(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１，１−ジエトキシプロパンおよび／またはフェニルプロパン酸エチルエステルを有効成分として含むことを特徴とする抗ストレス剤。
【請求項２】
さらに、ダマセノン、１，１−ジエトキシプロパン、１，１−ジエトキシ−２−メチルプロパン、１，１−ジエトキシ−３−メチルブタン、およびケルカスラクトンｂからなる群から選択される１種以上の成分を含むことを特徴とする請求項１に記載の抗ストレス剤。
【請求項３】
フェニルプロパン酸エチルエステルを有効成分として含むことを特徴とする請求項１または２に記載の抗ストレス剤。
【請求項４】
１，１−ジエトキシプロパンおよび／またはフェニルプロパン酸エチルエステルが、製剤中に１重量％以上含まれていることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の抗ストレス剤。
【請求項５】
医薬品であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の抗ストレス剤。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載の抗ストレス剤を含むことを特徴とするＧＡＢＡ受容体活性剤。
【請求項７】
さらに、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤、水、糖類、グリコール類、油類、および防腐剤からなる群より選択される少なくとも１種を含有する請求項５記載の抗ストレス剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、酒類の香気成分の濃縮物、およびそれを用いた抗ストレス剤に関する。また、本発明は、酒類の香気成分を含み、ストレスによって生じる精神的または身体的疾患を予防または軽減する医薬品または機能性食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
高度でしかも複雑に入り組み、２４時間休むことなく活動する現代社会では、人は様々なタイプの物理・化学的、心理的、社会的ストレスに曝されている。特に、複雑な人間関係の中で生きている現代人にとって、ストレスを構成するものとして心理的な要因が大きい。
心理的ストレスとそれが引き起こす様々な症状については、種々の研究が行われている。例えば、心理的ストレスが大脳で感知されると、広範な脳部位でノルアドレナリンの放出が亢進し、それが引き金となって不安や緊張といった精神症状を引き起こすと報告されている(田中正敏：代謝、vol.26, p122-131,1989）。ストレスが長時間持続すると、全身の諸臓器に影響を及ぼし、その結果重篤な心身症、うつ病、胃潰瘍、高血圧症などを引き起こすこともある。
【０００３】
現在、ストレスの軽減、またはストレスに起因する疾患の予防もしくは治療の目的に使用されている薬は、主にベンゾジアゼピン系の抗不安薬と睡眠薬である。脳内ＧＡＢＡ神経系はベンゾジアゼピン系の抗不安薬と睡眠薬などの作用点と考えられている。ＧＡＢＡ神経系に存在するＧＡＢＡａ受容体は、Ｃｌチャンネルを中心としてベンゾジアゼピン受容体およびバルビタール結合部位と複合体を形成している。ベンゾジアゼピン受容体およびバルビタール結合部位が刺激を受けると、ＧＡＢＡａ受容体のＧＡＢＡに対する親和性が上昇することが報告されている（D.G Nicholls, Amino Acids as Neurotransmitter, in "Proteins,  Tensmitters and Synapses." Blackwell Scientific Publication, Oxford, pp. 155-185(1994)）。
【０００４】
また、脳内ＧＡＢＡ神経系を賦活するとストレス緩和作用が発現することも報告されている。ラットを寒冷拘束ストレス（４℃，２時間）に暴露すると胃潰瘍が発生する。この胃潰瘍の発生は、ＧＡＢＡ (５，１０，２０，５０μｇ)およびＧＡＢＡａ受容体の作動薬（agonist）のムシモール（Muscimol）（５，１０μｇ）の脳室内投与により用量依存的に抑制されること、ＧＡＢＡ受容体の拮抗薬（antagonist）のビククリン（bicuculine）（４０μｇ）はＧＡＢＡによるストレス潰瘍の抑制を消失させることが報告されている (Br. J. Pharmacol. 84:619-623 (1985))。また、ＧＡＢＡａ受容体の作動薬（agonist）のムシモール（Muscimol）や脳内ＧＡＢＡ濃度を上昇させるアミノオキシ酢酸（aminooxy-acetic acid）(GABA deaminase阻害薬)によりラットにおけるストレスによる運動量の増加や胃潰瘍の発生が抑制されることも報告されている (Psychopharmacology 89:472-476 (1986))。このように脳内ＧＡＢＡ神経系は、ストレスの緩和に重要な役割をはたしている。
【０００５】
ベンゾジアゼピン系の抗不安薬と睡眠薬は比較的安全性の高い薬であるが、習慣性や副作用を併せ持つことから、日常生活における一時的なストレスに対して、頻繁に服用するのは好ましくない。また、服用後その使用を中断するとリバウンドが起こり、かえって症状が悪化する場合さえあり、理想的な抗ストレス剤とは言い難い。
【０００６】
