(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（III)又は（IV）：
【化１】
0004290889.tif 000015
［ここで、Ｒ1 ＝Ｈ，Ｃ1 −Ｃ3 アルキル又はＣ1 −Ｃ3 アシルであり；
ここで、一般式（III)又は（IV）の場合において環Ａ及び／又はＢは、任意に１，２，３，４，６，７、又は８位において少なくとも１つのＯＸ遊離基（但しＸ＝Ｈ，Ｃ1 −Ｃ3 アルキル又はＣ1 −Ｃ3 アシル）で置換され；
ここで、任意に少なくとも１つの、１７，１８，１９及び２０位の炭素原子が、ＯＸ遊離基（但しＸ＝Ｈ，Ｃ1 −Ｃ3 アルキル又はＣ1 −Ｃ3 アシル）で置換され；
ここで、任意に少なくとも１つの、１７，１８，１９及び２０位のＣＨ3 基が、１つのＣＯＯＨ基によって置換され；
ここで、任意に少なくとも１つの、環の１，２，３，６、又は７位がケト基であり；そして
ここで、任意に少なくとも１つの二重結合が、式（III)の環の１，２，３，６，７，８，８（１７）位において存在し；そして
ここで、任意に少なくとも１つの二重結合が、式(IV)の環の１，２，３，４（１８）、６，７，８，８（１７）位に存在する］で表されるクレロダン（ｃｌｅｒｏｄａｎｅ）型の少なくとも１つの二環式ジテルペンを有効成分として含むプロラクチン低下薬であって、（＋）ハードウィック酸(hardwickiic acid)、クロレチン酸(crolechinic acid)、オートリワ酸(hautriwaic acid)、を除くプロラクチン低下薬。
【請求項２】
月経前症候群、乳房痛、月経周期の障害の処置のための、請求項１に記載のプロラクチン低下薬。
【請求項３】
過少月経又は無月経の処置のための、請求項１に記載のプロラクチン低下薬。
【請求項４】
月経前症候群、乳房痛、月経周期の障害の処置のための、クレロダ−Ｙ，１４−ジエン−１３−オール（ここで、Ｙ＝環の１，２，３，４（１８），６，７又は８（１７）位）を有効成分として含むプロラクチン低下薬。
【請求項５】
過少月経若しくは無月経の処置のための、クレロダ−Ｙ，１４−ジエン−１３−オール（ここで、Ｙ＝環の１，２，３，４（１８），６，７又は８（１７）位）を有効成分として含むプロラクチン低下薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明はプロラクチン低下薬に関する。
【０００２】
ハマゴウ属のセイヨウニンジンボク（Ｖｉｔｅｘ  ａｇｎｕｓ−ｃａｓｔｕｓ）（ａｇｎｕｓ  ｃａｓｔｕｓ，ｃｈａｓｔｅ  ｔｒｅｅ）由来の抽出物は、月経前症候群の処置のための天然の治療薬において長い間使用されてきた。月経前の短期間、患者はしばしば臨床的にプロラクチン量の増大を伴う胸の張りを訴える。
【０００３】
ハマゴウ属のセイヨウニンジンボク由来の抽出物は、従来技術において臨床的に、かつ薬理学的に更に確かめられうる、プロラクチン低下特性を有する。月経前症候群の緩和にとって重要なハマゴウ属のセイヨウニンジンボク中のそれらの物質を特徴づけ、又は単離までするための試みが、従来技術において多く試みられてきた。
【０００４】
この様に、Ｄａｎｉｅｌ  Ｂｅｒｇｅｒによる、“Ｖｉｔｅｘ  ａｇｎｕｓ−ｃａｓｔｕｓ：Ｕｎｂｅｄｅｎｋｌｉｃｈｋｅｉｔ  ｕｎｄ  Ｗｉｒｋｓａｍｋｅｉｔ  ｂｅｉｍ  ｐｒｅｅｍｅｎｓｔｒｕｅｌｌｅｎ  Ｓｙｎｄｒｏｍ，Ｗｉｒｋｐｒｉｎｚｉｐｉｅｎ  ａｎｄ  Ｗｉｒｋｍｅｃｈａｎｉｓｍｅｎ  ｅｉｎｓ  ｎｅｕ  ｅｎｔｗｉｃｋｅｌｔｅｎ  Ｅｘｔｒａｋｔｅｓ”［Ｖｉｔｅｘ  ａｇｎｕｓ−ｃａｓｔｕｓ：Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｒｅｍｅｎｓｔｒｕａｌ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗｌｙ  ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ  ｅｘｔｒａｃｔ］と題された、バーゼル大学哲学自然科学部での、１９９８年１月１３日の論文は、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボクと関連づけられる多くの観点を扱う。
