【手続補正書】
【提出日】平成25年8月23日(2013.8.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくともブロッコリー系統BRM 51-1162またはブロッコリー系統BRL 51-1128の染色体の第1の組を含むブロッコリー植物であって、当該系統の種子サンプルが各々ATCC受託番号PTA-9675およびATCC受託番号PTA-9674で寄託されている、ブロッコリー植物。
【請求項２】
少なくともブロッコリー系統BRM 51-1162またはブロッコリー系統BRL 51-1128の染色体の第1の組を含む種子であって、当該系統の種子サンプルが各々ATCC受託番号PTA-9675およびATCC受託番号PTA-9674で寄託されている、種子。
【請求項３】
近交系である、請求項1に記載の植物。
【請求項４】
雑種である、請求項1に記載の植物。
【請求項５】
雑種植物がブロッコリー雑種PS05151639であって、当該雑種PS05151639の種子サンプルがATCC受託番号PTA-9676で寄託されている、請求項4に記載の植物。
【請求項６】
近交系植物がBRM 51-1162系統またはBRL 51-1128系統である、請求項3に記載の植物。
【請求項７】
請求項1に記載の植物の植物部分。
【請求項８】
葉、胚株、房、花粉、花蕾球または細胞としてさらに定義される、請求項7に記載の植物部分。
【請求項９】
請求項5に記載のブロッコリー植物のすべての生理学的および形態学的特徴を有する、ブロッコリー植物またはその部分。
【請求項１０】
請求項6に記載のブロッコリー植物のすべての生理学的および形態学的特徴を有する、ブロッコリー植物またはその部分。
【請求項１１】
請求項1に記載の植物の再生可能細胞の組織培養物。
【請求項１２】
胚、分裂組織、子葉、花粉、葉、葯、根、根端、雌ずい、花、種子および茎からなる群から選択される植物部分に由来する細胞もしくはプロトプラストを含む、請求項11に記載の組織培養物。
【請求項１３】
請求項12に記載の組織培養物から再生されたブロッコリー植物。
【請求項１４】
2:1から40:1(重量/重量)のMSBとMSPの比率で存在する内因性量のMSB(グルコラファニン)およびMSP(グルコイベリン)を含む、ブロッコリー房。
【請求項１５】
MSBとMSPの比率が2:1から10:1(重量/重量)である、請求項14に記載のブロッコリー房。
【請求項１６】
MSBとMSPの比率が3:1から8:1(重量/重量)である、請求項14に記載のブロッコリー房。
【請求項１７】
少なくとも10 μmole/g 乾燥重量のMSBおよびMSPを含む、請求項14に記載の房。
【請求項１８】
雑種ブロッコリー植物から得られる、請求項14に記載の房。
【請求項１９】
商業栽培に適合させたブロッコリー植物から得られる、請求項14に記載の房。
【請求項２０】
請求項14に記載の房を産生する植物。
【請求項２１】
請求項1に記載の植物を栄養繁殖させる方法であって、
(a) 請求項1に記載の植物から増殖可能な組織を集めて;
(b) 該組織を培養して、増殖したシュートを取得し; そして
(c) 該増殖したシュートを発根させて、発根した小植物体を得る
工程を含む、方法。
【請求項２２】
さらに、該発根した小植物体を植物に成長させることを含む、請求項21に記載の方法。
【請求項２３】
ブロッコリー系統に望まれる特性を導入する方法であって、
(a) 系統BRM 51-1162またはBRL 51-1128の植物であって、当該系統の種子サンプルが各々ATCC受託番号PTA-9675およびATCC受託番号PTA-9674で寄託されている植物を、望まれる特性を含む第2のブロッコリー植物と交配して、F1子孫を作製し;
(b) 望まれる特性を含むF1子孫を選択し; 
(c) 選択されたF1子孫を系統BRM 51-1162またはBRL 51-1128の植物と交配して、戻し交配子孫を作製し;
(d) 望まれる特性およびブロッコリー系統BRM 51-1162またはBRL 51-1128の生理学的および形態学的特徴を含む戻し交配子孫を選択し; そして
(e) 工程(c)および(d)を3回またはそれ以上の回数繰り返し、望まれる特性を含む選択された第4またはそれ以上の世代の戻し交配子孫を作製すること
を含む、方法。
【請求項２４】
請求項23に記載の方法により作製されるブロッコリー植物。
【請求項２５】
付与された望まれる特性を含む植物を作製する方法であって、望まれる特性を付与する導入遺伝子を、雑種PS05151639、系統BRM 51-1162または系統BRL 51-1128の植物であって、当該雑種および系統の種子サンプルが各々ATCC受託番号PTA-9676、ATCC受託番号PTA-9675およびATCC受託番号PTA-9674で寄託されている植物に導入することを含む、方法。
【請求項２６】
植物から核酸のサンプルを取得し、当該核酸中の複数の多型を検出することを含む、請求項1に記載の植物の遺伝子型を決定する方法。
【請求項２７】
さらにコンピューター可読媒体上に複数の多型の検出結果を記憶させる工程を含む、請求項19に記載の方法。
【請求項２８】
請求項27に記載の方法により作製されるコンピューター可読媒体。
【請求項２９】
