(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
南瓜子及び紅花の２種の生薬に、オオバコ、スイカズラのいずれか或いは双方を配合することからなるマクロファージ活性剤。
【請求項２】
南瓜子、紅花、オオバコ、スイカズラ４種類の生薬を配合することからなる請求項１に記載のマクロファージ活性剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載の持続性マクロファージ活性剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、新規なマクロファージ活性化剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
マクロファージに関する研究は最近とみに活発となり、種々の分野において新知見が急速に集積しつつあって、それに伴いマクロファージの生物学的概念も幅広く多様化してきた。マクロファージは元来貪食能旺盛な細胞と定義されているが、単なる原始的食細胞にとどまらず、Ｔ細胞への抗原提示、炎症性サイトカインの産生、抗腫瘍免疫のエフェクター、免疫応答の調節など、極めて多岐にわたる生体防御の多くの局面に重要な役割を担う細胞であることが明らかになってきた。さらに古くから知られていた細胞内殺菌の分子機構の多くの局面に重要な役割をになう機能変化が解明され、近年では活性化マクロファージに見られる細胞内殺菌の亢進や抗腫瘍活性の発現機構として、一酸化窒素（ＮＯ）の生成とその機構が脚光を浴びている。
【０００３】
マクロファージは大別して３つの大きな役割をもっている。
その第一は体に生じた廃棄物の処理である。古くなった細胞や死滅した細胞の処理を行い、組織の新陳代謝や創傷の修復過程でも大切な役割を担っている。また胎児形成の過程で、種々組織の再構成にも関与していると考えられている。
第２は、微生物や腫瘍細胞に対する防御機能である。単球、マクロファージは、血液中の顆粒球や好中球とともに第一線の生体防御を営んでいる。また、リンパ球の産生する抗体やリンホカインの作用を介して、免疫応答におけるエフェクター機能の重要な一翼を担っている。
第３はリンパ球、ことにＴ細胞への抗原の提示とインターロイキン１の産生を介し、免疫応答のaccessory cellとしての働きである。
その他、マクロファージは造血機能や、補体成分の産生等に関与している。
即ち、その機能は以下のように極めて多彩である。
【０００４】
▲１▼食作用
マクロファージの第１の仕事は、老廃化した細胞や異物を取り込み、消化して処理する。
また、好中球の貪食殺菌作用に対して抵抗性の細菌や真菌の防御はマクロファージによる貪食殺菌作用に委ねられている他、活性化マクロファージはウイルスを不活化する作用があることからウイルスの防御にも１役買っている。
▲２▼炎症と組織の修復
マクロファージはプラスミノーゲンアクチベーター、コラゲナーゼ、エラスターゼなどのプロテアーゼや、カテプシンＢ，Ｃ，Ｄ等酸性加水分解酵素、β−グルクロニダーゼ、ヒアルロニダーゼ、リゾチーム、α−グルコシダーゼ等の多糖体分解酵素、Ｃ１〜Ｃ５の古典的経路やファクターＢ、Ｄ、β１Ｈ、Ｃ３ｂＩＮＡ等の副経路の補体成分、プロスタグランジンＥ１、ロイコトリエンＢ４などアラキドン酸代謝物、活性酵素、インターロイキン１、インターフェロンα、ＴＮＦα、ＴＧＦβ、ＦＧＦ、血小板活性化因子等のメディエーターなど必要に応じて様々な分泌物を産生放出している。これら分泌物は炎症と組織の修復、再生に大きく関与している。
急性炎症においては在住のマクロファージが貪食や分泌機能によって原因の除去にあたり、次いで単球由来の滲出マクロファージが集積する。このマクロファージは様々な分解酵素、補体成分、メディエーター等を産生し炎症を増幅拡大させる。慢性炎症においてはマクロファージは類上皮細胞或いは多核性巨細胞になり、残存した異物を包囲し肉芽組織を形成する。類上皮細胞はライソゾーム酵素やサイトカインの分泌が活発で、ｂ−ＦＧＦやＴＧＦ−β等を介して繊維芽細胞や血管新生を促して障害組織の修復を行う。
【０００５】
▲３▼抗腫瘍作用
マクロファージはライソソーム酵素や活性化酸素、サイトトキシン等の分泌物により腫瘍細胞を破壊する作用もある。これにはマクロファージが直接に、或いは腫瘍細胞に結合した抗体を介して腫瘍に接着し攻撃することや、ＴＮＦを放出することなどがある。
▲４▼リンパ球機能の補助
食細胞としての機能の他にも、マクロファージは抗原物質を取り込み、消化して、完全に消化されない場合には適当な大きさになった残存抗原を抗原提示細胞に受け渡す働きがある。
また、マクロファージ自身が抗原提示細胞として働くことも多い。
