(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する薬剤を有効成分とする抗炎症点眼剤であって、シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する薬剤が、エトドラク、N-(2-(シクロヘキシルオキシ)-4-ニトロフェニル)メタンスルホンアミド、及びメロキシカムからなる群から選ばれる少なくとも１種である抗炎症点眼剤、ただし眼軟膏および眼用ヒドロゲルは除く。
【請求項２】
シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する薬剤がエトドラクである、請求項１記載の点眼剤。
【請求項３】
エトドラクの濃度が０．５〜５％である請求項２記載の点眼剤。
【請求項４】
シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する薬剤がN-(2-(シクロヘキシルオキシ)-4-ニトロフェニル)メタンスルホンアミドである、請求項１記載の点眼剤。
【請求項５】
N-(2-(シクロヘキシルオキシ)-4-ニトロフェニル)メタンスルホンアミドの濃度が０．５〜５％である請求項４記載の点眼剤。
【請求項６】
シクロオキシゲナーゼ−２を選択的に阻害する薬剤がメロキシカムである、請求項１記載の点眼剤。
【請求項７】
メロキシカムの濃度が０．１〜１％である請求項６記載の点眼剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はプロスタグランディンが炎症のメディエーターである眼炎症疾患の治療剤に関するものであり、特徴的な例として白内障手術後等の前眼部眼炎症疾患の予防及び治療のための点眼剤に関するものである。
従来の技術
炎症のメディエーターであるプロスタグランディンの生合成を阻害することにより抗炎症作用を発揮する、ジクロフェナクナトリウムなどの非ステロイド性抗炎症点眼剤は、経口投与による炎症性疾患の治療以外に、局所投与においても種々の炎症性疾患に用いられている。局所投与である点眼投与でも、眼炎症性疾患、特に白内障手術後の前眼部の炎症症状および術中・術後合併症に広く使用されている。
一方、このような非ステロイド性抗炎症点眼剤の使用は、抗炎症作用は優れているが角膜上皮障害のような副作用の発生が臨床の場で１．６％程度指摘されており（わかもと製薬医薬品添付文書１９９６年）、副作用である角膜上皮障害の少ない非ステロイド性抗炎症点眼剤の開発が望まれている。
最近の研究の進歩は、非ステロイド性抗炎症剤の作用点としてシクロオキシゲナーゼ−１（以下ＣＯＸ−１とする）およびシクロオキシゲナーゼ−２（以下ＣＯＸ−２とする）の２つの酵素阻害を指摘している。ＣＯＸ−１は細胞の保護の役割があり、ＣＯＸ−２は炎症に関与する酵素であると考えられていることより、ＣＯＸ−２を選択的に阻害する、細胞障害が少ない抗炎症剤の開発が期待されている。このような観点からの、全身投与抗炎症薬剤の副作用としての胃潰瘍の研究は詳細に研究されＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の役割はほぼ明確にされており、胃潰瘍の発生にはＣＯＸ−１の阻害が関与することが明らかになっている。
このように胃潰瘍については作用機序が明確になっているが、胃潰瘍と同様の作用機序が角膜上皮障害の原因であることは明確になっていない。このような角膜上皮障害と眼炎症疾患についてＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の役割を明確に区別できる薬剤の開発が期待される。前眼部炎症がＣＯＸ−２阻害剤で抑制されることはＭａｓｆｅｒｒｅｒ，ＪＬら（Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  ４１（ｓｕｐｐｌ  ２）：Ｓ３５−Ｓ４０，１９９７）が述べているが、ここでは角膜上皮障害について何らの記載もされていない。三宅（臨床眼科医報５１（１１）１９０−１９１（１９９７））はＣＯＸ−２選択阻害剤の使用が角膜上皮障害を軽減することを示唆しているが、この解決のための具体的記載はない。
発明の開示
本発明者らは非ステロイド性抗炎症剤の中でＣＯＸ−２を選択的に阻害する薬剤を点眼剤として使用して、眼の前眼部炎症疾患と細胞障害性について効果を検討し本発明を完成させた。
すなわち、本発明はＣＯＸ−２選択性の高い薬物を有効成分とする抗炎症性点眼剤に関するものである。本発明者らは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗炎症効果とｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞障害性をＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２の選択性を有する化合物から選択して試験を試みた結果、ＣＯＸ−２選択性の高い薬物を有効成分とする抗炎症性点眼剤が優れた抗炎症効果及び細胞障害性の軽減を示すことを発見した。本発明は角膜上皮細胞あるいは結膜細胞のような細胞に対する障害性の軽減した抗炎症剤及び角膜上皮障害性の少ない点眼剤を提供するものである。
