(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0004249928.tif 000017
［式中、Ｘは、塩素または臭素；
Ｑは、Ｏ、ＳまたはＮＨ；および
Ｒは、水素、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、もしくはＲ’ＣＯ−、Ｒ’ＮＨＣＯ−、Ｒ’ＳＯ２−またはＲ’ＮＨＳＯ２−（ここで、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール）；もしくはＲ−Ｑはともに、塩素である］
で示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩；
ここで、
“置換Ｃ１−６アルキル”は、アリール、Ｒ１−置換アリール、ヘテロアリール、ニトロ、シアノ、ハロゲン、−ＯＲ１，−ＳＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−ＮＲ１２、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２、−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｒ２−置換Ｃ１−６アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、Ｒ２−置換アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリール（Ｃ１−６）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１−６アルキルまたはアミノである）から選ばれる１〜３個の置換基で置換されたＣ１−６アルキルを意味する；
“置換アリール”は、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−ＳＲ１、−ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２，−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−ＮＲ１２、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１から選ばれる１〜３個の置換基で置換されたアリールを意味する；またはアリールにおける２つの隣接する置換基は、一緒になって、低級アルキレンジオキシを形成する；（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｒ２−置換Ｃ１−６アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、Ｒ２−置換アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリール（Ｃ１−６）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１−６アルキルまたはアミノである）；および
“置換ヘテロアリール”は、アルキル、Ｒ１−置換アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、−ＳＲ１、−ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２、−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−ＮＲ１２、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１から選ばれる１〜３個の置換基で置換されたヘテロアリールを意味する；またはヘテロアリールにおける２つの隣接する置換基は、一緒になって、低級アルキレンジオキシを形成する；（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｒ２−置換Ｃ１−６アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、Ｒ２−置換アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリール（Ｃ１−６）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１１−６アルキルまたはアミノである）。
【請求項２】
式（Ｉ）：
【化２】
0004249928.tif 000018
［式中、Ｘは、塩素または臭素；
Ｑは、Ｏ、ＳまたはＮＨ；および
Ｒは、水素、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、もしくはＲ’ＣＯ−、Ｒ’ＮＨＣＯ−、Ｒ’ＳＯ２−またはＲ’ＮＨＳＯ２−（ここで、Ｒ’は、水素、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール）である］
で示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩；
ここで、
“置換Ｃ１−６アルキル”は、アリール、Ｒ１−置換アリール、ヘテロアリール、ニトロ、シアノ、ハロゲン、−ＯＲ１，−ＳＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−ＮＲ１２、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２、−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｒ２−置換Ｃ１−６アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、Ｒ２−置換アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリール（Ｃ１−６）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１−６アルキルまたはアミノである）から選ばれる１〜３個の置換基で置換されたＣ１−６アルキルを意味する；
