(57)【要約】  本発明は、新規な着色表現型を有するペチュニアの花を提供する。ペチュニア植物およびそれを作る方法もまた提供される。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
青または紫の着色を有するペチュニアの花であって、前記着色が、前記花の中央部分と比べて前記花の縁部分において著しく高い濃度であり、前記花の前記縁部分と前記中央部分とが、境界部によって分けられていることを特徴とする、ペチュニアの花。
【請求項２】
前記着色が、王立園芸協会の価値尺度に従って５８〜１１８の範囲、特に青色（Ｎ８９〜１１８）または紫色（５８〜８８）を指定する範囲にあるものとして特徴付けられ得る、請求項１に記載のペチュニアの花。
【請求項３】
前記花の前記縁部分と前記中央部分との間の前記境界部が、前記縁部分を花の総面積の比率として表現することができるように位置付けられる、請求項１または２に記載のペチュニアの花。
【請求項４】
前記花が完全に開花している場合に、前記縁部分が、前記花の総面積の５％以上、好ましくは前記花の総面積の１０％以上、好ましくは前記花の総面積の２０％以上、好ましくは前記花の総面積の５０％以上を構成する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項５】
前記花が完全に開花している場合に、前記縁部分が、前記花の総面積の８０％未満、好ましくは前記花の総面積の６０％未満を構成する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項６】
ペチュニア植物Ｐ１３−５０１から得ることができ、その代表する種子がＮＣＩＭＢに寄託番号ＮＣＩＭＢ  ４２１８７で寄託されている、請求項１〜５のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項７】
ペチュニア植物Ｐ１３−５０５から得ることができ、その代表する種子がＮＣＩＭＢに寄託番号ＮＣＩＭＢ  ４２１８８で寄託されている、請求項１〜６のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項８】
ペチュニア植物Ｐ１２−２０１８から得ることができ、その代表する種子がＮＣＩＭＢに寄託番号ＮＣＩＭＢ  ４２１８９で寄託されている、請求項１〜７のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項９】
ペチュニア植物Ｐ１２−２７９１から得ることができ、その代表する種子がＮＣＩＭＢに寄託番号ＮＣＩＭＢ  ４２１９０で寄託されている、請求項１〜８のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１０】
前記花が、ケイ皮酸誘導体、フラボノイド、およびアントシアニンのプロフィールによって測定される、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｂｌｕｅ  Ｍｏｒｎなどのモーン模様を有する花とは著しく異なる色素組成を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１１】
前記花の試料中で、ケンペロールおよびクエルセチンのリストから選択されるフラボノイド化合物のうちの１種類、最も好ましくは２種類が検出され得る、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１２】
前記花の試料中で、シアニジン、ペラルゴニジン、ペツニジン、マルビジン、デルフィニジン、ペオニジンのリストから選択されるアントシアニン類のうちの１種類、より好ましくは２種類、より好ましくは３種類、より好ましくは４種類、より好ましくは５種類、最も好ましくは６種類が検出され得る、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１３】
アントシアニン類の存在率が、前記花の前記縁部分と比べて前記花の前記中央部分でより低い、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１４】
前記花の前記中央部分におけるアントシアニン類の存在率が、前記花の前記縁部分において見出される存在率の２０％未満である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１５】
フラボノイド類の存在率およびアントシアニン類の存在率が、前記花の前記縁部分と比べて前記花の前記中央部分でより低い、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１６】
Ｍｅｒｌｉｎ  Ｂｌｕｅ  Ｍｏｒｎなどのモーン模様を有する花とは著しく異なる遺伝子発現プロフィールを有する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１７】
カルコン合成酵素（ＣＨＳ）遺伝子の発現の増加が、前記花の前記中央部分におけるＣＨＳ遺伝子の発現と比べて前記花の前記縁部分において観察された、請求項１〜１６のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１８】
