(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（Ｉ）：
【化１】
0004317278.tif 000008
（式中、Ｒ１は水素原子又はアルキル基を示し；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に水素原子又はアルキル基を示すが、Ｒ２及びＲ３は互いに結合して１個又は２個以上のアルキル基を有していてもよいシクロアルキル環又はビシクロアルキル環を形成していてもよい）で表される化合物。
【請求項２】
Ｒ１が水素原子又はＣ１−１２アルキル基であり、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１−８アルキル基であるか、Ｒ２及びＲ３は互いに結合して１個又は２個以上のＣ１−１０アルキル基を有していてもよい５〜８員のシクロアルキル環又は８〜１２員のビシクロアルキル環を形成していてもよい、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物を含む蛋白質キナーゼＣの活性化調節剤。
【請求項４】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）で表される化合物を含む医薬。
【請求項５】
白血病の治療に用いる請求項４に記載の医薬。
【請求項６】
ヒト後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療に用いる請求項4に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、蛋白質キナーゼＣの活性化調節剤として有用な化合物及び該化合物を含む医薬の発明に関する。
【０００２】
【従来の技術】
蛋白質キナーゼＣはほとんど全ての動物細胞に存在する酵素であり、基質蛋白質をリン酸化することにより、細胞内の情報伝達に深くかかわっている。生理的条件下では、蛋白質キナーゼＣの活性化は、その酵素上の調節ドメインの認識部位に特異的に結合する1,2-sn-ジアシルグリセロールによって開始される。一方、ある種の非常に強力な腫瘍促進物質は、特異的かつ非常に高い親和性をもってこの酵素のジアシルグリセロール結合部位に結合し、この酵素を活性化する。この部位に結合する腫瘍促進物質には３つのクラスの化合物が存在する：ジテルペンエステル類（例えば、ホルボールエステル、インゲノールエステルなど）；インドールアルカロイド類（例えばテレオシジン、インドラクタム−Ｖなど）；及び、ポリアセテート類（例えば、アプリシアトキシンなど）。
【０００３】
これらの化合物、例えば、天然から単離されたホルボール-12-テトラデカノエート-13-アセテート、リングビアトキシン、及びアプリシアトキシンはある種の白血病細胞、例えば、ヒト前骨髄球性白血病細胞に対し、増殖阻害および正常細胞への分化を促進する抗白血病活性を有する。また、これらの化合物はヒト後天性免疫不全症ウイルスの正常細胞への感染を妨げる抗ウイルス活性を有する。これらの化合物は極端に細胞毒性が高く、また、皮膚での発癌促進の疑いのある因子であり、そのままヒトの治療因子として用いることには躊躇があるにもかかわらず、最近、試験的に臨床応用されており、関連化合物への期待は極めて大きい。しかしながら、天然化合物の構造修飾による細胞毒性と抗白血病活性あるいは抗ウイルス活性の分離は達成されていない。
【０００４】
上記の異なるクラスの化合物は事実上同一の生物活性を有するにもかかわらず、構造は多岐にわたっている。活性発現のための共通の構造要求性を明らかにする上で障害となっていたテレオシジンクラスの化合物の２つの立体配座と生物活性との関連に関して、シス型アミド構造をもつ配座が活性立体配座であるという結論が得られた。また、ホルボールエステルの一種、ホルボール−１３−アセテートと蛋白質キナーゼＣの１アイソタイプである蛋白質キナーゼＣデルタの複合体のX線結晶解析構造が報告された。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、特異的蛋白質キナーゼＣの活性化調節剤として有用な化合物を提供することにある。また、本発明の別な課題は、蛋白質キナーゼＣの特異的活性化調節剤として優れた活性を有し、かつ細胞毒性等の少ない化合物を提供することにある。さらに、本発明の別の課題は、白血病治療剤又は抗ウイルス剤として有用な医薬を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意努力した結果、下記一般式で表されるパーヒドロベンゾアゼピノン構造を有する化合物が蛋白質キナーゼＣに対して優れた活性化調節作用を有しており、また、この化合物を有効成分として含む医薬が白血病の治療や後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療などに有用であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち本発明は、下記の一般式（Ｉ）：
【化２】
0004317278.tif 000002
（式中、Ｒ１は水素原子又はアルキル基を示し；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に水素原子又はアルキル基を示すが、Ｒ２及びＲ３は互いに結合して１個又は２個以上のアルキル基を有していてもよいシクロアルキル環又はビシクロアルキル環を形成していてもよい）で表される化合物を提供するものである。本発明の好ましい態様によれば、Ｒ１が水素原子又はＣ１−１２アルキル基を示し；Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に水素原子又はＣ１−８アルキル基であるか、Ｒ２及びＲ３は互いに結合して１個又は２個以上のＣ１−１０アルキル基を有していてもよい５〜８員のシクロアルキル環又は８〜１２員のビシクロアルキル環を形成していてもよい上記化合物が提供される。