このように、現代社会におけるストレス負荷の増大とストレスの与える精神衛生上のみならず、生体に及ぼす深刻な影響を考慮すると、真に有効で安全な抗ストレス剤の開発が望まれている。特に予防的見地からは、食品や嗜好品に活用できる抗ストレス剤の開発が望まれている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ストレスを有効に予防または軽減でき、さらに安全でかつ服用や摂取が容易な抗ストレス剤、および該抗ストレス剤として有用な物質または組成物を提供することを目的とする。また、本発明は、ＧＡＢＡ受容体を活性化し、ストレスに伴う諸症状を抑制または予防する抗ストレス剤を提供することも目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、有効で安全な抗ストレス剤を開発すべく、種々の化合物について試行錯誤の検討を行っていたところ、酒類、好ましくは果実酒、日本酒、焼酎またはウィスキー類の香気成分の濃縮に成功し、さらに、得られた酒類の香気成分は、抗ストレス作用を示すという思いがけない知見を得た。
【０００９】
より詳しくは、本発明者らは、ＧＡＢＡ受容体を発現させたアフリカツメガエルの卵母細胞のＧＡＢＡ応答に対する増強作用を指標に、抗ストレス作用を有する物質のスクリーニングを行った。その結果、本発明者らは、酒類の香気成分がＧＡＢＡ受容体のＧＡＢＡ応答を増強する作用があることを見出した。特に、果実酒、日本酒、焼酎またはウィスキー類の香気成分が強力な上記作用を有することを見出した。さらに、本発明者らは、マウスにＧＡＢＡ受容体拮抗薬であるペンチレンテトラゾールを投与した時の痙攣に対する抑制効果を指標に、in vivoでの薬理学的評価を行い、ウィスキーの香気成分であるフェニルプロパン酸エチルエステル（Ethyl phenylpropanoate）が、ペンチレンテトラゾールによって誘起される痙攣を著しく抑制することを見出した。上述したように、脳内ＧＡＢＡ神経系はストレスの緩和に重要な役割をはたしていることから、酒類の香気成分、好ましくは果実酒、日本酒、焼酎またはウィスキー類の香気成分、とくにフェニルプロパン酸エチルエステルは、脳内ＧＡＢＡ神経系の活性化を通じてストレスを緩和する作用を有する。
【００１０】
そのうえ、酒類の香気成分を含む抗ストレス剤は、酒が長年の間、人々に愛飲されていることから、安全性上の問題はない。また、酒類の香気成分の濃縮物を医薬品または機能性食品とした場合は、服用または摂取が容易であり、また、酒が飲めない人も服用または摂取できるという利点もある。
【００１１】
すなわち、本発明は、
（１）  酒類の香気成分を有効成分として含むことを特徴とする抗ストレス剤、
（２）  酒類が、果実酒、日本酒、焼酎またはウィスキー類であることを特徴とする前記（１）に記載の抗ストレス剤、
（３）  酒類が、ウィスキーであることを特徴とする前記（１）に記載の抗ストレス剤、
（４）  香気成分が、ダマセノン、１，１−ジエトキシプロパン、１，１−ジエトキシ−２−メチルプロパン、１，１−ジエトキシ−３−メチルブタン、１，１−ジエトキシヘプタン、ケルカスラクトンｂおよびフェニルプロパン酸エチルエステルからなる群から選択される１種以上の成分であることを特徴とする前記（１）〜（３）に記載の抗ストレス剤、
（５）  香気成分が、フェニルプロパン酸エチルエステルであることを特徴とする前記（１）〜（３）に記載の抗ストレス剤、
（６）  香気成分が、製剤中に１重量％以上含まれていることを特徴とする前記（１）〜（５）に記載の抗ストレス剤、
に関する。
【００１２】
また、本発明は、
（７）  医薬品であることを特徴とする前記（１）〜（６）に記載の抗ストレス剤、
（８）  機能性食品であることを特徴とする前記（１）〜（６）に記載の抗ストレス剤、
（９）  ＧＡＢＡ受容体活性剤であることを特徴とする前記（１）〜（８）に記載の抗ストレス剤、
（１０）  酒類の香気成分含有濃縮物、
（１１）  酒類の香気成分を１重量％以上含有することを特徴とする前記（１０）に記載の濃縮物、
（１２）  酒類が、果実酒、日本酒、焼酎またはウィスキー類であることを特徴とする前記（１０）または（１１）に記載の濃縮物、
に関する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明に係る酒類の香気成分の濃縮物は、以下のようにして得ることができる。
酒類の香気成分は、酒類の揮発性成分の中性部・中高沸点部に含まれている。そこで、本発明において酒類の香気成分の濃縮には、酒類の揮発性成分の中性部・中高沸点部を抽出できる方法ならどの方法でも用いることができる。具体的には、以下のような方法で酒類の香気成分を濃縮することができる。原料となる酒類を水で希釈する。このとき、約１．１〜５倍程度、より好ましくは約２倍程度に希釈するのが好ましい。ついで、希釈された溶液に対し有機溶媒を用いた抽出を行う。溶媒抽出の際に用いる有機溶媒は、当業者が公知溶媒の中から適宜選択することができる。なかでも、前記有機溶媒としては、炭素数１〜８の低級炭化水素、好ましくは炭素数１〜８の低級アルカン、より好ましくはペンタンを用いることが好適である。また、前記有機溶媒としては、エーテルまたはエーテルと炭素数１〜８の低級炭化水素の混合溶媒を用いることも好適である。より好ましくは、エーテルとペンタンの混合溶液、さらに好ましくは前記成分の混合比（容量比）が２：１の混合溶液を用いることが好適である。ついで、有機溶媒を飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄する。そのとき、中性部は有機溶媒層に分画される。有機溶媒層のみを取り出し、脱水剤、好ましくは無水硫酸ナトリウムで脱水する。その後、溶媒を除去する。溶媒の除去は、当業者が公知方法の中から適宜選択することができる。具体的には、減圧下で留去する方法、シュナイダーカラムを用いたＫＤ濃縮器で常圧濃縮し、さらに減圧下で除去する方法を用いることが好ましい。ついで、さらに残渣を減圧下、好ましくは約１００ｍｍＨｇ程度の圧力下で蒸留し、イソアミルアルコール等のフーゼルアルコールを除去する。かかる一連の処理により、酒類の香気画分を得ることができる。