雑種PS05151639、系統BRM 51-1162または系統BRL 51-1128の少なくとも1つに由来する植物の種子を作製する方法であって、
(a) 雑種PS05151639、系統BRM 51-1162または系統BRL 51-1128のブロッコリー植物であって、当該雑種および系統の種子サンプルが各々ATCC受託番号PTA-9676、ATCC受託番号PTA-9675およびATCC受託番号PTA-9674で寄託されているブロッコリー植物を、第2のブロッコリー植物と交配し; そして
(b) 雑種PS05151639、系統BRM 51-1162またはBRL 51-1128に由来するブロッコリー植物の種子を形成させる
工程を含む、方法。
【請求項３０】
さらに、
(c) 当該雑種PS05151639、BRM 51-1162またはBRL 51-1128に由来するブロッコリー種子から育てられた植物をそれ自身と、または第2のブロッコリー植物と交配して、雑種PS05151639、BRM 51-1162またはBRL 51-1128に由来するさらなるブロッコリー種子を作製し;
(d) 工程(c)の雑種PS05151639、BRM 51-1162またはBRL 51-1128に由来するさらなるブロッコリー種子を生育させて、雑種PS05151639、BRM 51-1162またはBRL 51-1128に由来するさらなるブロッコリー植物を作製し; そして
(e) (c)および(d)の交配および生育工程を繰り返して、雑種PS05151639、BRM 51-1162またはBRL 51-1128に由来するさらなるブロッコリー植物を作製する
工程を含む、請求項29に記載の方法。
【請求項３１】
第2のブロッコリー植物が近交系ブロッコリー系統である、請求項29に記載の方法。
【請求項３２】
BRM 51-1162系統をBRL 51-1128系統と交配することを含み、当該系統の種子サンプルが各々ATCC受託番号PTA-9675およびATCC受託番号PTA-9674で寄託されている、請求項29に記載の方法。
【請求項３３】
BRL 51-1128系統が雄親として使用される、請求項32に記載の方法。
【請求項３４】
BRL 51-1128系統が雌親として使用される、請求項32に記載の方法。
【請求項３５】
請求項32に記載の方法により作製される植物。
【請求項３６】
請求項35に記載の植物の植物部分。
【請求項３７】
葉、房、花、花蕾球、胚株、花粉または細胞としてさらに定義される、請求項36に記載の植物部分。
【請求項３８】
請求項35に記載の植物の細胞の組織培養物。
【請求項３９】
組織培養物の細胞が、胚、分裂組織、子葉、花粉、葉、葯、根、根端、雌ずい、花、種子および茎からなる群から選択される組織に由来するものである、請求項38に記載の組織培養物。
【請求項４０】
請求項39に記載の組織培養物から再生されるブロッコリー植物であって、ブロッコリー雑種PS05151639の生理学的および形態学的特徴のすべてを発現する、ブロッコリー植物。
【請求項４１】
BRM 51-1162またはBRL 51-1128の一方もしくは両方および第2の植物が導入遺伝子を含む、請求項35に記載の植物。
【請求項４２】
BRM 51-1162またはBRL 51-1128の一方もしくは両方および第2の植物が単一遺伝子座変換を含む、請求項35に記載の植物。
【請求項４３】
(a) 成熟するまで育てられた請求項1に記載の植物を取得し; そして
(b) 当該植物から組織を回収すること
を含む、食物または飼料を産生する方法。
【請求項４４】
請求項1に記載の植物がブロッコリー植物の雑種PS05151639であり、当該雑種PS05151639の種子サンプルがATCC受託番号PTA-9676で寄託されている、請求項43に記載の方法。
【請求項４５】
請求項1に記載の植物をそれ自身または第2のブロッコリー植物と交配し、種子を形成させることを含む、ブロッコリー種子を作製する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
発明の要約
1つの局面において、本発明は、PS05151639と命名されたブロッコリー植物の雑種を提供する。また、ブロッコリー雑種PS05151639の生理学的および形態学的特徴のすべてを有するブロッコリー植物および/またはブロッコリー系統BRM 51-1162およびBRL 51-1128が提供される。また、例えば、植物の花粉、胚株、房、花蕾球および細胞を含む本発明のブロッコリー植物の部分が提供される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明の他の局面において、付加された遺伝学的特性を有するブロッコリー植物の雑種PS05151639および/またはブロッコリー系統BRM 51-1162およびBRL 51-1128が提供される。遺伝学的特性は、例えば、優性もしくは劣性対立遺伝子である遺伝子座を含み得る。本発明の1つの態様において、ブロッコリー植物の雑種PS05151639および/またはブロッコリー系統BRM 51-1162およびBRL 51-1128は、単一遺伝子座変換を含むものとして定義される。本発明の特定の態様において、付加された遺伝子座は、1個またはそれ以上の特性、例えば、除草剤耐性、害虫耐性、病気耐性および修飾された炭水化物代謝を与える。さらなる態様において、特性は、系統のゲノムへの自然発生的な遺伝子導入、戻し交配、天然のもしくは誘導された突然変異、または遺伝学的形質転換技術を用いて植物または任意のその前の世代である先祖植物に導入された導入遺伝子により与えられ得る。遺伝子座は、形質転換により導入されると、単一の染色体位置に組み込まれた1個またはそれ以上の遺伝子を有し得る。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
