(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式 (I)：
【化１】
0004234425.tif 000016
（式中、
X1およびX2は各々独立してハロゲンであり、
R1およびR2は各々独立して水素またはアルキルであり、
R3は水素、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、モノアラルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルケニルカルボニルアミノ、ハロアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アルコキシアルキルカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアルキルカルボニルアミノ、グリシンアミド、モノアルキルグリシンアミド、アリールカルボニルグリシンアミド、アミノカルボニルグリシンアミド、(アミノカルボニル) (アルキル) グリシンアミド、(アルコキシアルキルカルボニル) グリシンアミド、ウレイド、モノアルキルウレイド、モノアリールウレイド、モノアラルキルウレイド、またはアラニンアミドであり、
X1またはX2のいずれか1つは123I、125I、128I、131I、75Br、76Br、80Brおよび18Fから成る群から選択されるか、あるいはこの化合物中の炭素原子の1つが11Cである）
で表わされる化合物またはその薬学上許容される塩。
【請求項２】
式 (II)：
【化２】
0004234425.tif 000017
（式中、
X1およびX2は各々独立してハロゲンであり、
R1およびR2は各々独立して水素またはアルキルであり、そして
R4は水素であり、そして
R5は、式 (III)：
【化３】
0004234425.tif 000018
で表されるキレート化基であるか、又は式 (IV)：
【化４】
0004234425.tif 000019
で表されるキレート化基である）
で表わされる化合物またはその薬学上許容される塩。
【請求項３】
前記化合物がケモカインレセプターCCR1に結合し、そして血液脳関門を通過する、請求項1または2に記載の化合物。
【請求項４】
R1がピペラジニル基の2位におけるメチルであり、そしてR2がピペラジニル基の5位におけるメチルである、請求項1または2に記載の化合物。
【請求項５】
R1がピペラジニル基の2位におけるメチルであり、そしてR2が水素である、請求項1または2に記載の化合物。
【請求項６】
X1がフェニル基の4位におけるクロロであり、そしてX2がフェニル基の4位における18Fである、請求項1に記載の化合物。
【請求項７】
請求項1〜６のいずれかに記載の一塩化物塩。
【請求項８】
請求項1〜６のいずれかに記載の二塩化物塩。
【請求項９】
式 (f) ：
【化５】
0004234425.tif 000020
(式中、R1、R2、R3、およびX1は請求項１において定義した通りである) の化合物を、式 (b) ：
【化６】
0004234425.tif 000021
の化合物と還元剤の存在下に反応させることを含んでなる、式 (I) の化合物を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、アルツハイマー病の診断において有用である新規な放射性医薬に関する。
【０００２】
背景の技術の簡単な説明
アルツハイマー病は重度の神経変性障害であり、そして現在約400万人のアメリカ人がこの病気を患っている。老化する人口は増加し続けているので、この数は治癒または予防が発見されないかぎり、次の世紀の中ごろまでに1400万人に到達するであろう。現在、アルツハイマー病を容易に診断する感受性、特異的死亡前 (premortem) 試験は存在しない。現在、アルツハイマー病は、認識の減少の臨床的観測、ならびにそれらの症候の他の可能な原因の全身的排除に基づいて診断される。「確からしいアルツハイマー病」の臨床的診断の確認は、死亡直後の (postmortem) 脳の検査よってのみ実施することができる。アルツハイマー病の脳は、学習および記憶に関係する脳領域 (例えば、脳皮質および海馬) における2つの明確な異常なタンパク質沈着により特徴づけられる。
【０００３】
これらの沈着は、アルツハイマー病の特徴を示す、細胞外アミロイドプラーク、および他の神経変性障害において同様に見出すことができる、細胞内神経原繊維もつれ (NFL) である。アミロイドペプチドは典型的には40または42アミノ酸長さ (それぞれ，″Aβ1-40uまたは″Aβ1-42u) であり、未知機能のより大きい膜関連タンパク質、アミロイド前駆体タンパク質 (「APP」) の異常なプロセシングから形成される。これらのペプチドのオリゴマー凝集物は神経毒性であると考えられ、究極的にシナプス変性および神経喪失を生ずる。アミロイドの沈着量は、死亡時における症候の重症度におおよそ相関する。
【０００４】
過去において、アルツハイマー病の死亡前の診断剤として使用できる放射性医薬を設計する試みはいくつか存在した。
Bomebroek他は、123Iで標識化した、アミロイド関連タンパク質の血清アミロイドP成分 (SAP) が、脳アミロイド症の患者の、多分血管壁において、脳皮質中に低レベルで蓄積することを示した (Bomebroek, M., et al., Nucl. Med. Commun. (1996), Vol. 17, pp. 929−933)。
【０００５】
Saito他は、血液脳関門を通して125I標識化Aβ1-40をベクター仲介で送出すことを提案した。ヨウ素化Aβ1-40は組織切片中でAβアミロイドプラークに結合することが報告されている (Saito, Y., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995, Vol. 92, pp. 10227−10231)。
米国特許第5,231,000号には、アルツハイマー病の患者の脳の中に見出されるA4アミロイドペプチドに対する特異性を有する抗体が開示されている。しかしながら、血液脳関門を横切ってこれらの抗体を送出す方法は記載されてきていない。
【０００６】
Zhen他は、「Congo RedTM」として知られているアミロイド結合性色素の修飾およびこれらの修飾された分子とテクネチウムおよびレニウムとの錯体を記載している。放射性イオンとの錯体は、アルツハイマー病についての潜在的造影剤であると主張されている (Zhen et al., J. Mol. Chem. (1999), Vol. 42, pp. 2805−2815)。しかしながら、血液脳関門を横切る錯体の潜在性は限定される。
【０００７】
アメリカ合衆国におけるペンシルベニア大学の1グループ (Skovronsky, M., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 2000, Vol., 97, pp. 7609−7614) は、脳透過性であり、かつアミロイド物質 (すなわち、β−プリーツシートのコンフォメーションのペプチド) に非特異的に結合する、Congo Redの蛍光標識化誘導体を開発した。この化合物は放射線標識化し、次いで臨床被験前に前臨床スクリーンを通して薬物速度論および毒性について実験した。
【０００８】
Klunk他は、Congo RedTMの誘導体、クリサミンG (CG) を使用する実験を報告した。CGはin vitroで合成β−アミロイドの十分に結合し、正常マウスの血液脳関門を横切ることが報告されている (Klunk et al., Neurobiol. Aging (1994), Vol. 15, No. 6, pp. 691−698)。
Bergstrom他は、アルツハイマー病においてM1およびM2ムスカリンアセチルコリンレセプターの可視化するための潜在的ラジオリガンドとしてヨード−123として提示した (Bergstrom et al., Eur. J. Nucl. Med. (1999), Vol. 26, pp. 1482−1485)。
【０００９】
最近、ある種の特定のレセプターはアルツハイマー病の患者の脳においてアップレギュレートされることが発見された (Horuk, R. et al., J. Immunol. (1997), Vol. 158, pp. 2882−2890)；Xia et al., J. Neuro. Virol. (1999), Vol. 5, pp. 32−41)。さらに、ケモカインレセプターCCR1は進行したアルツハイマー病の患者の脳においてアップレギュレートされ、そして正常の年齢の脳の中に存在しないことが最近示された (Halks−Miller et al., CCR1 Immunoreactivity in Alzheimer’s Disease Brains, Society for Neuroscience Meeting Abstract, #786.6, Volume 24, 1998)。CCR1レセプターに対するアンタゴニストおよび抗炎症剤としてそれらの使用はPCT公開特許出願、WO 98/56771に記載されている。
【００１０】
前述の提案のいずれも、アルツハイマー病の初期の診断のための造影剤を開発しなかった。したがって、アルツハイマー病の信頼性ある初期の診断のために使用できる診断剤が臨床的に要求されている。
【００１１】
発明の要約
本発明は、CCR1レセプターに結合し、血液脳関門を通過することができ、したがって、好ましくはアルツハイマー病の初期段階において、アルツハイマー病の診断において有用である放射性医薬に関する。
したがって、1つの面において、本発明は、式 (I)：
【００１２】
【化７】
0004234425.tif 000002
【００１３】
（式中、
X1およびX2は各々独立してハロであり、
R1およびR2は各々独立して水素またはアルキルであり、
R3は水素、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、モノアラルキルアミノ、アルキルカルボニルアミノ、アルケニルカルボニルアミノ、ハロアルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、アルコキシアルキルカルボニルアミノ、アルコキシカルボニルアルキルカルボニルアミノ、グリシンアミド、モノアルキルグリシンアミド、アリールカルボニルグリシンアミド、アミノカルボニルグリシンアミド、(アミノカルボニル) (アルキル) グリシンアミド、(アルコキシアルキルカルボニル) グリシンアミド、ウレイド、モノアルキルウレイド、モノアリールウレイド、モノアラルキルウレイド、またはアラニンアミドであり、
X1またはX2のいずれか1つは123I、125I、128I、131I、75Br、76Br、80Brおよび18Fから成る群から選択されるか、あるいはこの化合物中の炭素原子の1つは11Cである）
の化合物またはその薬学上許容される塩に関する。
【００１４】
他の面において、本発明は、式 (II)：
【００１５】
【化８】
0004234425.tif 000003
【００１６】
（式中、
X1およびX2は各々独立してハロであり、
R1およびR2は各々独立して水素またはアルキルであり、そして
R4は水素であり、そして
R5は99mTc、186Reおよび188Reから成る群から選択される放射性金属原子に結合することができるか、あるいは99mTc、186Reおよび188Reと錯体を形成することができるキレート化剤である）
の化合物またはその薬学上許容される塩に関する。
【００１７】
他の面において、本発明は、アルツハイマー病の診断を必要とするヒトに前述しかつ本明細書に記載する式 (I) または式 (II) の化合物を投与し、そしてガンマカメラまたは陽電子放射断層写真 (PET) によりヒトへの化合物の投与から生ずる放射能を測定することを含んでなる、ヒトにおけるアルツハイマー病を診断する方法に関する。
他の面において、本発明は、ヒトにおけるアルツハイマー病を診断する放射性医薬を製造するために本発明による化合物を使用する方法に関する。
他の面において、本発明は、本発明の化合物を製造する方法に関する。
【００１８】
発明の詳細な説明
定義
本明細書および添付された特許請求の範囲において使用するとき、特記しない限り、下記の用語は示した意味を有する：
「アルキル」は、もっぱら炭素および水素から成り、不飽和を含有せず、1〜8個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状の1価または2価の基、例えば、メチル、エチル、n−プロピル、1−メチルエチル (i−プロピル)、n−ブチル、n−プロピル、1,1−ジメチルエチル (t−ブチル)、n−ヘプチル、およびその他を意味する。
