(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式[Ｉ]：
【化１】
0004233353.tif 000016
(式中、Ｘ1はハロゲン原子；
Ｘ2はハロゲン原子；
Ｑは−ＣＨ2−基または−(ＣＨ2)2−基；
ＹはＣ1-6アルキル基；および
ＣＯ2Ｒはカルボキシル基またはＣ2-7アルコキシカルボニル基)
で示されるフェニルアラニン誘導体、またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
化学式が下記式[Ｉ−１]：
【化２】
0004233353.tif 000017
(式中、記号は請求項１と同じである)
である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｘ1が塩素原子またはフッ素原子;Ｘ2が塩素原子またはフッ素原子；およびＹがＣ1-4アルキル基である、請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
Ｘ1が塩素原子またはフッ素原子；Ｘ2が塩素原子またはフッ素原子；Ｑが−ＣＨ2−基；Ｙがメチル基、エチル基またはｎ−プロピル基；およびＣＯ2Ｒがカルボキシル基、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、またはtert−ブトキシカルボニル基である、請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
Ｘ1がフッ素原子；Ｘ2が塩素原子またはフッ素原子；Ｑが−ＣＨ2−基；およびＹがメチル基またはエチル基である、請求項３記載の医薬組成物。
【請求項６】
有効成分がＮ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン；
Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン；
またはそれらのＣ1-6アルキルエステル、またはその薬理学的に許容される塩である、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】
α４介在細胞接着による病態の治療または予防用の、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項８】
該病態がリウマチ関節炎、喘息、アレルギー性疾患、成人呼吸窮迫症候群、ＡＩＤＳ痴呆、アルツハイマー病、心・血管疾患、血栓症または有害な血小板凝集、血栓溶解後の再閉塞、再潅流障害、皮膚炎症性疾患、糖尿病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、胃腸管への白血球浸潤が関与する疾病、上皮組織への白血球浸潤が関与する疾病、膵炎、乳腺炎、肝炎、胆嚢炎、胆管炎、胆管周囲炎、気管支炎、副鼻腔炎、肺の炎症性疾患、サルコイドーシス、骨粗鬆症、変形性関節症、動脈硬化症、腫瘍性疾患、外傷、眼病、シェーグレン症候群、臓器移植後の拒絶反応、脈管内膜過形成、手術後の再梗塞または再狭窄、腎炎、骨髄腫誘発骨吸収、および中枢神経障害から選択される、請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】
該病態が喘息、アレルギー性疾患、炎症性腸疾患、リウマチ関節炎、アトピー性皮膚炎、多発性硬化症または臓器移植後の拒絶反応である、請求項７記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は喘息、糖尿病、リウマチ関節炎、炎症性腸疾患、および組織(例えば皮膚、尿道、気管、関節滑膜、肺、血管、心臓、神経系など)への白血球浸潤が関与する疾患などの治療に有効な、α4介在接着の阻害剤である、新規なフェニルアラニン誘導体を有効成分とする医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
白血球の内皮細胞または細胞外マトリックスプロティンへの接着は、免疫および炎症の基礎的なプロセスであり、多数の接着相互反応が関与している。このプロセスの最初の事象は、白血球のローリングであり、ついでインテグリンアビジチー(親和性)の変化が起こり、堅固な接着となる(例えば、非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；および非特許文献７参照)。化学走化性因子(chemotactic factor)に呼応して、白血球は２つの隣接した内皮細胞を介して、細胞外マトリックスプロティンのフィブロネクチン(ＦＮ)(例えば、非特許文献８参照)およびコラーゲン(例えば、非特許文献９；および非特許文献１０参照)から成る組織に移行する。これらの反応に関与する重要な認識分子はインテグリン遺伝子スーパーファミリーに属する(例えば、非特許文献３；非特許文献１１；非特許文献５；および非特許文献６参照)。
【０００３】
インテグリンは、アルファ(α)およびベータ(β)サブユニットと称される非共有結合で集合したサブユニットから構成されるヘテロダイマーである(例えば、非特許文献３；非特許文献１１；非特許文献５；および非特許文献６参照)。現在のところ、８個のインテグリンβサブユニットが同定され、１６個の異なるαサブユニットと結合して２３個の異なるインテグリンを形成することが知られている。
ＶＬＡ−４(最遅延抗原−４；Very Late Antigen-4)としても知られているα4β1インテグリンはリンパ球、単球、および好酸球などの白血球上に発現し(例えば、非特許文献１２；および非特許文献１３参照)、炎症の間これらの細胞のリクルートメントにおいて重要な役割を果たす。ＶＬＡ−４は血管細胞接着分子−１(ＶＣＡＭ−１)(例えば、非特許文献１４参照)およびＦＮ Ａ鎖の結合セグメント１(ＣＳ−１)(例えば、非特許文献１５参照)の受容体である。さらに、α4β1インテグリンは、動脈硬化性プラークにアップレギュレートされるオステオポンチン(osteopontin)と結合することが知られている(例えば、非特許文献１６参照)。
【０００４】
α4β7インテグリンは３個の既知のリガンド(ＶＣＡＭ−１、ＣＳ−１、ＭＡｄＣＡＭ−１)と結合する。ひとつは粘膜アドレシン細胞接着分子−１(Mucosal Addressin Cell Adhesion Molecule-1 (ＭＡｄＣＡＭ−１))であり、α4β7に対し特異性を示す(例えば、非特許文献１７；非特許文献１８；および非特許文献１９参照)。ＭＡｄＣＡＭ−１は腸間膜リンパ節内の集合リンパ小節高内皮小静脈(Peyer's patch high endothelial venules)、および消化管基底膜および乳腺小静脈に多く発現される(例えば、非特許文献２０参照)。インテグリンα4β7およびＭＡｄＣＡＭ−１は正常な腸への白血球移動の制御に重要であることが証明されている(例えば、非特許文献２１参照)。
【０００５】
残り２つのリガンドＶＣＡＭ−１およびＣＳ−１(例えば、非特許文献１４参照)はα4β7及びα4β1インテグリンによって共有されている。
【０００６】
インビボでの多くの研究により、α4β1インテグリン及びα4β7インテグリン(以下、両者を総称してα4インテグリンまたはα4と称する)が多くの疾病の病因に重大な役割を担っていることが示されており、α4に対するモノクロナル抗体が様々な疾病モデルで試験されている。例えば、抗α4抗体の有効性は実験的自己免疫型脳脊髄炎のラットおよびマウスモデルで示されている(例えば、非特許文献２２；および非特許文献２３参照)。また、α4のモノクロナル抗体はいくつかの肺抗原攻撃モデルにおいて有効であった(例えば、非特許文献２４；および非特許文献２５参照)。さらに、自然発生慢性大腸炎を発症するワタボウシタマリン(Cotton-top tamarin)は抗α4抗体あるいは抗α4β7抗体の投与により、大腸炎の有意な軽減を示した(例えば、非特許文献２６；非特許文献２７；および非特許文献２８参照)。ＣＤ４５ＲＢhigh ＣＤ４+ Ｔ細胞で再構成された重症複合型免疫不全マウスにおいて、β7またはＭＡｄＣＡＭ−１のモノクロナル抗体は大腸への白血球リクルートメントを遮断し、大腸の炎症の重篤度を軽減した(例えば、非特許文献２９参照)。α4に対するモノクロナル抗体は膵島炎を阻害し、非肥満糖尿病(ＮＯＤ)マウスの糖尿病の発病を遅らせる(例えば、非特許文献３０；非特許文献３１；および非特許文献３２参照)。
【０００７】
また、ＮＯＤマウスにおいて、ＭＡｄＣＡＭ−１は膵臓内の炎症した膵島の高内皮性小静脈上に発現し、これはα4β7インテグリンの糖尿病における役割を示唆している(例えば、非特許文献３３参照)。炎症滑膜への白血球の接着はα4β1インテグリン／ＶＣＡＭ−１相互反応に支配されていると言われていたが、しかしながら、α4β7ポジティブＴ細胞の増加がリウマチ関節炎患者の滑膜にも発見されており(例えば、非特許文献３４参照)、α4β7インテグリンの発現はこの疾病の増悪および恒久化に関与していると示唆されている(例えば、非特許文献３５参照)。さらにまた、α4β7およびα4β1インテグリンのリンパ球および好酸球上の発現、およびα4β7／α4β1インテグリンがＶＣＡＭ−１、ＣＳ−１およびＭＡｄＣＡＭ−１へのヒト好酸球接着を介在することを示すインビトロでの研究(例えば、非特許文献３６参照)により、α4インテグリンが喘息治療の適した治療標的であることが示されている。α4インテグリンが関与する他の疾病として、リウマチ関節炎(例えば、非特許文献３７参照；および非特許文献３８参照)、動脈硬化症(例えば、非特許文献３９参照)、同種移植拒絶反応(例えば、非特許文献４０参照)、および腎炎(例えば、非特許文献４１参照)が挙げられる。遅延型過敏反応(例えば、非特許文献４２参照)、接触過敏反応(例えば、非特許文献４３参照、および非特許文献４４参照)および脈管内膜過形成(例えば、非特許文献４５参照)もまた抗α4抗体により妨害される。これらのデータはα4β7およびα4β1インテグリンが多様な炎症性疾患において重要な役割を有していることを示している。
【０００８】
また、経口投与できる、生体内利用可能な非ペプチド性小分子α4アンタゴニストは、喘息、炎症性腸疾患、リウマチ関節炎、多発性硬化症および他の疾病の治療および予防に有効であることが開示されている(例えば、特許文献１参照)。
【０００９】
【特許文献１】
国際公開第９９／３６３９３号パンフレット
【非特許文献１】
バッチャー(Butcher), Cell, (1991), 67巻, p. 1033-1036
【非特許文献２】
ハーラン(Harlan), Blood, (1985), 3巻, p. 513-525
