(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＶ）
0004390861.tif 000008
の化合物の合成法であって、
（ｉ）式（ＩＩ）
0004390861.tif 000009
の化合物と、式（ＩＩＩ）
0004390861.tif 000010
の化合物を極性の非プロトン性溶媒に溶解し、
（ｉｉ）式（ＩＩ）の化合物と、式（ＩＩＩ）の化合物を、テトラメチルウロニウムを基剤とするペプチドカップリング試薬およびアミン塩基の存在下にて反応させて、混合物を生成させ、
（ｉｉｉ）前記混合物から、式（ＩＶ）の遊離塩基を含んでなる化合物を直接結晶化し、
（ｉｖ）場合によっては、式（ＩＶ）の化合物を式（Ｉ）
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のＨＣｌ塩に転換する
工程を含んでなる、方法。
【請求項２】
カップリング試薬が２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アミン塩基がトリエチルアミンである、請求項４に記載の方法。
【請求項４】
反応が２０〜２５℃で起こる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
反応が少なくとも１時間起こる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
上記カップリング工程を２０〜２５℃で行う、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
極性の非プロトン性溶媒がジメチルホルムアミドである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
式（ＩＶ）の化合物を式（Ｉ）のＨＣｌ塩に転換する、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、アクリジン誘導体の改良製造法に関する。特に、本発明は、多剤耐性癌細胞を化学療法剤に対して感作することができる化合物の合成に関する。
Ｎ−｛４−［２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−２−イソキノリニル）−エチル］フェニル｝−９，１０−ジヒドロ−５−メトキシ−９−オキソ−４−アクリジンカルボキサミドとして化学的に知られている多剤耐性阻害薬（ＭＤＲＩ）及びその生理学的に許容可能な塩は、Laboratories Glaxo S.A.の名称で出願され１９９２年７月２３日に公表されたＷＯ９２／１２１３２号明細書に記載されており、及びGlaxo Wellcome Inc.の名称で出願され、１９９６年４月１８日に公表されたＷＯ９６／１１００７号明細書にも記載されている。これらの化合物は、化学療法剤に対する多剤耐性癌細胞の感作に有用であるとして開示されている。
ＷＯ９２／１２１３２号明細書には、ペプチド合成によく用いられるカップリング試薬の存在下で化合物を反応させることによって合成されるものとして開示された。開示されたカップリング試薬としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド（場合によっては、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下で）、ジフェニルホスホリルアジドまたはＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾールが挙げられる。この反応に適当な不活性溶媒としては、エーテル、ハロゲン化炭化水素、アミドまたはケトンが挙げられる。
Ｎ−｛４−［２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−２−イソキノリニル）−エチル］フェニル｝−９，１０−ジヒドロ−５−メトキシ−９−オキソ−４−アクリジンカルボキサミド、及びその生理学的に許容可能な塩及び溶媒和物の合成も、Ne’rina Dodic et al.,Journal of Medicinal Chemistry,1995,Vol.38,No.13,pp.2418-2426に開示されている。Dodicの合成経路では、ＷＯ９２／１２１３２号明細書に記載したのと同じカップリング試薬が用いられた。Dodicの文献において、実施例８４は、Ｎ−｛４−［２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−２−イソキノリニル）−エチル］フェニル｝−９，１０−ジヒドロ−５−メトキシ−９−オキソ−４−アクリジンカルボキサミドに相当する。
