(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ’
【化１】
0004249277.tif 000013
で表わされる（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル) フエニル）- ４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル) アセチルアミノ)-３- フエニルプロピオン酸- エチルエステル- マレイン酸水素塩（エチルエステル：マレイン酸のモル比＝約１：１）又はその生理学的に許容し得る塩。
【請求項２】
式ＩＩ
【化２】
0004249277.tif 000014
（式中、ＨＶはマレイン酸と異なる任意の無機又は有機酸であり、さらに（Ｓ）立体配置がイミダゾリジン環中のキラル中心にあり、そして（Ｓ）立体配置がプロピオン酸単位中のキラル中心にある。）
で表わされる化合物を用いてマレイン酸及び（又は）マレイン酸塩とのアニオン交換を行う、請求項１記載の式Ｉ’で表わされる化合物の製造方法。
【請求項３】
アニオン交換のために、式ＩＩで表わされる化合物をマレイン酸で負荷されたイオン交換体を通してクロマトグラフィー分離する、請求項２記載の方法。
【請求項４】
アニオン交換のために、式ＩＩで表わされる化合物を溶剤中でマレイン酸又はマレイン酸塩と接触させる、請求項３記載の方法。
【請求項５】
アニオン交換を式ＩＩｂ
【化３】
0004249277.tif 000015
（式中、（Ｓ）立体配置がイミダゾリジン環中のキラル中心にあり、そして（Ｓ）立体配置がプロピオン酸単位中のキラル中心にある。）
の酢酸塩を用いて行う、請求項２〜４のいずれか１つに記載の方法。
【請求項６】
式ＩＩで表わされる化合物を製造するために、式ＩＩＩ
【化４】
0004249277.tif 000016
（式中、（Ｓ）立体配置がイミダゾリジン環中のキラル中心にあり、そして（Ｓ）立体配置がプロピオン酸単位中のキラル中心にある。）
で表わされる化合物及び式ＩＶ
【化５】
0004249277.tif 000017
（式中、（Ｓ）立体配置がイミダゾリジン環中のキラル中心にあり、そして（Ｓ）立体配置がプロピオン酸単位中のキラル中心にある。）
で表わされる化合物をカップリングして、式Ｖ
【化６】
0004249277.tif 000018
（式中、（Ｓ）立体配置がイミダゾリジン環中のキラル中心にあり、そして（Ｓ）立体配置がプロピオン酸単位中のキラル中心にある。）
で表わされる化合物を生成させ、この式Ｖで表わされる化合物をヒドロキシルアミンで式（ＶＩ）
【化７】
0004249277.tif 000019
（式中、（Ｓ）立体配置がイミダゾリジン環中のキラル中心にあり、そして（Ｓ）立体配置がプロピオン酸単位中のキラル中心にある。）
で表わされる化合物に変え、この式（ＶＩ）で表わされる化合物を水素化し、式ＨＶの酸を付加して式ＩＩで表わされる化合物に変える、請求項２〜５のいずれか１つに記載の方法。
【請求項７】
式（ＶＩ）で表わされる化合物を酢酸の存在下に水素化して、請求項５記載の式ＩＩｂの化合物に変える、請求項６記載の方法。
【請求項８】
血小板凝集を阻害する又は血栓症を防止するための医薬の製造に、請求項１記載の式Ｉ’で表わされる化合物又はその生理学的に許容し得る塩を使用する方法。
【請求項９】
冠状血管系又は脳血管系の疾患、末梢動脈疾患又は静脈もしくは微小循環血管の疾患を治療又は予防するための医薬、あるいは透析又は体外循環の際に使用される医薬を製造するために、請求項１記載の式Ｉ’で表わされる化合物又はその生理学的に許容し得る塩を使用する方法。
【請求項１０】
有効物質として、請求項１記載の式Ｉ’で表わされる化合物又はその生理学的に許容し得る塩１種以上と薬学的に許容し得る担体物質及び添加物質を一緒に含有する、血小板凝集を阻害する又は血栓症を防止するための薬学的調製物。
【請求項１１】
適する投薬形態にある、請求項１０記載の薬学的調製物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は式Ｉ
【０００２】
【化８】
0004249277.tif 000002
【０００３】
（式中ＨＢはマレイン酸である。）
の３-(２-(４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル塩及びその生理学的に相容な塩、その製造方法及びこれを医薬として使用する方法に関する。
【０００４】
【従来の技術】
３-(２-(４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- ハイドロクロライド及びその薬理学的性質は、すでにＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ９４／０３４９１（ＷＯ−Ａ−９５／１４００８）中に記載されている。しかし（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステルの、（Ｒ)-３-(２-(（Ｒ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル、（Ｓ)-３-(２-(（Ｒ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステルの及び（Ｒ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステルのハイドロクロライド塩は、これらが無定形であり、結晶状態で得られないという欠点を有する。したがって上記ハイドロクロライド塩を、結晶化によって精製することができず、それ故に、その構成成分の純度が法規で明確に規定されている医薬中の有効物質として、そして薬理学的に有効な物質の工業的規模での合成−その単離- 及び精製処理に於て、同様に法規によって明確に規定された条件が守られねばならない−に於ける目的生成物としてほとんど使用することができない。更にその物理的性質及び取り扱い性によって、無定形ハイドロクロライド塩は、薬学的調製物の製剤製造、たとえば錠剤の製造にあまり適していない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
したがって本発明の課題は、容易に所望の純度を維持することができ、そして工業的規模での合成に関連する要求及び製剤製造に対する要求を満足させることができる、３-(２-(４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステルを適する非吸湿性の形で製造することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
驚くべきことに、この課題は３-(２-(４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステルのマレイン酸塩を、特に塩─────これは塩の形で（すなわち酸付加塩の形で）このエチルエステルとマレイン酸を約１：１のモル比で含有する──────の形で、製造することによって解決される。
