(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミン含有サッカライドを含むグリコペプチド抗生物質において、Ｎ4部位および他の１またはそれ以上のアミンを還元的にアルキル化する方法であって、シアノホウ水素化ナトリウムまたはピリジン−ボラン複合体である還元剤の存在下で、グリコペプチド抗生物質の可溶性銅複合体をケトンまたはアルデヒドと反応させることを含む方法。
【請求項２】
メタノール中で行う請求項１に記載の方法。
【請求項３】
グリコペプチド抗生物質の可溶性銅複合体を、グリコペプチド抗生物質と銅の可溶な形態からin situで調製する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
グリコペプチド抗生物質がバンコマイシンタイプのグリコペプチド抗生物質である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
グリコペプチド抗生物質がＡ８２８４６Ｂである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
アルデヒドが４’−クロロ−４−ビフェルカルボキシアルデヒドである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
アルキル化されたグリコペプチド抗生物質の銅複合体を回収することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
アルキル化されたグリコペプチド抗生物質を回収することをさらに含む、請求項１、２、３、４、５、６または７に記載の方法。
【請求項９】
請求項１、２、３、４、５、６または７のいずれかに記載の方法により製造された、還元的にアルキル化されたグリコペプチド抗生物質との銅の複合体。
【請求項１０】
還元的にアルキル化されたＡ８２８４６Ｂの、請求項９に記載の複合体。
【請求項１１】
還元的にアルキル化されたＡ８２８４６Ｂが、Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂである、請求項１０に記載の複合体。
【請求項１２】
アミン含有サッカライドを含むグリコペプチド抗生物質においてＮ4部位がアルキル化されたグリコペプチド抗生物質を製造する方法であって、ｐＨ≦４での該グリコペプチド抗生物質の銅複合体の水溶液での処理を含む方法。
【発明の詳細な説明】
本発明は、グリコペプチド抗生物質を還元的にアルキル化するための改良された方法に関する。本発明は、複数の部位の間の反応の増大した領域選択性を提供し、それにより好ましい生成物の増加した収率をもたらす。特に、本発明は、１またはそれ以上の更なるアミンを有するグリコペプチド抗生物質のサッカライドのアミンにおける還元的アルキル化反応を選択的に行うための方法に関する。
本発明の本質は、可溶性の銅の存在下で反応を行うことがサッカライドの位置にあるアミンとの選択的な反応に有利であり、それによりこの部位での還元的アルキル化の収率が改善されるという発見である。最初の工程は、グリコペプチド抗生物質の銅複合体の形成であり、これが次に還元的アルキル化を受ける。本発明はまた、出発物質であるグリコペプチド抗生物質のこれらの銅複合体を目的とする。アルキル化されたグリコペプチド抗生物質生成物は銅複合体として得られ、これは本発明の別の態様である。
本発明は、グリコペプチド抗生物質の還元的アルキル化に関する。
グリコペプチド抗生物質は、微生物、または微生物とその後の部分的修飾によって製造される物質の大きなクラスである。こられのうちの２つ、バンコマイシンとテイコプラニンは、抗生物質製品として販売されているが、特に１９８０年代後期に、グリコペプチド自身を含めた様々な抗生物質に対する耐性が出現して以来、多くの他の抗生物質が発見され、開発を目的として研究されている。グリコペプチド抗生物質の全クラスは、“Glycopeptide Antibiotics”，Ramakrishnan Nagarajan編（Marcel Dekker, Inc., New York, 1994）によく記述されている。より最近に発見されたグリコペプチドには、Ａ８２８４６Ａ（エレモマイシンとも呼ばれる）、Ａ８２８４６Ｂ（クロロオリエンチシンＡとしても知られている）、Ａ８２８４６Ｃ（オリエンチシンＣとしても知られている）およびオリエンチシンＡとして知られているものがある。本発明は、バンコマイシン、Ａ８２８４６Ａ、Ａ８２８４６Ｂ、Ａ８２８４６ＣおよびオリエンチシンＡを含むバンコマイシンタイプのグリコペプチド抗生物質との使用に好ましく、本発明は特にＡ８２８４６Ｂとの使用に好ましい。天然のグリコペプチドに対する多くの修飾がなされてきた。その修飾のうちのひとつに、グリコペプチドの反応性アミンの還元的アルキル化がある。例えば、バンコマイシンの還元的アルキル化を記載している米国特許第４，６９８，３２７号、およびバンコマイシン、Ａ８２８４６Ａ、Ａ８２８４６Ｂ、Ａ８２８４６ＣおよびオリエンチシンＡを含む様々なグリコペプチドの還元的アルキル化をいずれも記載しているＥＰＯ ４３５ ５０３ Ａ１とＥＰＯ ６６７ ３５３ Ａ１を参照。これらの文献は、もとになるグリコペプチドに多様なアルキル基を導入する還元的アルキル化を記載している。
４,６９８,３２７号は、式：
0004308912.tif 000002
［式中、
Ｒは、水素またはメチルであり；
ｎは、１または２であり；および
Ｒ1は、水素またはメチルであり；
Ｒ2およびＲ3は、独立に、水素または式：Ｒ6Ｒ7ＣＨ−で示される基あり；
Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｒ5、Ｒ5−（Ｃ1−Ｃ5アルキル）またはＲ5−（Ｃ2−Ｃ5アルケニル）であり；
Ｒ5は、水素、Ｃ1−Ｃ10アルキル、Ｃ2−Ｃ10アルケニル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、Ｃ3−Ｃ10シクロアルキル、Ｃ5−Ｃ12シクロアルケニル、フェニル、ナフチル、インデニル、テトラリニル、デカリニル、アダマンチル、環に３〜８原子を含む単環式ヘテロ環系または６〜１１原子を含む二環式ヘテロ環系であるが、但し、その環系の少なくとも１つの原子は炭素であり、その環系の少なくとも１つの原子はＯ、ＮおよびＳから選択されるヘテロ原子であり、Ｒ5は１またはそれ以上のヒドロキシ、ニトロ、Ｃ1−Ｃ10アルコキシ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、フェニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオ、ニトリル、ハロ、Ｃ2−Ｃ4アシルアミノ、アミノ、Ｃ1−Ｃ4ジアルキルアミノ基で置換されていてもよく；そして