発明の概要
本発明は、多剤耐性阻害薬であるＮ−｛４−［２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−２−イソキノリニル）−エチル］フェニル｝−９，１０−ジヒドロ−５−メトキシ−９−オキソ−４−アクリジンカルボキサミドの塩酸塩の改良合成法を提供する。この方法では、中間体のカップリングの際に水に不溶性のジイソプロピル尿素副生成物を生じる従来技術によるカップリング試薬の使用が除かれている。この尿素副生成物は、容易には除去されないものであった。従来技術では、中間体合成段階中に塩素化溶媒、例えばジクロロメタンの使用も示唆していた。
本発明は、カップリング中間体から形成される副生成物であるテトラメチル尿素が水溶性であり、容易に除去される改良法も提供する。更に、本発明の方法では、塩素化溶媒を用いる必要がなく、反応混合物から中間体の直接結晶化を行うことができる。本発明は、処理量が増加し、更に高純度の生成物を有する改良法も提供する。
本発明は、式（Ｉ）の塩酸塩であるＮ−｛４−［２−（１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−２−イソキノリニル）−エチル］フェニル｝−９，１０−ジヒドロ−５−メトキシ−９−オキソ−４−アクリジンカルボキサミドの合成のスキームに含まれる合成段階及び中間体を包含する。
0004390861.tif 000002
0004390861.tif 000003
発明の詳細な説明
明細書中の記載及び実施例では、下記の略号を用いることがある:ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）、ＴＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、g（グラム）、mL（ミリリットル）、ｍｐ（融点）、1Ｈ−ＮＭＲ（プロトン核磁気共鳴）、ppm（百万分率）、MHz（メガヘルツ）、及びeq.（モル当量）。特に断らない限り、総ての温度は℃（摂氏温度）で表す。
1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、Bruker ARX-300MHz装置を用い、ＤＭＳＯ中で測定した。化学シフトは、ＤＭＳＯのような内部標準に対してppmで表した。見かけの多重線は、ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｔ，三重線；ｍ，多重線；ｂｒ．ｓ，幅広い一重線と呼ぶ。Perkin Elmer DSC 7上で測定した。ＨＰＬＣデータは、Hitachi L-6200 Aポンプ、L-4000 UV検出器、D-2500積分計で集めた。
合成工程に用いる材料は、ウィスコンシン州、ミルウォーキーのAldric Chemical Companyから発売されている。ペプチドカップリング試薬のＴＢＴＵは、英国、ウェールズにあるPeboc,Llangefui,Anglesey,Gwyneddから発売されている。濾過助剤のHarborliteは、英国、ハルにあるHarborliteから発売されている。
合成工程は、テトラメチルウロニウム塩を基剤とするペプチドカップリング剤およびテトラメチルウロニウム塩を基剤とする活性剤のようなペプチド合成に用いるカップリング試薬の存在下で行う。代表的な薬剤としては、ＴＢＴＵ、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、およびＯ−（１，２−ジヒドロ−２−オキソ−１−ピリジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートが挙げられる。１，１’−カルボニルジイミダゾールのような他の酸活性化試薬を、この合成工程で用いることができる。この合成工程は、ピリジンのような芳香族アミン塩基の他にトリエチルアミンおよびジイソプロピルアミンのようなアルキルアミン塩基中で行うことができる。合成工程に適する溶媒としては、極性の非プロトン性溶媒、例えばＤＭＦまたは１−メチル−２−ピロリジノン、並びにアセトニトリルが挙げられる。
