(57)【要約】【課題】新規のインドリルおよびインドリニルヒドロキサメートの使用を提供する。【解決手段】虚血性および出血性卒中、脊髄損傷、脳神経損傷、末梢神経損傷、および、神経変性疾患または認知障害を治療するための薬剤または医薬品組成物の製造においてインドリルおよびインドリニルヒドロキサメートを使用する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体の神経変性疾患または認知障害を治療するための方法であって、以下の式（Ｉ）を有する化合物を治療上有効な量で前記被験体に投与するステップを含み、
2016537375.tif 000006
式中、鎖線および実線は、単結合または二重結合を示し、Ｂは、Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＣＨ２Ｒ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ３Ｒ、またはＳＯ２ＮＲＲ’であり、Ｃは、Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｒ、ＣＨ２Ｒ、ＳＯ２Ｒ、または、ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＮＨＯＨであり、Ｘａ、Ｘｂ、ＸｃおよびＸｄは、それぞれ独立してＲ、ハロゲン基、ニトロ基、ニトロソ基、ＯＲ、または、ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＮＨＯＨであり、ＲおよびＲ’は、それぞれ独立してＨ、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、または、ヘテロアリール基であり、
一例では、Ｃ、Ｘａ、Ｘｃ、Ｘｄは、それぞれ独立してＨであり、Ｂは、ＳＯ２Ｒであり、Ｘｂは、ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＮＨＯＨ、または、薬学的に許容できるその塩である、
方法。
【請求項２】
Ｂは、ＳＯ２Ｒであり、Ｃは、Ｈであり、Ｘａ、Ｘｂ、および、Ｘｃは、それぞれ独立してＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＮＨＯＨであり、Ｘｄは、水素であり、Ｒは、フェニル基またはＦで置換されるフェニル基である、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記式（Ｉ）を有する化合物は、以下の化合物から選択される、請求項１に記載の方法。
2016537375.tif 000007
2016537375.tif 000008
2016537375.tif 000009
2016537375.tif 000010
2016537375.tif 000011
2016537375.tif 000012
【請求項４】
前記式（Ｉ）を有する化合物は、３−（１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−５−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−アクリルアミドである、
請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記式（Ｉ）を有する化合物は、約１〜１００ｍｇ／ｋｇ被験体に投与される、
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記式（Ｉ）を有する化合物は、約１〜５０ｍｇ／ｋｇ被験体に投与される、
請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記神経変性疾患または認知障害は、ハンチントン病、ウィルソン病、線條体黒質変成症、大脳皮質基底核神経節変性症、トゥレット症候群、進行性核上麻痺、進行性球麻痺、家族性痙性対麻痺、脊髄筋委縮症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、歯状核赤核萎縮症、オリーブ橋小脳萎縮症、傍腫瘍性小脳変性症、ドーパミン毒性、フリードライヒ運動失調症、糖尿病、末梢神経障害、網膜神経変性、脳アミロイド症、ピック萎縮、レット症候群、認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、エイズに関連する認知症、リー病、びまん性レビー小体病、てんかん、多系統萎縮症、ギランバレー症候群、リポフスチン沈着症などのリソソーム貯蔵障害、ダウン症候群の末期変性段階、アルパース病、中枢神経系変性によるめまい、大脳皮質基底核変性症、進行性核上麻痺、発育遅延、学習障害、ダウン症、または、酸化ストレスである、
請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記神経変性疾患または認知障害は、ハンチントン病、パーキンソン病、認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または、アルツハイマー病である、
請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記被験体は、ヒトである、
請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ニューロン損傷の症状を改善すべく、追加の薬剤を投与するステップをさらに含む、
請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記追加の薬剤は、請求項１に記載の前記化合物を投与する前に、同時に、および／または後に、投与され得る、
請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記追加の薬剤は、活性酸素スカベンジャー（ＲＯＣ）、抗凝血剤、ニューロンエンハンサ、または、ニューロン保護薬である、