Ｒ4は水素である：
但し、
（１）Ｒ2およびＲ3の少なくとも１つは水素以外でなければならず；
（２）ｎが２であるとき、Ｒは水素でなければならず；
（３）ＲがメチルでありＲ3が水素であるとき、Ｒ2はメチルではあり得ず；および
（４）ＲとＲ1の両方がメチルであるとき、Ｒ2は水素またはメチルであり、ｎは１である］
で示されるアルキル化されたバンコマイシン化合物を記載している。
ＥＰＯ ４３５ ５０３ Ａ１は、式：
0004308912.tif 000003
［式中、
Ｒは、水素または式
0004308912.tif 000004
で示される（４−epi−バンコサミニル）−Ｏ−グルコシル基または式
0004308912.tif 000005
で示されるグルコシル基であり；
Ｘは、水素またはクロロであり；
Ｙは、水素またはクロロであり；
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は独立に、水素、Ｃ1−Ｃ12アルキル、Ｃ2−Ｃ9アルカノイル、または式
0004308912.tif 000006
で示される基であり；
ｎは、１〜３であり；
Ｒ4は、水素、ハロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、Ｃ1−Ｃ8アルコキシ、または式
0004308912.tif 000007
で示される基であり；
Ｒ5およびＲ6は独立に、水素またはＣ1−Ｃ3アルキルであり；
ｐは、０〜２であり；
ｍは、２または３であり、およびｒ＝３−ｍである；
但し、Ｒが（４−epi−バンコサミニル）−Ｏ−グルコシル基である場合、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3がすべて水素であるということはなく、Ｒが水素またはグルコシル基である場合、Ｒ1とＲ3が両方とも水素であるということはない］
で示されるアルキル化およびアシル化されたグリコペプチドに関する。
Ｒが（４−epi−バンコサミニル）−Ｏ−グルコシルである場合、そのように定義されるグリコペプチドは、
Ｘ＝Ｈ、Ｙ＝Ｃｌ、Ａ８２８４６Ａ
Ｘ＝Ｙ＝Ｃｌ、Ａ８２８４６Ｂ
Ｘ＝Ｙ＝Ｈ、Ａ８２８４６Ｃ
Ｘ＝Ｃｌ、Ｙ＝Ｈ、オリエンチシンＡ
である。
したがって、ＥＰＯ ４３５ ５０３ Ａ１は、アルキル基が
0004308912.tif 000008
であるＡ８２８４６Ａ、Ａ８２８４６Ｂ、Ａ８２８４６ＣおよびオリエンチシンＡのアルキル誘導体を記載している。好ましい基は、Ｃ8−Ｃ12アルキルおよび式：
0004308912.tif 000009
［式中、Ｒ4は水素、ハロ、Ｃ1−Ｃ8アルキル、またはＣ1−Ｃ8アルコキシである］
で示される基である。
ＥＰＯ ６６７ ３５３ Ａ１は、次式で示されるアルキル化されたグリコペプチド抗生物質を記載している：
0004308912.tif 000010
［式中、
ＸおよびＹはそれぞれ独立に、水素またはクロロであり；
Ｒは、水素、４−epi−バンコサミニル、アクチノサミニル、またはリストサミニルであり；
Ｒ1は、水素、またはマンノースであり；
Ｒ2は、−ＮＨ2、−ＮＨＣＨ3、または−Ｎ（ＣＨ3）2であり；
Ｒ3は、−ＣＨ2ＣＨ（ＣＨ3）2、［ｐ−ＯＨ、ｍ−Ｃｌ］フェニル、ｐ−ラムノース−フェニル、または［ｐ−ラムノース−ガラクトース］フェニル、［ｐ−ガラクトース−ガラクトース］フェニル、［ｐ−ＣＨ3Ｏ−ラムノース］フェニルであり；
Ｒ4は、−ＣＨ2（ＣＯ）ＮＨ2、ベンジル、［ｐ−ＯＨ］フェニル、または［ｐ−ＯＨ、ｍ−Ｃｌ］フェニルであり；
Ｒ5は、水素、またはマンノースであり；
Ｒ6は、バンコサミニル、４−epi−バンコサミニル、Ｌ−アコサミニル、Ｌ−リストサミニル、またはＬ−アクチノサミニルであり；
Ｒ7は、（Ｃ2−Ｃ16）アルケニル、（Ｃ2−Ｃ12）アルキニル、（Ｃ1−Ｃ12アルキル）−Ｒ8、（Ｃ1−Ｃ12アルキル）−ハロ、（Ｃ2−Ｃ6アルケニル）−Ｒ8、（Ｃ2−Ｃ6アルキニル）−Ｒ8、（Ｃ1−Ｃ12アルキル）−Ｏ−Ｒ8であってＲ6のアミノ基に結合しており；
Ｒ8は、以下からなる群から選択される：
ａ）以下からなる群から独立に選択される１またはそれ以上の置換基で置換されていないまたは置換されている多環式アリール：
（i）水素、
（ii）ハロ、
（iii）ニトロ、
（iv）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
（v）（Ｃ2−Ｃ6）アルケニル、
（vi）（Ｃ2−Ｃ6）アルキニル、
（vii）（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、
（viii）ハロ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
（ix）ハロ−（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、
（x）カルボ−（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ
（xi）カルボベンジルオキシ、
（xii）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、ハロ、またはニトロで置換されたカルボベンジルオキシ、
（xiii）式−Ｓ（Ｏ）n’−Ｒ9で示される基（ここで、ｎ’は０〜２であり、Ｒ9は（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、フェニル、または（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、ハロもしくはニトロで置換されたフェニルである）、および
