(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉの化合物または該化合物の医薬的に許容される塩。
【化１】
0004368524.tif 000015
［式中、
−ＡＲは
【化２】
0004368524.tif 000016
からなる群から選択され；
Ｘは、
（ａ）ＣＲ３Ｒ４、
（ｂ）Ｏ、
（ｃ）Ｓ
からなる群から選択され；
Ｒ１はＣＨ３であり；
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル、
（ｃ）Ｃ１−６アルコキシ、
（ｄ）Ｃ１−６アルキルチオ、
（ｅ）Ｃ１−６フルオロアルキル、
（ｆ）Ｃ１−６フルオロアルコキシ、
（ｇ）ＣＮ、
（ｈ）−ＣＯ２Ｒ６、
（ｉ）−Ｃ（Ｒ７）（Ｒ８）−ＯＨ、
（ｊ）−Ｃ１−６アルキル−ＣＯ２−Ｒ９、
（ｋ）ハロゲン、
（ｌ）水酸基、
（ｍ）Ｎ３、
（ｍ）ＮＯ２、
（ｎ）ＮＲ１０Ｒ１１、
（ｏ）ＮＨＣＯＲ１２
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立に、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル
（ｃ）（ＣＨ２）ｐＯＲ５、
（ｄ）Ｆ
からなる群から選択されるか；あるいは
Ｒ３とＲ４が一緒になって＝Ｏであり；
Ｒ５は
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル
（ｃ）Ｃ１−５アシル
からなる群から選択され
Ｒ６〜Ｒ１２は独立に、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル
からなる群から選択され；
ｐは０、１、２である。］
【請求項２】
Ｒ１がＣＨ３である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２がハロゲンまたはＣ１−６フルオロアルキルである請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＸがＣＲ３Ｒ４である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル、
（ｃ）Ｃ１−６アルコキシ、
（ｄ）Ｃ１−６アルキルチオ、
（ｅ）Ｃ１−６フルオロアルキル、
（ｆ）ＣＮ、
（ｇ）ハロゲン、
（ｈ）水酸基
からなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ａｒが
【化３】
0004368524.tif 000017
から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
−ＡＲが
【化４】
0004368524.tif 000018
からなる群から選択され；
Ｘが、
（ａ）ＣＲ３Ｒ４
からなる群から選択され；
Ｒ１がＣＨ３であり；
Ｒ２が、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−４アルキル、
（ｃ）Ｃ１−４アルコキシ、
（ｄ）Ｃ１−４アルキルチオ、
（ｅ）Ｃ１−４フルオロアルキル、
（ｆ）ＣＮ、
（ｇ）ハロゲン、
（ｈ）水酸基
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４が独立に、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−４アルキル
（ｃ）（ＣＨ２）ｐＯＲ５、
（ｄ）Ｆ
からなる群から選択されるか；あるいは
Ｒ３とＲ４が一緒になって＝Ｏであり；
Ｒ５が
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル
（ｃ）Ｃ１−５アシル
からなる群から選択され
ｐが０、１、２である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
−ＡＲが
【化５】
0004368524.tif 000019
からなる群から選択され；
Ｘが、
（ａ）ＣＲ３Ｒ４
からなる群から選択され；
Ｒ１がＣＨ３であり；
Ｒ２がＣ１−４フルオロアルキルであり；
Ｒ３およびＲ４が独立に、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−３アルキル
（ｃ）（ＣＨ２）ｐＯＲ５、
（ｄ）Ｆ
からなる群から選択されるか；あるいは
Ｒ３とＲ４が一緒になって＝Ｏであり；
Ｒ５が
（ａ）水素、
（ｂ）メチルもしくはエチル
からなる群から選択され
ｐが０または１である請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
（１）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（３）５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イルピリジン；
（４）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イルピリジン；
（５）２−（ホモピペリジン−１−イル）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（６）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（７）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（８）５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イルピリジン；
（９）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−メトキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１０）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−アセトキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１１）５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−メトキシメチル）ピロリジン−１−イルピリジン；
（１２）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（２−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１３）（−）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１４）（＋）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１５）５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イルピリジン；
（１６）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル−３−メチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１７）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ホモピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１８）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（２−（２−ヒドロキシエチル））ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１９）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２０）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２１）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２２）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２３）２−（４，４−ジフルオロ）ピペリジン−１−イル−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２４）２−（３，３−ジフルオロ）ピペリジン−１−イル−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２５）２−（４−フルオロ）ピペリジン−１−イル−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２６）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−モルホリン−４−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２７）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−チオモルホリン−４−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
からなる群から選択される化合物。
【請求項１０】
非ステロイド系抗炎症薬による治療に対して感受性の炎症疾患を治療するための医薬組成物であって、
無毒性で治療上有効量の請求項１、２、３、４、５、６、７または８に記載の化合物および医薬的に許容される担体を含有する組成物。
【請求項１１】
ＣＯＸ−１に優先してＣＯＸ−２を選択的に阻害する活性薬剤によって効果的に治療されるシクロオキシゲナーゼ介在疾患治療のための医薬組成物であって、
無毒性で治療上有効量の請求項１、２、３、４、５、６、７または８に記載の化合物および医薬的に許容される担体を含有する組成物。
【請求項１２】
請求項１、２、３、４、５、６、７、８または９に記載の化合物および医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項１３】
非ステロイド系抗炎症薬による治療に対して感受性を有する炎症疾患の治療用の医薬品製造における、請求項１、２、３、４、５、６、７、８または９に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
治療に用いられる請求項１、２、３、４、５、６、７、８または９に記載の化合物。
【請求項１５】
医薬的に許容される担体とともに、抗炎症的に有効量の請求項９に記載の化合物を含有する抗炎症医薬組成物。
【請求項１６】
医薬的に許容される担体とともに、ＣＯＸ−２選択的阻害に有効な量の請求項９に記載の化合物を含有する、ＣＯＸ−１と比較してＣＯＸ−２選択的阻害性である医薬組成物。
【請求項１７】
非ステロイド系抗炎症薬による治療に感受性を有する炎症疾患の治療に用いられる、請求項１ないし８のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物または該化合物の医薬的に許容される塩。
【請求項１８】
シクロオキシゲナーゼ介在疾患の治療に用いられる、請求項９に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、シクロオキシゲナーゼ介在疾患の治療方法および該治療のためのある種の医薬組成物に関するものである。
【０００２】
（背景技術）
非ステロイド系抗炎症薬は、シクロオキシゲナーゼとも呼ばれるプロスタグランジンＧ／Ｈシンターゼの阻害によって、それの抗炎症活性、鎮痛活性および解熱活性のほとんどを行い、ホルモン誘発子宮収縮およびある種の癌成長を阻害する。当初は、１種類のシクロオキシゲナーゼのみが知られており、それはシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）すなわちウシ精嚢で最初に確認された構成酵素に相当する。最近になって、第２の誘導可能な形のシクロオキシゲナーゼであるシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の遺伝子が、ニワトリ、マウスおよびヒトの取得源からクローニング、配列決定および特性決定された。その酵素は、ヒツジ、マウスおよびヒトなどの各種取得源からクローニング、配列決定および特性決定されたＣＯＸ−１とは異なったものである。第２の形のシクロオキシゲナーゼであるＣＯＸ−２は、分裂促進剤類、エンドトキシン、ホルモン類、サイトカイン類および成長因子類などの多くの作用物質によって急速かつ容易に誘発することができる。プロスタグランジン類は生理的役割および病理上の役割の両方を有することから、構成酵素ＣＯＸ−１がかなりの割合で、プロスタグランジン類の内因性での基本的放出を受け持ち、従って消化管系の保全性および腎臓血流の維持などの生理機能において重要であるという結論に本発明者らは到達した。それとは対照的に、誘導可能な形であるＣＯＸ−２は、催炎物質、ホルモン類、生長因子およびサイトカイン類などの物質に対する応答で、酵素の急速な誘発を起こすと考えられるプロスタグランジンの病理効果を主として受け持つという結論を本発明者らは得ている。そこで、ＣＯＸ−２の選択的阻害薬は、従来の非ステロイド系抗炎症薬と同様の抗炎症性、解熱性および鎮痛性を有するであろうし、さらには、ホルモン誘発子宮収縮を阻害し、抗癌効果を有する可能性があると考えられるが、その機序に基づく副作用の一部を誘発する能力は低くなるであろう。特に、そのような化合物では、消化管毒性の可能性が低下し、腎臓での副作用の可能性が低下し、出血回数の低減効果があり、恐らくはアスピリン感受性の喘息患者における喘息発作誘発能の低下があるはずである。
【０００３】
さらに、そのような化合物は、収縮性プロスタノイドの合成を防止することでプロスタノイド誘発平滑筋収縮も阻害し、従って、月経困難症、早産、喘息および好酸球関連障害の治療に使用することができる。その化合物はさらに、アルツハイマー病の治療、特に閉経後女性における骨損失の低減（すなわち、骨粗鬆症の治療）および緑内症治療において有用でもある。
【０００４】
シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬の可能な用途についての概説が、以下の論文で考察されている。
