(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
芳香環の２位の炭素原子が13Ｃに置換されていることを特徴とする同位体標識安息香酸。
【請求項２】
芳香環の３位の炭素原子が13Ｃに置換されていることを特徴とする同位体標識安息香酸。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、特定部位の炭素原子がその同位体で標識された新規な安息香酸に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、安定同位体はトレーサー実験に用いられており、一般に該トレーサーとして適していると考えられる化合物は、通常代謝される反応部位により近い位置が標識されているのがその変化を追跡しやすいが、代謝反応を受ける部位に標識されているものが必ずしもその変化を最も追跡しやすいとは限らない。
【０００３】
例えば、現在、安息香酸については、(1)その芳香環の１位の炭素が13Ｃ標識されたもの、(2)芳香環の炭素のいずれか一つがランダムに13Ｃ標識されたもの及び(3)芳香環の全ての炭素が13Ｃ標識されたものが知られているが、之等をトレーサーとして13Ｃ−ＮＭＲで観測する場合、(1)のものは標識位置が４級炭素であり測定感度が非常に低い欠点がある。(2)のものの測定感度は、全芳香環炭素が等しく標識されているとすれば、ある特定位置のみを標識したものに比べて、その全芳香環炭素分の１、即ち１／６となる。(3)のものは、全ての炭素原子を標識するため高価であるに加えて、13Ｃ−13Ｃカップリングが観測され、シグナルが複雑に分裂し、その構造変化の解読が非常に困難となる不利がある。
【０００４】
このようにトレーサーとして期待できる化合物は、標識されるべき炭素の位置において、それぞれ異なる性質を有し、どの位置がトレーサーとして理想的であるかは不明であり、従って、上記炭素のそれぞれの位置において選択的にこれを標識する技術の確立が当業界で望まれている。
【０００５】
また、上記公知の同位体標識安息香酸の製法としては、例えば以下のように種々報告されているが、いずれも芳香環の炭素原子の位置に特異的な方法である。(1) 酢酸エチルの１位標識体をグリニャール(Grignard)試薬と反応させて、１位が標識された１−メチル−１−ヒドロキシシクロヘキサンを得、その脱水、脱水素により、１位標識トルエンを経由して、１位標識安息香酸を得る（Fields M., et al., J. Am. Chem. Soc., 74, 5498 (1952)）。
(2) 標識ギ酸エチルをグリニャール試薬と反応させて、４位が標識された４−ヒドロキシ−１−メチルシクロヘキサンを得、その後、上記(1)と同様にして、４位標識安息香酸を得る（Dische R. and Rittenberg D., J. Biol. Chem.,211, 199 (1954)）。
(3) ピルビン酸ナトリウムの２位標識体を水酸化ナトリウムの存在下に縮合させ、次いで得られる化合物の脱炭酸、酸化反応により、１，３，５位が標識された安息香酸を得る（Hughes D.M. and Reid J.C., J. Org. Chem., 14, 516 (1949)）。
【０００６】
上記(1)〜(3)はいずれも14Ｃ標識法として開発されたものであるが、13Ｃ標識についても同様にして実施でき、かくして１位が13Ｃで標識された安息香酸（[1-13C]と表記する、以下、標識位置と同位体の表示は、同様の表記法によるものとする）が市販されている。また、[2-13C]又は[3-13C]ピルビン酸ナトリウムから上記(3)と同様にして[1,3,5-13C3]安息香酸も既に合成されている（Akira K. and Baba S., J. Labelled Comp. Padiopharm.,31, 109 (1992)）。更に、[4-13C]安息香酸の合成も既に報告されている（Akira K., et al., J. Labelled Comp. Radiopharm.,36, 845 (1995)）。
【０００７】
しかしながら、[2-13C]安息香酸及び[3-13C]安息香酸の選択的合成法についての報告は未だなされていない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、トレーサーとして理想的な性質を有する同位体標識安息香酸、及びこれを選択的に得る合成技術を確立することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記目的より、鋭意研究を重ねる過程において、ジエンとジエノフィルとのディールス−アルダー反応によるシクロヘキサン環の形成反応に着目し、13Ｃ標識ビニルエーテルとピロンとの逆電子要請型ディールス−アルダー反応を応用し、原料化合物、触媒、溶媒、反応条件等を選択することによって、ｏ位、ｍ位及びｐ位に位置選択的に13Ｃ標識された安息香酸を得るに成功し、ここに本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明によれば、芳香環の２位の炭素原子が13Ｃに置換されていることを特徴とする同位体標識安息香酸（例えば[2-13C]安息香酸）及び芳香環の３位の炭素原子が13Ｃに置換されていることを特徴とする同位体標識安息香酸（例えば[3-13C]安息香酸）が提供される。