(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量が１０ｐｐｍ未満におよび／またはビフラボンの含有量が２０ｐｐｍ未満に低減されそして該ビフラボンがアメントフラボン、ビロベチン、ギンゲチン、イソギンゲチンおよびシアドピチシンよりなる群から選ばれたイチョウ葉の抽出物を製造するための方法であって、下記工程、すなわち、
ａ）含水アセトン、炭素数が１〜３の含水アルカノールまたは無水メタノールを用いてイチョウの葉を抽出する工程と、
ｂ）前記有機溶媒を最大で１０重量％の含有量にまで濃縮することによって前記溶媒を分離する工程、ここで、最終蒸留工程において水を添加してもよい、と、
ｃ）残りの水溶液を水で５〜２５重量％の固形分にまで希釈し、２５℃よりも低い温度にまで冷却し、そして沈殿物が形成されるまで静置しておく工程と、
ｄ）残りの水溶液を硫酸アンモニウムで処理した後、メチルエチルケトンまたはメチルエチルケトンとアセトンとの混合物を用いて少なくとも１回抽出する工程と、
ｅ）得られた抽出物を濃縮し、エタノールと水との混合物で希釈することによって、１０重量％の固形分において５０重量％の水と５０重量％のエタノールとを含有する溶液を得る工程と、
ｆ）前記溶液を鉛化合物または不溶性ポリアミドで処理する工程と、
ｇ）ろ過された溶液を、６０〜１００℃の沸点を有する脂肪族または脂環式溶媒を用いて抽出する工程と、
ｈ）残りの水性アルコール溶液を濃縮した後、硫酸アンモニウムで処理し、メチルエチルケトンおよびエタノールで抽出する工程と、
ｉ）得られた有機相を５０〜７０重量％の固形分にまで濃縮する工程と、
ｋ）得られた濃縮物を、炭素数が１〜３の含水アルカノールに溶解させ、任意にろ過する工程と、
ｌ）ビフラボンの含有量を低減するための吸着樹脂および／または４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量を低減するための酸性イオン交換体でろ過する工程、ここで除去されるべき物質は前記樹脂および／または酸性イオン交換体上に保持される、と、
ｍ）濃縮物を減圧下で乾燥させることによって、含水率が５％未満である乾燥抽出物を得る工程と、
を含んでなることを特徴とする前記方法。
【請求項２】
工程ｋ）における含水アルカノールは、含水エタノールである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記含水エタノールは、４０〜６０重量％の含有量を有するエタノールである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
工程ｌ）における吸着樹脂は、任意に置換されるスチレン／ジビニルベンゼンに基づいた樹脂である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
工程ｌ）における酸性イオン交換体は、強酸性イオン交換体である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が低減されたイチョウ葉の抽出物を調製するための改善された多段階法であって、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの除去は吸着樹脂および／またはイオン交換体によるろ過によって行われ、前記除去されるべき物質は前記樹脂上に保持される。さらに本発明は、本発明による方法によって得られる、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が低減されたイチョウ抽出物、およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
何十年にもわたって、イチョウの葉からの抽出物は薬物として利用されている。現在、それら抽出物は、異なる種類の認知症およびその症状ならびに脳および末梢血液循環障害の治療に利用されている。その効力に関与している成分は、テルペンラクトン（ギンゴライドＡ、ＢおよびＣおよびビロバライド）およびフラボンのグリコシド（ケルセチン、ケンペロールおよびイソラムネチン）である。イチョウの葉には、所望の効力には寄与しないが危険や副作用をもたらす可能性のある成分も含まれている。ギンコール酸のごとき非寒帯植物成分の他に、それらの成分は、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよびビフラボンである。効能があると同時に可能な限り安全で可能な限り副作用が少ないイチョウ抽出物には、これらの化合物は、できる限り存在してはならない。
