(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式（１）
【化１】
0004235000.tif 000006
で表される化合物又はその塩を有効成分とする糸球体疾患の予防又は治療剤。
【請求項２】
糸球体疾患が、ＩｇＡ腎症、巣状糸球体硬化症、膜性腎症、膜性増殖性腎炎及び慢性糸球体腎炎から選ばれるものである請求項１記載の予防又は治療剤。
【請求項３】
糸球体疾患の予防又は治療剤を製造するための請求項１記載の化合物又はその塩の使用。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は糸球体疾患の予防及び治療に有用な薬剤に関する。
背景技術
腎臓の糸球体に病変を起こした糸球体疾患（原発性糸球体腎炎）は、臨床的に溶連菌感染後急性腎炎、半月体形成性腎炎（急速進行性腎炎）、ＩｇＡ腎症、膜性腎症、膜性増殖性腎炎、巣状糸球体硬化症及び微小変化型ネフローゼの７つに分類される。これらのうち、溶連菌感染後急性腎炎、半月体形成性腎炎及び微小変化型ネフローゼを除く各疾患は一般的に慢性糸球体腎炎と呼ばれ、その発症の原因及び時期は比較的不明瞭な場合が多く、またその多くの障害過程は進行性で最終的には腎不全に至るものも多いとされている。
斯かる慢性糸球体腎炎には、糸球体に病変が認められることが多く、当該糸球体病変には糸球体構成細胞の一つであるメサンギウム細胞の増殖やその細胞外基質（メサンギウム基質）の蓄積が大きく関与すると考えられている。また最近では、サイトカイン／増殖因子のＰＤＧＦ−ＢＢやＴＧＦ−β１等の因子が斯かるメサンギウム領域（メサンギウム細胞及びメサンギウム基質）の障害に関与することが示唆されている。例えばメサンギウム細胞から産生されるＰＤＧＦ−ＢＢがメサンギウム細胞の増殖を促進させることや（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ，Ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｔ．，４０：４７０，１９９１）、ＴＧＦ−β１によりメサンギウム基質の合成・分泌が促進されることが報告されている（Ｂｏｒｄｅｒ  ＷＡ．，ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ．，３４６：３７１，１９９０）。
従って、ＰＤＧＦ−ＢＢやＴＧＦ−β１に対するメサンギウム細胞の応答を抑制し、メサンギウム細胞の増殖やメサンギウム基質の増生を抑制することは、メサンギウム領域の障害進展を抑制しうると考えられ、ひいては糸球体疾患の進展を抑制できるものと考えられ、今日までに、病態モデルを用いての種々薬剤（メサンギウム細胞増殖抑制剤など）の検討が成されている（Ｆｉｔｎｅｒ  Ｆ，ｅｔ  ａｌ，  Ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｔ．，５１（１）６９，１９９７）。
しかしながら、未だ治療剤の開発には至っていないのが現状であり、上記糸球体疾患に対して優れた効果を示す新規薬剤の開発が切望されている。
本発明は、糸球体病変、特にメサンギウム領域の障害に基づく糸球体病変を起こした糸球体疾患の予防又は治療剤を提供することを目的とする。
発明の開示
本発明者らは、斯かる実情に鑑み鋭意研究した結果、下記式（１）で表される化合物（（＋）−（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル］−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸）がメサンギウム基質の産生を抑制することによってメサンギウム領域の障害を抑制し、糸球体疾患の予防又は治療剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
すなわち本発明は、次式（１）
0004235000.tif 000002
で表される化合物又はその塩を有効成分とする糸球体疾患の予防又は治療剤を提供するものである。
また本発明は、糸球体疾患の予防又は治療剤を製造するための上記化合物又はその塩の使用を提供するものである。
