(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で示される化合物。
【化１】
0004266081.tif 000007
（ただし、式中Ｒ1は炭素数９〜３５の直鎖状又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基、Ｒ2は炭素数２〜３４の直鎖状又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基、Ｒ3は炭素数２〜３０の直鎖状又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基である。）
【請求項２】
請求項１記載の一般式（Ｉ）で示される化合物の少なくとも１種を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規スフィンゴミエリン及び皮膚外用剤に関し、詳しくはω−アシルオキシ化スフィンゴミエリン及びそれを含有する皮膚外用剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚は、外界からの抗原進入の防御や、体内からの水分放出を制御する上で極めて重要な組織であり、表皮中の角層がこの機能を担っている。角層透過バリア機能と称されるこの機能は、角層の細胞間脂質から構成されるラメラ構造が担っており、中でもラメラ構造の主成分である１型セラミドが角層透過バリア機能の維持に必須であることが多数報告されている。肌荒れや皮膚疾患などのバリア機能が低下した角層では、１型セラミドが減少している場合が多い。また１型セラミドは、他のセラミド（２〜７型）と異なり脂肪酸残基に、ω位にエステル結合を介してリノール酸を有することから、リノール酸の供給体としても重要であり、１型セラミドの減少がバリア機能低下を引き起こす要因であると報告されている。
【０００３】
そこで肌荒れや皮膚疾患にセラミドを補給し、皮膚症状を改善する方法が考えられた。しかし、１型セラミドの天然原料からの単離や合成は困難であり、かつ高コストであることから、大量の供給は不可能であった。このため天然原料からの単離や合成が容易な他の型のセラミド（２〜７型）やセラミド類似成分の外用が検討されていたが、肌荒れや皮膚疾患を改善させるほど満足な効果を有するセラミドの供給方法は見出されてはいなかった。
【０００４】
さらにセラミドは、皮膚においてセラミダーゼの作用によって遊離スフィンゴシンに分解されることがわかっている。遊離スフィンゴシンは、プロテインキナーゼＣの活性を阻害し、細胞増殖に影響を与えたり、さらにはアポトーシスを引き起こすことが報告されている。したがって、外因性のセラミドやセラミド類似成分を必要以上に直接皮膚に塗布することは、過剰な遊離スフィンゴシンの蓄積を招くことが予想されるので、１型セラミドを安全に角層に供給する方法が望まれていた。
【０００５】
一方、内因的に１型セラミドの供給を促進させる方法としては、セレブロシダーゼを活性化する方法がある。１型セラミドは、ω位にエステル結合した脂肪酸部分を有するアシルオキシ型のグルコシルセラミドからセレブロシダーゼにより代謝され、生成される。セレブロシダーゼを活性化するガラクトシルセラミドを外用することで、角層の１型セラミド量は増加し[Hara  et  al.,  Journal  of  Dermatological  Science,  12,64-68,1996]、アトピー性皮膚炎などの皮膚疾患を顕著に改善する[浜中ら、皮膚、37,619-25,1994]。これらから、１型セラミドを内因的に増加させることは、肌荒れやアトピー性皮膚炎の改善に有効な方法であると考えられる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
したがって、本発明の目的とするところは、安全に１型セラミドを角層へ供給することが可能な化合物および皮膚外用剤を提供することを目的とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記の目的を達成するために、本発明者等はセラミド自体を用いるのではなく、皮膚内部で１型セラミドを供給する成分が有効であると考え、鋭意研究した。角層のセラミドは表皮のターンオーバーに伴い、スフィンゴミエリンおよびグルコシルセラミドから生成される。中でも、前述のとおり１型セラミドは、ω位にエステル結合した脂肪酸を有するアシルオキシ型のグルコシルセラミドから特異的に生成され、スフィンゴミエリンからは生成されないことを報告している［Uchidaら、Journal  of  Lipid  Research、2001,41,2071-82］。したがって、１型セラミドを皮膚内で多く供給するには、アシルオキシ型グルコシルセラミドから１型セラミドへの代謝を促進させる方法が考えられるが、表皮内のアシルオキシ型グルコシルセラミド量が減少している場合には有効ではない。そこで、ω位にエステル結合した脂肪酸残基を含有するω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンを合成し、生体内での代謝を調べたところ、スフィンゴミエリンとは異なり、１型セラミドを供給することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
即ち、本発明は、下記一般式（Ｉ）で示される化合物
【０００９】
【化２】
0004266081.tif 000002
【００１０】
