ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号５６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン；及び／又は（ｂ）（ｉ）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。
【０１７６】
その他の態様において、抗ＬＧＲ５抗体が提供され、該抗体は、上記に提供される実施態様の何れかに記載のＶＨ、及び上記に提供される実施態様の何れかに記載のＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、配列番号２４及び配列番号２３のそれぞれＶＨ及びＶＬ配列を、それらの配列の翻訳後修飾を含み、含む。
【０１７７】
更なる態様において、方法の何れかの幾つかの実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、本明細書において提供される抗ＬＧＲ５抗体と同じエピトープに結合する。例えば、ある実施態様において、配列番号２４のＶＨ配列及び配列番号２３のＶＬ配列を含む抗ＬＧＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号２２のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む抗ＬＧＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号６７のアミノ酸３２４−４２３からの、範囲内の、又は重複するエピトープに結合する抗体が提供される。幾つかの実施態様において、アミノ酸３０３−４０２からの、範囲内の、又は重複するエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号６７のアミノ酸３２４−５５５からの、範囲内の、又は重複するエピトープに結合する抗体が提供される。幾つかの実施態様において、アミノ酸３０３−５３４からの、範囲内の、又は重複するエピトープに結合する抗体が提供される。例えば、ある実施態様において、配列番号２６のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む抗ＬＧＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号６７のアミノ酸２２−１２３からの、範囲内の、又は重複するエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、アミノ酸１−１０２からの、範囲内の、又は重複するエピトープに結合する抗体が提供される。例えば、ある実施態様において、配列番号８のＶＨ配列及び配列番号７のＶＬ配列を含む抗ＬＧＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある実施態様において、配列番号６７のアミノ酸２２−３２３からの、範囲内の、又は重複するエピトープに結合する抗体が提供される。幾つかの実施態様において、アミノ酸１−３１２からの、範囲内の、又は重複するエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１７８】
上記実施態様の何れかにおいて、抗ＬＧＲ５抗体はヒト化されている。一実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、上記実施態様の何れか記載されるＨＶＲを含み、更に、ヒトアクセプターフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークを含む。ある実施態様において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩＶコンセンサス（ＶＬＫＩＶ）フレームワーク及び／又はＶＨフレームワークＶＨ１である。ある実施態様において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩＶコンセンサス（ＶＬＫＩＶ）フレームワーク及び／又は重鎖フレームワーク領域ＦＲ３内にＲ７１Ｓ変異及びＡ７８Ｖ変異を含むＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１７９】
更なる態様では、上記実施態様のいずれかに記載の抗ＬＧＲ５抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施態様において、抗体は、全長抗体、例えば、インタクトなＩｇＧ１抗体、又は本明細書において定義された他の抗体クラス又はアイソタイプである。
【０１８０】
更なる態様にて、以下のセクション１−７で説明されるように、上記実施態様のいずれかに記載の抗ＬＧＲ５抗体は、単独又は組み合わせで、任意の特徴を組み込むことができる：
【０１８１】
１．抗体親和性
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有し、任意選択的に、≧１０−１３Ｍ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）である。
【０１８２】
一実施態様では、Ｋｄは、以下のアッセイに記載されるように、目的のＦａｂ型抗体及びその抗原を用いて実施する放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定する。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、一連の漸増量の非標識抗原の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原を用いてＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体をコーティングしたプレートを用いて結合した抗原を捕獲することによって測定する（例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイ条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）に入れた５μｇ／ｍｌの捕獲抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、続いて、ＰＢＳに入れた２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンを用いて、２から５時間、室温（約２３℃）でブロッキングする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）において、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］−抗原を目的のＦａｂの段階希釈物と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致している）。次いで、目的のＦａｂを一晩インキュベートする。しかしインキュベーションは、確実に平衡状態に達するように、より長期間（例えば約６５時間）続けてもよい。その後、この混合物を捕獲プレートに移して、室温で（例えば、１時間）インキュベートする。次いで溶液を除去し、０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））のＰＢＳ溶液でプレートを８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）でプレートを１０分間カウントする。最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度を選んで、競合的結合アッセイで使用する。
【０１８３】
別の実施態様によれば、Ｋｄは、〜１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いるＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を２５℃で使用して、表面プラズモン共鳴アッセイによって測定する。簡単に述べると、供給業者の説明書に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８を用いて、５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈してから、５μｌ／分の流速で注入して、約１０応答単位（ＲＵ）の結合タンパク質を得る。抗原の注入に続いて、１Ｍエタノールアミンを注入して、未反応基をブロックする。カイネティクス測定については、Ｆａｂの２倍階段希釈物（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に、約２５μｌ／分の流速で２５℃で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェア３．２版）を使用して、結合センサーグラムと解離センサーグラムを同時に適合することによって計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）を、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって、オンレート（on-rate）が１０６Ｍ−１Ｓ−１を超える場合は、ストップフロー装備分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを有する８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定される、漸増濃度の抗原の存在下において、ＰＢＳ、ｐＨ７．２に入れた２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の２５℃での蛍光発光強度（励起＝２９５ｎＭ；発光＝３４０ｎＭ、１６ｎＭバンドパス）の増大又は低下を測定する蛍光クエンチング法を使用することによって、オンレート（on-rate）を決定することができる。
【０１８４】
２．抗体断片
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は抗体断片である。抗体断片としては、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ及びｓｃＦｖ断片並びに以下に記載する他の断片が挙げられる。特定の抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編、（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、２６９−３１５頁（１９９４）を参照されたい。国際公開第９３／１６１８５号；並びに米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期が増大したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。
【０１８５】
ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号；Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【０１８６】
シングルドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべて若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインのすべて若しくは一部を含む抗体断片である。ある種の実施態様では、シングルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６Ｂ１号を参照されたい）である。
【０１８７】
抗体断片は、これらに限定されないが、本明細書に記載のように、インタクトな抗体のタンパク質消化並びに組換え宿主細胞（例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はファージ）による産生を含めた様々な手法によって作製することができる。
【０１８８】
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体はキメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例を挙げれば、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ又は非ヒト霊長類、例えばサルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例を挙げれば、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合性断片を含む。
【０１８９】
ある種の実施態様では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するためにヒト化されるが、非ヒト親抗体の特異性及び親和性を保持する。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１つ又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。幾つかの実施態様では、例えば、抗体特異性又は親和性を回復する又は改善するために、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基が、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０１９０】
ヒト化抗体及びその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されており、更に、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号及び第７０８７４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記載）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング」を記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載）；並びにＯｓｂｏｕｒｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」アプローチを記載）に記載されている。
【０１９１】
ヒト化に使用することができるヒトフレームワーク領域としては、これらに限定されないが、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖又は重鎖可変領域の特定サブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、並びにＦＲライブラリーのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）；及びＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が挙げられる。
【０１９２】
４．ヒト抗体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で知られている様々な手法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ及びｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）、並びにＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０１９３】
ヒト抗体は、抗原負荷に反応してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。そうした動物は、典型的にはヒト免疫グロブリン座のすべて又は一部を含み、ヒト免疫グロブリン座は、内在性の免疫グロブリン座に置き換わるか、又は染色体外に存在するか、若しくは動物の染色体にランダムに組み込まれる。そうしたトランスジェニックマウスでは、内在性の免疫グロブリン座は、一般に不活化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６０７５１８１号及び第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載する米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７０４１８７０号、並びにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。そうした動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、更に改変することができる。
【０１９４】
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系統が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、５１−６３頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体も、Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。更なる方法としては、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞系統からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）及びＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）も、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７−９３７（２００５）、並びにＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０１９５】
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。次いで、そうした可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。ヒト抗体を抗体ライブラリーから選択する手法を以下に記載する。
【０１９６】
５．ライブラリー由来抗体
本明細書における使用のための抗体は、所望の活性（１又は複数）を有する抗体について、コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成するための、及び所望の結合特徴を有する抗体についてそうしたライブラリーをスクリーニングするための種々の方法が、当技術分野で知られている。そうした方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００１）に概説されており、更に、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載されている。
【０１９７】
ある種のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されているように、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに組換え、次いでこれを、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片の何れかとして、抗体断片を提示する。免疫化された供給源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要無しで、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ Ｊ、１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されているように、ナイーブレパートリーを（例えばヒトから）クローニングし、いかなる免疫化もせずに、幅広い非自己及び自己抗原に対して抗体の単一供給源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１−３８８（１９９２）によって記載されているように、再配列していないＶ−遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし且つｉｎ ｖｉｔｒｏで再配列を達成するためのランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ナイーブライブラリーも合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公報としては、例えば、米国特許第５７５０３７３号、並びに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、第２００５／０１１９４５５号、第２００５／０２６６０００号、第２００７／０１１７１２６号、第２００７／０１６０５９８号、第２００７／０２３７７６４号、第２００７／０２９２９３６号及び第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【０１９８】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書で、ヒト抗体又はヒト抗体断片とみなす。
