(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式［１］
【化１】
0004226324.tif 000011
（ただし、Ｍは水素原子または１価の陽イオン、ｍはメチレン鎖長を示す１〜５の整数、ｎはメチレン鎖長を示す１〜３の整数、ｐはメチレン鎖長を示す１３〜１７の整数である）で表されるカルボン酸型脂質。
【請求項２】
次の一般式［８］
【化２】
0004226324.tif 000012
（ただし、Ｍは水素原子または１価の陽イオン、ｍは１、ｎおよびｎ’はメチレン鎖長を示す１３〜２１の整数である）で表されるカルボン酸型脂質。
【発明の詳細な説明】
【発明の属する技術分野】
この出願の発明は、小胞体の膜構成脂質として使用できるカルボン酸型脂質に関するものである。さらに詳しくは、この出願の発明は、小胞体等の分子集合体や分子集合膜の負電荷成分として使用でき、その構造や組成に応じて集合体の表面電荷密度や表面水和状態の調節、多重層小胞体の層数の制御、小胞体間の凝集抑制等を可能とする負電荷を有するカルボン酸型脂質に関するものである。
【従来技術とその課題】
内水相に有用物質を封入させた小胞体やその分散液は、医薬品、香粧品、食品などの様々な分野において重要な技術である。小胞体の膜構成脂質としては、ジアシルホスファチジルグリセロール、ジアシルホスファチジルイノシトール、ジアシルホスファチジルセリンなどの負電荷リン脂質をジアシルホスファチジルコリン、あるいはジアシルホスファチジルコリンとコレステロールの混合脂質に任意量混合させた混合脂質が広く用いられている。
しかし、現在、生体に投与できる小胞体製剤において、負電荷成分として導入されているジアシルホスファチジルグリセロール、ジアシルホスファチジルイノシトール、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミンなどは生理活性を有するため、生体内での血小板の凝集を起こすことが報告されており、それにより、さらに血小板減少症や白血球類の機能障害等の重大な副作用が発生することが明らかとなっている。
そこで、負電荷リン脂質を用いずに小胞体表面に簡易的に負電荷を導入するために、長鎖脂肪酸類が用いられているが、一本鎖脂肪酸は分子集合体中に安定に導入されず、一部が水相に抜け出したり、血中でリポタンパク質やアルブミンにより引き抜かれたりするという問題があった。
この出願の発明は、以上のとおりの事情に鑑みてなされたものであり、従来技術の問題点を解決し、副作用なく、安定に、小胞体表面に負電荷を付与できる負電荷脂質を提供することを課題としている。
【課題を解決するための手段】
この出願の発明者らは上記の実情に鑑み、鋭意研究を行った結果、３個以上の官能性基を有する化合物をスペーサーとした、リン酸基を有さないカルボン酸型二本鎖脂質の合成に成功した。また、発明者らは、このカルボン酸型二本鎖脂質がリン脂質二分子膜中に安定に固定され、負電荷成分としてこれを導入した小胞体では血流中において血小板凝集が起こらないことを見出し、この出願の発明に到達したのである。
すなわち、この出願の発明は、上記の課題を解決するものとして、第１には、次の一般式［１］
【化３】
0004226324.tif 000002
（ただし、Ｍは水素原子または１価の陽イオン、ｍはメチレン鎖長を示す１〜５の整数、ｎはメチレン鎖長を示す１〜３の整数、ｐはメチレン鎖長を示す１３〜１７の整数である）で表されるカルボン酸型脂質を提供する。
また、第２には、この出願の発明は、次の一般式［８］
【化４】
0004226324.tif 000003
（ただし、Ｍは水素原子または１価の陽イオン、ｍは１、ｎおよびｎ’はメチレン鎖長を示す１３〜２１の整数である）表されるカルボン酸型脂質をも提供する。
【発明の実施の形態】
この出願の発明は、前記一般式［１］および［８］で表されるカルボン酸型脂質を提供するものである。
前記一般式［１］および［８］のカルボン酸型脂質では、Ｍは水素原子あるいは１価の陽イオンであればよく、１価の陽イオンのとしては、Ｎａ+、Ｋ+、Ｌｉ+、ＮＨ3+、などが例示されるが、これに限定されない。
カルボン酸脂質における鎖状炭化水素基の原料としては、水酸基を有する直鎖第一飽和アルコール、例えばセチルアルコール、ステアリルアルコール、イコサノール、ドコサノール等が挙げられる。
この出願の発明のカルボン酸型脂質では、親水性基としては、適当な長さのメチレン基のスペーサーを介し、カルボキシル基をアミノ酸やモノデンドロンの官能性基に共有結合にて導入できるものであればよい。メチレン基の鎖長は、１〜５とすることが特に好ましい。このような親水性基の原料化合物としては、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、ピメリン酸やその無水物が好ましく例示される。
以下、添付した図面に沿って実施例を示し、この発明の実施の形態についてさらに詳しく説明する。もちろん、この発明は以下の例に限定されるものではなく、細部については様々な態様が可能であることは言うまでもない。
【実施例】
＜実施例１＞
グルタミン酸（2.96 g、20 mmol）、ｐ−トルエンスルホン酸（4.56 g、24 mmol）およびヘキサデシルアルコール（10.65 g、44 mmol）をベンゼン（150 mL）に溶解させ、脱水しながら、１００℃で１４時間還流させた。
