(57)【要約】  がん幹細胞を調節する方法および組成物が開示される。より具体的には、本発明は、タンパク質キナーゼＣシータ（ＰＫＣ−θ）過剰発現細胞（がん幹細胞を含む）の増殖を阻害するための、化学治療剤または放射線療法のがん細胞に対する生物学的効果を強化するための、がん（転移性がんを含む）を治療するための、および／またはがんの再発を防止するための、ＰＫＣ−θ阻害剤の使用を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変する方法であって、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、形成、増殖、維持、ＥＭＴまたはＭＥＴを調節する量のＰＫＣ阻害剤と接触させることを含むか、接触させることからなるか、あるいは本質的に接触させることからなる方法。
【請求項２】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞が、ＣＳＣ、およびＣＳＣ以外の腫瘍細胞より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞がＣＳＣである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞がＣＳＣ以外の腫瘍細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成を阻害する量のＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の増殖を阻害する量のＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＥＭＴを阻害する量のＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＭＥＴを刺激または誘発する量のＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＣＳＣが乳房、前立腺、肺、膀胱、膵臓、結腸、黒色腫、肝臓または神経膠腫のＣＳＣである、請求項２または請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
ＣＳＣが乳房ＣＳＣである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
乳房ＣＳＣが乳房上皮ＣＳＣである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
乳房上皮ＣＳＣが乳管上皮ＣＳＣである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＣＳＣが多能性幹細胞マーカーであるＯｃｔ４またはＳｏｘ２の発現を減じるかまたは抑止する、請求項２、３および９〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＣＳＣ以外の腫瘍細胞がＣＳＣ以外の乳房、前立腺、肺、膀胱、膵臓、結腸、黒色腫、肝臓または神経膠腫腫瘍細胞である、請求項２または請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
ＣＳＣ以外の腫瘍細胞がＣＳＣ以外の乳房腫瘍細胞である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＣＳＣ以外の乳房腫瘍細胞がＣＳＣ以外の乳房上皮腫瘍細胞である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＣＳＣ以外の乳房上皮腫瘍細胞がＣＳＣ以外の乳管上皮腫瘍細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＣＳＣが、ＡＢＣＢ５、ＡＬＤＨ１、ＡＢＣＧ２、α６インテグリン、α２β１インテグリン、βカテニン活性、ＣＤ１５、ＣＤ１３、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ２６、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ９０、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、ＣＤ２７１、ｃ−Ｍｅｔ、ヘッジホッグ−Ｇｌｉ、ネスチン、ＣＸＣＲ４、ＬＧＲ５、トロップ２およびノダル−アクチビンより選択される１または複数のＣＳＣマーカーを発現する、請求項２、３または９〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＣＳＣが、ＡＬＤＨ１、ＣＤ２４、ＣＤ４４、ＣＤ９０、ＣＤ１３３、ヘッジホッグ−Ｇｌｉ、α６インテグリンより選択される１または複数のＣＳＣマーカーを発現する、請求項２、３または９〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＣＳＣがＣＤ２４およびＣＤ４４（例、ＣＤ４４ｈｉｇｈ、ＣＤ２４ｌｏｗ）を発現する、請求項２、３、９〜１３、１８または１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＰＫＣ−θ阻害剤が選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ＰＫＣ−θ阻害剤が非選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、ＰＫＣ−θ遺伝子の発現を減らすか、あるいはその遺伝子の発現産物のレベルまたは機能的活性を減じる、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、ＰＫＣ−θのリガンド結合部位の少なくとも１つの活性を減じるか、または阻止することを含め、その機能を阻害する、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞におけるＰＫＣ−θ遺伝子の過剰発現を検出することをさらに含む、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の核中にあるＰＫＣ−θまたはその増加量を検出することをさらに含む、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞中でのＰＫＣ−θとＣＤ４４またはｕＰＡＲのプロモータとの結合を検出することをさらに含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞中でのＰＫＣ−θとクロマチンとの結合を検出することをさらに含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の１または複数のＣＳＣマーカー（例えば、請求項１８〜２０のいずれか一項にて定義されるマーカー）の発現を検出することをさらに含む、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
対象における、少なくとも１種のＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成、増殖または維持を阻害することにより、および／またはＣＳＣのＥＭＴを阻害することにより、および／またはＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発することによりがんを治療または予防する方法であって、その対象にＰＫＣ−θ阻害剤を該がんの治療または予防に効果的な量で投与することを含む、方法。
【請求項３１】
がんが転移性がんである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
適切には、ＰＫＣ−θ阻害剤を投与する前に、対象が転移性がんに罹患しているか、またはそれを発症する危険があるかを確認することをさらに含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
少なくとも１種のＰＫＣ−θ過剰発現細胞がＣＳＣである、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
少なくとも１種のＰＫＣ−θ過剰発現細胞がＣＳＣ以外の腫瘍細胞である、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
少なくとも１種のＰＫＣ−θ過剰発現細胞がＣＳＣまたはＣＳＣ以外の腫瘍細胞である、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
対象における、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖を阻害するか、がんの症状を治療するかまたは改善し、あるいはがんの発症または進行を退行させるかまたは阻害する、少なくとも１種の療法を該対象に共投与することをさらに含む、請求項３４または請求項３６に記載の方法。
【請求項３７】
がん療法が、放射線療法、化学療法、幹細胞移植療法、および抗体療法から選択される、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
がんが、乳がん、前立腺がん、肺がん、膀胱がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫がん、肝臓がんまたは神経膠腫がんより選択される、請求項３０〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
がんが乳がんである、請求項３０〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
対象においてがん（ここで該がんはＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）を治療または予防する方法であって、該対象にＰＫＣ−θ阻害剤をＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するのに、あるいはＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するのに効果的な量で投与することを含む、方法。
【請求項４１】
がんが転移性癌である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ＰＫＣ−θ阻害剤を投与する前に、対象がＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがんに罹患しているか、または該がんを発症する危険があるかを確認することをさらに含む、請求項４０または請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
がんが、乳がん、前立腺がん、肺がん、膀胱がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫がん、肝臓がんまたは神経膠腫がんより選択される、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
がんが乳がんである、請求項４０〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）中のＰＫＣ−θ遺伝子の過剰発現を検出することをさらに含む、請求項４０〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）中の１または複数のＣＳＣマーカー（例えば、請求項１８〜２０のいずれか一項にて定義されるマーカー）の発現を検出することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
対象においてがん（ここで該がんはＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）を治療または予防する方法であって、該対象にＰＫＣ−θ阻害剤をＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するのに、あるいはＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するのに効果的な量で、そしてＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害するがんの療法または薬剤を同時に投与し、それによりがんを治療または予防することを含む、方法。
【請求項４８】
がんの療法または薬剤が、放射線療法、手術、化学療法、ホルモン除去療法、アポトーシス促進療法および免疫療法より選択される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
がんの療法または薬剤が、速やかに分裂する細胞を標的とするか、または細胞周期または細胞分裂の中断させる、請求項４７または請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
がんが転移性がんである、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
共投与の前に、対象がＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがんに罹患しているか、または該がんを発症する危険があるかを確認することをさらに含む、請求項４７〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
がんが、乳がん、前立腺がん、肺がん、膀胱がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫がん、肝臓がんまたは神経膠腫がんより選択される、請求項４７〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
がんが乳がんである、請求項４７〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）中のＰＫＣ−θ遺伝子の過剰発現を検出することをさらに含む、請求項４７〜５３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５５】
ＣＳＣが乳房ＣＳＣである、請求項４７〜５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、ＣＳＣが１または複数のＣＳＣマーカー（例えば、請求項１８〜２０のいずれか一項にて定義されるマーカー）を発現することを検出することをさらに含む、請求項４７〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
ＰＫＣ−θ阻害剤と、がん治療剤とが、相乗的に有効な量で投与される、請求項４７〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
対象において、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＰＫＣ−θ過剰発現細胞を含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するのに有用である薬剤を確かめるための方法であって、ここで、調製物（（ｉ）ＰＫＣ−θの少なくとも１の生物学的に活性なフラグメントまたはその変異体もしくは誘導体に対応するアミノ酸配列を含ポリペプチド；または（ｉｉ）ＰＫＣ−θ遺伝子の転写物またはその一部が産生可能であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド；または（ｉｉｉ）ＰＫＣ−θ遺伝子の発現を制御し、レポータ遺伝子に作動可能に連結する遺伝的配列の少なくとも一部（例、転写因子）を含むポリヌクレオチドを含む）を試験剤と接触させ；レポータ遺伝子のポリペプチド、代謝物または代謝物の一部、あるいは発現産物のレベルおよび／または機能的活性にて、試験剤の不存在下で、正常なまたは対照となるレベルおよび／または機能的活性と比べて減少を検出することを含み、減少すれば該試験剤がＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するのに、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＭＥＴを刺激または誘発するのに、あるいはがんを治療または予防するのに有用であることを示す、方法。
【請求項５９】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞がＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞より選択される、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
ＰＫＣ−θおよびＰＫＣ−θリガンドを薬剤と接触させ、そのＰＫＣ−θとリガンドとの結合を測定することによって決定されるように、薬剤がＰＫＣ−θとＰＫＣ−θリガンドの間の結合を阻害する、請求項５８または請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＰＫＣ−θ過剰発現細胞を含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するための薬剤の製造方法であって、ここで、請求項５８〜６０のいずれか一項にて記載されるＰＫＣ−θの機能を阻害すると思われる薬剤を試験し、その薬剤が阻害、刺激／誘発または治療／予防の試験で陽性を示すことに基づき、該薬剤を合成する、方法。
【請求項６２】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞がＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞より選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＰＫＣ−θ過剰発現細胞を含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するための薬剤の効能を改善するのに、薬剤を誘導化することをさらに含み、その誘導化された薬剤が医薬的に許容される担体および／または希釈剤と一緒に処方されてもよい、請求項６１または請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）を含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するためのＰＫＣ−θ阻害剤の使用。
【請求項６５】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＰＫＣ−θ過剰発現細胞を含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するための医薬の製造におけるＰＫＣ−θ阻害剤の使用。
【請求項６６】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞がＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞より選択される、請求項６５に記載の使用。
【請求項６７】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、リポソーム、ミセル、デンドリマー、生分解性粒子、人工ＤＮＡナノ構造物、脂質をベースとするナノ粒子、および炭素または金ナノ粒子からなる群より選択されるビヒクルに含有されるか、そうでなければ一緒にアソシエートされる、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）；ポリマーポリ（乳酸−共同−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）；ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、およびＰＬＡ−ＰＥＧコポリマー、あるいはそれらのいずれかの組み合わせからなる群より選択されるビヒクルによって対象に投与される、請求項６７に記載の使用。
【請求項６９】
がんの療法または薬剤のがん細胞に対する生物学的効果を強化する方法であって、その必要とする対象にがん療法または薬剤と一緒に有効量のＰＫＣ−θ阻害剤を投与することを含む、方法。
【請求項７０】
がんの療法または薬剤が化学治療薬または放射線療法である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）を含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するための医薬組成物であって、ＰＫＣ−θ阻害剤と、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害する薬剤とを含む、医薬組成物。
【請求項７２】
ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害するがんの療法または薬剤の効能を強化するためのＰＫＣ−θ阻害剤の使用。
【請求項７３】
ＰＫＣ−θ阻害剤と、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害するがんの療法または薬剤との、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）およびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがんを治療または予防するための使用。
【請求項７４】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、所望によりがんの療法または薬剤が、この目的のために医薬として調製または製造される、請求項７３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、出典を明示することにより、その内容がすべて本明細書に組み込まれる、２０１３年９月１８日付け出願の発明の名称が「幹細胞調節ＩＩ」であるオーストラリア国仮出願番号２０１３９０３５８９号に対して優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、一般には、がん幹細胞を調節する組成物および方法に関する。より具体的には、本発明は、がん幹細胞を含むＰＫＣ−θ過剰発現細胞の増殖を阻害するための、化学療法薬または放射線照射のがん細胞に対する生物学的作用を強化するための、転移性がんを含むがんを治療するための、および／またはがんの再発を防止するための、タンパク質キナーゼＣ−θ阻害剤の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
上皮間葉転換（ＥＭＴ）ががんの進行および転移の際のキーとなる工程である。しかしながら、がん幹細胞（ＣＳＣ）または「前駆体」転移細胞と称される、腫瘍細胞のほんの一部の集団だけが、転移性腫瘍の発症および再発にて大きな役割を果たしている可能性がある。ＣＳＣが腫瘍の起源であり、さらに分化した非幹細胞の子孫の複製を生じさせ、その複製を支持することにより悪性進行に至る（例えば、Kleffelら、2013. Adv Exp Med Biol. 734：145-79；Chenら、2013. Acta Pharmacologica Sinica 34：732-740；Paezら、2012、Clin Cancer Res. 18(3)：645-53を参照のこと）。ＣＳＣが、腫瘍形成、がん転移、腫瘍再発、薬物耐性ならびに化学療法および放射線療法の失敗に根本的に関与することが立証されている。残念なことに、ＣＳＣがそれにより腫瘍形成および増殖を惹起する作用機序、および腫瘍形成におけるＣＳＣに特異的な分化の可塑性の潜在的役割は、現在のところ分かっていない。
【０００４】
関心事項として、ＣＳＣは正常な幹細胞と類似した多くの特性を共有する。例えば、ＣＳＣは自己再生能を有し、すなわち、分裂の回数に制限があるのとは対照的に、典型的には他の分裂腫瘍細胞よりもゆっくりした速度で新たな腫瘍原性がん幹細胞を生じさせる能力を有する。ＣＳＣはまた、多数の腫瘍が宿主器官起源の複数の細胞型を含有するだけでなく、その多様性が腫瘍転移にて一般に保持されることの組織学的証拠を説明する、複数の細胞型に分化する能力を有する（すなわち、多能性である）。
【０００５】
ＣＳＣは、例えば、以下の表１に列挙される特定の細胞表面マーカーを発現する：
【表１】
2016537400.tif 000002
【０００６】
正常な体性幹細胞は化学療法剤に対して必然的に耐性であり、薬物をポンプアウトする種々のポンプ（多剤耐性（ＭＤＲ）タンパク質など）および効果的なＤＮＡ修復機構を有する。さらには、それらはまた、細胞回転速度が遅く、一方で化学療法剤は細胞を速やかに複製することを標的とする。ＣＳＣは、正常な幹細胞の変異したカウンターパートでもあり、薬物療法および放射線治療から生き残れるように同様の機構を有するかもしれない。言い換えれば、従来の化学療法および放射線療法は、腫瘍のバルクを形成し、腫瘍を再生できない、分化した細胞または分化している細胞を殺す。他方、分化した、および分化している細胞を産生するＣＳＣの集団は手つかずのままで、疾患を再発させる。従来の抗がん療法でのさらなる脅威は、例えば化学療法による治療により化学療法耐性のＣＳＣだけが残り、その結果として生じる再発性腫瘍は化学療法に対しても耐性である可能性のあることである。
【０００７】
結果として、疾患の再発、および遠隔転移拡散を防止および／または治療するために、細胞毒性薬に耐性の腫瘍起源のＣＳＣを標的とする新規な方法を同定するという差し迫った要求がある。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、一部には、ＰＫＣ−θが、ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞（non-CSC tumor cells）で過剰に発現され、ＥＭＴを制御するのに、ならびにＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞の形成および維持に重要であるとの決定に基づく。本発明者らはまた、ＥＭＴ、ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞の形成および維持を阻害すること、ならびに間葉から上皮への細胞転換（ＭＥＴ）を誘発することが、この酵素の活性を阻害することにより可能であることを見出した。従って、ＰＫＣ−θ阻害剤は、後記されるように、ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖を減少または阻害する（ＥＭＴを阻害すること、ＭＥＴを刺激または誘発すること、およびがんの再発を減らすことを含む）のに有用であることが提案される。
【０００９】
従って、一の態様にて、本発明は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変する方法を提供する。これらの方法は、一般に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、形成−、増殖−、維持−、ＥＭＴ−またはＭＥＴ−調節量のＰＫＣ阻害剤と接触させることを含むか、接触させることからなるか、あるいは本質的に接触させることからなる。適当には、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞は、ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞より選択され、その典型例として、乳房、前立腺、肺、膀胱、膵臓、結腸、黒色腫、肝臓または神経膠腫のＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞が挙げられる。ある実施態様において、ＣＳＣは乳房ＣＳＣ（例、乳房上皮ＣＳＣ（乳管上皮ＣＳＣを含む））である。ある実施態様において、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞はＣＳＣ以外の乳房腫瘍細胞（例、ＣＳＣ以外の乳房上皮腫瘍細胞（ＣＳＣ以外の乳管上皮腫瘍細胞を含む））である。適切には、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を１または複数のＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成を阻害し、増殖を阻害し、維持を阻害し、ＥＭＴを阻害する量の、あるいはＭＥＴを刺激／誘発する量のＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞中でのＰＫＣ−θの過剰発現は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の核中にてＰＫＣ−θが存在すること、または量が増加することを含む。
【００１０】
ある実施態様（ＰＫＣ−θ過剰発現細胞がＣＳＣである）において、ＣＳＣは１または複数の（例、１、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上の）ＡＢＣＢ５、ＡＬＤＨ１、ＡＢＣＧ２、α６インテグリン、α２β１インテグリン、βカテニン活性、ＣＤ１５、ＣＤ１３、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ２６、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ９０、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、ＣＤ２７１、ｃ−Ｍｅｔ、ヘッジホッグ−Ｇｌｉ、ネスチン、ＣＸＣＲ４、ＬＧＲ５、トロップ２およびノダル−アクチビンより選択されるＣＳＣマーカーを発現する。ある実施態様において、ＣＳＣは１または複数の（例、１、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上の）ＡＬＤＨ１、ＣＤ２４、ＣＤ４４、ＣＤ９０、ＣＤ１３３、ヘッジホッグ−Ｇｌｉ、α６インテグリンより選択されるＣＳＣマーカーを発現する。この型の典型例では、ＣＳＣはＣＤ２４およびＣＤ４４（例、ＣＤ４４ｈｉｇｈ、ＣＤ２４ｌｏｗ）を発現する。
【００１１】
限定されるものではないが、適切なＰＫＣ−θ阻害剤の例として、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、炭水化物、脂質あるいは他の有機（含炭素）または無機分子が挙げられる。特定の実施態様において、ＰＫＣ阻害剤は、小型分子阻害剤および核酸分子（例、ＰＫＣ−θ遺伝子の転写または翻訳を阻害する分子、あるいはＲＮＡ干渉を介在する分子）より選択される。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は、阻害剤が不在の場合の、ＰＫＣ−θ遺伝子の発現の、あるいは対応するＰＫＣ−θ発現産物のレベルまたは機能活性の約９／１０、４／５、７／１０、３／５、１／２、２／５、３／１０、１／５、１／１０、１／２０、１／５０、１０−１、１０−２、１０−３、１０−４、１０−５、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、１０−１０、１０−１１、１０−１２、１０−１３、１０−１４または約１０−１５以下にまで、ＰＫＣ−θ遺伝子の発現を、あるいはＰＫＣ−θ発現産物のレベルまたは機能活性を減少させる（例えば、ＰＫＣ−θポリペプチドのレベルを減少させ、ＰＫＣ−θ介在性リン酸化を減少させ、ＰＫＣ−θとＣＤ４４またはｕＰＡＲのプロモータとの結合を阻害し、ＰＫＣ−θ（例、活性ＰＫＣ−θ）とクロマチンとの結合を減少させ、グアニン交換因子、ＧＩＶ／ギルジン（Girdin）のＰＫＣ−θ介在性阻害を減少させ、制御性Ｔ細胞機能のＰＫＣ−θ介在性阻害を減少させ、またはＰＫＣ−θ介在性ＥＭＴを減少させる）。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。他の実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は非選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。
【００１２】
ある実施態様において、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変する方法は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞におけるＰＫＣ−θの過剰発現（例えば、正常細胞（例、正常な乳腺細胞）におけるＰＫＣ−θの発現と比べて過剰な発現）を検出することをさらに含む。限定されるものではないが、この型の例において、該方法はＣＳＣにおけるＰＫＣ−θの過剰発現を検出することを含む。限定されるものではないが、他の例において、該方法は、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞におけるＰＫＣ−θの過剰発現を検出することを含む。限定されるものではないが、さらに別の例において、該方法は、ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞におけるＰＫＣ−θの過剰発現を検出することを含む。
【００１３】
ある実施態様において、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変する方法は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の核中でのＰＫＣ−θの存在または増加した量（例えば、正常細胞（例、正常な乳腺細胞）の核中におけるＰＫＣ−θの量と比べて量）を検出することをさらに含む。この型の典型的な例では、該方法はＣＳＣの核中のＰＫＣ−θの存在または増加量を検出することを含む。他の典型例では、該方法はＣＳＣ以外の腫瘍細胞の核中のＰＫＣ−θの存在または増加量を検出することを含む。さらに別の典型例では、該方法はＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞の核中のＰＫＣ−θの存在または増加量を検出することを含む。
【００１４】
ある実施態様において、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変する方法は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞におけるＰＫＣ−θとＣＤ４４またはｕＰＡＲのプロモータとの結合を検出することをさらに含む。この型の典型例にて、該方法は、ＣＳＣにおけるＰＫＣ−θとＣＤ４４またはｕＰＡＲのプロモータとの結合を検出することを含む。他の典型例において、該方法は、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞におけるＰＫＣ−θとＣＤ４４またはｕＰＡＲのプロモータとの結合を検出することを含む。さらに別の典型例において、該方法は、ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞におけるＰＫＣ−θとＣＤ４４またはｕＰＡＲのプロモータとの結合を検出することを含む。
【００１５】
ある実施態様において、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変する方法は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞におけるＰＫＣ−θとクロマチンとの結合を検出することをさらに含む。限定されるものではないが、この型の例において、該方法は、ＣＳＣにおけるＰＫＣ−θとクロマチンとの結合を検出することを含む。限定されるものではないが、他の例において、該方法は、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞におけるＰＫＣ−θとクロマチンとの結合を検出することを含む。限定されるものではないが、さらに別の例において、該方法は、ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞におけるＰＫＣ−θとクロマチンとの結合を検出することを含む。
【００１６】
適切には、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変する方法は、上記にて大まかに示されるように、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の１または複数のＣＳＣマーカーの発現を検出することをさらに含む。
【００１７】
もう一つ別の態様にて、本発明は、対象におけるがん（例えば、転移性がん）を治療または予防する方法であって、がんが少なくとも１つのＰＫＣ−θ過剰発現細胞を含むところの方法を提供する。これらの方法は、一般に、対象に、ＰＫＣ−θ阻害剤を少なくとも１つのＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変するのに効果的な量にて投与することを含むか、投与することからなるか、あるいは本質的に投与することからなる。適切には、ＰＫＣ−θ阻害剤は、対象に、少なくとも１つのＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；または（ｉｖ）ＥＭＴを阻害するのに、あるいは少なくとも１つのＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｖ）ＭＥＴを刺激または誘発するのに効果的な量にて投与される。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。他の実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は非選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。適切には、少なくとも１つのＰＫＣ−θ過剰発現細胞はＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞より選択される。
【００１８】
ある実施態様において、がんは、乳がん、前立腺がん、肺がん、膀胱がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫、肝臓がんまたは神経膠腫より選択される。適切には、がんは乳がんである。ある実施態様において、ＣＳＣはホルモン耐性であるＣＳＣ以外の腫瘍細胞を惹起する。
【００１９】
ある実施態様において、がんを治療または予防する方法は、ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、その対象より得られる腫瘍サンプル（少なくとも１つのＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）を含む）中にＰＫＣ−θ遺伝子の過剰発現を検出することをさらに含む。
【００２０】
ある実施態様において、がんを治療または予防する方法は、ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、その対象より得られる腫瘍サンプル（少なくとも１つのＰＫＣ−θ過剰発現細胞を含む）中に上記にて大まかに記載されるように１または複数のＣＳＣマーカーの発現を検出することをさらに含む。
【００２１】
本発明のさらにもう一つ別の態様は、対象においてがん（例、転移性がん）を治療または予防する方法であって、そのがんがＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む方法を提供する。これらの方法は、一般に、対象に、（１）ＰＫＣ−θ阻害剤をＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；または（ｉｉｉ）維持の少なくとも１つを阻害するのに；および／またはＣＳＣの（ｉｖ）ＥＭＴを阻害するのに；および／またはＣＳＣの（ｖ）ＭＥＴを刺激または誘発するのに効果的な量にて投与し、（２）がんを治療または予防するために、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害するがんの治療法または薬剤を投与することを含むか、投与することからなるか、あるいは本質的に投与することからなる。適切には、ＰＫＣ−θ阻害剤は、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、または（ｉｉｉ）維持を阻害するのに、および／またはＣＳＣの（ｉｖ）ＥＭＴを阻害するのに、および／またはＣＳＣの（ｖ）ＭＥＴを刺激または誘発するのに効果的な量にて対象に投与される。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。他の実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は非選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。ある実施態様において、がんの治療法または薬剤は、放射線療法、手術、化学療法、ホルモン除去療法、アポトーシス促進療法および免疫療法より選択される。この型の実例において、がんの治療法または薬剤は、細胞を速やかに分裂させることを標的とするか、細胞サイクルまたは細胞分裂を混乱させる。 
【００２２】
適切には、該方法は、共同投与を行う前に、対象にて、ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがんを進行させる危険があるのか、あるいは進行しているのかを同定することをさらに含む。ある実施態様において、がんは、乳がん、前立腺がん、肺がん、膀胱がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫、肝臓がんまたは神経膠腫より選択される。適切には、がんは、乳がん、前立腺がん、肺がん、膀胱がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫、肝臓がんまたは脳がんより選択される。
【００２３】
ある実施態様において、がんを治療または予防する方法は、ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣまたはＣＳＣ以外の腫瘍細胞あるいはその両方を含む腫瘍サンプル）中にてＰＫＣ−θの過剰発現（例えば、正常細胞（例、正常な乳房細胞）におけるＰＫＣ−θの発現と比べて過剰な発現）を検出することをさらに含む。
【００２４】
ある実施態様において、がんを治療または予防する方法は、ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣまたはＣＳＣ以外の腫瘍細胞あるいはその両方を含む腫瘍サンプル）中にてＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞の核中のＰＫＣ−θの存在または増加した量（例えば、正常細胞（例、正常な乳房細胞）の核中のＰＫＣ−θの量と比べた量）を検出することをさらに含む。
【００２５】
ある実施態様において、がんを治療または予防する方法は、ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣまたはＣＳＣ以外の腫瘍細胞あるいはその両方を含む腫瘍サンプル）のＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞中でのＰＫＣ−θとＣＤ−４４またはｕＰＡＲのプロモータとの結合を検出することをさらに含む。
【００２６】
ある実施態様において、がんを治療または予防する方法は、ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣまたはＣＳＣ以外の腫瘍細胞あるいはその両方を含む腫瘍サンプル）のＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞中でのＰＫＣ−θとクロマチンとの結合を検出することをさらに含む。
【００２７】
ある実施態様において、がんを治療または予防する方法は、上記にて大まかに示されるように、ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、ＣＳＣの１または複数のＣＳＣマーカーの発現を検出することをさらに含む。
【００２８】
適切には、ＰＫＣ−θ阻害剤とがん治療剤とは、相乗的に効果的な量で投与される。
【００２９】
典型的には、ＰＫＣ−θ阻害剤と、がん療法またはがん治療剤とは、その一方または両方が、慣用的投与計画に基づき、例えば毎日、週に少なくとも二回、週に少なくとも六回、毎週、隔週毎に、３週毎に、４週毎に、毎月、２ヶ月に一回、３ヶ月に一回、４ヶ月に一回、および６ヶ月に一回投与される。
【００３０】
ある実施態様において、がん療法は、患者を高い危険性で病原性微生物での感染に曝す可能性がある。従って、これらの実施態様においては、該方法は、ＰＫＣ−θ阻害剤および／またはがん療法／薬剤と、がん療法または薬剤の投与により発症するか、発症する危険性の高い感染症に対して効果的である、少なくとも１つの抗感染剤とを同時に、連続して、または別個に投与することをさらに含んでもよく、ここで該抗感染剤は、抗菌剤、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、駆虫剤、抗原虫剤および抗線虫剤より選択される。
【００３１】
さらにもう一つ別の態様において、本発明は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、または（ｉｉｉ）維持を阻害するのに、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉｖ）ＥＭＴを阻害するのに、あるいはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴを刺激または誘発し、あるいは対象にてがんを治療または予防するのに有用な薬剤を同定する方法であって、ここでがんがＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）を含む、方法を提供する。これらの方法は、一般に、調製物を試験薬剤と接触させることを含み、ここで該調製物は（ｉ）ＰＫＣ−θの少なくとも１の生物学的に活性なフラグメントまたはその変異体もしくは誘導体に対応するアミノ酸配列を含ポリペプチド；または（ｉｉ）ＰＫＣ−θ遺伝子の転写物またはその一部が産生可能であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド；または（ｉｉｉ）ＰＫＣ−θ遺伝子の発現を制御し、レポータ遺伝子に作動可能に連結する遺伝的配列の少なくとも一部（例、転写因子）を含むポリヌクレオチドを含む。レポータ遺伝子のポリペプチド、代謝物または代謝物の一部、あるいは発現産物のレベルおよび／または機能的活性にて検出される（例えば、上記にて大まかに示される）、試験剤の不存在下で、正常なまたは対照となるレベルおよび／または機能的活性と比較した減少は、該試験剤がＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、または（ｉｉｉ）維持を阻害するのに、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉｖ）ＥＭＴを阻害するのに、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴを刺激または誘発し、あるいはがんを治療または予防するのに有用であることを示す。
【００３２】
本発明のさらに別の態様は、一の対象において、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、または（ｉｉｉ）維持を阻害するための、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉｖ）ＥＭＴを阻害するための、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴを刺激または誘発するための、あるいはがんを治療または予防するための薬剤の製造方法であって、該がんが上記に大まかに示されるようにＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）を含む、方法を提供する。これらの方法は、一般に、上記にて大まかに示されるようにＰＫＣ−θを阻害すると考えられる薬剤を試験し；その試験で阻害について陽性であることに基づいて薬剤を合成することを含む。適切には、該方法は、対象において、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、または（ｉｉｉ）維持を阻害する、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉｖ）ＥＭＴを阻害する、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴを刺激または誘発する、あるいはがんを治療または予防する薬剤の効能を改善するために、がんがＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＤおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）を含むところであって、該薬剤を誘導体化し、その誘導体化された薬剤を医薬的に許容される担体および／または希釈剤で所望により処方してもよい。
【００３３】
本発明のもう一つ別の態様は、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、または（ｉｉｉ）維持の少なくとも１つを阻害するか；および／またはＰＣＳＣの（ｉｖ）ＥＭＴを阻害するか；および／またはＣＳＣの（ｖ）ＭＥＴを刺激するか；および／またはがん（上記に大まかに示されるようなＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがん）を治療または予防するための医薬組成物を提供する。これらの組成物は、一般に、ＰＫＣ−θ阻害剤と、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害する第２薬剤／助剤を含むか、第２薬剤／助剤からなるか、または本質的に第２薬剤／助剤からなる。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。他の実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は非選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。
【００３４】
さらなる態様において、本発明は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変するための、あるいはがん（上記に大まかに示されるように、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣまたはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）を含むがん）を治療または予防するための、ＰＫＣ−θ阻害剤の使用を提供する。