このようにして得られる濃縮物には、酒類の香気成分が約１重量％以上含有されていることが好ましい。
【００１４】
本発明において用いる酒類としては、香気成分を含むアルコール飲料であれば特に限定されない。具体的に、酒類としては、醸造酒、蒸留酒または混成酒などが挙げられる。醸造酒は、通常、糖質を酵母の働きによりアルコール発酵させて製造される酒類をいう。醸造酒としては、ビール、エール、日本酒(清酒とも言う)、老酒、 シードルもしくはワインなどの果実酒、ミードなどが挙げられる。また、蒸留酒としては、通常、上記醸造酒を蒸留させた酒類をいう。蒸留酒としては、穀類を原材料とする蒸留酒と、糖類を原材料とする蒸留酒とに大別される。穀類を原材料とする蒸留酒としては、例えば、ウィスキー、ジン、ウォッカまたは焼酎などが挙げられる。糖類を原材料とする蒸留酒としては、例えばブランデー、コニャック、アルマニャック、カルヴァドス、ボワール、カスマール、キルッシュワッサー、ミラベル、フランボワーズまたはラムなどが挙げられる。また、混成酒は、上記蒸留酒に香料、草根、糖質などを加えたものをいう。混成酒としては、例えばカンパリ、コアントロ、グランマニエ、カシス、フランボアーズ、アイリッシュ・クリームなどが挙げられる。
【００１５】
本発明に係る香気成分の濃縮物の原料としては、上記酒類のうち、果実酒、日本酒、焼酎、ウィスキー類を用いるのがより好ましい。前記果実酒としては、ワインが好ましい。前記ワインは、赤ワインであっても、白ワインであってもよい。また、前記焼酎としては、酒税法第２条に言う甲種焼酎であってもよいし、乙種焼酎であってもよい。
なかでも、前記原料としてはウィスキー類がより好ましい。ウィスキー類としては、ウィスキーとブランデーが含まれる。より具体的には、ウィスキーとしては、発芽させた穀類・水を原料として糖化させて発酵させたアルコール含有物を蒸留し、熟成させたものが挙げられる。ブランデーとしては、果実・水を原料として発酵させたアルコール含有物を蒸留し、熟成させたものが挙げられる。
【００１６】
本発明に係る香気成分の濃縮物の原料としては、製造後、例えば樽などの中で熟成または保存された酒類、特に蒸留酒を用いるのも好ましい。前記酒類、特に蒸留酒を熟成または保存させる容器の材質は、木材であることが好ましい。また、熟成または保存の期間は特に限定されないが、約１週間〜３０年程度であることが好適である。
【００１７】
本発明において、前記原料としてはウィスキーを用いるのがさらに好ましい。ウィスキーには、ウィスキー原酒または熟成ウィスキー原酒も含まれる。また、ウィスキーを熟成させるための樽の材質は、特に限定されないが、オーク材を用いるのが好ましい。より具体的には、前記樽は、（ａ）アメリカンオークで作られた樽でバーボンウィスキーの熟成に使われた古樽であるバーボン樽や、（ｂ）スパニッシュホワイトオークで作られた樽でシェリー酒を熟成させた古樽であるシェリー樽や、（ｃ）前記バーボン樽やシェリー樽を一度スコッチ・ウィスキーの熟成に使った古樽、いわば再々使用した樽であるプレーンオーク（リフィルカスク）など、いかなる樽であってよい。また、熟成期間も特に限定されないが、約１年〜３０年程度であることが好ましい。
【００１８】
本発明は、酒類の香気成分を含む抗ストレス剤を提供する。前記酒類としては、果実酒、日本酒、焼酎、ウィスキー類を用いるのが好ましい。また、前記酒類としては、貯蔵された酒類、特に蒸留酒を用いるのもまた好ましい。さらに、前記酒類としては、ウィスキー類を用いるのがより好ましく、ウィスキーを用いるのが特に好ましい。
本発明に係る抗ストレス剤には、酒類に含まれる複数の香気成分が混合している状態で含まれていてよい。例えば、上述のようにして得られる酒類の香気成分の濃縮物を、そのまま本発明に係る抗ストレス剤に含有させてもよい。また、上述のようにして得られる酒類の香気成分の濃縮物を精製して、その精製物を本発明に係る抗ストレス剤に含有させてもよい。前記濃縮物の精製には、例えばカラムクロマトグラフィーによる精製などの公知の方法を用いてよい。また、本発明においては、酒類の香気成分として、既に精製されている市販品を用いてよい。さらに、当該香気成分中の化合物を化学合成して用いてもよい。
【００１９】
上記酒類の香気成分としては、特に限定されず、公知の成分であってよい。具体的に、前記香気成分としては、ダマセノン、１，１−ジエトキシプロパン、１，１−ジエトキシ−２−メチルプロパン、１，１−ジエトキシ−３−メチルブタン、１，１−ジエトキシヘプタン、ケルカスラクトンｂまたはフェニルプロパン酸エチルエステルなどが好適な例として挙げられる。
【００２０】
