(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラパマイシン３１-シリルエーテルを製造する方法であって、
(ａ)ラパマイシンを、不活性溶媒中、適当な塩基の存在下で、０〜５℃にてクロロトリメチルシランを含むシリル化剤と反応させて、ラパマイシン３１,４２-ビス-シリルエーテルを形成し、
(ｂ)３１,４２-ビス-シリルエーテルを０〜５℃にて希酸で加水分解して、ラパマイシン３１-シリルエーテルを得ることを含む方法。
【請求項２】
構造：
【化１】
0004289813.tif 000009
［式中、Ｒはエステルまたはエーテル］
を有するラパマイシンの４２-エステルまたはエーテルを製造する方法であって、
(ａ)ラパマイシンを０〜５℃にてシリル化剤と反応させて、ラパマイシン３１,４２-ビス-シリルエーテルを形成し、
(ｂ)３１,４２-ビス-シリルエーテルを０〜５℃にて希酸中で加水分解して、ラパマイシン３１-シリルエーテルを得て、
(ｃ)ラパマイシン３１-シリルエーテルを、０℃未満の温度で適当なエステル化剤またはエーテル化剤と反応させて、ラパマイシンの３１-シリルエーテル,４２-エステルまたはエーテルを形成し、
(ｄ)３１-シリルエーテルを−５℃〜１０℃にて希酸中で加水分解して、所望のラパマイシン４２-エステルまたはエーテルを得て、必要なら、逐次または同時に、存在する他の保護基を除去することを含む方法。
【請求項３】
式(Ｉ)で示される化合物のＲが、
(ｉ)-Ｏ-Ｃ＝Ｏ.ＣＲ７Ｒ８Ｒ９(すなわち、エステル)；式中：
Ｒ７は、水素、炭素数１〜６のアルキル、炭素数２〜７のアルケニル、炭素数２〜７のアルキニル、-(ＣＲ３Ｒ４)ｆＯＲ１０、-ＣＦ３、-Ｆまたは-ＣＯ２Ｒ１１；
Ｒ８およびＲ９は、各々独立して、水素、炭素数１〜６のアルキル、または-(ＣＲ３Ｒ４)ｆＯＲ１０；あるいはＲ８およびＲ９は一緒になってＸを形成する；
Ｒ１０は、水素、炭素数１〜６のアルキル、炭素数２〜７のアルケニル、炭素数２〜７のアルキニル、トリフェニルメチル、ベンジル、炭素数２〜７のアルコキシメチル、クロロエチルまたはテトラヒドロピラニル；
Ｘは、５-(２,２-ジ-(炭素数１〜６のアルキル))[１,３]ジオキサニル、５-(２-スピロ(炭素数３〜８のシクロアルキル))[１,３]ジオキサニル、４-(２,２-ジ-(炭素数１〜６のアルキル))[１,３]-ジオキサニル、４-(２-スピロ(炭素数３〜８のシクロアルキル))[1,３]ジオキサニル、４-(２,２-ジ-(炭素数１〜６のアルキル))[１,３]ジオキサラニルまたは４-(２-スピロ(炭素数３〜８のシクロアルキル))[１,３]ジオキサラニル；
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、炭素数１〜６のアルキル、炭素数２〜７のアルケニル、炭素数２〜７のアルキニル、トリフルオロメチル、または-Ｆ；および
ｆ＝０〜６；ただし、Ｒは少なくとも１個の-(ＣＲ３Ｒ４)ｆＯＲ１０またはＸ基を含有する；
または
(ii)-ＯＲ１(すなわち、エーテル)；式中、Ｒ１は、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリルおよびジオキソラニルアリル、カルボアルコキシアルキル；ここで、「アルコ」または「アルキル」は、Ｃ１−６有枝鎖または直鎖アルキル、好ましくはＣ１−３アルキル；ここで、炭素鎖はエーテル結合(-Ｏ-)で中断されていてもよい；「アシル」はアルキルカルボニルを表し、「アリール」は６〜１０個の炭素原子を有する；
のいずれかである請求項２記載の方法。
【請求項４】
Ｒ１がヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシアルキル、アシルアミノアルキルおよびアミノアルキルから選択される請求項３記載の方法。
【請求項５】
Ｒ１が２-ヒドロキシエチル、３-ヒドロキシプロピル、２-[(２-ヒドロキシ)エトキシ]エチルおよび２-アセトアミノエチルから選択される請求項４記載の方法。
【請求項６】
式(Ｉ)で示される化合物のＲが２,２-ビス(ヒドロキシメチル)プロピオニルオキシまたは２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボニルオキシである請求項２記載の方法。
【請求項７】
エステル化工程(ｃ)が２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸クロリドまたは２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸の２,４,６-トリクロロベンゾイル混合無水物を用いて実施される請求項６記載の方法。
【請求項８】
塩化メチレンを含む溶媒中で実施される請求項７記載の方法。
【請求項９】
−５０℃〜２５℃の温度で実施される請求項７または８記載の方法。
【請求項１０】
工程(ｄ)の酸が希釈した無機酸である請求項２〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
酸が硫酸、塩酸またはリン酸である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
工程(ｄ)に用いる酸が０.１Ｎ〜３Ｎである請求項２〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
工程(ｄ)に用いる酸が０.２Ｎ〜２Ｎである請求項２〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
工程(ｄ)に用いる酸が０.５Ｎである請求項２〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
工程(ｄ)が酸水溶液と有機溶媒とからなる一相系で実施される請求項２〜１４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
有機溶媒がアセトンである請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
工程(ｄ)が０℃〜５℃の温度で実施される請求項２〜１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
工程(ｂ)で調製する３１-シリルエーテルが式ＩＡ：
【化２】
0004289813.tif 000010
［式中、Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は、同一または相異なり、炭素数１〜６のアルキル、フェニルおよびベンジルから選択される］
を有する請求項１〜１７のいずれか１項記載の方法。
【請求項１９】
工程(ａ)のシリル化剤がトリ-(Ｃ１-Ｃ６)アルキルシリルハライドである請求項１〜１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