【０００７】
したがって本発明は、すべての立体異性体の形での、及びそれらの任意の割合の混合物の形での式Ｉ
【０００８】
【化９】
0004249277.tif 000003
【０００９】
（式中ＨＢはマレイン酸である。）
の３-(２-(４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル塩及びその生理学的に相容な塩に関する。
式Ｉの化合物は結晶質であって、吸湿性でないので、前述の欠点を有していない。したがってこれを限定された条件下で結晶化し、再結晶によって精製することができ、医薬中への使用及び医薬の製剤製造に適する。
【００１０】
本発明は、式Ｉの化合物のすべての立体異性体を包含する。すなわち（Ｓ）立体配置をイミダゾリジン環中のキラル中心にかつ（Ｓ）立体配置をプロピオン酸単位中のキラル中心に有する異性体、（Ｒ）立体配置をイミダゾリン環中のキラル中心に、かつ（Ｓ）立体配置をプロピオン酸単位中のキラル中心に有する異性体、（Ｓ）立体配置をイミダゾリン環中のキラル中心にかつ（Ｒ）立体配置をプロピオン酸単位中のキラル中心に有する異性体及び（Ｒ）立体配置をイミダゾリン環中のキラル中心にかつ（Ｒ）立体配置をプロピオン酸単位中のキラル中心に有する異性体である。好ましい形態は、（Ｓ）立体配置をイミダゾリン環中のキラル中心にかつプロピオン酸単位中のキラル中心に有する異性体である。それはすなわち式Ｉａ
【００１１】
【化１０】
0004249277.tif 000004
【００１２】
（式中、ＨＢはマレイン酸である。）
の（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル塩及びその生理学的に相容な塩である。
本発明は、式Ｉの立体異性体２種以上を任意の量割合で有するすべての混合物も包含する。
【００１３】
３-(２-(４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステルとマレイン酸とをモル比約１：１で含有する式Ｉの新規化合物に於て、マレイン酸の２個のＣＯＯＨ基の１つは、塩基性アミジノ基によって中和され、塩の形で、すなわち負に荷電したカルボキシレート基の形で存在する（マレイン酸のプロトン化後に、エチルエステル中のアミジノ基は陽に荷電したアミジニウム基として存在する。）。マレイン酸の２個のＣＯＯＨ基のもう１つは、新規化合物中に酸の形で、すなわち１個のＣＯＯＨ基として存在することができるか又は塩の形で、すなわちカルボキシレート基として存在することができる。本発明は、依然としてＣＯＯＨ基１個が存在し、好ましい形であるマレイン酸水素塩及びこの塩から導かれ、かつこの塩と無機塩基又は有機塩基とから生じる生理学的に許容し得る塩に関する。
【００１４】
この際、生理学的に許容し得る塩は、特に薬学的に使用可能な又は非毒性塩である。この塩中に存在していてよいカチオンはアルカリ金属又はアルカリ土類金属、たとえばナトリウム、カリウム、マグネシウム及びカルシウムから、アンモニアから又は生理学的に許容し得る有機アミン、たとえばトリエチルアミン、エタノールアミン又はトリス-(２- ヒドロキシ- エチル)-アミンから導かれる。式Ｉの化合物の塩は、下記の製造方法で、直接得ることができる。この場合たとえばマレイン酸の適する塩を使用するか又は適する塩基を添加する。しかし塩は、最初に製造された式Ｉのマレイン酸水素塩（式中１個のＣＯＯＨがまだ存在する。）を適する塩基、たとえばアルカリ金属- 又はアルカリ土類金属- 水酸化物、 -炭酸塩又は- 炭酸水素塩、アルカリ土類金属の酸化物又はアミンで処理して得ることができる。この際ＣＯＯＨ基を全部又は部分的にのみ塩の形に変化させることができる。この様な塩生成が行われる範囲は、使用目的に応じて要求されるｐＨに依存する。遊離のＣＯＯＨ基  −  再度全部に又は一部だけ  −  の塩の形への変化も、薬剤の製造で式Ｉのマレイン酸水素塩が塩基性物質と一緒に使用された時初めて生じる。
【００１５】
式Ｉの化合物は、式ＩＩ
【００１６】
【化１１】
0004249277.tif 000005
【００１７】
（式中ＨＶはマレイン酸と異なる任意の無機又は有機酸である。）
の化合物を用いてマレイン酸及び（又は）マレイン酸塩とのアニオン交換を当業者に公知の慣用方法に従って行うことによって製造される。式ＨＶの酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸又はメタンスルホン酸が挙げられる。式ＩＩの化合物（式中ＨＶは塩酸又は酢酸である。）として式ＩＩａ及びＩＩｂ
【００１８】
【化１２】
0004249277.tif 000006
【００１９】
の化合物が夫々挙げられる。式ＩＩの出発化合物を、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ９４／０３４９１及びＰＣＴ／ＥＰ９６／０１５７２（ＷＯ−Ａ−９６／３３９７６）に、たとえば塩化物（塩酸との塩）又は酢酸との塩に対して記載されている様に製造することができる。この点で、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ９４／０３４９１及びＰＣＴ／ＥＰ９６／０１５７２の内容は、全部が本発明の構成の一部である。マレイン酸のナトリウム塩、リチウム塩、カリウム塩及びアンモニウム塩又はマレイン酸と有機アンモニウムカチオンとの塩は、たとえばアニオン交換の際にマレイン酸塩として使用される。この場合マレイン酸を使用するのが好ましい。
【００２０】
アニオン交換の際に、式ＩＩの化合物の溶液を、たとえばマレイン酸で負荷されたイオン交換体を通してクロマトグラフィー分離することができる。この目的のための適する溶剤としては、水、アルコール、たとえばメタノール、エタノール、ブタノール又はｉ- プロパノール及びこれらの溶剤の混合物、たとえば水／アルコール混合物である。市場で入手できるアニオン- 交換体を使用することができる。この交換体は予め慣用法でマレイン酸型に変えられるか又はくり返し使用でその都度この型に再生される。アニオン交換体を通常−１０〜４０℃、特に−５〜３０℃、好ましくは０〜２５℃の温度で実施する。所望の生成物を、必要ならば濃縮の後にイオン交換クロマトグラフィーの溶離液から、たとえば冷却及び（又は）沈澱によって結晶化し、次いで濾過又は遠心分離によって単離する。
【００２１】