更にまた本発明は、上記化合物又はその塩を投与することを特徴とする糸球体疾患の処置方法を提供するものである。
発明を実施するための最良の形態
本発明の化合物（１）又はその塩は、メサンギウム基質産生抑制試験において、メサンギウム基質の増生指標であるプロコラーゲンタイプＩ・Ｃペプチド（ＰＩＰ）の産生を顕著に抑制し（実施例１）、進行性抗Ｔｈｙ−１腎炎ラットに対する薬理試験において、尿中への蛋白排泄量、尿細管及び間質領域における障害を顕著に抑制する（実施例２）と共に、更に腎不全モデルラットにおいて腎機能の悪化を抑制し（実施例３）、且つ優れた安全性を有する（実施例４）。このように、本発明化合物を投与すればメサンギウム領域の障害を抑制でき、糸球体疾患の発症進展を抑制できると考えられることから、本発明の化合物（１）又はその塩は、ＩｇＡ腎症、巣状糸球体硬化症、膜性腎症及び膜性増殖性腎炎といった慢性糸球体腎炎を始めとする各種糸球体疾患、特にメサンギウム領域の障害を伴う糸球体疾患の予防又は治療剤として有用である。
本発明の化合物（１）は、常法によりその薬理学的に許容される塩とすることができるが、このような塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、又はアンモニウム塩を挙げることができ、好ましくはナトリウム塩及びカルシウム塩である。
また、本発明化合物（１）又はその塩には、水和物や医薬品として許容される溶媒との溶媒和物も含まれる。
また、本発明の化合物（１）には、不飽和結合及び不斉炭素原子に関して立体異性体が存在するが、本発明においてはそれら全ての異性体を包含するものである。
本発明の化合物（１）又はその塩は、極めて優れたＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害活性を有する公知化合物であり、公知の方法又はこれに準じた方法により製造することができる（特許第２５６９７４６号公報、米国特許第５８５６３３６号明細書、欧州特許第０３０４０６３号明細書）。
本発明の化合物（１）又はその塩は、用法に応じ種々の剤形の医薬品製剤とすることができる。斯かる剤形としては例えば、散剤、顆粒剤、細粒剤、ドライシロップ剤、錠剤、カプセル剤、注射剤等を挙げることができる。
これらの製剤は、その剤形に応じて製剤学上使用される賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、希釈剤、緩衝剤、等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤等の医薬品添加物と適宜混合、希釈又は溶解し、常法に従い製造することができる。
例えば、散剤は、化合物（１）又はその塩に必要に応じて適当な賦形剤、滑沢剤等を加えよく混和して調製すればよく、錠剤は、必要に応じて適当な賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤等を加え、常法に従い打錠して調製すればよい。また錠剤は必要に応じてコーティングを施し、フィルムコート錠、糖衣錠等にすることができる。
また注射剤は、液剤（無菌水又は非水溶液）、乳剤及び懸濁剤の形態とすることができ、これらに用いられる非水担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルとしては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、オレイン酸エチル等の注射可能な有機酸エステルが挙げられる。また、該組成物には防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤等の補助剤を適宜配合することができる。
本発明の糸球体疾患の予防又は治療剤の投与量は、患者の体重、年齢、性別、疾患の程度等により適宜決定されるが、化合物（１）又はその塩として、経口投与の場合、成人１日当たり０．０１〜１００ｍｇを一回又は数回に分けて投与することができる。
実施例
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
製造例