【０００５】
この論文は、前記薬剤の薬理学的特性の説明について考慮した、多くの異なる成分を記載している。
【０００６】
次の様に、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボクにおいて、アウクビン、アグヌシド（ａｇｎｕｓｉｄｅ）及びユーロシド（ｅｕｒｏｓｉｄｅ）が、葉の薬剤及び果実の薬剤、その両方の中に見出される。
【０００７】
更に親油性のフラボノール類カスチシン（ｃａｓｔｉｃｉｎ）、ペンジュレチン（ｐｅｎｄｕｌｅｔｉｎ）、クリソスプレノールＤ（ｃｈｒｙｓｏｓｐｌｅｎｏｌ  Ｄ）及び６−ヒドロキシケンペロールの３，６，７，４’−テトラメチルエーテルを、果物から単離することができた。
【０００８】
従来技術は更に、プロゲステロン、１７α−ヒドロキシ−プロゲステロン、テストステロン及びエピテストステロンを、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボク中で検出することができたことを記載している。
【０００９】
これとは別に、合計で約７３の異なる化合物がハマゴウ属のセイヨウニンジンボクの果実において見出すことができ、特にモノテルペン、例えばα−ピネン、サビネン、β−フェランドレン及び４−テルピネオール、並びにセスキテルペン、例えばカリオフィレン、アロ−アロマデンドレン、ゲルマクレンＢ、スパチュレノール（ｓｐａｔｈｕｌｅｎｏｌ）及びτ−カジノールである。
【００１０】
既に上文で言及した物質のクラス以外にも、大量の脂肪酸がハマゴウ属のセイヨウニンジンボクの果実において更に見出すことができ、これらは飽和、単不飽和及び多不飽和脂肪酸である。次の様に、例えばα−リノレン酸、オレイン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、リノレン酸及びアドレン酸（ａｄｒｅｎｉｃ  ａｃｉｄ）が前記果実中で検出された。
【００１１】
ハマゴウ属のセイヨウニンジンボクの果実由来の精油の更なる調査も、ジテルペンの存在を発見した。上文で言及した論文は、以下のジテルペンが、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボクの果実から単離されたという情報を提供している：
【００１２】
ロツンジフラン（ｒｏｔｕｎｄｉｆｕｒａｎ）、ビテキシラクトン（ｖｉｔｅｘｉｌａｃｔｏｎｅ）及び６β，７β−ジアセトキシ−１３−ヒドロキシ−ラブダ−８，１４−ジエンであり、これらの構造式を以下に表す；
【化１６】
0004290889.tif 000002
【化１７】
0004290889.tif 000003
【００１３】
従来技術において、多くの試験方法が、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボク由来の抽出物の有効な機構、及び特定の物質又は特定のクラスの物質が完全な抽出物の薬理学的効果の調査に適しているかどうかについて見出すために行われた。
【００１４】
次の様に、例えば測定は様々なオピオイド受容体、ベンゾジアゼピン受容体、セロトニン再取込み部位、ヒスタミンＨ1 受容体及びドーパミンＤ2 受容体に対して行われた。
【００１５】
ドーパミンＤ2 受容体に対しての、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボク由来の画分を用いる受容体の結合の研究の結果を証明し、そしてそれによって真の活性物質を発見するために、上述した従来技術において、ハマゴウ属の既知の成分（純物質）を用いて実験を行った。これらの純粋な成分はアウクビン、カスチシン、ホモオリエンチン（ｈｏｍｏｏｒｉｅｎｔｉｎ）、リノレン酸、ルテオリン−７−グリコシド、オリエンチン、及びジテルペン、ビテキシン（ｖｉｔｅｘｉｎ）、ロツンジフラン、６β，７β−ジアセトキシ−１３−ヒドロキシ−ラブダ−８，１４−ジエンであった。
