(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒメマツタケ(Agaricus,blazei,Murr.)の抽出物を有効成分とする痴呆改善薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒメマツタケ(Agaricus,blazei,Murr.)の抽出物を有効成分とする痴呆改善薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
脳循環不全あるいは脳代謝機能不全により痴呆症状が発現することは知られている。痴呆は、記憶障害、見当識障害などの知的機能の低下を中核症状とし、感情障害（不安、焦燥、躁状態、うつ状態、多幸など）、意志発動性の障害（意欲低下、自発性低下など）、精神症状（幻覚、妄想、作話など）及び問題行動の発現（徘徊、失禁、暴力行為など）を周辺症状とする症候群である。これらを呈する基礎疾患は、脳血管性痴呆、アルツハイマー病など様々であり、発症原因としては脳の器質的障害、より具体的には神経伝達機構の障害であると言われているが、発症原因については未だ不明の部分が多い。
現在までのところ、このような痴呆の改善には神経伝達機能の賦活作用、脳内エネルギー代謝や脳血流の改善作用を有する薬物が使用されており、代表的なものとして塩酸ビフェメラン、イデベノン、塩酸アマンタジン、塩酸インデロキサジン、プロペントフィリン、ニセルゴリン、イブジラスト、塩酸ジラゼップなどの脳代謝賦活薬や脳循環改善薬がある。また、周辺症状の改善にはハロペリドール、チアプリド、クロカプラミン、マプロチリン塩酸などの向精神薬が使用されているのが現状である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上述した薬物はいずれもその作用機序に伴い、種々の副作用を発現し、肝機能や腎機能に障害を伴っている患者や高齢者への投与はとくに慎重を要する。さらに、上記の向精神薬は周辺症状のみを改善するにすぎず、中核症状を改善するものではない。
本発明は上述した問題点を解決するためになされたものであり、痴呆の中核症状の改善に有効で、しかも副作用が無く、患者の生活の質を向上させる痴呆改善薬を提供することを目的とする。
【０００４】
【問題点を解決するための手段】
本発明者は天然素材を用いた痴呆改善薬について鋭意研究した結果、ヒメマツタケの抽出物が安定した痴呆改善作用を有し、しかも副作用のないことを見出し、本発明を完成した。
即ち、本発明はヒメマツタケ(Agaricus,blazei,Murr.)の抽出物を有効成分として含有する痴呆改善薬である。
本発明で用いられる菌体は、ハラタケ属(Agaricus)のヒメマツタケ(Agaricus,blazei, Murr.)である。この菌糸体の培養及びキノコの栽培法は特に限定されるものではなく、同種のキノコと同様の条件下で培養栽培することが可能である。例えば、本菌体はｐＨ５．５〜７．０、含水率５５〜８０％、Ｃ／Ｎ比２５〜９５の堆肥培地中で培養、栽培することが出来、特にサトウキビの葉、頂頭部、バカスを原材料として、上記の条件で堆肥を熟成化させた後、菌糸体をその培地に接種して植壌土によって覆土処理して、光照射下の条件で栽培することができる。
【０００５】
また、本発明の抽出物も特に限定されるものではなく、例えば、ヒメマツタケの子実体又は培養菌糸体の水抽出液として、また、液体培地を用いて菌糸体を培養した場合は液体培地のろ液として、さらにはこれらの液体を凍結乾燥させた粉体として得ることができる。通常、１日の服用分は、例えば、ヒメマツタケの子実体の乾燥試料３〜１０ｇを８０〜９０℃の熱水４００ｍｌ〜６００ｍｌで３０〜６０分間抽出して得ることができ、得られた抽出液は１日３〜６回に分けて、食前又は食間に服用することが好ましい。
本発明に係る痴呆改善薬は、痴呆の中核症状である記憶障害、見当識障害、などの知的機能の低下を治療・予防する。また、本発明は本来食用に用いられてきたキノコの抽出物を有効成分とするため、副作用が無く、長期連用による弊害は生じない。
【０００６】
【実施例】
以下、本発明の実施例について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。以下の実施例においては、ヒメマツタケとしてヒメマツタケＣＪ−０１株を用いた。その理由は、栽培や品質管理の方法が確立されており、その結果、もっとも安定した薬理効果の評価が期待できるからである。