４’−Ｏ−メチルピリドキシンは、痙攣発作および意識不明のごとき中毒症状を発症させる原因となり得る。従って、この化合物もギンコトキシンと呼ばれる。イチョウに含有されるビフラボンは、免疫毒性を示し、接触アレルギーを誘発することがある。イチョウに含有されるこれらビフラボンは、主に、アメントフラボン、ビロベチン、ギンゲチン、イソギンゲチンおよびシアドピチシンといった化合物である。
４’−Ｏ−メチルピリドキシン：
【０００３】
【化１】
0004304230.tif 000002
【０００４】
ビフラボン：
【０００５】
【化２】
0004304230.tif 000003
【０００６】
４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび同時にビフラボンを除去するための方法および得られる抽出物は、ＥＰ１０３７６４６Ｂ１にすでに記載されている。その文献では、４’−Ｏ−メチルピリドキシンは酸性カチオン交換体を用いて保持され、ビフラボンは活性炭に吸着される。これらの除去工程は、ＥＰ１０３７６４６Ｂ１による方法の工程ｆ）（３ページ目）の後、すなわち、「溶液を鉛化合物または不溶性ポリアミドで処理した」後で実施されることが好ましい。ＥＰ１０３７６４６Ｂ１の方法は、ＤＥ３９４００９１Ｃ２に最初に記載された方法に基づいている。
ＥＰ１０３７６４６Ｂ１では、ビフラボンおよび４’−Ｏ−メチルピリドキシンの除去は、前記方法における一段階（工程ｆ））において実施される。ここでは、鉛塩およびアンモニウム塩が比較的高い含有率で存在するので、使用するイオン交換体を増量させなければならない。
【０００７】
さらに、ビフラボンおよび４’−Ｏ−メチルピリドキシンの除去は、組み合わせでのみ、記載およびクレームされている。しかしながら、将来的に設けられる可能性がある制限によっては、および、抽出物の組成の変更を最小限にするという要件に鑑みると、ビフラボンのみ、あるいは、４’−Ｏ−メチルピリドキシンのみを除去することが望ましいことがあり得る。
さらに、ＥＰ１０３７６４６Ｂ１が目指す５０ｐｐｍ未満の４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび１００ｐｐｍ未満のビフラボンという含有量は、まだ比較的高い。ＥＰ１０３７６４６Ｂ１には比較例が記載されていないため、実施例２および３において達成される実際の除去の程度は、この引用文献からは分からない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、本発明の目的は、４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンの含有量が低いイチョウ抽出物を調製するための方法であって、前述の欠点が無く、とりわけ、
・  リサイクル性が高いおよび／または非常に安価な吸着剤を使用し、
・  ４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量を２０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満、特に好ましくは２ｐｐｍ未満にし、および／または、ビフラボンの含有量を２０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満、特に好ましくは５ｐｐｍ未満にし、そして
・  好ましくは２０〜３０重量％（特に好ましくは２２．０〜２７．０％）のフラボノイド、４．５〜８．５重量％（特に好ましくは５．０〜７．０％、好ましくは２．８〜３．４％のギンゴライドＡ、ＢおよびＣならびに２．６〜３．２％のビロバリド）のテルペンラクトンおよび（最大で５ｐｐｍ）のギンコール酸を含有する抽出物をもたらす（前記２２．０〜２７．０％のフラボノイド、５．０〜７．０％（２．８〜３．４％のギンゴライドＡ、ＢおよびＣおよび２．６〜３．２％のビロバリド）のテルペンラクトンおよび（最大で５ｐｐｍ）のギンコール酸は、ドイツ薬局方２００３（“Ｄｅｕｔｓｃｈｅｓ  Ａｒｚｎｅｉｂｕｃｈ；ＤＡＢ”）の必要条件を満たす）、
