(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
0004317920.tif 000016
式中：
Ｒ1はフタルイミドであり；
Ｒ2は３個から７個までの炭素を有するシクロアルキルであり；
Ｒ3は−（ＣＨ2）m−ＮＨＣ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2、−Ｒ6−Ｈ、−Ｒ12−（Ｊ）2、−Ｒ6−ＮＯ2、−（ＣＨ2）m−ＮＨ2及び−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｊよりなる群から選択され；
Ｒ4は−ＣＨ（ＣＨ2Ｒ7）−Ｑであり：
Ｒ5は−ＮＯ2であり；
Ｒ6は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−であり；
Ｒ12は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ−であり；
Ｑは−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｘ−Ａ−Ｙであり；
Ｒ7はフェニル及び１個から８個までの炭素を有するアルキルよりなる群から選択され；
Ｘは結合であり；
Ａは１〜８個の炭素のアルキレン基であり；
ＹはＮ（Ｒ13）−Ｇであり；
ＧはＨ、保護基、ＳＯ2Ｒ9よりなる群から選択され；
または−Ａ−Ｙ部分は５、６もしくは７員のラクタム環を形成し；
Ｒ9は選択的にＫで置換されたアリールであり；
Ｒ13はＨ及び低級アルキルよりなる群から選択され；
Ｊは保護基であり；
Ｋはハロゲンであり；
ｎは５から１０までの整数であり；
ｍは２から５までの整数であり；
ただし、Ｘが結合であり、Ｒ3が−Ｒ6−Ｈまたは−（ＣＨ2）m−ＮＨ2である場合、ＧがＳＯ2Ｒ9である、
を有する化合物またはその製薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ｒ2がシクロペンチルである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ3が−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−Ｈ、−Ｒ12−（Ｊ）2、−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｊまたは−（ＣＨ）m−ＮＨ2である請求項１記載の化合物。
【請求項４】
ＪがＢｏｃ、メチルスルホニルまたはピラジノイルである請求項３記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ7がフェニルまたは低級アルキルである請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ7がイソプロピルである請求項５記載の化合物。
【請求項７】
Ａが−ＣＨ2ＣＨ2−である請求項１記載の化合物。
【請求項８】
ＧがＳＯ2−アリールである請求項１記載の化合物。
【請求項９】
ＧがＳＯ2−アリールであり、該アリール基が１個またはそれ以上のハロゲン原子で置換されている請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
ＧがＳＯ2−フェニルである請求項８記載の化合物。
【請求項１１】
ＧがＳＯ2−フェニルであり、該フェニル基が１個またはそれ以上のハロゲン原子で置換されている請求項９記載の化合物。
【請求項１２】
ＧがＨまたは保護基である請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
該保護基がｔ−Ｂｏｃである請求項１２記載の化合物。
【請求項１４】
Ｘが結合であり、
Ａが−ＣＨ2ＣＨ2−であり、
ｎが８であり、
Ｒ1がフタルイミドであり、
Ｒ2がシクロアルキルであり、
ＧがＨ、ｔ−ＢｏｃまたはＳＯ2Ｒ9であり、ここで、Ｒ9が場合によりハロゲンで置換されていてもよいフェニルであり、
Ｒ7がフェニルまたはアルキルであり、更に、
Ｒ3が−（ＣＨ2）m−ＮＨＣ（＝ＮＨ）−ＮＯ2、−（ＣＨ2）m−ＮＨＣ（＝ＮＨ）−ＮＨ3Ｃｌ、−（ＣＨ2）m−ＮＨ3Ｃｌまたは−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｊであり、ここで、ＪがＢｏｃ、メチルスルホニルまたはピラジノイルである請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ2がシクロペンチルであり、そしてＲ7がイソプロピルである請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ1がＮ−フタルイミドであり、
Ｒ2がシクロペンチルであり、
Ｒ7がフェニルまたはイソプロピルであり、
Ｘが結合であり、
Ａが−ＣＨ2−ＣＨ2−であり、更に、
Ｙが−ＮＨ−ＳＯ2Ｐｈ、−ＮＨ−ＳＯ2−（３，４−ジクロロ）Ｐｈ、−ＮＨ−ｔＢｏｃ、ＮＨ2・ＨＣｌ、Ｎ（Ｍｅ）ＳＯ2Ｐｈであり、または−Ａ−Ｙ部分が構造：
【化２】
0004317920.tif 000017
を形成し、更に、
Ｒ3が−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨＮＯ2、−（ＣＨ2）4−ＮＨ−Ｂｏｃ、−（ＣＨ2）4−ＮＨ−ＳＯ2ＣＨ3、−（ＣＨ2）3−ＮＨ−ピラジノイル、−（ＣＨ2）4−ＮＨ2・ＨＣｌ、−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ2・ＨＣｌまたは−（ＣＨ2）3−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＮＯ2）−ＮＨ2である請求項１記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ1がＮ−フタルイミドであり、Ｒ2がシクロペンチルであり、そしてＲ3及びＲ4が以下の表：
【表１】
0004317920.tif 000018
に従って選択される請求項１記載の化合物。
【請求項１８】
請求項１記載の化合物及び製薬学的に許容しうる担体を含んでなる、多機能性プロテアーゼを阻害するための組成物。
【請求項１９】
請求項１記載の多機能性プロテアーゼのインヒビター及び製薬学的に許容しうる担体を含んでなる、Ｃｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ−１酵素分解を減少させるための組成物。
【請求項２０】
多機能性プロテアーゼの阻害用医薬製剤を調製するための請求項１記載の化合物の使用。
【請求項２１】
哺乳類におけるＣｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ−１酵素の分解の減少用医薬製剤を調製するための請求項１記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【関連出願との関係】
本願は１９９７年１０月７日に出願された米国仮出願第６０／０６１，３８２号及び１９９８年１０月６日に出願された「α−ケトアミド多機能性プロテアーゼインヒビター」という名称の米国出願の利益を請求し、それらの開示は引用することにより全部本明細書に組み込まれる。
【０００２】
【発明の分野】
本発明は多機能性プロテアーゼ（ＭＣＰ）のα−ケトアミドインヒビター、そのようなインヒビターを含有する組成物及びＭＣＰインヒビターの使用方法に関する。本発明のＭＣＰインヒビターは、例えば、様々な生理的状態に付随する筋肉質量の低下を遅らせるために有用である。
【０００３】
【発明の背景】
真核細胞は細胞タンパク質を絶えず分解し、取り替える。これにより細胞は異常な構造を有するタンパク質及びペプチドを選択的に且つ迅速に取り除くことができ、調節ペプチドのレベルを調整することにより代謝経路にわたって制御を及ぼすことができ、そして飢餓状態におけるような必要な場合にエネルギーのアミノ酸を供給することができる。Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、Ａ．Ｌ．及びＳｔ．Ｊｏｈｎ、Ａ．Ｃ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４５：７４７−８０３（１９７６）を参照。哺乳類の細胞機構はタンパク質分解の複数の経路を備えている。これらの経路のいくつかはアデノシン三リン酸（「ＡＴＰ」）の形態でエネルギー投入を必要とするようである。Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、Ａ．Ｌ．及びＳｔ．Ｊｏｈｎ、上記を参照。
【０００４】
多機能性プロテアーゼ（ＭＣＰ、「多機能性プロテイナーゼ」、「プロテアソーム」、「多機能性プロテイナーゼ複合体」、「多機能性エンドペプチダーゼ複合体」、「２０Ｓプロテアソーム」及び「インゲンシン（ｉｎｇｅｎｓｉｎ）」とも呼ばれる）は、ペプチド及びアミノ酸へのタンパク質の分解の少なくとも２つの細胞経路において役割を果たす高分子量（７００ｋＤ）真核生物細胞質プロテイナーゼ複合体である。Ｏｒｌｏｗｓｋｉ、Ｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２９（４５）１０２８９−１０２９７（１９９０）を参照。複合体は少なくとも３つの異なる型の加水分解活性：（１）塩基性アミノ酸のカルボキシル側でペプチド結合を切断するトリプシン様活性；（２）疎水性アミノ酸のカルボキシル側でペプチド結合を切断するキモトリプシン様活性；及び（３）グルタミン酸のカルボキシル側でペプチド結合を切断する活性を有する。Ｒｉｖｅｔｔ、Ａ．Ｊ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：２１  １２２１５−１２２１９（１９８９）及びＯｒｌｏｗｓｋｉ、上記を参照。
【０００５】
ＭＣＰを含むタンパク質加水分解の一つの経路はポリペプチド「ユビキチン」も含む。Ｈｅｒｓｈｋｏ、Ａ．及びＣｉｅｃｈａｎｏｖｅｒ  Ａ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５１：３３５−３６４（１９８２）。ＭＣＰ、ＡＴＰ及びユビキチンを必要とするこの経路は、きわめて異常なタンパク質、ある種の短寿命の正常なタンパク質、並びに増殖する繊維芽細胞及び成熟する網状赤血球におけるタンパク質の大部分の分解を招くようである。Ｄｒｉｓｃｏｌｌ、Ｊ．及びＧｏｌｄｂｅｒｇ、Ａ．Ｌ．ＰＮＡＳ  ８６：７８７−７９１（１９８９）を参照。この経路により分解されるタンパク質は、ＡＴＰ依存的にそれらのリシンアミノ基を介してユビキチンに共有結合的に結合される。次に、ユビキチンに結合したタンパク質は、ＭＣＰをタンパク質分解コアとして含有する２６ＳプロテアソームによりＡＴＰ依存性プロテアーゼ複合体により小ペプチドに分解される。Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、Ａ．Ｌ．及びＲｏｃｋ、Ｋ．Ｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３５７：３７５−３７９（１９９２）。
