(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノアルコール又はその塩を式Ｒ−ＣＯＯＨ、
（式中、Ｒが水素；任意に不飽和の、任意に少なくとも１つの水酸基で置換された又は任意に１以上のヘテロ原子を含有する、５５までの炭素原子を有する直鎖又は分岐のアルキル基；任意に不飽和の、任意に少なくとも１つの水酸基で置換された又は任意に１以上のヘテロ原子を含有するＣ5-8のシクロアルキル基；任意に少なくとも１つの水酸基で置換されたアリール又はヘテロアリール基；又は任意に少なくとも１つの水酸基で置換されたベンジル基である）
を有する有機酸でＮ-アシル化することを含む、Ｎ−アシル化アミノアルコールの調製方法において、前記有機酸が酸ハロゲン化物の形態であり、前記結合、即ちＮ−アシル化が、有機溶媒中で水の付加的な存在によって起こることを特徴とする、当該調製方法。
【請求項２】
以下の工程を含む、請求項１に記載のＮ−アシル化アミノアルコールの調製方法。
（１）アミノアルコール又はその塩を、有機溶媒中で、水０.０１〜１０容積に対して有機溶媒１容積の存在下、懸濁又は溶解する工程、
（２）有機酸ハロゲン化物を純粋な化合物として又はアミノアルコールを懸濁するために使用される有機溶媒における溶液若しくは懸濁液として添加し、一方、ｐＨを５〜１２の範囲に維持する工程、
（３）得られた混合物を、前記アミノアルコールがＮ−アシル化化合物に変換されるまで撹拌する工程、
（４）Ｎ−アシル化アミノアルコールを有機相から回収する工程。
【請求項３】
前記ｐＨが６〜１１の値で維持される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記酸ハロゲン化物が、有機溶媒中、その場で生産される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記酸ハロゲン化物が、酸クロライドである請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
Ｎ−アシル化アミノアルコールのＮ−アシル基上のヒドロキシ置換基が、前記有機酸ハロゲン化物のＲ基上の、対応するハロゲン置換基により与えられ、前記ハロゲン置換基が、結合の後、酸素官能基に変換され、前記酸素官能基が、次にヒドロキシ置換基に変換される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記有機溶媒が、ハロゲン化炭化水素、エステル、エーテル、ケトン、アルカン、芳香族炭化水素又は芳香族アルコールである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記有機溶媒が、全ての混合比で水と混和できる溶媒でない、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記有機溶媒が、ギ酸、酢酸又はプロピオン酸のアルキルエステルであり、該アルキル基が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル又はイソブチル基である、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
前記有機溶媒が、酢酸エチル、酢酸イソプロピル又は酢酸ブチルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
アミノアルコールが、次式のスフィンゴイド塩基である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
Ｒ'−Ａ−ＣＨ(ＯＲ''')−Ｃ(ＮＨ2)−ＣＨ2−ＯＲ”
（式中、Ｒ’は任意に１以上の二重結合を含んでもよく及び／又は任意に少なくとも１つの水酸基で置換されていてもよい、１０〜２２の炭素原子を有する直鎖又は分岐のアルキル基であり、および、
Ｒ”は、水素又は炭水化物であり、
