【手続補正書】
【提出日】平成25年1月10日(2013.1.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的領域を検出する、生物学的サンプル中のイベントＤＡＳ−５９１２２−７を同定するためのキットであって、該キットが、イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的領域を検出し得るプライマー対を含み、該プライマー対は、第一および第二のプライマーを含み、ここで、該第一および第二のプライマーは、少なくとも１８ヌクレオチドであり、そして、該第一および第二のプライマーは、以下：
ａ）配列番号１９に示されるヌクレオチド配列またはその相補体を含む核酸分子にアニーリングし得る第一のプライマー、および、配列番号２０に示されるヌクレオチド配列またはその相補体を含む核酸分子にアニーリングし得る第二のプライマー；
ｂ）配列番号１９に示されるヌクレオチド配列またはその相補体を含む核酸分子にアニーリングし得る第一のプライマー、および、配列番号２４に示されるヌクレオチド配列またはその相補体を含む核酸分子にアニーリングし得る第二のプライマー；ならびに、
ｃ）配列番号２０に示されるヌクレオチド配列またはその相補体を含む核酸分子にアニーリングし得る第一のプライマー、および、配列番号２４に示されるヌクレオチド配列またはその相補体を含む核酸分子にアニーリングし得る第二のプライマー；
からなる群から選択され、
ここで、該イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的領域は、イベントＤＡＳ−５９１２２−７の異種挿入ＤＮＡの一部と連続する５’または３’の隣接領域内の領域であり、そして、該５’隣接領域は配列番号１９であり、該３’隣接領域は配列番号２０であり、そして、該異種挿入ＤＮＡが配列番号２４である、キット。
【請求項２】
前記第一および第二のプライマーがそれぞれ、以下：
ａ）配列番号１８および配列番号１の配列；
ｂ）配列番号１０および配列番号９の配列；
ｃ）配列番号２および配列番号１７の配列；
ｄ）配列番号８および配列番号１７の配列；ならびに
ｅ）配列番号３６および配列番号３７の配列
からなる群より選択される１対の配列を含む、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
生物学的サンプル中のイベントＤＡＳ−５９１２２−７を同定するためのキットであって、該キットが、イベントＤＡＳ−５９１２２−７を一意に同定し得る特異的プローブを含み、該特異的プローブが、以下：
ａ）配列番号１９および配列番号２４の連続する配列を含む配列；ならびに
ｂ）配列番号２０および配列番号２４の連続する配列を含む配列、
からなる群より選択される配列にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする配列を含む、キットであって、ここで、該プローブは、少なくとも１８ヌクレオチドであり、そして、該ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件が、５０％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳ中の３７℃であり、６０〜６５℃における０．１×ＳＳＣ中の洗浄である、キット。
【請求項４】
生物学的サンプル中のイベントＤＡＳ−５９１２２−７を同定するための方法であって、該方法は、少なくとも２つのプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応を用いて、該生物学的サンプル中の核酸からＤＮＡフラグメントを増幅することによって、イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的領域を検出する工程を包含し、該少なくとも２つのプライマーが、配列番号１９と配列番号２４内、配列番号２０と配列番号２４内、または配列番号１９と配列番号２０内の配列を認識し、ここで、該２つのプライマーの各々は、少なくとも１８ヌクレオチドであり、そして、該イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的領域は、イベントＤＡＳ−５９１２２−７の異種挿入ＤＮＡの一部と連続する５’または３’の隣接領域内の領域であり、そして、該５’隣接領域は配列番号１９であり、該３’隣接領域は配列番号２０であり、そして、該異種挿入ＤＮＡが配列番号２４である、方法。
【請求項５】
