(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロレラ・レギュラリスおよび／またはクロレラ・レギュラリス抽出物を有効成分とする白内障の予防・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、クロレラおよび／またはクロレラ抽出物を有効成分とする白内障の予防・治療剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
白内障は、水晶体の混濁により視力が障害される疾患である。水晶体混濁の原因として最も多いのは加齢（老人性）であるが、その他にも糖尿病、ステロイドの長期使用、外傷、炎症などの眼疾患、内眼手術、遺伝（先天性）、アトピー性皮膚炎に伴うものなどがある。
【０００３】
白内障に対しては、現時点では有効な薬物療法はなく、進行すると手術治療が必要となる。また、発展途上国では、視力障害の大半が白内障によるため、その障害発症程度を緩和することが急務となっている。このため、白内障発症メカニズムを解明する試みがなされており、例えば、小原らは（小原喜隆、門屋講司ほか：日眼会誌，99,1303(1995)）、水晶体が老化とともに光や酸素に暴露される組織であることから、細胞膜の脂質過酸化が水晶体の混濁をもたらすとの認識により、生体内の酸化防御機構の障害が発生の一因となる可能性を示唆している。また、糖尿病に起因する発症メカニズムとしては、高血糖により房水中のグルコースが増加し、これが水晶体へ移行した後アルドースレダクターゼによりソルビトールに還元され、これにより浸透圧のバランスが崩れるため、膜が傷つき混濁が起こるとの報告がある（Kinoshita, J. H. :JAMA, 246, 257(1981)）。
【０００４】
しかしながら、白内障発症のメカニズムは未だ明らかとなってはおらず、特公平７−５５９０２号公報等に記載されているアルドースレダクターゼ阻害剤も、必ずしも満足できるものではない。
ところで、緑藻類の一種であるクロレラは、その藻体中に良質のタンパク質や必須アミノ酸、ビタミン類、ミネラル類がバランスよく豊富に含有されており、増殖速度が速く生産性が高いという利点もあるため、古くから健康食品、食品素材及び養殖魚等の餌料素材等として利用されている。
【０００５】
クロレラに関しては、動脈硬化予防、血圧上昇抑制、免疫賦活等様々な生理作用も報告されている。例えば、特開昭６２−４５５３２号公報には、クロレラ画分の血圧上昇抑制効果が記載されており、特開昭６１−１９７５２５号公報にはクロレラを有効成分とする免疫賦活剤が、特開平１−３００８８１号公報にはクロレラ熱水抽出液とオリゴ糖との混合物からなる健康飲料が、また、特開平９−１２４６６号公報には、クロレラを有効成分とする脂質の吸収阻害・排出促進剤が開示されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、白内障に対する予防、進行の抑制、治療効果を有するとともに、長期間経口摂取を行っても副作用を起こすことのない、嗜好的にも優れた物質を提供することを目的としている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、意外にもクロレラが白内障の予防・治療効果を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、クロレラおよび／またはクロレラ抽出物を有効成分とする白内障の予防・治療剤を提供するものである。
【０００９】
また、本発明は、上記白内障の予防・治療剤を含有することを特徴とする白内障の予防・治療用飲食品をも提供するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明で利用するクロレラは、クロレラ属に属する緑藻類であればいずれを用いてもよく、特定の種に限定されるものではないが、入手が容易で安全性の点で優れているものとしては、クロレラ・レギュラリス（Chlorella regularis）、クロレラ・ブルガリス（Chlorella vulugaris）、クロレラ・ピレノイドサ（Chlorella  pyrenoidosa）、クロレラ・エリプソリディア（Chlorella ellipsoidea）等が具体的にあげられ、特にクロレラ・レギュラリスが好ましい。
【００１１】
また、本発明実施のために用いるクロレラは、上記のクロレラを、任意の培養法で培養することにより得られる。具体的には、炭酸ガスを供給しながら光照射下で光合成を行わせながら培養する独立的培養や、炭素源としてグルコースや酢酸などを含む培地中で培養する従属的培養法等が挙げられる。
