(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つのごみダニアレルゲンの抗原決定基であって、非アトピー性個体のＢ細胞またはそのＢ細胞が分泌する前記アレルゲンに対する抗体が認識する少なくとも一つのごみダニアレルゲンの抗原決定基、ならびにＴ細胞の活性化をトリガーする、前記アレルゲンとは異なる抗原の少なくとも一つの抗原決定基からなる、ごみダニアレルギーの予防および／または治療に用いる化合物において、化合物が、下記のアミノ酸配列：
配列番号：１
0004383667.tif 000022
配列番号：３
0004383667.tif 000023
配列番号：４
0004383667.tif 000024
配列番号：５
0004383667.tif 000025
を有するペプチド、または
前記アミノ酸配列のうち少なくとも一つをコードするヌクレオチド配列、または
配列番号：６
0004383667.tif 000026
のヌクレオチド配列
からなる群から選択されることを特徴とする化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物の両方の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列であって、患者の細胞中で活性な一つ以上の調節配列に連結されているヌクレオチド配列を含有する、ごみダニアレルギーの予防および／または治療に用いる化合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物、および医薬として許容可能な担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項４】
請求項１または２に記載の化合物、および美容上許容可能な担体を含んでなる美容組成物。
【請求項５】
請求項１または２に記載の化合物、ならびに液体、食品および／または飼料として許容できる担体を含んでなる飲料、食品および／または飼料の組成物。
【請求項６】
医薬として使用する請求項１または２に記載の化合物。
【請求項７】
ごみダニアレルギーまたはごみダニアレルギーが起源の疾患を予防および／または治療する際の医薬を製造するための、請求項１または２に記載の化合物または請求項３に記載の医薬組成物の使用。
【請求項８】
前記疾患が、アレルギーが起源の鼻炎と静脈洞炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、いくつかの形態の急性と慢性のじんま疹、薬物過敏症に関連するアナフィラキシー反応および／またはこれらの混合した疾患からなる群から選択される請求項７に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の属する技術分野
本発明は、アレルギーおよび／またはアレルギー由来の疾患、特に即時型過敏性アレルギーの予防および／または治療に用いる新しい化合物及び新しい方法に関する。
【０００２】
従来の技術
即時型過敏症は、非常に迅速に、すなわち、患者を原因アレルゲンにさらして数秒間または数分間以内に発現するアレルギー反応の一形態である。この即時反応に続いて遅延発症の第二反応が起こって、標的器官に炎症性変化をもたらし、喘息またはアトピー性皮膚炎などの慢性症状が現れる。
【０００３】
即時型過敏症は、限定されないが、主としてＩｇＥアイソタイプに属する抗体によって仲介される。ＩｇＥ抗体は、好塩基球、肥満細胞またはランゲルハンス細胞などの細胞上の特異的受容体に結合している。アレルゲンに暴露されると、表面に結合しているＩｇＥが、前記細胞にシグナルを伝達し、続いてその細胞が活性化され、好塩基球と肥満細胞の場合、ヒスタミンや酵素などの予め形成された伝達物質が放出されかつアラキドン酸の代謝物が合成される。これらの伝達物質は、気管支けいれん、血管拡張、粘膜の分泌過多およびかゆみをもたらす知覚性神経終末の刺激などのアレルギー徴候とアレルギー症状の発生の原因である。
【０００４】
ＩｇＥ抗体は、適切な活性化シグナルを受けたＢリンパ球が産生する。ＩｇＥ抗体が産生される機序の完全な説明は適切な概説に見られる（例えば、Vercelli, D., Allergy Proc. １４巻４１３〜４１６頁１９９３年参照）。
【０００５】
アレルギー症状の現在行われている治療法としては、アレルゲン回避法、薬物療法および免疫療法がある。アレルゲンに対する暴露を完全に回避することが最も論理的な方法であるが、膨大な症例で達成することは、依然として非常に困難であるかまたは不可能である。薬物療法は有用であるが、症状の原因に作用することなく症状を軽減する。その上、薬物療法は、望ましくない副作用があるので通常、制限される。
【０００６】
現在行われている免疫療法は次のとおりである。
１）患者が感受性を示した単一もしくは複数のアレルゲンの投与量を逐次増やしながら、患者に投与することからなる治療法である通常の減感作療法。
２）特異的抗体、特にＩｇＥの認識を低下させることを目的とするアレルゲンオルタレーション法（allergen alteration）。
３）特異的Ｂ細胞とＴ細胞間のコグネイト相互作用に干渉させるために使用されるすなわちＩｇＥ結合Ｂ細胞エピトープを含有するアレルゲン由来のペプチド。
【０００７】
特異的Ｔ細胞の活性化を阻害してＴ細胞不応答性の状態を誘発しようとして動物実験やヒトに用いられる一種類または数種のＴ細胞エピトープを含有するかようなアレルゲン由来のペプチドについてはＰＣＴ特許願公開第ＷＯ  ９３／０８２７９号に記載されている。
【０００８】
上記考えのヒトに対する一つの応用例は、Ｆｅｌ  ｄＩアレルゲン上に存在するＴ細胞エピトープの配列由来のペプチドを、Ｃａｔ感受性の個体（Ｃａｔ−sensitive individual）に皮下注射することによって投与する方法である（Wallner B.P., Gefter M.L., Allergy ４９巻３０２〜３０８頁１９９４年）。この考えを補足する他の方法は動物実験にも用いられている。使用されるペプチドは、特異的Ｂ細胞上のＭＨＣクラスII抗原決定基に結合する性能を保持するような方法で修飾されているが、対応するＴ細胞を活性化する性能を失っている（O'Hehir R.E.ら、International Immunology ３巻８１９〜８２６頁１９９１年）。
【０００９】
アレルギー反応は、ＩｇＥ抗体が支配している、ＩｇＥに対する高親和性表面受容体を有する好塩基球または肥満細胞のような標的細胞から伝達物質が遊離することによって発生することが分かっている。伝達物質の遊離が起こる最小限の要件は、同じアレルギンを認識する二つのＩｇＥ分子が架橋され、次に、前記受容体を架橋して、活性化信号が前記細胞内に導入されることである。たとえ一つのＩｇＥ分子がアレルゲンと結合できても、細胞の活性化は起こらないが、ＩｇＥの結合部位がふさがれ、自然のアレルゲン（native allergen）に暴露された場合の細胞の活性化が防止される。したがって、単一のＩｇＥ結合エピトープを使用することが、アレルギー疾患を治療するのに適切な方法であると主張されている（Ball T.ら、J. Biol. Chem. ２６９巻２８３２３〜２８３２８頁１９９４年；ヨーロッパ特許願公開第Ａ−０７１４６６２号）。
【００１０】
現在の技術水準
米国特許第４９４６９４５号には、生物学的応答調節剤（ＢＲＭ）とアレルゲンで構成された、免疫療法に有用な複合タンパク質（protein conjugate）が記載されている。前記複合タンパク質は、医薬として許容できる担体に結合させることができる。サイトカイン、細菌、真菌およびウイルスの免疫増強剤および胸腺ホルモンが、使用するのに適切なＢＲＭとして上記文献に開示されている。
【００１１】
国際特許願公開第ＷＯ  ９５／３１４８０号には、各種のアミノ酸の特異的な配列を有する二つのαらせんで製造された合成化合物の製造と使用が記載されている。前記化合物は、機能ユニットすなわち特にエピトープＢおよび／またはＴを結合させる支持体として使用されている。
【００１２】
定義
“アトピー”は、アレルゲンに暴露されて応答し、ＩｇＥアイソタイプに属する抗体を過剰に産生する免疫系を有する個体の、一部分遺伝が原因になっている素質を意味する。したがって、このような特性を示す個体は“アトピー性個体（atopics）”と呼称される。
【００１３】
“アレルゲン”は、通常、素質があり、どちらかといえば遺伝的素質がある個体（アトピー性個体）にＩｇＥ抗体の産生を誘発するタンパク質組成の巨大分子の物質と定義される。
