(57)【要約】本発明は、緑内障、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の損失もしくは損傷、または眼圧上昇（ＩＯＰ）に罹患した被験者を治療し、または患者におけるＲＧＣの損失もしくは損傷を低減し、またはＩＯＰを低下させる方法であって、前記被験者を治療し、前記被験者におけるＲＧＣの損失もしくは損傷を低減し、またはＩＯＰを低下させるために有効な量のラキニモドを投与することを含んでなる方法を提供する。緑内障にり患した被験者を治療するための医薬組成物、パッケージおよび治療的パッケージもまた提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑内障に罹患している被験者を治療する方法であって、前記被験者に対して、該被験者を治療するのに有効な量のラキニモドを投与することを含む方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記ラキニモドの投与は、前記被験者における緑内障の症状を低減または阻害するのに有効である方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、前記症状が網膜神経節細胞の損傷、網膜神経節細胞の損失、または上昇した眼内圧である方法。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか１項に記載の方法であって、前記ラキニモドがラキニモド酸ナトリウムである方法。
【請求項５】
請求項１〜４の何れか１項に記載の方法であって、前記ラキニモドの投与経路は、眼内、眼周囲、点眼、経口、全身または局所である方法。
【請求項６】
請求項１〜５の何れか１項に記載の方法であって、前記ラキニモドがエアロゾル、吸入可能な粉末、注射可能な液体、ゲル、固体、カプセルまたは錠剤の形態で投与される方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、前記液体またはゲル中のラキニモドの濃度が５〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、２０〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、１０〜１５ｍｇ／ｍＬ溶液、または２０〜５０ｍｇ／ｍＬ溶液である方法。
【請求項８】
請求項１〜７の何れか１項に記載の方法であって、ラキニモドが定期的に投与される方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、ラキニモドが毎日投与される方法。
【請求項１０】
請求項８に記載の方法であって、ラキニモドが１日１回以下、または１日１回よりも頻繁に投与される方法。
【請求項１１】
請求項１〜１０の何れか１項に記載の方法であって、投与されるラキニモドの量が少なくとも０．２ｍｇ／日、および／または０．６ｍｇ／日未満である方法。
【請求項１２】
請求項１〜１０の何れか１項に記載の方法であって、投与されるラキニモドの量が０．０３〜６００ｍｇ／日、０．１〜４０．０ｍｇ／日、０．１〜２．５ｍｇ／日、０．２５〜２．０ｍｇ／日、０．５〜１．２ｍｇ／日、０．２５ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日、０．５ｍｇ／日、０．６ｍｇ／日、１．０ｍｇ／日、１．２ｍｇ／日、１．５ｍｇ／日または２．０ｍｇ／日である請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２の何れか１項に記載の方法であって、投与されるラキニモドの量が投与あたり０．０５〜４．０ｍｇ、投与あたり０．０５〜２．０ｍｇ、投与あたり０．２〜４．０ｍｇ、投与あたり０．２〜２．０ｍｇ、投与あたり約０．１ｍｇ、または投与あたり約０．５ｍｇである方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３の何れか１項に記載の方法であって、更に、緑内障の治療のための第二の薬剤を投与することを含む方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であって、前記第二の薬剤は、β−アドレナリンアンタゴニスト、アドレナリンアゴニスト、副交感神経作動薬、プロスタグランジン様類似体、または炭酸脱水酵素阻害剤である方法。
【請求項１６】
請求項８〜１５の何れか１項に記載の方法であって、前記ラキニモドの定期的な投与は、少なくとも３日間、３０日超、４２日超、８週間以上、少なくとも１２週間、少なくとも２４週間、２４週間超、または６ヶ月以上継続される方法。
【請求項１７】
請求項１〜１６の何れか１項に記載の方法であって、前記被験者がヒト患者である方法。
【請求項１８】
網膜神経節細胞の損失または網膜神経節細胞の損傷に罹患している被験者を治療し、または被験者における網膜神経節細胞の損失または損傷を低減する方法であって、前記被験者に対して、該被験者における網膜神経節細胞その損失または網膜神経節細胞の損傷を低減させるのに有効な量のラキニモドを投与することを含む方法。
【請求項１９】
高眼圧に罹患した被験者を治療し、または被験者における眼圧を低下させる方法であって、前記被験者に対して、該被験者における眼圧を低下させるために有効な量のラキニモドを投与することを含む方法。
【請求項２０】
ａ）ある量のラキニモドを含有する医薬組成物と、
ｂ）緑内障に罹患した患者を治療するように前記医薬組成物を使用するための指示書
を含んでなるパッケージ。
【請求項２１】
請求項２０に記載のパッケージであって、該パッケージは、緑内障の治療のためのある量の第二の薬剤を含有する第二の医薬組成物を含んでなるパッケージ。
【請求項２２】
請求項２１に記載のパッケージであって、前記第二の薬剤はβ−アドレナリンアンタゴニスト、アドレナリンアゴニスト、副交感神経作動薬、プロスタグランジン様類似体、または炭酸脱水酵素阻害剤であるパッケージ。
【請求項２３】
請求項２０〜２２の何れか１項に記載のパッケージであって、前記医薬組成物は、エアロゾル、吸入可能な粉末、注射可能な液体、ゲル、固体、カプセルまたは錠剤の形態であるパッケージ。
【請求項２４】
請求項２３に記載のパッケージであって、前記液体またはゲル中のラキニモドの濃度は、５〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、２０〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、１０〜１５ｍｇ／ｍＬ溶液または２０〜５０ｍｇ／ｍＬ溶液であるパッケージ。
【請求項２５】
請求項２３に記載のパッケージであって、前記錠剤は、酸素がコアと接触するのを阻止するコーティングで被覆されるパッケージ。
【請求項２６】
請求項２５に記載のパッケージであって、前記コーティングは、セルロース系ポリマー、粘着防止剤、光沢増強剤、または顔料を含んでなるパッケージ。
【請求項２７】
請求項２０〜２６の何れか１項に記載のパッケージであって、前記医薬組成物はマンニトール、アルカリ化剤、酸化還元剤、潤滑剤、充填剤、および／または乾燥剤を含んでなるパッケージ。
【請求項２８】
請求項２７に記載のパッケージであって、前記アルカリ化剤がメグルミンであるパッケージ。
【請求項２９】
請求項２０〜２７の何れか１項に記載のパッケージであって、前記医薬組成物は安定しており、且つアルカリ化剤または酸化還元剤を含まず、好ましくは、前記医薬組成物はアルカリ化剤または還元剤酸化を含まないパッケージ。
【請求項３０】
請求項２０〜２９の何れか１項に記載のパッケージであって、前記医薬組成物は安定であり、且つ崩壊剤を含まないパッケージ。
【請求項３１】
請求項２７に記載のパッケージであって、前記潤滑剤が固体粒子として前記医薬組成物中に存在するパッケージ。
【請求項３２】
請求項２７または３１に記載のパッケージであって、前記潤滑剤が、フマル酸ステアリルナトリウムまたはステアリン酸マグネシウムであるパッケージ。
【請求項３３】
請求項２７に記載のパッケージであって、前記充填剤は、固体粒子として前記医薬組成物中に存在するパッケージ。
【請求項３４】
請求項２７または３３に記載のパッケージであって、前記充填剤は、ラクトース、ラクトース一水和物、スターチ、イソマルト、マンニトール、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、乾燥ラクトース噴霧、無水ラクトース、またはそれらの組み合わせであるパッケージ。
【請求項３５】
請求項２７に記載のパッケージであって、前記乾燥剤はシリカゲルであるパッケージ。
【請求項３６】
請求項２０〜３５の何れか１項に記載のパッケージであって、前記医薬組成物は安定であり、且つ４％以下の水分含量を有するパッケージ。
【請求項３７】
請求項２０〜３６の何れか１項に記載のパッケージであって、前記ラキニモドが、固体粒子として前記医薬組成物中に存在するパッケージ。
【請求項３８】
請求項２０〜３７の何れか１項に記載のパッケージであって、前記パッケージは、１リットル当たり１５ｍｇ／日以下の透湿性を有する密封包装体、または０．００５ｍｇ／日以下の最大透湿性を有するブリスターパックであるパッケージ。
【請求項３９】
請求項３８に記載のパッケージであって、前記密封されたパッケージがボトルであるか、またはＨＤＰＥボトルを含んでなり、好ましくは、前記ボトルは熱誘導ライナーで閉鎖されるパッケージ。
【請求項４０】
請求項３８または３９に記載のパッケージであって、前記密封されたパッケージが酸素吸収剤を含んでなり、該酸素吸収剤は好ましくは鉄であるパッケージ。
【請求項４１】
請求項２０〜４０の何れか１項に記載のパッケージであって、前記医薬組成物中のラキニモドの量は、少なくとも０．２ｍｇ未満、０．６ｍｇ、０．１〜４０．０ｍｇ、０．０３〜６００ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５〜２．０ｍｇ、０．５〜１．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２ｍｇ、１．５ｍｇ、または２．０  ｍｇであるパッケージ。
【請求項４２】
請求項２０〜４１の何れか１項に記載のパッケージであって、前記医薬組成物は、０．０５〜４．０ｍｇ、０．０５〜２．０ｍｇ、０．２〜４．０ｍｇ、０．２〜２．０ｍｇ、約０．１ｍｇ、または約０．５ｍｇの単位用量のラキニモドを含むパッケージ。
【請求項４３】
