(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
0004384261.tif 000041
（式中、Ｒ1及びＲ2は独立して、Ｈ、ＯＨ、
0004384261.tif 000042
から選ばれ、
Ｒ3は、ＯＨ、
0004384261.tif 000043
及びＣＨ3Ｃ（ＣＨ3）＝ＣＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−
から選ばれ、
Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ12の飽和した又は不飽和の、単環式又は多環式の脂肪族環系であって、適宜Ｃ1〜Ｃ6のアルキル、Ｈ、ＯＨ、＝ＣＨ2若しくはＣ1〜Ｃ4のアルキルカルボキシルオキシで置換されている環系から選ばれるか、又はＣ1〜Ｃ6の直鎖若しくは分岐したアルキレン基であって、かかる環系で置換されている基を示し、
Ｒ5は、Ｃ1〜Ｃ4のアルキル、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ及び−ＣＨ2ＯＨから選ばれ、
Ｒ6は、−ＯＨ、
0004384261.tif 000044
から選ばれる）で示される化合物の、乾癬治療用の薬剤の製造における使用。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｒ1及びＲ2が独立して、Ｈ、−ＯＨ、
0004384261.tif 000045
から選ばれる、請求の範囲第１項記載の使用。
【請求項３】
式（Ｉ）において、Ｒ3が、−ＯＨ、
0004384261.tif 000046
から選ばれる、請求の範囲第１項又は第２項記載の使用。
【請求項４】
式（Ｉ）において、Ｒ4が、
0004384261.tif 000047
から選ばれる、請求の範囲第１項〜第３項のいずれかに記載の使用。
【請求項５】
式（Ｉ）において、Ｒ4が、
0004384261.tif 000048
から選ばれる、請求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
式（Ｉ）において、Ｒ5が、ＣＨ3、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ及び−ＣＨ2ＯＨから選ばれる、請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
式（Ｉ）において、Ｒ6が、ＯＨ、
0004384261.tif 000049
から選ばれる、請求の範囲第１項〜第６項のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
式（Ｉ）において、
Ｒ1及びＲ2が独立して、Ｈ及びＯＨ（βＯＨ又はαＯＨ）から選ばれ、
Ｒ3が、ＯＨ、
0004384261.tif 000050
から選ばれ、
Ｒ4が、
0004384261.tif 000051
から選ばれ、
Ｒ5が、ＣＨ3であり、
Ｒ6が、ＯＨ、
0004384261.tif 000052
から選ばれる、請求の範囲第１項〜第７項のいずれかに記載の使用。
【請求項９】
式（Ｉ）において、Ｒ1及びＲ2が独立して、Ｈ及びＯＨ（βＯＨ又はαＯＨ）から選ばれ、
Ｒ3が、ＯＨ及び（Ｅ）−３−メチルペント−２−エノエート、すなわち、
0004384261.tif 000053
から選ばれ、
Ｒ4が、
0004384261.tif 000054
から選ばれ、
Ｒ5が、ＣＨ3であり、
Ｒ6がＯＨである、請求の範囲第８項に記載の使用。
【請求項１０】
乾癬治療剤の製造における、請求の範囲第１項〜第９項のいずれかに記載の式（Ｉ）で示される化合物の使用。
【請求項１１】
化合物が、式：
0004384261.tif 000055
で示される、請求の範囲第１０項記載の使用。
【請求項１２】
化合物が、式：
0004384261.tif 000056
で示される、請求の範囲第１０項記載の使用。
【請求項１３】
化合物が、式：
0004384261.tif 000057
で示される、請求の範囲第１０項記載の使用。
【請求項１４】
化合物が、式：
0004384261.tif 000058
で示される、請求の範囲第１０項記載の使用。
【請求項１５】
式（Ｉ）
0004384261.tif 000059
（式中、Ｒ1及びＲ2が独立して、−ＯＨ、Ｈ、
0004384261.tif 000060
から選ばれ、
Ｒ3が、（Ｅ）−３−メチルペント−２−エノエート及び、
0004384261.tif 000061
から選ばれ、
Ｒ4がＣ6〜Ｃ12の飽和又は不飽和の、単環式又は多環式の脂肪族環系であって、適宜Ｃ1〜Ｃ6のアルキル、Ｈ、−ＯＨ、＝ＣＨ2又はＣ1〜Ｃ4のアルキルカルボキシルオキシにより置換されている環系から選ばれるか、又はＣ1〜Ｃ6の直鎖若しくは分岐したアルキレン基であって、かかる環系で置換されている基を示し、
Ｒ5が、Ｃ1〜Ｃ4のアルキル、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ及び−ＣＨ2ＯＨから選ばれ、
Ｒ6が、−ＯＨである）
で示される化合物（但し、以下の化合物：
0004384261.tif 000062
を除く）又はその配座異性体並びにＤ型及びＬ型異性体。
【請求項１６】
式（Ｉ）において、Ｒ1及びＲ2が独立して、−ＯＨ、Ｈ、
0004384261.tif 000063
から選ばれる、請求の範囲第１５項記載の化合物。
【請求項１７】
式（Ｉ）において、Ｒ3が（Ｅ）−３−メチルペント−２−エノエート及び、
0004384261.tif 000064
から選ばれる、請求の範囲第１５項又は第１６項記載の化合物。
【請求項１８】
式（Ｉ）において、Ｒ4が、
0004384261.tif 000065
から選ばれる、請求の範囲第１５項〜第１７項のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９】
式（Ｉ）において、Ｒ4が、
0004384261.tif 000066
から選ばれる、請求の範囲第１５項〜第１８項のいずれかに記載の化合物。
【請求項２０】
式（Ｉ）において、Ｒ5が、−ＣＨ3、−ＣＨＯ、−ＣＨ2ＯＨ及び−ＣＯＯＨから選ばれる、請求の範囲第１５項〜第１９項のいずれかに記載の化合物。
【請求項２１】
式（Ｉ）において、Ｒ6が、ＯＨである、請求の範囲第１７項〜第１９項のいずれかに記載の化合物。
【請求項２２】
式（Ｉ）において、Ｒ1及びＲ2が独立して、Ｈ又は−ＯＨであり、
Ｒ3が、（Ｅ）−３−メチルペント−２−エノエートであり、
Ｒ4が、
0004384261.tif 000067
から選ばれ、
Ｒ5がＣＨ3であり、
Ｒ6がＯＨである、請求の範囲第１７項〜第２１項のいずれかに記載の化合物又はその配座異性体並びにＤ型及びＬ型異性体。
【請求項２３】
式：
0004384261.tif 000068
で示される、請求の範囲第１５項〜第２２項のいずれかに記載の化合物。
【請求項２４】
式：
0004384261.tif 000069
で示される、請求の範囲第１７項〜第２３項のいずれかに記載の化合物。
【請求項２５】
乾癬治療剤の製造における、キンセンカ種から単離した、請求の範囲第１５項〜第２４項のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項２６】
化合物が、カレンデュラ・オフィシナリス、カレンデュラ・アルベンシス及び／又はカレンデュラ・ペルシカから単離される、請求の範囲第２５項記載の使用。
【請求項２７】
化合物が、カレンデュラ・オフィシナリスから単離される、請求の範囲第２５項又は第２６項記載の使用。
【請求項２８】
薬学的に許容しうる担体と混合した、少なくとも１種のキンセンカ種から単離された、式（Ｉ）：
0004384261.tif 000070
（式中、Ｒ1及びＲ2は独立して、Ｈ、ＯＨ、
0004384261.tif 000071
から選ばれ、
Ｒ3は、ＯＨ、
0004384261.tif 000072
及びＣＨ3Ｃ（ＣＨ3）＝ＣＨＣ（＝Ｏ）Ｏ−
から選ばれ、
Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ12の飽和した又は不飽和の、単環式又は多環式の脂肪族環系であって、適宜Ｃ1〜Ｃ6のアルキル、Ｈ、ＯＨ、＝ＣＨ2若しくはＣ1〜Ｃ4のアルキルカルボキシルオキシで置換されている環系から選ばれるか、又はＣ1〜Ｃ6の直鎖若しくは分岐したアルキレン基であって、かかる環系で置換されている基を示し、
Ｒ5は、Ｃ1〜Ｃ4のアルキル、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ及び−ＣＨ2ＯＨから選ばれ、