（xiv）式−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ10）2で示される基（ここで、置換基Ｒ10はそれぞれ独立に、水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、フェニル、または（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、ハロもしくはニトロで置換されたフェニルである）；
ｂ）以下からなる群から独立に選択される１またはそれ以上の置換基で置換されていないまたは置換されているヘテロアリール：
（i）ハロ、
（ii）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
（iii）（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、
（iv）ハロ（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
（v）ハロ（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、
（vi）フェニル、
（vii）チオフェニル、
（viii）ハロ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ2−Ｃ6）アルケニル、（Ｃ2−Ｃ6）アルキニル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシまたはニトロで置換されたフェニル、
（ix）カルボ−（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、
（x）カルボベンジルオキシ、
（xi）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、ハロまたはニトロで置換されたカルボベンジルオキシ、
（xii）前記と同意義である式−Ｓ（Ｏ）n’−Ｒ9で示される基、
（xiii）前記と同意義である式−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ10）2で示される基、および
（xiv）チエニル；
ｃ）式：
0004308912.tif 000011
［式中、
Ａ1は、−ＯＣ（Ａ2）2−Ｃ（Ａ2）2−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（Ａ2）2−Ｏ−、−Ｃ（Ａ2）2−、または−Ｃ（Ａ2）2−Ｃ（Ａ2）2−Ｃ（Ａ2）2−Ｃ（Ａ2）2−であって、各置換基Ａ2は独立して、水素、（Ｃ1−Ｃ6）−アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、および（Ｃ4−Ｃ10）シクロアルキルから選択される］
で示される基；
ｄ）式：
0004308912.tif 000012
［式中、
ｐは、１〜５であり；
Ｒ11は独立に、
（i）水素、
（ii）ニトロ、
（iii）ヒドロキシ、
（iv）ハロ、
（v）（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、
(vi)（Ｃ1−Ｃ8）アルコキシ、
（vii）（Ｃ9−Ｃ12）アルキル、
（viii）（Ｃ2−Ｃ9）アルキニル、
（ix）（Ｃ2−Ｃ9）アルコキシ、
（x）（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシまたは（Ｃ1−Ｃ4）アルキルチオで置換された（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシ、
（xi）（Ｃ2−Ｃ5）アルケニルオキシ、
（xii）（Ｃ2−Ｃ13）アルキニルオキシ、
（xiii）ハロ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
（xiv）ハロ−（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、
（xv）（Ｃ2−Ｃ6）アルキルチオ、
（xvi）（Ｃ2−Ｃ10）アルカノイルオキシ、
（xvii）カルボキシ−（Ｃ2−Ｃ4）アルケニル、
（xviii）（Ｃ1−Ｃ3）アルキルスルホニルオキシ、
（xix）カルボキシ−（Ｃ1−Ｃ3）アルキル、
（xx）Ｎ−［ジ（Ｃ1−Ｃ3）−アルキル］アミノ−（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシ、
（xxi）シアノ−（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、および
（xxii）シフェニル−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
からなる群から選択されるが、但し、
Ｒ11が（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、（Ｃ1−Ｃ8）アルコキシ、またはハロであるとき、ｐは２より大きいかまたは等しくなければならず、または
Ｒ7が（Ｃ1−Ｃ3アルキル）−Ｒ8であるとき、Ｒ11は水素、（Ｃ1−Ｃ8）アルキル、（Ｃ1−Ｃ8）アルコキシ、またはハロではない］
で示される基；
ｅ）式：
0004308912.tif 000013
［式中、
ｑは、０〜４であり；
Ｒ12は、以下からなる群から独立に選択され：
（i）ハロ、
（ii）ニトロ、
（iii）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
（iv）（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、
（v）ハロ−（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
（vi）ハロ−（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、および
（vii）ヒドロキシ、および
（vii）（Ｃ1−Ｃ6）チオアルキル；
ｒは１〜５であるが、但し、ｑとｒの合計が５より大きくてはならず；
Ｚは、以下からなる群から選択され：
（i）単結合、
（ii）ヒドロキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシで置換されていないまたは置換されている２価の（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
