(57)【要約】  本発明は、単量体（＋）‐カテキンおよび少なくとも１つの塩基性アミノ酸の化合物を含む経口投与用胃腸治療組成物に関し、前記組成物は、癌の治癒的および／または予防的治療のために、（＋）‐カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸の少なくとも１つの誘導体もしくは前駆体との複合体の形態で用いられ、前記複合体は、単量体（＋）‐カテキンの少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体に対するモル当量比、１：１〜１：２．５を有することを特徴とする。
2016518422.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単量体（＋）‐カテキンおよび少なくとも１つの塩基性アミノ酸の化合物を含む経口投与用胃腸治療組成物であって、前記組成物が、癌の治癒的および／または予防的治療のために用いられ、前記単量体（＋）‐カテキンの、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体に対するモル当量比が、１：１〜１：２．５であることを特徴とする胃腸治療組成物。
【請求項２】
前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸が、天然もしくは合成由来のリジンまたは天然もしくは合成由来のアルギニン、または前記２つの混合物である、請求項１に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項３】
前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸が、リジンである、請求項１または２に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項４】
少なくとも１つの酸を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項５】
前記酸が、アスコルビン酸、酢酸、クエン酸、および塩酸から選択される、請求項４に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項６】
前記酸が、アスコルビン酸である、請求項４または５に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項７】
１つ以上の生体適合性賦形剤も含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項８】
（＋）‐カテキンおよび塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸の誘導体の含有量が、前記組成物の総重量に対して１５重量％〜９５重量％であり、好ましくは、６０％〜９０％、有利には、６５％〜８５％である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項９】
液体の形態、好ましくは水溶液である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１０】
２５℃の０．０１モル濃度溶液において、ｐＨが、３以上、好ましくは、４〜１１、有利には、４．５〜９であることを特徴とする、請求項９に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１１】
固体の形態、好ましくは、水溶性固体の形態、特には、粉末、錠剤、またはロゼンジの形態である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１２】
前記単量体（＋）‐カテキンおよび前記少なくとも１つのアミノ酸または前記少なくとも１つのアミノ酸誘導体が、複合体を形成する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１３】
前記複合体が、前記複合体の塩の形態であり、前記塩は、前記複合体を含み、前記複合体は、少なくとも１つの酸から誘導される少なくとも１つのプロトンおよび前記少なくとも１つの酸から誘導される少なくとも１つのアニオンを含み、前記塩は、塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸誘導体の量に対して等モル量の前記プロトンおよび前記アニオンを示すことを特徴とする請求項１０に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１４】
前記複合体が、投与後に形成され、前記組成物が、前記単量体（＋）‐カテキン、および前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体、ならびに所望に応じて前記酸を、前記複合体または前記複合体の前記塩の前駆体として、１：１〜２．５のモル当量比に従って含む固体組成物である、請求項１０に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、固体形態であり、単量体（＋）‐カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体、ならびに所望に応じて前記酸を、前記複合体または前記複合体の前記塩の前駆体として、水相中に溶解しての同時使用のための混合製剤として含み、前記複合体は、経口投与前に形成され、前記単量体（＋）‐カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体は、１：１〜１：２．５のモル当量比で存在する、請求項１０または１１に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１６】
肝細胞癌の予防的および／または治癒的治療のためである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１７】
白血病の予防的および／または治癒的治療のためである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１８】
骨髄腫の予防的および／または治癒的治療のためである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１９】
リンパ腫の予防的および／または治癒的治療のためである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項２０】
限定されないが、肝臓癌、前立腺癌、乳癌、子宮癌、精巣癌、膀胱癌、腎臓癌、肺癌、気管支癌、骨癌、口癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、および結腸直腸癌の予防的および／または治癒的治療のためである、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳類、特にヒトを対象とする単量体（＋）‐カテキンおよび少なくとも１つの塩基性アミノ酸の化合物を含む経口投与用の胃腸組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリフェノールは、植物界に広く存在する有機分子のファミリーを構成する。それらは、その名称から示されるように、一般的には高分子量である構造中に複数のフェノール基が組み合わされて存在することを特徴とする。このような化合物は、植物中の二次代謝の産物である。
【０００３】
特に、その単量体の形態の（＋）‐カテキンは、アセンヤク（Uncaria gambir）抽出物から直接得られる。
【０００４】
そのような組成物は、例えば、結合組織（connected tissues）の変性型の慢性疾患の治療に関する米国特許第４，２８５，９６４号の文書から既に知られている。最も良く知られ、ヒトに最も広く蔓延している疾患を含むこのような変性疾患としては、例えば、関節症、軟骨軟化症、および歯周症（parodontosis）である。
【０００５】
米国特許第４，２８５，９６４号によると、単量体（＋）‐カテキンおよび少なくとも１つの塩基性アミノ酸の化合物を含む組成物は、活性物質が単量体（＋）‐カテキンである医薬である。
【０００６】
米国特許第４，２８５，９６４号の文書は、主として注射用組成物に関する。しかし、この文書では、注射用組成物を乾燥することによって、経口製剤を得るために上述の注射用組成物を転用することが推定されている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、癌の、好ましくは肝細胞癌の治癒的および／または予防的治療のための最初に述べた経口組成物の新規な使用に関し、前記単量体（＋）‐カテキンは、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸誘導体（もしくはそれ以外ではアミノ酸前駆体）に対して、１：１から１：２．５のモル当量比を有する。
【０００８】
哺乳類における癌の治療薬としての単量体（＋）‐カテキンの使用は、２００１年に発表された論文Weynant M.J., Carothers A.M., Dannenberg A.J., and Betragnolli M.M., Cancer Research, volume 61, page 118から公知である。
【０００９】
この論文には、経口投与された純単量体（＋）‐カテキンを用いたマウスにおける腸腫瘍の治療について記載されており、従って１つ以上のアミノ酸とはまったく関連していない。特に、この論文には、経口投与された際のその高いバイオアベイラビリティのために、単量体（＋）‐カテキンが、哺乳類、好ましくはヒトにおける広範な様々な上皮型腫瘍の治療のための有望な活性剤であると明記されている。
【００１０】
残念なことに、この論文は有望な結論を出してはいるが、その結果をマウスからヒトへと置き換えることが実証されない限り、それは依然として仮設の域を出ない。
【００１１】
本発明において、まったく驚くべきことに、単量体（＋）‐カテキンおよび少なくとも１つの塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸の少なくとも１つの誘導体に基づく組成物が、経口投与された場合、哺乳類、特にヒトにおける癌の治療および予防、好ましくは改善された予防を可能とすることが観察された。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
この抗癌作用は、本発明による組成物の依然として説明されない特性によって説明され、それらは以下の通りである：
膜安定化作用；
哺乳類の器官を取り巻く結合組織のウェブの保護特性；および
潰瘍およびカルチノイド腫瘍を起こしやすいと考えられている胃粘膜への直接の保護作用。
【００１３】
加えて、出願者らによって実際に実証されたように、前記少なくとも１つのアミノ酸（または前記少なくとも１つのアミノ酸誘導体もしくは前駆体）が請求される通りの当量比で存在することにより、予想外な様式で単量体（＋）‐カテキンの抗癌作用を強めることが可能となる。
【００１４】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１〜１：２である。
【００１５】
有利には、前記モル当量比は、１：１または１：２の比率である。
【００１６】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１以上であり、特に、１：１超である。
