(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
0004240544.tif 000013
［式中、Ｒ1はＣ1−Ｃ11アルキル、Ｃ1−Ｃ11−Ｒ1aアルキルまたはＲ1a−（リンカー(0または1)−Ｒ1a）0または1（ここに、Ｒ1aはそれぞれ独立してフェニル、またはそれぞれ独立してハロ、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ8低級アルキル、Ｃ1−Ｃ8低級アルコキシ、Ｃ1−Ｃ4低級アルキルチオまたはトリフルオロメチルである１つまたは２つの置換分によって置換されているフェニルであり、「リンカー」は−Ｏ−、−ＣＨ2−または−Ｏ−（ＣＨ2）n−（ここに、ｎは１−３である）である）を表し；
Ｒ2は水素または式：
0004240544.tif 000014
［式中、Ｒ2aは水素または−ＣＨ2−Ｒ1（式中、Ｒ1は上記定義のとおりであり、
Ｎ1位のＲ1と同一または異なっていてよい）である］
で示されるエピバンコサミニル基を表し、；ならびに、
Ｒ3は式：
0004240544.tif 000015
［式中、Ｒ3aは水素であるか、あるいはＲ2がエピバンコサミニルであり、その上のＲ2aが−ＣＨ2−Ｒ1である場合、Ｒ3aはＮ1位のものと同一の−ＣＨ2−Ｒ1でもあり得る］
で示されるエピバンコサミニル基を表す］
で示される化合物または製薬的に許容されるその塩。
【請求項２】
Ｒ1がＲ1a−（リンカー(0または1)−Ｒ1a）0または1（ここに、Ｒ1aは請求項１で定義したとおりである）である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ2が、Ｒ2aが−ＣＨ2−Ｒ1（ここに、Ｒ2aおよびＲ1は誰求項１で定義したとおりである）であるエピバンコサミニル基である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ2aがｐ−フェニルベンジルである請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ2aがｐ−（ｐ−クロロフェニル）ベンジルである請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物を、製薬的に許容される希釈剤または担体と組み合わせて含む医薬製剤。
【請求項７】
宿主内の細菌感染を処置するための請求項６に記載の医薬製剤。
【請求項８】
細菌感染がバンコマイシン耐性エンテロコッカスに起因する請求項７に記載の医薬製剤。
【請求項９】
式：Ｒ1ＣＨＯ（式中、Ｒ1は請求項１で定義したとおりである）で示されるアルデヒドを用いて、式：
0004240544.tif 000016
［式中、Ｒ2は請求項１で定義したとおりである］
で示される親グリコペプチドを還元的アルキル化することを含む請求項１に記載の化合物の製造方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法において還元的アルキル化した後製薬的に許容される塩を形成させることを含む、請求項１に記載の化合物の製薬的に許容される塩の製造方法。
【発明の詳細な説明】
本発明はグリコペプチドに関し、特に、Ａ８２８４６Ｂの「ヘキサペプチド」と称されることもあるデスロイシルＡ８２８４６Ｂの誘導体およびそのＮDISACCバリエーションに関する。これらの誘導体は、ヘキサペプチドのＮ1アミンをアルキル化されている。これらの誘導体は抗菌剤として有用である。
発明の詳細な説明
本発明は式：
0004240544.tif 000002
［式中、
Ｒ1はＣ1−Ｃ11アルキル、Ｃ1−Ｃ11−Ｒ1aアルキル、またはＲ1a−（リンカー(0または1)−Ｒ1a）0または1（ここに、Ｒ1aはそれぞれ独立してフェニル、またはそれぞれ独立してハロ、ヒドロキシ、Ｃ1−Ｃ8低級アルキル、Ｃ1−Ｃ8低級アルコキシ、Ｃ1−Ｃ4低級アルキルチオまたはトリフルオロメチルである１つまたは２つの置換分によって置換されているフェニルであり、「リンカー」は−Ｏ−、−ＣＨ2−または−Ｏ−（ＣＨ2）n−（ここに、ｎは１−３である）である）を表し；
Ｒ2は水素または式：
0004240544.tif 000003
［式中、Ｒ2aは水素または−ＣＨ2−Ｒ1（式中、Ｒ1は上記定義のとおりであり、Ｎ1位のＲ1と同一または異なっていてよい）である］
で示されるエピバンコサミニル基（epivancosaminyl radical）を表し、；ならびに、
Ｒ3は式：
0004240544.tif 000004
［式中、Ｒ3aは水素であるか、あるいはＲ2がエピバンコサミニルであり、その上のＲ2aが−ＣＨ2−Ｒ1である場合、Ｒ3aはＮ1位のものと同一の−ＣＨ2−Ｒ1でもあり得る］
で示されるエピバンコサミニル基を表す］
で示されるアルキル化Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドおよび製薬的に許容されるその塩に関する。
一般に、本発明のアルキル化Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドは、式：
0004240544.tif 000005
［式中、Ｒ2は上記定義のとおりである］
で示される対応するＡ８２８４６Ｂヘキサペプチドを還元的アルキル化することによって製造する。還元的アルキル化を行う際、Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドをまず、式：Ｒ1−ＣＨＯ（式中、Ｒ1は上記定義のとおりである）で示されるアルデヒドと反応させる。これによりシッフの塩基が形成され、次いでこれを還元して、所望のアルキル化Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドを得る。極性溶媒、例えばＤＭＦ、メタノールまたはこれらの混合物中、２５℃から１００℃の温度、好ましくは６０℃から７０℃の温度で両反応工程を行う。好ましい還元剤はホウ水素化ナトリウム、とりわけシアノホウ水素化ナトリウムである。
さらなる態様では、ヘキサペプチド、アルデヒドおよび還元剤、特にシアノホウ水素化ナトリウムを一度にすべて混合していっしょにする。この態様は、非ベンジルアルデヒドとの反応に関して好ましいが、ベンジルアルデヒドとの反応に関しても同様に用いることができる。
Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチドの還元的アルキル化は、１つ以上の部位をアルキル化し得る。Ｎ1位が反応するのが好ましいが、この分子のＮDISACCおよび／またはＮMONOSACC部位でもアルキル化が起こり得る。所望のＮDISACC基をすでに有するＡ８２８４６Ｂヘキサペプチドから出発し、次いでＮ1位をアルキル化することによって、Ｎ1位およびＮDISACC位上に異なるアルキル基を都合よく生じさせる。
出発Ａ８２８４６Ｂヘキサペプチド自体は親グリコペプチド：
0004240544.tif 000006
［式中、Ｒ2aは上記定義のとおりである］
から合成する。この合成は、ペプチドまたはタンパク質のＮ末端残基を開裂させる二工程の方法である「エドマン分解」よる。本発明では、上記親グリコペプチドをまず、式：ＳＣＮ−Ｒ4で示されるイソチオシアネートと反応させ、式：
0004240544.tif 000007
［式中、Ｒ4はＣ1−Ｃ10アルキル、フェニル、ナフチル、またはそれぞれ独立してハロ、Ｃ1−Ｃ4低級アルキル、Ｃ1−Ｃ4低級アルコキシ、ベンジルオキシ、ニトロまたは
0004240544.tif 000008
（式中、Ｒ4aはそれぞれ独立してＣ1−Ｃ4低級アルキルである）
である１つまたは２つの置換分で置換されているフェニルを表す］
で示される中間体ＮLEU−（チオカルバモイル）−Ａ８２８４６Ｂ化合物を得る。
この反応は、ピリジンを含む水中、２５℃−３０℃の温度で、少過剰のイソチオシアネート試薬を用いて都合よく行われる。ＮLEU−（チオカルバモイル）Ａ８２８４６Ｂ中間体を慣用の方法により分離するか、反応溶媒を除去した後、エドマン分解の第二工程に用いることができる。
第二工程では、非極性溶媒、例えばジクロロメタン中、ＮLEU−（チオカルバモイル）Ａ８２８４６Ｂを有機酸、好ましくはトリフルオロ酢酸と反応させる。この反応は０℃から３５℃の温度で進行するが、０℃から２５℃の温度で行うのが好ましい。一般に反応は数時間で完了する。所望であれば、得られたヘキサペプチド産物を常法により分離し、精製する。
エドマン分解の第二工程は、結果としてジサッカライドエピバンコサミン（disaccharide epivancosamine）を喪失させる場合がある。より長い反応時間を用いて、ＮDISACC−デス−エピバンコサミニル化合物（NDISACC-des-epivancosaminyl compound、Ｒ2＝水素）を得ることができる。
