(57)【要約】  本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの特定の代謝物質に関する。特に、本発明は、上記代謝物質を含む医薬組成物、ならびにその調製のための方法、および疾患の治療におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2016518443.tif 000039
から選択される、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの代謝物質またはその塩。
【請求項２】
【化２】
2016518443.tif 000040
である、請求項１に記載の代謝物質またはその塩。
【請求項３】
請求項１または２に記載の代謝物質またはその塩、および少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬製剤。
【請求項４】
患者の眼内血管新生性疾患を治療する方法であって、請求項１または２に記載の代謝物質またはその塩を、療法を必要としている前記患者に投与するステップを含む方法。
【請求項５】
タンパク質キナーゼ、特にタンパク質チロシンキナーゼに媒介される対象の疾患または障害、より特定的にはＶＥＧＦ−Ｒ受容体依存性疾患の治療のための、請求項１または２のいずれか一項に記載の代謝物質またはその塩の使用。
【請求項６】
タンパク質キナーゼ、特にタンパク質チロシンキナーゼ、さらに特にＶＥＧＦ−Ｒ受容体の異常活性を特徴とする、対象の障害または疾患の治療のための、請求項１または２のいずれか一項に記載の代謝物質の使用。
【請求項７】
対象のＶＥＧＦ−Ｒ活性を阻害する方法であって、治療有効量の請求項１または２のいずれか一項に記載の代謝物質を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項８】
ＶＥＧＦ−Ｒに媒介される対象の障害または疾患を治療する方法であって、治療有効量の請求項１または２のいずれか一項に記載の代謝物質を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項９】
前記疾患が、ＡＭＤまたは糖尿病網膜症である、請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの特定の類縁体に関する。特に、本発明は、上記化合物を含む医薬組成物、ならびにその調製のための方法、およびタンパク質キナーゼ、例えばＶＥＧＦ−Ｒ受容体依存性疾患に媒介される状態の治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
関連するその開示を参照により本明細書に組み込むＷＯ２０１０／０６６６８４では、キナーゼ用の阻害剤としての一連の複素二環式カルボキサミドが開示されている。この開示によって現在では、上記化合物が、いくつかのタンパク質キナーゼの阻害を示すと判明している。ＷＯ２０１０／０６６６８４に記載の化合物は特に、次のタンパク質キナーゼのうち１種または複数の阻害を特に示す：ＥｐｈＢ４、ｃ−Ａｂｌ、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｃ−Ｋｉｔ、Ｒａｆキナーゼ、例として特にＢ−Ｒａｆ、トランスフェクション時再構成（ＲＥＴ）型がん原遺伝子（ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｏ−ｏｎｃｏｇｅｎｅ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、Ｌｃｋ、Ｈｃｋ、ならびに最も特定的には血管内皮成長因子受容体（ＶＥＧＦ−Ｒ）、例として特にＶＥＧＦ−Ｒ１およびＶＥＧＦ−Ｒ２。本化合物はまた、前記キナーゼの突然変異体もさらに阻害する。こうした作用を考慮すれば、ＷＯ２０１０／０６６６８４に記載の化合物は、上述のような種類のキナーゼ、特には言及したキナーゼの特段に異常な活性または過剰な活性に関連した、疾患の治療に使用することができる。こうした種類に含まれる特定の化合物は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドであり、遊離塩基の形態または塩酸塩として入手することができる。Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの構造は、下記に示されている：
【０００３】
【化１】
2016518443.tif 000002
【発明の概要】
【０００４】
Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドは、下記反応を特徴とする、代謝による変換を介して代謝されると知られている。
【化２】
2016518443.tif 000003
【０００５】
代謝反応は、
−  ニトロンおよびオキシムの形成、
−  ピリミジン−カルボン酸およびピリミジン−メタノールの形成、
−  ピリミジン−アミド部分の形成、
−  メチル−５−トリフルオロメチル−ピラゾール部分の脱メチル化、
−  メチルアミノメチル−ピリミジン部分の脱メチル化。
−  Ｎ−アセチル−システイン付加体の形成、
−  Ｎ−アセチル化、
−  硫酸化、
−  グルクロニド化
−  インビトロ代謝反応およびインビボ代謝反応を介した、後述するさらなる特定の代謝物質の生成
を含む。
Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの特定の類縁体が今では同定されており、キャラクタリゼーションされてもいる。上記類縁体は、加齢性黄斑変性等の眼疾患の治療用として実現可能な新しい作用物質である。
【０００６】
したがって、本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの任意の代謝物質またはその塩の単離形態、ならびにその医薬組成物、治療の方法、および使用に関する。
【０００７】
本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの作製方法ならびに／またはその塩および多形、ならびにその医薬組成物、治療の方法、および使用にさらに関する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドＨＣｌ塩形態Ａの粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図２】結晶性Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドＨＣｌ塩形態Ａの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を示す。
【図３】Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドＨＣｌ塩形態Ｂの粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図４】結晶性Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドＨＣｌ塩形態Ｂの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を示す。
【図５】Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド形態Ａの粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図６】結晶性Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド形態Ａの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
（発明の開示）
したがって、本発明は、動物、ヒトおよび／またはインビトロ細胞アッセイにおけるＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの代謝によって形成される、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの類縁体である、下記化合物に関する。
【００１０】
下記の化合物において、化合物の一部の周りにある囲み枠が「酸素化」と表記されているのならば、化合物の提示領域の長さに沿った特定箇所に、追加の酸素、例えばＮ−オキシド基またはヒドロキシル基が存在することを指し示している。
【００１１】
下記の化合物において、化合物の周りにある囲み枠が「グルクロニド」と表記されているのならば、化合物の長さに沿った特定箇所にて、分子の特定部分にグルクロン酸が移転されていること、すなわち、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド分子の一部へのＵＤＰ−グルクロン酸のグルクロン酸構成要素の移転が生起していることを指し示している。
【００１２】
下記の化合物において、化合物の周りにある囲み枠が「硫酸化」と表記されているのならば、化合物の長さに沿った特定箇所にて、分子の特定部分に硫酸が移転されていること、すなわち、ＰＡＰＳ（３’−ホスホ−アデノシン−５’−ホスホ硫酸）による、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド分子の一部への硫酸構成要素の移転が生起していることを指し示している。
【００１３】
したがって、第１の態様において、本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの任意の代謝物質またはその塩の単離形態に関する。
【００１４】
第２の実施形態において、本発明は、代謝物質が、
【化３−１】
2016518443.tif 000004
【化３−２】
2016518443.tif 000005
【化３−３】
2016518443.tif 000006
【化３−４】
2016518443.tif 000007
から選択される、第１の実施形態による代謝物質またはその塩である。
【００１５】
第３の実施形態において、本発明は、代謝物質が、
【化４】
2016518443.tif 000008
から選択される、第１の実施形態による代謝物質またはその塩である。
【００１６】
第４の実施形態において、本発明は、代謝物質が、
【化５】
2016518443.tif 000009
である、第１の実施形態による代謝物質またはその塩である。
【００１７】
第５の実施形態において、本発明は、第１の実施形態から第４の実施形態までの代謝物質またはその塩、および少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬製剤である。
【００１８】
第６の実施形態において、本発明は、患者の眼内血管新生性疾患を治療する方法であって、第１の実施形態から第４の実施形態の代謝物質またはその塩を、療法を必要としている患者に投与するステップを含む方法である。
【００１９】
第７の実施形態において、本発明は、タンパク質キナーゼ、特にタンパク質チロシンキナーゼに媒介される対象の疾患または障害、より特定的にはＶＥＧＦ−Ｒ受容体依存性疾患の治療のための、第１の実施形態から第４の実施形態までのいずれか１つの代謝物質またはその塩の使用である。
【００２０】
第８の実施形態において、本発明は、タンパク質キナーゼ、特にタンパク質チロシンキナーゼ、より特定的にはＶＥＧＦ−Ｒ受容体の異常活性を特徴とする、対象の障害または疾患の治療のための、第１の実施形態から第４の実施形態までのいずれか１つによる代謝物質の使用である。
【００２１】
第９の実施形態において、本発明は、対象のＶＥＧＦ−Ｒ活性を阻害する方法であって、治療有効量の、第１の実施形態から第４の実施形態までのいずれか１つによる代謝物質を対象に投与することを含む方法である。
【００２２】
第１０の実施形態において、本発明は、ＶＥＧＦ−Ｒに媒介される対象の障害または疾患を治療する方法であって、治療有効量の、第１の実施形態から第４の実施形態までのいずれか１つによる代謝物質を対象に投与することを含む方法である。
【００２３】
第１１の実施形態において、本発明は、疾患が、ＡＭＤまたは糖尿病網膜症である、第１０の実施形態の方法である。
【００２４】
第１２の実施形態において、本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の結晶形態である。
【００２５】
第１３の実施形態において、本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩形態Ａを含む、第１２の実施形態による結晶形態である。
【００２６】
第１４の実施形態において、本発明は、形態Ａから本質的になる、第１２の実施形態または第１３の実施形態による結晶形態である。
【００２７】
第１５の実施形態において、本発明は、前記形態Ａが実質的に純粋な形態になっている、第１１から第１４のまでによる結晶形態である。
【００２８】
第１６の実施形態において、本発明は、６．３９１±０．２°、８．６±０．２°、９．５３２±０．２°、１０．３３３±０．２°、１１．７４±０．２°、１２．６９１±０．２°、１３．４８６±０．２°、１４．７６７±０．２°、１５．１０５±０．２°、１５．７６７±０．２°、１６．５７１±０．２°、１６．９７３±０．２°、１７．３９±０．２°、１７．９８６±０．２°、１８．８５４±０．２°、１９．４２７±０．２°、１９．９９±０．２°、２０．４７２±０．２°、２０．９９３±０．２°、２２．５９３±０．２°、２３．１６６±０．２°、２４．０１２±０．２°、２４．４１３±０．２°、２５．２１２±０．２°、２５．７８８±０．２°、２６．１７４±０．２°、２６．９７４±０．２°、２７．２４５±０．２°、２８．２３１±０．２°、３２．８０９±０．２°、３４．８４３±０．２°および３８．８３１±０．２°からなる群より選択される、約２２℃の温度における４つ以上の２θ値を含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、第１１の実施形態から第１５の実施形態による結晶形態である。
【００２９】
第１７の実施形態において、本発明は、６．３９１±０．２°、８．６±０．２°、９．５３２±０．２°、１０．３３３±０．２°、１１．７４±０．２°、１２．６９１±０．２°、１３．４８６±０．２°、１４．７６７±０．２°、１５．１０５±０．２°、１５．７６７±０．２°、１６．５７１±０．２°、１６．９７３±０．２°、１７．３９±０．２°、１７．９８６±０．２°、１８．８５４±０．２°、１９．４２７±０．２°、１９．９９±０．２°、２０．４７２±０．２°、２０．９９３±０．２°、２２．５９３±０．２°、２３．１６６±０．２°、２４．０１２±０．２°、２４．４１３±０．２°、２５．２１２±０．２°、２５．７８８±０．２°、２６．１７４±０．２°、２６．９７４±０．２°、２７．２４５±０．２°、２８．２３１±０．２°、３２．８０９±０．２°、３４．８４３±０．２°および３８．８３１±０．２°からなる群より選択される、約２２℃の温度における５つ以上の２θ値を含む粉末Ｘ線回折パターンをさらに特徴とする、第１６の実施形態の結晶形態である。
【００３０】
第１８の実施形態において、本発明は、図１に示された粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じＸ線回折スペクトルを有する、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の結晶形態である。
【００３１】
第１９の実施形態において、本発明は、図２に示された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムと実質的に同じ示差走査熱量測定サーモグラムを有する、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の結晶形態である。
【００３２】
第２０の実施形態において、本発明は、第１１の実施形態から第１９の実施形態までによる結晶形態、および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物である。
【００３３】
第２１の実施形態において、本発明は、前記結晶形態が、形態Ａである、第２０の実施形態による医薬組成物である。
【００３４】
第２２の実施形態において、本発明は、前記形態Ａが、実質的に純粋な形態である、第２１の実施形態による医薬組成物である。
【００３５】
第２３の実施形態において、本発明は、治療有効量の、第１１の実施形態から第１９の実施形態までのいずれか１つによる結晶形態、および第２の治療上活性な作用物質を含む、合剤、特に医薬合剤である。
【００３６】
第２４の実施形態において、本発明は、前記結晶形態が、形態Ａである、第２３の実施形態による医薬組成物である。
【００３７】
第２５の実施形態において、本発明は、前記形態Ａが、実質的に純粋な形態である、第２４の実施形態による医薬組成物である。
【００３８】
第２６の実施形態において、本発明は、ＶＥＧＦ−Ｒに媒介される対象の障害または疾患を治療する方法であって、治療有効量の、第１１の実施形態から第１９の実施形態までによるＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の結晶形態をほ乳類に投与することを含む方法である。
【００３９】
第２７の実施形態において、本発明は、前記結晶形態が、形態Ａである、第２６の実施形態による方法である。
【００４０】
第２８の実施形態において、本発明は、前記形態Ａが、実質的に純粋な形態である、第２７の実施形態による方法である。
【００４１】
第２９の実施形態において、本発明は、対象が、ヒトである、第２６の実施形態による方法である。
【００４２】
第３０の実施形態において、本発明は、組成物の重量に基づいて少なくとも９０重量％の、第１１の実施形態から第１９の実施形態までによる結晶形態を含む、組成物である。
【００４３】
第３１の実施形態において、本発明は、実施例５のステップを含む、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の形態Ａを作製する方法である。
【００４４】
第３２の実施形態において、本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩形態Ｂを含む、第１２の実施形態による結晶形態である。
【００４５】
第３３の実施形態において、本発明は、形態Ｂから本質的になる、第１２の実施形態または第３２の実施形態による結晶形態である。
【００４６】
第３４の実施形態において、本発明は、前記形態Ｂが、実質的に純粋な形態である、第３２の実施形態から第３３の実施形態までによる結晶形態である。
【００４７】
第３５の実施形態において、本発明は、８．４１１３±０．２°、８．８３６±０．２°、１２．６７８９±０．２°、１３．５６８６±０．２°、１５．７１２４±０．２°、１６．８２４８±０．２°、１７．３９１１±０．２°、１８．７４６２±０．２°、２０．４２４８±０．２°、２１．０７２±０．２°、２４．１２６±０．２°、２４．６５１８±０．２°、２５．２７８８±０．２°、２６．５３２７±０．２°、２７．７２６±０．２°および３５．４７２１±０．２°からなる群より選択される、約２２℃の温度における４つ以上の２θ値を含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、第１２の実施形態または第３２の実施形態から第３４の実施形態までによる結晶形態である。
【００４８】
第３６の実施形態において、本発明は、８．４１１３±０．２°、８．８３６±０．２°、１２．６７８９±０．２°、１３．５６８６±０．２°、１５．７１２４±０．２°、１６．８２４８±０．２°、１７．３９１１±０．２°、１８．７４６２±０．２°、２０．４２４８±０．２°、２１．０７２±０．２°、２４．１２６±０．２°、２４．６５１８±０．２°、２５．２７８８±０．２°、２６．５３２７±０．２°、２７．７２６±０．２°および３５．４７２１±０．２°からなる群より選択される、約２２℃の温度における５つ以上の２θ値を含む粉末Ｘ線回折パターンをさらに特徴とする、第３５の実施形態による結晶形態である。
【００４９】
第３７の実施形態において、本発明は、図３に示された粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じＸ線回折スペクトルを有する、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の結晶形態である。
【００５０】
第３８の実施形態において、本発明は、図４に示された示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムと実質的に同じ示差走査熱量測定サーモグラムを有する、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の結晶形態である。
【００５１】
第３９の実施形態において、本発明は、第１２の実施形態または第３２の実施形態から第３８の実施形態までによる結晶形態、および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物である。
【００５２】
第４０の実施形態において、本発明は、前記結晶形態が、形態Ｂである、第３９の実施形態による医薬組成物である。
【００５３】
第４１の実施形態において、本発明は、前記形態Ｂが、実質的に純粋な形態である、第４０の実施形態による医薬組成物である。
【００５４】
第４２の実施形態において、本発明は、治療有効量の、第１２の実施形態または第３２の実施形態から第３８の実施形態までのいずれか１つによる結晶形態、および第２の治療上活性な作用物質を含む、合剤、特に医薬合剤である。
【００５５】
第４３の実施形態において、本発明は、前記結晶形態が、形態Ｂである、第４２の実施形態による医薬組成物である。
【００５６】
第４４の実施形態において、本発明は、前記形態Ｂが、実質的に純粋な形態である、第４３の実施形態による医薬組成物である。
【００５７】
第４５の実施形態において、本発明は、ＶＥＧＦ−Ｒに媒介される対象の障害または疾患を治療する方法であって、治療有効量の、第１２の実施形態または第３２の実施形態から第３８の実施形態までによるＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の結晶形態をほ乳類に投与することを含む方法である。
【００５８】
第４６の実施形態において、本発明は、前記結晶形態が、形態Ｂである、第４５の実施形態による方法である。
【００５９】
第４７の実施形態において、本発明は、前記形態Ｂが、実質的に純粋な形態である、第４６の実施形態による方法である。
【００６０】
第４８の実施形態において、本発明は、対象が、ヒトである、第４５の実施形態による方法である。
【００６１】
第４９の実施形態において、本発明は、組成物の重量に基づいて少なくとも９０重量％の、第１２の実施形態または第３２の実施形態から第３８の実施形態までによる結晶形態を含む、組成物である。
【００６２】
第５０の実施形態において、本発明は、実施例６のステップを含む、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の形態Ｂを作製する方法である。
【００６３】
第５１の実施形態において、本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの結晶形態である。
【００６４】
第５２の実施形態において、本発明は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド形態Ａを含む、第５１の実施形態による結晶形態である。
【００６５】
第５３の実施形態において、本発明は、形態Ａから本質的になる、第５１の実施形態または第５２の実施形態による結晶形態である。
【００６６】
第５４の実施形態において、本発明は、前記形態Ａが、実質的に純粋な形態である、第５１の実施形態から第５３の実施形態までによる結晶形態である。
【００６７】