工程(ａ)のシリル化剤がトリメチルシリルクロリドである請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
シリル化工程(ａ)が適当な塩基の存在下、不活性溶媒中で実施される請求項１〜２０のいずれか１項記載の方法。
【請求項２２】
塩基がイミダゾール、１-メチルイミダゾール、トリエチルアミンまたはＮ,Ｎ-ジイソプロピルエチルアミンである請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
工程(ｂ)の酸が希釈した無機酸である請求項１〜２２のいずれか１項記載の方法。
【請求項２４】
酸が硫酸、塩酸またはリン酸である請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
工程(ｂ)で用いる酸が０.０８Ｎ〜２.５Ｎである請求項１〜２４のいずれか１項記載の方法。
【請求項２６】
工程(ｂ)の酸強度が０.１Ｎ〜１Ｎである請求項１〜２４のいずれか１項記載の方法。
【請求項２７】
工程(ｂ)で用いる酸が０.５Ｎである請求項１〜２４のいずれか１項記載の方法。
【請求項２８】
工程(ｂ)が酸水溶液と水不混和性の有機溶媒とからなる二相系で実施される請求項１〜２７のいずれか１項記載の方法。
【請求項２９】
水不混和性の有機溶媒が酢酸エチルである請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
２,２-ビス-(ヒドロキシメチル)プロピオン酸とのラパマイシン４２エステルを製造する方法であって、
(ａ)ラパマイシンをシリル化剤と反応させて、ラパマイシン３１,４２-ビス-シリルエーテルを形成し、
(ｂ)４２-シリルエーテルを冷たい希酸中で選択的に加水分解して、ラパマイシン３１-シリルエーテルを得て、
(ｃ)ラパマイシン３１-シリルエーテルを２,２,５-トリメチル[１,３-ジオキサン]-５-カルボン酸クロリドまたは２,２,５-トリメチル[１,３-ジオキサン]-５-カルボン酸の２,４,６-トリクロロベンゾイル混合無水物でアシル化して、２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテル,４２-エステルを得て、
(ｄ)(ｉ)３１-シリルエーテルを冷たい希酸中で選択的に加水分解して、２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパンマイシン４２-エステルを得た後、２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパマイシン４２-エステルを希酸で処理して、２,２-ビス-(ヒドロキシメチル)プロピオン酸との４２-エステルを得るか、あるいは
(ii)２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテル,４２-エステルを希酸で処理して、２,２-ビス-(ヒドロキシメチル)プロピオン酸との４２-エステルを得る、
ことを含む方法。
【請求項３１】
アシル化工程(ｃ)が０℃より低い温度で実施される請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
４２-Ｏ-(２-ヒドロキシ)エチル-ラパマイシンを製造する方法であって、
(ａ)ラパマイシンをシリル化剤と反応させて、ラパマイシン３１,４２-ビス-シリルエーテルを形成し、
(ｂ)４２-シリルエーテルを冷たい希酸中で選択的に加水分解して、ラパマイシン３１-シリルエーテルを得て、
(ｃ)ラパマイシン３１-シリルエーテルをエチレングリコール等価物(該エチレングリコール等価物の一方の末端には、酸で不安定になるヒドロキシル保護基が存在し、該エチレングリコール等価物の他方の末端には、ヒドロキシル基をアルキル化するのに適当な脱離基が存在する)と反応させ、
(ｄ)３１位および４２-ヒドロキシエチル位の保護基を穏やかな酸性条件下で加水分解する、
ことを含む方法。
【請求項３３】
シリル化剤がトリアルキルシリルハライドである請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
シリル化剤がクロロトリメチルシランである請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
エチレングリコール等価物が２-(ｔ-ブチルジメチルシリル)オキシエチルトリフラートである請求項３２〜３４のいずれか１項記載の方法。
【請求項３６】
工程(ｂ)および(ｄ)で用いる酸が硫酸である請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
請求項２に記載の方法に従ってその方法の工程（ｂ）で得られる、式ＩＡ：
【化３】
0004289813.tif 000011
［式中、Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は同一または相異なり、炭素数１〜６のアルキル、フェニルおよびベンジルから選択される］
を有するレギオ特異的化合物。
【請求項３８】
請求項２に記載の方法に従ってその方法の工程（ｃ）で得られる、式ＩＢ：
【化４】
0004289813.tif 000012
［式中、Ｒは請求項３と同意義のエステルまたはエーテル基、Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は同一または相異なり、炭素数１〜６のアルキル、フェニルおよびベンジルから選択される］
を有するレギオ特異的化合物。
【請求項３９】
請求項２に記載の方法に従ってその方法の工程（ｃ）で得られる、式(Ｄ)：
【化５】
0004289813.tif 000013
［式中、Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は同一または相異なり、炭素数１〜６のアルキル、フェニルおよびベンジルから選択される］
を有するレギオ特異的化合物。
【請求項４０】
請求項２に記載の方法に従ってその方法の工程（ｃ）で得られる、２,２,５-トリメチル[１,３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテル,４２-エステルであるレギオ特異的化合物。
【請求項４１】
式(Ｃ)：
【化６】
0004289813.tif 000014
で示される化合物を製造する方法であって、
式(Ｂ)：
【化７】
0004289813.tif 000015
［式中、Ｒ２は水素または-ＳｉＲ'Ｒ''Ｒ'''；ここで、Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は同一または相異なり、炭素数１〜６のアルキル、フェニルおよびベンジルから選択される］
で示される化合物を、希硫酸を用いて加水分解することを含む方法。
【請求項４２】
１Ｎ〜３Ｎの硫酸を用いて実施される請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
−５℃〜＋１０℃の温度で実施される請求項４１または４２記載の方法。
