(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）：
0004204073.tif 000011
（式中、Ｒａは水素またはアミノ基；Ａは隣接するカルボニル基と分子中のアミノ基を介して結合するアミノ酸残基を表わす）
で示されるＮ−ベンゾイル誘導体、
式（ＩＩＩ）：
0004204073.tif 000012
（式中、Ｒｂ及びＲｃはそれぞれ独立してα−アミノ酸のα位置換基を表わす）
で示されるジペプチド、又は
式（ＩＶ）：
ＨＯＯＣ−Ｘｂ−Ｘｃ−ＣＯＯＨ      （ＩＶ）
（式中、Ｘｂは単結合又はカルボニル基；Ｘｃは置換されていてもよいアルキレンを表わす）で示されるジカルボン酸を含有し、さらに
式（Ｉ）：
0004204073.tif 000013
（式中、Ｒ1が水素またはニトロ、Ｒ2が水素、ニトロ、ハロゲン、またはハロゲン化メチル、Ｒ3が水素、Ｒ4が水素または置換されていてもよい低級アルキル、Ｙが水素、ハロゲン、置換されていてもよい低級アルキル、または置換されていてもよいヘテロ環を表す）
で示される化合物又はその製薬上許容される塩もしくは水和物を含有することを特徴とする、興奮性アミノ酸アンタゴニスト含有製剤。
【請求項２】
興奮性アミノ酸アンタゴニストの副作用が軽減された、請求項１記載の製剤。
【請求項３】
副作用が腎臓毒性である、請求項２記載の製剤。
【請求項４】
式（ＩＩ）：
0004204073.tif 000014
（式中、ＲａおよびＡは請求項１と同意義）
で示されるＮ−ベンゾイル誘導体、または
式（ＩＩＩ）：
0004204073.tif 000015
（式中、ＲｂおよびＲｃは請求項１と同意義）
で示されるジペプチドを含有する、請求項１記載の製剤。
【請求項５】
Ａが−ＮＨ−Ｘａ−ＣＯＯＨ（式中、Ｘａは置換されていてもよい低級アルキレンを表わす）である、請求項４記載の製剤。
【請求項６】
式（ＩＩ）で示されるＮ−ベンゾイル誘導体または式（ＩＩＩ）で示されるジペプチドが、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニン、Ｎ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸、Ｎ−ベンゾイル−グリシン、ｐ−アミノ馬尿酸、またはＬ−トリプトファン−Ｌ−アラニンである、請求項４記載の製剤。
【請求項７】
Ｘｃが炭素数２〜１０のアルキレンである、請求項１記載の製剤。
【請求項８】
式（Ｉ）：
0004204073.tif 000016
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＹは、請求項１と同意義）
で示される化合物又はその製薬上許容される塩もしくは水和物に対する、
式（ＩＩ）：
0004204073.tif 000017
（式中、ＲａおよびＡは請求項１と同意義）
で示されるＮ−ベンゾイル誘導体、
式（ＩＩＩ）：
0004204073.tif 000018
（式中、ＲｂおよびＲｃは請求項１と同意義）
で示されるジペプチド、または
式（ＩＶ）：
ＨＯＯＣ−Ｘｂ−Ｘｃ−ＣＯＯＨ      （ＩＶ）
（式中、ＸｂおよびＸｃは請求項１と同意義）で示されるジカルボン酸の含有比率がモル比で、０．１〜１０当量である、請求項１記載の製剤。
【請求項９】
式（Ｉ）で示される化合物が、６−（１，４−ジヒドロ−４−オキソ−１−ピリジル）−７−ニトロ−２，３（１Ｈ，４Ｈ）−キノキサリンジオンである、請求項１記載の製剤。
【請求項１０】
式（ＩＩ）：
0004204073.tif 000019
（式中、ＲａおよびＡは請求項１と同意義）
で示されるＮ−ベンゾイル誘導体、
式（ＩＩＩ）：
0004204073.tif 000020
（式中、ＲｂおよびＲｃは請求項１と同意義）
で示されるジペプチド、または、
式（ＩＶ）：
ＨＯＯＣ−Ｘｂ−Ｘｃ−ＣＯＯＨ      （ＩＶ）
（式中、ＸｂおよびＸｃは請求項１と同意義）で示されるジカルボン酸、及び、
式（Ｉ）：
0004204073.tif 000021
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＹは、請求項１と同意義）
で示される化合物又はその製薬上許容される塩もしくは水和物、並びに、
所望によりこれらを溶解するための水溶液から構成される、注射用製剤を用時調製するためのキット。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、興奮性アミノ酸アンタゴニストを含有する医薬製剤に関し、とりわけ該アンタゴニストの副作用が軽減された製剤に関する。さらに詳しくは、Ｎ−アシルアミノ酸又はジカルボン酸を含有させることによって、興奮性アミノ酸アンタゴニスト投与時に発現する可能性のある腎臓毒性等の副作用を軽減せしめた医薬製剤である。
背景技術