Ａは、ＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ2−Ｃ(Ｈ)ＯＲ'''であり、及び
Ｒ'''は、水素又は１〜３の炭素原子のアシル基である。）
【請求項１２】
前記スフィンゴイド塩基がスフィンガニン、スフィンゴシン又はフィトスフィンゴシンである、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アミノアルコールのアシル化の分野に関する。
【０００２】
（発明の背景）
セラミドは、皮膚の上層、即ち角質層において主要な脂質成分である。この皮膚層は、重要なバリア機能を有し、ここで、外部化合物が一般に締め出される一方で、皮膚からの水分ロスが制限される。セラミドが、例えば化粧品に適用されるのは、皮膚におけるその水分保持効果のためである。
典型的に、化粧品に使用するセラミドは、天然源から、又は化学合成ルートを経由するか、若しくは発酵及び化学合成プロセスを経由して入手される。後ろの２ルートは、潜在的に有害な感染性の薬剤が、哺乳類源に存在するかもしれないという事実から好ましい。
【０００３】
セラミドを合成する種々の方法が当業者に知られている。最も頻繁に使用される方法は、スフィンゴイド塩基及び好適な脂肪酸成分を出発材料として含む。この脂肪酸成分は、その結果、スフィンゴイド塩基のアミノ基に、アミド結合を介して結合される。
WO93/20038は、アミノアルコールのアシル化であって、脂肪酸がアミノ基に混合した無水物として結合されるものを開示する。混合した無水物を使用するこの反応において、実質的に無水条件下で起きることは必須である。
Philippeら（Int. J. Cosm. Sci. 17、133〜146ページ、1995年）は、脂肪酸がアミンに酸ハロゲン化物として結合するアシル化方法であって、テトラヒドロフラン(ＴＨＦ)を溶媒として使用し、トリエチルアミンを有機塩基として使用する方法を開示する。この方法において、当該結合反応も、無水環境において起こる。
【０００４】
無水条件に対する要求は、１つ又は双方の出発物質を含水材料として送達する場合に重要な不利益となる。例えば、スフィンゴイド塩基が、微生物発酵プロセスから発する湿潤結晶塊(cake)内に含まれる場合である。
上記方法の更なる不利益は、中程度の収率にしかならないことである。
さらに、他のアシル化方法は、ＴＨＦを同容積の５０％ＮａＡｃ溶液と混合する溶媒系を適用するものとして知られる(EP212400参照)。水は、この系に存在するが、高い塩濃度の付加的な存在が要求される。高い塩濃度は、高価で、無駄な負荷を増加するので望ましくない。
【０００５】
従って、スフィンゴイド塩基反応物が実質的に水なしであることを要求せず、さらに高い塩濃度を要求せず、かつ現在知られている方法より高い収率を与えるアシル化方法を適用し得ることが望ましい。
【０００６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、酸ハロゲン化物の形態である脂肪酸を使用する、アミノアルコールのアシル化方法であって、結合が、有機溶媒中で、水の付加的な存在によって起こる方法に関する。
水が反応混合物中に存在することは、いくつかの重要な利益になる。例えば、、アシル化方法においてアミノアルコール反応物を適用する前に、この反応物を乾燥する必要はない。これは、アミノアルコール、例えばスフィンゴイド塩基が微生物発酵を経由して、又は、水性環境で起こる反応からの生成物として得られる場合に、特に有利となる。加えて、反応のｐＨは、単純な無機塩、例えば、ＮａＯＨを、潜在的に有害な有機塩のかわりに使用して、有利に調節され得る。
【０００７】
