(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
クラブラン酸のカリウム塩を形成し得るカリウムイオン源とクラブラン酸またはその塩を反応させることによる構造式Ｉ：
0004319252.tif 000011
のクラブラン酸のカリウム塩の製造方法であって、溶媒としてのｎ―ブタノール又はイソブタノール（２―メチル―１―プロパノール）中で０．５〜１０％の水の存在下で反応を実施することを特徴とする製造方法。
【請求項２】
塩の形のクラブラン酸を反応させてクラブラン酸のカリウム塩を形成させる、請求項１による製造方法。
【請求項３】
アミン塩の形のクラブラン酸を反応させてクラブラン酸のカリウム塩を形成させる、請求項２による製造方法。
【請求項４】
アミン塩が、クラブラン酸のｔｅｒｔ―ブチルアミン塩、ｔｅｒｔ―オクチルアミン（２―アミノ―２，４，４―トリメチルペンタン）塩、Ｎ，Ｎ’―ジイソプロピル―エチレン―ジアミン塩、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’―テトラメチル―ジアミノエタン塩又は１，３―ビス（ジメチルアミノ）―２―プロパノール塩から選択される請求項３による製造方法。
【請求項５】
アミン塩が、アミンを有機溶媒中のクラブラン酸の不純溶液と接触させて得られ、単離される請求項３又は４による製造方法。
【請求項６】
有機溶媒中のクラブラン酸の不純溶液が、有機溶媒によるクラブラン酸の不純酸性水溶液の抽出により得られる請求項５による製造方法。
【請求項７】
クラブラン酸の不純酸性水溶液が、発酵が終了した後、酸性化された発酵ブロスから、及び／又は発酵中に部分的に収穫され酸性化された発酵ブロスから得られる請求項６による製造方法。
【請求項８】
クラブラン酸の不純水溶液を、酸性化に先立ち濃縮に付する請求項７による製造方法。
【請求項９】
発酵ブロスが、有機溶媒により直接抽出される請求項７又は８のいずれかによる製造方法。
【請求項１０】
有機溶媒による抽出に先立って、発酵ブロス中に懸濁している固体が少なくとも部分的に除去される請求項７又は８のいずれかによる製造方法。
【請求項１１】
クラブラン酸を含む発酵ブロスが、クラブラン酸の産生能力を有する微生物の発酵により得られる請求項７〜１０のいずれかによる製造方法。
【請求項１２】
クラブラン酸をそのカリウム塩へ転化するのに使われるｎ―ブタノール又はイソブタノールが共沸蒸留により回収されて、実質的に水を含まないｎ―ブタノール又は実質的に水を含まないイソブタノール；及び実質的にｎ―ブタノール又はイソブタノールを含まない水を得る、請求項１〜１１のいずれかによる製造方法。
【請求項１３】
請求項１に記載の構造式Ｉのクラブラン酸のカリウム塩を製造するための、請求項１に記載の製造方法におけるｎ―ブタノール又はイソブタノールの水の存在下での使用。
【請求項１４】
構造式Ｉｐ：
0004319252.tif 000012
のクラブラン酸のカリウム塩を製造する方法であって、カルボン酸のカリウム塩をクラブラン酸のアミン塩に添加し、溶媒としてｎ−ブタノール又はイソブタノールを使用し、前記溶媒が０．５％〜１０％の水を含有することを特徴とする製造方法。
【発明の詳細な説明】
本発明は構造式Ｉのクラブラン酸の医薬的に許容可能な塩の製造に関する。
0004319252.tif 000002
医薬的に許容可能なクラブラン酸の塩は公知であり、例えば
ａ）クラブラン酸を産生する能力のある微生物の発酵、
ｂ）発酵ブロスからのクラブラン酸の単離、
ｃ）クラブラン酸の精製（例えばその塩を経由する）、及び
ｄ）工程ｃ）の精製クラブラン酸（例えばその塩）の医薬的に許容可能なクラブラン酸の塩への転化
を経由する各種の製造プロセスが公開されている。
発酵工程ａ）は例えばＧＢ１，５０８，９７７及びＷＯ９３／２５，５５７に全般的に記述されているように実施することができる。特定の発酵プロセスは、例えばＥＰ１８２，５２２においては、発酵中、炭素源を連続又は間欠的に供給することによる方法；例えばＷＯ９６／１８，７４３においては、アンモニウムと尿素を低水準に維持する方法；例えばＥＰ３４９，１２１；ＷＯ９５／０３，４１６；ＣＡ２，１０８，１１３；ＷＯ９４／１８，３２６；ＷＯ９４／１２，６５４；及びＷＯ９６／１０，０８４においては、クラブラン酸産生に関わる少なくとも一つの酵素をコードしているＤＮＡ又はＤＮＡフラグメントを含むベクターで軽質転換された宿主からのクラブラン酸産生による方法が公開されている。適切な微生物は、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属の微生物、例えばＳ．ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ、すなわちＮＲＲＬ３５８５菌株、又はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ．ｓｐ．Ｐ６６２１  ＦＥＲＭ  ２８０４（日本特許５５−１６２，９９３）又は他の変異菌株である。
