(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液サンプルの中の様々な形態成分を示差的にハイライト化するのにそして血液サンプルの中の血漿を着色するのにも有効である一つ又はそれ以上の着色剤と混合されている実質的に希釈されてない抗凝固全血静止サンプルで全血の構成要素の計数を行うための方法であって、前記血液サンプル及び着色剤は変動厚さ領域を有する観察用チャンバー（１４）の中に収容され、その変動厚さにより、個々の赤血球（３２）を含む区域（１）、赤血球の単層（３１）を含む区域（３）、及び赤血球の凝集体（３３）を含む区域（５）に区分されており、
ａ）血液サンプルを、既知面積の視野（１、３、５、７′、７、９、１１）を有する光学機器（５４）によって走査し;
ｂ）前記静止血液サンプル中の、個々の赤血球（３２）を含む区域（１）、赤血球の単層（３１）を含む区域（３）、又は赤血球の凝集体（３３）を含む区域（５）であって、該区域のそれぞれが血液サンプル中のその他の形態成分（３０、３４）を含有しうる、一又は二以上の区域を突き止め; 及び
ｃ）静止血液サンプルの中の前記区域を、様々な形態の血液サンプル要素を示差的にハイライト化するように選択された波長の光によって照射し、この照射は前記サンプル中の単位容積あたりのハイライト化された血液サンプル要素の濃度に関する情報の前記光学機器による誘導を可能にする仕方で行なわれる;
工程を含んでいる前記方法。
【請求項２】
前記走査工程が、個々の視野の中に赤血球の凝集体と血漿小腔（３５）を一緒に含有しているチャンバーの一の領域で行われ; そして更に、血液サンプルのヘマトクリット（Ｈｃｔ）値を、完全に血漿で満たされた視野（７′）から発するであろうと計算された信号強度又は光学濃度と、前記一の領域の実際の視野から発する測定された信号強度又は光学濃度との関数として算出する工程が含まれている、請求項１の方法。
【請求項３】
前記一の領域が約７μ〜約４０μの範囲の厚さを有する、請求項２の方法。
【請求項４】
算出工程が、式
Ｈｃｔ  ＝  １−（Ｂa／Ｂt）
（式中、Ｂaは測定された信号強度又は光学濃度であり、そしてＢtは計算された全信号強度又は光学濃度である）
を解くことを伴う、請求項２の方法。
【請求項５】
算出工程が、ヘマトクリットを血液サンプル全体に対する百分率として表すことを伴い、そして式
Ｈｃｔ  ％  ＝  〔１−（Ｂa／Ｂt）〕×１００
（式中、Ｂaは測定された信号強度又は光学濃度であり、そしてＢtは計算された全信号強度又は光学濃度である）
を解くことを伴う、請求項２の方法。
【請求項６】
前記走査工程がチャンバーの二以上の領域で行われ、該領域の少なくとも一の領域は個々の視野に血漿小腔を含有し、該領域の少なくとも一の領域は個々の視野に個々の赤血球又は単層の赤血球を含有し; そして更に、サンプル中の赤血球についての平均血球容積（ＭＣＶ）を、視野の血漿小腔区域から発した測定された信号強度又は光学濃度と視野中の個々の赤血球又は単層の赤血球から発した測定された信号強度又は光学濃度との差の関数として算出する工程が含まれている、請求項１の方法。
【請求項７】
前記走査工程が、個々の赤血球又は単層の赤血球と、血漿小腔との両方を個々の視野に含有しているチャンバーの一の領域で行われ; そして更に、血液サンプルについての赤血球数（ＲＢＣ）を、式
ＲＢＣ  ＝  Ｈｃｔ  ×  １０／ＭＣＶ
を解くことによって算出する工程が含まれている、請求項１の方法。
【請求項８】
「ＲＢＣ」はサンプル１マイクロリッター当りの血球１００万単位数で表され、「Ｈｃｔ」は血液サンプルから誘導された赤血球のサンプル全体に対する算出パーセントであり、そして「ＭＣＶ」は血液サンプルから誘導されるフェムトリーター数で表される平均赤血球容積である、請求項７の方法。
【請求項９】
４１３ｎｍにおける又は約５５０ｎｍのオキシヘモグロビンバンドの中の赤血球の積算光学濃度を測定することによって平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）を決定する工程を含む、血液サンプルのヘモグロビン値を決定する更なる工程が含まれている、請求項７の方法。
【請求項１０】
式
Ｈｇｂ  ＝  ＭＣＨ  ×  ＲＢＣ／１０
を解く工程を含む、血液サンプルについて追加のヘモグロビン（Ｈｇｂ）値を決定する更なる工程が含まれている、請求項９の方法。
【請求項１１】
前記走査工程が、白血球も含有しているチャンバーの一の領域で行われ; 更に、選択視野の中の個々の白血球を計数し、そして前記選択視野の容積を求めて血液サンプルについての容量白血球数を誘導する、諸工程が含まれている、請求項１の方法。
【請求項１２】
前記容量白血球数を誘導するのに臨床上有意な数の異なる視野が走査される、請求項１１の方法。
【請求項１３】
前記着色剤が、様々なタイプの白血球から発する異なる信号強度によって白血球のタイプを互いに区別するのに有効であり、それによって特異白血球数が前記血液サンプルから誘導されることができる、請求項１１の方法。
【請求項１４】
選択視野の容積が、視野の面積に各視野のチャンバーの厚さを掛けることによって求められる、請求項１１の方法。
【請求項１５】
各視野におけるチャンバーの厚さが、各視野の小腔区域から発する測定された信号強度の関数として算出される、請求項１４の方法。
【請求項１６】
各視野におけるチャンバーの厚さが前記チャンバーの中の最小厚さ領域から各視野の位置までの距離の関数として算出される、請求項１４の方法。
【請求項１７】
前記チャンバーの中に収容された血液サンプルの赤血球沈降速度（ＥＳＲ）相関を求める工程が含まれており、そのＥＳＲ相関工程は、或る時間にわたって前記チャンバーの中での赤血球連銭形の形成速度を測定し、赤血球連銭形の圧縮度を測定し、そしてサンプル中の連銭形区域の中の非結合赤血球の度合を測定することを包含する、請求項１の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は抗凝固全血(anticoagulated whole blood)の静止サンプル(quiescent sample)を分析するための装置及び方法に関する。特に、本発明は分析過程中に血液サンプル分析装置の中に液流を通過させることを必要とせずに、血液サンプルを静止状態で分析するための装置及び方法に関する。サンプルの単位体積当りの血液成分計数(blood constituent counts); 血液成分容積; ヘマトクリット; ヘモグロビン測定; 赤血球沈降速度の厳密な近似; 及び血液成分タイプの同定は、いずれも本発明の装置及び方法を使用して遂行できる。
【０００２】
（背景技術）
