(57)【要約】  本発明は、単量体（＋）−カテキンと、少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸の誘導体の化合物を含んでなる胃腸組成物であって、前記化合物が、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸またはその誘導体に対する前記単量体（＋）−カテキンのモル当量比が１：１〜１：２．５、好ましくは１：１〜１：２である錯体の形態である経口投与用胃腸組成物に関する。
2016518423.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸の化合物を含んでなる経口投与用胃腸組成物であって、前記化合物が錯体の形態であり、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体に対する前記単量体（＋）−カテキンのモル当量比が１：１〜１：２．５であることを特徴とする、経口投与用胃腸組成物。
【請求項２】
前記モル当量比が１：１以上、特に１：１を超える、請求項１に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項３】
前記比が１：２．５以下、特に１：２．５未満である、請求項１に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項４】
前記モル当量比が１：２以下、より詳細には１：２未満である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項５】
前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸が、天然または合成起源のリジンまたはアルギニン、またはその２つの混合物である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項６】
前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸がリジンである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項７】
前記錯体が前記錯体の塩の形態であり、前記塩が前記錯体を含んでなり、前記錯体が少なくとも１つの酸に由来する少なくとも１つのプロトンおよび前記少なくとも１つの酸に由来する少なくとも１つのアニオンを含んでなり、前記塩が塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸誘導体の量に対して等モル量で前記プロトンを呈することを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項８】
前記酸がアスコルビン酸、酢酸、クエン酸、および塩酸から選ばれる、請求項７に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項９】
前記酸がアスコルビン酸である、請求項７または８に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１０】
１つ以上の生体適合性賦形剤を含んでなることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１１】
（＋）−カテキンと前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸の誘導体の錯体の含有量が、前記組成物の全体重量に対して重量で１５％〜９５％、好ましくは６０％〜９０％、有利には６５％〜８５％である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１２】
固体形態、特に粉末、錠剤、またはロゼンジの形態である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１３】
同時使用のための組み合わせ製剤として、前記錯体または該錯体の前記塩の前駆体として単量体（＋）−カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体、および随意に少なくとも１つの酸を含んでなる請求項９に記載の経口投与用胃腸組成物であって、前記錯体が経口投与後に形成され、前記単量体（＋）−カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体が、１：１〜１：２．５、好ましくは１：１以上、特に１：１を超える、好ましくは１：２．５以下、特に１：２．５未満、より詳細には１：２以下、より詳細には１：２未満のモル当量比で存在する経口投与用胃腸組成物。
【請求項１４】
水相溶液での同時使用のための組み合わせ製剤として、前記錯体または該錯体の前記塩の前駆体として単量体（＋）−カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体、および随意に少なくとも１つの酸を含んでなる請求項９に記載の経口投与用胃腸組成物であって、前記錯体が経口投与前に形成され、前記単量体（＋）−カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体が、１：１〜１：２．５、好ましくは１：１以上、特に１：１を超える、好ましくは１：２．５以下、特に１：２．５未満、より詳細には１：２以下、より詳細には１：２未満のモル当量比で存在する経口投与用胃腸組成物。
【請求項１５】
液体状の請求項１〜１１のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１６】
０．０１モル濃度溶液中で２５℃において、ｐＨが３以上、好ましくは４〜１１、有利には４．５〜９であることを特徴とする、請求項１０に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１７】
がん、好ましくは肝細胞がんの予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１８】
白血病の予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１６に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項１９】
骨髄腫の予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１６に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項２０】
リンパ腫の予防的治療および／または治療的処置のための請求項１６に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項２１】
肝がん、前立腺がん、乳がん、子宮がん、精巣がん、膀胱がん、腎がん、肺がん、気管支がん、骨がん、口がん、食道がん、胃がん、膵がん、および結腸直腸がんの予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１６に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項２２】
抗炎症性疾患の予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項２３】
関節症の予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項２４】
コラーゲン欠乏症の予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項２５】
コラーゲンおよび／またはエラスチンが  である、骨形成不全症、マルファン症、エーラス・ダンロス疾、皮膚弛緩症、全身性強皮症、およびその他膠原病などの結合組織遺伝子疾患の予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項２６】
消化性潰瘍およびまた消化管アレルギーの予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【請求項２７】
細胞老化の予防的治療および／または治療的処置のための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の経口投与用胃腸組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸の化合物を含んでなる、哺乳類、特にヒトを対象とする経口投与用胃腸組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリフェノール類は植物界に広く存在する有機分子のファミリーを構成する。その名称が示すように、ポリフェノール類は一般に高分子量の構造に結合した数個のフェノール基の存在を特徴とする。これらの化合物は植物の二次代謝産物である。
【０００３】
特に、（＋）−カテキンはその単量体の形態で、ガンビールノキ（Uncaria gambir）抽出物から直接得られる。
【０００４】
そのような組成物は、例えば結合組織の変性型の慢性疾患の治療という文脈において、文献米国特許第４２８５９６４号から既に知られている。ヒトにおいて最も周知で最も良く見られるものを含むこれらの変性疾患には、例えば、関節症、軟骨軟化症、および歯周疾患がある。
【０００５】
文献米国特許第４２８５９６４号によれば、単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸の化合物を含んでなる組成物は、活性物質が単量体（＋）−カテキンである薬剤である。
【０００６】
さらにこの文献は、これらの疾患を治療することが可能であるために、この化合物を、活性物質が作用しなければならない部位、つまり疾患に冒された関節に投与できることが重要なことを開示する。
【０００７】
したがって、特許米国特許第４２８５９６４号の主要な目的は、体内に、例えば関節に注射できる注射可能組成物を形成することである。
【０００８】
この目的はさらに厳密には特徴付けられていない単量体（＋）−カテキンの複塩の形成によって達成され、注射可能形態であることを目的として（＋）−カテキンを生理学的ｐＨで水性媒質に可溶にするために、その複塩は（＋）−カテキン、リジンおよび塩酸の等モルの混合物であるので、酸の添加はこの複塩の溶解度を調節し、複塩のｐＨを生理的な値（ｐＨ＝７．２〜７．４）に調整することを可能にする。
【０００９】
確かに、この文献は、（＋）−カテキンが、Ｌ−アルギニンまたはＬ−リジンなどの塩基性アミノ酸および酸、例えばＨＣｌの存在下で複塩を形成する際、前記カテキンの水溶液（生理学的ｐＨでの水など）への溶解度が高く、最高で４００ｇ／Ｌであることを示している。
【００１０】
この水性媒質への溶解度の向上は、水への溶解度が１ｇ／Ｌに制限される純粋な単量体（＋）−カテキンの使用と比べて、非経口型の投与に有利である。
【００１１】
ちなみに文献米国特許第４２８５９６４号は、注射可能な組成物を乾燥させることによって経口製剤を得るために前記注射可能な組成物を推定する。
【００１２】
しかし、この文献は上記経口組成物の安定性および生体内器官による取り込み能に関してなにも示していない。
【００１３】