適切な条件下の発酵は各種刊行物（例えば工程ａ）で引用された参照文献）から更に詳細に知られており、その内容はその引用先行技術を含め、ここで参考に使用されるものである。
単離工程ｂ）は、例えば、クラブラン酸を溶解し得る水不混和性溶媒による酸性化発酵ブロスの抽出（例えば、発酵ブロスの直接抽出により、又は少なくとも発酵ブロスに懸濁した懸濁固体の部分を除去した後に）により実施することができる。固体は例えばフロキュレーション、濾過（例えば微細濾過）又は遠心分離により除去することができる。固体除去に先立って、ブロスの濾過性を改良する目的で発酵ブロスに水混和性溶媒を添加してもよい。この水性クラブラン酸含有液は、便宜的に酸性化と抽出に先立って、特定濃度範囲になるように、前濃縮（例えばアニオン交換又は浸透圧を利用した方法により）してもよい。クラブラン酸の有機溶媒溶液（例えば抽出により得られる）は、例えば更に精製するため水に逆抽出してもよい。水相及び有機相の相分離は例えば遠心分離法により容易に行うことができる。クラブラン酸の有機溶媒溶液は、更に処理する前に乾燥して特定の水分範囲に調節してもよい。適切な条件を使う単離プロセスは、更に詳細に各種の文献（例えば、ＥＰ３８７，１７８；ＷＯ９３／２５，５５７；ＷＯ９５／１１，２９５；ＷＯ９５／３４，１９４；ＷＯ９６／２８，４５２；ＷＯ９６／２２，２９６）から知ることができる。工程ｂ）で引用された参照文献の内容は、その引用先行技術を含め、ここで参考に使用されるものである。
工程ｃ）は例えばクロマトグラフィーにより又は塩形成（例えば使用溶媒から沈澱、例えば結晶するクラブラン酸塩の形成）を経て実施することができる。このような塩は、例えばクラブラン酸のリチウム塩（たとえばＧＢ１，５４３，５６３、又はＧＢ１５０８９７７に記述されるように）、又はアミン塩でよい。クラブラン酸と塩を形成する適切なアミンは各種の文献に記述されており、例えば、ＥＰ２６，０４４におけるｔｅｒｔ―ブチルアミン；ＥＰ５６２，５８３におけるＮ，Ｎ―（ジ）アルキル―アルキレン―ジアミン（例えばジイソプロピル―エチレンジアミン）；ＥＰ７１９，７７８におけるＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’―テトラメチル―エチレンジアミン；例えばＧＢ２，２６４，９４４におけるｔｅｒｔ―オクチルアミン；又は例えばＷＯ９３／２５，５５７において記述されている構造式ＩＩのアミンのクラスである。
0004319252.tif 000003
［式中で、Ｒ1，Ｒ2及びＲ3は、次から選択される。
ｃａ）Ｒ1は任意に置換された環状基で一般式は
Ｒ―（ＣＨＲ4）m―
（式中、ｍは０か整数１〜５であり、Ｒは任意に置換された３〜８環炭素原子を含む脂肪族炭化水素環系であり、Ｒ4は水素又はアルキル、アミノ―又はヒドロキシ置換アルキル；又は置換アミノ―置換アルキル；又は上述と同じ一般式Ｒ1の基である）であり、
Ｒ2及びＲ3は、Ｒ1が選択されたのと同じ基から；又は水素；アルキル；アルケニル；アミノ―又はヒドロキシ―置換アルキル又はアルケニル；又は置換アミノ―置換アルキル又はアルケニルから、独立に選択され；又は
ｃｂ）Ｒ1，Ｒ2及びＲ3は同じか又は異なり、水素；アルキル；アルケニル；アミノ―又はヒドロキシ―又はアルコキシ―置換アルキル又はアルケニル；又は置換アミノ―置換アルキル又はアルケニルから、独立に選択され；又は
ｃｃ）Ｒ1は任意に置換されたアリール基で一般構造式は
0004319252.tif 000004
（式中、Ｒ4は水素又は１つ又はそれ以上の置換基であり、ｍは０又は１〜５の整数である）であり、
Ｒ2及びＲ3は、水素；アルキル；アミノ―又はヒドロキシ―置換アルキル；又は置換アミノ―置換アルキル；又はＲ1が選択されたのと同じ一般式の基から独立に選択され；
又は
ｃｄ）Ｒ1とＲ2と任意にＲ3が示された窒素原子と共に環員に窒素原子を含みかつ任意に１又はそれ以上の追加の環ヘテロ原子を含む任意に置換されたヘテロ環系の残基を構成し、及び、Ｒ3が環系の一部でない場合は、Ｒ3は水素；アルキル；アミノ―又はヒドロキシ―置換アルキル；又は置換アミノ―置換アルキルから、独立に選択され；又は
ｃｅ）Ｒ1は一般構造式
0004319252.tif 000005
（式中、Ｒ4及びＲ5は独立に水素；アルキル；アミノ―置換アルキル；又は置換アミノ―置換アルキルであり；ｍは０又は１〜５の整数である）の基であり、
Ｒ2及びＲ3は、独立に水素；アルキルアミノ―又はヒドロキシ置換アルキル；又は置換アミノ―置換アルキルから選択され；又は
ｃｆ）Ｒ1及びＲ2の１つ又は両方が水素であり、
Ｒ3は、アミノ酸のカルボキシレート基がエステル化されているか又はアミンの形であり得るアミノ酸の残基を表す］。
適切なアミンは例えば更にＷＯ９４／２２，８７３に記述されている構造式
0004319252.tif 000006
（式中、Ｒ6及びＲ7はそれぞれＣ1-8アルキル；Ｃ3-8シクロアルキル；又はＣ3-8シクロアルキル―Ｃ1-8アルキルであり；任意に１つ又は複数の不活性置換基により置換され；又は互いに連結して４〜７環原子の環を形成し、