ことを特徴とする方法を提供することである。
前記ＤＡＢによれば、フラボノイドは、酸加水分解後にケルセチン、ケンペロールおよびイソラムネチンの形態で測定され、フラボノイドグリコシドとして計算される。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
この目的は、ビフラボンを吸着樹脂を用いて分離させ、および／または、４’−Ｏ−メチルピリドキシンを酸性イオン交換体によって分離させることによって達成することができる。
【００１０】
本発明による抽出物を生成するには、好ましくは下記方法、
ここで工程ａ）〜ｉ）および工程ｍ）はすでにＤＥ３９４００９１Ｃ２に実質的に記載されており、その開示内容の全体は、特に方法の詳細に関して、本願に援用されるべきである、
ａ）２０〜９０重量％の含有量を有する含水アセトン、炭素数が１〜３（メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールおよびイソプロパノール）でありかつ２０〜９０重量％の含有量を有する含水アルカノールまたは無水メタノールを用いて、２０〜１００℃、好ましくは４０〜６０℃の温度で、イチョウ（薬物）の葉を抽出する工程、ここで薬物と溶媒の量比は、１：４〜１：２０、好ましくは１：５〜１：１０である、と、
ｂ）前記有機溶媒を最大で１０重量％（好ましくは最大で５重量％）の含有量にまで蒸発させることによって前記溶媒を分離する工程、ここで最終蒸留工程において水を添加してもよい、と、
ｃ）残りの水溶液を水で５〜２５重量％（好ましくは１５〜２０重量％）の固形分にまで希釈し、２５℃よりも低い温度（好ましくは約１０〜１２℃）にまで冷却し、そして残りの水溶液を沈殿物が形成されるまで静置しておく工程と、
ｄ）残りの水溶液を硫酸アンモニウムで（好ましくは最大４０重量％、特に好ましくは２５〜３５重量％の含有量にまで）処理した後、メチルエチルケトンまたはメチルエチルケトンとアセトンとの（好ましくは９：１〜４：６、とりわけ６：４の比率の）混合物を用いて少なくとも１回抽出する工程と、
ｅ）得られた抽出物を（好ましくは５０〜７０重量％の固形分にまで）濃縮し、エタノールと水との混合物で希釈することによって、５０重量％の水と５０重量％のエタノールとを含有しかつ１０重量％の固形分を有する溶液を得る工程と、
ｆ）前記溶液を、茶色から暗褐色への色の変化が生じるまで鉛化合物（好ましくは酢酸鉛、酢酸水酸化鉛、硝酸鉛、または水酸化鉛の水性懸濁液）または不溶性ポリアミド（好ましくはポリアミド６、ポリアミド６，６または架橋ポリビニルピロリドン（ポリビドン））で処理する工程と、
ｇ）ろ過された溶液を、６０〜１００℃の沸点を有する脂肪族または脂環式溶媒を用いて抽出する工程と、
ｈ）残りの水性アルコール溶液を濃縮した後、硫酸アンモニウムで処理し、メチルエチルケトンおよびエタノールで抽出する（前記溶液は、減圧下において、最大で約５％のエタノール含有量にまで濃縮し、２０重量％の硫酸アンモニウムを添加し、前記溶媒で８：２〜５：５、好ましくは６：４の割合で抽出することが好ましい）工程と、
ｉ）得られた有機相を５０〜７０重量％の固形分にまで濃縮する工程と、
ｋ）得られた濃縮物を、炭素数が１〜３の含水アルカノールに溶解させ、任意にろ過する工程と、
ｌ）吸着樹脂および／またはイオン交換体でろ過する工程、ここで除去されるべき物質は前記樹脂上に保持される、と、
ｍ）濃縮物を（好ましくは６０〜８０℃の最高温度で）減圧下において乾燥させることによって、含水率が５％未満である乾燥抽出物を得る工程と、
を含んでなる方法が実施される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明による方法の利点とは、前記除去工程が前記方法の最後に行われるということである。従って、より少量のイオン交換体が使用されなければならず、とりわけ低い含有量の４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよび／またはビフラボンが得られる。