【００１４】
類似の定義が以下の文献に示されている。すなわち、Clin. Exp. Allergy,２６号４９４〜５１６頁１９９６年；Mol. Biol. of Allergy and Immunology, R. Bush編、Immunology and Allergy Clinics of North American Series（１９９６年８月）に示されている。
【００１５】
これらのアレルゲンは、好ましくは以下のアレルゲンからなる群から選択される主要アレルゲンである。
−  落花生、たら、卵の白身、大豆、えび、牛乳および小麦中に存在する食品アレルゲン；
−  ダーマトファゴイデス spp.プテロニシヌス（Dermatophagoides spp. pteronyssinus）、フリネ（farinae）、およびミクロセラス（microceras）、ユーログリフス・メイネイ（Euroglyphus maynei）；またはブロミア（Blomia）から得られる家ごみダニアレルゲン；
−  ゴキブリまたは膜翅類昆虫類中に存在する昆虫由来のアレルゲン；
−  花粉、特に樹木、イネ科植物および雑草の花粉由来のアレルゲン；
−  動物、特にネコ、イヌ、馬およびげっ歯類中に存在するアレルゲン；
−  真菌類、特にアスペルギルス（Aspergillus）属、アルテルナリア（Alternaria）属またはクラドスポリウム（Cladosporium）属の真菌類中に存在するアレルゲン；
−  ラテックス、アミラーゼなどの製品中に存在する職業的アレルゲン；
である。
【００１６】
前記アレルゲン類は、かび類、またはホルモン類、抗生物質類、酵素類などの各種薬剤中に存在する主要アレルゲンでもある。
“アレルギー”は、アトピー性の固体が感作されているアレルゲンに、その固体が遭遇するときいつでも観察される徴候と症状が合併したものであり、このアレルギーによって、アレルギー性鼻炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎などの各種の疾患と症状が発生する。
【００１７】
“過敏症”は、感受性の個体が感作されていた抗原に暴露されると発生する厄介な反応である。即時型過敏症はＩｇＥ抗体が生成することに依存しているのでアレルギーに等しい。
【００１８】
用語“エピトープ”または“抗原決定基”は、抗原（好ましくはタンパク質組成で形成されているが、一つ以上のハプテンもしくは医薬として有効な化合物の部分でも形成されているアレルゲンを含む巨大分子の構造体）の一つまたはいくつもの部分（コンホメーション依存エピトープと定義できる）を意味し、これは、抗体、またはＢリンパ球もしくはＴリンパ球の細胞表面の受容体が特異的に認識して結合する。
【００１９】
発明が解決しようとする課題
本発明の目的は、アトピー性個体がアレルゲンに対して行う抗体応答を、アトピー性個体が自発的に認識するアレルゲンの主要決定基から、非アトピー性個体の抗体が自発的に認識する同じ分子の決定基へ、または、大多数の個体が、それら個体のアトピー状態とは独立して、自発的に認識しない決定基へ移行させる予防接種法を提供することである。
【００２０】
課題を解決するための手段
本発明は、少なくとも一つのアレルゲンの抗原決定基であって、非アトピー性個体のＢ細胞またはそのＢ細胞が分泌する（前記アレルゲンに対する）抗体が認識し、そして好ましくはＴ細胞が認識しない少なくとも一種のアレルゲン抗原決定基（アトピー性個体が認識せず非アトピー性個体が最小限、認識する潜在決定基を含む）、ならびに前記アレルゲンと異なる抗原の抗原決定基であってＴ細胞の活性化をトリガーする少なくとも一種の抗原決定基；または、前記抗原決定基の両者をコードするヌクレオチド配列であって、場合によっては、患者の細胞に対して活性である二種以上の調節配列に連結されているヌクレオチド配列；
を含有する化合物に関する。
【００２１】
公知の主要アレルゲン中に存在する特異的なアレルゲン抗原決定基は、当業技術者によって容易に確認され、当業技術者は、非アトピー性個体（前記アレルゲンに対する非アトピー性個体）が認識しかつアトピー性個体が上記のように抗体を産生する他のエピトープと異なる、前記アレルゲンの前記エピトープすなわち抗原決定基を選択できる。同様に、当業技術者は、Ｔ細胞の活性化をトリガーすることが分かっているいずれかの抗原（前記アレルゲンとは異なる）の特異的抗原決定基を選択することができる。前記抗原はアレルゲンでない方が好ましい。このエピトープの好ましい選択については後記実施例で説明する。
【００２２】
本発明の化合物は、アトピー性患者の抗体が、自発的には認識しないかまたは最小限にのみ認識するエピトープすなわち抗原決定基に対する抗アレルゲン免疫応答のシフトを、アトピー性患者に起こす。
【００２３】
本発明の化合物の、アレルゲン抗原決定基と非アレルギー性抗原の抗原決定基は、好ましくは少なくとも二つのアミノ酸で形成されているペプチドのリンクによって化学的に結合されているペプチド配列（線状タンデム形または分枝形）が好ましい。本発明の化合物は、付加部分が使用されるか使用されないかにかかわらず、例えばペプチド−ペプチドの相互作用を阻止するため線状または環形である。
【００２４】
アレルゲンは下記の群から選択することが有利である。すなわち、家ごみダニのダーマトファゴイデス・プテロニシヌスのＤｅｒ  ｐＩとＤｅｒ  ｐII、アスペルギルス・フミガーツス（Aspergillus fumigatus）の主要抗原、ぶどう球菌Ｂエンテロトキシン（ＳＥＢ）およびウシβ−ラクトグロブリン、または以下の諸文献：Clin. Exp. Allergy, ２６号４９４〜５１６頁１９９６年；Mol. Biol. of Allergy and Immunology, R. Bush編、Immunology and Allergy Clinics of North American Series（１９９６年８月）に記載されているアレルゲンからなる群から選択することが有利である。
【００２５】
本発明の化合物の、Ｔ細胞の活性化をトリガーする抗原の抗原決定基は、破傷風トキソイド、ジフテリア、マイコバクテリウム（mycobacterium）属の細菌、インフルエンザもしくははしかのウイルスの抗原のＴ細胞エピトープ（好ましくはヘルパーＴ細胞のエピトープ）が有利である（前記Ｔ細胞エピトープの他の例は国際特許願公開第ＷＯ  ９５／２６３６５の表IIに記載されている）。
【００２６】
本発明の化合物は、下記のアミノ酸配列を有するペプチドすなわち
配列番号：１
0004383667.tif 000002
配列番号：２
0004383667.tif 000003
配列番号：３
0004383667.tif 000004
配列番号：４
0004383667.tif 000005
配列番号：５
0004383667.tif 000006
からなる群；
または、前記アミノ酸配列のうちの少なくとも一つをコードするヌクレオチド配列、好ましくは
配列番号：６
0004383667.tif 000007
のヌクレオチド配列から選択することが好ましい。
【００２７】
本発明の別の側面は、本発明の化合物ならびに医薬、美容用製品、食品および／または飼料として許容できる担体を含有する医薬、美容用製品、食品および／または飼料の組成物に関する。
【００２８】
好ましくは前記医薬組成物は、本発明の組成物（ワクチン）を患者に投与して、所望の治療特性もしくは予防特性を得るのに適切な非毒性の適合性物質である医薬として許容可能な担体を含有していてもよいワクチンである。経口投与するのに適切な本発明の医薬として許容可能な担体は、当業技術者にとって公知の担体であり、例えば錠剤、コーティング丸剤もしくは非コーティング丸剤、カプセル剤、水剤またはシロップ剤がある。その外の適切な医薬の担体もしくは賦形剤は、投与の方式［皮膚、エピキュタニアス（epicutaneous）、皮下、皮内、吸入、貼布、静脈内、筋肉内、非経口、経口など］によって変えることができる。
【００２９】
本発明の化合物がヌクレオチドの配列の場合、その化合物は、裸で、または患者の細胞によって、前記配列のトランスフェクション形質導入および発現を行うために（前記ヌクレオチド配列がコードするペプチド配列の細胞の外部での発現と分泌を含む）使用される“ベクター”などの適切な医薬担体とともに投与できる。前記“ベクター”は、プラスミド、ウイルス（レトロウイス、アデノウイルスなど）、脂質ベクター（例えばカチオンベシクル、リポソームなど）、トランスフェクトされた細胞を化学的もしくは物理的に修飾する分子もしくはデバイス（リン酸デキストラン、リン酸カルシウム、顕微注射デバイス、エレクトロポーションデバイスなど）、または例えばサルモネラ（Salmonella）属もしくはマイコバクテイア（Mycobacterium）属の菌株由来の本発明の化合物を含有する修飾組み換え生物体すなわちRoyら、Nature Medicine ５巻３８７〜３９１頁１９９９年に記載されているようなキトサンなどのマイクロ粒子もしくはナノ粒子の形態の被包された核酸などからなる群から選択することが好ましい。