【非特許文献３】
ヘムラー(Hemler), Annu. Rev. Immunol., (1990), 8巻, p. 365-400
【非特許文献４】
オズボーン(Osborn), Cell, (1990), 62巻, p. 3-6
【非特許文献５】
シミズ(Shimizu)ら, Immunol. Rev., (1990), 114巻, p. 109-143
【非特許文献６】
スプリンガー(Springer), Nature, (1990), 346巻, p. 425-434
【非特許文献７】
スプリンガー(Springer), Cell, (1994), 76巻, p. 301-314
【非特許文献８】
ワイナー(Wayner), J. Cell Biol., (1987), 105巻, p. 1873-1884
【非特許文献９】
ボーンステイン(Bornstein)ら, Ann. Rev. Biochem., (1980), 49巻, p. 957-1003
【非特許文献１０】
ミラー(Miller), Ｋ. Ａ. ピエズ(K.A. Piez)およびＡ. Ｈ. レジ(A.H. Reddi)編集、「細胞外マトリックス生化学(Extracellular Matrix Biochemistry)、“コラーゲンおよびその分布の化学”, エウセヴィエル出版、アムステルダム, (1983), p. 41-78
【非特許文献１１】
ハイネス(Hynes), Cell, (1987), 48巻, p. 549-554
【非特許文献１２】
ヘムラー(Hemler)ら, J. Bio. Chem. (1987), 262巻, p. 11478-11485
【非特許文献１３】
ボッチャー(Bochner)ら, J. Exp. Med. (1991), 173巻, p. 1553-1556
【非特許文献１４】
エリセス(Elices)ら, Cell, (1990), 60巻, p. 577-584
【非特許文献１５】
ウェイ(Wayne)ら, J. Cell Biol., (1989), 109巻, p. 1321-1330
【非特許文献１６】
バイレス(Bayless)ら, J. Cell Science, (1998), 111巻, p. 1165-1174
【非特許文献１７】
アンドリュー(Andrew)ら, J. Immunol., (1994), 153巻, p. 3847-3861
【非特許文献１８】
ブリスキン(Briskin)ら, Nature, (1993), 363巻, p. 461-464
【非特許文献１９】
シャジャン(Shyjan)ら, J. Immunol., (1996), 156巻, p. 2851-2857
【非特許文献２０】
ベルグ(Berg)ら, Immunol. Rev., (1989), 105巻, p. 5
【非特許文献２１】
ホルツマン(Holzmann)ら, Cell, (1989), 56巻, p. 37-46
【非特許文献２２】
バロン(Baron)ら, J. Exp. Med., (1993), 177巻, 57-68
【非特許文献２３】
エドノック(Yednock)ら, Nature, (1992), 356巻, p. 63-66
【非特許文献２４】
アブラハム(Abraham)ら, J. Clin. Invest., (1994), 93巻, p. 776-787
【非特許文献２５】
ウェグ(Weg)ら, J. Exp. Med., (1993), 177巻, p. 561-566
【非特許文献２６】
ベル(Bell)ら, J. Immunol., (1993), 151巻, p. 4790-4802
【非特許文献２７】
ポドルスキー(Podolsky)ら, J. Clin. Invest., (1993), 92巻, p. 372-380
【非特許文献２８】
ヘステルベルグ(Hesterberg)ら, Gastroenterology, (1996), 111巻, p. 1373-1380
【非特許文献２９】
ピカレラ(Picarella)ら, J. Immunol., (1997), 158巻, p. 2099-2106
【非特許文献３０】
バロン(Baron)ら, J. Clin. Invest., (1994), 93巻, p. 1700-1708
【非特許文献３１】
バークリー(Burkly)ら, Diabetes, (1994), 43巻, p. 529-534
【非特許文献３２】
ヤング(Yang)ら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (1993), 90巻, p. 10494-10498
【非特許文献３３】
ヤング(Yang)ら, Diabetes, (1997), 46巻, p. 1542-1547
【非特許文献３４】
マックマリー(McMurray), Semin. Arthritis Rheum., (1996), 25巻, p. 215-233
【非特許文献３５】
ラザロビッツ(Lazarovits)ら, J. Immunol., (1993), 151巻, p. 6482-6489
【非特許文献３６】
ウォルシュ(Walsh)ら, Immunology, (1996), 9巻, p. 112-119
【非特許文献３７】
ラホン(Laffon)ら, J. Clin. Invest., (1991), 88巻, p. 546-552
【非特許文献３８】
モラレス−デュクレ(Morales-Ducret)ら, J. Immunol., (1992), 149巻, p. 1424-1431
【非特許文献３９】
チブルスキーら、Science, 251：788-791 (1991)
【非特許文献４０】
イソベ(Isobe)ら, J. Immunol. (1994), 153巻, p. 5810-5818
【非特許文献４１】
アレン(Allen)ら, J. Immunol. (1999), 162巻, p. 5519-5527
【非特許文献４２】
イセクズ(Issekutz), (1991), J. Immunol., 147巻, p. 4178-4184
【非特許文献４３】
キショルム(Chisholm)ら, Eur. J. Immunol., (1993), 23巻，p. 682-688
【非特許文献４４】
ファーグソン(Ferguson)ら, J. Immunol., (1993), 150巻, p. 1172-1182
【非特許文献４５】
ラムスデン(Lumsden)ら, J. Vasc. Surg., (1997), 26巻, p. 87-93
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的はα4介在細胞接着による炎症性疾患および／またはアレルギー性疾患の治療または予防に有用な医薬組成物を提供することである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明は式[Ｉ]：
【化３】
0004233353.tif 000002
(式中、Ｘ1はハロゲン原子；
Ｘ2はハロゲン原子；
Ｑは−ＣＨ2−基または−(ＣＨ2)2−基；
ＹはＣ1-6アルキル基；および
ＣＯ2Ｒはエステル化されていてもよいカルボキシル基)
で示される新規なフェニルアラニン誘導体、またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とする医薬組成物に関する。
【００１２】
さらに、本発明は、式[Ｉ]の化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とすることを特徴とする、α4インテグリン介在細胞接着による病態の治療または予防用医薬組成物に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明の医薬組成物における有効成分である式[Ｉ]の化合物はその不斉炭素に基づいて光学活性異性体が存在するが、本発明はこれらの異性体およびその混合物も包含する。
【００１４】
本発明の一態様において、化合物[Ｉ]におけるエステル化されていてもよいカルボキシル基とは、カルボキシル基および体内で加水分解されてカルボキシル基になるエステル化カルボキシル基を意味する。そのようなエステル化カルボキシル基の例としては、メトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル基等の置換または非置換Ｃ2-7アルコキシカルボニル基が挙げられる。特にＣ2-7アルコキシカルボニル基が好ましい。
【００１５】
本発明の一態様において、不斉中心におけるＲ／Ｓ立体配位は確定する必要はない。本発明における活性化合物は単一の配位の化合物でもよく、または異なる配位が混合した化合物でもよい。
【００１６】
本発明の活性化合物中、好ましい化合物は式[Ｉ−１]の化合物である。
【化４】
0004233353.tif 000003
(式中、記号は前記と同じ)
【００１７】
さらに好ましい態様において、Ｘ1は塩素原子またはフッ素原子、Ｘ2は塩素原子またはフッ素原子、ＹはＣ1-4アルキル基、およびＣＯ2Ｒはカルボキシル基またはＣ2-7アルコキシカルボニル基である。
【００１８】
さらに好ましい別の態様においては、Ｘ1は塩素原子またはフッ素原子、Ｘ2は塩素原子またはフッ素原子、Ｑは−ＣＨ2−基、Ｙはメチル基、エチル基、またはｎ−プロピル基、およびＣＯ2Ｒはカルボキシル基、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、またはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である。
【００１９】
特に好ましい活性化合物は、Ｘ1がフッ素原子、Ｘ2が塩素原子またはフッ素原子、Ｑが−ＣＨ2−基、Ｙがメチル基またはエチル基、およびＣＯ2Ｒがカルボキシル基またはメトキシカルボニル基およびエトキシカルボニル基等のＣ2-7アルコキシカルボニル基である化合物である。
【００２０】
本発明の最も好ましい活性化合物は以下の化合物から選ばれる。
Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン[つまり、(２Ｓ)−２−[(２,６−ジフルオロベンゾイル)アミノ]−３−[４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)フェニル]プロピオン酸]；
Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン[つまり、(２Ｓ)−２−[(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)アミノ]−３−[４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)フェニル]プロピオン酸]；
Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン[つまり、(２Ｓ)−２−[(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)アミノ]−３−[４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)フェニル]プロピオン酸]；
Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン[つまり、(２Ｓ)−２−[(２,６−ジフルオロベンゾイル)アミノ]−３−[４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)フェニル]プロピオン酸]；
またはそのＣ1-6アルキルエステル、
またはその薬理学的に許容される塩。
【００２１】
本発明の活性化合物は遊離の形または製薬学的に許容される塩のいずれの形でもよい。製薬学的に許容される塩とは、無機塩基との塩、有機塩基との塩、または塩基性アミノ酸との塩(ナトリウム塩およびカリウム塩等のアルカリ金属塩；マグネシウム塩およびカルシウム塩等のアルカリ土類金属塩；またはアンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩等のアミンとの塩；リジンとの塩等)、および無機酸または有機酸との塩(塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、臭化水素酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩等)が挙げられる。また、製薬学的に許容される塩には、分子内塩、または溶媒和物または水和物も含まれる。
【００２２】
本発明の活性化合物の特徴は、(１)ビフェニル環の４'位へのＣ1-6アルコキシ置換Ｃ1-2アルキル基の導入と、(２)ジハロ置換ベンゾイル基および２',６'−ジメトキシ−４'−(Ｃ1-6アルコキシ置換Ｃ1-2アルキル)ビフェニル環との組み合わせにあり、そのような特徴は先行文献では特に開示されていない。
【００２３】
本発明の活性化合物はα4介在細胞接着に対する強力な阻害活性を保持し、また、ａ)代謝安定性、ｂ)血漿蛋白質結合およびｃ)水溶性が総体的に改善されており、このため経口投与時に優れた生体内利用性を示す。特に、ビフェニル環の４'位へのＣ1-6アルコキシ置換Ｃ1-2アルキル基の導入により、先行文献に開示されているいくつかの化合物に見られるような速い代謝を減速する。本発明の活性化合物は肝クリアランスの減少等により生体内利用性を改善している。
【００２４】
よって、本発明の医薬組成物はα4介在細胞接着による病態に対して優れた改善作用を示し、本発明の医薬組成物はヒトなどの哺乳動物におけるα4接着介在病態の治療または予防に用いることができる。
【００２５】
さらに、本発明の医薬組成物は分子ＭＡｄＣＡＭ−１および／またはＶＣＡＭ−１を発現する組織への白血球(たとえば、リンパ球、単球)の浸潤(リクルートメント、および／または組織中の白血球の蓄積を含む)が関与する疾病に罹患した個体の治療に用いることができる。たとえば、胃集合内皮細胞を含む胃腸管、他の粘膜組織、あるいはＭＡｄＣＡＭ−１分子を発現する組織(小腸大腸の固有層の細静脈などの胃集合組織、乳腺(泌乳乳腺)等)への白血球浸潤が関与する疾病を含む、炎症性疾病が本組成物により治療できる。同様に、本発明組成物はＶＣＡＭ−１分子を発現する組織への白血球浸潤が関与する疾病に罹患した個体の治療に用いることができる。
【００２６】
よって、本発明の医薬組成物は、リウマチ関節炎等の炎症性疾患；喘息；鼻炎などのアレルギー性疾患；成人呼吸窮迫症候群；ＡＩＤＳ痴呆；アルツハイマー病；心・血管疾患；血栓症または有害な血小板凝集；血栓溶解後の再閉塞；再潅流障害；乾癬、湿疹、接触性皮膚炎およびアトピー性皮膚炎などの皮膚炎症性疾患；糖尿病(たとえば、インスリン依存性糖尿病、自己免疫性糖尿病)；多発性硬化症；全身性エリテマトーデス；潰瘍性大腸炎、クローン病(限局性腸炎)および嚢炎(pouchitis)(たとえば、直腸結腸切除後および回腸肛門吻合後に発症)などの炎症性腸疾患；他の胃腸管への白血球浸潤が関与する疾患、例えば、セリアック病、非熱帯スプルー、血清反応陰性関節症が関与する腸疾患、リンパ球性大腸炎、コラーゲン蓄積大腸炎、および好酸球性胃腸炎；他の上皮組織(例えば皮膚、尿道、気管支、関節滑膜)への白血球浸潤が関与する疾患；膵炎；乳腺炎；肝炎；胆嚢炎；胆管炎または胆管周囲炎(胆管および肝臓の周囲組織)；気管支炎；副鼻腔炎；間質性線維症を引き起こす肺の炎症性疾患(たとえば、過敏性肺炎)；サルコイドーシス；骨粗鬆症；変形性関節症；腫瘍脈管形成、悪性腫瘍、多発性骨髄腫、および腫瘍性または癌性増殖転移を含む腫瘍性疾患；外傷(外傷治癒促進)；網膜剥離、アレルギー性結膜炎および自己免疫ブドウ膜炎などのある種の眼病；シェーグレン症候群；宿主対移植片疾患、移植片対宿主疾患などの臓器移植後の拒絶反応(慢性および急性)；脈管内膜過形成；動脈硬化症(アテローム性動脈硬化症や移植後の移植片動脈硬化症を含む)；経皮経管冠動脈形成術(ＰＴＣＡ)および経皮経管動脈再疎通術などの外科手術後の再梗塞または再狭窄；腎炎；骨髄腫誘発性骨吸収；および脳卒中、外傷性脳損傷および脊椎損傷などの中枢神経障害などの治療または予防に用いることができる。
【００２７】
本発明の医薬組成物は好ましくは、喘息、鼻炎などのアレルギー性疾患、潰瘍性大腸炎やクローン病などの炎症性腸疾患、リウマチ関節炎、アトピー性皮膚炎、多発性硬化症および臓器移植後の拒絶反応の治療または予防に用いることができる。
【００２８】
治療に適切な化合物は、適切な動物モデルを用いてインビボで評価できる。炎症の適切な動物モデルは文献に開示されている。たとえば、ＮＯＤマウスはインスリン依存性糖尿病の動物モデルである。ＣＤ４５ＲＢHi ＳＣＩＤマウスモデルは、クローン病および潰瘍性大腸炎両者と類似性のあるモデルである(ポウリーら、Immunity, 1：553-562 (1994))。ワタボウシタマリンは自然発生的に、しばしば慢性的に大腸炎を起こし、それは臨床的にまた組織学的にヒトにおける潰瘍性大腸炎に相似している(マダラら、Gastroenterology, 88：13-19 (1985))。ネズミ大腸炎のデキストラン硫酸ナトリウム(ＤＳＳ)モデルは飲料水にＤＳＳを加えて導入される。ＤＳＳ大腸の生理的および組織学的変化は文献に十分に開示されており、ヒト潰瘍性大腸炎によく似ている(クーパーら、Laboratory Investig., 69：238-249 (1993))。ヒト炎症性腸疾患の病変と相似の胃腸病変を起こすＩＬ−１０ノックアウトマウスも開示されている(ストローバーら、Cell, 75：203-205 (1993))。
【００２９】
本発明の医薬組成物は、通常、有効成分の式[Ｉ]の化合物および薬理学的に許容される担体または希釈剤を含有する。
【００３０】
製薬学的に許容される担体または希釈剤は、たとえば、結合剤(シロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント、ポリビニルピロリドン等)、賦形剤(乳糖、砂糖、コーンスターチ、リン酸カリウム、ソルビトール、グリシン等)、滑沢剤(ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、シリカ等)、崩壊剤(馬鈴薯デンプン等)および湿潤剤(ラウリル硫酸ナトリウム等)等を挙げることができる。
【００３１】
医薬組成物は口、肺、眼、直腸、非経口(皮下、筋肉内および静脈内を含む)、動脈内、局所、経鼻吸入(たとえばエアゾールと)またはバッカル投与に適した製剤形が挙げられる。これらの製剤は製薬分野で公知の持続型製剤も含むものと理解される。経口および非経口投与が好ましい投与方法である。
【００３２】
医薬組成物は単位投与形が適当であり、製薬分野でよく知られたいずれの方法によっても調製できる。一般的に、製剤は有効成分を液体担体または細密に粉砕された固体担体、または両者と均一かつ完全に混合し、ついで、要すれば、生成物を所望の形に成形することにより調製される。
【００３３】
経口投与に適した本発明の製剤は、カプセル剤、カシェ剤、錠剤、ロゼンジ剤等のそれぞれ分離した単位形で、各単位形は予め決定された量の有効成分を粉末、顆粒、または水性液体溶液または懸濁液の形で含有する。他の投与方法の製剤としては非水性液体を含み得、水中油乳剤や、油中水乳剤、エアゾール剤、クリーム剤または軟膏、または経皮的に有効成分を投与するための経皮パッチ剤への含浸剤の形で、必要な患者に投与される。本発明の活性化合物はそれを必要とする患者にボーラス剤、舐剤、またはペースト剤の形でも投与できる。
【００３４】
本発明の活性化合物はα4介在細胞接着を減少または予防するために十分な量で、それを必要とする患者に投与することができる。他の態様では、本発明の活性化合物は所望の治療効果および／または予防効果を得るために十分な量で、またはＭＡｄＣＡＭ−１／ＶＣＡＭ−１介在結合を減少あるいは予防し、よって白血球接着および浸潤を阻害しそれに伴う細胞応答を阻止するために十分な量で、患者に投与できる。
【００３５】
治療効果を得るために必要な化合物[Ｉ]の用量は、投与方法、治療対象の年齢、性別、体重および症状、および治療する疾患や病気により変化するが、化合物[Ｉ]またはその製薬学的に許容される塩の１日あたりの投与量は、哺乳動物の体重１ｋｇ当たり０.１〜１００ｍｇ、好ましくは０.３〜３０ｍｇ／ｋｇである。非経口投与の場合、投与量は体重１ｋｇ当たり化合物の０.１〜１０ｍｇ、好ましくは０.３〜３ｍｇ／ｋｇの範囲である。経口投与の場合、適切な１日量は体重１ｋｇあたり化合物１〜１００ｍｇ、好ましくは２〜３０ｍｇ、最も好ましい投与量は１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲で、１日あたり２〜３回に分けて投与される。局所投与の場合、例えば皮膚や眼に投与する場合は、式[Ｉ]の化合物、または製薬学的に許容される塩の適切な投与量は体重１ｋｇ当たり化合物０.１〜１００μｇの範囲である。
【００３６】
式[Ｉ]の化合物、またはその製薬学的に許容される塩は以下の工程で合成できる。
(１)式[ＩＩ]：
【化５】
0004233353.tif 000004
(式中、ＣＯ2Ｒ1はエステル化されたカルボキシル基、および他の記号は前記と同じ)