Ｒ6は、−ＯＨ、
0004384261.tif 000073
から選ばれる）
で示される化合物の少なくとも１種を含む、乾癬治療用医薬製剤。
【請求項２９】
式（Ｉ）で示される化合物の少なくとも１種が、キンセンカ種の少なくとも１種に由来する抽出物から単離及び／又は精製される、請求の範囲第２８項記載の製剤。
【請求項３０】
式（Ｉ）で示される化合物の少なくとも１種が、カレンデュラ・アルベンシス、カレンデュラ・ペルシカ及びカレンデュラ・オフィシナリスの少なくとも１種に由来する抽出物から単離及び／又は精製される、請求の範囲第２８項又は第２９項に記載の製剤。
【請求項３１】
式（Ｉ）で示される化合物の少なくとも１種が、カレンデュラ・オフィシナリスに由来する抽出物から単離及び／又は精製される、請求の範囲第２８項〜第３０項のいずれかに記載の製剤。
【請求項３２】
式（Ｉ）で示される化合物の少なくとも１種が、
0004384261.tif 000074
である、請求の範囲第２８項〜第３１項のいずれかに記載の製剤。
【請求項３３】
少なくとも１種の化合物が、
0004384261.tif 000075
である、請求の範囲第３２項記載の製剤。
【請求項３４】
哺乳類の乾癬用の医薬組成物であって、請求の範囲第１５項記載の、式（Ｉ）で示される化合物の、有効かつ無毒の量を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項３５】
式（Ｉ）で示される化合物が、
0004384261.tif 000076
である、請求の範囲第３４項記載の医薬組成物。
【請求項３６】
化合物が、
0004384261.tif 000077
から選ばれる、請求の範囲第３４項又は第３５項に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
乾癬用薬剤として使用するための、式：
0004384261.tif 000078
で示される化合物。
【請求項３８】
乾癬用薬剤として使用するための、式：
0004384261.tif 000079
で示される化合物。
【請求項３９】
乾癬用薬剤として使用するための、式：
0004384261.tif 000080
で示される化合物。
【発明の詳細な説明】
発明の属する技術分野
本発明は、細胞増殖阻害作用を有するものとして示されている化合物及び前記化合物を含む植物抽出物に関する。より詳細には、本発明は、キンセンカ属（Calendula species）に由来するグリコシド化合物、細胞増殖抑制作用を有する植物性グリコシド及び、特に乾癬治療における細胞増殖抑制剤としての使用に関する。
従来技術
キンセンカ属植物の粗抽出物は、数種の病気の治療のための民間医療（medicinal folklore）において何世紀もの間使用されてきている。前記抽出物は、例えば抗炎症剤等として又は抗炎症剤等において使用されてきている。
国際特許出願ＷＯ９１／１５２１８号パンフレットは、乾癬に対する治療用組成物であって、活性成分として少なくとも６種の異なる薬草の溶媒抽出物を含む組成物を教示している。前記の出願は、マリゴールド（marigold）の浸出液を、胃及び腸の潰瘍に対して並びに治癒が遅い創傷及び潰瘍をふさぐ（pack）ために使用することができることを教示している。しかし、マリゴールド抽出物が、それ自身で、乾癬に対する治療用組成物における活性成分として実際に使用されることはどこにも述べられていない。
Ｐｉｚｚａ  Ｃ．及びｄｅ  Ｔｏｍｍａｓｉ  Ｎ．、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２７巻、７号、２２０５〜２２０８頁（１９８８）は、カレンデュラ・アルベンシス（Ｃａｌｅｎｄｕｌａ  Ａｒｖｅｎｓｉｓ）由来のセスキテルペンの単離及び構造を教示している。カレンデュラ・アルベンシス（キク科）は、炎症及び発熱に対する治療薬としてイタリアの民族薬に使用される薬草であることが述べられている。しかし、得られたセスキテルペングリコシドが細胞増殖抑制活性を有すること又は乾癬治療において使用することができるということは示唆されていない。
Ｍａｓｃｏｌｏ  Ｎ．ら、Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１巻、２８〜３１頁（１９８７）は、マリゴールド抽出物は抗炎症活性を有することが知られていることを教示している。しかし、マリゴールド抽出物が抗乾癬剤として使用することは述べられていない。
Ｇｒａｃｚａ  Ｌ．、Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ、５３、２２７頁（１９８７）は、カレンデュラ・オフィシナリス（Ｃａｌｅｎｄｕｌａ  Ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）由来の種々の酸素含有テルペンを開示している。前記テルペンの使用は、帯下及び殺トリコモナス剤活性に対して示されている。しかし、抗乾癬剤としてのテルペン誘導体の使用に関する言及はない。
Ｆａｚａｋａｓ  Ｂ．及びＲａｃｚ、Ｇ．Ｆａｒｍａｃｉａ、ＸＩＩＩ巻、２号、９１頁（１９６５）も、カレンデュラ・オフィシナリスの花に由来する抽出物は帯下（過剰量の帯下）用の伝統的な生薬において使用され、良好な殺トリコモナス活性を示すことを教示している。
Ｇｒａｃｚｅ  Ｌ．及びＳｚａｓｚ  Ｋ．、Ａｃｔａ．Ｐｈａｒｍ．Ｈｕｎｇ．、３８、１１８〜１２５頁（１９６８）は、Ｆａｚａｋａｓ及びＲａｃｚ（前出）により報告されている殺トリコモナス作用の原因となる溶液を分離しかつ同定する目的での、マリゴールド（カレンデュラ・オフィシナリス）の花弁の化学分析について報告している。単離された最も活性な液体状の化合物は、分光学的データにより、テルペンアルコール及びテルペンラクトンとして記載された。
Ｊａｋｕｐｏｖｉｃら、Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ、５４、（３）、２５４〜２５６頁（１９８８）は、カレンデュラ・ペルシカ（Ｃａｌｅｎｄｕｌａ  ｐｅｒｓｉｃａ）由来の５種のセスキテルペングリコシドの抽出及び単離を教示している。しかし、抽出及び単離した分子の可能性のある又は実際の用途についての言及はない。
Ａｈｍｅｄ  Ａ  Ａｈｍｅｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、５６巻、１０号、１８２１〜１８２４頁（１９９３）は、カレンデュラ・アルベンシス由来の抽出生成物に関するものである。生成物は、４種の新規なセスキテルペングリコシド及び３種の既知の物質として記載されている。しかし、それらに対する可能性のある用途についての言及はない。
ＥＰ  ３６４４４２  Ｂ１は、乾癬に対する治療用組成物であって、キンセンカ属を含んでいてもよい薬草の範囲から選ばれる少なくとも３種の薬草の油抽出物を含む組成物について記載している。しかしながら、薬草の個々の抽出物は、単独で使用したとき、乾癬に対して治療効果を提供しなかったことが述べられている。更に、キンセンカ属の浸出液それ自身が、とりわけ胃及び腸の潰瘍の治療に使用されることが述べられている。しかし、キンセンカ属の浸出液が、乾癬等の疾患における皮膚細胞の増殖の異常な速度（例えば、過剰増殖）と関係する皮膚病の治療にとって有益であることは記載されていない。
ＤＥ  ３８３６５１９  Ｃ２は、カレンデュラ・オフィシナリスの切りたての混成の花序及び軟膏基剤（salve base）としてのミルキンググリース（milking grease）を含む医薬製剤は、乾癬治療に有用であることを主張している。しかしながら、前記組成物はアレルギーを引き起こし、治療の中断を導くことが記載されており、更に組成物の活性成分の指摘又は同定はない。又、細胞増殖抑制活性の記載もなく、更にカレンデュラ・オフィシナリスを基礎とした、主張された医薬製剤におけるどの成分又は成分の混合物が活性成分であるかということが明らかでない。更に、前記組成物が乾癬治療に使用されたことを証明する実際の証拠は全く明らかにされていない。
皮膚細胞の過剰増殖に関係する疾患の発症、持続及び／又は進行に反抗する、特に乾癬治療に効果を有する新規な細胞増殖抑制剤を開発する必要性が存在する。
発明の概要
本発明の目的は、皮膚細胞の過剰増殖に関連する疾患の治療、特に乾癬の治療用の薬剤の製造における、活性化合物又は少なくとも１種の活性化合物を含む精製された植物抽出物の使用を提供することである。
本発明の第二の目的は、皮膚細胞の過剰増殖に関連する疾患の治療、特に乾癬の治療における使用のための、単離及び／又は精製されたキンセンカ属由来の化合物を提供することである。
