【手続補正書】
【提出日】平成25年6月27日(2013.6.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌細胞におけるアポトーシスを選択的に誘導する方法であって、
（ａ）前記癌細胞のプロカスパーゼ−３分子を修飾することができる化合物を当該癌細胞に投与するステップと、
（ｂ）アポトーシスを誘導するように前記プロカスパーゼ−３分子を修飾するステップと、
を含む方法。
【請求項２】
前記癌細胞が、処置を必要とする患者に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物が下記式ＺＺを有する、請求項１又は２に記載の方法。
【化１】
2013100285.tif 000001
［式中、ｎは１又は２であり、Ｒは各々、他のＲとは独立して、水素、ハロゲン、アリル又は短鎖アルキルであり、Ｒ２は、水素、短鎖アルキル、エステル、又は生理学的条件下で除去可能な部分であり、Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アリル、アルケニル、アルケノール、アルカノール又はハロアルケニルであり、Ｒ４及びＲ５は、いずれもＮであるか、Ｒ４がＮでＲ５がＣであるか、いずれもＣであり、Ａは酸素又は硫黄である。］
【請求項４】
前記化合物が、下記式ＺＺ、ＰＡＣ−１及び構造５からなる群より選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【化２】
2013100285.tif 000002
［式中、ｎは１又は２であり、Ｒは各々、他のＲとは独立して、水素、ハロゲン、アリル又は短鎖アルキルであり、Ｒ２は、水素、短鎖アルキル、エステル、又は生理学的条件下で除去可能な部分であり、Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アリル、アルケニル、アルケノール、アルカノール又はハロアルケニルであり、Ｒ４及びＲ５は、いずれもＮであるか、Ｒ４がＮでＲ５がＣであるか、いずれもＣであり、Ａは酸素又は硫黄である。］
【化３】
2013100285.tif 000003
【化４】
2013100285.tif 000004
【請求項５】
前記化合物が下記ＰＡＣ−１である、請求項１又は２に記載の方法。
【化５】
2013100285.tif 000005
【請求項６】
癌細胞におけるプロカスパーゼ−３又はカスパーゼ−３のパラメーターを評価するステップをさらに含み、
前記パラメーターが、半定量的若しくは定量的な量、機能的な量、又は前記プロカスパーゼ−３若しくはカスパーゼ−３の活性レベル、の１つ又は複数である、
請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
プロカスパーゼ−３分子を修飾することができる化合物を直接、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでスクリーニングするための方法であって、
（ａ）試験化合物を提供するステップと、
（ｂ）精製したプロカスパーゼ−３を提供するステップと、
（ｃ）前記精製したプロカスパーゼ−３に前記試験化合物を暴露するステップと、
（ｄ）前記試験化合物への暴露の後でプロカスパーゼ−３活性を測定するステップと、
（ｅ）前記試験化合物への前記暴露の際の試験活性を、前記試験化合物への暴露なしでの無修飾活性と比較することにより、修飾化合物を同定するステップと、
を含み、
それにより、プロカスパーゼ−３分子を修飾することができる化合物をスクリーニングする方法。
【請求項８】
前記修飾活性又は前記無修飾活性を基準活性と比較するステップをさらに含み、
前記基準活性が、下記式ＺＺ、ＰＡＣ−１及び構造５からなる群より選択される化合物への暴露によるものである、
請求項７に記載の方法。
【化６】
2013100285.tif 000006
［式中、ｎは１又は２であり、Ｒは各々、他のＲとは独立して、水素、ハロゲン、アリル又は短鎖アルキルであり、Ｒ２は、水素、短鎖アルキル、エステル、又は生理学的条件下で除去可能な部分であり、Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アリル、アルケニル、アルケノール、アルカノール又はハロアルケニルであり、Ｒ４及びＲ５は、いずれもＮであるか、Ｒ４がＮでＲ５がＣであるか、いずれもＣであり、Ａは酸素又は硫黄である。］
【化７】
2013100285.tif 000007
【化８】
2013100285.tif 000008
【請求項９】
プロカスパーゼ−３分子を修飾することができる化合物の細胞スクリーニングのための方法であって、
（ａ）試験化合物を提供するステップと、
（ｂ）プロカスパーゼ−３を推定上発現する細胞を提供するステップと、
（ｃ）前記試験化合物に前記細胞を暴露するステップと、
（ｄ）前記試験化合物への暴露の後で、細胞生存率、アポトーシス指標、及び他のパラメーターを含む細胞パラメーターの、１つ又は複数を測定するステップと、
（ｅ）前記試験化合物への前記暴露の際の試験細胞パラメーターを、前記試験化合物への暴露なしでの無修飾細胞パラメーターと比較することにより、修飾化合物を同定するステップと、
を含み、
それにより、プロカスパーゼ−３分子を修飾することができる化合物をスクリーニングする方法。
【請求項１０】
前記修飾活性又は前記無修飾活性を基準活性と比較するステップをさらに含み、
前記基準活性が、下記式ＺＺ、ＰＡＣ−１及び構造５からなる群より選択される化合物への暴露によるものである、
請求項９に記載の方法。
【化９】
2013100285.tif 000009
［式中、ｎは１又は２であり、Ｒは各々、他のＲとは独立して、水素、ハロゲン、アリル又は短鎖アルキルであり、Ｒ２は、水素、短鎖アルキル、エステル、又は生理学的条件下で除去可能な部分であり、Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アリル、アルケニル、アルケノール、アルカノール又はハロアルケニルであり、Ｒ４及びＲ５は、いずれもＮであるか、Ｒ４がＮでＲ５がＣであるか、いずれもＣであり、Ａは酸素又は硫黄である。］
【化１０】
2013100285.tif 000010
【化１１】
2013100285.tif 000011
【請求項１１】
プロカスパーゼ活性化化合物による癌細胞の処置に対する潜在的感受性を同定又は診断するための方法であって、
（ａ）前記癌細胞内のプロカスパーゼパラメーターを評価するステップと、
（ｂ）前記パラメーターによりプロカスパーゼの活性化に対する感受性が上昇したかどうかを判定するステップと、
を含む方法。
【請求項１２】
