(57)【要約】  本明細書において、ｍｉＲ−１２２活性の阻害のための組成物および方法が記載される。組成物は、ｍｉＲ−１２２活性の強力な阻害剤を生じさせるあるヌクレオシド修飾を有する。化合物は、肝臓への送達を容易にするためのコンジュゲートを含み得る。組成物は、Ｃ型肝炎ウイルスおよび関連病態のための治療としてＣ型肝炎ウイルスに感染している対象に投与することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
１６〜２２個の結合ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記ヌクレオ塩基配列は、ｍｉＲ−１２２（配列番号１）に相補的であり、前記修飾オリゴヌクレオチドは、５’から３’配向の以下のヌクレオシドパターンＩ：
（Ｒ）Ｘ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ−（ＮＺ）Ｙ
［式中、それぞれのＲは、独立して、非二環式ヌクレオシドまたは二環式ヌクレオシドであり；
Ｘは、４〜１０であり；
それぞれのＮＢは、独立して、二環式ヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、独立して、非二環式ヌクレオシドであり；
Ｙは、０または１であり；および
ＮＺは、修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシドである］
の少なくとも１６個の連続ヌクレオシドを含む化合物。
【請求項２】
前記修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレオシドパターンＩの少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または２２個の連続ヌクレオシドを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
それぞれの二環式ヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシド、ｃＥｔヌクレオシド、およびＥＮＡヌクレオシドから独立して選択される、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
少なくとも２つの二環式ヌクレオシドは、互いに異なる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
全ての二環式ヌクレオシドは、互いに同一の糖部分を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
それぞれの二環式ヌクレオシドは、ｃＥｔヌクレオシドである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記ｃＥｔヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記ｃＥｔヌクレオシドは、Ｒ−ｃＥｔヌクレオシドである、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
それぞれの二環式ヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである、請求項５に記載の化合物。
【請求項１０】
少なくとも２つの非二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
それぞれの非二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、および２’−フルオロヌクレオシドから独立して選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、および２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから独立して選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである、請求項１〜９または１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
それぞれの非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである、請求項１〜９または１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
２つ以下の非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、それぞれの他の非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである、請求項１〜１０、１２または１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記５’末端および３’末端非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、およびそれぞれの他の非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
２つの非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、およびそれぞれの他の非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１９】
それぞれのＲは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである、請求項１〜１３または１５〜１８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｘは、４、５、６、７、８、９、または１０である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｙは、０である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｙは、１である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２３】
ａ）Ｘは、７であり；
それぞれのＲは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；およびＹは、０であり；
ｂ）Ｘは、４であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４であり、ＮＲ１およびＮＲ３のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ２およびＮＲ４のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
Ｙは、１であり；およびＮＺは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、
ｃ）Ｘは、４であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４であり、ＮＲ１およびＮＲ４のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ２およびＮＲ３のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
Ｙは、１であり；およびＮＺは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、
ｄ）Ｘは、７であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、およびＮＲ４のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ５およびＮＲ７のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、およびＮＲ６は、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；およびＹは、０であり；
ｅ）Ｘは、７であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、およびＮＲ５のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ６は、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ７は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；およびＹは、０であり；
ｆ）Ｘは、７であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、ＮＲ５、およびＮＲ６のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、かつＮＲ７は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；およびＹは、０であり；
ｇ）Ｘは、１０であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７−ＮＲ８−ＮＲ９−ＮＲ１０であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、ＮＲ５、およびＮＲ６のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ７およびＮＲ９のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＲ８およびＮＲ１０のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；およびＹは、０であり；
ｈ）Ｘは、１０であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７−ＮＲ８−ＮＲ９−ＮＲ１０であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、ＮＲ５、およびＮＲ６のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ７およびＮＲ９のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＮＲ８およびＮＲ１０のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
Ｙは、１であり、およびＮＺは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
ｉ）Ｘは、４であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４であり、ＮＲ１およびＮＲ４のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ１およびＮＲ３のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
Ｙは、１であり、およびＮＺは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
ｊ）Ｘは、４であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４であり、ＮＲ１は、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ２およびＮＲ４のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ３は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
Ｙは、１であり、およびＮＺは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記ヌクレオ塩基配列は、ｍｉＲ−１２２（配列番号１）のヌクレオ塩基配列に少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２５】
少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合であり、またはそれぞれのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合であり、任意選択的に前記修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２６】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記ヌクレオ塩基配列は、配列番号３〜６から選択され、それぞれのＴは、ＴおよびＵから独立して選択される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２７】
前記修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基配列に対して０、１、２、または３つのミスマッチを有する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２８】
構造：
【化１】
2016518842.tif 000067
を有し、
上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示し；下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；およびそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１に記載の化合物。
【請求項２９】
前記修飾オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３０】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記３’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記５’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３２】
前記修飾オリゴヌクレオチドの前記３’末端に結合している第１のコンジュゲート部分および前記修飾オリゴヌクレオチドの前記５’末端に結合している第２のコンジュゲート部分を含む、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３３】
前記コンジュゲート部分は、炭水化物、コレステロール、脂質、リン脂質、抗体、リポタンパク質、ホルモン、ペプチド、ビタミン、ステロイド、およびカチオン脂質から選択される少なくとも１つのリガンドを含む、請求項２９〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
構造：
Ｌｎ−リンカー−ＭＯ
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３５】
構造：
Ｌｎ−リンカー−Ｘ−ＭＯ
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３６】
構造：
Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯ
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３７】
構造：
Ｌｎ−リンカー−Ｘ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯ
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３８】
構造：
Ｌｎ−リンカー−Ｙ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯ
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；それぞれのＹは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである、請求項２９〜３３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３９】
ｎが１を上回る場合、Ｌｎ−リンカーは、構造：
【化２】
2016518842.tif 000068
［式中、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり；ｎは、１〜１０であり；Ｓは、足場であり；ならびにＱ’およびＱ’’は、独立して、結合基である］
を有する、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４０】
Ｑ’およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される、請求項３９に記載の化合物。
【請求項４１】
前記足場は、２、３、４、または５つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる、請求項３９または４０に記載の化合物。
【請求項４２】
前記足場は、３つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる、請求項４１に記載の化合物。
【請求項４３】
構造：
【化３】
2016518842.tif 000069
［式中、
Ｂは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、および−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され；
ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり；
ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、およびベンジルから選択され；
Ｚ、Ｚ’、およびＺ’’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択され；
それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり；
ｍは、１〜５であり；
Ｘは、ホスホジエステル結合およびホスホロチオエート結合から選択され；
Ｙは、ホスホジエステル結合であり；および
波線は、前記リンカーおよびリガンドの残部への連結を示す］
を有する、請求項３４〜４２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４４】
Ｘは、ホスホジエステル結合である、請求項３５、３７、３９または４３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４５】
ｎは、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である、請求項３４〜４３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４６】
ｎは、３である、請求項３４〜４３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４７】
少なくとも１つのリガンドは、炭水化物である、請求項３４〜４６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４８】
少なくとも１つのリガンドは、マンノース、グルコース、ガラクトース、リボース、アラビノース、フルクトース、フコース、キシロース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−リボース、Ｌ−リボース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アルファ−Ｄ−マンノフラノース、ベータ−Ｄ−マンノフラノース、アルファ−Ｄ−マンノピラノース、ベータ−Ｄ−マンノピラノース、アルファ−Ｄ−グルコフラノース、ベータ−Ｄ−グルコフラノース、アルファ−Ｄ−グルコピラノース、ベータ−Ｄ−グルコピラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトフラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトフラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトピラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトピラノース、アルファ−Ｄ−リボフラノース、ベータ−Ｄ−リボフラノース、アルファ−Ｄ−リボピラノース、ベータ−Ｄ−リボピラノース、アルファ−Ｄ−フルクトフラノース、アルファ−Ｄ−フルクトピラノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、Ｎ−アセチルガラクトサミンから選択される、請求項３４〜４７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４９】
少なくとも１つのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される、請求項３４〜４７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５０】
それぞれのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミンである、請求項３４〜４７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５１】
構造：
【化４】
2016518842.tif 000070
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する、請求項３４〜５０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５２】
修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドは、構造
ＣＬＣＡＬＴＴＧＬＴＬＣＡＣＬＡＣＬＴＣＬＣＬ
を有し、下付き文字「Ｌ」は、ＬＮＡを示し、かつ下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、およびそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、前記コンジュゲート部分は、前記修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、かつ構造：
【化５】
2016518842.tif 000071
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する化合物。
【請求項５３】
Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方は、ホスホジエステル結合である、請求項５１または５２に記載の化合物。
【請求項５４】
Ｘ１およびＸ２のそれぞれは、ホスホジエステル結合である、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５５】
ｍは、１である、請求項３５〜５４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５６】
ｍは、２、３、４、または５である、請求項３５〜５４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５７】
Ｎｍは、Ｎ’ｐＮ’’であり、それぞれのＮ’は、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｐは、０〜４であり；およびＮ’’は、非修飾糖部分を含むヌクレオシドである、請求項３５〜５６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５８】
ｐは、０である、請求項５７に記載の化合物。
【請求項５９】
ｐは、１、２、３、または４である、請求項５７に記載の化合物。
【請求項６０】
それぞれのＮ’は、非修飾糖部分を含む、請求項５５〜５９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６１】
それぞれの非修飾糖部分は、独立して、β−Ｄ−リボースまたはβ−Ｄ−デオキシリボースである、請求項５７〜６０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６２】
Ｎ’’は、プリンヌクレオ塩基を含む、請求項５７〜６１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６３】
Ｎ’’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む、請求項５７〜６１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６４】
少なくとも１つのＮ’は、プリンヌクレオ塩基を含む、請求項５７または５９〜６２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６５】
それぞれのプリンヌクレオ塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、および７−メチルグアニンから独立して選択される、請求項６２または６４に記載の化合物。
【請求項６６】
Ｎ’’は、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである、請求項５７〜６２、６４、または６５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６７】
少なくとも１つのＮ’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む、請求項５７または５９〜６６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６８】
それぞれのピリミジンヌクレオ塩基は、シトシン、５−メチルシトシン、チミン、ウラシル、および５，６−ジヒドロウラシルから独立して選択される、請求項６３または６７に記載の化合物。
【請求項６９】
それぞれのｎの前記糖部分は、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、２’−Ｏ−メトキシ糖、２’−Ｏ−メチル糖、２’−フルオロ糖、および二環式糖部分から独立して選択される、請求項３５〜６８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７０】
それぞれの二環式糖部分は、ｃＥｔ糖部分、ＬＮＡ糖部分、およびＥＮＡ糖部分から独立して選択される、請求項６９に記載の化合物。
【請求項７１】
前記ｃＥｔ糖部分は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分である、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７２】
前記ｃＥｔ糖部分は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分である、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７３】
修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドは、構造
ＡＥＭｅＣＥＡＥＭｅＣＥＭｅＣＥＡＥＴＥＴＧＵＳＣＳＡＣＳＡＣＳＴＣＳＣＳ
を有し、下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、およびそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；前記コンジュゲート部分は、前記修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、かつ構造：
【化６】
2016518842.tif 000072
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、１であり；Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、前記修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する化合物。
【請求項７４】
修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドは、構造
ＣＬＣＡＬＴＴＧＬＴＬＣＡＣＬＡＣＬＴＣＬＣＬ
を有し、下付き文字「Ｌ」は、ＬＮＡを示し、かつ下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、およびそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、前記コンジュゲート部分は、前記修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、かつ構造：
【化７】
2016518842.tif 000073
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、１であり；Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、前記修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する化合物。
【請求項７５】
細胞を、請求項１〜７４のいずれか一項に記載の化合物と接触させることを含む、細胞中のｍｉＲ−１２２の活性を阻害する方法。
【請求項７６】
前記細胞は、インビボである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記細胞は、インビトロである、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
ＨＣＶ感染対象に、請求項１〜７４のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項７９】
前記投与は、ＨＣＶ感染の症状を低減させる、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記投与は、血清ＨＣＶ  ＲＮＡのリバウンドを予防する、請求項７８または７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記投与は、血清ＨＣＶ  ＲＮＡのリバウンドを遅延させる、請求項７８または７９に記載の方法。
【請求項８２】
ＨＣＶ感染を有する対象を選択することを含む、請求項７８〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
前記対象は、ゲノタイプ１、ゲノタイプ２、ゲノタイプ３、ゲノタイプ４、ゲノタイプ５、およびゲノタイプ６から選択される１つ以上のＨＣＶゲノタイプに感染している、請求項７８〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記化合物の投与前、前記対象がゲノタイプ１、ゲノタイプ２、ゲノタイプ３、ゲノタイプ４、ゲノタイプ５、およびゲノタイプ６から選択される１つ以上のＨＣＶゲノタイプに感染していることを決定した、請求項７８〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
前記ＨＣＶゲノタイプは、ゲノタイプ１ａ、ゲノタイプ１ｂ、ゲノタイプ２ａ、ゲノタイプ２ｂ、ゲノタイプ２ｃ、ゲノタイプ２ｄ、ゲノタイプ３ａ、ゲノタイプ３ｂ、ゲノタイプ３ｃ、ゲノタイプ３ｄ、ゲノタイプ３ｅ、ゲノタイプ３ｆ、ゲノタイプ４ａ、ゲノタイプ４ｂ、ゲノタイプ４ｃ、ゲノタイプ４ｄ、ゲノタイプ４ｅ、ゲノタイプ４ｆ、ゲノタイプ４ｇ、ゲノタイプ４ｈ、ゲノタイプ４ｉ、ゲノタイプ４ｊ、ゲノタイプ５ａ、およびゲノタイプ６ａから選択される、請求項８３または８４に記載の方法。
【請求項８６】
前記ＨＣＶゲノタイプは、ゲノタイプ１ａ、１ｂ、および２から選択される、請求項８３または８４に記載の方法。
【請求項８７】
少なくとも１つの追加の治療剤を投与することを含む、請求項７８〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記対象は、少なくとも１つの治療剤に対して耐性であるＨＣＶ変異体に感染している、請求項７８〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
前記少なくとも１つの治療剤が、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、補因子阻害剤、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、構造タンパク質阻害剤、非構造タンパク質阻害剤、シクロフィリン阻害剤、侵入阻害剤、ＴＬＲ７アゴニスト、およびインターフェロンから選択される、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９０】
前記少なくとも１つの治療剤は、プロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ＮＳ３／４Ａ阻害剤、ヌクレオシドＮＳ５Ｂ阻害剤、ヌクレオチドＮＳ５Ｂ阻害剤、非ヌクレオシドＮＳ５Ｂ阻害剤、シクロフィリン阻害剤およびインターフェロンから選択される、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９１】
前記少なくとも１つの治療剤は、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファコン−１、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、徐放インターフェロン−アルファ−２ｂ、インターフェロンラムダ、ソホスブビル、リバビリン、テラプラビル、ボセプレビル、バニプレビル、アスナプレビル、リトナビル、セトロブビル、ダクラスタビル、シメプレビル、アリスポリビル、メリシタビン、テゴブビル、ダノプレビル、ソバプレビル、およびネセプレビルから選択される、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９２】
前記少なくとも１つの治療剤は、インターフェロン、リバビリン、およびテラプラビルから選択される、請求項８７または８８に記載の方法。
【請求項９３】
前記対象は、少なくとも１つの治療剤に対する非応答者である、請求項７８〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
前記対象は、インターフェロン非応答者である、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記対象は、直接作用型抗ウイルス剤非応答者である、請求項９３または９４に記載の方法。
【請求項９６】
血清１ミリリットル当たり３５０，０００コピーを上回るＨＣＶ  ＲＮＡレベルを有する対象を選択することを含む、請求項７８〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９７】
血清１ミリリットル当たり３５０，０００〜３，５００，０００コピーのＨＣＶ  ＲＮＡレベルを有する対象を選択することを含む、請求項７８〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
血清１ミリリットル当たり３，５００，０００コピーを上回るＨＣＶ  ＲＮＡレベルを有する対象を選択することを含む、請求項７８〜９５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記対象は、ＨＣＶ関連疾患を有する、請求項７８〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記ＨＣＶ関連疾患は、肝硬変、肝線維症、脂肪性肝炎、脂肪症、または肝細胞癌腫である、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを低減させるための十分なある用量の前記化合物を投与することを含む、請求項７８〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを血清１ｍｌ当たり４０コピー未満に低減させるある用量の前記化合物を投与することを含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの少なくとも２ｌｏｇ低減を達成するために十分なある用量の前記化合物を投与することを含む、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
前記投与は、持続性ウイルス学的著効を達成する、請求項７８〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
少なくとも０．５倍、少なくとも１．０倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２．０倍、または少なくとも２．５倍のＨＣＶ  ＲＮＡレベル低減を達成するために十分なある用量の前記化合物を投与することを含む、請求項７８〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記ＨＣＶ  ＲＮＡレベル低減は、前記化合物の最初の投与の２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間後に達成される、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
