(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
造粒物の７０％以上が、粒径０．１〜２．０mmであり、且つかさ密度が０.６〜０.８g/mlである、乳酸発酵液から分離して得たホエー精製液から複合型造粒機を用いて造粒したアンジオテンシン阻害ペプチド含有造粒物。
【請求項２】
該造粒物の８０％以上が、粒径０．２〜１．０mmであり、且つかさ密度が０．６〜０．８g/mlである請求項１記載の造粒物。
【請求項３】
複合型造粒機内で流動している種粉に、乳酸発酵液を固液分離して得たホエー画分を精製処理して得たホエー精製液をスプレーして一次造粒する第１工程と、かくして得られた一次造粒物を整粒機を用いて整粒する第２工程と、かくして整粒された粉末を再度複合型造粒機に戻し、これを種粉として流動させながら、該精製ホエー液を噴霧して造粒を完結させる第３工程とからなるアンジオテンシン阻害ペプチド含有造粒物の製造方法。
【請求項４】
請求項３において得られたアンジオテンシン阻害ペプチド含有造粒物を、必要により微粉化した後、種粉として複合型造粒機に投入して流動させながら、乳酸発酵液を固液分離して得たホエー画分を精製処理して得たホエー精製液を噴霧して一次造粒する第１工程と、かくして得られた一次造粒物を整粒機を用いて整粒する第２工程と、かくして整粒された粉末を再度複合型造粒機に戻し、これを種粉として流動させながら、該ホエー精製液を噴霧して造粒を完結させる第３工程とからなるアンジオテンシン阻害ペプチド含有造粒物の製造方法。
【請求項５】
該ホエー精製液が、乳酸発酵液を固液分離して得たホエー画分を電気透析処理して濃縮、精製処理して得たものである、請求項３又は請求項４に記載のアンジオテンシン阻害ペプチド含有造粒物の製造方法。
【請求項６】
造粒物の７０％以上が、粒径０．１〜２．０mmであり、且つかさ密度が０．６〜０．８g/mlである請求項３、４又は５記載の造粒物を製造する方法。
【請求項７】
造粒物の８０％以上が、粒径０．２〜１．０mmであり、且つかさ密度が０．６〜０．８g/mlである請求項３、４又は５記載の造粒物を製造する方法。
【請求項８】
請求項１乃至請求項７に記載されたアンジオテンシン阻害ペプチド含有造粒物を原料として製造した経口摂取可能な抗高血圧用錠剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、アンジオテンシン変換酵素阻害活性を示すペプチド（以下ＡＣＥＩペプチドと称す）、即ち、Ｉｌｅ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ及び又はＶａｌ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏを基本骨格とするペプチドを含有する乳酸発酵液のホエーから調製した、高血圧降下剤用造粒物、その製法及びこれを用いた錠剤に関する。更に又、ここに得られる高血圧降下用造粒物から調製した錠剤は、高血圧降下用の医薬品乃至機能性食品として用いられる。
【０００２】
【従来の技術】
アンジオテンシン変換酵素（以下ＡＣＥと呼ぶ）は、主に肺や血管内皮細胞に存在し、レニンにより分解されたアンジオテンシンＩ（Ａｓｐ  Ａｒｇ  ＶａｌＴｙｒ  Ｉｌｅ  Ｈｉｓ  Ｐｒｏ  ＰｈｅＨｉｓ  Ｌｅｕ）に作用してC末端よりジペプチド（ Ｈｉｓ  Ｌｅｕ）を遊離させ、強力な血圧上昇作用を有するアンジオテンシンＩＩを生成させる。又、この酵素は、降圧作用を有するブラジキニンを分解し、不活性化する作用を合せ持つ。このようにＡＣＥは、昇圧ペプチド（アンジオテンシンＩＩ）を産生すると共に、一方では降圧ペプチド（ブラジキニン）を分解、不活性化するので、結果として血圧を上昇させる作用を示す。したがって、この酵素を阻害することにより、血圧の上昇を抑えることが出来るので、このための医薬品としてのＡＣＥ阻害物質が各種開発、使用されている。
【０００３】