【０００６】
また、ＭＣＰ及びＡＴＰを必要とするが、ユビキチンを必要としないタンパク質分解のもう一つの経路も記述されている。Ｄｒｉｓｃｏｌｌ、Ｊ．及びＧｏｌｄｂｅｒｇ、Ａ．Ｌ．、上記を参照。この工程では、ＭＣＰはタンパク質をＡＴＰ依存的に加水分解する。Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、Ａ．Ｌ．及びＲｏｃｋ、Ｋ．Ｌ．、上記を参照。この工程は骨格筋において認められている。Ｄｒｉｓｃｏｌｌ及びＧｏｌｄｂｅｒｇ、上記を参照。しかしながら、筋肉において、ＭＣＰは別のプロテアーゼ、マルチパインと相乗的に機能し、それ故、筋肉タンパク質の加速された分解をもたらすことが示唆されている。Ｇｏｌｄｂｅｒｇ及びＲｏｃｋ、上記を参照。
【０００７】
細胞タンパク質の合成及び分解経路の相対的活性は、タンパク質が蓄積されるかまたは取り除かれるかを決定する。タンパク質質量の異常な低下は、筋ジストロフィー、心臓性悪液質、気腫、ライ、栄養障害、骨軟化症、小児急性白血病及び癌悪液質のようないくつかの疾病状態と関係する。また、老化、長期入院またはベッドへの長期拘束及び慢性腰痛症においても筋肉質量の低下が見られる。
【０００８】
神経除去または不使用で、骨格筋は迅速な萎縮を受け、それは大きさ、タンパク質含有量及び収縮強度の大きい減少を導く。この萎縮はヒトにおける多数の神経筋疾患の重要な要素である。タンパク質分解の増大は神経除去萎縮における筋肉消耗の主要な原因として関連づけられている、Ｆｕｒｏｎｏ、Ｋ．等、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６５／１５：８５５０−８５５７（１９９０）を参照。筋肉におけるタンパク質加水分解に関与する特定の工程または複数の工程は同定されていないが、筋肉タンパク質の加速された分解におけるＭＣＰの関与を結び付ける証拠がある。例えば、Ｆｕｒｏｎｏ、上記及びＰＣＴ公開出願ＷＯ ９２／２０８０４（公開日：１９９２年１１月２６日）を参照。
【０００９】
細胞周期調節を招くいくつかのタンパク質のレベルは、プロテアソームによるユビキチン依存的分解により制御される。これらのプロテアソーム基質の中には癌抑制タンパク質ｐ５３（Ｓｃｈｎｅｆｆｅｒ、Ｍ．等、Ｃｅｌｌ  ７５：４９５−５０５（１９９３））、サイクリン依存性キナーゼインヒビターｐ２７（Ｐａｇａｎｏ、Ｍ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９：６８２−６８５（１９９５））及びサイクリンＢ（Ｇｌｏｔｚｅｒ、Ｍ．等、Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：１３２−１３８（１９９１））がある。ユビキチン依存的タンパク質分解によるこれらの重要な調節タンパク質の不適当な分解は、ｐ５３とヒトパピローマウイルスを含有する子宮頸癌の場合において（Ｓｃｈｎｅｆｆｅｒ、Ｍ．等、ＰＮＡＳ  ８８：５５２３−５５２７（１９９１）；Ｈｕｂｂｅｒｔ、Ｎ．等、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：６２３７−６２４１（１９９２））、そして結腸癌におけるｐ２７を例として（Ｌｏｄａ、Ｍ．等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．３：２３１−２３４（１９９７））腫瘍の発生と相関関係がある。さらに、高レベルのｐ２７は、結腸癌（Ｌｏｄａ、上記；Ｆｒｅｄｅｒｓｄｏｒｆ．Ｓ．等、ＰＮＡＳ  ９４：６３８０−６３８５）、乳癌（Ｃａｔｚａｖａｌｏｓ、Ｃ．等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．３：２２７−２３０（１９９７）；Ｐｏｒｔｅｒ、Ｐ．等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．３：２２２−２２５（１９９７）；Ｆｒｅｄｅｒｓｄｏｒｆ、上記）及び胃癌（Ｍｏｒｉ、Ｍ．等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．３：５９３（１９９７））における陽性の臨床結果と関係する。プロテアソームインヒビターでの形質転換細胞の処置はｐ２７（Ｄｒｅｘｌｅｒ、Ｈ．Ｃ．Ａ．  ＰＮＡＳ  ９４：８５５−８６０（１９９７））及びｐ５３（Ｓｈｉｎｏｈａｒａ、Ｋ．等、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３１７：３８５−３８８（１９９６）；Ｌｏｐｅｓ、Ｕ．等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１２８９３−１２８９６（１９９７））の蓄積をもたらし、そして細胞のアポトーシス死を引き起こすことが報告されている。それ故、これらの増殖阻害因子の分解を妨げる化合物は細胞周期の停止を引き起こすと考えられ、癌並びに乾癬及び再狭窄を初めとする他の増殖性疾患の処置に有用である。
【００１０】
転写因子ＮＦ−κＢは、免疫及び炎症反応において重要な多種多様な遺伝子の発現を刺激する（Ｂａｕｅｒｌｅ、Ｐ．及びＨｅｎｋｅｌ、Ｔ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：１４１−１７９（１９９４））。非刺激細胞において、ＮＦ−κＢはインヒビタータンパク質、ＩκＢとの不活性細胞質複合体として存在する。細胞の刺激時に、ＩκＢタンパク質はユビキチン化され、プロテアソームにより分解され、ＮＦ−κＢを活性化する（Ｐａｌｏｍｂｅｌｌａ、Ｖ．等、Ｃｅｌｌ  ７８：７７３−７８５（１９９４））。得られた遊離ＮＦ−κＢは細胞核に入り、そこでそれは転写を開始する。
【００１１】
ＮＦ−κＢの活性化は、腫瘍壊死因子α、インターロイキン−２及びインターロイキン−６のような炎症性サイトカイン並びに細胞内細胞接着分子１（ＩＣＡＭ−１）、血管細胞接着分子１−（ＶＣＡＭ−２）及びＥ−セレクチンを初めとする細胞接着分子の生産をもたらす（Ｂａｅｕｅｒｌｅ及びＨｅｎｋｅｌ、上記）。それ故、プロテアソームの阻害によるＮＦ−κＢの活性化の抑制は、関節炎、敗血症及び炎症性腸疾患を初めとする炎症性疾患の処置方法を与える。
【００１２】
細胞のアポトーシスプログラムの活性化はヒト癌の処置の最新の戦略である。Ｘ線照射及び標準的な化学療法薬はアポトーシスの誘導によりある腫瘍細胞を殺すことが示されている（Ｆｉｓｈｅｒ、Ｄ．Ｅ．Ｃｅｌｌ  ７８、５３９−５４２（１９９４））。残念なことに、現在ヒト癌の大部分はこれらの治療に抵抗性である（Ｈａｒｒｉｓｏｎ、Ｄ．Ｊ．Ｊ．Ｐａｔｈｏ．１７５：７−１２（１９９５））。ＮＦ−κＢの活性化は、ＴＮＦ−α、癌化学療法薬及び放射線の前アポトーシス（ｐｒｏ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ）作用に対してある腫瘍細胞を抵抗性にすることが示されている（Ｂｅｇ、Ａ．及びＢａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４、７８２−７８４（１９９６）；Ｗａｎｇ、Ｃ．Ｙ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４、７８４−７８７（１９９６）；Ｖａｎ  Ａｎｔｗｅｒｐ  Ｄ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７４、７８７−７８９（１９９６））。癌にかかっている患者にイオン化放射線または他の化学療法薬と組み合わせてプロテアソームインヒビターを投与することは、前アポトーシス性薬剤の効能を高める可能性がある。
【００１３】
また、活性化されたＮＦ−κＢはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の複製のためにも必要とされる（Ｎａｂｅｌ、Ｇ．及びＢａｌｔｉｍｏｒｅ、Ｄ．Ｎａｔｕｒｅ  ３２６：７１１−７１３（１９８７））。それ故、ＮＦ−κＢの活性化を妨げる方法は、ＨＩＶに感染した患者に治療的に有益である可能性がある。
【００１４】
細胞質抗原はユビキチン化及びプロテアソームにより触媒される切断によりペプチドにプロセシングされ、それは小胞体に輸送され、ＭＨＣ−１複合体につながれる。プロテアソームインヒビターは、ＭＨＣ−II抗原プロセシングに対する影響なしにＭＨＣ−１抗原提示を妨げる（Ｒｏｃｋ、Ｋ．等、Ｃｅｌｌ  ７８：７６１−７７１（１９９４）；Ｈａｒｄｉｎｇ、Ｃ．等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１７６７−１７７５（１９９５））。それ故、そのようなインヒビターは、自己免疫疾患及び移植の拒絶を初めとする不適当な抗原提示に起因する疾病の処置に有用なはずである。
【００１５】
また、プロテアソーム活性は多数の寄生虫生物の生活環においても必要とされる。例えば、原生動物寄生虫トリパノソーマ・ブルセイ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）の血流及び昆虫型は両方とも２０Ｓプロテアソームをコードし、それはそれらの生物の生存のために必要であると考えられる（Ｈｕａ等、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．７８、３３−４６（１９９６）；Ｌｏｍｏ等、Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ３６、２８５−２９３（１９９７）；Ｔｏ及びＷａｎｇ  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４０４、２５３−２６２（１９９７））。プロテアソームのインヒビターは、トリパノソーマ・クルーズ錐鞭毛期の無鞭毛期への形質転換、及び錐鞭毛期への無鞭毛期の細胞内発生を防ぐことが示されている（Ｇｏｎｚａｌｅｚ等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４、１９０９−１９１８（１９９６））。それ故、プロテアソームインヒビターはアフリカ睡眠病及びマラリアを初めとするがそれらに限定されない寄生虫感染に起因する疾病の処置に有用性を有するはずである。
【００１６】