L-グルタミン酸、L-アスパラギン酸などの興奮性アミノ酸は、中枢神経系における神経伝達物質として神経細胞活性化のために重要である。しかし、これらの興奮性アミノ酸の細胞外での過剰な蓄積は、神経細胞の過度な刺激を誘引し、パーキンソン氏病、老人性痴呆症、ハンチントン舞踏病、てんかんなどの種々の脳神経学的疾患、ならびに、酸素欠乏時、虚血症、低血糖状態時、頭部または脊髄損傷時などに見られるような精神および運動機能の欠失を引き起こすと考えられている（McGeerら、Nature、263、517-519（1976）、Simonら、Science、226、850-852（1984）、Wieloch、Science、230、681-683（1985）、Fadenら、Science、244、798-800（1989）、Turskiら、Nature、349、414-418（1991））。
上記興奮性アミノ酸の中枢神経細胞に対する活性は、神経細胞上に存在するグルタメート受容体を介して作用することが知られている。従って、このような受容体への上記興奮性アミノ酸の結合に拮抗する物質は、上記疾患および症状の治療薬剤として有用であると考えられている。このようなグルタメート受容体が果たす重要な役割については、例えば、特開平6-25294、特開平6-239747、特開平6-228112、WO93/8173、EP5725852、Exp.Opin.Ther.Patents,6（10）,1069-1079（1996）、J.Med.Chem.39,3971-3979（1996）等にも報告されている。
上記グルタメート受容体は、イオンチャンネル型と代謝型とに分類され、さらにイオンチャンネル型は、アゴニストに対する選択性に基づいて、３種に分類される。これらは各々、N-メチル-D-アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体、２−アミノ−３−（３−ヒドロキシ−５−メチルイソキサゾール−４−イル）プロパン酸（ＡＭＰＡ）受容体およびカイネート受容体と呼ばれる。
ＮＭＤＡ受容体は、ＮＭＤＡ、イボテン酸などのアゴニストによって選択的に活性化される。このＮＭＤＡ受容体の強い刺激は、大量のカルシウムイオンの神経細胞への流入を引き起こし、これが神経細胞死の原因の一つと考えられている。このＮＭＤＡ受容体に対する選択的アンタゴニストとして、これまでにD-２−アミノ−５−ホスホバレリン酸（D-ＡＰ５）、３−［２−カルボキシピペラジン−４−イル］プロピル−１−リン酸（ＣＰＰ）などが知られている。
またＮＭＤＡ受容体には、上記アゴニストを認識する部位の他に、グリシンが結合するアロステリック部位（グリシン結合部位）を有する。このグリシン結合部位へのグリシンの結合によって、ＮＭＤＡ受容体機能が著しく増強されることが知られている。最近は、ＮＭＤＡ受容体に対して上記のようにアロステリックに作用する、グリシン結合部位に対するアンタゴニストまたはモジュレーターの開発にも関心が向けられている。このようなグリシン結合部位へのアンタゴニストとして、５，７−ジクロロキヌレン酸などが知られている。
一方、ＡＭＰＡ受容体は、ＡＭＰＡ、グルタミン酸およびキスカル酸などのアゴニストによって選択的に活性化される。ＡＭＰＡ受容体に対するアンタゴニストとして、６，７−ジニトロキノキサリン−２，３−ジオン（ＤＮＱＸ）、６−シアノ−７−ニトロキノキサリン−２，３−ジオン（ＣＮＱＸ）、２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロ−７−スルファモイルベンゾキノキサリン（ＮＢＱＸ）および６−イミダゾリル−７−ニトロキノキサリン−２，３−（１Ｈ，４Ｈ）−ジオン（ＹＭ９０Ｋ）、６，７−ジクロロ−８―ニトロ−１，４−ジヒドロキシキノキサリン−２，３−ジオン（ＡＣＥＡ１０２１）のようなキノキサリン（１，４−ベンゾジアゼピン）骨格を有する化合物の開発が進められてきている（Science、241、701-703（1988）,Eur.J.Pharmacol.、174、197-204（1989）,WO92/07847、特開昭63-83074、特開昭63-258466、特開平1-153680、特開平2-48578、特開平2-221263、および特開平2-221264等）。特に、特開平7-324084号（シオノギ）には、上記ＡＭＰＡ受容体及びＮＭＤＡ受容体のグリシン結合部位の両方に強力に作用して、前記疾患及び症状に対してより優れた治療効果を有する一連のキノキサリン誘導体が記載されている。
ところでこれらの興奮性アミノ酸アンタゴニストは、副作用発現等の問題があり未だ医薬として実用化されるには至っていない。特に、キノキサリン骨格を有する興奮性アミノ酸アンタゴニストについては、例えばＮＢＱＸ等について報告されている通り、中性付近での低溶解性による尿細管内での結晶析出に起因する腎細胞死現象が引き金となって腎臓毒性が発現することが知られている（J.Cerb Blood Flow Metab.,Vol,14.No2（1994））。