式（ＩＩ）の化合物を調製するためのスキーム１の出発化合物は、下記の段階１および２に従って調製される。
0004390861.tif 000004
段階１では、式（ＩＩｃ）のメトキシ二酸は、２−アミノ−３−メトキシ安息香酸（ＩＩａ）、２−ブロモ安息香酸（ＩＩｂ）、炭酸カリウムおよび銅粉末の懸濁液を形成し、これをエタノール中で攪拌し、少なくとも０．５時間、好ましくは１時間加熱還流することによって得られる。懸濁液を２０〜２５℃まで冷却し、水を加える。濾過助剤を加え、混合物を濾過する。濾過床を水で洗浄し、合わせた濾液を濃塩酸を約３０分間かけて加えることによってｐＨ２〜３に調整した。次に、生成する懸濁液を、１０〜１２℃の反応装置中で少なくとも１時間エージングし、固形生成物を濾過によって集め、水で洗浄し、５０℃にて真空で乾燥する。
段階２では、段階１で形成した式（ＩＩｃ）のメトキシ二酸をアセトニトリルと混合し、加熱還流し、オキシ塩化リンを２時間かけて滴加する。生成する混合物を、少なくとも１時間、好ましくは２時間加熱還流する。次いで、この混合物を１０〜１５℃まで冷却する。水を加えて、生成する粘稠なスラリーを還流温度で２．５時間加熱する。次に、スラリーを１０℃まで冷却して、濾過する。生成物である式（ＩＩ）のアクリドン酸を水で洗浄した後、アセトニトリルで洗浄し、５０℃で４８時間真空乾燥する。
式（ＩＩＩ）の化合物を調製するためのスキーム１の出発化合物は、下記の段階３および４に従って調製される。
0004390861.tif 000005
段階３では、式（ＩＩＩｃ）のニトロフェネチルイソキノリンが、式（ＩＩＩａ）の４−ニトロフェネチルブロミド、式（ＩＩＩｂ）の６，７−ジメトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩、無水炭酸カリウム、およびヨウ化カリウムをＤＭＦ中で混合することによって得られる。混合物を、窒素雰囲気下にて攪拌しながら７０℃で１８時間加熱する。混合物を５０℃まで冷却し、メタノールを加える。混合物を更に３０℃まで冷却し、水を加える。次いで、混合物を１０℃で１時間攪拌して、濾過し、生成物を水で洗浄し、４５℃で真空乾燥する。
段階４では、段階３で形成されたニトロフェネチルイソキノリンまたは式（ＩＩＩｃ）をエタノールとＴＨＦの溶液中で１５〜２０°で攪拌し、窒素置換して、Ｐｄ／Ｃ触媒を加える。再度窒素置換した後、攪拌を停止し、混合物を水素置換する。攪拌を再開し、水素の吸収が完了するまで混合物を１５〜２５℃に保持する。反応混合物を濾過し、濾紙をＴＨＦで濯ぎ、合わせた濾液を真空下、５５〜６５℃で適当な容積まで濃縮する。ヘキサンを２０〜４０分の時間をかけて加え、生成するスラリーを０℃まで冷却する。０℃で１．５時間攪拌した後、懸濁液を濾過し、固形生成物をヘキサンで洗浄し、真空オーブンで４０〜４５℃で乾燥する。生成する固形生成物は、式（ＩＩＩ）のアミノフェネチルイソキノリンである。
式（ＩＶ）の多剤阻害薬遊離塩基化合物を調製するためのスキーム１の中間体化合物を、段階５に従って調製する。
0004390861.tif 000006
スキーム２の段階５では、中間体化合物である式（ＩＩ）のアクリドン酸と式（ＩＩＩ）のアミノフェネチルイソキノリンの混合物をＤＭＦ中窒素雰囲気下にて攪拌し、約１０分間で完全に溶解させる。ペプチドカップリング試薬ＴＢＴＵを加えた後、塩基であるトリエチルアミンを加える。溶液を２０〜２５℃で１〜２時間攪拌して、反応を完了させる。イソプロパノール−水の混合物を加え、混合物を２０〜２５℃で３０〜６０分間攪拌して、結晶化を起こさせる。生成するスラリーである式（ＩＶ）のＭＤＲＩ遊離塩基を濾過して、メタノールで洗浄した後、水で洗浄し、５０℃までの真空オーブン中で乾燥する。
次いで、粗製のＭＤＲＩ遊離塩基を、３５〜４０℃でＤＭＦに溶解した後、３５〜４０℃で約４時間かけてエタノールを加える。次に、生成するスラリー１０℃で１時間冷却し、濾過する。生成物をメタノールで洗浄し、５０℃までの真空オーブンで乾燥する。
