【手続補正書】
【提出日】平成25年10月2日(2013.10.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液サンプルにおける総ヘモグロビンに対する総糖化ヘモグロビンのパーセント、または総ヘモグロビンに対する糖化ヘモグロビンＡ１ｃのパーセントを、該血液サンプル中の総ヘモグロビンを別のプロセスにおいて測定することなく、直接定量するための方法であって：
ａ）糖化ペプチドまたは糖化アミノ酸を含むタンパク断片を、フルクトシルアミノ酸オキシダーゼに接触させて過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を生成する工程であって、該タンパク断片は、該血液サンプルを、１）該血液サンプル中の赤血球からヘモグロビンを放出させる溶解バッファー、２）低分子量還元性物質を選択的に酸化する第１酸化剤、３）高分子量還元性物質を選択的に酸化する第２酸化剤、および４）糖化ヘモグロビンを糖化ペプチドまたは糖化アミノ酸に消化するプロテアーゼ、に接触させることによって生成される、工程；
ｂ）工程ａ）において生成されるＨ２Ｏ２を、ペルオキシダーゼの存在下に発色性物質に接触させて測定可能な信号を生成する工程；ならびに、
ｃ）工程ｂ）において生成される信号を、較正曲線に適用することによって、該血液サンプル中の総ヘモグロビンを別に測定することなく、該サンプル中の総糖化ヘモグロビンのパーセント、または糖化ヘモグロビンＡ１ｃのパーセントを決定する工程、
を含む、方法。
【請求項２】
前記第１酸化剤が、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナンか、またはＮ−エチルマレイミドであり、前記第２酸化剤がテトラゾリウム塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記溶解バッファーが、前記第１酸化剤または前記第２酸化剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記溶解バッファーが、前記第１酸化剤および前記第２酸化剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記溶解バッファーが、前記第１酸化剤、前記第２酸化剤、および前記プロテアーゼを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記溶解バッファーが前記プロテアーゼを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記第１酸化剤および前記第２酸化剤が、単一組成物中に処方される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記第１酸化剤および前記第２酸化剤が、別の組成物中に処方される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記プロテアーゼが、前記第１酸化剤または前記第２酸化剤と共に、単一組成物中に処方される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記第１酸化剤、前記第２酸化剤、および前記プロテアーゼが、単一組成物中に処方される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ、前記ペルオキシダーゼ、および前記発色性物質が、単一組成物中に処方される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
テトラゾリウム塩が、２−（４−ヨードフェニル）−３−（２，４−ジニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム一ナトリウム塩、または２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム一ナトリウム塩である、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記発色性物質が、Ｎ−カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）−ジフェニルアミンナトリウム塩（ＤＡ−６４）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−ヘキサ（３−スルホプロピル）−４，４’，４”，−トリアミノ−トリフェニルメタン６ナトリウム塩（ＴＰＭ−ＰＳ）、または１０−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジンナトリウム塩（ＤＡ−６７）である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記血液サンプルが、全血液、または収集血球である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記プロテアーゼが、エンド型プロテアーゼか、またはエキソ型プロテアーゼである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記プロテアーゼが、プロテイナーゼＫ、プロナーゼＥ、サーモリシン、スブチリシン、およびウシすい臓プロテアーゼから成る群から選ばれる、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記プロテアーゼが、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属またはバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属微生物起源の中性プロテアーゼである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記プロテアーゼが、２から３０のアミノ酸残基の糖化ペプチドを生成する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記プロテアーゼが、糖化グリシン、糖化バリン、または糖化リシン残基、あるいは、糖化グリシン、糖化バリン、または糖化リシン残基を含む糖化ペプチドを生成する、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ペルオキシダーゼが、西洋ワサビペルオキシダーゼである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記糖化ペプチド、または糖化アミノ酸を含む、前記タンパク断片が、前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼおよび前記ペルオキシダーゼに、順次、または同時に接触される、請求項１〜１０および１２〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
疾患または障害の予後または診断に使用される、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記疾患または障害が、糖尿病である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
血液サンプルにおける総ヘモグロビンに対する総糖化ヘモグロビンのパーセント、または総ヘモグロビンに対する糖化ヘモグロビンＡ１ｃのパーセントを、血液サンプル中の総ヘモグロビン含量の別途の測定を要することなく、直接定量するためのキットであって：