本発明化合物は、常法により調製可能な塩を容易に形成する。
以下の実施例は本発明化合物の製造を例示する。
ＮLEU−（フェニルチオカルバモイル）−ＮDISACC−（ｐ−（ｐ−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂの製造
ＮDISACC−（ｐ−（ｐ−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂ三塩酸塩（１００．０ｍｇ、０．０５２６mmol）をＨ2Ｏ−ピリジン（１：１ ｖ／ｖ）１０ｍＬに溶解させ、フェニルイソチオシアネート（０．０１０ｍＬ、０．０８３mmol）で処理した。得られた混合物を室温で１時間攪拌した。この時点でＨＰＬＣ分析は出発物質が完全に消費されたことを示した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、粗製の生成物を調製用ＨＰＬＣによって精製し、標題化合物７６．６ｍｇ（７６％収率）を得た。ＦＡＢ−ＭＳ：Ｃ93Ｈ102Ｃｌ3Ｎ11Ｏ26Ｓとしての計算値１９２５．５、実測値１９２８．５（Ｍ＋３）。
単離されたチオ尿素からのＮDISACC−（ｐ−（ｐ−クロロフェニル）ベンジル）−デスロイシル−Ａ８２８４６Ｂの製造
精製されたＮLEU−（フェニルチオカルバモイル）−ＮDISACC−（ｐ−（ｐ−クロロフェニル）ベンジル）Ａ８２８４６Ｂ（６３．３ｍｇ、０．０３２７mmol）をＣＨ2Ｃｌ2１０ｍＬに懸濁し、０℃にまで冷却し、次いでトリフルオロ酢酸（０．１０ｍＬ）で処理した。１時間後、反応混合物を室温にまであたため、さらに２時間攪拌した。減圧下で溶媒を除去し、粗製の生成物を調製用ＨＰＬＣで精製し、標題化合物２５．３ｍｇ（４６％収率）を白色粉末として得た。ＦＡＢ−ＭＳ：Ｃ79Ｈ84Ｃｌ3Ｎ9Ｏ25としての計算値１６６３．５、実測値１６６６．４（Ｍ＋３）。
チオ尿素中間体の単離を行わないＮDISACC−（ｐ−フェニルベンジル）デスロイシル−Ａ８２８４６Ｂの製造
ＮDISACC−（ｐ−フェニルベンジル）Ａ８２８４６Ｂ（４１．０ｍｇ、０．０２３３mmol）をＨ2Ｏ−ピリジン（１：１ ｖ／ｖ）４ｍＬに溶解させ、フェニルイソチオシアネート（０．００４０ｍＬ、０．０３３mmol）で処理した。得られた混合物を室温で３時間攪拌した。この時点でＨＰＬＣ分析は出発物質が完全に消費されたことを示した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、粗製のチオ尿素中間体を白色固形物として得た。次いで、このチオ尿素誘導体をＣＨ2Ｃｌ2 １０ｍＬに懸濁し、０℃にまで冷却し、次いで、トリフルオロ酢酸（０．２５ｍＬ）で処理した。３０分後、この反応混合物を室温にまであたため、さらに１時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗製の生成物を調製用ＨＰＬＣによって精製し、標題化合物１４．０ｍｇ（３７％収率）を白色粉末として得た。ＦＡＢ−ＭＳ：Ｃ79Ｈ85Ｃｌ2Ｎ9Ｏ25としての計算値１６２９．５、実測値１６３２．５（Ｍ＋３）。
実施例１９の化合物の製造
精製されたデスロイシル−Ａ８２８４６Ｂのサンプル（１４１ｍｇ、０．０９６２mmol）、８−フェニルオクタナール（２８ｍｇ、０．１３７mmol）およびシアノホウ水素化ナトリウム（３５ｍｇ、０．５５６mmol）をＤＭＦ−ＭｅＯＨ（１：１ ｖ／ｖ）２０ｍＬに溶解させた。得られた混合物を６５℃にまで加熱し、１時間攪拌した。この時点でＨＰＬＣ分析は出発物質が完全に消費されたことを示した。この反応混合物を室温にまで冷却し、減圧下で濃縮し、粗製の生成物を調製用ＨＰＬＣで精製し、実施例１９の化合物２０ｍｇ（１３％収率）を得た。
実施例３の化合物の製造
精製されたデスロイシル−Ａ８２８４６Ｂのサンプル（１４０ｍｇ、０．０９５６mmol）および４−フェニルベンズアルデヒド（３０ｍｇ、０．１６５mmol）をＤＭＦ−ＭｅＯＨ（１：１ ｖ／ｖ）２０ｍＬに溶解させた。得られた混合物を６５℃にまで加熱し、１．５時間攪拌し、シアノホウ水素化ナトリウム（２７ｍｇ、０．４２９mmol）を加え、この反応物をさらに１．５時間攪拌した。この時点でＨＰＬＣ分析は出発物質が消費されたことを示した。この反応混合物を室温にまで冷却し、減圧下で濃縮し、粗製の生成物を調製用ＨＰＬＣによって精製し、実施例３の化合物３８ｍｇ（２４％収率）を得た。