それ故に、現在の先行技術に照らして、経口投与後に吸収可能で、摂取後に安定した状態を保つ単量体（＋）−カテキンに基づく経口投与用胃腸組成物が必要である。
【発明の概要】
【００１４】
このために、本発明は、前記化合物が錯体の形態であり、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体もしくは前駆体に対する前記単量体（＋）−カテキンのモル当量比が１：１〜１：２．５であることを特徴とする組成物（以下［Ｃ：ＡＡ／１：１−１：２．５］錯体と呼び、Ｃは単量体（＋）−カテキン、およびＡＡは塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸誘導体もしくは前駆体を表す）を提供する。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
確かに本発明の文脈で注目すべきは、まったくもって驚いたことに、単量体（＋）−カテキンと、少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体もしくは前駆体とが１：１〜１：２．５の特定のモル当量比である錯体が、摂取後に安定した状態を保ち、高い経口投与後バイオアベイラビリティーをもつことである。この高い経口投与後バイオアベイラビリティーは、本発明に係る錯体の生体内安定性によって可能になる。
【００１６】
実際、単量体（＋）−カテキンに結合した前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸の存在により、錯体が容易に腸壁を通過でき、したがってその結果、血中の遊離単量体（＋）−カテキンの割合がより高くなると考えられる。
【００１７】
本発明の文脈に提示された結果に基づいて、経口で投与された場合、１グラムの錯体の形態での単量体（＋）−カテキンの高いバイオアベイラビリティーは、ヒトにおいて少なくとも９００ｎｇ時／ｍＬ（５４０００ｎｇ分／ｍＬ）の値に達することが観察される。本発明の結果に照らして、「ヒトにおける高いバイオアベイラビリティー」という用語はしたがって、１グラムの経口投与に対して９００ｎｇ時／ｍＬ（５４０００ｎｇ分／ｍＬ）に少なくとも等しいバイオアベイラビリティーを意味することを意図する。
【００１８】
本特許出願の発明者らによって得られた結果は、単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸のモル当量比が１：１〜１：２．５の錯体の形態で摂取された、１グラムの（＋）−カテキンについてヒトで測定されるバイオアベイラビリティーは、少なくとも９００ｎｇ時／ｍＬ（５４０００ｎｇ分／ｍＬ）であることを示す。
【００１９】
例示として、ヒトにおいて経口で投与された場合、単量体（＋）−カテキンの錯体の形態で摂取された（＋）−カテキンのバイオアベイラビリティー［１．５ｇの錯体の形態で摂取された０．９２０ｇの単量体（＋）−カテキンに対して１２６３±８８ｎｇ時／ｍＬ（７５７８０ｎｇ分／ｍＬ）］は、単独で摂取された単量体（＋）−カテキンのバイオアベイラビリティー［０．９２０ｇの純粋な単量体（＋）−カテキンの経口摂取の相当量に対して８３２±１５０ｎｇ時／ｍＬ（４９９２０ｎｇ分／ｍＬ）］より高く、すなわち、錯体のおかげでバイオアベイラビリティーが＋５２％増加することが本発明の文脈で観察される。
【００２０】
純粋な単量体（＋）−カテキンは、その水への溶解度が、少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸の誘導体もしくは前駆体と形成した錯体の形態で溶解した場合に測定される溶解度よりも４００倍低いことが本発明の文脈で示されているので、この特徴はなおいっそう予期せぬものである。
【００２１】
確かに、（＋）−カテキンのリジン塩の溶解度は、２０℃で水１リットル当たり４００ｇに達する一方で、（＋）−カテキン自体は同一条件下で１リットル当たり０．９ｇの溶解度を示す。
【００２２】
本発明に係る組成物が高い経口投与後バイオアベイラビリティーを有することを考えれば、後者は少ない投与量での吸収を可能にし、それは一方で、より少ない投与量が吸収されるはずなので治療コストの点での利益の観点、他方では、単量体（＋）−カテキンが、たとえ体内で概ね耐容性であっても、ということが知られていることを考えれば、この治療に伴う副作用、特に長期治療に関連する副作用の減少を構成する。
【００２３】
くわえて、以下が観察されている：
−［Ｃ：ＡＡ／１：１−１：２．５］錯体の形態で経口投与された（＋）−カテキンの使用により、遊離単量体（＋）−カテキンの最高血漿濃度、ｃ（ｍａｘ）は、同一条件下で摂取された同一投与量の純粋な単量体（＋）−カテキンで得られたｃ（ｍａｘ）と比較して２倍を超え、そのまま摂取された１ｇの単量体（＋）−カテキンに対してｃ（ｍａｘ）が２８０ｎｇ／ｍＬであるのに比べて、錯体の形態で摂取された１ｇの（＋）−カテキンに対して５７１ｎｇ／ｍＬであり、つまり＋１０３％の増加である；
−その２倍を超える最高血漿濃度は、（＋）−カテキンが単量体（＋）−カテキン単独の形態よりむしろ［Ｃ：ＡＡ／１：１−１：２．５］錯体の形態で摂取されたときに、２倍を超えて速く［Ｔ（ｍａｘ）］に達し、Ｔ（ｍａｘ）は８０分に対して３０分であり、つまり＋１６６％の増加である。
【００２４】
よって、本発明に係る錯体の高い経口バイオアベイラビリティーに加えて、経口投与後吸収の場合に血中の遊離単量体（＋）−カテキンの割合は遅延して維持されるので、単量体（＋）−カテキンが経口で投与された際、その治療的処置および／または予防的治療の向上が想定可能になることもまた本願では示される。
【００２５】
好ましくは、前記モル当量比は１：１以上、特に１：１を超える。
【００２６】
有利には、前記モル当量比は１：２．５以下である。
【００２７】
特に、前記モル当量比は１：２．５未満、より詳細には１：２以下である。
【００２８】
優先的には、前記モル当量比は１：２未満である。
【００２９】
代替的には、モル当量比は１：１．５〜１：２．５、好ましくは１：１．５〜１：２である。
【００３０】
有利には、前記モル当量比は１．００：１．００以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００３１】
非常に有利には、前記モル当量比は１．００：１．００以上であり、かつ１．００：１．５０以下である。
【００３２】
好ましくは、前記モル当量比は１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．００以下である。
【００３３】
好ましくは、前記モル当量比は１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００３４】
好ましくは、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸はリジンである。
【００３５】
１つの本発明の優先的な実施形態では、前記錯体は１分子の単量体（＋）−カテキンに対して１分子のリジンを含んでなる錯体である。
【００３６】
１つの本発明の有利な実施形態では、前記錯体は１分子の単量体（＋）−カテキンに対して１分子のアルギニンを含んでなる錯体である。
【００３７】
１つの本発明の特定の実施形態では、前記錯体は１分子の単量体（＋）−カテキンに対して２分子のリジンを含んでなる錯体である。
【００３８】
（＋）−カテキンと２つのリジンの錯体は、すべての実験において、経口で投与した場合に単量体（＋）−カテキンのバイオアベイラビリティーを向上する断然最良の組み合わせである。
【００３９】
別の特定の実施形態では、前記錯体は１分子の単量体（＋）−カテキンに対して２分子のアルギニンを含んでなる錯体である。
【００４０】
別の優先的な形態では、前記錯体は１分子の単量体（＋）−カテキンに対して１分子のリジンおよび１分子のアルギニンを含んでなる錯体である。
【００４１】
好ましくは、本発明に係る組成物は前記錯体の塩の形態であることを特徴とし、前記塩は前記錯体を含んでなり、前記錯体は少なくとも１つの酸に由来する少なくとも１つのプロトンおよび前記少なくとも１つの酸に由来する少なくとも１つのアニオンを含んでなり、前記塩は塩基性アミノ酸または塩基性アミノ酸誘導体もしくは前駆体の量に対して等モル量で前記プロトンを呈する。
【００４２】
このように、錯塩は以下の式によって定義される：
−ＨＣｌなどの単官能酸の場合、［Ｃ：ＡＡ：Ｈ＋：Ａ−／１：ｘ：ｘ：ｘ］；または
−酸の場合、［Ｃ：ｘＡＡ：ｘＨ＋：ｘ／ｙＡｙ］、
Ｈ＋は酸のプロトンを表わし、
Ａ−は酸のアニオンを表わし、
ｘはＡＡのモル当量の数を表わし、
ｙはアニオンによって帯びる電荷を表わす。
【００４３】
有利には、前記少なくとも１つの酸は、好ましくはアスコルビン酸、酢酸、クエン酸、および塩酸から選ばれる。非常に有利には、前記酸はアスコルビン酸である。
【００４４】
アスコルビン酸の役割はビタミン補填の役割である。さらに、この酸は抗酸化物質でもあるので、（＋）−カテキンの抗酸化の役割に関して相乗的な抗酸化の役割を担う。
【００４５】
また、この酸の添加により、経口で投与した場合に（＋）−カテキンのバイオアベイラビリティーを向上させることが可能になる。この観察知見は、酸性の媒質中での（＋）−カテキンのより安定な状態によって説明される。
【００４６】
１つ特定の実施形態では、前記組成物は１つ以上の生体適合性賦形剤を含んでなることも特徴とする。
【００４７】
好ましくは、（＋）−カテキンと前記塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸の誘導体もしくは前駆体の錯体の含有量は、前記組成物の全体重量に対して重量で１５％〜９５％、好ましくは６０％〜９０％、有利には６５％〜８５％である。
【００４８】
好ましくは、組成物は液体状または固体形態であり、好ましくは水溶性の固体形態、特に粉末、錠剤、またはロゼンジの形態である。
【００４９】
有利には、液体状の組成物は、０．０１モル濃度溶液中で２５℃にてｐＨが３（割合が１：０．５のＣ：Ｌ塩の理論的ｐＨ）以上、好ましくは４〜１１、有利には４．５〜９である。
【００５０】
随意に、本発明に係る組成物は、２５℃で０．０１Ｍに溶解したとき、ｐＨが３以上、好ましくは４〜１１、有利には４．５〜９であり、同時経口使用のための組み合わせ製剤として、前記錯体または該錯体の前記塩の前駆体として単量体（＋）−カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体、および随意に少なくとも１つの酸を含んでなり、前記錯体は経口投与後に形成される固体組成物である。
【００５１】
本発明に係る固体組成物は、単量体（＋）−カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体もしくは前駆体を１：１〜１：２．５のモル当量比で含んでなる。
【００５２】
好ましくは、前記モル当量比は１：１以上、特に１：１を超える。
【００５３】
有利には、前記モル当量比は１：２．５以下である。
【００５４】
特に、前記モル当量比は１：２．５未満、より詳細には１：２以下である。
【００５５】
優先的には、前記モル当量比は１：２未満である。
【００５６】
代替的には、モル当量比は１：１．５〜１：２．５、好ましくは１：１．５〜１：２である。
【００５７】