さらに、マクロファージはリンパ球に抗原を提示するということ以外でもリンパの反応を支持する。マクロファージの産生するインターロイキン１（ＩＬ−１）は抗原と反応したＴ細胞やＢ細胞の増殖を助け、リンホカインの産生やキラー細胞への分化、抗体産生細胞への分化を補助する。胸腺リンパ球の増殖も増強する作用を有している。
マクロファージはインターフェロンも産生し、それによってキラーＴ細胞やＮＫ細胞の活性化を強化する。
【０００６】
▲５▼免疫抑制
マクロファージはこのようにリンパ球の反応を補助する一方、抑制する機能も有している。その産生するプロスタグランジンＥ２はリンパ球の増殖と機能発現を抑えている。
▲６▼補体の産生
マクロファージは免疫反応に重要な物質である補体成分（Ｃ１〜Ｃ５、Ｂ因子、Ｄ因子など）の主要な産生細胞でもある。
▲７▼フィブロネクチン産生
また、オプソニンとして働くフィブロネクチンもマクロファージから生成される。マクロファージの産生するＩＬ−１はＩＬ−６を介して肝からのＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白）、α１アンチトリプシンなどの急性期反応物質の産生、放出を増強するが、これらの物質は感染防御に役立っている。
【０００７】
以上のような機能発現の為にはマクロファージの活性化が必要である。
マクロファージを活性化させる物質としては、Ｔ細胞の産生するリンホカイン、いわゆるマクロファージ活性化因子（ＭＡＦ）の他、結核菌、ＢＣＧ、コリネバクテリア、ノカルジア、プロピオネバクテリアなどの細菌成分や細菌のリポ多糖体、ムラミル−ジペプチドが知られている。
【０００８】
生薬のマクロファージ活性化作用に関しては、一酸化窒素産生刺激作用を指標としたスクリーニングにより、２００種の生薬の内で虎杖根、黄ろう、蛇床子、麦芽、桑白皮、梗米、山椒、浮ひょう、姜黄、延胡索、牡蠣、益母草、人参の１３種に活性を認めた旨の報告がある（福田、日本薬学会第１１７年会、１９９７年）。
【０００９】
国際公開第９５／３４２１８号には、南瓜子、オオバコ、スイカズラの１種以上（とりわけ３種の生薬）を飼料に添加することにより、寄生虫、細菌及びウイルス病の特に自然感染を防ぎ、生体防御力の強化と共に肉質、卵質を改善する旨が開示されている。更には、南瓜子、オオバコ、スイカズラ、紅花の４種の生薬を配合した飼料について採卵鶏の健康状態、生存率、卵質の向上、抗ロイコチトゾーン病効果が開示されている。
【００１０】
特開昭５６−９２８２０号にはニホンカボチャ等のウリ科植物からインターフェロン誘起剤が抽出される旨が、特開昭５６−７９６２３号及び特開昭５６−９７２３２号には金銀花、車前子等からインターフェロン誘起剤が抽出され、ヒト及び動物のウイルス感染症の予防及び治療に有用である旨が各々記載されている。また、特開昭５７−３２２２２号にはベニバナから抽出したインターフェロン誘起剤の抗ウイルス活性及び抗腫瘍活性が開示され、抗腫瘍剤や生理作用改良、健康増進剤として有用である旨が記載されている。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者は、動物飼料成分として優れた効果を有する、南瓜子、オオバコ、スイカズラ等の生薬の生理機能の解明及び更なる用途を見出すことを目的として、鋭意検討を重ねてきた。その結果、南瓜子及び紅花の２種の生薬を必須成分とし、更に任意添加成分としてオオバコ、スイカズラのいずれか或いは双方の配合により、強力且つ持続的なマクロファージ活性化作用が得られることを見出した。
【００１２】
【課題を解決する為の手段】
本発明は新規なマクロファージ活性化剤に関し、貪食能を指標とした場合に貪食数、貪食率の双方を増強し、且つ、従来のマクロファージ活性化剤には見られない持続作用を特徴とする。
本発明は、南瓜及び紅花の２種の生薬を配合することからなるマクロファージ活性化剤である。また、本発明は南瓜及び紅花の２種の生薬と、オオバコ、スイカズラのいずれか或いは双方を配合することからなるマクロファージ活性化剤である。好ましくは、南瓜子、紅花、オオバコ、スイカズラの４種の生薬を配合することからなるマクロファージ活性化剤である。更には、本発明は当該３種又は４種の生薬を配合することからなる持続性マクロファージ活性化剤である。
本発明は、また、これらのマクロファージ活性化剤が機能性食品、健康食品に添加されるマクロファージ活性化剤であり、南瓜及び紅花の２種の生薬を配合することからなるマクロファージ活性作用を有する飲食品である。
【００１３】