【００３５】
本発明のさらにもう一つ別の態様は、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害するがん療法または薬剤の効能を強化するための、ＰＫＣ−θ阻害剤の使用を提供する。
【００３６】
さらにもう一つ別の態様において、本発明は、ＰＫＣ−θ阻害剤と、がん（上記に大まかに示されるように、ＣＳＣまたはＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがん）を治療または予防するためのＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害するがん療法または薬剤との使用を提供する。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤、および任意のがん療法または薬剤はこの目的のために医薬として調製または製造される。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１Ａ】ＭＣＦ−ＩＭモデルにおけるＭＣＦ−７細胞のＰＫＣ誘発剤、ホルボール１２−ミリスタート１３−アセタート（Phorbol 12-Myristate 13-Acetate（ＰＭＡ））を用いる刺激が最大ＥＭＴをもたらすことを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は刺激されていないか（ＮＳ（non-stimulated））、ＴＮＦ−α（２０ｎｇ／ｍＬ）、ＥＧＦ（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＩＬ−６（５０ｎｇ／ｍＬ）、ＴＧＦ−α（２.５ｎｇ／ｍＬ）またはＰＭＡ（２０ｎｇ／ｍＬ）で６０時間刺激される（stimulated）かのいずれかであった。３枚以上の位相差画像をオリンパス製１７Ｘ１顕微鏡を用いて刺激毎にとらえた。少なくとも２００個の細胞が画像毎に計数され、ＥＭＴ中の細胞の平均割合（％）を計算し、その後でグラフにプロットした。独立した２回の実験から、結果を平均値±標準誤差で示す。
【００３８】
【図１Ｂ】ＭＣＦ−ＩＭモデルにおけるＥＭＴマーカー、ラミニン（Laminin）−５の形態学的ＥＭＴ変化および識別細胞内染色パターンを示すフォトグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は刺激されていないか（ＮＳ）、ＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）で刺激されるか（ＳＴ）のいずれかであり、その後で位相差顕微鏡で写真を撮るか、抗ラミニン−５抗体（緑色）またはＤＡＰＩ染色剤（核染色）（青色）で各々染色するかのいずれかであった。ＭＣＦ−７の共焦点顕微鏡画像を、ライカ製顕微鏡を用いて６０ｘの倍率でとらえた。
【００３９】
【図１Ｃ】ＭＣＦ−ＩＭモデルにおけるより大きな創傷治癒を示すフォトグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞を（ｉ）ＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬ）で１８時間刺激するか、（ｉｉ）未処理のままで刺激されなかった（ＮＳ）。その後で創傷治癒アッセイの位相差画像が０時間（赤線）および１８時間（緑線）の時点でオリンパス製１７Ｘ１により１０ｘの倍率を用いてとらえられた。２つの画像を重ね合わせ（赤線と緑線を一つの画像で一緒にし）、処理による創傷治癒能を明らかにした。
【００４０】
【図１Ｄ】ＭＣＦ−ＩＭおよび基底／転移性がんモデルにおいて高いＰＫＣキナーゼ活性を示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は刺激されていない（ＮＳ）か、ＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬ）で刺激される（ＳＴ）かのいずれかであった。ＰＫＣエライザ（ELISA）をベースとするキナーゼアッセイが、ＮＳおよびＳＴ処理のＭＣＦ−７細胞およびＭＤＡ−ＭＤ２３１細胞の両方から由来の全細胞溶解液（ＷＣＬ）、細胞質抽出液（ＣＥ）または核抽出液（ＮＥ）のいずれかで行われた。吸光度を４５０ｎｍで測定した。陰性対照と比較した相対的キナーゼ活性としてデータをプロットする。データは独立した３回の実験の平均値±ＳＥで表され、統計的有意性はGraph Pad Prism 5.03を用いる両側対応ｔ−検定により決定された。
【００４１】
【図１Ｅ】ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいてＣＤ４４ｈｉｇｈ／ＣＤ２４ｌｏｗ−がん幹様細胞（ＣＳＣ）部分母集団を分類するためのＦＡＣＳゲート方法を示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は未処理のままで刺激されない（ＮＳ）か、ＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬ）で６０時間刺激される（ＳＴ）かのいずれかであった。細胞は、その後で、ＦＡＣＳ分類に付される前に、ヘキスト製ＡＰＣ−抗ＣＤ４４およびＰＥ−抗ＣＤ２４カクテルで染色された。がん幹様細胞（ＣＳＣ）集団はＣＤ４４ｈｉｇｈ／ＣＤ２４ｌｏｗ染色剤により特定された。ＣＳＣ様およびＮＣＳＣ部分母集団のゲートをＰＭＡ刺激の集団でまず作り、これらのゲートを刺激されていない集団にコピーし、ＣＳＣ様集団が刺激されていない細胞で０.１％以下であることを確かめた。独立した１０回の実験の代表的なＦＡＣＳプロットをゲート方法を強調するのに示した。
【００４２】
【図１Ｆ】ＭＣＦ−ＩＭモデルが高いパーセンテージのＣＤ４４ｈｉｇｈ／ＣＤ２４ｌｏｗまたはＣＳＣ様部分母集団をもたらすことを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は未処理のままで刺激されない（ＮＳ）か、ＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬ）で６０時間刺激される（ＳＴ）かのいずれかであった。ＦＡＣＳ分析を図１Ｅに記載されるゲート方法を用いて実施し、その後で、独立した１０回の実験からのＣＳＣ様部分母集団の平均％をプロットした（エラーバーは標準誤差である）。
【００４３】
【図１Ｇ】ＭＣＦ−ＩＭモデルが乳腺球状塊（mammosphere）を形成するに至ることを示すフォトグラフおよびグラフ表示である。乳腺球状塊アッセイは、超低アタッチメントの６ウェルプレートにて、４ｘ１０４個のＭＣＦ−７細胞／ウェルで行われた。細胞は（Ａ）刺激されない（ＮＳ）か、（Ｂ）ＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬ）で、または（Ｃ）ＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍＬ）で刺激されるかのいずれかであった。乳腺球状塊アッセイを開始した６日後に、該アッセイ用の位相差顕微鏡を用いて画像をとらえ、グラフをプロットした。実験は２回重複して行われ、各ウェルでの乳腺球状塊を計数して平均化した。データは独立した２回の実験の平均値±ＳＥを表す。
【００４４】
【図１Ｈ】誘発されたＣＳＣ様部分母集団がＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて別個の転写プロフィールを有することを示すグラフ表示である。転写分析は、刺激されない（ＮＳ）か、あるいはＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）で刺激され、ＦＡＣＳ分類で部分母集団−がん幹様細胞（ＣＳＣ様）および非がん幹様細胞（ＮＣＳＣ）であるいずれかのＭＣＦ−７細胞で、遺伝子ＣＤ４４、ラミニン−５、ｕＰＡＲ、フィブロネクチンおよびインテグリン−βについて実施された。ＴａｑＭａｎ（登録商標）レアルタイムＰＣＲは、上記の３つの母集団から単離された全ＲＮＡより合成のｃＤＮＡで実施された。各時点で得られる閾値サイクル（Ｃｔ）値を任意のコピー数に換算し、シクロフィリン（Cyclophilin）Ａリファレンスレベルに正規化した。ｍＲＮＡレベルは任意のコピー数で表され、刺激されない細胞と比べた変化の倍数をエラーバーの上に示す。データは独立した３回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００４５】
【図１Ｉ】誘発されたＣＳＣ様およびＮＣＳＣの部分母集団が、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいてｍｉＲ２００ファミリーメンバーの発現の減少をもたらすことを示すグラフ表示である。ｍｉＲ２００ｂおよびｍｉＲ２００ｃについてのミクロＲＮＡ  ｃＤＮＡレベルを、未処理のままで刺激されない（ＮＳ）か、あるいはＰＭＡ刺激（０.６５ｎｇ／ｍＬ、６０時間）のＦＡＣＳ分類した部分母集団のがん幹様細胞（ＣＳＣ様）および非がん幹様細胞（ＮＣＳＣ）のいずれかのＭＣＦ−７細胞から、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ミクロＲＮＡリアルタイム分析により測定した。各時点で得られる閾値サイクル（Ｃｔ）値を任意のコピー数に換算し、ＲＮＵ６Ｂリファレンスレベルに正規化した。ミクロＲＮＡレベルは任意のコピー数で表され、データは独立した３回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００４６】
【図２Ａ】広域スペクトルのＰＫＣ阻害剤であるビスインドリルマレイミド−ＩがＭＣＦ−ＩＭモデルにおいてにおいてＥＭＴを阻害することを示すフォトグラフ表示である。刺激されない（ＮＳ）およびＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）刺激（ＳＴ）のＭＣＦ−７細胞の位相差顕微鏡画像を、ＰＫＣ特異的阻害剤で前処理することなく（ＳＴ−ＢＩＳ）、あるいはＰＭＡ刺激の前にビスインドリルマレイミド（１μＭ）で１時間前処理して（ＳＴ＋ＢＩＳ）とらえた。
【００４７】
【図２Ｂ】極めて高濃度のビスインドリルマレイミド−Ｉ（Ｇｏ６９７６ではない）だけが、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、ＣＤ４４ｈｉｇｈＣＤ２４ｌｏｗ−ＣＳＣ様部分母集団を阻害することを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は、ＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）刺激（ＳＴ）の前に、ビヒクル単独と、またはビスインドリルマレイミド−Ｉ（１００ｎＭおよび１μＭ）またはＧｏ６９７６（１μＭ）と一緒にプレインキュベートされた。その後で、細胞は、ヘキスト３３５２８、ＡＰＣ−抗ＣＤ４４およびＰＥ−抗ＣＤ２４で氷上にて２０分間染色され、ＦＡＣＳ分析に供された。ＦＡＣＳプロットのサークルは、ＣＤ４４ｈｉｇｈ／ＣＤ２４ｌｏｗ  ＣＳＣ様部分母集団の適切なゲートを示し、ＣＳＣ様部分母集団の％は、各々、そのゲートの上に示される。
【００４８】
【図２Ｃ】図２Ｂに示されるデータを別にグラフで表示したものである。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００４９】
【図２Ｄ】１μＭのビスインドリルマレイミド−Ｉが、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、乳腺球状塊形成を減少させることを示すフォトグラフ表示である。乳腺球状塊アッセイは、超低アタッチメントの６ウェルプレートにて、４ｘ１０４個のＭＣＦ−７細胞／ウェルで行われた。ＭＣＦ−７細胞は、ＰＭＡ刺激（０.６５ｎｇ／ｍＬで６日間）（ＳＴ）の前に、あるいは刺激されない（ＮＳ）ままで、ビヒクル単独と、またはビスインドリルマレイミド−Ｉ（１μＭで１時間）と一緒にプレインキュベートされた。アッセイの６日後に、乳腺球状塊の位相差顕微鏡画像を撮影し、６０μｍよりも大きな乳腺球状塊だけを計数した。
【００５０】
【図２Ｅ】図２Ｂに示されるデータを別にグラフで表示したものである。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００５１】
【図２Ｆ】１００ｎＭのビスインドリルマレイミド−Ｉの処置が、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、鍵となる誘発性ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子の転写を阻害し得ないことを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は、未処理のままで刺激されていないか（ＮＳ）、またはＰＭＡ（０.６５ｎｇ／μＬで６０時間）刺激（ＳＴ）の前に、ビスインドリルマレイミド−Ｉ（１００ｎＭ）で１時間前処理されるかのいずれかであった。ＴａｑＭａｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲ分析を、ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子−ラミニン−５、ｕＰＡＲおよびＣＤ４４について、全ＲＮＡより合成されたｃＤＮＡで行った。各時点で得られる閾値サイクル（Ｃｔ）値を任意のコピー数に換算し、シクロフィリンＡリファレンスレベルに正規化した。ｍＲＮＡレベルは、刺激されない細胞と比べた変化の倍数で表される。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００５２】
【図２Ｇ】１μＭのビスインドリルマレイミド−Ｉの処置が、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、鍵となる誘発性ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子の転写を阻害することを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は、未処理のままで刺激されていないか（ＮＳ）、またはＰＭＡ（０.６５ｎｇ／μＬで６０時間）刺激（ＳＴ）の前に、ビスインドリルマレイミド−Ｉ（１μＭ）で１時間前処理されるかのいずれかであった。ＴａｑＭａｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲ分析を、ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子−ラミニン−５、ｕＰＡＲおよびＣＤ４４について、全ＲＮＡより合成されたｃＤＮＡで行った。各時点で得られる閾値サイクル（Ｃｔ）値を任意のコピー数に換算し、シクロフィリンＡリファレンスレベルに正規化した。ｍＲＮＡレベルは、刺激されない細胞と比べた変化の倍数で表される。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００５３】
【図２Ｈ】１μＭのＧｏ６９７６の処置が、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、鍵となる誘発性ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子の転写を阻害できなかったことを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は、未処理のままで刺激されていないか（ＮＳ）、またはＰＭＡ（０.６５ｎｇ／μＬで６０時間）刺激（ＳＴ）の前に、Ｇｏ６９７６（１μＭ）で１時間前処理されるかのいずれかであった。ＴａｑＭａｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲ分析を、ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子−ラミニン−５、ｕＰＡＲおよびＣＤ４４について、全ＲＮＡより合成されたｃＤＮＡで行った。各時点で得られる閾値サイクル（Ｃｔ）値を任意のコピー数に換算し、シクロフィリンＡリファレンスレベルに正規化した。ｍＲＮＡレベルは、刺激されない細胞と比べた変化の倍数で表される。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００５４】
【図２Ｉ】広域スペクトルのＰＫＣ阻害剤であるビスインドリルマレイミド−Ｉが、基底細胞がん／転移性がんのモデルにおいて、ＥＭＴを阻害することを示すフォトグラフ表示である。ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞の位相差顕微鏡画像を、ＰＫＣ特異的阻害剤で前処理することなく（−ＢＩＳ）、あるいはビスインドリルマレイミド（４μＭ）で処理して（＋ＢＩＳ）とらえた。
【００５５】
【図２Ｊ】ビスインドリルマレイミド−Ｉが、基底細胞がん／転移性がんのモデルにおいて、ＣＤ４４ｈｉｇｈＣＤｌｏｗ−ＣＳＣ様部分母集団を阻害することを示すグラフ表示である。ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞は、ビヒクル単独で、またはビスインドリルマレイミド−Ｉ（４μＭ）と一緒にインキュベートされた。細胞は、その後で、ヘキスト３３５２８、ＡＰＣ−抗ＣＤ４４およびＰＥ−抗ＣＤ２４で氷上にて２０分間染色され、ＦＡＣＳ分析に供された。ＣＳＣ様部分母集団の％は棒グラフで示される。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００５６】
【図２Ｋ】ビスインドリルマレイミド−Ｉの処置が、基底細胞がん／転移性がんのモデルにおいて、鍵となる誘発性ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子の転写を阻害することを示すグラフ表示である。ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞は、ビヒクル単独で、またはビスインドリルマレイミド−Ｉ（４μＭ）と一緒にインキュベートされた。ＴａｑＭａｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲ分析を、ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子−ラミニン−５、ｕＰＡＲおよびＣＤ４４について、全ＲＮＡより合成されたｃＤＮＡで行った。各時点で得られる閾値サイクル（Ｃｔ）値を任意のコピー数に換算し、シクロフィリンＡリファレンスレベルに正規化した。ｍＲＮＡレベルは、刺激されない細胞と比べた変化の倍数で表される。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００５７】
【図３Ａ】極めて低濃度のＰＫＣ−θペプチド阻害剤が、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、ＥＭＴを除去することを示すフォトグラフ表示である。刺激されない（ＮＳ）、およびＰＭＡ（０.６５ｎｇ／μＬで６０時間）刺激（ＳＴ）のＭＣＦ−７細胞の位相差顕微鏡画像を、阻害剤で前処理することなく、あるいはＰＭＡで刺激する前にＰＫＣ−θ特異的ペプチド（３０μＭ）で２４時間前処理してとらえた。
【００５８】
【図３Ｂ】ＰＫＣ−θペプチド阻害剤が、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、ＣＤ４４ｈｉｇｈＣＤ２４ｌｏｗ−ＣＳＣ様部分母集団を阻害することを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は、ＰＭＡ（０.６５ｎｇ／μＬで６０時間）刺激（ＳＴ）の前に、ビヒクル単独で、あるいはＰＫＣ−θ特異的ペプチド（３０μＭ）のいずれかと一緒にプレインキュベートされた。細胞は、その後で、ヘキスト３３５２８、ＡＰＣ−抗ＣＤ４４およびＰＥ−抗ＣＤ２４で氷上にて２０分間染色され、ＦＡＣＳ分析に供された。ＣＤ４４ｈｉｇｈ／ＣＤ２４ｌｏｗＣＳＣ様部分母集団の適切なゲート化を行い、棒グラフをプロットした。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００５９】
【図３Ｃ】ＰＫＣ−θペプチド阻害剤の処理が、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、鍵となる誘発性ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子の転写を減少させることを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は、ＰＭＡ（０.６５ｎｇ／μＬで６０時間）刺激（ＳＴ）の前に、ビヒクル単独で、あるいはＰＫＣ−θ特異的ペプチド（３０μＭ）のいずれかと一緒にプレインキュベートされた。ＴａｑＭａｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲ分析を、ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子−ＣＤ４４について、全ＲＮＡより合成されたｃＤＮＡで行った。各時点で得られる閾値サイクル（Ｃｔ）値を任意のコピー数に換算し、シクロフィリンＡリファレンスレベルに正規化した。ｍＲＮＡレベルは、刺激されない細胞と比べた変化の倍数で表される。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００６０】
【図３Ｄ】ＰＫＣ−θのノックダウンが、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、ＰＭＡ誘発性ＣＳＣ様部分母集団の除去をもたらし、その一方でＰＫＣ−βのノックダウンがＰＭＡ誘発性ＣＳＣ様部分母集団を強化することを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞はモックｓｉＲＮＡ（モック）、ＰＫＣ−θｓｉＲＮＡまたはＰＫＣ−βｓｉＲＮＡのいずれかで４８時間トランスフェクトされ、つづいて未処理のままで刺激されないか（ＮＳ）、またはＰＭＡ刺激（ＳＴ）（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）に付されるかのいずれかであった。その後で、ＦＡＣＳ分析が、細胞をヘキスト、ＡＰＣ−抗ＣＤ４４およびＰＥ−抗ＣＤ２４抗体染色カクテルで染色することによりなされた。ＣＳＣ様部分母集団を適切なゲート化に付し、ＣＳＣ様部分母集団の％を棒グラフに示す。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００６１】
【図３Ｅ】ＰＫＣ−θのノックダウンが、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、乳腺球状塊形成を減少させることを示すグラフ表示である。乳腺球状塊アッセイは、超低アタッチメントの６ウェルプレートにて、４ｘ１０４個のＭＣＦ−７細胞／ウェルで行われた。ＭＣＦ−７細胞はモックｓｉＲＮＡ（モック）またはＰＫＣ−θｓｉＲＮＡのいずれかで４８時間トランスフェクトされ、つづいて未処理のままで刺激されないか（ＮＳ）、またはＰＭＡ刺激（ＳＴ）（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）に付されるかのいずれかであった。アッセイの６日後に、乳腺球状塊の位相差顕微鏡画像を撮影し、６０μｍよりも大きな乳腺球状塊だけを計数し、棒グラフをプロットした。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００６２】
【図３Ｆ】ＰＫＣ−θのノックダウンが、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、鍵となる誘発性ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子の転写の阻害をもたらすが、ＰＫＣ−βノックダウンが、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、この阻害のないことを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞はモックｓｉＲＮＡ（モック）、ＰＫＣ−θｓｉＲＮＡまたはＰＫＣ−βｓｉＲＮＡのいずれかで４８時間トランスフェクトされ、つづいて未処理のままで刺激されないか（ＮＳ）、またはＰＭＡ刺激（ＳＴ）（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）に付されるかのいずれかであった。ＴａｑＭａｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲ分析を、ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子−ｕＰＡＲおよびＣＤ４４について、全ＲＮＡより合成されたｃＤＮＡで行った。各時点で得られる閾値サイクル（Ｃｔ）値を任意のコピー数に換算し、シクロフィリンＡリファレンスレベルに正規化した。ｍＲＮＡレベルは刺激されない細胞と比べた変化の倍数で表される。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００６３】
【図３Ｇ】ＰＫＣ−θ  ＮＬＳ（核局在化シグナル）の過剰発現の変異がＰＫＣ−θの核中へのエントリーを減少させることを示すフォトグラフ表示である。ＰＫＣ−θ  ＷＴ（野生型）またはＰＫＣ−θ  ＮＬＳの過剰発現は共焦点顕微鏡検査に付す前に７２時間にわたりＭＣＦ−ＩＭモデルにて実施された。
【００６４】
【図３Ｈ】ＰＫＣ−θ  ＮＬＳ（核局在化シグナル）の過剰発現の変異がＭＣＦ−ＩＭモデルにおいてＣＳＣ％を減少させることを示すグラフ表示である。Ｍｏｃｋベクター、ＰＫＣ−θ  ＷＴ（野生型）またはＰＫＣ−θ  ＮＬＳの過剰発現は、細胞を刺激する（０.６５ｎｇ／μＬで６０時間）の前に７２時間、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて行われた。その後で、細胞をヘキスト、ＡＰＣ−抗ＣＤ４４およびＰＥ−抗ＣＤ２４抗体染色カクテルで染色することにより、ＦＡＣＳ分析が実施された。ＣＳＣ様部分母集団を適切なゲート化に付し、ＣＳＣ様部分母集団のモック以上の増加％を計算し、棒グラフに示す。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００６５】
【図３Ｉ】ＰＫＣ−θ  ＮＬＳ（核局在化シグナル）の過剰発現の変異が、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、鍵となる誘発性ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子の転写の阻害をもたらすことを示すグラフ表示である。Ｍｏｃｋベクター、ＰＫＣ−θ  ＷＴ（野生型）またはＰＫＣ−θ  ＮＬＳの過剰発現は、細胞を刺激する（０.６５ｎｇ／μＬで６０時間）の前に７２時間、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて行われた。ＴａｑＭａｎ（登録商標）リアルタイムＰＣＲ分析を、ＥＭＴ／ＣＳＣ遺伝子−ｕＰＡＲおよびＣＤ４４について、全ＲＮＡより合成されたｃＤＮＡで行った。各時点で得られる閾値サイクル（Ｃｔ）値を任意のコピー数に換算し、シクロフィリンＡリファレンスレベルに正規化した。ｍＲＮＡレベルは刺激されない細胞と比べた変化の倍数で表される。データは独立した２回の実験の平均±標準誤差（ＳＥ）を表す。
【００６６】
【図４Ａ】ＰＫＣ−θががん幹細胞中のＣＤ４４遺伝子のプロモータ領域でクロマチンと結合することを示すグラフ表示である。ＣｈＩＰアッセイは、ＭＣＦ−ＩＭモデル、ＨＭＬＥ−ＩＭおよび基底転移性モデルにおいて、抗体、抗ＰＫＣ−θ抗体で免疫沈降したＤＮＡについて行われた。リアルタイムＰＣＲ分析はＣＤ４４プロモータプライマーを用いてこれらの免疫沈降したＤＮＡについて行われた。データは、対照となるｎｉｌ抗体と比べて免疫沈降したＤＮＡのＣｈＩＰに富む割合として、かつインプットＤＮＡ全体に対して正規化してグラフで示される。結果は独立した３回の実験の一つからのＣｈＩＰに富む割合を表す。
【００６７】
【図４Ｂ−Ｃ】ＰＫＣ−θの活性形態、ＰＫＣ−θ（ホスホ）が、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、ＣＳＣ誘発性遺伝子のプロモータ領域でクロマチンに極めて富むことを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞は刺激されない（ＮＳ）か、またはＰＭＡで刺激（ＳＴ）（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）されるかのいずれかである。その後で、ＣｈＩＰアッセイが抗ＰＫＣ−θ（ホスホ）抗体で免疫沈降したＤＮＡについて行われた。リアルタイムＰＣＲ分析は（Ｂ）ｕＰＡＲおよび（Ｃ）ＣＤ４４プロモータプライマーを用いてこれらの免疫沈降したＤＮＡについて実施された。データは、対照となるｎｉｌ抗体と比べて免疫沈降したＤＮＡのＣｈＩＰに富む割合として、かつインプットＤＮＡ全体に対して正規化してグラフで示される。結果は独立した３回の実験の一つからのＣｈＩＰに富む割合を表す。
【００６８】
【図４Ｄ】ＰＫＣ−θが、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、ＣＳＣ誘発性遺伝子のｕＰＡＲ上のＰｏｌ  ＩＩと物理的に相互に作用することを示すグラフ表示である。シーケンシャルＣｈＩＰが、刺激されない（ＮＳ）か、またはＰＭＡ刺激（ＳＴ）（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）のＭＣＦ−７細胞のいずれかで行われた。まず第１のクロマチン免疫沈降操作が実施され、次に第２のクロマチン免疫沈降操作が第１の免疫沈降操作より回収されたクロマチンについて実施された。使用される抗体は抗Ｐｏｌ  ＩＩ抗体との第１ＣｈＩＰおよび抗ＰＫＣ−θ抗体との第２ＣｈＩＰであった。リアルタイムＰＣＲ分析はｕＰＡＲプロモータ指向性プライマーを用いてこれらの免疫沈降したＤＮＡについて実施された。データは、対照となるｎｉｌ抗体と比べて免疫沈降したＤＮＡのＣｈＩＰに富む割合として、かつインプットＤＮＡ全体に対して正規化してグラフで示される。「Ｎｉｌ抗体」とは、抗体が全く（第１または第２抗体のいずれもが）架橋したＤＮＡに加えられていないサンプルをいう。結果は独立した３回の実験の一つからのＣｈＩＰに富む割合を表す。
【００６９】
【図４Ｅ】薬理学的阻害またはＰＫＣ−θのノックダウンが、ＭＣＦ−ＩＭモデルにおいて、ｕＰＡＲのプロモータと交差するそのクロマチン結合を減少させることを示すグラフ表示である。ＭＣＦ−７細胞をまず、ビヒクル単独で、またはビスインドリルマレイミド−Ｉ（１μＭ）と一緒に１時間プレインキュベートし、続いてＰＭＡ（０.６５ｎｇ／μＬで６０時間）で刺激（ＳＴ）した。別の実験にて、細胞をモックｓｉＲＮＡ（モック）またはＰＫＣ−θｓｉＲＮＡのいずれかでトランスフェクトさせ、続いてそのトランスフェクションの４８時間後にＰＭＡ刺激（ＳＴ）（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）に付した。その後で、ＣｈＩＰアッセイを抗ＰＫＣ−θ抗体で免疫沈降したＤＮＡについて行った。リアルタイムＰＣＲ分析がｕＰＡＲプロモータプライマーを用いることでこれらの免疫沈降したＤＮＡについて実施された。データは、対照となるｎｉｌ抗体と比べて免疫沈降したＤＮＡのＣｈＩＰに富む割合として、かつインプットＤＮＡ全体に対して正規化してグラフで示される。結果は独立した３回の実験の一つからのＣｈＩＰに富む割合を表す。
【００７０】
【図５】ヒト正常組織および浸潤乳がん組織における活性なＰＫＣ−θの核染色を示すフォトグラフ表示である。正常組織およびヒト乳がん組織の核染色は抗ＰＫＣ−θ（ホスホロス）抗体を用いて実施され、顕微鏡写真を撮影した。
【００７１】
【図６Ａ】ＰＫＣ−θ特異的活性阻害剤の化合物２７（Ｃ２７）についてのＰＫＣ  ＥＬＩＳＡをベースとするキナーゼアッセイを示すグラフを表示する。キナーゼ活性はブランクのウェルの値を減じてから算定された。
【００７２】
【図６Ｂ】Ｃ２７阻害剤を含まない（−）または含む（＋）ＭＣＦ−ＩＭから由来の核抽出物または細胞質抽出物のＰＫＣ  ＥＬＩＳＡをベースとするキナーゼアッセイを示すグラフを表示する。アッセイは、特定の免疫沈降物のＰＫＣ活性ではなく、包括的なＰＫＣ活性について行われた。
【００７３】
【図６Ｃ】ＭＣＦ−ＩＭモデルにおけるＣＤ４４ｈｉｇｈ／ＣＤ２４ｌｏｗＣＳＣ部分母集団のＦＡＣＳ分析を示すグラフを表示する。ＭＣＦ−７細胞は、ＰＫＣ−θ特異的活性阻害剤の化合物２７で前処理することなく（−Ｃ２７）あるいは化合物２７で前処理する（＋Ｃ２７）（１μＭで２４時間）かのいずれかでＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍＬで６０時間）を用いて刺激された。
【００７４】
【図６Ｄ】サンプルを用いるリアルタイムＰＣＲによるｍＲＮＡ発現を示すグラフを表示する。
【００７５】
【図６Ｅ−Ｆ】ヒクル単独で、またはＰＫＣ−θ特異的阻害剤である化合物２７（Ｃ２７）のいずれかでＭＣＦ−ＩＭを処理した後の核ｐ５０または核ｐ６５活性を示すグラフを表示する。
【００７６】
【図６Ｇ】化合物２７で処理した（＋）または処理しなかった（−）後にＭＣＦ−ＩＭ核抽出物をセリン４６８でのリン酸化ＮＦ−κＢｐ６５（ｐ４６８）について免疫ブロット法に付したフォトグラフおよびグラフを表示する。ウェスタンブロットに１５μｇのタンパク質を用い、核対照としてヒストンＨ３抗体を用いた。
【００７７】
【図６Ｈ】化合物２７で処理した（＋）または処理しなかった（−）後にＭＣＦ−ＩＭ核フラクションを包括的ＮＦ−κＢｐ６５について免疫ブロット法に付したフォトグラフおよびグラフを表示する。濃度測定分析は以下のウェスタンブロットにて提供されるイメージ・ジェイ（Image J）ソフトウェアを用いて実施された。
【００７８】
【図６Ｉ】化合物２７で処理した（＋）または処理しなかった（−）後にＭＣＦ−ＩＭ細胞質フラクションを包括的ＮＦ−κＢｐ６５について免疫ブロット法に付したフォトグラフおよびグラフを表示する。濃度測定分析は以下のウェスタンブロットにて提供されるイメージ・ジェイソフトウェアを用いて実施された。
【００７９】
【図６Ｊ】抗ＰＫＣ−θ抗体で刺激したＭＣＦ−ＩＭ細胞をハーフウェイＣｈＩＰ分析に付したホトグラフを表示する。「ＷＣＬ」は免疫沈降（ＩＰ）実験に利用される全細胞溶解物をいう。ＷＣＬを抗ＰＫＣ−θ抗体での免疫ブロットに供する。「−Ａｂ」では抗体が存在しない。抗ＲＮＡ  Ｐｏｌ  ＩＩ、抗ｐ６５抗体または抗ＰＫＣ−θ抗体のいずれかで免疫ブロットに供する。結果は、すべて独立した３回の実験の、あるいは３回繰り返した（Ｎ＝３）個々の実験の平均±標準誤差を示す。＊＊はＰ＜０.０１であり、＊はＰ＜０.０５であって、ｎｓは有意ではない。
【発明を実施するための形態】
【００８０】
１．定義
特記されない限り、本明細書に使用される技術的および科学的用語はすべて、本発明の属する分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意義を有する。本発明を実施または試験するのに、本明細書に記載の方法および材料と同様のまたは均等な方法および材料を用いることもできるが、好ましい方法および材料が記載されている。本発明の目的を達成するのに、次の用語を以下に定義する。
【００８１】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本明細書にて、その冠詞の文法上の対象が１つ、または１つより多くあること（すなわち、少なくとも１つあること）をいうのに使用される。例として、「１つの元素」とは、一の元素または一より多くの元素を意味する。
【００８２】
「同時投与」または「同時に投与する」あるいは「共同投与」等なる語は、２またはそれ以上の活性物を含有する単一の組成物を投与すること、または各活性物を別々の組成物として投与すること、および／またはその効果の結果がかかる活性物を単一の組成物として投与した場合に得られる結果と均等であるように十分に短期間の間で、同じ期間の間に、同時に、連続するかのいずれかで別々の経路で送達することをいう。「同時に」とは、活性剤が実質的に同時に投与されること、所望により同じ製剤中で一緒に投与されてもよいことを意味する。「同じ期間の間に」とは、活性剤が時間的に近接して投与されること、例えば、一の活性剤がもう一つ別の活性剤を投与する前後で約１分の範囲内から約１日の範囲内までで投与されることを意味する。同じ期間の間のいずれの時間も有用である。しかしながら、同時に投与されない場合は、薬剤は約１分の範囲内から約８時間の範囲内で、適切には約１時間未満から約４時間の範囲内で投与されることが多いであろう。同じ期間の間に投与される場合、薬剤は適切には対象の同じ部位に投与される。「同じ部位」なる語は厳密に同じ位置であることを含むが、約０.５〜約１５ｃｍの範囲内とすることができる。本明細書中に使用されるような「別個に」なる語は、薬剤が、一定間隔で、例えば約１日ないし約７週間または７ヶ月の間隔で投与されることを意味する。活性剤はどの順序で投与されてもよい。本明細書中に使用されるような「連続して」なる語は、薬剤が、順序通りに、例えば一定間隔で、または数分、数時間、数日または数週間の間隔で投与されることを意味する。適切ならば、活性剤は規則正しい繰り返しサイクルで投与されてもよい。
【００８３】
「薬剤」または「調節剤」なる語は、所望の薬理学的および／または生理学的作用を含む化合物を包含する。該用語はまた、本明細書中に具体的に言及される、限定されるものではないが、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、活性代謝物、アナログ等を含む、それらの化合物の医薬的に許容され、薬理学的に活性な成分を包含する。上記の用語が使用される場合、その時には、この用語は、活性剤それ自体を、ならびに医薬的に許容される、薬理学的に活性な塩、エステル、アミド、プロドラッグ、代謝物、アナログなどを包含すると認識されるべきである。「薬剤」なる語は、狭義に解釈されるべきではなく、小型分子、ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質などのタンパク性分子、ならびにそれらを含む組成物、およびＲＮＡ、ＤＮＡなどの遺伝性分子、およびその模倣体および化学的アナログ、ならびに細胞性薬剤にまで及ぶと理解されるべきである。「薬剤」なる語は、本明細書にて言及されるポリペプチドの、ならびにそのポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドの産生能および分泌能を有する細胞を包含する。かくして、「薬剤」なる語は、ウイルス性または非ウイルス性ベクター、発現ベクターおよび一連の細胞において発現および分泌に関与するプラスミドなどのベクターを含む核酸構築物にまで及ぶ。
【００８４】
「抗原結合分子」なる語は、標的となる抗原に対して結合アフィニティを有する分子を意味する。この用語は、免疫グロブリン、免疫グロブリンのフラグメント、および非免疫グロブリン誘導のタンパク質骨格（抗原結合活性を示す）にまで及ぶと理解されるであろう。
【００８５】
「抗原性または免疫原性活性」なる語は、本発明に係るポリペプチド、フラグメント、変種または誘導体の、それが投与される動物、適切には哺乳動物における抗原性または免疫原性応答の産生能をいい、ここでその応答はポリペプチドまたはそのフラグメントと特異的に結合する因子を産生することを含む。
【００８６】
「アラルキル」は、例えば、−ＣＨ２フェニル、−（ＣＨ２）２フェニル、−（ＣＨ２）３フェニル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２フェニル等、およびその誘導基の上記されるアリール基で置換される、上記のアルキルを意味する。
【００８７】
本明細書にて使用されるように、「芳香族」または「アリール」は、各環において７個までの原子を有する安定したいずれの単環または二環式炭素環をも意味し、ここで少なくとも１個の環は芳香族環であるものとする。かかるアリールの構成要素の例として、限定されるものではないが、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントリルまたはアセナフチルが挙げられる。
【００８８】
ある場合には、置換基は、（Ｃ０−Ｃ６）アルキレン−アリールなどの、０を含む一連の数の炭素で限定されてもよい。アリールがフェニルであるとすれば、この定義は、フェニルそれ自体を包含し、ならびに例えば、−ＣＨ２Ｐｈ、−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）Ｐｈも包含する。
【００８９】
本明細書に記載の化合物は、不斉中心を有してもよく、従って１より多くの立体異性体の形態で存在しうることも理解されるであろう。かくして、本発明は、１または複数の不斉中心で、実質的に純粋な異性体の形態の、例えば約９５％または９７％ｅｅなどの約９０％ｅｅより大きな、または９９％ｅｅより大きな化合物、ならびにそのラセミ体を包含する混合物にも関する。かかる異性体は、天然に存在するものであってもよく、または例えばキラル中間体を用いる不斉合成により、あるいはキラル分割により調製されてもよい。
【００９０】
本明細書にて使用されるように、抗原結合分子に言及する場合で「特異的に結合する」、「特異的に免疫相互活性である」等の用語は、タンパク質および他の生物物質の不均一な集団の存在下で抗原の存在を決定するような結合反応をいう。かくして、特定の免疫アッセイ条件下では、所定の抗原結合分子は特有の抗原と結合し、サンプル中に存在する他のタンパク質または抗原とは有意な量で結合しない。そのような条件下で抗原と特異的に結合するには、抗原結合分子が特定の抗原に対する特異性があるように選択される必要がある。例えば、抗原に結合するが、サンプル中に存在する他のタンパク質と結合しない、選択される抗原タンパク質に対する抗原結合分子が産生され得る。種々の免疫アッセイフォーマットを用いて、特有のタンパク質と特異的に免疫相互活性である抗原結合分子を選択してもよい。例えば、タンパク質と特異的に免疫相互活性であるモノクローナル抗体を選択するには、固相エライザ免疫アッセイの使用が慣用的である。特異的免疫反応性を測定するのに用いることのできる、免疫アッセイフォーマットおよび条件の記載については、HarlowおよびLane（1988）抗体・実験室マニュアル（Antibodies、A Laboratory Manual）、Cold Spring Harbor Publications、Ｎew Ｙorkを参照のこと。
【００９１】
「がん幹細胞」または「ＣＳＣ」なる語は、広く増殖する能力を含め、腫瘍形成能および腫瘍維持能を有し、新たな腫瘍を形成し、がんの進行を維持する細胞、すなわち腫瘍形成および増殖を誘導する無限の増殖可能性のある細胞をいう。ＣＳＣは、生物学的に、バルク腫瘍細胞とは異なり、幹細胞と関連付けられる特性を有し、具体的には自己複製能およびあるがんサンプル中に認められる型のあらゆる細胞を増殖させ、かつ惹起する能力を有する。「がん幹細胞」または「ＣＳＣ」なる語は、幹細胞（ＳＣ）での遺伝子改変体（gene alteration）およびＣＳＣとなる細胞での遺伝子改変体の両方を包含する。特定の実施態様にて、ＣＳＣは乳房ＣＳＣであり、適切にはＣＤ２４＋／ＣＤ４４＋であり、その典型例はＣＤ４４ｈｉｇｈ／ＣＤ２４ｌｏｗを包含する。
【００９２】
「コード配列」とは、遺伝子のポリペプチド産物をコードするのに寄与するいずれの核酸配列も意味する。反対に、「非コード配列」なる語は、遺伝子のポリペプチド産物をコードするのに寄与しないいずれの核酸配列をも意味する。
【００９３】
本明細書全体を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む（comprise、comprises）」および「含んでいる（comprising）」なる語は、所定の工程または要素あるいは工程または要素の群を含むが、他のいずれの工程または要素あるいは工程または要素の群も排除するものではないことを暗示すると理解されるであろう。このように、「含んでいる」等の語の使用は、列挙されている要素は必須または強制であるが、他の要素は任意であり、あってもなくてもよいことを意味する。「からなる（consisting of）」は、「からなる」の用語がその前にどんな要素があったとしても、それらを含み、かつそれらに限定されることを意味する。かくして、「からなる」なる語は、列挙されている要素が必須または強制であり、他の要素を含んではならないことを意味する。「本質的にからなる」とは、その用語の前に列挙された要素を含み、その列挙された要素について本明細書中に特定される活性または作用に干渉または寄与しない他の要素に限定されることを意味する。かくして、「本質的にからなる」なる語は、列挙されている要素は必須または強制であるが、他の要素は任意であり、それらが列挙されている要素の活性または作用に影響を及ぼすか否かに応じて、あってもなくてもよいことを意味する。
【００９４】
「対応する」または「対応している」とは、対照となる核酸配列と実質的な配列同一性（例えば、対照となる核酸配列の全部または一部と少なくとも約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％の、または実に１００％までの配列同一性）を示す核酸配列、あるいは対照となるアミノ酸配列と実質的な配列類似性または同一性（例えば、対照となるアミノ酸配列の全部または一部と少なくとも約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％の、または実に１００％までの配列類似性または同一性）を示すアミノ酸配列を意味する。
【００９５】
「誘導化する」、「誘導化している」等の語は、一の化合物を他の物質から化学反応によって、例えば、化合物を官能基付加剤等と反応させることにより、１または複数の反応基を該化合物に付加することによって生成または得ることをいう。
【００９６】
「誘導体」なる語は、親化合物（例えば、本明細書に開示される化合物）の構造より誘導される（例えば、化学変形により誘導される）構造を有し、その構造が本明細書に開示される構造と十分に類似し、その類似性に基づいて、当業者が特許請求の範囲に係る化合物と同一または類似の活性または有用性を示すか、または先駆体としてその特許請求の範囲に係る化合物と同一または類似の活性または有用性を誘発すると考える、化合物をいう。小分子の典型的な誘導体として、親化合物の塩、エステル、アミド、エステルまたはアミドの塩、およびＮ−オキシドが挙げられる。ポリペプチドに関して、「誘導体」なる語は、修飾により、例えば他の化合物の基とコンジュゲートまたは複合させるか、あるいは当該分野にて認識されているような、翻訳後修飾技法により、基礎となる配列より誘導されるポリペプチドをいう。「誘導体」なる語はまた、その範囲内に、機能的に均等な分子を提供する、親配列に対してなされる改変（付加または欠失を含む）を包含する。誘導体の調製は当該分野にて公知の方法により実施され得る。
【００９７】
本明細書中で使用されるようながん細胞の「分化」なる語は、がん幹細胞の多分化能腫瘍の原体への変化と、多分化能腫瘍の原体の単分化能腫瘍の原体および／または最終的に分化した腫瘍細胞への変化との両方をいう。
【００９８】
症状を治療または予防するとの文脈において、「効果的な量」とは、かかる治療または予防を必要する個体に、単回用量にて、または一連の投与の一部として、その症状の、一の徴候の発生を防止するために、かかる徴候を抑制するために、および／または存在する徴候を治療するために一定量の薬剤または組成物を投与することを意味する。効果的な量は、治療されるべき個体の健康状態および体調に、治療されるべき個体の分類群に、組成物の製剤に、医療状況に、および他の関連する因子に応じて変化するであろう。相対的に広範囲に入るであろう量はルーチン実験を通して決定され得ると考えられる。
【００９９】
本明細書にて使用される場合に、「上皮間葉転換」（ＥＭＴ）は、胚発生における正常な工程である、上皮から間葉への表現型の変形をいう。ＥＭＴはまた、イオンとして機能する上皮細胞が損傷を受け、流動輸送体がマトリクス改造間葉細胞となるプロセスでもある。上皮性悪性腫瘍において、この形質転換は、典型的には、細胞形態の改変、間葉細胞タンパク質の発現および浸潤活性亢進をもたらす。インビトロにてＥＭＴを定義する基準として、上皮細胞の極性の喪失、個々の細胞への分離、細胞運動性を獲得した後のその後の分散が挙げられる（Vincent-Salomonら、Breast Cancer Res. 2003； 5(2): 101-106を参照のこと）。ＥＭＴの間に発現、分布および／または機能が変化し、因果的に関連付けられる一連の分子は、成長因子（例、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−β、ｗｎｔｓ）、転写因子（例、Ｓｎａｉｌ、ＳＭＡＤ、ＬＥＦおよび核β−カテニン）、細胞・細胞間接着軸の分子（カドヘリン、カテニン）、細胞骨格調節剤（Ｒｈｏファミリー）、および細胞外プロテアーゼ（マトリクスメタロプロテイナーゼ、プラスミノゲンアクチベータ）（Thompsonら、Cancer Research 65, 5991-5995, Jul. 15, 2005を参照のこと）。
【０１００】
本明細書にて使用されるような「間葉上皮転換」（ＭＥＴ）は、運動性、多極性または紡錘形の間葉細胞から、上皮細胞と称される極性細胞の平面アレイへの転換を伴う、可逆的生物学的プロセスである。ＭＥＴはＥＭＴの反対プロセスである。ＭＥＴは、正常な細胞発生、がん転移および人工多能性幹細胞の再プログラミングにおいて生じる。
【０１０１】
本明細書にて使用されるような「上皮」なる語は、血管および他の小腔の内壁を含む、体の内面および外面を覆うものをいう。上皮は、構成細胞が細胞−細胞の結合により横方向に相互にかつ広範囲に接着することによって、相対的に薄いシートまたは層を形成する上皮細胞の集まりからなる。その層は分極化され、先端側と底側とに分かれる。上皮細胞は密に組織化されるにもかかわらず、その上皮組織はある程度可塑性があり、上皮層中にて細胞は、平坦から円柱へと変化し、あるいは一端で締め付けられ、他端で膨脹するように、形状を変化させ得る。しかしながら、これらのことは個々に起こるというよりもむしろ細胞群にて起こる傾向にある（Thompsonら、2005、前掲を参照のこと）。
【０１０２】
本明細書にて使用されるような「間葉」なる語は、膠様基質に軽く充填して収められた未分化の細胞からなる胚子中胚葉細胞の一部であって、そこから結合組織、骨、軟骨ならびに循環系およびリンパ系に進化する部分をいう。間葉は相対的に広がった組織ネットワークを形成する細胞の集まりである。間葉は完全な細胞層ではなく、該細胞は典型的にはその表面にそれらと隣接する細胞と接着するのに利用される点だけを有する。これらの接着はまたカドヘリン結合とも関係する可能性がある（Thompsonら、2005、前掲を参照のこと）。