また本発明の他の局面において、ブロッコリー植物の雑種PS05151639および/またはブロッコリー系統BRM 51-1162およびBRL 51-1128の再生可能な細胞の組織培養物が提供される。組織培養物は、好ましくは、出発植物の生理学的および形態学的特徴のすべてを発現し、出発物質と実質的に同一の遺伝子型を有する植物を再生することが可能なブロッコリー植物を再生することができる。雑種PS05151639および/またはブロッコリー系統BRM 51-1162およびBRL 51-1128の生理学的および形態学的特徴のいくつかの例は、本明細書の表に記載された特性を含む。そのような組織培養物における再生可能細胞は、例えば、胚、分裂組織、子葉、花粉、葉、葯、根、根端、雌ずい、花、種子および茎に由来し得る。またさらに、本発明は、雑種PS05151639および/またはブロッコリー系統BRM 51-1162およびBRL 51-1128の生理学的および形態学的特徴のすべてを有する、本発明の組織培養物から再生されたブロッコリー植物を提供する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
また他の局面において、本発明は、約2:1から約40:1(重量/重量)のMSBとMSPの比率で存在する内因性量のMSB (グルコラファニン)およびMSP (グルコイベリン)を含むブロッコリー房を提供する。本発明の特定の態様において、比率は、少なくとも約2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、8:1または10:1である。さらなる態様において、比率は、約2:1から約30:1、約2:1から約20:1、約2:1から約15:1、約2:1から約10:1、約2:1から約8:1、約2:1から約6:1、約3:1から約25:1、約3:1から約20:1、約3:1から約15:1、約3:1から約10:1、約3:1から約7:1、約4:1から約30:1、約4:1から約20:1、約4:1から約15:1、約4:1から約10:1、約5:1から約30:1、約5:1から約15:1、または約5:1から約10:1であり得る。1つの態様において、房は、少なくとも約10 μmole/g 乾燥重量のMSBおよびMSPを含む。特定の態様において、房は、約10 μmole、15 μmole、20 μmole、25 μmole、30 μmole、40 μmole、50 μmole、60 μmole、70 μmole、80 μmole、90 μmole、100 μmole、125 μmole、150 μmoleまたはそれ以上MSBおよび/またはMSPを含み得る。特定の態様において、房は、ブロッコリー雑種植物から得られる。1つの態様において、房は、商業栽培に適合させたブロッコリー植物から得られる。「商品(commercial product)に適合させる」なる用語は、植物が栽培に適するように改変された品種であることを意味する。植物育種の分野で既知のとおり、そのような植物は、病気もしくはストレス耐性、および生産者が商業的に有意義な産物を収穫するのを可能にする収量のような区別可能な特性を生じる。本発明はまた、そのような房を産生するブロッコリー植物を提供する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
特定の態様において、本発明は、食物または飼料を生産する方法であって、(a) ブロッコリー植物の雑種PS05151639および/またはブロッコリー系統BRM 51-1162およびBRL 51-1128を得て(ここで、当該植物は、成熟するまで育てられる)、(b)植物の組織を集めることを含む方法を提供する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
また他の局面において、本発明は、本発明のブロッコリー植物の半数体遺伝的相補体と第2ブロッコリー植物、好ましくは別のブロッコリー植物の半数体遺伝的相補体の組み合わせにより形成されたブロッコリー植物細胞、組織、植物、および種子により示される雑種遺伝的相補体を提供する。他の局面において、本発明は、本発明の雑種遺伝的相補性を含む組織培養物から再生したブロッコリー植物を提供する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
表1: 雑種PS05151639の生理学的および形態学的特徴
【表１】
2011097921.tif 000001
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
【表２】
2011097921.tif 000002