前述の各公開公報においては本発明の有効成分である各生薬についてインターフェロン誘起作用が開示されているが、マクロファージ活性化作用については何ら開示も示唆もない。また、前述の国際公開第９５／３４２１８号には、本発明の４種の生薬を配合した飼料について動物の寄生虫、細菌及びウイルスに対する感染防御剤としての効果は開示されているものの、マクロファージ活性化作用については開示も示唆もない。
本発明においては、マクロファージ活性化作用に基づき、寄生虫、真菌、細菌及びウイルスに対する感染防御剤、抗腫瘍剤のみならず皮膚炎、関節炎、乳房炎、子宮蓄膿症等に対する抗炎症剤、或いは、リンパ球機能の不全や補体やフィブロネクチン産生の低調に関連する様々な疾病の予防剤、治療剤として有用であることが期待される。
【００１４】
更には、本発明のマクロファージ活性化剤は従来にはない持続的な作用を示すことから、間欠投与や、周期的な服用形態の可能性が期待できる。
しかも、古来から民間療法に使用されてその安全性は確認されている生薬の組合せであることから、ヒト又は動物の治療用医薬としてのみならず、予防薬或いは機能性食品、健康食品として長期に渡って常用するにはふさわしい。本発明において、機能性食品、健康食品或いは飲食品とはヒトが摂取する食品に限られる。
【００１５】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を更に詳細に説明する。
まず、本発明において使用される生薬について説明する。
南瓜子はウリ科の植物南瓜（和名：ニホンカボチャCucurbita moschata Duch.）の種子であるが、本発明においては本発明の目的を達成するその類縁植物の種子も含む。南瓜子は、生のまま使用してもよいが、乾燥品の方が医薬、健康食品として保存上好ましく、また、種皮のみを用いてもよい。成分としてククルビチン、タンパク質、ビタミンＡ、Ｂ１、Ｂ２，Ｃを含み、またカロチン等も含まれている。
紅花（Carthamus tinctorius L.）はキク科の植物の管状花の乾燥したものである。成分としてはカルサミン、サフラーイエロー、リグナン、ステロールを含む。婦人病、冷え症、更年期障害などの血行障害の治療に用いる。
【００１６】
オオバコ（Plantago asiatica L.）はオオバコ科の植物で成熟した種子（車前子）または全草（車前）が用いられる。成分としては多糖類、Plantenolic acid.、コハク酸、アデニン、Aucubin、PlantagininやビタミンＡ、Ｂ１等を含む。生薬としてヒトにおいては消炎、利尿、止しゃ薬として用いられている。
スイカズラ（Lonicera japonica Thunb.）はスイカズラ科の花若しくは蕾（金銀花）、葉、茎或いは全草（忍冬）が用いられる。成分としては蝋様物質、イノシトール、タンニン、サポニン、ロニセリン等を含む。生薬としては、解熱、解毒、利尿、消炎薬として用いられている。
【００１７】
本発明のマクロファージ活性化剤には配合生薬総量の内、南瓜子と紅花を各々５〜９５％の範囲で含み、オオバコ、スイカズラを各々０〜８０％の範囲で含む。
本発明ではこれらの生薬を原末或いは水又は有機溶媒抽出エキスとして用いることができる。即ち、原末、溶媒製剤、粉剤、成型剤、浸出剤等として用いる。有機溶媒としてはエタノール、アセトン等が用いられ、これらは水或いは２種以上の有機溶媒と混合して用いてもよい。抽出は生薬に対し数倍量の溶媒を加え常温乃至加温下に抽出或いは浸出を行う。また、生薬を原末として使用するときは、その生鮮、陰干し、或いは乾燥したものを用い細断或いは粉末として用いる。
【００１８】
本発明のマクロファージ活性化剤、即ち上記生薬の組合せは、各種食品用素材として広く使用でき、その用途は食品素材として使用できるものであれば、いずれの食品でも良い。  本発明の生薬の原末或いは水又は有機溶媒抽出エキスは、そのまま又は自体公知の方法で各種の形態にして健康食品、機能性食品（サプリメント）、医薬として利用できる。
【００１９】
例えば、医薬或いは機能性食品（サプリメント）は通常の製剤化方法により経口用の錠剤、散剤、細粒剤、カプセル剤、丸剤、シロップ剤として提供される。
製剤化の為に、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、緩衝剤、矯味剤、安定剤等を必要に応じて添加することもできる。少なくとも一つの不活性な希釈剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムと混合される。組成物は常法に従って、不活性な希釈剤以外の添加剤、例えばステアリン酸マグネシウム、スターチ、タルクのような潤滑剤や繊維素グリコール酸カルシウムのような崩壊剤、ラクトースのような安定化剤、グルタミン酸又はアスパラギン酸のような溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要によりショ糖、ゼラチン、寒天、ペクチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