前記化合物を、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、１ヵ月に１回、２ヵ月に１回、または３ヵ月に１回投与する、請求項７８〜１０６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記化合物の前記用量は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、７．５ｍｇ／ｋｇ以下、１週間当たり５ｍｇ／ｋｇ以下、４．５ｍｇ／ｋｇ以下、４．０ｍｇ／ｋｇ以下、３．５ｍｇ／ｋｇ以下、３．０ｍｇ／ｋｇ以下、２．５ｍｇ／ｋｇ以下、２．０ｍｇ／ｋｇ以下、１．５ｍｇ／ｋｇ以下、または１．０ｍｇ／ｋｇ以下である、請求項７８〜１０７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記投与が、肝酵素レベルを正常化させ、前記肝酵素は、任意選択的にアラニンアミノトランスフェラーゼである、請求項７８〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記対象は、ヒトである、請求項７８〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１１】
前記化合物は、医薬組成物中に存在する、請求項７８〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
治療法において使用される、請求項１〜７４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１３】
ＨＣＶ感染対象の治療において使用される、請求項１〜７４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１４】
前記対象は、ヒトである、請求項１１３に記載の使用される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書において、ｍｉＲ−１２２の活性のモジュレーションにおいて使用される化合物および方法が提供される。このような方法は、ｍｉＲ−１２２活性に関連する疾患、例えば、ＨＣＶ感染の治療を含む。
【背景技術】
【０００２】
マイクロＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）は、「成熟マイクロＲＮＡ」としても公知であり、植物および動物のゲノム中でコードされる小型（約１８〜２４ヌクレオチド長）の非コードＲＮＡ分子である。ある例において、高度に保存される内因的に発現されるマイクロＲＮＡは、特異的ｍＲＮＡの３’非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）に結合することにより遺伝子の発現を調節する。１０００個を超える異なるマイクロＲＮＡが、植物および動物において同定されている。ある成熟マイクロＲＮＡは、数百ヌクレオチド長であることが多い長い内因性一次マイクロＲＮＡ転写物（プリマイクロＲＮＡ、プリｍｉｒ、プリｍｉＲまたはプリプレマイクロＲＮＡとしても公知）に由来すると考えられる（Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，２００２，２１（１７），４６６３−４６７０）。
【０００３】
肝臓中で豊富におよび特異的に発現されるマイクロＲＮＡのｍｉＲ−１２２は、Ｃ型肝炎ウイルス蓄積に重要な宿主因子である（Ｊｏｐｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００５，３０９（５７４０），１５７７−８１）。ｍｉＲ−１２２は、ＨＣＶゲノムの５’非コード領域中の２つの狭い間隔のシード配列部位に結合することによりＨＣＶと相互作用し、ＨＣＶゲノムの安定化をもたらし、複製および翻訳を支持する（Ｊａｎｇｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．，２０１０，８４：６６１５−６６２５；Ｍａｃｈｌｉｎ，ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。重要なことに、ｍｉＲ−１２２結合部位は、ＨＣＶゲノム中で全てのゲノタイプおよびサブタイプにわたり完全に保存されている（Ｗｉｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，２０１１，８５：２３４２−２３５０）。抗ｍｉＲによるｍｉＲ−１２２の阻害は、マウスおよびカニクイザルにおける総循環コレステロールレベルの低減、ならびにコレステロールホメオスタシス、脂肪酸、および脂質代謝に関与する遺伝子の発現の変化をもたらす（Ｅｓａｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，３：８７−９８）。慢性的にＨＣＶ感染しているチンパンジーにおいて、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの長期的および可逆的抑制ならびに総血清コレステロールの低減への抗ｍｉＲの毎週の静脈内投与（Ｌａｎｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２７：１９８−２０１）。ナイーブＨＣＶ感染患者の慢性治療において、抗ｍｉＲ−１２２治療は血清ＨＣＶ  ＲＮＡの低減をもたらし、したがって、臨床的概念実証を証明する。
【０００４】
Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）は、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）の肝臓指向性ＲＮＡウイルスであり、ＨＣＶ感染の原因に加え、慢性肝疾患および肝細胞癌腫の主因である。現在の標準的治療のペグ化インターフェロンとリバビリンとの組合せは、多くの患者により不十分に忍容され、一部の患者において５０％という低い応答率を有し得る。いくつかの直接作用型抗ウイルス剤ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤が、現在、ＨＣＶ感染患者における使用のために承認されているが、ＨＣＶにおける耐性突然変異の出現により、追加の薬剤による治療が要求される。開発中の治療法としては、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａタンパク質阻害剤、ヌクレオシド／チドＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤および非ヌクレオシドＮＳ５Ｂ阻害剤が挙げられる。しかしながら、現在の治療に対して応答せず、良好な治療後に再発し、または１つ以上の現在使用されている薬物について低い忍容性を有する感染個体を治療するための追加の治療法が依然として必要とされている。抗ウイルス剤療法に対する耐性は、ＨＣＶの高い成熟速度に伴う主要な問題であり、複数の機序を介して機能する薬物の組合せについても見られる。したがって、保存されている突然変異耐性ウイルス宿主因子、例えば、ｍｉＲ−１２２を標的化する治療法は、より高い、およびより持続的な治癒率を達成するための機会となる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本明細書において、１６〜２２個の結合ヌクレオシドからなる修飾ヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、ｍｉＲ−１２２（配列番号１）に相補的であり、修飾オリゴヌクレオチドは、５’から３’配向の以下のヌクレオシドパターンＩ：
（Ｒ）Ｘ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ−（ＮＺ）Ｙ
［式中、それぞれのＲは、独立して、非二環式ヌクレオシドまたは二環式ヌクレオシドであり；
Ｘは、４〜１０であり；
それぞれのＮＢは、独立して、二環式ヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、独立して、非二環式ヌクレオシドであり；
Ｙは、０または１であり；および
ＮＺは、修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシドである］
の少なくとも１６個の連続ヌクレオシドを含む化合物が提供される。
【０００６】
ある実施形態において、本明細書に提供される化合物は、ヌクレオシドパターンＩの少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または２２個の連続ヌクレオシドを含む修飾ヌクレオチドを含む。
【０００７】
ある実施形態において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシド、ｃＥｔヌクレオシド、およびＥＮＡヌクレオシドから独立して選択される。ある実施形態において、少なくとも２つの二環式ヌクレオシドは、互いに異なる。ある実施形態において、全ての二環式ヌクレオシドは、互いに同一の糖部分を有する。ある実施形態において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、ｃＥｔヌクレオシドである。ある実施形態において、ｃＥｔヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである。ある実施形態において、ｃＥｔヌクレオシドは、Ｒ−ｃＥｔヌクレオシドである。ある実施形態において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。
【０００８】
ある実施形態において、少なくとも２つの非二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含む。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、および２’−フルオロヌクレオシドから独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、および２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。ある実施形態において、２つ以下の非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、それぞれの他の非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある実施形態において、５’末端および３’末端非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、およびそれぞれの他の非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある実施形態において、２つの非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、およびそれぞれの他の非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
【０００９】
ある実施形態において、それぞれのＲは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。ある実施形態において、Ｘは、４、５、６、７、８、９、または１０である。ある実施形態において、Ｙは、０である。ある実施形態において、Ｙは、１である。
【００１０】
ある実施形態において、Ｘは、７であり、それぞれのＲは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、およびＹは、０である。
【００１１】
ある実施形態において、Ｘは、４であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４であり、ＮＲ１およびＮＲ３のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ２およびＮＲ４のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり；およびＮＺは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
【００１２】
ある実施形態において、Ｘは、４であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４であり、ＮＲ１およびＮＲ４のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ２およびＮＲ３のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり；およびＮＺは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
【００１３】
ある実施形態において、Ｘは、７であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、およびＮＲ４のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ５およびＮＲ７のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、およびＮＲ６は、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；およびＹは、０である。
【００１４】
ある実施形態において、Ｘは、７であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４およびＮＲ５のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ６は、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ７は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；およびＹは、０である。
【００１５】
ある実施形態において、Ｘは、７であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、ＮＲ５、およびＮＲ６のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、かつＮＲ７は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；およびＹは、０である。
【００１６】
ある実施形態において、Ｘは、１０であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７−ＮＲ８−ＮＲ９−ＮＲ１０であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、ＮＲ５、およびＮＲ６のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ７およびＮＲ９のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＲ８およびＮＲ１０のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；およびＹは、０である。
【００１７】
ある実施形態において、Ｘは、１０であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７−ＮＲ８−ＮＲ９−ＮＲ１０であり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、ＮＲ５、およびＮＲ６のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ７およびＮＲ９のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＮＲ８およびＮＲ１０のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり、およびＮＺは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
【００１８】
ある実施形態において、Ｘは、４であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４であり、ＮＲ１およびＮＲ４のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ１およびＮＲ３のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり、およびＮＺは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
【００１９】
ある実施形態において、Ｘは、４であり；（Ｒ）Ｘは、ＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４であり、ＮＲ１は、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ２およびＮＲ４のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、かつＮＲ３は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり、およびＮＺは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
【００２０】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、ｍｉＲ−１２２（配列番号１）のヌクレオ塩基配列に少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相補的である。
【００２１】
ある実施形態において、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合であり、またはそれぞれのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合であり、任意選択的に修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【００２２】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、配列番号３〜６から選択され、それぞれのＴは、ＴおよびＵから独立して選択される。
【００２３】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基配列に対して０、１、２、または３つのミスマッチを有する。
【００２４】
ある実施形態において、化合物は、構造：
【化１】
2016518842.tif 000002
を有し、
上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示し；下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；およびそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【００２５】
一部の実施形態において、化合物は、構造：
【化２】
2016518842.tif 000003
を有し、
下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；およびそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。一部のこのような実施形態において、化合物は、化合物３８５９１、３８６３３、３８９９８、または３８６３４である。
【００２６】
本明細書に提供される化合物のいずれかは、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端に結合しているコンジュゲート部分を含み得る。ある実施形態において、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む。ある実施形態において、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む。ある実施形態において、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合している第１のコンジュゲート部分および修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合している第２のコンジュゲート部分を含む。ある実施形態において、コンジュゲート部分は、炭水化物、コレステロール、脂質、リン脂質、抗体、リポタンパク質、ホルモン、ペプチド、ビタミン、ステロイド、およびカチオン脂質から選択される少なくとも１つのリガンドを含む。
【００２７】
ある実施形態において、化合物は、構造Ｌｎ−リンカー−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【００２８】
ある実施形態において、化合物は、構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【００２９】
ある実施形態において、化合物は、構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【００３０】
ある実施形態において、化合物は、構造Ｌｎ−リンカー−Ｘ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【００３１】
ある実施形態において、化合物は、構造Ｌｎ−リンカー−Ｙ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯを有し、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、かつｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；それぞれのＹは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【００３２】
ある実施形態において、ｎが１を上回る場合、Ｌｎ−リンカーは、構造：
【化３】
2016518842.tif 000004
［式中、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり；ｎは、１〜１０であり；Ｓは、足場であり；ならびにＱ’およびＱ’’は、独立して、結合基である］
を有する。
【００３３】
ある実施形態において、Ｑ’およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。
【００３４】
ある実施形態において、足場は、２、３、４、または５つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる。ある実施形態において、足場は、３つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる。
【００３５】
非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉ）：
【化４】
2016518842.tif 000005
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよび置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【００３６】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【００３７】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｉ）：
【化５】
2016518842.tif 000006
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；ならびにＲ１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される］
である。
【００３８】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルから選択される。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈまたはメチルである。
【００３９】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｉｉ）：
【化６】
2016518842.tif 000007
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【００４０】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【００４１】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｖ）：
【化７】
2016518842.tif 000008
［式中、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；ならびにＲ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【００４２】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【００４３】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖ）：
【化８】
2016518842.tif 000009
［式中、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；ならびにＲ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【００４４】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【００４５】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉ）：
【化９】
2016518842.tif 000010
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；ならびにＲ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【００４６】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【００４７】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉｉ）：
【化１０】
2016518842.tif 000011
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択され；ならびにＺおよびＺ’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択される］
である。
【００４８】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのＰ原子上のＺまたはＺ’は、Ｓであり、他のＺまたはＺ’は、Ｏである（すなわち、ホスホロチオエート結合）。一部の実施形態において、それぞれの−ＯＰ（Ｚ）（Ｚ’）Ｏ−は、ホスホロチオエート結合である。一部の実施形態において、ＺおよびＺ’は、両方とも少なくとも１つのＰ原子上のＯである（すなわち、ホスホジエステル結合）。一部の実施形態において、それぞれの−ＯＰ（Ｚ）（Ｚ’）Ｏ−は、ホスホジエステル結合である。
【００４９】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉｉｉ）：
【化１１】
2016518842.tif 000012
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；ならびにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【００５０】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【００５１】
非限定的な例示的な足場および／または足場を含むリンカー、ならびにそれらの合成は、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１３／０３３２３０号パンフレット、米国特許第８，１０６，０２２Ｂ２号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１５７５０９Ａ１号明細書；米国特許第５，９９４，５１７号明細書；米国特許第７，４９１，８０５Ｂ２号明細書；米国特許第８，３１３，７７２Ｂ２号明細書；Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ｍ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １６，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２００１，３９１−４６９に記載されている。
【００５２】
ある実施形態において、化合物は、構造：
【化１２】
2016518842.tif 000013
［式中、
Ｂは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、および−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され；
ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり；
ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、およびベンジルから選択され；
Ｚ、Ｚ’、およびＺ’’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択され；
それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり；
ｍは、１〜５であり；
Ｘは、ホスホジエステル結合およびホスホロチオエート結合から選択され；
Ｙは、ホスホジエステル結合であり；および
波線は、リンカーおよびリガンドの残部への連結を示す］
を有する。
【００５３】
ある実施形態において、Ｘは、ホスホジエステル結合である。
【００５４】
ある実施形態において、ｎは、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である。ある実施形態において、ｎは、３である。
【００５５】
ある実施形態において、少なくとも１つのリガンドは、炭水化物である。
【００５６】
ある実施形態において、少なくとも１つのリガンドは、マンノース、グルコース、ガラクトース、リボース、アラビノース、フルクトース、フコース、キシロース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−リボース、Ｌ−リボース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アルファ−Ｄ−マンノフラノース、ベータ−Ｄ−マンノフラノース、アルファ−Ｄ−マンノピラノース、ベータ−Ｄ−マンノピラノース、アルファ−Ｄ−グルコフラノース、ベータ−Ｄ−グルコフラノース、アルファ−Ｄ−グルコピラノース、ベータ−Ｄ−グルコピラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトフラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトフラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトピラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトピラノース、アルファ−Ｄ−リボフラノース、ベータ−Ｄ−リボフラノース、アルファ−Ｄ−リボピラノース、ベータ−Ｄ−リボピラノース、アルファ−Ｄ−フルクトフラノース、アルファ−Ｄ−フルクトピラノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、Ｎ−アセチルガラクトサミンから選択される。
【００５７】
ある実施形態において、少なくとも１つのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される。
【００５８】
ある実施形態において、それぞれのリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミンである。
【００５９】
ある実施形態において、化合物は、構造：
【化１３】
2016518842.tif 000014
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する。
【００６０】
ある実施形態において、本明細書に提供される化合物は、修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含み、修飾オリゴヌクレオチドは、構造
ＣＬＣＡＬＴＴＧＬＴＬＣＡＣＬＡＣＬＴＣＬＣＬ  （配列番号７）
を有し、下付き文字「Ｌ」は、ＬＮＡを示し、かつ下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、およびそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、コンジュゲート部分は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、かつ構造：
【化１４】
2016518842.tif 000015
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する。
【００６１】
ある実施形態において、Ｘ１およびＸ２少なくとも一方は、ホスホジエステル結合である。ある実施形態において、Ｘ１およびＸ２のそれぞれは、ホスホジエステル結合である。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。
【００６２】
ある実施形態において、Ｎｍは、Ｎ’ｐＮ’’であり、それぞれのＮ’は、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、かつｐは、０〜４であり；およびＮ’’は、非修飾糖部分を含むヌクレオシドである。ある実施形態において、ｐは、０である。ある実施形態において、ｐは、１、２、３、または４である。
【００６３】
ある実施形態において、それぞれのＮ’は、非修飾糖部分を含む。ある実施形態において、それぞれの非修飾糖部分は、独立して、β−Ｄ−リボースまたはβ−Ｄ−デオキシリボースである。ある実施形態において、Ｎ’’は、プリンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、Ｎ’’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、少なくとも１つのＮ’は、プリンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、それぞれのプリンヌクレオ塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、および７−メチルグアニンから独立して選択される。ある実施形態において、Ｎ’’は、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである。ある実施形態において、少なくとも１つのＮ’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、それぞれのピリミジンヌクレオ塩基は、シトシン、５−メチルシトシン、チミン、ウラシル、および５，６−ジヒドロウラシルから独立して選択される。
【００６４】
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、それぞれのＮの糖部分は、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、２’−Ｏ−メトキシ糖、２’−Ｏ−メチル糖、２’−フルオロ糖、および二環式糖部分から独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの二環式糖部分は、ｃＥｔ糖部分、ＬＮＡ糖部分、およびＥＮＡ糖部分から独立して選択される。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分である。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分である。本明細書に記載の任意の実施形態において、それぞれのＮの糖部分は、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、および２’−フルオロ糖から独立して選択することができる。
【００６５】
本明細書において、修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドは、構造
ＡＥＭｅＣＥＡＥＭｅＣＥＭｅＣＥＡＥＴＥＴＧＵＳＣＳＡＣＳＡＣＳＴＣＳＣＳ  （配列番号４）
を有し、下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、およびそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；コンジュゲート部分は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、かつ構造：
【化１５】
2016518842.tif 000016
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、１であり；Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する化合物が提供される。
【００６６】
本明細書において、修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドは、構造