（ただし、式中Ｒ1は炭素数９〜３５の直鎖状又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基、Ｒ2は炭素数２〜３４の直鎖状又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基、Ｒ3は炭素数２〜３０の直鎖状又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基である。）にある。また、上記化合物（Ｉ）の少なくとも１種を含有することを特徴とする皮膚外用剤にある。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明において用いられる一般式（Ｉ）で示される化合物は、Ｒ1は炭素数９〜３５の直鎖又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基であり、好ましくは炭素数１８〜３０の直鎖飽和脂肪族炭化水素基である。Ｒ2は炭素数２〜３４の直鎖又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基であり、好ましくは炭素数１４〜２２の直鎖であり飽和もしくは不飽和である脂肪族炭化水素基である。Ｒ3は炭素数２〜３０の直鎖又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基であり、好ましくは炭素数１２〜２２の直鎖であり飽和もしくは不飽和である脂肪族炭化水素基である。
【００１２】
一般式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、既に報告されている方法［Journal  of  Lipid  research,28,710-718,1987］に従って合成することができる。つまり、ＤＤＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）存在下でスフィンゴシルホスホリルコリンとω−アシルオキシ脂肪酸を反応させ、アミド化する方法である。また、スフィンゴシルホスホリルコリンと一般式（ＩＩ）で示される活性基を有するカルボン酸誘導体を塩基の存在下、アミド化反応させることによっても得られる。
【００１３】
【化３】
0004266081.tif 000003
【００１４】
（但し、上記式中、活性基のＲ4は、ｐ−ニトロフェニル基、スクシンイミド基、フタルイミド基、２，４，５−トリクロロフェニル基等を挙げることができる。Ｒ1は炭素数９〜３５の直鎖又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基、Ｒ2は炭素数２〜３４の直鎖又は分岐鎖状の、飽和又は不飽和の、ヒドロキシル基を有する又は有さない脂肪族炭化水素基である。
【００１５】
本発明に係る皮膚外用剤は、前記一般式（Ｉ）で示されるω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンの少なくとも１種を有効成分として含有する。ここで、本発明の皮膚外用剤とは、化粧料、医薬部外品、医薬品の区別無く、人体の頭皮を含む表皮に適用されるあらゆる組成物を指し、化粧料においても基礎化粧品、メイクアップ化粧品、養毛化粧品等に何ら制限無く適用できる。剤形としては、例えば、ロ−ション、乳液、クリ−ム、パック、顆粒、入浴剤、粉末、軟膏、ミスト、フォーム、パップ、ゲル等、種々のものとすることができる。
【００１６】
本発明の皮膚外用剤には、前記一般式（Ｉ）で示されるω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンの少なくとも１種を有効成分として含有していればよく、その配合量は、最終製剤の総量を基準として大略０．０００１〜１０．０質量％（以下、単に％と記する）が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜１．０％である。配合量がこの範囲より少ないと本発明の効果が十分に達成されない場合があり、一方、上限（１０．０％）を越えて配合してもその増加分に見合った効果の向上がない場合があり、好ましくない。
【００１７】
本発明の皮膚外用剤は、上記の他に化粧品、医薬部外品、医薬品等に一般に用いられる色素、香料、防腐剤、界面活性剤、顔料、抗酸化剤等を本発明の目的を達成する範囲内で適宜配合することができる。さらに、他のセラミド合成促進剤（ガラクトシルセラミド、ナイアシンアミド、ナイアシン、シモン葉エキス等）と組み合わせることも好ましい。
【００１８】
【実施例】
以下実施例によって本発明を説明する。
・実施例１  化合物（ＩＩＩ）の合成
【００１９】
【化４】
0004266081.tif 000004
【００２０】
スフィンゴシルホスホリルコリン（１０ｍｇ）と２３−オクタデカノイルオキシトリコサン酸ｐ−ニトロフェニル（３０ｍｇ）にピリジン（１ｍＬ）を加え溶かし、室温で３０時間攪拌した。減圧下でピリジンを除去した後、残分をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、化合物（ＩＩＩ）を得た。
【００２１】
化合物（ＩＩＩ）のＮＭＲスペクトル
1Ｈ−ＮＭＲ解析により、次のケミカルシフト（ＴＭＳ）が確認された。
0.89（t×2，6Ｈ），1.28（br.  S，88Ｈ），3'+3''；1.57〜1.68（m，6Ｈ），6；2.00〜2.05（m，2Ｈ），2'；2.18（t，2Ｈ），2''；2.31（t，2Ｈ），N(CH3)  3；3.21（s，9Ｈ），β；3.55〜3.65（2Ｈ），1,2；3.90〜3.95（2Ｈ），3+2  3'；4.06〜4.09（3Ｈ），α；4.25（1Ｈ），４；5.41〜5.50（m，1Ｈ），5；5.68〜5.78（m，1Ｈ），
【００２２】
・実施例２
14Ｃリノール酸残基含有ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンの合成
［一般式（Ｉ）の化合物において、Ｒ1：炭素数２９の直鎖飽和炭化水素基、Ｒ2：炭素数１７の直鎖不飽和炭化水素基、Ｒ3：炭素数１５の直鎖で不飽和の炭化水素基である化合物］
14Ｃリノール酸（アマシャム社製、５５ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）を含有したリノール酸（２０μｍｏｌ）を、ヘキサン中で塩化チオニル（２００μｍｏｌ）と６０℃１時間反応させた。生成した14Ｃリノール酸クロライドと、３０−ヒドロキシトリアコンタン酸ｐ−ニトロフェニルを、ピリジン中で５時間攪拌した。有機層は１ｍｏｌ／Ｌ塩酸で洗浄した後クロロホルムで抽出し、溶媒を除去した。生成混合物をシリカゲルカラムにて精製し、３０−リノレオイルオキシトリアコンタン酸ｐ−ニトロフェニル（14Ｃリノール酸残基含有）を得た。３０−リノレオイルオキシトリアコンタン酸ｐ−ニトロフェニルはスフィンゴシルホスホリルコリン（Ｓｉｇｍａ社製）とピリジン中で６０℃１昼夜反応させた。反応混合物はシリカゲルカラムにて精製し、14Ｃリノール酸残基含有ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン（14Ｃリノレオイルオキシスフィンゴミエリン）を得た。