“置換アリール”は、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−ＳＲ１、−ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２，−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−ＮＲ１２、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１から選ばれる１〜３個の置換基で置換されたアリールを意味する；またはアリールにおける２つの隣接する置換基は、一緒になって、低級アルキレンジオキシを形成する；（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｒ２−置換Ｃ１−６アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、Ｒ２−置換アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリール（Ｃ１−６）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１−６アルキルまたはアミノである）；および
“置換ヘテロアリール”は、アルキル、Ｒ１−置換アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、−ＳＲ１、−ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２、−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−ＮＲ１２、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１から選ばれる１〜３個の置換基で置換されたヘテロアリールを意味する；またはヘテロアリールにおける２つの隣接する置換基は、一緒になって、低級アルキレンジオキシを形成する；（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｒ２−置換Ｃ１−６アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、Ｒ２−置換アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリール（Ｃ１−６）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ−Ｃ１１−６アルキルまたはアミノである）。
【請求項３】
Ｘが、塩素である請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｑが、Ｏである請求項３記載の化合物。
【請求項５】
Ｒが、Ｒ’ＣＯ−、Ｒ’ＮＨＣＯ−、Ｒ’ＳＯ２−またはＲ’ＮＨＳＯ２−である請求項４記載の化合物。
【請求項６】
Ｒが、Ｒ’ＳＯ２−である請求項５記載の化合物。
【請求項７】
Ｒが、ベンゼンスルホニル、パラ−ブロモベンゼンスルホニル、パラ−ニトロベンゼンスルホニル、パラ−トルエンスルホニルまたはメタンスルホニルである請求項６記載の化合物。
【請求項８】
２−（パラ−ブロモベンゼンスルホニル）エチル  Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−クロロエチル）ホスホロジアミデートである請求項７記載の化合物。
【請求項９】
Ｒが、水素、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールである請求項４記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒが、水素、メチルまたはベンジルである請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
２−ヒドロキシエチル  Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（２−クロロエチル）ホスホロジアミデートである請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
Ｑが、ＮＨである請求項３記載の化合物。
【請求項１３】
式（ＩＩ）：
【化３】
0004249928.tif 000019
［式中、Ｘは、塩素または臭素である］
で示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項１４】
Ｘが、塩素である請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
治療上有効量の請求項１〜１４のいずれか１つに記載の化合物および少なくとも１種の医薬的に許容しうる担体を含む医薬組成物。
【請求項１６】
哺乳動物における腫瘍の治療に使用するための請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
哺乳動物における腫瘍の治療用医薬の製造のための請求項１〜１４のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（背景技術）
(ａ)技術分野
本発明は、化学化合物、治療方法、医薬組成物およびその製造方法に関する。さらに詳しくは、該化合物は、抗腫瘍活性を有するか、または抗腫瘍活性をもつように修飾されることが可能である。したがって、本発明は特に、腫瘍の治療方法、特にガンの治療方法における該化合物の使用ならびにその製造方法に関する。
【０００２】
(ｂ)関連技術の記載
現在のガン化学療法プロトコルは、アドリアマイシン、ビンクリスチン、シスプラチン、ドキソルビシン、ダウノマイシンおよびメトトレキセートなどの有糸分裂阻害剤、ジフテリア毒素、シュードモナス毒素およびリシンなどの毒素、ならびにシクロホスファミドおよびイソホスファミドなどの抗腫瘍剤を患者へ投与することを含む。シクロホスファミドは、世界中で最も広く使用されている抗ガン剤の１つであり、種々の血液および固体腫瘍を治療するために多くの他の薬剤と組合せて投与される。しかし、シクロホスファミドの幾つかの特徴が、その臨床的有効性を損なっている。たとえば、該薬剤は、ガン細胞に対して毒性がある代謝産物を生成するために肝臓において代謝活性化を必要とする。該薬剤は、膀胱に対して特に毒性があり、アルキル化剤クラスの抗ガン剤に特有の骨髄毒性も示す。シクロホスファミドは、ガンの治療に用いられる用量において免疫系の強力な抑制剤であり、したがって、疾病によって既に衰弱させられた患者の感染格闘能力を減少させる。最終的に、シクロホスファミドを頻繁に繰り返して使用すると、患者のガン細胞において薬剤に対する耐性が生じ、該薬剤の有効性が無くなる。
【０００３】