Ｒ8及びＲ9はそれぞれＣ1-8アルキル；Ｃ3-8シクロアルキル；又はＣ3-8シクロアルキル―Ｃ1-8アルキルであり；任意に１つ又は複数の不活性置換基により置換され；又は互いに連結して４〜７環原子の環を形成し、
Ｘは水素又は水素架橋形成基であり、及び
ｍ’及びｎ’は独立して０〜５の整数を示す）
のアミンであることができる。
特に記述されるアミンは、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’―テトラメチル―１，２―ジアミノエタン及び１，３―ビス（ジメチルアミノ）―２―プロパノールである。
適切なアミンは、例えば更にＷＯ９６／２０，１９９に記述される通り、構造式
0004319252.tif 000007
（式中、Ｒ10は任意に１つ又は複数の不活性置換基で置換したアルキレン基であり、
Ｒ11及びＲ12は、独立して水素又は任意に１つ又は複数の不活性置換基で置換したアルキルであり、又は、
Ｒ11及びＲ12は窒素原子と共に、任意に１つ又は複数の不活性置換基で置換された４〜７炭素原子を有するヘテロ環を形成する。）
のアミンであることができる。
適切なアミンは、例えば更にＥＰ７２９，９６１に記述される通り、構造式
0004319252.tif 000008
（式中、Ｒ13及びＲ14は、独立して水素原子又は医薬的に許容可能な置換基を表す。）
のアミンであることができる。
適切なアミンは、例えば更にＷＯ９４／２１，６４７に記述される通り、構造式
0004319252.tif 000009
［式中、Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、及びＲ18は、水素原子；直鎖又は分岐鎖Ｃ1-8アルキル基；アルキル基がメチル又はエチル基であり且つアリール基がフェニル基であるアラルキル基（該アラルキル基は、アルキル基がＣ1-4アルキルであるＮ―アルキル又はＮ，Ｎ―ジアルキル基により任意に置換される）を示し；又は
Ｒ15、Ｒ16、Ｒ17、及びＲ18は、共同で独立して３〜６メチレン基をもつ環状アルキレン環を示し、これらの基の一つは任意に酸素又は硫黄原子又はアミノ基により置換され；そして
Ｒ19は水素原子又はメチル基を示し；そして
ｐは１〜３の整数を示す］
のアミンであることができる。
適切な条件下の精製は各種刊行物から、例えば工程ｃ）で引用された参照文献から更に詳細に知られており、その引用先行技術を含め、その内容はここで参考に使用されるものである。
ｄ）項によるプロセスにおいて、クラブラン酸はそれ自体で、またはその反応活性誘導体、例えばその塩、例えばそのリチウム塩又はナトリウム塩の形で、；又はそのアミン塩の形で転化することができる。塩形成において、アミンを溶液中、有機溶媒又は溶媒系中のクラブラン酸と接触させてよい。便宜的には、（例えば任意に前処理した発酵ブロスの）水相からクラブラン酸の抽出に使った同じ溶媒を使うことができる。クラブラン酸を含有する有機溶液をアミンと接触させる前に、溶液を前濃縮することができる。クラブラン酸のアミンとの接触は任意の適切な方法（例えばアミンを有機溶媒中のクラブラン酸溶液に、例えば溶媒中のクラブラン酸溶液への単純添加により、または、例えば溶媒中のクラブラン酸溶液の流れへのアミンの混合により添加する）により実施することができる。クラブラン酸の所望のアミン塩は、例えばもし塩が固体、例えば結晶を形成すれば、濾過又は遠心分離により、有機溶媒から単離することができる。第２の溶媒をクラブラン酸、溶媒及びアミンを含有する混合物に添加して、クラブラン酸のアミン塩の沈澱を起こさせることができる。クラブラン酸のアミン塩は、溶媒和物例えばアセトン溶媒和物の形で取得することができる。クラブラン酸アミン塩の再結晶も行うことができる。もし溶媒が完全に又は部分的に水に不混和性である場合、クラブラン酸のアミン塩を水に抽出して該塩の水溶液を形成させることができるが、この水溶液は、例えばＷＯ９５／２１，１７３に記述される通り、非常に濃厚な水溶液に濃縮することもできる。クラブラン酸の塩、例えばアミン塩の精製及び／又は単離における反応条件、特定反応条件、試薬、試薬の量範囲、濃度範囲、温度等のような条件は、例えば工程点ａ），ｂ）及びｃ）で引用した文献から知られており、その内容は、その引用先行技術を含め、ここで参考に使用されるものである。
転化工程ｄ）は公知技術により実施することができる。クラブラン酸の医薬的に許容可能な塩は、例えば、クラブラン酸の医薬的に許容可能なアルカリ又はアルカリ土類金属の塩、好ましくはカリウム塩である。一般的にクラブラン酸又はその塩を、例えばそのアミン塩を、便宜的には溶液として、医薬的に許容可能なクラブラン酸の塩を形成する能力のあるカチオン源と接触させる。適切なカチオン源は、例えば上述引用参考文献に記述されている。好ましいカチオン源は、カルボン酸、例えば２―エチルヘキサン酸のアルカリ又はアルカリ土類金属塩、例えばそのカリウム塩、又は例えば酢酸塩（任意に、酢酸と組み合わせる）である。