【０００５】
１．John Vane, “Towards a better aspirin” in Nature, Vo1. 367, pp. 215-216, 1994：
２．Bruno Battistini, Regina Botting and Y.S. Bakhle, “COX-1 and COX-2: Toward the Development of More Selective NSAIDs” in Drug News and Perspectives, Vo1. 7, pp. 501-512, 1994；
３．David B. Reitz and Karen Seibert, “Selective Cyclooxygenase Inhibitors” in Annual Reports in Medicinal Chemistry, James A.Bristol, Editor, Vo1. 30, pp. 179-188, 1995；
４．Don E. Griswold and Jerry L. Adams, “Constitutive Cyclooxygenase (COX-1) and Inducible Cyclooxygenase (COX-2): Rationale for Selective Inhibition and Progress to Date” in Medicinal Research Reviews, Vo1. 16, pp. 181-206, 1996。
【０００６】
（発明の開示）
本発明は、下記式Ｉの新規化合物、ならびにシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療方法であって、そのような治療を必要とする患者に対して、無毒性で治療上有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を有する方法を包含するものである。
【０００７】
【化６】
0004368524.tif 000002
本発明はさらに、シクロオキシゲナーゼ−２介在疾患治療用のある種の医薬組成物であって、式Ｉの化合物を含有する組成物をも包含するものである。
【０００８】
（発明を実施するための最良の形態）
本発明は、下記式Ｉの新規化合物または該化合物の医薬的に許容される塩、ならびにシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療方法であって、そのような治療を必要とする患者に対して、無毒性で治療上有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を有する方法を包含するものである。
【０００９】
【化７】
0004368524.tif 000003
【００１０】
式中、
−ＡＲは
【００１１】
【化８】
0004368524.tif 000004
【００１２】
からなる群から選択され；
Ｘは、
（ａ）ＣＲ３Ｒ４、
（ｂ）Ｏ、
（ｃ）Ｓ
からなる群から選択され；
Ｒ１は、
（ａ）ＣＨ３、
（ｂ）ＮＨ２、
（ｃ）ＮＨＣ（Ｏ）ＣＦ３
からなる群から選択され；
Ｒ２は、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル、
（ｃ）Ｃ１−６アルコキシ、
（ｄ）Ｃ１−６アルキルチオ、
（ｅ）Ｃ１−６フルオロアルキル、
（ｆ）Ｃ１−６フルオロアルコキシ、
（ｇ）ＣＮ、
（ｈ）−ＣＯ２Ｒ６、
（ｉ）−Ｃ（Ｒ７）（Ｒ８）−ＯＨ、
（ｊ）−Ｃ１−６アルキル−ＣＯ２−Ｒ９、
（ｋ）ハロゲン、
（ｌ）水酸基、
（ｍ）Ｎ３、
（ｍ）ＮＯ２、
（ｎ）ＮＲ１０Ｒ１１、
（ｏ）ＮＨＣＯＲ１２
からなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は独立に、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル
（ｃ）（ＣＨ２）ｐＯＲ５、
（ｄ）Ｆ
からなる群から選択されるか；あるいは
Ｒ３とＲ４が共にＯであり；
Ｒ５は
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル
（ｃ）Ｃ１−５アシル
からなる群から選択され
Ｒ６〜Ｒ１２は独立に、
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ１−６アルキル
からなる群から選択され；
ｐは０、１、２である。
【００１３】
本発明のある好ましい実施態様は、Ｒ１がＣＨ３のものである。
【００１４】
本発明の別の好ましい実施態様は、Ｒ２がハロゲンまたはＣ１−６フルオロアルキルのものである。
【００１５】
本発明の別の好ましい実施態様は、ＸがＣＲ３Ｒ４のものである。
【００１６】
別の態様において、本発明はさらに、非ステロイド系抗炎症薬による治療に対して感受性を有する炎症疾患を治療するための医薬組成物であって、
無毒性で治療上有効量の式Ｉの化合物および医薬的に許容される担体を含有する組成物をも含むものである。
【００１７】
別の態様において、本発明はさらに、ＣＯＸ−１に優先してＣＯＸ−２を選択的に阻害する活性薬剤によって効果的に治療されるシクロオキシゲナーゼ介在疾患治療のための医薬組成物であって、
無毒性で治療上有効量の式Ｉの化合物および医薬的に許容される担体を含有する組成物をも含むものである。
【００１８】
別の態様において、本発明はさらに、非ステロイド系抗炎症薬による治療に対して感受性を有する炎症疾患を治療する方法であって、
そのような治療を必要とする患者に対して、無毒性で治療上有効量の式Ｉの化合物および医薬的に許容される担体を投与する段階を含む方法をも含むものである。
【００１９】
別の態様において、本発明はさらに、ＣＯＸ−１に優先してＣＯＸ−２を選択的に阻害する活性薬剤によって効果的に治療されるシクロオキシゲナーゼ介在疾患の治療方法であって、
そのような治療を必要とする患者に対して、無毒性で治療上有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を含む方法をも含むものである。
【００２０】
別の態様において、本発明はさらに、非ステロイド系抗炎症薬による治療に対して感受性を有する炎症疾患の治療用の医薬品製造における、式Ｉの化合物または医薬組成物の使用を含むものである。
【００２１】
本発明は、本明細書に開示の実施例の化合物ならびに表Ｉの化合物によって例示される。
【００２２】
１）定義
以下の略称は、ここに示す意味を有する。
【００２３】
ＡＡ＝アラキドン酸
Ａｃ＝アセチル
ＡＩＢＮ＝２，２−アゾビスイソブチロニトリル
Ｂｎ＝ベンジル
ＣＨＯ＝チャイニーズハムスター卵巣
ＣＭＣ＝１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）カルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネート
ＣＯＸ＝シクロオキシゲナーゼ
ＤＢＵ＝ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン
ＤＭＡＰ＝４−（ジメチルアミノ）ピリジン
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
Ｅｔ３Ｎ＝トリエチルアミン
ＨＢＳＳ＝ハンクス液
ＨＥＰＥＳ＝Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ１−［２−エタンスルホン酸］
ＨＷＢ＝ヒト全血
ＩＰＡ＝イソプロピルアルコール
ＫＨＭＤＳ＝カリウム・ヘキサメチルジシラザン
ＬＤＡ＝リチウム・ジイソプロピルアミド
ＬＰＳ＝リポ多糖類
ｍＣＰＢＡ＝メタクロロ過安息香酸
ＭＭＰＰ＝モノペルオキシフタル酸マグネシウム
Ｍｓ＝メタンスルホニル＝メシル
Ｍｓ０＝メタンスルホネート＝メシレート
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモコハク酸イミド
ＮＣＳ＝Ｎ−クロロコハク酸イミド
ＮＩＳ＝Ｎ−ヨードコハク酸イミド
ＮＳＡＩＤ＝非ステロイド系抗炎症薬
ＯＤＣＢ＝ｏ−ジクロロベンゼン
オキソン（登録商標）＝ペルオキシモノ硫酸カリウム
ＰＣＣ＝クロロクロム酸ピリジニウム
ＰＤＣ＝重クロム酸ピリジニウム
ｒ．ｔ．＝室温
ｒａｃ．＝ラセミ
Ｔｆ＝トリフルオロメタンスルホニル＝トリフリル
ＴＦＡＡ＝無水トリフルオロ酢酸
Ｔｆ０＝トリフルオロメタンスルホネート＝トリフレート
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー
ＴＭＰＤ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ｐ−フェニレンジアミン
Ｔｓ＝ｐ−トルエンスルホニル＝トシル
ＴｓＯ＝ｐ−トルエンスルホネート＝トシレート
Ｔｚ＝１Ｈ（または２Ｈ）−テトラゾール−５−イル
ＳＯ２Ｍｅ＝メチルスルホン（ＳＯ２ＣＨ３とも書く）
ＳＯ２ＮＨ２＝スルホンアミド。
【００２４】
アルキル基略称
Ｍｅ＝メチル
Ｅｔ＝エチル
ｎ−Ｐｒ＝ノルマルプロピル
ｉ−Ｐｒ＝イソプロピル
ｎ−Ｂｕ＝ノルマルブチル
ｉ−Ｂｕ＝イソブチル
ｓ−Ｂｕ＝セカンダリーブチル
ｔ−Ｂｕ＝ターシャリーブチル
ｃ−Ｐｒ＝シクロプロピル
ｃ−Ｂｕ＝シクロブチル
ｃ−Ｐｅｎ＝シクロペンチル
ｃ−Ｈｅｘ＝シクロヘキシル。
【００２５】
用量関係略称
ｂｉｄ＝bis in die＝１日２回
ｑｉｄ＝quater in die＝１日４回
ｔｉｄ＝ter in die＝１日３回。
【００２６】
本明細書に関して「アルキル」とは、指定数の炭素原子を有する、直鎖、分岐および環状の構造ならびにそれらの組み合わせを意味する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓ−およびｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、エイコシル、３，７−ジエチル−２，２−ジメチル−４−プロピルノニル、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロドデシルメチル、２−エチル−１−ビシクロ［４．４．０］デシルなどがある。
【００２７】
本明細書に関して「フルオロアルキル」とは、指定数の炭素原子を有する、１以上の水素がフッ素に置き換わったアルキル基を意味する。例としては、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２ＣＦ３、ｃ−Ｐｒ−Ｆ５、ｃ−Ｈｅｘ−Ｆ１１などがある。
【００２８】
本明細書に関して「アルコキシ」とは、直鎖、分岐または環状の構造を有する指定数の炭素原子のアルコキシ基を意味する。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ、シクロヘキシルオキシなどがある。
【００２９】
本明細書に関して「アルキルチオ」とは、直鎖、分岐または環状の構造を有する指定数の炭素原子のアルキルチオ基を意味する。アルキルチオ基の例としては、メチルチオ、プロピルチオ、イソプロピルチオ、シクロヘプチルチオなどがある。例を挙げると、プロピルチオ基は−ＳＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３を意味する。
【００３０】
本明細書に関して「フルオロアルコキシ」とは、直鎖、分岐もしくは環状の構造を有する指定数の炭素原子のアルコキシ基であって、１以上の水素がフッ素で置き換わったものを意味する。フルオロアルコキシアルコキシ基の例としては、−ＯＣＦ３、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｆなどがある。
【００３１】
本明細書に関して「ハロゲン」とは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味する。
【００３２】
本発明の例としては、以下のものがある。
【００３３】
（１）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（３）５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イルピリジン；
（４）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イルピリジン；
（５）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（１，２，３，６−テトラヒドロピリジニル）−５−トリフルオロメチルピリジン；
（６）２−（ホモピペリジン−１−イル）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（７）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（８）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（９）５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イルピリジン；
（１０）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−メトキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１１）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−アセトキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１２）５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−メトキシメチル）ピロリジン−１−イルピリジン；
（１３）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（２−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１４）（−）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１５）（＋）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１６）５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イルピリジン；