工程ｌ）における好ましい吸着樹脂は、ダイアイオン（Ｄｉａｉｏｎ）  ＨＰ−２０、ＨＰ−２１またはセパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）  ＳＰ−２０７およびＳＰ−８５０のごとき、任意に置換されるスチレン／ジビニルベンゼンを基礎とする樹脂である。好ましいイオン交換体は、メルク（Ｍｅｒｃｋ）  Ｉまたはアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０のごとき、強酸性イオン交換体である。前記ろ過は、任意に、さらなる溶媒を用いた通常の洗浄を伴う。工程ｋ）における含水アルカノールは、２０〜９０重量％の含有量を有する含水メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたはイソプロパノールであり、好ましくは含水エタノールであり、４０〜６０重量％の濃度が特に好ましい。
【００１２】
本発明の対象は、本発明による方法によって得られうる、かつ、
・  ２０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満、とりわけ２ｐｐｍ未満の４’−Ｏ−メチルピリドキシン、および／または
・  ２０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満、とりわけ５ｐｐｍ未満のビフラボン
を含有する抽出物、とりわけ、乾燥抽出物である。
【００１３】
さらに、本発明の対象は、本発明による方法によって得られうる、かつ、
・  ２０〜３０重量％、好ましくは２２．０〜２７．０重量％のフラボノイド、
・  ４．５〜８．５重量％、好ましくは５．０〜７．０重量％のテルペンラクトン、および
・  １０ｐｐｍ未満、好ましくは５ｐｐｍ以下のギンコール酸
を含有する抽出物、とりわけ、乾燥抽出物である。
【００１４】
本発明のさらなる対象は、本発明による方法によって得られ、かつ、
・  ２０〜３０重量％、好ましくは２２．０〜２７．０重量％のフラボノイド、
・  合計で２．５〜４．５重量％、好ましくは２．８〜３．４重量％のギンゴライドＡ、ＢおよびＣ、
・  ２．０〜４．０重量％、好ましくは２．６〜３．２重量％のビロバリド、
・  １０ｐｐｍ未満、好ましくは５ｐｐｍ以下のギンコール酸、および
・  ２０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満、特に好ましくは２ｐｐｍ未満の４’−Ｏ−メチルピリドキシン、および／または
・  ２０ｐｐｍ未満、好ましくは１０ｐｐｍ未満、特に好ましくは５ｐｐｍ未満のビフラボン
を含有する抽出物、とりわけ、乾燥抽出物である。
ヨーロッパ薬局方によれば、乾燥抽出物は、一般に、少なくとも９５重量％の乾燥残留物を有する。
【００１５】
本発明による抽出物は、粉末、顆粒、錠剤、糖衣錠（コーティングされた錠剤）またはカプセルの形態で、好ましくは経口で、投与することができる。錠剤を調製するには、抽出物を、好適な薬学的に許容しうるアジュバント、例えばラクトース、セルロース、二酸化ケイ素、クロスカルメロースおよびステアリン酸マグネシウムと混ぜ合わせ、プレス成形して錠剤にし、任意に前記錠剤に、例えばヒドロキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、顔料（例えば二酸化チタン、酸化鉄）および滑石粉から成る好適なコーティングが施される、本発明による抽出物はカプセルに充填してもよく、その際に任意に安定剤、充填剤等のごときアジュバントを添加してもよい。投与量としては、１日当たり、１０〜２，０００ｍｇ、好ましくは５０〜１，０００ｍｇ、特に好ましくは１００〜５００ｍｇの抽出物が投与される。
【００１６】
本発明のさらなる対象は、これらの抽出物と、任意に活性成分および／または薬学的に許容しうるアジュバントのごとき他の物質とを含有する薬剤、食品および他の調合物である。ここで用いられる「食品」という用語は、特に、ダイエット食品、栄養補助食品ならびに医療食品および健康補助食品を指す。