生物学的流体の分析における、特に、分析血液学における、最近の進歩は患者の血液サンプルから入手できる情報の量及び質を増大させている。結果として、患者の血液サンプルを診断ツールとして使用することへの医学界の関心も増しており、そして抗凝固全血に対して行われる最も普通に遂行される試験は全血球計数(complete blood count)又はＣＢＣであり、それは、ヘマトクリット（Ｈｃｔ）、ヘモグロビン量（Ｈｇｂ）、赤血球数（ＲＢＣ）、白血球数（ＷＢＣ）及び血小板数（Ｐｌｔ）、赤血球計量(red blood cell metrics)例えば平均赤血球容積（ＭＣＶ）及びその他、及び、存在する白血球のタイプの分類である白血球分画計数(leukocyte differential count)（ＬＤＣ又は「Ｄｉｆｆ」）も包含すると考えられている一揃いの試験である。他のどの検査室試験に比べても、ＣＢＣの固有の特徴はそれを行うどの機器又は方法も４つの異なるタイプの分析を行わなければならないということである。第一に、サンプルの一般的な物理的性質、即ち、ヘマトクリット及び様々な血球又は粒子の計数は、サンプル全体に関して定量的方法を使用して分析されなければならない。従来の機器及び方法では、これは正確なサンプル計量(sample metering) と希釈、及びその後の、特異化された測定装置を要求する。第二に、サンプルの特定の化学的性質、即ち、ヘモグロビン濃度は、通常は定量的化学的手段によって測定されなければならない。第三に、機器は個々の血球の定量的特徴を測定しなければならず、それは通常はサンプルの高度希釈を提供することを伴い、それに続いて、その希釈された物質が、電子的又は光学的手段を使用して血球を測定するフローセル(flow cell) の中を通過することを伴う。第四に、定量的測定は、亜集団を構成する全白血球の百分率を分類するのに使用される。亜集団の数は関与する機器の複雑さに依存し、それは２つ程度の少ないものであってもよいし又は７分類より多くてもよい。
【０００３】
歴史的には、ＣＢＣの種々の態様は別々の方法を使用して行われてきた。例えば、ＣＢＣのＬＤＣ部分は伝統的に、希釈されてない血液の少量をスライド上に塗り付け、この乾燥した固着フィルムを染色し、そしてこの塗抹標本(smear) を顕微鏡で検査することによって行われた。かかる塗抹標本からは妥当な結果を得ることができるが、データの正確度及び信頼性は専門技術者の経験と技術に大きく依存する。加えて、血液塗抹標本の使用は労力がかかりそして手が出せないほど費用が高く、従って一般的に商業的応用には有望でない。別の方法は電気インピーダンス又は光学的フローサイトメトリー(optical flow cytometry)を使用する。フローサイトメトリーは希釈血液サンプルを小さな容器の中を通過させることを伴い、そこでは成分血球が容器中を順次通過するときに電気インピーダンス又は光学センサーが成分血球を評価する。同装置は同時に血球計量データ(cell metric data)を数え上げ提供するのに使用されてもよい。ＷＢＳ’ｓ及び／又は血小板を評価するには、血液サンプルは希釈されなければならず、そしてサンプルはＷＢＣ’ｓ及び血小板に比べて圧倒的な数のＲＢＣ’ｓを緩和するように処理されなければならない。フローサイトメトリーは上記塗抹標本法よりも便利で且つばらつきがないけれども、幾つかの欠点も有している。フローサイトメトリーの一つの欠点はセンサーを通る希釈血液サンプルの流量を制御するのに必要である配管と流体制御である。現状のフローサイトメータにおける配管は漏れることがあり、しばしば漏れ、従って、装置の正確度及び安全性を潜在的に危うくする。多くの現状のフローサイトメータのもう一つの欠点は内部流体流れ調整と自動希釈機器の正確度に関する。フローサイトメータの正確度は流体流れ調整及びサンプル希釈機器の正確度、及びそれらの正確に較正状態のままでいられる能力に依存する。流れ調整及び希釈機器は定期的な再較正を必要とする。再較正の必要性は不正確な結果の可能性と、多くの現在入手可能なフローサイトメータと共に存在する望ましくない操作コストとを説明している。ジョン  エル．ヘインズ(John H. Haynes)によって執筆され、１９８８年にサイトメトリー  サプルメント(Cytometry Supplement)３: ７〜１７に公開された記事には、フローサイトメトリーの原理、インピーダンスと光学の両方、と、かかる技術の様々な分野への応用の努力とが記載されている。フローサイトメータで実験された血液サンプルは１０：１から５０，０００：１までのいずれかで希釈される。
【０００４】
全身性炎症の指標である赤血球沈降速度は抗凝固全血に対して行われるもう一つの臨床上有意な試験である。この試験は抗凝固全血のサンプルを試料管の中に入れそして１時間にわたって管中で赤血球が重力で沈降するにまかせることを伴う。１時間の間の赤血球の沈降度は供血者の全身性炎症の反映である。
【０００５】
血球細胞分析(cellular analysis) に対するもう一つのアプローチは米国特許第５，５４７，８４９号、第５，５８５，２４６号及びその他に概説されているような定量毛管走査(volumetric capillary scanning) であり、そこでは、全血の比較的希釈されてないサンプルを容積と厚さが既知の毛管の中に入れそして血液が静止状態にある間に検査する。この技術は走査波長を赤血球が比較的透明であるものに限定することによって赤血球の存在に対処しており、そしてそれは赤血球が測定過程中に凝集しないようにサンプルを処理することを必要とする。従って、この技術は長波長蛍光の使用に限定されており、そして赤血球及び血小板の検査又は何らかの細胞形態学の検査は提供されない。また、計数は定容量の中で起こらなければならないので、広範なサンプル粒状成分を単一のサンプル容器の中で試験するのは困難又は不可能である、何故ならば、これら成分の相対数は全血サンプルの中で１０００対１以上も異なることがあるからである。ＣＢＣ又は関連試験を行うのに利用可能な多数の市販機器が存在するが、ＣＢＣ試験のうちの２つ、３つより多くを迅速に提供するものは複雑で、高価で、しかも故障しやすい。加えて、特定の血液検査用には多数の方法が提起されているが、これらはＣＢＣに期待される臨床上有効な情報の全てを提供するわけではない。
【０００６】
ＣＢＣを行うためのより複雑な現在入手可能な機器のもう一つの問題はそれらが較正されなければならないということである。これは希釈及び測定の殆どが絶対的ではなくむしろ相対的であるからであり、そうなると、正確な定量化を提供するには、実際の微粒子物、一般的には、既知の値を有する全血の安定化されたサンプル、が機器によって分析されなければならず、そして機器は正しい値が生じるように調節されなければならない。このタイプの較正は基準物質の製造及びその輸送又は貯蔵中の安定性に誤差を生じやすいことは明らかなはずである。その物質は高価でもあり、それは検査コストを増大させる。この較正は、もしも全ての測定が実質的に希釈されてないサンプルに対して、較正が方法に統合されているような方法を使用して行われるならば、必要とされないであろう。
【０００７】
