(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のあるトマト植物を生産する方法であって、
ａ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のある、ＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を供し、
ｂ．Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ａで供されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を交雑させ、
ｃ．段階ｂでの交雑から得られた種子を収集し、
ｄ．該種子を植物に再生させ、
ｅ．段階ｄの植物を、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性について評価し、
ｆ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を同定して選択する、
段階を包含する方法。
【請求項２】
さらに、所望の果実サイズ、形状、香り、色または貯蔵寿命を示すＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ｆで選択された植物を戻し交雑させ、交雑から得られた種子を収集し、該種子を植物に再生させ、該植物をＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性について評価し、及び、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を同定して選択する段階を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
植物を、発病評価区分スケールを用いてＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性について段階ｅで評価し、発病評価区分が１〜５の数字系［ここで、１は、病班がないかまたは葉のみに小さな病班があることに対応し；２は、葉に病班がないかまたは小さな病班があり、かつ葉の病班が拡大して葉柄に小さな病班（直径２ｍｍ）があることに対応し；３は、葉に病班がないかまたは小さな病班があり、葉の病班が拡大して葉柄に小さな病班（直径２ｍｍ）があり、かつ葉柄の病班が拡大していることに対応し；４は、葉に病班がないかまたは小さな病班があり、葉の病班が拡大して葉柄に小さな病班（直径２ｍｍ）があり、葉柄の病班が拡大し、かつ茎に小さな病班（直径２ｍｍ）があることに対応し；及び、５は、葉に病班がないかまたは小さな病班があり、葉の病班が拡大して葉柄に小さな病班（直径２ｍｍ）があり、葉柄の病班が拡大し、茎に小さな病班（直径２ｍｍ）があり、かつ茎の病班が拡大しているか、または植物が死滅することに対応する］からなり、２．９未満の発病評価区分を示す系統を耐性であると見なし、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を段階ｆで同定して選択する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性であるトマト植物を生産する方法であって、
ａ．ＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と交雑させ、
ｂ．段階ａでの交雑から得られた種子を収集し、
ｃ．該種子を植物に再生させ、
ｄ．段階ｃの植物を、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性について評価し、及び、
ｅ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を同定して選択する、
段階を包含する方法。
【請求項５】
さらに、段階ｅで選択された植物を、所望の果実サイズ、形状、香り、色または貯蔵寿命を示すＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と戻し交雑させ、交雑から得られた種子を収集し、該種子を植物に再生させ、該植物をＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性について評価し、及び、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を同定して選択する段階を包含する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
植物を、発病評価区分スケールを用いてＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性について段階ｄで評価し、発病評価区分が１〜５の数字系［ここで、１は、病班がないかまたは葉のみに小さな病班があることに対応し；２は、葉に病班がないかまたは小さな病班があり、かつ葉の病班が拡大して葉柄に小さな病班（直径２ｍｍ）があることに対応し；３は、葉に病班がないかまたは小さな病班があり、葉の病班が拡大して葉柄に小さな病班（直径２ｍｍ）があり、かつ葉柄の病班が拡大していることに対応し；４は、葉に病班がないかまたは小さな病班があり、葉の病班が拡大して葉柄に小さな病班（直径２ｍｍ）があり、葉柄の病班が拡大し、かつ茎に小さな病班（直径２ｍｍ）があることに対応し；及び、５は、葉に病班がないかまたは小さな病班があり、葉の病班が拡大して葉柄に小さな病班（直径２ｍｍ）があり、葉柄の病班が拡大し、茎に小さな病班（直径２ｍｍ）があり、かつ茎の病班が拡大しているか、または植物が死滅することに対応する］からなり、２．９未満の発病評価区分を示す系統を耐性であると見なし、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を段階ｅで同定して選択する、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性であるトマト植物を生産する方法であって、
ａ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のある、ＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物から得たプロトプラストを、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物から得たプロトプラストと融合させ、
ｂ．得られた異質遺伝子細胞をＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物に再生させて、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性について評価し、及び、
ｃ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を同定して選択する、
段階を包含する方法。
【請求項８】
請求項１、４または７の方法によって生産された、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性であるトマト植物。
【請求項９】
請求項８の植物によって生産された種子。
【請求項１０】