前記境界部が、２０を超える遷移変化勾配の値を有するものとして特徴付けられる、請求項１〜１７のいずれか一項に記載のペチュニアの花。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の花を有するペチュニア植物であって、前記植物が、雑種または近交系であることを特徴とする、ペチュニア植物。
【請求項２０】
前記ペチュニア植物が、前記青または紫の着色を含まない花を有するペチュニア植物と比較して、７を超えるｐＨ値に対して耐性がある、請求項１９に記載のペチュニア植物。
【請求項２１】
前記植物が、温室の典型的な気候条件下で成長する、請求項１９または２０に記載のペチュニア植物。
【請求項２２】
前記気候条件が、２１℃の昼間の平均温度、１８℃の夜間の平均温度によって特徴付けられる、請求項２１に記載のペチュニア植物。
【請求項２３】
請求項１９〜２２のいずれか一項に記載のペチュニア植物の、植物部位。
【請求項２４】
請求項１９〜２２のいずれか一項に記載のペチュニア植物の、種子または生長性切り枝。
【請求項２５】
請求項１９〜２２のいずれか一項に記載のペチュニア植物を作り出す方法であって、
（ａ）所望の形質を有する第一の親のペチュニア植物を、第二の親のペチュニア植物と交雑させて、子孫の植物を作り出す工程と、
（ｂ）前記所望の形質を有する１種類または複数種類の子孫の植物を選択して、選択された子孫の植物を作り出す工程と
を含むことを特徴とする、方法。
【請求項２６】
前記所望の形質が、７を超えるｐＨ値に対する耐性である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
請求項２５または２６に記載の方法によって作り出される、ペチュニア植物の種子。
【請求項２８】
請求項２７に記載の種子を成長させることによって作り出される、ペチュニア植物またはその部位。
【請求項２９】
請求項２８に記載のペチュニア植物から作り出される細胞の組織培養物であって、前記組織培養物の細胞が、種子、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌蕊、葯、花、茎、および葉柄からなる群から選択される植物部位から作り出されることを特徴とする、組織培養物。
【請求項３０】
請求項２９に記載の組織培養物から再生される、ペチュニア植物。
【請求項３１】
雑種ペチュニアの種子を作り出す方法であって、第一の親のペチュニア植物を、第二の親のペチュニア植物と交雑させる工程と、得られる雑種ペチュニアの種子を収穫する工程とを含み、前記第一の親のペチュニア植物および／または第二の親のペチュニア植物が、請求項１９〜２２のペチュニア植物であることを特徴とする、方法。
【請求項３２】
請求項３１に記載の雑種ペチュニアの種子を成長させることによって作り出される、雑種ペチュニア植物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ツクバネアサガオ（Ｐｅｔｕｎｉａ  ｈｙｂｒｉｄａ）種の植物に関する。具体的には新規な着色表現型を有するツクバネアサガオ（Ｐｅｔｕｎｉａ  ｈｙｂｒｉｄａ）に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペチュニア（Ｐｅｔｕｎｉａ）は、ナス科（ｆａｍｉｌｙ  Ｓｏｌａｎａｃｅａｅ）のタバコ、ブドウホオズキ、トマト、ベラドンナ、ジャガイモ、および唐辛子の近縁種である南米起源の約４０種の顕花植物の属である。同名のよく知られている花は、その別称をトゥピ・グアラニ語由来の「タバコ」を意味するペチュン（ｐｅｔｕｎ）という語を借用したフランス語から得ている。庭園で見られる一年生の大部分の品種は雑種（ツクバネアサガオ（Ｐｅｔｕｎｉａ×ｈｙｂｒｉｄａ））である。ツクバネアサガオ（Ｐ．ｈｙｂｒｉｄａ）の起源は、Ｐ．アキラリス（Ｐ．ａｘｉｌｌａｒｉｓ）（ヨサキペチュニア）とＰ．インテグリフォリア（Ｐ．ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）（菫色の花のペチュニア）との交雑によるものと考えられる。
【０００３】
ペチュニアの多くの種が知られており、これらに限定されないがＰ．アルピコラ（Ｐ．ａｌｐｉｃｏｌａ）、Ｐ．アルチプラーナ（Ｐ．ａｌｔｉｐｌａｎａ）、Ｐ．アキラリス（Ｐ．ａｘｉｌｌａｒｉｓ）、Ｐ．バジーンシス（Ｐ．ｂａｊｅｅｎｓｉｓ）、Ｐ．ボンジャージネンシス（Ｐ．ｂｏｎｊａｒｄｉｎｅｎｓｉｓ）、Ｐ．エクスセルタ（Ｐ．ｅｘｓｅｒｔａ）、Ｐ．グアラプアベンシス（Ｐ．ｇｕａｒａｐｕａｖｅｎｓｉｓ）、Ｐ．ヘリアンセモイデス（Ｐ．ｈｅｌｉａｎｔｈｅｍｏｉｄｅｓ）、Ｐ．フミフーサ（Ｐ．ｈｕｍｉｆｕｓａ）、Ｐ．インフラータ（Ｐ．ｉｎｆｌａｔａ）、Ｐ．インテグリフォリア（Ｐ．ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ）、Ｐ．インテリア（Ｐ．ｉｎｔｅｒｉｏｒ）、Ｐ．レディフォリア（Ｐ．ｌｅｄｉｆｏｌｉａ）、Ｐ．リットラリス（Ｐ．ｌｉｔｔｏｒａｌｉｓ）、Ｐ．マンチクエイレンシス（Ｐ．ｍａｎｔｉｑｕｅｉｒｅｎｓｉｓ）、Ｐ．オクシデンタリス（Ｐ．ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）、Ｐ．パルビフローラ（Ｐ．ｐａｒｖｉｆｌｏｒａ）、Ｐ．パタゴニカ（Ｐ．ｐａｔａｇｏｎｉｃａ）、Ｐ．プベスセンス（Ｐ．ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ）、Ｐ．レイツィー（Ｐ．ｒｅｉｔｚｉｉ）、Ｐ．リオグランデンシス（Ｐ．ｒｉｏｇｒａｎｄｅｎｓｉｓ）、Ｐ．サクシコーラ（Ｐ．ｓａｘｉｃｏｌａ）、Ｐ．シェイデアーナ（Ｐ．ｓｃｈｅｉｄｅａｎａ）、Ｐ．バリアビリス（Ｐ．ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）、Ｐ．ビラディアーナ（Ｐ．ｖｉｌｌａｄｉａｎａ）が挙げられる。