【００２０】
また、本発明の有効成分である生薬に影響を与えない程度でカフェイン、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビオチン、カルニチン、パントテン酸、及びニコチン酸とその誘導体などの水溶性ビタミン、ビタミンＡ、ビタミンＥとその誘導体などの脂溶性ビタミン、タウリン、アルギニンなどのアミノ酸、生薬（甘草、蒲公英、魚腥草、菊花、人参、桂皮など）を配合することができる。
経口投与の為の液体組成物は、製薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤を含有していてもよい。
【００２１】
また、健康食品としては、飲料、或いはゼリー、ビスケット、クッキー、キャンディー等菓子の形態で提供することができる。
本発明の生薬は、投与対象の年齢、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定されるが、通常、成人１日当たり生薬総量として１０ｍｇ〜５ｇ、好ましくは５０ｍｇ〜３ｇを経口摂取することにより、重篤な副作用の恐れもなく、所望のマクロファージ活性化作用が発揮できる。
【００２２】
【実施例】
以下の実施例は本発明を説明するものである。
実施例１  鶏腹腔内マクロファージ活性化試験
ブロイラー専用種（チャンキー）を１群１０羽として、試験投与群には飼料中に０．０５％の添加量で各組成の生薬混合物を添加し、不断給餌により自由摂取させた。試験開始後２８日目に腹腔内マクロファージの貪食率及び貪食数を測定し、対照群の値に対する百分率を求めた。
その結果、表１に示す通り、試験群１：南瓜子、スイカズラ、オオバコ、紅花添加群は貪食数、貪食率共に顕著に増大した。また、試験群２：南瓜子、スイカズラ、紅花添加群、試験群３：南瓜子、オオバコ、紅花添加群も貪食数、貪食率共に有意に増大した。一方、試験群４：南瓜子単独添加群は貪食率は増大したが、貪食数に変化は見られなかった。
以上より、マクロファージの貪食数及び貪食率双方の増大には南瓜子と紅花が必須添加成分であることがわかった。更にオオバコとスイカズラを任意添加成分として添加しても所望のマクロファージ活性化が果たされることがわかった。
【００２３】
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実施例２  成牛マクロファージの貪食率に対する効果試験
ホルスタイン種の体重５９６〜６５０ｋｇの健康な泌乳牛４頭を対照群と試験群に各２頭に振り分け、試験群には１日１回南瓜子５０％、紅花１０％、オオバコ２５％、スイカズラ１５％の成分組成の混合生薬２０ｇを朝の給餌時に飼料に混合して２８日間連続投与し、経時的に採血して血中マクロファージ貪食能を測定した。
その結果、図１に示す通り、試験群の血中マクロファージ貪食率は試験開始後増大し、４週間の投与の後、驚くべきことに投与中止後４週までその効果は持続した。
【００２４】
実施例３  顆粒剤
南瓜子５．０ｇ、紅花３．０ｇ、オオバコ１．０ｇ、スイカズラ３．０ｇと乳糖６７ｇ及びデンプン１６ｇを堅形混合機にて均一に混合し、先にハイドロキシプロピルセルロース２ｇ、カプリン酸トリグリセライド５ｇを８５％エタノール４０ｇに溶解したもの練合溶媒とし、練合したのちバスケット型製粒機（スクリーン径１ｍｍ）にて造粒後、１４メッシュ篩を通過させ乾燥後円柱状顆粒とする。
上記成分とマンニット、ヒドロキシプロピルセルロース、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、アスパルテーム及び香料を均一に混合し、顆粒剤１２包を得た。
【００２５】
【発明の効果】
本発明によれば、強力且つ持続的なマクロファージ活性化剤が提供される。本発明のマクロファージ活性化作用に基づき、寄生虫、真菌、細菌及びウイルスに対する感染防御剤、抗腫瘍剤のみならず関節炎、皮膚炎、乳房炎、子宮蓄膿症等の抗炎症剤、或いはリンパ球機能の補助や補体の産生、フィブロネクチン産生に関連する様々な疾病の予防剤、治療剤として有用であることが期待される。また、生薬を有効成分とするため、副作用の恐れがなく、ヒト及び動物の医薬としてのみならず、機能性食品、健康食品として長期間常用することができる。
【図面の簡単な説明】
図１は成牛マクロファージの貪食率に対する本発明のマクロファージ活性化剤の効果を示す。
【図１】
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