(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
痴呆の予防または治療のための医薬の製造のための、（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５β−フロスト−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシドまたはその立体異性体の使用。
【請求項２】
痴呆がアルツハイマー病、血管性痴呆、または混合型痴呆である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
活性成分としての（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５β−フロスト−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシドまたはその立体異性体、及び薬学的に受容できる担体、賦形剤または添加剤を含む、痴呆の予防または治療のための医薬組成物。
【請求項４】
着色剤、保存剤、スパイス、フレーバー及び甘味剤から選択される添加剤をさらに含む請求項３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、痴呆の予防または治療のためのステロイドサポニン化合物であって新規なステロイドサポニン化合物及び該化合物を含む医薬組成物に関する。
【０００２】
【背景】
痴呆は老年の人々にしばしばみられる疾病であり、そして記憶、論理的に考えること、判断、見当識が徐々に失われていくことを含む、全体的な認識の低下によっても定義される。これは主としてアルツハイマー病（ＡＤ）、血管性痴呆（ＶＤ）、混合痴呆及びいつくかの他のタイプを含む。痴呆の発生率はは６５を超えた老人で３〜８％であり、８０を超える老人には２０％程度に高い。中国の上海は米国と協力して最近痴呆の調査を実施し、そしてその結果は痴呆の発生率は上海においては６５を超える老人では４．３２％であったことを示している。社会の改善及び人の寿命の伸びによって、世界中の各国は老年化社会に入りつつあり、痴呆を患う患者は著しく増加するだろう。痴呆は解決しなければならない医療的及び社会的問題である。
【０００３】
最近、痴呆を治療するための薬剤の発見と開発に多くの注意が払われている。ＡＤの完全な治療または治癒は無いが、異なる薬剤学的な戦略が積極的に調査されている。現在、コリンエステラーゼインヒビター（タクリン、ｈｕｐｅｒｚｉｎｅ  Ａ）、血管拡張剤（ｈｙｄｅｒｇｉｎ）、カルシウム通過インヒビター（ｎｉｍｏｄｉｐｉｎｅ）、及び神経生長因子は、ＡＤの症状の治療への利用可能なアプローチを示す。痴呆を治療するための新しい有効な薬剤の開発は、大きな社会的重要性及び経済的利点を有する。
【０００４】
ステロイドサポニンは、スピロスタンから誘導される一群のオリゴ多糖グリコシドである。これはｍｏｎｏｃｏｔｙｌｅｄｏｎ及びｄｉｃｏｔｙｌｅｄｏｎを含む植物、特にＤｉｏｓｃｏｒｅａｃｅａｅ，  Ｌｉｌｉａｃｅａｅ、Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ、Ｓｍｉｌａｃａｃｅａｅ、Ａｇａｖａｃｅｅ等に広く分布している。例えば、ステロイドサポニンは、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｎｉｐｐｏｎｉｃａ  Ｍａｋｉｎｏ、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｐａｎｔｈａｉｃａ  Ｐｒａｉｎ  ｅｔ  Ｂｕｒｋ、Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ  Ｌ，、Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅ、Ｐａｒｉｓ  ｐｏｌｙｐｈｌｌａ、Ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ（Ｍｉｌｌ）Ｄｒａｃｅ、Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ａｇａｖｅ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  Ｌ等の中に豊富である。ステロイドサポニンは、ステロイド避妊薬、及びホルモン薬のための部分合成のための前駆体であるそのサポゲニンとして有名である。そしてサポゲニンはそれら自体よりも重要である。調査者達はまた、いくつかのステロイドサポニンは、抗腫瘍性であり、血糖を減じ、免疫を適応させ、コレステロールを減じ、心血管の疾患を治療でき、そして防腐の活性を有することが発見された。例えば、Ｐａｒｉｓ  ｐｏｌｙｐｈｙｌｌａからのサポニンＩ及びＩＶはＰ388、Ｌ−１２１０及びＫＢ細胞への細胞毒作用を有する。経口的に摂取された、Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅ．からの、プロトチモサポニンＡＩＩＩ及び偽ロトチモサポニンＡＩＩＩはストレプトゾトシン−及びアロキサン−糖尿病マウスにおいて、用量依存的に低血糖作用を示す。Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓからのサポニンははマウスに免疫刺激効果を示す。前のソビエト連邦の学者らは、いくつかのステロイドサポニンがコレステロールを低下させ、そしてスピロスタノールサポニンの活性がフロスタノールサポニンよりも高いことを発見した。ステロイドサポニンは、それがコレステロールとバクテリア細胞膜内で複合体を形成できるので、防腐作用を有する。Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｚｉｎｇｉｂｅｒｅｎｓｉｓ  Ｗｒｉｇｈｔからの水溶性サポニンは心臓のアンギナを軽減し、代謝を適応させ、そして冠動脈心臓疾患を治療することができる。
発明の目的
本発明の目的は、高い効果と低い副作用を伴って、痴呆の予防又は治療のための新しいクラスの薬剤を提供することである。
発明の概要
広くそして深い研究を通して、本発明者らは、式Ｉのサポニンが脳基部動脈を広げ、脳の循環及び代謝を改善し、ニコチンレセプターの数を有意に上に調節し、神経細胞の数を増加させ、そして遊離基を除去することができることを予期せずに発見した。顕著に、２つの細胞系統、ＳＹ−ＳＨ５Ｙ及びＭ１０の培養試験において、本発明の化合物が効率的にｎａＣｈＲの数を上に調節し、そして能力がニコチンのものと類似であることを発見した。さらに、効果は濃度に依存する。結果として、式Ｉの化合物は痴呆の予防及び治療に使用できる。本発明の完成は上記の発見に基づく。
【０００５】
本発明の最初の面は式Ｉのステロイドサポニン及びその立体異性体の痴呆及び治療のための使用に関する。
【０００６】
【化１８】
0004338306.tif 000002
【０００７】
【化１９】