有利には、前記モル当量比は１．００：１．００以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００５８】
非常に有利には、前記モル当量比は１．００：１．００以上であり、かつ１．００：１．５０以下である。
【００５９】
好ましくは、前記モル当量比は１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．００以下である。
【００６０】
好ましくは、前記モル当量比は１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００６１】
単量体（＋）−カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体は、水性媒質中で錯体形成反応に関与し、本発明に係る錯体を形成する前駆体である。
【００６２】
この場合、錯体は唾液の水分または胃中の食塊に含まれる水分と接触して消化管で生体内形成される。
【００６３】
代替的に、本発明に係る組成物は、水相溶液での同時経口使用のための組み合わせ製剤として、前記錯体または該錯体の前記塩の前駆体として単量体（＋）−カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体、および随意に少なくとも１つの酸を含んでなり、前記錯体は経口投与前に形成され、前記単量体（＋）−カテキンおよび前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体は１：１〜１：２．５のモル当量比で存在する固体組成物である。
【００６４】
好ましくは、前記モル当量比は１：１以上、特に１：１を超える。
【００６５】
有利には、前記モル当量比は１：２．５以下である。
【００６６】
特に、前記モル当量比は１：２．５未満、より詳細には１：２以下である。
【００６７】
優先的には、前記モル当量比は１：２未満である。
【００６８】
代替的には、モル当量比は１：１．５〜１：２．５、好ましくは１：１．５〜１：２である。
【００６９】
有利には、前記モル当量比は１．００：１．００以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００７０】
非常に有利には、前記モル当量比は１．００：１．００以上であり、かつ１．００：１．５０以下である。
【００７１】
好ましくは、前記モル当量比は１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．００以下である。
【００７２】
好ましくは、前記モル当量比は１．００：１．５０以上であり、かつ１．００：２．５０以下である。
【００７３】
このように、組成物を水溶液に置くとすぐに、すなわち経口投与前に錯体は形成される。
【００７４】
特に、本発明は治療的または予防的、療法または食品組成物に関する。
【００７５】
本発明に係る組成物の他の実施形態は、添付の請求の範囲に示される。
【００７６】
また本発明は、がん、好ましくは肝細胞がんの経口投与による予防的治療および／または治療的処置に使用するための本発明に係る組成物に関する。
【００７７】
有利には、本発明はまた、白血病の経口投与による予防的治療または治療的処置に使用するための本発明に係る組成物に関する。
【００７８】
非常に有利には、本発明はまた、骨髄腫の経口投与による予防的治療または治療的処置に使用するための本発明に係る組成物に関する。
【００７９】
随意に、本発明はまた、リンパ腫の予防的治療および／または治療的処置に経口投与によって使用するための本発明に係る組成物に関する。
【００８０】
随意に、本発明はまた、肝がん、前立腺がん、乳がん、子宮がん、精巣がん、膀胱がん、腎がん、肺がん、気管支がん、骨がん、口がん、食道がん、胃がん、膵がん、および結腸直腸がんの予防的治療および／または治療的処置の状況で用いる本発明に係る組成物に関する。
【００８１】
がんの経口投与による予防的治療および／または治療的処置のための本発明に係る組成物の他の実施形態は、添付の請求の範囲に示される。
【００８２】
また本発明は、炎症性疾患および／または変性疾患、特に関節症の予防的治療および／または治療的処置の状況で経口投与によって使用するための本発明に係る組成物に関する。
【００８３】
この使用は、単量体（＋）−カテキンの広く認められている消炎作用によって可能になる。
【００８４】
炎症性疾患の経口投与による炎症性疾患および治療的処置のための本発明に係る組成物の他の実施形態は、添付の請求の範囲に示される。
【００８５】
また本発明は、細胞老化の予防的治療および／または治療的処置の状況で経口投与によって使用するための本発明に係る組成物に関する。
【００８６】
この使用は、単量体（＋）−カテキンの広く認められている抗酸化作用によって可能になる。
【００８７】
細胞老化の経口投与による炎症性疾患および治療的処置のための本発明に係る組成物の他の実施形態は、添付の請求の範囲に示される。
【００８８】
また本発明は、コラーゲン欠乏症の予防的治療および／または治療的処置の状況で経口投与によって使用するための本発明に係る組成物に関する。
【００８９】
この使用は本願に示されるように、単量体（＋）−カテキンおよびその塩によるコラーゲン産生およびそれら線維の保護を刺激する作用によって可能になる。
【００９０】
特に、本発明に係る本組成物は、コラーゲンおよび／またはエラスチンが異常に可溶性になると思われる、骨形成不全症、マルファン症、エーラス・ダンロス疾、皮膚弛緩症、全身性強皮症、およびその他膠原病などの遺伝的膠原病の予防的治療および／または治療的処置を目標とし、歯周疾患・歯周炎、硬皮症、伸展裂創、または照射、放射線療法、もしくは長時間の日光への露出によって引き起こされる結合組織の組織修復または病変の問題の場合でも同様である。
【００９１】
コラーゲン欠乏症の経口投与による予防的治療および／または治療的処置のための本発明に係る組成物の他の実施形態は添付の請求の範囲に示される。
【００９２】
また本発明は、消化性潰瘍および消化管アレルギーの予防的治療および／または治療的処置の状況で経口投与によって使用するための本発明に係る組成物に関する。
【００９３】
この使用は本願に示されるように、本発明に係る組成物の胃潰瘍に対する保護作用および胃粘膜のレベルでのそのヒスタミンレベルを下げる効果によって可能になる。
【００９４】
消化性潰瘍および消化管アレルギーの予防的治療および／または治療的処置のための本発明に係る組成物の他の実施形態は添付の請求の範囲に示される。
【００９５】
本発明の他の特徴および利点は、以下に与えられる説明から非制限的に、下記に記載される実施例（および特に比較例）を参照して明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１ａ】図１ａは、単量体（＋）−カテキンとリジンの錯体のＮＭＲスペクトルを、１：２のモル当量比（ａ）および１：１のモル当量比（ｂ）について図示する。
【図１ｂ】図１ｂは、単量体（＋）−カテキンとリジンの錯体のＮＭＲスペクトルを、１：２のモル当量比（ａ）および１：１のモル当量比（ｂ）について図示する。
【図２ａ】図２ａは、単量体（＋）−カテキンとアルギニンの錯体のＮＭＲスペクトルを、１：２のモル当量比（ａ）および１：１のモル当量比（ｂ）について図示する。
【図２ｂ】図２ｂは、単量体（＋）−カテキンとアルギニンの錯体のＮＭＲスペクトルを、１：２のモル当量比（ａ）および１：１のモル当量比（ｂ）について図示する。
【図３】図３は、（＋）−カテキン塩酸リジン（hydrochlorolysine）（６１重量％の量で単量体（＋）−カテキンに富む、Ａ群）および１グラムの純粋な単量体（＋）−カテキン（Ｂ群）の吸収後、時間Ｔ（時間）にわたって単位ｎｇ／ｍＬでヒトにおいて測定した遊離（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）の展開を図示する。
【図４ａ】図４ａは、単量体（＋）−カテキンとリジンの錯体の（粉末）Ｘ線回折スペクトルを１：２のモル当量比について図示する。
【図４ｂ】図４ｂは、単量体（＋）−カテキンとリジンの錯体の（粉末）Ｘ線回折スペクトルを１：２のモル当量比について図示する。
【図５】図５は、単量体（＋）−カテキンとリジンの間のモル当量比：１：０、１：１、１：２、１：２．５、１：３、および１：５に応じた血漿中の遊離単量体（＋）−カテキンの濃度の展開を［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣＩ］錯塩について図示する（表１４を参照）。
【実施例】
【００９７】
明細書では、実施例１〜６および比較例１〜５は、本発明に係る［Ｃ：ＡＡ／１：１−１：２．５］錯体に基づく組成物について哺乳類（ラットおよびヒト）において得られた経口バイオアベイラビリティーならびに抗がん活性の結果に関する。
【００９８】
比較例６〜１０は、モル当量比が１：１〜１：２．５、好ましくは１：１〜１：２である単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸の誘導体の混合物に基づく組成物についてラットにおいて得られた経口バイオアベイラビリティーの結果を記述する。
【００９９】
本発明の文脈において、ラットおよびヒトにおいて得られた試験の結果の間の等価性も示されている。したがって、ラットにおいて得られた結果が実際にヒトにおいて再現されることが証明されている。
【０１００】
後に続く例では、表７ｂの結果の例外を除いて、血中の（＋）−カテキンの含有量は単量体遊離（＋）−カテキンの含有量に対応する。
【０１０１】
材料および方法：バイオアベイラビリティー測定
バイオアベイラビリティーは、初回投与量と比べた、生体に見られる遊離単量体（＋）−カテキンの割合に相当する。
【０１０２】
本発明の文脈において非制限的に、（＋）−カテキンは、［Ｃ：ＡＡ］錯体の形態または純粋な単量体（＋）−カテキン、すなわち少なくとも１つの塩基性アミノ酸もしくは少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体に結合しない形態で吸収できる。
【０１０３】
本発明の文脈において、まず初めに吸収されている（＋）−カテキン、遊離単量体（＋）−カテキン、すなわち非結合形態での血中での存在、結合（＋）−カテキン、すなわち哺乳類の代謝によって誘導体化された（＋）−カテキンを区別する必要がある。
【０１０４】
誘導体化された単量体（＋）−カテキンは、代謝によって（例えば非限定的に、腸肝サイクルによって）血中の遊離単量体（＋）−カテキンを排出するサイクルから生じる。
【０１０５】
生体に異質の活性物質（または分子）の排出は、幾つかのプロセスの共同作用から生じる。それは、さまざまな臓器の代謝能、第一に肝臓の代謝能ならびにあらゆる形態での、特に腎臓（尿）の排泄および肝臓（胆汁）での排泄を含んでなる。
【０１０６】
この排出代謝は、酵素変換プロセスに従う２つの代謝段階を伴う周知の生物変換サイクルで単量体（＋）−カテキンの誘導体化をもたらす。したがって、段階Ｉ反応および段階ＩＩ反応は区別される：
−段階Ｉ反応は、主として肝臓のミクロソームに見出される酸化反応；頻度が非常に少なくあまり良く調べられていない還元反応；および肝臓、さまざまな組織や、血漿中でさえも起こる平凡な（banal）代謝経路を構成する加水分解反応を含んでなり；その後