本発明の第三の目的は、皮膚細胞の過剰増殖に関連する疾患の治療、特に乾癬の治療における使用のための単離された化合物を提供することである。
本発明のこれらの及びその他の目的は、以下に示す説明及び実施例より明らかになるだろう。
発明の詳細な説明
本発明に従い、一般式（Ｉ）：
0004384261.tif 000002
（式中、Ｒ1及びＲ2は独立して、Ｈ、ＯＨ、
0004384261.tif 000003
並びにそれらの関連するエステルから選ばれ、
Ｒ3は、ＯＨ、
0004384261.tif 000004
並びにそれらの関連のエステルから選ばれ、
Ｒ4は、Ｃ6〜Ｃ12の飽和した又は不飽和の、単環式又は多環式の脂肪族環系であって、適宜Ｃ1〜Ｃ6のアルキル、Ｈ、ＯＨ、＝ＣＨ2若しくはＣ1〜Ｃ4のアルキルカルボキシルオキシで置換されている環系から選ばれるか、又はＣ1〜Ｃ6の直鎖若しくは分岐したアルキレン基であって、かかる環系で置換されている基を示し、
Ｒ5は、Ｃ1〜Ｃ4のアルキル、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ及び−ＣＨ2ＯＨ並びにその関連するエステル及びにエーテルから選ばれ、
Ｒ6は、−ＯＨ、
0004384261.tif 000005
から選ばれる）で示される化合物の、皮膚細胞の過剰増殖に関係する疾患の治療用の薬剤の製造における使用が提供される。
本発明の目的に対して、「関連するエステル及びエーテル」とは、本明細書で言及したＲ基について定義される全てのエステルを意味し、一般的には、飽和した又は不飽和の、直鎖又は分岐した、Ｃ1〜Ｃ20のカルボキシアルキルエステル化酸（esterifying acid）を意味する。適当な例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル並びにペンタニル、ペンテニル、ヘキサニル及びヘキセニルアルキル基の全ての異性体を含むエステル化酸が含まれる。又、「関連するエステル」という用語に含まれるものとしては、例えば安息香酸及びケイ皮酸等の芳香族酸も含まれる。前記で「関連するエステル」で定義した直鎖又は分岐したアルキル基を含むＣ1〜Ｃ20のアルキルエステルもこれに含まれる。
好ましくは、一般式（Ｉ）において、
Ｒ1及びＲ2が独立してＨ、−ＯＨ、
0004384261.tif 000006
から選ばれ、
Ｒ3が、−ＯＨ、
0004384261.tif 000007
Ｒ4が、
0004384261.tif 000008
から選ばれ、
Ｒ5が、ＣＨ3、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ及び−ＣＨ2ＯＨから選ばれ、
Ｒ6が、ＯＨ、
0004384261.tif 000009
から選ばれる化合物の使用が提供される。
更に好ましくは、キンセンカ属から抽出することができる、一般式（Ｉ）で示される化合物であって、式中、
Ｒ1及びＲ2が独立して、Ｈ及びＯＨ（βＯＨ又はαＯＨ）から選ばれ、
Ｒ3が、ＯＨ、
0004384261.tif 000010
から選ばれ、
Ｒ4が、
0004384261.tif 000011
から選ばれ、
Ｒ5がＣＨ3であり、
Ｒ6が、ＯＨ、
0004384261.tif 000012
から選ばれる化合物の使用が提供される。
特に好ましくは、キンセンカ属から抽出することができる、一般式（Ｉ）で示される化合物であって、式中、
Ｒ1及びＲ2が独立して、Ｈ及びＯＨ（βＯＨ又はαＯＨ）から選ばれ、
Ｒ3がＯＨ及び（Ｅ）−３−メチルペント−２−エノエート、すなわち、
0004384261.tif 000013
から選ばれ、
Ｒ4が、
0004384261.tif 000014
から選ばれ、
Ｒ5がＣＨ3であり、
Ｒ6がＯＨである化合物の使用が提供される。
基Ｒ1、Ｒ2、Ｒ6及びＲ3がアキシアル又はエクアトリアルのいずれかの配座で存在していてもよいことは、当業者（skilled addressee）に理解されるだろう。
もちろん、式（Ｉ）で示される生理学的に機能性の異性体は、キンセンカ属に見出されるもの及び合成由来のもの、配座異性体、構造異性体並びにＤ型及びＬ型異性体を含めて、本発明に含まれることが当業者に理解されるだろう。本発明の配座異性体の例には、以下に示す式（Ｉａ）及び（Ｉｂ）：
0004384261.tif 000015
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6は式（Ｉ）で定義されたものと同一である）で示される化合物が含まれる。
もちろん、「いす形」（式（Ｉａ））及び「舟形」（式（Ｉｂ））に関するその他の構造的な異性変異体であって、生理学的に機能するものは、本発明の範囲に許容されることは当業者に理解されるだろう。式（Ｉ）で示される化合物は、通常の有機溶媒抽出技術を使用して、キンセンカ属から単離することができる。一般的に、式（Ｉ）で示される化合物は、例えば葉、茎、花の部分、根、苗条等のあらゆる植物組識から抽出することができる。
本発明の更なる態様においては、前記一般式（Ｉ）において、Ｒ1及びＲ2が独立して、−ＯＨ、Ｈ、
0004384261.tif 000016
から選ばれ、
Ｒ3が、（Ｅ）−３−メチルペント−２−エノエート及び、
0004384261.tif 000017
から選ばれ、
Ｒ4がＣ6〜Ｃ12の飽和又は不飽和の、単環式又は多環式の脂肪族環系であって、適宜Ｃ1〜Ｃ6のアルキル、Ｈ、−ＯＨ、＝ＣＨ2又はＣ1〜Ｃ4のアルキルカルボキシルオキシにより置換されている環系から選ばれ、
Ｒ5が、Ｃ1〜Ｃ4のアルキル、−ＣＨＯ、−ＣＯＯＨ及び−ＣＨ2ＯＨから選ばれ、
Ｒ6が、
0004384261.tif 000018
から選ばれる化合物及び生理学的に機能性のその異性体が提供される。
好ましくは、式（Ｉ）において、
Ｒ1及びＲ2が独立して−ＯＨ、Ｈ、
0004384261.tif 000019
から選ばれ、
Ｒ3が、（Ｅ）−３−メチルペント−２−エノエート及び、
0004384261.tif 000020
から選ばれ、
Ｒ4が、
0004384261.tif 000021
から選ばれ、
Ｒ5が−ＣＨ3、−ＣＨＯ、−ＣＨ2ＯＨ及び−ＣＯＯＨから選ばれ、
Ｒ6が、
0004384261.tif 000022
から選ばれる新規化合物及び生理学的に機能性のその異性体が提供される。
更なる態様において、式（Ｉ）において、
Ｒ1及びＲ2が独立してＨ及び−ＯＨから選ばれ、
Ｒ3が（Ｅ）−３−メチルペント−２−エノエートであり、
Ｒ4が、
0004384261.tif 000023
から選ばれ、
Ｒ5がＣＨ3であり、
Ｒ6がＯＨである化合物及び生理学的に機能性のその異性体が提供される。
基Ｒ1、Ｒ2、Ｒ6及びＲ3はアキシアル又はエクアトリアルのいずれかの配置で存在することができることは当業者に理解されるだろう。
本発明の目的に対する、「生理学的に機能性の異性体」とは、皮膚細胞の過剰増殖を実質的に衰えさせるか又は停止させることができる異性体を意味する。したがって、前記異性体は、皮膚細胞に対し実質的な細胞増殖抑制効果を有することが示されるだけでなく、例えば乾癬等の皮膚疾患の治療に有用であることが示されるだろう。
本発明の新規化合物の例には、
（ｉ）（ｒｅｌ）−１ａα，４ａξ，７ａβ，７ｂα−デカヒドロ−１，１，４ξ，７α−テトラメチル−１Ｈ−シクロプロプ［ｅ］アズレン−４ξ−Ｏ−（２−Ｅ−｛３−メチルペント−２−エノイル｝−β−キノボピラノシド（Ｖａｎ−１０−３）：
0004384261.tif 000024
（ｉｉ）（ｒｅｌ）−５ξ、７ξ、１４ξ−ユーデスム（ｅｕｄｅｓｍ）−４（１５）−エン−１１−Ｏ−（２−Ｅ−｛３−メチル｝ペント−２−エノイル）−β−フコピラノシド（Ｖａｎ−１０−２）：
0004384261.tif 000025
（ｉｉｉ）（ｒｅｌ）−１ａα，４ａξ，７ａβ，７ｂα−デカヒドロ−１，１，４ξ，７α−テトラメチル−１Ｈ−シクロプロプ［ｅ］アズレン−４ξ−Ｏ−（２−Ｅ−｛３−メチル｝ペント−２−エノイル）−β−フコピラノシド（Ｖａｎ−１０−４）：
0004384261.tif 000026
が含まれる。
本発明の好ましい新規化合物は、その生物学的活性を基本とすると、前記（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）の化合物並びに生理学的に機能性のその誘導体及び類似体である。生物学的活性を基本とした最も好ましい化合物は前記（ｉｉｉ）の化合物である。
皮膚細胞の過剰増殖と関係する疾患を治療、特に乾癬を治療するための組成物における式（Ｉ）で示される化合物の使用は、本発明の態様に含まれる。もちろん、前記の使用には、キンセンカ属に由来する既知の化合物、例えば、