で示される化合物を式[Ｉａ]：
【化６】
0004233353.tif 000005
(式中、記号は前記と同じ)
で示される化合物に変換し；
(２)要すれば、化合物[Ｉａ]のエステル化されたカルボキシル基をカルボキシル基に変換し；
(３)さらに要すれば、得られた化合物をその製薬学的に許容される塩に変換する。
【００３７】
工程１：
化合物[ＩＩ]の化合物[Ｉａ]への変換は後記の方法ＡからＣのいずれか１法により行うことができる。
【００３８】
工程２：
エステル化されたカルボキシル基ＣＯ2Ｒ1のカルボキシル基への変換は、通常の方法により、例えば、塩基(水酸化リチウムや水酸化ナトリウムなどの水酸化アルカリ金属など)や酸(塩酸など)を用いた加水分解や、酸(ＴＦＡなど)処理等により行うことができる。
【００３９】
工程３：
得られた化合物[Ｉ]のその製薬学的に許容される塩への変換は、塩基(水酸化ナトリウムなどの無機塩基、エチルアミンなどの有機塩基、リジンなどの塩基性アミノ酸など)や酸(塩酸、硝酸および硫酸などの無機酸、酢酸やマレイン酸などの有機酸、またはアスパラギン酸やグルタミン酸などの酸性アミノ酸)を用いる通常の方法により行うことができる。
【００４０】
化合物[ＩＩ]の化合物[Ｉａ]への変換は以下の方法(方法Ａ〜Ｃ)のいずれか１法により行うことができる。
【００４１】
方法Ａ：
Ｑが−ＣＨ2−基である化合物[Ｉａ]は以下の方法で合成できる：
(１)化合物[ＩＩ]を酸化して式[ＩＩＩ]：
【化７】
0004233353.tif 000006
(式中、記号は前記と同じ)
で示される化合物とし、ついで
(２)化合物[ＩＩＩ]を式[ＩＶ]：
Ｙ−ＯＨ          [ＩＶ]
(式中、記号は前記と同じ)
で示される化合物と還元的に縮合する。
【００４２】
工程１：
酸化反応は適当な溶媒中(例えば、ＣＨ2Ｃｌ2、ベンゼン、トルエン、ＤＭＳＯ、あるいはこれらの混合物)、塩基(例えば、Ｅｔ3Ｎ、ＤＩＥＡ)の存在下あるいは非存在下、慣用の酸化剤(例えば、ＭｎＯ2、ＳＯ3・ピリジンなど)を用いて行うことができる。
反応は−５０℃〜５０℃の間、好ましくは室温下で行うことができる。
【００４３】
工程２：
化合物[ＩＩＩ]と化合物[ＩＶ]の縮合反応は還元剤(例えば、トリエチルシラン等)および脱水剤(例えば、硫酸、トリフルオロ酢酸等)の存在下、溶媒中(例えば、ＴＨＦ、ＣＨ2Ｃｌ2など)または無溶媒で行うことができる。
反応は−５０℃〜５０℃に間、好ましくは０℃〜室温下で行うことができる。
【００４４】
方法Ｂ：
化合物[Ｉａ]は以下の方法で合成できる：
(１)化合物[ＩＩ]を式[Ｖ]：
【化８】
0004233353.tif 000007
(式中、Ｚは脱離基、および他の記号は前記と同じ)
で示される化合物に変換し、ついで
(２)化合物[Ｖ]を化合物[ＩＶ]と反応させる。
【００４５】
脱離基Ｚとしては、例えば、ハロゲン原子(塩素原子、臭素原子およびヨウ素原子)が使用できる。
【００４６】
工程１：
化合物[ＩＩ]の化合物[Ｖ]への変換は、適当な溶媒中(例えば、ＣＨ2Ｃｌ2、ジオキサン、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＤＭＳＯなど)、塩基の存在下(例えば、Ｎａ2ＣＯ3、ＮａＨＣＯ3など)または非存在下でハロゲン化剤(例えば、三臭化リン、三塩化リン、およびＣＢｒ4とトリフェニルホスフィンとの組み合わせなど)で化合物[ＩＩ]をハロゲン化することにより行うことができる。
反応は−５０℃〜５０℃の間、好ましくは０℃〜室温下で行うことができる。
【００４７】
工程２：
化合物[Ｖ]と化合物[ＩＶ]の反応は銀化合物(酸化第１銀(Ａｇ2Ｏ)、酸化銀(ＡｇＯ)等の存在下で、適当な溶媒中(例えば、トルエン、ＣＨ2Ｃｌ2、ジオキサン、ＭｅＣＮなど)または無溶媒で行うことができる。
反応は室温下から１００℃の範囲の温度下で行うことができる。
【００４８】
方法Ｃ：
化合物[Ｉａ]は化合物[ＩＩ]を式[ＶＩ]：
Ｙ−Ｚ          [ＶＩ]
(式中、記号は前記と同じ)
で示される化合物でアルキル化することにより合成できる。
【００４９】
アルキル化反応は銀化合物(酸化第１銀(Ａｇ2Ｏ)および酸化銀(ＡｇＯ)の存在下、適当な溶媒中または無溶媒で行うことができる。反応は方法Ｂの工程２と同様の方法で行うことができる。
【００５０】
出発化合物[ＩＩ]は以下の方法(方法ＤまたはＥ)により合成できる。
方法Ｄ：
【化９】
0004233353.tif 000008
(上記反応工程式中、記号は前記と同じである)
【００５１】
化合物[ＩＩ]は式[ＶＩＩ]の化合物またはその反応性誘導体を、式[ＶＩＩＩ]の化合物またはその塩と縮合させることにより合成できる。
【００５２】
化合物[ＶＩＩＩ]の塩としては、例えば無機酸または有機酸との塩(トリフルオロ酢酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、塩酸塩、硫酸塩など)が挙げられる。化合物[ＶＩＩ]と化合物[ＶＩＩＩ]またはその塩との縮合反応は適当な溶媒中(例えば、ＣＨ2Ｃｌ2、ＴＨＦ、ＤＭＦ)、縮合剤(例えば、ＢＯＰ−Ｃｌ、ＢＯＰ試薬、ＥＤＣなど)および塩基(例えば、ＤＩＥＡ、Ｅｔ3Ｎ、４−メチルモルホリン)の存在下で行うことができる。
【００５３】
縮合剤は活性化剤(例えば、ＨＯＢｔ)と共に用いることが好ましい。
【００５４】
反応は−５０℃から５０℃の間で、好ましくは０℃から室温下で行うことが出来る。
【００５５】
化合物[ＶＩＩＩ]またはその塩と化合物[ＶＩＩ]の反応性誘導体との縮合反応は適当な溶媒中(例えば、ＡｃＯＥｔ、水、ＣＨ2Ｃｌ2、ＴＨＦ、ＤＭＦ、トルエンあるいはそれらの混合物)、塩基(例えば、ＤＩＥＡ、Ｅｔ3Ｎ、Ｎａ2ＣＯ3、Ｋ2ＣＯ3、ＮａＨＣＯ3など)の存在下で行うことが出来る。
【００５６】
化合物[ＶＩＩ]の反応性誘導体の例としては、例えば酸ハライド(酸クロリドなど)が挙げられる。反応は−３０℃から室温下で行うことが出来る。
【００５７】
方法Ｅ：
【化１０】
0004233353.tif 000009
(上記反応工程式中、Ｌは脱離基、および他の記号は前記と同じである)
【００５８】
化合物[ＩＩ]は式[ＩＸ]の化合物を式[Ｘ]の化合物とカップリングさせて合成できる。
脱離基Ｌの例としては、トリフルオロメタンスルホニルオキシ基が挙げられる。
【００５９】
カップリング反応は、例えば室温から１５０℃(好ましくは、８０℃から１５０℃)の間で、パラジウム触媒(例えば、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム、パラジウム(ＩＩ)アセテート、パラジウム(ＩＩ) クロリド)および塩基(例えばＫ2ＣＯ3、Ｅｔ3Ｎ、ＤＩＥＡ、ジイソプロピルアミン、モルホリン)の存在下、ホスフィンリガンド(例えば、トリフェニルホスフィン、トリエチルホスフィン、トリメチルホスフィン)の存在または非存在下に、適当な溶媒中(例えば、トルエン、ＴＨＦ、ＤＭＦ、ＮＭＰ、水またはこれらの混合溶媒)で行われる。
【００６０】
化合物[ＩＸ]は、
(１)式[ＸＩ]：
【化１１】
0004233353.tif 000010
(式中、Ｚ1はハロゲン原子であり、他の記号は前記と同じ)
で示される化合物と式[ＸＩＩ]：
【化１２】
0004233353.tif 000011
(式中、ＣＯ2Ｒ1は上記と同じ)
で示される化合物またはその塩と、方法Ｄと同様の方法で縮合し；ついで
(２)得られた化合物の水酸基を脱離基に変換することにより合成できる。例えば、水酸基のトリフルオロメタンスルホニルオキシ基への変換は、無水トリフルオロメタンスルホン酸を用い、−３０℃から０℃の間で、塩基(例えば、ピリジン、ＮＥｔ3、ＤＩＥＡ)の存在下、適当な溶媒(例えば、ＣＨ2Ｃｌ2、ＴＨＦあるいはこれらの混合溶媒)中で行うことができる。
【００６１】
化合物[ＶＩＩＩ]は、
(１)式[ＸＩＩＩ]：
【化１３】
0004233353.tif 000012
(式中、Ｐはアミノ基の保護基、および他の記号は前記と同じ)
で示される化合物を、化合物[Ｘ]とカップリング反応により縮合し；
(２)得られた化合物のアミノ基の保護基を除くことにより合成できる。
【００６２】
アミノ基の保護基は通常のアミノ基の保護基から選択でき、例えば、アリール−Ｃ2-7アルコキシカルボニル基(例えば、ベンジルオキシカルボニル基)、Ｃ2-7アルコキシカルボニル基(例えば、tert-ブトキシカルボニル基)等を用いることができる。
【００６３】
カップリング反応は、方法Ｅにおける化合物[ＩＸ]と化合物[Ｘ]の反応と同様の方法で行うことが出来る。
アミノ基の保護基の除去は常法により行われ、例えば、触媒(例えば、パラジウム−活性炭素)を用いた接触還元、酸(例えばＴＦＡ、ＨＣｌ)処理等により実施できる。
【００６４】
Ｌがトリフルオロメタンスルホニルオキシ基である化合物[ＸＩＩＩ]は、式[ＸＩＶ]：
【化１４】
0004233353.tif 000013
(式中、記号は前記と同じである)
で示される化合物と無水トリフルオロメタンスルホン酸を、化合物[ＩＸ]の合成の工程２と同様の方法で反応させることにより合成することができる。
【００６５】
化合物[Ｘ]は、
(１)式[ＸＶ]：
【化１５】
0004233353.tif 000014
(式中、Ｑは前記と同じ)
で示される化合物を、アルキルリチウム(例えば、ｎ−ＢｕＬｉ)と、−１００℃から室温の間、適当な有機溶媒(例えば、ジエチルエーテル、ＴＨＦまたはこれらの混合溶媒)中で反応させ、
(２)得られた化合物をホウ酸トリメチルと−１００℃から室温の間で、適当な有機溶媒(例えば、ジエチルエーテル、ＴＨＦまたはこれらの混合溶媒)中で反応させ、ついで
(３)得られた化合物を０℃から室温の間、適当な溶媒(例えば、ジエチルエーテル、ＴＨＦ、ジオキサン、水、またはそれらの混合溶媒)中で、酸(例えば、酢酸、クエン酸)の存在下で加水分解して合成できる。
【００６６】
本明細書および請求の範囲を通じて、ハロゲン原子は、塩素原子、フッ素原子、臭素原子、またはヨウ素原子である。Ｃ1-6アルキル基は、炭素数１〜６個の、好ましくは炭素数１〜４個の、直鎖、分岐鎖あるいは環状アルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、イソプロピル、シクロプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル等が挙げられる。Ｃ2-7アルコキシカルボニル基は、炭素数２〜７の、好ましくは炭素数２〜５の、直鎖、分岐鎖または環状アルコキシカルボニル基を意味し、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、ｎ−ブトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、シクロプロポキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル等が挙げられる。