近年、低毒性で安全性の高い降圧物質として、ＡＣＥＩペプチドが注目され、天然物、合成物が多数報告されている（特開平３ー１２０２２５）。又、乳酸菌又は、乳酸菌と酵母をある種の培地に培養することによって、 Ｉｌｅ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ（以下ＩＰＰと略す）及び又はＶａｌ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ（以下ＶＰＰと略す）を基本骨格とするＡＣＥＩペプチドの大量生産の方法が知られており、これらのペプチドを含む発酵生産物を各種の精製処理を施して、安全性が高く、微量の経口摂取で有効なＡＣＥ阻害活性を有する医薬品、機能性食品が提案されている（日本特許第２７８２１４２号、２７８２１５３号）。
【０００４】
上記日本特許の方法に従い、乳酸菌又は、乳酸菌と酵母を培養することによって得られる発酵乳をそのままＡＣＥ阻害剤の有効成分として用いることも出来るが、降圧作用を有する医薬品、機能性食品として使用するためには、通常、各種の精製処理を施して有効成分以外の苦味、酸等を除去し、ＩＰＰ及び又はＶＰＰを基本骨格とするＡＣＥＩペプチドの含有率が高い、固形状態で使用に供するのが好ましい。
又、この固形状の医薬品、機能性食品であっても、第三成分を含有しない方が、その嗜好性の面からも、更にこれを加工して用いる場合にも好ましい。
【０００５】
そこで、発酵乳の固液分離を行い、 ＡＣＥＩペプチドが多く溶解している液体ホエー画分を、例えば、電気透析処理、イオン交換樹脂処理、中空糸膜透析処理、逆浸透圧処理、クロマトグラフィー処理、及びこれらの組み合わせ等の方法で処理して精製した後、精製液を真空凍結乾燥、スプレードライ、スプレードライしたものを流動層造粒して、或いは噴霧乾燥式流動層造粒して使用に供される。
【０００６】
しかしながら、これらの方法の内、スプレードライによって製造された粉末は、吸湿性が高く、かさ密度が軽質であり、又、粒度分布が広いため流動性が悪く、必要により行うその後の工程、例えば打錠工程の効率を著しく低下させる等の欠点がある。
又、スプレードライと流動層造粒を組み合わせる方法では、２種類の設備と２回の操作を必要とし、製造コストの面でも不利となる欠点を有する。
他方、噴霧乾燥式流動層造粒の方法で得られる造粒物は、粒度分布は比較的狭いが、吸湿率が高く、又、目的物質であるＡＣＥＩペプチドの回収率が大幅に低下するという欠点がある。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
この発明の目的は、安全性が高く、微量の経口投与（摂取）で有効な ＡＣＥ阻害活性を有し、医薬品、機能性食品として使用出来るＡＣＥＩペプチドを主要成分とする造粒物及びその製造法を提供する。更に詳しくは、吸湿性が低く、かさ密度が高くて重質であり、又、粒度分布が狭くて流動性に優れたＡＣＥ阻害剤からなる造粒物を提供することにあり、またこのＡＣＥ阻害剤の回収率を高収率で製造する方法を提供することにある。
【０００８】
本発明の別の目的は、この造粒物を用いて吸湿性が低く、又、錠剤の大きさ、重量、硬度、高密度で且つ密度にバラツキのない錠剤及びその安価且つ容易な製造方法を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明においては、乳酸発酵を行って得た発酵乳の固液分離を行い、 ＡＣＥＩペプチドが多く溶解している液体画分（ホエー部分）を、例えば、電気透析処理、イオン交換樹脂処理、中空糸膜透析処理、逆浸透圧処理、クロマトグラフィー処理、及びこれらの組み合わせ等の方法で処理した精製液（以下ホエー精製液と呼ぶ）を、複合型造粒機内で流動している乳糖、澱粉等通常用いられる種粉にスプレーして一次造粒を行う（第１工程）。
【００１０】
ここで得られる一次造粒物の組成は、種粉を１０％以上含んでいる。そこで、再度複合型造粒機で処理できるよう、これを取りだし、整粒機にかけて、細粒とする（第２工程）。
【００１１】
第２工程で整粒された粉末を、再度複合型造粒機に投入し、流動させながら、残りのホエー精製液を噴霧して造粒を完結させる（第３工程）。
以上の工程を完了した後は、第１工程において用いる一般の種粉、即ち、乳糖、澱粉等は使用せず、前回の製品を種粉として使用する。このとき、製品を必要に応じて細かく砕いて細粉として種粉とする。