前記プロカスパーゼパラメーターがプロカスパーゼ−３レベルであり、前記プロカスパーゼがプロカスパーゼ−３である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記プロカスパーゼパラメーターがプロカスパーゼ−７レベルであり、前記プロカスパーゼがプロカスパーゼ−７である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
癌細胞を処置するための方法であって、
（ａ）プロカスパーゼ活性化化合物による癌細胞の処置に対する潜在的感受性を同定するステップと、
（ｂ）有効な量の前記プロカスパーゼ活性化化合物に前記癌細胞を暴露するステップと、
を含む方法。
【請求項１５】
前記プロカスパーゼ活性化化合物が、下記式ＺＺ、ＰＡＣ−１及び構造５からなる群より選択される、請求項１４に記載の方法。
【化１２】
2013100285.tif 000012
［式中、ｎは１又は２であり、Ｒは各々、他のＲとは独立して、水素、ハロゲン、アリル又は短鎖アルキルであり、Ｒ２は、水素、短鎖アルキル、エステル、又は生理学的条件下で除去可能な部分であり、Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アリル、アルケニル、アルケノール、アルカノール又はハロアルケニルであり、Ｒ４及びＲ５は、いずれもＮであるか、Ｒ４がＮでＲ５がＣであるか、いずれもＣであり、Ａは酸素又は硫黄である。］
【化１３】
2013100285.tif 000013
【化１４】
2013100285.tif 000014
【請求項１６】
前記プロカスパーゼ活性化化合物が、プロカスパーゼ−３、プロカスパーゼ−７、又はプロカスパーゼ−３及びプロカスパーゼ−７の両方を活性化することができる、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
下記ＰＡＣ−１を合成するための方法であって、
スキーム１のステップを含む方法。
【化１５】
2013100285.tif 000015
【請求項１８】
下記構造５又は式ＺＺの化合物を合成するための方法であって、
適切な変更を有するスキーム１のステップを含む方法。
【化１６】
2013100285.tif 000016
【化１７】
2013100285.tif 000017
［式中、ｎは１又は２であり、Ｒは各々、他のＲとは独立して、水素、ハロゲン、アリル又は短鎖アルキルであり、Ｒ２は、水素、短鎖アルキル、エステル、又は生理学的条件下で除去可能な部分であり、Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アリル、アルケニル、アルケノール、アルカノール又はハロアルケニルであり、Ｒ４及びＲ５は、いずれもＮであるか、Ｒ４がＮでＲ５がＣであるか、いずれもＣであり、Ａは酸素又は硫黄である。］
【請求項１９】
癌患者の候補者を、前記候補者においてプロカスパーゼレベルの上昇を同定することにより、プロカスパーゼ活性化剤による可能な処置についてスクリーニングするための方法であって、
前記候補者から細胞又は組織の試験サンプルを得るステップと、
前記試験サンプル中のプロカスパーゼレベルを評価するステップと、
前記プロカスパーゼレベルが、基準レベルに比べて前記試験サンプル中で上昇したかどうかを判定するステップと、
を含み、
それにより、癌患者の候補者を、プロカスパーゼ活性化剤による可能な処置についてスクリーニングする方法。
【請求項２０】
前記プロカスパーゼが、プロカスパーゼ−２、プロカスパーゼ−３、プロカスパーゼ−６、プロカスパーゼ−７、プロカスパーゼ−８及びプロカスパーゼ−９からなる群より選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記プロカスパーゼがプロカスパーゼ−３である、請求項１９又は２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記試験サンプルの前記上昇レベルが前記基準レベルの少なくとも約２倍である、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記試験サンプルの前記上昇レベルが前記基準レベルの少なくとも約４倍である、請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記基準レベルが、同一患者からの第２の試験サンプルからのものである、請求項１９〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記基準レベルが正常細胞又は正常組織のサンプルからのものである、請求項１９〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記基準レベルが細胞株からのものである、請求項１９〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記基準レベルが癌細胞株からのものである、請求項１９〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記基準レベルが正常細胞株からのものである、請求項１９〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記基準レベルが絶対閾値の量である、請求項１９〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
癌細胞における死を誘導するための方法であって、
当該癌細胞のプロカスパーゼ−３分子を活性化することができる化合物を当該癌細胞に投与するステップを含む方法。
【請求項３１】
前記化合物が下記式ＺＺを有する、請求項３０に記載の方法。
【化１８】
2013100285.tif 000018
［式中、ｎは１又は２であり、Ｒは各々、他のＲとは独立して、水素、ハロゲン、アリル又は短鎖アルキルであり、Ｒ２は、水素、短鎖アルキル、エステル、又は生理学的条件下で除去可能な部分であり、Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、ハロアルキル、アリル、アルケニル、アルケノール、アルカノール又はハロアルケニルであり、Ｒ４及びＲ５は、いずれもＮであるか、Ｒ４がＮでＲ５がＣであるか、いずれもＣであり、Ａは酸素又は硫黄である。］
【請求項３２】
前記化合物が下記式ＺＺ２を有する、請求項３０に記載の方法。
【化１９】
2013100285.tif 000019
［式中、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して、水素、ハロゲン、アルキル、アリル、ハロアルキル、アルケニル、アルケノール、アルカノール又はハロアルケニルである。］