（iii）２価の（Ｃ2−Ｃ6）アルケニル、
（iv）２価の（Ｃ2−Ｃ6）アルキニル、または
（v）式−（Ｃ（Ｒ14）2）S−Ｒ15−または式−Ｒ15−（Ｃ（Ｒ14）2）S−
（式中、
ｓは０〜６であり；
Ｒ14置換基はそれぞれ、水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルまたは（Ｃ4−Ｃ10）シクロアルキルから独立に選択され；
Ｒ15は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、−ＳＯ2−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｃ1−Ｃ6アルキル）−、および−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、Ｎ＝Ｎから選択される）
で示される基であり；
Ｒ13は、
（i）（Ｃ4−Ｃ10）ヘテロサイクリル、
（ii）ヘテロアリール、
（iii）Ｃ1−Ｃ6アルキルで置換されていないまたは置換されている（Ｃ4−Ｃ10）シクロアルキル、または
（iv）ハロ、ヒドロキシ、ニトロ、（Ｃ1−Ｃ10）アルキル、（Ｃ1−Ｃ10）アルコキシ、ハロ−（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシ、ハロ−（Ｃ1−Ｃ3）アルキル、（Ｃ1−Ｃ3）アルコキシフェニル、フェニル、フェニル−（Ｃ1−Ｃ3）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシフェニル、フェニル−（Ｃ2−Ｃ3）アルキニルおよび（Ｃ1−Ｃ6）アルキルフェニルから独立に選択される１〜５の置換基で置換されていないまたは置換されているフェニル
からなる群から独立に選択される］
で示される基；
ｆ）以下からなる群から独立に選択される１またはそれ以上の置換基で置換されれていないまたは置換されている（Ｃ4−Ｃ10）シクロアルキル：
（i）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、
（ii）（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシ、
（iii）（Ｃ2−Ｃ6）アルケニル、
（iv）（Ｃ2−Ｃ6）アルキニル、
（v）（Ｃ4−Ｃ10）シクロアルキル、
（vi）フェニル、
（vii）フェニルチオ、
（viii）ニトロ、ハロ、（Ｃ1−Ｃ6）アルカノイルオキシ、またはカルボシクロアルコキシで置換されたフェニル、および
（ix）式−Ｚ−Ｒ13（ここで、ＺおよびＲ13は前記と同意義である）で示される基；および
ｇ）式
0004308912.tif 000014
［式中、
Ａ3およびＡ4はそれぞれ、以下からなる群から独立に選択され：
（i）結合、
（ii）−Ｏ−、
（iii）−Ｓ（Ｏ）t−（ここでｔは０〜２である）、
（iv）−Ｃ（Ｒ17）2（ここで、Ｒ17置換基はそれぞれ、水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ヒドロキシ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルコキシから独立に選択されるか、または両方のＲ17置換基が一緒になってＯである）、
（v）−Ｎ（Ｒ18）2−（ここで、Ｒ18置換基はそれぞれ、水素；（Ｃ1−Ｃ6）アルキル；（Ｃ2−Ｃ6）アルケニル；（Ｃ2−Ｃ6）アルキニル；（Ｃ4−Ｃ10）シクロアルキル；フェニル；ニトロ、ハロ、（Ｃ1−Ｃ6）アルカノイルオキシで置換されたフェニルから独立に選択されるか、または両方のＲ18置換基が一緒になって（Ｃ4−Ｃ10）シクロアルキルである）；
Ｒ16は、前記と同意義のＲ12またはＲ13であり；そして
ｕは、０〜４である］
で示される基。
この文献において、好ましいグリコペプチド抗生物質は、Ａ８２８４６Ａ、Ａ８２８４６Ｂ、Ａ８２８４６Ｃ、およびオリエンチシンＡであり、好ましいアルキルは、Ｒ7がＣＨ2−Ｒ8であるものであり；好ましいＲ8部分はグループ
（ｄ）および（ｅ）として記載されているものである。
本発明をこれら文献に記載されたアルキル化されたグリコペプチドを製造するために利用することができる。本製造方法により製造し得る好ましいアルキル化されたグリコペプチドには、以下のものが含まれる：
Ｎ4−ｎ−オクチルＡ８２８４６Ｂ
Ｎ4−ｎ−デシルＡ８２８４６Ｂ
Ｎ4−ベンジルＡ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−クロロベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−ブロモベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−プロピルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−イソプロピルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−ブチルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−イソブチルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−ペンチルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−イソヘキシルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−オクチルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−プロポキシベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−イソプロポキシベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−ブトキシベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−tert-ブトキシベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−ペンチルオキシベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−ヘキシルオキシベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｏ−ヘキシルオキシベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−ヘプチルオキシベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（ｐ−オクチルオキシベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−フェネチルＡ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（４−フェニルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジルＡ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（４−（４−メチルベンジルオキシ）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（４−（４−エチルベンジルオキシ）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（４−（４−クロロフェネチル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂ
Ｎ4−（４−（２−（４−メトキシフェニル）エチニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂ。
上記の文献は、第１の工程においてグリコペプチドがそれぞれのアルデヒドまたはケトンと反応してシッフ塩基を形成し、それが第２の工程において所望のアルキル化された生成物に還元される還元的アルキル化を記載している。この製造方法の１つの変法において、ＥＰＯ ６６７ ３５３ Ａ１は、還元剤を、グリコペプチドおよびアルデヒドまたはケトンと同時に加える製造方法を記載している。この文献は、いずれかの化学的還元剤が使用できると述べているが、シアノホウ水素化ナトリウムが好ましいことも示唆している。
本質的にすべてのグリコペプチドは、複数の反応部位を含んでいる。これらの複数の部位の取り扱いが、一律に有利であるわけではない。グリコペプチドを領域選択的に反応させて複数の部位部位の１つのみにおいて反応が起こるようにすることが時として望ましい。このことは、グリコペプチドの還元的アルキル化の場合においても同じことがいえる。この例がＡ８２８４６Ｂである。ロイシンアミン（Ｎ1）および／またはモノサッカライド（Ｎ6）においてアルキル化された誘導体は抗菌剤として活性であるが、Ｎ4（ジサッカライド）アミンのアルキル化が好ましいようである。薬学的な実施には、比較的純粋な形態が必要であり、したがって高純度のＮ4−アルキル化生成物を達成するためにＮ4部位の優先的な反応が好ましい。
本発明は、グリコペプチド抗生物質のＮ4位のサッカライドのアミンにおいて優先的な反応を行うための技術を提供する。バンコマイシン、Ａ８２８４６Ａ、Ａ８２８４６Ｂ、Ａ８２８４６ＣおよびオリエンチシンＡの場合において、本製造方法は、Ｎ1およびＮ6の部位における反応性を減少させ、それによってＮ4（ジサッカライド）部位に対する反応の選択性を増加させる。本発明は、グリコペプチドの可溶性銅複合体を最初に製造することを必要とし、後にその複合体は還元的にアルキル化される。可溶性銅複合体は、グリコペプチド抗生物質と銅を反応させることによって、典型的には可溶性の銅の供給源をグリコペプチド抗生物質を含む反応混合物に加えることにより、形成させる。銅の供給源の種類は、少なくとも部分的に可溶性でありpＨに悪影響を与えない限りは厳密なものではない。このような銅の塩は、無水物または水和物の形態で使用することができる。銅の好ましい供給源は酢酸銅（ＩＩ）であり、水和物として最も便利に使用される。
銅を反応混合物に加えると、出発物質グリコペプチド抗生物質との銅複合体の最初の生成が、典型的には１：１の比で起こる。出発物質グリコペプチド抗生物質のこの銅複合体は、本発明の特徴のうちの１つである。
本発明において使用する還元剤は、シアノホウ水素化ナトリウムまたはピリジン−ボラン複合体である。
溶媒の種類は重要である。純メタノールにより高い収率が得られており、ＤＭＦまたはＤＭＳＯで若干希釈したメタノールは許容し得る収率を与えるうであろうと予想される。他の溶媒では満足のゆく結果が得られていない。したがって、反応溶媒はメタノールを少なくとも主体とする。
反応は、pＨ６〜８、好ましくはpＨ６.３〜７.０で行う。
使用する反応物および試薬の量は厳密なものではない；生成物の収率を最大にする量は、反応物の種類で幾分変わるであろう。反応によって、グリコペプチド抗生物質とアルデヒドまたはケトンが等しい量で消費される。やや過剰のアルデヒドまたはケトン、例えば１.３〜１.７：１が好ましい。使用するグリコペプチド抗生物質の量は、その純度について補正しなければならない。反応によって、等モル量の還元剤が消費される。少なくともそのような量を使用すべきであり、やや過剰な量が好ましい。可溶性の銅の量は、還元剤としてシアノホウ水素化ナトリウムを使用する場合は厳密なものではない。ピリジン−ボランを還元剤として使用する場合は、過剰の銅がピリジン−ボランと反応するため、使用する可溶性銅の量がより重要になる。還元剤の種類に関係なく、本製造方法によりグリコペプチド抗生物質との１：１の複合体の形成が最初に起こるので、銅は、好ましくはグリコペプチド抗生物質と大体等モルで存在させる。１モル当量を超える量（ピリジン−ボランの場合）または２モル当量を超える量（シアノホウ水素化ナトリウムの場合）は望ましくない。
以上を要約すると、使用する理想的な量は、
グリコペプチド：アルデヒドまたはケトン：還元剤：銅塩の比は、ピリジン−ボラン複合体を還元剤として使用する場合を除き、１：１.３〜１.５：１.３：１であり、好ましい比は、１：１.３〜１.７：１.５：０.９〜１.０である。