−段階Ｉ反応から生じる誘導体は次いで結合を受ける。まさにこの結合が段階ＩＩ反応を構成し、例えばそれらの誘導体とグルクロン酸の結合を伴うグルクロン酸化を含まれる。
【０１０７】
この状況では、所与のバイオアベイラビリティーは、単量体（＋）−カテキンの経口投与後、血中の遊離単量体（＋）−カテキンの所与の割合（または含有量）に対応する。
【０１０８】
−手順：
下記の実験結果は、健常なヒトおよび体重が約２５０グラムの健常なウィスターラットで実施された試験を基にして得られた。
【０１０９】
ラットで実施された試験に関して、個体は、２０℃〜２５℃の周囲温度で２４時間中１２時間照明を施して、おがくず敷料を用いたケージ内で最大で４個体の群で飼育した。順応期間を実験開始前に履行した。
【０１１０】
実験的試験の間、ラットは標準的な市販飼料および水を自由に摂らせた。活性産物の源の投与前夜はラットには何も与えなかった。活性産物が単量体（＋）−カテキン（または他のポリフェノール：ケルセチンおよびＥＧＣＧ）であることが理解される。
【０１１１】
ラットは５ｍＬの体積の活性産物溶液の経口投与を受けた。
【０１１２】
ラットおよびヒトからの血液試料の採取に関して、血液は内側がＥＤＴＡでコーティングされたチューブに集めた後、３０００ｒｐｍ（回毎分）で周囲温度にて４５分間、次いで４℃の温度にて１５分間遠心分離した。次に血漿を集め、分析前に−７０℃で保存した。
【０１１３】
血中の活性物質を測定するための分析技術（タンデム質量分析計結合液体クロマトグラフィーを表わすＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）は、the Journal of Agricultural and Food Chemistry、５５巻、８８５７頁に２００７年に報告されたMata-Bilbao et al.に記載の方法に基づく。
【０１１４】
方法論的開発に関して、参照血漿を活性物質で処置しなかったラットおよびウシから内部的に集め、−２０℃で保存した。
【０１１５】
遊離（＋）−カテキンは血漿からリン酸、ＥＤＴＡ、およびアスコルビン酸の溶液を用いて抽出し、次にＳＰＥ（固相抽出）、具体的にはＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって分析されるＯａｓｉｓ（商標）ＨＬＢ抽出によって精製した。定量は（＋／−）−カテキン−２，３，４−１３Ｃ３を内部標準（ＳＩ）として用いる標準的なキャリブレーション手順に従って実施した。
【０１１６】
この文脈では、遊離（＋）−カテキンの含有量は、血漿から分離された単量体遊離（＋）−カテキンの含有量だけでなく、前記血漿からの遊離（＋）−カテキンの抽出に係わる単量体遊離（＋）−カテキンの異性化から生じるその異性体形態も集約する。
【０１１７】
血中の遊離ケルセチンまたはＥＣＧＣの抽出および定量に関して手順は同一である。
【０１１８】
総（＋）−カテキンの抽出および定量に関して、ＳＰＥよる精製の前に追加工程を実施することを除いて、遊離（＋）−カテキンに適用されるものと手順は同じである。この追加工程は、アリール硫酸塩およびグルクロニダーゼの消化溶液で試料を処理して、血漿細胞から活性物質を抽出することから成る。
【０１１９】
（＋）−カテキン（遊離または誘導体化されたもの）の総濃度（ｃｔ）は、例えば台形法を用いて、単量体（＋）−カテキンの源の経口投与後の時間にわたってｎｇ／ｍＬで測定された血漿濃度（ｃｃ）の展開の濃度曲線下面積を測定することによって計算される。
【０１２０】
−標準
（＋）−カテキンの１ｍｇ／ｍＬ（メタノール）の内部標準溶液をストック（＋）−カテキンから調製し、−２０℃で保存した。
【０１２１】
シグマアルドリッチ社製のカテキン−Ｃ１３（参照：７１９５７９、９９．３重量％の純度）をＳＩとして使用した。
【０１２２】
（遊離および総）（＋）−カテキンの定量用ＳＩ溶液を、メタノール中のストック液の５ｍＬを１０ｍＬの最終体積に希釈することによって調製した。次に、このＳＩ溶液を−２０℃で保存した。
【０１２３】
−方法
ａ）血漿中の遊離単量体（＋）−カテキンを分析するための抽出プロトコール
−５００μＬのホモジナイズした血漿を１５ｍＬフラスコに移す；
−５０μＬのＳＩ（１０ｐｐｍ）の添加；
−１８０μＬの抗酸化物質溶液（２０ｍｇ／ｍＬのアスコルビン酸および１ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ）ならびに１０μＬのオルトリン酸の添加；
−ボルテックスして２分間混合；
−１．５ｍＬの希釈用水を添加して、抽出混合物を得る；
−Ｗａｔｅｒ  Ｏａｓｉｓ（商標）ＨＬＢを用い、当業者に周知で本手順に適応できる標準的なプロトコールに従って抽出混合物に適用される固相抽出；
−  ４５℃で不活性雰囲気下での蒸発による溶離液の乾燥；
−  乾燥抽出物のアセトニトリルへの溶解、それに続く３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離；ならびに
−  ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィーを表わす）分析
【０１２４】
ｂ）血漿中の総単量体（＋）−カテキンを分析するための抽出プロトコール
−５００μＬのホモジナイズした血漿を１５ｍＬフラスコに移す；
−５０μＬのＳＩ（１０ｐｐｍ）の添加；
−１８０μＬの抗酸化物質溶液（１ｍｇ／ｍＬのＥＤＴＡ中の２０ｍｇ／ｍＬのアスコルビン酸）および１０μＬのオルトリン酸の添加；
−ボルテックスして２分間混合；
−  ７５０μＬの０．２Ｍ酢酸緩衝溶液（ｐＨ４．８）の添加；
−  ５μＬのリンゴマイマイ（Helix pomatia）の混合物の添加、それに続く５５℃で２時間の溶液を消化する工程；
−  ４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離を行い、抽出混合物を得る；
−Ｗａｔｅｒ  Ｏａｓｉｓ（商標）ＨＬＢを用い、当業者に周知で本手順に適応できる標準的なプロトコールに従って抽出混合物に適用される固相抽出；
−  ４５℃で不活性雰囲気下での蒸発による溶離液の乾燥；
−  乾燥抽出物のアセトニトリルへの溶解、それに続く３０００ｒｐｍで１０分間遠心分離；ならびに
−  ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィーを表わす）分析
【０１２５】
ｃ）抽出−Ｗａｔｅｒ  Ｏａｓｉｓ（商標）ＨＬＢ
活性化溶液：
１ｍＬのメタノール；
１ｍＬの水；および
０．１％（体積による）のギ酸を含む１ｍＬのＤＭＦ溶液（７０体積％）
洗浄溶液：
ＥｍＬの水；
１ｍＬのメタノール溶液（３０体積％）；
１ｍＬの酢酸エチル
溶離溶液
５ｍＬのモル当量比が１：２の酢酸エチルとメタノールの混合物
【０１２６】
ｄ）ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ分析
液体クロマトグラフィー（ＬＣ）
−カラム：オルチマ  Ｃ１８  ５ｕ；
−ＨＰＬＣ水性移動相Ａ：（０．１体積％の量に濃縮した）ギ酸；
−ＨＰＬＣ移動相Ｂ：０．１体積％の量でギ酸を含むアセトニトリルの溶液；
−流速：０．６ｍＬ／分；
−オーブン温度：３０℃；および
−注入体積：５０μｌ；
−溶離プログラム：
【０１２７】
【表１】
2016518423.tif 000003
【０１２８】
質量分析法（ＭＳ）
−４００℃の脱溶媒和温度でのネガティブモードＥＳＩイオン化；
−源温度：１２０℃；
−コーンガス流量：１５０Ｌ／ｈ；
−脱溶媒和ガス流量：１０００Ｌ／ｈ
【０１２９】
本発明に係る錯体の合成
錯体は、単量体（＋）−カテキンが水素結合（hydrogen bridge）型の結合によって、前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体に結合する分子構造体に相当する。
【０１３０】
これは、錯体が水溶液中で解離しない場合、を意味する。
【０１３１】
単量体（＋）−カテキンは単量体の形態で存在するポリフェノールに相当する。
【０１３２】
塩基性アミノ酸は中性のｐＨで正電荷を持つラジカル基を有する。
【０１３３】
塩基性アミノ酸誘導体としては、塩基性アミノ酸に由来し、そのアミノ酸上で起こる１つ以上の化学変換から生じる分子として本発明の文脈で定義される。
【０１３４】
優先的には、錯体（随意に塩の形態）は、経口投与後のアミノ酸またはアミノ酸誘導体への変換を目的とした分子である、単量体（＋）−カテキンおよび少なくとも１つのアミノ酸前駆体を含んでなる。
【０１３５】
例えば非制限的に、アミノ酸前駆体は、いったん吸収されるとβ−グルクロニダーゼ酵素の作用に基づいて生体によってアミノ酸に変換されるアミノ酸のグルクロニドまたはグルクロノシドであってもよい。
【０１３６】
実施例１：単量体（＋）−カテキンとリジンの錯体の調製
１ａ．モル当量比が１：２の単量体（＋）−カテキンとリジンの錯体
当業者に周知の方法の１つに従ってガンビールノキから抽出した単量体（＋）−カテキンを粉砕し、次に５０℃にて真空下で３０分間乾燥する。
【０１３７】
この乾燥工程の後に、抽出された（＋）−カテキンは少なくとも微量の水を含んでなる。
【０１３８】
次に、ヘリウムをバブリングした蒸留水に溶けるまで、２当量のリジンを（＋）−カテキンに撹拌しながら連続的に加える。次に、溶液を４０℃〜４５℃の温度まで熱し、２当量のリジンが完全に溶けるまで約１時間撹拌し、その後冷蔵庫に１６時間置く。
【０１３９】
代替的に、（＋）−カテキンを２当量のリジンの溶液に加え、撹拌しながら温度を４０℃〜４５℃にすることができる。
【０１４０】
次に、溶液をブフナー漏斗に通してろ過し、５０ｍＬの蒸留水で洗浄した後、最初にロータリーエバポレーターを用いて、次いで真空ライン（５０℃の温度で４時間）を用いて水を蒸発させて乾燥する。
【０１４１】
得られた生成物は重水素化メタノールには溶けないが、重水（Ｄ２Ｏ、ＮＭＲ分析に使用される溶媒）には溶ける。得られたＮＭＲスペクトルを図１ａに図示する。
【０１４２】
ＮＭＲスペクトルの読み取りでは、錯体は１モルの単量体（＋）−カテキンに対して２モルのリジンからなることが観察された。
【０１４３】
そのうえ、スペクトル上の３つのピーク、Ａ、Ｂ、およびＣの存在は、リジンが実際にカテキンに結合していることを示す。５．９５〜５．８７ｐｐｍ前後でのピークの消失および６．５０〜７．００ｐｐｍでのピークの統合不良を含む（＋）−カテキンの芳香族ピークの強い変形が実際に観察された。これは、フェノール基のレベルで、リジンと（＋）−カテキンの芳香環との間の相互作用があり、これらの相互作用は水素結合型の結合を伴うこと示す。
【０１４４】
Ｃｕ  Ｋα放射線（λ＝１．５４２Ａ）を用いるＳｉｅｍｅｎｓ  Ｄ５０００粉末回折計を使用して収集されるＸ線回折スペクトルを以下の組成物について取った：単量体（＋）−カテキン（ＪＥ１４３）、塩酸リジン、単量体（＋）−カテキン、とプロトン化リジンの混合物（ＪＥＣａｔＬｙｓＨ）（混合物Ｃ：ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２）、および単量体（＋）−カテキンと非プロトン化リジンの３つの混合物（ＪＥ１４９ｂ、ＪＥ１５０、ＪＥ１５１）。データは５°〜６０°の範囲で０．０１６７°刻みに記録した。
【０１４５】