【００６７】
略語：
ＢＯＰ−Ｃｌ：ビス(２−オキソ−３−オキサゾリジニル)ホスフィン酸クロリドＢＯＰ試薬：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＥＤＣ：１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＭＦ：Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＮＭＰ：１−メチル−２−ピロリドン
ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
Ａｃ：アセチル
Ｍｅ：メチル
Ｅｔ：エチル
Ｐｒ：プロピル
Ｂｕ：ブチル
Ｐｈ：フェニル
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル(＝ＡｃＯＥｔ)
【００６８】
実験例
ＲＰＭＩ８８６６／ＣＳ−１細胞接着阻害試験：
本試験は、α4β7インテグリンを発現するＲＰＭＩ８８６６細胞(以下、ＰＲＭＩ細胞)とフィブロネクチンＣＳ−１の部分配列ペプチドを用いて、本発明有効成分のα4β7インテグリン介在細胞接着阻害作用を測定したものである。
(１)検体溶液の調製
後記製造例記載化合物をジメチルスルホキシドに溶解した後、０.２５％トリ卵白アルブミン添加ダルベッコ変法イーグル培地溶液で希釈し、所望の濃度の検体溶液を調製した。
(２)ペプチド被膜プレートの調製
ＣＳ−１部分配列ペプチド(配列：ＣＬＨＧＰＥＩＬＤＶＰＳＴ)と組換ペプチド(配列：ＣＬＨＰＧＩＥＬＶＳＤＰＴ)をベックマン９９０シンセサイザーで合成した。マイクロプレートの各ウェルをヒト血清アルブミンリン酸緩衝生理食塩水溶液(２０μｇ／ｍＬ、１００μｌ)を用いて室温で２時間被膜した後、リン酸緩衝生理食塩水で一回洗浄し、３−(２−ピリジルジチオ)プロピオン酸  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルリン酸緩衝生理食塩水溶液(１０μｇ／ｍＬ、100μｌ)で１時間誘導体化した。洗浄後、前記ペプチドのジメチルスルホキシド溶液(１００μｇ／ｍＬ、１００μｌ)を各ウェルに加え、４℃で一晩プレートに架橋させた。プレートをリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、次いで、プレートをウシ血清アルブミンのリン酸緩衝生理食塩水溶液(２.５ｍｇ／ｍＬ、１００μｌ)で被膜させ(３７℃、１時間)、未反応サイトをブロックした。
(３)細胞接着
検体溶液１００μｌをプレートに加えた後、ＲＰＭＩ細胞の０.２５％トリ卵白アルブミン含有ダルベッコ変法イーグル培地溶液(２.５×１０6細胞／ｍＬ、１００μｌ)をプレートに加え、３７℃で１時間インキュベートした。インキュベート後、プレートをリン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。
ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコースアミニドを０.１Ｍクエン酸緩衝液(ｐＨ５)に７.５ｍＭの濃度で溶解し、等量の０.５％のトリトンＸ−１００(ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール)と混合した。この溶液５０μｌをプレートに加え、プレートを３７℃で６０分間インキュベートした。グリシン／エデト酸(エチレンジアミン四酢酸)溶液(５０ｍＭグリシン、５ｍＭエデト酸緩衝液、ｐＨ１０.４)１００μｌを添加して反応を止めた。分光光度計で４０５ｎｍの吸光度を測定し、遊離したｐ−ニトロフェノールを定量した。
組換ペプチドを用いて得られた非特異的結合を差し引いた後、濃度阻害曲線から５０％阻害濃度(ＩＣ50)を計算した。結果は下記第１表のとおりである。
なお、比較対照化合物として、ＷＯ９９／３６３９３パンフレットに記載のＮ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシフェニル)−Ｌ−フェニルアラニンを用いた。
【表１】
0004233353.tif 000015
第１表から明らかな通り、本発明の活性化合物は優れたα4β7インテグリン介在細胞接着阻害作用を示す。
【００６９】
製造例１：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
(１)Ｌ−チロシン エチルエステル塩酸塩(５５.０８ｇ)と炭酸水素ナトリウム(２２.５２ｇ)のＣＨ2Ｃｌ2／水(２８０ｍｌ／２８０ｍｌ)混合物に二炭酸ジｔｅｒｔ−ブチル(５６.８２ｇ)を少量ずつ加えた。混合物を室温で２時間攪拌し、酢酸エチルで希釈した。有機層を水洗し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をジエチルエーテルとヘキサンの混合溶媒で再結晶してＮ−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)−Ｌ−チロシン エチルエステル(６２.７１ｇ)を得た。融点：８７−８８℃；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ３２７ (Ｍ＋ＮＨ4)、３１０(Ｍ＋Ｈ)。
【００７０】
(２)ピリジン(４８ｍｌ)を上記で得た生成物(６１.６３ｇ)のＣＨ2Ｃｌ2(１８００ｍｌ)溶液にアルゴン下加えた。溶液を−３５℃から−３０℃に冷却し、無水トリフルオロメタンスルホン酸(３５ｍｌ)を攪拌下少量ずつ加えた。添加後、混合物を−３０℃から−２０℃で２時間攪拌した。氷水を混合物に加え、有機層を集め、５％クエン酸水溶液、水、および食塩水で洗浄した。得られたＣＨ2Ｃｌ2溶液をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝４：１)で精製してＮ−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)−Ｏ−(トリフルオロメタンスルホニル)−Ｌ−チロシン エチルエステル(８７.９４ｇ)を得た。融点：４７−４９℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３９０,１７３７,１６９１ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ (Ｍ＋ＮＨ4)。
【００７１】
(３)上記で得た生成物(７６.５１ｇ)と２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルベンゼンボロン酸(６２.２７ｇ)のＤＭＦ(３５０ｍｌ)混合物にＥｔ3Ｎ(４１ｇ)を加え、アルゴンで脱気した。Ｐｄ(ＰＰｈ3)4(１９.５ｇ)を混合物に加え、８０〜９０℃でアルゴン下１時間攪拌した。混合物を冷却し、ＡｃＯＥｔと水で希釈し、セライト濾過し、ＡｃＯＥｔで洗浄した。濾液を水で希釈し、分取した。有機層を水と食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥、活性炭処理して減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝３：２〜２：３)で精製し、イソプロピルアルコールで再結晶して、Ｎ−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(６９.４ｇ)を得た。融点：１４２−１４３℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３５０７,３３２３,１７３１,１６８９,１６０６ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ４７７(Ｍ＋ＮＨ4)。
【００７２】
(４)上記で得た生成物(１０.０ｇ)のジオキサン(５０ｍｌ)溶液に４Ｎ ＨＣｌ−ジオキサン(５０ｍｌ)を０℃で加え、混合物を室温下２時間攪拌した。混合物をジエチルエーテルで希釈した。得られた沈殿物を濾取し、ジエチルエーテルで洗浄して、４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル塩酸塩(８.２６ｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３２１,１７３５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ３６０(Ｍ＋Ｈ)。
【００７３】
(５)上記で得た生成物(１.５ｇ)のＮａＨＣＯ3(９５５ｍｇ)含有ＡｃＯＥｔ／水(６０ｍｌ／６０ｍｌ)混合物に、２,６−ジクロロベンゾイルクロリド(０.６ｍｌ)を０℃で加え、混合物を０℃で０.５時間攪拌した。混合物をＡｃＯＥｔ、水、および少量のＣＨ2Ｃｌ2で希釈した。有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。残渣を結晶化してＮ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(１.９３ｇ)を得た。融点：１２１℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３２４９,１７２５,１６４１ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５３２(Ｍ＋Ｈ)。
【００７４】
(６)上記で得た生成物(５０８ｍｇ)のＣＨ2Ｃｌ2(１０ｍｌ)溶液にＭｎＯ2(９７６ｍｇ)を加えた。混合物を室温下２.５時間攪拌し、１４時間還流した。混合物を冷却し、セライト濾過し、ＣＨ2Ｃｌ2で洗浄した。濾液を減圧濃縮してＮ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ホルミルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(３５２ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７３４,１６９１,１６５５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５３０(Ｍ＋Ｈ).
