(57)【要約】  本発明は、クメストロールを含むマメ抽出物を有効成分として含む更年期疾患の予防等についての組成物に関し、より詳細には、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を含む更年期疾患の予防等についての組成物に関する。
2016526019.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含む、更年期疾患の予防または治療用薬学組成物。
【請求項２】
クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含む、更年期疾患の予防または改善用健康食品組成物。
【請求項３】
クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含む、更年期皮膚症状の予防または改善用化粧料組成物。
【請求項４】
前記発芽発酵マメは、発芽工程と発酵工程が同時にまたは順次的に進行されたマメである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記マメは、発芽工程後に発酵工程が進行されたものである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記発芽工程は、反応器の体積全体に対して２０〜８０体積％の培地を含む反応器内において、反応器の体積全体に対して１〜５０体積％のマメによって進行されるものである、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記発芽工程は、２０〜３５℃の温度および暗条件で、２〜１０日間進行されるものである、請求項４に記載の組成物。
【請求項８】
前記発酵工程は、前記発芽マメと微生物を接触させるものである、請求項４に記載の組成物。
【請求項９】
前記微生物は、真菌、酵母および乳酸菌から構成された群より選択される一つ以上である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記微生物は、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ショウユコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｏｊａｅ）、ニホンコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）、およびビフィドバクテリウムインファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）からなる群より選択された一つ以上である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記更年期疾患は、更年期による筋肉疾患、骨疾患、心臓疾患、皮膚疾患または肥満である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項１２】
前記筋肉疾患は、更年期によるリウマチ性関節炎または退行性関節炎であり；
前記骨疾患は、更年期による骨粗鬆症、腰痛、くる病、骨軟化症またはパジェット骨病（Ｐａｇｅｔ´ｓ  ｄｉｓｅａｓ  ｅ  ｏｆ  ｂｏｎｅ）であり；
前記心臓病は、更年期による狭心症または動脈硬化症であり；あるいは
前記皮膚疾患は、皮膚紅潮または皮膚乾燥症である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記更年期皮膚症状は、皮膚紅潮、皮膚の厚み減少、皮膚の弾力減少、紫外線による皮膚刺激または皮膚乾燥症である、請求項３に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物は、組成物の総重量に対して０．０００１〜１０質量％でクメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クメストロールを含む大豆抽出物を有効成分として含む、更年期疾患の予防等するための組成物に関し、より詳細には、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を含む、更年期疾患の予防等するための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
更年期症状は、男性ホルモンまたは女性ホルモンの分泌減少によって誘発される疾患をいう。特に、女性の場合、卵巣の老化によるエストロゲンの分泌減少によって閉経前後約２〜１０年にわたって現れる疾患で、高熱、汗、不眠症、うつ病、尿失禁、痛み、骨粗鬆症、心筋梗塞、脳卒中および高血圧といった症状が誘発される。
【０００３】
更年期症状の中で最も代表的な疾患である骨粗鬆症は、破骨細胞の活性が造骨細胞に比べて増加することにより総骨量（ｔｏｔａｌ  ｂｏｎｅ  ｍａｓｓ）が減少する症状をいう。骨粗鬆症が発生すると、皮質骨（ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｂｏｎｅ）の幅が減少し、骨髄の空洞（ｃａｖｉｔｙ）が拡大し、網状組織骨梁が低くなって骨が継続して多孔質となる。骨粗鬆症が進展するに伴い、骨の物理的強度が低下して腰痛や関節痛が誘発され、少しの衝撃でも骨が欠けやすくなる。
【０００４】
こうした更年期症状の予防および治療のために、ホルモン代替療法、非ステロイド系製剤および骨粗鬆症治療のための薬物治療法等が開発されており、現在、ホルモン代替療法がもっとも効果的な方法として使用されている。しかし、前記のようにホルモンを長期投与する場合には、発癌リスク、頭痛、体重増加といった副作用等が発生する短所があるものと知られている。これにより、より安全かつ効果的な天然由来物質を利用した治療剤の開発が切実に求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】韓国特許公開第１０−２０１１−００８９１０７号公報