【０１０３】
「発現」なる語は遺伝子産物を生合成することをいう。例えば、コード配列の場合には、発現はコード配列をｍＲＮＡに転写し、ｍＲＮＡを１または複数のポリペプチドに翻訳することを含む。反対に、非コード配列の発現は、非コード配列を転写産物だけに翻訳することを含む。
【０１０４】
「発現ベクター」とは、そのベクター内に含まれるポリヌクレオチドの転写を指令する能力を有し、そのポリヌクレオチドによってコードされるペプチドまたはポリペプチドの合成を適宜に可能とするいずれの遺伝的因子をも意味する。かかる発現ベクターは当業者にとって公知である。
【０１０５】
本明細書にて使用されるような「機能」なる語は、生物学的、酵素学的または治療学的機能をいう。
【０１０６】
本明細書にて使用されるような「遺伝子」なる語は、細胞ゲノムのありとあらゆる別個のコード領域、ならびに関連付けられる非コード領域および調節領域をいう。該用語は特定のポリペプチドをコードするオープン・リーディング・フレーム、イントロン、および発現の調節に関与する隣接する５’および３’非コードヌクレオチド配列を意味するものとする。このことに関して、遺伝子は、プロモータ、エンハンサー、所定の遺伝子と天然に結合した終結および／またはポリアデニル化シグナル、または異種調節シグナルなどの調節シグナルをさらに含んでもよい。ＤＮＡ配列はｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡあるいはそのフラグメントであってもよい。遺伝子は、染色体外維持のために、または宿主に組み込まれるために、適切なベクターに導入されてもよい。
【０１０７】
化学種に用いられる「基」なる語は、分子の一部を形成する一連の原子をいう。ある場合には、基は相互に結合して分子の一部を形成する２またはそれ以上の原子を含んでもよい。一の基は一価であっても、分子の１または複数のさらなる基と結合することを可能とする多価（例、二価）とすることもできる。例えば、一価の基は、分子の別の基と結合することができるように、その水素原子の一が取り除かれている分子であると認識され得る。一の基は正にまたは負に荷電され得る。例えば、正に荷電する基は１または複数のプロトン（すなわち、Ｈ＋）が付加する中性基として認識され得、負に荷電する基は１または複数のプロトンが除去される中性基として認識され得る。該基の例として、限定されるものではないが、アルキル基、アルキレン基、アルケニル基、アルケニレン基、アルキニル基、アルキニレン基、アリール基、アリーレン基、イミニル基、イミニレン基、ヒドリド基、ハロ基、ヒドロキシ基、アルコキシ基、カルボキシ基、チオ基、アルキルチオ基、ジスルフィド基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基、シリル基、およびシロキシ基が挙げられる。アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールおよびヘテロサイクリルなどの基は、単独で、化合物名の中で、あるいは基の定義の中で使用されるとしても、１または複数の置換基により所望により置換されてもよい。本明細書にて使用されるような「所望により置換されてもよい」とは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ハロ、ハロアルキル、ハロアルケニル、ハロアルキニル、ハロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、アルケニルオキシ、アリールオキシ、ベンジルオキシ、ハロアルコキシ、ハロアルケニルオキシ、ハロアリールオキシ、ニトロ、ニトロアルキル、ニトロアルケニル、ニトロアルキニル、ニトロアリール、ニトロヘテロシクリル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノ、フェニルアミノ、ジフェニルアミノ、ベンジルアミノ、ジベンジルアミノ、ヒドラジノ、アシル、アシルアミノ、ジアシルアミノ、アシルオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヘテロシクルアミノ、ハロヘテロシクリル、カルボキシエステル、カルボキシ、カルボキシアミド、メルカプト、アルキルチオ、ベンジルチオ、アシルチオ、および含リン基より選択される１または複数の期でさらに置換されても、されなくてもよい基をいう。本明細書にて使用されるような「所望により置換されてもよい」なる語はまた、ＣＨ２基をカルボニル（Ｃ＝Ｏ）基で置換されるものもいう。任意の置換基の例は、限定されるものではなく、アルキル、好ましくはＣ１−８アルキル（例、メチル、エチル、プロピル、ブチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルなどのＣ１−６アルキル）、ヒドロキシＣ１−８アルキル（例、ヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル）、アルコキシアルキル（例、メトキシメチル、メトキシエチル、メトキシプロピル、エトキシメチル、エトキシエチル、エトキシプロピル等）、Ｃ１−８アルコキシ（例、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロポキシ、シクロブトキシなどのＣ１−６アルコキシ）、ハロ（フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード）、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、トリブロモメチル、ヒドロキシ、フェニル（ここで、それ自体は本明細書中に記載されるような任意の置換基、例えば、ヒドロキシ、ハロ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、メトキシ、エトキシ、アセトキシ、アミノによってさらに置換されてもよい）、ベンジル（ここで、ＣＨ２および／またはフェニル基は本明細書中に記載されるようにさらに置換されてもよい）、フェノキシ（ここで、ＣＨ２および／またはフェニル基は本明細書中に記載されるようにさらに置換されてもよい）、ベンジルオキシ（ここで、ＣＨ２および／またはフェニル基は本明細書中に記載されるようにさらに置換されてもよい）、アミノ、Ｃ１−８アルキルアミノ（例、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノなどのＣ１−６アルキルアミノ）、ジＣ１−８アルキルアミノ（例、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノなどのジＣ１−６アルキルアミノ）、アシルアミノ（例、ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３）、フェニルアミノ（ここで、フェニルそれ自体は本明細書中に記載されるようにさらに置換されてもよい）、ニトロ、ホルミル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−８アルキル（例、アセトキシなどの−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキル）、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−アルキル（例、アセチルオキシなどの−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキル）、ベンゾイル（ここで、ＣＨ２および／またはフェニル基それ自体はさらに置換されてもよい）、ＣＨ２をＣ＝Ｏで置換されるもの、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｃ１−８アルキル（例、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステルなどのＣ１−６アルキルエステル）、−ＣＯ２フェニル（ここで、フェニルはさらに置換されてもよい）、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨフェニル（ここで、フェニルそれ自体は本明細書中に記載されるようにさらに置換されてもよい）、−ＣＯＮＨベンジル（ここで、ＣＨ２および／またはフェニル基は本明細書中に記載されるようにさらに置換されてもよい）、−ＣＯＮＨＣ１−８アルキル（例、メチルアミド、エチルアミド、プロピルアミド、ブチルアミドなどの−ＣＯＮＨＣ１−６アルキル）、−ＣＯＮＨジＣ１−８アルキル（例、−ＣＯＮＨジＣ１−６アルキル）を包含する。
【０１０８】
「ヘテロアラルキル」基は、ヘテロアリール基で置換される上記のアルキル、例えば、−ＣＨ２ピリジニル、−（ＣＨ２）２ピリミジニル、−（ＣＨ２）３イミダゾリル等、およびその誘導体を意味する。
【０１０９】
本明細書にて使用されるような「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」なる語は、各環に７個までの原子の安定した単環式または二環式環であって、ここで少なくとも１個の環が芳香族であり、Ｏ、ＮおよびＳからなる群より選択される１ないし４個のヘテロ原子を含有する単環または二環を表す。この定義の範囲内にあるヘテロアリール基は、以下の基に限定されないが、アクリジニル、カルバゾリル、シンノリニル、キノキサリニル、ピラゾリル、インドリル、ベンゾトリアゾリル、フラニル、チエニル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、インドリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、テトラヒドロキノリンを包含する。以下のヘテロサイクルの定義と同様に、「ヘテロアリール」も、いずれの含窒素ヘテロアリールのＮ−オキシド誘導体をも包含するものと理解される。
【０１１０】
「ヘテロサイクリル」および「ヘテロアリール」のさらなる例として、限定されるものではないが、以下の：ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾキサゾリル、カルバゾリル、カルボリニル、シンノリニル、フラニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、インドラジニル、インダゾリル、イソベンゾフラニル、イソインドリル、イソキノリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ナフトピリジニル、オキサジアゾリル、オキサゾリル、オキサゾリン、イソキサゾリン、オキセタニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドピリジニル、ピリダジニル、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、キナゾリニル、キノリル、キノキサリニル、テトラヒドロピラニル、テトラゾリル、テトラゾロピリジル、チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリル、アゼチジニル、アジリジニル、１,４−ジオキサニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ジヒドロベンゾイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、ジヒドロベンゾキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、メチレンジオキシベンゾイル、テトラヒドロフラニル、およびテトラヒドロチエニル、ならびにそのＮ−オキシドが挙げられる。ヘテロサイクリル置換基の結合は、炭素原子を介して、またはヘテロ原子を介して起こり得る。
【０１１１】
本明細書にて使用されるように、「ヘテロアリーレン」は、好ましくは、約３員ないし約１５員の二価の単環または多環式環系をいい、ここで該環系の１または複数の、より好ましくは１ないし３個の原子がヘテロ原子、すなわち炭素以外の元素、例えば窒素、酸素および硫黄原子であるところの環系をいう。ヘテロアリーレン基は１または複数の、適切には１ないし３個のアリール基の置換基で所望により置換されてもよい。典型的なヘテロアリーレン基として、例えば、１,４−イミダゾリレンが挙げられる。
【０１１２】
本明細書にて使用されるような「ヘテロサイクル」、「ヘテロ脂肪族基」または「ヘテロサイクリル」なる語は、Ｏ、ＮおよびＳからなる群より選択される１ないし４個のヘテロ原子を含有する５ないし１０員の非芳香族ヘテロサイクルを意味するものとし、二環式基を包含する。
【０１１３】
「ヘテロサイクルアルキル」基は、ヘテロサイクル基で置換される上記のアルキル基、例えば、−ＣＨ２ピロリジン−１−イル、−（ＣＨ２）２ピペリジン−１−イル等、およびその誘導体を意味する。
【０１１４】
本明細書にて使用される「ｈｉｇｈ」なる語は、正常値より大きな、所定の測定値または下位群の測定値などの標準値よりも大きな、あるいはもう一つ別の下位群の測定値よりも相対的に大きな、測定値をいう。例えば、ＣＤ４４ｈｉｇｈは正常なＣＤ４４測定値よりも大きなＣＤ４４の測定値をいう。結果として、「ＣＤ４４ｈｉｇｈ」は、常に、対象体の関連する部分における、あるいは対象体から由来の関連するサンプル中にある、少なくとも検出可能なＣＤ４４に相当する。正常な測定値は当業者に利用可能ないずれかの方法に従って決定されてもよい。「ｈｉｇｈ」なる語はまた、所定の測定値、例えば所定のカットオフと等しい、またはより大きな測定値を言うこともある。対象体が特定のマーカーについて「ｈｉｇｈ」でないならば、それはそのマーカーについて「ｌｏｗ」である。一般に、対象体が「ｈｉｇｈ」であるか「ｌｏｗ」であるかどうかを決定するのに使用されるカットオフは、ディビジョン（division）が臨床的に関連付けられるようになるように選択されるべきである。
【０１１５】
「ホモログ」は、本明細書にて、共通の祖先のＤＮＡ配列からの遺伝的特徴により他の遺伝子または遺伝子産物と関連付けられる遺伝子またはその産物を意味するのに使用される。
【０１１６】
「相同性」なる語は、本明細書にて、「配列同一性」または「配列類似性」と均等に使用され、遺伝的特徴または系統発生的関係による同一性を要求するものではない。
【０１１７】
「ホルモン受容体陰性（ＨＲ−）腫瘍」なる語は、標準的方法、例えば患者の生物学的サンプル中の核を免疫組織化学的に染色することにより決定されるような特定の閾値よりも上に、腫瘍の増殖、残存または生存能を刺激するホルモンの受容体を発現しない腫瘍を意味する。その閾値は、例えば、Allredスコアまたは遺伝子発現を用いて測定されてもよい。例えば、Harveyら（1999. J Clin Oncol 17: 1474-1481）およびBadveら（2008. J Clin Oncol 26(15): 2473-2481）を参照のこと。ある実施態様において、腫瘍はエストロゲン受容体を発現しない（ＥＲ−）および／またはプロゲステロン受容体を発現しない（ＰＲ−）。
【０１１８】
「ホルモン受容体陽性（ＨＲ＋）腫瘍」なる語は、標準的方法、例えば患者の生物学的サンプル中の核を免疫組織化学的に染色することにより決定されるような特定の閾値よりも上に、腫瘍の増殖、残存または生存能を刺激するホルモンの受容体を発現する腫瘍を意味する。その閾値は、例えば、Allredスコアまたは遺伝子発現を用いて測定されてもよい。例えば、Harveyら（1999. J Clin Oncol 17: 1474-1481）およびBadveら（2008. J Clin Oncol 26(15): 2473-2481）を参照のこと。ある実施態様において、腫瘍は、標準的方法（例えば、患者の生物学的サンプル中の核を免疫組織化学的に染色する方法）により測定されるように、エストロゲン受容体（ＥＲ）またはプロゲステロン受容体（ＰＲ）のいずれかを発現する。
【０１１９】
本明細書中で使用されるような「ホルモン耐性がん」なる語は、非ホルモン耐性がんと比較した場合に、ホルモン療法または内分泌療法に対する応答を減らすか、排除するがんをいう。生物学的および臨床的観点から、耐性はいくつかのパターン：Ａ）内分泌受容体を発現するにも拘わらず標的とする内分泌受容体（例、エストロゲン受容体）に対して本質的に応答しない腫瘍（膵内分泌療法耐性またはデノボ耐性）；Ｂ）ホルモン依存的であるが、１または複数の特異的内分泌療法に対して耐性である腫瘍（例えば、タモキシフェンに応答するが、アロマターゼ阻害剤には応答しない薬剤選択的耐性）；およびＣ）内分泌療法に対して最初は応答するが、その後は進行する腫瘍（獲得耐性）に区別され得る。あらゆる型の耐性は本明細書に含まれる。ある実施態様において、ホルモン耐性がんはホルモンまたは内分泌療法を行う前からホルモン耐性であるがんである（すなわち、そのがんはデノボホルモン耐性である）。別の実施態様において、ホルモン耐性がんは、最初はホルモン耐性ではないが、少なくとも１回のホルモン療法または内分泌療法の処理の後でホルモン耐性となるがんである。
【０１２０】
本明細書で使用されるような「ホルモン療法」または「エンドクリン療法」なる語は、ホルモンの遮断または除去と関連する治療法として定義される。該治療は、ホルモンまたはプロホルモンを合成する腺を取り除いても、ホルモン合成を遮断または阻害しても、ホルモンがその受容体と結合することを防止または阻害しても、あるいはホルモン受容体をダウンレギュレートまたは分解させてもよい。
【０１２１】
「ハイブリッド形成」は、本明細書において、相補的ヌクレオチド配列を対合し、ＤＮＡ−ＤＮＡハイブリッドまたはＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドを産生することを意味するのに使用される。相補的塩基配列は塩基対合則により関連付けられる塩基配列である。ＤＮＡでは、ＡはＴと対合し、ＣはＧと対合する。ＲＮＡでは、ＵはＡと対合し、ＣはＧと対合する。これに関して、本明細書で使用されるような「マッチ」および「ミスマッチ」なる語は、相補的核酸鎖にてヌクレオチドの対合する可能性のあるハイブリッド形成をいう。上記の古典的なＡ−ＴおよびＧ−Ｃ塩基対などのヌクレオチドのマッチングが効率よくハイブリッドを形成する。ミスマッチは、効率よくハイブリッド形成しない、ヌクレオチドの他の組み合わせである。本発明において、好ましい対合の機構には、オリゴマー化合物の鎖の相補的ヌクレオシドまたはヌクレオチド塩基（ヌクレオ塩基）の間で水素結合（ワトソン−クリック型、フーグスティーン型またはリバースフーグスティーン型水素結合であってもよい）が関与している。例えば、アデニンとチミンは、水素結合の形成を通して対合する相補的ヌクレオ塩基である。ハイブリッド形成は当業者に公知であるように様々な環境下で起こり得る。
【０１２２】
「特異的にハイブリッド形成する」等の語は、たった一つの分子が、ストリンジェントな条件下で、特定のヌクレオチド配列が複合的混合物（例、全細胞）のＤＮＡまたはＲＮＡにある場合に、その配列と結合し、二本鎖を形成するか、またはハイブリッド形成することをいう。
【０１２３】
本明細書で使用されるような「ヒドロカルビル」なる語は、炭素と水素を含有する、飽和、不飽和、芳香族、直鎖または分岐鎖あるいは多環基を含む環状基をも含む、いずれの基も包含する。ヒドロカルビルは、限定されるものではないが、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル、フェニルおよびナフチルなどのアリール、ベンジルなどのＡｒ（Ｃ１−Ｃ８）アルキルを包含し、そのいずれも所望により置換されてもよい。
【０１２４】
本明細書中で「免疫相互作用」への言及は、分子間の、特に分子の一方が免疫系の成分であるか、またはその模倣体である場合に、いずれの相互作用、反応または他の結合形成に対する言及も包含する。
【０１２５】
本明細書で使用されるように、「阻害剤」なる語は、ＰＫＣ−θポリペプチドの機能または生物学的活性を、あるいはＰＫＣ−θ遺伝子（例、ＰＲＫＣＴ、ＰＫＣＴ、ＭＧＣ１２６５１４、ＭＧＣ１４１９１９、ｎＰＫＣ−シータとしても知られるＰＲＫＣＱ）の発現を減らすか、阻害する薬剤を意味する。
【０１２６】
「単離される」とは、天然状態では材料と共に存在するのが一般的である成分がその材料に実質的にまたは本質的に含まれていないことを意味する。
【０１２７】
本明細書で使用されるような「ｌｏｗ」なる語は、正常値よりも低い、所定の測定値もしくは下位群の測定値などの標準値よりも低い、またはもう一つ別の下位群の測定値よりも相対的に低い測定値をいう。例えば、ＣＤ２４ｌｏｗは、正常なＣＤ２４測定値よりも低いＣＤ２４の測定値をいう。正常な測定値は当業者に利用可能ないずれの方法に従って決定されてもよい。「ｌｏｗ」なる語はまた、所定の測定値以下の、例えば所定のカットオフ値以下の測定値をもいう。
【０１２８】
「低級アルキル」なる語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、tert−ブチル、sec−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル等などの炭素数が１〜６の直鎖または分岐鎖のアルキル基をいう。ある実施態様において、低級アルキル基はメチルまたはエチルである。
【０１２９】
「低級アルコキシ」なる語は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、tert−ブトキシ、sec−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、２−メチル−ペントキシ等などの炭素数が１〜６の直鎖または分岐鎖のアルコキシ基をいう。一般に、低級アルコキシ基はメトキシまたはエトキシである。
【０１３０】
「調節する」とは、標的分子のレベルまたは機能的活性を、直接的にか、間接的に、増大または減少させることを意味する。例えば、ある薬剤は、標的分子以外の分子と相互に作用することによりそのレベル／活性を間接的に調節してもよい。この点で、標的ポリペプチドをコードする遺伝子を間接的に調節することとして、その範囲内に、第１核酸分子の発現を調節することが挙げられ、ここでその第１核酸分子の発現産物は標的ポリペプチドをコードする核酸分子の発現を調節するものとする。
【０１３１】
本明細書で使用されるような「オリゴヌクレオチド」なる語は、ホスホジエステル結合（またはその関連する構造変異体または合成アナログ）を通して連結した多様性のヌクレオチド残基（デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、あるいはその関連する構造変異体または合成アナログ）からなるポリマーをいう。かくして、「オリゴヌクレオチド」なる語は、典型的には、ヌクレオチド残基およびその間の結合が天然に生じるヌクレオチドポリマーをいうが、該用語は、その範囲内に、限定されるものではないが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ホスホルアミダート、ホスホロチオアート、メチルホスホナート、２−Ｏ−メチルリボ核酸等を含む種々のアナログを包含することが理解されよう。該分子の正確な大きさは個々の用途に応じて変化しうる。オリゴヌクレオチドは、典型的には、その長さがかなり短い、一般に約１０〜３０個のヌクレオチド残基であるが、該用語はどのような長さの分子をいうこともできる。ただし、「ポリヌクレオチド」または「核酸」には、典型的には、ラージオリゴヌクレオチドが使用される。
【０１３２】
本明細書で使用されるような「作動可能に結合した」または「作動可能に連結した」なる語は、構造遺伝子を、限定されるものではないが、プロモータを含む調節因子（その場合、遺伝子の転写を、所望によって翻訳を調節する因子）を制御調節下に置くことを意味する。異種プロモータ／構造遺伝子の組み合わせを構築するにおいて、遺伝的配列またはプロモータを遺伝子転写開始部位から一定の距離に（遺伝的配列またはプロモータと、それをその天然のセッティングにて調節する遺伝子、すなわち遺伝的配列またはプロモータを誘導する遺伝子との間の距離が略同じである位置に）配置することが一般に好ましい。当該分野にて知られているように、この距離の変動は機能を喪失することなく適用され得る。同様に、異種遺伝子について調節配列因子の好ましい配置は、その因子を、すなわちそれを誘導する遺伝子を、天然のセッティングにて配置することにより定められる。
【０１３３】
「過剰発現する」、「過剰発現」または「過剰発現した」なる語は、区別されることなく、正常細胞と比べて、一般にがん細胞にて検出可能なレベルでより大きく転写または翻訳される遺伝子（例、ＰＫＣ−θ遺伝子）をいう。従って、過剰発現は、タンパク質およびＲＮＡの過剰発現（転写、転写後プロセシング、翻訳、翻訳後プロセシング、改変安定性、および変性タンパク質分解の増加による）、ならびに局所過剰発現（変性タンパク質トラフィック・パターン（核極大化の増大）および機能活性の拡大による（例えば、基質の酵素加水分解の増加におけるような））の両方をいう。過剰発現はまた、正常細胞または比較細胞（例、乳腺細胞）と比べて、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上の差とすることもできる。
【０１３４】
本明細書中で互換的に使用される「患者」、「対象」、「宿主」または「個体」なる語は、彼等のために治療または予防が望ましい、いずれの対象、特に脊椎動物の対象、さらには哺乳動物の対象をもいう。本発明の範囲内にある適切な脊椎動物は、制限されるものではないが、霊長類（例、ヒト、サルおよび類人猿、マカク属（例、オナガザル科などのカニクイザル、および／またはアカゲザル）からなどの種のサルを含む）およびヒヒ（チャクマヒヒ）、ならびにマーモセット（カリスリクス属からの種）、リスザル（サイミリ属からの種）およびタマリン（サグイヌス属からの種）、ならびにチンパンジーなどの類人猿の種））、げっ歯動物（例、マウス、ラット、モルモット）、ウサギ（例、ラビット、野ウサギ）、ウシ（例、カトル）、ヒツジ（例、シープ）、ヤギ（例、ゴート）、ブタ（例、ピッグ）、ウマ（例、ホース）、イヌ（例、ドッグ）、ネコ（例、キャット）、鳥類（例、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ、カナリア、セキセイインコなどのコンパニオン・バード等）、海洋哺乳類（例、イルカ、クジラ）、は虫類（ヘビ、カエル、トカゲ等）および魚類を包含する。具体的な実施態様において、対象はヒトなどの霊長類である。しかしながら、上記の用語はその徴候があることを意味するものではないと理解されるであろう。
【０１３５】
「医薬的に許容される担体」とは、生物学的に許容されない副作用、さもなければ望ましくない副作用を含まない医薬用ベヒクルを意味し、すなわち該物質は、どのような副作用も、または実質的な副作用も惹起することなく、選択される活性剤と一緒に対象に投与され得る。担体は、賦形剤および希釈剤、崩壊剤、着色剤、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、保存剤、トランスフェクション剤等などの他の添加剤を包含してもよい。
【０１３６】
同様に、本明細書にて提供されるような化合物の「薬理学的に許容される」塩、エステル、アミド、プロドラッグまたは誘導体は、生物学的でないとすれば、あるいは望ましくない、塩、エステル、アミド、プロドラッグまたは誘導体である。
【０１３７】
「ポリヌクレオチド」、「遺伝物質」、「遺伝形態」、「核酸」および「ヌクレオチド配列」なる語は、当業者によって容易に理解されるように、センス鎖およびアンチセンス鎖の両方の、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成形態および混合ポリマーを包含し、化学的または生化学的に修飾されても、非天然の、あるいは誘導化ヌクレオチド塩基を含有してもよい。
【０１３８】
「フェニルアルキル」は、フェニルで置換される上記のアルキル、例えば、−ＣＨ２フェニル、−（ＣＨ２）２フェニル、−（ＣＨ２）３フェニル、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２フェニル等、およびその誘導体を意味する。フェニルアルキルはアルキル基の部分集合である。
【０１３９】
「ポリヌクレオチド変種」および「変種」なる語は、リファレンスポリヌクレオチド配列と実質的に同一の配列を表示するポリヌクレオチド、または当該分野にて公知のストリンジェントな条件下（例えば、Sambrookら、「Molecular Cloning. A Laboratory Manual」、Cold Spring Harbor Press, 1989を参照のこと）でリファレンス配列とハイブリッド形成するポリヌクレオチドをいう。これらの用語はまた、１または複数のヌクレオチドが付加または欠失されているか、あるいは異なるヌクレオチドと置換されているポリヌクレオチドを包含する。この点で、変異、付加、欠失および置換を含む特定の改変がリファレンスポリヌクレオチドになされ、それにより改変されたポリヌクレオチドがリファレンスポリヌクレオチドの生物学的機能または活性を保持しうることは当該分野にて十分に理解される。「ポリヌクレオチド変種」および「変種」なる語はまた、天然に存在するアレル変種も包含する。
【０１４０】
「ポリペプチド」、「タンパク質性分子」、「ペプチド」および「タンパク質」なる語は、本明細書にて、アミノ酸残基のポリマー、およびその物の変種および合成アナログをいうのに区別することなく使用される。かくして、これらの用語は、１または複数のアミノ酸残基が合成の天然に存しないアミノ酸（対応する天然に存するアミノ酸の化学的アナログなど）であるアミノ酸ポリマーに、ならびに天然に存するアミノ酸ポリマーに適用する。これらの用語は、修飾、例えば、糖鎖形成、アセチル化、リン酸化等を排除するものではない。対象のタンパク質性分子の可溶性形態が特に有用である。例えば、１または複数のアミノ酸のアナログを含有する、例えば非天然のアミノ酸を含むポリペプチド、あるいは結合の置換されたポリペプチドは、該定義の範囲内に含まれる。
【０１４１】
「ポリペプチド変種」なる語は、１または複数のアミノ酸が異なるアミノ酸と置換されているポリペプチドをいう。いくつかのアミノ酸が、下記に示されるように、ポリペプチドの活性の特性を変えることなく広く同様の特性を有しながら他のアミノ酸と変わってもよいこと（保存置換）は当該分野にて周知である。これらの用語はまた、１または複数のアミノ酸が付加または欠失されている、あるいは別のアミノ酸で置換されているポリペプチドを包含する。
【０１４２】
「プロドラッグ」なる語は、その最も広義の意味で使用され、本発明の化合物にインビボにて変換されるそれらの誘導体を包含する。かかる誘導体は当業者であれば容易に思い浮かべることができ、例えば有利ヒドロキシ基がエステル誘導基に変換されている化合物を包含する。
【０１４３】
本明細書に使用される場合の「防止する」、「防止した」または「防止している」なる語は、対象が疾患または症状を発達させることに対する耐性を増大させる、言い換えれば、対象が疾患または症状を発達させる可能性を減少させる予防的処理、ならびにその疾患または症状を発症した後に、該疾患または症状を緩和または完全に排除するか、またはそれがさらに悪化するのを防止するための処理をいう。これらの用語はまた、その範囲内に、該疾患または症状に罹り易いが、未だ罹患していないと診断される対象が該疾患または症状を発症することを防止することを含む。
【０１４４】
本明細書中で使用される「ラセミ体」はエナンチオマーの混合物をいう。
【０１４５】
「塩」および「プロドラッグ」なる語は、受容者に投与すると、（直接または間接的に）本発明の化合物を提供する能力を有する医薬的に許容されるいずれの塩、エステル、水和物またはいずれか他の化合物、あるいはその活性な代謝産物または残留物を包含する。適切な医薬的に許容される塩は、塩酸、硫酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸および臭化水素酸などの医薬的に許容される無機酸の塩、あるいは酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、クエン酸、乳酸、粘液酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリン酸、パントテン酸、タンニン酸、アスコルビン酸および吉草酸などの医薬的に許容される有機酸の塩を包含する。塩基性塩は、限定されるものではないが、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムおよびアルキルアンモニウムなどの医薬的に許容されるカチオンで形成される塩を包含する。また、塩基性含窒素基は、塩化、臭化およびヨウ化のメチル、エチル、プロピルおよびブチルなどの低級アルキルハライド；ジメチルおよびジエチルサルファートなどのジアルキルサルファート等で四級化されてもよい。しかしながら、医薬的に許容されない塩も医薬的に許容される塩の調製において有用である可能性があるために、それらも本発明の範囲内にあることが理解されよう。塩およびプロドラッグの調製は当該分野で公知の方法により実施され得る。例えば、金属塩は本発明の化合物を金属水酸化物と反応させることにより調製され得る。酸付加塩は適切な酸を本発明の化合物と反応させることにより調製され得る。
【０１４６】
「選択的」なる語は、ＰＫＣ−α、ＰＫＣ−β、ＰＫＣ−γ、ＰＫＣ−δ、ＰＫＣ−ε、ＰＫＣ−ζ、ＰＫＣ−η、ＰＫＣ−λ、ＰＫＣ−μ、ＰＫＣ−νなどの他のＰＫＣ酵素の機能を実質的に阻害または拮抗することなく、ＰＫＣ−θを阻害するか、あるいはそれに対して拮抗作用を示す化合物をいう。反対に、「非選択的」なる語は、ＰＫＣ−θを阻害するか、またはそれに対して拮抗作用を示し、またＰＫＣ−α、ＰＫＣ−β、ＰＫＣ−γ、ＰＫＣ−δ、ＰＫＣ−ε、ＰＫＣ−ζ、ＰＫＣ−η、ＰＫＣ−λ、ＰＫＣ−μ、ＰＫＣ−νなどの少なくとも１つの他のＰＫＣ酵素の機能を実質的に阻害または拮抗する化合物をいう。一般に、ＰＫＣ−θに対して選択的である化合物は、他のＰＫＣ（すなわち、ＰＫＣ−α、ＰＫＣ−β、ＰＫＣ−γ、ＰＫＣ−δ、ＰＫＣ−ε、ＰＫＣ−ζ、ＰＫＣ−η、ＰＫＣ−λ、ＰＫＣ−μ、ＰＫＣ−νなどのＰＫＣ−θ以外のＰＫＣ）を阻害すること、またはその拮抗作用に関して、約２倍、５倍、１０倍、２０倍、５０倍より大きな、または１００倍より大きなＰＫＣ−θ選択性を示す。ある実施態様において、選択的化合物は、他のＰＫＣ（すなわち、ＰＫＣ−α、ＰＫＣ−β、ＰＫＣ−γ、ＰＫＣ−δ、ＰＫＣ−ε、ＰＫＣ−ζ、ＰＫＣ−η、ＰＫＣ−λ、ＰＫＣ−μ、ＰＫＣ−νなどのＰＫＣ−θ以外のＰＫＣ）に対するよりも、ＰＫＣ−θに対して少なくとも５０倍より大きな阻害または拮抗作用を示す。さらに別の実施態様において、選択的化合物は、他のＰＫＣ（すなわち、ＰＫＣ−α、ＰＫＣ−β、ＰＫＣ−γ、ＰＫＣ−δ、ＰＫＣ−ε、ＰＫＣ−ζ、ＰＫＣ−η、ＰＫＣ−λ、ＰＫＣ−μ、ＰＫＣ−νなどのＰＫＣ−θ以外のＰＫＣ）に対するよりも、ＰＫＣ−θに対して少なくとも１００倍より大きな阻害または拮抗作用を示す。さらに別の実施態様において、選択的化合物は、他のＰＫＣ（すなわち、ＰＫＣ−α、ＰＫＣ−β、ＰＫＣ−γ、ＰＫＣ−δ、ＰＫＣ−ε、ＰＫＣ−ζ、ＰＫＣ−η、ＰＫＣ−λ、ＰＫＣ−μ、ＰＫＣ−νなどのＰＫＣ−θ以外のＰＫＣ）に対するよりも、ＰＫＣ−θに対して少なくとも５００倍より大きな阻害または拮抗作用を示す。さらに別の実施態様において、選択的化合物は、他のＰＫＣ（すなわち、ＰＫＣ−α、ＰＫＣ−β、ＰＫＣ−γ、ＰＫＣ−δ、ＰＫＣ−ε、ＰＫＣ−ζ、ＰＫＣ−η、ＰＫＣ−λ、ＰＫＣ−μ、ＰＫＣ−νなどのＰＫＣ−θ以外のＰＫＣ）に対するよりも、ＰＫＣ−θに対して少なくとも１０００倍より大きな阻害または拮抗作用を示す。
【０１４７】
本明細書で使用されるような「配列同一性」なる語は、ヌクレオチドとヌクレオチドをベースに、またはアミノ酸とアミノ酸をベースに、比較するウィンドウにわたって（over a window of comparison）配列の程度が同一であることをいう。かくして、「配列同一性％」は比較するウィンドウにわたって２つの最適に整列させた配列を比較し、同一の核酸塩基（例、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＣｙｓおよびＭｅｔ）が両方の配列に存在しているポジションの数を決定してマッチドポジションの数を得、そのマッチドポジションの数を比較するウィンドウ（すなわち、ウィンドウの大きさ）におけるポジションの総数で割り、結果に１００を掛けることで配列同一性％を得ることにより算定される。本発明のためには、「配列同一性」は適切な方法により計算される「マッチ％」を意味すると解される。例えば、配列同一性分析は、ソフトウェアに付随する参考マニュアルにて使用されるような標準的デフォルトを用いてＤＮＡＳＩＳコンピュータプログラム（バージョン２.５（ウィンドウズ用）；日立ソフトウェアエンジニアリング（株）、South San Francisco、California、USA）を利用して実施されてもよい。
【０１４８】
「類似性」は、表２に規定されるように、同一であるか、または保存置換を構成する、アミノ酸の％数をいう。
【表２】
2016537400.tif 000003
【０１４９】
類似性はＧＡＰなどの配列比較プログラムを用いて決定されてもよい（Deverauxら、1984、Nucleic Acids Research 12, 387-395）。このように、本明細書に引用される配列と、類似するまたは実質的に異なる長さの配列は、ギャップを該整列に挿入することで比較されてもよく、かかるギャップは、例えば、ＧＡＰｂにより使用される比較アルゴリズムにより決定される。
【０１５０】
２またはそれ以上のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの間の配列の関係を記載するのに使用される用語として、「リファレンス配列」、「比較ウィンドウ」、「配列同一性」、「配列同一性％」および「実質的同一性」が挙げられる。「リファレンス配列」は、モノマー単位が少なくとも１２個であるが、１５〜１８個（両端を含む）であることも度々あり、少なくとも２５個であることもしばしばであるヌクレオチドおよびアミノ酸残基である。２個のポリヌクレオチドは、各々、（１）２個のポリヌクレオチド間で類似する配列（すなわち、全長ポリヌクレオチド配列の一部だけ）、および（２）２個のポリヌクレオチド間で異なる配列を含むため、２個（またはそれ以上）のポリヌクレオチド間の配列比較は、典型的には、２個のポリヌクレオチドの配列を「比較ウィンドウ」にわたって比較し、配列類似性の局所領域を同定して比較することによるのが好ましい。「比較ウィンドウ」は、２個の配列を最適に配置した後に、配列を同数の連続ポジションのリファレンス配列と比較して、少なくとも６個の、通常は約５０ないし約１００個の、より一般的には約１００ないし約１５０個のポジションが連続している概念的セグメントをいう。比較ウィンドウは、２個の配列を最適に整列させるのに、リファレンス配列（付加または欠失を含まない配列）と比べて約２０％以下の付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでもよい。比較ウィンドウを整列するための配列の最適整列は、コンピュータ化されたアルゴリズム（Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0、Genetics Computer Group、575 Science Drive Madison、WI、USAのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）の履行により、あるいは選択される種々のいずれかの方法により作成される最良の整列を精査すること（すなわち、比較ウィンドウにわたって最高の相同性％を得ること）により行うことができる。例えば、Altschulらにより、1997, Nucl. Acids Res. 25: 3389に開示されるようなＢＬＡＳＴファミリーのプログラムを参考にしてもよい。配列分析の詳細な検討は、Ausubelら、「Current Protocols in Molecular Biology」 John Wiley & Sons Inc, 1994-1998, Chapter 15のユニット１９.３に記載される。
【０１５１】
本明細書に使用されるような「小分子」は、分子量が３キロダルトン（ｋＤａ）未満で、典型的には１.５キロダルトン未満で、より好ましくは約１キロダルトン未満である組成物をいう。小分子は核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、脂質または他の有機（含炭素）または無機分子であってもよい。当業者は本明細書の記載に基づいて正しく理解するであろうから、化学的および／または生物学的混合物、しばしば、真菌、細菌または藻類の抽出物の広範囲にわたるライブラリーは本発明のいずれかのアッセイによりスクリーニングされ、生物活性を調節する化合物を同定することができる。「小有機分子」は分子量が３キロダルトン未満であるか、１.５キロダルトン未満であるか、あるいは約１キロダルトン未満でさえある、有機化合物（または無機化合物（例、金属）と複合した有機化合物）である。
【０１５２】
本明細書で使用されるような「ストリージェンシー」は、ハイブリッド形成の間の、温度およびイオン強度条件、および特定の有機溶媒の有無をいう。ストリージェンシーが高ければ高いほど、配列間で観察される相補性の度合いは高くなる。本明細書で使用されるような「ストリンジェントな条件」は、その条件下で、高割合の相補的塩基を有するポリヌクレオチドだけが、好ましくは厳格な相補性のあるポリヌクレオチドだけがハイブリッド形成するであろう、温度およびイオン条件をいう。必要とされるストリージェンシーはヌクレオチド配列依存的であり、ハイブリッド形成の間に存在する種々の成分に依存し、ヌクレオチドアナログが使用されると大きく変化する。一般に、ストリンジェントな条件は、所定のイオン強度およびｐＨで、特定の配列に関して熱融解点（Ｔｍ）未満の約１０℃ないし２０℃であるように選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が相補的プローブとハイブリッド形成する（特的のイオン強度およびｐＨの下での）温度である。ポリヌクレオチドは、少なくとも低ストリンジェンシー条件下で、好ましくは少なくとも中ストリンジェンシー条件下で、より好ましくは高ストリンジェンシー条件下で標的配列とハイブリッド形成すると理解されるであろう。本明細書中での低ストリンジェンシー条件への言及は、少なくとも約１％ｖ／ｖないし少なくとも約１５％ｖ／ｖのホルムアミドと、少なくとも約１Ｍないし少なくとも約２Ｍのハイブリッド形成に用いるための塩とを４２℃で、および少なくとも約１Ｍないし少なくとも約２Ｍの洗浄に用いるための塩を４２℃で用いることを包含する。低ストリンジェンシー条件はまた、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０.５Ｍ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７.２）、ハイブリッド形成のための７％ＳＤＳを６５℃で、および（ｉ）２ｘＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ；または（ｉｉ）０.５％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、４０ｍＭ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７.２）、洗浄のための５％ＳＤＳを室温で用いることを包含してもよい。中ストリンジェンシー条件は、少なくとも約１６％ｖ／ｖないし少なくとも約３０％ｖ／ｖのホルムアミドと、少なくとも約０.５Ｍないし少なくとも約０.９Ｍのハイブリッド形成に用いるための塩とを４２℃で、および少なくとも約０.５Ｍないし少なくとも約０.９Ｍの洗浄に用いるための塩を４２℃で用いることを包含する。中ストリンジェンシー条件はまた、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０.５Ｍ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７.２）、ハイブリッド形成のための７％ＳＤＳを６５℃で、および（ｉ）２ｘＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ；または（ｉｉ）０.５％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、４０ｍＭ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７.２）、洗浄のための５％ＳＤＳを４２℃で用いることを包含してもよい。高ストリンジェンシー条件は、少なくとも約３１％ｖ／ｖないし少なくとも約５０％ｖ／ｖのホルムアミドと、少なくとも約０.０１Ｍないし少なくとも約０.１５Ｍのハイブリッド形成に用いるための塩とを４２℃で、および少なくとも約０.０１Ｍないし少なくとも約０.１５Ｍの洗浄に用いるための塩を４２℃で用いることを包含する。高ストリンジェンシー条件はまた、１％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０.５Ｍ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７.２）、ハイブリッド形成のための７％ＳＤＳを６５℃で、および（ｉ）０.２ｘＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ；または（ｉｉ）０.５％ＢＳＡ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、４０ｍＭ  ＮａＨＰＯ４（ｐＨ７.２）、洗浄のための１％ＳＤＳを６５℃を超えて室温で用いることを包含してもよい。高ストリンジェンシー条件の一の実施態様は、６ｘＳＳＣ中、約４５℃でハイブリッド形成し、つづいて０.２ｘＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ中、６５℃で１または複数回洗浄することを包含する。超高ストリンジェンシー条件の一の実施態様は、０.５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳと６５℃でハイブリッド形成し、つづいて０.２ｘＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ中、６５℃で１または複数回洗浄することを包含する。他のストリンジェントな条件は当該分野にて周知である。種々の因子を操作してハイブリッド形成の特異性を最適化し得ることを当業者は認識するであろう。最終洗浄のストリンジェンシーの最適化は、高度のハイブリッド形成を確保するのに供することができる。詳細な例に関しては、ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ（前掲）セクション２.１０.１〜２.１０.１６、およびＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ  Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ（Sambrookら編）（Cold Spring Harbor Press 1989）セクション１.１０１〜１.１０４を参照のこと。
【０１５３】
「実質的に相補的」とは、オリゴヌクレオチドまたはその部分配列が標的となる配列とハイブリッド形成するのに十分に相補的であることを意味する。従って、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列または部分配列が、標的配列の正確な相補的配列を反映する必要はない。好ましい実施態様において、オリゴヌクレオチドは標的配列とのミスマッチがない。
【０１５４】
本明細書で使用されるような「相乗的」なる語は、がん治療薬または治療剤と組み合わせて投与した場合に（逆もまた同様で）、ＰＫＣ−θ阻害剤の治療効果が、ＰＫＣ−θ阻害剤およびがん治療薬または治療剤を単独で投与した場合に予測されるその相加的治療効果よりも大きいことを意味する。ＰＫＣ−θ阻害剤およびがん治療薬または治療剤に適用されるような「相乗的に効果的な量」なる語は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、（ｉｉｉ）維持、または（ｉｖ）ＥＭＴを阻害するか、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴを刺激または誘発し、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害し、それによってがんを治療または予防するのに効果的であり、かつＰＫＣ−θ阻害剤の用量、ｖｓ．がん治療薬または治療剤の用量、ｖｓ．ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、（ｉｉｉ）維持、または（ｉｖ）ＥＭＴの阻害、またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴの刺激または誘発、およびＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能の阻害についての用量応答プロット（ＰＫＣ−θ阻害剤の用量を軸とするか、がん治療薬または治療剤の用量を軸とするかのいずれかである）にて交差しない効果を得る、組成物（一般に、医薬組成物）中の各成分の量をいう。当該分野にて相乗作用を決定するのに使用される用量応答曲線は、例えば、Sandeらによって記載されている（頁１０８０−１１０５、A. Goodmanら編、the Pharmacological Basis of Therapeutics、MacMillan Publishing Co., Inc., New York（1980）を参照のこと）。相乗作用の最適量は、９５％の信頼限界を用い、用量レベル、投与計画および応答などの因子を変え、そしてＰＫＣ−θ阻害剤およびがん治療薬または治療剤の種々の組み合わせについての用量応答曲線からのアイソボログラムを生成するコンピュータ発生モデルを利用することにより決定され得る。ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞の用量応答での増殖、残存または生存能の最大の阻害は最適用量レベルと相関関係にある。
【０１５５】
本明細書で使用されるような「治療」、「治療する」等の語は、所望の薬理的および／または生理的効果を得ることをいう。その効果は、疾患または症状（例、転移性がんを含むがん）および／または該疾患または症状に起因する副作用を部分的にまたは完全に治癒する見地において治療的であってもよい。これらの用語は、哺乳動物、特にヒトにおける症状または疾患のいずれの治療にも及び、（ａ）該疾患または症状を阻害すること、すなわちその発展を阻止すること；または（ｂ）該疾患または症状を寛解すること、すなわち該疾患または症状を退行させることを包含する。
【０１５６】