【０００４】
ペチュニアの種子は一般に５〜１５日で発芽し、かつ比較的過酷な状況に耐えることができる。それらは低湿度、湿った土壌でよく成長する。若木は種子から成長させることができる。ペチュニアには、２日〜５日ごとに１回、またより乾燥した地域では毎日水やりすべきである。最高の成長は晩春に起こる。ペチュニアは一般には、例えばつり花かご中で育てられるか、庭園中で混ぜて育てられる。
【０００５】
花の色は、色素（ペチュニアの場合には主にフラボノイド類）、補色素、液胞ｐＨ、細胞形状と関係する複雑な形質である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ペチュニアは、重要かつ高価な花壇用草花である。したがって消費者は常に目新しさを求めている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本出願の発明者らは、新規な表現型を有するペチュニアの花を提供した。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】新規な模様を示すペチュニアの花を示す。
【図２】緩やかな境界部エッジの遷移（モーン（ｍｏｒｎ）模様）を特徴とするペチュニアの二色の花中のケイ皮酸誘導体、フラボノイド類、およびアントシアニジン類の存在率の例示を示す。
【図３】Ｐａｔｔｅｒｎ  １によって特徴付けられるペチュニアの二色の花中のケイ皮酸誘導体、フラボノイド類、およびアントシアニジン類の存在率の例示を示す。
【図４】くっきりした境界部エッジの遷移によって特徴付けられるペチュニアの二色の花（Ｐａｔｔｅｒｎ  ２、ピコチー、およびスター）中のケイ皮酸誘導体、フラボノイド類、およびアントシアニジン類の存在率の例示を示す。
【図５】二色ペチュニアの淡い色（ｌ）および濃い色（ｄ）の部分中のカルコン合成酵素遺伝子（ＣＨＳ）の相対的発現を示す。
【図６】ＩｍａｇｅＪによる花の色の試料採取を示す。
【図７】画像解析用の処理されたペチュニアの花を示す。
【図８】選ばれた模式種（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）の写真を示す。
【図９】選ばれた模式種の写真を示す。
【図１０】選ばれた模式種の写真を示す。
【図１１】選ばれた模式種の写真を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
青または紫の着色を有するペチュニアの花が提供される。上記着色は花の中央部分と比べて花の縁部分において著しく高い濃度であり、花の縁部分と中央部分とが境界部によって分けられている。
【００１０】
一実施形態では、その着色は王立園芸協会（Ｒｏｙａｌ  Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ）の価値尺度に従って５８〜１１８の範囲、具体的には青色（Ｎ８９〜１１８）または紫色（５８〜８８）を指定する範囲にあるものとして特徴付けられ得る。
【００１１】
一実施形態では、本発明によるペチュニアの花は、花の縁部分と中央部分との間に境界部を有し、それは縁部分を花の総面積の比率として表すことができるように位置付けられる。
【００１２】
一実施形態では、花が完全に開花している場合に縁部分が花の総面積の５％以上、好ましくは花の総面積の１０％以上、好ましくは花の総面積の２０％以上、好ましくは花の総面積の５０％以上を構成する。
【００１３】
一実施形態では、本発明によるペチュニアの花は、花の縁部分と中央部分との間に境界部を有し、それは花が完全に開花している場合に縁部分が花の総面積の８０％未満、好ましくは花の総面積の６０％未満を構成するように位置付けられる。
【００１４】
一実施形態では、本発明によるペチュニアの花は、優性突然変異によって引き起こされる着色を有する。別の実施形態では、本発明によるペチュニアの花は、劣性突然変異によって引き起こされる着色を有する。
【００１５】
一実施形態では、ペチュニア植物Ｐ１３−５０１から得ることができる本発明による青または紫色の縁を有するペチュニアの花が提供される。その代表する種子は、ＮＣＩＭＢに寄託番号ＮＣＩＭＢ  ４２１８７で寄託されている。このペチュニアの花は、本発明のＰａｔｔｅｒｎ  １Ａの典型的なものである。
【００１６】
一実施形態では、ペチュニア植物Ｐ１３−５０５から得ることができる本発明による青または紫色の縁を有するペチュニアの花が提供される。その代表する種子は、ＮＣＩＭＢに寄託番号ＮＣＩＭＢ  ４２１８８で寄託されている。このペチュニアの花は、本発明のＰａｔｔｅｒｎ  １Ｂの典型的なものである。
【００１７】