請求項２０〜４２の何れか１項に記載のパッケージであって、前記医薬組成物は、眼内、眼周囲、点眼、経口、全身または局所投与のために処方されるパッケージ。
【請求項４４】
請求項２０〜４３の何れか１項に記載のパッケージであって、緑内障に罹患している被験者の治療に使用するためのパッケージ。
【請求項４５】
緑内障に罹患している被験者に配薬するための治療用パッケージであって：
ａ）１以上の単位用量であって、このような各単位用量はある量のラキニモドを含有し、ここで前記単位用量中の前記ラキニモドの量は前記被験者に投与したときに前記被験者を治療するために有効である単位用量と、
ｂ）完成した医薬容器であって、該容器は前記単位用量（複数可）を含み、更に前記被験者の治療における前記パッケージの使用を指示するラベルを含み、または備えてなる容器
を具備する治療用パッケージ。
【請求項４６】
請求項４５に記載の治療用パッケージであって、該パッケージは、緑内障の治療のためのある量の第二の薬剤を含有する第二の医薬組成物を含んでなる治療用パッケージ。
【請求項４７】
請求項４６に記載の治療用パッケージであって、前記第二の薬剤は、βアドレナリン拮抗薬、アドレナリン作動薬、副交感神経作動薬、プロスタグランジン様類似体、または炭酸脱水酵素阻害薬である治療用パッケージ。
【請求項４８】
緑内障に罹患した被験者を治療することにおいて使用するための、ある量のラキニモドを含有する医薬組成物。
【請求項４９】
請求項４８に記載の医薬組成物であって、緑内障の治療のためのある量の第二の薬剤を含有する医薬組成物。
【請求項５０】
請求項４９に記載の医薬組成物であって、前記第二の薬剤は、βアドレナリン拮抗薬、アドレナリン作動薬、副交感神経作動薬、プロスタグランジン様類似体、または炭酸脱水酵素阻害薬である医薬組成物。
【請求項５１】
請求項４８〜５０の何れか１項に記載の医薬組成物であって、エアロゾル、吸入可能な粉末、注射可能な液体、ゲル、固体、カプセルまたは錠剤の形態の医薬組成物。
【請求項５２】
請求項５１に記載の医薬組成物であって、前記液体またはゲル中のラキニモドの濃度は５〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、２０〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、１０〜１５ｍｇ／ｍＬ溶液、または２０〜５０ｍｇ／ｍＬ溶液である医薬組成物。
【請求項５３】
請求項５１に記載の医薬組成物であって、溶液中に少なくとも０．２ｍｇのラキニモドを含有する１０μＬの水性医薬溶液の単位容量を含んでなる医薬組成物。
【請求項５４】
請求項４８〜５３の何れか１項に記載の医薬組成物であって、ラキニモドがラキニモドナトリウムである、請求項４８−５３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５５】
請求項５１に記載の医薬組成物であって、前記錠剤が、酸素がコアと接触するのを阻害するコーティングで被覆される医薬組成物。
【請求項５６】
請求項５５に記載の医薬組成物であって、前記コーティングは、セルロース系ポリマー、粘着防止剤、光沢増強剤、または顔料を含んでなる医薬組成物。
【請求項５７】
請求項４８〜５６の何れか１項に記載の医薬組成物であって、更に、マンニトール、アルカリ化剤、還元剤、酸化剤、潤滑剤および／または充填剤を含む医薬組成物。
【請求項５８】
請求項５７に記載の医薬組成物であって、前記アルカリ化剤はメグルミンである医薬組成物。
【請求項５９】
請求項４８〜５７に記載の医薬組成物であって、前記アルカリ化剤または酸化還元剤を含まない、好ましくは、前記アルカリ化剤を含まず且つ前記酸化還元剤を含まない医薬組成物。
【請求項６０】
請求項４８〜５９に記載の医薬組成物であって、安定であり、前記崩壊剤を含まない医薬組成物。
【請求項６１】
請求項５７に記載の医薬組成物であって、前記潤滑剤が、固体粒子として前記医薬組成物中に存在する医薬組成物。
【請求項６２】
請求項６１に記載の医薬組成物であって、前記潤滑剤が、フマル酸ステアリルナトリウムまたはステアリン酸マグネシウムである医薬組成物。
【請求項６３】
請求項６７に記載の医薬組成物であって、前記充填剤は、固体粒子として前記医薬組成物中に存在する医薬組成物。
【請求項６４】
請求項５７または６３に記載の医薬組成物であって、前記充填剤は、ラクトース、ラクトース一水和物、スターチ、イソマルト、マンニトール、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、乾燥ラクトース噴霧、無水ラクトース、またはそれらの組み合わせである医薬組成物。
【請求項６５】
請求項４８〜６４の何れか１項に記載の医薬組成物であって、前記ラキニモドの量は、少なくとも０．２ｍｇ、０．６ｍｇ未満、０．１〜４０．０ｍｇ、０．０３〜６００ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５〜２．０  ｍｇ、０．５〜１．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２ｍｇ、１．５ｍｇ、または２．０  ｍｇである医薬組成物。
【請求項６６】
請求項４８〜６５の何れか１項に記載の医薬組成物であって、０．０５〜４．０ｍｇ、０．０５〜２．０ｍｇ、０．２〜４．０ｍｇ、０．２〜２．０ｍｇ、約０．１ｍｇ、または約０．５ｍｇのラキニモドの単位用量を含んでなる医薬組成物。
【請求項６７】
請求項４８〜６６の何れか１項に記載の医薬組成物であって、眼内、眼周囲、点眼、経口、全身または局所投与用に製剤化される医薬組成物。
【請求項６８】
請求項４８〜６７の何れか１項に記載の医薬組成物であって、緑内障に罹患した被験者の治療において使用するための医薬組成物。
【請求項６９】
緑内障に罹患した被験者の治療において有用な単位剤型の医薬組成物であって、ある量のラキニモドを含有し、該組成物中のラキニモドの量は、前記被験者への１以上の前記組成物の単位容量形を投与したときに、前記被験者を治療するために有効である医薬組成物。
【請求項７０】
ａ）請求項４８〜６９の何れか１項に記載の医薬組成物と、
ｂ）緑内障に罹患している被験者を治療するように前記医薬組成物を使用するための指示書
を備えてなるパッケージ。
【請求項７１】
緑内障に罹患した被験者の治療に使用するための医薬の製造のためのラキニモド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１３年１１月１５日に出願された米国仮出願番号６１／９０４９６２の優先権を主張するものであり、その全体の内容を、本明細書の一部として本願に援用する。
【０００２】
本願の全体を通して、種々の刊行物がその筆頭発明者および発行年によって引用される。これらの刊行物の完全な引用は、特許請求の範囲の直前の参照文献の章に提示される。本明細書で引用される文書および刊行物の開示の全体を、本明細書の一部として本願に援用する。
【背景技術】
【０００３】
緑内障は、少なくとも部分的には眼圧（ＩＯＰ）亢進による、目に対する進行性の損傷を特徴とする眼疾患群である（Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９９））。更に、緑内障は、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の死、軸索の損失、および視神経乳頭の洞穴状外観により特徴付けられる（Ａｌｗａｒｄ  １９９８）。緑内障は、視野テストによって、および「カッピング」を検出するための視神経の検眼鏡検査によって、視力低下が生じる前に診断することができる。通常の成人の平均ＩＯＰは１５〜１６ｍｍＨｇであり、正常な範囲は１０〜２１ｍｍＨｇである。緑内障の管理の一形態は、局所的に適用される薬を使用して、ＩＯＰを低下させることに基づいている（Ｃｏｌｅｍａｎ、１９９９）。
【０００４】
現在、ＩＯＰを低下させるために使用される５つの主要な分類の薬剤が存在する：即ち、βアドレナリン拮抗薬、アドレナリン作動薬、副交感神経作動薬、プロスタグランジン様類似体および炭酸脱水酵素阻害剤である（Ｍｅｄｅｉｒｏｓ ｅｔ ａｌ．２００２）。殆どの薬物は眼に局所的に適用されるが、それらは重篤な全身性副作用を引き起こし、患者の生活の質に有害な影響を与える可能性がある。もし、追加のＩＯＰ低下が指示され、または投薬が十分にＩＯＰを低下させなかった場合には、通常はレーザー線維柱帯形成術が次のステップである。ＩＯＰが未だ適切に制御されない場合には、切開緑内障手術が指示される（出典は上記と同じ）。神経細胞損失の程度はかなり減少させるにもかかわらず、ＲＧＣの損失が継続する可能性があるため、ＩＯＰの低下は疾患プロセスの停止を保証するものではない。医学的または外科的介入後のＩＯＰの調節と視野損失の関連性に関する最近の研究によって、ＩＯＰが低い場合には、視野検査に反映される継続的なニューロン損失が減少し得ることが示された。しかし、神経細胞の損失は、ＩＯＰが減少した後にも発生し続ける可能性がある（Ｂａｋａｌａｓｈ ｅｔ ａｌ．２００２）。  
緑内障視神経症は、特定の病態生理学的変化と、その後のＲＧＣおよびその軸索の死に起因すると思われる。ＲＧＣ死のプロセスは二相性であると考えられている：即ち、損傷の開始の原因である一次障害と、これに続く変性細胞を取り巻く厳しい環境に起因した遅い二次変性である（Ｋｉｐｎｉｓ ｅｔ ａｌ．２０００）。 
ＲＧＣ死を誘発する分子機構は未だ同定されていない。神経栄養因子の欠乏、虚血、グルタミン酸の慢性的上昇および無秩序な一酸化窒素代謝昇が、可能なメカニズムであるとして疑われている（Ｆａｒｋａｓ ｅｔ ａｌ．２００１）。加えて、ＲＧＣ死に導く機構は、他の種類の神経損傷と共通した特徴、例えばミトコンドリアの脱分極または転写調節、細胞死の誘導を共有することが可能である（Ｗｅｉｎｒｅｂ ｅｔ ａｌ．１９９９）。
【０００５】
＜ラキニモド＞
ラキニモド（ＬＡＱ）は、経口での生体利用性が高い新しい合成化合物であり、多発性硬化症（ＭＳ）の治療のための経口処方剤として提唱されている（Ｐｏｌｍａｎ，２００５；Ｓａｎｄｂｅｒｇ−Ｗｏｌｌｈｅｉｍ，２００５）。ラキニモドおよびそのナトリウム塩形態は、例えば米国特許第６，０７７，８５１号に記載されている。
【０００６】
