(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬剤の投与を受けた患者の血小板におけるインテグリンα２の発現量を測定する工程、及び、測定された発現量に基づき血小板以外の、血管新生が起こり得る組織の細胞又は腫瘍細胞である細胞に対する該薬剤の影響を判定する工程を含んで成る、該細胞に対する該薬剤の影響を検定する方法。
【請求項２】
前記細胞が血管内皮細胞又は腫瘍細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
インテグリンα２の発現量を、免疫化学的方法により測定する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
免疫化学的方法がフローサイトメトリーである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
インテグリンα２の発現量を、インテグリンα２をコードするmRNAの量を測定することにより測定する請求項１に記載の方法。
【請求項６】
mRNAの量を定量的PCRにより測定する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
薬剤が、一般式(I)
【化１】
0004255285.tif 000007
〔式中、
Ｂは置換基を有していてもよく、環の一部が飽和されていても良い、C6-C10アリール環または6員ないし10員ヘテロアリール環を、
Ｋは単結合、-CH=CH-、または-(CR4bR5b)mb-（式中、R4bおよびR5bは同一または相異なって水素原子、C1-C4アルキル基を、mbは1または2の整数を意味する。）を、
Ｒ1は水素原子またはC1-C6アルキル基を、
Ｚは単結合または-CO-NH-を、
Ｒは置換基を有していてもよく、環の一部が飽和されていても良い、C6-C10アリール環または6員ないし10員ヘテロアリール環を、それぞれ意味する。〕で表されるスルホンアミド化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの水和物である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
Ｒがインドール、キノリン、またはイソキノリンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
薬剤が、一般式(Ia)
【化２】
0004255285.tif 000008
[式中、
Ａa環は置換基を有していてもよい、単環式または二環式芳香環を、
Ｂa環は置換基を有していてもよい、６員環式不飽和炭化水素またはヘテロ原子として窒素原子を１個含む不飽和６員ヘテロ環を、
Ｃa環は置換基を有していてもよい、窒素原子を１または２個含む５員ヘテロ環を、
Ｒ1aは水素原子またはC1-C6アルキル基を、
Ｗaは単結合または-CH=CH-を、
Ｙaは炭素原子または窒素原子を、
Ｚaは-N(R2a)-（式中、R2aは水素原子または低級アルキル基を意味する。）、または窒素原子を、それぞれ示す。]で表わされるスルホンアミド化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの水和物である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
Ｗaが単結合である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｗaが単結合であり、Ｚaが-NH-であり、かつＹaが炭素原子である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
Ｂa環が置換基を有していてもよいベンゼンまたはピリジンである、請求項９〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
Ｃa環が置換基を有していてもよいピロールである、請求項９〜１２いずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
Ａa環が置換基を有していてもよいベンゼンまたはピリジンであり、Ｂa環が置換基を有していてもよいベンゼンであり、Ｃa環が置換基を有していてもよいピロールであり、Ｗaが単結合であり、Ｚaが-NH-である、請求項９に記載の方法。
【請求項１５】
薬剤が、一般式(Ib)
【化３】
0004255285.tif 000009
[式中、
Abは水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ハロゲン原子で置換されていてもよいC1-C4アルキル基またはアルコキシ基、シアノ基、-(CO)kbNR2bR3b（式中、 R2bおよびR3bは同一または相異なって水素原子またはハロゲン原子で置換されていてもよいC1-C4アルキル基を
意味し、kbは０または１を意味する。）、置換基を有していてもよいC2-C4のアルケニル基またはアルキニル基、または下記A群から選ばれる置換基を有していてもよいフェニル基またはフェノキシ基を、
Bbは下記A群から選ばれる置換基を有していてもよいアリール基または単環ヘテロアリール基、または
【化４】
0004255285.tif 000010
（式中、環Qbは１つまたは２つの窒素原子を有していてもよい芳香環を、環Mbは環Qbと二重結合を共有するC5-C12不飽和の単環または複環を意味し、当該環は、窒素原子、酸素原子、硫黄原子から選ばれる１から４のヘテロ原子を有していてもよい。環Qbおよび環Mbは窒素原子を共有する場合がある。また、環Qbおよび環Mbは下記A群から選ばれる置換基を有していてもよい。）を、
Kbは単結合、または-(CR4bR5b)mb-（式中、R4bおよびR5bは同一または相異なって水素原子、C1-C4アルキル基を、mbは1または2の整数を意味する。）を、
Tb、Wb、XbおよびYbは同一または相異なって=C(Db)-[式中、Dbは水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ハロゲン原子で置換されていてもよいC1-C4アルキル基またはアルコキシ基、シアノ基、-(CO)nbNR6bR7b（式中、R6bおよびR7bは同一または相異なって水素原子またはハロゲン原子で置換されていてもよいC1-C4アルキル基を意味し、nbは０または１を意味する。）、または置換基を有していてもよいC2-C4のアルケニル基またはアルキニル基を、それぞれ示す]、または窒素原子を、
UbおよびVbは同一または相異なって、=C(Db)-（式中、Dbは前記を意味する。）、窒素原子、-CH2-、酸素原子または-CO-を、
Zbは単結合または-CO-NH-を、
R1bは水素原子またはC1-C4アルキル基を、
【化５】
0004255285.tif 000011
は単結合または二重結合を意味する。）
A群：ハロゲン原子、水酸基、ハロゲン原子で置換されていてもよいC1-C4アルキル基またはアルコキシ基、シアノ基、-R8bR9bN(NH)pb-（式中、R8bおよびR9bは同一または相異なって水素原子またはハロゲン原子で置換されていてもよいC1-C4アルキル基を意味し、pbは０または１を意味する。また、R8bおよびR9bは結合している窒素原子と一緒になって５または６員式環を形成してもよく、当該環はさらに窒素原子、酸素原子または硫黄原子を含んでいてもよく、置換基を有していてもよい。）、モノまたはジC1-C4アルキル基で置換されていてもよいアミノスルホニル基、置換基を有していてもよいC1-C8アシル基、C1-C4アルキル-S(O)sb-C1-C4アルキレン基（式中、sbは０、１または２の整数を意味する。）、C1-C4アルキルまたは置換基を有していてもよいフェニルスルホニルアミノ基、-(CO)qbNR10bR11b（式中、R10bおよびR11bは同一または相異なって水素原子、またはハロゲン原子またはC1-C4アルキル基で置換されていてもよいアミノ基で置換されていてもよいC1-C4アルキル基を意味し、qbは０または１を意味する。）、または置換基を有していてもよいアリール基またはヘテロアリール基を意味する。]で表わされるスルホンアミド含有複素環化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの水和物である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
UbおよびVbが=C(Db)-（式中、Dbは前記を意味する。）、または窒素原子である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
Zbが単結合である、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
Tb、Ub、Vb、Wb、XbおよびYbの少なくとも一つが窒素原子である、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
Abがハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいC1-C4アルキル基またはアルコキシ基、シアノ基、-(CO)rbNR12bR13b（式中、R12bおよびR13bは同一または相異なって水素原子またはハロゲン原子で置換されていてもよいC1-C4アルキル基を意味し、rbは０または１を意味する。）、または置換基を有していてもよいC2-C4のアルケニル基またはアルキニル基である、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
Tb、Ub、Vb、Wb、XbまたはYbのうち一つのみが窒素原子である、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
Tb、WbまたはYbの一つのみが窒素原子である、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
薬剤が、Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの水和物である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
血小板以外の細胞が、血管新生が起こり得る組織の細胞であり、前記細胞に対する影響が血管新生抑制作用として判定される請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
血小板以外の細胞が腫瘍細胞であり、前記細胞に対する影響が腫瘍増殖抑制作用として判定される請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、インテグリンの発現に影響を与える薬剤、好ましくは血管新生抑制剤の効果を検定する方法に関する。
背景技術
癌は死亡率の高い疾患であり、抗癌剤による治療の目的は一般に患者ＱＯＬの向上及び生存期間の延長にある。しかし、薬剤による延命効果を短期間で判定することは困難であり、腫瘍縮小率や血中腫瘍抗原量が、治療効果の指標となる代理（ｓｕｒｒｏｇａｔｅ）マーカーとして使用されている。
また、抗癌剤の臨床治験においても、延命期間を薬剤の効果判定に用いた場合には長期の試験が必要となるため、比較的短期間で評価可能である腫瘍縮小率が代理マーカーとして利用されてきた。しかし、腫瘍縮小率は必ずしも延命の指標とならないことが指摘されている。そこで、腫瘍縮小率に加え、増悪抑制期間（ｔｉｍｅ  ｔｏ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）、無病期間（ｄｅｃｅａｓｅ  ｆｒｅｅ  ｓｕｒｖｉｖａｌ）、生物学的マーカーなどを代理マーカーとして用いることが試みられているが、これらの方法は未だ確立していない。
薬剤の投与により引き起こされ、かつ生存期間の延長と密接に関連する変化を示す生物学的マーカーを代理マーカーとして利用することができれば、臨床試験において適正な治療方法を容易に決定でき、治療時には薬剤の治療効果の指標としての使用が可能となると考えられる。
代理マーカーとしては次のものが報告されている。
糖タンパクＥｐＣＡＭに対する抗体Ｐａｎｏｒｅｘは、最初に大腸癌細胞の腫瘍マーカーとして見出され、後に接着分子として同定されたが、骨髄中に残存する微小癌細胞消失の代理マーカーとして生存率との相関性が検討されており（Ｓｔｅｐｈａｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９９，５，３９９９−４００４）、平行して大規模な第三相臨床試験が進行中である。
前立腺特異抗原（ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ）は、前立腺癌のホルモン療法の代理マーカーとして、至適投与量の決定に用いられた（Ｄｅｎｉｓ  Ｌ  ａｎｄ  Ｍａｈｌｅｒ  Ｃ．Ｕｒｏｌｏｇｙ，１９９６，４７（１Ａ  Ｓｕｐｐｌ），２６−３２．）。
血管新生阻害剤に関する代理マーカーの使用としては、マトリックスメタロプロテイナーゼインヒビター（ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ＢＭＳ２７５２９１の第一相臨床試験で、皮膚に穴を開けたときの創傷治癒の血管新生を指標とする方法が検討され、また別のマトリックスメタロプロテイナーゼインヒビターで、腫瘍部位での酵素活性をマーカーとする方法が報告されている（Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，２０００，６（８），３２９０−６）。
また血管新生阻害剤は、癌以外の疾患、例えば動脈硬化症・糖尿病性網膜症・網膜静脈閉塞症・未熟児網膜症・加齢黄斑変性・血管新生緑内障・関節リュウマチ・小児関節リュウマチ・乾せん・血管腫・血管線維腫等の有効な治療薬となることが期待される。これらの疾患においても、血管新生の代理マーカーが見出されれば、それを指標として薬剤の適切な投与量を設定し、薬剤の効果や使用期間を判断することが可能となる。
インテグリンは細胞表面に発現される細胞接着分子で、α鎖とβ鎖から構成されている。インテグリンは細胞外マトリックス膜タンパクと細胞との接着、または細胞間の接着に関与している。細胞接着分子がインテグリンに結合すると、細胞内のシグナル系が動きだし、その結果、細胞接着だけでなく、細胞進展、細胞増殖、アポトーシス、分化、細胞骨格配向、細胞移動、組織形成、癌の浸潤・転移、創傷治癒、血液凝固などが稼働する。
これらのインテグリンの中で、インテグリンα２β１はコラーゲン、ラミニンなどを接着分子としており、血管新生時における血管内皮細胞のチューブ形成に関与すること（Ｇｅｏｒｇｅ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．１９９６．２２４，３９−５１）が知られている。
また、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、インテグリンα１とインテグリンα２の抗体がＶＥＧＦによる血管新生を抑制した（Ｄｏｎａｌｄ  ＲＳ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．１９９７．９４．１３６１２−１３６１７）と報告されている。
インテグリンαｖβ３は血管新生を起こしている内皮細胞に特異的に存在し、ニワトリ胚漿尿膜を使用した血管新生モデルにおいてインテグリンαｖβ３中和抗体（ＬＭ６０９）が繊維芽細胞増殖因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）−２（ＦＧＦ−２）による血管新生を抑制した（Ｂｒｏｏｋ，Ｐ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４，２６４，５６９−５７１）と報告されている。また、ＦＧＦ−２，腫瘍壊死因子（ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ）−αによる血管新生にはインテグリンαｖβ３が関与し、血管内皮増殖因子（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）（ＶＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）−αによる血管新生にはインテグリンαｖβ５が関与する（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，２７０，１５００−１５０２）と報告されている。抗インテグリンαｖβ３抗体、インテグリンαｖβ３阻害剤は現在、臨床試験中である。
発明の開示
本発明の課題は、インテグリン、好ましくはインテグリンα２の発現に影響を与え、血管新生を抑制する薬剤の代理マーカーを見出すことにある。
本発明者らは、インテグリンα２の発現抑制を介して血管新生を阻害する、式（ＩＩ）の化合物（以下、化合物Ａと称す）を代表とする薬剤により、インテグリンα２の発現が低下し血管新生が減少して癌細胞の増殖が抑制される様な条件の下では、末梢血の血小板表面のインテグリンα２の発現も減少することを見出した。
0004255285.tif 000002
そして、末梢血血小板表面のインテグリンα２量が、血管新生抑制の代理マーカーとして有用であることを見出して本発明を完成させた。
すなわち本発明は、以下のものを提供する。
１．薬剤の投与を受けた患者の血小板におけるインテグリンの発現量を測定する工程、及び、測定された発現量に基づき血小板以外の細胞におけるインテグリンの発現に対する該薬剤の影響を判定する工程を含んで成る、該薬剤のインテグリンの発現に対する影響を検定する方法。
２．インテグリンがインテグリンα２である、１に記載の方法。
３．インテグリンの発現量を、免疫化学的方法により測定する、１に記載の方法。
４．免疫化学的方法がＦＡＣＳ法である３に記載の方法。
５．３に記載の方法において使用するインテグリンの定量試薬。
６．インテグリンの発現量を、インテグリンをコードするｍＲＮＡの量を測定することにより測定する１に記載の方法。
７．ｍＲＮＡの量を定量的ＰＣＲにより測定する、６に記載の方法。
８．６に記載の方法において使用するインテグリンをコードするｍＲＮＡの定量試薬。
９．薬剤が、一般式（Ｉ）
0004255285.tif 000003
〔式中、