【００１２】
独立的培養法は、無機塩に窒素源を加えた培地にクロレラを接種し、光照射下で炭酸ガスを含む空気を通気して培養する。無機塩としては、KH2PO4、MgSO4、その他微量無機成分を加え、窒素源としては、アンモニア、硫酸アンモニウム等を用いることができる。光源としては人工光源または太陽光を用いることができる。クロレラ細胞の培養液は、遠心分離機で洗浄、濃縮し、その後細胞を不活性化するためにプレートヒーター等を用いて加熱処理する。
【００１３】
従属的培養法は、培養タンクの中で無菌的に行われる。炭素源としては、主にグルコース、酢酸が用いられる。これらの炭素源とKH2PO4、MgSO4、微量無機成分及び窒素源（硫酸アンモニウム、アンモニア）を含む培地に通気して培養する。細胞濃度が高いと酸素の消費量が多いので、通気と同時に激しい攪拌も必要である。独立的培養法に比べ、増殖速度も速く、収量も多いのが特徴で、２日間で８０g/Lに達することができる。培養液からの細胞の収穫工程は独立的培養法と同じである。
【００１４】
得られたクロレラは、そのまま、あるいは乾燥するだけで、本発明の白内障予防・治療剤として用いることができるが、フレンチプレスや超音波処理等によって細胞を破砕したりしたものを用いても差し支えない。またクロレラをそのまま、あるいは上記のような処理をした後、アセトン、メタノール、エタノール、ヘキサンなどの有機溶媒や水系の抽出液を用いた抽出操作によって調製した抽出物を用いても差し支えない。
【００１５】
また、本発明のクロレラまたはクロレラ抽出物は、溶媒の種類や使用目的に応じて乾燥、濃縮、あるいは希釈などの操作を行い使用してもよい。必要ならば、その効力に影響のない範囲で脱臭、脱色などの精製処理を、通常使用される手段を用いて行ってもよい。これらは単独または２種以上混合して用いることも可能である。
【００１６】
また、本発明のクロレラまたはクロレラ抽出物は、後述するように、糖尿病の合併症と深い関わりのある、タンパク質の糖化反応による生成物であるヘモグロビンA1cを低下させる効果を有しており、このことから、糖尿病合併症の予防・治療にも有効と考えられる。
【００１７】
本発明のクロレラまたはその抽出物は、上記のように、単独あるいはその他一般的に使用されている成分と併用し、食品、医薬品、医薬部外品等様々な用途に利用することが可能である。例えば、食品に使用する場合には、砂糖、果糖等の糖質、安定剤、酸味料（クエン酸、リンゴ酸）、ビタミン類、ミネラル等を配合し、お茶、コーヒー、果汁飲料、発酵乳、炭酸飲料、プリン、ゼリー、ドロップ、キャラメル、チョコレート、ふりかけ、ドレッシング、スープ等の形態で用いることができる。また、医薬品であれば、その剤形は任意に選定することが出来る。一般的には、薬学的に許容できる液状または固体状の担体と配合し、且つ必要に応じて溶剤、分散剤、乳化剤、緩衝剤、安定剤、賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤等を加えて、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等に製剤して使用するのが適当である。
【００１８】
本発明のクロレラまたはクロレラ抽出物を有効成分とする白内障の予防・治療剤は、従来より健康食品として利用されており、安全性も確認されているクロレラを利用するものであるから、投与方法、投与量に厳格な制限はないが、そのまま、あるいは任意の飲食物と混合して、経口投与する。また、その好適な服用量は、健康食品としての目安摂取量である１日３〜８g（乾燥重量）である。
【００１９】
また、クロレラを食品に添加する場合の添加量は、食品の形態等に応じて異なるものの、錠剤においては風味面等から、通常２０〜５０重量％（乾燥クロレラ換算）、特に２０〜３０重量％が好ましい。２０重量％未満ではクロレラの風味感が足らず、５０重量％以上ではクロレラの特異な不快臭（青臭み）が強すぎてしまうのである。
【００２０】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２１】
【製造例１】
クロレラの製造法
１ｍ3の滅菌可能な密閉タンクに表１の組成の培地を滅菌充填（約0.7ｍ３）した後、クロレラ・レギュラリス（Chlorella regularis）１０7細胞数/mLを７Ｌ接種する。接種後、通気撹拌を行いながら、ｐＨが６．５になるよう１０％ＮａＯＨ溶液で調製しながら、３０℃で４８時間培養した。収穫は遠心機で濃縮と洗浄を同時に行い、約１００Ｌの濃縮液を作成し、ＵＨＴで加熱殺菌を行った。この濃縮液をスプレードライヤーで噴霧乾燥し、約８kgのクロレラ粉末を得た。