ラキニモドの作用機構は完全には理解されていない。動物実験により、それがＴｈ１（Ｔヘルパー１細胞、炎症促進性サイトカイン類を生じる）を、抗炎症性プロファイルをもったＴｈ２（Ｔヘルパー２細胞、抗炎症性サイトカイン類を生じる）へとシフトさせることが示されている（Ｙａｎｇ，２００４；Ｂｒｕｅｃｋ，２０１１）。もう一つの研究により、ラキニモドが抗原提示に関連する遺伝子および対応する炎症経路の抑制を誘導することが示された（Ｇｕｒｅｖｉｃｈ，２０１０）。示唆された他の可能な作用機構には、ＣＮＳ中への白血球の遊走阻害、軸索一体性の増大、サイトカイン産生の調節、および脳由来神経栄養性因子（ＢＤＮＦ）のレベル増大が含まれる（Ｒｕｎｓｔｒｏｅｍ，２００６；Ｂｒｕｅｃｋ，２０１１）。
【０００７】
緑内障に対するラキニモドの効果は、以前には研究されていない。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、緑内障に罹患している被験者を治療する方法であって、前記被験者に対して、該被験者を治療するのに有効な量のラキニモドを投与することを含む方法を提供する。
【０００９】
本発明はまた、網膜神経節細胞の損失または網膜神経節細胞の損傷に罹患している被験者を治療し、または被験者における網膜神経節細胞の損失または損傷を低減する方法であって、前記被験者に対して、該被験者における網膜神経節細胞その損失または網膜神経節細胞の損傷を低減させるのに有効な量のラキニモドを投与することを含む方法を提供する。
【００１０】
本発明はまた、高眼圧に罹患した被験者を治療し、または被験者における眼圧を低下させる方法であって、前記被験者に対して、該被験者における眼圧を低下させるために有効な量のラキニモドを投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
本発明はまた、ａ）ある量のラキニモドを含有する医薬組成物と、ｂ）緑内障に罹患した患者を治療するように前記医薬組成物を使用するための指示書とを含んでなるパッケージを提供する。
【００１２】
本発明はまた、  緑内障に罹患している被験者に配薬するための治療用パッケージにおいて：ａ）１以上の単位用量であって、このような各単位用量はある量のラキニモドを含有し、ここで前記単位用量中の前記ラキニモドの量は前記被験者に投与したときに前記被験者を治療するために有効である単位用量と、ｂ）完成した医薬容器であって、該容器は前記単位用量（複数可）を含み、更に前記被験者の治療における前記パッケージの使用を指示するラベルを含み、または備えてなる容器とを具備する治療用パッケージを提供する。
【００１３】
本発明はまた、緑内障に罹患した被験者の治療に使用するための、本明細書に記載された医薬組成物およびパッケージを提供する。
【００１４】
本発明はまた、緑内障に罹患した被験者の治療において有用な単位剤型の医薬組成物であって、ある量のラキニモドを含有し、該組成物中のラキニモドの量は、前記被験者への１以上の前記組成物の単位容量形を投与したときに、前記被験者を治療するために有効である医薬組成物を提供する。
【００１５】
本発明はまた、ａ）本明細書に記載される医薬組成物と、ｂ）緑内障に罹患している被験者を治療するように前記医薬組成物を使用するための指示書を備えてなるパッケージを提供する。
【００１６】
本発明はまた、緑内障に罹患した被験者の治療に使用するための医薬の製造のためのラキニモドを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】例１：平均のΔΙΟΡ（ＯＨＴマイナス非ＯＨＴ）（ｍｍＨｇ）。
【図２】例１：フッ素−金で標識されたＲＧＣ損失％。
【図３】例１：平均のフッ素−金標識されたＲＧＣカウント／ｍｍ２。
【図４】視神経損傷等級（１−５）。
【図５Ａ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号４８、グループ１、左眼。
【図５Ｂ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号４８、グループ１、右眼。
【図５Ｃ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号５９、グループ２、左眼。
【図５Ｄ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号５９、グループ２、右眼。
【図５Ｅ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号２２、グループ３、左眼。
【図５Ｆ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号２２、グループ３、右眼。
【図５Ｇ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号３１、グループ４、左眼。
【図５Ｈ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号３１、グループ４、右眼。
【図５Ｉ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号３５、グループ５、左眼。
【図５Ｊ】例１：ＦＧ標識されたＲＧＣを用いた網膜の代表的な画像−動物番号３５、グループ５、右眼。
【発明の詳細な説明】
【００１８】
本発明は、緑内障に罹患している被験者を治療する方法であって、前記被験者に対して、該被験者を治療するのに有効な量のラキニモドを投与することを含む方法を提供する。
【００１９】
一実施形態において、前記ラキニモドの投与は、前記被験者における緑内障の症状を低減または阻止するために有効である。別の実施形態において、前記症状は、網膜神経節細胞の損傷、網膜神経節細胞の損失、または上昇した眼内圧である。別の実施形態において、ラキニモドはラキニモドナトリウムである。
【００２０】
一実施形態では、ラキニモドの投与経路は、眼内、眼周囲、全身または局所である。別の実施形態では、ラキニモドは経口投与を介して投与される。別の実施形態では、ラキニモドが眼内投与を介して投与される。別の実施形態では、ラキニモドはエアロゾル、吸入可能な粉末、注射可能な、液体、ゲル、固体、カプセルまたは錠剤の形態で投与される。
【００２１】
一実施形態において、前記液体またはゲル中ラキニモドの濃度は、５〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液を、２０〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液を、１０〜１５ｍｇ／ｍＬ溶液、または２０〜５０ｍｇ／ｍＬ溶液である。別の実施形態では、ラキニモドは定期的に投与される。別の実施形態では、ラキニモドは毎日投与される。別の実施形態では、ラキニモドは１日１回よりも頻繁に投与される。更に別の実施形態では、ラキニモドは１日１回未満の頻度で投与されまる
一実施形態において、投与されるラキニモドの量は少なくとも０．２ｍｇ／日、および／または０．６ｍｇ／日未満である。別の実施形態では、投与されるラキニモドの量が０．０３〜６００ｍｇ／日、０．１〜４０．０ｍｇ／日、０．１〜２．５ｍｇ／日、０．２５〜２．０ｍｇ／日、０．５〜１．２ｍｇ／日である。別の実施形態では、投与されるラキニモドの量は、０．２５ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日、０．５ｍｇ／日、０．６ｍｇ／日、１．０ｍｇ／日、１．２ｍｇ／日、１．５ｍｇ／日または２．０ｍｇ／日である。更に別の実施形態では、投与されるラキニモドの量は、投与あたり０．０５〜２．０ｍｇ、投与あたり０．２〜４．０ｍｇ、投与あたり０．２〜２．０ｍｇ、投与あたり約０．１ｍｇ、または投与あたり約０．５ｍｇである。
【００２２】
本発明の一実施形態では、当該方法は更に、緑内障の治療のための第二の薬剤を投与することを含む。別の実施形態では、前記第二の薬剤は、β−アドレナリンアンタゴニスト、アドレナリンアゴニスト、副交感神経作動薬、プロスタグランジン様類似体、または炭酸脱水酵素阻害剤である。
【００２３】
一実施形態では、ラキニモドの定期的な投与は、前記ラキニモドの定期的な投与は、少なくとも３日間、３０日超、４２日超、８週間以上、少なくとも１２週間、少なくとも２４週間、２４週間超、または６ヶ月以上継続される。別の実施形態において、前記被験者はヒト患者である。
【００２４】
本発明はまた、網膜神経節細胞の損失または網膜神経節細胞の損傷に罹患している被験者を治療し、または被験者における網膜神経節細胞の損失または損傷を低減する方法であって、前記被験者に対して、該被験者における網膜神経節細胞その損失または網膜神経節細胞の損傷を低減させるのに有効な量のラキニモドを投与することを含む方法を提供する。
【００２５】
本発明はまた、高眼圧に罹患した被験者を治療し、または被験者における眼圧を低下させる方法であって、前記被験者に対して、該被験者における眼圧を低下させるために有効な量のラキニモドを投与することを含む方法を提供する。
【００２６】
本発明はまた、ａ）ある量のラキニモドを含有する医薬組成物と、ｂ）緑内障に罹患した患者を治療するように前記医薬組成物を使用するための指示書を含んでなるパッケージを提供する。
【００２７】
本発明の一実施形態では、前記パッケージは、緑内障の治療のためのある量の第二の薬剤を含有する第二の医薬組成物を含んでいる。別の実施形態では、前記第二の薬剤はβ−アドレナリンアンタゴニスト、アドレナリンアゴニスト、副交感神経作動薬、プロスタグランジン様類似体、または炭酸脱水酵素阻害剤である。一実施形態では、前記医薬組成物は、エアロゾル、吸入可能な粉末、注射可能な液体、ゲル、固体、カプセルまたは錠剤の形態である。別の実施形態では、前記医薬組成物は、液体またはゲルの形態である。
【００２８】
一実施形態では、前記液体またはゲル中のラキニモドの濃度は、５〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、２０〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、１０〜１５ｍｇ／ｍＬ溶液または２０〜５０ｍｇ／ｍＬ溶液である。
【００２９】
別の実施形態では、前記医薬組成物はカプセルの形態、または錠剤の形態である。別の実施形態において、該錠剤は、酸素がコアと接触するのを阻止するコーティングで被覆される。別の実施形態では、該コーティングは、セルロース系ポリマー、粘着防止剤、光沢増強剤、または顔料を含む。
【００３０】
一実施形態において、前記医薬組成物は、更にマンニトールを含む。別の実施形態では、該医薬組成物は更にアルカリ化剤を含む。別の実施形態では、該アルカリ化剤はメグルミンである。別の実施形態では、前記医薬組成物は更に酸化還元剤を含む。