【００１９】
「アルキルカルボニルアミノ」は、式−N(H)−C(O)−Ra (ここでRaは上に定義したアルキル基である) の基、例えば、アセチルアミノ、エチルカルボニルアミノ、n−プロピルカルボニルアミノ、およびその他を意味する。
「アルケニル」は、もっぱら炭素および水素から成り、少なくとも1つの二重結合を含有し、1〜8個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状の1価または2価の基、例えば、エテニル、プロプ−１−エニル、ブト−１−エニル、ペントブト−１−エニル、ペンタ−1,4−ジエニル、およびその他を意味する。
【００２０】
「アルケニルカルボニルアミノ」は、式−N(H)−C(O)−Rc (ここでRcは上に定義したアルケニル基である) の基、例えば、エテニルカルボニルアミノ、プロプ−2−エニルカルボニルアミノ、ブト−2−エニルカルボニルアミノ、およびその他を意味する。
「アルコキシ」は、式−ORa (ここでRaは上に定義したアルキル基である) の基、例えば、メトキシ、エトキシ、n−プロポキシ、1−メチルエトキシ (i−プロポキシ)、n−ブトキシ、n−ペントキシ、1,1−ジメチルエトキシ (t−ブトキシ)、およびその他を意味する。
【００２１】
「アルコキシカルボニルアルキルカルボニルアミノ」は、式−N(H)−C(O)−Ra−C(O)ORa (ここで各Raは独立して上に定義したアルキル基である) の基、例えば、エトキシカルボニルメチルカルボニルアミノ、メトキシカルボニルメチルカルボニルアミノ、(2−エトキシカルボニルエチル) カルボニルアミノ、(2−メトキシカルボニルエチル) カルボニルアミノ、およびその他を意味する。
「 (アルコキシカルボニル) グリシンアミド」は、式−N(H)−C(O)−CH2−N(H)−C(O)−Ra−O−Ra (ここで各Raは独立して上に定義したアルキル基である) の基、例えば、(メトキシアセチル) グリシンアミド、(エトキシアセチル) グリシンアミド、およびその他を意味する。
【００２２】
「アミノ」は、基−NH2を意味する。
「アミノカルボニルグリシンアミド」は、式−N(H)−C(O)−CH2−N(H)−C(O)−NH2の基を意味する。
「 (アミノカルボニル) (アルキル) グリシンアミド」は、式−N(H)−C(O)−CH2−N(Ra)−C(O)−NH2 (ここでRaは上に定義したアルキル基である) の基を意味する。
【００２３】
「アリール」はフェニルまたはナフチル基を意味する。特記しない限り、用語「アリール」および接頭語「アラ」(「アラルキル」におけるような) は、ここにおいて定義するように、ハロ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、アミノ、モノアルキルアミノ、およびジアルキルアミノから成る群から選択される1または2以上の置換基により置換されていてもよいアリール基を包含することを意味する。
【００２４】
「アリールカルボニルアミノ」は、式−N(H)−C(O)−Rb (ここでRbは上に定義したアリール基である) の基、例えば、(4−メトキシフェニル) カルボニルアミノ、(4−フルオロフェニル) カルボニルアミノ、(4−クロロフェニル) カルボニルアミノ、およびその他を意味する。
「アリールカルボニルグリシンアミド」は、式−N(H)−C(O)−CH2−N(H)−C(O)−Rb (ここでRbは上に定義したアリール基である) の基、例えば、フェニルカルボニルグリシンアミド、(4−フルオロ−3−トリフルオロメチルフェニル) カルボニルグリシンアミド、(4−フルオロフェニル) カルボニルグリシンアミド、およびその他を意味する。
【００２５】
「アラルキル」は、式−RaRb (ここでRaは上に定義したアルキル基であり、そしてRbは上に定義したアリール基である) の基、例えば、ベンジル、およびその他を意味する。
「アルコキシカルボニルアミノ」は、式−N(H)−C(O)−Ra−O−Ra (ここで各Raは独立して上に定義したアルキル基である) の基、例えば、メトキシメチルカルボニルアミノ、エトキシエチルカルボニルアミノ、メトキシエチルカルボニルアミノ、およびその他を意味する。
「アラニンアミド」は、式−N(H)−C(O)−CH2−C(CH3)H−NH2の基を意味する。
【００２６】
「ベンジル」は、式−CH2−Rh (ここでRhはハロ、アルキル、ハロアルキル、アルコキシ、ニトロ、アミノ、モノアルキルアミノ、およびジアルキルアミノから成る群から選択される1または2以上の置換基により置換されていてもよいフェニル基である) の基を意味する。
「ジアルキルアミノ」は、式−N(Ra)Rb (ここでRaは上に定義したアルキル基であり、そしてRbは上に定義したアリール基である) の基、例えば、ジメチルアミノ、メチルエチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、エチルプロピルアミノ、およびその他を意味する。
【００２７】
「グリシンアミド」は、式−N(H)−C(O)−CH2−NH2の基を意味する。
「ハロ」は、ブロモ、クロロ、ヨード、またはフルオロを意味する。
「ハロアルキル」は、上に定義したように、1または2以上のハロ基により置換された、上に定義した、アルキル基、例えば、トリフルオロメチル、ジフルオロ、トリクロロメチル、2−フルオロエチル、1−フルオロメチル−2−フルオロエチル、3−ブロモ−2−フルオロプロピル、1−ブロモメチル−2−ブロモエチル、およびその他を意味する。
【００２８】
「ハロアルキルカルボニルアミノ」は、式−N(H)−C(O)−Rf (ここでRfは上に定義したハロアルキル基である) の基、例えば、トリフルオロメチルカルボニルアミノ、トリフルオロエチルカルボニルアミノ、2−ブロモエチルカルボニルアミノ、およびその他を意味する。
「モノアルキルアミノ」は、式−N(H)Ra (ここでRaは上に定義したアルキル基である) の基、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、およびその他を意味する。
【００２９】
「モノアラルキルアミノ」は、式−N(H)Rd (ここでRdは上に定義したアラルキル基である) の基、例えば、ベンジルアミノ、(3,4,5−トリメトキシベンジル) アミノ、(4−クロロベンジル) アミノ、およびその他を意味する。
「モノアルキルウレイド」は、式−N(H)−C(O)−N(H) Raの基または式−N(Ra)−C(O)−NH2の基(ここでRaは上に定義したアルキル基である) の基を意味する。
「モノアリールウレイド」は、式−N(H)−C(O)−N(H) Rbの基または式−N(Rb)−C(O)−NH2の基(ここでRbは上に定義したアリール基である) の基を意味する。
「モノアラルキルウレイド」は、式−N(H)−C(O)−N(H) Rdの基または式−N(Rd)−C(O)−NH2の基(ここでRdは上に定義したアラルキル基である) の基を意味する。
【００３０】
「任意の」または「必要に応じて」は、環境の引き続いて記載する事象が起こることがあるか、あるいはないこと、および前記事象または環境グルタミン酸起こる場合および起こらない場合を記載が包含することを意味する。例えば、「置換されていてもよいアリール」は、アリール基が置換されることができるか、あるいはできないこと、および置換されたアリール基および置換基をもたないアリール基の両方を記載が包含することを意味する。
「薬学上許容される塩」は、酸および塩基の両方の付加塩を意味する。
【００３１】
「薬学上許容される酸付加塩」は、生物学的にまたは他の方法で望ましい、遊離塩基の生物学的有効性および性質を保持し、そして無機酸、例えば、フッ化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸およびその他、および有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、ピルビン酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p−トルエンスルホン酸、サリチル酸、およびその他と形成された塩を意味する。本発明の化合物特に好ましい塩は、一塩化物および二塩化物である。
【００３２】
「薬学上許容される塩基付加塩」は、生物学的にまたは他の方法で望ましい、遊離塩基の生物学的有効性および性質を保持する塩である。これらの塩は、遊離酸に対する無機塩基または有機塩基の付加から製造される。無機塩基から誘導される塩は下記のものを包含するが、これらに限定されない：ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、アルミニウムの塩およびその他。好ましい無機塩はアンモニウム、ナトリウム、カルシウム、およびマグネシウムの塩である。
【００３３】
有機塩基から誘導される塩は下記のものを包含するが、これらに限定されない：第一級、第二級、および第三級アミン、天然に産出する置換アミンを包含する置換アミン、環式アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、2−ジメチルアミノエタノール、2−ジエチルアミノエタノール、トリメチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルコサミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、N−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂およびその他の塩。
【００３４】
「ウレイド」は、式−N(H)−C(O)−NH2の基を意味する。
上の定義および例から理解されるように、置換アルキル基を含有するアルキル基について、それに対する任意の置換がアルキル基の任意の炭素上で起こることができる。
【００３５】
本発明の化合物、またはそれらの薬学上許容される塩は、それらの構造中に非対称炭素原子を有することができる。したがって、本発明の化合物またはそれらの薬学上許容される塩は単一の鏡像異性体、ジアスレオマー、ラセミ体、および鏡像異性体とジアスレオマーとの混合物として存在することができる。すべてのこのような単一の鏡像異性体、ジアスレオマー、ラセミ体、およびそれらの混合物は本発明の範囲内に入ることを意図する。化合物内のある種の炭素原子の絶対的立体配置は、知られている場合、適当な絶対的デスクリプターRまたはSで示される。
【００３６】
実用性および投与
本明細書に記載する本発明の化合物は、CCR1として知られているケモカインレセプターに対するアンタゴニストであり、血液脳関門を通過する能力を有する。したがって、化合物はアルツハイマー病の造影するin vivo診断剤として有用である。放射能はよく知られている手法に従いガンマカメラを使用するか、あるいは陽電子放射断層写真 (PET) により検出する。
【００３７】
好ましくは、本発明の化合物の遊離塩基または薬学上許容される塩の形態、例えば、一塩化物または二塩化物は診断剤として生薬処方物において使用するとができる。本発明の化合物を含有する生薬処方物は必要に応じてこの分野において知られているアジュバント、例えば、緩衝剤、塩化ナトリウム、乳酸、界面活性剤およびその他を含有する。使用前に無菌条件下に生薬処方物を濾過することによって、滅菌することができる。
放射性物質の投与量は1〜100 mCi、好ましくは5〜30 mCi、最も好ましくは5〜20 mCiの範囲である。
【００３８】
試験
アルツハイマー病の造影剤としての化合物の適性は、この分野において知られている実験のプロトコルにより証明することができる。例えば、アルツハイマー病の脳中のCCR1レセプターのアップレギュレーションは、実施例において以後詳細に記載するように、アルツハイマー病の患者から収集した剖検脳組織の免疫組織学的染色実験により証明することができる。CCR1レセプターに結合する本発明の化合物の能力および血液脳関門を通過するそれらの能力は、また、実施例において後述するように、既知のin vitroおよびin vivoで評価することができる。
【００３９】
特に、実施例10において、アルツハイマー病の異なる段階におけるCCR1発現の程度を扱うために実施した大規模実験を記載する。50の剖検症例からの脳組織は、アルツハイマー病における臨床的重症度 (痴呆) とジストロフィー性神経炎におけるCCR1発現との間の相関を示した。臨床的の正常の個体の脳内のプラーク様構造におけるCCR1発現は稀であった。また、付随するアルツハイマー病の病理学 (特に、プラーク中のAβ1-42) が存在しないかぎり、他の神経変性疾患を有する個体の脳においてCCR1発現は見出されない。