【実施例】
【００１７】
実施例１および２および比較例１および２で使用される抽出物溶液の調製
イチョウの乾燥葉（薬物）を、その重量（ｗ／ｗ）の７倍（すなわち、薬物／溶媒比は１：７）のアセトン／水（６０／４０）（ｗ／ｗ）を用いて、約５０℃の温度で抽出した（工程ａ））。
前記有機溶媒の大部分を抽出物から分離し（工程ｂ））、残りの濃縮水溶液を水で約１０重量％の固形分にまで希釈した。得られた溶液を攪拌しながら約１２℃の温度まで冷却し、形成された沈殿物を除去した（工程ｃ））。
残りの水溶液に約３０重量％の硫酸アンモニウムを添加し、形成された溶液を、メチルエチルケトンとアセトンとを６：４の割合で含んでなる混合物を用いて抽出した（工程ｄ））。
【００１８】
得られた抽出物を高度に濃縮し、そのようにして得られた濃縮物を水とエタノールとで希釈することによって、約１０重量％の固形分において５０重量％の水と５０重量％のエタノールとを含有する溶液が得られた（工程ｅ）。この溶液をろ過し、ろ液に酢酸水酸化鉛の水溶液を添加した（工程ｆ）。
さらなるろ過の後、残りの水性アルコール溶液をヘプタンで抽出した（工程ｇ））。
その後、残りの水性アルコール溶液を減圧下において約５％のエタノール含有量にまで濃縮し、硫酸アンモニウムを添加することによって、含水量に基づいて約２０重量％の含有量を達成した。
得られた溶液を、メチルエチルケトンとエタノールとを６：４の割合で含んでなる混合物を用いて抽出した（工程ｈ））。
得られた有機相を高度に濃縮した（約５５重量％の固形分）（工程ｉ））。その後、得られた生成物をエタノールと水とで希釈することによって、約７５％のエタノール含有量と、約１５％の固形分とを有する溶液が得られた（工程ｋ））。
【００１９】
実施例１：  ４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量が低減されたイチョウ抽出物
上記調製法に従って得られた１，２４９ｇの抽出物溶液を、水で約４０％（ｗ／ｗ）のエタノール含有量にまで調整し、５０ｍｌ（０．２８ｍｌ／ｇの乾燥抽出物に相当）のアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０（強酸性イオン交換体）（カラム：約２×１６．５ｃｍ、流量：約８ｍｌ／分）に適用し（工程ｌ））、２００ｍｌの５０％エタノール（ｗ／ｗ）で洗浄した。得られた溶液を回転蒸発器で濃縮し、真空中において５０℃で乾燥させた（工程ｍ））：１７９．４ｇ。
下記表から分かるように、０．４ｐｐｍという４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量は、効力に関与している成分の含有量を基本的に変えることなく達成された。
【００２０】
比較例１：  本発明の工程ｌ）による除去が無いイチョウ抽出物
実施例１で使用された９８．４ｇの抽出物溶液を蒸発によって濃縮し、真空中において５０℃で乾燥させた：１４．７ｇ。
【００２１】
実施例２ａ）：  ビフラボンの含有量が低減されたイチョウ抽出物
上記調製法に従って得られた５００ｇの抽出物溶液を、水で約４０％（ｗ／ｗ）のエタノール含有量にまで調整し、４００ｍｌ（５．７ｍｌ／ｇの乾燥抽出物に相当）のセパビーズ（Ｓｅｐａｂｅａｄｓ）  ＳＰ−８５０（吸着樹脂）（カラム：約４×３２ｃｍ、流量：約８ｍｌ／分）に適用し（工程ｌ））、合計で約２ｌの４０％エタノール（ｗ／ｗ）で洗浄した。得られた溶液の１０％（２５９．３ｇ）を回転蒸発器で濃縮し、凍結乾燥させた（工程ｍ））：６．９２ｇ。前記溶液の残りの９０％は実施例２ｂ）で使用した。
下記表から分かるように、１ｐｐｍ未満というビフラボンの含有量は、効力に関与している成分の含有量を基本的に変えることなく達成された。
【００２２】
実施例２ｂ）：  ４’−Ｏ−メチルピリドキシンおよびビフラボンの含有量が低減されたイチョウ抽出物
【００２３】
実施例２ａ）で得られた溶液の９０％（２，３３４．１ｇ）を、２５ｍｌ（０．４０ｍｌ／ｇの乾燥抽出物に相当）のアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）  ＩＲ−１２０（強酸性イオン交換体）（カラム：約１．５×１１ｃｍ、流量：約１０ｍｌ／分）に適用し（工程ｌ））、１００ｍｌの４０％エタノール（ｗ／ｗ）で洗浄した。得られた溶液を回転蒸発器で濃縮し、凍結乾燥させた（工程ｍ））：６１．６７ｇ。
