【手続補正書】
【提出日】平成25年3月8日(2013.3.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所望のポリペプチドおよび発現増強ドメイン（「EED」）を含み、該EEDが第一および第二のシステインアミノ酸残基Cys1およびCys2をそれぞれ含み、Cys1が複合体ポリペプチド分子のN末端に対してCys2よりも近くに位置し、ここでCys1およびCys2がポリペプチドリンカーによって隔てられ、該リンカーが、
・システインおよびプロリンを含まず；
・Cys1およびCys2が分子内ジスルフィド結合で互いに結合する事を可能にするために十分な長さを定義し;かつ
・水溶液中でポリペプチドの二次構造を本質的に含まない、柔軟なポリペプチド立体構造を有し
ここでCys1およびCys2の少なくとも1つは、誘導体化成分によって誘導体化される、
複合体ポリペプチド。
【請求項２】
リンカー中のアミノ酸残基の少なくとも75%が、Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Ser、Thr、Met、Tyr、Asn、およびGlnから選択される、請求項1記載の複合体ポリペプチド。 
【請求項３】
1本鎖ポリペプチドである、請求項1または2記載の複合体ポリペプチド。
【請求項４】
EEDが複合体ポリペプチドのC末端またはN末端に位置する、前記請求項のいずれか一項記載の複合体ポリペプチド。
【請求項５】
EEDが以下の形態である、前記請求項のいずれか一項記載の複合体ポリペプチド：
-Cys1-(Xaa)n-Cys2-(Pro)m、
式中、
・nは2から20の任意の整数であり；
・mは0（ゼロ）または1であり；かつ
・Xaaは、各位置でGly、Ala、Thr、またはSerでもよい。
【請求項６】
n=4であり、および(Xaa)4が(Gly)4、(Gly)3Ser、(Gly)2SerGly、GlySer(Gly)2、またはGly(Ser)3である、請求項5記載の複合体ポリペプチド。
【請求項７】
n=5であり、および(Xaa)5が(Gly)5、(Gly)4Ser、(Gly)3SerGly、(Gly)2Ser(Gly)2、GlySer(Gly)3、またはSer(Gly)4である、請求項5記載の複合体ポリペプチド。
【請求項８】
EEDが以下の形態である、請求項5〜7のいずれか一項記載の複合体ポリペプチド： 
-His-His-His-His-His-His-Cys1-(Xaa)n-Cys2-(Pro)m；または
-Cys1-(Xaa)n-Cys2-His-His-His-His-His-His-(Pro)m。
【請求項９】
誘導体化されたCys1および/またはCys2が、マレイミド基、スルフヒドリル基、またはピリジルジスルフィド基を含む誘導体化成分とCys1残基および/またはCys2残基との反応生成物である、前記請求項のいずれか一項記載の複合体ポリペプチド。
【請求項１０】
マレイミド基を含む誘導体化成分が、PEG-マレイミド（「PEG-MAL」）、マレイミド官能化蛍光マーカー、マレイミド官能化アッセイ検出マーカー、マレイミド官能化放射性トレーサー、またはマレイミド官能化タンパク質架橋剤から選択される、請求項9記載の複合体ポリペプチド。
【請求項１１】
PEG-MALが以下から選択される、請求項10記載の複合体ポリペプチド：
・メトキシPEG-MAL 5 kD；
・メトキシPEG-MAL 20 kD；
・メトキシ(PEG)2-MAL 40 kD；
・メトキシPEG(MAL)2 5 kD；
・メトキシPEG(MAL)2 20 kD；
・メトキシPEG(MAL)2 40 kD；または
・これらの任意の組み合わせ。
【請求項１２】
Cys1またはCys2が、5-チオ-2-ニトロ安息香酸（「TNB-チオール」）基またはスルフヒドリル基を含む誘導体化成分によって誘導体化され、特に該誘導体化成分が、ジスルフィド結合によりCys1に結合したCys2である、請求項9記載の複合体ポリペプチド。
【請求項１３】
Cys1およびCys2の両方が誘導体化成分によって誘導体化される、前記請求項のいずれか一項記載の複合体ポリペプチド。 
【請求項１４】
