(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フコイダン及びバチルス・パミルスに属する細菌を含有することを特徴とする魚介類の感染症予防・治療剤。
【請求項２】
フコイダン及びバチルス・パミルスに属する細菌を含有することを特徴とする魚介類の養殖用飼料。
【請求項３】
フコイダン及びバチルス・パミルスに属する細菌を投与することを特徴とする魚介類の養殖方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、魚介類の病原性細菌及びウイルス等による感染症を予防・治療する薬剤、これを含有する飼料及びこれを投与することによる魚介類の養殖方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
クルマエビやブリ、マダイ、ヒラメ等の養殖場では、魚介類が高い密度で飼育されているため、病気が発生することが多い。病気の原因は、病原性細菌、ウイルス、寄生虫等による感染症が主であり、これに対し様々な対策が講じられている。
【０００３】
感染症の中でも、数年前から台湾や中国、東南アジアで急激に流行し始めたエビ類を死滅させるウイルス感染症（ＰＲＤＶ：Penaeid Rod-Shaped  ＤＮＡ  Virus）は、輸入業者によって日本にも伝播し、深刻な被害を発生させている。また、ブリのイリドウイルス感染症や連鎖球菌症等も発生頻度の高い感染症として重篤な被害をもたらしている。
【０００４】
これら感染症に対しては、抗生物質や免疫賦活物質等を投与するなどの対抗手段が講じられている。しかし、抗生物質を投与する場合、養魚等への残留が懸念され、またその効果は必ずしも満足しうるものではなかった。
【０００５】
一方、最近になって、硫酸化多糖類の魚類感染症に対する効果も知られるようになっている。例えば、特公平７−１０８８５８号公報には、各種海藻類の水抽出物がコイやブリ等の細菌感染症を予防することが記載されている。また、本出願人も硫酸化多糖類がウイルス感染の予防・治療効果を有することを見出し、これを特許出願している（ＷＯ９８／４２２０４号公報）。
更に、本出願人は、水溶性タンパク質又はペプチドを資化する能力を有するバチルス属細菌が、魚介類の養殖場等における硫化物の発生を抑制し、歩留まりを増加させることを見出し、特許出願している（ＷＯ９８／４５４０２号公報）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
上記のように魚介類の養殖場等における感染症を予防・治療する試みは多種なされているものの、未だ被害の発生は減少しておらず、より効果の高い新たな予防・治療剤が要望されている。
また、ウイルス感染又は細菌感染のどちらか一方に効果的な薬剤でも、他方を抑制できないものが多く、このことが養魚の歩留まり低下を防ぐことのできない原因となることが多い。このため、ウイルス及び細菌の両者の感染に対して優れた予防・治療効果を有するものが望まれている。
【０００７】
従って、本発明は、ウイルス感染及び細菌感染に対する優れた予防・治療効果を有するとともに、安価で安全性の高い魚介類の感染症予防・治療剤を提供することを目的としている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは鋭意研究したところ、フコイダンを多く含有するもずくには抗菌作用のあることが知られており（特開平１０−３０６０３５号公報）、フコイダンと細菌との併用は不可能と考えられたが、全く意外にも、フコイダンとある種のバチルス属細菌を併用して魚介類に投与することにより、相乗的に高い感染症予防・治療効果が得られ、歩留まりが増加することを見出し本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、フコイダン及びバチルス・パミルス又はバチルス・レンタスに属する細菌を含有することを特徴とする魚介類の感染症予防・治療剤を提供するものである。
また、本発明は、フコイダン及びバチルス・パミルス又はバチルス・レンタスに属する細菌を含有することを特徴とする魚介類の養殖用飼料を提供するものである。
更に、本発明は、フコイダン及びバチルス・パミルス又はバチルス・レンタスに属する細菌を投与することを特徴とする魚介類の養殖方法を提供するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明の第一の成分であるフコイダンは主としてフコースからなる分子量数十万前後の硫酸化多糖類であって、褐藻類のモズク、ウミウチワ、マコンブ、ワカメ、コンブ、アミジグサ等に豊富に含有されており人体に無害のものである。