【００１７】
有利には、前記モル当量比は、１：２．５以下である。
【００１８】
特に、前記モル当量比は、２．５未満であり、特に、１：２以下である。
【００１９】
好ましくは、前記モル当量比は、２未満である。
【００２０】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１以上であり、特に、１：１超である。
【００２１】
有利には、前記モル当量比は、１：２．５以下である。
【００２２】
特には、前記モル当量比は、１：２．５未満であり、特に、１：２以下である。
【００２３】
好ましくは、前記モル当量比は、１：２未満である。
【００２４】
別の選択肢として、モル当量比は、１：１．５〜１：２．５であり、好ましくは、１：１．５〜１：２である。
【００２５】
有利には、前記モル当量比は、１．００：１．００以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００２６】
非常に有利には、前記モル当量比は、１．００：１．００以上であり、かつ１．００：１．５０以下である。
【００２７】
好ましくは、前記モル当量比は、１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．００以下である。
【００２８】
好ましくは、前記モル当量比は、１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００２９】
好ましくは、前記組成物は、（＋）‐カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸の少なくとも１つの誘導体との複合体の形態で用いられ、前記複合体は、前記単量体（＋）‐カテキンの前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体に対するモル当量比１：１から１：２．５を有する（以降、［Ｃ：ＡＡ／１：１‐１：２．５］複合体と称する）。
【００３０】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１〜１：２である。
【００３１】
有利には、前記モル当量比は、１：１または１：２の比率である。
【００３２】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１以上であり、特に、１：１超である。
【００３３】
有利には、前記モル当量比は、１：２．５以下である。
【００３４】
特に、前記モル当量比は、２．５未満であり、特に、１：２以下である。
【００３５】
好ましくは、前記モル当量比は、２未満である。
【００３６】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１以上であり、特に、１：１超である。
【００３７】
有利には、前記モル当量比は、１：２．５以下である。
【００３８】
特に、前記モル当量比は、１：２．５未満であり、特に、１：２以下である。
【００３９】
好ましくは、前記モル当量比は、１：２未満である。
【００４０】
別の選択肢として、モル当量比は、１：１．５〜１：２．５であり、好ましくは、１：１．５〜１：２である。
【００４１】
有利には、前記モル当量比は、１．００：１．００以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００４２】
非常に有利には、前記モル当量比は、１．００：１．００以上であり、かつ１．００：１．５０以下である。
【００４３】
好ましくは、前記モル当量比は、１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．００以下である。
【００４４】
好ましくは、前記モル当量比は、１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００４５】
好ましくは、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸は、リジンである。
【００４６】
癌の経口による治療および予防において［Ｃ：ＡＡ／１：１‐１：２．５］複合体を用いることは、少なくとも１つの塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸の少なくとも１つの誘導体もしくは前駆体と複合体形成された場合の（＋）‐カテキンの経口投与時における高いバイオアベイラビリティによって可能となるものであり、この特性は、今まで開示されていなかった。
【００４７】
実際、単量体（＋）‐カテキンと結合された前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸が存在することによって、この複合体が容易に腸壁を透過可能となるものと考えられ；従って、このことにより、血中における遊離の単量体（＋）‐カテキンの割合が高められる結果となる。
【００４８】
Weynant M. J. et al.は、自身の論文において、特に経口投与時における高いバイオアベイラビリティの意味するところを定義していない。
【００４９】
本発明において提示される結果に基づいて、複合体の形態の１グラムの単量体（＋）‐カテキンの経口投与時における高いバイオアベイラビリティは、ヒトの場合、少なくとも９００ｎｇ時／ｍＬ（５４０００ｎｇ分／ｍＬ）の値に達する。本発明の結果に照らして、「ヒトにおける高いバイオアベイラビリティ」の用語は、従って、１グラムの経口投与に対して少なくとも９００ｎｇ時／ｍＬ（５４０００ｎｇ分／ｍＬ）に等しいバイオアベイラビリティを意味することを意図している。
【００５０】
本特許出願の発明者らによって得られた結果は、単量体（＋）‐カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸との１：１〜１：２．５のモル当量比での複合体の形態で摂取された１グラムの単量体（＋）‐カテキンに対するヒトで測定されたバイオアベイラビリティは、少なくとも９００ｎｇ時／ｍＬ（５４０００ｎｇ分／ｍＬ）であることを示している。
【００５１】
実例として、本発明において、単量体（＋）‐カテキンの複合体の形態で摂取されたヒトへの経口投与時における（＋）‐カテキンのバイオアベイラビリティ［１．５ｇの複合体の形態で摂取された単量体（＋）‐カテキン０．９２０ｇに対して１２６３±８８ｎｇ時／ｍＬ（７５７８０ｎｇ分／ｍＬ）］は、単量体（＋）‐カテキン単独で摂取された場合のバイオアベイラビリティ［経口摂取された純単量体（＋）‐カテキンの同等量０．９２０ｇに対して８３２±１５０ｎｇ時／ｍＬ（４９９２０ｎｇ分／ｍＬ）］よりも非常に高いことが観察されており、すなわち、複合体であることによってバイオアベイラビリティが＋５２％増加している。
【００５２】
この特性は、本発明において、純単量体（＋）‐カテキンの水への溶解度が、少なくとも１つの塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸の少なくとも１つの誘導体と共に形成された複合体の形態で可溶化された場合に測定された溶解度よりも４００倍低いことが示されたことから、なお一層予想外である。
【００５３】
実際、（＋）‐カテキンのリジン塩の溶解度は、２０℃において、水１リットルあたり４００ｇに達し、一方（＋）‐カテキン自体は、同じ条件下にて、１リットルあたり０．９ｇの溶解度を示す。
【００５４】
２つのその他の重要な利点にも留意されたい。
【００５５】
第一に、［Ｃ：ＡＡ／１：１‐１：２．５］複合体の形態で経口投与される（＋）‐カテキンを用いることにより、遊離単量体（＋）‐カテキンの最大血漿濃度ｃ（ｍａｘ）が、同じ条件下で摂取された純単量体（＋）‐カテキンの同一用量で得られたものと比較して２倍超となることであり；単独で摂取された単量体（＋）‐カテキン１ｇに対する２８０ｎｇと比較して、複合体の形態で摂取された（＋）‐カテキン１ｇに対するｃ（ｍａｘ）は５７１ｎｇであり、すなわち、＋１０３％の増加である。
【００５６】
第二に、このような２倍超の最大血漿濃度に到達する時間［Ｔ（ｍａｘ）］は、単量体（＋）‐カテキン単独の形態よりも、［Ｃ：ＡＡ／１：１‐１：２．５］複合体の形態で（＋）‐カテキンが摂取された場合の方が２倍超早く：Ｔ（ｍａｘ）は、８０分と比較して３０分であり、すなわち、＋１６６％の速度の上昇である。
【００５７】
このような特性はすべて、特に癌の予防および／または治療を意図する医薬の場合、真の利点を構成する。投与されるべき用量は、この場合、非常に高い場合が多く、および長期間にわたって摂取されることになるため、［Ｃ：ＡＡ］複合体によって用量を低減することができるだけでなく、この複合体の摂取後、分子単独の場合に得られることになる血中レベルに対して２倍超の血中レベルが直接得られることも有利である。
【００５８】
（＋）‐カテキンは、一般的に耐容性が良いことから、高用量における唯一の問題は消化障害であり、これは、長期間にわたる治療において、［Ｃ：ＡＡ／１：１‐１：２．５］複合体を用いることによる結果として、排除することができるか、または少なくとも低減することができる。
【００５９】
加えて、本発明において、癌の治療および予防に対して本発明による複合体を経口で用いることにより、前記組成物を注射によって用いる場合と少なくとも同等の有効性が示されることが実証されている。
【００６０】
実際、ラットにおいて、注射投与した場合よりも、経口投与した場合の［Ｃ：ＡＡ／１：１‐１：２．５］複合体のバイオアベイラビリティが１．９０倍高いことが本発明で実証されている。
【００６１】
また、（＋）‐カテキンは、注射後、迅速に代謝され、体内から排出されることも実証されている（注射後１時間で、遊離単量体（＋）‐カテキンの含有量の９０％に近い量が血液から排出された）。経口吸収の場合、遊離単量体（＋）‐カテキンの血中ピーク濃度は、吸収後１時間以内に見られ、２時間後に見られるこの含有量の減少率は、５０％である。
【００６２】
このことは、経口投与によって、経時で遅延される遊離単量体（＋）‐カテキンの血中割合を維持することが可能となり、従って抗癌作用の改善が可能であることを意味している。
【００６３】
最後に、本発明による複合体を経口摂取することによって癌の治療に関してラットで得られた結果が、ヒトで得られた結果と良好に一致することから、ラットでの結果をヒトでの状況に置き換えられることが証明される。
【００６４】
（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの１５０ｍｇ／ｋｇを摂取したラットにおいて、血中遊離（＋）‐カテキンのバイオアベイラビリティは、１３２３４９ｎｇ分／ｍＬ（２２０６ｎｇ時間／ｍＬ）であり、一方ヒトの場合、同じ（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの１．５ｇの摂取により、７５７８０ｎｇ分／ｍＬ（１２６３ｎｇ時間／ｍＬ）のバイオアベイラビリティが得られる。ラットでは代謝が加速されるという事実を考慮すると、続いて述べるバイオアベイラビリティ試験において、その結果をヒトに置き換えることができることが見出されている（表４および２を参照）。
【００６５】
本出願では、癌の、特に肝細胞癌の治療において、単量体（＋）‐カテキンが、放射線療法または化学療法に代表されるより大規模な治療に対する代替法であるという事実について述べる。
【００６６】
好ましくは、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸は、リジンである。
