(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＥの存在下にクロレラを培養することを特徴とするビタミンＥを強化されたクロレラの製造方法。
【請求項２】
ビタミンＥおよび脂肪酸化合物の存在下にクロレラを培養することを特徴とするビタミンＥおよび脂肪酸化合物を強化されたクロレラの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ビタミンＥおよび／またはカロチノイドが強化されたクロレラ、並びに脂肪酸化合物がさらに強化されたクロレラの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
クロレラは、緑色植物門、緑藻綱、クロレラ属の緑藻である。クロレラには、特に多くの蛋白質が含有され、必須アミノ酸、核酸、ミネラルの他、ビタミンＥやカロチノイドなども含有されている。
【０００３】
クロレラが含有するビタミンＥには、α−トコフェロール等が含まれ、これらのビタミンＥは、動物の必須栄養素であり、生体内で赤血球の溶血を防ぐこと、生殖に必要であること、脂肪やカロチンの酸化を防ぐ働き等があることが知られている。また、カロチノイドには、α−カロチン、β−カロチン等の様なカロチン、ルティン、ゼアキサンチンのようなキサントフィル等の色素が含まれる。これらのカロチノイドは、ビタミンΑの前駆物質であること、活性酸素除去活性があること等が知られている。
【０００４】
このようにクロレラは栄養豊富であるので、仔稚魚に対する餌料生物（例えば、ワムシ）の生物餌料、動物用の飼料や人の健康食品あるいは食品添加物として利用されている。しかしながら、クロレラが本来含有するビタミンＥおよびカロチノイドの量は、乾燥藻体100ｇ当たり、それぞれ10〜25ｍｇおよび100ｍｇ程度であり、栄養価等の観点からは必ずしも十分な量とはいえない。
【０００５】
そこで、クロレラが含有するビタミンＥ、カロチノイドを高めるための試みがなされている。
例えば、特開平3-183498号公報には、培地成分を制御した培地でクロレラを培養することにより、クロレラが体内に蓄積するβ−カロチンの量を上げる方法が記載されている。また、特開平6-153986号公報には、活性酸素発生剤に耐性を持つ、クロレラを含む藻類を培養することにより、クロレラが体内に蓄積するβ−カロチンの量を上げる方法が記載されている。
【０００６】
さらに、特開昭57-54585号公報には、グルタミン酸、リンゴ酸を添加した培地でクロレラを培養することにより、クロレラが蓄積するビタミンＥの量を上げる方法が記載されている。
【０００７】
しかしながら、上記いずれの方法も、クロレラ自体が有するβ−カロチン、ビタミンＥを産生することのできる能力を幾分か高めるに過ぎず、β−カロチン、ビタミンＥの量を更に高めることが望まれている。さらに、これらの方法は、いずれもビタミンＥまたはβ−カロチンのいずれか一方しか強化することができないという欠点の他に、特開平6-153986号公報の方法では、活性酸素発生剤に耐性を有するというその性質が特殊なクロレラにしか適用できないという制約もある。
【０００８】
なお、特許第2790642号公報には、ユーグレナを脂肪酸や、ビタミンＣ、ビタミンＥを添加した培地で培養することにより、これらの化合物でユーグレナを強化し得ることが記載されている。しかしながら、ユーグレナは、原生動物の一種であり、植物としても分類されるが、緑藻類であるクロレラとは、分類学上離れた種である。さらに、ユーグレナは、ペリクルといわれる蛋白質の柔軟な外膜と鞭毛を有しアメーバ状に運動するのに対し、クロレラは多糖質の強固な細胞壁を持つ点で、細胞構造が大きく異なる。従って、細胞内への物質の取り込みに関しても相違が認められ、ユーグレナが取り込み、蓄積できる物質が必ずしもクロレラが蓄積できるとは考えられず、そのような物質の例にはイカ肝油がある。