スペクトルを図４に図示した。図４ａに示すように、ＪＥＣａｔＬｙｓＨサンプルと関連するのは単量体（＋）−カテキンと塩酸リジンのスペクトルのオーバーラップと思われないＸＲＤスペクトルであり、よって２つの構成成分の混合物ではなく錯体の形成を示す。特に、錯体のスペクトルの中でリジンの３１．５度および３６度の角度でのピークの消失はとりわけ特筆される。
【０１４６】
３つの単量体（＋）−カテキンと非プロトン化リジンの混合物（ＪＥ１４９ｂ、ＪＥ１５０、ＪＥ１５１）のスペクトルは、これらの化合物の結晶性のいかなる徴候を示さないので、塩酸リジンと単量体（＋）−カテキンのスペクトルの重ね合わせに相当しない結晶網状組織が特定されたＪＥＣａｔＬｙｓＨ混合物で観察されたこととは逆に、これらの参照基準ＪＥ１４９ｂ、ＪＥ１５０、およびＪＥ１５１については非晶質結晶の状態での組成物の形成があることを示す。
【０１４７】
１ｂ．モル当量比が１：１の単量体（＋）−カテキンとリジンの錯体
モル当量比が１：１の単量体（＋）−カテキンとリジンの錯体を実施例１ａのリジン錯体の合成に用いたのと同じプロトコールに従って合成したが、リジンの量を２分の１に減らし、その結果（＋）−カテキンが過剰になり、リジン不足のためにモル当量比が１：１の前記錯体の形成が促進された。
【０１４８】
重水に溶解したＮＭＲスペクトルを図１ｂに図示する。ＮＭＲスペクトルの読み取りでは、錯体は１モルの単量体（＋）−カテキンに対して１モルのリジンからなることが観察された。
【０１４９】
実施例２：単量体（＋）−カテキンとアルギニンの錯体の調製
２ａ．モル当量比が１：２の単量体（＋）−カテキンとアルギニンの錯体
単量体（＋）−カテキンとアルギニンの錯体を実施例１ａのリジン錯体の合成に用いたのと同じプロトコールに従って合成した。
【０１５０】
図２ａに図示されたＮＭＲスペクトルの読み取りでは、錯体は水素結合型の結合を介して１分子の単量体（＋）−カテキンに結合された２分子のアルギニンから成ることが観察される。
【０１５１】
２ｂ．モル当量比が１：１の単量体（＋）−カテキンとアルギニンの錯体
単量体（＋）−カテキンとアルギニンの錯体を実施例１ｂのリジン錯体の合成に用いたのと同じプロトコールに従って合成した。
【０１５２】
図２ｂに図示された前記複合のＮＭＲスペクトルの読み取りでは、錯体は水素結合型の結合を介して１分子の単量体（＋）−カテキンに結合された１分子のアルギニンから成ることが観察される。
【０１５３】
本発明に係る錯体の経口投与後のバイオアベイラビリティー
実施例３：ヒトにおける単量体（＋）−カテキン塩酸リジネート（hydrochlorolysinate）（または［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩）の経口投与後のバイオアベイラビリティーの測定
１．５ｇの単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸の錯体：単量体（＋）−カテキン塩酸リジネート。プロトコール１ｂに従って得られた［Ｃ：Ｌｙｓ］錯体から開始して、単量体（＋）−カテキンは、前記錯体の全体重量に対して６１重量％の割合（すなわち１．５ｇに対して０．９２ｇ）で存在し、単量体（＋）−カテキン塩酸リジネート［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩）を、前記錯体と等モルの量でＨＣｌ加えて前記［Ｃ：Ｌｙｓ］錯体を中和することによって合成する。
【０１５４】
このように、リジンがＨＣｌ由来のプロトンに結合され（Ｌｙｓ−Ｈ＋）、塩化物（Ｃｌ−アニオン）が溶液に遊離される錯塩は、［Ｃ：Ｌｙｓ−Ｈ＋］錯体と相互作用しない。
【０１５５】
この錯塩をＡ群の５名の健常ボランティアに投与する。
【０１５６】
０．９２ｇの単量体（＋）−カテキンを含有する１．５ｇの単量体（＋）−カテキン塩酸リジネートを摂取した後、血中の遊離単量体（＋）−カテキンの含有量をＡ群のボランティアについて経時的に測定した（表１）。
【０１５７】
表１：時間Ｔ（時間）の関数としてのＡ群の遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）
【０１５８】
【表２】
2016518423.tif 000004
【０１５９】
表２：時間Ｔ（時間）の関数としてＡ群の遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された経口投与後バイオアベイラビリティーを評価するパラメーター
【０１６０】
【表３】
2016518423.tif 000005
【０１６１】
図３は、（＋）−カテキン塩酸リジネートの経口投与後の時間Ｔ（時間）にわたって単位ｎｇ／ｍＬで測定された血漿濃度（ｃｃ）の展開（曲線Ａ）を図示する。この曲線は表１に列挙されたデータから推定される。
【０１６２】
例えば、文献で周知の台形方法を用いて測定される曲線下の面積は、塩酸リジネートと形成された錯体の形態で、（＋）−カテキンの摂取開始から６時間にわたって血漿中に吸収され、測定された遊離単量体（＋）−カテキンの総濃度（ｃｔ）を示す。このｃｔパラメーターにより、ｎｇ時／ｍＬで表わされる（＋）−カテキンのバイオアベイラビリティーを表１のデータから計算できる。ｃｔは（＋）−カテキン塩酸リジネートについては１２６３±８８ｎｇ時／ｍＬである。
【０１６３】
図３から、最高濃度ｃ（ｍａｘ）は曲線のピークにあたる。［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩を受けた群については、ｃ（ｍａｘ）は５２５ｎｇ／ｍＬに達する。この最高濃度は、単量体（＋）−カテキン錯体を受けたＡ群では時間Ｔ（ｍａｘ）が０．５時間で達成された。
【０１６４】
比較例１：ヒトにおける純粋な単量体（＋）−カテキンの経口投与後バイオアベイラビリティーの測定
純粋な単量体（＋）−カテキンをＢ群の５名の健常ボランティアに１ｇの投与量で投与する。
【０１６５】
（＋）−カテキンを摂取した後、Ｂ群ボランティアの血中の遊離単量体（＋）−カテキンの含有量を経時的に測定した。結果を表３に示す。
【０１６６】
表３：時間Ｔ（時間）の関数としてのＢ群の遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）
【０１６７】
【表４】
2016518423.tif 000006
【０１６８】
表４：時間Ｔ（時間）の関数としてＢ群の遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された経口投与後バイオアベイラビリティーを評価するパラメーター
【０１６９】
【表５】
2016518423.tif 000007
【０１７０】
図３は、純粋な（＋）−カテキンの経口投与後の時間Ｔ（時間）にわたって単位ｎｇ／ｍＬで測定された血漿濃度（ｃｃ）の展開（曲線Ｂ）を図示する。この曲線は表３に列挙されたデータから推定される。
【０１７１】
測定される曲線下の面積は、純粋な（＋）−カテキンの摂取開始から６時間にわたって血漿中に吸収され、測定された遊離単量体（＋）−カテキンの総濃度（ｃｔ）を示す。このｃｔパラメーターにより、ｎｇ時／ｍＬで表わされる（＋）−カテキンのバイオアベイラビリティーを表１および表３のデータから計算できる。０．９２ｇの純粋な（＋）−カテキンを含有する１．５ｇの単量体（＋）−カテキン塩酸リジネートについては、ｃｔは１２６３±８８ｎｇ時／ｍＬと計算される。１ｇの純粋な（＋）−カテキンについては９０４±１６３ｎｇ時／ｍＬと計算され、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩（本発明に係る実施例２を参照）で摂取された投与量に相当する０．９２ｇの純粋な（＋）−カテキンについては８３２±１５０ｎｇ時／ｍＬであり、つまりバイオアベイラビリティーが少なくとも５２％向上する。
【０１７２】
図３では、最高濃度ｃ（ｍａｘ）は曲線のピークにあたる。１ｇの純粋な単量体（＋）−カテキンを受けた群については、ｃ（ｍａｘ）は２８０ｎｇ／ｍＬと計算され、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩で摂取された（＋）−カテキンの投与量に相当する０．９２ｇの純粋な（＋）−カテキンについては２５８ｎｇ／ｍＬである。［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩を受けた群については、ｃ（ｍａｘ）は５２５ｎｇ／ｍＬに達し、純粋な（＋）−カテキンと比較して１０３％の増加にあたる。これらの最高濃度は、時間Ｔ（ｍａｘ）がＢ群については１．２０時間で、単量体（＋）−カテキン錯体で治療された群については０．５時間でそれぞれ達成された。
【０１７３】
この第１の比較例から、純粋形態で単量体（＋）−カテキンを摂取する場合と比較して、（＋）−カテキン錯体、および特に（＋）−カテキン塩酸リジネートは、単量体（＋）−カテキンの経口投与後バイオアベイラビリティーを著しく向上する（＋５２％）ことが示された。また、Ｔ（ｍａｘ）パラメーターで測定される単量体（＋）−カテキンが血液に入る（次いで血漿中で遊離形態で存在する）速度、および最高濃度、ｃ（ｍａｘ）も顕著に増加し、単量体（＋）−カテキンをその純粋形態で摂取する場合と比較してそれぞれ＋１６６％および＋１０３％である。
【０１７４】
比較例２：ラットにおける純粋な単量体（＋）−カテキンおよび（＋）−カテキンとリジンの錯体の経口投与後バイオアベイラビリティーの測定
純粋な単量体（＋）−カテキン（ＣＰ）の１００ｍｇ（体重１ｋｇ当たり）の投与量、または１００ｍｇの（＋）−カテキンに相当する（＋）−カテキンリジネート（lysinate）の投与量を供試体である５頭のウィスターラットに各々個別に投与した。
【０１７５】
（＋）−カテキン：ＣＰ、またはさまざまなリジン錯体のさまざまな源の経口投与後バイオアベイラビリティーを評価するパラメーターを表５に載せる。
【０１７６】
表５：時間Ｔ（分）の関数として（＋）−カテキンの各々の源について遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された経口投与後バイオアベイラビリティーを評価するパラメーター
【０１７７】
【表６】
2016518423.tif 000008
【０１７８】
この表では、Δｃｔ（％として表される）は、各々の錯体で得られたｃｔと、純粋な単量体（＋）−カテキンについて得られたｃｔとの間の差異の測定にあたり、ＣＰのバイオアベイラビリティー値に関連付けられる。例示として、［Ｃ：Ｌｙｓ／１：１］錯体について計算されるΔｃｔは次のように得られる。
【０１７９】
【数１】
2016518423.tif 000009
【０１８０】
最良のパラメーター値は［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］錯体で達成され、１．９×１０５ｎｇ分／ｍＬに近い経口投与後バイオアベイラビリティー値に達し、純粋形態で摂取された（＋）−カテキンと比較して９４％の増加にあたる。
【０１８１】
さらに、血液に入るカテキンの最高濃度［Ｃ（ｍａｘ）］は１１６％増加し、［Ｔ（ｍａｘ）］は、他の源では６０分であるのに比べて、このＣｍａｘを与えるピークは１２０分に位置し、時間をかけて遊離単量体（＋）−カテキンの血液レベルを有利に増加する効果も有し、活性物質の遅延作用と、それ故の抗がん作用の向上を確認する。