【０１９９】
６．多重特異性抗体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある種の実施態様では、結合特異性の１つはＬＧＲ５に対してであり、他は、任意の他の抗原に対してである。ある種の実施態様では、結合特異性の１つはＬＧＲ５に対してであり、他はＣＤ３に対してである。例えば、米国特許第５８２１３３７号を参照されたい。ある種の実施態様では、二重特異性抗体は、ＬＧＲ５の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体は、ＬＧＲ５を発現する細胞に細胞傷害剤を局在させるのに使用することもできる。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０２００】
多重特異性抗体を作製するための手法としては、これらに限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ及びＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、国際公開第９３／０８８２９号、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、並びに「ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ」エンジニアリング（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照されたい）が挙げられる。多重特異性抗体は、抗体のＦｃ−ヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体又は断片を架橋結合すること（例えば、米国特許第４６７６９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、及び例えば、ＴｕｔｔらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているような三重特異性抗体を調製することによって、作製することもできる。
【０２０１】
「オクトパス抗体」を含めて、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照されたい）。
【０２０２】
本明細書の抗体又は断片には、ＬＧＲ５及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含まれる（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０を参照されたい）。
【０２０３】
７．抗体変異体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的な特性を改善することが望ましい場合もある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入すること、又はペプチド合成によって調製することができる。そうした修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はその残基への挿入、及び／又はその残基の置換が挙げられる。最終的な構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合を有することを条件として、最終的な構築物を得るために、欠失、挿入及び置換を任意に組み合わせることができる。
【０２０４】
ａ）置換、挿入及び欠失変異体
ある種の実施態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異誘発の目的の部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換を、表１において「好ましい置換」の項目の下に示す。より実質的な変化を、表１おいて「例示的置換」の項目の下に提供し、アミノ酸側鎖クラスに関連して以下に更に記載するように提供する。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされる。
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【０２０５】
アミノ酸は、共通の側鎖特性によってグループ化することができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
【０２０６】
非保存的酸置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを必要とするであろう。
【０２０７】
置換変異体の１タイプは、親抗体（例えば、ヒト化の又はヒト抗体）の１つ又は複数の高頻度可変領域残基を置換することを含む。一般に、更なる試験のために選択された得られた変異体（複数可）は、親抗体と比較して、特定の生物学的な特性（例えば親和性の増大、免疫原性の低減）における改変（例えば改善）を有する、及び／又は実質的に保持された、親抗体の特定の生物学的な特性を有する。例示的置換変異体は親和性成熟抗体であり、これは、例えば、ファージディスプレイに基づく親和性成熟法、例えば本明細書に記載のものを使用して、都合良く生成することができる。簡単に述べると、１つ又は複数のＨＶＲ残基を変異させ、変異体抗体をファージ上に提示し、特定の生物活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングする。
【０２０８】
変更（例えば置換）は、例えば抗体親和性を改善するために、ＨＶＲにおいて行うことができる。そうした変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程の間に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行うことができ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬは、結合親和性について試験される。２次ライブラリーを構築し、それから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、（２００１））に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様では、種々の方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング又はオリゴヌクレオチド指定突然変異）のうちの何れかによって、成熟のために選ばれた可変遺伝子中に多様性を導入する。次いで２次ライブラリーを作出する。次いで、このライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定する。多様性を導入するための別の方法は、幾つかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４−６残基）をランダム化する、ＨＶＲ指向性アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング変異誘発又はモデリングを使用して、具体的に特定することができる。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的にされることが多い。
【０２０９】
ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、そうした変化が、抗体が抗原に結合する能力を実質的に低減しない限り、１つ又は複数のＨＶＲ内に生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的変更（例えば、本明細書で提供する保存的置換）は、ＨＶＲ内で行うことができる。そうした変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上記の変異体ＶＨ及びＶＬ配列のある種の実施態様では、各ＨＶＲは、不変であるか、又は１つ、２つ又は３つのアミノ酸置換を含むにすぎないかの何れかである。
【０２１０】
突然変異誘発の標的にされ得る抗体の残基又は領域を同定するのに有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５によって記載されているように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基又は集団（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）を同定し、中性の又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）で置き換えて、抗原との抗体の相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。更なる置換を、最初の置換に機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入することができる。あるいは、又は更に、抗原抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原の間の接触点を同定する。そうした接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的にされてもよいし、排除されてもよい。変異体をスクリーニングして、それらが所望の特性を含むかどうかを決定することができる。
【０２１１】
アミノ酸配列挿入は、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さに及ぶアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体としては、抗体の血清半減期を増大させる（例えばＡＤＥＰＴについての）酵素又はポリペプチドに対する抗体のＮ末端又はＣ末端への融合が挙げられる。
【０２１２】
ｂ）グリコシル化変異体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増大又は低下させるように変化させる。抗体に対するグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ又は複数のグリコシル化部位が作出される又は除去されるようにアミノ酸配列を変化させることによって、好都合に達成することができる。
【０２１３】
抗体がＦｃ領域を含む場合は、それに結合する炭水化物を変化させることができる。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、一般に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合によって結合した、分枝した二分岐オリゴ糖を典型的には含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら、ＴＩＢＴＥＣＨ１５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸、並びに二分岐のオリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。幾つかの実施態様では、特定の改善した特性を有する抗体変異体を作出するために、抗体のオリゴ糖を修飾することができる。
【０２１４】
一実施態様では、Ｆｃ領域に（直接的又は間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、そうした抗体のフコースの量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％又は２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるような、Ａｓｎ２９７に結合したすべての糖構造体（例えば複合、ハイブリド及び高マンノース構造体）の合計に対して、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定する。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、抗体の軽微な配列バリエーションが原因で、Ａｓｎ２９７は、２９７位の約±３アミノ酸上流又は下流、すなわち２９４位と３００位の間に位置する可能性もある。そうしたフコシル化変異体は、改善したＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照されたい。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関する刊行物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；国際公開第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号；米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号；米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号；米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号；米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；国際公開第２００３／０８４５７０号；国際公開第２００５／０３５５８６号；国際公開第２００５／０３５７７８号；国際公開第２００５／０５３７４２号；国際公開第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞系統の例としては、タンパク質のフコシル化を欠いたＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ripkaら Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545(1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２Ａ１号、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）、並びにノックアウト細胞系統、例えば、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８のノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０−６８８（２００６）；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照されたい）が挙げられる。
【０２１５】
抗体変異体は、二分されたオリゴ糖を更に備えており、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐のオリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている。そうした抗体変異体は、フコシル化が低減されている、及び／又はＡＤＣＣ機能が改善されている可能性がある。そうした抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。そうした抗体変異体は、ＣＤＣ機能が改善されている可能性がある。そうした抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０２１６】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
ある種の実施態様では、１つ又は複数のアミノ酸修飾を、本明細書で提供する抗体のＦｃ領域に導入することができ、それによって、Ｆｃ領域変異体を生成することができる。Ｆｃ領域変異体は、１つ又は複数のアミノ酸の位置に、アミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含むことができる。
【０２１７】
ある種の実施態様では、本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗体半減期が重要であるけれども、特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）は不要又は有害である適用にとって望ましい候補とする、すべてではないが、いくらかのエフェクター機能を有する抗体変異体が、本明細書に記載される方法において有用であるとして企図される。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／喪失を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性がある）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持するということを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁の表３に概説されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの非限定例は、米国特許第５５００３６２号（例えばＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９−１５０２（１９８５）；第５８２１３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることもできる（例えば、ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリー用の非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照されたい）。そうしたアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、又は更に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、ＣｌｙｎｅｓらＰｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているものなどの動物モデルで評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイを行って、抗体がＣ１ｑに結合することができず、それ故にＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２（２００３）；並びにＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．及びＭ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ、Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。当技術分野で知られている方法を使用して、ＦｃＲｎ結��及びｉｎ ｖｉｖｏクリアランス／半減期の測定も行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０２１８】
エフェクター機能が低減した抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ又は複数の置換を有する抗体（米国特許第６７３７０５６）が挙げられる。そうしたＦｃ突然変異体としては、残基２６５及び２９７からアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体（米国特許第７３３２５８１号）を含めて、アミノ酸の位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２つ以上の置換を有するＦｃ突然変異体が挙げられる。
【０２１９】
ＦｃＲへの結合が改善又は減弱された特定の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShieldsら, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照されたい）。
【０２２０】
