(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬理学的に有効な量のガンマグロブリン及び医薬として許容される担体からなるポリオ後遺症（ＰＰＳ）になやまされる患者の静脈内、筋肉内または皮下に投与するための医薬組成物。
【請求項２】
ガンマグロブリンが正常なガンマグロブリンである請求項１の組成物。
【請求項３】
ガンマグロブリンを0.01g/kg/日ないし1.0g/kg/日の量で投与するための請求項１又は２の組成物。
【請求項４】
ガンマグロブリンを0.1g/kg/日ないし0.4g/kg/日の量で投与するための請求項１又は２の組成物。
【請求項５】
静脈内投与するための請求項１の組成物。
【請求項６】
薬理学的に有効な量のガンマグロブリンと医薬として許容される担体とを配合することからなるポリオ後遺症を治療するための医薬の製造方法。
【請求項７】
ガンマグロブリンが正常なガンマグロブリンである請求項６の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明はポリオ後遺症（ＰＰＳ）を治療するための方法及びこの治療に使用しうる医薬組成物に関する。
【０００２】
発明の背景
ポリオ後遺症（ＰＰＳ）は、人生の初期に小児麻痺感染した人におこる状態である。急性ポリオ感染に続いて数十年間の長い安定期間の後にＰＰＳが起こる。それは一般に、増大するまたは新しい筋肉虚弱、筋肉萎縮、筋肉疲労、及び痛みを特徴とする。ＰＰＳの原因はまだ確立されていない。他の病気で死亡したＰＰＳ患者の解剖は背髄中の炎症性細胞を示している。彼等の脳脊髄液中にも非特定の炎症性変化が起っていることが示された。
【０００３】
ＰＰＳの病因についていくつかのメカニズムが提案されており運動神経の老化による磨耗またはポリオビールスの頑固な残存及び活性化された免疫反応などを含む。
【０００４】
ＰＰＳの治療方法はないけれどもＰＰＳに関連する苦痛は鎮痛剤投与によって、非常に効果的ではないにしても軽減することができる。このようにＰＰＳの治療法には大きな需要がある。
【０００５】
発明の目的
本発明の目的はＰＰＳを治療する方法を提供することである。本発明の別の目的はそのような治療のための医薬組成物を提供することである。
更に別の本発明の目的は下記の記載によって明らかであろう。
【０００６】
発明の概要
本発明は、ＰＰＳ患者が特にその脳脊髄液（ＣＳＦ）中にインターロイキン−４（ＩＬ−４）ｍ−ＲＮＡレベルを表わす主要組織適合コンプレックスのレベルが異常に増大していることを示し、またインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）ｍ−ＲＮＡ、ガンマ−インターフェロン（ＩＦγ）ｍ−ＲＮＡ、及び腫瘍壊死ファクターアルファ（ＴＮＦα）ｍＲＮＡのレベルも異常に増加していることを示すという発見に基づいている。これらのレベルは健康なボランティアに見られるレベルよりも統計的に有意な差が見られる。これは、ＰＰＳ患者のＣＳＦ中に進行する炎症があるであろうということを示している。発明者による他の発見は更にＰＰＳ患者における炎症がＣＳＦに限定されていることを示している。
【０００７】
ＩＬ−４は、抗原−存在細胞及び２Ｔ−ヘルパー細胞タイプによって生成される炎症性サイトカインである。ＩＬ−４は、抗体及び／または抗体−媒介免疫の、補足システム及びＰＭＮｓによって強化された刺戟に関連するＴ−リンパ球とＢ−リンパ球との媒介者である。炎症細胞間、及び炎症性カスケード中の異なる媒介者間の複雑な相互作用は完全には理解されていない。これらの媒介者が中枢神経系内で作用する時、ＣＮＳは他の器官及び周辺組織から免疫学的に異なるという事実によって解釈は複雑になる。正常には、脳−血液バリアは抗体及び免疫媒介者の通路さえ制限して、免疫競争者の細胞はほとんど通過させない。周辺を循環中のＴ−細胞は、もし活性化された時にのみＣＮＳに達することができる。このバリアを通過するために特別の抗原に対してＴ−細胞を活性化しなければならないのではない。このメカニズムは“免疫監視”（immune surveillance）と呼ばれ、ＣＮＳ中に特定の抗原または病原体をＴ−細胞に発見させることができ、その後特別に活性化することができる。ＣＮＳの細胞も、主要組織適合性抗原ＭＨＣの低い表現を示している。ＣＮＳにおいてはこのように、外傷、感染または自己免疫反応によってＭＨＣ表現が引き起こされるであろう。