0004338306.tif 000003
【０００８】
【化２０】
0004338306.tif 000004
【０００９】
【化２１】
0004338306.tif 000005
【００１０】
Ｒ4は水素、−ＯＨまたは−ＳＯ3Ｎａ、
Ｒ5は水素、ヒドロキシ、−Ｏ−Ｇｌｕまたは存在せず、
Ｒ6は水素、ＯＨ、オキソ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｑｕｉ−Ｒｈａまたは−Ｏ−Ｑｕｉ−Ｘｙｌ、
Ｒ12は水素、−ＯＨまたはオキソ（＝Ｏ）、
Ｒ14は水素、または−ＯＨ、
Ｒ15は水素、または−ＯＨ、
Ｒ22はヒドロキシ、またはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3（ｎは０〜３）、または存在せず、
Ｒ23は水素、または−ＯＨ、
Ｒ27は−ＣＨ3、−ＣＨ2ＯＨ、または＝ＣＨ2、
ＸはＯまたはＮＨであり、
［点線と実線の二重線］は単結合または二重結合を表わし、
Ｙは直接結合であるか、または存在せず、
ＺはＧｌｕであるか、または存在しない；
ただし、Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ3＝β−ＯＨ、Ｒ5＝β−Ｈ、Ｘ＝Ｏであり、［点線と実線の二重線］が単結合であり、Ｙが直接結合であり、Ｒ22は存在せず、Ｚは存在せず、Ｒ27は−ＣＨ#であり、そしてＣ25が（Ｓ）配置である式Ｉの化合物を含まないことを条件とする。
【００１１】
本発明の第２の面は、式ＩＩによって示される新規なステロイドサポニンに関する。
【００１２】
【化２２】
0004338306.tif 000006
【００１３】
式中、５位と６位の間の点線は二重結合を表わさず、５位はβＨであり、
Ｃ25はＳ配置であり、
Ｒ’15は水素、
Ｒ’2はα−ＯＨ又はβ−ＯＨ、
【００１４】
【化２３】
0004338306.tif 000007
【００１５】
Ｒ’22はＯＨまたはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3（ｎは０〜３）、または存在せず、同時に２０位と２２位の間の点線は二重結合を表わすか、
または
Ｒ’2は水素、
Ｒ’3は−Ｏ−Ｇａｌ−Ｇｌｕであり、
５位と６位の間の点線は二重結合を表わさず、５位はβＨであり、
Ｃ25は（Ｓ）配置であり、
Ｒ’15はα−ＯＨまたはβ−ＯＨであり、
Ｒ’22はＯＨまたはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3（ｎは０〜３）、または存在せず、同時に２０位と２２位の間の点線は二重結合を表わすか、
または
Ｒ’2は水素、
５位と６位の間の点線は二重結合を表わし、
Ｒ’15は水素、
Ｃ25はＲまたはＳ配置であり、
Ｒ’22はＯ（ＣＨ2）nＣＨ3（ｎは０〜３）、またはＲ’22は存在せず、同時に２０位と２２位の間の点線は二重結合を表わし、
【００１６】
【化２４】
0004338306.tif 000008
【００１７】
本発明のさらなる面は、活性成分としての式Ｉの化合物及び薬学的に受容できる担体、賦形剤または添加剤を含む、痴呆の予防及び治療のための医薬組成物に関する。
【００１８】
本発明の他の面は、痴呆の予防または治療のための薬剤の調製のための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００１９】
本発明の最後の面は、式Ｉの化合物またはこれを含む薬剤組成物の予防または治療有効量を痴呆の予防または治療を必要とするホストに投与することを含む方法に関する。
【００２０】
本発明の詳細な説明
図面の説明
図１は、本発明の化合物ＩＩＩの、ＫＣｌによって起こされたラットの大動脈収縮の禁止効果を示す。
【００２１】
図２は、本発明の化合物ＩＩＩの、ラットにおける脳血流への影響を示す。
図３は、本発明の化合物ＩＩＩの、ニコチンレセプターに対する働きを示す。
【００２２】
図４は、本発明の化合物ＩＩＩの、ニコチンレセプターに対する働きを示す。
本発明は、最初に化合物Ｉの化合物及びその立体異性体の痴呆の予防及び治療にための使用に関する。
【００２３】
【化２５】
0004338306.tif 000009
【００２４】
【化２６】
0004338306.tif 000010
【００２５】
【化２７】
0004338306.tif 000011
【００２６】
【化２８】
0004338306.tif 000012
【００２７】
Ｒ4は水素、−ＯＨまたは−ＳＯ3Ｎａ、
Ｒ5は水素、ヒドロキシ、−Ｏ−Ｇｌｕ、または存在せず、
Ｒ6は水素、ＯＨ、オキソ（＝Ｏ）、−Ｏ−Ｑｕｉ−Ｒｈａまたは−Ｏ−Ｑｕｉ−Ｘｙｌ、
Ｒ12は水素、−ＯＨまたはオキソ（＝Ｏ）、
Ｒ14は水素、または−ＯＨ、
Ｒ15は水素、または−ＯＨ、
Ｒ22はヒドロキシ、またはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3（ｎは０〜３）、または存在せず、
Ｒ23は水素、または−ＯＨ、
Ｒ27は−ＣＨ3、−ＣＨ2ＯＨ、または＝ＣＨ2、
ＸはＯまたはＮＨであり、
［点線と実線の二重線］は単結合または二重結合を表わし、
Ｙは直接結合であるか、または存在せず、
ＺはＧｌｕであるか、または存在しない；
ただし、Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ3＝β−ＯＨ、Ｒ5＝β−Ｈ、Ｘ＝Ｏであり、［点線と実線の二重線］が単結合であり、Ｙが直接結合であり、Ｒ22は存在せず、Ｚは存在せず、Ｒ27は−ＣＨ3であり、そしてＣ25が（Ｓ）配置である式Ｉの化合物を含まないことを条件とする。
【００２８】
本発明のさらなる面は、式ＩＩによって示される新規なステロイドサポニンに関する。
【００２９】
【化２９】
0004338306.tif 000013
【００３０】
式中、５位と６位の間の点線は二重結合を表わさず、５位はβＨであり、
Ｃ25はＳ配置であり、
Ｒ’15は水素、
Ｒ’2はα−ＯＨ又はβ−ＯＨ、
【００３１】
【化３０】
0004338306.tif 000014
【００３２】
Ｒ’22はＯＨまたはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3（ｎは０〜３）、または存在せず、同時に２０位と２２位の間の点線は二重結合を表わすか、
または
Ｒ’2は水素、
Ｒ’3は−Ｏ−Ｇａｌ−Ｇｌｕであり、
５位と６位の間の点線は二重結合を表わさず、５位はβＨであり、
Ｃ25は（Ｓ）配置であり、
Ｒ’15はα−ＯＨまたはβ−ＯＨであり、
Ｒ’22はＯＨまたはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3（ｎは０〜３）、または存在せず、同時に２０位と２２位の間の点線は二重結合を表わすか、
または
Ｒ’2は水素、
５位と６位の間の点線は二重結合を表わし、
Ｒ’15は水素、
Ｃ25はＲまたはＳ配置であり、
Ｒ’22はＯ（ＣＨ2）nＣＨ3（ｎは０〜３）、またはＲ’22は存在せず、同時に２０位と２２位の間の点線は二重結合を表わし、