本発明の方法は、EP212400に開示された方法の場合のような、高い塩濃度の使用を、更に要求することはなく、WO93/20038に開示された方法の場合のような、化学量論的な量の補助的な化学薬品の使用を要求することもない。更に重要な利点は、アシル化反応生成物は、有機相から、単に有機相を水洗し、その後水を共沸除去し及び結晶化して回収されることである。予想外にも、本発明の方法は、アシル化アミノアルコールを、WO93/20038またはPhilippeらによって得られた収率よりもかなり高い収率で与える。加えて、生成物は、高い純度を有する。即ち、望ましくない副生物を含まない。これは、Ｏ−アシル化が、非常に狭い範囲で起こるためである。
【０００８】
本発明の方法において、アミノアルコールは、式ＲＣＯＯＨの有機酸によってアシル化し、当該有機酸は酸ハロゲン化物の形態を有する。前記方法は、以下の工程を含む。
（１）アミノアルコール又はその塩を、有機溶媒中で、水０.０１〜１０容積に対して有機溶媒１容積の存在下、懸濁又は溶解する工程、
（２）有機酸ハロゲン化物を純粋な化合物として又はアミノアルコールを懸濁するために使用される有機溶媒における溶液若しくは懸濁液として添加し、一方、ｐＨを５〜１２の範囲に維持する工程、
（３）得られた混合物を、前記アミノアルコールがＮ−アシル化化合物に変換されるまで撹拌する工程、
（４）Ｎ−アシル化アミノアルコールを有機相から回収する工程。
【０００９】
式ＲＣＯＯＨの有機酸において、Ｒは水素、任意に不飽和の、任意に置換された又は任意に１以上のヘテロ原子を含有する、５５までの炭素原子を有する直鎖又は分岐のアルキル基；任意に不飽和の、任意に置換された又は任意に１以上のヘテロ原子を含有するＣ5-8のシクロアルキル基；任意に置換されたアリール又はヘテロアリール基；又は任意に置換されたベンジル基である。
本発明の好ましい態様として、当該アルキル基が、酸素原子又は内部エステル基によって任意に中断される。他の好ましい態様として、アルキル基は１〜５０の炭素原子を有し、より好ましくは、１０〜５０の炭素原子を有し、最も好ましくは、１５〜４５の炭素原子を有する。
【００１０】
上記のごとく定義した基の好ましい置換基は、水酸基、特にα−水酸基である。
本発明の好ましい態様において、式ＲＣＯＯＨの有機酸は、ヘキサン酸、オクタン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、27-ステアロイルオキシ−ヘプタコサン酸、27-リノレオイルオキシ−ヘプタコサン酸、α−ヒドロキシ−ステアリン酸、乳酸、レチノイン酸、サリチル酸又はフェルラ酸である。
任意の水酸基に対する保護基は、当該技術分野で周知のものであり、Greene, T. (1981) Protective Groups in Organic Synthesis (John Wiley & Sons; New York)に記載されたような好適な基から選択してもよい。本発明の一つの態様として、水酸基は、アセチルエステル又はメトキシメチルエーテルとして保護される。
本発明の他の態様として、水酸基は、ハロゲン基を将来の水酸基に対応する位置に含む酸ハロゲン化物を最初に結合し、その後、ハロゲン基を変換、即ち、結合後、酸素官能基、例えばアセトキシ基に変換することによって提供される。ハロゲン基の酸素官能基への変換及びその後の酸素官能基の水酸基への変換は、従来から一般に公知の方法を使用して行われる。好ましくは、当該ハロゲン基は、臭素基である。
【００１１】
本発明は、関連する有機酸の混合物を使用する選択肢も考慮する。例えば、異なる鎖長及び／又は異なる不飽和の程度のアルキル基を有する脂肪酸の混合物がある。
本発明の他の好ましい態様として、当該アミノアルコールは、次式のスフィンゴイド塩基、又はその塩である。
Ｒ'−Ａ−ＣＨ(ＯＲ''')−Ｃ(ＮＨ2)−ＣＨ2−ＯＲ”
（式中、Ｒ’は任意に１以上の二重結合を含んでもよく及び／又は任意に、好ましくは１以上の水酸基で置換されていてもよい、１０〜２２の炭素原子を有する直鎖又は分岐のアルキル基であり、好ましくは１２〜１８の炭素原子を有する直鎖のアルキル基であり、より好ましくは、１３の炭素原子を有する直鎖のアルキル基であり、および、