Cys1またはCys2のいずれかが第一の誘導体化成分によって誘導体化され、一方、それぞれの他のCys2またはCys1がそれぞれ第二の誘導体化成分によって誘導体化される、請求項1〜12のいずれか一項記載の複合体ポリペプチド。
【請求項１５】
第二の誘導体化成分がエチルマレイミドである、請求項14記載の複合体ポリペプチド。
【請求項１６】
所望のポリペプチドが単一特異性1本鎖抗体または二重特異性1本鎖抗体から選択される、前記請求項のいずれか一項記載の複合体ポリペプチド。
【請求項１７】
二重特異性1本鎖抗体が、エフェクター抗原に特異的に結合する第一の部分、および標的抗原に特異的に結合する第二の部分を含む、請求項16記載の複合体ポリペプチド。
【請求項１８】
エフェクター抗原が、ヒトCD3抗原、ヒトCD64抗原、ヒトCD89抗原、およびヒトNKG2D抗原から選択される、請求項17記載の複合体ポリペプチド。 
【請求項１９】
標的抗原が、EpCAM、CCR5、CD19、HER-2neu、HER-3、HER-4、EGFR、PSMA、CEA、MUC-1（ムチン）、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5AC、MUC5B、MUC7、hCG、ルイス-Y、CD20、CD33、CD30、ガングリオシドGD3、9-O-アセチル-GD3、GM2、Globo H、フコシルGM1、Poly SA、GD2、カルボ・アンヒドラーゼIX（MN/CA IX）、CD44v6、ソニックヘッジホッグ（Shh）、Wue-1、形質細胞抗原、（膜結合型）IgE、黒色腫コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（MCSP）、CCR8、TNF-α前駆体、STEAP、メソセリン（mesothelin）、A33抗原、前立腺幹細胞抗原（PSCA）、Ly-6;デスモグレイン4、Eカドヘリンネオエピトープ、胎児のアセチルコリン受容体、CD25、CA19-9マーカー、CA-125マーカー、およびミュラー阻害物質（MIS）受容体II型、sTn（シアル酸付加Tn抗原; TAG-72）、FAP（繊維芽細胞活性化抗原）、エンドシアリン（endosialin）、EGFRvIII、LG、SAS、およびCD63から選択され、かつ全ての該抗原がヒト抗原である、請求項17または18記載の複合体ポリペプチド。
【請求項２０】
前記請求項のいずれか一項記載の複合体ポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項２１】
所望のポリペプチドを含みかつ所望のポリペプチドよりもより高収率で発現する請求項1〜19のいずれか一項記載の複合体ポリペプチドを生成する方法であって、以下を含む方法：
（a）所望のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を提供する段階;
（b）所望のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列のどちらかの端に、発現増強ドメイン（「EED」）をコードするヌクレオチド配列を組み込む段階であって、EEDをコードしている該ヌクレオチド配列が第一および第二のシステインアミノ酸残基であるCys1およびCys2のコドンをそれぞれ含み、Cys1のコドンが、ヌクレオチド配列の5'末端に対してCys2のコドンよりも近くに位置し、ここで、Cys1およびCys2のコドンはポリペプチドリンカーをコードするヌクレオチド配列によって隔てられ、該リンカーはシステインを含まず; かつCys1およびCys2が分子内ジスルフィド結合で互いに結合することを可能にするのに十分な長さを定義するものである段階;
（c）段階（b）からのヌクレオチド配列を、適切なベクターで宿主の発現系にトランスフェクトする段階;
（d）段階（b）からのヌクレオチド配列の発現を生じさせるのに適切な条件下で宿主の発現系をインキュベートする段階;
（e）段階（d）において発現したポリペプチドを単離して複合体ポリペプチドを得る段階。 
【請求項２２】
段階（e）において得られた複合体ポリペプチドをCys1および/またはCys2で誘導体化するさらなる段階を含む、請求項21記載の方法。