１．ヒメマツタケ子実体の栽培
サトウキビの葉、頂頭部、バカスを原材料とし、ｐＨ６．２、含水率７０％、Ｃ／Ｎ比４５の状態に熟成した堆肥培地４００ｇを８００ｍｌ容のポリプロピレン製培養瓶に詰め、オートクレーブで滅菌した。この培養基に菌糸体を接種し３０日間培養したヒメマツタケの菌糸体が増殖した培地を栽培用培地に接種し、植壌土によって覆土処理した後、温度２０〜３５℃、湿度８０％以上で、５００ルクスの光照射下で培養し、栽培３０〜１２０日の間に連続的に子実体を得た。
２．ヒメマツタケの系統的識別
上記の方法で培養、収穫したヒメマツタケＣＪ−０１株及び他株Ａ並びにＢの子実体１０ｇを各々４℃の蒸留水１５０ｍｌ中で３時間攪伴して冷水抽出液を得た。得られた各々の冷水抽出液を、アンホライン（ｐＨ３．５〜９．５）を含む５％ポリアクリルアミドゲルを使用して、７００Ｖ、１５ｍＡ、１５Ｗの条件で３時間、電気泳動した後、活性染色を行い各々のアイソザイムパターンを得た。
結果を図１に示す。
【０００７】
３．ヒメマツタケ子実体の成分分析
上記の方法で培養、収穫したヒメマツタケの子実体について以下のような成分分析を行なった。
（１）一般分析
ヒメマツタケの子実体を６０℃で通風乾燥した後、水分、タンパク質、脂質、炭水化物（糖質、繊維質）及び灰分の含量を日本食品標準成分表に記載された方法で定量した。結果を表１に示す。
【表１】
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また、ヒメマツタケ乾燥子実体１００ｇに含まれる無機質を蛍光Ｘ線分析装置を用いて定量した。結果を表２に示す。
【表２】
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（２）ビタミン類
ヒメマツタケ乾燥子実体１００ｇに含まれるビタミン類を常法に従って、分析した。結果を表３に示す。
【表３】
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表３から明らかなように、ヒメマツタケ子実体は、キノコ類としては多量のビタミンを含有していた。また、動物性食品に含有されるビタミンＢ１２が検出されたことは注目に値する。
【０００８】
（３）アミノ酸
ヒメマツタケ乾燥子実体をサンプルミルで粉砕した。粉砕したもののうち１６メッシュのふるいを透過した粉末３０ｇを秤量し、８０℃の蒸留水６００ｍｌで１時間加熱抽出した。この熱水抽出液を凍結乾燥し、粉末化した。この粉末（以下、熱水抽出物という。）１ｍｇを７０％ギ酸１ｍｌに溶解し、気相加水分解法でアミノ酸へ分解し、アミノ酸分析装置で分析した。
その結果、ヒメマツタケにはグルタミン酸、グリシン及びアスパラギンが多く含有されていることが明らかになった。
（４）糖類
熱水抽出物を７２％硫酸で加水分解した後、さらに４％硫酸で加水分解し、アルジトールアセテートとしてＧＣ分析して中性糖を定量した。内部標準物質としてはｍｙｏ−イノシトールを用いた。結果を表４に示す。
熱水抽出物中のウロン酸の定量をｍ−ヒドロキシビフェニル法により行なった。標準物質としてはグルクロン酸を用いた。その結果、１．７％のウロン酸が検出された。
【表４】
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【０００９】
（５）メチル化分析
箱守法を２回繰り返し、さらにクーン法を１回行い熱水抽出物をメチル化した。メチル化糖に９０％のギ酸を加え、１００℃で２時間加熱後、０．５Ｎ硫酸を加え、１００℃で１２時間加水分解し、炭酸バリウムで中和した。脱塩後、水素化ホウ酸ナトリウムを加え、室温で一晩放置した。これに無水酢酸−ピリジン混合物（１：１）を加え、１００℃で１時間加熱し、アルジトールアセテートとして、ガスクロマトグラフ法により分析を行なった。
結果を図２及び表５に示す。図２はメチル化アルジトールアセテートのガスクロマトグラムを示し、表５は図２のクロマトグラムの各々のピークが表すメチル化糖、そのグリコシド結合及び重量百分率を示す。
【表５】
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【００１０】
（６）１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル