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明標識安息香酸は、これを利用して、例えばフェニルアラニン、塩酸トリヘキシルフェニジン（抗パーキンソン病薬）、安息香酸エストラジオール（女性ホルモン）等の各種ベンゼン環を含む医薬品有効成分化合物を合成することができ、之等各化合物の生体内での代謝情報（代謝経路、修飾作用部位の解明等）の入手に利用することができる。
【００１２】
以下、本発明同位体標識安息香酸の製法につき詳述する。
【００１３】
本発明同位体標識安息香酸の製造は、ピロン誘導体と13Ｃ標識されたビニルエーテルとの逆電子要請型ディールス・アルダー反応を鍵反応として実施できる。原料とする13Ｃ標識されたビニルエーテルは、公知の[1-13C]酢酸ナトリウムから[1-13C]酢酸エステルを経由して合成することができる。該化合物とピロン誘導体との逆電子要請型ディールス・アルダー反応は、例えばランタノイド触媒の存在下、穏和な条件で行なうことができる。得られた２−オキサビシクロ［２．２．２］オクタン誘導体を加熱して脱炭酸させ、更に塩基処理して脱アルコキシル化し、最後に加水分解して、[2-13C]安息香酸を得る。
【００１４】
上記において13Ｃ標識原料として[2-13C]酢酸ナトリウムを用いれば、[3-13C]安息香酸を製造することができる。
【００１５】
より具体的には、本発明に係る[2-13C]安息香酸（１ａ）は、公知の[1-13C]酢酸ナトリウムを出発原料として、下記反応工程式に示すようにして製造することができる。
【００１６】
【化１】
0004214341.tif 000002
【００１７】
即ち、反応工程式−１によれば、まず、[1-13C]酢酸ナトリウム（２）を、安息香酸とベンゾイルブロミドと共に加熱して、[1-13C]アセチルブロミド（３）を得る。この反応は１１０〜１４０℃程度の加熱条件下に、５〜１２時間程度を要して実施することができる。ここで、原料として利用される安息香酸及びベンゾイルブロミドの使用量は、[1-13C]酢酸ナトリウムに対して、それぞれ０．９〜１．１倍モル量及び３〜６倍モル量程度の範囲から選ばれるのが好ましい。上記反応では原料とするベンゾイルブロミドが溶媒も兼ねるので特に他の溶媒を利用する必要はない。
【００１８】
次いで、得られる化合物（３）にオクチルアルコール及び４−ジメチルアミノピリジンを反応させて、[1-13C]酢酸オクチル（４）を得る。この反応は、通常塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン、四塩化炭素などのハロゲン化炭化水素経溶媒の存在下に、０℃〜室温程度の温度条件下、１時間〜１．５日程度を要して実施できる。オクチルアルコールの使用量は、化合物（３）に対して０．９〜１．１倍モル量程度の範囲から選ばれるのがよく、４−ジメチルアミノピリジンの使用量は、化合物（３）に対して１〜１．５倍モル量の範囲から選ばれるのがよい。
【００１９】
その後、得られる[1-13C]酢酸オクチル（４）を、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）でエノール化し、得られるエノラートをクロロリン酸ジエチルで捕捉してリン酸エステル（５）を得、更に該化合物（５）をバーチ（Birch）還元してオクチル[1-13C]ビニルエーテル（６）を得る。
【００２０】
上記エノール化反応は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，２−ジエトキシエタン等のエーテル系溶媒中で、−８０〜−３０℃の温度条件下に、１５〜６０分程度を要して実施できる。ＬＤＡの使用量は、化合物（４）に対して１〜２婆モル量程度の範囲から選ばれるのが望ましい。
【００２１】
クロロリン酸ジエチルによるエノラートの捕捉反応は、クロロリン酸ジエチルをエノラートに対して１．５〜２倍モル量程度用いて、エーテル系溶媒とヘキサメチルリン酸トリアミド（ＨＭＰＡ）との混合溶媒中、−８０〜−７０℃程度の温度下に、１５〜３０分間程度で実施できる。
【００２２】
引き続くバーチ還元は、液体アンモニアとアルコール類（例えばｔ−ブタノール等）との混合溶媒中、リチウムを化合物（５）に対して５〜１０倍モル程度用いて、−８０〜−３５℃程度の温度下に、１０〜６０分間を要して実施できる。