ＭＣＰ活性はいくつかの疾病状態に関係している。例えば、ヒト白血病細胞系におけるＭＣＰの異常に高い発現が報告されている。Ｋｕｍａｔｏｒｉ、Ａ．等、ＰＮＡＳ  ８７：７０７１−７０７５（１９９０）。また、全身性エリテマトーデス（「ＳＬＥ」）にかかっている患者におけるＭＣＰに対する自己抗体も報告されている。Ａｒｒｉｂａｓ、Ｊ．等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：４２３−４２７（１９９０）。
【００１７】
ＭＣＰ複合体を阻害することができる薬剤が必要とされており；そのような薬剤は例えばＭＣＰ活性の分野において研究を実施する者及び例えば異常なまたは変種のＭＣＰ活性の有害な作用を制御するために医療分野における者の両方に有益な手段を与える。本発明はこれらの重要な目的に関する。
【００１８】
【発明の要約】
本発明は新規なα−ケトアミド多機能性プロテアーゼ（「ＭＣＰ」）インヒビターに関する。また、本発明は、筋肉消耗性疾患の処置を初めとするある種の疾患と関係するＭＣＰの阻害方法も含んでなる。
【００１９】
一つの態様として、式Ｉ：
【００２０】
【化３】
0004317920.tif 000002
【００２１】
式中：
Ｒ1は−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ8、フタルイミド、−ＮＨＳＯ2Ｒ8及び−ＮＨ−Ｊよりなる群から選択され；
Ｒ2はＨ、ヒドロキシル、１個から１０個までの炭素を有するアルキル及び３個から７個までの炭素を有するシクロアルキルよりなる群から選択され；
Ｒ3は−（ＣＨ2）m−ＮＨＣ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2、−Ｒ6−Ｈ、−Ｒ6−Ｊ、−Ｒ12−（Ｊ）2、−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−ＣＮ、−（ＣＨ2）m−ＮＨ2及び−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｊよりなる群から選択され；
Ｒ4は−ＣＨ（ＣＨ2Ｒ7）−Ｑであり：
Ｒ5は−ＮＯ2、−ＣＮ及び−Ｊよりなる群から選択され；
Ｒ6は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−であり；
Ｒ12は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ−であり；
Ｑは−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｘ−Ａ−Ｙであり；
Ｒ7はフェニル及び１個から８個までの炭素を有するアルキルよりなる群から選択され、該アルキル基は場合により１個またはそれ以上のハロゲン原子、アリールまたはヘテロアリール基で置換されていてもよく；
Ｒ8は水素及び１個から６個までの炭素を有するアルキルよりなる群から選択され、該アルキル基は場合により１個またはそれ以上のハロゲン原子、アリールまたはヘテロアリール基で置換されていてもよく；
Ｘは結合または−Ｏ−であり；
Ａは１〜８個の炭素のアルキレン基であり、該アルキレン基は場合により１個またはそれ以上のハロゲン原子、アリールまたはヘテロアリール基で置換されていてもよく；
ＹはＮ（Ｒ13）−Ｇであり；
ＧはＨ、ブロッキング基、ＳＯ2Ｒ9、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ10、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＲ10及び−ＣＯ2Ｒ9よりなる群から選択され；
または−Ａ−Ｙ部分は５、６もしくは７員のラクタム環を形成し；
Ｒ9はアルキル、アリール及びヘテロアリールよりなる群から選択され、該アルキル、アリールまたはヘテロアリール基は場合によりＫで置換されていてもよく；
Ｒ10はＨ、アルキル、アリール及びヘテロアリールよりなる群から選択され、該アルキル、アリールまたはヘテロアリール基は場合によりＫで置換されていてもよく；
Ｒ13はＨ及び低級アルキルよりなる群から選択され；
Ｊはブロッキング基であり；
Ｋはハロゲン、ＣＯ2Ｒ10、Ｒ10ＯＣ（＝Ｏ）、Ｒ10ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ2、ＮＲ10Ｒ11、Ｎ＝Ｃ（ＮＲ10Ｒ11）2、ＳＲ10、ＯＲ10、フェニル、ナフチル、ヘテロアリール及び３個から８個までの炭素原子を有するシクロアルキル基よりなる群から選択され；
Ｒ11はＲ10と同じものであり；
ｎは５から１０までの整数であり；
ｍは２から５までの整数であり；
ただし、Ｘが結合であり、Ｒ3が−Ｒ6−Ｈまたは−（ＣＨ2）m−ＮＨ2である場合、ＧがＳＯ2Ｒ9である、
を有する化合物またはその製薬学的に許容しうる塩が提供される。
【００２２】
式Ｉの化合物のある好ましい態様として、Ｒ1がフタルイミド、−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＣＨ3または−ＮＨＳＯ2ＣＦ3である。式Ｉの化合物のさらに好ましい態様として、Ｒ2がＨまたはシクロペンチルである。
【００２３】
式Ｉの化合物のある好ましい態様として、Ｒ3が−Ｒ6−Ｊ、−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−Ｈ、−Ｒ12−（Ｊ）2、−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｊまたは−（ＣＨ）m−ＮＨ2であり、ここで、Ｊが好ましくはＢｏｃ、メチルスルホニルまたはピラジノイルである。
【００２４】
式Ｉの化合物のある好ましい態様として、Ｒ7がフェニルまたは低級アルキルであり、イソプロピルが好ましい。
【００２５】
式Ｉの化合物のある好ましい態様として、Ｘが結合である。式Ｉの化合物のさらに好ましい態様として、Ａが−ＣＨ2ＣＨ2−である。
【００２６】
好ましくは、ＧがＳＯ2−アリールであり、ＳＯ2−フェニルが好ましい。より好ましい態様として、アリールまたはフェニル基が場合により好ましくは１個またはそれ以上のハロゲン原子で置換されていてもよい。
【００２７】
式Ｉの化合物のさらに好ましい態様として、ＧがＨまたはブロッキング基であり、ｔ−Ｂｏｃが好ましい。
【００２８】
ある好ましい態様として、−Ａ−Ｙ部分が５、６または７員のラクタム環を形成し、それが好ましくは構造：
【００２９】
【化４】
0004317920.tif 000003
【００３０】
を有する。
【００３１】
より好ましいものは以下の実施例において記述される化合物に対して示される置換基であり、実施例１−８において示される置換基が特に好ましい。
【００３２】
式Ｉの化合物の特に好ましい態様として、Ｘが結合であり；Ａが−ＣＨ2ＣＨ2−であり；ｎが８であり；Ｒ1がフタルイミドであり；Ｒ2がシクロアルキルであり、シクロペンチルが特に好ましく；ＧがＨ、ｔ−ＢｏｃまたはＳＯ2Ｒ9であり、ここで、Ｒ9が場合によりハロゲンで置換されていてもよいフェニルであり；Ｒ7がフェニルまたはアルキルであり、イソプロピルが好ましく；そしてＲ3が−（ＣＨ2）m−ＮＨＣ（＝ＮＨ）−ＮＯ2、−（ＣＨ2）m−ＮＨＣ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｂｏｃ）2、−（ＣＨ2）m−ＮＨＣ（＝ＮＨ）−ＮＨ3Ｃｌ、−（ＣＨ2）m−ＮＨ3Ｃｌまたは−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｊであり、ここで、ＪがＢｏｃ、メチルスルホニルまたはピラジノイルである。
【００３３】
式Ｉの化合物中のＲ1−Ｒ4のある特に好ましい置換基は、以下の化合物１、１４、１７、１９、２０、２８、３４、３５、３６及び３７−９に対して示されるものである。
【００３４】
本発明の化合物は様々な用途において有用である。例えば、ＭＣＰ経路の機械論的理解及び主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ（ＭＨＣＩ）経路によるペプチド抗原の提示のインビトロ及びインビボモデルをさらに精緻なものにし、開発するために研究用途においてそれらの化合物を用いることができる。
【００３５】
治療環境では、ＭＣＰの正常な、異常な、そして／または変種の活性と関係する疾患を緩和し、とりなし、減らし、そして／または防ぐために本発明の化合物を利用することができる。例えば、ＭＣＰ活性を阻害するため、関節炎、敗血症及び炎症性腸疾患を初めとする炎症性疾患の処置のため、様々な腫瘍細胞におけるアポトーシスの強力な誘導物質として、従って、抗癌剤としての有用性を与え、筋肉質量の低下を減らし、筋肉消耗性疾患を処置し、スーパーオキシドジスムターゼ分解を減らし、そしてスーパーオキシドジスムターゼ活性の減少を特徴とする疾患を処置するために請求化合物を含んでなる組成物を用いることができる。
【００３６】
好ましい態様として、本発明の化合物を含んでなる、ＭＣＰを阻害するための組成物が与えられる。別の好ましい態様として、阻害する量の本発明の化合物とＭＣＰを接触させることを含んでなる、ＭＣＰの阻害方法が与えられる。
【００３７】
また、本発明のα−ケトアミドインヒビターを製造するための方法論も開示される。いったん本開示が与えられると、他の有用な方法論は当業者に明らかである。本発明の化合物のこれら及び他の特徴を以下により詳細に記述する。
【００３８】
【詳細な説明】
本発明はＭＣＰインヒビター、これらのインヒビターを含有する組成物及びこれらのインヒビターの使用方法を提供する。本発明の一つの態様として、式Ｉ：
【００３９】
【化５】
0004317920.tif 000004
【００４０】
式中：
Ｒ1は−Ｃ≡Ｎ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ8、フタルイミド、−ＮＨＳＯ2Ｒ8及び−ＮＨ−Ｊよりなる群から選択され；
Ｒ2はＨ、ヒドロキシル、１個から１０個までの炭素を有するアルキル及び３個から７個までの炭素を有するシクロアルキルよりなる群から選択され；
Ｒ3は−（ＣＨ2）m−ＮＨＣ（＝Ｎ−Ｒ5）−ＮＨ2、−Ｒ6−Ｈ、−Ｒ6−Ｊ、−Ｒ12−（Ｊ）2、−Ｒ6−ＮＯ2、−Ｒ6−ＣＮ、−（ＣＨ2）m−ＮＨ2及び−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｊよりなる群から選択され；
Ｒ4は−ＣＨ（ＣＨ2Ｒ7）−Ｑであり：
Ｒ5は−ＮＯ2、−ＣＮ及び−Ｊよりなる群から選択され；
Ｒ6は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ−であり；
Ｒ12は−（ＣＨ2）m−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ−であり；
Ｑは−Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−Ｘ−Ａ−Ｙであり；