アニオン交換の際、式ＩＩの化合物を、たとえば溶剤中でマレイン酸及び（又は）マレイン酸塩と接触させることもできる。この場合、溶剤とは、溶剤２種又はそれ以上の混合物も意味する。適する溶剤の例は水、アルコール、たとえばＣ- 原子数１〜８のもの、特にＣ- 原子数１〜６のもの、好ましくはＣ- 原子数１〜４のもの、エーテル、たとえばジオキサン、テトラヒドロフラン、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル及びジエチレングリコールジメチルエーテル、ケトン、たとえばアセトン又はブタノン、ニトリル、たとえばアセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、及びこれらの溶剤の混合物、たとえば水とアルコールの混合物である。使用することができるアルコールの例は、メタノール、エタノール、ｉ- 及びｎ- プロパノール、ｎ- 、ｉ- ｓ- 及びｔ- ブタノール、ｎ- 、ｉ- 、ｓ- 及びｔ- ペンタノール、ｎ- ヘキサノール、２- エチルブタノール、２- エチルヘキサノール、イソオクチルアルコール、シクロペンタノール、メチルシクロヘキサノール（混合物）又はベンジルアルコールである。
【００２２】
この処理で、式ＩＩの化合物：マレイン酸又はマレイン酸塩のモル比は、通常１：１〜１：１０、好ましくは１：１〜１：２、特に好ましくは約１：１である。式ＩＩの化合物を、予め加え、次いでマレイン酸又はマレイン酸塩、又はマレイン酸とマレイン酸塩との混合物を加えるか又はこの工程の逆を行うことができ、しかも２つの成分を反応容器中に同時に配量添加することもできる。成分を溶液の形で接触させることができるがイオン交換を行う方法に応じて、予め懸濁液を加え及び（又は）懸濁液又は固体を添加するのが有利である。アニオン交換を通常−１０〜４０℃、特に−５〜３０℃、好ましくは０〜２５℃の温度で実施する。単離のために、得られたマレイン酸塩を必要ならば濃縮の後に、たとえば冷却及び（又は）沈澱によって結晶化し、次いで濾過又は遠心分離によって分離する。要求に応じて、更に洗滌し、所望の場合に再結晶又は蒸解によって精製を行うことができる。
【００２３】
式Ｉの新規マレイン酸塩の好ましい製造方法で、式ＩＩｂの酢酸塩を出発化合物として使用することができる。この際、塩とマレイン酸を溶剤中で接触させるのが特に好ましい。
好ましい処理で、アニオン交換で使用される式ＩＩの化合物が次の工程で得られる。式ＩＩＩ
【００２４】
【化１３】
0004249277.tif 000007
【００２５】
の化合物──これはＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ９４／０３４９１及びＰＣＴ／ＥＰ９６／０１５７２中の記載に従って製造される──を、水結合剤、たとえばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｏ-(（シアノ（エトキシカルボニル）メチレン）アミノ)-Ｎ，Ｎ，Ｎ',Ｎ'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＯＴＵ）又は無水プロピルホスホン酸（ＰＰＡ）の存在下にこの様な反応に慣用の条件下で式ＩＶ
【００２６】
【化１４】
0004249277.tif 000008
【００２７】
の化合物──これは文献（たとえば E. Juaristi, D. Quintana, J. Escalante,Aldrichimica Acta, Vol. 27, No. 1, 1994, 3-11 ; D. C. Cole, Tetrahedron,Vol. 50, 1994, 9517-9582参照）に記載された方法に従って製造される──とカップリングして、式Ｖ
【００２８】
【化１５】
0004249277.tif 000009
【００２９】
を生じることができる。この際（Ｒ）立体配置又は（Ｓ）立体配置は夫々式ＩＩＩ及びＩＶ及びＶの化合物のイミダゾリジン環及びプロピオン酸単位中のキラル中心に存在することができる。式ＩＩＩ及びＩＶの化合物を純粋な立体異性体（対掌体）の形で又は立体異性体混合物の形で、すなわち、たとえばラセミ形で又は光学的に活性な形で使用することができる。
【００３０】
式Ｖの化合物を、たとえばニトリルを適する溶剤中で、たとえばアルコール、たとえばメタノール又はエタノール中で、ヒドロキシルアミンを用いて又はヒドロキシルアンモニウム塩及び塩基、たとえば第三アミン又はアルカリ金属- 水酸化物、 -炭酸塩又は -炭酸水素塩を用いてアミドオキシムに変える慣用方法に従って式ＶＩ
【００３１】
【化１６】
0004249277.tif 000010
【００３２】
の化合物に変えることができる。この化合物を慣用条件下で反応させて、たとえば金属触媒の存在下に水素で水素化し、式ＨＶの酸を添加し、特に式ＨＶの酸の存在下に水素化して式ＩＩの化合物に変えることができる。高価な金属触媒、たとえば木炭上のパラジウムを、大気圧又は好ましくは高められた圧力下に行われる水素化で金属触媒として使用することができる。その際式ＩＩｂの化合物の好ましい製造に関して、たとえば適する溶剤中で酢酸の存在下に又は溶剤として酢酸中でも水素添加を行うことができる。
【００３３】
式Ｉの化合物の薬理学的性質は、これらがマレイン酸塩であるということに左右されない。たとえば対応する塩酸塩のように、たとえば式Ｉの新規化合物はＡｒｇ- Ｇｌｙ- Ａｓｐ- 含有たん白質、たとえばフィブロネクチン、フィブリノーゲンの相互作用に基づく細胞／細胞接着を又はフォンビルノブランド(vonWillebrand) ファクターを、いわゆるインテグリン(integrin)を用いて阻害することができる。インテグリンは経膜代謝糖たん白質、すなわちＡｒｇ- Ｇｌｙ- Ａｓｐ含有細胞マトリックスたん白質に対するレセプターである（E. Ruoslahti及び M. D. Pierschbacher, Science 238(1987)491-497 ; D. R. Phillips, I. F. Charo, L. V. Parise及び L. A. Fitzgerald, Blood 71(1988)831-843) 更にこれらは他の接着性たん白質、たとえばビトロネクチン、コラーゲン及びラミニンの対応するレセプターへの結合を種々の細胞タイプの表面上で阻害する。特に、式Ｉの新規化合物は血小板凝集を阻害し、血栓症を防止するのに適する。更に、式Ｉの化合物は癌細胞の転移を阻害する。更に、本発明は、式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に相容な塩をこの目的に使用する方法、これを血小板凝集を阻害する血栓症を防止する又は癌細胞の転移を阻害する医薬を製造することに使用する方法に関する。
【００３４】
式Ｉの化合物又はその生理学的に相容な塩を、動物、好ましくは哺乳類、特にヒトに医薬として単独で、相互に混合して又は薬学的調製物の形で投与することができ、これは経口又は非経口使用を可能にし、そして有効成分として少なくとも１個の式Ｉの化合物又はその生理学的に相容な塩の有効薬用量を、慣用の薬学的に申し分のない担体物質及び添加物質と共に含有する。本発明は特に医薬として使用するための式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に相容な塩、並びに有効物質として式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に相容な塩１種又はそれ以上と薬学的に容認された担体物質及び添加物質及び場合により更に他の薬理学的に有効な物質又はそれ以上を一緒に含有する薬学的調製物に関する。この様な薬学的調製物は通常式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に相容な塩を約０．５〜９０重量％含有する。