ＣＬＣＡＬＴＴＧＬＴＬＣＡＣＬＡＣＬＴＣＬＣＬ  （配列番号７）
を有し、下付き文字「Ｌ」は、ＬＮＡを示し、かつ下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、およびそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、コンジュゲート部分は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、かつ構造：
【化１６】
2016518842.tif 000017
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、１であり；Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；およびＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する化合物が提供される。一部の実施形態において、ＣＬヌクレオシドの全ては、ＭｅＣＬヌクレオシドであり、上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示す。
【００６７】
本明細書において、細胞を、本明細書に提供される任意の化合物と接触させることを含む、細胞中のｍｉＲ−１２２の活性を阻害する方法が提供される。ある実施形態において、細胞は、インビボである。ある実施形態において、細胞は、インビトロである。
【００６８】
本明細書において、ＨＣＶ感染対象に、本明細書に提供される化合物のいずれかを投与する方法が提供される。ある実施形態において、投与は、ＨＣＶ感染の症状を低減させる。ある実施形態において、投与は、血清ＨＣＶ  ＲＮＡのリバウンドを予防する。ある実施形態において、投与は、血清ＨＣＶ  ＲＮＡのリバウンドを遅延させる。ある実施形態において、ＨＣＶ感染を有する対象を、本明細書に提供される化合物による治療のために選択する。ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、ゲノタイプ１、ゲノタイプ２、ゲノタイプ３、ゲノタイプ４、ゲノタイプ５、およびゲノタイプ６から選択される１つ以上のＨＣＶゲノタイプに感染している。ある実施形態において、本明細書に提供される化合物の投与前、対象がゲノタイプ１、ゲノタイプ２、ゲノタイプ３、ゲノタイプ４、ゲノタイプ５、およびゲノタイプ６から選択される１つ以上のＨＣＶゲノタイプに感染していることを決定した。ある実施形態において、ＨＣＶゲノタイプは、ゲノタイプ１ａ、ゲノタイプ１ｂ、ゲノタイプ２ａ、ゲノタイプ２ｂ、ゲノタイプ２ｃ、ゲノタイプ２ｄ、ゲノタイプ３ａ、ゲノタイプ３ｂ、ゲノタイプ３ｃ、ゲノタイプ３ｄ、ゲノタイプ３ｅ、ゲノタイプ３ｆ、ゲノタイプ４ａ、ゲノタイプ４ｂ、ゲノタイプ４ｃ、ゲノタイプ４ｄ、ゲノタイプ４ｅ、ゲノタイプ４ｆ、ゲノタイプ４ｇ、ゲノタイプ４ｈ、ゲノタイプ４ｉ、ゲノタイプ４ｊ、ゲノタイプ５ａ、およびゲノタイプ６ａから選択される。ある実施形態において、ＨＣＶゲノタイプは、ゲノタイプ１ａ、１ｂ、および２から選択される。
【００６９】
本明細書に提供される方法のいずれかは、少なくとも１つの追加の治療剤を投与することを含み得る。ある実施形態において、少なくとも１つの治療剤は、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、補因子阻害剤、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、構造タンパク質阻害剤、非構造タンパク質阻害剤、シクロフィリン阻害剤、侵入阻害剤、ＴＬＲ７アゴニスト、およびインターフェロンから選択される。ある実施形態において、少なくとも１つの治療剤は、プロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ＮＳ３／４Ａ阻害剤、ヌクレオシドＮＳ５Ｂ阻害剤、ヌクレオチドＮＳ５Ｂ阻害剤、非ヌクレオシドＮＳ５Ｂ阻害剤、シクロフィリン阻害剤およびインターフェロンから選択される。ある実施形態において、少なくとも１つの治療剤は、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファコン−１、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、徐放インターフェロン−アルファ−２ｂ、インターフェロンラムダ、ソホスブビル、リバビリン、テラプラビル（ｔｅｌａｐｒａｖｉｒ）、ボセプレビル、バニプレビル、アスナプレビル、リトナビル、セトロブビル、ダクラスタビル（ｄａｃｌａｓｔａｖｉｒ）、シメプレビル、アリスポリビル、メリシタビン、テゴブビル、ダノプレビル、ソバプレビル、およびネセプレビルから選択される。ある実施形態において、少なくとも１つの治療剤は、インターフェロン、リバビリン、およびテラプラビルから選択される。
【００７０】
ある実施形態において、対象は、少なくとも１つの治療剤に対して耐性であるＨＣＶ変異体に感染している。ある実施形態において、対象は、直接作用型抗ウイルス剤に対して耐性であるＨＣＶ変異体に感染している。ある実施形態において、対象は、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、補因子阻害剤、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、構造タンパク質阻害剤、非構造タンパク質阻害剤、およびシクロフィリン阻害剤から選択される少なくとも１つの治療剤に対して耐性であるＨＣＶ変異体に感染している。ある実施形態において、対象は、プロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ＮＳ３／４Ａ阻害剤、ヌクレオシドＮＳ５Ｂ阻害剤、ヌクレオチドＮＳ５Ｂ阻害剤、非ヌクレオシドＮＳ５Ｂ阻害剤、およびシクロフィリン阻害剤から選択される少なくとも１つの治療剤に対して耐性であるＨＣＶ変異体に感染している。ある実施形態において、対象は、ソホスブビル、リバビリン、テラプラビル、ボセプレビル、バニプレビル、アスナプレビル、リトナビル、セトロブビル、ダクラスタビル、シメプレビル、アリスポリビル、メリシタビン、テゴブビル、ダノプレビル、ソバプレビル、およびネセプレビルから選択される少なくとも１つの治療剤に対して耐性であるＨＣＶ変異体に感染している。
【００７１】
ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、少なくとも１つの治療剤に対する非応答者である。ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、インターフェロン非応答者である。ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、直接作用型抗ウイルス剤非応答者である。
【００７２】
本明細書に提供される方法のいずれかは、血清１ミリリットル当たり３５０，０００コピーを上回るＨＣＶ  ＲＮＡレベルを有する対象を選択することを含み得る。ある実施形態において、対象は、血清１ミリリットル当たり３５０，０００〜３，５００，０００コピーのＨＣＶ  ＲＮＡレベルを有する。ある実施形態において、対象は、血清１ミリリットル当たり３，５００，０００コピーを上回るＨＣＶ  ＲＮＡレベルを有する。
【００７３】
ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、ＨＣＶ関連疾患を有する。ある実施形態において、ＨＣＶ関連疾患は、肝硬変、肝線維症、脂肪性肝炎、脂肪症、または肝細胞癌腫である。
【００７４】
ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、ＨＣＶ関連疾患でない１つ以上の疾患を有する。ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、ＨＣＶ以外の１つ以上のウイルスに感染している。ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染している。ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、追加の治療剤を投与することを含み、それは、ＨＩＶ感染の治療において使用される抗ウイルス剤である。ある実施形態において、追加の治療剤は、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）である。ある実施形態において、追加の治療剤は、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）である。ある実施形態において、追加の治療剤は、プロテアーゼ阻害剤である。ある実施形態において、追加の治療剤は、侵入阻害剤または融合阻害剤である。ある実施形態において、追加の治療剤は、インテグラーゼ阻害剤である。ある実施形態において、追加の治療剤は、エファビレンツ、エトラビリン、ネビラピン、アバカビル、エムトリシタビン、テノホビル、ラミブジン、ジドブジン、アタザナビル、ダルナビル、フォサムプレナビル、リトナビル、エンフビルチド、マラビロク、およびラルテグラビルから選択される。
【００７５】
本明細書に提供される方法のいずれかは、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを低減させるために十分なある用量の化合物を投与することを含み得る。ある実施形態において、投与用量の化合物は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを血清１ｍｌ当たり４０コピー未満に低減させる。ある実施形態において、投与用量の化合物は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの少なくとも２ｌｏｇ低減を達成する。ある実施形態において、本明細書に提供される化合物の投与は、持続性ウイルス学的著効を達成する。ある実施形態において、投与用量の化合物は、少なくとも０．５倍、少なくとも１．０倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２．０倍、または少なくとも２．５倍のＨＣＶ  ＲＮＡレベル低減を達成するために十分である。ある実施形態において、ＨＣＶ  ＲＮＡレベル低減は、化合物の最初の投与の２週間、３週間、４週間、５週間、または６週間後に達成される。ある実施形態において、本明細書に提供される化合物は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、または１ヵ月に１回投与する。ある実施形態において、本明細書に提供される化合物は、２ヵ月に１回または３ヵ月に１回投与する。一部の実施形態において、本明細書に提供される化合物は、４週間に１回投与する。
【００７６】
ある実施形態において、投与される化合物の用量は、１週間当たり５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ以下、４．５ｍｇ／ｋｇ以下、４．０ｍｇ／ｋｇ以下、３．５ｍｇ／ｋｇ以下、３．０ｍｇ／ｋｇ以下、２．５ｍｇ／ｋｇ以下、２．０ｍｇ／ｋｇ以下、１．５ｍｇ／ｋｇ以下、または１．０ｍｇ／ｋｇ以下である。ある実施形態において、化合物は、１〜５ｍｇ／ｋｇ、または１〜４ｍｇ／ｋｇ、または２〜５ｍｇ／ｋｇ、または２〜４ｍｇ／ｋｇの範囲内の用量において投与する。ある実施形態において、投与される化合物の用量は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、７．５ｍｇ／ｋｇ以下、１週間当たり１０ｍｇ／ｋｇ以下、または１週間当たり７．５ｍｇ／ｋｇ以下である。
【００７７】
ある実施形態において、本明細書に提供される化合物の投与は、肝酵素レベルを正常化させ、肝酵素は、任意選択的にアラニンアミノトランスフェラーゼである。
【００７８】
本明細書に提供される実施形態のいずれかにおいて、化合物は、医薬組成物中に存在する。
【００７９】
本明細書において、ＨＣＶ感染対象の治療において使用される化合物が提供される。
【００８０】
ある実施形態において、対象は、ヒトである。
【図面の簡単な説明】
【００８１】
【図１Ａ−Ｂ】抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。（Ａ）示される用量における化合物の単回投与後の抗ｍｉＲ−１２２の作用の発生および持続時間。（Ｂ）示される用量における抗ｍｉＲ−１２２化合物の単回投与７日後のＡＬＤＯＡの脱抑制。
【図２】３つのＧａｌＮＡｃリガンドを含むコンジュゲート部分の構造。
【図３Ａ−Ｃ】コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド構造。
【図４Ａ−Ｃ】ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。
【図５Ａ−Ｂ】ｍｉＲ−１２２のアンチセンス阻害は、ＨＣＶタイターを低減させる。
【図６Ａ−Ｂ】ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。
【図７Ａ−Ｂ】ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。
【図８Ａ−Ｂ】ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのインビボ効力。
【図９Ａ−Ｂ】抗ｍｉＲ−１２２化合物の薬物動態。
【発明を実施するための形態】
【００８２】
特に定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されるものと同一の意味を有する。規定の定義が提供されない限り、本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医学および薬化学に関連して利用される命名、ならびにそれらの手順および技術は、当技術分野において周知であり、一般に使用されるものである。本明細書の用語について複数の定義が存在する場合、そのセクションにおけるものが優先される。標準的な技術を化学合成、化学分析、医薬調製、配合および送達、ならびに対象の治療に使用することができる。あるこのような技術および手順は、“Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ”Ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｓａｎｇｖｉ  ａｎｄ  Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．，１９９４；および“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０に見出すことができ、それらは、例えば、任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる。許容される場合、本明細書の全開示にわたり言及される全ての特許、特許出願、公開出願および刊行物、ＧＥＮＢＡＮＫ配列、ウエブサイトならびに他の公開材料は、特に記載のない限り、参照により全体として組み込まれる。ＵＲＬまたは他のそのような識別子もしくはアドレスが参照される場合、そのような識別子は、変化し得、インターネット上の特定の情報は変化し得るが、インターネットを検索することにより同等の情報を見出すことができることが理解される。その言及は、そのような情報の利用可能性および公的な普及を証明する。
【００８３】
本組成物および方法が開示および記載される前、本明細書において使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的のためのものであるにすぎず、限定的なものではないことを理解すべきである。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、特に文脈が明確に指定しない限り、複数形の参照物を含むことに留意しなければならない。
【００８４】
定義
「ＨＣＶ感染」は、Ｃ型肝炎ウイルスの１つ以上のゲノタイプによる感染を意味する。
【００８５】
「ＨＣＶ感染対象」は、Ｃ型肝炎ウイルスの１つ以上のゲノタイプに感染した対象を意味する。ＨＣＶ感染対象は、ＨＣＶ感染の症状を示しても示さなくてもよい。ＨＣＶ感染対象は、ＨＣＶの１つ以上のゲノタイプに感染したが、対象の血液中のＨＣＶ  ＲＮＡは検出レベル未満である対象を含む。
【００８６】
「ＨＣＶ関連疾患」は、ＨＣＶ感染により媒介される病理学的プロセスを意味する。ＨＣＶ関連疾患としては、限定されるものではないが、肝硬変、肝線維症、脂肪性肝炎、および肝細胞癌腫が挙げられる。
【００８７】
「血液ＨＣＶ  ＲＮＡ」は、ＨＣＶ感染対象の血液中に存在するＣ型肝炎ウイルスＲＮＡを意味する。血液は、全血および血清を含む。
【００８８】
「血清ＨＣＶ  ＲＮＡのリバンウンド」は、事前のＨＣＶ  ＲＮＡレベルの減少後のＨＣＶ  ＲＮＡレベルの増加を意味する。
【００８９】
「ＨＣＶ  ＲＮＡレベル」は、対象の血液の所与の容量中のＨＣＶ  ＲＮＡの量を意味する。ＨＣＶ  ＲＮＡレベルは、１ミリリットル当たりのＲＮＡのコピー数として表現することができる。「ＨＣＶ  ＲＮＡレベル」は、「ＨＣＶウイルス負荷」または「ＨＣＶ  ＲＮＡタイター」と呼ぶこともできる。
【００９０】
「持続性ウイルス学的著効」は、全治療過程の終了時における、およびさらなる６ヵ月後の対象の血液中の検出不能なＣ型肝炎ウイルスＲＮＡを意味する。ある実施形態において、ＨＣＶ  ＲＮＡは、血液１ミリリットル当たり４０コピー未満で検出不能とみなされる。
【００９１】
「非応答者」は、治療を受けたが、疾患マーカーまたは症状の臨床的に許容可能な改善が認められない対象を意味する。
【００９２】
「インターフェロン非応答者」は、インターフェロンによる治療を受けたが、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの臨床的に許容可能な低減が認められないＨＣＶ感染対象を意味する。
【００９３】
「直接作用型抗ウイルス剤」は、ＨＣＶ酵素の活性を阻害する医薬剤を意味する。
【００９４】
「直接作用型抗ウイルス剤非応答者」は、直接作用型抗ウイルス剤による治療を受けたが、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの臨床的に許容可能な低減が認められないＨＣＶ感染対象を意味する。ある実施形態において、ウイルスは、直接作用型抗ウイルス剤に対する耐性を発現している。
【００９５】
「ｍｉＲ−１２２関連病態」は、ｍｉＲ−１２２をモジュレートすることにより治療、予防または改善することができる任意の疾患、障害または病態を意味する。ｍｉＲ−１２２関連疾患は、過剰のｍｉＲ−１２２により特性決定されることを要しない。ｍｉＲ−１２２関連疾患としては、限定されるものではないが、ＨＣＶ感染、コレステロール上昇、および鉄過剰負荷障害が挙げられる。
【００９６】
「鉄過剰負荷障害」は、体内の過剰の鉄により特性決定される任意の疾患、障害または病態を意味する。「対象」は、治療または治療法のために選択されるヒトまたは非ヒト動物を意味する。
【００９７】
「それが必要とされる対象」は、治療法または治療が必要とされると同定される対象を意味する。
【００９８】
「有する疑いのある対象」は、疾患の１つ以上の臨床的指標を呈する対象を意味する。
【００９９】
「投与すること」は、医薬剤または組成物を対象に提供することを意味し、それとしては、限定されるものではないが、医療専門家による投与および自己投与が挙げられる。
【０１００】
「非経口投与」は、注射または注入を介する投与を意味する。非経口投与としては、限定されるものではないが、皮下投与、静脈内投与、および筋肉内投与が挙げられる。
【０１０１】
「皮下投与」は、皮膚直下の投与を意味する。
【０１０２】
「静脈内投与」は、静脈中への投与を意味する。
【０１０３】
「同時投与する」は、それぞれの薬剤の薬理学的効果が対象中に存在する任意の様式における２つ以上の薬剤の対象への共投与を指す。同時投与は、両方の薬剤を単一医薬組成物中で投与することも、同一の剤形において投与することも、同一の投与経路により投与することも要求しない。両方の薬剤の効果は、同時に存在する必要はない。効果は、一定期間の重複のみを必要とし、同一の広がりである必要もない。
【０１０４】
「持続時間」は、活性またはイベントが継続する時間の期間を意味する。ある実施形態において、治療の持続時間は、医薬剤または医薬組成物の用量が投与される時間の期間である。
【０１０５】
「治療法」は、疾患治療法を意味する。ある実施形態において、治療法としては、限定されるものではないが、化学療法、放射線療法、または医薬剤の投与が挙げられる。
【０１０６】
「治療」は、疾患の治癒または改善に使用される１つ以上の規定の手順の適用を意味する。ある実施形態において、規定の手順は、１つ以上の医薬剤の投与である。
【０１０７】
「改善」は、病態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度の低下を意味する。ある実施形態において、改善は、病態または疾患の１つ以上の指標の進行の遅延または遅滞を含む。指標の重症度は、当業者に公知の主観または客観的尺度により決定することができる。
【０１０８】
「発症するリスクがある」は、対象が病態または疾患を発症しやすい状態を意味する。ある実施形態において、病態または疾患を発症するリスクがある対象は、病態または疾患の１つ以上の症状を呈するが、その病態または疾患と診断するために十分な数の症状を呈さない。ある実施形態において、病態または疾患を発症するリスクがある対象は、病態または疾患の１つ以上の症状を呈するが、その病態または疾患と診断するために要求されるよりも低い程度で呈する。
【０１０９】
「の発生を予防する」は、疾患または病態を発症するリスクがある対象における病態または疾患の発症を予防することを意味する。ある実施形態において、疾患または病態を発症するリスクがある対象は、既にその疾患または病態を有する対象が受けた治療と同様の治療を受ける。
【０１１０】
「の発生を遅延させる」は、疾患または病態を発症するリスクがある対象における病態または疾患の発症を遅延させることを意味する。ある実施形態において、疾患または病態を発症するリスクがある対象は、既にその疾患または病態を有する対象が受けた治療と同様の治療を受ける。
【０１１１】
「治療剤」は、疾患の治癒、改善または予防に使用される医薬剤を意味する。
【０１１２】
「用量」は、単回投与において提供される医薬剤の規定量を意味する。ある実施形態において、用量は、２つ以上のボーラス、錠剤、または注射剤中で投与することができる。例えば、皮下投与が望まれるある実施形態において、所望用量は、単回注射により容易に適合しない容量を要求する。このような実施形態において、２つ以上の注射剤を使用して所望用量を達成することができる。ある実施形態において、用量は、２つ以上の注射剤中で投与して個体における注射部位反応を最小化することができる。ある実施形態において、用量は、低速注入として投与する。
【０１１３】
「投与量単位」は、医薬剤が提供される形態を意味する。ある実施形態において、投与量単位は、凍結乾燥オリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。ある実施形態において、投与量単位は、再構成オリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
【０１１４】
「治療有効量」は、治療利益を動物に提供する医薬剤の量を指す。
【０１１５】
「医薬組成物」は、医薬剤を含む個体への投与に好適な物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、無菌水溶液を含み得る。
【０１１６】
「医薬剤」は、対象に投与された場合に治療効果を提供する物質を意味する。
【０１１７】
「活性医薬成分」は、所望の効果を提供する医薬組成物中の物質を意味する。
【０１１８】
「臓器機能の改善」は、臓器機能の正常範囲への変化を意味する。ある実施形態において、臓器機能は、対象の血液または尿中に見出される分子を計測することにより評価される。例えば、ある実施形態において、肝機能の改善は、血中肝トランスアミナーゼレベルの低減により計測される。ある実施形態において、腎機能の改善は、血中尿窒素の低減、タンパク尿の低減、アルブミン尿の低減などにより計測される。
【０１１９】
「許容可能な安全性プロファイル」は、臨床的に許容可能な限界値内の副作用のパターンを意味する。
【０１２０】
「副作用」は、所望の効果以外の治療に起因する生理学的応答を意味する。ある実施形態において、副作用としては、限定されるものではないが、注射部位反応、肝機能試験異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、およびミオパシーが挙げられる。このような副作用は、直接または間接的に検出することができる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。
【０１２１】
「注射部位反応」は、個体における注射の部位における皮膚の炎症または異常発赤を意味する。
【０１２２】
「対象コンプライアンス」は、対象による推奨または処方される治療法に従うことを意味する。
【０１２３】
「遵守する」は、対象による推奨される治療法に従うことを意味する。
【０１２４】
「推奨される治療法」は、疾患を治療し、改善し、遅延させ、または予防するために医療専門家により推奨される治療を意味する。
【０１２５】
「ｍｉＲ−１２２」は、ヌクレオ塩基配列
【化１７】
2016518842.tif 000018
を有するマイクロＲＮＡを意味する。
【０１２６】
「ｍｉＲ−１２２ステムループ」は、ヌクレオ塩基配列
【化１８】
2016518842.tif 000019
を有するマイクロＲＮＡ前駆体を意味する。
【０１２７】
「抗ｍｉＲ」は、マイクロＲＮＡに相補的なヌクレオ塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある実施形態において、抗ｍｉＲは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【０１２８】
「抗ｍｉＲ−１２２」は、ｍｉＲ−１２２に相補的なヌクレオ塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある実施形態において、抗ｍｉＲ−１２２は、ｍｉＲ−１２２に完全に相補的である（すなわち、１００％相補的）。ある実施形態において、抗ｍｉＲ−１２２は、少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。ある実施形態において、抗ｍｉＲ−１２２は、修飾オリゴヌクレオチドである。
【０１２９】
「標的核酸」は、オリゴマー化合物がハイブリダイズするように設計される核酸を意味する。
【０１３０】
「標的化」は、標的核酸にハイブリダイズするヌクレオ塩基配列の設計および選択のプロセスを意味する。
【０１３１】
「に標的化される」は、標的核酸へのハイブリダイゼーションを可能とするヌクレオ塩基配列を有することを意味する。
【０１３２】
「モジュレーション」は、機能、量、または活性の摂動を意味する。ある実施形態において、モジュレーションは、機能、量、または活性の増加を意味する。ある実施形態において、モジュレーションは、機能、量、または活性の減少を意味する。
【０１３３】
「発現」は、遺伝子コード情報が細胞中で存在し、作動する構造に変換される任意の機能およびステップを意味する。
【０１３４】
「５’標的部位」は、特定のオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオ塩基に相補的な標的核酸のヌクレオ塩基を意味する。
【０１３５】
「３’標的部位」は、特定のオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオ塩基に相補的な標的核酸のヌクレオ塩基を意味する。
【０１３６】
「領域」は、核酸内の結合ヌクレオシドの一部を意味する。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは、標的核酸の領域に相補的なヌクレオ塩基配列を有する。例えば、あるこのような実施形態において、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡ配列の領域に相補的である。あるこのような実施形態において、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡの領域に完全に相補的である。
【０１３７】
「セグメント」は、領域のより小さいまたは下位部分を意味する。
【０１３８】
「ヌクレオ塩基配列」は、オリゴマー化合物または核酸中の連続ヌクレオ塩基の順序を意味し、典型的には、５’から３’配向で、いかなる糖、結合、および／またはヌクレオ塩基修飾からも独立して列記される。
【０１３９】
「連続ヌクレオ塩基」は、核酸中の互いに直接隣接するヌクレオ塩基を意味する。
【０１４０】
「ヌクレオ塩基相補性」は、水素結合を介して非共有結合により対合する２つのヌクレオ塩基の能力を意味する。
【０１４１】
「相補的」は、ある核酸が別の核酸またはオリゴヌクレオチドにハイブリダイズし得ることを意味する。ある実施形態において、相補的は、標的核酸にハイブリダイズし得るオリゴヌクレオチドを指す。
【０１４２】
「完全に相補的」は、オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオ塩基が標的核酸中のそれぞれの対応位置におけるヌクレオ塩基と対合し得ることを意味する。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに完全に相補的であり、すなわち、オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオ塩基は、マイクロＲＮＡ中の対応位置におけるヌクレオ塩基に相補的である。ある実施形態において、それぞれのヌクレオ塩基がマイクロＲＮＡ配列の領域内のヌクレオ塩基への相補性を有するオリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡ配列に完全に相補的である。
【０１４３】
「相補性パーセント」は、標的核酸の等長部分に相補的なオリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基の割合を意味する。相補性パーセントは、標的核酸中の対応位置におけるヌクレオ塩基に相補的なオリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基の数を、オリゴヌクレオチド中のヌクレオ塩基の総数により除すことにより算出される。
【０１４４】
「同一性パーセント」は、第２の核酸中の対応位置におけるヌクレオ塩基と同一である第１の核酸中のヌクレオ塩基の数を、第１の核酸中のヌクレオ塩基の総数により除したものを意味する。ある実施形態において、第１の核酸は、マイクロＲＮＡであり、第２の核酸は、マイクロＲＮＡである。ある実施形態において、第１の核酸は、オリゴヌクレオチドであり、第２の核酸は、オリゴヌクレオチドである。
【０１４５】
「ハイブリダイズする」は、ヌクレオ塩基相補性を介して生じる相補的核酸のアニーリングを意味する。
【０１４６】
「ミスマッチ」は、第２の核酸の対応位置におけるヌクレオ塩基とワトソンクリック対合し得ない第１の核酸のヌクレオ塩基を意味する。
【０１４７】
ヌクレオ塩基配列に関する「同一」は、糖、結合、および／またはヌクレオ塩基修飾から独立して、および存在するいかなるピリミジンのメチル状態からも独立して同一のヌクレオ塩基配列を有することを意味する。
【０１４８】
「マイクロＲＮＡ」は、酵素ＤｉｃｅｒによるプレマイクロＲＮＡの開裂の産物である、１８〜２５ヌクレオ塩基長の内因性非コードＲＮＡを意味する。成熟マイクロＲＮＡの例は、ｍｉＲＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）として公知のマイクロＲＮＡデータベースに見出される。ある実施形態において、マイクロＲＮＡは、「ｍｉｃｒｏＲＮＡ」または「ｍｉＲ」と略される。
【０１４９】
「プレマイクロＲＮＡ」または「プレｍｉＲ」は、Ｄｒｏｓｈａとして公知の二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼによるプリｍｉＲの開裂の産物である、ヘアピン構造を有する非コードＲＮＡを意味する。
【０１５０】
「ステムループ配列」は、ヘアピン構造を有し、成熟マイクロＲＮＡ配列を含有するＲＮＡを意味する。プレマイクロＲＮＡ配列およびステムループ配列は、重複し得る。ステムループ配列の例は、ｍｉＲＢａｓｅ（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）として公知のマイクロＲＮＡデータベースに見出される。
【０１５１】
「プリマイクロＲＮＡ」または「プリｍｉＲ」は、二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼＤｒｏｓｈａについての基質であるヘアピン構造を有する非コードＲＮＡを意味する。
【０１５２】
「マイクロＲＮＡ前駆体」は、ゲノムＤＮＡに由来し、１つ以上のマイクロＲＮＡ配列を含む非コード構造化ＲＮＡを含む転写物を意味する。例えば、ある実施形態において、マイクロＲＮＡ前駆体は、プレマイクロＲＮＡである。ある実施形態において、マイクロＲＮＡ前駆体は、プリマイクロＲＮＡである。
【０１５３】
「マイクロＲＮＡ調節転写物」は、マイクロＲＮＡにより調節される転写物を意味する。
【０１５４】
「モノシストロン性転写物」は、単一マイクロＲＮＡ配列を含有するマイクロＲＮＡ前駆体を意味する。
【０１５５】
「ポリシストロン性転写物」は、２つ以上のマイクロＲＮＡ配列を含有するマイクロＲＮＡ前駆体を意味する。
【０１５６】
「シード配列」は、成熟マイクロＲＮＡ配列の５’末端のヌクレオ塩基１〜９の６〜８つの連続ヌクレオ塩基を含むヌクレオ塩基配列を意味する。
【０１５７】
「シードマッチ配列」は、シード配列に相補的であり、シード配列と同一の長さであるヌクレオ塩基配列を意味する。
【０１５８】
「オリゴマー化合物」は、複数の結合モノマーサブユニットを含む化合物を意味する。オリゴマー化合物としては、オリゴヌクレオチドが挙げられる。
【０１５９】
「オリゴヌクレオチド」は、それぞれが互いに独立して修飾または非修飾であり得る複数の結合ヌクレオシドを含む化合物を意味する。
【０１６０】
「天然存在のヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の３’から５’ホスホジエステル結合を意味する。
【０１６１】
「天然糖」は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）中に見出される糖を意味する。
【０１６２】
「ヌクレオシド間結合」は、隣接ヌクレオシド間の共有結合を意味する。
【０１６３】
「結合ヌクレオシド」は、共有結合により結合しているヌクレオシドを意味する。
【０１６４】
「ヌクレオ塩基」は、別のヌクレオ塩基と非共有結合により対合し得る複素環式部分を意味する。
【０１６５】
「ヌクレオシド」は、糖部分に結合しているヌクレオ塩基を意味する。
【０１６６】
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部分に共有結合しているリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
【０１６７】
ある数の結合ヌクレオシド「からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物」は、規定数の結合ヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味する。したがって、化合物は、追加の置換基またはコンジュゲートを含み得る。特に記載のない限り、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドのものの他にいかなる付加ヌクレオシドも含まない。
【０１６８】
「修飾オリゴヌクレオチド」は、天然存在の末端、糖、ヌクレオ塩基、および／またはヌクレオシド間結合に対して１つ以上の修飾を有するオリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリゴヌクレオチドは、非修飾ヌクレオシドを含み得る。
【０１６９】
「一本鎖修飾オリゴヌクレオチド」は、相補鎖にハイブリダイズされない修飾ヌクレオチドを意味する。
【０１７０】
「修飾ヌクレオシド」は、天然存在のヌクレオシドからの任意の変化を有するヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖、および非修飾ヌクレオ塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、修飾糖および修飾ヌクレオ塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、天然糖および修飾ヌクレオ塩基を有し得る。ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドである。ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、非二環式ヌクレオシドである。
【０１７１】
「２’−修飾ヌクレオシド」は、位置が２−デオキシリボースまたはリボース中で番号付与されるフラノシル環の２’位に等価の位置における任意の修飾を有する糖を含むヌクレオシドを意味する。２’−修飾ヌクレオシドとしては、限定されるものではないが、二環式糖部分を含むヌクレオシドが挙げられることを理解すべきである。
【０１７２】
「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然存在のヌクレオシド間結合からの任意の変化を意味する。
【０１７３】
「ホスホロチオエートヌクレオシド間結合」は、非架橋原子の１つが硫黄原子である、ヌクレオシド間の結合を意味する。「ホスホロチオエート結合」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合と同一の構造を有する２つの化学部分間の結合、例えば、−ＯＰ（Ｏ）（Ｓ）Ｏ−を意味する。
