(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくともトランス−１０二重結合を有する共役リノール酸（＝ＣＬＡ）異性体を含めた異なるＣＬＡ異性体を含む、ＣＬＡ混合物を濃縮する方法であって、
ここにおいて、少なくとも５重量％のトランス−１０ＣＬＡ異性体を含む前記ＣＬＡ混合物を、混合物中に共に存在する、他のシス及び／又はトランス異性体からトランス−１０異性体を選択識別することのできる酵素を使用して、モノ−、ジ−、又は多価アルコールの存在下酵素変換にさらし、
前記酵素が、アルカリゲネスに由来し、ゲルろ過による測定により２５０，０００未満の分子量を有するリパーゼか、又はシュードモナス・セパシア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｐａｃｉａ）に由来するリパーゼであり、
得られた混合物について、未転化のＣＬＡ異性体と転化後に形成されたＣＬＡエステル又はグリセリドとを、物理的又は化学的手段により分離する、方法。
【請求項２】
転化が、２０℃乃至８０℃で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
転化が、４０℃乃至５０℃で行われる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
転化の間に形成される水が、真空によるか又は水結合剤の添加により除去される、請求項１乃至３のいずれか１請求項記載の方法。
【請求項５】
転化の間に形成される水が、分子ふるいにより除去される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
反応混合物の水含量が、転化の間、１乃至４重量％に維持される、請求項１乃至５のいずれか１請求項記載の方法。
【請求項７】
未転化のＣＬＡ異性体と形成されたＣＬＡエステルとの分離が、分子蒸留、及び／又は遊離ＣＬＡ異性体の塩を形成し、形成された塩の除去により行われる、請求項１乃至６のいずれか１請求項記載の方法。
【請求項８】
出発物質として使用するＣＬＡ混合物が、総ＣＬＡ混合物に基づいて２０重量％より多いトランス−１０ＣＬＡ異性体を含む、請求項１乃至７のいずれか１請求項記載の方法。
【請求項９】
ＣＬＡ混合物が、総ＣＬＡ混合物に基づいて３０重量％より多いトランス−１０ＣＬＡ異性体を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
出発物質として使用するＣＬＡ混合物が、トランス−１０シス１２及びシス−９トランス−１１異性体を等モル量で含む、請求項１乃至９のいずれか１請求項記載の方法。
【請求項１１】
ＣＬＡ転化がほぼ完了する間、ＣＬＡ異性体：モノ−、ジ−、又は多価アルコールのモル比が等モル比より大きい、請求項１乃至１０のいずれか１請求項記載の方法。
【請求項１２】
ＣＬＡ異性体の転化が８０％未満に維持される間、ＣＬＡ異性体：モノ−、ジ−、又は多価アルコールのモル比が等モル比未満である、請求項１乃至１０のいずれか１請求項記載の方法。
【請求項１３】
前記ＣＬＡ異性体の転化が７０％未満に維持される、請求項１２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、トランス−１０異性体中の化合物の濃縮方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
本願発明者らの以前の特許出願である国際公開第９７／１８３２０号において、本願発明者らは、多不飽和脂肪酸の異なる幾何異性体を含む化合物（共役リノール酸（ＣＬＡ）のような）をこれらの異性体の一つに濃縮するために、これらの異性体のうちの一つに特異性を有する酵素で出発組成物を酵素処理にさらすことにより、アルコール分解（グリセロリシス（glycerolysis）を含む）を行なう方法を開示している。このアルコール分解の経路は、トランス−１０異性体を含む、所望の特定の異性体に富む化合物を作ることを可能にする。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、上記の方法は、トランス−１０異性体に富むエステル生成物を得るにはあまり適さない。これは、この先の特許出願に開示された酵素が、遊離脂肪酸の経路に沿ってトランス−１０異性体を濃縮するためのみに使用することができるという事実のためである。エステル中にトランス−１０異性体の濃縮が必要とされる場合、第一に遊離脂肪酸生成物は次にエステルに転化されるように製造されなければならず、そしてこの方法は何度か繰り返されなければならない。この結果、この方法が複雑となり、より低度の濃縮しかできないことになる。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
したがって、本願発明者らは、トランス−１０異性体に富んだエステル生成物を、一つのエステル交換工程においてより高度に濃縮することのできる、他の経路を見出すことができるかどうかを研究した。
【０００５】
上記の研究は、本発明をもたらし、ここにおいて、トランス−１０特異性を有することが知られていなかった周知の酵素を使用した。
【０００６】
【発明の実施の形態】