【００３５】
医薬は、たとえば丸剤、錠剤、ラック錠剤、糖衣丸、顆粒、硬- 及び軟ゼラチンカプセル、溶液、シロップ、エマルジョン又は懸濁液形で経口投与することができる。しかし投与を直腸に、たとえば坐剤の形で、又は腸管外に、たとえば注射溶液、注入溶液、マイクロカプセル又はロッドの形で、又は経皮的に、たとえば軟膏又はチンキ又はたとえば鼻スプレー又はエアゾール混合物の形で行うこともできる。
【００３６】
薬学的調製物は、別の方法で公知方法で製造される。この際、薬学的に不活性な無機及び（又は）有機担体物質及び添加物質を使用し製造することができる。これを有効物質と一緒にして所望の投与形態とする。丸剤、錠剤、フイルム錠剤、糖衣丸及び硬ゼラチンカプセルの製造に、乳糖、とうもろこしでんぷん又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩等々を使用することができる。軟ゼラチンカプセル及び坐剤に対する担体物質は脂質、ロウ、半固体の及び液状ポリオール、天然又は硬化油等々である。溶液及びシロップの製造に対する担体物質としてはたとえば水、ショ糖、転化糖、ブドウ糖、ポリオール等々が適当である。注射溶液の製造に対する担体物質としてはたとえば水、アルコール、グリセリン、ポリオール、植物油等々が適当である。マイクロカプセル、インプラント又はロッドに対する担体物質としては、たとえばグリコール酸及び乳酸から成る混合ポリマーが適当である。
【００３７】
薬学的調製物は有効物質及び賦形剤と共に更に添加物質、たとえば増量剤、砕解剤、結合剤、滑剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、保存剤、甘味料、着色料、風味剤又は香料、増粘剤、希釈剤、緩衝物質、更に溶剤又は溶解媒体、緩慢放出作用を達成するための剤、並びに浸透圧の変化のための塩、被覆剤又は酸化防止剤を含有することができる。この調製物は２種又はそれ以上の式Ｉなる化合物及び（又は）その生理学的に相容な塩及び更に１又は数種のその他の治療上有効な物質を含有することもできる。
【００３８】
この様なその他の治療上有効な物質はたとえば血流促進剤、たとえばジヒドロエルゴクリスチン、ニセルゴリン、ニコチン酸及びそのエステル、ベンシクラン、ナフチドロフリル、プロスタサイクリン誘導体及びＰＧＥ１ 誘導体；抗狭心性化合物、たとえばイソソルビドジニトラート、イソソルビドモノニトラート、グリセロールニトラート、モルシドミン、ニフエジピン及びヴエラパミル；β- 遮断剤、たとえばプロプラノロール、オキシプレノロール、アテノロール、メトプロロール及びペンブトロールである。更に、化合物をＡＣＥ阻害剤、たとえばカプトプリル、ラミプリル、エナラプリル、リシノプリル及びトランドラプリル、血栓症作用阻害剤、たとえばアセチルサリチル酸、チクロピジン及びクロピドグレル、及び血液凝固阻害剤、たとえばヘパリン及び低分子量ヘパリンと共に配合することができる。
【００３９】
薬用量は広い範囲内で変化することができ、夫々個々の場合個人の症状に合わせる。一般に経口投与で一日薬用量約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．３〜３ｍｇ／ｋｇ体重、特に０．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重が有効な結果を生じるために適切である。静脈内適用に於て一日薬用量は一般に約０．０１〜０．６ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．０５〜０．３ｍｇ／ｋｇ体重、特に０．０５〜０．１ｍｇ／ｋｇ体重である。一日薬用量は一般に、特により多くの量を適用する場合、数回、たとえば２，３又は４回の投与に分ける。場合により各個の作用に応じて記載された一日薬用量から上下にずれることができる。薬学的調製物は一般に薬用量あたり式Ｉの有効物質又はその塩を０．２〜５００ｍｇ、好ましくは１〜２００ｍｇ、特に１０〜１００ｍｇを含有する。
【００４０】
新規化合物は、たとえば心臓血管系の疾患、冠状血管系の疾患又は脳血管系の疾患、又は末梢血管系の疾患の抑制又は予防に使用することができる。これらは、急性的に血栓症の危険がある時に及び慢性的に動脈硬化症及び血栓症の予防で、たとえば動脈血管疾患、たとえば急性心筋梗塞、心筋梗塞の第二予防、溶解及び拡張後の際咬合予防（ＰＴＣＡ）、不安定な狭心性、一過性虚血性発作、博動、冠状バイパスの際咬合予防、肺動脈塞栓症、末梢動脈閉塞性疾患、解剖する動脈瘤の予防及び治療で；更に静脈及びマイクロ環状血管障害、たとえば極度の静脈血栓症、伝染された静脈内血餅、術後及び分娩後の外傷、外科又は感染ショック、敗血症の治療で又は反応異常血小板を有する疾患、血栓性血小板減少紫斑病、子かん前症、生理前症候群、透析又は体外循環の治療で使用され、更に癌手術の間及び癌で予防的に使用される。これらの疾患の治療又は予防に式Ｉの新規化合物、及び（又は）その生理学的に相容な塩を使用することは、上記疾患の治療又は予防のための医薬の製造に使用することと同様に本発明の対象の１部である。特に、本発明は冠状血管系の疾患又は脳血管系の疾患、末梢動脈疾患又は静脈もしくは微小循環血管の疾患を治療又は予防するための、あるいは透析又は体外循環の際に使用するための医薬の製造にこれらを使用することに関する。
【００４１】
式Ｉの化合物を特に血小板凝集及び血小板へのフィブリノーゲンの付着に於けるその阻害作用について（ゲル−濾過された血小板を、ＡＤＰ又はトロンビンで活性化されたヒトのドナー血液から使用する。）、並びに血小板凝集阻害及び血栓症阻害へのその生体内作用を試験する。
【００４２】
【実施例】
生成物のすべては、マススペクトル及びＮＭＲスペクトルによって同定する。
〔例１〕
（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- マレイン酸水素塩
【００４３】
【化１７】
0004249277.tif 000011
【００４４】
アンバーライト（登録商標）ＩＲＡ９３（遊離塩基、Fluka)１００ｇを２Ｍマレイン酸溶液１０００ｍｌと共に室温で１０分間攪拌する。マレイン酸溶液を吸引濾取し、イオン交換体を同一方法で２Ｍマレイン酸溶液で更に２回処理する。次いでイオン交換樹脂を中性になるまで水洗する。（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- ハイドロクロライド１．５１ｇ（３ｍｍｏｌ）を水１５ｍｌ中に溶解する。この溶液を、上述の様にマレイン酸が装填されたアンバーライトＩＲＡ９３  ８０ｍｌで満たされたイオン交換カラムに通す。次いでカラムを水で溶離する。夫々２５ｍｌの分画を集める。純粋な（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- マレイン酸水素塩を分画２及び３から室温で結晶化する。結晶を濾過によって単離する。