【００４０】
好ましい態様
本発明の種々の面のうちで、式 (I) のある種の化合物は好ましい。X1がフェニル基の4位におけるクロロであり、そしてX2がフェニル基の4位における18Fである、式 (I) の化合物は好ましい。陽電子放射断層写真 (PET) において診断剤として使用するための化合物は特に好ましい。
R3がフェニル環の2位に存在し、R1がピペラジニル環の2位におけるメチルであり、そしてR2がピペラジニル環の5位におけるメチルである、式 (I) の化合物は特に好ましい。R3がフェニル環の2位に存在し、R1がピペラジニル基の2位におけるメチルであり、そしてR2が水素である、式 (I) の化合物は特に好ましい。
【００４１】
一塩化物および二塩化物の形態である、これらの好ましい化合物はさらに好ましい。
本発明の種々の面のうちで、式 (II) のある種の化合物は好ましい。特に、−N(R4)R5がフェニル環の2位に存在し、R1がピペラジニル環の2位に存在し、そしてR2がピペラジニル環の5位に存在する、式 (II) の化合物は好ましい。−N(R4)R5がフェニル環の2位に存在し、R1がピペラジニル環の2位におけるメチルであり、そしてR2が水素である、式 (II) の化合物は特に好ましい。
【００４２】
R5が式 (III)：
【化９】
0004234425.tif 000004
【００４３】
のキレート化剤であるか、あるいはR5が式 (IV)：
【化１０】
0004234425.tif 000005
【００４４】
のキレート化剤である、式 (II) の化合物、ならびに99mTc、186Reおよび188Reとのそれらの錯体はさらにいっそう好ましい。R5が式 (III) または式 (IV) のキレート化剤を含んでなり、キレート化剤が1〜10個の炭素原子を有するアルキル基を含んでなるリンカー部分を介して式 (II) の非放射性化合物の−N(R4)R5基中の窒素に結合しており、ここでアルキル基が必要に応じて1〜10個の−C(O)−基、1〜10個の−C(O)N(R)−基、1〜10個の−N(R)C(O)−基、1〜10個の−N(R)−基、1〜10個の−N(R)2基、1〜10個のヒドロキシ基、1〜10個の−C(O)OR−基、1〜10個の酸素原子、1〜10個の硫黄原子、1〜10個の窒素原子、1〜10個のハロゲン原子、1〜10個のアリール基、および1〜10個の飽和または不飽和複素環式環を含有し、ここでRは水素またはアルキルである、式 (II) の化合物はさらにいっそう好ましい。好ましいリンカー部分は−C(O)−CH2−N(H) −である。
【００４５】
本発明の化合物のうちで、式 (I) の最も好ましい化合物は下記の化合物から成る群から選択される化合物である：
1− (5−クロロ−2−{2−[ (2R) −4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエチルオキシ}フェニル) 尿素；
N’− (メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル}グリシルグリシンアミド、テクネチウム−99m−錯体；
1− (2−{2−[ (2R) −4− (4−フルオロベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}−5−ヨード−123I−フェニル) 尿素；
N’− (2−メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル}グリシンアミド、テクネチウム−99m−錯体；
【００４６】
N− (2−メルカプトエト−1−イル) −N− (5−メルカプト−3−アザペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル}グリシンアミド、テクネチウム−99m−錯体；
2− (2−アミノ−4−クロロフェノキシ) −[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−エタン−1−オン；
2− (2−アミノ−4−クロロフェノキシ) −[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−エタン−1−オン；
2− (2−アミノ−4−クロロフェノキシ) −[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−エタン−1−オン；
【００４７】
2− (2−アミノ−4−クロロフェノキシ) −[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−エタン−1−オン；
4−[4−クロロ−2− (ジエチルアミノ) フェノキシ] −[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−エタン−1−オン；
4−[4−クロロ−2− (ジエチルアミノ) フェノキシ] −[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−エタン−1−オン；
4−[4−クロロ−2− (ジエチルアミノ) フェノキシ] −[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−エタン−1−オン；
4−[4−クロロ−2− (ジエチルアミノ) フェノキシ] −[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−エタン−1−オン；
【００４８】
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル] −2−オキソエトキシ}フェニル) −3− (2,4−ジクロロフェニル) 尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル] −2−オキソエトキシ}フェニル) −3− (2,4−ジクロロフェニル) 尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル) −3− (2,4−ジクロロフェニル) 尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル] −2−オキソエトキシ}フェニル) −3− (2,4−ジクロロフェニル) 尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)尿素；
【００４９】
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素；
【００５０】
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素；
1−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−(2−イソペンチルアミノ−4−クロロフェノキシ) エタン−1−オン；
1−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−(2−イソペンチルアミノ−4−クロロフェノキシ) エタン−1−オン；
1−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−(2−イソペンチルアミノ−4−クロロフェノキシ) エタン−1−オン；
【００５１】
1−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−(2−イソペンチルアミノ−4−クロロフェノキシ) エタン−1−オン；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−2−メチルプロパンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−2−メチルプロパンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−メチルプロパンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−メチルプロパンアミド；
【００５２】
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−2−(メトキシ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−2−(メトキシ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メトキシ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メトキシ)アセトアミド；
(E)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−ブタンアミド；
【００５３】
(E)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−ブタンアミド；
(E)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−ブタンアミド；
(E)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−ブタンアミド；
メチルN− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)スクシナメート；
メチルN− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)スクシナメート；
【００５４】
メチルN− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)スクシナメート；
メチルN− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)スクシナメート；
エチルN− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)スクシナメート；
エチルN− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)スクシナメート；
エチルN− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)スクシナメート；
【００５５】
エチルN− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)スクシナメート；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)アセトアミド；
【００５６】
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)プロパンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)プロパンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)プロパンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)プロパンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−フルオロベンズアミド；
【００５７】
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−フルオロベンズアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−フルオロベンズアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−フルオロベンズアミド；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−3−(p−トリル)尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−3−(p−トリル)尿素；
【００５８】
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−(p−トリル)尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−(p−トリル)尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−エチル尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−エチル尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−3−エチル尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−3−エチル尿素；