【００６７】
本発明の１つの好ましい実施形態では、前記複合体は、１分子の単量体（＋）‐カテキンに対して１分子のリジンを含む複合体である。
【００６８】
本発明の１つの有利な実施形態では、前記複合体は、１分子の単量体（＋）‐カテキンに対して１分子のアルギニンを含む複合体である。
【００６９】
本発明の１つの特定の実施形態では、前記複合体は、１分子の単量体（＋）‐カテキンに対して２分子のリジンを含む複合体である。
【００７０】
２つのリジンとの単量体（＋）‐カテキンの複合体は、すべての実験において、経口投与時の単量体（＋）‐カテキンのバイオアベイラビリティを改善するための間違いなく最良の組み合わせである。
【００７１】
本発明の別の特定の実施形態では、前記複合体は、１分子の単量体（＋）‐カテキンに対して２分子のアルギニンを含む複合体である。
【００７２】
別の好ましい形態では、前記複合体は、１分子の単量体（＋）‐カテキンに対して１分子のリジンおよび１分子のアルギニンを含む複合体である。
【００７３】
好ましくは、本発明による組成物は、前記複合体が、前記複合体の塩の形態であることを特徴とし、前記塩は、前記複合体を含み、前記複合体は、少なくとも１つの酸から誘導される少なくとも１つのプロトンおよび前記少なくとも１つの酸から誘導される少なくとも１つのアニオンを含み、前記塩は、塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸誘導体の量に対して等モル量の前記プロトンを示す。
【００７４】
この方法では、複合体塩は、以下の式で定められ：
ＨＣｌなどの一官能酸の場合、［Ｃ：ＡＡ：Ｈ＋：Ａ−／１：ｘ：ｘ：ｘ］；または
酸の場合、［Ｃ：ｘＡＡ：ｘＨ＋：ｘ／ｙＡｙ］であり、
Ｈ＋は、酸のプロトンを表し、
Ａ−は、酸のアニオンを表し、
ｘは、ＡＡのモル当量数を表し、
ｙは、アニオンの持つ電荷を表す。
【００７５】
有利には、前記少なくとも１つの酸は、好ましくは、アスコルビン酸、酢酸、クエン酸、および塩酸から選択される。非常に有利には、前記酸は、アスコルビン酸である。
【００７６】
アスコルビン酸の役割は、ビタミン補助剤の役割である。さらに、この酸は、抗酸化剤でもあることから、単量体（＋）‐カテキンの役割と関連して、相乗的抗酸化剤の役割も担っている。
【００７７】
この酸の添加により、経口投与時の（＋）‐カテキンのバイオアベイラビリティの改善が可能となる。この観察結果は、酸性媒体中において（＋）‐カテキンがより安定な状態であることによって説明される。
【００７８】
１つの特定の実施形態では、前記組成物は、１つ以上の生体適合性賦形剤も含むことを特徴とする。
【００７９】
好ましくは、（＋）‐カテキンと前記塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸の前記少なくとも１つの誘導体との複合体の含有量は、前記組成物の総重量に対して１５重量％から９５重量％であり、好ましくは６０％から９０％、有利には６５％から８５％である。
【００８０】
好ましくは、組成物は、液体形態または固体形態であり、好ましくは水溶性固体形態、特には粉末、錠剤、またはロゼンジの形態である。
【００８１】
有利には、液体形態の組成物は、２５℃の０．０１モル濃度の溶液において、３以上のｐＨを有し（すなわち、モル当量比１：０．５の［Ｃ：Ｌｙｓ：Ｈ＋：Ａ］塩の理論ｐＨ）、好ましくは４〜１１、有利には４．５〜９である。
【００８２】
所望に応じて、本発明による組成物は、０．０１Ｍおよび２５℃で溶解された場合のｐＨが３以上、好ましくは４〜１１、有利には４．５〜９であり、単量体（＋）‐カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体、ならびに所望に応じて少なくとも１つの酸を、前記複合体または前記複合体の塩の前駆体として、同時経口使用のための混合製剤として含む固体組成物であり、前記複合体は、経口投与後に形成される。
【００８３】
本発明による固体組成物は、単量体（＋）‐カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体を、１：１〜１：２．５のモル当量比で含む。
【００８４】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１以上であり、特に、１：１超である。
【００８５】
有利には、前記モル当量比は、１：２．５以下である。
【００８６】
特に、前記モル当量比は、１：２．５未満であり、特に、１：２以下である。
【００８７】
好ましくは、前記モル当量比は、１：２未満である。
【００８８】
別の選択肢として、モル当量比は、１：１．５〜１：２．５であり、好ましくは、１：１．５〜１：２である。
【００８９】
有利には、前記モル当量比は、１．００：１．００以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００９０】
非常に有利には、前記モル当量比は、１．００：１．００以上であり、かつ１．００：１．５０以下である。
【００９１】
好ましくは、前記モル当量比は、１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．００以下である。
【００９２】
好ましくは、前記モル当量比は、１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００９３】
単量体（＋）‐カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体は、水性媒体中、本発明による複合体が形成される複合体形成反応に関与する前駆体である。
【００９４】
この場合、複合体は、唾液の水分または胃の食塊に含まれる水分との接触によって胃腸管中で生体内形成される。
【００９５】
別の選択肢として、本発明による組成物は、単量体（＋）‐カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体、ならびに所望に応じて少なくとも１つの酸を、前記複合体または複合体の前記塩の前駆体として、水相中に溶解しての同時経口使用のための混合製剤として含む固体組成物であり、前記複合体は、経口投与前に形成され、前記単量体（＋）‐カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体は、１：１〜１：２．５のモル当量比で存在する。
【００９６】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１以上であり、特に、１：１超である。
【００９７】
有利には、前記モル当量比は、１：２．５以下である。
【００９８】
特に、前記モル当量比は、１：２．５未満であり、特に、１：２以下である。
【００９９】
好ましくは、前記モル当量比は、１：２未満である。
【０１００】
別の選択肢として、モル当量比は、１：１．５〜１：２．５であり、好ましくは、１：１．５〜１：２である。
【０１０１】
有利には、前記モル当量比は、１．００：１．００以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【０１０２】
非常に有利には、前記モル当量比は、１．００：１．００以上であり、かつ１．００：１．５０以下である。
【０１０３】
好ましくは、前記モル当量比は、１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．００以下である。
【０１０４】
好ましくは、前記モル当量比は、１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【０１０５】
この方法では、複合体は、組成物を水溶液中に入れると直ちに、すなわち経口投与前に形成される。
【０１０６】
好ましくは、前記経口組成物は、様々な形態の癌の予防および治療に用いられることを特徴とし、慢性もしくは非慢性白血病、肝臓癌、前立腺癌、乳癌、子宮癌、精巣癌、膀胱癌、腎臓癌、肺癌、気管支癌、骨癌、口癌、食道癌、胃癌、膵臓癌、結腸直腸癌、リンパ腫、および骨髄腫が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０７】
実際、本発明において、前記経口または注射用（非経口）組成物は、腫瘍の広がりを予防し、癌の外科的切除後の身体の回復を助け、化学療法で用いられるその他の医薬の有害な影響を低減することが実証された。また、本発明において、前記組成物が、同様に、放射線療法の過程での結合組織の破壊、特にコラーゲン線維の破壊を低減することも実証される。
【０１０８】
本発明による複合体に基づく組成物の他の実施形態は、添付の請求項において示される。
【０１０９】
本発明はまた、癌の治療および／または予防のための、本発明による複合体または複合体塩に基づく経口治療組成物の使用にも関する。
【０１１０】
本発明はまた、哺乳類、特にヒトにおける癌の治療および予防のための経口治療組成物の作製のための本発明による組成物の使用にも関する。
【０１１１】
本発明のその他の特徴および利点は、限定されない形で、および以下で述べる実施例（および特に比較実施例）を参照して以降で与えられる記述から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１１２】
【図１ａ】図１は、モル当量比１：２（ａ）およびモル当量比１：１（ｂ）の場合の単量体（＋）‐カテキンとリジンとの複合体のＮＭＲスペクトルを示す。
【図１ｂ】図１は、モル当量比１：２（ａ）およびモル当量比１：１（ｂ）の場合の単量体（＋）‐カテキンとリジンとの複合体のＮＭＲスペクトルを示す。
【図２】図２は、モル当量比１：２（ａ）およびモル当量比１：１（ｂ）の場合の単量体（＋）‐カテキンとアルギニンとの複合体のＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】図３は、（＋）‐カテキンヒドロクロロリジン（６１重量％の量で単量体（＋）‐カテキンがリッチ、グループＡ）および１グラムの純単量体（＋）‐カテキン（グループＢ）の吸収後にヒトで測定した経時Ｔ（時間）での遊離（＋）‐カテキン血漿濃度（ｃｃ）の変化をｎｇ／ｍＬで示す。
【図４ａ】図４は、モル当量比１：２での単量体（＋）‐カテキンとリジンとの複合体の（粉末）Ｘ線回折スペクトルを示す。
【図４ｂ】図４は、モル当量比１：２での単量体（＋）‐カテキンとリジンとの複合体の（粉末）Ｘ線回折スペクトルを示す。
【図５】図５は、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩の場合における単量体（＋）‐カテキンとリジンとのモル当量比：１：０、１：１、１：２、１：２．５、１：３、および１：５の関数としての遊離単量体（＋）‐カテキンの血漿濃度の変化を示す（表１４参照）。
【発明を実施するための形態】
【０１１３】
本明細書中、実施例１〜６、および比較実施例１〜５も、本発明による［Ｃ：ＡＡ／１：１‐１：２．５］複合体に基づく組成物における経口でのバイオアベイラビリティ、および哺乳類（ラットおよびヒト）で得られた抗癌活性の結果に関する。
【０１１４】
比較実施例６〜１０は、単量体（＋）‐カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸の少なくとも１つの誘導体との１：１〜１：２．５、好ましくは１：１〜１：２のモル当量比での混合物に基づく組成物においてラットで得られた経口でのバイオアベイラビリティの結果について記載する。
【０１１５】