ａ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のある、ＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を供し、
ｂ．Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ａで供されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を交雑させ、
ｃ．段階ｂでの交雑から生じる種子を収集し、
ｄ．該種子を植物に再生させ、
ｅ．段階ｄの植物を、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性について評価し、
ｆ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を同定して選択し、
ｇ．段階ｆの植物を、所望の果実サイズ、形状、香り、色または貯蔵寿命を示すＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と戻し交雑させ、
ｈ．段階ｇの交雑から生じる種子を収集して、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のあるトマト植物を得る、
段階を包含する方法によって生成された、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性のあるトマト植物。
【請求項１１】
ａ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のある、ＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物から得たプロトプラストを、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物から得たプロトプラストと融合させ、
ｂ．得られた異質遺伝子細胞をＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物に再生させて、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性について評価し、及び、
ｃ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を同定して選択する、
段階を包含する方法によって生成された、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性であるトマト植物。
【請求項１２】
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のあるトマト植物となる種子を生産する方法であって、
ａ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のある、ＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を供し、
ｂ．Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ａで供されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を交雑させ、
ｃ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のあるトマト植物になる、段階ｂでの交雑から得られた種子を収集する、
段階を包含する方法。
【請求項１３】
Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のあるトマト植物となる種子を生産する方法であって、
ａ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のある、ＡＴＣＣ受託番号９７３８２号を有するＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を供し、
ｂ．Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と、段階ａで供されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を交雑させ、
ｃ．段階ｂでの交雑から得られた種子を収集し、
ｄ．該種子を植物に再生させ、
ｅ．段階ｄの植物を、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性について評価し、
ｆ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性である植物を同定して選択し、
ｇ．段階ｆの植物を、所望の果実サイズ、形状、香り、色または貯蔵寿命を示すＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物と戻し交雑させ、
ｈ．Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性のあるトマト植物になる、段階ｇの交雑から得られた種子を収集する、
段階を包含する方法。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
１世紀以上の間、トマトおよびポテト植物における斑点病（ｌａｔｅ  ｂｌｉｇｈｔ）は、植物育種者に懸念の原因になってきた。斑点病は、寒冷で湿潤な気候を示す地域によくあり、湿度が高い雨季には壊滅的であり得る。斑点病は、世界中の問題であるが、米国東部、メキシコおよび極東において特に問題となっている。
斑点病は、Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ（Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）と呼ばれる真菌によって起こされる。Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓは、植物残骸、ジャガイモ塊茎、及びナス科雑草（Ｓｏｌａｎａｃｅｏｕｓ  ｗｅｅｄｓ）で生き延びることができる。この真菌の胞子は、一般に風雨の強い期間の間、ばら撒かれる。一方、この真菌は、感染した植物の残骸および果実に伝染する。トマト植物の葉、茎および果実に付着した胞子は、植物組織にすぐに感染して、組織の崩壊そして最終的な植物の死を引き起こし得る。
現在のところ、トマトのＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓについて記載された２つの生理学的病原型（ｒａｃｅ）がある。第一は、耐性遺伝子を含まない市販の品種に病原性のあるＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０である。第二は、Ｐｈ1耐性遺伝子を含む市販の品種に病原性のあるＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１である。