一実施形態では、ペチュニア植物Ｐ１２−２０１８から得ることができる本発明によるペチュニアの花が提供される。その代表する種子は、ＮＣＩＭＢに寄託番号ＮＣＩＭＢ  ４２１８９で寄託されている。このペチュニアの花は、本発明のＰａｔｔｅｒｎ  ２Ａの典型的なものである。
【００１８】
一実施形態では、ペチュニア植物Ｐ１２−２７９１から得ることができる本発明による青色の縁を有するペチュニアの花が提供される。その代表する種子は、ＮＣＩＭＢに寄託番号ＮＣＩＭＢ  ４２１９０で寄託されている。このペチュニアの花は、本発明のＰａｔｔｅｒｎ  ２Ｂの典型的なものである。
【００１９】
Ｐａｔｔｅｒｎ  １Ａおよび１Ｂは、本発明のＰａｔｔｅｒｎ  １の典型的なものである。Ｐａｔｔｅｒｎ  ２Ａおよび２Ｂは、本発明のＰａｔｔｅｒｎ  ２の典型的なものである。
【００２０】
一実施形態では、本発明によるペチュニアの花が提供され、上記花は、ケイ皮酸誘導体、フラボノイド、およびアントシアニンのプロフィールによって測定される、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｂｌｕｅ  Ｍｏｒｎなどのモーン模様を有する花とは著しく異なる色素組成を有する。
【００２１】
ケンペロールおよびクエルセチンのリストから選択されるフラボノイド化合物のうちの１種類、最も好ましくは２種類を花の試料中で検出することができる、本発明によるペチュニアの花が提供される。
【００２２】
シアニジン、ペラルゴニジン、ペツニジン、マルビジン、デルフィニジン、ペオニジンのリストから選択されるアントシアニン類のうちの１種類、より好ましくは２種類、より好ましくは３種類、より好ましくは４種類、より好ましくは５種類、最も好ましくは６種類を上記花の試料中で検出することができる、本発明によるペチュニアの花が提供される。
【００２３】
一実施形態では、アントシアニン類の存在率が花の縁部分と比べて花の中央部分でより低い。一実施形態では、上記のより低い存在率がＰａｔｔｅｒｎ  １中に存在する。一実施形態では、上記のより低い存在率がＰａｔｔｅｒｎ  ２中に存在する。一実施形態では、花の中央部分中のアントシアニンの存在率が、花の縁部分中に見出される存在率の２０％未満である。
【００２４】
一実施形態では、フラボノイド類の存在率およびアントシアニン類の存在率が、花の縁部分と比べて花の中央部分でより低い。一実施形態では、上記のより低い存在率がＰａｔｔｅｒｎ  １中に存在する。一実施形態では、上記のより低い存在率がＰａｔｔｅｒｎ  ２中に存在する。
【００２５】
カフェー酸、ｐ−クマル酸のリストから選択されるケイ皮酸誘導体類のうちの１種類、最も好ましくは２種類を花の試料中で検出することができる、本発明によるペチュニアの花が提供される。
【００２６】
一実施形態では、花の縁部分と比べて花の中央部分でケイ皮酸誘導体の存在率がより高い。一実施形態では、上記のより高い存在率がＰａｔｔｅｒｎ  １中に存在する。一実施形態では、上記のより高い存在率がＰａｔｔｅｒｎ  ２中に存在する。
【００２７】
１つまたは複数の遺伝子がＭｅｒｌｉｎ  Ｂｌｕｅ  Ｍｏｒｎなどのモーン模様を有する花とは著しく異なる遺伝子発現プロフィールを有する、本発明によるペチュニアの花が提供される。
【００２８】
一実施形態では、ＣＨＳ遺伝子の遺伝子発現プロフィールが著しく異なる。
【００２９】
一実施形態では、カルコン合成酵素（ＣＨＳ）遺伝子の発現の増加が、花の中央部分におけるＣＨＳ遺伝子の発現と比べて花の縁部分において観察された。一実施形態では、上記高い発現がＰａｔｔｅｒｎ  １中に存在する。一実施形態では、上記高い発現がＰａｔｔｅｒｎ  ２中に存在する。
【００３０】
一実施形態では、花の中央部分と比べて花の縁部分でのＣＨＳ遺伝子の相対的発現が、平均で５０，０００倍超多い。一実施形態では、花の中央部分と比べて花の縁部分でのＣＨＳ遺伝子の相対的発現が、平均で１００，０００倍超多い。
【００３１】
本発明の花は２つ以上の模式種からなり、縁部分と中央部分との間のくっきりした境界部または拡散境界部のいずれかを有するものとして特徴付けられる。色の遷移変化の勾配の値は、画像解析によって分析することができる。表５は、モーン、Ｐａｔｔｅｒｎ  １、およびＰａｔｔｅｒｎ  ２型の花の比較を示す。
【００３２】
拡散境界部は、例えばモーン型およびＰａｔｔｅｒｎ  １型の花の低い遷移変化勾配を有するものとして特徴付けることができる。くっきりした境界部は、例えばＰａｔｔｅｒｎ  ２型の花の高い遷移変化勾配を有するものとして特徴付けることができる。
【００３３】
一実施形態では、本発明の花は、２０を超える遷移変化勾配の値を有する。一実施形態では、本発明の花は、３０を超える遷移変化勾配の値を有する。一実施形態では、本発明の花は、３５を超える遷移変化勾配の値を有する。一実施形態では、本発明の花は、２０〜４０の遷移変化勾配の値を有する。
【００３４】
本発明の花の中央部分は実質上非着色であり、白色の外観を有する。中央部分は花喉領域を除く。花喉領域はそれを取り巻く中央領域とは実質上異なる色である。
【００３５】
一実施形態では、本発明のこの植物の開花は早咲きでかつ持続的である。
【００３６】
また本発明による花を有するペチュニア植物が提供される。一実施形態では、上記植物は雑種である。一実施形態では、上記植物は近交系である。
【００３７】