【０００８】
別の観点からは、上記式（Ｉ）で表される化合物を含む蛋白質キナーゼＣの活性化調節剤、及び上記化合物を有効成分として含む医薬が提供される。この医薬は、白血病やヒト後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療に有用である。さらに別の観点からは、白血病又はヒト後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療方法であって、上記式（Ｉ）で表される化合物の治療及び／又は予防有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；及び上記医薬の製造のための上記式（Ｉ）で表される化合物の使用が提供される。
【０００９】
【発明の実施の形態】
一般式（Ｉ）において、Ｒ１は水素原子又はアルキル基を示す。本明細書においてアルキル基という場合には、直鎖状又は分枝鎖状のいずれでもよい。Ｒ１が示すアルキル基としては、例えば、Ｃ１−１２アルキル基を用いることができ、好ましくは、メチル基、ｎ−ブチル基、又はｎ−オクチル基などを用いることができる。Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に水素原子又はアルキル基を示す。Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が示すアルキル基としては、例えば、Ｃ１−８アルキル基を用いることができ、Ｃ４−８アルキル基が好ましい。Ｒ３及びＲ４が共にアルキル基である場合には、Ｒ２は水素原子であることが好ましく、Ｒ３及びＲ４は共にｎ−ブチル基であることが好ましい。
【００１０】
また、Ｒ２及びＲ３は互いに結合して、それらが結合する２個の炭素原子と共に、シクロアルキル環又はビシクロアルキル環を形成してもよい。Ｒ２及びＲ３が互いに結合して形成されるシクロアルキル環としては、例えば、５〜８員環、好ましくは５又は６員環を挙げることができる。Ｒ２及びＲ３が互いに結合して形成されるビシクロアルキル環としては、例えば、８〜12員環、好ましくは８〜10員環を挙げることができる。これらの環は、環上の任意の位置に１個又は２個以上のアルキル基を有していてもよい。環上に置換するアルキル基としては、例えば、Ｃ１−１０アルキル基などを用いることができ、２個以上の置換基が存在する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。ビシクロアルキル環を形成する場合の例として、ステロイド骨格、例えばコレスタン骨格又はアンドロスタン骨格などのＣ環及びＤ環部分に相当するビシクロアルキル環、並びに必要に応じてその側鎖構造を有するビシクロ環構造を挙げることができる。
【００１１】
一般式（Ｉ）で表される本発明の化合物において、７員環の環構造を平面としてみた場合、Ｒ１は紙面に対して上向き又は下向きの立体配置のいずれの配置であってもよい。また、７員環を構成するアミド基の窒素原子に隣接し、かつ、ヒドロキシメチル基により置換された炭素原子も不斉炭素であり、このヒドロキシメチル基は７員環の環構造を平面としてみた場合に紙面に対して上向き又は下向きの立体配置のいずれの配置であってもよい。さらに、一般式（Ｉ）で示される構造式において６員環の環構造を平面としてみた場合、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に紙面に対して上向き又は下向きの立体配置のいずれの配置であってもよい。
【００１２】
これらの不斉炭素の存在に加えて、本発明の化合物は、置換基の種類によってはさらに１個又は２個以上の不斉炭素を有する場合があるが、いずれの不斉炭素の立体配置も特に限定されない。これらの不斉炭素に基づく光学活性体やジアステレオ異性体などの立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などは、いずれも本発明の範囲に包含される。また、上記化合物の水和物又は溶媒和物も本発明の範囲に包含される。
【００１３】
一般式（Ｉ）で示される本発明の化合物のうち、好ましい化合物として、以下の表及び化学式に示す化合物を挙げることができるが、本発明の範囲はこれらの化合物に限定されることはない（下記化学式における立体配置は相対配置を示すが、下記の化合物のうち、化学式に示されたとおりの絶対配置を有する化合物はさらに好ましい化合物である）。
【００１４】
【表１】
0004317278.tif 000003
【００１５】
【化３】
0004317278.tif 000004
【００１６】
本発明の化合物の代表例として、上記に化学式を示したSL-220、SL-230、SL-120、及びSL-130の製造方法を下記のスキームに示すまた、これらの化合物および他の化合物の製造方法を、本明細書の実施例に詳細かつ具体的に示した。もっとも、本発明の化合物及びその製造方法に下記のスキームに記載されたものに限定されることはない。当業者は、下記スキームに示された製造方法及び実施例の具体的説明を参照しつつ、原料化合物、反応条件、試薬などを適宜選択し、必要に応じてこれらの方法に適宜の修飾ないし改変を加えることにより、一般式（Ｉ）に包含される本発明の化合物をいずれも製造することが可能である。