【００３３】
【化３１】
0004338306.tif 000015
【００３４】
式Ｉまたは式ＩＩの化合物中にキラル炭素原子が存在し、それによって式Ｉまたは式ＩＩによって示される化合物の立体異性体も本発明の範囲に含まれることとが理解されるべきである。
【００３５】
式Ｉまたは式ＩＩにおいて、略号は次に示す通りである。
Ｇｌｕ：グルコース
Ｇａｌ：ガラクトース
Ｒｈａ：ラムノース
Ｘｙｌ：キシロース
Ａｒａ：アラビノース
Ｆｕｃ：フコース
Ｍａｎ：マンノース
Ｑｕｉ：キノボース
Ａｐｉ：アピオース。
【００３６】
本発明に従い、好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ3は−Ｏ−β−Ｇａｌ2−β−Ｇｌｕ、Ｒ5＝β−Ｈ、Ｒ27＝−ＣＨ3、そしてＣ25がＳ−配置であり、ＸはＯ、Ｚは−β−Ｇｌｕ、Ｙは存在せず、Ｒ22は存在せず、Ｃ２０位とＣ２２位との間の点線は二重結合であり、他の［点線と実線の二重線］は単結合である式Ｉの化合物である。
【００３７】
本発明に従い、好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ3は−Ｏ−β−Ｇｌｕ2−β−Ｇｌｕ、Ｒ5＝β−Ｈ、Ｒ27＝−ＣＨ3、そしてＣ25がＳ−配置であり、ＸはＯ、Ｚは−β−Ｇｌｕ、Ｙは存在せず、Ｒ22は存在せず、Ｃ２０位とＣ２２位との間の点線は二重結合であり、他の［点線と実線の二重線］は単結合である式Ｉの化合物である。
【００３８】
本発明に従い、好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ22はＯＨ、Ｒ3は−Ｏ−β−Ｇａｌ2−β−Ｇｌｕ、Ｒ5＝β−Ｈ、Ｃ25がＳ−配置であり、Ｒ27＝−ＣＨ3、ＸはＯ、Ｚは−β−Ｇｌｕ、Ｙは存在せず、［点線と実線の二重線］は単結合である式Ｉの化合物である。
【００３９】
本発明に従い、好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ22は−ＯＣＨ3、Ｒ3は−Ｏ−β−Ｇａｌ2−β−Ｇｌｕ、Ｒ5＝β−Ｈ、そしてＣ25がＳ−配置であり、Ｒ27は−ＣＨ3、ＸはＯ、Ｚは−β−Ｇｌｕ、Ｙは存在せず、［点線と実線の二重線］は単結合である式Ｉの化合物である。
【００４０】
本発明に従い、好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ3は
【００４１】
【化３２】
0004338306.tif 000016
【００４２】
Ｒ5＝α−Ｈ、Ｒ22は存在せず、Ｒ27＝−ＣＨ3、ＸはＯ、Ｙは直接結合、Ｚは存在せず、［点線と実線の二重線］は単結合であり、Ｃ２５はＲ−配置である式Ｉの化合物である。
【００４３】
本発明に従い、好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ3は
【００４４】
【化３３】
0004338306.tif 000017
【００４５】
Ｒ5＝α−Ｈ、Ｒ22は存在せず、Ｒ27＝−ＣＨ3、ＸはＯ、Ｙは直接結合、Ｚは存在せず、［点線と実線の二重線］は単結合であり、Ｃ２５はＳ−配置である式の化合物である。
【００４６】
本発明に従い、好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ22＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ2＝−α−ＯＨ、Ｒ3は
【００４７】
【化３４】
0004338306.tif 000018
【００４８】
Ｒ5＝α−Ｈ、Ｒ22は存在せず、Ｒ27＝−ＣＨ3、ＸはＯ、Ｙは直接結合、［点線と実線の二重線］は単結合であり、Ｚは存在せず、Ｃ２５はＲ−配置である式Ｉの化合物である。
【００４９】
本発明に従い、好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ2＝α−ＯＨ、Ｒ3は
【００５０】
【化３５】
0004338306.tif 000019
【００５１】
Ｒ5＝α−Ｈ、Ｒ22は存在せず、Ｒ27＝−ＣＨ3、ＸはＯ、Ｙは直接結合、［点線と実線の二重線］は単結合であり、Ｚは存在せず、Ｃ２５はＳ−配置である式Ｉの化合物である。
【００５２】
本発明に従い、好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ3は
【００５３】
【化３６】
0004338306.tif 000020
【００５４】
Ｒ22は存在せず、Ｒ27＝−ＣＨ3、ＸはＯ、Ｙは直接結合、Ｚは存在せず、Ｃ２５はＲ配置であり、Ｒ5は存在せず、Ｃ5ー6の［点線と実線の二重線］は二重結合であり、他の［点線と実線の二重線］は単結合である式Ｉの化合物である。
【００５５】
本発明に従い、好ましいものはＲ1＝Ｒ2＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ5は存在せず、Ｒ22は存在せず、Ｒ27＝−ＣＨ3、Ｒ3は
【００５６】
【化３７】
0004338306.tif 000021
【００５７】
ＸはＯ、Ｙは直接結合、Ｚは存在せず、Ｃ２５はＳ配置であり、Ｃ5ー6の［点線と実線の二重線］は二重結合であり、他の［点線と実線の二重線］は単結合である式Ｉの化合物である。
【００５８】
本発明に従い、Ｒ1＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ2＝α−ＯＨ、Ｒ3は
【００５９】
【化３８】
0004338306.tif 000022
【００６０】
Ｒ22は存在せず、Ｒ27＝−ＣＨ3、ＸはＯ、Ｙは直接結合、Ｚは存在せず、Ｃ２５はＲ配置であり、Ｒ5は存在せず、Ｃ5ー6の［点線と実線の二重線］は二重結合であり、他の［点線と実線の二重線］は単結合である式Ｉの化合物である。
【００６１】
好ましいものは、Ｒ1＝Ｒ4＝Ｒ6＝Ｒ12＝Ｒ14＝Ｒ15＝Ｒ23＝Ｈ、Ｒ2＝α−ＯＨ、Ｒ3は
【００６２】
【化３９】
0004338306.tif 000023
【００６３】
Ｒ22は存在せず、Ｒ27＝−ＣＨ3、ＸはＯ、Ｙは直接結合、Ｚは存在せず、Ｃ２５はＳ配置であり、Ｒ5は存在せず、Ｃ5ー6の［点線と実線の二重線］は二重結合であり、他の［点線と実線の二重線］は単結合である式Ｉの化合物である。
【００６４】
本発明に従い、式Ｉの好ましい化合物は、
（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５β−フロスト−３β、２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５β−フロスト−２β、３β、２６−トリオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