【特許文献２】韓国特許公開第１０−２０１１−０１１００５３号公報
【特許文献３】韓国特許公開第１０−２０１１−０１１００５２号公報
【特許文献４】韓国特許公開第１０−２００２−００００９８０号公報
【特許文献５】国際公開第２０１２／００６７５０号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、更年期症状または疾患に効果のある、天然の抽出物を含む組成物を提供するところにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記目的を達成するために、本発明は、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含む、更年期疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する。
【０００８】
本発明は、また、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含む、更年期疾患の予防または改善用健康食品組成物を提供する。
【０００９】
さらに、本発明は、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含む、更年期皮膚症状の予防または改善用化粧料組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の組成物は、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含むため、更年期疾患または更年期症状の予防、治療および改善に有用に利用することができる。具体的に、本発明の組成物は、更年期による体重増加の程度を緩和させることができ、骨密度を更年期前と類似した水準に回復させることができ、更年期に伴う皮膚の厚み減少および皮膚の弾力減少の水準を緩和させることができる。それだけでなく、本発明の組成物は、更年期に伴う皮膚の水分損失の水準も緩和させることができ、エストロゲンを活性化させることができ、コラーゲンを分解するＭＭＰ１の量を減少させるとともにプロコラーゲンの量を増加させることができるため、更年期疾患または更年期症状に有用に使用することができる。また、本発明の組成物は、天然物を有効成分として含むため、長期間の使用時にも耐性がなく、副作用がほとんどないという長所がある。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】卵巣摘出を通じた更年期誘導マウスモデルにおける、１４週間の体重変化を測定したグラフである（ｘ軸：週（ｗｅｅｋ）、ｙ軸：グラム（ｇ））。
【図２】卵巣摘出を通じた更年期誘導マウスモデルにおける、３０週齢無毛マウスの皮膚の厚みを測定した結果である（ｙ軸：グラム（ｇ））。
【図３】卵巣摘出を通じた更年期誘導マウスモデルにおける、無毛マウスの皮膚の弾力性および粘性を測定した結果を図示したものである（ｙ軸：ユニット（ｕｎｉｔ））。
【図４】卵巣摘出を通じた更年期誘導マウスモデルにおける、無毛マウスの皮膚の水分蒸発量を測定した結果を図示したものである。
【図５】各実験群における、エストロゲン受容体を活性化させる程度を比較したものである。
【図６】各実験群におけるＭＭＰ１の発現を抑制する程度を比較したものである。
【図７】各実験群によるプロコラーゲン合成量の程度を比較したものである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、一観点において、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含む、更年期疾患の予防または治療用薬学組成物に関する。
【００１３】
本発明は、他の観点において、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含む、更年期疾患の予防または改善用健康食品組成物に関する。
【００１４】
本発明は、また他の観点において、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含む、更年期の皮膚症状の予防または改善用化粧料組成物に関する。
【００１５】
本明細書において、前記「マメ」は、発芽が可能で、クメストロールを含む、または合成するマメ科植物であれば制限なく使用可能である。
【００１６】
具体的に、前記マメは、ジャン類および豆腐用、ナムル用、かて飯用または枝豆用の品種であってよい。ジャン類および豆腐用品種としては、大豊、湖醤、壮元、デーファン、ソダム、松鶴、大元、真品、蛋白、豆油、新八達、太光、萬里、長壽、無限、白雲、セアル、黄金および長葉等があり、ナムル用品種としては、シンファコン、ソウォンコン、安平、西南、多彩、小緑、小湖、疏明、多元、豊産ナムル、益山ナムル、小白ナムル、光安、短葉および銀河等があり、かて飯用品種としては、青磁、黒青、褐味、鮮黒、コムジョンコンおよび一品コムジョンコン等がある。また、枝豆用品種としては、ダオル、新緑、セオル、コムジョンオル、夕凉プッコンおよび華厳プッコン等がある。
【００１７】