１９５２年に、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓに対する耐性が、野生トマト近縁系統Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍで報告された。この耐性は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０のトマト株に対する耐性を付与する単一の優性遺伝子（Ｐｈ1；公式的にはＴＲ1として知られる）によって付与されることが分かった。しかし、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１のトマト株は、Ｐｈ1によって付与される耐性を克服する。Ｇａｌｌｅｇｌｙ，Ｍ．Ｅ．、「トマトにおける斑点病真菌類に対する耐性（Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｌａｔｅ  Ｂｌｉｇｈｔ  Ｆｕｎｇｕｓ  ｉｎ  Ｔｏｍａｔｏ）」、キャンベル植物科学セミナー（Ｃｅｍｐｂｅｌｌ  Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｅｍｉｎａｒ）、１１６頁（１９６０年）参照。さらに、多遺伝子耐性は、トマト系Ｗｅｓｔ  Ｖｉｒｇｉｎｉａ７００（Ｐ１２０４９９６）で同定された。この耐性は、完全ではなく、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性のみが得られる。環境条件が、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１の発生に好ましい場合、これらの耐性植物は、重大な病害を被った。
栽培されたトマト、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍは、米国および世界中で最も重要な野菜の内の１つであり、毎年、米国だけで数百万トンが生産されている。上記作物の商業的重要性により、栽培品種を改善する一定の努力がなされてきた。したがって、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１に耐病性を示す栽培トマト品種が必要とされる。
Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１のトマト株に対する耐性の源として使用できる新規Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ栽培品種を開示することが本発明の目的である。Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に耐性であり、且つ、野外において発病圧が高い場合でもＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１に対する耐性を示すＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物を提供することがこの発明の別の目的である。
発明の要旨
本発明は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性であるトマト植物（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）を生産する方法を包含する。これらの植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性を付与する新規対立遺伝子を含むことが見出されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍと交雑させることによって製造される。交雑を行った後、種子を収集し、植物に再生する。生じた植物を、Ｐ．  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性について評価する。耐性を示す植物を、同定し、選択する。これらの選択された耐性植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に耐性である商業的に許容しうる品種を得るために、所望の表現型を示す他のＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ系と戻し交雑させる。この方法は、Ｐ．  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に耐性であるトマト植物（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）になる種子を生産するのにも使用できる。
Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する新規耐性を示すことが見出され、続いてＬ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍとの交雑に使用されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ選択物は、ＬＡ２５３３として示され、それは、本発明者によってＨｏｐｅ８４とも呼ばれた。
本発明の植物は、プロトプラスト融合によっても生成できる。プロトプラスト融合によって植物を生成するために、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に耐性であるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍのプロトプラストを、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍのプロトプラストと一緒に得る。その後、２種のプロトプラストは、当業者に知られる標準プロトプラスト融合方法を使用することによって融合される。得られた異質遺伝子細胞を植物に再生して、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性について評価する。耐性植物を同定し選択する。
本発明の方法にしたがって製造されたＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性であり、野外において発病圧が高い場合でもＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１に対する耐性を示す。
本発明は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性を付与する対立遺伝子を包含するトマト植物および上記トマト植物によって生成される種子も包含する。
発明の詳細な説明
本発明は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓのトマト株に対して耐性であるトマト植物（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の創出を包含する。Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓのトマト株にさらされたときに、ある植物が、病徴を示さないか、または感受性植物に比較して実質的に少ない病徴しか示さない場合、当該植物は、耐病性であると言われる。本発明の植物はＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性であるので、新規である。
