(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アガリクス・ブラゼー抽出物を主成分とする抗腎機能不全薬。
【請求項２】
請求項１記載の抗腎機能不全薬において、アガリクス・ブラゼー抽出物は、アガリクス・ブラゼー乾燥粉末を熱水抽出したものを主成分とすることを特徴とする抗腎機能不全薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
【０００２】
本発明は抗腎機能不全薬及びそれを用いた方法、特に天然物由来の抗腎機能不全薬に関する。
【０００３】
【従来の技術】
腎機能不全を生じる原因は多々あり、またその結果発現する症状も各種考えられるが、一般的に腎機能不全の初期症状は判別しにくくさらに慢性化しやすいため、有効な腎機能不全の予防、治療手段の要望は大きい。
そして、長期にわたる予防、治療薬の投与は、患者に負担を与える可能性が大きく、投与薬の長期連用による副作用はきわめて大きな問題である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、従来において、長期にわたり連用しても、副作用を生じる可能性の低い抗腎機能不全薬は少なく、その開発が望まれていた。
本発明は前記従来技術の課題に鑑みなされたものであり、その目的は急性毒性のみならず、長期連用による副作用も実質的に発現しない、安全性の高い抗腎機能不全薬及び方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するために本発明者らが鋭意検討を行った結果、食用にも用い得るアガリクス・ブラゼーに優れた抗腎機能不全作用が存在することを見いだし、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明にかかる抗腎機能不全薬は、アガリクス・ブラゼー抽出物を主成分とすることを特徴とする。
また、前記抗腎機能不全薬において、アガリクス・ブラゼー抽出物は、アガリクス・ブラゼー乾燥粉末を熱水抽出したものを主成分とすることが好適である。また、本発明にかかる抗腎機能不全方法は、アガリクス・ブラゼー抽出物を有効量投与することを特徴とする。
【０００６】
なお、抗腎機能不全薬として用いる際の投与量は、症状などにより大きく異なるが、おおよそ１〜１０ｇアガリクス・ブラゼー乾燥粉末／ｄａｙとなる程度に熱水抽出物を摂取することで充分な効果を期待できる。
なお、ここでアガリクス・ブラゼーとは、学名をAgarucus blazei Murillといい、日本ではハラタケ科ハラタケ属のキノコでヒメマツタケ、或いはカワリハラタケと呼ばれる。
【０００７】
天然には草地に発生する。収穫期の傘はまんじゅう型（直径５〜１０cm）で表面は褐色の鱗片で覆われる。ひだの形成は密で、傘の開きに伴って白色から黒褐色になる。柄は白色で基部が若干膨らみを持ち長さ５〜１０cm、太さ２〜３cmで内部は多くの場合、中空である。膜質で早落性の内皮膜を持ち下面は綿くず状である。胞子は６×３μm程度の楕円形で、胞子紋は茶褐色〜黒褐色。菌糸体は樹枝状に伸長成長する。
【０００８】
栽培は、サトウキビの葉、頂頭部、バカス、稲藁及び馬糞などを原材料としてｐＨ６．５、含水率７０％、Ｃ／Ｎ比４５の状態で熟成した堆肥に菌糸体を接種して埴壌土によって覆土処理した後、温度２５℃、湿度８０％以上で５００lxの光照射下で培養し、菌糸体接種後３０〜１２０日の間に連続的に子実体を収穫できる。
【０００９】
従来、アガリクス・ブラゼーは子実体乾燥物を熱水抽出して得た抽出液を飲用する利用法が一般的であり、前臨床、及び臨床試験からガン、肝臓病、糖尿病、高血圧症、アトピー性皮膚炎、膠原病、全身性エリテマトーデス、慢性間接リウマチなどに有効であり、免疫調整作用及び抗炎症作用を有することが知られているが、抗腎機能不全機能については全く知られていなかった。
【００１０】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の好適な実施形態について説明する。
