【手続補正書】
【提出日】平成23年12月20日(2011.12.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１７５】
上記のように、C2093、B5860N、またはC6055遺伝子のヌクレオチド配列に対応するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、C2093、B5860N、またはC6055遺伝子の発現レベルを低下させることができる。具体的には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、C2093、B5860N、もしくはC6055遺伝子、またはこれらに対応するmRNAのいずれかと結合することにより作用し得、それによって遺伝子の転写もしくは翻訳を阻害し、mRNAの分解を促進し、および/または遺伝子によってコードされるタンパク質の発現を阻害し、最終的にC2093、B5860N、またはC6055タンパク質の機能を阻害する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膀胱癌細胞を検出する方法であって、以下の段階を含む方法：
(a) 膀胱癌細胞を含むことが疑われる対象から採取された細胞試料における、SEQ ID NO:2のアミノ酸配列をコードする遺伝子の発現レベルを検出する段階；および
(b) 発現レベルの上昇によって膀胱癌細胞を含むことが示される段階。
【請求項２】
発現レベルが以下からなる群より選択される段階のいずれか1つによって検出される、請求項1記載の方法：
(a) SEQ ID NO:1に対応する塩基配列を含むmRNAを検出する段階；および
(b) SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含むタンパク質を検出する段階。
【請求項３】
膀胱癌を治療または予防するための化合物の候補をスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
(a) 被験化合物を、以下からなる群より選択されるポリペプチドと接触させる段階：
(1) SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
(2) SEQ ID NO:2のアミノ酸配列、または該配列と少なくとも80%の相同性を有する配列を含みSEQ ID NO:2のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な細胞増殖活性を有するポリペプチド；および
(3) SEQ ID NO:1のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドであって、SEQ ID NO:2のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な細胞増殖活性を有するポリペプチド；
(b) ポリペプチドと被験化合物との結合活性を検出する段階；ならびに
(c) ポリペプチドに結合する化合物を選択する段階。
【請求項４】
膀胱癌を治療または予防するための化合物をスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
(a) 被験化合物を、以下からなる群より選択されるポリペプチドを発現する細胞と接触させる段階：
(1) SEQ ID NO:2のアミノ酸配列を含むポリペプチド；
(2) SEQ ID NO:2のアミノ酸配列、または該配列と少なくとも80%の相同性を有する配列を含みSEQ ID NO:2のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な細胞増殖活性を有するポリペプチド；および
(3) SEQ ID NO:1のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドであって、SEQ ID NO:2のアミノ酸配列からなるポリペプチドと同等な細胞増殖活性を有するポリペプチド；
(b) 段階(a)のポリペプチドの細胞増殖活性を検出する段階；ならびに
(c) 被験化合物の非存在下で検出される細胞増殖活性と比較して、ポリペプチドの細胞増殖活性を抑制する化合物を選択する段階。
【請求項５】
膀胱癌を治療または予防するための化合物をスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
(a) 被験化合物を、SEQ ID NO:1のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを発現する細胞と接触させる段階；および
(b) 被験化合物の非存在下で検出される発現レベルと比較して、SEQ ID NO:1のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドの発現レベルを低下させる化合物を選択する段階。
【請求項６】
細胞が膀胱癌細胞である、請求項4または5記載の方法。
