(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルノシンの０．０１〜２０％溶液を酢酸を用いてｐＨ３．５〜４．０に調整し、その溶液を８５〜９５℃になるまで加熱し、冷却後ｐＨ８．０以上に調整して製した酢酸処理カルノシンを有効成分とする抗酸化能増強剤。
【請求項２】
請求項１に記載の酢酸処理カルノシンとフラボノイド系又はポリフェノール系の抗酸化成分とを有効成分とする食品用の抗酸化能増強剤。
【請求項３】
カルノシンの０．０１〜２０％溶液を酢酸を用いてｐＨ３．５〜４．０に調整し、その溶液を８５〜９５℃になるまで加熱し、冷却後ｐＨ８．０以上に調整して、カルノシンよりも抗酸化能増強力を強化させた酢酸処理カルノシンを製し、これを有効成分とする抗酸化能増強剤を製造する方法。
【請求項４】
カルノシンの０．０１〜２０％溶液を酢酸を用いてｐＨ３．５〜４．０に調整し、その溶液を８５〜９５℃になるまで加熱し、冷却後ｐＨ８．０以上に調整して、カルノシンよりも、ＸＹＺ系活性酸素消去発光法における〔Ｚ〕活性を増強させた酢酸処理カルノシンを製し、これを有効成分とする抗酸化能増強剤を製造する方法。
【請求項５】
請求項１に記載の酢酸処理カルノシン又はその製剤を、フラボノイド系又はポリフェノール系の天然性の抗酸化剤と併用することにより、その抗酸化剤の抗酸化能を増強させる方法。
【請求項６】
請求項１に記載の酢酸処理カルノシン又はその製剤と、フラボノイド系又はポリフェノール系の天然性の抗酸化剤とを食品に添加することにより、その食品の抗酸化能を増強させる方法。
【請求項７】
請求項１に記載の酢酸処理カルノシン又はその製剤を、フラボノイド系又はポリフェノール系の抗酸化成分を天然に含有する食品に添加することにより、その食品の抗酸化能を増強させる方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗酸化能増強剤及びその製造方法並びにその使用方法に関する。さらに詳しくは、カルノシンよりも抗酸化能増強力を強化させた「酢酸で処理した特定のカルノシン」を有効成分とする抗酸化能増強剤及びその容易かつ安定的な製造方法並びにそれを用いて特定の抗酸化剤や食品の抗酸化能を増強させる方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
カルノシン（β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン）は、イミダゾール基を有するジペプチドであり、種々の脊椎動物の脳や骨格筋などに遊離の形で存在することが知られている。例えば、豚肉、牛肉、羊肉、鶏肉などにはカルノシンが豊富に含まれている。カルノシンは、β−アラニンとヒスチジンによって化学合成することもできる。
【０００３】
カルノシン単体が抗酸化性（酸化防止力）を有することはよく知られていて、これまでにも、特開平４−１８７０６７号、特開平９−９９２１号など、カルノシンを酸化防止剤として使用する発明がいくつか特許出願されている。
【０００４】
しかし、これらの公知技術では、カルノシンを１％近く添加しないと抗酸化効果が見られない。しかしながら、カルノシン製剤の価格は、試薬などの場合、１ｋｇ当たり数十万円であるため、カルノシンをそのまま食品や化粧品などの抗酸化剤として使用すると膨大なコストアップとなる。また、畜肉や鶏肉などのカルノシンを含有する食品を食することによってカルノシンを有効に摂取しようとすると、きわめて多量の同種食品が必要となる。
【０００５】
したがって、従来、カルノシンを抗酸化剤として使用することは、食品業界や化粧品業界などの実務としては到底考えられないことであった。また、カルノシンを有効成分として含有する食品、例えば、豚ロース肉や豚肉エキスなどの抗酸化能を増強させたり、これらの食品を抗酸化剤的に使用することなどは、到底考えられないことであった。
【０００６】
また、特開昭５６−４０６１３号には、カルノシンに無水酢酸と酢酸の混液を加え、１００℃で２時間加熱後メタノールで再結晶した、化学修飾を施したカルノシンが消化性腫瘍の治療に効果がある旨記載されている。しかし、この公報には、上記化学修飾を施したカルノシンの抗酸化能については、何も開示されていない。このような化学修飾は、一般の食品加工中に起こり得る方法ではなく、また、カルノシンに化学修飾を施したものを食品に使用することは、さらにコストアップとなる。