まず、本発明にかかる抗腎機能不全薬の効果確認方法を図１の試験スケジュールに従って説明する。
【００１１】
被検試料の調製
乾燥アガリクス・ブラゼー５ｇを６００mlの８０℃熱水で１時間抽出し、被検試料を得た。
供試ラット
Wistar系雄性ラット（６週齢  体重約１８０ｇ）を日本チャールズリバー株式会社から購入後、室温２２±１℃、湿度６０％に調整された部屋で明時間（１２時間）、暗時間（１２時間）となるように光調整し、１週間予備飼育した。
【００１２】
ＤＯＣＡ食塩高血圧症の誘発及び飼育方法
腎性高血圧症の誘発は、ネンプタール麻酔下で左腎を摘出し、１週間後から酢酸デオキシコルチコステロン（ＤＯＣＡ）を、０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を含む０．９％食塩水中に、４mg／mlとなるように懸濁し、５ml/kgＢ．Ｗ．の投与量に調整して週１回背部に皮下注射した。一方、疑似手術処置を行った群（Ｓｈａｍ）は、ＣＭＣ溶液を皮下注射した。片腎摘出群はさらに手術翌日よりヒメマツタケ熱水抽出物を経口的に自由摂取した群（ＤＯＣＡ−１ｓｔ、ｎ＝７）、血圧上昇後にヒメマツタケ熱水抽出物を経口的に自由摂取した群（ＤＯＣＡ−２ｎｄ、ｎ＝８）及び滅菌水投与群（ＤＯＣＡ−ｃｏｎ、ｎ＝６）の３群に分けた。また、疑似手術処置群は手術翌日よりヒメマツタケ熱水抽出物を投与した群（Ｓｈａｍ−ＡＢ、ｎ＝４）と滅菌水投与群（Ｓｈａｍ−ｃｏｎ、ｎ＝４）の２群に分け、合計５群とした。飲料水としてヒメマツタケ熱水抽出物投与群には１％食塩を含むヒメマツタケ熱水抽出物を、滅菌水投与群には１％食塩水を自由摂取させた。ヒメマツタケ熱水抽出物は週平均飲用量から換算して５ｇ（子実体乾燥粉末重量）／６０kg  Ｂ．Ｗ．／ｄａｙとなるように滅菌水で希釈して調製した。なお、抽出物からの沈殿物の発生を防ぐため、１２時間毎に抽出物を交換した。飼料は固形飼料（ＮＭＦ、オリエンタル酵母工業（株））を自由摂取させた。ラットは湿度２２±１℃、湿度６０％の環境下、１２時間明暗サイクルの日付変動を考慮した飼育室で飼育した。
【００１３】
各ラットの摂食量、飲用量及び尿量を毎日９：３０〜１２：００に測定した。
飼育期間終了後、ラットは１２時間絶食の後、ネンブタール深睡眠下、心臓穿刺により採血し、高血圧症について血液生化学検査を行った。
結果を以下に示す。
【００１４】
［試験結果］
尿量及び飲水量の変動
図２に飲水量変化を示す。
同図より明らかなように、Ｓｈａｍ群と片腎摘出群（ＤＯＣＡ群）の飲水量を比較すると、ＤＯＣＡ投与開始後から片腎摘出群の飲水量はＳｈａｍ群よりも増量しており、ＤＯＣＡ投与４１日以降ではＳｈａｍ群と比較して明らかな差異が確認できた。さらに、片腎摘出群ではアガリクス・ブラゼー飲用両群（ＤＯＣＡ−１ｓｔ，ＤＯＣＡ−２ｎｄ）の方が未適用群（ＤＯＣＡ−Ｃｏｎ）と比較して飲用水量の減少傾向が認められた。
【００１５】
また、図３に尿量変化を示す。
尿量の変動は、Ｓｈａｍ群と比較してＤＯＣＡ群の方が腎摘出当初から尿量の増量が認められ、ＤＯＣＡ投与４１日以降では両群の差は顕著であった。なお、アガリクス・ブラゼー飲用群では、血圧上昇がピーク値となったＤＯＣＡ投与４１日以降に連用させた群（ＤＯＣＡ−２ｎｄ）は未投与群（ＤＯＣＡ−Ｃｏｎ）と比較して尿量が抑制傾向にあった。そして、ＤＯＣＡ投与４１日以降から血圧は最高値に達し、その後ほぼ一定の高血圧症状となった。
【００１６】
以上の成績は片腎摘出及びＤＯＣＡ／ＮａＣｌ負荷によって明らかな腎排泄機能障害の生じることを示唆し、且つアガリクス・ブラゼー飲用群は尿崩症を改善することを示唆している。
【００１７】
腎重量の変動
図４に腎重量の変動を示す。
ＤＯＣＡ投与（腎摘出）９０日目のＳｈａｍ群及びＤＯＣＡ群、無処置群（ＷＫＹ）の腎重量を比較した。Ｓｈａｍ群ではアガリクス・ブラゼーを飲用させた群（Ｓｈａｍ−ＡＢ）、未適用群（Ｓｈａｍ−Ｃｏｎ）もほぼ同じで約１．９ｇであった。しかも、この重量は無処置のラットと同様な重量であった。しかし、ＤＯＣＡ群は倍以上の約４ｇ以上と著明な腎の重量増加とともに著しい肥大が観察された。一方、ＤＯＣＡ群ではアガリクス・ブラゼーを連続飲用させた群（ＤＯＣＡ−１ｓｔ）と腎摘出４１日以降から連続服用させた群（ＤＯＣＡ−２ｎｄ）の腎肥大ならびに異常な腎重量の増加は未適用群と比較して明らかに減少していた。さらに、ＤＯＣＡ−１ｓｔ群はＳｈａｍ群と比較して肥大は認められるものの腎重量は近似値を示した。