Ｒ”は、水素又は炭水化物、例えば、ヘキソース又はペントース部分(任意に更なる炭水化物部分と結合する)、好ましくは水素又はグルコース又はガラクトース部分であり、
Ａは、ＣＨ2−ＣＨ2、ＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ2−Ｃ(Ｈ)ＯＲ'''であり、及び
Ｒ'''は、水素又は１〜３の炭素原子のアシル基、好ましくは、水素又はアセチル基である。）
【００１２】
本発明の方法で使用されるスフィンゴイド塩基は、好ましくはスフィンゴシン、スフィンガニン又はフィトスフィンゴシンである。より好ましくは、スフィンゴイド塩基は、フィトスフィンゴシンである。
本発明の特に好ましい態様は、フィトスフィンゴシンが、微生物発酵から誘導したテトラアセチルフィトスフィンゴシン、例えば、イーストであるPichia ciferriの脱アセチル化を経由して得られることである。テトラアセチルフィトスフィンゴシンの部分的脱アセチル化によって得られたアセチルフィトスフィンゴシンを使用することも可能である。本発明は、フィトスフィンゴシン又は部分的脱アセチル化アセチルフィトスフィンゴシンが、断続的な回収及び／又は乾燥工程を適用せずに、本発明のアセチル化工程に直接使用されることを有利に許容する。
スフィンゴイド塩基の塩として、ＨＣｌ又は硫酸塩が好ましい。
【００１３】
結合反応で使用される有機溶媒は、アミノアルコールを十分に溶解する、即ち、完全に溶解するか、又はアミノアルコールを続く酸ハロゲン化物との反応に十分影響されやすいように保持する程度に溶解する、いかなる溶媒であってもよい。好ましくは、有機溶媒は、ハロゲン化炭化水素、エステル、エーテル、ケトン、アルカン、芳香族炭化水素又は芳香族アルコールである。より好ましくは、この有機溶媒は、過酸化物を生じることはない。更に好ましくは、この有機溶媒は、全ての混合比で水と混和しない溶媒である。更に好ましくは、この有機溶媒は、ギ酸、酢酸、プロピオン酸のアルキルエステルであり、該アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル又はイソブチル基である。最も好ましくは、この有機溶媒は、酢酸のアルキルエステル、例えば酢酸エチル、酢酸イソプロピル又は酢酸ブチルである。酢酸のアルキルエステルの使用は、これらの溶液が当該方法から容易に回収され及び任意に再利用され、安価で過酸化物のないものであるという利点がある。
【００１４】
本発明の方法において、アミノアルコールは、有機溶媒中に、水の付加的な存在下で懸濁される。水は、アミノアルコールをこの有機溶媒中に懸濁する間又は懸濁後に添加され得るか、又はアミノアルコール源から生じ得、その双方でもよい。アミノアルコールの有機溶媒懸濁液又は溶液中に存在してもよい水の量は、有機溶媒の容量の０.０１〜１０倍で変化してもよい。好ましくは、水の量は、有機溶媒の容量の０.１〜０.５倍である。水の量の上限は、一般に技術的理由によって決定され、例えば、反応容器の容量によって決定される。
アミノアルコールが有機溶媒−水混合物中に存在する場合の濃度は、都合よく１〜９００ｇ／ｌ、好ましくは、２５〜２５０ｇ／ｌの量である。
【００１５】
本発明の方法の次の工程において、酸ハロゲン化物は、このアミノアルコール−有機溶媒−水混合物に、撹拌下、添加され、それによって、この酸ハロゲン化物は、純粋な化合物として、あるいは、アミノアルコールの懸濁に使用される有機溶媒の溶液又は懸濁液として添加されてもよい。
本発明の好ましい態様において、酸ハロゲン化物は、酸クロライドである。
【００１６】
本発明は、酸ハロゲン化物をその場で好適な有機酸を上述のハロゲン化剤と反応することによって調製する選択肢も考慮する。好ましいハロゲン化剤は、亜リン酸トリクロライド及び塩化チオニルである。