【００２３】
【化２】
0004214341.tif 000003
【００２４】
本発明においては、次いで上記反応工程式−１で得られたオクチル[1-13C]ビニルエーテル（６）を、ユーロピウムトリス（６，６，７，７，８，８，８−ヘプタフルオロ−２，２−ジメチル−３，５−オクタンジオナート）（Eu(fod)3）触媒下に、公知の２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボン酸メチル（７）と共に加熱して逆電子要請型ディールス−アルダー反応に付す。かくして、２−オキサビシクロ［２．２．２］オクタン誘導体（８）を得る。
【００２５】
上記逆電子要請型ディールス・アルダー反応は、例えば文献記載の方法に準じて行なうことができる〔I.E.Marko, G.R.Evans and J.-P. Declercq, Tetrahydron, 50, 4557-4574 (1994)〕。
【００２６】
上記において、Eu(fod)3触媒の使用量は、一般に化合物（６）に対して０．０５〜１倍モル量の範囲から選択できる。化合物（７）の使用量は化合物（６）に対して１〜２倍モルの範囲から選ばれる。反応は、室温〜６０℃程度の温度下に、約５〜２４時間程度で終了する。
【００２７】
上記で得られる誘導体（８）を脱炭酸させて６−オクチルオキシ−１，３−シクロヘキサジエン−１−カルボン酸メチル（９）を得、これを単離することなく、脱アルコキシル化し、更に加水分解することにより、所望の[2-13C]安息香酸（１ａ）を得る。
【００２８】
上記脱炭酸反応は、一般に１１０〜１５０℃の温度下、１０〜２０時間程度で実施できる。反応溶媒としては、例えばトルエン、キシレンなどのベンゼン系溶媒を使用できる。より具体的には、ｏ−キシレン中、１２０℃で加熱することにより実施できる。
【００２９】
上記脱アルコキシル化反応は、上記と同様のベンゼン系溶媒中、一般に１５０〜１６０℃程度で、１〜５時間程度で実施できる。より具体的には、反応溶液中に１，８−ジアザビシクロ〔５．４．０〕ウンデ−７−セン（ＤＢＵ）を加えて還流することにより実施できる。
【００３０】
上記加水分解反応は、アルカリを用いて、一般には０℃〜室温程度の温度下に、１．５〜１２時間程度で行なわれる。アルカリとしては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムなどを用いることができ、反応溶媒としては、メタノールなどのアルコール類やＴＨＦなどを使用できる。
【００３１】
また、本発明に係る[3-13C]安息香酸は、上記において、[1-13C]酢酸ナトリウムに代えて[2-13C]酢酸ナトリウムを用いて、同様にして得ることができる。
【００３２】
かくして得られる本発明同位体標識安息香酸の反応系からの分離、精製は、常法に従い、例えば抽出や再結晶操作等に従って容易に行なうことができる。
【００３３】
本発明同位体標識安息香酸は、これを出発原料としてベンゼン環を含む各種の医薬品有効成分化合物の標識体を製造することができ、かかる標識体の利用によれば、その医薬品有効成分化合物の代謝経路や修飾作用部位等をトレースすることができる。
【００３４】
即ち、本発明同位体標識安息香酸からは、安定同位体標識された安息香酸エステル類、ベンゾイルブロミド、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコールなどを容易に製造することができ、之等を原料として各種の安定同位体標識された医薬品の製造が可能であり、之等合成された医薬品を投与し、呼気や尿、血清などの様々な生体サンプルを赤外分光法（ＩＲ）、質量分析法（ＭＳ）、核磁気共鳴法（ＮＭＲ）で分析することにより、之等医薬品の代謝、分布、排泄などの機構を調べることができる。殊に、核磁気共鳴法による検出は、放射性同位体標識法では非常に困難な標識位置の特定を非破壊的に行なうことができる点で有利である。
【００３５】
また、トレーサーは、高感度で代謝変化が追跡できる標識位置のものでなければならないが、本発明同位体標識安息香酸の標識原料としての利用は、種々の医薬品などの芳香環部のｏ位、ｍ位に安定同位体標識を可能とする。このことは、ＮＭＲで分析する際、検出感度の低い４級炭素を避け、且つ代謝変化を追跡しやすい位置への安定同位体標識を可能とし、これは公知の標識原料の使用では非常に困難である。
【００３６】
【実施例】
以下、本発明を更に詳しく説明するため、本発明化合物の製造例を実施例として挙げる。
【００３７】
【実施例１】
(1) オクチル[1-13C]ビニルエーテルの製造
(1-1) [1-13C]酢酸オクチル（２）