【００１８】
以上の成績は、片腎摘出及びＤＯＣＡ／ＮａＣｌ負荷によって明らかな腎肥大に伴う腎障害を誘発させることを示唆し、且つ、アガリクス・ブラゼー飲用は改善作用を有することを示唆している。
【００１９】
血液検査値の変動
表１にはＤＯＣＡ投与（腎摘出）９０日目のＳｈａｍ群及びＤＯＣＡ群の血液検査値を比較した。
【表１】
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【００２０】
前記表１より明らかなように、Ｓｈａｍ群はアガリクス・ブラゼーの飲用有無の両群において著明な差が見られる検査項目はなかった。これらの値に対してＤＯＣＡ群のアガリクス・ブラゼー未適用群（ＤＯＣＡ−Ｃｏｎ）は肝機能を反映する検査項目には著明な差異は有していなかったが、Ａ／Ｇ比、ＢＵＮ（血液尿素態窒素）、クレアチニンのような腎機能を反映する検査項目に著明な差が認められた。さらに、総コレステロール値（Ｔ−Ｃｈｏ）、ＣＲＰ、総タンパク量（ＴＰ）、アルブミン値に有意な差が認められることから、腎排泄機能調節に著しい障害が生じていることが推測された。
【００２１】
一方、アガリクス・ブラゼー飲用の両群（ＤＯＣＡ−１ｓｔ，ＤＯＣＡ−２ｎｄ）は未適用群と比較して著明な改善効果が腎機能系の検査項目に認められた。ことに、ＤＯＣＡ群でアガリクス・ブラゼーを連続飲用させた群（ＤＯＣＡ−１ｓｔ）では改善項目によってはＳｈａｍ群と近似になった検査値が認められた。これらの成績は、前述した尿量、腎重量の異常な増加や肥大との成績を加味すると、片腎摘出ラットにＤＯＣＡならびにＮａＣｌ負荷を処置することによって明らかな腎機能障害、ことに組織崩壊を誘発させることが考えられた。さらに、アガリクス・ブラゼー飲用は改善作用を有することを示唆している。
【００２２】
尿検査値の変動
表２にはＤＯＣＡ投与（腎摘出）９０日目のＳｈａｍ群及びＤＯＣＡ群の尿検査値を比較した。
【表２】
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【００２３】
前記表２より明らかなように、Ｓｈａｍ群はアガリクス・ブラゼーの飲用有無の両群において著明な差が認められる検査項目はなかったものの、クレアチンやリン（Ｐ）の排泄がアガリクス・ブラゼーの飲用によって増加されることが考えられる。ＤＯＣＡ群（ＤＯＣＡ−Ｃｏｎ）はＳｈａｍ群と比較すると尿比重を除くいずれの検査項目でも著明な差が認められ、腎機能障害の発現が推測された。一方、ＤＯＣＡ群のアガリクス・ブラゼー服用群には、タンパク質排泄に著明な改善効果が認められた。
【００２４】
これらの成績は、腎機能が片腎摘出ラットにＤＯＣＡならびにＮａＣｌ負荷を処置することによって重篤な障害を受けていることを示しており、しかも尿細管系の重篤な機能不全を示唆する。これらの機能不全に対して、アガリクス・ブラゼー服用は尿タンパク質の異常排泄を抑制したことから、腎炎やネフローゼ症候群への治療効果が期待できるものと思われる。
【００２５】
腎の病理学的所見
腎の組織写真を図５（Ｓｈａｍ群）、図６（ＤＯＣＡ−ｃｏｎ群）、図７（ＤＯＣＡ−１ｓｔ群）に示した。
Ｓｈａｍ群にはいずれの群においても顕著な腎組織障害は認められていなかった。しかし、ＤＯＣＡ−ｃｏｎ群はいずれも顕著な腎組織障害が認められており、ことに、硬化性、硝子円様が観察され、尿細管上皮脱落や尿細管壊死脱落の生じていることが明確となった。これらの病理所見は前述した剖検ならびに生化学的検査結果における考察を指示すると考えられる。一方、アガリクス・ブラゼー服用群は病理組織所見でも統計学的に有意な差を持って組織障害の発現を抑制することが明らかとなった。
【００２６】