酸ハロゲン化物は、典型的に、アミノアルコール−有機溶媒−水混合物に、アミノアルコールのモルと同量、又はわずかにアミノアルコールのモル量が過多の量で添加される。
酸ハロゲン化物をアミノアルコール−有機溶液−水懸濁液に添加する一方、反応混合物のｐＨは、５〜１２の範囲、好ましくは６〜１１の範囲の値に、塩基を添加して調節することによって維持される。本発明は、ｐＨ調節を単なる無機塩基、例えばＮａＯＨを使用して行うことができる。ｐＨを結合中に安定なレベルに維持するため、一部の塩基を炭酸ナトリウム又は炭酸カリウムとして添加する選択肢がある。
【００１７】
結合反応中の温度は、混合物の撹拌中、ある値に保った。結合中の温度は、使用した溶液の沸点にも依存するかもしれない。沸点が高いと、適用される温度も高くなる。典型的に、低い溶解度を有するＮ−アシル化アミノアルコール、例えば、ある種のセラミドの調製には、温度は、４０〜８０℃の値に維持される。
反応混合物は、十分な時間撹拌して、アミノアルコールからＮ−アシル化化合物へ実質的に完全に変換させた。変換の程度は、周知の方法、例えば、薄層クロマトグラフィ、ＮＭＲスペクトル、ＨＰＬＣ等によって調査した。典型的に、実質的に完全な変換は、約３０〜６０分後に得られる。完全な変換が得られない場合、付加的な酸クロライドを添加してもよい。
【００１８】
本発明の一つの態様において、有機酸ＲＣＯＯＨのＲ基に存在するハロゲン置換基は、結合段階に続き、結合段階で使用されるのと同様の有機溶媒中で、酸素官能基に置換される。
本発明の方法において生産されるＮ−アシル化アミノアルコールは、有機相から、通常の技術を使用して回収される。回収プロセスは、一般に、単純なプロセスであり、有機相を水洗する工程、水−溶媒共沸混合物から蒸留する工程を含む。
即ち、反応終了後、反応混合物の温度は、混合物の沸点のちょうど下の値まで上昇する。水層は除去され、有機層は、任意に水洗される。水−溶媒共沸混合物は、蒸留される。任意に、固体粒子を取り除くための熱ろ過工程及び／又は脱色のための活性炭処理が適用される。生産物は、有機相から、結晶生産物の冷却及びろ過によって回収される。
【００１９】
本発明の方法により調製されたＮ−アシル化アミノアルコールは、セラミド、セレブロシド、レチノイル−スフィンゴイド塩基、サリチルスフィンゴイド塩基、又は短鎖α−ヒドロキシアシル−スフィンゴイド塩基である。これらの化合物は、好ましくは、化粧品又は皮膚用組成物に適用される。
【００２０】
(実施例１)
Ｎ−ステアロイル−フィトスフィンゴシンの調製
フィトスフィンゴシン(純度９５.４％)５０ｇの懸濁液、酢酸イソプロピル７００ｍｌ及び水１００mlを窒素雰囲気下、メカニカルスターラー、ｐＨ−電極、還流冷却器及び窒素導入口を備えるジャケット付き１リットル反応器中で撹拌した。その間、反応混合物は、５０℃の水を当該ジャケットに通してポンプで送ることによって、５０℃に保った。ｐＨを、３６％塩酸９．５ｍｌで７．１に調節した。結合中、ｐＨを、必要であれば２５％水酸化ナトリウムを添加し、ｐＨ制御システム及びバルブを利用することによって、７+/-0.2に保った。
１と1/4時間にわたり、ステアリン酸クロライド５５ｍｌ（４８．４２ｇ）及び酢酸イソプロピル５０ｍｌを、滴下漏斗から添加した。その間、温度は５０℃に保った。懸濁液が得られた。この滴下漏斗を、酢酸イソプロピル２５ｍｌですすいだ。撹拌を５０℃で０．５時間続けた。ＴＬＣ（クロロホルム／メタノール９／１を溶出剤として使用し、エタノール中５％リンモリブデン酸(phosphormolybdenic acid)を、脂質の検出に使用）は、フィトスフィンゴシンが存在しないことを示した。
【００２１】
この混合物を、水の温度を８０℃にあげることによって７７℃まで加熱し、撹拌を止めて層を分離した。水層をいくつかの中間層と共に除去した。有機層を水１００ｍｌと７７℃で撹拌し、層を分離した。水層を最初の水層と結合して、酢酸イソプロピル５０ｍｌで温抽出した。有機層を最初の有機層に添加し、この混合物を、蒸留物を反応器に戻しながら蒸留して除き、その後、水層を除去した。蒸留物が０.５リットルとなった後、液体の温度は、８２℃(蒸気は７２℃)となり、水２６ｍｌを除去した。