クラブラン酸の塩、例えばアミン塩の精製及び／又は単離における反応条件、特定反応条件、試薬、試薬の量範囲、濃度範囲、温度等のような条件は、例えば工程ａ），ｂ）及びｃ）で引用した文献から知られており、その内容は、その引用先行技術を含め、ここで参考に使用されるものである。
実際、上に引用した多くの参考文献に、溶媒（実用的にはエタノール又はイソプロパノールである）中でクラブラン酸のアミン塩を、２―エチルヘキサン酸カリウム塩又は酢酸カリウムの添加によって、沈澱（例えば結晶）し得るクラブラン酸カリウム塩とする転化方法が記述されている。このようなプロセスでは一般的に数パーセントの水を添加し、転化反応中に追加の水が生成する。水は使用溶媒を汚染し、溶媒再利用で問題を生じる。エタノール及びイソプロパノールは水と共沸混合物を作るので、再利用は難しく、３成分共沸混合、例えば任意に置換したベンゼン、他の芳香族炭化水素又はシクロヘキサンを添加して水を溶媒から除去しなければならない。しかし、このような溶媒は再利用溶媒を汚染することがあり得る。
さて、我々は驚くべきことに、或る溶媒中で、クラブラン酸を例えばその塩の形で、例えばそのアミン塩の形で、適切なカチオン源の存在下で転化して、クラブラン酸の医薬的に許容可能な塩を高収率且つ高純度で得ることができ、更に、得られた塩を追加的に更に溶媒を使うことなく容易に回収できることを発見した。この溶媒は工業的規模で使用することができる。
ある視点では、本発明は、溶媒としてのｎ―ブタノール又はイソブタノール（２―メチル―１―プロパノール）中で転化を行うことを特徴とする、クラブラン酸をその医薬的に許容可能な塩へ転化することによる、構造式Ｉのクラブラン酸の医薬的に許容可能な塩の製造方法を提供する。
溶媒としてのｎ―ブタノール及びイソブタノールは混合物として使用してもよく、また好ましくはｎ―ブタノール又はイソブタノールを使用する。
他の視点では、本発明は、クラブラン酸をその医薬的に許容可能な塩に転化することによる、構造式Ｉのクラブラン酸の医薬的に許容可能な塩の製造におけるｎ―ブタノール又はイソブタノールの使用を提供する。
クラブラン酸はそれ自体で、又はその塩例えばそのリチウム塩又はナトリウム塩又はアミン塩の形で転化することができる。好ましくは、クラブラン酸のアミン塩を例えば上記引用文献に公開されているごとく、例えばアセトン溶媒和物のような溶媒和物の形で使用することができる。参考文献のいずれかに記述されているアミン塩を使うことができる。好ましいアミン塩は、ｔｅｒｔ―ブチルアミン、ｔｅｒｔ―オクチルアミン（２―アミノ―２，４，４―トリメチルペンタン）、Ｎ，Ｎ’―ジイソプロピル―エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’―テトラメチル―ジアミノエタン及び１，３―ビス（ジメチルアミノ）―２―プロパノールとのクラブラン酸塩を含み、更に好ましくはｔｅｒｔ―オクチルアミン又はｔｅｒｔ―ブチルアミンとの塩である。
他の視点では、本発明は、溶媒としてのｎ―ブタノール又はイソブタノール（２―メチル―１―プロパノール）中で転化を行うことを特徴とする、クラブラン酸の塩、例えばそのアミン塩［例えばそのアミン塩はクラブラン酸のｔｅｒｔ―ブチルアミン、ｔｅｒｔ―オクチルアミン（２―アミノ―２，４，４―トリメチルペンタン）、Ｎ，Ｎ’―ジイソプロピル―エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’―テトラメチル―ジアミノエタン又は１，３―ビス（ジメチルアミノ）―２―プロパノール塩から選択される］をクラブラン酸の医薬的に許容可能な塩へ転化することによる、構造式Ｉのクラブラン酸の医薬的に許容可能な塩の製造プロセスを提供する。
クラブラン酸の医薬的に許容可能な塩はクラブラン酸の医薬的に許容可能なアルカリ又はアルカリ土類金属塩例えば、カリウム塩であることができる。
他の視点では、本発明は、溶媒としてのｎ―ブタノール又はイソブタノール（２―メチル―１―プロパノール）中で転化を行うことを特徴とする、クラブラン酸を、例えば塩の形で、例えばそのアミン塩の形で、例えばクラブラン酸のｔｅｒｔ―ブチルアミン、ｔｅｒｔ―オクチルアミン（２―アミノ―２，４，４―トリメチルペンタン）、Ｎ，Ｎ’―ジイソプロピル―エチレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’―テトラメチル―ジアミノエタン又は１，３―ビス（ジメチルアミノ）―２―プロパノールから選択したアミンとの塩の形でクラブラン酸のカリウム塩へ転化することによる、構造式Ｉのクラブラン酸のカリウム塩を製造するプロセスを提供する。
本発明による転化は、例えば工程ａ）、ｂ）、ｃ）及びｄ）で引用したいずれかの文献で記述された通常の方法で実施することができるものである（その内容は、その引用先行技術を含め、ここで参考に使用されるものである）が、ｎ―ブタノール又はイソブタノールを溶媒として使い、そして好ましくは、次の様に実施することができる。