【００５９】
1−ベンジル−3−(5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素；
1−ベンジル−3−(5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素；
1−ベンジル−3−(5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)尿素；
1−ベンジル−3−(5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−(4−ニトロフェニル)尿素；
【００６０】
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−3−(4−ニトロフェニル)尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−3−(4−ニトロフェニル)尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル−3−(4−ニトロフェニル)尿素；
2−(ベンジルアミノ−4−クロロフェノキシ)−1−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]エタン−1−オン；
2−(ベンジルアミノ−4−クロロフェノキシ)−1−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]エタン−1−オン；
【００６１】
2−(ベンジルアミノ−4−クロロフェノキシ)−1−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]エタン−1−オン；
2−(ベンジルアミノ−4−クロロフェノキシ)−1−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]エタン−1−オン；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)グリシンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)グリシンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)グリシンアミド；
【００６２】
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)グリシンアミド；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2R)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素；
1− (5−クロロ−2−{2−[(2S)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチル−ピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メチルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチル−ピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メチルアミノ)アセトアミド；
【００６３】
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチル−ピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メチルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチル−ピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メチルアミノ)アセトアミド；
2−ブロモ−N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)アセトアミド；
2−ブロモ−N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)アセトアミド；
2−ブロモ−N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)アセトアミド；
【００６４】
2−ブロモ−N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(ウレイド)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(ウレイド)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(ウレイド)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(ウレイド)アセトアミド；
【００６５】
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(1−メチルウレイド)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(1−メチルウレイド)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(1−メチルウレイド)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(1−メチルウレイド)アセトアミド；
(2RS)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−アミノプロパンアミド；
【００６６】
(2SR)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−アミノプロパンアミド；
(2RS)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−アミノプロパンアミド；
(2SR)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−アミノプロパンアミド；
(2RS)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−アミノプロパンアミド；
(2SR)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−アミノプロパンアミド；
【００６７】
(2RS)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−アミノプロパンアミド；
(2SR)−N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−アミノプロパンアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(2,4−ジフルオロベンゾイルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(2,4−ジフルオロベンゾイルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(2,4−ジフルオロベンゾイルアミノ)アセトアミド；
【００６８】
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(2,4−ジフルオロベンゾイルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メトキシアセチルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メトキシアセチルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メトキシアセチルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(メトキシアセチルアミノ)アセトアミド；
【００６９】
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(2−ヨードベンゾイルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5RS)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(2−ヨードベンゾイルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2SR,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(2−ヨードベンゾイルアミノ)アセトアミド；
N− (5−クロロ−2−{2−[(2RS,5SR)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2,5−ジメチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)−2−(2−ヨードベンゾイルアミノ)アセトアミド；
【００７０】
N− (5−クロロ−2−{2−[(2R)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}グリシンアミド；および
N− (5−クロロ−2−{2−[(2S)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}グリシンアミド；
ならびにそれらの一塩化物および二塩化物。
【００７１】
本発明の化合物の製造
A.  式 (I) の化合物の製造
一般に、本発明の式 (I) の放射性造影剤は、反応性4−ハロベンゾイル誘導体をピペラジン誘導体と反応させることによって製造される。PET造影のための18F標識化4−フルオロベンゾイル誘導体は好ましい。4−フルオロ−18F−ベンジルハロゲン化物を製造する一般的方法は下記の文献に記載されている：Iwata et al., Applied Radiation and Isotopes (2000), Vol. 52, pp. 87−92。
18F標識化4−フルオロベンゾイル誘導体は、式 (a) のベンズアルデヒド化合物を18Fイオンと反応させて式 (b) のベンズアルデヒドを生成させることによって製造される：
【００７２】
【化１１】
0004234425.tif 000006
【００７３】
式中LGは離脱基、例えば、ブロモ、クロロ、ヨード、ニトロ、またはN(R)3+X-であり、ここでRはアルキルであり、そしてXはハロイオン、例えば、Br-、Cl-、またはI-；アルカン酸のイオン、例えば、アセテートイオン(CH3C(O)O-)；またはアルキルスルホン酸、例えば、トリフラート (CF3SO3-) である)。好ましくは、LGはトリフラートである。式 (b) の化合物から出発すると、いくつかの合成経路が式 (I) の化合物の製造において可能である。
【００７４】
第1合成経路において、式 (b) の化合物をBaBH4で還元して式 (c) の化合物を生成する：
【化１２】
0004234425.tif 000007
【００７５】
次いで式 (c) の化合物をHI、P2I4またはPh3PBr2と反応させて、式 (d) または (e) のヨードまたはブロモ置換化合物を生成する：
【化１３】
0004234425.tif 000008
【００７６】
式 (d) および (e) の化合物は50〜60％の放射線化学的収率で得ることができる。放射線化学的純度は95％より大きい。化合物の比活性は5 mCi／1 nMである。
次いで式 (d) または (e) の化合物をピペラジン誘導体 (f) と反応させて、式 (g) の化合物 (式 (I) の化合物) を生成することができる：
【００７７】
【化１４】
0004234425.tif 000009
【００７８】
式 (f) の化合物臭化水素酸は当業者に知られている方法に従い製造することができ、PCT公開特許出願、WO 98/56771に詳細に記載されている。
