【手続補正書】
【提出日】平成25年1月24日(2013.1.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本出願人は、細胞又は細胞小器官内等のプロトン濃度を調節する働きを担うプロトンポンプ阻害剤が、メラノサイト内の酸性化作用を有し、細胞内酸性化作用によりチロシナーゼ活性を低下させメラニン産生抑制効果を発揮することにより、美白をはじめとする皮膚色素異常関連疾患に有用であることを見出している。また、前記プロトンポンプ阻害剤は、細胞内における環境的な要因、即ち、細胞内酸性化作用によりチロシナーゼ活性を抑制することによりメラニン産生を抑制し美白効果を発揮する点において、従前のメラニン産生抑制剤に属するチロシナーゼの酵素活性を低下させるチロシナーゼ直接阻害剤、チロシナーゼファミリータンパク質を減少させるチロシナーゼファミリータンパク減少剤等とは全く異なる作用機序を有する美白剤であると言える。言い換えれば、従前のメラニン産生抑制剤とプロトンポンプ阻害剤は、メラニン産生抑制作用を有する物質としては共通するが、その作用機作により明確に区別されるものである。加えて、従前のメラニン産生抑制剤とは異なった作用機序によりメラニン産生抑制作用を発揮するので、プロトンポンプ阻害作用を有するメラニン産生抑制剤と、従前のメラニン産生抑制剤との併用は、少なくとも相加的効果を奏する。この様な背景からも、プロトンポンプ阻害剤は、高い効果が期待出来る新たな作用機作を有するメラニン産生抑制剤である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
ショウガ科に属する植物には、ジンゲロール誘導体又はショウガオール誘導体が含有され、該誘導体が、角層修復促進作用（例えば、特許文献３を参照）、皮膚角質層水分量増加作用（例えば、特許文献４を参照）、血行促進作用（例えば、特許文献５を参照）を有することが知られている。また、前記誘導体とは別に、化学合成されたショウガオール及びジンゲロールと類似構造を有する化合物が、チロシナーゼ阻害作用（例えば、特許文献６を参照）を有することも既に知られている。しかしながら、ジンゲロール誘導体が、プロトンポンプ阻害作用を有することは全く知られていなかった。さらに、ジンゲロール誘導体のプロトンポンプ阻害作用に関する構造活性相関は全く明らかにされておらず、プロトンポンプ阻害作用の発現が、ジンゲロール誘導体の化学構造に制約を受けることも知られていなかった。加えて、前記のプロトンポンプ阻害作用を有するジンゲロール誘導体を含有する皮膚外用剤が、プロトンポンプ阻害作用を介し、美白をはじめとする色素異常疾患の予防又は治療に有効であることも全く知られていなかった。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
ここで前記一般式（３）に表される化合物に付いて述べれば、式中、Ｒ７は、炭素数１〜１２の直鎖又は分岐のアルキル基を表す。前記Ｒ７は、炭素数１〜１２の直鎖又は分岐のアルキル基を表し、具体例を挙げれば、具体例を挙げれば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基が好適に例示出来、より好ましくは、ペンチル基、ヘプチル基、ノニル基が好適に例示出来る。前記一般式（３）に表される化合物に関し、具体例を挙げれば、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−ヘキサノン、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−ヘプタノン、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−オクタノン、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−ノナノン、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−デカノン（６−ジンゲロール、化合物３）、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−ウンデカノン、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−ドデカノン（８−ジンゲロール、化合物２）、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−トリデカノン、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−テトラデカノン（１０ジンゲロール、化合物１）、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−ペンタデカノン）テトラデカ−３−オン、５−ヒドロキシ−１−（３−ブチルオキシ−４−ヒドロキシフェニル）テトラデカ−３−オン、その異性体及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩が好適に例示出来る。