請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記活性酸素スカベンジャーは、カタラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、α‐フェニル‐Ｎ‐ｔｅｒｔ‐ブチルニトロン（ＰＢＮ）、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ポリフェノール化合物、または、カロチノイドである、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗凝血剤は、ビタミンＫ、ワルファリン、アセノクマロール、ヘパリン、アスピリン、クロピドグレル、または、ジピリダモールである、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の前記式（Ｉ）を有する化合物は、前記被験体に経口または非経口投与される、
請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
被験体の虚血性および出血性卒中、脊髄損傷、脳神経損傷、または、末梢神経損傷を治療する方法であって、請求項１に記載の前記式（Ｉ）を有する化合物を、治療上有効な量で前記被験体に投与するステップを含む、方法。
【請求項１７】
脊髄損傷、または、末梢神経損傷の治療に用いられる、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インドリルおよびインドリニルヒドロキサメートの新規な使用に関する。特に、本発明は、虚血性および出血性卒中、脊髄損傷、脳神経損傷、末梢神経損傷、および、神経変性疾患または認知障害を治療するための薬剤または医薬品組成物の製造におけるインドリルおよびインドリニルヒドロキサメートの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経変性疾患は、時間の経過にともなう選択的なニューロン集団の進行性変性を共通の病態生理学的特徴とする、ヒトの疾患群である。これらの神経変性疾患は、アルツハイマー病およびそれに関連する認知症、パーキンソン病、ハンチントン病、レビー小体型認知症およびそれに関連する運動障害、フリードライヒ運動失調症およびそれに関連する脊髄小脳失調を含むが、これらに限定されない。老年人口の増加にともない、アルツハイマー病などの認知症の形態を含む神経変性疾患の患者数は増加していくだろう。これらの疾患は、年齢とともに進行し、患者自身ならびにその生活環境にも影響を及ぼすので、早期に治療法を見出すことが重要である。アルツハイマー病の特徴的な臨床症状は、進行性の認知力低下、日常活動を行う能力の低下、神経精神症状、および、行動変化を含む。アルツハイマー病の臨床兆候が認められる何年も前に、ベータアミロイドとよばれる異常な折り畳み構造のタンパク質を含む斑が脳に形成される。これらの斑および神経原線維変化がこの病気の病理学的特徴をなす。これらの特徴は、死体解剖時に初めて見つかることであり、臨床診断を裏付けるのに役立つ。
【０００３】
ハンチントン病（ＨＤ）は、大脳基底核にある細胞が失われることによって発症する常染色体優性遺伝の神経変性疾患である。このような細胞へのダメージは、認識能力（思考、判断、記憶）、運動および感情制御に影響を及ぼす。ハンチントン病は、不随意運動（舞踏様運動）および人格変化によって特徴づけられる。ハンチントン病の患者は、言語不明瞭、歩行不安定、および、嚥下困難という症状を呈する。ハンチントン病の効果的な治療はない。長患いの後、ハンチントン病の患者は、窒息または感染などの合併症で死ぬ。
【０００４】
パーキンソン病（ＰＤ）は、突発性で徐々に進行する変性中枢神経系障害であり、動作緩慢、筋硬直、休止時振戦、および、姿勢不安定という特徴がある。広範な調査にもかかわらず、ハンチントン病の原因は解明されていない。尾状核、被殻へと投射する黒質ニューロンが失われると、それらの領域では神経伝達物質であるドーパミンが欠乏する。
【０００５】
大人の中枢神経系においてニューロンが急性および／または慢性的に欠損すると、成熟神経細胞には欠損したニューロンを急速に増殖させて補うという能力がほぼないことから、脳の不可逆的機能喪失をもたらす。よって、ニューロンの欠損を抑制することは、脳の機能保護に必須である。
【０００６】
したがって、神経変性疾患を治療するための薬剤または化合物が必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、被験体の神経変性疾患または認知障害を治療する方法を提供する。方法は、以下に説明するような式（Ｉ）を有する化合物を治療上有効な量で被験体に投与することを含む。これに伴い、本発明は、被験体の神経変性疾患または認知症を治療するための薬剤の製造における、式（Ｉ）を有する化合物の使用を提供する。また、被験体の神経変性疾患または認知症の治療に用いられる、式（Ｉ）を有する化合物も提供する。本発明の他の側面は、被験体の虚血性および出血性卒中、脊髄損傷、脳神経損傷、または、末梢神経損傷を治療するための方法を提供する。方法は、以下に説明するような式（Ｉ）を有する化合物を治療上有効な量で被験体に投与することを含む。これに伴い、本発明は、被験体の虚血性および出血性卒中、脊髄損傷、脳神経損傷、または、末梢神経損傷を治療するための薬物の製造における、式（Ｉ）を有する化合物の使用を提供する。
【０００８】
好適な化合物は、３−（１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−５−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−アクリルアミドである。約１〜１００ｍｇ／被験体の体重（ｋｇ）の量の化合物を静脈注射、筋肉注射、または、経口摂取によって被験体に投与する。一実施形態では、被験体はヒトであり、化合物の投与量は、約１〜５０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、好ましくは、約１〜３０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、好ましくは、約１〜２０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、約１〜１０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、約２〜１０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、約２〜８ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、または、約２〜１０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、より好ましくは、約３〜５ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）である。