本病理所見による成績から、片腎摘出ラットにＤＯＣＡならびにＮａＣｌ負荷を処置することによって重篤な尿細管系の機能不全、さらには腎硬化症を誘発させることが明確となった。しかも、アガリクス・ブラゼー服用によって著明にこれらの疾患誘発が抑制されており、併用時期に差異のないことから、予防のみならず治療にも効果を有する可能性のあること、及び腎透析における併用効果が期待される。
【００２７】
内分泌物質の変動
腎機能に関与する内分泌物質のうち、レニン、アルドステロン、コルチゾール、アンギオテンシンIIの変動について検討を行った。表３にその結果を示す。
【表３】
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【００２８】
前記試験結果より、片腎摘出ラットにＤＯＣＡならびにＮａＣｌ負荷を処置することによって重篤な腎機能不全の誘発が観察される。そのため、表３に示す如く高血圧性障害と深く関連性を有するレニン、アンギオテンシンIIは、ＤＯＣＡ群で著明な減少が認められた。さらに、腎機能と付随する副腎皮質ホルモンのアルドステロンやコルチゾールの値も著明な低下が観察された。一方、アガリクス・ブラゼー服用群は腎機能関連の内分泌物質の低下に対する抑制効果はＳｈａｍ群にまでは回復を示さないものの有意な差をもって改善効果を有することが判明した。さらに、興味のあることは、副腎皮質の内分泌物質の低下を著明に改善することから、免疫系或いは内分泌機能の保護作用を有することが推測される。
【００２９】
以上の結果、薬物誘発腎機能障害に対するアガリクス・ブラゼーの効果について、以下のことが確認乃至示唆された。
片腎摘出ラットにＤＯＣＡならびにＮａＣｌ負荷を処置することによって重篤な腎機能不全が誘発された。しかもこの腎障害は尿細管壊死脱落を伴い、腎硬化症を惹起するものであった。
【００３０】
アガリクス・ブラゼー連続服用は著明にＤＯＣＡ誘発の腎障害を改善し、投与時期（血圧の上昇前と後）に差のないことから予防のみならず治療効果をも有する可能性が考えられた。
アガリクス・ブラゼー服用による腎障害改善効果は副腎機能を改善させ、しかも尿細管排泄機能を回復させることから生じるものと思われる。
【００３１】
アガリクス・ブラゼー服用は、腎不全、尿細管転送障害、ネフローゼ症候群、腎硬化症、尿毒症、間質性腎炎、糸球体腎炎、腎移植予後治療、腎透析併用治療、水腎症の予防ならびに治療に効果的であることが示唆される。
なお、本発明にかかる抗腎機能不全薬は、内服剤、注射剤のいずれの剤型を用いることも可能である。
【００３２】
内服剤として用いる場合には通常、他の増量剤、賦型剤とともに用いて、散剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、茶剤、懸濁化剤、流エキス剤、液剤等の形態をとる。
また、注射剤の場合には、懸濁液、溶液、油性又は水性ビヒクル中の乳液のような形態をとることができ、懸濁化剤、安定化剤及び分散剤のような処方剤を含むことも可能である。
【００３３】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明にかかる抗腎機能不全薬及び方法は、食用可能なアガリクス・ブラゼーを主成分とするので、長期連用による安全性もきわめて高く、腎機能不全の予防、治療にきわめて有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明にかかる抗腎機能不全薬の効果確認を行った際の試験スケジュールを示す説明図である。
【図２】本発明にかかる抗腎機能不全薬の投与による飲水量変化を示す説明図である。
【図３】本発明にかかる抗腎機能不全薬の投与による尿量変化を示す説明図である。
【図４】本発明にかかる抗腎機能不全薬の投与による腎重量差異を示す説明図である。
【図５】正常ラット腎の組織写真である。
【図６】異常ラット腎の組織写真である。
【図７】本発明にかかる抗腎機能不全薬を投与したラット腎の組織写真である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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