ある種の実施態様では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３及び／又は３３４（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【０２２１】
幾つかの実施態様では、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されているように、変化した（すなわち、改善又は減弱した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす変更が、Ｆｃ領域中で行われる。
【０２２２】
半減期が延び、母性ＩｇＧを胎児へ移行させるのに関与する（Guyerら, J. Immunol. 117:587 (1976)、及びKimら, J. Immunol. 24:249 (1994)）新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ又は複数の置換を有する、Ｆｃ領域含む。そうしたＦｃ変異体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４の１つ又は複数での置換、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４での置換（米国特許第７３７１８２６号）を有する変異体が挙げられる。
【０２２３】
Ｆｃ領域変異体の他の例に関する、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
【０２２４】
ｄ）システイン操作抗体変異体
ある種の実施態様では、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば「チオＭＡｂ」を作出することが望ましい場合もある。特定の実施態様では、置換残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。そのような残基をシステインで置換することにより、反応性のチオール基は、それによって、抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書で更に記載するように、薬物部分又はリンカー−薬物部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートして、イムノコンジュゲートを作出するのに使用することができる。ある種の実施態様では、以下の残基の任意の１つ又は複数をシステインで置換することができる：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔの番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載されているように生成することができる。
【０２２５】
更に例示的なＶ２０５Ｃシステイン操作ｔｈｉｏｍａｂは、ＩｇＧ１など、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、及び２３から選択される可変領域及び配列番号８０の定常領域を含む軽鎖；並びに配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２及び２４から選択される可変領域及び重鎖定常領域を含む重鎖を含む。更に例示的なＡ１１８Ｃシステイン操作ｔｈｉｏｍａｂは、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、及び２３から選択される可変領域及びヒト軽鎖定常領域、例えばカッパ軽鎖定常領域を含む軽鎖；並びに配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２４から選択される可変領域及び定常領域を含む重鎖を含む。更に例示的なＳ４００Ｃシステイン操作ｔｈｉｏｍａｂは、配列番号３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、及び２３から選択される可変領域及びヒト軽鎖定常領域、例えばカッパ軽鎖定常領域を含む軽鎖；並びに配列番号４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、及び２４から選択される可変領域及び定常領域を含む重鎖を含む。 
【０２２６】
ｅ）抗体誘導体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は、当技術分野で知られており且つ容易に利用可能な付加的な非タンパク質性部分を含むように、更に改変することができる。抗体の誘導体化に適した部分としては、これに限定されないが、水溶性ポリマーが挙げられる。水溶性ポリマーの非限定例としては、これらに限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーの何れか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造における利点を有し得る。ポリマーは、いかなる分子量のものでもよく、分枝でも非分枝でもよい。抗体に結合したポリマーの数は変動する可能性があり、１ポリマーより多くが結合する場合は、それらは、同じ分子でも異なる分子でもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、これらに限定されないが、改善される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定められた条件下などで療法に使用されるかどうかなど含めた考慮に基づいて決定することができる。
【０２２７】
別の実施態様では、放射線へさらすことによって選択的に加熱することができる抗体及び非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施態様では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブ（Kamら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605(2005)）である。放射線はいかなる波長でもよく、これに限定はされないが、通常の細胞を害さないが、抗体−非タンパク質性部分の近位細胞が死滅する温度に非タンパク質性部分を加熱する波長が挙げられる。
【０２２８】
Ｃ．組換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されているような組換え法及び組成物を使用して産生することができる。一実施態様では、本明細書に記載の抗ＬＧＲ５抗体をコードする単離核酸が提供される。そうした核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施態様では、そうした核酸を含む１つ又は複数のベクター（例えば発現ベクター）が提供される。更なる実施態様では、そうした核酸を含む宿主細胞が提供される。そうした実施態様の１つでは、宿主細胞は、以下のものを含む（例えば、以下のもので形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、並びに抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施態様では、宿主細胞は、真核性であり、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様では、抗ＬＧＲ５抗体を作製する方法が提供され、この方法は、上記の抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養すること、及び任意選択的に、宿主細胞（又は宿主細胞の培養培地）から抗体を回収することを含む。
【０２２９】
抗ＬＧＲ５抗体を組換え産生するために、例えば上記のように、抗体をコードする核酸を単離し、更なるクローニング及び／又は宿主細胞での発現のために、１つ又は複数のベクターに挿入する。そうした核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）、容易に単離し、配列決定することができる。
【０２３０】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞としては、本明細書に記載の原核性又は真核性の細胞が挙げられる。例えば、抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要でない場合は、細菌で産生することができる。抗体断片及びポリペプチドの細菌での発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号及び第５８４０５２３号を参照されたい（大腸菌での抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）２４５−２５４頁も参照されたい）。発現させた後に、抗体を、可溶性画分の細菌細胞のペーストから単離することができ、更に精製することができる。
【０２３１】
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核性微生物が、抗体をコードするベクターにとってクローニング又は発現の適切な宿主であり、これには、グリコシル化経路が「ヒト化され」、その結果、部分的に又は完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体を産生する真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０２３２】
グリコシル化抗体の発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて使用することができる、特にヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために使用することができる、多数のバキュロウイルス株が同定されている。
【０２３３】
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載する）を参照されたい。
【０２３４】
脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞系統は、有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞系統の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系統、ヒト胚腎臓系統（例えば、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３又は２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されているようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されているようなＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞系統としては、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaubら, Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980)）を含めたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、及びＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞系統が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞系統の総説として、例えば、Ｙａｚａｋｉ及びＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ）、２５５−２６８頁（２００３）を参照されたい。
【０２３５】
Ｄ．アッセイ
本明細書で提供する抗ＬＧＲ５抗体は、当技術分野で知られている様々なアッセイによって、その物理的／化学的性質及び／若しくは生物活性を同定することができ、それらについてスクリーニングすることができ、又はそれらについて特徴づけることができる。
【０２３６】
一態様では、例えばＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ又はウェスタンブロットなどの既知の方法によって、抗体をその抗原結合活性について試験する。
【０２３７】
別の態様では、競合アッセイを使用して、ＬＧＲ５への結合について本明細書に記載の抗体のうちの何れかと競合する抗体を同定することができる。ある種の実施態様では、そうした競合抗体は、本明細書に記載の抗体が結合するのと同じエピトープ（例えば、直鎖状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６６巻（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ）に提供されている。
【０２３８】
例示的競合アッセイでは、固定化されたＬＧＲ５を、ＬＧＲ５に結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載の抗体のうちの何れか）と、ＬＧＲ５への結合について１次抗体と競合するその能力について試験される第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートする。２次抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。コントロールとして、固定化されたＬＧＲ５を、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。１次抗体がＬＧＲ５に結合可能な条件下でインキュベーションした後、過剰な未結合抗体を除去し、固定化されたＬＧＲ５に結合した標識の量を測定する。固定化されたＬＧＲ５に結合した標識の量が、コントロール試料と比較して試験試料中で実質的に低減する場合は、ＬＧＲ５への結合について、２次抗体が１次抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ第１４章（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）を参照されたい。
【０２３９】
Ｅ．イムノコンジュゲート
本明細書に提供されるのはまた、１種又は複数の細胞傷害剤、例えば、化学療法剤又は化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物若しくは動物起源のタンパク質毒素、酵素的に活性な毒素、又はそれらの断片）又は放射性同位元素（すなわち放射性コンジュゲート）にコンジュゲートした、本明細書における抗ＬＧＲ５抗体（「イムノコンジュゲート」とも言う）を含む、本明細書において使用のための抗ＬＧＲ５抗体である。
【０２４０】
イムノコンジュゲートは、非コンジュゲート薬物の全身投与が、正常細胞に対して許容できないレベルの毒性をもたらし得る場合に、薬物部分を腫瘍へ標的送達することを可能にし、幾つかの実施態様では、その中での細胞内蓄積を可能にする（Polakis P. (2005) Current Opinion in Pharmacology 5:382-387）。
【０２４１】
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗原を発現する腫瘍細胞に強力な細胞毒性薬物をターゲティングすることによって、抗体及び細胞毒性薬物の両方の特性を兼ね備え（Teicher, B.A. (2009) Current Cancer Drug Targets 9:982-1004）、それによって、有効性を最大にし、オフターゲットな毒性を最小にすることにより治療指数を高める（Carter, P.J.及びSenter P.D. (2008) The Cancer Jour. 14(3):154-169;Chari, R.V. (2008) Acc. Chem. Res. 41:98-107）、目標とされる化学療法分子である。
【０２４２】
ＡＤＣ化合物としては、抗がん活性を有するものが挙げられる。幾つかの実施態様ではＡＤＣ化合物は、薬物部分にコンジュゲートした、すなわち共有結合的に結合した抗体を含む。幾つかの実施態様では、抗体は、リンカーを介して共有結合的に薬物部分に結合している。抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、腫瘍組織に有効量の薬物を選択的に送達し、これによって、治療指数（「治療濃度域」）を増大させながら、より大きな選択性、すなわちより低い有効量を達成することができる。
【０２４３】
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の薬物部分（Ｄ）は、細胞傷害性又は細胞増殖抑制性効果を有する任意の化合物、部分又は基を含むことができる。薬物部分は、これらに限定されないが、チューブリン結合、ＤＮＡ結合又はインターカレーション、並びにＲＮＡポリメラーゼ、タンパク質合成及び／又はトポイソメラーゼの阻害を含めた機序によって、その細胞傷害性及び細胞増殖抑制性効果を与えることができる。例示的薬物部分は、これらに限定されないが、マイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシン及びその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテシン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、並びに細胞傷害性活性を有するそれらの立体異性体、同配体、類似体及び誘導体が挙げられる。そうしたイムノコンジュゲートの非限定例を、以下で更に詳細に論じる。
【０２４４】
１．例示的抗体−薬物コンジュゲート
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）化合物の例示的実施態様は、腫瘍細胞を標的とする抗体（Ａｂ）、薬物部分（Ｄ）、及びＡｂをＤに結合させるリンカー部分（Ｌ）を含む。幾つかの実施態様では、抗体は、リジン及び／又はシステインなどの１つ又は複数のアミノ酸残基を介してリンカー部分（Ｌ）に結合する。
【０２４５】
例示的ＡＤＣは、式Ｉ：
2016537399.tif 000015
を有する。
【０２４６】
式中、ｐは１から約２０である。幾つかの実施態様では、抗体にコンジュゲートすることができる薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって制限される。幾つかの実施態様では、遊離システイン残基を、本明細書に記載の方法によって抗体のアミノ酸配列に導入する。例示的な式ＩのＡＤＣとしては、これらに限定されないが、１、２、３又は４つの操作したシステインアミノ酸を有する抗体（Lyon，R.ら(2012) Methods in Enzym. 502:123-138）が挙げられる。幾つかの実施態様では、１つ又は複数の遊離システイン残基は、操作しなくても抗体中に既に存在し、そのような場合は、現存する遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物にコンジュゲートすることができる。幾つかの実施態様では、１つ又は複数の遊離システイン残基を生成するために、抗体のコンジュゲーションに先立って抗体を還元条件にさらす。
【０２４７】
ａ）例示的リンカー
「リンカー」（Ｌ）は、１つ又は複数の薬物部分（ｄ）を抗体（Ａｂ）に連結して、式Ｉの抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するのに使用することができる、二機能性又は多官能性部分である。幾つかの実施態様では、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、薬物及び抗体に共有結合的に結合する反応官能性を有するリンカーを使用して調製することができる。例えば、幾つかの実施態様では、抗体（Ａｂ）のシステインチオールは、リンカーの反応性官能基との結合、又はＡＤＣを作製するための薬物−リンカー中間体を形成することができる。
【０２４８】
一態様では、リンカーは、抗体に存在する遊離システインと反応して共有結合を形成することができる官能性を有する。非限定的な例示的なそうした反応官能基としては、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、スクシンイミドエステルなどの活性化エステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、及びイソチオシアネートが挙げられる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎら（２００４）、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １５（４）：７６５−７７３の７６６頁のコンジュゲーション方法、及び本明細書の実施例を参照されたい。