【００１７】
【化４】
0004317278.tif 000005
【００１８】
【化５】
0004317278.tif 000006
【００１９】
本発明の化合物は蛋白質Ｃキナーゼの活性化調節作用を有しており、例えば、白血病細胞に対して増殖阻害および正常細胞への分化を促進する作用や、ヒト後天性免疫不全症ウイルスの正常細胞への感染を妨げる作用を有している。従って、本発明の化合物は白血病の治療や、ウイルス性疾患、例えば、ヒト後天性免疫不全症候群の予防及び／又は治療のための医薬として有用である。本発明の医薬の有効成分としては、上記一般式（Ｉ）で表される化合物のほか、その水和物又は溶媒和物を用いてもよい。本発明の医薬としては、上記有効成分をそのまま投与してもよいが、一般的には、上記有効成分と１種又は２種以上の製剤用添加物とを含む医薬組成物を調製して投与することが望ましい。本発明の医薬の投与経路は特に限定されず、経口的又は非経口的に投与することが可能である。
【００２０】
経口投与に適する医薬用組成物としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、及びシロップ剤等を挙げることができ、非経口投与に適する医薬組成物としては、例えば、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、点眼剤、点鼻剤、経皮吸収剤、軟膏剤、クリーム剤、及び貼付剤等を挙げることができる。製剤用添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、pH調節剤、安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を用いることができ、医薬組成物の形態に応じて適宜のものを選択して使用することが可能である。本発明の医薬の投与量は特に限定されず、有効成分である化合物の種類、予防又は治療の目的、適用すべき疾患の種類、患者の年齢や症状、投与経路などの条件に応じて適宜の投与量を選択することが可能である。
【００２１】
【実施例】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されることはない。
実施例１：ＳＬ−２０及びＳＬ−３０の合成
５−α−コレスタン−３β−オール 15 g を塩化メチレン 200 ml に溶解し、ピリジニウムクロロクロメート20.8 g と中性活性アルミナ（メルク社、70-230 メッシュ）45 g の塩化メチレン 300 ml に懸濁液に激しく攪拌しながら注いだ。室温で５時間攪拌した後、反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝6:1）、ケトン体の無色結晶 14.3 g を得た（収率：96%）。
【００２２】
金属ナトリウム 2.91 g をメタノールに溶解し、メタノールを減圧留去した後、無水ベンゼン 150 ml を加えて攪拌した。ここに上記のケトン体 14.0 g、ギ酸エチル 8.73 ml のベンゼン 100 ml 溶液をゆっくり加え、２時間還流した後、反応液を水に注ぎ、10 % 塩酸で酸性にして塩化メチレンで抽出した。有機層を水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥後、溶媒を溜去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝20:1）、ヒドロキシメチレン体の無色結晶 13.7 g を得た（収率：91%）。
【００２３】
上記のヒドロキシメチレン体 2.5 g をTHF 70 ml に溶解し、無水メタノール 40 ml を加えて-10℃に冷却した。この溶液に水素化ホウ素ナトリウム 2.5 g を少量ずつ加え、２時間後に水 20 ml 次いで、酢酸 8.0 ml  を加えて弱酸性にした。混合物を水に注ぎ、塩化メチレンで抽出し、有機層を水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝8:1）、２α−ヒドロキシメチル体と２β−ヒドロキシメチル体の混合物 1.56 g を得た（収率：62%）。
【００２４】
上記のヒドロキシメチル体混合物 1.35 g とジイソプロリルエチルアミン 2.65 g を塩化メチレン 18 ml に溶解した溶液をトリメチルシリルエトキシメチルクロリド 2.7 g の塩化メチレン溶液 5 ml に0℃で滴下し、同温で３時間攪拌を続けた。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、塩化メチレンで抽出し、有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝12:1）、２α−SEMOCH2体と２β−SEMOCH2体混合物の無色液体 1.58 g を得た（収率：84%）。
【００２５】
上記の２α−SEMOCH2 体と２β−SEMOCH2体の混合物1.58 g のエタノール 40 ml溶液を酢酸ナトリウム３水和物 1.3 g とヒドロキシルアミン塩酸塩1.13 g の 4 ml 水溶液に滴下した。混合物を室温で１時間攪拌した後、エタノールを減圧で留去し、残渣を水で希釈して塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝6:1）により精製して異性体を分離し、２α−SEMOCH2−オキシム体 850 mg（収率：65%）と２β−SEMOCH2−オキシム体 197 mg（収率：15%）をそれぞれ無色液体として得た。