Ｂは置換基を有していてもよく、環の一部が飽和されていても良い、Ｃ６−Ｃ１０アリール環または６員ないし１０員ヘテロアリール環を、
Ｋは単結合、−ＣＨ＝ＣＨ−、または−（ＣＲ４ｂＲ５ｂ）ｍｂ−（式中、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂは同一または相異なって水素原子、Ｃ１−Ｃ４アルキル基を、ｍｂは１または２の整数を意味する。）を、
Ｒ１は水素原子またはＣ１−Ｃ６アルキル基を、
Ｚは単結合または−ＣＯ−ＮＨ−を、
Ｒは置換基を有していてもよく、環の一部が飽和されていても良い、Ｃ６−Ｃ１０アリール環または６員ないし１０員ヘテロアリール環を、それぞれ意味する。〕で表されるスルホンアミド化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの水和物である、２に記載の方法。
１０．Ｒがインドール、キノリン、またはイソキノリンである、９に記載の方法。
１１．薬剤が、一般式（Ｉａ）
0004255285.tif 000004
［式中、
Ａａ環は置換基を有していてもよい、単環式または二環式芳香環を、
Ｂａ環は置換基を有していてもよい、６員環式不飽和炭化水素またはヘテロ原子として窒素原子を１個含む不飽和６員ヘテロ環を、
Ｃａ環は置換基を有していてもよい、窒素原子を１または２個含む５員ヘテロ環を、
Ｒ１ａは水素原子またはＣ１−Ｃ６アルキル基を、
Ｗａは単結合または−ＣＨ＝ＣＨ−を、
Ｙａは炭素原子または窒素原子を、
Ｚａは−Ｎ（Ｒ２ａ）−（式中、Ｒ２ａは水素原子または低級アルキル基を意味する。）、または窒素原子を、それぞれ示す。］で表わされるスルホンアミド化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの水和物である、２に記載の方法。
１２．Ｗａが単結合である、１１に記載の方法。
１３．Ｗａが単結合であり、Ｚａが−ＮＨ−であり、かつＹａが炭素原子である、１１に記載の方法。
１４．Ｂａ環が置換基を有していてもよいベンゼンまたはピリジンである、１１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
１５．Ｃａ環が置換基を有していてもよいピロールである、１１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
１６．Ａａ環が置換基を有していてもよいベンゼンまたはピリジンであり、Ｂａ環が置換基を有していてもよいベンゼンであり、Ｃａ環が置換基を有していてもよいピロールであり、Ｗａが単結合であり、Ｚａが−ＮＨ−である、１１に記載の方法。
１７．薬剤が、一般式（Ｉｂ）
0004255285.tif 000005
［式中、
Ａｂは水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基またはアルコキシ基、シアノ基、−（ＣＯ）ｋｂＮＲ２ｂＲ３ｂ（式中、Ｒ２ｂおよびＲ３ｂは同一または相異なって水素原子またはハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基を意味し、ｋｂは０または１を意味する。）、置換基を有していてもよいＣ２−Ｃ４のアルケニル基またはアルキニル基、または下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいフェニル基またはフェノキシ基を、
Ｂｂは下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよいアリール基または単環ヘテロアリール基、または
0004255285.tif 000006
（式中、環Ｑｂは１つまたは２つの窒素原子を有していてもよい芳香環を、環Ｍｂは環Ｑｂと二重結合を共有するＣ５−Ｃ１２不飽和の単環または複環を意味し、当該環は、窒素原子、酸素原子、硫黄原子から選ばれる１から４のヘテロ原子を有していてもよい。環Ｑｂおよび環Ｍｂは窒素原子を共有する場合がある。また、環Ｑｂおよび環Ｍｂは下記Ａ群から選ばれる置換基を有していてもよい。）を、
Ｋｂは単結合、または−（ＣＲ４ｂＲ５ｂ）ｍｂ−（式中、Ｒ４ｂおよびＲ５ｂは同一または相異なって水素原子、Ｃ１−Ｃ４アルキル基を、ｍｂは１または２の整数を意味する。）を、
Ｔｂ、Ｗｂ、ＸｂおよびＹｂは同一または相異なって＝Ｃ（Ｄｂ）−［式中、Ｄｂは水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基またはアルコキシ基、シアノ基、−（ＣＯ）ｎｂＮＲ６ｂＲ７ｂ（式中、Ｒ６ｂおよびＲ７ｂは同一または相異なって水素原子またはハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基を意味し、ｎｂは０または１を意味する。）、または置換基を有していてもよいＣ２−Ｃ４のアルケニル基またはアルキニル基を、それぞれ示す］、または窒素原子を、
ＵｂおよびＶｂは同一または相異なって、＝Ｃ（Ｄｂ）−（式中、Ｄｂは前記を意味する。）、窒素原子、−ＣＨ２−、酸素原子−または−ＣＯ−を、
Ｚｂは単結合または−ＣＯ−ＮＨ−を、
Ｒ１ｂは水素原子またはＣ１−Ｃ４アルキル基を、
−−−は単結合または二重結合を意味する。）
Ａ群：ハロゲン原子、水酸基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基またはアルコキシ基、シアノ基、−Ｒ８ｂＲ９ｂＮ（ＮＨ）ｐｂ−（式中、Ｒ８ｂおよびＲ９ｂは同一または相異なって水素原子またはハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基を意味し、ｐｂは０または１を意味する。また、Ｒ８ｂおよびＲ９ｂは結合している窒素原子と一緒になって５または６員式環を形成してもよく、当該環はさらに窒素原子、酸素原子または硫黄原子を含んでいてもよく、置換基を有していてもよい。）、モノまたはジＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノスルホニル基、置換基を有していてもよいＣ１−Ｃ８アシル基、Ｃ１−Ｃ４アルキル−Ｓ（Ｏ）ｓｂ−Ｃ１−Ｃ４アルキレン基（式中、ｓｂは０、１または２の整数を意味する。）、Ｃ１−Ｃ４アルキルまたは置換基を有していてもよいフェニルスルホニルアミノ基、−（ＣＯ）ｑｂＮＲ１０ｂＲ１１ｂ（式中、Ｒ１０ｂおよびＲ１１ｂは同一または相異なって水素原子、またはハロゲン原子またはＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基を意味し、ｑｂは０または１を意味する。）、または置換基を有していてもよいアリール基またはヘテロアリール基を意味する。］で表わされるスルホンアミド含有複素環化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの水和物である、２に記載の方法。
１８．ＵｂおよびＶｂが＝Ｃ（Ｄｂ）−（式中、Ｄｂは前記を意味する。）、または窒素原子である、１７に記載の方法。
１９．Ｚｂが単結合である、１７または１８に記載の方法。
２０．Ｔｂ、Ｕｂ、Ｖｂ、Ｗｂ、ＸｂおよびＹｂの少なくとも一つが窒素原子である、１７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
２１．Ａｂがハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基またはアルコキシ基、シアノ基、−（ＣＯ）ｒｂＮＲ１２ｂＲ１３ｂ（式中、Ｒ１２ｂおよびＲ１３ｂは同一または相異なって水素原子またはハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基を意味し、ｒｂは０または１を意味する。）、または置換基を有していてもよいＣ２−Ｃ４のアルケニル基またはアルキニル基である、１７〜２０のいずれか一項に記載の方法。
２２．Ｔｂ、Ｕｂ、Ｖｂ、Ｗｂ、ＸｂまたはＹｂのうち一つのみが窒素原子である、１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
２３．Ｔｂ、ＷｂまたはＹｂの一つのみが窒素原子である、１７〜２２のいずれか一項に記載の方法。
発明を実施するための最良の形態
本発明の方法は、該薬剤のインテグリンの発現に対する影響を検定する方法であって、薬剤の投与を受けた患者の血小板におけるインテグリンの発現量を測定する工程、及び、測定された発現量に基づき血小板以外の細胞におけるインテグリンの発現に対する該薬剤の影響を判定する工程を含むことを特徴とする。
インテグリンはインテグリンα２であることが好ましい。インテグリンα２は、細胞表面に発現される接着分子のインテグリンファミリーの一つである。ヒトインテグリンα２の配列は、ＧｅｎＢａｎｋにＡｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＮＭ＿００２２０３で登録されている。
上記化合物Ａは、特にインテグリンα２発現を低下させて、血管新生阻害作用および抗腫瘍増殖作用を示す。従って、血小板上のインテグリンα２発現量を測定することにより、化合物Ａにより代表される薬剤の効果を一層高感度で判定することができる。