【０００７】
本発明者らは、上記の状況に鑑み、カルノシンの抗酸化能を有効に利用する方法について鋭意研究し、カルノシンを単独で使用するのではなく、他の物質と組み合わせて使用することによって、カルノシンの使用量を少量に抑え、その物質の抗酸化能を高めることができないか、種々試験をおこなった。その結果、カルノシンと天然性の特定の抗酸化剤とを食品に添加することによって、また、カルノシンを特定の抗酸化成分を天然に含有する食品に添加することによって、その食品の抗酸化能を増強できることを見いだし、その研究成果を整理して、特願２０００−２８１５２２号として特許出願をしている。
【０００８】
本発明者らは、カルノシンの抗酸化能を産業上有効に利用する方法について、その後も研究を続け、カルノシンの抗酸化能を引き出す別の手法を求めて、さらに種々の試験をおこなった。その結果、カルノシン溶液に酢酸を加え、加熱した後冷却し、さらにｐＨ調整をすることによって得られる「酢酸で処理した特定のカルノシン」が、無処理のカルノシンに比べて、特定の抗酸化剤と組み合わせたときに抗酸化能を増強させる力が強化さることを見いだした。そして、この「酢酸で処理した特定のカルノシン」を天然性の特定の抗酸化剤と組み合わせて、食品に添加するなどの応用面について研究を続け、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明者らは、上記の酢酸で処理したカルノシンを天然性の特定の抗酸化剤と併用することによって、実用に適したカルノシンの使用量の範囲において、その抗酸化剤の抗酸化能を増強できることを見いだした。また、本発明者らは、上記の酢酸で処理したカルノシンと天然性の特定の抗酸化剤とを食品に添加することによって、実用に適したカルノシンの使用量の範囲において、その食品の抗酸化能を増強できることを見いだした。さらに、本発明者らは、上記の酢酸で処理したカルノシンを特定の抗酸化成分を天然に含有する食品に添加することによって、実用に適したカルノシンの使用量の範囲において、その食品の抗酸化能を増強でき、かつ、その抗酸化能を安定に持続できることを見いだした。そして、これらの場合、上記の酢酸で処理したカルノシンの抗酸化能増強力は、無処理のカルノシンのそれに比べて、いずれも、著しく強化されることを見いだした。また、本発明者らは、上記の酢酸で処理したカルノシンの容易かつ安定的な製造方法を開発することができた。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
上記の状況に鑑み、本発明は、実用に適したカルノシンの使用量の範囲において、無処理のカルノシンに比べて、抗酸化能増強力を強化したカルノシン処理物を提供すること、及びそのカルノシン処理物の容易かつ安定的な製造方法並びにそのカルノシン処理物の有用な使用方法を提供することを課題とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を達成するために、本発明のうち請求項１に記載する発明は、カルノシンの０．０１〜２０％溶液を酢酸を用いてｐＨ３．５〜４．０に調整し、その溶液を８５〜９５℃になるまで加熱し、冷却後ｐＨ８．０以上に調整して製した酢酸処理カルノシンを有効成分とする抗酸化能増強剤である。
【００１２】
また、本発明のうち請求項２に記載する発明は、請求項１に記載の酢酸処理カルノシンとフラボノイド系又はポリフェノール系の抗酸化成分とを有効成分とする食品用の抗酸化能増強剤である。
【００１３】
また、本発明のうち請求項３に記載する発明は、カルノシンの０．０１〜２０％溶液を酢酸を用いてｐＨ３．５〜４．０に調整し、その溶液を８５〜９５℃になるまで加熱し、冷却後ｐＨ８．０以上に調整して、カルノシンよりも抗酸化能増強能を強化させた酢酸処理カルノシンを製し、これを有効成分とする抗酸化能増強剤を製造する方法である。
【００１４】
また、本発明のうち請求項４に記載する発明は、カルノシンの０．０１〜２０％溶液を酢酸を用いてｐＨ３．５〜４．０に調整し、その溶液を８５〜９５℃になるまで加熱し、冷却後ｐＨ８．０以上に調整して、カルノシンよりも、ＸＹＺ系活性酸素消去発光法における〔Ｚ〕活性を増強させた酢酸処理カルノシンを製し、これを有効成分とする抗酸化能増強剤を製造する方法である。