（１７）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル−３−メチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１８）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ホモピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（１９）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（２−（２−ヒドロキシエチル））ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２０）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２１）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２２）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２３）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２４）２−（４，４−ジフルオロ）ピペリジン−１−イル−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２５）２−（３，３−ジフルオロ）ピペリジン−１−イル−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２６）２−（４−フルオロ）ピペリジン−１−イル−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２７）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−モルホリン−４−イル−５−トリフルオロメチルピリジン；
（２８）３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−チオモルホリン−４−イル−５−トリフルオロメチルピリジン。
【００３４】
本明細書に記載の化合物の中には、１以上の不斉中心を有することから、ジアステレオマーおよび光学異性体を生じるものもある。本発明は、そのような可能なジアステレオマーならびにそれのラセミ体および分割されてエナンチオマー的に純粋な形、ならびにそれらの医薬的に許容される塩を含むものとする。
【００３５】
本明細書に記載の化合物の中には、オレフィン系二重結合を有するものもあり、別段の断りがない限り、それはＥおよびＺの両方の幾何異性体を含むものとする。
【００３６】
第２の実施態様において本発明は、シクロオキシゲナーゼの阻害および本明細書に開示のようなシクロオキシゲナーゼ介在疾患治療のための医薬組成物であって、医薬的に許容される担体と無毒性で治療上有効量の上記のような式Ｉの化合物を含有する組成物を含むものである。
【００３７】
この実施態様の範囲内において本発明は、シクロオキシゲナーゼ−２の阻害および本明細書に開示のようなシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患治療のための医薬組成物であって、医薬的に許容される担体と無毒性で治療上有効量の上記のような式Ｉの化合物を含有する組成物を含むものである。
【００３８】
第３の実施態様において本発明は、シクロオキシゲナーゼを阻害し、ＣＯＸ−１に優先してＣＯＸ−２を選択的に阻害する活性薬剤によって効果的に治療される本明細書に開示のようなシクロオキシゲナーゼ介在疾患を治療する方法であって、そのような治療を必要とする患者に対して、無毒性で治療上有効量の本明細書で開示のような式Ｉの化合物を投与する段階を含む方法を包含する。
【００３９】
本発明の医薬組成物は、有効成分としての式Ｉの化合物または該化合物の医薬的に許容される塩を含むものであり、医薬的に許容される担体および適宜に他の治療成分を含有することができる。「医薬的に許容される塩」という用語は、無機塩基および有機塩基などの医薬的に許容される無毒性塩基から製造される塩を指す。無機塩基から誘導される塩には、アルミニウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、銅塩、第二鉄塩、第一鉄塩、リチウム塩、マグネシウム塩、第二マンガン塩、第一マンガン塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩などがある。特に好ましいものとしては、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩およびナトリウム塩である。医薬的に許容される有機無毒性塩基から誘導される塩には、１級、２級および３級アミン塩、天然置換アミンを含む置換アミンの塩、環状アミンなどがあり、例えばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂類、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等ならびに塩基性イオン交換樹脂との塩がある。
【００４０】
以下に説明する治療方法の議論において、式Ｉの化合物に言及する場合、それは医薬的に許容される塩も含むものであることは明らかであろう。
【００４１】
式Ｉの化合物は、リューマチ熱、インフルエンザその他のウィルス感染に関連する症状、感冒、腰痛および頚部痛、月経困難症、頭痛、歯痛、捻挫および筋違い、筋肉炎、神経痛、関節滑膜炎、慢性関節リウマチを含む関節炎、変形性関節疾患（骨関節炎）、痛風および強直性脊椎炎、滑液嚢炎、火傷、手術および歯科手術後の創傷などの各種状態の疼痛、発熱および炎症の緩和に有用である。さらにそのような化合物は、細胞新生物障害および転移性腫瘍成長を阻害することができ、従って、癌治療で使用することができる。化合物Ｉは、糖尿病性網膜症および腫瘍血管形成で起こるものなどのシクロオキシゲナーゼ介在増殖性障害の治療および／または予防において有用なものともなり得る。
【００４２】
化合物Ｉはさらに、収縮性プロスタノイド類の合成を防止することで、プロスタノイド誘発平滑筋収縮を阻害することから、月経困難症、早産、喘息および好酸球関連障害の治療において有用なものとなり得る。該化合物は、アルツハイマー病の治療ならびに骨損失予防（骨粗鬆症の治療）および緑内障治療においても有用であろう。
【００４３】
高いシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）活性および／またはシクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）に優先してのシクロオキシゲナーゼ−２に対する特異性により、化合物Ｉは、従来の非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）に対する代替薬として有用であることが明らかである。特に、消化性潰瘍、胃炎、限局性腸炎、潰瘍性大腸炎、憩室炎もしくは消化管病変の再発歴のある患者；消化管出血、低プロトロンビン血症などの貧血を含む凝血障害、血友病その他の血液関係の問題のある患者；腎臓疾患患者；手術前または抗凝血剤を服用している患者など、そのような非ステロイド系抗炎症薬が禁忌となり得る場合に有用である。
【００４４】
同様に式Ｉの化合物は、従来のＮＳＡＩＤが現在他の薬剤または成分と併用投与される製剤において、該従来のＮＳＡＩＤに対して部分的または完全に代わるものとして有用である。そこでさらに別の態様において本発明は、上記で定義のようなシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患治療のための医薬組成物であって、無毒性で治療上有効量の上記で定義の式Ｉの化合物と、アセトミノフェンもしくはフェナセチンなどの別の疼痛緩和薬；カフェインなどの強化剤；水酸化アルミニウムもしくは水酸化マグネシウム、シメチコンなどのＨ２拮抗薬；フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、シュードフェドリン（pseudophedrine）、オキシメタゾリン、エピネフリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、プロピルヘキセドリンもしくはレボデスオキシエフェドリン（levodesoxyephedrine）などの鬱血除去薬；コデイン、ヒドロコドン、カラミフェン、カルベタペンタンもしくはデキストラメトルファン（dextramethorphan）などの鎮咳薬；ミソプロストール（misoprostol）、エンプロスチル（enprostil）、リオプロスチル（rioprostil）、オルノプロストール（ornoprostol）もしくはロサプロストール（rosaprostol）などのプロスタグランジン；利尿薬；鎮静性もしくは非鎮静性の抗ヒスタミン剤などの１以上の成分とを含有する組成物を含むものである。さらに本発明は、シクロオキシゲナーゼ介在疾患の治療方法であって、そのような治療を必要とする患者に対して、無毒性で治療上有効量の式Ｉの化合物を、適宜に１以上の直前に挙げたような成分との併用で投与する段階を含む方法を包含するものである。
【００４５】
上記のシクロオキシゲナーゼ介在疾患のいずれの治療においても、化合物Ｉは、従来の無毒性で医薬的に許容される担体、補助剤および媒体を含む単位製剤で、経口投与、局所投与、非経口投与、吸入噴霧投与または経直腸投与することができる。本明細書で使用する場合の非経口という用語は、皮下注射、静脈注射、筋肉注射、組織内注射または注入法を含むものである。マウス、ラット、ウマ、ウシ、ヒツジ、イヌ、ネコなどの温血動物の治療以外に、本発明の化合物はヒトの治療において有効である。
【００４６】
上記のように、ここで定義のシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患治療用の医薬組成物は適宜に、上記で挙げた１以上の成分を含有することができる。
【００４７】
上記有効成分を含む医薬組成物は、例えば錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性もしくは油性の懸濁液、分散性粉剤もしくは粒剤、乳濁液、硬もしくは軟カプセル、またはシロップもしくはエリキシル剤などの経口使用に好適な製剤とすることができる。経口用組成物は、医薬組成物製造に関して当業界で公知のいずれかの方法に従って調製することができ、そのような組成物には、甘味剤、芳香剤、着色剤および保存剤からなる群から選択される１以上の薬剤を含有させて、医薬的に見た目が良く、風味の良い製剤を提供することができる。錠剤は、錠剤製造に好適な無毒性で医薬的に許容される賦形剤との混合で、上記有効成分を含有する。その賦形剤としては、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；例えばコーンスターチもしくはアルギン酸などの造粒剤および崩壊剤；例えばデンプン、ゼラチンもしくはアカシアなどの結合剤；ならびに例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸もしくはタルクなどの潤滑剤などがあり得る。錠剤は未コーティングとすることができるか、あるいは公知の方法によってコーティングを施して、消化管における崩壊および吸収を遅延させ、それによって比較的長期間にわたって持続的作用を提供させることができる。例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの遅延材料を用いることができる。該材料は米国特許４２５６１０８号、同４１６６４５２号および同４２６５８７４号に記載の方法によってコーティングして、徐放用の浸透性治療錠剤を形成することもできる。
【００４８】
経口用製剤は、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンなどの不活性固体希釈剤と前記成分を混合した硬ゼラチンカプセルとして、あるいはプロピレングリコール、ＰＥＧおよびエタノールなどの水系溶媒もしくは水混和性溶媒または例えば落花生油、液体パラフィンもしくはオリーブ油などのオイル媒体と上記有効成分とを混合した軟ゼラチンカプセルとしても提供することができる。
【００４９】
水系懸濁液は、水系懸濁液の製造に好適な賦形剤との混合で活性材料を含有する。そのような賦形剤は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアカシアガムなどの懸濁剤であり；分散剤もしくは湿展剤は、例えばレシチンなどの天然ホスファチド、または例えばステアリン酸ポリオキシエチレンなどの脂肪酸とアルキレンオキサイドとの縮合生成物、または例えばヘプタデカエチレンオキシセタノールなどの長鎖脂肪族アルコールとエチレンオキサイドとの縮合生成物、またはモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトールなどの脂肪酸とヘキシトールから誘導される部分エステルとエチレンオキサイドとの縮合生成物、または例えばモノオレイン酸ポリエチレンソルビタンなどの、脂肪酸と無水ヘキシトールから誘導される部分エステルとエチレンオキサイドとの縮合生成物などがあり得る。水系懸濁液は、安息香酸エチルまたは安息香酸ｎ−プロピル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸などの１以上の保存剤、１以上の着色剤、１以上の芳香剤、ならびにショ糖、サッカリンもしくはアスパルテームなどの１以上の甘味剤を含有することもできる。
【００５０】
油性懸濁液は、有効成分を、落花生油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油などの植物油、あるいは液体パラフィンなどの鉱物油に懸濁させることで製剤することができる。油性懸濁液には、例えば蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールなどの増粘剤を含有させることができる。上記の甘味剤および芳香剤を加えて、風味の良い経口製剤を提供することもできる。このような組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤を加えることで防腐することができる。