患者への薬剤の投与量や投与方法は特に限定されず、その薬剤の目的に適合したものでよい。本発明の方法は、経口投与などの全身的投与による薬剤の影響を検定するのに用いることが好ましい。
血小板以外の細胞は、特に限定されないが、血管新生が起こり得る組織の細胞であることが好ましく、例えば、腫瘍組織の血管内皮細胞が挙げられる。また、インテグリンα２を介して細胞増殖・アポトーシス・分化といったシグナルが伝達される線維芽細胞、腫瘍細胞、例えばメラノーマ細胞であることが好ましい。更にインテグリンα２は単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞で発現が確認されているので、これらの細胞も挙げられる。本発明の方法は、これらの細胞の機能を推定するのにも役立つ。
血小板におけるインテグリンの発現量の測定方法は特に限定されず、免疫化学的方法などにより測定してもよいし、インテグリンをコードするｍＲＮＡの量を測定してもよい。
インテグリンの発現量の免疫化学的方法による測定方法としては、ＦＡＣＳ法が挙げられる。ＦＡＣＳ法は、蛍光活性化セルソーターを用いて、蛍光標識抗体により免疫化学的に染色した細胞の蛍光強度などを測定する方法である。
インテグリンをコードするｍＲＮＡの量の測定方法としては、定量的ＰＣＲが挙げられる。
以下に、発現量の測定工程の一態様について、１．血小板の分離、２．血小板表面のインテグリン量の定量、３．血小板中のインテグリンｍＲＮＡ量の定量の順に詳細に説明する。
１．血小板の分離
血小板の分離は遠心・ゲル濾過・フローサイトメトリー等の技術によりできる。
１）．遠心分離：血液に１０％量の３．８％クエン酸ナトリウム水溶液を加え、１００ｇ，１０ｍｉｎ，室温で遠心する。上層を多血小板血漿とし、これを１５００ｇ，１０ｍｉｎで遠心することにより沈査から血小板を得る。
２）．フローサイトメトリー：ＰＢＳ等にて希釈した血液をフローサイトメーターに流し、レーザー光線あるいは類似の光線をあてる。そのとき発生する前方散乱光および側方散乱光の強度にて血小板と他の血球とを分離することが可能である。
２．血小板表面のインテグリン量の定量
血小板表面のインテグリン量の定量は免疫化学的方法、例えば免疫組織染色・ＥＬＩＳＡ・ウェスタンブロット・フローサイトメトリー等の技術により測定できる。ＥＬＩＳＡでは、例えば固相化した血小板の表面抗原に対する抗体で血小板を固相に結合させ、洗浄後標識した抗インテグリン抗体を反応させて、結合した標識の量から血小板表面のインテグリンを定量できる。またウェスタンブロットでは、例えば分離した血小板をＳＤＳを含む緩衝液に可溶化後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ・ウェスタンブロットを行い、メンブレン上にブロットされたインテグリンを標識した抗インテグリン抗体により定量することができる。この際、同時に血小板表面抗原に対する抗体で血小板の量を定量すれば、血小板当たりのインテグリンの量を定量することも可能である。
フローサイトメトリーでは、例えば全血を希釈し標識した抗インテグリン抗体を結合させて、前方散乱光および側方散乱光により血小板分画を分離し、血小板上の蛍光強度を測定することにより血小板上のインテグリンの量を定量できる。以下にフローサイトメトリーについて具体的に説明するが、本発明はこれにより限定されない。フローサイトメトリーによれば、血小板を分離することなく全血を用いて、インテグリン量の定量が可能である。
血液４μｌを０．００３８％クエン酸ナトリウム水溶液を含むＰＢＳ３９６μｌにて希釈する。ＦＩＴＣで標識したインテグリンに対する抗体、好ましくはインテグリンα２に対する抗体、マウスであれば例えば抗マウスＣＤ４９ｂ  ＦＩＴＣ標識（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｃａｔ．ＢＤ−５５８７５７）、ヒトであれば抗ヒトＣＤ４９ｂ  ＦＩＴＣ標識（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｃａｔ．ＢＤ−５５５４９８）を０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳにて適当な濃度に希釈する。この抗体１０μｌを希釈した血液９０μｌに加える。室温にて６０ｍｉｎ反応させ、フィルター（ＦＡＬＣＯＮ，Ｃａｔ．２２３５）に通す。ＰＢＳ９００μｌを加え、フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）にて前方散乱光および側方散乱光により血小板分画を分離し、血小板上の蛍光強度を測定することにより血小板上のインテグリン、好ましくはインテグリンα２の量を定量する。
３．血小板中のインテグリンｍＲＮＡ量の定量
１）．ＲＮＡの抽出
ＲＮＡはチオシアン酸グアニジン法、フェノール法等により抽出できる。分離した血小板をＩＳＯＧＥＮ  １ｍｌにて溶解し、室温に５ｍｉｎ放置する。クロロホルム０．２ｍｌを加え、攪拌して２ｍｉｎ放置する。１３０００ｒｐｍ，１５ｍｉｎ，４℃（ＭＸ−１５０，ＴＯＭＹ，Ｒｏｔｏｒ  ＴＭＡ−１１）で遠心し、上清を別のチューブに移す。イソプロパノール０．５ｍｌを加え、室温に５ｍｉｎ放置する。１３０００ｒｐｍ，１０ｍｉｎ，４℃（ＭＸ−１５０，ＴＯＭＹ，Ｒｏｔｏｒ  ＴＭＡ−１１）で遠心し、上清を捨てる。７０％エタノール水溶液１ｍｌを加え、１５０００ｒｐｍ，１５ｍｉｎ，４℃（ＭＸ−１５０，ＴＯＭＹ，Ｒｏｔｏｒ  ＴＭＡ−１１）で遠心する。上清を捨て、ＲＮａｓｅフリーＨ２Ｏにて溶解する。
２）．ＲＮＡの定量
ＲＮＡはノーザンブロット解析、ドットブロット解析、ＲＮａｓｅプロテクションアッセイ、コンパラティブ（ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ）ＲＴ−ＰＣＲ、コンペティティブ（ｃｏｍｐｅｔｉｉｖｅ）ＲＴ−ＰＣＲ、定量的ＰＣＲ等の技術により定量出来る。好ましくは定量的ＰＣＲであることが望ましい。以下に定量的ＰＣＲの技術について説明するが、本発明はこれにより限定されない。定量的ＰＣＲはＴａｑＭａｎプローブとＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７７００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、次のように行う。
操作は逆転写反応及びＰＣＲ反応の２段階で行う。最初の段階である逆転写反応は、得られたＲＮＡにｄＮＴＰ・ｏｌｉｇｏ  ｄ（Ｔ）１６プライマー・Ｒｎａｓｅインヒビター・Ｍｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を加え、２５℃にて１０分間保温後、４８℃にて３０分間加熱することにより行う。反応を９５℃５分間加熱することにより停止させる。
得られたｃＤＮＡを第２段階のＰＣＲ反応に供する。ＰＣＲ反応は、例えば２．５ｎｇ  ｃＤＮＡ、１ｘＴａｑＭａｎ  ＰＣＲ  ｂｕｆｆｅｒ、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、各２００μＭ  ｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ、４００μＭ  ｄＵＴＰ、２００ｎＭプライマー対、０．０１Ｕ／μｌ  ＡｍｐＥｒａｓｅ  ＵＮＧ、０．０２５Ｕ／μｌ  ＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の反応系で行う。反応条件は５０℃２分間、９５℃１０分間に次いで９５℃２０秒間・５５℃２０秒間・７２℃３０秒間を４０サイクルで行う。プライマーとプローブはＰｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて設計する。複数検体の比較は、定量値を各検体の転写量に変動の少ないハウスキーピング遺伝子、好ましくはＧＡＰＤＨのｍＲＮＡレベルにより補正して行う。
上記のような発現量の測定工程により測定された発現量に基づき血小板以外の細胞におけるインテグリンの発現に対する該薬剤の影響が判定される。この判定は、血小板におけるインテグリンの発現量が血小板以外の細胞におけるインテグリンの発現量に相関することに基づいて行うことができる。すなわち、血小板における発現量が減少すれば、薬剤は、血小板以外の細胞におけるインテグリンの発現を減少させる影響があると判定でき、逆に血小板における発現量が増加すれば、薬剤は、血小板以外の細胞におけるインテグリンの発現を増加させる影響があると判定できる。
本発明は、また、本発明の方法において使用する定量試薬を提供する。
第１の態様の定量試薬は、また、薬剤の投与を受けた患者の血小板におけるインテグリンの発現量を免疫化学的方法により測定する工程、及び、測定された発現量に基づき血小板以外の細胞におけるインテグリンの発現に対する該薬剤の影響を判定する工程を含んで成る、該薬剤のインテグリンの発現に対する影響を検定する方法に使用するインテグリンの定量試薬である。