【０１７４】
「ホスホジエステル結合」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合と同一の構造を有する２つの化学部分間の結合、例えば、−ＯＰ（Ｏ）２Ｏ−を意味する。
【０１７５】
「非修飾ヌクレオ塩基」は、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然存在の複素環式塩基：プリン塩基のアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチルシトシンを含む）、およびウラシル（Ｕ）を意味する。
【０１７６】
「５−メチルシトシン」は、５位に結合しているメチル基を含むシトシンを意味する。
【０１７７】
「非メチル化シトシン」は、５位に結合しているメチル基を有さないシトシンを意味する。
【０１７８】
「修飾ヌクレオ塩基」は、非修飾ヌクレオ塩基でない任意のヌクレオ塩基を意味する。
【０１７９】
「フラノシル」は、４つの炭素原子および１つの酸素原子からなる５員環を含む構造を意味する。
【０１８０】
「天然存在のフラノシル」は、天然存在のＲＮＡ中に見出されるリボフラノシルまたは天然存在のＤＮＡ中に見出されるデオキシリボフラノシルを意味する。
【０１８１】
「糖部分」は、天然存在のフラノシルまたは修飾糖部分を意味する。
【０１８２】
「修飾糖部分」は、置換糖部分または糖サロゲートを意味する。
【０１８３】
「置換糖部分」は、天然存在のフラノシルでないフラノシルを意味する。置換糖部分としては、限定されるものではないが、天然存在のフラノシルの２’位、５’位および／または４’位における修飾を含む糖部分が挙げられる。ある置換糖部分は、二環式糖部分である。
【０１８４】
「糖サロゲート」は、フラノシルを含まず、得られるヌクレオシドが（１）オリゴヌクレオチド中に取り込まれ、（２）相補的ヌクレオシドにハイブリダイズし得るように、ヌクレオシドの天然存在のフラノシルと置き換わり得る構造を意味する。このような構造としては、フラノシルの比較的単純な変化、例えば、異なる数の原子を含む環（例えば、４、６、または７員環）；フラノシルの酸素の非酸素原子（例えば、炭素、硫黄、または窒素）による置き換え；または原子数の変化および酸素の置き換えの両方が挙げられる。このような構造は、置換糖部分について記載のものと対応する置換（例えば、追加の置換基を任意選択的に含む６員炭素環式二環式糖サロゲート）も含み得る。糖サロゲートとしては、より複雑な糖の置き換え（例えば、ペプチド核酸の非環系）も挙げられる。糖サロゲートとしては、限定されるものではないが、モルホリノ、シクロヘキセニルおよびシクロヘキシトールが挙げられる。
【０１８５】
「β−Ｄ−デオキシリボース」は、天然存在のＤＮＡ糖部分を意味する。
【０１８６】
「β−Ｄ−リボース」は、天然存在のＲＮＡ糖部分を意味する。
【０１８７】
「２’−Ｏ−メチル糖」または「２’−ＯＭｅ糖」は、２’位におけるＯ−メチル修飾を有する糖を意味する。
【０１８８】
「２’−Ｏ−メトキシエチル糖」または「２’−ＭＯＥ糖」は、２’位におけるＯ−メトキシエチル修飾を有する糖を意味する。
【０１８９】
「２’−Ｏ−フルオロ」または「２’−Ｆ」は、２’位におけるフルオロ修飾を有する糖を意味する。
【０１９０】
「二環式糖部分」は、４〜７員環の２つの原子を連結して第２の環を形成し、二環式構造をもたらす架橋を含む４〜７員環（例として、限定されるものではないが、フラノシル）を含む修飾糖部分を意味する。ある実施形態において、４〜７員環は、糖環である。ある実施形態において、４〜７員環は、フラノシルである。あるこのような実施形態において、架橋は、フラノシルの２’炭素および４’炭素を連結する。非限定的な例示的な二環式糖部分としては、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥｔ、Ｓ−ｃＥｔ、およびＲ−ｃＥｔが挙げられる。
【０１９１】
「ロックド核酸（ＬＮＡ）糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間の（ＣＨ２）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１９２】
「ＥＮＡ糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間の（ＣＨ２）２−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１９３】
「拘束エチル（ｃＥｔ）糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間のＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。ある実施形態において、ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋は、Ｓ配向で拘束される。ある実施形態において、ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋は、Ｒ配向で拘束される。
【０１９４】
「Ｓ−ｃＥｔ糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間のＳ−拘束ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１９５】
「Ｒ−ｃＥｔ糖部分」は、４’および２’フラノース環原子間のＲ−拘束ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
【０１９６】
「２’−Ｏ−メチルヌクレオシド」は、２’−Ｏ−メチル糖修飾を有する修飾ヌクレオシドを意味する。
【０１９７】
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル糖修飾を有する修飾ヌクレオシドを意味する。２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドは、修飾または非修飾ヌクレオ塩基を含み得る。
【０１９８】
「２’−フルオロヌクレオシド」は、２’−フルオロ糖修飾を有する修飾ヌクレオシドを意味する。２’−フルオロヌクレオシドは、修飾または非修飾ヌクレオ塩基を含み得る。
【０１９９】
「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を有する修飾ヌクレオシドを意味する。二環式ヌクレオシドは、修飾または非修飾ヌクレオ塩基を有し得る。
【０２００】
「ｃＥｔヌクレオシド」は、ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔヌクレオシドは、修飾または非修飾ヌクレオ塩基を含み得る。
【０２０１】
「Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０２０２】
「Ｒ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０２０３】
「非二環式ヌクレオシド」は、二環式糖以外の糖を有するヌクレオシドを意味する。ある実施形態において、非二環式ヌクレオシドは、天然存在の糖を含む。ある実施形態において、非二環式ヌクレオシドは、修飾糖を含む。ある実施形態において、二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある実施形態において、非二環式ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
【０２０４】
「β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド」は、天然存在のＤＮＡヌクレオシドを意味する。
【０２０５】
「β−Ｄ−リボヌクレオシド」は、天然存在のＲＮＡヌクレオシドを意味する。
【０２０６】
「ＬＮＡヌクレオシド」は、ＬＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０２０７】
「ＥＮＡヌクレオシド」は、ＥＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
【０２０８】
「モチーフ」は、オリゴヌクレオチド中の修飾および／もしくは非修飾ヌクレオ塩基、糖、ならびに／またはヌクレオシド間結合のパターンを意味する。ある実施形態において、モチーフは、ヌクレオシドパターンである。
【０２０９】
「ヌクレオシドパターン」は、修飾オリゴヌクレオチドまたはその領域中のヌクレオシド修飾のパターンを意味する。ヌクレオシドパターンは、オリゴヌクレオチド中のヌクレオシド修飾の配置を記載するモチーフである。
【０２１０】
「完全修飾オリゴヌクレオチド」は、それぞれのヌクレオ塩基、それぞれの糖、および／またはそれぞれのヌクレオシド間結合が修飾されていることを意味する。
【０２１１】
「均一修飾オリゴヌクレオチド」は、それぞれのヌクレオ塩基、それぞれの糖、および／またはそれぞれのヌクレオシド間結合が、修飾オリゴヌクレオチド全体にわたる同一の修飾を有することを意味する。
【０２１２】
「安定化修飾」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合している２’−デオキシヌクレオシドにより提供されるものに対してヌクレアーゼの存在下の修飾オリゴヌクレオチドに安定性の向上を提供するヌクレオシドへの修飾を意味する。例えば、ある実施形態において、安定化修飾は、安定化ヌクレオシド修飾である。ある実施形態において、安定化修飾は、ヌクレオシド間結合修飾である。
【０２１３】
「安定化ヌクレオシド」は、２’−デオキシヌクレオシドにより提供されるものに対してオリゴヌクレオチドにヌクレアーゼ安定性の向上を提供するように修飾されているヌクレオシドを意味する。一実施形態において、安定性ヌクレオシドは、２’−修飾ヌクレオシドである。
【０２１４】
「安定化ヌクレオシド間結合」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により提供されるものに対してオリゴヌクレオチドにヌクレアーゼ安定性の改善を提供するヌクレオシド間結合を意味する。一実施形態において、安定化ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０２１５】
本明細書において使用される「結合基」は、第１の化学実体を第２の化学実体に１つ以上の共有結合を介して結合させる原子または原子の基を指す。
【０２１６】
本明細書において使用される「リンカー」は、１つ以上のリガンドを、修飾または非修飾ヌクレオシドに１つ以上の共有結合を介して結合させる原子または原子の基を指す。修飾または非修飾ヌクレオシドは、本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドの一部であり得、または修飾オリゴヌクレオチドにホスホジエステルもしくはホスホロチオエート結合を介して結合していてよい。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合させる。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合させる。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合している修飾または非修飾ヌクレオシドに結合させる。一部の実施形態において、リンカーは、１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合している修飾または非修飾ヌクレオシドに結合させる。リンカーが１つ以上のリガンドを修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に、または修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合している修飾もしくは非修飾ヌクレオシドに結合させる場合、一部の実施形態において、リンカーのための結合点は、修飾または非修飾糖部分の３’炭素であり得る。リンカーが１つ以上のリガンドを、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に、または修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合している修飾もしくは非修飾ヌクレオシドに結合させる場合、一部の実施形態において、リンカーのための結合点は、修飾または非修飾糖部分の５’炭素であり得る。
【０２１７】
概要
ｍｉＲ−１２２の強力な阻害剤を同定するため、多数の抗ｍｉＲ−１２２化合物を設計および合成した。化合物は、長さならびに二環式ヌクレオシドおよび非二環式ヌクレオシドの数、配置、およびアイデンティティが変動する修飾オリゴヌクレオチドを含んだ。初期の系列の化合物をインビトロルシフェラーゼアッセイにおいて試験し、化合物のサブセットをインビトロ活性化合物として同定した。次いで、これらのインビトロ活性化合物をインビボアッセイにおいて試験してインビボでｍｉＲ−１２２の強力な阻害剤であるそれらの化合物を同定した。初期インビトロおよびインビボスクリーンから、ある化合物を追加の化合物の設計のための基礎として選択した。構造と活性（インビトロおよびインビボの両方）との間の実験的に観察された相関を使用してそれらの追加の化合物の設計に、長さならびに二環式および非二環式ヌクレオシドの選択および配置のさらなる変動を与えた。インビトロおよびインビボスクリーニングアッセイをそれらの追加の化合物について繰り返した。ある化合物は、他の特性、例えば、エキソヌクレアーゼ活性に対する感受性、組織蓄積、および組織半減期についても試験した。
【０２１８】
このプロセスの間にインビトロでスクリーニングされた４００個を超える化合物のうち、約１５０個がインビトロルシフェラーゼアッセイにおいて活性と同定された。これらの化合物の約７０個を、インビボ効力および安全性についてさらに評価した。化合物の設計およびスクリーニングのこの反復プロセスを介し、ある化合物、非コンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドおよびコンジュゲートｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドの両方が、インビボでｍｉＲ−１２２の強力な阻害剤であることが観察された。したがって、これらの化合物は、ｍｉＲ−１２２の活性により促進される細胞プロセスのモジュレーションに有用である。さらに、このような化合物は、ｍｉＲ−１２２に関連する疾患の発生の治療、予防、および／または遅延に有用である。このような疾患としては、限定されるものではないが、ＨＣＶ感染およびＨＣＶ関連合併症、例えば、肝硬変、肝線維症、脂肪性肝炎、脂肪症、および肝細胞癌腫が挙げられる。
【０２１９】
ある抗ｍｉＲ−１２２化合物
本明細書において、あるパターンの二環式および非二環式ヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドが提供される。本明細書において同定されたパターンを有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２活性の有効な阻害剤である。
【０２２０】
本明細書において説明されるヌクレオシドパターンのそれぞれは、５’から３’配向で示す。
【０２２１】
ある実施形態において、本明細書において、１６〜２２個の結合ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、ｍｉＲ−１２２（配列番号１）に相補的であり、修飾オリゴヌクレオチドは、５’から３’配向の以下のヌクレオシドパターンＩの少なくとも１６個の連続ヌクレオシドを含む化合物：
（Ｒ）Ｘ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ−（ＮＺ）Ｙ
［式中、それぞれのＲは、独立して、非二環式ヌクレオシドまたは二環式ヌクレオシドであり；
Ｘは、４〜１０であり；
それぞれのＮＢは、独立して、二環式ヌクレオシドであり；
それぞれのＮＱは、独立して、非二環式ヌクレオシドであり；
Ｙは、０または１であり；
ＮＺは、修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシド非二環式ヌクレオシドまたは二環式ヌクレオシドである］
が提供される。
【０２２２】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレオシドパターンＩの少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、または２２個の連続ヌクレオシドを含む。
【０２２３】
ある実施形態において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、独立して、ＬＮＡヌクレオシド、ｃＥｔヌクレオシド、およびＥＮＡヌクレオシドから選択される。
【０２２４】
ある実施形態において、少なくとも２つの二環式ヌクレオシドは、互いに異なる。
【０２２５】
ある実施形態において、全ての二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する。
【０２２６】
ある実施形態において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、ｃＥｔヌクレオシドである。ある実施形態において、ｃＥｔヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである。ある実施形態において、ｃＥｔヌクレオシドは、Ｒ−ｃＥｔヌクレオシドである。
【０２２７】
ある実施形態において、それぞれの二環式ヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。
【０２２８】
ある実施形態において、少なくとも２つの非二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含む。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、同一タイプの糖部分を有する。
【０２２９】
ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、および２’−フルオロヌクレオシドから独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、および２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから独立して選択される。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある実施形態において、それぞれの非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。
【０２３０】
ある実施形態において、２つ以下の非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。ある実施形態において、２つ以下の非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、それぞれの他の非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
【０２３１】
ある実施形態において、５’末端および３’末端非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、それぞれの他の非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
【０２３２】
ある実施形態において、２つの非二環式ヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、それぞれの他の非二環式ヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
【０２３３】
ある実施形態において、Ｒのそれぞれのヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドである。
【０２３４】
ある実施形態において、Ｘは、４、５、６、７、８、９、または１０である。
【０２３５】
ある実施形態において、Ｙは、０である。ある実施形態において、Ｙは、１である。
【０２３６】
ある実施形態において、Ｒは、７つの結合ヌクレオシドからなり、それぞれのヌクレオシドは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、０である。
【０２３７】
ある実施形態において、Ｒは、４つの結合ヌクレオシドＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４からなり、ＮＲ１およびＮＲ３のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、ＮＲ２およびＮＲ４のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり；ＮＺは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
【０２３８】
ある実施形態において、Ｒは、４つの結合ヌクレオシドＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４からなり、ＮＲ１およびＮＲ４のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、ＮＲ２およびＮＲ３のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり；ＮＺは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
【０２３９】
ある実施形態において、Ｒは、７つの結合ヌクレオシドＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７からなり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、およびＮＲ４のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ５およびＮＲ７のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、ＮＲ６は、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、０である。
【０２４０】
ある実施形態において、Ｒは、７つの結合ヌクレオシドＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７からなり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、およびＮＲ５のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ６は、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、ＮＲ７は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、０である。
【０２４１】
ある実施形態において、Ｒは、７つの結合ヌクレオシドＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７からなり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、ＮＲ５、およびＮＲ６のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ７は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、０である。
【０２４２】
ある実施形態において、Ｒは、１０個の結合ヌクレオシドＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７−ＮＲ８−ＮＲ９−ＮＲ１０からなり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、ＮＲ５、およびＮＲ６のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ７およびＮＲ９のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＲ８およびＮＲ１０のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、０である。
【０２４３】
ある実施形態において、Ｒは、１０個の結合ヌクレオシドＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４−ＮＲ５−ＮＲ６−ＮＲ７−ＮＲ８−ＮＲ９−ＮＲ１０からなり、ＮＲ１、ＮＲ２、ＮＲ３、ＮＲ４、ＮＲ５、およびＮＲ６のそれぞれは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ７およびＮＲ９のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＲ８およびＮＲ１０のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり、ＮＺは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
【０２４４】
ある実施形態において、Ｒは、４つの結合ヌクレオシドＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４からなり、ＮＲ１およびＮＲ４のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、ＮＲ１およびＮＲ３のそれぞれは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり、ＮＺは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
【０２４５】
ある実施形態において、Ｒは、４つの結合ヌクレオシドＮＲ１−ＮＲ２−ＮＲ３−ＮＲ４からなり、ＮＲ１は、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、ＮＲ２およびＮＲ４のそれぞれは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり、ＮＲ３は、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；それぞれのＮＢは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのＮＱは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；Ｙは、１であり、ＮＺは、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
【０２４６】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、ｍｉＲ−１２２（配列番号１）のヌクレオ塩基配列に少なくとも９０％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、または１００％相補的である。
【０２４７】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、配列番号１の２位がオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオ塩基と対合するように、ｍｉＲ−１２２に相補的である。例えば、以下のとおりである。
【化１９】
2016518842.tif 000020
【０２４８】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、配列番号１の１位がオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオ塩基と対合するように、ｍｉＲ−１２２に相補的である。例えば、以下のとおりである。
【化２０】
2016518842.tif 000021
【０２４９】
ある実施形態において、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、それぞれのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０２５０】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのピリミジンは、５−メチル基を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのシトシンは、５−メチルシトシンである。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのシトシンは、５−メチルシトシンである。ある実施形態において、シトシンを含むそれぞれの修飾ヌクレオチドは、５−メチルシトシンを含む。ある実施形態において、シトシンを含むそれぞれの２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドは、５−メチルシトシンを含む。
【０２５１】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、配列番号３〜６から選択され、それぞれのＴは、ＴおよびＵから独立して選択される。
【０２５２】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基配列に対して０、１、２、または３つのミスマッチを有する。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基配列に対して０個のミスマッチを有する。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基配列に対して１つのミスマッチを有する。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基配列に対して２つのミスマッチを有する。
【０２５３】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、２２個を超える結合ヌクレオシドからなり、ヌクレオシドパターンＩの少なくとも８つの結合ヌクレオシドを含む。ヌクレオシドパターンＩにより記載されるヌクレオシドに加えて存在するヌクレオシドは、修飾または非修飾のいずれかである。
【０２５４】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１６個未満の結合ヌクレオシドからなり、ヌクレオシドパターンＩの少なくとも８つの結合ヌクレオシドを含む。
【０２５５】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、表１に示されるヌクレオ塩基配列および修飾を有する。ヌクレオシドおよびヌクレオ塩基を以下のとおり示す：上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示し；下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０２５６】
【表１】
2016518842.tif 000022
【０２５７】
一部の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、以下に示されるヌクレオ塩基配列および修飾：
【化２１】
2016518842.tif 000023
を有し、
下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。一部のこのような実施形態において、化合物は、３８５９１、３８６３３、３８９９８、または３８６３４である。
【０２５８】
コンジュゲートを含む抗ｍｉＲ−１２２化合物
ある実施形態において、本明細書に提供される化合物は、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布および／または細胞取り込みを向上させる１つ以上の部分にコンジュゲートしている修飾オリゴヌクレオチドを含む。例えば、化合物の細胞取り込みの増加は、細胞表面受容体についてのリガンドであるコンジュゲートを利用することにより達成することができる。外因性分子（例えば、薬物）にコンジュゲートしているリガンドの、その細胞表面受容体への結合は、コンジュゲート分子の内在化をもたらし、それにより外因性分子の膜貫通輸送を向上させる。本明細書に提供される抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドのいずれかは、１つ以上の部分に結合させてコンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を形成することができる。
【０２５９】
ある実施形態において、本明細書に提供される化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端または３’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む。ある実施形態において、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む。ある実施形態において、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合しているコンジュゲート部分を含む。ある実施形態において、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合している第１のコンジュゲート部分および修飾オリゴヌクレオチドの５’末端に結合している第２のコンジュゲート部分を含む。
【０２６０】
ある実施形態において、コンジュゲート部分は、炭水化物、コレステロール、脂質、リン脂質、抗体、リポタンパク質、ホルモン、ペプチド、ビタミン、ステロイド、またはカチオン脂質から選択される少なくとも１つのリガンドを含む。
【０２６１】
リガンドは、修飾オリゴヌクレオチドに任意の好適なリンカーを介して共有結合させることができる。種々のリンカーが当技術分野において公知であり、ある非限定的な例示的なリンカーは、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１３／０３３２３０号パンフレットおよび米国特許第８，１０６，０２２Ｂ２号明細書に記載されている。一部の実施形態において、インビボ酵素的開裂に対して耐性であるリンカーを選択することができる。一部の実施形態において、インビボ加水分解開裂に対して耐性であるリンカーを選択することができる。一部の実施形態において、インビボ酵素的開裂を受けるリンカーを選択することができる。一部の実施形態において、インビボ加水分解開裂を受けるリンカーを選択することができる。
【０２６２】
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造：
Ｌ−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、リガンドであり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。ある実施形態において、ｍは、１であり、Ｘ１およびＸ２は、それぞれホスホジエステルである。
【０２６３】
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造Ａ：
Ｌｎ−リンカー−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。
【０２６４】
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造Ｂ：
Ｌｎ−リンカー−Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
【０２６５】
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造Ｃ：
Ｌｎ−リンカー−Ｘ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
【０２６６】
ある実施形態において、本明細書に記載のコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、構造Ｄ：
Ｌｎ−リンカー−Ｙ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯ；
を有し、
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり、ｎは、１〜１０であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；それぞれのＹは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである。ある実施形態において、ｍは、１である。一部の実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
【０２６７】
ある実施形態において、ｎが１を上回る場合、リンカーは、２つ以上のＬを化合物の残部に結合させ得る足場を含む（すなわち、修飾オリゴヌクレオチド（ＭＯ）に、Ｘ１−Ｎｍ−Ｘ２−ＭＯに、Ｘ−Ｎｍ−Ｙ−ＭＯに、など）。一部のこのような実施形態において、化合物（例えば、構造Ａ、Ｂ、Ｃ、またはＤの化合物）のＬｎ−リンカー部分は、構造Ｅ：
【化２２】
2016518842.tif 000024
［式中、それぞれのＬは、独立して、リガンドであり；ｎは、１〜１０であり；Ｓは、足場であり；Ｑ’およびＱ’’は、独立して、結合基である］
を含む。
【０２６８】
ある実施形態において、それぞれのＱ’およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸から独立して選択される。