ａ）血球を溶解してヘモグロビンを放出させる溶解バッファー；
ｂ）低分子量還元性物質を選択的に酸化する第１酸化剤；
ｃ）高分子量還元性物質を選択的に酸化する第２酸化剤；
ｄ）ヘモグロビンを、糖化ペプチドまたは糖化アミノ酸を含むタンパク断片に加水分解するプロテアーゼ；
ｅ）糖化ペプチドおよび糖化アミノ酸と反応して、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を生成する、フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ；
ｆ）ペルオキシダーゼおよび発色性物質；
ｇ）較正曲線を構築するために使用される、既知パーセントの糖化ヘモグロビン、または既知パーセントの糖化ヘモグロビンＡ１ｃを有する較正因子（単数または複数）、ならびに、
ｈ）請求項１に記載の方法を実行するための指示書、
を含む、キット。
【請求項２６】
前記第１酸化剤および前記第２酸化剤が、前記溶解バッファーの中に含まれる、請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
前記第１酸化剤および前記第２酸化剤が、前記プロテアーゼと同じバッファーに含まれる、請求項２５に記載のキット。
【請求項２８】
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ、前記ペルオキシダーゼ、および前記発色性物質が、単一組成物中に処方される、請求項２５に記載のキット。
【請求項２９】
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項２５〜２８のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３０】
前記第１酸化剤が、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナンか、またはＮ−エチルマレイミドであり、前記第２酸化剤がテトラゾリウム塩である、請求項２５〜２９のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３１】
前記テトラゾリウム塩が、２−（４−ヨードフェニル）−３−（２，４−ジニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム一ナトリウム塩、または２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム一ナトリウム塩である、請求項３０に記載のキット。
【請求項３２】
前記発色性物質が、Ｎ−カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）−ジフェニルアミンナトリウム塩（ＤＡ−６４）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−ヘキサ（３−スルホプロピル）−４，４’，４”，−トリアミノ−トリフェニルメタン６ナトリウム塩（ＴＰＭ−ＰＳ）、または１０−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジンナトリウム塩（ＤＡ−６７）である、請求項２５〜３１のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３３】
前記ペルオキシダーゼが、西洋ワサビペルオキシダーゼである、請求項２５〜３２のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３４】
前記プロテアーゼが、エンド型プロテアーゼか、またはエキソ型プロテアーゼである、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３５】
前記プロテアーゼが、プロテイナーゼＫ、プロナーゼＥ、サーモリシン、スブチリシン、およびウシすい臓プロテアーゼから成る群から選ばれる、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３６】
前記プロテアーゼが、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属またはバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属微生物起源の中性プロテアーゼである、請求項２５〜３３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項３７】
血液サンプルにおける総ヘモグロビンに対する総糖化ヘモグロビンのパーセント、または総ヘモグロビンに対する糖化ヘモグロビンＡ１ｃのパーセントを、該血液サンプル中の総ヘモグロビンを別のプロセスにおいて測定することなく、直接定量するための方法であって：
ａ）糖化ペプチドまたは糖化アミノ酸を含むタンパク断片を、フルクトシルアミノ酸オキシダーゼに接触させて過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を生成する工程であって、該タンパク断片は、該血液サンプルを、１）該血液サンプル中の赤血球からヘモグロビンを放出させる溶解バッファー、２）テトラゾリウム塩である酸化剤、および３）糖化ヘモグロビンを糖化ペプチドまたは糖化アミノ酸に消化するプロテアーゼ、に接触させることによって生成され、ここで、該フルクトシルアミノ酸オキシダーゼは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含むか、または配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含むフルクトシルアミノ酸オキシダーゼの機能的断片もしくは誘導体であり、該機能的断片もしくは該誘導体は、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含むフルクトシルアミノ酸オキシダーゼの活性の少なくとも５０％を保持する、工程；
ｂ）工程ａ）において生成されるＨ２Ｏ２を、ペルオキシダーゼの存在下に発色性物質に接触させて測定可能な信号を生成する工程；ならびに、
ｃ）工程ｂ）において生成される信号を、較正曲線に適用することによって、該血液サンプル中の総ヘモグロビンを別に測定することなく、該サンプル中の総糖化ヘモグロビンのパーセント、または糖化ヘモグロビンＡ１ｃのパーセントを決定する工程、
を含む、方法。
【請求項３８】