本明細書で使用されるような「腫瘍」なる語は、悪性または良性であろうとなかろうと、あらゆる前がん状態の、およびがん性細胞および組織の新生物の細胞成長および増殖をいう。「がん」および「がん性」なる語は、典型的には、細胞増殖の非制御によってある程度は特徴付けられる哺乳動物の生理的状態をいうか、または示す。本明細書で使用されるような「がん」なる語は、早期がんおよび進行期がんを含め、非転移性がんおよび転移性がんをいう。「前がん状態」なる語は、典型的には、がんに進行するか、がんを発症する状態または増殖をいう。「非転移性」とは、良性であるか、あるいは原発部位で留まっており、リンパ系または血管系に、または原発部位以外の組織に浸潤していないがんを意味する。一般に、非転移性がんは、ステージ０、ＩまたはＩＩのがん、場合によってはステージＩＩＩのがんである、いずれのがんでもある。「早期がん」とは、浸潤していない、または転移していないか、ステージ０に分類されるがんを意味する。「進行期がん」なる語は、一般に、ステージＩＩＩまたはステージＩＶのがんをいうが、ステージＩＩのがん、またはステージＩＩの前段階のがんをいうこともできる。当業者であれば、ステージＩＩのがんを早期がんまたは進行期がんのいずれに分類するかはがんの個々の型に依存することが分かるであろう。がんの典型例として、限定されるものではないが、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、膵臓がん、結直腸がん、肺がん、肝細胞がん、胃がん、肝臓がん、膀胱がん、尿路がん、甲状腺がん、腎臓がん、癌腫、黒色腫、脳がん、非小細胞肺がん、頭頸部扁平上皮がん、子宮内膜がん、多発性骨髄腫、直腸がん、および食道がんが挙げられる。典型例において、がんは乳がんである。
【０１５７】
本明細書に使用されるような「腫瘍サンプル」なる語は、がん患者より得られる腫瘍材料を含むサンプルを意味する。該用語は、臨床サンプル、例えば外科的切除により得られる組織、および例えばコア生検または細針生検などの生検により得られる組織を包含する。該用語はまた、原発腫瘍以外の部位から得られる腫瘍細胞、例えば循環性腫瘍細胞、ならびにホルマリン固定、パラフィン包埋腫瘍細胞または凍結腫瘍細胞などの保存腫瘍細胞を含むサンプルを包含する。該用語は、患者の腫瘍細胞の子孫である細胞、例えば原発腫瘍細胞または循環性腫瘍細胞より誘導される細胞培養サンプルを包含する。該用語は、インビボにて腫瘍細胞より放出されるタンパク質または核酸材料、例えば、骨髄、血液、血漿、血清等を含んでもよいサンプルを包含する。該用語はまた、腫瘍細胞に富むか、さもなければその獲得後に操作されているサンプル、および患者の腫瘍材料より得られるポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドを含むサンプルを包含する。
【０１５８】
「ベクター」なる語は、ポリヌクレオチド分子、好ましくは、例えばプラスミド、バクテリオファージ、酵母またはウイルスより誘導され、その中にポリヌクレオチドが挿入され得るか、またはクローン化され得るＤＮＡ分子を意味する。ベクターは、好ましくは、１または複数の独特な制限部位を有し、標的細胞または組織あるいはその始原細胞または組織を含む所定の宿主細胞において自律増殖能を有するか、またはクローン配列が再生されるそのような所定の宿主のゲノムと一体化され得る。従って、ベクターは、自律複製ベクター、すなわち、その複製が染色体複製から独立する染色体外物、例えば線状または閉鎖環状プラスミド、染色体外因子、ミニ染色体、または人工染色体として存在するベクターであり得る。ベクターは自己複製を保証する何らかの手段を有し得る。あるいはまた、ベクターは、宿主細胞に導入されると、ゲノムに組み込まれ、それが組み込まれた染色体と一緒に複製されるベクターとすることもできる。ベクター系は、単一のベクターまたはプラスミド、２個またはそれ以上のベクターまたはプラスミドを含み、それと一緒に宿主細胞のゲノムに導入される全ＤＮＡまたはトランスポゾンを含有しうる。ベクターの選択は、典型的には、ベクターと、そのベクターがその中に導入されるはずの宿主細胞との適合性に依存するであろう。本発明においては、ベクターは、好ましくは、ウイルスまたはウイルス誘導ベクターであり、動物細胞、好ましくは哺乳動物細胞にて作動可能に機能的である。かかるベクターはポックスウイルス、アデノウイルスまたは酵母より誘導されてもよい。ベクターはまた、適切な形質転換体の選択に使用され得る抗生物質耐性遺伝子などの選択マーカーを含み得る。かかる耐性遺伝子の例は当業者に公知であり、抗生物質のカナマイシンおよびＧ４１８（ジェネテシン（登録商標））に対する耐性を付与するｎｐｔＩＩ遺伝子、および抗生物質のヒグロマイシンＢに対する耐性を付与するｈｐｈ遺伝子を包含する。
【０１５９】
本明細書にて使用されるような遺伝子の名称の下線付与またはイタリック化は遺伝子を表すものであり、対照的に、そのタンパク質産生物は下線付与またはイタリック化なしで遺伝子の名称で表される。例えば、「ＰＫＣ−θ」はＰＫＣ−θ遺伝子を意味し、それに対して「ＰＫＣ−θ」はタンパク質産物またはＰＫＣ−θ遺伝子の転写および翻訳および／または選択的スプライシングより生成される産生物を表す。
【０１６０】
本明細書に記載の実施態様は、各々、特記されない限り、いずれも皆、必要な変更を加えて適用され得る。
【０１６１】
２．  がん幹細胞の増殖または生存能を減少または抑止する組成物および方法
本発明は、乳がんがＣＳＣに富んでおり、ＰＫＣ−θがそれらのＣＳＣにて、ならびにＣＳＣ以外の腫瘍細胞で過剰発現されるという決定にいくらか基づくものである。これらの知見に基づき、本発明者らは、乳がん、乳房ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の乳房腫瘍細胞をＰＫＣ−θ阻害剤で処理し、該阻害剤が乳房ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞の形成、増殖または維持を特異的に阻害し、乳房ＣＳＣのＥＭＴを阻害し、および／または乳房ＣＳＣでのＭＥＴを刺激／誘発することを見出した。理論または操作モードで拘束するものではないが、ＰＫＣ−θがそのシグナル化のレベルおよび乳房ＣＳＣを機能付けする後成的役割の両方で重要であり、この酵素の過剰発現が乳房ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞の産生および維持だけでなく、一般にＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞の産生を刺激することが提案されている。
【０１６２】
上記の観察に基づいて、本発明者らはＰＫＣ−θの阻害が、ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞の形成、増殖または維持の減少をもたらし、および／またはＣＳＣのＥＭＴの減少、および／またはＣＳＣのＭＥＴの増大をもたらし、そのことは、順次、そこから分化するＣＳＣ以外の腫瘍細胞を少なくし、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞のがん療法または治療剤での治療をより効果的なものとすると提案する。
【０１６３】
かくして、本発明によれば、ＰＫＣ−θ阻害剤のＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞の形成、増殖または維持を減少または抑止し、および／またはＣＳＣのＥＭＴを減少または抑止し、および／またはＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発する利点を考慮し、がん（例、転移性がん）を治療または予防するための方法および組成物が提供される。特定の実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤はＣＳＣ以外の腫瘍細胞のその子孫の増殖、残存または生存能を減少させるがん療法または薬剤と組み合わせて使用される。本発明の方法および組成物は、以下に記載されるように、転移性がんを含む、がんの治療または予防にてこのように特に有用である。
【０１６４】
２．１  ＰＫＣ−θ阻害剤
ＰＫＣ−θ阻害剤は、ＰＫＣ−θの蓄積、機能または安定性を減らすか；ＰＫＣ−θ遺伝子の発現を減少させる、いずれの活性剤も包含し、そのような阻害剤は、限定されるものではなく、小分子および巨大分子、例えば核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、炭水化物、多糖類、リポ多糖類、脂質または他の有機（含炭素）または無機分子を包含する。
【０１６５】
ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は、ＰＫＣ−θ転写体の転写または翻訳を阻害するように機能する拮抗作用を有する核酸分子である。この型の典型的な転写体として、以下の配列：
（１）例えば、ジンバンク受入番号（GenBank Accession Nos.）ＸＭ ００５２５２４９６、ＸＭ ００５２５２４９７、ＸＭ ００５２５２４９８、およびＸＭ ００５２５２４９９で示されるヒトＰＫＣ−θヌクレオチド配列、（２）（１）において言及されるいずれか一つの配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％の配列同一性を共有するヌクレオチド配列；（３）少なくとも低、中または高ストリンジェンシー条件下で、（１）において言及される配列とハイブリッド形成するヌクレオチド配列；（４）以下のアミノ酸配列：例えば、ジンペプト受入番号（GenPept Accession Nos.）ＸＰ ００５２５２５５３、ＸＰ ００５２５２５５４、ＸＰ ００５２５２５５５およびＸＰ ００５２５２５５６で示されるヒトＰＫＣ−θアミノ酸配列のいずれか一つをコードするヌクレオチド配列；（５）（４）において言及されるいずれか一つの配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％の配列類似性を共有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列；および（６）（４）において言及されるいずれか一つの配列と少なくとも７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９％の配列同一性を共有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列のいずれか一つに相当する核酸配列が挙げられる。
【０１６６】
典型的な拮抗作用を有する核酸分子として、アンチセンス分子、アプタマー、リボザイムおよび三重鎖形成分子、ＲＮＡｉおよび外部ガイドシーケンスが挙げられる。その核酸分子は、標的分子が持つ特異活性のエフェクター、阻害剤、調節剤、および刺激剤として作用することができ、あるいはその機能的核酸分子はいずれか他の分子とは独立した新しい活性を持ちうる。
【０１６７】
拮抗作用を有する核酸分子は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ポリペプチドまたは炭水化物鎖などのいずれの巨大分子とも相互作用しうる。かくして、拮抗作用を有する核酸分子は、ＰＫＣ−θ  ｍＲＮＡまたはＰＫＣ−θのゲノムＤＮＡと相互作用することができ、あるいはＰＫＣ−θポリペプチドと相互作用しうる。時に、拮抗作用を有する核酸分子は、標的分子とその拮抗作用を有する核酸分子の間の配列相同性に基づき、他の核酸と相互作用するように設計される。他の状況において、拮抗作用を有する核酸分子と標的分子の間の特異的認識は、その拮抗作用を有する核酸分子と標的分子の間の配列相同性に基づくものではなく、むしろ特異的認識が生じることを可能とする三次構造の形成に基づくものである。
【０１６８】
ある実施態様において、アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡ分子は、標的とされるｍＲＮＡと結合し、タンパク質の翻訳を妨げることによってＰＫＣ−θの翻訳を直接的に遮断するように使用される。アンチセンス分子は、カノニカルまたは非カノニカルのいずれかの塩基対合を介して標的核酸分子と相互作用するように設計される。アンチセンス分子と標的分子の相互作用が、例えば、ＲＮＡｓｅＨ介在ＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッド分解を介して、標的分子の崩壊を促進するように設計されてもよい。別法として、アンチセンス分子が、転写または複製などの、通常では標的分子で生じるであろうプロセシング機能を中断するように設計されてもよい。アンチセンス分子は標的分子の配列に基づき設計され得る。最も利用できる標的分子の領域を見つけることでアンチセンス効率を最適とする方法が多数存在する。限定されるものではないが、その方法として、ＤＭＳおよびＤＥＰＣを用いる、インビトロ実験およびＤＮＡ修飾実験が挙げられる。具体的な例において、アンチセンス分子は、１０−６、１０−８、１０−１０、または１０−１２以下の解離定数（Ｋｄ）で標的分子と結合する。具体的な実施態様において、例えば−１０と＋１０の間の領域にある翻訳開始部位より誘導されるアンチセンスオリゴデオキシリボヌクレオチドが利用される。
【０１６９】
アプタマーは、適切には特異的方法にて、標的分子と相互作用する分子である。アプタマーは、一般に、長さが１５−５０個の範囲にある塩基の小核酸であり、ステムループまたはＧ−四分子などの所定の二次および三次構造物に折りたたまれる。アプタマーは、ＡＴＰおよびテオフィリンなどの小分子、ならびに逆転写酵素およびトロンビンなどの大分子と結合しうる。アプタマーは標的分子と１０−１２Ｍ未満のＫｄで極めてしっかりと結合しうる。適切には、アプタマーは、標的分子と、１０−６、１０−８、１０−１０、または１０−１２未満のＫｄで結合する。アプタマーは標的分子と極めて高い特異度で結合しうる。例えば、標的分子と、分子上でほんの１カ所だけ異なるもう一つ別の分子との間で、結合アフィニティが１０,０００倍より大きく異なるアプタマーが単離される。アプタマーは、標的分子とのＫｄがバックグラウンド結合分子とのＫｄと比べて、少なくとも１０、１００、１０００、１０,０００、または１００,０００倍小さいことが望ましい。関心のある標的（例、ＰＫＣ−θ）に対するアプタマーを生成する適切な方法は、「指数関数的富化によるリガンドのシステマティック解析（Systematic Evolution of Ligands by EXponential Enrichment）」（ＳＥＬＥＸ（登録商標））である。そのＳＥＬＥＸ（登録商標）方法は、米国特許第５,４７５,０９６号および米国特許第５,２７０,１６３号（ＷＯ９１／１９８１３も参照のこと）に記載されている。簡単には、核酸の混合物を結合させるのに好ましい条件下で標的分子と接触させる。結合していない核酸と結合した核酸とを区分し、核酸−標的分子の複合体を分離する。次に、その分離した核酸を増幅させて、リガンドに富む核酸の混合物を得、それを、所望により、結合、区分け、分離および増幅の繰り返しサイクルに供し、標的分子に対して極めて特異的な高アフィニティ核酸リガンドを得る。
【０１７０】
他の実施態様において、抗ＰＫＣ−θリボザイムを用いてＰＫＣ−θ  ＲＮＡの特異的切断に触媒作用を生じさせる。リボザイムの作用機構は、リボザイム分子を相補的標的ＲＮＡとの配列特異的ハイブリッド形成に付し、つづいてヌクレオチド鎖切断に供することを含む。ヌクレアーゼまたは核酸ポリメラーゼ型反応に触媒作用を及ぼすリボザイムには、ハンマーヘッド型リボザイム、ヘアピン型リボザイム、およびテトラヒメノ系リボザイムなどの天然系に見られるリボザイムに基づいて、数種の異なる型がある。天然系では見られない多数のリボザイムもあるが、それらは新たに特異的反応に触媒作用を及ぼすように遺伝子操作される。典型的なリボザイムはＲＮＡまたはＤＮＡ基質を切断する。ある実施態様においては、ＲＮＡ基質を切断するリボザイムが利用される。潜在的ＲＮＡ標的内にある特異的リボザイム切断部位は、最初に、標的分子を、次の配列、ＧＵＡ、ＧＵＵおよびＧＵＣを含む、リボザイム切断部位についてスキャンすることにより確認される。そして確認されるとすぐに、切断部位を含有する標的遺伝子の領域に相当する１５〜２０個のリボヌクレオチドのショートＲＮＡ配列が、オリゴヌクレオチド配列を不適切のとする可能性のある第２構造などの予測される構造的特徴について評価してもよい。候補標的の適合性はまた、リボヌクレアーゼ保護アッセイを用い、相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリッド形成に対するその許容性を試験することによっても評価され得る。
【０１７１】
三重鎖を形成する機能的核酸分子は、二本鎖または一本鎖のいずれかの核酸と相互に作用しうる分子である。三重鎖分子が標的領域と相互作用すると、トリプレックスと称される構造物が形成され、そこにはワトソン−クリック型とフーグスティーン型の両方の塩基対に依存する三本鎖のＤＮＡ形成複合体がある。三重鎖分子は標的領域と高アフィニティおよび高特異性で結合しうるため、そのような分子が好ましい。三重鎖を形成する分子は標的分子と１０−６、１０−８、１０−１０、または１０−１２より小さいＫｄで結合することが一般には望ましい。
【０１７２】
外部ガイドシーケンス（ＥＧＳ）は、複合体を形成する標的核酸分子と結合する分子であり、この複合体は標的分子を切断するＲＮＡｓｅＰにより認識される。ＥＧＳは選択のＲＮＡ分子を特異的に標的とするように設計され得る。ＲＮＡｓｅＰは細胞内でトランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）のプロセシングの手助けをする。標的ＲＮＡ：ＥＧＳ複合体が天然のｔＲＮＡ基質を模倣させるＥＧＳを用いることにより、細菌性ＲＮＡｓｅＰを補充していずれかのＲＮＡ配列を実質的に切断させることができる。同様に、真核性ＥＧＳ／ＲＮＡｓｅＰ指向性のＲＮＡの切断を利用し、真核生物の細胞内で処方も標的を切断することができる。
【０１７３】
他の実施態様において、ＰＫＣ−θ遺伝子またはＰＫＣ−θ転写物のＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介するＲＮＡ分子を用いて遺伝子発現を減らすか抑止することができる。ＲＮＡｉは、標的遺伝子の転写物に相同的な一本鎖、通常は二本鎖のＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）を導入することにより標的遺伝子の産生を干渉すること、または破壊することをいう。二本鎖ＲＮＡ干渉（ｄｓＲＮＡｉ）または短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を含むＲＮＡｉ方法は、哺乳動物細胞および線虫のシー・エレガンス（C.elegans）を含む多数の生物にて広く文書にて公開されている（Fireら、1998. Nature 391, 806-811）。哺乳動物細胞では、ＲＮＡｉは短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の２１−ないし２３−ヌクレオチド（ｎｔ）のデュプレックス（duplex）により（Chiuら、2002 Mol. Cell. 10: 549-561；Elbashirら、2001. Nature 411: 11: 494-498）、あるいは微小ＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、機能的短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、またはＤＮＡ鋳型をＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモータと一緒に用いてインビボにて発現される他のｄｓＲＮＡ（Zengら、2002. Mol. Cell 9: 1327-1333；Paddisonら、2002. Genes Dev. 16: 948-958；Ｌeeら、2002. Nature Biotechnol. 20: 500-505；Paulら、2002. Nature Biotechnol. 20: 505-508；Tuschl, T.、2002. Nature Biotechnol. 20: 440-448；Ｙuら、2002. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99（9）: 6047-6052；McManusら、2002. RNA 8: 842-850；Suiら、2002. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99（6）: 5515-5520）によりトリガーされ得る。
【０１７４】
特定の実施態様において、ｄｓＲＮＡそれ自体と、特にＰＫＣ−θ遺伝子の少なくとも一部に相当するｄｓＲＮＡ産生構築物とは、その発現を減少させるのに、または抑止するのに使用される。遺伝子発現のＲＮＡｉ介在性阻害は、当該分野にて報告されているいずれかの技法を用いて、例えば、ステムループまたはヘアピンＲＮＡ構造物をコードする核酸構築物を標的細胞のゲノムにトランスフェクトすることにより、または類似するプロモータ間でＰＫＣ−θ遺伝子について相同性を有するトランスフェクトされた核酸構築物を発現することにより、あるいはシングルプロモータの後方からヘッドツーヘッドまたはテイルツーテイルのデュプリケーションとして達成されてもよい。類似するいずれの構築物もそれ自体が折り重ねる能力を有するシングルＲＮＡを産生する限り、あるいはそれが２つの別個のＲＮＡ転写物を産生し、ついでアニールして標的遺伝子と相同性を有するｄｓＲＮＡを形成する限り、そのいずれの構築物が使用されてもよい。
【０１７５】
ＲＮＡｉでは絶対的相同性は必要とされず、約２００の塩基対のｄｓＲＮＡで約８５％のより低い閾値の相同性が記載されている（PlasterkおよびKetting、2000, Current Opinion in Genetics and Dev. 10: 562-67）。従って、ｄｓＲＮＡの長さに応じて、ＲＮＡｉをコードする核酸は、標的とする遺伝子転写物に向かって含有する相同性のレベルが変化しうる；すなわち１００〜２００の塩基対のｄｓＲＮＡは標的遺伝子と少なくとも約８５％の相同性を有し、より長いｄｓＲＮＡ、すなわち３００〜１００の塩基対のｄｓＲＮＡは標的遺伝子と少なくとも約７５％の相同性を有し得る。別個に発現されるＲＮＡとアニールするように設計されるシングルＲＮＡ転写物を発現するＲＮＡコード化構築物、または相似するプロモータから転写物を別個に発現するシングル構築物は、適切には、長さが少なくとも１００個のヌクレオチドである。内折りを介してｄｓＲＮＡを形成するように設計されるシングルＲＮＡを発現するＲＮＡコード化構築物は、通常、長さが少なくとも約２００個のヌクレオチドである。
【０１７６】
ｄｓＲＮＡ形成構築物を発現するのに使用されるプロモータは、得られるｄｓＲＮＡが破壊について標的とされる細胞系統における遺伝子産物に特異的であるならば、いずれの型のプロモータであってもよい。あるいはまた、プロモータは特定の発達系統の細胞においてのみ発現する特異的な系統であってもよい。このことは、標的とされない細胞系統にて発現される遺伝子と、相同性においてある程度の重複が観察される場合に有利であるかもしれない。プロモータはまた、外部から調節される因子により誘発されてもよく、あるいは細胞内環境因子により誘発されてもよい。
【０１７７】
ある実施態様において、例えば、Tuschlらによって、米国２００２／００８６３５６に記載されるように、約２１ないし約２３のヌクレオチドのＲＮＡ分子であって、それらが対応する特異的ｍＲＮＡの切断を指示するＲＮＡ分子はＲＮＡｉの媒介に利用され得る。そのような２１−ないし２３−ｎｔ  ＲＮＡ分子は３’ヒドロキシル基を含むことができ、一本鎖または二本鎖とすることができ（２つの２１−ないし２３−ｎｔ  ＲＮＡとして）、ここでそのｄｓＲＮＡ分子はブラントエンドとすることも、オーバーハンギングエンド（例えば、５’,３’）を含むこともできる。
【０１７８】
ある実施態様において、拮抗作用を有する核酸分子はｓｉＲＮＡである。ｓｉＲＮＡはいずれか適当な方法により調製され得る。例えば、国際公開ＷＯ  ０２／４４３２１を参考にしてもよく、そこでは３’末端のオーバーハングと塩基対合させると、標的ｍＲＮＡの配列特異的分解能を有するｓｉＲＮＡを開示しており、その内容を出典明示により本明細書の一部とする。配列特異的遺伝子サイレンシングは、酵素ダイサーにより産生されるｓｉＲＮＡを模倣する合成のショート二本鎖ＲＮＡを用いて哺乳動物細胞にて達成され得る。ｓｉＲＮＡは化学的にまたはインビトロにて合成され得、あるいはショート二本鎖ヘアピン様ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）が細胞内でｓｉＲＮＡにプロセシングされる結果であってもよい。合成ｓｉＲＮＡは、一般に、アルゴリズムと、通常のＤＮＡ／ＲＮＡシンセサイザーを用いて設計される。供給業者として、Ambion（Austin, Tex.）、ChemGenes（Ashland, Mass.）、Dharmacon（Lafayette, Colo.）、Glen Research（Sterling, Va.）、MWB Biotech（Esbersberg, Germany）、Proligo（Boulder, Colo.）およびQiagen（Vento, Netherlands）が挙げられる。ｓｉＲＮＡはまた、AmbionのＳＩＬＥＮＣＥＲ（登録商標）ｓｉＲＮＡ構築キットなどのキットを用いてインビトロにて合成され得る。
【０１７９】
ｓｉＲＮＡのベクターからの生成はショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）の転写を通してなされるのがより一般的である。例えば、Ｉｍｇｅｎｅｘ’ｓ  ＧＥＮＥＳＵＰＰＲＥＳＳＯＲ（登録商標）Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ＫｉｔｓおよびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ’ｓ  ＢＬＯＣＫ−ＩＴ（登録商標）誘導性ＲＮＡｉプラスミドおよびレンチウイルスベクターなどのｓｈＲＮＡを含むベクターを生成するキットが利用可能である。さらには、ｓｉＲＮＡを処方およびそれを対象にデリバリーする方法も当該分野にて周知である。例えば、その各々が出典明示により本明細書の一部とされる、米国２００５／０２８２１８８；ＵＳ２００５／０２３９７３１；ＵＳ２００５／０２３４２３２；ＵＳ２００５／０１７６０１８；ＵＳ２００５／００５９８１７；ＵＳ２００５／００２０５２５；ＵＳ２００４／０１９２６２６；ＵＳ２００３／００７３６４０；ＵＳ２００２／０１５０９３６；ＵＳ２００２／０１４２９８０；およびＵＳ２００２／０１２０１２９を参照のこと。
【０１８０】
典型的なＲＮＡｉ分子（例、ＰＫＣ−θ  ｓｉＲＮＡおよびｓｈＲＮＡ）は文献（例、Maら、2013. BMC Biochem. 14: 20；およびKimら、2013. Immune Netw. 13（2）: 55-62）に記載されているか、またはSanta Cruz Biotechnology, Inc.（Santa Cruz, CA, USA）、OriGene Technologies, Inc.（Rockville, MD, USA）、Sigma-Aldrich Pty Ltd（Castle Hill, NSW, Australia）より商業的に入手可能である。
【０１８１】
本発明はさらにはペプチドまたはポリペプチドをベースとする阻害剤の化合物も検討する。例えば、種々のＰＫＣ−θアイソザイムおよび可変領域特異的ペプチドが知られており、その典型例として：
【０１８２】
（ａ）アミノ酸配列  ＧＬＳＮＦＤＣＧ［配列番号：１］（ＰＫＣ−θ残基８−１５）またはＹＶＥＳＥＮＧＱＭＹＩ［配列番号：２］（ＰＫＣ−θ残基３６−４６）を有するθＶ１誘導性ペプチド  θＶ１−１およびθＶ１−２（その各々が、出典明示により本明細書の一部とされる、米国特許第５,７８３,４０５号に開示されている）；
【０１８３】
（ｂ）アミノ酸配列  ＶＫＳＰＦＤＣＳ［配列番号：３］（ＰＫＣ−θ残基６５５−６６２）またはＤＲＡＬＩＮＳ［配列番号：４］を有するθＶ５誘導性ペプチド、または修飾ペプチド  ＶｒＳＰＦＤＣＳ［配列番号：５］（例えば、出典明示により本明細書の一部とされる、米国２００４／０００９９２２に開示されている）；および
【０１８４】
（ｃ）アミノ酸配列  ＫＧＤＮＶＤＬＩ［配列番号：６］、ＫＧＥＮＶＤＬＩ［配列番号：７］、ＫＧＫＥＶＤＬＩ［配列番号：８］、ＫＧＫＮＶＤＬＩ［配列番号：９］、ＲＧＫＮＶＥＬＡ［配列番号：１０］、ＲＧＥＮＶＥＬＡ［配列番号：１１］、ＫＧＫＱＶＮＬＩ［配列番号：１２］、ＫＧＫＱＶＮＬＩ［配列番号：１３］、ＫＧＤＱＶＮＬＩ［配列番号：１４］、またはＫＧＥＱＶＮＬＩ［配列番号：１５］を有するΨθ  ＲＡＣＫ誘導性ペプチド（例えば、出典明示により本明細書の一部とされる、米国２０１０／０３１１６４４に開示されている）
が挙げられる。
【０１８５】
例えば、上記にて開示されるようなＰＫＣ−θ阻害剤のペプチドは、融合タンパク質の一部であるように修飾されてもよい。その融合タンパク質は、ペプチド阻害剤の細胞取り込みを増加させる機能を有する輸送タンパク質またはペプチドを含むか、治療効果などの別の望ましい生物学的効果を有するか、あるいはこれらの両方の機能を有してもよい。融合タンパク質は当業者に既知の方法により産生されてもよい。阻害剤のペプチドは、当該分野にて既知の種々の方法にて、もう一つ別のペプチドと結合させてもよく、さもなければコンジュゲートさせてもよい。例えば、阻害剤のペプチドは、融合タンパク質の両方のペプチドがその活性を保持したままで、キャリアペプチドまたは本明細書に記載の他のペプチドとの架橋結合を介して結合してもよい。さらなる例として、ペプチドは、一のペプチドのＣ−末端と、他のペプチドのＮ−末端とのアミド結合により、相互に連結されても、あるいはまた相互にコンジュゲートされてもよい。阻害剤のペプチドと、融合タンパク質の他の構成員との間の連結はペプチド結合しており切断できなくても、あるいは例えば、エステル結合または当該分野にて公知の他の切断可能な結合であって切断できるものであってもよい。
【０１８６】
ある実施態様において、輸送タンパク質またはペプチドは、例えば、アミノ酸配列  ＣＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ［配列番号：１６］を含むドロソフィラ・アンテナペディア（Drosophila Antennapedia）ホメオドメイン誘導性配列であり、Ｎ−末端のＣｙｓ−Ｃｙｓ結合を介して架橋結合により阻害剤と結合してもよい（例えば、Theodoreら、1995. J. Neurosci. 15: 7158-7167；Johnsonら、1996. Circ. Res 79: 1086を参照のこと）。別法として、阻害剤は、Vivesら、1997. J. Biol. Chem, 272: 16010-16017、米国特許第５,８０４,６０４号に記載されるような、およびジンバンク受入番号ＡＡＴ４８０７０であるヒト免疫不全ウイルス・１型からのトランス活性化調節タンパク質（Ｔａｔ）誘導性輸送ポリペプチド（配列番号：１７  ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲで示されるＴａｔのアミノ酸４７−５７など）で；あるいはMitchellら、2000. J. Peptide Res. 56: 318-325およびRolhbardら、2000. Nature Med. 6: 1253-1257に記載されるようなポリアルギニンで修飾されてもよい。阻害剤は、細胞による阻害剤の取り込みを増加させるために、当業者に公知の他の方法で修飾されてもよい。
【０１８７】
ＰＫＣ−θ阻害剤のペプチドは、ＰＫＣ−θ阻害剤のペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を細胞に導入することによって、細胞中に導入されてもよい。核酸は組換え発現ベクターの形態とすることができる。ＰＫＣ−θ阻害剤のペプチドをコードする配列は、発現ベクターにて、転写調節因子、例えばプロモータと作動的に連結され得る。適切なベクターは、例えば、組換えレトロウイルス、レンチウイルスおよびアデノウイルス；レトロウイルス発現ベクター、レンチウイルス発現ベクター、核酸発現ベクター、およびプラスミド発現ベクターを包含する。ある場合には、発現ベクターは細胞のゲノムに組み込まれる。他の場合には、発現ベクターは細胞にてエピソーム状態であり続ける。
【０１８８】
適切な発現ベクターは、限定されるものではないが、ウイルスベクター（例、ワクシニアウイルス；ポリオウイルス；アデノウイルス（例、Liら、Invest Opthalmol Vis Sci 35: 2543-2549、1994；Borrasら、Gene Ther 6: 515-524、1999；LiおよびDavidson、PNAS 92: 7700-7704, 1995；Sakamotoら、H Gene Ther 5: 1088-1097, 1999；ＷＯ  ９４／１２６４９、ＷＯ  ９３／０３７６９；ＷＯ  ９３／１９１９１；ＷＯ  ９４／２８９３８；ＷＯ  ９５／１１９８４およびＷＯ  ９５／００６５５）；アデノ随伴ウイルス（例、Aliら、Hum Gene Ther 9: 81-86, 1998、Flanneryら、PNAS 94: 6916-6921, 1997；Bennettら、Invest Opthalmol Vis Sci 38: 2857-2863, 1997；Jomaryら、Gene Ther 4: 683-690, 1997；Rollingら、Hum Gene Ther 10: 641-648, 1999；Aliら、Hum Mol Genet. 5: 591-594, 1996； Srivastava、ＷＯ  ９３／０９２３９、Samulskiら、J. Vir. 63: 3822-3828, 1989；Mendelsonら、Virol. 166: 154-165, 1988；およびFlotteら、PNAS（1993） 90: 10613-10617）；ＳＶ４０；単純ヘルペスウイルス；ヒト免疫不全ウイルス（例えば、Miyoshiら、PNAS 94: 10319-23, 1997；Takahashiら、J Virol 73: 7812-7816, 1999を参照のこと）；レトロウイルスベクター（例、マウス白血病ウイルス、脾臓壊死ウイルス、およびラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、レンチウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および哺乳動物腫瘍ウイルスから由来のベクター）等を包含する。
【０１８９】
本発明はまた、ＰＫＣ−θの機能活性を減少させる（例えば、ＰＫＣ−θ介在性リン酸化を減少させ、ＰＫＣ−θのＣＤ４４またはｕＰＡＲとプロモータとの結合を阻害し、ＰＫＣ−θ（例、活性ＰＫＣ−θ）とクロマチンとの結合を減少させ、グアニン交換因子、ＧＩＶ／ＧｉｒｄｉｎのＰＫＣ−θ介在性阻害を減少させ、調節性Ｔ細胞機能のＰＫＣ−θ介在性阻害を減少させ、ＰＫＣ−θ介在性ＥＭＴを減少させる等）小分子薬剤も考慮する。
【０１９０】
ＰＫＣ−θの機能活性を減少させる小分子薬剤であって、本発明における使用に適する薬剤は、ＰＫＣ−θ機能活性を阻害するピリジン誘導体；ＰＫＣ−θ機能活性を阻害するプリン誘導体；ＰＫＣ−θ機能活性を阻害するピリミジン誘導体；ＰＫＣ−θ機能活性を阻害するアニリン化合物；ＰＫＣ−θ機能活性を阻害するインドール誘導体等を包含する。
【０１９１】
ある実施態様において、小分子のＰＫＣ−θ阻害剤は、例えば、Cookeらによって、米国公開番号２０１３／０１５７９８０（その全内容が出典を明示することで本明細書に組み込まれる）に記載されるような置換インドール誘導体より選択される。この型の典型的な誘導体は、式（Ｉ）：
【化１】
2016537400.tif 000004
で示される化合物を包含し、
【０１９２】
またはその医薬的に許容される塩もしくは水和物を包含する。
【０１９３】
式（Ｉ）で示される化合物のある実施態様において：
【０１９４】
ＸはＣＨまたはＮであり；
【０１９５】
ＲはＨまたはＰＯ３Ｈ２であり；
【０１９６】
Ｒ１はＨまたはＣ１−４アルキルであり；Ｒ２はＨまたはＣ１−４アルキルであり；Ｒ３はＨ、Ｃ１−４アルキル、ＣＮ、ＨａｌまたはＯＨであって；Ｒ４とＲ５は相互に独立してＨまたはＣ１−４アルキルであるか、あるいはＲ４とＲ５はそれらの結合する炭素原子と一緒になって３−６員のシクロアルキル基を形成する。
【０１９７】
式（Ｉ）で示される化合物の別の実施態様において：
【０１９８】
ＸはＣＨであり；
【０１９９】
ＲはＰＯ３Ｈ２であり；
【０２００】
Ｒ１はＨであり；
【０２０１】
Ｒ２はＨまたはＣ１−４アルキルであり；Ｒ３はＨまたはＣ１−４アルキルであって；Ｒ４とＲ５は相互に独立してＨであるか、あるいはＲ４とＲ５はそれらの結合する炭素原子と一緒になって３−６員のシクロアルキル基を形成する。
【０２０２】
式（Ｉ）で示される化合物のさらに別の実施態様において：
【０２０３】
ＸはＣＨであり；
【０２０４】
ＲはＨであり；
【０２０５】
Ｒ１はＨであり；
【０２０６】
Ｒ２はＨまたはＣ１−４アルキルであり；Ｒ３はＨまたはＣ１−４アルキルであって；Ｒ４とＲ５は相互に独立してＨであるか、あるいはＲ４とＲ５はそれらの結合する炭素原子と一緒になって３−６員のシクロアルキル基を形成する。
【０２０７】
式（Ｉ）で示される化合物のさらに別の実施態様において：
【０２０８】
ＸはＮであり；
【０２０９】
ＲはＰＯ３Ｈ２であり；
【０２１０】
Ｒ１はＨであり；
【０２１１】
Ｒ２はＨまたはＣ１−４アルキルであり；
【０２１２】
Ｒ３はＨであって；
【０２１３】
Ｒ４とＲ５は相互に独立してＨであるか、あるいはＲ４とＲ５はそれらの結合する炭素原子と一緒になって３−６員のシクロアルキル基を形成する。
【０２１４】
式（Ｉ）で示される化合物のさらに別の実施態様において：
【０２１５】
ＸはＮであり；
【０２１６】
ＲはＰＯ３Ｈ２であり；
【０２１７】
Ｒ１はＨであり；
【０２１８】
Ｒ２はＨまたはＣ１−４アルキルであり；
【０２１９】
Ｒ３はＨであって；
【０２２０】
Ｒ４とＲ５は相互に独立してＨまたはＣ１−４アルキルである。
【０２２１】
ある実施態様において、ＰＫＣ−θの機能的活性を阻害する置換インドール誘導体は、式（ＩＩ）：
【化２】
2016537400.tif 000005
で示される化合物を包含し、
【０２２２】
またはその医薬的に許容される塩を包含する。
【０２２３】
他の実施態様において、ＰＫＣ−θの機能的活性を阻害する置換インドール誘導体は、式（ＩＩＩ）：
【化３】
2016537400.tif 000006
で示される化合物を包含し、
【０２２４】
またはその医薬的に許容される塩もしくは水和物を包含する。
【０２２５】
さらに別の実施態様において、ＰＫＣ−θの機能的活性を阻害する置換インドール誘導体は、式（ＩＶ）：
【化４】
2016537400.tif 000007
で示される化合物を包含し、
【０２２６】
またはその医薬的に許容される塩を包含する。
【０２２７】
式（Ｉ）で示される化合物の典型例として：リン酸モノ−［３−［３−（４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イル）−イソキノリン−１−イル］−４−（７−メチル−１−Ｈ−インドール−３−イル）−２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−ピロール−１−イルメチル］エステル・一水和物；３−［３−（４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イル）−イソキノリン−１−イル］−１−ヒドロキシメチル−４−（７−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）−ピロール−２,５−ジオンまたはその医薬的に許容される塩；およびリン酸モノ−｛３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）キナゾリン−４−イル］−２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−ピロール−１−イルメチル｝エステルまたはその医薬的に許容される塩が挙げられる。
【０２２８】
他の実施態様において、小分子のＰＫＣ−θ阻害剤は、例えば、Zhaoらによって、米国公開番号２０１３／０１４３８７５（その全内容が出典を明示することで本明細書に組み込まれる）に記載されるようなピリミジンジアミン誘導体より選択される。この型の典型的な誘導体は、式（Ｖ）：
【化５】
2016537400.tif 000008
【０２２９】
［式中：
【０２３０】
Ｒ１は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａ、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１ｂ、および−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１ｃより選択され；ここでＲ１ａ、Ｒ１ｂおよびＲ１ｃの各々は、独立して、水素、アルキルまたはフェニルアルキルであり；
【０２３１】
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは、独立して、水素およびアルキルより選択され；
【０２３２】
ｍは１ないし５の整数であり；
【０２３３】
ｐは０ないし６の整数であり；
【０２３４】
Ｒ２はアシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、置換アルキル、置換アルコキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、およびトリハロメチルより選択され；
【０２３５】
Ｘ１、Ｘ２およびＸ３はＣＲ５であるか、あるいはＸ１、Ｘ２およびＸ３の一つはＮであり、残りがＣＲ５であり；
【０２３６】
Ｒ５は水素、ハロゲン、アルキルおよび置換アルキルより選択され；
【０２３７】
Ｒ３およびＲ４は、各々の場合で、水素、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールより独立して選択されるか；あるいはＲ３およびＲ４はそれらの結合する炭素原子と一緒になって炭素環式またはヘテロ環式の４ないし８員環を形成し；
【０２３８】
ｎは１ないし３の整数であり；
【０２３９】
Ｚ１、Ｚ２およびＺ３はＣＲ６Ｒ６ａ、Ｎ、ＯおよびＳより選択され；
【０２４０】
Ｚ４およびＺ５はＮ、ＣおよびＣＲ６より選択され；
【０２４１】
Ｒ６は水素、ハロゲン、アルキルおよび置換アルキルより選択され；
【０２４２】
Ｒ６ａは水素、ハロゲン、アルキルおよび置換アルキルより選択されるか、あるいは原子価要件を満たすのに不在であり；および
【０２４３】
点線は単結合または二重結合を表す］
で示される化合物を包含し、
【０２４４】
あるいはその塩または溶媒和物または立体異性体を包含する。
【０２４５】
式（Ｖ）で示される化合物のある実施態様においては、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄが低級アルキル基を表す。かかる化合物の典型例として、Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄがメチル基である、式（ＶＩ）：
【化６】
2016537400.tif 000009
で示される化合物が挙げられる。
【０２４６】
式（Ｖ）で示される化合物の他の実施態様においては、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３が、各々、ＣＨである。これらの化合物は次式（ＶＩＩ）：
【化７】
2016537400.tif 000010
で示される。
【０２４７】
式（Ｖ）で示される化合物の他の実施態様においては、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３が、各々、ＣＨであり；ｍが２である。これらの化合物は次式（ＶＩＩＩ）：
【化８】
2016537400.tif 000011
で示される。
【０２４８】
式（Ｖ）で示される化合物のさらに別の実施態様においては、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３が、各々、ＣＨであり；ｍが１である。これらの化合物は次式（ＩＸ）：
【化９】
2016537400.tif 000012
で示される。
【０２４９】
式（Ｖ）で示される化合物のさらに別の実施態様においては、Ｘ１、Ｘ２およびＸ３が、各々、ＣＨであり；ｎが２であって；一組のＲ３およびＲ４が水素である。これらの化合物は次式（Ｘ）：
【化１０】
2016537400.tif 000013
で示される。
【０２５０】
式（Ｖ）で示される化合物のさらに別の実施態様においては、Ｘ２がＮであり、Ｘ１およびＸ３が、各々、ＣＨである。これらの化合物は次式（ＸＩ）：
【化１１】
2016537400.tif 000014
で示される。
【０２５１】
式（Ｖ）で示される化合物のさらに別の実施態様においては、Ｘ３がＮであり、Ｘ１およびＸ２が、各々、ＣＨである。これらの化合物は次式（ＸＩＩ）：
【化１２】
2016537400.tif 000015
で示される。
【０２５２】
式（Ｖ）で示される化合物の別の実施態様においては、Ｚ４がＣであり、Ｚ５がＮである。かかる化合物は次式（ＸＩＩＩ）：
【化１３】
2016537400.tif 000016
で示される。
【０２５３】
式Ｖで示される化合物の典型例として、Ｎ２−（４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（１,２,２,６,６−ペンタメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４Ｈ−ベンゾ［ｂ］ピロロ［１,２−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４Ｈ−ベンゾ［ｂ］ピロロ［１,２−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（１,２,２,６,６−ペンタメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４,４−ジフルオロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４,４−ジフルオロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（１,２,２,６,６−ペンタメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４,４−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（１,２,２,６,６−ペンタメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４,４−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（５,５−ジメチル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］テトラゾロ［１,５−ｃ］［１,３］オキサジン−９−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（５,５−ジメチル−５Ｈ−ベンゾ［ｅ］テトラゾロ［１,５−ｃ］［１,３］オキサジン−９−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（１,２,２,６,６−ペンタメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（８,９−ジヒドロスピロ［ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−４,１’−シクロブタン］−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（８,９−ジヒドロスピロ［ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−４,１’−シクロブタン］−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（１,２,２,６,６−ペンタメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；５−フルオロ−Ｎ２−（４−メチル−８,９−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−Ｎ４−（２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；５−フルオロ−Ｎ２−（４−メチル−８,９−ジヒドロ−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−Ｎ４−（１,２,２,６,６−ペンタメチルピペリジン−４−イル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（（１,２,２,５,５−ペンタメチルピロリジン−３−イル）メチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（（２,２,５,５−テトラメチルピロリジン−３−イル）メチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４,４−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（（１,２,２,５,５−ペンタメチルピロリジン−３−イル）メチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４,４−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（（２,２,５,５−テトラメチルピロリジン−３−イル）メチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（４,４−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（（（３Ｓ）−２,２,５−トリメチルピロリジン−３−イル）メチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；およびＮ２−（４,４−ジメチル−４Ｈ−ベンゾ［ｂ］テトラゾロ［１,５−ｄ］［１,４］オキサジン−８−イル）−５−フルオロ−Ｎ４−（（（３Ｒ）−２,２,５−トリメチルピロリジン−３−イル）メチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；
【０２５４】
あるいはその塩または溶媒和物または立体異性体が挙げられる。
【０２５５】
別の小分子のＰＫＣ−θ阻害剤の化合物は、例えば、Maltaisらによって、米国公開番号２０１３／０１３７７０３（その全内容が出典を明示することで本明細書に組み込まれる）に記載されるようなアミノピリジン化合物より選択されてもよい。この型の化合物は、限定されるものではないが、式（ＸＩＶ）：