（ｉｖ）（ｒｅｌ）−１ａα，４ａξ，７ａβ，７ｂα−デカヒドロ−１，１，４ξ，７α−テトラメチル−１Ｈ−シクロプロプ［ｅ］アズレン−４ξ−Ｏ−β−フコピラノシド（Ｖａｎ１５Ａ）：
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の使用が含まれることは当業者に理解されるだろう。
例えば乾癬等の皮膚病の治療用薬剤の製造において使用される好ましい化合物は、前記（ｉｉｉ）の化合物である。
前記（ｉ）〜（ｉｖ）の化合物の類似体を、インサイチューでそこから合成してもよいことは当業者に理解されるだろう。例えば、基Ｒ1及びＲ6が共にＯＨであるか、又はＲ2及びＲ6は共に−ＯＨである場合には、適当な酸塩化物又は酸無水物と適当な出発化合物、例えば化合物（ｉｉｉ）とを、適当な塩基、例えばピリジンなどの存在下で反応させることにより、これらの物質をエステル化して、アンゲレート（angelate）、チグレート（tiglate）又はその他のエステルにしてもよい。両アルコール基はこの技術によりエステル化されるだろう。Ｒ1及びＲ6上に異なるエステル基、例えばチグレート及びアンゲレートを有する誘導体を、適当な化合物、例えば（ｉｉｉ）の化合物と２種の酸塩化物又は２種類の無水物の混合物とを反応させることにより製造してもよい。これにより、全部で４種の可能性のある異性体が製造され、これらは標準的な技術、例えばシリカゲルのクロマトグラフィー等により分離することができる。
化合物（ｉ）〜（ｉｉｉ）上のエチルクロトネートのアーム（ethyl crotonate arm）（Ｒ3）を、以下に示す一般的な手順を使用することにより、その他のカルボン酸エステルで置換することができる。Ｒ1及びＲ6のヒドロキシル基を、化合物とアセトンとをトルエンスルホン酸の存在下で反応させることによるアセトニド（acetonide）の形成により、又は当該技術分野において既知の類似の技術、例えばＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｔ  Ｗ  Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐ  Ｇ  Ｍ  Ｗｕｔｓ（ＩＳＢＮ  ０  ４７１  ６２３０１  ６）（例えば、第２章、１２３〜１２７頁）（前記文献は参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載された技術により保護し、例えば以下に示す化合物Ａ又はその類似化合物等を製造することができる。
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例えば化合物（ｉｉｉ）を酸又は塩基加水分解することによりエチルクロトネートのアームを取り除き、Ｒ3＝ＯＨを有する生成物を得ることができる。次いで得られる化合物と適当な酸塩化物又は酸無水物とを、例えばピリジン等の塩基の存在下で反応させ、Ｒ3上に例えばチグレート又はアングレート等のエステルを得ることができる。代わりに、化合物Ａ（前記）を過剰量の有機酸、例えばチグリン酸又はアンゲリカ酸を用いて、適当な酸又は塩基性触媒の存在下エステル転移反応することによりエステルを形成してもよい。最終的に、保護性のアセトニド基を、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｔ．Ｗ．の文献（前出）に記載されているように、適当な開裂試薬（cleaving reagent）、例えばメタノール中のヨウ素等により開裂することができる。
本発明の好ましい態様として、乾癬治療用薬剤を製造するための、キンセンカ属、例えばカレンデュラ・オフィシナリスから単離した少なくとも１種の化合物の使用が提供される。
典型的には、本発明の化合物は植物性グルコシド、例えばセスキテルペングルコシド等である。更に、乾癬に対する治療用組成物であって、キンセンカ属、例えばカレンデュラ・オフィシナリスから単離した少なくとも１種の植物性グルコシドを含むことを特徴とする組成物は、本発明の範囲に含まれる。一般的に、治療用組成物は、少なくとも１種の精製された植物性グルコシド、例えば式（Ｉ）のセスキテルペングルコシド等を含む。もちろん、前記組成物が、治療学的な細胞増殖抑制作用を起こすことができるあらゆる濃度の２種以上の植物性グルコシドを含んでいてもよいことは当業者に理解されるだろう。したがって、治療用組成物は、好ましくない混入化合物が実質的に存在しない、キンセンカ属の植物抽出物を含むことができる。例えば、植物抽出物は、多くの溶媒抽出工程を受け、好ましい成分、例えば式（Ｉ）に含まれる化合物等の好ましい成分から、好ましくない成分を分離することができるだろう。もちろん、前記溶媒抽出工程を受けた植物抽出物は、１種以上の植物性グルコシドを含むことができ、更に数種の植物性グルコシドを含んでいてもよい。次いで、前記植物抽出物を更なる溶媒抽出手順に付し、個々の式（Ｉ）で示される活性な植物性グルコシド化合物を単離してもよい。
皮膚細胞に細胞増殖抑制作用を及ぼすことができる活性成分を含む、キンセンカ属の精製された抽出物を得る一般的な方法、前記抽出物の精製（refinement）並びに抽出物からの活性成分の単離及び／又は続く抽出物の精製に関する記載が続く。
キンセンカ属の花を、グラインダー中で微粉砕し、得られた粉末を、消滅（exhaustion）するまで、石油エーテルを用いてソックスレー抽出した。次いで、抽出物を、例えば減圧下でエバポレータ、例えばロータリーエバポレータを用いて濃縮し、抽出残渣である粗抽出物を得た。次いで、粗抽出物を、例えば適当な溶媒及び極性が増加する溶媒系を用いた減圧液体クロマトグラフィー（ＶＬＣ）により分画することができる。適当な溶媒には、例えば極性及び非極性溶媒並びにそれらの混合物が含まれる。本発明の目的に適した抽出方法に使用してもよい溶媒の例としては、以下に示すものが含まれる（容量比）。
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ０〜１０％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  １２〜１８％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ２０〜２４％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ２４〜３０％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ３５〜４０％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ４５％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ５０〜５５％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ６０％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ６５〜７５％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ８０〜８５％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ９０〜９５％）
石油−ＥｔｏＡｃ（ＥｔｏＡｃ  ９５％）
ＥｔｏＡｃ−ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ  ０〜５％）
ＥｔｏＡｃ−ＭｅＯＨ（ＭｅＯＨ  １０〜１００％）
ヘキサン、ヘキサン：クロロホルム混合物におけるヘキサンの容量比は以下の通りである。
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クロロホルム、クロロホルム：メタノール混合物では、例えば、５：１、１：１等である。したがって、粗抽出物を、あらかじめ選択した割合、例えば極性が増加するような異なる有機溶媒混合物を使用して、数回分画することができる。