【００３１】
一実施形態において、前記医薬組成物は安定であり、アルカリ剤または酸化還元剤を含まない。別の実施形態では、前記医薬組成物はアルカリ化剤を含まず、且つ還元剤酸化を含まない。
【００３２】
一実施形態において、前記医薬組成物は安定であり、崩壊剤を含まない。別の実施形態では、前記医薬組成物は、更に潤滑剤を含む。別の実施形態において、該潤滑剤は、固体粒子として医薬組成物中に存在する。別の実施形態において、該潤滑剤はステアリルフマル酸ナトリウムまたはステアリン酸マグネシウムである。
【００３３】
一実施形態において、前記医薬組成物は更に充填剤を含有する。別の実施形態において、該充填剤は、固体粒子として医薬組成物中に存在する。別の実施形態において、該充填剤は、ラクトース、ラクトース一水和物、スターチ、イソマルト、マンニトール、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、乾燥ラクトース噴霧、無水ラクトース、またはそれらの組み合わせである。別の実施形態において、前記充填剤は、マンニトールまたはラクトース一水和物である。
【００３４】
一実施形態において、前記パッケージは更に乾燥剤を含んでいる。別の実施形態において、該乾燥剤はシリカゲルである。
【００３５】
一実施形態において、前記医薬組成物は安定であり、且つ４％以下の水分含量を有する。別の実施形態では、前記ラキニモドが、固体粒子として前記医薬組成物中に存在する。別の実施形態では、前記パッケージは、１リットル当たり１５ｍｇ／日以下の透湿性を有する密封包装体、または０．００５ｍｇ／日以下の最大透湿性を有するブリスターパックである。別の実施形態では、前記密封されたパッケージがボトルであるか、またはＨＤＰＥボトルを含んでなり、好ましくは、前記ボトルは熱誘導ライナーで閉鎖される。別の実施態様において、前記密封されたパッケージが酸素吸収剤を含んでいる。別の実施形態において、該酸素吸収剤は好ましくは鉄である。
【００３６】
一実施形態において、医薬組成物中のラキニモドの量は、前記医薬組成物中のラキニモドの量は、少なくとも０．２ｍｇ未満、または０．６ｍｇ未満である。別の実施携帯において、前記医薬組成物中のラキニモドの量は、０．１〜４０．０ｍｇ、０．０３〜６００ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５〜２．０ｍｇ、０．５〜１．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２ｍｇ、１．５ｍｇ、または２．０  ｍｇである。別の実施形態では、前記医薬組成物は、０．０５〜４．０ｍｇ、０．０５〜２．０ｍｇ、０．２〜４．０ｍｇ、０．２〜２．０ｍｇ、約０．１ｍｇ、または約０．５ｍｇの単位用量のラキニモドを含む。
【００３７】
一実施形態において、前記医薬組成物は、眼内、眼周囲、点眼、経口、全身または局所投与のために処方される。別の実施形態において、前記医薬組成物は経口投与、または点眼投与のために処方される。
【００３８】
本発明はまた、緑内障に罹患している被験者の治療に使用するための、本明細書に記載のパッケージを提供する。
【００３９】
本発明はまた、緑内障に罹患している被験者に配薬するための治療用パッケージにおいて：ａ）１以上の単位用量であって、このような各単位用量はある量のラキニモドを含有し、ここで前記単位用量中の前記ラキニモドの量は前記被験者に投与したときに前記被験者を治療するために有効である単位用量と、ｂ）完成した医薬容器であって、該容器は前記単位用量（複数可）を含み、更に前記被験者の治療における前記パッケージの使用を指示するラベルを含み、または備えてなる容器とを具備する治療用パッケージを提供する。
【００４０】
一実施形態において、該治療パッケージは、緑内障の治療のためのある量の第二の薬剤を含有する第二の医薬組成物を含んでいる。別の実施形態では、前記第二の薬剤は、βアドレナリン拮抗薬、アドレナリン作動薬、副交感神経作動薬、プロスタグランジン様類似体、または炭酸脱水酵素阻害薬である。
【００４１】
本発明はまた、緑内障に罹患している被験者を治療することにおいて使用するためのある量のラキニモドを含む医薬組成物を提供する。
【００４２】
一実施形態では、前記医薬組成物は、緑内障の治療のためのある量の第二の薬剤を含有する。別の実施形態では、前記第二の薬剤は、βアドレナリン拮抗薬、アドレナリン作動薬、副交感神経作動薬、プロスタグランジン様類似体、または炭酸脱水酵素阻害薬である。
【００４３】
一実施形態において、前記医薬組成物は、エアロゾル、吸入可能な粉末、注射可能な液体、ゲル、固体、カプセルまたは錠剤の形態である。別の実施形態において、前記医薬組成物は、液体またはゲルの形態である。
【００４４】
一実施形態では、前記液体またはゲル中のラキニモドの濃度は５〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、２０〜１００ｍｇ／ｍＬ溶液、１０〜１５ｍｇ／ｍＬ溶液、または２０〜５０ｍｇ／ｍＬ溶液である。別の実施形態では、前記医薬組成物は、溶液中に少なくとも０．２ｍｇのラキニモドを含有する１０μＬの水性医薬溶液の単位容量を含んでいる。別の実施形態では、ラキニモドはラキニモドナトリウムである。
【００４５】
一実施形態において、前記医薬組成物はカプセルの形態、または錠剤の形態である。別の実施形態では、該錠剤は、酸素がコアと接触するのを阻止するコーティングで被覆される。別の実施形態では、該コーティングは、セルロース系ポリマー、粘着防止剤、光沢増強剤、または顔料を含んでいる。別の実施形態では、該医薬組成物は更にマンニトールを含有する。
【００４６】
一実施形態では、前記医薬組成物は、更にアルカリ化剤を含有する。別の実施形態では、該アルカリ化剤はメグルミンである。別の実施形態では、前記医薬組成物は更に酸化還元剤を含有する。
【００４７】
一実施形態において、前記医薬組成物は、アルカリ化剤または酸化還元剤を含まない。別の実施形態では、前記医薬組成物は、アルカリ化剤を含まず且つ酸化還元剤を含まない。
【００４８】
一実施形態では、前記医薬組成物は安定であり、崩壊剤を含まない。別の実施形態では、前記医薬組成物は、更に潤滑剤を含有する。別の実施形態において、該潤滑剤は、固体粒子として前記医薬組成物中に存在する。別の実施形態において、該潤滑剤はステアリルフマル酸ナトリウムまたはステアリン酸マグネシウムである。
【００４９】
一実施形態では、前記医薬組成物は更に充填剤を含有する。別の実施形態において、充填剤は、固体粒子として前記医薬組成物中に存在する。別の実施形態において、前記充填剤は、ラクトース、ラクトース一水和物、スターチ、イソマルト、マンニトール、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、乾燥ラクトース噴霧、無水ラクトース、またはそれらの組み合わせである。別の実施形態において、該充填剤は、マンニトールまたはラクトース一水和物である。
【００５０】
一実施形態において、医薬組成物中のラキニモドの量は、少なくとも０．２ｍｇ未満または０．６ｍｇ未満である。別の実施形態では、ラキニモドの量は、０．１〜４０．０ｍｇ、０．０３〜６００ｍｇ、０．１〜２．５ｍｇ、０．２５〜２．０  ｍｇ、０．５〜１．２ｍｇ、０．２５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、１．０ｍｇ、１．２ｍｇ、１．５ｍｇ、または２．０  ｍｇである。別の実施形態では、前記医薬組成物は、０．０５〜４．０ｍｇ、０．０５〜２．０ｍｇ、０．２〜４．０ｍｇ、０．２〜２．０ｍｇ、約０．１ｍｇ、または約０．５ｍｇのラキニモドの単位用量を含んでいる。
【００５１】
一実施形態において、前記医薬組成物は、眼内、眼周囲、全身または局所投与用に製剤化される。別の実施形態では、前記医薬組成物は、経口または眼投与用に製剤化される。
【００５２】
本発明はまた、緑内障に罹患した被験者を治療することにおいて使用するための本明細書に記載される医薬組成物を提供する。
【００５３】
本発明はまた、緑内障に罹患した被験者の治療において有用な単位剤型の医薬組成物であって、ある量のラキニモドを含有し、該組成物中のラキニモドの量は、前記被験者への１以上の前記組成物の単位容量形を投与したときに、前記被験者を治療するために有効である医薬組成物を提供する。
【００５４】
本発明はまた、ａ）本明細書に記載の医薬組成物と、ｂ）緑内障に罹患している被験者を治療するように前記医薬組成物を使用するための指示書とを備えてなるパッケージを提供する。
【００５５】
本発明はまた、緑内障に罹患している被験者の治療に使用するための医薬の製造のためのラキニモドを提供する。
【００５６】
上記実施形態について、本明細書に開示される各実施形態は、開示された他の実施形態のそれぞれに適用可能であることが意図されている。例えば、方法の実施形態に記載の構成要素は、本明細書に記載した医薬組成物、パッケージおよび使用の実施形態においても用いることができ、その逆もまた可能である。
【００５７】
＜用語＞
本明細書で使用されるとき、別途言及しない限り、以下の用語の各々は、以下に示す定義を有するものとする。
【００５８】
本明細書で用いるとき、「ラキニモド」とは、ラキニモド酸またはその薬学的に許容される塩を意味する。
【００５９】
「それらの塩」とは、化合物の酸性塩または塩基性塩を作製することにより改変された本発明の化合物の塩である。この点において、「薬学的に許容される塩」の用語は、本発明の化合物の比較的無毒の無機および有機の酸付加塩または塩基付加塩を意味する。例えば、そのような塩を調製する１つの手段は、本発明の化合物を無機塩基で処理することによるものである。
【００６０】
本明細書で使用する場合、ミリグラム単位で測定したラキニモドの「量」または「用量」は、製剤の形態にかかわらず、調製物中に存在するラキニモド酸のミリグラム数を意味する。「０．６ｍｇのラキニモドの用量」は、製剤の形態に拘らず、該製剤中のラキニモド酸の量が０．６ｍｇであることを意味する。従って、塩の形態、例えばラキニモドナトリウム塩の形態で存在するとき、０．６ｍｇのラキニモド用量を提供するために必要な塩形態の重量は、追加の塩イオンの存在に起因して、０．６ミリグラム超えるであろう（例えば、０．６４ｍｇ）。
【００６１】
本明細書で使用する場合、「単位用量」、「単位用量（複数）」および「単位用量形態（複数可）」は、単一の薬物投与実体（複数可）を意味する。