本発明による花を有しない参照用ペチュニア植物に比べて、７を超えるが９未満のｐＨ値、最も好ましくは８を超えるが９未満のｐＨ値に対して耐性がある、本発明によるペチュニア植物が提供される。
【００３８】
一実施形態では、本発明の植物の耐性は、７を超えるが９未満のｐＨ値を有する土壌に対して耐性のない参照用ペチュニア植物と比べて葉の黄化レベルの軽減の観点で実証することができる。
【００３９】
一実施形態では、本発明の植物は、花かごおよび容器中で速成のよく育つ盛土の場合に力強く成長する。
【００４０】
一実施形態では、本発明の植物は、７を超えるが９未満のｐＨ値を有する土壌中で成長させた場合、濃緑色の葉を有する。
【００４１】
一実施形態では、温室の典型的な気候条件下で成長する、本発明による花を有するペチュニア植物が提供される。
【００４２】
一実施形態では、上記気候条件は、２１℃の昼間の平均温度、１８℃の夜間の平均温度、２４時間にわたって７２％の平均相対湿度、および１日当たり１４時間の植物の日光曝露によって特徴付けられる。
【００４３】
また本明細書中で述べるペチュニア植物の植物部位が提供される。
【００４４】
また本明細書中で述べるペチュニア植物の種子または生長性切り枝（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ  ｃｕｔｔｉｎｇ）が提供される。
【００４５】
また本明細書中で述べるペチュニア植物を作り出す方法が提供され、その方法は、
（ａ）所望の形質を有する第一の親のペチュニア植物を第二の親のペチュニア植物と交雑させて子孫の植物を作り出す工程と、
（ｂ）所望の形質を有する１種類または複数種類の子孫の植物を選択して、選択された子孫の植物を作り出す工程と
を含む。
【００４６】
一実施形態では、その所望の形質が、７を超えるが９未満のｐＨ値に対して耐性がある、本発明による方法が提供される。
【００４７】
また本明細書中で述べる方法によって作り出されるペチュニア植物の種子が提供される。
【００４８】
また本明細書中で述べる種子を成長させることによって作り出されるペチュニア植物またはその部位が提供される。
【００４９】
また本明細書中で述べるペチュニア植物から作り出される細胞の組織培養物が提供され、上記組織培養物の細胞は、種子、葉、花粉、胚、子葉、胚軸、分裂組織細胞、根、根端、雌蕊、葯、花、茎、および葉柄からなる群から選択される植物部位から作り出される。
【００５０】
また本明細書中で述べる組織培養物から再生されるペチュニア植物が提供される。
【００５１】
また第一の親のペチュニア植物を第二の親のペチュニア植物と交雑させる工程と、得られる雑種ペチュニアの種子を収穫する工程とを含む、雑種ペチュニアの種子を作り出す方法が提供され、上記第一の親のペチュニア植物および／または第二の親のペチュニア植物は、本明細書中で述べるペチュニア植物である。
【００５２】
また本明細書中で述べる雑種ペチュニアの種子を成長させることによって作り出される雑種ペチュニア植物が提供される。
【００５３】
また花の中央部分と比べて花の縁部分が色付きの色素形成を有し、かつ花の縁部分および中央部分がくっきりした境界部エッジを有する境界部によって分けられたペチュニアの花が提供される。
【００５４】
このような花の典型的な例を図７のａに示す。
【００５５】
一実施形態では、上記色素形成は劣性突然変異によって引き起こされる。
【００５６】
一実施形態では、上記色素形成は青色に色を付ける。別の実施形態では、上記色素形成は紫色に色を付ける。別の実施形態では、上記色素形成は、例えばペチュニア植物Ｐ１２−２０１８を紅梅色に色を付ける。別の実施形態では、上記色素形成は、淡い薄紫色に色を付ける。別の実施形態では、上記色素形成は、バラ色に色を付ける。あるいは上記色素形成は、非網羅的な色のリスト、すなわち赤色、オレンジ色、黄色、緑色、藍色、および菫色から選択される。
【００５７】
定義
本出願の範囲内で使用される技術用語および表現は、本明細書において以下で別段の指定がない限り、一般には植物の育種および栽培の関連技術においてそれらに普通に適用されている意味を与えられることになる。
【００５８】
本明細書および別添の特許請求の範囲の中で使用される単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈により別の意味であることが明白に規定されない限り、複数形の意味を含む。したがって、例えば「植物」への言及は１種類または複数種類の植物を含む。
【００５９】
本明細書中で使用される用語「境界部」は、花の中央部分から花の縁部分を分離する線を指す。その境界線は花の中央部分の周囲に囲まれた場所を形成する。例を図７のｂに示す。
【００６０】
本明細書中で使用される用語「育種」およびその文法的別形は、子孫の個体を発生させる任意の過程を指す。育種は、有性または無性であることも、またこれらの任意の組合せであることもできる。非限定的な育種の種類の実例には、交雑、自殖、倍加半数派生的生成、多倍数化、およびこれらの組合せが挙げられる。本発明の花の表現型は、育種によって容易かつ安定的に子孫に伝えることができる。
【００６１】
本明細書中で使用される植物の育種に関連する用語「雑種（交配種）」は、これには限定されないが２種類の近交系間の交雑を含めて異なる系統または品種または種の植物を交雑させることによって作り出される遺伝的に似ていない親の所産である植物を指す。