第５５の実施形態において、本発明は、８．６６４±０．２°、１６．５９５±０．２°、１７．４２３±０．２°、１８．０１７±０．２°、１９．４４８±０．２°、２０．００２±０．２°、２０．４６８±０．２°、２１．０７１±０．２°、２２．６４９±０．２°、２３．２１５±０．２°、２４．４６８±０．２°および２５．８３９±０．２°からなる群より選択される、約２２℃の温度における４つ以上の２θ値を含む粉末Ｘ線回折パターンを特徴とする、第５１の実施形態から第５４の実施形態までによる結晶形態である。
【００６８】
第５６の実施形態において、本発明は、８．６６４±０．２°、１６．５９５±０．２°、１７．４２３±０．２°、１８．０１７±０．２°、１９．４４８±０．２°、２０．００２±０．２°、２０．４６８±０．２°、２１．０７１±０．２°、２２．６４９±０．２°、２３．２１５±０．２°、２４．４６８±０．２°および２５．８３９±０．２°からなる群より選択される、約２２℃の温度における５つ以上の２θ値を含む粉末Ｘ線回折パターンをさらに特徴とする、第５５の実施形態による結晶形態である。
【００６９】
第５７の実施形態において、本発明は、図５に示された粉末Ｘ線回折スペクトルと実質的に同じＸ線回折スペクトルを有する、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの結晶形態である。
【００７０】
第５８の実施形態において、本発明は、図６に示された示差走査熱量測定サーモグラムと実質的に同じ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを有する、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの結晶形態である。
【００７１】
第５９の実施形態において、本発明は、第５１の実施形態から第５８の実施形態までによる結晶形態、および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物である。
【００７２】
第６０の実施形態において、本発明は、前記結晶形態が、形態Ａである、第５９の実施形態による医薬組成物である。
【００７３】
第６１の実施形態において、本発明は、前記形態Ａが、実質的に純粋な形態である、第６０の実施形態による医薬組成物である。
【００７４】
第６２の実施形態において、本発明は、治療有効量の、第５１の実施形態から第５８の実施形態までのいずれか１つによる結晶形態、および第２の治療上活性な作用物質を含む、合剤、特に医薬合剤である。
【００７５】
第６３の実施形態において、本発明は、前記結晶形態が、形態Ａである、第６２の実施形態による医薬組成物である。
【００７６】
第６４の実施形態において、本発明は、前記形態Ａが、実質的に純粋な形態である、第６３の実施形態による医薬組成物である。
【００７７】
第６５の実施形態において、本発明は、ＶＥＧＦ−Ｒに媒介される対象の障害または疾患を治療する方法であって、治療有効量の、第５１の実施形態から第５８の実施形態までによるＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの結晶形態をほ乳類に投与することを含む方法である。
【００７８】
第６６の実施形態において、本発明は、前記結晶形態が、形態Ａである、第６５の実施形態による方法である。
【００７９】
第６７の実施形態において、本発明は、前記形態Ａが、実質的に純粋な形態である、第６６の実施形態による方法である。
【００８０】
第６８の実施形態において、本発明は、対象が、ヒトである、第６５の実施形態による方法である。
【００８１】
第６９の実施形態において、本発明は、組成物の重量に基づいて少なくとも９０重量％の、第５１の実施形態から第５８の実施形態までによる結晶形態を含む、組成物である。
【００８２】
第７０の実施形態において、本発明は、実施例７のステップを含む、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩の形態Ａを作製する方法である。
【００８３】
第７１の実施形態において、本発明は、実施例８によるＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを作製する方法である。
【００８４】
「単離形態」とは、本発明者らによれば、化合物が、当該化合物が代謝によりインビボで形成されたときに通常ならば当該化合物に付随するいかなる構成要素も不含であることを意味する。例えば、化合物は、血清構成要素等の何らかの生体物質、および、インビボで形成されるＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの他の代謝物質を不含である。好適には、化合物は、精製された単離形態である。「精製された」とは、本発明者らによれば、化合物が、好都合には７５％超純粋であり、より好都合には９０％超純粋であり、好ましくは９５％超純粋であり、最も好ましくは９８％超純粋であることを意味する。
【００８５】
本明細書で使用されるとき、「異性体」という用語は、同じ分子式を有するが原子の配列および立体配置が異なっている、相異なる化合物を指す。さらに、本明細書で使用されるとき、「光学異性体」または「立体異性体」という用語は、所与の本発明の化合物において存在し得る、立体異性体に関する様々な立体配置のいずれかを指すものであり、幾何異性体も含める。置換基は、炭素原子のキラル中心に結合していてもよいと理解されている。したがって、本発明は、化合物の鏡像異性体、ジアステレオマーまたはラセミ体を含む。「鏡像異性体」とは、互いに対して重ね合せることができない鏡像である、一組の立体異性体である。一対の鏡像異性体の１：１混合物は、「ラセミ」混合物である。上記「ラセミ」という用語は、必要に応じて、ラセミ混合物を表すのに使用される。「ジアステレオマー」は、少なくとも２個の不斉原子を有するが互いに対して鏡像ではない、立体異性体である。絶対立体化学は、カーン−インゴールド−プレローグ式Ｒ−Ｓ系に従って指定される。化合物が純粋な鏡像異性体である場合、各キラル炭素の立体化学は、ＲまたはＳのいずれかによって指定することができる。絶対立体配置が未知の分割済み化合物は、当該化合物がナトリウムＤ線の波長において平面偏光を回転させる方向（右旋性または左旋性）に応じて、（＋）または（−）と表すことができる。本明細書に記載されている一部の化合物は、１つまたは複数の不斉中心を含有し、したがって、絶対立体化学の観点から（Ｒ）型または（Ｓ）型として規定できる鏡像異性体、ジアステレオマーおよび他の立体異性体形態を生じさせ得る。本発明は、ラセミ混合物、光学的に純粋な形態および中間体混合物も含めて、可能なすべての上述の異性体を包含するものとする。光学的に活性な（Ｒ）型異性体および（Ｓ）型異性体は、キラルなシントンまたはキラル試薬を用いて調製してもよく、または慣例的な技法を用いて分割してもよい。化合物が二重結合を含有する場合、置換基は、Ｅ型またはＺ型の立体配置であり得る。化合物が二置換シクロアルキルを含有する場合、シクロアルキル置換基は、シス型またはトランス型の立体配置を有し得る。すべての互変異性体形態もまた、包含されるものとする。
【００８６】
本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持していて、生物学的観点またはその他の観点において望ましくないものではない、塩を指す。大抵の場合、本発明の化合物は、アミノ基および／もしくはカルボキシル基またはこれらと同様の基の存在によって、酸性塩および／または塩基性塩を形成することができる。薬学的に許容される酸付加塩は、無機酸および有機酸、例えば、酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩、重炭酸塩／炭酸塩、重硫酸塩／硫酸塩、ホウ酸塩、カンシル酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩、エシル酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／塩化物、臭化水素酸塩／臭化物、ヨウ化水素酸塩／ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メチル硫酸塩、ナフチル酸塩、２−ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロト酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩／リン酸水素塩／リン酸二水素塩、糖酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩およびトリフルオロ酢酸塩によって形成することができる。塩が由来し得る無機酸には例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸およびリン酸が挙げられる。塩が由来し得る有機酸には例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびサリチル酸が挙げられる。薬学的に許容される塩基付加塩は、無機塩基および有機塩基によって形成することができる。塩が由来し得る無機塩基は例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガンおよびアルミニウムを含み、アンモニウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩が特に好ましい。塩が由来し得る有機塩基には例えば、第一級アミン、第二級アミンおよび第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含めた置換アミン、環式アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例として特にイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミンおよびエタノールアミンが挙げられる。本発明の薬学的に許容される塩は、慣例的な化学的方法によって親化合物、塩基性部分または酸性部分から合成することができる。一般に、上述の塩は、上記化合物の遊離酸形態を化学量論量の適切な塩基（Ｎａ、Ｃａ、ＭｇまたはＫの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩等）と反応させることによっても調製できるし、または、上記化合物の遊離塩基形態を化学量論量の適切な酸と反応させることによっても調製できる。上述の反応は、典型的には、水中もしくは有機溶媒中、またはこれら２つの混合物中で実施される。実現可能な場合、一般には、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノールまたはアセトニトリル等の非水性媒体が好ましい。さらなる適切な塩の一覧については、例えば、"Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)；および"Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)に見出すことができる。
【００８７】
本発明は、薬学的に許容されるすべての本発明の同位体標識化合物を含み、すなわち、（１）１個もしくは複数の原子が、同じ原子番号を有するが自然界で通常見受けられる原子量もしくは質量数と異なる原子量もしくは質量数を有する、原子によって置きかえられており、および／または（２）１個もしくは複数の原子の同位体比が、天然に存在する比と異なる、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物を含む。
【００８８】
本発明の化合物中への組み入れに適した同位体の例には、２Ｈおよび３Ｈ等の水素の同位体、１１Ｃ、１３Ｃおよび１４Ｃ等の炭素の同位体、３６Ｃｌ等の塩素の同位体、１８Ｆ等のフッ素の同位体、１２３Ｉおよび１２５Ｉ等のヨウ素の同位体、１３Ｎおよび１５Ｎ等の窒素の同位体、１５Ｏ、１７Ｏおよび１８Ｏ等の酸素の同位体、３２Ｐ等のリンの同位体、ならびに３５Ｓ等の硫黄の同位体を含める。
【００８９】
第１の実施形態から第７０の実施形態までの特定の同位体標識化合物、例えば、放射性同位体を組み込んだ同位体標識化合物は、薬物および／または基質組織の分布についての研究に有用である。放射性同位体トリチウムすなわち３Ｈ、および炭素１４すなわち１４Ｃは、組込みの容易さおよびすぐに使える検出手段から鑑みて、上記の研究目的には特に有用である。
【００９０】
重水素すなわち２Ｈ等、より重い同位体による置換は、代謝安定性の増大、例えばインビボ半減期の延長または投薬量要求量の低減に起因した治療上の特定の利点をもたらすことができ、したがって、特定の状況下では好ましいこともある。第１の実施形態から第７０の実施形態までの特定の化合物において、残留物Ｒ９またはＲ８とＲ９との組合せによって形成される環は、化合物の代謝安定性をインビボで向上するために１個または複数の重水素原子を含んでいてもよい。
【００９１】
１１Ｃ、１８Ｆ、１５Ｏおよび１３Ｎ等、ポジトロンを放出する同位体による置換は、基質受容体占有率を検査するためのポジトロン断層法（ＰＥＴ）による研究において、有用であり得る。
第１の実施形態から第７０の実施形態までの同位体標識化合物は一般に、当業者に公知の慣例的な技法によって調製することもできるし、または、添付の実施例で記述された方法と同様の方法、およびこれまでに用いられた未標識試薬の代わりに適切な同位体標識試薬を用いる調製によっても調製することができる。
【００９２】
薬学的に許容される本発明による溶媒和物には、結晶化に関する溶媒が同位体置換されていてもよい溶媒和物、例えばＤ２Ｏ、ｄ６−アセトン、ｄ６−ＤＭＳＯを含める。
【００９３】
本発明の化合物、すなわち、水素結合の供与体および／または受容体として作用できる基を含有する、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物は、適切な共結晶形成剤によって共結晶を形成できることもある。こうした共結晶は、共結晶を形成する公知の手法によって、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物から調製してもよい。このような手法には、破砕、加熱、共昇華、共溶融、または、結晶化条件下における溶液中での第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物と共結晶形成剤との接触によって形成された共結晶を単離することが挙げられる。適切な共結晶形成剤には、ＷＯ２００４／０７８１６３で開示された共結晶形成剤が挙げられる。したがって、本発明は、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物を含む、共結晶をさらに提供する。
【００９４】
本明細書で使用されるとき、「薬学的に許容される担体」という用語には、当業者にとっては公知であるが、あらゆる任意の溶媒、分散媒体、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば、抗細菌剤、抗真菌剤）、等張性調整剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物、薬物安定剤、結合剤、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、甘味料、香味料、染料、これらと同様の材料およびこれらの組合せを含める（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289 - 1329を参照されたい。）。何らかの慣例的な担体が有効成分と適合しない場合を除いて、治療用組成物または医薬組成物における慣例的な担体の使用も企図されている。
【００９５】
本発明の化合物の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的応答または医学的応答、例えば、酵素またはタンパク質の活性の低減または阻害をもたらし、または症状を緩和し、状態を軽減し、疾患の進行を減速もしくは遅延させ、または疾患を予防すること等を行う、本発明の化合物の量を指す。非限定的な一実施形態において、「治療有効量」という用語は、対象に投与されたとき、（１）（ｉ）ＶＥＧＦもしくはＶＥＧＦ受容体に媒介され、または（ｉｉ）ＶＥＧＦ活性もしくはＶＥＧＦ受容体の活性に関連付けられ、または（ｉｉｉ）ＶＥＧＦもしくはＶＥＧＦ受容体の異常活性を特徴とする、状態または障害または疾患を少なくとも部分的に軽減、阻害、予防および／または緩和するため；または（２）ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体の活性を低減または阻害するため；または（３）ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体の発現を低減または阻害するために効果的である、本発明の化合物の量を指す。別の非限定的な実施形態において、「治療有効量」という用語は、細胞または組織または非細胞型生体材料または媒体に投与されたとき、ＶＥＧＦもしくはＶＥＧＦ受容体の活性を少なくとも部分的に低減もしくは阻害するため；または、ＶＥＧＦもしくはＶＥＧＦ受容体の発現を少なくとも部分的に低減もしくは阻害するために効果的である、本発明の化合物の量を指す。ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体に関して上記実施形態で説明されている「治療有効量」という用語の意味については、Ｒｅｔ、ＰＤＧＦＲアルファおよびＰＤＧＦＲベータ、ならびにｃｋｉｔ等、関連する任意の他のタンパク質／ペプチド／酵素にも同じ意味を適用する。
【００９６】
本明細書で使用されるとき、「対象」という用語は、動物を指す。好ましくは、動物は、ほ乳類である。対象はまた、例えば霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚類および鳥類等も指す。好ましい実施形態において、対象は、ヒトである。
【００９７】
本明細書で使用されるとき、「阻害」または「阻害する」という用語は、所与の状態、症状もしくは障害もしくは疾患の低減もしくは抑制、または、生物学的活性もしくは生物学的プロセスのベースライン活性の顕著な低下を指す。
【００９８】
本明細書で使用されるとき、任意の疾患または障害を「治療する」または「治療」という用語は、一実施形態において、疾患または障害を緩和すること（すなわち、疾患または疾患の臨床症状のうち少なくとも１つの発生を減速させ、または停止させ、または低減すること）を指す。別の実施形態において、「治療する」または「治療」は、患者に認識可能でない可能性もある物理的パラメータも含めて、少なくとも１つの物理的パラメータを軽減または緩和することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」または「治療」は、物理的観点（例えば、認識可能な症状の安定化）、生理学的観点（例えば、物理的パラメータの安定化）、またはこれら両方の観点において疾患または障害を調節することを指す。さらに別の実施形態において、「治療する」または「治療」は、疾患または障害の発症もしくは発生または進行を予防または遅延させることを指す。
【００９９】
本明細書で使用されるとき、本発明との関連で（特に特許請求の範囲との関連で）使用される「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」という用語、「その（ｔｈｅ）」という用語および同様の用語は、本明細書中にそうではないとの記載がない限りまたは文脈によって明瞭に否定されていない限り、単数形と複数形の両方を包摂すると解すべきである。
【０１００】
本明細書で記述されたすべての方法は、本明細書中にそうではないとの記載がない限りまたは文脈によって明瞭に否定されていない限り、適切な任意の順序にして実施することができる。本明細書で提供されているあらゆる任意の例、または例示に関する言い回し（例えば「等」）の使用は、本発明のより良い説明を単に意図したものであり、特許請求の範囲に記載されていない限り、本発明の範囲に限定を加えることはない。
【０１０１】
本発明の化合物における任意の不斉原子（例えば、炭素等）は、ラセミ体状態または鏡像異性的に富化された状態で存在し得、例えば、（Ｒ）型立体配置、（Ｓ）型立体配置または（Ｒ，Ｓ）型立体配置で存在し得る。特定の実施形態において、各不斉原子は、（Ｒ）型立体配置または（Ｓ）型立体配置において、少なくとも５０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも６０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも７０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも８０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも９０％の鏡像異性体過剰率、少なくとも９５％の鏡像異性体過剰率、または少なくとも９９％の鏡像異性体過剰率を有する。不飽和結合を有する原子に付いた置換基は、可能である場合、シス（Ｚ）型形態で存在してもよく、またはトランス（Ｅ）型形態で存在してもよい。
【０１０２】
したがって、本明細書で使用されるとき、本発明の化合物は、可能な異性体、回転異性体、アトロプ異性体、互変異性体またはこれらの混合物のうち１つの形態であり得、例えば、実質的に純粋な幾何（シスまたはトランス）異性体、ジアステレオマー、光学異性体（対掌体）、ラセミ体またはこれらの混合物の状態であり得る。
【０１０３】
得られたあらゆる異性体の混合物は、構成成分の物理化学的差異に基づいて、例えばクロマトグラフィーおよび／または分別結晶化によって、純粋なまたは実質的に純粋な幾何異性体または光学異性体、ジアステレオマー、ラセミ体に分離することができる。
【０１０４】
得られたあらゆる最終生成物または中間体のラセミ体は、公知の方法によって光学対掌体に分割することができ、例えば、光学的に活性な酸または塩基を用いて得られた当該ラセミ体のジアステレオマー塩の分離、および光学的に活性な酸性または塩基性化合物を遊離させることよって、光学対掌体に分割することができる。したがって、特に塩基性部分は、例えば光学的に活性な酸、例えば酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジ−Ｏ，Ｏ’−ｐ−トルオイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸またはカンファー−１０−スルホン酸によって形成された塩の分別結晶化によって、本発明の化合物を本化合物の光学対掌体に分割するために用いることができる。ラセミ体状生成物はまた、キラルクロマトグラフィー、例えば、キラル吸着剤を用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）よって分割することもできる。
【０１０５】
本発明の化合物は、遊離形態として得られ、本化合物の塩として得られ、または本化合物のプロドラッグ誘導体として得られる。
【０１０６】
塩基性基と酸基の両方が同じ分子中に存在する場合、本発明の化合物は、内塩、例えば両性イオンの分子を形成することもある。
【０１０７】
本発明はまた、インビボで本発明の化合物に変換する、本発明の化合物のプロドラッグも提供する。プロドラッグは、対象へのプロドラッグの投与後、加水分解および代謝等のインビボ生理学的作用によって本発明の化合物になるよう化学的に修飾された、活性または不活性な化合物である。プロドラッグの作製および使用に関係する好適性および技法は、当業者には周知である。プロドラッグは概念上、生物学的前駆体プロドラッグおよび担体プロドラッグという２つの非排他的なカテゴリーに分割できる。The Practice of Medicinal Chemistry, Ch. 31-32 (Ed. Wermuth, Academic Press, San Diego, Calif., 2001)を参照されたい。一般に、生物学的前駆体プロドラッグは、不活性でありまたは対応する活性な薬物化合物に比較して低い活性を有し、１種または複数の保護基を含有し、代謝または加溶媒分解によって活性形態に変換される、化合物である。活性薬物形態と、放出されるあらゆる代謝産物とは両方とも、許容される程に低い毒性を有するべきである。
