(57)【要約】  本発明は、創傷の治療、特に瘢痕形成（特に、肥厚性瘢痕またはケロイド形成）の減少または予防において有用な組成物および方法を提供する。従って、本発明は、肥厚性瘢痕またはケロイド修復において有用な方法および予防的瘢痕阻害方法を含む治療方法をさらに提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ゼラチンおよび高分子炭水化物を水性媒体中で第１の温度で混合して、前記ゼラチンが、組成物中に存在する前記ゼラチンおよび前記高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する液体ヒドロゲル組成物を形成する工程と、
前記液体ヒドロゲル組成物を絶えず混合しながら、前記第１の温度よりも少なくとも約５℃低く、かつ、前記液体ヒドロゲル組成物が固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移するゲル化温度よりも高い、前記ゲル化温度の約７℃以内の保持温度まで冷却する工程と、
前記液体ヒドロゲル組成物を前記ゲル化温度までさらに冷却して、前記液体ヒドロゲル組成物を安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移させる工程と、
を含む、安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【請求項２】
前記安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数を示すか、前記安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に、少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数を示す、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．４のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．２のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３５のＵＡヒドロゲル安定係数、および３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数のうちの１つ以上で定義される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記第１の温度は約４５℃以上である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記ゲル化温度は約３５℃である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ゲル化温度までさらに冷却する工程を約２時間未満の時間で行う、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記さらなる冷却工程は、前記安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物を約１℃〜約１２℃の貯蔵温度まで冷却する工程を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記水性媒体は、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満のオスモル濃度を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記水性媒体は、約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記水性媒体は、約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度および約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度の一方または両方を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記水性媒体は、媒体１９９を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記安定なヒドロゲル組成物中の前記ゼラチンおよび前記高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記安定なヒドロゲル組成物を凍結乾燥する工程をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記安定なヒドロゲル組成物は、
３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数、
３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数、
５Ｎの注射器プランジャー圧力および３５℃〜３９℃の温度で、５／８インチの長さの２５ゲージ針を通して注射器から押し出した場合に約１０μＬ／ｓ以上の流速、
３５℃〜３９℃の温度で約１．５Ｐａ−ｓ以下の粘度、
約３ｎｍｏｌ／ｍｇ以上のフィブロネクチン結合活性、および
哺乳類の皮膚または皮下組織において約３日以上の滞留時間、
のうちの１つ以上を示す、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法に従って調製した安定なヒドロゲル組成物。
【請求項１５】
ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤をさらに含み、ここで、前記ゼラチンは、前記再構成した組成物中に存在する前記ゼラチンおよび前記高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する、流動性かつ注射可能な組成物。
【請求項１６】
前記流動性かつ注射可能な再構成した組成物は、５Ｎの注射器プランジャー圧力および３５℃〜３９℃の温度で、５／８インチの長さの２５ゲージ針を通して注射器から押し出した場合に約２５μＬ／ｓ以上の流速を有する、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記２種以上の添加剤は、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤、ｖ）ポリソルベートおよびポリオール、ｖｉ）ポリソルベートおよび塩、ｖｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｖｉｉｉ）ポリオールおよび糖、ｉｘ）塩および糖、ｘ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ｘｉ）ポリソルベート、塩および糖、ｘｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｘｉｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｘｉｖ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｘｖ）グリセリンおよび二糖類、ｘｖｉ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｘｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびに、ｘｖｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含む、請求項１５または請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記２種以上の添加剤は、
約１：２０〜約２０：１の比で界面活性剤および吸湿性賦形剤、
約１：４０〜約１０：１の比で界面活性剤および増量剤、または
約１：１０〜約１０：１の比で吸湿性賦形剤および増量剤
を含む、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１９】
前記流動性かつ注射可能な再構成した組成物は、３５℃〜３９℃の温度で約１．５Ｐａ−ｓ以下の粘度を有する、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記流動性かつ注射可能な再構成した組成物は、３５℃未満の温度で固体または半固体に転移するように構成されている、請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記固体または半固体の再構成した組成物は、皮膚または皮下組織において約３日以上の滞留時間を有する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつ前記ゼラチンが前記凍結乾燥した組成物中に存在する前記ゼラチンおよび前記高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を用意する工程と、
再構成したヒドロゲル組成物が、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤を含み、かつ前記再構成したヒドロゲル組成物中の前記ゼラチンおよび前記高分子炭水化物の総濃度が約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであるように、前記凍結乾燥した組成物を水性の再構成用流体で再構成して前記ヒドロゲル組成物を形成する工程と、
を含む、ヒドロゲル組成物の調製方法。
【請求項２３】
前記凍結乾燥した組成物に接触する前記水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の前記界面活性剤を含むという条件、
前記凍結乾燥した組成物に接触する前記水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の前記吸湿性賦形剤を含むという条件、および
前記凍結乾燥した組成物に接触する前記水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の前記増量剤を含むという条件
のうちの１つ以上を満たす、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記凍結乾燥した組成物に接触する前記水性の再構成用流体は、約０．０５重量％〜約６重量％の前記添加剤を含む、請求項２２または請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記２種以上の添加剤は、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤、ｖ）ポリソルベートおよびポリオール、ｖｉ）ポリソルベートおよび塩、ｖｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｖｉｉｉ）ポリオールおよび糖、ｉｘ）塩および糖、ｘ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ｘｉ）ポリソルベート、塩および糖、ｘｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｘｉｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｘｉｖ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｘｖ）グリセリンおよび二糖類、ｘｖｉ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｘｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびに、ｘｖｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含む、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記２種以上の添加剤は、
約１：２０〜約２０：１の比で界面活性剤および吸湿性賦形剤、
約１：４０〜約１０：１の比で界面活性剤および増量剤、または
約１：１０〜約１０：１の比で吸湿性賦形剤および増量剤
を含む、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつ前記ゼラチンが前記凍結乾燥した組成物中に存在する前記ゼラチンおよび前記高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を収容する第１の容器と、
再構成用材料を収容する第２の容器と、
前記第１の容器および前記第２の容器の内容物を１つにまとめて、急性皮膚創傷の治療に有用な再構成したヒドロゲル組成物を形成するための使用説明書と、
を含み、
前記第１の容器および前記第２の容器の前記１つにまとめられた内容物は、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤を含むキット。
【請求項２８】
前記第１の容器は、前記添加剤のうちの少なくとも１種を含む、請求項２７に記載のキット。
【請求項２９】
前記第２の容器は、前記２種以上の添加剤を含む、請求項２７または請求項２８に記載のキット。
【請求項３０】
前記第２の容器は、水性の再構成用流体を含む、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３１】
前記水性の再構成用流体は、前記２種以上の添加剤を含む、請求項２７〜３０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３２】
前記水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の前記界面活性剤を含むという条件、
前記水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の前記吸湿性賦形剤を含むという条件、および
前記水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の前記増量剤を含むという条件
のうちの１つ以上を満たす、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
前記水性の再構成用流体は、約０．０５重量％〜約６重量％の前記添加剤を含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３４】
前記２種以上の添加剤は、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤、ｖ）ポリソルベートおよびポリオール、ｖｉ）ポリソルベートおよび塩、ｖｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｖｉｉｉ）ポリオールおよび糖、ｉｘ）塩および糖、ｘ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ｘｉ）ポリソルベート、塩および糖、ｘｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｘｉｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｘｉｖ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｘｖ）グリセリンおよび二糖類、ｘｖｉ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｘｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびに、ｘｖｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含む、請求項２７〜３３のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３５】
前記２種以上の添加剤は、
約１：２０〜約２０：１の比で界面活性剤および吸湿性賦形剤、
約１：４０〜約１０：１の比で界面活性剤および増量剤、または
約１：１０〜約１０：１の比で吸湿性賦形剤および増量剤
を含む、請求項２７〜３４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３６】
前記第１の容器の内容物の前記第２の容器への無菌移動および前記第２の容器の内容物の前記第１の容器への無菌移動の一方または両方に適したコネクタをさらに含む、請求項２７〜３５のいずれか１項に記載のキット。
【請求項３７】
前記第１の容器および前記第２の容器のうちの少なくとも１つは注射器であり、かつ前記キットは、前記注射器への取り付けに適した２３〜２７ゲージ針を任意に含む、請求項２７〜３６のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚創傷の治療に適した組成物、そのような治療のための方法、およびそのような組成物の調製方法に関する。特に、本組成物は、優先的には瘢痕化、特にケロイド形成を減少させた状態での治癒を促進するのに有効なように、皮膚創傷での使用を特に有効なものにし得るヒドロゲル安定係数で定義することができる。
【背景技術】
【０００２】
医学には、創傷の回復を遅らせたり妨げたりする創傷治癒不良などにより、創傷が適切に治癒しない状況が多く存在する。それどころか、得られる機能または美容術を制限し得る創傷治癒事象がさらに存在する。例示的な望ましくない結果としては、機能や可動性を損なう広範囲な瘢痕化、ケロイドまたは創傷拘縮を生じさせる肥厚反応が挙げられる。
【０００３】
肥厚性瘢痕は、体がコラーゲンを過剰生成した際に生じ、瘢痕は周囲の皮膚よりも盛り上がった状態となる。肥厚性瘢痕は、多くの場合、皮膚上に盛り上がった赤い塊となって現れ、通常は、創傷感染または過剰な引っ張りによる創傷縫合および／または他の外傷性皮膚損傷から４〜８週間以内に生じる。ケロイド形成は特に、非常に難しい創傷治癒問題である。ケロイドは、軟部組織腫瘍を生じさせる良性の線維性（線維芽細胞または筋線維芽細胞）増殖として定義されている。ケロイドにおける高密度線維組織の良性の過剰増殖は、異常な治癒反応から皮膚損傷に発展し、正常な創傷治癒や肥厚性瘢痕などの瘢痕化とは似ていない。これらの差は、細胞プロセス、コラーゲン生成／沈着、元の創傷の境界を越える持続的増殖、および切除後の高い再発率に現れる。正常な瘢痕または肥厚性瘢痕とは異なり、ケロイドは、Ｉ型プロコラーゲン、ＶＥＧＦ、ＴＧＦβ１／β２、ＰＤＧＦ−α受容体を過剰生成する線維芽細胞を含み、アポトーシス率またはアポトーシス遺伝子の下方制御のいずれか一方の低下と共に、増殖因子要求性が低下している(Robles, et al., Clinics in Dermatology, 2007)。これらの異常な線維芽細胞プロセスは、生体外および生体内でのコラーゲンおよび細胞外マトリックスの生成の増加を示している。正常な瘢痕、肥厚性瘢痕およびケロイド瘢痕のＸ線回折検査により、瘢痕線に平行に走っているコラーゲン原線維（正常な瘢痕）または瘢痕線に僅かに整列したコラーゲン原線維（肥厚性瘢痕）ではなく、特定の向きのコラーゲンを全く示さないケロイド瘢痕のコラーゲン原線維が実証されている(Koonin eta al., S.A。Medical Journal 1964)。さらに、このコラーゲンは、沈着パターン、コラーゲン型の混合物（ＩＩＩ型が非常に豊富であり、後にＩ型に取って代わられる）、および過剰さが他の組織または瘢痕型とは異なっているため、「ケロイドコラーゲン」と呼ばれている(Cheng et al. African Journal of Biotechnology 2011)。最後に、正常な瘢痕または肥厚性瘢痕とは異なり、ケロイド瘢痕における再発傾向は、４５〜１００％と報告されており、ケロイドには、瘢痕または肥厚性瘢痕に使用される公知の治療が効かない(Robles, et al., Clinics in Dermatology 2007)。
【０００４】
創傷治癒を促進するための組成物は、体の主要な構造タンパク質であるコラーゲンの使用と共に記載されている。特に、創傷治癒を促進するか創傷修復のための組織鋳型として機能させるための、体の構造多糖であるグリコサミノグリカンと組み合わせたコラーゲン組成物についても記載されている。例えば、米国特許第４，８３７，０２４号には、創傷表面をコラーゲンおよびグリコサミノグリカンの粒子からなる懸濁液と接触させて創傷治癒を促進することについて記載されている。米国特許第４，２８０，９５４号には、コラーゲンと、合成皮膚などの分解性外科的プロテーゼとして有用なムコ多糖（グリコサミノグリカン）とを含む複合材料について記載されている。変性コラーゲンを用いる組成物についても多糖を含む創傷治癒組成物に記載されている。米国特許第６，２６１，５８７号および米国特許第６，７１３，０７９号には、血管新生を刺激して創傷治癒を促進するために使用されるゼラチンおよびデキストランまたはヘパリンからなる組成物について記載されている。皮膚創傷治療、具体的には急性皮膚創傷治療において有用であって、特にケロイドおよび肥厚性皮膚治癒に対処する方法および組成物がなお必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、治癒を促進するための、特に肥厚性創傷治癒および／または瘢痕形成を減少または制限するように治癒を促進するための、創傷治療において有用であり得る安定なヒドロゲル組成物を提供する。本発明は、相分離および構造再編成に対して安定なヒドロゲル組成物の形成方法、そのような組成物の使用方法、およびそのような組成物が組み込まれた製品をさらに提供する。本発明の方法および組成物は、限定されるものではないが、術後瘢痕、肥厚性瘢痕、外傷または熱傷により生じた瘢痕などの瘢痕化およびケロイドを減少または制限するのに特に有用であり得る。
【０００６】
各種実施形態では、本開示は、安定なヒドロゲル組成物の調製方法に関する。例示的な一実施形態では、本方法は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を水性媒体中で第１の温度で混合して、ゼラチンが本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する液体ヒドロゲル組成物を形成する工程を含むことができる。本方法は、液体ヒドロゲル組成物を絶えず混合しながら、第１の温度よりも低く、かつ液体ヒドロゲル組成物が固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移するゲル化温度よりも高い保持温度まで冷却する工程をさらに含むことができる。本方法は、液体ヒドロゲル組成物をゲル化温度までさらに冷却して、液体ヒドロゲル組成物を安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移させる工程も含むことができる。
【０００７】
混合工程を行う第１の温度は、例えば、約４５℃以上、より詳細には約４６℃〜約７０℃であってもよい。保持温度は、第１の温度よりも少なくとも約５℃低くてもよい。さらなる実施形態では、保持温度は、ゲル化温度の約７℃以内であってもよい。ゲル化温度は、例えば、約３５℃未満であってもよい。いくつかの実施形態では、ゲル化温度へのさらなる冷却工程を約２時間未満の時間で行ってもよい。さらなる冷却工程は特に、安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物を貯蔵温度まで冷却する工程を含むことができる。貯蔵温度は、約１℃〜約１２℃であってもよい。さらに、本方法は、安定なヒドロゲル組成物を凍結乾燥する工程をさらに含んでもよい。
【０００８】
具体的な実施形態では、本ヒドロゲルを形成するために使用される水性媒体を、その塩濃度で定義することができる。例えば、本ヒドロゲルを形成するための水性媒体は、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満のオスモル濃度を有していてもよい。さらなる実施形態では、水性媒体は、約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有していてもよい。他の実施形態では、水性媒体は、約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度を有していてもよい。同様に、水性媒体は、約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有していてもよい。いくつかの実施形態では、水性媒体は、媒体１９９を含むことができる。
【０００９】
上記方法に従って形成されたヒドロゲル組成物を、その組成および特性によってさらに特徴づけてもよい。例えば、安定なヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであってもよい。
【００１０】
具体的な実施形態では、上記方法に従って形成された安定なヒドロゲル組成物を、本ヒドロゲル組成物の特定の調製方法により生じることが分かっている相分離および構造再編成に対するその固有の安定性により定義してもよい。そのような固有の安定性は、本ヒドロゲルが相分離および構造再編成に抵抗する能力を明らかにする超音波評価に関して特徴づけることができる。従って、安定なヒドロゲルは、超音波減衰ヒドロゲル安定係数に基づいて識別することができる。例えば、本開示に係る安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数を示すことができる。この安定係数は、この試験条件下で試験したヒドロゲルの超音波減衰が、この試験期間において４０％未満で変化したということを示す。さらなる実施形態では、安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数を示すことができる。さらなる実施形態では、安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．４のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．２のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３５のＵＡヒドロゲル安定係数、および３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数のうちの１つ以上で定義することができる。