【００６２】
「植物」は、発生の任意の段階における任意の植物である。
【００６３】
「植物細胞」は、原形質体と細胞壁とを含む植物の構造的かつ生理的単位である。植物細胞は、分離単細胞または培養細胞の形態であってもよく、または例えば植物組織、植物器官、または全植物などのより高度な組織化された単位の一部としての形態であってもよい。
【００６４】
「植物細胞培養物」は、例えば発生の様々な段階における原形質体、細胞培養物の細胞、植物組織中の細胞、花粉、花粉管、胚珠、胚嚢、接合子、および胚などの植物単位の培養物を意味する。
【００６５】
本明細書中で使用される語句「植物部位」は、それから植物を繁殖させることができる植物中の無傷の植物細胞、細胞凝集塊、および組織培養物などの単細胞および細胞組織を含めた植物の一部を指す。植物部位の例には、これらに限定されないが花粉、胚珠、葉、胚、根、根端、葯、花、果実、茎、芽、および種子由来の、また接ぎ穂、根茎、原形質体、カルス等由来の単細胞および組織が挙げられる。
【００６６】
本明細書中で使用される用語「子孫」は、特定の交雑種の末裔を指す。一般に子孫は、２つの個体の交配（ｂｒｅｅｄｉｎｇ）から生ずるが、一部の種（具体的には一部の植物および両性動物）は自殖させることもできる（すなわち同じ植物が雄および雌の両方の配偶子として機能する）。その末裔は、例えばＦ１、Ｆ２、または任意の後続の世代のものであることができる。
【００６７】
「形質」とは、本発明の範囲内では、特徴または表現型、例えば青または紫の着色または色を指すものと理解されたい。形質は、優性または劣性的に受け継がれることも、また単遺伝子性または多遺伝子性であることもできる。
【００６８】
「優性」とは、本発明の範囲内では、ヘテロ接合またはホモ接合状態で存在する場合には表現型を決定する対立遺伝子を指すものと理解されたい。
【００６９】
「劣性」対立遺伝子は、ホモ接合状態で存在する場合にのみ発揮する。
【００７０】
「花喉」とは、本発明の範囲内では、筒状の花冠または蕚の開口部（そこでその筒が枝状突出部（ｌｉｍｂ）と接する）を指すものと理解されたい。花弁の枝状突出部は、筒状の花の広がっている上の部分である。「縁」とは、本発明の範囲内では、実質上花の外周に広がる花の領域を指すものと理解されたい。
【００７１】
本明細書中で使用される花の「中央」部分という用語は、縁によって囲まれているが花喉を除く部分を指す。本発明に関連して使用される場合、中央部分は縁部分と比べた場合に淡色である。
【００７２】
種子寄託の詳細
品種Ｐ１３−５０１（ツクバネアサガオ（Ｐｅｔｕｎｉａ  ｈｙｂｒｉｄａ）植物）の種子は、ブタペスト条約の約定に基づきＮＣＩＭＢ，Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＵＫに２０１３年１１月１１日にＮＣＩＭＢ  ４２１８７の番号で寄託されている。
【００７３】
品種Ｐ１３−５０５（ツクバネアサガオ（Ｐｅｔｕｎｉａ  ｈｙｂｒｉｄａ）植物）の種子は、ブタペスト条約の約定に基づきＮＣＩＭＢ，Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＵＫに２０１３年１１月１１日にＮＣＩＭＢ  ４２１８８の番号で寄託されている。
【００７４】
品種Ｐ１２−２０１８（ツクバネアサガオ（Ｐｅｔｕｎｉａ  ｈｙｂｒｉｄａ）植物）の種子は、ブタペスト条約の約定に基づきＮＣＩＭＢ，Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＵＫに２０１３年１１月１１日にＮＣＩＭＢ  ４２１８９の番号で寄託されている。
【００７５】
品種Ｐ１２−２７９１（ツクバネアサガオ（Ｐｅｔｕｎｉａ  ｈｙｂｒｉｄａ）植物）の種子は、ブタペスト条約の約定に基づきＮＣＩＭＢ，Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ，Ａｂｅｒｄｅｅｎ，ＵＫに２０１３年１１月１１日にＮＣＩＭＢ  ４２１９０の番号で寄託されている。
【００７６】
すべての種子の寄託は、Ｓｙｎｇｅｎｔａ  Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｏｎｓ  ＡＧ，Ｂａｓｅｌ  ４００２，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄの名称でなされた。
【実施例】
【００７７】
実施例１
花の模様の色素分析  −  模式種の選定および試料採取
この検討の目的は、知られている既存の模様と比較して本発明のペチュニアの新規な反転模様の特徴を調べることであった。市場に存在する様々な花の模様の色彩を選択した。フラボノイド類およびアントシアニン類が、ペチュニアの花の色に関与する主な色素である。この検討は、これら色素の仲間だけでなくそれらの前駆体（ケイ皮酸誘導体）の分析にも焦点を当てた。
【００７８】
花弁の縁部分の着色部分と白色の中央とを示す独特な模様を有する材料を作り出した（図１参照）。
【００７９】
それらの花の色および模様について１８種類のペチュニアの模式種が選択された（表１参照）。数種類の模様、すなわち