【００６２】
本明細書で使用する場合、数値または範囲の文脈における「約」は、明細書および特許請求の範囲に記載された数値または範囲の±１０％を意味する。
【００６３】
本明細書で使用する場合、ある化学物質「フリー」の組成物とは、該化学物質が製剤の一部ではなく、また製造プロセスの如何なるの部分においても肯定的には添加されなかったが、当該組成物が、不可避的な量の当該化学物質を含有することを意味する。例えば、アルカリ化剤「フリー」である組成物は、アルカリ化剤は、存在したとしても、重量で該組成の少量成分であることを意味する。好ましくは、組成物がある成分について「フリー」である場合、当該組成物は０．１重量％未満、０．０５重量％未満、０．０２重量％未満、または０．０１重量％未満の当該成分を含む。
【００６４】
本明細書で使用するとき、「アルカリ化剤」の用語は、「アルカリ性反応成分」または「アルカリ剤」の用語と互換的に使用され、それが使用される医薬組成物においてプロトンを中和し、また該組成物のｐＨを上昇させる任意の医薬的に許容可能な賦形剤を意味する。
【００６５】
本明細書で使用するとき、「酸化還元剤」とは、「酸化防止剤」、「還元剤」及び「キレート剤」を含む一群の化学物質を言う。
【００６６】
本明細書で使用するとき、「抗酸化剤」とは、トコフェロール、メチオニン、グルタチオン、トコトリエノール、ジメチルグリシン、ベタイン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ターメリン、ビタミンＥ、パルミチン酸アスコルビル、トコフェロール、メシル酸デテロキサイム（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ）、メチルパラベン、エチルパラベン、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、メタ重亜硫酸ナトリウムもしくはカリウム、亜硫酸ナトリウムもしくはカリウム、α−トコフェロールもしくはその誘導体、アスコルビン酸ナトリウム、エデト酸二ナトリウム、ＢＨＡ（ブチル化ヒドロキシアニソール）、上記化合物の医薬的に許容可能な塩もしくはエステル、およびこれらの混合物からなる群から選択される化合物をいう。
【００６７】
本明細書で使用される「抗酸化剤」の用語はまた、ケルセチン、モリン、ナリンゲニンおよびヘスペレチン、タキシフォリン、アフゼリン（ａｆｚｅｌｉｎ）、クエルシトリン、ミリシトリン、ゲニステイン、アピゲニン及びビオカニンＡ、フラボン、フラボピリドールの群から選択されるもの等のフラボノイド、大豆イソフラボノイド、ゲニステインのようなイソフラボノイド、茶カテキン、エピガロカテキンガレート、フラボノール、エピカテキン、ヘスペレチン、クリシン、ジオスミン、ヘスペリジン、ルテオリン、およびルチンのようなカテキン類を指称する。
【００６８】
本明細書で使用するとき、「還元剤」とは、チオール含有化合物、チオグリセロール、メルカプトエタノール、チオグリコール、チオジグリコール、システイン、チオグルコース、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、ジチオ−ビス−マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルフェノール（ＢＨＴ）、亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ホルムアミジンメタ重亜硫酸ナトリウム、および重亜硫酸アンモニウムからなる群から選択される化合物を言う。
【００６９】
本明細書で使用する場合、「キレート剤」とは、ペニシラミン、トリエンチン、Ν，Ν’−ジエチルジチオカルバメート（ＤＤＣ）、２，３，２’−テトラミン（２，３，２’  −ｔｅｔ）、ネオクプロイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−ピリジルメチル）エチレンジアミン（ＴＰＥＮ）、１，１０−フェナントロリン（ＰＨＥ）、テトラエチレンペンタミン、トリエチレンテトラアミン、およびトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、フェリオキサミン、ＣＰ９４、ＥＤＴＡ、メタンスルホン酸塩としてのデフェロキサイニンＢ（ＤＦＯ）（デスフェリオキサニリンＢメシレート（ＤＦＯＭ）としても知られる）、ノバルティス（以前のチバ・ガイギー）から入手可能なデスレラル、およびアポフェリチンからなる群から選択される化合物を言う。
【００７０】
本明細書で使用するとき、医薬組成物は、該組成物が貯蔵中の活性医薬成分の物理的安定性／完全性および／または化学的安定性／完全性を維持した場合に「安定」である。更に、「安定した医薬組成物」は、その分解生成物のレベルが、時間ゼロにおけるにおけるレベルと比較して、４０℃／７５％ＲＨで６ヶ月後に５％以下、５５℃／７５％ＲＨで２週間後に３％以下であることを特徴とする。
【００７１】
本明細書で使用する場合、ラキニモドの量に言及するときの「有効な」とは、所望の治療応答をもたらすのに十分なラキニモドの量を意味する。効力は、例えば、減少した眼内圧（ＩＯＰ）により測定することができる。
【００７２】
「被験者に投与する」または「（ヒト）患者に投与する」とは、状態、例えば病理的状態に関連した症状を緩和、治癒または軽減するために、被験者／患者に対して医薬、薬物、または療法を与え、送達し、または適用することを意味する。投与は定期的な投与であることができる。本明細書で使用するとき、「定期的投与」とは、ある時間だけ離間して反復／再開される投与を意味する。投与と投与の間の時間は、好ましくは一定している。定期的な投与としては、例えば１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、毎週、毎週２回、毎週３回、毎週４回等の投与を含むことができる。
【００７３】
投与経路は、例えば、局所的であってよい。投与経路はまた、効果が局所的であるか（例えば局所投与）または全身的であるか（例えば経腸または非経口投与）によって分類することができる。本明細書で使用される「局所投与」とは、その作用が望まれる場所に化合物または組成物を直接投与することを意味し、特に全身投与を除外するものである。本明細書中で使用される化合物または組成物の「局所投与」は、皮膚もしくは目などの粘膜等の体表面への化合物または組成物の適用を意味する。本明細書で使用する「点眼」とは、被験者の眼の周囲（眼周囲の皮膚）への化合物または組成物の適用、すなわち、局所投与を意味するものである。点眼投与の例としては、眼への直接の局所投与、瞼への局所投与、または眼の一部もしくは眼ソケットへの注入が含まれる。加えて、本明細書で使用される「眼科用医薬組成物」は、眼への投与のために製剤化された医薬組成物を意味する。
【００７４】
本明細書で使用する「治療する」とは、疾患または障害、例えば、緑内障の阻害、退行もしくは静止を誘導し、または疾患もしくは障害の症状を緩和、軽減、抑制、重症度軽減、排除または実質的に排除することを包含する。
【００７５】
被験者における疾患進行または疾患合併症の「阻害」とは、該被験者における疾患の進行および／または疾患の合併症を予防または減少させることを意味する。
【００７６】
緑内障に関連する「症状」とは、緑内障に関連する任意の臨床的または研究室的な症状が含まれ、被験者が感得または観察できるものに限定されない。
【００７７】
本明細書で使用する場合、緑内障に「罹患した」被験者とは、該被験者が、緑内障と診断されたことを意味する。
【００７８】
本明細書で使用するとき、「ベースライン」にある被験者とは、本明細書に記載するように、治療においてラキニモド投与前の被験者をいう。
【００７９】
「医薬的に許容可能なキャリア」とは、合理的な利益／リスク比に見合った、過度の有害な副作用（例えば、毒性、刺激、およびアレルギー反応など）を伴わずに、ヒトおよび／または動物での使用に適した担体または賦形剤を意味する。それは、被験者に本発明の化合物を送達するための、医薬的に許容可能な溶媒、懸濁剤、または担体であることができる。
【００８０】
パラメータ範囲が設けられている場合、その範囲内の全ての整数、及びそれらの１０分の１もまた本発明によって提供されることが理解される。例えば、「０．１〜２．５ｍｇ  ／日」には、０．１ｍｇ／日、０．２ｍｇ／日、０．３ｍｇ／日等、２．５ｍｇ／日までが含まれる。
【００８１】
本発明は、以下の実験の詳細を参照することによって更によく理解されるであろうが、当業者であれば、詳述した特定の実験は後続の特許請求の範囲においてより完全に記載される本発明の単なる例示であることを容易に理解するであろう。
【実験の詳細】
【００８２】
実施例１：ラット緑内障モデルにおける網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の生存についてのラキニモドの神経保護効果の評価
本研究の目的は、ブラウンノルウェーラットの片眼で強膜上静脈への高張食塩水注入により作製した緑内障のラットモデルにおいて、慢性高眼圧症（ＯＨＴ）およびＲＧＣ変性に対するラキニモドの保護効果を評価することであった。このモデルにおいて、ＲＧＣの変性は、緑内障を有するヒト患者と同様のＩＯＰの上昇およびＯＨＴに応答して生じる。
【００８３】
＜概要＞
本研究には、次の５つの群（各々ｎ＝８）が含められた：即ち、群１（局所投与のための１％ラキニモド）、群２（局所投与のための媒質）、群３（局所投与のための４％ラキニモド）、群４（０．２５％ラキニモド）、群５（経口投与のための０．１％ラキニモド）である。
【００８４】
何れかの実験手順に先立って、臨床観察が毎日行われ、体重が入手され、眼圧（ＩＯＰ）が測定され、両眼についての詳細な眼の検査が行われた。ベースラインでの眼の異常がなく臨床的に正常であると認められた動物が、研究で使用するために選択された。
【００８５】
慢性高眼圧症（ＯＨＴ）／緑内障のラットモデルが、各１週間間隔で２回の高張食塩水注射（ＨＳＩ）を介して各動物の左眼で作成された。注入しなかった右眼を対照とした。研究の全体を通して、対照媒質および試験製品を毎週調製した。
【００８６】
ラットには、最初のＨＳＩの日から出発して安楽死させるまで、局所投与群（群１〜４）については１日２回、経口投与群（群５）については１日１回投与した。詳細な眼の検査は、２回目のＨＳＩ後に１週間および安楽死の当日に行った。安楽死の約１週間前に、ＲＧＣは、脳内の上丘へのフルオロゴールド（ＦＧ）の両側注射によって逆行性標識された。投与後ＩＯＰが、２回目のＨＳＩの１週間後に開始して安楽死させるまで、５週間にわたって毎週測定された。