【００２６】
上記の２α−SEMOCH2−オキシム体 108 mg をピリジン 0.8 ml に溶解し、トルエン−p−スルホニルクロリド 110 mg を加えて40℃で２時間攪拌した後、水 0.2 ml を加えて80℃で30分攪拌した。反応液を２N 塩酸 12 ml に注ぎ、塩化メチレン 8 ml を加えて30分室温で攪拌した後、混合物を塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝1:1）、２α−SEMOCH2−アミド体 84 mgを無色結晶として得た（収率：78%）。
【００２７】
上記の２α−SEMOCH2−アミド体 102 mg をTHF 3 ml に溶解し、0℃に冷却した。この溶液にフッ化水素酸ピリジン 1 ml を滴下し、0℃で２時間攪拌した後、反応液を 10% 水酸化ナトリウム水溶液（0℃）に注ぎ、塩化メチレンで抽出した。有機層を 2N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をエタノールから再結晶して SL-20 78mg を無色麟片状結晶として得た（収率：99%）。
mp 249-253℃
元素分析：C28H49NO2  理論値  N: 3.24%; C: 77.90%; H: 11.35%，実測値  N: 3.20%; C: 77.67%; H: 11.46%
【００２８】
上記の２β−SEMOCH2−オキシム体 88 mg をピリジン 0.7 ml に溶解し、p−トルエンスルホニルクロリド 90 mg を加え、40℃で２時間攪拌した後、水 0.2 mlを加えて80℃で30分攪拌した。反応液を２N 塩酸 12 ml に注ぎ、塩化メチレン 8 ml を加えて30分室温で攪拌した後、反応混合物を塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝1:1）、２β−SEMOCH2−アミド体 65 mg を無色結晶として得た。（収率：74%）
【００２９】
上記の２α−SEMOCH2−アミド体 58 mg をTHF 2 ml に溶解し、0℃に冷却した。この溶液にフッ化水素酸ピリジン 1 ml を滴下し、0℃で２時間攪拌した後、反応液を 10% 水酸化ナトリウム水溶液（0℃）に注ぎ、塩化メチレンで抽出した。有機層を2N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。n-ヘキサン／エタノールから再結晶して SL-30（42 mg）を無色麟片状結晶として得た（収率：95%）。
mp 196-199℃
元素分析：C28H49NO2  理論値  N: 3.24%; C: 77.90%; H: 11.35%，実測値  N: 3.22%; C: 77.61%; H: 11.40%
【００３０】
実施例２：ＳＬ−１２０及びＳＬ−１３０の合成
エピアンドロステロン 5.0 g をジエチレングリコール 120 ml に懸濁し、ヒドラジン水和物7.2 g を加えた。混合物を 130℃で90分攪拌した後、水酸化カリウム 5 g を加え、さらに210℃で５時間攪拌した。反応液を室温まで冷却して水で希釈した後、塩化メチレンで抽出した。有機層を水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝4:1）、５−α−アンドロスタン−３β−オール 4.86 g を得た（収率：98%）。
【００３１】
５−α−アンドロスタン−３β−オール 1.7 g を塩化メチレン 50 ml に溶解し、ピリジニウムクロロクロメート4.0 g と中性活性アルミナ（メルク社、70-230メッシュ）8.5 g の塩化メチレン 50 ml 懸濁液に激しく攪拌しながら注いだ。室温で５時間攪拌した後、反応液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝6:1）、ケトン体の無色結晶 1.63 g を得た（収率：96%）。
【００３２】
金属ナトリウム 330 mg をメタノールに溶解し、メタノールを減圧留去した後、無水ベンゼン 20 ml を加えて攪拌した。ここに上記のケトン体 1.6 g、ギ酸エチル 0.96 ml のベンゼン 10 ml 溶液をゆっくり加え、２時間還流した。反応液を水に注ぎ、10 % 塩酸で酸性にして塩化メチレンで抽出した。有機層を水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝20:1）、ヒドロキシメチレン体の無色結晶 1.52 g を得た（収率：90%）。
【００３３】
上記のヒドロキシメチレン体 880 mg をTHF 35 ml に溶解し、無水メタノール 20 ml を加えて-10〜-20℃に冷却した。この溶液に水素化ホウ素ナトリウム 580 mg を少量ずつ加え、１時間後に水 10 mlと酢酸 1.86 ml  を加えて弱酸性にした。混合物を水に注いで塩化メチレンで抽出し、有機層を水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：塩化メチレン／酢酸エチル＝6:1）、２α−ヒドロキシメチル体と２β−ヒドロキシメチル体との混合物 604 mg を得た（収率：68%）。
【００３４】
上記のヒドロキシメチル体混合物 180 mg とジイソプロリルエチルアミン 1.56 g を塩化メチレン 10 ml に溶解した溶液をトリメチルシリルエトキシメチルクロリド 1.6 g の塩化メチレン溶液 3 ml に 0℃で滴下し、同温で90分攪拌を続けた。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、塩化メチレンで抽出し、有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝10:1）、２α−SEMOCH2 体と２β−SEMOCH2体混合物の無色液体 558 mg を得た（収率：68%）。