【００５１】
水の添加による水系懸濁液の調製に好適な分散性粉剤および顆粒は、分散剤もしくは湿展剤、懸濁剤および１以上の保存剤との混合で有効成分を提供するものである。好適な分散剤もしくは湿展剤および懸濁剤の例としては、既に上述したものがある。例えば甘味剤、芳香剤および着色剤などの別の賦形剤も存在させることができる。
【００５２】
本発明の医薬組成物は、水中油型乳濁液の剤型とすることもできる。その油相は、例えばオリーブ油もしくは落花生油などの植物油または例えば液体パラフィンなどの鉱物油あるいはこれらの混合物とすることができる。好適な乳化剤としては、例えば大豆レシチンなどの天然ホスファチド、ならびに例えばモノオレイン酸ソルビタンなどの脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導されるエステルもしくは部分エステル、ならびに例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどの前記部分エステルとエチレンオキサイドとの縮合生成物があり得る。乳濁液はさらに、甘味剤および芳香剤を含有することもできる。
【００５３】
シロップおよびエリキシル剤は、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ソルビトールまたはショ糖などの甘味剤を加えて製剤することができる。そのような製剤には、粘滑剤、保存剤および芳香剤ならびに着色剤を含有させることもできる。該医薬組成物は、無菌の注射用水性もしくは油性懸濁液の形態とすることができる。この懸濁液は、上述した好適な分散剤もしくは湿展剤および懸濁剤を用いて、公知の技術に従って製剤することができる。該無菌注射製剤は、例えば１，３−ブタンジオールなどの無毒性で非経口的に許容される希釈剤もしくは溶媒中での無菌注射溶液もしくは懸濁液とすることもできる。使用可能な許容される媒体および溶媒には、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液などがある。エタノール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール類などの共溶媒を用いることもできる。さらに従来のように、溶媒もしくは懸濁媒体として、無菌の固定油を用いる。それに関しては、合成モノもしくはジグリセリド等のいかなる固定油商品も使用可能である。さらに、注射剤の製剤には、オレイン酸などの脂肪酸が用いられる。
【００５４】
化合物Ｉは、該薬剤の直腸投与用の坐剤の形態で投与することもできる。そのような組成物は、常温で固体であるが直腸温度では液体であることから、直腸で融解して上記薬剤を放出する好適な非刺激性の賦形剤と該薬剤とを混和することで調製することができる。そのような材料は、カカオバターおよびポリエチレングリコール類である。
【００５５】
局所投与用には、式Ｉの化合物を含むクリーム、軟膏、ゲル、液剤または懸濁液などを用いる（その投与法に関して、局所投与は含嗽液およびうがい剤を含むものとする）。局所投与製剤は、医薬用担体、共溶媒、乳化剤、透過増強剤、保存系および皮膚緩和剤を含有することができる。
【００５６】
上記の状態の治療には、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１４０ｍｇ／ｋｇ／日、あるいは別表現として患者当たり約０．５ｍｇ〜約７ｇ／日程度の投与レベルが有用である。例えば炎症は、当該化合物を約０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、あるいは別表現として、患者当たり約０．５ｍｇ〜約３．５ｇ／日にて投与することで、効果的に治療することができる。
【００５７】
担体材料と組み合わせて単一製剤を得ることができる有効成分の量は、治療対象宿主および特定の投与形態に応じて変わるものである。例えばヒトの経口投与用製剤には、適切かつ妥当な量の担体材料（組成物総量の約５〜約９５％の範囲で変動し得る）と配合して活性薬剤０．５ｍｇ〜５ｇを含有させることができる。単位製剤は通常、有効成分を約１ｍｇ〜約５００ｍｇ、代表的には２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇまたは１０００ｍｇ含有する。
【００５８】
しかしながら、特定患者についての具体的な用量レベルは、年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時刻、投与経路、排泄速度、併用薬剤および治療対象の特定疾患の重度などの各種要素によって決まることは明らかであろう。
【００５９】
合成方法
本発明の式Ｉの化合物は、図式１に示した合成経路に従い、さらには本明細書に記載の方法に従って製造することができる。
【００６０】
図式１
式Ｉの２−アミノピリジン類は、必要な２−アミノピリジンＩＩから、多段階で製造することができる。最初に酢酸中臭素でＩＩを臭素化することで、臭化物ＩＩＩを得る。炭酸ナトリウムなどの好適な塩基存在下で、４−（メチルチオ）フェニルボロン酸とＩＩＩとのパラジウム触媒カップリングを行うことでスルフィドＩＶが得られ、それはＭＭＰＰ、オキソン（登録商標）またはＯｓＯ４／ＮＭＯなどのいくつかの酸化剤のいずれかを用いて酸化して、相当するスルホンＶとすることができる。アミノピリジンＶは、亜硝酸ナトリウムおよびＨＢｒ／Ｂｒ２もしくはＨＣｌのいずれかでＶを処理し、次にＰＯＣｌ３と反応させることで２−ハロピリジンＶＩ（Ｘ＝Ｂｒ、Ｃｌ）に変換することができる。ＤＭＦもしくはＤＭＳＯなどの不活性溶媒中、適切に置換されたアミンＶＩＩおよびＫ２ＣＯ３、Ｃｓ２ＣＯ３もしくはＫＨなどの好適な塩基でＶＩを処理するか、あるいは別法としてＣｕＩなどの銅塩存在下にアミンＶＩＩおよびＶＩの無希釈混合物を加熱することで、式Ｉの２−アミノピリジンを得る。
【００６１】
【化９】
0004368524.tif 000005
【００６２】
代表的化合物
表Ｉに、本発明の新規化合物を挙げてある。
【００６３】
【表１】
0004368524.tif 000006
【００６４】
【表２】
0004368524.tif 000007
【００６５】
【表３】
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【００６６】
【表４】
0004368524.tif 000009
【００６７】
生理活性測定アッセイ
以下に記載のアッセイを用いて式Ｉの化合物を調べて、そのシクロオキシゲナーゼ−２阻害活性を求めることができる。
【００６８】
シクロオキシゲナーゼ活性の阻害
ＣＨＯトランスフェクション細胞系を用いるＣＯＸ−２およびＣＯＸ−１についての全細胞アッセイ
このアッセイには、ヒトＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２ ｃＤＮＡを含む真核細胞発現ベクターｐＣＤＮＡＩＩＩで安定にトランスフェクションされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系を用いる。これらの細胞系はそれぞれ、ＣＨＯ［ｈＣＯＸ−１］およびＣＨＯ［ｈＣＯＸ−２］と称する。シクロオキシゲナーゼアッセイでは、懸濁培養液からのＣＨＯ［ｈＣＯＸ−１］細胞と付着培養物のトリプシン処理によって得られるＣＨＯ［ｈＣＯＸ−２］細胞を、遠心によって回収し（３００×ｇ、１０分間）、１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含むＨＢＳＳで１回洗浄し、細胞濃度１．５×１０６個／ｍＬで、１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）を含むＨＢＳＳに再懸濁させる。被験薬剤をＤＭＳＯに溶かして、最高被験薬濃度の６６．７倍とする。化合物の試験は代表的には、最高薬剤濃度の連続３倍ＤＭＳＯ希釈液を用いて、二連にて８濃度で行う。細胞（０．３×１０６個／２００μＬ）を、３７℃で１５分間、被験薬またはＤＭＳＯ媒体３μＬとともに前インキュベートする。濃厚ＡＡのエタノール溶液を１５ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）含有ＨＢＳＳで１０倍希釈することで、過酸化物を含まないＡＡの作業溶液（ＣＨＯ［ｈＣＯＸ−１］アッセイおよびＣＨＯ［ｈＣＯＸ−２］アッセイのそれぞれについて、５．５μＭおよび１１０μＭ ＡＡ）を調製する。次に、薬剤の存在下または非存在下で、細胞にＡＡ／ＨＢＳＳ溶液を負荷して、ＣＨＯ［ｈＣＯＸ−１］アッセイにおいて０．５μＭ ＡＡの最終濃度、ＣＨＯ［ｈＣＯＸ−２］アッセイにおいて１０μＭ ＡＡの最終濃度とする。１Ｎ ＨＣｌ（１０μＬ）を加えることで反応を停止し、０．５Ｎ ＮａＯＨ（２０μＬ）によって中和する。サンプルを４℃で１０分間３００×ｇで遠心し、透明上清の一部を適切に希釈して、ＰＧＥ２についての酵素結合イムノアッセイを用いてＰＧＥ２レベルを求める（相関（Correlate）ＰＧＥ２酵素イムノアッセイキット、Assay Designs, Inc.）。被験化合物非存在下でのシクロオキシゲナーゼ活性を、アラキドン酸を負荷した細胞でのＰＧＥ２レベルにおけるエタノール媒体を擬似負荷した細胞でのＰＧＥ２レベルに対する差として求める。被験化合物によるＰＧＥ２合成阻害は、陽性対照サンプルにおける活性に対する薬剤存在下での活性のパーセントとして計算する。
【００６９】
Ｕ９３７細胞ミクロソームからのＣＯＸ−１活性のアッセイ
Ｕ９３７細胞を５００×ｇで５分間遠心することでペレット状とし、リン酸緩衝生理食塩水で１回洗浄し、再度ペレットとする。０．１ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、２μｇ／ｍＬのロイペプチン、２μｇ／ｍＬの大豆トリプシン阻害剤、２μｇ／ｍＬのアプロチニンおよび１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオライドからなる均質化緩衝液に、細胞を再懸濁させる。細胞懸濁液を１０秒間４回超音波処理し、４℃で１０分間、１００００×ｇにて遠心する。上清を４℃で１時間、１０００００×ｇにて遠心する。１０００００×ｇミクロソームペレットを０．１ＭトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭ ＥＤＴＡに再懸濁させて、蛋白約７ｍｇ／ｍＬとし、−８０℃で保存する。
【００７０】
ミクロソーム取得物は使用直前に解凍し、短時間の超音波処理を施し、１０ｍＭのＥＤＴＡ、０．５ｍＭのフェノール、１ｍＭの還元グルタチオンおよび１μＭのヘマチンを含む０．１ＭトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）で、蛋白１２５μｇ／ｍＬの濃度に希釈する。アッセイは、最終容量２５０μＬで二連にて行う。最初に、深い９６ウェル（deepwell）ポリプロピレン力価測定プレートのウェルで、１０ｍＭ ＥＤＴＡを含む０．１ＭトリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）２０μＬに、ＤＭＳＯ媒体または薬剤のＤＭＳＯ溶液５μＬを加える。次に、ミクロソーム調製液２００μＬを加え、室温で１５分間前インキュベートしてから、１Ｍアラキドン酸の０．１ＭトリスＨＣｌおよび１０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）溶液２５μＬを加える。サンプルを室温で４０分間インキュベートし、１Ｎ ＨＣｌ（２５μＬ）を加えることで反応を停止する。１Ｎ ＮａＯＨ（２５μＬ）を加えてサンプルを中和してから、ラジオイムノアッセイ（Dupont-NENまたはAmershamのアッセイキット）によって、ＰＧＥ２含有量の定量を行う。シクロオキシゲナーゼ活性は、アラキドン酸存在下およびエタノール媒体存在下にインキュベートしたサンプル中のＰＧＥ２濃度差とする。
【００７１】
精製ヒトＣＯＸ−２活性アッセイ
ＣＯＸ−２によるＰＧＧ２からＰＧＨ２への還元時における、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ｐ−フェニレンジアミン（ＴＭＰＤ）の酸化に基づく発色アッセイを用いて、酵素活性を測定する（Copeland et al., (1994) Proc.Natl.Acad.Sci. 91, 11202-11206）。
【００７２】
前述の方法に従って、Ｓｆ９細胞から組換えヒトＣＯＸ−２を精製する（Percival et al (1994) Arch. Biochem. Biophys. 15, 111-118）。アッセイ混合物（１８０μＬ）には、１００ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．５）、２ｍＭゲナポール（genapol）Ｘ−１００、１μＭヘマチン、１ｍｇ／ｍＬゼラチン、精製酵素８０〜１００単位（酵素１単位は、６１０ｎｍで０．００１／分のＯ．Ｄ．変化を生じるのに要する酵素量と定義される）および被験化合物のＤＭＳＯ溶液４μＬを含有させる。混合物を室温（２２℃）で１５分間前インキュベートしてから、１Ｍアラキドン酸（ＡＡ）および１ｍＭ ＴＭＰＤのアッセイ緩衝液溶液を超音波処理したもの（酵素やヘマチンを含まない）２０μＬを加えることで酵素反応を開始する。反応の最初の３６秒間にわたるＴＭＰＤ酸化の初期速度を計算することで、酵素活性を求める。酵素非存在下で、非特異的酸化速度を観察し（０．００７〜０．０１０ Ｏ．Ｄ．／分）、それを差し引いてから阻害％の計算を行う。対数用量−阻害％のプロットの４パラメータ最小二乗非線形回帰分析から、ＩＣ５０値を誘導する。
【００７３】
ヒト全血アッセイ
原理
