(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一つのシュードモナス属細菌の抽出物を含む、エラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【請求項２】
抽出物が少なくとも一つの細菌を培養した後得られたバイオマス又はその画分から成る、請求項１に記載のエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【請求項３】
細菌をシュードモナス ベシクラリス及びシュードモナス マルトフィリアから選択する、請求項２に記載のエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【請求項４】
細菌を培養した後得られた細菌バイオマスから成る抽出物に、部分的な脱水、滅菌、精製、粉砕及び／又はアシル化から少なくとも選択する少なくとも一つの工程を行う、請求項２又は３に記載のエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【請求項５】
組成物の全質量に対して０．０００５質量％〜５質量％の割合で細菌固形物を含む組成物の形態で抽出物を適用する、先の請求項１ないし４のいずれか１項に記載のエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【請求項６】
割合が０．００１質量％〜２質量％の範囲内にある、請求項５に記載のエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤。
【請求項７】
皮膚の老化に対抗し、乾燥皮膚の外観及び張性を改良し、かつ／又は皮膚の弾性を保持又は改良する化粧処置方法であって、該方法が、少なくとも一つのシュードモナス属細菌の抽出物を含むエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤を皮膚又は頭皮に適用することから成る工程を含み、該抽出物は該細菌を培養した後得られたバイオマス又はその画分から成る、方法。
【請求項８】
少なくとも一つのシュードモナス属細菌の抽出物を含むエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤が以下の性質の少なくとも一つを有する、請求項７に記載の方法：
−  細菌がシュードモナス ベシクラリス又はシュードモナス マルトフィリア種に属する；
−  抽出物が細菌の培養後に得られた細菌バイオマスから成る；
−  組成物の全質量に対して０．０００５質量％〜５質量％の割合で細菌固形物を含む組成物の形態で抽出物を適用する。
【請求項９】
組成物の全質量に対して０．００１質量％〜２質量％の割合で細菌固形物を含む組成物の形態でエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤を適用する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
細菌を培養した後得られた細菌バイオマスから成る抽出物を含むエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤に、部分的な脱水、滅菌、精製、粉砕及び／又はアシル化から少なくとも選択する少なくとも一つの工程を行う、請求項７ないし９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
乾燥皮膚の外観を改良するための、請求項７ないし１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
乾燥皮膚の張性を改良するための、請求項７ないし１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
皮膚の弾性を保持し又は改良するための、請求項７ないし１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
化粧品として受容可能な添加剤と組み合わせた少なくとも一つのシュードモナス属細菌の抽出物を化粧品として含むエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤を含む化粧組成物、ここで該抽出物は該細菌を培養した後得られたバイオマス又はその画分から成る。
【請求項１５】
少なくとも一つのシュードモナス属細菌の抽出物を含むエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤が以下の性質の少なくとも一つを有する、請求項１４に記載の組成物：
−  細菌がシュードモナス ベシクラリス又はシュードモナス マルトフィリア種に属する；
−  抽出物が細菌の培養後に得られた細菌バイオマスから成り、該バイオマスが少なくとも部分的に脱水されている；
−  組成物が、組成物の全質量に対して０．０００５質量％〜５質量％の割合で細菌固形物を含む。
【請求項１６】
組成物が、組成物の全質量に対して０．００１質量％〜２質量％の割合で細菌固形物を含む、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