即ち、イカ肝油には、高度不飽和脂肪酸を含有する油脂が含まれているが、イカ肝油を添加した培地でユーグレナを培養することによりイカ肝油の成分は細胞内に取り込まれ、蓄積され得るが、クロレラはこれを蓄積することができないことが知られている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記事情に鑑みてなわれたものであり、ビタミンＥおよびカロチノイド、さらには脂肪酸化合物のような物質を強化された、高栄養価のクロレラの製造方法、並びにそのようにして製造されたクロレラを提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究した結果、クロレラをビタミンＥの存在下に培養することにより、従来の方法では到達し得なかった高水準にビタミンＥを強化できること、さらに、カロチノイドを特定の物質に溶解したうえで培地に添加することにより、それ単独で培地に添加しては強化し得ないカロチノイドをクロレラに強化し得ることを見い出した。
【００１１】
さらに、本発明者らは、前記カロチノイドを溶解すべき物質として、ビタミンＥ、並びに脂肪酸、その塩および／またはそのエステル（以下、「脂肪酸化合物」ともいう）を用いることにより、それぞれカロチノイドおよびビタミンＥで、並びにカロチノイドおよび脂肪酸化合物でクロレラを強化できることを見い出した。また、特に、カロチノイドを溶解すべき物質として脂肪酸化合物を用いることにより、カロチノイドを強化できることに追加して、これらの脂肪酸化合物を単独で培地に添加した場合に比べて高水準に脂肪酸化合物を強化し得ることも見い出し、本発明を成すに至った。すなわち、本発明は、次の（１）〜（４）の方法、およびそのようにして製造されたクロレラを提供する。
【００１２】
（１）ビタミンＥの存在下にクロレラを培養することを特徴とするビタミンＥを強化されたクロレラの製造方法。
【００１３】
（２）ビタミンＥおよび脂肪酸化合物の存在下にクロレラを培養することを特徴とするビタミンＥおよび脂肪酸化合物を強化されたクロレラの製造方法。
【００１４】
（３）適切な溶媒に溶解したカロチノイドの存在下にクロレラを培養することを特徴とするカロチノイドを強化されたクロレラの製造方法。
【００１５】
（４）ビタミンＥおよび脂肪酸化合物からなる群の少なくとも１種に溶解したカロチノイドの存在下にクロレラを培養することを特徴とするカロチノイドと、ビタミンＥおよび脂肪酸化合物からなる群の少なくとも１種とを強化されたクロレラの製造方法。
【００１６】
【発明の実施の形態】
以下、本発明のビタミンＥ、カロチノイド等を強化されたクロレラの製造方法を詳細に説明する。
【００１７】
本発明において、ビタミンＥとは、動物体内でビタミンＥ活性を示し得るいずれもの物質をいう。具体的には、トコフェロール（α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール）、およびそれらの酸（例えば、酢酸、ニコチン酸）との塩、並びにトコトリエノール等が含まれる。これらトコフェロールおよびトコトリエノールには種々の異性体が存在するが、これらの異性体も含まれる。
【００１８】
カロチノイドとは、動物体内でビタミンＡ活性を示し得るいずれもの物質をいう。これらのビタミンＡ活性を有する物質は、活性酸素除去能もあることが知られている。具体的には、カロチノイドには、ビタミンＡおよび動物体内でビタミンＡに変換されるプロビタミンＡ（α−カロチン、β−カロチン、γ−カロチン等）のようなカロチン、並びにルティン、アスタキサンチンおよびゼアキサンチン等のキサントフィル等が含まれる。カロチノイドにも種々の異性体が存在するが、これらの異性体の全てが含まれる。
【００１９】
脂肪酸化合物には、遊離の脂肪酸、その塩およびそのアルキルエステルが含まれる。
【００２０】
遊離の脂肪酸とは、好ましくは炭素原子数12〜28個を有する飽和または不飽和（不飽和結合の数が１〜６個）の直鎖状または分岐鎖の脂肪酸をいう。本明細書において、特に、炭素原子数20〜28個を有する不飽和（不飽和結合の数が１個以上）の脂肪酸を「高度不飽和脂肪酸」ともいう。
【００２１】
