(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
産卵したカイコ受精卵を２５℃で３０〜６０日間保護し、この受精卵を２０〜５℃の間で温度を複数回段階的に下げて各温度でそれぞれ２日間又は５日間の間段階的に保護し、その後さらに０℃で１０日間保護し、次いで０〜−２.５℃で３０８〜４１０日間冷蔵した後、５℃で９０日間保護して胚子を活性化させ、この胚子が活性化された受精卵に対して産卵後４８８日目から５４８日目までの期間が経過した後に、始め１０℃次いで１５℃の一連の中間手入れを１回だけ施し、その後０〜−２.５℃で１２０〜１８０日間再冷蔵し、最後に出庫、催青を行うことを特徴とするカイコ受精卵の保存法。
【請求項２】
請求項１記載のカイコ受精卵の保存法において、該再冷蔵後に、出庫のために温度を１０℃に上げて３日間維持し、１５℃の中間温度に２日間維持し、次いで２５℃で１１日間催青を行うことを特徴とするカイコ受精卵の保存方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、カイコ受精卵の保存法に関し、特に孵化サイクルがほぼ２カ年となり、孵化率が高いカイコ受精卵保存法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
カイコには実用品種の他に、多くの保存系統と育種素材系統がある。我が国では大学や（独）農業生物資源研究所などを合わせると、遺伝資源として１０００種を越える保存系統があるほか、５００種余りの実用品種と育種素材が維持されている。それらの品種を系統保存するためには毎年一回飼育する必要がある。そのため、系統を維持・保存するためには、多大の労力、経費を要しており、その省力化が求められてきた。
【０００３】
休眠性卵（越年蚕種）は産卵後休眠に入り、翌年になって孵化してくるものである。この産卵直後から翌年孵化するまでの期間の蚕卵の取扱いを蚕種の保護と呼んでおり、この期間の保護の良否は、卵の孵化に重要な影響を与えるのみならず、交雑種では作柄や繭糸質にも影響するので、極めて重要な作業である。
【０００４】
従来の確立された蚕種保存技術としては、休眠を覚醒した活性卵の長期冷蔵法として、採種から１５ヶ月間は保護できる複式冷蔵法（例えば、非特許文献１参照。）がある。複式冷蔵法とは、図１にそのプロセスを示すように、採卵後５０〜６０日間２５℃、３０日間２０℃、約１５０日間自然温度で受精卵を保護した後、９０日間−２.５℃に置き、次いで保護中の卵をいったん高温に曝して胚子の発育段階を少し進める中間手入れを一回施し、その後２.５℃で出庫まで保護する方法であり、現在広く実用化されている。
【０００５】
卵の胚子の冷蔵に対する抵抗性は、発育段階によって異なり、最長期（丙Ｂ）の胚子が最も抵抗力が強いので、休眠から覚醒した卵を冷蔵し続けるためには、胚子の発育段階をこの丙Ｂの時期まで進め、再度冷蔵する方法を取るのが良いとされている。このように、冷蔵中の受精卵を所定の温度に一定期間接触させて、胚子の発育を丙Ｂ、好ましくは丙Ｂの少し前まで促進し、卵の冷蔵に対する抵抗性を増すため操作を中間手入れという。
【０００６】
また、いまだ研究段階ではあるが、第１代目の孵化から第２代目の孵化までが２カ年サイクルとなる受精卵の長期貯蔵で高い孵化率(交雑種1品種(宝鐘×春月)を得ることができるた方法（例えば、非特許文献２参照。）が提案されている。即ち、図２に示すように、産卵直後の高温(２５℃)保護を９０日間行い、２０℃、１５℃、１０℃、５℃の各温度にそれぞれ５日間、段階的に移して保護し、次いで２.５℃で４０日間保護し、その後−２.５℃で冷蔵する方法である。この方法では、次いで２.５℃に２０日間、５℃に３０日間置いた後、１５℃で中間手入れを６回行う。この中間手入れの開始日は、保護開始日から４３０、４７０、５１０、５５０、５９０、６１０日目であり、これらの中間手入れの各段階とも、受精卵が破壊されないようにするために初めに各中間手入れ温度よりも低い温度で予備手入れを行っている。この手入れ後の冷蔵温度は、１回目及び２回目の手入れ後は−２.５℃、３回目及び４回目の手入れ後は０℃、５回目及び６回目の手入れ後は２.５℃である。なお、上記方法において、中間手入れを１回のみ施した場合での孵化率は、最高でも保護開始後５５０日目に１回施した場合の７３.１％である。
【０００７】
【非特許文献１】