この態様の定量試薬の構成成分は、インテグリンを免疫化学的に定量するのに使用される試薬と同様でよい。この態様の定量試薬は、免疫化学的方法による測定の方法に応じて、定量試薬の製造に通常に用いられる技術を選択して用いることにより製造することができる。通常には、抗インテグリン抗体を含む。抗インテグリン抗体は、蛍光物質により標識されていてもよい。
定量試薬が複数の構成成分から構成される場合には、キットとされてもよい。また、定量試薬は、定量試薬に用いるのに許容可能な担体をさらに含む組成物とされてもよい。例えば、キットには、蛍光標識したインテグリンα２に対するモノクローナル抗体、または、インテグリンα２に対するモノクローナル抗体と蛍光標識した抗マウスＩｇ抗体、希釈液、固定液が含まれてよい。
第２の態様の定量試薬は、薬剤の投与を受けた患者の血小板におけるインテグリンの発現量を、インテグリンをコードするｍＲＮＡの量を測定することにより測定する工程、及び、測定された発現量に基づき血小板以外の細胞におけるインテグリンの発現に対する該薬剤の影響を判定する工程を含んで成る、該薬剤のインテグリンの発現に対する影響を検定する方法に使用するインテグリンの定量試薬である。
この態様の定量試薬の構成成分は、インテグリンをコードするｍＲＮＡを定量するのに使用される試薬と同様でよい。この態様の定量試薬は、ｍＲＮＡの定量の方法に応じて、定量試薬の製造に通常に用いられる技術を選択して用いることにより製造することができる。例えば、ＰＣＲ、ハイブリダイゼーションなどに基づく方法が挙げられる。通常には、インテグリンをコードするｍＲＮＡに相補的な、プライマーやプローブとして使用できる核酸を含む。なお、既知のインテグリンをコードする塩基配列に基づき、プライマーやプローブを設計することは当業者であれば容易である。
定量試薬が複数の構成成分から構成される場合には、キットとされてもよい。また、定量試薬は、定量試薬に用いるのに許容可能な担体をさらに含む組成物とされてもよい。例えば、キットには、ＰＣＲプライマー、好ましくは定量的ＰＣＲのための標識プライマー、コントロールプライマー、コントロールＤＮＡが含まれてよい。
薬剤は、好ましくは、一般式（Ｉ）、一般式（Ｉａ）または一般式（Ｉｂ）で表されるスルホンアミド化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの水和物である。
一般式（Ｉ）のＢおよびＲにおける、置換基を有していてもよく、環の一部が飽和されていても良い、Ｃ６−Ｃ１０アリール環または６員ないし１０員ヘテロアリール環とは、炭素数６から１０の芳香族炭化水素基または、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子および硫黄原子のうち少なくとも１個を含む６員ないし１０員の芳香族ヘテロ環を意味し、その環上に１以上の置換基を有していてもよく、環の一部が飽和されていても良い。具体的には例えば、ベンゼン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、ナフタレン、キノリン、イソキノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、インドール、イソインドール、インドリジン、インダゾール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンズオキサゾール、ベンズイミダゾール、ベンゾピラゾール、ベンゾチアゾール、４，５，６，７−テトラハイドロインドール、１，２，３，４−テトラハイドロイソキノリン、２，３−ジヒドロベンゾフラン、インダン、テトラロン、インドリン、イソインドリン、クロマン、テトラリンなどが挙げられる。上記芳香環は置換基１〜３個を有していてもよく、置換基が複数個ある場合には、同一または異なっていてもよい。置換基としては、例えば、低級アルキル基または低級シクロアルキル基で置換されていてもよいアミノ基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、水酸基、ニトロ基、メルカプト基、シアノ基、低級アルキルチオ基、ハロゲン基、式−ａａ−ｂａ［式中、ａａは単結合、−（ＣＨ２）ｋａ−、−Ｏ−（ＣＨ２）ｋａ−、−Ｓ−（ＣＨ２）ｋａ−または−Ｎ（Ｒ３ａ）−（ＣＨ２）ｋａ−を、ｋａは１〜５の整数を、Ｒ３ａは水素原子または低級アルキル基を、ｂａは−ＣＨ２−ｄａ（式中、ｄａは低級アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、ハロゲン基、水酸基、低級アルキルチオ基、シアノ基または低級アルコキシ基を意味する）を意味する］で示される基、式−ａａ−ｅａ−ｆａ［式中、ａａは前記と同じ意味を、ｅａは−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−を、ｆａは低級アルキル基または低級アルコキシ基で置換されていてもよいアミノ基、低級アルキル基、トリフルオロメチル基、−（ＣＨ２）ｍａ−ｂａまたは−Ｎ（Ｒ４ａ）−（ＣＨ２）ｍａ−ｂａ（式中、ｂａは前記と同じ意味を示し、Ｒ４ａは水素原子または低級アルキル基を、ｍａは１〜５の整数を意味する）を意味する］で示される基、式−ａａ−ｇａ−ｈａ［式中、ａａは前記と同じ意味を示し、ｇａは−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｓ）−を、ｈａは低級アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、水酸基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、−（ＣＨ２）ｎａ−ｂａまたは−Ｎ（Ｒ５ａ）−（ＣＨ２）ｎａ−ｂａ（式中、ｂａは前記と同じ意味を示し、Ｒ５ａは水素原子または低級アルキル基を、ｎａは１〜５の整数を意味する）を意味する］で示される基、式−ａａ−Ｎ（Ｒ６ａ）−ｇａ−ｉａ［式中、ａａおよびｇａは前記と同じ意味を示し、Ｒ６ａは水素原子または低級アルキル基を、ｉａは水素原子、低級アルコキシ基またはｆａ（ｆａは前記と同じ意味を示す）を意味する］で示される基、式−ａａ−Ｎ（Ｒ７ａ）−ｅａ−ｆａ（式中、ａａ、ｅａおよびｆａは前記と同じ意味を示し、Ｒ７ａは水素原子または低級アルキル基を意味する）で示される基、式−（ＣＨ２）ｐａ−ｊａ−（ＣＨ２）ｑａ−ｂａ（式中、ｊａは酸素原子または硫黄原子を意味し、ｂａは前記と同じ意味を示し、ｐａおよびｑａは同一または異なって１〜５の整数を意味する）、式−（ＣＨ２）ｕａ−Ａｒａ（式中、Ａｒａは低級アルキル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子で置換されていてもよい、フェニル基またはヘテロアリール基を意味し、ｕａは０または１〜５の整数を意味する）、式−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｕａ−Ａｒａ（式中、Ａｒａおよびｕａは前記を意味する）、または式−ＳＯ２−（ＣＨ２）ｕａ−Ａｒａ（式中、Ａｒａおよびｕａは前記を意味する）で示される基などを挙げることができる。
一般式（Ｉ）においては、Ｒがインドール、キノリン、またはイソキノリンである化合物が好ましい。
上記一般式（Ｉａ）において、Ａａ環の意味する「置換基を有していてもよい、単環式または二環式芳香環」とは、芳香族炭化水素、または窒素原子、酸素原子および硫黄原子のうち少なくとも１個を含む芳香族ヘテロ環であり、当該環上には置換基１〜３個があってもよい。Ａａ環に含まれる主な芳香環を例示すると、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、チオフェン、フラン、チアゾール、オキサゾール、ベンゼン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、ナフタレン、キノリン、イソキノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、インドール、イソインドール、インドリジン、インダゾール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンズオキサゾール、ベンズイミダゾール、ベンゾピラゾール、ベンゾチアゾールなどがある。上記芳香環は置換基１〜３個を有していてもよく、置換基が複数個ある場合には、同一または異なっていてもよい。