細菌を培養した後得られたバイオマスから成る抽出物を含むエラスターゼ活性阻害剤及び／又はヒアルロニダーゼ活性阻害剤に、部分的な脱水、滅菌、精製、粉砕及び／又はアシル化から少なくとも選択する少なくとも一つの工程を行う、請求項１４ないし１５のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シュードモナス科細菌の抽出物の化粧品、特に人の皮膚の老化に対抗する化粧品としての使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚の老化は、まず真皮の弾性線維の数及び分裂の減少を通じて現れることは知られている。エラスチンはエラスターゼによる分解に対してより感受性となり、エラスチンの減少が弾性線維の無秩序化につながる。これらの現象は結果として皮膚の弾性を喪失させ、しわを形成する。
皮膚の老化の別の発現は皮膚の乾燥であり、表皮の柔軟性が失われかつ落屑する傾向を伴って皮膚は粗くなる。若い人の皮膚の結合組織においては、高度に親水性であるヒアルロネートの含量が高く、真皮の湿潤化を促進し、これが皮膚の張性の本質的要素となっている。老化により、真皮のヒアルロネートの含量、すなわち水分含量が大幅に減少し、その不運な結果として皮膚は弛緩し、表皮に拡散する真皮の水分が減少し、乾燥する。さらに、真皮の水分含量が減少する結果、代謝物、イオン及び酸素の循環が特に妨げられ、従って真皮及び表皮細胞の代謝が低下する。ヒアルロネート含量の減少は酵素、ヒアルロニダーゼの活性と結び付いており、該酵素はヒアルロネートのグリコシド結合を開裂させる。このため、この酵素は皮膚の老化で非常に重要な役割を果たしている。
さらに、表皮の乾燥により、皮膚の表面における大気との気体交換が減少する。皮膚呼吸と呼ばれる、気体交換のこの現象は、年齢と共に減少する。
さらに、日光に曝されると皮膚組織に炎症反応が生じ、反復してかつ長時間日光に曝されると、特にＵＶＡ照射に曝されると結局皮膚は乾燥し、過度にしわが寄り、柔軟性を失うことが知られている：皮膚のこの早発性老化を“光線加齢”という。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
従って、特に加速された又は早発性の老化に対して皮膚を保護し、皮膚の光線加齢を含む日光への曝露によって生じる傷害に対して皮膚をより効率的に保護する新たな手段を見出すことが望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
シュードモナス科細菌、特にシュードモナス属細菌からの抽出物は、それを皮膚に適用した場合、特に皮膚の湿潤化を改良しかつ紫外線照射に曝したことによる炎症反応の有害な結果に対して皮膚を保護することが可能であることが見出された。より一般的には、これらの抽出物は、皮膚の光線加齢を含む皮膚の老化を減少させ及び／又は遅延させる。
【０００５】
【発明の実施の形態】
これらの細菌抽出物は、特にＵＶ暴露の結果生じる皮膚の結合組織の損傷を阻害する性質を特に有している。これらの細菌抽出物は、実際、以下の実験の部に示すように炎症領域におけるエラスターゼの放出を阻害する性質を有し、さらにエラスターゼ活性を阻害する性質も有する。より一般的には、これらの細菌抽出物を皮膚に適用すると、これらは抗炎症性及び緩和性を有し、日光に暴露した後を含めて局所的な炎症又は微小炎症を示す皮膚の外観を改良する。
これらの細菌抽出物は、ヒアルロニダーゼ活性に対する阻害作用も有する。従って、これらにより、日光への暴露後も含めて皮膚の自然の早発性老化の場合、また光線加齢の場合に、皮膚の乾燥を阻止し又は処置することが可能となる。さらに、これらは真皮の湿潤化を促進して皮膚の張性を改良する。
従って、本発明の主題は、シュードモナス科の少なくとも一つの細菌の抽出物を、光線加齢を含む皮膚の自然又は早発性老化に対抗し、乾燥皮膚の外観及び張性を改良し、皮膚の弾性を保持又は改良し、及び／又は日光への暴露後を含む炎症反応を示す皮膚の外観を改良するための化粧品として使用することである。本出願において、皮膚の老化に“対抗する”という表現は、皮膚の老化を阻止又は遅延させ、又は処置することを意味する。
【０００６】
本発明に従って使用することができる細菌のうち、特に以下を挙げることができる：
−  シュードモナス ベシクラリス（Pseudomonas vesicularis）、これの一つの型がNo.11426でATCCに寄託されている菌株である。
−  シュードモナス マルトフィリア（Pseudomonas maltophilia）、これの一つの型がNo.13637でATCCに寄託されている菌株である。
シュードモナス マルトフィリアは、ステノトロホモナス マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）とも呼ばれる。
本出願において、“細菌の抽出物”又は“細菌抽出物”という表現は、該細菌を培養した後得られたバイオマス及びこれらのバイオマスから得られた生成物、特に精製及び／又は滅菌及び／又は分画をした後の生成物の両者を意味する。例えばバイオマスは任意に少なくとも部分的に脱水し及び／又は粉砕してもよい。これらを例えば加熱により滅菌することができる。当然のことながら、バイオマス全体と同じ皮膚の抗老化特性を有するバイオマスのいずれの画分も、特に炎症の領域でエラスターゼの分泌を阻害し及び／又はヒアルロニダーゼ活性を阻害するいずれの画分も含む抽出物の使用まで、本発明は含む。本出願では、抽出物の概念は、ある種の官能基（例えばアミノ基）を化学的に変性して得られた誘導体も含む。
【０００７】
本発明で使用する細菌抽出物の製造方法は、細菌をインビトロで公知の方法に従って培養する工程、及び次いで得られたバイオマスを収集する工程から成る。
シュードモナス科の細菌は、厳密に好気性グラム陰性菌である。これらは通常栄養培地で、例えば２５〜３０℃程度の温度で生長する。