（＋）−ビス［（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル］−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸］・一カルシウム（化合物Ａ）の製造
２−アミノ−４’−フルオロベンゾフェノンを用い、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２８９９（１９６６）に記載の方法に準じて、メチル［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル］カルボキシレートを合成し、このものを用いて特許第２５６９７４６号公報、米国特許第５８５６３３６号明細書又は欧州特許第０３０４０６３号明細書に記載の実施例１〜３に準じて標記化合物Ａを合成した。
実施例１  メサンギウム基質産生抑制作用
（１）ヒトメサンギウム細胞の培養と保存
ヒトメサンギウム細胞は、正常ヒト糸球体間質細胞ＣｒｙｏＮＨＭＣ（三光純薬（株）製）を使用し、７５ｃｍ２フラスコ（４３０７２０  ＣＯＲＮＩＮＧ）２本（ＭｓＧＭ培地１５ｍＬ／フラスコ）で培養を開始し、２〜３日毎に培地交換を行なった。培養スケールを２２５ｃｍ２フラスコ（３０００  ＣＯＳＴＥＲ）に上げ、５×１０６個／セルバンカー１ｍＬ／Ｖｉａｌ（４３０６５９、ＣＯＲＮＩＮＧ）でｐａｓｓａｇｅ  ５を３本、ｐａｓｓａｇｅ  ６を２７本作製し、液体窒素保存容器にて保存した。
（２）メサンギウム基質産生抑制活性の測定
凍結保存したｐａｓｓａｇｅ  ６のヒトメサンギウム細胞を起こし、７５ｃｍ２フラスコに蒔き、翌日培地交換を行い、更に３日間培養し、０．２５％トリプシン−０．０２％ＥＤＴＡにて処理した。９６穴プレートを用い、本ヒトメサンギウム細胞（５７６０個／０．１ｍＬ／ｗｅｌｌ）に化合物Ａ（１，３，１０，３０μｍｏｌ／Ｌ）を添加後、直ちにＴＧＦ−β１（１０ｎｇ／ｍＬ）を添加し、７２時間培養した。化合物Ａの各濃度に４ｗｅｌｌを用いた。培養終了後、ＥＬＩＳＡ法（ＰＩＰ測定キット：ＴＡＫＡＲＡ社製）を用いて培養液中のＰＩＰ濃度を測定した。抑制率（％）を下記の式で算出し、それを基にＰＩＰ産生抑制活性（ＩＣ５０値）を導き出した。結果を表１に示す。
0004235000.tif 000003
0004235000.tif 000004
化合物Ａは、ＴＧＦ−β１刺激によるＰＩＰの産生を低濃度で抑制した。
実施例２  進行性抗Ｔｈｙ−１腎炎ラットに対する薬理試験
（１）Ｗｉｓｔａｒ雌性ラット（５週齢、日本エスエルシー社から購入）を４日間検疫馴化させ実験に供した。はじめに、ラットをペントバルビタール麻酔下で右背側部より右腎を摘出した。２週間経過後に抗Ｔｈｙ−１抗体（抗メサンギウム細胞抗体／モノクローナル抗体１−２２−３；（株）パナファームラボラトリーズより購入）を尾静脈内投与（５００μｇ／匹）することにより進行性抗Ｔｈｙ−１腎炎を惹起させた。直ちに０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液に懸濁した化合物Ａを経口ゾンデにて強制的に連続経口投与した（２０ｍｇ／ｋｇ体重、１日１回、１０週間）。化合物Ａを１０週間投与後にメタボリックケージ（杉山元社製）で１８時間採尿し、尿中総タンパク排泄量を測定した。
本発明化合物を処置することにより尿中への蛋白排泄量が有意に抑制された（図１）。
（２）採尿処理後に腎を摘出し、ホルマリン固定後、パラフイン包埋した。薄切した切片についてヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色を施し、実体顕微鏡下で、Ｒａｉｊらの方法（Ｒａｉｊ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ：Ｍｅｓａｎｇｉａｌ  ｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｊｕｒｙ，ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  Ｄａｈｌ  ｒａｔｓ．Ｋｉｄｎｅｙ  ｉｎｔ．２６：１３７−１４３，１９８４）に従い、病理組織学的検討を行った。具体的には、低倍（対物×１０）で、腎冠状断面皮質領域全体を観察し、全体の面積に対するＨＥ染色された障害領域の面積の割合を下記の基準に従ってスコア化した。