【請求項７】
膀胱癌を治療または予防するための化合物をスクリーニングする方法であって、以下の段階を含む方法：
(a) 被験化合物を、SEQ ID NO:1のヌクレオチド配列を含むマーカー遺伝子の転写制御領域およびその転写制御領域の調節下で発現されるレポーター遺伝子を含むベクターを導入した細胞と接触させる段階；
(b) 該レポーター遺伝子の発現レベルまたは活性を測定する段階；および
(c) 被験化合物の非存在下で検出される該レポーター遺伝子の発現レベルまたは活性と比較して、該レポーター遺伝子の発現レベルまたは活性を低下させる化合物を選択する段階。
【請求項８】
膀胱癌を治療または予防するための組成物であって、当該組成物は活性成分としてのSEQ ID NO:1の塩基配列からなるポリヌクレオチドに相補的な塩基配列を含み、その産生を減少させるアンチセンスポリヌクレオチドまたは低分子干渉RNAの薬学的有効量および薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項９】
低分子干渉RNAが標的配列としてSEQ ID NO:21のヌクレオチド配列を含み、かつ25ヌクレオチド長、またはそれ未満の長さからなる、請求項8記載の組成物。
【請求項１０】
siRNAが一般式5'-[A]-[B]-[A']-3'を有し、
式中、[A]はSEQ ID NO:21のヌクレオチド配列に対応するリボヌクレオチド配列であり、
[B]は3〜23ヌクレオチドからなるリボヌクレオチド配列であり、かつ
[A']は[A]の相補配列からなるリボヌクレオチド配列である、
請求項9記載の組成物。
【請求項１１】
組成物がトランスフェクション促進剤を含む、請求項8記載の組成物。
【請求項１２】
膀胱癌を診断するための診断薬であって、試薬が、SEQ ID NO: 1の塩基配列からなるポリヌクレオチドにハイブリダイズするオリゴヌクレオチド、またはSEQ ID NO: 2のアミノ酸配列からなるポリペプチドに結合する抗体を含む診断薬。
【請求項１３】
センス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖分子であって、センス鎖がSEQ ID NO:21に対応するリボヌクレオチド配列を含み、かつアンチセンス鎖が該センス鎖と相補的なリボヌクレオチド配列を含み、該センス鎖と該アンチセンス鎖が相互にハイブリダイズして二本鎖分子を形成し、SEQ ID NO:1のヌクレオチド配列からなる遺伝子を発現する細胞に導入した場合に、該遺伝子の発現を阻害する二本鎖分子であって、25ヌクレオチド長、またはそれ未満の二本鎖分子。
【請求項１４】
センス鎖が、SEQ ID NO:1のヌクレオチド配列に由来する19〜25個の連続したヌクレオチドを含む、請求項13記載の二本鎖分子。
【請求項１５】
センス鎖がSEQ ID NO:21に対応するリボヌクレオチド配列からなる、請求項13記載の二本鎖分子。
【請求項１６】
単一のリボヌクレオチド転写産物がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む、請求項13記載の二本鎖分子であって、該センス鎖と該アンチセンス鎖を連結する一本鎖リボヌクレオチド配列をさらに含む二本鎖分子。
【請求項１７】
請求項13記載の二本鎖分子をコードするベクター。
【請求項１８】
二次構造を有する転写産物をコードする請求項17記載のベクターであって、転写産物がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含むベクター。
【請求項１９】
転写産物が、センス鎖とアンチセンス鎖を連結する一本鎖リボヌクレオチド配列をさらに含む、請求項17記載のベクター。
【請求項２０】
患者由来の生体試料におけるBLC番号231の遺伝子の発現レベルを決定する段階を含む、対象における膀胱癌または膀胱癌を発症する素因を診断する方法であって、該試料の発現レベルが該遺伝子の正常対照レベルと比較して上昇していることにより、該対象が膀胱癌に罹患しているかまたは膀胱癌を発症するリスクがあることが示される方法。
【請求項２１】
試料の発現レベルが正常対照レベルより少なくとも10%高い、請求項20記載の方法。
【請求項２２】
複数の膀胱癌関連遺伝子の発現レベルを決定する段階をさらに含む、請求項20記載の方法。
【請求項２３】
遺伝子発現レベルが、以下からなる群より選択される方法によって決定される、請求項20記載の方法：
(a) BLC番号231の遺伝子のmRNAを検出する段階、
(b) BLC番号231の遺伝子によってコードされるタンパク質を検出する段階、および
(c) BLC番号231の遺伝子によってコードされるタンパク質の生物活性を検出する段階。
【請求項２４】
検出がDNAアレイ上で行われる、請求項23記載の方法。
【請求項２５】
患者由来の生体試料が上皮細胞を含む、請求項20記載の方法。
【請求項２６】
患者由来の生体試料が膀胱癌細胞を含む、請求項20記載の方法。
【請求項２７】
患者由来の生体試料が膀胱癌細胞由来の上皮細胞を含む、請求項20記載の方法。