【０２６９】
ある実施形態において、足場は、２、３、４、または５つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる。ある実施形態において、足場は、３つのリガンドを修飾オリゴヌクレオチドに結合させる。
【０２７０】
非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉ）：
【化２３】
2016518842.tif 000025
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【０２７１】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【０２７２】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｉ）：
【化２４】
2016518842.tif 000026
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択される］
である。
【０２７３】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルから選択される。一部の実施形態において、Ｒ１は、Ｈまたはメチルである。
【０２７４】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｉｉ）：
【化２５】
2016518842.tif 000027
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【０２７５】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【０２７６】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｉｖ）：
【化２６】
2016518842.tif 000028
［式中、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【０２７７】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【０２７８】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖ）：
【化２７】
2016518842.tif 000029
［式中、Ｌ１およびＬ２は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【０２７９】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【０２８０】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉ）：
【化２８】
2016518842.tif 000030
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【０２８１】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【０２８２】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉｉ）：
【化２９】
2016518842.tif 000031
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択され；ＺおよびＺ’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択される］
である。
【０２８３】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。一部の実施形態において、少なくとも１つのＰ原子上のＺまたはＺ’は、Ｓであり、他のＺまたはＺ’は、Ｏである（すなわち、ホスホロチオエート結合）。一部の実施形態において、それぞれの−ＯＰ（Ｚ）（Ｚ’）Ｏ−は、ホスホロチオエート結合である。一部の実施形態において、ＺおよびＺ’は、両方とも少なくとも１つのＰ原子上のＯである（すなわち、ホスホジエステル結合）。一部の実施形態において、それぞれの−ＯＰ（Ｚ）（Ｚ’）Ｏ−は、ホスホジエステル結合である。
【０２８４】
さらなる非限定的な例示的な構造Ｅは、構造Ｅ（ｖｉｉｉ）：
【化３０】
2016518842.tif 000032
［式中、Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３は、それぞれ独立して、リガンドであり；Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、それぞれ独立して、結合基であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および置換Ｃ１〜Ｃ６アルキルからそれぞれ独立して選択される］
である。
【０２８５】
一部の実施形態において、Ｑ’１、Ｑ’２、Ｑ’３、およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸からそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、およびブチルからそれぞれ独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、Ｈおよびメチルからそれぞれ選択される。
【０２８６】
非限定的な例示的な足場および／または足場を含むリンカー、ならびにそれらの合成は、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１３／０３３２３０号パンフレット、米国特許第８，１０６，０２２Ｂ２号明細書、米国特許出願公開第２０１２／０１５７５０９Ａ１号明細書；米国特許第５，９９４，５１７号明細書；米国特許第７，４９１，８０５Ｂ２号明細書；米国特許第８，３１３，７７２Ｂ２号明細書；Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ｍ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １６，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２００１，３９１−４６９に記載されている。
【０２８７】
ある実施形態において、化合物のＬｎ−リンカー部分は、構造Ｆ：
【化３１】
2016518842.tif 000033
［式中、
Ｂは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、および−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され；
ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり；
ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、およびベンジルから選択され；
Ｚ、Ｚ’、およびＺ’’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択され；
それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり；
ｍは、１〜５であり；
Ｘは、ホスホジエステル結合およびホスホロチオエート結合から選択され；
Ｙは、ホスホジエステル結合であり；
波線は、リンカーおよびリガンドの残部への連結を示す］
を含む。
【０２８８】
ある実施形態において、波線は、上記構造Ｅへの連結を示す。
【０２８９】
ある実施形態において、ｎは、１〜５、１〜４、１〜３、または１〜２である。ある実施形態において、ｎは、１である。ある実施形態において、ｎは、２である。ある実施形態において、ｎは、３である。ある実施形態において、ｎは、４である。ある実施形態において、ｎは、５である。
【０２９０】
ある実施形態において、化合物のＬｎ−リンカー部分は、構造Ｇ：
【化３２】
2016518842.tif 000034
［式中、
Ｂは、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（ＲＮ）−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−、−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｘ−、および−Ｚ−Ｐ（Ｚ’）（Ｚ’’）Ｏ−Ｎｍ−Ｙ−から選択され；
ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドであり；
ＲＮは、Ｈ、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、およびベンジルから選択され；
Ｚ、Ｚ’、およびＺ’’は、ＯおよびＳからそれぞれ独立して選択され；
それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり；
ｍは、１〜５であり；
Ｘは、ホスホジエステル結合およびホスホロチオエート結合から選択され；
Ｙは、ホスホジエステル結合であり；
それぞれのＬは、独立して、リガンドであり；ｎは、１〜１０であり；Ｓは、足場であり；Ｑ’およびＱ’’は、独立して、結合基である］
を含む。
【０２９１】
ある実施形態において、それぞれのＱ’およびＱ’’は、ペプチド、エーテル、ポリエチレングリコール、アルキル、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ２０アルキニル、Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルコキシ、アミノ、アミド、ピロリジン、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、および６−アミノヘキサン酸から独立して選択される。
【０２９２】
化合物の非限定的な例示的なＬｎ−リンカー部分（例えば、構造ＦまたはＧの）を、以下の構造Ｈ：
【化３３】
2016518842.tif 000035
［式中、波線は、修飾オリゴヌクレオチド（ＭＯ）への、例えば、構造Ｂ中のＸ１への、または例えば、構造Ｃ、もしくはＤ中のＸもしくはＹへの結合を示す］
に示す。
【０２９３】
ある実施形態において、それぞれのリガンドは、炭水化物である。炭水化物−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、細胞表面レクチンにより認識される場合、細胞膜を通過して細胞中に輸送される。ある実施形態において、細胞表面レクチンは、Ｃ型レクチンである。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、クッパー細胞上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、マクロファージ上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、内皮細胞上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、単球上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、白血球上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、樹状細胞上に存在する。ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、Ｂ細胞上に存在する。コンジュゲートは、Ｃ型レクチンを発現する任意の細胞型中への抗ｍｉＲ−１２２化合物の取り込みを容易にし得る。
【０２９４】
ある実施形態において、Ｃ型レクチンは、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）である。ある実施形態において、コンジュゲートは、ＡＳＧＰＲについての親和性を有する１つ以上のリガンド、例として、限定されるものではないが、ガラクトースまたはガラクトース誘導体を含む。ある実施形態において、ＡＳＧＰＲについての親和性を有するリガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、またはＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンである。このようなコンジュゲートは、ＡＳＧＰＲを発現する細胞、例えば、肝細胞および樹状細胞中への化合物の取り込みを容易にする。
【０２９５】
ある実施形態において、リガンドは、マンノース、グルコース、ガラクトース、リボース、アラビノース、フルクトース、フコース、キシロース、Ｄ−マンノース、Ｌ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ガラクトース、Ｄ−グルコース、Ｌ−グルコース、Ｄ−リボース、Ｌ−リボース、Ｄ−アラビノース、Ｌ−アラビノース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−フルクトース、Ｄ−フコース、Ｌ−フコース、Ｄ−キシロース、Ｌ−キシロース、アルファ−Ｄ−マンノフラノース、ベータ−Ｄ−マンノフラノース、アルファ−Ｄ−マンノピラノース、ベータ−Ｄ−マンノピラノース、アルファ−Ｄ−グルコフラノース、ベータ−Ｄ−グルコフラノース、アルファ−Ｄ−グルコピラノース、ベータ−Ｄ−グルコピラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトフラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトフラノース、アルファ−Ｄ−ガラクトピラノース、ベータ−Ｄ−ガラクトピラノース、アルファ−Ｄ−リボフラノース、ベータ−Ｄ−リボフラノース、アルファ−Ｄ−リボピラノース、ベータ−Ｄ−リボピラノース、アルファ−Ｄ−フルクトフラノース、アルファ−Ｄ−フルクトピラノース、グルコサミン、ガラクトサミン、シアル酸、およびＮ−アセチルガラクトサミンから選択される炭水化物である。
【０２９６】
ある実施形態において、リガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−ホルミルガラクトサミン、Ｎ−プロピオニル−ガラクトサミン、Ｎ−ｎ−ブタノイルガラクトサミン、およびＮ−イソ−ブタノイル−ガラクトサミンから選択される。
【０２９７】
ある実施形態において、リガンドは、Ｎ−アセチルガラクトサミンである。
【０２９８】
ある実施形態において、化合物は、構造：
【化３４】
2016518842.tif 000036
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］を含む。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
【０２９９】
ある実施形態において、化合物は、構造：
【化３５】
2016518842.tif 000037
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を含む。ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
【０３００】
ある実施形態において、化合物は、修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含み、修飾オリゴヌクレオチドは、構造
ＣＬＣＡＬＴＴＧＬＴＬＣＡＣＬＡＣＬＴＣＬＣＬ  （配列番号７）
を有し、下付き文字「Ｌ」は、ＬＮＡを示し、下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、コンジュゲート部分は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、構造：
【化３６】
2016518842.tif 000038
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する。一部の実施形態において、ＣＬヌクレオシドの全ては、ＭｅＣＬヌクレオシドであり、上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示す。
【０３０１】
一部の実施形態において、化合物は、構造：
【化３７】
2016518842.tif 000039
［式中、それぞれのＮは、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｍは、１〜５であり；Ｘ１およびＸ２は、それぞれ独立して、ホスホジエステル結合またはホスホロチオエート結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］を有する。
【０３０２】
ある実施形態において、Ｘ１およびＸ２の少なくとも一方は、ホスホジエステル結合である。ある実施形態において、Ｘ１およびＸ２のそれぞれは、ホスホジエステル結合である。
【０３０３】
ある実施形態において、ｍは、１である。ある実施形態において、ｍは、２である。ある実施形態において、ｍは、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍは、２、３、４、または５である。ある実施形態において、ｍが１を上回る場合、Ｎｍのそれぞれの修飾または非修飾ヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合またはホスホロチオエートヌクレオシド間結合によりＮｍの隣接修飾または非修飾ヌクレオシドに連結していてよい。
【０３０４】
本明細書に記載の実施形態のいずれかにおいて、Ｎｍは、Ｎ’ｐＮ’’であり得、それぞれのＮ’は、独立して、修飾または非修飾ヌクレオシドであり、ｐは、０〜４であり；Ｎ’’は、非修飾糖部分を含むヌクレオシドである。
【０３０５】
ある実施形態において、ｐは、０である。ある実施形態において、ｐは、１、２、３、または４である。ある実施形態において、ｐが１、２、３、または４である場合、それぞれのＮ’は、非修飾糖部分を含む。
【０３０６】
ある実施形態において、非修飾糖部分は、β−Ｄ−リボースまたはβ−Ｄ−デオキシリボースである。
【０３０７】
ある実施形態において、ｐが１、２、３、または４である場合、Ｎ’は、プリンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、Ｎ’’は、プリンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、プリンヌクレオ塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、キサンチン、および７−メチルグアニンから選択される。ある実施形態において、Ｎ’は、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである。ある実施形態において、Ｎ’’は、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンまたはβ−Ｄ−デオキシリボグアノシンである。
【０３０８】
ある実施形態において、ｐは、１であり、Ｎ’およびＮ’’は、それぞれ、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、Ｎ’およびＮ’’は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合している。ある実施形態において、ｐは、１であり、Ｎ’およびＮ’’は、それぞれ、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、Ｎ’およびＮ’’は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合している。ある実施形態において、ｐは、１であり、Ｎ’およびＮ’’は、それぞれ、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり、Ｎ’およびＮ’’は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合により結合している。
【０３０９】
ある実施形態において、ｐが１、２、３，または４である場合、Ｎ’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、Ｎ’’は、ピリミジンヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、ピリミジンヌクレオ塩基は、シトシン、５−メチルシトシン、チミン、ウラシル、および５，６−ジヒドロウラシルから選択される。
【０３１０】
ある実施形態において、それぞれのＮの糖部分は、独立して、β−Ｄ−リボース、β−Ｄ−デオキシリボース、２’−Ｏ−メトキシ糖、２’−Ｏ−メチル糖、２’−フルオロ糖、および二環式糖部分から選択される。ある実施形態において、それぞれの二環式糖部分は、独立して、ｃＥｔ糖部分、ＬＮＡ糖部分、およびＥＮＡ糖部分から選択される。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分である。ある実施形態において、ｃＥｔ糖部分は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分である。
【０３１１】
ある実施形態において、化合物は、構造：
【化３８】
2016518842.tif 000040
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、１であり；Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を含む。
【０３１２】
ある実施形態において、化合物は、構造：
【化３９】
2016518842.tif 000041
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、２であり；それぞれのＮは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｎのヌクレオシドは、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合しており；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を含む。
【０３１３】
ある実施形態において、化合物は、修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含み、修飾オリゴヌクレオチドは構造
ＡＥＭｅＣＥＡＥＭｅＣＥＭｅＣＥＡＥＴＥＴＧＵＳＣＳＡＣＳＡＣＳＴＣＳＣＳ  （配列番号４）
を有し、下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり；コンジュゲート部分は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、構造：
【化４０】
2016518842.tif 000042
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、１であり；Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する。
【０３１４】
ある実施形態において、化合物は、修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含み、修飾オリゴヌクレオチドは、構造
ＣＬＣＡＬＴＴＧＬＴＬＣＡＣＬＡＣＬＴＣＬＣＬ  （配列番号７）
を有し、下付き文字「Ｌ」は、ＬＮＡを示し、下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、コンジュゲート部分は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、構造：
【化４１】
2016518842.tif 000043
［式中、Ｘは、ホスホジエステル結合であり；ｍは、１であり；Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；Ｙは、ホスホジエステル結合であり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する。一部の実施形態において、ＣＬヌクレオシドの全ては、ＭｅＣＬヌクレオシドであり、上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示す。
【０３１５】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、表２に示されるヌクレオ塩基配列および修飾を有する。ヌクレオシドおよびヌクレオ塩基を以下のとおり示す：上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示し；下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０３１６】
【表２】
2016518842.tif 000044
【０３１７】
ある実施形態において、本明細書に提供される化合物は、修飾ヌクレオチドおよびコンジュゲート部分を含み、修飾オリゴヌクレオチドは、構造
ＣＳＡＳＣＳＡＳＣＳＵＳＣＳＣＳ  （配列番号９）
を有し、下付き文字「Ｓ」は、Ｓ−ｃＥｔを示し、下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり、それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、コンジュゲート部分は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端に結合しており、構造：
【化４２】
2016518842.tif 000045
［式中、Ｘ１およびＸ２は、ホスホジエステル結合であり；ｍは、１であり；Ｎは、β−Ｄ−デオキシリボアデノシンであり；ＭＯは、修飾オリゴヌクレオチドである］
を有する。
【０３１８】
修飾オリゴヌクレオチドへのコンジュゲーションのための追加の部分としては、フェナジン、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、および色素が挙げられる。ある実施形態において、コンジュゲート基は、修飾オリゴヌクレオチドに直接結合している。
【０３１９】
ある代謝産物
エキソヌクレアーゼおよび／またはエンドヌクレアーゼへのインビトロまたはインビボ曝露時、化合物は、化合物全体にわたる種々の位置における開裂を受け得る。このような開裂の産物は、親化合物の活性のいくらかの程度を保持し得、したがって、活性代謝産物とみなされる。したがって、化合物の代謝産物を本明細書に記載の方法において使用することができる。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチド（非コンジュゲートまたはコンジュゲート）は、５’末端および／または３’末端における開裂を受け、親修飾オリゴヌクレオチドに対して５’末端および／または３’末端におけるヌクレオチドが１、２、または３つ少ない代謝産物をもたらす。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端における開裂を受け、５’末端ヌクレオチドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドに対して５’末端におけるヌクレオチドが１つ少ない代謝産物をもたらす。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端における開裂を受け、２つの５’末端ヌクレオシドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドに対して５’末端におけるヌクレオチドが２つ少ない代謝産物をもたらす。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端における開裂を受け、３’末端ヌクレオチドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドに対して３’末端におけるヌクレオチドが１つ少ない代謝産物をもたらす。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端における開裂を受け、２つの３’末端ヌクレオシドを放出し、親修飾オリゴヌクレオチドに対して３’末端におけるヌクレオチドが２つ少ない代謝産物をもたらす。
【０３２０】
コンジュゲート部分に結合している修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物は、修飾オリゴヌクレオチドおよびリガンド間のリンカー内の部位における開裂も受け得る。ある実施形態において、開裂は、コンジュゲート部分の一部を含む親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。ある実施形態において、開裂は、修飾オリゴヌクレオチドおよびリガンド間のリンカーの１つ以上のサブユニットを含む親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。例えば、化合物が構造Ｌｎ−リンカー−Ｎｍ−Ｐ−ＭＯを有する場合、一部の実施形態において、開裂は、Ｎｍの１つ以上のヌクレオチドを含む親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。一部の実施形態において、コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの開裂は、親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。一部のこのような実施形態において、例えば、化合物が構造Ｌｎ−リンカー−Ｎｍ−Ｐ−ＭＯを有する場合、一部の実施形態において、開裂は、いかなるＮｍのヌクレオチドも有さない親修飾オリゴヌクレオチドを生じさせる。
【０３２１】
あるヌクレオ塩基配列
成熟ｍｉＲ−１２２およびその対応ステムループ配列のヌクレオ塩基配列は、ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋにおいて見出されるマイクロＲＮＡ配列およびアノテーションのオンライン検索可能なデータベースのｍｉＲＢａｓｅに見出される。ｍｉＲＢａｓｅ配列データベース中のエントリーは、マイクロＲＮＡ転写物の予測ヘアピン部分（ステムループ）を、成熟マイクロＲＮＡ配列の局在および配列に関する情報とともに表す。データベース中のマイクロＲＮＡステムループ配列は、厳密に、前駆体マイクロＲＮＡ（プレマイクロＲＮＡ）でなく、一部の例において、想定される一次転写物からのプレマイクロＲＮＡおよび一部のフランキング配列を含み得る。本明細書に記載のマイクロＲＮＡヌクレオ塩基配列は、マイクロＲＮＡの任意のバージョン、例として、ｍｉＲＢａｓｅ配列データベースのリリース１５．０に記載の配列およびｍｉＲＢａｓｅ配列データベースの任意の以前のリリースに記載の配列を包含する。配列データベースリリースは、あるマイクロＲＮＡの改名をもたらし得る。本発明は、本明細書に記載のマイクロＲＮＡの任意のヌクレオ塩基配列バージョンに相補的な修飾オリゴヌクレオチドを包含する。
【０３２２】
ある実施形態において、ｍｉＲ−１２２に標的化される修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２、またはその前駆体のヌクレオ塩基配列中の対応位置におけるヌクレオ塩基との塩基対合を受け得る。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、その標的マイクロＲＮＡまたは前駆体配列に対して１つ以上のミスマッチ塩基対を有し得、その標的配列にハイブリダイズし得るままである。
【０３２３】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２前駆体、例えば、ｍｉＲ−１２２ステムループ配列のヌクレオ塩基配列に相補的なヌクレオ塩基配列を有する。ｍｉＲ−１２２は、ｍｉＲ−１２２前駆体配列内に含有されるため、ｍｉＲ−１２２に相補的なヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２前駆体の領域にも相補的である。
【０３２４】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオ塩基１〜１６、１〜１７、１〜１８、１〜１９、１〜２０、１〜２１、または１〜２２に相補的なヌクレオ塩基配列を有する。
【０３２５】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオ塩基２〜１６、２〜１７、２〜１８、２〜１９、２〜２０、２〜２１、または２〜２２に相補的なヌクレオ塩基配列を有する。
【０３２６】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオ塩基３〜１７、３〜１８、３〜１９、３〜２０、３〜２１、または３〜２２に相補的なヌクレオ塩基配列を有する。
【０３２７】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシド数は、ｍｉＲ−１２２、またはその前駆体の長さ未満である。あるこのような実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２、またはその前駆体の領域に相補的なヌクレオ塩基配列を有する。ｍｉＲ−１２２の長さ未満である結合ヌクレオシドの数を有する修飾オリゴヌクレオチド（修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２ヌクレオ塩基配列中の対応位置におけるそれぞれのヌクレオ塩基に相補的である）は、ｍｉＲ−１２２に完全に相補的なヌクレオ塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドとみなされる。例えば、１９個の結合ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチド（ヌクレオシド１〜１９のヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２の対応位置にそれぞれ相補的であり、ｍｉＲ−１２２は、２２ヌクレオ塩基長である）は、ｍｉＲ−１２２の１９個の連続ヌクレオ塩基に完全に相補的である。このような修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基配列に１００％相補的なヌクレオ塩基配列を有する。
【０３２８】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−１２２の長さよりも１つ少ない。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端におけるヌクレオシドが１つ少ない。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端におけるヌクレオシドが１つ少ない。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端におけるヌクレオシドが２つ少ない。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、３’末端におけるヌクレオシドが２つ少ない。
【０３２９】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１５個の連続ヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２の１５個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１６個の連続ヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２の１６個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１７個の連続ヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２の１７個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１８個の連続ヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２の１８個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの１９個の連続ヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２の１９個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの２０個の連続ヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２の２０個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの２１個の連続ヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２の２１個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの２２個の連続ヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２の２２個の連続ヌクレオ塩基にそれぞれ相補的である。