【０１０８】
担体プロドラッグは、例えば作用部位への取り込みおよび／または限局的な送達を改善する輸送部分を含有する、薬物化合物である。このような担体プロドラッグに関しては、薬物部分と輸送部分との連結が共有結合であり、プロドラッグが不活性であり、または薬物化合物に比べて活性が小さく、放出されるあらゆる輸送部分が、許容される程に非毒性であることが望ましい。輸送部分が取り込みを増進させることを目的とするプロドラッグの場合、典型的には、輸送部分の放出は迅速にすべきである。他の場合においては、緩やかな放出をもたらす部分、例えば、特定のポリマーまたはシクロデキストリン等といった他の部分を利用することが、望ましい。担体プロドラッグは例えば、次の特性のうち１つまたは複数を改善するために使用することができる：親油性の増大、薬理学的効果の持続期間の延長、部位特異性の増大、毒性および有害反応の減少、ならびに／または、薬物製剤の改良（例えば、安定性、水溶性、望ましくない感覚刺激的特性または生理学的特性の抑制）。例えば、親油性は、（ａ）親油性カルボン酸（例えば、少なくとも１つの親油性部分を有するカルボン酸）を用いたヒドロキシル基のエステル化、または、（ｂ）親油性アルコール（例えば、少なくとも１つの親油性部分を有するアルコール、例えば脂肪族アルコール）を有するカルボン酸基のエステル化によって、増大させることができる。
【０１０９】
例示的なプロドラッグは、例えば、遊離カルボン酸のエステル、およびチオールのＳ−アシル誘導体、およびアルコールまたはフェノールのＯ−アシル誘導体であり、ここで、アシルは、本明細書で規定された意味を有する。生理学的条件下での加溶媒分解によって、親化合物とするカルボン酸、例えば低級アルキルエステル、シクロアルキルエステル、低級アルケニルエステル、ベンジルエステル、一置換または二置換低級アルキルエステル、例として  −（アミノ、モノ−またはジ−低級アルキルアミノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル）低級アルキルエステル、−（低級アルカノイルオキシ、低級アルコキシカルボニルまたはジ−低級アルキルアミノカルボニル）低級アルキルエステル、例として当技術分野で慣例的に使用されているピバロイルオキシメチルエステル等に変換可能である、薬学的に許容されるエステル誘導体が好ましい。さらに、アミンは、アリールカルボニルオキシメチル置換誘導体として遮へいされており、この誘導体がエステラーゼによって開裂されると、遊離状態の薬物およびホルムアルデヒド（Bundgaard, J. Med. Chem. 2503 (1989)）がインビボで放出される。さらに、イミダゾール、イミドおよびインドール等、酸性ＮＨ基を含有する薬物は、Ｎ−アシルオキシメチル基（Bundgaard, Design of Prodrugs, Elsevier (1985)）によって遮へいされている。ヒドロキシ基は、エステルおよびエーテルとして遮へいされている。ＥＰ０３９，０５１（ＳｌｏａｎおよびＬｉｔｔｌｅ）では、マンニッヒ塩基ヒドロキサム酸プロドラッグ、その調製および使用が開示されている。
【０１１０】
さらに、それらの塩も含めて、本発明の化合物はまた、本化合物の水和物の形態において入手することもでき、または、本化合物の結晶化用に使用される他の溶媒を含んでいてもよい。
【０１１１】
別の態様において、本発明は、本発明の化合物および担体、例えば、薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。医薬組成物は、経口投与、点眼式投与（例えば、局所投与、硝子体内注射、インプラント（硝子体内用インプラント、経強膜式インプラントおよびテノン嚢下用インプラント等、またはデポ剤等も含める）および非経口投与等、特定の投与経路用に製剤化することができる。さらに、本発明の医薬組成物は、カプセル剤、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤もしくは坐剤を含めた固体形態にして調合してもよく、または、液剤、懸濁剤または乳剤を含めた液体形態にして調合してもよい。本医薬組成物は、滅菌等の慣例的な製薬処理を施してもよく、ならびに／または、慣例的な不活性希釈剤、滑沢剤もしくは緩衝剤、ならびに保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤およびバッファー等のアジュバントを含有していてもよい。
【０１１２】
典型的には、医薬組成物は、有効成分と一緒に
ａ）希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロールおよび／またはグリシン；
ｂ）滑沢剤、例えばシリカ、タルカム、ステアリン酸、ステアリン酸のマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、および／またはポリエチレングリコールも含み、錠剤の場合にはさらに、
ｃ）結合剤、例えばケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロール、ナトリウムカルボキシメチルセルロールおよび／またはポリビニルピロリドンも含み、望ましい場合には
ｄ）崩壊剤、例えばデンプン、寒天、アルギン酸もしくはアルギン酸のナトリウム塩、または発泡性混合物；ならびに／または
ｅ）吸収剤、着色料、香味料および甘味料
も含む、錠剤およびゼラチンカプセル剤である。
【０１１３】
錠剤は、当技術分野で公知の方法に従って、フィルムコーティング加工されていてもよく、または腸溶性コーティング加工されていてもよい。
【０１１４】
経口投与に適した組成物は、錠剤、口中錠、水性懸濁液もしくは油性懸濁液、分散可能な散剤もしくは顆粒剤、乳剤、硬カプセル剤もしくは軟カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤の形態である、有効量の本発明の化合物を含む。経口用である組成物は、医薬組成物の製造用として当技術分野で公知な任意の方法に従って調製され、このような組成物は、薬学的に洗練されていて美味でもある調合剤を提供するために、甘味料、香味料、着色料および保存剤からなる群より選択される、１種または複数の作用物質を含有していてもよい。錠剤は、錠剤の製造に適していて非毒性薬学的に許容される賦形剤と混ざり合った、有効成分を含有する。こうした賦形剤は例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム等の不活性希釈剤；顆粒化剤および崩壊剤、例えばコーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム；ならびに滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクである。錠剤は、未コーティング加工であり、または、消化管内での崩壊および吸収を遅延させ、これによって、より長い期間にわたって持続的な作用をもたらすための公知の技法によって、コーティング加工されている。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリル等の時限遅延用材料（time delay material）を用いてもよい。経口式の使用のための製剤は、有効成分が不活性固体状希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合されている硬ゼラチンカプセル剤として提供することもできるし、または、有効成分が水または油型媒体、例えばピーナッツ油、液体もしくはオリーブ油と混合されている軟ゼラチンカプセル剤として提供することもできる。
注射可能な特定の組成物は、等張性で水性の液剤または懸濁剤であり、坐剤は、有利には、脂肪乳剤または懸濁剤から調製される。前記組成物は、滅菌されていてもよく、ならびに／または、保存剤、安定剤、湿潤剤もしくは乳化剤、溶解促進剤、浸透圧調節用の塩および／またはバッファー等のアジュバントを含んでいてもよい。さらに、上記組成物はまた、治療用に有益な他の物質を含有していてもよい。前記組成物は、それぞれ慣例的な混合方法、顆粒化方法またはコーティング方法に従って調製され、約０．１〜７５％の有効成分を含有し、または約１〜５０％の有効成分を含有する。
【０１１５】
注射可能な特定の組成物は、眼内投与、眼部周辺への投与、結膜下投与および／またはテノン嚢下投与に適した、眼用インプラントおよび眼用デポ製剤を含む。典型的には、注射可能な組成物は、生体適合性または生分解性のポリマー材料と組み合わせられた、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物を含む。
【０１１６】
経皮施用に適した組成物は、担体と一緒になった有効量の本発明の化合物を含む。担体は、宿主の皮膚の通過を補助するために薬理学的に許容される吸収可能な溶媒を含む。例えば、経皮吸収用器具は、裏当て部材と、任意選択的に担体と一緒になった本化合物を内包する貯留部と、制御された所定の速度で長期間の時間にわたって宿主の皮膚の本化合物を送達するための任意選択的な速度調節用バリア材と、器具を皮膚に固定するための手段とを含む、包帯の形態である。例えば皮膚および眼への局所適用に適した組成物には、水溶液、懸濁液、軟膏、クリーム、ゲル、または、例えばエーロゾル等による送達用の噴霧可能な製剤が挙げられる。このような局所送達用の系は、例えば眼疾患の治療のための眼への施用には特に適しており、例えば、黄斑変性、糖尿病網膜症、虹彩ルベオーシス、および角膜、強膜、網膜または他の眼組織の血管新生等の治療における、予防用途または治療用途の使用には特に適している。したがって、上記局所送達用の系は、当技術分野で周知の局所製剤における使用には特に適している。こうした局所送達用の系は、可溶化剤、安定剤、張度増大剤、バッファーおよび保存剤を含有していてもよい。
【０１１７】
特定の適切な局所用点眼薬型製剤は、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物の水溶液または水性懸濁液を含み、１種または複数の保存剤、張度調整剤および／または滑沢剤を任意選択的にさらに含む。本明細書で使用されるとき、局所適用は、吸入または鼻腔内施用にも関係し得る。上記の局所用点眼薬型製剤は好都合には、適切な噴射剤の使用の有無にかかわらず、ドライパウダー吸入器からドライパウダー（単独の状態、混合物、例えばラクトースとの乾燥配合物の状態、または、例えばリン脂質と混合された構成要素粒子の状態のいずれか）の形態において送達され、または、加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器またはネブライザーからエーロゾルスプレー状の供給物の形態において送達される。
【０１１８】
本発明の眼用組成物は、本組成物によって治療しようとする眼および／または他の組織と適合するように製剤化される。眼への局所適用の場合、本発明の組成物は一般に、無菌水性組成物（例えば、懸濁剤、液剤または乳剤等）として製剤化されるものであり、典型的には少なくとも７０ｗ／ｖ％、より典型的には８０ｗ／ｖ％、さらにより典型的には少なくとも９０ｗ／ｖ％または９５ｗ／ｖ％の精製水を含む。本組成物は、次の成分の任意の組合せを含み得る：１種もしくは複数の保存剤（例えば、ポリマー状第四級アンモニウム化合物）、１種もしくは複数の界面活性剤（例えば、ポリソルベート、チロキサポール、ポリエトキシ化ヒマシ油またはこれらの組合せ等）、１種もしくは複数の粘度調整剤（例えば、置換セルロール、グルコマンナンポリマー、カルボキシビニルポリマーまたはこれらの組合せ等）、１種もしくは複数のバッファー（例えば、ホウ酸）、１種もしくは複数の張度調整剤（例えば、塩化ナトリウム）、１種もしくは複数のポリオール（例えば、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトールまたはこれらの組合せ等）、または他の適切な成分。眼の角膜表面への直接施用を目的とする点眼式組成物は、眼に適合したｐＨおよび張度を有するように製剤化される。上記点眼式組成物は典型的には、４から９までの範囲、好ましくは５．５から８．５までの範囲、最も好ましくは５．５から８．０までの範囲のｐＨを有する。特に望ましいｐＨ範囲は、６．０から７．８までであり、より特定的には６．４から７．６までである。組成物は、キログラムあたりの２００から４００までの、または４５０ミリオスモルのオスモル濃度（ｍＯｓｍ／ｋｇ）を有し、より好ましくは、２４０ｍＯｓｍ／ｋｇから３６０ｍＯｓｍ／ｋｇまでのオスモル濃度を有する。さらに、多回用量用の局所適用に適した点眼式組成物は大抵の場合、眼の角膜表面に個々の液滴を吐出することができる、点眼器内に配置される。
【０１１９】
水によって本化合物の分解が容易になり得るため、本発明は、本発明の化合物を有効成分として含む、無水医薬組成物および剤形をさらに提供する。本発明の無水医薬組成物および剤形は、無水成分または低含水率成分および低水分または低湿度条件を用いて調製することができる。無水医薬組成物は、その無水性状が維持されるような態様にして調製および貯蔵することができる。したがって、無水組成物は好ましくは、処方集による適切なキットへの組み入れを可能にすべく、水への曝露を予防すると知られた材料を用いて包装される。適切な包装の例には、限定するわけではないが、密封済みホイル、プラスチック、単位用量容器（例えば、バイアル）、ブリスターパックおよびストリップパックが挙げられる。
【０１２０】
本発明は、有効成分としての本発明の化合物が分解する速度を低下させる１種または複数の作用物質を含む、医薬組成物および剤形をさらに提供する。「安定剤」として本明細書で言及されるこうした作用物質には、限定するわけではないが、アルコルビン酸、ｐＨバッファーまたは塩バッファー等の抗酸化剤が挙げられる。
【０１２１】
遊離形態または薬学的に許容される塩の形態である本発明の化合物は、例えば、次のセクションに記載されるインビトロ試験およびインビボ試験において示される通り、有益な薬理学的特性、例えば、ＶＥＧＦ受容体を調節する特性を示し、したがって、療法に必要とされる。
【０１２２】
有力なＶＥＧＦ受容体阻害剤としての第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物の特性に基づいて、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物は、調節を受けていない血管新生に付随した疾患、特に眼内血管新生によって引き起こされる疾患、特に網膜症、例として糖尿病網膜症または加齢性黄斑変性、虹彩ルベオーシス、乾癬、フォン−ヒッペル−リンドウ病、血管芽細胞腫、血管腫、メサンギウム細胞増殖障害、例として慢性腎臓疾患もしくは急性腎臓疾患、例えば糖尿病性ネフロパチー、悪性腎硬化症、血栓性微小血管症もしくは移植拒絶反応、または特に炎症性腎臓疾患、例として糸球体腎炎、特にメサンギウム増殖性糸球体腎炎、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性ネフロパチー、高血圧性腎硬化症、粉瘤、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、線維性障害（例えば肝硬変）、糖尿病、子宮内膜症、慢性喘息、アテローム性動脈硬化症または移植後のアテローム硬化症、神経変性性障害、ならびに特に腫瘍性疾患（特に固形腫瘍であるが白血病もある）、例として特に乳がん、腺がん、結腸直腸がん、肺がん（特に非小細胞肺がん）、腎臓がん、肝臓がん、膵臓がん、卵巣がんまたは前立腺がん、ならびに骨髄腫、特に多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、ＡＭＬ（急性骨髄性白血病）、ＡＭＭ（原因不明の髄様化生）、中皮腫、神経膠腫および膠芽腫の治療には特に適している。第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物は、腫瘍の転移による拡散および微小転移巣の成長を予防することにも特に適している。
【０１２３】
したがって、さらなる実施形態として、本発明は、療法における、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物の使用を提供する。さらなる実施形態において、療法は、ＶＥＧＦ受容体活性の阻害によって緩和される疾患から選択される。別の実施形態において、疾患は、上記の一覧から選択され、好適には眼疾患から選択され、より好適には、滲出型加齢性黄斑変性および萎縮型加齢性黄斑変性、地図状委縮症、中心性漿液性網膜症、嚢胞様黄斑浮腫、糖尿病網膜症、増殖性糖尿病網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、虹彩ルベオーシス、未熟網膜症、網膜中心静脈閉塞症および網膜静脈分子閉塞、炎症性／感染性網膜血管新生／浮腫（例えば後部ブドウ膜炎、サルコイド、トキソプラズマ症、ヒストプラスマ症、フォークト−小柳−原田病、慢性ブドウ膜炎、結核、梅毒、点状脈絡膜内層症および多巣性脈絡膜内層症（multifocal inner choroidophaty））、網膜芽細胞腫、メラノーマ、眼球腫瘍、網膜剥離、近視性血管新生、網膜色素線条症、イールズ病、虚血性網膜症（網膜動脈閉塞症、高安病、頸動脈閉塞症）、脈絡膜破裂、コンタクトレンズの着用、ドライアイ、眼瞼炎、角膜ジストロフィー、角膜の外傷および角膜への既往外科手術（角膜移植、ＬＡＳＩＫ、ＬＡＳＥＫ）、角膜感染症（細菌性、ウイルス性、寄生虫性、ヘルペス性）、角膜熱傷（化学物質、アルカリ、酸）、角膜移植拒絶反応、免疫学的角膜疾患（類天疱瘡、スティーブンス−ジョンソン症候群）、ならびに変性角膜疾患から選択される。
【０１２４】
本発明の医薬組成物または医薬合剤は、約５０〜７０ｋｇの対象用として約１〜１０００ｍｇの有効成分、または約１〜５００ｍｇの有効成分、または約１〜２５０ｍｇの有効成分、または約１〜１５０ｍｇの有効成分、または約０．５〜１００ｍｇの有効成分、または約１〜５０ｍｇの有効成分という単位投薬量にすることができる。化合物、医薬組成物、またはこれらの組合せの治療用に効果的な投薬量は、対象の種、体重、年齢、および、治療される個体の状態、障害もしくは疾患またはこれらの重症度に依存する。通常の技能を持つ医師、臨床医または獣医ならば、障害または疾患の進行を予防、治療または阻害するために必要な各有効成分の有効量を容易に決定することができる。
【０１２５】
上記投薬量特性は、有利にはほ乳類、例えばマウス、ラット、イヌ、サル、またはこれらから単離された器官、組織および調製物を用いて、インビトロ試験およびインビボ試験によって、実証する。本発明の化合物は、インビトロにおいては溶液、例えば、好ましくは水溶液の形態にして施用することができるし、インビボにおいては、例えば懸濁液または水溶液として、経腸方式、非経口方式、有利には静脈内方式のいずれかで施用される。インビトロでの薬量は、約１０−３モル濃度から１０−９モル濃度の間の範囲であり得る。インビボでの治療有効量は、投与経路に応じて、約０．１〜５００ｍｇ／ｋｇの間の範囲であり得、または約１〜１００ｍｇ／ｋｇの間の範囲であり得る。
【０１２６】
他の実施形態において、第１の実施形態から第７０の実施形態までによる少なくとも１つの化合物および少なくとも１つの担体を含む、医薬組成物が提供される。
【０１２７】
第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物はまた、他の抗増殖剤と組み合わせて有利に用いてもよい。このような抗増殖剤には、限定するわけではないが、アロマターゼ阻害剤；抗エストロゲン薬；トポイソメラーゼＩ阻害剤；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；微小管作用剤；アルキル化剤；ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤；細胞分化プロセスを誘導する化合物；シクロオキシダーゼ阻害剤；ＭＭＰ阻害剤；ｍＴＯＲ阻害剤；抗腫瘍性代謝拮抗物質；プラチン化合物；タンパク質キナーゼまたは脂質キナーゼの活性を標的とし、または低下させる化合物およびさらなる抗血管新生性化合物；タンパク質ホスファターゼまたは脂質ホスファターゼの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物；ゴナドレリンアゴニスト；抗アンドロゲン薬；メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤；ビスホスホネート；生物学的応答調節剤；抗増殖性抗体；ヘパラナーゼ阻害剤；Ｒａｓ発癌性アイソフォームの阻害剤；テロメラーゼ阻害剤；プロテアソーム阻害剤；造血器悪性腫瘍の治療に使用される作用物質；Ｆｌｔ−３の活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物；Ｈｓｐ９０阻害剤；テモゾロミド（ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標））；ならびにロイコボリンが挙げられる。
【０１２８】
第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物はまた、限定するわけではないがＭａｃｕｇｅｎ、ＶＥＧＦ  ｔｒａｐ、光線力学的治療、酢酸アネコルタブ、ステロイド、非ステロイド型抗炎症性（例えばＮａｐｒｏｘｅｎ、イブプロフェン、ジクロフェナク）Ｃｏｘ−１阻害剤およびＣｏｘ−２阻害剤、シクロスポリン、デキサメタゾン、ｍｔｏｒ（ほ乳類ラパマイシン標的タンパク質）阻害剤、例としてラパマイシンおよびエベロリムス等、ＰＫＣ（タンパク質キナーゼＣ）ベータ阻害剤、腫瘍壊死アルファ阻害剤、インターロイキン１ベータ阻害剤、血小板由来成長因子ベータ阻害剤および血小板由来成長因子アルファ阻害剤および血小板由来成長因子受容体阻害剤、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）、Ａｖａｓｔｉｎ、Ｅｙｌｅａ、ＶＥＧＦ抗体、ＰＬＧＦ抗体、ＶＥＧＦファミリー（ＶＥＧＦＡ〜Ｅ、ＰＬＧＦ、ニューロピリン）／ＶＥＧＦ受容体に対するｓｉＲＮＡ、古典的経路、副経路およびレクチン経路を標的とする補体阻害剤、ＩＬ−１０阻害剤、Ｃ５ａＲ阻害剤、Ｃ３ａＲ阻害剤、ならびに、スフィンゴシンホスフェート阻害剤およびスフィンゴシンホスフェート受容体阻害剤を含めて、他の点眼式治療薬と組み合わせて有利に用いてもよい。本発明の化合物は、少なくとも１つの他の治療剤と同時に投与してもよく、少なくとも１つの他の治療剤より前に投与してもよく、または少なくとも１つの他の治療剤より後に投与してもよい。本発明の化合物は、同じもしくは異なる投与経路によって別々に投与してもよく、または、同じ医薬組成物に取り込ませて一緒に投与してもよい。
【０１２９】
一実施形態において、他の治療剤は、下記のものから選択される。
【０１３０】
本明細書で使用される「アロマターゼ阻害剤」という用語は、エストロゲン生成、すなわち、基質であるアンドロステンジオンおよびテストステロンからそれぞれエストロンおよびエストラジオールへの変換を阻害する、化合物に関する。上記用語には、限定するわけではないが、ステロイド、特にアタメスタン、エキセメスタンおよびフォルメスタンも挙げられるし、特には、非ステロイド薬、特にアミノグルテチミド、ログレチミド、ピリドグルテチミド、トリロスタン、テストラクトン、ケトコナゾール、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールも挙げられる。エキセメスタンは例えば、例えば商標ＡＲＯＭＡＳＩＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。フォルメスタンは例えば、例えば商標ＬＥＮＴＡＲＯＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。ファドロゾールは例えば、例えば商標ＡＦＥＭＡの下で販売されているときの形態において、投与することができる。アナストロゾールは例えば、例えば商標ＡＲＩＭＩＤＥＸの下で販売されているときの形態において、投与することができる。レトロゾールは例えば、例えば商標ＦＥＭＡＲＡまたはＦＥＭＡＲの下で販売されているときの形態において、投与することができる。アミノグルテチミドは例えば、例えば商標ＯＲＩＭＥＴＥＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。アロマターゼ阻害剤である化学療法薬を含む本発明の合剤は、ホルモン受容体陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の治療には特に有用である。
