【手続補正書】
【提出日】平成24年12月4日(2012.12.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭素源を含む発酵培地中で微生物の発酵を行うことにより、スラウストキトリアレス（Thraustochytriales）目の微生物から多価不飽和脂肪酸を含む脂質を生産するための方法であって、該方法が、
少なくとも２０℃の温度で炭素源を含む発酵培地を供するステップと、
前記微生物を前記発酵培地に加えるステップと、
フェッド・バッチ法において前記発酵培地に追加の量の炭素源を加えて発酵培地のバイオマス密度を少なくとも１００ｇ／Ｌに増加させるステップであって、前記追加の量の炭素源が、発酵培地のバイオマス密度が少なくとも１００ｇ／Ｌに増加するのに十分な速度で添加されるステップと、
を含み、
前記発酵培地のバイオマス密度が少なくとも１００ｇ／Ｌであるときに、前記微生物による炭素源の主な使用が脂質を生産することであり、
前記脂質が多価不飽和脂肪酸を含み、
前記脂質がバイオマスの少なくとも２０％である、方法。
【請求項２】
非アルコール炭素源および制限栄養素源を含む発酵培地中で微生物の発酵を行うことにより、スラウストキトリアレス目の微生物から多価不飽和脂肪酸を含む脂質を生産するための方法であって、該方法が、
非アルコール炭素源および制限栄養素源を含む発酵培地を供するステップと、
前記微生物を前記発酵培地に加えるステップと、
前記発酵培地に追加の量の非アルコール炭素源および制限栄養素源を加えて発酵培地のバイオマス密度を少なくとも１００ｇ／Ｌに増加させるステップであって、前記追加の量の非アルコール炭素源が、発酵培地のバイオマス密度が少なくとも１００ｇ／Ｌに増加するのに十分な速度で添加されるステップと、
追加する制限栄養素源の量を減少させながら追加の量の炭素源を加え、前記微生物による脂質生産を誘導するステップと、
を含み、
前記微生物による炭素源の主な使用が脂質生産の誘導後に脂質を生産することであり、
前記バイオマス密度が少なくとも１００ｇ／Ｌであるときの前記微生物の発酵が、多価不飽和脂肪酸を含む脂質を生産し、
前記脂質がバイオマスの少なくとも２０％である、方法。
【請求項３】
炭素源を含む発酵培地中で微生物の発酵を行うことにより、スラウストキトリアレス目の微生物から多価不飽和脂肪酸を含む脂質を生産するための方法であって、該方法が、
少なくとも２０℃の温度で炭素源を含む発酵培地を供するステップと、
前記微生物を前記発酵培地に加えるステップと、
フェッド・バッチ法において前記発酵培地に追加の量の炭素源を加えて発酵培地のバイオマス密度を少なくとも１００ｇ／Ｌに増加させるステップであって、前記追加の量の炭素源が、発酵培地のバイオマス密度が少なくとも１００ｇ／Ｌに増加するのに十分な速度で添加されるステップと、
を含み、
前記発酵培地のバイオマス密度が少なくとも１００ｇ／Ｌであるときに、前記微生物による炭素源の主な使用が脂質を生産することであり、
前記方法が、多価不飽和脂肪酸を含む脂質を生産する、方法。
【請求項４】
炭素源および制限栄養素源を含む発酵培地中で微生物の発酵を行うことにより、スラウストキトリアレス目の微生物を増殖するための方法であって、該方法が、
炭素源および制限栄養素源を含む発酵培地を供するステップと、
前記微生物を前記発酵培地に加えるステップと、
前記発酵培地に追加の量の炭素源および制限栄養素源を加えて発酵培地のバイオマス密度を少なくとも１００ｇ／Ｌに増加させるステップであって、前記追加の量の炭素源および制限栄養素源が、発酵培地のバイオマス密度が少なくとも１００ｇ／Ｌに増加するのに十分な速度で添加されるステップと、
追加する制限栄養素源の量を減少させながら追加の量の炭素源を加え、前記微生物による脂質生産を誘導するステップと、
を含み、
前記微生物による炭素源の主な使用が脂質生産の誘導後に脂質を生産することであり、
前記バイオマス密度が少なくとも１００ｇ／Ｌであるときの前記微生物の発酵が、多価不飽和脂肪酸を含む脂質を生産し、
前記脂質がバイオマスの少なくとも２０％であり、
前記微生物により生産される全脂質の少なくとも１５％が多価不飽和脂肪酸である、方法。
【請求項５】
そのバイオマスの少なくとも２０％を脂質として生産することができるスラウストキトリアレス目の微生物から、ポリエン脂肪酸を含む脂質を生産するための方法であって、前記微生物を含む発酵培地に、該発酵培地のバイオマス密度を少なくとも約１００ｇ／Ｌに増大させるのに十分な速度で、非アルコール炭素源および制限栄養素源を加えることを含む、方法。
【請求項６】
微生物の脂質を生産するための方法であって、