【０３３０】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、シード配列に相補的なヌクレオ塩基配列を含み、すなわち、修飾オリゴヌクレオチドは、シードマッチ配列を含む。ある実施形態において、シード配列は、ヘキサマーシード配列である。あるこのような実施形態において、シード配列は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基１〜６である。あるこのような実施形態において、シード配列は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基２〜７である。あるこのような実施形態において、シード配列は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基３〜８である。ある実施形態において、シード配列は、ヘプタマーシード配列である。あるこのような実施形態において、ヘプタマーシード配列は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基１〜７である。あるこのような実施形態において、ヘプタマーシード配列は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基２〜８である。ある実施形態において、シード配列は、オクタマーシード配列である。あるこのような実施形態において、オクタマーシード配列は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基１〜８である。ある実施形態において、オクタマーシード配列は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基２〜９である。
【０３３１】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−１２２配列の長さよりも多い。あるこのような実施形態において、付加ヌクレオシドのヌクレオ塩基は、ｍｉＲ−１２２ステムループ配列のヌクレオ塩基に相補的である。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−１２２の長さよりも１つ多い。あるこのような実施形態において、付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端において存在する。あるこのような実施形態において、付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端において存在する。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの結合ヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−１２２の長さよりも２つ多い。あるこのような実施形態において、２つの付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端において存在する。あるこのような実施形態において、２つの付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端において存在する。あるこのような実施形態において、１つの付加ヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの５’末端において局在し、１つの付加ヌクレオシドは、その３’末端において局在する。ある実施形態において、オリゴヌクレオチドの領域は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基配列に完全に相補的であり得るが、全修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２２に完全には相補的でない。例えば、２３個の結合ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチド（ヌクレオシド１〜２２のヌクレオ塩基が、２２ヌクレオ塩基長であるｍｉＲ−１２２の対応位置にそれぞれ相補的である）は、ｍｉＲ−１２２のヌクレオ塩基配列に完全に相補的な２２個のヌクレオシド部分を有する。
【０３３２】
ある実施形態において、化合物は、１つ以上のヌクレオシドを含むリンカーを介してリガンドに結合している修飾オリゴヌクレオチドを含む。相補性の割合を算出する目的のため、リンカーの任意の付加ヌクレオシドは、リンカーの一部とみなされ、修飾オリゴヌクレオチドの一部とはみなされない。したがって、コンジュゲート化合物の修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオ塩基配列は、リンカーがｍｉＲ−１２２に相補的でない１つ以上のヌクレオシドを含む場合であっても、ｍｉＲ−１２２に依然として１００％相補的であり得る。
【０３３３】
本明細書に記載のｍｉＲ−１２２ヌクレオ塩基配列、例として、限定されるものではないが、実施例および配列表に見出されるものは、核酸へのいかなる修飾からも独立している。したがって、配列番号により定義される核酸は、独立して、１つ以上の糖部分への、１つ以上のヌクレオシド間結合への、および／または１つ以上のヌクレオ塩基への１つ以上の修飾を含み得る。
【０３３４】
本出願に付属する配列表は、それぞれのヌクレオ塩基配列を適宜「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれかとして識別するが、実際、それらの配列は、化学修飾の任意の組合せにより修飾されていてよい。当業者は、修飾オリゴヌクレオチドを記載するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」としてのこのような指定が、いくぶん任意であることを容易に認識する。例えば、２’−ＯＨ糖部分およびチミン塩基を含むヌクレオシドを含む修飾オリゴヌクレオチドは、修飾糖（ＤＮＡの天然２’−Ｈについて２’−ＯＨ）を有するＤＮＡとして、または修飾塩基（ＲＮＡの天然ウラシルについてチミン（メチル化ウラシル））を有するＲＮＡとして記載することができる。
【０３３５】
したがって、本明細書に提供される核酸配列、例として、限定されるものではないが、配列表中のものは、天然または修飾ＲＮＡおよび／またはＤＮＡの任意の組合せを含有する核酸、例として、限定されるものではないが、修飾ヌクレオ塩基を有するこのような核酸を包含するものとする。さらなる例として、限定されるものではないが、ヌクレオ塩基配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有する修飾オリゴヌクレオチドは、そのようなヌクレオ塩基配列（修飾または非修飾を問わない）を有する任意のオリゴヌクレオチド、例として、限定されるものではないが、ＲＮＡ塩基を含むそのような化合物、例えば、配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するものならびにいくつかのＤＮＡ塩基およびいくつかのＲＮＡ塩基、例えば、「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」を有するものならびに他の修飾塩基、例えば、「ＡＴｍｅＣＧＡＵＣＧ」（ｍｅＣは、５−メチルシトシンを示す）を有するオリゴヌクレオチドを包含する。同様に、ヌクレオ塩基配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有する修飾オリゴヌクレオチドは、そのようなヌクレオ塩基配列（修飾または非修飾を問わない）を有する任意のオリゴヌクレオチド、例として、限定されるものではないが、ＤＮＡ塩基を含むそのような化合物、例えば、配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有するものならびにいくつかのＤＮＡ塩基およびいくつかのＲＮＡ塩基、例えば、「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」を有するものならびに他の修飾塩基、例えば、「ＡＴｍｅＣＧＡＵＣＧ」（ｍｅＣは、５−メチルシトシンを示す）を有するオリゴヌクレオチドを包含する。
【０３３６】
ｍｉＲ−１２２組成物のある使用
マイクロＲＮＡのｍｉＲ−１２２は、ＨＣＶの複製のための重要な内因性「宿主因子」である肝臓発現マイクロＲＮＡであり、ｍｉＲ−１２２を標的化するオリゴヌクレオチドは、ＨＣＶ複製を遮断する（Ｊｏｐｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０９，１５７７−８１）。Ｃ型肝炎ウイルスに慢性的に感染しているチンパンジーにおけるｍｉＲ−１２２の阻害は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを低減させた。ＨＣＶ感染患者において、ｍｉＲ−１２２の阻害は、抗ｍｉＲ−１２２化合物の５週間の投与後にＨＣＶ  ＲＮＡレベルの平均２ｌｏｇ低減をもたらした。本明細書に記載の化合物は、ｍｉＲ−１２２活性の強力な阻害剤である。したがって、本明細書において、ＨＣＶ感染対象への本明細書に提供される化合物を含む、ＨＣＶ感染を治療する方法が提供される。
【０３３７】
本明細書において、対象に本明細書に提供される化合物を投与することを含む、ＨＣＶ感染対象を治療する方法が提供される。ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、ＨＣＶ感染対象を選択することを含む。ある実施形態において、対象は、ヒトである。
【０３３８】
ある実施形態において、投与は、ＨＣＶ感染の症状を低減させる。ＨＣＶ感染の症状としては、限定されるものではないが、肝臓にわたる疼痛、黄疸、嘔吐、食欲不振、および疲労が挙げられる。
【０３３９】
ＨＣＶ治療レジメン後、ＨＣＶ感染対象は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの減少と、それに続くＨＣＶ  ＲＮＡレベルの増加が認められ得、この後続の増加は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルのリバウンドとして公知である。ある実施形態において、本明細書に提供される化合物および方法は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルのリバウンドを予防する。ある実施形態において、本明細書に提供される化合物および方法は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルのリバウンドを遅延させる。
【０３４０】
ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを使用してＨＣＶ感染を診断し、疾患活性をモニタリングし、治療に対する対象の応答をモニタリングすることができる。ある実施形態において、本明細書に提供される化合物の投与は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを低減させる。ある実施形態において、本明細書の化合物は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを低減させるために十分な用量において投与する。ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、血清１ミリリットル当たり３５０，０００コピーを上回る、血清１ミリリットル当たり３５０，０００〜３，５００，０００コピーの、または血清１ミリリットル当たり３，５００，０００コピーを上回るＨＣＶ  ＲＮＡレベルを有する対象を選択することを含む。ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを低減させることを含む。ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを血清１ミリリットル当たり２００コピー未満に、血清１ミリリットル当たり１００コピー未満に、または血清１ミリリットル当たり４０コピー未満に低減させることを含む。ＨＣＶ  ＲＮＡレベルは、「ウイルス負荷」または「ＨＣＶ  ＲＮＡタイター」と称することができる。
【０３４１】
ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの変化は、ｌｏｇ変化率として記載することができる。例えば、６０，０００〜６００の降下は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの２ｌｏｇ降下である。ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、２ｌｏｇ以上のＨＣＶ  ＲＮＡレベル減少を達成する。ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、少なくとも０．５倍、少なくとも１．０倍、少なくとも１．５倍、少なくとも２．０倍、または少なくとも２．５倍のＨＣＶ  ＲＮＡレベル減少を達成する。
【０３４２】
ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、持続性ウイルス学的著効を達成することを含む。
【０３４３】
ＨＣＶ感染対象は、ＨＣＶ関連疾患を発症し得る。ＨＣＶ感染の主要な肝臓病学的結果は、肝硬変およびその合併症、例として、出血、肝不全、および肝細胞癌腫である。追加の合併症は、線維症であり、これは細胞外マトリックス構成成分の堆積を引き起こす慢性炎症の結果であり、肝構造の破壊ならびに微小循環および肝機能の遮断をもたらす。肝硬変が進行し、線維性組織が構築されるにつれ、重度の壊死炎症活性が起き、脂肪症が発生する。脂肪症は、肝外病変、例として、糖尿病、タンパク質栄養不良、高血圧、細胞毒、肥満、および酸素欠乏症をもたらす。線維症および脂肪症が重度になるにつれ、肝臓は最終的には機能せず、肝移植が要求される。ＨＣＶ感染対象は、肝細胞癌腫も発症し得る。ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、ＨＣＶ関連疾患を有する。ある実施形態において、ＨＣＶ関連疾患は、肝硬変、線維症、脂肪性肝炎、脂肪症、および／または肝細胞癌腫である。
【０３４４】
ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、１つ以上の疾患を有する。ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、ＨＣＶ以外の１つ以上のウイルスに感染している。ある実施形態において、ＨＣＶ感染対象は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染している。本明細書に提供される化合物は、１つ以上の追加の治療剤と同時投与することができる。ある実施形態において、１つ以上の追加の治療剤は、免疫療法、免疫調節剤、治療ワクチン、抗線維症剤、抗炎症剤、気管支拡張剤、粘液溶解剤、抗ムスカリン剤、抗ロイコトリエン剤、細胞接着の阻害剤、酸化防止剤、サイトカインアゴニスト、サイトカインアンタゴニスト、肺サーファクタント、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗ＨＣＶ剤、抗癌剤、抗ｍｉＲ−１２２化合物、ＲＮＡｉ剤またはシクロフィリン阻害剤を含む。
【０３４５】
ある実施形態において、１つ以上の追加の治療剤は、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、補因子阻害剤、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、構造タンパク質阻害剤、非構造タンパク質阻害剤、シクロフィリン阻害剤、侵入阻害剤、ＴＬＲ７アゴニスト、およびインターフェロンから選択することができる。
【０３４６】
ある実施形態において、追加の治療剤は、構造
ＣＬＣＡＬＴＴＧＬＴＬＣＡＣＬＡＣＬＴＣＬＣＬ  （配列番号７）
を有する修飾オリゴヌクレオチドであり、下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；下付き文字「Ｌ」が続くヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドを示し；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、治療剤は、
ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート  ＣＬＣＡＬＴＴＧＬＴＬＣＡＣＬＡＣＬＴＣＬＣＬ  （配列番号７）
である。一部の実施形態において、ＣＬヌクレオシドの全ては、ＭｅＣＬヌクレオシドであり、上付き文字「Ｍｅ」は、５−メチルシトシンを示す。
【０３４７】
ある実施形態において、追加の治療剤は、プロテアーゼ阻害剤、ＮＳ５Ａ阻害剤、ＮＳ３／４Ａ阻害剤、ヌクレオシドＮＳ５Ｂ阻害剤、ヌクレオチドＮＳ５Ｂ阻害剤、非ヌクレオシドＮＳ５Ｂ阻害剤、シクロフィリン阻害剤およびインターフェロンから選択される。
【０３４８】
ある実施形態において、追加の治療剤は、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファコン−１、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、徐放インターフェロン−アルファ−２ｂ、インターフェロンラムダ、ソホスブビル、リバビリン、テラプラビル、ボセプレビル、バニプレビル、アスナプレビル、リトナビル、セトロブビル、ダクラスタビル、シメプレビル、アリスポリビル、メリシタビン、テゴブビル、ダノプレビル、ソバプレビル、およびネセプレビルから選択される。ある実施形態において、追加の治療剤は、ファルダプレビル、ＡＢＴ−４５０、ＭＫ−５１７２、メリシタビン、レジパスビル、オムビタスビル、ＧＳ−５８１６、ＭＫ−８７４２、ダサブビル、ＢＭＳ−７９１３２５、およびＡＢＴ−０７２から選択される。
【０３４９】
ある実施形態において、追加の治療剤は、インターフェロン、リバビリン、およびテラプラビルから選択される。ある実施形態において、インターフェロンは、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファコン−１、ペグインターフェロンアルファ−２ｂ、およびペグインターフェロンアルファ−２ａから選択される。
【０３５０】
ある実施形態において、追加の治療剤は、ペグインターフェロンアルファ−２ｂおよびリバビリンを含む。例えば、対象は、本明細書に提供される化合物、ペグインターフェロンアルファ−２ｂおよびリバビリンを含む治療法を受け得る。ある実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤は、ペグインターフェロンアルファ−２ａおよびリバビリンを含む。例えば、対象は、本明細書に提供される化合物、ペグインターフェロンアルファ−２ａおよびリバビリンを含む治療法を受け得る。ある実施形態において、追加の治療剤は、オムビタスビルおよびＡＢＴ−４５０である。ある実施形態において、追加の治療剤は、アスナプレビル、ダクラタスビル、およびＢＭＳ−７９１３２５である。ある実施形態において、追加の治療剤は、ソホスブビルおよびレジパシブル（ｌｅｄｉｐａｓｉｖｒ）である。ある実施形態において、追加の治療剤は、ＭＫ−８７４２およびＭＫ−５１７２である。
【０３５１】
ある治療法、例えば、インターフェロンまたはリバビリン療法を受けるある対象は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの有意な、または治療的に有益な低減が認められないことがある。このような対象は、１つ以上の追加の治療剤の投与から利益を受け得る。ある実施形態において、本明細書に提供される方法の対象は、非応答者である。ある実施形態において、対象は、インターフェロン非応答者である。ある実施形態において、対象は、直接作用型抗ウイルス剤非応答者である。
【０３５２】
ある実施形態において、追加の治療剤は、ＨＩＶ感染の治療において使用される抗ウイルス剤である。ある実施形態において、追加の治療剤は、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）である。ある実施形態において、追加の治療剤は、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩ）である。ある実施形態において、追加の治療剤は、プロテアーゼ阻害剤である。ある実施形態において、追加の治療剤は、侵入阻害剤または融合阻害剤である。ある実施形態において、追加の治療剤は、インテグラーゼ阻害剤である。ある実施形態において、追加の治療剤は、エファビレンツ、エトラビリン、ネビラピン、アバカビル、エムトリシタビン、テノホビル、ラミブジン、ジドブジン、アタザナビル、ダルナビル、フォサムプレナビル、リトナビル、エンフビルチド、マラビロク、およびラルテグラビルから選択される。
【０３５３】
ＨＣＶに感染している対象は、ビリルビン、アルブミン、およびプロトンビン（ｐｒｏｔｈｏｍｂｉｎ）時間の１つ以上を計測することにより評価される異常肝機能が認められ得る。肝酵素アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の計測を実施して肝炎症を評価する。これらのマーカーの異常レベルの１つ以上が、異常肝機能を呈し得る。ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、肝機能を正常化させることを含む。ある実施形態において、本明細書に提供される方法は、肝酵素レベルを正常化させることを含む。
【０３５４】
本明細書に提供される方法のいずれかにおいて、化合物は、医薬組成物中に存在し得る。
【０３５５】
本明細書に提供される化合物は、治療法において使用され得る。ある実施形態において、化合物は、ＨＣＶ感染対象の治療において使用される。ある実施形態において、対象は、ヒトである。ＨＣＶ感染対象の治療において使用される化合物は、ある実施形態において、本明細書に記載の任意の治療方法において使用され得る。
【０３５６】
本明細書において、本明細書に提供される化合物を、ｍｉＲ−１２２関連病態を有する対象に投与することを含む方法が提供される。ある実施形態において、ｍｉＲ−１２２関連病態は、ＨＣＶ感染である。
【０３５７】
ある実施形態において、ｍｉＲ−１２２関連病態は、コレステロール上昇である。ある実施形態において、抗ｍｉＲ−１２２化合物の対象への投与は、血清コレステロールの低減をもたらす。したがって、ある実施形態において、本明細書において、対象に本明細書に提供される化合物を投与することを含む、対象におけるコレステロールを低下させる方法が提供される。ある実施形態において、コレステロールレベルをバイオマーカーとして使用して本明細書に提供される抗ｍｉＲ−１２２化合物の活性を、単独で、または効力の別の指標、例えば、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの低減に加えて評価することができる。したがって、本明細書において、本明細書に提供される化合物を対象に投与すること、対象から血液試料を回収すること、および対象からの血液試料中のコレステロールを計測することを含む方法が提供される。コレステロールのレベルを、対象における抗ｍｉＲ−１２２化合物活性の指標として使用することができる。
【０３５８】
ある実施形態において、ｍｉＲ−１２２関連病態は、肥満症である。したがって、ある実施形態において、本明細書において、対象に本明細書に提供される化合物を投与することを含む、対象における肥満症を低減させる方法が提供される。
【０３５９】
ある実施形態において、ｍｉＲ−１２２関連病態は、鉄過剰負荷障害である。鉄過剰負荷障害は、過剰量の鉄を体内に吸収させる遺伝子突然変異の結果として生じ得る。鉄過剰負荷障害は、非遺伝子的原因、例として、限定されるものではないが、慢性輸血、慢性肝炎、または過剰量の鉄の摂取も有し得る。ある実施形態において、鉄過剰負荷障害は、輸血性鉄過剰負荷、食事性鉄過剰負荷、遺伝性血色素症、鎌状赤血球貧血、サラセミア、Ｘ連鎖性鉄芽球性貧血、ピルビン酸キナーゼ欠損症、およびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ欠損症から選択される。ある実施形態において、鉄過剰負荷障害は、血色素症１型、血色素症２Ａ型、血色素症２Ｂ型、血色素症３型、血色素症４型（またはフェロポーチン疾患）、アフリカ血色素症、新生児血色素症、無セルロプラスミン血症、および無トランスフェリン血症から選択される遺伝性血色素症である。ある実施形態において、鉄過剰負荷障害を有する対象への本明細書に提供される化合物の投与は、対象の体内の過剰鉄の低減をもたらす。
【０３６０】
ある修飾
修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレオ塩基、糖、および／またはヌクレオシド間結合への１つ以上の修飾を含み得る。修飾ヌクレオ塩基、糖、および／またはヌクレオシド間結合は、所望の特性、例えば、細胞取り込みの向上、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標的についての親和性の向上およびヌクレアーゼ存在下の安定性の増加などのため、非修飾形態を上回って選択することができる。
【０３６１】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、安定化ヌクレオシドである。安定化ヌクレオシドの例は、２’−修飾ヌクレオシドである。
【０３６２】
ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、修飾糖部分を含む。ある実施形態において、修飾糖部分を含む修飾ヌクレオシドは、非修飾ヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、修飾糖は、修飾ヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、修飾ヌクレオシドは、２’−修飾ヌクレオシドである。
【０３６３】
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、二環式糖部分を含む。あるこのような実施形態において、二環式糖部分は、アルファ立体配置のＤ糖である。あるこのような実施形態において、二環式糖部分は、ベータ立体配置のＤ糖である。あるこのような実施形態において、二環式糖部分は、アルファ立体配置のＬ糖である。あるこのような実施形態において、二環式糖部分は、ベータ立体配置のＬ糖である。
【０３６４】
ある実施形態において、二環式糖部分は、２’および４’炭素原子間の架橋基を含む。あるこのような実施形態において、架橋基は、１〜８つの結合ビラジカル基を含む。ある実施形態において、二環式糖部分は、１〜４つの結合ビラジカル基を含む。ある実施形態において、二環式糖部分は、２または３つの結合ビラジカル基を含む。ある実施形態において、二環式糖部分は、２つの結合ビラジカル基を含む。このような４’から２’糖置換基の例としては、限定されるものではないが、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−；４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’；４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（ｃＥｔ）および４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’、ならびにそのアナログ（例えば、２００８年７月１５日に発行された米国特許第７，３９９，８４５号明細書参照）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’およびそのアナログ、（例えば、２００９年１月８日に公開された国際公開第２００９／００６４７８号パンフレット参照）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’およびそのアナログ（例えば、２００８年１１月１１日に公開された国際公開第２００８／１５０７２９号パンフレット参照）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（例えば、２００４年９月２日に公開された米国特許出願公開第２００４／０１７１５７０号明細書参照）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’、および４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−（式中、それぞれのＲは、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１−Ｃ１２アルキルである）；４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、または保護基である）（２００８年９月２３日に発行された米国特許第７，４２７，６７２号明細書参照）；４’−ＣＨ２−Ｃ-（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（例えば、Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４参照）；および４’−ＣＨ２−Ｃ（＝ＣＨ２）−２’およびそのアナログ（２００８年１２月８日に公開された公開中のＰＣＴ国際出願の国際公開第２００８／１５４４０１号パンフレット参照）が挙げられる。
【０３６５】
ある実施形態において、このような４’から２’架橋は、独立して、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−、および−Ｎ（Ｒａ）−から独立して選択される１または２〜４つの結合基を含み；
ｘは、０、１、または２であり；
ｎは、１、２、３、または４であり；
それぞれのＲａおよびＲｂは、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり；
それぞれのＪ１およびＪ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、または保護基である。
【０３６６】
二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡと称される。ある実施形態において、二環式ヌクレオシドとしては、限定されるものではないが、以下に示される（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ（拘束エチルまたはｃＥｔとも称される）；（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ；（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ；（Ｊ）ｃ−ＭＯＥ（４’−ＣＨ２−ＯＭｅ−２’）ＢＮＡおよび（Ｋ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡ
【化４３】
2016518842.tif 000046
［式中、Ｂｘは、ヌクレオ塩基部分であり、Ｒは、独立して、Ｈ、保護基、またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである］
が挙げられる。
【０３６７】
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、ハロ、アリル、アミノ、アジド、ＳＨ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ（Ｒｍ）−アルキル；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ（Ｒｍ）−アルケニル；Ｏ−、Ｓ−またはＮ（Ｒｍ）−アルキニル；Ｏ−アルキレニル−Ｏ−アルキル、アルキニル、アルカリール、アラルキル、Ｏ−アルカリール、Ｏ−アラルキル、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択される２’−置換基を含み、それぞれのＲｍおよびＲｎは、独立して、Ｈ、アミノ保護基または置換もしくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。これらの２’−置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ（ＮＯ２）、チオール、チオアルコキシ（Ｓ−アルキル）、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニルおよびアルキニルから独立して選択される１つ以上の置換基によりさらに置換されていてよい。
【０３６８】
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＮＨ２、Ｎ３、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）３ＮＨ２、ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、およびＮ−置換アセトアミド（Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択される２’−置換基を含み、それぞれのＲｍおよびＲｎは、独立して、Ｈ、アミノ保護基または置換もしくは非置換Ｃ１−Ｃ１０アルキルである。
【０３６９】
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、およびＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
【０３７０】
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、Ｏ−ＣＨ３、およびＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
【０３７１】
ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、４’−チオ修飾ヌクレオシドである。ある実施形態において、２’−修飾ヌクレオシドは、４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドである。４’−チオ修飾ヌクレオシドは、β−Ｄ−リボヌクレオシドを有し、４’−Ｏは、４’−Ｓにより置き換えられている。４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドは、２’−置換基により置き換えられている２’−ＯＨを有する４’−チオ修飾ヌクレオシドである。好適な２’−置換基としては、２’−ＯＣＨ３、２’−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、および２’−Ｆが挙げられる。
【０３７２】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上のヌクレオシド間修飾を含む。あるこのような実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。ある実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、リン原子を含む。
【０３７３】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０３７４】
ある実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、リン原子を含まない。あるこのような実施形態において、ヌクレオシド間結合は、短鎖アルキルヌクレオシド間結合により形成される。あるこのような実施形態において、ヌクレオシド間結合は、シクロアルキルヌクレオシド間結合により形成される。あるこのような実施形態において、ヌクレオシド間結合は、混合ヘテロ原子およびアルキルヌクレオシド間結合により形成される。あるこのような実施形態において、ヌクレオシド間結合は、混合ヘテロ原子およびシクロアルキルヌクレオシド間結合により形成される。あるこのような実施形態において、ヌクレオシド間結合は、１つ以上の短鎖ヘテロ原子ヌクレオシド間結合により形成される。あるこのような実施形態において、ヌクレオシド間結合は、１つ以上の複素環式ヌクレオシド間結合により形成される。あるこのような実施形態において、ヌクレオシド間結合は、アミド骨格を有する。あるこのような実施形態において、ヌクレオシド間結合は、混合Ｎ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２構成部分を有する。
【０３７５】
ある実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオ塩基を含む。ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、７−デアザグアニン、７−デアザアデニン、ヒポキサンチン、キサンチン、７−メチルグアニン、２−アミノピリジンおよび２−ピリドンから選択される。ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジンならびにＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン、例として、２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシンから選択される。
【０３７６】
ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、多環式複素環を含む。ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、三環式複素環を含む。ある実施形態において、修飾ヌクレオ塩基は、フェノキサジン誘導体を含む。ある実施形態において、フェノキサジンをさらに修飾してＧクランプとして当技術分野において公知のヌクレオ塩基を形成することができる。
【０３７７】
あるこのような実施形態において、化合物は、特性、例えば、ヌクレアーゼ安定性などを向上させるために修飾オリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に結合している１つ以上の安定化基を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。安定化基には、キャップ構造が含まれる。これらの末端修飾は、修飾オリゴヌクレオチドをエキソヌクレアーゼ分解から保護し、送達および／または細胞内の局在化において役立ち得る。キャップは、５’末端（５’−キャップ），もしくは３’末端（３’−キャップ）において存在し得、または両方の末端上に存在し得る。キャップ構造としては、例えば、逆向きデオキシ非塩基（ａｂａｓｉｃ）キャップが挙げられる。