【００３５】
上記の２α−SEMOCH2 体と２β−SEMOCH2 体混合物 558 mg のエタノール 15 ml溶液を酢酸ナトリウム３水和物 690 mg とヒドロキシルアミン塩酸塩500 mg の 2 ml 水溶液に滴下し、室温で攪拌した。15分後にエタノールを減圧で留去し、残渣を水で希釈して塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝9:1）により精製して異性体を分離し、２α−SEMOCH2−オキシム体 406 mg（収率：70%）と２β−SEMOCH2−オキシム体 55 mg（収率：10%）をそれぞれ無色液体として得た。
【００３６】
上記の２α−SEMOCH2−オキシム体 400 mg をピリジン3.7 ml に溶解し、p−トルエンスルホニルクロリド 506 mg を加え、40℃で２時間攪拌後、水 0.9 ml を加えて80℃で30分攪拌した。反応液を２N 塩酸 55 ml に注ぎ、塩化メチレン 35 ml を加えて30分室温で攪拌した後、塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝2:1）、２α−SEMOCH2−アミド体 310 mg を無色結晶として得た（収率：78%）。
mp 164℃
元素分析：C26H45NO3Si  理論値  N: 3.13%; C: 69.75%; H: 10.13%，実測値  N: 3.36%; C: 69.72%; H: 10.38%
【００３７】
上記の２α−SEMOCH2−アミド体 200 mg をTHF 7 ml に溶解し、0℃ に冷却した。この溶液にフッ化水素酸ピリジン 4 ml を滴下し、0℃で２時間攪拌した。反応液を 10% 水酸化ナトリウム水溶液（0℃）に注ぎ、塩化メチレンで抽出して、有機層を 2N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥して溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：塩化メチレン／メタノール＝20:1）、エタノールから再結晶して SL-120 110mg を無色麟片状結晶として得た（収率：81%）。
mp 278-279℃
元素分析：C20H33NO2  理論値  N: 4.38%; C: 75.19%; H: 10.41%, 実測値  N: 4.43%; C: 75.32%; H: 10.55%
【００３８】
上記の２β−SEMOCH2−オキシム体 160 mg をピリジン 3.7 ml に溶解し、p−トルエンスルホニルクロリド 210 mg を加え、40℃で２時間攪拌後、水 0.4 ml を加えて80℃で30分攪拌した。反応液を２N 塩酸 20 ml に注ぎ、塩化メチレン 15 ml を加えて30分室温で攪拌した。この混合物を塩化メチレンで抽出し、有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝2:1）、２β−SEMOCH2−アミド体 119 mg を無色液体として得た。（収率：74%）
【００３９】
上記の２α−SEMOCH2−アミド体 110 mg をTHF 3.5 ml に溶解し、0℃に冷却した。この溶液にフッ化水素酸ピリジン 2 ml を滴下し、0℃で２時間攪拌した。反応液を 10% 水酸化ナトリウム水溶液（0℃）に注ぎ、塩化メチレンで抽出し、有機層を 2N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：塩化メチレン／メタノール＝20:1）、エタノール／水から再結晶して SL-130 110mg を無色麟片状結晶として得た（収率：87%）。
mp 184-185℃
元素分析：C20H33NO2  理論値  N: 4.38%; C: 75.19%; H: 10.41%，実測値  N: 4.27%; C: 75.29%; H: 10.36%
【００４０】
実施例３：ＳＬ−２２０及びＳＬ−２３０の合成
マグネシウム 4.9 g、塩化水銀 (II) 200 mg をTHF 15 ml 中に懸濁し、室温で攪拌した。この懸濁液にクロロメチルエチルエーテル 4.0 g の 5 ml THF 溶液を反応温度に注意しながら滴下し、さらにクロロメチルエチルエーテル 16.6 g、５−ノナノン20.65 g の 25 ml THF 溶液を氷冷しながら滴下した。反応混合物を室温で攪拌すると発熱して還流するが、反応がおさまった時点で 90℃に加熱して２時間還流した。冷却後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を終了し、エーテルで抽出して、有機層を水、飽和食塩水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝15:1）、５−エトキシメチル−５−ノナノール 19.4 g を得た（収率：66%）。
【００４１】
５−エトキシメチル−５−ノナノール 19.4 gとギ酸 25 ml を混合し、１時間加熱還流した。反応液を冷却後、0℃で 0.05 M 硫酸中に徐々に注ぎ、エーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去して２−n−ブチル−１−ヘキサナール 14.0 g を得た（収率：93%）。