【００１１】
さらなる実施形態では、本開示は、安定なヒドロゲル組成物を提供する。安定なヒドロゲル組成物は、好ましくは本明細書に記載されている方法に従って調製したヒドロゲルであり、そのようなヒドロゲル組成物は、そのさらなる特性によって特徴づけることができる。例えば、安定なヒドロゲル組成物は、５Ｎの注射器プランジャー圧力および３５℃〜３９℃の温度で、５／８インチの長さの２５ゲージ針を通して注射器から押し出した場合に、約１０μＬ／ｓ以上の流速を有していてもよい。安定なヒドロゲル組成物は、３５℃〜３９℃の温度で約１．５Ｐａ−ｓ以下の粘度を有していてもよい。安定なヒドロゲル組成物は、約３ｎｍｏｌ／ｍｇ以上のフィブロネクチン結合活性を有していてもよい。安定なヒドロゲル組成物は、哺乳類の皮膚または皮下組織において約３日以上の滞留時間を有していてもよい。
【００１２】
なおさらなる実施形態では、本開示は、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲル組成物に関するものであってもよい。凍結乾燥した材料が当該技術分野で知られているが、これまで、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含む凍結乾燥したヒドロゲルマトリックスを、特に細いゲージ針を通した注射に適し、かつ流動性形態に迅速かつ容易に再構成することができる形態に再構成するのは難しいという認識はされていない。
【００１３】
従って、例示的な実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含む流動性かつ注射可能な組成物であって、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤をさらに含む組成物を提供することができる。ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成することが好ましい。さらなる実施形態では、流動性かつ注射可能な再構成した組成物は、５Ｎの注射器プランジャー圧力および３５℃〜３９℃の温度で、５／８インチの長さの２５ゲージ針を通して注射器から押し出した場合に、約２５μＬ／ｓ以上の流速を有する。
【００１４】
２種以上の添加剤は特に、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ならびに、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤のうちのいずれかを含んでもよい。具体的な実施形態では、２種以上の添加剤は、ｉ）ポリソルベートおよびポリオール、ｉｉ）ポリソルベートおよび塩、ｉｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｉｖ）ポリオールおよび糖、ｖ）塩および糖、ｖｉ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ならびに、ｖｉｉ）ポリソルベート、塩および糖のうちのいずれかを含む。さらなる実施形態では、２種以上の添加剤は、ｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｉｖ）グリセリンおよび二糖類、ｖ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｖｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびに、ｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含む。２種以上の添加剤は特に、約１：２０〜約２０：１の比で界面活性剤および吸湿性賦形剤を含んでもよい。２種以上の添加剤は、約１：４０〜約１０：１の比で界面活性剤および増量剤も含んでもよい。２種以上の添加剤は、約１：１０〜約１０：１の比で吸湿性賦形剤および増量剤をさらに含む。
【００１５】
流動性かつ注射可能な再構成した組成物は、３５℃〜３９℃の温度で約１．５Ｐａ−ｓ以下の粘度を有することが好ましい。流動性かつ注射可能な再構成した組成物は、３５℃未満の温度で固体または半固体に転移するように構成することができる。固体または半固体の再構成した組成物は、皮膚または皮下組織において約３日以上の滞留時間を有することが好ましい。
【００１６】
さらなる実施形態では、本開示は、皮膚創傷により生じる皮膚の瘢痕化またはその影響を防止または減少させる方法を提供することができる。特に、本方法は、本明細書に記載されている組成物を皮膚創傷に塗布する工程を含むことができる。本方法は、縫合糸、ステープル、接着剤およびそれらの組み合わせからなる群から選択される閉鎖物により創傷を閉鎖する工程をさらに含むことができる。塗布工程は、流動性かつ注射可能な液体組成物を皮膚創傷に近接する皮膚または皮下組織に注射する工程を含むことができる。具体的な実施形態では、皮膚創傷は、手術創傷、例えば、以前から存在する瘢痕（ケロイド、肥厚性瘢痕または熱傷に関連した瘢痕であってもよい）の少なくとも一部の切除後に残った創傷であってもよい。塗布工程は、本マトリックス組成物の局所塗布を含んでもよい。本方法を用いて、ケロイド形成または肥厚性瘢痕形成を予防または減少させることが好ましい。例えば、防止または減少させることができる瘢痕化の影響としては、痛み、痒み、変色、異常な硬直、異常な肥大、表面の凹凸およびそれらの組み合わせを挙げることができる。特定の実施形態では、塗布工程は、２．５ｃｍの創縁当たり約０．１ｍＬ〜約１０ｍＬのマトリックス組成物を塗布する工程を含むことができる。
【００１７】
本開示に係るヒドロゲル組成物のさらなる調製方法は、凍結乾燥形態のヒドロゲルを再構成して、本明細書に記載されている再構成した組成物を形成する工程を含むことができる。例示的な一実施形態では、ヒドロゲル組成物の調製方法は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を用意する工程と、再構成したヒドロゲル組成物が、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤を含み、かつ再構成したヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであるように、凍結乾燥した組成物を水性の再構成用流体で再構成して本ヒドロゲル組成物を形成する工程とを含むことができる。特定の実施形態では、凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の界面活性剤を含むことができる。さらに、凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の吸湿性賦形剤を含むことができる。なおさらに、凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の増量剤を含むことができる。さらに、凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、全部で約０．０５重量％〜約６重量％の添加剤を含むことができる。
【００１８】
各種実施形態では、２種以上の添加剤は、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ならびに、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤のうちのいずれかを含むことができる。他の実施形態では、２種以上の添加剤は、ｉ）ポリソルベートおよびポリオール、ｉｉ）ポリソルベートおよび塩、ｉｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｉｖ）ポリオールおよび糖、ｖ）塩および糖、ｖｉ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ならびに、ｖｉｉ）ポリソルベート、塩および糖のいずれかを含むことができる。さらに、２種以上の添加剤は、ｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｉｖ）グリセリンおよび二糖類、ｖ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｖｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびに、ｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含むことができる。特に、２種以上の添加剤は、約１：２０〜約２０：１の比で界面活性剤および吸湿性賦形剤を含むことができ、２種以上の添加剤は、約１：４０〜約１０：１の比で界面活性剤および増量剤を含むことができ、かつ／または２種以上の添加剤は、約１：１０〜約１０：１の比で吸湿性賦形剤および増量剤を含むことができる。
【００１９】
さらなる実施形態では、本開示はさらに、本明細書に記載されているヒドロゲル組成物を形成する際に有用な１種以上の成分を提供することができるキットなどの製品に関する。例示的な一実施形態では、キットは、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を収容する第１の容器と、再構成用材料を収容する第２の容器と、第１の容器および第２の容器の内容物を１つにまとめて、急性皮膚創傷の治療に有用な再構成したヒドロゲル組成物を形成するための使用説明書とを含むことができる。特に、第１の容器および第２の容器の１つにまとめられた内容物は、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤を含む。
【００２０】
さらなる実施形態では、第１の容器は、少なくとも１種の添加剤を含むことができる。第２の容器は、２種以上の添加剤を含むことができる。第２の容器は、水性の再構成用流体を含むことができる。水性の再構成用流体は、２種以上の添加剤を含むことができる。各種実施形態では、水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の界面活性剤を含むことができ、水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の吸湿性賦形剤を含むことができ、水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の増量剤を含むことができ、かつ／または水性の再構成用流体は、約０．０５重量％〜約６重量％の添加剤を含むことができる。
【００２１】
さらなる実施形態では、２種以上の添加剤は、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ならびに、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤のうちのいずれかを含むことができる。２種以上の添加剤は、ｉ）ポリソルベートおよびポリオール、ｉｉ）ポリソルベートおよび塩、ｉｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｉｖ）ポリオールおよび糖、ｖ）塩および糖、ｖｉ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ならびに、ｖｉｉ）ポリソルベート、塩および糖のうちのいずれかを含むことができる。２種以上の添加剤は、ｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｉｖ）グリセリンおよび二糖類、ｖ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｖｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびにｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含むことができる。２種以上の添加剤は、約１：２０〜約２０：１の比で界面活性剤および吸湿性賦形剤を含むことができる。２種以上の添加剤は、約１：４０〜約１０：１の比で界面活性剤および増量剤を含むことができる。２種以上の添加剤は、約１：１０〜約１０：１の比で吸湿性賦形剤および増量剤を含むことができる。
【００２２】
キットは、本ヒドロゲル組成物を形成または送達するのに有用なさらなる構成要素をさらに含むことができる。例えば、当該キットは、第１の容器の内容物の第２の容器への無菌移動および第２の容器の内容物の第１の容器への無菌移動のうちの一方または両方に適したコネクタをさらに含むことができる。第１の容器および第２の容器のうちの少なくとも１つは注射器であってもよい。当該キットは、注射器への取り付けに適した針をさらに含むことができる。特に、針は、２３〜２７ゲージ針であってもよい。
【００２３】
本発明は、限定されるものではないが、以下の実施形態を含む。
【００２４】
実施形態１：ゼラチンおよび高分子炭水化物を水性媒体中で第１の温度で混合して、ゼラチンが本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する液体ヒドロゲル組成物を形成する工程と、液体ヒドロゲル組成物を絶えず混合しながら、第１の温度よりも少なくとも約５℃低く、かつ液体ヒドロゲル組成物が固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移するゲル化温度よりも高い、ゲル化温度の約７℃以内の保持温度まで冷却する工程と、液体ヒドロゲル組成物をゲル化温度までさらに冷却して液体ヒドロゲル組成物を安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移させる工程とを含む、安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００２５】
実施形態２：安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数を示すか、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数を示す、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００２６】
実施形態３：安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．４のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．２のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３５のＵＡヒドロゲル安定係数、および３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数のうちの１つ以上で定義される、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００２７】
実施形態４：第１の温度は約４５℃以上である、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００２８】
実施形態５：ゲル化温度は約３５℃である、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００２９】
実施形態６：ゲル化温度までさらに冷却する工程を約２時間未満の時間で行う、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００３０】
実施形態７：さらなる冷却工程は、安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物を約１℃〜約１２℃の貯蔵温度まで冷却する工程を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００３１】
実施形態８：水性媒体は、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満のオスモル濃度を有する、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００３２】
実施形態９：水性媒体は、約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇのオスモル濃度を有する、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００３３】
実施形態１０：水性媒体は、約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度および約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度のうちの一方または両方を有する、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００３４】
実施形態１１：水性媒体は、媒体１９９を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００３５】
実施形態１２：安定なヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００３６】
実施形態１３：安定なヒドロゲル組成物を凍結乾燥する工程をさらに含む、上記または下記実施形態のいずれかに係る安定なヒドロゲル組成物の調製方法。
【００３７】
実施形態１４：安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数、５Ｎの注射器プランジャー圧力および３５℃〜３９℃の温度で、５／８インチの長さの２５ゲージ針を通して注射器から押し出した場合に約１０μＬ／ｓ以上の流速、３５℃〜３９℃の温度で約１．５Ｐａ−ｓ以下の粘度、約３ｎｍｏｌ／ｍｇ以上のフィブロネクチン結合活性、および哺乳類の皮膚または皮下組織において約３日以上の滞留時間のうちの１つ以上を示す、上記実施形態のうちのいずれかに係る方法に従って調製した安定なヒドロゲル組成物。
【００３８】
実施形態１５：ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤をさらに含む、流動性かつ注射可能な組成物。
【００３９】
実施形態１６：流動性かつ注射可能な再構成した組成物は、５Ｎの注射器プランジャー圧力および３５℃〜３９℃の温度で、５／８インチの長さの２５ゲージ針を通して注射器から押し出した場合に約２５μＬ／ｓ以上の流速を有する、上記または下記実施形態のいずれかに係る組成物。
【００４０】
実施形態１７：２種以上の添加剤は、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤、ｖ）ポリソルベートおよびポリオール、ｖｉ）ポリソルベートおよび塩、ｖｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｖｉｉｉ）ポリオールおよび糖、ｉｘ）塩および糖、ｘ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ｘｉ）ポリソルベート、塩および糖、ｘｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｘｉｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｘｉｖ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｘｖ）グリセリンおよび二糖類、ｘｖｉ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｘｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびに、ｘｖｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含む、上記または下記実施形態のいずれかに係る組成物。
【００４１】
実施形態１８：２種以上の添加剤は、約１：２０〜約２０：１の比で界面活性剤および吸湿性賦形剤、約１：４０〜約１０：１の比で界面活性剤および増量剤、または約１：１０〜約１０：１の比で吸湿性賦形剤および増量剤を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係る組成物。
【００４２】
実施形態１９：流動性かつ注射可能な再構成した組成物は、３５℃〜３９℃の温度で約１．５Ｐａ−ｓ以下の粘度を有する、上記または下記実施形態のいずれかに係る組成物。
【００４３】
実施形態２０：流動性かつ注射可能な再構成した組成物は、３５℃未満の温度で固体または半固体に転移するように構成されている、上記または下記実施形態のいずれかに係る組成物。
【００４４】
実施形態２１：固体または半固体の再構成した組成物は、皮膚または皮下組織において約３日以上の滞留時間を有する、上記または下記実施形態のいずれかに係る組成物。
【００４５】
実施形態２２：ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を用意する工程と、再構成したヒドロゲル組成物が、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤を含み、かつ再構成したヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであるように、凍結乾燥した組成物を水性の再構成用流体で再構成して本ヒドロゲル組成物を形成する工程とを含む、ヒドロゲル組成物の調製方法。
【００４６】
実施形態２３：凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の界面活性剤を含むという条件、凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の吸湿性賦形剤を含むという条件、および凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の増量剤を含むという条件のうちの１つ以上を満たす、上記または下記実施形態のいずれかに係るヒドロゲル組成物の調製方法。
【００４７】
実施形態２４：凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０５重量％〜約６重量％の添加剤を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るヒドロゲル組成物の調製方法。
【００４８】
実施形態２５：２種以上の添加剤は、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤、ｖ）ポリソルベートおよびポリオール、ｖｉ）ポリソルベートおよび塩、ｖｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｖｉｉｉ）ポリオールおよび糖、ｉｘ）塩および糖、ｘ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ｘｉ）ポリソルベート、塩および糖、ｘｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｘｉｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｘｉｖ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｘｖ）グリセリンおよび二糖類、ｘｖｉ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｘｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびに、ｘｖｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るヒドロゲル組成物の調製方法。
【００４９】
実施形態２６：２種以上の添加剤は、約１：２０〜約２０：１の比で界面活性剤および吸湿性賦形剤、約１：４０〜約１０：１の比で界面活性剤および増量剤、または約１：１０〜約１０：１の比で吸湿性賦形剤および増量剤を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るヒドロゲル組成物の調製方法。
【００５０】
実施形態２７：ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を収容する第１の容器と、再構成用材料を収容する第２の容器と、第１の容器および第２の容器の内容物を１つにまとめて、急性皮膚創傷の治療に有用な再構成したヒドロゲル組成物を形成するための使用説明書とを含み、第１の容器および第２の容器の１つにまとめられた内容物は、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤を含むキット。
【００５１】
実施形態２８：第１の容器は、少なくとも１種の添加剤を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００５２】
実施形態２９：第２の容器は、２種以上の添加剤を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００５３】
実施形態３０：第２の容器は、水性の再構成用流体を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００５４】
実施形態３１：水性の再構成用流体は、２種以上の添加剤を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００５５】
実施形態３２：水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の界面活性剤を含むという条件、水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の吸湿性賦形剤を含むという条件、および水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の増量剤を含むという条件のうちの１つ以上を満たす、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００５６】