収量：７７１ｍｇ白色結晶性固体（４４％）
融点：２２８℃．
〔α〕Ｄ ＝−５４．４ｏ （ｃ＝１；メタノール；２２℃）
ＦＡＢ- ＭＳ：４６６（Ｍ＋Ｈ）＋  
Ｘ線結晶構造分析によって、化合物が（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- マレイン酸水素塩（エチルエステル：マレイン酸のモル比１：１を有する）であり、これは上記式に相当する次のイオン式によっても表わすことができることが確認される。
【００４５】
【化１８】
0004249277.tif 000012
【００４６】
更に、純粋な（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２, ５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- マレイン酸水素塩７４０ｍｇを、分画２及び３の母液から及び分画４〜１２から水溶液の凍結乾燥によって単離することができる。
全収量：１．５１１ｇ（８７％）
〔例２〕
（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- マレイン酸水素塩
２ａ．  （Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４- シアノフエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル
（Ｓ)-３- アミノ -３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- ハイドロクロライド７．７ｋｇ（３３．５ｍｏｌ）を、予め容器中に加え、酢酸エチル１５ｌ中に２-(（Ｓ)-４-(４- シアノフエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル) 酢酸９．１４ｋｇ（３３．５モル）を有する溶液を加える。Ｎ- エチルモルフィン７．７２ｋｇ（８．５４ｌ；６７モル）を２０〜２３℃の内部温度でポンプ送入する。混合物を１５分間攪拌し、その後Ｏ-(（シアノ（エトキシカルボニル）メチレン）アミノ -Ｎ，Ｎ，Ｎ',Ｎ'-テトラメチルウロニウム- テトラフルオロボラート（ＴＯＴＵ）１１ｋｇ（３３．５モル）を２０〜２３℃で入口閉じて一度に加える。次いで混合物を２０〜２３℃の温度で２時間攪拌し、その後水５０ｌを加え、混合物を２０〜２３℃の温度で３０分間攪拌する。メチルｔ- ブチルエーテル５０ｌを加え、混合物を８〜１２℃の温度で２時間攪拌する。白色懸濁液を遠心分離機に移し、遠心分離する。濾過ケーキを水２８ｌで、次いでエタノール２８ｌで、最後に水５６ｌで洗滌する。生成物を、窒素流中で４０℃で減圧乾燥器中で乾燥する。
収量：９．８４ｋｇ（８５％）
ＦＡＢ- ＭＳ：４４９（Ｍ＋Ｈ）＋
２ｂ．  （Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- ヒドロキシイミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル
エタノール１２０ｌを予め容器中に加える。室温で（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４- シアノフエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル１２ｋｇ（２６．７８６ｍｏｌ）を攪拌しながら容器に加える。ヒドロキシアミン- ハイドロクロライド３．７４ｋｇ（５３．８１３モル）及びトリエチルアミン５．４４ｋｇ（７．４５ｌ；５３．８６モル）を加える。反応混合物を還流加熱し、８０℃で２時間攪拌する。エタノール９０ｌを浴温度５０℃で減圧蒸留する。残存する混合物を酢酸エチル２２０ｌ中に取り、この混合物を夫々５０ｌの水で３回抽出する。酢酸エチル相を減圧でかつ浴温度５０℃で蒸発して３ｌとする。夫々１０ｌのトルエンで４回処理し、蒸発乾固する。
収量：１１．１ｋｇ（８５％）
ＦＡＢ- ＭＳ：４８２（Ｍ＋Ｈ）＋
２ｃ．  （Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- 酢酸塩
（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- ヒドロキシイミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステルを氷酢酸７０ｌ中に溶解し、この溶液を１２５ｌオートクレーブ中に入れる。パラジウム／木炭（１０％；５０％水）１．０ｋｇ及び氷酢酸５ｌの懸濁液をこの溶液に加える。混合物を１５時間、５０℃及び水素圧１０バールで水素添加する。触媒を窒素下に加圧フィルターによって吸引濾過し、氷酢酸５ｌで洗滌する。濾液を回転蒸発器で浴温度６０℃で完全に減圧蒸発する。残留物をアセトン３０ｌ中に溶解し、溶液を３０分かけて２０℃で、メチルｔ- ブチルエーテル２００ｌに加える。次いで混合物を室温で１時間攪拌し、沈澱した生成物を遠心分離する。次いで濾過ケーキをメチルｔ- ブチルエーテル１０ｌで洗滌し、遠心分離機から除き、減圧で乾燥する。生成物１０．１ｋｇ（８５％）が得られる。ＦＡＢ- ＭＳ：４６６（Ｍ＋Ｈ）
精製のために、アセトン９０ｌを予め容器に加え、上記生成物１０．１ｋｇを加える。混合物を５０℃に加熱し、１時間攪拌する。次いで攪拌を２０℃のジャケット温度で一晩続け、その後固体を遠心分離機を用いて単離するち。アセトン１０ｌで洗滌する。アセトン- 湿性生成物を、アセトン５０ｌと攪拌し、還流温度（５７℃）に加熱し、１時間攪拌する。混合物を２４時間、攪拌下に冷却し、１時間１５℃で攪拌し、生成物を遠心分離機を用いて単離する。濾過ケーキをメチルｔ- ブチルエーテル１０ｌで洗滌し、遠心分離から除き、０．１バール及び４０℃で減圧乾燥する。生成物を粉砕する。
収量：７．２ｋｇ（６０％）
ＦＡＢ- ＭＳ：４６６（Ｍ＋Ｈ）＋
２ｄ．  （Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- マレイン酸水素塩
（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- 酢酸塩７５．６８ｇ（１４４ｍｍｏｌ）を、水３４０ｍｌ中に溶解する。溶液を濾過し、水４８ｍｌ中にマレイン酸（９９％）１６．８７ｇ（１４４ｍｍｏｌ）を有する溶液を攪拌しながら加える。混合物を室温で１時間攪拌し、次いで一晩氷浴中で放置する。生成物が結晶性固体として溶液から沈澱する。吸引濾取し、高減圧下に五酸化リンによって高減圧下で乾燥する。
収量：８０．７ｇ白色結晶性固体（９６％）
融点：２２８℃
〔α〕Ｄ ＝−５４．４ｏ （ｃ＝１；メタノール；２２℃）
ＦＡＢ- ＭＳ：４６６（Ｍ＋Ｈ）＋
第２ａ工程で使用される出発化合物