溶媒中の反応物の濃度は、製造方法にいくらか関係する。グリコペプチド抗生物質の質量に対するメタノールの体積は５０：１〜５００：１の間で変更することができる。より高い希釈率によってやや高い収率が得られるかもしれないが、１００：１の希釈が有用で実際的な比であるようである。製造過程が実行される温度は厳密なものではない。メタノール中の反応混合物は約６７℃で沸騰し、これにより、溶媒として純メタノールを使用した場合の最高温度が決まる。勿論、メタノールの混合物を使用する場合または加圧下で操作する場合にはより高い温度が可能である。より低い温度も許容し得るが、約４５℃より低い温度は好ましくない。還元剤としてのシアノホウ水素化ナトリウムに理想的な条件は、純メタノールの使用と還流温度で反応を行うことである；還元剤としてのピリジン−ボランに理想的な条件もまた、純メタノールを使用であるが、温度は約５８〜６３℃である。
若干の生成物は、短い反応時間でも生じる。６時間〜４８時間のようなより長い反応時間が好ましい。但し、理想的な反応時間は、約２０〜２５時間であろう。より長い時間は、グリコペプチド抗生物質の望ましくない部位がアルキル化された生成物の収率を増大させるかもしれない。
本発明の実行においては、グリコペプチド抗生物質と銅を溶媒中で好ましく混合し、グリコペプチドの可溶性銅複合体を作製し、次いでアルデヒドおよび還元剤を加える。しかし、添加の順序は厳密でなくてよい。還元剤を少量ずつ添加するのが好ましく、ピリジン−ボラン複合体を還元剤として使用する場合では良好な結果を得るために必要である。一定時間反応を続け、その後生成物が生じてこれを反応混合物から分離することができる。
反応時間が完了したら、ホウ水素化ナトリウムを加えるなどして反応混合物を好ましくクエンチする。この試薬は残留したアルデヒドまたはケトンを消費し、それにより更なる望ましくない反応を阻止する。
生成物をアルキル化されたグリコペプチドの銅複合体として反応混合物から単離する。反応混合物の濃縮と、非溶媒例えば酢酸エチル、アセトン、１−プロパノール、イソプロピルアルコール、または好ましくはアセトニトリルなどの添加による複合体の沈殿により単離を達成する。pＨ2４での水溶液での処理により複合体は分解し、単体のアルキル化されたグリコペプチド生成物が遊離し、所望ならば、慣用の方法でそれを精製することができる。
以下の実施例は本発明を説明するものであって、当業者が同じことを実践することを可能にするであろう。
参考例Ａ（銅不在）
Ａ８２８４６Ｂ（６.０ｇ，７６.５％力価，４.５９ｂｇ，２.８８mmol）、４’−クロロ−４−ビフェニルカルボキシアルデヒド（０.８６ｇ，３.９７mmol）、およびシアノホウ水素化ナトリウム（８４ｍg，１.３４mmol）を６００ｍLのメタノールに加え、溶液を還流温度に３時間加熱した。シアノホウ水素化ナトリウム（８４ｍg，１.３４mmol）をさらに加え、混合物を還流温度でさらに３時間加熱した。最後にシアノホウ水素化ナトリウム（８４ｍg，１.３４mmol）を加え、還流温度でさらに１７時間加熱を続けた。無色透明な溶液を室温に冷却し、ロータリーエバポレーターで１３０ｍLに濃縮した。２時間かけて２００ｍLのイソプロピルアルコールを添加することにより生成物を沈殿させた。０℃に冷却し１時間撹拌した後、濾過によりＮ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂを白色の固体（５.６１ｇ，４９.３％力価，２.７７ｂｇ，５３.７％）として得た。
実施例１
Ａ８２８４６Ｂ（０.５０ｇ，７６.３％力価，０.３８ｂｇ，０.２４mmol）、４’−クロロ−４−ビフェニルカルボキシアルデヒド（７０ｍg，０.３２mmol）、および酢酸銅（ＩＩ）一水和物（５１ｍg，０.２６mmol）を５０ｍLのメタノール中で撹拌した。シアノホウ水素化ナトリウム（２０ｍg，０.３２mmol）を加え、溶液を還流温度に２３時間加熱した。透明な紫色の溶液を室温に冷却し、１４Ｍ水素化ナトリウム水溶液中の１２％ホウ水素化ナトリウム（０.０３ｍL，０.１４mmol）を加えた。酢酸を１滴加えて溶液のpＨを７.３に調整した。１４Ｍ水素化ナトリウム水溶液中の１２％ホウ水素化ナトリウム（０.２３ｍL，０.１０mmol）をさらに加えた後、酢酸を１滴加えて溶液のpＨを７.３に維持した。混合物を室温で１時間撹拌し、ロータリーエバポレーターで１２ｍLに濃縮した。２５ｍLのアセトにトリルを２０分間かけて添加することにより生成物を沈殿させた。室温で２０分間撹拌した後、濾過によりＮ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂの銅複合体（０.５８ｇ，５９.５％力価，０.３５ｂｇ，８０.３％）を紫色の固体として得た。
実施例２
Ａ８２８４６Ｂ（６.０ｇ，７８.４％力価，４.７ｂｇ，２.９５mmol）を６００ｍLのメタノール中で撹拌し、酢酸銅（ＩＩ）（０.６６ｇ，３.６mmol）を加えた。室温で１５分間撹拌した後、４’−クロロ−４−ビフェニルカルボキシアルデヒド（０.９５ｇ，４.４mmol）、シアノホウ水素化ナトリウム（０.２７ｇ，４.３mmol）を加え、混合物を還流温度に２４時間撹拌した。室温に冷却した後、反応アリコートのＨＰＬＣ分析により、Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂの４.５２ｇ（８５.４％）の収率を得た。
実施例３
Ａ８２８４６Ｂ（２.５ｇ，７８.５％力価，１.９６ｂｇ，１.２３mmol）を２５０ｍLのメタノール中で撹拌し、酢酸銅（ＩＩ）一水和物（０.２６ｇ，１.３２mmol）を加えた。室温で１０分間撹拌した後、４’−クロロ−４−ビフェルカルボキシアルデヒド（０.３５ｇ，１.６mmol）、およびシアノホウ水素化ナトリウム（３４ｍg，０.５４mmol）を加え、混合物を還流温度に３時間加熱した。シアノホウ水素化ナトリウム（３４ｍg，０.５４mmol）をさらに加え、混合物を還流温度にさらに３時間加熱した。最後にシアノホウ水素化ナトリウム（３４ｍg，０.５４mmol）を加え、還流温度で加熱をさらに１７時間続けた。混合物を室温に冷却し、１４Ｍ水素化ナトリウム水溶液中の１２％ホウ水素化ナトリウム（０.１４ｍL，０.６３mmol）を加えた。酢酸を２、３滴加えて溶液のpＨを７.３に調整した。１４Ｍ水素化ナトリウム水溶液中の１２％ホウ水素化ナトリウム（０.１３ｍL，０.６mmol）をさらに加え、酢酸を２、３滴加えて溶液のpＨを８.１に調整した。室温で２時間撹拌した後、ロータリーエバポレーターで反応混合物を６０ｍLに濃縮した。イソプロピルアルコール（１７５ｍL）を１時間かけて滴加し、Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂの銅複合体を沈殿させた。濾過により複合体を紫色の固体として得た（ウェットケーキとして６.５０ｇ，２６.９％力価，１.７５ｂｇ，７９.１％）。