フレデリック  エル．ネイサン(Frederic L. Nason) は米国特許第４，７９０，６４０号の中で、幾つかの血球要素すなわち鎌型赤血球(sickle cell) を赤血球の集団(mass)から、それらを、減少する好ましくは単細胞厚さ(monocellularthickness)の楔状チャンバーの中にトラップさせることによって分離できる装置の製造を記載している。上記特許には、楔状チャンバーの中でどのようにして血液学的情報例えば血球数、ヘマトクリット、ヘモグロビン測定、血球形態学検査を、又はどのようにして様々な形態成分(formed constituents) を同定できるかについては全く示唆されていない。
【０００８】
多数の様々な血液学的パラメーターに対する正確な定性的及び定量的結果を与えることが可能であり、そしてサンプル分析中にサンプル流体がサンプリングチャンバーの中をフローすることを要求しない、抗凝固全血の静止サンプルを検査するための方法及び装置を有することは望ましいであろう。
【０００９】
（発明の開示）
本発明はチャンバーの中に収容した実質的に希釈されてない抗凝固全血静止サンプルを検査しそこから情報を得るのに使用するための方法及び装置に関する。本発明に関連して使用されるとき用語「実質的に希釈されてない」は、約１：１より以上には希釈されてない、好ましくは遙かにわずかにしか希釈されてない、血液サンプルを記述している。一般に、本発明の方法を遂行するのに使用されるであろう唯一の試薬は染料、染色剤と、抗凝固剤であり、そしてこれらはサンプルを希釈することを意図していない。好ましくは、チャンバー中の数個の領域の変動する通し面厚さ(varying through plane thicknesses) は、最終的にはチャンバー中に静止血液サンプルを生じるチャンバー全体への血液サンプルの拡がりを起こさせるように十分な毛管力(capillary forces)をチャンバーの全領域に発生させるであろう。血液サンプルにおける唯一の運動は血液サンプルの形態成分のブラウン運動であろうが、その運動は本発明の装置を使用できなくはしない。装置はサンプルを封じ込める向かい合う壁を有しているサンプル保持チャンバーを包含し、壁の少なくとも一つは透明であり、それら壁はチャンバーの少なくとも一部分へ収斂する。従って、チャンバーの通し面厚さはチャンバーの領域が異なれば異なる。この開示で使用されるとき、用語「通し面(through plane) 」はチャンバーのどの領域でも収斂壁間の最短距離に相当する視軸(line of sight)を称している。チャンバーの中の任意の特定点における、２つの壁の封じ込め度、即ち、２つの壁の間の距離、は既知であるか、又はサンプルをチャンバーに入れた後に測定できるかどちらかであり、それは後述する。
【００１０】
チャンバーの最も薄い領域はチャンバーを血液サンプルで満たしたときにサンプル中に存在する個々の赤血球の単層ができるであろうようなサイズになっているであろう。チャンバーのこの部分の厚さは約２〜約７μであるべきであり、そして好ましくは約５μである。従って、チャンバーのこの領域では、個々の赤血球の測定、平均赤血球容積（ＭＣＶ）及び平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）のような計量(metrics) を測定することができ、それは後述する。
【００１１】
チャンバー厚さは、血液サンプル中の細胞状又は微粒子状の要素を同定し数え上げるのに使用されるチャンバーの中に漸次厚くなる領域を形成するように、チャンバーの最も薄い領域から増加する。全ての場合において、かかる計数はチャンバーの領域で起こり、その領域の厚さは決定することができる、そこで血球又は成分の計数値はサンプルの所定容量の中の血球又は成分の数値として与えることができる。チャンバーの中のより厚い領域の一つは白血球および赤血球連銭形(rouleaux)を集めるであろう。チャンバーのこの領域の厚さは代表的には約７〜約４０μの範囲にある。チャンバーは血液サンプルを引き入れることができるサンプルホルダーの中に収容されている。
【００１２】
検定されるべきサンプルは例えば蛍光染料であることができる着色剤と混合され、そして得られた混合物はチャンバーの中に拡がってチャンバー壁の収斂による変動厚さを有する静止サンプルになる。着色剤はサンプルをチャンバーの中に入れる前にサンプルに添加することができる、又は着色剤はサンプルがチャンバーの境界内にある間に例えばチャンバーの壁の上に着色剤を乾燥塗布することによってサンプルに添加することができる。抗凝固剤もまた血液サンプルをチャンバーの中に引き入れる前に血液サンプルに添加することができる、又はそれらは血液サンプルがチャンバーの中に入る前に例えばチャンバーの壁の上に抗凝固剤を乾燥塗布することによって血液サンプルと混合することができる。チャンバーの中の関心ある領域はサンプルの中の着色剤を発光させる選択された波長（単数又は複数）を有する光源によって個々に照らされる、又は別の仕方で定量化される。血液サンプルの中の様々なサイズの形態成分を含有しているチャンバー中の領域は従って、好ましくは、光学機器によって走査され、そして走査の結果はデジタル化されてもよく、そして分析される。
【００１３】
形態成分を含有していないで、かつ、その中に血球又は血液中のその他の形態成分が懸濁されるところの血液サンプルの血漿部分だけを含有している領域がサンプル中に存在することを確実にするように、サンプルが操作又は処理されるであろう。かかる形態成分を含有しない領域で発せられた蛍光又は透過信号（光学濃度）の単位面積当たりの強度は血漿の厚さに直接関係しており、従って、その液体の蛍光度又は光学濃度はチャンバーの厚さが増すと増加する。同様に、サンプルからの蛍光度又は光学濃度は血漿中に溶解されている着色剤に取って代わるように作用可能である血液サンプル中の何らかの形態物の容積に比例して減少するであろう。
【００１４】
チャンバーの任意特定点におけるチャンバー壁間の通し面距離(through plane distance)は幾つかの仕方で決定することができる。２壁の収斂角度が決まれば、任意の特定点におけるチャンバーの厚さは最小チャンバー厚領域と検分される特定点との間の距離の関数である。２壁の収斂角度がチャンバーの製造時に予め定められたときには、そのチャンバーを有する装置はバーコード化されることができる、又はそうでなくても、２壁の収斂角度を装置の使用中に機器によって決定できるようにラベル化されることができ、そして検分される任意の特定領域の厚さは上記のように決定することができる。
【００１５】