本発明に係る抗ストレス剤に含まれる酒類の香気成分が遊離の酸または塩基である場合、該香気成分は薬学的に許容されうる塩の形で含有されていてもよい。前記薬学的に許容されうる塩としては、薬学的に許容される酸（例えば、無機酸または有機酸）や塩基（例えば、無機塩基または有機塩基）などとの塩が挙げられる。より具体的には、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸等の無機酸；シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸等の有機酸；ナトリウムもしくはカリウム等のアルカリ金属、マグネシウムもしくはカルシウム等のアルカリ土類金属などの無機塩基；例えば、トリエチルアミン等の有機アミン類、アルギニン等の塩基性アミノ酸類などの有機塩基との塩を挙げることができる。例えば、本発明の抗ストレス剤の有効成分がフェニルプロパン酸エチルエステルの場合は、例えば塩酸塩の形で、本発明に係る製剤中に含有されていてもよい。
本発明に係る抗ストレス剤には、上述の酒類の香気成分を、製剤中に約１重量％以上含んでいることが好ましい。
【００２１】
本発明に係る抗ストレス剤とは、ストレスを緩和または鎮静し、生体の恒常性を維持させる抗ストレス作用を有する物質、または該物質を含む組成物をいう。言い換えれば、本発明における抗ストレス剤とは、ストレスに対し生体が防御または適応しようとする反応を引き起こす物質、または該物質を含む組成物をいう。ここで、ストレスとは、通常ストレスの原因となる刺激（ストレッサー）が生体に加わった際に、精神や身体に生ずるひずみをいう。ストレッサーとしては、寒冷、気象変化、放射線、騒音などの物理的刺激；薬物、ビタミン不足、酸素欠乏などの化学的刺激；細菌感染など生物的刺激；痛みとか発熱などの疾病、障害からくる身体的な刺激；社会や家庭における人間関係から生ずる緊張、不安、恐怖などの精神的刺激などが挙げられる。
従って、本発明に係る抗ストレス剤は、ストレスを予防し、またはストレスからの回復を促進させること等に有用であり、ストレスに起因する医学的症状を予防または改善もしくは治癒することができる。
【００２２】
上記ストレスに起因する医学的症状としては、（ａ）動脈硬化症、虚血性心疾患（狭心症、心筋梗塞）、本態性高血圧、心臓神経症、不整脈などの循環器系疾患や、（ｂ）気管支喘息、過呼吸症候群、神経性咳嗽などの呼吸器系疾患や、（ｃ）消化性潰瘍、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、神経性食欲不振症、神経性嘔吐症、腹部膨満症、空気嚥下などの消化器系疾患や、（ｄ）肥満症、糖尿病、心因性多飲症、バセドウ病などの内分泌代謝系疾患や、（ｅ）偏頭痛、筋緊張性頭痛、自律神経失調症などの神経系疾患や、（ｆ）夜尿症、インポテンツ、過敏性膀胱などの泌尿器系疾患や、（ｇ）慢性関節リウマチ、全身性筋痛症、脊椎過敏症などの骨筋肉系疾患などが挙げられる。
【００２３】
また、さらに前記ストレスに起因する医学的症状としては、（ｈ）神経性皮膚炎、円形脱毛症、多汗症、湿疹などの皮膚系疾患や、（ｉ）メニエール症候群、咽喉頭部異物感症、難聴、耳鳴り、乗物酔い、失声吃音などの耳鼻咽喉科領域の疾患や、（ｊ）原発性緑内症、眼精疲労、眼瞼けいれん、眼ヒステリーなどの眼科領域の疾患や、（ｋ）月経困難症、無月経、月経異常、機能性子宮出血、更年期障害、不感症、不妊症などの産婦人科領域の疾患や、（ｌ）起立性調節障害、再発性臍疝痛、心因性の発熱、夜驚症などの小児科領域の疾患や、（ｍ）腸管癒着症、ダンピング症候群、頻回手術症（ポリサージャリー）、形成手術後神経症などの手術前後の状態や、（ｎ）特発生舌痛症、ある種の口内炎、口臭症、唾液分泌異常、咬筋チェック、義歯神経症などの口腔領域の疾患や、（ｏ）神経症、（ｐ）うつ病なども挙げることができる。
【００２４】
本発明に係るストレス剤は、医薬品または機能性食品として用いることができる。本発明の抗ストレス剤を医薬品として用いる場合、かかる医薬品は経口投与または非経口投与が都合よく行われるものであればどのような剤形のものであってもよい。本発明に係る医薬品の剤形としては、例えば注射液、輸液、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、腸溶剤、トローチ、内用液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、外用液剤、湿布剤、点鼻剤、点耳剤、点眼剤、吸入剤、軟膏剤、ローション剤、坐剤等が挙げられる。また、本発明においては、症状に応じて、上記剤形の本発明に係る医薬品をそれぞれ単独で、または組合わせて使用することができる。
【００２５】
本発明に係る医薬品においては、目的に応じて主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤、安定化剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の添加剤を添加することができる。
より具体的には、本発明に係る医薬品がカプセル剤、錠剤、散剤または顆粒剤などの固形製剤の場合には、例えば、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニットなどの賦形剤；澱粉、アルギン酸ソーダなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤；ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンなどの結合剤；脂肪酸エステルなどの界面活性剤；グリセリンなどの可塑剤などの添加剤を製剤中に含有させることができる。また、本発明にかかる医薬品が液体製剤の場合には、例えば、水、ショ糖、ソルビット、果糖などの糖類；ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどのグリコール類；ごま油、オリーブ油、大豆油などの油類；ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤などの添加剤を製剤中に含有させることができる。また、液体製剤の場合、本発明に係る医薬品は有効成分である香気成分を用時溶解させる形態の製剤であってもよい。