フコイダンは、褐藻類を粉砕等して直接給餌してもよい。また、フコイダンは、抽出方法が確立されており、抽出物も好適に使用し得る。抽出方法としては、酸抽出法、熱水抽出法等が挙げられるが、これらに限定されず、種々の方法で抽出することができる。また、フコイダンは、海藻から抽出された高分子量のものを例えば弱酸処理等による加水分解等により、低分子化もしくはオリゴ糖化させてから用いてもよい。
【００１１】
一方、本発明の第二の成分であるバチルス・パミルス又はバチルス・レンタスとしては、特に、ＷＯ９８／４５４０２に開示されたバチルス・パミルスＡ−１株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６２８０）、バチルス・レンタスＡ−２株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６２７８）、バチルス・レンタスＡ−３株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６２７９）、バチルス・パミルスＡ−４株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６２８１）から選ばれる１種又は２種以上を用いることが好ましい。
【００１２】
これらのバチルス属細菌の投与形態としては、菌体を通常の増殖用培地、例えば、乾燥ブイヨン等で増殖させたものをそのまま投与してもよく、該培養液から遠心分離、静置して上清を除く等の手段により回収した菌体を投与してもよい。また、菌体は澱粉、スキムミルク等の賦形剤等とともに凍結乾燥したものを用いてもよい。更に、培養後の菌体を担体に担持させたものを投与してもよい。ここで用いる担体は特に限定されないが、ゼオライト、麦飯石、活性炭、火成岩、サンゴ石等が菌体の保持能の点で好ましく、特にゼオライトがコスト面から好ましい。
上記フコイダン及び前記バチルス属細菌は、両者を別個に投与することができる。すなわち、フコイダンをそのままあるいはこれを含む海藻類又は抽出乾燥物を直接給餌し、別途前記バチルス属細菌の培養液あるいは遠心分離等の手段により回収した菌体をそのまま、又は担体に担持して投与してもよい。
【００１３】
また、これらは通常魚介類の養殖に用いられる飼料原料に混合又は配合して用いてもよい。飼料に混合又は配合する両者の量は、魚介類や養殖方法により異なるが、フコイダンは一般的に感染予防のためには、０．５〜５０ｇ／kg程度が好ましい。一方、前記バチルス属細菌の量も魚介類の種類等に合わせ適宜決定すればよく、通常、１×１０4cfu／ｇ〜１×１０8cfu／ｇ程度、特に、１×１０5cfu／ｇ〜１×１０7cfu／ｇ程度が養魚の歩留まり、コスト面、作業性等の点から好ましい。これらを含有する飼料の給餌量は、１日に魚介類の体重の３％程度がよい。
【００１４】
両者を別個に投与する場合の投与量は、フコイダンは上記と同様となるよう設定すればよい。また、前記バチルス属細菌は１×１０5cfu／m3〜１×１０9cfu／m3程度、特に、１×１０6cfu／m3〜１×１０8cfu／m3程度養殖場等へ投与することが好ましい。
【００１５】
本発明の感染症予防・治療剤を適用し得る魚介類としては、特に限定されず、淡水魚として、ウナギ、コイ、ニジマス、アユ、ティラピア、フナ等、海水魚として、ブリ、タイ、ギンザケ、マアジ、ヒラメ、カレイ、クロソイ、トラフグ、カンパチ等、無脊椎動物としてクルマエビ、ブラックタイガー、ウシエビ、コウライエビ、ガザミ等が挙げられる。また、適用できる感染症としては、イリドウイルス、ビルナウイルス、ＰＲＤＶ等のウイルス感染症、ビブリオ、シュードモナス、連鎖球菌、類結節症等の細菌感染症が挙げられる。中でも、イリドウイルスやＰＲＤＶ、連鎖球菌症に対する効果が高く好ましい。
【００１６】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１７】
実施例１
ブリの連鎖球菌症とイリドウイルス症の混合感染に対するフコイダン及びバチルス・パミルスの併用効果を検討した。
（供試魚）鹿児島県下のブリ養殖場において、網生簀に養殖中の平均体重２５０ｇ／尾のブリ群４生簀を試験に供した。
（飼育方法）１０ｍ×１０ｍ×１５ｍの網生簀４基を使用した。
（供試尾数）試験には自然発症した連鎖球菌症とイリドウイルス症の混合感染を確認したブリ群４０，０００尾（各試験区１０，０００尾）を供した。