ホスホルアミド誘導体は、文献において長く知られており、アルキル化剤として詳しく立証されている。これらのうち幾つかは、ガンの治療に有用であることが見出されている（DeVita,"Principles of Cancer Therapy", pages 765-788、Petersdorfらの Principles of Internal Medicine, 10th ed. McGraw-Hill, NY., 1983を参照）。シクロホスファミド類縁体もまた文献に公知であり、広く誘導体化されている（Cyclophosphamide, Merck Index, 11th Edition pages 429-430, US5190929）。しかし、ビス−(Ｎ,Ｎ'−ビス−(２−ハロエチル)アミノ)ホスホルアミデートについては、相対的に少しの文献しかない（DE19524515, US5306727, W09306120, DE3835772, GB2207674, DE3239858, EP072531）。US5556942には、
【化８】
0004249928.tif 000002
[式中、Ｚは臭素、およびＲは水素であるか、または合成反応中間体としてＲは塩素である]
で示される化合物が開示されている。
【０００４】
（発明の概要）
本発明は、式(Ｉ)：
【化９】
0004249928.tif 000003
[式中、Ｘは、ハロゲン原子；
Ｑは、Ｏ、ＳまたはＮＨ；および
Ｒは、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、もしくはＲ'ＣＯ−、Ｒ'ＮＨＣＯ−、Ｒ'ＳＯ２−またはＲ'ＮＨＳＯ２−（ここで、Ｒ'は、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール）；もしくはＲ−Ｑはともに、塩素である]
で示される新規なクラスのホスホルアミデート化合物およびその医薬的に許容しうる塩に関する。
【０００５】
本発明の別の態様は、少なくとも１種の医薬的に許容しうる担体と組合せた治療上有効量の式(Ｉ)で示される化合物を含む医薬組成物に関する。さらに詳しくは、該組成物は、有糸分裂阻害剤が有効であるガンおよび他の疾患を治療するために設計される。
本発明のさらに別の態様は、有糸分裂阻害剤が有効であるガンおよび他の疾患の治療方法に関するものであり、該方法は、そのような疾患の哺乳動物に、治療上有効量の式(Ｉ)で示される化合物を投与することを含む。
本発明のまた別の態様は、式(Ｉ)で示される化合物の製造方法に関する。
【０００６】
（発明の詳細な記載）
定義：
本明細書で用いる用語は、それらの認識された意味に基き、当業者によって明確に理解されるであろう。
「ハロゲン」または「ハロ」は、ブロモ、ヨード、フルオロまたはクロロを意味する。
「アルキル」または「アルキルオキシ」における「アルキル」は、Ｃ１−Ｃ２０の一価のヒドロカルビル部分を意味し、直鎖、分岐鎖または環状であってよい。「低級アルキル」、「ハロ低級アルキル」、「アリール（低級）アルキル」または「ヘテロアリール（低級）アルキル」における「低級アルキル」は、炭素原子および水素原子のみを含む１〜１０個の炭素原子を有する完全飽和一価炭化水素基を意味し、環式、分枝鎖または直鎖基であってよい。この用語の例としては、メチル、エチル、イソプロピル、プロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロペンチル、シクロプロピルメチル、シクロヘキシルまたはシクロへキシルメチルなどの基が挙げられる。本発明に関しては、１〜６個の炭素原子を有する低級アルキルが好ましい。
【０００７】
「置換アルキルまたは置換低級アルキル」は、それぞれ、典型的には、アリール、Ｒ'−置換アリール、ヘテロアリール、ニトロ、シアノ、ハロゲン、−ＯＲ１、−ＳＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１、−ＮＲ１２、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２、−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１（ここで、各Ｒ１は、独立して、水素、低級アルキル、Ｒ２−置換低級アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール（低級）アルキル、Ｒ２−置換アリール（低級）アルキルまたはアリール（低級）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、低級アルキル、ハロ低級アルキルまたはアミノである）などの基で、モノ−、ジ−またはトリ置換されたアルキルまたは低級アルキルである。シアノ、ハロ、低級アルキルオキシ、チオ、ニトロ、アミノまたはヒドロキシからなる群から選ばれる１〜３の置換基で置換された置換アルキルまたは置換低級アルキルが特に好ましい。
【０００８】
「ハロ低級アルキル」は、１〜３個のハロ基で置換された低級アルキルを意味し、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３および−ＣＨ２ＣＣｌ３などの基がさらに例示される。
「アリール（低級）アルキル」は、アリールで置換された低級アルキル基を意味する。「置換アリール（低級）アルキル」は、その基のアリール部分もしくはアルキル部分またはその両方に１〜３個の置換基を有するアリール（低級）アルキル基を意味する。
「ヘテロアリール（低級）アルキル」は、ヘテロアリールで置換された低級アルキル基を意味する。「置換ヘテロアリール（低級）アリール」は、その基のヘテロアリール部分もしくはアルキル部分またはその両方に１〜３個の置換基を有するヘテロアリール（低級）アルキル基を意味する。
「低級アルキルオキシ」は、Ｒ３が低級アルキルである−ＯＲ３基を意味する。
【０００９】
「アリール」、「アリールオキシ」および「アリール（低級）アルキル」における「アリール」は、６〜２０個の環炭素原子を含み、単環（例えば、フェニル）または２もしくはそれ以上の縮合環、好ましくは２〜３個の縮合環（例えばナフチル）、あるいは単結合で結合した２もしくはそれ以上の芳香環、好ましくは２〜３個の芳香環（例えばビフェニル）を有する芳香族炭化水素から誘導される基を意味する。アリールは、好ましくはＣ６−Ｃ１６、さらに好ましくはＣ６−Ｃ１４である。アリール基は、それ自体、アルキル、置換アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−ＳＲ１、−ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２、−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯ（Ｏ）Ｒ１、−ＮＲ１２、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、低級アルキル、Ｒ２−置換低級アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール（低級）アルキル、アリール（低級）アルキルまたはＲ２−置換アリール（低級）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロ、低級アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、低級アルキル、ハロ低級アルキルまたはアミノである）などの基で、単一または複数、置換されている。