【００１６】
しかし、前記の論文は１５４ページ上の２．３．４．５章において、単一物質として、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボク由来の完全な抽出物又は親油性ヘキサン画分の活性及びそれによる薬理学的作用を試験することができる様な、十分に低いＩＣ50 値を持つ物質が無かったことを明快に述べている。
【００１７】
この従来技術から出発して、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボクの果実由来の純物質を提供することが目的であり、それによって月経前症候群を処置するための薬剤が医薬製剤において製造されうる。
【００１８】
この目的は、請求項１に記載の薬剤並びに請求項１２及び１４に記載の新規物質によって達成される。
【００１９】
本発明の骨格において、驚いたことに二環式のクラスのジテルペン由来の化合物が、ラット由来の培養下垂体細胞に対して、プロラクチン低下作用を有することが明らかになった。この機構は、ヒトに移すことができると大いに思われる。
【化１８】
0004290889.tif 000004
【００２０】
ここで、前記の有効なジテルペンは、ラブダン（ｌａｂｄａｎｅ）型及びクレロダン（ｃｌｅｒｏｄａｎｅ）型の両方の骨格構造を有することがある：
【００２１】
特に、培養下垂体細胞に対するプロラクチン低下作用は、同時に低い細胞毒性を有する次の一般式Ｉ〜IVに従う化合物によって達成されうる：
【化１９】
0004290889.tif 000005
【化２０】
0004290889.tif 000006
［但し、Ｒ1 ＝Ｈ，Ｃ1 −Ｃ3 アルキル又はＣ1 −Ｃ3 アシルであり；
ここで、一般式（Ｉ）又は（II）の場合において環Ａ及び／又はＢは、任意に１，２，３，４，６，７，８又は９位において少なくとも１つのＯＸ遊離基（但しＸ＝Ｈ，Ｃ1 −Ｃ3 アルキル又はＣ1 −Ｃ3 アシル）で置換され；
ここで、一般式（III)又は（IV）の場合において環Ａ及び／又はＢは、任意に１，２，３，４，６，７、又は８位において少なくとも１つのＯＸ遊離基（但しＸ＝Ｈ，Ｃ1 −Ｃ3 アルキル又はＣ1 −Ｃ3 アシル）で置換され；
ここで、任意に少なくとも１つの、１７，１８，１９及び２０位の炭素原子が、ＯＸ遊離基（但しＸ＝Ｈ，Ｃ1 −Ｃ3 アルキル又はＣ1 −Ｃ3 アシル）で置換され；
ここで、任意に少なくとも１つの、１７，１８，１９及び２０位のＣＨ3 基が、１つのＣＯＯＨ基によって置換され；
ここで、任意に少なくとも１つの、環の１，２，３，６、又は７位がケト基であり；そして
ここで、任意に少なくとも１つの二重結合が、式（Ｉ）及び（III)の１，２，３，６，７，８，８（１７）位において環に存在し；そして
ここで、任意に少なくとも１つの二重結合が、式（II）及び（IV）の１，２，３，４（１８），６，７，８，８（１７）位において環に存在する］。
【００２２】
更に次の化合物；
【化２１】
0004290889.tif 000007
【化２２】
0004290889.tif 000008
並びにクレロダ−Ｙ，１４−ジエン−１３−オール［但し、Ｙ＝環の１，２，３，４（１８），６，７又は８（１７）位］：及び
クレロダ−Ｙ，Ｚ，１４−トリエン−１３−オール［但し、Ｙ又はＺ＝環の１，３、又は１，４（１８）又は１，６又は１，７又は１，８（１７）位あるいは環の２，４（１８）又は２，６又は２，７又は２，８（１７）位あるいは環の４（１８），６又は４（１８），７又は４（１８），８（１７）位あるいは環の６，８（１７）位］が、本発明の好ましい態様である。
【００２３】