検分される任意の特定視野におけるチャンバーの厚さを測定するもう一つの仕方は、かかる特定視野から又は吸光染料の光学濃度から発する蛍光信号の強度に関係する。薄い領域のサンプルでは、形態成分を含有しないサンプル中の明澄区域から発する蛍光信号の強度はサンプルの厚さに比例し、従ってチャンバーのそれら領域の厚さにも比例する。従って、検分される任意の特定領域におけるサンプルの厚さはかかる明澄区域における着色剤信号の強度を測定することによって測定できる。チャンバーの被検区域の厚さを測定するための後者の方法はチャンバーが組み込まれるカセットの中に、着色剤及びサンプルの一部と接することが可能である既知サイズの検量区域を包含することによって助けられる。検量区域が走査され、そこからの着色剤信号が測定されれば、走査機器はチャンバー厚さＡが着色剤信号Ｂを発することとＢの分数又は倍数がＡの比例的分数又は倍数に等しいであろうことを知るであろう。走査機器の視野の面積はわかっているであろうから、この情報によって、サンプルの単位容量当たりの形態成分の数を計数できる。視野の既知面積と視野の測定厚さを掛けることによって、血液サンプルの明澄区域が存在するチャンバーのどこでも視野の容積を算出できる。
【００１６】
チャンバーは血液サンプル中の形態成分の容積を測定するのにも使用できる。この測定はチャンバーと組み合わされる予め形成された予め定められた容積を有する幾何学的造作物(geometric feature) から着色剤信号変化がどれほど生じるかを知ることで走査機器によって可能にされる。この造作物は着色明澄血漿に取って代わる信号抑制容積であることができる、又はこの造作物は着色明澄血漿を増加させる信号増強容積であることができる。形態成分の容積を測定するのに信号強度‐対‐容積の相関関係を使用するためには、形態成分の区域からの蛍光信号強度又は光学濃度の強さを積算し、そして形態成分が存在しないとすればその位置に期待される度合の蛍光信号強度又は光学濃度と比較する。形態成分の区域上での信号強度又は光学濃度の度合の何らかの減少は形態成分によって着色血漿が置換されたためであるので、この「欠失着色血漿(missing colored plasma)」からの信号の量は容易に算出可能であり、そして形態成分の容積に等しい。従って、形態成分の容積はチャンバー中で測定できる。この技術の異型はサイトメトリー(Cytometry) 第３巻第６号第４２８〜４３４頁（１９８３年）にマーサ  エル．グレイ(Martha L. Glay)等による記事の中に公開された。グレイ等の技術はフローサイトメトリックシステムの中に使用されたが、血球が着色剤を排除した含有容積は確定しなかったので、既知容積の血球による較正を必要とした。本発明では視野の容積が既知であるので、かかる較正は必要ない。
【００１７】
他の特徴、例えば、成分のタイプ、成分の形態学、等も、形態成分から発する着色剤信号を分析することにより決定できる。表面エピトープ標識抗体(surface epitope-tagging labeled antibodies)を使用することによって、血液サンプルの中の検査される形態成分に関する更なる情報は、サンプルをかかる標識抗体について走査しそしてかかる標識抗体がサンプル中の何らかの形態成分によって占拠されているかどうかを決定することによっても得ることができる。
【００１８】
従って、本発明の目的は抗凝固全血静止サンプルから容積関連情報(volumetrically related information)を得るのに使用するための方法及び装置を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的は、前記容積関連情報が外部標準化物質(external standardization substances) を使用する必要無しで得ることができる特徴的な方法及び装置を提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的は、実質的に希釈されてない全血サンプルを単位サンプル容量当たりの形態成分の計数情報について検査することを可能にする記載の特徴の方法及び装置を提供することに関する。
【００２１】
本発明の更なる目的は、サンプルを透明な壁を通して光学的又は視覚的に検査できるように壁の少なくとも一つが透明である向かい合う収斂チャンバー壁によって形成されている異なる通し面厚さの領域を有するサンプル収容チャンバーを包含する記載の特徴の方法及び装置を提供することである。
【００２２】
本発明の別の目的は、チャンバーの中の様々な通し面厚さ領域が血液サンプル中の異なるサイズの個々の血球及びその他の形態成分の形態学的特徴、計数、及び容積の測定を可能にするようなサイズにつくられている記載の特徴の方法及び装置を提供することである。
【００２３】
本発明の更に別の目的は、赤血球沈降速度の正確な推定値を血液サンプルから誘導できる記載の特徴の方法及び装置を提供することである。
【００２４】
本発明のこれら及びその他の目的及び利点は図面と組み合わせて説明された本発明の幾つかの態様の下記詳細から更に容易に明らかになるであろう。
【００２５】
（発明の具体的態様の詳細な説明）
ところで、図面を引用すると、図１及び図２は包括的に数字２によって示されている装置の概略図であり、その装置２は変動する通し面厚さを有するサンプル収容チャンバー１４を包含している。装置２は下部支持壁４を包含しており、それは例示のためには例えば顕微鏡スライドであってもよい。装置は更に、レクチリニアリム(rectilinear shim)６; 及び上部壁８、例示のためには例えば、顕微鏡スライドカバースリップであってもよい、を包含していてもよい。壁４及び８の少なくとも一方が透明であるのでそれらの間に置かれたサンプルは透明な壁４又は８を通して検査できる。望むならば、壁４及び８の両方が透明であってもよい。壁８は壁４の上又はそのごく近くに載っている一つ縁１０を有しており、それの反対側の縁１２はシム６の上面に置かれている。壁４と８の間の収斂関係の結果は通し面距離Ｄで測定されるような変動する通し面厚さを有するチャンバー１４の形成であり、通し面厚さは縁１０から反対の縁１２に向かって増加している。
【００２６】
図２に描かれている容器アセンブリーにおいては、壁８は通し面厚さが縁１０から縁１２まで直線状に変動しているチャンバーを生じるように十分に剛性である。図３に描かれている容器アセンブリー２においては、壁８は通し面厚さが縁１０から縁１２まで非直線状に変動しているチャンバーを生じるように十分に可撓性である。図２及び図３に示されている構造は、チャンバー１４にサンプルを満たした後にサンプル中の形態成分が残留できるところの本質的に無限数の異なる通し面厚さの領域を有するチャンバー１４を生じるであろう。
【００２７】