前記第一のプライマーが、配列番号１９内の配列を認識し、そして前記第二のプライマーが、配列番号２４内の配列を認識する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記第一のプライマーが、配列番号２０内の配列を認識し、そして第二のプライマーが、配列番号２４内の配列を認識する、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記第一および第二のプライマーが、それぞれ配列番号１８および配列番号１の配列を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記第一および第二のプライマーが、それぞれ配列番号１０および配列番号９の配列を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記第一および第二のプライマーが、それぞれ配列番号２および配列番号１７の配列を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記第一および第二のプライマーが、それぞれ配列番号８および配列番号１７の配列を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記第一および第二のプライマーが、それぞれ配列番号３６および配列番号３７の配列を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
ＤＡＳ−５９１２２−７  ＰＣＲ同定プロトコルを用いて、約５５５ｂｐのフラグメントを増幅する工程を包含する、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
ＤＡＳ−５９１２２−７  ＰＣＲ同定プロトコルを用いて、約３１３ｂｐのフラグメントを増幅する工程を包含する、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
ＤＡＳ−５９１２２−７  ＰＣＲ同定プロトコルを用いて、約５４７ｂｐのフラグメントを増幅する工程を包含する、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
ＤＡＳ−５９１２２−７  ＰＣＲ同定プロトコルを用いて、約７５４ｂｐのフラグメントを増幅する工程を包含する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
ＤＡＳ−５９１２２−７  ＰＣＲ同定プロトコルを用いて、約１０４ｂｐのフラグメントを増幅する工程を包含する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
生物学的サンプル中のイベントＤＡＳ−５９１２２−７またはその後代の存在を検出する方法であって、以下の工程：
（ａ）該生物学的サンプルからＤＮＡサンプルを抽出する工程；
（ｂ）以下：
ｉ）配列番号１８および配列番号１の配列；
ｉｉ）配列番号１０および配列番号９の配列；
ｉｉｉ）配列番号２および配列番号１７の配列；ならびに
ｉｖ）配列番号８および配列番号１７の配列
からなる群より選択される、１対のＤＮＡプライマー分子を提供する工程；
（ｃ）ＤＮＡ増幅反応条件を提供する工程；
（ｄ）該ＤＮＡ増幅反応を行って、ＤＮＡアンプリコン分子を生成する工程；ならびに
（ｅ）該ＤＮＡ増幅反応における該ＤＮＡアンプリコン分子の検出が、イベントＤＡＳ−５９１２２−７の存在を示す、該ＤＮＡアンプリコン分子を検出する工程を包含する、方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法によって生成されるアンプリコンのいずれか１つを含む、イベントＤＡＳ−５９１２２−７を検出するための単離されたＤＮＡ分子。
【請求項１９】
サンプル中のイベントＤＡＳ−５９１２２−７に対応するＤＮＡの存在を検出する方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）トウモロコシＤＮＡを含む該サンプルと、ポリヌクレオチドプローブを接触させる工程であって、該ポリヌクレオチドプローブは、イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的ＤＮＡとストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズし、該イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的ＤＮＡは、以下：
（ｉ）配列番号１９および配列番号２４の連続する配列を含む配列；ならびに、
（ｉｉ）配列番号２０および配列番号２４の連続する配列を含む配列
からなる群から選択される工程；
（ｂ）該サンプルおよびプローブを、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下に置く工程；ならびに
（ｃ）該ＤＮＡへの該プローブのハイブリダイゼーションを検出する工程であって、ハイブリダイゼーションの検出が、イベントＤＡＳ−５９１２２−７の存在を示す、工程
