【誤訳訂正書】
【提出日】平成25年4月17日(2013.4.17)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛋白質キナーゼＣβ２を活性化できる蛋白質キナーゼＣ調節因子(modulator)により処理された単核細胞から生成される、
ことを特徴とする多能性幹細胞。
【請求項２】
前記蛋白質キナーゼＣ調節因子が、Ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ−１やＧｏ６９７６或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項１に記載の多能性幹細胞。
【請求項３】
前記蛋白質キナーゼＣ調節因子が、ＧＭ−ＣＳＦやＳＤＦ或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項１に記載の多能性幹細胞。
【請求項４】
前記蛋白質キナーゼＣ調節因子が、コラーゲンやフィブロネクチン或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項１に記載の多能性幹細胞。
【請求項５】
単核細胞の蛋白質キナーゼＣβ２を活性化できる蛋白質キナーゼＣ調節因子を使用して、単核細胞を多能性幹細胞に分化する、
ことを特徴とする多能性幹細胞の形成方法。
【請求項６】
前記活性化単核細胞の蛋白質キナーゼＣβ２は、蛋白質キナーゼＣ調節因子として、Ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ−１やＧｏ６９７６或いはそれらを組合わせたものを使用することを特徴とする請求項５に記載の多能性幹細胞の形成方法。
【請求項７】
前記蛋白質キナーゼＣβ２が、ＧＭ−ＣＳＦやＳＤＦ或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項５に記載の多能性幹細胞の形成方法。
【請求項８】
前記蛋白質キナーゼＣ調節因子が、コラーゲンやフィブロネクチン或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項５に記載の多能性幹細胞の形成方法。
【請求項９】
多能性幹細胞に分化誘導因子を添加し、培地において、培養されることにより形成される、
ことを特徴とする標的細胞。
【請求項１０】
骨細胞であり、前記培地が低ブドウ糖ＤＭＥＭで、分化誘導因子がｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅやβ−グリセロリン酸、アスコルビン酸或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項９に記載の標的細胞。
【請求項１１】
軟骨細胞であり、前記培地が低ブドウ糖ＤＭＥＭで、分化誘導因子がｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅやトランスフォーミング成長因子−β１或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項９に記載の標的細胞。
【請求項１２】
神経細胞であり、前記培地がα−ＭＥＭで、分化誘導因子がメルカプトエタノールやレチノイン酸、Ｌ−グルタミン、Ｎ２補助剤、Ｂ２７補助剤或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項９に記載の標的細胞。
【請求項１３】
心筋細胞であり、前記培地がＩＭＤＭで、分化誘導因子が５−アザシチジンであることを特徴とする請求項９に記載の標的細胞。
【請求項１４】
腎臓細胞であり、前記培地がＥｍｂｒｙｏ Ｍｅｄｉｕｍで、分化誘導因子が白血病抑制因子であることを特徴とする請求項９に記載の標的細胞。
【請求項１５】
肺臓細胞であり、前記培地がＤＭＥＭで、分化誘導因子がインシュリンや繊維芽細胞成長因子或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項９に記載の標的細胞。
【請求項１６】
肝臟細胞であり、前記培地が低ブドウ糖ＤＭＥＭで、分化誘導因子が肝細胞増殖因子や繊維芽細胞成長因子或いはそれらを組合わせたものであることを特徴とする請求項９に記載の標的細胞。
【請求項１７】
骨格筋細胞であり、前記培地がＤＭＥＭで、分化誘導因子が５−アザシチジンであることを特徴とする請求項９に記載の標的細胞。
【請求項１８】
脂肪細胞であり、前記培地がＤＭＥＭで、分化誘導因子がｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅとｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ、インシュリン及びｍｅｔｈｙｌ−ｉｓｏｂｕｔｙｌｘａｎｔｉｎｅであることを特徴とする請求項９に記載の標的細胞。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
本発明の目的の１は、少なくとも一つの単核細胞と少なくとも一つの蛋白質キナーゼＣ調節因子(modulator)により、直接に単核細胞から分化される多能性幹細胞を提供する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
実施例１の具体例１
例えばＧｏ６９７６である蛋白質キナーゼＣ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｃ）抑制調節因子を、培養液の中においての濃度が０.１−１０mＭになるように、細胞培養液に添加し、３０分の作用後、培養液の中においての濃度が５−１５mＭになるように、例えばｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ−１である蛋白質キナーゼＣ活性化調節因子を添加する。そして、３７℃の５％のＣＯ２を含有する培養器（ｉｎｃｕｂａｔｏｒ）で１５−２１日に細胞を培養する。培地において、単核細胞が直接に多能性幹細胞に分化誘導し、その分化誘導率が、約百パーセントである。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
また、本実施例において、単核細胞を分離する方法は、ヒトＣＤ１４抗体を連結する磁性ビードにより分離し、磁性細胞選別器（Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｃｅｌｌ ｓｏｒｔｏｒ）単核細胞を収集するのが、公知の方法である。本実施例において、単核細胞のソースは、血液検体に限らない。その結果は、図（１）のようである。多能性幹細胞を、無菌生理食塩水で、少なくとも３回清浄し、最後に、１０００回転の遠心速度で１０分により上清液を除去して、濃縮した多能性幹細胞を無菌注射器内に収集し、これにより、直接に損傷組織細胞の部位に注射して、修復することに供されることができる。本実施例において、蛋白質キナーゼＣ調節因子は、Ｇｏ６９７６やｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ−１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＳＤＦ、コラーゲン、フィブロネクチン或いるその組合わせる物だけでなく、蛋白質キナーゼＣの活性を抑制できる物質や活性化蛋白質キナーゼＣの物質或いは同じ効果を有するものとその組合わせる者であればよい。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
図４は、０時間と０.２５時間、０.５時間、１時間、２時間、６時間、１２時間及び２４時間に、単核細胞の細胞質（ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ）と細胞膜（ｍｅｍｂｒａｎｅ）においての蛋白質キナーゼＣの電気泳動の変化図であり、任意のハイポタイプの蛋白質キナーゼＣが活性化された後、一部の細胞質が細胞膜に転位（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）し、また、同時に濃度の変化が見られる。ｍＰＫＣは、細胞膜の蛋白質キナーゼＣのハイポタイプの電気泳動を測定し、ｃＰＫＣは、細胞質の蛋白質キナーゼＣのハイポタイプの電気泳動を測定する。図４から分かるように、蛋白質キナーゼＣのβ２だけが活性化される。単核細胞の蛋白質キナーゼＣのβ２が活性化されれば、単核細胞を多能性幹細胞に分化することができる。単核細胞の蛋白質キナーゼＣのβ２が活性化された任意の物は、蛋白質キナーゼＣのβ２の活性化調節因子になり、当該蛋白質キナーゼＣのβ２の活性化調節因子は、単一の物質や複合の物質である。図３の実験方法により、粉砕された単核細胞を高速に遠心し、上清液について、細胞質の蛋白質キナーゼＣのハイポタイプの電気泳動を測定し、沈殿した細胞屑について、細胞膜の蛋白質キナーゼＣのハイポタイプの電気泳動を測定する。