【化１４】
2016537400.tif 000017
で示される化合物を包含し、
【０２５６】
またはその医薬的に許容される塩である。
【０２５７】
ここで：
【０２５８】
Ｒ１は−Ｈ、Ｃ１−Ｃ３脂肪族基、ＦまたはＣｌである。環Ｂは５または６員の単環のヘテロ環式環である。Ｘは−ＣＨ−、−Ｓ−または−ＮＲ２−である。Ｒ２は不在か、または−Ｈである。Ｙは−Ｙ１または−Ｑ１である。Ｙ１は１または複数のＦで所望によりかつ独立して置換されてもよいＣ１−１０脂肪族基であり；
【０２５９】
Ｑ１はフェニルあるいは窒素、酸素および硫黄より独立して選択される０−３個のヘテロ原子を有する５ないし６員の単環式ヘテロアリール環であり；Ｑ１は１または複数のＪａで所望によりかつ独立して置換されてもよく；
【０２６０】
Ｄは環Ｃまたは−Ｑ−Ｒ３であり；
【０２６１】
環Ｃは１−２個の窒素原子を有する６〜８員の非芳香族単環式環、または窒素および酸素より選択される１−３個のヘテロ原子を有する８〜１２員の非芳香族架橋二環式環系であり、環Ｃは１または複数のＪｂで所望によりかつ独立して置換されてもよく；
【０２６２】
Ｑは−ＮＨ−または−Ｏ−であり；
【０２６３】
Ｒ３は−ＯＨまたは−ＮＨ２で置換されるＣ１−１０アルキルであり、ここでＲ３中の３ないいし６個のメチレン単位はＣ３−Ｃ６員のシクロアルキル環を所望により形成してもよく、Ｒ３はさらに１または複数のＪｅで所望によりかつ独立して置換されてもよく；
【０２６４】
Ｊａは、各々独立して、ＦまたはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
【０２６５】
ＪｂはＣ１−Ｃ１０アルキルであり、ここで３個までのメチレン単位は−Ｏ−と所望により置き換えられてもよく、Ｃ１−Ｃ１０アルキルは１または複数のＪｃで所望によりかつ独立して置換されるか、またはＪｂはＣ３−Ｃ６シクロアルキルまたはＣ５−Ｃ６ヘテロアリールであるか、またはＪｂはＪｄで所望によりかつ独立して置換されるフェニルであるか、あるいは同じ炭素上の２個のＪｂが＝ＯまたはスピロＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成し；
【０２６６】
Ｊｃは、各々独立して、Ｆ、−ＯＨまたはＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり；
【０２６７】
Ｊｄは、各々独立して、ＦまたはＣｌであり；
【０２６８】
Ｊｅは、各々独立して、フェニル、または窒素、酸素および硫黄より独立して選択される１−３個のヘテロ原子を有する５ないし６員の単環式の芳香族または非芳香族環であるか、あるいは同じ炭素原子上にある２個のＪｅがスピロＣ３−Ｃ６シクロアルキルを形成し；
【０２６９】
ｕは０または１である。
【０２７０】
ある実施態様においては、環Ｂがピリジルであり、環Ｃがピペリジニル、ピペリジニル、ジアゼパニル、トリアゼパニル、アゾカニル、ジアゾカニル、トリアゾカニル、インドリル、インダゾリル、またはジアザビシクロオクチルからなる群より選択され、環Ｃが１または複数のＪｂで所望によりかつ独立して置換されてもよく、残りの可変基が上記に定義されるとおりである。
【０２７１】
式（ＸＩＶ）で示される典型的な化合物として、
【化１５−１】
2016537400.tif 000018
【０２７２】
【化１５−２】
2016537400.tif 000019
【０２７３】
【化１５−３】
2016537400.tif 000020
【０２７４】
【化１５−４】
2016537400.tif 000021
【０２７５】
【化１５−５】
2016537400.tif 000022
【０２７６】
【化１５−６】
2016537400.tif 000023
【０２７７】
【化１５−７】
2016537400.tif 000024
【０２７８】
【化１５−８】
2016537400.tif 000025
【０２７９】
【化１５−９】
2016537400.tif 000026
【０２８０】
【化１５−１０】
2016537400.tif 000027
【０２８１】
【化１５−１１】
2016537400.tif 000028
が挙げられる。
【０２８２】
本発明はまた、例えば、Jimenezらによって、米国公開番号２０１３／００５３３９５（その全内容が出典を明示することで本明細書に組み込まれる）に記載されるようなピラゾロピリジン化合物を想定する。この型の典型的な誘導体は、式（ＸＶ）：
【化１６】
2016537400.tif 000029
で示される化合物
【０２８３】
またはその医薬的に許容される塩を包含し、
【０２８４】
式中：
【０２８５】
Ｔは−ＮＨ−または不在であり；
【０２８６】
Ｊｃ１およびＪｃ２は、各々独立して、−ＣＮ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＲ、−ＣＨ２ＯＲまたは−ＣＦ３であり；
【０２８７】
Ｕ１、Ｕ２およびＵ３は、各々独立して、−Ｈ、Ｚ、またはＪｂであり、ここでＵ１、Ｕ２およびＵ３のうち一つだけが−Ｈであるか、あるいはＵ１、Ｕ２およびＵ３の２つが一緒になって、０−１個のヘテロ原子を有し、１または複数のＪｅで所望によりかつ独立して置換されてもよいＣ１−６シクロアルキル環を形成し；
【０２８８】
ＺはＹ２−Ｑ２であり；
【０２８９】
Ｙ２は不在であるか、あるいは１または複数のＪｄで所望によりかつ独立して置換されてもよいＣ１−６アルキルであり；
【０２９０】
Ｑ２は不在であるか、あるいは０−１個のヘテロ原子を有し、１または複数のＪｅで所望によりかつ独立して置換されてもよいＣ３−８シクロアルキルであり、ここでＹ２とＱ２の両方が不在であることはなく；
【０２９１】
Ｊｂは、各々独立して、−Ｆ、−ＯＲ、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、Ｃ１−６アルキル（１または複数のＪａで所望によりかつ独立して置換されてもよい）であり；
【０２９２】
Ｊａは、各々独立して、−Ｆ、−ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）２または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり；
【０２９３】
Ｊｄは、各々独立して、−ＯＲ、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）２またはＦであり；
【０２９４】
Ｊｅは、各々独立して、Ｃ１−６アルキル、−ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−ＣＦ３またはＦであり；および
【０２９５】
Ｒは、各々、−ＨまたはＣ１−６アルキルである。
【０２９６】
ある実施態様においては、＊で示される炭素にアキラル中心がある。
【０２９７】
式（ＸＶ）で示される化合物の例として、限定されるものではないが、次式：
【化１７】
2016537400.tif 000030
で示される化合物が挙げられる。
【０２９８】
さらに別の実施態様において、小分子のＰＫＣ−θ阻害剤が、例えば、Boyallらによって米国公開番号２０１２／００７１４９４（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）に記載されるようなピラゾロピリジン化合物より選択される。この型の化合物は、限定されるものではないが、式（ＸＶａ）：
【化１８】
2016537400.tif 000031
で示されるか、
【０２９９】
またはその医薬的に許容される塩であって、
【０３００】
ここで、
【０３０１】
ｔは０、１または２であり；
【０３０２】
ｗは０または１であり；
【０３０３】
Ｊｃは、各々独立して、−ＣＮ、−Ｆ、−Ｃｌ、−ＯＲ、−ＣＨ２ＯＲ、または−ＣＦ３であり；
【０３０４】
ＵはＺまたはＪｂであり；
【０３０５】
ＺはＹ２−Ｑ２であり；
【０３０６】
Ｙ２は不在であるか、あるいは１または複数のＪｄで所望によりかつ独立して置換されてもよいＣ１−６アルキルであり；
【０３０７】
Ｑ２は不在であるか、あるいは０−１個のヘテロ原子を有し、１または複数のＪｅで所望によりかつ独立して置換されてもよいＣ３−８シクロアルキルであり、ここでＹ２とＱ２の両方が不在であることはなく；
【０３０８】
Ｊｂは、各々独立して、−Ｆ、−ＯＲ、−ＣＮ、−ＣＦ３、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、Ｃ１−６アルキル（１または複数のＪａで所望によりかつ独立して置換されてもよい）であり；
【０３０９】
Ｊａは、各々独立して、−Ｆ、−ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）２または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２であり；
【０３１０】
Ｊｄは、各々独立して、−ＯＲ、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−Ｎ（Ｒ）２またはＦであり；
【０３１１】
Ｊｅは、各々独立して、−ＯＲ、−ＣＦ３、−Ｎ（Ｒ）２またはＦであり；
【０３１２】
Ｔは−ＣＨ２−、−ＣＨ（Ｊｂ）−、−Ｃ（Ｊｂ）２−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｊｂ）−であり；および
【０３１３】
Ｒは、各々、−ＨまたはＣ１−６アルキルである。
【０３１４】
特定の実施態様において、式ＸＶａの化合物は、例えば、Jimenezら（2013, J.Med.Chem. 56 1799-180）（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）によって開示されるような、式ＸＶａ１：
【化１９】
2016537400.tif 000032
で示される化合物であり、
【０３１５】
ここで、
【０３１６】
Ｒ１は、独立して、Ｆ、ＣｌまたはＣＦ３であり；
【０３１７】
Ｒ２は、独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、ＣＮまたはＣＨ２ＯＨである。
【０３１８】
特定の実施態様において、ピラゾロピリジン化合物は、式（ＸＶａ２）：
【化２０】
2016537400.tif 000033
で示される。
【０３１９】
この化合物は、Jimenezら（2013, J.Med.Chem. 56 1799-180）にて、（Ｒ）−２−（Ｓ）−４−（３−クロロ−５−フルオロ−６−（１Ｈ−ピラゾロ［３,４−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリジン−２−イル）ピペラジン−２−イル）−３−メチルブタン−２−オールまたは化合物２７（本明細書にて「Ｃ２７」とも称される）と指定される。
【０３２０】
さらに別の実施態様において、小分子のＰＫＣ−θ阻害剤は、例えば、Brenchleyらによって、米国公開番号２０１２／０１８４５３４（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）に記載されるような三環式ピラゾロピリジン化合物より選択される。この型の化合物は、限定されるものではないが、式（ＸＶＩ）：
【化２１】
2016537400.tif 000034
で示されるか、
【０３２１】
またはその医薬的に許容される塩であって、
【０３２２】
ここで、
【０３２３】
Ｒ１は−Ｈ、ハロゲン、−ＯＲ’、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−ＣＮ、−ＮＯ２、Ｃ１−１０脂肪族基（１または複数のＪａで所望によりかつ独立して置換されてもよい）、またはＣ３−８シクロ脂肪族基（１または複数のＪｂで所望によりかつ独立して置換されてもよい）であり；
【０３２４】
Ｒ２は−Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＯＲ’、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、Ｃ１−１０脂肪族基（１または複数のＪａで所望によりかつ独立して置換されてもよい）、またはＣ３−８シクロ脂肪族基（１または複数のＪｂで所望によりかつ独立して置換されてもよい）であり；
【０３２５】
Ｘは−Ｃ−または−Ｎ−であり；
【０３２６】
Ｒｘは不在であるか、または−Ｈであり；
【０３２７】
環Ｂは芳香族または非芳香族環と所望により縮合してもよい５員の単環式ヘテロ芳香族環であり、環Ｂは１個のＹで所望により置換されてもよく、１または複数のＪｃでさらに所望によりかつ独立して置換されてもよく；
【０３２８】
Ｙは−Ｙ１−Ｑ１であり；
【０３２９】
Ｙ１は不在であるか、またはＣ１−１０脂肪族基であり、ここでＹ１の３個までのメチレン単位はＧ’で所望によりかつ独立して置き換えられてもよく、Ｇ’は−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、または−Ｓ（Ｏ）ｐ−であり；Ｙ１は１または複数のＪｄで所望によりかつ独立して置換されてもよく；
【０３３０】
Ｑ１は不在であるか、あるいは窒素、酸素および硫黄より独立して選択される０−３個のヘテロ原子を有する、Ｃ３−８員の飽和の、部分的に不飽和の、または完全に不飽和の単環式環であり、Ｑ１は１または複数のＪｂで所望によりかつ独立して置換されてもよく、ここでＹ１とＱ１の両方が不在であることはなく；
【０３３１】
環Ｃは、窒素、酸素および硫黄より独立して選択される０−３個のヘテロ原子を有する、Ｃ３−８員の飽和の、部分的に不飽和の、または完全に不飽和の単環式環であるか、あるいは窒素、酸素および硫黄より独立して選択される０−５個のヘテロ原子を有する、８ないし１２員の飽和の、部分的に不飽和の、または完全に不飽和の二環式環系であり、環Ｃは１個のＺで所望により置換されてもよく、１または複数のＪｂでさらに所望によりかつ独立して置換されてもよく；
【０３３２】
Ｚは−Ｙ２−Ｑ２であり；
【０３３３】
Ｙ２は不在であるか、またはＣ１−１０脂肪族基であり、ここでＹ２の３個までのメチレン単位はＧ’で所望によりかつ独立して置換されてもよく、Ｇ’は−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）−、または−Ｓ（Ｏ）ｐ−であり；Ｙ２は１または複数のＪｄで所望によりかつ独立して置換されてもよく；
【０３３４】
Ｑ２は不在であるか、窒素、酸素および硫黄より独立して選択される０−３個のヘテロ原子を有する、Ｃ３−８員の飽和の、部分的に不飽和の、または完全に不飽和の単環式環であるか、あるいは窒素、酸素および硫黄より独立して選択される０−５個のヘテロ原子を有する、８ないし１２員の飽和の、部分的に不飽和の、または完全に不飽和の二環式環系であり、Ｑ２は１または複数のＪｅで所望によりかつ独立して置換されてもよく、ここでＹ２とＱ２の両方が不在であることはなく；
【０３３５】
Ｒ’は、各々独立して、−Ｈ、またはＣ１−６アルキル（１または複数のＪａで所望によりかつ独立して置換されてもよい）であり；
【０３３６】
Ｊａは、各々独立して、ハロゲン、−ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＮ、−ＮＯ２、またはオキソであり；
【０３３７】
Ｊｂは、各々独立して、ハロゲン、−ＯＲ、−Ｎ（Ｒ）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）２、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ、−ＣＮ、−ＮＯ２、オキソ、またはＣ１−Ｃ６アルキル（Ｊａで所望によりかつ独立して置換されてもよい）であり；
【０３３８】
Ｊｃは、各々独立して、ハロゲン、−ＯＲ’、−Ｎ（Ｒ’）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−ＣＮ、−ＮＯ２、またはＣ１−Ｃ１０脂肪族基（１または複数のＪａで所望によりかつ独立して置換されてもよい）、またはＣ３−Ｃ８シクロ脂肪族基（１または複数のＪｂで所望によりかつ独立して置換されてもよい）であり；
【０３３９】
Ｊｄは、各々独立して、ハロゲン、−ＣＮ、または−ＮＯ２である。Ｊｅは、各々独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、オキソ、Ｃ１−１０脂肪族基であり、ここで３個までのメチレン単位はＧ’と所望によりかつ独立して置き換えられてもよく、Ｇ’は−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ’）−または−Ｓ（Ｏ）ｐ−であり、脂肪族基は１または複数のＪｄで所望によりかつ独立して置換されてもよく、あるいはＪｅは１または複数のＪｂで所望によりかつ独立して置換されてもよいＣ３−８シクロ脂肪族基であり；
【０３４０】
Ｒは、各々独立して、−ＨまたはＣ１−６アルキルであり；
【０３４１】
ｐは、各々独立して、０、１または２である。
【０３４２】
式（ＸＶＩ）に係る化合物の典型例として、
【化２２】
2016537400.tif 000035
が挙げられる。
【０３４３】
小分子のＰＫＣ−θ阻害剤のさらに別の実施態様は、例えば、Flemingらによって、米国公開番号２０１１／００７１１３４（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）に記載されるような２−（アミノ置換）−４−アリール ピリミジン化合物を包含する。この型の典型的な化合物は、式（ＸＶＩＩ）：
【化２３】
2016537400.tif 000036
で示されるか、
【０３４４】
またはその医薬的に許容される塩であって、
【０３４５】
式中：
【０３４６】
Ｒ１およびＲ２は、各々独立して、Ｈ、Ｃ１−３アルキルまたはＣ３−５シクロアルキルであり；
【０３４７】
Ｒ３はＨまたはＦであり；
【０３４８】
Ｒ４はＨ、Ｆ、−ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａまたは−Ｎ（Ｒａ）２であるか；あるいはＲ３とＲ４がそれらの結合する炭素原子と一緒になってカルボニル基を形成し；ここでＲａは、各々の場合で、独立して、Ｈ、Ｃ１−３アルキルまたはＣ３−５シクロアルキルであり；
【０３４９】
環Ａは、１または２の独立したＲ５で所望により置換されてもよく、ここでＲ５は、各々、ハロ、Ｃ１−４脂肪族基、−ＣＮ、−ＯＲｂ、−ＳＲＣ、−Ｎ（Ｒｂ）２、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、−ＮＲｂＣＯ２ＲＣ、−ＣＯ２Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、−Ｓ（Ｏ）２ＲＣ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂ）２、−Ｓ（Ｏ）ＲＣ、−ＮＲｂＳＯ２Ｎ（Ｒｂ）２、−ＮＲｂＳＯ２ＲＣ、またはＣ１−４脂肪族基（ハロ、−ＣＮ、−ＯＲｂ、−ＳＲＣ、−Ｎ（Ｒｂ）２、ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、−ＮＲｂＣＯ２ＲＣ、−ＣＯ２Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、−Ｓ（Ｏ）２ＲＣ、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂ）２、−Ｓ（Ｏ）ＲＣ、−ＮＲｂＳＯ２Ｎ（Ｒｂ）２、または−ＮＲｂＳＯ２ＲＣで所望により置換されてもよい）より独立して選択され、ここで各々の場合で、Ｒｂは、独立して、ＨまたはＣ１−４脂肪族基であるか；あるいは同じ窒素原子上の２個のＲｂがその窒素原子と一緒になって５−８員の、その窒素原子の他にＮ、ＯまたはＳより選択される０−２個の環ヘテロ原子を有する芳香族または非芳香族環を形成し；各々の場合で、ＲＣは独立してＣ１−４脂肪族であり；
【０３５０】
Ｃｙ１は、ａ）環のメタまたはパラ位で１個の存するＷで置換される６員のアリールまたはヘテロアリール環；またはｂ）１個の存するＷで置換される５員のヘテロアリール環より選択され；
【０３５１】
ここで、Ｃｙ１は、１ないし３個の独立して存するＲ６で所望によりさらに置換されてもよく、ここで各々の場合で存するＲ６は、−ハロ、Ｃ１−８脂肪族、−ＣＮ、−ＯＲｂ、−ＳＲＤ、−Ｎ（ＲＥ）２、−ＮＲＥＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲＥＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＥ）２、−ＮＲＥＣＯ２ＲＤ、−ＣＯ２Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＥ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＥ）２、−Ｓ（Ｏ）２ＲＤ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＥ）２、−Ｓ（Ｏ）ＲＤ、−ＮＲＥＳＯ２Ｎ（ＲＥ）２、−ＮＲＥＳＯ２ＲＤ、−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（ＲＥ）２、またはＣ１−８脂肪族基（ハロ、−ＣＮ、−ＯＲｂ、−ＳＲＤ、−Ｎ（ＲＥ）２、−ＮＲＥＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲＥＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＥ）２、−ＮＲＥＣＯ２ＲＤ、−ＣＯ２Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＥ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＥ）２、−Ｓ（Ｏ）２ＲＤ、−ＳＯ２Ｎ（ＲＥ）２、−Ｓ（Ｏ）ＲＤ、−ＮＲＥＳＯ２Ｎ（ＲＥ）２、−ＮＲＥＳＯ２ＲＤ、または−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（ＲＥ）２で所望により置換されてもよい）より独立して選択され、ここで各々で存するＲＤはＣ１−６脂肪族基であり、各々で存するＲＥは、独立して、Ｈ、Ｃ１−６脂肪族基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂまたは−ＳＯ２Ｒｂであるか；あるいは同じ窒素原子上の２個のＲＥがその窒素原子と一緒になって５−８員の、その窒素原子の他にＮ、ＯまたはＳより選択される０−２個の環ヘテロ原子を有する芳香族または非芳香族環を形成し；
【０３５２】
Ｗは−Ｒ８、Ｖ−Ｒ８、Ｌ１−Ｒ７、Ｖ−Ｌ１−Ｒ７、Ｌ１−Ｖ−Ｒ８、またはＬ１−Ｖ−Ｌ２−Ｒ７であり；ここで、Ｌ１およびＬ２は、各々独立して、所望により置換されてもよいＣ１−６アルキレン鎖であり；Ｖは−ＣＨ２−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯ２−、−ＮＲＥ−ＮＲＥＣ（Ｏ）−、−ＮＲＥＣＯ２−、−ＮＲＥＳＯ２−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂ）−、−ＮＲＥＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）−または−ＯＣ（Ｏ）−であり；Ｒ７はＨ、ハロ、−ＯＨ、−Ｎ（ＲＦ）２、−ＣＮ、−ＯＲＧ、−Ｃ（Ｏ）ＲＧ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２ＲＧ、−ＳＲＧ、−Ｓ（Ｏ）ＲＧ、−Ｓ（Ｏ）２ＲＧ、−Ｎ（ＲＥ）Ｃ（Ｏ）ＲＧ、−Ｎ（ＲＥ）ＣＯ２ＲＧ、−Ｎ（ＲＥ）ＳＯ２ＲＧ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＦ）２、−ＳＯ２Ｎ（ＲＦ）２、−Ｎ（ＲＥ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＦ）２、−ＯＣ（Ｏ）ＲＦ、あるいはＣ１−１０脂肪族、Ｃ６−１０アリール、３−１４員のヘテロシクリルまたは５−１４員のヘテロアリールより選択される所望により置換されてもよい基であり、ここで、各々で存するＲＦは、独立して、Ｈ、Ｃ１−６脂肪族、Ｃ６−１０アリール、３−１４員のヘテロシクリル、５−１４員のヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｂまたは−ＳＯ２Ｒｂであるか；あるいは同じ窒素原子上の２個のＲＦがその窒素原子と一緒になって５−８員の、その窒素原子の他にＮ、ＯまたはＳより選択される０−２個の環ヘテロ原子を有する所望により置換されてもよい芳香族または非芳香族環を形成し、各々で存するＲＧはＣ１−６脂肪族、Ｃ６−１０アリール、３−１４員のヘテロシクリル、または５−１４員のヘテロアリールであり；Ｒ８はＣ１−１０脂肪族基、Ｃ６−１０アリール、３−１４員のヘテロシクリルまたは５−１４員のヘテロアリールより選択される所望により置換されてもよい基であり；
【０３５３】
Ｑは結合手、ＣＨ２またはＣ（＝Ｏ）であり；
【０３５４】
Ｃｙ２はＣ６−１０アリール、５−１０員のヘテロアリール、または５−１０員のヘテロシクリル環であり、ここで各環は、１ないし３個の独立して存するＲ９および１個の存するＲ１０で所望により置換されてもよく；
【０３５５】
ここで、各々で存するＲ９は、Ｃ１−４脂肪族基、−Ｎ（Ｒｂ）２、ハロ、ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＳＲＣ、−Ｓ（Ｏ）ＲＣ、−Ｓ（Ｏ）２ＲＣ、−ＯＳ（Ｏ）２ＲＣ−、Ｎ（Ｒｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｎ（Ｒｂ）ＣＯ２Ｒａ、−Ｎ（Ｒｂ）ＳＯ２Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂ）２、−Ｎ（Ｒｂ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、またはＣ１−４脂肪族基（−Ｎ（Ｒｂ）２、ハロ、ＮＯ２、−ＣＮ、−ＯＲｂ、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＳＲＣ、−Ｓ（Ｏ）ＲＣ、−ＯＳ（Ｏ）２ＲＣ、−Ｓ（Ｏ）２ＲＣ、−Ｎ（Ｒｂ）Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｎ（Ｒｂ）ＣＯ２Ｒａ、−Ｎ（Ｒｂ）ＳＯ２Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、−ＳＯ２Ｎ（Ｒｂ）２、−Ｎ（Ｒｂ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２、または−ＯＣ（Ｏ）Ｒａで所望により置換されてもよい）より独立して選択され；および
【０３５６】
Ｒ１０はフェニル、または５−６員のヘテロシクリルまたはヘテロアリール環より選択される。
【０３５７】
ある実施態様において、式ＸＶＩＩの化合物は、１または複数の、あるいはすべての次の制限に供される：
【０３５８】
１）Ｃｙ１がメタ位にてＷで置換されるフェニルである場合、その時には：
【０３５９】
ａ）Ｗが−ＯＭｅであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の各々が水素であって、Ｑが結合手である場合、その時に環ＡがＲ５でさらに置換されている場合、Ｒ５は−ＣＦ３または−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒｂ）２以外の基であり；および
【０３６０】
ｂ）Ｗが−ＯＭｅであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の各々が水素であって、Ｑが−ＣＨ２−である場合、その時にはＣｙ２は１Ｈ−ベンズイミダゾール−１−イル以外であり；
【０３６１】
２）Ｃｙ１がパラ位でＷで置換されるフェニルであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の各々が水素である場合、その時には：
【０３６２】
ａ）Ｑが結合手である場合、Ｗは以下の基以外の基であり、ｉ）−ＣＯＮＨ２；ｉｉ）−ＣＯＮＨＲ８（Ｒ８はフェニル、−アルキルフェニル、アルキルまたは−アルキルヘテロシクリルより選択される所望により置換されてもよい基である）；ｉｉｉ）−ＣＦ３；ｉｖ）−ＳＯ２Ｍｅ；ｖ）−ＮＨ２；ｖｉ）−ｔＢｕ；ｖｉｉ）−ＣＯ２Ｈ（Ｃｙ２がモルホリンである場合）；ｖｉｉｉ）−Ｏ（フェニル）（Ｃｙ２がインドールである場合）；およびｉｘ）−ＯＭｅ；
【０３６３】
ｂ）Ｑが−ＣＨ２−である場合、Ｗは以下の基以外の基であり、ｉ）−ＣＯＮＨ２（Ｃｙ２が所望により置換されてもよいイミダゾールまたはベンズイミダゾールである場合）；ｉｉ）−ＣＯＮＨＲ８（Ｒ８はフェニル、−アルキルフェニル、または−アルキルヘテロシクリルより選択される所望により置換されてもよい基である）；ｉｉｉ）−ＣＦ３；ｉｖ）−ＳＯ２Ｍｅ；ｖ）−ＯＨ（Ｃｙ２が５−１０員のヘテロ環式環である場合）；ｖｉ）ｔＢｕ（Ｃｙ２が５−１０員のヘテロ環式環である場合）；およびｖｉｉ）−ＯＭｅ；ならびに
【０３６４】
３）Ｃｙ１が５員のヘテロアリール環である場合、その時には：
ａ）Ｃｙ１がイソキサゾールであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の各々が水素であり、Ｑが結合手であり、およびＷがｐ−フルオロフェニルである場合、その場合にはＣｙ２はピリジルまたはＮ−ピロリジニル以外の基であり；
【０３６５】
ｂ）Ｃｙ１がトリアゾリルであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の各々が水素であり、Ｑが結合手であって、Ｗが−（ＣＨ２）２Ｎ（シクロペンチル）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ナフチル）である場合、その場合にはＣｙ２はＮ−ピペリジニル以外の基であり；
【０３６６】
ｃ）Ｃｙ１がイミダゾリルであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の各々が水素であり、Ｑが結合手であって、Ｗがメタ−ＣＦ３−フェニルである場合、その場合にはＲ６はＣ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ３以外の基であり；および
【０３６７】
ｄ）Ｃｙ１がイミダゾール−５−イルであり、Ｗがパラ−フルオロ−フェニルである場合、その場合にはＲ６はシクロヘキシル以外の基である。
【０３６８】
この型の化合物は、限定されるものではないが、以下の構造式で表される：
【化２４−１】
2016537400.tif 000037
【０３６９】
【化２４−２】
2016537400.tif 000038
【０３７０】
【化２４−３】
2016537400.tif 000039
【０３７１】
【化２４−４】
2016537400.tif 000040
【０３７２】
【化２４−５】
2016537400.tif 000041
【０３７３】
【化２４−６】
2016537400.tif 000042
【０３７４】
【化２４−７】
2016537400.tif 000043
【０３７５】
【化２４−８】
2016537400.tif 000044
【０３７６】
【化２４−９】
2016537400.tif 000045
【０３７７】
【化２４−１０】
2016537400.tif 000046
【０３７８】
【化２４−１１】
2016537400.tif 000047
【０３７９】
【化２４−１２】
2016537400.tif 000048
【０３８０】
【化２４−１３】
2016537400.tif 000049
【０３８１】
【化２４−１４】
2016537400.tif 000050
【０３８２】
【化２４−１５】
2016537400.tif 000051
【０３８３】
【化２４−１６】
2016537400.tif 000052
【０３８４】
【化２４−１７】
2016537400.tif 000053
【０３８５】
【化２４−１８】
2016537400.tif 000054
【０３８６】
【化２４−１９】
2016537400.tif 000055
【０３８７】
【化２４−２０】
2016537400.tif 000056
【０３８８】
【化２４−２１】
2016537400.tif 000057
【０３８９】
【化２４−２２】
2016537400.tif 000058
【０３９０】
【化２４−２３】
2016537400.tif 000059
【０３９１】
【化２４−２４】
2016537400.tif 000060
【０３９２】
【化２４−２５】
2016537400.tif 000061
【０３９３】
【化２４−２６】
2016537400.tif 000062
【０３９４】
【化２４−２７】
2016537400.tif 000063
【０３９５】
【化２４−２８】
2016537400.tif 000064
【０３９６】
【化２４−２９】
2016537400.tif 000065
【０３９７】
【化２４−３０】
2016537400.tif 000066
【０３９８】
【化２４−３１】
2016537400.tif 000067
【０３９９】
【化２４−３２】
2016537400.tif 000068
【０４００】
【化２４−３３】
2016537400.tif 000069
【０４０１】
【化２４−３４】
2016537400.tif 000070
【０４０２】
【化２４−３５】
2016537400.tif 000071
【０４０３】
【化２４−３６】
2016537400.tif 000072
【０４０４】
【化２４−３７】
2016537400.tif 000073
【０４０５】
【化２４−３８】
2016537400.tif 000074
【０４０６】
【化２４−３９】
2016537400.tif 000075
【０４０７】
【化２４−４０】
2016537400.tif 000076
【０４０８】
【化２４−４１】
2016537400.tif 000077
【０４０９】
【化２４−４２】
2016537400.tif 000078
【０４１０】
【化２４−４３】
2016537400.tif 000079
【０４１１】
【化２４−４４】
2016537400.tif 000080
【０４１２】
【化２４−４５】
2016537400.tif 000081
【０４１３】
【化２４−４６】
2016537400.tif 000082
【０４１４】
【化２４−４７】
2016537400.tif 000083
【０４１５】
【化２４−４８】
2016537400.tif 000084
【０４１６】
【化２４−４９】
2016537400.tif 000085
【０４１７】
【化２４−５０】
2016537400.tif 000086
【０４１８】
【化２４−５１】
2016537400.tif 000087
【０４１９】
さらに別の実施態様において、小分子のＰＫＣ−θ阻害剤は、例えば、Cardozoらによって、米国公開番号２００５／０１２４６４０（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）に記載されるように、ピリミジン誘導体を包含する。この型の典型的な化合物は、式（ＸＶＩＩＩ）：
【化２５】
2016537400.tif 000088
【０４２０】
［式中：
【０４２１】
Ｒ１はＣ１−８アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、Ｃ３−７シクロアルキル−Ｃ１−８アルキル、ナフチル、キノリニル、アリール−Ｃ１−８アルキル、またはヘテロアリール−Ｃ１−８アルキルであり、ここで各Ｃ１−８アルキル基中のメチレン基は所望により−ＮＨＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−で置き換えられてもよく、そのＣ１−８アルキル基の各々は１のオキソ基あるいは１または複数のＣ１−３アルキル基によって所望により置換されてもよく、Ｃ１−８アルキル基の同じ炭素原子上にある２個のアルキル置換基が所望により合わさってＣ２−５アルキレン架橋を形成してもよく、およびアリール基は隣接する炭素原子でＣ３−６アルキレン架橋基により所望により置換されてもよく、その中のメチレン基は酸素、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−または−Ｎ（Ｒ６）−により所望により置き換えられてもよく；
【０４２２】
あるいはＲ１は以下の構造式：
【化２６】
2016537400.tif 000089
を有し、
【０４２３】
ここで、ｘおよびｙは、独立して、０、１、２、３または４である：ただしｘ＋ｙは２〜４であり、ｚは０、１または２であり、環中の１または２個のＣＨ２基は−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＳＯ２−または−Ｎ（Ｒ６）によって所望により置き換えられてもよく；
【０４２４】
ここで、各Ｒ１基は、１または複数の以下の基：Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ハロゲン、ニトロ、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、アリール、アリールＣ１−６アルキル、アリールオキシ、アリールチオ、アミノスルホニル、あるいは１または２個のＣ１−６アルキル基で所望により置換されてもよいアミノによって所望により置換されてもよく、ここで各アリール基は、１または複数のＣ１−６アルキル、ハロゲン、ニトロ、ヒドロキシまたは１もしくは２個のＣ１−６アルキル基により所望により置換されてもよいアミノによって所望により置換されてもよく、Ｃ１−６アルキル基の各々にて、メチレン基は所望により−ＮＨＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−により置き換えられもよく、Ｃ１−６アルキル基の各々は１または複数のハロゲンによって所望により置換されてもよく；
【０４２５】
Ｒ２は、以下の基：
【化２７】
2016537400.tif 000090
より選択され、
【０４２６】
ここで、
【０４２７】
ｎは３〜８の整数であり；
【０４２８】
ｐは１〜３の整数であり；
【０４２９】
ｑは０〜３の整数であり；
【０４３０】
Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、アリールＣ１−６アルキル、またはアミジノより選択され、ここで各アリール基は１または複数のＣ１−６アルキル、ハロゲン、ニトロ、ヒドロキシまたは１もしくは２個のＣ１−６アルキル基で所望により置換されてもよいアミノによって所望により置換されてもよく、およびＣ１−６アルキル基の各々は１または複数のハロゲンにより所望により置換されてもよく、アミジノは１〜３個のＣ１−６アルキルによって所望により置換されてもよく；
【０４３１】
Ｒ６は水素またはＣ１−６アルキルであり；
【０４３２】
ここで、各Ｒ２基は、１または複数のＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ＣＮ、−ＯＨ、−ＮＨ２またはハロゲンにより所望により置換されてもよく；
【０４３３】
Ｒ３はハロゲン、シアノ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシカルボニルまたはアミノカルボニルであり、ここでＣ１−６アルキル基の各々は１または複数のハロゲンで所望により置換されてもよい］
【０４３４】
で表される化合物、あるいはその互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、またはアミノ保護誘導体である。
【０４３５】
ある実施態様において、ピリミジン誘導体は、式（ＸＶＩＩＩ）で示される化合物であって、
【０４３６】
Ｒ１はアリール−Ｃ１−４アルキルまたはヘテロアリール−Ｃ１−４アルキルであり、各Ｃ１−４アルキル基中のメチレン基は−ＮＨＣ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−で所望により置き換えられてもよく、各Ｃ１−４アルキル基は１のオキソ基あるいは１または複数のＣ１−３アルキル基によって所望により置換されてもよく、Ｃ１−４アルキル基の同じ炭素原子上にある２個のアルキル置換基が所望により合わさってＣ２−５アルキレン架橋を形成してもよく、およびアリール基は隣接する炭素原子でＣ３−６アルキレン架橋基により所望により置換されてもよく、その中のメチレン基は酸素、硫黄または−Ｎ（Ｒ６）−により所望により置き換えられてもよく；
【０４３７】
あるいはＲ１は次の構造式：
【化２８】
2016537400.tif 000091
を有し、
【０４３８】
ここで、ｘおよびｙは独立して０、１、２または３である：ただし、ｘ＋ｙは２〜３であり、ｚは０または１であり；
【０４３９】
「ヘテロアリール」はピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、イミダゾリル、またはインドリルとして定義され；
【０４４０】
Ｒ１基は、各々、１または複数の以下の基：Ｃ１−６アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ニトロ、ヒドロキシ、ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＯＣＦ２Ｈ、−ＳＣＦ３、Ｃ１−４アルキルオキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、フェニル、ベンジル、フェニルオキシ、フェニルチオ、アミノスルホニル、または１もしくは２個のＣ１−３アルキル基によって所望により置換されてもよいアミノによって所望により置換されてもよく；
【０４４１】
Ｒ２は以下の基：
【化２９】
2016537400.tif 000092
より選択され；
【０４４２】
ここで、
【０４４３】
ｎは５〜７の整数であり；
【０４４４】
ｐは１〜２の整数であり；
【０４４５】
ｑは１〜２の整数であり；
【０４４６】
Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、アリールＣ１−６アルキル、またはアミジノより選択され；
【０４４７】
Ｒ６は水素であり；
【０４４８】
Ｒ３はＢｒ、Ｃｌ、Ｆ、シアノまたはニトロである
【０４４９】
で表される化合物、あるいはその互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、またはアミノ保護誘導体である。
【０４５０】
他の実施態様において、ピリミジン誘導体は、式（ＸＶＩＩＩ）で示される化合物であって、
【０４５１】
Ｒ１がフェニル−Ｃ１−４アルキルまたはナフチルＣ１−２アルキルであり、
【０４５２】
ここで、Ｒ１基の各々は、１または複数の以下の基：メチル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ニトロ、ヒドロキシ、ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＳＣＦ３、Ｃ１−４アルキルオキシまたはＣ１−４アルキルチオにより所望により置換されてもよく；
【０４５３】
Ｒ２が以下の基：
【化３０】
2016537400.tif 000093
より選択され；
【０４５４】
ここで、
【０４５５】
Ｒ４およびＲ５が、各々独立して、水素、Ｃ１−３アルキル、またはアミジノより選択され；
【０４５６】
Ｒ３がＢｒ、Ｃｌ、シアノまたはニトロである
【０４５７】
で表される化合物、あるいはその互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、またはアミノ保護誘導体である。
【０４５８】
さらに別の実施態様において、ピリミジン誘導体は、式（ＸＶＩＩＩ）で示される化合物であって、
【０４５９】
Ｒ１がフェニルＣＨ２−であり、
【０４６０】
ここで、フェニル基は、１または複数の以下の基：メチル、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、ニトロ、ヒドロキシ、ＣＦ３、−ＯＣＦ３、−ＳＣＦ３、Ｃ１−４アルキルオキシまたはＣ１−４アルキルチオによって所望により置換されてもよく；
【０４６１】
Ｒ２が、以下の基：
【化３１】
2016537400.tif 000094
より選択され；
【０４６２】
Ｒ３がニトロであり；
【０４６３】
Ｒ４およびＲ５が、各々独立して、水素、メチル、またはアミジノより選択される
【０４６４】
で表される化合物、あるいはその互変異性体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、またはアミノ保護誘導体である。
【０４６５】
式（ＸＶＩＩＩ）で示されるピリミジン誘導体の化合物の例は、限定されるものではないが、以下の群：
【０４６６】
エチル  ４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−２−［（２−クロロベンジル）アミノ］ピリミジン−５−カルボキシレート；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［（２Ｒ）−１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン−２−イル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［（２Ｓ）−１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン−２−イル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［（１Ｒ）−１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［（１Ｓ）−１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン−１−イル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（４−クロロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（２−メチルフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（３−メチルフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（４−メチルフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（２−フルオロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−メチル｝−Ｎ２−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（４−フルオロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２−アミノベンジル）−Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３,５−ジメトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［３,５−ビス（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；｛３−［（｛２−［（２−クロロベンジル）アミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル｝アミノ）メチル］フェニル｝メタナミン；２−（｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝メチル）フェノール；Ｎ２−（５−アミノ−２−クロロベンジル）−Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−２−［（２−クロロベンジル）アミノ］ピリミジン−５−カルボキシアミド；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シク��ヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−フルオロピリミジン−２,４−ジアミン；３−（｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝メチル）−Ｎ−［２−（２−メチルフェニル）エチル］ベンズアミド；（１Ｓ,２Ｒ）−２−（｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝メチル）シクロヘキサノール；（１Ｒ,２Ｒ）−２−（｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝メチル）シクロヘキサノール；メチル  ４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−２−［（２−クロロベンジル）アミノ］ピリミジン−５−カルボキシレート；４−｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝−Ｎ−［２−（２−メチルフェニル）エチル］ブタンアミド；５−｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝−Ｎ−［２−（２−メチルフェニル）エチル］ペンタンアミド；６−｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝−Ｎ−［２−（２−メチルフェニル）エチル］ヘキサンアミド；（１Ｒ,３Ｒ）−３−（｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝メチル）−４,４−ジメチルシクロヘキサノール；Ｎ４−（｛４−シス−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］ベンジル｝−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］ベンジル｝−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］ベンジル｝−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル］−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル］−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル］−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−Ｎ４−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２−メトキシベンジル）−Ｎ４−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−メトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメチル）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,４−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−メトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（ピリジン−２−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ−（４−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,４−ジメトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,５−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロ−６−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−メチル｝−Ｎ２−（２−フリルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（チエン−２−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−メチルピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（６−アミノヘキシル）−Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ−［４−（アミノメチル）ベンジル］−Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（７−アミノヘプチル）−Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［３−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４