脂肪酸の塩とは、上記遊離の脂肪酸の塩をいい、ナトリウム、カリウム等のようなアルカリ金属、バリウム、カルシウム等のようなアルカリ土類金属の塩が含まれる。
【００２２】
脂肪酸のアルキルエステルとは、上記遊離の脂肪酸とアルカノールとのエステルをいう。エステルを形成することのできるアルカノールとしては、好ましくは炭素数12〜28個を有する直鎖状および分岐鎖のアルカノールが含まれる。
【００２３】
本発明において、ビタミンＥで強化されたクロレラとは、本発明の方法を適用する前のクロレラが含有するビタミンＥの量よりも多い量のビタミンＥを含有するクロレラをいう。ビタミンＥを含有するとは、クロレラの藻体の細胞壁内にビタミンＥが取り込まれた状態をいい、ビタミンＥが細胞壁外になんらかの方法により付着した状態は含まない。
【００２４】
カロチノイドで強化されたクロレラおよび脂肪酸化合物で強化されたクロレラも、上記ビタミンＥの場合と同様である。
【００２５】
本明細書を通して用いられる「Ａおよび／またはＢ」、「Ａ、ＢおよびまたはＣ」のような用語は、「および／または」で結ばれる物質から成る群から選択される少なくとも１種を意味する。即ち、「Ａおよび／またはＢ」とは、Ａ単独、Ｂ単独並びにＡおよびＢを意味する。
【００２６】
本発明の第１の態様において、ビタミンＥの存在下にクロレラを培養することにより、ビタミンＥを強化したクロレラを製造することができる。
【００２７】
本発明の第１の態様において用いることのできるクロレラは、クロレラ属に属するものであれば特に制限はない。一例を挙げると、クロレラ・ブルガリス(Chlorella vulgaris)、クロレラ・レギュラリス(Chlorella regularis)、クロレラ・ビレノイドサ(Chlorella pyrenoidosa)、クロレラ・サッカロフィラ(Chlorella saccharophila)が含まれる。
【００２８】
クロレラを培養する基本培地は、上記クロレラを培養することができるものであれば特に制限はない。ここで、基本培地とは、クロレラに取り込ませるべき物質（第１の態様ではビタミンＥ）が添加されていない培地をいう。基本培地としては、例えば、ブリストール培地、ソロキン・クラウス培地（藻類実験法、田宮博、渡辺篤編集、南江堂、68〜104頁）を用いることができる。
【００２９】
本発明の第１の態様において、基本培地に添加すべきビタミンＥとしては、先に規定したビタミンＥ活性を有するものを用いることができる。これらのビタミンＥ活性を有する化合物は、市販されているものを用いることができる。
【００３０】
これらのビタミンＥ活性を有する化合物は、単独で用いることも、異なる種の化合物を併用することもできる。
【００３１】
ビタミンＥの使用量としては、用いるクロレラの種類、基本培地、クロレラの培地中の濃度、培養温度、培養時間、強化すべきビタミンＥの量等により適宜設定することができるが、通常、培養液１リットル（以下、「Ｌ」と表記する。）0.01ｇ〜20ｇに設定することができる。
【００３２】
ビタミンＥを培地に添加する時期は、ビタミンＥの存在下にクロレラを培養することができれば特に制限はなく、予め基本培地に添加しておき、クロレラを培養することも、培養の途中で添加することも、培養終了後の藻体に添加して再培養をおこなうこともできる。しかしながら、培養中におけるビタミンＥの分解を防ぎ、培養に要する作業を低減し、培養時間を短縮する観点から、培養後期、具体的には、培養時間の半分以上が経過した時に添加することが望ましい。
【００３３】
クロレラを培養する温度、時間、クロレラの濃度、光照射の時間、光強度、撹拌強度等は、クロレラを培養し得るものであればに特に制限はない。クロレラを培養し得るものであれば特に制限はなく、クロレラの増殖特性、接種濃度等に応じて適宜設定することができる。一例を上げると、10〜20ｇ／Ｌ程度の濃度のクロレラを培養する場合、25〜37℃の温度で、20〜150時間、０〜１万ルクスの光を20〜150時間照射し、生産することができる。なお、基本培地に添加したビタミンＥは培地に溶解し得ないので、撹拌を強めること等により懸濁状態に保つことが好ましい。