【００１０】
「置換アリール」は、アルキル、置換アルキル、ハロゲン、シアノ、ニトロ、−ＳＲ１、−ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２、−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯ（Ｏ）Ｒ１、−ＮＲ１２、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、低級アルキル、Ｒ２−置換低級アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール（低級）アルキル、アリール（低級）アルキルまたはＲ２−置換アリール（低級）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロ、低級アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、低級アルキル、ハロ低級アルキルまたはアミノである）から選ばれる１〜３個の置換基で置換されたアリールを意味する。さらに、アリールにおける２つの隣接する置換基は、必要に応じて、一緒になって、低級アルキレンジオキシを形成していてもよい。置換アリールにおける特に好ましい置換基には、ヒドロキシ、ハロ、低級アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、低級アルキル、ハロ低級アルキル、ハロ低級アルキルまたはアミノが含まれる。
【００１１】
「ヘテロアリール」および「ヘテロアリール（低級）アルキル」における「ヘテロアリール」は、５〜１４個の環原子を含み、そのうちの１〜５が、Ｎ、ＯまたはＳから独立して選ばれるヘテロ原子である、芳香族炭化水素から誘導される基を意味し、単環、縮合ヘテロ環および縮合炭素環およびヘテロ芳香族環が含まれる（例えばチエニル、フリル、ピロリル、ピリミジニル、イソキサゾリル、オキサゾリル、インドリル、イソベンゾフラニル、プリニル、イソキノリル、プテリジニル、イミダゾリル、ピリジル、ピラゾリル、ピラジニル、キノリルなど）。
【００１２】
「置換ヘテロアリール」は、アルキル、Ｒ１−置換アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、−ＳＲ１、−ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２、−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯ（Ｏ）Ｒ１、−ＮＲ１２、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、低級アルキル、Ｒ２−置換低級アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール（低級）アルキル、アリール（低級）アルキルまたはＲ２−置換アリール（低級）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロ、低級アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、低級アルキル、ハロ低級アルキルまたはアミノである）から選ばれる１〜３個の置換基で置換されたヘテロアリールを意味する。さらに、ヘテロアリールにおける２つの隣接する置換基は、必要に応じて、一緒になって、低級アルキレンジオキシを形成していてもよい。置換ヘテロアリールにおける特に好ましい置換基には、ヒドロキシ、ハロ、低級アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、低級アルキル、ハロ低級アルキル、ハロ低級アルキルまたはアミノが含まれる。
【００１３】
「ヘテロ環」は、５〜１４個の環原子を含み、そのうちの１〜５が、Ｎ、ＯまたはＳから独立して選ばれるヘテロ原子である、芳香族炭化水素から誘導される基を意味し、単環、縮合ヘテロ環および縮合炭素環およびヘテロ芳香族環が含まれる（例えばチエニル、フリル、ピロリル、ピリミジニル、イソキサゾリル、オキサゾリル、インドリル、イソベンゾフラニル、プリニル、イソキノリル、プテリジニル、イミダゾリル、ピリジル、ピラゾリル、ピラジニル、キノリルなど）。ヘテロ環は、アルキル、Ｒ１−置換アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、−ＳＲ１、−ＯＲ１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１、−ＳＯ２ＯＲ１、−ＯＳＯ２Ｒ１、−ＳＯ２ＮＲ１２、−ＮＲ１ＳＯ２Ｒ１、−ＣＯ（Ｏ）Ｒ１、−ＮＲ１２、−ＣＯＮＲ１２または−ＮＲ１Ｃ（Ｏ）Ｒ１（ここで、各Ｒ１は独立して、水素、低級アルキル、Ｒ２−置換低級アルキル、アリール、Ｒ２−置換アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリール（低級）アルキル、アリール（低級）アルキルまたはＲ２−置換アリール（低級）アルキルであり、各Ｒ２は独立して、ヒドロキシ、ハロ、低級アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、低級アルキル、ハロ低級アルキルまたはアミノである）から選ばれる１〜３個の置換基を有する。さらに、ヘテロアリールにおける２つの隣接する置換基は、必要に応じて、一緒になって、低級アルキレンジオキシを形成していてもよい。置換ヘテロアリールにおける特に好ましい置換基には、ヒドロキシ、ハロ、低級アルキルオキシ、シアノ、チオ、ニトロ、低級アルキル、ハロ低級アルキル、ハロ低級アルキルまたはアミノが含まれる。
【００１４】
「エステル基」は、Ｒ'Ｃ（Ｏ）−Ｏ、Ｒ'ＣＯ−Ｓ−、スルホネートまたはカルバメート（ここで、Ｒ'は、水素、低級アルキル、低級アリール、アリールまたはヘテロ環）を意味する。
【００１５】
本発明に関して、「疾患」は、腫瘍、特にガン、および有糸分裂阻害剤が有効である他の疾患を含むことを意図し、良性過形成および真菌などの病原体による感染および寄生虫感染が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００１６】