置換基としては、例えば、低級アルキル基または低級シクロアルキル基で置換されていてもよいアミノ基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、水酸基、ニトロ基、メルカプト基、シアノ基、低級アルキルチオ基、ハロゲン基、式−ａａ−ｂａ［式中、ａａは単結合、−（ＣＨ２）ｋａ−、−Ｏ−（ＣＨ２）ｋａ−、−Ｓ−（ＣＨ２）ｋａ−または−Ｎ（Ｒ３ａ）−（ＣＨ２）ｋａ−を、ｋａは１〜５の整数を、Ｒ３ａは水素原子または低級アルキル基を、ｂａは−ＣＨ２−ｄａ（式中、ｄａは低級アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、ハロゲン基、水酸基、低級アルキルチオ基、シアノ基または低級アルコキシ基を意味する）を意味する］で示される基、式−ａａ−ｅａ−ｆａ［式中、ａａは前記と同じ意味を、ｅａは−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−を、ｆａは低級アルキル基または低級アルコキシ基で置換されていてもよいアミノ基、低級アルキル基、トリフルオロメチル基、−（ＣＨ２）ｍａ−ｂａまたは−Ｎ（Ｒ４ａ）−ＣＨ２）ｍａ−ｂａ（式中、ｂａは前記と同じ意味を示し、Ｒ４ａは水素原子または低級アルキル基を、ｍａは１〜５の整数を意味する）を意味する］で示される基、式−ａａ−ｇａ−ｈａ［式中、ａａは前記と同じ意味を示し、ｇａは−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｓ）−を、ｈａは低級アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、水酸基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、−（ＣＨ２）ｎａ−ｂａまたは−Ｎ（Ｒ５ａ）−（ＣＨ２）ｎａ−ｂａ（式中、ｂａは前記と同じ意味を示し、Ｒ５ａは水素原子または低級アルキル基を、ｎａは１〜５の整数を意味する）を意味する］で示される基、式−ａａ−Ｎ（Ｒ６ａ）−ｇａ−ｉａ［式中、ａａおよびｇａは前記と同じ意味を示し、Ｒ６ａは水素原子または低級アルキル基を、ｉａは水素原子、低級アルコキシ基またはｆａ（ｆａは前記と同じ意味を示す）を意味する］で示される基、式−ａａ−Ｎ（Ｒ７ａ）−ｅａ−ｆａ（式中、ａａ、ｅａおよびｆａは前記と同じ意味を示し、Ｒ７ａは水素原子または低級アルキル基を意味する）で示される基、式−（ＣＨ２）ｐａ−ｊａ−（ＣＨ２）ｑａ−ｂａ（式中、ｊａは酸素原子または硫黄原子を意味し、ｂａは前記と同じ意味を示し、ｐａおよびｑａは同一または異なって１〜５の整数を意味する）、式−（ＣＨ２）ｕａ−Ａｒａ（式中、Ａｒａは低級アルキル基、低級アルコキシ基またはハロゲン原子で置換されていてもよい、フェニル基またはヘテロアリール基を意味し、ｕａは０または１〜５の整数を意味する）、式−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）ｕａ−Ａｒａ（式中、Ａｒａおよびｕａは前記を意味する）、または式−ＳＯ２−（ＣＨ２）ｕａ−Ａｒａ（式中、Ａｒａおよびｕａは前記を意味する）で示される基などを挙げることができる。
上記置換基例において、アミノ基が２個のアルキル基で置換されている場合には、これらのアルキル基が結合して５または６員環を形成していてもよい。また、Ａａ環が水酸基またはメルカプト基を有する含窒素ヘテロ環である場合には、これらの基が共鳴構造をとることにより、オキソ基またはチオキソ基の形になっていてもよい。
Ｂａ環の意味する「置換基を有していてもよい、６員環式不飽和炭化水素またはヘテロ原子として窒素原子を１個含む不飽和６員ヘテロ環」とは、一部が水素化されていてもよい、ベンゼンまたはピリジンであり、当該環上に置換基１または２個を有していてもよく、置換基が２個ある場合には同一または異なっていてもよい。
Ｃａ環の意味する「置換基を有していてもよい、窒素原子を１または２個含む５員ヘテロ環」とは、一部が水素化されていてもよい、ピロール、ピラゾール、イミダゾールであり、当該環上に置換基１または２個を有していてもよく、置換基が２個ある場合には同一または異なっていてもよい。
Ｂａ環およびＣａ環が有していてもよい置換基としては、例えば、ハロゲン基、シアノ基、低級アルキル基、低級アルコキシ基、水酸基、オキソ基、式−Ｃ（Ｏ）−ｒａ（式中、ｒａは水素原子、低級アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、低級アルキル基、低級アルコキシ基または水酸基を意味する）、低級アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、トリフルオロメチル基などを挙げることができる。
上記一般式（Ｉａ）において、Ｒ１ａ、Ｒ２ａおよびＡａ環、Ｂａ環、Ｃａ環が有していてもよい置換基の定義中の低級アルキル基であり、その例としては、炭素数１〜６の直鎖もしくは分枝状のアルキル基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基（アミル基）、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、１−メチルブチル基、２−メチルブチル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基、１−メチルペンチル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、１，１−ジメチルブチル基、１，２−ジメチルブチル基、２，２−ジメチルブチル基、１，３−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、３，３−ジメチルブチル基、１−エチルブチル基、２−エチルブチル基、１，１，２−トリメチルプロピル基、１，２，２−トリメチルプロピル基、１−エチル−１−メチルプロピル基、１−エチル−２−メチルプロピル基などを意味する。これらのうち好ましい基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基などを挙げることができ、これらのうち、最も好ましい基としてはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基を挙げることができる。
Ａａ環が有していてもよい置換基の定義中の低級シクロアルキル基とは炭素数３〜８のシクロアルキル基であり、その例としては、シクロプロピル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などを挙げることができる。
Ａａ環、Ｂａ環およびＣａ環が有していてもよい置換基の定義中の低級アルコキシ基とは、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基など上記の低級アルキル基から誘導される低級アルコキシ基を意味するが、これらのうち最も好ましい基としてはメトキシ基、エトキシ基を挙げることができる。低級アルキルチオ基とは、上記の低級アルキル基から誘導される低級アルキルチオ基を意味する。ハロゲン原子としてはフッ素原子、塩素原子、臭素原子などが挙げられる。
これらのうちで特に好ましい化合物としては、
１）Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド
２）Ｎ−（３−シアノ−４−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−６−クロロ−３−ピリジンスルホンアミド
３）Ｎ−（３−ブロモ−５−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−４−スルファモイルベンゼンスルホンアミド
４）Ｎ−（５−ブロモ−３−クロロ−１Ｈ−インドール−７−イル）−６−アミノ−３−ピリジンスルホンアミド
５）Ｎ−（３−ブロモ−５−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−３−シアノベンゼンスルホンアミド
６）Ｎ−（４−ブロモ−１Ｈ−インドール−７−イル）−４−シアノベンゼンスルホンアミド
７）Ｎ−（４−クロロ−１Ｈ−インドール−７−イル）−６−アミノ−３−ピリジンスルホンアミド
８）Ｎ−（３−ブロモ−４−クロロ−１Ｈ−インドール−７−イル）−６−アミノ−３−ピリジンスルホンアミド
９）Ｎ−（３−ブロモ−５−メチル−１Ｈ−インドール−７−イル）−５−シアノ−２−チオフェンスルホンアミド
１０）Ｎ−（４−ブロモ−３−クロロ−１Ｈ−インドール−７−イル）−２−アミノ−５−ピリミジンスルホンアミド
１１）Ｎ−（３−クロロ−１Ｈ−インドール−７−イル）−４−スルファモイルベンゼンスルホンアミド
などが挙げられる。
上記一般式（Ｉａ）で示されるスルホンアミド誘導体は酸または塩基と塩を形成する場合もある。本発明は化合物（Ｉａ）の塩をも包含する。酸との塩としては、たとえば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩等の無機酸塩や酢酸、乳酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸との塩を挙げることができる。また、塩基との塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などの無機塩、トリエチルアミン、アルギニン、リジン等の有機塩基との塩を挙げることができる。