ＶＬＣにおいては、典型的に、シリカゲル（メルク（Ｍｅｒｃｋ）７７４９）を、容器、例えば焼結した漏斗（sintered funnel）に、減圧下で充填し、カラムを得る。粗抽出物を、例えばシリカ上に吸着（例えば、１：１（ｗ／ｗ））させ、前記の様にカラムの上端に置くことにより、ＶＬＣカラムに導入する準備をし、溶媒又は極性が増加させる溶媒系、例えば前記のあらかじめ選択した割合で用いて少なくとも１回溶離する。ＶＬＣカラムからの溶離液を集め、カラムクロマトグラフィー又はその他の適当なクロマトグラフィー手段により、更なる分画工程に付することができる。粗抽出物の分画の後、集めた溶離液を、これに含まれる活性成分の分析のための分離用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）に付することができる。例えば、ある方法においては、クロロホルム：メタノールを９５：５の割合で用いたカラムクロマトグラフィーにより得られた、Ｖａｎ−５−１０と命名された画分を、最初の溶媒系であるヘキサン：クロロホルム：酢酸エチルの容量比が３：６：６の系を使用してＴＬＣ分析に付し、５つの画分を得、Ｖａｎ−９−１、Ｖａｎ−９−２、Ｖａｎ−９−３、Ｖａｎ−９−４及びＶａｎ−９−５と命名した。前記画分を、式（Ｉ）に含まれる別個のグリコシド分子の精製された混合物を含むものとみなすことができるので、混入成分、例えば植物性タンパク質、植物性ホルモン等が実質的に存在しない混合物としてみることができる。細胞増殖抑制活性を有する前記溶離画分は本発明の態様を形成する。
更なる工程において、前記の画分Ｖａｎ−９−１〜Ｖａｎ−９−５を、更なる有機溶媒調製物を使用した、更なる分離用薄層クロマトグラフィー（ｐｒｅｐ．ＴＬＣ）シリカゲル解析に付することができる。例えば、溶離画分Ｖａｎ−９−２を、ヘキサン：クロロホルム：酢酸エチルの容量比が３：６：４の溶媒調製物を使用して分離用ＴＬＣに付し、Ｖａｎ−９−２のサブ画分を得、Ｖａｎ−９−２Ｂ及びＶａｎ−９−２Ｃと命名することができる。分離用ＴＬＣ工程より得たサブ画分を更なるクロマトグラフィー工程、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）に付することができる。例えば、ＴＬＣで分離した画分である、Ｖａｎ−９−２−Ｂ及びＶａｎ−９−２−Ｃを、０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含む水中の７５％アセトニトリル溶媒を用いた、オクタデシル−シラノール（ＯＤＳ）（分析用）カラムを使用したＨＰＬＣに付することができる。ＨＰＬＣ技術により得た個々の画分を、ＮＭＲ技術により、及びインビトロにおける細胞増殖抑制活性について分析することにより、活性成分について評価してもよい。
原料の大きなバッチ、例えばカレンデュラ・オフィシナリスの乾燥花弁について、以下に示す一般的な抽出法法を使用することができる。
乾燥した植物材料、例えばカレンデュラ・オフィシナリスの花弁を粗い粉末に粉砕し、適当な有機溶媒中に抽出することができる。一般的に、抽出方法は、当該技術分野において既知の適当な抽出方法、例えばソックスレー抽出、バッチ抽出及び連続抽出等であってもよい。したがって、本発明の更なる面として、特にソックスレー抽出、バッチ抽出又は連続抽出方法により、カレンデュラ属から得ることができる式（Ｉ）で示される抗乾癬化合物が提供される。前記抽出方法は当該技術分野において既知である。好ましくは、カレンデュラ属は、カレンデュラ・オフィシナリスであり、好ましい抽出法法は、連続抽出法である。連続抽出法に使用するための適当な溶媒としては、メタノール、エタノール、ジクロロメタン、トルエン、ヘキサン、酢酸エチル、イソプロピル等の極性及び非極性有機溶媒が含まれる。好ましくは、溶媒は、例えばヘプタン等の非極性有機溶媒である。得られた抽出物を、抽出物の重量／溶液の容積の百分率の比（％  ｗ／ｖ）が適当な値になるまで、減圧下で濃縮した。適当な溶液比（％  ｗ／ｖ）は、１０〜６０％  ｗ／ｖ、より好ましくは１５〜３０％  ｗ／ｖ、特に好ましくは約２０％  ｗ／ｖである。得られた濃縮物を更に、適当な重量部：重量部の比、例えば１０：０〜７：３の極性溶媒／水の溶液中で抽出する。好ましくは、比は１０：０〜８：２である。より好ましくは、比は９：１である。適当な極性有機溶媒は、アセトニトリル、メタノール、エタノール、酢酸エチル等から選んでもよい。好ましい極性溶媒はアセトニトリルである。ヘプタン画分を捨て、次いでＶＡＮ含有極性有機溶媒画分（例えばアセトニトリル画分）を組合わせ、極性有機溶媒を減圧下で取り除くことができる。得られた溶液を適当な極性又は非極性有機溶媒、例えば酢酸エチル、メタノール、アセトニトリル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、トルエン等に再溶解し、次いで連続的に、１０：３０％  ｗ／ｖ比の水中の炭酸水素ナトリウム等の塩基、０．０５〜０．１Ｍの濃度の希釈した無機酸、例えば塩酸、又は０．２〜１．０Ｍの濃度のクエン酸等の希釈した有機酸、最終的に水を用いて洗浄することができる。次いで有機溶媒溶液を減圧下で蒸発させる。
得られた粗調製物を更に適当なＶＡＮ−１０化合物、例えばＶＡＮ−１０−４に精製してもよい。粗調製物を、例えば極性有機溶媒等の有機溶媒の適当な容量又は少なくとも１種類の極性有機溶媒：少なくとも１種の非極性有機溶媒の混合物の適当な容量に再溶解してもよい。好ましくは、有機溶媒は１種の非極性有機溶媒と混合した１種の極性溶媒から構成される。有機溶媒の適当な混合物を使用する場合、お互いに混和性でなければならない。極性有機溶媒：非極性有機溶媒の比（％（ｖ／ｖ））は８０：２０〜２０：８０％（ｖ／ｖ）の範囲にあり、好ましくは、３０：７０〜７０：３０％（ｖ／ｖ）の範囲にある。例えば、粗抽出物のある量を、５０％極性有機溶媒：５０％非極性有機溶媒の比の極性有機溶媒：非極性有機溶媒の適当量に再溶解することができる。好ましい有機溶媒混合物は、５０％酢酸エチル：５０％ヘキサンである。更に適当な溶媒を、前記の極性及び非極性有機溶媒から選んでもよい。溶解した物質をフラッシュクロマトグラフィーシステム、例えばフラッシュ７５カラムに充填し、移動相としての適当な溶媒混合物、例えば５０％酢酸エチル：５０％ヘキサンを用い、適当な流量で溶離してもよい。フラッシュクロマトグラフィーカラムからの適当な流量は、移動相として例えば５０％酢酸エチル：５０％ヘキサン混合物を使用する場合、使用するカラムの大きさに依存して、５０〜５００ｍｌ／分、好ましくは１００〜２５０ｍｌ／分、より好ましくは約２５０ｍｌ／分である。移動相のための極性溶媒：非極性溶媒の比は、前記に概略したように粗抽出物に再溶解するために使用する範囲内にあることができる。実際の割合は、使用する溶媒混合物に依存するだろう。前記のフラッシュシステムを使用して、ＶＡＮ混合物を多数の画分に分離してもよい。次いでこれらの画分を組み合せ、蒸発させて乾燥してもよい。蒸発後、組合わせた画分（すなわち、準粗物質（semi crude material））を、前記の適当な極性有機溶媒に再溶解し、溶解した画分のサンプルを、例えばスフェリソーブ（Spherisorb）カラム等の逆相カラムを用いたＨＰＬＣにより精製することができる。ＨＰＬＣの前、フラッシュクロマトグラフィーの後に得られた、組合わせた準粗物質の原液を、移動相として使用するものと同様の溶媒に再溶解し、アリコートに分割することができる。次いで、アリコートを、当該技術分野において既知の標準的なＨＰＬＣ技術により、例えばアイソクラチック分離又は勾配溶出により処理してもよい。もちろん、移動相に再溶解する準粗物質の最大濃度は用いる溶媒に依存することは当業者に理解されるだろう。例えば、２５ｍｇ／ｍｌまでの組合わせた準粗物質抽出物をアセトニトリルに再溶解し、次いでＨＰＬＣカラムに流すために適当な容量に分割してもよい。各サンプルを、用いる移動相に依存した時間流し、ＶＡＮ−１０化合物を適当な時間間隔で溶離することができる。適当な時間間隔を、移動相として異なる溶媒系を用いて分析カラム中を流す分離用ＨＰＬＣを構成し、溶離の最適速度及びサンプルの良好な分解能を生ずる溶媒系を選択することにより、適当な時間間隔を算出してもよい。移動相において、極性有機溶媒の％：非有機極性溶媒の％は、９０：１０から１０：９０���好ましくは７０〜８０：３０：２０、特に好ましくは７５〜８０：２５〜２０であってもよい。したがって、ＨＰＬＣ分離のための、アセトニトリル：水から構成される移動相は、７５％アセトニトリル：２５％水であり、流量は使用するカラムの大きさに従い、例えば５ｍｌ／分であることができる。適当な極性有機溶媒には前記のものが含まれる。好ましい有機溶媒は、アセトニトリル又はメタノールである。
活性物質の単離の各工程における溶媒又は溶媒混合物の選択は、各画分のバイオアッセイ分析の結果により導き、最終的に活性成分の同定を、抽出手順の異なる工程において各画分中に見出すことができることは、当業者にとって明らかであろう。
本発明の化合物は、インビトロにおけるマウス胚線維芽細胞に対して細胞増殖抑制活性を有することが見出されている。したがって、一般式（Ｉ）の化合物の細胞増殖抑制活性は、インビトロにおける細胞増殖抑制活性についての多数の試験において実証されている。更に、一般式（Ｉ）の化合物の細胞増殖抑制活性はインビボにおいても実証されている。