溶媒を減圧除去後、クロロホルムに再溶解して、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で３回、水で３回洗浄した。
クロロホルム層を硫酸ナトリウムで脱水し、濾過後、溶媒を減圧除去した。６０℃でメタノール（400 mL）に溶解させ、４℃で再結晶した後、濾過し、乾燥してグルタミン酸誘導体［Ａ］を白色固体として得た（9.5 g、収率80 %）。また、同様の方法でテトラデシルアルコール、あるいはオクタデシルアルコールをグルタミン酸に結合させた化合物［Ａ］を合成した。
【化５】
0004226324.tif 000004
分析結果を表１に示した。
【表１】
0004226324.tif 000005
得られた化合物［Ａ］(1.49g、2.5mmol)をクロロホルムとテトラヒドロフランの混合溶液（混合比1：1 (容量／容量) ）に溶解させ、無水コハク酸(0.38g、3.8mmol)を加えて5時間撹拌した。溶媒を減圧除去した後、エタノールとアセトンの混合溶媒（混合比1：5（容量／容量））から4℃で再結晶し、濾過し、乾燥してグルタミン酸骨格を有する負電荷脂質［Ｂ］を白色固体として得た(1.5g、収率86%)。
【化６】
0004226324.tif 000006
分析結果を表２に示した。
【表２】
0004226324.tif 000007
＜実施例２＞
L-グルタミン酸(1.47g、10mmol )と無水t-ブトキシカルボニル（2.62g、12mmol）をジオキサン（20ml）、水（10ml）、１Ｎ−NaOH（10ml）の混合溶媒に溶解し２５℃で６時間撹拌した。減圧下10mlまで濃縮し、5%硫酸水素カリウム水溶液をｐＨ２．４になるまで加え、その後酢酸エチルで３回、水で３回洗浄した。酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで脱水後、溶媒を減圧除去した。ヘキサンから４℃で再結晶し、濾過し、乾燥してアミノ基をt-ブトキシカルボニル基（Boc基）保護したモノデンドロン誘導体を白色固体（1.85g、収量75%）として得た。
モノデンドロン誘導体の分析結果を表３に示した。
【表３】
0004226324.tif 000008
モノデンドロン誘導体（0.49g、2mmol）とDCC（0.82g、4mmol）をクロロホルムに溶解し、4℃で1時間撹拌した後、化合物［Ａ］(2.98g、5mmol)とトリエチルアミン(0.20g、2mmol)を溶解したクロロホルム溶液に滴下した。反応混合溶液を25℃で6時間撹拌した後、グラスフィルター（G4）で濾過し、濾液を減圧濃縮してメタノールで再沈殿精製した。沈殿物を濾過回収した後、シリカゲルカラム（溶媒：クロロホルム／メタノール＝6／1（容量／容量））で精製してモノデンドロン誘導体（1.40g，収量50%）を得た。
IRによるアミド結合由来のピーク（1638cm−1）の出現から目的物の生成を確認した。
モノデンドロン誘導体（1.40g、1mmol）をトリフルオロ酢酸（TFA）に溶解し、1時間撹拌して保護基を除去した。反応溶液をメタノールから4℃で再結晶し、濾過し、乾燥させてモノデンドロン誘導体［Ｊ］（1.17g、収量90%）を得た。
【化７】
0004226324.tif 000009
1H−NMRによるBoc基のメチルプロトンのピーク（δ＝1.44）の消失から目的物の生成を確認した。
モノデンドロン誘導体［Ｊ］(1.17g、0.9mmol)をクロロホルムとテトラヒドロフランの混合溶液（混合比  1：1 (容量／容量) ） に溶解させ、無水コハク酸 (130g、1.35mmol)を加えて5時間撹拌した。溶媒を減圧除去した後、残分をエタノールとアセトンの混合溶液（混合比 1：5 （容量／容量））から4℃で再結晶し、濾過し、乾燥してモノデンドロン骨格を有するカルボン酸４本鎖脂質［Ｋ］を白色固体として得た（0.95g、収率75%）。
【化８】
0004226324.tif 000010
【発明の効果】
以上述べたように、この出願の発明により、非リン脂質型カルボン酸脂質が提供される。これは、一般に小胞体の膜構成脂質として使用されているリン脂質型のジアシルホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ジアシルホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ジアシルホスファチジルセリン（ＰＳ）、ジアシルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）と同様に、リン脂質小胞体の表面電荷密度や表面極性の調節、小胞体の凝集融合の防止に効果を示すだけでなく、生体適合性に優れ、安定な小胞体製剤の成分として利用できる。このカルボン酸型脂質は、また、生体内、特に血中に投与した場合、血漿蛋白質、血球成分などとの相互作用を調節できる。
さらに、この出願の発明により、簡便に合成できるカルボン酸型脂質が提供され、疎水部の構造を変化させることが容易であるため、医薬品、食品、化粧品、染料等の乳化剤、安定剤、分散剤、可溶化剤、混和剤、湿潤剤、浸透剤、粘度調整剤などの様々な用途に抵当な負電荷両親媒性分子として適用できる。特に、ヘモグロビンを含有させた小胞体の負電荷脂質として使用されれば、人工酸素運搬体として利用できる。