より具体的に、本明細書において、前記「マメ」は、霜太（Ｓｅｏｒｉｔａｅ，Ｇｌｙｃｉｎ  ｍａｘ  ＭＥＲＲ）、鼠目太（Ｓｅｏｍｏｋｔａｅ，Ｒｈｙｎｃｈｏｓｉａ  Ｎｏｌｕｂｉｌｉｓ）、黒太（Ｂｌａｃｋ  ｓｏｙｂｅａｎ，Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）Ｍｅｒｒ．）、青太（ｂｌｕｅ  ｂｅａｎ，Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ  ＭＥＲＲ）、黄太（ｙｅｌｌｏｗ  ｂｅａｎ，Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ  ＭＥＲＲ）、ソラマメ（ｆｉｅｌｄ  ｂｅａｎ，Ｖｉｃｉａ  ｆａｂａ）、インゲンマメ（ｋｉｄｎｅｙ  ｂｅａｎ，Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、ウズラマメ（ｐｉｎｔｏ  ｂｅａｎ，Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ  Ｌ．）、赤小豆（ｓｍａｌｌ  ｒｅｄ  ｂｅａｎ，Ｖｉｇｎａ  ａｎｇｕｌａｒｉｓ）、黒小豆（ｓｍａｌｌ  ｂｌａｃｋ  ｂｅａｎ，Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ  ａｎｇｕｌａｒｉｓ．Ｆ．ＷＩＧＨＴ．）、モヤシマメ（ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ  ｂｅａｎ，Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）Ｍｅｒｒ．）および大豆（ｓｏｙｂｅａｎ，Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ）から構成された群より選択される１以上であってよい。
【００１８】
本明細書において、前記「発芽発酵マメ」とは、発芽工程と発酵工程が同時にまたは順次的に進行されたマメを意味する。
【００１９】
本発明の一側面において、発芽工程および発酵工程のうちいずれか一つ以上の工程の条件は、発芽および発酵が持続的に行われ得る条件であれば特に制限されない。発芽または発酵工程の条件について例示すると、以下のとおりである。
【００２０】
たとえば、前記発芽工程は、マメの少なくとも一部を、酸素または空気と接触させて進行されてよい。
【００２１】
前記発芽工程は、反応器内で進行可能であるが、かかる発芽工程は、反応器の体積に対して２０〜８０体積％、具体的に、４０〜６０体積％、より具体的に、４５〜５５体積％の培地を含む反応器内で進行されてよい。
【００２２】
前記発芽工程において使用する培地は、発芽および／または発酵が円滑に行われ得る培地であれば特に制限されず、具体的に、液体栄養培地、より具体的に、ＰＤＢ培地（ｐｏｔａｔｏ  ｄｅｘｔｒｏｓｅ  ｂｒｏｔｈ）を例として挙げることができる。本発明の他の一側面において、培地は、培地重量全体に対して０．００１〜１０質量％、具体的に、０．１〜５質量％、より具体的に、０．５〜２質量％の糖類を含んでよい。
【００２３】
本発明の一側面において、前記発芽工程は、反応器の体積に対して１〜５０体積％、具体的に、５〜２０体積％、より具体的に、６〜１２体積％のマメを反応器に接種して進行されてよい。
【００２４】
本発明の一側面において、前記発芽工程は、酸素または空気を最大に供給しつつ進行されてよい。たとえば、５０００ｍｌ反応器で工程が進行される場合には２，５００ｖｖｍ／ｍ、３Ｌ反応器で工程が進行される場合には１５，０００ｖｖｍ／ｍで、酸素または空気を供給してよい。このように十分な酸素または空気を供給することにより、発芽が円滑に行われ得る。
【００２５】
本発明の一側面において、前記発芽工程は、前記工程は、２０〜３５℃、具体的に、２０〜３０℃の温度で進行されてよい。本発明の他の一側面において、前記工程は、遮光条件下で進行されてよい。本発明の他の一側面において、前記工程は、２〜１０日間進行されてよい。たとえば、発芽工程が２日間進行された後、発芽工程と発酵工程が同時にまたは時間差を置いて６〜８日間進行されてよい。
【００２６】
前記発酵工程は、大豆の少なくとも一部を、微生物と接触させて進行されてよい。
【００２７】
具体的に、前記発酵工程は、マメに微生物を１〜１０回、具体的に、１〜５回、より具体的に、１〜３回接種させて進行されてよい。このような過程を通じて、微生物が豆により十分に接触され得る。本発明の一側面において、前記微生物は、当業界において知られている、マメの発酵を可能にする微生物であれば制限なしに適用可能であるが、具体的に、真菌、酵母または乳酸菌であってよい。また、より具体的に、前記真菌は、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）またはモナスカス（Ｍｏｎａｓｃｕｓ）属の微生物であってよく、前記微生物は、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ショウユコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｏｊａｅ）、ニホンコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）およびビフィドバクテリウムインファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）からなる群より選択された一つ以上であってよい。
【００２８】
また、前記発酵工程は、微生物とマメとの接触が可能な形態であれば制限なしに適用可能である。たとえば、微生物の胞子の懸濁液をマメの子葉表面に塗布することによりマメの微生物を接触させてもよく、または、微生物のパウダーをマメが含まれている培地に加えることにより微生物をマメに接触させてもよい。
【００２９】
前記発酵工程において、培地重量を基準として０．０５〜２質量％、具体的に、０．７５〜２質量％、より具体的に、１．０〜２．０質量％の微生物をマメと接触させてよい。
【００３０】
前記「発芽発酵マメ」の製造において、発芽工程と発酵工程が同時に進行される場合、マメを微生物と接触させた状態で、酸素または空気と接触させる方法で進行されてよい。具体的に、前記マメを、前記微生物を含む培地に浸漬させた状態で、前記酸素または空気と接触させて進行されてよい。
【００３１】
前記「発芽発酵マメ」の製造において、発芽工程と発酵工程は、順次的に、たとえば、発芽工程を進行した後に発酵工程を進行して、または、発酵工程を進行した後に発芽工程を進行して得られてよい。具体的に、発芽工程を２日間進行した後に、発芽工程および発酵工程を同時にまたは順次的に進行させて６〜８日間進行されてよい。
【００３２】