Ｒ7はフェニル及び１個から８個までの炭素を有するアルキルよりなる群から選択され、該アルキル基は場合により１個またはそれ以上のハロゲン原子、アリールまたはヘテロアリール基で置換されていてもよく；
Ｒ8は水素及び１個から６個までの炭素を有するアルキルよりなる群から選択され、該アルキル基は場合により１個またはそれ以上のハロゲン原子、アリールまたはヘテロアリール基で置換されていてもよく；
Ｘは結合または−Ｏ−であり；
Ａは１〜８個の炭素のアルキレン基であり、該アルキレン基は場合により１個またはそれ以上のハロゲン原子、アリールまたはヘテロアリール基で置換されていてもよく；
ＹはＮ（Ｒ13）−Ｇであり；
ＧはＨ、ブロッキング基、ＳＯ2Ｒ9、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ10、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＨＲ10及び−ＣＯ2Ｒ9よりなる群から選択され；
または−Ａ−Ｙ部分は５、６もしくは７員のラクタム環を形成し；
Ｒ9はアルキル、アリール及びヘテロアリールよりなる群から選択され、該アルキル、アリールまたはヘテロアリール基は場合によりＫで置換されていてもよく；
Ｒ10はＨ、アルキル、アリール及びヘテロアリールよりなる群から選択され、該アルキル、アリールまたはヘテロアリール基は場合によりＫで置換されていてもよく；
Ｒ13はＨ及び低級アルキルよりなる群から選択され；
Ｊはブロッキング基であり；
Ｋはハロゲン、ＣＯ2Ｒ10、Ｒ10ＯＣ（＝Ｏ）、Ｒ10ＯＣ（＝Ｏ）ＮＨ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ2、ＮＲ10Ｒ11、Ｎ＝Ｃ（ＮＲ10Ｒ11）2、ＳＲ10、ＯＲ10、フェニル、ナフチル、ヘテロアリール及び３個から８個までの炭素原子を有するシクロアルキル基よりなる群から選択され；
Ｒ11はＲ10と同じものであり；
ｎは５から１０までの整数であり；
ｍは２から５までの整数であり；
ただし、Ｘが結合であり、Ｒ3が−Ｒ6−Ｈまたは−（ＣＨ2）m−ＮＨ2である場合、ＧがＳＯ2Ｒ9である、
を有するＭＣＰインヒビターまたはその製薬学的に許容しうる塩が与えられる。
【００４１】
式Ｉの化合物の様々な立体異性体が存在する可能性があることが認められる。本発明の好ましい化合物は、置換基Ｒ3が結合している炭素でＬ配置を有する。しかしながら、ラセミ化合物及び個々の鏡像異性体及びそれらの混合物は本発明の一部を形成する。
【００４２】
本明細書に用いられる場合、「アルキル」という用語は、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、１−エチルペンチル、ヘキシル、オクチル、シクロプロピル、メチルシクロペンチル及びシクロヘキシル基のような直鎖状、分枝鎖状及び環式炭化水素基を含む。好ましいアルキル基は１〜約１０個の炭素原子を有する。より好ましいものは、好ましくは１個から約６個までの炭素原子を有する「低級アルキル」基である。本明細書に用いられる場合、「アルキレン」という用語は、例えば、エチレン（−ＣＨ2ＣＨ2−）、プロピレン、ブチレン、ヘキシレン、１−メチルエチレン、２−メチルエチレン及び２−メチルプロピレンのような１〜約８個の炭素原子を有する分枝鎖状または非分枝鎖状炭化水素基を表す。「アシル」基はアルキルカルボニル基である。「アリール」基は、フェニル、トリル、ナフチル、アントラシル、フェナントリル及びピレニルを初めとするがそれらに限定されない芳香族環式化合物である。また、「アリール」の定義の範囲内に含まれるものは、ビフェニルのような、結合により連結された２個の芳香環を保有する環系である。好ましいアリール基はフェニル及びナフチルを含む。
【００４３】
「炭素環式］という用語は、本明細書に用いられる場合、環部分が全く炭素原子からなる環式基をさす。「ハロゲン」という用語はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩ原子をさす。「アリールアルキル」という用語はアリール基を保有するアルキル基、例えばベンジル基を表す。本明細書に用いられる場合、「アルコキシ」基は酸素原子を介して連結されたアルキル基である。アルコキシ基の例はメトキシ（−ＯＣＨ3）及びエトキシ（−ＯＣＨ2ＣＨ3）基を含む。一般に、「オキシ」という用語は接尾語として用いられる場合、酸素原子を介しての結合を表す。従って、アルコキシカルボニル基はアルコキシ置換基を含有するカルボニル基、すなわち、一般式−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒ、式中、Ｒはアルキルである、の基である。「アルコキシアルキル」という用語は本明細書に用いられる場合アルキル基に結合したアルコキシ基を表す。「アリールオキシ」という用語は酸素原子を介して連結したアリール基を表し、そして「アリールアルキルオキシ」という用語は酸素原子を介して連結したアリールアルキル基を表す。
【００４４】
「複素環」、「ヘテロサイクリル］及び「複素環式」という用語は、環部分がＯ、ＮまたはＳのような少なくとも１個のヘテロ原子を含む環式基をさす。複素環式基は「ヘテロアリール」及び「ヘテロアルキル」基を含む。「ヘテロアリール」という用語は、芳香環内に１個またはそれ以上のヘテロ原子（例えば、Ｏ、ＮまたはＳ）を含有するアリール基を表す。また、「ヘテロアリール」の定義の範囲内に含まれるものは、環の少なくとも１個がヘテロ原子を含有する、結合により連結された２個の芳香環を有する環系である。好ましい「ヘテロアリール」基は、ピリジル、ピリミジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、キノリル、イソキノリル、ベンゾイミダゾリル、チアゾリル、ビピリジル、ピリジルチオフェニル、ピリミジルチオフェニル、イソオキサゾリルチオフェニル、ピラゾリルチオフェニル、フタルイミド及びベンゾチアゾリルを含む。「ヘテロシクロアルキル」という用語は、低級アルキル基を介して結合した複素環を表す。「ヘテロアリールアルキル」という用語は、アルキル基を介して結合したヘテロアリール基を表す。本明細書に用いられる場合、「ヘテロアルキル」という用語は、複素環式環中に少なくとも１個の飽和した炭素原子を含有する複素環式基を表す。ヘテロアルキル基の例は、ピペリジン、ジヒドロピリジン及びテトラヒドロイソキニル基を含む。
【００４５】
式（Ｉ）の化合物中に存在する官能基はブロッキング基を含有してもよい。ブロッキング基は、ヒドロキシル基、アミノ基、チオ基及びカルボキシル基のような官能基に選択的に付加することができる化学官能基としてそれ自体知られている。保護基は官能基から容易に取り除くことができるブロッキング基である。これらの基は、化合物がさらされる化学反応条件に対してそのような官能基を不活性にするために化学化合物中に存在する。様々な保護基のいずれを本発明で用いてもよい。そのような保護基の例は、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ；Ｚ）、トルエンスルホニル、ｔ−ブトキシカルボニル、メチルエステル及びベンジルエーテル基である。本発明の他の好ましい保護基をＧｒｅｅｎｅ、Ｔ．Ｗ．及びＷｕｔｓ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版、Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９１中に見いだすことができる。
【００４６】
本発明の化合物に有用なさらなるブロッキング基は、それらのアミノ基上にアシル、アロイル、ヘテロアロイル、アルキル、アルカンスルホニル、アリールアルカンスルホニルまたはアリールスルホニル置換基を保有するものを含む。他の有用なブロッキング基はアルキルエーテル、例えば、セリンのメチルエーテルを含む。
【００４７】
先に示したように、ＭＣＰ活性は様々な疾患及び疾病と関連している。本明細書に開示されるような化合物はＭＣＰの活性を妨げることに有用であり、そしてそのような化合物の有用性を研究及び治療環境の両方に適用することができるので、本発明の化合物とＭＣＰを接触させることによりＭＣＰの活性を阻害する方法論は、医薬品または薬剤としてヒトを初めとする哺乳類に化合物を与えることを含む。
【００４８】
本明細書に用いられる場合、「接触させる」という用語は、成分が相互に物理的に接触するように、接触させる成分を直接的または間接的に一緒に置くことを意味する。従って、接触させるは、容器中に成分を一緒に入れることまたは患者に成分を投与することのような物理的行為を含む。従って、例えば、疾病または疾患と関係するＭＣＰの異常な、そして／または変種の活性と関係する疾病または疾患を明白に示すヒト患者に本発明の化合物を投与することは、「接触させる」という用語の定義の範囲内に入る。
【００４９】
好ましい態様として、ＭＣＰの異常な、そして／または変種の活性と関係する疾患、すなわち、異常な体調、疾病または病理生理学的疾患を患っている患者に本発明の製薬学的組成物を投与する。本発明の組成物を投与する疾患は、好ましくは、直接的または間接的に筋肉質量の消耗（すなわち、低下）をもたらすもの、すなわち、筋肉消耗性疾患である。これらは筋ジストロフィー、心臓性悪液質、気腫、ライ、栄養障害、骨軟化症、小児急性白血病、エイズ悪液質及び癌悪液質を含む。
【００５０】
本発明の文脈上、「投与する」は患者への製薬学的組成物の導入を意味する。好ましい投与方法は静脈内、皮下及び筋肉内投与を含む。好ましくは、生理食塩水のような製薬学的に許容しうる担体と組み合わせて化合物を含んでなる製薬学的組成物として化合物を投与する。他の適当な担体をＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９８０）中に見いだすことができる。
【００５１】
製薬学的組成物中の本明細書に記述される化合物の濃度は、投与される薬剤の投薬量、用いられる化合物の化学的特性（例えば、疎水性）及び投与の経路を初めとする多数の因子により変わる。一般的に言えば、非経口投与のためには約０．１〜１０％ ｗ／ｖの化合物を含有する生理的緩衝水溶液中で本発明の化合物を与えることができる。典型的な投与量範囲は１日当たり約１μｇ／ｋｇ体重から約１ｇ／ｋｇ体重までであり；好ましい投与量範囲は１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重までである。投与される薬剤の好ましい投薬量は、疾病または疾患の進行の型及び程度、特定の患者の総合的な健康状態、選択される化合物の相対的な生物学的効能、及び化合物賦形剤の配合、及びその投与経路のような変数によると思われる。本明細書に用いられる場合、「患者」という用語はあらゆる型の脊椎動物を表す。好ましくは、患者はヒトである。
【００５２】