ところで、図４及び図５を引用すると、容器アセンブリー２の更に２つの態様が示され、その両者も、変動する通し面厚さを有するサンプルチャンバー１４を生じるであろう。両方の図に示された態様においては、装置２は下部壁４と上部壁８を包含している。両方の図に示された態様においては、下部壁４は壁８の縁１０に向かって縁１２から出発開始する方向に壁８に向けて収斂する一般にテーパーを付けた窪んだ表面１８をもって形成されている。どちらの態様の装置２においても、壁８は壁４の上面に平らに配置されている。図４に示された態様の装置２においては、窪んだ表面１８は予め定められた距離だけ壁８から離される複数の階段増分２０、２２、２４、及び必要ならばそれ以上を包含している。従って、図４に示された態様においては、チャンバー１４の表面はチャンバーの一方の縁からチャンバーの反対の縁まで直線的ではなく増分的又は非直線的に収斂する。図５に示された態様の装置２においては、窪んだ表面１８は壁８に向かって一定角度で収斂し、それによってチャンバー１４の通し面厚さは壁８の縁１２から縁１０まで測定したとき直線的に変動する。従って、図４及び図５に示された態様の装置は増分的又は直線的に変動する通し面厚さの領域を包含するサンプルチャンバー１４を例証する。窪んだ表面１８に凸状又は凹状に湾曲した構造を与えることによって非直線的に変動する通し面厚さをもったチャンバーをつくることができるであろうということは認識されるであろう。
【００２８】
ところで、図６を引用すると、変動可能な厚さのサンプルチャンバー１４を提供するように作用可能である装置２の更に別の態様が示される。装置２は下部壁４と上部壁８を包含しており、その少なくとも一方は透明である。下部壁４は中央の隆起部２０を包含しており、そして下部壁４の窪んだ表面１８はこの中央の隆起部２０を取り囲んでいる。図６に図解された特殊な態様においては、上部壁８は平坦であり、そしてその縁はシム６によって壁４の上に持ち上げられ取り囲まれている。表面１８は図６に示されているように曲線から成ることができる、又は図５に示されているように直線から成ることができる。従って、図６に示された態様の装置２の中に形成されたチャンバー１４は直線状又は非直線状で変動する通し面厚さを有することができる。また、表面１８は図４に示されているように階段状傾きをもって形成されることもできる。
【００２９】
図８はチャンバー１４の厚さが最も薄い縁１０から最も厚い縁１２までどう変動するかを示すグラフ図である。実線ＰＬ  は図２及び図５に示されたチャンバー構造によって生じた厚さと距離の関係を示しており、そして破線ＰNLは図３及び図６に示されたチャンバー構造によって生じた厚さと距離の関係を示している。壁４と８の収斂角度が既知のファクターである場合には、この情報はチャンバー１４の内容物を走査するのに使用されるコンピューター処理される機器の中に予めプログラミングされることができる。
【００３０】
図９はチャンバー１４を組み込んである装置２であってチャンバーが血液サンプルで満たされたときにチャンバー１４の中には被検血液サンプル中に存在する如何なる異なるサイズの形態成分も静止的に分布するであろう仕方を表す概略平面図である。数字１０はチャンバー１４のより小さな厚さの領域を示し、そして数字１２はチャンバー１４のより大きな厚さの領域を示す。図９に示された装置２の描写においては、描かれたチャンバー１４の部分には３つの異なる厚さの領域Ａ、Ｂ及びＣが存在する。領域Ａはチャンバーの中のより小さな厚さの領域であり、領域Ｂはチャンバー１４の中の中位の厚さの領域であり、そして領域Ｃはチャンバー１４の中の最も大きな厚さの領域である。明らかなように、異なる厚さ領域のこの具体的な数は本発明のチャンバー１４の主な特徴を単に例示するのに使用されており、そして本発明を制限するものではない、何故ならば、チャンバー１４は、上に言及した通り、本質的に無限数の異なる厚さの領域を包含することができる。図９には３つの異なる視野１、３及び５も示されている。これら視野１、３及び５は顕微鏡のような光学機器によって観察されるときの視野を図解するように円として描写されている。図９に描写された図解においては、血液サンプルがチャンバー１４の中に満たされ、そして少なくとも数秒間は静止された。チャンバー１４の最も薄い領域Ａには、平らになった赤血球、単独３２又は単層３１どちらか、が見いだされる。少数の血小板３０も領域Ａには見いだされるかも知れない。平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）及びその他の血球細胞計量(cellular metrics)の測定は視野１の中で、又は領域Ａに見いだされる似たような視野の中で、行われてもよい。
【００３１】
領域Ｂの下方部には、赤血球が赤血球無しの血漿によって包囲されている連銭状赤血球又はその他凝集体３３を形成するのに十分な場所が存在する。視野３では、血小板３０が数え上げられるかも知れない。領域Ｂの上方部では、視野５には、白血球３４の計数及び分類を可能にするのに十分なチャンバー容積が存在する。従って、白血球３４は表面受容体サイトのためのこの領域で検定することができ; 類型に分類することができ; 容積測定することができ; 形態学的に研究することができる; そして白血球３４についての付加的な小さな情報は領域Ｂの上方部における血液サンプルから誘導することができる。チャンバー厚さが領域Ｃに示されたものにまで増加すると、赤血球凝集体３３は融合層(confluent layer) を形成し、そして白血球を突き止める能力は低下するが、この領域は非常に低い白血球数には利用されるかも知れない。
【００３２】
図１０はチャンバー１４の部分平面図であり、数字１２はチャンバー１４の厚い方の端を示しそして数字１０はチャンバー１４の薄い方の端を示す。その最も薄い部分１０における約０〜約３μからその最も厚い部分１２における約２００μまで変化する変動厚さを有するチャンバー１４は血液サンプルの単位容量当たりの粒子計数の動的範囲(dynamic range) を１００倍にするであろう。４つの概略視野７′、７、９及び１１が図９に示されている。形態成分３２が視野７、９及び１１の各々に描かれており、そして視野７′には何も示されていない。空位の又は明澄流体のスペース３５は視野７′、７および９にも描かれているが、視野１１には描かれてない。この図解は有効情報を含有する視野を見いだすことにおけるチャンバー１４の動的有効範囲を説明している。この図に示された成分３２は前述した血液成分のいずれか、即ち、血小板、赤血球、又は白血球、でありえよう。視野７′は成分３２が欠けており、そして視野１１は成分３２が過剰に群がっているので、成分３２に関する有効な情報を何ら含有しない２つの視野１１及び７′が存在するということは注目されるであろう。しかしながら、微粒子物の単なる存否も或る種の環境では意味があり、例えば、異常血球が見いだされる場合がそのケースであろう。視野７及び９はどちらも、成分３２と明澄血漿区域３５を含有している。走査機器はこれら視野の一つを詳細分析用に選択してもよい。上に言及した通り、走査機器はチャンバー１４の中のサンプルの単位容量当たりの形態成分３２の計数を誘導することを伴うサンプル検査の遂行においてチャンバー１４の中の有効領域を求めてチャンバー１４を探索するときに、それは７′、７、９及び１１のような視野を調べるであろう。
【００３３】