[1-13C]酢酸ナトリウム（２）（９９．５atom% 13C,２．５１ｇ，３０．２mmol）及び安息香酸（３．３２ｇ，２７．２mmol）を、三方コックを備えた２００ｍｌ丸底フラスコに入れ、混合物を減圧下に５０℃で２時間攪拌した。得られた混合物にベンゾイルブロミド（１７．８ｍｌ，２８．０ｇ，１５１．１mmol）をアルゴン雰囲気下に加え、全体を１２０℃に加熱し、一夜攪拌後、減圧蒸留して、受入れフラスコ中に、[1-13C]アセチルブロミド（３）を得た。
【００３８】
次いで、上記フラスコ中に塩化メチレン（４５ｍｌ）を加え、溶液に３分を要してオクチルアルコール（４．８ｍｌ，３．９４ｇ，３０．２mmol）を滴下し、次いで１５分間を要して４−（ジメチルアミノ）ピリジン（３．６９ｇ，３０．２mmol）の塩化メチレン溶液（１４ｍｌ）を０℃で滴下した。反応混合物を室温下に１．５日間攪拌し、１Ｎ塩酸溶液で洗浄した。水層をジエチルエーテル（各１００ｍｌ）で３回抽出した。得られた各有機層を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び生理食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン：ジエチルエーテル＝４：１）にて精製して、[1-13C]酢酸オクチル（４）を無色液体として得た（４．３２ｇ，８３％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．１９−１．３１（１０Ｈ，ｍ），１．６１（２Ｈ，ｍ），２．０５（３Ｈ，ｄ，2ＪC-H＝６．９Ｈｚ），４．０５（２Ｈ，ｄｔ，3ＪC-H＝３．０Ｈｚ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：１７１．３
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：２９２９，２８５８，１７０１，１４６８，１３６５，１２１２，１０３９
(1-2) ジエチル  １−オクチルオキシ[1-13C]ビニルホスファート（５）
ジイソプロピルアミン（３．３ｍｌ，２８．７mmol）、ｎ−ブチルリチウム（２．５２Ｍヘキサン溶液，８．６ｍｌ，２１．５mmol）及び乾燥テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２０ｍｌ）から調製したリチウムジイソプロピルアミドのＴＨＦ溶液中に、[1-13C]酢酸オクチル（４）（２．４９ｇ，１４．４mmol）の乾燥ＴＨＦ溶液（７ｍｌ）を、−７８℃下に、ブリッヂを経由して８分間を要して滴下した。混合物を同温度で攪拌した。３０分後、上記混合物中に、１５分を要してクロロリン酸ジエチル（４．１５ｍｌ，２８．７mmol）の乾燥ＨＭＰＡ（７ｍｌ）及びＴＨＦ（６ｍｌ）溶液を滴下した。全体を１時間同温度で攪拌し、その後水を加えて反応を停止させた。水層をジエチルエーテルで３回洗浄した。有機層を合わせ、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液及び生理食塩水で洗浄し、無水炭酸カリウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン：ジエチルエーテル＝２：１，２％トリエチルアミン含有）で精製して、表記化合物（５）を淡黄色液体として得た（３．３０ｇ，７４％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．２１−１．４３（１０Ｈ，ｍ），１．３６（６Ｈ，ｄｔ，4ＪP-H＝１．１Ｈｚ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．７１（２Ｈ，ｍ），３．５２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝2ＪC-H＝３．８Ｈｚ），３．７７（２Ｈ，ｄｔ，3ＪC-H＝１．６Ｈｚ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．８５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，4ＪP-H＝2ＪC-H＝１．９Ｈｚ），４．２０（４Ｈ，ｍ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：１５７．０（ｄ，2ＪP-H＝５．５Ｈｚ）
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：２９３０，２８５８，１６３７，１４６８，１３９４，１３７０，１２８３，１２３３，１１６６，１０３３，９９４
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（％）：３０９（Ｍ+，０．８），１６８（３９．９），１５５（２１５．２），１２７（１００．０），９９（８０．７）
(1-3) オクチル[1-13C]ビニルエーテル（６）
