【手続補正書】
【提出日】平成25年10月4日(2013.10.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１１４位置にアラニンへのアミノ酸置換を含み、４１０位置にヒスチジンへのアミノ酸置換を含むＮＰポリペプチドをもたらす突然変異を含有する人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルスであって、該ＮＰポリペプチドが５５位置にスレオニンを含み、且つ該インフルエンザＢウイルスが温度感受性表現型をもつものである人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項２】
前記ＮＰポリペプチドが、５０９位置にスレオニンへのアミノ酸置換を含むものである請求項１に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項３】
前記ＮＰポリペプチド中のアミノ酸置換が、１１４位置でのアラニンへの置換、４１０位置でのヒスチジンへの置換、及び５０９位置でのスレオニンへの置換から構成されるものである請求項２に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項４】
４３１位置にメチオニンへのアミノ酸置換及び／又は４９７位置でのヒスチジンへのアミノ酸置換の少なくとも１個を含むＰＡポリペプチドをもたらす１個以上の突然変異を含有する請求項１〜３のいずれか１項に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項５】
１５９位置でのグルタミンへのアミノ酸置換及び１８３位置でのバリンへのアミノ酸置換の少なくとも１個を含むＭ１ポリペプチドをもたらす１個以上の突然変異を含有する人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルスを含み、且つ該インフルエンザＢウイルスが弱毒性表現型をもつ請求項１〜４のいずれか１項に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項６】
６３０位置にアルギニンへのアミノ酸置換を含むＰＢ２ポリペプチドをもたらす１個以上の突然変異を含有する請求項１〜５のいずれか１項に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項７】
リアソータントインフルエンザＢウイルスが６：２リアソータントインフルエンザＢウイルスである請求項１〜６のいずれか１項に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項８】
３３℃の細胞培養で増殖したウイルスの力価が、３７℃で増殖した同じウイルスの力価に比較して少なくとも２ｌｏｇ１０大きい請求項１〜７のいずれか１項に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項９】
ウイルスがインフルエンザＢ／Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ／１／６６株に由来する請求項１〜８のいずれか１項に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項１０】
インフルエンザＢウイルスが、フェレット弱毒アッセイにおいて、アミノ酸置換を含有しないインフルエンザＢウイルスに比較して少なくとも２．０ｌｏｇ１０〜５．０ｌｏｇ１０の複製低下を示す請求項５〜９のいずれか１項に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項１１】
インフルエンザＢウイルスが、フェレット弱毒アッセイにおいて検出不能な複製を示す請求項１０に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルス。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルスと、医薬キャリヤー又は賦形剤とを含む組成物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の組成物を投与する段階を含む、免疫応答を刺激する方法。
【請求項１４】
（ａ）１１４位置にアラニンへのアミノ酸置換を含み、４１０位置にヒスチジンへのアミノ酸置換を含むＮＰポリペプチドをもたらす突然変異をインフルエンザＢウイルスゲノムに導入する段階であって、前記ＮＰポリペプチドが５５位置にスレオニンを含むものである該段階、
（ｂ）培養した宿主細胞集団に複数のベクターを導入する段階であって、該複数のベクターはインフルエンザＢウイルスゲノムに相当し、且つ（ａ）段階で生じた突然変異を含有するものである該段階、
（ｃ）宿主細胞集団を培養する段階、及び
（ｄ）（ｃ）段階の宿主細胞により生産された人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルスを回収する段階であって、前記インフルエンザＢウイルスは温度感受性表現型をもつものである該段階、
を含む人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルスの製造方法。
【請求項１５】
５０９位置にスレオニンへのアミノ酸置換を含むＮＰポリペプチドをもたらす１個以上の突然変異をインフルエンザＢウイルスゲノムに導入する段階を含む請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
１１４位置でのアラニンへの置換、４１０位置でのヒスチジンへの置換、及び５０９位置でのスレオニンへの置換から構成されるアミノ酸置換を有するＮＰポリペプチドをもたらす突然変異をインフルエンザＢウイルスゲノムに導入する段階を含む請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
４３１位置でのメチオニンへのアミノ酸置換及び４９７位置でのヒスチジンへのアミノ酸置換の少なくとも１個を含有するＰＡポリペプチドをもたらす１個以上の突然変異をインフルエンザＢウイルスゲノムに導入する段階を含む請求項１４〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
１５９位置でのグルタミンへのアミノ酸置換及び１８３位置でのバリンへのアミノ酸置換の少なくとも１個を含有するＭ１ポリペプチドをもたらす突然変異をインフルエンザＢウイルスゲノムに導入する段階を含み、且つ前記インフルエンザＢウイルスが弱毒表現型をもつものである請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
６３０位置にアルギニンへのアミノ酸置換を含むＰＢ２ポリペプチドをもたらす突然変異をインフルエンザＢウイルスゲノムに導入する段階を含む請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
リアソータントインフルエンザＢウイルスが６：２リアソータントインフルエンザＢウイルスである請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
３３℃の細胞培養で増殖したウイルスの力価が、３７℃で増殖した同じウイルスの力価に比較して少なくとも２ｌｏｇ１０大きい請求項１４〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
ウイルスがインフルエンザＢ／Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ／１／６６株に由来する請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルスを、（ｄ）段階後、培養細胞中又は鶏卵中に通過させることにより増幅する段階を更に含む請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
インフルエンザＢウイルスが、フェレット弱毒アッセイにおいて、アミノ酸置換を含有しないインフルエンザＢウイルスに比較して少なくとも２．０ｌｏｇ１０〜５．０ｌｏｇ１０の複製低下を示す請求項１８〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
インフルエンザＢウイルスが、フェレット弱毒アッセイにおいて検出不能な複製を示す請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
細胞が３５℃以下の温度で培養される請求項１４〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
培養細胞又は宿主細胞が独立にＶｅｒｏ細胞、ＭＤＣＫ細胞、２９３Ｔ細胞及びＣＯＳ細胞から選択される請求項１４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
突然変異が部位特異的突然変異誘発法により導入される請求項１４〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
人工構築組換え又はリアソータントインフルエンザＢウイルスを、（ｄ）段階後、医薬キャリヤー又は賦形剤と配合する段階を更に含む請求項１４〜２７のいずれか１項に記載の方法。