【０１８２】
純粋な（＋）−カテキン（表４）の経口摂取を［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣＬ、１：１：１］錯塩（表２）の経口摂取と比較すると、これらのデータは我々がヒトで見出していたことに対応する。実際、バイオアベイラビリティーは同じ割合、ヒトついては＋５２％、ラットについては＋３６％増加する。
【０１８３】
本例ではラットにおいて、［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］錯体が経口投与後の（＋）−カテキンのバイオアベイラビリティーをさらにより顕著に増加することを我々は示す。
【０１８４】
比較例３：ラットにおける、純粋な単量体（＋）−カテキン、（＋）−カテキンとアルギニンの錯体、および（＋）−カテキンとリジンの錯体の経口投与後バイオアベイラビリティーの測定
純粋な単量体（＋）−カテキン（ＣＰ）の１００ｍｇ（体重１ｋｇ当たり）の投与量、または１００ｍｇの（＋）−カテキンに相当する（＋）−カテキン錯体の投与量を供試体である５頭のウィスターラットに各々個別に投与した。
【０１８５】
（＋）−カテキン：ＣＰ、またはさまざまなリジン錯体もしくはアルギニン錯体のさまざまな源の経口投与後バイオアベイラビリティーを評価するパラメーターを表６に載せる。
【０１８６】
表６：時間Ｔ（分）の関数として（＋）−カテキンの各々の源について遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された経口投与後バイオアベイラビリティーを評価するパラメーター
【０１８７】
【表７】
2016518423.tif 000010
【０１８８】
これらの結果から、（＋）−カテキンに結合し、それ故に（＋）−カテキンの核に位置するオルトジフェノール基の酸性度を中和する塩基性アミノ酸のいずれか（すなわち、リジン、アルギニン、およびヒスチジンから選ばれる）は、経口投与後の前記カテキンのバイオアベイラビリティーに対して同様の有益な効果を有する可能性があることが推定される。
【０１８９】
比較例４：ラットにおける、純粋な単量体（＋）−カテキンならびにモル当量比が１：１および１：５の（＋）−カテキンとリジンの錯体の経口投与後バイオアベイラビリティーの測定
純粋な単量体（＋）−カテキン（ＣＰ）の２５ｍｇ（体重１ｋｇ当たり）の投与量、または２５ｍｇの（＋）−カテキンリジネートに相当する（＋）−カテキン錯体の投与量を供試体である３頭のウィスターラットに各々個別に投与した。
【０１９０】
（＋）−カテキン：ＣＰ、またはさまざまなリジン錯体のさまざまな源の経口投与後バイオアベイラビリティーを評価するパラメーターを表７ａに載せる。
【０１９１】
血中に存在する総（＋）−カテキンのＴ（ｍａｘ）、ｃ（ｍａｘ）、およびｃｔパラメーターを表７ｂに載せる。総（＋）−カテキンは遊離単量体（＋）−カテキンとラットの体に結合した単量体（＋）−カテキンを集約する。
【０１９２】
表７ａ：時間Ｔ（分）の関数として（＋）−カテキンの各々の源について遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された経口投与後バイオアベイラビリティーを評価するパラメーター
【０１９３】
【表８】
2016518423.tif 000011
【０１９４】
表７ｂ：時間Ｔ（分）の関数として（＋）−カテキンの各々の源について総単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された血中に存在する総（＋）−カテキンに関するＴ（ｍａｘ）、ｃ（ｍａｘ）、およびｃｔパラメーター
【０１９５】
【表９】
2016518423.tif 000012
【０１９６】
純粋な（＋）−カテキン、すなわちリジンを伴わずに摂取された（＋）−カテキンと比較して、［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］錯体は遊離および総血漿（＋）−カテキンともにその含有量を増加させる一方で、［Ｃ：Ｌｙｓ／１：５］錯体はそれらの含有量を明らかに減少させる。
【０１９７】
この例の結果は、表５に示された結果と比較して、経口投与後バイオアベイラビリティーの点で最適なものは、実際には、随意にＨＣｌの存在下で［Ｃ：ＡＡ／１：２］錯体で達成される。なお注目すべきは、酸の存在は経口投与後バイオアベイラビリティーのパラメーターに好ましい影響を及ぼすが（表５を参照）、その酸の存在は経口投与後バイオアベイラビリティーを増加させるのに必須ではないことである。
【０１９８】
本発明に係る錯体の抗がん作用
実施例４：皮膚における、単量体（＋）−カテキン塩酸リジネートおよび単量体（＋）−カテキンアスコルビン酸リジネート（ascorbolysinate）の、３Ｈ−プロリンの総取り込みおよびコラーゲンへの取り込みに対する作用の測定
リソソーム膜の安定化は、結合組織基質、特にコラーゲンの分解の原因となるタンパク質分解酵素の放出を防ぐ。この分解はどんな種類のがんでも転移がん細胞の増殖の原因となる（Cell Communication and Signaling 2010, 8:22）。
【０１９９】
皮膚は特に結合組織基質およびコラーゲン線維が豊富な組織であり、皮膚の弾性に全面的に寄与する。
【０２００】
経口で投与された（＋）−カテキン塩酸リジネートおよび単量体（＋）−カテキンアスコルビン酸リジネートの、一方では３Ｈ−プロリンの（皮膚全体ので）総取り込みおよび他方では前記皮膚のコラーゲンへの取り込みに対する有効性をここに示す。
【０２０１】
これを行うために、体重が９５〜１１５ｇの２４頭の雌ウィスターラットの１団を、各々１２頭のラットの２つの群、Ｃ群およびＤ群に分けて試験を実施した。各群について、その具体的な放射能が１３．６Ｃｉ／１０−３ｍｏｌの放射性３Ｈ−ヒドロキシプロリンを個体重量に対して１ｍＣｉ／ｋｇの投与量でプロリン−Ｌ−（５−３Ｈ）の腹腔内注射によって動物すべてに投与した。該投与量は１００μＣｉ／個体の放射性３Ｈ−プロリン換算の放射能を意味する。
【０２０２】
各群の６頭のラットに経管栄養法による単量体（＋）−カテキンに基づく処置を、１００ｍｇ／ｋｇの割合で５日間施行した後、屠殺した。単量体（＋）−カテキンに基づく処置を受けなかった他の６頭のラットが対照小群（subgroup）（対照）である。Ｃ群は単量体（＋）−カテキン塩酸リジネートを受け、Ｄ群は単量体（＋）−カテキンアスコルビン酸リジネートを受けた。
【０２０３】
表８：ラットの皮膚における３Ｈ−ヒドロキシプロリンの総取り込み（ＩＴ）およびコラーゲンへの取り込み（ＩＣ）レベル（単位ｄｐｍ／ｍｇ）に対するその錯体形態での単量体（＋）−カテキン（１００ｍｇ／ｋｇ）の作用
【０２０４】
【表１０】
2016518423.tif 000013
【０２０５】
表８において取り込みレベルは、１ｍｇの乾燥重量当たりの毎分の放射性３Ｈ−ヒドロキシプロリン壊変数（ｄｐｍ）によって測定されている。この数が高いほど、３Ｈ−ヒドロキシプロリンの濃度が高い。
【０２０６】
表８の結果は、カテキンおよび錯体である（＋）−カテキン塩酸リジネートは結合組織生合成および特にコラーゲン合成を刺激することを示す。
【０２０７】
くわえて本発明によれば、この例は、経口で与えられた単量体（＋）−カテキン錯体の経口吸収による生体内での結合組織網（connective  web）の保護、その結果として特にがん細胞の侵入に対する該網の保護を裏付ける。
【０２０８】
比較例５：皮膚における３Ｈ−プロリンの総取り込みおよびコラーゲンへの取り込みに対する純粋な単量体（＋）−カテキンの作用の測定
この比較例では、Ｅ群の体重が９５〜１１５ｇの１２頭のウィスターラットに、その具体的な放射能が１３．６Ｃｉ／１０−３ｍｏｌの放射性３Ｈ−ヒドロキシプロリンを、個体重量に対して１ｍＣｉ／ｋｇの投与量でプロリン−Ｌ−（５−３Ｈ）の腹腔内注射によって全個体に投与した。該投与量は１００μＣｉ／個体の放射性３Ｈ−プロリン換算の放射能を意味する。
【０２０９】
各群の６頭のラットに経管栄養法による純粋な単量体（＋）−カテキンに基づく処置を、１００ｍｇ／ｋｇの割合で５日間施行した後、犠牲にした。単量体（＋）−カテキンに基づく処置を受けなかった他の６頭のラットが対照小群（対照）である。
【０２１０】
表９：ラットの皮膚における３Ｈ−ヒドロキシプロリンの総取り込み（ＩＴ）およびコラーゲンへの取り込み（ＩＣ）レベル（単位ｄｐｍ／ｍｇ）に対する純粋な単量体（＋）−カテキン（１００ｍｇ／ｋｇ）の作用
【０２１１】
【表１１】
2016518423.tif 000014
【０２１２】
表９において取り込みレベルは、１ｍｇの乾燥重量当たりの毎分の放射性３Ｈ−ヒドロキシプロリン壊変数（ｄｐｍ）によって測定されている。この数が高いほど、３Ｈ−ヒドロキシプロリンの濃度が高い。
【０２１３】
表８および表９の結果は、単量体（＋）−カテキン塩酸リジネート（＋１５％）および単量体（＋）−カテキンアスコルビン酸リジネート（＋１４％）の錯体の取り込みレベルの増加は、純粋な単量体（＋）−カテキンを経管栄養法によって与えた際に測定された取り込みレベルの増加（＋１６％）と同等であることを示す。
【０２１４】
この比較例は、経口で与えられた単量体（＋）−カテキン錯体の経口吸収による生体内での結合組織網の保護、その結果として特にがん細胞の侵入に対する該網の保護を裏付ける。これは、純粋な（＋）−カテキン（１００ｍｇの（＋）−カテキン）が摂取された際に遭遇する単量体（＋）−カテキン含有量より事実上低い単量体（＋）−カテキン含有量（１００ｍｇの錯体に対して６１ｍｇの（＋）−カテキン）で起こる。
【０２１５】
実施例５：マストミスラットにおける胃潰瘍の発生率および胃粘膜のヒスタミンレベルに対する単量体（＋）−カテキン塩酸リジネート（［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩）の作用の測定
この例では、胃病変および特に胃癌が自然発生的にできることが知られているアフリカ原産のラットであるマストミスにおける単量体（＋）−カテキン塩酸リジネートの生体内での有効性が示される。
【０２１６】
実はマストミスは胃粘膜にヒスタミンを蓄える細胞の特殊な系をもち、それらの細胞はカルチノイド腫瘍を引き起こす可能性がある。
【０２１７】
この例では、試験検体であるｎ＝４８頭のマストミスを１ｍｇの水酸化アルミニウムを含有する０．２ｍＬの生理食塩水に溶かした３μｇのオボアルブミンの腹腔内注射で初回感作を行う。オボアルブミンは抗免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体および抗免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抗体を生じさせる。７日後、麻酔下の動物の体のレベルで（at the level of the corpus）、０．０１ｍＬの生理食塩水中の１ｍｇのオボアルブミンの２回目の注射を胃粘膜に行う。それによって潰瘍化病変が実際の注射部位に引き起こされる。
【０２１８】
４８頭のラットを２４個体の１群と１２個体の２群の３つの群に分ける。２４個体の第１の群（Ｇ１）はプラシーボ（０．１５Ｍ濃縮ＮａＣｌ溶液）を受けた。
【０２１９】
