(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（１）式で示されるオイゲニンからなることを特徴とするα−グルコシダーゼ阻害剤。
【化１】
0004380815.tif 000015
【請求項２】
クローブの水及び／又は有機溶剤の抽出物から得られるものであることを特徴とする請求項１に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、医薬品、食品、健康食品、特定保健用食品などに使用することができるクローブあるいはクローブの水及び／又は有機溶剤の抽出物を有効成分として含有してなるα−グルコシダーゼ阻害物質に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
α−グルコシダーゼ阻害物質は、小腸の微絨毛に局在するα−グルコシダーゼを阻害し、食後の血糖値の急上昇及びそれに続くインスリン値の上昇を抑制することが、Diabate Medicine, 10, 688(1993)に報告され、人間及び人間以外の動物においても炭水化物（特に、澱粉由来のオリゴ糖、シュクロース等）の代謝を抑制するために、例えば血糖上昇抑制作用を示し、過血糖症状及び過血糖に由来する肥満症、糖尿病などの種々の疾患の改善に有用である。また、α−グルコシダーゼ阻害物質を添加して製造した（健康）食品は、代謝異常の患者食に適しており、さらに代謝異常予防食として健康な人にも適している。
【０００３】
食品に由来するα−グルコシダーゼ阻害物質としては、例えば、特開平９−６５８３６号公報には、動物性蛋白質又は植物性蛋白質の酵素加水分解物が開示され、特開平５−１７３６４号公報には茶ポリフェノールが開示されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記特開平９−６５８３６号公報に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤は、α−グルコシダーゼ阻害活性を示すためには食品として大量に摂取しなくてはならず、また、特開平５−１７３６４号公報開示技術では、ポリフェノールの精製が煩雑であり、かつ通常摂取する茶ではやはり多量に摂取する必要があった。本発明では、α−グルコシダ一ゼ阻害活性が強く、かつ摂取も容易な優れたα−グルコシダーゼ阻害物質を提供することを目的とするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、鋭意検討を行った結果、食材としても用いられているクローブが、強いα−グルコシダーゼ阻害活性を有することを見いだし本発明を完成するに至った。
【０００６】
本発明のクローブ（Syzgium aromaticum Merrill et Perry）は香辛料として一般に市販されているものである。クローブは全部を用いてもよいが、好ましくは蕾部を用いる。
【０００７】
クローブは乾燥させて粉末化したり、そのものを水中で粉砕しスラリー状にしたものでもα−グルコシダーゼ阻害活性を示し、水、有機溶剤等で抽出でき、該有機溶剤としてはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール、酢酸エチル、アセトン等が挙げられる。中でも、クローブの水及び／又はアルコールでの抽出物がより強いα−グルコシダーゼ阻害活性が得られるので好ましく、更には３０〜７０重量％アルコール水溶液による抽出物が好ましく、該アルコールとしては、メタノール、エタノールが好ましい。抽出法としては、加熱抽出、連続抽出、浸漬、超臨界抽出などの抽出方法を使用してもよい。    抽出法として具体的には、クローブに３０〜７０重量％メタノール水溶液をグローブの乾燥重量に対して、５〜１００倍重量加え、室温で１〜７日放置、もしくは、４０〜６０℃で１２〜１８時間程度加熱することにより、有効成分を抽出することができる。
【０００８】
該抽出物は、水、有機溶剤を留去すれば、オイル状となり、これをα−グルコシダーゼ阻害物質として用いることが好ましい。
さらに、少量の摂取で効果を挙げるために、該抽出物をメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、クロロホルム、酢酸エチル、トルエン、ヘキサン、ベンゼンなどの極性有機溶媒を用いた溶媒分画操作によって有効成分を濃縮し、更にアルミナカラムクロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフイー、高速液体クロマトグラフィーなどの適当な分離精製により精製することもできる。