・Ｐａｔｔｅｒｎ  １：有色の縁と淡色／白色の中央とを有し、柔らかな境界部エッジ（色の段階的移行）によって区切られた周縁模様、
・Ｐａｔｔｅｒｎ  ２：有色の縁と淡色／白色の中央とを有し、くっきりした境界部エッジによって区切られた周縁模様、
・モーン：有色の縁と淡色／白色の中央とを有し、柔らかな境界部エッジ（色の段階的移行）によって区切られた周縁模様、
・ピコチー（Ｐｉｃｏｔｅｅ）：白色の縁と有色の中央とを有し、くっきりした境界部エッジによって区切られた周縁模様、
・スター（Ｓｔａｒ）：くっきりした境界部エッジを有する有色の花弁上に星形のホワイトスターを形成する二色模様
を調べた。
【００８０】
これらペチュニア植物を開花するまで挿し木から成長させた。
【００８１】
表1: 選ばれた模式種のリスト。模様、色、および品種が表示のように報告される。
【表１】
2016537002.tif 000003
【００８２】
試料採取
花は新たに開いた花の段階で保冷ボックス中に収集してから解体した。十分な量の組織を収集するために最高で５個の花が使用された。花弁の有色部分と淡色／白色部分をピンセットおよび外科用メスで分離した（花喉器官および生殖器官は除去した）。解体した花弁を色ごとに５０ｍＬの試験管中に収集し、一晩凍結乾燥し、発送まで−８０℃で保管した。
【００８３】
試料は、色素抽出および分析のために保冷条件下で発送された。
【００８４】
実施例２
花の模様の色素分析  −  色素の抽出および分析
試料をファストプレップ（ｆａｓｔ  ｐｒｅｐ）を使用して処理した。すべての試料に関して微細な無水粉末を形成した。
１．花弁のホモジネート（約５０ｍｇ）をクライオバイアル（ｃｒｙｏｖｉａｌ）に移した。
２．その管に少量のザクロ石のマトリックスをセラミックボールと一緒に加えた。
３．その管に脱イオン水（１ｍＬ）を加え、内容物をシェーカーミル上で１分間振とうした。
４．次いでそのクライオバイアルに酢酸エチル（２．５ｍＬ）を加え、その管をシェーカーミル上で５分間振とうした。
５．次いで得られた懸濁液を４０００ｒｐｍで４℃で１０分間遠心分離した。
６．酢酸エチル層を除去し、廃棄した。
７．次いで残留ペレットおよび水性相を上記で述べたのと同様に２×２．５ｍＬのＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ／ＨＣＯＯＨ（５：５：１）で抽出した。
【００８５】
得られた２種類の極性抽出物を一緒にし、−２０℃で凍結状態で保管してＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析を待った。
【００８６】
色素のスクリーニングには高性能液体クロマトグラフィ−高分解能質量分析（ＨＰＬＣ−ＨＲＭＳ）法を使用した。
【００８７】
実施例３
花の模様の色素分析  −  分析結果
すべての試料中で検出された化合物を表２に列挙する。
【００８８】
表2: 色素分析において検出された色素アグリコン
【表２】
2016537002.tif 000004
【００８９】
モーン模様を有するすべての模式種に共通してアントシアニジン類の蓄積の減少が、花弁の濃い色の部分と比較して淡い色の部分において観察される（図２参照）。
【００９０】
Ｐａｔｔｅｒｎ  １は、濃い色の部分に比べて淡い色の部分におけるより高いケイ皮酸誘導体の存在率によって特徴付けられる。これに加えて淡色の組織中ではフラボノイド類およびアントシアニン類が高度に減少しているか、または存在しない（図３参照）。
【００９１】
くっきりした境界部エッジの模様は、有色部分に比べて淡色部分においてケイ皮酸誘導体の高い存在率を有する。反対にこの同じ組織中ではフラボノイド類およびアントシアニン類の存在率が減少／不在である。
【００９２】
すべての他の模式種と比べた場合、Ｐａｔｔｅｒｎ  ２Ａ（Ｐａｔｔｅｒｎ  ２）の模式種の淡い色の部分のフラボノイド類およびアントシアニン類の濃度はかなり高い。
【００９３】
Ｐａｔｔｅｒｎ  １および２は、有色部分に比較して淡色部分におけるフラボノイド類およびアントシアニン類の減少／不在を示し、反対にケイ皮酸誘導体の濃度が淡色の組織中で増加する。
【００９４】
本発明者らの新規なＰａｔｔｅｒｎ  １および２では顕著な量のフラボノイド類およびアントシアニン類は花弁の濃い色の部分にのみ見出される。これらの結果は、以前に報告された遺伝子発現の研究と一致する。これら両方のＰａｔｔｅｒｎにおいてカルコン合成酵素（Ｃｈｓ）遺伝子の発現の明らかな減少が、花弁の淡色部分において観察された。ＣＨＳは、ケイ皮酸のフラボノイド類への変換に関与する酵素をコードすることが知られている。
【００９５】
実施例４
遺伝子発現分析  −  試料採取およびｑＲＴ−ＰＣＲの条件
花の「淡色」および「有色」の部分に関して遺伝子発現の検討を行い、知られている既存のペチュニアの模様と比較した。
【００９６】
この検討の目的は、本発明のペチュニアの新規な反転模様の特徴を既存のペチュニアと比較して調べることであった。市場に存在する様々な花模様の色彩を、実施例１で述べたのと同様に選び出した。フラボノイド類およびアントシアニ類がペチュニアの花の色に関与する主な色素であることが分かっているため、この検討は、アントシアニン経路に関与する遺伝子の写しを分析することに焦点を当てた。
【００９７】