上記(1-2)で得た化合物（５）（３．２９ｇ，１０．６mmol）の乾燥ｔ−ブタノール（１１ｍｌ）及びＴＨＦ（２１ｍｌ）溶液を、ガス導入口、セプタムキヤップ及びＣａＣｌ2管を付したドライアイスコンデンサーを備えた５００ｍｌ−３つ口フラスコに入れた。液体アンモニア（１５７ｍｌ）を、−７８℃下に、ガス導入口より上記フラスコにチャージし、次いでリチウムワイヤー（０．７４ｇ，１０６．３mmol）を加えた。全体を同温度で１５分間攪拌し、エタノール及び飽和塩化アンモニウムを加えて反応を停止させた。混合物を室温に戻し、水を加えた。水層をペンタンで４回抽出した。有機層を合わせ、生理食塩水で洗浄し、無水炭酸カリウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣の粗生成物を減圧蒸留により精製して、オクチル[1-13C]ビニルエーテル（６）を無色液体として得た（０．９１ｇ，５４％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．１９−１．３９（１０Ｈ，ｍ），１．６５（２Ｈ，ｍ），３．６７（２Ｈ，ｄｔ，3ＪC-H＝２．５Ｈｚ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．９７（１Ｈ，ｄｄｄ，2ＪC-H＝５．２Ｈｚ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，６．９Ｈｚ），４．１７（１Ｈ，ｄｄｄ，2ＪC-H＝５．８Ｈｚ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１４．６Ｈｚ），６．４７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１４．６Ｈｚ，ＪC-H＝１８０．５Ｈｚ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：１５２．１
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：２９５６，２９２８，２８５８，１６０９，１５９１，１４６８，１３７９，１３１７，１１８７，９５９，８１０
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（％）：１５７（Ｍ+，１２．６），１４２（２１．０），１１０（１７．０），８３（３４．４），７１（５５．３），５７（８８．２），４３（１００．０）
ｂｐ．：５４−５５℃（４ｍｍＨｇ）
(2) [2-13C]安息香酸の製造
(2-1) （１Ｒ*，４Ｒ*，８Ｒ*）−８−オクチルオキシ−３−オキソ−２−［８−13Ｃ］オキサビシクロ［２．２．２］オクト−５−エン−４−カルボン酸メチル（８）
２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキン酸メチル（７）（５１０ｍｇ，３．３１mmol）を乾燥ジクロロエタン（１５ｍｌ）に溶かした溶液に、Eu(fod)3（８９６ｍｇ，０．８６mmol）を加えた。混合物を室温で５分間攪拌し、次いでオクチル[1-13C]ビニルエーテル（６）（４５３ｍｇ，２．８８mmol）の乾燥ジクロロエタン溶液（１１ｍｌ）を加えた。全体を６０℃で７時間攪拌後、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製して、表記化合物（８）を無色液体として得た（６８７ｍｇ，７７％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．２１−１．５９（１２Ｈ，ｍ），１．６８（１Ｈ，ｄｄｔ，2ＪC-H＝６．６Ｈｚ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ，１．５Ｈｚ），２．６０（１Ｈ，ｍ），３．３４（１Ｈ，ｄｄｔ，3ＪC-H＝３．７Ｈｚ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，６．６Ｈｚ），３．４６（１Ｈ，ｄｄｔ，3ＪC-H＝３．２Ｈｚ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，６．３Ｈｚ），３．９２（３Ｈ，ｓ），４．３７（１Ｈ，ｍ，ＪC-H＝１５３．６Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，ｍ），６．６１（１Ｈ，ｄｄｄ，4ＪC-H＝１．１Ｈｚ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，７．７Ｈｚ），６．８１（１Ｈ，ｍ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：７２．７
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：２９２９，２８５７，１７６３，１７４３，１６１８，１４５９，１４３８，１３６３，１３４８，１２８２，１１９７，１１２８，１０９４，１０７４，９７５