【０１３１】
本明細書で使用される「抗エストロゲン薬」という用語は、エストロゲン受容体レベルにおいてエストロゲンの効果に拮抗する化合物に関する。上記用語には、限定するわけではないが、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェンおよびラロキシフェン塩酸塩を含める。タモキシフェンは例えば、例えば商標ＮＯＬＶＡＤＥＸの下で販売されているときの形態において、投与することができる。ラロキシフェン塩酸塩は例えば、例えば商標ＥＶＩＳＴＡの下で販売されているときの形態において、投与することができる。フルベストラントは、ＵＳ４，６５９，５１６で開示された態様で製剤化することができ、または、フルベストラントは例えば、例えば商標ＦＡＳＬＯＤＥＸの下で販売されているときの形態において、投与することができる。抗エストロゲン薬である化学療法薬を含む本発明の合剤は、エストロゲン受容体陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の治療には特に有用である。
【０１３２】
本明細書で使用される「抗アンドロゲン薬」という用語は、男性ホルモンの生物学的効果を阻害できる任意の物質に関し、限定するわけではないがビカルタミド（ＣＡＳＯＤＥＸ）を含み、ビカルタミドは、例えばＵＳ４，６３６，５０５で開示された態様で製剤化することができる。
【０１３３】
本明細書で使用される「ゴナドレリンアゴニスト」という用語には、限定するわけではないが、アバレリクス、ゴセレリンおよび酢酸ゴセレリンを含める。ゴセレリンは、ＵＳ４，１００，２７４で開示されており、また、ゴセレリンは例えば、例えば商標ＺＯＬＡＤＥＸの下で販売されているときの形態において、投与することができる。アバレリクスは、例えばＵＳ５，８４３，９０１で開示された態様で製剤化することができる。
【０１３４】
本明細書で使用される「トポイソメラーゼＩ阻害剤」という用語には、限定するわけではないが、トポテカン、ジャイマテカン、イリノテカン、カンプトテシンおよびカンプトテシンの類縁体、９−ニトロカンプトテシン、ならびに高分子状カンプトテシン複合体ＰＮＵ−１６６１４８（ＷＯ９９／１７８０４の化合物Ａ１）を含める。イリノテカンは例えば、商標ＣＡＭＰＴＯＳＡＲの下で販売されているときの形態において、投与することができる。トポテカンは例えば、例えば商標ＨＹＣＡＭＴＩＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。
【０１３５】
本明細書で使用される「トポイソメラーゼＩＩ阻害剤」という用語には、限定するわけではないが、ドキソルビシン（リポソーマル製剤、例えばＣＡＥＬＹＸを含める）、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびネモルビシン等のアントラサイクリン、アントラキノンのミトキサントロンおよびロソキサントロン、ならびにポドフィロトキシンのエトポシドおよびポドフィロトキシンテニポシドを含める。エトポシドは例えば、商標ＥＴＯＰＯＰＨＯＳの下で販売されているときの形態において、投与することができる。テニポシドは例えば、商標ＶＭ２６−ＢＲＩＳＴＯＬの下で販売されているときの形態において、投与することができる。ドキソルビシンは例えば、商標ＡＤＲＩＢＬＡＳＴＩＮまたはＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。エピルビシンは例えば、例えば商標ＦＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。イダルビシンは例えば、例えば商標ＺＡＶＥＤＯＳの下で販売されているときの形態において、投与することができる。ミトキサントロンは例えば、商標ＮＯＶＡＮＴＲＯＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。
【０１３６】
「微小管作用剤」という用語は、微小管安定化剤、微小管不安定化剤および微小管重合阻害剤に関し、限定するわけではないが、タキサン、例えばパクリタキセルおよびドセタキセル、ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン、特にビンブラスチン硫酸塩、ビンクリスチン、特にビンクリスチン硫酸塩、ならびにビノレルビン、ディスコデルモライド、コルヒチン、ならびにエポチロンおよびエポチロン誘導体、例えばエポチロンＢもしくはエポチロンＤまたはこれらの誘導体を含める。パクリタキセルは例えば、販売されているときの形態、例えばＴＡＸＯＬにおいて、投与してもよい。ドセタキセルは例えば、例えば商標ＴＡＸＯＴＥＲＥの下で販売されているときの形態において、投与することができる。ビンブラスチン硫酸塩は例えば、例えば商標ＶＩＮＢＬＡＳＴＩＮ  Ｒ．Ｐ．の下で販売されているときの形態において、投与することができる。ビンクリスチン硫酸塩は例えば、例えば商標ＦＡＲＭＩＳＴＩＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。ディスコデルモライドは例えば、ＵＳ５，０１０，０９９で開示された態様で入手することができる。ＷＯ９８／１０１２１、ＵＳ６，１９４，１８１、ＷＯ９８／２５９２９、ＷＯ９８／０８８４９、ＷＯ９９／４３６５３、ＷＯ９８／２２４６１およびＷＯ００／３１２４７で開示されているＥｐｏｔｈｉｌｏｎｅ誘導体も同様に含まれる。ＥｐｏｔｈｉｌｏｎｅＡおよび／またはＢは、特に好ましい。
【０１３７】
本明細書で使用される「アルキル化剤」という用語には、限定するわけではないが、シクロフォスファミド、イホスファミド、メルファランまたはニトロソウレア（ＢＣＮＵまたはＧｌｉａｄｅｌ）を含める。シクロフォスファミドは例えば、例えば商標ＣＹＣＬＯＳＴＩＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。イホスファミドは例えば、例えば商標ＨＯＬＯＸＡＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。
【０１３８】
「ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤」または「ＨＤＡＣ阻害剤」という用語は、ヒストン脱アセチル化酵素を阻害し、抗増殖活性を有する、化合物に関する。上記用語には、ＷＯ０２／２２５７７で開示された化合物、特にＮ−ヒドロキシ−３−［４−［［（２−ヒドロキシエチル）［２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［［２−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミド、および薬学的に許容されるその塩を含める。上記用語には特に、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）をさらに含める。
【０１３９】
「抗腫瘍性代謝拮抗物質」という用語には、限定するわけではないが、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；カペシタビン；ゲムシタビン；５−アザシチジンおよびデシタビン等のＤＮＡ脱メチル化剤；メトトレキサート；エダトレキサート；ならびに、ペメトレキセド等の葉酸アンタゴニストを含める。カペシタビンは例えば、例えば商標ＸＥＬＯＤＡの下で販売されているときの形態において、投与することができる。ゲムシタビンは例えば、例えば商標ＧＥＭＺＡＲの下で販売されているときの形態において、投与することができる。モノクローナル抗体トラツズマブも同様に含まれ、このモノクローナル抗体トラツズマブは例えば、例えば商標ＨＥＲＣＥＰＴＩＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。
【０１４０】
本明細書で使用される「プラチン化合物」という用語には、限定するわけではないが、カルボプラチン、シスプラチン、シスプラチナムおよびオキサリプラチンを含める。カルボプラチンは例えば、例えば商標ＣＡＲＢＯＰＬＡＴの下で販売されているときの形態において、投与することができる。オキサリプラチンは例えば、例えば商標ＥＬＯＸＡＴＩＮの下で販売されているときの形態において、投与することができる。
【０１４１】
本明細書で使用される「タンパク質キナーゼまたは脂質キナーゼの活性を標的とし、または低下させる化合物、およびさらなる抗血管新生性化合物」という用語には、限定するわけではないが、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、ならびに／またはセリンおよび／もしくはトレオニンキナーゼ阻害剤、または脂質キナーゼ阻害剤を含め、例えば、
ａ）線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦ−Ｒｓ）の活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物；
ｂ）インスリン様成長因子Ｉ受容体（ＩＧＦ−ＩＲ）の活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物、特に、ＩＧＦ−ＩＲを阻害する化合物、例としてＷＯ０２／０９２５９９で開示されている上述のような化合物；
ｃ）Ｔｒｋ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物；
ｄ）Ａｘｌ受容体チロシンキナーゼファミリーの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物；
ｅ）ｃ−Ｍｅｔ受容体の活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物；
ｆ）タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）およびセリン／チロシンキナーゼのＲａｆファミリーのメンバー、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫ、ＰＤＫおよびＲａｓ／ＭＡＰＫファミリーメンバーのメンバー、もしくはＰＩ（３）キナーゼファミリーのメンバー、もしくはＰＩ（３）キナーゼ関連キナーゼファミリーのメンバー、ならびに／または、サイクリン依存性キナーゼファミリー（ＣＤＫ）のメンバーの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物、特にＵＳ５，０９３，３３０で開示されている上述のようなスタウロスポリン誘導体、例えばミドスタウリン（さらなる化合物の例には、例えばＵＣＮ−０１、サフィンゴール、ＢＡＹ４３−９００６、Ｂｒｙｏｓｔａｔｉｎ１、Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ；Ｉｌｍｏｆｏｓｉｎｅ；ＲＯ３１８２２０およびＲＯ３２０４３２；ＧＯ６９７６；Ｉｓｉｓ３５２１；ＬＹ３３３５３１／ＬＹ３７９１９６；ＷＯ００／０９４９５で開示されたイソキノリン化合物等のイソキノリン化合物；ＦＴＩｓ；ＰＤ１８４３５２またはＱＡＮ６９７（Ｐ１３Ｋ阻害剤）が挙げられる。）；
ｇ）タンパク質−チロシンキナーゼの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物、例としてイマチニブメシル酸塩（ＧＬＩＶＥＣ／ＧＬＥＥＶＥＣ）またはチルホスチン等
を含める。（チルホスチンは、好ましくは、低分子量（Ｍｒ＜１５００）化合物または薬学的に許容されるその塩であり、特には、ベンジリデンマロニトリルの部類またはＳ−アリールベンゼンマリニトリルもしくは二基質キノリン類（bisubstrate quinoline）の部類の化合物から選択される化合物であり、より特定的には、Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ  Ａ２３／ＲＧ−５０８１０；ＡＧ９９；Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ  ＡＧ２１３；Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ  ＡＧ１７４８；Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ  ＡＧ４９０；Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ  Ｂ４４；Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ  Ｂ４４（＋）鏡像異性体；Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ  ＡＧ５５５；ＡＧ４９４；Ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ  ＡＧ５５６、ＡＧ９５７およびアダホスチン（４−｛［（２，５−ジヒドロキシフェニル）メチル］アミノ｝安息香酸アダマンチルエステル；ＮＳＣ６８０４１０、アダホスチン）からなる群より選択される任意の化合物である。）；ならびに
ｈ）受容体チロシンキナーゼ（ホモ二量体状態またはヘテロ二量体状態のＥＧＦ−Ｒ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４）の上皮成長因子ファミリーの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物、例として上皮成長因子受容体ファミリーの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物は特に、ＥＧＦ受容体チロシンキナーゼファミリーのメンバー、例えばＥＧＦ受容体、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４を阻害し、またはＥＧＦもしくはＥＧＦ関連リガンドに結合する化合物、タンパク質または抗体であり、特には、ＷＯ９７／０２２６６（例えば、実施例３９の化合物）で具体的に概略を開示されている、またはＥＰ０５６４４０９、ＷＯ９９／０３８５４、ＥＰ０５２０７２２、ＥＰ０５６６２２６、ＥＰ０７８７７２２、ＥＰ０８３７０６３、ＵＳ５，７４７，４９８、ＷＯ９８／１０７６７、ＷＯ９７／３００３４、ＷＯ９７／４９６８８、ＷＯ９７／３８９８３、ならびに特にＷＯ９６／３０３４７（例えば、ＣＰ３５８７７４として公知の化合物）、ＷＯ９６／３３９８０（例えば、化合物ＺＤ１８３９）およびＷＯ９５／０３２８３（例えば、化合物ＺＭ１０５１８０）で具体的に概略を開示されている、上述のような化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体であり；例えば、トラツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ）、セツキシマブ、Ｉｒｅｓｓａ、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））、ＣＩ−１０３３、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ−２０１６、Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３またはＥ７．６．３、およびＷＯ０３／０１３５４１で開示されている７Ｈ−ピロロ−［２，３−ｄ］ピリミジン誘導体である。
【０１４２】
さらなる抗血管新生性化合物には、例えばタンパク質キナーゼまたは脂質キナーゼの阻害と無関係である、その活性に関する別の機構を有する化合物が挙げられ、例えば、サリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ）およびＴＮＰ−４７０が挙げられる。
【０１４３】
タンパク質ホスファターゼまたは脂質ホスファターゼの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物は、例えば、ホスファターゼ１、ホスファターゼ２Ａ、ＰＴＥＮまたはＣＤＣ２５の阻害剤であり、例えばオカダ酸またはその誘導体である。
【０１４４】
細胞分化プロセスを誘導する化合物は、例えば、レチノイン酸、α−γ−もしくはδ−トコフェロール、またはα−γ−もしくはδ−トコトリエノールである。
【０１４５】
本明細書で使用される「シクロオキシダーゼ阻害剤」という用語には、限定するわけではないが、例えば、Ｃｏｘ−２阻害剤、５−アルキル置換２−アリールアミノフェニル酢酸およびその誘導体、例としてセレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ）、ロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸ）、エトリコキシブ、バルデコキシブまたは５−アルキル−２−アリールアミノフェニル酢酸、例えば５−メチル−２−（２’−クロロ−６’−フルオロアニリノ）フェニル酢酸、ルミラコキシブを含める。
【０１４６】
「ｍＴＯＲ阻害剤」という用語は、シロリムス（Ｒａｐａｍｕｎｅ（登録商標））、エベロリムス（Ｃｅｒｔｉｃａｎ（商標））、ＣＣＩ−７７９およびＡＢＴ５７８等、ほ乳類ラパマイシン標的タンパク質（ｍＴＯＲ）を阻害し、抗増殖活性を有する、化合物に関する。
【０１４７】
本明細書で使用される「ビスホスホネート」という用語には、限定するわけではないが、エチドロン酸、クロドロン酸、チルドロン酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、イバンドロン酸、リセドロン酸およびゾレドロン酸を含める。「エチドロン酸」は例えば、例えば商標ＤＩＤＲＯＮＥＬの下で販売されているときの形態において、投与することができる。「クロドロン酸」は例えば、例えば商標ＢＯＮＥＦＯＳの下で販売されているときの形態において、投与することができる。「チルドロン酸」は例えば、例えば商標ＳＫＥＬＩＤの下で販売されているときの形態において、投与することができる。「パミドロン酸」は例えば、例えば商標ＡＲＥＤＩＡ（商標）の下で販売されているときの形態において、投与することができる。「アレンドロン酸」は例えば、例えば商標ＦＯＳＡＭＡＸの下で販売されているときの形態において、投与することができる。「イバンドロン酸」は例えば、例えば商標ＢＯＮＤＲＡＮＡＴの下で販売されているときの形態において、投与することができる。「リセドロン酸」は例えば、例えば商標ＡＣＴＯＮＥＬの下で販売されているときの形態において、投与することができる。「ゾレドロン酸」は例えば、例えば商標ＺＯＭＥＴＡの下で販売されているときの形態において、投与することができる。
【０１４８】
本明細書で使用される「ヘパラナーゼ阻害剤」という用語は、ヘパリンスルフェートの分解を標的とし、低減し、または阻害する化合物を指す。上記用語には、ＰＩ−８８を含めるが、これに限定されるわけではない。
【０１４９】
本明細書で使用される「生物学的応答調節剤」という用語は、リンホカインまたはインターフェロン、例えばインターフェロンγを指す。
【０１５０】
本明細書で使用される「Ｒａｓ発癌性アイソフォームの阻害剤」という用語、例えばＨ−Ｒａｓ、Ｋ−ＲａｓまたはＮ−Ｒａｓは、Ｒａｓの発癌活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物を指し、例えば「ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤」を指し、例えばＬ−７４４８３２、ＤＫ８Ｇ５５７またはＲ１１５７７７（Ｚａｒｎｅｓｔｒａ）を指す。
【０１５１】
本明細書で使用される「テロメラーゼ阻害剤」という用語は、テロメラーゼの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物を指す。テロメラーゼの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物は特に、テロメラーゼ受容体を阻害する化合物であり、例えばテロメスタチンである。
【０１５２】
本明細書で使用される「メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤」という用語は、メチオニンアミノペプチダーゼの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物を指す。メチオニンアミノペプチダーゼの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物は、例えばベンガミドまたはその誘導体である。
【０１５３】
本明細書で使用される「プロテアソーム阻害剤」という用語は、プロテアソームの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物を指す。プロテアソームの活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物には、例えばＰＳ−３４１およびＭＬＮ３４１が挙げられる。
【０１５４】
本明細書で使用される「マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤」または（「ＭＭＰ阻害剤」）という用語には、限定するわけではないが、コラーゲン型ペプチド模倣性阻害剤およびコラーゲン型非ペプチド模倣性阻害剤、テトラサイクリン誘導体、例えばヒドロキサム酸型ペプチド模倣薬性阻害剤であるバチマスタットおよび経口方式で生体が利用可能なバチマスタットの類縁体であるマリマスタット（ＢＢ−２５１６）、プリノマスタット（ＡＧ３３４０）、メタスタット（ＮＳＣ６８３５５１）ＢＭＳ−２７９２５１、ＢＡＹ１２−９５６６、ＴＡＡ２１１、ＭＭＩ２７０ＢまたはＡＡＪ９９６を含める。
【０１５５】
本明細書で使用される「造血器悪性腫瘍の治療に使用される作用物質」という用語には、限定するわけではないが、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、Ｆｌｔ−３の活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物；インターフェロン、１−ｂ−Ｄ−アラビノフフラノシルシトシン（ａｒａ−ｃ）およびブスルファン；ならびに、ＡＬＫ阻害剤、例えば、未分化リンパ腫キナーゼを標的とし、低減し、または阻害する化合物を含める。
【０１５６】
「Ｆｌｔ−３の活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物」という用語は特に、Ｆｌｔ−３を阻害する化合物、タンパク質または抗体であり、例えば、ＰＫＣ４１２、ミドスタウリン、スタウロスポリン誘導体、ＳＵ１１２４８およびＭＬＮ５１８である。
【０１５７】
本明細書で使用される「ＨＳＰ９０阻害剤」という用語には、限定するわけではないが、ＨＳＰ９０の内因性ＡＴＰアーゼ活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物と、ユビキチンプロテアソーム経路を介してＨＳＰ９０クライアントタンパク質を分解させ、標的とし、低減し、または阻害する化合物とを含める。ＨＳＰ９０の内因性ＡＴＰアーゼ活性を標的とし、低下させ、または阻害する化合物は特に、ＨＳＰ９０のＡＴＰアーゼ活性を阻害する化合物、タンパク質または抗体であり、例えば、１７−アリルアミノ、１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７ＡＡＧ）、ゲルダナマイシン誘導体；他のゲルダナマイシン関連化合物；ラジシコールおよびＨＤＡＣ阻害剤である。
【０１５８】