本発明の発明者は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性を付与する対立遺伝子を含有するＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を発見した。これらのＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対して耐性であるトマト植物（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）の創出に使用できる。例えば、ＬＡ２５３３として示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍを用いて、本発明の植物を創出した。ＬＡ２５３３として示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍは、本発明者によってＨｏｐｅ８４とも呼称される。ＬＡ２５３３（Ｈｏｐｅ８４）の種子は、ブタペスト条約の規定によってメリーランド２０８５２、パークローン・ドライブ１２３０１のｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託された。上記種子は、１９９５年１２月１４日に寄託され、ＡＴＣＣ受託番号９７３８２を受けた。さらに、ＬＡ２５３３（Ｈｏｐｅ８４）は、請求により、カリフォルニア州、デイビスのカリフォルニア大学デイビスにあるリック・センターから入手可能でもある。
本発明者は、ＬＡ２５３３植物が、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に耐性を示すことを発見した。この知見が得られるまでは、ＬＡ２５３３として示される植物のＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性は、知られていなかった。ＬＡ２５３３として示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に対する耐性を付与する対立遺伝子を含有する。しかし、当業者は、当該対立遺伝子を含有し、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に耐性である任意のＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍを本発明に使用することができることを認識する。
本発明の植物は、伝統的な育種技術によって製造することができる。例えば、ＬＡ２５３３として示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物の種子を使用できる。ＬＡ２５３３の種子を、温室または野外で播種する。得られた植物を、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株にさらす。充分に発病圧をかけた後、最良の耐性を示す植物体を選択する。Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性は、２つの方法で測定することがきる。Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓに対する耐性を測定する第一の方法は、「温室スクリーン」と呼ばれるものを使用することを包含する。温室スクリーンでは、トマト実生を、第５本葉（ｔｒｕｅ  ｌｅａｆ）が出現し始めるまで育成する。この時点で、植物に、１ミリリットルの溶液当たり１０，０００胞子嚢の濃度で、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１の胞子嚢懸濁液を散布する。接種後、当該植物を、２４時間、１００％湿度のチャンバー内に置く。次に、それらを湿潤チャンバーから温室ベンチに移して発病させる。およそ７日で耐性植物を同定し、選択する。その後、当該植物に、同様の方法でＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０の懸濁液を用いて２回目の散布をすることができる。しかし、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１に耐性のあるトマト植物がおそらく同様に病原型０にも耐性であることが当業者に一般によく知られているので、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０に対する耐性について植物を度々試験する必要はない。
Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性を測定する第２の方法は、野外スクリーンを包含する。野外スクリーンは、気候条件が自然の感染および発病に好ましい野外に実生を移植することを包含する。発病後、植物が果実をつけ始めた頃、耐性植物を同定し、選択する。
本発明の発明者は、本発明の方法によて製造された植物がＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して耐性であるかまたは感受性であるかを評価するために発病評価区分のスケールを考案した。発病評価区分のスケールは、１から５の数字で示され、それらの数字は以下の意味を有する：１は、病斑がないかまたは葉のみに小さな病斑があることに対応し；２は、葉に病斑がないかまたは小さな病斑があり、葉の病班が拡大し葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があることに対応し；３は、葉に病斑がないかまたは小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、かつ葉柄の病斑を拡大していることに対応し；４は、葉に病斑がないかまたは小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、葉柄の病斑が拡大し、かつ茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）があることに対応し；そして５は、葉に病斑がないかまたは小さな病斑があり、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、葉柄の病斑が拡大し、茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）があり、かつ茎の病斑が拡大するか、または植物が死滅することに対応する。３未満の発病評価区分スケールを示す植物は、耐性であると考えられる一方で、３またはそれより大きい発病評価区分スケールを示す植物は、感受性であると考えられる。
伝統的に、ほどんどの植物育種者は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓに耐性を示すトマトを評価したり、同定したりそして選択したりしていない。ほとんどの育種者は、この真菌の存在がそれらの全体の作物を壊滅させ得るという懸念を持たず、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓについて研究しない。その代わり、ほとんどの育種者は、上記真菌にそれらの作物に影響を及ぼさせないよう努力するなかで、殺菌剤を散布してＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓを防除する。