クラブラン酸例えばその塩、好ましくはそのアミン塩をｎ―ブタノール又はイソブタノールに溶解する。水は存在してよい。０．５〜１０％、例えば１．０〜５％、例えば１．０〜４％、例えば１．５〜３．０％のような低含量の水は使うことができる。クラブラン酸に対するｎ―ブタノール又はイソブタノールの量は臨界的ではないが、任意に水が存在する時に、当該塩を確実に溶解するのに十分でなければならない。例えば、クラブラン酸アミン塩を使う場合、上記量はアミン塩の形成に使うアミンの性質に依るであろう。クラブラン酸のアミン塩１ｇ当り３〜１５ｍｌ、例えば４〜１２ｍｌのｎ―ブタノール又はイソブタノールを使うことができる。溶解は溶媒系を約４５℃まで、例えば３５℃に暖めることで助勢することができる。溶液は、例えば着色副産物を除去するために活性炭素で処理し、また清澄溶液を得るために任意に更なる処理に先立って濾過することができる。クラブラン酸の溶液は医薬的に許容可能なクラブラン酸の塩を形成し得るカチオン源と接触させることができる。カチオン源は任意の適切なカチオン源、例えば上に引用した文献のいずれかで記述されたもの（その内容はその引用先行技術を含め、ここで参考に使用されるものである）、例えば医薬的に許容可能なアルカリ又はアルカリ土類塩であり得、好ましくはＣ2-8カルボン酸の塩、更に好ましくは２―エチル―ヘキサン酸の塩、例えばそのカリウム塩又は医薬的に許容可能な酢酸塩、例えば酢酸カリウムであり得る。酢酸塩は任意に酢酸と組み合わせて使うことができる。酢酸を酢酸塩と組合せて使う場合は、酢酸塩の１当量あたり約１〜５モル、例えば約１．５〜約３モル、例えば１．５〜約２．５モルの酢酸を使うことができる。カチオン源のクラブラン酸との接触は通常のように、例えば上の参考文献のいずれかで記述されたように実施することができ（その内容はその引用先行技術を含めここで参考に使用されるものである）；例えばカチオン源の溶液（好ましくはクラブラン酸の溶解に使ったのと同じ溶媒の溶液）をクラブラン酸の溶液に添加することができる。溶媒、例えばｎ―ブタノール又はイソブタノールの量は臨界的でないが、使用するカチオン源を溶解するに十分でなければならない。上記量は、例えばカチオン源の化学的性質、及び水のような又はもしカチオン源が酢酸塩のときは酢酸のような他の添加物質の量に依存するであろう。カチオン源として例えば２―エチル―ヘキサン酸カリウムのようなカルボン酸の塩を使う場合、塩１ｍｍｏｌ当り約０．２ｍｌ以上で、例えば０．５ｍｌを使うことができる。酢酸塩、例えば酢酸カリウムを使う場合、酢酸カリウム１ｇ当り例えば１．５ｍｌ以上、例えば２．０ｍｌ以上、例えば約２．０〜約２．５ｍｌの量で、任意に酢酸の存在下において、使用することができる。酢酸が酢酸塩と組合せて使われるのであれば、酢酸はクラブラン酸溶液中又は酢酸塩溶液中に存在させることができる。カチオン源は一回に又は数回に分けて添加してもよい。添加温度は臨界的ではなく、例えば上の参考文献のいずれかで記述されたようであることができ（その内容はその引用先行技術を含めここで参考に使用されるものである）、便宜的に、０℃以下〜室温、例えば約０〜約２５℃、例えば約１０〜約２０℃であることができる。クラブラン酸に関して使用されたカチオン源の範囲は、例えば上の参考文献のいずれかで記述されたようであることができ（その内容はその引用先行技術を含めここで参考に使用されるものである）、例えばクラブラン酸（塩）の１ｍｏｌは少なくとも１当量のカチオン源、例えば医薬的に許容可能なアルカリ塩又はアルカリ土類塩、例えばカリウム塩と接触させることができる。カチオン源はクラブラン酸に対して過剰添加することができる。好ましくは、クラブラン酸１モル当たり約１．０〜約３．０当量、より好ましくは、約１．１〜２．０当量のカチオン源を添加することができる。クラブラン酸がカチオン源と接触した際、クラブラン酸の医薬的に許容可能な塩が沈澱し、例えば結晶するであろう。もし望ましければ、上の参考文献のいずれかで記述されるように（その内容はその引用先行技術を含めここで参考に使用されるものである）、沈澱を生じさせる第二の溶媒を添加することができる。医薬的に許容可能なクラブラン酸の塩の単離に先立って、反応混合物を暫くの間攪拌し、完全に転化するために、例えば引用参考文献のいずれかに記述されている温度、例えば０℃以下〜約１０℃、例えば約０〜約５℃に冷却することができる。医薬的に許容可能な塩は、例えば汎用の方法で、例えば上の引用参考文献のいずれにか記述されているように、好ましくは濾過又は遠心分離により、更に好ましくは濾過により単離し、場合により、例えば上の引用参考文献のいずれにか記述されているように、塩が不溶であるか又はわずかに過剰に溶解する有機溶媒、例えばアセトンで洗浄し、乾燥する。
クラブラン酸の結晶性カリウム塩が、例えば本実施例においてはロゼットを含まない形態で；又は例えばその内容はその引用参考文献を含めここで参考に使用されるＥＰ２７７，００８に記述されるようにロゼット形態で得られる。