実施形態３３：水性の再構成用流体は、約０．０５重量％〜約６重量％の添加剤を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００５７】
実施形態３４：２種以上の添加剤は、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤、ｖ）ポリソルベートおよびポリオール、ｖｉ）ポリソルベートおよび塩、ｖｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｖｉｉｉ）ポリオールおよび糖、ｉｘ）塩および糖、ｘ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ｘｉ）ポリソルベート、塩および糖、ｘｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｘｉｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｘｉｖ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｘｖ）グリセリンおよび二糖類、ｘｖｉ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｘｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびに、ｘｖｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００５８】
実施形態３５：２種以上の添加剤は、約１：２０〜約２０：１の比で界面活性剤および吸湿性賦形剤、約１：４０〜約１０：１の比で界面活性剤および増量剤、または約１：１０〜約１０：１の比で吸湿性賦形剤および増量剤を含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００５９】
実施形態３６：第１の容器の内容物の第２の容器への無菌移動および第２の容器の内容物の第１の容器への無菌移動のうちの一方または両方に適したコネクタをさらに含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００６０】
実施形態３７：第１の容器および第２の容器のうちの少なくとも１つは注射器であり、注射器への取り付けに適した２３〜２７ゲージ針を任意に含む、上記または下記実施形態のいずれかに係るキット。
【００６１】
本開示のこれらおよび他の特徴、態様および利点は、以下に簡単に述べる添付の図面と共に、以下の詳細な説明を読めば明らかになるであろう。本発明は、そのような特徴または要素が本明細書中の特定の実施形態の記載において明白に組み合わせられているか否かに関わらず、上記実施形態の２つ、３つ、４つまたはそれ以上の任意の組み合わせならびに本開示に記載されている任意の２つ、３つ、４つまたはそれ以上の特徴または要素の組み合わせを含む。本開示は、全体論的に解釈されるものとし、よって、本開示の発明のあらゆる分離可能な特徴または要素は、その各種態様および実施形態のいずれかにおいて、その文脈が明らかに別の意を示していない限り、組み合わせ可能であるものとみなすべきである。
【図面の簡単な説明】
【００６２】
【図１】本開示に係る例示的な組成物の示差走査熱量測定曲線を示すグラフである。
【図２】本開示の例示的な実施形態に係る組成物の物理的性質を示すグラフである。
【図３】本組成物のゼラチン濃度に対する本開示のさらなる実施形態に係る組成物の物理的性質を示すグラフである。
【図４】水を基準とした３種類の異なる周波数における本方法に従って調製した実施例１のヒドロゲル組成物の相対的超音波減衰を示すグラフである。
【図５】３種類の異なる周波数における本方法に従って調製した実施例２のヒドロゲル組成物の相対的超音波減衰を示すグラフである。
【図６】実施例１の方法に従って調製したヒドロゲル組成物および実施例２に従って調製したヒドロゲル組成物の相対的超音波速度を示すグラフである。
【図７】それぞれがヒドロゲル組成物の調製のための成分を含む複数の容器を含む本開示の例示的な実施形態に係るキットを示す。
【図８ａ】４０℃の温度で２４時間温置した場合の本開示の一実施形態に従って調製した組成物の相変化を示すグラフである。
【図８ｂ】４０℃の温度で２４時間温置した場合の本開示の一実施形態に従って調製したヒドロゲル組成物の相変化を示すグラフである。
【図８ｃ】４０℃の温度で２４時間温置した場合の中間冷却工程なしに調製された組成物の相変化を示すグラフである。
【図８ｄ】４０℃の温度で２４時間温置した場合の中間冷却工程なしに調製されたさらなる組成物の相変化を示すグラフである。
【図９ａ】５０℃の温度で２４時間温置した場合の本開示の一実施形態に従って調製した組成物の相変化を示すグラフである。
【図９ｂ】５０℃の温度で２４時間温置した場合の本開示の一実施形態に従って調製したさらなる組成物の相変化を示すグラフである。
【図９ｃ】５０℃の温度で２４時間温置した場合の中間冷却工程なしに調製された組成物の相変化を示すグラフである。
【図９ｄ】５０℃の温度で２４時間温置した場合の中間冷却工程なしに調製されたさらなる組成物の相変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００６３】
以下、本発明を、その例示的な実施形態を参照しながら、より完全に説明する。本開示を徹底的かつ完全なものにすると共に、本発明の範囲が当業者に十分に伝わるように、これらの例示的な実施形態について説明する。実際には、本発明は、多くの異なる形態で具体化することができ、本明細書に記載されている実施形態に限定されるものとして解釈されるべきではなく、むしろ、本開示が適用可能な法的要件を満たすように、これらの実施形態を提供する。明細書および添付の特許請求の範囲に使用されている単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その（前記）（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに別の意を示していない限り、複数の指示対象を含む。
【００６４】
本開示は、創傷、特に皮膚（すなわち真皮）の創傷の治療に使用するのに有利な組成物に関する。ヒトの平均核心温度は３７℃（＋／−０．５℃）であるが、皮膚温度は、著しく低くなることがあり、典型的には約３３℃（＋／−１℃）の範囲である。本開示は、様々な形態で提供することができ、よって、皮膚創傷の治療に特に有用であり得るゼラチンおよび高分子炭水化物で形成された組成物について記載する。より具体的には、ゼラチンと炭水化物の相互作用により、平均皮膚温度とほぼ等しいかそれに満たない温度で固体または半固体ゲルマトリックス組成物が形成されるように、ゼラチンおよび高分子炭水化物を組み合わせることができる。以下により完全に説明するように、本組成物は、３５℃未満の温度で固体または半固体の材料であってもよい。
【００６５】
皮膚または皮下組織において、本組成物は、創傷治癒および創傷成熟プロセスの間に、その物理的存在およびゼラチンと高分子炭水化物との潜在的相互作用により創傷治癒を調節する、実質的に固体または半固体のゲルマトリックスの形態である。本開示の組成物は、生分解し、かつ／または埋め込まれたマトリックス組成物を取り囲む組織によって生理的に再吸収される。従って、固体または半固体マトリックス組成物は、本組成物が創傷治癒を高め、かつゆっくりと分解する規定の滞留時間を有する。さらに本明細書に記載されているように、本組成物は、ゼラチンと高分子炭水化物との相互作用により生じるヒドロゲル構造を本組成物が保持する能力を定義するヒドロゲル安定係数を有する。これは、皮膚条件下で構成成分に分離し、よって、本開示に係る可能な方法で創傷治癒を調節するのに必要な特性を欠いている以前のヒドロゲルとは異なる。本組成物は、本組成物の長期貯蔵に特に有用な乾燥（例えば、粉末）形態で提供することができると有利である。そのような粉末組成物は、様々な生理的に許容される溶媒および添加剤を用いて、再構成可能にすることができる。
【００６６】
本発明は、特定の機序によって縛られるものではないが、ゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせにより、自然な創傷治癒環境（例えば、コラーゲンおよびグリコサミノグリカンの存在下）に類似した環境を提供すると考えられる。そのような環境により、肥厚性瘢痕形成およびケロイド形成を含む肥厚性創傷治癒を減少または制限することができる。
【００６７】
本開示の組成物は、平均皮膚温度よりも僅かに高い温度で流動性（かつ注射可能な）液体であり、よって、界面組織に熱損傷を与えることなく注射することができるという利点を与える。但し、本組成物は、およそ平均皮膚温度で固体または半固体ゲルマトリックスに転移し、かつ本ヒドロゲル構造を長期間維持するというさらなる利点を与える。従って、本組成物は、皮膚創傷の近傍における十分な持続性を示し、創傷治癒過程の間に、これまで知られているヒドロゲル組成物を用いた場合には得られないと思われていた有利な効果を与えることができる。本組成物は分解性にすることができるが、急性創傷の治癒期間、例えば、約２週間持続することができ、コラーゲン成熟および創傷組織修復に有利であるようなより長期間にわたって持続できることが好ましい。本組成物は、急性皮膚創傷の治療にも特に有用であり得る。本組成物は、ケロイド瘢痕、肥厚性瘢痕、熱傷に関連した瘢痕の治療、または特に瘢痕が形成されやすい患者において手術創傷の予防的治療にも有用であり得る。そのようなカテゴリに分類される患者は、過去の瘢痕化歴、例えば、肥厚性瘢痕化またはケロイド形成歴に基づいて識別することができる。さらに、ケロイド形成のリスクが高いものとして当該技術分野で認識されているグループ（すなわち、濃く色素沈着した皮膚）への分類に基づいて患者を識別することができる。例えば、色素沈着の少ない人々に比べて、色素沈着の度合いが高い人々では、ケロイド発生頻度が１５倍高い。より具体的には、アフリカ系の人々は、ケロイド発生のリスクが高いものとして認識されている。
【００６８】
本開示の組成物は、その特定の特性に関して特に特徴づけることができる。例えば、ゼラチンの生成の間に、コラーゲンを分解する様々な化学的プロセスを使用し、これにより、得られるゼラチンのフィブロネクチンおよび高分子炭水化物結合特性が低下してしまうことがある。所望の特性を有するために、本組成物は、損なわれていないフィブロネクチン結合活性を有するゼラチンを含むことが好ましい。この目的のために、規定の分子量のゼラチンを使用することが好ましい。具体的には、ゼラチンは、約７５，０００以上、約８０，０００Ｄａ以上、約１００，０００Ｄａ以上または約１１０，０００Ｄａ以上の平均分子量を有していてもよい。具体的な実施形態では、ゼラチンは、約７５，０００Ｄａ〜約２５０，０００Ｄａ、約９０，０００Ｄａ〜約２２５，０００Ｄａ、約１００，０００Ｄａ〜約２００，０００Ｄａまたは約１２０，０００Ｄａ〜約１８０，０００Ｄａの平均分子量を有していてもよい。具体的な実施形態では、約１４０，０００Ｄａ〜約１６０，０００Ｄａの分子量を有するゼラチンが特に有用なものになり得る。
【００６９】
分子量は、重量平均分子量（Ｍｗ）または数平均分子量（Ｍｎ）として表わすことができる。どちらの表現も、各分子の平均分子数（ｎｉ）およびモル質量（Ｍｉ）を有するものとして巨大分子溶質を含む溶液の特性評価に基づいている。従って、数平均分子量は、以下の式１で定義される。
【数１】
2016518391.tif 000003
重量平均分子量（分子量平均としても知られている）は、光散乱法を用いて直接測定可能であり、以下の式２で定義される。
【数２】
2016518391.tif 000004
分子量は、Ｚ平均モル質量（Ｍｚ）として表わすこともでき、ここでは、この計算は、大きなモル質量を有する分子を強く強調する。Ｚ平均モル質量は、以下の式３で定義される。
【数３】
2016518391.tif 000005
特に断りのない限り、本明細書では、分子量を重量平均分子量として表わす。
【００７０】
本発明に従って使用されるゼラチンは、動物の皮膚、結合組織または骨に由来するコラーゲンを少なくとも部分的に加水分解して得られるものなど、様々な有用な提供源から得ることができる。あるいは、ゼラチンは、細胞培養などの生体外合成したものであっても、ヒト由来であっても、合成物質であってよい。Ａタイプのゼラチン（すなわち、酸処理された前駆体に由来）またはＢタイプのゼラチン（すなわち、アルカリ処理された前駆体に由来）を使用することができる。さらに、ゼラチンは、コラーゲンを変性させるための化学的加水分解および／または熱加水分解を用いて得ることができる。
【００７１】
本組成物の高分子炭水化物は、グリコサミノグリカンなどの天然の炭水化物であっても合成の炭水化物であってもよい。ゼラチンと共に所望の温度で固体または半固体ゲルマトリックスを形成するための所望の特性を有するために、約１０，０００〜１，０００，０００Ｄａの分子量を有する炭水化物（例えば、デキストラン）が好ましい。その範囲の上限の分子量を有する炭水化物により、マトリックスのより大きな物理的性質および安定性を得ることができる。
【００７２】
高分子炭水化物は、グリコサミノグリカンすなわちムコ多糖および合成の炭水化物などの様々な多糖を包含することができる。使用することができる高分子炭水化物の具体的かつ非限定的な例としては、アガロース、アルギン酸塩、アミロペクチン、アミロース、カラゲナン、セルロース、キチン、キトサン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、デキストラン、デキストラン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン、ヘパラン硫酸、ヘパリン、ヒアルロン酸、ケラタン硫酸および澱粉が挙げられる。
【００７３】
化学量論量のゼラチンおよび高分子炭水化物を、生理的ｐＨにおいて２種類の高分子成分の相補的なイオン電荷により望ましい範囲で製剤化できることが好ましい。所望の物理的および潜在的な生物学的特性は、高分子成分（ゼラチン＋高分子炭水化物）に由来するため、好ましい化学量論範囲は、実施例に記載されているような好適な特性を得るためには、ゼラチンを含む高分子の重量の少なくとも６０％である。従って、ゼラチン成分は、ゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの約６０重量％以上を構成することができる。さらなる実施形態では、ゼラチン成分は、ゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの約６２重量％以上、約６５重量％以上、約６７重量％以上または約７０重量％以上を構成することができる。さらなる実施形態では、ゼラチンは、組成物全体におけるゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの約６０重量％〜約９５重量％、約６５重量％〜約９０重量％または約７０重量％〜約８５重量％を構成することができる。
【００７４】
既に上に記載したように、水性成分を含む本組成物を形成する材料の全体的組み合わせにより、比較的狭い相変化温度範囲を有する材料を形成することができる。具体的には、本組成物の高分子材料とさらなる成分との相互作用により、平均皮膚温度とほぼ等しいかそれに満たない温度で固体または半固体であって、平均皮膚温度よりも僅かに高い温度まで加熱することにより流動性の液体組成物に転移させることができる相制御可能なヒドロゲルマトリックスを形成することができる。言い換えると、本開示の組成物は、驚くべき程に狭い相制御を提供することができる。具体的には、例えば、たった約０．５℃〜約３℃、約０．８℃〜約２．５℃または約１℃〜約２℃の差が流動性かつ注射可能な液体から固体または半固体への相転移またはその逆（皮膚組織への注射後など）を引き起こすのに有効であり得るように、本組成物を非常に狭くかつ特定の転移温度範囲を有するように調整することができる。特定の実施形態では、本開示の水和組成物は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）により測定した場合に３５℃以上の温度で流動性の液体であってもよい。より詳細には、本開示の組成物は、３５℃以上、約３６℃（＋／−０．５℃）以上または約３７℃（＋／−０．５℃）以上の温度で流動性の液体であってもよい。他の実施形態では、本開示の組成物は、３５℃未満の温度で固体または半固体ゲルマトリックスであってもよい。
【００７５】
ゼラチンおよび高分子炭水化物の総高分子化合物濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約３５０ｍｇ／ｍＬまたは約１００ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬの範囲であってもよい。本組成物を生理的ｐＨ近くまで滴定し、２種類の高分子成分のイオン相互作用を可能にして、ゲルを形成してもよい。緩衝液を利用して、約６〜約８の範囲の適当なｐＨを促進することができる。生理的塩およびアミノ酸などの他の成分を本組成物に組み込んで、創傷治癒に関与する細胞に支持的環境を与えることができる。使用することができる例示的なアミノ酸としては、グルタミン酸、アルギニン、リジン、システインおよびアラニル−グルタミンが挙げられる。アミノ酸のＬ−異性体などの特定の異性体を使用することができる。例示的な有用な塩としては、エデト酸二ナトリウムおよび、亜鉛塩（例えば、硫酸亜鉛）、カルシウム塩、マグネシウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩などの金属塩が挙げられる。
【００７６】
本開示の組成物は、平均的なヒトの皮膚温度（すなわち、３５℃以上）よりも僅かに高い温度まで加熱すると、固体または半固体材料から流動性液体に変化するという点で特に有用である。流動性液体組成物は、皮膚創傷を取り囲んでいる組織などの皮膚および皮下組織への本組成物の注射を可能にする好適な物理的性質を示すことが好ましい。具体的な実施形態では、この物理的性質は、流動性液体組成物が比較的細いゲージ針を通した注射に適するといった性質である。例えば、流動性液体組成物を、約０．２ｍｍ以上、約０．２５ｍｍ以上または約０．３ｍｍ以上の名目上の内径を有する針などを通した注射に適合させることができる。流動性液体組成物は、約０．２ｍｍ〜約０．４ｍｍまたは約０．２５ｍｍ〜約０．３５ｍｍの名目上の内径を有する針などを通した注射にさらに適合させることができる。有用な針ゲージの例としては、１８〜２７ゲージ針、２３〜２７ゲージ針または２３〜２５ゲージ針が挙げられる。比較的細いゲージ針は、皮膚組織によって提供されるような比較的小さい標的に組成物を注射することが求められるため、注射可能な組成物は、十分に低い粘度を示すものでなければならない。また、注射可能な組成物は、コロイド状または不溶性の粒子を、注射針の名目上の内径よりも小さい粒径範囲の粒子に制限しなければならない。従って、コロイド状または不溶性の粒子が注射針の名目上の内径の約１／５以下、約１／６以下または約１／８以下の平均粒径を有すると有利であり得る。より具体的には、コロイド状または不溶性の粒子は、注射針の名目上の内径の約１／５〜約１／１０の平均粒径を有していてもよい。そのような粒径にすることで、針を詰まらせることなく本組成物を注射することができる。
【００７７】
総固体含有量は同様に、本組成物の流動性や注射可能性に悪影響を及ぼすことがある。好ましくは、流動性の液体形態の場合、特に細いゲージ針を通した注射に適した粘度を得るために、本組成物は、特定の閾値未満の総固体含有量を有することが望ましい。例えば、総固体含有量は、約０．５ｇ／ｍＬ以下、約０．４ｇ／ｍＬ以下、約０．３ｇ／ｍＬ以下、約０．２ｇ／ｍＬ以下または約０．１ｇ／ｍＬ以下であると有利であり得る。さらなる実施形態では、流動性かつ注射可能な液体組成物の総固体含有量は、約０．０１ｇ／ｍＬ〜約０．５ｇ／ｍＬ、約０．０２５ｇ／ｍＬ〜約０．４５ｇ／ｍＬ、約０．０５ｇ／ｍＬ〜約０．４ｇ／ｍＬまたは約０．１ｇ／ｍＬ〜約０．３ｇ／ｍＬであってもよい。
【００７８】
さらに上記に加えて、本開示に係る流動性液体組成物の粘度は、例えば、細いゲージ針を通した材料の注射可能性に関連していてもよい。より具体的には、顕著に高い粘度は、手動の注射器を用いた本組成物の注射能力を制限する可能性がある。好ましくは、流動性液体形態の場合、本組成物は、約２Ｐａ−ｓ以下、約１．５Ｐａ−ｓ以下、約１．２５Ｐａ−ｓ以下、約１．１Ｐａ−ｓ以下、約１Ｐａ−ｓ以下、約０．７５Ｐａ−ｓ以下、約０．５Ｐａ−ｓ以下または約０．２５Ｐａ−ｓ以下の粘度を有することが望ましい。さらなる実施形態では、流動性液体組成物は、約０．０１Ｐａ−ｓ〜約２Ｐａ−ｓ、約０．０２５Ｐａ−ｓ〜約１．７５Ｐａ−ｓ、約０．０５Ｐａ−ｓ〜約１．５Ｐａ−ｓ、約０．１Ｐａ−ｓ〜約１．２５Ｐａ−ｓまたは約０．２Ｐａ−ｓ〜約１．１Ｐａ−ｓの粘度を有していてもよい。粘度を評価する方法の１つは、以下の実施例４に記載されており、粘度値は、約３９℃の試験温度範囲を基準にすることができる。
【００７９】
水和された液体組成物の流動性は、針を通した本組成物の圧力および流速に関して特徴づけることができる。例えば、Ｎｏｒｄｓｏｎ／ＥＦＤ社から入手可能なものなど、公知の流体分注システムを使用して、流速を評価することができる。具体的な試験では、１ｍＬの試験流体を１ｍＬの注射器に入れることができ、５ニュートン（Ｎ）の注射器プランジャー力をかけて、その流体を１６ｍｍ（５／８インチ）の長さの２５ゲージ針（０．２６ｍｍの名目上の内径）を通して注射器から押し出すことができる。そのような試験は、ＩＳＯ７８８６−１に準拠しているが、他の試験条件も使用することができる。上記試験条件を使用する場合、本開示に係る水和された液体組成物は、約５μＬ／ｓ以上、約１０μＬ／ｓ以上、約１５μＬ／ｓ以上、約２５μＬ／ｓ以上、約７５μＬ／ｓ以上、約１００μＬ／ｓ以上または約２００μＬ／ｓ以上の平均流速を有していてもよい。平均流速は、特に約１０μＬ／ｓ〜約４００μＬ／ｓ、約１２μＬ／ｓ〜約３５０μＬ／ｓまたは約１５μＬ／ｓ〜約３００μＬ／ｓであってもよい。上記値は同様に、本明細書に別途記載されている任意のゲージ針を通した流動性に当て嵌めることができる。さらに、そのような流動性の値は、約３９℃の試験温度範囲を基準にすることができる。
【００８０】
固体または半固体状態の場合、本開示の組成物を、材料の圧縮強度によって特徴づけることができる。機械的強度を評価するための機械的試験は、特に以下の実施例６に記載されており、そのような試験は、当業界で入手可能な材料および方法を用いて行うことができる。特定の実施形態では、本開示に係る固体または半固体組成物は、周囲条件で約１５ｋＰａ以上、約２０ｋＰａ以上または約２５ｋＰａ以上の圧縮弾性率を示すことができる。他の実施形態では、圧縮弾性率は、周囲条件で約１５ｋＰａ〜約５０ｋＰａ、約２０ｋＰａ〜約４５ｋＰａまたは約２０ｋＰａ〜約４０ｋＰａであってもよい。特定のさらなる実施形態では、圧縮弾性率を、周囲条件で少なくとも約３４ｋＰａ、少なくとも約３５ｋＰａまたは少なくとも約３６ｋＰａとして特徴づけることができる。いくつかの実施形態では、本発明に係る製造プロセスは、比較的高レベルの圧縮弾性率を有する本発明の組成物を製造することができ、それにより特定の創傷治療におけるそのような材料の性能を高めることができる。圧縮弾性率を評価する方法の１つは、実施例６に記載されている。
【００８１】
固体または半固体状態の場合、本開示の組成物は、材料の溶解特性によって特徴づけることもできる。本発明の材料の溶解を評価するための試験は特に、以下の実施例６に記載されており、そのような試験は、当業界で入手可能な材料および方法を用いて行うことができる。特定の実施形態では、円盤状に形成された（直径が８ｍｍ、高さが１．５ｍｍに寸法決めされた）本発明の組成物は、約４５分超、約４６分超、約４７分超または約４８分超で、３４℃のリン酸緩衝食塩水における目視検査によって完全溶解を示すことができる。溶解に対する抵抗性の上昇は一般に、創傷部位に埋め込まれた場合の滞留時間の向上に相関しており、これにより本発明の組成物の創傷治癒機能を高めることができる。
【００８２】
本開示の組成物は、その特定の成分の保存された活性に関して特に有利であり得る。上に記載したように、コラーゲンを変性させるプロセス（例えば、その化学的処理）により、得られるゼラチンのフィブロネクチンおよび高分子炭水化物結合特性が低下してしまうことがある。これは、コラーゲンのα鎖の分解に部分的に関連し得る。しかし、本開示の組成物は、特に変性コラーゲンを含む他の組成物と比較して、より高分子量のコラーゲンα鎖の保存に部分的に起因する高いフィブロネクチン結合活性（ＦＢＡ）を示すことができる。特定の実施形態では、本開示に係る組成物は、約３ｎｍｏｌ／ｍｇ以上、約４ｎｍｏｌ／ｍｇ以上または約５ｎｍｏｌ／ｍｇ以上のＦＢＡを示すことができる。そのような活性は、本組成物中のゼラチン濃度に正規化されたゼラチン上のフィブロネクチン結合部位の濃度として測定することができる。フィブロネクチン結合活性を測定する方法の１つは、実施例５に記載されている。
【００８３】
さらに以下に記載するように、本開示の組成物は特に、哺乳類、特にヒトの皮膚または皮下組織の治療で使用することができる。一般に、流動性組成物を、新しい治癒の途中または既に癒された創傷領域などの皮膚または皮下組織の領域に注射することができる。従って、本組成物を、皮膚または皮下組織内の損なわれていない組成物の滞留時間に関して特徴づけることができる。本組成物のそのような滞留時間は、本組成物の生分解時間すなわち配置から周囲組織および生理的プロセスにより本組成物の材料が分解または生体吸収されるまでの時間と称すこともできる。特定の実施形態では、ヒトなどの哺乳類の皮膚または皮下組織における本開示に係る組成物の滞留時間は、約３日以上、約４日以上、約５日以上、約６日以上または約７日以上であってもよい。他の実施形態では、滞留時間は、約３日〜約６０日、約４日〜約４５日、約５日〜約４０日または約６日〜約３５日であってもよい。
【００８４】