「医薬的に許容しうる塩」は、酸性基、さらに詳しくは、存在する酸性プロトンが無機または有機の塩基と反応することができるときに形成し得る塩が含まれる。酸性プロトンは、たとえば、−ＯＲ１、−ＳＯ２ＯＲ１または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１基に存在する。典型的には、親化合物を、過剰のアルカリ試薬、例えば適当なカチオンを含む、水酸化物、カーボネートまたはアルコキシドなどで処理する。Ｎａ＋、Ｋ−、Ｃａ２＋およびＮＨ４＋などのカチオンが、医薬的に許容し得る塩に存在するカチオンの例である。Ｎａ＋塩は特に有用である。従って、許容し得る無機塩基には、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウムが含まれる。塩は、有機塩基、例えばエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、エタノールアミンおよびトロメタミンなどの有機塩基を用いて調製することもできる。本発明の化合物が塩基性基を含んでいるならば、酸付加塩を調製することができる。その化合物の酸付加塩は、適当な溶媒中、親化合物と、過剰量の酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸（硫酸塩および重硫酸塩を生じる）、硝酸、リン酸など、有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、シクロペンタンプロピオン酸、乳酸、ｏ−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、１,２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、４−メチル−ビシクロ［２.２.２］オクタン−２−エン−１−カルボン酸、グルコヘプタン酸、グルコン酸、４,４’−メチレンビス（３−ヒドロキシ−２−ナフトエ）酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、ｔ−ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルクロン酸、グルタミン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ステアリン酸、ムコン酸などから、標準的な方法で調製する。「医薬的に許容しうる塩」は、分子内塩または両性イオンも含む。両性イオンは、式(Ｉ)で示される化合物が酸性プロトンおよび塩基性基の両方を含む場合に形成される。「分子内塩」または「両性イオン」は、アミノ基の窒素原子の孤立電子対において、カルボキシル基からプロトンが転移することによって形成し得る。
【００１７】
「立体異性体」は、同じ共有結合の順序を有しているが、空間におけるそれら原子の相対的な配置が異なる化合物を意味する。
「治療上有効量」は、疾患を処置するために動物へ投与する場合、その量が、その疾患に対するそのような治療を達成するのに十分であることを意味する。
「有糸分裂阻害剤」は、真核細胞の核の分裂を妨げる薬物または作用剤を意味する。
【００１８】
哺乳類において疾患を「治療すること」または疾患の「治療」には、以下のものが含まれる：
（１）その疾患になりやすいが、まだその疾患を経験していないかまたはその疾患の症状が表れていない哺乳類において、その疾患の発生を阻止すること；
（２）その疾患を阻害すること、すなわち、その疾患の進行を制止すること；または
（３）その疾患を軽減すること、すなわち、その疾患の後退をもたらすこと。
本発明の特定の化合物は、１つまたはそれ以上のキラル中心をもつことができる。このような場合、すべての立体異性体もまた、本発明の範囲に含まれる。したがって、本発明の範囲にある化合物は、個々に単離された立体異性体ならびにそのような立体異性体の混合物を含むことが理解される。
【００１９】
好ましい具体例
本発明の第１の態様の化合物のうち、特定の化合物（該化合物の医薬的に許容し得る塩を含む）が好ましい。
これらの好ましい化合物として、
(１)Ｘが、塩素または臭素、特に塩素；
(２)Ｑが、ＯまたはＮＨ；
(３)Ｒが、Ｒ'ＣＯ−、Ｒ'ＮＨＣＯ−、Ｒ'ＳＯ２−またはＲ'ＮＨＳＯ２−（ここで、Ｒ'は、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール）であり、特にここで、Ｒが、アセチル、ベンゾイル、ベンゼンスルホニル、パラ−ブロモベンゼンスルホニル、パラ−ニトロベンゼンスルホニル、パラ−トルエンスルホニルまたはメタンスルホニル；または
(３')Ｒが、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり、特にここでＲが、水素、メチルまたはベンゾイル；
である化合物が挙げられる。
【００２０】
本発明化合物のうち、与えられた選択がmetである化合物はが、選択がmetでない化合物よりも好ましく；より多くのmet選択を有する化合物が、より少ない選択がmetである化合物よりも好ましい。
特に好ましい化合物は、Ｘが塩素、ＱがＯおよびＲが水素、ベンジル、アセチル、ベンゾイル、ベンゼンスルホニル、パラ−ブロモベンゼンスルホニル、パラ−ニトロベンゼンスルホニル、パラ−トルエンスルホニルまたはメタンスルホニルであるか、またはＲ−Ｑがともに、塩素である化合物であり、２−ヒロドキシエチル−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラキス(２−クロロエチル)ホスホロジアミデートおよび２−クロロエチル−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラキス(２−クロロエチル)ホスホロジアミデートが特に好ましい。
さらに他の好ましい化合物は、Ｘが塩素およびＲがＲ'ＳＯ２−（ここで、Ｒ'は、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール）である化合物である。Ｒがベンゾイル、メタンスルホニル、パラ−ニトロベンゼンスルホニルまたはパラ−ブロモベンゼンスルホニルである化合物が、特に好ましい。Ｒがパラ−ブロモベンゼンスルホニルである化合物が最も好ましい。
【００２１】
薬理学および有用性
