(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
３，４−ジヒドロ−８−（２−ヒドロキシ−３−イソプロピルアミノ）プロポキシ−３−ニトロキシ−２Ｈ−１−ベンゾピラン又はその酸付加塩を有効成分とする網膜神経細胞保護剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は網膜神経細胞保護剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
網膜疾患は、世界的にも失明の最大の原因となっていることから、眼科疾患において重要な位置を占めている。
網膜における神経細胞死は糖尿病性網膜症、黄斑変性症、網膜血管閉塞症などの眼疾患に関与しているといわれており、当該神経細胞を保護する薬剤の開発が望まれている。
【０００３】
従って、本発明は、このような眼疾患の治療薬として有用な網膜神経細胞保護剤を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者らは、β−遮断作用を有する薬剤（β−ブロッカー）を用いて網膜神経細胞に対する作用を検討してきたところ、β−ブロッカーのうち、下記化合物が特異的に網膜神経細胞死及び網膜神経細胞障害を抑制し、網膜神経細胞保護剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００５】
従って、本発明は、３，４−ジヒドロ−８−（２−ヒドロキシ−３−イソプロピルアミノ）プロポキシ−３−ニトロキシ−２Ｈ−１−ベンゾピラン（一般名：ニプラジロール）又はその酸付加塩を有効成分とする網膜神経細胞保護剤を提供するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明の網膜神経細胞保護剤の有効成分であるニプラジロールは、特公平１−５３２４５号に記載の如く、血圧降下作用、β−遮断作用等を有し、循環系疾患治療剤として有用であることは知られているが、網膜神経細胞に対していかなる作用をするかは全く知られていない。
【０００７】
ニプラジロールは、後記試験例に示す如く、培養系における網膜神経細胞の生存率を有意に向上させる。また、ニプラジロールは、網膜神経細胞の興奮性アミノ酸、グルタミン酸受容体の一種であるＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体の活性薬であるＮＭＤＡによる網膜障害モデルに対して優れた網膜障害抑制作用を有する。一方、ニプラジロールは、特公平１−５３２４５号記載の如く、安全性が高いことが既に知られている。従って、ニプラジロールは、網膜神経細胞保護剤として有用であり糖尿病性網膜症、黄斑変性症、網膜血管閉塞症などにおける網膜障害治療薬として用いることができる。
【０００８】
ニプラジロールは、酸付加塩の形で用いることもできる。付加塩を形成する酸としては、例えば塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、シュウ酸、マレイン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等が好ましい。また、ニプラジロールには２個の不斉炭素原子を有するので４種類の光学異性体が存在するが、本発明にはそれらの光学異性体及びそれらの混合物のいずれも用いることができる。
【０００９】
本発明の医薬は、経口投与用あるいは非経口投与用のいずれの形態でも用いることができる。たとえば、経口投与剤としては散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤等の固形製剤を例示することができ、非経口投与剤としては点眼剤、眼軟膏剤、注射剤等を例示することができる。
【００１０】
これらの製剤はニプラジロール又はその酸付加塩に薬学的に許容される添加剤（担体）などを加えて常法により製造される。たとえば、点眼剤は、ニプラジロール又はその酸付加塩に必要に応じて塩化ナトリウム、グリセリン等の等張化剤、エデト酸ナトリウム等の安定化剤、塩化ベンザルコニウム、パラベン類等の防腐剤、非イオン界面活性剤等の溶解補助剤、リン酸水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、ホウ酸、四ホウ酸ナトリウム（ホウ砂）、塩酸、水酸化ナトリウム等のpH調節剤などを用い、常法により製造できる。眼軟膏剤は、ニプラジロール又はその酸付加塩に必要に応じて精製ラノリン、ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール等の眼軟膏基剤と練合して製造できる。
【００１１】
経口投与製剤は、ニプラジロール又はその酸付加塩に必要に応じて、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤などとを用いて常法により前記形態にすればよい。また注射剤は、ニプラジロール又はその酸付加塩に、必要に応じてpH調節剤、等張化剤等を用いて製造すればよい。