本発明において、ラットおよびヒトで得られた試験の結果の間の同等性も実証された。従って、ラットで得られた結果が、実際にヒトで再現されることが証明されている。
【０１１６】
以下に示す実施例において、表７ｂの結果以外は、血液中の（＋）‐カテキン含有量は、単量体遊離（＋）‐カテキンの含有量に相当する。
【実施例】
【０１１７】
材料および方法：バイオアベイラビリティ測定
バイオアベイラビリティは、最初に投与された量と比較した、生物中に見られる遊離単量体（＋）‐カテキンの比率に相当する。
【０１１８】
本発明において、これらに限定されないが、（＋）‐カテキンは、［Ｃ：ＡＡ］複合体の形態で、または純単量体（＋）‐カテキン、すなわち、少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体と結合していない形態で吸収され得る。
【０１１９】
本発明において、まず、吸収された（＋）‐カテキン、遊離単量体（＋）‐カテキン、すなわち、非結合形態の血液中の存在と、結合（＋）‐カテキン、すなわち哺乳類の代謝によって誘導体化されたものとを区別する必要がある。
【０１２０】
誘導体化単量体（＋）‐カテキンは、代謝による血液中の遊離単量体（＋）‐カテキンの排出サイクルから得られる（例えば、限定されないが、腸肝サイクルによる）。
【０１２１】
生物にとって異質である活性物質（または分子）の排出は、いくつかのプロセスを合わせた作用から得られる。それは、種々の器官の、何よりもまずは肝臓の代謝能、および、特に腎排せつ（尿）であるが肝排せつ（胆汁）も含むあらゆる形態の排せつを含む。
【０１２２】
この排出代謝は、酵素変換プロセスによる２つの代謝相が関与する公知の生物変換サイクルによる単量体（＋）‐カテキンの誘導体化をもたらす。従って、第Ｉ相反応および第ＩＩ相反応は以下のように区別される：
第Ｉ相反応は、主として肝臓ミクロソーム中で行われる酸化反応；これよりも非常に頻度が低く、それほどよくは研究されていない還元反応；ならびに、肝臓、種々の組織、およびさらには血漿中でも行われる通常の（banal）代謝経路を構成する加水分解反応を含み；および続いて、
第Ｉ相反応から得られた誘導体が、次に結合される。この結合が第ＩＩ相反応を構成するものであり、このような誘導体のグルクロン酸との結合が関与するグルクロン酸抱合を含む。
【０１２３】
この意味において、任意のバイオアベイラビリティは、単量体（＋）‐カテキンの経口投与後における遊離単量体（＋）‐カテキンの任意の血中割合（または含有量）に相当する。
【０１２４】
手順：
以下で述べる実験結果は、健康なヒト、および体重約２５０グラムの健康なウィスターラットで実施した研究に基づいて得られたものである。
【０１２５】
ラットに対して実施された研究に関しては、個体を、最大４体のグループで、おが屑を敷藁としたケージ中、２０℃〜２５℃の周囲温度にて、２４時間のうち１２時間の照明で飼育した。実験の開始前に順応期間を確保した。
【０１２６】
実験研究中、ラットには、標準的な市販の餌および水を自由に摂らせた。活性生成物源の投与前の夜には、ラットに食べ物を何も与えなかったが、この活性生成物は、単量体（＋）‐カテキン（またはその他のポリフェノール：ケルセチンおよびＥＧＣＧ）であることは理解される。
【０１２７】
ラットは、活性生成物の溶液の５ｍＬの体積の経口投与を受けた。
【０１２８】
ラットおよびヒトからの血液サンプルの採取に関して、血液は、内部をＥＤＴＡでコーティングしたチューブに採取し、続いて３０００ｒｐｍ（毎分回転数）、周囲温度で４５分間、次に４℃の温度で１５分間遠心分離した。続いて、血漿を回収し、分析まで−７０℃で保存した。
【０１２９】
血液中の活性物質を測定するための分析法（ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳは液体クロマトグラフィータンデム型質量分析計を表す）は、２００７年に発表されたMata-Bilbao et al., the Journal of Agricultural and Food Chemistry, volume 55, page 8857に記載の方法に基づいた。
【０１３０】
方法の開発に関して、レファレンス血漿を、活性物質で処理していないラットおよびウシから内部で採取し、続いて−２０℃で保存した。
【０１３１】
リン酸、ＥＤＴＡ、およびアスコルビン酸の溶液を用いて遊離（＋）‐カテキンを血漿から抽出し、続いてＳＰＥ（固相抽出）によって精製したが；特に、それは、Ｏａｓｉｓ（商標）ＨＬＢ抽出であり、分析はＬＣ‐ＭＳ／ＭＳによって行う。定量は、（＋／−）‐カテキン‐２，３，４‐１３Ｃ３を内標準（ＳＩ）として用いた標準的な較正手順に従って行った。
【０１３２】
この場合、集計される遊離（＋）‐カテキンの含有量は、血漿から単離された単量体遊離（＋）‐カテキンの含有量だけでなく、前記血漿からの遊離（＋）‐カテキンの抽出のための条件に付随する単量体遊離（＋）‐カテキンの異性体化に起因するその異性体の形態の含有量も含む。
【０１３３】
この手順は、血液中の遊離ケルセチンまたはＥＣＧＣの抽出および定量に関する手順と同一である。
【０１３４】
全（＋）‐カテキンの抽出および定量に関して、手順は、遊離（＋）‐カテキンに適用される手順と同じであるが、但し、ＳＰＥによる精製の前に追加の工程が行われる。この追加の工程は、アリールサルフェートおよびグルコロニダーゼ（glucoronidase）の消化溶液でサンプルを処理して、血漿細胞から活性物質を抽出することにある。
【０１３５】
（＋）‐カテキンの全濃度（ｃｔ）（遊離または誘導体化分）は、例えば台形法を用いて、単量体（＋）‐カテキン源の経口投与後におけるｎｇ／ｍＬで測定した経時での血漿濃度（ｃｃ）の変化の曲線下面積を測定することによって算出する。
【０１３６】
標準
１ｍｇ／ｍＬ（メタノール）の（＋）‐カテキンの内標準溶液を、（＋）‐カテキンのストック溶液から調製し、続いて−２０℃で保存した。
【０１３７】
シグマアルドリッチ製のカテキン‐Ｃ１３（品番：７１９５７９、純度９９．３重量％）をＳＩとして用いた。
【０１３８】
（遊離および全）（＋）‐カテキンの定量のためのＳＩ溶液は、５ｍＬのストック溶液をメタノールで希釈して最終体積１０ｍＬとすることで調製した。このＳＩ溶液を、続いて−２０℃で保存した。
【０１３９】
方法
ａ）血漿中遊離単量体（＋）‐カテキンの分析のための抽出プロトコル
５００μＬのホモジナイズした血漿を１５ｍＬフラスコに移す；
５０μＬのＳＩ（１０ｐｐｍ）を添加する；
１８０μＬの抗酸化剤溶液（２０ｍｇ／ｍＬのアスコルビン酸および１ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ）および１０μＬのオルソリン酸を添加する；
２分間のボルテックス混合を行う；
抽出混合物を得るために、１．５ｍＬの水を添加して希釈する；
当業者に公知であり本手順に適合可能である標準的なプロトコルに従い、Ｗａｔｅｒ  Ｏａｓｉｓ（商標）ＨＬＢを用いて、固相抽出をこの抽出混合物に適用する；
不活性雰囲気下、４５℃での蒸発によって、溶出液を乾燥する；
乾燥抽出物をアセトニトリル中に溶解し、続いて３０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離を行う；ならびに
ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィを表す）分析を行う。
【０１４０】
ｂ）血漿中全単量体（＋）‐カテキンの分析のための抽出プロトコル
５００μＬのホモジナイズした血漿を１５ｍＬフラスコに移す；
５０μＬのＳＩ（１０ｐｐｍ）を添加する；
１８０μＬの抗酸化剤溶液（１ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ中の２０ｍｇ／ｍＬのアスコルビン酸）および１０μＬのオルソリン酸を添加する；
２分間のボルテックス混合を行う；
７５０μＬの０．２Ｍ  酢酸緩衝溶液（ｐＨ４．８）を添加する；
５μＬのへリックスポマチア（Helix pomatia）の混合物を添加し、続いて５５℃で２時間のこの溶液の消化工程を行う；
４０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離を行い、抽出混合物を得る；
当業者に公知であり本手順に適合可能である標準的なプロトコルに従い、Ｗａｔｅｒ  Ｏａｓｉｓ（商標）ＨＬＢを用いて、固相抽出をこの抽出混合物に適用する；
不活性雰囲気下、４５℃での蒸発によって、溶出液を乾燥する；
乾燥抽出物をアセトニトリル中に溶解し、続いて３０００ｒｐｍで１０分間の遠心分離を行う；ならびに
ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィを表す）分析を行う。
【０１４１】
ｃ）抽出−Ｗａｔｅｒ  Ｏａｓｉｓ（商標）ＨＬＢ
活性化溶液：
１ｍＬのメタノール；
１ｍＬの水；および
１ｍＬの０．１（体積）％ギ酸含有ＤＭＦ溶液（７０体積％）
洗浄溶液：
ＥｍＬの水；
１ｍＬのメタノール溶液（３０体積％）；
１ｍＬの酢酸エチル
溶出溶液：
５ｍＬのモル当量比１：２での酢酸エチルおよびメタノール混合物
【０１４２】
ｄ）ＬＣ‐ＭＳ／ＭＳ分析
液体クロマトグラフィ（ＬＣ）
カラム：Ａｌｌｔｉｍａ  Ｃ１８  ５μ；
ＨＰＬＣ水性固定相Ａ：ギ酸（０．１体積％の量に濃縮）；
ＨＰＬＣ移動相Ｂ：０．１体積％の量でギ酸を含有するアセトニトリルの溶液；
流速：０．６ｍＬ／分；
オーブン温度：３０℃；
注入体積：５０μＬ；
溶出プログラム：
【０１４３】
【表１】
2016518422.tif 000003
【０１４４】
質量分析（ＭＳ）
脱溶媒温度４００℃でのネガティブモードＥＳＩイオン化；
イオン源温度：１２０℃；
コーンガス流量：１５０Ｌ／時間；
脱溶媒ガス流量：１０００Ｌ／時間
【０１４５】
本発明による複合体の合成
複合体は、単量体（＋）‐カテキンが前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸と、または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体と、水素架橋型の結合によって結合している分子構造に相当する。
【０１４６】
これは、複合体が水溶液中で解離していない場合であることを意味している。
【０１４７】
単量体（＋）‐カテキンは、単量体の形態で存在するポリフェノールに相当する。
【０１４８】
塩基性アミノ酸は、中性ｐＨにおいて正に帯電するラジカルを有する。
【０１４９】
塩基性アミノ酸誘導体の方は、本発明において、塩基性アミノ酸に由来し、このアミノ酸に行われた１つ以上の化学変換から得られる分子として定義される。
【０１５０】
好ましくは、複合体（所望に応じて塩の形態であってもよい）は、単量体（＋）‐カテキン、および経口投与後にアミノ酸への変換またはアミノ酸誘導体への変換を意図するものである少なくとも１つの塩基性アミノ酸前駆体を含む。
【０１５１】
例えば、限定されないが、アミノ酸前駆体は、アミノ酸のグルクロニドまたはグルクロノシド（glucuronoside）であってよく、これは、吸収された後、β‐グルクロニダーゼ酵素の働きにより、生物によってアミノ酸に変換される。
【０１５２】
実施例１：単量体（＋）‐カテキンおよびリジンの複合体の作製
１ａ．モル当量比１：２での単量体（＋）‐カテキンおよびリジンの複合体
当業者に公知の方法のうちの１つに従ってアセンヤクから抽出された単量体（＋）‐カテキンを粉砕し、続いて５０℃で３０分間真空乾燥する。
【０１５３】
この乾燥工程の後、抽出された（＋）‐カテキンは、少なくとも微量の水分を含む。