下記表から分かるように、０．４ｐｐｍという４’−Ｏ−メチルピリドキシンの含有量および１ｐｐｍ未満というビフラボンの含有量は、効力に関与している成分の含有量を基本的に変えることなく達成された。
【００２４】
比較例２：  本発明の工程ｌ）による除去が無いイチョウ抽出物
５０ｇの実施例２ａ）で使用された抽出物溶液を蒸発によって濃縮し、凍結乾燥させた：７．０５ｇ。
【００２５】
比較例３：  ＥＰ１０３７６４６Ｂ１に準じた鉛化合物による処理（工程ｆ））後にビフラボンおよび４’−Ｏ−メチルピリドキシンが除去されたイチョウ抽出物
イチョウの乾燥葉（薬物）を、その重量（ｗ／ｗ）の７倍（すなわち、薬物／溶媒比は１：７）のアセトン／水（６０／４０）（ｗ／ｗ）を用いて、約５０℃の温度で抽出した。
前記有機溶媒の大部分を抽出物から分離し、残りの濃縮水溶液を水で約１０重量％の固形分にまで希釈し、攪拌しながら約１２℃の温度まで冷却し、形成された沈殿物を除去した。
残りの水溶液に約３０重量％の硫酸アンモニウムを添加し、形成された溶液を、メチルエチルケトンとアセトンとを６：４の割合で含んでなる混合物を用いて抽出した。
得られた抽出物を高度に濃縮し、そのようにして得られた濃縮物を水とエタノールとで希釈することによって、約１０重量％の固形分において５０重量％の水と５０重量％のエタノールとを含有する溶液が得られた。この溶液をろ過し、ろ液に酢酸水酸化鉛の水溶液を添加し、再度ろ過した（工程ｆ））。
【００２６】
そのようにして得られた溶液の１５０ｍｌ（乾燥抽出物の部分：７．１％、エタノール含有量：約５０％）を、２．５ｇ（最終生成物の０．１７ｇ／ｇに相当）の活性炭と、室温で３０分間かき混ぜ合わせた。ろ液を、４．２ｍｌ（最終生成物の０．２８ｍｌ／ｇに相当）の強酸性カチオン交換体（Ｍｅｒｃｋ  Ｉ）を備えたカラムに適用した。前記イオン交換体カラムを、４×５ｍｌのＥｔＯＨ（５０％）で洗浄した。
一緒にした溶出液を、３×７０ｍｌのｎ−ヘキサンを用いて振盪によって抽出した。エタノール／水相を回転蒸発器で濃縮し、水で１００ｇにまで希釈した。そのようにして得られた抽出物溶液を、１×４０ｍｌ、２×３０ｍｌおよび１×２０ｍｌの、メチルエチルケトンとエタノールとを３：２の割合で含んでなる混合物を用いて抽出し、１５ｇの硫酸アンモニウムを添加して相分離を行った。
有機相に２５ｇの硫酸アンモニウムを添加した後、室温で１時間攪拌した。溶解しない硫酸アンモニウムおよび形成された水相を分離した。抽出物溶液を５０℃において回転蒸発器で濃縮し、真空中において６０℃で乾燥させた：１４．８ｇ。
【００２７】
下記表から分かるように、５２ｐｐｍという４’−Ｏ−メチルピリドキシン含有量および３１．３ｐｐｍというビフラボン含有量、従って、本発明による実施例２ｂ）よりも著しく高い含有量および劣った除去結果が得られた。
表１に記載のフラボノイド、テルペンラクトンおよびギンコール酸の含有量の測定は、前記ＤＡＢに従って行った。
４’−Ｏ−メチルピリドキシンの定量は、Ｓｅｐ  Ｐａｋ  Ｐｌｕｓ  Ｃ１８カートリッジによる濃縮に続いてＢｏｎｄ  Ｅｌｕｔ  ＬＲＣ−ＳＣＸカートリッジによる濃縮を行った後、ＨＰＬＣおよび蛍光検出によって行った。前記定量では、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｐｒｏｄｉｇｙ  ５  μ  ＯＤＳ−３  ＨＰＬＣカラムおよびトリフルオロ酢酸（ｐＨ２）：メタノール＝９：１（ｖ／ｖ）→メタノールの勾配を用いた。
表１に記載のビフラボンの含有量の測定は、９：１（ｖ／ｖ）の水：アセトニトリル＋０．３容量％のリン酸（８５％）→アセトニトリル＋０．３容量％のリン酸の勾配を用いて、Ｗａｔｅｒｓ  Ｎｏｖａ  Ｐａｋ  Ｃ１８カラムによってＨＰＬＣおよび３４０ｎｍでの紫外検出によって行った。
いずれの場合も、高く、明確な純度等級を有する基準物質を用いて較正を行った。
【００２８】
【表１】
0004304230.tif 000004