(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
５０００〜２００００の分子量を有するきのこ類由来のβ（１→３）グルカンを有効成分として含有することを特徴とする腸疾患の予防、改善及び／又は治療用薬剤。
【請求項２】
当該β（１→３）グルカンが、グルカンの加水分解により得られたものである請求の範囲１記載の薬剤。
【請求項３】
当該β（１→３）グルカンが、きのこの水抽出物から得られたものである請求の範囲１又は２記載の薬剤。
【請求項４】
きのこの水抽出物から得られたものが、きのこの水抽出−アルコール沈殿物から得られたもの又は当該沈殿物を更に分解して低分子量化したものである請求の範囲３記載の薬剤。
【請求項５】
経口投与用である請求の範囲１〜４何れか記載の薬剤。
【請求項６】
当該腸疾患が炎症性腸疾患である請求の範囲１〜５何れか記載の薬剤。
【請求項７】
５０００〜２００００の分子量が平均分子量で表して５０００〜２００００の分子量である請求の範囲１〜６何れか記載の薬剤。
【請求項８】
きのこ類がシイタケである請求の範囲１〜７何れか記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は腸疾患、特に炎症性腸疾患に有効な腸疾患の予防、改善及び／又は治療用に適した新規薬剤に関する。本発明においては安全性が高く経口投与が可能であり、広く多くの患者に簡便に適用することができる。更に、本発明は腸疾患の予防、改善及び／又は治療方法や、上記薬剤に使用する特定有効成分の当該薬剤への使用等にも関する。
背景技術
腸疾患、特に炎症性腸疾患は近年患者数が増え医療現場でその予防、治療の必要性が高まっている疾患である。腸内細菌の偏在、免疫学的不全が疾患の原因として想定されているが、その発症原因、病態増悪機序の何れも定かではない。炎症性腸疾患の代表である潰瘍性大腸炎とクローン病の間には病態に大きな差異が認められるが、液性免疫亢進の関与が前者で高く、細胞性免疫の亢進が後者で高いとされているが詳細は不明である。従って、本疾患を予防したり、病態を改善する手段は限られ満足できるものではない。特に予防の視点では医療現場のニーズを満足させるものは提供されていないと言って過言ではない。
発明が解決しようとする課題
以上のような情況下に、腸疾患用の薬剤、特に炎症性腸疾患を対象に広く使用でき、副作用が殆ど無く経口投与で効果を示し、多くの患者に簡便に使用できる薬剤や予防食品の開発が求められている。本発明の課題はこのような薬剤や予防食品を開発することにある。
発明の開示
本発明者等は上記課題解決に向けて鋭意研究を重ねた結果、特定の分子量を有する植物由来のβ（１→３）グルカンを自由飲水で与えたマウスによるモデル動物試験で前記目的とする薬効を有することを見出し、目的とする腸疾患の予防、改善及び治療等用の薬剤として使用できることを見出し、これらの知見に基づいて本発明を完成するに到った。
即ち、本発明は５０００〜２００００の分子量を有する植物由来のβ（１→３）グルカンを有効成分として含有することに特徴を有する腸疾患の予防、改善及び／又は治療用薬剤に存する。
本発明は、別の形態として、５０００〜２００００の分子量を有する植物由来のβ（１→３）グルカンを生体内に摂取又は投与することに特徴を有する腸疾患の予防、改善及び／又は治療方法に存する。当該摂取又は投与する形態については、上記本発明の薬剤の各種形態を採用することができる。
本発明は、更に別の形態として、５０００〜２００００の分子量を有する植物由来のβ（１→３）グルカンの、腸疾患の予防、改善及び／又は治療用薬剤への使用にも存する。当該薬剤への使用形態については、上記本発明の薬剤の各種形態を採用することができる。
発明の実施の形態
以下に本発明の実施の形態について説明する。
本発明の薬剤を投与する対象については、腸疾患、特に炎症性腸疾患の予防、改善、治療等を求めるものであれば特に制限は無いが、哺乳動物、通常はヒト（患者）に対して適用される。
本発明の薬剤が適用される腸疾患については制限は無いが、クローン病、潰瘍性大腸炎で代表される炎症性腸疾患に対して特に有効である。