上述したような本発明に係る医薬品は、それ自体製剤学の分野で周知または慣用の方法に従って容易に製造することができる。
【００２６】
本発明に係る医薬品の投与経路は、特に限定されず、経口投与または非経口投与のいずれでもよい。中でも、本発明に係る医薬品は経口投与が可能であることが、服用の容易性の観点から好ましい。
また、本発明に係る医薬品の投与量は、投与経路、剤形、患者の症状の重篤度、年齢もしくは体重などによって異なるので、一概には言えない。具体的には、成人に対する１回の投与量が、本発明の上記香気成分の総量として約５〜５００ｍｇ程度、好ましくは約５〜５０ｍｇ程度である。
【００２７】
本発明の抗ストレス剤を機能性食品として用いる場合には、形態としては前述の医薬製剤の形態と同様でよい。また、前記食品は、自然流動食、半消化態栄養食もしくは成分栄養食、またはドリンク剤等の加工形態とすることもできる。さらに、本発明に係る機能性食品は、アルコール飲料やミネラルウォーターに用時添加する易溶性製剤としてもよい。より具体的には、本発明に係る機能性食品としては、例えばビスケット、クッキー、ケーキ、キャンデー、チョコレート、チューインガム、和菓子などの菓子類；パン、麺類、ごはん、豆腐もしくはその加工品、；清酒、薬用酒などの発酵食品；みりん、食酢、醤油、味噌、ドレッシングなどの調味料；ヨーグルト、ハム、ベーコン、ソーセージ、マヨネーズなどの畜農食品；かまぼこ、揚げ天、はんぺんなどの水産食品；果汁飲料、清涼飲料、スポーツ飲料、アルコール飲料、茶などの飲料等の形態が挙げられる。
【００２８】
また、本発明に係る機能性食品は、例えば、医師の食事箋に基づく栄養士の管理の下に、病院給食の調理の際に任意の食品に本発明の香気成分を加え、その場で調製した機能性食品の形態で患者に与えることもできる。本発明の香気成分は、液状であっても、粉末や顆粒などの固形状であってもよい。
【００２９】
本発明に係る機能性食品は、食品分野で慣用の補助成分を含んでいてもよい。前記補助成分としては、たとえば乳糖、ショ糖、液糖、蜂蜜、ステアリン酸マグネシウム、オキシプロピルセルロース、各種ビタミン類、微量元素、クエン酸、リンゴ酸、香料、無機塩などが挙げられる。
【００３０】
本発明に係る機能性食品は、ストレス負荷が予想される時、または例えば肉体労働時、精神作業時もしくはスポーツをしている時などストレス負荷時に摂取してもよい。また、ストレスの予防または軽減を計るため常用してもよい。
本発明に係る機能性食品の摂取量は、摂取する人のストレスの状態、年齢、性別などによって異なるので、一概には言えない。具体的には、成人に対する１回の摂取量が、本発明の香気成分の総量として約５〜５００ｍｇ程度、好ましい約５〜５０ｍｇ程度であることが好適である。
【００３１】
本発明に係る医薬品または機能性食品は、他の抗ストレス剤、ビタミン剤もしくはホルモン剤その他の栄養剤、または微量元素もしくは鉄化合物と併用することができる。例えば、本発明に係る機能性食品がドリンク剤の場合、所望により、他の生理活性成分、ミネラル、ホルモン、栄養成分、香味剤等を混合することにより、嗜好飲料的性格を持たせることができ、好適である。
【００３２】
【実施例】
以下に実施例を示し、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３３】
[実施例１]  ウィスキー香気成分の抽出
市販のウィスキー（サントリー株式会社製  商品名「響」）750mlを水で２倍希釈し、同量のペンタンで３回抽出した。ペンタンを硫酸ナトリウムで脱水した後、５０℃で蒸留し、溶媒を留去し、８８mgの香気画分を得た。
【００３４】
[実施例２]  ウィスキー香気成分のin vitroでのＧＡＢＡ受容体活性化作用
実験材料には、アフリカツメガエルの卵母細胞を用いた。卵母細胞の核にラット由来のGABA受容体mRNAを注入して、卵表面にGABA受容体を発現させた。卵母細胞は、通常のカエルのリンゲル液(115mM NaCl, 1 mM KCl, 1.8mM CaCl2, 5 mM Tris, pH 7.2)中で保持した。GABA（10μM）による抑制性電位の発生は、voltage clamping amplifier(CEZ-1100;日本光電工業製)を用いたvoltage clamp法で測定した。
【００３５】
サンプルには、上述のようにして得られたウィスキー香気成分と、以下の７種類のウィスキー香気成分を用い、添加濃度は2μl/mlとした。使用したサンプルは、以下の通りである。ダマセノン（damascenone）（図１中、Ｄａｓｃで示す。）、１，１−ジエトキシプロパン（1,1-diethoxypropane）（図１中、１，１−ＤＴＰで示す。）、１，１−ジエトキシ−２−メチルプロパン（1,1-diethoxy-2-methylpropane）（図１中、１，１−ＤＭＰで示す。）、１，１−ジエトキシ−３−メチルブタン（1,1-diethoxy-3-methyl butane）（図１中、１，１−ＤＭＢで示す。）、 １，１−ジエトキシヘプタン（1,1-diethoxyheptane）（図１中、１，１−ＤＥＨで示す。）、 ケルカスラクトンｂ（Quelcuslactone b）（図１中、Lactone bで示す。）、 フェニルプロパン酸エチルエステル（Ethyl phenylpropanoate）（図１中、ＥＰＰで示す。）。