【０２４９】
幾つかの実施態様では、リンカーは、抗体に存在する求電子基と反応することができる官能性を有する。例示的なそうした求電子基としては、これらに限定されないが、アルデヒド基及びケトンカルボニル基が挙げられる。幾つかの実施態様では、リンカーの反応官能基のヘテロ原子は、抗体の求電子基と反応することができ、抗体ユニットに対して共有結合を形成することができる。非限定的な例示的なそうした反応官能基としては、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられる。
【０２５０】
リンカーは、１つ又は複数のリンカー構成成分を含むことができる。例示的リンカー構成成分としては、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」又は「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、及び４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（「ＭＣＣ」）が挙げられる。様々なリンカー構成成分が当技術分野で知られており、それらの幾つかを以下に記載する。
【０２５１】
リンカーは、薬物の放出を促進する「切断可能なリンカー」でもよい。非限定的な例示的な切断可能なリンカーとしては、（例えばヒドラゾンを含む）酸不安定性リンカー、プロテアーゼ感受性（例えばペプチダーゼ感受性）リンカー、感光性リンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chariら, Cancer Research 52:127-131(1992)；米国特許第５２０８０２０号）が挙げられる。
【０２５２】
ある種の実施態様では、リンカーは、以下の式ＩＩ：
2016537399.tif 000016
を有する。
【０２５３】
式中、Ａは「ストレッチャーユニット」であり、ａは０から１の整数である。Ｗは「アミノ酸ユニット」であり、ｗは０から１２の整数である。Ｙは「スペーサーユニット」であり、ｙは０、１又は２である。
式ＩＩのリンカーを含むＡＤＣは、式Ｉ（Ａ）：Ａｂ−（Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−Ｄ）ｐを有し、Ａｂ、Ｄ及びｐは、式Ｉについて上記で定義されている。そうしたリンカーの例示的実施態様は、出典明示により本明細書に明確に援用される、米国特許第７４９８２９８号に記載されている。
【０２５４】
幾つかの実施態様では、リンカー構成成分は、抗体を別のリンカー構成成分又は薬物部分に連結する「ストレッチャーユニット」（Ａ）を含む。非限定的な例示的ストレッチャーユニットを以下に示す（式中、波線は抗体、薬物又は追加的なリンカー構成成分への共有結合部位を示す）。
2016537399.tif 000017
【０２５５】
幾つかの実施態様では、リンカー構成成分は「アミノ酸ユニット」（Ｗ）を含む。幾つかのそうした実施態様では、アミノ酸ユニットによって、プロテアーゼによるリンカーの切断が可能になり、それによって、リソソーム酵素などの細胞内プロテアーゼへさらされた際に、イムノコンジュゲートからの薬物放出が促進される（Doroninaら(2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784）。例示的アミノ酸ユニットとしては、これらに限定されないが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド及びペンタペプチドが挙げられる。例示的ジペプチドとしては、これらに限定されないが、バリン−シトルリン（ｖｃ又はｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆ又はａｌａ−ｐｈｅ）、フェニルアラニン−リジン（ｆｋ又はｐｈｅ−ｌｙｓ）、フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）、及びＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が挙げられる。例示的トリペプチドとしては、これらに限定されないが、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が挙げられる。アミノ酸ユニットは、天然に生じるアミノ酸残基及び／又はマイナーなアミノ酸及び／又は天然に存在しないアミノ酸類似体、例えばシトルリンを含み得る。アミノ酸ユニットは、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ及びＤ又はプラスミンプロテアーゼによる酵素切断について、設計及び最適化することができる。
【０２５６】
典型的には、ペプチドタイプのリンカーは、二以上のアミノ酸及び/又はペプチド断片間でペプチド結合を形成することによって調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、液相合成法に従って調製することができる (例えば、E. Schroder and K. Lubke (1965) “The Peptides”, volume 1, pp 76-136, Academic Press)。
【０２５７】
幾つかの実施態様では、リンカー構成成分は、直接的に又はストレッチャーユニット及び／若しくはアミノ酸ユニットを介して抗体を薬物部分に連結する「スペーサー」ユニット（Ｙ）を含む。スペーサーユニットは、「自壊性」でもよいし、「非自壊性」でもよい。「非自壊性」スペーサーユニットは、ＡＤＣの切断の際に、一部又はすべてのスペーサーユニットが薬物部分に結合したままのスペーサーユニットである。非自壊性スペーサーユニットの例としては、これらに限定されないが、グリシンスペーサーユニット及びグリシン−グリシンスペーサーユニットが挙げられる。幾つかの実施態様では、グリシン−グリシンスペーサーユニットを含むＡＤＣの腫瘍細胞関連プロテアーゼによる酵素切断によって、ＡＤＣの残部からグリシン−グリシン−薬物部分が放出される。幾つかのそうした実施態様では、グリシン−グリシン−薬物部分が、腫瘍細胞において加水分解ステップにかけられ、それにより、薬物部分からグリシン−グリシンスペーサーユニットが切断される。
【０２５８】
「自壊性」スペーサーユニットによって、薬物部分の放出が可能になる。ある種の実施態様では、リンカーのスペーサーユニットは、ｐ−アミノベンジルユニットを含む。幾つかのそうした実施態様では、ｐ−アミノベンジルアルコールが、アミド結合を介してアミノ酸ユニットに結合し、カルバミン酸、メチルカルバミン酸又は炭酸塩が、ベンジルアルコールと薬物の間に作られる（Hamannら(2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103）。幾つかの実施態様では、スペーサーユニットは、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）である。幾つかの実施態様では、自壊性リンカーを含むＡＤＣは、構造：
2016537399.tif 000018
を有する。
【０２５９】
式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロ又は−シアノであり、ｍは０から４に及ぶ整数であり、Ｘは一以上の付加的スペーサーユニットであってよく又は欠損していてもよく、ｐは１から約２０の範囲に及ぶ。幾つかの実施態様では、ｐは１から１０、１から７、１から５、又は１から４の範囲に及ぶ。非限定的な例示的Ｘスペーサーユニットは、
2016537399.tif 000019
を含み；Ｒ１及びＲ２はＨ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立に選択される。幾つかの実施態様において、Ｒ１及びＲ２は、各々−ＣＨ３である。
【０２６０】
自壊性スペーサーの他の例としては、これらに限定されないが、ＰＡＢ基、例えば、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（米国特許第７３７５０７８；Hayら(1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237）及びオルソ−又はパラ−アミノベンジルアセタールと電子的に類似している芳香族化合物が挙げられる。幾つかの実施態様では、置換及び無置換の４−アミノ酪酸アミド（Rodriguesら(1995) Chemistry Biology 2:223）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Stormら(1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815）、並びに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Amsberryら(1990) J. Org. Chem. 55:5867）などの、アミド結合加水分解の際に環化を受けるスペーサーを使用することができる。グリシン残基のα−炭素への薬物の結合は、ＡＤＣにおいて有用であり得る自壊性スペーサーの別の例である（Kingsburyら(1984) J. Med. Chem. 27:1447）。
【０２６１】
幾つかの実施態様では、リンカーＬは、分枝状の、多官能性リンカー部分を介して１つより多い薬物部分を抗体へ共有結合するための樹状型リンカー（Sunら(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215；Sunら(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768）でもよい。樹状リンカーは、ＡＤＣの効力に関係している、抗体に対する薬物のモル比、すなわち負荷を増加させることができる。したがって、抗体がたった１つの反応性システインチオール基のみを有する場合は、多数の薬物部分は、樹状リンカーを介して結合することができる。
【０２６２】
式ＩのＡＤＣと関連して、非限定的な例示的リンカーを以下に示す。
2016537399.tif 000020
（式中、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立に選択される。幾つかの実施態様において、Ｒ１及びＲ２は各々−ＣＨ３である）；
2016537399.tif 000021
（式中、ｎは０から１２である。幾つかの実施態様において、ｎは２から１０である。幾つかの実施態様において、ｎは４から８である）。
【０２６３】
更なる非限定的な例示的ＡＤＣは、以下の構造：
2016537399.tif 000022
を含み、
式中、Ｘは、
2016537399.tif 000023
であり、Ｙは、
2016537399.tif 000024
であり、
各Ｒは独立に、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり、ｎは１から１２である。
【０２６４】
幾つかの実施態様では、リンカーは、溶解度及び／又は反応性を調節する基で置換される。非限定例として、スルホネート（−ＳＯ３−）又はアンモニウムなどの荷電置換基は、リンカー試薬の水溶性を高めることができ、ＡＤＣを調製するために用いられる合成経路に応じて、抗体及び／若しくは薬物部分とのリンカー試薬のカップリング反応を容易にするか、又はＤとのＡｂ−Ｌ（抗体−リンカー中間体）のカップリング反応若しくはＡｂとのＤ−Ｌ（薬物−リンカー中間体）カップリング反応を容易にすることができる。幾つかの実施態様では、リンカーの一部が抗体に結合し、リンカーの一部が薬物に結合し、次いで、Ａｂ−（リンカー部分）ａが薬物−（リンカー部分）ｂに結合して、式ＩのＡＤＣを形成する。
【０２６５】
化合物は、これらに限定されないが、以下のリンカー試薬を用いて調製されるＡＤＣを特に意図する。ビス−マレイミド−トリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、スクシンイミジルヨード酢酸（ＳＩＡ）、スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノアート］（ＳＭＰＨ）、イミノチオラン（ＩＴ）、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ及びスルホ−ＳＭＰＢ、並びにスクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）（ビス−マレイミド試薬：ジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）２（以下に示す）、及びＢＭ（ＰＥＧ）３（以下に示す）；イミドエステルの二機能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジサクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を含む）。幾つかの実施態様では、ビス−マレイミド試薬によって、抗体のシステインのチオール基の、チオール含有薬物部分、リンカー又はリンカー−薬物中間体への結合が可能になる。チオール基と反応性の他の官能基としては、これらに限定されないが、ヨードアセトアミド、ブロムアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート及びイソチオシアネートが挙げられる。
2016537399.tif 000025
【０２６６】
特定の有用なリンカー試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（ＢｏｕｌｄｅＲ、ＣＯ）などの様々な商業的供給元から得ることができ、又は当分野で記載されている手順、例えば、Ｔｏｋｉら（２００２）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、３８：５２５７−６０；Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．６０：５３５２−５３５５；Ｆｒｉｓｃｈら（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．７：１８０−１８６；米国特許第６２１４３４５号；国際公開第０２／０８８１７２号；米国特許出願公開第２００３１３０１８９号；米国特許出願公開第２００３０９６７４３号；国際公開第０３／０２６５７７号；国際公開第０３／０４３５８３号；及び国際公開第０４／０３２８２８号に記載されている手順に従って合成することができる。
【０２６７】
炭素１４標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの、抗体へのコンジュゲーションについての例示的キレート剤である。例えば、国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。
【０２６８】
ｂ）例示的薬物部分
（１）マイタンシン及びマイタンシノイド
幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、１つ又は複数のマイタンシノイド分子にコンジュゲートした抗体を含む。マイタンシノイドはマイタンシンの誘導体であり、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。マイタンシンは、東アフリカの灌木であるメイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ ｓｅｒｒａｔａ）から最初に単離された（米国特許第３８９６１１１号）。続いて、ある種の微生物も、マイタンシノール及びＣ−３マイタンシノールエステル（米国特許第４１５１０４２号）などのマイタンシノイドを産生することが発見された。合成マイタンシノイドは、例えば、米国特許第４１３７２３０号；第４２４８８７０号；第４２５６７４６号；第４２６０６０８号；第４２６５８１４号；第４２９４７５７号；第４３０７０１６号；第４３０８２６８号；第４３０８２６９号；第４３０９４２８号；第４３１３９４６号；第４３１５９２９号；第４３１７８２１号；第４３２２３４８号；第４３３１５９８号；第４３６１６５０号；第４３６４８６６号；第４４２４２１９号；第４４５０２５４号；第４３６２６６３号；及び第４４３７１５３３号に開示されている。
【０２６９】
マイタンシノイド薬物部分は、抗体−薬物コンジュゲートにおける魅力的な薬物部分である。これは、マイタンシノイド薬物部分が、（ｉ）発酵又は発酵産物の化学修飾又は誘導体化によって調製するのに比較的利用しやすく、（ｉｉ）非ジスルフィドリンカーを介する抗体へのコンジュゲーションに適した官能基を用いる誘導体化を受けることができ、（ｉｉｉ）血漿中で安定であり、（ｉｖ）種々の腫瘍細胞系統に対して有効であることが理由である。
【０２７０】
マイタンシノイド薬物部分としての使用に適した特定のマイタンシノイドは、当技術分野で知られており、天然源から既知の方法に従って単離することができ、又は遺伝子工学的手法を使用して産生することができる（例えば、Ｙｕら（２００２）ＰＮＡＳ９９：７９６８−７９７３を参照されたい）。マイタンシノイドは、既知の方法に従って合成的に調製することもできる。
【０２７１】
例示的マイタンシノイド薬物部分としては、これらに限定されないが、Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４２５６７４６号）（例えば、アンサマイトシンＰ２の水素化リチウムアルミニウム還元によって調製される）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（又はＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号及び第４３０７０１６号）（例えば、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）若しくは放射菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）を使用する脱メチル化又はＬＡＨを使用する脱塩素によって調製される）；及びＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４２９４７５７号）（例えば、塩化アシルを使用するアシル化によって調製される）などの修飾された芳香族環を有するもの、並びに芳香族環の他の位置での修飾を有するものが挙げられる。
【０２７２】
例示的マイタンシノイド薬物部分としては、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号）（例えば、マイタンシノールとＨ２Ｓ又はＰ２Ｓ５との反応によって調製される）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）；Ｃ−１４−ヒドロキシメチル又はアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（例えば、ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）から調製される）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（例えば、ストレプトマイセスによるマイタンシノールの変換によって調製される）；Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号及び第４３１５９２９号）（例えば、トレウィア・ヌドロフローラ（Ｔｒｅｗｉａ ｎｕｄｌｆｌｏｒａ）から単離される）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４３６２６６３号及び第４３２２３４８号）（例えば、ストレプトマイセスによるマイタンシノールの脱メチル化によって調製される）；及び４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号）（例えば、マイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元によって調製される）などの修飾を有するものも挙げられる。
【０２７３】
マイタンシノイド化合物の多くの位置が結合位置として有用である。例えば、エステル結合は、従来のカップリング手法を使用して、ヒドロキシル基との反応によって形成することができる。幾つかの実施態様では、反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位で起こり得る。幾つかの実施態様では、結合は、マイタンシノール又はマイタンシノール類似体のＣ−３位で形成される。