ヒト全血は、選択的ＣＯＸ−２阻害薬などの抗炎症化合物の生化学的効力の試験に適した蛋白・細胞豊富環境を提供する。研究により、正常なヒト血液にはＣＯＸ−２酵素が含まれないことが明らかになっている。これは、正常血液におけるＰＧＥ２産生に対してＣＯＸ−２阻害薬が効果を持たないという所見と一致するものである。そのような阻害薬は、ＣＯＸ−２を誘発するヒト全血のＬＰＳとのインキュベーション後にのみ活性である。このアッセイを用いて、ＰＧＥ２産生に対する選択的ＣＯＸ−２阻害薬の阻害効果を評価することができる。さらに、全血中の血小板は多量のＣＯＸ−１酵素を含む。血液凝固の直後、血小板はトロンビンが介在する機序によって活性化される。その反応により、ＣＯＸ−１の活性化を介して、トロンボキサンＢ２（ＴｘＢ２）が産生される。そこで、血液凝固後のＴｘＢ２レベルに対する被験化合物の効果を調べ、ＣＯＸ−１活性の指標として用いることができる。従って、同じアッセイで、ＬＰＳ誘発後のＰＧＥ２レベル（ＣＯＸ−２）および血液凝固後のＴｘＢ２レベル（ＣＯＸ−１）を測定することで、被験化合物による選択性の程度を求めることができる。
【００７４】
方法
Ａ．ＣＯＸ−２（ＬＰＳ誘発ＰＧＥ２産生）
男性および女性の両方の志願者から、静脈穿刺によって、ヘパリンを塗った試験管に新鮮血液を採血する。被験者には外見上で炎症状態はなく、採血前の７日以上にわたってＮＳＡＩＤを服用していない。小分けした血液検体２ｍＬから直ちに血漿を得て、ブランクとして使用する（ＰＧＥ２の基底線レベル）。残りの血液を、室温で５分間、ＬＰＳ（最終濃度１００μｇ／ｍＬ、Sigma Chem、大腸菌からの＃Ｌ−２６３０；０．１％ＢＳＡ（リン酸緩衝生理食塩水）で希釈）とともにインキュベートする。血液５００μＬずつを、３７℃で２４時間、１０ｎＭ〜３０ｎＭの範囲の最終濃度の媒体（ＤＭＳＯ）２μＬまたは被験化合物２μＬとともにインキュベートする。インキュベーション終了後、血液を１２０００×ｇで５分間遠心して血漿を得る。小分けした血漿１００μＬをメタノール４００μＬと混合して、蛋白を沈殿させる。上清を得て、それについて、メーカー指定の方法に従って、ＰＧＥ２をそれのメチルオキシメート誘導体に変換した後、ラジオイムノアッセイキット（Amersham, RPA#530）を用いて、ＰＧＥ２のアッセイを行う。
【００７５】
Ｂ．ＣＯＸ−１（凝血誘発ＴｘＢ２産生）
抗凝血剤の入っていないバキュテーナーに新鮮血液を採血する。５００μＬずつを直ちに、１０ｎＭ〜３０ｎＭの範囲の最終濃度でＤＭＳＯまたは被験化合物２μＬを予め入れておいたシリコン処理微量遠心管に移し入れる。該遠心管を３７℃で１時間、渦攪拌およびインキュベートして、血液を凝固させる。インキュベーション終了後、遠心（１２０００×ｇで５分間）によって血清を得る。血清の小分けサンプル１００μＬをメタノール４００μＬと混合して、蛋白を沈殿させる。上清を得て、それについて、酵素イムノアッセイキット（Cayman, #519031）を用いて、メーカー指定の方法に従ってＴｘＢ２のアッセイを行う。
【００７６】
ラット前足浮腫アッセイ
試験実施計画
雄のスプレーグ・ドーリーラット（１５０〜２００ｇ）を終夜絶食させ、媒体（１％メトセル（methocel）または５％Ｔｗｅｅｎ８０）または被験化合物のいずれかを経口投与する。１時間後、一方の後足首より上の高さに、永久的マーカーを用いて線を引いて、モニタリングする足の面積を決定する。水置換の原理に基づく体積測定計（Ugo-Basile、イタリア）を用いて、足体積（Ｖ０）を測定する。次に動物に対して、２５ゲージ針を取り付けたインシュリン注射器を用いて、足に１％カラギーナンの生理食塩水溶液（FMC Corp, Maine）５０ｍＬを足底部皮下に（subplantarly）注射する（すなわち、片足にカラギーナン５００ｍｇ）。３時間後、足体積（Ｖ３）を測定し、足体積の増加（Ｖ３−Ｖ０）を計算する。動物をＣＯ２窒息によって屠殺し、胃病変の有無を評点する。データを媒体対照の値と比較して、阻害パーセントを計算する。投与群は全てコード化して、観察者の先入観を排除するようにする。
【００７７】
非麻酔ラットにおけるＬＰＳ誘発発熱
雄スプレーグ・ドーリーラット（１５０〜２００ｇ）を、使用前１６〜１８時間にわたって絶食させた。ほぼ午前９時３０分に、動物を一時的にプレキシガラス容器に入れ、デジタル温度計（０８５０２型、Cole Parmer）に接続された可撓性温度プローブ（ＹＳＩシリーズ４００）を用いて、動物の基底線直腸体温を記録した。全ての動物について同じプローブおよび温度計を用いて、実験誤差を低減するようにした。体温測定後、動物をケージに戻した。時間ゼロで、ラットに対して、生理食塩水またはＬＰＳ（２ｍｇ／ｋｇ、Sigma Chem）のいずれかを腹腔内注射し、ＬＰＳ注射から５時間後、６時間後および７時間後に直腸体温を測定した。体温上昇が横這いとなった５時間後の測定後、ＬＰＳ注射ラットに対して、媒体（１％メトセル）もしくは被験化合物を経口投与して、化合物が発熱状態を回復させることができるか否かを調べた。基準（ゼロ回復）点として、対照（媒体投与）群で７時間後に得られた直腸体温を用いて、発熱の回復パーセントを計算した。ＬＰＳ投与前の基底線値までの完全な発熱回復を１００％とする。
【００７８】
非麻酔リスザルにおけるＬＰＳ誘発発熱
リスザル（Saimiri sciureus）（１．０〜１．７ｋｇ）の群において、手術によって、腹部皮下に温度プローブを埋め込んだ。それにより、遠隔測定感知システム（Data Sciences International, Minnesota）によって、非麻酔・非拘束のサルで体温をモニタリングすることができる。使用前の１３〜１４時間にわたり動物を絶食させ、個々のケージに入れて馴致させた。埋込温度プローブからの信号を拾う電子受信装置を、ケージの側面に取り付けた。実験当日のほぼ午前９：００に、サルを一時的に訓練用椅子に拘束し、ＬＰＳ（６ｍｇ／ｋｇ、無菌生理食塩水に溶かしたもの）の大量静脈注射を行った。動物をケージに戻し、５分ごとに連続的に体温を記録した。体温が１．５〜２℃だけ上昇したＬＰＳ注射から２時間後に、媒体（１％メトセル）または被験化合物（３ｍｇ／ｋｇ）のいずれかをサルに経口投与した。１００分後、体温と基底線値の差を求めた。対照群における値を０％阻害として、阻害パーセントを計算した。
【００７９】
ラットにおけるカラギーナン誘発の急性炎症性痛覚過敏
雄スプレーグ・ドーリーラット（９０〜１１０ｇ）を用いて実験を行った。３時間前にカラギーナンを足底皮下注射することで（片方の後足に４．５ｍｇ）、後足の物理的圧迫に対する痛覚過敏を誘発した。対照動物には、等量の生理食塩水（足底皮下に０．１５ｍＬ）を投与した。カラギーナン投与から２時間後に、被験化合物（０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．５％メトセルの蒸留水溶液に懸濁させたもの）または媒体（０．５％メトセル）を経口投与した（２ｍＬ／ｋｇ）。１時間後、痛覚計（Ugo Basile）を用いて、後足の圧迫に対する発声応答を測定した。
【００８０】
片側ＡＮＯＶＡ（BMDP Statistical Software Inc.）を用いて、カラギーナン誘発痛覚過敏についての統計解析を行った。痛覚過敏は、生理食塩水注射ラットでの発生閾値を、カラギーナン注射動物で得られた値から差し引くことで求めた。薬剤投与ラットについての痛覚過敏スコアは、その応答のパーセントとして表した。次に、ＧｒａＦｉｔ（Erithacus Software）を用いて平均データの非線形最小二乗回帰分析を行うことで、ＩＤ５０値（最大観察応答の５０％をもたらす用量）を計算した。
【００８１】
ラットにおける補助剤誘発関節炎
６．５〜７．５週齢の雌ルイスラット（Lewis rat；体重約１４６〜１７０ｇ）について体重を測定し、耳にマークを施し、各群内で体重が同等となるように、群（関節炎を誘発しなかった陰性対照群；媒体対照群；総１日用量１ｍｇ／ｋｇでインドメタシンを投与した陽性対照群ならびに総１日用量０．１０〜３．０ｍｇ／ｋｇで被験化合物を投与した４群）に割り付けた。それぞれラット１０匹からなる６群に対して、軽油（補助剤）０．１ｍＬに入ったMycobacterium butyricum０．５ｍｇを後足に注射し、ラット１０匹からなる陰性対照には、補助剤は注射しなかった。補助剤注射の前（第−１日）および２１日後に、体重、反対側足体積（水銀置換体積記録法によって測定）および側面X線撮像（ケタミンおよびキシラジン麻酔下で得たもの）を得て、補助剤注射の前（第−１日）および４日後および２１日後に、主たる試験足の体積を求めた。ラットには、X線撮影用にケタミン（８７ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（１３ｍｇ／ｋｇ）を併用で０．０３〜０．１ｍＬ筋肉注射して麻酔を施し、補助剤を注射した。ファキシトロン（Faxitron；４５ｋＶｐ、３０秒）およびコダック（Kodak）Ｘ−ＯＭＡＴ ＴＬフィルムを用いて、第０日および第２１日に、両後足についてのX線撮影を行い、自動処理装置で現像した。実験投与について知らされていない試験担当者が、X線撮像について、軟組織および硬組織における変化を評価した。以下のX線撮像上の変化を、重度に応じて数値にて等級分けした。すなわち、軟組織体積の増加（０〜４）、関節窩の狭窄もしくは拡張（０〜５）、肋軟骨下びらん（０〜３）、骨膜反応（０〜４）、骨溶解（０〜４）、亜脱臼（０〜３）および変性性関節変化（０〜３）である。各Ｘ線撮像的変化について、個別の基準を用いて、重度の数値的等級分けを行った。片足当たりの最大可能スコアは２６であった。補助剤注射後の開始時点およびその後２１日間にわたって継続的に、総１日用量０．１、０．３、１および３ｍｇ／ｋｇ／日の被験化合物、総１日用量１ｍｇ／ｋｇ／日のインドメタシンまたは媒体（０．５％メトセルの無菌水溶液）を、１日２回経口投与した。化合物の製造は毎週行い、用時まで暗所で冷蔵し、投与直前に渦混合した。
【００８２】
体重および足体積についての％変化ならびに等級変換Ｘ線撮像総スコアには、「時間」に関する反復計測を用いる２変量（「投与」および「時間」）分散分析を適用した。その後、ドゥネット（Dunnett's）検定を行って、投与の効果を媒体と比較した。胸腺重量および脾臓重量には片側分散分析を適用し、次にドゥネット検定を行って、投与の効果を媒体と比較した。非線形最小二乗回帰を用いる４パラメータロジスティック関数によって、第４日、第１４日および第２１日での足体積における阻害％に関する用量−応答曲線の適合を行った。ＩＤ５０は、媒体からの５０％軽減に相当する用量と定義し、適合４パラメータ式からの内挿によって誘導した。
【００８３】
ラットにおける薬物動態
ラットにおける経口薬物動態
手順：
指針（Guidelines of the Canadian Council on Animal Care）に従って、動物を飼育し、飼料を摂取させ、世話をする。
【００８４】
雄スプレーグ・ドーリーラット（３２５〜３７５ｇ）を終夜絶食させてから、各経口血中レベル試験を行う。
【００８５】
ラットを１回に１匹ずつ固定装置に入れ、箱をしっかりと固定する。尾先端から小切片を切り取ることで（１ｍｍ以下）、ゼロ血液検体を得る。次に尾を、強くしかしゆっくりとした動きで先端からつけ根までさすることで、血液を絞り出す。ヘパリンを塗ったバキュテーナ（vacutainer）管に血液約１ｍＬを採血する。
【００８６】
化合物は、必要に応じて、標準的な投与容量１０ｍＬ／ｋｇで調製し、１６ゲージの３インチ強制経口投与用針を胃まで通すことで経口投与する。
【００８７】
再度尾を切る必要がない点を除き、ゼロ採血の場合と同じ方法で、それ以後の採血を行う。尾を１枚のガーゼで清拭し、上記の方法に従って絞り出し／さすりを行って、適切にラベルを施した管に採血する。
【００８８】
採血直後に、血液を遠心し、分離し、明瞭にマークを施した薬品瓶に入れ、分析時まで冷凍庫保管する。
【００８９】
経口投与後のラット血中レベル測定についての代表的な時点は、０、１５分、３０分、１時間、２時間、４時間および６時間である。
【００９０】
４時間の時点での採血後、ラットには飼料を自由に摂取させる。試験中のいかなる時点でも飲料水は与える。
【００９１】
媒体
経口ラット血中レベル測定では、以下の媒体を用いることができる。
【００９２】
ＰＥＧ２００／３００／４００：２ｍＬ／ｋｇに制限
メトセル０．５％〜１．０％：１０ｍＬ／ｋｇ
Ｔｗｅｅｎ８０：１０ｍＬ／ｋｇ
【００９３】
経口血中レベル用の化合物は懸濁液の形とすることができる。溶解度を高めるため、液を約５分間超音波処理器で処理することができる。
【００９４】
分析においては、小分けサンプルを等量のアセトニトリルで希釈し、遠心して、蛋白沈殿物を除去する。上清を、ＵＶ検出器を取り付けたＣ−１８ＨＰＬＣカラムに直接注入する。既知量の薬剤を入れたクリーンな血液検体に関して定量を行う。静脈投与と経口投与で曲線下面積（ＡＵＣ）を比較することで、生物学的利用能（Ｆ）を評価する。
【００９５】
【数１】
0004368524.tif 000010
【００９６】
クリアランス速度を、以下の関係式から計算する。
【００９７】
【数２】
0004368524.tif 000011
【００９８】
ＣＬの単位はｍＬ／ｈ・ｋｇ（ミリリットル／時・キログラム）である。
【００９９】
ラットにおける静脈投与薬物動態
手順：
指針（Guidelines of the Canadian Council on Animal Care）に従って、動物を飼育し、飼料を摂取させ、世話をする。
【０１００】
雄スプレーグ・ドーリーラット（３２５〜３７５ｇ）を、吊り上げ床、ケージ上面、飲料水瓶および飼料のあるプラスチック製靴箱型ケージに入れる。
【０１０１】
化合物は必要に応じて、標準的投与容量１ｍＬ／ｋｇで調製する。
【０１０２】
ラットについてはゼロ採血用に採血し、ＣＯ２鎮静下で投与を行う。ラットを１回に１匹ずつ、準備しておいたＣＯ２室に入れ、ラットが立直り反射を失ったら直ちにＣＯ２室から出す。次に、ラットを拘束台に載せ、口輪の上にＣＯ２導入管を取り付けた円錐頭（ｎｏｓｅ  ｃｏｎｅ）を置き、ラットをその台にゴムで拘束する。鉗子と鋏を用いて頸静脈を露出させ、ゼロ検体を採血し、次に所定用量の化合物を頸静脈に注射する。注射部位を指で軽く押さえ、円錐頭を外す。時間を記録し、これをゼロ時点とする。
【０１０３】
尾の先端から小切片を切り取ることで（１〜２ｍｍ）、５分間の放血で採血を行う。次に尾を、強くしかしゆっくりとした動きで先端からつけ根までさすることで、尾から血液を絞り出す。ヘパリンを塗った採血管に血液約１ｍＬを採血する。再度尾を切る必要がない点を除き、同じ方法で、それ以後の採血を行う。尾を１枚のガーゼで清拭し、上記の方法に従って、適切にラベルを施した管に採血する。
【０１０４】