上記サンプルとしては、市販品を用いた。すなわち、Quelcuslactone bは長谷川香料株式会社製のものを、他の化合物は高砂香料株式会社製のものを用いた。
【００３６】
結果を図１に示す。指標には、サンプルのGABAによる抑制性電位に対する増強作用を用いた。また、図１に示した結果は、GABA(10μM)単独添加の場合に発生する抑制性電位に対して、GABAとサンプルを併用した時の抑制性電位が何％であるかで表わした。図１から明らかなように、評価したサンプル全てがGABA受容体のGABA応答を増強し、特にフェニルプロパン酸エチルエステルと１，１−ジエトキシヘプタンに前記応答を強く増強する作用があることがわかった。
【００３７】
実施例２において、ポジティブコントロールとして、ヘキサノールを用いた。ヘキサノールはフィトンチッドの成分としてGABA受容体活性化作用があり（Biosci. Biotechnol.Biochem., 63, 743-748, 1999)、ストレス緩和作用がある（平成10年度〜平成11年度科学研究補助金 基盤研究（C) （２）研究成果報告書 研究課題番号 10670070）ことも知られている。
【００３８】
[実施例３]  用量依存性の検討
実施例２で強い活性が認められたフェニルプロパン酸エチルエステルと１，１−ジエトキシヘプタンの用量依存性について検討した。試験方法は、実施例２と全く同様である。GABA濃度は0.25μM、サンプル濃度は0.05〜0.2μl/mlとした。その結果を図２に示す。図２から明らかなように、フェニルプロパン酸エチルエステルは最大５６０％、１，１−ジエトキシヘプタンは最大２５０％、GABA受容体のGABA応答を増強した。なお、図２に示した結果は、GABA(10μM)単独添加の場合した場合に発生する抑制性電位に対して、GABAとサンプルを併用した時の抑制性電位が何％であるかで表わした。
【００３９】
[実施例４]   ペンチレンテトラゾールによる痙攣に対する抑制作用
実施例３においてGABA受容体活性化作用の強かったフェニルプロパン酸エチルエステルについて、in vivoの評価を行った。
試験動物として ddy系雄性マウス(8週齢)を清水実験材料株式会社より購入し、１週間の予備飼育の後、実験に用いた。飼育条件が、室温23±2℃、湿度55±5％、換気回数12〜15回／時間（オールフレッシュ方式）、照明時間（12時間／日、午前７時点灯、午後７時消灯）に設定された飼育室でポリイソペンテンケージ（日本クレア株式会社製）に飼育した。飼料は固形飼料CE-2（日本クレア株式会社製）を用い、飲料水は自由に摂取させた。
【００４０】
5匹のマウスを、フェニルプロパン酸エチルエステル1mlを染み込ませたおがくずを敷いたプラスティックケージに入れ、15分間サンプルを吸入させた。次に、生理食塩水に溶解したペンチレンテトラゾールをその投与量が80mg/kgとなるように腹腔内投与し、痙攣発現時間を測定した。
実験結果を図３に示す。図３に示した実験結果は平均値±標準誤差で表示されており、有意差検定にはStudentのt-検定を用いた。図３から明らかなように、フェニルプロパン酸エチルエステルは痙攣発現時間を有意に延長させた。
【００４１】
[実施例５]  有効量の検討
試験動物としては ddy系雄性マウス(8週齢)を清水実験材料株式会社より購入し、１週間の予備飼育の後、実験に用いた。飼育条件が、室温23±2℃、湿度55±5 ％、換気回数12〜15回／時間（オールフレッシュ方式）照明時間（12時間／日、午前7時点灯、午後７時消灯）に設定された飼育室でポリイソペンテンケージ（日本クレア株式会社製）に5匹ずつ飼育した。飼料は固形飼料CE-2（日本クレア株式会社製）を用い、飲料水は自由に摂取させた。
マウスに対し、Tween80に懸濁したフェニルプロパン酸エチルエステルを、投与量が2.5または5mg/kgとなるように経口投与した。なお、それぞれの群には5匹ずつのマウスを用いた。30分後に生理食塩水に溶解したGABA拮抗薬であるペンテトラゾール（Pentetrazole）をその投与量が80mg/kgとなるように腹腔内投与し、痙攣発現時間を測定した。
その結果を図４に示す。図４に示した実験結果は平均値±標準誤差で表示されており、有意差検定にはStudentのt-検定を用いた。図４から明らかなように、フェニルプロパン酸エチルエステルは、その投与量が5mg/kgのときにペンチレンテトラゾールによる痙攣の発現時間を有意に延長させた。
【００４２】
[実施例６]  醸造酒の香気成分のin vitroでのＧＡＢＡ受容体活性化作用
市販の赤ワイン（シャトーグランジュ  １９９６）、白ワイン（ファンケルベルグ＜マドンナ＞アイスヴァイン  １９９７）、日本酒（菊正宗  菊正宗酒造株式会社製）、甲類焼酎（いいちこ  三和酒類株式会社製）、乙種焼酎（霧島  霧島酒造株式会社製）のそれぞれ５００ｍＬを水で２倍希釈し、同量のペンタンで３回抽出した。ペンタンを硫酸ナトリウムで脱水した後、５０℃で蒸留し、溶媒を留去し、香気画分を得た。