１２個体の第２の群（Ｇ２）は、経口投与単量体（＋）−カテキン塩酸リジネートで１日二回（２×３００ｍｇ）、注射２日前および注射３日後に処置した。１２個体の第３の群（Ｇ３）は、Ｇ２群の条件と同一条件下で、単量体（＋）−カテキン塩酸リジネートを１００ｍｇの割合で腹膜内に与えた。
【０２２０】
表１０の結果に示されるように、（＋）−カテキン塩酸リジネートの経口投与は、胃潰瘍（ＮＵ）を呈する動物の数を非常に顕著に減少させ（−７２％）、またヒスタミンレベル（ＨＬ）の顕著な減少（−１８％）をもたらし、このレベルは胃粘膜のタンパク質の１０−６ｍｇ／ｋｇとして表わされる。Ｇ１群、Ｇ２群、およびＧ３群についてヒスタミンレベルを供試体であるｎ＝１２個体に基づいて測定する。
【０２２１】
胃粘膜に蓄積されるヒスタミンのレベルの減少は、ヒスタミンを蓄える細胞の細胞壁に対する単量体（＋）−カテキンの作用に直接起因する。これら細胞の細胞壁の補強に寄与することにより、単量体（＋）−カテキンは胃粘膜に吸収されるヒスタミンのレベルを減少させることができ、それ故に潰瘍の数を減らすことができる。
【０２２２】
この実験に関して興味深いことには、特に多くの種類の慢性白血病または急性白血病においてヒスタミンレベルの増加と同時に、また免疫グロブリンレベルの増加とともに肥満細胞の増加が見られる（Blood Cells Mol. Dis. 35 (3), 370-383, 2005）。
【０２２３】
表１０：マストミスにおける胃潰瘍の発生率および胃粘膜のヒスタミンレベルに対する（＋）−カテキン塩酸リジネートの作用
【０２２４】
【表１２】
2016518423.tif 000015
【０２２５】
実施例６：がん罹患者の治療における単量体（＋）−カテキン塩酸リジネート（［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩）の作用の測定
【０２２６】
この例では、１日５００ｍｇの［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩錠剤を用いた治療を一年を超えて受けた２名のがん患者における単量体（＋）−カテキン塩酸リジネートの効果の試験に関連する結果が提示される。
【０２２７】
第１の患者、６７歳男性では、（ワルデンストレームマクログロブリン血症型の）リンパ形質細胞性リンパ腫がＤ０日での術後血液テストの間に見られた。診断は免疫グロブリン（ＩｇＭ）の単クローンピークの電気泳動検出に基づく。この診断は電気泳動による同一の検出を用いる第２の分析の間に再確認され、ピークを解析した。
【０２２８】
免疫グロブリンは攻撃に対する生体防御に本質的な役割を果たし、通常Ｂリンパ球によって分泌される。
【０２２９】
多発性骨髄腫または、例えば、ワルデンストレーム病の場合では、骨髄に存在する形質細胞による、無制御に大幅に増える単一タイプの免疫グロブリン、またはモノクローナル免疫グロブリンの分泌が観察される。
【０２３０】
これらの免疫グロブリンは血中および尿中において高濃度で見られる。したがって、それらは天然の腫瘍マーカーである。それを検査することにより、病的細胞の数および疾患の程度が明らかになり、結果として治療中の疾患の進行のモニターが可能になる。
【０２３１】
継続した血液試験は、ＩｇＭアッセイ（単位血漿１００ｍＬ当たりのｍｇ）について以下のデータを与える。
【０２３２】
表１１：経時的な血中ＩｇＭレベル（単位ｍｇ／１００ｍＬ）の展開
【０２３３】
【表１３】
2016518423.tif 000016
【０２３４】
表１１の結果は、１年半の間の単量体（＋）−カテキン塩酸リジネートの採取以来、治療の投与が開始されたＤＴ日に見られた最高値未満で安定化していることを示す。
【０２３５】
２０００ｍｇ／１００ｍＬを超えるＩｇＭの値にもかかわらず、浸潤レベルは低いままであった。くわえて、患者は化学療法治療を受けなかった。したがって、彼は安定していると考えられる。
【０２３６】
第２の患者では、まず最初に左鎖骨下頸部リンパ節腫脹がＤ０日に見られた。次いで２週間後、左腎腺がんがこの患者で見つかり、その腎臓に腺がんが見つかった３日後に左の腎臓の腎摘除を受けた。
【０２３７】
その後、Ｄ０日＋３か月にその患者に左部リンパ節切開を行った。この処置の後に、一連の１５回の放射線療法セッションが続いた。
【０２３８】
Ｄ０日＋１５か月（すなわちＤＴ日）から開始して、患者に１日５００ｍｇの（＋）−カテキン塩酸リジネートの錠剤を経口投与した。
【０２３９】
ＤＴ日＋１５か月に、病的縦隔リンパ節腫脹の出現（体積で４５ｃｍ３）が観察され、縦隔リンパ節郭清、続いてＤＴ日＋１７か月に肺検査を要した。この検査では、左肺では５ｍｍの微細粒状影の退縮があることおよび肺実質および腹部ステージ（abdominal stage）のレベルで二次病変がないことが示された。
【０２４０】
ＤＴ＋１９か月に、診察報告書は腎明細胞癌が寛解にあると結論付けた。この診断はＤＴ＋２３か月に実施された対照検査（controlled examinations）の間に確認された。明らかに、１年間の（＋）−カテキン塩酸リジネートの摂取は患者の状態を安定化したと思われる。
【０２４１】
本発明に係る錯体または錯塩の前駆体の組成物の合成
前記単量体（＋）−カテキンと前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸を含んでなる組成物を前記錯体の前駆体として製造する方法は以下の工程を含んでなる：
−単量体（＋）−カテキンの第１の量を準備する工程；
−少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体の第２の量を準備し、前記（＋）−カテキンと前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸誘導体の間のモル当量比を１：１〜１：２．５、好ましくは１：１以上、特に１：１を超える、好ましくは１：２．５以下、特に１：２．５未満、より詳細には１：２以下、より詳細には１：２未満とする工程；
−前記単量体（＋）−カテキンを前記少なくとも１つの塩基性アミノ酸または前記塩基性アミノ酸誘導体と接触させ、単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸または少なくとも１つの塩基性アミノ酸の誘導体の前記混合物を得る工程。
【０２４２】
優先的には、該方法は酸、好ましくはアスコルビン酸を供給することから成る追加工程を含んでなる。
【０２４３】
代替的に、該方法は、（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸の水相に溶ける錯体を形成するように、前記水相を供給することおよび前記混合物を前記水相に溶かすことから成る追加工程を含んでなる。
【０２４４】
代替的に、該方法はまた、生体適合性賦形剤を本発明に係る前記混合物に加える工程を含んでなる。
【０２４５】
好ましくは、供給される前記少なくとも１つのアミノ酸は天然または合成起源リジンおよびアルギニンおよびそれらの混合物からなる群から選択される。
【０２４６】
後に続く比較例６〜９では、経口で投与された組成物は、モル当量比が１：１、１：２、１：３、および１：５である、粉末形態の塩酸リジネート（Ｌｙｓ：ＨＣｌ）と純粋な単量体（＋）−カテキンの混合物に基づいて調製された。
【０２４７】
単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸を前記［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ］錯塩の前駆体として含んでなる組成物が得られる。
【０２４８】
次に各々の混合物を水に溶かす。混合物の溶解の間に、水相での（＋）−カテキンと塩酸リジネートの錯体の形成が起こる。そのようにして得られる溶液は、錯体の形態の（＋）−カテキン塩酸リジネートの溶液であり、この溶液中に得られる錯体は、本発明に係る混合物のモル当量比と同一のモル当量比をもつ単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸（またはそれらの誘導体）の錯体である。よって、モル当量比が１：１の単量体（＋）−カテキンとアミノ酸の混合物は、いったん水相に溶けると、モル当量比が１：１に等しい単量体（＋）−カテキンと少なくとも１つの塩基性アミノ酸（またはそれらの誘導体）の錯体の溶液をもたらすことになる。
【０２４９】
次に、この溶液を経口（ＰＯ）または静脈内（ＩＶ）注射によって、５頭のウィスターラット群の各個体に、純粋な単量体（＋）−カテキンの（体重１キログラム当たり）２５ｍｇの投与量または２５ｍｇの（＋）−カテキンに相当する（＋）−カテキンリジネートの投与量にて投与する。
【０２５０】
本発明に係る錯体または錯塩前駆体の組成物の経口投与後バイオアベイラビリティー
比較例６：ラットにおける、モル当量比が１：１および１：２の（＋）−カテキンとリジンの錯体の経口投与後および注射による投与後のバイオアベイラビリティーの測定
【０２５１】
表１２ａ：時間Ｔ（分）の関数としての総単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）
【０２５２】
【表１４】
2016518423.tif 000017
【０２５３】
表１２ｂ：時間Ｔ（分）の関数としての遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）
【０２５４】
【表１５】
2016518423.tif 000018
【０２５５】
表１２ｃ：ラットにおける、２５ｍｇ／ｋｇのＣ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２の静脈内投与後および経口投与後の遊離単量体（＋）−カテキンおよび総単量体（＋）−カテキンの単位ｎｇ分／ｍＬでの総血漿濃度（ｃｔ）の比較
【０２５６】
【表１６】
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【０２５７】
＊ΔｃｔはＩＶデータとＰＯデータの間で比較した。
【０２５８】
表１２ａおよび表１２ｂにまとめた結果に示されるように、［Ｃｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］錯塩の静脈内注射後、（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）は、当然開始時には非常に高く、極めて急速に下がって非常に低いレベルに戻り、２時間後に血漿に見られる総（＋）−カテキンは３４０ｎｇ／ｍＬであり、遊離（＋）−カテキンは０ｎｇ／ｍＬである一方で、同一条件下で経口摂取された同一物の総血液レベルは２時間後に１９９０ｎｇ／ｍＬに維持され、遊離（＋）−カテキンの量は７６７ｎｇ／ｍＬである。
【０２５９】
この静脈内注射（（＋）−カテキンを可溶にする塩酸リジネートのおかげで可能になった）は、単量体（＋）−カテキンに結合するリジンが１分子であろうと２分子であろうと、その（＋）−カテキンは急速に血流から取り除かれることを示す。
【０２６０】
それに対して、単量体（＋）−カテキンの錯体形態の経口摂取は、一方では血中の遊離単量体（＋）−カテキンに量を増加させ、他方では最高濃度ピークを遅らせる。
【０２６１】