【０００８】
発明者らは、ＰＰＳ患者において異常な免疫反応を示すＩＬ−４のためのｍＲＮＡを表わす単核細胞の異常な量、またＩＬ−１０ ｍＲＮＡ、ＩＥγ ｍＲＮＡ及びＩＮＦα ｍ−ＲＮＡの異常に増大したレベルを表わす細胞の異常な量をも発見した。同じ患者において、しかしながら、他の神経炎症パラメーター、例えばＩｇＧ−指数、ＣＳＦ−蛋白質、ＣＳＦ／血清アルブミン比、及び全ＣＳＦ細胞数などは正常値からの変動はみられなかった。このことは、古い小児麻痺感染、例えば変異性ポリオビールスの頑固な残存によって支持された慢性的な免疫不均衡を示している。ＩＬ−４をコードするｍ−ＲＮＡを表わすＴ−細胞の異常な数、またＩＬ−１０、ＩＥγ、およびＴＮＦαをコードするｍ−ＲＮＡを表わすＴ−細胞の異常な計数はそのような小児麻痺ビールスによる永続的な感染を示しまたそこから引き起こされる慢性的な炎症プロセスを示すことができた。
【０００９】
しかしながら、これらの発見はＰＰＳ患者の健康状態の悪化について報告された話が他のできごと、例えばポリオビールス以外の他のビールスの感染によるものであるかも知れないということを排除するものではない。そのような感染は非特定活性化Ｔ−細胞で、それらをＣＮＳに入りこませうるものであるかも知れない。それらはより特定的に抗原的に活性化され、それらの活動が脊髄前方角状突起（cornu anterius medullae spinalis）の細胞に対して向けられるものであるかも知れない。ここでも結果は慢性的炎症プロセスになるであろう。
【００１０】
これらの発見と仮定は説明のためにのみ与えられるもので本発明を如何なる方法でも限定すると考えてはならない。これらは本発明者らにポリオ後遺症患者のための免疫調節治療を考えつかせたのである。
【００１１】
本発明によれば、薬理学的に有効な量の免疫調節剤を静脈内、筋肉内または皮下投与することによるポリオ後遺症（ＰＰＳ）になやむ患者を治療するための方法を開示する。静脈内投与が好ましい。免疫調節剤は、ガンマグロブリン、特に“正常な”ガンマグロブリンであることが好ましい。即ち多勢の提供者から集められ、分留以前にプールされた人間のプラズマから作られたガンマグロブリンであるのが好ましい。
【００１２】
ガンマグロブリンの毎日の投与量は0.01g/kg/日ないし1.0g/kg/日、好ましくは約0.1g〜0.4g/kg/日であるのが好ましい。0.5gないし50.0gのガンマグロブリンを含む１日の単一投与量が好ましい。治療期間は１日ないし６日間、または２週間までであるのが好ましい。治療休止期間の後、第２回目の治療期間が続き、そのようにして続く。治療休止期間は少なくとも１日、より好ましくは少なくとも３日間、最も好ましくは少なくとも２週間であるのが好ましい。本発明によればこのように、複数の治療期間、好ましくは組み合わせた治療期間の長さよりも長い治療休止期間によって中断された複数の治療期間からなる治療計画を開示している。しかしながら、ある患者の場合には長期間の連続治療、例えば１ヶ月またはそれ以上または一生の間中断することなしの治療によって効果がある。
【００１３】
本発明によって又、薬理学的に効果のある量で“正常な”ガンマグロブリン及び担体を含むポリオ後遺症（ＰＰＳ）を治療するために静脈内、筋肉内または皮下投与するための医薬組成物をも開示する。
【００１４】