【０１５４】
続いて、ヘリウムをバブリングした蒸留水に溶解するまで、撹拌しながら２当量のリジンを（＋）‐カテキンに添加する。次に、この溶液を４０℃から４５℃の温度まで加熱し、２当量のリジンが完全に溶解するまでおよそ１時間撹拌し、続いて冷蔵庫に１６時間入れる。
【０１５５】
別の選択肢として、（＋）‐カテキンを２当量のリジンの溶液に添加し、撹拌しながら４０℃から４５℃の温度としてもよい。
【０１５６】
次に、この溶液をブフナー漏斗でろ過し、５０ｍＬの蒸留水で洗浄し、続いて、まずはロータリーエバポレーター中で、次に真空ラインを用いることで（５０℃の温度で４時間）水を蒸発させて乾燥させる。
【０１５７】
得られた生成物は、重水素化メタノールに可溶性ではないが、重水（Ｄ２Ｏ、ＮＭＲ分析に用いられる溶媒）には可溶性である。得られたＮＭＲスペクトルを図１ａに示す。
【０１５８】
ＮＭＲスペクトルの読み取りから、複合体が、１モルの単量体（＋）‐カテキンに対して２モルのリジンから作られていることが分かる。
【０１５９】
さらに、スペクトルに３つのピークＡ、Ｂ、およびＣが存在することから、リジンが、実際にカテキンと結合していることが分かる。実際、（＋）‐カテキンの芳香族ピークの強い修飾が、５．９５‐５．８７ｐｐｍ周辺のピークの消滅および６．５０‐７．００ｐｐｍのピークの弱い積分と共に見られる。このことは、リジンと（＋）‐カテキンの芳香族環との間にフェノール基のレベルで相互作用が存在することを示しており、このような相互作用は、水素架橋型の結合が関与している。
【０１６０】
Ｃｕ  Ｋα線（λ＝１．５４２Å）によるＳｉｅｍｅｎｓ  Ｄ５０００粉末回折計を用いて収集されるＸ線回折スペクトルを、以下の化合物について取得した：単量体（＋）‐カテキン（ＪＥ１４３）、リジン塩酸塩、単量体（＋）‐カテキン、およびプロトン化リジンの混合物（ＪＥＣａｔＬｙｓＨ）（Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２の混合物）、ならびに単量体（＋）‐カテキンおよび非プロトン化リジンの３つの混合物（ＪＥ１４９ｂ、ＪＥ１５０、ＪＥ１５１）。データは、０．０１６７°のステップで、５°から６０°の範囲で記録した。
【０１６１】
スペクトルを図４に示す。図４ａに示すように、ＪＥＣａｔＬｙｓＨに関連するＸＲＤスペクトルは、単量体（＋）‐カテキンおよびリジン塩酸塩のスペクトルの重なりが見られず、従って、２つの成分の混合物ではなく、複合体の形成が示される。特に、複合体のスペクトルにおいて、３１．５および３６度の角度でのリジンのピークが消滅していることに特に留意されたい。
【０１６２】
単量体（＋）‐カテキンおよび非プロトン化リジンの３つの混合物（ＪＥ１４９ｂ、ＪＥ１５０、ＪＥ１５１）のスペクトルは、これらの化合物の結晶性をまったく示しておらず、そのことから、これらのレファレンスＪＥ１４９ｂ、ＪＥ１５０、およびＪＥ１５１において、アモルファス結晶状態の組成物の形成が示唆されており、これは、リジン塩酸塩および単量体（＋）‐カテキンのスペクトルの重なりには相当しない結晶性ネットワークが識別されたＪＥＣａｔＬｙｓＨ混合物で見られるものとは対照的である。
【０１６３】
１ｂ．モル当量比１：１での単量体（＋）‐カテキンおよびリジンの複合体
実施例１ａのリジン複合体の合成で用いたものと同じプロトコルに従うが、リジン不足によってモル当量比１：１の前記複合体の形成を促進する過剰の（＋）‐カテキンが存在するようにリジンの量を２分の１に減らして、モル当量比１：１での単量体（＋）‐カテキンとリジンとの複合体を合成した。
【０１６４】
重水中で取得したＮＭＲスペクトルを図１ｂに示す。ＮＭＲスペクトルの読み取りから、複合体が、１モルの単量体（＋）‐カテキンに対して１モルのリジンから作られていることが分かる。
【０１６５】
実施例２：単量体（＋）‐カテキンおよびアルギニンの複合体の作製
２ａ．モル当量比１：２での単量体（＋）‐カテキンおよびアルギニンの複合体
実施例１ａのリジン複合体の合成で用いたものと同じプロトコルに従って、単量体（＋）‐カテキンとアルギニンとの複合体を合成した。
【０１６６】
図２ａに示すＮＭＲスペクトルの読み取りから、複合体が、１分子の単量体（＋）‐カテキンに対して水素架橋型の結合を介して結合した２分子のアルギニンから作られていることが分かる。
【０１６７】
２ｂ．モル当量比１：１での単量体（＋）‐カテキンおよびアルギニンの複合体
実施例１ｂのリジン複合体の合成で用いたものと同じプロトコルにより、単量体（＋）‐カテキンとアルギニンとの複合体を合成した。
【０１６８】
図２ｂに示す前記複合体のＮＭＲスペクトルの読み取りから、複合体が、１分子の単量体（＋）‐カテキンに対して水素架橋型の結合を介して結合した１分子のアルギニンから作られていることが分かる。
【０１６９】
本発明による複合体の経口投与後のバイオアベイラビリティ
実施例３：ヒトにおける単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネート（または［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩）の経口投与後におけるバイオアベイラビリティ測定
単量体（＋）‐カテキンおよび少なくとも１つの塩基性アミノ酸の複合体：単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの１．５ｇ。プロトコル１ｂに従って得られた［Ｃ：Ｌｙｓ］複合体から開始すると、単量体（＋）‐カテキンは、前記複合体の総重量に対して６１重量％の割合で存在し（すなわち、１．５ｇに対して０．９２ｇ）、単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネート（［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩）は、前記［Ｃ：Ｌｙｓ］複合体を、前記複合体に対して等モル量で添加されたＨＣｌで中和することによって合成する。
【０１７０】
この方法により、リジンがＨＣｌ由来のプロトンと結合し（Ｌｙｓ−Ｈ＋）、塩化物イオン（Ｃｌ−アニオン）が溶液中に遊離して、［Ｃ：Ｌｙｓ−Ｈ＋］複合体と相互作用を起こさない複合体。
【０１７１】
この複合体塩を、５名の健康な志願者のグループＡに投与する。
【０１７２】
０．９２ｇの単量体（＋）‐カテキンを含有する、１．５ｇの単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートを投与した後、血液中の遊離単量体（＋）‐カテキンの含有量を、志願者グループＡにおいて経時で測定した（表１）。
【０１７３】
【表２】
2016518422.tif 000004
【０１７４】
【表３】
2016518422.tif 000005
【０１７５】
図３は、（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの経口投与後における経過時間Ｔ（時間）にわたるｎｇ／ｍＬで測定した血漿濃度（ｃｃ）の変化を示しており（曲線Ａ）；この曲線は、表１に記載のデータから推定したものである。
【０１７６】
例えば文献で公知の台形法を用いて測定した曲線下面積は、ヒドロクロロリジネートと形成された複合体の形態での（＋）‐カテキンの摂取から開始して６時間にわたって測定した血漿中に吸収された遊離単量体（＋）‐カテキンの全濃度（ｃｔ）を示している。このパラメーターｃｔにより、表１のデータから、ｎｇ時間／ｍＬで表される（＋）‐カテキンのバイオアベイラビリティを算出することが可能となる。（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートに対するｃｔは、１２６３±８８ｎｇ時間／ｍＬである。
【０１７７】
図３より、最大濃度ｃ（ｍａｘ）は、曲線のピークに相当する。［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩を受けたグループでは、ｃ（ｍａｘ）は、５２５ｎｇ／ｍＬに達する。この最大濃度に到達する時間Ｔ（ｍａｘ）は、単量体（＋）‐カテキン複合体を受けたグループＡの場合、０．５時間である。
【０１７８】
比較実施例１：ヒトにおける純単量体（＋）‐カテキンの経口投与後におけるバイオアベイラビリティ測定
純単量体（＋）‐カテキンの１ｇの用量を、５名の健康な志願者のグループＢに投与する。
【０１７９】
（＋）‐カテキンの摂取後、志願者グループＢにおいて、血液中の遊離単量体（＋）‐カテキンの含有量を経時で測定した。結果を表３に示す。
【０１８０】
【表４】
2016518422.tif 000006
【０１８１】
【表５】
2016518422.tif 000007
【０１８２】
図３は、純（＋）‐カテキンの経口投与後における経過時間Ｔ（時間）にわたるｎｇ／ｍＬで測定した血漿濃度（ｃｃ）の変化を示している（曲線Ｂ）。この曲線は、表３に記載のデータから推定したものである。
【０１８３】
曲線下面積は、純（＋）‐カテキンの摂取から開始して６時間にわたって測定した血漿中に吸収された遊離単量体（＋）‐カテキンの全濃度（ｃｔ）を示している。このパラメーターｃｔにより、表１および３のデータから、ｎｇ時間／ｍＬで表される（＋）‐カテキンのバイオアベイラビリティを算出することが可能となる。０．９２ｇの純（＋）‐カテキンを含有する（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの１．５ｇに対するｃｔは、１２６３±８８ｎｇ時間／ｍＬと算出される。１ｇの純（＋）‐カテキンに対しては、９０４±１６３ｎｇ時間／ｍＬと算出され、すなわち、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩を用いて摂取された用量に相当する０．９２ｇの純（＋）‐カテキン対しては８３２±１５０ｎｇ時間／ｍＬであり（本発明による実施例２を参照）、すなわち、少なくとも５２％のバイオアベイラビリティの改善である。
【０１８４】
図３より、最大濃度ｃ（ｍａｘ）は、曲線のピークに相当する。１ｇの純単量体（＋）‐カテキンを受けたグループでは、ｃ（ｍａｘ）は、２８０ｎｇ／ｍＬと算出され、すなわち、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩を用いて摂取された（＋）‐カテキンの用量に相当する０．９２ｇの純（＋）‐カテキン対しては２５８ｎｇ／ｍＬである。［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩を受けたグループの場合、ｃ（ｍａｘ）は、５２５ｎｇ／ｍＬに達し、これは、純（＋）‐カテキンの場合と比較して１０３％の増加に相当する。これらの最大濃度に到達する時間Ｔ（ｍａｘ）は、それぞれ、グループＢでは１．２０時間であり、単量体（＋）‐カテキン複合体での治療を受けたグループでは０．５時間である。
【０１８５】
この第一の比較実施例から、（＋）‐カテキン複合体、特に（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートが、単量体（＋）‐カテキンの経口投与後におけるバイオアベイラビリティを、純形態でのその摂取の場合と比較して大きく改善したことが示される（＋５２％）。パラメーターＴ（ｍａｘ）およびさらには最大濃度ｃ（ｍａｘ）によって測定される単量体（＋）‐カテキンが血液中へと送られる（そしてそこでは、血漿中の遊離形態である）スピードも、単量体（＋）‐カテキンをその純形態で摂取する場合と比較して、それぞれ＋１６６％および＋１０３％と非常に大きく増加している。