【００４２】
２−n−ブチル−１−ヘキサナール 4.32 g を無水ベンゼン 10 ml に溶解し、エチルビニルケトン 2.32 g と硫酸 0.03 ml を加え、室温で30分攪拌した。ディーンスターク装置を付け、水を共沸しながら還流を４時間続けた。反応液を冷却後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に徐々に注ぎ、エーテルで抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝20:1）、シクロヘキセノン体 3.33 g を得た（収率：54%）。
【００４３】
上記のシクロヘキセノン体 3.5 g をｎ−ペンタン 15 ml に溶解し、10% パラジウム炭素触媒 300 mg を加えて、１気圧水素気流下で１時間攪拌した。触媒を濾去後、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝20:1）、無色液体のシクロヘキサノン体 3.55 g を得た。（収率：91%）
高分解能マススペクトル：C15H28O  理論値  224.2140，実測値  224.2125
【００４４】
上記のシクロヘキサノン体 7.0 g を無水ベンゼン 12 ml に溶解し、メチルビニルケトン 4.36 g と硫酸 0.03 ml を加え、室温で30分攪拌した。ディーンスターク装置を付け、水を共沸しながら還流を６時間続けた。反応液を冷却後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に徐々に注ぎ、エーテルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝30:1）、淡黄色液体の環化体 3.67 g を得た。（収率：43 %）
【００４５】
乾燥フラスコ中にリチウム 395 mg を入れ、ドライアイスコンデンサーをつけ、アルゴン気流下、-78℃に冷却して、アンモニア 500 ml を導入した。t-ブタノール 702 mg のTHF 10 ml 溶液を加えた後、上記の環化体 2.05 g をTHF 60 ml に溶解して加えた。ドライアイスコンデンサーをつけたまま、反応液を室温で１時間攪拌し、反応液の青色が消えるまでメタノールを入れ、さらに、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて、室温で12時間攪拌してアンモニアを留去した。残渣をエーテルで抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝20:1）、淡黄色液体のトランス−デカリン体 1.00 g を得た（収率：49 %）。
高分解能マススペクトル：C19H34O  理論値  278.2610，実測値  278.2610
【００４６】
金属ナトリウム 220 mg をメタノールに溶解し、メタノールを減圧留去し、無水ベンゼン 10 ml を加えて攪拌した。ここに上記のトランス−デカリン体 1.00 g、ギ酸エチル 1.33 g のベンゼン 5 ml 溶液をゆっくり加えた。反応混合物を30分還流した後、反応液を水に注ぎ、10% 塩酸で酸性にしてエーテルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を溜去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝20:1）、ヒドロキシメチレン体の淡黄色液体 820 mg を得た（収率：74%）。
高分解能マススペクトル：C20H34O2  理論値  306.2559，実測値  306.2565
【００４７】
上記のヒドロキシメチレン体 820 mg をTHF 30 ml に溶解し、無水メタノール 15 ml を加え、-10〜-20℃に冷却した。この溶液に水素化ホウ素ナトリウム 252 mg を少量ずつ加え、15分後に水 10 mlと酢酸 0.8 ml を順次加えて弱酸性にした。混合物を水に注ぎ、エーテルで抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝6:1）、２α−ヒドロキシメチル体と２β−ヒドロキシメチル体との混合物 349 mg を得た（収率：42%）。
【００４８】
上記のヒドロキシメチル体混合物 340 mg とジイソプロリルエチルアミン 1.13 g を塩化メチレン 6 ml に溶解した溶液をトリメチルシリルエトキシメチルクロリド 917 mg を塩化メチレン溶液 2 ml に 0℃で滴下し、同温で90分攪拌を続けた。反応混合物に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、塩化メチレンで抽出し、有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝8:1）、２α−SEMOCH2体と２β−SEMOCH2体混合物の無色液体 59 mg を得た。（収率：75%）
【００４９】
上記の２α−SEMOCH2体と２β−SEMOCH2体混合物 359 mg のエタノール 15 ml 溶液を酢酸ナトリウム３水和物 558 mg とヒドロキシルアミン塩酸塩470 mg の 1 ml 水溶液に滴下し、室温で攪拌した。10分後にエタノールを減圧で溜去し、残渣を水で希釈し、塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝15:1）により精製して異性体を分離し、２α−SEMOCH2−オキシム体 173.4 mg（収率：46%）と２β−SEMOCH2−オキシム体 93.4 mg（収率：26%）をそれぞれ無色液体として得た。