その後、最善の耐性を示す植物を、１方の植物から得た花粉を他方の柱頭に載せることによって、市販のトマト植物（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）と交雑させる。トマト果実が発生した後、種子を収集する。種子は、植物体に育成され、耐病性について評価される。耐性植物は選択され、植物型（有限対無限）、果実サイズ、形状、香り、色および長い貯蔵寿命のような所望の表現型の特徴を保持する市販のトマト植物と戻し交雑できる。所望の表現型特徴を持ち、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１のトマト株に耐性である品種が得られるまで、戻し交雑を継続し得る。生じる植物は、野外において、高い発病圧下でもＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１に対して安定である。
Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍが閉鎖花であることに注目するのは興味深い。したがって、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍとＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍとの間で交雑受粉が、ヒトの技術介入なしになされるということは野外では非常におこりにくい。Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対する耐性を付与する対立遺伝子についての同定、選択および戻し交雑が自然に起こることもありそうにない。
プロトプラスト融合も、本発明の植物を創出するのに使用できる。例えば、第一のプロトプラストを、ＬＡ２５３３として示されるＬｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍから得、第二のプロトプラストを、Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ  ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍから得る。その後、２種プロトプラストを、当業界でよく知られた従来のプロトプラスト融合方法を使用して融合させる。
例えば、プロトプラスト融合は、融合緩衝液、すなわち、膜を融合させる高いｐＨ溶液の存在下で、凝集を起こすポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を用いることによって達成できる。このような体細胞ハイブリダイゼーションは、種間雑種又はその変形種の製造についてＳｕｎｄｂｅｒｇら（Ｐｌａｎｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、４３、１５５（１９８６年）：参照によりここに援用する）によって開示された条件下で達成し得る。しかし、当業者は、プロトプラスト融合が、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を用いる以外の方法でも達成できることを認識する。例えば、プロトプラストは、Ｋｏｏｐら（１９８９年）「細胞生物学での電気穿孔法および電気融合（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｅｌｅｃｔｒｏｆｕｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｎｅｕｍａｎら編、３５５−３６５頁で「高等植物の予備選択単一プロトプラストおよびサブプロトプラストを用いた電界誘導融合および細胞再構築（Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｆｉｅｌｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｆｕｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  Ｐｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ  ａｎｄ  Ｓｕｂｐｒｏｔｏｐｌａｓｔｓ  ｏｆ  Ｈｉｇｈｅｒ  Ｐｌａｎｔｓ）」（参照によりここに援用する）で記載されるとおり電界誘導融合法を使用することによって融合し得る。さらに、プロトプラスト融合は、Ｈａｕｐｔｍａｎｎら、「アミノ酸類似体耐性の相補性によって選択されるニンジン対タバコの体細胞ハイブリッド（Ｃａｒｒｏｔ×Ｔｏｂａｃｃｏ  Ｓｏｍａｔｉｃ  Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｓ  Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｂｙ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ａｎａｌｏｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）」、第６回国際プロトプラストシンポジウム、バーゼル、１９８３年８月１２−１６日（参照によりここで援用する）によって記載されるとおり、デキストランおよびポリビニルアルコールを用いて達成できる。
非限定的例示として、本発明の実施例を以下に示す。
実施例１
数種の異なる植物を、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ耐性の有無について評価した。以下の種子を得た。ＬＡ３７３として示されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ、ＬＡ１３３８として示されるＬ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ  ｖａｒ．  ｃｅｒａｓｉｆｏｒｍｅ、ＬＡ１３７５として示されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ、ＬＡ２６５０として示されるＬ．ｈｉｒｓｕｔｕｍ、およびＬＡ２５３３（Ｈｏｐｅ８４）として示されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ。これらの種子の全ては、カリフォルニア州、デイビス（Ｄａｖｉｓ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）のカリフォルニア大学デイビス校にあるリック・センターから得た。Ｈｏｐｅ３３は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に耐性を示すトマトの系統である。ＣｅｌｅｂｒｉｔｙおよびＦａｎｄａｎｇｏは、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓにいかなる耐性をも示さない市販の品種である。