一方、ある種のβ−ラクタム系抗生物質や抗ガン剤であるシスプラチンは、それ自身が直接的な強い細胞毒性を有しており、特に腎臓毒性軽減に関してはベタミプロンに代表されるＮ−ベンゾイル−アミノ−アシル誘導体との併用が報告されている（特公平４−３２０５３、特公平７−５４６１、
Chem.Pharm.Bull..19,1451-1456（1996）等）。しかしこれらの文献では、興奮性アミノ酸アンタゴニストの腎臓毒性については何等、問題視されていない。
従って、興奮性アミノ酸アンタゴニスト、特にキノキサリン誘導体について、その腎臓毒性を軽減させる有効な方法は未だ見出されておらず、有効な解決手段が要望されていた。
なお、上記以外にも興奮性アミノ酸アンタゴニストを開示した文献としては、ＷＯ９５３２２０５号、ＷＯ９６０９２９５号、ＷＯ９６０８４９３号、ＷＯ９６１５１２７号、ＷＯ９６１００２３号、ＷＯ９６１４３１８号、ＷＯ９６２８４４５号、ＷＯ９６１９４７６号、ＷＯ９６１２７２４号、ＷＯ９６１２７２５号、ＷＯ９６４０６５１号、ＷＯ９６４０６５０号、ＷＯ９６４０１４１号、ＷＯ９７０８１５５号、ＷＯ９７０３０７９号、ＤＥ１９５３２０５０号、ＤＥ１９５１９９７９号、ＷＯ９６３１５１１号、ＧＢ２２８８８００号、ＧＢ２２９０２９２号、ＦＲ２７１７８１４号、ＦＲ２７１７８１３号、ＦＲ２７１７８１２号、ＦＲ２７１７８１１号、ＦＲ２７１７８０５号、ＥＰ７０５８３４号、ＥＰ７０５８３５号、ＷＯ９７３２５８１、ＷＯ９７３２８５８、ＷＯ９７３２８７３、ＷＯ９７３２８８３、ＷＯ９７４６５５５、Exp.Opin.Ther.Patents（1997）7（10）等があげられる。
発明を実施するための最良の形態
本発明者らは上記課題に鑑み鋭意検討した結果、興奮性アミノ酸アンタゴニストを投与する際に、Ｎ−アシルアミノ酸又はジカルボン酸を併用すれば、腎臓毒性等の副作用を軽減できることを見出し本発明を完成した。即ち、本発明は、Ｎ−アシルアミノ酸又はジカルボン酸を含有することを特徴とする、興奮性アミノ酸アンタゴニスト含有製剤（以下、本発明製剤という）を提供する。さらに本発明は、本発明製剤を調製するためのキットや、興奮性アミノ酸アンタゴニストの副作用を軽減する方法等も提供する。
本発明の好ましい例を以下に示す。
（１）Ｎ−アシルアミノ酸又はジカルボン酸を含有することを特徴とする、興奮性アミノ酸アンタゴニスト含有製剤。
（２）興奮性アミノ酸アンタゴニストの副作用が軽減された、上記（１）の製剤。
（３）副作用が腎臓毒性である、上記（２）の製剤。
（４）Ｎ−アシルアミノ酸を含有する、上記（１）の製剤。
（５）Ｎ−アシルアミノ酸が、式：
0004204073.tif 000002
（式中、Ｒａは水素またはアミノ基；Ａは隣接するカルボニル基と分子中のアミノ基を介して結合するアミノ酸残基を表わす）
で示されるＮ−ベンゾイル誘導体であるか又は、式：
0004204073.tif 000003
（式中、Ｒｂ及びＲｃはそれぞれ独立してα−アミノ酸のα位置換基を表わす）で示されるジペプチドである、上記（１）の製剤。
（６）Ａが−ＮＨ−Ｘａ−ＣＯＯＨ（式中、Ｘａは置換されていてもよい低級アルキレンを表わす）である、上記（５）の製剤。
（７）Ｎ−ベンゾイル誘導体が、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニン又はＮ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸である、上記（５）の製剤。
（８）ジカルボン酸が、式：ＨＯＯＣ−Ｘｂ−Ｘｃ−ＣＯＯＨ（ＩＶ）（式中、Ｘｂは単結合又はカルボニル基；Ｘｃは置換されていてもよいアルキレンを表わす）で示される化合物である、上記（１）の製剤。
（９）Ｘｃが炭素数２〜１０のアルキレンである、上記（８）の製剤。
（１０）興奮性アミノ酸アンタゴニストに対する、Ｎ−アシルアミノ酸又はジカルボン酸の含有比率がモル比で０．１〜１０当量である、上記（１）の製剤。
（１１）興奮性アミノ酸アンタゴニストがキノキサリン誘導体である、上記（１）の製剤。
（１２）キノキサリン誘導体が式：
0004204073.tif 000004
（式中、Ｒ1、Ｒ2、及びＲ3はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、置換されていてもよいアミノ、置換されていてもよい低級アルキル、置換されていてもよい低級シクロアルキル、置換されていてもよい低級アルコキシ、置換されていてもよい低級アルキルカルボニル、低級アルキルにより置換されていてもよいカルバモイル、低級アルキルにより置換されていてもよいカルバモイルアミノ、低級アルキルにより置換されていてもよいスルファモイル、低級アルキルにより置換されていてもよいスルファモイルアミノ、置換されていてもよいスルホニル；Ｒ4は水素、ヒドロキシ、置換されていてもよい低級アルキル、置換されていてもよい低級アルコキシ、または置換されていてもよい低級シクロアルキル；Ｙは、水素、ハロゲン、ニトロ、シアノ、置換されていてもよい低級アルコキシ、置換されていてもよいアミノ、又は置換されていてもよいヘテロ環を表わす。又、Ｒ1とＲ2、Ｒ2とＹ、Ｒ3とＹ、およびＲ3とＲ4は、それぞれ一緒になって隣接する原子と共に置換されていてもよくヘテロ原子を含有していてもよい炭素環を形成してもよい。）