【００３４】
本発明の第２の態様において、ビタミンＥおよび脂肪酸化合物の存在下にクロレラを培養することにより、ビタミンＥおよび脂肪酸を強化したクロレラを製造することができる。
【００３５】
本発明の第２の態様は、第１の態様で用いるビタミンＥに追加して脂肪酸化合物（遊離の脂肪酸、その塩および／またはそのアルキルエステル）を用いること以外は、上述した第１の態様と同様に行うことができる。撹拌を強めることが好ましいことも第１の態様と同じである。
【００３６】
本発明の第２の態様で用い得る遊離の脂肪酸には、パルミチン酸、ステアリン酸等のような飽和の脂肪酸が含まれ、不飽和脂肪酸には、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等の他、アラキドン酸、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）のような高度不飽和脂肪酸等が含まれる。脂肪酸としては、栄養強化の観点からＥＰＡ、ＤＨＡを好ましく用いることができる。これらの脂肪酸化合物は、市販されているものを用いることができる。また、これらの脂肪酸化合物は、１種のみを用いることも多種の脂肪酸の混合物を用いることもできる。
【００３７】
使用する脂肪酸化合物として、遊離の脂肪酸、その塩および／またはそのエステルのいずれを用いるかは、クロレラに強化することを所望する脂肪酸の種類により適宜選択することができる。一例を挙げると、本出願人の１であるクロレラ工業株式会社に係る特開平10-276684号公報に記載される方法を用いることにより、異なる脂肪酸化合物の混合物の中から、例えば高度不飽和脂肪酸のような特定の種の脂肪酸化合物を優先的取り込ませることができる。即ち、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）を含む遊離の脂肪酸の混合物であって、酸または塩の形態にあるものを用いることにより、ＤＨＡまたはその塩を他の脂肪酸またはその塩よりも優先的にクロレラに取り込ませることができる。一方、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）を含む脂肪酸の混合物であって、アルキルエステルの形態にあるものを用いることにより、アルキルエステルの形態にあるＥＰＡを他の脂肪酸のアルキルエステルよりも優先的に取り込ませることができる。
【００３８】
脂肪酸化合物の使用量は、クロレラが取り込み得る量であれば特に制限はないが、通常、0.1〜20ｇ／Ｌに設定することができる。
【００３９】
脂肪酸化合物とビタミンＥとの添加順に特に制限はなく、いずれか一方を添加した後に他方を添加することも、両者を同時に添加することもできる。
【００４０】
本発明の第３の態様において、適切な溶媒に溶解させたカロチノイドの存在下にクロレラを培養することにより、カロチノイドを強化されたクロレラを製造することができる。
【００４１】
本発明者らは、培地にカロチノイドを単独で添加してクロレラを培養してもカロチノイドでクロレラを強化することができないが、カロチノイドを適切な溶媒に溶解したうえで培地に添加することにより、クロレラをカロチノイドで強化し得ることを見い出した。
【００４２】
本発明の第３の態様は、上記第１の態様で用いるビタミンＥの代わりに、適切な溶媒に溶解したカロチノイドを用いること以外は第１の態様と同様の条件で行うことができる。撹拌を強めることが好ましいことも第１の態様と同じである。
【００４３】
用いるカロチノイドとしては、先に規定した動物体内でビタミンＡ活性や活性酸素除去活性を示し得るものであれば特に制限はない。生物活性の観点からβ−カロチン、ルティン、アスタキサンチン等が好ましい。これらのカロチノイドは、市販のものを用いることができる。また、１種のみを単独で用いることも、複数種のものを併用することもできる。
【００４４】
カロチノイドの使用量は、クロレラがカロチノイドを取り込み得る量であれば特に制限はないが、通常、0.1ｇ〜２ｇ／Ｌに設定することができる。
【００４５】