【０００９】
本発明の化合物は、神経変性疾患または認知障害の治療に特に有効であり、とりわけ、ハンチントン病、パーキンソン病、認知症、および、アルツハイマー病に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明の一実施形態による、記憶形成強化に対する化合物１の効果を示す。
【図２】本発明の一実施形態による、記憶に関連するタンパク質のアップレギュレーションに対する化合物１の効果を示す。
【図３】本発明の一実施形態による、恐怖条件付け文脈テストに対する化合物１の効果を示す。条件刺激−無条件刺激（ＣＳ−ＵＳ）の対を与えたＴｇ２５７６マウスの運動機能および認識力を示している。
【図４】本発明の一実施形態による、Ｔｇ２５７６マウスの海馬の加齢に伴う変化によるシナプス可塑性タンパク質レベルの低下の発現に対する、１日あたり５０ｍｇ／ｋｇの化合物１を２０日間にわたり経口投与した効果を示す。
【図５】本発明の一実施形態による、運動機能の回復に対する化合物１の効果を示す。
【図６】本発明の一実施形態による、脊髄損傷後のニューロン欠損の抑制に対する化合物１の効果を示す。
【図７】本発明の一実施形態による、脊髄損傷後の抗アポトーシスに対する化合物１の効果を示す。
【図８】本発明の一実施形態による、脊髄損傷後のヒストン３、４のアセチル化、ｐ２１、および、ホスホＥＲＫの発現に対する化合物１の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、神経変性疾患または認知障害の治療にインドリルおよびインドリニルヒドロキサメートが有効であり、したがって、これらの活性化合物は、神経変性疾患、または、認知障害、好ましくは認知症の治療のための治療薬として用いられる潜在的なリード化合物である、という発見に基づくものである。また、本発明により、上記の化合物が脊髄損傷の治療に有効であることを見出した。
【００１２】
特に定義しない限り、本願明細書中で用いられるすべての科学技術用語は、本技術分野で共通に用いられる意味を有する。本願明細書中に用いられるような以下の単語または言い回しは特定の意味を有する。
【００１３】
本願明細書中で用いられる「１つの」は、特に指示しない限り「少なくとも１つの」を意味する。
【００１４】
「アルキル基」という用語は、１〜２０炭素元素（例えば、Ｃ１〜Ｃ１０）を含む直鎖または分岐鎖の一価の炭化水素を意味する。アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、およびｔ−ブチル基が挙げられるがこれらに限定されない。「アルケニル基」という用語は、２〜２０炭素元素（例えば、Ｃ２〜Ｃ１０）および１以上の二重結合を含む直鎖または分岐鎖の一価の炭化水素を意味する。アルケニル基の例としては、エテニル基、プロペニル基、アリル基、および１，４−ブタジエニルが挙げられるが、これらに限定されない。「アルキニル基」という用語は、２〜２０炭素元素（例えば、Ｃ２〜Ｃ１０）および１以上の三重結合を含む直鎖または分岐鎖の一価の炭化水素を意味する。アルキニル基の例としては、エチニル基、１−プロピニル基、１−および２−ブチニル基、ならびに１−メチル−２−ブチニル基が挙げられるが、これらに限定されない。「アルコキシル基」という用語は、Ｏ−アルキルラジカルを意味する。アルコキシル基の例としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、および、ｔ−ブトキシ基が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１５】
「アリール基」という用語は、一価の６炭素単環芳香族環系、１０炭素単環芳香族環系、１４炭素３環芳香族環系を意味する。アリール基の例としては、フェニル基、ナフチル基、およびアントラセニル基が挙げられるがこれらに限定されない。「ヘテロアリール基」という用語は、１以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、ＳまたはＳｅ）を有する一価の芳香族５〜８員単環系、８〜１２員２環系、または１１〜１４員３環系を意味する。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル基、フリル基、イミダゾリル基、ベンズイミダゾリル基、ピリミジニル基、チエニル基、キノリニル基、インドリル基、テトラゾール基、および、チアゾリル基が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１６】
上記アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基およびヘテロアリール基は、置換および非置換部分双方を包含する。アリール基およびヘテロアリール基に存在しうる置換基としては、Ｃ１−Ｃ１０アルキル基、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル基、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル基が挙げられるがこれらに限定されない。
【００１７】
「脊髄損傷（ＳＣＩ）」という用語は、神経インパルスの伝導を遮断し、神経機能障害を招くことを意味する。脊髄への一次的損傷は、ただちに細胞膜を破壊し、縦束のミエリンおよび軸索を破壊し、微小血管を傷つけ、さまざまな有害因子を放つ破壊的な二次損傷過程を引き起こす。二次損傷過程の多数の細胞・分子機構は、複雑なカスケードを介して、一次損傷の部位よりも広い範囲にまで神経変性を拡大させる。二次損傷のカスケードは、能動生物学的プロセスであり、したがって、選択的な阻害剤を用いた脊髄損傷の治療の絶好の機会をもたらす。脊髄損傷の能動的二次損傷メディエータを標的とした適切な治療法により、神経細胞を保護し、軸索の再生および再接続を増やすことができる。
【００１８】
「神経変性疾患または認知障害」という用語は、神経系の灰白質または白質、あるいは両方で変性が起きる疾患を指す。
【００１９】