【００３０】
半ビボ（ex vivo）または生体内での治療を行うための患者の一種もしくは複数種の細胞の遺伝子修飾（genetic modification）は、当業技術者であれば、遺伝子治療の分野の公知の方法（国際特許願公開第ＷＯ  ９１／０２８０５号、同第ＷＯ  ９１／１８０８８号、同第ＷＯ  ９１／１５５０１号に記載されている方法などがある）によって実施できる。
【００３１】
また、本発明の医薬組成物またはワクチンは、患者の免疫系の体液、局所、粘膜および／または細胞の応答を調節できる当業技術者にとって周知のアジュバント（ヘルパーウイルスを含む）も含有し、本発明の化合物の効用を改善することができる。
【００３２】
アジュバントは、ヒトへ投与するのに適している場合、各種の形態であってもよい。このようなアジュバントの例は、無機質もしくは植物起源の油性乳濁液；リン酸アルミニウムもしくは水酸化アルミニウムまたはリン酸カルシウムなどの無機質化合物；Ｐ４０［コリネバクテリウム・グラニューロスム（Corynebacterium granulosum）の細胞壁由来］、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ，ＬＰＳの誘導体）およびムラミルペプチド誘導体とその複合体（conjugate）（マイコバクテリウム属細菌の成分の誘導体）などの細菌産生物と誘導体；みょうばん、不完全フロイントアジュバント；リポシン（Liposyn）；サポニン；スクワレンなどである。ヒトに投与するアジュバントの細菌の概説は、Gupta R.K.ら、Vaccine １１巻２９３〜３０６頁１９９３年およびJohnson A.G., Clin. Microbiol. Rev. ７巻２７７〜２８９頁１９９４年に記載されている。
【００３３】
本発明の医薬組成物は、各種の医薬組成物、特にワクチンを製造するため当業技術者が広く利用している方法で製造される。すなわち、有効化合物／医薬として許容可能な担体の比率は非常に大きな範囲内で変えることができ（一般に適切な単位剤形は、患者の体重１Ｋｇ当たり約０．００５μｇ〜約１ｍｇの化合物を含有している）、患者の当該化合物に対する耐性およびアコインタンス（accointance）のレベルによってのみ制限される。その限界は、とりわけ、投与の頻度および治療すべき特定の疾患または症状によって決まる。
【００３４】
本発明の化合物は、好ましくは、アレルギーまたはアレルギー起源の疾患の徴候と症状（好ましくは即時型過敏性アレルギーの徴候と症状）を少なくとも減退させるかまたは抑制させる濃度で、医薬組成物中に存在している。
本発明の美容組成物は、特定の投与法にしたがって選択される美容用に許容可能な担体を含有していてもよい。例えば、皮膚衛生のため、本発明の美容組成物は、クリーム、軟膏またはバルサムの形態の製品でもよい。
【００３５】
本発明の食品もしくは飼料の組成物は、本発明の化合物を含む、通常の液体の食品もしくは飼料の成分を含有するいずれの食品、飼料または飲料に許容可能な担体でもよい。
【００３６】
本発明の他の側面は、本発明の化合物の医薬としての使用に関する。
【００３７】
また、本発明は、本発明の化合物または本発明の医薬組成物の、アレルギーもしくはアレルギーが原因の疾患、特に即時型過敏性アレルギーを予防および／または治療する際の医薬を製造するための使用に関する。
【００３８】
本発明の他の側面は、アトピー性個体の免疫系が自然には認識しないかまたは最小限にしか認識しない、アレルゲンの抗原決定基に対する抗体の産生を有利に誘発もしくは増大させるために、本発明の化合物または医薬組成物を、患者、好ましくはヒトの患者、特にアレルゲンに対しアトピー性の個体に投与するステップを含む、アレルギーまたはアレルギーが原因の疾患、特に即時型過敏性アレルギーを予防および／または治療する方法に関する。
【００３９】
これらの疾患としては、アレルギーが原因の鼻炎と静脈洞炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、いくつかの様式の急性および慢性のじんま疹、β−ラクトグロブリンなどの食品アレルゲンの摂取に関連する胃腸症候群、アレルギーが原因のいわゆる口咽頭症候群、薬物過敏性に関連するアナフィラキシー反応がある。
【００４０】
本発明を、添付図面を参照して下記実施例で説明するこれらの実施例は、本発明の各種実施態様を例示するものであり、本発明を限定するものではない。
【００４１】
発明の実施の形態
非アトピー性被験者のみならずアトピー性被患者は、環境アレルゲンに対する抗体を産生する。これらの抗体は、ＩｇＥを含めてこれまで報告されたすべてのアイソタイプに属している（Saint-Remy J.M.R. ら、J. Immunol. ４巻３３８〜３４７頁１９８８年）。アトピー性個体が、非アトピー性個体より、１０〜１００倍ものＩｇＥ抗体を産生することが通常、観察されるが、このことは、アトピー性個体が、その個体が感作されているアレルゲンに遭遇すると、症状を呈する理由を少なくとも一部分説明している。
【００４２】
アトピー性個体の抗体が認識する家ごみダニ、ダーマトファグイデス・プテロニシヌスの二つの主要アレルゲンのＤｅｒ  ｐＩとＤｅｒ  ｐIIなどのアレルゲンの抗原決定基が、非アトピー性個体が認識する抗原決定基と同一でないということが、予想外にも発見されたのである。この結論には、マウス内で、Ｄｅｒ  ｐＩまたはＤｅｒ  ｐIIの精製分子に対して生成した一連のモノクローナル抗体を利用することによって到達した。本発明の発明者らは、競合イムノアッセイで、前記抗原決定基のいくつかを、アトピー性個体由来の抗アレルゲン抗体が認識するが、残りの決定基を、非アトピー性個体が産生する抗アレルゲン抗体が認識することを確認したのである。さらに、本発明の発明者らは、アレルギー症状が、自然にまたは治療した結果、改善されたアトピー性患者が、非アトピー性個体が認識する決定基そのものに対する抗体を産生し始め、一方、当初の抗体の産生が減少することを示した。
【００４３】
本発明は、非アトピー性個体が生成する抗体が認識するアレルゲン分子の領域、または場合によっては自然な抗体応答を誘発しない領域由来のペプチドの使用に関する。前記ペプチドをアトピー性個体に投与すると、特異的抗体が産生される。このような抗体は、患者がアレルゲンに自然に暴露されるといつでもそのアレルゲンに結合し、その結果、患者が自然に生成する抗体がアクセスするのを制限する。いくらかのアトピー性患者は、さらに、非アトピー性個体が認識する抗原決定基に対する抗体を小比率で産生する。このような症例では、このようなペプチドを投与すると、かような抗体の比率が増大して、その抗体が、抗アレルゲン免疫反応において支配的になる。
【００４４】
したがって本発明の目的は、抗アレルゲン免疫応答を、アトピー性患者が産生する抗体が、自然には認識しないかまたは最小限にしか認識しないエピトープに対して向けなおす方法を提供することである。
【００４５】
本発明が目的とする免疫化方法は、他の方法を超えるいくつもの利点を提供する。
【００４６】
第一に、本発明の免疫化法は、使用されるペプチドが、ＩｇＥ抗体が認識できる決定基を保持していないのでアナフィラキシー反応を誘発することができないから安全である。この特性は、その自然形態（native form）または変化した形態（altered form）の全アレルゲン分子を使用する免疫化法と全く異なっている。
【００４７】
第二に、本発明に必要な免疫物質の量と注射の回数は、以下の理由によって、他の免疫療法に比べてはるかに少ない。
（１）本発明によって製造されるペプチドはＩｇＥ結合決定基を含有していないので、ペプチドの免疫原性投与量は一度に与えることができる。したがって治療期間が有意に短縮される。アジュバントの混合物の投与またはアジュバントの同時投与によって、これらペプチドの免疫原性を増大して、単独のペプチドの場合に比べて、注射の回数（および必要な物質の量）をさらに減らすことができる；
