【手続補正書】
【提出日】平成25年8月13日(2013.8.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的遺伝子の発現を抑制する発現抑制配列を含む一本鎖ＲＮＡ核酸分子であって、
５’側から３’側にかけて、５’側領域（Ｘｃ）、内部領域（Ｚ）および３’側領域（Ｙｃ）を、前記順序で含み、
前記内部領域（Ｚ）が、前記発現抑制配列を含み、内部５’側領域（Ｘ）および内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成され、
前記内部領域（Ｚ）の塩基数が、１９塩基〜３０塩基であり、
前記５’側領域（Ｘｃ）が、前記内部５’側領域（Ｘ）と相補的であり、
前記３’側領域（Ｙｃ）が、前記内部３’側領域（Ｙ）と相補的であり、
前記内部領域（Ｚ）の長さ（Ｚ）と、前記領域（Ｘｃ）および領域（Ｙｃ）の合計長さ（Ｘｃ＋Ｙｃ）との差（Ｚ−（Ｘｃ＋Ｙｃ））が、０〜４塩基であり、
前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が１〜１１塩基であるか、または、前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が１〜１１塩基であり、
５’末端と３’末端とが未結合であることを特徴とする一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項２】
前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に、リンカー領域（Ｌｘ）を有し、
前記リンカー領域（Ｌｘ）を介して、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）とが連結している、請求項１記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項３】
前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、
前記リンカー領域（Ｌｙ）を介して、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）とが連結している、請求項１または２記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項４】
前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）との間に、リンカー領域（Ｌｘ）を有し、
前記リンカー領域（Ｌｘ）を介して、前記５’側領域（Ｘｃ）と前記内部５’側領域（Ｘ）とが連結し、
前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）との間に、リンカー領域（Ｌｙ）を有し、
前記リンカー領域（Ｌｙ）を介して、前記３’側領域（Ｙｃ）と前記内部３’側領域（Ｙ）とが連結している、請求項１から３のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項５】
前記内部領域（Ｚ）の塩基数（Ｚ）、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、下記式（１）および（２）の条件を満たす、請求項１から４のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
Ｚ＝Ｘ＋Ｙ  ・・・（１）
Ｚ≧Ｘｃ＋Ｙｃ  ・・・（２）
【請求項６】
前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）、前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）および前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、下記（ａ）〜（ｄ）のいずれかの条件を満たす、請求項１から５のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
（ａ）下記式（３）および（４）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ  ・・・（３）
Ｙ＝Ｙｃ  ・・・（４）
（ｂ）下記式（５）および（６）の条件を満たす。
Ｘ＝Ｘｃ  ・・・（５）
Ｙ＞Ｙｃ  ・・・（６）
（ｃ）下記式（７）および（８）の条件を満たす。
Ｘ＞Ｘｃ  ・・・（７）
Ｙ＞Ｙｃ  ・・・（８）
（ｄ）下記式（９）および（１０）の条件を満たす。
Ｘ＝Ｘｃ  ・・・（９）
Ｙ＝Ｙｃ  ・・・（１０）
【請求項７】
前記（ａ）〜（ｄ）において、前記内部５’側領域（Ｘ）の塩基数（Ｘ）と前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）の差、前記内部３’側領域（Ｙ）の塩基数（Ｙ）と前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）の差が、下記条件を満たす、請求項６記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
（ａ）下記式（１１）および（１２）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝１、２または３  ・・・（１１）
Ｙ−Ｙｃ＝０  ・・・（１２）
（ｂ）下記式（１３）および（１４）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝０  ・・・（１３）
Ｙ−Ｙｃ＝１、２または３  ・・・（１４）
（ｃ）下記式（１５）および（１６）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝１、２または３  ・・・（１５）
Ｙ−Ｙｃ＝１、２または３  ・・・（１６）
（ｄ）下記式（１７）および（１８）の条件を満たす。
Ｘ−Ｘｃ＝０  ・・・（１７）
Ｙ−Ｙｃ＝０  ・・・（１８）
【請求項８】
前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、１〜７塩基である、請求項１から７のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項９】
前記５’側領域（Ｘｃ）の塩基数（Ｘｃ）が、１〜３塩基である、請求項１から８のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項１０】
前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、１〜７塩基である、請求項１から９のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項１１】
前記３’側領域（Ｙｃ）の塩基数（Ｙｃ）が、１〜３塩基である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項１２】
少なくとも１つの修飾された残基を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項１３】