この混合物を１９℃で一晩冷却した。その間、穏やかに撹拌した。その後、ガラスフィルター(Ｇ４)でろ過した。反応器を、ろ塊に置換するために使用される酢酸イソプロピル２００mlで、少しずつすすいだ。ろ塊を他の部分の酢酸イソプロピル１００ｍｌで洗浄し、湿潤ろ塊（１９８ｇ）を空気流下、３５℃で乾燥した。さらに、真空下、４０℃で乾燥し、Ｎ−ステアロイル−フィトスフィンゴシン８７．５ｇを得た。収率は、９１％だった。
【００２２】
(実施例２)
Ｎ−ステアロイル−フィトスピンゴシンの調製
フィトスフィンゴシン５０ｇの懸濁液、酢酸イソプロピル７５０ｍｌ及び水１００mlを窒素雰囲気下、メカニカルスターラー、ｐＨ−電極、還流冷却器及び窒素導入口を備えるジャケット付き１リットル反応器中で撹拌した。その間、反応混合物は、５０℃の水を当該ジャケットに通してポンプで送ることによって、５０℃に保った。結合段階の間、ｐＨを、必要であれば２５％水酸化ナトリウムを添加し、ｐＨ制御システム及びバルブを利用することによって、７に保った。
１と3/4時間にわたり、ステアリン酸クロライド５５ｍｌ（４８．４２ｇ）及び酢酸イソプロピル５０ｍｌを、滴下漏斗から添加した。その間、温度は５０℃に保った。この混合物約４０ｍｌを添加した後、ｐＨは、７から落ち、ｐＨ制御を始めた。この滴下漏斗を、酢酸イソプロピル５ｍｌですすいだ。撹拌を５０℃で０．５時間続け、ＴＬＣは、フィトスフィンゴシンが存在しないことを示した。
【００２３】
この混合物を、水の温度を８０℃にあげることによって７６℃まで加熱し、撹拌を止めて層を分離した。水層をいくつかの中間層と共に除去した。有機層を水１００ｍｌと８０℃で撹拌し、層を分離した。水層を最初の水層と結合して、酢酸イソプロピル１００ｍｌで温抽出した。有機層を最初の有機層に添加し、この混合物を、蒸留物を反応器に戻しながら蒸留して除き、その後水層を除去した。蒸留物が０.４リットルとなった後、液体の温度は、８４℃となり、水３２ｍｌを除去した。
この混合物を１９℃で冷却した。その間、穏やかに撹拌した(結晶化は７８℃で開始する)。その後、ガラスフィルター(Ｇ３)でろ過した。反応器を、ろ塊に置換するために使用される酢酸イソプロピルで少しずつすすいだ(全部で３００ｍｌ)。湿潤ろ塊（１５６ｇ）を空気流下、３５℃で乾燥した。さらに、真空下で乾燥し、純度９８％のＮ−ステアロイル−フィトスピンゴシン８８ｇを得た。収率は、９８％だった。
【００２４】
(実施例３)
Ｎ−オレオイル−フィトスフィンゴシンの調製
フィトスフィンゴシン５０ｇの懸濁液、酢酸イソプロピル７５０ｍｌ及び水１００mlを窒素雰囲気下、メカニカルスターラー、ｐＨ−電極、還流冷却器及び窒素導入口を備えるジャケット付き１リットル反応器中で撹拌した。その間、反応混合物は、５０℃の水を当該ジャケットに通してポンプで送ることによって、５０℃に保った。ｐＨは、３６％塩酸１０ｍｌで７に調節した。結合段階の間、ｐＨを、必要であれば２５％水酸化ナトリウムを添加し、ｐＨ制御システム及びバルブを利用することによって、７に保った。
１．２５時間にわたり、オレイン酸クロライド５５ｍｌ及び酢酸イソプロピル５０ｍｌを、滴下漏斗から添加した。その間、温度は５０℃に保った。この滴下漏斗を、酢酸イソプロピル５ｍｌですすいだ。撹拌を５０℃で０．５時間続け、ＴＬＣが、フィトスフィンゴシンが存在しないことを示した。
【００２５】
この混合物を、水の温度をあげることによって７６℃まで加熱し、撹拌を止めて層を分離した。水層をいくつかの中間層と共に除去した。有機層を水１００ｍｌと７６℃で撹拌し、層を分離した。この混合物を、蒸留物を反応器に戻しながら蒸留して除いた。液体の温度が８４℃となった後、この混合物を１２℃で冷却した。その間、穏やかに撹拌した(結晶化は４６℃で開始する)。その後、ガラスフィルター(Ｇ３)でろ過した。反応器を、ろ塊に置換するために使用される酢酸イソプロピルで少しずつすすいだ(全部で３００ｍｌ)。
