【手続補正書】
【提出日】平成25年6月18日(2013.6.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合のタンパク質純度が少なくとも95面積%であるヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項２】
色素リガンドアフィニティークロマトグラフィーから浸出する物質を含まない、請求項１記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項３】
pH8の10mM Trisバッファーおよび60mMスクロース中にある場合、13,000〜23,000 fSRC単位/mgのSRCアッセイ活性を有する、請求項１又は２記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項４】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合、2面積%未満の凝集タンパク質を含有する、請求項１〜３のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項５】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合、1面積%未満のクロストリパインを含有する、請求項１〜４のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項６】
アニオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、1面積%未満のゼラチナーゼを含有する、請求項１〜５のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項７】
1ug/mg(w/w)未満のロイペプチンを含有する、請求項１〜６のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項８】
1cfu/ml未満の生物汚染度を有し、滅菌されている、請求項１〜７のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項９】
10EU/ml未満の内毒素を含有する、請求項１〜８のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項１０】
5EU/mg未満の内毒素を含有する、請求項１〜９のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項１１】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合に少なくとも97面積%のタンパク質純度を有する、請求項１〜１０のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項１２】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合に少なくとも98面積%のタンパク質純度を有する、請求項１〜１１のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼI。
【請求項１３】
ヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIの大量生産物であって、逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合の該コラゲナーゼIのタンパク質純度は、少なくとも95面積%であり、該コラゲナーゼIは、色素リガンドアフィニティークロマトグラフィーを用いる工程を含まない以下の工程：
a) ヒストリチクス菌を発酵させる工程;
b) コラゲナーゼIを含む粗発酵物を回収する工程;ならびに
c) 濾過およびカラムクロマトグラフィーによって、粗回収物からコラゲナーゼIを、逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合に少なくとも95面積％のタンパク質純度まで精製する工程
を含む方法により得られる、大量生産物。
【請求項１４】
a) ヒストリチクス菌を発酵させる工程;
b) コラゲナーゼIを含む粗発酵物を回収する工程;ならびに
c) 濾過およびカラムクロマトグラフィーによって、粗回収物からコラゲナーゼIを、逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合に少なくとも95面積％のタンパク質純度まで精製する工程
を含む、請求項２記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIの製造方法。
【請求項１５】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合のタンパク質純度が少なくとも95面積%であるヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項１６】
色素リガンドアフィニティークロマトグラフィーから浸出する物質を含まない、請求項１５記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項１７】
pH8の10mM Trisバッファーおよび60mMスクロース中にある場合、200,000〜380,000 fGPA単位/mgのGPAアッセイ活性を有する、請求項１５又は１６記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項１８】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合、2面積%未満の凝集タンパク質を含有する、請求項１５〜１７のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項１９】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合、1面積%未満のクロストリパインを含有する、請求項１５〜１８のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項２０】
アニオン交換クロマトグラフィーで測定した場合、1面積%未満のゼラチナーゼを含有する、請求項１５〜１９のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項２１】
1ug/mg(w/w)未満のロイペプチンを含有する、請求項１５〜２０のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項２２】
1cfu/ml未満の生物汚染度を有し、滅菌されている、請求項１５〜２１のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項２３】
10EU/ml未満の内毒素を含有する、請求項１５〜２２のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項２４】
5EU/mg未満の内毒素を含有する、請求項１５〜２３のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項２５】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合に少なくとも97面積%のタンパク質純度を有する、請求項１５〜２４のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項２６】
逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合に少なくとも98面積%のタンパク質純度を有する、請求項１５〜２５のいずれかに記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼII。
【請求項２７】
ヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIIの大量生産物であって、逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合の該コラゲナーゼIIのタンパク質純度は、少なくとも95面積%であり、該コラゲナーゼIIは、色素リガンドアフィニティークロマトグラフィーを用いる工程を含まない以下の工程：
a) ヒストリチクス菌を発酵させる工程;
b) コラゲナーゼIIを含む粗発酵物を回収する工程;ならびに
c) 濾過およびカラムクロマトグラフィーによって、粗回収物からコラゲナーゼIIを、逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合に少なくとも95面積％のタンパク質純度まで精製する工程
を含む方法により得られる、大量生産物。
【請求項２８】
a) ヒストリチクス菌を発酵させる工程;
b) コラゲナーゼIIを含む粗発酵物を回収する工程;ならびに
c) 濾過およびカラムクロマトグラフィーによって、粗回収物からコラゲナーゼIIを、逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合に少なくとも95面積％のタンパク質純度まで精製する工程
を含む、請求項１６記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIIの製造方法。
【請求項２９】
請求項１記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIおよび請求項１５記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIIからなり、コラゲナーゼIとコラゲナーゼIIが１：１の質量比を有する、大量生産物。
【請求項３０】
請求項２記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIおよび請求項１６記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIIからなり、該コラゲナーゼIとコラゲナーゼIIが１：１の質量比を有する、大量生産物。
【請求項３１】
請求項１記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIおよび請求項１５記載のヒストリチクス菌由来コラゲナーゼIIを含む製剤であって、コラゲナーゼIとコラゲナーゼIIが１対１の質量比を有し、逆相高性能液体クロマトグラフィーで測定した場合のコラゲナーゼIとコラゲナーゼIIのタンパク質純度が少なくとも95面積%であり、色素リガンドアフィニティークロマトグラフィーから浸出する物質を含まないものである、製剤。