【手続補正書】
【提出日】平成24年1月6日(2012.1.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
【図１】図１は本発明において用いられる化合物の概略図である（Ｇ３Ｒ７は配列番号：１の配列である）。
【図２】図２は本発明のいくつかの態様の概略図である。
【図３】図３〜１０は、実施例４に記載するような治療薬の経皮送達を表す写真である。
【図４】図３〜１０は、実施例４に記載するような治療薬の経皮送達を表す写真である。
【図５】図３〜１０は、実施例４に記載するような治療薬の経皮送達を表す写真である。
【図６】図３〜１０は、実施例４に記載するような治療薬の経皮送達を表す写真である。
【図７】図３〜１０は、実施例４に記載するような治療薬の経皮送達を表す写真である。
【図８】図３〜１０は、実施例４に記載するような治療薬の経皮送達を表す写真である。
【図９】図３〜１０は、実施例４に記載するような治療薬の経皮送達を表す写真である。
【図１０】図３〜１０は、実施例４に記載するような治療薬の経皮送達を表す写真である。
【図１１】図１１〜１２は、実施例５に記載するような治療用処方のターゲティングを表す写真である。
【図１２】図１１〜１２は、実施例５に記載するような治療用処方のターゲティングを表す写真である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
（発明の開示）
一般的記載
本発明は、イメージング剤、遺伝子または他の治療薬の選択的、持続的な送達のための成分ベースのシステムを提供する。組成物の個々の特性は、臨床処方において所望の成分を指定することにより選択できる。さらに、イメージングおよび特異的ターゲティング部分は、別の負に帯電した主鎖上に提供され、これは正の主鎖と非共有イオン結合を形成する。これらの成分を負に帯電した主鎖上に配置することにより、本発明は成分を他の方法（立体的制限のために有効な組み合わせがないレベルまで、複雑さおよび費用を増大させ、効率を低下させる）において用いられるような正の主鎖上の正確な位置に結合させる必要性がなくなり。本発明は図１を参照してさらに理解される。この図において、成分は（１）結合した正に帯電した基（暗色線と結合した黒丸として示される効率基とも称する）、例えば、（Ｇｌｙ）ｎ１−（Ａｒｇ）ｎ２（配列番号：２−７）（式中、下付き文字ｎ１は３〜約５の整数であり、下付き文字ｎ２は約７〜約１７の奇数である）またはＴＡＴドメインを有する強固な主鎖；（２）結合したイメージング部分（淡色線に結合した白抜き三角）を有する短い負に帯電した主鎖；（３）結合したターゲティング剤および／または治療薬（淡色線に結合した白抜き丸）を有する短い負に帯電した主鎖；（４）オリゴヌクレオチド、ＲＮＡ、ＤＮＡまたはｃＤＮＡ（薄くクロスハッチされた棒）；および（５）残存因子をエンコードするＤＮＡ（黒っぽくクロスハッチされた棒）として示される。図２は多成分組成物の様々な例を表し、図中、基は図１において記載したように図示される。例えば、図２において、第一の多成分組成物は、正に帯電した主鎖がイメージング成分、ターゲティング成分、オリゴヌクレオチドおよび残存因子と結合している。診断／徴候イメージングのために設計される第二の多成分組成物が図示される。この組成物において、正に帯電した主鎖はイメージング成分およびターゲティング成分の両方と錯体を形成する。最後に、遺伝子送達に有用な第三の多成分系を示す。この系において、正に帯電した主鎖、ターゲティング成分、関心のある遺伝子および残存因子をエンコードするＤＮＡ間で複合体が形成される。本発明は、以下にさらに詳細に記載されるが、治療および診断プログラムにおいて有用な多くのさらなる組成物を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
前記の主鎖のそれぞれにおいて、正に帯電した基を有する側鎖基を結合させることができる。例えば、スルホンアミド結合主鎖（−ＳＯ２ＮＨ−および−ＮＨＳＯ２−）は窒素原子に結合した側鎖を有し得る。同様に、ヒドロキシエチレン（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−）結合はヒドロキシ置換基に結合した側鎖基を有し得る。当業者は、標準的合成法を用いて正に帯電した側鎖基を得るために他の結合化学を容易に採用することができる。
特に好ましい例において、正に帯電した主鎖は，−（ｇｌｙ）ｎ１−（ａｒｇ）ｎ２（配列番号：８−１８）、ＨＩＶ−ＴＡＴまたはそのフラグメントを含む枝分かれ基（効率基とも称する）を有するポリペプチドであり、ここにおいて、下付き文字ｎ１は０〜２０の整数であり、より好ましくは０〜８であり、さらにより好ましくは２〜５であり、下付き文字ｎ２は約５〜約２５の奇数であり、より好ましくは約７〜約１７であり、最も好ましくは約７〜約１３である。ＨＩＶ−ＴＡＴフラグメントは式（ｇｌｙ）ｐ−ＲＧＲＤＤＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号：１９）または（ｇｌｙ）ｐ−ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−（ｇｌｙ）ｑ（配列番号：２０）（式中、下付き文字ｐおよびｑはそれぞれ独立して０〜２０の整数である）を有し、フラグメントはフラグメントのＣ−末端またはＮ−末端のいずれかにより主鎖に結合している例もさらに好ましい。好ましいＨＩＶ−ＴＡＴフラグメントは下付き文字ｐおよびｑがそれぞれ独立して０〜８、より好ましくは２〜５の整数であるものである。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