「認知症」という用語は、人間の機能能力に影響を及ぼす精神能力の損失により現れる疾患として定義される。認知症疾患は、若年層では精神的なものが発端であるとみられ、高齢者層では、加齢による「ぼけ」からくるものとみられていた。これらの治療にはほとんど望みがなかった。神経行動学的欠陥、特に、認知機能の低下は、重大な障害の原因となる。それゆえ、神経行動学的欠陥の改善に有効な化合物は、認知症を治療する薬物または組成物を製造するための潜在的な候補化合物となる。
【００２０】
本願明細書中で用いられるような「被験体」という用語は、ヒト、ブタ、ラット、マウス、イヌ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、サル、類人猿、ウサギ、ウシなどのいかなる温血哺乳類を指してよいが、これらに限定されない。
【００２１】
本願明細書中で使用されている「治療」という用語は、予防手段（例えば予防薬）、予防療法または対症療法を含み、「治療する」という言葉も、予防手段（例えば予防薬）、予防療法または対症療法を含む。
【００２２】
本願明細書中を通じて使用されている「有効量」という用語は、治療される状態または病状のさらなる悪化を軽減、克服、または、抑制するという所望の結果をもたらすか否かにかかわらず、本発明の化合物を投与する際に有効である量または濃度を意味する。本発明による化合物の有効量は、化合物を必要とする患者の認知力または記憶力を強化または向上させるのに有効な量を含む。
【００２３】
本発明の一側面は、被験体の神経変性疾患または認知障害を治療する方法を提供する。方法は、式（Ｉ）を有する化合物を治療上有効な量で被験体に投与することを含む。
2016537375.tif 000002
式中、鎖線および実線は、単結合または二重結合を示し、Ｂは、Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｒ，ＣＨ２Ｒ、ＳＯ２Ｒ、ＳＯ３Ｒ、またはＳＯ２ＮＲＲ’であり、Ｃは、Ｒ、Ｃ（Ｏ）Ｒ、ＣＨ２Ｒ、ＳＯ２Ｒ、または、ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＮＨＯＨであり、Ｘａ、Ｘｂ、ＸｃおよびＸｄは、それぞれ独立してＲ、ハロゲン基、ニトロ基、ニトロソ基、ＯＲ、または、ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＮＨＯＨであり、ＲおよびＲ’は、それぞれ独立してＨ、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、または、ヘテロアリール基である。一例では、Ｃ、Ｘａ、Ｘｃ、Ｘｄは、それぞれ独立してＨであり、Ｂは、ＳＯ２Ｒであり、Ｘｂは、ＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＮＨＯＨ、または、薬学的に許容できるその塩、異性体、プロドラッグ、または、溶媒和物を含む。
【００２４】
これに伴い、本発明は、被験体の神経変性疾患または認知障害を治療するための薬物の製造における式（Ｉ）を有する化合物の使用も提供する。さらに、被験体の神経変性疾患または認知障害を治療するために用いられる、式（Ｉ）を有する化合物を提供する。
【００２５】
本発明の他の側面は、被験体の虚血性および出血性卒中、脊髄損傷、脳神経損傷、または、末梢神経損傷を治療するための方法を提供する。方法は、式（Ｉ）を有する化合物を治療上有効な量で被験体に投与することを含む。これに伴い、本発明は、被験体の虚血性および出血性卒中、脊髄損傷、脳神経損傷、または、末梢神経損傷を治療するための薬物の製造における、式（Ｉ）を有する化合物の使用を提供する。さらに、被験体の虚血性および出血性卒中、脊髄損傷、脳神経損傷、または、末梢神経損傷を治療するため使用される、式（Ｉ）を有する化合物も提供される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、Ｂは、ＳＯ２Ｒであり、Ｃは、Ｈであり、Ｘａ、Ｘｂ、および、Ｘｃは、それぞれ独立してＣＨ＝ＣＨＣ（Ｏ）ＮＨＯＨであり、Ｘｄは、水素であり、Ｒは、フェニル基またはＦで置換されるフェニル基である。
【００２７】
以下に、本発明の例示的化合物である化合物１〜１１を示す。
2016537375.tif 000003
2016537375.tif 000004
2016537375.tif 000005
【００２８】
本発明の化合物、特に、式（Ｉ）を有する化合物は、２０１１年３月２９日に出願されたチェンらによる米国特許出願第１３／０７４，３１２号に記載された方法によって合成され得る。この先願の内容は、参照により本願明細書に組み込まれる。例えば、本発明の化合物１である３−（１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−５−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−アクリルアミドは、チェンらによって記述されたスキーム２によって合成され得る。
【００２９】
ニューロン損傷（例えば、認知症または脊髄損傷）を治療する方法は、上記のような式（Ｉ）を有する化合物をそれが必要な被験体に有効量で投与するステップを含む。好適な実施形態では、化合物は、３−（１−ベンゼンスルホニル−１Ｈ−インドール−５−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−アクリルアミドである。一実施形態では、被験体は、哺乳類、好ましくは、ヒトであってよい。
【００３０】