走査機器は計数検査の遂行時には明澄流体要素３５を有しない視野を無視するようにプログラミングすることができる、何故ならば、幾つかの場合には、かかる視野要素３５の存在は機器がそれが見ている視野の深度を決めるのに必要とされるからである、また、形態成分を欠く７′のような視野を無視するようにプログラミングすることもできる。先に言及した通り、深度測定は明澄要素３１から発する着色剤信号強度の関数又は幾つかの他の性質例えばチャンバーにおける走査機器のＸ−Ｙ位置の関数であってもよい。走査機器は視野の面積を知るようにプログラミングしたコンピューターを含んでおり、そして機器は任意視野の深度を測定したらその視野の容積を計算する。走査機器は必要な明澄要素３１を有するが形態成分３２の有意数を含有しない特定視野を無視するようにプログラミングされてもよい。従って、走査機器は視野７を無視することがありうるし、そして視野７′及び１１を無視するであろう。かかる場合には、走査機器は視野９の中の形態成分３２の数を計数するだけであろう。
【００３４】
走査機器は臨床上有意な数の成分３２を計数するように十分な数の有効視野を検分したときに、それはチャンバー１４の中のサンプルの単位容量当たりの成分３２の数を計算するであろう。何が臨床上有意な数の計数成分３２を構成するかの決定は計数手順にとっての予め定められた臨床上許容される誤差限界に依存するであろう。この数字はどんな成分３２が計数されるかに依存するかも知れないということが認識されよう。走査機器コンピューターは任意の特定視野で何が観察されるかに依存して、有効視野を見つけ出すのにはチャンバー１４の端１０又は端１２どちらに向かって動かなければならないかをわかるようプログラミングされるであろうことが認識されよう。従って、機器は１１のような視野を見るときは、より有効な視野を突き止めるためにチャンバー１４の端１０に向かって動かなければならないことをわかるであろう。９のような有効視野が突き止められたら、機器はチャンバー１４の端１０及び１２に平行に動くことによってチャンバー１４の中に似たような視野を多分見つけるであろうことをわかるであろう。幾つかの成分はチャンバー１４の幾つかの領域からは必然的に排除されるであろうので、他の領域でのそれらの濃度が増すことになるということに留意すべきである。実際、チャンバー１４の最も薄い領域におけるサンプルの容量は他での検査容量に比べて少量であるので、その濃度効果は無視できる。機器が視野当たりの微粒子計数を遂行できるように１０以上の成分と明澄区域を有する視野を見つけ出すようにプログラミングされているならば、それは視野９を選ぶであろう;それは成分３２をそれらの明るい発光特性によって同定するであろう; それは視野９の成分３２を計数するであろう; そして、それは視野９の容積を推定するであろう、従って、視野９の容積当たりの成分計数を誘導する。サンプル全体についての特定成分の計数はチャンバー１４の中の臨床上有意な数の類似視野を探し出しそしてその中の同成分の計数を行うことから導くことができる。
【００３５】
アクリジンオレンジのような着色剤によって超生体染色されたサンプル中に存在する白血球は４６０ｎｍ範囲の光によって励起されたときの５４０ｎｍの蛍光性発光における細胞特有核蛍光(cells' characteristic nuclear fluorescence)及び６２０ｎｍの蛍光性発光における細胞質蛍光(cytoplasmic fluorescence)によって同定されてもよい。有核赤血球もこの手順に従って同定できる。これら２つの波長の比は顆粒白血球(granulocyte) のようないくつかの炎症細胞(inflammatory cells)を同定するのにも使用できる。アストロゾンオレンジのような他の染料が類似分析を遂行するのに類似波長と共に使用されてもよい。
【００３６】
米国では、重力分離した全血サンプルの中のパックした赤血球カラム(packed red cell column)の百分率として典型的に定義されているが、欧州では、全血サンプルの中のパックした赤血球カラムのデシマル(decimal) 又は分画として定義されてもよい、血液サンプルのヘマトクリットは次の仕方で走査機器によって測定される。センシブルマーカー(sensible marker) 、好ましくは、その発光波長が赤である蛍光染料、例えば、スルホルローダミンＳ１０１、を血液サンプルと緊密に混合する。小腔(lacunae) 及び赤血球連銭形の場合には、染料はサンプルに発光を起こさせ、そしてサンプルの小腔及び連銭状赤血球区域のデジタル画像が走査機器によって捕らえられる。この画像はコンピューター分析にかけられ、ここでの第一の目的は小腔をつくっている血漿の平均単位蛍光を測定することである。これは小腔を赤血球連銭形からデジタル分離しそして画像の中の小腔からの信号強度又は輝度を平均化することによって行われてもよい。もう一つの方法は強度の読みのヒストグラムを作ることであり、そこでは、最も高い読みは血漿からのものを表している。小腔は本質的に血漿だけを含有しているので、それらの平均信号強度は像形成された視野全体についての平均血漿信号強度に等しい。次いで、走査機器は血漿のピクセル当たりの平均信号強度に視野のピクセル数を掛けることによって全信号強度(total signal intensity)Ｂtを計算する。この工程の積は視野に連銭状赤血球が存在しない場合の全視野信号強度であるものである。次の工程は走査された視野からの実際の信号強度Ｂaを決定することである。この決定は視野の中に含有されている全ピクセルの実際の信号強度を合算することに行われる。上記画像分析は多数の市販のソフトパッケージ、たとえば、バージニア州ビエナ（Vienna) のシグナル・アナリティクス・コーポレーション(Signal Analytics Corporation)によって販売されているもの、又はその他のかかる画像処理システム、によって遂行されてもよい。
【００３７】
サンプルの中に赤血球が存在しない、即ち、ヘマトリックスがゼロ、の場合には、実際の信号強度Ｂaは算出された全信号強度Ｂtに等しいであろう。赤血球はセンシブルマーカーを排除するので、視野の中の赤血球の存在はどの特定視野の中のＢaも減少させる、従って、Ｂtに比べてＢaを低下させる。従って、チャンバーの中の血液サンプル全体に対する百分率として表される、走査された血液サンプル中の視野のヘマトクリット（Ｈｃｔ）は次のように計算できる:
％  Ｈｃｔ  ＝  〔１−（Ｂa／Ｂt）〕×１００。
また、Ｈｃｔは、式  Ｈｃｔ  ＝  １−（Ｂa／Ｂt）
を解くことによって血液サンプル全体の分画として表すことができる。上に言及した通り、臨床上有意な数の視野を走査すべきであり、そして走査された各視野からのヘマトクリット結果は血液サンプル全体について妥当に精密なヘマトクリット値を得るように平均されるべきである。
【００３８】