（２）アトピー性個体は、実際に、非アトピー性個体が認識するエピトープに対する抗体を少量産生することができるので、したがって、本発明によって得られるペプチドを注射すると、二次免疫応答が追加される（boost）（二次免疫応答によって、一次免疫応答よりはるかに高い抗体価が生成する）；
（３）ペプチドを投与すると、早い段階、すなわちアレルゲンの認識、抗原提示細胞によるプロセシングおよびＴ細胞への提示の段階でアレルゲンに対する免疫応答を変えるので、限定された量の物質が、本発明の目的を達成するのに必要なすべてである。
【００４８】
上記特性は、何ヶ月も何年も投与しなければならずしかも多量のアレルゲンを使用する従来の脱感作法を超える明確な利点を示している。ペプチドを使用してＴ細胞をアネルギー化（anergize）するなどの別の治療法の場合、高速度のペプチド異化作用を補償するのに極めて多量の遊離ペプチドが必要であり、かつそのアネルギー状態を維持するため繰返し投与する必要がある。
【００４９】
第三に、本発明によって治療されている患者が自然環境中に存在しているアレルゲンに暴露され続けても、免疫化に使用されたペプチドに対応する抗原決定基に対する免疫応答は十分に維持される。抗原由来のペプチドで免疫化されたマウスは、その後、全抗原（whole antigen）を用いてチャレンジを行うと、該ペプチドに対する反応性を維持する［クローン優性現象（clonal dominance phenomenon）］ことを示す実験証拠を実際に得ることができる（Benjamini E.ら、J. Immunol. １４１巻５５〜６３頁１９８８年、Schutze M.P.ら、J. Immunol. １４２巻２６３５〜２６４０頁１９８９年、および添付した図１）。
【００５０】
また、本発明の方法は、新規な抗原決定基に対する免疫化ではなくてアレルゲンに対する免疫寛容（tolerance）が求められている他の治療法を超える明白な利点を示している。他の治療法は、不応答の状態を維持するために寛容原を繰り返し投与することが必要である。
【００５１】
本発明の作用の正確な機序はまだ完全には解明されていない。
【００５２】
アレルゲンに対する抗体が認識できる、可能な抗原決定基の数は大きい。しかし、アレルゲンは通常、小さい分子なので、アレルゲンに同時に結合できる抗体分子の数は制限される。最高の濃度で存在しおよび／または最高の親和性を示す抗体は、アレルゲンに対し優先的に結合する。同じことが特異的Ｂ細胞に当てはまる。この細胞はそれらが分泌するのと同一の免疫グロブリン分子を、その表面膜において発現する。したがって抗原は、最高の親和性および／または最高の頻度を有するＢ細胞によって捕獲される。これによって、同じ分子上の他のエピトープを認識するＢ細胞の活性化を防止する。なおこの現象は“クローン優性現象”と呼称される（Schutze M.P.ら、J. Immunol. １４２巻２６３５〜２６４９頁１９８９年）。
【００５３】
自然に生成した抗体が認識しないかまたはごく弱く認識するエピトープに対する、アトピー性個体の優性的免疫応答が誘発されると、クローン優性現象は、抗アレルゲン免疫応答がこられの新しい決定基に向けられ、当初、認識された抗原決定基に対する該応答は減少することを示す。実験証拠の二つのラインはこの考えを支持する。第一に、抗原のイムノドミナント細胞エピトープを除くと、無傷の抗原上で認識されずかつ抗体応答が向けられているエピトープが暴露される（Scheerlink J.P.Y. ら、Mol. Immunol. ３０巻７３３〜７３９頁１９９３年）。第二に、抗原で免疫化されたマウスは、それらの潜在Ｂ細胞レパトア（potential B cell repertoire）のフラクションだけを使用して特異的免疫応答をマウント（mount）し、ペプチドによる免疫化は、Ｂ細胞の選択されたレパトアを活性化して、その反応性は、動物がその後、自然抗原によってチャレンジされても維持される（Benjamini E.ら、J. Immunol. １４１巻５５〜６３頁１９８８年）。
【００５４】
これら２組の実験は、本発明の化合物を投与した結果、何が起こっているかを示している。クローン優性の概念とその概念のアレルギーに対する適用をさらに確証するために、Ｂａｌｂ／ｃマウスに組み換え（ｒ）アレルゲンＤｅｒ  ｐIIを注射した。このようなマウスが産生する抗体の正確な特異性を、五つのアミノ酸のオーバーラップを有する全Ｄｅｒ  ｐII配列をカバーする１５量体ペプチドのパネルとの反応で測定した。
【００５５】
図１に示す実施例のマウスは、ｒＤｅｒ  ｐIIとペプチド１１−２５に対する抗体を産生している。ペプチド２１−３５によって、さらに免疫化すると、ペプチド２１−３５に対する免疫応答が誘発され、ペプチド１１−２５に対する結合が有意に低下する。したがって、Ｄｅｒ  ｐIIに対する免疫応答は、最初は認識されなかった決定基に向けなおされる。さらに、この実験は、誘発された、“向けなおされた”免疫応答が、全ｒＤｅｒ  ｐIIアレルゲンによるさらなる免疫化に抵抗することを示す。
【００５６】
しかし、完全に有効にするには、Ｂ細胞エピトープを有するペプチドを、Ｔ細胞が認識できるエピトープとともに投与しなければならず、その結果、Ｂ細胞に対して、成熟した抗体産生形質細胞に完全に分化させるのに必要なシグナルが提供される。そのＴ細胞エピトープはＢ細胞と同じ分子由来のものであってはならない。したがって、与えられたアレルゲン由来のＢ細胞エピトープおよび他の起源のＴ細胞エピトープを含有するヘテロペプチドは、必要な特異性をＢ細胞レベルで維持しながら、Ｔ細胞が提供する必要な信号が存在することを補償する。このような信号としては、インターロイキンの産生、ＣＤ４０とそのリガンドの相互作用、Ｂ７（ＣＤ８０）とＣＤ２８の相互作用などのコグネイトＢ−Ｔ細胞認識の信号および抗原の非特異的信号がある（AustynおよびWood著、Principles of Cellular and Molecular Immunology, oxford University Press １９９３年）。
【００５７】
本発明に使用される一種のＴ細胞エピトープ（または複数種のエピトープ）は大多数の患者のＴ細胞を活性化するその性能によって選択される。Ｔ細胞エピトープは、通常の免疫化に通常使用される抗原、例えば破傷風トキソイドの抗原またはジフテリアの抗原から得られる。これは二つの主な利点を有している。第一に、前記分子中の多数の普遍的な共通Ｔ細胞エピトープすなわち大多数の患者が認識するエピトープが報告されている（Reece J.C.ら、J. Immunol. １５１巻６１７５〜６１８４頁１９９３年）。第二に、事実上、すべての個体が破傷風トキソイドまたはジフテリアの予防接種を受けるから、本発明に使用されるＴ細胞エピトープによる初回免疫は容易に行うことができ、その結果、投与量と注射の回数をできるだけ減らして予防接種の有効性が増大されるであろう。
【００５８】
本発明に関連する免疫化に用いられるペプチドは、applied biosystem peptide synthesizer model ４３０Ａもしくは４３１による合成（例えばGrant編、Synthetic Peptides参照）、または当該ペプチドをコードする核酸配列を用いる組み換えＤＮＡ法で製造することが好ましい。
【００５９】
これらのペプチドを含有する組成物は、皮下、筋肉内または皮膚内の経路で注射するのに適切な形態の組成物である。しかし、吸入、経口摂取、または皮膚もしくは粘膜への直接塗布を行う形態も可能である。
【００６０】
これらのペプチドは、例えばペプチド−ペプチドの相互作用を遮断するため、追加部分を使用するかまたは使用しないにかかわらず線状または環式であってもよい。またこれらペプチドは、αらせんなどの特異的な三次元コンホメーションを形成する短いペプチド構造に組みこむことができる。
【００６１】
本発明の組成物は、アジュバントなどの他の物質を含有していてもよい。
【００６２】
本発明に記載されている方法は、ＩｇＥ抗体が確認されて、症状をトリガーする役割を演じているとみなされるヒトもしくは動物の疾患を治療するのに使用できる。
【００６３】
また、本発明は、動物もしくは植物が起源のアレルゲンまたは化合物および抗生物質（ペニシリン）などの医薬化合物に対し感受性の患者にも適用できる。
【００６４】
【実施例】
実施例１
破傷風トキソイドのＴ細胞エピトープを示す１５ＡＡ（その重鎖のアミノ酸８３０〜８４４）と、Ｄｅｒ  ｐIIのＢ細胞エピトープを含有する１４ＡＡで形成された３１個のアミノ酸のペプチド（これら二つのエピトープは二つのグリシン残基のストレッチによって分離されている）を合成によって得る。その配列は配列番号：１
0004383667.tif 000008