上記のようにして得られた香気成分のin vitroでのＧＡＢＡ受容体活性化作用を、実施例２と全く同様にして測定した。測定に用いた香気成分は、最終濃度がもとの酒類の５分の１量になるように添加した。その結果を、図５に示す。図５から明らかなように、赤ワイン、白ワイン、日本酒および焼酎の香気成分は、いずれもＧＡＢＡ受容体のＧＡＢＡ応答を増強した。
【００４３】
［実施例７］  ウィスキー香気成分のストレス緩和作用
実施例１で抽出したウィスキー香気成分について、ストレス緩和作用の評価を行った。
試験動物としてLong-Evans系雄性ラットを株式会社星野試験動物飼育所から購入し、1週間の予備飼育の後、実験に用いた。飼育条件が、室温23±2℃、湿度55±5％、換気回数12〜15回/時間（オールフレッシュ方式）、照明時間（12時間/日）に設定された飼育室でポリペンテンケージ（日本クレア株式会社製）に飼育した。飼料は固形飼料CE-2（日本クレア株式会社）を用い、飲料水は自由に摂取させた。
Long-Evans系雄性ラット(300-500g)8匹に対して、外頚動脈にあらかじめシリコンチューブのカニューレを埋め込み、4〜6日後より実験に供した。ストレスとしては四肢を緊縛する方法を用いた。ウィスキー香気成分の提示には、香気成分を無臭のTriethyl Citrateに溶解したものをガス洗浄ビンを通してカニューレでケージに導いた。ウィスキー香気成分の濃度は、元のウィスキー濃度（10ppm）になるように調整した。ポジティブコントロールとしてみどりの香り（n-hexanol,n-hexanalの等量混合物：0.3重量％）を使用した。実験はすべて午後1時30分より行い、一度に4匹のラットを用いた。ストレスのみ、ウィスキー香気成分＋ストレス、みどりの香り＋ストレスを1週間間隔でこの順で同一ラットについて行い、次に異なる4匹のラットについて、ウィスキー香気成分＋ストレス、みどりの香り＋ストレス、ストレスのみの順で1週間隔で行った。
【００４４】
香気成分の提示はストレス負荷30分前より30分間行った。午後2時より20分間緊縛ストレスを負荷した。
ストレス負荷直前、ストレス負荷直後、ストレス負荷40、70、100、160分後の7回において0.6〜0.8mlづつの採血を行い、ヘパリン加血液として血漿を遠心分離して、-20℃で保存した。ストレスホルモンのACTHは、三菱化学のACTH測定RIAキットで測定した。
統計処理は、Studentのt-testによって行った。
図６および図７に示すように緊縛ストレスによりストレスホルモンのACTHは対照時の5倍程度増大するが、ウィスキー香気成分やみどりの香りの提示によりその増加は顕著に抑制された。
【００４５】
[実施例８]  ウィスキー香気成分のストレス鎮静作用
実施例１で抽出したウィスキー香気成分について、ストレス鎮静作用の評価を行った。
20代の男性14名にあらかじめ実験内容を説明したうえ協力を要請した。ストレス鎮静作用の指標として、脳波の随伴性陰性変動（CNV）を用いた。このCNVは脳が興奮した状態で大きくなり、逆に脳が鎮静した状態では小さくなる。被験者に脳波測定のため脳波電極（FPZ,FZ,CZ,PZおよび両耳）、ヘッドホーン（音刺激）、光刺激用ゴーグルを装着してもらい、右手にはボタンスィッチ、左手には香気成分提示のためのガラスロートを持たせ、胸の上で鼻腔より20〜30cmの位置に楽な姿勢になるようにして固定させ、脳波記録用椅子に座らせた。脳波は日本光電製Neupack4mini(MEB5304)で測定した。
香気成分の提示には香気成分を無臭のTriethyl Citrateにウィスキー香気成分を10ppmの濃度で溶解したものを、ガス洗浄ビンを通してカニューレにてロートに導いた。また、ポジティブコントロールとしてみどりの香り（n-hexanol,n-hexanalの等量混合物）およびα-ピネンを使用し、それぞれの香気成分を無臭のTriethyl Citrateに0.3重量％の濃度で溶解したものを、前記と全く同様にして被験者に提示した。
【００４６】
統計処理には、Repeated One Way ANOVAとNeuman-Keuls Multiple Comparison testを用いた。
実験は各香気成分の提示の前に5〜10分間の対照の記録を行い、続いて香りを提示しながら約10分間記録を行った。被験者には、光が見えたらできるだけ早く手元のスイッチでその光を消すように指示した。光がつく2秒前に、予告のブザーを鳴らした。この一連の操作の間の脳波の変化を測定しCNVを求めた。
図８に示すように、ウィスキーの香気成分、みどりの香りおよびα-ピネンは、FZの初期CNVの面積を低下させた。
【００４７】
[実施例９]  カプセル剤の製造
下記処方に従ってフェニルプロパン酸エチルエステルと乳糖を混合し、打錠後粉砕したものに下記処方量のステアリン酸マグネシウムを混合した。得られた混合物を500mgづつ２号カプセルに充填して、１カプセル中に5mgのフェニルプロパン酸エチルエステルを含有するカプセル剤を製造した。
処方（１カプセルあたり）
フェニルプロパン酸エチルエステル     5mg
乳糖                               493mg
ステアリン酸マグネシウム             2mg
【００４８】
[実施例１０]  ドリンク剤の製造
下記処方の成分を蒸留水8 Lに溶解し、さらに蒸留水を加えて全量10 Lとした。ついで、0.22μmの除菌フィルターを通過させ、100 mlづつ褐色びんに無菌充填して、１剤あたり5mgのフェニルプロパン酸エチルエステルを含有するドリンク剤を製造した。