発明を実施するための最良の形態
本発明の点眼剤に使用するＣＯＸ−２の選択性の高い非ステロイド性抗炎症性薬剤の好ましい例としては、エトドラク（１，８−ｄｉｅｔｈｙｌ−１，３，４，９−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒａｎｏ［３，４−ｂ］ｉｎｄｏｌｅ−１−ａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ）、Ｎ−（２−（シクロヘキシルオキシ）−４−ニトロフェニル）メタンスルホンアミド（ＮＳ−３９８）及びメロキシカム（４−ｈｙｄｒｏｘｙ−２−ｍｅｔｈｙｌ−Ｎ−（５−ｍｅｔｈｙｌ−２−ｔｈｉａｚｏｌｙｌ）−２Ｈ−１，２−ｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｉｎｅ−３−ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ  １，１−ｄｉｏｘｉｄｅ）が挙げられる。
本発明の点眼剤は無菌製剤が望ましく、エトドラクあるいはＮＳ−３９８は溶解剤としてヒマシ油、ゴマ油あるいはその他の界面活性剤を使用してもよく、軟こう剤としてもよい。
メロキシカムもまた同様にＣＯＸ−２の選択性が高い薬剤であり、上記薬剤に比較して水溶性の高いことに特徴があり、水溶性点眼剤として使用でき、軟膏剤としても使用できる。
このような炎症性疾患に使用される薬剤の好ましい濃度は、水溶性製剤であるメロキシカムは０．１％から１％の濃度で、エトドラク及びＮ−（２−（シクロヘキシルオキシ）−４−ニトロフェニル）メタンスルホンアミドのように油製剤としたときは０．５％から５％であり、それぞれ炎症モデル実験で効果を示した。
細胞障害性に関しては、角膜上皮細胞および結膜細胞においてＣＯＸ−２選択性のある薬剤は何れも細胞障害性の少ないものであった。とくに薬剤に長く暴露したとき、角膜上皮障害性の少ないことが明白になった。
このように角膜上皮細胞あるいは結膜細胞などの細胞障害の少ない点眼剤、特に角膜上皮障害の発生を少なくした抗炎症作用を期待できるＣＯＸ−２選択的阻害剤が点眼剤として適用されるのは本発明が初めてである。
以下、実施例及び試験例により本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１
エトドラク                              ５ｇ
パラオキシ安息香酸プロピル              ０．０１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                ０．０５ｇ
ひまし油                                １００ｍＬとする
ひまし油８０ｍＬにエトドラク、パラオキシ安息香酸プロピルおよびパラオキシ安息香酸メチルを加えて溶解した後、ひまし油で１００ｍＬとし、除菌ろ過して本発明の点眼剤を得た。
実施例２
Ｎ−（２−（シクロヘキシルオキシ）−４−ニトロフェニル）メタンスルホン
アミド                                    ５ｇ
パラオキシ安息香酸プロピル              ０．０１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                ０．０５ｇ
ひまし油                                １００ｍＬとする
ひまし油８０ｍＬにＮ−（２−（シクロヘキシルオキシ）−４−ニトロフェニル）メタンスルホンアミド、パラオキシ安息香酸プロピルおよびパラオキシ安息香酸メチルを加えて溶解した後、ひまし油で１００ｍＬとし、除菌ろ過して本発明の点眼剤を得た。
実施例３
メロキシカム                            ０．５ｇ
Ｔｗｅｅｎ−８０                        ０．５ｇ
メチルセルロース                        ０．５ｇ
ホウ酸                                  ０．１ｇ
ＥＤＴＡ                                ０．００５ｇ
塩化ベンザルコニウム                    ０．００５ｇ
０．１Ｎ塩酸／０．１Ｎ水酸化ナトリウム  ｐＨ７．２になるまで
精製水                                  １００ｍＬとする
精製水８０ｍＬにメロキシカム、Ｔｗｅｅｎ−８０（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ−８０）、メチルセルロース、ホウ酸、ＥＤＴＡおよび塩化ベンザルコニウムを加えて溶解した。０．１Ｎ塩酸または０．１Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７．２に調整し、精製水で１００ｍＬとし、除菌ろ過して本発明の点眼剤を得た。
本発明の点眼剤の用法、容量は、患者の症状、年齢等により変動するが、通常１日１〜６回、１回１〜２滴が点眼される。