蚕種の保護取扱い指針、協同組合全国蚕種研究会発行、昭和52年11月10日、pp. 14-16
【非特許文献２】
清水・青木、蚕糸研究、1988年9月(142号)、pp. 45-51
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
上記従来技術の複式冷蔵法では、第１代目の飼育から次世代の飼育開始（催青着手）まで１年半程度が可能であるが、桑葉による飼育は５月中旬から１０月中旬までの時期に限られているので、実際には、晩秋に採種した卵を翌々年の春まで貯蔵・保存するのは無理であるという問題がある。
また、上記非特許文献２記載の受精卵の保存を２カ年間近く保存する方法では、細かく温度を変えたり、中間手入れを６回施すなど、貯蔵工程が極めて煩雑で手間がかかって熟練者でないと実施が困難であるばかりでなく、必ずしも一定の高い孵化率が得られていないという問題がある。
【０００９】
そのため、現在、カイコ系統保存では１年に１回は飼育して継代しているのが実情である。しかしながら、受精卵を２カ年間保存しても高い孵化率を得ることができる簡便な保存法があれば、２年に１回の飼育で系統保存が可能になり、労力も経費も半分に減少することになり、系統保存の省力化に直結する。
本発明の課題は、カイコ受精卵を冷蔵により長期間保護しても高い孵化率を有する、少なくとも２カ年孵化サイクルを有する簡便なカイコ受精卵保存法を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明のカイコ受精卵の保存法は、産卵したカイコ受精卵を２５℃で３０〜６０日間保護し、この受精卵を２０〜５℃の間で温度を複数回段階的に下げて各温度でそれぞれ２日間又は５日間の間段階的に保護し、その後さらに０℃で１０日間保護し、次いで０〜−２.５℃で３０８〜４１０日間冷蔵した後、５℃で９０日間保護して胚子を活性化させ、この胚子が活性化された受精卵に対して産卵後４８８日目から５４８日目までの期間が経過した後に、始め１０℃次いで１５℃の一連の中間手入れを１回だけ施し、その後０〜−２.５℃で１２０〜１８０日間再冷蔵し、最後に出庫、催青を行うことを特徴とする。
【００１１】
上記再冷蔵後に、出庫のために温度を１０℃に上げて３日間維持し、１５℃の中間温度に２日間維持し、次いで２５℃で１１日間催青を行うことを特徴とする。
【００１２】
上記したように産卵後所定の時期に中間手入れを１回施しただけでカイコ受精卵を長期にわたって冷蔵保存することができ、ほぼ２カ年サイクルで系統保存が可能となる。中間手入れをこの期間外に施すと、高い孵化率を維持したままでの２カ年サイクルの系統保存が困難となる。また、上記保護温度及び保護期間の範囲を外れると、高い孵化率を維持したままでの２カ年サイクルの系統保存が困難となる。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態を説明する。
本発明の実施の形態によれば、カイコ受精卵をほぼ２カ年保存する方法は、産卵後に採卵した受精卵を２５℃で３０〜６０日間保護し、この受精卵を２０℃、１５℃、１０℃、５℃の温度に４回段階的に移して各温度でそれぞれ２日間又は５日間、合計２０日間以下の間段階的に保護し、次いで０〜−２.５℃で３０８〜４１０日間保護・冷蔵した後、５.０℃で９０日間保護して胚子を活性化させ、この胚子が活性化された受精卵に対し、産卵後４８８日目から５４８日目までの期間が経過した後に、始め１０℃で次いで１５℃で一連の中間手入れを１回施して冷蔵に対する受精卵の抵抗性を増し、その後、０〜−２.５℃で１２０〜１８０日間再冷蔵する。
【００１４】
この場合、中間手入れにおいて、受精卵が破壊されないようにするためには、初めに低い温度、例えば１０℃で２日間予備手入れを行い、次いで１５℃で４日間中間手入れを行うことが好ましい。再冷蔵後、例えば、出庫のために温度を１０℃に上げて３日間維持し、１５℃の中間温度に２日間維持し、次いで２５℃で１１日間催青を行うことが好ましい。
【００１５】
本発明の保存法では、上記したように、産卵直後の高温（２５℃）保護期間を短くし、冷蔵への移行も短時間で行い、休眠打破することなく低温貯蔵している。また、低温貯蔵は０〜−２.５℃で行うことができ、中間手入れも１回とすることができるので、従来報告されている方法に比べて作業を著しく単純・簡易化することができる。