本発明の薬剤に使用する有効成分には５０００〜２００００の分子量を有する植物由来のβ（１→３）グルカンを使用する。平均分子量で表して５０００〜２００００の分子量を有する成分を主成分として使用するのが簡便である。そのような分子量の範囲のグルカンを調製するのに、より高分子量のグルカンを加水分解、例えば、β−（１−３）グルカナーゼで酵素分解したものや、蟻酸等で化学分解処理したもの、物理的な方法で低分子化したものを採用することもできる。
本発明において、「β（１→３）グルカン」にはβ（１→３）結合を有するグルカンは勿論、β（１→３）グルコシド結合を主鎖とするグルカンも含まれる。
植物由来のβ（１→３）グルカンとしてはマツタケ、シイタケ、ぶくりょう、カワラタケ、エノキダケ、ヒラタケ、ヤマブシタケ、アガリクスきのこ等のきのこ類から得られるβ（１→３）グルカンを使用することができる。そのような成分をきのこ類から調製するには、例えば水（熱水等）の抽出物もしくは本抽出物をアルコール（エタノール等）による沈殿により得られたものから、必要により低分子化することにより容易に調製することができる。分子量を前記範囲に調整するには適当な方法で加水分解（酵素分解、蟻酸など酸による加水分解、物理的処理による分解等）する方法を挙げることができる（佐々木等，Ｇａｎｎ，６７，１９１〜１９５，４月，１９７６年参照。）。
本発明になる薬剤の特徴の一つに経口投与でも優れた効果を示すこと、インスリン依存性の糖尿病疾患（ＮＩＤＤＭ）にも効果があり、安全で肥満の影響も受けない。従って、投与形態については特に制限は無い。経口投与、非経口投与（静脈投与等）各種の投与形態が採用可能であり、炎症性腸疾患患者に広くしかも簡便に適用することができる。安全性や経口投与に適していることからそのような疾患に対する予防、改善のために、或いは腸に疾患を有する患者に対し健康食品や医療食品の形で使用することも可能である。またこれら疾患のハイリスク患者に広く予防、治療的にしかも簡便に適用することができる。
本発明においては、他の薬剤成分（医薬活性物質）と共に、例えば混合又は組み合わせて使用することができ、このような場合本発明で目的とする有効成分を含み目的とする前記薬理活性を示すものであれば本発明の薬剤に含まれる。
その他、薬理学的に許容し得る各種の製剤用物質（補助剤等として）を含むこともできる。製剤用物質は製剤の剤型により適宜選択することができるが、例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤等を挙げることができる。更に、製剤用物質を具体的に例示すると、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトール及びその他の糖類、タルク、牛乳蛋白、ゼラチン、澱粉、セルロース及びその誘導体、動物及び植物油、ポリエチレングリコール、及び溶剤、例えば滅菌水及び一価又は多価アルコール、例えばグリセロールを挙げることができる。
本発明の薬剤は、前述の如く公知の又は将来開発される様々な医薬製剤の形態、例えば、経口投与、腹腔内投与、経皮的投与、吸入投与等各種の投与形態に調製することができる。本発明の薬剤をこれら様々な医薬製剤の形態に調製するためには公知の又は将来開発される方法を適宜採用することができる。
これら様々な医薬製剤の形態として、例えば適当な固形又は液状の製剤形態、例えば顆粒、粉剤、被覆錠剤、錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、ジュース、懸濁液、乳濁液、滴下剤、注射用溶液、活性物質の放出を延長する製剤等を挙げることができる。
以上に例示した製剤形態にある本発明の薬剤には、薬効を奏するに有効な量の前記成分を含有すべきことは当然のことである。
本発明の薬剤の投与量については、腸疾患の程度や重症度、種類、製剤の形態等に応じて適当に選択される。例えば、経口投与で患者１日当たり、有効成分の正味重量で表して好ましくは１０ｍｇ〜１０ｇ程度、より好ましくは１００ｍｇ〜５ｇ程度、更に好ましくは５００〜２０００ｍｇ程度投与することができる。また、重篤な場合には更に増量することもできる。投与の回数、時期については、数日に１回でも、また１日１回でも可能であるが、通常は１日当たり数回、例えば２〜４回に分けて投与される。また、静脈投与の場合には上記経口投与に比べて十〜二十分の一程度の投与量でも良い。