蛍光マーカーが好ましいけれども、透過光を吸収する染料を使用することもできる。かかる染料を使用するときは、蛍光信号強度ではなく光学信号強度の値を測定し、そしてＢtは血漿のピクセル当たりの平均積算光学強度に、画像形成された視野の面積を掛けたものであり、そしてＢaは画像形成された視野の面積の上の積算光学強度である。
【００３９】
ヘマトクリットを測定するためには、センシブルマーカー染料が赤血球に入ってはならないこと、又はそれが赤血球に入る場合には赤血球の中に移行してしまったマーカー部分の有効性の低下について補正できるように、全信号へのその寄与率を算出できなければならないこと、を理解すべきである。
【００４０】
サンプルのヘモグロビン量を測定するには２つの一般的方法がある。第一は、約４１３ｎｍのソーレー帯(Soret band)での又は約５５０ｎｍのオキシヘモグロビン帯での、図９に示された視野１の中の赤血球の積算光学濃度を測定することによってサンプルのＭＣＨを決定することを伴う。ヘモグロビンについてはこれら波長の光吸収が周知であるので、サンプル全体についての平均値は臨床上有意な数の赤血球を画像形成した後に計算することができる。これが平均赤血球ヘモグロビン量（ＭＣＨ）である。ＭＣＨはサンプル全体のヘモグロビン量を赤血球数（ＲＢＣ）で割ったものに比例し、従ってサンプルのヘモグロビン量はＭＣＨとＲＢＣの値から誘導できる。ＲＢＣの測定を下記に説明する。
【００４１】
ＭＣＶ（フェムトリッター数で表す）は図９に示された視野１で測定され、そこでは、赤血球は単一又は単層で存在する。Ｈｃｔのために使用された同じ染料及び波長がこの測定にも使用される。視野のデジタル画像はコンピューター処理され、そして血漿だけからの信号が上記のように求められる。次に、単一赤血球がデジタル分離され、そして画像からの全蛍光Ｓ1が測定される。次に、単離赤血球におけるピクセルの数に平均血漿信号Ｓ2を掛ける。信号の差、Ｓ1−Ｓ2は赤血球の容積によって画像から排除された信号の量を表している。下記に説明する信号／容積較正ファクターを使用して、単一血球の容積が測定されてもよい。ＭＣＶは多数の単一血球の容積を測定することによるか、又は連続グループの血球の容積を測定しそしてグループ内の血球の数で割ることによるか、どちらかによって算出されてもよい。
【００４２】
数学的には、フェムトリッター数で表されるＭＣＶは、血液サンプルに対する百分率として表されるＨｃｔを、血液１マイクロリッター当たりの１００万単位の血球数で表されるＲＢＣで割ったものとして同定され、従ってＲＢＣは、式
ＲＢＣ  ＝  Ｈｃｔ  ×  １０／ＭＣＶ
を解くことによって計算することができる。
【００４３】
図７、１１及び１２は、読み取り機器によって使用中に較正された後にチャンバー視野厚さを測定できるように機器を較正するのに使用できる様々な内蔵構造をもって本発明に従ってつくられた装置２を示す。着色剤信号からサンプル容量への換算を可能にする装置の較正は、少なくとも一つの体積規定造作物(volume-defined feature)が存在している領域の中での着色血漿の測定を可能にする何らかの手段によって提供されてもよい。図７に示されている通り、一例においては、単位長さ、好ましくは約厚さ２０μ、当たりの既知容積を有する矩形ガラス毛管１３がチャンバー１４の一部と連続しており、それによって毛管はサンプルで及び混合された着色剤で満たされるであろう。連銭状赤血球が毛管内に生じた後に、平均血漿蛍光は上記方法によって求めることができる。毛管は精密な公差に製造されるので毛管の単位長さ当たりの容積が知れるので、容積当たりの蛍光は走査機器によって算出できる。
【００４４】
装置２の中に組み込まれてもよいもう一つの較正用造作物は図１１及び１２の中に示されており、チャンバー１４に隣接しそれと液が通じる、現場でつくられる較正‐標準要素(calibration-standard component)３８を包含する。サンプルがチャンバー１４に入ると、較正標準要素３８はサンプルの染色された又はさもなくば着色された明澄な流体成分で満たされるであろう。較正要素３８は底３７と底３７から上に延びている中央の隆起部３６とを有する正確に深さを制御されたウェル(well)の形態をとってもよく、その隆起部３６は正確にわかった容積を有している。走査機器は計数手順を開始するとき、それはまず要素３８のところに行き、そして要素３８の底３７から発する信号強度を検知する。底３７からの平均信号は隆起部３６が無ければ存在したであろう全蛍光を算出するのに使用されるであろう。これは隆起部３６の容積置換効果(volume-displacing effect)を包含する要素３８の区域からの実際の蛍光信号と比較され、従って算出された蛍光と実際の蛍光の間の差は造作物の容積によって置き換えられた蛍光を表している。それが行われたら、走査機器はチャンバー１４の中の単位容積当たりの着色剤信号減分の既知値を確立するであろう。次いで、走査機器はサンプルの中の形態成分の容積を測定するのにこの情報を使用することができる。従って、走査機器は検査される具体的着色剤及び装置２のための注文作成されたチャンバー領域の容積の及び形態成分の容積の情報が提供されるであろう。走査機器を較正するのに使用された毛管装置の正確な容積及び深さは走査機器の中に予めプログラミングすることができる、又はサンプリングチャンバーを含有するカセットの上に置かれたバーコード又はその他の機械読み取り可能なラベルの中に包含させることができ、そのラベルは較正工程の前に走査機器によって読み取られる。
【００４５】
図１３は数字５４によって一般的に表示されている自動化された比色顕微鏡機器アセンブリーの概略図であり、そしてそれは装置２の中に収容されている血液サンプルを走査するのに使用することができ、そして有意な人間の介在無しに血液サンプルの様々な成分からの発色波長を比色分析することができ、それによって様々な成分を同定する。それはまた、サンプルの中の様々な形態成分の単位血液サンプル当たりの容積計数を遂行することができ; 走査される血液サンプルの中の形態成分の様々なタイプの間を比色的及び／又は形態学的に差別化し; そして血液サンプルのヘモグロビン量及びヘマトクリットを比色的に測定することができる。機器アセンブリー５４は走査された血液サンプルの中の形態成分の画像を生じ保存又は伝送するように設計されている。機器アセンブリー５４には、サンプルホルダー２に携わるクリップ５８を包含しそしてサンプルホルダー２の内容物が走査されるときサンプルホルダー２をＸとＹの方向に水平に動かすことを可能にするステージ５６が包含されている。
【００４６】