【００１５】
また、本発明のうち請求項５に記載する発明は、請求項１に記載の酢酸処理カルノシン又はその製剤を、フラボノイド系又はポリフェノール系の天然性の抗酸化剤と併用することにより、その抗酸化剤の抗酸化能を増強させる方法である。
【００１６】
さらに、本発明のうち請求項６に記載する発明は、請求項１に記載の酢酸処理カルノシン又はその製剤と、フラボノイド系又はポリフェノール系の天然性の抗酸化剤とを食品に添加することにより、その食品の抗酸化能を増強させる方法である。
【００１７】
さらに、本発明のうち請求項７に記載する発明は、請求項１に記載の酢酸処理カルノシン又はその製剤を、フラボノイド系又はポリフェノール系の抗酸化成分を天然に含有する食品に添加することにより、その食品の抗酸化能を増強させる方法である。
【００１８】
以下、本発明について、さらに詳しく説明する。
本発明において、「カルノシン」とは、カルノシンの単体ないしその原薬のことをいい、「カルノシンの製剤」とは、カルノシンを主成分とする製剤のことをいう。カルノシン製剤は、市販のものを使用して差し支えない。
以下、本発明において、請求項１に記載の酢酸処理カルノシンのことを、単に「酢酸処理カルノシン」と称する。
【００１９】
本発明において、「抗酸化剤」とは、酸化防止剤（又は酸化防止材）とも称せられ、自動酸化する種々の物質に対して、光や熱などの条件下における酸素の作用を防止ないし抑制する性質を有する化合物のことをいう。また、「抗酸化能」とは、その物質が有する酸素の作用を防止ないし抑制する機能のことをいう。さらに、本発明において、「抗酸化成分」とは、フラボノール、没食子酸などの抗酸化能を有する化学成分のことをいう。
【００２０】
本発明において、フラボノイド系の天然性の抗酸化剤とは、フラボン、フラボノール、（＋）−カテキンなどのフラボノイド系の抗酸化成分を天然に含有する抗酸化剤のことである。また、ポリフェノール系の天然性の抗酸化剤とは、没食子酸、レゾルシン、ヒドロキノンなどのポリフェノール系の抗酸化成分を天然に含有する抗酸化剤のことである。
【００２１】
本発明で好適に使用できるフラボノイド系及びポリフェノール系の天然性の抗酸化剤ないしこれらの抗酸化成分を含有する天然抽出物を例示すると、アオイ花抽出物（シロバナツタの花弁からエタノールで抽出：成分はゴシペチン）、イソケルセチン（ドクダミの葉からエタノールで抽出）、カンゾウ油性抽出物（マメ科カンゾウの根や根茎などの水抽出物残渣をエタノールで抽出：成分はフラボノイド）、（＋）−カテキン（マメ科のペグアセンヤクの木部などから乾留して水又はエタノールで抽出・精製）、ごま油抽出物、ごま油不ケン化物、セザモール（セザモリンの加水分解物）、食用カンナ抽出物（食用カンナの根茎から水又はエタノールで抽出：成分はフラボノイド）、ナタネ油抽出物（アブラナのナタネ油不ケン化物から分離：成分はイソフラボン類）、コーヒー豆抽出物（アカネ科コーヒーの種子から水で抽出：成分はポリフェノール類など）、ブルーベリー葉抽出物（ブルーベリーの葉からエタノールで抽出：成分はフラボノイド）、没食子酸（ウルシ科ヌルデに発生する五倍子やブナ科に発生する没食子から水又はエタノールで抽出した後加水分解）、リンドウ根抽出物（トウリンドウの根茎から水又はエタノールで抽出：成分はゲンチジン酸）、アズキ全草抽出物（アズキの全草からエタノールで抽出：成分はフラボノイド系のルチン）、ソバ全草抽出物（タデ科ソバの全草から水又はエタノールで抽出：成分はフラボノイド系のルチン）、ローズマリー抽出物（シソ科マンネンロウの花葉からエタノールで抽出：成分はローズマノール、カルバクロール）などを挙げることができる。
【００２２】
【発明の実施の形態】
本発明においては、「酢酸処理カルノシン」は、以下の方法によって製する。
すなわち、まず、カルノシンを清水に溶解して０．０１〜２０％溶液を作り、この溶液に酢酸を添加して、ｐＨ３．５〜４．０に調整する。酢酸としては、試薬用の特級酢酸又は氷酢酸を使用することが好ましい。次いで、その溶液を８５〜９５℃になるまで加熱した後２０℃前後まで冷却し、１Ｎ以上の水酸化ナトリウムなどを用いてｐＨ８．０以上に調整する。以上の操作によって、本発明で使用する「酢酸処理カルノシン」を得ることができる。
