【手続補正書】
【提出日】平成25年8月9日(2013.8.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式(I):
【化１】
2012077060.tif 000001
（式中、nは整数を表す）
で表されるタンパク質コンジュゲートでマウスを免疫して得られる、Ａ環部にジヒドロキシブテニル基を有するシガトキシン類を特異的に認識するモノクローナル抗体を産生する、受託番号FERM BP-11401として2010年９月15日に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(郵便番号305-8566、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６)に寄託されたハイブリドーマ3G8。
【請求項２】
Ａ環部にジヒドロキシブテニル基を有するシガトキシン類が、シガトキシンCTX1Bまたは54-デオキシ-CTX1Bである請求項１に記載のハイブリドーマ3G8。
【請求項３】
請求項１または２に記載のハイブリドーマ3G8により産生される、Ａ環部にジヒドロキシブテニル基を有するシガトキシン類を特異的に認識するモノクローナル抗体。
【請求項４】
請求項３に記載のモノクローナル抗体と、受託番号FERM BP-11400として2004年12月22日に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(郵便番号305-8566、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６)に寄託されたハイブリドーマ8H4または受託番号FERM BP-8293として平成14年（2002年）３月５日に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(郵便番号305-8566、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６)に寄託されたハイブリドーマ3D11により産生されるモノクローナル抗体とを含む、シガトキシン類検出キット。
【請求項５】
請求項３に記載のモノクローナル抗体、または受託番号FERM BP-11400として2004年12月22日に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(郵便番号305-8566、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６)に寄託されたハイブリドーマ8H4により産生されるモノクローナル抗体もしくは受託番号FERM BP-8293として平成14年（2002年）３月５日に独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(郵便番号305-8566、日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１  中央第６)に寄託されたハイブリドーマ3D11により産生されるモノクローナル抗体が標識されている請求項４に記載のシガトキシン類検出キット。
【請求項６】
標識が酵素標識である請求項４または５に記載のシガトキシン類検出キット。
【請求項７】
次の式(II):
【化２】
2012077060.tif 000002
で表される化合物。
【請求項８】
請求項７に記載の化合物がキャリアータンパク質と結合してなる、次の式(I)
【化３】
2012077060.tif 000003
（式中、nは整数を表す）
で表されるタンパク質コンジュゲート。
【請求項９】
キャリアータンパク質が、ウシ血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニンまたは卵アルブミンである請求項８に記載のタンパク質コンジュゲート。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
さらに、本発明者らは、Ｍ環部にヒドロキシ基を有するシガトキシン51-OH-CTX3CやCTX1Bを検出する抗体を作製するために、シガトキシン類のHIJKLM環部の構造を有する化合物をはじめて合成し、これをハプテンとして動物を免疫することにより受託番号FERM BP-11400として寄託されたハイブリドーマ8H4を作製し、該ハイブリドーマを用いてシガトキシン類51-OH-CTX3CやCTX1Bに特異的に結合する特異性の高いモノクローナル抗体8H4を調製することに成功した。また、本発明者らは、上記モノクローナル抗体8H4と10C9とを組み合わせることにより、検出特性を改善したサンドイッチ法によりシガトキシン51-OH-CTX3Cを検出するキットを作製した(特許文献４および非特許文献７)。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、Ａ環部にジヒドロキシブテニル基を有するシガトキシン類のABCDE環部の構造を有する化合物をはじめて合成し、これをハプテンとして用いることにより、上記の課題を解決できることを見出した。
よって、本発明は、Ａ環部にジヒドロキシブテニル基を有するシガトキシン類を特異的に認識するモノクローナル抗体を提供する。
また、本発明は、上記のモノクローナル抗体を産生する受託番号FERM BP-11401として寄託されたハイブリドーマ3G8（受託番号FERM BP-11401として独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター(茨城県つくば市東1-1-1中央第６、〒305-8566、日本)に寄託された。受託日：平成22年9月15日、本明細書ではこのハイブリドーマを抗体と同じ名称3G8と表示する。）である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
また、本発明は、上記のモノクローナル抗体と、受託番号FERM BP-11400として寄託されたハイブリドーマ8H4（平成16年12月22日に独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター(茨城県つくば市東1-1-1中央第６、〒305-8566、日本)に寄託）により産生されるモノクローナル抗体またはFERM BP-8298として受託されたハイブリドーマ3D11(平成14年3月5日に独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センター(茨城県つくば市東1-1-1中央第６、〒305-8566、日本)に寄託）により産生されるモノクローナル抗体とを含むシガトキシン類検出キットである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
その他のモノクローナル抗体としては、受託番号FERM BP-11400として平成16年12月22日に独立行政法人産業技術総合研究所  特許微生物寄託センターに寄託されたハイブリドーマ8H4により産生されるモノクローナル抗体8H4、または受託番号FERM BP-8293として平成14年３月５日に独立行政法人産業技術総合研究所  特許微生物寄託センターに原寄託されたハイブリドーマ3D11により産生されるモノクローナル抗体3D11を好ましく用いることができる。
モノクローナル抗体8H4は、本発明者らにより、Ｍ環部にヒドロキシ基を有するシガトキシン類のHIJKLM環部を合成ハプテンとして用いて、Ｍ環部にヒドロキシ基を有するシガトキシン類に特異的に結合し得るモノクローナル抗体として作製された（特開２００６−１９３４８５号公報参照）。また、モノクローナル抗体3D11は、本発明者らにより、Ｍ環部にヒドロキシ基を有しないシガトキシン類のIJKLM環部を合成ハプテンとして用いて、Ｍ環部にヒドロキシ基を有しないシガトキシン類に特異的に結合し得るモノクローナル抗体として作製された（特開２００３−５５４００号公報参照）。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
得られたハイブリドーマ細胞 (Mouse-Mouse hybridoma)をHAT培地[無血清培地144 mLにFCS 40 mL、L-グルタミン(200 mM、GIBCO 社製25030-081) 2 mL、ブライクローン(BioResearch Ireland社製BR-001)10 mL、HAT (GIBCO社製31062-011)4 mLを加えたもの] 60 mLに浮遊させ、100μL/ウェルずつ96ウェルプレート６枚に移した。炭酸ガス培養装置中、約２週間培養し、式(II)の化合物とBSAとのコンジュゲート（すなわち、式(I)におけるタンパク質がBSAの化合物）に結合する抗体を産生するハイブリドーマを、該BSAコンジュゲートを用いてELISA法でスクリーニングした。陽性のウェルを選択し、２回クローニング後に、再度ELISA陽性となったモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを順次培養し、それぞれ約200 mLまで増殖させた。これにより、高い抗体価でモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ3G8を得て、これを、平成22年9月15日に、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに、受託番号FERM BP-11401として寄託した(このハイブリドーマを抗体と同じ名称3G8と表示する)。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
F. サンドイッチ法によるシガトキシン類検出キット
8H4抗体の酵素標識（サンドイッチ法に用いる8H4-HRPの合成）
受託番号FERM BP-11400として寄託されたハイブリドーマ8H4により産生される抗体8H4（Ｍ環部にOH基を有するシガトキシン類を認識するモノクローナル抗体、特開２００６−１９３４８５号公報を参照）を、HRP-Antibody All-in-OneTM Conjugationキット(solulink社製)を同社説明書に従って用いて、HRP標識した。8H4抗体(100μg)を用いて8H4-HRP溶液約150μLが得られた。この溶液を500μLチューブに入れ、４℃で保存した。