で示される化合物又はその製薬上許容される塩もしくは水和物である、上記（１１）の製剤。
（１３）Ｒ1が水素またはニトロ、Ｒ2が水素、ニトロ、ハロゲン、またはハロゲン化メチル、Ｒ3が水素、Ｒ4が水素または置換されていてもよい低級アルキル、Ｙが水素、ハロゲン、置換されていてもよい低級アルキル、または置換されていてもよいヘテロ環である、上記（１２）の製剤。
（１４）式（Ｉ）で示される化合物が６−（１，４−ジヒドロ−４−オキソ−１−ピリジル）−７−ニトロ−２，３（１Ｈ，４Ｈ）−キノキサリンジオンである、上記（１２）の製剤。
（１５）Ｎ−アシルアミノ酸がＮ−ベンゾイル−β−アラニン又はＮ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸であり、興奮性アミノ酸アンタゴニストがキノキサリン誘導体である、上記（１）の製剤。
（１６）興奮性アミノ酸アンタゴニスト、Ｎ−アシルアミノ酸又はジカルボン酸、及び所望によりこれらを溶解するための水溶液から構成される、上記（１）の注射用製剤を用時調製するためのキット。
（１７）Ｎ−アシルアミノ酸又はジカルボン酸を併用することを特徴とする、興奮性アミノ酸アンタゴニストの副作用軽減方法。
（１８）副作用の軽減された興奮性アミノ酸アンタゴニスト含有製剤を製造するために、Ｎ−アシルアミノ酸又はジカルボン酸を使用する方法。
本発明製剤に含有され得る興奮性アミノ酸アンタゴニストとは、前述のとおり、脳内興奮性アミノ酸の細胞外での過剰蓄積に起因する種々の疾患の予防・治療に有効ではあるが、臨床上、何らかの副作用、例えば、腎臓毒性、肝臓毒性、排尿障害等が発現する可能性のある薬物を幅広く意味し、前記先行文献に開示された種々のアンタゴニストを包含する。その中でも本発明による副作用軽減効果が特に有効なアンタゴニストとしては、特にキノキサリン誘導体があげられ、代表的には、前記化合物（Ｉ）などの１，４−ジヒドロキノキサリン−２，３−ジオン誘導体が例示される。しかし、その他の化学構造を有する種々の興奮性アミノ酸アンタゴニストも本発明の適用対象となり得る。本発明に適用し得る興奮性アミノ酸アンタゴニストを本明細書の末尾の表４〜６に例示する。
化合物（Ｉ）中のハロゲンとしては、塩素、フッ素、臭素、ヨウ素などが挙げられる。低級アルキルとは、炭素数が１から６までの直鎖状または分岐状のアルキルを意味し、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、又はヘキシルである。低級シクロアルキルは、好ましくは炭素数が３から６までのシクロアルキルを意味し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルである。低級アルコキシとは、上記低級アルキル由来のアルコキシを意味し、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、又はブトキシ等である。
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4の各定義における「置換されていてもよい」の各置換基としては、低級アルキル（例：メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル等）、低級アルキルカルボニル、低級アルコキシカルボニル、低級アルコキシカルボニルメチル、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ）、ハロゲン化メチル（例：ＣＦ3）、置換されていてもよいアミノ（例：ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ベンゾイルアミノ等）、シアノ、ニトロ、カルボキシ、オキソ、カルボキシメチル、ＣＨＯ、ＰＯ（ＯＨ）2、ＯＰＯ（ＯＨ）2、ＰＯ（ＯＣＨ2ＣＨ3）2、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2ＣＨ3．ＳＯ2ＣＦ3.置換されていてもよいフェニル（フェニル、ｐ−ニトロフェニル、ｐ−メチルフェニル、ｍ−クロロフェニル等）、低級アルキルにより置換されていてもよいカルバモイル、低級アルキルにより置換されていてもよいスルフェモイル、置換されていてもよいアシルアミノ（チエニルアセチルアミノ）、ヘテロ環（ピロリジン、チオヘン、イミダゾール、テトラゾール、モルホリノ等）、フェニルアミノカルボニル、ベンゾイルアミノエチル等から置換可能なものが選択される。