このように、本発明に係る「酢酸処理カルノシン」の製法は、きわめて簡単であるから、ダレでも容易にかつ安定的に「酢酸処理カルノシン」を作ることができる。
【００２３】
上記のようにして得られた「酢酸処理カルノシン」又はその製剤を、天然性の抗酸化剤のうち、特に、フラボン、フラボノール、（＋）−カテキンなどのフラボノイド系の抗酸化成分を含有する天然性の抗酸化剤、、又は没食子酸、レゾルシン、ヒドロキノンなどのポリフェノール系の抗酸化成分を含有する天然性の抗酸化剤と併用すると、「酢酸処理カルノシン」とこれらの抗酸化剤の抗酸化能とがそれぞれ相乗的に増強され、無処理のカルノシンとこれらの抗酸化剤とを併用するよりも、その抗酸化剤の抗酸化能を増強させ、かつ安定に持続させることができる。
【００２４】
また、上記のようにして得られた「酢酸処理カルノシン」又はその製剤と、フラボノイド系又はポリフェノール系の天然性の抗酸化剤のうちのいずれか１種又は２種以上とを食品に併用・添加すると、その食品に対して「酢酸処理カルノシン」だけを添加する場合や上記の抗酸化剤だけを添加する場合に比べて、また、無処理のカルノシンと上記の抗酸化剤とを併用・添加する場合に比べて、その食品の酸化を安定的に防止又は抑制できる。この場合における「酢酸処理カルノシン」の有効添加量は、これを添加する抗酸化剤の種類やこれらを併用・添加する食品の種類によっても異なるが、一般的には、「酢酸処理カルノシン」の濃度が０．０１ｍＭ〜５０ｍＭ、抗酸化剤の抗酸化成分の濃度が０．２ｍＭ〜１ｍＭとなる量を、食品に対してそれぞれ添加するのが好ましい。
【００２５】
また、本発明においては、「酢酸処理カルノシン」又はその製剤を、フラボノイド系の抗酸化成分を天然に含有する食品又はポリフェノール系の抗酸化成分を天然に含有する食品に添加すると、その食品の抗酸化能を著しく増強させ、その食品の酸化を安定的に防止又は抑制できる。この場合における「酢酸処理カルノシン」の有効添加量は、その食品の種類によっても異なるが、一般的には、その食品が含有する抗酸化成分濃度０．２ｍＭ〜１ｍＭ当たり、「酢酸処理カルノシン」の濃度が０．０１ｍＭ〜５０ｍＭとなるような量を添加するのが好ましい。
【００２６】
フラボノイド系の抗酸化成分を天然に含有する食品の例としては、大豆煮物、納豆、味噌、醤油、豆腐などの大豆加工食品を挙げることができる。またポリフェノール系の抗酸化成分を天然に含有する食品の例としては、香辛料抽出物、ハーブ抽出物、やワイン、シードル（りんご酒）、野菜ジュース、野菜スープなどを挙げることができる。これらの食品は、抗酸化成分を含有するといっても、いずれも単品では、その抗酸化能は弱く、かつ不安定で持続性に乏しい。「酢酸処理カルノシン」又はその製剤は、これらのいずれの食品に対しても、その食品の抗酸化能を増強させ、かつ安定に持続できる。
【００２７】
本発明の食品用の抗酸化能増強剤は、「酢酸処理カルノシン」とフラボノイド系の抗酸化成分又はポリフェノール系の抗酸化成分を有効成分とするものであるが、この意味は、「酢酸処理カルノシン」を主成分として含有するとともに、上記の抗酸化成分の１種又は２種以上をも主成分として含有している製剤のことである。なお、主成分の組み合わせ例としては、「酢酸処理カルノシン」とフラボノール、「酢酸処理カルノシン」とレゾルシンなど種々のものを挙げることができる。本発明に係る抗酸化能増強剤は、各種の食品に添加することによって、その食品の抗酸化能を増強させることができる。
【００２８】
本発明に係る食品用の抗酸化能増強剤の製法は、「酢酸処理カルノシン」又はその製剤と、上記の天然性の抗酸化成分を含有する製剤又は上記の抗酸化成分を天然に含有する食品とを混合して、製剤化すればよい。例えば、「酢酸処理カルノシン」の製剤とトマトジュースを混合し、殺菌して液状製剤とするか又はスプレードライして粉末化して粉末製剤とするか、もしくは、必要に応じて、常法にしたがい、顆粒状などの固形製剤に製するなどの方法で、経口投与製剤とする。この場合、製剤中の「酢酸処理カルノシン」濃度は、０．０１〜５０ｍＭ程度、抗酸化成分の濃度は０．２ｍＭ〜１ｍＭ程度となるように、それぞれ配合することが好ましい。