かくすることによって、製品中のＡＣＥＩペプチド含量が高い製品を得ることが出来る。
【００１２】
即ち、本発明は、前回の製品を、必要により微粉化した後、種粉として複合型造粒機に投入して流動させながら、ホエー精製液を噴霧して一次造粒する第１工程と、かくして得られた一次造粒物を整粒機を用いて整粒する第２工程と、かくして整粒された粉末を再度複合型造粒機に戻し、流動させながら、該ホエー精製液を噴霧する第３工程とからなる、乳酸発酵液から調製したＡＣＥＩペプチドを含有する、吸湿性が低く、かさ密度が高くて重質であり、又、粒度分布が狭くて流動性に優れた造粒物を製造する方法である。
【００１３】
又、本発明は、実質的に乳酸発酵液成分以外の第3成分を含有せず、ＡＣＥＩペプチドを多く含有し、吸湿性が低く、かさ密度が高くて重質であり、又、粒度分布が狭くて流動性に優れた造粒物である。
【００１４】
更に本発明は、上に得られた造粒物を原料とする実質的に乳酸発酵液成分以外の種粉を含有しないＡＣＥＩペプチドの錠剤である。
本発明によって得られる造粒物は、粒度分布が狭く、吸湿性が低く、且つ重質であり又、流動性にも優れているので、通常の錠剤成型用の打錠機による打錠適性が極めて高い。
以下本発明を更に詳細に説明する。
【００１５】
本発明においてその出発物質として用いられるＡＣＥＩペプチドが多く溶解している液体ホエー画分は、日本特許第２７８２１４２号、２７８２１５３号等に記載された方法によって、乳酸発酵乳を固液分離、次いで各種の精製処理を行って調製される（ホエー精製液）。
かくして得られるホエー精製液は、アンジオテンシン変換酵素阻害成分として、ＩＰＰ及び又はＶＰＰを主とし、更にはＩＰＰ及び／又はＶＰＰを基本骨格とする１０残基程度までのオリゴペプチドを含んでいる。
用いられるホエー精製液としては、上記液体ホエー画分を必要により濃縮した後、電気透析して、乳酸その他のイオンを除去したものが有利に用いられる。
【００１６】
本発明の造粒物を製造するに当たっては、組成としては吸湿性が高い成分を
多く含んでいるので、通常の複合型造粒機が有利に用いられる。初めての生産に当たっては、該複合型造粒機内に、乳糖、澱粉等の一般に用いられる種粉を流動させながら、ホエー精製液をスプレーして一次造粒を行う（第１工程）。
【００１７】
一方、複合型造粒機以外の造粒機、例えば、スプレー造粒運転方法によるスプレードライ機、スプレードライ機にかけた後流動層造粒機にかけて造粒を完結させる２種類の装置の併用によって造粒を行ったときには、形状が不安定で、微粉末を多く含む。この結果、得られた造粒物は吸湿性が高く、短時間の大気への暴露により流動性が悪化する。従って、得られた造粒物を更に錠剤化するに当たっても、打錠機内を減圧にする必要があったり、それでも打錠機の杵が作動しなくなること、更に、流動性の悪い原料粉末の場合、臼に一定量の原料粉末が供給されず、打錠圧がバラツキ、得られる製品の錠剤の硬度、重量も一定でないという欠点がある。
又、噴霧乾燥式流動層造粒装置により造粒を行ったときは、得られる造粒物の粒径分布は比較的小さいが、吸湿率が高く、又、目的物質であるＡＣＥＩペプチドの回収率が大幅に低下するという欠点がある。
【００１８】
本発明における第１工程においては、種粉とホエー精製液がくっつき合って不揃いな塊ができる。この状態では、粒径約２００μm以下の細粉はほぼ無くなっている（約５％程度以下）。ここで得られた半造粒物を、いったん取りだし、整粒機にかけて細粒して細粉化、粒揃えを行う（第２工程）。
【００１９】
第２工程で整粒された粉末を、再度複合型造粒機に投入し、流動させながら、残りのホエー精製液を噴霧して造粒を完結させる（第３工程）。
以上の工程を完了した後は、第１工程において用いる一般の種粉、即ち、乳糖、澱粉等は使用せず、前回の製品を、必要に応じて適当な大きさに細粉化した後、第一工程の種粉として使用する。
本発明の方法によるときは、 ＡＣＥＩペプチドの回収率も高く、又、造粒助剤としての第３成分を必要としないので、製品中のＡＣＥＩペプチド含量が高い製品を得ることが出来る。
【００２０】