前記発芽発酵マメの製造において、発芽工程の前に、マメを滅菌水、エタノールおよび次亜塩素酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ）のうちいずれか一つ以上、具体的に、滅菌水で洗浄する殺菌工程をさらに含んでよい。
【００３３】
上述したような工程を通じて得られたクメストロールが含まれているマメを利用して、水またはエタノールで室温冷浸あるいは温浸して得た抽出物を完全に濃縮した後、再び水に分散し、同量のヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール、エタノール、メタノール、および水から選択される一つ以上の溶媒で分画して、クメストロールが含有されているマメ抽出物を得ることができる。しかし、抽出方法は、これに制限されるものではなく、最終的な抽出物中にクメストロールが含まれるようにするあらゆる抽出方法を使用してよい。
【００３４】
本明細書において、前記「クメストロール」は、下記化学式１のような構造を有してよい。
【００３５】
【化１】
2016526019.tif 000003
【００３６】
本発明の一観点である薬学組成物または健康食品組成物において、前記更年期疾患は、更年期による筋肉疾患、骨疾患、心臓疾患、皮膚疾患または肥満を含んでよい。
【００３７】
なお、前記筋肉疾患は、更年期によるリウマチ性関節炎または退行性関節炎であってよく、前記骨疾患は、更年期による骨粗鬆症、腰痛、くる病、骨軟化症またはパジェット骨病（Ｐａｇｅｔ´ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｏｆ  ｂｏｎｅ）であってよく、前記心臓病は、更年期による狭心症または動脈硬化症であってよく、前記皮膚疾患は、皮膚紅潮または皮膚乾燥症であってよい。
【００３８】
本発明の一観点である化粧料組成物において、更年期による皮膚症状は、具体的に、皮膚紅潮、肥満、皮膚の厚み変化、皮膚の弾力性減少または皮膚乾燥症を含んでよいが、これらに制限されるものではなく、更年期に伴う皮膚の変化現象すべて包括するものである。
【００３９】
本発明の一実施例に係る薬学組成物は、防腐剤、安定化剤、水和剤または乳化促進剤、浸透圧調節のための塩および／または緩衝剤等の薬剤学的補助剤およびその他治療的に有用な物質をさらに含有してよく、通常の方法に従って、多様な経口投与剤または非経口投与剤の剤形に剤形化してよい。
【００４０】
前記経口投与剤は、たとえば、錠剤、丸剤、硬質および軟質カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳化剤、シロップ剤、粉剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、ペレット剤等があり、これらの剤形は、有効成分以外に、界面活性剤、希釈剤（例：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロースおよびグリシン）、滑沢剤（例：シリカ、タルク、ステアリン酸およびそのマグネシウムまたはカルシウム塩ならびにポリエチレングリコール）を含有してよい。錠剤はまた、マグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカンス、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンといった結合剤を含有してよく、場合に応じて、澱粉、寒天、アルギン酸またはそのナトリウム塩といった崩解剤、吸収剤、着色剤、香味剤および甘味料等の薬剤学的添加剤を含有してよい。前記錠剤は、通常の混合、顆粒化またはコーティング方法によって製造されてよい。
【００４１】
また、前記非経口投与剤は、たとえば、注射剤、点滴剤、軟膏、ローション、ゲル、クリーム、スプレー、懸濁剤、乳剤、坐剤、パッチ等の剤形であってよいが、これらに制限されるものではない。
【００４２】
本発明の一実施例に係る前記薬学組成物は、経口、非経口、直腸、局所、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下等に投与されてよい。本発明の一実施例に係る薬学組成物は、たとえば、頭皮に局所投与されてよい。
【００４３】
また、前記活性成分の薬剤学的に許容可能な容量、すなわち投与量は、治療を受ける対象の年齢、性別、体重と、治療する特定の疾患または病理状態、疾患または病理状態の深刻度、投与経路および処方者の判断に応じて変わり得るものである。こうした因子に基づく投与量の決定は、当業者の水準内にある。一般的な投与量は、０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日であってよく、１ｍｇ／ｋｇ／日〜４０ｍｇ／ｋｇ／日とされてもよいが、前記投与量は、いかなる方法でも本発明の範囲を限定するものではない。
【００４４】
また、本発明の他の実施形態に係る健康食品組成物は、発酵乳、チーズ、ヨーグルト、ジュース、生菌製剤および健康補助食品等に加工されてよく、その他多様な食品添加物の形態で使用されてよい。
【００４５】
前記組成物は、本発明が目的とする主効果を損なわない範囲内で、主効果に相乗効果を与え得る他の成分等を含有してよい。たとえば、物性改善のために、香料、色素、殺菌剤、酸化防止剤、防腐剤、保湿剤、増粘剤、無機塩類、乳化剤および合成高分子物質等の添加剤をさらに含んでよい。その他にも、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖および海藻エキス等の補助成分をさらに含んでもよい。前記成分は、剤形または使用目的に応じて、当業者が困難なく適宜選定して配合してよく、その添加量は、本発明の目的および効果を損なわない範囲内で選択されてよい。
【００４６】
本発明に係る組成物の剤形は、溶液、乳化物、粘性型混合物、タブレット、粉末等の多様な形態であってよく、これは、単純飲用、注射投与、スプレー方式、またはスクイーズ方式等の多様な方法で投与されてよい。