【０００９】
上記精製法により、下記式（２）〜（５）の化合物〔（２）：2-methyl-5,7-dihydroxychromone 8-C-β-D-glucoside、（３）：2-methyl-5,7-dihydroxychromone 6-C-β-D-glucoside(biflorin)、（４）：β-1-galloyl-2,3:4,6-bis-hexahydroxydiphenoyl-D-glucose、（５）：β-1,2,3-trigalloyl-4,6-hexahydroxydiphenoyl-D-glucose(eugeniin、オイゲニイン)〕が単離され、これらの単離化合物をα−グルコシダーゼ阻害物質として用いることも可能である。
【００１０】
【化２】
0004380815.tif 000002
【００１１】
【化３】
0004380815.tif 000003
【００１２】
【化４】
0004380815.tif 000004
【００１３】
【化５】
0004380815.tif 000005
【００１４】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害物質は、血糖上昇抑制作用を有しているので水、エタノール、エチレングリコール、ポリエチレングリコールなどの液状担体や、でんぷん、セルロース、ポリアミド粉末などの固形担体などの無毒性担体で希釈して、アンプル剤、顆粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、シロツプ剤等の医薬品、健康食品として代謝異常の患者食又は予防薬、糖尿病、肥満症の予防薬として用いることができる。さらに、本発明のα−グルコシダーゼ阻害物質を含有する上記製剤を、食前、食中、食後、食間などに服用することにより、喫食による血糖濃度の増加を抑制することができる。
【００１５】
このときの人の摂取量としては、クローブの乾燥粉末として、０．１〜５０ｇ／日が好ましく、特に０．５〜２０ｇ／日が好ましい。水及び／又は有機溶剤の抽出物あるいは、上記で述べた単離化合物を用いる場合、該乾燥粉末の１／１０００〜１／１０の摂取量でもよい。
【００１６】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害物質は、食品に添加することも可能で、例えば、コーヒー、果汁、清涼飲料水、ビール、牛乳、味噌汁、スープ、紅茶、茶、栄養剤、シロップ、マーガリン、ジャムなどの液状（流動状）食品、米飯、パン、じゃがいも製品、もち、飴、チョコレート、ふりかけ、ハム、ソーセイジ、キャンディーなどの固形形状食品などの主食、 副食、 菓子類ならびに調味料に添加することも可能である。このときの添加量としては、上記食品に対して、クローブの乾燥粉末として、０．００１〜８５重量％が好ましく、特に０．０１〜６０重量％が好ましい。水及び／又は有機溶剤抽出物あるいは、上記で述べた単離化合物を用いる場合、該乾燥粉末の１／１０００〜１／１０（重量比）の添加量でもよい。また、食品の場合も摂取量は上記で述べた医薬品、健康食品の場合と同様が好ましく、さらに本発明の効果を阻害しない範囲で、甘味剤、保存剤、分散剤、着色剤、酸化防止剤等も併用することができる。更に、その他の公知のα−グルコシダーゼ阻害物質であるバリエナミンやアミノシクリトールなどのα−グルコシダ一ゼ阻害物質と併用してもよい。
【００１７】
【実施例】
以下本発明について具体的に説明する。尚、以下の記述で「％」とあるのは重量％である。
実施例１
乾燥したクローブの蕾部２５ｇに５０％メタノール水溶液２５０ｍｌを加え、室温で１日静置抽出後、抽出液をロータリーエバポレーターで濃縮し、オイル状物を得た。該オイル状物を分液漏斗に入れて、ヘキサン／水〔１／１（容量比）〕の混合溶液を濃縮液の５倍量加えて、水層を分画し、更に水飽和ブタノールを水層の３倍重量加えて振盪し、ブタノール層を分画する。該ブタノール層をエバポレータで濃縮する。
該濃縮画分を逆相シリカゲルクロマトグラフィーにアプライし、水、メタノール、ギ酸〔６：４：０．１（容量比〕）の混合溶媒系で溶出を行った。該溶出画分を逆相高速液体クロマトグラフィーにアプライし、水、アセトニトリル、トリフルオロ酢酸〔８：２：０．０１（容量比）〕で溶出した。この溶出画分のα−グルコシダーゼ阻害活性を測定し、α−グルコシダーゼ阻害活性の認められた溶出画分（ＣＢ−１、ＣＢ−２、ＣＢ−３、ＣＢ−４）の収量を表１に示した。また、ＭＳ、ＮＭＲによりそれぞれの溶出画分（ＣＢ−１、ＣＢ−２、ＣＢ−３、ＣＢ−４）を同定し、その結果を以下に示す。