（２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５−エン−フロスト−３β、２６−ジオール−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）［β−Ｄ−グルコピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシド、
（２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５−エン−フロスト−３β、２６−ジオール−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシド、
（２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５−エン−フロスト−３β、２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）［β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシド、
（２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５−エン−フロスト−３β、２６−ジオール−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド、
（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−５β−フロスト−２０（２２）−エン−３β、２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド
より成る群から選択される。
【００６５】
本発明に従い、式ＩＩの好ましい化合物は、
（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５β−フロスト−２β，３β，２６−トリオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−メトキシ−５β−フロスト−２β，３β，２６−トリオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−５β−フロスト−２０（２２）−エン−２β，３β，２６−トリオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−ガラクトピラノシド、
（２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５−エン−フロスト−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
（２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−メトキシ−５−エン−フロスト−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
（２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−５−エン−フロスト−２０（２２）−エン−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド
より成る群から選択される。
【００６６】
本発明に従い、本発明の医薬組成物は、活性成分としての式Ｉの化合物及び薬学的に受容できる担体、賦形剤または添加剤を含む。
【００６７】
本発明に従い、本発明の医薬組成物は、活性成分としての式ＩＩの化合物及び薬学的に受容できる担体、賦形剤または添加剤を含む。
【００６８】
本発明に従い、本発明はさらに、痴呆の予防または治療のための薬剤の製造のための、式Ｉの化合物またはその立体異性体の使用に関する。
【００６９】
本発明に従い、式Ｉの化合物またはこれを含む薬剤組成物の予防または治療有効量を痴呆の予防または治療を必要とするホストに投与することを含む方法に関する。
【００７０】
本発明において、用語「痴呆」とは、アルツハイマー病、血管性痴呆、混合型の痴呆または他のタイプの痴呆に関する。
【００７１】
本発明において、式Ｉ及び式ＩＩの化合物は、Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅ．、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｐａｎｔｈａｉｃａ  Ｐｒａｉｎ  ｅｔ  Ｂｕｒｋ、Ａｌｌｉｕｍ  ｓａｔｉｖｕｍ  Ｌ，、Ｐａｒｉｓ  ｐｏｌｙｐｈｌｌａ、Ｐｏｌｙｇｏｎａｔｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ（Ｍｉｌｌ）Ｄｒａｃｅ、Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ、Ａｇａｖｅ  ａｍｅｒｉｃａｎａ  Ｌ、Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ  ｎｉｐｐｏｎｉｃａ  Ｍａｋｉｎｏ等のような植物から得ることができ、または合成によって製造できる。
産業上の用途
一般式（Ｉ）によって示される化合物は、通常の一般的な医薬製剤の形態で医薬として使用される。この医薬製剤は、充填剤、増量充填剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、表面活性剤、潤滑剤のような慣用の希釈剤を使用することによって配合される。医薬製剤は、治療目的に従って、種々の投与形態から選択できる。典型的な投与形態について、錠剤、ピル、粉末、液体、サスペンション、エマルジョン、グラニュール、カプセル、座剤、注射製剤（液体、サスペンション等）等によって例示できる。投与単位形態を錠剤へ付形する目的のために、この分野における周知の種々の担体が広く使用できる。担体の例について、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、珪酸等のような賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖溶液、澱粉溶液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、燐酸カリウム、ポリビニルピロリドン等のような結合剤；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、アガー−アガー粉末、ラミナラン粉末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸のモノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素化油等の崩壊禁止剤；４級アンモニウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム糖のような吸収促進剤；グリセリン、澱粉のような湿潤剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状珪酸等のような吸着剤；精製タルク、ステアレート、ほう酸粉末、ポリエチレングリコール等の潤滑剤があげられる。