本明細書で使用される「抗増殖性抗体」という用語には、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−ＤＭ１、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、ＰＲＯ６４５５３（抗ＣＤ４０型）および２Ｃ４抗体、ならびにＥｙｌｅａ（登録商標）を含めるが、これらに限定されるわけではない。抗体とは、当該抗体が望ましい生物学的活性を示す限り、例えば無欠失モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの無欠失抗体から形成された多特異的抗体、および抗体フラグメントを意味する。
【０１５９】
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の治療の場合、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物は、標準的な白血病療法と組み合わせて使用することができ、特に、ＡＭＬの治療に使用される療法と組み合わせて使用することができる。特に、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物は、例えばファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ならびに／または、Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ、Ａｒａ−Ｃ、ＶＰ−１６、Ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ、Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ、Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ、ＣａｒｂｏｐｌａｔｉｎｕｍおよびＰＫＣ４１２等といったＡＭＬの治療に有用な他の薬物と組み合わせて投与することができる。
【０１６０】
コード番号、一般名または商標によって特定される作用剤の構造は、標準的な目録「Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ」の現行版から取得してもよく、またはデータベース、例えばＰａｔｅｎｔｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（例えば、ＩＭＳ  Ｗｏｒｌｄ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）から取得してもよい。第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物と組み合わせて使用することができる、上記化合物は、上記文献等、当技術分野において説明されている態様にして、調製して投与することができる。
【０１６１】
第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物はまた、公知の治療法、例えば、ホルモンの投与または特に放射線の適用と組み合わせて有利に用いてもよい。
【０１６２】
第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物は特に、放射線増感剤として使用してもよく、特に、放射線療法に対して乏しい感受性を示す腫瘍の治療のための放射線増感剤として使用してもよい。
【０１６３】
一実施形態において、本発明は、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物および少なくとも１つの他の治療剤を含み、療法における同時の使用、別々の使用または逐次的な使用のための配合剤の状態である、製品を提供する。一実施形態において、療法は、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体の活性に媒介される疾患または状態の治療である。配合剤として提供される製品は、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物と他の治療剤とを、同じ医薬組成物中に一緒に取り込んだ状態にして含む、組成物を含み、または、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物と他の治療剤とを、別々にした形態、例えばキットの形態にして含む、組成物を含む。
【０１６４】
一実施形態において、本発明は、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物および別の治療剤を含む、医薬組成物を提供する。任意選択的に、医薬組成物は、薬学的に許容される上記の賦形剤を含んでいてもよい。
【０１６５】
一実施形態において、本発明は、２つ以上の別個の医薬組成物を含む、キットを提供し、こうした２つ以上の別個の医薬組成物のうち少なくとも１つは、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物を含む。一実施形態において、キットは、容器、区分けされたボトル、またはホイルで作られていて区分けされたポケット等、前記組成物を別々に保持するための手段を備える。このようなキットの一例は、典型的には錠剤およびカプセル剤等の包装用に使用される、ブリスターパックである。
【０１６６】
本発明のキットは、相異なる投薬量間隔で別々の組成物を投与するため、または、別々の組成物どうしを互いに対して滴定するために、相異なる剤形、例えば、経口用剤形および非経口用剤形を投与することを目的として、使用することができる。コンプライアンスを促すために、本発明のキットは、典型的には、投与に関する説明書を含む。本発明の組合せ療法において、本発明の化合物および他の治療剤は、同じまたは異なる製造業者によって製造および／または製剤化され得る。さらに、本発明の化合物および他の治療薬は、（ｉ）医師へのこうした合剤製品の公開前（例えば、本発明の化合物および他の治療剤を含むキットの場合）に併用療法に統合してもよく、（ｉｉ）投与直前に医師自身（または医師の指導下）により併用療法に統合してもよく、（ｉｉｉ）患者自身により、例えば本発明の化合物および他の治療剤の逐次的な投与中に、併用療法に統合してもよい。
【０１６７】
したがって、本発明は、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体の活性に媒介される疾患または状態を治療するための医薬品の製造における、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物の使用を提供し、ここで、上記医薬品が、別の治療剤と一緒にしての投与用に調製される。本発明はまた、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体の活性に媒介される疾患または状態を治療するための医薬品の製造における、別の治療剤の使用も提供し、ここで、上記医薬品が、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物と一緒にしての投与用に調製される。
【０１６８】
本発明はまた、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体の活性に媒介される疾患または状態を治療する方法における使用のための、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物も提供し、ここで、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物が、別の治療剤と一緒にしての投与用に調製される。本発明はまた、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体の活性に媒介される疾患または状態を治療する方法における使用のための、別の治療剤も提供し、ここで、他の治療剤が、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物と一緒にしての投与用に調製される。本発明はまた、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体の活性に媒介される疾患または状態を治療する方法における使用のための、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物も提供し、ここで、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物が、別の治療剤と一緒に投与される。本発明はまた、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体の活性に媒介される疾患または状態を治療する方法における使用のための、別の治療剤も提供し、ここで、他の治療剤が、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物と一緒に投与される。
【０１６９】
本発明はまた、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体に媒介される疾患または状態を治療するための医薬品の製造における、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物の使用も提供し、ここで、上記患者が、事前に（例えば、２４時間以内に）別の治療剤によって治療されている。本発明はまた、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体に媒介される疾患または状態を治療するための医薬品の製造における、別の治療剤の使用も提供し、ここで、上記患者が、事前に（例えば、２４時間以内に）第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物によって治療されている。
【０１７０】
下記の例は、本発明の説明を意図したものであり、本発明への限定であるとして解すべきでない。温度は、セルシウス度において与えられている。そうではないとの言及がない場合、すべての蒸発は、好ましくは約１５ｍｍＨｇから１００ｍｍＨｇの間（＝２０〜１３３ｍｂａｒ）の減圧下で実施される。最終生成物、中間体および出発物質の構造は、標準的な分析方法、例えば微量分析および分光特性、例えばＭＳ、ＩＲ、ＮＭＲによって確認される。使用されている略語は、当技術分野において慣例的な略語である。
【０１７１】
本発明の化合物を合成するのに利用されるすべての出発物質、構成単位、試薬、酸、塩基、脱水剤、溶媒および触媒は、市販されており、または、当業者に公知の有機合成法（Houben-Weyl 4th Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volume 21）によって生成することができる。さらに、本発明の化合物は、下記の例で示されているように、当業者に公知の有機合成法によって生成することができる。
【０１７２】
有力なＶＥＧＦ受容体阻害剤としての第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物の特性に基づいて、第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物は、調節を受けていない血管新生に付随する疾患、特に眼内血管新生によって引き起こされる疾患、特に網膜症、例として糖尿病網膜症または加齢性黄斑変性、乾癬、フォン−ヒッペル−リンドウ病、血管芽細胞腫、血管腫、メサンギウム細胞増殖障害、例として慢性腎臓疾患もしくは急性腎臓疾患、例えば糖尿病性ネフロパチー、悪性腎硬化症、血栓性微小血管症もしくは移植拒絶反応、または特に炎症性腎臓疾患、例として糸球体腎炎、特にメサンギウム増殖性糸球体腎炎、溶血性尿毒症症候群、糖尿病性ネフロパチー、高血圧性腎硬化症、粉瘤、動脈再狭窄、自己免疫疾患、関節リウマチを含めた急性炎症、線維性障害（例えば肝硬変）、糖尿病、子宮内膜症、慢性喘息、アテローム性動脈硬化症または移植後のアテローム硬化症、神経変性性障害、例えば多発性硬化症、ならびに特に腫瘍性疾患、例としてがん（特には固形腫瘍であるが白血病もある）、例として特に乳がん、腺がん、結腸直腸がん、肺がん（特に非小細胞肺がん）、腎臓がん、肝臓がん、膵臓がん、卵巣がんまたは前立腺がん、ならびに骨髄腫、特に多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、ＡＭＬ（急性骨髄性白血病）、ＡＭＭ（原因不明の髄様化生）、中皮腫、神経膠腫および膠芽腫の治療には特に適している。第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物は、腫瘍の転移による拡散および微小転移巣の成長を予防することにも特に適している。第１の実施形態から第７０の実施形態までの化合物は、キナーゼとしてのその活性を理由として、移植に関連した治療においても同様に有用である。
【０１７３】
結晶性化合物
本明細書で使用されるとき、「多形」は、同じ化学組成を有するが、結晶を形成している分子、原子および／またはイオンの空間的配列が異なっている、結晶形態を指す。
【０１７４】
本明細書で使用されるとき、「溶媒和物」は、結晶格子構造内に組み込まれた１種または複数の溶媒の分子をさらに含む、分子、原子および／またはイオンの結晶形態を指す。溶媒和物中の溶媒分子は、規則的な配列および／または無秩序な配列になって存在し得る。溶媒和物は、化学量論量の溶媒分子または化学量論量ではない溶媒分子を含み得る。例えば、化学量論量ではない溶媒分子を有する溶媒和物は、溶媒和物からの溶媒の部分的喪失によって生じ得る。溶媒和物は、結晶格子構造の内部に１個より多い分子またはＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを含む、二量体またはオリゴマーとして生じ得る。
【０１７５】
本明細書で使用されるとき、「非晶質」は、結晶性ではない分子、原子および／またはイオンの固体形態を指す。非晶質固体は、決定的なＸ線回折パターンを示さない。
本明細書で使用されるとき、ある形態に関して使用されている場合の「実質的に純粋な」とは、当該化合物の重量に基づいて、９０重量％超の純度、９１重量％超の純度、９２重量％超の純度、９３重量％超の純度、９４重量％超の純度、９５重量％超の純度、９６重量％超の純度、９７重量％超の純度、９８重量％超の純度および９９重量％超の純度の純度を含め、約１００重量％に等しい純度も同様に含めて、９０重量％超の純度のＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを有する、化合物を意味する。残存の材料は、化合物の他の形態、ならびに／または、化合物の調製から発生する反応不純物および／もしくは加工不純物を含む。例えば、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの結晶形態は、この結晶形態が、当技術分野において現時点で公知になっていて一般に受け入れられてもいる手段によって測定して９０重量％超の純度を有するのならば、実質的に純粋と考えることができ、ここで、残存している１０重量％未満の材料は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの他の形態、ならびに／または反応不純物および／もしくは加工不純物を含む。
【０１７６】
実質的に純粋と規定する別の方法は、下記の通りである。
【０１７７】
本明細書で使用されるとき、特定の多形形態に関する「実質的に純粋な」という用語は、当該多形形態が、１０重量％未満、好ましくは５重量％未満、より好ましくは３重量％未満、最も好ましくは１重量％未満である、化合物の任意の他の物理的形態を含むことを意味する。
【０１７８】
本開示の一実施形態において、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの結晶形態は、実質的に純粋な形態において提供される。実質的に純粋な形態であるＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの上記結晶形態は、例えば賦形剤、担体、および他の医薬品有効成分の１つ、異なる分子構造を持つ活性な化学的要素からなる群より選択される、１種または複数の他の構成要素を任意選択的に含んでいてもよい、医薬組成物中に用いることができる。
【０１７９】
好ましくは、結晶形態は、実験により測定されたＸＲＰＤパターンのピーク総面積の１０％未満、好ましくは５％未満、より好ましくは２％未満が、模擬的なＰＸＲＤパターには存在しない余分なピークに起因していることによって指し示される、実質的に純粋な相均一性を有する。実験により測定されたＰＸＲＤパターンのピーク総面積の１％未満が、模擬的なＰＸＲＤパターンには存在しない余分なピークに起因している、実質的に純粋な相均一性を有する結晶形態が、最も好ましい。
【０１８０】
Ｘ線回折ピーク位置に関する「本質的に同じ」という用語は、典型的なピーク位置および強度のバラツキが考慮されることを意味する。例えば、当業者ならば、ピーク位置（２θ）が、ある程度の装置間のバラツキを示し、典型的には最大で０．２°の装置間のバラツキを示す点については理解されよう。さらに、当業者ならば、相対的なピーク強度が、装置間のバラツキ、ならびに結晶度の度合い、好ましい配向、調製された試料の表面および当業者に公知な他の因子によるバラツキを示すものであり、単なる定性的な尺度として取り扱うべきである点については、理解されよう。
【０１８１】
結晶性材料の調製
結晶形態は、種々の方法によって調製することができ、例えば、適切な溶媒からの結晶化または再結晶、昇華、溶融物からの成長、別の相から固相への転移、超臨界流体からの結晶化、およびジェット噴霧が挙げられる。溶媒混合物からの結晶形態の結晶化または再結晶のための技法には、例えば溶媒の蒸発、溶媒混合物の温度低下、結晶形態の分子および／または塩の過飽和溶媒混合物への結晶接種処理、溶媒混合物の凍結乾燥、ならびに溶媒混合物への逆溶剤（逆溶媒）の添加が挙げられる。処理能力の高い結晶化技法を用いて、多形を含めた結晶形態を調製してもよい。
【０１８２】
多形を含めた薬物の結晶、薬物結晶の調製の方法、および薬物結晶のキャラクタリゼーションは、Solid-State Chemistry of Drugs, S.R. Byrn, R.R. Pfeiffer, and J.G. Stowell, 2nd Edition, SSCI, West Lafayette, Indiana (1999)で論述されている。
【０１８３】
溶媒を用いる結晶化技法の場合、１種または複数の溶媒の選択は、典型的には、化合物の溶解度、結晶化技法および溶媒の蒸気圧等といった１つまたは複数の因子に依存する。溶媒の組合せを用いてもよく、例えば、化合物を第１の溶媒中に可溶化して溶液を生じさせ、続いて、逆溶媒を添加して溶液への化合物の溶解度を低下させ、結晶の形成を起こしてもよい。逆溶媒は、化合物が低い溶解度を有する溶媒である。
【０１８４】
結晶を調製する一方法において、化合物が適切な溶媒中に懸濁され、および／または適切な溶媒中で撹拌されるとスラリーが生じ、このスラリーは、溶解を促進するために加熱してもよい。本明細書で使用される「スラリー」という用語は、化合物の飽和溶液を意味し、こうした飽和溶液はまた、所与の温度において化合物と溶媒との不均一混合物を生じさせるようなさらなる量の化合物を含んでいてもよい。
【０１８５】
種結晶が、結晶化を促進するために任意の結晶化混合物に添加されてもよい。接種処理が、特定の多形の成長を制御するため、または結晶性生成物の粒径分布を制御するために用いられてもよい。したがって、必要とされるシードの量の計算は、例えば"Programmed Cooling of Batch Crystallizers," J.W. Mullin and J. Nyvlt, Chemical Engineering Science, 1971,26, 369-377で記述されているように、利用可能なシードと、平均的な生成物粒子に関して望ましいサイズとに依存する。一般に、小型のシードが、バッチ中の結晶の成長を効果的に制御するために必要とされる。小型のシードは、大きな結晶のふるい分け、粉砕もしくは微粒化、または溶液の微結晶化によって生成することができる。結晶の粉砕または微粒化が、望ましい結晶形態からの結晶度のいかなる変化（すなわち、非晶質または別の多形への変化）も起こさない点については、注意すべきである。
【０１８６】
冷却した結晶化混合物は、真空下でろ過してもよく、単離された固体を、冷たい再結晶用溶媒等の適切な溶媒で洗浄し、窒素パージ下で乾燥させて、望ましい結晶形態を生じさせてもよい。単離された固体は、生成物の好ましい結晶形態の形成を保証するために、固相核磁気共鳴、示差走査熱量測定または粉末Ｘ線回折等の適切な分光法式の技法または分析技法によって分析してもよい。得られた結晶形態は典型的には、結晶化手法に元々用いられた化合物の重量に基づいて約７０重量％超の単離収率、好ましくは９０重量％超の単離収率という量で生成される。生成物は必要ならば、生成物を破塊（ｄｅｌｕｍｐ）するために共粉砕してもよく、またはメッシュスクリーンを通過させてもよい。
【０１８７】
結晶形態は、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを調製するための最終プロセスの反応媒体から直接調製してもよい。こうした調製は例えば、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドが結晶化し得る溶媒または溶媒の混合物を、最終プロセスステップにおいて用いることによって達成してもよい。代替的には、結晶形態は、蒸留または溶媒添加法によって入手してもよい。こうした入手を目的とした適切な溶媒には、例えば、上記の非極性溶媒および極性溶媒が挙げられるし、アルコール等のプロトン性極性溶媒、およびケトン等の非プロトン性極性溶媒も挙げられる。
【０１８８】
試料中の１より多い多形の存在は、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）または固相核磁気共鳴分光法等の技法によって測定することができる。例えば、実験により測定されたＰＸＲＤパターンと模擬的なＰＸＲＤパターンとの比較において、余分なピークが存在することは、試料中に１つより多い多形があることを指し示している可能性がある。模擬的なＰＸＲＤは、単結晶Ｘ線データから計算してもよく（Smith, D.K., "A FORTRAN Program for Calculating X-Ray Powder Diffraction Patterns," Lawrence Radiation Laboratory, Livermore, California, UCRL-7196 (April 1963)を参照されたい。）、または、ＴＯＰＡＳプログラム（Ｔｏｔａｌ  Ｐａｔｔｅｒｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、Ｂｒｕｃｋｅｒ  ＡＸＳ  Ｉｎｃ．から入手可能）から計算してもよい。
【０１８９】
様々な分析方法が、キャラクタリゼーションのために使用され得る。
【０１９０】
Ｉ．  粉末Ｘ線回折測定
当業者ならば、採用される測定条件に依存する測定誤差を伴ってＸ線回折パターンが得られ得る点については、理解されよう。特に、Ｘ線回折パターンの強度が、採用される測定条件に応じて増減し得る点については、一般に公知である。相対強度もまた、実験条件に応じて変動し得、したがって、強度の正確な桁を考慮すべきではないという点については、さらに理解すべきである。さらに、慣例的なＸ線回折パターンに関する回折角度の測定誤差は、典型的には約５％以下であり、こうした測定誤差の度合いは、上記回折角度につきものであるとして考慮すべきである。この結果、本発明の結晶形態が、本明細書で開示されている添付の図面中に示されたＸ線回折パターンと完全に同一なＸ線回折パターンをもたらす結晶形態に限定されない点については、理解すべきである。添付の図面中で開示されたＸ線回折パターンと実質的に同一のＸ線回折パターンを提供する、あらゆる結晶形態は、本発明の範囲に含まれる。Ｘ線回折パターンの実質的同一性を確認する能力は、当業者の範囲に含まれる。
【０１９１】
ＩＩ．  示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