【請求項４４】
テトラヒドロフラン溶媒の存在下で実施される請求項４１〜４３のいずれか１項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明はラパマイシンの４２位における誘導体のレギオ選択的な合成に関する。これらの誘導体は免疫抑制を誘発するのに有用であり、また、移植拒絶反応、宿主対移植片疾患、自己免疫疾患、炎症の疾患、成人Ｔ細胞白血病/リンパ腫、充実性腫瘍、真菌感染症および過増殖性血管疾患の治療に有用である。さらに詳しくは、本発明はラパマイシンの４２-エステルおよびエーテルへの中間体として有用なラパマイシンの３１-シリル保護化エーテルを製造する本質的に選択的な方法を提供する。
【０００２】
（背景技術）
ラパマイシンは、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス(Streptomyces hygroscopicus)により産生される大環状トリエン系の抗生物質であり、インビトロおよびインビボにおける抗真菌活性、特にカンジダ・アルビカンス(Candida albicans)に対する抗真菌活性を有することが見い出された［シー・ヴェチーナ(C. Vezina)ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス(J. Antibiot.)28,721(1975)；エス・エヌ・セガール(S.N. Seghal)ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス(J. Antibiot.)28,727(1975)；エイチ・エイ・ベイカー(H.A. Baker)ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス(J. Antibiot.)31,539(1978)；米国特許第3,929,992号；および米国特許第3,993,749号]。
【０００３】
ラパマイシンは、単独で（米国特許第4,885,171号)、あるいは、ピシバニルと組み合わせて（米国特許第4,401,653号)、抗腫瘍活性を有することが示されている。アール・マーテル(R. Martel)ら［カナディアン・ジャーナル・オブ・フィジオロジカル・ファーマコロジー(Can. J. Physiol. Pharmacol.)55,48(1977)］は、ラパマイシンが、実験的なアレルギー性脳脊髄炎モデル（すなわち、多発性硬化症のモデル）やアジュバント性関節炎モデル（すなわち、慢性関節リウマチのモデル）において有効であり、IｇＥ様抗体の形成を効果的に阻害したことを開示した。
【０００４】
ラパマイシンの免疫抑制効果は、ファセブ(FASEB)3,3411(1989)に開示されている。シクロスポリンＡやＦＫ-５０６などの大環状分子が免疫抑制剤として有効であることも示されており、それゆえ、移植拒絶反応を防止するのに有用である[ファセブ(FASEB)3,3411(1989)；ファセブ(FASEB)3,5256(1989)；アール・ワイ・カルネ(R.Y. Calne)ら、ランセット(Lancet)1183(1978)；および米国特許第5,100,899号]。
【０００５】
ラパマイシンは、全身性エリテマトーデス[米国特許第5,078,899号]、肺の炎症[米国特許第5,080,899号]、インスリン依存性糖尿病[米国特許第5,321,009号]、血管損傷後の平滑筋細胞増殖および内膜肥厚化[米国特許第5,516,781号]、成人Ｔ細胞白血病/リンパ腫[欧州特許出願第525,960 A1号]および眼の炎症[米国特許第5,387,589号]を予防または治療するのに有用であることが示されている。
【０００６】
数多くのラパマイシン４２-誘導体が知られており、典型的にはラパマイシンの４２-ヒドロキシル基のエステル(炭素および硫黄に基づく)またはエーテルであり、４２-位のエステル化またはエーテル化により製造される。ラパマイシンの４２-位におけるエステル化は、一般的に、所望の生成物を得るためにラパマイシンをアシル化剤と直接反応させることにより調製された。この化学はかなり簡単なように見える。しかし、ラパマイシンは３１位および４２位に２個の２級ヒドロキシル基を有するので、４２-モノアシル化生成物の選択的な合成を達成するために、これら２つの官能中心を区別する試みは困難な挑戦を提起した。このタイプの非レギオ選択的な反応は、３１,４２-ビス-アシル化副生成物を与え、その上、一部の未反応ラパマイシンが反応混合物中に残存した。最終的な結果は、より低い収率であり、純粋な４２-モノアシル化生成物を得るには、煩雑な精製を必要とした。この問題は、２,２-ビス-(ヒドロキシメチル)プロピオン酸(ここでは化合物[Ｃ]と呼ぶ)とのラパマイシン４２-エステルなどの４２-モノエステルの合成を参照することにより例示することができる。例えば、米国特許第5,362,718号の実施例１０に記載された２,２-ビス-(ヒドロキシメチル)プロピオン酸とのラパマイシン４２-エステルの合成は非レギオ選択的であり、３１,４２-ビスエステル副生成物も生成した。その結果、後処理後の粗生成物[Ｂ]は、所望の生成物[Ｂ]、３１,４２-ビスエステル副生成物および未反応のラパマイシンを含有する。残存する出発物質のラパマイシンを消費させようと、反応を長期間にわたり進行させると、否定的な結果になった。すなわち、３１,４２-ビスエステルの量が有意に増大した。得られた粗生成物[Ｂ]は、未反応のラパマイシンおよび３１,４２-ビスエステルを不純物として含み、次いでカラムクロマトグラフィーで精製しようとしても、４２,３１-ビスエステルは保持時間が生成物[Ｂ]と非常に近いので困難であることがわかった。全体的に、化合物[Ｂ]の大規模生産における主たる障害は、精製の困難性によりさらに複雑化する非レギオ選択性であると思われる。
【０００７】
それゆえ、ラパマイシンの４２-エステルまたはエーテルのレギオ選択的な合成が必要とされている。
【０００８】
商業的または大規模生産に適当であり、効率的に実施することができる、ラパマイシンの４２-エステルまたはエーテルを選択的に製造する方法が必要とされている。
【０００９】
（発明の開示）
第１の態様では、本発明はラパマイシンの３１-シリルエーテル、例えば、式ＩＡ：
【００１０】
【化８】
0004289813.tif 000002
【００１１】
［式中、Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は、各々、アルキル基(好ましくは、炭素数１〜６；例えば、炭素数１〜４；最も好ましくは、メチル、エチルおよびプロピル)などの有機基である］
で示される化合物を製造するレギオ選択的な方法を提供する。かかる方法は、
(ａ)ラパマイシンをシリル化剤と反応させて、ラパマイシン３１,４２-ビス-シリルエーテルを形成し、
(ｂ)４２-シリルエーテル基を冷たい希酸中で加水分解して、ラパマイシン３１-シリルエーテル、例えば、上記式(Ｉ)で示される化合物を得る、