【００５０】
上記の２α−SEMOCH2−オキシム体 170 mg をピリジン1.5 ml に溶解し、p−トルエンスルホニルクロリド 216 mg を加え、40℃で２時間攪拌後、水 0.2 ml を加えて80℃で２時間攪拌した。反応液を２N 塩酸 25 ml に注ぎ、塩化メチレン 20 ml を加えて30分室温で攪拌した。反応混合物を塩化メチレンで抽出し、有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝1:1）、２α−SEMOCH2−アミド体 135 mg を無色液体として得た（収率：79%）。
高分解能マススペクトル：C26H51NO3Si  理論値  453.3638，実測値  453.3633
【００５１】
上記の２α−SEMOCH2−アミド体 123 mg をTHF 3 ml に溶解し、0℃ に冷却した。この溶液にフッ化水素酸ピリジン 3 ml を滴下し、0℃で２時間攪拌した。反応液を 10% 水酸化ナトリウム水溶液（0℃）に注ぎ、塩化メチレンで抽出し、有機層を 2N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をエタノール／水から再結晶して SL-220 65.7 mg を無色麟片状結晶として得た（収率：78%）。
mp 58-59℃
元素分析：C20H37NO2  理論値  N: 4.33%; C: 74.25%; H: 11.53%，実測値  N: 4.13%; C: 74.08%; H: 11.44%
【００５２】
上記の２β−SEMOCH2−オキシム体 90 mg をピリジン 0.7 ml に溶解し、p−トルエンスルホニルクロリド 114 mg を加え、40℃で２時間攪拌後、水 0.4 ml を加えて80℃で２時間攪拌した。反応液を２N 塩酸 20 ml に注ぎ、塩化メチレン 15 ml を加えて30分室温で攪拌した。反応混合物を塩化メチレンで抽出し、有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝1:1）、２β−SEMOCH2−アミド体 74.6 mg を無色液体として得た（収率：83%）。
高分解能マススペクトル：C26H51NO3Si  理論値  453.3638，実測値  453.3642
【００５３】
上記の２α−SEMOCH2−アミド体 67 mg をTHF 2 ml に溶解し、0℃に冷却した。この溶液にフッ化水素酸ピリジン 2.5 ml を滴下し、0℃で２時間攪拌した。反応液を 10% 水酸化ナトリウム水溶液（0℃）に注ぎ、塩化メチレンで抽出し、有機層を 2N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をn-ヘキサンから再結晶して SL-230（33.4 mg）を無色麟片状結晶として得た（収率：70%）。
mp 184-185℃
元素分析：C20H37NO2  理論値  N: 4.33%; C: 74.25%; H: 11.53%，実測値  N: 4.18%; C: 74.25%; H: 11.52%
【００５４】
実施例４：ＳＬ−２２１の合成
SL−220およびSL−230の合成中間体であるシクロヘキサノン体 4.78 g を無水ベンゼン 8 ml に溶解し、エチルビニルケトン  2.24 g と硫酸 0.02 ml を加え、室温で１時間攪拌した。ディーンスターク装置を付け、水を共沸しながら還流を14時間継続した。反応液を冷却後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液に徐々に注ぎ、エーテルで抽出し、有機層を 水、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝30:1）、淡黄色液体の環化体 3.26 g を得た（収率：53%）。
【００５５】
乾燥フラスコ中にリチウム 850 mg を入れ、ドライアイスコンデンサーをつけ、アルゴン気流下、-78℃に冷却してアンモニア 500 ml を導入した。t-ブタノール 908 mg のTHF 10 ml 溶液を加えた後、上記の環化体 3.56 g をTHF 60 ml に溶解して加えた。ドライアイスコンデンサーをつけたまま、反応液を室温で１時間攪拌し、反応液の青色が消えるまでメタノールを入れ、さらに飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて室温で12時間攪拌し、アンモニアを留去した。残渣をエーテルで抽出し、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝20:1）、淡黄色液体のトランス−デカリン体 2.06 g を得た（収率：57%）。
高分解能マススペクトル：C20H36O  理論値  292.2766，実測値  292.2758
【００５６】
金属ナトリウム 1.6 g をメタノールに溶解し、メタノールを減圧留去し、無水ベンゼン 20 ml を加えて攪拌した。ここに上記のトランス−デカリン体 2.06 g、ギ酸エチル 2.59 g のベンゼン 10 ml 溶液をゆっくり加え、反応混合物を90分還流した。反応液を水に注ぎ、10% 塩酸で酸性にして、エーテルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝20:1）、ヒドロキシメチレン体の無色液体 1.51 g を得た（収率：67%）。