いくつかの実施形態では、神経変性疾患または認知障害は、これらに限定されないが、脳幹神経節に影響を及ぼす変性状態を含む中枢運動系の疾患（ハンチントン病、ウィルソン病、線條体黒質変成症、大脳皮質基底核神経節変性症）、トゥレット症候群、パーキンソン病、進行性核上麻痺、進行性球麻痺、家族性痙性対麻痺、脊髄筋委縮症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）およびその変種、歯状核赤核萎縮症、オリーブ橋小脳萎縮症、傍腫瘍性小脳変性症、および、ドーパミン毒性；フリードライヒ運動失調症、糖尿病、末梢神経障害、および、網膜神経変性などの感覚ニューロンに影響を及ぼす疾患；脳アミロイド症、ピック萎縮、および、レット症候群などの大脳辺縁系および皮質系の疾患；認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、エイズに関連する認知症、リー病、びまん性レビー小体病、てんかん、多系統萎縮症、ギランバレー症候群、リポフスチン沈着症などのリソソーム貯蔵障害、ダウン症候群の末期変性段階、アルパース病、中枢神経系変性によるめまい、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、大脳皮質基底核変性症、および、進行性核上麻痺を含む多ニューロン系および／または脳幹に関わる神経変性病変；発育遅延、学習障害、ダウン症、および、酸化ストレスによる神経細胞死に関連する病状；例えば、（ｉ）アルコール依存症による青斑核、小脳、コリン作動性前脳基底核におけるニューロンの変性、（ｉｉ）認知および運動障害の原因となる、老化による小脳ニューロンおよび皮質ニューロンの変性、および、（ｉｉｉ）運動障害の原因となる、慢性的なアンフェタミン乱用による基底核ニューロンの変性を含む、老化および慢性的なアルコールまたは薬物乱用によりおきる病状；卒中、局所的虚血、血管不全、低酸素性虚血性脳症、高血糖、低血糖、閉鎖性頭部外傷、および、直接的な外傷；治療薬および治療の副作用としておきる病状（例えば、グルタミン酸受容体のＮＭＤＡアンタゴニストを抗痙攣用に投与したことによる帯状および内嗅皮質ニューロンの変性）、を含む。好ましくは、神経変性疾患または認知障害は、認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、または、ハンチントン病である。
【００３１】
これに伴い、本発明は、認知症または脊髄損傷を患う哺乳類、好ましくはヒトを治療する方法を提供する。方法は、上記式を有する化合物を含む本発明の薬物または医薬組成物を投与することを含む。
【００３２】
いくつかの実施形態では、静脈注射、筋肉注射、または、経口摂取によって被験体に投与される、式（Ｉ）を有する化合物の有効量は、約１〜１００ｍｇ／被験体の体重（ｋｇ）である。静脈注射、筋肉注射、または、経口摂取によって被験体に投与される量は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００ｍｇ／被験体の体重（ｋｇ）である。一実施形態では、被験体はヒトであり、化合物の投与量は、約１〜５０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）であり、好ましくは、約１〜３０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、好ましくは、約１〜２０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、約１〜１０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、約２〜１０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、約２〜８ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、または、約２〜１０ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）、より好ましくは、約３〜５ｍｇ／ヒトの体重（ｋｇ）である。投与は、一回で行われてもよく、複数回に分けて行われてもよい。
【００３３】
いくつかの実施形態では、方法は、本発明の化合物を投与する前に、同時に、および／または後に、ニューロン損傷の症状を改善することが知られている薬剤を投与するステップをさらに含む。このような薬剤の例は、従来知られている活性酸素スカベンジャー（ＲＯＳ）、抗凝血剤、ニューロンエンハンサ、ニューロン保護薬などが挙げられるこれらに限定されない。活性酸素スカベンジャーの例は、カタラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、α‐フェニル‐Ｎ‐ｔｅｒｔ‐ブチルニトロン（ＰＢＮ）、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ポリフェノール化合物、カロチノイドなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３４】
本開示は、ニューロン損傷を治療するための医薬組成物も提供する。組成物は、治療上有効な量の、上記の式（Ｉ）を有する化合物と、治療上許容できる賦形剤とを含む。一般的に、本発明の式（Ｉ）を有する化合物は、医薬組成物の総重量の約０．１重量％〜９９重量％を占める。いくつかの実施例では、本発明の式（Ｉ）を有する化合物は、医薬組成物の総重量の少なくとも１重量％を占める。特定の実施例では、本発明の式（Ｉ）を有する化合物は、医薬組成物の総重量の少なくとも５重量％を占める。さらなる他の実施例では、本発明の式（Ｉ）を有する化合物は、医薬組成物の総重量の少なくとも１０重量％を占める。さらなる他の実施例では、本発明の式（Ｉ）を有する化合物は、医薬組成物の総重量の少なくとも２５重量％を占める。
【００３５】
いくつかの実施例では、本発明の薬剤または医薬組成物は、認知症または脊髄損傷の症状を改善することで知られる薬剤をさらに含む。このような薬剤の例は、従来知られている活性酸素スカベンジャー（ＲＯＳ）、抗凝血剤、ニューロンエンハンサ、ニューロン保護薬などが挙げられるこれらに限定されない。活性酸素スカベンジャーの例は、カタラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、α‐フェニル‐Ｎ‐ｔｅｒｔ‐ブチルニトロン（ＰＢＮ）、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ポリフェノール化合物、カロチノイドなどが挙げられるがこれらに限定されない。抗凝血剤の例としては、ビタミンＫ、ワルファリン、アセノクマロール、ヘパリン、アスピリン、クロピドグレル、ジピリダモールなどが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３６】
薬剤または上記医薬組成物は、例えば、レミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第１７版、アルフォンソＲジェンナーロ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、ペンシルバニア州イーストン（１９８５）に記載されているような条件を満たした調剤手順によって調製される。薬学的に許容できる賦形剤は、製剤の他の成分と親和性があり、生物学的に許容可能であるものである。