これは驚くべき結果である。確かに、血液への直接注射後に得られる血漿濃度は、投与後最初の１時間にわたっては生成物が経口で与えられた場合よりはるかに高い血液レベルをもたらし、このことは予想される。他方では、錯体が経口で投与された場合、血漿中で利用可能な遊離（＋）−カテキンに関して８８％増加している遊離単量体（＋）−カテキンｃｔ値が観察される（ｃｔはＩＶ投与では僅か８７９７０ｎｇ分／ｍＬに比べて経口投与では１６５３２５ｎｇ分／ｍＬ）。同じことが血漿中に見られる総カテキンに当てはまり、ｃｔは同様に７３％増加し、これは極めて注目に値する。したがって予想外にも、遊離であろうと総量であろうと、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］錯塩の投与後の血漿中の（＋）−カテキンの全体的なバイオアベイラビリティーについて、経口投与は静脈内投与より優れていることを示す。
【０２６２】
さらに、ＩＶ注射後では１２０分後に（＋）−カテキンは事実上もはや血中に存在しない一方で、同量での［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］錯塩の経口摂取後では最高レベルの血中カテキンが観察される。
【０２６３】
したがって、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］錯塩は予想外の方法でカテキンのバイオアベイラビリティーを向上する。確かに、遊離していようと結合していようと、この（＋）−カテキンの血中バイオアベイラビリティーは、驚いたことに経口で投与される場合のほうが静脈内注射によって投与される場合より良好であることが示されている。
【０２６４】
これは、静脈内投与後のレベルおよびバイオアベイラビリティーデータから経口投与を推定することが可能ではなく、本発明の結果は、経口摂取についてのバイオアベイラビリティーテストが例証されなかった文献米国特許第４２８５９６４号と明らかに異なることを示す。
【０２６５】
比較例７：ラットにおける（＋）−カテキンとリジンの錯体の経口投与後バイオアベイラビリティーに対する酸の効果の測定
［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］錯体への酸の添加が及ぼす可能性のある効果を実証するために、我々は、ＣＰまたは［Ｃｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］錯塩の経口摂取後の遊離単量体（＋）−カテキンの血漿中レベルを測定した。結果を下表に載せる。
【０２６６】
表１３：時間Ｔ（分）の関数として（＋）−カテキンの各々の源について遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された血中に存在する遊離（＋）−カテキンに関するＴ（ｍａｘ）、ｃ（ｍａｘ）、およびｃｔパラメーター
【０２６７】
【表１７】
2016518423.tif 000020
【０２６８】
単量体（＋）−カテキンのバイオアベイラビリティーおよびその最高濃度に対する２分子のリジンの好ましい効果がこの場合もまた見られる。２分子のＨＣｌの添加は２分子のリジンの効果に影響を及ぼし、ΔｃｔはＨＣｌの存在下で＋７７％であり、ＨＣｌ無しでは＋１７％である（表７ａを参照）。
【０２６９】
比較例８：本発明に係る（＋）−カテキン塩酸リジネートの錯体の経口投与後バイオアベイラビリティーに対する（＋）−カテキンと塩基性アミノ酸のモル当量比の効果のラットにおける測定
【０２７０】
表１４：時間Ｔ（分）の関数として（＋）−カテキンの各々の源について遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された血中に存在する遊離（＋）−カテキンに関するＴ（ｍａｘ）、ｃ（ｍａｘ）、およびｃｔパラメーター
【０２７１】
【表１８】
2016518423.tif 000021
【０２７２】
＊単量体（＋）−カテキン：リジンのモル当量比の関数としてｃｔの展開の曲線の形状から推定されたｃｔ値（図５を参照）。図５で最初に推定された他のｃｔ値は、１：１．５：１．５比のものでは１４２０００ｎｇ分／ｍＬ、１：１：１比のものでは１２７０００ｎｇ分／ｍＬである。
§塩酸リジネートと純粋な（＋）−カテキンを別々に経口摂取。
【０２７３】
図５の曲線に記録されているＣ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：１．５：１．５錯塩に関するｃｔの値（ｎｇ分／ｍＬ）は１４２ｋ  ｎｇ分／ｍＬであり、すなわち１：１：１（１２７ｋ、実測値）より良好で、１：２．５：２．５（１０５ｋ  ｎｇ分／ｍＬ、実測値）より良好であるが、１：２：２（１６５ｋ、計算値）ほど良好ではない。
【０２７４】
割合が１：２．５：２．５以下の（＋）−カテキン塩について得られたｃｔ値はすべて、割合がより高い１：３：３（３８ｋ、計算値）および１：５：５（２６ｋ、計算値）、これらと同じ塩について得られた値よりはるかに良好である。
【０２７５】
これらの結果は比較例４の結果を確認する。［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］錯塩は経口で摂取された（＋）−カテキンのバイオアベイラビリティーを明らかに向上する唯一の（＋）−カテキン−リジン会合である。
【０２７６】
この例のデータは、［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］錯塩が最適なバイオアベイラビリティーをもたらすことを示すだけでなく、この割合を超えるとすぐに、その効果は逆転し、Δｃｔは１：３：３のモル当量比では−５９％、および１：５：５のモル当量比では−６６％である。
【０２７７】
くわえて、単量体（＋）−カテキンと塩酸リジネートを（５〜１０分以内に）別々に摂取することは、血漿中の遊離単量体（＋）−カテキンの量に対して負の効果（Δｃｔが−４８％）をもたらす。これは、カテキンとリジンは摂取前に（随意に水に溶ける形態に）混合されるか、少なくとも同時に摂取されなければならないことを示す。
【０２７８】
比較例９：経口投与後のバイオアベイラビリティーに対する治療用組成物の性質のラットにおける測定
経口投与された組成物が実施例１ａ（１ｂ）または２ａ（２ｂ）（実施例１および実施例２を参照）に記載の方法に従って調製された［Ｃ：ＡＡ／１：１−１：２．５］錯体に基づこうと、経口投与された組成物が所望のモル当量比の粉末の（＋）−カテキンと塩酸リジン（塩酸リジネートとも呼ばれる）の混合物であろうと、経口投与後バイオアベイラビリティーの点で結果は同様である（下記表１５を参照）。
【０２７９】
［Ｃ：Ｌｙｓ／１：２］錯体をプロトコール１ａ（実施例１を参照）に従って調製した比較例２の結果、および［Ｃ：Ｌｙｓ：ＨＣ１／１：２：２］錯塩を１モルの粉末状（＋）−カテキンと２モルの粉末状塩酸リジネートを単に混合し、次いで経口投与前に溶解することによって調製した比較例８の結果を考慮すると、表１５にまとめた結果は、これらの錯体の経口投与後バイオアベイラビリティーの向上が同程度にとどまることを示す。
【０２８０】
表１５：時間Ｔ（分）の関数として（＋）−カテキンの各々の源について遊離単量体（＋）−カテキンの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された血中に存在する遊離（＋）−カテキンに関するＴ（ｍａｘ）、ｃ（ｍａｘ）、およびｃｔパラメーター
【０２８１】
【表１９】
2016518423.tif 000022
【０２８２】
最適のバイオアベイラビリティーパラメーターが（＋）−カテキンとアミノ酸の粉末状混合物に基づいて得られることができることは、この混合物の調製が単一固相で極めて簡単に行なわれる限り生産コストの点で有利であることを意味し、それにより大量生産の見込みを想定できる。
【０２８３】
比較例１０：ケルセチンおよび没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）に関する経口投与後のバイオアベイラビリティーのラットにおける測定
この例では、下記表１６の結果に示されるように、ケルセチンの経口投与後バイオアベイラビリティーに対しても、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）の経口投与後バイオアベイラビリティーに対しても、リジンの効果が顕著ではないことが示される。
【０２８４】
表１６：時間Ｔ（分）の関数として、各ポリフェノール源のポリフェノールの血漿濃度（ｃｃ）（単位ｎｇ／ｍＬ）の曲線から計算された血中に存在する遊離ポリフェノールに関するＴ（ｍａｘ）、ｃ（ｍａｘ）、およびｃｔパラメーター
【０２８５】
【表２０】
2016518423.tif 000023
【０２８６】
＊ＱＰ：純粋なケルセチン、すなわち、１つの塩基性アミノ酸とも錯体を作っていない
§［Ｑ：Ｌｙｓ：ＨＣｌ／１：２：２］：ケルセチンと２つのリジンの錯体
＊＊Δｃｔｑ：ＱＰのバイオアベイラビリティー値に関連付けた、錯体で得られたｃｔとＱＰに関して測定されたｃｔの間の差の大きさ
【０２８７】
この例では、経口で投与された組成物は、モル当量比が、ケルセチンについては１：２、ＥＧＣＧに関しては１：１、１：２、１：３、および１：５である、粉末形態の塩酸リジネート（Ｌｙｓ：ＨＣｌ）と純粋な単量体ケルセチンまたはＥＧＣＧの混合物に基づいて調製された。
【０２８８】
各々の混合物を水に溶かす。次に、この溶液を、５頭のウィスターラット群の各個体に、純粋な単量体ケルセチンもしくはＥＧＣＧの（体重１ｋｇ当たり）２５ｍｇの１回投与量または２５ｍｇのポリフェノールに相当するケルセチンリジネートもしくはＥＧＣＧＣリジネートの投与量の割合で経口（ＰＯ）投与される。
【０２８９】
ＥＧＣＧに関して、純粋なＥＧＣＧについてであろうとその錯体形態についてあろうと、没食子酸エピガロカテキンに加える塩酸リジネートがどんな割合であっても（１：１：１、１：２：２、１：３：３でも、１：５：５のモル当量比でも）、測定レベルは信頼のおける検出限界未満（すなわち２５０ｎｇ／ｍＬ未満）にとどまる。
【０２９０】
結論として、モル当量比が１：２の（＋）−カテキンと塩基性アミノ酸の錯体について得られた最適バイオアベイラビリティーの結果を考慮し、ケルセチンまたはＥＧＣＧなどの他の酸とポリフェノールの錯体形成の試みが失敗した事実を考えると、［Ｃ：ＡＡ／１：１−１：２．５］錯体はその消化管の通過に関して特有の活性をもつ錯体であることが本発明の文脈において示される。したがって明らかに後者の場合、ケルセチンおよびＥＧＣＧの経口投与後バイオアベイラビリティーを上げるはずであったのは単なる酸−塩基中和ではない。
【０２９１】
また、本発明は前記の特定の実施形態に決して限定されないこと、および添付の請求の範囲の内容から逸脱することなく変更が導入されうることが理解される。
【図１ａ】
2016518423.tif 000024
【図１ｂ】
2016518423.tif 000025
【図２ａ】
2016518423.tif 000026
【図２ｂ】
2016518423.tif 000027
【図３】
2016518423.tif 000028
【図４ａ】
2016518423.tif 000029
【図４ｂ】
2016518423.tif 000030
【図５】
2016518423.tif 000031
【国際調査報告】
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