錠剤調製物はさらに、通常の錠剤コーティングによってコートされた錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチンフィルムでコートした錠剤、腸溶性コーティングでコートした錠剤、フィルムコーティングでコートされた錠剤、または２層錠、多層錠剤へと付形できる。投与単位をピルへと付形する目的のために、この分野で周知の種々の担体が使用できる。担体の例として、ブドウ糖、乳糖、澱粉、カカオバター、水素化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤；粉末アカシア、粉末トラガカント、ゼラチン、エタノール等のような結合剤；ラミナラン、アガー−アガー等のような崩壊剤が例示できる。投与単位を座剤へと付形する目的のために、この分野で周知の種々の担体が使用できる。担体の例について、ポリエチレングリコール、カカオバター、高級アルコール、高級アルコールのエステル、ゼラチン、半合成グリセリド等があげられる。投与単位をカプセルに付形する目的のために、有効成分としての式Ｉの化合物が上述の種々の担体と混合され、そしてそのように得られた混合物は硬質のゼラチンカプセルまたは軟質カプセル内におかれる。投与単位を硬質のゼラチンカプセルまたは軟質のカプセルへと付形する目的のために。投与形態を注射製剤と付形する目的のために、液体製剤、エマルジョン製剤及びサスペンション製剤が、滅菌され、さらにこれらの製剤は好ましくは血液に等張であり、そしてこの分野で慣用の全ての希釈剤、例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシイソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルが使用される。さらに、等張注射溶液を調製する目的のために、適量の塩化ナトリウム、ブドウ糖またはグリセリンを注射製剤に加えることができ、さらに通常の溶解添加剤、緩衝剤、局所麻酔剤等も使用し得る。さらに、もし必要であれば、着色剤、保存剤、スパイス、フレーバー、甘味剤等が医薬製剤に添加し得る。
【００７２】
本発明の医薬製剤内に含まれるべき式Ｉの化合物の量は、特定的に制限されず、そして広い範囲から適切に選択できる。
【００７３】
本発明の薬学製剤を投与する方法は制限されず、それらは種々の形態の製剤、患者の年齢、性別、及び他の条件、症状の程度等に従って投与される。例えば、錠剤、ピル、液体、サスペンション、エマルジョン、グラニュール及びカプセルが経口的に投与される。一方、注射製剤は血管内に、単一で、または必要であればブドウ糖またはアミノ酸溶液のような通常のと輸液と混合して投与され、それらは単一で筋肉内、皮内、皮下または腹膜内に投与される。
【００７４】
本発明の医薬製剤の用量は適切に、使用法、患者の年齢、性別及び他の条件、症状の程度に応じて選択される。
【００７５】
以下の実施例及び薬学的試験はこれを詳細に示すが、本発明のいかなる限定を意味しない。
【００７６】
Ｒｈｉｚｏｍａ  Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａｅは、Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅ．（Ｌｉｌｉａｎｃｅａｅ）の根茎である。心臓−洗浄及び炎症−除去機能並びに体液の生成を促進し、かつ肺に滋養になる作用によって、それは頻繁な臨床実践を有する。我々は、Ｒｈｉｚｏｍａ  Ａｎｅｍａｅｅｈｅｎａｅからステロイドサポニンを抽出し、精製し、それらの構造を解明し、そしてその作用を研究した。
実施例１
Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅ．（３ｋｇ）を９０％ＥｔＯＨで３回還流し、真空下に濃縮し、そしてＥｔＯＨを回収し、粗抽出物７００ｇを得た。粗抽出物を水に溶解し、濾過し、水溶性の画分及び水不溶性の画分を得た。水溶性の画分を濃縮し、そしてｎ−ＢｕＯＨで抽出した。ｎ−ＢｕＯＨ溶液を濃縮し、そして９０ｇの抽出物を得た。それをシリカゲルカラム上のクロマトグラフにかけ、そしてＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（６０：３５：１０低相）で溶出した。各画分は１５０ｍＬであり、高い極性の画分５４〜画分６２を合わせて、準画分を回収し、これをシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーに、ＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（最初６０：３５：１０、次に５５：３５：１０）の低相で再びかけた。我々は、画分４５〜画分４８（それぞれ１００ｍＬ）を合わせ、そして１．２ｇの残留物を得た。それを逆相予備ＨＰＬＣで繰り返し精製し、そして凍結乾燥して化合物Ｉ（２８．０ｍｇ）、化合物ＩＩ（１１．８ｍｇ）、化合物ＩＩＩ（５７．４ｍｇ）及び化合物ＩＶ（２０．０ｍｇ）をそれぞれ得た。
【００７７】
水不溶性画分をＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ3（１：１）で還流し、そして溶液を濃縮して淡黄色の抽出物（３８ｇ）を得、これをＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏの低相でシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにかけ、９つの画分（画分Ｉ−ＩＸ）を得た。画分ＩＶをシリカゲル上でＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（６０：３０：１０低相）によって再度クロマトグラフィーによって精製した。同じＴＬＣ特性を有する画分を合わせて、１３の画分（画分１〜１３）を回収した。それらのうち、画分７及び９を赤外検出器を有する逆相予備ＨＰＬＣによって精製した。物質Ｖ（１３．０ｍｇ）及び物質ＶＩＩ（１１．５ｍｇ）として試験的に設計されたステロイド成分を、画分７からＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（９０：１０）溶媒で得、物質ＶＩ（１０．６ｍｇ）及び物質ＶＩＩＩ（１１．７ｍｇ）を画分９からＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏ（８０：２０）溶媒で製造した。物質Ｖ〜ＶＩＩＩはそれぞれ一対のエピマーの４つの混合物である。「ａ」は、２５Ｒ異性体を示し、「ｂ」は２５Ｓ異性体を示す。
【００７８】
【化４０】
0004338306.tif 000024
【００７９】
実施例２
Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅ．の乾燥根茎（２ｋｇ）を沸騰水で４回煎じた。溶液を濃縮し、そしてＥｔＯＨで沈殿させた（最終濃度：７５％）。上澄みを真空下で濃縮し、次にｎ−ＢｕＯＨで抽出した。ｎ−ＢｕＯＨ溶液を濃縮して、９０ｇの残留物を得た。これをシリカゲルカラム上のクロマトグラフィーにかけ、そしてＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ−Ｈ2Ｏで繰り返し溶出した。溶出液をＴＬＣでチェックし、そして化合物ＩＩＩを含む画分を集め、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０上のカラムクロマトグラフィーに再びかけて化合物ＩＩＩ（７．１ｇ）を得た。
構造の解析
化合物Ｉ  白色非晶質粉末、融点＞２２６℃（分解）。リーベルマン−ブルヒャルト及びモーリシュ反応及びエールリッヒ試薬に陽性である。ＩＲγmaxｃｍ-1：
【００８０】
【数１】
0004338306.tif 000025
【００８１】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表１に示す。化合物Ｉの構造は、（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−５β−フロスト−２０（２２）−エン−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（アネマルサポニンＢ）であると解析された。
【００８２】
化合物ＩＩ  白色非晶質粉末、融点＞２１２℃（分解）。リーベルマン−ブルヒャルト及びモーリシュ反応及びエールリッヒ試薬に陽性である。Ｃ45Ｈ74Ｏ18・２．５Ｈ2Ｏについての分析計算。
【００８３】
【数２】
0004338306.tif 000026
【００８４】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表１に示す。化合物ＩＩの構造は、（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−５β−フロスト−２０（２２）−エン−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（アネマルサポニンＣ）であると解析された。
【００８５】
化合物ＩＩＩ  白色非晶質粉末、融点＞２４３℃（分解）。リーベルマン−ブルヒャルト及びモーリシュ反応及びエールリッヒ試薬に陽性である。
【００８６】
【数３】
0004338306.tif 000027
【００８７】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表１に示す。化合物ＩＩＩの構造は、（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５β−フロスト−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（プロトチモサポニンＡＩＩＩ）であると解析された。
【００８８】
化合物ＩＶ  白色非晶質粉末、融点２４４℃（分解）。リーベルマン−ブルヒャルト及びモーリシュ反応及びエールリッヒ試薬に陽性である。
【００８９】
【数４】
0004338306.tif 000028
【００９０】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表１に示す。化合物ＩＶの構造は、（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−メトキシ−５β−フロスト−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（アネマルサポニンＥ）であると解析された。
【００９１】
物質Ｖ  白色非晶質粉末、融点２７１℃（分解）。リーベルマン−ブルヒャルト及びモーリシュ反応に陽性で、エールリッヒ試薬に陰性である。
【００９２】
【数５】
0004338306.tif 000029
【００９３】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表２に示す。化合物Ｖａは、チゴゲニン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（デガラクトチゴニン）である。
【００９４】
【数６】
0004338306.tif 000030
【００９５】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表２に示す。化合物Ｖｂは、ネオチゴゲニン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（ジウラアントシドＡ）である。
【００９６】
物質ＶＩ  白色非晶質粉末、融点２４７℃（分解）。リーベルマン−ブルヒャルト及びモーリシュ反応に陽性で、エールリッヒ試薬に陰性である。
【００９７】
【化７】
0004338306.tif 000031
【００９８】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表２に示す。化合物ＶＩａは、ジトゲニン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｆ−ジトニン）である。
【００９９】
【数８】
0004338306.tif 000032
【０１００】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表２に示す。化合物ＶＩｂは、ネオジトゲニン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（アネマルサポニンＦ）である。
【０１０１】
物質ＶＩＩ  白色非晶質粉末、融点２４２℃（分解）。リーベルマン−ブルヒャルト及びモーリシュ反応に陽性で、エールリッヒ試薬に陰性である。
【０１０２】
【数９】
0004338306.tif 000033
【０１０３】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表２に示す。化合物ＶＩＩａは、ジオスゲニン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（アスピジストリン）である。
【０１０４】
【数１０】
0004338306.tif 000034
【０１０５】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表２に示す。化合物ＶＩＩｂは、ヤモゲニン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（３−Ｏ−β−リコテトラソイルヤモゲニン）である。
【０１０６】
物質ＶＩＩＩ  白色非晶質粉末、融点２５８℃（分解）。リーベルマン−ブルヒャルト及びモーリシュ反応に陽性で、エールリッヒ試薬に陰性である。
【０１０７】
【数１１】
0004338306.tif 000035