ことからなる。
【００１２】
ラパマイシン３１-シリルエーテルを４２-ヒドロキシ基についてアシル化またはエーテル化した後、３１-シリル保護基および存在しうる任意の他の保護基を除去して、ラパマイシンの所望の４２-エステルまたはエーテルを得ればよい。
【００１３】
したがって、第２の態様では、本発明は、構造(Ｉ)：
【００１４】
【化９】
0004289813.tif 000003
【００１５】
［式中、Ｒはエステルまたはエーテル］
を有する４２-エステルまたはエーテルラパマイシンのレギオ選択的な製造方法を提供する。かかる方法は、
(ａ)ラパマイシンをシリル化剤で処理して、ラパマイシン３１,４２-ビス-シリルエーテルを形成し、
(ｂ)４２-シリルエーテルを冷たい希酸中で加水分解して、ラパマイシン３１-シリルエーテルを得て、
(ｃ)ラパマイシン３１-シリルエーテルを適当なエステル化またはエーテル化試薬で処理して、ラパマイシン３１-シリルエーテル,４２-エステルまたはエーテルを形成し、
(ｄ)３１-シリルエーテルを冷たい希酸中で加水分解し、必要なら、Ｒ上の任意の保護基を同時または逐次に除去して、所望のラパマイシン４２-エステルまたはエーテルを得る、
ことからなる。
【００１６】
本発明により提供される方法で製造することができるラパマイシンの好ましい４２-エステルおよびエーテルは以下の特許に開示されている(出典を示すことによりすべて本明細書の一部をなす)。アルキルエステル(米国特許第4,316,885号)；アミノアルキルエステル(米国特許第4,650,803号)；フッ素化エステル(米国特許第5,100,883号)；アミドエステル(米国特許第5,118,677号)；カルバメートエステル(米国特許第5,118,678号)；シリルエーテル(米国特許第5,120,842号)；アミノエステル(米国特許第5,130,307号)；アセタール(米国特許第5,51,413号)；アミノジエステル(米国特許第5,162,333号)；スルホネートおよびスルフェートエステル(米国特許第5,177,203号)；エステル(米国特許第5,221,670号)；アルコキシエステル(米国特許第5,233,036号)；Ｏ-アリール、-アルキル、-アルケニルおよび-アルキニルエーテル(米国特許第5,258,389号)；カーボネートエステル(米国特許第5,260,300号)；アリールカルボニルおよびアルコキシカルボニルカルバメート(米国特許第5,262,423号)；カルバメート(米国特許第5,302,584号)；ヒドロキシ-エステル(米国特許第5,362,718号；WO 95/28406)；ヒンダード型エステル(米国特許第5,385,908号)；ヘテロ環式エステル(米国特許第5,385,909号)；gem-二置換エステル(米国特許第5,385,910号)；アミノアルカンエステル(米国特許第5,389,639号)；ホスホリルカルバメートエステル(米国特許第5,391,730号)；カルバメートエステル(米国特許第5,411,967号)；カルバメートエステル(米国特許第5,434,260号)；アミジノカルバメートエステル(米国特許第5,463,048号)；カルバメートエステル(米国特許第5,480,988号)；カルバメートエステル(米国特許第5,480,989号)；カルバメートエステル(米国特許第5,489,680号)；ヒンダード型Ｎ-オキシドエステル(米国特許第5,491,231号)；ビオチンエステル(米国特許第5,504,091号)；およびＯ-アルキルエーテル(米国特許第5,665,772号)。これらの特許は上記式(Ｉ)におけるＲの等価物に関する様々な意味および上記工程(ｃ)に利用するエステル化またはエーテル化の方法を開示している。
【００１７】
上記式(Ｉ)におけるＲの特に好ましい意味は、
(ａ)-Ｏ-Ｃ＝Ｏ.ＣＲ７Ｒ８Ｒ９(すなわち、エステル)；式中：
Ｒ７は、水素、炭素数１〜６のアルキル、炭素数２〜７のアルケニル、炭素数２〜７のアルキニル、-(ＣＲ３Ｒ４)ｆＯＲ１０、-ＣＦ３、-Ｆまたは-ＣＯ２Ｒ１１；
Ｒ８およびＲ９は、各々独立して、水素、炭素数１〜６のアルキル、または-(ＣＲ３Ｒ４)ｆＯＲ１０；あるいはＲ８およびＲ９は一緒になってＸを形成する；
Ｒ１０は、水素、炭素数１〜６のアルキル、炭素数２〜７のアルケニル、炭素数２〜７のアルキニル、トリフェニルメチル、ベンジル、炭素数２〜７のアルコキシメチル、クロロエチルまたはテトラヒドロピラニル；
Ｘは、５-(２,２-ジ-(炭素数１〜６のアルキル))[１,３]ジオキサニル、５-(２-スピロ(炭素数３〜８のシクロアルキル))[１,３]ジオキサニル、４-(２,２-ジ-(炭素数１〜６のアルキル))[１,３]-ジオキサニル、４-(２-スピロ(炭素数３〜８のシクロアルキル))[1,３]ジオキサニル、４-(２,２-ジ-(炭素数１〜６のアルキル))[１,３]ジオキサラニルまたは４-(２-スピロ(炭素数３〜８のシクロアルキル))[１,３]ジオキサラニル；
Ｒ３およびＲ４は、各々独立して、水素、炭素数１〜６のアルキル、炭素数２〜７のアルケニル、炭素数２〜７のアルキニル、トリフルオロメチル、または-Ｆ；および
ｆ＝０〜６；ただし、Ｒは少なくとも１個の-(ＣＲ３Ｒ４)ｆＯＲ１０またはＸ基を含有する；
および
【００１８】
(ｂ)-ＯＲ１(すなわち、エーテル)；式中、Ｒ１は、アルキル、チオアルキル、アリールアルキル、ヒドロキシアルキル、ジヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルアリールアルキル、ジヒドロキシアルキルアリールアルキル、アルコキシアルキル、アシルオキシアルキル、アミノアルキル、アルキルアミノアルキル、アルコキシカルボニルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アリールスルホンアミドアルキル、アリル、ジヒドロキシアルキルアリルおよびジオキソラニルアリル、カルボアルコキシアルキル；ここで、「アルコ」または「アルキル」は、Ｃ１−６有枝鎖または直鎖アルキル、好ましくはＣ１−３アルキル；ここで、炭素鎖はエーテル結合(-Ｏ-)で中断されていてもよい；「アシル」はアルキルカルボニルを表し、「アリール」は６〜１０個の炭素原子を有し、フェニル、ナフチルなどが挙げられる。
【００１９】
最も好ましくは、Ｒ１はヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルコキシアルキル、アシルアミノアルキルおよびアミノアルキルから選択される；特に、４０-Ｏ-(２-ヒドロキシ)エチル-ラパマイシン、４０-Ｏ-(３-ヒドロキシ)プロピル-ラパマイシン、４０-Ｏ-[２-(２-ヒドロキシ)エトキシ]エチル-ラパマイシンおよび４０-Ｏ-(２-アセトアミノエチル)-ラパマイシン。
【００２０】
最も好ましくは、式(Ｉ)におけるＲは、２,２-ビス(ヒドロキシメチル)プロピオニルオキシまたは２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボニルオキシである。
【００２１】