【００１２】
本発明の医薬の投与量は患者の年齢、体重、病態及び剤型により適宜選択されるが、ニプラジロールとして、点眼剤又は眼軟膏剤の場合には、０．０５〜１重量％のものを１日１回〜数回点眼又は塗布することが望ましく、経口剤又は注射剤の場合には１人当たり通常１日１〜３０mgを１回又は数回に分けて投与することが望ましい。
【００１３】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、これにより本発明は限定されるものではない。
【００１４】
試験例１（単離培養ラット網膜神経節細胞（ＲＧＣ）に対する影響）
生後２日齢のラットよりＲＧＣを２−ステップ  パンニング法を用い単離し、無血清培地にニプラジロール１０-5Ｍ、１０-6Ｍ、１０-7Ｍ、１０-8Ｍもしくはそれらの基剤である塩酸溶液を負荷し、２日間培養した。その後、生存細胞では蛍光を発する５−クロロメチルフルオレセインジアセテートと反応させた後に、ＲＧＣの生存率をフローサイトメトリーを用いて判定した。また、作用機序を検討するため、ニプラジロール１０-5Ｍと可溶性グアニル酸シクラーゼ阻害剤である、メチレンブルー１０-5Ｍを同時に負荷した。更に、メチレンブルー１０-5Ｍを単独で負荷しＲＧＣの生存率も検討した。
【００１５】
その結果、各サンプルにおいて１０，０００個の細胞が２分以内で判定された。ＲＧＣは大型のものと小型のものに大別され、各細胞ごとに生存率を検討した。両細胞ともニプラジロール投与により、その生存率はほぼ濃度依存的に向上した。メチレンブルーは、ニプラジロールの生存率向上を抑制したが、単独では生存率には影響を与えなかった。従って、ニプラジロールは培養ＲＧＣの生存率を向上させ、その作用には一酸化窒素（ＮＯ）の関与が示唆された。
【００１６】
試験例２（ラットＮＭＤＡ硝子体内投与網膜障害モデルを用いた網膜神経細胞に対する作用）
ＳＤ系雄性ラット（７週齢、体重１７０〜２４０ｇ）を用いペントバルビタール（５０mg／kg，i.p.）麻酔し、保温マットで体温を３７℃に維持した。散瞳剤（ミドリンＭ）及び局所麻酔剤（ベノキシール）を点眼し、実態顕微鏡下に３３Ｇ針でサンプル液５μＬを１分間かけて硝子体内に投与した。麻酔から回復させた後、１週間通常飼育した。眼球を摘出し、１％グルタルアルデヒド−４％ホルマリン緩衝液中４℃で眼球表面を固定した。２時間後、角膜に割を入れ１％グルタルアルデヒド−４％ホルマリン緩衝液中４℃で眼球内部を一晩固定した。翌日固定液を４％ホルマリン緩衝液にかえ、更に室温で一晩固定した。次いで７０％アルコールで２時間、８０、９０及び９５％アルコールで各８時間、１００％アルコール（３回）各８時間（以上脱水）、キシレン（中間液）（２回）で各２時間、パラフィン（４回）で各２時間処理した。得られた網膜をパラフィン包埋し３μｍの切片作製した。これをヘマトキシリン・エオジン染色し、神経節細胞数及び細胞層厚を測定した。
【００１７】
その結果は、次の通りであった。
（１）ＮＭＤＡ硝子体内投与により、網膜神経節細胞数及び内網状層厚は約５０％に減少した。また、ＮＭＤＡ受容体遮断剤ＭＫ−８０１の同時投与により網膜障害が抑制されたことから、本実験系におけるＮＭＤＡ受容体の関与が示唆された。
（２）ニプラジロール（５×１０-7〜５×１０-3nmol）単独では網膜障害は惹起されず、ニプラジロールによる網膜障害の発生はなかった。
（３）ＮＭＤＡ（２００nmol）とニプラジロールの同時投与により、ＮＭＤＡによる網膜神経節細胞数及び内網状層厚の減少は約２５％程度にまで抑制された（図１）。
（４）一方、β−ブロッカーであるチモロールでは網膜障害は抑制されなかった。
【００１８】
ＮＭＤＡはイオンチャネル型グルタミン酸受容体の一種であるＮＭＤＡ型受容体の活性薬で、高濃度で神経細胞に変性壊死を起こす神経毒作用を持ち併せている。そして、上記で用いた網膜障害モデルは、興奮性アミノ酸であるグルタミン酸により誘発される網膜障害であるとされており、ニプラジロールはこれを有意に抑制することが判明した。一方、β−ブロッカーであるチモロールにこの作用がなかった。従って、ニプラジロールの網膜神経細胞保護作用はβ−遮断作用によるものでなく、ニプラジロール特有の作用である。
【００１９】
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【００２０】
【発明の効果】
本発明の医薬を用いれば、緑内障、糖尿病性網膜症、黄斑変性症、網膜血管閉塞症などにおける網膜障害を治療できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＮＭＤＡ網膜障害モデル（神経節細胞数及び内網状層厚）に対するニプラジロールの作用（神経節細胞数及び内網状層厚）を示す図である。
【図１】
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