更に、本発明によって、薬理学的に有効な量のガンマグロブリン、特に“正常な”ガンマグロブリンと医薬として許容しうる担体とを含むポリオ後遺症の治療のために静脈内投与するための医薬の製造方法を開示する。
【００１５】
以下に本発明を好ましい実施例によって更に詳細に記載するがこれらは本発明を限定するものではない。
【００１６】
好ましい実施態様の記載
[実施例１]  ＰＰＳ患者及び健康な対照者からの非ＰＰＳ特定研究所でのデータ
包括基準：ＩＬ−４及び／または他のサイトカインをコードするｍＲＮＡの表現をもつＭＮＣレベルが増大したＰＰＳ患者
除外基準：選択的ＩｇＡ欠乏
ＰＰＳ群は１３人の患者からなり、これを７人の健常者のグループと比較した。
【００１７】
静脈血サンプルから末梢血（ＰＢ）を得、腰椎穿刺によってＣＳＦを得た。両方のグループのプラズマについて電気泳動を実施し、末梢血中のアルファ−１−アンチトリプシン、オロソムコイド、ハプトグロビン、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ及び補体ファクター３及び４（Ｃ3ｄとして）のレベルを測定した。アルブミンとＩｇＧのためのＣＳＦ／血清比を計算した。ＣＳＦの電気泳動パターンは等電点電気泳動によってしらべプラズマのパターンは電気泳動によってしらべた。
【００１８】
結果
細胞計数：表１にはＣＳＦ中の単核白血球、多型核白血球及び赤血球細胞の数を記載してある。他の研究所のデータ、すべての患者の非ＰＰＳ特定研究所のデータ及び対照のデータは表２に記載してある。プラズマＩｇＧ指数：ＣＳＦの蛋白質含有量；プラズマ中のＣ３−Ｃ４による補足系の活性化；プラズマ及びＣＳＦ中の同じオリゴクロナルバンドの存在；血液脳バリヤに対する損傷。
【００１９】
１３人のＰＰＳ患者中１２人は正常な血液脳バリヤをもっていた。残りの患者（Ｎｏ．８）はやや損なわれた血液脳バリヤをもっておりこれは上昇したＣＳＦ／アルブミン比によって確認された。ＰＰＳ患者または対照者の誰も上昇した補足ファクターＣ３、Ｃ４またはＣ３ｄをもっていなかった。ＰＰＳ患者のうち３人はＣＳＦ中にオリゴクロナルＩｇ−Ｇバンドをもち、そのプラズマ中に類似のバンドをもっていた。これらのオリゴクロナルバンドは、非特定炎症反応のせいであると解釈された。ＰＰＳ患者のうち６人は、また対照者のうち２人もまたＣＳＦ中のやや上昇した蛋白質のレベルをもっており、これは非特定炎症の徴候であるが、彼等のうちの誰も異常なＩｇＧ指数を持っていなかった。
【００２０】
[実施例２]  ＰＰＳ患者からのＰＰＳ特定データ。ＰＰＳ患者と健常者との炎症マーカーレベルの比較
実施例１の患者Ｎｏ．1〜７を含むＰＰＳグループを同じ実施例の７人の健康なボランティアと比較した。
【００２１】
患者のＰＢ及びＣＳＦをその場での交配（ＩＳＨ）により分析した。これはサイトカインｍＲＮＡ表現を検出するためのより特別の方法である。ＩＳＨは血液及びＣＳＦからの単核細胞中のサイトカインｍＲＮＡ表現の検査を可能にする。ＩＳＨは非固定組織を使用するＡ．Ｄａｇｅｒｌｉｎｄらに従って感受性ｍＲＮＡ検出によって実施した。放射性と非放射性の組み合わせによる組織化学でのその場での交配、組織化学１９９２，３９−４９。５×１０４ＰＢリンパ球または１０×１０３ＣＳＦ細胞を含むアリクォットをスーパーフロストマイクロスコープ（Menzel-Glazer, Kebo Lab. ストックホルム，スウェーデン）のスライド上で乾燥させた。
【００２２】