【０１８６】
比較実施例２：ラットにおける純単量体（＋）‐カテキンおよび（＋）‐カテキン複合体の経口投与後におけるバイオアベイラビリティ測定
純単量体（＋）‐カテキン（ＣＰ）の１００ｍｇ（体重１ｋｇあたり）の用量、または（＋）‐カテキン１００ｍｇと同等の（＋）‐カテキンリジネートの用量を、５体のウィスターラットの各個体に投与した。
【０１８７】
経口投与後におけるバイオアベイラビリティを評価するためのパラメーターを、様々な（＋）‐カテキン源：ＣＰまたは様々なリジン複合体について表５に示す。
【０１８８】
【表６】
2016518422.tif 000008
【０１８９】
この表において、Δｃｔ（％として表す）は、各複合体で得られたｃｔと純単量体（＋）‐カテキンの場合に測定されたｃｔとの間の差異を、ＣＰに対するバイオアベイラビリティ値と再度関連付けた量に相当する。例として、［Ｃ：Ｌｙｓ／１：１］複合体に対して算出されるΔｃｔは、以下のようにして得られる：
１００×［（１１２４２２−９６２３８）／９６２３８］＝１７％
【０１９０】
最良のパラメーター値は、１．９×１０５ｎｇ分／ｍＬに近い経口投与後のバイオアベイラビリティ値が得られる［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］複合体で達成されており、これは、純形態の（＋）‐カテキン摂取と比較して９４％の増加に相当する。
【０１９１】
さらに、血液中に送られたカテキンの最大濃度［Ｃ（ｍａｘ）］は、１１６％増加しており；Ｃｍａｘを与えるピークは、その他のカテキン源の６０分と比較して１２０分［Ｔ（ｍａｘ）］に位置し、このことも、経時で遊離単量体（＋）‐カテキンの血中レベルを有利に増加させる効果を有するものであり、活性物質の遅延作用、従って改善された抗癌作用が確認される。
【０１９２】
これらのデータは、純（＋）‐カテキン（表４）の経口摂取を［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ、１：１：１］複合体塩（表２）の場合と比較することによってヒトで見出されたものと対応している。バイオアベイラビリティは、実際、同じ割合で増加しており、ヒトでは＋５２％、ラットでは＋３６％である。
【０１９３】
本実施例において、ラットの場合、［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］複合体が、経口投与後、（＋）‐カテキンのバイオアベイラビリティをなお一層大きく増加させていることが示される。
【０１９４】
比較実施例３：ラットにおける純単量体（＋）‐カテキン、（＋）‐カテキンとアルギニンとの複合体、および（＋）‐カテキンとリジンとの複合体の経口投与後におけるバイオアベイラビリティ測定
純単量体（＋）‐カテキン（ＣＰ）の１００ｍｇ（体重１ｋｇあたり）の用量、または（＋）‐カテキン１００ｍｇと同等の（＋）‐カテキン複合体の用量を、５体のウィスターラットのサンプルの各個体に投与した。
【０１９５】
経口投与後におけるバイオアベイラビリティを評価するためのパラメーターを、様々な（＋）‐カテキン源：ＣＰまたは様々なリジン複合体またはアルギニン複合体について表６に示す。
【０１９６】
【表７】
2016518422.tif 000009
【０１９７】
これらの結果から、（＋）‐カテキンと結合する、従って（＋）‐カテキンの核に位置するオルソ‐ジフェノール基の酸性を中和するいずれの塩基性アミノ酸も（すなわち、リジン、アルギニン、およびヒスチジンから選択される）、経口投与後の前記カテキンのバイオアベイラビリティに対する同一の有益な効果を有する可能性があることが導かれる。
【０１９８】
比較実施例４：ラットにおける純単量体（＋）‐カテキン、ならびにモル当量比１：１および１：５での（＋）‐カテキンとリジンとの複合体の経口投与後におけるバイオアベイラビリティ測定
純単量体（＋）‐カテキン（ＣＰ）の２５ｍｇ（体重１ｋｇあたり）の用量、または（＋）‐カテキン２５ｍｇと同等の（＋）‐カテキンリジネートの用量を、３体のウィスターラットのサンプルの各個体に投与した。
【０１９９】
経口投与後におけるバイオアベイラビリティを評価するためのパラメーターを、様々な（＋）‐カテキン源：ＣＰまたは様々なリジン複合体について表７ａに示す。
【０２００】
血液中に存在する全（＋）‐カテキンに関するパラメーターＴ（ｍａｘ）、ｃ（ｍａｘ）、およびｃｔを表７ｂに示す。全（＋）‐カテキンは、遊離単量体（＋）‐カテキンおよびラットの体内で結合された単量体（＋）‐カテキンを集計したものである。
【０２０１】
【表８】
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【０２０２】
【表９】
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【０２０３】
［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］複合体は、遊離および全血漿中（＋）‐カテキンの両方の含有量を増加させる一方で、［Ｃ：Ｌｙｓ／１：５］複合体は、純（＋）‐カテキン、すなわちリジンなしで摂取された（＋）‐カテキンと比較して、これらの含有量を明らかに減少させている。
【０２０４】
この実施例の結果は、表５に示す結果と比較して、経口投与後のバイオアベイラビリティに関する最適化は、実際、所望に応じてＨＣｌが存在してよい［Ｃ：ＡＡ／１：２］複合体で達成されることを示している。酸の存在は、経口投与後のバイオアベイラビリティパラメーターに好適な影響を与えるが（表５参照）；しかし、この酸の存在は、経口投与後のバイオアベイラビリティの増加を得るために必須ではないことには留意されたい。
【０２０５】
本発明による複合体の抗癌作用
実施例４：皮膚における３Ｈ‐プロリンの全取り込みおよびコラーゲンへの取り込みに対する単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートおよび単量体（＋）‐カテキンアスコルボリジネート（ascorbolysinate）の作用の測定
リソソーム膜の安定化は、結合基質（connective matrix）、特にコラーゲンの分解の原因となるタンパク質分解酵素の放出を阻止する。この分解は、癌の種類に関わらず、転移性癌細胞の増殖の原因となる（Cell Communication and Signaling 2010, 8: 22）。
【０２０６】
皮膚は、結合基質およびコラーゲン線維が特に豊富な組織であり、それがそのすべての弾力性をもたらしている。
【０２０７】
経口投与された（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートおよび単量体（＋）‐カテキンアスコルボリジネートの、３Ｈ‐プロリンの一方では全取り込み（皮膚全体）に対する、他方では前記皮膚のコラーゲンへの取り込みに対する効果についてここでは実証する。
【０２０８】
これを行うために、体重が９５〜１１５ｇの２４体の雌ウィスターラットのバッチをラット１２体ずつに分けた２つのグループＣおよびＤに対して、生体内研究を行った。各グループにおいて、比放射能が１３．６Ｃｉ／１０−３モルである放射性３Ｈ‐ヒドロキシプロリンを、放射性３Ｈ‐プロリンに関して１００μＣｉ／個体の放射能を表す個体の体重に対して１ｍＣｉ／ｋｇの用量でのプロリン‐Ｌ‐（５‐３Ｈ）の腹腔内注射によってすべての動物に投与した。
【０２０９】
各グループのラット６体に、１００ｍｇ／ｋｇの割合で５日間にわたって単量体（＋）‐カテキンに基づく処理を食事投与によって受けさせ、その後屠殺した。単量体（＋）‐カテキンに基づく処理を受けなかったそれ以外のラット６体は、コントロールサブグループである（対照）。グループＣは、単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートを受け、一方グループＤは、単量体（＋）‐カテキンアスコルボリジネートを受けた。
【０２１０】
【表１０】
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【０２１１】
表８において、取り込みのレベルは、乾燥重量のｍｇあたりの１分間あたりの放射性３Ｈ‐ヒドロキシプロリンの崩壊数（ｄｐｍ）によって測定する。この数が大きいほど、３Ｈ‐ヒドロキシプロリンの濃度が高い。
【０２１２】
表８の結果は、カテキンおよび（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの複合体が、結合組織の生合成、特にコラーゲン合成を刺激することを示している。
【０２１３】
加えて、本発明によるこの実施例により、経口で与えられた単量体（＋）‐カテキン複合体の経口吸収により、生体内で結合ウェブが保護されること、従って、特に癌細胞の侵入に対してこのウェブが保護されることが確認される。
【０２１４】
比較実施例５：皮膚における３Ｈ‐プロリンの全取り込みおよびコラーゲンへの取り込みに対する純単量体（＋）‐カテキンの作用の測定
この比較実施例では、体重が９５〜１１５ｇの１２体のウィスターラットのグループＥに対して、比放射能が１３．６Ｃｉ／１０−３モルである放射性３Ｈ‐ヒドロキシプロリンを、放射性３Ｈ‐プロリンに関して１００μＣｉ／個体の放射能を表す個体の体重に対して１ｍＣｉ／ｋｇの用量でのプロリン‐Ｌ‐（５‐３Ｈ）の腹腔内注射によってすべての個体に投与した。
【０２１５】
各グループのラット６体は、１００ｍｇ／ｋｇの割合で５日間にわたって純単量体（＋）‐カテキンに基づく処理を食事投与によって受けさせ、その後屠殺した。単量体（＋）‐カテキンに基づく処理を受けなかったそれ以外のラット６体は、コントロールサブグループである（対照）。
【０２１６】
【表１１】
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【０２１７】
表９において、取り込みのレベルは、乾燥重量のｍｇあたりの１分間あたりの放射性３Ｈ‐ヒドロキシプロリンの崩壊数（ｄｐｍ）によって測定する。この数が大きいほど、３Ｈ‐ヒドロキシプロリンの濃度が高い。
【０２１８】
表８および９の結果は、単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネート（＋１５％）および単量体（＋）‐カテキンアスコルボリジネート（＋１４％）の複合体における取り込みのレベルの増加が、ラットに食事投与によって純単量体（＋）‐カテキンを与えた場合の測定値（＋１６％）と同等であることを示している。
【０２１９】
この比較実施例により、経口で与えられた単量体（＋）‐カテキン複合体の経口吸収により、生体内で結合ウェブが保護されること、従って、特に癌細胞の侵入に対してこのウェブが保護されることが確認され、これは、純（＋）‐カテキンの摂取時（１００ｍｇの（＋）‐カテキン）に得られる量よりも実は少ない単量体（＋）‐カテキン含有量においてである（１００ｍｇの複合体に対して６１ｍｇの（＋）‐カテキン）。
【０２２０】
実施例５：マストミスラット（Mastomys rat）の胃粘膜における胃潰瘍の発症およびヒスタミンレベルに対する単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネート（［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩）の作用の測定
