【手続補正書】
【提出日】平成25年2月14日(2013.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子を導入した複数のタンパク質読み枠の間に挿入することにより、前記外来遺伝子のポリシストロニックな翻訳効率を向上させるＩＲＥＳ活性を有している外来遺伝子発現要素であって、
配列番号１で表される塩基配列のうち、少なくとも３０塩基対以上の長さの配列を含むポリヌクレオチドである、外来遺伝子発現要素。
【請求項２】
配列番号１で表される塩基配列の第１位〜第２２７位を有するポリヌクレオチドである、請求項１に記載の外来遺伝子発現要素。
【請求項３】
配列番号２〜１０で表される塩基配列からなる群から選ばれる１種の塩基配列を有するポリヌクレオチドである、請求項１に記載の外来遺伝子発現要素。
【請求項４】
ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子を導入した複数のタンパク質読み枠の間に挿入することにより、前記外来遺伝子のポリシストロニックな翻訳効率を向上させるＩＲＥＳ活性を有している外来遺伝子発現要素であって、
配列番号１で表される塩基配列のうち、少なくとも３０塩基対以上の長さを有するポリヌクレオチドである、第１の塩基配列部分と、
配列番号１１で表される塩基配列のうち、少なくとも１つのステム−ループ構造を形成可能であり、且つ前記ステム−ループ構造のステムは６塩基対以上３０塩基対以下の二重鎖又は部分二重鎖を形成するポリヌクレオチド、又は、配列番号１２で表される塩基配列のうち、少なくとも１つのステム−ループ構造を形成可能であり、且つ前記ステム−ループ構造のステムは６塩基対以上３０塩基対以下の二重鎖又は部分二重鎖を形成するポリヌクレオチドである、第２の塩基配列部分と、を少なくとも含む外来遺伝子発現要素。
【請求項５】
前記第１の塩基配列部分は、（１）配列番号１で表される塩基配列の第１位〜第２２７位からなる塩基配列、（２）配列番号２で表される塩基配列、（３）配列番号３で表される塩基配列、（４）配列番号４で表される塩基配列、（５）配列番号５で表される塩基配列、（６）配列番号６で表される塩基配列、（７）配列番号７で表される塩基配列、（８）配列番号８で表される塩基配列、（９）配列番号９で表される塩基配列、又は（１０）配列番号１０で表される塩基配列のいずれか１つ又は２つ以上を有するポリヌクレオチド
である、請求項４に記載の外来遺伝子発現要素。
【請求項６】
前記第２の塩基配列部分は、（ａ）配列番号１１で表される塩基配列のうち、第１３位〜第３４位の塩基配列、（ｂ）配列番号１２で表される塩基配列のうち、第１３位〜第６５位の塩基配列のいずれか一方を有するポリヌクレオチドである、請求項４又は５に記載の外来遺伝子発現要素。
【請求項７】
ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子を導入した複数のタンパク質読み枠の間に、請求項１〜６のいずれか１項に記載の外来遺伝子発現要素が挿入された多重遺伝子発現構造体。
【請求項８】
真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された請求項１〜６のいずれか１項に記載の外来遺伝子発現要素とを含む外来遺伝子発現ベクター。
【請求項９】
真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された請求項１〜６のいずれか１項に記載の外来遺伝子発現要素と、前記プロモーターによって作動可能に結合されるとともに、前記外来遺伝子発現要素によってポリシストロニックな翻訳が可能に結合された、ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子とを含む外来遺伝子発現ベクター。
【請求項１０】
真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された請求項７に記載の多重遺伝子発現構造体とを含む請求項９に記載の外来遺伝子発現ベクター。
【請求項１１】
真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された請求項１〜６のいずれか１項に記載の外来遺伝子発現要素と、前記プロモーターによって作動可能に結合されるとともに、前記外来遺伝子発現要素によってポリシストロニックな翻訳が可能に結合された、ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子とを保持する形質転換体。
【請求項１２】
真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された請求項７に記載の多重遺伝子発現構造体とを保持する請求項１１に記載の形質転換体。
【請求項１３】
真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された請求項１〜６のいずれか１項に記載の外来遺伝子発現要素と、前記プロモーターによって作動可能に結合されるとともに、前記外来遺伝子発現要素によってポリシストロニックな翻訳が可能に結合された、ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子とを植物細胞又は植物体に導入して形質転換体を作製する形質転換体の製造方法。
【請求項１４】
真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された請求項７に記載の多重遺伝子発現構造体とを植物細胞又は植物体に導入して形質転換体を作製する請求項１３に記載の形質転換体の製造方法。
【請求項１５】
請求項１３又は１４に記載の形質転換体の製造方法によって作製された形質転換体によって、前記外来遺伝子にコードされたペプチド又はタンパク質を発現させる工程を備える外来遺伝子発現方法。
【請求項１６】
請求項１３又は１４に記載の形質転換体の製造方法によって作製された形質転換体を増殖又は生育させて、前記外来遺伝子にコードされたペプチド又はタンパク質である外来遺伝子産物を製造する工程を備える外来遺伝子産物の製造方法。
【請求項１７】
ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子を導入した複数のタンパク質読み枠の間に、請求項１〜６のいずれか１項に記載の外来遺伝子発現要素を挿入することにより、前記外来遺伝子のポリシストロニックな翻訳効率を向上させる、外来遺伝子高効率発現方法。
【請求項１８】
上流側に配置されたタンパク質読み枠と、これに連結するタンパク質読み枠との間に、請求項１〜６のいずれか１項に記載の外来遺伝子発現要素を挿入することにより、上流側に配置されたタンパク質読み枠の翻訳効率を向上させる、請求項１７に記載の外来遺伝子高効率発現方法
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
また本発明は、真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された本発明に係る前記外来遺伝子発現要素とを含む外来遺伝子発現ベクターを提供する。
また本発明は、真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された本発明に係る前記外来遺伝子発現要素と、前記プロモーターによって作動可能に結合されるとともに、前記外来遺伝子発現要素によってポリシストロニックな翻訳が可能に結合された、ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子とを含む外来遺伝子発現ベクターを提供する。
前記外来遺伝子発現ベクターは、真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された本発明に係る前記多重遺伝子発現構造体とを含むことが好ましい
。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
また本発明は、真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された本発明に係る前記外来遺伝子発現要素と、前記プロモーターによって作動可能に結合されるとともに、前記外来遺伝子発現要素によってポリシストロニックな翻訳が可能に結合された、ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子とを保持する形質転換体を提供する。
前記形質転換体は、真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された本発明に係る前記多重遺伝子発現構造体とを保持することが好ましい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
また本発明は、真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された本発明に係る前記外来遺伝子発現要素と、前記プロモーターによって作動可能に結合されるとともに、前記外来遺伝子発現要素によってポリシストロニックな翻訳が可能に結合された、ペプチド又はタンパク質のコード領域を有するポリヌクレオチド鎖である外来遺伝子とを植物細胞又は植物体に導入して形質転換体を作製する形質転換体の製造方法を提供する。
前記形質転換体の製造方法において、真核細胞で動作可能なプロモーターと、該プロモーターの下流側に結合された本発明に係る前記多重遺伝子発現構造体とを植物細胞又は植物体に導入して形質転換体を作製することが好ましい。