【００２９】
以下、本発明に係る抗酸化能増強剤の製造方法及びその抗酸化能増強効果を、試験例をもって説明する。また、本発明の抗酸化能増強方法及び抗酸化能増強剤の実施態様を実施例をもって説明する。なお、本発明の全説明において、「部」や「％」の表示は、特に断らない限り、重量割合（重量部、重量％）を示す。
【００３０】
【試験例１】
市販のカルノシン試薬８０ｍＭ溶液に特級酢酸試薬を加え、ｐＨを３．５とした後、液温が８５℃になるまで加熱した。氷水中で２０℃まで冷却した後、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ８．５に調整した。水で希釈して「酢酸処理カルノシン」濃度を４０ｍＭに調整して、活性酸素の消去を補佐する力の強さ〔Ｚ〕をＸＹＺ系活性酸素消去発光法により検討した。なお、測定は、４０ｍＭ「酢酸処理カルノシン」１ｍＬに２％過酸化水素〔Ｘ〕、１０％アセトアルデヒドに溶解させた飽和没食子酸〔Ｙ〕を各１ｍＬづつ加え、ＣＣＤカメラにより捉えた発光の輝度を測定した。なお、この試験例で製した「酢酸処理カルノシン」を実施例１とする。比較例１として、４０ｍＭカルノシン溶液の活性を実施例１と同様の方法で測定した。
【００３１】
【表１】
0004290356.tif 000002
【００３２】
表１の数値は、各試料に活性酸素と没食子酸（主成分はフラボノイド）を組み合わせたときの、ＸＹＺ系活性酸素消去発光法による〔Ｚ〕活性、すなわち、活性酸素消去を補佐する力の強さを示す。表１から、カルノシンを「酢酸処理カルノシン」に調整すると、フラボノイドとの併用効果が無処理のカルノシンに比べて顕著に増大し、抗酸化能を補佐する力が増強されることが判る。
【００３３】
【試験例２】
１０ｍＭ「酢酸処理カルノシン」と０．２ｍＭフラボノール（３ヒドロキシフラボン）を混合したときの効果を、ウサギの赤血球膜を用いた脂質過酸化物の生成を抑制する能力（ウサギ赤血球膜ゴーストの酸化度合）について検討した。
なお、上記の「酢酸処理カルノシン」とフラボノールとの混合物を実施例２とする。比較例２として、１０ｍＭのカルノシンと０．２ｍＭフラボノールの混合物についても同じ試験をおこなった。この試験により、図１の結果を得た。
【００３４】
図１において、Control は、カルノシン、フラボノールの代わりに水を入れたものを示す。また、Car は、カルノシンを示す。
Fravonolは、３ヒドロキシフラボンを示す。
酢酸Car は、「酢酸処理カルノシン」を示す。
【００３５】
図１から、カルノシンを「酢酸処理カルノシン」に調整したものは、フラボノールと併用した場合（実施例１）、カルノシンとフラボノールとを併用した場合（実施例２）よりも、また、カルノシン単独やフラボノール単独の場合よりも、フラボノールとの相乗効果が増強され、フラボノール自身が有する脂質過酸化物生成の抑制力を格段に増強させることが判明した。
【００３６】
【発明の効果】
以上、詳細に説明したとおり、本発明によって、カルノシンよりも抗酸化能を増強する力がが著しく強化された「酢酸処理カルノシン」を、容易にかつ安定的に製造することができる。
また、本発明に係る「酢酸処理カルノシン」を特定の抗酸化剤と併用することによって、無処理のカルノシンをその抗酸化剤と併用する場合に比べて、その抗酸化剤の抗酸化能を著しく増強させることができる。
また、本発明に係る「酢酸処理カルノシン」を特定の抗酸化剤と併用して食品に添加することによって、無処理のカルノシンとその抗酸化剤とを併用する場合に比べて、その食品の抗酸化能を著しく増強させることができる。
さらに、本発明に係る「酢酸処理カルノシン」を特定の抗酸化成分を含有する食品に添加することによって、無処理のカルノシンをその食品に添加する場合に比べて、その食品の抗酸化能を著しく増強させることができる。
以上のとおり、本発明に係る「酢酸処理カルノシン」は、無処理のカルノシンに比べて、抗酸化能の増強力が強化されているので、食品の抗酸化能増強剤としてきわめて有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】酢酸処理カルノシン又はカルノシンとフラボノールとを併用した場合の抗酸化能の度合の比較説明図
【図１】
0004290356.tif 000003