スキーム２の式（Ｉ）の化合物であって、式（ＩＶ）のＭＤＲＩ遊離塩基が段階６に従って式（Ｉ）の塩酸塩に転換されているもの。
0004390861.tif 000007
段階６では、式（ＩＶ）のＭＤＲＩ遊離塩基を氷酢酸中で攪拌懸濁したものを６５〜７０℃に加熱し、生成する溶液を熱時濾過する。次に、溶液を７０℃まで再加熱し、加熱して前濾過したエタノールを加える。次に、前濾過した濃塩酸を、約３０分間かけて加える。生成する溶液を、７０℃で結晶が生成するまで約２０分間攪拌した後、１時間かけて２０〜２５℃まで冷却して、濾過する。生成する濾過ケーキをエタノールで洗浄し、真空オーブンで６５℃で少なくとも７０時間乾燥する。
実施例
実施例１
メトキシ二酸（式ＩＩｃ）
２−アミノ−３−メトキシ安息香酸（式ＩＩａ）１６４．６ｇ（１モル当量）、２−ブロモ安息香酸（式ＩＩｂ）２１７．７ｇ（１．１モル当量）、炭酸カリウム２７２．３ｇ（２．０モル当量）、および銅粉末１２．５ｇ（０．２モル当量）の懸濁物をエタノール１５００ｍＬ中で攪拌し、０．５〜３時間、好ましくは１時間加熱還流する。懸濁液を２０〜２５℃まで冷却し、水１４５０ｍＬを加える。濾過助剤１５ｇを加え、混合物を濾過する。濾過床を水８７５ｍＬで洗浄し、合わせた濾液に濃塩酸２５０ｍＬを３０分間かけて加えることによってｐＨ２〜３に調整する。次に、生成する懸濁液を反応装置で１０〜１２℃で少なくとも１時間エージングし、固形生成物を濾過によって集め、水１４５０ｍＬで洗浄し、５０℃で真空乾燥する。標記化合物の予想収量は、理論収率で９５％である。
1Ｈ−ＮＭＲ（300MHz）:δ3.7（s,3H,OMe）,6.1-7.9（m,7H,Ar）,9.7（br s,1H,COOH）,11.1（br s,1H,COOH）ppm。Ｍｐは254〜256℃である。
実施例２
アクリドン酸（式ＩＩ）
メトキシ二酸（式ＩＩｃ）２８０．０ｇ（１モル当量）をアセトニトリル２３００ｍＬと混合したものを加熱還流し、オキシ塩化リン２００ｍＬ（２．２モル当量）を２時間かけて滴加する。混合物を１〜５時間、好ましくは２時間加熱還流する。混合物を次に、１０〜１５℃まで冷却する。混合物に、水１７００ｍＬを加え、生成する粘稠なスラリーを２．５時間加熱還流する。次いで、スラリーを１０℃まで冷却し、濾過する。得られる生成物を水８５０ｍＬで２回洗浄し、アセトニトリル８５０ｍＬで２回洗浄し、５０℃で４８時間真空乾燥する。標記化合物の予想収率は、理論収率で９５％である。
1Ｈ−ＮＭＲ（300MHz）:δ4.0（s,3H,OMe）,6.9-8.5（m,7H,6ArおよびNH）,10.1（br s,1H,COOH）ppm。Ｍｐは354〜362℃である。
実施例３
ニトロフェネチルイソキノリン（式ＩＩＩｃ）
４−ニトロフェネチルブロミド（式ＩＩＩａ）３０２ｇ（１モル当量）、６，７−ジメトキシ−１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン塩酸塩（式ＩＩＩｂ）３０２ｇ（１モル当量）、無水炭酸カリウム１８１ｇ（１．１モル当量）、およびヨウ化カリウム４５ｇ（０．２モル当量）をＤＭＦ１５００ｍＬ中で混合したものを、窒素雰囲気下にて攪拌しながら７０℃で１２〜２４時間、好ましくは１８時間加熱する。混合物を５０℃まで冷却し、メタノール４５０ｍＬを加える。次いで、混合物を３０℃まで冷却した後、水３０００ｍＬを加える。混合物を１０℃で１時間攪拌して濾過し、生成物を水１５００ｍＬで２回洗浄し、４５℃で真空乾燥する。標記化合物の予想収率は、理論終始津で９０％である。
1Ｈ−ＮＭＲ（300MHz）:δ2.53-3.0（m,8H,CH2）,3.5（s,2H,N-CH2-Ph）,3.7（s,6H,OMe）,6.4（d,2H,Arイソキノリン）,7.2および7.9（dd,4H,Ar PHNO2）ppm。Ｍｐは116〜118℃である。
実施例４
アミノフェネチルイソキノリン（式ＩＩＩ）