【００８７】
２回目のＨＳＩの後の各ＩＯＰ測定時間点について、ＩＯＰ上昇は、ＯＨＴを用いた左目のＩＯＰと、ＯＨＴを用いなかった右眼のＩＯＰ上昇との間の差（ΔΙΟΡ）として計算された。ＨＳＩ後の週５回のＩＯＰ測定についてのΔΙΟΡを平均し、各動物について平均ΔΙΟΡを構築した。前記ＯＨＴ眼において≧５０ｍｍＨｇの個々のＩＯＰ測定値を持たなかったラットが、より大きなプールから選択され、これらの群（ｎ＝８）は平均ΔΙΟΡについて一致した。他の動物は試験から除外した。
【００８８】
動物を、２回目のＨＳＩの５週後に安楽死させた。網膜のフラットマウントし、スライドＩＤをマスクし、共焦点顕微鏡を用いて網膜当たり８つの領域を画像化した。これら領域におけるＲＧＣを、画像Ｊソフトウェアを使用して計数した。視神経を抽出した後、それらをプラスチック包埋切片にして、マサチューセッツ州ボストンのシェッペン眼研究所において、トルイジンブルーで染色した。視神経内の損傷を評価し、盲検様式で顕微鏡検査により等級付けした。
【００８９】
研究の開始時には、４０匹の動物の何れにおいても、異常な臨床徴候または眼の異常は見られなかった。動物の何れにおいても、研究中の臨床観察および眼の検査には治療に関連した所見は認められなかった。
【００９０】
一方向ＡＮＯＶＡにより、投与日における各群の体重は、各群の間で統計的な差がないことが示された（Ｐ＝０．９５７）。これらの群はまた、投与日と安楽死の日の間において、得られた体重に差は認められなかった（一方向ＡＮＯＶＡ；Ｐ＝０．５５９）。投与後５週間について、平均ΔΙΟΡ値（ＯＨＴ−非ＯＨＴ）（平均±ＳＤ）は、群１、２、３、４および５について、それぞれ９．１±２．６ｍｍＨｇ、９．３±２．７ｍｍＨｇ、９．２±１．５ｍｍＨｇ、および９．１±２．９ｍｍＨｇ、および９．１±２．２ｍｍＨｇであった。一方向ＡＮＯＶＡ分析は、上記の群が平均ΔΙΟΡについて良好に適合していることを示した（Ｐ＞０．９）。非ＯＨＴの網膜と比較して、ＯＨＴの網膜におけるフルオロ金で標識されたＲＧＣの損失％（平均±ＳＤ）は、群１、２、３、４および５について、それぞれ１７．６±３３．８、３４．８±４２．７、２６．８±３６．４、２１．６±２１．７、および２２．９±３３．１であった。ＦＧ標識されたＲＧＣのｍｍ２当たりの計数が、各群について両側対応ｔ検定を用い、非ＯＨＴ網膜とＯＨＴ網膜の間で比較された。
【００９１】
群２（媒質局所；Ｐ＝０．０４７）および群４（０．２５％ラキニモド局所；Ｐ＝０．０３３）は、非ＯＨＴの眼に比較して、ＯＨＴの眼は少ないＲＧＣを有していた。群３（局所４％ラキニモド；Ｐ＝０．０７１）および群５（０．１％ラキニモド経口；Ｐ＝０．０７５）におけるＲＧＣの数は、ＯＨＴの眼と非ＯＨＴの眼の間において統計的に異なっていた。しかし、群１（１％ラキニモド局所）においては、ＯＨＴの眼と非ＯＨＴの眼の間でＲＧＣの数における統計的有意差は存在しなかった（Ｐ＝０．１８９）。これは、１％ラキニモドの毎日の局所適用が、ＲＧＣについて神経保護的であることを示唆している。非ＯＨＴ（対照）の眼における視神経について、平均傷害等級（平均±ＳＤ）は、群１、群２、群３、群４および群５について、それぞれ、１．１±０．１、１．２±０．２、１．２±０．２、１．２±０．３および１．２±０．２であった。ＯＨＴの眼には視神経について、平均傷害グレードがＯＨＴ視神経のための（平均±ＳＤ）は２．５±１．３、３．０±１．６、３．０±１．５、２．８±１．３、およびグ２．７±１．５であった。二次分析としては、傷害等級に対する平均（Mean ON Injury Grades）を、各群について、両側対応ｔ検定を用いて非ＯＨＴ視神経とＯＨＴ視神経の間で比較した。傷害等級に対する平均は、全ての群において、非ＯＨＴ対照眼に比較してＯＨＴ眼で有意に大きかった（Ｐ＜０．０５）。
【００９２】
＜材料＞
試験製品：光から保護して室温で保存されたラキニモドナトリウム。
【００９３】
対照製品：冷蔵下に保存された０％ラキニモドナトリウム。
【００９４】
＜動物＞
数および種：研究の引用および概要−指定されたデータは、４０ブラウンノルウェーラット（ドブネズミ）について収集した。ラットは、歴史的にＯＨＴモデルとして使用されてきており、他の承認された代替（非動物法）は存在しない。研究は、該研究の終了時に十分なデータが利用可能であることを保証するために、９０匹の動物で開始された。
【００９５】
性別：雄
体重／週齢の範囲：  約２７１．２〜３６６．４グラム／少なくとも１２週齢（成獣）、０．１ｇの単位までの近似で秤量した。
【００９６】
＜手順＞
眼および経口での暴露は、人間の暴露経路に対応する。４つの局所投与群において、試験品および対照品は、試験系の１つの眼の表面に局所的に適用した。試験品は、第５群の動物については経口投与した。
【００９７】
＜試験品および対照品の調製＞
全ての試験品および対照品は、以下に記載したようにして調製した。以下に記載した製剤の最終容量は２００ミリリットルであるが、該製剤は、各調製について必要とされる容量に変更された。局所適用のための試験製品の三つの異なる濃度（０．２５％、１％、４％）、および経口胃管栄養法のための試験製品（０．１％）が毎週調製された。局所適用のための対照製品もまた、毎週調製された。試験製品および対照製品の識別表示は、局所製剤の調製後に覆い隠された。
【表１】
2016537364.tif 000002
【００９８】
表１のプロセス：
１．全体のプロセスは、黄色光または暗条件下で行われる。
【００９９】
２．１７５ｇ（１７５ｍＬ）の注射用水を、撹拌機を含むガラス容器の中に秤量する。
【０１００】
３．一塩基性リン酸ナトリウム１水和物および二塩基性リン酸ナトリウム７水和物を秤量して加え、約５分間撹拌する。清澄で透明な溶液の目視観察により、完全な溶解を確認する。
【０１０１】
４．ｐＨを測定する（約７．７〜８．３）
５．ラキニモドナトリウムを秤量して溶液に添加する。残留するラキニモドナトリウムを〜５ｍＬの水で秤量ボートから前記溶液へと洗い流す。約５分間撹拌して、清澄で透明な溶液の目視観察により完全な溶解を確認する。
【０１０２】
６．ヒドロキシエチルセルロースＨＸを秤量し、添加する。
【０１０３】
７．約２時間撹拌する。
【０１０４】
８．撹拌機を除去し、該溶液を２００ｍＬ容積のフラスコに加える。
【０１０５】
９．２００ｍＬにまで注射用水を加える。
【０１０６】
１０．約２分間、手動で振盪する。
【０１０７】
１１．適切な容器に移す。アルミ箔で包み、溶液を冷蔵で維持する。
【表２】
2016537364.tif 000003
【０１０８】
表２のプロセス：
１．全体のプロセスは、黄色光または暗条件下で行われる。
【０１０９】
２．１７５ｇ（１７５ｍＬ）の注射用水を、撹拌機を含むガラス容器の中に秤量する。
【０１１０】
３．一塩基性リン酸ナトリウム１水和物および二塩基性リン酸ナトリウム７水和物を秤量して加え、約５分間撹拌する。清澄で透明な溶液の目視観察により、完全な溶解を確認する。
【０１１１】
４．ｐＨを測定する（約７．７〜８．３）
５．ラキニモドナトリウムを秤量して溶液に添加する。残留するラキニモドナトリウムを〜５ｍＬの水で秤量ボートから前記溶液へと洗い流す。約５分間撹拌して、清澄で透明な溶液の目視観察により完全な溶解を確認する。
【０１１２】
６．塩化ナトリウムを秤量して前記溶液に加える。約２分間撹拌する。清澄で透明な溶液の目視観察により、完全な溶解を確認する。
【０１１３】
７．ヒドロキシエチルセルロースＨＸを秤量し、添加する。
【０１１４】
８．約２時間撹拌する。
【０１１５】
９．撹拌機を除去し、該溶液を２００ｍＬ容積のフラスコに加える。
【０１１６】
１０．２００ｍＬにまで注射用水を加える。
【０１１７】
１１．約２分間、手動で振盪する。
【０１１８】
１２．適切な容器に移す。アルミ箔で包み、溶液を冷蔵で維持する。
【表３】
2016537364.tif 000004
【０１１９】
表３のプロセス：
１．全体のプロセスは、黄色光または暗条件下で行われる。
【０１２０】
２．１７５ｇ（１７５ｍＬ）の注射用水を、撹拌機を含むガラス容器の中に秤量する。
【０１２１】
３．一塩基性リン酸ナトリウム１水和物および二塩基性リン酸ナトリウム７水和物を秤量して加え、約５分間撹拌する。清澄で透明な溶液の目視観察により、完全な溶解を確認する。
【０１２２】
４．ｐＨを測定する（約７．７〜８．３）
５．ラキニモドナトリウムを秤量して溶液に添加する。残留するラキニモドナトリウムを〜５ｍＬの水で秤量ボートから前記溶液へと洗い流す。約５分間撹拌して、清澄で透明な溶液の目視観察により完全な溶解を確認する。
【０１２３】
６．塩化ナトリウムを秤量して前記溶液に加える。約２分間撹拌する。清澄で透明な溶液の目視観察により、完全な溶解を確認する。
【０１２４】
７．ヒドロキシエチルセルロースＨＸを秤量し、添加する。
【０１２５】
８．約２時間撹拌する。
【０１２６】
９．撹拌機を除去し、該溶液を２００ｍＬ容積のフラスコに加える。
【０１２７】
１０．２００ｍＬにまで注射用水を加える。
【０１２８】
１１．約２分間、手動で振盪する。
【０１２９】
１２．適切な容器に移す。アルミ箔で包み、溶液を冷蔵で維持する。
【表４】
2016537364.tif 000005
【０１３０】
表４のプロセス：
１．全体のプロセスは、黄色光または暗条件下で行われる。
【０１３１】
２．１７５ｇ（１７５ｍＬ）の注射用水を、撹拌機を含むガラス容器の中に秤量する。
【０１３２】
３．一塩基性リン酸ナトリウム１水和物および二塩基性リン酸ナトリウム７水和物を秤量して加え、約５分間撹拌する。清澄で透明な溶液の目視観察により、完全な溶解を確認する。
【０１３３】
４．ｐＨを測定する（約７．７〜８．３）
５．塩化ナトリウムを秤量して前記溶液に加える。約２分間撹拌する。清澄で透明な溶液の目視観察により、完全な溶解を確認する。
【０１３４】
６．ヒドロキシエチルセルロースＨＸを秤量し、添加する。
【０１３５】
８．約２時間撹拌する。
【０１３６】
９．撹拌機を除去し、該溶液を２００ｍＬ容積のフラスコに加える。
【０１３７】
１０．２００ｍＬにまで注射用水を加える。
【０１３８】
１１．約２分間、手動で振盪する。
【０１３９】
１２．適切な容器に移す。
【表５】
2016537364.tif 000006
【０１４０】
表５のプロセス：
１．全体のプロセスは、黄色光または暗条件下で行われる。