【００７５】
(７)上記で得た生成物(３４５ｍｇ)のＥｔ3ＳｉＨ(２２６ｍｇ)含有ＥｔＯＨ(４ｍｌ)混合物に濃硫酸(０.５ｍｌ)を加えた。室温で１８時間攪拌後、混合物をＡｃＯＥｔと水の混合物で処理した。有機層を水と食塩水で順次洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ｎ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝２：１)で精製し、ジイソプロピルエーテルとイソプロパノールの混合溶媒で結晶化して標記化合物(２５４ｍｇ)を得た。融点：９１〜９４℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３２９０,１７２９,１６５２,１４６３,１１２３ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５６０(Ｍ＋Ｈ)。
【００７６】
製造例２：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル
(１)Ｎ−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)−Ｌ−チロシン メチルエステル(３.３４ｇ)を製造例１−(１)と同様にして、Ｌ−チロシン メチルエステル塩酸塩(２.６９ｇ)から得た。融点：１０５〜１０６℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３４１５,３３２１,１７６１,１６９１ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ３１３(Ｍ＋ＮＨ4),２９６(Ｍ＋Ｈ)。
【００７７】
(２)上記で得た生成物(３.３ｇ)をＮ−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)−Ｏ−(トリフルオロメタンスルホニル)−Ｌ−チロシン メチルエステル(４.６２ｇ)に、製造例１−(２)と同様にして変換した。ＩＲ(Ｎｅａｔ)３３６６,１７４７,１７１５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ４４５(Ｍ＋ＮＨ4)。
【００７８】
(３)上記で得た生成物(４.５６ｇ)をＮ−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル(３.２１ｇ)に、製造例１−(３)と同様にして変換した。融点：１００℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３６０,１７３９,１６８３,１６６１ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ４６３(Ｍ＋ＮＨ4)。
【００７９】
(４)上記で得た生成物(３.１９ｇ)を４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル塩酸塩(２.４５ｇ)に、製造例１−(４)と同様にして変換した。融点：２１１−２１３℃(分解)；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３０１,１７３９ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ３４６(Ｍ＋Ｈ)。
【００８０】
(５)上記で得た生成物(１.０８ｇ)をＮ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル(８７４ｍｇ)に、製造例１−(５)と同様にして変換した。融点：１１６〜１２０℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３２３０,３０６９,１７４９,１７３２,１６４１ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５１８(Ｍ＋Ｈ)。
【００８１】
(６)上記で得た生成物(９３７ｍｇ)のＮａＨＣＯ3(３０４ｍｇ)含有ジオキサン(１０ｍｌ)混合物にＰＢｒ3(６８０ｍｇ)のジオキサン(２ｍｌ)溶液を室温下少量ずつ加えた。２０分間攪拌後、混合物に氷を入れて反応を止め、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を水と食塩水で順次洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ＡｃＯＥｔ／ＣＨＣｌ3＝１：１０)で精製してＮ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(４−ブロモメチル−２,６−ジメトキシフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル(５９８ｍｇ)を得た。ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５８４,５８２,５８０(Ｍ＋Ｈ)。
【００８２】
(７)上記で得た生成物(５７１ｍｇ)のＡｇＯ(６５９ｍｇ)含有ＥｔＯＨ(２０ｍｌ)混合物を室温下７時間超音波で処理した。混合物をセライト濾過し、ＥｔＯＨで洗浄した。濾液を減圧濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ＡｃＯＥｔ／ＣＨＣｌ3＝１：２０)で精製して標記化合物(３１８ｍｇ)を得た。ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５４６(Ｍ＋Ｈ)。
【００８３】
製造例３：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例１の化合物(２０７ｍｇ)のＴＨＦ／水(８ｍｌ／２ｍｌ)溶液にＬｉＯＨ(３０ｍｇ)を５℃で加えた。混合物を５℃で２０時間攪拌し、６Ｎ塩酸(１ｍｌ)で反応を止め、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を水と食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をＭｅＯＨ、ジエチルエーテルおよびヘキサンの混合溶媒で再結晶して標記化合物(１４７ｍｇ)を得た。融点：１９６〜１９８℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３００,３２７０,１７０５,１６５１,１４６２,１１２６ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ−Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５３０(Ｍ−Ｈ)。
【００８４】
製造例４：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
製造例１−(５)の生成物(３０４ｍｇ)のＡｇ2Ｏ(８６８ｍｇ)含有ＣＨ3ＣＮ(３０ｍｌ)混合物にＭｅＩ(８７１ｍｇ)を加えた。混合物を室温下１８.５時間攪拌し、ついで５０℃で５時間超音波で処理した。混合物をセライト濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ＡｃＯＥｔ／ｎ−ヘキサン＝１：２)で精製して標記化合物(２２２ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)３２８５,１７３６,１６６３ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５４６(Ｍ＋Ｈ)。
【００８５】
製造例５：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例４で得た生成物(２１０ｍｇ)を製造例３と同様にして標記化合物(１３９ｍｇ)に変換した。融点：２３２〜２３５℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３３６,１７１７,１６８５ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ−Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５１６(Ｍ−Ｈ)。
【００８６】
製造例６：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ｎ−プロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
(１)製造例１−(５)で得た生成物(３.０ｇ)のＰＰｈ3(１.７７ｇ)含有ＣＨ2Ｃｌ2(８０ｍｌ)溶液にＣＢｒ4(２.８ｇ)を０℃で加えた。混合物を室温下３時間攪拌し、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ＡｃＯＥｔ／ｎ−ヘキサン＝１：１)で精製してＮ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ブロモメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(３.１５ｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７３１,１６５４ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５９６(Ｍ＋Ｈ)。
【００８７】
(２)上記で得た生成物(３０４ｍｇ)のＡｇＯ(５１５ｍｇ)含有ｎ−ＰｒＯＨ(１２ｍｌ)混合物をアルゴン下４５℃で２８時間超音波で処理した。混合物をセライト濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ｎ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝３：１)で精製して標記化合物(２５８ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７３３,１６５５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５７４ (Ｍ＋Ｈ)。
【００８８】
製造例７：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ｎ−プロピルオキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例６で得た生成物(１５０ｍｇ)を製造例３と同様にして標記化合物(１４２ｍｇ)に変換した。融点：１８３〜１８６℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７１９,１６８４ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５４４(Ｍ−Ｈ)。
【００８９】
製造例８：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−イソプロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
製造例６−(１)で得た生成物(２３１ｍｇ)をｎ−プロパノールの代わりにイソプロパノールを用いる以外は、製造例６−(２)と同様にして標記化合物(１７９ｍｇ)に変換した。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３２７０,１７３１,１６５８ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５７４(Ｍ＋Ｈ)。
【００９０】
製造例９：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−イソプロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例８で得た生成物(１２２ｍｇ)を製造例３と同様にして加水分解して標記化合物(１１７ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３４１,３０７０,１７１８,１６８１ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ) ｍ／ｚ ５４４(Ｍ−Ｈ)。
【００９１】
製造例１０：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
(１)製造例１−(４)で得た生成物(２.１ｇ)を製造例１−(５)と同様にして２,６−ジフルオロベンゾイルクロリドでアシル化し、Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(２.７５ｇ)を得た。融点：７０〜７２℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３４００,３２６３,１７３５,１６５４,１６２４ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５００(Ｍ＋Ｈ)。
【００９２】
(２)上記で得た生成物(１.７２ｇ)のＤＭＳＯ(２０ｍｌ)溶液にＥｔ3Ｎ(４.８ｍｌ)とＳＯ3・ピリジン(５.６ｇ)を室温下順次加えた。混合物全体を室温で２５分間攪拌した。反応混合物を氷水に注ぎ、ついで混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を５％ＨＣｌ水溶液、水および食塩水で順次洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ｎ−ヘキサン／ＥｔＯＡｃ＝５：１〜１：１)で精製してＮ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ホルミルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(１.５４ｇ)を得た。融点：１１４〜１１６℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３３２,１７３５,１６９５,１６５７,１６４４,１６２３ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ４９８(Ｍ＋Ｈ)。
【００９３】
(３)上記で得た生成物(７１６ｍｇ)を製造例１−(７)と同様にして標記化合物(４２８ｍｇ)に変換した。融点：８７〜８９℃；ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)３３００,１７３９,１６６８ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５２８(Ｍ＋Ｈ)。
【００９４】
製造例１１：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル
(１)製造例２−(４)で得た生成物(１.００ｇ)を製造例１−(５)と同様にして２,６−ジフルオロベンゾイルクロリドでアシル化し、Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル(８７３ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３２５７,１７４３,１６５５,１６２４ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５０３(Ｍ＋ＮＨ4),４８６(Ｍ＋Ｈ)。
【００９５】
(２)上記で得た生成物(８６０ｍｇ)を製造例２−(６)と(７)と同様にして標記化合物(２２０ｍｇ)に変換した。
【００９６】
製造例１２：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例１０で得た生成物(２００ｍｇ)を製造例３と同様に加水分解して標記化合物(１６０ｍｇ)を得た。融点：１５６−１５８℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７３５,１６５５ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ) ｍ／ｚ ４９８(Ｍ−Ｈ)。
【００９７】
製造例１３：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
(１)製造例１０−(１)で得た生成物(１.４１ｇ)を製造例６−(１)と同様にしてＮ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ブロモメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(１.２２ｇ)に変換した。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３１７,１７４０,１６５３,１６２３ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５６４(Ｍ＋Ｈ)。
【００９８】
(２)上記で得た生成物(２３１ｍｇ)を、ｎ−プロパノールの代わりにメタノールを用いる以外は製造例６−(２)と同様にして、標記化合物(９６ｍｇ)に変換した。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３４７,１７５４,１６５５,１６２６ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５１４(Ｍ＋Ｈ)。
【００９９】
製造例１４：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例１３で得た生成物(９６ｍｇ)を製造例３と同様にして加水分解し、標記化合物(６２ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３０３,３２７５,１７２４,１７０９,１６５５,１６２６ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ−Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ４８４(Ｍ−Ｈ)。
【０１００】
製造例１５：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ｎ−プロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
製造例１３−(１)で得た生成物を製造例６−(２)と同様にして標記化合物に変換した。ＩＲ(Ｎｅａｔ)３３０２,１７３９,１６７４,１６２４ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５４２(Ｍ＋Ｈ)。
【０１０１】
製造例１６：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−イソプロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
製造例１３−(１)で得た生成物を、ｎ−プロパノールの代わりにイソプロパノールを用いる以外は製造例６−(２)と同様にして標記化合物に変換した。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３３２,１７５６,１６５３,１６２５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５４２(Ｍ＋Ｈ)。
【０１０２】
製造例１７：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ｎ−プロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例１５で得た生成物を製造例３と同様にして加水分解して標記化合物を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７３５,１６６０,１６２４ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ) ｍ／ｚ ５１２(Ｍ−Ｈ)。
【０１０３】
製造例１８：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−イソプロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例１６で得た生成物を製造例３と同様にして加水分解して標記化合物を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７３５,１６５５,１６２４ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ−Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５１２(Ｍ−Ｈ)。
【０１０４】
製造例１９：Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
(１)製造例１−(４)で得た生成物(８６３ｍｇ)と２−クロロ−６−フルオロ安息香酸(４５６ｍｇ)のＤＭＦ(１５ｍｌ)溶液にＥＤＣ・ＨＣｌ(５４９ｍｇ)、ＨＯＢｔ(３８３ｍｇ)および４−メチルモルホリン(０.４８ｍｌ)を室温下で順次加えた。混合物を室温で１４時間攪拌し、水で希釈した。混合物をＡｃＯＥｔで抽出し、有機層を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液、水および食塩水で順次洗浄した。得られた有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ｎ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１：１)で精製してＮ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(９５０ｍｇ)を得た。融点：１０１〜１０４℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)２９２１,２８５３,１７３３,１６５２,１６０５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５１６(Ｍ＋Ｈ)。
【０１０５】
(２)上記で得た生成物(６３０ｍｇ)を製造例１−(６)と同様にして酸化してＮ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ホルミルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(４６６ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３２７９,１７３５,１６９１,１６５７ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５１４(Ｍ＋Ｈ)。
【０１０６】
(３)上記で得た生成物(４６６ｍｇ)を製造例１−(７)と同様にして標記化合物(４５４ｍｇ)に変換した。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)３２８９,１７３７,１６６３,１６０５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５４４(Ｍ＋Ｈ)。
【０１０７】
製造例２０：Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−エトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例１９で得た生成物(２１０ｍｇ)のＴＨＦ(５ｍｌ)溶液に０.５Ｎ ＬｉＯＨ(１.５４ｍｌ)と３％ Ｈ2Ｏ2(６５μｌ)を５℃で加えた。混合物を５℃で１４時間攪拌し、１Ｎ塩酸で酸性とした。混合物を濃縮し、水で希釈し、得られた沈殿物を濾過して集め、水洗して標記化合物(１７１ｍｇ)を得た。融点：１８２〜１８４℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３２９５,１７２９,１７１１,１６５３ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ) ｍ／ｚ ５１４(Ｍ−Ｈ)。
【０１０８】
製造例２１：Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル
(１)製造例２−(４)で得た生成物(４９ｇ)を製造例１９−(１)と同様にして２−クロロ−６−フルオロ安息香酸でアシル化して、Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル(５８ｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７３５,１６５１ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５１９(Ｍ＋ＮＨ4)。
【０１０９】
(２)上記で得た化合物(５８ｇ)を製造例１−(６)と同様にして酸化してＮ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ホルミルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン メチルエステル(４５.８ｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３２７５,１７４３,１６９１ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５００(Ｍ＋Ｈ)。
【０１１０】
(３)上記で得た生成物(２.０ｇ)を、エタノールの代わりにメタノールを用いる以外は製造例１−(７)と同様にして標記化合物(１.４ｇ)に変換した。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)３２８５,１７４５,１６６５,１６０５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ＋Ｑ１ＭＳ) ｍ／ｚ ５３３(Ｍ＋ＮＨ4),５１６(Ｍ＋Ｈ)。
【０１１１】
製造例２２：Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
(１)製造例１９−(１)で得た生成物(３.２９ｇ)をＮ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ブロモメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(２.９１ｇ)に、製造例６−(１)と同様にして変換した。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)３３１５,１７３５,１６６２,１６０３ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５８２,５８０,５７８(Ｍ＋Ｈ)。
【０１１２】
(２)上記で得た生成物(２５０ｍｇ)を、エタノールの代わりにメタノールを用いる以外は製造例２−(７)と同様にして標記化合物(１９０ｍｇ)に変換した。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７３６,１６５９ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５３０(Ｍ＋Ｈ)。
【０１１３】
製造例２３：Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−メトキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例２２で得た生成物(１３０ｍｇ)を製造例３と同様に加水分解して標記化合物(１００ｇ)を得た。融点：１７０〜１７５℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７２０,１６８０ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ) ｍ／ｚ ５００(Ｍ−Ｈ)。
【０１１４】
製造例２４：Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ｎ−プロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
製造例２２−(１)で得た生成物を、エタノールの代わりにｎ−プロパノールを用いる以外は、製造例２−(７)と同様にして標記化合物に変換した。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)１７３７,１６６７ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５５８(Ｍ＋Ｈ)。
【０１１５】
製造例２５：Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−イソプロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
製造例２２−(１)で得た生成物を、エタノールの代わりにイソプロパノールを用いる以外は、製造例２−(７)と同様にして標記化合物に変換した。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)３３０５,１７３７,１６６５,１６０５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５５８(Ｍ＋Ｈ)。
【０１１６】
