(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リン酸フルダラビンのリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩を製造する方法において、リン酸フルダラビンを、水に溶解し、この溶液を攪拌しながら３０℃未満の温度においてアルカリ金属又はアルカリ土類金属の塩基性溶液を添加し、この溶液を、４５〜５５℃に加温したアセトンに注入、冷却、そして沈降した沈澱を、必要な場合には、濾過し、必要な場合には乾燥する方法。
【請求項２】
リン酸フルダラビンを製造する方法において、そのリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩を、請求項１によって製造し、引き続いて鉱酸を用いてリン酸フルダラビンを遊離させる方法。
【請求項３】
リン酸フルダラビンを製造する方法において、そのリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩を、請求項１によって貯蔵に安定な形で製造し、引き続いて鉱酸を用いてリン酸フルダラビンを遊離させる方法。
【請求項４】
リン酸フルダラビンを精製する方法において、粗製のリン酸フルダラビンを水に溶解させ、攪拌しながら、この溶液に３０℃未満の温度においてアルカリ金属又はアルカリ土類金属の塩基性溶液を添加し、これを４５〜５５℃に加温したアセトンに緩慢に注入、冷却、そして沈降した沈澱を、濾過、必要な場合には、乾燥し、そのリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム又はマグネシウム塩として貯蔵に安定な形にして採取し、引き続いて、この貯蔵安定型物質を、水に溶かし、鉱酸により酸性とし、ここで沈降した沈澱を、濾過、そして乾燥する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、リン酸フルダラビンを精製するための中間生成物として使用することができるリン酸フルダラビンのリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩の製造方法、そして少なくとも 99.5 ％の純度を有するリン酸フルダラビンに関する。
【０００２】
リン酸フルダラビンは、９−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニン−５’−Ｏ−二水素リン酸の「国際非独占名」（ＩＮＮ）である。その最初の合成に関しては、リン酸フルダラビンの前駆体である９−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニンについて米国特許 US-PS 4,188,378に記載される。この物質には、強い細胞傷害性を示す性質があり、副作用の減少を目的として種々の誘導体が製造された。米国特許 US-PS 4,357,324の中で、５’−リン酸塩（プロドラッグ）、つまりリン酸フルダラビン及びその製造について記載される。そのほかの文献、例えば、米国特許 US-PS 4,210,745、国際特許 WO 91/08215及び国際特許 WO 94/12514は、別の製造方法を開示する。
【０００３】
現在、利用されている製造法においては、９−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニンから出発して、これをリン酸トリメチル及びオキシ塩化リンと反応させる（リン酸化）。抽出物を反応させ、引き続き水から結晶させる。ほぼ７５℃の温度で再結晶させると物質の一部が分解するのは、この温度の水においてリン酸フルダラビンが、熱的に不安定であることによる。さらに欠点として指摘されるが、現在の技術で知られる再結晶を行っても、純度は、ごく僅かしか改善されず、かつ工業的に製造する場合でも、この方法によると出発物質の量は約１ｋｇにも満たない。ドイツ特許 DE 4141454 A1に記載されるリン酸フルダラビンの塩は、記載の教示によって実施しても合成ができない。記載の反応条件を用いると、分子内においてリン酸が分離することが主な原因と考えられる。
【０００４】
米国特許 US 5,296,589 の第１０段、３７〜４０行に、リン酸フルダラビン（２−フルオロ−アラ−アデノシン５’−リン酸）のナトリウム塩に関する水溶性が記載される。さらに第９段、６１〜６９行には、この塩は、水からの再結晶によっては精製されないことが記述され、この条件においては化合物の分解が生じるためであろうと述べられている（ドイツ特許 DE 195 43 052 A1 、国際特許WO 92/0312 A1 及び米国特許 US 5,506,352 も併せて参照のこと）。
【０００５】
本発明の課題は、リン酸フルダラビンについて明らかに改良された性質（純度）が得られ、工業規模の方法において、１キログラムを超える量でも問題なく適用できる精製方法を提供することにある。
【０００６】
本課題は、請求項の教示によって解決される。
【０００７】
本発明は、リン酸フルダラビンのリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩の製造方法に関し、ここでリン酸フルダラビンは、水に懸濁され、溶液を攪拌しながら３０℃未満の温度においてアルカリ金属又はアルカリ土類金属の塩基性溶液が添加され、この溶液を４４〜５５℃に加温したアセトンに緩慢に注入、冷却し、そして沈降した沈澱は、必要な場合には、濾過され、必要な場合には、乾燥され、そして本発明は、さらにリン酸フルダラビンの製造方法に関し、ここで請求項１に基づいてリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩が、製造され、そして引き続いて鉱酸を使用して遊離される。