その予防も含めて広く前記腸の疾患改善の目的で或いはそのような疾患を既に有する患者に食事を提供する目的で、健康食品、医療用食品、特定保健食品等として本発明の薬剤を使用することができるが、このような健康食品等に使用する場合にも上記経口投与製剤を参考に健康食品等として必要であり経口摂取可能な成分、添加剤を加えて調製することができる。その場合、食品（チューインガムや歯磨き等口に入れるものは全て含まれる。）並びに栄養剤、輸液製剤等の形態で提供することも可能であり、これらも当然本発明の薬剤の使用に含まれる。医療用食品等は固形状物であっても液状物であってもよく、その形態を問わない。
尚、本発明において低分子量のβ（１→３）グルカンが腸疾患に対して作用する機作は次の通りと推測している。β（１→３）グルカンは主として炎症性細胞のうちマクロファージを標的として作用すると考えられる。炎症性腸疾患の腸管粘膜にはマクロファージの著明な浸潤が認められるが、このマクロファージが腸内細菌に対する免疫応答を強めると考えられる。β（１→３）グルカンはマクロファージに作用してその免疫応答増強作用を抑制すると考えられる。
前記の通り本発明は、別の形態として、５０００〜２００００の分子量を有する植物由来のβ（１→３）グルカンを生体内に摂取又は投与することに特徴を有する腸疾患の予防、改善及び／又は治療方法や、更に別の形態として、５０００〜２００００の分子量を有する植物由来のβ（１→３）グルカンの、腸疾患の予防、改善及び／又は治療用薬剤への使用にも存する。
これ等の発明については、上記摂取又は投与形態或いは上記薬剤への使用形態等を含めて、何れも前記本発明の薬剤についての説明や、後述の実施例等に基づいて、また必要により従来からの技術を参考にすることにより、容易に実施をすることができる。
好適な実施の形態
以下、実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、この実施例により本発明は何等制限されるものではない。この実施例において使用される％値は、特に説明が無い限り重量％で示されている。
（試料及び実験動物）
１．デキストラン硫酸（ＤＥＸＴＲＡＮ  ＳＯＤＩＵＭ  ＳＵＬＦＡＴＥ；ＩＣＮ社製「Ｃａｔ  １６０１１０」）
２．Ｃ５７／ＢＬ６  マウス雌１３週齢（日本チャールスリバー製）
（きのこ熱水抽出物の蟻酸分解物の調製）
１）６０分間加水分解物
還流冷却器、温度計、メカニカルスターラーを設置した２リットルの丸底三頚フラスコにドライＬを３１．０ｇ秤取り、８０％蟻酸６２０ｍｌを加え、予め１００℃に加熱したオイルバス中で攪拌した。２０分間で反応液の温度が９０℃に到達し、更に６０分間、攪拌を続けた。その後、反応容器を氷−水浴中に浸して反応を停止した。反応液を室温まで冷却して得られる茶褐色のゲル状物質を２リットルのナス型フラスコに移し変え、溶媒を減圧下に留去してニカワ状の固形物５０．４ｇを得た。これに純水２リットルを加え、水浴中６０℃まで加温して固形物を可能な限り溶解し、静置して清澄な上澄み液をデカンテーションによって分離した。繊維状の固形物が残存する不溶部に純水８００ｍｌを加え、家庭用ミキサーを用いて６０分間混合・粉砕を行った。これに先の上澄み液を加え、更に超音波浴中で超音波処理して、均一な懸濁液を得た。得られた懸濁液をドライアイス−アルコール浴中で急速凍結した後、凍結乾燥し、固形物３０．４ｇを得た。そのものの０．２２％（重量）懸濁液のｐＨ値は４．５１であった。平均分子量は１２２００であった。
尚、ドライＬは生シイタケ（Ｌｅｎｔｉｎｕｓ  ｅｄｏｄｅｓ）子実体１ｋｇを熱水５０００ｍｌに溶解しエタノール５０００ｍｌで沈殿化（３２０ｇ）したものである。
２）３０分間加水分解物
上記６０分間加水分解物の調製法のうち、９０℃到達後の加熱時間を３０分とし、それ以外は上記と同様の操作を行った。固形物３０．８ｇを得、その０．２２％（重量）懸濁液のｐＨ値は４．８６であった。平均分子量は２５０００であった。