式(Ｉ)で示される化合物は、抗腫瘍活性を有するか、または抗腫瘍活性をもつように修飾されることが可能である。これらの化合物において分子の２−ハロエチル、特に、２−クロロエチル部分が、ＤＮＡのアルキレーターとして直接作用しうるか、またはアジリジニルに変換されうる。アジリジニル体は、分子の高活性体であり、化合物のナイトロジェンマスタードクラスにとって必要とされるメカニズムをもつ。したがって、該化合物は、腫瘍および良性過形成および病原体による感染などの有糸分裂阻害剤が有効である他の疾患の治療に有効である。これらの化合物は、抗腫瘍活性を獲得するために肝臓において代謝的に活性化されなくてもよく、したがって、シクロホスファミドと同じ毒性プロファイルをもたない。
【００２２】
投与および医薬組成物
本発明化合物は、通常および許容しうる経路のいずれかによって治療上有効量で、治療される患者に投与することができる。投与経路として、静脈内、腹腔内、筋肉内および皮下注射などの注射による投与、局所適用、点鼻スプレー、座剤などの経粘膜または経皮デリバリーによる投与、あるいは経口投与がが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
治療上有効量は、疾患の重篤度、患者の年齢および相対的健康度および使用する化合物の強度ならびに他の因子に応じて大きく変化する。通常、約１ｍｇ／体重ｋｇ／日〜１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲であり、約１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日が好ましい。
【００２３】
一般に、本発明化合物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、半固体、散剤、徐放性製剤、液剤、懸濁剤、エリキシル剤または他の適当な組成物のいずれかの剤形をとることができ、一般に、少なくとも１種の医薬的に許容しうる担体と組合せた式(Ｉ)で示される化合物を含む医薬組成物として投与される。許容しうる担体は、非毒性であり、投与を補助し、式(Ｉ)で示される化合物の治療上の利点に不利な影響を及ぼさない。このような賦形剤は、固体、液体または半固体であってよい。
【００２４】
固体の医薬賦形剤として、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、胡粉、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳などが挙げられる。液体および半固体の賦形剤は、水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、および石油、動物油、野菜油または合成油などの種々の油（たとえば、ピーナツ油、大豆油、鉱物油、胡麻油など）から選ばれる。好ましい液体担体、特に注射液に適した担体として、水、生理的食塩水、水性デキストロースおよびグリコールが挙げられる。
【００２５】
組成物中の式(Ｉ)で示される化合物の量は、組成物のタイプ、単位用量の大きさ、賦形剤の種類および医薬品化学業者に公知の他の因子に応じて大きく変わる。一般に、最終組成物は、１％ｗ／ｗ〜９９％ｗ／ｗ、より好ましくは、１０％ｗ／ｗ〜９０％ｗ／ｗ、最も好ましくは、２５％ｗ／ｗ〜７５％ｗ／ｗの本発明化合物ならびに残量の賦形剤（１種またはそれ以上）を含む。
【００２６】
医薬組成物は、慣例の調剤技術にしたがって製造される。
治療上有効量の式（Ｉ）：
【化１０】
0004249928.tif 000004
［式中、Ｘは、ハロゲン原子；
Ｑは、Ｏ、ＳまたはＮＨ；および
Ｒは、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、もしくはＲ’ＣＯ−、Ｒ’ＮＨＣＯ−、Ｒ’ＳＯ２−またはＲ’ＮＨＳＯ２−（ここで、Ｒ’は、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール）；もしくはＲ−Ｑはともに、ハロゲンである］
で示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩および少なくとも１種の医薬的に許容しうる担体を含む医薬組成物は、本発明の具体例と同様にして製造される。
【００２７】
本発明はさらに、単独または他の薬理剤と組合せて用いる１種またはそれ以上の式(Ｉ)で示される化合物を含む医薬組成物の投与を企図する。本発明の好ましい具体例は、１種またはそれ以上の式(Ｉ)で示される化合物を、抗生物質、抗新生物薬、殺腫瘍剤、腫瘍静止剤などからなる群から選ばれる他の薬理学的活性剤と組合せて用いる組合せ療法である。このような組合せ療法の使用は、当業者であれば、一般に容認された医療介護規格にしたがい、一般に容認された臨床原則に基いて、容易に実施することができる。
【００２８】
本発明はまた、治療上有効量の式(Ｉ)：
【化１１】
0004249928.tif 000005
[式中、Ｘは、ハロゲン原子；
Ｑは、Ｏ、ＳまたはＮＨ；および
Ｒは、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール、もしくはＲ'ＣＯ−、Ｒ'ＮＨＣＯ−、Ｒ'ＳＯ２−またはＲ'ＮＨＳＯ２−（ここで、Ｒ'は、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリール）；もしくはＲ−Ｑはともに、塩素である]
で示される化合物またはその医薬的に許容しうる塩を、それらを必要とする哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における腫瘍、特にガンの治療方法を企図する。
【００２９】
式(Ｉ)で示される化合物の合成
【化１２】
0004249928.tif 000006
式(Ｉ)で示される化合物は、上記および下記説明の反応工程式にしたがって、製造することができる。
【００３０】
化合物Ｂは、酸塩化リンを化合物Ａであるビス(２−ハロエチル)アミンハライドと反応させることによって製造することができる。不活性溶媒中で反応混合物を反応させる。不活性溶媒は、芳香族炭化水素であってよい。反応混合物に塩基、より好ましくは有機アミンなどの有機塩基、最も好ましくはトリエチルアミンを加え、次いで、０〜５０℃にて反応混合物を長時間攪拌する。混合物（懸濁液であることが多い）を０〜１００℃に加熱し、長時間攪拌する。次いで、混合物を冷却し、たとえば、木炭などの吸着剤で処理し、室温にて攪拌し、濾過する。次いで、溶媒を除去して化合物Ｂを得る。
【００３１】
続いて、化合物Ｂを化合物Ｃと反応させる。反応は、極性溶媒中で行う。反応混合物を攪拌し、次いで、冷却する。アルカリアルコキシドを混合物に加え、次いで、０〜５０℃にゆっくりと温め、長時間攪拌する。反応混合物にＨＣｌなどのハロゲン化水素の水溶液を加える。有機画分を集め、水性画分を水−混和しない非プロトン性極性溶媒(２×４Ｌ）で抽出する。水−混和しない非プロトン性極性溶媒として、ジクロロメタン、クロロホルムなどが挙げられる。有機画分を合わせ、戦場し、溶媒を減圧除去する。次いで、得られる反応粗生成物（式(Ｉ)で示される化合物）を洗浄し、慣例の手段で精製する。