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（％）：３１１（Ｍ+，２．０），２８０（７．４），１５５（１００．０），１４２（２１．２），１３９（２１．３），１２３（４８．５），１１０（７３．０），８３（２５．８），７１（２８．２），５７（３４．３）
(2-2) [2-13C]安息香酸
メチル（１Ｒ*，４Ｒ*，８Ｒ*）−８−オクチルオキシ−３−オキソ−２−［８−13Ｃ］オキサビシクロ［２．２．２］オクト−５−エン−４−カルボキン酸メチル（８）（６７３ｍｇ，２．１６mmol）のｏ−キシレン（２２ｍｌ）溶液を１２０℃で一夜攪拌した。この溶液にＤＢＵ（０．９７ｍｌ，６．４９mmol）を室温で加えた。混合物を１時間還流し、室温に冷却した。この混合物に４０％水酸化カリウム水溶液（２２ｍｌ）及びメタノール（１０ｍｌ）を加えた。反応混合物を一夜攪拌し、ジエチルエーテル及び水で分配した。水層を３Ｎ塩酸水溶液で酸性化し、ジエチルエーテルで３回抽出した。有機層を合わせ、生理食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。粗生成物を水から結晶化させて、[2-13C]安息香酸（１ａ）を白色固体として得た（２１２ｍｇ，８０％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
７．４９（２Ｈ，ｍ），７．６２（１Ｈ，ｍ），８．１３（１Ｈ，ｍ），８．１３（１Ｈ，ｍ，ＪC-H＝１６３．７Ｈｚ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：１３０．３
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：３３００−２２００，３０６９，２８４１，２６７６，２５６３，１６８７，１５９３，１５７７，１４５１，１４２５，１３２６，１２９２，１１８５，１１７８，１１２８，１０７０，１０２５，９３３
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（％）：１２３（Ｍ+，９０．０），１０６（１００．０），７８（５９．０），７８（５９．０），５２（１６．１）
ｍｐ．１２２．９−１２４．８℃
【００３９】
【実施例２】
(1) オクチル[2-13C]ビニルエーテルの製造
(1-1) [2-13C]酢酸オクチル（２'）
[2-13C]酢酸ナトリウム（２'）（９９atom% 13C,１．９９ｇ，２３．９mmol）及び安息香酸（２．６３ｇ，２１．５mmol）を、三方コックを備えた２００ｍｌ丸底フラスコに入れ、混合物を減圧下に５０℃で１時間攪拌した。得られた混合物にベンゾイルブロミド（１４．１ｍｌ，２２．１ｇ，１１９．６mmol）をアルゴン雰囲気下に加えた。全体を１２０℃に加熱し、一夜攪拌後、減圧蒸留して、受入れフラスコ中に、[2-13C]アセチルブロミド（３'）を得た。
【００４０】
次いで、上記フラスコ中に乾燥塩化メチレン（３５ｍｌ）を加え、この溶液に２分を要してオクチルアルコール（３．８ｍｌ，３．１１ｇ，２３．９mmol）を滴下し、次いで１０分間を要して４−（ジメチルアミノ）ピリジン（２．９２ｇ，２３．９mmol）の乾燥塩化メチレン溶液（１２ｍｌ）を０℃下に滴下した。反応混合物を室温下に１時間攪拌し、１Ｎ塩酸溶液で洗浄した。水層をジエチルエーテル（各１００ｍｌ）で３回抽出した。得られた各有機層を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び生理食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、蒸留した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン：ジエチルエーテル＝４：１）にて精製して、[2-13C]酢酸オクチル（４'）を無色液体として得た（３．４０ｇ，８２％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．２１−１．３８（１０Ｈ，ｍ），１．６０（２Ｈ，ｍ），２．０５（３Ｈ，ｄ，ＪC-H＝１２９．４Ｈｚ），４．０５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：２１．０
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：２９２９，２８５８，１７４４，１４６７，１３８０，１３５５，１２３４，１０３３
(1-2) ジエチル  １−オクチルオキシ[2-13C]ビニルホスファート（５'）