（きのこ熱水抽出物の酵素分解物の調製）
還流冷却器、温度計、メカニカルスターラーを設置した２リットルの丸底三頚フラスコに生シイタケ熱水抽出物を３０．０ｇ秤取り、滅菌水２Ｌに溶解し、市販β−（１−３）グルカナーゼを添加し３０℃で攪拌、反応させた。６０分間、反応を続けた。その後、反応容器を氷−水浴中に浸して反応を停止した。反応液を５リットルのナス型フラスコに移し変え、溶液を減圧下に留去、固形物が析出する寸前に留去を停止した。清澄な上澄み液を分離した後に、更に超音波浴中で超音波処理して、均一な清澄液を得た。得られた液をドライアイス−アルコール浴中で急速凍結した後、凍結乾燥し、固形物３２．４ｇを得た。そのものの０．２２％（重量）懸濁液のｐＨ値は６．５２であった。平均分子量は９２００であった。
（ドライＬ加水分解物０．０２重量％水溶液の調製）
ドライＬ６０分蟻酸加水分解物又はドライＬ３０分蟻酸加水分解物２ｇを１リットルの滅菌水（２回蒸留後ミリポアーフイルターにて濾過）に溶解してｐＨ値を測定した。１規定の水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ値７．０付近へ調整し、ドライＬ０．０２重量％水溶液を調製した。
（ドライＬ０．１重量％水溶液の調製）
ドライＬ６０分蟻酸加水分解物１ｇを１リットルの滅菌水に溶解してｐＨ値を測定した。１規定の水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ値７．０付近へ調整し、ドライＬ０．１重量％水溶液を調製した。
（１％ＤＳＳ水溶液の調製）
デキストラン硫酸ナトリウム塩１０ｇを１リットルの滅菌水に溶解して１％ＤＳＳ水溶液を調製した。
（実施例１）
炎症性腸疾患（ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患）モデルを用いたドライＬ経口摂取薬効検定
ドライＬ分解物の経口摂取によりＤＳＳ誘導炎症性腸疾患は抑制されるのが確かめられた。以下、具体的に説明する。
炎症性腸疾患（以下、「ＩＢＤ」と称する。）モデルとして、マウスにデキストラン硫酸（以下、「ＤＳＳ」と称する。）水溶液を飲水させる系が知られている。この系を用い、ドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液を前投与することで発症が抑制若しくは促進されるかの検討を行った。
ＩＢＤを発症すると、体重の減少が起こる。発症の指標として、血便、体重減少及び生存率を用い検討した。
Ｃ５７／ＢＬ６  雌１３週齢より、ドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液、ドライＬ３０分蟻酸分解物水溶液、対照として滅菌水を、それぞれ飲水させ、飲水開始１０日目、ＤＳＳ１％水溶液に切り換え、週１回体重測定を行い、逐次生存の確認を行った。
ＤＳＳ１％水溶液切り換え１０日目の体重減少は、対照群１６％に比べ、ドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液飲水群１２．５％とドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液飲水群で有意に低いことが確認された（図１ｂ参照。）。ＤＳＳ１％水溶液切り換え３４日目の発症率（血便発生率）は対照群１００％に比べ、ドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液飲水群で３７％とドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液飲水群で、有意に発症の抑制が確認された。また、ドライＬ３０分蟻酸分解物水溶液飲水群において、発症率７５％と発症の抑制が確認された（図１ａ参照。）。