合成オリゴヌクレオチド試料の混合物（ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＦＮγ及びＴＮＦα各々の表現のため；スカンジナビア遺伝子合成（Scandinavian Gene Synthesis），ケーピング，スウェーデン）をその３’−末端でデオキシアデノシン−５’−α−（チオ）−トリフォスフェート（35Ｓ）（デュポンスカンジナビアＡＢ，ストックホルム，スウェーデン）により末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（Amersham International, Little Chalfont, UK）を使用して標識した。各サイトカインのアンチセンスストランドに補足する試料の混合物をネガティブコントロールとして使用した。50％ホルムアミド、４×ＳＳＣ緩衝液、１×デンハート溶液（Denhart’s solution）（0.02重量％の各々ポリビニルピロリドン（Sigma, Poole, UK）、ウシ血清アルブミン及びフィコル（Ficoll, Sigma）を含む）、１％サルコシル（Sigma）、0.02M燐酸緩衝液、pH7.0、10％デキストランサルフェート（Pharmacia，ウプサラ，スウェーデン）、500μg/mlの熱変性したサケ精液ＤＮＡ（Sigma）及び200mMジチオスレイトール（Sigma）を含む交配液混合物100μlに対し標識された試料の106ＣＰＭで４２℃で１６〜１８時間交配を実施した。交配に際してスライドを１×ＳＳＣ中で５５℃で１５分間４回洗浄しエタノールグラディエント（６５％〜９５％）を使用して脱水し空気乾燥した。スライドをコダックＮＴＢ２エマルジョン（Kodak）を蒸留水で１：１に稀釈した液中に４℃の温度で２週間浸した。コダックＤ１９現像液中で現像した後スライドをクレジルバイオレット（Sigma）で着色しエンテラン（Entellan）（Merck，ダルムシュタット，ドイツ）で固定した。スライドをコードし光顕微鏡で評価した。１０以上のオートラジオグラフィーの銀粒子をもつ細胞をサイトカインｍＲＮＡを表わす細胞とした。ＩＨＳ分析は両方のグループについて同じ試料で同じ時に実施した。
【００２３】
統計的分析：ＰＰＳ患者と健康な対照者に記録された各サイトカインの細胞数における相違を非パラメータウィルコクソン（Wilcoxon）サインドランクテストによってその有意性をテストした。
【００２４】
結果：この実験で得られたＰＰＳ特定データは表３−６に記載してある。
【００２５】
７人のＰＰＳ患者のうち１人（患者Ｎｏ．４）を除くすべてがＣＳＦ中でＴ−細胞を製造するＩＬ−４の異常な価をもっていたが対照者では誰も持っていなかった（表４）。１人（Ｎｏ．４）を除くすべての患者はＣＳＦ中に細胞を製造するＩＦＮγの異常な価をもっていたがただ１人（ボランティアＮｏ．２）の対照者のみが異常な価をもっていた。ＰＰＳ患者のうちの４人はＣＳＦ中ＴＦＮαの異常な価をもっていた（表６）。
【００２６】
結論：対照者と比較してＰＰＳグループではＩＬ−４の有意に高いレベル（ｐ＜0.02）があった。一方ＩＬ−１０、ＩＮＦγ、及びＴＮＦαは統計的に有意なものではないとはいえ、より高いレベルへの傾向を示した。ＣＳＦ中サイトカインのためのｍＲＮＡを表わすＭＮＣの増大するレベルはＰＢ中では平行していない。健常者はＣＳＦ中でサイトカインのためのｍＲＮＡを表わすＭＮＣｓレベルが増大していない。従ってＣＳＦ中のＩＬ−４はＰＰＳのための選択マーカーである。この結果はＩＬ−１０、ＩＮＦγ及びＴＮＦαもまたＰＰＳマーカーとして役立つことを示している。
【００２７】
[実施例３]  ガンマグロブリンの静脈内投与によるＰＰＳ患者２人に生成された無痛性
彼等の人生の早い時期にポリオ感染が記録されておりハルステッドとロッシー（Halstead, Rossi）による基準によってＰＰＳに該当しそしてボルク（Borg）によるポリオ後遺性筋肉機能障害の基準に該当する２人の患者（女性、年齢７９歳および６７歳）に静脈内ガンマグロブリン（GammagardTM, Baxter）を処置した。年とった方の患者は20gのガンマグロブリンの単一投与量を受け、若い方の患者は各回30gの投与量で連続して３日間投与を受けた。彼等が治療を受けた病状は進行性神経筋肉機能障害と時間と共に増大する痛みであった。治療効果は開始後２週間で評価された。両方の患者とも痛みが減少したと報告した。患者の１人は、筋力の定量評価の方法によって試験した時神経筋肉機能の改善を示した。