である。
【００６５】
ペプチドの特性
１．Ｂ細胞エピトープはＩｇＥ抗体によって認識されない
上記ペプチドは、自然タンパク質に対して感受性の個体が生成するＩｇＥ抗体によって認識されない。このことは、以下のように実施されるイムノアッセイによって確証される。上記ペプチドを、ポリスチレン製微量滴定プレート上に不溶化し、次いで、Ｄｅｒ  ｐIIに感受性のアトピー性個体の血清試料のパネルを加えて、特異的ＩｇＥ抗体が結合するのを、アイソタイプの特異的試薬を添加することによって検出する。
【００６６】
したがって、Ｄｅｒ  ｐIIのアミノ酸１１−２４に対応する配列
0004383667.tif 000009
のペプチド（配列番号：２）が、そのアミノ末端にビオチンの部分を付加する当業技術者にとって周知の方法を使用する固相合成法で得られる。そのペプチドを、ニュートラビジン（neutravidin）をコートしたプレート上で不溶化して、アトピー性個体の血清と反応させる。この実験の結果を図２に示す。したがって、Ｄｅｒ  ｐIIに対するＩｇＥ抗体を含有するアトピー性個体の血清を、１１アミノ酸オーバーラップでＤｅｒ  ｐIIの配列７−３９をカバーする１２量体のペプチドとともに予備インキュベートを行ったニュートラビジンでコートしたプレートに添加した。バックグランド値を超える結合性は２２種のペプチドのどれにも認められなかった。これは、かような配列に結合できるＩｇＥ抗体が存在しないことを示している。
【００６７】
２．Ｂ細胞エピトープが非アトピー性個体のＩｇＧ抗体によって認識される
上記のことを、ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体を用いてＩｇＧ抗体を検出しかつ血清の１／１００希釈物を用いたことを除いて、ＩｇＥ抗体について先に述べたのと類似の検定法を利用して確認した。この実験の代表的な結果を図３に示す。図３から、アミノ酸１１と２４の間およびアミノ酸２２と３４の間で有意な結合が起こったことが分かる。したがってＤｅｒ  ｐIIの７−３９の領域は、非アトピー性個体のＩｇＧに対する二つの結合部位を含有している。
【００６８】
３．Ｂ細胞エピトープは、アトピー性個体のＩｇＥ抗体によって認識されない
上記のことを、この場合、血清をＤｅｒ  ｐII過敏性患者から得たことを除いて、上記検定法と同一の検定法を非アトピー被験者に用いて確認した。図４に示す結果は、アトピー性個体のＩｇＧが、１１−２４のＤｅｒ  ｐIIの領域に結合しないことを示している。少数の患者が、８−１９のペプチドと反応する抗体を有している。
４．１１−２４のＤｅｒ  ｐII領域はＴ細胞エピトープを含有していない
上記のことを、当業技術者にとって周知の方法を利用するＴ細胞増殖検定法によって確認した（例えば、Coligan JE, Kruisbeek AM, Margulies DH, Shevach EMおよびStrober W, 編、Current Protocols in Immunology,第３章、Greene Publishing Associates & John Wiley & Sons, １９９２〜１９９８年参照）。末梢血単核細胞（Peripheral blood mononucleated cell）（ＰＢＭＣ）を、密度勾配遠心分離法によって全血から分離する。得られたＰＢＭＣの懸濁液を、ｒＤｅｒ  ｐII、またはＤｅｒ  ｐIIの７−３９領域に含まれている１２量体のペプチドとともに４〜６日間インキュベートする。図５に示す結果は、ＰＢＭＣ懸濁液にペプチド１１−１２を添加してもＴ細胞は増殖しなかったが、ペプチド２２−３３とＰＨＡ（ＰＨＡは正の対照として使用）の場合は有意な増殖が認められた。
【００６９】
ハイブリッドペプチドの使用
ペプチド（配列番号：１）を、その免疫原性を高めるため、ヒトへの投与に適切なアジュバントと混合する。したがって、ムラミル−ジペプチド（ＭＤＰ）を使用して、発表されている方法にしたがって前記ペプチドに共有結合させる（I. AzumaおよびG. Jolles編、Immunostimulants:Now and Tomorrow, ７９−９７頁１９８７年のMatsumoto K.らの報告、Japan Sci. Soc. Press, Tokyo/Springer-Verlag,ベルリン）。
【００７０】
次に、上記ペプチドとＭＤＰを含有する混合物を、Ｄｅｒ  ｐIIに対し感受性の患者に投与する。したがって、１００μｇ／ｍｌのペプチドを含有する懸濁液を、ヒト血清アルブミン０．３％とフエノール０．４％を含有する食塩水で調製し、その懸濁液１ｍｌを腕に皮下経路で注射する。
【００７１】
実施例２
本発明の化合物を、組み換えＣＤＮＡ法で製造して、Ｔ細胞とＢ細胞のエピトープを含有するペプチドの一連の繰り返し単位で製造されたポリペプチドを製造できる。ＴＴ（重鎖のアミノ酸８３０〜８４０）由来の重複（duplicated）Ｔ細胞エピトープで形成されたポリペプチドと、Ｄｅｒ  ｐII由来の６ヶの繰り返しＢ細胞エピトープをＤＮＡ技法で製造する。二つのアミノ酸残基の配列を各エピトープの間に挿入するその配列は
0004383667.tif 000010
である（配列中ＸはＧＧまたはＳＳである）。
【００７２】
かようなポリペプチドは以下のようにして得られる。QYIKANSKFIGITEL（配列番号：１３）に対応するＴＴエピトープのヌクレオチド配列と、CHGSEPCNIHRGKPF（配列番号：１４）に対応するＤｅｒ  ｐIIエピトープ２１−３５のヌクレオチド配列が推定される。理論的な組立は、一方では、配列ＴＴエピトープ−ＧＧ−ＴＴエピトープ（Ｔサブユニット）に対応するヌクレオチドから行われ、そして他方では、ＧＧ配列によって分離されたＤｅｒ  ｐIIエピトープの二つのコピー（Ｂサブユニット）から行われる。各サブユニットの全配列をカバーするオリゴヌクレオチド（一つのＴサブユニットと一つのＢサブユニット）を合成する。これら二つのサブユニットをコードする完全なＤＮＡ配列はＰＣＲによって得られる。
【００７３】
上記二つのＴＴサブユニットに対するセンスプライマーは、
0004383667.tif 000011
（配列番号：７）であり、そしてアンチセンスプライマーは
0004383667.tif 000012
（配列番号：８）である。
【００７４】
上記二つのＢサブユニットに対するセンスプライマーは、
0004383667.tif 000013
（配列番号：９）であり、そしてアンチセンスプライマーは
0004383667.tif 000014
（配列番号：１０）である。
【００７５】
前記ポリペプチドに対応する完全なＤＮＡ配列は、適合性末端を生成する制限酵素部位が隣接している配列を使用して、サブユニットを方向性多量体化（directional multimerization）することによって得られる。
【００７６】
最終の１３７アミノ酸のポリペプチドの配列は、
0004383667.tif 000015
（配列番号：３）である。
【００７７】
Ｄｅｒ  ｐIIの２１−３５アミノ酸配列に対応するペプチド CHGSEPCNIHRGKPF（配列番号：１４）は、ＩｇＥ結合エピトープを含有していない。このことは図２で述べたのと類似の検定法で確認される。しかし、このペプチドは、非アトピー性固体のＩｇＧ抗体が認識するエピトープを含有しているが、アトピー性被験者のＩｇＧ抗体が認識するエピトープを含有していない。このことは、図３と図４それぞれで述べたのと類似の検定システムを用いて示される。
【００７８】
前記１３７アミノ酸のポリペプチドは、当業技術者にとって周知であり、かつAusubel FM, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seidman JG, Smith JA およびStruhl K, 編 Curvent Protocols in Molecular Biology １６．１３章、John Wiley & Sons, １９９４年〜１９９７年などの参考文献に見られる方法による酵母の培養物中に産生される。上記ポリペプチドは水酸化アルミニウムに吸着させて、１００μｇの投与量で皮下注射することによって投与する。３週間の間隔をあけて２回注射する。
実施例３
本発明の化合物をコードするヌクレオチド配列は、直接遺伝子免疫化法（direct gene immunization）に使用できる。このＤＮＡベースのワクチンは、“裸の”ＤＮＡ、キトサンなどのマイクロ微粒子もしくはナノ粒子の形態の被包ＤＮＡ（K. Royら、Nature Medicine ５巻３８７〜３９１頁１９９９年）を用いて、各種の経路（すなわち、筋肉内、皮内、皮下、経口の経路）で投与することができる。