【０３７８】
好適なキャップ構造としては、４’，５’−メチレンヌクレオチド、１−（ベータ−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、アルファ−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、ホスホロジチオエート結合、トレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環式３’，４’−セコヌクレオチド、非環式３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環式３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆向きヌクレオチド部分、３’−３’−逆向き非塩基部分、３’−２’−逆向きヌクレオチド部分、３’−２’−逆向き非塩基部分、１，４−ブタンジオールホスフェート、３’−ホスホラミデート、ヘキシルホスフェート、アミノヘキシルホスフェート、３’−ホスフェート、３’−ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、架橋メチルホスホネート部分、および非架橋メチルホスホネート部分５’−アミノ−アルキルホスフェート、１，３−ジアミノ−２−プロピルホスフェート、３−アミノプロピルホスフェート、６−アミノヘキシルホスフェート、１，２−アミノドデシルホスフェート、ヒドロキシプロピルホスフェート、５’−５’−逆向きヌクレオチド部分、５’−５’−逆向き非塩基部分、５’−ホスホラミデート、５’−ホスホロチオエート、５’−アミノ、架橋および／または非架橋５’−ホスホラミデート、ホスホロチオエート、ならびに５’−メルカプト部分が挙げられる。
【０３７９】
ある合成方法
修飾オリゴヌクレオチドは、当技術分野において公知の自動化固相合成方法により作製することができる。固相合成の間、ホスホラミダイトモノマーを、固体担体に共有結合しているヌクレオシドに連続的にカップリングさせる。このヌクレオシドは、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオシドである。典型的には、カップリングサイクルは、４つのステップ：脱トリチル化（酸による５’−ヒドロキシル保護基の除去）、カップリング（担体結合ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドへの活性化ホスホロアミダイトの結合）、酸化または硫化（酸化剤または硫化剤による新たに形成されたホスファイトトリメスター（ｔｒｉｍｅｓｔｅｒ）の変換）、およびキャッピング（未反応５’−ヒドロキシル基のアセチル化）を含む。最後のカップリングサイクル後、固体担体結合オリゴヌクレオチドを脱トリチル化ステップに供し、次いでオリゴヌクレオチドを同時に固体担体から放出させ、保護基を塩基から除去する開裂および脱保護ステップを行う。固体担体を濾過により除去し、濾液を濃縮し、得られた溶液をアイデンティティおよび純度について試験する。次いで、例えば、アニオン交換樹脂が充填されたカラムを使用してオリゴヌクレオチドを精製する。
【０３８０】
ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドは、非コンジュゲートオリゴヌクレオチドを産生した固相合成に類似の自動化固相合成により作製することができる。ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲートオリゴヌクレオチドの合成の間、ホスホラミダイトモノマーを、固体担体に共有結合しているＧａｌＮＡｃコンジュゲートに連続的にカップリングする。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートの合成およびＧａｌＮＡｃコンジュゲート固体担体は、例えば、米国特許第８，１０６，０２２号明細書、および国際出願公開の国際公開第２０１３／０３３２３０号パンフレット（それぞれ、炭水化物含有コンジュゲート、例として、１つ以上のＧａｌＮＡｃ部分を含むコンジュゲートの合成の、および固体担体に共有結合しているコンジュゲートの合成の記載について参照により全体として本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０３８１】
ある医薬組成物
本明細書に提供される化合物のいずれかは、医薬組成物として調製することができる。ある実施形態において、医薬組成物は、投与量単位（例えば、錠剤、カプセル剤、ボーラスなど）の形態で投与される。一部の実施形態において、医薬組成物は、本明細書に提供される化合物を、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、および４００ｍｇ〜６００ｍｇから選択される範囲内の用量において含む。ある実施形態において、このような医薬組成物は、本明細書に提供される化合物を、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍｇ、３００ｍｇ、３０５ｍｇ、３１０ｍｇ、３１５ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３０ｍｇ、３３５ｍｇ、３４０ｍｇ、３４５ｍｇ、３５０ｍｇ、３５５ｍｇ、３６０ｍｇ、３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３８５ｍｇ、３９０ｍｇ、３９５ｍｇ、４００ｍｇ、４０５ｍｇ、４１０ｍｇ、４１５ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３０ｍｇ、４３５ｍｇ、４４０ｍｇ、４４５ｍｇ、４５０ｍｇ、４５５ｍｇ、４６０ｍｇ、４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４８５ｍｇ、４９０ｍｇ、４９５ｍｇ、５００ｍｇ、５０５ｍｇ、５１０ｍｇ、５１５ｍｇ、５２０ｍｇ、５２５ｍｇ、５３０ｍｇ、５３５ｍｇ、５４０ｍｇ、５４５ｍｇ、５５０ｍｇ、５５５ｍｇ、５６０ｍｇ、５６５ｍｇ、５７０ｍｇ、５７５ｍｇ、５８０ｍｇ、５８５ｍｇ、５９０ｍｇ、５９５ｍｇ、６００ｍｇ、６０５ｍｇ、６１０ｍｇ、６１５ｍｇ、６２０ｍｇ、６２５ｍｇ、６３０ｍｇ、６３５ｍｇ、６４０ｍｇ、６４５ｍｇ、６５０ｍｇ、６５５ｍｇ、６６０ｍｇ、６６５ｍｇ、６７０ｍｇ、６７５ｍｇ、６８０ｍｇ、６８５ｍｇ、６９０ｍｇ、６９５ｍｇ、７００ｍｇ、７０５ｍｇ、７１０ｍｇ、７１５ｍｇ、７２０ｍｇ、７２５ｍｇ、７３０ｍｇ、７３５ｍｇ、７４０ｍｇ、７４５ｍｇ、７５０ｍｇ、７５５ｍｇ、７６０ｍｇ、７６５ｍｇ、７７０ｍｇ、７７５ｍｇ、７８０ｍｇ、７８５ｍｇ、７９０ｍｇ、７９５ｍｇ、および８００ｍｇから選択される用量において含む。あるこのような実施形態において、医薬組成物は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、および８００ｍｇから選択される本明細書に提供される化合物の用量を含む。
【０３８２】
ある実施形態において、本明細書に提供される化合物を含む医薬組成物は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、９ｍｇ／ｋｇ以下、８ｍｇ／ｋｇ以下、７．５ｍｇ／ｋｇ以下、７ｍｇ／ｋｇ以下、６．５ｍｇ／ｋｇ以下、６ｍｇ／ｋｇ以下、５．５ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、４．５ｍｇ／ｋｇ以下、４ｍｇ／ｋｇ以下、３．５ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、２．５ｍｇ／ｋｇ以下、２ｍｇ／ｋｇ以下、１．５ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．７５ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下、または０．２５ｍｇ／ｋｇ以下の用量において投与される。
【０３８３】
ある実施形態において、医薬剤は、好適な希釈剤、例えば、注射用無菌水または注射用無菌生理食塩水により再構成される無菌凍結乾燥化合物である。再構成された生成物は、生理食塩水中に希釈された後に皮下注射として、または静脈内注入として投与される。凍結乾燥薬物生成物は、調製の間に酸または塩基によりｐＨ７．０〜９．０に調整された注射用水中で、または注射用生理食塩水中で調製され、次いで凍結乾燥された化合物からなる。凍結乾燥化合物は、２５〜８００ｍｇのオリゴヌクレオチドであり得る。これは、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、および８００ｍｇの修飾凍結乾燥オリゴヌクレオチドを包含することが理解される。さらに、一部の実施形態において、凍結乾燥化合物は、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、または４００ｍｇ〜６００ｍｇの範囲の量で存在する。凍結乾燥薬物生成物は、２ｍＬのＩ型透明ガラスバイアル（硫酸アンモニウム処理）中で包装し、ブロモブチルゴムクロージャにより封入し、アルミニウムＦＬＩＰ−ＯＦＦ（登録商標）オーバーシールにより密封することができる。
【０３８４】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、治療有効量の化合物を含む。ある実施形態において、治療有効量は、疾患の症状を予防、緩和もしくは改善するため、または治療される対象の生存を持続させるために十分である。治療有効量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０３８５】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、医薬組成物中に慣用的に見出される他の補助構成成分を、それらの当技術分野において確立された使用レベルにおいてさらに含有し得る。したがって、例えば、組成物は、追加の適合性の薬学的に活性な材料、例えば、鎮痒剤、収斂剤、局所麻酔剤もしくは抗炎症剤などを含有し得、または本発明の組成物の種々の剤形の物理的配合において有用な追加の材料、例えば、色素、着香剤、保存剤、酸化防止剤、乳白剤、増粘剤および安定剤を含有し得る。しかしながら、このような材料は、添加される場合、本発明の組成物の構成成分の生物学的活性と過度に干渉すべきでない。配合物は、滅菌し、所望により、配合物のオリゴヌクレオチドと有害に相互作用しない助剤、例えば、滑沢剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧影響のための塩、緩衝液、着色剤、着香剤および／または芳香物質などと混合することができる。
【０３８６】
脂質部分は、種々の方法において核酸療法において使用されている。ある方法においては、核酸を、カチオン脂質および中性脂質の混合物から作製された事前形成リポソームまたはリポプレックス中に導入する。別の方法においては、モノまたはポリカチオン脂質とのＤＮＡ複合体を中性脂質の存在なしで形成する。ある実施形態において、脂質部分は、特定の細胞または組織に対する医薬剤の分布を増加させるように選択する。ある実施形態において、脂質部分は、脂肪組織に対して医薬剤の分布を増加させるように選択する。ある実施形態において、脂質部分は、筋組織に対して医薬剤の分布を増加させるように選択する。
【０３８７】
ある実施形態において、ＩＮＴＲＡＬＩＰＩＤを使用してオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を調製する。Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄは、静脈内投与のために調製された脂肪エマルションである。これは、１０％のダイズ油、１．２％の卵黄リン脂質、２．２５％のグリセリン、および注射用水から構成される。さらに、最終生成物ｐＨ範囲が６〜８．９になるようにｐＨを調整するために水酸化ナトリウムが添加されている。
【０３８８】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、核酸と複合体形成しているポリアミン化合物または脂質部分を含む。このような製剤は、脂質製剤の開示について参照により全体として本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開の国際公開第２００８／０４２９７３号パンフレットに記載されている。ある追加の製剤は、脂質製剤の開示について参照により全体として本明細書に組み込まれるＡｋｉｎｃ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２６，５６１−５６９（０１  Ｍａｙ  ２００８）に記載されている。
【０３８９】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、１つ以上の化合物および１つ以上の賦形剤を含む。あるこのような実施形態において、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンから選択される。
【０３９０】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、公知の技術、例として、限定されるものではないが、混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、粉末化、乳化、カプセル封入、捕捉または製錠プロセスを使用して調製される。
【０３９１】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、液体（例えば、懸濁液、エリキシル剤および／または液剤）である。あるこのような実施形態において、液体医薬組成物は、当技術分野において公知の成分、例として、限定されるものではないが、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、保存剤、および着色剤を使用して調製される。
【０３９２】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、固体（例えば、散剤、錠剤および／またはカプセル剤）である。あるこのような実施形態において、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む固体医薬組成物は、当技術分野において公知の成分、例として、限定されるものではないが、デンプン、糖、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、および崩壊剤を使用して調製される。
【０３９３】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、デポー製剤として配合される。あるこのようなデポー製剤は、典型的には、非デポー製剤よりも長期作用性である。ある実施形態において、このような製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内）により、または筋肉内注射により投与される。ある実施形態において、デポー製剤は、好適なポリマーもしくは疎水性材料（例えば、許容可能な油中のエマルション）もしくはイオン交換樹脂を使用して、または難溶性誘導体として、例えば、難溶性塩として調製される。
【０３９４】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、送達系を含む。送達系の例としては、限定されるものではないが、リポソームまたはエマルションが挙げられる。ある送達系は、疎水性化合物を含むものを含むある医薬組成物の調製に有用である。ある実施形態において、ある有機溶媒、例えば、ジメチルスルホキシドが使用される。
【０３９５】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、本明細書に提供される１つ以上の化合物を特異的な組織または細胞型に送達するように設計された１つ以上の組織特異的送達分子を含む。例えば、ある実施形態において、医薬組成物は、組織特異的抗体によりコーティングされたリポソームを含む。
【０３９６】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、共溶媒系を含む。あるこのような共溶媒系は、例えば、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、および水相を含む。ある実施形態において、このような共溶媒系は、疎水性化合物に使用される。このような共溶媒系の非現実的な例は、３％ｗ／ｖのベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの非極性界面活性剤Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（商標）および６５％ｗ／ｖのポリエチレングリコール３００を含む絶対エタノールの溶液であるＶＰＤ共溶媒系である。このような共溶媒系の比率は、それらの溶解度および毒性特性を顕著に変えずにかなり変動させることができる。さらに、共溶媒系構成成分のアイデンティティは、変動させることができる：例えば、他の界面活性剤を、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（商標）に代えて使用することができ；ポリエチレングリコールの分画サイズを変動させることができ；他の生体適合性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドンは、ポリエチレングリコールと置き換わり得；他の糖または多糖はデキストローズの代わりになり得る。
【０３９７】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、徐放系を含む。このような徐放系の非現実的な例は、固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスである。ある実施形態において、徐放系は、それらの化学性質に応じて、医薬剤を数時間、数日間、数週間または数ヵ月間の期間にわたり放出させ得る。
【０３９８】
ある実施形態において、本明細書に提供される医薬組成物は、経口投与のために調製される。あるこのような実施形態において、医薬組成物は、修飾オリゴヌクレオチドを含む１つ以上の化合物を、１つ以上の薬学的に許容可能な担体と合わせることにより配合される。あるこのような担体により、対象による経口摂取のための錠剤、ピル剤、糖衣錠、カプセル剤、液体、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁液などとしての医薬組成物の配合が可能となる。ある実施形態において、経口使用のための医薬組成物は、オリゴヌクレオチドおよび１つ以上の固体賦形剤を混合することにより得られる。好適な賦形剤としては、限定されるものではないが、増量剤、例えば、糖、例として、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトール；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、イネデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などが挙げられる。ある実施形態において、このような混合物は任意選択的に粉砕され、助剤が任意選択的に添加される。ある実施形態において、医薬組成物は、錠剤または糖衣錠コアを得るように形成される。ある実施形態において、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸またはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウム）が添加される。
【０３９９】
ある実施形態において、糖衣錠コアには、コーティングが提供される。あるこのような実施形態において、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ｃａｒｂｏｐｏｌゲル、ポリエチレングリコール、および／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに好適な有機溶媒もしくは溶媒混合物を任意選択的に含有し得る濃縮糖溶液を使用することができる。染料または顔料を錠剤または糖衣錠コーティングに添加することができる。
【０４００】
ある実施形態において、経口投与のための医薬組成物は、ゼラチン製のプッシュフィット（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル剤である。あるこのようなプッシュフィットカプセル剤は、１つ以上の増量剤、例えば、ラクトース、結合剤、例えば、デンプン、および／または滑沢剤、例えば、タルクもしくはステアリン酸マグネシウム、および任意選択的に安定剤との混合物の本発明の１つ以上の医薬剤を含む。ある実施形態において、経口投与のための医薬組成物は、ゼラチンおよび可塑剤、例えば、グリセロ−ルまたはソルビトール製の軟質密封カプセル剤である。ある軟質カプセル剤において、本発明の１つ以上の医薬剤は、好適な液体、例えば、脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコール中で溶解または懸濁している。さらに、安定剤を添加することができる。
【０４０１】
ある実施形態において、医薬組成物は、バッカル投与のために調製される。あるこのような医薬組成物は、慣用の様式で配合される錠剤またはトローチ剤である。
【０４０２】
ある実施形態において、医薬組成物は、注射（例えば、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与のために調製される。あるこのような実施形態において、医薬組成物は、担体を含み、水溶液、例えば、水または生理学的に適合性の緩衝液、例えば、ハンクス液、リンガー液、もしくは生理食塩緩衝液中で配合される。ある実施形態において、他の成分が含まれる（例えば、溶解性を補助し、または保存剤として機能する成分）。ある実施形態において、注射用懸濁液は、適切な液体担体、懸濁化剤などを使用して調製される。ある注射用医薬組成物は、単位剤形、例えば、アンプルまたは多用量容器中で提供される。ある注射用医薬組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、液剤またはエマルションであり、配合剤、例えば、懸濁化剤、安定剤および／または分散剤を含有し得る。注射用医薬組成物における使用に好適なある溶媒としては、限定されるものではないが、親油性溶媒および脂肪油、例えば、ゴマ油、合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド、およびリポソームが挙げられる。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、またはデキストランを含有し得る。任意選択的に、このような懸濁液は、好適な安定剤または高濃縮溶液の調製を可能とするために医薬剤の溶解度を増加させる薬剤も含有し得る。
【０４０３】
ある実施形態において、医薬組成物は、経粘膜投与のために調製される。あるこのような実施形態において、障壁の浸透に適切な浸透剤が配合物中で使用される。このような浸透剤は、一般に当技術分野において公知である。
【０４０４】
ある実施形態において、本明細書に提供される１つ以上の修飾オリゴヌクレオチは、プロドラッグとして投与される。ある実施形態において、インビボ投与時、プロドラッグは、生物学的、薬学的または治療的により活性形態のオリゴヌクレオチドに化学的または酵素的に変換される。ある実施形態において、プロドラッグは、それらが対応する活性形態よりも投与が容易であるため、有用である。例えば、ある例において、プロドラッグは、対応する活性形態よりもバイオアベイラブル（例えば、経口投与を介して）であり得る。ある実施形態において、プロドラッグは、細胞膜を越える優れた伝達を有する。ある実施形態において、プロドラッグは、所望の細胞型、組織、または臓器への修飾オリゴヌクレオチドの送達を容易にする。ある実施形態において、プロドラッグは、コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物である。ある例において、プロドラッグは、対応する活性形態と比較して改善された溶解度を有し得る。ある実施形態において、プロドラッグは、対応する活性形態よりも水溶性でない。ある実施形態において、プロドラッグは、エステルである。あるこのような実施形態において、エステルは、投与時にカルボン酸に代謝的に加水分解される。ある例において、カルボン酸を含有する化合物は、対応する活性形態である。ある実施形態において、プロドラッグは、酸基に結合している短鎖ペプチド（ポリアミノ酸）を含む。あるこのような実施形態において、ペプチドは、投与時に開裂されて対応する活性形態を形成する。ある実施形態において、プロドラッグは、活性化合物がインビボ投与時に再生されるように、薬学的に活性な化合物を修飾することにより産生される。プロドラッグは、薬物の代謝安定性もしくは輸送特徴を変えるように、副作用もしくは毒性をマスクするように、薬物の風味を改善するように、または薬物の他の特徴もしくは特性を変えるように設計することができる。インビボの薬力学的プロセスおよび薬物代謝の知識から、当業者は、薬学的に活性な化合物が公知になると、その化合物のプロドラッグを設計することができる（例えば、Ｎｏｇｒａｄｙ（１９８５）Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐａｇｅｓ  ３８８−３９２参照）。
【０４０５】
ある投与経路
ある実施形態において、対象への投与は、非経口投与を含む。ある実施形態において、対象への投与は、静脈内投与を含む。ある実施形態において、対象への投与は、皮下投与を含む。
【０４０６】
ある実施形態において、対象への投与は、動脈内、経肺、経口、経直腸、経粘膜、経腸、腸内、局所、経皮、坐剤、鞘内、脳室内、腹腔内、鼻腔内、眼内、筋肉内、髄内、および腫瘍内投与を含む。
【０４０７】
あるｍｉＲ−１２２キット
本発明はまた、キットを提供する。一部の実施形態において、キットは、本明細書に提供される１つ以上の化合物を含む。一部の実施形態において、本明細書に提供される化合物は、バイアル内に存在する。複数のバイアル、例えば、１０個が、例えば、調剤パック中に存在し得る。一部の実施形態において、バイアルは、シリンジにより利用可能であるように製造される。キットは、本明細書に提供される化合物を使用するための説明書も含有し得る。
【０４０８】
一部の実施形態において、キットは、対象への本明細書に提供される化合物の投与のために使用することができる。このような例において、本明細書に提供される少なくとも１つの化合物を含むことに加え、キットは、以下のもの：シリンジ、アルコール綿棒、綿ボール、および／またはガーゼパッドの１つ以上をさらに含み得る。一部の実施形態において、ｍｉＲ−１２２に相補的である化合物は、バイアル中ではなく、プレフィルドシリンジ（例えば、例として、ニードルガードを有する２７ゲージ、１／２インチ針を有する単回用量シリンジ）中に存在し得る。複数のプレフィルドシリンジ、例えば、１０個が、例えば、調剤パック中に存在し得る。キットは、本明細書に提供される化合物を投与するための説明書も含有し得る。
【０４０９】
ある実験モデル
ある実施形態において、本発明は、本明細書に提供される化合物を実験モデルにおいて使用および／または試験する方法を提供する。当業者は、このような実験モデルを選択および改変して本明細書に提供される化合物を評価することができる。
【０４１０】
抗ｍｉＲ化合物の投与後のマイクロＲＮＡのアンチセンス阻害の効果は、当技術分野において公知の種々の方法により評価することができる。ある実施形態において、これらの方法を使用して細胞または組織中のマイクロＲＮＡレベルをインビトロまたはインビボで定量する。ある実施形態において、マイクロＲＮＡレベルの変化をマイクロアレイ分析により計測する。ある実施形態において、マイクロＲＮＡレベルの変化を、いくつかの市販のＰＣＲアッセイの１つ、例えば、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＭｉｃｒｏＲＮＡ  Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓブランド）により計測する。
【０４１１】
抗ｍｉＲ化合物のインビトロ活性は、ルシフェラーゼ細胞培養アッセイを使用して評価することができる。このアッセイにおいて、マイクロＲＮＡルシフェラーゼセンサ構築物は、ルシフェラーゼ遺伝子に融合している目的マイクロＲＮＡの１つ以上の結合部位を含有するようにエンジニアリングされる。マイクロＲＮＡがルシフェラーゼセンサ構築物中のそのコグネート部位に結合した場合、ルシフェラーゼ発現が抑制される。適切な抗ｍｉＲが細胞中に導入された場合、それは、標的マイクロＲＮＡに結合し、ルシフェラーゼ発現の抑制を緩和させる。したがって、このアッセイにおいて、目的マイクロＲＮＡの有効な阻害剤である抗ｍｉＲは、ルシフェラーゼ発現の増加を引き起こす。
【０４１２】
抗ｍｉＲ化合物の活性は、マイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルを計測することにより評価することができる。マイクロＲＮＡは、１つ以上の標的ＲＮＡ内の相補的部位に結合し、標的ＲＮＡの抑制をもたらし、したがって、マイクロＲＮＡの阻害はマイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡまたはタンパク質のレベルの増加（すなわち、脱抑制）をもたらす。１つ以上の標的ＲＮＡの脱抑制は、インビボまたはインビトロで計測することができる。例えば、ｍｉＲ−１２２の標的は、アルドラーゼＡ（ＡＬＤＯＡ）である。ｍｉＲ−１２２の阻害は、ＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡのレベルの増加をもたらし、したがって、ＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルを使用して抗ｍｉＲ−１２２化合物の阻害活性を評価することができる。
【０４１３】
ＨＣＶ複製に対する抗ｍｉＲ−１２２化合物の効果は、ＨＣＶレプリコンアッセイにおいて計測することができる。このアッセイにおいて、安定ルシフェラーゼレポーターおよび３つの細胞培養適合突然変異（ｌｕｃ−ｕｂｉ−ｎｅｏ／ＥＴ）を有するＨＣＶのサブゲノムレプリコンを含有する細胞系（例えば、ヒト肝癌細胞系）中に化合物を導入する。ルシフェラーゼレポーターは、ＨＣＶ複製の間接的尺度として使用する。使用されるレプリコンは、親ＨＣＶゲノタイプまたは抗ウイルス剤に対して耐性を付与する突然変異を有するＨＣＶゲノタイプであり得る。抗ｍｉＲ−１２２化合物は、単独で、またはＨＣＶ感染の治療において使用される他の薬剤との組合せで評価することができる。一部の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、インビボまたはインビトロアッセイにおいて試験し、続いてコンジュゲートして本明細書に記載の方法において使用される化合物を形成することができる。
【実施例】
【０４１４】
以下の実施例は、本発明の一部の実施形態をより十分に説明するために提供する。しかしながら、これらは、決して本発明の広い範囲を限定するものと解釈すべきでない。当業者は、本発見の基礎原理を容易に適合させ、本発明の趣旨から逸脱せずに種々の化合物を設計する。
【０４１５】
実施例１
抗ｍｉＲ−１２２化合物の設計および評価
ｍｉＲ−１２２の強力な阻害剤を同定するため、多数の抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドを設計および合成した。修飾オリゴヌクレオチドは、長さ、ならびに二環式ヌクレオシドおよび非二環式ヌクレオシドの数、配置、およびアイデンティティが変動した。化合物を多数のアッセイにおいて評価してＨＣＶ感染の治療に好適な治療剤である抗ｍｉＲを同定した。化合物の評価は、反復様式で実施し、高度に活性な化合物を設計変化を介してさらに最適化し、次いで、得られた化合物を追加のスクリーニングに供した。化合物評価プロセスは、効力、安全性、および物理化学的特徴の評価を含んだ。
【０４１６】
合計で、４００個を超える抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドを設計し、最初のルシフェラーゼ細胞培養活性アッセイにおいて試験した。追加のルシフェラーゼアッセイ後、およびある化合物について代謝安定性の計測後、それらの化合物の約７０個をさらなるインビボ試験のために選択した。これらの７０個の化合物のうち、約１０個の化合物が、好適なインビボ効力（例えば、５ｍｇ／ｋｇ未満のＥＤ５０）を有すると同定された。これらの化合物のサブセットは、げっ歯類および非ヒト霊長類においてある安全性プロファイルを有すると同定された。したがって、スクリーニングされた数百個の化合物のうち、最初の４００個を超える化合物の小さいサブセットのみが、ある効力、安全性および物理化学的基準を満たした。
【０４１７】
ある抗ｍｉＲ−１２２化合物を表Ａに示す。「ｍｉＲ−１２２上の位置」は、その欄内のヌクレオシドが、配列番号１の５’末端からカウントして配列番号１に相補的である位置である。
【０４１８】
【表３】
2016518842.tif 000047
【０４１９】
糖部分を以下のとおり示す：下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；下付き文字「Ｌ」が続くヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドを示す。それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を示す。上付き文字「Ｍｅ」は、ヌクレオシドの塩基上の５−メチル基を示す。
【０４２０】
効力
インビトロおよびインビボ効力
インビトロルシフェラーゼアッセイを使用して細胞培養物中のｍｉＲ−１２２の活性を阻害するそれぞれの化合物の能力を計測した。このアッセイにおいて、マイクロＲＮＡルシフェラーゼセンサ構築物は、ルシフェラーゼ遺伝子に融合している複数のｍｉＲ−１２２結合部位を含有するようにエンジニアリングした。ｍｉＲ−１２２がルシフェラーゼセンサ構築物中のその標的部位に結合した場合、ルシフェラーゼ発現は抑制される。活性抗ｍｉＲ−１２２化合物を細胞中に導入した場合、それがｍｉＲ−１２２に結合し、ルシフェラーゼ発現の抑制を緩和させる。したがって、このアッセイにおいて、ｍｉＲ−１２２の有効な阻害剤である抗ｍｉＲ−１２２化合物は、ルシフェラーゼ発現の増加を引き起こす。
【０４２１】
ルシフェラーゼセンサ構築物、およびｍｉＲ−１２２を発現する第２の構築物を、Ｈｅｌａ細胞中に導入した。抗ｍｉＲ−１２２化合物を、いくつかの異なる濃度において細胞中に形質移入した。１００ｎＭ未満のＥＣ５０を有する化合物を追加のルシフェラーゼアッセイに、最初のルシフェラーゼアッセイよりも広い範囲の抗ｍｉＲ濃度において供して活性を確認した。表Ｂに示されるとおり、化合物を２つの別個の実験において試験した。それぞれの化合物についての平均ＥＣ５０を表Ｂに示す。結果は、糖部分またはヌクレオ塩基の変更が、抗ｍｉＲ−１２２化合物のインビトロ効力に影響を及ぼし得ることを実証する。
【０４２２】
【表４】
2016518842.tif 000048
【０４２３】
インビボ効力を測定するため、ある化合物を、ｍｉＲ−１２２活性により通常抑制される遺伝子の肝アルドラーゼＡ（ＡＬＤＯＡ）の発現を脱抑制するそれらの能力について評価した。ｍｉＲ−１２２の阻害は、ＡＬＤＯＡ発現の増加をもたらし、したがって、ＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルを使用してインビボｍｉＲ−１２２阻害活性を計測することができる。化合物をマウスに、表Ｃに示される量の単回用量で投与し、７日後に試験を終了させ、ＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルを定量的ＰＣＲにより肝臓から単離されたＲＮＡ中で計測した。化合物３８９１０を除き、表Ｃのそれぞれの化合物を同一試験において試験した。生理食塩水に対するＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡの変化倍率を算出してインビボ効力を測定した（「ＮＤ」は、「未測定を示す）。
【０４２４】
【表５】
2016518842.tif 000049
【０４２５】
表Ｃにおいて確認することができるとおり、糖部分またはヌクレオ塩基の配置の単一変化は、インビボ効力に対する影響を有し得る。例えば、３８８７２および３８０１１間の差は、ｃＥｔ糖部分の配置のみであるが、００１１のインビボ効力は、３８８７２よりも有意に低く、１０ｍｇ／ｋｇの３８０１１のより高用量においてのみ達成されるＡＬＤＯＡ脱抑制は、化合物３８８７２についての３ｍｇ／ｋｇ用量と比較して同等レベルである。化合物３８０２１は、３８０１６に対してｃＥｔ糖部分に代えてＬＮＡを有し、３８０１６に類似の効力を有し、したがって、この差は効力に影響を及ぼさなかった。この群の化合物のうち、化合物３８０１２、３８０１６、３８０２１および３８８７２が活性化合物として同定された。
【０４２６】
追加の試験を実施してある追加の抗ｍｉＲ−１２２化合物を評価した。これらの試験の結果を表Ｄに示す。化合物３８６４６、３８６４７、３８６４８、３８６４９、３８６５０、３８６５１、および３８６５２を、１つのインビボ試験において一緒に試験し、化合物３８６５９および３８６６０を別のインビボ試験において一緒に試験した。
【０４２７】
【表６】
2016518842.tif 000050
【０４２８】
上記のとおり、これらのデータは、糖部分の配置の単一変化が、インビボ効力に対する実質的な影響を有し得ることを説明する。さらに、インビトロおよびインビボ効力は、必ずしも相関しないことが示される。例えば、化合物３８６５９は低いインビトロ効力を有するが、インビボではｍｉＲ−１２２の極めて強力な阻害剤である。
【０４２９】