用いる溶媒としては、粉体の状態にあるカロチノイドを溶解し得るものであれば特に制限はない。カロチノイドを溶解する溶媒は、１種のみを用いることも、複数種のものを併用することもできる。
【００４６】
上記本発明の第３の態様において、カロチノイドの溶媒としてビタミンＥおよび／または脂肪酸化合物を用いることができる。この態様を本発明の第４の態様という。
【００４７】
本発明の第４の態様によれば、溶媒として用いるビタミンＥおよび／または脂肪酸化合物もカロチノイドと同時に強化することができる。本発明者らは、第４の態様のうち、特に、溶媒として脂肪酸化合物を用いることにより、脂肪酸化合物の強化量が、脂肪酸化合物のみを基本培地に添加する場合に比べて高めることができるという予想外の結果を見い出した。
【００４８】
本発明の第４の態様は、上記本発明の第１の態様で用いるビタミンＥの代わりに、ビタミンＥおよび／または脂肪酸化合物に溶解したカロチノイドを用いること以外は、第１の態様と同様の条件で行うことができる。撹拌を強めることが好ましいことも第１の態様と同じである。
【００４９】
カロチノイドを溶解させる溶媒の量は、用いるカロチノイドの種類、量、その溶媒に対するカロチノイドの溶解度等に応じて適宜設定することができる。一例を上げると、溶媒として脂肪酸化合物を用いる場合、ビタミンＥを用いる場合の両者とも、0.1〜５％に設定することができる。
【００５０】
溶媒として用いるビタミンＥおよび脂肪酸化合物の種類に特に制限はなく、上述した第１の態様で用いたビタミンＥおよび第２の態様で用いた脂肪酸化合物を用いることができ、強化を所望する種に応じて適宜用いることができる。用いる脂肪酸化合物として遊離の酸、その塩および／またはそのエステルのいずれかを選択することにより、所望する種の脂肪酸化合物を強化できるのことは、上記第２の態様で述べた通りである。
【００５１】
以上説明した方法に従い培養したクロレラは、それ自体は既知の、遠心分離等による濃縮・水洗工程を経た後、仔稚魚に対する餌料生物の生物餌料として、家畜等動物の飼料として、人の食品添加物、健康食品等の使用に供することができる。また、必要に応じて凍結乾燥し、貯蔵することもできる。
【００５２】
また、本発明には、上述した本発明の変形例として、クロレラに強化することを所望する化合物であって、上述したもの以外の、例えば、ビタミンＤ等の存在下にクロレラを培養することにより、当該化合物を単独でまたはビタミンＥ、カロチンおよび／または脂肪酸化合物と共に強化したクロレラの製造方法も含まれる。
【００５３】
【実施例】
以下、本発明の方法を実施例により説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５４】
＜実施例１＞
坂口フラスコを用い、クロレラ・ブルガリス(Chlorella vulgaris C-30、東京大学ＩＡＭカルチャーコレクションより入手）の培養を行った。培地は水道水１Ｌ当たり、尿素0.6g、リン酸一カリウム0.3g、硫酸マグネシウム0.3g、ＥＤＴＡ−鉄15mg、微量元素Α5溶液６ミリリトル（以下、「mL」と表記する）（藻類実験法、田宮博、渡辺篤編集、南江堂、99頁）、グルコース20gを添加したものを用いた。培養は、上記培養液100mL中にクロレラ・ブルガリス５×１０8細胞を接種し、温度30℃、照度5000ルックスで振盪培養を行った。
【００５５】
培養３日目に、ビタミンＥとして理研オイル600（理研ビタミン製、α−トコフェロール５％、β−トコフェロール25％、γ−トコフェロール30％含有）を培養液100mL当たり0g、0.05g、0.1g、0.15g添加し、更に一日の培養を行った。
【００５６】
培養を終了したクロレラは、遠心分離によって濃縮・水洗した後、凍結乾燥した。各試験区とも約１gの藻体が得られ、この乾燥藻体のビタミンＥの測定を行った。
【００５７】
ビタミンＥの測定は、クロロホルム・メタノール混液によって抽出した粗抽出液をケン化し、不ケン化物を回収して分析の試料とした。分析は、高速液体クロマトグラフィー（ギルソン社製）により行った。