【００２２】
【表１】
0004368449.tif 000002
【００２３】
【試験例１】
１０週齢のWistar系ラット（雄、体重約２７０g）にストレプトゾトシン（５mg／１００g体重）を投与し、糖尿病を誘発させた。投与後１週間目に、糖尿病を誘発したラットを６匹ずつ２群に群分けした。それぞれの群は、製造例１により得られたクロレラ・レギュラリスの乾燥藻体を配合した飼料を与える群（以下クロレラ区という）と、クロレラを添加しない対照飼料を投与する群（以下対照区）とし、それぞれの飼料を１１週間摂取させた。なお飼料の配合の詳細は表２に示したとおりである。また、有意差の判定にはt検定を用いた。
【００２４】
飼料と水は自由摂取とし、白内障の発症、体重、摂食量、尿量を１週間おきに測定した。白内障の発症は、実験飼料投与１１週目のラットを肉眼で観察し、その白濁の程度を１〜９のスコアで表し判定した（表３）。その結果、体重、摂食量、尿量に有意差はなく、クロレラ区では、有意に白内障の進行が抑制された。
【００２５】
【表２】
0004368449.tif 000003
【００２６】
【表３】
0004368449.tif 000004
【００２７】
また、飼料投与１１週間目に解剖を行い、生化学的検査を行った。生化学的検査の項目は血清の血糖値、総コレステロール濃度、過酸化脂質濃度および糖化ヘモグロビンであるヘモグロビンＡ1cを測定した。ここで過酸化脂質はチオバルビツール酸反応物（TBARS）として定量した。また肝臓を摘出し、そのホモジネートの化学発光(以下ＣＬ：chemiluminescence)を測定した。肝臓のホモジネートのＣＬ値と過酸化脂質(TBARS)濃度は相関があり、フリーラジカルを含む一重項酸素の発生と関係があると考えられている（T. Miyazawa, et. al, J. Nutr. Sci. Vitaminol., vol27, p415-423(1981)）。したがって、肝臓のホモジネートのＣＬ値は、肝臓の酸化ストレスの程度を表すものである。具体的には、肝臓０．５gと０．１Ｍリン酸緩衝液９．５mLを混合してホモジネートを作成し、そのうち５mLを用いて、ＣＬ測定装置（ＣＬＤ−１０、東北電子産業（株））で測定した（条件：４０℃、５分間）。
【００２８】
飼育期間中の体重、摂食量、尿量に関しては、対照区とクロレラ区で、有意な差は存在しなかった。表４に解剖時の生化学的検査項目の結果について示す。血糖値に関しては有意な差は存在しなかった。しかしながら、血糖値の長期的な指標であり、糖尿病合併症と深い関わりがあるタンパク質の糖化反応による生成物であるヘモグロビンＡ1cは、クロレラ区で有意に低下した。
【００２９】
血清総コレステロールについては、クロレラ区で有意な低下がみられた。一般に、糖尿病においては、末梢からの脂肪酸放出増加と高血糖によって、肝臓における超低密度リポタンパク(VLDL)の産生が増加する。また、同時にトリグリセライドの異化に重要な酵素であるリポタンパクリパーゼ(LPL)がインスリン依存性であるため、LPL活性が低下し、血中VLDLの増加が起きると考えられている。現時点では、クロレラ投与による血清総コレステロールの低下メカニズムは明らかではないが、糖尿病の合併症の一つである高脂血症にも有効であることが明らかとなった。また血清過酸化脂質についても低下傾向がみられた。表５に肝臓ホモジネートの化学発光強度の結果を示す。このようにクロレラ投与によって生体内の酸化ストレスが低減されていることが明らかとなった。
【００３０】
【表４】
0004368449.tif 000005
【００３１】
【表５】
0004368449.tif 000006
【００３２】
【実施例１】
表６に示す処方で各種成分を混合、打錠して錠剤を製造した。これを専門パネラー１０人で官能評価した。評価は、錠剤の風味、クロレラ感を指標として、＋２：非常においしい、＋１：ややおいしい、０：普通、−１：ややまずい、−２：まずいとした。結果を表７に示す。クロレラ２０〜５０％、特に２０〜３０％で良好な風味が得られた。
【００３３】
【表６】
0004368449.tif 000007
【００３４】
【表７】
0004368449.tif 000008
【００３５】
【発明の効果】
本発明のクロレラおよび／またはクロレラ抽出物を用いれば、白内障の予防や進行の抑制を安価、簡便かつ継続的に行うことができる。
また、本発明のクロレラおよび／またはクロレラ抽出物を用いれば、糖尿病の合併症を抑制することも可能であると思われる。