第2合成経路において、還元剤、例えば、ギ酸、フマル酸アンモニウム、NaBH3CNを使用して、式 (b) の化合物を式 (f) の化合物と直接反応させて、式 (g) の化合物 (式 (I) の化合物) を生成する：
【００７９】
【化１５】
0004234425.tif 000010
【００８０】
B.  式 (II) の化合物の製造
単一フォトン放射計算断層写真(“SPECT”) のために、99mTc標識化化合物は好ましい。それらの化合物は式 (II) の化合物である。99mTc結合性キレート化剤、例えば、N2S2キレート化剤と反応させる式 (II) の化合物の非放射性類似体を使用して、これらの化合物の一般的合成経路を開始する。式 (II) の化合物の非放射性類似体の製造は、PCT公開特許出願、WO 98/56771に詳細に記載されている。キレート化剤の合成は標準的手順、例えば、下記の文献に記載されている手順に従う：A. Mahmood et al., A N2S2−Tetradentate Chelate for Solid−Phase Synthesis : Technetum, Rhenium in Chemistry and Nuclear Medicine (1999), Vol. 5, p. 71またはZ. P. Zhuang et al., Bioconjugate Chemistry (1999), Vol. 10, p. 159。
【００８１】
好ましいキレート化剤は式 (III) または (IV) のキレート化剤である：
【化１６】
0004234425.tif 000011
【００８２】
キレート化剤の1つが式 (II) の非放射性化合物の−N(R4)R5基中の窒素に直接結合しているか、あるいは1〜10個の炭素原子を有するアルキル基を含んでなるリンカー部分を介して式 (II) の非放射性化合物の−N(R4)R5基中の窒素に結合しており、ここでアルキル基が必要に応じて1〜10個の−C(O)−基、1〜10個の−C(O)N(R)−基、1〜10個の−N(R)C(O)−基、1〜10個の−N(R)−基、1〜10個の−N(R)2基、1〜10個のヒドロキシ基、1〜10個の−C(O)OR−基、1〜10個の酸素原子、1〜10個の硫黄原子、1〜10個の窒素原子、1〜10個のハロゲン原子、1〜10個のアリール基、および1〜10個の飽和または不飽和複素環式環を含有し、ここでRは水素またはアルキルである。好ましいリンカー部分は−C(O)−CH2−N(H) −である。
本発明の実施を促進するガイドとして下記の特定の実施例を提供する。これらの実施例は本発明を限定ことを意図しない。
【００８３】
実施例1．1− (5−クロロ−2−{2−[(2R)−2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル）尿素の製造
【化１７】
0004234425.tif 000012
【００８４】
A．DIEA (19.10 mL、110 mmol) を250 mLの塩化メチレン中の (R)−(−)−2−メチルピペラジン (10 g、100 mmol) の溶液に添加した。この溶液を−10 ℃に冷却した。BOC無水物を250 mLの塩化メチレン中に溶解し、冷却したピペラジン溶液に1時間かけて添加した。この反応を16時間かけて周囲温度に放温した。反応混合物を濾過して溶液を除去し、濾液を500 mLの水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発させると、油状物が得られた。この油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、11.0 gの式 (a) の化合物が得られた。
【００８５】
B.  式 (a) の化合物 (11.0 g、55 mmol) およびDIEA (10.5 mL、60.4 mmol) を100 mLの塩化メチレン中に溶解した。生ずる溶液を−10 ℃に冷却した。−10 ℃の温度に維持した溶液に、塩化クロロアセチル (4.37 mL、55 mmol) を滴下した。1時間攪拌した後、反応混合物を100 mLの水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発させると、油状物が得られた。この油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、14.8 gの式 (b) の化合物が得られた。
【００８６】
C.  75 mLのDMSO中の式 (b) の化合物 (14.8 g、53.5 mmol) および式 (e) の化合物 (9.98 g、53.5 mmol) の溶液に、塩化カリウム (18.48 g、133.7 mmol) を添加した。生ずる混合物を50 ℃に3時間加熱した。この混合物を30 ℃に冷却し、700 mLの水の中に注いだ。水を200 mLの酢酸エチルで3回抽出した。酢酸エチル抽出液を一緒にし、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させると、泡状物が得られた。泡状物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、19.6 gの式 (c) の化合物が得られた。
【００８７】
D.  式 (c) の化合物 (7.68 g、18 mmol) を40 mLの酢酸エチル中に溶解した。生ずる溶液を氷浴中で冷却し、この溶液を通して無水HClガスを泡立てて通入した。この混合物を周囲温度において1時間放置すると、生成物は沈殿した。この生成物を濾過により集め、フィルター上において新鮮な酢酸エチルで洗浄すると、5.9 gの1− (5−クロロ−2−{2−[(2R)− 2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素、式 (d) の化合物が白色固体状物として得られた；NMR (2ロトマー)；(400 MHz、DMSO)、9.7 (m、0.5 H)、9.2 (m、0.5 H)、8.16 (s、1 H)、8.13 (s、0.5 H)、6.8 (s、2 H)、4.9 (m、2 H)、4.4 (m、5 H)、3.8 (bs、0.5 H)、3.4 (bs、0.5 H)、3.2 (m、2.5 H)、3.0 (m、2 H)、1.2〜1.4 (m、3 H) ppm。
【００８８】
実施例2．式(e) の化合物の製造
【化１８】
0004234425.tif 000013
【００８９】
周囲温度において100 mLの無水THF中の2−アミノ−4−クロロフェノール (10 g、69.7 mmol) の溶液に、トリメチルシリルイソシアネート (18.8 mL、139.4 mmol) を添加した。この溶液を60 ℃に加熱し、この温度に22時間維持し、この時水 (1.3 mL、76.7 mmol) を添加した。30分後、この溶液を周囲温度に冷却し、濃縮すると、褐色油状物が得られた。この油状物を酢酸エチル中に溶解し、活性炭で処理し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過した。濾液を濃縮すると、ピンク色固体が得られ、これを10：1、トルエン／メタノールから結晶化させると、5.4 gの式 (e) の化合物が黄褐色粉末として得られた。
【００９０】
実施例3．1− (5−クロロ−2−{2−[(2R)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル）尿素の製造
A.  H2O−18Oをプロトンで衝撃することによって、フッ化水素−18Fを調製した。生ずるフッ化水素−18Fをアニオン交換カートリッジ上に吸収させた。水性アセトニトリル (1.5 mL、66％) 中のKryptofix 222 (15 mg、40μmol) およびK2CO3 (2.77 mg、20μmol) の溶液で、フッ化水素−18Fを溶離した。放射性画分を窒素ガス流中で蒸発乾固した。乾燥アセトニトリル (1 mL) を使用して、この手順を3回反復した。乾燥DMF (250μl) 中の4−トリメチルアンモニウム−ベンズアルデヒド−トリフレート (2 mg、6.4μmol) の溶液を添加した後、生ずる反応混合物を100 ℃に5分間加熱した。
【００９１】
周囲温度に冷却した後、50μlの酢酸中の1− (5−クロロ−2−{2−[(2R)− 2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素、式 (d) の化合物、(3 mg、8.3μmol) の溶液および100μlのDMF中のシアノホウ水素化ナトリウム (4 mg、63.7μmol) の溶液を添加した。反応混合物を120 ℃に10分間加熱した。5 mLの水を添加した後、この混合物をポリスチロール−カートリッジ上で濾過した。吸着された生成物を2 mLの水で洗浄すると、標題化合物、1− (5−クロロ−2−{2−[(2R)−4− (4−フルオロ−18F−ベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル尿素が得られ、これを1.5 mLのアセトニトリルで溶離し、HPLCにより精製した。
【００９２】
B.  同様な方法において、18F原子を含有する式 (I) の他の化合物を製造する。
実施例4．N−(5−クロロ−2−{2−[(2R)−4− (4−フルオロベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)グリシンアミドの製造
【化１９】
0004234425.tif 000014
【００９３】
A.   20 mLのCH2Cl2中の (R)−(−)−2−メチルピペラジン (2.0 g、20 mmol) の溶液に、DIEA (5.2 g、40 mmol) および塩化4−フルオロベンジル (2.39 mL、20 mmol) を添加した。生ずる混合物を周囲温度において15時間攪拌した。反応が完結した後、反応混合物を水 (3×20 mL) およびブラインで洗浄し、次いでNa2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮すると、式 (f) の化合物 (2.2 g)が白色固体状物として得られた。
【００９４】
B.  50 mLのCH2Cl2中の式 (f) の化合物 (2.2 g、10 mmol) の溶液に、塩化クロロアセチル (0.4 mL、10 mmol) を添加した。生ずる混合物を周囲温度において10分間攪拌し、次いでトリエチルアミン (3 mL、21 mmol) を添加した。30分後、この混合物を水 (3×20 mL) およびブラインで洗浄し、次いでNa2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮すると、油状物が得られた。シリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、式 (g) の化合物 (2.5 g)が得られた。
【００９５】
C.  50 mLのDMF中の式 (g) の化合物 (2.4 g、8.4 mmol) の溶液に、K2CO3 (2.5 g、17 mmol)、NaI (0.2 g) および4−クロロ−2−ニトロフェノール (1.3 g、8.4 mmol) を添加した。生ずる混合物を70〜80 ℃に加熱した。1時間後、この混合物を真空濃縮し、次いで酢酸エチル (150 mL) の中に取り、水 (3×100 mL)、次いでブラインで洗浄した。有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮すると、油状物が得られた。シリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、式 (h) の化合物 (3.1 g) が得られた。
【００９６】
D.  10 mLのエタノール中の式 (h) の化合物 (1.1 g、2.6 mmol) の溶液に、5 mLのエタノール中の塩化錫 (II) 二水和物 (3.0 g、13 mmol) の溶液を添加した。生ずる混合物を75 ℃に加熱した。1時間後、この混合物を真空濃縮し、次いで酢酸エチル (100 mL) の中に取り、水中の1N NaOH (3×100 mL) およびブラインで洗浄した。有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮すると、油状物が得られた。シリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、式 (i) の化合物 (0.75 g) が得られた。
【００９７】