【００５８】
以下の表１に、ビタミンＥの添加量とクロレラのビタミンＥの分析値を示す。
【００５９】
【表１】
0004249828.tif 000002
【００６０】
表１に示すように、本発明の方法によれば、ビタミンＥの含量を、200倍以上に強化させることが可能である。また、クロレラが元来ほとんど含有しないβ−トコフェロール、γ−トコフェロールの含量が著しく増加することからも、添加したビタミンＥがクロレラ細胞に有効に蓄積されていることが明らかである。
【００６１】
＜実施例２＞
実施例１において培養第３日目に添加した理研ビタミンＥオイル600の代わりに、理研ビタミンＥオイル600と遊離脂肪酸オイル（日本水産製、ドコサヘキサエン酸  60％）を８：１の割合で混合したものを、培養液100mL当たり0mL、0.45mL添加したこと以外は、実施例１と同じ条件で培養を行った。
【００６２】
実施例１と同様にクロレラを収穫し、ビタミンＥと脂肪酸の分析を行った。
ビタミンＥの測定は、実施例１の方法で行った。脂肪酸は、クロロホルム・メタノールで抽出した粗抽出液をケン化し、ケン化物から脂肪酸を回収した後、ガスクロマトグラフィー（島津製作所製）により分析した。
【００６３】
以下の表にオイル混合物の添加量と、クロレラのビタミンＥおよびドコサヘキサエン酸の分析値を示す。
【００６４】
【表２】
0004249828.tif 000003
【００６５】
表２に示すように、ビタミンＥと脂肪酸（ドコサヘキサエン酸）を共に蓄積させることが可能であった。
【００６６】
＜実施例３＞
実施例１において培養第３日目に添加した理研ビタミンＥオイル600の代わりに、理研ビタミンＥオイル600にβ−カロチン（和光純薬工業社製）５％となるように溶解したものを、培養液100mL当たり0mL、0.1mL添加したこと以外は実施例１と同じ条件で培養を行った。
【００６７】
実施例１と同様の方法でクロレラを収穫し、ビタミンＥとβ−カロチンの分析を行った。ビタミンＥの測定は、実施例１の方法で行った。カロチンの測定は、クロロホルム・メタノールによって抽出した粗抽出液をケン化し、不ケン化物を回収して分析の試料とした。分析は高速液体クロマトグラフィー（ギルソン社製）により行った。
【００６８】
以下の表にオイル混合物の添加量と、クロレラのビタミンＥおよびβ−カロチンの分析値を示す。
【００６９】
【表３】
0004249828.tif 000004
【００７０】
表３に示すように、本発明の方法によれば、β−カロチン濃度を２倍以上に強化することができ、ビタミンＥも併せて強化することができた。
【００７１】
＜実施例４＞
実施例２において培養第３日目に添加した理研ビタミンＥオイル600と遊離脂肪酸オイルの８：１の割合の混合物の代わりに、同じ脂肪酸オイルにβ−カロチンを５％となるように溶解したものを、培養液100mL当たり0mL、0.5mL添加したこと以外は、実施例２と同じ培養方法を行った。対照として、脂肪酸オイルにβ−カロチンを溶解したものの代わりに、同じ脂肪酸オイルのみを、培養液100mL当たり0.5mL添加したこと以外は上記試料と同じ試料を調製し、同じ条件で培養を行った。
【００７２】
実施例１と同様の方法でクロレラを収穫し、カロチンの測定は実施例３の方法で、脂肪酸の測定は実施例２の方法で行った。
【００７３】
以下の表にオイル混合物の添加量と、クロレラのβ−カロチンおよびドコサヘキサエン酸の分析値を示す。
【００７４】
【表４】
0004249828.tif 000005
【００７５】
表４に示すように、本発明の方法によれば、β−カロチン濃度を顕著に高めることができる。
【００７６】
さらに、β−カロチンと脂肪酸を併用して添加することにより、脂肪酸のみを添加した場合に比べて、クロレラに強化された脂肪酸（ドコサヘキサエン酸）の量も増加されるという予期しない結果が得られた。
【００７７】
＜実施例５＞