（飼料）対照区には冷凍マイワシ８０部とブリ用モイスト粉末（ミヤコ化学製）２０部を混合し、成形したブリ用モイストペレット（対照飼料）を使用した。試験区１（フコイダン・バチルス併用投与区）には冷凍マイワシ８０部とブリ用モイスト粉末（同上）２０部に加えて、ブリ体重１kgあたりフコイダンを６０mg及び飼料１ｇあたりバチルス・パミルスを１０6個となるように添加混合し、成形したブリ用モイストペレット（試験飼料１）を、試験区２（フコイダン単用投与区）には同様にフコイダンを６０mgとなるように、試験区３（バチルス単用投与区）には同様にバチルス・パミルスを１０6個となるように添加混合し、成形したブリ用モイストペレット（試験飼料３）を使用した。
給餌は毎日定刻の１０時に行い、設定給餌率はブリの総体重量あたり８％とした。
【００１８】
（試験方法）試験期間を８月３日から８月２２日の２０日間と定め、ブリの日間斃死数を求めた。
試験期間中に斃死したブリを任意に採取し、細菌検査によって連鎖球菌感染、ＰＣＲ法によってイリドウイルス感染の有無を確認した。その結果、斃死の原因は連鎖球菌症とイリドウイルス症の混合感染によるものであった。
【００１９】
試験期間中の日間斃死数は図１に示す。その結果、フコイダン及びバチルス・パミルスの併用投与により、それぞれの単独投与に比べて、ブリの連鎖球菌症とイリドウイルス症の混合感染による死亡を顕著に防止できた。
【００２０】
実施例２
ブリの連鎖球菌症とイリドウイルス症の混合感染に対するフコイダン及びバチルス・パミルスの併用効果を検討した。
（供試魚）鹿児島県下のブリ養殖場において、網生簀に養殖中の平均体重４５０ｇ／尾のブリ群６生簀を試験に供した。
（飼育方法）１０ｍ×１０ｍ×１５ｍの網生簀６基を使用した。
（供試尾数）試験には自然発症した連鎖球菌症とイリドウイルス症の混合感染を確認したブリ群３０，０００尾（各試験区５，０００尾）を供した。
（飼料）対照区には冷凍マイワシ８０部とブリ用モイスト粉末（同上）２０部を混合し、形成したブリ用モイストペレット（対照飼料）を使用した。試験区１（フコイダン・バチルス併用投与区）には冷凍マイワシ８０部とブリ用モイスト粉末（同上）２０部に加えて、ブリ体重１kgあたりフコイダンを６０mg及び飼料１ｇあたりバチルス・パミルスを１０6個となるように添加混合し、成形したブリ用モイストペレット（試験飼料１）を、試験区２（フコイダン単用投与区１）には同様にフコイダンを６０mg、試験区３（フコイダン単用投与区２）には同様にフコイダンを１００mgとなるように添加混合し、成形したブリ用モイストペレット（試験飼料２、３）を、試験区４（バチルス単用投与区１）には同様にバチルス・パミルスを１０6個、試験区５（バチルス単用投与区２）には同様にバチルス・パミルスを１０8個となるように添加混合し、成形したブリ用モイストペレット（試験飼料４、５）を使用した。
（給餌方法）給餌は毎日定刻の１０時に行った。設定給餌率はブリの総体重あたり６％とした。試験開始時に、対照区には対照飼料１３５kgを、各試験区には各試験飼料１３５kgを給餌し、成長及び生存尾数をみて適宜給餌量を増減した。
（試験方法）試験期間を９月１日から９月１４日の１４日間と定め、ブリの日間斃死数を求めた。
試験期間中に斃死したブリを任意に採取し、細菌検査によって連鎖球菌感染、ＰＣＲ法によってイリドウイルス感染の有無を確認した。その結果、斃死の原因は連鎖球菌症とイリドウイルス症の混合感染によるものであった。
【００２１】
試験期間中の日間斃死数を図２に示した。その結果、フコイダン及びバチルス・パミルスの併用投与により、それぞれの単独投与に比べて、ブリの連鎖球菌症とイリドウイルス症の混合感染による死亡をより顕著に防止できた。
また、フコイダン投与量を６０mg／kgから１００mg／kgに増加させても、またバチルス・パミルスを飼料１ｇあたり１０6個から１０8個に増加させてもその感染防止効果に差がなかったことから、本発明のフコイダンとバチルス・パミルスとの併用によって得られる効果は、単なる相加効果でなく相乗効果であることが明らかである。
【００２２】
【発明の効果】
本発明によれば、魚介類のウイルスや細菌による感染症、特に両者の混合感染症に対して予防することができる。魚介類の養殖時の飼料として用いてもよい。
【図面の簡単な説明】
【図１】連鎖球菌とイリドウイルス症の混合感染ブリに対するフコイダン及びバチルス・パミルスの併用効果を示す図である。
【図２】連鎖球菌とイリドウイルス症の混合感染ブリに対するフコイダン及びバチルス・パミルスの併用効果を示す図である。
【図１】
0004331824.tif 000002
【図２】
0004331824.tif 000003