Ｉ．（Ｓ)-３- アミノ -３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- ハイドロクロライド
Ｉａ．（Ｒ)-２- アミノ -２- フエニルエタノール
水素化ホウ素リチウム２０ｇ（９２０ｍｍｏｌ）を、無水テトラヒドロフラン４２０ｍｌ中に溶解する。トリメチルクロロシラン２３３．５ｍｌ（１．８４モル）を攪拌しながら滴加し、次いで（Ｒ)-フエニルグリシン６９．５ｇ（０．４６モル）を、４時間以内に少しづつ分けて加える。反応混合物を室温で一晩攪拌する。メタノール６９０ｍｌを加え、混合物を室温で２時間攪拌し、減圧で濃縮する。残留物を２０％酢酸カリウム水溶液６９０ｍｌ中に攪拌しながら溶解する。水相を３回酢酸エチルで抽出する。一緒にされた有機相を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧で濃縮する。
収量：４１．２ｇ（６５．３％）
ＦＡＢ- ＭＳ：１３８（Ｍ＋Ｈ）＋
Ｉｂ．  （Ｒ)-２- ベンジルオキシカルボニルアミノ -２- フエニルエタノール  （Ｒ)-２- アミノ -２- フエニルエタノール４０．５ｇ（２９５モル）を無水ジメチルホルムアミド３８５ｍｌ中に溶解する。Ｎ-(ベンジルオキシカルボニルオキシ)-スクシンイミド７３．５ｇ（２９５ｍｍｏｌ）を０℃で攪拌しながら加え、混合物を０℃で１時間攪拌する。氷浴を除き、混合物を４８時間室温で放置する。反応溶液を減圧で濃縮し、残留物を酢酸エチル５００ｍｌ中に取る。有機相を１０％クエン酸水溶液で２回、水で１回洗滌する。無水硫酸ナトリウムによって乾燥し、濃縮する。生じる結晶性粗生成物（８２．３ｇ）を再度酢酸エチル中に溶解する。有機相を１０％クエン酸水溶液で２回、水で１回洗滌する。次いで再結晶を酢酸エチル／石油エーテルから行う。
収量：７４．６ｇ（９３．３％）
ＦＡＢ- ＭＳ：２７２（Ｍ＋Ｈ）＋
Ｉｃ．  ((Ｒ)-２- ベンジルオキシカルボニルアミノ -２- フエニルエチル)-４- メチルフエニルスルホネート
（Ｒ)-２- ベンジルオキシカルボニルアミノ -２- フエニルエタノール５３．９ｇ（１９８．７ｍｍｏｌ）を、メチレンクロライド５００ｍｌとピリジン８０．３ｍｌ（９９３．５ｍｍｏｌ）との混合物中に溶解する。メチレンクロライド２４０ｍｌ中のトシルクロライド４５．５ｇ（２３８．４ｍｍｏｌ）を、０℃で攪拌しながら加え、混合物を室温で７時間攪拌する。更にトシルクロライド１１．３６ｇ（５９．６１ｍｍｏｌ）を加える。混合物を０℃で５時間攪拌する。次いで室温で一晩放置し、減圧で濃縮する。残留物を酢酸エチル中に取る。有機相を１０％クエン酸水溶液で３回、水で２回洗滌し、無水硫酸マグネシウムによって乾燥し、減圧で濃縮する。残留物をジエチルエーテルと共に粉砕し、吸引濾取し、ジエチルエーテルで洗滌し、五酸化リンで乾燥する。収量：６０．９ｇ（７２％）。母液を濃縮し、残留物をｎ- ヘプタン／酢酸エチル（６：４）中に取り、シリカゲルによってクロマトグラフィー分離する。
収量：３．５ｇ（４．２％）
全収量：６４．４ｇ（７６．２％）
ＦＡＢ- ＭＳ：４２６（Ｍ＋Ｈ）＋
Ｉｄ．  （Ｓ)-３- ベンジルオキシカルボニルアミノ -３- フエニル- プロピオニトリル
((Ｒ)-２- ベンジルオキシカルボニルアミノ -２- フエニル- エチル)-４- メチルフエニルスルホネート６０．５ｇ（１４２．２ｍｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド６７５ｍｌ中に溶解する。シアン化カリウム１３．９ｇ（２１３．３ｍｍｏｌ）１８- クラウン- ６  ５．６４ｇ（３．１３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を５０℃で２０時間攪拌する。反応溶液を氷水５００ｍｌ中に注ぎ、次いでこの混合物を０℃で５時間攪拌する。吸引濾取し、沈澱を酢酸エチル中に溶解する。有機相を３回水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧で濃縮する。残留物をジエチルエーテルと共に粉砕し、吸引濾取し、ジエチルエーテルで洗滌し、五酸化リンで乾燥する。
収量：２５．３ｇ（６３．５％）
ＦＡＢ- ＭＳ：２８１（Ｍ＋Ｈ）＋
Ｉｅ．  （Ｓ)-３- ベンジルオキシカルボニルアミノ -３- フエニル- プロピオン酸エチルエステル
（Ｓ)-３- ベンジルオキシカルボニルアミノ -３- フエニル- プロピオニトリル１５ｇ（５３．５１ｍｍｏｌ）を無水エタノール１１０ｍｌ及びジオキサン３０ｍｌの混合物中に懸濁する。ＨＣｌガスを１０−１５℃で攪拌及び冷却しながら導入する。短時間の後に、澄明な溶液が生じる。更にＨＣｌガスを出発化合物が薄層クロマトグラフィーでもはや検出できなくなるまで冷却しながら導入する。次いで窒素が１５分間反応溶液を通過し、混合物を減圧で濃縮する。濁りが残存するまで、水を残留物に加える。次いで混合物を室温で３０分間攪拌し、水相を３回酢酸エチルで抽出する。一緒にされた有機相を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧で濃縮する。残留物を酢酸エチル／石油エーテル（１：１）中に取り、シリカゲルでクロマトグラフィー分離する。
収量：１０．５５ｇ（６０％）
ＦＡＢ- ＭＳ：３２８（Ｍ＋Ｈ）＋
Ｉｆ．  （Ｓ)-３- アミノ -３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル- ハイドロクロライド
（Ｓ)-ベンジルオキシカルボニルアミノ -３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステル１０．２９ｇ（３１．４４ｍｍｏｌ）をエタノール１２５ｍｌ中に溶解し、自動ビュレットを用いて２Ｎエタノール性ＨＣｌを加えながら、ｐＨ４でＰｄ／活性炭によって接触水素化する。触媒をけいそう土によって吸引濾取し、濾液を濃縮する。残留物をジエチルエーテルと共に粉砕し、吸引濾取し、ジエチルエーテルで洗滌し、五酸化リンで乾燥する。
収量：５．０５ｇ（７０％）
ＦＡＢ- ＭＳ：１９４（Ｍ＋Ｈ）＋
ＩＩ．  ２-(（Ｓ)-４-(４- シアノフエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソイミダゾリジン -１- イル) 酢酸
ＩＩａ．  （Ｒ，Ｓ)-４-(４- ブロモフエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソイミダゾリジン
４- ブロモアセトフエノン４９．８ｇ（０．２５ｍｏｌ）、シアン化カリウム２１．２ｇ（０．３２５ｍｏｌ）及び炭酸アンモニウム２１１．４ｇ（２．２ｍｏｌ）をエタノール水溶液１．０ｌ（蒸留水０．５ｌ及びエタノール０．５ｌ）中に懸濁化する。懸濁液を、出発化合物が薄層クロマトグラフィーによってもはや検出できなくなるまで６０℃で攪拌する（８時間）。混合物を室温に冷却させる。溶液のｐＨを半濃縮された塩酸で６．３に調整する。生成物は白色沈澱として析出する。混合物を４℃で一晩放置する。白色沈澱を吸引濾取し、水洗し、五酸化リンで減圧乾燥する。