静脈投与後のラット血中レベル測定についての代表的な時点は、
０、５分、１５分、３０分、１時間、２時間および６時間、あるいは
０、５分、３０分、１時間、２時間、４時間および６時間である。
【０１０５】
媒体
静脈投与ラット血中レベル測定では、以下の媒体を用いることができる。
【０１０６】
ブドウ糖：１ｍＬ／ｋｇ
モレキュロゾル（moleculosol）２５％：１ｍＬ／ｋｇ
【０１０７】
ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）：動物当たり０．１ｍＬの投与容量に制限
ＰＥＧ２００：４０％無菌水との混合で６０％以下−１ｍＬ／ｋｇ
ブドウ糖を用いる場合、溶液が濁っている場合は、重炭酸ナトリウムまたは炭酸ナトリウムを加えることができる。
【０１０８】
分析においては、小分けサンプルを等量のアセトニトリルで希釈し、遠心して、蛋白沈殿物を除去する。上清を、ＵＶ検出器を取り付けたＣ−１８ＨＰＬＣカラムに直接注入する。既知量の薬剤を入れた透明血液検体に関して定量を行う。静脈投与と経口投与で曲線下面積（ＡＵＣ）を比較することで、生物学的利用能（Ｆ）を評価する。
【０１０９】
【数３】
0004368524.tif 000012
【０１１０】
クリアランス速度を、以下の関係式から計算する。
【０１１１】
【数４】
0004368524.tif 000013
【０１１２】
ＣＬの単位はｍＬ／ｈ・ｋｇ（ミリリットル／時・キログラム）である。
【０１１３】
ラットにおけるＮＳＡＩＤ誘発胃疾患
原理
従来のＮＳＡＩＤの主要な副作用は、ヒトにおいて胃病変を生じる能力である。その作用は、消化管でのＣｏｘ−１の阻害によって引き起こされると考えられている。ラットは、ＮＳＡＩＤの作用に対して特に感受性である。実際これまでに、現在使用されている従来のＮＳＡＩＤについての消化管副作用を評価するに当たっては、ラットモデルが一般的に用いられている。本アッセイでは、５１Ｃｒ標識赤血球の全身注射後における糞５１Ｃｒ排泄を測定することで、ＮＳＡＩＤ誘発消化管損傷を観察する。糞５１Ｃｒ排泄は確立された技術であり、動物およびヒトにおける消化管の完全性を検出する上で高感度の方法である。
【０１１４】
方法
雄スプレーグ・ドーリーラット（１５０〜２００ｇ）に対して、１回投与（急性投与）または１日２回で５日間投与（慢性投与）のいずれかにて、被験化合物を経口投与する。最後の投与が終了したら直ちに、ラットに対して、供血ラットからの５１Ｃｒ標識赤血球０．５ｍＬを、尾静脈から注射する。動物を個別に代謝ケージに入れ、飼料および飲料水は自由に摂取させる。４８時間にわたって糞を採取し、５１Ｃｒ糞排泄を、総注射用量のパーセントとして計算する。５１Ｃｒ標識赤血球は、以下の手順で調製する。ヘパリンを塗った試験管に、供血ラットの大静脈からの血液１０ｍＬを採血する。遠心によって血漿を除去し、等量のＨＢＳＳで再度満たす。赤血球を、３７℃で３０分間、５１クロム酸ナトリウム（４００Ｃｉ）とともにインキュベートする。インキュベーション終了後、赤血球をＨＢＳＳ ２０ｍＬで２回洗浄して、遊離の５１クロム酸ナトリウムを除去する。最後に、赤血球をＨＢＳＳ １０ｍＬで再生し、ラット１匹当たりに、その溶液０．５ｍＬ（約２０Ｃｉ）を注射する。
【０１１５】
リスザルにおける蛋白損失性胃疾患
原理
蛋白損失性胃疾患（消化管における循環細胞および血漿蛋白の出現として発現する）は、標準的な非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）に対する重大な有害応答であって、それによって用量が限定される。それは、５１ＣｒＣｌ３溶液の静脈投与によって定量的に評価することができる。その同位体イオンは、細胞および血清グロブリン類ならびに細胞小胞体に強く結合することができる。従って、その同位体を投与してから２４時間にわたって採取した糞で認められる放射能の測定値は、蛋白損失性胃疾患の高感度かつ定量的な指標を提供するものである。
【０１１６】
方法
雄リスザル（０．８〜１．４ｋｇ）の群に、Ｈ２Ｏ媒体中の１％メトセルもしくは５％Ｔｗｅｅｎ８０（３ｍＬ／ｋｇ、１日２回）あるいは用量１〜１００ｍｇ／ｋｇ（１日２回）の被験化合物のいずれかを５日間にわたって、強制経口投与する。最後の薬剤／媒体投与から１時間後に、５１Ｃｒ（１ｍＬ／ｋｇのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中５Ｃｉ／ｋｇ）を静脈投与し、代謝ケージで２４時間にわたって糞を採取し、γ線カウンティングによって排泄５１Ｃｒを評価する。最後の薬剤投与から１時間後および８時間後に静脈血を採血し、ＲＰ−ＨＰＬＣによって、薬剤の血漿濃度を測定する。
【０１１７】
代表的生物学的データ
本発明の化合物はシクロオキシゲナーゼ−２の阻害薬であることから、上記で挙げたようなシクロオキシゲナーゼ−２介在疾患の治療において有用である。シクロオキシゲナーゼに対する化合物の活性は、以下に示す代表的結果で認めることができる。このアッセイでは、アラキドン酸、シクロオキシゲナーゼ−１またはシクロオキシゲナーゼ−２ならびに阻害薬候補剤の存在下で合成されるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の量を測定することで、阻害を求める。ＩＣ５０値は、ＰＧＥ２合成を未阻害対照と比較して得られる値の５０％まで回復させるのに必要な阻害薬候補剤の濃度を表す。
【０１１８】
上記生物アッセイの或るものについての結果を表ＩＩに示してある。
【０１１９】
【表５】
0004368524.tif 000014
【０１２０】
以下、実施例によって本発明を説明するが、本発明はこれら実施例によって限定されるものではない。以下の実施例において、別段の断りがない限り、下記の（ｉ）〜（ｖｉｉｉ）の通りとする。
【０１２１】
（ｉ）操作はいずれも室温もしくは環境温度、すなわち１８〜２５℃の範囲の温度で行った。
【０１２２】
（ｉｉ）溶媒留去は、６０℃以下の浴温で、減圧下（６００〜４０００パスカル；４．５〜３０ｍｍＨｇ）にて、ロータリーエバポレータを用いて行った。
【０１２３】
（ｉｉｉ）反応の経過は薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって追跡し、反応時間は例示のみを目的として示してある。
【０１２４】
（ｉｖ）融点は未補正であり、「ｄ」は分解を示している。示した融点は、ここに記載の方法に従って製造された材料について得られた融点である。一部の製造においては、多形によって、異なる融点を有する材料が単離される場合がある。
【０１２５】
（ｖ）全ての最終生成物の構造および純度は、ＴＬＣ、質量スペクトル分析、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル測定または微量分析データのうちの１以上の方法によって確認したものである。
【０１２６】
（ｖｉ）収率は、例示のみを目的として示したものである。
【０１２７】
（ｖｉｉ）ＮＭＲデータがある場合、そのデータは、指定の溶媒を用いて３００ＭＨｚまたは４００ＭＨｚで測定した、内部標準としてのテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対するｐｐｍで与えられる主要な特徴的プロトンについてのデルタ（ｄ）値の形で示してある。信号の形状に関して使用される略称は、ｓ（一重線）、ｄ（二重線）、ｔ（三重線）、ｍ（多重線）、ｂｒ（広い）などである。さらに、「Ａｒ」は芳香環の信号を表す。
【０１２８】
（ｖｉｉｉ）化学記号はその通常の意味を有する。以下の略称も用いた；ｖ（容量）、ｗ（重量）、ｂ．ｐ．（沸点）、ｍ．ｐ．（融点）、Ｌ（リットル）、ｍＬ（ミリリットル）、ｇ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、ｍｏｌ（モル）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、ｅｑ（当量）、ｒ．ｔ．（室温）、ｈ（時間）、ｍｉｎ（分）。
【０１２９】
実施例１
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
【０１３０】
段階１：２−アミノ−３−ブロモ−５−トリフルオロメチルピリジン
２−アミノ−５−トリフルオロメチルピリジン（９ｇ）の酢酸（７５ｍＬ）溶液に室温で、臭素（５．８ｍＬ）をゆっくり加えた。１時間後、０℃で水酸化ナトリウム（１０Ｎ）を注意深く加えることで酸を中和した。得られた橙赤色沈殿をエーテルに溶かし、飽和炭酸カリウム、飽和Ｎａ２ＳＯ３およびブラインの順で洗浄し、脱水し、濃縮した。残留固体をヘキサン中で１時間高攪拌して、濾過後に、標題化合物を白色固体として得た（１０．２ｇ）。
【０１３１】
段階２：２−アミノ−３−（４−メチルチオ）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン
段階１からの臭化物、４−メチルチオベンゼンボロン酸（Li et al., J. Med. Chem., 1995, 38, 4570）（８．５ｇ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（６０ｍＬ）およびパラジウムテトラキス（トリフェニルホスフィン）（４９０ｍｇ）のエタノール／ベンゼン（１００ｍＬ、１：１）中混合物を１５時間加熱還流した。混合物を冷却して室温とし、水で希釈し、エーテルで抽出した。有機層を濃縮し、残留物をエーテル／ヘキサン中で１時間高攪拌して、濾過後に標題化合物（１１．２ｇ）をベージュ固体として得た。
【０１３２】
段階３：２−アミノ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン
２−アミノ−３−（４−メチルチオ）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（９．７ｇ）、ＯｓＯ４（４％水溶液２ｍＬ）およびＮＭＯ（１３ｇ）の酢酸／水（６０ｍＬ：５ｍＬ）中混合物を室温で終夜攪拌した。飽和Ｎａ２ＳＯ３水溶液を加え、得られた混合物を３０分間攪拌した。アセトンを留去し、得られた混合物をエーテルおよび酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ３、水、ブラインで洗浄し、濃縮した。固体残留物をヘキサンおよびエーテル中で１時間高攪拌し、濾過して、標題化合物を淡黄色固体として得た（９．９ｇ）。
【０１３３】
段階４：２−ブロモ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン
２−アミノ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（７．２ｇ）の４８％ＨＢｒ（２５ｍＬ）および臭素（３．５ｍＬ）中溶液に０℃で、亜硝酸ナトリウム（３．９ｇ）を注意深くゆっくりと加えた。混合物を昇温させて室温とし、４時間攪拌した。混合物を飽和炭酸ナトリウムで処理し、エーテルで抽出した。有機層を飽和重亜硫酸ナトリウムおよびブラインの順で洗浄し、脱水し、濃縮した。残留物についてフラッシュクロマトグラフィー（７：３ヘキサン／酢酸エチル）を行って、標題化合物を淡黄色固体として得た（６．４ｇ）。
【０１３４】
段階５：３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
ピロリジン（０．５ｍＬ）、炭酸カリウム（２５０ｍｇ）および２−ブロモ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（１５０ｍｇ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中混合物を、ＴＬＣ分析で反応完結が示されるまで６５℃で攪拌した（１５時間）。その混合物に１Ｎ ＨＣｌを加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和重炭酸ナトリウムおよびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）または好適な溶媒（エーテルまたは酢酸エチルなど）中での残留物の高攪拌により、標題化合物を白色固体として得た（９３ｍｇ）。
【０１３５】
融点：１８４〜１８７℃。
【０１３６】
実施例２
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
ピロリジンに代えてピペリジンを用いた以外、実施例１段階５に記載の手順に従って、標題化合物を淡黄色固体として得た。
【０１３７】
融点：１５９〜１６０℃。
【０１３８】
実施例３
５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イルピリジン
【０１３９】
段階１：２−アミノ−３−ブロモ−５−クロロピリジン
２−アミノ−５−クロロピリジン（１０ｇ）の酢酸（７５ｍＬ）溶液に室温で、臭素（２．６ｍＬ）をゆっくり加えた。３０分後、０℃で水酸化ナトリウム（１０Ｎ）を注意深く加えることで酸を中和した。得られた橙赤色沈殿を酢酸エチルに溶かし、飽和炭酸カリウム、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３およびブラインの順で洗浄し、脱水し、濃縮した。残留固体のフラッシュクロマトグラフィー（溶離液：ヘキサン／酢酸エチル、３：１（体積基準））により、標題化合物を淡黄色固体として得た（１４．８ｇ）。
【０１４０】
段階２：２−アミノ−５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニルピリジン
２−アミノ−３−ブロモ−５−トリフルオロメチルピリジンに代えて段階１からの２−アミノ−３−ブロモ−５−クロロピリジン（５ｇ）を用いた以外、実施例１段階２および３に記載の手順に従って、標題化合物を白色固体として得た（５．３ｇ）。
【０１４１】
段階３：２，５−ジクロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニルピリジン
２−アミノ−５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニルピリジン（１．５ｇ）のジオキサン／水（１５ｍＬ）および濃ＨＣｌ（１．５ｍＬ）溶液に０℃で、亜硝酸ナトリウム（５８０ｍｇ）の水溶液（水１．５ｍＬ）を加えた。混合物を５℃で１時間攪拌し、ｐＨが塩基性となるまで１０Ｎ ＮａＯＨを加えた。混合物を水で希釈し、エーテルで４回抽出した。合わせた有機層を１０％ＮａＯＨで洗浄し、脱水し、濃縮した。粗固体（１．４ｇ）とＰＯＣｌ３（３リットル）とをスチールボンベ中で１１０℃にて３時間加熱した。混合物を冷却して室温とし、水で注意深く希釈し、１０Ｎ ＮａＯＨで中和した。混合物をエーテルで抽出し、有機層をブラインで洗浄し、脱水し、濃縮した。固体取得物をトルエンから再結晶して、標題化合物をオフホワイト固体（１．２ｇ）として得た。
【０１４２】
段階４：５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イルピリジン
ピペリジン（２５０ｍｇ）、炭酸セシウム（６８０ｍｇ）および２，５−ジクロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニルピリジン（２４０ｍｇ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中混合物を、ＴＬＣ分析で反応完結が示されるまで１２０℃で攪拌した（１５時間）。混合物に水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。残留物のクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）によって、標題化合物を白色固体として得た（１０１ｍｇ）。
【０１４３】
融点：１８４〜１８７℃
【０１４４】
元素分析
計算値：Ｃ、５８．２０；Ｈ、５．４６；Ｎ、７．９８
実測値：Ｃ、５８．０６；Ｈ、５．６０；Ｎ、７．８５。
【０１４５】
実施例４
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イルピリジン
【０１４６】
段階１：２−クロロ−３−（４−メチルチオ）フェニルピリジン
２−クロロ−３−ヒドロキシピリジン（２ｇ）およびトリエチルアミン（５ｍＬ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）溶液に、−７８℃で無水トリフルオロメタンスルホン酸（２．８ｍＬ）を加え、昇温させて室温とした。飽和塩化アンモニウムを加え、混合物をエーテルで抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、脱水し、濃縮した。粗トリフレートを含む残留取得物、４−メチルチオベンゼンボロン酸（Li et al., J.Med.Chem., 1995, 38, 4570）（２．６ｇ）、２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（１７ｍＬ）および触媒量のパラジウムテトラキス（トリフェニルホスフィン）のエタノール／ベンゼン（４０ｍＬ、１：１）中混合物を３時間加熱還流した。混合物を冷却して室温とし、水で希釈し、エーテルで抽出した。有機層を濃縮し、残留物についてフラッシュクロマトグラフィー（８５：１５ヘキサン／酢酸エチル）を行った。標題化合物を固体として得た（６４０ｍｇ）。
【０１４７】
段階２：２−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニルピリジン
２−アミノ−３−（４−メチルチオ）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジンに代えて、段階１からの２−クロロ−３−（４−メチルチオ）フェニルピリジンを用いた以外、実施例１段階３に記載の手順に従って、標題化合物を白色固体として得た。
【０１４８】
段階３：３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−ピペリジン−１−イルピリジン
ピペリジン（０．５ｍＬ）、炭酸カリウム（１００ｍｇ）および２−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニルピリジン（１５０ｍｇ）のＤＭＳＯ（１．５ｍＬ）中混合物を、ＴＬＣ分析で反応完結が示されるまで１６５℃で攪拌した（１５時間）。水を加え、混合物をエーテルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（７：３ヘキサン／酢酸エチル）により、標題化合物を黄色固体として得た（８０ｍｇ）。
【０１４９】
元素分析
計算値：Ｃ、６４．５３；Ｈ、６．３７；Ｎ、８．８５
実測値：Ｃ、６４．７１；Ｈ、６．４０；Ｎ、８．４７。
【０１５０】
実施例５
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（１，２，３，６−テトラヒドロピリジニル）−５−トリフルオロメチルピリジン
ピロリジンに代えて１，２，３，６−テトラヒドロピリジンを用いた以外、実施例１段階５に記載の手順に従って、標題化合物を固体として得た。
【０１５１】
融点：１４９〜１４９．５℃。
【０１５２】
実施例６
２−（ホモピペリジン−１−イル）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン
ピロリジンに代えてホモピペリジンを用いた以外、実施例１段階５に記載の手順に従って、標題化合物を固体として得た。
【０１５３】
融点：１６１．４〜１６３．５℃。
【０１５４】
実施例７
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
【０１５５】
段階１：２−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン
２−アミノ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（１．２ｇ）の水／濃ＨＣｌ（９．５ｍＬ：１ｍＬ）溶液に０℃で、亜硝酸ナトリウム（２６２ｍｇ）の水溶液（水５ｍＬ）を加えた。混合物を昇温して室温とし、終夜攪拌した。追加の亜硝酸ナトリウム３０ｍｇを加え、３時間後、不均一混合物を濾過した。固体の一部（２５０ｍｇ）とＰＯＣｌ３（１１０ｍＬ）のＤＭＦ（２ｍＬ）溶液を７０℃で６０時間加熱した。混合物を冷却して室温とし、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し、濃縮して、標題化合物を淡黄色固体として得た（２７０ｍｇ）。それをそのまま次の反応に用いた。
【０１５６】
段階２：３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
（Ｓ）−２−ピロリジンメタノール（４００ｍｇ）、炭酸セシウム（１ｇ）および２−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（６００ｍｇ）のＤＭＦ（６ｍＬ）中混合物を、ＴＬＣ分析で反応完結が示されるまで８０℃で攪拌した（１５時間）。水を加え、混合物をエーテルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（３：７ヘキサン／酢酸エチル）によって、標題化合物を白色泡状物として得た（４７０ｍｇ）。
【０１５７】
元素分析
計算値：Ｃ、５３．９９；Ｈ、４．７８；Ｎ、７．００
実測値：Ｃ、５４．１３；Ｈ、４．９３；Ｎ、６．８９。
【０１５８】
実施例８
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
（Ｓ）−２−ピロリジンメタノールに代えて（Ｒ）−２−ピロリジンメタノールを用いた以外、実施例７段階２に記載の手順に従って、標題化合物を白色泡状物として得た。
【０１５９】
元素分析
計算値：Ｃ、５３．９９；Ｈ、４．７８；Ｎ、７．００
実測値：Ｃ、５３．７５；Ｈ、４．７６；Ｎ、６．７８。
【０１６０】
実施例９
５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イルピリジン
（Ｓ）−２−ピロリジンメタノール（２ｍＬ）、ＣｕＩ（１６ｍｇ）および２，５−ジクロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニルピリジン（５１０ｍｇ）の混合物を、ＴＬＣ分析で反応完結が示されるまで１００℃で攪拌した（１５時間）。水を加え、混合物をエーテルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（３：７ヘキサン／酢酸エチル）によって、標題化合物を白色泡状物として得た（５００ｍｇ）。
【０１６１】
元素分析
計算値：Ｃ、５５．６６；Ｈ、５．２２；Ｎ、７．６４
実測値：Ｃ、５５．６８；Ｈ、５．３２；Ｎ、７．４７。
【０１６２】
実施例１０
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−メトキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
（Ｓ）−２−ピロリジンメタノールに代えて（Ｓ）−２−（メトキシメチル）ピロリジンを用いた以外、実施例７段階２に記載の手順に従って、標題化合物を白色泡状物として得た。
【０１６３】
元素分析
計算値：Ｃ、５５．０６；Ｈ、５．１１；Ｎ、６．７６
実測値：Ｃ、５５．２４；Ｈ、４．９４；Ｎ、６．６９。
【０１６４】
実施例１１
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−アセトキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン（２００ｍｇ）およびＤＭＡＰ（触媒量）のＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）溶液に室温で、無水酢酸（０．１ｍＬ）を加えた。２時間後、水を加え、混合物をエーテルで抽出した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（３：２ヘキサン／酢酸エチル）によって、標題化合物を白色泡状物として得た（１６０ｍｇ）。
【０１６５】
元素分析
計算値：Ｃ、５４．２９；Ｈ、４．７８；Ｎ、６．３３
実測値：Ｃ、５４．０９；Ｈ、４．７４；Ｎ、６．１７。
【０１６６】
実施例１２
５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−メトキシメチル）ピロリジン−１−イルピリジン
５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イルピリジン（６５ｍｇ）およびヨウ化メチル（０．１ｍＬ）のＤＭＦ（５ｍＬ）溶液に室温で、カリウムｔ−ブトキシド（１Ｍ ＴＨＦ溶液０．５ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を脱水し、濃縮した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（４：１ヘキサン／酢酸エチル）によって、標題化合物を白色泡状物として得た。
【０１６７】
１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、アセトン−ｄ６）：ｄ１．５〜１．６３（ｍ、１Ｈ）、１．６〜１．８３（ｍ、２Ｈ）、１．９７〜２．０５（ｍ、１Ｈ）、２．６０（ｄｔ、１Ｈ）、２．８５（ｄｔ、１Ｈ）、３．１５（ｓ、３Ｈ）、３．３０（ｓ、３Ｈ）、３．４０（ｄｄ、１Ｈ）、３．５９（ｄｄ、１Ｈ）、４．４８（ｍ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、１Ｈ）、７．７１（ｄ、２Ｈ）、７．９８（ｄ、２Ｈ）、８．１１（ｄ、１Ｈ）。
【０１６８】
実施例１３
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（２−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
２−（ヒドロキシメチル）ピペリジン（１ｍＬ）、ＣｕＩ（１０ｍｇ）および２−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（２００ｍｇ）の混合物を１００℃で１５時間攪拌した。水を加え、混合物をエーテルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）によって、標題化合物を白色泡状物として得た（５０ｍｇ）。
元素分析
【０１６９】
計算値：Ｃ、５５．０６；Ｈ、５．１１；Ｎ、６．７６
実測値：Ｃ、５４．７４；Ｈ、５．３４；Ｎ、６．５１。
【０１７０】
実施例１４および１５
（−）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジンおよび（＋）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
【０１７１】
段階１：ラセミ体の３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
２−（ヒドロキシメチル）ピペリジンに代えて３−（ヒドロキシメチル）ピペリジンを用いた以外、実施例１３に記載の手順に従って、標題化合物を白色固体として得た。
【０１７２】
元素分析
計算値：Ｃ、５５．０６；Ｈ、５．１１；Ｎ、６．７６
実測値：Ｃ、５４．７４；Ｈ、５．１５；Ｎ、６．６２。
【０１７３】
段階２：（−）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジンおよび（＋）−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
段階１で得られたラセミ体の一部（１００ｍｇ）について、キラルカラム（ＤＡＩＣＥＬからのキラルパック（chiralpak）ＡＤ；２×２５ｃｍ）ならびに流量９ｍＬ／分（１０×１０ｍｇ注入）での溶離液ヘキサン／イソプロパノール（８０：２０）を用いたＨＰＬＣを行った。保持時間１１．６分で最初に溶出した化合物（２９０ｎｍでモニタリング）を濃縮後に白色固体として得た（４０ｍｇ）（［ａ］Ｄ−７８°；ｃ＝０．２０５、ＣＨ２Ｃｌ２）。誘導したモッシャー（Mosher's）エステルの１Ｈ ＮＭＲは、＞９８％ｅｅを示していた。２番目に溶出した化合物（保持時間１２．５分）を、濃縮後に白色固体として得た（１５ｍｇ）（［ａ］Ｄ＋７２．２°；ｃ＝０．１８、ＣＨ２Ｃｌ２）。誘導したモッシャーエステルの１Ｈ ＮＭＲは、約９８％ｅｅを示していた。