分画した親油性の抽出によって、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボクの果実からのエタノール−水抽出物由来の類似の化合物を強化し、そして特徴づけ、そしてそれらの構造を決定することが可能であった。
【００２４】
特に高い親油性のある溶媒、例えば中程度の鎖長の炭化水素Ｃ5 〜Ｃ10、特にｎ−ヘキサンによる抽出は、プロラクチン低下作用の強力な強化をもたらした。更に、ハマゴウ属のセイヨウニンジンボクの果実からの、超臨界二酸化炭素による抽出は、一般式Ｉ〜IVに従う化合物に還元されうる、有効な原理の強力な強化を認めた。
【００２５】
本発明に従う、構造式を上文で表した全ての化合物が、ラットの下垂体由来の乳腺刺激細胞に対して放出されるプロラクチンの阻害を示す。
【００２６】
細胞毒性に対する別の研究において、本発明に従い単離し、そして特徴づけた化合物の全てが、低い細胞毒性を示し、医薬製剤の観点においてそれらを特に魅力的にするという事実が明らかとなった。
【００２７】
列挙した物質も、ヒト組み換えドーパミンＤ2 受容体に結合することが更に明らかとなった。
【００２８】
本発明の更なる利点及び特徴は、態様の説明及び図に起因する。
【００２９】
セイヨウニンジンボク（Ｆｒｕｃｔｕｓ  Ａｇｎｉ  ｃａｓｔｉ）からのエタノール抽出物は、本質的に知られている方法で、有機溶媒又は有機溶媒と水との混合物又は超臨界二酸化炭素を用いる単離又は濾過によって製造される。
【００３０】
このために、好ましくは５０：５０〜９０：１０の比のエタノールと水との混合物が、２０〜６０℃で使用される。
【００３１】
この方法で得られる抽出物は、異なる極性を有する２つの非混和性の層の間に分配される。ここで、アルカン、ハロゲン化炭素水素、ケトン、エステルが親油性の層として使用され、そしてアルコール及び水が親水性の層として使用される。有利に、等量のＣ5 −Ｃ7 のアルカン及び１：２〜１：１０の比のエタノール／水の混合物が使用される。
【００３２】
前記の親油性の層は、プロラクチン低下活性を含み、そして既知の方法、例えば本質的に知られている方法の高圧液体クロマトグラフィー及び予備的な薄層クロマトグラフィーを用いて更に精製されうる。
【００３３】
１kgの押しつぶしたハマゴウ属のセイヨウニンジンボクの果実からの抽出物は、１０Ｌのエタノール／水  ６／４（ｖ／ｖ）を用いた濾過によって製造される。これから製造し、そして１．７５ｇの乾燥残査を有する濃縮抽出物を、分液ロート内で３７５mlの１５％エタノールと３７５mlのｎ−ヘキサンとの間に分配し、ｎ−ヘキサン層を回収し、そして水層を、再びｎ−ヘキサンを用いて振とうすることで抽出する。
【００３４】
低圧下での濃縮の後、一緒のヘキサン層は３００mgの残査を与える。
【００３５】
その様に得た残査を、高圧液体クロマトグラフィーによって更に分離する。これのために、２１．４×３００mmの寸法を有するカラムが、固定層としての８μｍの粒度を有するＣ−１８材料と一緒に使用される。クロマトグラフィーは、溶媒としてのアセトニトリル／水  ６０／４０の混合物の１０ml／分の流速で行う。試料の充填の後、アセトニトリル含量は、６０分以内に直線的に１００％まで増大する。
【００３６】
全てのジテルペンが、３５０〜４５０mlの容積で溶出する。３００ｇのヘキサン層から、約３８mgのジテルペン混合物が得られる。前記のジテルペンは画分の型で適当に回収される。
【００３７】
この様に得られたジテルペン混合物の更なる精製は、１mmの層の厚さを有するシリカゲル層上での、異なる溶出液を用いる薄層クロマトグラフィーによって更に下文の単一物質のための記載に従い、行う。検出はアニスアルデヒド試薬（ＤＡＢ１０，１９９７）で行う。薄層プレート上の純粋なジテルペンの領域はクロロホルム／メタノールで溶出され、そして組み合わせたガスクロマトグラフィー質量分析計によって解析される。
【００３８】
９８−１４６（図１において“１４６”と表す）の製造：