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
【表４】
2011097921.tif 000003
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４０】
【表６】
2011097921.tif 000004
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
【表７】
2011097921.tif 000005
*これらは、典型値である。値は、環境により変わり得る。実質的に同等な他の値はまた、本発明の範囲内である。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
【表１０】
2011097921.tif 000006
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
【表１１】
2011097921.tif 000007
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４７】
【表１３】
2011097921.tif 000008
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４９】
【表１５】
2011097921.tif 000009
*これらは、典型値である。値は、環境により変わり得る。実質的に同等な他の値はまた、本発明の範囲内である。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
【表１７】
2011097921.tif 000010
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
【表１８】
2011097921.tif 000011
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
【表２０】
2011097921.tif 000012
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
【表２２】
2011097921.tif 000013
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
【表２３】
2011097921.tif 000014
*これらは、典型値である。値は、環境により変わり得る。実質的に同等な他の値はまた、本発明の範囲内である。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
表4: PS05151639および選択された品種*についての品質特性
【表２４】
2011097921.tif 000015
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
【表２５】
2011097921.tif 000016
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
E. 本発明のさらなる態様
本発明の特定の局面において、少なくとも1個の望まれる遺伝学的特性を含むように修飾された植物が提供される。1つの態様において、そのような植物は、戻し交配と呼ばれる植物育種技術により開発され得て、ここで、遺伝子座が戻し交配技術により植物に移されることに加えて、品種の望まれる形態学的および生理学的特性の実質的にすべてが回復する。本明細書で使用される単一遺伝子座変換植物なる用語は、戻し交配と呼ばれる植物育種技術により開発されるブロッコリー植物を意味し、ここで、遺伝子座が戻し交配技術により植物に移されることに加えて、品種の望まれる形態学的および生理学的特性の実質的にすべてが回復する。望まれる形態学的および生理学的特性の実質的にすべては、戻し交配または導入遺伝子の直接導入の間に生じ得る偶発的変種特性以外に、同じ環境において比較されるときに他に存在する植物の特性が回復することを意味する。
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８２】
F. 遺伝学的改変により誘導される植物
戻し交配により、および直接植物に導入され得る多くの有用な特性は、遺伝学的形質転換技術により導入されるものである。したがって、遺伝学的形質転換は、選択された導入遺伝子を本発明の植物に挿入するために使用されるか、または戻し交配により導入され得る導入遺伝子の作製のために使用され得る。当業者に既知であり、多くの作物品種に適用可能な植物の形質転換法は、エレクトロポレーション、微粒子銃、アグロバクテリウム仲介形質転換およびプロトプラストによるDNAの直接取り込みを含むが、これらに限定されない。
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１０】
再生: 組織培養物からの植物の発生。
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１６】
導入遺伝子: 形質転換によりブロッコリー植物のゲノム中に導入された配列を含む遺伝子座。