試験例１  白色家兎前眼部炎症に対する効果
体重１．８〜２．４ｋｇの日本白色種雄性家兎（日本医科学動物資材研究所）を各群６〜７羽として用いた。
ヘパリン（武田薬品工業）２５０Ｕ／ｋｇを家兎の耳静脈内に投与後、被験物質を両眼に約６０μＬ点眼した。その４５分後にベノキシール点眼液（参天製薬）にて局所麻酔を施した後、２７Ｇ注射針にて前房水を全量採取した。これを一次房水とする。房水採取９０分後に家兎を過量のペントバルビタールナトリウムにて麻酔死させた後、房水を再度採取した。これを二次房水とする。
採取した二次房水中のプロスタグランディンＥ２（以下ＰＧＥ２と称する）濃度及び蛋白量を測定し炎症の指標とした。ＰＧＥ２濃度は、房水１００μＬをＢｏｎｄ  Ｅｌｕｔｅ  Ｃ１８カラムにて前処理後、バイオトラックＰＧＥ２ＥＩＡシステム（アマシャム）を用いて測定した。また、蛋白量は、Ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ（ナカライ）を標準蛋白としてＬｏｗｒｙ法にて測定した。
被験物質であるエトドラクは局方ヒマシ油に０．５％と５％濃度に溶解した。メロキシカムは生理食塩水に希釈して使用した。
図１および図２に示すように、エトドラクは前房穿刺による房水中のＰＧＥ２含量および蛋白含量の増大を抑制した。
また、表１に示すようにメロキシカムは０．１％から１．０％の濃度の範囲で蛋白及びＰＧＥ２量の増大を抑制し，他の薬剤に比べ顕著な効果を示した。
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試験例２  ＬＰＳ惹起ぶどう膜炎に対する影響
体重１．７〜２．４ｋｇの日本白色種雄性家兎を各群１２〜１６眼を用いた。
家兎耳介静脈よりＥ．ｃｏｌｉ由来のリポポリサッカライド（ＬＰＳ）（０５５：Ｂ５ｔｙｐｅ，Ｓｉｇｍａ）を１．２５μｇ／ｋｇ投与し、ぶとう膜炎を惹起させた。ＬＰＳ投与４ｈｒ後、家兎を過量のペントバルビタール・ナトリウム（東京化成）にて麻酔死させた後、前房水を採取した。
採取した房水中のＰＧＥ２濃度および蛋白量の測定は実施例１と同様に行った。
なお、被験物質はＬＰＳ投与１ｈｒ前に、両眼に約６０μＬをそれぞれ点眼した。
被験物質であるＮＳ−３９８は局方ヒマシ油で０．５％と５．０％濃度に溶解または懸濁した。メロキシカムは生理食塩水で希釈して使用した。
表２に示すように、ＮＳ−３９８はＰＧＥ２量の増大を顕著に抑制した。また、表３に示すように、メロキシカムは０．１％から１．０％の範囲で蛋白及びＰＧＥ２量の増大を顕著に抑制し、抗炎症作用に優れていることが判明した。
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試験例３  角膜上皮細胞および結膜細胞に対するシクロオキシゲナーゼ阻害薬の影響
使用細胞：角膜細胞はＳＶ４０不死化ヒト角膜上皮細胞株（Ａｒａｋｉ−Ｓａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．ＩＯＶＳ  ３６：６１４−６２１，１９９５）を、結膜細胞はＣｈａｎｇヒト結膜細胞株（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２０．２）を使用した。
試験方法：細胞を９６穴プレートで培養し、３０〜５０％ｃｏｎｆｌｕｅｎｔとした後、培地で段階希釈した被験物を加え、３７℃で培養した。培養後、ＰＢＳ（−）で洗浄し、残存した細胞数をβ−ヘキソサミニダーゼ活性で測定した。
毒性の評価法：被験物を溶解した溶媒のみで処置した群を陰性対照とし、その値を細胞生存数１００％として、各被験物濃度の細胞生存率による用量相関曲線を作成し、その曲線から生存率５０％の被験物濃度（ＥＣ５０）を毒性値とした。
表４に示すように、ＣＯＸ−２の相対活性の大きなエトドラクは、インドメタシンあるいはジクロフェナクナトリウムのようなＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２選択性の小さい化合物に比べ、角膜上皮細胞および結膜細胞に対して細胞障害性が弱かった。このことは角膜障害性の少ない非ステロイド性抗炎症剤の開発に道を開くものである。
また、表５に示すように、メロキシカムは角膜上皮細胞および結膜細胞に対する障害性が弱かった。
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産業上の利用可能性
本発明のＣＯＸ−２を選択的に阻害する薬剤は、点眼剤として角膜障害性の少ない眼炎症性疾患の治療に顕著な効果を示す。特にメロキシカムは結膜細胞に比べ、角膜上皮細胞に長時間暴露した場合にも優れた効果を示す。
【図面の簡単な説明】
図１は、エトドラクの前房穿刺により上昇したＰＧＥ２含量に及ぼす効果を示すグラフである。
図２は、エトドラクの前房穿刺により上昇したタンパク含量に及ぼす効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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