E.  10 mLのDMF中の式 (i) の化合物 (0.7 g、1.78 mmol) の溶液に、BOC−Gly−OSU (0.58 g、2.13 mmol) を添加した。生ずる混合物を50〜60 ℃に加熱した。24時間後、この混合物を真空濃縮し、次いで酢酸エチル (150 mL) の中に取り、水 (3×100 mL)、次いでブラインで洗浄した。有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮すると、油状物が得られた。シリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、式 (j) の化合物 (0.7 g) が得られた。
【００９８】
F.  10 mLのCH2Cl2中の式 (j) の化合物 (0.6 g、1.1 mmol) の溶液に、TFA (5 mL) を添加した。生ずる混合物を周囲温度に加熱した。1時間で反応が完結した後、反応混合物を真空濃縮し、酢酸エチル (100 mL) の中に取り、水中の1N NaOH (3×100 mL) およびブラインで洗浄した。有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮すると、油状物が得られた。シリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、N−(5−クロロ−2−{2−[(2R)−4− (4−フルオロベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}フェニル)グリシンアミド、式 (k) の化合物 (0.45 g)が白色固体状物として得られた。NMR (CDCl3) 10.2 (s、1)、8.5 (s、1)、7.3 (m、2)、7.0 (m、3)、6.8 (d、1)、4.7 (m、2)、3.4〜3.6 (m、5)、3.0 (m、1)、2.8 (m、1)、2.6 (d、1)、2.2 (m、1)、2.0 (m、2)、1.2〜1.4 (m、3) ppm。
【００９９】
実施例5．N’− (メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ] フェン−1−イル }グリシルグリシンアミド、テクネチウム−99m−錯体の製造
A.  5 mLのジクロロメタン中のN−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル}グリシンアミド (175.5 mg、0.4 mmol) (上記実施例4において製造した式 (k) の化合物) 、N−(S−トリチル−2−メルカプト−1−イル)−N−(S−トリチル−5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル)グリシン (291.4 mg、0.4 mmol) (これはA. Mahmood et al., A N2S2−Tetradentate Chelate for Solid−Phase Synthesis : Technetum, Rhenium in Chemistry and Nuclear Medicine (1999), Vol. 71に従い合成することができる)、およびN−ヒドロキシスクシンイミド (45.5 mg、0.4 mmol) の攪拌した溶液に、3 mLのジクロロメタン中のジシクロヘキシルカーボジイミド (81.4 mg、0.4 mmol) の溶液を添加した。生ずる懸濁液を一夜周囲温度において攪拌した。
【０１００】
濾過後、生ずる溶液を減圧下に蒸発させた。シリカゲルのクロマトグラフィー (溶離液：ジクロロメタン／メタノール、98：2) 後、所望生成物、N− (S−トリチル−2−スルファニルエト−1−イル) −N− (S−トリチル−5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシルグリシンアミド (340 mg、72.8％)が白色粉末として単離された。
元素分析：
計算値：  C 69.93  H 5.87  N 7.20  O 6.85  S 5.49
実測値：  C 69.69  H 6.05  N 7.01  O       S 5.32
【０１０１】
B.   上で製造した N− (S−トリチル−2−スルファニルエト−1−イル) −N− (S−トリチル−5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシルグリシンアミド  (116.8 mg、0.1 mmol) を5 mLのトリフルオロ酢酸中に溶解した。トリエチルシラン (48 μl、0.3 mmol) を添加した後、生ずる懸濁液を周囲温度において15分間攪拌した。濾液を減圧下に蒸発させ、残留物を7 mLのジエチルエーテルで粉砕した。
【０１０２】
沈殿を周囲温度において1時間攪拌し、濾過し、所望生成物、N− (メルカプト−1−イル) −N− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシルグリシンアミド、ビス−トリフルオロ酢酸塩 (87 mg、95.5％) が白色固体状物として得られた。
計算値：  C 44.81  H 4.65  N 9.22  O 15.80  S 7.04
実測値：  C 44.54  H 4.91  N 8.99  O        S 6.80
【０１０３】
C.  酒石酸二ナトリウム (1 mg) および上で製造したN− (メルカプト−1−イル) −N− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシルグリシンアミド、ビス−トリフルオロ酢酸塩 (100 μg) を500 μlのリン酸ナトリウム緩衝液 (0.1 M、pH＝8.5) 中に溶解した。37MBq99mTc−発生剤溶出液の添加後、5 μlの塩化錫 (II) 溶液を添加し、この混合物を100 ℃に10分間加熱した。HPLC分析は、所望生成物、N’− (メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ] フェン−1−イル }グリシルグリシンアミド、テクネチウム−99m−錯体がRCP＞90％で合成されたことを示す主要なピークを示した。
【０１０４】
実施例6．1− (2−{2−[ (2R) −4− (4−フルオロベンジル) −2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}−5−ヨードフェニル) 尿素の製造
【化２０】
0004234425.tif 000015
A.  18 mLの酢酸中のp−ヨードフェノール (2.2 g、10 mmol) の溶液に、5 mLの中のHNO3 (0.7 mL、70％) の溶液を滴下した。生ずる混合物を周囲温度において攪拌した。30分後、反応混合物を100 mLの氷水により希釈した。沈殿を収集し、100 mLの水で洗浄した。フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、1.2 gの2−ニトロ−4−ヨードフェノールが得られた。
【０１０５】
B.  10 mLのDMF中の式 (g) の化合物 (0.3 g、1.05  mmol) (ここにおいて製造した) の溶液に、K2CO3 (0.45 g、3.2 mmol)、NaI (0.01 g) および2−ニト−4−ヨードロフェノール (0.28 g、1.05 mmol) を添加した。生ずる混合物を70〜80 ℃に加熱した。1時間後、この混合物を真空濃縮し、次いで酢酸エチル (150 mL) の中に取り、水 (3×100 mL)、次いでブラインで洗浄した。有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮すると、油状物が得られた。シリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、0.28 gの式 (l) の化合物が得られた。
【０１０６】
C.  5 mLのエタノール中の式 (l) の化合物 (0.28 g、0.55 mmol) の溶液に、5 mLのエタノール中の塩化錫 (II) 二水和物 (0.616 g、2.73 mmol) の溶液を添加した。生ずる混合物を75 ℃に加熱した。1時間後、この混合物を真空濃縮し、次いで酢酸エチル (100 mL) の中に取り、水中の1N NaOH (3×100 mL) およびブラインで洗浄した。有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮すると、油状物が得られた。シリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、式 (m) の化合物 (0.25 g) が得られた。
【０１０７】
D.  3 mLのAcOH中の式 (m) の化合物 (0.25 g、0.52 mmol) の溶液に、水 (6 mL) を添加した。生ずる混合物を周囲温度において10分間攪拌し、次いで1 mLの水中のKOCN (0.085 g、1.0 mmol) の溶液をを滴下した。反応混合物を周囲温度において10分間攪拌し、次いで55 ℃に5分間加熱した。反応が完結した後、反応混合物を真空濃縮し、次いでCH2Cl2 (50 mL) の中に取り、水中の2N NaOH (2×100 mL) およびブラインで洗浄した。有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空濃縮すると、油状物が得られた。シリカのフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製すると、式 (n) の化合物 (0.16 g) が白色固体状物として得られた。NMR (CDCl3) 9.0 (s、1)、8.6 (s、1)、7.3 (m、2)、7.0 (t、3)、6.6 (d、1)、4.9 (s、2)、4.7 (m、2)、4.4 (m、1)、3.4〜3.6  (m、3)、3.0 (m、1)、2.8 (m、1)、2.6 (d、1)、2.2 (m、1)、2.0 (m、2)、1.2〜1.4 (m、3) ppm。
【０１０８】
実施例7．1−(2−{2−[(2R)−4−(4−フルオロベンジル)−2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}−5−ヨード−123I−フェニル) 尿素の製造
A.  300 μlのDMF中の上で製造した式 (n) の化合物 (1 mg) および10μgの硫酸銅 (II) の溶液に、1 mCiのヨウ化ナトリウム [123I] 溶液を添加した。生ずる反応混合物を一夜100 ℃に加熱した。1 mLの半飽和水性NaHCO3溶液を添加した後、生成物を2 mLのCH2Cl2で抽出した。有機層を窒素ガス流中で蒸発乾固した。RP−カートリッジ [溶出液：EtOH／水 (2：1)] を使用して、所望生成物、1−(2−{2−[(2R)−4−(4−フルオロベンジル)−2−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ}−5−ヨード−123I−フェニル) 尿素を精製した。
【０１０９】
B. 前述したように同様な方法において、式 (I) の他の化合物を製造する。
実施例8．N’− (メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ] フェン−1−イル }グリシンアミド、テクネチウム−99m−錯体の製造
A.  5 mLのジクロロメタン中の156.7 mg (0.4 mmol) の5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]アニリン (式 (j) の化合物に対応する) 、(291.4 mg、0.4 mmol)、N−(S−トリチル−2−メルカプト−1−イル)−N−(S−トリチル−5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル)グリシン (これはA. Mahmood et al., A N2S2−Tetradentate Chelate for Solid−Phase Synthesis : Technetum, Rhenium in Chemistry and Nuclear Medicine (1999), Vol. 71に従い合成することができる)、およびN−ヒドロキシスクシンイミド (45.5 mg、0.4 mmol) の攪拌した溶液に、3 mLのジクロロメタン中のジシクロヘキシルカーボジイミド (81.4 mg、0.4 mmol) の溶液を添加した。
【０１１０】