【０２７４】
マイタンシノイド薬物部分には、構造：
2016537399.tif 000026
を有するものが含まれる。
【０２７５】
式中、波線はマイタンシノイド薬物部分の硫黄原子の、ＡＤＣのリンカーへの共有結合を示す。各Ｒは独立に、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルでもよい。アミド基を硫黄原子に結合させるアルキレン鎖は、メタニル、エタニル又はプロピルでもよく、すなわち、ｍは、１、２又は３でもよい（米国特許第６３３４１０号；米国特許第５２０８０２０号；Chariら(1992) Cancer Res. 52:127-131;Liuら(1996) Proc. Natl. Acad. Sci USA 93:8618-8623）。
【０２７６】
マイタンシノイド薬物部分のすべての立体異性体、すなわち、キラル炭素でのＲ及びＳ配置の任意の組み合わせ（出典明示によりその全体が援用される、米国特許第７２７６４９７号；米国特許第６９１３７４８号；米国特許第６４４１１６３号；米国特許第６３３４１０（ＲＥ３９１５１）号；米国特許第５２０８０２０号；Widdisonら(2006) J. Med. Chem. 49:4392-4408）がＡＤＣについて企図される。幾つかの実施態様では、マイタンシノイド薬物部分は、以下の立体化学：
2016537399.tif 000027
を有する。
【０２７７】
マイタンシノイド薬物部分の例示的実施態様としては、これらに限定されないが、構造：
2016537399.tif 000028
を有する、ＤＭ１、ＤＭ３及びＤＭ４が挙げられ、
式中、波線は抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への薬物の硫黄原子の共有結合を示す。
【０２７８】
他の例示的マイタンシノイド抗体−薬物コンジュゲートは、以下の構造及び略称を有する（式中、Ａｂは抗体であり、ｐは１から約２０である。幾つかの実施態様では、ｐは１から１０、ｐは１から７、ｐは１から５、又はｐは１から４である）。
2016537399.tif 000029
【０２７９】
ＤＭ１が、ＢＭＰＥＯリンカーを介して抗体のチオール基へ連結される場合の例示的抗体−薬物コンジュゲートは、構造及び略称：
2016537399.tif 000030
を有する。
【０２８０】
式中、Ａｂは抗体であり、ｎは０、１又は２であり、ｐは１から約２０である。幾つかの実施態様では、ｐは１から１０、ｐは１から７、ｐは１から５、又はｐは１から４である。
【０２８１】
マイタンシノイドを含むイムノコンジュゲート、その作製方法及びその治療的使用は、例えば、米国特許第５２０８０２０号及び第５４１６０６４号、米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２Ａ１号、並びに欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号に開示されており、その開示は、出典明示により本明細書に明確に援用される。Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３（１９９６）；及びＣｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）も参照されたい。
【０２８２】
幾つかの実施態様では、抗体−マイタンシノイドコンジュゲートは、マイタンシノイド分子に抗体を化学的に連結することによって、抗体又はマイタンシノイド分子の何れかの生物活性を顕著に減弱させることなく調製することができる。例えば、米国特許第５２０８０２０号を参照されたい（その開示は、出典明示により本明細書に明確に援用される）。幾つかの実施態様では、抗体分子あたり平均３−４個のマイタンシノイド分子がコンジュゲートしたＡＤＣは、抗体の機能又は溶解度に負の影響を及ぼすことなく、標的細胞の細胞傷害性の増強において有効性を示した。場合によっては、１分子の毒素／抗体でさえ、ネイキッド抗体の使用において細胞傷害性を増強することが期待される。
【０２８３】
抗体−マイタンシノイドコンジュゲートを作製するための例示的連結基としては、例えば、本明細書に記載のもの、及びその開示が出典明示により本明細書に明確に援用される、米国特許第５２０８０２０号；欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号；ＣｈａｒｉらＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２Ａ１号；及び米国特許出願公開第２００５／０１６９９３Ａ１号に開示されているものが挙げられる。
【０２８４】
（２）オーリスタチン及びドラスタチン
薬物部分としては、ドラスタチン、オーリスタチン、及びそれらの類似体及び誘導体（米国特許第５６３５４８３号；米国特許第５７８０５８８号；米国特許第５７６７２３７号；米国特許第６１２４４３１号）が挙げられる。オーリスタチンは、海生軟体動物の化合物のドラスタチン−１０誘導体である。いかなる特定の理論にも束縛されることを意図するものではないが、ドラスタチン及びオーリスタチンは、微小管動態、ＧＴＰ加水分解並びに核及び細胞の分裂を妨げること（Woykeら(2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584）、並びに抗がん性（米国特許第５６６３１４９号）及び抗真菌活性（Pettitら(1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965）を有することが示されている。ドラスタチン／オーリスタチン薬物部分は、ペプチド性薬物部分のＮ（アミノ）末端又はＣ（カルボキシル）末端を介して、抗体に結合することができる（国際公開第０２／０８８１７２号；Doroninaら(2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784；Franciscoら(2003) Blood 102(4):1458-1465）。
【０２８５】
例示的なオーリスタチンの実施態様としては、Ｎ末端に連結したモノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦが挙げられ、これらは、その開示が出典明示によりその全体が明確に援用される、米国特許第７４９８２９８号及び米国特許第７６５９２４１号に開示されている。
2016537399.tif 000031
【０２８６】
式中、ＤＥ及びＤＦの波線は抗体又は抗体−リンカー構成成分への共有結合部位を示し、独立して各位置で、
Ｒ２は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環）から選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環）から選択され、
Ｒ５は、Ｈ及びメチルから選択され、
又はＲ４及びＲ５は、共同で炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し（式中、Ｒａ及びＲｂは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル及びＣ３−Ｃ８炭素環から独立に選択され、ｎは２、３、４、５及び６から選択される）、
Ｒ６は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環）から選択され、
各Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環及びＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から独立に選択され、
Ｒ９は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ１０は、アリール又はＣ３−Ｃ８ヘテロ環から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ又はＮＲ１２であり（式中、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルである）、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、又は−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され、
ｍは、１−１０００に及ぶ整数であり、
Ｒ１３は、Ｃ２−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１４は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１５の各存在は、独立に、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ又は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１６の各存在は、独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル又は−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８ヘテロ環）、及び−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され、
ｎは、０から６に及ぶ整数である。
【０２８７】
一実施態様では、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７は、独立に、イソプロピル又はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は、−Ｈ又はメチルである。例示的実施態様では、Ｒ３及びＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
【０２８８】
更に別の実施態様では、Ｒ２及びＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ９は−Ｈである。
【０２８９】
なお別の実施態様では、Ｒ８の各存在は−ＯＣＨ３である。
【０２９０】
例示的実施態様では、Ｒ３及びＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ２及びＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各存在は−ＯＣＨ３であり、Ｒ９−Ｈである。
【０２９１】
一実施態様では、Ｚは、−Ｏ−又は−ＮＨ−である。
【０２９２】
一実施態様では、Ｒ１０はアリールである。
【０２９３】
例示的実施態様では、Ｒ１０は−フェニルである。
【０２９４】
例示的実施態様では、Ｚが−Ｏ−である場合は、Ｒ１１は、−Ｈ、メチル又はｔ−ブチルである。
【０２９５】
一実施態様では、Ｚが−ＮＨである場合は、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、Ｒ１６は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル又は−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
【０２９６】
別の実施態様では、Ｚが−ＮＨである場合は、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
【０２９７】
式ＤＥの例示的なオーリスタチンの実施態様はＭＭＡＥであり、式中、波線は抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。
2016537399.tif 000032
【０２９８】
式ＤＦの例示的なオーリスタチンの実施態様はＭＭＡＦであり、式中、波線は抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。
2016537399.tif 000033
【０２９９】
他の例示的実施態様としては、ペンタペプチドオーリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニンカルボキシ修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８８４８号）、及びペンタペプチドオーリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニン側鎖修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８６０３号）が挙げられる。
【０３００】
ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦ及び様々なリンカー構成成分を含む式ＩのＡＤＣの非限定的な例示的実施態様は、以下の構造及び略称を有する（式中、「Ａｂ」は抗体であり、ｐは１から約８であり、「Ｖａｌ−Ｃｉｔ」はバリン−シトルリンジペプチドであり、「Ｓ」は硫黄原子である）。
2016537399.tif 000034
【０３０１】
ＭＭＡＦ及び様々なリンカー構成成分を含む式ＩのＡＤＣの非限定的な例示的実施態様は、Ａｂ−ＭＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ及びＡｂ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦを更に含む。タンパク分解的に切断不可能なリンカーによって抗体に結合したＭＭＡＦを含むイムノコンジュゲートは、タンパク分解的に切断可能なリンカーによって抗体に結合したＭＭＡＦを含むイムノコンジュゲートと匹敵する活性を有することが示されている（Doroninaら(2006) Bioconjugate Chem. 17:114-124）。幾つかのそうした実施態様では、薬物放出は、細胞における抗体の分解によってもたらさせると考えられている。
【０３０２】
典型的には、ペプチド−ベースの薬物部分は、２つ以上のアミノ酸及び／又はペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって調製することができる。そうしたペプチド結合は、例えば、液相合成法に従って調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ及びＫ．Ｌｕｂｋｅ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、１巻、７６−１３６頁、１９６５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。幾つかの実施態様では、オーリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、米国特許第７４９８２９８号；米国特許第５６３５４８３号；米国特許第５７８０５８８号；Ｐｅｔｔｉｔら（１９８９）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３−５４６５；Ｐｅｔｔｉｔら（１９９８）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ １３：２４３−２７７；Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１９９６、７１９−７２５；Ｐｅｔｔｉｔら（１９９６）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１ ５：８５９−８６３；並びにＤｏｒｏｎｉｎａ（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１（７）：７７８−７８４の方法に従って調製することができる。
【０３０３】
幾つかの実施態様では、ＭＭＡＥなどの式ＤＥ及びＭＭＡＦなどのＤＦのオーリスタチン／ドラスタチン薬物部分、及び薬物−リンカー中間体、並びにそれらの誘導体、例えばＭＣ−ＭＭＡＦ、ＭＣ−ＭＭＡＥ、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ及びＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、米国特許第７４９８２９８号；Ｄｏｒｏｎｉｎａら（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４；及びＤｏｒｏｎｉｎａら（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：７７８−７８４に記載されている方法を使用して調製することができ、次いで、目的の抗体にコンジュゲートすることができる。
【０３０４】
（３）カリケアマイシン
幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、１つ又は複数のカリケアマイシン分子にコンジュゲートした抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリー及びその類似体は、ピコモル濃度以下で二本鎖ＤＮＡの切断を引き起こすことができる（Hinmanら, (1993) Cancer Research 53:3336-3342;Lodeら, (1998) Cancer Research 58:2925-2928）。カリケアマイシンは、細胞内作用部位を有するが、場合によっては、形質膜を容易に通過しない。したがって、抗体媒介性内部移行を介するこうした薬剤の細胞内取込は、幾つかの実施態様では、その細胞傷害性作用を大きく増強し得る。カリケアマイシン薬物部分を有する抗体−薬物コンジュゲートの調製に関する非限定的な例示的方法は、例えば、米国特許第５７１２３７４号；米国特許第５７１４５８６号；米国特許第５７３９１１６号；及び米国特許第５７６７２８５号に記載されている。
【０３０５】
（４）ピロロベンゾジアゼピン
幾つかの実施態様では、ＡＤＣは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む。幾つかの実施態様では、ＰＤＢ二量体は、特異的なＤＮＡ配列を認識し、それに結合する。天然物のアントラマイシンであるＰＢＤは、１９６５年に最初に報告された（LeimGruberら, (1965) J. Am. Chem. Soc., 87:5793-5795;LeimGruberら, (1965) J. Am. Chem. Soc., 87:5791-5793）。それ以来、二量体の三環式ＰＢＤスキャフォールド（米国特許第６８８４７９９号；米国特許第７０４９３１１号；米国特許第７０６７５１１号；米国特許第７２６５１０５号；米国特許第７５１１０３２号；米国特許第７５２８１２６号；米国特許第７５５７０９９号）を含めて、天然産及び類似体の両方の幾つかのＰＢＤが報告されている（Thurstonら, (1994) Chem. Rev. 1994, 433-465）。いかなる特定の理論にも束縛されることを意図するものではないが、二量体構造は、Ｂ型ＤＮＡの副溝を伴う等螺旋性に適切な３次元形状を与え、結合部位でのぴったりとした嵌合をもたらすと考えられている（Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley及びNeedham-VanDevanter, (1986) Acc. Chem. Res., 19:230-237）。Ｃ２アリール置換基を有する二量体のＰＢＤ化合物は、細胞傷害剤として有用であることが示されている（Hartleyら(2010) Cancer Res. 70(17):6849-6858;Antonow (2010) J. Med. Chem. 53(7):2927-2941;Howardら(2009) Bioorganic and Med. Chem. Letters 19(22):6463-6466）。
【０３０６】
ＰＢＤ二量体が抗体にコンジュゲートしており、得られたＡＤＣは、抗がん特性を有することが示された。非限定的な例示的なＰＢＤ二量体の結合部位としては、５員のピロロ環、ＰＢＤユニット間のテザー、及びＮ１０−Ｃ１１イミン基が挙げられる（国際公開第２００９／０１６５１６号；米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号；米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号；米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号；米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号；国際公開第２０１１／１３０５９８号）。
【０３０７】