バイオマスを区分し分離するために、種々の公知の方法、例えばろ過又は遠心分離を使用することができる。バイオマスを乾燥しかつ脱水により濃縮することも可能であり、特に減圧下の乾燥（例えば約８０〜１２０℃程度の温度で）又は凍結乾燥により、可能である。
細菌抽出物を誘導体、例えば少なくとも部分的にアシル化した誘導体の形態で使用することができる。カルボン酸無水物又は対応する酸クロリドを使用してアシル化を行う。例えば無水酢酸又は塩化アセチルの使用が可能である。細菌のバイオマス中に存在する第１又は第２アミン基の少なくともいくらかをアシル化するようにアシル化反応を行う。アシル化剤の割合及びアシル化反応の条件を、アシル化反応の前後における第１及び第２アミン基を常法に従って分析することにより容易に決定することができる。
【０００８】
シュードモナスの抽出物又はその誘導体を、皮膚及び／又は頭皮に適用する組成物に、活性成分として導入する。これらの組成物は良好な皮膚耐性を示す。
従って、本発明は、活性成分として少なくとも一つのシュードモナス科細菌の抽出物を、化粧品として受容可能な添加剤と組み合わせて含む化粧組成物に関する。
本発明の組成物に存在する添加剤は通常の添加剤である。これらは皮膚、頭皮及び／又は毛髪での使用と適合性がある。
本発明に従って使用する組成物において、細菌抽出物は一般に、組成物の質量に対して細菌固形物の質量で０．０００５質量％〜５質量％、例えば０．００１質量％〜２質量％、特に０．０１質量％〜２質量％の割合で存在する。
これらの組成物は細菌抽出物を、適切な担体、例えば水、有機溶媒、油を含む脂肪物質、及びこれらの混合物中の分散剤（特に乳剤）の形態で含むことができる。
【０００９】
本組成物は、特に水／アルコール又は油／アルコールローション、ジェル、液体のコンシステンシーを有する乳剤、クリーム、固形スティック又は小胞状の懸濁物の形態にあることができる。これらの組成物を、通常の方法に従って製造することができる。これらは成分及びこの成分を特に直前に述べた形態の一つにすることが可能な担体を含む。これらは細菌抽出物の他に、他の活性成分、例えば紫外線を吸収する物質、常用の湿潤化剤、フリーラジカル捕捉剤、抗酸化剤、温泉水、例えばラロッシュ−ポセー（La Roche-Posay）の温泉水、皮膚軟化剤又は他の通常の成分、例えば保存剤、芳香剤等を含むことができる。これらの成分及びその使用も公知であり、これ以上本明細書では述べない。
本発明の組成物で任意に使用する温泉水は、特に皮膚に対して有用な化粧特性を有する温泉水である。例えばラロッシュ−ポセー（La Roche-Posay）（フランス）の温泉水はセレンが豊富で特に皮膚へのＵＶＡ照射の有害な作用を保護する性質を有し、かつＵＶＢ照射に暴露した繊維芽細胞の生存を促進する抗酸化特性も有する。従って、ラロッシュ−ポセー温泉水は、特に日光に皮膚を照射している間又は照射後に使用することを意図している化粧品では、有利な活性剤を構成する。
【００１０】
本発明の主題は、上記の組成物を皮膚又は頭皮に適用することを特徴とする、皮膚の老化に対抗する化粧処置方法でもある。この組成物を通常の方法で適用する。
以下の実施例は本発明を説明する。これらの実施例において、百分率は質量による百分率である。
【００１１】
【実施例】
実施例１：シュードモナス ベシクラリス及びシュードモナス マルトフィリアの培養
培養したシュードモナス ベシクラリス菌株をATCC（ATCC 11426）から得た。
シュードモナス マルトフィリア菌株はATCC 13637菌株である。
細菌をディフコ栄養ブロス003培養培地（Medium 3 ATCC）中で培養する。少なくとも２０分間１２１℃で滅菌する前に、培地のｐＨを７．１５に調整する。
培養を、振とう（１００rpm）しつつ２６℃で、少なくとも１５％に等しい溶解酸素濃度を確保しつつ、行う。
２４時間培養後、バイオマスを遠心分離により収穫する。
バイオマスを、オートクレーブ中での加熱により安定化し、凍結乾燥し、凍結し及び／又は粉砕することができる。
所望であれば、無水酢酸の作用により、全体として又は部分的に第１及び第２アミン基をアセチル化することも可能である。
【００１２】
実施例２：クリーム
クリームの組成は以下のとおりである：
−  実施例１で得られたPs.ベシクラリスをベースとする凍結乾燥物・・・・・0.05%
−  カルボマー 940*・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.30%
−  トリエタノールアミン・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.30%
−  ステアリン酸・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  セチルアルコール・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・2.00%
−  自己乳化性グリセロールモノステアレート・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  大豆油・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・10.00%
−  ラノリンアルコール・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・2.00%
−  イソプロピルミリステート・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・4.00%
−  セチル２−エチルヘキサノエート・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・4.00%