Ｙにおけるヘテロ環とは、Ｏ、Ｓ及びＮ原子から選択される同一又は異なるヘテロ原子を１〜４個含有する、５〜７員の芳香族又は非芳香族環を意味するが、薬理活性の面から好ましくは、Ｎ原子を含有する５又は６員環であり、例えばピリジン環、イミダゾール環、トリアゾール環、ピロール環、ピペリジン環等が例示される。該ヘテロ環における置換基としては、オキソ、チオキソ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、アミノ、アシルアミノ（例：アセチルアミノ、ベンゾイルアミノ、ピリジルカルボニルアミノ）、アシルアミノメチル、ジ低級アルキルアミノ、カルボキシ、低級アルキル、ハロゲン化低級アルキル（例：トリフルオロメチル）、カルボキシ低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン化低級アルコキシ（例：トリフルオロメトキシ）、低級アルコキシカルボニル、低級アルコキシカルボニルメチル、低級アルキルにより置換されていてもよいカルバモイル、低級アルキルにより置換されていてもよいカルバモイルアミノ、低級アルキルにより置換されていてもよいスルフェモイルアミノ、Ｓ０3Ｈ、ＳＯ2ＮＨ2、ＮＨＣＳＮＨ2、ＮＨＣＳＨ、ＮＨＳＯ2ＮＨ、ＮＨＳＯ2ＣＦ3、置換されていてもよいアリール（例：ハロゲン化フェニル）、ピリジルカルバモイルメチル、ピペラジニルカルボニル等が例示され、これらを１〜４個の範囲で置換可能な位置に有していてもよい。特に好ましいＹは、置換されていてもよい１，４−ジヒドロ−４−オキソ−１−ピリジルである。
Ｒ1とＲ2、Ｒ2とＹ、Ｒ3とＹ、またはＲ3とＲ4が、それぞれ一緒になって隣接する原子と共に形成する炭素環とは、Ｏ、Ｓ及びＮ原子から選択される同一又は異なるヘテロ原子を１〜４個の範囲内で含有していてもよい５〜７員環が例示され、例えば、ベンゼン環、チオフェン環、ピロール環、ピロリジン環、イミダゾール環、オキサゾール環、チアゾール環、イミダゾリン環、イミダゾリジン環、オキサゾリジン環、ピリジン環、ピラン環、チオピラン環、ピペリジン環、ピペラジン環、モルホリノ環、トリアゾール環などが例示される。これらは、上記のＹにおけるヘテロ環の場合と同様の置換基を有していてもよい。
本発明の興奮性アミノ酸アンタゴニストは製薬上許容される塩であってもよく、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸との塩、もしくは酢酸、酒石酸、フマル酸、スルホン酸などの有機酸との塩、または水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの無機塩基との塩（すなわちナトリウム塩、カリウム塩など）、もしくはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、コリンなどの有機塩基との塩が例示され、また１水和物、２水和物などの水和物であってもよい。
次に、本発明製剤において薬物の副作用を軽減するために含有される、Ｎ−アシルアミノ酸及びジカルボン酸について説明する。Ｎ−アシルアミノ酸としては、興奮性アミノ酸アンタゴニストの主作用に悪影響を及ぼすことなく、その副作用、特に腎臓毒性を軽減できる化合物を幅広く意味する。該アシル基は、芳香族アシル又は脂肪族アシルのいずれでもよい。芳香族アシルアミノ酸として好ましくは、前記式ＩＩで示されるＮ−ベンゾイル誘導体（以下、化合物（ＩＩ）ともいう）である。脂肪族アシルアミノ酸として好ましくはジペプチドであり、例えば前記式ＩＩＩで示されるジペプチド（以下、化合物（ＩＩＩ）ともいう）が例示される。化合物（ＩＩ）において、Ｒａは好ましくはｐ−アミノ基である。
Ａで示されるアミノ酸残基におけるアミノ酸は、天然又は合成のアミノ酸を意味し、アミノ基の位置は特に限定されずまた、ラセミ体または光学活性体（Ｄ体又はＬ体）のいずれでもよい。天然アミノ酸としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン等が例示されるが、好ましくは、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、バリン、リジン等である。
またＡが合成アミノ酸残基である場合としては、例えば、−ＮＨ−Ｘａ−ＣＯＯＨ（式中、Ｘａは置換されていてもよい低級アルキレンを表わす）であるアミノ酸基が例示される。Ｘａで示される低級アルキレンは、好ましくは炭素数１〜６の直鎖または分枝状のアルキレンであり、その置換基としては、例えば、低級アルキル（メチル、イソプロピル等）、低級アルキルチオ（メチルチオ等）、フェニル、ベンジル、フェニルチオ、ベンゾイルアミノ等が例示される。Ｘａとして好ましくは、無置換のエチレン、ブチレン等が例示される。