非限定的なＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成成分は、式Ａのもの：
2016537399.tif 000035
及びその塩及び溶媒和化合物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
点線は、Ｃ１及びＣ２の間又はＣ２及びＣ３の間の二重結合の任意選択的な存在を示し、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから独立に選択され、ハロ又はジハロから更に選択されてもよく、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ及びハロから独立に選択され、
Ｒ６及びＲ９は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立に選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立に選択され、
Ｑは、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立に選択され、
Ｒ１１は、Ｈ若しくはＲの何れかであり、又は、ＱがＯの場合は、ＳＯ３Ｍであり、ここでＭは金属カチオンであり、
Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立に、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、Ｃ３−２０ヘテロ環、及びＣ５−２０アリール基から選択され、任意選択的に、ＮＲＲ’基に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と共に、置換されていてもよい４、５、６又は７員ヘテロ環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７について定義される通りであり、
Ｒ”は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１つ又は複数のヘテロ原子、例えばＯ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅ及び／又は環が置換されていてもよい芳香族環、例えばベンゼン又はピリジンによって離断されてもよく、
Ｘ及びＸ’は、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立に選択される。
【０３０８】
幾つかの実施態様では、Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立に、置換されていてもよいＣ１−１２アルキル、Ｃ３−２０ヘテロ環、及びＣ５−２０アリール基から選択され、任意選択的に、ＮＲＲ’基に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と共に、置換されていてもよい４、５、６又は７員ヘテロ環を形成する。
【０３０９】
幾つかの実施態様では、Ｒ９及びＲ１９はＨである。
【０３１０】
幾つかの実施態様では、Ｒ６及びＲ１６はＨである。
【０３１１】
幾つかの実施態様では、Ｒ７及びＲ１７は両方ともＯＲ７Ａであり、Ｒ７Ａは、置換されていてもよいＣ１−４アルキルである。幾つかの実施態様では、Ｒ７ＡはＭｅである。幾つかの実施態様において、Ｒ７ＡはＣｈ２Ｐｈ（Ｐｈはフェニル基である）である。
【０３１２】
幾つかの実施態様では、ＸはＯである。
【０３１３】
幾つかの実施態様では、Ｒ１１はＨである。
【０３１４】
幾つかの実施態様では、各単量体ユニットのＣ２とＣ３の間に二重結合が存在する。
【０３１５】
幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、Ｈ及びＲから独立に選択される。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、独立にＲである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は独立に、置換されていてもよいＣ５−２０アリール又はＣ５−７アリール又はＣ８−１０アリールである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は独立に、置換されていてもよいフェニル、チエニル、ナフチル、ピリジル、キノリニル又はイソキノリニルである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ−ＲＤ及び＝Ｃ（ＲＤ）２から独立に選択される。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、各々、＝ＣＨ２である。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれＨである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれ＝Ｏである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれ＝ＣＦ２である。幾つかの実施態様では、Ｒ２及び／又はＲ１２は、独立に＝Ｃ（ＲＤ）２である。幾つかの実施態様では、Ｒ２及び／又はＲ１２は、独立に＝ＣＨ−ＲＤである。
【０３１６】
幾つかの実施態様では、Ｒ２及び／又はＲ１２が＝ＣＨ−ＲＤの場合は、それぞれの基は、独立に、以下に示す配置の何れかを有し得る。
2016537399.tif 000036
幾つかの実施態様では、ａ＝ＣＨ−ＲＤは配置（Ｉ）中に存在する。
【０３１７】
幾つかの実施態様では、Ｒ”はＣ３アルキレン基又はＣ５アルキレン基である。
【０３１８】
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成成分は式Ａ（Ｉ）：
2016537399.tif 000037
（式中、ｎは０又は１である）
の構造を有する。
【０３１９】
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成成分は、式Ａ（ＩＩ）：
2016537399.tif 000038
（式中、ｎは０又は１である）
の構造を有する。
【０３２０】
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成成分は、式Ａ（ＩＩＩ）：
2016537399.tif 000039
（式中、ＲＥ及びＲＥ”は、それぞれ独立にＨ又はＲＤから選択され、ＲＤは上記で定義されており、
ｎは０又は１である）
の構造を有する。
【０３２１】
幾つかの実施態様では、ｎは０である。幾つかの実施態様では、ｎは１である。幾つかの実施態様では、ＲＥ及び／又はＲＥ”はＨである。幾つかの実施態様では、ＲＥ及びＲＥ”はＨである。幾つかの実施態様では、ＲＥ及び／又はＲＥ”はＲＤであり、ＲＤは、置換されていてもよいＣ１−１２アルキルである。幾つかの実施態様では、ＲＥ及び／又はＲＥ”はＲＤであり、ＲＤはメチルである。
【０３２２】
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成成分は、式Ａ（ＩＶ）：
2016537399.tif 000040
（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立に、置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１及びＡｒ２は、同じでも異なっていてもよく、
ｎは０又は１である）
の構造を有する。
【０３２３】
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成成分は、式Ａ（Ｖ）：
2016537399.tif 000041
（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立に、置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１及びＡｒ２は、同じでも異なっていてもよく、
ｎは０又は１である）
の構造を有する。
【０３２４】
幾つかの実施態様では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立に、置換されていてもよいフェニル、フラニル、チオフェニル及びピリジルから選択される。幾つかの実施態様では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立に、置換されていてもよいフェニルである。幾つかの実施態様では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立に、置換されていてもよいチエン−２−イル又はチエン−３−イルである。幾つかの実施態様では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立に、置換されていてもよいキノリニル又はイソキノリニルである。キノリニル又はイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位置を介してＰＢＤコアに結合することができる。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル及びキノリン−８−イルでもよい。幾つかの実施態様では、キノリニルは、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イルから選択される。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル及びイソキノリン−８−イルでもよい。幾つかの実施態様では、イソキノリニルは、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルから選択される。
【０３２５】
更なる非限定的なＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成成分は、式Ｂのもの：
2016537399.tif 000042
及びその塩及び溶媒和化合物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
ＯＨに繋がれた波線は、Ｓ又はＲ配置を示し、
ＲＶ１及びＲＶ２は、Ｈ、メチル、エチル及びフェニル（フェニルは、特に４位のフルオロで任意選択的に置換されていてもよい）及びＣ５−６ヘテロシクリルから独立に選択され、式中、ＲＶ１及びＲＶ２は同一又は異なるものでも良く、
ｎは０又は１である。
【０３２６】
幾つかの実施態様では、ＲＶ１及びＲＶ２は、Ｈ、フェニル及び４−フルオロフェニルから独立に選択される。
【０３２７】
幾つかの実施態様では、リンカーは、Ｂ環のＮ１０イミン、Ｃ環のＣ−２エンド／エキソ位又はＡ環に連結するテザーユニットを含めたＰＢＤ二量体薬物部分の様々な部位のうちの１つで結合することができる（以下の構造Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）を参照されたい）。
【０３２８】
非限定的なＡＤＣの例示的なＰＢＤ二量体構成成分は、式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）：
2016537399.tif 000043
を含む。
【０３２９】
式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）をそれらのＮ１０−Ｃ１１イミン形態において示す。例示的ＰＢＤ薬物部分は、以下の表：
2016537399.tif 000044
で示すように、カルビノールアミン及び保護されたカルビノールアミン形態も更に含む。
式中、
Ｘは、ＣＨ２（ｎ＝１から５）、Ｎ又はＯであり、
Ｚ及びＺ’は、ＯＲ及びＮＲ２から独立に選択され、Ｒは、１から５個の炭素原子を含む一級、二級又は三級アルキル鎖であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２及びＲ’２は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−２０アリール（置換されたアリールを含む）、Ｃ５−２０ヘテロアリール基、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＯＨ及び−ＳＨから選択され、幾つかの実施態様では、アルキル、アルケニル及びアルキニル鎖は、５炭素原子まで含み、
Ｒ３及びＲ’３は、Ｈ、ＯＲ、ＮＨＲ及びＮＲ２から独立に選択され、Ｒは、１から５個の炭素原子を含む一級、二級又は三級アルキル鎖であり、
Ｒ４及びＲ’４は、Ｈ、Ｍｅ及びＯＭｅから独立に選択され、
Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−２０アリール（ハロ、ニトロ、シアノ、アルコキシ、アルキル、ヘテロシクリルによって置換されたアリールを含む）、及びＣ５−２０ヘテロアリール基から選択され、幾つかの実施態様では、アルキル、アルケニル及びアルキニル鎖は、５炭素原子まで含み、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル又は保護基（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、又は、バリン−シトルリン−ＰＡＢなどの自壊ユニットを含む部分）であり、
Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル又は保護基であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、Ｒ’２、Ｒ５又はＲ１２のうちの１つの水素、又はＡ環の間の−ＯＣＨ２ＣＨ２（Ｘ）ｎＣＨ２ＣＨ２Ｏ−スペーサーの水素は、ＡＤＣのリンカーに繋がれた結合で置き換えられている。
【０３３０】
ＡＤＣの例示的ＰＤＢ二量体部としては、これらに限定されないが、
2016537399.tif 000045
が挙げられる（波線は、リンカーへの共有結合部位を示す）。
【０３３１】
ＰＢＤ二量体を含むＡＤＣの非限定的な例示的実施態様は、以下の構造を有し、
2016537399.tif 000046
2016537399.tif 000047
式中、
ｎは０から１２である。幾つかの実施態様では、ｎは２から１０である。幾つかの実施態様では、ｎは４から８である。幾つかの実施態様では、ｎは４、５、６、７及び８から選択される。
【０３３２】
ＰＢＤ二量体−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ及びＰＢＤ二量体−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ−Ａｂのリンカーはプロテアーゼ切断可能であるが、ＰＢＤ二量体−マレイミド−アセタールのリンカーは酸不安定性である。
【０３３３】
ＰＢＤ二量体及びＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、当技術分野で知られている方法に従って、調製することができる。例えば、国際公開第２００９／０１６５１６号；米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号；米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号；米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号；米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号；国際公開第２０１１／１３０５９８号を参照されたい。
【０３３４】
（５）アントラサイクリン
幾つかの実施態様では、ＡＤＣはアントラサイクリンを含む。アントラサイクリンは、細胞傷害性活性を示す抗生物質化合物である。いかなる特定の理論にも束縛されることを意図するものではないが、研究によって、アントラサイクリンは、幾つかの異なる機序によって細胞を死滅させる働きをすることが示され、この機序には、１）細胞のＤＮＡへ薬物分子がインターカレーションし、それによってＤＮＡ依存性核酸合成が阻害されること、２）薬物によりフリーラジカルが産生され、次いで、それが細胞の高分子と反応して、細胞に損傷を引き起こすこと、及び／又は３）細胞膜との薬物分子の相互作用が含まれる（例えば、Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎら、「Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ａｎｄ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｏｆ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ」ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ；Ｎ．Ｒ．Ｂａｃｈｕｒ「Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｄａｍａｇｅ」ｉｄ．９７−１０２頁を参照されたい）。その細胞傷害性潜在能力のために、アントラサイクリンは、多数のがん、例えば、白血病、乳癌、肺癌、卵巣腺癌及び肉腫の治療に使用されてきた（例えば、Ｐ．Ｈ−Ｗｉｅｒｎｉｋ、ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ Ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ、１１頁を参照されたい）。
【０３３５】
非限定的な例示的アントラサイクリンとしては、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノマイシン、ネモルビシン、及びそれらの誘導体が挙げられる。ダウノルビシン及びドキソルビシンのイムノコンジュゲート及びプロドラッグが調製され、研究された（Kratzら(2006) Current Med. Chem. 13:477-523;Jeffreyら(2006) Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362；Torgovら(2005) Bioconj. Chem. 16:717-721；Nagyら(2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834；Dubowchikら(2002) Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532；Kingら(2002) J. Med. Chem. 45:4336-4343；欧州特許第０３２８１４７号；米国特許第６６３０５７９号）。抗体−薬物コンジュゲートのＢＲ９６−ドキソルビシンは、腫瘍関連抗原のＬｅｗｉｓ−Ｙと特異的に反応し、第Ｉ相及び第ＩＩ相試験で評価された（Salehら(2000) J. Clin. Oncology 18:2282-2292；Ajaniら(2000) Cancer Jour. 6:78-81；Tolcherら(1999) J. Clin. Oncology 17:478-484）。
【０３３６】
ＰＮＵ−１５９６８２は、ネモルビシンの強力な代謝物（又は誘導体）である（Quintieriら(2005) Clinical Cancer Research 11(4)：1608-1617）。ネモルビシンは、ドキソルビシンのグリコシドアミノに２−メトキシモルホリノ基を有する、ドキソルビシンの半合成的類似体であり、臨床評価下にあり（Grandiら(1990) Cancer Treat. Rev. 17:133；Ripamontiら(1992) Brit. J. Cancer 65:703;）、臨床評価には、肝細胞癌の第ＩＩ／ＩＩＩ相試験（Sunら(2003) Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 22, Abs1448；Quintieri (2003) Proceedings of the American Association of Cancer Research, 44:第１版, Abs 4649；Pacciariniら(2006) Jour. Clin. Oncology 24:14116）が含まれる。
【０３３７】
ネモルビシン又はネモルビシン誘導体を含む非限定的な例示的ADCを、式Ｉａに示す。
2016537399.tif 000048
式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ又はメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基又は薬学的に許容可能なそれらの塩であり、