前記溶解バッファーが前記酸化剤を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記溶解バッファーが前記プロテアーゼを含む、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記酸化剤および前記プロテアーゼが、単一組成物中に処方される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記テトラゾリウム塩が、２−（４−ヨードフェニル）−３−（２，４−ジニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム一ナトリウム塩、または２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム一ナトリウム塩である、請求項３７〜４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記発色性物質が、Ｎ−カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）−ジフェニルアミンナトリウム塩（ＤＡ−６４）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−ヘキサ（３−スルホプロピル）−４，４’，４”，−トリアミノ−トリフェニルメタン６ナトリウム塩（ＴＰＭ−ＰＳ）、または１０−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジンナトリウム塩（ＤＡ−６７）である、請求項３７〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記ペルオキシダーゼが、西洋ワサビペルオキシダーゼである、請求項３７〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記プロテアーゼが、エンド型プロテアーゼか、またはエキソ型プロテアーゼである、請求項３７〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記プロテアーゼが、プロテイナーゼＫ、プロナーゼＥ、サーモリシン、スブチリシン、およびウシすい臓プロテアーゼから成る群から選ばれる、請求項３７〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記プロテアーゼが、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属またはバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属微生物起源の中性プロテアーゼである、請求項３７〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記機能的断片または前記誘導体が、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含むフルクトシルアミノ酸オキシダーゼの活性の少なくとも９０％を保持する、請求項３７〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
血液サンプルにおける総ヘモグロビンに対する総糖化ヘモグロビンのパーセント、または総ヘモグロビンに対する糖化ヘモグロビンＡ１ｃのパーセントを、血液サンプル中の総ヘモグロビン含量の別途の測定を要することなく、直接定量するためのキットであって：
ａ）血球を溶解してヘモグロビンを放出させる溶解バッファー；
ｂ）テトラゾリウム塩である酸化剤；
ｃ）ヘモグロビンを、糖化ペプチドまたは糖化アミノ酸を含むタンパク断片に加水分解するプロテアーゼ；
ｄ）糖化ペプチドおよび糖化アミノ酸と反応して、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）を生成する、フルクトシルアミノ酸オキシダーゼであって、該フルクトシルアミノ酸オキシダーゼは、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含むか、または配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含むフルクトシルアミノ酸オキシダーゼの機能的断片もしくは誘導体であり、該機能的断片もしくは該誘導体は、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含むフルクトシルアミノ酸オキシダーゼの活性の少なくとも５０％を保持する、フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ；
ｅ）ペルオキシダーゼおよび発色性物質；
ｆ）較正曲線を構築するために使用される、既知パーセントの糖化ヘモグロビン、または既知パーセントの糖化ヘモグロビンＡ１ｃを有する較正因子（単数または複数）、ならびに、
ｇ）請求項３７に記載の方法を実行するための指示書、
を含む、キット。
【請求項５０】
前記酸化剤が、前記溶解バッファーの中に含まれる、請求項４９に記載のキット。
【請求項５１】
前記プロテアーゼが、前記溶解バッファーの中に含まれる、請求項４９または５０に記載のキット。
【請求項５２】
前記酸化剤および前記プロテアーゼが、単一組成物中に処方される、請求項４９に記載のキット。
【請求項５３】
前記フルクトシルアミノ酸オキシダーゼが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含む、請求項４９に記載のキット。
【請求項５４】
前記テトラゾリウム塩が、２−（４−ヨードフェニル）−３−（２，４−ジニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム一ナトリウム塩、または２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム一ナトリウム塩である、請求項４９〜５３のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５５】
前記発色性物質が、Ｎ−カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）−ジフェニルアミンナトリウム塩（ＤＡ−６４）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”−ヘキサ（３−スルホプロピル）−４，４’，４”，−トリアミノ−トリフェニルメタン６ナトリウム塩（ＴＰＭ−ＰＳ）、または１０−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−フェノチアジンナトリウム塩（ＤＡ−６７）である、請求項４９〜５４のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５６】
前記ペルオキシダーゼが、西洋ワサビペルオキシダーゼである、請求項４９〜５５のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５７】
前記プロテアーゼが、エンド型プロテアーゼか、またはエキソ型プロテアーゼである、請求項４９〜５６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５８】
前記プロテアーゼが、プロテイナーゼＫ、プロナーゼＥ、サーモリシン、スブチリシン、およびウシすい臓プロテアーゼから成る群から選ばれる、請求項４９〜５６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項５９】
前記プロテアーゼが、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属またはバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属微生物起源の中性プロテアーゼである、請求項４９〜５６のいずれか一項に記載のキット。
【請求項６０】
前記機能的断片または前記誘導体が、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を含むフルクトシルアミノ酸オキシダーゼの活性の少なくとも９０％を保持する、請求項４９〜５９のいずれか一項に記載のキット。