６β−アセトキシ−９α−ヒドロキシ−１５，１６−エポキシ−１３（１６），１４−ラブダジエン（ロツンジフラン）
【化２３】
0004290889.tif 000009
溶出液：クロロホルム／メタノール  ９５／５
Ｒｆ値：０．７５
ＧＣ−ＭＳにおける非誘導体化物質の特徴的なフラグメント：
ｍ／ｚ＝３６２［Ｍ］＋，３４４，３０２，２８７，２８４，２０７，１５０，１３５，９５，８１．
【００３９】
９８−１１９（図１において“１１９”と表す）の製造：
クレロダ−ｙ，１４，−ジエン−１３−オール
溶出液：クロロホルム／メタノール  ９５／５
Ｒｆ値：０．６３
ＧＣ−ＭＳにおける非誘導体化物質の特徴的なフラグメント：
ｍ／ｚ＝２９０［Ｍ］＋，２７２，２５７，２４３，２２９，１９１，１８９，
【化２４】
0004290889.tif 000010
【００４０】
９８−１５３（図１に示さない）の製造：
ｘ，１３−ジヒドロキシ−１４−ラブデン
溶出液：クロロホルム／メタノール  ９５／５
Ｒｆ値：０．３７
ＧＣ−ＭＳにおける非誘導体化物質の特徴的なフラグメント：
ｍ／ｚ＝２９０［Ｍ−Ｈ２０］＋，２７５，２７２，２５７，１９１，１７７
【化２５】
0004290889.tif 000011
【００４１】
９８−１５２（図１に示さない）の製造：
６β，７β−ジアセトキシ−１３−ヒドロキシ−ラブダ−８，１４−ジエン
溶出液：クロロホルム／メタノール  ９９／１
流れ距離１６cm、展開３回
Ｒｆ値：０．５
ＧＣ−ＭＳにおける非誘導体化物質の特徴的なフラグメント：
ｍ／ｚ＝３４６［Ｍ−６０］＋，３０７，３０４，２８６，２４７，２０５，１８７，１７７，１３５
【化２６】
0004290889.tif 000012
【００４２】
９８−１６６（図１において“１６６”と表す）の製造：
ｘ−ヒドロキシ−ｙ−ケト−１５，１６−エポキシ−１３（１６），１４−ラブダジエン
溶出液：クロロホルム／ｎ−ヘキサン  ９０／１０
展開３回、流れ距離１６cm
Ｒｆ値：０．７４
ＧＣ−ＭＳにおける非誘導体化物質の特徴的なフラグメント：
ｍ／ｚ＝３１８［Ｍ］＋，３００，２８５，１９３，１６６，９５，８１
【化２７】
0004290889.tif 000013
【００４３】
９８−１６７（図１において“１６７”と表す）の製造：
ｘ−アセトキシ−１３−ヒドロキシ−ラブダ−ｙ，１４−ジエン
溶出液：クロロホルム／ｎ−ヘキサン  ９０／１０
展開３回、流れ距離１６cm
Ｒｆ値：０．５５
ＧＣ−ＭＳにおける非誘導体化物質の特徴的なフラグメント：
ｍ／ｚ＝３３０［Ｍ−Ｈ２０］＋，２８８，２７０，２５５，２４９，１８９，１３２，１１９，７１
【化２８】
0004290889.tif 000014
【００４４】
プロラクチン放出に対する影響；
雄のラットの培養下垂体細胞からのプロラクチン放出の決定は、Ｊａｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１０２，（１９９４）４４８−４５４に記載されている様に行った。前記のジテルペンを、エタノール溶液中の細胞培養液に加えた。相当するエタノール濃度及びドーパミンをコントロールとして一緒に行った。
【００４５】
添加してない培地中でインキュベートした細胞の上清の、測定したプロラクチン濃度の平均値は、ほぼ１００％となる様に設定される。前記のジテルペンは、プロラクチンの放出を有意に低下させる。結果を図１に表す。それは二環式のジテルペンを介した、ラットの培養下垂体細胞のプロラクチン放出の低下を示している。コントロールとして、培地、培地＋エタノール及び１０-4Ｍドーパミン（＝ＤＡ−４Ｍ）を一緒に行った。濃度は培地１ml当たりのジテルペンのmgを示す。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１はラットの培養下垂体細胞からのプロラクチン放出に対する、二環式ジテルペンの影響を示す。
【図１】
0004290889.tif 000016