本発明において、環Ｑｂの意味する「１つまたは２つの窒素原子を有していてもよい芳香環」とは、芳香族炭化水素、または１つまたは２つの窒素原子む６員式芳香族ヘテロ環である。環Ｑｂに含まれる主な芳香環を例示すると、ベンゼン、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジンなどがある。また、環Ｍの意味する「Ｃ５−Ｃ１２の不飽和の単環または複環を意味し、当該環は窒素原子、酸素原子、硫黄原子から選ばれる１から４のヘテロ原子を有していてもよい。」とは、環Ｑｂと二重結合を共有する不飽和の単環または複環で有り、ベンゼン、ナフタレン等の芳香族炭化水素、シクロペンテン、シクロヘキセン、シクロヘプテン、シクロオクテン、シクロペンタジエン、シクロヘプタジン、シクロオクタジエン等の不飽和炭化水素、テトラヒドロピリジン、ピロール、フラン、チオフェン、オキサゾール、イソキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、トリアジン、インドール、イソインドール、キノリン、イソキノリン、インダゾリジン、ナフチリジン、ベンゾフラン、ベンゾピラン、ベンゾチオフェン、ベンツイミダゾールベンゾキサゾール、ベンゾチアゾール、ピロロピリジン、ピリドピリミジン、イミダゾピリジン等の不飽和複素環を意味する。また、「環Ｑｂと環Ｍｂは１つの窒素原子を共有してもよい。」とは、両環の縮合位置に窒素原子がある場合をいい、そのようにして形成される環としては、インダゾリジン、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン、イミダゾ［１，５−ａ］ピリジン、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンなどを挙げることができる。
本発明において、Ｒ１ｂ、Ｒ４ｂ、Ｒ５ｂにおけるＣ１−Ｃ４アルキル基、またはＡｂ、Ｄｂ、Ｒ１ｂ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ｂ、Ｒ６ｂ、Ｒ７ｂ、Ｒ８ｂ、Ｒ９ｂ、Ｒ１０ｂ、Ｒ１１ｂ、Ｒ１２ｂ、Ｒ１３ｂ、Ｒ１４ｂ、Ｒ１５ｂ、Ｇ１ｂ、Ｇ２ｂおよびＡ群におけるハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基におけるＣ１−Ｃ４アルキル基とは、炭素数１〜４の直鎖もしくは分枝状のアルキル基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基を意味する。ハロゲン原子で置換されていてもよいとは、これらのアルキル基がフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子から選ばれるハロゲン原子で置換されていてもよいことを意味する。例えば、モノフルオロメチル基、モノクロロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、１−または２−モノフルオロエチル基、１−または２−モノクロロエチル基、１−または２−モノブロムエチル基、１，２−ジフルオルエチル基、１，２−ジクロロエチル基、１，１，２，２，２−ペンタフルオロエチル基、３，３，３−トリフルオロプロピル基などを挙げることができる。それらの例の好ましいものとして、モノフルオロメチル基、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、１−または２−モノフルオロエチル基、１，２−ジフルオロエチル基、１，１，２，２，２−ペンタフルオロエチル基などを挙げることができる。
本発明において、Ａｂ、ＤｂおよびＡ群におけるハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ基におけるＣ１−Ｃ４アルコキシ基とは、炭素数１〜４の直鎖もしくは分枝状のアルコキシ基、例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、ｎ−ブチルオキシ基、イソブチルオキシ基、ｓｅｃ−ブチルオキシ基、ｔｅｒｔ−ブチルオキシ基を意味する。ハロゲン原子で置換されていてもよいとは、これらのアルコキシ基がフッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子から選ばれるハロゲン原子で置換されていてもよいことを意味する。例えば、モノフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基、１−または２−モノフルオロエトキシ基、１−または２−モノクロロエトキシ基、１−または２−モノブロムエトキシ基、１，２−ジフルオルエトキシ基、１，１，２，２，２−ペンタフルオロエトキシ基、３，３，３−トリフルオロプロピルオキシ基などを挙げることができる。それらの例の好ましいものとして、モノフルオロメトキシ基、ジフルオロメトキシ基、トリフルオロメトキシ基、１−または２−モノフルオロエトキシ基、１，２−ジフルオルエトキシ基、１，１，２，２，２−ペンタフルオロエトキシ基などを挙げることができる。
本発明において、ＡｂおよびＤｂに見られるＣ２−Ｃ４アルケニル基またはアルキニル基とは炭素数２から４のアルケニル基またはアルキニル基を意味し、ビニル基、アリル基、２−または３−ブテニル基、１，３−ブタジエニル基、エチニル基、２−プロピニル基、２−メチルエチニル基、２−または３−ブチニル基等を挙げることができる。
本発明において、ＢｂおよびＡ群に見られるアリール基とは芳香族炭化水素を意味し、フェニル基、ナフチル基などを挙げることができる。また、ヘテロアリール基とは窒素原子、酸素原子、硫黄原子を１または２以上含有する単環または複環であり、例えば、ピロリル、イミダゾリル基、ピラゾリル基、トリアゾリル基、フリル基、チエニル基、オキサゾリル基、イソキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、チアジアゾリル基、ピリジル基、ピリミジル基、ピラジル基、インドリル基、インドリジニル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、キノリニル基、イソキノリニル基、キナゾリニル基、フタラジニル基などを挙げることができる。
本発明において、Ｒ８ｂ、Ｒ９ｂに見られる「Ｒ８ｂおよびＲ９ｂは結合している窒素原子と一緒になって５または６員式環を形成してもよく、当該環はさらに窒素原子、酸素原子または硫黄原子を含んでいてもよく、」とは、Ｒ８ｂおよびＲ９ｂが結合している窒素原子と一緒になってピロリジニル基、ピペリジニル基、モルホリノ基、チオモルホリノ基、ピペラジニル基などを形成することを意味する。
本発明において、Ａ群に見られるモノまたはジＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノスルホニル基、Ｃ１−Ｃ４アルキル−Ｓ（Ｏ）ｓｂ−Ｃ１−Ｃ４−アルキレン基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基または置換基を有していてもよいフェニルスルホニルアミノ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基とは、上記と同じアルキル基を意味し、アルキレン基とは、メチレン基、エチレン基、プロピレン基、ブチレン基、またはメチルメチレン基、１−または２−メチルエチレン基、１−、２−または３−メチルプロピレン基、ジメチルメチレン基などを挙げることができる。
また、Ｃ１−Ｃ８アルカノイル基とホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、ベンゾイル基等を意味する。
本発明のＪｂに見られる「保護基を有していてもよいアミノ基」における保護基とは、通常の有機合成上アミノ基の保護基として知られている基であればいかなるきでもよく、特に限定はされないが、例えばベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ホルミル基、アセチル基、クロロアセチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、ベンジリデン基、ベンツヒドリル基、トリチル基などを挙げることができる。また、保護基を有していてもよいカルボキシ基における保護基およびＲ１６ｂおけるカルボキシ基の保護基とは、通常の有機合成上カルボキシ基の保護基として知られている基であればいかなる基でもよく、特に限定はされないが、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｔ−ブチル基、メトキシメチル基、２，２，２−トリクロロエチル基、ピバロイルオキシメチル基、ベンジル基などを挙げることができる。
本発明において「置換基を有してもよい」における置換基とは、上に述べたハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキル基またはアルコキシ基、水酸基、ヒドロキシＣ１−Ｃ４アルキル基、モノまたはジＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノ基、Ｃ２−Ｃ４アルケニル基またはアルキニル基、シアノ基、Ｃ１−Ｃ８アシル基、モノまたはジＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいアミノスルホニル基、カルボキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシカルボニル基、モノまたはジＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されていてもよいカルバモイル基等を意味する。