製造例２６：Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−ｎ−プロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例２４で得た生成物を、製造例３と同様にして加水分解し標記化合物を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７１３,１６５４ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５２８(Ｍ−Ｈ)。
【０１１７】
製造例２７：Ｎ−(２−クロロ−６−フルオロベンゾイル)−４−(２,６−ジメトキシ−４−イソプロポキシメチルフェニル)−Ｌ−フェニルアラニン
製造例２５で得た生成物を製造例３と同様に加水分解して標記化合物を得た。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)３４００,３２８０,１７３７,１６６０,１６０５ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ) ｍ／ｚ ５２８(Ｍ−Ｈ)。
【０１１８】
製造例２８：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−エトキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン ｔｅｒｔ−ブチルエステル
(１)Ｌ−チロシン ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２.５ｇ)を製造例１−(５)と同様にアシル化して、Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−Ｌ−チロシン ｔｅｒｔ−ブチルエステル(４.３ｇ)を得た。融点：１７７〜１７８℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７２１,１６５２ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ４２７(Ｍ＋ＮＨ4),４１０(Ｍ＋Ｈ)。
【０１１９】
(２)上記で得た生成物(４.３ｇ)を製造例１−(２)と同様にして、Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−Ｏ−(トリフルオロメタンスルホニル)−Ｌ−チロシン ｔｅｒｔ−ブチルエステル(５.６ｇ)に変換した。融点：９２〜９３℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７１６,１６４３ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５５９(Ｍ＋ＮＨ4)。
【０１２０】
(３)上記で得た生成物(４.０７ｇ)、２,６−ジメトキシ−４−(２−ヒドロキシエチル)ベンゼンボロン酸(２.７１ｇ)およびＥｔ3Ｎ(２.２７ｇ)のＤＭＦ(１００ｍｌ)脱気懸濁液にＰｄ(ＰＰｈ3)4(８６６ｍｇ)を加えた。混合物を８０〜９０℃で２時間アルゴン下加熱した。得られた混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、水洗し、セライト濾過した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(塩基性シリカゲル(Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ−ＮＨ、富士シリシア化学株式会社)；溶出液：酢酸エチル；ついでシリカゲル；溶出液：酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝３：２〜２：１)で精製し、ジエチルエーテルで再結晶してＮ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−ヒドロキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２.５ｇ)を得た。融点：９６〜９８℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７２７,１６４５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５９１(Ｍ＋ＮＨ4)。
【０１２１】
(４)上記で得た生成物(２５４ｍｇ)を製造例４と同様にしてＥｔＩでアルキル化し、標記化合物(１１６ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)３３０１,１７３０,１６６９ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ６１９(Ｍ＋ＮＨ4)。
【０１２２】
製造例２９：Ｎ−(２,６−ジクロロベンゾイル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−エトキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン
製造例２８で得た生成物(１０９ｍｇ)のＣＨ2Ｃｌ2(２ｍｌ)溶液に４Ｎ ＨＣｌ−ジオキサン(３ｍｌ)を室温下で加えた。混合物を室温で３日間攪拌し、減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル；溶出液：ｎ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１：１)で精製して標記化合物(８８ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３２０,３０６７,１７３６,１７１５,１６８３ｃｍ-1；ＭＳ(ＥＳＩ) ｍ／ｚ ５４４(Ｍ−Ｈ)。
【０１２３】
製造例３０：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−エトキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン ｔｅｒｔ−ブチルエステル
(１)Ｌ−チロシン ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１０.０ｇ)を製造例１−(５)と同様にして２,６−ジフルオロベンゾイルクロリドでアシル化して、Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−Ｌ−チロシン ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１５.９ｇ)を得た。融点：１４５〜１４８℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７２８,１６３８ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ３９５(Ｍ＋ＮＨ4),３７８(Ｍ＋Ｈ)。
【０１２４】
(２)上記で得た生成物(１５.９ｇ)を製造例１−(２)と同様にしてＮ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−Ｏ−(トリフルオロメタンスルホニル)−Ｌ−チロシン ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２１.０４ｇ)に変換した。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)１７３２,１６５８ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５２７(Ｍ＋ＮＨ4)。
【０１２５】
(３)上記で得た生成物(５.６１ｇ)を製造例２８−(３)と同様にして、Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−ヒドロキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン ｔｅｒｔ−ブチルエステル(３.５４ｇ)に変換した。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)３３０７,１７３１,１６６０ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５５９(Ｍ＋ＮＨ4),５４２(Ｍ＋Ｈ)。
【０１２６】
(４)上記で得た生成物(２５０ｍｇ)を製造例４と同様にしてＥｔＩでアルキル化し、標記化合物(２３０ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)１７３１,１６７５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５８８(Ｍ＋ＮＨ4),５７０(Ｍ＋Ｈ)。
【０１２７】
製造例３１：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−エトキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン
製造例３０で得た生成物(２００ｍｇ)を製造例２９と同様にして加水分解し、標記化合物(１６１ｍｇ)を得た。融点：６３〜７０℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)１７３７,１６６０,１６２４ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５１２(Ｍ−Ｈ)。
【０１２８】
製造例３２：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−メトキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル
(１)製造例１−(２)で得た生成物(４３.８３ｇ)を製造例２８−(３)と同様にしてＮ−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−ヒドロキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(３８.０３ｇ)に変換した。融点：１１２−１１４℃。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３４８７,３３２７,１７２９,１６８８,１６０７ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ４９１(Ｍ＋ＮＨ4)。
【０１２９】
(２)上記で得た生成物(３.０４ｇ)を製造例１−(４)と同様にして４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−ヒドロキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル塩酸塩(２.５７ｇ)に変換した。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３４００,１７３０ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ３７４(Ｍ＋Ｈ)。
【０１３０】
(３)上記で得た生成物(２.５７ｇ)を製造例１−(５)と同様にして２,６−ジフルオロベンゾイルクロリドでアシル化して、Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−ヒドロキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン エチルエステル(２.３５ｇ)を得た。融点：１１５〜１１７℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３５６８,３３５５,１７５３,１６５５,１６２７ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５１４(Ｍ＋Ｈ)。
【０１３１】
(４)上記で得た生成物(３２９ｍｇ)を製造例４と同様にしてアルキル化し、標記化合物(２９４ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３３４１,１７５５,１６５５,１６２５ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ５２８(Ｍ＋Ｈ)。
【０１３２】
製造例３３：Ｎ−(２,６−ジフルオロベンゾイル)−４−[２,６−ジメトキシ−４−(２−メトキシエチル)フェニル]−Ｌ−フェニルアラニン
製造例３２で得た生成物(１８７ｍｇ)を製造例３と同様にして加水分解し、標記化合物(１４３ｍｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｅａｔ＋ＣＨＣｌ3)１７３９,１６６７ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ４９８(Ｍ−Ｈ)。
【０１３３】
参考例１：２,６−ジメトキシ−４−ヒドロキシメチルベンゼンボロン酸
３,５−ジメトキシベンジルアルコール(８０ｇ)のＴＨＦ(１９００ｍｌ)溶液にｎ−ＢｕＬｉ(１.６Ｍ ヘキサン溶液、７５０ｍｌ)を−５０℃でアルゴン下０.５時間かけて少量ずつ加えた。混合物を室温まで２時間加温し、再度−６０℃まで冷却した。混合物に(ＭｅＯ)3Ｂ(２００ｍｌ)を加え、得られた混合物を室温で加温し、一晩攪拌した。反応混合物にクエン酸(３００ｇ)の水(１２００ｍｌ)溶液を０℃で少量ずつ加えた。水層を分離し、ＮａＣｌの飽和とし、ＡｃＯＥｔで抽出した。集めたＡｃＯＥｔ抽出液をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。結晶性残渣をＡｃＯＥｔでトリチュレーションし、濾取して標記化合物(７５.１ｇ)を得た。融点：９２〜９８℃；ＩＲ(Ｎｕｊｏｌ)３４６０,３４０８,３２１８,１６１３,１５７８,１２８８,１２３１,１１２３,１０５５,９６０,７７９ｃｍ-1；ＭＳ(ＡＰＣＩ) ｍ／ｚ ２３０(Ｍ＋ＮＨ4)。
【０１３４】
参考例２：２,６−ジメトキシ−４−(２−ヒドロキシエチル)ベンゼンボロン酸(１)ＬｉＡｌＨ4(１.０５ｇ)のジオキサン(１００ｍｌ)溶液に３,５−ジメトキシフェニル酢酸(５.３２ｇ)のジオキサン(２０ｍｌ)溶液を少量ずつ０℃で加えた。混合物を室温下０.５時間攪拌し、５０℃で２時間攪拌した。混合物に濃ＮＨ4ＯＨを加えて反応を止め、セライト濾過した。濾液を減圧濃縮して粗体の３,５−ジメトキシフェネチルアルコール(５.１ｇ)を得た。ＩＲ(Ｎｅａｔ)３４００,１６００ｃｍ-1；ＭＳ(ＧＣ−ＥＩ)１８２(Ｍ+),１５１(Ｍ−ＭｅＯ)。
(２)上記で得た生成物(２７.１６ｇ)を参考例１と同様にして標記化合物(３９.１ｇ)に変換した。
【発明の効果】
本発明の有効成分である化合物［Ｉ］は、優れたα4介在細胞接着阻害作用を有する。また、本発明の活性化合物は、ビフェニル環の４'位へのＣ1-6アルコキシ置換Ｃ1-2アルキル基の導入という構造的特徴により、ａ)代謝安定性、ｂ)血漿蛋白質結合、ｃ)水溶性等が改善され、優れた生体内利用性を示す。さらに、本発明の活性化合物は毒性が低く、医薬として安全性が高い。このため、本発明の医薬組成物は、α4介在細胞接着が関与する疾病の治療に有用である。