ジイソプロピルアミン（４．４ｍｌ，３８．６mmol）、ｎ−ブチルリチウム（２．５２Ｍヘキサン溶液，１１．５ｍｌ，２８．９mmol）及び乾燥ＴＨＦ（２７ｍｌ）から調製したリチウムジイソプロピルアミドのＴＨＦ溶液中に、[2-13C]酢酸オクチル（４'）（３．３４ｇ，１９．３mmol）の乾燥ＴＨＦ溶液（８ｍｌ）を、−７８℃下に、ブリッヂを経由して１０分間を要して滴下した。混合物を同温度で攪拌した。３０分後、上記混合物中に、１５分を要してクロロリン酸ジエチル（５．５８ｍｌ，３８．６mmol）の乾燥ＨＭＰＡ（９ｍｌ）及び乾燥ＴＨＦ（７ｍｌ）溶液を滴下した。全体を３０分間同温度で攪拌し、その後水を加えて反応を停止させた。水層をジエチルエーテルで３回洗浄した。有機層を合わせ、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液及び生理食塩水で洗浄し、無水炭酸カリウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン：ジエチルエーテル＝２：１，２％トリエチルアミン含有）で精製して、表記化合物（５'）を淡黄色液体として得た（４．３０ｇ，７２％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．２１−１．４３（１０Ｈ，ｍ），１．３６（６Ｈ，ｄｔ，4ＪP-H＝１．１Ｈｚ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．７１（２Ｈ，ｍ），３．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝ＪC-H＝１６２．８Ｈｚ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），３．７８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．８５（１Ｈ，ｄｄｄ，ＪC-H＝１６５．１Ｈｚ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，4ＪP-H＝１．９Ｈｚ），４．２０（４Ｈ，ｍ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：１６７．５（ｄ，3ＪP-H＝４．４Ｈｚ）
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：２９３０，２８５８，１６４８，１４６９，１３９５，１３７０，１２８２，１２５７，１１６６，１０３３，９８８
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（％）：３０９（Ｍ+，０．９），１９８（３８．５），１６９（４４．４），１５５（１５８．５），１２７（１００．０），９９（９５．９）
(1-3) オクチル[2-13C]ビニルエーテル（６'）
上記(1-2)で得た化合物（５'）（４．２９ｇ，１０．６mmol）の乾燥ｔ−ブタノール（１４ｍｌ）及び乾燥ＴＨＦ（２７ｍｌ）溶液を、ガス導入口、セプタムキヤップ及びＣａＣｌ2管を付したドライアイスコンデンサーを備えた５００ｍｌ−３つ口フラスコに入れた。液体アンモニア（２００ｍｌ）を、−７８℃下に、ガス導入口より上記フラスコにチャージし、次いでリチウムワイヤー（０．９６ｇ，１３８．６mmol）を加えた。全体を同温度で３０分間攪拌し、エタノール及び飽和塩化アンモニウムを加えて反応を停止させた。混合物を室温に戻し、水を加えた。水層をペンタンで４回抽出した。有機層を合わせ、生理食塩水で洗浄し、無水炭酸カリウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣の粗生成物を減圧蒸留により精製して、オクチル[2-13C]ビニルエーテル（６'）を無色液体として得た（１．１８ｇ，５４％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．１９−１．４２（１０Ｈ，ｍ），１．６６（２Ｈ，ｍ），３．６７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．９７（１Ｈ，ｄｄｄ，ＪC-H＝１６１．３Ｈｚ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，６．６Ｈｚ），４．１７（１Ｈ，ｄｄｄ，ＪC-H＝１５６．３Ｈｚ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１４．６Ｈｚ），６．４７（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１４．６Ｈｚ，3ＪC-H＝９．６Ｈｚ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：８６．２