実施例４
Ａ８２８４６Ｂ（２.５ｇ，７８.５％力価，１.９６ｂｇ，１.２３mmol）を２５０ｍLのメタノール中で撹拌し、酢酸銅（ＩＩ）一水和物（０.２６ｇ，１.３２mmol）を加えた。室温で１０分間撹拌した後、４’−クロロ−４−ビフェルカルボキシアルデヒド（０.３５ｇ，１.６mmol）、およびシアノホウ水素化ナトリウム（３４ｍg，０.５４mmol）を加え、混合物を還流温度に３時間撹拌した。シアノホウ水素化ナトリウム（３４ｍg，０.５４mmol）をさらに加え、混合物を還流温度にさらに３時間加熱した。最後にシアノホウ水素化ナトリウム（３４ｍg，０.５４mmol）を加え、還流温度にさらに１７時間加熱を続けた。混合物を室温に冷却し、１４Ｍ水素化ナトリウム水溶液中の１２％ホウ水素化ナトリウム（０.１４ｍL，０.６３mmol）を加えた。酢酸を２、３滴加えて溶液のpＨを７.３に調整した。１４Ｍ水素化ナトリウム水溶液中の１２％ホウ水素化ナトリウム（０.１３ｍL，０.６mmol）をさらに加え、酢酸を２、３滴加えて溶液のpＨを８.２に調整した。室温で１.５時間撹拌した後、ロータリーエバポレーターで反応混合物を６０ｍLに濃縮した。イソプロピルアルコール（１７５ｍL）を１時間かけて滴加して生成物を沈殿させた。濾過および真空乾燥して、Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂの銅複合体を紫色の固体として得た（２.５６ｇ，６２.９％力価，１.６１ｂｇ，７２.９％）。
実施例５
Ａ８２８４６Ｂ（６.０ｇ，７６.１％力価，４.５６ｂｇ，２.９mmol）を６００ｍLのメタノール中で撹拌し、酢酸銅（ＩＩ）一水和物（０.６３ｇ，３.１５mmol）を加えた。室温で１５分間撹拌した後、４’−クロロ−４−ビフェルカルボキシアルデヒド（０.８５ｇ，３.９mmol）、およびシアノホウ水素化ナトリウム（８４ｍg，１.３mmol）を加え、混合物を還流温度に３時間加熱した。シアノホウ水素化ナトリウム（８４ｍg，１.３mmol）をさらに加え、混合物を還流温度にさらに３時間加熱した。最後にシアノホウ水素化ナトリウム（８４ｍg，１.３mmol）を加え、還流温度でさらに１６時間加熱を続けた。混合物を室温に冷却し、５０％水素化ナトリウム水溶液を加えて反応混合物のpＨを７.６に調整した。ホウ水素化ナトリウム（０.１１ｇ，２.９mmol）を加え、溶液を室温で３.５時間撹拌した。ロータリーエバポレーターで反応混合物を１１０ｍLに濃縮し、イソプロピルアルコール（２５０ｍL）を４時間かけて滴加し、生成物を沈殿させた。紫色のスラリーを０℃に１時間冷却した後、濾過によりＮ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂの紫色の複合体（ウェットケーキとして１１.０３ｇ，３６.２％力価，３.９９ｂｇ，７７.６％）を得た。
参考例Ｂ（銅不在）
Ａ８２８４６Ｂ（０.５０ｇ，８４.３％力価，０.４２ｂｇ，０.２６mmol）を５０ｍLのメタノール中で撹拌し、４’−クロロ ４−ビフェルカルボキシアルデヒド（７２ｍg，０.３３mmol）およびピリジン−ボラン複合体（０.０３３ｍL，０.３３mmol）を加えた。混合物を還流温度で６時間加熱した後、室温に冷却した。反応アリコートのＨＰＬＣ分析により、Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂの０.２５ｇ（５３.２％）の収率を得た。
実施例６
Ａ８２８４６Ｂ（０.５０ｇ，８４.３％力価，０.４２ｂｇ，０.２６mmol）を５０ｍLのメタノール中で撹拌し、酢酸銅（ＩＩ）（４５ｍg，０.２５mmol）を加えた。室温で１０分間撹拌した後、４’−クロロ ４−ビフェルカルボキシアルデヒド（８４ｍg，０.３９mmol）およびピリジン−ボラン複合体（０.０３９ｍL，０.３９mmol）を加えた。混合物を５７℃で２４時間加熱した後、室温に冷却した。反応アリコートのＨＰＬＣ分析により、Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂの０.３４ｇ（７２.３％）の収率を得た。
実施例７
Ａ８２８４６Ｂ（０.５０ｇ，７６.３％力価，０.３８ｂｇ，０.２４mmol）および酢酸銅（ＩＩ）（４３ｍg，０.２１６mmol）を５０ｍLのメタノール中で撹拌し、４’−クロロ−４−ビフェルカルボキシアルデヒド（８４.５ｍg，０.３９mmol）およびピリジン−ボラン複合体（０.０１１ｍL，０.１１mmol）を加えた。混合物を６３℃で２時間加熱した後、ピリジン−ボラン（０.０１ｍL，０.１mmol）をさらに加えた。６３℃でさらに２時間後、３度目のピリジン−ボラン（０.００５ｍL，０.０５mmol）を加えた。２時間後に４度目のピリジン−ボラン（０.００５ｍL，０.０５mmol）を加えた後、６３℃でさらに５時間後、５度目のピリジン−ボラン（０.００５ｍL，０.０５mmol）を加えた。混合物を６３℃でさらに１１時間加熱した後室温に冷却した。反応アリコートのＨＰＬＣ分析により、Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂを０.３４ｇ（７９.２％）の収率で得た。
参考例ＡおよびＢおよび実施例１〜７で報告した反応を、（１）残存している出発物質のグリコペプチドの量、（２）Ｎ4−位以外のアミン部位でアルキル化された生成物の量、および（３）複数がアルキル化された生成物の量についても調べた。結果を以下の表に示し、Ｎ4−アミンでモノアルキル化された目的の生成物に対する百分率として示し；目的の生成物の収率は上記実施例において引用した実際の収率である。
0004308912.tif 000015
これらのデータは、本発明がいくつかの利点をもたらすことを示している。第１に、Ｎ4−でアルキル化された生成物の収率が増加している。第２にＮ1および／またはＮ6でアルキル化された生成物の収率が減少している。したがって、本発明は反応の領域選択性における有意の改良をもたらしている。
実施例８
Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂ銅複合体