微量成分としてｎ―ブタノール又はイソブタノールを、例えば５重量％以下；４重量％以下；３％重量以下；２重量％以下；及び１重量％以下；約０．６重量％以下、例えば０．５重量％以下、例えば０．１重量％以下から０．６重量％迄、例えば０．１重量％から０．６重量％含む医薬的に許容可能なクラブラン酸の塩、例えばクラブラン酸のカリウム塩は新規であり、更に、本発明の部分を形成する。かかる製剤は医薬的に許容可能であり十分容認されるものである。
他の視点では、本発明は、微量成分としてｎ―ブタノール又はイソブタオールを例えば５重量％以下、例えば０．６重量％以下を含む医薬的に許容可能なクラブラン酸の塩を提供する。
アミンを、例えば上に記述したように、又はここに引用した参考文献のその引用参考文献を含めいずれかに記述されるように、有機溶媒中のクラブラン酸の不純溶液と接触させてクラブラン酸のアミン塩を取得することができる。有機溶媒中のクラブラン酸の不純溶液は、例えば上に記述したように、又はここに引用した参考文献のその引用参考文献を含めいずれかに記述されるように、クラブラン酸の不純酸性水溶液の有機溶媒による抽出により取得することができる。クラブラン酸の不純酸性水溶液は、例えば上に記述したように、又はここに引用した参考文献のその引用参考文献を含めいずれかに記述されるように、発酵が終了した後。酸性化した発酵ブロスから及び／又は発酵中に部分的に収穫し酸性化した発酵ブロスから取得することができる。クラブラン酸の不純水溶液は、例えば上に記述したように、又はここに引用した参考文献のその引用参考文献を含めいずれかに記述されるように、酸性化に先立ち予備濃縮することができる。発酵ブロスは、例えば上に記述したように、又はここに引用した参考文献のその引用参考文献を含めいずれかに記述されるように、有機溶媒で直接抽出するか、又は有機溶媒による抽出に先立って、そして任意には酸性化に先立って、少なくとも発酵ブロスに懸濁した固体を部分的に除去することができる。クラブラン酸を含む発酵ブロスは、例えば上に記述したように、又はここに引用した参考文献のその引用参考文献を含めいずれかに記述されるように、クラブラン酸産生能力のある微生物の発酵により取得することができる。
他の視点では、本発明は、クラブラン酸、例えばアミン塩の形のクラブラン酸をクラブラン酸の医薬的に許容可能な塩へ転化することによる、構造式Ｉのクラブラン酸の医薬的に許容可能な塩を製造するプロセスであって、
―  アミン塩は、アミンを有機溶媒中のクラブラン酸の不純溶液と接触させることにより取得し、及び所望により該アミン塩を単離し、
―  有機溶媒中のクラブラン酸の不純溶液は、クラブラン酸の不純酸性水溶液を有機溶媒で抽出して取得し、
―  クラブラン酸の不純酸性水溶液は、発酵が終了した後、酸性化した発酵ブロスから、及び／又は発酵中に部分的に収穫し酸性化した発酵ブロスから取得し、
―  クラブラン酸の不純水溶液は、もし望ましければ酸性化に先立ち、予備濃縮し、
―  発酵ブロスは、有機溶媒で直接抽出するか、又は有機溶媒による抽出に先立って、少なくとも発酵ブロスに懸濁した固体を部分的に除去し、
―  クラブラン酸を含む発酵ブロスは、クラブラン酸産生能力のある微生物の発酵により取得する
ことを特徴とするプロセスを提供する。
他の視点では、本発明は、ｎ―ブタノール又はイソブタノールを溶媒として使うことを特徴とする、アルカリ塩の添加により、クラブラン酸のアミン塩から構造式Ｉｐのクラブラン酸のアルカリ塩を製造するプロセスを提供する。
0004319252.tif 000010
本発明による溶媒、すなわちｎ―ブタノール及びイソブタノールは、
―  クラブラン酸のアミン塩を溶解するのに驚くべきほど十分に極性が高く、
―  アルカリ塩を実用的に溶解せずに残すのに驚くべきほど十分に極性が低く、及び
―  異相共沸混合物を形成するための別の溶媒を添加することなしに、簡単な異相共沸精留により、乾燥形態で回収することができる
という利点を有する。
本発明プロセスにより取得したクラブラン酸のカリウム塩は、抗生物質として有用であり、特に、例えば他の抗生物質、例えばアモキシシリン、例えばアモキシシリン三水和物との混合において有用である。かかる混合物は、例えばＧＢ２，００５，５３８及びＷＯ９５／２８，９２７に記述されるような特有の特性をもつことができる。例えば投与用組成物に有用であるｎ―ブタノール又はイソブタノールを含むクラブラン酸カリウムのアモキシシリンとの混合物は新規である。ｎ―ブタノール又はイソブタノールを含むクラブラン酸カリウムとアモキシシリン、例えばアモキシシリン三水和物との、例えばＧＢ２，００５，５３８及びＷＯ９５／２８，９２７に記述される範囲における混合物は新規であり、本発明の部分を形成する。
他の視点では、本発明はｎ―ブタノール又はイソブタノールを含むクラブラン酸のカリウム塩とアモキシシリンを含む混合物を提供する。
例えばＧＢ２，００５，５３８及びＷＯ９５／２８，９２７に記述されたように（その内容はその引用先行技術を含めここで参考に使用されるものである）、医薬的に許容可能な担体及び／又は希釈剤を含む、クラブラン酸のカリウム塩とアモキシシリンの特定範囲の混合物を調製することができる。