処方
フェニルプロパン酸エチルエステル  0.5g
DL−酒石酸ナトリウム              0.1g
コハク酸                            9mg
液糖                              800g
クエン酸                           12g
ビタミンC                         10g
香料                              12ml
塩化カリウム                       1g
硫酸マグネシウム                 0.5g
【００４９】
【発明の効果】
本発明に係る抗ストレス剤は、ＧＡＢＡ受容体の活性化、特に脳内ＧＡＢＡ神経系の活性化を介して、ストレスを有効に予防・軽減することができる。その結果、本発明の抗ストレス剤は、ストレスに伴う諸症状を抑制または予防することができる。
また、本発明に係る抗ストレス剤は、酒類の香気成分を有効成分として含有しているので、安全性に優れ、使用に際して特別な制限がないという利点を有する。
【００５０】
さらに、本発明に係る抗ストレス剤は、酒類の香気成分が濃縮されて含まれているので、服用または摂取しやすい。特に、本発明に係る抗ストレス剤をドリンク剤などの機能性食品の形態にした場合は、ストレスを予防および／または軽減するために、日常的に用いることが可能である。
より具体的には、例えばウィスキーの香気成分の一つであるフェニルプロパン酸エチルエステルは、ウィスキー中に約０．０９ｐｐｍ含まれているが、抗ストレス作用の効果を十分に得るために有効な量（約５ｍｇ程度）を摂取しようとすると、ウィスキーを５６Ｌも摂取する必要があり、非現実的である。さらに、酒が飲めない人は、上記酒類の香気成分を摂取することは困難である。しかし、酒類の香気成分の濃縮物を医薬品または機能性食品の形態とした場合は、前記香気成分の服用または摂取が容易であり、また、酒が飲めない人も前記香気成分を服用または摂取できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ウィスキーに含まれる各種の香気成分のin vitroでのＧＡＢＡ受容体活性化作用を示すグラフである。
【図２】  １，１−ジエトキシヘプタンとフェニルプロパン酸エチルエステルのＧＡＢＡ受容体活性化作用の用量依存性を示すグラフである。なお、四角は、フェニルプロパン酸エチルエステルの用量依存曲線を示し、ひし形は１，１−ジエトキシヘプタンの用量依存曲線を示す。
【図３】  フェニルプロパン酸エチルエステルをマウスに吸入させた場合のペンチレンテトラゾールによる痙攣発現時間に及ぼす影響を示すグラフである。なお、＊はコントロールに対してｐ＜０．０５で、有意差があることを示す。また、ＥＰＰはフェニルプロパン酸エチルエステルを示し、ＣＯＮＴはコントロールを示す。
【図４】  フェニルプロパン酸エチルエステルをマウスに経口投与した場合のペンチレンテトラゾールによる痙攣発現時間に及ぼす影響を示すグラフである。なお、＊はコントロールに対してｐ＜０．０５で、有意差があることを示す。また、ＥＰＰ（２．５）はフェニルプロパン酸エチルエステルを２．５ｍｇ／ｋｇ投与した場合を示し、ＥＰＰ（５）はフェニルプロパン酸エチルエステルを５ｍｇ／ｋｇ投与した場合を示し、ＣＯＮＴはコントロールを示す。
【図５】  各種醸造酒の香気成分のin vitroでのＧＡＢＡ受容体活性化作用を示すグラフである。
【図６】  ストレスによる血中ACTH濃度の増加に対してウィスキー香気成分が及ぼす影響を示すグラフである。すなわち、図中の塗りつぶしのひし形は、ウィスキー香気成分をラットに提示した場合の血中ACTH濃度の変化を示し、図中の塗りつぶしの四角は、ウィスキー香気成分をラットに提示しなかった場合の血中ACTH濃度の変化を示す。なお、図中の**は、ストレスのみの場合（ウィスキー香気成分をラットに提示しなかった場合）に対するウィスキー香気成分を提示した場合の差が、p<0.01で有意であることを示す。
【図７】  ストレスによる血中ACTH濃度の増加に対してみどりの香りが及ぼす影響を示すグラフである。すなわち、図中の塗りつぶしのひし形は、みどりの香りをラットに提示した場合の血中ACTH濃度の変化を示し、図中の塗りつぶしの四角は、みどりの香りをラットに提示しなかった場合の血中ACTH濃度の変化を示す。なお、図中の**は、ストレスのみの場合（みどりの香りをラットに提示しなかった場合）に対するみどりの香りを提示した場合の差が、p<0.01で有意であることを示す。
【図８】  ウィスキー、みどりの香りおよびα-ピネンをヒトに提示した場合のCNVにおよぼす影響を示すグラフである。なお、図中の *、**は、Neuman-Keuls Multiple Comparison testにおいて、それぞれp<0.05、p<0.01で対照群に対して有意差のあったことを示す。なお、Repeated One Way ANOVAでは、すべての値がp<0.0001で対照群に対して有意であった。
【図１】
0004305806.tif 000002
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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