【００７９】
実施例２と同様にして製造したが、ＴＴ由来の一つのＴ細胞エピトープおよびＤｅｒ  ｐII由来の二つのＢ細胞エピトープをコードするＤＮＡ配列を含有する（各エピトープは二つのグリシン残基をコードする配列GGAGGTまたはGGCGGTで分離されている）ヌクレオチド構造体を使用して筋肉内注射を行うことによって、直接免疫化を行った。そのヌクレオチド配列には、５′側に、ＥｃｏＲＩ制限部位とKOZAK配列（すなわち GAATTCCCACCATGG（配列番号：１６））が隣接し、そして３′側に、終止コドンとＮｏｔＩ制限部位（すなわち TAGGCGGCCGC（配列番号：１７））が隣接しており、そして適切なベクターに挿入される。
【００８０】
センスプライマーは
0004383667.tif 000016
（配列番号：１１）であり、そしてアンチセンスプライマーは
0004383667.tif 000017
（配列番号：１２）である。
【００８１】
配列
0004383667.tif 000018
（配列番号：６）の構造体をマウスの免疫化に使用する。６頭のＢａｌｂ／ｃマウスを、−７日目にＴＴで初回免疫を行い、ゼロ日目に、マウスに麻酔をかけ、そして１００μｇずつのＤＮＡを、２週間の間隔をあけ筋肉内（ＩＭ）に注射する。３回注射した後、マウスから採血し、次いでその血清を、前記ＤＮＡ構造体から産生されるＢ細胞エピトープに対する抗体および全長の自然Ｄｅｒ  ｐII分子に対する抗体の存在について評価する。
【００８２】
実施例４
インフルエンザＡウイルスのＴ細胞エピトープを示す１３ＡＡ、正準プロテアーゼ感受性部位（canonical protease sensitive site）、繰り返される同一のＴ細胞エピトープ、第二GKKGおよびＤｅｒ  ｐＩの細胞エピトープを含有する６ＡＡで形成された４０アミノ酸のペプチドを合成する。その配列は
0004383667.tif 000019
（配列番号：４）である。類似の検定システムを用いて、実施例１と同じ特性が確認される。
【００８３】
実施例５
Ｂ細胞エピトープを含有する部分の野性型配列は、免疫ペプチド（immunizing peptide）内に別の機能性Ｔ細胞エピトープが存在していることによって、Ｂ決定基の完全な免疫原性を維持しながら内因性（intrinsic）Ｔ細胞エピトープを除く方法で変えることができる。
【００８４】
したがって、配列
0004383667.tif 000020
（配列番号：５）の３２アミノ酸の長さのペプチドを、実施例１のような合成法で製造する。このペプチドは、ＧＧのストレッチで分離されている、ＴＴ由来のＴ細胞エピトープ（アミノ酸８３０〜８４４）とＤｅｒ  ｐII由来のＢ細胞エピトープに対応する。そのＢ細胞エピトープの配列は、２８位に点置換部分がありすなわちＩがＮに変わっており、このことで主要Ｔ細胞エピトープが除かれていることが、図５に記載の検定システムによって分かった。
【００８５】
上記ペプチドをマウスの免疫化に使用する。したがって、６頭のＢａｌｂ／ｃマウスの各足蹠に、前記ペプチド５０μｇを含有する完全フロイントアジュバントによる乳濁液５０μｌを注射する。不完全フロイントアジュバントを使用することを除いて、同じ注射法を２週間間隔で２回利用する。最後の注射を行ってから２週間後、マウスから採血し、その血清が、免疫化に用いた合成ペプチドに含まれているＤｅｒ  ｐII  Ｂ細胞エピトープおよび全長のＤｅｒ  ｐIIタンパク質に対する特異的抗体を含有していることが分かった。Ｔ細胞懸濁液を製造するのに用いる局所ドレーニングリンパ節（regional draining lymph node）を入手する。そのＴ細胞懸液は、ＴＴの存在下で増殖するが、Ｄｅｒ  ｐIIまたは免疫化に用いるＢ細胞部分に対応するペプチドの存在下では増殖しないことを示す。
【００８６】
実施例６
多抗原性ペプチドを免疫化に使用できる。この場合、免疫原性が増大しかつ異なるアレルゲン分枝、場合によっては非類縁のアレルゲン分子由来のＢエピトープを含有する免疫源を用いることができるという利点がある。多抗原性ペプチドすなわち分枝ペプチドを、当業技術者にとって公知の方法で合成する。この方法の適切な説明は、例えば、Tam J.P., Proc. Natl. Acad. Sci USA ８５巻５４０９〜５４１３頁１９８８年に見られる。
【００８７】
８個のリシン（Ｋ）残基からなるコアペプチドを合成によって製造する。Ｋのε−アミン基は各々、Ｋの骨格に、ペプチドリンクで結合される特別のペプチドで置換することができる。したがって、最初の二つの残基は、ＴＴのＴ細胞エピトープ（アミノ酸８３０〜８４４）に対応する配列 QYIKANSKFIGITEL（配列番号：１３）で置換される。残基３と４は、１２８Ｎ点置換によって、Ｄｅｒ  ｐII由来のＢ細胞エピトープに対応する配列 CHGSEPCNIHRGKPF（配列番号：１４）で置換される。残基５と６は、実施例４に示すＤｅｒ  ｐＩ由来のＢ細胞エピトープを含有する配列 VIIGIK で置換される。残基７と８は、インフルエンザＡウイルスの主要Ｔ細胞エピトープに対応する配列 PKYVKQNTLKLAT（配列番号：１５）によって置換される。
【００８８】
前記置換された分枝ペプチドを使用して、実施例５に記載したのと同じ方法で、Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫化する。その血清が、全長のＤｅｒ  ｐIIとＤｅｒ  ｐＩのタンパク質およびこれら２種のアレルゲン由来の２種のＢ細胞エピトープに対する抗体を含有していることを示している。Ｔ細胞増殖の検定結果は、ＴＴおよびＴ細胞エピトープ配列を含有するインフルエンザＡウイルスタンパク質に対して正の応答を示す。
実施例７
本発明の化合物をコードするヌクレオチド配列は、組み換えウイルスベクターもしくは組み換え非ウイルスベクター（例えば人造脂質二重層）、分子複合体、または例えばサルモネラ属もしくはマイコバクテリア属の細菌由来の修飾組み換え生物を使用し、遺伝子導入技法で投与することができる。
したがって、実施例３と同じＤＮＡ配列を含有するアデノウイルスの担体を製造する。このベクターは２種の成分すなわちアデノウイルスＤＮＡベクター（Ａｄ５  Ｅ１−Ｅ３−ベクター）とパッキング細胞系で製造される。１種のＴ細胞エピトープと２種のＢ細胞エピトープをコードする配列を第一に、ｐＡｄプラスミドに挿入する。次に、その線状化キメラプラスミドを、制限されたＡｄゲノマ（restricted Ad genoma）を用いる通常のＤＮＡ導入法を利用して、生体内で相同的組み換えを行わせるために、Ｅ１トランスコンプレメンテイング２９３パッキング細胞（Ｅ１ transcomplementing ２９３ packing cell）中にコトランスフェクト（co-transfect）させる。
【００８９】
２９３細胞中に調製されたウイルスストックは、３×１０１０〜２×１０１１プラーク形成単位／ｍｌ（ｐｆｕ／ｍｌ）の範囲内の力価を示す。
【００９０】
１０７ｐｆｕｓを吸入によってＢａｌｂ／ｃマウスに吸入させる。３週間後に、マウスから採血して、免疫化構造体（immunizing construct）に含有されている、Ｄｅｒ  ｐIIに対する抗体とＢ細胞部分のレベルを、図３で述べたような直接結合ELISA法で評価する。
【００９１】
実施例８
本発明の化合物の、ヒトに対する免疫原性は、ヒト化動物モデルで評価できる。したがって、重篤な複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）のマウスを、ヒト起源の免疫適格性細胞で再構成させる。Ｄｅｒ  ｐIIに対し感受性のアトピー性ドナーから得た末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ；１５×１０６／マウス）を、各ＳＣＩＤマウスの腹膜に注射する。このように再構成された６頭のマウスに、実施例２に記載した組み換えポリペプチド５０μｇずつを１日目、１５日目および３０日目に注射する。上記免疫化を開始する前および開始してから６週間後に、マウスから採血する。その血清を、図４において述べたのと類似の直接結合検定法を用いて、前記組み換えポリペプチドに対する抗体の存在を評価して、免疫化を行う前は陰性で免疫化後は陽性であることを確かめる。
【００９２】
実施例９：皮膚衛生用の美容組成物
0004383667.tif 000021