本開示の組成物の調製では、本明細書に記載されているように高分子化合物が相互作用してヒドロゲルマトリックスを形成することができるように、十分な水（または他の溶媒）と共に高分子成分を混合することができる。高分子化合物を乾燥状態で混合容器に添加し、次いで、一緒に水和させることができ、あるいは個々の高分子化合物の別個の溶液（例えば、本ヒドロゲル組成物を形成するために、希釈用に様々な濃度で用意することができる原液）を調製し、次いで一緒に混合することができる。緩衝液または滴定剤を添加して、ｐＨおよびイオン強度を調整することができる。次いで、成分の組み合わせを加熱しながら（例えば、本明細書に記載されている液体転移温度よりも高い温度まで）混合して、均一なヒドロゲル組成物を形成することができる。そのような調製様式により、治療効果が本組成物の成分の性質に依存するがヒドロゲル自体の全体的構造に依存しない特定の用途での使用に適したヒドロゲルマトリックスを達成することができる。特に、本開示によって、本明細書に記載されている温度および混合仕様ならびに塩濃度範囲を利用することなくヒドロゲルを形成すると、固体または半固体状態で存在することができるが生理的条件下で相分離する熱可逆性材料が生じる場合があるということが分かった。具体的には、ヒドロゲル構造が破壊するようにゼラチンおよび高分子炭水化物成分が顕著に分離し、液体成分が周囲組織によって急速に再吸収され、かつ分離した高分子化合物が骨格様構造を与える時間にわたって持続する。そのような生体高分子骨格は、いくつかの治療効果を与えることができるが、本開示により、皮膚創傷、特に急性皮膚創傷の望ましい治癒、具体的には瘢痕化の減少およびケロイド形成の減少または除去を与えるには不十分であるということがさらに分かった。しかし、本明細書に定義されている仕様に従って調製したヒドロゲル組成物を利用して、そのような目的を本開示に従って達成することができる。特に、本ヒドロゲル組成物の調製手段は、皮膚条件下でヒドロゲルの相安定性に対して予期せぬ効果を有し、従って、本開示のヒドロゲル組成物は、本組成物の調製方法に直接相関させることができるヒドロゲル安定係数でさらに定義することができるということが分かった。
【００８５】
特定の実施形態では、ヒドロゲルの超音波評価により、ヒドロゲル安定係数を計算することができる。高い超音波周波数で試料を通って伝播する音波の速度および減衰の高分解能測定を用いる、ヒドロゲル特性の非破壊分析にとって有効なあらゆる超音波分光計を使用することができる。実施例１３に記載されているように、ＨＲ−ＵＳ１０２超音波分光計（Sonas Technologies社（アイルランドのダブリン）から入手可能）を使用してもよい。超音波速度は、分子間相互作用、水和、ミクロ弾性、架橋結合、および試料の内部構造および組成に極めて敏感な本ヒドロゲル（または他の試験媒体）の高周波弾性に関する情報を提供する。超音波減衰は、試料を通って伝播する超音波におけるエネルギー損失によって決定され、高周波粘度に比例している。そのような評価は、試料の微細構造組織およびその漸進的変化（例えば、粒径、凝集および合体）に関する情報を得るのに有用である。従って、本開示により、超音波試験は、熱可逆性ヒドロゲルの皮膚の安定性を評価し、かつそのような皮膚の安定性と本ヒドロゲル組成物の調製方法とを相関させるための信頼性の高い手段であることが分かった。
【００８６】
望ましいヒドロゲル安定性を有する組成物の調製のための好ましい一実施形態は、実施例１に記載されている。各種実施形態では、本組成物の非高分子成分の一部を水性媒体（実施例１では媒体１９９）に混合し、かつ平衡化させることができる。成分を混合して液体ヒドロゲル組成物を形成する工程は、高分子炭水化物との相互作用のためにゼラチン上の結合部位の利用能を増加させるのに適した第１の温度で行うことが好ましい。特定の実施形態では、第１の混合温度は、約４５℃以上または約５０℃以上（例えば、約４５℃〜約８０℃、約４６℃〜約７０℃、約４８℃〜約６５℃または約５０℃〜約６０℃）の温度であってもよい。その後、高分子炭水化物およびゼラチン（乾燥形態および高分子化合物原液を含む）を連続的または一緒に溶液に添加することができる。高分子化合物を溶液に入れたら、本ヒドロゲル組成物のｐＨを所望の範囲に調整することができる。ｐＨ調整により平衡化させた後、残りの非高分子成分を液体ヒドロゲル組成物の中に撹拌させることができる。全てのヒドロゲル成分を水和させるか、そうでなければ液体溶液の形態にする本ヒドロゲル処理は、本ヒドロゲル成分を溶液中に実質的に維持する絶え間ない混合または同様の撹拌を行いながら行うことが好ましい。例えば、撹拌子または同様の混合装置を使用してもよい。いくつかの実施形態では、液体ヒドロゲル組成物の形成は、絶えず撹拌しながら第１の温度で、約１０分以上、約３０分以上、約６０分以上または約９０分以上（例えば、約２０分〜約３００分、約３０分〜約２４０分または約４５分〜約１８０分間）行うことができる。
【００８７】
本開示により、ヒドロゲル安定性は、調製方法の温度条件により直接影響を受けるということが分かった。上に規定した温度で混合する工程は、本組成物材料の可溶化、従って液体ヒドロゲル組成物の最初の形成にとって有用であるが、本組成物を、混合の停止前に第１の温度よりも低い保持温度まで冷却すると有利である。保持温度は、本ヒドロゲル組成物の第１の温度および／またはゲル化温度に関して定義することができる。いくつかの実施形態では、保持温度は、第１の温度よりも少なくとも約２℃、少なくとも約５℃、または少なくとも約８℃低くてもよい。さらなる実施形態では、保持温度は、本ヒドロゲル組成物のゲル化温度の約１０℃以内、約７℃以内、約５℃以内または約２℃以内であってもよい。ゲル化温度は、液体ヒドロゲル組成物が固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移する温度であると理解される。特定の実施形態では、保持温度は、約４５℃未満または約４２℃未満（例えば、約３６℃〜約４４℃、約３７℃〜約４３℃または約３８℃〜約４２℃）であってもよい。例えば、約５０℃で平衡化された液体ヒドロゲル組成物を、約４０℃で混合容器から保持容器の中に汲み出すことができる（その間にフィルタ滅菌を行ってもよい）。本組成物成分を上記のように十分に可溶化して液体ヒドロゲル組成物を形成したら、任意の冷却手段を使用してそれを保持温度まで冷却することができる。好ましい実施形態では、保持容器に入れられる液体ヒドロゲル組成物が保持温度に冷却されるように、保持容器を能動的に冷却することができる。また、冷却工程は、濾過の間または他の手段により行ってもよい。いくつかの実施形態では、形成された液体ヒドロゲルを、規定の期間、例えば、約８時間未満、約４時間未満、約２時間未満または約１時間未満の時間で保持温度まで冷却することが好ましい。液体ヒドロゲル組成物を保持温度に冷却している間に絶えず混合することが特に好ましい。また、液体ヒドロゲル組成物を液体ヒドロゲル組成物が保持温度で保持されている全時間にわたって絶えず混合することが好ましい。液体組成物をゲル化温度に冷却する前の絶えず混合する工程の適用は、液体ヒドロゲル組成物を均質な液体高分子溶液として維持するものとして特徴づけることができる。混合工程の停止が早すぎると、ゼラチンおよび高分子炭水化物の相分離が生じ、かつゲル化温度未満で形成する固体または半固体ヒドロゲルが高分子成分間の必要な結合を達成するような高分子成分の液体組成物全体への均質な分散が生じないという点で、液体高分子溶液が非均質になってしまう。
【００８８】
保持温度における液体ヒドロゲル組成物は、所望の包装または貯蔵容器に分注してもバルク組成物のまま維持してもよい。その後、液体ヒドロゲル組成物を本組成物のゲル化温度未満の貯蔵温度（すなわち、本組成物が固体または半固体状態である温度）までさらに冷却することができる。いくつかの実施形態では、第１の方法を用いて保持温度まで冷却する工程を行ってもよく、第２の異なる方法を用いてゲル化温度へのさらなる冷却工程を行ってもよい。例えば、第１の方法は、混合工程を含むことができ、第２の方法は、混合工程を含まなくてもよい。さらなる例としては、第１の方法は、第１の時間で所望の温度まで冷却する工程を含むことができ、第２の方法は、第２の異なる時間でゲル化温度まで冷却する工程を含むことができる。いくつかの実施形態では、本ヒドロゲル組成物を冷却する工程を、最小の時間にわたって保持温度で実質的に停止することができる。従って、保持温度まで冷却する工程およびゲル化温度まで冷却する工程は別個の異なる工程であり、かつ本開示に係る好適なヒドロゲルは、保持温度への第１の冷却工程なしに第１の温度からゲル化温度まで直接冷却した場合には達成されないことは明らかである。上に記載したように、保持温度はゲル化温度に実質的に近いため、本組成物に対する望ましくない影響を生じさせることなく、すなわちヒドロゲル高分子の均質性を実質的に損なうことなく、混合工程の非存在下で、貯蔵温度まで冷却する工程を行うことができる。冷却工程により本組成物がゲル化段階を通して転移して形成される固体または半固体ヒドロゲル組成物は、均質に混合された液体組成物の大きな相分離または構造再編成を回避するのに十分な程に急速に固体または半固体ゲルが形成されるという点で、安定化形態であると特徴づけることができる。固体または半固体ヒドロゲル組成物を、実質的に本組成物のゲル化温度未満の温度、例えば、冷蔵で、特に、約２０℃未満、約１５℃未満または約１０℃未満の温度（例えば、約１℃〜約１２℃、約２℃〜約１０℃または約２℃〜約８℃の温度）で貯蔵することができる。混合工程の停止と固体または半固体ヒドロゲル組成物を形成するためのゲル化との間の時間は、約２時間未満、約１時間未満または約３０分未満であることが好ましい。
【００８９】
本ヒドロゲル組成物の調製の際に使用される媒体（例えば、水）の性質も、本ヒドロゲルの安定性に顕著に影響を与える場合がある。ヒドロゲル媒体は脱イオン水であり、１種以上の緩衝液および／または防腐剤と共に添加できることが好ましい。但し、ヒドロゲル媒体は、特に特定のイオンに関して過剰な塩濃度を回避することがさらに好ましい。各種実施形態では、液体ヒドロゲル組成物を形成する際に使用される水性媒体を、特定の濃度未満のオスモル濃度で定義することができる。例えば、水性媒体は、総塩濃度において約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満であってもよい。さらなる実施形態では、水性媒体のオスモル濃度は、約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満、約３２５ｍＯｓｍ／ｋｇ未満または約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満であってもよい。特に、水性媒体のオスモル濃度は、約１０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇまたは約５０ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇであってもよい。理論により縛られたくはないが、上記オスモル濃度条件は、固体または半固体ヒドロゲル組成物が本明細書に記載されている所望の治療効果を達成するのに十分な滞留時間にわたってそのゲル化構造を維持する能力に影響を与えるように、哺乳類の皮膚組織内の細胞外マトリックスの性質を十分に模倣していると考えられる。従って、特定の実施形態では、本開示のヒドロゲル組成物を、治療される組織の細胞外マトリックスのオスモル濃度を約２０％以下、約１８％以下または約１５％以下で超えるオスモル濃度を有するものとして定義することができる。
【００９０】
さらなる実施形態では、水性媒体の性質を、リン酸イオン濃度および／または炭酸イオン濃度に関して定義することもできる。例えば、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）は、本開示に係る安定なヒドロゲルを達成するのに許容し難い程に高いリン酸濃度を与えることが分かった。これは、別記の実施例２に示されている。本開示に従って使用される水性媒体は、約２５ｍＭ以下、約２０ｍＭ以下または約１５ｍＭ以下のリン酸イオン濃度を有することが好ましい。同様に、本開示に従って使用される水性媒体は、約２５ｍＭ以下、約２０ｍＭ以下または約１５ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有する。一方、別記の実施例１で使用されている媒体１９９は、非常に安定なヒドロゲル組成物の形成を与える程に十分に低いリン酸イオン濃度を有する有用なヒドロゲル媒体であることが分かった。
【００９１】
安定なヒドロゲル組成物の調製のための上記処理パラメータは別々に列挙されているが、本開示に係る方法を、上記処理パラメータの１つまたは上記処理パラメータの任意の組み合わせで定義できるものと理解される。さらに、本明細書に提供されているそのさらなる説明の任意の態様に従って、個々の処理パラメータを実施してもよい。例えば、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含む有用かつ安定なヒドロゲル組成物の調製方法を、以下のパラメータ：
本明細書に記載されているように、第１の温度で混合する工程および保持温度まで冷却する工程、
本明細書に記載されているように、冷却しながら混合工程を維持する工程、
本明細書に記載されているように、規定のリン酸濃度を有する媒体を利用する工程、
本明細書に記載されているように、規定の炭酸塩濃度を有する媒体を利用する工程、
本明細書に記載されているように、第１の温度で混合する工程、保持温度まで冷却する工程、および冷却しながら混合工程を維持する工程、
本明細書に記載されているように、第１の温度で混合する工程、保持温度まで冷却する工程、および規定のリン酸濃度を有する媒体を利用する工程、
本明細書に記載されているように、第１の温度で混合する工程、保持温度まで冷却する工程、および規定の炭酸塩濃度を有する媒体を利用する工程、
本明細書に記載されているように、第１の温度で混合する工程および保持温度まで冷却する工程、冷却しながら混合工程を維持する工程、および規定のリン酸濃度を有する媒体を利用する工程、
本明細書に記載されているように、第１の温度で混合する工程および保持温度まで冷却する工程、冷却しながら混合工程を維持する工程、および規定の炭酸塩濃度を有する媒体を利用する工程、
本明細書に記載されているように、第１の温度で混合する工程および保持温度まで冷却する工程、冷却しながら混合工程を維持する工程、規定のリン酸濃度を有する媒体を利用する工程、および規定の炭酸塩濃度を有する媒体を利用する工程、
のいずれかに関して定義することができる。
【００９２】
上記を考慮すると、本開示に係る有用なヒドロゲル組成物は、特定のヒドロゲル安定係数を得るための処理条件下で形成された組成を有するヒドロゲルとして定義することができる。次いで、このヒドロゲル安定係数を、瘢痕修復を含む急性皮膚創傷の有効な治療のための本ヒドロゲル組成物の能力に直接相関させることができる。別記の実施例に記載されている試験により、使用される溶媒媒体（例えば、実施例１および実施例２の媒体１９９および高リン酸ＰＢＳ）のみが主に異なるヒドロゲルマトリックスを形成するために同じ２種類の高分子化合物を同じ量で使用した場合であっても、本ヒドロゲル組成物を調製するプロセスにより本組成物のヒドロゲル安定性が顕著に変化する可能性があることが分かった。具体的には、本開示に係るより大きな安定係数を有するヒドロゲル組成物は、本ヒドロゲル高分子化合物の結合相互作用により生じるヒドロゲル構造を維持しながら、十分な持続期間にわたって皮膚組織に留まり続けるため、より低い安定係数を有する同様のヒドロゲルの治療有効性レベル（例えば、瘢痕の減少）を顕著に、かつ予期せずに超える治療有効性レベルを達成すると考えられる。具体的には、より低い安定係数を有する本ヒドロゲルは、許容し難い程に短い皮膚滞留時間後に、相分離およびヒドロゲル再編成を生じることがあるため、本組成物のヒドロゲル構造により促進される必要な創傷治癒機序は、瘢痕化、特にケロイド形成を減少させるように進行することができない。本ヒドロゲルが、注射のために液化され、かつ皮膚組織において固体または半固形に再形成されても、安定化された固体または半固体ヒドロゲル組成物の形成に対する本明細書に記載されている温度、混合工程および塩濃度パラメータの安定化作用は引き継がれるという点で、この差は驚きである。
【００９３】
本開示に係る急性皮膚創傷治療に有用な安定性を示すヒドロゲル組成物は、本明細書に記載されているように、超音波試験などにより確認することができる。本明細書で使用されるヒドロゲル安定係数は、規定の周波数または周波数範囲および規定の試験温度での超音波試験の最小の規定時間にわたる超音波減衰（ＵＡ）の変化率として定義することができる。例えば、０．５のＵＡヒドロゲル安定係数は、規定の期間にわたって５０％未満の超音波減衰の変化に対応している。
【００９４】
例示的な一実施形態では、本開示に係る有用なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４のＵＡヒドロゲル安定係数を示すことができる。従って、本ヒドロゲルの超音波減衰は、この指定された試験条件下で少なくとも５００分の時間にわたって４０％未満で変化する。別の例示的な実施形態では、本開示に係る有用なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数を示すことができる。従って、本ヒドロゲルの超音波減衰は、この指定された試験条件下で少なくとも６００分の時間にわたって５０％未満で変化する。より低いヒドロゲル安定係数は、有効な瘢痕減少治療を与えるのに十分な皮膚の滞留時間にわたって相分離および構造再編成に抵抗する、より安定なヒドロゲルに対応する。
【００９５】
一実施形態では、本開示に係る有用なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数を有していてもよい。別の実施形態では、有用なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．４のＵＡヒドロゲル安定係数を有していてもよい。別の実施形態では、有用なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．２のＵＡヒドロゲル安定係数を有していてもよい。別の実施形態では、有用なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数を有していてもよい。別の実施形態では、有用なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３５のＵＡヒドロゲル安定係数を有していてもよい。別の実施形態では、有用なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数を有していてもよい。
【００９６】
得られたゲルマトリックスの安定性をさらに促進するために、最終組成物の安定性に寄与する高分子化合物の一部をその場で濃縮することが望ましい。本組成物の生成の際に、各高分子化合物または混合された組成物の可溶性部分の大部分を除去して、所望の特性を有する各高分子化合物の一部を濃縮するための方法を使用することができる。所望の高分子化合物を濃縮する方法の１つは、加熱しながら高分子化合物を一緒にゆっくりと可溶化し、かつ可溶性液体の大部分をデカントまたは除去して、残りの高分子化合物混合物を濃縮することであってもよい。本組成物を濃縮する別の方法は、水／アルコール混合物への曝露などにより部分的に可溶な条件下に置くか、またはＮａＣｌ溶液を用いるなどの高イオン強度条件により、各高分子化合物または高分子化合物混合物を洗浄することであってもよい。そのようなゲル洗浄技術により、少ない可溶性成分を保持し、従って、本組成物の物理的性質を向上させ、かつ治療部位における持続性を高める組成物を得ることができる。高分子化合物間のイオン相互作用および分別を可能にして、高分子組成物のより多くの可溶性部分を除去するために、所望のｐＨ範囲で高分子化合物を混合しながら本組成物を濃縮すると特に有利である。
【００９７】
当該技術分野で知られているバルク分別法を使用して上に記載したように高分子化合物を濃縮することができる。例えば、サイズ排除クロマトグラフィ（例えば、ゲル濾過クロマトグラフィまたはゲル浸透クロマトグラフィ）またはＢａｋｅｒ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ分別を使用することができる。本組成物の調製において有用であり得るさらなる分別法は、Francuskiewicz, Polymer Fractionation, Springer-Verlag, 1994に記載されており、その開示内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。そのように分別された組成物は、固体または半固体状態にある場合に、より大きな安定性および向上した物理的性質を有することが期待される。
【００９８】
本開示の組成物は、その使用を容易にするか治療が必要な部位に対するその有利な効果を促進するための他の活性剤も含むことができる。そのような活性剤としては、止血剤（コラーゲンまたはトロンビンなど）、抗菌剤（抗生物質など）、殺菌剤または静菌剤、増殖因子（表皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子、血小板由来増殖因子またはインスリン様増殖因子など）、または抗炎症剤（コルチコステロイドまたは非ステロイド性抗炎症剤など）が挙げられる。
【００９９】
周囲条件での出荷および貯蔵を容易にするために、本組成物を乾燥状態まで凍結乾燥し、かつ使用前に再構成または再水和させることができる。凍結乾燥した組成物は、安定性が向上し、使用前の室温貯蔵を可能にすることができる。本発明に従って使用することができる例示的な凍結乾燥方法は、米国特許第５，１９２，７４３号、米国特許第７，６６６，４１３号、米国特許第７，６９５，７３６号、および米国特許第２００８／０１４５４０４号に開示されている。上記全ての文献の開示内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。本組成物の独特な使用により、凍結乾燥用の製剤を生成物の迅速な再構成を可能にするように調整することができる。例えば、再構成は、約３０秒〜約９０分以内に実質的に完了することができる。具体的な実施形態では、再構成が実質的に完了する時間は、約６０分以下、約３０分以下、約２０分以下、約１５分以下または約１０分以下であってもよい。再構成のための時間は特に、約３０秒〜約９０分、約６０秒〜約６０分、約２分〜約３０分、約３分〜約２０分または約４分〜約１５分の範囲であってもよい。再構成の間に加熱工程を適用することができ、かつ／または再構成のために使用される液体は、特定の温度まで予め加熱することができる。例えば３５℃以上の温度までの加熱工程は有利であり得る。再構成は、凍結乾燥した組成物への水溶液の添加ならびに本組成物を含む容器の開封や医療関係者による使用を煩雑化させる無菌的取り扱いを必要とする混合方法を使用しない混合工程を含むことが好ましい。再構成を容易にする手段は、より低密度かつより多孔性の乾燥材料を得るための本組成物の希釈濃度での製剤化を含むことができる。その後、乾燥させた材料を、凍結乾燥のために本組成物を調製するために必要であった量よりも少ない流体で再水和させることができる。
【０１００】
本組成物の優先的な再構成時間は、さらなる成分の使用により促進することができる。例えば、界面活性剤を利用して凍結乾燥した組成物内での疎水性相互作用を最小限に抑え、それにより、再構成のために必要な水浸透を制限することができる。好適な界面活性剤の非限定的な例としては、アニオン性界面活性剤（例えば、脂肪酸、脂肪酸の塩、およびラウリル硫酸ナトリウムなどのアルキル硫酸塩）、カチオン性界面活性剤（例えば、セラミド）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオールエステル、ポリオキシエチレンエステル、および、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０などのポリソルベート）、ならびに両性もしくは双性イオン性界面活性剤が挙げられる。さらなる例としては、ポリエチレングリコール、ポリオール（例えば、グリセリン）、シクロデキストリン、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウムおよび塩化亜鉛などの吸湿性賦形剤も使用することができる。同様に、最初のヒドロゲルマトリックス組成物の調製において様々な増量剤を利用することができ、かつ／または凍結乾燥した組成物の再構成中に添加することができる。理論により縛られたくはないが、そのような増量剤の添加により、再構成のために使用される水または他の溶媒がより容易に浸透することができる凍結乾燥した生成物を得ることができると考えられる。使用することができる例示的な増量剤としては、単糖および二糖類（例えば、デキストロース、スクロースまたはトレハロース）、ならびに糖アルコール（例えば、マンニトール）が挙げられる。
【０１０１】
上述のように、本ヒドロゲルマトリックス組成物の調製において緩衝液を利用することができ、最初の組成物の形成および／または凍結乾燥した組成物の再構成の間に、適当な緩衝液を添加することができる。使用することができる例示的な緩衝液としては、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、クエン酸塩、グリシン、および４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸が挙げられる。さらに、防腐剤を添加することができ、防腐剤は、脱水または凍結乾燥中に本組成物を保存するのに有用であり得る。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、特定の界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤（またはそれらの組み合わせ）は、凍結乾燥条件を向上させ、凍結乾燥後の保存を容易にし、かつ／または再構成した材料の特性を向上させるのに有用であり得る。再構成のために好ましい添加剤は、本組成物が、特に狭い制御された相変化温度にわたって、高温で流動性かつ注射可能な流体を形成し、かつ皮膚（すなわち、皮膚および／または皮下）温度で固体または半固体ヒドロゲルマトリックスを形成する能力を妨げないものであればよい。