１８種類のペチュニアの模式種をそれらの花の色および模様について選択し、数種類の模様の試料を上記実施例１および表１中で述べたのと同様に採取した。
【００９８】
切り裂いた花弁を色ごとに５０ｍＬのバイアル中に集めた。満たされたら直ちにバイアルを液体窒素中で凍結し、次いで発送するまで−８０℃で保管した。試料は、ＲＮＡ抽出およびｑＲＴ−ＰＣＲ検定のためにドライアイスに載せて米国に送られた。
【００９９】
ＲＮＡ調製は、ＲｉｂｏＰｕｒｅ抽出キットを用いて手作業で行った。ＲＮＡは、高濃度の塩の存在下でシリカ膜に吸着する。汚染物質はシリカカラムに結合することができず、したがってカラムを通過する。負荷カラムを洗浄し、次いで結合したＲＮＡを溶出させた。
【０１００】
ＲＴ−ＰＣＲ増幅のために使用したプライマーセットは、以前に公表されていた（表３参照）。チューブリン検定を相対的発現値を計算するための基準として使用した。
【０１０１】
表3: リアルタイムPCR用のプライマー対
【表３】
2016537002.tif 000005
【０１０２】
増幅
９４℃で３０秒間、５５℃で３０秒間、および６８℃で６０秒間の１０サイクル、続いて９４℃で３０秒間、５５℃で３０秒間、および６８℃で６０秒間の２５サイクル（Ｇｒｉｅｓｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ  ２００７，Ｊ．Ａｍｅｒ．ＳＯＣ．ＨＯＲＴ．ＳＣＩ．１３２（５），６８０−６９０）。
【０１０３】
実施例５
遺伝子発現分析  −  分析結果
計算された発現値を模様の種類ごとに図５に示す。
【０１０４】
この実験の焦点は、アントシアニン経路に関与するＣｈｓ遺伝子の発現パターン（オン／オフ）に向けられた。Ｃｈｓの発現は、Ｇｒｉｅｓｂａｃｈらからのオリゴを使用して評価された。Ｃｈｓ発現のレベルは、ピコチーおよびスター模様における花弁の淡色の部分では著しく低い。これはＧｒｉｅｓｂａｃｈらによって以前に報告された。モーン模様は、それら２つの有色組織間でＣｈｓ発現の違いを示さなかった。Ｐａｔｔｅｒｎ  １および２は、Ｃｈｓに関してスターおよびピコチーと似た発現パターンを有した。
【０１０５】
この検討は、新規な模様の両方（Ｐａｔｔｅｒｎ  １およびＰａｔｔｅｒｎ  ２）の「淡い色」の部分におけるカルコン合成酵素（Ｃｈｓ）の発現が、この新しい模式種の高度に白色の部分の形成に関与していることを示唆する。
【０１０６】
実施例６
画像解析  −  花の色
花を開花段階で新たに摘み取り、それらの表を上にし、花冠ができるだけ平坦になるように支えの上に置いた。固定アーム上に取り付けた写真機（Ｃａｎｏｎ  ＥＯＳ  ５５０Ｄ）により写真を撮った。その設定は、再現可能な条件を可能にする人工光のみを有する暗室中であった。
【０１０７】
花が出芽する前に、Ｘ−Ｒｉｔｅカラーの写真が作られた。これは、その花の正確なカラープロファイルを得ることを可能にする。模式種につき６個の花が分析された。
【０１０８】
花の色はＩｍａｇｅＪを使用して計算した。各花について試料の濃い色および淡い色をそれぞれの色について手作業で選定した。中央値を使用して「濃い」および「淡い」色をそれぞれ特徴付けた。
【０１０９】
測定値の例を図６に示す。
【０１１０】
表4: 画像解析による花の色の平均測定値。模式種ごとに6個の花を分析した。
【表４】
2016537002.tif 000006
【０１１１】
実施例７
画像解析  −  色遷移
計算された色遷移を図７に示す。
【０１１２】
花を黒色と白色の写真に変換した。遷移部の両端間でその区域を手作業で描いた。花ごとに５つの区域が作られ、また模式種ごとに６個の花が分析された。この区域の各ピクセルの彩度の値をグラフ上にプロットした。その曲線を分析し、曲線の勾配を花の色遷移の参考資料として使用した。値を下記の表５に示す。
【０１１３】
モーンの模式種およびＰａｔｔｅｒｎ  １の模式種の色遷移の勾配は、顕著な違いを示さない。低い値は、濃い色から淡い色への緩やかな遷移を有する柔らかな境界部エッジの特徴を示す。Ｐａｔｔｅｒｎ  ２Ｂは、くっきりした境界部エッジ模様に特有の著しく高い遷移勾配を示す。
【０１１４】
表5: 画像解析による色遷移の勾配の値。遷移は、花弁区域の両端間の彩度値の変動によって特徴付けられる。
【表５】
2016537002.tif 000007
【図１】
2016537002.tif 000008
【図２】
2016537002.tif 000009
【図３】
2016537002.tif 000010
【図４】
2016537002.tif 000011
【図５】
2016537002.tif 000012
【図６】
2016537002.tif 000013
【図７】
2016537002.tif 000014
【図８】
2016537002.tif 000015
【図９】
2016537002.tif 000016
【図１０】
2016537002.tif 000017
【図１１】
2016537002.tif 000018
【配列表】
2016537002000001.app
【国際調査報告】
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2016537002.tif 000020
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