筋ジストロフィーは、神経変性を明白に示さない筋肉繊維の進行性衰弱及び分解を特徴とする遺伝病である。デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）では、患者は筋肉質量の平均６７％の減少を示し、そして筋緊張性ジストロフィーでは、（おそらく同化ホルモンまたは基質に対する損なわれた末端器官応答のために）部分筋肉タンパク質合成が、筋肉以外のタンパク質合成のいかなる対応する減少もなしに平均２８％減少していることが示されている。加速されたタンパク質分解がＤＭＤ患者の筋肉において示されている。
【００５３】
重いうっ血性心不全（ＣＨＦ）は、平均１９％の体重減少と共に、「心臓性悪液質」、すなわち、心臓及び骨格筋の両方の筋肉タンパク質消耗を特徴とする。心臓性悪液質は加速された筋原繊維タンパク質分解により引き起こされる。
【００５４】
気腫は、肺胞壁の破壊的変化を伴う、終末非呼吸細気管支の末梢の空隙の拡大により定義される慢性閉塞性肺疾患である。減少した肺機能の臨床徴候は、咳、喘鳴、反復性呼吸器感染、水腫及び機能障害及び短くなった寿命を含む。気腫患者においてチロシンの排出は４７％増加している。また、全身のロイシン排出は正常なままであり、全身のロイシン酸化は増加しており、そして全身のタンパク質合成は減少している。その結果は、全身のタンパク質代謝回転及び骨格筋質量の減少を伴う、筋肉タンパク質合成の減少である。この減少は疾病の進行及び長期的悪化と共にますます明白になる。
【００５５】
糖尿病では、慢性部分神経除去（ニューロパシー）による、手の小筋肉（ｓｍａｌｌ  ｍｕｓｃｌｅ）の一般的消耗がある。これは長期の疾病進行及び重さと共に最も明らかであり、悪化する。
【００５６】
ライは親指と人差し指の中手骨の間に起こる筋肉消耗と関係する。重い栄養障害はとりわけ激しい筋肉消耗を特徴とする。
【００５７】
骨軟化症はビタミンＤ及びカルシウムの欠乏により引き起こされる栄養障害である。それは小児では「くる病」、成人では「骨軟化症」と呼ばれる。（類骨の過剰な蓄積と共に、損なわれた石灰化よる）骨の軟化、痛み、圧痛、筋肉消耗及び衰弱、食欲不振並びに全般的な体重減少を特徴とする。それは栄養障害、繰り返された妊娠及び授乳（ビタミンＤ及びカルシウム貯蔵を使い果たすかまたは枯渇させる）並びにビタミンＤ抵抗性に起因する可能性がある。
【００５８】
小児急性白血病では、骨格筋消耗をもたらすタンパク質エネルギー栄養障害がある。研究により、ある子供は白血病の診断前にさえ筋肉質量の平均２７％の減少で筋肉消耗を見せることが示されている。また、同時に脂肪組織の３３％−３７％の増加もあり、相対体重及び体肢周径の正味の変化をもたらさない。
【００５９】
癌悪液質は、充実性腫瘍及び血液学的悪性腫瘍にかかっている患者において多様な発生率で起こる複合症候群である。臨床的に、癌悪液質は脂肪組織及び除脂肪筋肉質量の両方の大きい減少がある体重減少として示され、癌に起因する一つの死亡原因である。癌悪液質患者はより短い生存期間及び化学療法に対する低下した反応を有する。筋肉消耗をもたらす疾患に加えて、他の状況及び状態が筋肉質量の減少と何らかの関連があるようである。そのような原因は慢性背痛、高齢、疾病または損傷による長期入院、アルコール中毒症及びコルチコステロイド治療による筋肉消耗を含む。
【００６０】
慢性腰痛の重い症例では、傍脊骨（ｐａｒａｓｐｉｎａｌ）の筋肉消耗があることが研究により示されている。傍背骨の筋肉消耗を減らすことは痛みを緩和し、機能を改善する。
【００６１】
また、高齢における一般的な衰弱は筋肉消耗によることも考えられる。体が老化するにつれて、増大する割合の骨格筋が繊維性組織により置き換えられる。結果は筋力の著しい低下であるが、脂肪を含まない質量のほんの最低限の排除である。
【００６２】
損傷または慢性疾患を患い、長期間入院している患者では、筋肉質量の平均３１％の減少で、長期にわたる一側性筋肉消耗があることが研究により示されている。また、集中的物理療法でこれを治療できることも研究により示されている。しかしながら、薬剤療法で改善をもたらすことは多くの患者にとってより有効である可能性がある。
【００６３】
アルコール中毒症患者では、前脛骨筋肉の消耗がある。この近位筋肉損傷は神経原性損傷、すなわち、損なわれた糖分解及びホスホリラーゼ酵素活性により引き起こされる。飲酒癖の期間が長いほど損傷は明白になり、悪化する。コルチコステロイドで処置された患者は筋肉質量の低下を経験する。
【００６４】
ＭＣＰはＮＦκＢと呼ばれる炎症の細胞内メディエーターを活性化することが示されている（Ｂａｅｕｅｒｌｅ、Ｐ．Ａ．及びＨｅｎｋｅｌ、Ｔ．（１９９４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２、１４１−１７９を参照）。それ故、ＭＣＰのインヒビターは潜在的に自己免疫及び炎症性疾患の処置に用途を有する。
【００６５】
前述の疾患等に起因する筋肉質量低下を軽減するために本発明の化合物を用いることができる。さらに、本発明のＭＣＰインヒビターは、例えば、動物の体重減少を阻止するため、または成長を促進するために獣医学及び畜産学用途において有用である。
【００６６】
ＭＣＰは主要組織適合遺伝子複合体クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ）経路によるペプチド抗原の提示に関与している。Ｇｏｌｄｂｅｒｇ及びＲｏｃｋ、上記を参照；Ｒｏｃｋ等、Ｃｅｌｌ、７８：７６１−７７１（１９９４）、以下「Ｒｏｃｋ等」も参照。それ故、ＭＣＰのインヒビターは、ＭＨＣ Ｉ経路の阻害が所望される研究における研究試薬として、そして抗原の変種の及び／または異常なＭＨＣ−Ｉプロセシングと関係する疾病及び疾患の軽減において有用性がある。ＭＨＣ−Ｉ分子上に提示されるペプチドの大部分の厳密な起源はまだ明白ではなく、そしてＭＣＰがＭＨＣ−Ｉ提示において役割を果たす可能性があるという証拠が最近集まっているので（Ｒｏｃｋ等、上記を参照）、ＭＨＣ−Ｉ提示のための抗原のタンパク質分解プロセシングを妨げる開示されたＭＣＰインヒビターのような試薬は、この経路の重要な問題の解明に有用である。
【００６７】
また、本発明のＭＣＰインヒビターは、Ｃｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ−１（「ＳＯＤ−１」）酵素の活性を高めることにも有用である。従って、これらの化合物は、ＳＯＤ−１欠損系の研究のための研究環境及びＳＯＤ−１酵素活性の減少を特徴とする（すなわち、そのような減少が疾患の発症に関係している）神経変性または他の疾患の処置の両方において有用である。そのような疾患はパーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、脳卒中、外傷、筋萎縮性側索硬化症及び虚血のような酸化的ストレスを伴う疾病を含む。
【００６８】
ＳＯＤ−１は有毒なスーパーオキシドアニオンＯ2.-のＯ2及びＨ2Ｏ2への不均化を触媒するホモダイマーの金属酵素である。ＳＯＤ−１は遊離基の捕獲剤であり、それ故、好気性代謝の通常の副産物であるスーパーオキシド残基の解毒における最前線防御として働く。ＳＯＤ−１は主として真核生物に存在し、実質的に全ての細胞型の細胞質に見いだされる。ＳＯＤ−１は酸素毒性に対する生理的応答の必須酵素であり、酸化的ストレスに関連した病的疾患の治療薬として活発に研究されている。Ｂａｎｎｉｓｔｅｒ等、ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１１１−１８０（１９８７）；Ｈａｌｌｉｗｅｌｌ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８６：１−７５（１９９０）；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ、Ｆｒｅｅ  Ｒａｄ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．８：２０１−２０９（１９９０）を参照。
【００６９】
治療薬としてのＳＯＤ−１の使用を妨げている特性は、外因的に与えた場合のその乏しい細胞内到達及び血清中のその非常に短い半減期である。それ故、細胞内ＳＯＤ−１の活性を高める化合物はＳＯＤ−１治療において著しい進歩を与える。
【００７０】
ＡＬＳは脊髄及び脳の大運動ニューロンの変性により引き起こされる進行麻痺性疾患である。ＡＬＳ症例の約５−１０％は家族性（ＦＡＬＳ）であり、常染色体優性形質として受け継がれる。最近、ＦＡＬＳにかかっている家族の小集団において１６個の異なるミスセンス突然変異が同定されており、ＳＯＤ−１をコードする遺伝子内に存在する。Ｒｏｓｅｎ、Ｄ．Ｒ．等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１０４７−１０５１（１９９３）；Ｄｅｎｇ、Ｈ．−Ｘ．等、Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：５９−６２（１９９３）を参照。これらの突然変異は赤血球及び脳組織においてＳＯＤ−１活性の減少を導き、そしてＳＯＤ−１タンパク質を不安定にし、酵素の増加した代謝回転をもたらすことが示されている。Ｂｏｗｌｉｎｇ、Ａ．Ｃ．等、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６１：２３２２−２３２５（１９９３）；Ｂｏｒｃｈｅｌｔ、Ｄ．Ｒ．等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：８２９２−８２９６（１９９４）を参照。さらに、ＳＯＤ−１とＡＬＳの間の関連性の示唆に基づく、ＡＬＳのトランスジェニックマウスモデルが記述されている。Ｂｒｏｗｎ、Ｒ．Ｈ．３３１／１６  ＮＥＪＭ  １０９１（１９９４）。
【００７１】
以下の実施例により本発明をさらに例示する。これらの実施例は本発明を説明することを意図する。それらの実施例は請求の範囲を限定することを意図しない。
実施例
一般法．  薄層クロマトグラフィーをシリカゲルプレート（ＭＫ６Ｆ ６０Ａ、大きさ１ ｘ ３インチ、層の厚み２５０μｍ、Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｃ．）で実施した。分取薄層クロマトグラフィーをシリカゲルプレート（大きさ２０ ｘ ２０インチ、層の厚み１０００ミクロン、Ａｎａｌｔｅｃｈ）で実施した。Ｍｅｒｃｋシリカゲル、４０−６３μｍ、２３０−４００メッシュを用いて分取カラムクロマトグラフィーを実施した。内部標準としてテトラメチルシランを用いてＧＥ ＱＥ Ｐｌｕｓ装置（３００ＭＨｚ）で1Ｈ ＮＭＲスペクトルを記録した。エレクトロスプレー質量スペクトルをＶＧプラットフォームII装置（Ｆｉｓｏｎｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で記録した。
【００７２】
実施例１
化合物１の製造