【０００８】
塩基としては、水に対する溶解性が良好なアルカリ金属又はアルカリ土類金属の水酸化物及び炭酸塩が適し、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム又はカルシウムの水酸化物、そしてナトリウム又はカリウムの炭酸塩が挙げられる。
【０００９】
驚くべき発見であったが、まさにリン酸フルダラビンのアルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩は、安定であり、結晶性がよく、そして良い特徴を示す物質として製造することができ、結晶化することによって精製される。リン酸フルダラビンのアルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩は、分離のときに問題がないことが判明した。比較的長い時間の貯蔵にも耐性を示し、不安定の要素を示さなかった。特にリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウム塩に適性がある。
ここで特に水／アセトンから結晶させると有利であることが明らかになった。従って、リン酸フルダラビンに、炭酸ナトリウム溶液又は類似する他の元素の塩基性溶液を加えて溶解し、この水溶液を、アセトンに注入する。例として挙げるとリン酸フルダラビン 6.1 kg を、水 35 l に懸濁させて、水 7.9 lに溶かした炭酸ナトリウム 1.79 kgを加え、この溶液を、４５〜５５℃、好ましくは５０℃においてアセトン150 l に注入する。温度が上昇し、６０℃を超えることがあってはならない。その場合には、副反応として、ヒドロキシルによるフッ素の置換反応が発生して望ましくない。混合物を冷却することにより、リン酸化されていない誘導体は、溶液中に残り、所望する生成物が、結晶として得られる。
【００１０】
アルカリ金属及びアルカリ土類金属のリン酸フルダラビン塩は、水に溶解しても強い酸性を示さず、その溶液は殆ど中性である。この塩を元に戻してリン酸フルダラビンを遊離させることは、強い鉱酸と反応させれば難なく行える。鉱酸として、例えば、塩酸、硫酸、硝酸又はリン酸が使用される。自由塩基が遊離するときに多重にリン酸化された副生成物が溶液中に残る。
【００１１】
特許請求されたリン酸フルダラビン塩は、リン酸フルダラビンの前駆体として比較的長い時間の貯蔵を行って問題なく、そして必要な場合に活性物質が遊離される。
【００１２】
本発明は、少なくとも純度 99.5 ％を有するリン酸フルダラビンにも関する。現在の技術によると、従来の活性物質について、約 98.0 〜98.5％の純度しか得られなかった。従来の結晶化方法を用いて、例えば、水から結晶させて98.5％を超える純度を得ることは、たとえ数回にわたって結晶を採っても不可能である。例に挙げた水溶液の加熱と濾過に、長時間を要する場合には、従来の精製方法に問題があり、これには２５分又はそれ以上の時間が必要とされている。この場合には、種々の不純物、ゴム状物質が生成することになり、これらの物質はもはや結晶化方法によって除去されることがない。
【００１３】
本発明による方法により、リン酸フルダラビンの純度として、例えば、99.5; 99.55; 99.6; 99.65; 99.7; 99.75; 99.8; 99.9 又は 99.95％が得られるが、これはリン酸フルダラビンの精製を、本発明の方法を用いて、１回だけ行った場合である。そしてまた本方法を、リン酸フルダラビンの試料について、２回、それ以上の回数についても適用することもできる。
【００１４】
次の実施例は、発明を詳しく説明するものである。
【００１５】
実施例１
リン酸フルダラビン二ナトリウム
純度 98.5 ％のリン酸フルダラビン 5.0 gを、水 30 mlに懸濁して約３〜５分間の攪拌を行う。この懸濁液を攪拌しながら３０℃未満の温度において、カセイソーダ溶液（18.5重量％）6.5 mlを添加する。添加が終了してから、混合物に１５分の攪拌を与え、引き続いて不溶性物質を濾過する。このようにして得られた透明な溶液を、アセトン（５０℃において）に緩慢に注入する。その後、２時間の攪拌を行い、冷却する。沈降した沈澱を、濾過し、アセトンによる洗浄を行い、そして乾燥する。リン酸フルダラビン二ナトリウム 5.0 gが、理論値の９８％として得られる。
融点：２３５℃；純度：98.5％
分析：Ｃ10Ｈ11ＦＮａ2 Ｎ5 Ｏ7 Ｐ×２Ｈ2 Ｏ (445.20) について
計算値: 炭素 26.98；水素 3.39;  フッ素 4.27;  窒素 15.73; リン 6.96;
ナトリウム 10.33
実験値: 炭素 27.15；水素 3.93;  窒素 15.72; ナトリウム 9.65;リン 6.15
ＩＲ（ＫＢｒ）：3420, 3340, 3200, 2910, 1650, 1610, 1390, 1210, 1100, 及
び 980ｃｍ-1
ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）：4.05-4.22 m (3H; H-4' ; 両H-5' ); 4.45-4.60 m (2H;
H-2'及びH-3' ); 6.2 d (1H; H-1'); 8.45 s (1H; H-8)