【００３７】
本発明の化合物（例えば、上記式（Ｉ）を有する化合物）は、経口、非経口、経皮、直腸、または、吸入投与されてよく、単独で、または、従来の薬学的に許容できる賦形剤と組み合わせて投与されてよい。好適な実施形態では、本発明の化合物は、被験体に経口または非経口投与され得る。
【００３８】
本発明の化合物は、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、腹腔内注射、若しくは経口摂取によって投与され得る滅菌溶液、または、懸濁液である液状医薬組成物に調製されてよい。無菌注射可能な溶液または懸濁液を製造するための適切な希釈剤または溶媒としては、１、３−ブタンジオール、マンニトール、水、リンゲル液、および、生理食塩水が挙げられるがこれらに限定されない。オレイン酸などの脂肪酸およびそのグリセリド誘導体は、オリーブ油またはひまし油などの天然の薬学的に許容できる油であり、注射可能薬物を調製するのに役立つ。これらの油剤または油懸濁液は、アルコール希釈剤、あるいは、カルボキシメチルセルロースまたは同様の分散剤を含んでよい。ツイン（商品名）またはスパン（商品名）などの他の一般的に用いられる界面活性剤、または、薬学的に許容できる剤形を製造するのに一般的に用いられる、他の同様の乳化剤若しくは生物有用性を高める物質も剤形の目的で使用されることができる。経口投与は、液状および固形のいずれの剤形でなされてもよい。
【００３９】
薬剤または上記本発明による医薬組成物は、局所適用のためのさまざまな剤形で調製されてよい。この分野ではよく知られている多種多様な皮膚病学的に許容される不活性賦形剤が用いられてよい。局所適用される組成としては、液体、クリーム、ローション、軟膏、ジェル、スプレー、エアロゾル、皮膚用パッチ剤などが挙げられる。典型的な不活性賦形剤は、例えば、水、エチルアルコール、ポリビニルピロリドン、プロピレングリコール、鉱油、ステアリルアルコール、および、ゲル生成物であってよい。上記剤形および賦形剤はすべて、製薬の技術分野ではよく知られている。剤形の選択は、本願明細書に記載された組成の効能にとって重要ではない。
【００４０】
薬剤または上記本発明による医薬組成物は、腔粘膜を介したドラッグデリバリのための頬側および／または舌下薬剤投与単位などの、粘膜投与のためのさまざまな剤形で調製されてもよい。薬学的に許容でき、適切な付着度および所望の薬剤放出のいずれをも実現し、調製される活性薬剤、および、頬側および／または舌下薬剤投与単位に存在しうる他の成分と相溶する多種多様な生分解性高分子賦形剤が用いられ得る。一般的に、高分子賦形剤は、口腔粘膜の濡れた表面に付着する親水性ポリマーを含む。高分子賦形剤の例としては、アクリル酸ポリマーおよびコポリマー、加水分解ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、ポリアクリレート、ビニルポリマーおよびコポリマー、ポリビニルピロリドン、デキストラン、グアーガム、ペクチン、デンプン、および、セルロースポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
このような薬剤または組成物は、当該組成物の有効成分を適切または所望の作用部位に運搬するいかなるルートを介して、例えば、経口、経鼻、経肺、パッシブまたはイオン導入デリバリーなどの経皮、または、例えば、直腸、デポ、皮下、静脈、筋肉、鼻腔内、小脳内、点眼剤、若しくは、軟膏などの非経口によって哺乳類、好ましくはヒトに投与される。さらに、本発明の化合物の投与は、他の有効成分と並行してすなわち同時に投与されてよい。
【００４２】
本発明の化合物の投与量は、選択された特定の化合物または組成、投与経路、および、患体の所望の反応を導くための（単独あるいは他の薬剤との組合せにおける）化合物の能力に対してだけでなく、病状、または、緩和されるべき状態の深刻度、患者の年齢、性別、体重、患者の状態、及び治療されている病的状態の深刻度、併用投薬若しくはその後患者が従う特別食などの要因、並びに、当業者なら理解するであろう他の要因に対しても、患者ごとに異なり、適切な投与量は、最終的には担当医の裁量に委ねられる。投薬計画は、治療反応を向上させるように調整されてよい。治療効果のある量とは、治療に有益な作用が化合物または組成の毒性または有害作用に勝る量である。本発明による化合物または組成物は、症状の数および／または深刻さが低下するような量および時間で投与されることが好ましい。
【００４３】
以下の実施例によって本発明をさらに詳しく説明するが、例示目的であって、限定する意図はない。
【実施例１】
【００４４】
［認知症を患う被験体にニューロン保護効果をもたらす化合物１］
Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスは、若年性アルツハイマー病（ＡＤ）患者のいるスウェーデンの大家族から得たヒトＡＰＰの６９５アミノ酸アイソフォームの導入遺伝子コードを担持する。これらのマウスは、突然変異体Ａβの濃度が高く、アミロイド斑がかなり多数出現し、記憶障害を呈している。本発明の化合物がニューロン保護効果を有するか否かを検証すべく、Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスをテスト化合物（例えば化合物１）または賦形剤で処置し、脳の機能欠損および神経可塑性に対するテスト化合物の効果を恐怖条件付け文脈テスト、および、ウェスタンブロッティングにてそれぞれ測定した。
【００４５】
［１．１  認知症の動物モデルの準備］
Ｔｇ２５７６トランスジェニックマウスは、若年性アルツハイマー病（ＡＤ）患者のいるスウェーデンの大家族から得たヒトＡＰＰの６９５アミノ酸アイソフォームの導入遺伝子コードを担持する。これらのマウスは、突然変異体Ａβの濃度が高く、アミロイド斑がかなり多数出現し、記憶障害を呈している。Ｔｇ２５７６マウスは、米国メイン州のジャクソン研究所から購入した。容量依存効果を調べるため、台湾のバイオラスコ社から６〜８週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを購入した。動物は５匹ずつケージに入れ、室内を温度２１±１℃、湿度７０±５％に保ち、明１２時間、暗１２時間の明暗サイクルとし、点灯時間は午前６時とした。実験中、動物には食料および水を自由に摂取させた。上記サイクルの明の期間において行動テストを行った。すべての動物実験は、台北医学大学（台北、台湾、Ｒ．Ｏ．Ｃ．）の動物使用管理委員会によって規定された規則に従って実行された。