化合物（ＩＩ）の具体例としては、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニン、Ｎ−ベンゾイル−４−アミノ酪酸、Ｎ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸、Ｎ−ベンゾイル−６−アミノカプロン酸、Ｎ−ベンゾイル−α−アラニン、Ｎ−ベンゾイルバリン、Ｎ−ベンゾイルメチオニン、Ｎα,ε−ジベンゾイルリジン、Ｎ−ベンゾイル−フェニルグリシン、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニン、Ｎ−ベンゾイルグリシン、ｐ−アミノ馬尿酸、等が例示されるが、好ましくは、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニン、Ｎ−ベンゾイルグリシン、ｐ−アミノ馬尿酸、Ｎ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸等である。
またジペプチドである化合物（ＩＩＩ）を形成している２個のアミノ酸は、前記の天然又は合成アミノ酸から選択される同一又は異なるα−アミノ酸であり、トリプトファン、フェニルアラニン、グリシン、アラニン、ロイシン、アルギニン等が例示される。よってＲｂ、Ｒｃとしては、インドリルメチル、ベンジル、水素、メチル、イソブチル、グアニジノプロピル等が例示される。化合物（III）として好ましくは、Ｌ−トリプトファン−Ｌ−アラニンである。
ジカルボン酸としては好ましくは脂肪族カルボン酸であり、前記の式：ＨＯＯＣ−Ｘｂ−Ｘｃ−ＣＯＯＨ（ＩＶ）で示される化合物（以下、化合物（ＩＶ）ともいう）が例示される。Ｘｃにおけるアルキレンとは、好ましくは炭素数１〜１０、更に好ましくは炭素数３〜１０の直鎖または分枝状のアルキレンであり、これらは、例えば、低級アルキル（メチル、イソプロピル等）、低級アルキルチオ（メチルチオ等）、フェニル、ベンジル、フェニルチオ、ベンゾイルアミノ等で置換されていてもよい。化合物（IV）としては、α−ケトグルタル酸が例示される。
本発明製剤における上記添加剤、即ちＮ−アシルアミノ酸またはジカルボン酸の含有割合は、活性成分である興奮性アミノ酸アンタゴニストの種類や含量または想定される副作用の種類、程度によって適宜設定すればよいが、例えば、興奮性アミノ酸アンタゴニストに対してモル比で約0.1〜２００当量、好ましくは約０．1〜１０当量、さらに好ましくは１〜１０当量であり、又重量比では、約０．5〜１００当量、好ましくは約１〜０．５当量である。
本発明製剤の投与方法は興奮性アミノ酸アンタゴニストの投与方法に準じればよく、経口または非経口投与のいずれでもよいが、好ましくは非経口投与であり、より好ましくは注射、特に点滴静注による投与である。注射投与の場合、本発明製剤の形態は、上記の活性成分（興奮性アミノ酸アンタゴニスト）及び副作用軽減のための添加剤（Ｎ−アシルアミノ酸またはジカルボン酸）を含有する注射液自体であってもよく、あるいはその注射液を用時調製するための固形製剤、例えば凍結乾燥製剤であってもよい。さらに該凍結乾燥製剤は、該活性成分及び該添加剤を混合または２層のいずれの状態で含有していてもよい。また本発明の一形態としては、該活性成分及び該添加剤をそれぞれ別々に凍結乾燥したものを１セットに組み合わせた用時調製用のキットであってもよい。該キットの構成としては、さらにこれらの成分を再溶解するための水溶液が含まれていてもよい。
本発明製剤に含有される興奮性アミノ酸アンタゴニストの１回投与当たりの含量は、アンタゴニストや対象疾患の種類等によって適宜設定すればよいが、例えば、約１〜１０００ｍｇ、好ましくは約１０〜５００ｍｇである。また本発明製剤に含有される興奮性アミノ酸アンタゴニストの投与量は、アンタゴニストや対象疾患の種類等によって適宜設定すればよいが、通常の成人の場合、経口投与では１日当り、約１〜1000mg、好ましくは10〜500mgの範囲であり、非経口投与では、約１〜500mgの範囲である。投与は、１日１回または数回に分けて投与されるか、あるいは持続投与である。
本発明製剤にはさらに、興奮性アミノ酸アンタゴニストの副作用軽減のためには必須ではないが、その他の目的のための添加物、例えば、安定化剤、ｐＨ調節剤、等張化剤等を任意に含有していてもよい。
安定化剤としては、例えば、人血清アルブミン、アプロチニン、Ｌ−アスコルビン酸、ピロ亜硫酸ナトリウム、α−トコフェロール等が例示される。
ｐＨ調節剤としては、例えば、塩酸、クエン酸塩、酢酸塩、リン酸塩、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム等が例示される。
等張化剤としては、例えば、食塩、ブドウ糖、マンニトール等が例示される。
本発明製剤または用時調製用キットの使用方法のひとつは、上記したように、興奮性アミノ酸アンタゴニストとＮ−アシルアミノ酸またはジカルボン酸とを１製剤として同時に投与する方法である。また他の方法としては、両者を別々に含有する２種類の製剤を同時に又は時間をずらして投与すればよい。