【０１０３】
各種実施形態では、再構成用添加剤の組み合わせを使用して、凍結乾燥形態から再構成され、望ましくは急速な時間で再構成され、かつ望ましい注射可能性特性を有する流体形態に再構成されるヒドロゲルを得ることができる。本明細書に記載されているように、再構成用添加剤の残留物が凍結乾燥した組成物中に残存し、かつ所望の再構成効果を与えるように、凍結乾燥前に、再構成用添加剤を本ヒドロゲルと共に含めてもよい。再構成用添加剤は、凍結乾燥した組成物を再構成するために使用される再構成用流体の中にのみ存在してもよい。再構成用残留物が凍結乾燥した組成物中に存在するように、凍結乾燥前に、再構成用添加剤を本ヒドロゲルと共に含めてもよく、また再構成用流体と共に含めてもよい。具体的には、再構成前に含められる添加剤は、再構成用流体と共に含められる添加剤とは異なっていてもよく、あるいは、再構成用流体に含められる凍結乾燥前添加剤および再構成用添加剤は、一般的な１種以上の材料を有していてもよい。
【０１０４】
再構成した組成物中に存在する再構成用添加剤の量を、再構成用流体に関する再構成用添加剤材料の濃度で（再構成用媒体（例えば脱イオン水）中の直接的な添加剤または凍結乾燥した組成物中の再構成用流体の中に引き継がれた残留物のいずれかとして）定義することができる。いくつかの実施形態では、再構成用流体は、最大約４重量％、最大約３重量％、最大約２重量％または最大約１重量％の界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤のうちのいずれか１つを含むことができる。他の実施形態では、再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％、約０．０１５重量％〜約３重量％、約０．０２重量％〜約２重量％または約０．０２５重量％〜約１．５重量％の界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤のうちのいずれか１つを含むことができる。再構成用流体全体は、最大約１０重量％、最大約８重量％、最大約６重量％または最大約４重量％の１つにまとめられた全ての再構成用添加剤を含んでもよい。さらなる実施形態では、再構成用流体全体は、約０．０５％〜約６％、約０．１％〜約５％、約０．２５％〜約４％または約０．５重量％〜約３重量％の１つにまとめられた全ての再構成用添加剤を含んでもよい。再構成用添加剤を脱イオン水に入れて提供してもよい。
【０１０５】
特定の実施形態では、再構成用添加剤の組み合わせは、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、例えば、ポリソルベートおよびポリオール（例えば、Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン）またはポリソルベートおよび塩（例えば、ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ）、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、例えば、ポリソルベートおよび糖（例えば、Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、デキストロースなど）、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、例えば、ポリオールおよび糖（例えば、グリセリンおよび二糖類、デキストロースなど）または塩および糖（例えば、ＮａＣｌおよび二糖類、デキストロースなど）、ならびに、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤、例えば、ポリソルベート、ポリオールおよび糖（例えば、Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、デキストロースなど）またはポリソルベート、塩および糖（例えば、Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類、デキストロースなど）のうちのいずれかを含むことができる。界面活性剤（例えば、ポリソルベート）および吸湿性賦形剤（例えば、ポリオールまたは塩）は、約１：２０〜約２０：１の比で存在していてもよい。界面活性剤（例えば、ポリソルベート）および増量剤（例えば、二糖類、デキストロースなど）は、約１：４０〜約１０：１の比で存在していてもよい。吸湿性賦形剤（例えば、ポリオールまたは塩）および増量剤（例えば、二糖類、デキストロースなど）は、約１：１０〜約１０：１の比で存在していてもよい。
【０１０６】
一実施形態では、再構成用流体は、脱イオン水中に約０．０１重量％〜約４重量％の界面活性剤と、約０．０１重量％〜約４重量％の吸湿性賦形剤とを含むことができる。別の実施形態では、再構成用流体は、脱イオン水中に約０．０１重量％〜約４重量％の界面活性剤と、約０．０１重量％〜約４重量％の増量剤とを含むことができる。さらなる実施形態では、再構成用流体は、脱イオン水中に、約０．０１重量％〜約４重量％の吸湿性賦形剤と、約０．０１重量％〜約４重量％の増量剤とを含むことができる。さらに別の実施形態では、再構成用流体は、脱イオン水中に約０．０１重量％〜約４重量％の界面活性剤と、約０．０１重量％〜約４重量％の吸湿剤と、約０．０１重量％〜約４重量％の増量剤を含むことができる。
【０１０７】
本開示は、本組成物を外科的切開および切除部位を含む皮膚創傷に塗布して、創傷の治癒過程を改善し、よって、肥厚性瘢痕化およびケロイド瘢痕化を含む瘢痕化の発生を予防または減少させ、かつ瘢痕化の影響を防止または減少させることができる各種治療方法も提供する。本開示の組成物の塗布は、治療部位の性質に応じて異なってもよく、局所塗布ならびに創傷の近くの（すなわち、創傷の片側に沿っているか創傷を部分的もしくは完全に取り囲む）皮膚または皮下組織などへの注射を含むことができる。注射を使用する場合、本組成物は、既に上に記載したように、細いゲージ針（例えば、２３ゲージ、２５ゲージまたは２７ゲージなど）を通した注射に特に適し得る。本組成物の塗布に加えて、本方法は、縫合糸、ステープル、接着剤およびそれらの組み合わせからなる群から選択される閉鎖物などを用いて創傷を閉鎖する工程も含むことができる。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、本方法は、皮膚の切創や熱傷などの不慮の創傷または慢性創傷への塗布を包含することができる。他の実施形態では、本方法は、外科的切開などの外科手術で形成された創傷への塗布を包含することができる。具体的には、手術創傷は、以前から存在する瘢痕（例えば、肥厚性瘢痕、ケロイド瘢痕または熱傷に関連した瘢痕）の切除後に残った創傷であってもよい。
【０１０９】
具体的な実施形態では、本開示の方法は、皮膚のケロイドまたは肥厚性瘢痕（あるいは熱傷に関連した瘢痕などの他の種類の瘢痕）の修復方法を含むことができる。肥厚性瘢痕は、コラーゲンの過剰生成により生じた盛り上がった瘢痕として特徴づけてもよい。ケロイドを、大きな肥厚性腫瘤または軟部組織腫瘍を生じさせる良性の線維性増殖として特徴づけてもよい。そのような修復方法は、切除部位（すなわち、組織が外科的に除去された部位）を形成するために瘢痕組織の少なくとも一部を切除する工程を含むことができる。本方法は、本明細書に記載されているマトリックス組成物を皮膚または皮下組織および／または切除部位の周囲に塗布する工程をさらに含むことができる。従って、本組成物を切除部位内の露出された組織に直接塗布することができ、かつ／または本組成物を、上記のように周囲組織に注射することができる。
【０１１０】
塗布される本組成物の量は、治療領域の寸法に応じて変えることができる。いくつかの実施形態では、水和組成物を創傷の寸法に対する体積で塗布することができる。例えば、相対体積は、創縁（すなわち、切開の各側）を基準にすることができる。いくつかの実施形態では、総塗布体積は、約０．１ｍＬ〜約１００ｍＬ、約０．５ｍＬ〜約７５ｍＬまたは約１ｍＬ〜約５０ｍＬの量であってもよい。他の実施形態では、水和組成物を、２．５ｃｍの創縁当たり約０．１ｍＬ〜約１０ｍＬ、２．５ｃｍの創縁当たり約０．２ｍＬ〜約８ｍＬ、２．５ｃｍの創縁当たり約０．２５ｍＬ〜約６ｍＬまたは２．５ｃｍの創縁当たり約０．５ｍＬ〜約４ｍＬの相対体積で塗布することができる。本方法は、１つ以上の閉鎖物により切除部位を閉鎖する工程をさらに含むことができる。例えば、閉鎖物は、ステープル、縫合糸および接着剤を含むことができる。各種実施形態では、本組成物を、閉鎖前および／または閉鎖後に注射することができる。
【０１１１】
大きな瘢痕は、痛みまたは不快感を引き起こすことがあり、社会不安症または気おくれの原因になり得る。本開示に係る手術瘢痕の修復は、以前から存在する瘢痕を除去することができるだけでなく、瘢痕の再発を予防または減少させることができるという点で特に有利であり得る。この分野では、以前は肥厚性瘢痕化またはケロイド形成を生じやすかった患者は、修復外科手術後であっても同様の大きさおよび性質の瘢痕の再発を経験する可能性が高いと認識されている。研究により、再発は少なくとも５０％の修復手術、典型的にはそれ以上の修復手術で認められることが分かっている。本開示の組成物を手術修復と組み合わせて使用することにより、この問題を大きく減らすことができる。その有利な効果は、正常な皮膚の境界層の外側に形成される瘢痕組織の体積に関して特に認めることができる。瘢痕体積の評価については、特に実施例１２に記載されている。具体的な実施形態では、修復外科手術前の瘢痕組織体積に対して、本マトリックス組成物の塗布と併用される修復外科手術から１２ヶ月後に存在する瘢痕組織体積は、約１５％以下である。言い換えると、本明細書に記載されている修復方法により、外側瘢痕体積を８５％以上減少させることができる。さらなる実施形態では、修復手術から１２ヶ月後の相対的外側瘢痕体積は、１０％以下、５％以下または２％以下であってもよい。
【０１１２】
本組成物の開示されている使用は、治療から１２ヶ月後の時点で測定可能な盛り上がった瘢痕組織が生じないように、治療によりケロイド形成の再発を同様に予防または減少させることができる。例えば、治療から１２ヶ月後における再発率の低下は、測定可能な盛り上がった瘢痕組織を経験していない治療患者の２０％以下、１５％以下、１０％以下または５％以下であってもよい。
【０１１３】
本開示に係る本組成物の治療および使用を、瘢痕化の影響に関してさらに特徴づけることができる。従って、本組成物の使用および塗布により、肥厚性瘢痕化およびケロイド形成を含む瘢痕化を予防または減少させることができるだけでなく、本組成物の使用および塗布により、瘢痕化の影響を防止または減少させ、よって、形成されたあらゆる瘢痕組織に関連する患者の不快感および／または不満を防止または減少させることができる。例えば、防止または減少させることができる瘢痕の影響としては、瘢痕組織および／または周囲組織の痛み、痒み、変色、対象の正常な皮膚組織に対する瘢痕組織または周囲組織の異常な硬直、対象の正常な皮膚組織に対する瘢痕組織または周囲組織の異常な肥大、および瘢痕組織または周囲組織の表面の凹凸（例えば、ざらつき、むら）のうちの１つ以上が挙げられる。
【０１１４】
別記の実施例と併せた上の記載は、術後瘢痕化、肥厚性瘢痕化、熱傷瘢痕化および／またはケロイド形成を減少または予防するための創傷部位（慢性、外傷性または手術創傷）の治療に有用な相制御可能なマトリックス組成物の調製に必要な開示要求を満たしていると考えられる。本開示との組み合わせにおいて有用になり得る組成物のさらなる例示的な材料および調製方法は、米国特許第５，８２４，３３１号、米国特許第６，２３１，８８１号、米国特許第６，２６１，５８７号、米国特許第６，３５２，７０７号、米国特許第６，７１３，０７９号、米国特許第６，９９２，０６２号、米国特許第６，７３０，３１５号、米国特許第７，３０３，８１４号、米国特許第７，７００，６６０号、米国特許第７，７９９，７６７号、米国特許第８，０５３，４２３号、米国特許出願公開第２００８／０１４５４０４号、米国特許出願公開第２００８／０１４５４０４号、米国特許出願公開第２００８／０１９９５０８号、米国特許出願公開第２００９／０１２３５４７号および米国特許出願公開第２００９／０１２４５５２号に提供されている。上記全ての文献の開示内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１５】
さらなる実施形態では、本開示は、ヒドロゲル組成物の形成に使用される材料の組み合わせの提供および／または瘢痕修復治療または瘢痕予防治療などの、皮膚創傷、例えば急性皮膚創傷の治療におけるヒドロゲル組成物の使用に適したキットまたは他の製品も提供する。特定の実施形態では、本開示に係る物品は、複数のアイテムをその中に保持するのに適した包装部材を含むことができる。例示的な包装部材は、ケース、箱、熱成形物品（例えば、ブリスターパックまたは発泡パック）などであってもよい。
【０１１６】
本開示に係る物品は、本ヒドロゲル組成物を形成するのに有用な２種以上の材料を含む第１の容器および第２の容器をさらに含むことができる。例えば、第１の容器は、別途本明細書に記載されている凍結乾燥した組成物を含んでもよい。例示的な一実施形態では、凍結乾燥した組成物は、ゼラチンおよび高分子炭水化物ならびに凍結乾燥した組成物を提供するために処理された最初に形成されたヒドロゲルからのあらゆる残留成分を含んでもよい。
【０１１７】
さらなる例としては、第２の容器は、再構成用材料を含んでもよい。そのような再構成用材料としては、凍結乾燥したヒドロゲル組成物の再構成に利用することができる別途本明細書に記載されているあらゆる材料を挙げることができる。例えば、再構成用材料は、再構成用流体、特に水性流体を含んでもよい。再構成用材料は、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤などの、凍結乾燥した組成物の再構成を向上させるのに有利な本明細書に記載されている１種以上の添加剤を含んでもよい。そのような添加剤の１種以上が、凍結乾燥した組成物と共に残留物として第１の容器に存在していてもよい。
【０１１８】
当該物品は、凍結乾燥した組成物の再構成に関する使用説明書をさらに含んでもよい。そのような使用説明書は、特に医療提供者、特に外科医に対するものであってもよく、皮膚創傷治療、特に瘢痕修復および／または瘢痕予防もしくは減少において有効性を示す再構成したヒドロゲルを達成するための第１および第２の容器の内容物の混合工程の方法を定義してもよい。使用説明書は、脱イオン水などの水性流体の第１および第２の容器の一方または両方への添加についての詳細を含んでもよく、そのような脱イオン水をそれぞれのキットと共に含めても含めてなくてもよい。
【０１１９】
当該物品は、第１の容器の内容物の第２の容器への無菌移動および第２の容器の内容物の第１の容器への無菌移動の一方または両方に適したコネクタをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、第１の容器および第２の容器のうちの少なくとも１つは注射器であってもよい。一例として、第１の容器および第２の容器を互いに、またはさらなる装置に取り付けるためのルアーコネクタを含めてもよい。他の実施形態では、当該物品は、注射器への取り付けに適した針を含んでもよい。従って、これらの容器の内容物を１つにまとめて本ヒドロゲルを形成してもよく、次いで、提供される物品またはキットに含まれていない混合装置を必要とすることなく、これを皮膚創傷に直接塗布することができる。いくつかの実施形態では、組織外傷を制限するために特に皮膚の治療箇所に合わせて寸法決めされた針を使用してもよい。例えば、針は、２３〜２７ゲージ針であってもよい。
【０１２０】
使用時に、非水性材料を可溶化および水和するため、よって、本ヒドロゲル組成物を形成するために、水性流体をこれらの容器の間を移動させるなどして、当該キット内のこれらの容器の内容物を１つにまとめることができる。例示的な一実施形態では、両方の容器が注射器であってもよく、１つの注射器の中の水性流体を他の注射器に移動させてその中で当該材料の水和を達成するように、これらの注射器をルアーコネクタで接続してもよい。本ヒドロゲル組成物を形成するために均質な混合および再構成を確実にする時間にわたって、この移動を何度も繰り返してもよい。次いで、最終的に再構成したヒドロゲルを含む注射器を、針などの適当な送達装置に取り付けて、再構成したヒドロゲル組成物を治療が望まれている皮膚創傷に塗布することができる。
【０１２１】
本開示に係るキットの例示的な実施形態は、図７に示されている。そこに示されているように、キット１０は、包装２０、第１の容器３０、第２の容器４０、２つの接続端（５３および５５）を有するコネクタ５０、針６０、および使用説明書セット７０（文字で記載されていてもデジタル形式であってもよい）を含む。第１の容器３０は、凍結乾燥したヒドロゲル組成物３５を含む注射器である。第２の容器４０も注射器であり、再構成用流体４５を含む（本明細書に記載されている１種以上の再構成用添加剤を含んでいてもよい）。さらなる容器を含めてもよい。例えば、第２の容器４０が、再構成用流体４５を含んでいてもよく、１種以上の再構成用添加剤を第３の容器に含めてもよい。
【０１２２】
本開示は、規定の仕様によりヒドロゲル組成物を達成するための複数の成分で形成された組成物を提供する。本組成物を定義するこれらの成分および仕様が別々に記載されている場合もあるが、本開示は、材料およびその達成される仕様の様々な組み合わせを包含することを意図している。さらに、各種組成物はそれぞれ、皮膚創傷の治療、特に瘢痕予防および瘢痕修復、より詳細にはケロイドの治療または予防において有用なものとして認識される。さらに、規定の仕様を有する各種組成物およびそれらの有利な使用は、本明細書に開示されている調製方法により得られる。本組成物の有用性、その製造方法、およびそれを用いた治療方法を示す本発明の特定の例示的な実施形態が以下に示されている。そのような例示的な実施形態は、例示のためのものであり、本明細書に提供されているさらなる開示によって包含され得るさらなる組成物、規定の仕様、製造方法または治療方法の範囲を限定するものとしてみなされるべきではない。
【０１２３】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンが本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、かつ本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であり、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであるように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む安定なヒドロゲル組成物を提供する。この安定なヒドロゲル組成物は、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数、より詳細には、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．２のＵＡヒドロゲル安定係数、または３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３５のＵＡヒドロゲル安定係数により定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、５Ｎの注射器プランジャー圧力および３５℃〜３９℃の温度で、５／８インチの長さの２５ゲージ針を通して注射器から押し出した場合に約１０μＬ／ｓ以上の流速により定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、３５℃〜３９℃の温度で約１．５Ｐａ−ｓ以下の粘度により定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満、より詳細には約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇの総オスモル濃度を有するものとして定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度を有するものとして定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有するものとして定義してもよい。
【０１２４】
安定なヒドロゲル組成物の上記特性は別々に列挙されているが、当然のことながら、本開示に係る有用な組成物を、上記特性のうちの１つまたは上記特性の任意の組み合わせで定義することができる。さらに、個々の特性は、別途本明細書に記載されている値範囲のいずれかの範囲内にあってもよい。例えば、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含む有用かつ安定なヒドロゲル組成物（ゼラチンが本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、かつ、本ヒドロゲル組成物は、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスである）を、
本明細書に記載されている超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数、
本明細書に記載されている流速、
本明細書に記載されている粘度、
本明細書に記載されている総オスモル濃度、
本明細書に記載されているリン酸イオン濃度、
本明細書に記載されている炭酸イオン濃度、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数および流速の両方、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数および粘度の両方、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数および総オスモル濃度の両方、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数およびリン酸イオン濃度の両方、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数および炭酸イオン濃度の両方、
本明細書に記載されている流速および粘度の両方、
本明細書に記載されている流速および総オスモル濃度の両方、
本明細書に記載されている流速およびリン酸イオン濃度の両方、
本明細書に記載されている流速および炭酸イオン濃度の両方、
本明細書に記載されている粘度および総オスモル濃度の両方、
本明細書に記載されている粘度およびリン酸イオン濃度の両方、
本明細書に記載されている粘度および炭酸イオン濃度の両方、
本明細書に記載されている総オスモル濃度およびリン酸イオン濃度の両方、
本明細書に記載されている総オスモル濃度および炭酸イオン濃度の両方、
本明細書に記載されているリン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度の両方、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速および粘度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速および総オスモル濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、粘度および総オスモル濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、粘度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、粘度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、総オスモル濃度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、総オスモル濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、粘度および総オスモル濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、粘度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、粘度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、総オスモル濃度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、総オスモル濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている粘度、総オスモル濃度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている粘度、総オスモル濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている粘度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている総オスモル濃度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、粘度および総オスモル濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、粘度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、粘度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速および総オスモル濃度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、総オスモル濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、粘度、総オスモル濃度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、粘度、総オスモル濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、粘度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、総オスモル濃度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、粘度、総オスモル濃度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、粘度、総オスモル濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、粘度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、総オスモル濃度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている粘度、総オスモル濃度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、粘度、総オスモル濃度およびリン酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、粘度、総オスモル濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、粘度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、総オスモル濃度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、粘度、総オスモル濃度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