【００１８】
ＣＢ−１は、下記式（６）〔(2-methyl-5,7-dihydroxychromone 8-C-β-D-glucoside)〕と同定された。
【００１９】
【化６】
0004380815.tif 000006
0004380815.tif 000007
【００２０】
ＣＢ−２は下記式（７）〔(2-methyl-5,7-dihydroxychromone 6-C-β-D-glucoside(biflorin)〕と同定された。
【００２１】
【化７】
0004380815.tif 000008
0004380815.tif 000009
【００２２】
ＣＢ−３は下記式（８）〔β-1-galloyl-2,3:4,6-bis-hexahydroxydiphenoyl
-D-glucose)〕と同定された。
【００２３】
【化８】
0004380815.tif 000010
0004380815.tif 000011
【００２４】
ＣＢ−４は下記式（９）〔β-1,2,3-trigalloyl-4,6-hexahyroxydiphenoyl-D-      glucose、オイゲニイン〕と同定された。
【００２５】
【化９】
0004380815.tif 000012
0004380815.tif 000013
【００２６】
また、それぞれの溶出画分のα−グルコシダーゼ阻害活性は、以下のように測定した。
（１） ラット小腸からの二（三）糖加水分解酵素（α−グルコシダーゼ）の調製
冷凍保存しておいたラット小腸（空腸）を解凍し、粘膜をピンセットで押出すように採取した。該粘膜に５倍重量の５ｍＭエチレンジアミン四酢酸を含む０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、冷却しながらホモゲナイズした。その後遠心分離（４℃、２１０００×ｇ、６０分）し、得られた沈殿に５倍重量になるように１％トリトンＸ−１００を含む０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）を加え、可溶化処理（４℃、６０分）を行った。これを超遠心分離（４℃、１１００００×ｇ、９０分）し、この上清を０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）で透析（４℃、２４時間）し、酵素液とした。
【００２７】
（２）酵素（α−グルコシダーゼ活性）の測定
酵素活性は市販のキットを用い、基質としてはシュクロースを用いた。
標準反応液組成は、６０ｍＭ基質溶液（シュクロースを０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液ｐＨ６．３に溶解してたもの）０．７ｍｌ、被験物質溶液（それぞれの溶出画分の水、有機溶剤を完全に除去した後、５０％ジメチルスルホキシド水溶液に溶解）０．２ｍｌ、上記酵素液０．１ｍｌ（計１．０ｍｌ）とした。この反応液を３７℃、１５分間反応させ、２Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）１．５ｍｌを用いて反応を停止させ試験液とした。それぞれの溶出画分の阻害活性を、反応液中の被験物の濃度が１０-3Ｍとして以下の測定方法で求めた。
次に９６穴マイクロプレートに１穴あたり発色試薬（グルコースＢテストワコー（和光純薬製））２００μｌに試験液５０μｌを加え、３７℃で３０分間インキュベートした後、マイクロプレートリーダ（ＢＩＯ  ＲＡＤ社製、ＭＯＤＥＬ５５０）で４９０ｎｍの吸光度を測定した。基質溶液の代りに０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．３）を加えた時の吸光度をブランク値とし、この値を差し引いた値をＡ490sとした。被験液の代りに５０重量％ジメチルスルホキシド水溶液を加えた時の吸光度をコントロール値（Ａ490c）とし、下式によりα−グルコシダーゼ阻害活性を求めた。測定は２回行い、平均値を測定値とした。
【００２８】
【数１】
α−グルコシダーゼ阻害活性（％）＝{(Ａ490c−Ａ490s)/Ａ490c}×１００
上記溶出画分のα−グルコシダーゼ阻害活性を表１に示した。
【００２９】
【表１】
0004380815.tif 000014
【００３０】
【発明の効果】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害物質はクローブあるいはクローブの水及び／又は有機溶剤の抽出物を有効成分として含有するので、摂取し易く、強い阻害活性を示す。