【００４７】
本発明の一観点である組成物において、前記マメは、発芽工程と発酵工程が同時にまたは順次的に進行された発芽発酵マメであってよい。
【００４８】
本発明の一観点である組成物において、前記マメは、発芽工程後に発酵工程が進行されてよい。
【００４９】
本発明の一観点である組成物において、前記発芽工程は、反応器の体積全体に対して２０〜８０体積％の培地を含む反応器内で、反応器の体積全体に対して１〜５０体積％のマメで進行されてよい。
【００５０】
本発明の一観点である組成物において、前記発芽工程は、２０〜３５℃の温度および暗条件で、２〜１０日間進行されてよい。
【００５１】
本発明の一観点である組成物において、前記発酵工程は、前記発芽マメと微生物を接触させるものであってよい。
【００５２】
本発明の一観点である組成物において、前記微生物は、真菌、酵母および乳酸菌から構成された群より選択される一つ以上であってよい。
【００５３】
本発明の一観点である組成物において、前記微生物は、コウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ）、ショウユコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｏｊａｅ）、ニホンコウジカビ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）およびビフィドバクテリウムインファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）からなる群より選択された一つ以上であってよい。
【００５４】
本発明の一観点である組成物において、前記組成物は、組成物の総重量に対して０．０００１〜１０質量％でクメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を含んでよい。前記抽出物が０．０００１質量％未満で含有される場合、更年期症状または疾患に対する効果が多少微々たるものと観察され、１０質量％を超えて含有される場合、組成物の他の成分範囲に影響を及ぼす。前記のような観点から、前記組成物は、組成物の総重量に対して０．００１〜９．５質量％、０．０１〜９質量％、または０．１〜８．５質量％のクメストロールを含んでよい。
【００５５】
以下、実施例を通じて本発明をより詳細に説明することとする。これらの実施例は、もっぱら本発明を例示するためのものであって、本発明の範囲がこれらの実施例により制限されると解釈されないことは、当業界における通常の知識を有する者にとって自明のことであろう。
【００５６】
［実施例１］クメストロールを含む発芽発酵マメおよびその抽出物の製造
まず、すべての器具を、微生物接種前に、１２１℃の高圧滅菌器で滅菌して準備した。マメは豊産ナムルコン（ソウォンコン、Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ（Ｌ．）Ｍｅｒｒｉｌｌ）を利用した。マメの種子を、滅菌水、エタノール、および次亜塩素酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ  ｈｙｐｏｃｈｌｉｒｉｔｅ）で２回洗浄殺菌した。その後、１％スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）、１％グルコース（ｇｌｕｃｏｓｅ）および１％ＳＲＴのうち一つ以上を含む培地を、反応器の体積に対して２０〜８０体積％の量で準備した。たとえば、１０トン単位の反応器を使用する場合、培地の量は８トン使用した。また、マメの種子は、反応器の体積に対して３〜１２体積％の密度で接種した。たとえば、１０トン単位の反応器を使用する場合、種子の量は１．２トン使用した。培地とマメの種子を含む反応器において、温度２５℃、遮光、空気供給１５０００ｖｖｍ／ｍ条件下で、それぞれマメの種子を発芽させた。
【００５７】
発芽２日目、マメに芽が出始めると、培地の重量全体に対して０〜１．２５質量％の菌株（ニホンコウジカビ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｙｚａｅ）（（株）ＭＥＤＩＯＧＥＮから入手、１×１０９ＣＦＵ／ｇ）を培地に入れ、８日目までこれを培養して発酵させた。
【００５８】
このように得られた発芽発酵マメに、８０℃以上の熱水を加えて抽出した抽出物を乾燥した後、使用した。前記発芽発酵マメ抽出物中、クメストロールの濃度は、約０．１％であった。
【００５９】
［実験例１］発芽発酵マメ抽出物による更年期体重増加の改善
実験動物としては、体重が２６〜２７ｇの雌無毛マウスを使用した。前記実験動物は、温度２３±１℃、湿度４０〜６０％および明暗周期１２時間の条件で飼育し、基本飼料と飲用水は制限なし供給した。ただし、採血前日には飲用水のみ供給した。
【００６０】
卵巣摘出手術は、１５週齢の無毛マウスを麻酔した後、７０％エタノールで消毒した後、無菌的に手術を施した。一側の側背部下端部位の脊椎線に沿って皮膚組織を約２〜３ｃｍ程度切開した後、卵巣が位置する筋肉および腹膜を１．５ｃｍ切開して卵巣を露出させた。卵巣を切除し、シルクを使用して腹膜、筋肉および皮膚を縫合した。反対側についても、同様の方法で卵巣を摘出した。対照群としては、腹膜までのみ同一に施術し、卵巣は摘出しないまま再び縫合する偽手術（ｓｈａｍ  ｏｐｅｒａｔｉｏｎ）を施した。手術後、１週間の回復期を置いた。
【００６１】
実験動物を対照群（偽手術群）と卵巣摘出群とに区分し、卵巣摘出群は、さらに発芽発酵マメ抽出物５００ｍｇ／ｋｇ投与群とクメストロール０．５ｍｇ／ｋｇ投与群に各１０匹ずつ分けた。クメストロール投与群の濃度は、発芽発酵マメ抽出物におけるクメストロール含有量が０．１％であることを勘案して、発芽発酵マメ内のクロメストロールが等量（＝５００ｍｇ／ｋｇ×０，１％）になるように決定した。前記各実験群に対して、前記のような投与量で飼料を作製し、摂取期間は卵巣摘出手術後１週間が経過した１６週齢のマウスを使用して、３０週齢までの１４週間とした。