本明細書に記載されている流速、粘度、総オスモル濃度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、ならびに
本明細書に記載されているＵＡヒドロゲル安定係数、流速、粘度、総オスモル濃度、リン酸イオン濃度および炭酸イオン濃度のうちの全て、
のうちのいずれかにおいて特徴づけることができる。
【０１２５】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数を示すように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む安定なヒドロゲル組成物を提供する。
【０１２６】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満、より詳細には約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇの総オスモル濃度を有するように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む安定なヒドロゲル組成物を提供する。この安定なヒドロゲル組成物を、約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度を有するものとして定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有するものとして定義してもよい。
【０１２７】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ、約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度および約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有するように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む安定なヒドロゲル組成物を提供する。
【０１２８】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む流動性かつ注射可能な組成物であって、本組成物は、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎなどのポリソルベート）、吸湿性賦形剤（例えば、グリセリンなどのポリオールまたはＮａＣｌなどの塩）、および増量剤（例えば、糖類、特に二糖類、デキストロースなど）からなる群から選択される２種以上の添加剤をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである組成物を提供する。この安定なヒドロゲル組成物を、５Ｎの注射器プランジャー圧力および３５℃〜３９℃の温度で、５／８インチの長さの２５ゲージ針を通して注射器から押し出した場合に約１０μＬ／ｓ以上の流速により定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、３５℃〜３９℃の温度で約１．５Ｐａ−ｓ以下の粘度により定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満、より詳細には約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇの総オスモル濃度を有するものとして定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度を有するものとして定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有するものとして定義してもよい。
【０１２９】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む流動性かつ注射可能な組成物であって、本組成物は、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎなどのポリソルベート）および吸湿性賦形剤（例えば、グリセリンなどのポリオールまたはＮａＣｌなどの塩）をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである組成物を提供する。
【０１３０】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む流動性かつ注射可能な組成物であって、本組成物は、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎなどのポリソルベート）および増量剤（例えば、糖類、特に二糖類、デキストロースなど）をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである組成物を提供する。
【０１３１】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む流動性かつ注射可能な組成物であって、本組成物は、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ吸湿性賦形剤（例えば、グリセリンなどのポリオールまたはＮａＣｌなどの塩）および増量剤（例えば、糖類、特に二糖類、デキストロースなど）をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである組成物を提供する。
【０１３２】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む流動性かつ注射可能な組成物であって、本組成物は、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎなどのポリソルベート）、吸湿性賦形剤（例えば、グリセリンなどのポリオールまたはＮａＣｌなどの塩）、および増量剤（例えば、糖類、特に二糖類、デキストロースなど）をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである組成物を提供する。
【０１３３】
一実施形態では、本開示は、流動性ヒドロゲル組成物を皮膚創傷に塗布する工程を含む、皮膚創傷により生じる皮膚の瘢痕化またはその影響を防止または減少させる方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物は、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数を示ように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む方法を提供する。塗布工程は、本ヒドロゲル組成物を皮膚または皮下組織に注射する工程を含んでもよい。この方法を特に、以前から存在する瘢痕、特にケロイド、肥厚性瘢痕または熱傷に関連した瘢痕の切除のために使用してもよい。
【０１３４】
一実施形態では、本開示は、流動性ヒドロゲル組成物を皮膚創傷に塗布する工程を含む、皮膚創傷により生じる皮膚の瘢痕化またはその影響を防止または減少させる方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満、より詳細には約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇの総オスモル濃度を有するように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む方法を提供する。この安定なヒドロゲル組成物を、約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度を有するものとして定義してもよい。この安定なヒドロゲル組成物を、約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有するものとして定義してもよい。塗布工程は、本ヒドロゲル組成物を皮膚または皮下組織に注射する工程を含んでもよい。この方法を特に、以前から存在する瘢痕、特にケロイド、肥厚性瘢痕または熱傷に関連した瘢痕の切除のために使用してもよい。
【０１３５】
一実施形態では、本開示は、流動性ヒドロゲル組成物を皮膚創傷に塗布する工程を含む、皮膚創傷により生じる皮膚の瘢痕化またはその影響を防止または減少させる方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度および約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有するように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む方法を提供する。塗布工程は、本ヒドロゲル組成物を皮膚または皮下組織に注射する工程を含んでもよい。この方法を特に、以前から存在する瘢痕、特にケロイド、肥厚性瘢痕または熱傷に関連した瘢痕の切除のために使用してもよい。
【０１３６】
一実施形態では、本開示は、流動性ヒドロゲル組成物を皮膚創傷に塗布する工程を含む、皮膚創傷により生じる皮膚の瘢痕化またはその影響を防止または減少させる方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含み、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎなどのポリソルベート）、吸湿性賦形剤（例えば、グリセリンなどのポリオールまたはＮａＣｌなどの塩）、および増量剤（例えば、糖類、特に二糖類、デキストロースなど）からなる群から選択される２種以上の添加剤をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである方法を提供する。塗布工程は、本ヒドロゲル組成物を皮膚または皮下組織に注射する工程を含んでもよい。この方法を特に、以前から存在する瘢痕、特にケロイド、肥厚性瘢痕または熱傷に関連した瘢痕の切除のために使用してもよい。
【０１３７】
一実施形態では、本開示は、流動性ヒドロゲル組成物を皮膚創傷に塗布する工程を含む、皮膚創傷により生じる皮膚の瘢痕化またはその影響を防止または減少させる方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含み、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎなどのポリソルベート）および吸湿性賦形剤（例えば、グリセリンなどのポリオールまたはＮａＣｌなどの塩）をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである方法を提供する。塗布工程は、本ヒドロゲル組成物を皮膚または皮下組織に注射する工程を含んでもよい。この方法を特に、以前から存在する瘢痕、特にケロイド、肥厚性瘢痕または熱傷に関連した瘢痕の切除のために使用してもよい。
【０１３８】
一実施形態では、本開示は、流動性ヒドロゲル組成物を皮膚創傷に塗布する工程を含む、皮膚創傷により生じる皮膚の瘢痕化またはその影響を防止または減少させる方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含み、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎなどのポリソルベート）および増量剤（例えば、糖類、特に二糖類、デキストロースなど）をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである方法を提供する。塗布工程は、本ヒドロゲル組成物を皮膚または皮下組織に注射する工程を含んでもよい。この方法を特に、以前から存在する瘢痕、特にケロイド、肥厚性瘢痕または熱傷に関連した瘢痕の切除のために使用してもよい。
【０１３９】
一実施形態では、本開示は、流動性ヒドロゲル組成物を皮膚創傷に塗布する工程を含む、皮膚創傷により生じる皮膚の瘢痕化またはその影響を防止または減少させる方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含み、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ吸湿性賦形剤（例えば、グリセリンなどのポリオールまたはＮａＣｌなどの塩）および増量剤（例えば、糖類、特に二糖類、デキストロースなど）をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである方法を提供する。塗布工程は、本ヒドロゲル組成物を皮膚または皮下組織に注射する工程を含んでもよい。この方法を特に、以前から存在する瘢痕、特にケロイド、肥厚性瘢痕または熱傷に関連した瘢痕の切除のために使用してもよい。
【０１４０】
一実施形態では、本開示は、流動性ヒドロゲル組成物を皮膚創傷に塗布する工程を含む、皮膚創傷により生じる皮膚の瘢痕化またはその影響を防止または減少させる方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含み、凍結乾燥形態から再構成したヒドロゲルであり、かつ界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎなどのポリソルベート）、吸湿性賦形剤（例えば、グリセリンなどのポリオールまたはＮａＣｌなどの塩）、および増量剤（例えば、糖類、特に二糖類、デキストロースなど）をさらに含み、ここで、ゼラチンは、再構成した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである方法を提供する。塗布工程は、本ヒドロゲル組成物を皮膚または皮下組織に注射する工程を含んでもよい。この方法を特に、以前から存在する瘢痕、特にケロイド、肥厚性瘢痕または熱傷に関連した瘢痕の切除のために使用してもよい。
【０１４１】
一実施形態では、本開示は、ケロイドの少なくとも一部を切除する工程と、流動性ヒドロゲル組成物を切除部位の少なくとも一部に塗布する工程とを含む、ケロイドの修復方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、かつ本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであるように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む方法を提供する。
【０１４２】
一実施形態では、本開示は、ケロイドの少なくとも一部を切除する工程と、流動性ヒドロゲル組成物を切除部位の少なくとも一部に塗布する工程とを含む、ケロイドの修復方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ本組成物が、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎなどのポリソルベート）、吸湿性賦形剤（例えば、グリセリンなどのポリオールまたはＮａＣｌなどの塩）、および増量剤（例えば、糖類、特に二糖類、デキストロースなど）からなる群から選択される２種以上の添加剤を含むように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む方法を提供する。
【０１４３】
一実施形態では、本開示は、ケロイドの少なくとも一部を切除する工程と、流動性ヒドロゲル組成物を切除部位の少なくとも一部に塗布する工程とを含む、ケロイドの修復方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ本組成物が、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数を示すように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む方法を提供する。
【０１４４】
一実施形態では、本開示は、ケロイドの少なくとも一部を切除する工程と、流動性ヒドロゲル組成物を切除部位の少なくとも一部に塗布する工程とを含む、ケロイドの修復方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ本組成物が、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満、より詳細には約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇの総オスモル濃度を有するように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む方法を提供する。
【０１４５】
一実施形態では、本開示は、ケロイドの少なくとも一部を切除する工程と、流動性ヒドロゲル組成物を切除部位の少なくとも一部に塗布する工程とを含む、ケロイドの修復方法であって、ここで、流動性ヒドロゲル組成物は、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、本組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであり、本ヒドロゲル組成物が、３５℃以上の温度で流動性かつ注射可能な液体であって、より低い温度で固体または半固体ゲルマトリックスであり、かつ本組成物が、約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度および約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有するように組み合わせられたゼラチンおよび高分子炭水化物（例えば、デキストラン）を含む方法を提供する。
【０１４６】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を水性媒体中で第１の温度で混合して、ゼラチンが本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する液体ヒドロゲル組成物を形成する工程と、液体ヒドロゲル組成物を絶えず混合しながら、第１の温度よりも低く、かつ液体ヒドロゲル組成物が固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移するゲル化温度よりも高い保持温度まで冷却する工程と、液体ヒドロゲル組成物をゲル化温度までさらに冷却して液体ヒドロゲル組成物を、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．４の超音波減衰（ＵＡ）ヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および２〜８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも６００分で０．５のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および２．７ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３のＵＡヒドロゲル安定係数、３５℃の温度および５．１ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．２のＵＡヒドロゲル安定係数、または３５℃の温度および７．８ＭＨｚの周波数で試験した場合に少なくとも５００分で０．３５のＵＡヒドロゲル安定係数を示す安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移させる工程とを含む、安定なヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【０１４７】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を水性媒体中で第１の温度で混合して、ゼラチンが本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する液体ヒドロゲル組成物を形成する工程と、液体ヒドロゲル組成物を絶えず混合しながら第１の温度よりも少なくとも約５℃低く、かつ、液体ヒドロゲル組成物が固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移するゲル化温度の約７℃以内である保持温度まで冷却する工程と、液体ヒドロゲル組成物をゲル化温度までさらに冷却して液体ヒドロゲル組成物を安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移させる工程とを含む、安定なヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【０１４８】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を水性媒体中で第１の温度で混合して、ゼラチンが本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ安定なヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである液体ヒドロゲル組成物を形成する工程と、液体ヒドロゲル組成物を絶えず混合しながら第１の温度よりも少なくとも約５℃低く、かつ、液体ヒドロゲル組成物が固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移するゲル化温度の約７℃以内である保持温度まで冷却する工程と、液体ヒドロゲル組成物をゲル化温度までさらに冷却して液体ヒドロゲル組成物を安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移させる工程とを含み、ここで、ゲル化温度までさらに冷却する工程を約２時間未満の時間で行う、安定なヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【０１４９】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ未満のオスモル濃度（例えば、約２５ｍＯｓｍ／ｋｇ〜約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇ）を有する水性媒体中で第１の温度で混合して、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ安定なヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである液体ヒドロゲル組成物を形成する工程と、液体ヒドロゲル組成物を絶えず混合しながら、第１の温度よりも低く、かつ液体ヒドロゲル組成物が固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移するゲル化温度よりも高い保持温度まで冷却する工程と、液体ヒドロゲル組成物をゲル化温度までさらに冷却して液体ヒドロゲル組成物を安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移させる工程とを含む、安定なヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【０１５０】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を約２０ｍＭ以下のリン酸イオン濃度および約２０ｍＭ以下の炭酸イオン濃度を有する水性媒体中で第１の温度で混合して、ゼラチンが、本組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成し、かつ安定なヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬである液体ヒドロゲル組成物を形成する工程と、液体ヒドロゲル組成物を絶えず混合しながら、第１の温度よりも低く、かつ液体ヒドロゲル組成物が固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移するゲル化温度よりも高い保持温度まで冷却する工程と、液体ヒドロゲル組成物をゲル化温度までさらに冷却して液体ヒドロゲル組成物を安定な固体または半固体ヒドロゲル組成物に転移させる工程とを含む、安定なヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【０１５１】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を用意する工程と、再構成したヒドロゲル組成物が、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤を含み、かつ再構成したヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであるように、凍結乾燥した組成物を水性の再構成用流体で再構成して本ヒドロゲル組成物を形成する工程とを含み、凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の界面活性剤を含む、ヒドロゲル組成物の調製を提供する。