工程(ａ)に関して、シリル化は不活性な溶媒(例えば、酢酸エチル)中、好ましくは適当な塩基(例えば、イミダゾール)の存在下で実施すればよい。反応は低温(例えば、室温)またはそれ以下(例えば、０℃；好ましくは、０〜５℃)で実施すればよい。３１-および４２-ヒドロキシル基がトリアルキルシリルエーテルとして保護されていることが好ましい。３１,４２-ビス-シリル化ラパマイシンの４２-シリル保護化ヒドロキシル基は、穏やかな酸性条件下で選択的に開裂して、３１-シリルラパマイシンを与える。この変換に用いるシリル化剤は、一般的に市販されているクロロアルキルシラン(例えば、クロロトリメチルシラン、クロロトリエチルシランまたはクロロトリプロピルシラン)である。しかし、トリアルキルシランのかさが高いほど、３１-ヒドロキシル基を再生する最後から２番目の工程の間に酸性媒体中で脱保護するのに必要な時間がかかる。また、酸性媒体中での反応時間が長いと、より多くの分解副生成物が生じる。ラパマイシン３１-Ｏ-トリアルキルシリルエーテルの製造には、クロロトリメチルシラン、クロロトリエチルシランまたはクロロトリプロピルシランを用いることができるが、クロロトリメチルシランが好ましいシリル化剤である。トリメチルシリル基はより酸不安定性であり、それゆえ、変換の間に脱保護しやすい。その結果、これは分解生成物の形成を最少限にする。好ましい方法では、ラパマイシンは、有機塩基の存在下、０〜５℃で、酢酸エチル中、過剰のトリメチルシランで処理され、ラパマイシンの４２-および３１-ヒドロキシル基はシリル化され、ラパマイシン３１,４２-ビス-Ｏ-トリメチルシリルエーテルを定量的収率で形成する。この一般的なシリル化反応には、一般的な有機塩基(例えば、イミダゾール、１-メチルイミダゾール、トリエチルアミンおよびＮ,Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン)を用いることができる。しかし、イミダゾールは、反応が３０分以内に完結することができるので、ラパマイシンのシリル化に好ましい塩基であることが見出されている。
【００２２】
工程(ｂ)に関して、驚くべきことに、ラパマイシン３１,４２-ビス-Ｏ-シリルエーテルの４２-シリルエーテル基を除去して、ラパマイシン３１-Ｏ-シリルエーテルを形成する脱保護を冷たい希酸中で行えば、非常に少量(例えば、３１-シリルエーテルに対して、２０％未満であるが、一般的には１０％未満)のラパマイシン(すなわち、完全な脱保護の生成物)などの副生成物を本質的に定量的に生成するだけであることを見出した。ここで示されているように、脱保護工程(ｂ)の生成物は、約８０％程度またはそれ以上の３１-シリルエーテル保護化ラパマイシンと約１０％未満のラパマイシンとを含有することができる。ラパマイシンレベルは約１％程度に減少する可能性がある。この選択的な脱保護は、希釈した有機酸または無機酸(特に、硫酸、塩酸またはリン酸などの無機酸；例えば、＜２.５Ｎ、好ましくは０.８Ｎ〜約２.５Ｎ、最も好ましくは０.１Ｎ〜１Ｎ)を用いて、実施するのが都合よい。硫酸が特に好ましい。好ましくは、反応は、酸水溶液と有機溶媒とからなる二相系で、特に、例えば、約２〜３時間で選択的に除去することができる保護基としてトリメチルシリルを用いる場合には、例えば、第２相として酢酸エチルを用いて実施される。望ましくは低い反応温度、例えば、約２５℃またはそれ以下、好ましくは約１５℃またはそれ以下、例えば、約−５℃〜＋１０℃、最も好ましくは０℃〜５℃が用いられる。最も好ましくは、脱保護は、シリル化反応後に、その場で、０℃〜５℃で、エタノール、エタノール-水混合物、水および希釈した無機酸または有機酸を用いて行う。反応がきれいであり、２〜５時間で完結することができる(商業的な生産には都合がよい)ので、硫酸(０.５Ｎ)が特に好ましい。しかし、反応性がより乏しいシリル保護基(例えば、トリエチルシリルまたはトリプロピルシリル)を採用する場合には、より長い反応時間が必要であることが見出されており、かかる場合には、一相の溶媒系(例えば、酸/アセトン)を用いて、選択的な脱保護を行うことができる。
【００２３】
数多くの有機溶媒をシリル化に用いることができ、特に、ＤＭＦが文献中で言及されることが多い。しかし、本発明では、酢酸エチルが工程(ａ)の好ましい溶媒であるので、次の脱保護工程(ｂ)には、二相の反応媒体を用いる。
【００２４】
工程(ｃ)に関して、３１-保護化ラパマイシンのエステル化またはエーテル化は、上記特許に記載された条件下で実施することができる。例えば、以下に示すスキームＩでは、ラパマイシン３１-トリメチルシリルエーテルのアシル化は、４-ジメチルアミノピリジンまたは類似の試薬の存在下で、２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸の２,４,６-トリクロロベンゾイル混合無水物を用いて達成した。加えて、２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸クロリドも、４-ジメチルアミノピリジンまたは類似の試薬の存在下で、本発明の有効なアシル化剤であることが見出された。アシル化の条件としては、塩化メチレンが従来技術に記載されたテトラヒドロフランより好ましい溶媒である。反応は約−５０℃〜約＋２５℃の温度で実施すればよい。しかし、０℃未満の低い反応温度(−２０℃〜−１５℃またはそれ以下がより好ましい)は、米国特許第5,362,718号に記載された室温でのアシル化より良好な結果を与える。
【００２５】
工程(ｄ)に関して、４２-エステル化またはエーテル化３１-シリルラパマイシンから３１-シリル保護基を除去することは、例えば、上記のような希酸(好ましくは、希釈した無機酸；例えば、硫酸、塩酸またはリン酸)を用いて、加水分解することにより行えばよい。他の保護基を同時に除去するのに望ましいかどうかに依存して、酸は約０.１Ｎ〜約３Ｎ、好ましくは約０.２Ｎ〜約２Ｎ、最も好ましくは約０.５Ｎである。例えば、有機溶媒がアセトンである場合には、工程(ｄ)は酸水溶液と有機溶媒とからなる一相系で実施するのが都合よい。反応は約２５℃またはそれ以下、例えば、約−５℃〜約１０℃、好ましくは約０℃〜約５℃の温度で実施すればよい。
【００２６】
以下のスキームＩでは、アシル化生成物、３１-Ｏ-ＴＭＳ、４２-(保護化ヒドロキシ)エステル(化合物[Ｅ])をさらに希酸で処理して、それらを４２-(保護化ヒドロキシ)エステル(化合物[Ｂ])に変換するか、あるいは最終生成物４２-ヒドロキシエステル(最終生成物[Ｃ])を製造するのに直接用いることができる。この方法論は、用いるエステル化剤またはエーテル化剤を単純に変更することにより、ラパマイシンの他のエステルまたはエーテルを製造するのに用いることができる。
【００２７】
以下のスキームは、本発明で提供される方法に従って製造することができる、ラパマイシンの代表的な４２-エステルとして、２,２-ビス-(ヒドロキシメチル)プロピオン酸とのラパマイシン４２-エステルのレギオ選択的な製造も例示する。
【００２８】