熱水抽出物８０ｍｇを重水１ｍｌに溶解し、アセトンを内部標準物質として３９９．６５ＭＨｚ、７０℃で１Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを得た。結果を図３に示す。
δｐｐｍ：    ５．０３    ５．２４    ５．６２    ５．６６
上記の結果から、ヒメマツタケは、グルコースはα（１−４）及びα（１−６）結合しており、プルランと類似した構造を有することが明らかになった。また、ガラクトースはβ（１−６）結合していることが明らかになった。
【００１１】
４．ヒトに対するヒメマツタケの一般薬理試験
ヒメマツタケのヒトに対する一般薬理作用を確認するため、手術経験、常備薬及び特記事項となる既往暦のない２０代及び３０代の男性８人を被験者として、ヒト服用試験を行なった。
ヒメマツタケの乾燥子実体をサンプルミルで粉砕し、粉砕した子実体のうち１６メッシュのふるいを通過した粉末１０ｇを８０℃の熱水６００ｍｌで１時間抽出し、抽出液を得た。
被験者は抽出液６００ｍｌを１日３回に分けて服用した。被験者の生活は、これまでの生活暦と同様とした。被験者は服用開始前、服用開始後１ヶ月及び３ヶ月の時点で採血され、採取された血液は一般血液検査、生化学的検査、免疫学的検査に供された。
結果を表６〜表８に示す。
【表６】
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【表７】
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【表８】
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【００１２】
上記の結果から明らかなように、ヒメマツタケ抽出液の飲用により、免疫能を指標するＴ細胞、ＮＫ細胞のレベルが上昇していることが認められる。ヒメマツタケ抽出液は免疫能を亢進することにより、神経細胞死を抑制する機能があることが推察される。また、ヒメマツタケ抽出液の引用による副作用は認められなかった。
【００１３】
５．４血管結紮法誘導脳虚血モデルラットに対するヒメマツタケ抽出液の薬理試験
ヒメマツタケ抽出液の痴呆改善作用、特に脳血管性痴呆に対する有効性を確認するために、８方向放射状迷路課題に対する４血管結紮法脳虚血モデルラットを用いた試験を行った。
（１）８方向放射状迷路課題
脳の高次機能である学習・記憶を定量的に観察する方法として、ラットの空間認知記憶を測定することができる８方向放射状迷路を用いた。本装置は、中心に８角形のプラットホーム、そこから８方向にのびたアームがあり、その先端には１個の餌が隠してある。ラットを中心のプラットホームに置くと、ラットは餌を求めて各アームに進入し餌を獲得する。訓練の最初は記憶が成立していないために、８個の餌を全て取り終えるまでに、餌を獲得し終わったアームに進入する誤りを犯す。しかし、毎日１回約１０分間の訓練をすると、しだいに餌を獲得したアームには進入しなくなる。すなわち、最小回数８回のアーム進入によって、全ての餌を獲得するようになる。これはラットが空間認知を手がかりに８方向のアームの先端に餌があるというルールを記憶する参照記憶（長期記憶に相当）と８個の餌を全て取り終えるまでの間、残りの餌のあるアームを覚えておく作業記憶（短期記憶に相当）を保持していることを意味する。通常、参照記憶は１ケ月以上保持され、作業記憶は１時間が保持の限界である。
【００１４】
上記の空間認知記憶を獲得したラットに、一時的な脳虚血状態を施すと、獲得された空間認知記憶が障害され、空間認知記憶獲得訓練の最初と同じような誤りを犯すようになる。これらに任意の薬剤を投与し空間認知記憶の障害抑制・改善率をスコアー化し成績を比較することによって薬剤の有効性を確認する。
【００１５】
（２）虚血モデル（４ＶＯ）ラットの作成
脳神経は常時多くのエネルギーを消費しているにもかかわらず、他の臓器とは異なりエネルギー源の貯蔵はほとんどなく、グルコースと酸素はすべて血流から供給されている。したがって脳血管障害により脳血流が分断されると数分で脳波や神経活動は停止し、この状態が持続すると神経活動に不可逆的変化が生じる。特に海馬ＣＡ１領域の錘体細胞、線条体の中・小型細胞、大脳皮質の３，５層錘体細胞などでは、短時間の虚血の後に血流が再開されエネルギーが回復しても、不可逆的変化は進行し、数日後に細胞死が発現することから遅発性細胞死と呼ばれている。このような細胞死は脳血管性痴呆の中核症状の原因である脳の高次機能障害と密接なつながりがあるものと考えられている。