また、前記一般式（３）に表される化合物は、その化学構造中に不斉炭素原子を有するためラセミ化合物、光学活性体及び／又はその混合物等の様々な形態存在し得るが、かかる化合物のプロトンポンプ阻害作用、生体内における安定性及び安全性等を考えた場合、（Ｓ）体であることが好ましい。また、前記一般式（３）に表される化合物の内、より好ましい化合物としては、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−デカノン（６−ジンゲロール、化合物３）、５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−ドデカノン（８−ジンゲロール、化合物２）、（５−ヒドロキシ−１−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−３−テトラデカノン（１０−ジンゲロール、１０−gingerol、化合物１）、その異性体及び／又はそれらの薬理学的に許容される塩が好適に例示出来る。かかる化合物は、優れたプロトンポンプ阻害作用、並びに、プロトンポンプ阻害作用に基づくメラニン産生抑制作用を有する。また、製剤化における溶剤等への溶解性に優れ、皮膚外用剤等への製剤化が容易であり、更に、製剤中の安定性、皮膚貯留性に優れ、色素沈着予防又は改善等の美白作用を発揮する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
＜製造例１： 本発明のショウガ科ショウガ属ショウガより得られる植物抽出物、及び、前記一般式（１）に表される化合物（化合物１、化合物２、化合物３）の単離精製方法＞
本発明のショウガ科ショウガ属ショウガ（ショウキョウ）より得られる植物抽出物の製造方法を示す。本抽出物は、ショウガZingiber officinale Roscoe( Zingiberaceae ) の根茎をエタノールに浸漬し製造した。具体的には、ショウガ科ショウガ属ショウガ（ショウキョウ）を粗粉末にしたもの２００ｇに、薄めたエタノール（３７〜５０％）約６００ｍLを加え、時々かき混ぜながら可溶性成分が充分に溶けるまで放置し、布ごしし、残留物を薄めたエタノール（３７〜５０％）少量で洗い、圧搾し、浸出液及び洗液をあわせ、２日間放置し、濾過し、さらに薄めたエタノール（３７〜５０％）を加え、本発明のショウガ科ショウガ属ショウガより得られる植物抽出物全量１０００ｍLを製造した。本発明のショウガ科ショウガ属ショウガより得られる植物抽出物は、上記の製造例に記載の方法に準じ製造することも出来るし、丸善株式会社、一丸ファルコス株式会社などにより市販されている抽出物を購入し、使用することも出来る。
前記一般式（１）に表される化合物の内、化合物１〜３に関し単離精製を行った。市販のショウキョウ（乾燥品、刻み、ウチダ和漢薬）１．８ｋｇを９リットルのメタノール中で２時間加熱還流抽出を２回行い、ろ過後２回分の濾液をあわせたものを減圧下濃縮、乾燥し、ショウキョウメタノールエキス１５９ｇを得た。ショウキョウメタノールエキス１５９ｇを１０％の水を含んだメタノール溶液に溶解させ、ｎ−ヘキサンで液液分配抽出を行い、得られたｎ−ヘキサン画分を減圧下濃縮・乾燥し、ｎ−ヘキサンエキス６１．８ｇを得た。ｎ−ヘキサンエキス６１．８ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Fuji Silysia PSQ100B、６００ｇ）に付し、ｎ−ヘキサンと酢酸エチルの混合溶液の比率を変えながら溶出させ、２８のフラクションに分画した。このうち２０番目のフラクション４ｇをさらにTSK-gel ODS-80Ts（東ソー株式会社）カラムを装着した分取ＨＰＬＣにて分画、精製を行い、化合物１〜３を得た。さらに、前記化合物１〜３に関しては、試薬メーカーより購入した１０−ジンゲロール（化合物１、ChromaDex Inc.）、８−ジンゲロール（化合物２、ChromaDex Inc.）及び６−ジンゲロール（化合物３、和光純薬工業株式会社）を標準品として用い、例えば、Journal of Cromatography B，８５６，４１−４７（２００７）に記載の高速液体クロマトグラフィーにより保持時間を比較し、化合物１〜３であることを確認した。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
＜製造例３： 本発明の皮膚外用剤の製造例２＞
表５及び表６に示す処方に従って、本発明の皮膚外用剤であるエッセンス化粧料を作製した。即ち、イ、ロ及びハの成分をそれぞれ７５℃に加熱し、イにロを徐々に加え乳化し、更に、ハを加え中和、増粘させ、攪拌冷却してエッセンスエマルション（化粧料）を得た。