抗ｍｉＲ−１２２化合物構造およびインビボ効力の比較により、活性抗ｍｉＲ−１２２の群に共通する１１個のヌクレオシドコア配列が明らかになった。Ｂ−Ｄ−デオキシ糖部分および二環式糖部分が抗ｍｉＲ−１２２ヌクレオチド配列の同一位置に存在するこのコア配列を、表Ｄ−２に強調する。１１個のヌクレオシドコアのヌクレオ塩基配列は、ｍｉＲ−１２２（配列番号１）のヌクレオ塩基２〜１２に相補的である。
【０４３０】
【表７】
2016518842.tif 000051
【０４３１】
これらのデータは、インビボのｍｉＲ−１２２の強力な阻害剤を生じさせるあるコアヌクレオシドパターンの発見を説明する。
【０４３２】
ＨＣＶレプリコン試験
ＨＣＶレプリコンアッセイを使用してＨＣＶ、例として、親ＨＣＶゲノタイプおよび抗ウイルス剤に対する耐性を付与する突然変異を有するＨＣＶゲノタイプの複製を阻害する抗ｍｉＲ−１２２化合物の能力を決定した。化合物３８６４９をこのアッセイにおいて試験してゲノタイプ１ａ（Ｈ７７株）、ゲノタイプ１ｂ、およびゲノタイプ１ｂのいくつかの変異体（Ａ１５６Ｔ、Ａ１５６Ｓ、Ｄ１６８ａ、およびＶ３６Ｍ）のＨＣＶサブゲノムレプリコンの複製を阻害するその能力を決定した。
【０４３３】
このアッセイのため、使用される細胞系は、細胞系ＥＴ、安定なルシフェラーゼレポーターおよび３つの細胞培養適合突然変異を有するＨＣＶのサブゲノムレプリコンを含有するＨｕｈ７ヒト肝癌細胞系（ｌｕｃ−ｕｂｉ−ｎｅｏ／ＥＴ）であった。ルシフェラーゼレポーターは、ＨＣＶ複製の間接的尺度として使用する。ＨＣＶレプリコン抗ウイルス評価アッセイは、それぞれの化合物の６つの半ｌｏｇ濃度において化合物の効果を試験した。ヒトインターフェロンアルファ−２ｂを陽性対照化合物として含めた。ＥＴ系のサブコンフルエント培養物を９６ウェルプレート中にプレーティングし、翌日に抗ｍｉＲ−１２２化合物をカチオン脂質により細胞に形質移入した。細胞が依然としてサブコンフルエントである場合、細胞を７２時間後に処理した。ＨＣＶレプリコンレベルは、ＨＣＶ  ＲＮＡレプリコン由来ルシフェラーゼ活性として評価した。ＥＣ５０（５０％阻害が観察された濃度）をそれぞれのＨＣＶゲノタイプについて算出し、表Ｅに示す。選択指数（ＳＩ５０、ウイルス複製についてのＥＣ５０と、固有の細胞毒性についてのＥＣ５０との比）も算出し、表Ｅに示す。
【０４３４】
【表８】
2016518842.tif 000052
【０４３５】
レプリコンアッセイからの結果は、複数のＨＣＶゲノタイプに対する化合物３８６４９の抗ウイルス活性を実証する。抗ウイルス活性は、アッセイを実施した一定期間（１８日間）持続した。化合物３８６４９の活性は、ＨＣＶ感染を治療するために処方されるあるプロテアーゼ阻害剤に対して耐性であることが公知の突然変異を含むＨＣＶレプリコンに対して同様にロバストである。
【０４３６】
抗ｍｉＲ−１２２の単回投与試験
化合物３８６４９をマウスにおける単回投与試験において試験して作用の発生、最大標的脱抑制、および作用の持続時間を、０．３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｋ／ｋｇの範囲の用量において決定した。この試験からＥＤ５０も算出した。
【０４３７】
抗ｍｉＲ化合物を、５匹のマウスの群に、それぞれ、０．３、１．０、３．０、１０、および３０ｍｇ／ｋｇの用量において腹腔内投与した。０．３および１．０の用量については、動物群を３、７、および２８日目に安楽死させた。３．０、１０および３０ｍｇ／ｋｇの用量については、動物群を３、５、７、１４、２１、および２８３８６４９日目に安楽死させた。肝臓中のＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルは、定量的ＰＣＲにより計測し、生理食塩水処理マウスの肝臓中のＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルと比較してＡＬＤＯＡ発現の変化倍率を算出した。
【０４３８】
図１Ａに示されるとおり、ＡＬＤＯＡ脱抑制は、３日目という早さで観察され、化合物３８６４９の投与後２８日間を超えて維持された。最大標的脱抑制は、１０ｍｇ／ｋｇにおいて達成された。７日目のデータから、６．７ｍｇ／ｋｇのＥＤ５０が算出された（図１Ｂ）。
【０４３９】
物理化学的特徴
物理化学的特徴の評価としては、抗ｍｉＲの溶液があるタイプの非経口投与を介する投与、例えば、皮下投与に好適か否かを決定するための粘度の計測；抗ｍｉＲ−１２２化合物をヒト対象中に投与することができる頻度を推定するための肝臓中の抗ｍｉＲ半減期の算出；およびヌクレアーゼによる開裂に対して感受性であり得る化合物を同定するための代謝安定性アッセイを挙げることができる。
【０４４０】
代謝安定性は、抗ｍｉＲ−１２２化合物を非ヒト霊長類肝臓溶解物とインキュベートすることにより評価した。肝組織ホモジネート中のヌクレアーゼ活性は、ヌクレアーゼ活性に対する公知の耐性を有する化合物、３’−エキソヌクレアーゼ活性に対して感受性である化合物、およびエンドヌクレアーゼ活性に対して感受性である化合物を含む参照オリゴヌクレオチドを使用することにより確認した。内部標準化合物を使用して抽出効率を制御した。０時間および２４時間の時点において、それぞれの試料を高速液体クロマトグラフィー飛行時間型質量分析（ＨＰＬＣ−ＴＯＦ  ＭＳ）に供してオリゴヌクレオチドの長さおよび量を計測した。損失割合は、０時間および２４時間の時点における全長化合物の量を比較することにより決定した。化合物３８６４６、３８６４７、３８６４８、３８６４９、３８６５０、３８６５１、３８６５２、３８６５９、および３８６６０は、２４時間の時点において１０％以下の損失割合を示した。化合物３８０１２は、２４時間の時点において約５０％の損失割合を示した。
【０４４１】
追加の単回投与試験をマウスにおいて実施して化合物３８６４９の半減期を推定した。肝臓中の半減期は、少なくとも２週間であると推定された。
【０４４２】
安全性
種々の安全性パラメータを評価するため、げっ歯類におけるインビボ試験を本明細書に記載のある化合物について実施して化合物が炎症促進応答を誘発する潜在性を評価した。評価されたパラメータは、臓器重量、例えば、脾重量および肝重量の変化、ならびに肝臓中のインターフェロン誘導遺伝子、例えば、ＩＦＩＴおよびＯＡＳＬの発現を含んだ。血清化学物質も評価した。さらに、ある化合物について、安全性パラメータは、非ヒト霊長類において評価し、血液学的エンドポイント、血清化学物質、臓器重量、凝集、補体活性化、サイトカイン／ケモカイン変化、および炎症促進遺伝子発現を含んだ。
【０４４３】
試験化合物が評価された安全性パラメータのうちでいくらかの変動性を示した一方、化合物のいくつか、例として、化合物３８６４９は、特に好適な安全性プロファイルを有することが見出された。
【０４４４】
実施例２
コンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチド
抗ｍｉＲ−１２２修飾オリゴヌクレオチドを、ＧａｌＮＡｃ含有部分にコンジュゲートしてコンジュゲーションがオリゴヌクレオチドの効力を改善するか否かを決定した。
【０４４５】
ＧａｌＮＡｃ含有化合物は、図２の構造を３８６４９修飾オリゴヌクレオチドの３’末端にコンジュゲートすることにより形成した。ＧａｌＮＡｃ含有部分および３８６４９の３’末端間の結合は、表Ｆ−１に示されるとおりに変動した。例えば、化合物３８３６８において、ＧａｌＮＡｃ含有部分は、ホスホジエステル結合を介して３８６４９の３’末端ヌクレオシドに直接結合しており、図３Ｃに示されるとおり、Ｘは、ホスホジエステル結合であり、ＭＯは、化合物３８６４９である。化合物３８４５８において、ＧａｌＮＡｃ含有部分は、β−Ｄ−デオキシヌクレオシドを介して３８６４９の３’末端ヌクレオシドに結合しており、３８６４９の３’末端ヌクレオシド間はホスホロチオエート結合であり、β−Ｄ−デオキシヌクレオシドおよびＧａｌＮＡｃ含有部分間はホスホジエステル結合であり、図３Ａに示されるとおり、Ｘ２は、ホスホロチオエート結合であり、ｍは、１であり、Ｎｍは、β−Ｄ−デオキシヌクレオシドであり、Ｘ１は、ホスホジエステル結合であり、ＭＯは、化合物３８６４９である。
【０４４６】
【表９】
2016518842.tif 000053
【０４４７】
ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを、インビボ効力、ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドからの非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの放出、ならびに肝臓および組織濃度について評価した。
【０４４８】
効力試験は、上記の非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドを評価するために使用されるプロトコルに従って実施した。化合物をマウス中に注射し、７日目においてＡＬＤＯＡの脱抑制を計測することによりインビボ効力を評価した。コンジュゲート化合物の投与量は、投与される修飾オリゴヌクレオチドの投与量を示す。
【０４４９】
図４に示されるとおり、３つの試験ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドのそれぞれは、非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドよりも強力であった。化合物３８３６８および３８３７１は、非コンジュゲート３８６４９に対して約３倍の効力の増加を示した（図４Ａ）。それぞれがβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド結合基を有する化合物３８４５８および３８４５９は、効力の少なくとも１０倍の増加を示した（図４Ｂ）。それぞれが２’−糖修飾結合基を有する化合物３８５９７および３８５９８も、効力の少なくとも１０倍の増加を示した（図４Ｃ）。追加の試験において、最大２０倍の効力増加が化合物３８４５９、３８４５８、３８５９７、および３８５９８について観察された。
【０４５０】
追加の実験を実施してより広い範囲の用量の化合物３８４５９を含めた。化合物３８４５９（ｎ＝６）または化合物３８６４９（ｎ＝３）をマウスに投与し、肝臓中のＡＬＤＯＡレベルおよび血液中のコレステロールレベルを７日後に計測した。平均ＡＬＤＯＡおよびコレステロールレベルを算出し、表Ｆ−２に示す。表Ｆ−２に示されるとおり、単回皮下用量の化合物３８４５９は、ＡＬＤＯＡレベルの増加およびコレステロールレベルの低下について、非コンジュゲート化合物３８６４９に対して効力の増加を示した。この実験において、化合物３８４５９についての算出ＥＤ５０は０．１９ｍｇ／ｋｇであり、化合物３８６４９についての算出ＥＤ５０は３．５ｍｇ／ｋｇ（１８倍の効力差）であった。
【０４５１】
【表１０】
2016518842.tif 000054
【０４５２】
１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇの用量における化合物３８３６８および３８３７１、ならびに０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および３ｍｇ／ｋｇの用量における化合物３８４５８および３８４５９の単回皮下投与７日後の肝および腎組織中の非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの量も計測した。それぞれの試料を高速液体クロマトグラフィー飛行時間型質量分析（ＨＰＬＣ−ＴＯＦ  ＭＳ）に供してオリゴヌクレオチドの長さおよび量を計測した。この方法による定量下限（ＬＬＯＱ）は、０．２〜１．０μｇ／ｇである。
【０４５３】
ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドは、非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの形成の変動速度を有することが見出された。例えば、化合物３８３６８の投与後、１０％未満の化合物３８６４９（非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド）が肝臓中で検出される。化合物３８３７１の投与後、化合物３８６４９は化合物３８３７１のいずれの用量においても肝臓中で検出されなかった。逆に、化合物３８４５９の皮下投与７日後、検出された唯一の非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド種は、非コンジュゲート３８６４９であり；親化合物３８４５９は検出されなかった。化合物３８４５８の投与後、非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドが２つの形態：３８６４９、および３８６４９−ＰＯ−Ａ（化合物３８４５８の代謝産物）で検出された。この代謝産物は、非コンジュゲート３８６４９よりも高いレベルにおいて検出された。
【０４５４】
０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および３ｍｇ／ｋｇの用量における化合物３８４５８および３８４５９の単回皮下投与２４時間後の肝臓中の非コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの量も計測した。抗ｍｉＲレベルは、ＬＣ−ＴＯＦにより計測した。この方法による定量下限（ＬＬＯＱ）は、０．２〜１．０μｇ／ｇである。化合物３８４５９の投与後、肝臓中に存在する総化合物の９０％が非コンジュゲート化合物３８６４９であることが観察された。３８４５８の投与後、肝臓中に存在する総化合物の約４６％が、非コンジュゲート化合物３８６４９であった。したがって、非コンジュゲート化合物３８６４９は、化合物３８４５８よりも急速に化合物３８４５９から放出される。これらのデータは、コンジュゲート化合物の代謝がリンカーおよび修飾オリゴヌクレオチド間の結合により影響されることを示唆する。
【０４５５】
オリゴヌクレオチドは、一般に、腎組織中で最大レベルに蓄積し、次いで肝組織中で蓄積する。非コンジュゲート化合物に対し、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートが腎組織と比較して肝組織中の化合物の蓄積を変更したか否かを決定するため、腎組織中の非コンジュゲート３８６４９の量も計測した。上記のとおり、化合物３８４５９の投与後、肝臓中に見出される総化合物の１００％は、非コンジュゲート３８６４９であり、このことは、ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９からの３８６４９の完全な放出を示す。化合物３８４５９の投与後、化合物３８６４９は、化合物３８６４９の投与後の化合物３８６４９の蓄積に対し、肝臓と比較して腎臓中であまり蓄積しなかった（すなわち、より低い腎臓：肝臓比を示した）。したがって、化合物３８４５９は、非コンジュゲート３８６４９と比較して化合物３８６４９を肝臓に優先的に送達し得る一方、腎臓への送達を最小化する。
【０４５６】
化合物３８４５９についての作用の発生および持続時間は、インビボ試験において評価した。マウス群に、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および３ｍｇ／ｋｇにおける単回皮下（ＳＣ）用量の化合物３８４５９を与えた。追加のマウス群に、１０ｍｇ／ｋｇの用量における化合物３８６４９を投与した。それぞれの処理からの動物群を、１、２、３、４、５、６、１４、２１、２８、および５６日目のそれぞれで安楽死させた。ＲＮＡを肝臓から単離し、ＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルをリアルタイムＰＣＲにより計測した。それぞれの群についての平均ＡＬＤＯＡレベルを算出した。対照群（ＰＢＳ処理）に対する変化倍率を表Ｇに示す。
【０４５７】
【表１１】
2016518842.tif 000055
【０４５８】
表Ｇのデータは、化合物３８４５９、および化合物３８６４９が、化合物の単回投与１日後という早さのＡＬＤＯＡ脱抑制により証明されるとおり、作用の急速な発生を有することを実証する。さらに、ＡＬＤＯＡ脱抑制は、化合物の単回投与後少なくとも８週間維持される。
【０４５９】
これらのデータは、非コンジュゲート３８６４９化合物よりも少なくとも１０倍強力であるＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９が、有意に低い肝組織濃度においてこの効力を達成し、肝組織に優先的に送達されることを実証する。さらに、化合物３８４５９は、作用の急速な発生、および少なくとも８週間の作用の持続時間を示す。
【０４６０】
表Ｈに示されるＬＮＡ含有非コンジュゲートおよびコンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドも試験した。
【０４６１】
【表１２】
2016518842.tif 000056
【０４６２】
糖および結合部分を以下のとおり示す：下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；下付き文字「Ｌ」が続くヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドを示し；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０４６３】
化合物３６８４８および３６８５２を、上記と同一のプロトコルに従ってインビボ効力について試験してｍｉＲ−１２２活性を阻害し、ＡＬＤＯＡ発現を増加させる化合物の能力を評価した。それぞれの化合物はｍｉＲ−１２２の強力な阻害剤であった一方、ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３６８５２は、非コンジュゲート化合物３６８４８よりも大きい効力を示した（約３倍大きい）。
【０４６４】
化合物３６６３２も、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、および１０．０ｍｇ／ｋｇの用量における上記と同様のプロトコル後の単回用量投与試験におけるインビボ効力について試験した。化合物３６６３２は、それぞれ、ＰＢＳ処理対照に対して１．６、２．７、３．７、４．３、４．７、６．０のＡＬＤＯＡ発現の増加倍率を実証した。１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、および１０ｍｇ／ｋｇの用量における化合物３６８４８は、それぞれ、１．６、２．５、および５．３のＡＬＤＯＡ発現の増加倍率をもたらした。化合物３６６３２と化合物３６８４８との比較により、非コンジュゲート化合物に対してコンジュゲート化合物について約３０倍の効力の増加が明らかになった。
【０４６５】
実施例３
ＨＣＶ感染のマウスモデル
宿主−病原体特異性に起因して、ＨＣＶは、ヒトおよびチンパンジーにのみ感染し得る。したがって、実験的インビボ試験に典型的に使用されるより小型の種、例えば、マウスを、ＨＣＶ感染の治療のための候補薬剤の試験のためにＨＣＶにより感染させることができない。この問題に対処するため、ヒト肝臓キメラマウスモデルを利用することができる（例えば、Ｂｉｓｓｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳ  Ａ，２００７，１０４：２０５０７−２０５１１；Ｂｉｓｓｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．，２０１０，１２０：９２４−９３０参照）。このモデルにおいて、免疫不全マウスの肝臓をヒト肝細胞により再増殖させ、肝細胞のほとんどがヒト肝細胞であるキメラ肝をもたらす。次いで、マウスをＨＣＶにより感染させ、抗ＨＣＶ剤により処理する。このマウスモデルは、例えば、ＰｈｏｅｎｉｘＢｉｏから市販されている。
【０４６６】
抗ｍｉＲ−１２２化合物を、ＨＣＶに感染したヒトキメラ肝を有するマウスにおいて試験する。動物群（ｎ＝５〜１０）は、１つ以上の用量の抗ｍｉＲ−１２２化合物を、例えば、治療レジメン試験から同定された用量において受けた。薬物動態分析およびＨＣＶ  ＲＮＡレベルの計測のため、血漿を種々の時点において回収する。試験を終了させる場合、肝組織を回収する。
【０４６７】
一部の実施形態において、ｍｉＲ−１２２の阻害は、ヒトＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルを計測することにより確認する。抗ｍｉＲ−１２２化合物の投与がマウスの血清中のＨＣＶ  ＲＮＡレベルを低減させることが予測される。
【０４６８】
実施例４
ｍｉＲ−１２２阻害に応答するＨＣＶ  ＲＮＡレベルの低減
ヒトキメラマウス肝モデルを使用してｍｉＲ−１２２標的遺伝子発現およびＨＣＶウイルスタイターに対するｍｉＲ−１２２阻害の効果を評価した。
【０４６９】
ヒトキメラ肝マウス
標的遺伝子発現に対するｍｉＲ−１２２阻害の効果は、ＨＣＶ感染を有さないヒトキメラ肝マウスにおいて評価した。マウス群（ｎ＝６）を、単回用量のＰＢＳ、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの化合物３８４５９により処理した。処理７日後、試験を終了させ、ＡＬＤＯＡ発現および化合物組織濃度の計測のために肝組織を回収した。ＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルは、ＰＢＳ処理マウスにおけるＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルに対して増加したが、ＡＬＤＯＡ発現の脱抑制は、野生型マウスにおいて観察されたものよりも３倍から５倍低かった。化合物３８４５９レベルは、野生型マウスにおける濃度に対してキメラ肝マウスにおいて約３倍低かった。これらの観察は、野生型マウスに対するヒトキメラ肝マウスにおけるアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）の発現の低減と一致する。肝細胞中の化合物の蓄積はＡＳＧＰＲによる取り込みに依存するため、ＡＳＧＰＲの発現の低減は、ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチドの蓄積の低減をもたらし、結果的にｍｉＲ−１２２の内因性標的、例えば、ＡＬＤＯＡを脱抑制する化合物３８４５９の能力に対する感受性の低減をもたらすことが予測される。したがって、ヒトキメラ肝マウスモデルは、ＡＳＧＰＲ発現が維持される対象における化合物３８４５９の活性を過少評価し得る。予備データは、ＡＳＧＰＲ発現が非ＨＣＶ感染対象の肝臓に対してＨＣＶ感染患者の肝臓において類似レベルにおいて維持されることを示唆する。
【０４７０】
ＨＣＶ感染ヒトキメラ肝マウスの処理
抗ｍｉＲ−１２２化合物を、ＨＣＶ感染のヒトキメラ肝マウスモデルにおいて試験した。免疫不全マウスの肝臓を、ヒト肝細胞により再増殖させ、肝細胞のほとんどがヒト肝細胞であるキメラ肝をもたらした。ＨＣＶゲノタイプ１ａの接種約３．５週間後、＞１×１０６コピー／ｍｌのＨＣＶ  ＲＮＡレベルを有するマウスをこの試験に含めるために選択した（−７日目）。
【０４７１】
１週間の試験のため、３匹の動物群を、０日目に単回１０ｍｇ／ｋｇ用量の３８４５９により処理した。血液を−７、０、３、および７日目に回収した。試験を７日目に終了させ、そのとき、血液に加えて肝組織および腎組織を回収した。この試験において、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルは３および７日目において低減した。
【０４７２】
複数週の試験のため、５匹の動物群を、それぞれ、以下のとおり処理した：ＰＢＳ（ｎ＝５）；３ｍｇ／ｋｇの３８４５９（ｎ＝５）；１０ｍｇ／ｋｇの３８４５９（ｎ＝４〜５）；または３０ｍｇ／ｋｇの３８４５９（ｎ＝４〜５）。追加の動物群を、１０ｍｇ／ｋｇの非コンジュゲート化合物３６８４８（ｎ＝５）により処理した。処理は、０日目に単回皮下注射として施した。血液を、−７、０、３、７、１０、１４、１７、２１、２４、２８、および３５日目に回収した。血液中のＨＣＶ  ＲＮＡレベルを、定型的方法に従ってリアルタイムＰＣＲにより計測し、表Ｉに示す。特に記載のない限り、それぞれの処理群は、５匹の動物を含有した。表Ｉに示されるとおり、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルは、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇの化合物３８４５９により処理された群において３日目という早さで有意に低減し、この低減は、少なくとも３５日目まで持続した。統計的有意性を、ＰＢＳ処理動物における平均ＨＣＶ  ＲＮＡレベルに正規化された化合物処理動物における平均ＨＣＶ  ＲＮＡレベルの二元ＡＮＯＶＡ分析により算出した。この試験において、非コンジュゲート化合物３６８４８は、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルを低減させなかった。これらの結果を図５Ａにもグラフ形式で説明する。
【０４７３】
【表１３】
2016518842.tif 000057
【０４７４】
これらの結果は、ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート修飾オリゴヌクレオチド３８４５９の単回投与後、ＨＣＶウイルスタイターがＨＣＶ感染動物において有意に低減し、作用の発生が早期であり、持続時間が持続したことを実証する。
【０４７５】
追加の試験を実施し、マウスがＨＣＶゲノタイプ３ａに感染しているＨＣＶ感染のヒトキメラ肝マウスモデルにおける化合物３８４５９の効果を評価した。５匹の動物群を、それぞれ、以下のとおり処理した：ＰＢＳ（ｎ＝４）；１０ｍｇ／ｋｇの３８４５９（ｎ＝５）；または３０ｍｇ／ｋｇの３８４５９（ｎ＝５）。マウスにＨＣＶゲノタイプ３ａを接種した。処理の７日前、ウイルスタイターの計測のために血液をマウスから回収した。処理は、０日目に単回皮下注射として施した。血液を処理後０、３、７、１０、１４、１７、２１、２４、および２８日目に回収した。血液中のＨＣＶ  ＲＮＡレベルを定型的方法に従ってリアルタイムＰＣＲにより計測した。図５Ｂに示されるとおり、ＨＣＶ  ＲＮＡレベルは、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇの化合物３８４５９により処理された群において３日目という早さで有意に低減し、この低減は、少なくとも２８日目まで持続した。
【０４７６】
化合物３８４５９により処理されたマウスの肝臓中の肥満症の実質的な低減も観察された。肥満症の低減は、ＨＣＶに感染しているマウス、および非感染マウスにおいて観察され、このことは、ｍｉＲ−１２２の阻害がＨＣＶ感染の存在および不存在下の両方において肥満症を低減させ得ることを示唆する。
【０４７７】
実施例５
コンジュゲート短鎖修飾オリゴヌクレオチド
ＧａｌＮＡｃ含有化合物を、図３の構造を表Ｊに示される修飾オリゴヌクレオチドの３’末端にコンジュゲートすることにより形成した。糖部分、ヌクレオシド間結合、およびヌクレオ塩基を以下のとおり示す：下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
【０４７８】
【表１４】
2016518842.tif 000058
【０４７９】
インビボ効力を決定するため、化合物を、肝アルドラーゼＡ（ＡＬＤＯＡ）の発現を脱抑制するそれらの能力について評価した。化合物をマウスに投与し、ＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルを定量的ＰＣＲにより肝臓から単離されたＲＮＡにおいて計測した。生理食塩水に対するＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡの変化倍率を算出してインビボ効力を決定した（図６Ａおよび６Ｂならびに７Ａおよび７Ｂ）。それらの実験の結果から算出されたＥＤ５０（ＡＬＤＯＡ脱抑制が最大の５０％である化合物の濃度）およびＥＤ９０（ＡＬＤＯＡ脱抑制が最大の９０％である化合物の濃度）を、表ＫおよびＬに示す。
【０４８０】
【表１５】
2016518842.tif 000059
【０４８１】
【表１６】
2016518842.tif 000060
【０４８２】
表Ｋに示されるとおり、本発明によるＧａｌＮＡｃコンジュゲーションは、８ｍｅｒの抗ｍｉＲ−１２２化合物のＥＤ５０およびＥＤ９０を少なくとも１００倍だけ改善した。表Ｌに示されるとおり、本発明によるＧａｌＮＡｃコンジュゲーションは、１３ｍｅｒの抗ｍｉＲ−１２２化合物のＥＤ５０およびＥＤ９０を少なくとも１０倍だけ改善した。
【０４８３】
別のｍｉＲ−１２２標的遺伝子、ＣＤ３２０の脱抑制も、化合物３８６３４および３８９９８について決定した。結果は、表Ｋに示されるＡＬＤＯＡについて得られた結果と同様であった：本発明によるＧａｌＮＡｃコンジュゲーションは、実験１および２においてそれぞれＥＤ５０を３４３倍および２７２倍だけを改善し、実験１および２においてそれぞれＥＤ９０を４９２倍および５４５倍だけ改善した。
【０４８４】
本明細書に記載のＧａｌＮＡｃコンジュゲーションは、コレステロール低下効力も改善し、これは、ＧａｌＮＡｃを含む化合物についても観察された。実験１からの例示的な結果を図８Ａおよび８Ｂに示す。ＧａｌＮＡｃコンジュゲートである化合物３８６３３および３８６３４は、ＧａｌＮＡｃを欠く化合物３８５９１および３８９９８よりも強力であった。同様の結果が実験２について得られた（データ示さず）。
【０４８５】
実施例６
非ヒト霊長類における抗ｍｉＲ−１２２化合物の薬力学的活性
抗ｍｉＲ−１２２化合物を、正常非ヒト霊長類（カニクイザル）において試験した。単回用量のＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９または非コンジュゲート化合物３８６４９を、皮下投与した（それぞれの化合物についてｎ＝３）。ＰＢＳを対照処理（ｎ＝５）として投与した。化合物の投与後４日目および８日目、肝組織を回収し、ＡＬＤＯＡレベルの計測のためにＲＮＡを単離した。血液中の総コレステロールを８日目に計測した。表Ｌに示されるとおり、ＡＬＤＯＡ脱抑制は、それぞれの化合物３８４５９の用量、例として、１ｍｇ／ｋｇの最低用量において４日目および８日目に観察される。コレステロール低下も、最低用量の化合物３８４５９について観察された。したがって、ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９は、非コンジュゲート化合物３８６４９に対して非ヒト霊長類において有意に強力である。さらに、両方の化合物は、非ヒト霊長類における単回投与後少なくとも１週間の作用の持続時間を有する。
【０４８６】
【表１７】
2016518842.tif 000061
【０４８７】
実施例７
コンジュゲート抗ｍｉＲ−１２２化合物の薬物動態活性
抗ｍｉＲ−１２２化合物の血漿および組織薬物動態を、マウスおよび非ヒト霊長類において評価した。
【０４８８】
単回皮下用量の化合物３８６４９またはＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９を、ＣＤ−１マウスに投与した。投与後の２４時間の期間にわたり複数の時点において血液を回収し、血液中の化合物の総量をハイブリダイゼーションベースＥＬＩＳＡにより計測した。
【０４８９】
単回皮下用量の化合物３８６４９またはＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９を、非ヒト霊長類に投与した。投与後の２４時間の期間にわたり複数の時点において血液を回収し、血液中の化合物の総量をＬＣ−ＭＳにより計測した。
【０４９０】
図９に示されるとおり、マウス（図９Ａ）および非ヒト霊長類（図９Ｂ）において、ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９は、非コンジュゲート化合物３８６４９と比較して急速に血漿からクリアランスされる。ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９の投与後、非コンジュゲート化合物３８６４９は検出されず、このことは、コンジュゲート化合物３８４５９が血液中で代謝されないことを示す（データ示さず）。
【０４９１】
この試験において、化合物の組織レベルを、マウス（表Ｍ）および非ヒト霊長類（表Ｎ）の肝臓および腎臓中でも計測した。
【０４９２】
【表１８】
2016518842.tif 000062
【０４９３】
【表１９】
2016518842.tif 000063
【０４９４】
投与後、化合物３８４５９は、肝臓および腎臓中で非コンジュゲート化合物３８６４９に急速に代謝される。さらに、上記のマウス試験からのデータと一致して、化合物３８４５９の腎臓肝臓比は、化合物３８６４９よりも有意に低い。
【０４９５】
投与２４時間後の肝臓中の化合物の濃度に基づき、約６μｇ／ｇのＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９および約３０μｇ／ｇの非コンジュゲート化合物３８４５９が、７日目に９０％の最大効力（ＡＬＤＯＡ脱抑制により計測）をもたらすことが推定された。したがって、化合物３８４５９は、非コンジュゲート化合物３８６４９に対して低い肝組織濃度において大きい効力をもたらす。
【０４９６】
これらのデータは、非ヒト霊長類およびマウスにおいて、ＧａｌＮＡｃ含有部分へのコンジュゲーションが肝臓への修飾オリゴヌクレオチドの送達の有意な向上をもたらすことを実証する。さらに、より低い腎臓肝臓比と結びつけられる低いＥＤ５０は、ＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９が高い治療指数を有し得ることを示唆する。
【０４９７】
実施例８
抗ｍｉＲ−１２２化合物の毒性学および安全性試験
複数の試験をマウス、げっ歯類および非ヒト霊長類において実施してＧａｌＮＡｃ−コンジュゲート化合物３８４５９の安全性および忍容性を評価した。
【０４９８】
例えば、化合物３８４５９を、ラットにおける炎症促進試験において評価した。雄Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに単回皮下用量の化合物３８４５９を投与した。投与後１４日目、ＡＬＤＯＡおよびＣＸＣＬ１３（インターフェロン誘導遺伝子）の発現を肝臓中で計測した。
【０４９９】
表Ｏに示されるとおり、ＣＸＣＬ１３発現の増加は１００ｍｇ／ｋｇという高い用量において検出されなかった一方、ＡＬＤＯＡレベルは、１ｍｇ／ｋｇの用量において開始して上昇した。公知の炎症抗ｍｉＲ−１２２化合物も試験し、１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇの用量における２〜２．５倍のＣＸＣＬ１３レベルの増加をもたらした。
【０５００】
【表２０】
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【０５０１】
追加の毒性学試験をマウスおよび非ヒト霊長類（カニクイザル）において実施し、治療関連用量において有意な有害効果は観察されなかった。
【０５０２】
実施例９
コンジュゲート短鎖修飾オリゴヌクレオチド
コレステロール含有化合物を、コレステロールを表Ｐに示される修飾オリゴヌクレオチドの３’末端にコンジュゲートすることにより形成した。糖部分、ヌクレオシド間結合、およびヌクレオ塩基を以下のとおり示す：下付き文字が続かないヌクレオシドは、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；下付き文字「Ｓ」が続くヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；それぞれのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合であり、但し、ホスホジエステル結合である下付き文字（Ｏ）により示されるヌクレオシド間結合を除く。
【０５０３】
【表２１】
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【０５０４】
インビボ効力を決定するため、化合物を、肝アルドラーゼＡ（ＡＬＤＯＡ）の発現を脱抑制するそれらの能力について評価した。化合物をマウスに投与し、ＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡレベルを定量的ＰＣＲにより肝臓から単離されたＲＮＡにおいて計測した。生理食塩水に対するＡＬＤＯＡ  ｍＲＮＡの変化倍率を算出してインビボ効力を決定した。それらの実験の結果から算出されたＥＤ５０（ＡＬＤＯＡ脱抑制が最大の５０％である化合物の濃度）およびＥＤ９０（ＡＬＤＯＡ脱抑制が最大の９０％である化合物の濃度）を、表Ｑに示す。
【０５０５】
【表２２】
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【０５０６】
表Ｑに示されるとおり、本発明によるコレステロールコンジュゲーションは、８ｍｅｒの抗ｍｉＲ−１２２化合物のＥＤ５０およびＥＤ９０を少なくとも３０倍だけ改善した。
【０５０７】
別のｍｉＲ−１２２標的遺伝子、ＣＤ３２０の脱抑制も、化合物３８０７０および３８９９８について決定した。結果は、ＡＬＤＯＡについて得られた結果と同様であった（データ示さず）。
【０５０８】
本明細書に記載のコレステロールコンジュゲーションは、コレステロール低下効力も改善した。ほとんどの試験濃度において、化合物３８０７０は、コレステロールを同一濃度の化合物３８９９８よりも大きい程度で低減させた（データ示さず）。
【０５０９】
本明細書に記載のものに加え、本発明の種々の改変形態は、上記説明から当業者に明らかである。このような改変形態も、添付の特許請求の範囲の範囲内であるものとする。本出願において引用されるそれぞれの参照文献（例として、限定されるものではないが、雑誌論文、米国および非米国特許、特許出願公開、国際特許出願公開、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）寄託番号など）は、参照により全体として本明細書に具体的に組み込まれる。
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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