【０１５２】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を用意する工程と、再構成したヒドロゲル組成物が、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤を含み、かつ再構成したヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであるように、凍結乾燥した組成物を水性の再構成用流体で再構成して本ヒドロゲル組成物を形成する工程とを含み、凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の吸湿性賦形剤を含む、ヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【０１５３】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を用意する工程と、再構成したヒドロゲル組成物が、界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤からなる群から選択される２種以上の添加剤を含み、かつ再構成したヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであるように、凍結乾燥した組成物を水性の再構成用流体で再構成して本ヒドロゲル組成物を形成する工程とを含み、凍結乾燥した組成物に接触する水性の再構成用流体は、約０．０１重量％〜約４重量％の増量剤を含む、ヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【０１５４】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を用意する工程と、再構成したヒドロゲル組成物が、ｉ）界面活性剤および吸湿性賦形剤、ｉｉ）界面活性剤および増量剤、ｉｉｉ）吸湿性賦形剤および増量剤、ならびに、ｉｖ）界面活性剤、吸湿性賦形剤および増量剤のうちのいずれかを含み、かつ再構成したヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであるように、凍結乾燥した組成物を水性の再構成用流体で再構成して本ヒドロゲル組成物を形成する工程とを含む、ヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【０１５５】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を用意する工程と、再構成したヒドロゲル組成物が、ｉ）ポリソルベートおよびポリオール、ｉｉ）ポリソルベートおよび塩、ｉｉｉ）ポリソルベートおよび糖、ｉｖ）ポリオールおよび糖、ｖ）塩および糖、ｖｉ）ポリソルベート、ポリオールおよび糖、ならびにｖｉｉ）ポリソルベート、塩および糖のうちのいずれか含み、かつ再構成したヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであるように、凍結乾燥した組成物を水性の再構成用流体で再構成して本ヒドロゲル組成物を形成する工程とを含む、ヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【０１５６】
一実施形態では、本開示は、ゼラチンおよび高分子炭水化物を含み、かつゼラチンが凍結乾燥した組成物中に存在するゼラチンおよび高分子炭水化物の組み合わせの総重量の約６０重量％以上を構成する凍結乾燥した組成物を用意する工程と、再構成したヒドロゲル組成物が、ｉ）Ｔｗｅｅｎおよびグリセリン、ｉｉ）ＴｗｅｅｎおよびＮａＣｌ、ｉｉｉ）Ｔｗｅｅｎおよび二糖類、ｉｖ）グリセリンおよび二糖類、ｖ）ＮａＣｌおよび二糖類、ｖｉ）Ｔｗｅｅｎ、グリセリンおよび二糖類、ならびにｖｉｉ）Ｔｗｅｅｎ、ＮａＣｌおよび二糖類のうちのいずれかを含み、かつ再構成したヒドロゲル組成物中のゼラチンおよび高分子炭水化物の総濃度が約５０ｍｇ／ｍＬ〜約４００ｍｇ／ｍＬであるように、凍結乾燥した組成物を水性の再構成用流体で再構成して本ヒドロゲル組成物を形成する工程とを含む、ヒドロゲル組成物の調製方法を提供する。
【実施例】
【０１５７】
以下、本発明を以下の実施例によって、より完全に示すが、これらは、本発明の実施形態を示すために記載されており、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【０１５８】
実施例１：ゼラチン／デキストラン組成物の調製
液体を均質な状態に維持するように混合しながら液体および粉末状原料（表１）を特定の時点および高温で連続的に添加して、本開示の一実施形態に係る組成物を調製した。次いで、この溶液を無菌濾過し、バイアルに無菌的に分注し、密閉し、冷蔵温度で貯蔵した。
【表１】
2016518391.tif 000006
【０１５９】
デキストロースおよび媒体１９９（１．１７ｍＭのリン酸イオン濃度を有する）を計量し、予め加熱したウォータージャケット付き（５０℃）ガラス容器に移し、撹拌子を用いて混合した。この混合物を５０℃まで平衡化させ、その後、Ｌ−システイン、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−リジンおよびＥＤＴＡ二ナトリウムを、媒体１９９を含む容器に分注した。平衡時間後に、デキストラン粉末を添加し、これらの成分を混合した。デキストランが溶液に溶け込んだように見えたら、ゼラチンをこの容器に添加し、溶解させた。ゼラチンが溶液に溶け込んだように見えたら、ｐＨを７．４５＋／−０．０５に調整した。ＰＨ調整による平衡化後に、残りのＬ−グルタミン酸、アルギニンおよびＬ−システインを、硫酸亜鉛と共にこの溶液の中に撹拌した。総混合時間は約２時間であった。
【０１６０】
５０℃での平衡化後に、無菌充填工程前の待機のために、この溶液を混合容器から、加熱した０．２μｍの正電荷を持たせた医薬品グレードナイロンフィルタを通して４０℃の撹拌容器に汲み出して、この溶液を濾過滅菌した。約３０分かけて濾過を行った。この溶液を濾過した後、これを４０℃に維持して混合し続けながら、バイアルの中に１２ｍｌの分割量で無菌的に分注した。その後、これらのバイアルに栓をし、密閉し、クリンプし、目視検査し、ラベルを貼り、次いで、冷蔵（２〜８℃）で貯蔵した。生成収率は約１５０個のバイアルであった。本組成物の分注は、約１時間かけて行った。
【０１６１】
実施例２：リン酸緩衝液を用いたゼラチン／デキストラン組成物の調製
液体を均質な状態に維持するように混合しながら、液体および粉末状原料（表２）を高温で連続的に添加して組成物を調製した。
【表２】
2016518391.tif 000007
【０１６２】
実施例１の組成物とは異なり、６５ｍＭのリン酸イオン濃度を有するリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を用いて、本組成物の製剤を調製した。さらに、本実施例では、Ｌ−アラニル−Ｌ−グルタミンまたは５０％デキストロースを添加しなかった。具体的には、最初に２，２８２ｍＬのＰＢＳを予め加熱したウォータージャケット付き（５０℃）ガラス容器に入れ、撹拌子を用いて混合して、本実施例の組成物を調製した。この混合物を５０℃まで平衡化させ、その後、３７５μＬのＬ−システイン、６．９ｍＬのＬ−グルタミン酸、１３．８ｍＬのＬ−リジンおよび２４．２ｍＬのＥＤＴＡ二ナトリウムを、ＰＢＳを含む容器に分注した。平衡時間後に、１３７．５ｇのデキストラン粉末を添加し、これらの成分を混合した。このデキストランが溶液に溶け込んだように見えたら、３３０ｇのゼラチンをこの容器に添加し、溶解させた。このゼラチンが溶液に溶け込んだように見えたら、１０％水酸化ナトリウムを添加して、ｐＨを７．４５＋／−０．０５に調整した。ＰＨ調整による平衡化後に、２０．６ｍＬのＬ−グルタミン酸、２０．６ｍＬのアルギニン、１３．８ｍＬの硫酸亜鉛および６．５ｍＬのＬ−システインを溶液の中に撹拌した。その後、バイアルに栓をし、密閉し、クリンプし、目視で検査し、ラベルを貼り、次いで、冷蔵（２〜８℃）で貯蔵した。総混合時間は、約２時間であった。
【０１６３】
実施例３：組成物の熱的特性
実施例１および実施例２に係る組成物の熱的特性を示差走査熱量測定（ＤＳＣ）で調べた。実施例１および実施例２に係る組成物の試料を５℃で６０分間温置し、次いで、５℃で開始し４５℃の温度で終了する１分当たり５℃の走査速度のＤＳＣ試験に供した。代表的なサーモグラムおよび熱転移エンタルピーから、これらの熱的特性を評価した。３５〜３７℃の範囲の転移ピークにより、固体の組成物の液体への融解転移が観察された。本組成物の代表的なサーモグラムは、図１に示されている。
【０１６４】
実施例４：組成物の流動性／注射可能性
６０％ゼラチンおよび４０％デキストランからなる組成物を、５０℃に加熱したＴｒｉｓ緩衝食塩水（ＴＢＳ）中に０．２ｇ／ｍｌの最終固体濃度になるまで可溶化させた。得られた組成物を４ｍｌの試料に分けて、２０ｍｌのバイアルに入れ、試料を含むバイアルを４℃で貯蔵した。流動性を評価するために、本組成物を含むバイアルを貯蔵庫から取り出し、室温に置いた。次いで、このバイアルを３９℃の加熱器(Lab-line Multiblock Heater)に入れ、本組成物が固体から流動性液体に転移するまで監視した。この液体組成物を１ｍｌの注射器に入れ、使い捨ての無菌皮下注射に関する国際ガイダンス（ＩＳＯ７８８６−１を参照）により１ｍｌの注射器に対して推奨される力である５Ｎのプランジャー力に設定した流体分注システム（１５００ＸＬ、Ｎｏｒｄｓｏｎ／ＥＦＤ社）に取り付けた。約１６ｍｍ（５／８インチ）の長さの２５ゲージ針（０．２６ｍｍの名目上の内径）を取り付け、１ｍＬの組成物がこの針を通過した時間を記録した。約３９℃の温度でこの針を通して注射を行った。本組成物は、流体を吸引するか充填後すぐに流体を注射することを目的としたプラスチック製の無菌の使い捨て皮下注射器に対する要件（性能を含む）を指定するＩＳＯ７８８６−１に準拠した、細いゲージ針を通した注射による投与に対する条件を満たしていた。
【０１６５】
細いゲージ針を通した注射への適合性を評価するために本組成物の固体含有量を調べて、表３に示すように本組成物中のデキストランおよびゼラチンの総高分子化合物含有量を変えた。高分子化合物を、５０℃で１５ｍｌの円錐管の中でゆっくり混合しながら、１０ｍＬのＨＥＰＥＳ緩衝食塩水（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、０．１３８ＭのＮａＣｌおよび０．００２７ＭのＫＣｌ）に可溶化させた。
【表３】
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【０１６６】
調製後に、試料を冷却した。上記試験方法を用いて、試料を３９℃の加熱ブロックに入れて、１インチ（２２．５ｍｍ）の長さの２５ゲージおよび２３ゲージ針を通して１ｍｌを注射した。注射速度について、各試料を各サイズの針を通して少なくとも３回試験した。この針を通して最小の０．５ｍｌを注射することができなかった場合、試験は失敗であり、注射が成功するまで試料を加熱し続けた。注射試験の結果を表４に示す。
【表４】
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【０１６７】
注射可能性ついて試験した製剤を、注射を可能にする最大粘度を決定するために粘度について特徴づけた。注射可能性について試験される同じ比のゼラチン：デキストランを用いた試料製剤を、先に記載したように、ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中に各種総高分子化合物含有量で調製した。これらの試料を５０℃で予め調整し、試験のためにクェット型のRheometrics Scientific社製ＲＦＳＩＩレオメーターに充填した。粘度が平衡測定値に安定するまで、３９℃で新たに負荷した試料を用いて複数回の測定を行った。最大１０００ｓ−１のせん断速度範囲を試験したが、各試料のせん断速度範囲をレオメーターのトルク範囲に調整した。せん断速度範囲は、高濃度の試料では低下した。
【０１６８】
１９０〜３８０ｍｇ／ｍＬの総高分子化合物の試料は、ニュートン粘性応答を示した。より高濃度の試料は、僅かに直線的でない粘性応答を示したが、標準的な線形回帰分析による特性評価には適していた。粘度の結果を表５にまとめた。０．４５６５Ｐａ−ｓよりも高い製剤粘度は、２５ゲージ針を通した注射には適していなかった。２３ゲージ針を通して、最大１．１６１８Ｐａ−ｓの粘度が注射可能であった。
【表５】
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【０１６９】
実施例５：組成物のフィブロネクチン結合活性
実施例１の組成物を、ゼラチンのフィブロネクチン結合活性に関して評価した。本アッセイは、直接ＥＬＩＳＡ結合形式に従い、ここでは、試験材料をマイクロタイタープレートのウェル表面に固定化させてフルオレセイン化ヒト血漿フィブロネクチンを結合させ、捕捉されたタグ付きフィブロネクチンの蛍光の直接測定を可能にした。このアッセイでは、実施例１の組成物を（３９℃で３０分間の温置により）完全に融解させ、ｐＨ９．６の緩衝液で希釈して、１〜１０μｇ／ｍＬの範囲の最終ゼラチン濃度を得、蛍光測定に最適な不透明の高結合９６ウェルプレートのウェルを被覆した。プレートを３９℃で１時間温置することにより、本組成物中に使用したゼラチンをウェル表面に非可逆的に固定化させた。過剰な非結合材料および緩衝液を除去し、１ＭのＮａＣｌ（洗浄緩衝液）を含むＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）でプレートを３回洗浄した。非特異的結合部位を３％のミルクを含むＰＢＳ（ブロッキング剤）により、室温で３０分間ブロックした。過剰な緩衝液を除去し、先に行ったように、プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した。次いで、フィブロネクチン１分子当たり１〜５個のフルオレセイン分子に結合させ、ブロッキング剤で４５μｇ／ｍＬの最終濃度まで希釈したヒトの血漿フィブロネクチンを、プレートウェルに添加した。プレートに蓋をし、それを穏やかに室温で２時間回転させて、暗所で最大限結合させた。過剰なフルオレセイン化フィブロネクチンを除去し、先に行ったように、プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した。ＰＢＳ（１００μＬ）を各ウェルに添加し、４８５ｎｍの励起波長および５３０ｎｍの発光波長を用いて、プレートリーダーで蛍光を記録した。プレートを数回読み取り、データを平均した。
【０１７０】
試料および標準物質の両方を二度測定した。本組成物で使用されるゼラチン原料を７種類の濃度（表６を参照）で試験して標準曲線を生成した。本組成物の試料を４種類の希釈濃度で試験した。線形回帰による標準物質の範囲から、各試料中のゼラチン濃度を決定した。
【表６】
2016518391.tif 000011
【０１７１】
本組成物のフィブロネクチン結合含有量を比較するために、タンパク質含有量も測定し、それを使用して各試料のフィブロネクチン結合部位の量を正規化した。製造業者の使用説明書に従って、比色分析ビシンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイ（Pierce Biochemical Micro BCAタンパク質アッセイキット、＃２３２３５）でタンパク質濃度を測定した。簡単に言うと、ＰＢＳ（ｐＨ７．４、Ｓｉｇｍａ社Ｐ５３６８）を用いて、ゼラチン原料を１．５６〜１００μｇ／ｍＬの２倍希釈濃度で調製した。試料（典型的にはＰＢＳ中に５ｍｇ／ｍＬの開始濃度）をＰＢＳ中に２５〜５０μｇ／ｍＬに希釈した（５〜１０μＬのタンパク質（０．５ｍｇ／ｍＬ）および９０〜９５μＬのＰＢＳ）。１００μＬの試料を１００μＬのＢＣＡ使用試薬と混合し（２５：２４：１＝ＭＡ：ＭＢ：ＭＣ試薬）、かつプレートを３７〜３９℃の乾燥器中で１５〜３０分間穏やかに回転させて、ＵＶ／Ｖｉｓ吸光度測定にとって最適な透明９６ウェルプレートで反応を行い、タンパク質含有量を示す紫色を発色させた。次いで、各反応の５６２ｎｍでの吸光度を分光測光プレートリーダー（Spectramax M5、Molecular Devices社）で記録した。試料および標準物質の両方の各濃度の測定を２回行い、それを平均した。
【０１７２】
表７は、実施例１で調製した組成物の小さい番号および大きい番号のバイアルについてタンパク質（ｍｇ／ｍＬ）に対するフィブロネクチンの比を比較することにより、タンパク質濃度に正規化されたフィブロネクチン結合部位の測定濃度を示す。最初にこれらの試料を３９℃（１時間）で融解させ、ＰＢＳで５ｍｇ／ｍＬに希釈した。次いで、これらの試料を３９℃で３０分間融解させて、ゼラチンを完全に溶解した後、フィブロネクチン結合およびＢＣＡタンパク質アッセイの両方のために、それらをさらにＰＢＳで０．５ｍｇ／ｍＬまで希釈した。
【表７】
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【０１７３】
その試験結果から、ゼラチン原料が顕著なフィブロネクチン結合活性を示していることが分かる。フィブロネクチン結合特性は、生成中に早期に回収したバイアル（バイアル＃８）ならびに生成の終わり近くに回収したバイアル（＃１４４）の両方に由来する本開示の組成物に保持されている。
【０１７４】
実施例６：組成物の物理的性質
溶解アッセイを使用して、創傷における滞留時間の尺度として、生理溶液への可溶化（溶解）による完全性の喪失に対する組成物抵抗性を測定した。このアッセイは、シミュレートされた皮膚環境における小体積の試験用に修正された、米国薬局方（ＵＳＰ）ＸＸＩＩＩ（１９９５年）の１７９１〜１７９３頁に準拠した標準的な溶解試験に基づいていた。このアッセイにより、２０ｍＬのバイアル中に３ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）当たり１つの円盤を、３４℃の乾燥器中で穏やかに（２００〜２５０ｒｐｍ）に回転させるという一連の規定条件下で、本組成物の試料円盤の３４℃の皮膚温度における完全溶解の総時間（単位：分）を測定した。
【０１７５】
鋳造円盤を形成するために、実施例１に係る組成物を含むバイアルを３５℃で１．５時間融解させ、１０〜１５回バイアルを回転させながら反転させて混合した。融解させた組成物を１ｍＬの分割量で取り出して、ポリプロピレン型の６〜１２個の円形のウェル（８ｍｍの直径および１．５ｍｍの高さの円盤）に充填し、薄いゴムマットにより平らな金属プレートにしっかりと密封した。これらの円盤を放置して冷却し、室温で３０分間ゲルを形成した後、それらを型から取り出し、予め重量を測定した蓋付きの管に貯蔵した。識別のために円盤の重量（７０〜１００ｍｇの典型的な範囲）を決定した。円盤を合計１〜２時間放置して室温に設定した後、これらを試験した。本組成物を含むバイアルごとに、最小の気泡を含む３つの円盤を完全溶解試験のために選択した。各円盤を３４℃に予め温めた３ｍＬのＰＢＳに添加し、３４℃の乾燥器の中の回転プラットフォーム上に置いた。各試験で、バイアルを５〜１５分ごとに目視検査で同時に監視した。完全な円盤であるこれらの試料が、その材料が表面で可溶化されるにつれて試験中にゆっくりと小さくなっていく様子が観察された。試料の観察を迅速に行って、これらの試料における温度変化を最小限に抑えた。各円盤の完全溶解時間を記録した（図２を参照）。
【０１７６】
本組成物から鋳造した円柱状の試験試料の機械的試験により、本組成物の圧縮強度も調べた。試験は、小さいヒドロゲル試料を試験するために修正された、圧縮時のゴム特性を調べるためのASTM D575-91(2007)試験方法に記載されている、圧縮による機械的試験に基づいていた。鋳造された試料円柱体を形成するために、本組成物を含むバイアルを３５℃で１．５時間融解させ、１０〜１５回バイアルを回転させながら反転させて混合した。融解させた組成物を１ｍＬの分割量で取り出して、１５個のウェルを含むデルリン製の型の各円形のウェル（１ｃｍの直径および１ｃｍの高さの円柱体）を過剰充填せずに完全に充填し、薄いゴムマットにより平らな金属プレートにしっかりと密封した。５つの円柱体を各バイアルから鋳造した。
【０１７７】
これらの型を１．５時間放置して室温に設定し、これらの試料を型から穏やかに取り出した。識別のために円柱体の重量を測り（範囲：０．７〜１ｇ）、合計１〜４時間放置して室温に設定した後、それらを試験した。次いで、各円柱体をプラスチック製の円柱状ホルダー（１．５ｃｍの直径および１．５ｃｍの高さ）内に置き、平針（１ｃｍの直径および１０ｍｍの高さの頭部を有する）で圧縮し、機械的試験機（インストロン試験機モデル５５４２）の変換器にきつく固定した。３ｍｍ／分の速度で５ニュートンの負荷セルを用いて、インストロン試験機で圧縮弾性率を測定した。インストロン試験機で計算した各円柱体を圧縮するための圧縮弾性率値を自動圧縮弾性率値（単位：ｋＰａ）として報告した。バイアルごとに３〜４つの円柱体を測定した。円柱体ごとに、３〜４つの連続する一貫した値を平均した。インストロン機器により、最大の圧縮加重（ｇｆ）および最大の圧縮加重値における圧縮応力（ｋＰａ）も測定した。実施例１の組成物を含むバイアルの試験結果から、図２に示されているように、バッチプロセス中に後で製造された大きな番号のバイアルから、より大きな物理的性質が示された。
【０１７８】
実施例７：組成物の化学量論量
好適な製剤の化学量論量を調べるために、各種量のゼラチン（Gelita USA社、Ａタイプのブタのゼラチン）およびデキストラン（Sigma Aldrich社、５００，０００ＭＷのデキストラン）の重量を測り、５ｍＬのスナップキャップ管の中で１つにまとめ、２ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．４）を添加した。２００ｍｇ／ｍｌおよび２３０ｍｇ／ｍｌの総高分子化合物重量（ゼラチン＋デキストラン）を有する試料を調製し、試験した。これらの試料を簡単にボルテックス混合した後、一晩温置した。全ての試料を５０℃の乾燥器内で約１９時間、８ｒｐｍで穏やかに一晩回転させた。その際、これらの試料は、均質な流動性の組成物を示した。本組成物を溶解試験のために使用される型の中に入れて、組成物ごとに６〜９つの円盤を鋳造し、３０分間放置して室温に設定した。型から外した円盤（組成物ごとに３つ）をさらに１．５時間放置して室温に設定した。３４℃で穏やかに回転させながら各円盤を３ｍＬのＰＢＳに曝露した状態で、試験組成物ごとに３つの円盤試料を用いて、実施例６に記載されているように、試料円盤を物理的完全性について溶解アッセイで試験した。円盤試料を物理的完全性について１５分ごとに監視した。
【０１７９】
表８の溶解の結果から、両高分子化合物の濃度に対して６０重量％以下のゼラチンを含む試料では、物理的完全性の欠如が示されている。６０重量％超のゼラチンを含む試料は、生理的ｐＨおよびイオン強度で試験した場合に、およそ同じ量の溶解抵抗性を示した。
【表８】
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【０１８０】
第２の実験では、先の実験のゼラチンおよびデキストランを、６０％、７０％、８０％、９０％および１００％のゼラチンを含む１７０ｍｇ／ｍｌの総高分子化合物濃度で、ＰＢＳに入れて製剤化した。５つの異なる比のゼラチン／デキストラン製剤を加熱して材料を液化し、実施例６の方法を用いて物理的性質の特徴づけのために円盤試料を鋳造した。その結果から、先の実験と同様に６０％超のゼラチンを含む製剤の溶解抵抗性が実証された。これらの製剤の圧縮試験によっても６０％超のゼラチンを含む製剤の物理的性質における顕著な増加が実証された。試験結果は、図３に示されている。
【０１８１】
実施例８：組成物の凍結乾燥および使用のための再構成
実施例２の組成物を凍結させ、乾燥するまで凍結乾燥した。本組成物を約０．０５℃／分の冷却速度で約−３０℃まで凍結させ、−３０℃で約１２時間保持した。凍結させた組成物を−３０℃で約２４時間真空下においた。その後、この温度を約０．２５℃／分の速度で約−１０℃まで徐々に上昇させた。次いで、本組成物を約−１０℃で少なくとも１２時間真空下に保持した後、この温度を約０．０５℃／分の速度で約２０℃までさらに上昇させた。次いで、凍結乾燥した組成物の重量を測定し、バイアルの中に入れた。
【０１８２】
凍結乾燥した組成物を含むバイアルを脱イオン水で再構成して、創傷への投与に適した流動性組成物を形成した。１ｇの凍結乾燥した組成物をバイアルの中で５ｍｌの水と混合して０．２ｇ／ｍｌの最終濃度を得た。これらのバイアルを３９℃で１時間加熱し、１５分間および３０分間ボルテックス混合した。その結果、上に記載したように皮膚および皮下組織への注射に適した流動性液体組成物が得られた。
【０１８３】
凍結乾燥した組成物を、実施例５および実施例６の方法を用いて、フィブロネクチン結合、溶解時間および圧縮弾性率についてアッセイした。再構成した組成物は、５．１３〜５．８８ｎｍｏｌ／ｍｇのフィブロネクチン結合、３０〜４５分の範囲の溶解時間、および１７〜２９ｋＰａの範囲の圧縮弾性率を示した。１％のグリセリンおよび０．１％のＴｗｅｅｎ２０を再構成用流体に添加した場合、再構成した組成物は、３３分の溶解時間および３４ｋＰａの圧縮弾性率を示した。０．１５ＭのＮａＣｌおよび１％のＴｗｅｅｎ２０を再構成用流体に添加した場合、再構成した組成物は、３０分の溶解時間および３３ｋＰａの圧縮弾性率を示した。
【０１８４】
実施例９：創傷／組織への注射のための凍結乾燥した組成物の再構成
各種条件下で、実施例８に係る組成物の再構成を調べた。凍結乾燥した組成物を含むバイアルを、３９℃まで予め加熱した５ｍＬの再構成用流体と混合して、０．２ｇ／ｍｌの固体含有量を得た。これらのバイアルを３９℃のブロック加熱器に入れ、５分後に観察し、ボルテックス混合した。その後、１〜２分ごとにこれらのバイアルを目視で調べ、流動性の均一な液体が観察されるまでボルテックス混合した。次いで、再構成した組成物を、実施例４に記載されている条件下で、２５ゲージ針を通した１ｍｌの注射器を用いた注射により、その流動能力について試験した。