実施例４において、培養第３日目に添加した、遊離脂肪酸オイルにβ−カロチンを５％となるように溶解したものの代わりに、同じ遊離脂肪酸オイルにクロレラから抽出したキサントフィル（ルチン、ビオラキサンチン）を５％となるよう溶解したものを、培養液100mL当たり0mL、0.5mL添加したこと以外は、実施例４と同じ培養方法を行った。
【００７８】
実施例４と同様の方法でクロレラを収穫した。クロレラ中のキサントフィル濃度は、85％アセトンで抽出した粗色素液をケン化し、不ケン化物を石油エーテルとメタノールで分配することによって得られたキサントフィル画分の吸収スペクトルから求めた。脂肪酸の測定は、実施例２の方法で行った。
【００７９】
以下の表５にオイル混合物の添加量と、クロレラのキサントフィルおよびドコサヘキサエン酸の分析値を示す。
【００８０】
【表５】
0004249828.tif 000006
【００８１】
表５に示すように、カロチノイドとしてキサントフィルを用いた場合にも、カロチノイドを高濃度に強化することができ、さらに脂肪酸も強化することができた。
【００８２】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の第１の態様によれば、高度にビタミンＥを強化されたクロレラを製造することができる。
本発明の第２の態様によれば、高度にビタミンＥおよび脂肪酸化合物を強化されたクロレラを製造することができる。
【００８３】
本発明の第３の態様によれば、高度にカロチノイドを強化されたクロレラを製造することができる。
本発明の第４の態様によれば、高度にカロチノイドと、ビタミンＥおよび／または脂肪酸化合物を強化されたクロレラを製造することができる。
【００８４】
これらの本発明の方法は、ビタミンＥをそのまま培地に添加する、またはカロチノイドを溶媒に溶解するという簡単な操作を行った上で培地に添加することの他は、通常のクロレラの培養と同様の操作で実施することができるので、作業効率が高いという利点も有する。このように油状物質をそのまま培地に添加しすることにより、また脂溶性物質を適切な溶媒に溶解した上で培地に添加することにより、クロレラを当該添加した物質で強化できることを見い出したのは、本発明者らが初めてである。
【００８５】
さらに、本発明の方法により製造されるクロレラは、クロレラが産生することのできる能力を高めることによりビタミン等を強化する従来の方法を用いて製造したクロレラに比べて顕著に高い濃度にビタミンＥおよび／またはカロチノイド、さらには脂肪酸化合物等が強化されている。従って、本発明の方法によれば、本来、蛋白質等の有用物質を豊富に含有するクロレラの栄養を更に高めることができ、仔稚魚に対する餌料生物の生物餌料、家畜等動物の飼料、人の健康食品あるいは食品添加物等として非常に有用である。また、本発明の方法により製造されたクロレラをこれらの用途に用いることにより、次のような従来の問題点を解決することができるという利点もある。
【００８６】
即ち、ビタミンＥは、常温で油状である。従って、仔稚魚に対する生物餌料であるワムシ等に対してビタミンＥを与えるためには、ビタミンＥを乳化油脂等として与えていたため、海水を汚染するなどの欠点があった。また、従来、動物用の飼料等にビタミンＥを強化するためには、予め別の油状成分にビタミンＥを溶解した後加工しなければならず、強化方法が限られ、さらに、製造工程中にビタミンＥが変化を受けるという欠点もあった。また、食品へビタミンＥを添加する場合、添加対象となり得るものがマーガリンやサラダオイル等のような油状の食品に限定されてしまうため、通常の食事により大量に摂取することは困難であった。少量服用することによっても十分なビタミンＥを摂取するためには、ビタミンＥを含有するカプセル等に加工する必要があった。
【００８７】
一方、カロチノイドは、常温で粉体であり、かつ脂溶性である。従って、通常、油脂に溶解した後、餌料、飼料、食品等に添加されている。したがって。カロチノイドの利用に当たっても、上述したビタミンＥと同様に、強化方法が限られる、汚染を引き起こす等の欠点があった。
【００８８】
これに対して、本発明の方法により製造されるクロレラは、これらの問題点を有することなく餌料、飼料、食品等として利用することができる。