Ｌ１及びＺは共に、本明細書に記載のリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは本明細書に記載の抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１から約２０である。幾つかの実施態様では、ｍは、１から１０、１から７、１から５、又は１から４である。
【０３３８】
幾つかの実施態様では、Ｒ１及びＲ２は両方ともメトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０３３９】
ネモルビシン又はネモルビシン誘導体を含む更なる非限定的な例示的ＡＤＣを、式Ｉｂに示す。
2016537399.tif 000049
式中、Ｒ１は水素原子、ヒドロキシ又はメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基又は薬学的に許容可能なそれらの塩であり、
Ｌ２及びＺは共に、本明細書に記載のリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは本明細書に記載の抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１から約２０である。幾つかの実施態様では、ｍは、１から１０、１から７、１から５、又は１から４である。
【０３４０】
幾つかの実施態様では、Ｒ１及びＲ２は両方ともメトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０３４１】
幾つかの実施態様では、ネモルビシン含有ＡＤＣのネモルビシン構成成分はＰＮＵ−１５９６８２である。幾つかのそうした実施態様では、ＡＤＣの薬物部は、以下の構造のうちの１つを有してもよい。
2016537399.tif 000050
式中、波線は、リンカー（Ｌ）への結合を示す。
【０３４２】
アントラサイクリンは、ＰＮＵ−１５９６８２を含めて、幾つかの結合部位及び本明細書に記載のリンカーを含めた種々のリンカー（米国特許出願公開第２０１１／００７６２８７号；国際公開第２００９／０９９７４１号；米国特許出願公開第２０１０／００３４８３７号；国際公開第２０１０／００９１２４号）を介して、抗体にコンジュゲートすることができる。
【０３４３】
ネモルビシン及びリンカーを含む例示的ＡＤＣとしては、これらに限定されないが、
2016537399.tif 000051
2016537399.tif 000052
2016537399.tif 000053
2016537399.tif 000054
式中、Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立に選択され；及び
2016537399.tif 000055
が挙げられる。
【０３４４】
ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂのリンカーは酸不安定性であるが、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー−Ａｂ、及びＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー（Ｒ１Ｒ２）−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能である。
【０３４５】
（６）他の薬物部分
薬物部分としては、ゲルダナマイシン（Mandlerら(2000) J. Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581；Mandlerら(2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028；Mandlerら(2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791）、並びに酵素的に活性な毒素及びその断片も挙げられ、これらに限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテセンが含まれる。例えば、国際公開第９３／２１２３２号を参照されたい。
【０３４６】
薬物部分としては、核酸分解活性を有する化合物（例えば、ＲＮＡ分解酵素又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ）も挙げられる。
【０３４７】
ある種の実施態様では、イムノコンジュゲートは高放射性原子を含むことができる。種々の放射性同位元素が、放射性コンジュゲート抗体を産生するのに利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位元素が挙げられる。幾つかの実施態様では、検出にイムノコンジュゲートが使用される場合、イムノコンジュゲートは、シンチグラフィー試験用に放射性原子、例えばＴｃ９９若しくはＩ１２３を含むことができ、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴イメージング、ＭＲＩとしても知られる）用にスピン標識、例えばジルコニウム−８９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン若しくは鉄を含むことができる。ジルコニウム−８９は、例えば、ＰＥＴイメージング用に、様々な金属キレート剤と錯体形成していてもよく、抗体にコンジュゲートしていてもよい（国際公開第２０１１／０５６９８３号）。
【０３４８】
放射性標識又は他の標識を、既知の方法でイムノコンジュゲートに組み込むことができる。例えばペプチドは、例えば、１つ又は複数の水素の代わりに１つ又は複数のフッ素−１９原子を含む適切なアミノ酸前駆体を使用して、生合成又は化学合成することができる。幾つかの実施態様では、Ｔｃ９９、Ｉ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８及びＩｎ１１１などの標識は、抗体のシステイン残基を介して結合することができる。幾つかの実施態様では、イットリウム−９０は、抗体のリジン残基を介して結合することができる。幾つかの実施態様では、ＩＯＤＯＧＥＮ法（Frakerら(1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80: 49-57）を使用して、ヨウ素−１２３を組み込むことができる。「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ」（Ｃｈａｔａｌ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９８９）は、特定の他の方法を記載している。
【０３４９】
ある種の実施態様では、イムノコンジュゲートは、プロドラッグ活性化酵素にコンジュゲートした抗体を含むことができる。幾つかのそうした実施態様では、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグ（例えばペプチジル化学療法剤、国際公開第８１／０１１４５号を参照されたい）を、活性薬物、例えば抗がん剤に変換する。幾つかの実施態様では、そうしたイムノコンジュゲートは、抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体にコンジュゲートすることができる酵素としては、これらに限定されないが、リン酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用であるアルカリホスファターゼ；硫酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用であるアリールスルファターゼ；無毒性の５−フルオロシトシンを、抗がん剤、５−フルオロウラシルに変換するのに有用であるシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用であるプロテアーゼ、例えばセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ及びカテプシン（カテプシンＢ及びＬなど）；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するのに有用であるＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用である、β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼなどの炭水化物切断酵素；β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用であるβ−ラクタマーゼ；並びにそのアミン窒素においてフェノキシアセチル又はフェニルアセチル基でそれぞれ誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用であるペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼが挙げられる。幾つかの実施態様では、酵素は、当技術分野でよく知られている組換えＤＮＡ手法によって、共有結合的に抗体に結合することができる。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照されたい。
【０３５０】
ｃ）薬物負荷
薬物負荷は、ｐ、すなわち式Ｉの分子における抗体あたりの薬物部分の平均数によって表される。薬物負荷は、抗体あたり１から２０の薬物部分（ｄ）に及び得る。式ＩのＡＤＣは、１から２０の範囲の薬物部分とコンジュゲートした抗体の集合を含む。コンジュゲーション反応由来のＡＤＣ調製物における抗体あたりの薬物部分の平均数は、質量分光、ＥＬＩＳＡアッセイ及びＨＰＬＣなどの従来の手段で明らかにすることができる。ｐに関してのＡＤＣの定量的分布を、決定することもできる。場合によっては、ｐが他の薬物負荷を有するＡＤＣ由来の特定の値である場合の均一なＡＤＣの分離、精製及び特徴づけは、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動などの手段によって達成することができる。
【０３５１】
幾つかの抗体−薬物コンジュゲートについては、ｐは、抗体の結合部位の数によって制限され得る。例えば、結合がシステインチオールである場合は、上記の特定の例示的実施態様にあるように、抗体は、１つのみ又は幾つかのシステインチオール基を有してもよいし、リンカーが結合することができる、１つのみ又は幾つかの十分に反応性のチオール基を有してもよい。ある種の実施態様では、高薬物負荷、例えばｐ＞５は、特定の抗体−薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、毒性又は細胞透過性の喪失を引き起こす可能性がある。ある種の実施態様では、ＡＤＣに対する平均薬物負荷は、１から約８、約２から約６、又は約３から約５の範囲に及ぶ。実際に、特定のＡＤＣについて、抗体あたりの薬物部分の最適な比は、８未満、及び約２から約５であり得ることが示された（米国特許第７４９８２９８号）。
【０３５２】
ある種の実施態様では、理論上の最大数より少ない薬物部分が、コンジュゲーション反応の間に抗体にコンジュゲートする。以下で論じるように、抗体は、例えば、薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬に反応しないリジン残基を含むことができる。一般に、抗体は、薬物部分に連結され得る、遊離及び反応性システインチオール基を多く含まず、実際に、抗体のほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある種の実施態様では、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤で、部分的又は全還元条件下で抗体を還元して、反応性システインチオール基を生成することができる。ある種の実施態様では、抗体を変性条件にかけて、リジン又はシステインなどの反応性求核基を明らかにする。
【０３５３】
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比率）は、様々な方法で、例えば、（ｉ）抗体と比較して過剰な薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬のモル濃度の制限、（ｉｉ）コンジュゲーションの反応時間又は温度の制限、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分的又は制限的還元条件によって調節することができる。
【０３５４】
１つより多い求核基が薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬と反応する場合は、得られた産物は、抗体に結合した１つ又は複数の薬物部分が分布したＡＤＣ化合物の混合物であることを理解されたい。抗体あたりの薬物の平均数は、抗体に対して特異的且つ薬物に対して特異的な二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって、混合物から計算することができる。個々のＡＤＣ分子を、質量分光によって混合物中で同定することができ、ＨＰＬＣ、例えば疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離することができる（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈら（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ１９（７）：２９９−３０７；Ｈａｍｂｌｅｔｔら（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０；Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．ら「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ−ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ」、要旨番号６２４、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｍａｒｃｈ２７−３１、２００４、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ、４５巻、Ｍａｒｃｈ２００４；Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．ら「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、要旨番号６２７、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｍａｒｃｈ２７−３１、２００４、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ、５巻、Ｍａｒｃｈ ２００４を参照されたい）。ある種の実施態様では、単一の負荷値を有する均一なＡＤＣを、電気泳動又はクロマトグラフィーによって、コンジュゲーション混合物から単離することができる。
【０３５５】
ｄ）イムノコンジュゲート調製の特定の方法
式ＩのＡＤＣは、当業者に知られている有機化学の反応、条件及び試薬を用いる幾つかの経路によって調製することができ、これは、（１）抗体の求核基を二価のリンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＡｂ−Ｌを形成し、続いて、薬物部分Ｄと反応させること、及び（２）薬物部分の求核基を二価のリンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＤ−Ｌを形成し、続いて、抗体の求核基と反応させることを含む。後者の経路を介して式ＩのＡＤＣを調製するための例示的方法は、米国特許第７４９８２９８号に記載されており、これは、出典明示により本明細書に明確に援用される。
【０３５６】
抗体の求核基としては、これらに限定されないが、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えばリジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えばシステイン、及び（ｉｖ）抗体がグリコシル化される場所である糖ヒドロキシル又はアミノ基が挙げられる。アミン、チオール及びヒドロキシル基は、求核性であり、（ｉ）活性エステル、例えばＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロギ酸及び酸ハライド、（ｉｉ）アルキル及びベンジルハライド、例えばハロアセトアミド、並びに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル及びマレイミド基を含めた、リンカー部分及びリンカー試薬の求電子基と共有結合を形成するように反応することができる。特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体を完全に又は部分的に還元するように、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤で処理することによって、リンカー試薬とのコンジュゲーションのために抗体を反応性にすることができる。したがって、理論的に、各システイン架橋は、２つの反応性チオール求核剤を形成する。リジン残基の修飾を介して、例えば、リジン残基を２−イミノチオラン（トラウト試薬）と反応させることによって、追加的な求核基を抗体に導入することができ、これによって、アミンをチオールに変換することができる。１つ、２つ、３つ、４つ又はそれ以上のシステイン残基を導入することによって（例えば、１つ又は複数の非天然のシステインアミノ酸残基を含む変異体抗体を調製することによって）、反応性チオール基を抗体に導入することもできる。
【０３５７】
抗体−薬物コンジュゲートは、例えばアルデヒド又はケトンカルボニル基などの抗体の求電子基とリンカー試薬又は薬物の求核基との間の反応によって産生することもできる。リンカー試薬における有用な求核基としては、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート及びアリールヒドラジドが挙げられる。一実施態様では、抗体を、リンカー試薬又は薬物の求核性置換基と反応することができる求電子性部分を導入するように修飾する。別の実施態様では、グリコシル化抗体の糖を、例えば過ヨウ素酸塩酸化試薬を用いて酸化して、リンカー試薬又は薬物部分のアミン基と反応し得るアルデヒド又はケトン基を形成することができる。得られたイミンシッフ塩基基は、安定な結合を形成することができ、又は例えばホウ化水素試薬によって還元されて、安定なアミン結合を形成することができる。一実施態様では、ガラクトース酸化酵素又はメタ過ヨウ素酸ナトリウムの何れかとのグリコシル化抗体の炭水化物部の反応は、薬物の適切な基と反応することができるカルボニル（アルデヒド及びケトン）基を抗体中にもたらし得る（Hermanson, Bioconjugate Techniques）。別の実施態様では、Ｎ末端セリン又はスレオニン残基を含む抗体は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応することができ、一級アミノ酸の代わりにアルデヒドを産生することができる（Geoghegan & Stroh, (1992) Bioconjugate Chem. 3:138-146；米国特許第５３６２８５２号）。そうしたアルデヒドは、薬物部分又はリンカー求核剤と反応することができる。
【０３５８】
薬物部分の例示的求核基としては、これらに限定されないが、（ｉ）活性エステル、例えばＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロギ酸及び酸ハライド、（ｉｉ）アルキル及びベンジルハライド、例えばハロアセトアミド、（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル及びマレイミド基を含めたリンカー部分及びリンカー試薬の求電子基と共有結合を形成するように反応することができる、アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジド基が挙げられる。
【０３５９】
ＡＤＣを調製するのに使用することができる非限定的な例示的架橋試薬は、「例示的リンカー」と表題をつけたセクションにおいて本明細書に記載する。タンパク質部分及び化学物質部分を含めた２つの部分を連結するためのそうした架橋試薬を使用する方法は、当技術分野で知られている。幾つかの実施態様では、抗体及び細胞傷害剤を含む融合タンパク質を、例えば、組換え手法又はペプチド合成によって作製することができる。組換えＤＮＡ分子は、互いに隣接した又コンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離した、コンジュゲートの抗体及び細胞傷害性部分をコードする領域を含むことができる。