可逆的電気モーター５９はサンプルホルダー２をＸとＹの方向に水平に動かせるように駆動スクリュー６０を反対方向に選択的に回転させるのに使用できる。この仕方で、サンプルホルダー２の内容物全体が走査できる。機器アセンブリー５４の自動の態様は、サンプルホルダーアセンブリー２の中のサンプル含有部に焦点を合わせるようにＺ方向に選択的に動かせる、ＣＣＤカメラ６２、ビームスプリッター６４、及びレンズ６６のセットを包含している。ＣＣＤカメラ６２は選択回転可能なフィルターホイール７４の上に搭載されていてもよい複数の異なる発光波長フィルター６８、７０及び７２を通してサンプルの画像を観察し記録する。機器アセンブリー５４はビームスプリッター６４及び焦点を結ぶレンズセット６６を通してサンプルホルダー２に励起光ビームを向ける励起光源７５も包含している。一連の励起光波長フィルター７６、７８および８０は選択回転可能なフィルターホイール８２の上に搭載されてもよい。励起光ビームは焦点を結ぶレンズ６６に向かってビームスプリッター６４によって偏向され、そしてレンズ６６によってサンプルホルダー２の上に焦点を結ばされる。従って、２つのフィルターホイール７４と８２は励起光源ばかりでなく発光光源の波長を選択的に制御し変動させることができる。予めプログラミングされたプロセッサーコントローラー８４はサンプルホルダー２の運動; フィルターホイール７４と８２の回転; およびＣＣＤカメラ６２の操作を、選択的に制御するように操作可能である。従って、コントローラー８４は有意な人間の介在の必要無しに機器アセンブリー１２の完全自動操作を可能にする。
【００４７】
本発明と組み合わせて使用される機器はサンプリングチャンバーの中に入れた血液のサンプルの赤血球沈降速度の測定も可能にする。赤血球沈降速度（ＥＳＲ）は特定条件下の管の中に閉じ込められたときに赤血球のカラムが１時間でどれだけ沈むかの尺度である。ＥＳＲは実際には、抗凝固全血の静止サンプルにおいて赤血球がどれだけ急速に凝集するかの間接的尺度である。赤血球が急速に凝集するサンプルにおいては、赤血球は懸濁から急速に沈降し、従って結果として高いＥＳＲ測定を生じるが、正常な個々においては、赤血球はそれほど急速には凝集せず、従ってより長く懸濁のままとどまり、そして結果としてより低いＥＳＲ測定を生じる。ＥＳＲの歴史的及び医学的意味でのより幅広い記載は１９９６年４月９日登録のブル(Bull)等の米国特許第５，５０６，１４５号に記載されており、その特許は全体的に本願明細書中に組み入れられる。
【００４８】
本発明においては、抗凝固全血サンプルはチャンバーの中に静止して置かれており、そして赤血球の凝固して連銭形を形成する性質は赤血球凝集体形成の迅速性と赤血球凝集体のサイズを試験することによって容易に測定することができる。本発明を使用してＥＳＲを決定するための好ましい手順は静止血液サンプル中に赤血球連銭形と血漿小腔が形成されるところのチャンバーの領域を走査することを伴う。視野のマルチデジタル画像は血液サンプルがチャンバーの中に導入されたときから始められる。走査によって認められた観察された赤血球凝集速度は凝集力の相対強さの尺度であり、従って高いＥＳＲを有するサンプルも赤血球凝集体の急速形成の証拠となるであろうが、正常サンプルは遙かに遅い速度の赤血球凝集体形成を示すであろう。加えて、より高いＥＳＲを有する患者の血液の中に形成された赤血球凝集体はより密集している傾向があり、そしてより低いＥＳＲを有する患者からのサンプルにおけるよりも少ない非結合血球を有する。これらパラメーターを測定することによって、赤血球凝集体形成の速度及び本性と従来のＥＳＲ手順との間の相関関係が標準相関法によって確立できる。
【００４９】
従って、様々な血液サンプルの従来行われたＥＳＲ測定の統計的に有意な数を同じ血液サンプル集団から本発明に従って検出された通りの赤血球凝集体形成パラメーターと比較することによって、従来のＥＳＲ測定と本発明のＥＳＲ測定方法との間の相関関係が同定されるであろう。
【００５０】
本発明の方法は抗凝固全血の静止サンプルから発する測光発光の関数としての幾つかの血液学的パラメーターの測定を可能にするということは注目されるであろう。本発明の方法はＥＳＲ、Ｈｃｔ、Ｈｇｂ、ＭＣＶ、ＭＣＨ及び血液サンプルの単位容量当たりの血球数の測定を全て、配管の必要性や血液サンプルの希釈の必要性を伴わずに、そして比較的小さくコンパクトなサンプル容器の中で、可能にする。本発明の方法は赤血球が走査視野から排除されることも要求しないし、そして実際、抗凝固全血の実質的に希釈されてないサンプルは機器によって走査される各々の有効視野の中に赤血球が個々にか又は単層でか又は連銭形の形態でかどれかで存在するであろうことを実際に保証する。
【００５１】
本発明の開示された態様の多数の変更又は変形が本発明の概念から逸脱することなく可能であるので、本発明は特許請求の範囲によって要求される以外に限定されるものではない。
【図面の簡単な説明】
【図１】  変動する通し面厚さの領域を有するサンプル受容チャンバーを包含する血液サンプル分析装置の概略斜視図である。
【図２】  チャンバーの通し面厚さが直線状に変動する、図１に示されたタイプのチャンバーの断面図である。
【図３】  チャンバーの通し面厚さが非直線状に変動する、図２に類似のチャンバーを示す断面図である。
【図４】  チャンバーの通し面厚さが階段状に変動する、変動通し面厚さを有するチャンバーの別の態様の断面図である。
【図５】  線状に変動する通し面厚さを有する、図４に類似のチャンバーを示す断面図である。
【図６】  変動する通し面厚さを有するチャンバーの更に別の態様の断面図である。
【図７】  血液サンプルを分析するのに使用される走査機器を較正するのに使用するための毛細管を包含する、本発明に従ってつくられたサンプルチャンバーの平面図である。
【図８】  チャンバー厚さと、チャンバーの中の最小通し面厚さの領域からチャンバーの中の任意の他の通し面厚さの領域までの距離との間の相関関係のプロットであり、実線は図２に示されているもののような線状チャンバーについて表し、そして破線は図３に示されているもののような非線状チャンバーについて表す。
【図９】  本発明に従ってつくられた変動する厚さのチャンバーの一部分の概略平面図であり、そして静止液サンプルの中の様々なサイズの形態成分がチャンバーの中の異なる視野の中で個別に見ることができるようにチャンバーの中の様々な厚さの領域の中へと分離されるさまを概略的に図解している。
【図１０】  サンプル走査機器によって検分されるであろう４つの異なる視野を示すチャンバーの一部分の概略平面図である。
【図１１】  本発明のチャンバーを使用しておりそして着色剤信号強度較正要素も包含している装置の態様の概略側面図である。
【図１２】  図１１の較正要素から発する信号発生パターンの概略平面図である。
【図１３】  チャンバーの中に入れた抗凝固全血サンプルの形態成分の或る特性を同定し、計数しそして分析することができる走査機器の概略図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１０】
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【図１３】
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