したがって、本発明は、第一に多不飽和脂肪酸（＝ＰＵＦＡ）混合物を濃縮する方法に関し、該ＰＵＦＡ混合物はトランス−１０二重結合を有する多不飽和異性体、特にトランス−１０二重結合を有するＣＬＡ異性体中に、一つの不飽和はトランス−１０二重結合である異性体を含む、少なくとも二つの共役不飽和を有する異なる異性体を含み、該ＰＵＦＡ混合物は特にＣＬＡ混合物であり、異なるＣＬＡ異性体を含むがその異性体中にトランス−１０二重結合を有するＣＬＡ異性体を少なくとも含む混合物であり、ここにおいて、少なくとも５重量％のトランス−１０異性体、特に少なくとも５重量％のトランス−１０ＣＬＡ異性体を含むＰＵＦＡ混合物を、ＰＵＦＡ混合物、特にＣＬＡ混合物中に共に存在する、他のシス及び／又はトランス異性体からトランス−１０異性体を選択識別することのできる酵素を使用して、モノ−、ジ−、又はより多価のアルコールの存在下酵素変換にさらし、転化の後得られた混合物について、未転化のＰＵＦＡ酸、特にＣＬＡ及びエステル又はグリセリドを、ＰＵＦＡ酸、特にＣＬＡから物理的又は化学的手段により分離し、出発物質に比べて少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、トランス−１０異性体に富んだＰＵＦＡ、特にＣＬＡからエステル又はグリセリド混合物を単離する。
【０００７】
本発明の新しい方法は、食品等級の、短鎖アルキルアルコール（Ｃ１−Ｃ６）、好ましくはエタノール及びグリセロールを使用する時に特に有用である。
【０００８】
本発明の目的において好ましい酵素は、
１）  アルカリゲネス（Alcaligenes）に由来し、ゲルろ過による測定により２５０,０００未満の分子量を有するリパーゼ、又は、
２）  シュードモナス・セパシア（Pseudomonas cepacia）由来のリパーゼ
である。
【０００９】
これらの酵素は、例えば、名糖産業株式会社（Meito Sangyo Co.）から入手可能である。しかし、これらの酵素は、他のシス及びトランス異性体からトランス−１０異性体を選択識別することが可能であることは知られていなかった。
【００１０】
本発明の方法は、２０乃至８０℃、好ましくは３０乃至５５℃、最も好ましくは４０乃至５０℃で行われる。
【００１１】
本発明の方法の間に形成される水は、反応混合物から除去され得る。これを行う方法は周知であり、真空（vacuo）処理、又は分子ふるいのような水結合剤の使用又は不活性ストリッピングガスの使用を含む。
【００１２】
この方法では、反応混合物の水含量は、転化の間１乃至４重量％に維持することができる。
【００１３】
未転化のＰＵＦＡ異性体、特に、ＣＬＡ異性体と、ＰＵＦＡエステル、特に形成されたＣＬＡエステルの分離は、分子蒸留により、及び／又は遊離ＦＵＰＡ異性体、特に、ＣＬＡ異性体の塩の形成及び形成された塩の除去により行われる。
【００１４】
転化に使用される出発物質は、総ＰＵＦＡ混合物、特に総ＣＬＡ混合物に基づいて２０重量％以上、好ましくは３０重量％以上のトランス−１０ＰＵＦＡ異性体、特にトランス−１０ＣＬＡ異性体を含む、好ましくはＰＵＦＡ混合物、特に、ＣＬＡ混合物を基本とする。
【００１５】
特に好ましくは、出発物質は、約等モル量のトランス−１０シス−１２異性体及びシス−９トランス−１１異性体を含む。
【００１６】
本発明の方法は、制限された転化が得られるまで、又は反応混合物中の少なくとも一つの成分が完全に転化されるまで行うことができる。これは、ＰＵＦＡ異性体（又はＣＬＡ異性体）：使用するアルコールのモル比が等しいか否かによる。ＰＵＦＡ異性体：アルコールのモル比が等モルより大きくなるときに、転化がほとんど完了する。しかし、この比が等モル未満である場合、この転化は、使用されるＰＵＦＡ異性体の８０％未満、好ましくは７０％未満に制限される。
【００１７】
【実施例】
Ｉ．出発物質の製造（ｃ９ｔ１１とｔ１０ｃ１２の１：１ＣＬＡ混合物）
１５０ｇのＮａＯＨを、１６００ｇのプロピレングリコールに、６０℃へ加熱して溶解した。次に温度を９０℃へ上昇させ、５２３ｇのベニバナ油をこの混合物へ添加した。その後、温度を１３５℃まで上昇させた。得られた混合物を１３５℃でＮ２下で４０時間攪拌した。混合物を９０℃へ冷却し、形成された石けんを１.２ｌの硫酸（１０容積％）で分解した。混合物のｐＨは３.０であった。得られた油を３回熱湯（各回１ｌの湯）で洗浄した。最後の洗浄の後、湯のｐＨは７.０であった。湯を真空下８０℃で乾燥させた。４２０ｇのＣＬＡを得た。カール・フィッシャー法で検出される水は最終生成物中に存在しなかった。このＣＬＡの組成（高分解ＦＡＭＥにより測定）は、以下の通りである。
【００１８】
表１
炭素鎖                            ％
Ｃ１６：０                        ６.７７
Ｃ１８：０                        ２.７０
Ｃ１８：１                      １４.３４
Ｃ１８：２                        ６.０１
ｃ９ｔ１１                      ３３.８１
ＣＬＡ１０１２ＣＴ                ０.３９
ｔ１０ｃ１２                    ３３.６６
他のＣＬＡ異性体                  ２.０８
Ｃ２２：０                        ０.２４
【００１９】
II．異なる酵素を使用するｔ１０ｃ１２異性体の濃縮
実施例Ｉで得られた１００ｇのＣＬＡを、０.５ｇの水と混合した。上記のＣＬＡ／水混合物１０ｇを異なるリパーゼ（ＣＬＡに対して酵素０.５重量％）と混合し、各サンプルに２.０２ｍｌのエタノール（９６％）を添加することにより反応を開始した。反応混合物を３８℃で攪拌し、２、４及び２４時間後サンプルを採取し分析した。
【００２０】
ここで、１ｍｌの各サンプルを１ｍｌの水及び２ｍｌのイソオクタンと混合した。混合物を１分間強く攪拌し、イソオクタン中に抽出された油を回収した。
【００２１】
イソオクタンを除去した後、サンプルについて、０.２ＮＮａＯＨでの滴定により遊離脂肪酸含量を、及びＦＡＭＥ分析によりエチルエステルのメチルエステルへの転化の後異性体を分析した。
【００２２】
結果を以下の表に要約する。
【００２３】
0004295858.tif 000002
【００２４】
【発明の効果】
本発明の方法は、トランス−１０異性体に富んだエステル生成物を、一つのエステル交換工程において、従来技術の方法よりもより高度に濃縮することができる。