ニトロフェネチルイソキノリン（式ＩＩＩｃ）２３０．０ｇ（１モル当量）をエタノール１７００ｍＬおよびＴＨＦ１７００ｍＬに１５〜２０℃で攪拌溶解したものを窒素置換し、Ｐｄ／Ｃ触媒４６ｇを加える。再度窒素置換を行った後、攪拌を停止し、混合物を水素置換する。攪拌を再開し、水素の吸収が終わるまで（１〜２０時間）混合物を１５〜２５℃に保持する。反応混合物を濾過し、フィルターをＴＨＦ９００ｍＬで洗浄した後、合わせた濾液を真空下にて５５〜６５℃で７倍容積まで濃縮する。濃縮した濾液にヘキサン２０００ｍＬを２０〜４０分間かけて加え、生成するスラリーを０℃まで冷却する。０℃で１．５時間攪拌した後、懸濁液を濾過し、固形生成物をヘキサン４５０ｍＬで洗浄し、真空オーブンで４０〜４５℃で乾燥する。標記化合物の予想収量は、理論収率で８９％である。
1Ｈ−ＮＭＲ（300MHz）:δ2.5-3.0（m,8H,CH2）,3.5（s,2H,N-CH2-Ph）,3.7（s,6H,OMe）,6.4（d,2H,Arイソキノリン）,7.2および7.9（dd,4H,Ar PHNO2）ppm。Ｍｐは123〜126℃である。
実施例５
ＭＤＲＩ遊離塩基（式ＩＶ）
アクリドン酸（式ＩＩ）２００．０ｇ（１モル当量）とアミノフェネチルイソキノリン（式ＩＩＩ）２３２．１ｇ（１モル当量）の混合物を、ＤＭＦ２０００ｍＬ中で２０〜２５℃にて約１０分間で完全に溶解し終わるまで攪拌する。この混合物に、ペプチドカップリング試薬であるＴＢＴＵ２５０．５ｇ（１．０５モル当量）を加えた後、塩基であるトリエチルアミン２１８ｍＬ（２．１モル当量）を加える。生成する溶液を、２０〜２５℃にて反応が完了するまで１〜２時間攪拌する。イソプロパノール１０００ｍＬと１０００ｍＬとの１：１混合物を加え、混合物を結晶化が起こるまで２０〜２５℃にて攪拌する（３０〜６０分間）。生成するスラリーを濾過し、メタノール１６００ｍＬで洗浄した後、水１６００ｍＬで洗浄する。スラリーを真空オーブンで５０℃以下で乾燥する。
粗製のＭＤＲＩ遊離塩基（式ＩＶ）を次に３５〜４０℃のＤＭＦ１８００ｍＬに溶解した後、３５〜４０℃にてエタノール３６００ｍＬを約４時間かけて添加することによって再結晶する。次いで、生成するスラリーを１０℃まで１時間冷却し、濾過する。生成物をメタノール１０００ｍＬで洗浄し、真空にて５０℃以下で乾燥する。標記化合物の予想収量は、理論収率で７０〜７５％である。
1Ｈ−ＮＭＲ（300MHz）:δ2.40-2.95（m,8H,CH2）,3.58（s,2H,N-CH2-Ph）,3.72（s,6H,20Me）,4.05（s,3H,OMeアクリドン）,6.78（d,2H,Arイソキノリン）,7.20-7.88（m,8H,Ar）,8.48（t,2H,H2およびH7アクリドン）,10.60（br s,1H,CONH）,12.32（br s,1H,NHアクリドン）ppm。Ｍｐは215〜220℃である。
実施例６
ＭＤＲＩ原薬（式Ｉ）
ＭＤＲＩ遊離塩基（式ＩＶ）２０．０ｇ（１モル当量）を氷酢酸８０ｍＬ中に懸濁したものを６５〜７０℃に加熱し、生成する溶液を濾過する。次に、溶液を７０℃まで再加熱し、前濾過したエタノール（７０℃）２４０ｍＬを加える。この溶液に、前濾過した濃塩酸４．４ｍＬ（１．５モル当量）を約３０分間かけて加える。生成する溶液を結晶が生じるまで約２０分間７０℃で攪拌し、１時間かけて２０〜２５℃まで冷却して、濾過する。生成する濾過ケーキをエタノール１２０ｍＬで２回洗浄し、真空オーブン中で６５℃にて少なくとも７０時間乾燥する。標記化合物の予想収量は、理論収率で９０％である。
1Ｈ−ＮＭＲ（300MHz）:δ12.31（s,1H）,10.98（br s,1H）,10.75（s,1H）,8.53（dd,1H）,8.52（ddd,1H）,7.82（ddd,1H）,7.76（m,2H）,7.44（dd,1H）,7.40（dd,1H）,7.38（m,2H）,7.28（dd,1H）,6.84（s,1H）,6.81（s,1H）,4.52（d,1H）,4.29（dd,1H）,4.06（s,3H）,3.77（m,1H）,3.76（s,3H）,3.75（s,3H）,3.45（m,2H）,3.33（m,1H）,3.19（m,1H）,3.19（m,2H）,2.96（dt,1H）ppm。Ｍｐは240℃である。
分析値
Ｃ34Ｈ33Ｎ3Ｏ5・ＨＣｌ・0.5Ｈ2Ｏに対する計算値：Ｃ，67.04；Ｈ，5.57；Ｎ，6.90；Ｃｌ，５．８２。
実測値：Ｃ，67.00；Ｈ，5.78；Ｎ，6.89；Ｃｌ，５．８７。