【０１０８】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表２に示す。化合物ＶＩＩＩａは、ユッカゲニン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）［β−Ｄ−グリコシピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（カラタビオシドＡ）である。
【０１０９】
【数１２】
0004338306.tif 000036
【０１１０】
13Ｃ−ＮＭＲデータを表２に示す。化合物ＶＩＩＩｂは、リラゲニン−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）［β−Ｄ−キシロピラノシル（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（アネマルサポニンＧ）である。
【０１１１】
【表１】
0004338306.tif 000037
【０１１２】
【表２】
0004338306.tif 000038
【０１１３】
【表３】
0004338306.tif 000039
【０１１４】
【表４】
0004338306.tif 000040
【０１１５】
実施例１及び２の方法によって、次の化合物が植物から得られる。
１＊（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５β−フロスト−２β，３β，２６−トリオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
２＊（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシル−２２−メトキシ−５β−フロスト−２β，３β，２６−トリオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
３＊（２５Ｓ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グリコピラノシル−５β−フロスト−２０（２２）−エン−２β，３β，２６−トリオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド。
【０１１６】
【化４１】
0004338306.tif 000041
【０１１７】
化合物１＊：Ｒ２２＝ＯＨ、Ｃ20−Ｃ22は単結合である。
化合物２＊：Ｒ２２＝ＯＣＨ3、Ｃ20−Ｃ22は単結合である。
化合物３＊：Ｒ２２は存在せず、Ｃ20−Ｃ22は二重結合である。
【０１１８】
【表５】
0004338306.tif 000042
【０１１９】
【数１３】
0004338306.tif 000043
【０１２０】
１＊＊  （２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−ヒドロキシ−５−エン−フロスト−３β、２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）］−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
２＊＊  （２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２２−メトキシ−５−エン−フロスト−３β，２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→４）］−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、
３＊＊  （２５Ｒ）−２６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−５−エン−フロスト−２０（２２）−エン−３β、２６−ジオール−３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→４）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド。
【０１２１】
【化４２】
0004338306.tif 000044
【０１２２】
化合物１＊＊：Ｒ２２＝ＯＨ、Ｃ20−Ｃ22は単結合である。
化合物２＊＊：Ｒ２２＝ＯＣＨ3、Ｃ20−Ｃ22は単結合である。
化合物３＊＊：Ｒ２２は存在せず、Ｃ20−Ｃ22は二重結合である。
【０１２３】
【表６】
0004338306.tif 000045
【０１２４】
薬理学的試験
痴呆は、記憶、論理的に考えること、判断、見当識が徐々に失われていくことを含む、全体的な認識の低下によって定義される、一群の進行性の精神的な劣化である。これは主としてアルツハイマー病（ＡＤ）、血管性痴呆（ＶＤ）、混合痴呆及びいつくかの他のタイプを含む。それらの病因因子は複雑で、ＡＤの機構は今だ不明瞭である。発明者らは、Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅ．特に、化合物ＩＩＩ（プロトチモサポニン  ＡＩＩＩ）の活性を、異なる角度で観察した。
一．脳循環及び代謝への影響
痴呆を治療するための薬剤の開発は、痴呆の病原論であると考えられる。血管性痴呆のために、我々は、Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅ．からのステロイドサポニンは血管、特に脳血管を広げるかどうか、及びそれらがインビボのモデルにおいて脳血流を改善できるかどうかを知る必要がある。
１．脳基部動脈での試験
方法：
（１）１ｍｇの化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ及びＩＶをそれぞれ１ｍＬの生理食塩液に溶解する。５０μＬの溶液をとり、５ｍＬの生理食塩液に再度溶解する。
（２）新鮮な脳から大脳及び小脳を除き、そして基部動脈の中央部分をとる。
（３）変換器及び増幅器を調節してポインターをゼロにする。
（４）基部動脈を変換器に取り付け、そしてそれを浴中に浸す。
結果：
（１）５０μＬの化合物ＩＩＩを浴に加えた後、基部動脈はわずかに広がり、そして血管収縮薬ＫＣｌを加えたときに再度収縮しなかった。
（２）同じ体積の化合物Ｉ、ＩＩまたはＩＶの溶液を加えたときに明らかな影響はなかった。
（３）本試験を繰り返し、そして同じ結果を得た。
【０１２５】
結果は、化合物ＩＩＩは、１０-5ｇ／ｍＬ（０．０１ｍＭ）の濃度で、脳血管を広げ、そして血管収縮薬によって起こされる収縮に抵抗することができ、これは同じ試験条件における陽性のＬｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅのものよりも２ケタの大きさ低い。
２．ラットの胸部大動脈での試験
方法：
ラットから胸部大動脈をとり、結合組織及び血液を除き、大動脈をＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ液内に浸し、そして酸素を通し、大動脈を変換器にとりつけ、そしてその半径方向の張力を測定した。