化合物１を以下のスキーム１に示されるように構成単位２、３、４及び５から製造した：
【００７３】
【化６】
0004317920.tif 000005
【００７４】
化合物２の製造
ラセミ化合物としての化合物２の製造は米国特許５，５５０，２６２中に記述されており、それは引用することにより全部本明細書に組み込まれる。
化合物３の製造
化合物３をＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡから購入した。
化合物４の製造
化合物４及び関連するα−ヒドロキシ酸をＨａｒｂｅｓｏｎ等、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９４、３７、２９１８−２９２９の一般法に従って製造し、それは引用することにより全部本明細書に組み込まれる。
化合物５の製造
化合物５の製造を以下のスキーム２に示す：
【００７５】
【化７】
0004317920.tif 000006
【００７６】
化合物７の製造
ＴＨＦ（３０ｍＬ）中の１，２−エチレンジアミン（６、１０．８０ｇ、１２．００ｍＬ、０．１８ｍｏｌ）の溶液にＴＨＦ（７０ｍＬ）中のＢＯＣ−ＯＮ（２２．１０ｇ、０．０９ｍｏｌ）を４時間の期間にわたってゆっくりと添加した。反応混合物を一晩撹拌し、ロータベーターで濃縮し、水（１５０ｍＬ）中に溶解した。水層を固体クエン酸１水和物で酸性化し（ｐＨ 〜 ５−６）、エーテルで洗浄し（３ ｘ ５０ｍＬ）、次に、６Ｎ ＮａＯＨ溶液で（０℃で）処理してそれを塩基性にした（ｐＨ 〜 １２−１３）。塩基性溶液を酢酸エチル中に抽出し（３ ｘ １００ｍＬ）、合わせた酢酸エチル層を乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濃縮して７．２３ｇの１保護されたジアミン７を生ぜしめた。
化合物７：半固体；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ５．００（広幅、１Ｈ）、３．２０（広幅ｑ、２Ｈ）、２．８０（ｔ、２Ｈ）、１．４５（ｓ、９Ｈ）、１．２５（広幅、２Ｈ）。
化合物８の製造
塩化メチレン（５ｍＬ）中のアミン７（０．３２１ｇ、０．００２ｍｏｌ）の冷却した（０−５℃）溶液をトリエチルアミン（０．２４３ｇ、０．３３ｍＬ、０．００２４ｍｏｌ）及び塩化ベンゼンスルホニル（０．４２３ｇ、０．３０ｍＬ、０．００２４ｍｏｌ）で連続して処理した。氷浴を取り除き、溶液をもう０．５時間撹拌し、次に、水（２ ｘ ５ｍＬ）、冷えた（０−５℃）０．５Ｎ ＨＣｌ（１ ｘ ５ｍＬ）、２％ ＮａＨＣＯ3溶液（１ ｘ ５ｍＬ）及びブライン（１ ｘ ５ｍＬ）で連続して洗浄した。溶液をＭｇＳＯ4で乾燥させ、溶媒を蒸発させて残留物を得、それをｎ−ペンタンで数回洗浄して０．６０ｇのスルホンアミド誘導体８を生ぜしめた。
化合物８：白色固体、ｍｐ ９２−９５℃；Ｒf（ＴＬＣ、塩化メチレン中５％のメタノール）０．５５；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ７．８５（ｄ、２Ｈ）、７．５５（ｍ、３Ｈ）、５．３０（広幅ｄ、１Ｈ）、４．８５（広幅、１Ｈ）、３．２５（広幅ｑ、２Ｈ）、３．１０（広幅ｑ、２Ｈ）、１．４０（ｓ、９Ｈ）。
化合物５の製造
１，４−ジオキサン（４ｍＬ）中の化合物８（０．５６０ｇ、０．００１９ｍｏｌ）の溶液をジオキサン（４ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌで処理した。混合物を室温で１時間撹拌し、ロータベーターで濃縮した。残留物を酢酸エチルで数回洗浄し、真空下で乾燥させて０．４０ｇのアミン塩５を生ぜしめた。
化合物５：白色固体、ｍｐ １７８−１８０℃；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ ８．２０−８．００（広幅ｔ、４Ｈ）、７．８０（ｄ、２Ｈ）、７．６０（ｍ、３Ｈ）、２．９５（広幅ｑ、２Ｈ）、２．８０（広幅、２Ｈ）。
【００７７】
構成単位４、５、３及び２のカップリングを以下のスキーム３に示す。
【００７８】
【化８】
0004317920.tif 000007
【００７９】
化合物９の製造
無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中の化合物４（１．００ｇ、０．００３４ｍｏｌ）の冷却した（０℃）溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（１．４０ｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）、続いて、１−ＨＯＢｔ（０．５４ｇ、０．００４０ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ（１．８０ｇ、０．００４０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１５分間撹拌し、それに化合物５（０．７５ｇ、０．００３２ｍｍｏｌ）を添加した。冷却槽を取り除き、混合物を４時間撹拌し、氷水（２００ｍＬ）中に注ぎ入れ、酢酸エチル中に抽出した（３ ｘ １００ｍＬ）。有機層を２％クエン酸溶液（２ ｘ ５０ｍＬ）、２％重炭酸ナトリウム溶液（２ ｘ ５０ｍＬ）及びブライン（１ ｘ ５０ｍＬ）で洗浄し、それを無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下での溶媒蒸発により粗原料を得、それをｎ−ペンタンで数回洗浄して１．３０ｇの化合物９を生ぜしめた。
化合物９：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ ７．９０及び７．６５（２組のｔ、１Ｈ）、７．７５（ｄ、２Ｈ）、７．５５（ｑ、２Ｈ）、７．１５（ｍ、６Ｈ）、６．５５及び５．８０（２組のｄ、１Ｈ）、３．９０（ｍ、２Ｈ）、３．３０（ｄ、１Ｈ）、３．１０（ｍ、２Ｈ）、２．７５（ｍ、２Ｈ）、２．５０（ｍ、３Ｈ）、１．２０（ｓ、９Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ４７８（Ｍ＋Ｈ）、５００（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物１０の製造
１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）中の化合物９（０．４０ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）の溶液にジオキサン（１５ｍＬ）中の４Ｎ ＨＣｌを添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌し、減圧下で濃縮して残留物を得、それを酢酸エチルで数回洗浄し、真空下で乾燥させて０．３０ｇの化合物１０を生ぜしめた；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）はδ １．２０ｐｐｍのｔＢｏｃピークが全くないことを示した；ＭＳ ｍ／ｅ ３７８（Ｍ＋Ｈ）。
【００８０】
この物質を次の工程に直接用いた。
化合物１１の製造
化合物９の合成のために先に記述したのと同じ方法に従ってこの化合物を製造した。そのようにして、ＮＭＭ／ＨＯＢｔ／ＢＯＰの存在下で、化合物３（０．０７４ｇ、０．２３０５ｍｍｏｌ）及び１０（０．１００ｇ、０．２４２１ｍｍｏｌ）のカップリングにより０．１１７ｇの化合物１１（ジアステレオマー混合物）を生ぜしめ、それを直接次の工程に用いた。
化合物１１：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ７．８５（ｄ、２Ｈ）、７．５０（ｍ、３Ｈ）、７．２０（ｍ、５Ｈ）、７．４０−７．００（広幅、７Ｈ）、６．８０（広幅、１Ｈ）、５．５０及び５．１０（２組の広幅、１Ｈ）、４．５０（広幅、１Ｈ）、４．２０（広幅、１Ｈ）、３．７０−２．８０（一連のｍ、８Ｈ）、１．６５（ｓ、９Ｈ）、１．６０−１．３０（ｍ、５Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ６７９（Ｍ＋Ｈ）、７０１（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物１２の製造
化合物１０の合成のために先に記述したのと同じ方法に従ってこの化合物を製造した。そのようにして、０．１００ｇの化合物１１からジオキサン中４ＮのＨＣｌでのｂｏｃ−脱保護により０．０８８ｇの化合物１２を生ぜしめた；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）はｔＢｏｃピークが全くないことを示した。この物質を次の工程に直接用いた。
化合物１３の製造
化合物９の合成のために先に記述したのと同じ方法に従ってこの化合物を製造した。そのようにして、ＮＭＭ／ＨＯＢｔ／ＢＯＰの存在下で、化合物１２（０．０８５ｇ、０．１３８３ｍｍｏｌ）及び２（０．０５０ｇ、０．１２９７ｍｍｏｌ）のカップリングにより粗生成物を生ぜしめ、それを分取薄層クロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ2Ｃｌ2中４％のＭｅＯＨ）により精製して０．０５０ｇの１３をジアステレオマー混合物として生ぜしめた。
化合物１３：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ８．４０（広幅、１Ｈ）、８．００−６．８０（一連のｍ、２０Ｈ）、５．４０（広幅、１Ｈ）、４．３０及び４．１０（広幅、１Ｈ）、３．６０（広幅ｑ、２Ｈ）、３．５０−２．９０（一連のｍ、９Ｈ）、２．００−１．００（一連のｍ、２９Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ９４６（Ｍ＋Ｈ）、９６８（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物１の製造
無水塩化メチレン（４ｍＬ）中の化合物１３（０．０４５ｇ、０．０４７６ｍｍｏｌ）の冷却した（０℃）溶液にＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ）試薬（０．０４０ｇ、０．０９５２ｍｍｏｌ）を添加した。冷却槽を取り除き、混合物をもう１時間撹拌した。次に、それを塩化メチレン（１０ｍＬ）で希釈し、溶液を１０％チオ硫酸ナトリウム溶液（５ ｘ ５ｍＬ）、重炭酸ナトリウム飽和溶液（２ ｘ ５ｍＬ）及びブライン（１ ｘ ５ｍＬ）で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下での溶媒除去により残留物を得、それをｎ−ペンタン（８ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて０．０１７ｇの化合物１を生ぜしめた。