【００４６】
［１．２  薬剤の調製および投与］
化合物１は、５％のエタノール、３５％のポリエチレングリコール、および、６０％の生理食塩水からなる溶媒中に濃度１５ｍｇ／ｍｌになるよう溶解された。恐怖条件付け文脈テストの訓練に先立ち、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを化合物１（５０、１００、２００ｍｇ／ｋｇを腹腔内投与）、または、賦形剤で一回処置した。その後、５か月齢および１１か月齢のＴｇ２５７６トランスジェニックマウスに、化合物１を経口投与（１日あたり５０ｍｇ／ｋｇを２０日間）するか、または、賦形剤を投与した。
【００４７】
［１．３  恐怖条件付け文脈テスト］
不要なストレスを排除すべく、訓練の２時間前にすべてのマウスをラボに移した。この検査には、米国ニューヨークのクールボーンインスツルメンツのＴＲＵスキャンフォトビームトラッキングシステムが用いられた。行動訓練では、マウスをチャンバに入れ、２分後に、条件刺激（８０ｄＢの可聴音を３０秒間）と無条件刺激（０．７ｍＡの軽いフットショックを２秒間）とを対にして２分間隔で与えた。２４時間後、訓練チャンバに均等に配置されているマウスの音−ショックに関連する記憶力を測定すべく、すくみ反応を検査した。検査日、３分間の恐怖条件付け文脈テストをマウスに行い、その後、条件刺激を３分間与えた。そのデータは、記録され、このシステムのシステムソフトウェア（ＴｒｕＳｃａｎ２．０２）によって計算された。
【００４８】
［１．３  サンプル調製、タンパク質抽出、および、ウエスタンブロッティング］
動物を抱水クロラール（４００ｍｇ／ｋｇ）により深麻酔し、生理食塩水および４％のパラホルムアルデヒドで潅流した。海馬を集め、溶解緩衝液（ロシュ社の試薬、ライシス−Ｍ）にて溶解した。溶解物を氷上で５分間培養し、温度４℃、毎分回転数１４，０００ｒ．ｐ．ｍ．で遠心分離した。上澄みをサイトゾルタンパク質の抽出物として集めた。タンパク質濃度を測定し、ブラッドフォードタンパク質アッセイキット（ピアースバイオテクノロジー）を用いて正規化した。正規化の後、３０μｇのタンパク質に対してウエスタンブロッティングを行った。増強化学発光（メルクミリポア）を用いて免疫活性を検査した。
【００４９】
［１．４  結果］
図１は、正常なＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの記憶形成の強化に対する化合物１の用量依存的な効果を示す。２４時間の恐怖条件付け文脈テストの訓練の後のすくみ反応テストは、音−ショック対の記憶が著しく強化されたことを示した（それぞれ＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１；ｎ＝８、９、８および８）。本発明の化合物１は、正常なマウスであってもすくみ反応テストに有効であることが図１から明らかである。
【００５０】
図２は、１００ｍｇ／ｋｇの化合物１を腹腔内注射して２４時間後の記憶関連タンパク質のアップレギュレーションに対する化合物１の効果を示す。Ａは、海馬抽出物からのサンプルであり、化合物１で処置されたマウスのタンパク質レベルが変化していることを示す。Ｂは、定量的データであり、賦形剤の処置と化合物１の処置との間の著しい違いを示す（＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＃ｐ＜０．００１）。
【００５１】
図３は、恐怖条件付け文脈テストに対する化合物１の効果を示す。条件刺激−無条件刺激（ＣＳ−ＵＳ）の対を与えたＴｇ２５７６マウスの運動機能および認識力を示している。Ｔｇ２５７６マウス（それぞれｎ＝７、７、６、５、３、５）の音−ショックの対の記憶は、化合物１を経口投与する（１日あたり５０ｍｇ／ｋｇを２０日間）ことにより増強され（６か月齢のマウス対化合物１で処置された６か月齢のマウス、＊ｐ＝０．０２６４）、加齢に伴う健忘症により遅滞した（３か月齢マウス対６か月齢マウス、＊ｐ＝０．０１５２；３か月齢マウス対１２か月齢マウス、＊＊＊ｐ＝０．０００５；６か月齢マウス対化合物１で処置した６か月齢マウス、＃ｐ＝０．０２６４、１２か月齢マウス対化合物１で処置した１２か月齢マウス、＃＃ｐ＝０．００２８）。
【００５２】
図４Ａ〜Ｄは、Ｔｇ２５７６マウスの海馬の加齢に伴う変化によるシナプス可塑性タンパク質レベルの低下の発現に対する、化合物１の経口投与（１日あたり５０ｍｇ／ｋｇを２０日間）の効果を示す。
図４Ａ：ＮＭＤＡ受容体のサブユニットであるＮＲ２ａおよびＮＲ２ｂのタンパク質発現は、老化により低下し（左：３か月齢のマウスとの比較、＊ｐ＝０．０２２６；右：＊ｐ＝０．０４７７；＊＊ｐ＝０．００１２）、化合物１のチューブによる経口投与後に上昇した（左：＃Ｐ＝０．０２３１；右：＃ｐ＝０．０４９２）。
図４Ｂ：活性型転写および翻訳マーカー、抗アポトーシスマーカーであるホスホＥＲＫ（３か月齢の対照群と６か月齢の対照群との比較、＊ｐ＝０．０１６５；３か月齢の対照群と１２か月齢の対照群との比較、＊ｐ＝０．０４８６；＃ｐ＝０．０４２８）。
図４Ｃ：抗アポトーシスマーカーであるｐ２１（＊ｐ＝０．０１７５；＃ｐ＝０．０１４５）。
図４Ｄ：アセチルヒストンＨ４（３か月齢の対照群と６か月齢の対照群との比較、＊＊＊ｐ＝０．０００７；３か月齢の対照群と１２か月齢の対照群との比較、＊＊＊ｐ＝０．０００２；＃＃＃ｐ＝０．０００８）。
【実施例２】
【００５３】
［脊髄を損傷した被験体にニューロン保護効果をもたらす化合物１］
本実施例では、脊髄を損傷した動物モデルを用いて、本発明の化合物の効果を検証する。実施例１の手順と同様、動物に脊髄損傷を人工的に発症させた後、テスト化合物１または賦形剤で処置し、バッソ、ビーティーとブレスナハン（ＢＢＢ）運動評価尺度により行動スコアを測定し、ニューロン保存を免疫組織化学（ＩＨＣ）染色により測定し、抗アポトーシスをウエスタンブロット分析により測定した。
【００５４】
［２．１  脊髄損傷した動物モデルの準備］