結果：図１
図１は、化合物ＩＩＩが０．０４ｍＭの濃度において、ＫＣｌによって起こされるラットの大動脈の収縮を抑止できることを示した。
３．ラットの脳血流への影響
インビボでの試験の後、我々は、化合物ＩＩＩのインビボモデルにおける脳血流への影響を観察した。
【０１２６】
方法：水素−クリーニング法
装置：ＬＳ−ＩＩＩ血流メーター
動物：ウイスターラット、雄
方法及び手順：
１．ラットを１０％の抱水クロラールで麻酔し、腿の一般血管を分離し、そして挿管して化合物ＩＩＩを注入する用意をした。
２．頭蓋ドリルで皮膚上皮の頭頂葉内に窓を開き、そして水素電極をしまった。
３．手術後、血流メーター及びコンピューターを動物とつなぎ、３０分間安定化し、そしてｒＣＢＦ（局所脳血流）を測定し始めた。結果：以下の表及び図２
【０１２７】
【表７】
0004338306.tif 000046
【０１２８】
結果及び議論
１．化合物ＩＩＩが、５０μｇ／ｋｇの濃度でインビボにおいてラットのｒＣＢＦを２６．５％増加できることが示された。このことは、化合物ＩＩＩが脳血流循環及び代謝を改善でき、そしてそれは痴呆、特に血管性痴呆の改善に有益である。
２．溶血現象がサポニンについての最大の問題である。この有効濃度での化合物ＩＩＩの静脈内投与の時に、溶血現象はみられなかった。
二．化合物ＩＩＩのニコチンレセプターへの影響
コリン作用系は認識と多くの関係を有している。最近、疫学的調査、病理学的研究及びいくつかの医薬品の活性（タクリン等）は、ニコチンレセプターはＡＤにおいて重要な役割を演じることを示した。１９８０年後半から、いくつかの試験はほとんど、ＡＤを有する患者の脳組織内のＮレセプターの数が通常の人々のものよりも５０％低いことを、一致して示した。脳のＮレセプターの高親和性結合と低い、そして比較的に高い減少の比率との間に一方に傾いた発現がある。末梢Ｎレセプターの数も減少した。ニコチンはニコチンレセプターの数を上に調節し、そして記憶及び注意を改善する。しかし、ニコチンは、抗痴呆薬剤として、いくつかの潜在的な問題（副作用）を与える。それらの調査者は、中枢ニコチンレセプターと選択的に相互作用する、一連のニコチン誘導体を抗痴呆薬剤として開発しようと務めた。
【０１２９】
この試験において、我々は２つの異なる細胞系列、ＳＹ−ＳＨ５Ｙ及びＭ１０を使用した。ＳＹ−ＳＨ５Ｙは、天然のニコチン及びムスカリンレセプターを出すヒトの神経芽腫細胞であり、Ｍ１０細胞はリコンビナントａ４ｂ２亜類の鶏ニコチンレセプターを出す。我々は、両方の細胞系列を化合物ＩＩＩで３日間１μＭ〜１００μＭの異なる濃度で処理し、そしてｎＡＣｈＲｓの量を測定した。結果を図３及び４に示す。
【０１３０】
この治療は、有意にｎＡＣｈＲｓの数を上に調節し、そしてこの効果は濃度に依存性であった。化合物ＩＩＩは、ｎＡＣｈＲｓの数を上に調節することにおいて、ニコチンとして同様の能力を示した。それはＡｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｃｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅの主成分１つであり、それは中国において１千年以上も使用されてきており、そして毒性がほとんどない。さらに、その構造はニコチンと非常に異なっており、従って我々は、ニコチンレセプターと相互作用する新しい種類の抗痴呆化合物を発見できると希望する。
三．ラットの海馬ニューロン細胞の増殖への影響
方法：
１．ラットの胎児から海馬ニューロン細胞を得、そして予備的な細胞培養を行う。
【０１３１】
２．細胞を７日間、異なる濃度でインキュベートする（各群について３または５の平行穴）。
【０１３２】
３．ＭＴＴ染色を行い、ＯＤ値を測定する。
【０１３３】
【表８】
0004338306.tif 000047
【０１３４】
予備細胞培養は、化合物ＩＩＩがラットの海馬ニューロン細胞の増殖を促進できることを示した。この化合物へ７日間暴露すると、各群における細胞の数の増加は、０．１μＭ〜５００μＭの範囲の濃度で２３．９％〜４４．７％の範囲であった。
四．ヒドロキシル遊離基への除去効果
遊離基反応は、神経細胞膜の構造及び機能の損傷を引き起こす顕著な因子の１つであると考えられる。遊離基で仲介されるニューロンの損傷は、アルツハイマー病の病因への主に寄与するものであり得ることへの合意が大きくなりつつある。幾人かの調査者が痴呆を治療するためのいくつかの遊離基除去物を開発している。我々は、Ａｎｅｍａｒｒｈｅｎａ  ａｓｐｈｏｄｅｌｏｉｄｅｓ  Ｂｇｅ．からのサポニンのヒドロキシ遊離基への除去効果をＥＳＲ（電子スピン共鳴）法によって研究した。
１．材料及び方法：
ヒドロキシ遊離基を、フェントン反応によって発生させる。５μＬの２ｍＭ  ＦｅＳＯ４、１０μＬの０．８ｍＭ  ＤＭＰＯ及び５μＬの５０ｍＭ  ＥＤＴＡを混合し、５μＬのＨ2Ｏ2を混合物へ添加し、次に２５μＬのサポニンまたは蒸留水を加え、混合して、そして溶液を石英細管内に入れ、そしてそれを１分後に測定した。
【０１３５】
試験は、ＥＳＰ  ３００  ＥＳＲスペクトラムメーター上で行う。
条件：室温、ＣＦ＝３４７０ＧＳ、ＳＷ＝２００ＧＳ、ＭＦ＝２５ＫＨｚ、ＭＡ＝１ＧＳ、ＣＴ＝８４Ｓ、Ｐ（電力）＝１０ｍＷ。
【０１３６】
化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩをそれぞれ秤量し、そして蒸留水を加えて１０ｍｇ／ｍＬの溶液をつくる。各溶液をヒドロキシ遊離基系に、１：１の比率で加える。蒸留水はブランク対照として同じ条件で働く。ＥＳＲスペクトル信号の大きさを測定する。
【０１３７】
次の式を基に、クリアランス率を計算する。
Ｅ（％）＝（ｈｏ−ｈｘ）／ｈｏ×１００
「ｈｏ」は対照のＥＳＰスペクトルの高さを示す。
「ｈｘ」はサポニンが加えられたときの相当するピークの高さを示す。
２．結果
【０１３８】
【表９】
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【０１３９】
結果は、化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶがフェントン反応（Ｆｅ2+＋Ｈ2Ｏ2）によって生じたヒドロキシ遊離基を除去できることを示した。化合物ＩＩＩの効果が最も有効である。５ｍＭの濃度において、その禁止率は５６．７％である。物質Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ及びＶＩＩＩは除去効果はなかった。これはそれらが水溶性でないからかもしれない。試験は、化合物ＩＩＩの抗痴呆活性がその遊離基の除去効果と関係し得ることを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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