収量：６５．３ｇ白色固体（９７％）
ＦＡＢ- ＭＳ：２６９（Ｍ＋Ｈ）＋
ＩＩｂ．  （Ｒ，Ｓ)-２- アミノ -２-(４- ブロモフエニル) プロピオン酸
（Ｒ，Ｓ)-４-(４- ブロモフエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソイミダゾリジン５．３ｇ（２０ｍｍｏｌ）を３Ｎ水酸化ナトリウム溶液５０ｍｌ中に懸濁する。懸濁液を１４５℃で１時間オートクレーブ中で１０バールの窒素過圧で加熱する。冷却された反応溶液を水１５０ｍｌで希釈し、激しい攪拌及び氷冷下に酢酸でｐＨ４にする。０℃で２時間攪拌する。沈澱を吸引濾取し、水洗し、五酸化リンによって減圧で乾燥する。
収量：３．６５ｇ白色固体（７５％）
ＦＡＢ- ＭＳ：２４４（Ｍ＋Ｈ）＋
ＩＩｃ．  （Ｒ，Ｓ)-２- アミノ -２-(４- ブロモフエニル) プロピオン酸エチルエステル
（Ｒ，Ｓ)-２- アミノ -２-(４- ブロモフエニル) プロピオン酸２７．３ｇ（１１２．３ｍｍｏｌ）を９．８Ｎエタノール性塩化水素溶液１５０ｍｌ中に懸濁する。混合物を１８時間還流加熱し、その後別の９．８Ｎエタノール性塩化水素溶液５０ｍｌを加え、混合物をもう５時間還流加熱する。溶液を濃縮し、残留物を酢酸エチルと重炭酸ナトリウム飽和溶液に分配する。有機層を水洗し、硫酸ナトリウムによって乾燥する。精製のために、粗生成物（２３．２２ｇ）を高減圧で蒸留する（沸点＝２ｍｍＨｇで１２９〜１３０℃）
収量：２０．７ｇ（６８％）
ＦＡＢ- ＭＳ：２７２（Ｍ＋Ｈ）＋
ＩＩｄ．  （Ｓ)-２--アミノ -２-(４- ブロモフエニル) プロピオン酸エチルエステル
（Ｒ，Ｓ)-２- アミノ -２-(４- ブロモフエニル) プロピオン酸エチルエステル４４．３ｇ（１６３ｍｍｏｌ）及びＤ-(−)-マンデル酸２４．８ｇ（１６３ｍｍｏｌ）を、室温でイソプロパノール１３８ｍｌ中に溶解する。ジイソプロピルエーテル４１４ｍｌを加え、混合物を０℃で一晩冷却する。析出した沈澱を吸引濾取する。生じる塩を同一方法で更に２回再結晶する。対掌的に純粋な塩２０ｇが得られる（〔α〕Ｄ ＝−１４ｏ（ｃ＝１；２．１５Ｎエタノール性塩化水素溶液；２２℃）。この塩を酢酸エチルと重炭酸ナトリウム水溶液に分配する。有機相を水洗し、硫酸マグネシウムを乾燥し、減圧で濃縮する。
【００４７】
Ｒ-(−)-α- メトキシ -α-(トリフルオロメチル)-フエニル酢酸クロライド
(Mosher-試剤) で誘導体化後、対掌体純度をＨＰＬＣによって測定すると、９９％ｅｅ（予想誤差）より大きい。
収量：１２．５ｇ（２８％）．
〔α〕Ｄ ＝＋５２．７ｏ （ｃ＝１；２．１５Ｎエタノール性塩化水素溶液；２２℃）
ＦＡＢ- ＭＳ：２７２（Ｍ＋Ｈ）＋
ＩＩｅ．  Ｎ-(（Ｓ)-１-(４- ブロモフエニル)-１-(エトキシカルボニル) エチル)-Ｎ'-（エトキシカルボニルメチル) 尿素
（Ｓ)-２- アミノ -２-(４- ブロモフエニル) プロピオン酸エチルエステル１２．４ｇ（４５．６ｍｍｏｌ）を、メチレンクロライド７０ｍｌ中に溶解する。メチレンクロライド３５ｍｌ中にイソシアネート酢酸エチルエステル５．１１ｍｌ（４５．６ｍｍｏｌ）を有する溶液を０℃で１５分以内に滴加する。混合物を０℃で、２時間攪拌し、次いで濃縮する。
収量：１８．１ｇ（９９％）
〔α〕Ｄ ＝＋１０．７ｏ （ｃ＝１；２．１５Ｎエタノール性塩化水素溶液；２２℃）
ＦＡＢ- ＭＳ：４０１（Ｍ＋Ｈ）＋
ＩＩｆ．  ２-(（Ｓ)-４-(４- ブロモフエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソイミダゾリジン -１- イル) 酢酸
６Ｎ塩酸溶液１８０ｍｌをＮ-(（Ｓ)-１-(４- ブロモフエニル)-１-(エトキシカルボニル) エチル)-Ｎ'-（エトキシ- カルボニルメチル) 尿素１８ｇ（４４．９ｍｍｏｌ）に加える。反応混合物を還流下に１０時間沸騰加熱する。０℃に冷やし、沈澱した反応生成物を吸引濾取し、次いで水洗し、五酸化リンによって乾燥する。
収量：１１．４ｇ（７８％）
〔α〕Ｄ ＝＋３２．８ｏ （ｃ＝１；２．１５Ｎエタノール性塩化水素溶液；２２℃）
ＦＡＢ- ＭＳ：３２７（Ｍ＋Ｈ）＋
ＩＩｇ．  ２-(（Ｓ)-４-(４- シアノフエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソイミダゾリジン -１- イル) 酢酸
２-(（Ｓ)-４-(４- ブロモフエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソイミダゾリジン -１- イル) 酢酸１１．７５ｇ（３５．９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド９０ｍｌ中に溶解する。シアン化銅（Ｉ）１４．１５ｇ（１５８ｍｍｏｌ）加え、混合物を攪拌しながら２０時間還流加熱する。反応混合物を冷却し、次いで水３００ｍｌ中に注ぐ。水相を濃塩酸で酸性に調整し（ｐＨ＝１−１．５）、３０分攪拌し、ザイツ(Seitz) 層によって吸引濾取する。水相を３回酢酸エチルで抽出する。一緒にされた有機相を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧で濃縮する。
収量：９．３ｇ（９５％）
〔α〕Ｄ ＝＋３３．４ｏ （ｃ＝１；２．１５Ｎエタノール性塩化水素溶液；２２℃）
ＦＡＢ- ＭＳ：２７４（Ｍ＋Ｈ）＋
〔例３〕
水蒸気収着の測定
物質の水吸収を、減圧で又は大気圧中に操作され、定められた組成又は定められた圧力を有する自動上皿微量天秤を用いて測定する。乾燥サンプルを天秤の一方にのせ、もう一方に釣り合い重りをのせる。水蒸気体    その圧力は段階的に増加させる    を秤量域中に発生させる。水蒸気圧の作用としてサンプル重量の増加を記録する。測定を２５℃の一定温度で実施する。
【００４８】
秤量域を一定重量になるまで排気し、サンプルの出発重量を測定する。次いで水蒸気の定められた量を、入口バルブを通して排気された秤量域に導入する。下記の実験で、この第一段階で調整される水蒸気圧は２５℃の測定温度で相対大気湿度４．７％に相当する。一定重量を水蒸気の導入後もう一度達成する。すなわちサンプルが水蒸気体と平衡して存在する場合、サンプルの重量増加を記録する。その後、水蒸気圧を更に水蒸気（２５℃の測定温度で定められた相対大気湿度に相当する、夫々の水蒸気圧を有する）を導入することによって数段階で増加する。各段階で、サンプル重量の増加を一定重量が達成された後に記録する。（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル) フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニルプロピオン酸エチルエステル- マレイン酸水素塩を調べる場合、サンプルの出発重量に対して次の重量増加が観察される。
相対湿度  ４．７％、１８．５％、３２．８％、４９．６％、６４．７％、７５          ．５％、８２．１％