クラブラン酸、例えばクラブラン酸の塩、例えばクラブラン酸のアミン塩の転化に使われる溶媒、すなわちｎ―ブタノール又はイソブタノールは、たとえ溶媒が任意に転化工程で添加された及び／又は転化反応で生成した水を含んでも、容易に回収することができる。これは、例えば共沸混合物を分離する装置、所謂共沸ヘッドを有する異相共沸精留カラム系を使って実施することができる。実質的に水を含まないｎ―ブタノール又はイソブタノール、及び実質的にｎ―ブタノール又はイソブタノールを含まない水を以下の実施例Ａに記述した様に例えば精留系で得ることができる。
他の視点では、本発明は、クラブラン酸をその医薬的に許容可能な塩へ転化するのに使われたn―ブタノール又はイソブタノールを共沸蒸留により回収して、実質的に水を含まないn―ブタノール又は実質的に水を含まないイソブタノール；及び実質的にn―ブタノール又はイソブタノールを含まない水を得るプロセスを提供する。
ここで引用した全ての参考文献は、その中で引用された参考文献を含めて、ここで本発明の視点のいずれかにおける参考に使用されるものである。
次の実施例では全ての温度は摂氏で与える。実施例により得たクラブラン酸カリウム中のn―ブタノール又はイソブタノールの含量は約０．２〜０．６重量％である。
実施例１
２―アミノ―２，４，４―トリメチルペンタン―（２Ｒ，５Ｒ，Ｚ）―３―（２―ヒドロキシエチリデン）―７―オキソ―４―オキサ―１―アザビシクロ［３，２，０］―ヘプタン―２―カルボキシレート（クラブラン酸のｔｅｒｔ―オクチルアミン塩）４．５ｇを、水２．５％を含む２―メチル―１―プロパノール５０ｍｌに溶解する。攪拌しながら約３０分以内に、活性炭（Ｎｏｒｉｔｅ  ＣＧ１）０．２２ｇを添加し、混合物を清澄に濾過する。１０℃で、約２５分の工程にわたり激しく攪拌し、２―エチル―ヘキサン酸カリウム塩を２モル濃度含む２―メチル―１―プロパノール溶液１０ｍｌを添加する。混合物を＋４℃に冷却し約２時間攪拌する。形成する沈澱を濾過し、アセトン５０ｍｌで洗浄し、１８時間、２０℃、１ｍｂａｒで乾燥した。クラブラン酸カリウムが得られる（1Ｈ―ＮＭＲで確認した）。
実施例２
２―アミノ―２，４，４―トリメチルペンタン―（２Ｒ，５Ｒ，Ｚ）―３―（２―ヒドロキシエチリデン）―７―オキソ―４―オキサ―１―アザビシクロ［３，２，０］―ヘプタン―２―カルボキシレート（クラブラン酸のｔｅｒｔ―オクチルアミン塩）１０ｇを、水２．５％を含む２―メチル―１―プロパノール１００ｇに溶解し、清澄に濾過する。２０℃で約３０分間激しく攪拌し、２―エチル―ヘキサン酸カリウム塩を２モル濃度含む２―メチル―１―プロパノール溶液２０ｍｌを添加する。混合物を＋４℃に冷却し、約２時間かけて結晶化を完了させる。形成する沈澱を濾過し、アセトン１００ｍｌで洗浄し、１６時間、２０℃、１ｍｂａｒで乾燥した。クラブラン酸カリウムが得られる（1Ｈ―ＮＭＲで確認した）。
実施例３
ｔｅｒｔ―ブチルアミン―（２Ｒ，５Ｒ，Ｚ）―３―（２―ヒドロキシエチリデン）―７―オキソ―４―オキサ―１―アザビシクロ［３，２，０］―ヘプタン―２―カルボキシレート（クラブラン酸のｔｅｒｔ―ブチルアミン塩）１０．０ｇを、水２％を含む２―メチル―１―プロパノール４０ｍｌに溶解し、清澄に濾過する。２０℃で、約１５分激しく攪拌して、２―エチル―ヘキサン酸カリウム塩を２モル濃度含む２―メチル―１―プロパノール溶液２０．２ｍｌを添加する。混合物を＋４℃に冷却し、約２時間攪拌する。形成する沈澱を濾過し、アセトン５０ｍｌで洗浄し、１５時間、２０℃、１ｍｂａｒで乾燥した。クラブラン酸カリウムが得られる（1Ｈ―ＮＭＲで確認した）。
実施例４
クラブラン酸のｔｅｒｔ―オクチルアミン塩１３．６ｇを、水５．０％を含むn―ブタノール１７０ｇに溶解する。活性炭（Ｎｏｒｉｔ  ＣＧ―１）０．４ｇを添加する。約３０分後に混合物を清澄濾過する。１０℃で約３０分以内に激しく攪拌しながら、２―エチル―ヘキサン酸カリウム塩を２モル濃度含むｎ―ブタノール溶液４０ｍｌを添加する。混合物を＋４℃に冷却し、約２時間撹拌する。形成する沈澱を濾過し、アセトン５０ｍｌで洗浄し、１８時間、２２℃、１ｍｂａｒで乾燥した。クラブラン酸カリウムが得られる（1Ｈ―ＮＭＲで確認した）。
実施例５
クラブラン酸のｔｅｒｔ―オクチルアミン塩５．５ｇを、水３．０％を含むイソブタノール６０ｍｌに温度約３５℃で溶解する。活性炭（Ｎｏｒｉｔ  ＣＧ―１）０．３２ｇを添加する。懸濁液を約１５分間攪拌し、濾過し、濾液をイソブタノール２０ｍｌで洗浄する。溶液を約１５℃に冷却し、酢酸０．２ｍｌを添加する。酢酸カリウム２．１ｇを、水０．２５ｍｌを含むイソブタノール５５ｍｌに溶解し、ゆっくりと反応混合物に添加する。混合物を約２℃に冷却し、約１時間攪拌する。形成する沈澱を濾過し、アセトン３０ｍｌで洗浄し、２０時間、約４５℃で真空乾燥する。クラブラン酸カリウムが得られる。
1Ｈ―ＮＭＲ（３００Ｍｈｚ、Ｄ2Ｏ中、３―トリメチルシリルプロピオン酸―ｄ4―Ｎａに対して）：