ＤＳＳ１％水溶液切り換えより３４日目にＤＳＳ２％水溶液に切り換えた。ＤＳＳ２％水溶液への切り換えより１１日目の生存率は、対照群０％に比べ、ドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液飲水群１００％と、ドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液飲水群において著明な発症の抑制が確認された（図２参照。）。また、ＤＳＳ２％水溶液への切り換えより７日目までの体重変化は、切り換え開始時の体重を１とした割合をとると、対照群で０．８に対して、ドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液飲水群０．９とドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液飲水群の体重減少は対照群より少なく、ＩＢＤ発症が抑制されることが確認された（図３参照。）。
以上の結果から明らかな如く、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）モデルにおいて、ドライＬ６０分蟻酸分解物水溶液の飲水により、炎症性腸疾患が有意に抑制されることが確認された。
（実施例２）
炎症性腸疾患（ＤＳＳ誘導炎症性腸疾患）モデルを用いたきのこ酵素分解物の経口摂取薬効検定
シイタケ熱水抽出物の酵素分解物の経口摂取によりＤＳＳ誘導炎症性腸疾患は抑制されるのが確かめられた。以下、具体的に説明する。
炎症性腸疾患（以下、「ＩＢＤ」と称する。）モデルとして、マウスにデキストラン硫酸（以下、「ＤＳＳ」と称する。）水溶液を飲水させる系が知られている。この系を用い、シイタケ熱水抽出物酵素分解物水溶液を前投与することで発症が抑制若しくは促進されるかの検討を行った。
Ｃ５７／ＢＬ６  雌１３週齢より、シイタケ熱水抽出物酵素分解物水溶液、対照として滅菌水を、それぞれ飲水させ、飲水開始１０日目にＤＳＳ１％水溶液に切り換え、週１回体重測定を行い、逐次生存の確認を行った。
ＤＳＳ１％水溶液切り換え後１０日目の体重減少は、対照群１９％に比べ、シイタケ熱水抽出物酵素分解物水溶液９．５％とシイタケ熱水抽出物酵素分解物水溶液飲水群で有意に低いことが確認された。ＤＳＳ１％水溶液切り換え３０日目の発症率（血便発生率）は対照群１００％に比べ、シイタケ熱水抽出物酵素分解物水溶液飲水群で１７％とシイタケ熱水抽出物酵素分解物水溶液飲水群で、有意に発症の抑制が確認された。
以上の結果から、酵素分解物水溶液の飲水により、炎症性腸疾患が対照群と比較して有意に抑制されることが理解される。
発明の効果
本発明によれば、腸疾患、特に炎症性腸疾患用の薬剤として使用でき、副作用が殆ど無く経口投与でも優れた効果を示し多くの患者に簡便に使用できる腸疾患の予防、改善、治療等に適した薬剤を提供することができる。安全性にも優れており、健康食品の形態でも提供することができる。更に、本発明により腸疾患の予防、改善及び／又は治療方法やこれ等の薬剤への前記特定グルカンの有効成分としての使用も提供することができる。
従って、本発明は医薬品、食品、医療等、並びに飼料及び動物用医薬品等の分野で広く実施可能であり、故に産業上極めて有用である。
【図面の簡単な説明】
［図１］図１ａは、実施例１においてＩＢＤ（炎症性腸疾患）の発症率（％）（ＤＳＳ１％水溶液切り換え３４日目）を図示したものである。
図１ｂは、実施例１において体重減少率（％）（ＤＳＳ１％水溶液切り換え１０日目）を図示したものである。
図１ａ及び図１ｂにおいて、横軸は左側から順に、対照、ドライＬ６０分蟻酸分解物及びドライＬ３０分蟻酸分解物を表す。
［図２］図２は、実施例１においてＤＳＳ２％水溶液切り換え後の生存率（％）を図示したものである。
□：対照；●：ドライＬ６０分蟻酸分解物；△：ドライＬ３０分蟻酸分解物。
［図３］図３は、実施例１においてＤＳＳ２％水溶液切り換え後の体重変化を図示したものである。
縦軸：ＤＳＳ２％水溶液へ切り換え開始時の体重を１としたときの割合。
□：対照；○：ドライＬ６０分蟻酸分解物；●：ドライＬ３０分蟻酸分解物。
【図１（ａ）】
0004238726.tif 000002
【図１（ｂ）】
0004238726.tif 000003
【図２】
0004238726.tif 000004
【図３】
0004238726.tif 000005