【０１４１】
２．１５０ｇ（１５０ｍＬ）のオートクレーブ処理された水道水を、撹拌機を含むガラス容器の中に秤量する。
【０１４２】
３．ラキニモドナトリウムを秤量して溶液に添加する。残留するラキニモドナトリウムを〜５ｍＬの水で秤量ボートから前記溶液へと洗い流す。約５分間撹拌して、清澄で透明な溶液の目視観察により完全な溶解を確認する。
【０１４３】
１０．２００ｍＬにまで、オートクレーブ処理された水道水を加える。
【０１４４】
１１．５分間撹拌する。
【０１４５】
１２．適切な琥珀色の容器に移す。
【０１４６】
＜事前投与（Pre-Dose Administration）および動物の選択＞：
臨床観察は、以下の表６に従って毎日行われた：
【表６】
2016537364.tif 000007
【０１４７】
動物は、投与の開始に先立って毎週秤量された。最初の日に秤量されたラットは、研究日１、即ち、研究第１週の開始に割り当てられた。
【０１４８】
＜眼科検査＞
研究のために選択された動物は、試験製品または対照製品の最初の投与に先立って、両眼に異常、破損、および疾患がないことを確認するために検査された。初期容量の投与に先立って、表７に記載したような眼病巣を等級化するための分類システム、および表８の眼後部区画スコアリング尺度に従って、手持ち型スリットランプ及び直接検眼鏡、または外科的顕微鏡を用いて両眼が検査され、採点され、記録された。後部区画検査は、覚醒状態でのトロピカミドの適用の後、またはイソフォラン（isoflorane）吸入でラットを麻酔した後に行われた。眼の刺激、眼の欠陥、または角膜損傷の兆候を示さないラットのみを、本研究において使用した。
【表７−１】
2016537364.tif 000008
【０１４９】
【表７−２】
2016537364.tif 000009
【０１５０】
【表７−３】
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【０１５１】
【表８】
2016537364.tif 000011
【０１５２】
＜眼圧（IOP）測定＞
ベースラインＩＯＰ測定は、最初の用量の投与前に行った。局所麻酔（０．５％プロパラカインＨＣ１点眼液）を適用した後、遠野ペン獣医眼圧計（ライヘルト社；デピュー、ＮＹ）を用いて、両眼に意識のあるラットでＩＯＰを測定した。各眼から１０回のＩＯＰの読みを記録し、平均化する。ＩＯＰ測定は、ＩＯＰの概日変動を最小限にするために、測定時点に亘って、ほぼ同じ時間（例えば午前１０時と午後２時の間）に行われた。
【０１５３】
＜用量投与＞
ラットを５群に分けた。各群の動物は、試験期間中に次の五つの製品のうちの一つを受ける。
【０１５４】
１．  対照  局所担体
２．  ０．２５％ラキニモド局所
３．  １％ラキニモド局所
４．  ４％ラキニモド局所
５．  ０．１％ラキニモド経口、局所投与：
＜局所投与＞
ラットは、ＯＨＴが誘発された左眼の表面にのみ局所的に投与された。対照として働く手術しなかった右眼には製品を投与しなかった。
【０１５５】
局所用量は、較正されたマイクロピペット及び滅菌チップを用いて、左眼の表面に投与された。各局所用量の容積は１０μＬであった。
【０１５６】
ラットは、最初のＨＳＩの日に開始して安楽死まで、１日２回投与された。最初の日の用量は、午前８時から９時の間に約投与した。２回目の用量は、ほぼ午後４時と午後５時の間に投与した。安楽死当日、ラットは約午前８時から午前９時の間の午前中に１度だけ投与された。
【０１５７】
・経口投与：
ラットは、最初のＨＳＩの日に開始して安楽死まで、ほぼ８時から１０時の間に毎日経口投与された。投薬の最終日は、安楽死当日であった。各経口投与の容積は１ｍＬであった。
【０１５８】
＜投与後の手順＞：
慢性高眼圧症（ＯＨＴ）は、左眼に１週間間隔で行われた２回の高張食塩水注射（ＨＳＩ）を介して作製された。各ＨＳＩについて、ラットを適切な麻酔薬で麻酔した後、縫合糸を左瞼に通して、該瞼を開いたまま固定した。局所麻酔剤（例えば、０．５％プロパラカインＨＣ１点眼液）を、手術眼に対して局所的に適用した。結膜をバンナス鋏（Ｖａｎｎａｓ  ｓｃｉｓｓｏｒｓ）で切開して、強膜上静脈を露出させた。他の強膜上の静脈を妨げながら、選択した強膜上静脈については障害のない通路を提供するために、溝付き閉塞器リングを左眼の周りに取り付けた。ＩＯＰを上昇させる試みにおいて、房水流出経路に瘢痕を残すために、引延ばされたガラス針を用いて、５０〜２５０μＬの１．８Ｍ高張食塩水を露出された強膜上静脈に注射した。該リングは注射後すぐに除去された。手術しなかった右眼を対照とした。角膜の損傷を防止するために、眼科用軟膏を両眼に適用した。各ＨＳＩ処置について、適切な術後の痛みを管理するために、ブプレノルフィンを約２４時間皮下投与した。表６に記載したように、臨床的観察を少なくとも１日１回実施した。
【０１５９】
＜瀕死の動物および死亡した動物＞
臨床観察の一環として、動物の瀕死／死亡について毎日１回観察した。瀕死の動物は存在しなかった。
【０１６０】
＜測定および基準＞
ＩＯＰ測定は、２回目のＨＳＩ後１週間で開始して安楽死まで、毎週１回行った（合計で５回の測定）。ＩＯＰは、両眼に意識のあるラットについて、局所麻酔（０．５％プロパラカインＨＣ１点眼液）を適用した後に、遠野ペン獣医眼圧計（ライヘルト社；デピュー、ＮＹ）を用いて測定した。各時点について、１０回のＩＯＰの読みを各眼について記録し、平均した。ＩＯＰ測定は、ＩＯＰの概日変動を最小限にするために、測定時点を通してほぼ同じ時刻に（例えば、午前１０時と午後２時の間）行った。
【０１６１】
ＩＯＰ測定は次のようにして評価された：ＨＳＩ後の各時点において、ＯＨＴを伴った左眼におけるレベルと、正常な右眼におけるレベルの間の差（ΔΙΟΡ）として、ＩＯＰ上昇を計算した。５回のＨＳＩ後ＩＯＰ測定のΔΙΟΡを平均し、各動物についての平均ΔΙΟΡを構成した。各群について、ＯＨＴ眼における持続したＩＯＰ上昇を伴う１０匹の動物が更に大きなプールから選択され、複数の群は平均ΔＩＯＰについて一致する。他の動物は試験から除外し、安楽死させた。データを分析し、ＯＨＴの眼において≧５０  ｍｍＨｇの個々のＩＯＰ測定値を持たなかったラットについて報告された。
【０１６２】
＜眼科検査＞
２回目のＨＳＩ後１週間の時点および安楽死の日の時点で両眼を調べ、２回の合計について採点した。眼科検査は、手持ち型スリットランプおよび直接検眼鏡または手術用顕微鏡を用いて、表７に記載されているように眼病変を等級化するための分類システム、および表８の眼後部得点スケールに従って行われた。後部の検査は、意識のある状態でトロピカミドを局所適用した後に、またはラットをイソフルラン吸入で麻酔ささた後に行われた。
【０１６３】
＜網膜神経節細胞（ＲＧＣ）のフッ素−金（ＦＧ）逆標識＞：
安楽死の約１週間前に、ＲＧＣを逆行性トレーサーＦＧで標識した。まず、動物を適切な麻酔で鎮静させた。定位装置を用いて、各半球における上丘に２．５μＬの４％ＦＧを注射してＲＧＣを逆標識した。ラットは、手術後の痛みを管理するために、必要に応じて約４８時間、ブプレノルフィンの皮下注射を受けた。
【０１６４】
動物は、2回目のＨＳＩの５週間のちに、ＣＯ２吸入により安楽死させた。
【０１６５】
＜眼および視神経（ＯＮ）の抽出および処理＞：
眼は直ちに視神経を付けたままで眼球摘出された。眼に近いＯＮの約２．０ｍｍ片を分離し、神経の方向を示すために組織印で標識する。このＯＮ片をカコジル酸Ｎａ緩衝液中の０．１Ｍの改変カルノフスキー固定液の中に入れ、４±２℃で一晩維持する。翌日、ＯＮへんを０．１Ｍカコジル酸Ｎａ緩衝液中で少なくとも３回、各１０分間洗浄し、４±２℃において０．１Ｍのカコジル酸Ｎａ緩衝液中で保存した。試験片を契約処理施設に移送された後、一週間以内に、該視神経はプラスチック包埋のために処理された。即ち、少なくとも１．５時間、０．１Ｍカコジル酸Ｎａ緩衝液中の２％四酸化オスミウムで後固定した後、ＯＮをエタノール中で段階的に脱水してプロピレンオキサイドに移し、プロピレンオキシドおよびＥＰＯＮの混合物で浸潤させた。１〜５μｍ厚の断面を、眼球から約２．０ｍｍ離れたＯＮ末端においてミクロトームで採取した。ＯＮ切片を１％トルイジンブルーで染色し、封入処理した。処理された標本が返却された。ＯＮの識別情報は、傷害の分析を行う前にマスクで隠蔽した。このＯＮ断面切片を、傷害について光顕微鏡により次のようにして分析した。
【０１６６】
持続的なＩＯＰ上昇の有害な影響を、表９に記載の十分に確立された等級化システムを用いて、ＯＮ断面切片の定性的顕微鏡分析により評価した。この方法は、一つの切片における全体の網膜神経節細胞出力（ＯＮ）の光学顕微鏡による損傷分析を可能にし、特に軽度の神経損傷がある場合には、合計軸索を数えるよりも鋭敏であった。持続的なＩＯＰ上昇は、変性し腫脹した軸索をもたらし、また視神経における髄鞘を崩壊させた。次いで、ＩＯＰの上昇したラットにおいて観察された損傷のパターンに基いて、光学顕微鏡により等級化された。
【表９】
2016537364.tif 000012
【０１６７】
眼を少なくとも２４時間、４±２℃において４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）固定液で固定した。網膜を切除し、共焦点可視化および撮像のために、フラットホールをマウントした。網膜のフラットマウント識別表示は、共焦点撮像の前には隠蔽された。共焦点顕微鏡を使用して網膜当たり８つの領域が撮像され、また各領域におけるＲＧＣが次のようにしてカウントされた。
【０１６８】
網膜画像は、共焦点蛍光顕微鏡検査によって評価された。Ｘ軸、Ｙ軸、Ｚ軸の三次元図を設計し、画像解析ソフトウェア（ライカ共焦点ソフトウェア）の特定のシステムを用いて処理して、ＦＧで標識された生存ＲＧＣの画像を取得した。ＯＮヘッドの中心から約１．５ｍｍおよび２．７５ｍｍ離れた二つの領域が、各網膜象限（網膜当たり８つの領域）において選択され、網膜神経節細胞層の一連の画像が共焦点顕微鏡によって撮影された。この一連の画像の二次元の最大値投影画像を用い、画像解析ソフトを使用して生存ＲＧＣをカウントした。画像ごとに、生存ＲＧＣの数はｍｍ２で表された。
【０１６９】
＜評価基準＞
この研究の結果は、生存状態での観察および任意の顕微鏡観察の観点から検討された。
【０１７０】
＜ＩＯＰの基準＞