−  ペルヒドロスクアレン・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  パラフィン・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・2.00%
−  グリセロール・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  保存剤・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.30%
−  ラロッシュ−ポセー温泉水**・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・15.00%
−  精製水、適量で・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・100.00%
*カルボマー 940：架橋ポリアクリル酸を意味する商品名
**ラロッシュ−ポセーspaセンター（フランス）
【００１３】
シュードモナス ベシクラリスをベースとする凍結乾燥物を、シュードモナス マルトフィリアをベースとする凍結乾燥物に置き換えることができる。
同様の方法で、０．０１％のシュードモナス ベシクラリス凍結乾燥物及び０．０５％のシュードモナス マルトフィリア凍結乾燥物を含むクリームを製造した。
このクリームを製造するために、グリセロール、保存剤及び水を含む水性相を８０℃に加熱し；その中にカルボマー940を分散させ、次いでトリエタノールアミンで中和する。８０℃で加熱しかつ均一化した脂肪相を激しく攪拌しながら水性相に導入する。実施例１の凍結乾燥物を１０ｇの水に分散させ、かつ４０℃で攪拌しながらクリームに導入する。全混合物を室温まで冷却する。
このクリームを１日に１回又は２回顔又は首の皮膚に適用する。このクリームは乾燥皮膚の外観を改良する。これは皮膚の張性も改良することが可能である。
【００１４】
実施例３：皮膚用乳液
本乳液は以下の組成を有する：
−  実施例１で得られたPs.ベシクラリスの凍結乾燥物・・・・・・・・・・・・・・・・・0.10%
−  自己乳化性グリセリルモノステアレート・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  ワセリン・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・1.50%
−  液状ワセリン・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・2.50%
−  米ぬか油・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・1.50%
−  揮発性シリコーン油・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・5.00%
−  シアバター・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  カルボマー 940・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.20%
−  トリエタノールアミン・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.20%
−  キサンタンゴム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.10%
−  グリセロール・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  芳香剤・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.10%
−  保存剤・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.30%
−  水、適量で・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・100.00%
本乳液を実施例２に記載したのと同様の方法で製造する。
日光に暴露した後皮膚に適用すると、乳液は緩和特性を有する。
顔の皮膚に適用すると、本乳液は、特に日光に繰り返し暴露した人に見られる加速した皮膚の老化作用を減少させる。
【００１５】
実施例４：クリーム
実施例２と同じ手順に従って、以下の組成の乳剤を製造した：
−  実施例１で得られたPs.ベシクラリスの凍結乾燥物・・・・・・・・・・・・・・・・・0.10%
−  自己乳化性塩基・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・20.00%
−  コーデックス液状ワセリン・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・5.00%
−  グリセロール・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・5.00%
−  ステアリン酸アルミニウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.50%
−  EDTEジカリウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.05%
−  硫酸マグネシウム・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.70%