【０３６０】
更に別の実施態様では、抗体を、腫瘍のプレターゲティングに利用するための「受容体」（ストレプトアビジンなど）にコンジュゲートすることができ、ここでは、抗体−受容体コンジュゲートを患者に投与し、続いて、除去剤を使用して循環から未結合のコンジュゲートを除去し、次いで、細胞傷害剤（例えば、薬物又は放射性ヌクレオチド）にコンジュゲートした「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する。
【０３６１】
Ｆ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある実施態様において、本明細書で提供する抗ＬＧＲ５抗体のうちの何れかは、生物学的試料におけるＬＧＲ５の存在を検出するために、本明細書に記載される方法の何れかにおいて有用である。本明細書で使用する「検出」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。「生物学的試料」は、例えば、細胞又は組織（例えば、がん性又はがん性の可能性がある基底細胞がんを含めた生検材料）を含む。
【０３６２】
一実施態様において、診断又は検出の方法に使用される抗ＬＧＲ５抗体が提供される。更なる態様において、生物学的試料中のＬＧＲ５の存在を検出する方法が提供される。ある実施態様において、方法は、抗ＬＧＲ５抗体がＬＧＲ５に結合可能な条件下で、本明細書に記載のように、抗ＬＧＲ５抗体に生物学的試料を接触させること、及び生物学的試料において抗ＬＧＲ５抗体及びＬＧＲ５の間で複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ又はインビボでの方法であり得る。一実施態様では、例えば、ＬＧＲ５が患者を選択するための生物指標である場合、抗ＬＧＲ５抗体は、抗ＬＧＲ５抗体を用いる療法に好適な被験体を選択するのに使用される。更なる実施態様において、生物学的試料は、細胞又は組織（例えば、がん性又はがん性の可能性がある基底細胞癌組織を含めた生検材料）である。
【０３６３】
更なる実施態様において、抗ＬＧＲ５抗体は、例えば、がんの診断、予測若しくは病期分類、適切な療法経過の決定、又は療法に対するがんの応答のモニタリングの目的で、例えばインビボイメージングによって、被験体のＬＧＲ５陽性がんを検出するために、インビボで使用される。インビボ検出のための当技術分野で知られている一方法は、例えば、ｖａｎ Ｄｏｎｇｅｎら、Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ １２：１３７９−１３８９（２００７）、及びＶｅｒｅｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載されているような、免疫陽電子放出断層撮影法（免疫ＰＥＴ）である。そうした実施態様では、被験体のＬＧＲ５陽性のがんを検出するための方法が提供され、この方法は、ＬＧＲ５陽性のがんを有する又は有することが疑われる被験体に標識抗ＬＧＲ５抗体を投与すること、及び被験体において標識抗ＬＧＲ５抗体を検出することを含み、標識抗ＬＧＲ５抗体の検出が、被験体のＬＧＲ５陽性のがんを示す。ある種のそうした実施態様では、標識抗ＬＧＲ５抗体は、陽電子放出体、例えば６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ及び１２４Ｉにコンジュゲートした抗ＬＧＲ５抗体を含む。特定の実施態様では、陽電子放出体は８９Ｚｒである。
【０３６４】
更なる実施態様では、診断又は検出の方法は、支持体に固定化された第１の抗ＬＧＲ５抗体を、ＬＧＲ５の存在について試験される生物学的試料と接触させること、第２の抗ＬＧＲ５抗体に支持体をさらすこと、及び生物学的試料において第１の抗ＬＧＲ５抗体とＬＧＲ５の間の複合体に第２の抗ＬＧＲ５が結合しているかどうかを検出することを含む。支持体は、任意の支持媒体、例えば、ガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ及び他の支持体でもよい。ある実施態様において、生物学的試料は、細胞又は組織（例えば、がん性又はがん性の可能性がある基底細胞癌組織を含めた生検材料）を含む。ある実施態様において、第１又は第２の抗ＬＧＲ５抗体は、本明細書に記載の抗体のうちの何れかである。幾つかのそうした実施態様では、第２の抗ＬＧＲ５抗体は、８Ｅ１１でもよく、又は例えば本明細書に記載の８Ｅ１１に由来する抗体でもよい。幾つかのそうした実施態様では、第２の抗ＬＧＲ５抗体は、ＹＷ３５３でもよく、又は例えば本明細書に記載のＹＷ３５３に由来する抗体でもよい。幾つかの実施態様において、第１又は第２の抗ＬＧＲ５抗体は、３Ｇ１２及び２Ｈ６、及び例えば本明細書に記載の３Ｇ１２及び／又は２Ｈ６から由来する抗体から選択される。
【０３６５】
上記実施態様の何れかに従って診断又は検出することができる例示的障害としては、ＬＧＲ５陽性のがんが含まれる。幾つかの実施態様において、ＬＧＲ５陽性のがんは、抗ＬＧＲ５免疫組織化学（ＩＨＣ）又はインサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）の「０」より大きいスコアが与えられるがんであり、このスコアは、例Ｂにおいて本明細書に記載する条件下で、非常に弱い又は＞９０％の腫瘍細胞で染色無しに相当する。別の実施態様では、ＬＧＲ５陽性のがんは、例Ｂにおいて本明細書で記載する条件下で定められるように、ＬＧＲ５を１＋、２＋又は３＋のレベルで発現する。幾つかの実施態様では、ＬＧＲ５陽性のがんは、ＬＧＲ５のｍＲＮＡを検出する逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイによりＬＧＲ５を発現するがんである。幾つかの実施態様において、ＲＴ−ＰＣＲは、定量ＲＴ−ＰＣＲである。
【０３６６】
ある実施態様において、標識抗ＬＧＲ５抗体が提供される。標識には、これらに限定されないが、（蛍光、発色団、高電子密度、化学発光、及び放射性標識などの）直接的に検出される標識又は部分、並びに例えば、酵素反応又は分子の相互作用を介して間接的に検出される、酵素又はリガンドなどの部分が挙げられる。例示的標識としては、これらに限定されないが、放射性同位体の３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ及び１３１Ｉ、希土キレート又はフルオレセインなどのフルオロフォア及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質酸化酵素、例えばグルコース酸化酵素、ガラクトース酸化酵素及びグルコース−６−リン酸脱水素酵素、ヘテロ環酸化酵素、例えばウリカーゼ及びキサンチン酸化酵素、色素前駆体を酸化するために過酸化水素を用いる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ又はミクロペルオキシダーゼとの結合、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定なフリーラジカルなどが挙げられる。別の実施態様では、標識は陽電子放出体である。陽電子放出体としては、これらに限定されないが６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ及び１２４Ｉが挙げられる。特定の実施態様では、陽電子放出体は８９Ｚｒである。
【０３６７】
Ｇ．薬学的製剤
本明細書に記載のイムノコンジュゲートを含む抗ＬＧＲ５抗体の薬学的製剤は、所望の純度を有するそうした抗体又はイムノコンジュゲートを１つ又は複数の任意選択的な薬学的に許容可能な担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版， Ｏｓｏｌ， Ａ．編（１９８０））と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水性液剤の形で調製される。薬学的に許容可能な担体は、一般に、用いる投薬量及び濃度においてレシピエントに対して非中毒性であり、これらに限定されないが、リン酸、クエン酸及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含めた抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース若しくはデキストリンを含めた、単糖類、二糖類及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば亜鉛−タンパク質錯体）；並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性の界面活性剤が挙げられる。本明細書において例示的な薬学的に許容可能な担体としては、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）などの間質薬物分散剤、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を更に含む。特定の例示的ｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、ｒＨｕＰＨ２０を含めて、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ又は複数の追加的なグルコサミノグリカナーゼと組み合わせる。
【０３６８】
イムノコンジュゲート製剤を含む例示的な凍結乾燥抗体は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。イムノコンジュゲート製剤を含む水性抗体には、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤は、ヒスチジン−酢酸緩衝液を含む。
【０３６９】
本明細書の製剤は、治療される特定の適応症に必要である場合、１種より多い活性成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものを含むこともできる。
【０３７０】
活性成分は、コロイド薬物配送システム（例えば、リポソーム、アルブミン微粒子、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションにおいて、例えばコアセルベーション法又は界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに封入することができる。そうした手法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ編（１９８０）に開示されている。
【０３７１】
持続性放出調製物を調製することができる。持続性放出調製物の適切な例としては、マトリックスが成形品の形、例えばフィルム又はマイクロカプセルである、抗体又はイムノコンジュゲートを含む固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられる。
【０３７２】
インビボ投与に使用される製剤は、一般に無菌である。無菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成することができる。
【０３７３】
Ｈ．製造品
本発明の別の態様では、上記の障害の治療、予防及び／又は診断に有用な材料を含む製造品が提供される。製造品は、容器、及び容器上の若しくは容器に付随するラベル又は添付文書を含む。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、注射器、ＩＶ輸液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。容器は、単独で、又は別の組成物と組み合わせて、障害を治療、予防及び／若しくは診断するのに有効な組成物を収容し、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈輸液バッグ又はバイアルでもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、イムノコンジュゲートを含む抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択された状態を治療するのに使用されることを示す。更に、製造品は、（ａ）イムノコンジュゲートを含む抗体を含む組成物が中に含まれる第１の容器、及び（ｂ）更なる細胞傷害性薬又は治療薬を含む組成物が中に含まれる第２の容器を含むことができる。幾つかの実施態様において、組成物を有する第２の容器はその中に含有し、その組成物はヘッジホッグ経路の阻害剤を含む。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、スムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、ヘッジホッグ経路の阻害剤は、シクロパミン競合性のスムーズンドのアンタゴニストである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミド又はその塩である。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、２−クロロ−Ｎ−［４−クロロ−３−（ピリジン−２−イル）フェニル］−４−（メチルスルホニル）ベンズアミドである。幾つかの実施態様において、スムーズンドのアンタゴニストは、ビスモデギブである。
【０３７４】
本発明の本実施態様における製造品は、組成物が特定の状態を治療するのに使用ができることを示す添付文書を更に含むことができる。あるいは、又は更に、製造品は、薬学的に許容可能な緩衝液、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー液又はデキストロース溶液を含む第２（又は第３）の容器を更に含むことができる。他の緩衝液、希釈剤、濾過器、針及び注射器を含めた、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
【実施例】
【０３７５】
以下は本発明の方法及び組成物の例である。上記の一般的な説明を考慮すると、様々な他の実施態様が実施されてもよいことが理解される。
実施例１
ＬＧＲ５ＤＴＲｅＧＦＰ構築
ＬＧＲ５について、Ｃ５７ＢＬ／６ ＢＡＣ（ＲＰ２３ライブラリー）からの７，２１３ｂｐ断片（アセンブリ ＮＣＢＩ３７／ｍｍ９，ｃｈｒ１０：１１５，０２０，３１５−１１５，０２７，５２７）が、プラスミドｐＢｌｉｇｈｔ−ＴＫ２５にクローニングされた。ＬＧＲ５のためのＤＴＲ−ＥＧＦＰ ＫＩベクターを作成するために、エクソン１の残りの部分及びイントロン１のスプライスドナーを欠失させた（２１２ｂｐの欠失）ＤＴＲ−ＥＧＦＰ−ｐＡ−ｌｏｘＰ−Ｎｅｏ−ｌｏｘＰカセットが合成された（Ｂｌｕｅ Ｈｅｒｏｎ／Ｏｒｉｇｅｎｅ，ＤＴＲ−ＥＧＦＰ配列は、以前に記述されたものに基づいており２７、ＬＧＲ５のＡＴＧの直後に挿入された（ｃｈｒ１０：１１５，０２４，５４７、リバースストランド）。ＣｒｅＥＲＴ２ ＫＩベクターを作成するために、ｄｓＲｅｄ２−ＩＲＥＳ−ＣｒｅＥＲＴ２−ｐＡ−Ｆｒｔ−ｎｅｏ−Ｆｒｔカセットが合成され（Ｂｌｕｅ Ｈｅｒｏｎ／Ｏｒｉｇｅｎｅ）、ＤＴＲ−ＥＧＦＰカセットと同じ位置で挿入された。最終的なベクターは、ＤＮＡ配列決定によって確認された。
【０３７６】
ＬＧＲ５ ＫＩベクターはＮｏｔＩと直線化され、Ｃ５７ＢＬ／６ Ｃ２胚性幹細胞は、標準的な方法（Ｇ４１８陽性及びガンシクロビル陰性選択）を使用して標的とされた。陽性クローンは、ＰＣＲ及びＴａｑＭａｎ分析を使用して同定され、修飾された遺伝子座の配列決定によって確認された。正確に標的化された胚性幹細胞は、Ｎｅｏカセットを除去するために、Ｃｒｅ又はＦｌｐｅプラスミドでそれぞれでトランスフェクトされた。改変された胚性幹細胞は、次いで、標準的な技術を用いて、胚盤胞に注入され、生殖細胞系伝達は、得られたキメラをＣ５７ＢＬ／６Ｎ雌と交配後に得られた。
【０３７７】
表在型基底細胞癌におけるＤＴ細胞切除（ＢＣＣ）
Ｋ１４ＣｒｅＥＲ／＋；ｐ５３ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ；ＰｔｃｈｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ；ＬＧＲ５ＤＴＲｅＧＦＰ／＋マウスは、ｐ５３ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ；ＰｔｃｈｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ；ＬＧＲ５ＤＴＲｅＧＦＰ／＋マウスを、ｐ５３ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ；ＰｔｃｈｌｏｘＰ／＋；Ｋ１４ＣｒｅＥＲ／＋と交配することにより作成された。毛皮の喪失、汚らしい外被、耳又は尾皮膚の肥厚などの表在型ＢＣＣ疾患の明らかな兆候を示す動物が研究に置かれた。動物は、典型的には７週齢で研究に置かれた。Ｋ１４ＣｒｅＥＲ／＋；ｐ５３ｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ；ＰｔｃｈｌｏｘＰ／ｌｏｘＰ；ＬＧＲ５ＤＴＲｅＧＦＰ／＋マウスは、以下のような計画で処置された。残留する表在型ＢＣＣに対するＤＴ処置の影響を試験するために、マウスは、３８日間、ビスモデギブ（ＧＤＣ−０４４９）を７５ｍｇ１日２回経口で処置され、２９日目に開始して最終８日間隔日でジフテリア毒素（ＤＴ）を５０ｕｇ／ｋｇ併用した。対照マウスは、３８日間、ビスモデギブ（ＧＤＣ−０４４９）を７５ｍｇ１日２回経口で処置され、処置の最終８日間、２００ｕＬのＩＰ生理食塩水を併用した。更に、疾患（上記）の兆候を示す動物は、単一ＤＴ処置の効果を試験するために、５日間隔日で、５０μｇ／ｋｇの生理食塩水又はＤＴを単独で処置された。
【０３７８】
組織学及び免疫蛍光染色
処置した動物から採取した皮膚は、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色のために確立されたプロトコルを使用して処理された。あるいは、処置された動物の背中の皮膚を、４％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ溶液中で一晩固定し、洗浄し、一晩スクロース／ＰＢＳ溶液３０％中でインキュベートし、凍結ＯＣＴ中に包埋した。次いで、凍結したブロックから切片が８ｕｍで切断され、アポトーシスマーカーである切断カスパーゼ３（１：１０００）、ＧＦＰ（１：１０００）、又はケラチン５（１：１０００）について染色された。切片はＤＡＰＩで対比染色された。
【０３７９】
結果
強いＧＦＰ発現が、生理食塩水単独で処置された動物における表在型ＢＣＣ腫瘍において観察された。この結果は、ＬＧＲ５が表在型ＢＣＣ内で発現されることを明らかにしているインサイツハイブリダイゼーション実験においての観察と一致する。これらの対照マウスにおいて、ＣＣ３染色によってマークされたアポトーシス細胞は乏しく、毛包に対して単離された。合計５日間ＤＴで処置したマウスでは、腫瘍における有意なＣＣ３染色は、毛包においても観察された。有意なアポトーシスは、表皮の基底細胞では観察されず、ＤＴ処置は、腫瘍及び毛包を特に標的とすることを示唆している。
【０３８０】
ＤＴ処置は、残留するＢＣＣを標的にすることができるかどうかを決定するために、マウスはビスモデギブで２８日間処置され、その後更に８日間ビスモデギブとＤＴで共処置された。少なくとも一の動物において、ケラチン５染色により明らかにされるように残存病変は僅かであった。最小限のＣＣ３染色は、残存病変はこの動物においてはほぼ根絶されていることを示唆していた。他のマウスにおいて、我々は、スムーズンドアンタゴニストのビスモデギブによって皮膚からそもそも除去されない残存腫瘍において生じる標的アポトーシスを観察した。
【０３８１】
Ｈ＆Ｅ染色は、標的及び対照マウスからの様々な組織で実施された。ビスモデギブ単独による処置と比較して、ビスモデギブとＤＴにより処置された耳組織の肥厚において著しい減少が観察され、ＤＴ処置によるＬＧＲ５陽性細胞の更なる切除は残存病変を除去するのに有益であることを示唆している。
【０３８２】
前述の発明は、理解を明確にする目的のために例示及び実施例によってある程度詳細に説明してきたが、説明や例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。すべての特許及び本明細書に引用される科学文献の開示は、参照によりその全体が援用される。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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