体重２８０〜３３０ｇのオスのＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラット（台湾、アカデミアシニカ）は、到着後、２匹ずつケージに入れられ、少なくとも５日間置かれた。これらのラットには食料および水を自由に摂取させ、部屋の中の明暗サイクルは１２時間ずつとした。この研究は、台北大学の動物使用管理委員会によって規定され、動物実験委員会によって承認された規則に従い行われた。
【００５５】
ニューヨーク大学の衝撃装置を用いて脊髄損傷を生じさせた。４０ｍｇ／ｋｇのＺｏｌｅｔｉｌ５０を腹腔内投与して真麻酔させた状態で脊髄を挫傷させた。背面椎弓切除を施された脊髄分節Ｔ９を露出させた。その後、１０グラムの棒を５０ｍｍの高さから落とすことにより脊髄損傷を施した。挫傷は、後肢の運動機能欠損という結果になった。
【００５６】
［行動テスト］
行動テストおよび分析は、処置について知らない観察者によって行われた。バッソ、ビーティーとブレスナハン（ＢＢＢ）運動評価尺度を用いて、運動機能を観察し、記録した。損傷後１日目、３日目、７日目に、オープンフィールドＢＢＢスコアロコモータテストによって後肢の運動機能を評価した。
【００５７】
［２．３  薬剤の調製および投与］
化合物１は、５％のエタノール、３５％のポリエチレングリコール、および、６０％の生理食塩水からなる溶媒中に濃度１５ｍｇ／ｍｌになるよう溶解された。脊髄損傷後、すべての実験動物は、化合物１（１日あたり３０ｍｇ／ｋｇ）、または、賦形剤（５％のエタノール、３５％のポリエチレングリコール、および、６０％の生理食塩水）を静脈注射により７日間投与された。
【００５８】
［組織学、免疫組織化学、および、細胞数］
半側切断脊髄損傷から７日目に、動物をイソフルランで深麻酔し、後左心室よりリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で潅流後、冷たい４％のパラホルムアルデヒドが溶解されたｐＨ７．４の０．１５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液で潅流した。脊髄を直ちに除去し、４℃の同じ固定液において８時間後方側固定し、１５％および３０％のスクロース内で２〜３日凍結保護した。脊髄を粉末ドライアイスで凍結させ、使用時までマイナス８０℃で保存した。脊髄の片側切断の中心で、凍結・スライドミクロトームによって５マイクロメートルの切片にカットした。切片を免疫染色またはアポトーシス染色用に準備した。免疫組織化学染色のために、切片をリン酸緩衝食塩水で洗い、３％の正常ヤギ血清および０．３％のトリトンＸ−１００を含むリン酸緩衝食塩水中で１時間培養した。切片は、抗ＮｅｕＮ（カリフォルニア州、テメキュアのケミコン社）を用い、４℃にて浮遊させた状態で培養した。ベクタステインエリートＡＢＣペルオキシダーゼ法（カリフォルニア州、バーリンゲーム、ベクターラボラトリーズ社）により、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）をクロマゲンとして用いて、免疫活性を視覚化した。さらに、アポトーシス検出キット（マサチューセッツ州、ケンブリッジのオンコジーンリサーチプロダクツ社）を用いて、ＴＵＮＥＬ(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick-end labeling)法により脊髄損傷後のアポトーシスを検出した。製造業者の指示どおりにＴＵＮＥＬ染色を行った。クレノウ酵素の脱落により、ＴＵＮＥＬ染色の陰性対照が生じ、一方で、他の免疫組織化学的研究の陰性対照切片を一次抗体なしで上記のように培養した。倍率４００倍にて、上記抗体で染色した脊髄の片側切断の中心で６切片ごとに細胞を数えた。はっきりと染まって見える細胞のみを数えた。すべてのデータを、５つの連続的な細胞定量化の平均値±標準誤差として示した。
【００５９】
［結果］
図５は、運動機能の回復に対する化合物１の効果をＢＢＢスコアにより示す。化合物１を静脈注射された（１日あたり３０ｍｇ／ｋｇを７日間）ラットは、脊髄損傷後の７日目には、賦形剤が投与されたグループに比べ、ＢＢＢスコアの著しい回復を見せた（ｐ＝０．０１４７、各グループ共にｎ＝６）。
【００６０】
図６ＡおよびＢは、脊髄損傷後のニューロン欠損の保護に対する化合物１の効果を示す。ニューロンの特異的マーカーであるＮｅｕＮの免疫組織化学によって、賦形剤を投与したグループの深刻なニューロン欠損が示された。一方、７日間にわたり、１日３０ｍｇ／ｋｇの化合物１で処置されたグループのニューロンはきわめて良好に保護された（ニューロンのパーセンテージではｐ＜０．０００１、ニューロン数ではｐ＝０．０１５１、各グループ共にｎ＝３、倍率４００倍）。
【００６１】
図７ＡおよびＢは、脊髄損傷後の抗アポトーシスに対する化合物１の効果を示す。ＴＵＮＥＬ染色は、賦形剤を投与されたグループにおけるアポトーシス細胞の著しい増加を示し、一方、化合物１（７日間にわたり１日３０ｍｇ／ｋｇ）で処置されたグループにおけるアトポーシス細胞の著しい減少を示した（アポトーシス細胞のパーセンテージではｐ＝０．００９８、アポトーシス細胞数ではｐ＝０．００１５、各グループ共にｎ＝３、倍率４００倍）。
【００６２】
図８は、脊髄損傷後のヒストン３、４のアセチル化、ｐ２１、および、ホスホＥＲＫの発現に対する化合物１の効果を示す。１００ｍｇ／ｋｇの化合物を投与すると、賦形剤の対照群に比べ、ヒストン３、４のアセチル化、ｐ２１、および、ホスホＥＲＫの発現が著しく増加した（ａｃ−Ｈ３  ｐ＝０．０４５１、ａｃ−Ｈ４  ｐ＝０．００２３、ｐ２１  ｐ＝０．００４３、ｐ−ＥＲＫ  ｐ＝０．０３１１、各グループ共にｎ＝５）。
【図１】
2016537375.tif 000013
【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
2016537375.tif 000019
【図５】
2016537375.tif 000020
【図６Ａ】
2016537375.tif 000021
【図６Ｂ】
2016537375.tif 000022
【図６Ｃ】
2016537375.tif 000023
【図７Ａ】
2016537375.tif 000024
【図７Ｂ】
2016537375.tif 000025
【図８】
2016537375.tif 000026
【国際調査報告】
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