本発明の美容組成物は、クリーム形態で、患者の皮膚に対して直接、使用できる。また、本発明の化合物は、水相に溶解する代わりに、油相中に組みこむこともできる。
【００９３】
実施例１０：食品組成物（酸性化ホエーミルク）
１種のラクトバシラス（Lactobacillus）属の菌株と２種のストレプトコッカス（Streptococcus）属の菌株を含有し、ヨーグルトを製造するのに伝統的に使用されているホエーミルクを、水中１２．５％で再構成されたラクトセラムパウダー（lactoserum powder）から得た。このホエー４０ｌを、約９２℃で６分間、低温殺菌し、約７５℃および１５０バール（２レベル）でホモジナイズし、次いで、約４２℃の温度まで冷却した。
【００９４】
本発明の化合物（実施例１〜３のペプチド類）を組みこんだホエーミルクを、４２℃およびｐＨ約５でインキュベートし、次いで約５℃の温度まで冷却した。
【００９５】
本発明の上記食品組成物は、患者が、経口投与によって直接使用する。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ｒＤｅｒ  ｐII（フロイントアジュバント中１０μｇ）を、２週間の間隔をおいて２回皮下（ＳＣ）注射して投与し免疫化させたＢａｌｂ／ｃマウスを示す図である。これらのマウスから採血し、抗体の反応性を、一組の前記Ｄｅｒ  ｐII配列をカバーするオーバーラップペプチドまたはＴ細胞アジュバント（ＦＩＳ）を用いて評価した。ペプチド１１を認識するマウス（図１のポイント２を参照のこと）は、１０μｇのペプチド２１でさらに２回免疫化したところ、ペプチド１１に対する抗体の濃度より５０％低い濃度のペプチド２１を認識することが分かった（図１のポイント３参照のこと）。ｒＤｅｒ  ｐIIをさらに投与すると、ペプチド１１に対する抗体の濃度よりさらに低い濃度で、ペプチド２１に対する反応性を維持する（ポイント４）。
【図２】  リン酸塩緩衝食塩水（ｐＨ７．４）（ＰＢＳ）で、濃度２μｇ／ｍｌまで希釈したビオチン標識ペプチドを示す図である。この希釈液５０μｌを、ニュートラビジンをコートしたプレートに添加し、室温（ＲＴ）で１ｈインキュベートする。これらのプレートをＰＢＳで洗浄し、次いで残留結合部位を、ＰＢＳで５ｍｇ／ｍｌまで希釈されたカゼイン１００μｌを添加して飽和させる。ＲＴで３０分間経過した後、プレートを再び洗浄し、次いで、アトピー性固体由来の血清の５倍希釈液とともにＲＴにて２ｈインキュベートし、再び洗浄し、次に、ぺルオキシダーゼに結合させたヒトＩｇＥに特異的なヤギ抗体とともにインキュベートする。新たに洗浄した後、プレートを、上記酵素に対する基質［酵素による開裂（enzymatic cleavage）の後、着色する］とともにインキュベートする。ウエル中の着色強度（Ｙ軸の４９０ｎｍにおける吸光度で示す）は血清試料中に存在する特異的ＩｇＥ抗体の量に比例する。ペプチドなしまたは抗体希釈液なしの対照検定を行った。
【図３】  非アトピー性被験者から得た血清の１００倍希釈液を使用しかつヒトＩｇＥに対するヤギ抗体を使用することを除いて、図２の説明に記載したように実施した検定の結果を示す図である。
【図４】  アトピー性被験者から得た血清を使用したことを除いて、図３に記載したとおりに実施した検定の結果を示す図である。
【図５】  ２５ｍｌの血液を、静脈穿刺することによってヘパリン添加チューブ内に集め、次にＲＰＭＩ培地で２倍に希釈し、Ficoll Hypaque密度勾配にかける、これらのチューブを、１０００ｇにて２０分間遠心分離する。吸引によって、界面から細胞を集め次にＲＰＭＩ中に再度懸濁させ、ＲＰＭＩで２回洗浄し、最終的に、ＲＰＭＩに１０６細胞／ｍｌにて再び懸濁させる。培地で希釈されて、ペプチド１１−２２または２２−３３を１０μｇ／ｍｌ含有する５０μｌを添加して６日間３７℃でインキュベートする。ＰＨＡ（１０μｇ／ｍｌ）を含有する正の対象を添加する。細胞ＤＮＡ中へのブロモーウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込みの程度を、ＢｒｄＵに対し特異的な抗体を用いて評価することによって、Ｔ細胞の増殖を確認する。試験結果を４９０ｎｍにおける吸光度で示してある。バックグランド値を超えるＴ細胞の増殖は、ペプチド１１−２２については全く見られない。
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> U.C.B. S.A.
<120> COMPOUND AND METHOD FOR THE PREVENTION AND/OR THE TREATMENT OF ALLERGY
<130> P.UCB.09/WO
<140>
<141>
<160> 17
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> 1
<211> 31
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: synthetic peptide
<400> 1
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1               5                  10                  15
Gly His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser
20                  25                  30
<210> 2
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: synthetic peptide
<400> 2
His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser
1               5                  10
<210> 3
<211> 137
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: synthetic peptide
<400> 3
Asp Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
1               5                  10                  15
Gly Gly Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu
20                  25                  30
Leu Ser Ser Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys
35                  40                  45
Pro Phe Gly Gly Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg Gly
50                  55                  60
Lys Pro Phe Ser Ser Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg
65                  70                  75                  80
Gly Lys Pro Phe Gly Gly Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His
85                  90                  95
Arg Gly Lys Pro Phe Ser Ser Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile
100                 105                 110
His Arg Gly Lys Pro Phe Gly Gly Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile
115                 120                 125
Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Ser Arg
130                 135
<210> 4