【００１６】
実施例２
リン酸フルダラビン二ナトリウムからのリン酸フルダラビンの遊離抽出
実施例１によるリン酸フルダラビン二ナトリウム 5.0 gを、３〜５分の間に水 35 mlに溶かす。この溶液を濾過して塩酸（３７％）5 mlを緩慢に加えて１〜２時間の攪拌を与える。沈降した沈澱を、吸引濾過し、氷水とエタノールによる洗浄を行うと、リン酸フルダラビン 4.0 gが、理論値の９０％として得られる。
融点：２０２〜２０３℃；純度：99.6％
分析：Ｃ10Ｈ13ＦＮ5 Ｏ7 Ｐ (365.21) について
計算値: 炭素 32.89；水素 3.59;  窒素 19.17; フッ素 5.20;  リン 8.48
実験値: 炭素 32.81；水素 3.65;  窒素 19.03; リン 8.41
ＩＲ（ＫＢｒ）：3443, 3326, 3123, 2925, 2950-2100, 1663, 1591, 1211,
1126, 及び1050ｃｍ-1
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：3.94-3.99 m (1H; H-4'); 4.06-4.14 m (3H; H-3' ; 両
H-5'); 4.14-4.18 m (1H; H-2'); 5.4-6.1ブロード (OHプ
ロトン); 6.17 d (1H; H-1'); 7.6-8.0 ブロード(NH-プロ
トン);  8.14 s (1H; H-1') 9-11ブロード(P-OH)
【００１７】
実施例３
リン酸フルダラビン二リチウム
純度 97.4 ％のリン酸フルダラビン 10.0 g を、水 70 mlに入れて約５分の間に懸濁し、水酸化リチウム（１０％）の水溶液を加える。この溶液に室温のもとで１時間の攪拌を与え、引き続いて濾過する。このようにして得られた透明な溶液を、アセトン 250 ml （５０℃において）の中へ緩慢に注入して、その後、１時間の攪拌を行う。沈降した沈澱を、濾過し、アセトンによる洗浄を行い、そして乾燥するとリン酸フルダラビン二リチウム 4.3 gが得られる（理論値の 90 ％) 。
融点：２４０〜２６０℃；純度：98.5％
分析：Ｃ10Ｈ11ＦＬｉ2 Ｎ5 Ｏ7 Ｐ×３Ｈ2 Ｏ (431.12) について
計算値: 炭素 27.86；水素 3.98;  フッ素 4.41;  窒素 16.25; リン 7.18;
リチウム 3.22
実験値: 炭素 27.15；水素 3.86;  窒素 15.76; リチウム 3.05;  リン 6.72
ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）：4.05-4.22 m (H-4'; H-5' ); 4.45-4.55 m (H-2'及びH-3');
6.25 d (H-1'); 8.50 s (H-8)
実施例２の方法により酸を遊離させると、純度 99.85％のリン酸フルダラビンが得られる。
【００１８】
実施例４
リン酸フルダラビン二カリウム
純度 96.1 ％のリン酸フルダラビン 5.0 gを、水 30 mlに溶解し、この溶液に３０℃未満の温度において、炭酸カリウム溶液（18.5重量％）6.5 mlを添加する。その後、１５分間の攪拌を行ってから、固形物を濾過する。このようにして得られた透明な溶液を、５０℃においてアセトンの中へ緩慢に注入して、室温まで冷却し、その後、２時間の攪拌を行う。沈降した沈澱を、濾過、そしてアセトンにより２回洗浄する。リン酸フルダラビン二カリウム 4.5 gが得られる。
融点：２２０〜２３０℃；純度： 98.55％
ＩＲ（ＫＢｒ）：3420, 3340, 3200, 2910, 1650, 1610, 1390, 1210, 1100, 及
び 980ｃｍ-1
ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）：4.0-4.2 m (H-4'; H-5' ); 4.4-4.60 m (H-2' 及び H-3' );
6.25 d (H-1'); 8.5 s (H-8)
実施例２の方法により酸を遊離させると、純度 99.80％のリン酸フルダラビンが得られる。
【００１９】
実施例５
フルダラビンマグネシウム塩
純度 97.5 ％のリン酸フルダラビン 10.0 g を、水 100 ml に加え、約５分の間に懸濁し、この溶液に酸化マグネシウムを加える。この混合物に、室温のもとで１時間の攪拌を与え、引き続いて濾過する。この透明な溶液を、アセトン 200mlに注入し、１時間の攪拌を行ってから濾過により結晶を分離する。リン酸フルダラビンマグネシウム 10.0 g （理論値の９５％) が得られる。
融点：２６０℃；純度： 98.45％
分析：Ｃ10Ｈ11ＦＭｇＮ5 Ｏ7 Ｐ×２Ｈ2 Ｏ (423.525)について
計算値: 炭素 28.36；水素 3.57;  フッ素 4.49;  マグネシウム 5.74;
窒素 16.54; リン 7.31
実験値: 炭素 27.99；  水素 3.92;  マグネシウム 5.54;  窒素 16.38
ＩＲ（ＫＢｒ）：3420, 3340, 3200, 2910, 1650, 1610, 1390, 1210, 1100, 及
び 980ｃｍ-1
ＮＭＲ（Ｄ2 Ｏ）：4.0-4.2 m (H-4'; H-5' ); 4.5-4.60 m (H-2' 及び H-3' );
6.2 d (H-1'); 8.4 s (H-8)
実施例２の方法により酸を遊離させると、純度 99.55％のリン酸フルダラビンが得られる。