本発明の化合物は、疾患の進行において異常な程高い細胞増殖が見られる、皮膚病の治療に有用であることが示される。本発明の化合物は、異常な程高い細胞増殖が認められる病状である、例えば乾癬等の皮膚病の障害の治療に用いてもよい。
更に、本発明は、ヒトを含む哺乳類における、乾癬等の皮膚疾患の治療方法であって、式（Ｉ）の化合物又は生理学的に機能性の誘導体の臨床的に有用な量を薬学的に有用な形態で、１日に１回若しくは数回又は、例えばその他の適当なスケジュールで、経口又は局所的に使用することからなる方法を提供する。
更に、本発明の更なる又は代替の面として、例えば乾癬等の治療に使用する式（Ｉ）の化合物又は生理学的に機能性のその誘導体が提供される。
細胞増殖抑制剤として有効であるために必要な式（Ｉ）の化合物の量はもちろん変化し、最終的には医師又は獣医師に決定される。考慮すべき因子には、治療する状態、投薬経路、製剤の特徴、哺乳類の体重、表面積、年齢及び通常の状態、並びに投与する特定の化合物が含まれる。本発明の細胞増殖抑制化合物に適当な有効投与量は、約０．０１〜約１２０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば０．１〜約１２０ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば０．５〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重である。毎日の全投与量は、単一投与量、多回投与量（multiple dose）、例えば１日あたり２〜６回の適用で与えてもよい。例えば、７５ｋｇの哺乳類（例えばヒト）に対しては、投与量範囲は、約８〜９０００ｍｇ／１日であり、典型的な投与量は約５０ｍｇ／１日であろう。別個の多回投与量が示される場合、典型的には、治療は式（Ｉ）の化合物１５ｍｇを１日に４回まで与えてもよい。
活性化合物を単独で投与することができる一方、本発明の化合物は医薬製剤中に存在することが好ましい。医薬用途のための製剤は、式（Ｉ）の化合物及び１種以上の薬学的に許容しうる担体並びに適宜その他の治療成分を含んでいる。担体は、製剤中のその他の成分と適合するという意味で薬学的に許容しうるものであり、かつ受容者に対して無毒でなければならない。
それゆえ、本発明は更に、式（Ｉ）の化合物又は生理学的に機能性のその誘導体及び薬学的に許容しうる担体からなる医薬製剤が提供される。
もちろん、式（Ｉ）の化合物を含むあらゆる医薬製剤は、キンセンカ属に由来する抽出物から単離及び／又は精製した少なくとも１種の活性成分を含んでいることは当業者にに理解されるだろう。好ましくは、キンセンカ属は、カレンデュラ・オフィシナリス、カレンデュラ・アルベンシス及びカレンデュラ・ペルシカの少なくとも１種から選ばれる。特に好ましくは、キンセンカ属から単離された活性化合物は、カレンデュラ・オフィシナリスから単離及び／又は精製される。したがって、医薬製剤は、２種以上のキンセンカ属から単離及び／又は精製した活性成分を含み、前記活性成分は、前記式（Ｉ）に含まれる２種以上の活性化合物からなることができる。
更なる態様において、医薬製剤は、カレンデュラ・オフィシナリスに由来する抽出物から単離及び／又は精製した少なくとも１種の活性化合物並びにカレンデュラ・アルベンシス又はカレンデュラ・ペルシカから単離及び／又は精製した式（Ｉ）の少なくとも１種の活性化合物の混合物を含んでいてもよい。
医薬製剤の製造方法であって、式（Ｉ）の化合物又は生理学的に機能性のその誘導体及び薬学的に許容しうる担体を結び付けることからなる方法も提供される。
本発明の製剤は、経口又は局所投与に適したものも含まれる。好ましい製剤は、例えば皮膚への局所投与に適したものである。外側の組織、すなわち皮膚の感染症に対して、製剤は、好ましくは、活性成分を例えば０．０７５〜２０％  ｗ／ｗ、好ましくは０．２〜１５％  ｗ／ｗ、特に好ましくは０．５〜１０％  ｗ／ｗ含む局所用軟膏又はクリームとして適用される。軟膏に製剤化したとき、活性成分はパラフィン系又は水混和性軟膏基剤のいずれかと共に用いられる。代わりに、活性成分を水中油系クリーム基剤（oil-in-water cream base）を用いてクリームに製剤化してもよい。
所望により、クリームの水性相は、例えば少なくとも３０％  ｗ／ｗの多価アルコール、すなわち２以上のヒドロキシル基を有するアルコール、例えばプロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリアコール（glyercol）及びポリエチレングリコール並びにそれらの混合物を含んでいてもよい。局所用製剤は、好ましくは活性成分の皮膚又はその他の作用する領域への吸収又は透過を増強する化合物を含んでいるだろう。前記の皮膚浸透増強剤（dermal penetration enhancers）の例は、ジメチルスルホキシド及び関連する類似体を含んでいる。
本発明のエマルジョンの油性相は、既知の方法により、既知の成分から構成してもよい。相は乳化剤（エマルジェント（emulgent）として知られているその他のもの）のみ含んでいてもよいが、少なくとも１種の乳化剤と脂肪若しくは油又は脂肪及び油の両者との混合物を含んでいることが好ましい。好ましくは、親水性乳化剤は、安定化剤として作用する親油性乳化剤と共に含まれる。油と脂肪の両者を含むことも好ましい。安定化剤を有する又は有しない乳化剤は、いわゆる乳化ろうを構成し、油及び／又は脂肪を有する前記ろうは、いわゆる乳化軟膏基剤（emulsifying ointment base）を構成し、前記乳化軟膏基剤はクリーム状製剤の油性に分散した相を形成する。
本発明の製剤における使用に適したエマルジェント及び乳化安定剤には、Ｔｗｅｅｎ  ６０、Ｓｐａｎ  ８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセロールモノステアレート及びラウリル硫酸ナトリウムが含まれる。
製剤に適した油又は脂肪の選択は、所望の表面特性（cosmetic property）を達成することに依存する。なぜならば、医薬的エマルジョン製剤において使用されやすいほとんどの油において活性化合物の溶解度は非常に低いからである。したがって、クリームは、好ましくは、チューブ又はその他の容器からの漏れを回避するのに適当な粘稠度を有する、べとべとしない（non-greasy）、着色しない９（non-staining）かつ水に溶ける（washable）製品でなければならない。直鎖又は分岐した、モノ又はジ塩基（basic）アルキルエステル、例えばジ−イソアジピエート、イソセチルステアレート、ココヤシ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、イソプロピルミリステート、デシルオレエート、イソプロピルパルミテート、ブチルステアレート、２−エチルヘキシルパルミテート又はクロダモール（Ｃｒｏｄａｍｏｌ）ＣＡＰとして知られている分岐鎖エステルの混合物を使用してもよく、最後の３つが好ましいエステルである。これらは、必要な性質に依存して単独又は組合わせて使用してよい。代わりに、高融点の脂質、例えば白色ワセリン及び／又は流動パラフィン又はその他の鉱油を使用することができる。
製剤を単位投与形態に都合よく存在させ、薬学分野において周知のあらゆる方法により製造してもよい。全ての方法は、活性化合物を、１種以上の付属成分を構成する担体に結び付ける工程を含む。一般的に、製剤は、活性化合物を液体担体若しくは微粉固体担体又は両者に均一かつ十分（intimately）に結びつけ、必要により、製品を所望の製剤に成形することにより製造する。
経口投与に適した本発明の製剤は、別個の単位、例えばカプセル剤、カシェ剤、錠剤、風味をつけた基剤（flavoured base）、通常はスクロース及びアラビアゴム又はトラガカントゴム中に活性成分を含むトローチ剤、不活性基剤、例えばゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアラビアゴム中に活性成分を含む錠剤（pastille）、適当な液体担体中に活性成分を含む口内洗浄剤等として存在していてよい。各製剤は一般的にあらかじめ決められた量の活性化合物を、粉末又は顆粒、水性又は非水性液体中の溶液又は懸濁液、例えばシロップ剤、エリキシル剤等として含んでいる。