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: synthetic peptide
<400> 4
Pro Lys Tyr Val Lys Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Lys Lys
1               5                  10                  15
Gly Pro Lys Tyr Val Lys Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Lys
20                  25                  30
Lys Gly Val Ile Ile Gly Ile Lys
35                  40
<210> 5
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: synthetic peptide
<400> 5
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu Gly
1               5                  10                  15
Gly Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Asn Ile His Arg Gly Lys Pro Phe
20                  25                  30
<210> 6
<211> 175
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: synthetic nucleotidic sequence
<400> 6
gaattcccac catggatcag tatataaaag caaattctaa atttataggt ataactgaac 60    taggaggttg ccatggttca gaaccatgta tcattcatcg tggtaaacca ttcggcggtt 120   gtcacggaag tgagccttgc attatacaca gaggaaagcc gttctaagcg gccgc      175   <210> 7
<211> 53
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: primer
<400> 7
gtatctctcg agaaaagaga tcaatacatt aaggctaaca gtaagttcat tgg        53
<210> 8
<211> 99
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: primer
<400> 8
aaacagcctc tagagagttc ggtaatgccg ataaactttg aattggcttt gatgtactga 60    ccgccaagct ctgtgattcc aatgaactta ctgttagcc                        99
<210> 9
<211> 103
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: primer
<400> 9
gtatctacta gttgccatgg ttcagaacca tgtatcattc atcgtggtaa accattcggc 60    ggttgtcacg gaagtgagcc ttgcattata cacagaggaa agc                   103
<210> 10
<211> 51
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: primer
<400> 10
cgtatgtgtc gacccgctat ctagagaacg gctttcctct gtgtataatg c          51
<210> 11
<211> 103
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: primer
<400> 11
ccggaattcc caccatggat cagtatataa aagcaaattc taaatttata ggtataactg 60    aactaggagg ttgccatggt tcagaaccat gtatcattca tcg                   103
<210> 12
<211> 105
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: primer
<400> 12
tcgagcggcc gcttagaacg gctttcctct gtgtataatg caaggctcac ttccgtgaca 60    accgccgaat ggtttaccac gatgaatgat acatggttct gaacc                 105
<210> 13
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: synthetic peptide
<400> 13
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
1               5                  10                  15
<210> 14
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: synthetic peptide
<400> 14
Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe
1               5                  10                  15
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: synthetic peptide
<400> 15
Thr Ala Gly Gly Cys Gly Gly Cys Cys Gly Cys
1               5                  10
<210> 16
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: KOZAK sequence
<400> 16
gaattcccac catgg                                                  15
<210> 17
<211> 11
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Sequence containing stop codon and NotI restriction site
<400> 17
taggcggccg c                                                      11
配列表フリーテキスト
配列番号１は合成ペプチドの配列である。
配列番号２は合成ペプチドの配列である。
配列番号３は合成ペプチドの配列である。
配列番号４は合成ペプチドの配列である。
配列番号５は合成ペプチドの配列である。
配列番号６は合成ヌクレオチド配列である。
配列番号７はプライマーの配列である。
配列番号８はプライマーの配列である。
配列番号９はプライマーの配列である。
配列番号１０はプライマーの配列である。
配列番号１１はプライマーの配列である。
配列番号１２はプライマーの配列である。
配列番号１３は合成ペプチドの配列である。
配列番号１４は合成ペプチドの配列である。
配列番号１５は合成ペプチドの配列である。
配列番号１６はKOZAK配列である。
配列番号１７は停止コドン及びNotI制限酵素認識部位を含む配列である。
【図１】
0004383667.tif 000027
【図２】
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【図３】
0004383667.tif 000029
【図４】
0004383667.tif 000030
【図５】
0004383667.tif 000031