結晶形態を試験するために使用したＤＳＣ機器は、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（登録商標）Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙモデル２９１０、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（登録商標）Ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙモデル２９２０、またはＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（登録商標）Ｍｏｄｕｌａｔｅｄ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  ＣａｌｏｒｉｍｅｔｒｙモデルＱ１０００であった。ＤＳＣセル／試料チャンバーを、１００ｍｌ／ｍｉｎの超高純度窒素ガスによってパージした。上記機器を、高純度のインジウムによって較正した。こうした方法によって測定される試料温度の精度は、約±１℃以内であり、融解熱は、約±５％の相対誤差に収めて測定することができる。試料を、むき出しのアルミニウムＤＳＣ皿に入れて、空の基準皿に対比させて測定した。約２〜６ｍｇの試料粉末を皿の底部に置き、軽めにたたいて潰して、皿と接触させた。試料の重量は、１００分の１ミリグラムまで精密に測定して記録した。上記機器は、２５℃から３００℃の間の温度範囲において、１分当たり１０℃で昇温するようにプログラムしておいた。
【０１９２】
試料重量によって正規化した熱流を、測定された試料温度と対比させてプロットした。データは、ワット／グラム（「Ｗ／ｇ」）の単位において報告した。プロットを作製すると、吸熱ピークは、下降していくようになっていた。吸熱溶融ピークは、この分析における外挿した開始温度、ピーク温度および融解熱について評価した。
【０１９３】
ＩＩＩ．  熱重量分析（ＴＧＡ）
結晶形態を試験するために使用したＴＧＡ機器は、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ．ＲＴＭ．Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒｍｏｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  Ｑ５００またはＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ．ＲＴＭ．Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｔｈｅｒｍｏｇｒａｖｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ２９５０であった。１５〜２０ミリグラムの試料を、２５℃から約３００℃の間の温度範囲において、１分当たり１０℃の加熱速度で分析した。
【実施例】
【０１９４】
本発明については、下記実施例によって説明するが、いかなる観点においても限定されるわけではない。
略語
ＡＣＮ  アセトニトリル
ａｐｐ  見掛けの
ａｑ  水溶液
ａｔｍ  雰囲気
ＡＴＰ  アデノシン５’−三リン酸
ＢＯＣ  ターシャリーブチルカルボキシ
ＢＯＰ  （ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ｂｒ  ブロード
ＢＳＡ  ウシ血清アルブミン
ｄ  二重項
ＤＢＵ  １，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン
ＤＣＥ  １，２−ジクロロエタン
ｄｄ  二重項の二重項
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＤＩＥＡ  ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ  ４，４−ジメチルアミノピリジン
ＤＭＥ  １，４−ジメトキシエタン
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＰ  デス−マーチン試薬、１，１，１−トリアセトキシ−１，１−ジヒドロ−１，２−ベンゾヨードキソール−３（１Ｈ）−オン
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＤＴＴ  ジチオトレイトール
ＥＤＴＡ  エチレンジアミンテトラ酢酸
ＥＳＩ  エレクトロスプレーイオン化
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＦＣＣ  フラッシュカラムクロマトグラフィー
ｇ  グラム
ｇ（イタリック体）  重力加速度定数
ＧＳＨ  グルタチオン
ｈ  時間
ＨＡＴＵ  ２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートメタンアミニウム
ＨＢＴＵ  １−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−ベンゾトリアゾリウムヘキサフルオロホスフェート（１−）３−オキシド
ＨＯＢｔ  １−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ  高速液体クロマトグラフィー
ＩＲ  赤外分光法
ＬＣＭＳ  液体クロマトグラフィー結合質量分析法
ＬＴＭＰ  リチウム２，２’，６，６’−テトラメチルピペリジン
Ｍ  モル
ｍ  多重項
ＭｅＯＨ  メタノール
ｍｉｎ  分
ｍＬ  ミリリットル
ｍｍｏｌ  ミリモル
ＭＳ  質量分析法
ＭｓＯＨ  メタンスルホン酸
ｍ／ｚ  質量電荷比
Ｎ  標準
ＮＡＤＰＨ  β−ニコチンアミドジヌクレオチドリン酸（還元済み形態）
ＮＭＲ  核磁気共鳴
Ｐｄ／Ｃ  パラジウム炭素
ｐｐｍ  パーツパーミリオン
ＰｙＢＯＰ  ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ｒａｃ  ラセミ
ｒｔ  室温
Ｒｔ  保持時間
ｓ  一重項
ｓａｔ  飽和
ＳＦＣ  超臨界流体クロマトグラフィー
ｔ  三重項
ＴＢＳＣｌ  ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＦＡ  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
ＵＤＰＧＡ  ウリジン５’−ジホスホ−α−Ｄ−グルクロン酸
【実施例１】
【０１９５】
（Ｚ）−Ｎ−（（６−（（１−（（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）カルバモイル）−１Ｈ−インドール−５−イル）オキシ）ピリミジン−４−イル）メチレン）メタンアミンオキシドの調製
【化６】
2016518443.tif 000010
【０１９６】
ＷＯ２０１００６６６８４に記載のように調製したＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（３．０６ｇ、６．８７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１４０ｍＬ）に溶かした室温の懸濁液に、水（１４７ｍｌ、１４４３ｍｍｏｌ）中のＨ２Ｏ２の３０ｗｔ％溶液を添加した。反応物を３時間撹拌した。次いで混合物を５００ｍＬのＤＣＭで希釈し、続いて４００ｍＬの水で希釈し、得られた層を分離した。水性層を２５０ｍＬの追加のＤＣＭで抽出した。有機層を合わせ、引き続いて次に、ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、次いで飽和ＮａＨＳＯ３（１５０ｍＬ）で洗浄し、次いでブライン（１５０ｍＬ）でもう一度洗浄した。次いで有機相を顆粒状Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、ろ過し、濃縮した。得られた残留物を、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜１０％ＭｅＯＨ）によって部分的に精製し、次いで、温かい（約６０℃の）酢酸エチル溶液からの沈殿によってさらに精製し、続いてヘプタンをゆっくり添加し、続いて室温にゆっくり冷却した。得られた固体をろ過によって収集し、冷たい２：１のヘプタン：酢酸エチルで洗浄すると、（Ｚ）−Ｎ−（（６−（（１−（（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）カルバモイル）−１Ｈ−インドール−５−イル）オキシ）ピリミジン−４−イル）メチレン）メタンアミンオキシドが２５％の収率で生じた。1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δ=11.07 (s, 1H), 8.78 (d, J=1.0Hz, 1H), 8.42 (d, J=1.5Hz, 1H), 8.32 (d, J=9.1Hz, 1H), 8.19 (d, J=3.5Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.49 (d, J=2.5Hz, 1H), 7.16 (dd, J=2.3, 8.8Hz, 2H), 7.08 (s, 1H), 6.77 (d, J=4.0Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.89 (s, 3H).ＨＲＭＳ：Ｃ２０Ｈ１７Ｆ３Ｎ７Ｏ３  計算値４６０．１３４５、実測値４６０．１３４１。
【実施例２】
【０１９７】
５−（（６−カルバモイルピリミジン−４−イル）オキシ）−Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの調製
【化７】
2016518443.tif 000011
【０１９８】
ＤＣＭ（２０ｍｌ）中の５−（（６−（ヒドロキシメチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（７００ｍｇ、１．６１９ｍｍｏｌ）の溶液に、デス−マーチンペルヨージナン（１０３０ｍｇ、２．４２９ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２ｈ撹拌した。この時点で、ＮａＨＣＯ３の飽和水溶液を添加した。層どうしを分離し、有機物をＤＣＭで抽出した。有機層を合わせ、硫酸ナトリウムで脱水し、蒸発させた。得られた残留物に、ｔＢｕＯＨ（１６ｍｌ）／Ｈ２Ｏ（４ｍｌ）を添加し、続いて亜塩素酸ナトリウム（９４６ｍｇ、８．３７ｍｍｏｌ）、リン酸二水素ナトリウム（１００４ｍｇ、８．３７ｍｍｏｌ）および２−メチル−２−ブテン（６．６５ｍｌ、６２．７ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を４ｈ撹拌した。この時点で、ｐＨ７．４リン酸緩衝液を添加し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出した。ＤＣＭ（２ｍｌ）に溶かした０℃の粗製混合物（１００ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）の一部に、塩化オキサリル（０．０２９ｍｌ、０．３３６ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１．７３５μｌ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加した。２分後、ジオキサン中の０．５Ｍアンモニア（１３．４４ｍｌ、６．７２ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温に温め、終夜撹拌した。反応物を蒸発させ、１００：０から０：１００までに至るヘプタン：ＥｔＯＡｃによって溶出させるＦＣＣを用いて直接精製した。1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δppm 11.07 (s, 1 H) 8.87 (d, J=1.01Hz, 1 H) 8.34 (d, J=8.84Hz, 1 H) 8.28 (s, 1 H) 8.20 (d, J=3.79Hz, 1 H) 7.97 (s, 1 H) 7.53 (d, J=2.02Hz, 1 H) 7.41 (d, J=1.01Hz, 1 H) 7.19 (dd, J=9.09, 2.53Hz, 1 H) 7.08 (s, 1 H) 6.78 (d, J=3.79Hz, 1 H) 3.95 (s, 3 H).ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ４４５．９３（Ｍ＋Ｈ）。
【実施例３】
【０１９９】
５−（６−（アミノメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの調製
ａ）  ５−（６−（ベンジルオキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド
【化８】
2016518443.tif 000012
【０２００】
ＷＯ０１００６６６８４に記載のように調製した５−（（６−（（ベンジルオキシ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール（２．８８ｇ、８．６９ｍｍｏｌ）、およびＷＯ０１００６６６８４に記載のように調製したフェニル（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）カルバメート（３．１０ｇ、１０．８６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（８７ｍｌ）に溶かした窒素下で０℃の溶液に、ＮａＨ（鉱油中の６０％、１．０４３ｇ、２６．１ｍｍｏｌ）を添加した。
【０２０１】
３０分後、反応物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、３０ｍＬのＮＨ４Ｃｌ飽和水溶液で急冷した。水（５０ｍＬ）を添加した。水性層を２×５０ｍＬのさらなる酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗製油状物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（０〜１００％酢酸エチル：ヘプタン）によって精製すると、表題化合物が生じた。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ５２３．０（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０２】
ｂ）  ５−（６−（ヒドロキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド
【化９】
2016518443.tif 000013
【０２０３】
５−（６−（ベンジルオキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（３．２６ｇ、６．２４ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（１００ｍｌ）に取り込ませ、１００℃で加熱した。３時間後、反応物を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０〜１０％メタノール；メタノールは、１０％水酸化アンモニウムを含有していた）によって精製すると、表題化合物が生じた。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ４３３．０（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０４】
ｃ）  （６−（１−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）メチルメタンスルホネート
【化１０】
2016518443.tif 000014
【０２０５】
ＤＣＭ（１９．５５ｍｌ）中の５−（６−（ヒドロキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（０．９３ｇ、２．１５１ｍｍｏｌ）の溶液に、メタンスルホニルクロリド（０．２５２ｍｌ、３．２３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．５９９ｍｌ、４．３０ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２６ｍｇ、０．２１３ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、追加のメタンスルホニルクロリド（０．１２６ｍｌ、１．６１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．３００ｍｌ、２．１５ｍｍｏｌ）を添加した。２時間後、反応物を水（２０ｍｌ）で急冷し、ＤＣＭ（３×１０ｍｌ）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、濃縮すると、表題化合物が生じた。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ５１０．９（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０６】
ｄ）  ５−（６−（アミノメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド
【化１１】
2016518443.tif 000015
【０２０７】
ＴＨＦ（２．１０ｍｌ）中の（６−（１−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）メチルメタンスルホネート（１０７ｍｇ、０．２１０ｍｍｏｌ）の溶液に、アンモニア（ジオキサン中の０．５Ｍ、４．１９２ｍｌ、２．０９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で１日撹拌し、次いで４０℃で１日撹拌した。反応物を濃縮し、ＴＨＦ（２ｍｌ）およびアンモニア（メタノール中の７Ｍ、１．５０ｍｌ、１０．４８ｍｍｏｌ）に取り込ませ、３５℃で終夜加熱した。反応物を濃縮し、シリカに吸収して、ＦＣＣ（ＤＣＭ中の０〜５％メタノール；メタノールは、１０％水酸化アンモニウムを含有していた）によって精製した。生成物をＨＰＬＣ（２０〜１００％アセトニトリル：水のグラジエント、Ｓｕｎｆｉｒｅ  Ｃ８  ＯＢＤ  ５ｕｍ  ３０×１００カラム）によってさらに精製すると、表題化合物が生じた。1H NMR (400MHz, DMSO-d6)δppm 8.65 (s, 1 H) 8.32 (d, J=8.84Hz, 1 H) 8.18 (d, J=3.54Hz, 1 H) 7.46 (d, J=2.53Hz, 1 H) 7.10-7.15 (m, 2 H) 7.07 (s, 1 H) 6.76 (d, J=3.79Hz, 1 H) 3.95 (d, J=1.01Hz, 3 H) 3.82 (s, 2 H).Ｃ１９Ｈ１６Ｆ３Ｎ７Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＨＲＭＳ計算値４３２．１３９６、実測値４３２．１４０７。
【実施例４】
【０２０８】
Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの他の代謝物質の単離／キャラクタリゼーション
インビトロプロトコル
［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを、雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット、ニュージーランドホワイト種雄性ウサギ、雄性カニクイザルおよびヒト（男性と女性とが混在）に由来した肝細胞を用いて、１０μｍｏｌ／Ｌの濃度で６ｈインキュベートした。ヒト肝臓ミクロソームを用いて、１０μｍｏｌ／Ｌの［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドのインキュベーションも同様に１ｈ実施した。インキュベート対象物を、放射能検出を用いたＨＰＬＣによって分析した。代謝物質構造をＬＣ−ＭＳによってキャラクタリゼーションした。
【０２０９】
肝細胞およびヒト肝臓ミクロソームにおける［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの概略的な代謝経路
【化１２】
2016518443.tif 000016
【０２１０】
［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド、および放射性標識されていないＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを、ＤＭＳＯに溶解させると、１０ｍｍｏｌ／Ｌの濃度の溶液が得られた。ＬＣ−ＭＳ分析を容易にするために、最終的なストック溶液中での１４Ｃ標識度は、約５０％に調整した。したがって、６０μＬの［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド溶液を、４０μＬの非放射性Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド溶液と混合した。表１に記載の冷凍保存肝細胞を、この研究において使用した。
【０２１１】
【表１】
2016518443.tif 000017
冷凍保存肝細胞を液体Ｎ２により貯蔵した。インキュベーション当日には、肝細胞を、供給業者から提供された指示書に従って解凍した。
【０２１２】
肝細胞インキュベーションおよび生存可能性測定
冷凍保存肝細胞を解凍した後、生細胞を、ＨｅｐａｔｏＺＹＭＥ細胞培養培地（Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で遠心分離によって富化した。こうした富化を目的として、細胞は、３７℃の温かい４５ｍＬのＨｅｐａｔｏＺＹＭＥに添加し、室温において５０ｇで５ｍｉｎ遠心分離した。死細胞含有の上清を廃棄し、ペレット内の細胞をＨｅｐａｔｏＺＹＭＥに再懸濁させた。
【０２１３】
再懸濁させた肝細胞の生存可能性を、供給業者（Ｇｕａｖａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｈａｙｗａｒｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）によって説明されているように、ＶｉａＣｏｕｎｔ（登録商標）アッセイを用いてＧｕａｖａ  ＥａｓｙＣｙｔｅ（商標）Ｍｉｎｉシステムによって測定した。細胞の計数後、細胞濃度を、ＨｅｐａｔｏＺＹＭＥの添加によって１ｍＬ当たり約１×１０６個の生細胞になるよう調整した。続いて、インキュベーションを、ＤＭＳＯ中の溶液として［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドおよび未標識Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを添加することによって、開始した。インキュベーションにおけるＤＭＳＯの最終濃度は、０．１％（ｖ／ｖ）であった。
【０２１４】
インキュベート対象物中での［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの初期濃度は、代謝物質パターン分析用として１０μｍｏｌ／Ｌ（４．２ｋＢｑ／ｍＬ）であった。すべてのインキュベーションにおいて、２５ｍＬ組織培養フラスコ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｆｒａｎｋｌｉ  Ｌａｋｅｓ）を使用し、５００μＬのアリコートを相異なる時点（０ｈおよび６ｈ）で取得した。
【０２１５】