−  保存剤・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.20%
−  抗酸化剤・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.05%
−  芳香剤・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.30%
−  水、適量で・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・100.00%
上記の配合剤において、シュードモナス ベシクラリスの凍結乾燥物を、シュードモナス マルトフィリアの凍結乾燥物に置き換えることができる。２つの凍結乾燥物の混合物も使用することができる。
自己乳化性塩基は以下を含む：
−  鉱油
−  コーデックスワセリン
−  オゾケライト
−  グリセリルオレエート
−  液状ラノリン。
本クリームを皮膚に適用すると、皮膚の老化及び／又は皮膚の光線加齢の作用を減少させることができる。老人の皮膚の加湿の程度を改良することもできる。
【００１６】
実施例５：日焼け止め乳剤
本乳剤により、紫外線に対して皮膚を保護することが可能となる。乳剤は以下の配合物に相当する：
−  実施例１の凍結乾燥物・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・1.00%
−  ステアリン酸・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  セチルアルコール・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・1.50%
−  自己乳化性グリセリルモノステアレート・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  ヒマワリ由・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・8.00%
−  ポリアクリルアミド・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・3.00%
−  オクチルメトキシシンナメート・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・4.00%
−  ベンゼン−１，４−ジ−(３−メチリデン)−１０−カンホスルホン酸
のトリエタノールアミン塩（メキソリル SX）・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・2.60%
−  グリセロール・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・5.00%
−  トコフェロール・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・2.00%
−  保存剤・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.30%
−  エチレンジアミンテトラメチレンホスホネート
（ペンタナトリウム塩）・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・0.10%
−  精製水、適量で・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・100.00%
【００１７】
実施例６：エラスターゼ阻害試験
本試験をヒト白血球から分離したエラスターゼを使用して行う。
本試験を、E.O. Adeyemi他, J. Pharm. Pharmacol., 42: 487-490 (1990)に記載された方法に従って行う。本試験を、実施例１に記載した方法で得られた凍結乾燥物を用いて行う。
シュードモナス マルトフィリア培養物から得られた凍結乾燥物は、０．０５g／lの濃度で、エラスターゼ活性を３６％減少させる。０．１g／lの濃度では、シュードモナス ベシクラリス培養物から得られた凍結乾燥物はエラスターゼ活性を３３％減少させ、かつシュードモナス マルトフィリア培養物から得られた凍結乾燥物は、エラスターゼ活性を５３％減少させる。
【００１８】
実施例７：ヒアルロニダーゼ活性に対する阻害作用
試験を、Worthington Enzyme Manual, Enzymes and related biochemicals, Worthington Biochemical Corps., Frehold, New Jersey 07728, 米国（1993）に記載された常法に従って行う。
研究した細菌凍結乾燥物は、シュードモナス ベシクラリス凍結乾燥物である。これを０．１Mのホスフェート緩衝液、ｐＨ５．３に溶解させる。
使用した試薬はヒアルロン酸（シグマH-1876）及びシグマヒアルロニダーゼ型IV−S（H-3884）である。ヒアルロン酸とヒアルロニダーゼをホスフェート緩衝液に混合して、０．６g／lのヒアルロン酸と０．２５g／lのヒアルロニダーゼを含む溶液を得る。この混合物を３７℃で１５分間放置してインキュベートする。
次いで、０．５Mアセテート緩衝液、ｐＨ４．２中の１％牛アルブミン溶液を加えてヒアルロン酸を沈殿させる。
次いで、分解しなかったヒアルロン酸の量を５４０nmの波長での吸収を測定することによって測定する。
シュードモナスベシクラリス凍結乾燥物は、０．１％の濃度で、ヒアルロニダーゼ活性を３０％阻害する。