【００３２】
さらに詳しくは、化合物２（下記反応工程式２を参照）は、酸塩化リンを化合物１、すなわちビス(２−ハロエチル)アミン塩酸塩と反応させることによって製造することができる。トルエン、ベンゼン、キシレンなどの溶媒中の反応混合物を穏やかに攪拌し（透明溶液を得るため）、反応混合物にトリエチルアミンを５〜３０分かけて加える。次いで、反応混合物を室温にて長時間攪拌する。この混合物にさらにビス(２−ハロエチル)アミン塩酸塩およびトリエチルアミンを加える。得られる懸濁液を溶媒の還流温度まで加熱し、１６〜２４時間攪拌する。次いで、混合物を室温まで冷却し、木炭で処理し、室温にて２時間攪拌し、次いで、セライトパッドで吸引濾過する。次いで、回転蒸発器にて溶媒を減圧除去（３０ｍｍＨｇ、最終浴温５０℃にて）して、化合物２を得る。
【００３３】
このようにして製造した化合物を、次いで、化合物３と反応させる。反応は、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ｔ−ブチルメチルエーテルなどの溶媒中で行う。反応混合物を穏やかに攪拌し（透明あ化溶液を得るため）、氷／水浴を用いて混合物を０℃に冷却する。この冷却溶液にカリウムtert−ブトキシド（３６２ｇ、３．２２モル）を２０分かけて加える。次いで、反応混合物を室温までゆっくりと温め、長時間（１６〜２４時間）攪拌する。この段階で塩化水素の水溶液を反応混合物に加える。有機画分を集め、水性画分を酢酸エチル(２×４Ｌ）で抽出する。有機溶媒を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液(１×４Ｌ）で洗浄し、回転蒸発器にて溶媒を減圧除去（３０ｍｍＨｇ、最終浴温５０℃にて）する。得られる反応粗生成物（式(Ｉ)で示される化合物）を洗浄し、慣例の手段で精製する。
【００３４】
この合成において、酸塩化リン、化合物１および化合物３などの反応物はすべてアルドリッチ、フルカおよびアルファなどから商業的に入手する。
特定の式(Ｉ)で示される化合物の合成においては、保護基を導入し、最終的に除去してもよい。アミノ、ヒドロキシル、カルボキシル基のための適当な保護基は、Greeneらの"Protective Groups in Organic Synthesis," Second Edition, John Wiley and Sons, New York, 1991に記載されている。幾つかの誘導体はアルコールのエステル化を必要とするが、それは、当業者に公知の方法（たとえば、Larockの"Comprehensive Organic Transformations", VCH Publishers, New York, 1989を参照）によって達成することができる。
【００３５】
したがって、式(Ｉ)で示される化合物の製造方法は、１つまたはそれ以上の下記ステップを含む：
(ａ)式(２)：
【化１３】
0004249928.tif 000007
で示される化合物を式(３)：
【化１４】
0004249928.tif 000008
で示される化合物と反応させる；または
(ｂ)それ自体公知の方法で、式(Ｉ)で示される化合物の置換基を作成する；または
(ｃ)Ｒが水素であり、Ｑが酸素である式(Ｉ)で示される化合物をＲ−Ｑがともに、エステル基である式(Ｉ)で示される化合物に変換する；または
(ｄ)式(Ｉ)で示される化合物の遊離塩基を酸と反応させて、医薬的に許容しうる塩を得る；または
(ｅ)式(Ｉ)で示される化合物の酸付加塩を塩基と反応させて、対応する遊離塩基を形成する；または
(ｆ)式(Ｉ)で示される化合物を式(Ｉ)で示される化合物の他の医薬的に許容しうる塩に変換する；または
(ｇ)式(Ｉ)で示される化合物の適当な比率のラセミ混合物を分割して、その立体異性体を得る。
【００３６】
（実施例）
以下の実施例は、本発明を当業者がより明確に理解し、実施できるようにするために付与されるものである。それらは、本発明の範囲を制限するものではなく、説明ならびに典型例の表示にすぎないことを理解すべきである。
合成例において、薄層クロマトグラフィーは、1"x 3"Analtech GF 350シリカゲルプレートおよび蛍光インジケーターを用いて行う。ＴＬＣの視覚化は、ヨウ素蒸気中での観察によって行う。プロトンおよび炭素核磁気共鳴スペクトルは、内部標準としてテトラメチルシランを用いて、Bruker AC 300 MHz核磁気共鳴スペクトロメーターで得る。融点は、電熱融点装置を用いて得たものであり、補正はしない。赤外線スペクトルは、ＫＢｒペレットとして得、Perkin-Elmer Spectrum 1000 FT赤外線分光光度計で測定する。質量分析は、Shimadzu QP-5000 GC/質量分析計(CI, メタン)において直接注入により行う。熱分析は、Mettler Toledo DSC821e示差走査熱量計で行う。
【００３７】
式(Ｉ)で示される化合物の合成
反応工程式２
【化１５】
0004249928.tif 000009
【００３８】
実施例１  化合物３の製造（反応工程式２）
Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラキス(２−クロロエチル)ホスホロジアミド塩化物(化合物２)の製造
電気加熱マントル内の１２リットルの三つ首丸底フラスコに、オーバーヘッドメカニカルスターラー、還流コンデンサーおよび窒素入／出口バブラーでフタをした２リットル等圧化滴下ロートを取り付ける。フラスコに酸塩化リン（２５８ｍｌ、２．７７モル）、ビス(２−クロロエチル)アミン塩酸塩(４９５ｇ、２．７７モル）（化合物１）およびトルエン（５リットル）を入れる。スターラーを中速度で攪拌するようにセットし（透明な溶液を得るため）、反応混合物にトリエチルアミン(８１２ｍｌ、５．８２モル）を１０分かけて加える。次いで、反応混合物を室温にて２６時間攪拌する。この混合物にビス(２−クロロエチル)アミン塩酸塩(５０５ｇ、２．８３モル）およびトリエチルアミン(８３０ｍｌ、６．１１モル）を１０分かけて加える。黄褐色の懸濁液をトルエンで加熱還流（１１０℃）し、２２時間攪拌する。次いで、混合物を室温まで冷却し、木炭(５００ｇ）で処理し、室温にて２時間攪拌し、次いで、セライトパッド（１ｋｇ）で吸引濾過する。回転蒸発器にて溶媒を減圧除去（３０ｍｍＨｇ、最終浴温５０℃にて）して、Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラキス(２−クロロエチル)ホスホロジアミド塩化物(化合物２)を(９７９ｇ、収率９７％）を赤褐色油状物で得る。ＴＬＣ分析は、１つのスポットを示す（Ｒｆ＝０．７１；酢酸エチル：ヘキサン＝１：１）。プロトンＮＭＲスペクトルは、市販物質に一致する。