もう一つの特に好ましい例において、主鎖部分はポリリシンであり、正に帯電した枝分かれ基はリシン側鎖アミノ基に結合している。この特に好ましい例において用いられるポリリシンは商業的に入手可能な（Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri, USA）任意のポリリシン、例えば、ＭＷ＞７００００を有するポリリシン、７００００〜１５００００のＭｗを有するポリリシン、ＭＷ＞３０００００を有するポリリシンである。ポリリシンの適当な選択は、組成物の残存する成分に依存し、組成物に全体的に正味正の電荷を提供し、負に帯電した成分の合計長さの好ましくは１〜４倍の長さを提供するために十分である。好ましい正に帯電した枝分かれ基または効率基としては、例えば、−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ−ａｒｇ−ａｒｇ−ａｒｇ−ａｒｇ−ａｒｇ−ａｒｇ−ａｒｇ（−Ｇｌｙ３Ａｒｇ７）（配列番号：１）またはＨＩＶ−ＴＡＴが挙げられる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
実施例２
この実施例は、細胞毒性遺伝子を担うイメージ化された腫瘍特異性複合体である本発明の組成物の調製を説明する。
次の成分を調製する：
１．Ｌｙｓの側鎖アミノ末端によりＧｌｙ３Ａｒｇ７（配列番号：１）のカルボキシ末端と２０％の飽和度で結合したＧｌｙ３Ａｒｇ７（配列番号：１）を有するポリリシンからなる正に帯電した主鎖。リン酸塩緩衝塩溶液（ＰＢＳ）中１．５ｍｇ／ｍＬの濃度で主鎖部分の溶液を調製する。
２．サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターの制御下で単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼを発現するｃＤＮＡを、ＰＢＳ中０．５ｍｇ／ｍＬ濃度で使用する。
３．デキストラン−ＤＯＴＡ−ガドリニウム錯体をＰＢＳ中１：２の希釈度で使用する。
４．前記「２」の成分に対して１：２の負電荷比を得るために選択されたサイズ範囲およびＰＢＳ中濃度のデキストランに対して５％の飽和度の所望の腫瘍抗原に対して特異性の接合Ｆａｂフラグメント。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４６】
実施例３
この実施例は、細胞培養におけるトランスフェクションの多成分法の使用を説明する。
この実施例において、成分ベースの方法の一回分を評価するために６−ウェルプレートを使用した。グリシンの末端のカルボキシルをリシン側鎖の遊離アミンと１８％の飽和度（すなわち、それぞれ１００のリシン残基の内１８をＧｌｙ３Ａｒｇ７（配列番号：１）と接合させる）で接合させることにより、−Ｇｌｙ３Ａｒｇ７（配列番号：１）をポリリシン１５００００と接合することにより、正に帯電した主鎖を調製した。結果として得られた主鎖をＮＵＮＵ−０１と命名した。
次の混合物を調製した：
１）ＣＭＶプロモーターにより駆動される青色蛍光蛋白を発現するプラスミドの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液に対して４：１の電荷比のポリリシン（１５００００）。
２）ＣＭＶプロモーターにより駆動される青色蛍光蛋白を発現するプラスミドの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液に対して１５：１の比のＮＵＮＵ−０１。
３）ＣＭＶプロモーターにより駆動される青色蛍光蛋白を発現するプラスミドの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液に対して１０：１の比のＮＵＮＵ−０１。
４）ＣＭＶプロモーターにより駆動される青色蛍光蛋白を発現するプラスミドの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液に対して４：１の比のＮＵＮＵ−０１。
５）ＣＭＶプロモーターにより駆動される青色蛍光蛋白を発現するプラスミドの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液に対して１．２５：１の比のＮＵＮＵ−０１。
６）ＣＭＶプロモーターにより駆動される青色蛍光蛋白を発現するプラスミドの０．５ｍｇ／ｍＬ溶液に対して５：１の比の製造業者の推奨に従ったＳｕｐｅｒｆｅｃｔ（Ｑｕｉａｇｅｎ）。
【手続補正７】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）正に帯電した主鎖と；
ｂ）ｉ）複数の結合したイメージング部分を有する第一の負に帯電した主鎖；
ｉｉ）複数の結合したターゲティング剤を有する第二の負に帯電した主鎖；
ｉｉｉ）ＲＮＡ、ＤＮＡ、リボザイム、修飾オリゴヌクレオチドおよび選択された導入遺伝子をエンコードするｃＤＮＡからなる群から選択される少なくとも一つの要素；
ｉｖ）少なくとも一つの残存因子をエンコードするＤＮＡ；および
ｖ）複数の結合した生物学的薬剤を有する第三の負に帯電した主鎖
からなる群から選択される少なくとも２つの要素と
の非共有結合複合体を含む組成物であって、その結合複合体が正味正電荷を有し、ｂ）群からの前記の２つの要素のうちの少なくとも１つがｉ）、ｉｉｉ）またはｖ）群から選択される、組成物。