この実施例では、自然に胃病変を、特に胃癌を発症することが知られているアフリカのラット、マストミスにおける単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの生体内での効果を実証する。
【０２２１】
マストミスは、実際、胃粘膜中にヒスタミンを貯蔵する特別な細胞系を有しており；これらの細胞は、カルチノイド腫瘍を引き起こし得る。
【０２２２】
この実施例では、ｎ＝４８のマストミスのサンプルを、まず、１ｍｇの水酸化アルミニウムを含有する０．２ｍＬの生理食塩水溶液に溶解した卵白アルブミン３μｇの腹腔内注射によって感作させるものであり、卵白アルブミンは、抗免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）およびＧ（ＩｇＧ）抗体を発生させる。７日後、０．０１ｍＬの生理食塩水溶液中の卵白アルブミン１ｍｇの２回目の注射を、麻酔をかけた動物の胃体部（corpus）のレベルの胃粘膜に与え、実際の注射部位に潰瘍性病変を引き起こす。
【０２２３】
４８体のラットを、２４体の１グループおよび１２体ずつの２グループの３つのグループに分割する。２４体の第一のグループ（Ｇ１）は、プラセボ（０．１５Ｍの濃縮ＮａＣｌ溶液）を受けた。
【０２２４】
１２体の第二のグループ（Ｇ２）は、注射前の２日間および注射後の３日間、１日２回（２×３００ｍｇ）の単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの経口投与で処理した。１２体の第三のグループ（Ｇ３）は、Ｇ２グループと同じ条件下にて、単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートを１００ｍｇの割合で、しかし腹腔内投与によって受けた。
【０２２５】
表１０の結果によって示されるように、（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの経口投与により、胃潰瘍（ＮＵ）を発症する動物の数が非常に大きく減少し（−７２％）、また１０−６ｍｇ／ｋｇのタンパク質として表される胃粘膜中のヒスタミンレベル（ＨＬ）も大きく低下している（−１８％）。ヒスタミンレベルは、ｎ＝１２体のサンプルに基づいて、Ｇ１、Ｇ２、およびＧ３のグループについて測定する。
【０２２６】
胃粘膜に蓄積されるヒスタミンレベルの低下は、ヒスタミンを貯蔵する細胞の細胞壁への単量体（＋）‐カテキンの直接の作用の結果である。これらの細胞の細胞壁の強化に寄与することによって、単量体（＋）‐カテキンは、胃粘膜に吸収されるヒスタミンのレベルを低下し、従って、潰瘍の数を減少することが可能となる。
【０２２７】
興味深いことに、この実験に関連して、特に多くのタイプの慢性または急性白血病において、マスト細胞の増加が、ヒスタミンレベルの上昇およびさらには免疫グロブリンレベルの上昇を伴って見出されることに留意されたい（Blood Cells Mol Dis. 35(3), 370-383, 2005）。
【０２２８】
【表１２】
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【０２２９】
実施例６：癌に罹患している患者の治療における単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネート（［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩）の作用の測定
この実施例では、１日あたり１つの［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩５００ｍｇ錠剤で１年以上治療を受けた２名の癌患者での単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの効果の試験に関する結果を示す。
【０２３０】
第一の患者は、６７歳の男性であり、第Ｄ０日の術後血液検査でリンパ形質細胞性リンパ腫（lymphoplasmocytic lymphoma）（ワルデンストレームマクログロブリン血症型）が検出された。診断は、免疫グロブリン（ＩｇＭ）のモノクローナルピークの電気泳動検出に基づいている。この診断は、再確認され、ピークは、電気泳動による同一の検出方法を用いた第二の分析の過程で分析された。
【０２３１】
免疫グロブリンは、攻撃に対する生物の防御において不可欠な役割を担っており、通常は、Ｂリンパ球によって分泌される。
【０２３２】
多発性骨髄腫において、または例えばワルデンストレーム病の場合、骨髄に存在する形質細胞による単一種類の免疫グロブリン、またはモノクローナル免疫グロブリンの分泌、およびその制御されない形での増殖が観察される。
【０２３３】
このような免疫グロブリンは、血液中および尿中に高い濃度で見られる。従って、これらは、実際の腫瘍マーカーを成している。それを分析することにより、疾患細胞の数および疾患の度合いに関する評価が得られ、従って、治療下でのその進行をモニタリングすることが可能となる。
【０２３４】
続いての血液検査により、ＩｇＭ分析についての以下のデータが得られた（血漿１００ｍＬあたりのｍｇ）。
【０２３５】
【表１３】
2016518422.tif 000015
【０２３６】
表１１の結果は、１年半にわたって単量体（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートを服用したことにより、治療薬の投与を開始した第ＤＴ日に検出された最大値を下回って安定したことを示している。
【０２３７】
ＩｇＭ値が２０００ｍｇ／１００ｍＬを超えているにも関わらず、浸潤のレベルは低く維持された。加えて、患者は化学療法による治療を受けなかった。従って、この患者は安定化していると見なされる。
【０２３８】
第二の患者では、まず最初に、左鎖骨下頸部リンパ節腫大が第Ｄ０日に検出された。次に、２週間後、左腎腺癌がこの患者で検出され、続いてこの腎臓での腺癌検出の３日後、左腎臓の腎摘除を受けた。
【０２３９】
その後、第Ｄ０日＋３か月の時点で、左頸部リンパ節の切除がこの患者に施される。この施術に続いて、一連の１５の放射線療法セッションが行われた。
【０２４０】
第Ｄ０日＋１５か月（すなわち、第ＤＴ日）から開始して、患者は、１日あたり１つの（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネート５００ｍｇ錠剤の経口投与を受けた。
【０２４１】
第ＤＴ日＋１５か月の時点で、病的縦隔リンパ節腫大の出現（４５ｃｍ３の大きさ）が見られ、縦隔リンパ節切除が必要であり、続いて第ＤＴ日＋１７か月の時点で肺検査を行った。この検査により、左の肺の５ｍｍの小さい微小結節影の退縮が示され、ならびに肺実質および腹部ステージのレベルでの二次病変部が存在しないことも示された。
【０２４２】
ＤＴ＋１９か月の時点で、診察報告は、腎明細胞癌が完全に寛解したと結論付けた。この診断は、ＤＴ＋２３か月で行った対照検査で再確認された。明確に、（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの１年間の服用により、患者の病状が安定化されたことは明らかである。
【０２４３】
本発明による複合体の前駆体の組成物または複合体塩の前駆体の組成物の合成
前記複合体の前駆体としての前記単量体（＋）‐カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸を含む組成物を作製するための方法は、以下の工程を含む：
第一の量の単量体（＋）‐カテキンを提供する工程；
第二の量の少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体を提供して、前記（＋）‐カテキンと前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体とのモル当量比が、１：１〜１：２．５、好ましくは１：１以上、特に１：１超、好ましくは１：２．５以下、特に２．５未満、より特には１：２以下、より特には２未満とする工程；ならびに
前記単量体（＋）‐カテキンを、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記塩基性アミノ酸誘導体と接触させて、単量体（＋）‐カテキンおよび少なくとも１つの塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸の少なくとも１つの誘導体の前記混合物を得る工程。
【０２４４】
好ましくは、この方法は、酸、好ましくはアスコルビン酸を提供することから成る追加工程を含む。
【０２４５】
別の選択肢として、この方法は、水相を提供すること、および前記混合物を前記水相に溶解して（＋）‐カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸との複合体が形成され、前記複合体が前記水相に溶解することから成る追加工程を含む。
【０２４６】
別の選択肢として、この方法はまた、本発明による前記混合物に生体適合性賦形剤を添加する工程も含む。
【０２４７】
好ましくは、提供される前記少なくとも１つのアミノ酸は、天然または合成由来であるリジンおよびアルギニン、ならびにこれらの混合物から成る群より選択される。
【０２４８】
以下に続く比較実施例６〜９では、経口投与される組成物は、粉末形態のヒドロクロロリジネート（Ｌｙｓ：ＨＣｌ）と純単量体（＋）‐カテキンとのモル当量比１：１、１：２、１：３、および１：５での混合物をベースとして作製した。
【０２４９】
単量体（＋）‐カテキンおよび少なくとも１つの塩基性アミノ酸を前記［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］複合体塩の前駆体として含む組成物を得る。
【０２５０】
次に、各混合物を水に溶解する。混合物の溶解の過程で、（＋）‐カテキンとヒドロクロロリジネートとの複合体の水相中での形成が発生する。こうして得られた溶液は、複合体の形態の（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネートの溶液であり；この溶液中に得られた複合体は、単量体（＋）‐カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸（またはその誘導体）との、本発明による混合物と同一のモル当量比の複合体である。従って、単量体（＋）‐カテキンとアミノ酸とのモル当量比１：１での混合物は、水相中に溶解されると、単量体（＋）‐カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸（またはその誘導体）との、１：１に等しいモル当量比での複合体の溶液を与える。
【０２５１】
次に、この溶液を、経口で（ＰＯ）または静脈内（ＩＶ）注射によって、５体のウィスターラットのグループの各個体に、純単量体（＋）‐カテキンの２５ｍｇ（体重１キログラムあたり）の用量、または２５ｍｇの（＋）‐カテキンと同等の（＋）‐カテキンリジネートの用量で投与する。
【０２５２】
本発明による複合体または複合体塩の前駆体の組成物の経口投与後のバイオアベイラビリティ
比較実施例６：ラットにおけるモル当量比１：１および１：２での（＋）‐カテキンとリジンとの複合体の経口投与後ならびに注射投与後におけるバイオアベイラビリティ測定
【０２５３】
【表１４】
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【０２５４】
【表１５】
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【０２５５】