これらの実施例中で報告したＨＰＬＣ手順は以下のものである：
分析用：Ｗａｔｅｒｓ Ｃ18 μＢｏｎｄａｐａｋまたはＮｏｖａｐａｋ Ｃ18カラム（３．９×３００ｍｍ）を用い、２８０ｎｍでＵＶ検出を行う分析用ＨＰＬＣによって反応物をモニターした。３０分間にわたる５％ ＣＨ3ＣＮ−９５％緩衝液から８０％ ＣＨ3ＣＮ−２０％緩衝液の直線状濃度勾配により溶出を行った。用いた緩衝液は、Ｈ3ＰＯ4でｐＨ３に調節した０．５％トリエチルアミン水溶液であった。
調製用：Ｗａｔｅｒｓ Ｃ18 Ｎｏｖａ−Ｐａｋカラム（４０×３００ｍｍ）を用い、２８０ｎｍでＵＶ検出を行う調製用ＨＰＬＣによって粗製の反応混合物を精製した。３０分間にわたる５％ＣＨ3ＣＮ−９５％緩衝液から８０％ ＣＨ3ＣＮ−２０％緩衝液の直線状濃度勾配で溶出を行った。用いた緩衝液は、Ｈ3ＰＯ4でｐＨ３に調節した０．５％トリエチルアミン水溶液であった。その後、Ｗａｔｅｒｓ Ｃ18 Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標）（３５ｃｃ）を用いて所望のフラクションを脱塩し、次いで凍結乾燥した。
化合物を以下のように脱塩した。Ｗａｔｅｒｓ Ｓｅｐ−Ｐａｋ（登録商標）カートリッジをメタノール（２−３カラム容量）で前もって湿らせた後、水（２−３カラム容量）で調節した。最小容量の水に溶解させたサンプルをＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標）カラムに載せ、次いでこれを水（２−３カラム容量）で洗浄し、望ましくない塩を除去した。次いでこの生成物を適当な溶媒系、代表的には１：１ ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ、ＣＨ3ＣＮおよび／またはメタノールを用いて溶出させた。減圧下で有機溶媒成分を除去し、得られた水溶液を凍結乾燥し、最終産物を得た。
本発明の代表的化合物を以下の表に列挙する：
0004240544.tif 000009
0004240544.tif 000010
0004240544.tif 000011
本発明の化合物は、細菌感染の処置に有用である。したがって、別の態様において、本発明は、宿主動物、典型的には、温血動物における細菌感染を抑制する方法に関し、この方法は、その宿主動物に本発明の化合物の有効な抗菌量を投与することを含んでなる。この態様では、その化合物を使用して、様々な細菌、とりわけグラム陽性菌による感染を抑制して処置することができる。好ましい態様では、その化合物を使用して、実在する抗菌物質に耐性のある細菌による感染を抑制して処置する。例えば、ある細菌は、メチシリンに耐性であるが、他の細菌は、バンコマイシンおよび／またはテイコプラニンに耐性である。本発明の化合物は、そのような耐性菌種による感染を抑制して処置する技術を提供する。
本発明のこの態様を行う際には、経口経路ならびに静脈内および筋肉内のような非経口経路を含め、任意の慣用技術により、本発明の化合物を投与することができる。使用すべき化合物の量は重要ではなく、使用する個々の化合物、投与経路、感染の重篤度、服用間隔、および当業者に知られている他の要因により変わるであろう。一般に、約０．５から約１００mg／kgまでの用量が有効であろう；そして多くの状況では、約０．５から約５０mg／kgまでのより少ない用量が有効であろう。本発明の化合物を単回用量で投与することができるが、抗菌療法の既知の方法では、典型的には、約数日または約数週間といったような一定期間にわたって、本発明の化合物を繰り返し投与し、細菌感染の抑制を確実なものとする。
また既知の抗菌療法にしたがい、典型的には、必要な用量の便利なデリバリーのために本発明の化合物を製剤化する。従って、別の態様において、本発明は、製薬的に許容され得る担体と組み合わせて、本発明の化合物を含んでなる医薬製剤に関する。そのような担体は、経口経路および非経口経路の両方のデリバリーに関してよく知られている。一般に、ある製剤は、本発明の化合物を約０．１から約９０重量％まで、しばしば、約１．０〜約３％の濃度で含んでなるであろう。
本発明の化合物の抗菌効力を表にＩＩに例示する。標準的なブロスミクロ希釈アッセイ（broth micro-dilution assay）を使用して、最小阻止濃度（ＭＩＣｓ）を測定した。
0004240544.tif 000012