標識物質を含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項１４】
安定同位体を含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項１５】
前記リンカー領域（Ｌｘ）および／または前記リンカー領域（Ｌｙ）が、ヌクレオチド残基および非ヌクレオチド残基の少なくとも一つから構成される、請求項２から１４のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項１６】
前記ヌクレオチド残基が、非修飾ヌクレオチド残基および／または修飾ヌクレオチド残基である、請求項１５記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項１７】
前記リンカー領域（Ｌｘ）および／または前記リンカー領域（Ｌｙ）が、下記（１）〜（７）のいずれかの残基で構成される、請求項１５または１６記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
（１）非修飾ヌクレオチド残基
（２）修飾ヌクレオチド残基
（３）非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（４）非ヌクレオチド残基
（５）非ヌクレオチド残基および非修飾ヌクレオチド残基
（６）非ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
（７）非ヌクレオチド残基、非修飾ヌクレオチド残基および修飾ヌクレオチド残基
【請求項１８】
前記一本鎖ＲＮＡ核酸分子において、塩基数の合計が、５０塩基以上である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項１９】
前記遺伝子の発現抑制が、ＲＮＡ干渉による発現抑制である、請求項１から１８のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項２０】
前記一本鎖ＲＮＡ核酸分子の塩基配列が、
配列番号１４、３３、３４、３５、５８、５９および８０のいずれかの塩基配列である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子。
【請求項２１】
標的遺伝子の発現を抑制するための組成物であって、
請求項１から２０のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子を含むことを特徴とする、発現抑制用組成物。
【請求項２２】
請求項１から２０のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子を含むことを特徴とする、薬学的組成物。
【請求項２３】
炎症治療用である、請求項２２記載の薬学組成物。
【請求項２４】
非ヒト動物において標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、
請求項１から２０のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子を使用することを特徴とする発現抑制方法。
【請求項２５】
前記一本鎖ＲＮＡ核酸分子を、細胞、組織または器官に投与する工程を含む、請求項２４記載の発現抑制方法。
【請求項２６】
前記一本鎖ＲＮＡ核酸分子を、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで投与する、請求項２４または２５記載の発現抑制方法。
【請求項２７】
前記遺伝子の発現抑制が、ＲＮＡ干渉による発現抑制である、請求項２４から２６のいずれか一項に記載の発現抑制方法。
【請求項２８】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて標的遺伝子の発現を抑制する方法であって、
請求項１から２０のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子を使用することを特徴とする発現抑制方法。
【請求項２９】
非ヒト動物において標的遺伝子の発現を抑制するＲＮＡ干渉を誘導する方法であって、
請求項１から２０のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子を使用することを特徴とする発現誘導方法。
【請求項３０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて標的遺伝子の発現を抑制するＲＮＡの発現を誘導する方法であって、
請求項１から２０のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子を使用することを特徴とする発現誘導方法。
【請求項３１】
非ヒト動物の疾患の治療方法であって、
請求項１から２０のいずれか一項に記載の一本鎖ＲＮＡ核酸分子を、前記非ヒト動物に投与する工程を含み、
前記一本鎖ＲＮＡ核酸分子が、前記発現抑制配列として、前記疾患の原因となる遺伝子の発現を抑制する配列を有することを特徴とする治療方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
前記内部領域（Ｚ）は、前述のように、前記内部５’領域（Ｘ）と前記内部３’領域（Ｙ）が連結されている。前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）は、例えば、直接的に連結され、その間に介在配列を有していない。前記内部領域（Ｚ）は、前記５’側領域（Ｘｃ）および前記３’側領域（Ｙｃ）との配列関係を示すために、「前記内部５’側領域（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）が連結して構成される」と表わすものであって、前記内部領域（Ｚ）において、前記内部５’側領域（Ｘ）と前記内部３’側領域（Ｙ）とが、例えば、前記ｓｓＮｃ分子の使用において、別個の独立した領域であることを限定するものではない。すなわち、例えば、前記内部領域（Ｚ）が、前記発現抑制配列を有する場合、前記内部領域（Ｚ）において、前記領域（Ｘ）と前記領域（Ｙ）とにわたって、前記発現抑制配列が配置されてもよい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６０】
比較例のＲＮＡとして、以下に示す、ＲＮＡｉポジティブコントロール（Ｐｃ）のｄｓＲＮＡ（ＮＩ−００１１）を合成した。ＮＩ−００１１は、各一本鎖の３’末端に２塩基のオーバーハングを有し、配列番号４の一本鎖が、前記ＮＫ−００１６と同様に、前記１９塩基長の発現抑制配列を有している。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６８】
（１）材料および方法
実施例のＲＮＡとして、図２５に示すｓｓＲＮＡを使用した。図２５において、５’側から、小文字下線の領域は、前記領域（Ｘｃ）、大文字下線の領域は、前記内部５’領域（Ｘ）、小文字下線の領域は、前記領域（Ｙｃ）を示す。また、「Ｘｃ／Ｘ」は、前記領域（Ｘｃ）の塩基長（Ｘｃ）と、前記領域（Ｘ）の塩基長（Ｘ）との比を示す。図２５において、「＊」は、フリー塩基を示す。下記ＲＮＡの配列は、配列番号７４〜７６に示す。