生ずる懸濁液を一夜周囲温度において攪拌した。濾過後、生ずる溶液を減圧下に蒸発させた。シリカゲルのクロマトグラフィー (溶離液：ジクロロメタン／メタノール、98：2) 後、所望生成物、N’− (S−トリチル−2−メルカプトエト−1−イル) −N’− (S−トリチル−5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシンアミド (352 mg、79.2％)が白色粉末として単離された。
元素分析：
計算値：  C 71.36  H 5.90  N 6.30  O 5.76  S 5.77
実測値：  C 71.08  H 6.13  N 6.05  O       S 5.52
【０１１１】
B.   N’− (S−トリチル−2−メルカプトエト−1−イル) −N’− (S−トリチル−5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシン (111.1 mg、0.1 mmol) を5 mLのトリフルオロ酢酸中に溶解した。トリエチルシラン (48 μl、0.3 mmol) を添加した後、生ずる懸濁液を周囲温度において15分間攪拌した。濾液を減圧下に蒸発させ、残留物を7 mLのジエチルエーテルで粉砕した。
【０１１２】
沈殿を周囲温度において1時間攪拌し、濾過し、所望生成物、N− (メルカプト−1−イル) −N− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシンアミド、ビス−トリフルオロ酢酸塩 (75 mg、87.8％) が白色固体状物として得られた。
計算値：  C 44.99  H 4.60  N 8.20  O 14.93  S 7.51
実測値：  C 44.71  H 4.89  N 8.03  O        S 7.22
【０１１３】
C.  酒石酸二ナトリウム (1 mg) および上で製造したN− (2−メルカプト−1−イル) −N− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシンアミド、ビス−トリフルオロ酢酸塩 (100 μg) を500 μlのリン酸ナトリウム緩衝液 (0.1 M、pH＝8.5) 中に溶解した。37.5MBq99mTc−発生剤溶出液の添加後、5 μlの塩化錫 (II) 溶液を添加し、この混合物を100 ℃に10分間加熱した。HPLC分析は、所望生成物、N’− (2−メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザ−2−オキソペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ] フェン−1−イル }グリシンアミド、テクネチウム−99m−錯体がRCP＞91％で合成されたことを示す主要なピークを示した。
【０１１４】
実施例9．N’− (2−メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ] フェン−1−イル }グリシンアミド、テクネチウム−99m−錯体の製造
A.  5 mLのジクロロメタン中の5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]アニリン  (156.7 mg (0.4 mmol) およびトリエチルアミン (40.5 mg、0.4 mmol) を3 mLのジクロロメタン中の臭化α−ブロモアセチル (63 mg、0.4 mmol) の溶液をを滴下した。生ずる溶液を一夜周囲温度において攪拌した。
【０１１５】
溶媒を減圧下に蒸発させた。シリカゲルのクロマトグラフィー (溶離液：ジクロロメタン／メタノール、99：1) 後、所望生成物、N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }−2−ブロモアセトアミド (175 mg、85.3%) が白色粉末として単離された。
元素分析：
計算値：  C 51.53  H 4.72  N 8.19  O 5.76
実測値：  C 51.23  H 4.99  N 7.92  O
【０１１６】
B.  1,4−ジオキサン (5 mL) 中のN−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }−2−ブロモアセトアミド (165 mg、0.42 mmol) およびN,N−ビス−(S−(4−メトキシベンジル)−2−メルカプトエト−1−イル)エチレンジアミン(841.3 mg、2 mmol) (Z. P. Zhuang et al., Bioconjugate Chemistry (1999), Vol. 10, p. 159に従い合成した) の攪拌した溶液を還流下に24時間加熱した。残留物を15 mLのジクロロメタン中に溶解し、飽和水性炭酸ナトリウム溶液で洗浄した。MgSO4で乾燥した後、溶媒を減圧下に蒸発させた。
【０１１７】
シリカゲルのクロマトグラフィー (溶離液：ジクロロメタン／メタノール、99：1) 後、所望生成物、N−(S−(4−メトキシベンジル)−2−メルカプトエト−1−イル) −N− (S−(4’−メトキシベンジル)−5−メルカプト−3−アザペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシン (154 mg、43％)が白色固体状物として単離された。
計算値：  C 61.99  H 6.50  N 8.22  O 9.38  S 7.52
実測値：  C 61.71  H 6.58  N 8.03  O       S 7.28
【０１１８】
C.  N−(S−(4−メトキシベンジル)−2−メルカプトエト−1−イル) −N− (S−(4’−メトキシベンジル)−5−メルカプト−3−アザペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2−(2R)−メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシンアミド (140 mg、0.164 mmol) を0 ℃において5 mLのトリフルオロ酢酸中に溶解した。Hg(OAc)2 (104.5 mg、0.328 mmol) を添加した後、生ずる混合物を0 ℃において30分間攪拌し、H2Sで15分間飽和させた。
【０１１９】
濾過後、溶媒を減圧下に蒸発させた。生ずる褐色油状物を3 mLのジエチルエーテルで粉砕した。濾過後、所望生成物、N’− (2−メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシンアミド、トリス−トリフルオロ酢酸塩(126  mg、80.5％) が白色粉末として単離された。
計算値：  C 42.79  H 4.44  N 7.34  O 15.09  S 6.72
実測値：  C 42.48  H 4.73  N 7.02  O        S 6.76
【０１２０】
D.  酒石酸二ナトリウム (1 mg) および上で製造したN’− (2−メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ]フェン−1−イル }グリシンアミド、トリス−トリフルオロ酢酸塩 (100 μg) を500 μlのリン酸ナトリウム緩衝液 (0.1 M、pH＝8.5) 中に溶解した。
【０１２１】
37.5MBq99mTc−発生剤溶出液の添加後、5 μlの塩化錫 (II) 溶液を添加し、この混合物を100 ℃に10分間加熱した。HPLC分析は、所望生成物、N’− (2−メルカプトエト−1−イル) −N’− (5−メルカプト−3−アザペント−1−イル) −N−{5−クロロ−2−[2−[4− (4−フルオロベンジル) −2− (2R) −メチルピペラジン−1−イル]−2−オキソエトキシ] フェン−1−イル }グリシンアミド、テクネチウム−99m−錯体がRCP＞91％で合成されたことを示す主要なピークを示した。
【０１２２】
実施例10．ヒト脳におけるCCR1の免疫組織学的局在化
材料および方法
アルツハイマー病および対照の脳におけるケモカインレセプターCCR1の免疫組織学的染色のために、死亡から12時間以内の剖検において得られた脳からの組織試料の第1グループを使用した。前頭皮質および海馬からのパラフィンに埋め込んだ、厚さ5μmの、非染色切片をすべての免疫組織学的および組織化学的染色のために使用した。
【０１２３】
スライドをキシレン中で前もってパラフィン処理し、0.005％のトリトンX−100を含有するリン酸緩衝生理食塩水 (PBS−T) に対して水和した。光学顕微鏡検査 (色原体としてDABを使用する) のために、スライドをメタノール中の0.01％H2O2と30分間インキュベートすることによって、内因的ペルオキシダーゼ活性をブロックした。PBS中の10％正常ヤギ血清 (NGS) 中で30分間ブロックすることによって、非特異的結合を減少させた。
【０１２４】
一次抗体［ウサギ抗CCR1、(N−末端ペプチド)；マウス抗ニューロフィラメント；マウス抗GFAP；マウス抗Tau (AT8)；マウス抗CD68 (クローンKP1)；マウス抗β−アミロイド (Boehringer Mannheim、＃1 381 431)；ウサギ抗CCR8、(N−末端ペプチド)］をPBS−T中で希釈し、スライドを室温において一夜インキュベートした。Biogenex ABCTMキットを使用して、染色を完結した。すべての洗浄において、PBS−Tを使用した。DAB反応が完結したとき、スライドをギルのヘマトキシリン (Gill’s Hematoxylin) で薄く対比染色し、脱水し、パーマウント (Permount) のカバーガラスをかぶせた。カバーガラスをかぶせる前に、クロモーゲンがTrue BlueTMである以外同一方法を使用して、いくつかのスライドをAβペプチドに対する抗体で再染色した。
【０１２５】
免疫蛍光二重標識化研究のために、スライドを脱パラフィンし、10％NGSでブロックし、両方の一次抗体のカクテルと一夜インキュベートした。スライドをPBS−Tで洗浄し、次いで各々1／50希釈のヤギ二次抗体のカクテルとインキュベートした。内因的 (黄緑色) 組織の蛍光からの混乱を回避するために、二次抗体をCy3 (εmax＝565 nm；ヤギ抗マウス、Amersham)またはCy5 (εmax＝700 nm；ヤギ抗ウサギ、Amersham) に対して複合化した。スライドをクリプトン−アルゴンのレーザーを使用する共焦点顕微鏡 (2010型、Molecular Dynamics、カリフォルニア州サニーベイル) で見た。
【０１２６】
引き続いて、認識的に正常の中年過ぎの人からの10症例および臨床的痴呆等級 (CDR) について評価したアルツハイマー病の患者からの40症例から構成された脳組織の第2グループを獲得し、CCR1の免疫組織化学的発現について評価した。Aβ1-42に対して特異的なモノクローナル抗体 (クローン6D5) (散在性、初期アミロイド沈着ならびにいっそう成熟した神経炎性プラークについてのマーカー) をUrsula Moenning博士から入手した以外前述したような他のマーカーについて、試料を獲得した。これらの抗体をVector RedTM (Vector Labs) で可視化した。また、Moenning博士により、Aβ1-40 (クローン＃13E9) に対して特異的なモノクローナル抗体、すなわち、後期段階の疾患において見出されるプラークについてのマーカーが提供され、これをTrue BlueTMで可視化した。
【０１２７】
結果
脳の両方の組において、アルツハイマー病の病理学を有する領域は特徴的な染色パターンを示した。海馬構成体および脳皮質の両方の場合において、CCR1免疫反応性は神経炎 (すなわち、老人性) プラークに関連して見出された。免疫染色された構造は卵形に丸くなり、通常細胞本体に関連しなかった。それらはサイズが変化し、点状粒状物質で充填されているように見えた。これらの構造は老人性プラーク中のアミロイド沈着付近に「コロナ」を形成することが見出されたが、Aβそれ自体と区別された (第1図〜第4図)。
【０１２８】
第1図の上部パネルは、CCR1陽性プロセスのコロナを有する神経炎性プラークを示す。アルツハイマー病の症例におけるいくつかのCA1およびCA3ニューロンの神経細胞本体は、時にはCCR1抗体により染色された。第1図における下部パネルはこの結合を図解する。この染色は内神経原繊維のもつれ (NFT) または顆粒空胞体と区別されたが、それは普通にこれらの変性的変化を有するニューロンの体質の中に存在した。
【０１２９】
CCR1レセプタータンパク質の細胞外 (N−末端) 領域からの16マーのポリペプチドと抗体を前インキュベートすると、第2図に図解するように、すべての組織の染色は完全にブロックされた。特に、第2図中の上部の画像はポリペプチドと前インキュベートしたCCR1抗体によるアルツハイマー病の脳における染色の欠如を示すが、第2図中の下部の画像はインキュベートしなかった抗体で染色した姉妹切片における多数のCCR1陽性構造を示す。