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：２９２８，２８５８，１６３２，１６１６，１５９２，１４６８，１３７９，１３１７，１２００，９６４，８０４
ｂｐ．：６０−６２℃（５ｍｍＨｇ）
(2) [3-13C]安息香酸の製造
(2-1) （１Ｒ*，４Ｒ*，８Ｒ*）−８−オクチルオキシ−３−オキソ−２−［７−13Ｃ］オキサビシクロ［２．２．２］オクト−５−エン−４−カルボン酸メチル（８'）
２−オキソ−２Ｈ−ピラン−３−カルボキシレート（７）（１．３０ｇ，８．４１mmol）を乾燥ジクロロエタン（２７ｍｌ）に溶かした溶液に、Eu(fod)3（２．２８ｇ，２．１９mmol）を加えた。混合物を室温で５分間攪拌し、次いでオクチル[2-13C]ビニルエーテル（６'）（１．１５ｇ，７．３１mmol）の乾燥ジクロロエタン溶液（３８ｍｌ）を加えた。全体を６０℃で６時間攪拌し、蒸留した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製して、表記化合物（８'）を無色液体として得た（１．７０ｇ，７５％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．１８−１．３９（１０Ｈ，ｍ），１．４５（２Ｈ，ｍ），１．６８（１Ｈ，ｄｄｔ，ＪC-H＝１３３．１Ｈｚ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，１．６Ｈｚ），２．６０（１Ｈ，ｄｄｄｄ，ＪC-H＝１３４．２Ｈｚ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，７．７Ｈｚ，１４．０Ｈｚ），３．３４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，６．６Ｈｚ），３．４６（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，６．３Ｈｚ），３．９２（３Ｈ，ｓ），４．３７（１Ｈ，ｍ），５．２６（１Ｈ，ｍ），６．６１（１Ｈ，ｄｄｄ，3ＪC-H＝１．４Ｈｚ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，７．７Ｈｚ），６．８０（１Ｈ，ｍ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：３５．２
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：２９２９，２８５７，１７６３，１７４８，１６１９，１４５９，１４３８，１３６１，１３５１，１２８２，１１９９，１１２８，１０９５，１０７４，９７３
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（％）：３１１（Ｍ+，１．９），２８０（７．１），１５５（１００．０），１４１（２１．９），１３９（２０．５），１２３（５２．４），１１０（７７．１），８３（３４．６），７１（３５．８），５７（４５．８）
(2-2) [3-13C]安息香酸
（１Ｒ*，４Ｒ*，８Ｒ*）−８−オクチルオキシ−３−オキソ−２−［８−13Ｃ］オキサビシクロ［２．２．２］オクト−５−エン−４−カルボン酸メチル（８'）（１．６９ｇ，５．４３mmol）のｏ−キシレン（５５ｍｌ）溶液を１２０℃で一夜攪拌した。この溶液にＤＢＵ（２．４４ｍｌ，１６．２９mmol）を室温で加えた。混合物を１時間還流し、室温に冷却した。この混合物に４０％水酸化カリウム水溶液（５５ｍｌ）及びメタノール（２０ｍｌ）を加えた。反応混合物を一日攪拌し、ジエチルエーテル及び水で分配した。水層を３Ｎ塩酸水溶液で酸性化し、ジエチルエーテルで３回抽出した。有機層を合わせ、生理食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。粗生成物を水から結晶化させて、[3-13C]安息香酸（１ｂ）を白色固体として得た（５０５．１ｍｇ，７６％）。
分析値：
1Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：
７．４９（１Ｈ，ｍ，ＪC-H＝１６２．１Ｈｚ），７．４９（１Ｈ，ｍ），７．６２（１Ｈ，ｍ），８．１４（２Ｈ，ｍ）
13Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ：１２８．５
ＩＲ（neat）ｃｍ-1：３３００−２２００，３０６９，２８４２，２６７３，２５６４，１６８６，１５９４，１５７８，１４４９，１４２５，１３２５，１２９２，１１８４，１１２７，１０７０，１０１８，９３５
ＥＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ（％）：１２３（Ｍ+，９４．７），１０６（１００．０），７８（５７．３），５２（１３．９）
ｍｐ．１２２．６−１２３．５℃