−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（１−メチル−１−フェニルエチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；４−（４,４’−ビピペリジン−１−イル）−Ｎ−（２−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２−アミン；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−５−ニトロピリミジン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,５−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［４−（ジフルオロメトキシ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−エトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［（１Ｓ）−１−フェニルエチル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−クロロ−２−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（４−ペンチルベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−ブトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジメトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）−シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,５−ジメトキシベンジル）−５−ニトロ− ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−Ｎ４−［７−（ジメチルアミノ）ヘプチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（１,１’−ビフェニル−２−イルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,４−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−フルオロ−４−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−（２−クロロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］−メチル｝−Ｎ２−（２,６−ジメトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,６−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−クロロ−２−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（１−フェニルシクロプロピル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［１−（２−クロロフェニル）−１−メチルエチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジヒドロ−１−ベンゾフラン−５−イルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［（１,５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジメチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,４−ジメチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,５−ジメチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンジル［−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（６−クロロ−２−フルオロ−３−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロ−６−フルオロ−３−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−２−ナフチル−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−クロロ−２−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（５−クロロ−２−）メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−クロロ−２−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［５−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（−５−クロロ−２−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジフルオロ−４−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（５−フルオロ−２−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−１−ナフチル−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；｛４−トランス−［（｛２−［（２−クロロベンジル）アミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル｝アミノ）メチル］シクロヘキシル｝メタノール；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−（２,５−ジクロロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−（２,４−ジクロロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（シクロヘキシルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメチル）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（ジフルオロメトキシ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［３−（ジフルオロメトキシ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロ−４−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロ−３,６−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（２,３,５−トリフルオロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（２,３,４,５−テトラフルオロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ
２−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［（１Ｓ）−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［（１Ｒ）−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−１−イル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−クロロ−１−ナフチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−メトキシ−２−ナフチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−キノリン−６−イルピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−トランス−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,５−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−トランス−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（２−クロロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（３−クロロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロ−６−フェノキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−２−ナフチルピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（ピリジン−３−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−２−［（２−クロロベンジル）アミノ］ピリミジン−５−カルボニトリル；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［４−（ジメチルアミノ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−トランス−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（７−アミノヘプチル）−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（７−アミノヘプチル）−Ｎ２−（２,５−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ−（｛４−［（｛２−［（２−クロロベンジル）アミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル｝アミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）グアニジン；Ｎ２−（３−アミノベンジル）−Ｍ−｛［４（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［��−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（２−ニトロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［−２−（２−ブロモフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−クロロピリミジン−２,４−ジアミン；（４−｛［（２−｛［２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］アミノ｝−５−ニトロピリミジン−） ４−イル）アミノ］メチル｝シクロヘキシル）メタンアミニウムクロリド；Ｎ−（｛３−［（｛２−［（２−クロロベンジル）− アミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル｝アミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）グアニジン；３−（｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝メチル）フェノール；（４−｛［（２−｛［２−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）エチル］アミノ｝−５−ニトロピリミジン−４−イル）アミノ］メチル｝シクロヘキシル）−メタンアミニウムクロリド；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−Ｍ−（｛４−シス−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−クロロ−Ｎ２−（２−クロロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）ピリミジン−２.４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（２−フェニルエチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（３−フェニルプロピル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ−２−（４−フェニルブチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル−］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（２−フェニルプロピル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（４−メトキシフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（３−メトキシフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（２−メトキシフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；４−［（｛２−［（２−クロロベンジル）アミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル｝アミノ）メチル］ピペリジン−１−カルボキシイミダミド；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３,５−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（５−アミノペンチル）−Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；２−（ベンジルアミノ）−４−（１,４,６,７−テトラヒドロイミダゾ［４,５−ｃ］ピリジ���−５−イル）−５−トリフルオロメチル−ピリミジン；２−（４−クロロベンジルアミノ）−４−（１,４,６,７−テトラヒドロイミダゾ［４,５−ｃ］ピリジン−５−イル）−５−ニトロ−ピリミジン；２−（２−クロロベンジルアミノ）−４−（１,４,６,７−テトラヒドロイミダゾ［４,５−ｃ］ピリジン−５−イル）−５−ニトロ−ピリミジン；２−（ベンジルアミノ）−４−（１,４,６,７−テトラヒドロイミダゾ［４,５−ｃ］ピリジン−５−イル）−５−ニトロ−ピリミジン；またはＮ４−｛［トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン
より選択される。
【０４６７】
ある実施態様において、式（ＸＶＩＩＩ）で示されるピリミジン誘導体の化合物は
【０４６８】
Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［（２Ｒ）−１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン−２−イル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（４−クロロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（３−メチルフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（４−メチルフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（４−フルオロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；（１Ｒ,３Ｒ）−３−（｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝メチル）−４,４−ジメチルシクロヘキサノール；Ｎ４−（｛４−シス−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）−Ｎ２−｛−２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−Ｎ２−（１−ナフチル−メチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］ベンジル｝−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］ベンジル｝−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル］−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル］−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−メトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［２−（ト���フルオロメチル）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,４−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［４−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,５−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロ−６−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［３−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,５−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（−２−エトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−クロロ−２−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（１,１’−ビフェニル−２−イルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,４−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,６−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−クロロ−２−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジメチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（６−クロロ−２−フルオロ−３−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロ−６−フルオロ−３−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−２−ナフチル−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−クロロ−２−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（５−クロロ−２−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（３−クロロ−２−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［５−フルオロ−２−（トリフルオロメチル）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（５−クロロ−２−フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジフルオロ−４−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（５−フルオロ−２−メチルベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−（２,５−ジクロロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミ��；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（シクロヘキシルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメチル）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（ジフルオロメトキシ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロ−４−
フルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロ−３,６−ジフルオロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（２,３,５−トリフルオロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−インデン−２−イル−５− ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−クロロ−１−ナフチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（４−メトキシ−２−ナフチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−キノリン−６−イルピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−トランス−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（２−クロロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（３−クロロフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ブロモ−Ｎ２−２−ナフチルピリミジン−２,４−ジアミン；４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−２−［（２−クロロベンジル）アミノ］ピリミジン−５−カルボニトリル；Ｎ４−｛［４−トランス−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（７−アミノヘプチル）−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（７−アミノヘプチル）−Ｎ２−（２,５−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ−（｛４−［（｛２−［（２−クロロベンジル）アミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル｝アミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）グアニジン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（２−ニトロベンジル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（２−ブロモフェニル）エチル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−クロロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ−（｛３−［（｛２−［（２−クロロベンジル）アミノ］−５−ニトロピリミジン−４−イル｝アミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）グアニジン；３−（｛［４−（｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）−５−ニトロピリミジン−２−イル］アミノ｝メチル）フェノール；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−Ｎ４−（｛４−シス−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（２−フェニルエチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−（４−フェニルブチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；またはＮ４−｛［トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメトキシ）−ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン
より選択される。
【０４６９】
さらに別の実施態様において、式（ＸＶＩＩＩ）のピリミジン誘導体の化合物は
【０４７０】
Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）−Ｎ２−｛−２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］ベンジル｝−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］ベンジル｝−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル］−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メチル］−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−メトキシベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［３−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−Ｎ−４−（｛４−［（ジメチルアミノ）メチル］シクロヘキシル｝メチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−［２−（メチルチオ）ベンジル］−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−｛２−［（トリフルオロメチル）チオ］ベンジル｝ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（１−ナフチルメチル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２,３−ジクロロベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−｛［４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−Ｎ２−（２−ブロモベンジル）−５−ニトロピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２−クロロベンジル）−５−ニトロ−Ｎ４−（ピペリジン−４−イルメチル）ピリミジン−２,４−ジアミン；またはＮ４−｛［トランス−４−（アミノメチル）シクロヘキシル］メチル｝−５−ニトロ−Ｎ２−［２−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］ピリミジン−２,４−ジアミン
より選択される。
【０４７１】
別のＰＫＣ−θ阻害剤のピリミジン誘導体は、Barbosaらによって、米国公開番号２０１０／０３１８９２９（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）に記載される化合物を包含する。これらの化合物は、式（ＸＩＸ）：
【化３２】
2016537400.tif 000095
【０４７２】
［式中、
Ｒ１は、次の基：
【化３３】
2016537400.tif 000096
より選択され、
【０４７３】
ここで、ｐは１、２または３であり；ｑは０または１であって、Ｒ５およびＲ６は、各々独立して、（Ａ）水素、（Ｂ）Ｃ１−６アルキル（またはＲ５とＲ６が一緒になってメチレン架橋を構成し、その間にある窒素原子と共に４ないし６員の環を形成し、そのメチレン基の１つが所望により酸素または窒素原子と置き換えられてもよく、該環は１または複数の以下の基：（ｉ）Ｃ１−６アルキル、（ｉｉ）ＣＯＲ７（ここで、Ｒ７は（ａ）Ｃ１−６アルキル、または（ｂ）Ｃ１−６アルキルオキシである）で所望によりかつ独立して置換されてもよい）、（Ｃ）Ｃ１−６アルキルカルボニル、（Ｄ）Ｃ１−６アルキルスルホニル、（Ｅ）−ＣＯＮＲ８Ｒ９（ここで、Ｒ８およびＲ９は、各々独立して、（ｉ）水素、（ｉｉ）Ｃ１−６アルキルより選択される）より選択され；
Ｒ２は、以下の基：（Ｆ）ＣＦ３、（Ｇ）シアノ、（Ｈ）ＣＯＮＨ２、（Ｉ）ハロゲン、または（Ｊ）ニトロより選択され；
Ｒ３は、以下の基：（Ａ）水素、（Ｂ）Ｃ１−６アルキル（ハロゲンで所望により置換されてもよい）、（Ｃ）Ｃ１−６アルキルオキシ（ハロゲンで所望により置換されてもよい）、または（Ｄ）ハロゲンより選択され；
Ｒ４は、以下の基：（Ａ）ヘテロアリール（Ｃ１−６アルキルで所望により置換されてもよい）；（Ｂ）アリールまたはヘテロアリール（１または複数の以下の基：（ｉ）Ｃ１−６アルキル（ヒドロキシル、オキソまたはＮＲ１０Ｒ１１（ここでＲ１０およびＲ１１は、各々独立して、以下の基：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１−６アルキル（ヒドロキシルまたはＣＯＮＨ２で所望により置換されてもよい）、（ｃ）Ｃ１−６アルキルカルボニル（１または複数のハロゲンで所望により置換されてもよい）、（ｄ）Ｃ１−６アルキルスルホニル、あるいは（ｅ）Ｒ１０とＲ１１がメチレン架橋を構成し、それがその間にある窒素原子と一緒になって４〜６員の環を形成する基より選択される）で置換される）、（ｉｉ）ＣＯＮＲ１２Ｒ１３（ここで、Ｒ１２およびＲ１３は、各々独立して、水素またはＣ１−６アルキルより選択される）、（ｉｉｉ）ＳＯ２ＮＲ１２Ｒ１３（ここで、Ｒ１２およびＲ１３は、各々独立して、水素またはＣ１−６アルキルより選択される）で置換される）；（Ｃ）−ＮＲ１４Ｒ１５（ここで、Ｒ１４およびＲ１５は、各々独立して、（ｉ）Ｃ１−６アルキルカルボニル（アミノで置換される）、あるいは（ｉｉ）Ｒ１４とＲ１５がメチレン架橋を構成し、それがその間にある窒素原子と一緒になって４〜７員の環を形成し、そのメチレン基の１つがＣ１−６アルキルで置換され、そのＣ１−６アルキルは、各々、ヒドロキシルまたはＮＲ１０Ｒ１１（ここで、Ｒ１０およびＲ１１は上記と同意義である）で所望により置換されてもよい基より選択される）；（Ｄ）−ＣＯＮＲ１６Ｒ１７（ここで、Ｒ１６およびＲ１７は、各々独立して、（ｉ）Ｃ１−６アルキル（ヒドロキシルまたはＮＲ１８Ｒ１９（ここで、Ｒ１８およびＲ１９は、各々独立して、水素またはＣ１−６アルキルより選択されるか、あるいはＲ１８とＲ１９はメチレン架橋を構成し、それらの間にある窒素原子と一緒になって４ないし６員の環を形成し、そのメチレン基の１つが酸素により所望により置き換えられてもよい）で置換される）；または（Ｅ）Ｃ６アルキニル（アミノ、Ｃ１−３アルキルアミノまたはジ（Ｃ１−３アルキル）アミノで所望により置換されてもよい）
より選択され；および
Ａは炭素または窒素より独立して選択される］
で示される化合物、あるいは互変異性体またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくはアミノ保護誘導体である。
【０４７４】
この型の典型的な例において、Ｒ１は次の基：
【化３４】
2016537400.tif 000097
より選択され、
【０４７５】
ここで、ｑは０または１であって、Ｒ５およびＲ６は、各々独立して、（Ａ）水素、（Ｂ）Ｒ５とＲ６が一緒になってメチレン架橋を構成し、その間にある窒素原子と共に５ないし６員の環を形成し、そのメチレン基の１つが所望により窒素原子と置き換えられてもよく、該環は１または複数の以下の基：（ｉｖ）Ｃ１−６アルキル、（ｖ）ＣＯＲ７（ここで、Ｒ７はＣ１−６アルキルオキシである）で所望によりかつ独立して置換されてもよい基、（Ｃ）Ｃ１−６アルキルカルボニル、（Ｄ）Ｃ１−６アルキルスルホニルより選択され；
Ｒ２は、以下の基：（Ａ）シアノ、または（Ｂ）ニトロより選択され；
Ｒ３は、以下の基：（Ａ）Ｃ１−３アルキル、（Ｂ）Ｃ１−３アルキルオキシ（フッ素で所望により置換されてもよい）、または（Ｃ）ハロゲンより選択され；
Ｒ４は、以下の基：（Ａ）アリール（１または複数の以下の基：（ｉ）Ｃ１−３アルキル（ヒドロキシル、またはＮＲ２０Ｒ２１（ここでＲ２０およびＲ２１は、各々独立して、以下の基：（ｆ）水素、（ｇ）Ｃ１−３アルキル（ヒドロキシルまたはＣＯＮＨ２で所望により置換されてもよい）、あるいは（ｈ）Ｒ２０とＲ２１がメチレン架橋を構成し、それがその間にある窒素原子と一緒になって５ないし６員の環を形成する基より選択される）；（ｉｉ）ＣＯＮＨ２；（ｉｉｉ）ＳＯ２ＮＨ２で置換される）；（Ｂ）３−ピリジル（Ｃ１−３アルキルで所望により置換されてもよく、ここで各アルキル基はアミノで所望により置換されてもよい）；（Ｃ）−ＮＲ２２Ｒ２３（ここで、Ｒ２２およびＲ２３はメチレン架橋を構成し、それがその間にある窒素原子と一緒になって５ないし６員の環を形成し、そのメチレン基の１つがＣ１−３アルキルで置換され、そのＣ１−３アルキルは、各々、ＯＨまたはＮＲ２０Ｒ２１（ここで、Ｒ２０およびＲ２１は上記と同意義である）で所望により置換されてもよい）；（Ｄ）−ＣＯＮＲ２４Ｒ２５（ここで、Ｒ２４およびＲ２５は、各々独立して、（ｉ）Ｃ１−３アルキル（Ｃ１−３アルキルアミノで置換される）より選択され；および
Ａは炭素または窒素より独立して選択される、
化合物、あるいは互変異性体またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくはアミノ保護誘導体である。
【０４７６】
別の典型的な例において、式（ＸＩＸ）の化合物は、式（ＸＩＸａ）：
【化３５】
2016537400.tif 000098
【０４７７】
［式中：
【０４７８】
Ｒ１は以下の基：
【化３６】
2016537400.tif 000099
より選択され、
【０４７９】
ここで、ｑは０または１であり；Ｒ５およびＲ６は、各々独立して、（Ａ）水素、（Ｂ）Ｃ１−６アルキルカルボニル、（Ｃ）Ｃ１−６アルキルスルホニルより選択され；Ｒ２は以下の基：（Ａ）シアノまたは（Ｂ）ニトロより選択され；Ｒ３は以下の基：（Ａ）ＣＨ３、（Ｂ）ＯＣＦ３、（Ｃ）Ｃｌより選択され；Ｒ４は以下の基：
【化３７】
2016537400.tif 000100
より選択され；
【０４８０】
ここで、Ｒ２６は、以下の基：（Ａ）Ｃ１−３アルキル（ヒドロキシルまたはＮＲ２７Ｒ２８（ここで、Ｒ２７およびＲ２８は、各々独立して、以下の基：（ｉ）水素、（ｉｉ）Ｃ１−３アルキル（ヒドロキシルまたはＣＯＮＨ２で所望により置換されてもよい）より選択される）、（Ｂ）ＣＯＮＨ２、または（Ｃ）ＳＯ２ＮＨ２より選択され；およびＡは炭素または窒素である］
で示される化合物、あるいは互変異性体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくはアミノ保護誘導体である。
【０４８１】
小分子であるＰＫＣ−θ阻害剤が、例えば、Ajiokaらによって、米国公開番号２０１０／０１２０８６９（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）に記載されるように、アニリン化合物である場合も考えられる。この型の典型的な化合物は式（ＸＸ）：
【化３８】
2016537400.tif 000101
で示される。
【０４８２】
ここで、  式ＸＸ中のＸはアリールまたはヘテロアリールであり、各々、１−５個のＲ１基で置換される。式ＸＸ中のＹは−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−、−Ｎ（Ｒ４）−および−Ｃ（Ｒ４）２−であり、ここで下付のｎは０−２である。式ＸＸ中のＺは−Ｎ＝または−ＣＨ＝である。式ＸＸ中のＲ１は、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６ハロアルコキシ、−ＯＲ１ａ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１ａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂ、−ＮＲ１ａＲ１ｂ、−ＳＲ１ａ、−Ｎ（Ｒ１ａ）Ｃ（Ｏ）Ｒ１ｂ、−Ｎ（Ｒ１ａ）Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ｂ、−Ｎ（Ｒ１ａ）Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ａＲ１ｂ、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１ａ）２、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ１ａ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１ａＲ１ｂ、−Ｓ（Ｏ）２−Ｃ１−６ハロアルキル、−ＣＮ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールからなる群より独立して選択される。式ＸＸ中のＲ１ａおよびＲ１ｂは、独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルである。式ＸＸ中のＲ２は、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、−ＮＲ１ａＲ１ｂ、−ＮＲ１ａＣ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキル、−ＮＲ１ａＣ（Ｏ）−Ｃ１−６ハロアルキル、−ＮＲ１ａ−（ＣＨ２）−ＮＲ１ａＲ１ｂ、−ＮＲ１ａ−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ１ａＲ１ｂ、または−ＮＲ１ａ−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａであるか、あるいはまた隣接するＲ１基と隣接するＲ２基が合わさってシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールを形成することができる。式ＸＸ中のＲ３は−ＮＲ３ａＲ３ｂまたは−ＮＣＯである。式ＸＸ中のＲ３ａおよびＲ３ｂは、各々、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６ハロアルキル、−（ＣＨ２）−ＮＲ１ａＲ１ｂ、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ１ａＲ１ｂ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａ、−Ｃ（Ｓ）ＣＮ、アミノ酸残基、ペプチドまたはオリゴペプチドである。式ＸＸ中のＲ４は、各々独立して、ＨまたはＣ１−６アルキルであるか、あるいは複数のＲ４基が同じ原子に結合している場合、そのＲ４基は所望により合わさってＣ５−８シクロアルキルを形成してもよい。式ＸＸの化合物はその塩、水和物およびプロドラッグも包含する。
【０４８３】
ある実施態様において、式ＸＸのアニリン化合物は、式ＸＸａ：
【化３９】
2016537400.tif 000102
【０４８４】
［式中、Ｒ１は、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ１−６ハロアルコキシ、−ＯＲ１ａ、−ＣＮ、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、各々独立して、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキル、アミノ酸残基、ペプチドまたはオリゴペプチドである］
で示される。
【０４８５】
さらに別の実施態様において、式ＸＸａのＲ１は、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−６ハロアルキル、Ｃ１−６ハロアルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１ａ、シクロアルキル、またはヘテロアリールである。さらには、式ＸＸａのＲ２は、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、または−ＮＲ１ａＣ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキルである。さらに別の実施態様において、式ＸＸａのＲ１は、各々独立してＨ、メチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｔ−ペンチル、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、シクロペンチル、ピロリル、またはＣＯ２Ｈであり、Ｒ２は、各々独立して、ＨまたはＣｌである。他の実施態様において、式ＸＸのＲ３ａは、アミノ酸残基であり、Ｒ３ｂはＨである。適切には、アミノ酸残基はアルギニン残基である。
【０４８６】
さらに別の実施態様において、式ＸＸのアニリン化合物は、式ＸＸｂ：
【化４０】
2016537400.tif 000103
で示される。
【０４８７】
ある別の実施態様において、式ＸＸｂのＹはＳである。さらに別の実施態様において、式ＸＸｂのＹはＯである。ある実施態様において、式ＸＸｂのＲ１は、各々独立して、Ｈ、メチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｔ−ペンチル、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、シクロペンチル、ピロリル、またはＣＯ２Ｈである。さらに別の実施態様において、式ＸＸｂのＲ１は、各々独立して、Ｃ１−８アルキルまたはシクロアルキルである。その上さらに別の実施態様において、式ＸＸｂのＲ１は、各々独立して、４−ｔ−ブチル、４−シクロペンチル、または４−ｔ−ペンチルである。
【０４８８】
他の実施態様において、小分子のＰＫＣ−θ阻害剤は、式（ＸＸＩ）
【化４１】
2016537400.tif 000104
で示される、ロトレリン（カリフォルニア州、サンディエゴ、Calbiochemから入手可能なマロトキシンとしても公知であり、１−［６−［（３−アセチル−２,４,６−トリヒドロキシ−５−メチルフェニル）メチル］−５,７−ジヒドロキシ−２,２−ジメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−８−イル］−３−フェニル−２−プロペン−１−オンである）またはその誘導体もしくはアナログである。
【０４８９】
さらに別の実施態様において、小分子であるＰＫＣ−θ阻害剤は、例えば、Baudlerによって、米国特許出願公開番号ＵＳ２００５／０２２２１８６Ａ１（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）に記載されるように、置換ジアミノピリミジンを包含する。これらの化合物は式（ＸＸＩＩ）：
【化４２】
2016537400.tif 000105
【０４９０】
［式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、置換または非置換のフェニル、ナフチル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、１,２,３−トリアゾリル、インドリル、ベンズイミダゾリル、フラニル（フリル）、ベンゾフラニル（ベンゾフリル）、チオフェニル（チエニル）、ベンゾチオフェニル（ベンゾチエニル）、チアゾリル、イソキサゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、キノリニルおよびイソキノリニルからなる群より独立して選択され；Ｒ４は水素またはメチルであり；Ｒ５は水素またはメチルであり；Ａ１はＣ１−３アルキレンまたはエチレンオキシ（−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−）であり；Ａ２はＣ１−３アルキレンまたはエチレンオキシ（−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−）である］
で示される化合物；およびその水和物、溶媒和物、塩、またはエステルである。
【０４９１】
かかる化合物の例は、限定されるものではないが、［１−ベンジル（４−ピペリジル）］｛２−［（２−ピリジルメチル）アミノ］−５−（３−チエニル）ピリミジン−４−イル｝アミン；｛５−（４−メトキシフェニル）−２−［（４−ピリジルメチル）アミノ）ピリミジン−４−イル｝［１−ベンジル−（４−ピペリジル）］アミン；｛５−フェニル−２−［（４−ピリジルメチル）アミノ）ピリミジン−４−イル｝［１−ベンジル（４−ピペリジル）］アミン；｛５−（４−クロロフェニル）−２−［（４−ピリジルメチル）アミノ）ピリミジン−４−イル｝［１−ベンジル（４−ピペリジル）］アミン；｛５−（４−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル）−２−［（４−ピリジルメチル）アミノ）ピリミジン−４−イル｝［１−ベンジル（４−ピペリジル）］アミン；｛５−（フェニル−４−カルボキシアミド）−２−［（４−ピリジルメチル）アミノ）ピリミジン−４−イル｝［１−ベンジル（４−ピペリジル）］アミン；｛５−（４−カルボキシフェニル）−２−［（４−ピリジルメチル）アミノ）ピリミジン−４−イル｝［１−ベンジル−（４−ピペリジル）］アミン；｛５−（２−チエニル）−２−［（４−ピリジルメチル）アミノ）ピリミジン−４−イル｝［１−ベンジル（４−ピペリジル）］アミン；｛５−（２−フラニル）−２−［（４−ピリジルメチル）アミノ）ピリミジン−４−イル｝［１−ベンジル（４−ピペリジル）］アミン；｛５−（３−フラニル）−２−［（４−ピリジルメチル）アミノ）ピリミジン−４−イル｝［１−ベンジル（４−ピペリジル）］アミン；Ｎ（４）−（１−ベンジル−ピペリジン−４−イル）−５−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ（２）−ピリジン−２−イルメチル−ピリミジン−２,４−ジアミン；Ｎ−（３−［４−（１−ベンジル−ピペリジン−４−イルアミノ）−２−［（ピリジン−２−イルメチル）−アミノ］−ピリミジン−５−イル｝フェニル）−アセトアミド；３−［４−（１−ベンジル−ピペリジン−４−イルアミノ）−２−［（ピリジン−２−イルメチル）−アミノ］−ピリミジン−５−イル］−フェノール；および４−｛４−（１−ベンジルピペリジン−４−イルアミノ）−２−［（ピリジン−２−イルメチル）−アミノ］−ピリミジン−５−イル｝Ｎ,Ｎ−ジメチルベンズアミドを包含する。
【０４９２】
さらに別の実施態様において、小分子であるＰＫＣ−θ阻害剤は、例えば、Brunetteによって、米国特許出願公開番号ＵＳ２００６／０２１７４１７（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）に開示されるような置換ピリジン化合物より選択される。これらの化合物は、式（ＸＸＩＩＩ）：
【化４３】
2016537400.tif 000106
【０４９３】
［式中、Ｘは結合手あるいはＣ１−６の置換または非置換のアルキルであり、そのメチレン単位の１または２個は酸素または硫黄原子と置き換えることができ；Ｙは−ＮＨ−、−Ｏ−または−Ｓ−であり；Ｒ１はＣ３−６の置換または非置換のシクロアルキル、置換または非置換のアリール、あるいは置換または非置換のヘテロアリールであり；Ｒ２は次のトリフルオロメチル、シアノ、−ＣＯＮＨ２、ハロゲン、およびニトロからなる群より選択され；およびＲ３は
【化４４】
2016537400.tif 000107
であり；
【０４９４】