【表１６】
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【０２５６】
表１２ａおよび１２ｂにまとめた結果に示されるように、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］複合体塩の静脈内投与後、（＋）‐カテキンの血漿レベル（ｃｃ）は、最初は当然非常に高いが、非常に急速に非常に低いレベルまで戻り、２時間後、血漿中に見られる全（＋）‐カテキンは３４０ｎｇ／ｍＬ、遊離（＋）‐カテキンは０ｎｇ／ｍＬであり、一方、同一条件下で経口投与した同一生成物の全血中レベルは、２時間後でも１９９０ｎｇ／ｍＬに、遊離（＋）‐カテキンの量は７６７ｎｇ／ｍＬに維持されている。
【０２５７】
この静脈内注射（ヒドロクロロリジネートが（＋）‐カテキンを可溶性とすることによって可能となった）は、単量体（＋）‐カテキンに結合したリジンの分子が１つまたは２つであっても、この（＋）‐カテキンが血液流から急速に排出されることを示している。
【０２５８】
他方、単量体（＋）‐カテキンの複合体化された形態の経口摂取では、一方で血液中の遊離単量体（＋）‐カテキンの量が増加され、他方で最大濃度ピークが延長される。
【０２５９】
これは驚くべき結果である。実際、血液中への直接注射後に得られる血漿レベルは、投与後の最初の１時間にわたっては、この生成物が経口投与された場合よりも非常に高い血中レベルをもたらしており、これは予想通りである。他方、複合体が経口投与された場合、血漿中の利用可能な遊離（＋）‐カテキンに関する遊離単量体（＋）‐カテキンのｃｔ値の８８％の増加が観察されており（ＩＶ投与の場合の僅かに８７９７０ｎｇ分／ｍＬと比較して、経口投与の場合は１６５３２５ｎｇ分／ｍＬのｃｔ）：血漿中に見られる全カテキンについても同様であり：ｃｔは、同様に７３％増加しており：このことはまったく特筆すべきことである。従って、経口投与は、驚くべきことに、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］複合体塩の投与後、血漿中の遊離または全（＋）‐カテキンに関わらず、全体のバイオアベイラビリティにおいて静脈内投与よりも優れていることが示される。
【０２６０】
さらに、１２０分後には、ＩＶ注射後の血中に実質的に（＋）‐カテキンは存在しない一方で、同じ量での［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］複合体塩の経口摂取後では、血中に最大レベルのカテキンが見られている。
【０２６１】
従って、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］複合体塩が、驚くべき様式でカテキンのバイオアベイラビリティを改善することが実証されており、実際、この（＋）‐カテキンの血中バイオアベイラビリティは、それが遊離状態または結合状態であるかに関わらず、静脈注射による投与の場合よりも、経口投与の場合の方が驚くほど良好である。
【０２６２】
このことは、静脈内投与後のレベルおよびバイオアベイラビリティデータを、経口投与に外挿することができないこと、および本発明の結果が、経口摂取の場合のバイオアベイラビリティ試験が例示されていない米国特許第４，２８５，９６４号の文書とは明らかに異なっていることを示している。
【０２６３】
比較実施例７：ラットにおける（＋）‐カテキンとリジンとの複合体の経口投与後のバイオアベイラビリティに対する酸の効果の測定
［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］複合体への酸の添加の考え得る効果を確認するために、発明者らは、ＣＰまたは［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］複合体塩の経口摂取後の血漿中遊離単量体（＋）‐カテキンのレベルを測定した。結果を以下の表に示す。
【０２６４】
【表１７】
2016518422.tif 000019
【０２６５】
単量体（＋）‐カテキンのバイオアベイラビリティおよびその最大濃度に対するリジン２分子の良好な効果がここでも見いだされており；ＨＣｌの２分子の付加は、リジン２分子の効果に影響を与えており：Δｃｔが、ＨＣｌの存在下では＋７７％、ＨＣｌなしでは＋１７％である（表７ａ参照）。
【０２６６】
比較実施例８：本発明による（＋）‐カテキンヒドロクロロリジネート複合体の経口投与後のバイオアベイラビリティに対する（＋）‐カテキンと塩基性アミノ酸との間のモル当量比の効果のラットにおける測定
【０２６７】
【表１８】
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【０２６８】
図５の曲線上に報告されるＣ；Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：１．５：１．５複合体塩の場合のｃｔの値（ｎｇ分／ｍＬ）は、１４２ｋ  ｎｇ分／ｍＬであり、すなわち、１：１：１（１２７ｋ、報告値）よりも良好であり、１：２．５：２．５（１０５ｋ  ｎｇ分／ｍＬ、報告値）よりも良好であるが、１：２：２（１６５ｋ、算出値）ほど良好ではない。
【０２６９】
１：２．５：２．５以下の比率での（＋）‐カテキン塩で得られたｃｔ値はすべて、それよりも高い比率である１：３：３（３８ｋ、算出値）および１：５：５（２６ｋ、算出値）での同じ塩で得られた値よりも非常に良好である。
【０２７０】
これらの結果から、比較実施例４の結果が確認され：［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］複合体塩は、経口摂取された（＋）‐カテキンのバイオアベイラビリティを明らかに改善する唯一の（＋）‐カテキン‐リジン会合体である。
【０２７１】
この実施例のデータは、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］複合体塩が最適バイオアベイラビリティを与えることを示すだけでなく、この比率を超えた途端に、その効果が明らかに逆行することも示しており、Δｃｔは、モル当量比１：３：３に対しては−５９％であり、モル当量比１：５：５に対しては−６６％である。
【０２７２】
加えて、単量体（＋）‐カテキンとヒドロクロロリジネートとを別々に摂取すると（５分間から１０分間の間隔以内）、血漿中の遊離単量体（＋）‐カテキンの量に対して負の効果がもたらされる（−４８％のΔｃｔ）。このことは、カテキンとリジンが摂取の前に混合されるか（所望に応じて水に溶解された形態で）、または少なくとも同時に摂取されることが必要であることを示すものである。
【０２７３】
比較実施例９：経口投与後のバイオアベイラビリティに対する治療組成物の性質のラットにおける測定
経口投与される組成物が、実施例１ａ（１ｂ）もしくは２ａ（２ｂ）（実施例１および２参照）に記載の方法に従って作製された［Ｃ：ＡＡ／１：１‐１：２．５］複合体に基づくか、またはそうでなければ、経口投与される組成物が、（＋）‐カテキンおよびリジン塩酸塩（ヒドロクロロリジネートとも称される）の粉末の所望されるモル当量比での混合物であるかに関わらず、経口投与後のバイオアベイラビリティに関する結果は類似している（以下の表１５参照）。
【０２７４】
［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］複合体がプロトコル１ａ（実施例１参照）に従って作製された比較実施例２の結果、および［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］複合体塩が、１モルの粉末状（＋）‐カテキンおよび２モルの粉末状ヒドロクロロリジネートを単に混合し、続いて経口投与前に溶解することによって作製された比較実施例８の結果を考えると、表１５にまとめた結果は、これらの複合体における経口投与後のバイオアベイラビリティの改善が、同じ桁の大きさで維持されていることを示している。
【０２７５】
【表１９】
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【０２７６】
（＋）‐カテキンおよびアミノ酸の粉末状混合物に基づいて最適バイオアベイラビリティパラメーターを得ることが可能であることは、この混合物の作製が単一固相で非常に容易に行われる限りにおいて、作製コストという面での利点を示すものであり、それによって、大スケールによる生産の展望を想定することができる。
【０２７７】
比較実施例１０：ケルセチンおよび没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）の経口投与後のバイオアベイラビリティのラットにおける測定
この実施例では、以下の表１６の結果によって示されるように、ケルセチンまたは没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）の場合の経口投与後におけるバイオアベイラビリティに対して、リジンの効果が有意なものではないことが実証される。
【０２７８】
【表２０】
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【０２７９】
この実施例では、経口投与組成物を、粉末形態のヒドロクロロリジネート（Ｌｙｓ：ＨＣｌ）と純単量体ケルセチンまたはＥＧＣＧとの、ケルセチンの場合は１：２、ＥＧＣＧに関しては１：１、１：２、１：３、および１：５のモル当量比での混合物に基づいて作製した。
【０２８０】
各混合物を、水に溶解する。次に、この溶液を、５体のウィスターラットのグループの各個体に、純単量体ケルセチンもしくはＥＧＣＧの２５ｍｇの用量（体重１ｋｇあたり）、または２５ｍｇのポリフェノールと同等であるケルセチンリジネートもしくはＥＧＣＧＣリジネートの用量の割合で経口投与する。
【０２８１】
ＥＧＣＧに関して、測定されたレベルは、純ＥＧＣＧまたはその複合体形態に関わらず、没食子酸エピガロカテキンに添加されたヒドロクロロリジネートのいずれの割合においても（１：１：１、１：２：２、１：３：３、またはそれ以外では１：５：５のモル当量比）、信頼できる検出限界未満（すなわち、２５０ｎｇ／ｍＬ）のままである。
【０２８２】
結論として、（＋）‐カテキンと塩基性アミノ酸とのモル当量比１：２の複合体で得られた最適バイオアベイラビリティの結果を考慮し、ケルセチンまたはＥＧＣＧなどのその他の酸ポリフェノールの複合体化の試みが失敗であった事実を考えると、本発明において、［Ｃ：ＡＡ／１：１‐１：２．５］複合体が、胃腸管の透過に関する特定の活性を有する複合体であることが明らかに実証されている。明白なことには、従って、これは単純な酸塩基中和の現象ではなく、その場合であれば、ケルセチンおよびＥＧＣＧの経口投与後のバイオアベイラビリティも促進されたはずである。
【０２８３】
また、本発明は、いかなる形であっても、上述の特定の実施形態に限定されるものではないこと、および添付の請求項の文脈から逸脱することなく、多くの改変がそこに導入されてよいことも理解される。
【図１ａ】
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【図１ｂ】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図５】
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【国際調査報告】
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