ＨＳＩ後の各時点について、ＯＨＴを伴う左眼のレベルと正常な右目のレベルの間の差（ΔＩＯＰ）として、ＩＯＰ上昇が計算された。ＨＳＩの５週後のＩＯＰ測定のΔＩＯＰを平均化し、各動物における平均ΔＩＯＰを構成した。各群について、ＯＨＴ眼において持続的なＩＯＰ上昇を伴った１０匹の動物が大きい方のプールとして選択され、これら群は平均ΔＩＯＰのために適合された。他の動物は試験から除外し、安楽死させた。ＯＨＴの眼に≧５０ｍｍＨｇの個々のＩＯＰ測定値を持有していないラットについて、データが分析され、報告された。
【０１７１】
＜共焦点顕微鏡による網膜の撮像＞：
網膜画像は、共焦点蛍光顕微鏡検査によって評価された。Ｘ軸、Ｙ軸、Ｚ軸の三次元図を設計し、画像解析ソフトウェア（ライカ共焦点ソフトウェア）の特定のシステムを用いて処理し、ＦＧで標識された生存ＲＧＣの画像を取得した。ＯＮヘッドの中心から約１．５ｍｍおよび２．７５ｍｍ離れた二つの領域が、各網膜象限（網膜当たり８つの領域）において選択され、網膜神経節細胞層の一連の画像が共焦点顕微鏡によって撮影された。この一連の画像の二次元の最大値投影画像を用い、画像解析ソフトを使用して生存ＲＧＣをカウントした。画像ごとに、生存ＲＧＣの数がｍｍ２で表された。
【０１７２】
ＯＨＴの網膜におけるＲＧＣ損失パーセントは、次の式を使用して、同じ動物の非ＯＨＴの網膜におけるＲＧＣカウントと比較してカウントされる：［１００−（１００×ＯＨＴ／網膜当たりの非ＯＨＴ平均ＲＧＣカウント）］。各非ＯＨＴ網膜における平均ＲＧＣカウントは、その動物ついての１００％と看做された。
【０１７３】
持続的なＩＯＰ上昇の有害な影響は、表９に記載の十分に確立された等級化システムを用いて、ＯＮ断面の定性的顕微鏡分析により評価された。この方法は、一つの切片における全体の網膜神経節細胞出力（ＯＮ）の光学顕微鏡による損傷分析を可能にし、特に軽度の神経損傷がある場合には、合計軸索を数えるよりも鋭敏であった。持続的なＩＯＰ上昇は、変性および腫脹した軸索をもたらし、また視神経における髄鞘を崩壊させた。次いで、ＩＯＰの上昇したラットにおいて観察された損傷のパターンに基いて、損傷の範囲が光学顕微鏡により等級化された。
【０１７４】
＜データ解析＞：
最初に、一方向ＡＮＯＶＡを用いて、群間の統計的有意差を扱った。統計的有意性があった場合には、試験群のデータは更に、ダンネット（Dunnett）の多重比較検定を用いて対照群のデータと比較された。双方向ＡＮＯＶＡ、対応ｔ検定、％神経保護計算も行われた。対照動物および試験動物間の差異は、差異が偶然によるものであることの確率が等しいか、または５％未満（Ｐ≦０．０５：両側）である場合にのみ統計的に有意であると看做された。統計的解析は、Ｍｉｎｉｔａｂ株式会社（スタット・カレッジ、ＰＡ）のＭｉｎｉｔａｂを使用して行われる。任意の有意差は、文献や過去のデータと比較することにより、更に生物学的関連性についても評価される。
【０１７５】
＜結果＞
【表１０】
2016537364.tif 000013
【０１７６】
１．パープロトコルで、ＯＨＴの眼に≧５０ｍｍＨｇの個々のＩＯＰ測定値を持たない４０匹のラットについてデータが分析され、報告された。
【０１７７】
２．体重：群１〜５からの４０匹のラットのベースライン体重の範囲は、試験開始時において２５８．６〜３５１．３グラムであった。投与および最初のＨＳＩの日において、全てのラットの体重範囲は２７１．２〜３６６．４グラムであった。一方向ＡＮＯＶＡにより、前記群の体重は投与日において統計的に差がないことが示された（Ｐ＝０．９５７）。安楽死の日に、ラットは２７１．４〜３４９．３グラムと秤量された。前記複数の軍は、投与日と安楽死の日の間での体重増には差がなかった（一方向ＡＮＯＶＡ；Ｐ＝０．５５９）。
【０１７８】
３．臨床観察：動物の割り当て時に、試験開始においては異常な臨床観察はなかった。ＨＳＩ手術後、手術眼の腫れ、手術眼における結膜の腫れ、および強膜／角膜の変色が全ての群で観察された。フッ素−金の脳注入手術後、手術前の頭蓋の剃毛、並び手術後の頭蓋の皮膚が切開および縫合されたことによる頭蓋の脱毛が全ての群で認められた。これらの観察結果は予想されたものであり、緑内障モデル作成（ＨＳＩ）およびフッ素−金脳注入手術に関連していた。ＨＳＩとＦＧ注入手術に関連していなかった異常な臨床観察は、グループ５からの２匹の動物で、群２および群５の動物における脱毛、および群５の２匹の動物における皮膚創傷であった。群２は担体対照群であったので、これらの異常は群発的なものであり、試験製品とは無関係であった。
【０１７９】
４．ＩＯＰ測定（ｍｍＨｇ）：本研究に含められた動物は、ＯＨＴ眼における≧５０ｍｍＨｇの個々のＩＯＰ測定値を有していた。平均ΔＩＯＰ（ＯＨＴ−非ＯＨＴ）（平均±ＳＤ）は、群１、２、３、４および５について、それぞれ９．１±２．２ｍｍＨｇ、９．１±２．６ｍｍＨｇ、９．３±２．７ｍｍＨｇ、９．２±１．５ｍｍＨｇ、９．１±２．９ｍｍＨｇであった。一方向ＡＮＯＶＡ分析によって、これらの群が、平均ΔΙΟΡについて良く適合していることが示された（Ｐ＞０．９）（図１）。ＦＧ標識されたＲＧＣを有する網膜の代表的な画像が、図５Ａ−５Ｊに示されている。対応する非ＯＨＴの網膜と比較した、ＯＨＴの網膜におけるＦＧ標識ＲＧＣの損失％が表１０に示されている。対応する非ＯＨＴの網膜と比較ｋしたときのＯＨＴ網膜におけるＲＧＣ損失％（平均±ＳＤ）は、群１、２、３、４および５について、それぞれ１７．６±３３．８、３４．８±４２．７、２６．８±３６．４、２１．６±２１．７、２２．９±３３．１であった（図２）。
【０１８０】
５．ＦＧ標識されたＲＧＣのカウント：ＯＨＴおよび非ＯＨＴ（対照）におけるＲＧＣカウントに対する双方向ＡＮＯＶＡは、顕著な眼ｖｓ群の相互作用を示さず（Ｐ＝０．９１９）、これらの群はＯＨＴ眼および非ＯＨＴ眼におけるＲＧＣカウントに差がないことが示された（図３）。二次解析として、ｍｍ２当たりのＦＧ標識されたＲＧＣのカウントが、各群について非ＯＨＴ網膜とＯＨＴ網膜との間で、対応ｔ検定（両側）を使用して比較された。群２（担体、局所；ｐ＝０．０４７）および群４（０．２５％ラキニモド、局所；Ｐ＝０．０３３）は、非ＯＨＴ眼に比較してＯＨＴ眼においてより少ないＲＧＣを有していた。ＯＨＴ眼と非ＯＨＴ眼の間において、群３におけるＲＧＣの数（局所４％ラキニモド；Ｐ＝０．０７１）と群５におけるＲＧＣの数（０．１％ラキニモド、経口；Ｐ＝０．０７５）が統計的に僅かに異なっていた。しかし、群１（１％ラキニモド局所）において、ＯＨＴ眼と非ＯＨＴ眼の間では、ＲＧＣカウントにおける統計的に有意な差は存在しなかった（Ｐ＝０．１８９）。このことは、１％ラキニモドの毎日の局所適用は、ＲＧＣについて神経保護的であることを示唆している。
【０１８１】
６．視神経（ＯＮ）傷害等級：非ＯＨＴ眼についての平均ＯＮ傷害等級（平均±ＳＤ）は、群１、２、３、４および５について、それぞれ１．１±０．１、１．２±０．２、１．２±０．２、１．２±０．３および１．２±０．２であった。ＯＨＴ視神経についての平均傷害等級（平均±ＳＤ）は、群１、２、３、４および５について、それぞれ２．５±１．３、３．０±１．６、３．０±１．５、２．８±１．３および２．７±１．５であった。ＯＨＴのおよび非ＯＨＴの眼（対照）ｖｓ群における平均ＯＮ傷害に対する双方向ＡＮＯＶＡは、顕著な眼ｖｓ群の相互作用を示さず（Ｐ＝０．９８）、これらの群はＯＨＴおよび非ＯＨＴの視神経における傷害に差がないことが示された（図４）。二次解析として、各群について非ＯＨＴ視神経とＯＨＴ視神経との間で、対応ｔ検定（両側）を使用してＯＮ傷害等級が比較された。全ての群において、平均ＯＮ傷害等級は、非ＯＨＴ制御目に比較してＯＨＴ眼の方が有意に大きかった（Ｐ＜０．０５）。
【０１８２】
７．眼科検査（ＯＥｓ）：最初の投与前のベースライン眼検査では、研究に含められた全ての動物において、何れの眼にも異常は観察されなかった。投与後のＯＥの際には、非ＯＨＴ眼において、何れのなる動物にも眼科的問題は観察されなかった。しかし、全ての群において、ＯＨＴ眼には、緑内障モデル作製の手順（強膜上静脈への高張塩水注入手術）に起因する幾つかの異常が観察された。これらの異常には、僅かな鬱血、結膜における結膜浮腫（腫れ）、僅かな角膜混濁、瞳孔散大剤トロピカミド塗布後の瞳孔の十分な拡張性の欠如、ＯＨＴ眼におけるレンズ前面の自由浮遊光彩色素の存在が含まれる。ＯＨＴ眼におけるＨＳＩ後の眼所見は、同様の出来事を伴う全ての群において観察され、試験製品には関連しなかった。
【０１８３】
＜結論＞
本研究は、約６週間の毎日投与のための５群を含んでいた：即ち、群１（１％ラキニモド、局所）、群２（担体、局所）、群３（４％ラキニモド、局所）、群４（０．２５％ラキニモド、局所）および群５（０．１％ラキニモド、経口）。群１の動物におけるＲＧＣカウントの解析により、毎日の１％ラキニモドの局所適用に続く神経保護の傾向が示差された。
【０１８４】
実施例２：緑内障に罹患した患者を治療するためのラキニモドの有効性の評価
ラキニモド（経口または局所）の定期的（例えば、毎日または１日２回）な投与は、緑内障のヒト患者を治療することにおいて有効である。ラキニモド（経口または局所）の定期的（例えば毎日または１日２回）な投与は、前記被験者における緑内障関連の症状を軽減するために有効である。
【０１８５】
本明細書に記載したラキニモド組成物は、緑内障を患う被験者の眼に対して、全身的または局所的に投与される。該組成物の投与は、緑内障に罹患している被験者を治療するために有効である。該組成物の投与は、被験者における緑内障の緑内障関連症状を軽減するためにも有効です。該組成物の投与は、被験者における眼内圧を低下させるためにも有効である。該組成物の投与は、ＲＧＣ損傷および／またはＲＧＣ損失を低減し、被験者におけるＲＧＣの生存率を改善するために有効である。
【参照文献】
【０１８６】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図５Ｆ】
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【図５Ｇ】
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【図５Ｈ】
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【図５Ｉ】
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【図５Ｊ】
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【国際調査報告】
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