本発明によって得られる造粒物は、他の方法によって得られるものに比べて、その粒度分布が極めて狭い。通常、造粒物の７０％以上が、粒径０.１〜２.０mmのものが得られ、造粒物の７０％以上が粒径０.２〜１ｍｍである造粒物を得ることも可能である。さらには、造粒物の８０％以上が粒径０.１〜２.０ｍｍである造粒物を得ることも可能である。このことは、流動性においても非常に優れていることであり、後の工程における打錠においても有利となる。
そして、得られた造粒物のかさ密度が０.６〜０.８g/mlと極めて高く、又、他の方法によって製造した造粒物に比べて吸湿性も極めて低い。
【００２１】
本発明によって得られる ＡＣＥＩペプチドを高濃度に含有する造粒物は、 ＡＣＥ阻害剤として、そのまま或いは、更に目的に応じて、適宜錠剤等の固形、或いは液状に加工して医薬用乃至食品用に、経口摂取可能な降圧剤として用いることが出来る。
【００２２】
次いで、本発明によって得られる ＡＣＥＩペプチドを高濃度に含有する造粒物を原料として錠剤を調製するときは、極めて高品質の錠剤が製造できる。
打錠に当たっては、通常の打錠機が用いられ、０.５〜１％程度の乳化剤を打錠直前に混合して使用する。
本発明の ＡＣＥＩペプチドを高濃度に含有する造粒物は粒径分布が小さいため粉の流動性が高く、吸湿率が低いので、打錠圧のばらつきが少なく、杵や臼に原料がこびりついて運転に支障をきたすこともない。得られる錠剤についても、その硬度、１錠当たりの重量、大きさ、剤形も安定しており、錠剤の表面は、不必要な輝きが無く又、適度なキメを有し経口服用しても舌触りが好ましい錠剤が得られるのも本発明の特徴である。
【００２３】
【実施例】
実施例１
日本特許第２７８２１５３号に記載された方法に準じて、乳酸発酵乳１５００ｋｇを調製、これを固液分離して得た上澄液650ｋｇを、日阪製作所製、ロングプレート式ワンパス濃縮装置にて減圧下に92kgまで濃縮し、その３ｋｇ宛を電気透析装置として株式会社トクヤマ製、TS−２―１０型を用いて、電気透析処理を６２０分間行う工程を繰り返して、ホエー精製液５０kgを得た。この精製液中には、 ＶＰＰが３７．９mｇ， ＩＰＰが２５．３ｍｇ含まれていた。尚、本乳酸発酵液中のＡＣＥＩペプチドの一部は、ＶＰＰ，ＩＰＰに分解され、その主たる活性値は、ＶＰＰ，ＩＰＰが占める。又、ＩＰＰの重量当たりのＡＣＥＩ阻害活性はＶＰＰの１.７倍であるので、以下の式により求めたＡＣＥＩペプチド活性値を、以後全ＡＣＥＩペプチド量として表す。
ＡＣＥＩペプチド換算量（ ＶＰＰ換算ｍｇ/１００ｇ ）＝ ＩＰＰ量（ｍｇ/１００ｇ）×１.７＋ＶＰＰ量（ｍｇ/１００ｇ）
ここに得たホエー精製液のpHは３.０、乳酸酸度０.９４％、ＡＣＥ阻害活性０．９７Ｕ/ｇ、 ＡＣＥＩペプチド含有量８０.９mg/１００g（２.６４mg/g固体）であった。
【００２４】
乳糖３００g（DMV２００メッシュ）を複合型造粒機（株式会社パウレック製、MPー０１型）に投入、流動させながら、上に得たホエー精製液２１７７g（固形分２７.５％）を３時間かけて、２流体ノズルより噴霧した。尚、給気温度８０℃、排気温度５０〜５５℃、アトマイズエア量３０L／秒、ロータ回転数３００rpmにて運転を行って、一次造粒物試作品９４０gを得た。
【００２５】
上に得た一次造粒物試作品を、米国クワドロ、インク製整粒機１９７型「クワドロコーミル１９７」（Ｋｕａｄｒｏ，ＩＮＣ．、ＣＯＭＩＬ）を用いて、間口０.８mmにて１６メッシュ以上の粒子が残らないよう細粒化した。得られた粉末の内、３００gを種粉として、上記複合型造粒機に投入、流動させながら、ホエー精製液１０００g（固形分２７.５％）を２時間かけて噴霧して、二次造粒物４６０ｇを得た。運転条件は一次造粒物の場合と同じ。
この造粒物は、ＡＣＥＩペプチド含有量２００ｍｇ／１００ｇ、水分９．４％であり、かさ密度０．７ｇ／ｍｌであった。
【００２６】
実施例２
実施例1に準じて製造した二次造粒物４kgを、同様に「クワドロコーミル１９７」整粒機にかけて整粒した。本整粒により、１６メッシュ以上の粒子は確認されされなくなった。この二次造粒物を整粒した粒子を種粉に用いて複合型造粒のための細粒化粉末とする。
【００２７】