【００２８】
[実施例４]  ＰＰＳ治療の為の静脈内、筋肉内及び皮下投与のためのガンマグロブリン組成物
使用しうる正常なガンマグロブリン組成物は当業界で知られている。実施例３で使用した組成物はガンマガードTMS/D（Baxter Medical AB，キスタ，スウェーデン）である。それは北アメリカの提供者から集められたプラズマからコーン（Cohn）アルコール分留技術を少し変更したものによって製造されている。少なくとも98%はモノマーまたはダイマーの形である‘正常な’ＩｇＧ抗体の広いスペクトルを含む。ガンマガードＳ/Ｄは、ＩｇＧ、グリシン、塩化ナトリウム、グルコースモノハイドレート、ヒトアルブミン及びポリエチレングリコールを含む凍結乾燥した物質から医薬用担体として水を添加することにより再構成されている。ガンマグロブリン組成物は、例えばガンマノルムTM（GammanormTM ，Pharmacia & Upjohn Sverige AB，ストックホルム，スカンジナビアの提供者から集めたプラズマからのもの）のような筋肉内または皮下投与のための水溶液の形でも作られる。特にＰＰＳの自己治療のためにガンマグロブリンをあらかじめ充填した１回投与量入り注射器を提供するのが有利である。
【００２９】
【表１】
ポリオ後遺症患者の脳脊髄液中の血液細胞の全計数
0004226789.tif 000002
＊  ＣＳＦ中に赤血球細胞が存在するのは、血液細胞計数のためにＣＮＦからとったサンプルが最初に腰椎穿刺によったものであるためである。ポリオ病歴のある患者ではひどい脊柱側曲のゆえにしばしば腰椎穿刺が問題となる。特に最初の数ミリリットルを引き出すのに出血が影響を与える。
＊＊  対照は健康な対照物である。+細胞計数は数えた細胞の数×106/l液体である。
【００３０】
【表２】
ＰＰＳ患者と対照との研究室データ
0004226789.tif 000003
対照は健康な対照物である。細胞計数は数えた細胞数×106/l液体である。
ＩｇＧ−指数参照範囲：0.35-0.70
ＣＳＦ−蛋白質＝ＣＳＦの蛋白質含量；参照範囲：0.12-0.50g/l
Ｃ−活性＝Ｃ３−Ｃ４による補足系の活性化の分析
電気泳動＝プラズマ電気泳動；ＣＳＦの等電点電気泳動；０＝プラズマまたはＣＳＦ中に病原性パターンがないこと
yes＝プラズマ及びＣＳＦ中に類似のオリゴクロナルバンドが存在する。
バリヤ損傷：血液、脳バリヤに対する軽い損傷の徴候
【００３１】
【表３】
１ｌの液体当りＩＬ−４をコードするｍＲＮＡを表わす単核白血球（ＭＮＣ）の数×105
0004226789.tif 000004
＊  ＰＰＳ患者の末梢血中のＭＮＣ
＊＊  ＰＰＳ患者のＣＳＦ中のＭＮＣ
＋  対照の末梢血中のＭＮＣ
＋  対照のＣＳＦ中のＭＮＣ
非パラメータウィルコクソンのサインランクテストはＣＳＦ中のＩＬ−４をコードするｍＲＮＡを表わす細胞数の間に統計的有意差を示している（ｐ＜0.05）。
【００３２】
【表４】
１ｌの液体当りＩＬ−１０をコードするｍＲＮＡを表わす単核白血球（ＭＮＣ）の数×105
0004226789.tif 000005
＊  ＰＰＳ患者の末梢血中のＭＮＣ
＊＊  ＰＰＳ患者のＣＳＦ中のＭＮＣ
＋  対照の末梢血中のＭＮＣ
＋  対照のＣＳＦ中のＭＮＣ
【００３３】
【表５】
液体１ｌ当りのＩＦＮ−γをコードするｍＲＮＡを表わす単核白血球（ＭＮＣ）の数×105
0004226789.tif 000006
＊  ＰＰＳ患者の末梢血中のＭＮＣ
＊＊  ＰＰＳ患者のＣＳＦ中のＭＮＣ
＋  対照の末梢血中のＭＮＣ
＋  対照のＣＳＦ中のＭＮＣ
【００３４】
【表６】
液体１ｌ当りのＴＮＦ−αをコードするｍＲＮＡを表わす単核白血球（ＭＮＣ）の数×105
0004226789.tif 000007
＊  ＰＰＳ患者の末梢血中のＭＮＣ
＊＊  ＰＰＳ患者のＣＳＦ中のＭＮＣ
＋  対照の末梢血中のＭＮＣ
＋  対照のＣＳＦ中のＭＮＣ