【００２３】
・実施例３
14Ｃリノール酸残基含有ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン−ＢＳＡ水溶液の調製
実施例２記載の14Ｃリノール酸残基含有ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン［一般式（Ｉ）の化合物において、Ｒ1：炭素数２９の直鎖飽和炭化水素基、Ｒ2：炭素数１７の直鎖不飽和炭化水素基、Ｒ3：炭素数１５の直鎖で不飽和の炭化水素基である化合物］１０ｍｇをエタノール１０ｍＬ中で加温し溶解した後、アルブミン（；ＢＳＡ、５００μｍｏｌ／Ｌ、Ｓｉｇｍａ社製）と反応させ水溶液を調製した。
【００２４】
・試験例１  表皮細胞（ケラチノサイト）におけるω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンの代謝測定
ケラチノサイトは４×105個（φ９０ｍｍプレート）播種し、３７℃にて５日間培養した。実施例３記載の14Ｃリノール酸残基含有ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン−ＢＳＡ水溶液を、培地に終濃度１０μｍｏｌ／Ｌになるように添加した。アシル型オキシスフィンゴミエリンを含有しないＢＳＡ水溶液を対照（比較例１）とした。添加直後、１、６、２４時間後に培地を回収し、細胞をＰＢＳで洗浄した。セルスクレーパーで細胞を回収し、ＰＢＳ中で超音波処理により細胞を破砕した。クロロホルム、メタノールを添加して充分攪拌した後、有機層を回収し溶媒を留去して脂質サンプルとした。脂質サンプルをＨＰＴＬＣプレートに着点し、クロロホルム：メタノ−ル：水（40：10:１）で４０ｍｍ、クロロホルム：メタノ−ル：酢酸（96:3.5:0.5）で６４ｍｍを２回、ヘキサン：ジエチルエーテル：酢酸（70:30:1）で８０ｍｍ展開した。展開後のＨＰＴＬＣプレートは風乾後、ＢＡＳ１５００システム（富士フィルム製）にて放射活性を測定し、細胞中の14Ｃω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン及びセラミドに取り込まれた14Ｃ量（psl）を１プレートあたりでを算出した（psl/plate）。
【００２５】
【表１】
0004266081.tif 000005
【００２６】
上記表１で示したように、ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンは経時的にケラチノサイトに取り込まれ、また代謝されて１型セラミドを生成することが示された。以上の結果より、ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンが１型セラミドを供給することは明白である。
【００２７】
・実施例４
14Ｃリノール酸残基含有ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン溶液の調製
実施例２で得た14Ｃリノール酸残基含有ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン１０ｍｇ、および実施例１で得たω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン（化合物（ＩＩＩ））９０ｍｇを、エタノール７ｍＬ中で加温し溶解した後、プロピレングリコール３ｍＬを加え攪拌し、１％ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン溶液（質量／容量）を調製した。
【００２８】
・試験例２  マウス皮膚におけるω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンの代謝ヘアレスマウス（雄、８週齢、日本エスエルシー社より購入）を用いた。実施例４の14Ｃリノール酸残基含有ω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン溶液を、正常皮膚（無処置）あるいはアセトンにより脱脂した皮膚（アセトン処理）２．５ｃｍ2に１００μＬ塗布した。基剤（エタノール：プロピレングリコール＝７：３）溶液を比較例２とした。塗布６時間後に全層皮膚を摘出し、６０℃のＰＢＳ溶液中で１０秒間処理し、表皮を採取した。さらに得られた表皮は、０．５％トリプシン／ＰＢＳ溶液中でインキュベートし（４℃、一昼夜）、角層を採取した。得られた表皮、角層はBligh&Dyer法により脂質を抽出した。抽出した脂質はＨＰＴＬＣプレートに着点し、溶媒にて展開した。展開後のＨＰＴＬＣプレートは風乾後、ＢＡＳ１５００システム（富士フィルム製）にて放射活性を測定し、14Ｃω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンおよび１型セラミドに取り込まれた14Ｃ量（psl）を測定し、皮膚面積当たりで算出した（psl/cm2）。
【００２９】
【表２】
0004266081.tif 000006
【００３０】
表２に示すように、塗布されたω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンは１型セラミドに代謝されて角層に局在することが示された。さらにω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンの一部は顆粒層以下にも吸収されて代謝し、１型セラミドとして局在することが示された。以上から、皮膚に塗布したω−アシルオキシ型スフィンゴミエリンは１型セラミドに代謝され、角層に供給されることは明白である。
【００３１】
実施例５（化粧水）
下記の処方に従い、常法により化粧水を調製した。
原料成分                                              配合量（％）