細粒化粉末４kgを、複合型造粒機（株式会社パウレック製、MPー２５型）に投入、流動させながら、上に得たホエー精製液２１.６kg（固形分２６.５％）を５時間かけて、２流体ノズルより噴霧した。尚、給気温度８０℃、排気温度５０〜５５℃、アトマイズエア量３５０リットル/秒、回転数２００rpmにて運転を行って、本発明の造粒物（二次造粒物）９．１kgを得た。
【００２８】
実施例３
上に得た二次造粒物を同様にクワドロミル１９７型を用いて、間口０．８ｍｍにて細粒化した。得られた粉末のうち、４ｋｇを種粉として、上記複合型造粒機に投入、流動させながらホエー精製液１７．６ｋｇを４時間かけて上記の条件で噴霧して、二次造粒物８．８ｋｇを得た。
得られた二次造粒物は、ＡＣＥＩペプチド含有量２１５ｍｇ／１００ｇ、水分９．０％、かさ密度０．７ｇ／ｍｌであり、粒度分布は以下の如くであった。
粒径：１０００μm以上              ７．４％
粒径：１０００μm〜５５０μm    ４９．６％
粒径：２００μm〜５５０μm      ４０．８％
粒径：１５０μm〜２００μm        １．８％
粒径：７４μm〜１５０μm          ０．３％
粒径：７４μm以下                  ０．１％
【００２９】
試験例１
上のホエー精製液を用いて、スプレードライ、スプレードライ後流動層造粒、噴霧乾燥式流動層造粒を各々行って得た造粒物の諸性質は下記の通りであった。結果を表１に示す。
【００３０】
【表１】
0004290792.tif 000002
【００３１】
注：吸水率は、各造粒物を２５℃において湿度６５％の環境下に６時間
保ったときの前後に水分量を測定した。
ＡＣＥ阻害活性量 ： ＡＣＥを５０％阻害する力価を１単位とする。
【００３２】
実施例４
実施例３で得た二次造粒物１kgを用い、株式会社菊水製作所製打錠機ＣＬＥＣー２１K型機（Ф２０、Ｒ面１本立）を用い、２０℃、除湿環境下、乳化剤としてショ糖脂肪酸エステル「F２０ーW」（第一製薬工業製）を０.５％初頭に添加、混合、打錠圧４トン、回転数１０ｒｐｍにて１錠当たり２．５gの丸型錠剤を製造した。その結果、杵や臼に造粒物が付着することもなく、得られた錠剤のバラツキも殆どなく、噛み砕いて服用するのに最適な硬さの錠剤４００錠を得た。
得られた錠剤は、以下の通りであった。
重量            ２.５g/錠
厚み                ６.８７mm
硬度                １５.８kg
結合性          良好
滑沢性          良好
【００３３】
【発明の効果】
本発明の方法によるときは、ＡＣＥ阻害ペプチドの回収率も高く、又、造粒助剤としての第３成分を必要としないので、製品中のＡＣＥＩペプチド含量が高い造粒物製品を得ることが出来る。
そして、得られた造粒物のかさ密度は極めて高い。又、他の方法によって製造した造粒物に比べて吸湿性が極めて低く、更には、造粒物の粒径分布が小さいため流動性においても非常に優れている。
更には、かくして得られた造粒物を用いて錠剤を製造するに当たっても、本造粒物の粒径分布が小さいため粉の流動性が高く、吸湿率が低いので、打錠圧のばらつきが少なく、杵や臼に原料がこびりついて運転に支障をきたすこともない。得られる錠剤についても、その硬度、１錠当たりの重量、大きさ、剤形も安定しており、錠剤の表面に不必要な輝きが無いという極めて有利な効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、本発明によって得られる造粒物の顕微鏡写真である。（５０倍）
【図２】  図２は、スプレードライにより得られる粉末の顕微鏡写真である。（５０倍）
【図３】  図３は、スプレードライした後流動層造粒により得られる造粒物の顕微鏡写真である。（５０倍）
【図４】  図４は、噴霧乾燥式流動層造粒により得られる造粒物の顕微鏡写真である。（５０倍）
【図１】
0004290792.tif 000003
【図２】
0004290792.tif 000004
【図３】
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【図４】
0004290792.tif 000006