【００６２】
卵巣摘出を通じた更年期誘導モデルの場合、正常群に比べて体重増加が現れるのが一般的な現象である。これは、閉経後の女性の場合にも共通して現れる現象で、卵巣摘出モデルにおける体重増加が改善される効果があるならば、更年期性肥満にも大きな効果があるものと期待することができるというのが、当業界において自明の事実である。
【００６３】
ところで、前記のように飼料を摂取させて、合計１４週間、一週間に一回ずつ実験動物の体重を測定した結果（図１）、卵巣摘出群の場合、正常群よりも２０％体重が増加したが、クメストロール投与群の体重増加の程度は、卵巣摘出群よりも急激に減少したことが確認することができた。また、図１によれば、クメストロール群の体重増加の程度が、同量のクメストロールを摂取した群よりも低いこと（すなわち、発芽発酵マメ抽出物の体重増加改善効果がクメストロールのそれよりも優れること）を確認することができた。このことにより、発芽発酵マメ抽出物は、クメストロールだけでなく、多様な成分の組み合わせによってシナジー効果を有するものと見られる。
【００６４】
［実験例２］発芽発酵マメ抽出物による骨密度の改善
一般的に、更年期になると、骨密度が減少して、小さな衝撃で骨が欠ける現象が発生する。そこで、骨密度が増加して破断力が増加すれば、更年期症状に改善があるものと判断することができる。実験例１において使用した実験群と同一の実験群（３０週齢）に対し、二重エネルギー放射線骨密度測定器を利用して、骨密度を測定した結果を表１に示した。
【００６５】
【表１】
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【００６６】
表１から分かるように、対照群に比べて８％ほど骨密度が減少した卵巣摘出群の骨密度を、発芽発酵マメ抽出物が対照群と類似した水準に回復させることが確認できた。このような発芽発酵マメ抽出物投与群の結果は、同量のクメストロールを摂取した群よりも優れるものであるが、これは、発芽発酵マメ抽出物の多様な成分の組み合わせによるシナジー効果と見られる。
【００６７】
［実験例３］発芽発酵マメ抽出物による更年期の皮膚状態の改善
［実験例３‐１］更年期による皮膚の厚み減少の改善
実験例１において使用した実験群と同一の実験群（３０週齢）に対し、キャリパー（ＨＥＰＴ，Ｃｊｉｎａ）を利用して、皮膚の厚みを測定した。その結果、図２から見られるように、卵巣摘出群の場合、卵巣摘出をしなかった対照群に比べて１０％程度皮膚の厚みが減少したが、発芽発酵マメ抽出物投与群は、対照群とほぼ類似するように皮膚の厚みを維持することを確認することができた。なお、同量のクメストロールを摂取した群は、むしろ卵巣摘出群と同一の様相を示すことを確認できたことから、発芽発酵マメ抽出物の摂取は、更年期による皮膚の厚み減少の改善に対して優れた効果があることを確認することができた。
【００６８】
［実験例３‐２］更年期による皮膚の弾力性減少の改善
実験例１において使用した実験群と同一の実験群（３０週齢）に対し、キュートメーター（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を利用して、皮膚の弾力度を測定した。その結果、図３から見られるように、卵巣摘出群は、弾力測定に該当するすべての項目について、その値が対照群に比べて顕著に低下したことを確認できたが、発芽発酵マメ抽出物の摂取により、皮膚の弾力と関係した数値が卵巣を摘出しなかった対照群の値に非常に近接する水準に向かっていることを確認することができた。特に、このような効果は、同量のクメストロールを摂取した群よりも優れるものであったことから、発芽発酵マメ抽出物の摂取は、更年期による皮膚の弾力減少の改善に対して優れた効果があることを確認することができた。
【００６９】
［実験例３‐３］更年期による皮膚の水分損失の改善
実験例１において使用した実験群と同一の実験群（３０週齢）に対し、経皮水分損失器（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ  ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ  ＧｍｂＨ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を利用して、皮膚の水分蒸発量を測定した。その結果、図４から見られるように、卵巣摘出群の場合、対照群に比べて約３０％程度水分蒸発量が増加したが、発芽発酵マメ抽出物の投与により、このような水分蒸発量が急激に減少して、卵巣を摘出しなかった対照群よりも水分蒸発量が小さいことを確認することができた。特に、このような効果は、同量のクメストロールを摂取した群よりも優れるものであったことから、発芽発酵マメ抽出物の摂取は、更年期による皮膚の水分減少の改善に対して優れた効果があることを確認することができた。
【００７０】
［実験例４］発芽発酵マメ抽出物によるエストロゲン受容体の活性化
発芽発酵マメ抽出物のエストロゲン活性を確認するために、エストロゲン受容体に対する実験（ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ａｓｓａｙ）を行った。インディゴバイオサイエンス（Ｉｎｄｉｇｏ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）社のヒトＥＲ実験キット（ｈｕｍａｎ  ＥＲ  ｒｅｐｏｒｔｅｒ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ）に、発芽発酵マメ抽出物１００ｐｐｍ（クロメストロール０．１％含有）とクメストロール０．１ｐｐｍを２４時間処理し、陽性対照群としては、１７‐エストラジオール（１７‐ｅｓｔｒａｄｉｏｌ）０．１ｐｐｍを使用した。エストラジオールは、エストロゲン受容体のリガンドとして作用するが、特に、ＥＲα（Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒα）およびＥＲβ（Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒβ）に作用する。陰性対照群（図５の（−）群に該当）には、抽出物と同一のボリュームの蒸留水を添加した。