化合物１：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ８．４０（広幅、１Ｈ）、８．００−６．８０（一連のｍ、２０Ｈ）、５．５０（広幅、１Ｈ）、４．７０（広幅、１Ｈ）、３．６０（広幅ｑ、２Ｈ）、３．５０−２．９０（一連のｍ、８Ｈ）、２．００−１．００（一連のｍ、２８Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ９４４（Ｍ＋Ｈ）、９６６（Ｍ＋Ｎａ）。
【００８１】
実施例２
化合物１４の製造
合成に用いた構成単位を以下のスキーム４に示す。
【００８２】
【化９】
0004317920.tif 000008
【００８３】
化合物１の合成のために上に（スキーム３に）記述したのと同じ方法に従って構成単位２、３、１５及び１６から化合物１４を製造した。中間工程において塩化ベンゼンスルホニルの代わりに塩化３，４−ジクロロベンゼンスルホニルを用いたことを除いて、化合物５の合成のために先（スキーム２）に記述したのと同じ方法に従って化合物１６を製造した。
化合物１４：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ８．３０（広幅、１Ｈ）、７．９０（ｄ、１Ｈ）、７．７５（ｍ、１Ｈ）、７．６０（ｍ、２Ｈ）、７．５０（ｄ、２Ｈ）、７．７０−７．２０（一連の広幅、６Ｈ）、６．８０（広幅、１Ｈ）、５．３０（広幅、１Ｈ）、４．７０（広幅、１Ｈ）、３．６０（広幅ｔ、２Ｈ）、３．３５（広幅、４Ｈ）、３．１０（広幅、２Ｈ）、２．００−１．００（一連のｍ、３１Ｈ）、０．９０（ｑ、６Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ９７８及び９８２（塩素の異なる同位元素を有するＭ＋Ｈ）。
【００８４】
実施例３
化合物１７の製造
中間体からのＦｍｏｃ基を酢酸エチル中３０％のジエチルアミンで脱保護したことを除いて、化合物１の製造のために先に（スキーム３に）記述したのと同じ方法に従って化合物１０及び１８（Ｂａｃｈｅｍ、Ｋｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｒｕｓｓｉａ、ＰＡ）からこの化合物を製造した（以下のスキーム５を参照）。
【００８５】
【化１０】
0004317920.tif 000009
【００８６】
化合物１７：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ８．３５（広幅ｔ、１Ｈ）、７．８５（ｔ、２Ｈ）、７．７０（ｍ、１Ｈ）、７．５０（ｍ、２Ｈ）、７．３５−７．０５（ｍ、１１Ｈ）、６．９０（ｔ、１Ｈ）、６．５０（ｄ、１Ｈ）、６．００（ｔ、１Ｈ）、５．２０（ｔ、１Ｈ）、４．５０（広幅ｍ、１Ｈ）、３．７０（ｔ、２Ｈ）、３．６０−３．００（ｍ、８Ｈ）、２．００−１．００（ｍ、２８Ｈ）、１．４５（ｓ、１８Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ １０９９（Ｍ＋Ｈ）。
【００８７】
実施例４
化合物１９及び２０の製造
化合物１９及び２０の製造を以下のスキーム６に示す。
【００８８】
【化１１】
0004317920.tif 000010
【００８９】
化合物２３の製造
化合物９の合成のために先に記述したのと同じ方法に従ってこの化合物を製造した。そのようにして、ＮＭＭ／ＨＯＢｔ／ＢＯＰの存在下で、化合物２１（０．５３２ｇ、１．２０５２ｍｍｏｌ）及び２２（Ｏｘｆｏｒｄ  Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ、Ａｂｉｎｇｄｏｎ、ＵＫ、０．３３４ｇ、１．３２８９ｍｍｏｌ）のカップリングにより０．８１０ｇの化合物２３を生ぜしめた。
化合物２３：白色固体；Ｒf（ＴＬＣ、塩化メチレン中５％のメタノール）０．４３；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ８．４０（広幅、１Ｈ）、７．７５（ｄ、２Ｈ）、７．５５（ｄ、２Ｈ）、７．４０−７．００（ｍ、１３Ｈ）、５．６０（広幅ｄ、１Ｈ）、４．６０（広幅ｑ、１Ｈ）、４．３０（ｍ、２Ｈ）、４．１０（ｍ、３Ｈ）、３．２５（広幅、２Ｈ）、２．９０（広幅ｔ、２Ｈ）、２．００−１．２０（ｍ、５Ｈ）、１．３０（ｓ、９Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ６７５（Ｍ＋Ｈ）、６９７（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物２４の製造
化合物２３（０．４３７ｇ、０．６４７６ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（６ｍＬ）及び塩化メチレン（６ｍＬ）の混合物を室温で２時間撹拌した。溶液を真空中で濃縮して０．４０１ｇの化合物２４を生ぜしめ、それを次の工程に直接用いた；アリコートの1Ｈ−ＮＭＲスペクトルはδ １．３０ｐｐｍのｔＢｕピークがないことを示した；ＭＳ ｍ／ｅ ６１９（Ｍ＋Ｈ）。
化合物２５の製造
化合物９の合成のために先に記述したのと同じ方法に従ってこの化合物を合成した。そのようにして、ＮＭＭ／ＨＯＢｔ／ＢＯＰの存在下で、化合物２４（０．３９７ｇ、０．６４１７ｍｍｏｌ）及び７（０．１１３ｇ、０．７０５３ｍｍｏｌ）のカップリングにより０．３４０ｇの化合物２５を生ぜしめた；ＭＳ ｍ／ｅ ６６０（Ｍ−ｔＢｏｃ）、７６１（Ｍ＋Ｈ）、７８３（Ｍ＋Ｎａ）。この物質を次の工程に直接用いた。
化合物２６の製造
化合物２５（０．３２０ｇ、０．４２０６ｍｍｏｌ）及び酢酸エチル中３０％のジエチルアミン（６ｍＬ）の混合物を室温で１時間撹拌した。ＴＬＣにより出発原料の完全な消失が示された。反応混合物を真空中で濃縮して残留物を得、それを石油エーテルで数回洗浄して０．２２６ｇの化合物２６を生ぜしめ、それを次の工程に直接用いた。
化合物２７の製造
化合物９の合成のために先に記述したのと同じ方法に従ってこの化合物を製造した。そのようにして、ＮＭＭ／ＨＯＢｔ／ＢＯＰの存在下で、化合物２（０．１６２ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）及び２６（０．２２６ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）のカップリングにより粗生成物を生ぜしめ、それを分取薄層クロマトグラフィー（溶離剤：ＣＨ2Ｃｌ2中８％のＭｅＯＨ）により精製して０．０４０ｇの化合物２７を生ぜしめた。
化合物２７：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ８．４０（広幅、１Ｈ）、７．８０（ｍ、２Ｈ）、７．７０（ｍ、２Ｈ）、７．６０−７．００（ｍ、１０Ｈ）、６．７０（広幅、１Ｈ）、４．５０（広幅、２Ｈ）、４．１０（広幅、１Ｈ）、３．７０（ｔ、２Ｈ）、３．５０−３．００（一連のｍ、８Ｈ）、２．００−１．００（一連のｍ、２９Ｈ）、１．４０（ｓ、９Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ８０６（Ｍ＋Ｈ−ｔＢｏｃ）、９０６（Ｍ＋Ｈ）、９２８（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物１９の製造
化合物１の合成のために上（スキーム３）に記述したのと同じ方法に従ってこの化合物を製造した。そのようにして、０．０３５ｇの化合物２７のＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化により０．０２３ｇの化合物１９を生ぜしめた。
化合物１９：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ８．４０（広幅、１Ｈ）、８．００−７．００（一連のｍ、１４Ｈ）、６．８０（広幅、１Ｈ）、５．５０及び５．３０（２組の広幅、１Ｈ）、４．６０（広幅、１Ｈ）、３．７０（ｔ、２Ｈ）、３．５０−３．１０（一連のｍ、７Ｈ）、３．００（ｍ、１Ｈ）、２．００−１．００（一連のｍ、２８Ｈ）、１．４０（ｓ、９Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ９２６（Ｍ＋Ｎａ）、９４２（Ｍ＋Ｋ）。
化合物２０の製造
ｔＢｏｃ−脱保護（ジオキサン中４ＮのＨＣｌ、室温）により、化合物１９（０．０１８ｇ）から化合物２０（０．０１５ｇ）を生ぜしめた。
化合物２０：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ ８．６０（広幅、１Ｈ）、８．４０（広幅、１Ｈ）、８．２０（広幅、１Ｈ）、８．００−７．００（一連のｍ、１５Ｈ）、５．２０（広幅、１Ｈ）、４．２０（広幅、２Ｈ）、３．７０−２．７０（一連のｍ、９Ｈ）、２．００−０．９０（一連のｍ、２８Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ８０４（Ｍ＋Ｈ）。
化合物２８の製造
化合物２８の製造を以下のスキーム７に示す。
【００９０】
【化１２】
0004317920.tif 000011
【００９１】
酢酸エチル中３０％のジエチルアミンにより中間体の一つからＦｍｏｃ基を脱保護したことを除いて、上（スキーム３）に記述したのと同じ一般法に従って化合物１０及び２９（ＳＴＡＲ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）から製造した中間化合物３０から化合物２８を製造した。
化合物２８：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ７．８０（ｄ、２Ｈ）、７．７０（ｍ、１Ｈ）、７．５０（ｍ、２Ｈ）、７．４０−７．００（ｍ、１０Ｈ）、６．４０（広幅ｄ、１Ｈ）、６．２０（広幅ｄ、１Ｈ）、５．４０（広幅ｄ、１Ｈ）、５．２０（広幅ｄ、１Ｈ）、４．８０（広幅ｄ、１Ｈ）、４．５０（広幅、１Ｈ）、３．６５（ｔ、２Ｈ）、３．４０（広幅、２Ｈ）、３．３０−２．９０（広幅ｍ、６Ｈ）、２．００−１．００（ｍ、３０Ｈ）、１．６０（ｓ、９Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ８７１（Ｍ＋Ｈ−ｔＢｏｃ）、９７１（Ｍ＋Ｈ）、９９３（Ｍ＋Ｎａ）。
【００９２】
実施例６
化合物３４及び３５の製造
化合物３４及び３５の製造をスキーム８に示す：
【００９３】
【化１３】
0004317920.tif 000012
【００９４】
化合物３４の製造
化合物３０を上に（スキーム３に）記述したように脱保護して（ジオキサン中４ＮのＨＣｌ、室温、１時間）アミン塩３１を生ぜしめ、それを上記（スキーム２）のようにスルホニル化して（Ｅｔ3Ｎ、ＣＨ3ＳＯ2Ｃｌ、ＣＨ2Ｃｌ2、０℃〜室温、０．５時間）化合物３２を生ぜしめた。化合物３２のＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化により化合物３４を生ぜしめた。