【０１７４】
実施例１６
５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ピペリジン−１−イルピリジン
（Ｓ）−２−ピロリジンメタノールに代えて３−（ヒドロキシメチル）ピペリジンを用いた以外、実施例９に記載の手順に従って、標題化合物を淡黄色泡状物として得た。
元素分析
【０１７５】
計算値：Ｃ、５６．７６；Ｈ、５．５６；Ｎ、７．３５
実測値：Ｃ、５２．９２；Ｈ、５．７５；Ｎ、７．３４。
【０１７６】
実施例１７
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル−３−メチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
【０１７７】
段階１：３−ヒドロキシメチル−３−メチルピペリジン
ニペコチン酸エチル（１．３ｇ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液に室温で、カリウムビス（トリメチルシリル）アミド（０．５Ｍトルエン溶液１８ｍＬ）を加えた。１時間後、ヨウ化メチル（０．５ｍＬ）を加え、混合物を１５時間攪拌した。水を加え、混合物をエーテルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し、濃縮した。残留物（１．３ｇ）をＴＨＦ（２０ｍＬ）に溶かし、室温で水素化リチウムアルミニウム（１Ｍ ＴＨＦ溶液８．７ｍＬ）によって処理した。１５時間後、混合物を冷却して−５℃とし、酒石酸ナトリウムカリウム水溶液を加え、次に濃ＮＨ４ＯＨ、１０Ｎ ＮａＯＨを加え、得られた混合物を３０分間攪拌した。混合物を無水硫酸ナトリウムを通して濾過し、濾液をトルエンから２回濃縮した。標題化合物を含む残留油状物（１ｇ）を、精製せずに段階２で用いた。
【０１７８】
段階２：３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル−３−メチル）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
段階１からの粗３−ヒドロキシメチル−３−メチルピペリジン（５００ｍｇ）および２−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（３３０ｍｇ）の混合物を１００℃で３時間攪拌した。水を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２：３ヘキサン／酢酸エチル）を行い、次に半精製物をエーテル／ヘキサン中で高攪拌することで、標題化合物を白色固体として得た（２５０ｍｇ）。
【０１７９】
元素分析
計算値：Ｃ、５６．０６；Ｈ、５．４１；Ｎ、６．５４
実測値：Ｃ、５５．８３；Ｈ、４．７０；Ｎ、６．４２。
【０１８０】
実施例１８
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ホモピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
【０１８１】
段階１：Ｎ−ベンジルｅ−カプロラクタム
ｅ−カプロラクタム（２８．３ｇ）のＴＨＦ（５００ｍＬ）およびＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に室温で、水素化ナトリウム（６０％オイル中分散品１２ｇ）を少量ずつ加えた。添加終了後、臭化ベンジル（２９．７ｍＬ）を滴下し、滴下終了後、混合物を１５時間攪拌した。混合物に注意深く飽和塩化アンモニウムを加え、得られた混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、脱水し、濃縮した。標題化合物を白色固体として得て、それ以上精製せずに段階２で使用した。
【０１８２】
段階２：３−（ヒドロキシメチル）ホモピペリジン
ＬＤＡ（ジイソプロピルアミン５．３ｍＬおよびｎ−ＢｕＬｉの２．４Ｍヘキサン溶液１５．８ｍＬから０℃で調製したもの）のＴＨＦ（１５０ｍＬ）溶液に−７８℃で、段階１からのＮ−ベンジルｅ−カプロラクタム（７ｇ）を加えた。混合物を昇温させて−４０℃とし、次に冷却して−９８℃とした。その冷溶液にギ酸エチル（５当量）を加え、混合物を昇温させて室温とした。飽和塩化アンモニウムを加え、得られた混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を水およびブラインで洗浄し、シリカゲル層を通して濾過した。濾液を濃縮して、ホルミル化生成物（６ｇ）を得た。それをそのまま使用した。残留取得物をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶かし、水素化リチウムアルミニウム（１Ｍ ＴＨＦ溶液２当量）で処理した。１５時間後、混合物を冷却して−５℃とし、酒石酸ナトリウムカリウム水溶液を加え、次に濃ＮＨ４ＯＨ、１０Ｎ ＮａＯＨを加え、得られた混合物を３０分間攪拌した。混合物を無水硫酸ナトリウムを通して濾過し、濾液をシリカゲル層を通して濾過した。濾液を濃縮して、還元生成物（２．２ｇ）を得た。それをそのまま使用した。粗取得物と１０％Ｐｄ−Ｃ（２００ｍｇ）のエタノール（１００ｍＬ）中混合物を水素雰囲気（１気圧）下に２日間攪拌した。混合物をセライト層濾過し、濾液を濃縮した。残留物についてのフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル）によって、標題化合物を油状物として得て、それをそのまま段階３で用いた。
【０１８３】
段階３：３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシメチル）ホモピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
２−（ヒドロキシメチル）ピペリジンに代えて、３−（ヒドロキシメチル）ホモピペリジンを用いた以外、実施例１３に記載の手順に従って、標題化合物を白色固体として得た。
【０１８４】
元素分析
計算値：Ｃ、５６．０６；Ｈ、５．４１；Ｎ、６．５４
実測値：Ｃ、５５．８６；Ｈ、５．３０；Ｎ、６．４４。
【０１８５】
実施例１９
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（２−（２−ヒドロキシエチル））ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
２−ピペリジンエタノール（１．５ｇ）、ＣｕＩ（２０ｍｇ）および２−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（３３６ｍｇ）の混合物を１３０℃で１５時間攪拌した。水を加え、混合物をエーテルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）によって、標題化合物を白色固体として得た（５６ｍｇ）。
【０１８６】
融点：１３６〜１３７℃。
【０１８７】
実施例２０および２２
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジンおよび３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
【０１８８】
段階１：３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
４−ヒドロキシピペリジン（１ｇ）、ＣｕＩ（２０ｍｇ）、ジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ）および２−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（３３６ｍｇ）の混合物を１００℃で１５時間攪拌した。１Ｎ ＨＣｌおよびＣＨ２Ｃｌ２を加え、混合物を酢酸エチルおよびエーテルで抽出した。合わせた有機層を飽和アンモニアおよびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）によって、標題化合物（実施例２２）を白色固体として得た（１４７ｍｇ）。
【０１８９】
融点：１８５〜１８６．５℃。
【０１９０】
段階２：３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
段階１からの３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン（４００ｍｇ）、３Åモレキュラーシーブス（１ｇ）、ＴＰＡＰ（触媒量）およびＮＭＯ（２３４ｍｇ）のアセトニトリル（１０ｍＬ）中混合物を、室温で１５時間攪拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）とそれに続く半精製物のエーテル中での高攪拌によって、標題化合物（実施例２０）をベージュ固体として得た（７７ｍｇ）。
【０１９１】
元素分析
計算値：Ｃ、５４．２７；Ｈ、４．３０；Ｎ、７．０３
実測値：Ｃ、５３．９８；Ｈ、４．２３；Ｎ、６．９１。
【０１９２】
実施例２１および２３
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジンおよび３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
【０１９３】
段階１：３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
４−ヒドロキシピペリジンに代えて３−ヒドロキシピペリジンを用いた以外、実施例２０および２２の段階１に記載の手順に従って、標題化合物（実施例２３）を白色固体として得た。
【０１９４】
元素分析
計算値：Ｃ、５３．９９；Ｈ、４．７８；Ｎ、７．００
実測値：Ｃ、５３．７２；Ｈ、５．００；Ｎ、７．１０。
【０１９５】
段階２：３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジンに代えて、段階１からの３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジンを用いた以外、実施例２０および２２の段階２に記載の手順に従って、標題化合物（実施例２１）をベージュ固体として得た。
【０１９６】
融点：１７６〜１７６．５℃。
【０１９７】
実施例２４
２−（４，４−ジフルオロ）ピペリジン−１−イル−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン（４８０ｍｇ）およびＤＡＳＴ（０．３２ｍＬ）のベンゼン（１２ｍＬ）中混合物を３時間加熱還流した。飽和炭酸ナトリウムを注意深く加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（３：２ヘキサン／酢酸エチル）とそれに続く半精製物のエーテル中での高攪拌によって、標題化合物を白色固体として得た（３４０ｍｇ）。
【０１９８】
元素分析
計算値：Ｃ、５１．４３；Ｈ、４．０８；Ｎ、６．６６
実測値：Ｃ、５１．６２；Ｈ、３．８８；Ｎ、６．５７。
【０１９９】
実施例２５
２−（３，３−ジフルオロ）ピペリジン−１−イル−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジンに代えて３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（３−オキソ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジンを用いた以外、実施例２４に記載の手順に従って、標題化合物をオフホワイト固体として得た。
【０２００】
融点：１５２．５〜１５３．５℃。
【０２０１】
実施例２６
２−（４−フルオロ）ピペリジン−１−イル−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−（４−ヒドロキシ）ピペリジン−１−イル−５−トリフルオロメチルピリジン（１５０ｍｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（１．９ｍＬ）溶液に−７８℃でＤＡＳＴ（７４ｍＬ）を加えた。混合物を昇温させて室温とし、飽和炭酸ナトリウムを注意深く加えた。混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層をブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（３：２ヘキサン／酢酸エチル）とそれに続く半精製物のエーテル中での高攪拌によって、標題化合物を白色固体として得た（１１５ｍｇ）。
【０２０２】
融点：１３６〜１３７．５℃。
【０２０３】
実施例２７
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−モルホリン−４−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
２−（ヒドロキシメチル）ピペリジンに代えてモルホリンを用いた以外、実施例１３に記載の手順に従って、標題化合物を白色固体として得た。
【０２０４】
融点：１５９〜１６０℃。
【０２０５】
実施例２８
３−（４−メチルスルホニル）フェニル−２−チオモルホリン−４−イル−５−トリフルオロメチルピリジン
チオモルホリン（３５０ｍｇ）、ＣｕＩ（２０ｍｇ）、Ｎ−エチルモルホリン（２ｍＬ）および２−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）フェニル−５−トリフルオロメチルピリジン（５００ｍｇ）の混合物を１２８℃で１５時間攪拌した。１Ｎ ＨＣｌおよびＣＨ２Ｃｌ２を加え、混合物を酢酸エチルおよびエーテルで抽出した。合わせた有機層を飽和アンモニアおよびブラインで洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ４）、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１：１ヘキサン／酢酸エチル）とそれに続く半精製物のエーテル中での高攪拌によって、標題化合物を白色固体として得た（４６０ｍｇ）。
【０２０６】
元素分析
計算値：Ｃ、５０．７４；Ｈ、４．２６；Ｎ、６．９６
実測値：Ｃ、５０．５６；Ｈ、４．３４；Ｎ、６．９０