湿潤ろ塊（２２４ｇ）を空気流下、３５℃で乾燥した。さらに、真空下、４０℃で乾燥し、純度９８％のＮ−オレオイル−フィトスフィンゴシン８１．５ｇを得た。収率は、９１％だった。
【００２６】
(実施例４)
Ｎ−α−ヒドロキシステアロイル−フィトスフィンゴシンの調製
硫酸フィトスフィンゴシン５０ｇの懸濁液、ｎ−酢酸ブチル５００ｍｌ及び水２５ｍlを窒素雰囲気下、メカニカルスターラー、ｐＨ−電極、還流冷却器及び窒素導入口を備える１リットル三口フラスコ中で撹拌した。その間、反応混合物は、７１℃に保った。
結合段階の間、ｐＨを、必要であれば２５％水酸化ナトリウムを添加し、Mettler DL21滴定器を利用することによって、８．５に保った。この混合物を２５％ＮａＯＨ１１ｍｌで前滴定し、ｐＨを約３．２から約８に変化した。次に、炭酸ナトリウム２．７ｇを添加して、ｐＨを約９に変えた。
約５５分間にわたり、２−ブロモステアリン酸クロライド／ブロマイド５０ｍｌ（６０ｇ）及びｎ−酢酸ブチル５０ｍｌを、温度を７５℃にして、滴下漏斗から添加した。沈殿物が添加の途中で形成されたので、温度を８０℃に上げて溶解性を改善した。添加の最終付近で、更に沈殿物が形成されたので、温度を８５℃に上げた。滴下漏斗を、ｎ−酢酸ブチル２０ｍｌですすいだ。撹拌を８５℃で１時間続けた。
【００２７】
次に、この混合物を加熱して、ディーン−スターク装置(Dean-Stark setup)で水層を分離しながら還流し、水層７８ｍｌを１３０℃までの温度で分離した。１１６℃に冷却後、無水酢酸カリウム２５ｇを添加し、混合物を２時間、約１２９℃で還流した。一晩、室温で静置した後、還流を更に１.５時間続けた。
次に、この混合物を１００℃に冷却し、水２００ｍｌを添加して、混合物を液体の温度が１０６℃になるまで蒸留して除いた。蒸留中、蒸留物５００ｍｌが回収された場合に、水５０ｍｌの一部分を添加した。この蒸留物は、１６５ｍｌの水層と４６０ｍｌの有機層を含んでいた。次に、ブタノール５００ｍｌと水１００ｍｌを添加して、混合物を約８８℃に加熱した。その後撹拌を止め、水層を吸引によって除去し、有機層を約９０℃で、水１００ｍｌを用いて２回以上洗浄した。最後の水層は、ｐＨ５．７だった(容積は、それぞれ１５０、６０、８０ｍｌ)。次に、ｐＨを、２５％ＮａＯＨを添加することによって１１〜１２に維持した。ｐＨは、落ち続けた。約２時間後、１２ｍｌの２５％ＮａＯＨが消費され、温度は、約７０〜８０℃に保たれた。撹拌を止め、水層４０ｍｌを吸引によって除去した。有機層を蒸留して除去した。蒸留中、２つの部分のブタノールを添加した。合計１９０ｍｌの有機層と、６０ｍｌの水層の蒸留物を収集した。絵気温は、１０８℃に達した。
【００２８】
混合物を冷却し、約４６℃で沈殿が始まった。撹拌と冷却を２時間続け、最終温度は２℃であった。
沈殿物をろ過して除き、その塊を２５０ｍｌの冷ブタノール２５０ｍｌで置換し、乾燥まで吸引(sucked dry)した(合計約２０分)。
湿潤塊を、メタノール５００ｍｌ中で加熱し、温めながら(７０℃)、紙フィルターを通してろ過し、熱メタノール２５ｍｌで洗浄した。ろ液を冷却して約２６℃で結晶化を開始した。更に、０℃まで冷却した。０℃で１時間攪拌した後、沈殿物をろ過して除き、塊を冷メタノール２５０ｍｌで置換し、すばやくろ過した。湿潤ろ過塊を真空下、４５℃で乾燥して、生成物６０ｇを得た。
【００２９】
(実施例５)
Ｎ−オクタノイル−フィトスフィンゴシンの調製
硫酸フィトスフィンゴシン５０ｇの懸濁液、酢酸イソプロピル５２５ｍｌ及び純水(demiwater)７５ｍlを窒素雰囲気下、メカニカルスターラー、ｐＨ−電極、還流冷却器及び窒素導入口を備えるジャケット付き１リットル反応器中で撹拌した。その間、反応混合物は、７０℃の水を当該ジャケットに通してポンプで送ることによって、７０℃に保った。