インキュベーション条件下における［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの化学的安定性を確かめるために、この化合物を、１０μｍｏｌ／Ｌの濃度において、肝細胞を含んでいないＨｅｐａｔｏＺＹＭＥ中でインキュベートした。第２の一連の対照インキュベーションを、試験化合物の非存在下において、すべての種の肝細胞を用いて実施して、生存可能性に対する試験化合物の効果を調査した。これらの実験は、１２×６ｍＬＭｕｌｔｉＷｅｌｌＴＭプレート（Ａｒｔ．３９３５０３、Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）内で実施した。インキュベーションのさらなる詳細については、表２に示している。
【０２１６】
【表２】
2016518443.tif 000018
【０２１７】
インキュベーションを、９５％相対湿度および５％ＣＯ２の湿気を含んだ雰囲気下、Ｈｅｒａｅｕｓインキュベーター／ｃｙｔｏｐｅｒｍ（Ｋｅｎｄｒｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＡＧ、Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）内において３７℃で実施した。インキュベーション中、プレートおよびフラスコは、１分当たり３００振りにして振とうした。肝細胞の生存可能性を６ｈ後（インキュベーションの終了後）に測定した。
【０２１８】
放射性標識の代謝安定性の評価
Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの追加インキュベーションを、放射性標識の代謝安定性を評価するために別途実施した。インキュベーションは、先述したように実施したが、サル肝細胞には新たなバッチ（ＳＺＨ）を使用した。０時間、２時間、４時間および６時間の時点において、５０μＬのアリコート（４つとも同一の試料）を、１０ｍＬのＲｉａｌｕｍａ（Ｌｕｍａｃ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）が入った２０ｍＬＺｉｎｓｓｅｒ製バイアル内にピペットで直接移した。追加の５０μＬのアリコート（４つとも同一の試料）を空の２０ｍＬＺｉｎｓｓｅｒ製バイアル内にピペットで移し、このバイアル内で試料を終夜乾燥させた後、試料を１０ｍＬのＲｉａｌｕｍａと混合し、放射能測定用に６０分超音波処理した。
【０２１９】
ヒト肝臓ミクロソームインキュベーション
この研究においては、表３に記載の市販ヒト肝臓ミクロソームを使用した。ロットを、供給業者による様々な酵素の活性に関してキャラクタリゼーションした（データは図示されていないが、ファイルに保持されている。）。ミクロソームを、ドライアイスによって受け止め、使用するまで−８０℃で貯蔵した。
【０２２０】
【表３】
2016518443.tif 000019
【０２２１】
代謝物質パターン用のミクロソームインキュベーション
代謝物質プロファイル用のミクロソームインキュベーションを、１０μｍｏｌ／Ｌの［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（約５０％放射性標識済み）において実施し、このとき、１つの時点を用いて調査した（６０ｍｉｎ）。インキュベーションを、０．１ｍｏｌ／Ｌのリン酸ナトリウムバッファー  ｐＨ７．４の中において３７℃で実施した。インキュベーションカクテル中の最終濃度はミクロソームタンパク質１ｍｇ当たりにおいて、４ｍｍｏｌ／ＬのＵＤＰＧＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、１ｍｍｏｌ／Ｌのβ−ＮＡＤＰＨ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、５ｍｍｏｌ／ＬのＭｇＣｌ２、および６０μｇのアラメチシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）。上記の系を、１０ｍｉｎインキュベートしておいた後、試験化合物を添加して、アラメチシンによる細孔形成を可能にした。代謝反応を、［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの添加によって開始し、二倍量の氷冷したアセトニトリルの添加によって終結させた。試料は、分析まで−２０℃で貯蔵した。ミクロソームの非存在下における対照インキュベーションを実施して、インキュベーション混合物中での［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの化学的安定性を６０ｍｉｎにわたって測定した。
【０２２２】
【表４】
2016518443.tif 000020
【０２２３】
試料調製
試験化合物および条件
ＤＭＳＯ中の［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの１０ｍｍｏｌ／Ｌのストック溶液を、ミクロソームインキュベーションおよび肝細胞インキュベーションのために使用した。
【０２２４】
試料採取時間
すべての種に対する代謝物質プロファイルは、肝細胞を用いて６ｈのインキュベーション時間で実施し、一方、ヒト肝臓ミクロソームに対する代謝物質プロファイルは、１ｈのインキュベーション時間で実施した。
【０２２５】
代謝物質プロファイル用のインキュベーション方法
肝細胞インキュベーションのために、［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを、１０μｍｏｌ／Ｌの初期濃度において、１ｍＬ当たり約１×１０６個の生存肝細胞を含んだ血清不含培地（ＨｅｐａｔｏＺＹＭＥ）中でインキュベートした。
【０２２６】
ヒト肝臓ミクロソームインキュベーションのために、［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドを１０μｍｏｌ／Ｌの初期濃度において、０．５ｍｇのミクロソーム／Ｌと、補因子ＮＡＤＰＨ、ＧＳＨおよびＵＤＰＧＡとを含有するリン酸バッファー中で、インキュベートした。
【０２２７】
代謝物質の構造キャラクタリゼーションを、肝細胞およびミクロソームからのインキュベーション上清を用いたオンライン式放射能検出およびＬＣ−ＭＳ分析（精密質量測定を含める）によって達成した。
【０２２８】
試料調製
インキュベーション期間の終了時には、インキュベーション懸濁液のアリコート５００μＬを、二倍量の氷冷したアセトニトリルと混合して、酵素反応を停止させた。混合物をボルテックス混合し、次いで、タンパク質の沈殿を完了させる分析まで少なくとも４時間の間−２０℃で貯蔵した。次いで、各試料を解凍し、１００００ｇで１０ｍｉｎ遠心分離し、続いて上清Ｓ１を取り除いた。上清Ｓ１を、試料濃縮装置を用いて蒸発させ、さらなる使用まで−２０℃で貯蔵した。ＨＰＬＣへの注入前に、濃縮済み試料を移動相Ａで希釈した。
【０２２９】
得られたペレットを、２／１（ｖ／ｖ）になった５００μＬのＳｏｌｖａｂｌｅ／イソプロパノールによって可溶化し、２００μＬ塩酸（２Ｍ）で中和した。
【０２３０】
回収の測定用の放射能測定
放射能を、Ｌｉｑｕｉｄ  Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（モデルＴｒｉＣａｒｂ２２００ＣＡ、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔ．）によって測定した。インキュベーション混合物のアリコート（５０μＬ）を、１０〜１５ｍＬのシンチレーションカクテル（Ｒｉａｌｕｍａ）の添加後に測定した。可溶化したペレットを、１７．５ｍＬのシンチレーションカクテル（ＩｒｇａＳａｆｅ  Ｐｌｕｓ、Ｚｉｎｓｓｅｒ  ａｎａｌｙｔｉｃ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）の添加後に測定した。
【０２３１】
インキュベーションにおける合計での回収の計算のためには、ペレットは、可溶化しなければならないが、ある程度の放射能が喪失している可能性もある。しかしながら、ペレットと、再構成した４つの種の上清流とにおける放射能回収は、６ｈのとき、９２．３％から９７．７％の間の範囲であり、したがって、ほとんど完全であると考えられた。
【０２３２】
肝細胞インキュベーションのペレット中の放射能は、すべての試料において０ｈのとき１．１％未満であり、６ｈのとき４．５％未満であることが見出された。ヒト肝臓ミクロソームインキュベーションのペレット中では、放射能は、０ｈにおいては０．７％であり、インキュベーション終了時の１ｈにおいては１．３％であった。追加の肝細胞インキュベーションのペレット中の放射能は、すべての試料において６ｈのとき４．２％から９．５％の間の範囲であった。
【０２３３】
肝細胞の生存可能性
［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（１０μｍｏｌ／Ｌ）を用いたインキュベーション中では、ラット、ウサギ、サルおよびヒトに由来した肝細胞の生存可能性（合計細胞に対する生細胞の％）は、初期の７０〜９３％から６時間後には８〜４２％まで低下した。生存可能性の低下率は、（ヒト≒サル）＜ラット＜ウサギという順番に従っていた。本化合物の非存在下における対照インキュベーションでは、６時間後に４〜２１％という、いくらか低下した生存可能性が示された。
【０２３４】
ストック溶液および対照インキュベーション
本研究において使用された［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドストック溶液を、オンライン式放射能検出を用いたＨＰＬＣによって分析した。放射化学的純度は、９９．６％であった。すべての不純物の総計は、０．４％を占めていた。肝細胞または肝臓ミクロソームの非存在下における［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの対照インキュベーションにより、インキュベーション媒体中でのインキュベーションの間における本化合物の安定性を確認した。
【０２３５】
インビボプロトコル
動物
動物ライセンス番号
Ｎｏ．１８、Ｋａｎｔｏｎａｌｅｓ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒａｍｔ  Ｂａｓｅｌ
種、系統、性別
ラット、Ｗｉｓｔａｒ（Ｈａｎ：ＷＩＳＴ、アルビノ）、雄性ラット、Ｂｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙ（Ｂｎ／Ｃｒｌ、色素沈着済み）、雄
供給業者
Ｈａｎ：ＷＩＳＴ：Ｈａｒｌａｎ、Ｔｈ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ  Ｂｎ／Ｃｒｌ：Ｊａｎｖｉｅｒ、Ｆｒａｎｃｅ
水／給餌
研究の間を通して、水道水およびＮＡＦＡＧペレットＮｏ．８９０（Ｅｂｅｒｌｅ  ＮＡＦＡＧ  ＡＧ、Ｇｏｓｓａｕ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を自由に摂取可能
環境条件
２２±２℃
【０２３６】
製剤
試験製剤は、投与日に新たに調製した。原薬を１０％Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、７０％単分散ＰＥＧ２００（テトラ−エチレングリコール）および２０％水溶液状の０．９％ＮａＣｌ溶液に溶解させた。化合物１０ｍｇに対して、１グラムのＮＭＰを添加して化合物を溶解させ、次いで、７ｇのＰＥＧ２００および２ｇの０．９％ＮａＣｌを、合計で１０ｇになるまで引き続き添加した。
【０２３７】
投与
投与溶液（１ｇ／ｋｇ）を、酸素／イソフルラン（ホレン）混合物（９７／３、ｖ／ｖ）の吸入によって麻酔したすべてのラットの大腿静脈にボーラスとして投与した。名目用量は、１ｍｇ／ｋｇであった。
【０２３８】
血液／血漿
血液試料を舌下から収集した。試料収集のために、ラットを、酸素／イソフルラン（ホレン）混合物（９７／３、ｖ／ｖ）の吸入によって麻酔した。舌下静脈を、微細針を用いて穿孔し、必要な血液をＫ３−ＥＤＴＡバイアル内に収集した。出血は、傷に綿棒を押し当てることによって１０〜１５ｓ以内に止めた。ラットは、試料収集の度に約２〜３ｍｉｎの間無意識状態にしておいた。
【０２３９】
収集した血液は、収集後１０ｍｉｎ以内に遠心分離した（３０００ｇ、１０ｍｉｎ、室温）。血漿を分離し、２０μＬのアリコートを取り除き、秤量し、ＬＳＣによって放射能について評価した。残存の血漿を、ＡＢＡ（グループ１、グループ５ａ）またはＩＤＤ（グループ２）によるＮ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの測定まで約−８０℃で貯蔵した。グループ３およびグループ４で試料採取した血液に関しては、収集血液のアリコート２０μＬを取り除き、秤量し、ＬＳＣによって放射能について評価した。
【０２４０】
排泄物、死骸およびケージ洗液
尿および糞便を、グループ２およびグループ５ａの各ラットから定量的に収集した。尿をドライアイスにより収集した。糞便を室温で収集した。毎回の尿収集後、収集バイアルを３〜５ｍＬの水ですすぎ洗いし、この水も各尿試料に添加した。各尿試料（各約０．０５ｇ）のアリコート２つを取り除き、秤量し、放射能測定用に処理した。残存の尿は、ＩＤＤによる分析まで約−８０℃で貯蔵した。各糞便試料を秤量し、１％カルボキシメチルセルロール水溶液（糞便重量の約１０倍）を添加し、続いて、回転ナイフ式ホモジナイザー（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ）を用いて均一化した。各糞便ホモジネート（それぞれ２〜３ｇ）のアリコート３つを取り除き、秤量し、ＣＯ２捕集後の放射能測定用に処理した。残存の糞便ホモジネートは、ＩＤＤによる分析まで約−２０℃で貯蔵した。
【０２４１】
死骸は、グループ２およびグループ５ａの場合、研究の終了時に収集した。これらの死骸を放射能測定用にさらに処理した。ケージ洗液を、Ｒａｄｉａｃｗａｓｈ（Ｂｉｏｄｅｘ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ＵＳＡ；１：１０に希釈済み）、水およびエタノールでケージをすすぎ洗いすることによって得た。洗浄手順に使用されたすべての液体は、放射能測定用に一緒にして収集した。
【０２４２】
揮発性ＣＯ２捕集
インビボＣＯ２捕集
グループ５ａに属する２匹のラット１ａおよび２ａを、改造した代謝ガラスケージ内で４８ｈ飼育した。捕集された合計１４ＣＯ２の放射能を、エタノールアミン：メタノール（１：１０）およびメタノールという２つの捕集媒体中で、試料採取計画に従って各ラットから測定した。
【０２４３】
糞便からのＣＯ２捕集
糞便ホモジネート入りのバイアルを、気流（２．１〜３．６ｍＬ／ｍｉｎ）下に維持されたチャンバー内で開いた。上記気流を、それぞれエタノールアミン：メタノール（１：１０）およびメタノールという捕集媒体が入っている連接した２つのフラスコの中にバブリングした。こうした媒体を放射能測定用に処理した。
【０２４４】
液体シンチレーション計数
生体試料（血液、血漿、尿、糞便および死骸）およびその他の試料（投与溶液、ケージ洗液、捕集溶液）のアリコートにおける放射能を、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒ．製の２５００ＴＲ液体シンチレーションカウンターを用いてＬＳＣによって測定した。クエンチング補正のために、外部標準法を使用した。クエンチング補正曲線を、密封済み標準物質（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒ．）によって確立した。バックグラウンド値を、各マトリックスのブランク試料を用いて、試料の各バッチについて得た。ＬＯＤは、バックグラウンド値の１．８倍と規定していた。すべての放射能測定は、秤量済み試料を用いて実施した。
【０２４５】
試料調製中の放射能測定
生体試料中の放射能含量、および代謝物質パターン用の試料調製後の放射能の回収を、液体シンチレーション計数によって次の通りに測定した：均一な試料（血漿、尿、糞便、抽出物）を、１０〜２０ｍＬのＩｒｇａｓａｆｅ  Ｐｌｕｓ液体シンチレーションカクテル（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）が入っている２０ｍＬ帯電防止型ポリエチレンバイアル（Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ、Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）内で直接測定した。不均一試料（糞便、ペレット）を、０．５〜２ｍＬのＳｏｌｖａｂｌｅ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）／イソプロパノール（１：１、ｖ／ｖ）の混合物中に可溶化した。完全な溶解の後、試料を塩酸で中和し、液体シンチレーション計数のために１５〜２０ｍＬのＲｉａｌｕｍａ液体シンチレーションカクテル（Ｚｉｎｓｓｅｒ  Ａｎａｌｙｔｉｃ  Ｍａｉｄｅｎｈｅａｄ、Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ、ＵＫ）と混合した。０〜４８ｈにおける糞便プール中の放射能を、ＣＯ２捕集方法を用いて測定した。試料を、クエンチング補正用の外部標準比の方法を用いて、ＬＳＣカウンターモデルＴｒｉ−Ｃａｒｂ（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＣＴ、ＵＳＡ）内で１４Ｃ放射能について評価した。
【０２４６】
試料調製方法  血漿（代謝物質パターン用）
代謝物質パターン分析のために、血漿プール（１つの時点および１匹のラット毎に３μＬから１５μＬまでの範囲になっている、同一の体積）を、ｉ．ｖ．投与後にある後続の時点（０．０８３ｈ、０．５ｈ、１ｈ、４ｈ、８ｈおよび２４ｈ）（ｎ＝４／試料採取）用に調製した。血漿試料を、放射能検出を用いたＨＰＬＣ分析に直接使用した。ＨＰＬＣへの注入前に、参照用化合物と２３０μＬ溶媒Ａとを含有する２０μＬの混合物を添加した。放射能のＨＰＬＣ回収を、０．５ｈおよび８ｈの血漿プール（ｎ＝４）を用いた代表的な別個の試行によって、測定した。回収は、それぞれ９３．４％から１０６．２％の間の範囲であった。したがって、放射能の回収は、完全であることが示された。
【０２４７】
放射能のＨＰＬＣ回収を、０．５ｈおよび８ｈの血漿プール（ｎ＝４）を用いた代表的な別個の試行によって、測定した。回収は、それぞれ９３．４％から１０６．２％の間の範囲であった。したがって、放射能の回収は、完全であることが示された。秤量済みアリコート状の糞便ホモジネート（１１．７２ｇ）に対して。混合物に１ｍｉｎボルテックスを生み出し、１５ｍｉｎ超音波処理し、続いて２０００ｇで１５ｍｉｎ遠心分離した。次いで、上清Ｓ１をペレットＰ１から取り除いた。第２の抽出ステップにおいて、ペレットＰ１を１０ｍＬの水に溶解させ、先述したように３０ｍＬのアセトニトリルで抽出すると、上清Ｓ２およびペレットＰ２が生じた。上清Ｓ２を取り除き、ペレットＰ２を１０ｍＬの水に溶解させ、３５ｍＬのメタノールで３回目の抽出を行うと、上清Ｓ３およびペレットＰ３が生じた。上清Ｓ１〜Ｓ３の合計抽出収率は、９１．３％であった。上清Ｓ１〜Ｓ３を合わせ、混合物のアリコートをＨＰＬＣシステムに直接注入し、続いてオフライン式無線探知を実施した。別個の試行（糞便プール０〜４８ｈ）において測定された放射能のＨＰＬＣ回収は、１００．３％であり、したがって、完全であると考えられた。
【０２４８】
代謝物質のプロファイル作成および同定用のＨＰＬＣ方法
ＬＣ設備
バイナリー型キャピラリーポンプモデルＧ１３７６Ａ、脱気装置モデルＧ１３７９Ａ、および、標準的な１３μＬフローセルモデルＧ１３１５−６００１２付きのＵＶ／ＶＩＳダイオードアレイ検出器モデルＧ１３１５Ｂを備え付けた、ＨＰＬＣシステムモデル１１００（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。ＵＶスペクトルは、２００〜８００ｎｍの範囲で監視した。ＨＰＬＣシステム用の処理ソフトウェアは、ＬＣ３Ｄ、Ｒｅｖ．Ｂ．０４．０２用のＡｇｉｌｅｎｔ  ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎであった。
【０２４９】
ガードカラム
ＡＣＥ３  Ｃ１８  Ｇｕａｒｄ  Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ、内径１５ｍｍ×４．６ｍｍ、Ａｒｔ．ＡＣＥ−１１１−０１０３ＧＤ（ＡＣＴ、Ａｂｅｒｄｅｅｎ、Ｓｃｏｔｌａｎｄ）。
分析カラム
ＡＣＥ３  Ｃ１８、３μｍ、内径１５０ｍｍ×４．６ｍｍ、Ａｒｔ．ＡＣＥ−１１１〜１５４６（ＡＣＴ）
カラム条件
カラムチラーモデル７９５５（Ｊｏｎｅｓ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ｌｔｄ．、Ｈｅｎｇｏｅｄ、Ｍｉｄ．Ｇｌａｍｏｒｇａｎ、Ｕ．Ｋ．）内にある４０℃のサーモスタット
注入量
最大２５０μＬの量を、ＨＴＳ  ＰＡＬオートサンプラー（ＣＴＣ、Ｚｗｉｎｇｅｎ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて５００μＬ試料ループに注入した。
【０２５０】
ＵＶ検出を用いたＨＰＬＣ分析
クロマトグラフィー後、流出物を約１：２０の比に分割した。少ない方の量は、エレクトロスプレーＬＣ−ＭＳインターフェース内に誘導した。多い方の部分は、ＵＶ検出用に使用し、続いてオンライン式放射能検出用にも使用した。
【０２５１】
オンライン式放射能検出
フローセルモデルＺ−５００−５（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を備え付けたＨＰＬＣ放射能モニターモデルＬＢ５１３を使用した。このようにして、流出物を、３ｍＬ／ｍｉｎの流量で、Ｒｉａｌｕｍａ液体シンチレーション混合物（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）と混合した。クロマトグラムを、ＲａｄｉｏＳｔａｒソフトウェア（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）を用いて評価した。
移動相
Ａ：  １０ｍＭギ酸アンモニウム＋ギ酸１ｍＬ／Ｌ；ｐＨ＝３．５８
Ｂ：  アセトニトリル＋ギ酸１ｍＬ／Ｌ
流量
１０００μＬ／ｍｉｎ
グラジエント
０〜５ｍｉｎ：１０％Ｂ；５〜５０ｍｉｎ：１０〜６０％Ｂ；５０〜５５ｍｉｎ：６０〜１００％Ｂ；５５〜６０ｍｉｎ：１００％Ｂ
【０２５２】
代謝物質同定用のＭＳ法
ＭＳ設備
ＭａｓｓＬｙｎｘバージョン４．１により動作する飛行時間（ＰｒｅｍｉｅｒのＱ−Ｔ）式質量分析装置（Ｗａｔｅｒｓ、Ｍａｎｃｈｅｓｔｅｒ、ＵＫ）。
コーン電圧
３０Ｖ
コリジョンエネルギー
コリジョンセル内の分子のフラグメント化のために、１５〜３５ｅＶのコリジョンエネルギーを適用した
脱溶媒ガス
窒素
イオン化モード
陽イオンモードのエレクトロスプレー、Ｚスプレーインターフェースには、ＬｏｃｋＳｐｒａｙ（商標）を選択肢として用いてもよい。
精密質量測定
ＬｏｃｋＳｐｒａｙインターフェースの参照チャンネルは、５μＬ／ｍｉｎの流量において、５０／５０／０．１（ｖ／ｖ／ｖ）のアセトニトリル／水／ギ酸の混合物中のロイシン−エンケファリン（２００ｐｇ／μＬ）の溶液によって動作する。参照チャンネルからのデータ取得中、コーン電圧を４０Ｖに設定し、コリジョンエネルギーを５ｅＶに設定した。
温度
ソースブロック：１００℃；脱溶媒：２００℃
【０２５３】
Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドのマスフラグメント化の解釈、およびフラグメントイオンの命名法
［１４Ｃ］Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドのエレクトロスプレー質量スペクトルでは、プロトン化済み無欠失分子イオンＭ＋Ｈ＋（ｍ／ｚ４４６）、および、鍵となる２つの主要なフラグメントイオンＡ（ｍ／ｚ２５５）およびフラグメントイオンＢ（ｍ／ｚ２１２）が示された。それほどではないが、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドは、エーテルのところでフラグメント化して、フラグメントＣ（ｍ／ｚ１２２）をもたらす。他のフラグメントは、構造への割り当てへの有用性が劣っている。顕著な標識度（約５０％）のために、１４Ｃ標識を含むフラグメントイオンを質量スペクトルにより観察できたが、提案の構造と合致していた。