以下に本発明の実施例、試験例を示すが、これらはなんら本発明を制限するものではない。尚、興奮性アミノ酸アンタゴニストとしては前記化合物Ｓ（：６−（１，４−ジヒドロ−４−オキソ−１−ピリジル）−７−ニトロ−２，３（１Ｈ，４Ｈ）−キノキサリンジオン）を用いた。
実施例１
Ｎ−ベンゾイル−β−アラニン（東京化成）を生理食塩水に懸濁後、１Ｎ ＮａＯＨを添加して、濃度４０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ９．７の溶液（以下、Ａ液という）を作製した。この溶液に化合物Ｓを１０ｍｇ／ｍｌとなるように溶解することによって、副作用が軽減された化合物Ｓの注射用溶液が得られる。
実施例２
Ｎ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸（東京化成）を生理食塩水に懸濁後、１Ｎ ＮａＯＨを添加して、濃度４０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ９．７の溶液（以下、Ｂ液という）を作製する。この溶液に化合物Ｓを１０ｍｇ／ｍｌとなるように溶解することによって、副作用が軽減された化合物Ｓの注射用溶液が得られる。
実施例３
化合物Ｓ、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニン、及びｐＨ調節剤としてＮａＯＨ又は炭酸水素ナトリウムを含有する凍結乾燥製剤を調製する。このものを注射用無菌溶液に再溶解することによって、副作用が軽減された化合物Ｓの注射用溶液が得られる。
試験例１
Ｎ−アシルアミノ酸を併用した場合の化合物Ｓの腎臓組識中濃度を調べるために、キノキサリン骨格の２位及び３位部分を14Ｃでラベル化した化合物Ｓをラット（ＳＤ系雄性，体重約２５０ｇ〜３５０ｇ）に投与した後、腎臓中の放射活性をシンチレーションカウンターにて測定した。なお化合物Ｓは、本試験時間内では代謝による変化を受けずに腎臓から化合物Ｓとして排泄されるため、腎臓中の放射活性は化合物Ｓの腎臓組識中の量を示している。各投与方法は以下の通りである。
（1）化合物Ｓ単独投与の場合（対照例）
まず、14Ｃでラベル化した化合物ＳをｐＨ９．７の等張炭酸緩衝液に溶解して、濃度が１０ｍｇ／ｍｌの投与溶液（以下、Ｃ液という）を作製する。次に上記ラットをエーテルにて軽く麻酔した後、大腿静脈より、Ｃ液を化合物Ｓとして12.５ｍｇ／ｋｇになるよう投与した。投与後、１５分及び６０分後に腎臓中の放射活性を測定した。
（2）Ｎ−ベンゾイル−β−アラニン併用の場合
上記（1）同様にラットを麻酔した後、大腿静脈より化合物Ｓを含む上記Ｃ液及び実施例１にて調製したＮ−ベンゾイル−β−アラニン（N-benzoyl-β-alanine）を含むＡ液を同時投与した。各投与量は、化合物Ｓが１２．５ｍｇ／ｋｇ、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニンが５０ｍｇ／ｋｇである。投与後、上記（1）同様に放射活性を測定した。
（3）Ｎ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸併用の場合
上記（1）同様にラットを麻酔した後、大腿静脈より化合物Ｓを含む上記Ｃ液及び実施例２にて調製したＮ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸（N-benzoyl-5-aminovaleric acid）を含むＢ液を同時投与した。各投与量は、化合物Ｓが１２．５ｍｇ／ｋｇ、Ｎ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸が５０ｍｇ／ｋｇである。投与後、上記（1）同様に放射活性を測定した。結果を表１に示す。
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化合物Ｓを単独投与した場合には、投与１５分後に化合物Ｓは約６３４μｇ／ｍｌと高濃度に腎臓に蓄積しており、６０分後においてもかなりの高蓄積量を示した。一方、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニンを併用した場合には、投与１５分後の化合物Ｓの腎臓中濃度は約７４μｇ／ｍｌと、化合物Ｓ単独投与時に比べて約１／９の値を示し、６０分後においてはさらに低い値を示した。また、Ｎ−ベンゾイル−５−アミノ吉草酸を併用した場合にも同様に低い値を示した。以上の結果から、Ｎ−アシルアミノ酸を併用することによって興奮性アミノ酸アンタゴニストの腎臓組識での蓄積量を大幅に抑制できることが分かった。
試験例２
化合物ＳにＮ−ベンゾイル−β−アラニンを併用した場合の腎臓組識、機能の状態を調べた。