錠剤を、適宜１種以上の付属成分と共に圧縮又は成形することにより作成してもよい。圧縮した錠剤は、適宜、結合剤、（例えばポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、ナトリウムデンプングリコレート、架橋ポビドン、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース）、界面活性剤及び分散剤等と混合した（free-flowing form）、例えば粉末又は顆粒の状態の活性成分を、適当な機械中で圧縮することにより製造してもよい。成形した錠剤を、不活性液体希釈剤を用いて湿らせた粉末化合物の混合物を適当な機械中で成形することにより製造してもよい。錠剤は、適宜コーティング又は刻み目を入れ（score）られていてもよく、活性成分の遅延された又は制御された放出を提供するように、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースを異なった割合で使用して所望の放出プロフィールを提供するように製剤化してもよい。
シロップ剤は、活性化合物を、例えばスクロース等の糖の濃縮水性溶液に、あらゆる必要な成分と共に添加することにより製造してもよい。前記付属成分は、香料（flavouring）又はあらゆる他の成分の溶解度を増加させる薬剤、例えば多価アルコール、例えばグリセロール又はソルビトールを含んでいてもよい。
前記成分に加えて、本発明の製剤は、希釈剤、緩衝液、香料、結合剤、界面活性剤、増粘剤、滑沢剤、防腐剤（抗酸化剤を含む）等を更に含んでいてもよい。
更に、本発明は、乾癬治療剤を製造するための式（Ｉ）の化合物の化合物又は生理学的に機能性のその誘導体の使用を提供する。
図１：カレンデュラ・オフィシナリスの花から細胞増殖抑制化合物を単離するための抽出工程を示す概略図である。
図２：カレンデュラ・オフィシナリスの抽出物を用いた乾癬患者治療の結果を示している。
以下に示す、本発明を限定するものではない実施例により本発明を説明する。
実施例１：抽出物Ｖａｎ−６−１の単離
図１について言及する。
植物材料の抽出及び画分化：
粉末植物材料４００ｇを、石油エーテル（６０〜８０°）用い、消滅するまでソックスレー抽出した。次いで抽出物を減圧下、ロータリーエバポレーターを用いて濃縮し、抽出物残渣４９ｇを得た。植物材料を更にクロロホルムを用い前記と同様の条件下で抽出し、更なる抽出物を得た。これらの抽出物を減圧液体クロマトグラフィー（ＶＬＣ）用いて分画した。シリカゲル（メルク  ７７４９）を適用された減圧（applied vacuum）下、焼結漏斗に充填し、直径約１０ｃｍかつ高さ５ｃｍのカラムを得た。シリカに吸収（１：１、ｗ／ｗ）させた抽出物（１回に２０ｇ）をカラムの上端に置き、極性が増加する溶媒溶媒、例えばヘキサン、クロロホルムの濃度を増加させて含むヘキサン、クロロホルム及びメタノールの量を増加させて含むクロロホルムを用いて溶離した。ＶＬＣ溶離液を集め、画分をその構成についてＴＬＣにより分析した。ＴＬＣ分析に基づいて、ＶＬＣ溶離液は、１３の画分を含んでいた（表１）。これらを、細胞増殖阻害活性について、３Ｔ３バイオアッセイ手順に従い試験した（実施例５）。
Ｖａｎ−２−３６と命名された溶離液（クロロホルムとメタノールの１：１の混合物を用いて抽出）が最も活性であることを見出した。
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溶離液Ｖａｎ−２−１６を、ヘキサン：クロロホルム及びクロロホルム：極性を増加させたメタノールの混合物を用いて、シリカゲルのカラムクロマトグラフィーに付した。１０〜６０％のクロロホルム（ヘキサン中）を用いて溶離した画分はＶａｎ−５−４を与え、５％メタノール（クロロホルム中（ヘキサン中））を用いて溶離した画分はＶａｎ−５−４を与え、５％メタノール（クロロホルム中）を用いて溶離した画分はＶａｎ−５−９を与えた。これらの画分は（ＧＣ及びＮＭＲスペクトルから）脂肪酸の混合物であると見られ、細胞増殖阻害は示さなかった。５％メタノール溶離液はＶａｎ−５−１０であり、Ｖａｎ−５−１１、Ｖａｎ−５−１２及びＶａｎ−５−１５は１０％メタノール溶離液から得られた画分であった。
Ｖａｎ−５−１２を精製する更なる試みを、分離用（prep.）ＴＬＣ（シリカゲル、溶媒−クロロホルム：メタノール、９５：５）を用いて行った。これによりＶａｎ−６−１が得られ、これは細胞増殖バイオアッセイを用いたところ非常に高い活性であることが見出された（実施例５）。
実施例２：Ｖａｎ−９−２の単離
実施例１（前記）の手順を続け、ＶＬＣ及びＴＬＣ分析を含めた。
Ｖａｎ−５−１０を、分離用ＴＬＣ（シリカゲル、溶媒、ヘキサン：クロロホルム：酢酸エチル、３：６：６）に付し、５つの画分、Ｖａｎ−９−１〜Ｖａｎ−９−５を得、Ｖａｎ−９−２は３Ｔ３細胞バイオアッセイ用いたとき生物学的に活性であることが見出された（実施例５）。
実施例３：Ｖａｎ−１０−２、Ｖａｎ−１０−３及びＶａｎ−１０−４の単離
前記実施例１及び２のプロトコルに従い、Ｖａｎ−９−２を得た。
Ｖａｎ−９−０２を、分離用ＴＬＣ（溶媒：ヘキサン：クロロホルム：酢酸エチル：３：６：４）により、Ｖａｎ−９−２Ｂ及びＶａｎ−９−２Ｃに分離した。
Ｖａｎ−９−２Ｂ及びＶａｎ−９−２Ｃを、水中の７５％アセトニトリル（更に０．１％トリフルオロ酢酸を含む）用いたＯＤＳ分析カラムのＨＰＬＣにより分離した。これによりＶａｎ−１０−１、Ｖａｎ−１０−２、Ｖａｎ−１０−３及びＶａｎ−１０−４を得た。Ｖａｎ−１０−２、Ｖａｎ−１０−３及びＶａｎ−１０−４についてのＮＭＲデータを以下に示す。
アロマデンドラノール（aromadendranol）部分のＶａｎ化合物の立体化学は以下に示す構造である。
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以下に示す構造を有する、アロマデンドラノール部分の更なる立体化学的変異体が本発明に含まれることは当業者に理解されるだろう。
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実施例４：Ｖａｎ−１５Ａの単離
図１について言及する。
実施例１及び２のプロトコルを続け、Ｖａｎ−６−１を得た。
Ｖａｎ−６−１をカラムクロマトグラフィー（セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ２０：溶媒：クロロホルム：メタノール、１：１）により２つの画分：Ｖａｎ−１５−１（脂肪酸を含む重い画分）及びＶａｎ−１５−２（テルペンを含む軽い画分）に画分した。
Ｖａｎ−１５−２を分離ＴＬＣ（シリカゲル、溶媒：クロロホルム：メタノール：９５：５）に付し、Ｖａｎ−１５Ａ及び微量成分であるＶａｎ−１５Ｂを得た。活性成分であるＶａｎ−１５ＡについてのＮＭＲデータを以下に示す。
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実施例５：線維芽細胞細胞系３Ｔ３の増殖の可逆阻害
マウス胚線維芽細胞（フロウ（Ｆｌｏｗ）より入手することができる３Ｔ３）を、９６ウェル組織培養プレートに播いた。細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ギブコ（Ｇｉｂｃｏ））、１％グルタミン（ギブコ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ギブコ）及び１％非必須アミノ酸（ギブコ）を含む培地（ダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ギブコ）中に、５０，０００細胞／ｍｌの濃度で懸濁した。細胞懸濁液１００μｌを各ウェルに、５０００細胞／ウェルの濃度でピペットにより移した。細胞を５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で２４時間インキュベートした。培地をプレートから取り除き、化合物の異なる希釈物（０、３０、４５、６０、１００μｇ／ｍｌ）であって、内部的にＶａｎ−１０−４、Ｖａｎ−１０−２、Ｖａｎ−１０−３及びＶａｎ−１５Ａと命名した希釈物を、化合物を１００％ＤＭＳＯ（シグマ（Ｓｉｇｍａ））に溶解することにより調製した。次いでこれをＤＭＥＭを用いて希釈し、ＤＭＳＯ濃度を０．５％にした。次いで化合物を、０．５％ＤＭＳＯ含有ＤＭＥＭを用いて示した濃度（前記）に希釈し、プレートに添加した（１００μ／ウェル）。各希釈物は三重であり、対照は０．５％ＤＭＳＯ含有ＤＭＥＭであった。０．５μＣｉ3Ｈ−チミジン含有ＤＭＥＭ５０μｌを各ウェルに添加した。次に、４０％ウシ胎仔血清（ギブコ）含有５０μｌＤＭＥＭ、４％ペニシリン／ストレプトマイシン（ギブコ）、４％グルタミン（ギブコ）、４％非必須アミノ酸（ギブコ）を各ウェルに添加した。プレートを５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で２４時間インキュベートした。試験下にある化合物を含む培地を取り除き、プレートをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．３）を用いて２回（２×）洗浄した。バーシーン中の５％トリプシン（ギブコ）１００μｌ（ギブコより入手することができるＥＤＴＡキレート化剤）を各ウェルに添加した。プレートを更に５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で１５分間インキュベートし、次いで細胞を、半自動セル−ハーベスター（Ｓｋａｔｒｏｎ）を用いてウェルから収集した。収集した細胞を、オプティフェーズ」「セーフ」（Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ“ｓａｆｅ”）（ＬＫＢ）４ｍｌを含有するシンチレーションバイアル中に置き、放射能を液体シンチレーションカウンター（LKB WALLAC ＬＫＢ  1217  Rack beta）を用いて計数した。結果を表２Ａ〜Ｂに示す。