【化１３】
2016518443.tif 000021
【０２５４】
提案の代謝物質構造
代謝物質構造は、陽イオンモードのエレクトロスプレーを用いたＬＣ−ＭＳによって、キャラクタリゼーションした。質量スペクトルデータ、マスフラグメントの解釈、および提案の構造を、下記に示されている。代謝物質構造は、正確な質量測定および／または水素−重水素交換実験によっても支持された。移動相中のＨ２ＯがＤ２Ｏによって置換されたときのＭ＋Ｈ＋イオンの質量増大は、提案の構造と合致していた。続いて、特許請求の範囲に記載の代謝物質に関するこうした割り当てを、利用可能な参照用化合物に対する保持時間および質量スペクトルデータの比較によって確認した。
【化１４−１】
2016518443.tif 000022
【化１４−２】
2016518443.tif 000023
【化１４−３】
2016518443.tif 000024
【化１４−４】
2016518443.tif 000025
【実施例５】
【０２５５】
Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（ＨＣｌ塩）形態Ａの調製
メカニカルスターラー、窒素導入アダプター、温度計、滴下漏斗および冷却浴を備え付けた５Ｌ４ツ口丸底フラスコ内に、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（７６．８ｇ、１７２．４ｍｍｏｌ）およびエタノール（１．５Ｌ）を入れた。白色スラリーを２０℃で３０ｍｉｎ撹拌し、１Ｎ（１５７ｍｌ、１５７ｍｍｏｌ）のＨＣｌを迅速に添加した（ｐＨ＝５）。さらなる量のＨＣｌを添加して（２ｇ）、ｐＨを４に低下させた。得られた白色懸濁液を２３で２ｈ撹拌し、ＭＴＢＥ（１．５Ｌ）で希釈した。二相混合物を０〜５℃に冷却し、この温度で３ｈ撹拌した。固体を吸引ろ過によって単離し、冷たいＭＴＢＥ（２×３０ｍＬ）で洗浄し、真空オーブン内において５５〜６０℃で乾燥させると、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド塩酸塩（６６．９ｇ、８１％）がタン色固体として生じた。
【０２５６】
上記形態は、ＸＲＰＤおよびＤＳＣによると結晶性であった。形態ＡのＸＲＰＤが、図１に示されている。形態ＡのＤＳＣが、図２に示されている。
【０２５７】
【表５】
2016518443.tif 000026
【実施例６】
【０２５８】
Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（ＨＣｌ塩）形態Ｂの調製
Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドのＨＣｌ塩の結晶形態Ｂを、上記実施例５と同じ手順を用いて入手した。形態Ｂは、形態Ａに再び転化することになる一時的な形態である。
【０２５９】
上記形態は、ＸＲＰＤおよびＤＳＣによると結晶性であった。形態ＢのＸＲＰＤが、図３に示されている。形態ＡのＤＳＣが、図４に示されている。
【０２６０】
【表６】
2016518443.tif 000027
【実施例７】
【０２６１】
結晶性Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド形態Ａの調製
結晶性Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの単結晶型多形が、このようにして確認され、形態Ａと同定された。多形は、Ｐ１スペース基を有する三斜晶型結晶である。形態Ａが、蒸発方法によってメタノール、ＴＨＦ、アセトン、エタノール、アセトニトリル、塩化メチレンの溶液から結晶化すると、１ｍｇ／ｍＬの濃度で多形Ａが生じた。結晶性Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド多形Ａもまた、＞５ｍｇ／ｍＬの濃度になっている結晶１６を利用して、上記に列記されたすべての上記溶媒中において、加熱／冷却サイクル処理によって調製した。
【０２６２】
多形Ａは、ＸＲＰＤ（図５）によると非常に結晶性であり、ＤＳＣ（図６）の形跡は、約１９５℃の発熱によってキャラクタリゼーションされている。上記形態は、加熱時に０．６％の重量を喪失する。
【０２６３】
【表７】
2016518443.tif 000028
【実施例８】
【０２６４】
Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イル）オキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミドの化学合成
【化１５】
2016518443.tif 000029
【０２６５】
メカニカルスターラー、温度計、加熱マントル、還流凝縮器および窒素導入口を備え付けた５Ｌ４ツ口丸底フラスコに、２３℃で５−ヒドロキシインドール（１，２５７．７ｇ、１．９４ｍｏｌ）およびアセトニトリル（３Ｌ）を装入した。黒ずんだ混合物を１５ｍｉｎ撹拌した。内部温度が１５℃に低下した。まとめて、４−（ベンジルオキシメチル）−６−クロロピリミジン（２，３８６．６ｇ、１．６５ｍｏｌ）を添加した。フラスコをアセトニトリル（２×５０ｍＬ）ですすぎ洗いし、このアセトニトリルをバッチに添加した。反応混合物を２０℃に温め、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）（３８０ｇ、約３７６ｍＬ、２．５ｍｏｌ）を、滴下漏斗によって２５ｍｉｎかけて滴下した。反応混合物が黄褐色スラリーから黒ずんだ溶液に変化したら、６４〜６６℃の内部温度で１８ｈ加熱した。反応混合物を５０℃の浴温度で濃縮して、アセトニトリルの大部分を除去した。残留物をメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（１．５Ｌ）および水（１．２Ｌ）で希釈した。層どうしを分離し、水性層をＭＴＢＥ（２×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、水（８００ｍＬ）、０．５Ｎ水酸化ナトリウム溶液（８００ｍＬ）、および塩化ナトリウム飽和溶液（５００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との混合物で洗浄した。有機層を５０℃の浴温度で濃縮すると、粗製５−（６−（ベンジルオキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール（３，７０７ｇ、＞１００％）が黒ずんだ粘性液体として生じ、この黒ずんだ粘性液体をさらなる精製なしで次のステップに使用した。
【化１６】
2016518443.tif 000030
【０２６６】
メカニカルスターラー、温度計、冷却浴、還流凝縮器、滴下漏斗および窒素導入口を備え付けた１２Ｌ４ツ口丸底フラスコに、２３℃で５−（６−（ベンジルオキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール（３，７０６ｇ、１．６５ｍｏｌ、純度補正済み）およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（５．１Ｌ）を装入した。黒ずんだ混合物を２３℃で１０ｍｉｎ撹拌し、水酸化カリウム片（３３５．５ｇ、５．９６ｍｏｌ）をまとめて添加した。１５ｍｉｎ撹拌した後、反応混合物を水浴中で１４〜２０℃に冷却し、無水酢酸（５９１ｇ、５．７９ｍｏｌ）を、２５℃未満の温度を維持しながら滴下漏斗によって添加した。温度を２５℃未満に保持し、反応物を１０ｈ撹拌した。反応混合物をＭＴＢＥ（３Ｌ）で希釈し、１０〜１５℃に冷却した。バッチ温度を２５℃未満に維持しながら、水（２．５Ｌ）を１５ｍｉｎにわたってゆっくり添加した。得られたタン色混合物を２１℃で１ｈ撹拌し、終夜静置した。水性層をＭＴＢＥ（３×１．２Ｌ）で抽出した。合わせた有機層（約７Ｌ）を重炭酸ナトリウム飽和溶液（１．７Ｌ）、水（３×１．５Ｌ）および飽和塩化ナトリウム（１．５Ｌ）で洗浄した。減圧下において５０℃で濃縮すると、暗褐色の粘性液体（６０４ｇ）が生じた。粗製物を、シリカゲルカラムを用いたろ過によって精製し、ＭＴＢＥで溶出させると、粗製１−（５−（６−（ベンジルオキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−イル）エタノン（４，５９３ｇ、９６％）がオレンジ色油状物として生じ、このオレンジ色油状物をさらなる精製なしで次のステップに使用した。
【化１７】
2016518443.tif 000031
【０２６７】
メカニカルスターラー、温度計、還流凝縮器、加熱マントルおよび窒素導入口を備え付けた１Ｌ４ツ口丸底フラスコに、１−（５−（６−（ベンジルオキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−イル）エタノン（４，１００ｇ、２６７．８ｍｍｏｌ）およびトルエン（４０ｍＬ）を装入した。溶液を２３℃で１０ｍｉｎ撹拌し、トリフルオロ酢酸（３６８．４ｇ、３．２３ｍｏｌ）を迅速に添加した。バッチ温度は、添加中に４５℃まで上昇した。混合物を７０℃まで２０ｈかけて加熱した。２３℃に冷却した後、反応物をトルエン（４００ｍＬ）で希釈し、重炭酸ナトリウム（２８０ｇ、３．３３ｍｏｌ）、水（１．２Ｌ）およびトルエン（２００ｍＬ）の混合物にゆっくり添加した。温度は、上記添加の間２４℃未満に維持した。得られた黄色スラリーを２３℃で終夜撹拌した（ｐＨ＝６）。固体を吸引ろ過し、水（１００ｍＬ）およびトルエン（１００ｍＬ）で洗浄し、真空オーブン内において５５〜６０℃で乾燥させた。乾燥させて得られた材料（６１．３ｇ）を、５０℃の酢酸エチル（１８５ｍＬ）中で３０ｍｉｎ撹拌し、続いて２３℃で６ｈ撹拌し、上記のように乾燥させることによって精製すると、１−（５−（６−（ヒドロキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−イル）エタノン（５，３７．４ｇ、５８％）がタン色固体として生じた。
【化１８】
2016518443.tif 000032
【０２６８】
メカニカルスターラー、温度計、冷却浴、滴下漏斗および窒素導入口を備え付けた５Ｌ４ツ口丸底フラスコに、１−（５−（６−（ヒドロキシメチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−イル）エタノン（５，１３４．２ｇ、４７３．７ｍｍｏｌ）（純度９３％）、ＴＨＦ（２．４Ｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（６ｇ、４９ｍｍｏｌ）に装入した。１５ｍｉｎ撹拌した後、トリエチルアミン（９８ｇ、９６８．４ｍｍｏｌ）をまとめて添加し、得られたスラリーを５℃未満に冷却した。温度を７℃未満に維持しながら、メタンスルホニルクロリド（８９ｇ、７７７ｍｍｏｌ）を２５ｍｉｎにわたって添加した。タン色懸濁液を０〜５℃で１．５ｈ撹拌した。水（２５０ｍＬ）を添加し、バッチを２３℃に温めた。反応混合物を減圧下（浴温度＝３８℃）で濃縮し、残留物を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈した。混合物を再び濃縮し、残留物を酢酸エチル（１Ｌ）および水（３００ｍＬ）で希釈した。２３℃で５ｈ撹拌した後、得られた固体を吸引ろ過し、酢酸エチルと水との１：１混合物（２×６０ｍＬ）で洗浄し、恒量になるまで減圧下において４０〜５０℃で乾燥させると、６−（１−アセチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）メチルメタンスルホネート（６，１４２．２ｇ、８３％）がタン色固体として生じた。上記メシル三塩（７）は、酢酸エチル中において２３℃で１８ｈ撹拌することによって、さらに精製することができる。
【化１９】
2016518443.tif 000033
【０２６９】
メカニカルスターラー、温度計、水浴および窒素導入アダプターを備え付けた５Ｌ４ツ口丸底フラスコに、２３℃で６−（１−アセチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）メチルメタンスルホネート（６，１１８．５ｇ、３２８．２ｍｍｏｌ）（純度９５％）、およびＴＨＦ中の２Ｍ  メチルアミン（７，２．０４Ｌ、４ｍｏｌ）を装入した。透明なオレンジ色溶液を２３℃で８ｈ撹拌した。反応混合物を減圧下において４０℃で濃縮し、残留物を酢酸エチル（１．２Ｌ）で希釈した。２０℃において、水（５００ｍＬ）中の炭酸ナトリウム（９０ｇ）の溶液を添加した。有機層を分離し、水（４００ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム（４００ｍＬ）で洗浄した。有機層を減圧下において４０℃で濃縮し、得られた固体を酢酸イソプロピル（２５０ｍＬ）４０℃で１ｈ撹拌し、次いで２３℃で６ｈ撹拌した。固体を吸引ろ過によって単離し、酢酸イソプロピル（２×１５ｍＬ）で洗浄し、減圧下において４５℃で乾燥させると、１−（６−（１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（８，６６．４ｇ、８０％）がタン色固体として生じた。
【化２０】
2016518443.tif 000034
【０２７０】
温度計、加熱マントル、窒素導入口、還流凝縮器および滴下漏斗を備え付けた３Ｌ４ツ口丸底フラスコに、室温で１−（６−（１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）−Ｎ−メチルメタンアミン（８，３３．２ｇ、１３０．５６１ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１．１２５Ｌ）を装入した。霞んだ黄色の溶液を２３℃で１０ｍｉｎ撹拌した。この混合物に、まとめた固体状のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（２８．２１０ｇ、１２９．２５５ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を２３℃で１２ｈ撹拌した。濁ったオレンジ色溶液をろ紙によってろ過し、濃縮（３８℃／３００ｍｍ）すると、オレンジ色のゴム状物質（６２．９ｇ）になった。酢酸エチル（０．４Ｌ）を添加し、溶液を１５％アンモニア水（１２５ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム（１２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水した。ろ過後、溶液を４０℃／１００ｍｍにおいてロータリーエバポレーターによって濃縮すると、黒ずんだオレンジ色油状物（４６．３ｇ）になった。油状物を、１：１のＭＴＢＥ／ヘプタン（８０ｍＬ）中で１２ｈ撹拌し、得られた黄色固体をろ過し、２：１のヘプタン／ＭＴＢＥ（２×５５ｍＬ）で洗浄し、真空オーブン内において５０℃で終夜乾燥させると、ｔｅｒｔ−ブチル（６−（１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）メチル（メチル）カルバメート（９，３３．８ｇ、７１％）が生じた。
【化２１】
2016518443.tif 000035
【０２７１】
メカニカルスターラー、窒素導入口、還流凝縮器および温度計を備え付けた５Ｌ４ツ口丸底フラスコに、フェニルカルボノクロリデート（ｐｈｅｎｙｌ  ｃａｒｂｏｎｏｃｈｌｏｒｉｄａｔｅ）（９ｃ、９４ｍｌ、０．７５ｍｏｌ、１１７．５ｇ）およびＴＨＦ（２０００ｍＬ）を入れた。溶液を還流（８０℃の内部温度）において加熱し、ＴＨＦ（５００ｍＬ）中の１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−アミン（９ｂ、８２．５ｇ、４９９．６４９ｍｍｏｌ）を３０ｍｉｎにわたって滴下した。透明なオレンジ色溶液を還流において１６ｈ加熱し、ロータリーエバポレーター（４０℃、１２０ｍｍ）により濃縮した。得られた白色固体をヘプタン（５００ｍＬ）中で３０ｍｉｎ撹拌し、ろ過し、ヘプタンで洗浄し、真空オーブン内において５０℃で乾燥させると、フェニル１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバメート（９ａ、１２１．９ｇ、８５％）が白色固体として生じた。
【化２２】
2016518443.tif 000036
【０２７２】
水素化ナトリウム（６０％油中分散物）（３８．１４５ｇ、９５３．７１７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１３７５ｍＬ）中に懸濁させ、氷浴中で０℃に冷却した。温度を５℃未満に保持しながら、ＴＨＦ（１３７５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（６−（１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）メチル（メチル）カルバメート（９，１３０．０００ｇ、３６６．８１４ｍｍｏｌ）の溶液を９０ｍｉｎにわたって滴下した。懸濁液が灰色からオレンジ色に変化した。０℃で０．５ｈ撹拌した後、ＴＨＦ（５００ｍＬ）中のフェニル１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバメート（９ａ、１１５．０８６ｇ、４０３．４９５ｍｍｏｌ）の溶液を、６０ｍｉｎかけて滴下した。混合物を０℃で１ｈ撹拌すると、このとき、混合物が暗褐色懸濁液（いくらかの固体が存在する。）になった。酢酸エチル（３５００ｍＬ）および飽和塩化アンモニウム（１０００ｍＬ）を０℃で添加した。数分撹拌した後、層どうしを分離し、有機層を飽和塩化ナトリウム（１５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。酢酸エチル溶液を、ブフナー漏斗上のＳｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０（２３０〜４００メッシュ）およびＣｅｌｉｔｅによってろ過し、ろ液を濃縮すると、濡れたベージュ色固体（ＮａＨに由来した油状物）になった。ＭＴＢＥ（６２５ｍＬ）を添加し、混合物を６０ｍｉｎ撹拌した。得られた固体をろ過し、ＭＴＢＥ（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、真空オーブン内において５０℃で乾燥させると、ｔｅｒｔ−ブチルメチル（（６−（１−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）メチル）カルバメート（１０）（１５０．７ｇ、７５％）がオフホワイト色固体として生じた。
【化２３】
2016518443.tif 000037
【０２７３】
メカニカルスターラー、窒素導入アダプター、温度計および滴下漏斗を備え付けた５Ｌ４ツ口丸底フラスコ内に、ｔｅｒｔ−ブチルメチル（（６−（１−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イルカルバモイル）−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）ピリミジン−４−イル）メチル）カルバメート（１０）（１８０ｇ、３３０ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（２８８０ｍｌ）を入れた。固体が溶解すると、透明なオレンジ色溶液が形成され、この溶液を５℃未満に冷却した。この時点で、温度を５℃未満に保持しながら２，２，２−トリフルオロ酢酸（３９６ｍｌ、５．３４ｍｏｌ）を滴下した。添加の時間は、約１．５ｈであった。冷却浴を取り除き、溶液を２２℃に温め、５．５ｈ撹拌した。溶液を、水（３６００ｍＬ）中の炭酸ナトリウム（７９２ｇ）の溶液にゆっくり添加した（Ｔ＝１０〜１５℃）。わずかな発熱が観察されると、白色懸濁液が形成された。この懸濁液を終夜撹拌した。懸濁液をろ過し、固体を水（２×１５００ｍＬ）で洗浄した。漏斗上で数時間空気乾燥させた後、固体を真空オーブン内において５０℃で終夜乾燥させた。乾燥させた固体（３５６．７ｇ）を水（３６００ｍＬ）中で終夜撹拌し、ろ過し、水（３×５００ｍＬ）で洗浄し、上記のように乾燥させると、Ｎ−（１−メチル−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−５−（６−（（メチルアミノ）メチル）ピリミジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボキサミド（１１，１２０ｇ、８０％）がオフホワイト色固体として生じた。
【実施例９】
【０２７４】
ＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ  ＴＲ−ＦＲＥＴ法によって測定されるＫＤＲタンパク質キナーゼ活性
一般的なアッセイ設定を、液体取り扱い用ロボットにより室温で運転した。５０ｎＬの化合物または対照溶液が入ったアッセイプレートに、４．５μＬのＡＴＰ混合物（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１ｍＭのＤＴＴ、０．０２５％  Ｔｗｅｅｎ２０、０．０１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２および４μＭ  ＡＴＰ）を１ウェル毎に添加した。続いて、４．５μＬの酵素−基質混合物（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．０２５％  Ｔｗｅｅｎ２０、０．０１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、０．５％ＢＳＡ、１００ｎＭ  フルオレセイン標識ポリ（ＥＡＹ）および０．７６ｎＭ  ＫＤＲ（ＧＳＴ−ＫＤＲ（８０７−１３５６）、内部で生成された組み換えタンパク質）を添加した。
【０２７５】
最終的な反応体積は、９．０５μＬであり、このとき、最終的な試薬濃度は、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．０２５％  Ｔｗｅｅｎ２０、０．０１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２であり、２μＭ  ＡＴＰ、５０ｎＭの基質フルオレセイン標識ポリ（ＥＡＹ）および０．３８ｎＭ酵素という一般的な濃度も含んでいる。
【０２７６】
インキュベーションの１時間後、キナーゼ反応を、４．５μＬの停止液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．０２５％  Ｔｗｅｅｎ２０、０．０１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、５０ｍＭ  ＥＤＴＡ）を添加した直後、４．５μＬの抗体溶液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ｐＨ７．４、１ｍＭ  ＤＴＴ、０．０２５％  Ｔｗｅｅｎ２０、０．０１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、１．７２μｇ／ｍｌ  Ｔｂ−ＰＹ２０）を添加することによって、停止させた。
【０２７７】
暗所における４５ｍｉｎのインキュベーション時間後、プレートを蛍光リーダーに移し、時間分解蛍光モード（試薬供給業者の推奨に従ったセッティング）により計数した。酵素活性に対する化合物の効果を、エンドポイント測定から得た。
【０２７８】
【表８】
2016518443.tif 000038
【図１】
2016518443.tif 000041
【図２】
2016518443.tif 000042
【図３】
2016518443.tif 000043
【図４】
2016518443.tif 000044
【図５】
2016518443.tif 000045
【図６】
2016518443.tif 000046
【国際調査報告】
2016518443.tif 000047
2016518443.tif 000048
2016518443.tif 000049
2016518443.tif 000050