脳虚血を実験的に再現する方法として、パルシネリらが考案した４血管結紮法（４ＶＯモデル）を採用した。すなわち、ラットの椎骨動脈を焼灼した後、行動上に変化の無いことを確認し、翌日無麻酔下で総頚動脈を結紮し１０分間虚血処置２４時間後に誘発される空間認知記憶障害を８方向放射状迷路課題を用いて測定した。
【００１６】
（３）ヒメマツタケ抽出液の調整および投与方法
ヒメマツタケをサンプルミルで粉砕、１６メッシュのふるいを通過した粉末１０グラムを６００ｍｌの熱水（８０℃）中で１時間抽出した。得られた抽出液を１６．７ｍｇ／ｋｇ／日で体重換算し、１日の投与量とした。投与は経口ゾンデを用いた。対照群については、同量の蒸留水を、同じく経口ゾンデを用いて投与した。
投与は空間認知記憶獲得訓練開始と同時におこない、２１日目の虚血操作まで毎日１回投与した。
【００１７】
（４）試験方法および評価法
試験は図４に示されるスケジュールに基づいて行った。即ち、８方向放射状迷路課題における空間認知記憶獲得訓練開始から１９日目に４血管結紮法の手術を施した。そして、２０日目に手術によって空間認知記憶が障害されてないことを確認する試験を行った。２１日目に１０分間の虚血を行い、２２日目に再生試行試験を行った。
再生試行試験の評価方法は、最初の８回選択のうち餌を獲得した場合を正選択（ＣＣ）とし、一度餌を獲得したアームに再度進入した場合を誤選択（ＥＳ）とし、全ての餌を取り終えるまでの正選択と誤選択の回数を測定した。
また正選択数が７かつ誤選択数が１以下を示した場合を著効、正選択が７かつ誤選択数が２または３を示した場合を有効、および正選択数が６以下あるいは誤選択数が４以上を示した場合を無効の３段階に分けて改善率を計算した。
【００１８】
（５）実験結果
実験結果を表９及び表１０に示す。表９は対象群の成績を示し、表１０は投与群の成績を示す。
【表９】
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【表１０】
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【００１９】
図５に、脳虚血２４時間後の再生試行試験における正選択数、誤選択数の平均値を示す。対照群では正選択数が５．８６±０．１４（平均値±標準誤差）、誤選択数が８．８６±２．１９であった。一方、ヒメマツタケ投与群の正選択数は６．６３±０．２６、誤選択数が２．７５±０．９６であった。両群を比較するとヒメマツタケ投与群は正選択数において統計的に有意な差をもって増加が認められ、誤選択数において統計的に有意な差をもって減少が認められた。
また、２１日間にわたるヒメマツタケの慢性投与により、脳虚血性空間認知記憶障害が改善された実験動物は８匹中４匹（５０％）で、そのすべてが著明な回復（著効）を呈した。
【００２０】
本研究の記憶障害モデル動物は、脳への主要な血流が遮断された結果、獲得された空間認知記憶が障害される。本記憶障害は、脳循環障害にともなうエネルギー代謝異常（脳内グルコース取り込み量低下およびアシドーシスの進行）により脳機能障害（脳内アセチルコリン作動性神経系、ノルエピネフリン作動性神経系、セロトニン作動性神経系の活性低下）が惹起され、脳血流が再開してもなお脳細胞死が進行するという脳器質障害であるとことが証明されている。ヒメマツタケによる痴呆中核症状改善効果は、脳循環代謝改善作用、すなわち脳エネルギー代謝賦活作用、脳細胞保護作用、脳神経伝達系改善作用および免疫賦活作用によるものと思われる。
【００２１】
【発明の効果】
以上の説明から明らかなように、本発明によれば、痴呆の中核症状を有効に改善するとともに、副作用のない痴呆改善薬が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒメマツタケの子実体のアイソザイムパターンを示す図である。
【図２】メチル化アルジトルアセテートのガスクロマトグラムを示す図である。
【図３】１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図４】８方向放射状迷路課題の実験スケジュールを示す図である。
【図５】投与群と対照群の正選択数と誤選択数の平均値を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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