【００７１】
薬物処理後、テカンインフィニットＭ２００プロマルチプレートリーダー＋インジェクターシステム（Ｔｅｃａｎ  Ｉｎｆｉｎｉｔｅ  Ｍ２００ｐｒｏ  ｍｕｌｔｉｐｌａｔｅ  ｒｅａｄｅｒ  ＋  ｉｎｊｅｃｔｏｒ  ｓｙｓｔｅｍ）を利用して、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）活性を測定した結果を図５に示した。
【００７２】
その結果、発芽発酵マメ抽出物を投与した群は、エストロゲン受容体のリガンドであるエストラジオールよりも優れたエストロゲン受容体に対するバインディング（ｂｉｎｄｉｎｇ）効果を有することを確認することができた。これにより、発芽発酵マメ抽出物がエストロゲンと同一の信号を発生させ得るものであるため、更年期疾患または更年期症状に顕著な効果を有することを予想することができた。また、このような結果は、同量のクメストロールを摂取した群よりも優れた程度にエストロゲン受容体を活性化させるものであったが、これは、発芽発酵マメ抽出物内の多様な成分の組み合わせによるシナジー効果と見られる。
【００７３】
［実験例５］発芽発酵マメ抽出物によるコラーゲン分解の低下
［実験例５‐１］ＩＬ‐６、ｉＮＯＳおよびＭＭＰ１の遺伝子発現レベルの比較
一般的に、更年期になると、人体内の炎症反応が増加すると知られている。炎症反応が活性化されると、コラーゲンを分解するＭＭＰ１（ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ  １）の発現が増加してコラーゲンの分解を誘導するようになり、これは皮膚の弾力性低下の原因となる。したがって、炎症反応を抑制すれば、コラーゲンの分解を阻害して皮膚の弾力を維持することができるようになる。クメストロールおよび同量のクメストロールを含有した発芽発酵マメ抽出物の炎症反応抑制効果を観察するために、ヒト皮膚線維芽細胞のそれぞれに発芽発酵マメ抽出物１００ｐｐｍ（クロメストロール０．１％含有）とクメストロール０．１ｐｐｍを３時間前処理した後、ＬＰＳ（ｌｉ  ｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；１０ｇ／ｍｌ）を１２時間処理して、炎症反応を誘導した。陰性対照群（図６の（−）群に該当）には、抽出物と同一のボリュームの蒸留水を処理した。インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）社のトリゾール試薬（Ｔｒｉｚｏｌ  ｒｅａｇｅｎｔ）を利用してＲＮＡを抽出した後、フェルメンタス（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）社の逆転写キット（ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉ  ｐｔｉｏｎ  ｋｉｔ）を利用してｃＤＮを合成した後、炎症性サイトカイン（ＩＬ‐６）、酸化ストレス誘発タンパク質（ｉＮＯＳ）およびコラーゲン分解酵素（ＭＭＰ１）の遺伝子発現をＱ‐ＰＣＲで測定して定量した。
【００７４】
その結果（図６）、炎症反応と関連する炎症性サイトカイン（ＩＬ‐６）および酸化ストレス誘発タンパク質（ｉＮＯＳ）の量と、皮膚の弾力と直接的な関係のあるＭＭＰ１の量が、発芽発酵マメ抽出物の投与によって急激に低下することを確認することができた。また、このような結果は、同量のクメストロールを摂取した群よりも優れたものであったが、このことから、発芽発酵マメ抽出物内の多様な成分の組み合わせによるシナジー効果が、クメストロール単独による場合よりも優れることを確認することができた。
【００７５】
［実験例５‐２］プロコラーゲン量の増加
前記実験例５‐１におけるそれぞれの実験群において使用した細胞群の培地を回収した後、ミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）社のプロコラーゲンＥＬＩＳＡキット（ｐｒｏｃｏｌｌａｇｅｎ  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ）を利用して、培地に分泌されたプロコラーゲンの量を測定した。
【００７６】
その結果（図７）、プロコラーゲンの合成および分泌量が、発芽発酵マメ抽出物の処理によって大幅に増加することを確認することができた。また、このような結果は、同量のクメストロールを摂取した群よりも優れたものであったが、このことから、発芽発酵マメ抽出物内の多様な成分の組み合わせによるシナジー効果が、クメストロール単独による場合よりも優れることを確認することができた。
【００７７】
［実験例６］発芽発酵マメ抽出物による光老化改善効果
更年期の皮膚は、一般の皮膚とは異なり、皮膚の厚みが薄くなるため、紫外線などの皮膚刺激に弱いものと知られている。そこで、３Ｄ人工皮膚を作製して、紫外線を照射したときに、発芽発酵マメ抽出物が皮膚の改善に効果を示すのかについて実験してみた。
【００７８】
コラーゲン溶液に２．６４×１０５個の線維芽細胞を混ぜてマットレスを作製し、その上に５×１０６個の角質細胞を播種した後、１．２ｍＭのカルシウムを処理しながら分化を誘導して人工皮膚の分化を誘導させた。２週間分化を誘導した後、その細胞すべてに対してそれぞれ２０ｍＪの紫外線を照射し、クメストロール０．１ｐｐｍと発芽発酵マメ抽出物１００ｐｐｍを処理した後、培地を回収して、実験例５と同一の方法でＭＭＰ１発現量とプロコラーゲンの発現量を測定した。紫外線を照射しなかった群を１００としたとき、これに対する相対値を表２に示した。
【００７９】
【表２】
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【００８０】