【化１０】
0004289813.tif 000004
【００２９】
スキームＩにおいて、２,２-ビス-(ヒドロキシメチル)プロピオン酸とのラパマイシン４２-エステル[Ｃ]への化合物[Ｂ]の変換は、穏やかな酸性条件下で達成することができる。米国特許第5,362,718号に記載されているように塩酸水溶液を用いた場合に生成する不純物の形成を最少限にするので、硫酸水溶液を用いることが好ましい。塩酸を用いた場合に形成するテトラエン不純物は、所望の生成物からカラムクロマトグラフィーにより分離するのが困難であると報告されている(コーフィールド(Caufield)ら、テトラヘドロン・レターズ(Tetrahedron Lett.),1994,37,6835)。また、米国特許第5,362,718号に記載されているように室温よりむしろ０℃〜５℃で加水分解を実施するのが好ましい。
【００３０】
したがって、本発明は、式(Ｃ)：
【００３１】
【化１１】
0004289813.tif 000005
【００３２】
で示される化合物を製造する方法も提供する。かかる方法は、式(Ｂ)：
【００３３】
【化１２】
0004289813.tif 000006
【００３４】
［式中、Ｒ２は水素または-ＳｉＲ'Ｒ''Ｒ'''；ここで、Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は同一または相異なり、炭素数１〜６のアルキル、フェニルおよびベンジルから選択される］
で示される化合物を、希硫酸を用いて(例えば、１Ｎ〜３Ｎの硫酸を用いて)加水分解することからなる。好ましくは、反応は−５℃〜＋１０℃の温度で実施される。好ましくは、テトラヘドロンが溶媒として用いられる。
【００３５】
本発明に開示される合成経路は、ラパマイシンエステルまたはエーテルの製造について出版されている合成の方法論に比べて、主として、所望の４２-エステルまたはエーテルの収率および精製の容易性の点で、いくつかの明確な利点を提供する； これはレギオ選択的な合成であるので、所望の４２-エステルまたはエーテルの全収率は劇的に向上する。例えば、米国特許第5,362,718号に教示されている合成の方法論が化合物[Ｂ]を収率３５％で与えるのに対し、ここに開示した方法論を用いれば、[Ｂ]の合成は収率８５％で達成される。加えて、[Ｂ]から２,２-ビス-(ヒドロキシメチル)プロピオン酸とのラパマイシン４２-エステルへの変換は、ここに記載した方法を用いれば、約７５％の収率で達成されるのに対し、米国特許第5,362,718号の方法論を用いれば、わずか２０％の変換を与えるだけである。
【００３６】
同じ方法論を用いて、ラパマイシンの４２-エステルはレギオ選択的に製造することができる。一例として、米国特許第5,665,772号は、非レギオ選択的な様式によるラパマイシンの４０-Ｏ-アルキルエーテルの製造を開示している。命名法が異なるので、(本発明で言うところの)ラパマイシンの４２位は、米国特許第5,665,772号では、４０位と呼ばれている。これらの位置は同一である。ここに開示した方法論を用いて、ラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテルは、例えば、２-(ｔ-ブチルジメチルシリル)オキシエチルトリフラートで処理して、３１-Ｏ-トリメチルシリル,４２-Ｏ-[２-(ｔ-ブチルジメチルシリル)オキシ]エチル-ラパマイシンを与えることができる。ラパマイシンの３１-ヒドロキシル基および４２-ヒドロキシエチル部分からシリル保護基を除去することは、穏やかな酸性条件下、例えば、希硫酸で達成して、４２-Ｏ-(２-ヒドロキシ)エチルラパマイシンを与えることができる。ラパマイシンの他の４２-エーテルの非レギオ選択的な形成は、米国特許第5,665,772号に開示されている。これらも、ラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテルを経由して、レギオ選択的に製造することができる。
【００３７】
本発明は、ラパマイシンの３１-シリルエーテルおよびラパマイシンの４２-エステル化またはエーテル化誘導体の３１-シリルエーテルも包含する。これらは、ここに開示したように、ラパマイシンの４２-エステルおよびエーテルの製造に有用である。-ＳｉＲ'Ｒ''Ｒ'''で表されるケイ素部分は、同一または相異なっていてもよい３個の基を有する。本発明の典型的なシリルエーテルは、炭素数１〜６のアルキル、フェニルまたはベンジル基であるＲ'、Ｒ''またはＲ'''部分を有する。アルキル基は有枝鎖または直鎖であり得る。Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''はアルキル基であることが好ましく、Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''はメチルまたはエチルであることがより好ましい。３１-シリルエーテルはラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテルであることがさらにより好ましい。
【００３８】
したがって、本発明は、式(ＩＡ)および(ＩＢ)：
【００３９】
【化１３】
0004289813.tif 000007
【００４０】
【化１４】
0004289813.tif 000008
【００４１】
［式中、Ｒは上記のようなエステル基またはエーテル基、Ｒ'、Ｒ''およびＲ'''は同一または相異なり、炭素数１〜６のアルキル、フェニルおよびベンジルから選択される］
で示される３１-シリルエーテルを提供する。
【００４２】
以下の実施例は、本発明の方法により製造することができる化合物の代表例であるラパマイシン３１-シリルエーテルおよびラパマイシン４２-エステルの製造を例示する。
【００４３】
実施例１
ラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテル
酢酸エチル７５０ｍＬ中におけるラパマイシン(２５.０ｇ、強度９２.４％；２５.２８ミリモル)の溶液を０℃〜５℃に冷却した。イミダゾール７.５ｇ(１１０.２０ミリモル)を加え、攪拌して、溶液を形成した。この冷たい溶液に、クロロトリメチルシラン１１.０ｇ(１０１.２５ミリモル)を３０分間かけて滴下し、ラパマイシン３１,４２-ビス-Ｏ-トリメチルシリルエーテルの形成を完結させるために、０℃〜５℃でさらに３０分間攪拌した。５０ｍＬ量の０.５Ｎ硫酸を１０分間かけて滴下し、この混合物を０℃〜５℃で２.５時間攪拌した。反応混合物を分液漏斗に移し、水層を分離し、酢酸エチル１２５ｍＬで抽出した。有機層を合わせ、食塩水(１２５ｍＬ)、飽和重炭酸ナトリウム溶液(１００ｍＬ)、水(１２５ｍＬ×２)、次いで食塩水でｐＨ６〜７になるまで順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下でエバポレートして、ベージュ色の泡状生成物２８.５ｇ(理論量２４.９４ｇ)を得た。ＨＰＬＣ分析は、それが８６％(面積％による)のラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテルおよび７％のラパマイシンを含有することを示した。生成物は次の反応に直接用いた。