３．１４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．０Ｈｚ，Ｈ―６），３．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１７．０及び２．８ｐｐｍ，Ｈ―６’），４．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ＣＨ2―ＯＨ），４．９１〜４．９６（２Ｈ，ｍ，Ｈ―２及び＝ＣＨ），５．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，Ｈ―５）。
実施例６
クラブラン酸のｔｅｒｔ―オクチルアミン塩５．５ｇを、水３．０％を含むイソブタノール５５ｍｌに温度約３５℃で溶解する。活性炭（Ｎｏｒｉｔ  ＣＧ  １）０．３２ｇを添加する。懸濁液を約１５分攪拌し、濾過し、濾液をイソブタノール２０ｍｌで洗浄する。母液を約１０℃に冷却する。酢酸カリウム２．１ｇを、水０．２５ｍｌと酢酸０．３ｍｌを含むイソブタノール５５ｍｌに溶解し、ゆっくりと反応混合物に添加する。混合物を約５℃に冷却し、約２時間攪拌する。形成する沈澱を濾過し、アセトン３０ｍｌで洗浄し、２０時間、約４５℃で真空乾燥する。クラブラン酸カリウムが得られる（1Ｈ―ＮＭＲで確認される）。
実施例７
クラブラン酸のｔｅｒｔ―オクチルアミン塩５．５ｇを、水３．０％を含むブタノール５０ｍｌに溶解する。活性炭（Ｎｏｒｉｔ  ＣＧ  １）０．３２ｇを添加する。懸濁液を約１５分攪拌し、濾過し、濾液をブタノール２０ｍｌで洗浄する。母液を約１０℃に冷却する。酢酸カリウム２．１ｇを、ブタノール５０ｍｌに溶解し、この溶液をゆっくりと反応混合物に添加する。混合物を約４℃に冷却し、約２時間攪拌する。形成する沈澱を濾過し、アセトン３０ｍｌで洗浄し、２０時間、約４０℃で真空乾燥する。クラブラン酸カリウムが得られる（1Ｈ―ＮＭＲで確認される）。
実施例８
クラブラン酸のｔｅｒｔ―オクチルアミン塩５．５ｇを、水３．０％を含むブタノール５０ｍｌに溶解する。活性炭（Ｎｏｒｉｔ  ＣＧ  １）０．３２ｇを添加する。懸濁液を約１５分攪拌し、濾過し、濾液をブタノール２０ｍｌで洗浄する。溶液を約１０℃に冷却する。酢酸０．３ｍｌを添加する。酢酸カリウム２．１ｇを、ブタノール５０ｍｌに溶解し、この溶液を激しく攪拌しながら、ゆっくりと反応混合物に添加する。混合物を約５℃に冷却し、約２時間攪拌する。形成する沈澱を濾過し、アセトン３０ｍｌで洗浄し、２０時間、約４５℃で真空乾燥する。クラブラン酸カリウムが得られる（1Ｈ―ＮＭＲで確認される）。
実施例９
クラブラン酸のｔｅｒｔ―オクチルアミン塩５．５ｇを、水３．０％を含むイソブタノール５５ｍｌに、温度約３５℃で溶解する。酢酸カリウム２．１ｇを水０．２５ｍｌと酢酸０．２ｍｌを含むイソブタノール５５ｍｌに溶解する。酢酸カリウム溶液６．０ｍｌをクラブラン酸溶液に滴状で添加する。活性炭（Ｎｏｒｉｔ  ＣＧ  １）０．３２ｇを添加する。懸濁液を約１５分攪拌し、濾過し、濾液をイソブタノール２０ｍｌで洗浄する。溶液を約１０℃に冷却し、上に記述したように調製した酢酸カリウムの残った溶液をゆっくりと添加する。混合物を約５℃に冷却し、約２時間攪拌する。形成する沈澱を濾過し、アセトン３０ｍｌで洗浄し、２０時間、約４５℃で真空乾燥する。クラブラン酸カリウムが得られる（1Ｈ―ＮＭＲで確認される）。
クラブラン酸のカリウム塩はn―ブタノール又はイソブタノール中で、実施例１〜９に記述したのと類似の方法で、ｔｅｒｔ―オクチルアミン（２―アミノ―２，４，４―トリメチルペンタン）又はｔｅｒｔ―ブチルアミンの代りに、
Ｎ，Ｎ’―ジイソプロピル―エチレン―ジアミン
Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’―テトラメチル―ジアミノエタン
１，３―ビス（ジメチルアミノ）―２―プロパノール
から選択したアミンのクラブラン酸の塩を使用しても、取得することができる。
実施例Ａ―溶媒回収
ａ）実施例９により取得した一次母液１３０ｍｌを真空で蒸発させる。約１．５〜２％水を含むイソブタノールからなるこの蒸留物を、常圧で共沸ヘッドを有する精留カラムを経て蒸留し、共沸ヘッドで相分離する下層水相（９１％の水を含む）を系外に除去し；１５％の水を含む上層は精留装置にフィードバックする。共沸ヘッドで下層水相の更なる形成がなくなると、精留装置に残留するイソブタノールは水を含まなくなる。
ｂ）工程ａ）で除去される共沸ヘッドの下層水相（約９％イソブタノールを含む）は、水とイソブタノールの異相共沸組成（＝相分離の起こる前の組成：約イソブタノール７０％、水３０％）に達するまで、第二精留カラムの共沸ヘッドで蒸留によりイソブタノールを濃縮することができる。共沸ヘッドで得た上層（イソブタノール約８５％と水を含む）を除去し、下層を精留装置にフィードバックする。精留装置の残留物には実質的にイソブタノールを含まない水が得られる。共沸ヘッドで得た上層は上記したように第二精留を行うことができる。上記したのと類似の方法は、水及びn―ブタノールの分離にも使うことができる。この方法で実質的に水を含まないイソブタノール又はn―ブタノール；及び実質的にイソブタノール又はn―ブタノールを含まない水を得ることができる。