結合段階の間、ｐＨを、必要であれば２５質量％水酸化カリウムを添加し、Mettler DL21滴定器を利用することによって、８．５に保った。約４.５の初期ｐＨを２５％ＫＯＨで約７．５に調節し、無水炭酸カリウム(potassium carbonate anh.)３．１６ｇを添加し、ｐＨを約８．１とした。
【００３０】
約３／４時間にわたり、オクタノイルクロライド２０．５５ｇ及び酢酸イソプロピル３７ｍｌを、滴下漏斗から添加した。この間、温度は７０℃に保った。この滴下漏斗を、酢酸イソプロピル１０ｍｌですすいだ。撹拌を７０℃で続けた。０.５時間撹拌後、少量のフィトスフィンゴシンの存在が、ＴＬＣによって検出されたので、オクタノイルクロライド１ｍｌを添加した。０.５時間後、フィトスフィンゴシンが、まだ残っていたので、更にオクタノイルクロライド１ｍｌを添加した。１０分後、反応を止め、混合物を一晩室温の維持した。
この混合物を７０℃まで温め、更にオクタノイルクロライド０．５ｍｌを添加した。１５分撹拌後、撹拌を止め、層を分離した。固体は、水１００ｍｌを加えた後に溶解した水層に存在した。１０分後、水層を除去した。有機層を水１００ｍｌ、７１℃で撹拌し、分離した。水層は除去した。有機層を、蒸留物の有機層を反応器に戻しながら蒸留して除いた(ディーン−スターク装置)。液体の温度が、８２.６℃になったとき、水層は２０ｍｌであった。混合物は、水のグラムあたり１３.３ｍｇ含んでいた。
撹拌は、８℃に約３／４時間冷却する間継続し、５２℃で結晶化が始まった。撹拌を８℃で０.５時間続け、懸濁液をガラスフィルター(Ｇ３、幅１０cm)でろ過した。反応器を、ろ塊に置換するために使用される酢酸イソプロピル(合計１８０ｍｌ)で３回に分けてすすぎ、その塊を乾燥近くまで吸引した。この湿潤ろ塊を、真空下で乾燥し、生成物５５ｇを得た。
【００３１】
(実施例６)
Ｎ−ヘキサノイル−フィトスフィンゴシンの調製
硫酸フィトスフィンゴシン５０ｇの懸濁液、酢酸イソプロピル５２５ｍｌ及び純水７５ｍlを窒素雰囲気下、メカニカルスターラー、ｐＨ−電極、還流冷却器及び窒素導入口を備えるジャケット付き１リットル反応器中で撹拌した。その間、反応混合物は、７０℃の水を当該ジャケットに通してポンプで送ることによって、７０℃に保った。
結合段階の間、ｐＨを、必要であれば２５質量％水酸化カリウムを添加し、Mettler DL21滴定器を利用することによって、８．５に保った。約４.５の初期ｐＨを２５％ＫＯＨで約７．５に調節し、炭酸カリウム無水物３．１６ｇを添加し、ｐＨを約８．１とした。
【００３２】
約３／４時間にわたり、ヘキサノイルクロライド１９．２６ｇ及び酢酸イソプロピル４０ｍｌを、滴下漏斗から添加した。この間、温度は７０℃に保った。この滴下漏斗を、酢酸イソプロピル１０ｍｌですすいだ。撹拌を７０℃で続けた。０.５時間撹拌後、ＴＬＣは、フィトスフィンゴシンがないことを示したので、撹拌を止め、層を分離した。固体は、水５０ｍｌを加えた後に溶解した水層に存在した。１０分後、水層を除去した。有機層を水１００ｍｌ、７１℃で撹拌し、分離した。水層は除去した。有機層を、蒸留物の有機層を反応器に戻しながら蒸留して除いた(ディーン−スターク装置)。液体の温度が、８２.６℃になったとき、水層は２０．５ｍｌであった。溶液を熱いうちにろ過し、熱酢酸イソプロピル４０ｍｌですすいだ。ろ液は、水のグラムあたり１１．８ｍｇ含んでいた。これを、週末中、室温で維持した。
この混合物を撹拌しながら６０℃まで加熱し、ろ液を得た。撹拌は、冷却する間継続し、３５℃で結晶化が始まった。撹拌と冷却は、１℃まで約１時間続けた。撹拌を１℃で１時間続けた後、懸濁液をガラスフィルター(Ｇ３、幅１０cm)でろ過した。フラスコを、ろ塊に置換するために使用される酢酸イソプロピル(合計２００ｍｌ)で３回に分けてすすぎ、その塊を乾燥近くまで吸引した。全てのろ過に２.５時間かかった。この湿潤ろ塊を真空下、４９℃で乾燥し、生成物５１ｇを得た。