を包含し、そしてここで、該プローブは、少なくとも１８ヌクレオチドであり、該イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的ＤＮＡは、イベントＤＡＳ−５９１２２−７の異種挿入ＤＮＡの一部と連続する５’または３’の隣接領域内にあり、そして、該５’隣接領域は配列番号１９であり、該３’隣接領域は配列番号２０であり、そして、該異種挿入ＤＮＡが配列番号２４であり、そして、該ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件が、５０％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳ中の３７℃であり、６０〜６５℃における０．１×ＳＳＣ中の洗浄である、方法。
【請求項２０】
第一および第二のプライマーを含む１対の単離されたＤＮＡヌクレオチドプライマーであって、ここで、該第一のプライマーは、配列番号１、２、４、５、６、７、８、９、１１、および、３６からなる群から選択される配列、または、その相補体を含み、そして、該第二のプライマーは、配列番号３、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、および３７からなる群より選択される配列、またはその相補体を含む、１対の単離されたＤＮＡヌクレオチドプライマー。
【請求項２１】
第一のＤＮＡ分子および第二のＤＮＡ分子を含む、１対のＤＮＡ分子であって、該ＤＮＡ分子が、イベントＤＡＳ−５９１２２−７形質転換トウモロコシ植物またはその後代から抽出されるＤＮＡに特徴的なＤＮＡプライマーまたはプローブとして機能するために、以下：
ａ）配列番号２１に示される配列またはその相補体；および
ｂ）配列番号２２に示される配列またはその相補体
からなる群より選択される配列の連続ヌクレオチドを含み、ここで、該ＤＮＡプライマーのうち一方が、配列番号２１の５’隣接領域の一部または配列番号２２の３’隣接領域の一部の連続ヌクレオチドであり、他方のＤＮＡプライマーが、配列番号２１の異種挿入ＤＮＡの一部の連続ヌクレオチドまたは配列番号２２の異種挿入ＤＮＡの一部の連続ヌクレオチドであり、そして、該プローブは、配列番号２１および配列番号２２の異種ＤＮＡの一部と連続する５’または３’の隣接領域の一部を含み、ここで、該ＤＮＡプライマーまたはプローブの各々は、少なくとも１８ヌクレオチドである、１対のＤＮＡ分子。
【請求項２２】
配列番号３２、３３、３４、３５および３８ならびにその相補体からなる群より選択される配列を含む、イベントＤＡＳ−５９１２２−７を検出するための、単離されたＤＮＡ分子。
【請求項２３】
特異的プライマーまたはプローブを用いた、イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的領域の検出を包含する、種子純度を確認する方法であって、ここで、該特異的プライマーまたはプローブは、種子サンプル中において、配列番号１９および配列番号２４内、または、配列番号２０および配列番号２４内の配列を認識し、該イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的領域は、イベントＤＡＳ−５９１２２−７の異種挿入ＤＮＡの一部と連続する５’または３’の隣接領域内の領域であり、そして、該５’隣接領域は配列番号１９であり、該３’隣接領域は配列番号２０であり、そして、該異種挿入ＤＮＡが配列番号２４であって、ここで、該プライマーまたはプローブの各々は、少なくとも１８ヌクレオチドである、方法。
【請求項２４】
イベントＤＡＳ−５９１２２−７の存在について種子をスクリーニングする方法であって、該方法は、特異的プライマーまたはプローブを用いてイベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的領域を検出する工程を包含し、ここで、種子ロットのサンプル中において、該特異的プライマーまたはプローブは、配列番号１９および配列番号２４内、または、配列番号２０および配列番号２４内の配列を認識し、ここで、該イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的領域は、イベントＤＡＳ−５９１２２−７の異種挿入ＤＮＡの一部と連続する５’または３’の隣接領域内の領域であり、そして、該５’隣接領域は配列番号１９であり、該３’隣接領域は配列番号２０であり、そして、該異種挿入ＤＮＡが配列番号２４であって、ここで、該プライマーまたはプローブの各々は、少なくとも１８ヌクレオチドである、方法。
【請求項２５】
各々が少なくとも１８個のヌクレオチドを含み、かつ、ＤＮＡ増幅手順において一緒に用いられた場合にイベントＤＡＳ−５９１２２−７に特徴的なアンプリコンを生成する、１対の単離されたＤＮＡプライマーであって、各プライマーは、以下：
ａ）配列番号２１の配列；および
ｂ）配列番号２２の配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列の中から選択され、