ここで、ｐは１〜３（両端を含む）の整数であり；ｑは０〜３（両端を含む）の整数であり；ｎは０〜５（両端を含む）の整数であり；Ｒ４およびＲ５は、各々独立して、水素、Ｃ１−６の置換または非置換のアルキルからなる群より選択されるか、またはＲ４とＲ５が一緒になってメチレン架橋を構成し、それらの間にある窒素原子と共に４〜６員の置換または非置換の環を形成し、その内のメチレン基の１つが酸素、硫黄またはＮＲ基で所望により置き換えられてもよく、ここでＲは水素あるいはＣ１−６の置換または非置換のアルキルを意味する］
で示される化合物；互変異性体；およびその医薬的に許容される塩、溶媒和物またはアミノ保護誘導体である。
【０４９５】
式（ＸＸＩＩＩ）で示される化合物の例は、限定されるものではないが、５−ニトロ−Ｎ４−ピペリジン−４−イルメチル−Ｎ２−（２−トリフルオロメトキシ−ベンジル）−ピリジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−（２,３−ジクロロベンジル）−５−ニトロ−Ｎ４−ピペリジン−４−イルメチル−ピリジン−２,４−ジアミン；Ｎ２−［２−（３−クロロ−フェニル）エチル］−５−ニトロ−Ｎ４−ピペリジン−４−イルメチル−ピリジン−２,４−ジアミン；５−ニトロ−Ｎ２−フェネチル−Ｎ４−ピペリジン−４−イルメチル−ピリジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（４−アミノメチル−シクロヘキシルメチル）−５−ニトロ−Ｎ２−（２−トリフルオロメトキシ−ベンジル）ピリジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（４−アミノメチル−シクロヘキシルメチル）−Ｎ２−（２,３−ジクロロ−ベンジル）−５−ニトロピリジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（４−アミノメチル−シクロヘキシルメチル）−５−ニトロ−Ｎ２−フェネチル−ピリジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（４−アミノメチル−シクロヘキシルメチル）−Ｎ２−［２−（３−クロロ−フェニル）エチル］−５−ニトロ−１−ピリジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（４−アミノメチル−シクロヘキシルメチル）−５−ニトロ−Ｎ２−（２−クロロ−ベンジル）ピリジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（４−トランス−アミノメチル−シクロヘキシルメチル）−５−ニトロ−Ｎ−２−（２−トリフルオロメトキシベンジル）ピリジン−２,４−ジアミン；Ｎ４−（４−トランス−アミノ−シクロヘキシルメチル）−５−ニトロ−Ｎ２−（２−トリフルオロメトキシ−ベンジル）ピリジン−２,４−ジアミン；４−［（４−アミノメチル−シクロヘキシルメチル）アミノ］−６−（２−クロロ−ベンジルアミノ）ニコチンアミド；および４−［（４−アミノメチルシクロヘキシルメチル）アミノ］−６−（２−クロロ−ベンジルアミノ）ニコチノニトリルを包含する。
【０４９６】
さらに別の実施態様において、小分子であるＰＫＣ−θ阻害剤は、例えば、Aubersonによって、米国特許出願公開番号ＵＳ２００７／０１４２４０１（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）に開示されるようなインドリルピロールジオン誘導体より選択される。これらは、式（ＸＸＩＶ）：
【化４５】
2016537400.tif 000108
【０４９７】
［式中
【０４９８】
ＲａはＨ；Ｃ１−４アルキル；またはＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣ１−４アルキルまたはＮ（ジＣ１−４アルキル）２で置換されるＣ１−４アルキルであり；
【０４９９】
ＲｂはＨ；またはＣ１−４アルキルであり；
【０５００】
Ｒは式（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）
【化４６】
2016537400.tif 000109
で示される基であり；
【０５０１】
ここで、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１１およびＲ１４の各々は、ＯＨ；ＳＨ；ヘテロ環式残基；ＮＲ１６Ｒ１７（ここで、Ｒ１６およびＲ１７は、各々独立して、ＨまたはＣ１−４アルキルであるか、またはＲ１６とＲ１７はそれらが結合する窒素原子と一緒になってヘテロ環式残基を形成する）；あるいは式：α−Ｘ−Ｒｃ−Ｙ（α）（式中、Ｘは直接結合手、Ｏ、ＳまたはＮＲ１８（ここで、Ｒ１８はＨまたはＣ１−４アルキルである）であり、ＲｃはＣ１−４アルキレンまたはＣ１−４アルキレン（その内の１個のＣＨ２がＣＲｘＲｙ（ここで、ＲｘおよびＲｙの一方はＨであり、他方がＣＨ３であるか、ＲｘおよびＲｙの各々がＣＨ３であるか、あるいはＲｘおよびＲｙが一緒になって−ＣＨ２−ＣＨ２−を形成する）であり、Ｙはその末端の炭素原子に結合し、ＯＨ、ヘテロ環式残基、および−ＮＲ１９Ｒ２０（ここで、Ｒ１９およびＲ２０は、各々独立して、Ｈ、Ｃ３−６シクロアルキル、Ｃ３−６シクロアルキル−Ｃ１−４アルキル、アリール−Ｃ１−４アルキルまたはＣ１−４アルキルであり、その末端炭素原子にてＯＨで所望により置換されてもよく、あるいはＲ１０とＲ２０がそれらの結合する窒素原子と一緒になってヘテロ環式残基を形成してもよい）より選択され；
【０５０２】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５およびＲ’１５は、各々独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、ＣＦ３、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、ＮＨＣ１−４アルキル、Ｎ（ジＣ１−４アルキル）２またはＣＮであり；
【０５０３】
Ｅは−Ｎ＝であって、Ｇが−ＣＨ＝であるか、またはＥは−ＣＨ＝であって、Ｇが−Ｎ＝であり；
【０５０４】
環Ａは所望により置換されてもよい］
【０５０５】
で示される化合物またはその塩である。
【０５０６】
典型的な例において、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１１、Ｒ１４またはＹとしてのヘテロ環式残基、あるいはＮＲ１６Ｒ１７またはＮＲ１９Ｒ２０の各々で形成されるヘテロ環式残基は、３〜８員の飽和、不飽和、または芳香族のヘテロ環式環（１または２個のヘテロ原子を含む）であり、１または複数の環炭素原子および／または存在する場合には１個の環窒素原子上で所望により置換されてもよい。
【０５０７】
具体的な実施態様において、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ１１、Ｒ１４またはＹとしての、あるいはＮＲ１６Ｒ１７またはＮＲ１９Ｒ２０で個々に形成されるヘテロ環式残基は式（γ）：
【化４７】
2016537400.tif 000110
【０５０８】
［式中：
【０５０９】
環Ｄは５、６または７員の飽和、不飽和または芳香族の環であり；
【０５１０】
Ｘｂは−Ｎ−、−Ｃ−または−ＣＨ−であり；
【０５１１】
Ｘｃは−Ｎ＝、−ＮＲｆ−、−ＣＲｆ’＝または−ＣＨＲｆ’−であり、ここでＲｆは環窒素原子の置換基であり、Ｃ１−６アルキル；アシル；Ｃ３−６シクロアルキル；Ｃ３−６シクロアルキル−Ｃ１−４アルキル；フェニル；フェニル−Ｃ１−４アルキル；
【０５１２】
ヘテロ環式残基；および式：β−Ｒ２１−Ｙ’（β）で示される基より選択され；
【０５１３】
ここで、Ｒ２１はＣ１−４アルキレンまたはＣ２−４アルキレン（Ｏが割り込んでいる）であり、Ｙ’はＯＨ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１−４アルキル）またはＮ（Ｃ１−４アルキル）２であり；およびＲｆ’は、環炭素原子についての置換基であり、Ｃ１−４アルキル；
【０５１４】
Ｃ３シクロアルキル（所望によりＣ１−４−アルキルでさらに置換されてもよい）；
【化４８】
2016537400.tif 000111
【０５１５】
ここで、ｐは１、２または３であり；ＣＦ３；
【０５１６】
ハロゲン；ＯＨ；ＮＨ２；−ＣＨ２−ＮＨ２；−ＣＨ２−ＯＨ；ピペリジン−１−イル；およびピロリジニルより選択され；
【０５１７】
Ｃ１とＣ２との間の結合は飽和または不飽和のいずれかであり；
【０５１８】
Ｃ１およびＣ２は、各々独立して、環炭素原子について上記される置換基の中より選択される１または２個の置換基によって所望により置換されてもよい炭素原子であり；および
【０５１９】
Ｃ３とＸｂの間の線、Ｃ１とＸｂの間の線は、個々に、５、６または７員の環Ｄを得るのに必要とされる炭素原子の数を表す。
【０５２０】
式（ＸＸＩＶ）に係る化合物の例において、限定されるものではないが、
【０５２１】
ＲａがＨ；ＣＨ３；ＣＨ２ＣＨ３；またはイソプロピルであり、
【０５２２】
ＲｂがＨ；ハロゲン；Ｃ１−６アルコキシ；またはＣ１−６アルキルであって、
【０５２３】
Ｉ．Ｒが式（ａ）：
【化４９】
2016537400.tif 000112
【０５２４】
［式中、Ｒ１は３または４位にてＣＨ３で所望により置換されてもよいピペラジン−１−イル；または４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イルであり；Ｒ２はＣｌ；Ｂｒ；ＣＦ３；またはＣＨ３であり；Ｒ３はＨ；ＣＨ３；またはＣＦ３であり；ＲａがＨまたはＣＨ３で、ＲｂがＨで、Ｒ１が４−メチル−１−ピペラジニルである場合、Ｒ３はＨ以外の基である］
で示される基であるか；または
【０５２５】
ＩＩ．Ｒが式（ｂ）：
【化５０】
2016537400.tif 000113
【０５２６】
［式中、Ｒ４は３および／または４位にてＣＨ３で置換されるピペラジン−１−イル；または４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イルであり；Ｒ４が４−メチル−１−ピペラジニルである場合、ＲａはＨまたはＣＨ３以外の基である］
で示される基であるか；または
【０５２７】
ＩＩＩ．Ｒが式（ｃ）：
【化５１】
2016537400.tif 000114
【０５２８】
［式中、Ｒ１４は、３および／または４位にてＣＨ３で、または３位にてエチル、フェニル−Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ−Ｃ１−４アルキルまたはハロゲノ−Ｃ１−４アルキルで所望により置換されてもよいピペラジン−１−イル；または４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イルであり；Ｒ１５はハロゲン；ＣＦ３；またはＣＨ３であり；ＲａがＨまたはＣＨ３で、ＲｂがＨで、Ｒ１４が４−メチル−１−ピペラジニルで；Ｒ１６がＨ；ＣＨ３またはＣＦ３である場合、Ｒ１５はＣＨ３以外の基であって；Ｒ１５がＣｌで、ＲａがＨまたはＣＨ３で、ＲｂがＨであり、Ｒ１４が４−メチル−１−ピペラジニルである場合、Ｒ１６はＨ以外の基である］
で示される残基であるか；または
【０５２９】
ＩＶ．Ｒが式（ｄ）：
【化５２】
2016537400.tif 000115
【０５３０】
［式中、Ｒ８はピペラジン−１−イル、３−メチル−ピペラジン−１−イルまたは４−ベンジル−ピペラジン−１−イルである］
で示される基であるか；あるいは
【０５３１】
Ｖ．Ｒが式（ｅ）：
【化５３】
2016537400.tif 000116
【０５３２】
［式中、Ｒ９は、３位にてメチルまたはエチルで置換され、４位にてメチルで所望により置換されてもよい４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イル；またはピペラジン−１−イルである］
で示される基のいずれかである。
【０５３３】
式（ＸＸＩＶ）に係る化合物のある実施態様において、
【０５３４】
Ｒが式（ａ）で示される基である場合、
【０５３５】
Ｒ１は−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）、１−ピペラジニル、３−メチル−ピペラジン−１−イルまたは−（４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イル）であり、
【０５３６】
Ｒ２は２−Ｃｌまたは２−ＣＨ３であり、
【０５３７】
Ｒ３は３−ＣＨ３、３−ＣＦ３またはＨであり、
【０５３８】
ＲａはＨまたはＣＨ３であって；
【０５３９】
および
【０５４０】
Ｒが式（ｂ）で示される基である場合、
【０５４１】
Ｒ４は−（４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イル）、３−メチル−ピペラジン−１−イルまたは４−メチル−３−メチル−ピペラジン−１−イルであり、
【０５４２】
ＲａはＨまたはＣＨ３であって、
【０５４３】
および
【０５４４】
Ｒが式（ｃ）で示される基である場合、
【０５４５】
Ｒ１４は−４−メチル−ピペラジン−１−イル、３−メチル−ピペラジン−１−イル、−４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イル、１−ピペラジニル、４−メチル−３−メチル−ピペラジン−イル、３−メトキシエチル−ピペラジン−１−イル、３−エチル−ピペラジン−１−イル、３−ベンジル−ピペラジン−１−イルまたは３−ＣＨ２Ｆ−ピペラジン−１−イルであり、
【０５４６】
Ｒ１５はＣｌ、Ｂｒ、ＣＦ３、Ｆであり、
【０５４７】
Ｒ１６はＣＨ３、Ｈ、ＣＨ２ＣＨ３であり、
【０５４８】
ＲａはＨまたはＣＨ３であり、
【０５４９】
ＲｂはＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、Ｆ、ＣＨ（ＣＨ３）２、Ｃｌ、ＯＣＨ３、ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３であり、
【０５５０】
および
【０５５１】
Ｒが式（ｄ）で示される基である場合、
【０５５２】
Ｒ８は３−メチル−ピペラジン−１−イル、４−ベンジル−１−ピペラジニルまたは１−ピペラジニルであり、
【０５５３】
ＲａはＣＨ３またはＨであって、
【０５５４】
および
【０５５５】
Ｒが式（ｅ）で示される基である場合、
【０５５６】
Ｒ９は−４,７−ジアザ−スピロ［２.５］オクタ−７−イル、３−エチル−ピペラジン−１−イル、３−メチル−ピペラジン−１−イル、４−メチル−３−メチル−ピペラジン−１−イルまたは３−エチル−ピペラジン−１−イルであり、
【０５５７】
ＲａはＨ、ＣＨ２ＣＨ３またはＣＨ（ＣＨ３）２であり、
【０５５８】
ＲｂはＣＨ３、Ｆ、ＣＨ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ３、ＣＨ２ＣＨ３またはＣｌである。
【０５５９】
式（ＸＸＩＸ）で示される化合物の具体的な実施態様は、式：
【化５４】
2016537400.tif 000117
で示される、３−［２−クロロ−５−（４−メチルピペラジン−１−イル）−３−トリフルオロメチルフェニル］−４−（１Ｈ−インドール−３−イル）−ピロール−２,５−ジオン；および
【０５６０】
式：
【化５５】
2016537400.tif 000118
で示される、３−（１Ｈ−インドール−３−イル）−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−キナゾリン−４−イル］−ピロール−２,５−ジオン
を包含する。
【０５６１】
他の実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は、Ajiokaによって、米国特許出願公開番号ＵＳ２０１３／０２２５６８７（その全内容を出典明示により本明細書の一部とする）にて開示される選択的ＰＫＣ−θ小分子化合物より選択される。これらの化合物は、式（ＸＸＶ）：
【化５６】
2016537400.tif 000119
【０５６２】
［式中：
【０５６３】
Ｙは−Ｏ−、および−Ｓ−からなる群より選択され；および
【０５６４】
Ｒ１は、各々独立して、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｔ−ペンチル、ＣＦ３、ＯＣＦ３、シクロペンチル、ピロリル、およびＣＯ２Ｈからなる群より選択される］
で示される化合物、およびＰＫＣ−θを選択的に阻害する、その塩、水和物およびプロドラッグである。
【０５６５】
本発明は、既知のＰＫＣ−θ阻害剤だけでなく、いずれか適切なスクリーニングアッセイにより同定されるＰＫＣ−θ阻害剤をも包含する。したがって、本発明は、ＰＫＣ−θを阻害するのに有用な調節剤をスクリーニングする方法、ならびに同様にして、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変する方法、またはがん（例、転移性がん）を治療または予防する方法にまで及ぶ。ある実施態様において、スクリーニング方法は、（１）調製物を試験薬剤と接触させることを含み、ここで該調製物は（ｉ）ＰＫＣ−θの少なくとも１の生物学的に活性なフラグメントまたはその変異体もしくは誘導体に対応するアミノ酸配列を含ポリペプチド；または（ｉｉ）ＰＫＣ−θ遺伝子の転写物またはその一部が産生可能であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド；または（ｉｉｉ）ＰＫＣ−θ遺伝子の発現を制御し、レポータ遺伝子に作動可能に連結する遺伝的配列の少なくとも一部（例、転写要素）を含むポリヌクレオチドを含み、（２）試験薬剤の不在下で対照レベルまたは機能的活性と比較した、レポータ遺伝子のポリペプチド、ポリヌクレオチド、発現産物のレベルまたは機能的活性の変化を検出することを含む。試験薬剤の不存在下で、正常または対照レベルと比べて、および／または機能的活性と比べて、ポリペプチド、レポータ遺伝子の転写物または転写部分または発現産物のレベルおよび／または機能的活性の検出される減少は、該試験剤がＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、（ｉｉｉ）維持、（ｉｖ）ＥＭＴ、または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変するのに、あるいはがん（例、転移性がん）を治療または予防するのに有用であることを示唆する。適切には、このことは試験薬剤がＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成、（ｉｉ）増殖、（ｉｉｉ）維持、（ｉｖ）ＥＭＴ、または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変するかどうか、あるいはがんを治療または予防するかどうかを分析または決定することにより確かめられる。
【０５６６】
本発明の範囲内にある調節剤は、拮抗性抗原結合分子、および阻害剤のペプチドフラグメント、アンチセンス分子、リボザイム、ＲＮＡｉ分子および共抑制分子、ならびにＰＫＣ−θの多糖類およびリポ多糖類の阻害剤を含む、ＰＫＣ−θのレベルまたは機能的活性の阻害剤を含む。
【０５６７】
候補となる薬剤は、典型的には、分子量が５０ダルトン以上で、約２５００ダルトン以下の有機分子、好ましくは小有機化合物であるが、多数の化学種を包含する。候補薬剤はタンパク質との構造的相互作用に、特に水素結合に不可欠な官能基を含み、典型的には少なくとも１個のアミン、カルボニル、ヒドロキシルまたはカルボキシル基、望ましくは少なくとも２個の該官能基を含む。候補薬剤は、しばしば、１または複数の上記した官能基で置換されている炭素環またはヘテロ環構造あるいは芳香族または多芳香族構造を有する。候補薬剤はまた、限定されるものではないが、ペプチド、糖類、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジン、それらの誘導体、構造的アナログまたは組み合わせを含む、生体分子の間で見つかる。
【０５６８】
ＰＫＣ−θの小（非ペプチド）分子の調節剤が特に有利である。この点で、小分子は経口投与された後により容易に吸収されるか、抗原決定基となる可能性がほとんどないか、あるいは大きなタンパク質をベースとする医薬品よりも細胞膜を通り抜ける可能性が高いため、かかる分子が望ましい。小有機分子はまた、適切な細胞内に入り、（例えば、遺伝子発現に関与する調節領域または転写因子と相互作用することによって）遺伝子の発現に影響を及ぼすか、またはアクセサリー分子の結合を阻害または強化することによって遺伝子の活性に影響を及ぼす能力を有する
【０５６９】
あるいはまた、細菌、真菌、植物および動物の抽出物の形態での天然化合物のライブラリーは入手可能であるか、または容易に作製される。さらには、天然の、または合成で作製されたライブラリーおよび化合物は、慣用的な化学的、物理的、および生化学的手段を通して容易に修飾され、コンビナトリアル・ライブラリーを作製するのに使用されてもよい。既知の薬物を、アシル化、アルキル化、エステル化、アミド化等などの定方向または無作為の化学的修飾に供し、構造的アナログを産生してもよい。
【０５７０】
また、スクリーニングが既知の薬理学的に活性な化合物およびその化学的アナログに向けられてもよい。
【０５７１】
本発明に係る調節剤についてのスクリーニングはいずれか適切な方法により達成され得る。例えば、該方法は、ＰＫＣ−θをコードする遺伝子に対応するポリヌクレオチドを発現する細胞と、調節活性を有すると考えられる薬剤とを接触させ、ＰＫＣ−θのレベルまたはその機能的活性の調節について、またはそのポリヌクレオチドによりコードされる転写物のレベルの調節について、あるいはポリペプチドの、または転写物の下流にある細胞標的（以下、標的分子という）の活性または発現の調節についてスクリーニングすることを含んでもよい。かかる調節の検出は、限定されるものではないが、エライザ（ELISA）、細胞ベースエライザ、阻害エライザ、ウェスタンブロット、免疫沈降、スロットまたはドットブロットアッセイ、免疫染色、ＲＩＡ、シンチレーション近接アッセイ、フルオレセインまたはローダミンなどの蛍光物質の抗原結合分子とのコンジュゲートまたは抗原とのコンジュゲートを用いる蛍光免疫アッセイ、オクタロニー二重拡散分析、アビジン−ビオチンまたはストレプトアビジン−ビオチン検出システムを利用する免疫アッセイ、および逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を含む核酸検出アッセイを含む、技法を利用することで達成され得る。
【０５７２】
ＰＫＣ−θを調節するか、発現するポリヌクレオチドは、試験の対象である細胞中に天然に存在するものであってもよく、あるいは試験のために宿主細胞中に導入されたものであってもよいことが理解されるであろう。さらには、天然に存在するか、導入されたポリヌクレオチドは、その配列のコードされる産物の発現をダウンレギュレートする（そのダウンレギュレーションが核酸レベルで、または発現産物レベルであり得る）薬剤についてスクリーニングするのに有用であるモデルを提供することにより、構成的に発現されてもよい。さらには、ポリヌクレオチドが細胞中に導入されるという点で、ポリヌクレオチドはＰＫＣ−θをコードする全コード配列を含んでもよく、あるいはそのコード配列の一部（例、ＰＫＣ−θの活性部位）またはＰＫＣ−θをコードする対応する遺伝子の発現をレギュレートする部分（例、ＰＫＣ−θプロモータ）を含んでもよい。例えば、ポリヌクレオチドと自然に結び付いたプロモータを試験対象である細胞に導入してもよい。このようにプロモータだけが利用される場合には、そのプロモータ活性の調節の検出は、例えば、プロモータを、限定されるものではないが、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ルシフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼおよびカテコールアミンアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）を含む、適切なレポータポリヌクレオチドに作動可能に連結させることにより達成され得る。発現の調節は、レポータポリヌクレオチドと関連付けられる活性を測定することにより決定されてもよい。
【０５７３】
これらの方法は、合成、コンビナトリアル、化学および天然ライブラリーを含む、タンパク質性または非タンパク質性薬剤などの推定調節薬剤のハイスループットスクリーニングを行うための機構を提供する。これらの方法はまた、標的分子をコードするポリヌクレオチド、あるいは上流にある分子の発現を調節し、その後で標的分子をコードするポリヌクレオチドの発現を調節するポリヌクレオチドのいずれかと結合する薬剤の検出を容易にするであろう。従って、これらの方法は、本発明に係る標的分子の発現または活性を直接的または間接的に調節する薬剤を検出する機構を提供する。
【０５７４】
別の実施態様において、試験薬剤は、商業的に利用可能なＰＫＣ−θアッセイを用いてスクリーニングされ、その代表例として、ＡＤＰ−Ｇｌｏ（登録商標）ＰＫＣ−θキナーゼアッセイ（Promega Corporation, Madison, WI）、PKC Theta KinEASE（登録商標）EP Fluorescein Green Assay（EMD Millipore, Billerica, MA）が挙げられ、および／または米国特許出願公開番号ＵＳ２００８／０３１８９２９に開示のＰＫＣ−θアッセイを用いてスクリーニングされる。
【０５７５】
化合物は、動物実験にてさらに試験され、最も強力なインビボ作用を有する化合物を同定してもよい。これらの分子は、例えば、該化合物をその後の修飾、分子モデリング、および合理的な薬物設計において利用される他のルーチン操作に供することにより、さらに医薬を開発するための「リード化合物」として役立ててもよい。
【０５７６】
３．治療的および予防的使用
本発明によれば、ＰＫＣ−θ機能を阻害する薬剤が、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣまたはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；または（ｉｉｉ）維持；またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉｖ）ＥＭＴ；ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴを改変するための、あるいはがん（例、転移性がん）を治療または予防するための活性体として有用であると提案される。かくして、本発明によれば、ＰＫＣ−θ阻害剤の化合物は、がん（転移性がんを含む）を治療または予防するのに、適切には医薬組成物の形態にて有用である。本発明は、それ自体で、悪性腫瘍、特に転移性がんの徴候を治療、予防および／または緩和するための医薬組成物であって、有効量のＰＫＣ−θ阻害剤および医薬的に許容される担体および／または希釈体を含む医薬組成物を考慮する。
【０５７７】
どのようなＰＫＣ−θ阻害剤であっても本発明の組成物および方法にて用いることができる：ただし、該阻害剤は医薬的に活性であることを条件とする。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は非選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。特定の実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である。「医薬的に活性な」ＰＫＣ−θ阻害剤は、それを必要とする個体に投与した場合に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣまたはＣＳＣ以外の腫瘍細胞）の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；または（ｉｉｉ）維持；またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉｖ）ＥＭＴの減少、阻害、消滅、または予防を、および／またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴの強化を、および／または悪性腫瘍、特に転移性がんの治療および／または予防（徴候の発症の予防、かかる徴候の抑制、または転移性がんに付随して現れる徴候の治療を含む）をもたらす形態である。
【０５７８】
本発明の方法にて用いるための投与方法、ＰＫＣ−θ阻害剤の投与量、およびＰＫＣ−θ阻害剤の製剤は、当業者にとってルーチンであり、その範囲内にある。悪性腫瘍、特に転移性がんが治療されたかどうかは、該疾患の経過を示す１または複数の診断的パラメータを測定し、適切な対照と比較することにより決定される。動物実験の場合、「適切な対照」はＰＫＣ−θ阻害剤で処理されない動物、またはＰＫＣ−θ阻害剤を含まない医薬組成物で処理される動物である。ヒトを対照とする場合には、「適切な対照」は治療前の個体であってもよく、プラセボで処理されるヒト（例えば、年齢適合の、または年齢の近い対照）であってもよい。本発明によれば、転移性がんの治療は、限定するものではなく、（１）患者での、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；または（ｉｉｉ）維持；または（ｉｖ）ＥＭＴの発達の阻害、消滅、減少、防止または阻止を、あるいはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴの強化；（２）対象におけるがん（例、転移性がん）の治療；（３）未だがんであると診断されていないが、がんに罹りやすい体質の対象でのがん（例、転移性がん）の予防を包含する。したがって、治療は、がん（例、転移性がん）の退行を惹起する、がんの予防的治療を含む。
【０５７９】
本発明の組成物および方法は、このように、がん（例、転移性がん）と診断された個体、がん（例、転移性がん）である疑いのある個体、がん（例、転移性がん）に対して感受的であることが分かっており、それを発症する可能性があると考えられる個体、または前に治療したがん（例、転移性がん）を再発する可能性があると考えられる個体を治療するのに適している。がん（例、転移性がん）はホルモン受容体陽性であっても、ホルモン受容体陰性であってもよい。ある実施態様において、がん（例、転移性がん）はホルモン受容体陰性であり、かくしてホルモン療法または内分泌療法に対して耐性である。
がんが乳がんであるいくつかの実施態様において、乳がん（例、非乳ＣＭＣ腫瘍細胞）はホルモン受容体陰性（例、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性および／またはプロゲステロン受容体（ＰＲ）陰性）である。
【０５８０】
ある実施態様においては、意図する投与方法に応じて、ＰＫＣ−θ阻害剤を含有する組成物は、一般に、約０.０００００１重量％〜９０重量％、約０.０００１重量％〜５０重量％、または約０.０１重量％〜約２５重量％のＰＫＣ−θ阻害剤を含有し、残りは適当な医薬担体または希釈体等である。ＰＫＣ−θ阻害剤の投与量は、投与方法、治療を受ける対象の種類、年齢、性別、体重および一般的健康状態などの種々の因子に応じて変化し、当業者であれば標準的プロトコルを用いて容易に決定しうる。投与量はＰＫＣ−θ阻害剤とその標的分子との結合アフィニティ、その生物学的利用能、およびそのインビボでの薬理学的特性を考慮する必要もあろう。これに関して、薬剤の投与に関する正確な量はまた、当業者の判断に委ねられ得る。がん（例、転移性がん）を治療または予防するのに投与されるべき薬剤の有効量を決定するにおいて、医師または獣医は疾患または症状の進行を経時的に評価してもよい。いずれにしても、当業者は、過度の実験を行うことなく、ＰＫＣ−θ阻害剤の適切な投与量を容易に決定することができる。患者に投与される活性体の投与量は、患者において経時的に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；または（ｉｖ）ＥＭＴの減少、阻害、消滅、または予防、および／またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴの強化、および／またはがん（例、転移性がん）の治療および／または予防などの有益な応答をもたらすのに十分な量とすべきである。投与量は、血液学的悪性腫瘍の徴候を改善するのに、適切な間隔で投与されてもよい。かかる間隔は当業者に公知のルーチン操作を用いて確かめることができ、使用される活性剤の型およびその処方に応じて変化しうる。例えば、その間隔は、毎日、隔日、毎週、二週間毎、毎月、二ヶ月毎、三ヶ月毎、半年毎または毎年とすることができる。
【０５８１】
投与量および間隔は、ＰＫＣ−θ阻害剤の効果を維持するのに十分である、活性剤の血漿中レベルを提供するように個々に調整されてもよい。全身性投与での患者に対する用量は、通常、１−２０００ｍｇ／日、一般に１−２５０ｍｇ／日、典型的には１０−１５０ｍｇ／日の範囲である。患者の体重の観点から述べると、通常の用量は０.０２−２５ｍｇ／ｋｇ／日、一般には０.０２−３ｍｇ／ｋｇ／日、典型的には０.２−１.５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にある。患者の体表面積の観点から述べると、通常の用量は０.５−１２００ｍｇ／ｍ２／日、一般には０.５−１５０ｍｇ／ｍ２／日、典型的には５−１００ｍｇ／ｍ２／日の範囲内にある。
【０５８２】
本発明の特的の実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤によるＰＫＣ−θの阻害は、ＣＳＣ（例、乳がんＣＳＣ）の形成、増殖、維持またはＥＭＴの減少を、あるいはＣＳＣ（例、乳がんＣＳＣ）のＭＥＴの強化をもたらし、そのことは、順次、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞をＣＳＣよりほとんど分化させなくし、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞のがん療法または治療剤での治療をより効果的なものとする。かくして、本発明はさらには、ＰＫＣ−θ阻害剤を少なくとも１のがん療法（ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害する）と同時に投与することも考慮する。ＰＫＣ−θ阻害剤はがん療法の後に治療的に使用されてもよく、治療剤が投与される前に、または治療剤と一緒に投与されてもよい。従って、本発明は、ＰＫＣ−θ阻害剤と、限定するものではないが、一例として、放射線療法、手術、化学療法、ホルモン除去療法、アポトーシス促進療法および免疫療法を含むがん療法との同時投与を利用する併用療法を考慮するものである。
【０５８３】
３．１  放射線療法
放射線療法は、ＤＮＡ損傷を誘発する放射波、例えば、γ線照射、Ｘ線、ＵＶ照射、マイクロ波、電子放出、放射性同位体等を含む。療法は限局した腫瘍部位を上記される形態の放射線で照射することにより達成され得る。これらの因子はすべて、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製および修復、染色体の集合および維持に広範囲に及ぶ損傷をもたらす可能性が極めて高い。
【０５８４】
Ｘ線の線量範囲は、長期間（３ないし４週間）にわたって日線量が５０ないし２００レントゲンの範囲にあり、単回線量が２０００ないし６０００レントゲンの範囲にある。放射性同位体の線量範囲は、大きく変化し、その同位体の半減期、放出される放射線の強度および型、および新生細胞による摂取に応じて変化する。
【０５８５】
放射線療法の例として、限定されるものではないが、原体体外照射療法（conformal external beam radiotherapy）（４−８週間にわたって５０−１００グレイを少しずつ投与する）、単発または分割して投与するかのいずれかの高線量率近接照射療法、持続性組織内近接照射療法、全身性放射性同位体（例、ストロンチウム８９）療法が挙げられる。ある実施態様において、放射線療法は、放射線感作剤と組み合わせて行われてもよい。放射線感作剤の典型例として、限定されるものではないが、エファプロキシラル、エタニタゾール、フルオソール（fluosol）、ミソニダゾール、ニモラゾール、テモポルフィンおよびチラパザミンが挙げられる。
【０５８６】
３．２  化学療法
化学治療剤は、以下の：
【０５８７】
（ｉ）アルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロランブシル、ブスルファンおよびニトロソウレア）、抗代謝剤（例えば、抗葉酸剤、フルオロピリジン系５−フルオロウラシルおよびテガフール、ラルチトレキセド、メトトレキサート、シトシンアラビノシドおよびヒドロキシウレアなど）；抗腫瘍抗生物質（例えば、アントラサイクリン系アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシン）、抗有糸分裂剤（例えば、ビンカアルカロイド系ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビン、ならびにトキソイド様パクリタキセルおよびドセタキセル）、およびトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エピポドフィロキシン系エトポシドおよびテニポシド、アムサクリン、トポテカンおよびカンプトテシン）などの腫瘍内科学にて使用されるような、抗増殖性／抗新生物性薬物およびそれらの組み合わせ；
【０５８８】
（ｉｉ）抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびイドキシフェン）、エストロゲン受容体ダウンレギュレータ（例えば、フルベストラント）、抗アンドロゲン（例えば、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、および酢酸シプロテロン）、ＵＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン、ロイプロレリンおよびブセレリン）、プロゲストゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、ボロゾールおよびエキセメスタンなど）および５α−レダクターゼ阻害剤（例えば、フィナステリド）などの細胞分裂阻害剤；
【０５８９】
（ｉｉｉ）がん細胞浸潤を阻害する薬剤（例えば、マリスタットなどのメタロプロテイナーゼ阻害剤、およびウロキナーゼプロスミノゲンアクチベータ受容体機能の阻害剤）；
【０５９０】
（ｉｖ）成長因子機能阻害剤（例えば、かかる阻害剤として、成長因子抗体、成長因子受容体抗体（例えば、抗ｅｒｂｂ２抗体のトラスツズマブ［ハーセプチン（Herceptin（登録商標）］および抗ｅｒｂｂ１抗体のセツキシマブ［Ｃ２２５］）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤およびセリン／スレオニンキナーゼ阻害剤、例えば表皮成長因子ファミリーの他の阻害剤（例えば、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ギフィチニブ、ＡＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６,７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ−７７４）および６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ１０３３）などの他のＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害剤）、例えば血小板誘導成長因子ファミリーの阻害剤、および例えば造血細胞成長因子ファミリーの阻害剤が挙げられる）；
【０５９１】
（ｖ）抗血管新生剤（血管内皮細胞成長因子の作用を阻害する薬剤（例えば、抗血管内皮細胞成長因子抗体のベバシズマブ［アバスチン（登録商標）］、国際特許出願ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９７／３００３５、ＷＯ９７／３２８５６およびＷＯ９８／１３３５４）に開示されるような化合物、および他の作用機序により作動する化合物（例えば、リノミド、αｖβ３機能阻害剤およびアンギオスタチンなど）；
【０５９２】
（ｖｉ）コンブレタスタチン（Combretastatin）Ａ４および国際特許出願ＷＯ９９／０２１６６、ＷＯ００／４０５２９、ＷＯ００／４１６６９、ＷＯ０１／９２２２４、ＷＯ０２／０４４３４およびＷＯ０２／０８２１３に開示される化合物などの血管新生阻害剤；
【０５９３】
（ｖｉｉ）アンチセンス治療剤（例えば、ＩＳＩＳ２５０３、抗ｒａｓアンチセンスなどの上記される標的と対象とする治療剤）；および
【０５９４】
（ｖｉｉｉ）遺伝子治療法（例えば、異常ｐ５３などの異常遺伝子を置換する方法または異常ＧＤＥＰＴ（遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法）、例えばシトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌ニトロレダクターゼ酵素を用いる方法、および化学療法または放射線療法に対する患者の耐性を増大させる方法、例えば多剤耐性遺伝子療法を包含する）
の１または複数のいずれかのカテゴリーより選択され得る。
【０５９５】
３．３  免疫療法
免疫療法として、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカインでトランスフェクトするなどの、患者の腫瘍細胞の免疫原性を向上させるエクスビボおよびインビボでの方法、Ｔ細胞アネルギーを減少させる方法、サイトカインでトランスフェクトした樹状細胞などのトランスフェクトされた免疫細胞を用いる方法、サイトカインでトランスフェクトされた腫瘍細胞系を用いる方法、および抗イディオタイプの抗体を用いる方法が挙げられる。これらの方法は、一般に、免疫エフェクター細胞および分子を用い、腫瘍細胞を標的として破壊することに依拠する。その免疫エフェクターは、例えば、悪性腫瘍細胞の表面にあるマーカーに特異的な抗体であってもよい。抗体は単独で治療のエフェクターとして供してもよく、または細胞殺滅を実際に促進するように他の細胞を募ってもよい。抗体はまた薬物またはトキシン（化学療法剤、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラトキシン、百日咳トキシン等）とコンジュゲートし、単に標的剤として供してもよい。あるいはまた、エフェクターは、悪性腫瘍細胞の標的と、直接的または間接的に相互に作用する表面分子を担持するリンパ球であってもよい。種々のエフェクター細胞として、細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞が挙げられる。
【０５９６】
３．４  他の治療法
がん治療法の他の例として、光療法、冷凍療法、トキシン療法またはアポトーシス促進療法が挙げられる。当業者であれば、この列挙によりがんおよび他の過形成性病変のために利用可能な治療様式の型が排除されないことが分かるであろう。
【０５９７】
化学療法および放射線療法が、迅速に分裂する細胞を標的とし、および／または細胞周期または細胞分裂を中断させることは周知である。これらの治療は、がんを治療する数種の形態の一部として、その進行を遅らせるか、または治療的処理の手段によりその疾患の徴候を退行させるかのいずれかを目的として提案されている。しかしながら、これらのがん治療では、免疫無防備状態、そして確実に病原体感染に至る可能性があり、そのために本発明は、ＰＫＣ−θ阻害剤と、がん療法と、がん療法よりもたらされる免疫無防備状態より発症する、または発症の危険性の高い感染に対して効果的である、抗感染剤とを用いる併用療法にまでも及ぶ。抗感染薬は、適切には、限定されるものではなく、ウイルス、細菌、酵母、真菌、原虫類等などの微生物を殺し、その増殖を阻害する化合物を含む、抗菌剤より選択され、かくして抗生物質、殺アメーバ剤、抗真菌剤、抗原虫剤、抗マラリア剤、抗結核剤および抗ウイルス剤を包含する。抗感染薬はまた、その範囲内に、駆虫薬および抗線虫薬を含む。典型的な抗生物質として、キノロン（例えば、アミフロキサシン、シノキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、フレロキサシン、フルメキン、ロメフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、オキソリニン酸、ペフロキサシン、ロソキサシン、テマフロキサシン、トスフロキサシン、スパルフロキサシン、クリナフロキサシン、ガチフロキサシン、モキシフロキサシン、ゲミフロキサシン、およびゲレノキサシン）、テトラサイクリン、グリシルサイクリンおよびオキサゾリジノン（例えば、クロルテトラサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、リメサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、チゲサイクリン、リネゾリド、エペレゾリド）、グリコペプチド、アミノグリコシド（例えば、アミカシン、アルベカシン、ブチロシン、ジベカシン、ホルチミシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、メノマイシン、ネチルマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン）、β−ラクタマ（例えば、イミペネム、メロペネム、ビアペネム、セファクロル、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セファゼドン、セファドリン、セフィキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォタミン、セフォチアム、セフピミゾール、セフピラミド、セフポドキシム、セフスロジン、セフタジジム、セフテラム、セフテゾール、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアゾン、セフロキシム、セフゾナム、セファセトリル、セファレキシン、セファログリシン、セファロリジン、セファロチン、セファピリン、セフラジン、セフィネタゾール、セフォキシチン、セフォテタン、アズトレオナム、カルモナム、フロモキセフ、モキサラクタム、アムジノシリン、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、ベンジルペニシリン、カルフェシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、メチシリン、メズロシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペパラシ��ン、スルベニシリン、テモシリン、チカルシリン、セフジトレン、ＳＣ００４、ＫＹ−０２０、セフジニル、セフチブテン、ＦＫ−３１２、Ｓ−１０９０、ＣＰ−０４６７、ＢＫ−２１８、ＦＫ−０３７、ＤＱ−２５５６、ＦＫ−５１８、セフォゾプラン、ＭＥ１２２８、ＫＰ−７３６、ＣＰ−６２３２、Ｒｏ０９−１２２７、ＯＰＣ−２００００、ＬＹ２０６７６３）、リファマイシン、マクロライド（例えば、アジトロマイシン、クラリトロマイシン、エリスロマイシン、オレアンドマイシン、ロキタマイシン、ロサラマイシン、ロキシトロマイシン、トロレアンドマイシン）、ケトロイド（例えば、テリスロマイシン、セトロマイシン）、クーママイシン、リンコサミド（例えば、クリンダマイシン、リンコマイシン）およびクロラムフェニコールが挙げられる。
【０５９８】
典型的な抗ウイルス剤は、硫酸アバカビル、アシクロビルナトリウム、塩酸アマンタジン、アンプレナビル、シドホビル、メシル酸デラビルジン、ジダノシン、エファビレンズ、ファムシクロビル、ホミビルセンナトリウム、ホスカルネットナトリウム、ガンシクロビル、硫酸インジナビル、ラミブジン、ラミブジン／ジドブジン、メシル酸ネルフィナビル、ネビラピン、リン酸オセルタミビル、リバビリン、塩酸リマンタジン、リトナビル、サクイナビル、メシル酸サクイナビル、スタブジン、塩酸バラシクロビル、ザルシタビン、ザナミビル、およびジドブジンを包含する。
【０５９９】
限定するものではないが、抗アメーバ剤または抗原虫剤の例として、アトバクオン、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、メトロニダゾール、塩酸メトロニダゾール、およびイセチオン酸ペンタミジンが挙げられる。駆虫薬は、メベンダゾール、パモ酸ペランテル、アルベンダゾール、イベルメクチンおよびチアベンダドールより選択される少なくとも１つとすることができる。典型的な抗真菌剤は、アンホテリシンＢ、アンホテリシンＢコレステリルサルファート複合体、アンホテリシンＢ脂質複合体、アンホテリシンＢリポソーム、フルコナゾール、フルシトシン、微小グリセオフルビン、超微小グリセオフルビン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ニスタチン、および塩酸テルビナフィンより選択され得る。限定するものではなく、抗マラリア剤の例として、塩酸クロロキン、リン酸クロロキン、デキシサイクリン、硫酸ヒドロキシクロロキン、塩酸メフロキン、リン酸プリマキン、ピリメタミン、およびスルファドキシンを含むピリメタミンが挙げられる。抗結核剤は、限定されるものではなく、クロファジミン、シクロセリン、ダプソン、塩酸エタンブトール、イソニアジド、ピラジンアミド、リファブチン、リファンピン、リファペンチン、および硫酸ストレプトマイシンを包含する。
【０６００】
上記されるように、本発明は、ＰＫＣ−θ阻害剤と、関連のあるさらなる薬剤とを一緒に投与することを包含する。ＰＫＣ−θ阻害剤と他の薬剤とを投与することを含む実施態様において、その組み合わせ中の活性剤の投与量はそれだけで有効量を構成してもよく、さらなる薬剤が患者にとって治療的または予防的利益をさらに増強させてもよいと認識されるであろう。あるいはまた、ＰＫＣ−θ阻害剤およびさらなる薬剤は一緒になってがん（例、転移性がん）を予防または治療するのに効果的な量を構成してもよい。効果的な量は、例えば投与期間および回数、投与方法、製剤等を含む、特定の治療計画の文脈において定められ得ることも理解されよう。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は、所望によりがん治療剤は、ルーチンスケジュールで投与される。あるいはまた、がん治療剤は徴候が現れた時に投与されてもよい。本明細書中にて使用される「ルーチンスケジュール」とは所定の指定された期間をいう。ルーチンスケジュールは、スケジュールが予め決められている限りは、長さが同じまたは異なる期間を包含してもよい。例えば、ルーチンスケジュールは、ＰＫＣ−θ阻害剤を、毎日、隔日、三日毎、四日毎、五日毎、六日毎、毎週、毎月、または数日または数週間の間に定められた回数で、二ヶ月毎、三ヶ月毎、四ヶ月毎、五ヶ月毎、六ヶ月毎、七ヶ月毎、八ヶ月毎、九ヶ月毎、十ヶ月毎、十一ヶ月毎、十二ヶ月毎等に投与することを含んでもよい。あるいはまた、所定のルーチンスケジュールは、ＰＫＣ−θ阻害剤と、がん治療剤とを、第一週の間は毎日でも同時に投与し、つづいて数ヶ月にわたって毎月投与し、つづいてその後は三ヶ月毎に投与することを包含してもよい。適切なスケジュールが特定の日の投与を含むことが早めに決定される限り、個々のいずれの組み合わせもルーチンスケジュールによってカバーされる。