化合物３４：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ７．８０（ｄ、２Ｈ）、７．７０（ｍ、１Ｈ）、７．５５（ｍ、２Ｈ）、７．４０−７．００（ｍ、１０Ｈ）、６．８０（ｍ、１Ｈ）、６．４０（ｄ、１Ｈ）、６．００（広幅ｄ、１Ｈ）、５．４０（広幅、１Ｈ）、５．２０（２組の広幅ｔ、１Ｈ）、４．５０（広幅ｄ、１Ｈ）、３．６５（ｔ、２Ｈ）、３．４０（広幅、２Ｈ）、３．３０−３．００（広幅ｍ、６Ｈ）、２．９０（ｄ、３Ｈ）、２．００−１．００（ｍ、３０Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ９４９（Ｍ＋Ｈ）、９７１（Ｍ＋Ｎａ）、９８７（Ｍ＋Ｋ）。
化合物３５の製造
スキーム３において上に記述したように、アミン塩、化合物３１をカルボニル化して（ピラジン−２−カルボン酸、ＮＭＭ、ＨＯＢｔ、ＢＯＰ、ＤＭＦ、０℃〜室温、１時間）化合物３３を生ぜしめた。化合物３３のＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化により化合物３５を生ぜしめた。
化合物３５：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ９．３５（ｓ、１Ｈ）、８．７０（ｓ、１Ｈ）、８．５０（ｓ、１Ｈ）、８．００（２組の広幅ｔ、１Ｈ）、７．８０−７．００（ｍ、１６Ｈ）、６．７０（ｔ、１Ｈ）、６．５０（広幅ｄ、１Ｈ）、５．４０（広幅、１Ｈ）、４．６０（広幅、１Ｈ）、ｔ，、１Ｈ）、３．６５（ｍ、２Ｈ）、３．４０（広幅、２Ｈ）、３．３０−２．８０（ｍ、６Ｈ）、２．００−１．００（ｍ、３０Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ９７７（Ｍ＋Ｈ）、９９９（Ｍ＋Ｎａ）、１０１５（Ｍ＋Ｋ）。
【００９５】
実施例７
化合物３６及び３７の製造
化合物３６及び３７の製造を以下のスキーム９に示す：
【００９６】
【化１４】
0004317920.tif 000013
【００９７】
化合物３６の製造
ｔＢｏｃ−脱保護（ジオキサン中４ＮのＨＣｌ、室温）により化合物２８（０．０５２ｇ）から化合物３６（０．０４１ｇ）を生ぜしめた。
化合物３６：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ ８．６５（広幅、１Ｈ）、８．２０（広幅、１Ｈ）、７．８０（広幅、１０Ｈ）、７．６０（広幅、３Ｈ）、７．１５（広幅、５Ｈ）、５．２０（広幅、１Ｈ）、４．２５（広幅、１Ｈ）、３．６０−２．６０（一連の広幅ｍ、１１Ｈ）、２．００−０．８０（ｍ、３０Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ８７１（Ｍ＋Ｈ）。
化合物３７の製造
ｔＢｏｃ−脱保護（ジオキサン中４ＮのＨＣｌ、室温、一晩）により化合物１７（０．０３４ｇ）から化合物３７（０．０２０ｇ）を生ぜしめた。
化合物３７：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）はｔＢｏｃ基がないことを示す；ＭＳ ｍ／ｅ ８９９（Ｍ＋Ｈ）。
【００９８】
実施例８
化合物３８及び３９の製造
【００９９】
【化１５】
0004317920.tif 000014
【０１００】
化合物３８及び３９を上記の方法に従って適切な出発原料から合成した。
化合物３８：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ ８．００−６．８０（一連のｍ、２０Ｈ）、５．６０（広幅、１Ｈ）、４．６０（広幅、１Ｈ）、３．６０（ｔ、２Ｈ）、３．５０−２．９０（一連のｍ、８Ｈ）、２．８０（ｓ、３Ｈ）、２．００−１．００（一連のｍ、２８Ｈ）。ＭＳ ｍ／ｅ ９５８（Ｍ＋Ｈ）、９８０（Ｍ＋Ｎａ）。
化合物３９：白色固体（ジアステレオマー混合物）；1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）スペクトルは２つの異性体の存在のために複雑なものである。ＭＳ ｍ／ｅ ８７２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１０１】
実施例９
ＭＣＰのキモトリプシン様活性のアッセイ
引用することにより本明細書に全部組み込まれる米国特許５，６１４，６４９中に記述されたように、ヒト肝臓から潜在状態で単離された酵素を用いてＭＣＰの２０Ｓ型のキモトリプシン様触媒活性を測定した。
【０１０２】
ＤＭＳＯに溶解したインヒビターのアリコート（５μｌ）を三重反復で９６ウェルプレートに分配した。ＭＣＰを活性化バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ ７．５）、０．０４％ ＳＤＳ）中に希釈し、希釈した酵素の８５μＬアリコートをインヒビター含有ウェルに添加し、混合物を２７℃で１５分間インキュベートした。１０μＬのＳｕｃ−ＬＬＶＹ−ＡＭＣ（１００μＭの最終濃度）の添加により反応を開始し、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒシリーズ４０００プレート読み取り蛍光計（λex＝３６０ｎｍ；λem＝４６０ｎｍ）を用いて１．５分間隔で２０分にわたって生成物形成を調べた。インヒビターの非存在下での基質加水分解はアッセイの全期間にわたって直線状であった。
【０１０３】
ＭＣＰキモトリプシン様活性の阻害をインヒビターの非存在下での基質加水分解の割合に対するその存在下での割合の減少パーセントとして計算した。７つの濃度の試験化合物の存在下での基質加水分解の割合の減少パーセントからインヒビターのＩＣ50値（５０％の阻害をもたらすインヒビターの濃度に相当する）を決定した。結果をｌｏｇインヒビター濃度に対する阻害パーセントとしてプロットし、プログラムＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を用いて以下に示した４パラメーター計算式にデータを調整することによりＩＣ50を計算した。
【０１０４】
ｙ＝ｄ＋［（ａ−ｄ）／（１＋ｘ／ｃ）b］
パラメーターａ、ｂ、ｃ及びｄは以下のように定義される：ａはインヒビターの非存在下での阻害％であり、ｂは傾きであり、ｃはＩＣ50であり、そしてｄはインヒビターの無限濃度での阻害％である。
【０１０５】
本発明の実施例を挙げる表１に結果を要約する。
【０１０６】
0004317920.tif 000015
実施例１０
化合物１のインビボ抗癌活性
ａ．材料：インビボ研究に用いる化合物１を２５％ソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）中に調合した。
【０１０７】
ｂ．細胞系：１０％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｌａｂｓ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）、２ｍＭ グルタミン（ＧｉｂｃｏＢＲＬ、Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）、ペニシリン（１００Ｉ．Ｕ．／ｍＬ）（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）及びストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を含有する４．５ｇ／ｌのグルコース（Ｃｅｌｌｇｒｏ／Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）を含むダルベッコの修正イーグル培地中、９５％空気／５％ ＣＯ2大気で、給湿インキュベーター中３７℃でマウス黒色腫細胞系、Ｂ１６−Ｆ０を増殖させた。細胞がマイコプラズマ及び齧歯類ウイルスを含まないことを決定した（ＭＡＰ試験）。５ｍＬの温かいトリプシン／ＥＤＴＡ（０．０５％、０．５ｍＭ）（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を用いて指数的に増殖する細胞を集めた。トリプシンを中和させるために完全培地で全容量を１０ｍＬにし、血球計算器で細胞を数えた。次に、短時間の遠心分離により細胞を集め、１ ｘ １０7生細胞／ｍｌの最終濃度を得るように細胞ペレットをリン酸緩衝食塩水（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）中に再懸濁した。
【０１０８】
ｃ．動物：Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮから入手したメスＣ５７ＢＬマウス（２０−２５ｇ）を５匹のマウス／檻で飼育し、市販の食餌及び水を随意に与えた。湿度及び温度を制御した条件下で動物を収檻し、明／暗周期を１２時間間隔に設定した。実験操作前１週間マウスを隔離した。
【０１０９】
ｄ．腫瘍細胞移植及び増殖：上記のように培養した指数的に増殖するＢ１６−Ｆ０細胞を集め、マウスの右脇腹に注射した（１ ｘ １０6細胞／マウス）。０．０１−０．３ｃｍ3の大きさの腫瘍を保有する５０匹の動物を各１０匹の５群に分けた。化合物１を１０ｍｇ／ｋｇ／日、ｉｐで投与し；ビヒクル（２５％ソルトール）を１ｍｌ／ｋｇ／日、ｉｐで投与した。
【０１１０】
ｅ．腫瘍測定：２〜３日毎に副尺付きノギスを用いて腫瘍を測定した。腫瘍体積を式：
Ｖ（ｃｍ）3＝．５２３６ｘ長さ（ｃｍ）ｘ 幅（ｃｍ）［（長さ（ｃｍ）＋ 幅（ｃｍ））／２］
を用いて計算した。インビボ研究からの結果を図１に示し、ここで、全て、Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｏｌｓ試験によりビヒクルコントロールに対して、「ｘ」はｐ＜０．０５を表し；「ｘｘ」はｐ＜０．０１を表し；そして「ｘｘｘ」はｐ＜０．００１を表す。
【０１１１】
それらの結果は腫瘍体積を減少することにおける化合物１の有効性を示す。
【０１１２】
本特許書類中に記載される特許、出願及び発行された（ｐｒｉｎｔｅｄ）公開は引用することにより本明細書に全部組み込まれると考えられる。
【０１１３】
当業者が認識するように、本発明の趣旨からそれずに本発明の好ましい態様に対して多数の変更及び改変を行うことができる。全てのそのような変形は本発明の範囲内に入ると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  Ｂ１６−Ｆ０マウス黒色腫腫瘍を保有するメスＣ５７ＢＬマウスをビヒクルのみまたは１０ｍｇ／ｋｇ／日の化合物１のいずれかでｉｐで９日間処置したインビボ研究からの結果を示す。
【図１】
0004317920.tif 000019