ここで、該プライマーのうちの一方は、配列番号２１の５’隣接領域の一部または配列番号２２の３’隣接領域の一部の連続ヌクレオチドであり、もう一方のプライマーは、配列番号２１の異種挿入ＤＮＡの一部の連続ヌクレオチドまたは配列番号２２の異種挿入ＤＮＡの一部の連続ヌクレオチドである、１対の単離されたＤＮＡプライマー。
【請求項２６】
トウモロコシ組織中のイベントＤＡＳ−５９１２２−７挿入の存在を検出する方法であって、以下の工程：
（ａ）プライマー対の各々が、配列番号２１または配列番号２２由来の少なくとも１８個のヌクレオチドを含む、プライマー対を選択する工程；
（ｂ）該トウモロコシ組織のサンプルを該プライマー対と接触させる工程；
（ｃ）ＤＮＡ増幅を行い、そしてアンプリコンについて分析する工程
を包含し、
ここで、該プライマーのうちの一方は、配列番号２１の５’隣接領域の一部または配列番号２２の３’隣接領域の一部の連続ヌクレオチドであり、もう一方のプライマーは、配列番号２１の異種挿入ＤＮＡの一部の連続ヌクレオチドまたは配列番号２２の異種挿入ＤＮＡの一部の連続ヌクレオチドであり、
ここで、該イベントＤＡＳ−５９１２２−７特異的配列は、配列番号２１または配列番号２２の異種挿入ＤＮＡの一部と連続する隣接領域の一部を含む、方法。
【請求項２７】
前記プライマー対が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、３６および３７、または、その相補体からなる群より選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
トウモロコシ組織中のイベントＤＡＳ−５９１２２−７挿入の存在を検出する方法であって、以下の工程：
（ａ）該トウモロコシ組織のサンプルを、配列番号３２、３３、３４、３５および３８ならびにその相補体からなる群より選択される１つ以上のＤＮＡ配列とストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドプローブと接触させる工程であって、ここで、該ポリヌクレオチドプローブは、配列番号１９および配列番号２４の連続配列を含む配列を認識するか、または、配列番号２０および配列番号２４の連続配列を含む配列を認識する、工程；
（ｂ）該サンプルおよびプローブを、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下に置く工程；ならびに
（ｃ）該プローブのハイブリダイゼーションについて分析する工程
を包含し、ここで、該ポリヌクレオチドプローブは、少なくとも１８ヌクレオチドであり、そして、該ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件が、５０％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳ中の３７℃であり、６０〜６５℃における０．１×ＳＳＣ中の洗浄である、方法。
【請求項２９】
配列番号３２、３３、３４、３５および３８ならびにその相補体からなる群より選択される１つ以上のＤＮＡ配列とストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする、ポリヌクレオチドプローブを含む、ＤＮＡ検出キットであって、ここで、該ポリヌクレオチドプローブは、配列番号１９および配列番号２４の連続配列を含む配列を認識するか、または、配列番号２０および配列番号２４の連続配列を含む配列を認識し、ここで、該ポリヌクレオチドプローブは、少なくとも１８ヌクレオチドであり、そして、該ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件が、５０％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳ中の３７℃であり、６０〜６５℃における０．１×ＳＳＣ中の洗浄である、キット。
【請求項３０】
プライマー対の各々が、配列番号２１および配列番号２２の中から少なくとも１８個のヌクレオチドを含む、プライマー対を含むＤＮＡ検出キットであって、ここで、該配列は、配列番号２１または配列番号２２の異種挿入ＤＮＡの一部と連続する隣接領域の一部を含み、ここで、該プライマーのうちの一一方は、配列番号２１の５’隣接領域の一部または配列番号２２の３’隣接領域の一部の連続ヌクレオチドであり、もう一方のプライマーは、配列番号２１の異種挿入ＤＮＡの一部の連続ヌクレオチドまたは配列番号２２の異種挿入ＤＮＡの一部の連続ヌクレオチドである、キット。
【請求項３１】
前記プライマー対が、配列番号１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、３６および３７ならびにその相補体からなる群より選択される、請求項３０に記載のＤＮＡ検出キット。