（1）化合物Ｓ単独投与（対照例）
化合物ＳをｐＨ９．７の等張炭酸緩衝液に溶解して、５ｍｇ／ｍｌ濃度の投与溶液を作製した。ラット（ＳＤ系雄性，体重２４８．5〜３０４．４ｇ）を５匹用い、ラット尾静脈より投与溶液を１日１回、3日間反復投与した。投与量は化合物Ｓが２５ｍｇ／ｋｇとなるように投与を行った。3日間反復投与の翌日、ペントバルビタールナトリウム麻酔下で開腹した後、後大静脈より採血し、血漿中のクレアチニンおよび尿素窒素を測定した。腎臓は肉眼的に観察した後重量を測定し、常法に従ってH-E染色標本を作製して光顕的に観察した。
（2）Ｎ−ベンゾイル−β−アラニンの併用
上記（1）同様、化合物Ｓの投与溶液（５ｍｇ／ｍｌ）を作製した。一方、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニンを５０〜６０℃加温下にて、０．5ＮのＮａＯＨ溶液で溶解して１００ｍｇ／ｍｌ溶液を調製後、生理食塩水で希釈して、濃度１０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ９．７の投与溶液を作製した。
次に上記（1）と同種のラット５匹用い、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニン含有溶液をラット尾静脈より投与し、その１分後に化合物Ｓ含有溶液も同様に尾静脈より投与する方法で、両薬剤を１日１回、3日間反復投与した。投与量は、両薬剤とも２５ｍｇ／ｋｇであった。3日間反復投与の翌日、上記（1）同様に採血し、血漿中のクレアチニンおよび尿素窒素を測定し、また腎臓組識の状態を観察した。さらに同様にＮ−ベンゾイル−β−アラニン投与溶液（２０ｍｇ／ｍｌ，４０ｍｇ／ｍｌ）を調製した後、その投与量をかえて試験を行った。結果を表２に示す。
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化合物Ｓ単独投与の場合、剖検では全例の腎臓の皮質が部分的に退色しており、髄質（主として乳頭部）に化合物Ｓと考えられる微細顆粒状の黄白色物が認められた。また光顕観察の結果、化合物Ｓの投与により全例で集合管腔内に、化合物Ｓと考えられる結晶析出が認められ、さらに尿細管の拡張、近位尿細管上皮の空砲化および集合管上皮の再生等が認められた。また、腎孟上皮の過形成が3例、顆粒円柱が2例で認められた。さらに腎臓重量の増加やクレアチニン値の上昇等も認められた。これらの結果から、化合物Ｓ単独投与により全例で腎障害が誘発されていると判断される。
一方、化合物ＳとＮ−ベンゾイル−β−アラニンの併用投与によって、化合物Ｓ単独投与時に認められた上記異常は顕著に抑制された。特に、化合物Ｓに対してＮ−ベンゾイル−β−アラニンを４倍量併用した場合には、肉眼及び光顕所見においてほとんど異常は認められず、さらに腎臓重量増加やクレアチニン上昇は完全に抑制された。
以上の結果は、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニンを併用することによって、化合物Ｓの尿細管内での結晶析出が抑制され、その結果、腎臓毒性発現が大幅に軽減できたことを示す。
試験例３
試験例１と同様の手法にて、種々の添加剤を併用した場合の化合物Sの腎臓組織中濃度をさらに調べた。投与は、実際の医療現場での点滴投与を想定して持続投与とした。
（１）化合物Ｓの単独投与の場合（対照例）
まず、14Ｃでラベル化した化合物ＳをｐＨ９．７の等張炭酸緩衝液にて溶解して、濃度が６．２５ｍｇ／ｍｌの投与溶液（以下、Ｄ液という）を作製する。試験例１で用いたのと同じラットをボールマンケージに固定しその尾静脈より、化合物Ｓとして２５ｍｇ／ｋｇ／ｈｒとなるように、Ｄ液を４ｍｌ／ｋｇの速度にて１時間、持続投与した。投与終了の１時間後にラットを脱血死させて、腎臓中の放射活性を測定した。
（２）添加剤併用の場合
実施例1と同様にして、化合物Ｓを６．２５ｍｇ／ｍｌ及び副作用軽減のための添加剤を１２．５ｍｇ／ｍｌ含有する投与液を作製した。上記（１）と同様にして、この液をラットに1時間、持続投与した後、腎臓中の放射活性を測定した。併用した添加剤は、N-アシルアミノ酸として、Ｎ−ベンゾイル−β−アラニン、Ｎ−ベンゾイル−グリシン、パラアミノ馬尿酸、およびL−トリプトファン−L−アラニン、ジカルボン酸としてα−ケトグルタル酸である。結果を表３に示す。
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上記の各添加剤を化合物Sに対して2倍量、併用することにより、化合物Sを持続投与した場合にも、腎臓中残存量を大幅に低下させ得ることが明らかになった。
発明の効果
本発明によれば、興奮性アミノ酸アンタゴニストの副作用、特に腎臓毒性を軽減することが可能である。
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