【０６０１】
さらには、本発明は、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；または（ｉｖ）ＥＭＴの減少、阻害、消滅、または予防、および／またはＰＫＣ−θ過剰発現細胞（例、ＣＳＣ）の（ｖ）ＭＥＴの強化、および／または悪性腫瘍、特に、転移性がんの予防または治療のための医薬組成物であって、ＰＫＣ−θ阻害剤を含み、所望により悪性腫瘍の治療に有用ながん治療薬を含んでもよい医薬組成物を提供する。本発明の製剤は医薬的に許容される溶液にて投与され、それは慣用的に医薬的に許容される塩の濃縮物、緩衝剤、保存剤、適合性担体、アジュバントおよび任意の治療成分を含有してもよい。治療されるべき特定の状態に応じて、該製剤は全身的にまたは局所的に投与されてもよい。製剤化または投与の技法は、「Remingtons Pharmaceutical Science」, Mack Publishing Co., Easton, Pa, 最終版に記載されている。適切な投与経路は、例えば、経口、経直腸、経粘膜、または腸管投与；非経口的デリバリー、例えば筋肉内、皮下、髄内注射、ならびに髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内または眼内注射を包含する。注射では、本発明の活性剤または薬物は、水溶液に、適切には生理学的に適合しうるバッファー、例えばハンクス溶液、リンガー溶液または生理食塩水のバッファーに処方されてもよい。経粘膜投与の場合、通過させるバリアーに適する浸透剤がその製剤に使用される。かかる浸透剤は、当該分野にて周知である。
【０６０２】
薬物は、当該分野にて周知の医薬的に許容される担体を用いて、経口投与に適する剤形に容易に処方され得る。かかる担体は、治療されるべき患者が経口摂取できるように、錠剤、ピル、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等などの剤形に処方され得る。これらの担体は、糖類、澱粉、セルロースおよびその誘導体、モルト、ゼラチン、タルク、硫酸カルシウム、植物油、合成油、ポリオール、アルギン酸、リン酸緩衝溶液、乳化剤、等張食塩水およびピロゲン不含水より選択されてもよい。
【０６０３】
非経口投与用の医薬製剤は活性化合物の水溶液形態の水溶液を包含する。さらには、活性化合物の懸濁液は適切な油性懸濁注射液として調製されてもよい。適切な親油性溶媒またはビヒクルとして、ゴマ油などの脂肪油、またはオレイン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、あるいはリポソームが挙げられる。水性懸濁注射液は、その懸濁液の粘度を増大させる物質、例えばカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランを含有してもよい。所望により、該懸濁液はまた、適切な安定化剤または高濃度溶液の調製を可能とするのに該化合物の溶解度を増大させる物質を含有してもよい。
【０６０４】
経口投与用の医薬調製物は、活性化合物と固形賦形剤とを合わせ、その得られた混合物を所望により粉砕してもよく、適切な補助剤を添加した後に、その顆粒混合物を所望によって加工処理することにより得られ、錠剤または糖衣錠のコアを得ることができる。適切な賦形剤は、特に、糖類（ラクトース、シュークロース、マンニトールまたはソルビトールを含む）などの充填剤；セルロース調製物、例えば、トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、イモ澱粉、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などである。所望により、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、あるいはアルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどのその塩などの崩壊剤が添加されてもよい。かかる組成物はどのような調剤方法により調製されてもよいが、すべての方法は１または複数の上記される薬物を１または複数の必須成分で構成される担体と合わせるに至る工程を含む。一般に、本発明の医薬組成物は、自体公知の方法により、例えば、従前の混合工程、溶解工程、造粒工程、糖衣錠製造工程、粉砕工程、乳化工程、カプセル化工程、封入工程または凍結乾燥工程により製造されてもよい。
【０６０５】
糖衣錠コアは適切にコーティングされて提供される。このために、所望によりアラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコールまたは二酸化チタン、ラッカー溶液、および適当な有機溶媒または混合溶媒を含有してもよい、糖類の濃縮溶液が用いられる。活性化合物の用量の種々の組み合わせを同定するのに、あるいは特徴付けるために、染料または顔料を錠剤または糖衣錠のコーティング剤に添加してもよい。
【０６０６】
経口的に使用され得る医薬は、ゼラチンでできた押し込め嵌め式カプセル、ならびにゼラチンと、グリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤とでできたソフト密封カプセルを包含する。押し込め嵌め式カプセルは、活性成分を、ラクトースなどの充填剤、澱粉などの結合剤、またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤と一緒に含有し、所望により安定化剤を含有してもよい。ソフトカプセルの場合、活性な化合物を、脂肪油、流動パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールなどの適当な液体に溶解または懸濁させてもよい。さらには、安定化剤が添加されてもよい。
【０６０７】
本発明の薬物の剤形はまた、放出制御のために具体的に設計された注射用または移植用制御放出装置、あるいはこの方式にてさらに作用するように修飾された他の形態の移植装置を包含してもよい。本発明の薬剤の制御放出は、該薬剤を、例えば、疎水性ポリマー、例えばアクリル酸樹脂、ワックス、高級脂肪族アルコール、ポリ乳酸およびポリグリコール酸、ならびにヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの特定のセルロース誘導体でコーティングすることにより達成されてもよい。さらには、他のポリマーマトリックス、リポソームまたはミクロスフェアを用いることで制御放出を達成してもよい。
【０６０８】
本発明の薬物は医薬的に適合しうる対イオンとの塩として提供されてもよい。医薬的に適合しうる塩は、限定されるものではないが、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸等を含む、多種の酸で形成されてもよい。塩は対応する遊離塩基形態よりも水性または他のプロトン性溶媒により溶けやすい。
【０６０９】
本発明の方法にて使用されるいずれの化合物についても、治療的に効果的な用量はまず細胞培養アッセイより評価され得る。例えば、一用量は、細胞培養にて決定されるように、ＩＣ５０（例えば、ＰＫＣ−θポリペプチドの活性において最大阻害の半分を達成する、活性剤の濃度）を含む一の血中濃度の範囲を達成するように動物実験にて処方され得る。かかる情報を用いてヒトにて有用な用量をより正確に決定できる。
【０６１０】
かかる薬物の毒性および治療的効能は、例えば、ＬＤ５０（母集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（母集団の５０％に治療上効果的な用量）を決定するために細胞培養体または実験動物における標準的医薬操作により決定され得る。毒性と治療的効能の間の用量割合は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の割合で表すことができる。大きな治療指数を示す化合物が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物実験より得られるデータは、ヒトにて用いるための用量の範囲を処方するのに使用され得る。かかる化合物の用量は、毒性がほとんどない、または全くないＥＤ５０を含む、血中濃度の範囲内にあるのが好ましい。用量は、使用される剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変化してもよい。正確な処方、投与経路および用量は患者の状態を考慮して個々の医者により選択され得る（例えば、Finglら、1975, 「The Pharmacological Basis of Therapeutics」、Ch. 1 p1を参照のこと）。
【０６１１】
別法として、化合物は、全身投与よりもむしろ局所的に、例えば化合物を直接的に組織（好ましくは皮下または大網組織）に注射することを介して、時にはデポーまたは徐放性製剤にて、投与されてもよい。
【０６１２】
さらには、薬物は標的薬物デリバリーシステムにて、例えば細胞または組織を適切に標的とし、その細胞または組織により選択的に吸収される粒子にて投与されてもよい。ある実施態様において、ＰＫＣ−θ阻害剤は、リポソーム、ミセル、デンドリマー、生分解性粒子、人工ＤＮＡナノ構造物、脂質をベースとするナノ粒子、および炭素または金ナノ粒子からなる群より選択されるビヒクルに含有されるか、そうでなければ一緒にアソシエートされる。この型の典型例において、ビヒクルは、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）；ポリマーポリ（乳酸−共同−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）；ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、およびＰＬＡ−ＰＥＧコポリマー、あるいはそれらのいずれかの組み合わせからなる群より選択される。
【０６１３】
局所投与または選択的摂取の場合には、薬剤の効果的な局所濃度は血漿中濃度と関連付けられてはならない。
【０６１４】
本発明が容易に理解され、実効されるように、特に好ましい実施態様を以下の実施例に記載するが、これらは何ら本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０６１５】
実施例１
ＰＫＣ経路：ＥＭＴおよびＣＳＣ
ＰＫＣ経路は、種々の細胞アッセイを利用して、ＥＭＴおよびＣＳＣと関連付けられる。第１に、ＰＫＣ経路インデューサーであるＰＭＡは、形態学的変化により観察されるように、最も大きなＥＭＴ変化を惹起し（図１ＡおよびＢ）、ＥＭＴマーカー−ラミニン−５’細胞内染色（図１Ｂ）を、そしてＭＣＦ−ＩＭ実験にて創傷治癒（移動アッセイ）（図１Ｃ）を生じさせる。第２に、ＰＫＣはＭＣＦ−ＩＭおよび基底／転移実験において細胞質および核の両方で活性である（図１Ｄ）。第３に、ＰＭＡによるＰＫＣ経路の誘発はフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）分析（図１ＥおよびＦ）、乳腺球状塊アッセイ（図１Ｇ）およびＣＳＣ−誘発性遺伝子の転写物アッセイ（図１Ｈ）およびミクロＲＮＡ（図１Ｉ）により観察されるようにＣＤ４４ｈｉｇｈ／ＣＤ２４ｌｏｗ−ＣＳＣ系細胞の生成をもたらす。
【０６１６】
これらの結果は全体としてＰＫＣ経路がＥＭＴおよびＣＳＣの形成に重要であることを示す。
【０６１７】
実施例２
ＰＫＣ活性の阻害がＥＭＴおよびＣＳＣ形成を減少させる
広域スペクトルＰＫＣ経路阻害剤は、形態（図２Ａ）、ＦＡＣＳ（図２Ｂ＆Ｃ）、乳腺球状塊アッセイ（図２Ｄ＆Ｅ）およびＣＳＣ誘発性遺伝子の転写分析（図２Ｆ＆Ｇ）によって示されるように、ＭＣＦ−ＩＭ実験にて、および基底転移性実験（図２Ｉ、Ｊ＆Ｋ）においても、ＥＭＴおよびＣＳＣ経路の阻害をもたらす。反対に、従来のＰＫＣ阻害剤であるＧｏ６９７６を用いるプレインキュベーションはＰＭＡ誘発性ＥＭＴ様形態変化またはＣＳＣ形成を防止しなかった（図２Ｃ＆Ｈ）。
【０６１８】
これらの結果は全体としてＰＫＣ活性がＥＭＴおよびＣＳＣ形成に不可欠であることを示す。
【０６１９】
実施例３
ＰＫＣ−θシグナル伝達および核効果の阻害はＥＭＴおよびＣＳＣの除去をもたらす
ＰＫＣ−θ特異ペプチド阻害剤は、形態（図３Ａ）、ＦＡＣＳ（図３Ｂ）および転写分析（図３Ｃ）によって示されるように、ＭＣＦ−ＩＭ実験にてＥＭＴおよびＣＳＣを除去する。ＰＫＣ−βではなく、ＰＫＣ−θのノックダウンは、ＭＣＦ−ＩＭ実験において、ＥＭＴおよびＣＳＣの阻害をもたらす（図３Ｄ、Ｅ＆Ｆ）。ＰＫＣ−θ  ＮＬＳ（Nuclear Localization Signal）変異体の過剰発現はＰＫＣ−θの核への侵入を減少させ、したがってＰＫＣ−θ野生型ベクターの効果と比べて、ＭＣＦ−ＩＭ実験において、ＥＭＴおよびＣＳＣ効果の減少をもたらす（図３Ｇ、ＨおよびＩ）。
【０６２０】
これらの結果は全体としてＰＫＣ−θがＥＭＴおよびＣＳＣ形成の最上の調節剤であることを示す。さらに、核ＰＫＣ−θはＥＭＴおよびＣＳＣ形成に重要である。
【０６２１】
実施例４
核ＰＫＣ−θのＣＳＣでの誘発性遺伝子プロモータとの直接結合
クロマチン免疫沈降（ＣｈＩＰ）アッセイのＰＫＣ−θは、ＰＫＣ−θが種々のＣＳＣ実験にてＣＳＣ誘発性遺伝子ＣＤ４４のプロモータと直接結合することを示した（図４Ａ）。ＰＫＣ−θの活性形態（ＰＫＣ−θホスホ）は、ＭＣＦ−ＩＭ実験において、ＣＳＣ誘発性遺伝子−ｕＰＡＲおよびＣＤ４４でクロマチンと結合し（図４Ｂ＆Ｃ）、この活性形態は活性な転写マーカＲＮＡポリメラーゼ−ＩＩ（Ｐｏｌ  ＩＩ）に存在する（図４Ｄ）。ＰＫＣ阻害剤およびＰＫＣ−θのノックダウンがＰＫＣ−θのＣＤ４４遺伝子プロモータとの結合の減少をもたらす。
【０６２２】
これらの結果は全体として、活性なＰＫＣ−θがＥＭＴおよびＣＳＣ形成の遺伝子外調節剤であることを示す。
【０６２３】
実施例５
核活性ＰＫＣ−θ：浸潤性乳がんのマーカー
乳がん進行におけるＰＫＣ−θの臨床的関連が、正常な乳房組織および患者より由来の浸潤性乳がんでのＰＫＣ−θタンパク質発現を調査することにより分析された。健康な個体から由来の乳房組織と比べた場合に、ＥＲ／ＰＲ＋／Ｈｅｒ−２−のサブタイプの浸潤性がんにてＰＫＣ−θの強い細胞質発現が観察された。加えて、ＥＲ／ＰＲ＋／Ｈｅｒ−２−のサブタイプの浸潤性がんは活性なＰＫＣ−θのかすかな核染色があった（図５）。あらゆる型の乳がんが、活性なＰＫＣ−θについて弱い細胞質免疫反応性を示し、受容体の状態に関係なく有糸分裂中の乳がん細胞に見られる強い核染色を示した。
【０６２４】
これらの結果は全体として、核中の活性なＰＫＣ−θが侵襲性／浸潤性乳がんの診断的マーカであることを示す。
【０６２５】
実施例６
ＡＴＰ競合性のＰＫＣ−θ特異的阻害剤である化合物２７がＭＣＦ−ＩＭにおいてＣＳＣ形成を妨げ、ＰＫＣ−θを介するシグナル伝達がＮＦ−κＢ活性の必須条件である
新規で、高い選択性のあるＡＴＰ競合性のＰＫＣ−θ特異的阻害剤である化合物２７（Ｃ２７）（Jimenez, J.M.ら、2013. 自己免疫疾患の治療用の選択的タンパク質キナーゼＣシータ（ＰＫＣシータ）阻害剤の設計および最適化（Design and optimization of selective protein kinase C theta（PKC theta） inhibitors for the treatment of autoimmune diseases）  Journal of Medicinal Chemistry 56: 1799-1810）が、インビトロＰＫＣ−θ活性アッセイ（図６Ａ）およびＣ２７で前処理したＭＣＦ−ＩＭより得られる核および細胞抽出物（図６ＢおよびＣ）の両方においてＰＫＣ−θ活性を除去した。Ｃ２７はまた、ＦＡＣＳ（図６Ｃ）およびＣＳＣ誘発性遺伝子の転写（図６Ｄ）で測定されるようにＣＳＣ形成を除去した。さらには、Ｃ２７はｐ５０およびｐ６５核活性を有意に減少させ（図６ＥおよびＦ）、ＰＫＣ−θも間葉状態にてＮＦ−κＢタンパク質にシグナルを伝達していることを示唆する。
【０６２６】
ＭＣＦ−ＩＭからの核抽出物の免疫ブロット分析を抗ホスホｐ６５（セリン４６８）抗体を用いて行った。セリン４６８でのｐ６５リン酸化（ｐ６５−Ｐ−４６８）はつづいて刺激を誘発し、このリン酸化はＣ２７の存在下で阻害された（図６Ｇ）。しかしながら、ｐａｎ−ｐ６５抗体での免疫ブロットはＣ２７もまた、核中にて上皮および間葉の両方の状態でｐ６５の豊かさを阻害することを明らかにした（図６Ｈ）。他方で、ｐ６５の広範囲に及ぶ蓄積がＭＣＦ−ＩＭより誘導されたＣ２７処理の上皮および間葉細胞の細胞質フラクションにて観察された（図６Ｉ）。集合的には、このことは、ＰＫＣ−θ活性が、場合によっては、ｐ６５の核中での維持、かつこの転写因子の鍵となる活性部位（セリン４６８）でのそのリン酸化の両方に全体的に必要であることを示唆する。
【０６２７】
ＭＣＦ−ＩＭ核抽出物でＣｈＩＰの途中にあるＰＫＣ−θは内因性ＰＫＣ−θとｐ６５またはＲＮＡ  Ｐｏｌ  ＩＩとの間の結合を示した（図５Ｊ）。かくして、核ＰＫＣ−θは、間葉状態にてＮＦ−κＢおよび活性な転写複合体の近傍に存在する。
【０６２８】
全体として、これらのデータは、ＡＴＰ競合性のＰＫＣ−θ特異的阻害剤の化合物２７がＣＳＣ形成を妨げ、活性なＰＫＣ−θが活性なＮＦ−κＢファミリーメンバーと共同して作用することを示唆する。
【０６２９】
実験操作
細胞培養およびＣＳＣのＮＣＳＣからの分離
接着性ヒト哺乳動物腺がんＭＣＦ−７およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、低グルコースＤＭＥＭ（Gibco）中で、１０％ＦＣＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび０.１％ＰＳＮ抗生物質を補足して培養した。細胞を０.６５ｎｇ／ｍｌのホルボール１２−ミリスチン酸１３−アセタート（ＰＭＡ）（Sigma-Aldrich）で、またはｎｇ／ｍｌのＴＧＦ−β（R&D systems）で指定される回数刺激した。ビスインドリルマレイミド−Ｉ（Calbiochem）またはＰＫＣ−θペプチド阻害剤（Calbiochem）の研究のために、ＭＣＦ−７細胞を刺激する１時間前に、細胞を、各々、１μＭまたは３０μＭの阻害剤で前処理した。ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞では、該細胞を、各々、４μＭまたは３０μＭのビスインドリルマレイミド−ＩまたはＰＫＣ−θペプチド阻害剤で処理した。
【０６３０】
ＣＳＣをＣＳＣ以外の（ＮＣＳＣ）から分離するのに、抗−ＣＤ４４−ＡＰＣ（５５９９４２、BD Biosciences）および抗−ＣＤ２４−ＰＥ抗体（５５５４２８、BD Biosciences）を用いてヘキスト（Hoechst）３３２５８と一緒に染色した単細胞の懸濁液にて蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）操作を行い、細胞生存率をモニター観察した。この操作を通して使用されるのに、ＣＳＣは少数のＣＤ４４ｈｉｇｈ／ＣＤ２４ｌｏｗにより定義され、それに対してＮＣＳＣは細胞母集団の残りで定義される。
【０６３１】
乳腺球状塊の培養培地成分をStem Cell Technologiesより購入し、乳腺球状塊アッセイをその製造業者がガイドラインで推奨するように実施した。簡単には、４０,０００個の細胞／２ｍｌの細胞希釈液を調製し、次に２ｍｌの細胞を６ウェルの超低接着性平坦底プレート（Costar）に播種した。６０μｍよりも大きな乳腺球状塊を７日目にウェル当たりで計数し、写真を撮影した。
【０６３２】
オリンパス蛍光ＩＸ７１顕微鏡（Olympus）を用い、ｘ４倍率（創傷治癒アッセイ）またはｘ１０倍率（ＥＭＴ）で細胞を検視する位相差顕微鏡観察を行い、画像をＤＰＣｏｎｔｒｏｌｌｅｒソフトウェア（2002 Olympus Optical Co. LTD）を用いて取り、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＳ３（Adobe Systems Inc.）を用いて分析した。スキャンを１０μｍのスケールバーで取った。
【０６３３】
創傷治癒アッセイ
ＭＣＦ−７細胞の単層を滅菌処理したプラスチック製チップで傷を付けた。細胞をＰＢＳで２回、そしてＤＭＥＭで１回洗浄した。皿上の各ウェルに参照となる符号を設け、０時点での画像を顕微鏡で撮った。細胞をＰＭＡ（０.６５ｎｇ／ｍｌ）で６０時間にわたって処理し、適合する領域の第２の画像を撮った。創傷した単層の両面の端部を近づけ、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＳ３（Adobe Systems Inc.）を用いて重ね合わせた。
【０６３４】
プラスミド
各局在化シグナル（ＮＬＳ）を全長ＰＫＣ−θ野生型遺伝子配列の範囲内で変異させ、上記されるようにＣ−末端ＨＡ−タグでｐＴｒａｃｅｒ−ＣＭＣベクターにフレームにてクローンさせた（Sutcliffeら、2012. Front Immunol. 3: 260）。
【０６３５】
プライマー
ヒトＴａｑＭａｎ（登録商標）プライマーのセット：ＣＤ４４、Ｈｓ００１５３３０４、ＣＤ２４、Ｈｓ００２７３５６１、ｕＰＡＲ、Ｈｓ００１８２１８１、ラミニン−５、Ｈｓ００１９４３３３、Ｚｅｂ−１、Ｈｓ００６１１０１８、フィブロネクチン、Ｈｓ００４１５００６およびインテグリン−β、Ｈｓ００１６８４５８（Applied Biosystems）を用いた。ＳＹＢＲグリーンリアルタイムＰＣＲに使用されるプライマーは：Ｚｅｂ１（センス：５’−GTGCTGTAAGTGCCATTTCTCAGTA−３’およびアンチセンス：５’−CAAGAGACAAATCAACAAATGCTAGTT−３’）およびシクロフィリンＡ（センス：５’−CTCCTTTGAGCTGTTTGCAG−３’およびアンチセンス：５’−CACCACATGCTTGCCATCC−３’）である。
【０６３６】
トランスフェクション条件
ヒトＰＫＣ−θｓｉＲＮＡ（ｓｃ−３６２５２）、ｐ５０ｓｉＲＮＡ（ｓｃ−４４２１１）およびｐ６５ｓｉＲＮＡ（ｓｃ−４４２１２）をSanta Cruz Biotechnologiesより購入し、１０ｎＭ  ｓｉＲＮＡでのフォワードトランスフェクションはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Invitrogen）を用いて実施された。
【０６３７】
全ＲＮＡ単離および定量的リアルタイムＰＣＲ分析
全ＲＮＡはＴＲＩｚｏｌ（登録商標）試薬（Invitrogen）を用いて抽出され、ｃＤＮＡの第１鎖はＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩＩＲＮａｓｅＨ−逆転写酵素キット（Invitrogen）を用いて合成された。ＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイおよびＳＹＢＲグリーンリアルタイムＰＣＲは上記されるように実施された（Sutcliffeら、2009. Molecular and Cellular Biology. 29: 1972-86）。ミクロＲＮＡアッセイはＴａｑＭａｎ（登録商標）ミクロＲＮＡ逆転写キット（ＡＢＩ４３６６５９６）で行われ、データをSutcliffeら（2010、Molecular Cell. 41: 704-719）にて以前に記載されるようにＲＮＵ６Ｂに正規化した。
【０６３８】
ＣｈＩＰおよび配列ＣｈＩＰアッセイ
ＣｈＩＰバッファーをUpstate Biotechnologyより購入し、Upstate Biotechnologyによって供給されるプロトコルに従って、以前に記載されるようにＣｈＩＰアッセイを行った（Sutcliffeら、2011. Molecular Cell. 41: 704-719）。使用される抗体は：抗ＰＫＣ−θ（Santa Cruz、ｓｃ−２１２）、抗ＰＫＣ−θホスホｓ６９５（Abcam、ａｂ７６５６８）およびＰｏｌ  ＩＩ  ｃ−２１（Abcam、ａｂ８１７）であった。ＲＴ−ＰＣＲに使用されるプロモータプライマーは、ヒトＣＤ４４（Ｆｗｄ：TGAGCTCTCCCTCTTTCCAC、Ｒｅｖ：TTGGATATCCTGGGAGAGGA）、ｕＰＡＲ（Ｆｗｄ：GGGAAGCAAAGCAAGGGTTA、Ｒｅｖ：GTTTTGTCAGGAGGGATACTGG）およびＩＬ−６（Ｆｗｄ：CTCACCCTCCAACAAAGATTT、Ｒｅｖ：CAGAATGAGCCTCAGACATC）であった。連続的ＣｈＩＰアッセイは、Sutcliffeら（2011. Molecular Cell. 41: 704-719）によって以前に記載されるようにして行われた。
【０６３９】
ＰＫＣ活性アッセイ
ＰＫＣをEnzo Life Sciences（ＤＩ−ＥＫＳ−４２０Ａ）より購入し、その活性アッセイを以前に記載されるように製造業者のプロトコルに従って行った（Sutcliffe、2012  前掲）。
【０６４０】
免疫蛍光法
免疫組織化学的検査を標準プロトコルに従ってボンド自動システム（Vision Biosystems）を用いて行った。簡単には、５μＭの組織セクションをワックス除去し、グレーデッドアルコールで再水和させ、抗ＰＫＣ−θまたは抗ＰＫＣ−θホスホ抗体を用いて別々に染色した（０５３９の記載に従う）。ｐＨ８で２８分間熱回復（heat retrieval）を用いた。クロモゲン・ファスト・レッド（Chromogen Fast Red）（Leica Biosystems）およびＤＡＫＯエンビジョン（Envision）キットを用いてシグナルを可視化した。ヘマトキシリン対比染色を用いて核を可視化した。各操作において、陽性および陰性のアイソタイプと適合した対照を各スライドに含め、虚偽の陽性染色のないことを保証した。
【０６４１】
細胞内染色操作を、Sutcliffeら、2011. Molecular Cell. 41: 704-719において以前に記載されるようにして行った。
【０６４２】
データ解析
データをマイクロソフトエクセル（Microsoft）を用いて解析し、プリズム（Prism）（version 5.0、GraphPad software）を用いてグラフを作成した。
【０６４３】
実施例６についてのＰＫＣ活性アッセイ
ＰＫＣ−θおよびＰＫＣ−β活性アッセイ（Enzo Life Sciences；ＤＩ−ＥＫＳ−４２０Ａ）を、製造業者のプロトコルに従って、以前に（Sutcliffeら、2012. Chromatinized Protein Kinase C-theta: Can It Escape the Clutches of NF-kappaB? Front Immunol 3: 260）にて記載されるようにして行った。
【０６４４】
実施例６についてのＮＦ−κＢ活性アッセイ
トランスＡＭ  ＮＦ−κＢファミリーキットをＮＦ−κＢ活性アッセイに用いた（４３２９６、Active Motif）。製造業者のガイドラインに従って、アッセイを行った。ＭＤＡ−ＭＢ２３１またはＭＣＦ−ＩＭ（全細胞から由来）からのタンパク質（５μｇ）、核、細胞膜抽出物をこのアッセイのために三重重複して用いた。Ｒａｊｉ核抽出物を陽性対照として用いた。野生型および変異したコンセンサスオリゴヌクレオチドも、各々、陰性および陽性対照として使用された。
【０６４５】
実施例６についてのイムノブロット分析
イムノブロット分析を、製造業者のプロトコルに従って、以前に（Raoら、2003. c-Rel is required for chromatin remodeling across the IL-2 gene promoter. Journal of immunology 170: 3724-3731）に記載されるように、抗ＰＫＣ−θ（ｓｃ−２１２、Santa Cruz）、抗ｐ６５（ａｂ７９７０、Abcam）、抗ｐ６５ホスホ（ｓｅｒ−４６８）（３０３９、Cell Signaling）、抗ｐ６５ホスホ（ｓｅｒ−５３６）（３０３１、Cell Signaling）およびＲＮＡ  Ｐｏｌ  ＩＩ（ｃ−２１）（ａｂ８１７、Abcam）抗体を用いて行った。
【０６４６】
本明細書に引用されているあらゆる特許、特許出願および刊行物の開示は、その全内容が出典を明示することにより本明細書に組み込まれるものとする。
【０６４７】
本明細書に記載のいずれの参考文献の引用も自認するものと解釈されるべきではなく、かかる文献は本願に対する「先行文献」として利用可能である。
【０６４８】
明細書を通して本発明の目的はその好ましい実施態様に記載されており、かかる態様は本発明をいずれか１つの実施態様または特定の特徴の収集体に限定するものではない。従って、当業者は、本発明の開示を考慮して、種々の修飾および変形を本発明の範囲から逸脱することなく例示される特定の実施態様に施すことができる。かかる修飾および変形はすべて添付した特許請求の範囲に含まれるものとする。
【図１Ａ】
2016537400.tif 000120
【図１Ｂ】
2016537400.tif 000121
【図１Ｃ】
2016537400.tif 000122
【図１Ｄ】
2016537400.tif 000123
【図１Ｅ】
2016537400.tif 000124
【図１Ｆ】
2016537400.tif 000125
【図１Ｇ】
2016537400.tif 000126
【図１Ｈ】
2016537400.tif 000127
【図１Ｉ】
2016537400.tif 000128
【図２Ａ】
2016537400.tif 000129
【図２Ｂ】
2016537400.tif 000130
【図２Ｃ】
2016537400.tif 000131
【図２Ｄ】
2016537400.tif 000132
【図２Ｅ】
2016537400.tif 000133
【図２Ｆ】
2016537400.tif 000134
【図２Ｇ】
2016537400.tif 000135
【図２Ｈ】
2016537400.tif 000136
【図２Ｉ】
2016537400.tif 000137
【図２Ｊ】
2016537400.tif 000138
【図２Ｋ】
2016537400.tif 000139
【図３Ａ】
2016537400.tif 000140
【図３Ｂ】
2016537400.tif 000141
【図３Ｃ】
2016537400.tif 000142
【図３Ｄ】
2016537400.tif 000143
【図３Ｅ】
2016537400.tif 000144
【図３Ｆ】
2016537400.tif 000145
【図３Ｇ】
2016537400.tif 000146
【図３Ｈ】
2016537400.tif 000147
【図３Ｉ】
2016537400.tif 000148
【図４Ａ】
2016537400.tif 000149
【図４Ｂ】
2016537400.tif 000150
【図４Ｃ】
2016537400.tif 000151
【図４Ｄ】
2016537400.tif 000152
【図４Ｅ】
2016537400.tif 000153
【図５】
2016537400.tif 000154
【図６Ａ】
2016537400.tif 000155
【図６Ｂ】
2016537400.tif 000156
【図６Ｃ】
2016537400.tif 000157
【図６Ｄ】
2016537400.tif 000158
【図６Ｅ】
2016537400.tif 000159
【図６Ｆ】
2016537400.tif 000160
【図６Ｇ】
2016537400.tif 000161
【図６Ｈ】
2016537400.tif 000162
【図６Ｉ】
2016537400.tif 000163
【図６Ｊ】
2016537400.tif 000164
【手続補正書】
【提出日】平成28年5月19日(2016.5.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2016537400000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成28年5月19日(2016.5.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の（ｉ）形成；（ｉｉ）増殖；（ｉｉｉ）維持；（ｉｖ）ＥＭＴ；または（ｖ）ＭＥＴの少なくとも１つを改変する方法であって、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、形成、増殖、維持、ＥＭＴまたはＭＥＴを調節する量のＰＫＣ阻害剤と接触させることを含むか、接触させることからなるか、あるいは本質的に接触させることからなり、ここでＰＫＣ−θ過剰発現細胞ががん幹細胞（ＣＳＣ）である、方法。
【請求項２】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の形成を阻害する量のＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の増殖を阻害する量のＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＥＭＴを阻害する量のＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞を、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞のＭＥＴを刺激または誘発する量のＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ＣＳＣが乳房、前立腺、肺、膀胱、膵臓、結腸、黒色腫、肝臓または神経膠腫のＣＳＣである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＣＳＣが乳房ＣＳＣである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
乳房ＣＳＣが乳房上皮ＣＳＣである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
乳房上皮ＣＳＣが乳管上皮ＣＳＣである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＣＳＣが多能性幹細胞マーカーであるＯｃｔ４またはＳｏｘ２の発現を減じるかまたは抑止する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＳＣが、ＡＢＣＢ５、ＡＬＤＨ１、ＡＢＣＧ２、α６インテグリン、α２β１インテグリン、βカテニン活性、ＣＤ１５、ＣＤ１３、ＣＤ２０、ＣＤ２４、ＣＤ２６、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ９０、ＣＤ１３３、ＣＤ１６６、ＣＤ２７１、ｃ−Ｍｅｔ、ヘッジホッグ−Ｇｌｉ、ネスチン、ＣＸＣＲ４、ＬＧＲ５、トロップ２およびノダル−アクチビンより選択される１または複数のＣＳＣマーカーを発現する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ＣＳＣが、ＡＬＤＨ１、ＣＤ２４、ＣＤ４４、ＣＤ９０、ＣＤ１３３、ヘッジホッグ−Ｇｌｉ、α６インテグリンより選択される１または複数のＣＳＣマーカーを発現する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＣＳＣがＣＤ２４およびＣＤ４４（例、ＣＤ４４ｈｉｇｈ、ＣＤ２４ｌｏｗ）を発現する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＰＫＣ−θ阻害剤が選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＰＫＣ−θ阻害剤が非選択的ＰＫＣ−θ阻害剤である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、ＰＫＣ−θ遺伝子の発現を減らすか、あるいはその遺伝子の発現産物のレベルまたは機能的活性を減じる、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、ＰＫＣ−θのリガンド結合部位の少なくとも１つの活性を減じるか、または阻止することを含め、その機能を阻害する、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞におけるＰＫＣ−θ遺伝子の過剰発現を検出することをさらに含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の核中にあるＰＫＣ−θまたはその増加量を検出することをさらに含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞中でのＰＫＣ−θとＣＤ４４またはｕＰＡＲのプロモータとの結合を検出することをさらに含む、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞をＰＫＣ−θ阻害剤と接触させる前に、ＰＫＣ−θ過剰発現細胞中でのＰＫＣ−θとクロマチンとの結合を検出することをさらに含む、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ＣＳＣによる多能性幹細胞マーカーであるＯｃｔ４またはＳｏｘ２の発現の軽減または抑止を検出することをさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の１または複数のＣＳＣマーカー（例えば、請求項１１〜１３のいずれか一項にて定義されるマーカー）の発現を検出することをさらに含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
対象における、ＣＳＣの形成、増殖または維持を阻害することにより、および／またはＣＳＣのＥＭＴを阻害することにより、および／またはＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発することによりがんを治療または予防する方法であって、その対象にＰＫＣ−θ阻害剤を該がんの治療または予防に効果的な量で投与することを含み、ここで該がんがＣＳＣを含む、方法。
【請求項２５】
がんが転移性がんである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
適切には、ＰＫＣ−θ阻害剤を投与する前に、対象が転移性がんに罹患しているか、またはそれを発症する危険があるかを確認することをさらに含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＣＳＣによる多能性幹細胞マーカーであるＯｃｔ４またはＳｏｘ２の発現の軽減または抑止を検出することをさらに含む、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
ＰＫＣ−θ過剰発現細胞の１または複数のＣＳＣマーカー（例えば、請求項１１〜１３のいずれか一項にて定義されるマーカー）の発現を検出することをさらに含む、請求項２４〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
対象における、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖を阻害するか、がんの症状を治療するかまたは改善し、あるいはがんの発症または進行を退行させるかまたは阻害する、少なくとも１種の療法を該対象に共投与することをさらに含む、請求項２４〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
がん療法が、放射線療法、化学療法、幹細胞移植療法、および抗体療法から選択される、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
がんが、乳がん、前立腺がん、肺がん、膀胱がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫がん、肝臓がんまたは神経膠腫がんより選択される、請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
がんが乳がんである、請求項２４〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
対象においてがん（ここで該がんはＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）を治療または予防する方法であって、該対象にＰＫＣ−θ阻害剤をＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するのに、あるいはＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するのに効果的な量で投与することを含む、方法。
【請求項３４】
がんが転移性癌である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ＰＫＣ−θ阻害剤を投与する前に、対象がＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがんに罹患しているか、または該がんを発症する危険があるかを確認することをさらに含む、請求項３３または請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
がんが、乳がん、前立腺がん、肺がん、膀胱がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫がん、肝臓がんまたは神経膠腫がんより選択される、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
がんが乳がんである、請求項３３〜３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）中のＰＫＣ−θ遺伝子の過剰発現を検出することをさらに含む、請求項３３〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
ＣＳＣによる多能性幹細胞マーカーであるＯｃｔ４またはＳｏｘ２の発現の軽減または抑止を検出することをさらに含む、請求項３３〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）中の１または複数のＣＳＣマーカー（例えば、請求項１１〜１３のいずれか一項にて定義されるマーカー）の発現を検出することをさらに含む、請求項３２〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
対象においてがん（ここで該がんはＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）を治療または予防する方法であって、該対象にＰＫＣ−θ阻害剤をＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するのに、あるいはＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するのに効果的な量で、そしてＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害するがんの療法または薬剤を同時に投与し、それによりがんを治療または予防することを含む、方法。
【請求項４２】
がんの療法または薬剤が、放射線療法、手術、化学療法、ホルモン除去療法、アポトーシス促進療法および免疫療法より選択される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
がんの療法または薬剤が、細胞を速やかに分裂させることを標的とするか、または細胞周期または細胞分裂を中断させる、請求項４１または請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
がんが転移性がんである、請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
共投与の前に、対象がＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがんに罹患しているか、または該がんを発症する危険があるかを確認することをさらに含む、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
がんが、乳がん、前立腺がん、肺がん、膀胱がん、膵臓がん、結腸がん、黒色腫がん、肝臓がんまたは神経膠腫がんより選択される、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
がんが乳がんである、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、該対象より得られる腫瘍サンプル（ＣＳＣおよび／またはＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含む）中のＰＫＣ−θ遺伝子の過剰発現を検出することをさらに含む、請求項４１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
ＣＳＣが乳房ＣＳＣである、請求項４１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
ＣＳＣによる多能性幹細胞マーカーであるＯｃｔ４またはＳｏｘ２の発現の軽減または抑止を検出することをさらに含む、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
ＰＫＣ−θ阻害剤を対象に投与する前に、ＣＳＣの１または複数のＣＳＣマーカー（例えば、請求項１１〜１３のいずれか一項にて定義されるマーカー）の発現を検出することをさらに含む、請求項４１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
ＰＫＣ−θ阻害剤と、がん治療剤とが、相乗的に有効な量で投与される、請求項４１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
対象において、ＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＣＳＣを含む転移性がんを治療または予防するのに有用である薬剤を確かめるための方法であって、ここで、調製物（（ｉ）ＰＫＣ−θの少なくとも１の生物学的に活性なフラグメントまたはその変異体もしくは誘導体に対応するアミノ酸配列を含むポリペプチド；または（ｉｉ）ＰＫＣ−θ遺伝子の転写物またはその一部が産生可能であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド；または（ｉｉｉ）ＰＫＣ−θ遺伝子の発現を制御し、レポータ遺伝子に作動可能に連結する遺伝的配列の少なくとも一部（例、転写因子）を含むポリヌクレオチドを含む調製物）を試験剤と接触させ；そのポリペプチド、転写物または転写物の一部、あるいはレポータ遺伝子の発現産物のレベルおよび／または機能的活性が、試験剤を含まない正常なまたは基準となるレベルおよび／または機能的活性と比べて減少することを検出し、その減少が試験剤がＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するのに、またはＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するのに、あるいは転移性がんを治療または予防するのに有用であることを示す、方法。
【請求項５４】
薬剤がＰＫＣ−θとＰＫＣ−θリガンドの間の結合を阻害することを、ＰＫＣ−θとＰＫＣ−θリガンドを薬剤と接触させ、そのＰＫＣ−θとリガンドとの結合を測定することによって決定する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
ＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＣＳＣを含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するための薬剤の製造方法であって、ここで、請求項５３または５４にて記載されるＰＫＣ−θの機能を阻害すると思われる薬剤を試験し、その薬剤が阻害、刺激／誘発または治療／予防の試験で陽性を示すことに基づき、該薬剤を合成する、方法。
【請求項５６】
ＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＣＳＣを含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するための薬剤の効能を改善するのに、薬剤を誘導化することをさらに含み、その誘導化された薬剤が医薬的に許容される担体および／または希釈剤と一緒に処方されてもよい、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
ＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＣＳＣを含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するためのＰＫＣ−θ阻害剤の使用。
【請求項５８】
ＣＳＣの形成、増殖、維持またはＥＭＴを阻害するか、ＣＳＣのＭＥＴを刺激または誘発するか、あるいはＣＳＣを含むがん（例、転移性がん）を治療または予防するための医薬の製造におけるＰＫＣ−θ阻害剤の使用。
【請求項５９】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、リポソーム、ミセル、デンドリマー、生分解性粒子、人工ＤＮＡナノ構造物、脂質をベースとするナノ粒子、および炭素または金ナノ粒子からなる群より選択されるビヒクルに含有されるか、そうでなければ一緒にアソシエートされる、請求項５７または請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）；ポリマーポリ（乳酸−共同−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）；ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、およびＰＬＡ−ＰＥＧコポリマー、あるいはそれらのいずれかの組み合わせからなる群より選択されるビヒクルによって対象に投与される、請求項５９に記載の使用。
【請求項６１】
ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがんの療法または薬剤のがん細胞に対する生物学的効果を強化する方法であって、その必要とする対象にがん療法または薬剤と一緒に有効量のＰＫＣ−θ阻害剤を投与することを含む、方法。
【請求項６２】
がんの療法または薬剤が化学治療薬または放射線療法である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
ＰＫＣ−θ阻害剤と、ＣＳＣ以外の腫瘍細胞の増殖、残存または生存能を阻害するがんの療法または薬剤との、ＣＳＣおよびＣＳＣ以外の腫瘍細胞を含むがんを治療または予防するための使用。
【請求項６４】
ＰＫＣ−θ阻害剤が、所望によりがんの療法または薬剤が、この目的のために医薬として調製または製造される、請求項６３に記載の使用。
【国際調査報告】
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