ＬＣ/ＭＳエレクトロスプレー(＋)モード(Ｍ−Ｈ)＝９８５。
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ,ｄ６-ＤＭＳＯ)δ４.６０(ｍ,１Ｈ,(４２Ｃ)ＯＨ)，４.１０(ｍ,１Ｈ,Ｃ(３１)Ｈ)，３.０９(ｍ,１Ｈ,Ｃ(４２)Ｈ)，-０.０２７(ｓ,９Ｈ,３１-Ｏ-ＴＭＳ)。
【００４４】
実施例２
２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸クロリド
乾燥トルエン２００ｍＬ中における２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸(１７.４２ｇ、０.１モル)の溶液を４０℃に加温し、塩化オキサリル２６.０ｍＬ(３７.８３ｇ、０.３モル)を３０分間かけて滴下した後、４０℃で２.５時間攪拌した。反応混合物を減圧下でエバポレートして、溶媒および過剰な塩化オキサリルを除去した。残留する生成物を乾燥トルエン(２００ｍＬ)と共に２回エバポレートした後、高真空下、４０℃で２時間乾燥させて、生成物１９.７５ｇを橙色の液体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ(３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３)δ４.２８(２Ｈ,ｄ,Ｊ＝１０.５Ｈｚ)，３.７６(２Ｈ,ｄ,Ｊ＝１０.５Ｈｚ)，１.４６(３Ｈ,ｓ)，１.２９(３Ｈ,ｓ)。
１３Ｃ ＮＭＲ(７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３)δ１７６.４３，９８.７６，６６.０６，５２.０７，２５.８２，２１.２０，１８.１０。
【００４５】
実施例３
２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテル,４２-エステル
方法Ａ：
窒素下、室温で、塩化メチレン２００ｍＬ中における２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸(９.７７ｇ、５６.０８ミルモル)およびＮ,Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン(１２.００ｇ、９２.８０ミリモル)の溶液に、２,４,６-トリクロロベンゾイルクロリド(１３.３５ｇ、５４.７３ミリモル)を加え、得られた混合物を室温で５時間攪拌した。反応混合物を−２０℃〜−１５℃に冷却し、塩化メチレン１２０ｍＬ中におけるラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテル(２８.５０ｇ、粗製、ラパマイシン２５.２８ミリモルから製造)の溶液を加えた。塩化メチレン１１０ｍＬ中における４-ジメチルアミノピリジン(１１.６８ｇ、９５.６０ミリモル)の溶液を２時間かけて滴下した。反応混合物を−１５℃〜−１６℃で１６時間さらに攪拌した。反応混合物を水１００ｍＬでクエンチし、有機層を分離し、０.５Ｎ硫酸(１８０ｍＬ)で洗浄した後、食塩水(１００ｍＬ)、飽和重炭酸ナトリウム溶液(１００ｍＬ)、水(１００ｍＬ×２)、食塩水(１００ｍＬ)でｐＨ６〜７になるまで洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下でエバポレートして、表題化合物(３３.１８ｇ)をベージュ色の泡状物として得た。
ＬＣ/ＭＳエレクトロスプレー(＋)モード(Ｍ＋ＮＨ４)＝１１６０。
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ，ｄ６-ＤＭＳＯ)δ４.５７(ｍ,１Ｈ,Ｃ(４２)Ｈ)，４.１０(ｍ,１Ｈ,Ｃ(３１)Ｈ)，４.０３(ｄ,２Ｈ)，３.５７(ｄ,２Ｈ)，１.３４(ｓ,３Ｈ)，１.２４(ｓ,３Ｈ)，１.１３(ｓ,３Ｈ)，-０.０２３(ｓ,９Ｈ,３１-Ｏ-ＴＭＳ)。
【００４６】
方法Ｂ：
Ｎ,Ｎ-ジメチルホルムアミド２ｍＬを含有する塩化メチレン１２０ｍＬ中におけるラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテル(１１.００ｇ；ラパマイシン１０.０ｇから；１１.１５ミリモル)の溶液を窒素下で攪拌し、−１５℃に冷却し、４-ジメチルアミノピリジン(４.８０ｇ、３９.２９ミリモル)を加え、この混合物を攪拌して、溶液を形成した。この冷たい溶液に、塩化メチレン中における２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸クロリド(４２.１８ｇ；１６.４２ミリモル)の７.５％溶液を２時間かけて滴下した。この溶液を−１５℃で１時間さらに攪拌し、塩化メチレン中における酸塩化物(１４.０６ｇ、５.４７ミリモル)の付加的な７.５％溶液を３０分間かけて加えた。反応混合物を−１５℃〜−１６℃で１６時間さらに攪拌した。反応混合物を食塩水１００ｍＬでクエンチし、有機層を分離し、冷たい０.５Ｎ硫酸(１００ｍＬ)、食塩水(１００ｍＬ)、飽和重炭酸ナトリウム溶液(１００ｍＬ)、水(１００ｍＬ)、食塩水(１００ｍＬ)でｐＨ６〜７になるまで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下でエバポレートして、生成物(１２.１５ｇ)を黄色の泡状物として得た。
【００４７】
実施例４
２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパマイシン４２-エステル
アセトン１００ｍＬ中における２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテル,４２-エステル(３３.１８ｇ；実施例３から、方法Ａ)の溶液を攪拌し、０℃〜５℃に冷却した。この冷たい溶液に、０.５Ｎ硫酸１７ｍＬを１０分間かけて滴下し、この混合物を０℃〜５℃で２.５時間攪拌した。水２０ｍＬ中における重炭酸ナトリウム(１.４４ｇ)の溶液を２０分間かけて加えた後、さらに水３３ｍＬを３０分間かけて加えた。生成物は攪拌の１時間後に沈殿し始めた。この混合物を０℃〜５℃で一晩攪拌し、濾過した後、固形の生成物をアセトン-水(１：１)６０ｍＬで洗浄した。生成物を３０℃の真空炉で乾燥させて、生成物２８.８５ｇを得た(強度８３.９％、ラパマイシンからの全収率８９.３％)。生成物の１Ｈ ＮＭＲは、米国特許第5,362,718号の実施例１０に記載された生成物と同一であった。
【００４８】
実施例５
２,２-ビス-(ヒドロキシメチル)プロピオン酸とのラパマイシン４２-エステル
方法Ａ：