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実施例６：キンセンカ属植物の粉末からのＶａｎ−１０−４の抽出及び分画説明
ａ）ソックスレー
粉末５００ｇを、石油エーテル（６０〜８０）又はクロロホルムを用いて抽出した。抽出期間は、溶媒を使用したのにもかかわらず、通常約５日間であった。溶媒の容積は約３ｌであり、粗収量は６０ｇ（石油エーテル）又は〜８０ｇ（クロロホルム）であった。粗抽出物を等量の二酸化珪素と組み合せ、更に５日間乾燥することにより粉末にした。したがって各バッチについて得られた全粉末は、１２０ｇ（石油エーテル）又は１６０ｇ（クロロホルム）であった。
ｂ）ＶＬＣ
粗抽出物／二酸化珪素粉末の３０ｇを、シリカ（６０Ｈｇｅｌ）ＶＬＣカラムの上端に約深さ５ｃｍ×幅１０ｃｍで層にした。これを細砂の層で覆い、以下に示す溶媒系を用いて分画した。
５×２００ｍｌ  ５０％クロロホルム：石油エーテル（６０〜８０）
５×２００ｍｌ  ７０％クロロホルム：石油エーテル
５×２００ｍｌ  １００％クロロホルム
５×２００ｍｌ  １０％メタノール：クロロホルム
この最終工程により、Ｖａｎ−１０−４を含む画分を得た。ＴＬＣにより、全てのＶａｎ−１０−４がこの段階においてＶＬＣカラムから取り除かれたことを確認した。
関連する画分を、ロータリーエバポレーターにより乾燥した。得られたサンプルの重量は約２〜３ｇであった。
ｃ）セファデックス
この段階においてセファデックスカラムのインクルージョン（inclusion）により、ＶＬＣサンプルのより高速な精製方法を可能にした。サンプルをクロロホルムに再溶解し、カラムに入れた。使用したカラムは高さ２０ｃｍ×幅２ｃｍであり、１３ｇｍのセファデックス（親油性ＬＨ−２０−１００）を含んでいた。サンプルを、１０％石油エーテル：クロロホルムを、流量２〜３ｍｌ／分で用いて溶離し、１分間隔でサンプルを集めた。Ｖａｎ−１０−４の存在をＴＬＣにより確認し、関連する画分をまとめ、ロータリーエバポレーターに付した。得られたサンプルの重量は５００ｍｇであった。
ｄ）シリカ
小型のシリカカラムを使用した。５０ｍｌビュレットに、石油エーテル（６０〜８０）中のスラリーとして調製したシリカ２０ｇを入れた。サンプルをクロロホルムに再溶解し、カラムに入れた。カラムは高さ４０ｃｍ×幅１０ｃｍであった。サンプルを、以下に示す溶媒系１０ｍｌを、流量１ｍｌ／分用いて溶離し、画分を１分間隔で集めた。
石油エーテル（６０〜８０）
１０％クロロホルム：エーテル
２０％クロロホルム：エーテル
４０％クロロホルム：エーテル
５０％クロロホルム：エーテル（サンプルが分離を開始）
６０％クロロホルム：エーテル
７０％クロロホルム：エーテル
８０％クロロホルム：エーテル
９０％クロロホルム：エーテル
１００％クロロホルム
１０％酢酸エチル：クロロホルム
２０％酢酸エチル：クロロホルム
３０％酢酸エチル：クロロホルム
４０％酢酸エチル：クロロホルム（サンプルが溶離）
５０％酢酸エチル：クロロホルム
溶離は全てのＶａｎ−１０−４がカラムから溶離するまで続けた。これはＴＬＣにより確認した。
この方法により、Ｖａｎ−１０−４＋種々の不純物を含むサンプル（準精製サンプル）を得た。
実施例７：カレンデュラ・オフィシナリス抽出物を用いた乾癬の治療
材料
１．植物材料の抽出。調製物は、乾燥植物材料２０ｇあたり溶媒１００ｍｌで抽出した、植物材料のクロロホルムアルコール（無水エタノール中の５％  ｖ／ｖクロロホルム）抽出物から構成されていた。
２．クリームの製造。前記で製造した抽出物を蒸発させ乾燥し、秤量した。「乾燥」抽出物のウェート（weight）を充分量の水性クリームＢ．Ｐ．と混合し、黄色／オレンジ色のクリーム１００ｇを製造した。
３．プラセボクリームの製造。プラセボクリームを、βカロチンの充分量を水性クリームＢ．Ｐ．に添加し、天然の薬剤を含むクリームとほぼ同様の色の製品を得た。
カレンデュラ・オフィシナリス（ＳＳＳＢ）から得た植物材料の抽出物は、乾癬治療において臨床的に有用であることが見出された。
患者に対する経験的な所見の延長された期間に続いて、二重盲検臨床試験を乾癬患者７名からなるグループについて行った。患者（男性４名、女性３名）の年齢は、２６歳の１名を除いて、５３〜６３歳であった。患者は８．５〜２５年間乾癬を患っていた。治療を、試験前後の一連の写真及び治療前後の「乾癬の病状のスコア（score）」を用いてモニターした。治療は、１日に２回クリームを適用し、４週間続けた。ＳＳＳＢ、ベトノベート（Betnovate）及びプラセボの３種類の治療を行った。試験の結果を図２に示す。治療前の平均スコアは１１．１であり、ＳＳＳＢ治療後この値は３．５に減少し、一方ベトノベートでは５．５に、プラセボでは７．４に減少した。
実施例８：ＶＡＮ−１０−４の単離及び精製
実施例６と同様にソックスレー抽出した粗抽出物１５〜３０ｇを、５０％酢酸エチル：５０％ヘキサンの１５ｍｌに再溶解した。この物質をフラッシュ７５カラム（バイオテージ社（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｌｉｍｉｔｅｄ））に入れ、移動相として５０％酢酸エチル：５０％ヘキサンを流量１５０〜２００ｍｌ／分で用いて溶離した。フラッシュカラムからＶＡＮ化合物が溶離する時間を、ＴＬＣにより推定した。粗混合物の希釈溶液（酢酸エチルに再溶解）を、ＴＬＣプレート（シリカゲル６０）にスポット（spot）をつけた。Ｖａｎ化合物混合物を、標準バンニリン（vannilin）：濃硫酸展開液（１ｇ  バンニリン：１００ｍｌ  濃硫酸）を用いて可視化し、Ｒｆ値を計算した。ＴＬＣ移動相を、極性：非極性溶媒の割合を操作することにより、Ｒｆ値が約３．０になるまで調節した。製造者（バイオテージ）の指示に従い、等量カラム容積（equivalent column volume）を算出した。フラッシュ７５系に対するカラム容積は約１ｌであり、適当なＲｆを与える移動相は５０％酢酸エチル：５０％ヘキサンであった。
フラッシュ７５カラムを用いてこの方法を試験したとき、ＶＡＮ化合物は画分１５〜１９中に溶離した（４〜５のカラム容積と同一）。集めた各画分は２５０ｍｌであった。同様の条件下で操作を繰り返し、ＶＡＮ化合物は画分１４〜１８に溶離した。これらの画分を組み合せ、蒸発し、乾燥させ、準粗物質２００〜４００ｍｇを得た。準粗物質を、逆相スフェリソーブカラムを用いたＨＰＬＣにより精製した。準粗物質の原液を、アセトニトリル中の２５ｍｇ／ｍｌの溶液として調製し、２００μｌのアリコートをイソクラティク（isocratically）に処理した。使用した移動相は７５％アセトニトリル：２５％水であり、流量は５ｍｌ／分であった。各サンプルを１７分間流したところ、ＶＡＮ−１０−４が約１４分間で溶離した。ＮＭＲ分光法により、溶離物がＶＡＮ−１０−４であることを確認した。
実施例９：１ｋｇスケールのカレンデュラ・オフィシナリスの抽出
カレンデュラ・オフィシナリスの乾燥した花弁（１ｋｇ）を粗い粉末に粉砕し、ヘプタン（１〜４１）を用いて連続的に抽出、すなわちヘプタンを連続的に抽出物から蒸留し、花弁の塊より浸出させた。抽出物を減圧下、５００ｍｌまで濃縮し、５００ｍｌのアセトニトリル／水溶液（９：１（ｖ／ｖ））を用いて３回抽出した。ＶＡＮ含有アセトニトリル画分を組み合せ、減圧蒸留によりアセトニトリルを取り除いた。得られたオレンジ色のゴムを５００ｍｌ酢酸エチルに再溶解し、５００ｍｌの（０．１Ｍ）飽和炭酸水素ナトリウム、５００ｍｌの水、５００ｍｌの（０．１Ｍ）塩酸、最終的に５００ｍｌの水を順番に用いて洗浄した。次いで酢酸エチル溶液を減圧下で蒸留し、オレンジ色の油１０ｇを得た。
【図１】
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【図２】
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