【００３９】
実施例２
２−ヒドロキシエチル  Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラキス(２−クロロエチル)ホスホロジアミデート(化合物３)の製造
１２リットルの三つ首丸底フラスコに、オーバーヘッドメカニカルスターラー、温度計および窒素入／出口バブラーを取り付ける。フラスコにＮ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラキス(２−クロロエチル)ホスホロジアミド塩化物（９７９ｇ、２．６８モル）、エチレングリコール（１．５リットル、２６．８モル）（化合物４）およびテトラヒドロフラン（３リットル）を入れる。スターラーを中速度で攪拌するようにセットし（透明な赤い溶液を得るため）、混合物を氷／水浴を用いて０℃に冷却する。冷却溶液にカリウムtert−ブトキシド（３６２ｇ、３．２２モル）を２０分かけて加える。次いで、反応混合物を室温までゆっくりと温め、合計１９時間攪拌する。フラスコに塩化水素の水溶液（８リットル、１Ｍ）を１０分かけて加える。有機画分を集め、水性画分を酢酸エチル(２×４Ｌ）で抽出する。有機溶媒を合わせ、飽和塩化ナトリウム水溶液(１×４Ｌ）で洗浄し、回転蒸発器にて溶媒を減圧除去（３０ｍｍＨｇ、最終浴温５０℃にて）し、暗赤褐色油状物を得る。次いで、この粗有機生成物を暖かい（４０℃）のメチルtert−ブチルエーテル（２リットル）に溶解し、室温まで冷却し、合計１４時間攪拌する。得られるスラリーを０℃にて３０分間攪拌した後、沈殿を吸引濾過にて集め、冷メチルtert−ブチルエーテル（１リットル）で洗浄する。濾液を合わせ、回転蒸発器にて減圧濃縮（３０ｍｍＨｇ、最終浴温５０℃にて）し、体積を５００ｍｌにし、０℃にて３０分間攪拌する。得られる沈殿を吸引濾過にて集め、冷メチルtert−ブチルエーテル（２００ｍｌ）で洗浄する。次いで、２つのクロップの固体生成物を合わせ、一夜乾燥（３０ｍｍＨｇ、４０℃）して、２−ヒドロキシエチル  Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラキス(２−クロロエチル)ホスホロジアミデート(化合物３)(５２６ｇ、収率５０％）を黄褐色粉末で得る。ＴＬＣ分析は、１つのスポットを示す（Ｒｆ＝０．６２；メタノール：クロロホルム＝１：９）。融点７６〜７８℃；ＩＲ (KBr) 3372, 2957, 1459, 1344, 1206, 1098, 1053, 929 cm−１; MS (CI, メタン) m/z 391(MH+), 353, 339, 248, 106。熱分析（ＤＳＣ）は、１６４〜１７９および２２２〜２３１℃に２つの発熱分解レンジを示す。
【００４０】
下記表１は、同様の方法で製造された化合物を示す。
【化１６】
0004249928.tif 000010
【表１】
0004249928.tif 000011
【００４１】
実施例３
化合物１１の製造（反応工程式３）
【化１７】
0004249928.tif 000012
ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１：１）および１ＮのＮａＯＨ（２ｍｌ）中の化合物３(０．７８０ｇ、２ミリモル）の溶液に、ＴＨＦ中のｐ−トルエンスルホニルクロリド（ＴｓＣｌ、０．４０ｇ、２．１ミリモル）の溶液を加える。反応混合物を室温にて２４時間攪拌する。混合物を塩化メチレンで希釈し、１ＮのＨＣｌで洗浄する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥（炭酸カリウム）し、濃縮して、粘稠油状物（化合物１１）(１．０４ｇ、収率９６％）を得る。
【００４２】
下記表２は、同様の方法で製造された化合物を示す。
【化１８】
0004249928.tif 000013
【表２】
0004249928.tif 000014
【００４３】
実施例４  細胞生存率
１０％ウシ胎児血清、１％Ｌ−グルタメートおよび０．１％ゲンタマイシンを補足したＭＥＭ中で、ＰＲＭＩ８３２２ヒトメラノーマ細胞（ＡＴＣＣ）を成長させる。９６ウエルマイクロタイタープレートに２×１０６個／ウエルの密度で細胞を植える。２４時間後、１μＭ〜１０ｍＭの最終濃度の試験化合物および１％ＤＭＳＯを加えた同じ培地で培地を交換する。該化合物の存在下で細胞をさらに４日間成長させる。化合物の各濃度における試験は３回行う。着色剤の代謝転換をモニターする標準的アッセイ（CellTiter 96ＴＭ、 Promega）を用いて、細胞生存率を測定する。
【表３】
0004249928.tif 000015
【００４４】
実施例５  マウスにおける抗腫瘍効果
雌性の７週齢老年ＮＣｒ−ｎｕ無胸腺ヌードマウスをCharles River
Laboratories (Raliegh, NC)から購入し、実験前の１週間を実験室において順化させる。実験動物は、１２時間明／暗サイクルにて、１つのケージ当たり５匹をマイクロアイソレーターケージに収容する。実験動物には、濾過した滅菌水および滅菌したげっ歯類食餌を任意に与える。実験動物は、毎日観察し、腫瘍減少などの臨床的徴候に注意する。
【００４５】
腫瘍モデル：ＭＸ−１ヒト乳房腫瘍３０〜４０ｍｇフラグメントを、１２ゲージ套管針を用いて、マウスの右腋窩領域の近くに皮下移植し、成長させる。処置開始までに、腫瘍を７５〜１９６ｍｇ（大きさ７５〜１９６ｍｍ３）の重量にする。
【００４６】
薬物処置：投与量５５、７５および１００ｍｇ／ｋｇ／用量にて、５日間連続して、化合物３を腹腔内投与する。化合物３は、５％ＥｔＯＨ／４５％プロピレングリコール／５０％ＰＢＳ中、１０ｍｇ／ｍｌの濃度にて毎日新たに調合する。投与溶液は、調合後、４時間以内にマウスに投与する。化合物は、０．１ｍｌ／１０ｇ体重の注射量にて、正確な体重によって投与する。
【００４７】
腫瘍測定：腫瘍を測定し、処置の最初の日から開始して、実験動物を１週間に２回測定する。腫瘍体積は、カリパス測定器（ｍｍ）によって測定し、長円球体用の式：Ｌ×Ｗ２／２＝ｍｍ３（ここで、ＬおよびＷは、各測定で得られる長い方の径と短い方の径を意味する）で決定する。この式は、単位密度を仮定して（１ｍｍ３＝１ｍｇ）腫瘍重量の測定にも用いる。
実験継続期間は、腫瘍移植後２８日間である。腫瘍重量が４ｇに到った実験動物はいずれも、実験終了前に屠殺する。
【表４】
0004249928.tif 000016