テトラヒドロフラン２７６ｍＬ中における２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパマイシン４２-エステル(２８.８５ｇ；実施例４から)の溶液を攪拌し、０℃〜５℃に冷却した。この冷たい溶液に、冷たい２Ｎ硫酸８３ｍＬを３０分間かけて滴下し、この混合物を０℃〜５℃で６０時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチル６００ｍＬで希釈し、食塩水１２０ｍＬで洗浄した。水層を酢酸エチル１２０ｍＬで１回抽出し、有機抽出物を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム溶液(１２０ｍＬ)、水(２００ｍＬ×２)および食塩水(１２０ｍＬ)でｐＨ６〜７になるまで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下、室温でエバポレートして、生成物(２８.４２ｇ)をベージュ色の泡状物として得た。粗生成物をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィーに付し、ヘプタン中の３０％アセトンで溶出して、純粋な生成物１８.０６ｇを白色の固形物として得た(ラパマイシンからの全収率６９.４％)。生成物の１Ｈ ＮＭＲは、米国特許第5,362,718号の実施例１１に記載された生成物と同一であった。
【００４９】
方法Ｂ：
テトラヒドロフラン２３０ｍＬ中における２,２,５-トリメチル[１.３-ジオキサン]-５-カルボン酸とのラパマイシン３１-Ｏ-トリメチルシリルエーテル,４２-エステル(２３.２５ｇ、ラパマイシン２０.０６ｇから製造、強度９２.７％、２０.３４ミリモル)の溶液を攪拌し、０℃〜５℃に冷却した。この冷たい溶液に、冷たい２Ｎ硫酸１１５ｍＬを４５分間かけて滴下し、この混合物を０℃〜５℃で８８時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチル５００ｍＬで希釈し、食塩水１００ｍＬで洗浄した。水層を酢酸エチル１００ｍＬで１回抽出し、有機抽出物を合わせ、飽和重炭酸ナトリウム溶液(８０ｍＬ)、水(８０ｍＬ×２)および食塩水(１００ｍＬ)でｐＨ６〜７になるまで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下、室温でエバポレートして、生成物(２２.４８ｇ)をベージュ色の泡状物として得た。粗生成物をシリカゲルカラムでのクロマトグラフィーに付し、ヘプタン中の３０％アセトンで溶出して、純粋な生成物１６.５０ｇを白色の固形物として得た(ラパマイシンからの全収率７８.４％)。生成物の１Ｈ ＮＭＲは、米国特許第5,362,718号の実施例１１に記載された生成物と同一であった。
【００５０】
実施例６
ラパマイシン３１,４２-ビス-Ｏ-トリメチルシリルエーテル
酢酸エチル１５０ｍＬ中におけるラパマイシン(１０.０ｇ、強度９４.３％；１０.３ミリモル)の溶液を０℃〜５℃に冷却し、イミダゾール３.０ｇ(４４ミリモル)を加え、攪拌して、溶液を形成した。この冷たい溶液に、クロロトリメチルシラン４.４ｇ(４０.５ミリモル)を２０分間かけて滴下し、これに続いて、この溶液を０℃〜５℃でさらに３０分間攪拌した。反応混合物を濾過して、イミダゾールＨＣｌを除去し、濾液を減圧下でエバポレートして、黄色の泡状物を得た。ヘプタン(２００ｍＬ)を加え、室温で２０分間攪拌し、この混合物を濾過した。濾液を飽和重炭酸ナトリウム溶液４０ｍＬで洗浄した後、水(８０ｍＬ)で２回洗浄し、その後、食塩水(５０ｍＬ)で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、エバポレートして、生成物を黄色の泡状物１１.４２ｇ(９８.６％)として得た。
ＬＣ/ＭＳエレクトロスプレー(−)モード(Ｍ−Ｈ)＝１０５７。
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ，ｄ６-ＤＭＳＯ)δ４.１０(ｍ,１Ｈ,Ｃ(３１)Ｈ)，３.３１(ｍ,１Ｈ,Ｃ(４２)Ｈ)，０.０５７(ｓ,９Ｈ,４２-Ｏ-ＴＭＳ)，−０.０２７(ｓ,９Ｈ,３１-Ｏ-ＴＭＳ)。
【００５１】
実施例７
ラパマイシン３１-Ｏ-トリエチルシリルエーテル
酢酸エチル７５ｍＬ中におけるラパマイシン(５.００ｇ、強度９２.７％；５.０７ミリモル)の溶液を０℃〜５℃に冷却し、イミダゾール１.５０ｇ(２２.０３ミリモル)を加え、攪拌して、溶液を形成した。この冷たい溶液に、クロロトリエチルシラン３.０５ｇ(２０.２３ミリモル)を１０分間かけて滴下した。この混合物を０℃〜５℃で３０分間攪拌した後、室温で一晩攪拌して、ラパマイシン３１,４２-ビス-Ｏ-トリエチルシリルエーテルの形成を完結させた。反応混合物を濾過した後、濾液を減圧下、室温でエバポレートして、溶媒の大部分を除去した。残留する溶液(約１０ｍＬ)をアセトン６０ｍＬに溶解し、０.１５Ｎ硫酸１５ｍＬを加え、この混合物を０℃〜５℃で２５時間攪拌した。ラパマイシン３１,４２-ビス-Ｏ-トリエチルシリルエーテルは、この段階で消失した。反応混合物を酢酸エチル８０ｍＬで希釈し、食塩水(６０ｍＬ×２)、飽和重炭酸ナトリウム溶液(４０ｍＬ)、水(６０ｍＬ×２)、食塩水(６０ｍＬ)でｐＨ６〜７になるまで順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下でエバポレートして、明るい黄色のガム状物の生成物６.９２ｇ(理論量５.２１ｇ)を得た。ＨＰＬＣ分析は、それが９５.２％(面積％により)のラパマイシン３１-Ｏ-トリエチルシリルエーテルおよび０.９％のラパマイシンを含有することを示した。
【００５２】
実施例８
ラパマイシン３１-Ｏ-トリプロピルシリルエーテル
酢酸エチル７５ｍＬ中におけるラパマイシン(５.００ｇ、強度９２.７％；５.０７ミリモル)の溶液を０℃〜５℃に冷却し、イミダゾール１.５０ｇ(２２.０３ミリモル)を加え、攪拌して、溶液を形成した。この冷たい溶液に、クロロトリプロピルシラン３.９１ｇ(２０.３ミリモル)を１０分間かけて滴下した。この混合物を０℃〜５℃で３０分間攪拌した後、室温で２１時間攪拌して、ラパマイシン３１,４２-ビス-Ｏ-トリプロピルシリルエーテルの形成を完結させた。反応混合物を濾過した後、濾液を減圧下、室温でエバポレートして、溶媒の大部分を除去し、残留する溶液をアセトン６０ｍＬに溶解した。１５ｍＬ量の０.２５Ｎ硫酸を加え、この混合物を０℃〜５℃で４５時間攪拌した。ラパマイシン３１,４２-ビス-Ｏ-トリプロピルシリルエーテルは、この段階で消失した。反応混合物を酢酸エチル１００ｍＬで希釈し、食塩水(４０ｍＬ×２)、飽和重炭酸ナトリウム溶液(４０ｍＬ)、水(４０ｍＬ×２)、食塩水(５０ｍＬ)でｐＨ６〜７になるまで順次洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下でエバポレートして、明るい黄色のガム状物の生成物８.０７ｇ(理論量５.４３ｇ)を得た。ＨＰＬＣ分析は、それが９６.７％(面積％により)のラパマイシン３１-Ｏ-トリプロピルシリルエーテルおよび１％のラパマイシンを含有することを示した。