サンプルの重量増加  ０．０６％、０．１１％、０．１６％、０．２３％、０．                    ３３％、０．４３％、０．５４％
この結果から、約８０％の相対大気湿度でさえ、（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル) フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソイミダゾリジン -１- イル) アセチルアミノ)-３- フエニルプロピオン酸エチルエステルマレイン酸水素塩の重量増加は、ほんの僅かである（約０．５％）ことが明らかである。したがってこの物質は吸湿性でない。
〔例４〕
犬に於て冠状血流の周期的変化モデルでの薬理試験（不安定な狭心症のモデル）  雌雄どちらかの犬（２０〜３５ｇ）を麻酔し（ケンタミン＋ナトリウムペントバルビタール注入）、通気し、血行力学パラメーター（末梢及び左心室血圧、心筋収縮性、心拍数）及びＥＣＧの測定のために器具を取りつける。血液ガス及びヘマトクリットを電解質の注入によって一定に保つ。左開胸術後、心臓を取り出し、左回旋冠状動脈（ＬＣＸ）を、電磁フロープローブで平均冠状血流量を器機測定する。フロープローブの末端で、内皮を傷つけるためにＬＣＸを鉗子で簡単に締めつけ、小さい同心的に圧縮するプラスチックシリンダーを損傷部位上に置く（内径１．０〜１．７ｍｍ、これはＬＣＸのサイズによる、そして長さ４ｍｍ）。収縮筋はＬＣＸの１０秒閉塞に対する反応性充血応答を抑制し、狭窄された部位で血小板に富んだ血栓の再発形成によって生じる周期的血流変化（約１０／時間）の発生を開始する。血流の一定の変化の最初の発生の６０秒後、テスト化合物を静脈又は十二指腸巨丸薬によって投与する。周期的血流変化を更に少なくとも２〜５時間追跡する。冠状血栓の周期的血流変化の阻害率は、動物５〜８匹に化合物を投与１時間前及び後に周囲的血流変化の平均数の比較によって求められる。コントロール動物の場合、時間あたりの周期的血流変化の数が数時間保たれる（Folts, J. D.等(1976)、Circulation 54 : 365-370 ; Just, M. 等(1989)、J. Cardiovasc. Pharmacol. 14(suppl. 11) : S 129-136 参照).
(Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル) フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソイミダゾリジン -１- イル) アセチルアミノ)-３- フエニルプロピオン酸エチルエステルマレイン酸水素塩を試験した場合、次の結果が得られた。テスト化合物の投与１時間、２時間及び３時間後に１時間あたりの周期的冠状血流変化（ＣＦＶ's) を誘発する狭窄の数の減少率を、投与前の期間に比較して示す。投薬量を、ｍｇ／ｋｇ体重で示す。
【００４９】
投薬量            投与          ＣＦＶ's（％）の減少率
（ｍｇ／ｋｇ）                    １時間目  ２時間目  ３時間目
０．１          静脈内          ５２      ８１      ８９
０．２          静脈内          ７５      ９６      ９９
０．１        十二指腸内        ３９      ６２      ７４
０．３        十二指腸内        ２３      ６６      ７８
生体内モデルで得られたこの結果から、テスト化合物の強力な抗血栓症活性、特にその冠状抗血栓症作用が明らかである。テストの間に記録されたすべての血行力学パラメーターは、著しく変化しない。
〔例５〕
犬に於て血小板凝集の生体外阻害モデルでの薬理学試験
雌雄どちらかの犬（ラブラドール／ハリアーの混血、体重２１〜２８ｋｇ）を一晩閉じ込める。テスト化合物をゼラチンカプセルの形で経口で又は静脈内に投与する。テスト化合物の投与前及びその後の２４時間数回、血液２０ｍｌを頭部静脈から採血し、酸性クエン酸デキストロースで抗凝血化する（９＋１容量）。血小板に富んだ血漿（ＰＲＰ）が遠心分離して得られる。血小板凝集を、ＡＤＰ（３〜３０μｍｏｌ／ｌ）又はコラーゲン（０．３〜１０μｇ／ｍｌ）＋エピネフリン（１０μＭ）のどちらかの添加後３７℃でアグレゴメターター(BioData) 中で測定する。医薬の投与前及び投与後の最大凝集率を比較する。不可逆の最大凝集を誘発する作動薬の最小濃度での凝集阻害率が得られる。更に、皮膚の出血時間を、そられた腕内側で Simplate(登録商標）１装置を用いて血液収集の時間で測定する。医薬の投与後の出血時間の延長率を出発値と比較して算出する。
【００５０】
（Ｓ)-３-(２-(（Ｓ)-４-(４-(アミノ- イミノ- メチル)-フエニル)-４- メチル -２，５- ジオキソ- イミダゾリジン -１- イル)-アセチルアミノ)-３- フエニル- プロピオン酸- エチルエステルマレイン酸水素塩を試験した場合、次の結果が得られた。テスト化合物の投与１時間、４時間、８時間及び２４時間後の血小板凝集阻害率を記載する。投薬量をｍｇ／ｋｇ体重で示す。ｎはテストされる犬の数である。
ａ）ＡＤＰ- 誘発された生体外血小板凝集の阻害率
投薬量      投与                    凝集阻害率（％）
（ｍｇ／ｋｇ）（ｎ）        １時間後  ４時間後  ８時間後  ２４時間後
０．５    静脈内（６）    ９３      ８８      ５９        １６
０．５    経口（６）      ４６      ８３      ３３        １８
１        経口（６）      ７６      ９７      ８６        ７０
２        経口（８）      ６４      ８６      ７８        ４９
a）コラーゲン誘発された生体外血小板凝集の阻害率
投薬量      投与                      凝集阻害率（％）
（ｍｇ／ｋｇ）（ｎ）        １時間後  ４時間後  ８時間後  ２４時間後
０．５    静脈内（６）    ２７      ２６      １８          ０
０．５    経口（６）        ８      １９        ５          ０
１        経口（６）      ３６      ６７      ５０        １１
２        経口（８）      ２８      ６５      ６０        ２０
出血時間の最大変化は、０．５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与４時間後で６８％（ｐ＜０．０５）延長率であり、２ｍｇ／ｋｇの経口投与２時間後で１２２％（ｐ＜０．０５）延長率である。より低い経口投与量で、出血時間は著しく変化しない。このテストの結果から血小板凝集の生体内阻害のようにテスト化合物の顕著な有効性が明らかである。