エタノール                                              １０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．）            １
グリセリン                                                ３
１、３−ブチレングリコール                                ２
ジプロピレングリコール                                    ３
ポリエチレングリコール１５００                            １
リン酸二水素カリウム                                      ０．０７
リン酸一水素カリウム                                      ０．０３
メチルパラベン                                            ０．１
実施例１で得たω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン        ０．１
精製水                                                    残  量
【００３２】
実施例６（乳液）
下記の処方に従い、成分Ｂを成分Ａに添加し攪拌することにより、常法により乳液を調製した。
原料成分                                                  配合量（％）
Ａ成分
ステアリン酸                                              １
ステアリン酸グリセリンエステル                            ２
セタノール                                                １
コレステロール                                            ０．５
ワセリン                                                  ２
スクワレン                                                ５
流動パラフィン                                            ５
ジメチルポリシロキサン                                    １
（シリコンＫＦ−９６；１００ｃｓ、信越化学工業社製）
ブチルパラベン                                            ０．１
実施例１で得たω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン        ０．５
Ｂ成分
アシルグルタミン酸塩                                      １
アルキル変性カルボキシビニルポリマー                      ０．２
（ＰＥＭＵＬＥＮ  ＴＲ−１、BF.Goodrich社製）
グリセリン                                                ２
ジプロピレングリコール                                    ３
精製水                                                    残  量
【００３３】
実施例７（スキンクリーム）
原料成分                                                  配合量（％）
Ａ成分
ステアリン酸                                              ２
ステアリン酸グリセリンエステル                            ２
セタノール                                                ３
コレステロール                                            ０．５
ワセリン                                                  ２
スクワレン                                                ５
流動パラフィン                                          １０
ジメチルポリシロキサン                                    １
（シリコンＫＦ−９６；１００ｃｓ、信越化学工業社製）
ブチルパラベン                                            ０．１
実施例１で得たω−アシルオキシ型スフィンゴミエリン        １
Ｂ成分
アシルグルタミン酸塩                                      １
カルボキシビニルポリマー                                  ０．１５
アルキル変性カルボキシビニルポリマー                      ０．１５
（ＰＥＭＵＬＥＮ  ＴＲ−１、BF.Goodrich社製）
グリセリン                                                ５
ジプロピレングリコール                                    ３
精製水                                                    残  量
【００３４】
・調製法
上記に示したＡ，Ｂ成分を各々８０℃に加熱溶解した後、混合して撹拌しつつ、３０℃まで冷却してスキンクリ−ムを調製した。
【００３５】
【発明の効果】
以上のごとく、本発明により、安全かつ効率的に１型セラミドの皮膚への供給が可能である。