スコア０：正常からほぼ正常
スコア１：障害領域が１０％以下
スコア２：障害領域が１０％〜３０％
スコア３：障害領域が３０％〜５０％
スコア４：障害領域が５０％以上
結果を図２に示す。本発明化合物を処置することにより尿細管及び間質領域における障害（尿細管萎縮及び拡張、尿細管周囲の間質部位における線維化）が有意に抑制された。
実施例３  腎不全モデルラット（５／６腎摘ラット）に対する効果
雄性Ｗｉｓｔａｒラット（１０週齢、３００−３５０ｇ、日本エスエルシー社から購入）をペントバルビタール麻酔下に右腎を摘出した後に左腎を露出し、実体顕微鏡を用いて、左腎動脈分枝のうち中央の動脈を残して他の動脈を結紮した（５／６腎摘）（分枝は通常３本に分かれている。なお、分枝動脈を結紮することにより、その支配領域が虚血になるため、結紮した腎領域は肉眼的にわかる）。作成した腎不全モデルの判定は術後１日目の血中尿素窒素量（ＢＵＮ）の増加により確認し、術後１日目のＢＵＮ値として、約４０〜８０ｍｇ／ｄｌの範囲内に入った動物を選びモデルとして用いた。
術後１日目に各群でＢＵＮ値が均等になるように群分けし、化合物Ａの投与を開始した。群構成は正常ラット群（Ｎ＝５）、５／６腎摘且つ薬物未処置群（対照群：Ｎ＝８）及び５／６腎摘且つ化合物Ａ（１５ｍｇ／ｋｇ）投与群（Ｎ＝８）の計３群を設定した。化合物Ａは１日１回、０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液に懸濁し、強制的に経口投与した。術後７日、１４日、２１日、２８日及び３５日に尿中総タンパク／クレアチニン比（ＵＰ／Ｕｃｒ）並びにＢＵＮを測定した。結果を図３及び図４に示す。
図３より、化合物Ａ投与群において投与開始後比較的早い時期よりＵＰ／Ｕｃｒの低下が認められ、投与後７及び８週時では薬物未処置群と比較して有意な低下が認められた。
また図４より、化合物Ａ投与群で、投与開始３週よりＢＵＮの低下傾向が認められ、以後４週以降は有意な低下が認められた。
本モデルでは４週以降に糸球体硬化性病変などの不可逆性病変が出現してくるが、化合物Ａがその不可逆性病変のメディエーターである腎機能悪化（ＢＵＮ上昇）を抑制したことで、化合物Ａは腎疾患患者に有益な効果をもたらすと考えられる。従って、化合物Ａは、糸球体疾患の進行を抑制する薬剤として有用である。
実施例４  急性毒性試験
Ｓｌｃ：Ｗｉｓｔａｒ系雌雄ラット（６週齢、日本エスエルシー社から購入）をそれぞれ５匹用い、一夜絶食後、０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム水溶液に懸濁した化合物Ａを、雄性ラットには５００ｍｇ／ｋｇ、雌性ラットには２５０ｍｇ／ｋｇ強制経口投与した後、１４日間観察したが、死亡例は認められなかった。
実施例５  製剤処方例
１錠当たり下記組成を有する錠剤を、以下の方法で製造した。
0004235000.tif 000005
化合物Ａからメタケイ酸アルミン酸マグネシウムまでを混合し、均質な粉末混合物を調製し、精製水を適量加え攪拌造粒法にて顆粒化して打錠顆粒とした。この打錠顆粒にステアリン酸マグネシウムを混合して打錠して、化合物Ａを含有する錠剤を得た。
産業上の利用可能性
本発明の糸球体疾患の予防又は治療剤は、ＩｇＡ腎症、巣状糸球体硬化症、膜性腎症及び膜性増殖性腎炎などの慢性糸球体腎炎を始めとする各種糸球体疾患の予防又は治療剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
図１は、進行性抗Ｔｈｙ−１腎炎ラットにおける尿中への蛋白排泄量（１８時間蓄尿）を示す図である。
図２は、進行性抗Ｔｈｙ−１腎炎ラットにおける病理所見（尿細管間質障害）をスコアー化した図である。
図３は、腎不全モデルラットにおける尿中総タンパク／クレアチニン比の経日推移を示す図である。
図４は、腎不全モデルラットにおける血中尿素窒素量の経日推移を示す図である。
【図１】
0004235000.tif 000007
【図２】
0004235000.tif 000008
【図３】
0004235000.tif 000009
【図４】
0004235000.tif 000010