上記一般式（Ｉｂ）で示されるスルホンアミド含有複素環化合物は酸または塩基と塩を形成する場合もある。本発明は化合物（Ｉｂ）の塩をも包含する。酸との塩としては、たとえば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩等の無機酸塩や酢酸、乳酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸との塩を挙げることができる。また、塩基との塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などの無機塩、トリエチルアミン、アルギニン、リジン等の有機塩基との塩を挙げることができる。
また、これら化合物の水和物はもちろんのこと光学異性体が存在する場合はそれらすべてが含まれることはいうまでもない。また、生体内で酸化、還元、加水分解、抱合などの代謝を受けて本化合物から生成する血管新生抑制作用を示す化合物をも包含する。またさらに、本発明は生体内で酸化、還元、加水分解などの代謝を受けて本発明化合物を生成する化合物をも包含する。
本発明において使用される化合物は種々の方法によって製造することができる。例えば、特開平７−１６５７０８号公報、特開平８−２３１５０５号公報にそのいくつが具体的に開示されている。
実施例
以下に、具体的な例をもって本発明を示すが、本発明はこれに限られるものではない。
［参考例１］化合物Ａのインテグリンα２発現に対する効果
ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）は、ヒト臍帯より単離し、ＥＧＭ培地（２％ＦＣＳ，ヒドロコルチゾン不含，Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）で培養した。Ｉ型コラーゲンコートフラスコ（スミロン）で継代培養し、４〜６継代で使用した。抗ヒトインテグリンα２抗体（Ａ２−ＩＩＥ１０）はＵｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．より、抗ヒトＣＤ３１抗体（ＪＣ／７０Ａ）およびウサギ抗マウスイムノグロブリンのＦＩＴＣ標識Ｆ（ａｂ’）２フラグメントはＤａｋｏより購入した。
２５ｃｍ２細胞培養用フラスコにまきこんだ後、ＣＯ２インキュベーターにて３７℃で培養し、３時間後に化合物Ａ（５，５０，５００ｎｇ／ｍｌ）を含む同培地と交換し、更に４８時間培養した。細胞を回収し、２×１０５個の細胞を１００μｌのＰＢＳ（０．１％ＢＳＡ、０．０５％ＮａＮ３）に浮遊させ、１μｇの一次抗体を加えて４℃で３０分間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄後、ＦＩＴＣ標識二次抗体で３０分間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄後、ＣｅｌｌＦｉｘ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で細胞を固定した。ＦＡＣＳ  ｃａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用い、各サンプル２×１０４個の細胞の蛍光値を測定した。細胞表面分子の発現量は、各サンプルの蛍光値を一次抗体なしの対照（ｃｏｎｔｒｏｌ）サンプルの蛍光値で補正して求めた（次式）。
ＲＭＦＩ（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｍｅａｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）＝試料ＭＦＩ（ｍｅａｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）／バックグランドＭＦＩ
図１に示すように化合物Ａ（５０，５００ｎｇ／ｍｌ）はＨＵＶＥＣのインテグリンα２発現量を減少させた。
［参考例２］抗インテグリンα２抗体及び化合物Ａの管腔形成に対する影響
２４ウェルプレートにＩ型コラーゲンゲルを分注し、ゲル化した後、ＨＵＶＥＣを、１０ｎｇ／ｍｌ  ＥＧＦ（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）と２０ｎｇ／ｍｌ  ｂＦＧＦ（ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）または２０ｎｇ／ｍｌ  ＶＥＧＦ（和光純薬）を含む無血清培地（Ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ−ＳＦＭ  Ｂａｓａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｍｅｄｉｕｍ，ＧＩＢＣＯ  ＢＲＬ）に懸濁し、１〜１．２×１０５細胞／ウェルでまきこんだ。３７℃で一晩培養し、Ｉ型コラーゲンゲルを重層してゲル化させた後、薬剤（抗インテグリンα２抗体または化合物Ａ）を含む上記無血清培地（ＥＧＦとｂＦＧＦまたはＶＥＧＦを含む）を加え、更に３７℃で４日間培養した。なお、抗インテグリンα２抗体の作用については、９６ウェルプレートを使用して実験を行った。
培養後、細胞をＭＴＴにより発色させ、ＨＵＶＥＣが形成する管腔を顕微鏡下で写真撮影した。写真をスキャナで取り込み画像解析ソフトＭａｃ  ＳＣＯＰＥ  ２．５６（ＭＩＴＡＮＩ）を用いて管腔の長さを測定することによりＨＵＶＥＣの管腔形成を定量した。
図２に示すように抗インテグリンα２抗体はＨＵＶＥＣのｂＦＧＦにより誘導される管腔形成を阻害し、ｂＦＧＦによる管腔形成にインテグリンα２が関与していることが示された。また図３に示すように、化合物ＡはＨＵＶＥＣのｂＦＧＦまたはＶＥＧＦにより誘導される管腔形成を阻害した。参考例２の結果と併せ、化合物Ａはインテグリンα２発現を抑制することにより管腔形成を阻害したものと考えられた。
［実施例１］化合物Ａの腫瘍体積増加抑制作用と血小板インテグリンα２発現抑制作用との相関
ＫＰ−１（ヒト膵癌細胞株）のＰＢＳ懸濁液（５×１０７細胞／ｍｌ）１００μｌをマウス（ＳＬＣＫＳＮ，雌，ｌｏｔ．０８５６０５３７６）の皮下に移植した。移植１週間後から０．５％メチルセルロース水溶液（ｖｅｈｉｃｌｅ）または化合物Ａ  １００もしくは２００ｍｇ／ｋｇ（０．５％メチルセルロース懸濁液）を一日二回経口投与した。体重および腫瘍体積を経日的に測定した。経日的にマウスをジエチルエーテル麻酔し、眼底よりキャピラリー管を用いて採血を行った。血液４ｌを０．００３８％クエン酸ナトリウム水溶液を含むＰＢＳ  ３９６μｌにて希釈した。抗マウスＣＤ４９ｂ  ＦＩＴＣ標識抗体（Ｐｈｒａｍｉｎｇｅｎ，Ｃａｔ．０９７９４Ｄ，ｌｏｔ．Ｍ００６０７３）を０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳにて３０倍希釈した。この抗体１０μｌを希釈した血液９０μｌに加えた。室温にて６０ｍｉｎ反応させ、フィルター（ＦＡＬＣＯＮ，Ｃａｔ．２２３５）に通した。ＰＢＳ  ９００μｌを加え、フローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）にて、前方散乱光および側方散乱光により血小板分画を分離し、血小板上の蛍光強度を測定した。
図４に示すとおり化合物Ａは１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇの用量で、ＫＰ−１腫瘍体積の増加を抑制した。参考例１及び２の結果と併せると、化合物Ａはインテグリンα２の発現を抑制することにより管腔形成を阻害し、腫瘍によって誘導される血管新生を抑制した結果、腫瘍体積の増加を抑制したものと考えられた。
図５に示すとおり、化合物Ａは同時に測定した血小板におけるインテグリンα２の発現量を減少させた。血小板におけるインテグリンα２の発現量の減少は、腫瘍体積増加の抑制が見られる１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇの用量で観察され、血小板におけるインテグリンα２発現量が、化合物Ａの腫瘍体積増加抑制作用の代理マーカーとなり得ることが示された。
産業上の利用の可能性
本発明により、インテグリンの発現を抑制することにより薬効を発揮する薬剤、例えば血管新生阻害剤の薬効を、血小板におけるインテグリンの発現量を代理マーカーとしてモニターすることが可能となる。血小板は、試料としての採取が容易なので、効率的にモニターすることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
図１は、化合物Ａのインテグリンα２発現に対する効果を示す。
図２は、抗インテグリンα２抗体の管腔形成に対する影響を示す。
図３は、化合物Ａの管腔形成に対する影響を示す。
図４は、化合物Ａの腫瘍体積増加に対する抑制作用を示す。
図５は、化合物Ａの血小板におけるインテグリンα２発現に及ぼす影響を示す。
【図１】
0004255285.tif 000012
【図２】
0004255285.tif 000013
【図３】
0004255285.tif 000014
【図４】
0004255285.tif 000015
【図５】
0004255285.tif 000016