Ａ８２８４６Ｂ（０.５０ｇ，７５.６〜７８.８％力価，０.２４〜０.２５mmol）を５０ｍLのメタノール中で撹拌し、酢酸銅（ＩＩ）（５３〜５６ｍg，０.２９〜０.３１mmol）、次いで４’−クロロ−４−ビフェルカルボキシアルデヒド（７０〜７３ｍg，０.３２〜０.３４mmol）およびシアノホウ水素化ナトリウム（２０〜２２ｍg，０.３２〜０.３５mmol）を加えた。反応混合物を還流温度で２４時間加熱し、室温に冷却した。１Ｍ ＮaＯＨ溶液の添加によりpＨを９.０〜９.３に調整した。ロータリーエバポレーターで反応混合物を１０〜２０ｍLに濃縮し、イソプロピルアルコール（１３〜２０ｍL）を滴加して紫色のグリコペプチド銅複合体を沈殿させて、吸引濾過により単離した。６０℃で真空乾燥し、グリコペプチド銅複合体を紫色の粉末として得た。この製造過程を４回反復した後、集めたグリコペプチド複合体を銅含量について分析し、３.０％の銅を含むことが分かり、Ｎ4−（４−（４−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂとの１：１の銅複合体であることを確認した。
参考例Ｃおよび実施例９〜１９
様々な銅塩を標準的な方法で評価した。
Ａ８２８４６Ｂ（力価を調整した遊離塩基として１当量）を５０ｍLのメタノール中で撹拌し、２価金属塩（ＭＸ２、０.６３当量）または１価の金属塩（ＭＸ、１.２５当量）を加え、次いで４’−クロロ−４−ビフェルカルボキシアルデヒド（１.２５当量）およびシアノホウ水素化ナトリウム（１.２５当量）を加えた。混合物を還流温度で２４時間加熱した。室温に冷却した後、アリコートをＨＰＬＣ分析のために取り出した。
以下のＨＰＬＣシステムをin situ反応モニタリングと収率の計算に使用した：２３０ｎｍ、感度０.１吸光度単位、フィルターライズタイム１秒間に設定した、ＨＰ３３９５積分装置とApplied Biosystems ７５７検出器を取りつけたＨＰＬＣシステムWaters 600E。カラム：DuPont Zorbax SB-フェニル、４.６ｍｍ×２５ｃｍ。溶出液Ａ：１０％アセトニトリル、９０％緩衝液（０.２％トリエチルアミン、０.２５％Ｈ3ＰＯ4）。溶出液Ｂ：６０％アセトニトリル、４０％緩衝液（０.２％トリエチルアミン、０.２５％Ｈ3ＰＯ4）。１ｍL／分でのグラジェントプロファイル：初期設定１００％Ａ、８０％Ａ、２０％Ｂまでの５分間のグラジェント、５分間維持、１００％Ｂまでの２０分間のグラジェント、１００％Ａまでの５分間のグラジェント、２０分間維持。試料調製：０.５〜１.０ｇの反応混合物をアセトニトリル−緩衝液中で２５ｍLに希釈。銅複合体の紫色が消えるまで約３０分間室温に維持する。所望のグリコペプチドアルキル化生成物が１６〜１８分、出発物質のグリコペプチド核が３〜４分、Ｎ6（単糖）アルキル化生成物が１８〜１９分、Ｎ1（メチルロイシン）アルキル化生成物が１９〜２１分、ジアルキル化不純物が２４〜２６分、およびアルデヒドが３５〜３６分で溶出する。生成物の参照試料で調製された標準との比較によりin situ収率を決定した。
結果を以下の表に示す。アルキル化された副生成物の結果は、所望のＮ4アルキル化生成物に対する百分率として表した。
0004308912.tif 000016
同じ銅塩をさらに、それらのメタノール中での溶解性とそれらの存在下での出発物質グリコペプチド抗生物質の溶解性について調べた。方法は以下の通りであった：銅塩（０.１６５mmol）を５０ｍLのメタノールに加え、室温で１５分間撹拌した。溶解性のデータをpＨと共に記録した。グリコペプチド核（０.５５ｇ，７４.７％力価，０.４１ｂｇ，０.２６mmol）を加え、撹拌を１５分間続けた。溶解性とpＨを記録した。
0004308912.tif 000017
以下の実施例は、本発明のいくつかの態様を説明するものである。第１に、銅は、少なくとも部分的に可溶な形態で反応混合物に供給されねばならない。メタノールにほとんど溶けないＣuＦ2およびＣu（ＯＨ）2などの銅塩は、有効でない。さらに、銅塩は、好ましくは出発物質グリコペプチド抗生物質の完全な溶解を可能にすべきである。最も良好に作用する塩（Ｃu（ＯＡc）2、Ｃu（シクロヘキサンブチレート）2、およびＣu（２−エチルヘキサノエート）2）は、核の完全な溶解をもたらし、pＨ約６.７の核の溶液が得られる。添加しないよりかは改良をもたらすが最適ではない塩（Ｃu（Ｏ2ＣＣＦ3）2、ＣuＣl2、ＣuＢr2）は、核の溶解性はもたらすがpＨが至適pＨよりも低い（ＣuＢr2およびＣu（Ｏ2ＣＣＦ3）2）か、または至適pＨであるが完全な核の溶解性が得られない（ＣuＣl2）かのどちらかである。
要約すると、銅は、少なくとも部分的に可溶な形態でなければならず、許容し得るpＨ、典型的には６.３〜７で出発物質グリコペプチド抗生物質の完全な溶解性を可能にするまたは維持するものである。また、これらの実験を最適量に近い量の銅で行った。より高い銅濃度で本発明の利点がさらに得られる。
参考例Ｄ（銅不在）および実施例２０
グリコペプチド抗生物質Ａ８２８４６Ａとの２つの反応を行った。１つは銅なしで（参考例Ｄ）、もう１つは酢酸銅（ＩＩ）一水和物で行った。アルデヒドは、４’−クロロ−４−ビフェルカルボキシアルデヒドであった。反応は、本質的に上記実施例で報告したのと同じ方法で行った。結果は以下の表に記載した通りであった：
0004308912.tif 000018
実施例２１
Ａ８２８４６Ｂ銅複合体
Ａ８２８４６Ｂ（３.０ｇ，７８.７％力価，２.４ｂｇ，１.５mmol）を３００ｍLのメタノール中、室温で撹拌し、酢酸銅（ＩＩ）一水和物（０.３１ｇ，１.６mmol）を加えた。室温で２０分間撹拌した後、紫色の混合物を３５〜４０℃に加熱し、さらに３０分間撹拌した。ロータリーエバポレーターで溶液を４５ｍLに濃縮し、イソプロピルアルコール１００ｍLを２時間かけて滴加した。スラリーを０℃に冷却し、濾過した。３５℃で真空乾燥してＡ８２４８４６Ｂ銅複合体２.６ｇを紫色の固体として得た。質量分析は、Ａ８２８４６Ｂの参照試料の分析ではみられなかった１６５３あたりの一連のピークを含むその複合体について予想されたイオンを示し、Ａ８２８４６Ｂ−銅複合体を示した。
Ａ８２８４６Ｂ銅複合体の別の試料を同様にして調製し、ＵＶ−可視分光法によって分析し、Ａ８２８４６Ｂの参照標準または酢酸銅（ＩＩ）のスペクトルにはみられなかった約５４０ｍｍでの最大吸収を示し、Ａ８２８４６Ｂ銅複合体を示した。