本発明によれば、受精卵の産卵後から出庫前までの上記の日数に、第１世代の孵化から産卵までの保護期間４０日間及び出庫から第２世代の孵化(催青期間)までの期間１６日間を加えれば、第１世代の孵化から第２世代の孵化までの期間がほぼ２カ年となり、２年サイクルでの系統保存が可能となる。
【００１６】
【実施例】
以下、本発明の実施例を図面を参照して説明する。
【実施例１】
表１に示す各種品種の蚕について、産卵後に、図３に示すようなプロセスを経て保護・貯蔵し、第１世代の孵化から第２世代の孵化まで系統保存を行った。即ち、第１世代の孵化から産卵までの幼虫・蛹の期間が４０日間であり、平成１１年７月５日に産卵した卵を採種し、産卵後から９月２日まで２５℃で６０日間保護し、９月３日から９月２２日まで、２０℃、１５℃、１０℃、５℃の各温度にそれぞれ５日間段階的に移して保護し、次いで１０月２日まで０℃で１０日間保護した後、平成１２年１０月４日まで−２.５℃で３６８日間冷蔵した。次いで、胚子の活性化を図るために平成１３年１月２日まで５℃で９０日間保護した後、１月８日まで１０℃で２日間及び１５℃で４日間の中間手入れを１回施し、胚子の発育を丙Ｂの少し前まで進めて受精卵の冷蔵に対する耐性を高めた。中間手入れ後、５月８日まで０℃で１２０日間再冷蔵した。その後、出庫のため１０℃で３日間維持し、１５℃の中間温度で２日間維持し、２５℃で１１日間催青を行った。出庫から中間温度を経て第２世代の孵化までの卵の催青の期間は１６日間であった。
【００１７】
実施例１の場合、第１世代の孵化から第２世代の孵化までの期間は７３０日であった。
上記プロセスにより貯蔵した後の蚕卵の孵化率は、各種品種において、以下の表１に示すような結果が得られた。
（表１）
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【００１８】
表１から明らかなように、各種品種で９０％前後の高い孵化率が得られ、２カ年サイクルでの系統保存が可能となった。
また、孵化した幼虫を通常の方法で飼育して、長期貯蔵による生育や計量形質（繭重、繭層重）への影響を調べた。その結果、生育や計量形質への影響は認められず、長期貯蔵による障害等は現れなかった。
【００１９】
上記飼育の際の温度は、１〜３齢期は２７℃、４〜５齢期は２５℃を目標とし、給桑回数は１日２回とした。対照区に飼育前年の春採り蚕種を用い、飼育日数、繭重、繭層重を比較した結果、有意な差は認められなかった。
【００２０】
【実施例２】
実施例１と同様にして、第１世代の孵化から第２世代の孵化まで系統保存を行った。
平成１１年７月４日に産卵した卵を採種し、産卵後から９月１日まで２５℃で６０日間保護し、９月２日から９月２１日まで、２０℃、１５℃、１０℃、５℃の各温度にそれぞれ５日間段階的に移して保護し、次いで１０月１日まで０℃で１０日間保護した後、平成１２年８月４日まで−２.５℃で３０８日間冷蔵した。次いで、胚子の活性化を図るために１１月２日まで５℃で９０日間保護した後、１１月８日まで１０℃で２日間及び１５℃で４日間の中間手入れを１回施し、胚子の発育を丙Ｂまで進めて受精卵の冷蔵に対する耐性を高めた。中間手入れ後、平成１３年５月７日まで０℃で１８０日間再冷蔵した。その後、出庫のため１０℃で３日間維持し、１５℃の中間温度で２日間維持し、２５℃で１１日間催青を行った。出庫から中間温度を経て第２世代の孵化までの卵の催青に至る期間は１６日間であった。
【００２１】
実施例２の場合も、第１世代の孵化から産卵までの幼虫・蛹の期間が４０日間あるので、第１世代の孵化から第２世代の孵化までの期間は７３０日であった。
上記プロセスにより貯蔵した後の蚕卵の孵化率は、以下の表２に示すような結果が得られた。
また、孵化した幼虫を実施例１の場合と同様に通常の方法で飼育した結果、生育や計量形質への影響は認められず、長期貯蔵による障害等は現れなかった。
【００２２】
（参考例１）
実施例１と同様にして、第１世代の孵化から第２世代の孵化まで系統保存を行った。
平成１１年７月４日に産卵した卵を採種し、産卵後から９月１日まで２５℃で６０日間保護し、９月２日から９月２１日まで、２０℃、１５℃、１０℃、５℃の各温度にそれぞれ５日間段階的に移して保護し、次いで１０月３日まで０℃で３７８日間保護した。次いで、胚子の活性化をはかるために平成１３年１月１日まで５℃で９０日間保護した後、１月７日まで１０℃で２日間及び１５℃で４日間の中間手入れを１回施し、胚子の発育を丙Ｂの少し前まで進めて受精卵の冷蔵に対する耐性を高めた。中間手入れ後、５月７日まで０℃で１２０日間再冷蔵した。その後、出庫のため１０℃で３日間維持し、１５℃の中間温度で２日間維持し、２５℃で１１日間催青を行った。出庫から中間温度を経て第２世代の孵化までの卵の催青期間は１６日間であった。