【０１８５】
０．５ｍＬの流体を注射することができた場合、液体組成物を注射可能とみなした。０．５ｍｌ未満の体積の注射中に針の詰まりが観察された場合、注射が成功するまで加熱および混合工程を続けた。その結果を表９にまとめてあり、その成分割合は、特に明記しない限り、重量％で示している。
【表９】
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【０１８６】
その結果から、生成物の凍結乾燥した組成物を細いゲージ針で注射可能な流体に再構成できることが実証されている。吸湿性賦形剤、増量剤および界面活性剤などの再構成用添加剤により、凍結乾燥した組成物の注射可能な流体への再構成時間を減少させ、かつ／または標準的な５Ｎ注射力下で本組成物を注射する時間を減少できることが実証されている。
【０１８７】
実施例１０：動物皮膚モデルにおける組成物の組織反応
実施例１の組成物の試料を３８℃で加熱して、注射に適した流動性液体組成物を形成した。本組成物を、４４匹の麻酔した成体の雌ＳＤラットの腹部の真皮に注射した。４匹の各動物への注射から１、３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７および２８日後の剖検まで、これらの動物を毎日監視した。注射部位の組織試料を採取し、組織検査のために準備した。細胞反応および注射した組成物の存在について、注射部位から得た組織のＨ＆Ｅ病理組織検査を行った。
【０１８８】
病理組織検査により、本組成物が、全体に均一に分散されたエオジン好性線維の細い原線維を含む僅かに染色した材料の単一の塊として皮下空間に存在することが分かった。本組成物は、１日目に多形核白血球（ＰＭＮ）の本組成物および周囲組織への軽度の浸潤を、そして３日目に細胞浸潤量の増加を示した。組成物の量は、３日目に減少しているように見えた。埋め込み６日目には、本組成物が徐々になくなっていることが分かった。埋め込み９日目には、２匹の動物において組成物が存在せず、それに応じて炎症細胞の存在の減少が確認された。１２日目、１５日目および１８日目の組織では、１匹の動物で少量の本組成物が明らかに認められた。２１日目の組織では、本組成物の形跡は全く認められなかった。２４日目に、２匹の動物から組織中に少量の本組成物が認められた。２７日目および２８日目の組織には、本組成物の形跡は全く認められなかった。埋め込み材料がもはや明らかに認められなくなった後、注射部位の組織には、ＰＭＮが最小の量で存在し、マクロファージは顕著に存在せず、かつ新しいコラーゲン沈着または瘢痕形成の形跡は認められず、非常に良性の組織反応を示していることが実証された。その後の病理組織検査により、本組成物に関連するコラーゲン沈着または血管新生が存在しないと判定した。
【０１８９】
実施例１１：手術創傷を治療するための実施例１の組成物の投与
開腹手術または腹腔鏡検査下婦人科手術を受けた１８〜６０歳の１００人の女性対象を、前向き無作為化同一瘢痕対照臨床試験への参加者として登録して、実施例１の組成物による単回治療後に瘢痕形成の兆候および症状を評価して、創傷治癒の改善を評価した。９０人の対象を注射で治療し、１０人の対象をカテーテルで治療した。
【０１９０】
対象の外科的切開箇所を半分に分け、切開を縫合糸で閉鎖する直前に、半分を本組成物による「治療箇所」にランダムに割り当て、残りの半分を「対照箇所（治療なし）」に割り当てた。患者は、外科的切開の半分の評価のために、治療後１２ヶ月間を通して経過観察のために来院した。
【０１９１】
注射により治療される９０人の対象における創傷縫合時に、本組成物を３９℃（＋／−２℃）で加熱して、流動性かつ注射可能な液体を形成した。医師は、注射器および１８〜２５ゲージ針を使用して、本組成物を創縁に注射した。皮膚と皮下との界面に十分に深く、かつ切開創縁に可能な限り平行に、針を挿入した。注射痕を取り囲み、かつそれを含む領域に２．５ｃｍの創縁当たり約１〜２ｍＬの本組成物が供給されるように、十分な量の本組成物を注射痕および周囲組織に注射した。瘢痕特性の観察者（外科医）および患者評価を用いる有効な瘢痕評価スケール、すなわち、かつて有効であった視覚的アナログスケール（ＶＡＳ）に基づくアンカー付き視覚的アナログスケール（ＡＶＡＳ）、および患者および観察者瘢痕評価スケール（ＰＯＳＡＳ）を用いて、有効性を評価した。
【０１９２】
標準的なＶＡＳ評価は、左端に「考え得る限りで最悪の瘢痕」と、右端に「考え得る限りで最良の瘢痕」が記された１００ｍｍの水平の視覚的アナログ整容性スケールを使用する。評価者は、瘢痕の全体的審美的外観を示す水平のスケールに沿ってマークすることを求められた。スケールの低端から評価者のマークまでの水平の距離を測定し、かつ最も近いミリメートルに丸めて、数値スコアを計算した。ＡＶＡＳスケールは、評価者が、スケールの右端では正常な皮膚を用いながら、スケールの左端ではアンカーとして最悪の瘢痕半分を選択することができる、水平の視覚的アナログ整容性スケールを使用する。評価者は、２つに端部間により良好な瘢痕半分の全体的審美的外観を示す水平のスケールに沿ってマークすることを求められた。スケールの低端から評価者のマークまでの水平の距離を測定し、かつ最も近いミリメートルに丸めて、数値スコアを計算した。
【０１９３】
同じ対象についての観察の中で期待される相関を考慮に入れる時系列データの分析方法である一般化推定方程式（ＧＥＥ）を用いて、１２ヶ月を通した観察者および患者ＡＶＡＳスコアを分析した。自己回帰構造を推定してＡＶＡＳ分析を行った。ＧＥＥ分析を使用して、ＡＶＡＳスコアに対して治療間（対照側−治療される側）全体および個々の特性の推定される平均差を得、統計的有意性のための両側正規近似試験を行った。
【０１９４】
本組成物の注射により治療される９０人の対象を、アンカー付き視覚的アナログスケール（ＡＶＡＳ）を用いて、外科医の観察者および治療される対象により評価した。最初の３０人の対象の治療後に、ＡＶＡＳスケールを含むようにプロトコルを修正した。登録された最初の３０人の対象では、９ヶ月および１２ヶ月の経過観察来院時にのみ、観察者および患者からＡＶＡＳスコアを回収した。登録された次の６０人の対象では、全ての経過観察時に、観察者および患者からＡＶＡＳデータを回収した。治療箇所：対照箇所についてＡＶＡＳを評価する場合、１２ヶ月間を通した観察者および患者評価者について全体的に推定されるＡＶＡＳ差はそれぞれ、治療される側を支持する７．４９ｍｍ（ｐ＝０．００１８）および９．８６ｍｍ（ｐ＝０．０００９）であった。観察者および患者ＡＶＡＳの結果を表１０に示す。
【表１０】
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【０１９５】
瘢痕特性の観察者（医師／調査者）および患者の生の評価を用いて、上述のように、ＧＥＥによる有効なＰＯＳＡＳ瘢痕評価スケールにより、本組成物の有効性も評価した。ＰＯＳＡＳの観察者スケールは、１が最良のスコアであり１０が最悪のスコアである１〜１０のスケールで、数値でスコア化される５つの創傷治癒特性からなる。観察者スケールの総スコアは、５つの項目のそれぞれのスコアを追加する工程からなる（５〜５０の範囲）。最低のスコア（５）は、正常な皮膚を反映している。これらの結果を表１１および表１２に示す。治療箇所：対照箇所の観察者ＰＯＳＡＳスコアを評価する場合、１２ヶ月間を通して全体的に推定される差は、治療される側を支持する０．９８（ｐ＝０．００５１）であり、個々の観察者の評価特性について推定されるＰＯＳＡＳ差は、０．２０〜０．２６の範囲であり、全てが治療される瘢痕半分を有意に支持していた。治療箇所：対照箇所の患者ＰＯＳＡＳスコアを評価する場合、１２ヶ月間を通して全体的に推定される差は、治療される側を支持する１．１９（ｐ＝０．００１２）であり、個々の患者評価特性について推定されるＰＯＳＡＳ差は、０．０９〜０．３６の範囲であり、全てが治療される瘢痕半分を有意に支持していた。
【表１１】
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【表１２】
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【０１９６】
実施例１２：ケロイドの手術修復のための実施例１の組成物の効果
現代の文献に報告されている再発率と比較した場合、ケロイド組織の切除によるケロイド瘢痕の手術修復を受けた対象におけるケロイド瘢痕化に関連する、体積、外観および／または症状の減少における本組成物の使用を評価するための研究を行った。
【０１９７】
２６箇所の耳のケロイドを有する１９人の対象が研究に参加した。研究対象の耳のケロイドを外科的に除去し、切開の創縁を特定した。注射前に、実施例１の組成物を３９℃（＋／−２℃）で少なくとも６０分間加熱した。皮膚／皮下の界面にあり、かつ切開創縁に可能な限り平行であるように、２５ゲージ針を組織に十分に深く挿入した。調査者は、針を取り出すにつれて、本組成物が注射痕および周囲組織に拡散されるように、本組成物を注射した。創縁における注射痕および周囲組織に十分な量の組成物、すなわち創縁の各側の切開長さが２．５ｃｍ増加するごとに平均１．４８ｍｌの組成物を注射した。また、調査者は、注射により引き起こされる皮膚の引っ張り、本組成物の針からの易流動性、組織の白化、および組織が本組成物を含む物理的能力などの、注射プロセス時の視覚および触覚フィードバックにより誘導された。全ての切開位置（すなわち、右耳、左耳および／または両耳）を同じように閉鎖した。
【０１９８】
歯科用アルギン酸塩を含む印象材を用いるケロイド体積測定手順を使用して、病変部の体積を測定した。アルギン酸塩印象材を水で充填し、かつ目盛り付きスケールで体積を測って、ケロイドの体積を測定した。これにより、病変部の体積の数値を得ることができた。印象材は、アルギン酸塩印象材に適した病変部のみの型を取ることができた。アルギン酸塩印象材で型を取り、ベースラインで各対象の体積を計算した。１２ヶ月間の経過観察来院時に、５箇所の耳ケロイド（１９．２％）を、臨床検査に基づき再発していると特定した。各耳の型を取った。型の手術前の体積および１２ヶ月後の体積を以下の表１３に含めている。さらに、１２ヶ月後の型のそれぞれに対する手術前の体積の割合を計算した。本組成物で治療した５箇所の再発のうち２箇所の再発は、１２ヶ月後に５％以上の臨床的に有意な病変部サイズを示した。
【表１３】
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【０１９９】
手術切除後のケロイド再発に特定した文献は、併用治療（例えば、手術切除／コルチコステロイド注射）が標準治療になっていることを示している。以下の表１４は、手術切除のみを行った後のケロイド再発に最も関連する文献である。
【表１４】
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【０２００】
再発は、４４〜９３％であることが文献に記載されている。Ｂｅｒｍａｎらによる研究(Berman B., Flores F. “Recurrence rates of excised keloids treated with postoperative triamcinolone acetonide injections or interferon alfa-2b injections”, J AM Acad Dermatol. 1997; 37:755-7)は、その刊行物が有意な数の対象のデータセットを含むため、最良の現代の文献比較物とみなされている。特に耳垂ケロイドの手術切除を検討する場合、Ｂｅｒｍａｎらは、手術切除のみを受けた４３人の患者（８６％が耳垂または耳へリックスのケロイドを有する）を調査し、５１．２％のケロイドが平均６．５ヶ月で再発した。本組成物を用いた治療結果をＢｅｒｍａｎらの結果（１９９７）と比較して分析を行なった。
【０２０１】
２×２分割表を用いて、本組成物を用いた（上記のような）治療結果を、Ｂｅｒｍａｎらの刊行物と比較した。フィッシャーの正確確率検定を用いた分析は、統計的有意差を示す０．０１１の両側ｐ値を示した。１２ヶ月後に評価した際に、本組成物は、ケロイド再発を予防するために報告されている手術切除のみを用いた場合よりも有意に優れていることが分かった。本組成物は、ケロイド修復外科手術中に細いゲージ針で皮膚および皮下組織に注射で投与した際に、ケロイド再発を予防および最小化する能力を示した。
【０２０２】
実施例１３：実施例１および２の組成物の安定性比較
実施例１および実施例２に記載されているように調製したゼラチン／デキストラン組成物を用いて、比較的超音波分析を行った。過去に調製した試験試料を、試験まで２〜８℃で貯蔵した。固体のゲル試料を含むガラス製バイアルを４０℃の水浴に入れて、ゲル試料を融解させた。融解させたゲル試料を、３，０００ｒｐｍで遠心機を用いてプラスチック製注射器の中で素早く脱気させ、４０℃で予め平衡化させたＨＲ−ＵＳ１０２超音波分光計の試料セルに充填した。基準超音波セルを、脱気させた脱イオン水で満たした。両方のセルをシリコーン／ＰＴＦセプタムを備えたねじ式の蓋で密閉した。融解させた（すなわち流動性液体）組成物の超音波プロファイル（超音波速度および減衰）を、比較のために２〜１２ＭＨｚの周波数範囲で連続的に測定し、その際、ｉ）４０℃で４０分間保持、ｉｉ）１０分かけて３５℃まで冷却、ｉｉｉ）３５℃で７００分＋間保持という温度勾配を用いた。試料における超音波速度および減衰をキネティックモードで連続的に測定した。
【０２０３】
超音波評価により、それらの温度および時間プロファイリングにおいて実施例１および実施例２の試料の顕著かつ驚くべき程に異なる挙動が明らかになった。これは図４〜図６に示されており、それらは、４０℃から３５℃に素早く冷却し、かつその後に長期間３５℃の等温で管理した際の、経時的なゲル試料における相対的超音波減衰（実施例１の組成物については図４、実施例２組成物については図５）および超音波速度（図６）の漸進的変化を示している。
【０２０４】
最初に、図４〜図６から、実施例２の試料は、実施例１の試料と比較すると、４０℃でより高い超音波減衰および超音波速度を有していたことが分かる。両方の試料が、４０℃から３５℃への急速冷却に伴う超音波減衰および超音波速度における急激な上昇を示したが、実施例２の試料は、実施例１の試料よりも測定可能な程に大きな上昇を示さなかった。開始時の超音波減衰および超音波速度の値における差により、形成されたままのヒドロゲルが異なる高分子構造／立体配座状態を既に示してことが分かった。特に超音波減衰における差により、実施例１の試料および実施例２の試料が、超音波周波数で異なる緩和ダイナミクスを示したことが分かった。
【０２０５】
試料のヒドロゲル安定性における差は、３５℃での保持により試験を継続した際に、より明らかになった。図４および図６から分かるように、実施例１の試料は、経時的に超音波減衰および超音波速度における僅かであるが連続的な上昇を示した。これにより、ヒドロゲルの再構成が生じている（これは、本ヒドロゲル成分の最終的な生理的再吸収を支援するのに望ましい）が、実施例１のヒドロゲルにおける再構成プロセスは穏やかであることが分かった。さらに表１５から分かるように、実施例１のヒドロゲルは、試験持続期間の超過において安定性を示した。実施例２の試料は、試験の最初の４００分以内に同様のプロファイルを示した。しかし、その後に、実施例２の試料は、超音波減衰において急激かつ顕著な上昇（図５）を示し、かつ超音波速度において減少（図６）を示し、これは、実施例２のヒドロゲルの広範囲な再構成を示していた。理論により縛られたくはないが、この再構成は、ゼラチンおよび高分子炭水化物（これらの実施例ではデキストラン）の相分離、すなわち、本ヒドロゲル構造を維持するそれぞれの高分子化合物間のイオンおよび水素結合の喪失に対応していると考えられる。様々な塩含有量の実施例２の試料（すなわち、高いリン酸イオン濃度を有するＰＢＳを用いて形成された試料）が本ヒドロゲルの脱水を引き起こし、それも高分子化合物の構造再編成に対応し得ると考えられるという点で、その安定性に対する本ヒドロゲルの処理の効果も明らかに示されている。表１５は、実施例１のヒドロゲルの２種類の試料（Ｎ１およびＮ２）ならびに実施例２のヒドロゲルの２種類の試料（Ｎ３およびＮ４）の再構成転移時間を示し、試料の構造的安定性における差をさらに示している。実施例２の試料は、実施例１の試料（Ｎ１およびＮ２）と比較した場合、本ヒドロゲル状態からの転移の際にヒドロゲル安定性の有意な減少を示した。
【表１５】
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【０２０６】
実施例１４：瘢痕の手術修復のための実施例２の組成物の効果
実施例２の組成物を用いて、実施例１１および実施例１２において上に記載されているものと同様の研究を行った。この研究は、外観を改善させ、かつ瘢痕の手術修復を受けた対象における瘢痕化の兆候、症状および再発を減少させる際の、実施例２に記載されているように調製した組成物の安全性および有効性を評価する、前向き無作為化単盲検の同一瘢痕プラセボ対照実現可能性調査であった。この試験は、参加施設において瘢痕修復処置を受けるために選出された１４人の患者を含んでいた。瘢痕修復処置の間に、切開箇所を半分に分け、各側を、実施例２の組成物またはプラセボ（生理食塩水）注射のいずれかに無作為化した。プロトコルの手順の節に除外されている場合を除いて標準治療および外科医の通常の日常業務に従って、術後処置を行った。
【０２０７】
実施例１１と同様に、患者および観察者瘢痕評価スケール（ＰＯＳＡＳ）を用いて、実施例２の組成物の有効性も評価した。ＰＯＳＡＳ評価には、患者および観察者評価が組み込まれており、ここでは、観察者の評価は、患者の直接的な観察に基づいていた。患者はそれぞれ、「１」が最良で「１０」が最悪である１０点のスケールで、痛み、痒み、色、硬直、肥大および凹凸からなる創傷治癒特性を評価した。観察者は、同じ１０点スケールを用いて、血管新生、色素沈着、肥大、軽減および柔軟性を評価した。患者および観察者について別々に、個々のスコアを合計した（ここでは、より高いスコアは、より悪い結果を表わし、より低いスコアは、正常な皮膚により酷似している瘢痕を表わす）。合計スコアの平均差（対照箇所−治療箇所）を表１６に示す。負の数は、治療される側よりも良好なものとして評価されている対照側を表わす。
【表１６】
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【０２０８】
表１６から分かるように、ＰＯＳＡＳ評価から、実施例２のヒドロゲルと比較した場合に、実施例１のヒドロゲルにより、瘢痕修復において有意により良好な結果が得られることが分かった。驚くべきことに、本ヒドロゲルの製造方法が本ヒドロゲルの安定性に顕著に影響を与えるだけなく、評価される皮膚創傷モデルにおいて本ヒドロゲルの臨床的有効性にも有意に影響を与えたことが分かった。特に予期しなかったことだが、全ての実施例１のヒドロゲルの評価が非常に良好であり、全ての事例においてプラセボよりも良好な成果を上げたが、実施例２のヒドロゲルがプラセボよりも成果が劣るものとして主に評価されたことが分かった。
【０２０９】
実施例１５：過去に調製したゲル化組成物の相分離研究
異なる冷却プロトコルを用いて調製したヒドロゲル組成物の安定性を評価するための研究を行った。実施例１の製剤に係る４種類の異なるロットのヒドロゲル組成物に対して試験を行った。いずれの場合も、本ヒドロゲルを液状で形成し、冷却してゲル化させ、２〜８℃の冷蔵で貯蔵した。本明細書に記載されているように、５０℃で混合して液体ヒドロゲルを形成し、５０℃未満であって、液体から固体または半固体への転移温度を超える保持温度まで冷却し、次いで、本組成物を転移温度未満までさらに冷却して、ロット００１７−４および００１７−１８８のヒドロゲルを調製した。５０℃で混合して液体ヒドロゲルを形成してロットＦＧ−１３−００４９およびＦＧ−１３−００７５のヒドロゲルも調製したが、転移温度未満に直ちに冷却するまで５０℃に維持した。
【０２１０】
試験のために、２種類の水浴を、４０℃および５０℃の温度で少なくとも６０分間平衡化させた。４種類の各ロットのバイアルを２〜８℃の貯蔵庫から取り出し、４０℃の水浴に入れた。また、４種類の各ロットのバイアルを２〜８℃の貯蔵庫から取り出し、５０℃の水浴に入れた。２種類の異なる温度での試料の相分離を７時間監視し、指定された温度で約２４時間温置した。４０℃および５０℃のバイアルで観察された相分離の要約をそれぞれ、表１７および表１８に示す。その試験結果はそれぞれ、図８ａ〜図８ｄおよび図９ａ〜図９ｄにグラフで示されている。
【表１７】
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【表１８】
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【０２１１】
上記表および当該図から分かるように、最初の混合温度よりも低いが相転移温度よりも高い温度への中間冷却工程を含めて調製した本組成物は、中間冷却工程なしに調製した組成物であって、より長い期間にわたってより高い温度に維持された組成物よりも少なくとも２倍長く単相の完全性を維持した。これは、中間冷却工程を含めて本明細書に記載されているように調製した組成物は、ゲル構造のより大きな安定性および治療条件下での相分離に対する抵抗性を示すということを表わしている。
【０２１２】
実施例１６：過去に調製したゲル化組成物の相分離研究
ケロイド組織の切除によるケロイド瘢痕の手術修復を受けた対象における、ケロイド瘢痕化に関連する体積、外観および／または症状の減少における本開示の組成物の使用を評価するために、さらなる研究を行った。
【０２１３】
全部で６５箇所の耳ケロイドを有する対象が研究に参加した。実施例１２の上記プロトコルを用いて、ケロイドの除去および手術部位の治療を行った。本ヒドロゲル組成物を手術部位に平均２．８ｍｌ（手術部位の大きさに応じて、最小０．４ｍｌ〜最大９．５ｍｌの範囲）で注射した。２．５ｃｍの切開当たりに注射した本ヒドロゲル組成物の平均的な量は、１．２９ｍｌ（最小０．５ｍｌ／ｃｍ〜最大１．６ｍｌ／ｃｍの範囲）であった。
【０２１４】
本試験では、実施例１２に記載されているように歯科用アルギン酸塩を含む印象材を用いるケロイド体積測定のためのプロトコルを使用して、病変部の体積を測定した。型の手術前の体積および経過観察時の体積を以下の表１９に含めている。本試験の主要有効性評価項目は、切除後にケロイド瘢痕の再発を有する患者の割合に基づき、０．３ｃｍ３（０．３ｇ）超の瘢痕組織体積の存在として定義した。観察者および患者が評価したＰＯＳＡＳスコアに基づき有効性も評価し、それを表２０および表２１にそれぞれ示す。
【０２１５】
表１９を参照すると、治療される元の６５箇所のケロイドのうち、９つの事例のみが、外科手術後に測定可能な病変部を示した（治療から１ヶ月、３ヶ月および６ヶ月後に評価）。表１９から分かるように、６ヶ月後の測定可能な病変部の体積はいずれも、ケロイド再発の判断基準（すなわち、０．３ｃｍ３超の瘢痕組織体積の存在）を満たしていなかった。従って、本研究における６ヶ月後の再発率は、プロトコルにより０％と定義され、手術切除後のケロイド再発率を評価した場合、科学文献よりも統計学的に優れていることが実証された（表１４および関連する上記考察を参照）。表１９では、対象０１−２０−ＰＭは、３ヶ月後の来院で原因不明の耳の全体的腫脹を示し、それが測定体積を占めていた。原因不明の腫脹は治療することなく消失し、６ヶ月後の評価では、測定可能な病変部は存在しなかった。
【表１９】
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【０２１６】
表２０を参照すると、痛み、痒み、色差、硬直、肥大、凹凸、および全体的所見が対象により検討された。各カテゴリが１〜１０のスケールでスコア化され、ここでは、１が最良であり、１０が最悪である。平均スコアを表２０に示す。見て分かるように、対象は平均して、治療された部位が治療後に有意に向上していると評価した。
【０２１７】
表２１を参照すると、血管分布、色素沈着、肥大、軽減、柔軟性、表面積および全体的所見がそれぞれの調査者により検討された。各カテゴリは、１〜１０のスケールでスコア化され、ここでは、１は最良であり、１０は最悪である。平均スコアを表２１に示す。見て分かるように、調査者は平均的して、治療された部位が治療後に顕著に向上していると評価した。
【表２０】
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【表２１】
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【０２１８】
上の記載および関連する図面に示されている教示の利点を有する本発明の多くの修正形態および他の実施形態が、本発明が関係する当業者には想到される。従って、当然のことながら、本発明は、本明細書に開示されている具体的な実施形態に限定されず、その修正形態および他の実施形態が添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。本明細書には具体的な用語が用いられているが、それらは一般的かつ記述的な意味でのみ使用されており、限定のためのものではない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【図８ｃ】
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【図８ｄ】
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【図９ａ】
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【図９ｂ】
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【図９ｃ】
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【図９ｄ】
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【国際調査報告】
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