高分解能マススペクトル：C21H36O2  理論値  320.2715，実測値  320.2717
【００５７】
上記のヒドロキシメチレン体 1.4 g をTHF 55 ml に溶解し、無水メタノール 30 ml を加え、-10〜-20℃に冷却した。この溶液に水素化ホウ素ナトリウム 270 mg を少量ずつ加え、５分後に水 10 mlと酢酸 0.8 mlを順次加えて弱酸性にした。混合物を水に注いでエーテルで抽出し、有機層を水、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝10:1）、２α−ヒドロキシメチル体と２β−ヒドロキシメチル体との混合物 864 mg を得た（収率：56%）。
【００５８】
上記のヒドロキシメチル体混合物 415 mg とジイソプロリルエチルアミン 1.34 g を塩化メチレン 7 ml に溶解した溶液をトリメチルシリルエトキシメチルクロリド 1.08 g の塩化メチレン溶液 2 ml に 0℃で滴下し、同温で90分攪拌を続けた。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、塩化メチレンで抽出し、有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝6:1）、２α−SEMOCH2体と２β−SEMOCH2体との混合物の無色液体 560 mg を得た（収率：99%）。
【００５９】
上記の２α−SEMOCH2体と２β−SEMOCH2体混合物 1.2 g のエタノール 40 ml 溶液を酢酸ナトリウム３水和物 1.8 g とヒドロキシルアミン塩酸塩1.29 g の 2 ml 水溶液に滴下し、室温で攪拌した。16時間後にエタノールを減圧留去し、残渣を水で希釈して酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝15:1）により精製して異性体を分離し、２α−SEMOCH2−オキシム体 260 mg（収率：21%）を無色液体として得た。
【００６０】
上記の２α−SEMOCH2−オキシム体 128 mg をピリジン 1 ml に溶解し、p−トルエンスルホニルクロリド 156 mg を加え、40℃で２時間攪拌後、水 0.2 ml を加えて80℃で２時間攪拌した。反応液を２N 塩酸 25 ml に注ぎ、塩化メチレン 20 ml を加えて30分室温で攪拌し、混合物を塩化メチレンで抽出した。有機層を水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し（溶媒：n-ヘキサン／酢酸エチル＝6:1）、２α−SEMOCH2−アミド体 33.6 mg を無色液体として得た（収率：26%）。
高分解能マススペクトル：C27H53NO3Si  理論値  467.3795，実測値  467.3795
【００６１】
上記の２α−SEMOCH2−アミド体 19 mg をTHF 1 ml に溶解して0℃に冷却した。この溶液にフッ化水素酸ピリジン 1 ml を滴下し、0℃で２時間攪拌した。反応液を 10% 水酸化ナトリウム水溶液（0℃）に注ぎ、塩化メチレンで抽出し、有機層を 2N 塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗い、硫酸マグネシウム上で乾燥した後、溶媒を留去した。残渣をn-ヘキサンから再結晶して SL-221（9.0 mg）を無色麟片状結晶として得た（収率：78%）
mp 163-164℃
元素分析：C21H39NO2  理論値  N: 4.15%; C: 74.73%; H: 11.65%，実測値  N: 4.01%; C: 74.53%; H: 11.59%
【００６２】
試験例
実施例で得た本発明化合物の蛋白質キナーゼＣ結合活性および抗白血病活性試験を行った。
(1)蛋白質キナーゼＣ結合活性
活性は蛋白質キナーゼＣデルタ（PanVera 社製、ヒト組換え体より作製）を用い、トリチウム化したホルボール-12,13-ジデカノエートとの結合に対する被検化合物の阻害により測定した。1.5 ml のエッペンドルフチューブ中で、10 nM の蛋白質キナーゼＣデルタ、30 nM のトリチウム化ホルボール−12,13−ジデカノエート、50 mg/ml のフォスファチジルセリン、30 mg/ml のガンマーグロブリンと種々の濃度の被検化合物のDMSO溶液を含む 50 mM Tris-塩酸緩衝液（全量 250 ml）を１検体として阻害を測定した。
【００６３】
検体を30℃で20分インキュベーションした後、0℃で５分間放置し、187 ml の35% (W/W) ポリエチレングリコール溶液を加えて0℃で15分間放置して蛋白を沈澱させた。4℃、12000 rpm で遠心分離し、上清を吸引して除き、蛋白の沈澱を含むチューブの先端を切り取り、シンチレーションカウンターで残存する放射活性を測定した。被検化合物の蛋白質キナーゼＣ結合活性は30 nM のトリチウム化ホルボール-12,13-ジデカノエートの結合を50% 阻害する濃度を IC50 として表に示した。
【００６４】
(2)抗白血病活性
ヒト前骨髄球性白血病細胞 HL-60 の増殖抑制を指標とした。継代培養している HL-60 細胞をウシ胎児血清と抗生物質を含む RPMI 1640 培地に初期細胞数 8×104 個で接種し、種々の濃度の被検化合物を加えて37℃で培養した。４日後、細胞数を計測した。被検化合物の抗白血病活性は薬物を加えない場合の細胞数を50%にまで阻害する濃度を IC50 として表に示した。
【００６５】
【表２】
0004317278.tif 000007