種子を室温で播種した。トマト種子を土壌（５０％ピートモス、５０％砂）に播き、温室（日中７５°Ｆおよび夜間７０℃の温度）にあるベンチに載せ、必要に応じて灌漑した。トマトの実生が第５本葉段階に達したとき、それらにＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１を接種した。実生に、１ミリリットルの溶液当たり１０，０００胞子嚢の濃度で、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓの胞子嚢の懸濁液を流れ落ちるようになるまで散布した。接種後、植物を１００％湿度のチャンバー内に２４時間に置いた。次に、植物の覆いを除き、発病させた。接種後およそ７日目に、以下の発病評価区分を用いて耐性植物を同定し選択した。上で記述されたこれらの同じ系統を、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０についても同じ方法で評価した。
発病評価区分：
１＝病斑がないかまたは葉のみに小さな病斑がある。
２＝上述に加えて、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある。
３＝上述に加えて、葉柄の病斑が拡大している。
４＝上述に加えて、茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある。
５＝上述に加えて、茎の病斑が拡大しているか、または植物が死滅する。
発病評価区分の結果を、表１に示す。
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上記表により、ＬＡ２５３３として示されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物は、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に対して高いレベルの耐性を示した一方で、ＬＡ３７３および１３７５として示されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ系統は、高レベルの耐性を示さなかったことが分る。
実施例２
ＬＡ２５３３として示され、Ｈｏｐｅ８４とも呼称されるＬ．ｐｉｍｐｉｎｅｌｌｉｆｏｌｉｕｍ植物を、Ｆｌａ７０６５として示されるトマト（Ｌ．ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）植物と交雑させた。植物Ｆｌａ７０６５は、フロリダのフロリダ大学でＪａｙ  Ｓｃｏｔｔ博士の育種プログラムから得られた、有限の、大きな果実の、均一な緑の、フレッシュマーケットの、確定的近交育種系である。この交雑から得られた種子（Ｆ１）を、土壌に播き、温室で育成し、実施例１で先に記述したとおりに、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１で接種した。このスクリーンから得た実生のすべてが、実施例１に記述したのと同じ発病評価区分を用いて、１または２と評価され、それによって、それらがＰ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型０および１に耐性であったことが示された。これは、耐性に関与する遺伝子が優性形態で遺伝することを示唆する。
実施例３
実施例２で記述されたＦ１植物を、自家受粉させた。この（Ｆ２）から得た実生を、土壌に植え、温室で育成した。数週間後、この実生を、野外に移植し、ドロップ灌漑により給水し、成熟するまで成長させた。開花前に、挿木を取り、土壌に移植し、温室で育成した。２週間後、挿木を取り、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１の胞子嚢（濃度：１０，０００胞子嚢／ミリリットル）で接種し、２４時間１００％湿度のチャンバー内に置いた。２４時間後、植物を移動し、発病させた。１４日後、挿木を、１〜５の発病評価区分スケールで評価した。使用した発病評価区分は、以下のものであった：
罹病格付け：
１＝病斑がないかまたは葉のみに小さな病斑がある。
２＝上述に加えて、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある。
３＝上述に加えて、葉柄の病斑が拡大している。
４＝上述に加えて、茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある。
５＝上述に加えて、茎の病斑が拡大しているか、または植物が死滅する。
Ｆ２植物の発病評価区分による評価を表２に示す。
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２．９またはそれ未満の発病評価区分を示す系統は耐性であると見なされた一方で、３．０またはそれより大きい発病評価区分を示す系統は感受性であると見なされた（７１系統耐性：２４系統感受性）。表２にあるデータは、３：１の耐性対感受性の比を支持し、これは、耐性遺伝子座が優性遺伝である場合に期待される値である。一方、多くの系は、２．０〜２．８の間の発病評価区分を示した。本発明者は、この系は、異型接合体であり得ると確信する。そしてこれが真実であれば、これは、耐性が部分的に優性であり、同型接合体植物が、異型接合体植物より高いレベルの耐性を示すことを示唆する。
実施例４
実施例３で記述されたＦ２植物を、自家受粉させた。この（Ｆ３）から得た実生を、土壌に植え、温室で育成した。数週間後、この実生を、気候条件が、Ｐ．ｉｎｆｅｓｔａｎｓ病原型１の自然感染および発病に好ましい野外に移植した。感受性の対照植物（Ｃｅｌｅｂｒｉｔｙ）が死滅したことで、発病圧が高いことが明らかである。植物が果実を付け始めたときに、植物を、１〜５の発病評価区分スケールで評価した。使用した発病評価区分は、以下のものであった：
罹病格付け：
１＝病斑がないかまたは葉のみに小さな病斑がある。
２＝上述に加えて、葉の病斑が拡大して葉柄に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある。
３＝上述に加えて、葉柄の病斑が拡大している。
４＝上述に加えて、茎に小さな病斑（直径２ｍｍ）がある。
５＝上述に加えて、茎の病斑が拡大しているか、または植物が死滅する。
結果を、以下の表３に示す。
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上述の結果は、実施例３で記載されたＦ２植物から得た結果を確認する。Ｆ２植物で確認された同型接合体耐性（９４ＦＨ９８、９４ＦＨ９９、９４ＦＨ１１４、９４ＦＨ１２０、９４ＦＨ１２１、９４ＦＨ１４８、９４ＦＨ１６２、９４ＦＨ１７０）および感受性（９４ＦＨ９５、９４ＦＨ１１０、９４ＦＨ１１６、９４ＦＨ１２８、９４ＦＨ１２９、９４ＦＨ１５５、９４ＦＨ１７８、９４ＦＨ１８８）植物は、Ｆ３植物で同じ発病評価区分を示した。耐性が、多数の遺伝子（多遺伝子複合体）により付与された場合、その結果３：１の比に分離できず、同型接合体耐性植物は、例示された様に容易にそして迅速に同定できない。
これらの具体例は、本発明のいくつかの態様を例示することを意図するものであるから、ここに記載されそして請求される本発明は、ここに開示された特定の具体例による範囲に限定されない。すべての同等の実施態様は、本発明の範囲内にあることが意図される。実際、ここに示されそして記述されるものに加えて、様々な本発明の修正は、上記記載から当業者には明らかである。このような修正は、添付の請求項の範囲内に入ることも意図される。