【０１３０】
二重標識化研究において、第4図に示すように、ほとんどすべてのCCR1陽性構造はAβ1-42を含有する神経炎性プラークに関連することが示された。拡散性プラーク中のAβ1-42 (第5図) は、典型的にはCCR1に関連せず、また任意の有意な細胞の応答に関連しなかった。アルツハイマー病のいっそう進行した症例において、多数のより多くのAβ1-40陽性プラークが見られた。これらのすべてではなく、いくつかは第3図に示すようにCCR1染色に関連した。いくつかの症例において、CCR1陽性プラークはAβ1-40染色を完全に含有しなかった。
【０１３１】
有意なニューロンの喪失およびグリオーシスが見られた、重度のアルツハイマー病の症例において、海馬台および内嗅野中の反応性神経膠星状細胞はまたCCR1陽性であった。それほど重度でない症例において、CCR1陽性反応性神経膠星状細胞は異常であった。
二重標識化された切片の共焦点顕微鏡検査において、CCR1免疫反応性はニューロフィラメントプロセスと共局在化された。マクロファージ／小グリア細胞マーカーCD68はCCR1染色に関連せず、また異常にリン酸化されたタウタンパク質に対するAT8抗体に関連しなかった。光学顕微鏡検査の研究から期待されるように、CCR1免疫反応性は大グリア細胞症の領域においてGFAPと共局在化した。
【０１３２】
アルツハイマー病の脳組織および、染色法のための陽性の内部の対照として働く、対照脳組織の両方において、脳血管内に存在する白血球は強くCCR1陽性であった。第5図において、2つの脈管内細胞のCCR1陽性染色が認められる (矢印)。また、いくつかのCCR1陽性物質が星印において見られるが、一般に、拡散性プラークはCCR1に関連しない。
第2の研究 (ここで患者はCDRスコアにより既知の臨床的カテゴリーにグループ化した) からの海馬組織を使用して、海馬におけるCCR1陽性プラーク様構造の数の定量的評価を行った。臨床的 (CDR) 状態に関して手探りの条件下に、個々の切片の組織学的評価を実施した。不偏コンピュータ化法を使用して、体積の解析を実施した。
【０１３３】
第3図は、CCR1陽性ジストロフィー性神経突起 (褐色の染色) とAβ1-40を含有する神経炎性プラーク (青色の染色) との間の組織学的関係を証明する。第3図において、CCR1陽性プロセスはアミロイドと区別されることが認められる。Aβ1-40を含有するプラーク、ならびにCCR1陽性神経突起のクラスターは離散し、容易に計数された。海馬のスライドをCCR1陽性コロナの数、Aβ1-40陽性プラークの数、および両方のマーカーを含有するプラークの数について評価した。内嗅野を含む、全海馬形成内の領域 (例えば、CA3、CA1、および海馬台) により構造を計数し、次いで合計した。値は海馬蛍光顕微鏡の厚さ5μmの断面で表した、海馬中の構造物の数の相対的推定値である。第6図は、CDRスコアによるCCR1とAβ1-40との間の関係を示す。
【０１３４】
Aβ1-42はいっそう豊富であり、かつ容易に計数できない「散在性」プラークを形成するので、Aβ1-42の定量は異なる技術を必要した (第5図)。これらのスライドについて、コンピューター援用法 (C.A.S.T.立体学) を使用して、Aβ1-42により占有される内嗅野の面積を推定した。この面積をスライド上の皮質の総面積の百分率として表した。神経炎性プラークおよび拡散性プラークにより占有される領域を別々に計数した。コンピューター駆動顕微鏡段階は、組織切片のランダム (不偏) 評価を保証した。Aβ1-42により占有される内嗅野 (拡散性および神経炎性の両方) の容量％を、第7図において内嗅野の姉妹切片中のCCR1陽性プラークの数と比較する。
【０１３５】
第6図が示すように、海馬中のCCR1陽性ジストロフィー性神経突起の平均数はアルツハイマー病におけるCDRスコアの関数として増加する。初期のアルツハイマー病中の陽性構造の数 (CDR 0.5) は、対照 (CDR 0) より上に増加する。対照とアルツハイマー病のグループとの間の差はグループCDR 2まで統計的に有意とならなかったが、これらの発現パターンはCCR1がアルツハイマー病の非常に初期の段階においてさえジストロフィー性ニューロンプロセスにおいてアップレギュレートされることを支持する。Aβ1-40プラークの数はアルツハイマー病において後期まで上昇しないことが認められる。こうして、脳組織中のCCR1発現はアルツハイマー病の比較的初期のインジケーターであると考えることができる。
【０１３６】
内嗅野中のCCR1陽性プラークの数とAβ1-42の量との間の相関は第7図に示されている。一般に、内嗅野におけるCCR1レベルはアルツハイマー病の状態が増加するにつれて上昇する；しかしながら、サンプリングした面積は第6図においてサンプリングした面積よりも非常に小さい。しかしながら、Aβ1-42レベルはアルツハイマー病において初期に上昇することが認められる。
【０１３７】
実施例11．14C標識化トレーサーを使用する脳有効性の評価
1−(5−クロロ−2−｛2−［(2R)−４−(4−フルオロベンジル)−2−メチルピペラジン−1−イル］−2−オキソエトキシ｝フェニル) 尿素の14Cアナローグを調製し、脳有効性の薬物速度論の研究のために使用した。334,000 dpm／投与量を含有するアナローグを36 mg／kgで、カニューレ挿入頸静脈を通してマウスに静脈内注入した。注入後1、15、30、120、および1440分にマウス (4匹のグループ中の) をCO2吸入により殺し、次いで全血を取出すために心臓内穿刺した。次いで胸部を開き、心臓を通してマウスにリン酸緩衝生理食塩水を5分間潅流して、残留する放射性薬剤を血液区画から除去した。
【０１３８】
次いで脳を取出し、秤量し、脳皮質の2つの別々の片中の放射能の量のためにサンプリングした。2つの試料における組織1 mg当たりの放射能レベルを平均し、第8図に図解するように、データを総脳重量に対して正規化した。棒は標準誤差を表す (n＝4マウス／時点)。特に、第8図中のグラフが示すように、全マウス脳中の14Cアナローグについて崩壊の総数／分 (DPM) は注入後2時間までに無視できるレベルに減少する。1分の時点において、計算により、注入した投与量の平均約3％が全マウス脳 (平均重量450 g) の中に見出されることが示される。
【０１３９】
また、マウスから取出した全血から調製した血漿試料を放射能含量について分析した。等しい体積の脳および血漿中の放射能の量を、第9図に図解するように、注入した投与量の百分率として経時的に比較した。血漿1 ml当たりの見出された注入投与量 (i.d.) の％は経時的に減少して、2時間後に無視できるレベルに到達する。脳レベルに対する比較のために、DPM／脳の総数を脳重量に対して正規化し、脳組織1 g当たりのi.d.の百分率として表す。グラフに示したマウス脳の1 g中のi.d.の％は現実の値を約2倍だけ過大評価するので、マウス脳は平均約450 mgであることが認められる。脳中のアナローグのレベルは血漿レベルと共同するようになることが明らかである。アナローグは親油性であるが、正常のマウスの脳はCCR1アンタゴニストのための蓄積部位のように思われない。
【０１４０】
実施例12．他の神経変性疾患におけるCCR1発現
材料および方法
7つの異なる神経変性疾患 (アルツハイマー病以外) からの合計29症例からの剖検脳組織の組織学的試料を獲得し、CCR1含量について研究した。上の実施例10に記載されているように、スライドをCCR1に対する抗体で免疫染色し、特異的神経変性溶解に関して手探りの条件下に概観した。引き続いて、姉妹切片をCCCR1に対する抗体 (色原体としてDAB) およびAβ1-42に対する抗体 (色原体ンとしてVector RedTM) 二重標識化した。検査した疾患を単位列挙する：
【０１４１】
パーキンソン病 (PD)                                   6症例
Guamのパーキンソン症候群の痴呆                        3症例
コンゴフィリック脈管疾                                4症例
多梗塞性痴呆 (MID)                                    4症例
散在性レウイ体 (Lewy Body) 痴呆 (BLBD)                4症例
ピック病                                              4症例
進行性上核麻痺 (Progressive Supranuclear Palsy)       4症例
染色したスライドをCCR1およびAβ1−42含量について組織学的目盛りを使用して等級づけ、ここで0は染色の非存在であり、0.5は稀な発現を示し、そして等級1〜4は発現の増加するレベルを示し、4は高度に豊富であることを示す。
【０１４２】
結果
パーキンソン病のすべての6症例およびGuamのパーキンソン症候群の痴呆のすべての症例はCCR1について陰性であった。CCR1陽性プラーク様構造物は、アルツハイマー病において見出されるものに類似し、コンゴフィリック血管損傷のすべての4症例、DLBDの4症例のうちの3症例、PSPの4症例のうちの2症例、およびMIDおよびピック病の両方の4症例のうちの1症例において観測された。
【０１４３】
二重標識化研究において、アルツハイマー病の純粋な症例において見出される (実施例10) ように、これらのCCR1陽性プラーク様構造物がAβ1-42に関連するという仮定が確認された。第10図は、パーキンソン病 (脳中のCCR1について陰性であった) を除外した、すべての疾患についてグラフの形で病理学的評価の結果を示す。基本的には、Aβ1-42陽性神経炎性プラークがまた存在しないかぎり、CCR1発現は脳組織試料の中に決して見出されなかった。
【０１４４】
コードが破壊された後、CCR1発現を示すピック病の1症例をアルツハイマー病の診断を保持することが発見された。また、CCR1を有する2つのPSP症例は同時のアルツハイマー病とともに診断された。コンゴフィリック血管損傷およびDLBDは、アルツハイマー病病理学に精密に関連する疾患である。したがって、それらはまたAβ1-42に関連して高いレベルのCCR1発現を有するであろうことは驚くべきことではない。中年過ぎの個体群において、アルツハイマー病の病理学は他の疾患のプロセスをオーバーレイする症例がしばしば存在する。
【０１４５】
これはMIDの4症例のうちの1症例において見出された。これらの結果が示唆するように、脳中に存在することがある他の同時の病理学的プロセスを無視して、CCR1はアルツハイマー病の病理学 (特に、Aβ1-42陽性神経炎性プラーク) に精密に関連するマーカーである。それ自体、それはアルツハイマー病の病理学に対して高度に特異的であるようであり、したがって疾患の進行の診断の代理マーカーとして有用であることができる。
【０１４６】
本発明を特定の態様を参照して記載してきたが、本発明の範囲および精神から逸脱しないで、種々の変化が可能であり、かつ評価を置換することができることを理解すべきである。さらに、特定の状況、物質、組成物、プロセス、プロセスの1または2以上の工程、本発明の目的、精神および範囲に適合するように、多数の変更を行うことができる。すべてのこのような変更は添付された特許請求の範囲内に入ることを意図する。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図1は、アルツハイマー病の脳組織におけるCCR1の発現を示す。
【図２】  図2は、アルツハイマー病の脳組織におけるCCR1の抗体特異性を示す。
【図３】  図3は、CCR1−Aβ1-40二重標識化組織切片を示す。
【図４】  図4は、CCR1およびAβ1-42について二重標識化精巣上体神経炎プラークを示す。
【図５】  図5は、アルツハイマー病の脳における拡散性Aβ1-42の染色を示す。
【図６】  図6は、CDRスコアによるCCR1とAβ1-40との間の関係を示すグラフである。
【図７】  図7は、CDRスコアによるCCR1とAβ1-42との間の関係を示すグラフである。
【図８】  図8は、全脳放射能の経時的減少を証明するグラフである。
【図９】  図9は、脳および血漿の中に注入された投与量の百分率を示すグラフである。
【図１０】  図10は、他の神経変性疾患におけるCCR1発現を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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