【００２３】
参考例１の場合も、第１世代の孵化から産卵までの幼虫・蛹の期間４０日間を加えて、第１世代の孵化から第２世代の孵化までの期間は７３０日であった。
上記プロセスにより貯蔵した後の蚕卵の孵化率は、以下の表２に示すような結果が得られた。
また、孵化した幼虫を実施例１の場合と同様に通常の方法で飼育した結果、生育や計量形質への影響は認められず、長期貯蔵による障害等は現れなかった。
【００２４】
【実施例３】
実施例１と同様にして、第１世代の孵化から第２世代の孵化まで系統保存を行った。
平成１１年７月４日に産卵した卵を採種し、産卵後から８月２日まで２５℃で３０日間保護し、８月３日から８月１０日まで、２０℃、１５℃、１０℃、５℃の各温度にそれぞれ２日間段階的に移して保護し、次いで８月２０日まで０℃で１０日間保護した後、平成１２年１０月３日まで−２.５℃で４１０日間冷蔵した。次いで、胚子の活性化を図るために平成１３年１月１日まで５℃で９０日間保護した後、１月７日まで１０℃で２日間及び１５℃で４日間の中間手入れを１回施し、胚子の発育を丙Ｂまで進めて受精卵の冷蔵に対する耐性を高めた。中間手入れ後、５月７日まで０℃で１２０日間再冷蔵した。その後、出庫のため１０℃で３日間維持し、１５℃の中間温度で２日間維持し、２５℃で１１日間催青を行った。出庫から第２世代の孵化までの卵の催青期間は１６日間であった。
【００２５】
実施例３の場合も、第１世代の孵化から産卵までの幼虫・蛹の期間４０日間を加えて、第１世代の孵化から第２世代の孵化までの期間は７３０日であった。
上記プロセスにより貯蔵した後の蚕卵の孵化率は、以下の表２に示すような結果が得られた。
また、孵化した幼虫を実施例１の場合と同様に通常の方法で飼育した結果、生育や計量形質への影響は認められず、長期貯蔵による障害等は現れなかった。
【００２６】
（ 表２）
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【００２７】
上記実施例１〜３で行ったカイコ受精卵の保存法が、複式冷蔵法等の従来の方法と最も大きく異なるところは、産卵直後からの高温(２５℃)保護期間を３０〜６０日と短くし、高温保護から冷蔵に至る期間を著しく短くし(合計２０日間以下)、胚子のエネルギー消費が少ないうちに冷蔵したことであり、また、貯蔵中の温度変化及び中間手入れ回数を格段に少なくしたことである。
【００２８】
かくして、実施例１〜３から明らかなように、中間手入れ日数、冷蔵温度、冷蔵期間、再冷蔵期間等を所定の範囲内で変動させても、産卵直後からの高温保護期間及び高温保護から冷蔵に至る期間を短くし、また、中間手入れを産卵から４８８日目から５４８日目が経過した後に施すことにより、実用的な孵化率をもって２カ年の保存期間が達成でき、系統保存上問題がないことが分かった。
また、上記実施例では、休眠打破することなく低温貯蔵し、また、低温貯蔵を０℃〜−２.５℃に固定して行い、中間手入れも１回としたので、従来報告されている方法に比べて作業を著しく単純・簡易化することができた。その結果、貯蔵工程は単純化・簡易化され、作業が容易になった。
【００２９】
【発明の効果】
本発明によれば、産卵から一定の期間経過後に中間手入れを１回だけ施すことにより、また、産卵直後からの高温保護期間を短くしかつ高温保護から冷蔵に至る期間を短くすることにより、カイコ受精卵を長期にわたって冷蔵保存することができ、ほぼ２カ年サイクルで系統保存が可能となった。そのため、現在我が国が保有するカイコの遺伝資源及び実用品種とその素材系統を維持・保存に要する労力、経費を半減できる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】従来の複式冷蔵法のプロセスを説明するためのグラフ。
【図２】別の従来の長期冷蔵法のプロセスを説明するためのグラフ。
【図３】本発明の実施例１の保存法のプロセスを説明するためのグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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