炭素源および制限栄養素源を、スラウストキトリアレス目の微生物を増殖させる発酵培地に、該発酵培地のバイオマス密度を少なくとも約１００ｇ／Ｌに増大させるのに十分な速度で加えるステップと、
前記微生物が前記脂質を生産するのに十分な発行条件を供するステップと、
前記発酵培地のバイオマス密度が少なくとも１００ｇ／Ｌであるときに、前記微生物に脂質を生産させるステップと、
を含む方法。
【請求項７】
そのバイオマスの少なくとも２０％を脂質として生産することができるスラウストキトリアレス目の微生物を増殖させるための方法であって、前記微生物を含む発酵培地に、炭素源および制限栄養素源を、該発酵培地のバイオマス密度を少なくとも約１００ｇ／Ｌに増大させるのに十分な速度で加えることを含み、ここで、前記方法が、少なくとも０．５ｇ／Ｌ／ｈｒの平均速度で脂質を生産し、前記微生物により生産される全脂質の少なくとも１５％が多価不飽和脂肪酸である、方法。
【請求項８】
前記発酵培地から脂質を回収するステップをさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
多価不飽和脂肪酸が、全脂質の少なくとも１５％である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記方法が、少なくとも０．５ｇ／Ｌ／ｈｒの平均速度で脂質を生産する、請求項１〜６のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
前記方法が、少なくとも０．７ｇ／Ｌ／ｈｒの平均脂質生産速度である、請求項１〜７のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
前記微生物が、スラウストキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属、シゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
前記微生物が、シゾキトリウム（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）属である、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記炭素源が、炭水化物を含む、請求項１〜１３のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
前記制限栄養資源が、窒素源を含む、請求項１〜１４のいずれか一項記載の方法。
【請求項１６】
前記窒素源が無機アンモニウム源を含み、前記発酵培地のｐＨが、前記制限栄養素源により制御される、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
ドコサヘキサエン酸が全脂質の少なくとも１５％である、請求項１〜１６のいずれか一項記載の方法。
【請求項１８】
前記脂質の少なくとも４０％がドコサヘキサエン酸である、請求項１〜１７のいずれか一項記載の方法。
【請求項１９】
前記脂質が、発酵の時間あたり発酵培地のリッターあたり少なくとも０．５グラムの平均速度で生産され、かつ、ω−３およびω−６脂肪酸の合計量が前記脂質の少なくとも２０％である、請求項１〜１８のいずれか一項記載の方法。
【請求項２０】
前記脂質が、発酵の時間あたり発酵培地のリッターあたり少なくとも０．５グラムの平均速度で生産され、かつ、ドコサヘキサエン酸が前記脂質の少なくとも２５％である、請求項１〜１９のいずれか一項記載の方法。
【請求項２１】
前記微生物が、好気性条件下で脂質を生産する、請求項１〜２０のいずれか一項記載の方法。
【請求項２２】
前記発酵培地中の溶存酸素が制御されている、請求項１〜２１のいずれか一項記載の方法。
【請求項２３】
前記方法が、発酵の時間あたり発酵培地のリッターあたり平均少なくとも０．２グラムのドコサヘキサエン酸を生産する、請求項１〜２２のいずれか一項記載の方法。
【請求項２４】
前記微生物から脂質を回収する前に、前記発酵培地から水を除去して乾燥微生物を供することをさらに含み、ここで、該脂質の少なくとも１５％は多価不飽和脂肪酸である、請求項６記載の方法。
【請求項２５】
前記微生物から脂質を回収する前に、前もって遠心せずに蒸発により前記発酵培地から水を除去して乾燥微生物を供する、請求項６記載の方法。
【請求項２６】
前記微生物が、ポリケチドシンターゼ系を含む、請求項１〜２５のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
前記微生物の発酵が、前記発酵培地のバイオマス密度が少なくとも１５０ｇ／Ｌであるときに、多価不飽和脂肪酸を含む脂質を生産する、請求項１〜２６のいずれか一項記載の方法。