その結果、表２から分かるように、紫外線照射によるＭＭＰ１の発現増加およびプロコラーゲンの発現減少が、発芽発酵マメ抽出物の処理によって効果的に改善されることを観察することができた。発芽発酵マメ抽出物に含有された同量のクメストロールのみを処理した場合には、発芽発酵マメ抽出物処理群に比べて効果が微々たるものと示された。また、これらの発芽発酵マメ抽出物処理群の結果は、同量のクメストロールを摂取した群よりも優れたものであったが、このことから、発芽発酵マメ抽出物の多様な成分の組み合わせによるシナジー効果が、クメストロール単独による場合よりも優れることを確認することができた。
【００８１】
以下、本発明に係る組成物の剤形例を説明するが、薬学組成物、化粧料組成物または健康食品組成物は、様々な剤形に応用可能であり、これらは本発明を限定しようとするものでなく、ただ具体的に説明しようとするためのものである。
【００８２】
［製剤例１］軟質カプセルの製造
クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物８０ｍｇ、ビタミンＥ９ｍｇ、ビタミンＣ９ｍｇ、パーム油２ｍｇ、植物性硬化油８ｍｇ、黄蝋４ｍｇおよびレシチン９ｍｇを混合し、通常の方法に従い混合して軟質カプセル充填液を製造した。１カプセルあたり４００ｍｇずつ充填して軟質カプセルを製造した。そして、前記と別途に、ゼラチン６６重量部、グリセリン２４重量部およびソルビトール液１０重量部の比率で軟質カプセルシートを製造し、前記充填液を充填させて、本発明に係る組成物４００ｍｇが含有された軟質カプセルを製造した。
【００８３】
［製剤例２］錠剤の製造
クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物８０ｍｇ、ビタミンＥ９ｍｇ、ビタミンＣ９ｍｇ、ガラクトオリゴ糖２００ｍｇ、乳糖６０ｍｇおよび麦芽糖１４０ｍｇを混合し、流動層乾燥機を利用して顆粒化した後、糖エステル（ｓｕｇａｒ  ｅｓｔｅｒ）６ｍｇを添加した。これら組成物５０４ｍｇを、通常の方法で打錠して錠剤を製造した。
【００８４】
［製剤例３］ドリンク剤の製造
クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物８０ｍｇ、ビタミンＥ９ｍｇ、ビタミンＣ９ｍｇ、ブドウ糖１０ｇ、クエン酸０．６ｇおよび液状オリゴ糖２５ｇを混合した後、精製水３００ｍｌを加えて、各瓶に２００ｍｌずつになるように充填した。ボトルに充填した後、１３０℃で４〜５秒間殺菌して飲料を製造した。
【００８５】
［製剤例４］顆粒の製造
クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物８０ｍｇ、ビタミンＥ９ｍｇ、ビタミンＣ９ｍｇ、無水結晶ブドウ糖２５０ｍｇおよび澱粉５５０ｍｇを混合し、流動層造粒機を使用して顆粒に成形した後、包に充填して製造した。
【００８６】
［剤形例１］柔軟化粧水（スキンローション）
【００８７】
【表３】
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【００８８】
［剤形例２］栄養化粧水（ミルクローション）
【００８９】
【表４】
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【００９０】
［剤形例３］栄養クリーム
【００９１】
【表５】
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【００９２】
［剤形例４］マッサージクリーム
【００９３】
【表６】
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【００９４】
［剤形例５］パック
【００９５】
【表７】
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【００９６】
［剤形例６］軟膏
【００９７】
【表８】
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【００９８】
以上、本発明内容の特定の部分について詳細に記述したところ、当業界の通常の知識を有する者において、このような具体的記述は、単に好ましい実施態様であるに過ぎず、これにより本発明の範囲が制限されるものでない点は明白なことであろう。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付された請求項とそれらの等価物によって定義されると言える。
【産業上の利用可能性】
【００９９】
本発明は、クメストロールを含む大豆抽出物を有効成分として含む更年期疾患の予防等についての組成物に関し、より詳細には、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を含む更年期疾患の予防等についての組成物に関する。本発明の組成物は、クメストロールを含む発芽発酵マメ抽出物を有効成分として含むため、更年期疾患または更年期症状の予防、治療および改善に有用に利用することができる。具体的に、本発明の組成物は、更年期による体重増加の程度を緩和させることができ、骨密度を更年期前と類似した水準に回復させることができ、更年期に伴う皮膚の厚み減少および皮膚の弾力減少の水準を緩和させることができる。それだけでなく、本発明の組成物は、更年期に伴う皮膚の水分損失の水準も緩和させることができ、エストロゲンを活性化させることができ、コラーゲンを分解するＭＭＰ１の量を減少させるとともにプロコラーゲンの量を増加させることができるため、更年期疾患または更年期症状に有用に使用することができる。また、本発明の組成物は、天然物を有効成分として含むため、長期間の使用時にも耐性がなく、副作用がほとんどないという長所がある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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