(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
スタキボトリス属の糸状菌の培養初期に培地にアミノ酸又はアミノアルコールを添加することを特徴とする、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物（ここで、Ｒはアミノ酸の側鎖を表し、ｎは１〜１０の整数を表す）の製造法。
【化１】
0004257026.tif 000003
【請求項２】
スタキボトリス属の糸状菌がスタキボトリス・ミクロスポラ ＩＦＯ３００１８である、請求項１に記載の製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、トリプレニルフェノール骨格を有する微生物代謝産物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
トリプレニルフェノール骨格を有する微生物代謝産物のいくつかは重要な生理作用を持つ。例えば、Ｋ−７６は補体活性を阻害し、スタキボシンはエンドセリン拮抗作用を示し、ＳＭＴＰはプラスミノゲン活性化を促進する。これらのトリプレニルフェノールは糸状菌により、数多くの類似体と共に生産される。そのため、比較的収量が悪く、かつ精製に多くのクロマトグラフィー操作を要し、大量の標品を得ることが困難である。また、これらの化合物の、血栓症の治療と予防における使用は知られていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、糸状菌によるトリプレニルフェノールの短時間での選択的生産方法を確立し、大量の精製標品を提供すること、およびこれらの化合物の薬剤としての使用である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
請求項１に記載の一般式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物を選択的に生産するため、種々の生産糸状菌、培地組成、培養温度、培養時間、通気攪拌条件等を検討した結果、最適条件を選択し、本発明の完成に至った。
すなわち、好ましい生産菌としては、スタキボトリス属の糸状菌が選択された。特に好ましい生産菌はスタキボトリス・ミクロスポラＩＦＯ３００１８株であるが、本発明は、この菌に限定されるものではない。基本培地は、以下組成を示すＡ培地が好ましいが、本発明はこの組成の培地に限定されるものではない。Ａ培地：グルコース２０ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス３ｇ、リン酸二カリウム３ｇ、硫酸マグネシウム７水和物１ｇを１リットルの精製水に溶解し、塩酸あるいは水酸化ナトリウムでｐＨを５．５に調整する。培地組成で最も重要な点は、生産する化合物に応じて適当なアミノ酸あるいはアミノアルコールを培地に添加することである。すなわち、一般式（Ｉ）で示される化合物においては、以下の一般式（ＩＶ）で示される化合物を、一般式（ＩＩ）で示される化合物においては、以下の一般式（Ｖ）で示される化合物を、一般式（ＩＩＩ）で示される化合物においては、以下の一般式（ＶＩ）で示される化合物を添加する。ただし、一般式（Ｉ）
0004257026.tif 000002
と一般式（ＩＶ）のＲは同一であり、一般式（ＩＩＩ）と一般式（ＶＩ）のｎは同一である。例えば、ＳＭＴＰ−６（一般式（Ｉ）でＲがトリプトファンの側鎖で選択される化合物）の選択的生産にはトリプトファンを、ＳＭＴＰ−７（一般式（ＩＩＩ）でｎ＝３で選択される化合物）の選択的生産にはオルニチンを添加する。アミノ酸あるいはアミノアルコールの添加濃度は、０．５から２ｍｇ／ｍｌが望ましいが、本発明はこの濃度に限定されるものではない。アミノ酸あるいはアミノアルコールの添加時期は、培養直後から培養３日目までが理想的である。培養５日目以降の添加では生産量は激減する。培養温度は２５℃が最適であるが、この温度に限定されるものではない。培養時間は、アミノ酸あるいはアミノアルコール添加後３から６日で充分な生産量が得られる。通気攪拌条件は、５００ｍｌ容の三角フラスコに１００ｍｌのＡ培地を入れ、適当なつ通気栓をした場合、１８０ｒｐｍの旋回培養で得られる条件が適当である。ジャーファーメンターを用いる場合、これに相当する条件が望ましい。
本発明の方法により、極めて多様なトリプレニルフェノール化合物の一群を生産できる。この化合物ライブラリーを利用して、有効なプラスミノゲン活性化促進作用を有する化合物を同定することが可能である。例えば、トリプトファン添加培養で生産されるＳＭＴＰ−６（一般式（Ｉ）でＲがの側鎖で選択される化合物）やオルニチン添加培養で生産されるＳＭＴＰ−７（一般式（ＩＩＩ）で、ｎ＝３で選択される化合物）は強いプラスミノゲン活性化促進作用を持つ。これらの化合物は血栓の溶解を促進し、血栓症の予防と治療に有用である。これらの化合物を血栓症の予防及び治療薬として用いる場合には、遊離形態、酸付加塩等の塩やそれらの任意の水和物を用いることができる。これら化合物を成分とする薬剤は投与形態は経口的あるいは非経口的に投与でき、経口投与に適する製剤の例としては、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤またはシロップ剤等を挙げることができ、非経口投与に適する製剤の例としては、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、貼付剤等を挙げることができる。これら化合物を成分とする薬剤の投与量は特に制限されないが、投与形態、年齢、体重、症状に応じて適宜選択すればよい。例えば静脈内投与の場合には、成人１日当り有効成分量として０．１から５ｍｇ／ｋｇの投与、経口投与の場合には、成人１日当り有効成分量として１から５０ｍｇ／ｋｇの投与が望ましい。投与期間は、年齢、症状に応じて任意に定めることができる。
【０００５】
【発明の実施の形態】
本発明実施の最も望ましい形態の１つとしては、生産菌としてスタキボトリス・ミクロスポラＩＦＯ３００１８株を、１ｍｇ／ｍｌの適当なアミノ酸あるいはアミノアルコールを添加した１００ｍｌのＡ培地を含む５００ｍｌ容三角フラスコに接種して２５℃で４〜６日間培養することが挙げられる。このように培養した培養液中には、目的の構造のトリプレニルフェノールが１００μｇ／ｍｌ以上蓄積する。一方、従来の生産方法において問題となっていた類似物質の生産量は、その１０分の１から１００分の１以下であり、目的化合物の精製・単離は極めて容易となる。これらの化合物の中から選択される化合物は、プラスミノゲン活性化を促進し、血栓症の予防及び治療薬として使用できる。薬剤としての利用の一般的な形態の１つとしては経口投与が挙げられ、この場合、成人１日当り有効成分量として１０ｍｇ／ｋｇの投与が適当である。
【０００６】
【実施例】
以下に本発明の実施例を具体的に説明する。
【０００７】
実施例１：一般式（Ｉ）においてＲがトリプトファンの側鎖で選択される化合物ＳＭＴＰ−６の生産と単離
スタキボトリス・ミクロスポラＩＦＯ３００１８株を、１ｍｇ／ｍｌのトリプトファンを添加した１００ｍｌのＡ培地を含む５００ｍｌ容三角フラスコに接種して、２５℃で４日間培養した。この培養濾液中には、ＳＭＴＰ−６が８７５μｇ／ｍｌ蓄積した。培養濾液２．７リットルのｐＨを３に塩酸で調整後、メチルエチルケトン２．７リットルを加えＳＭＴＰ−６を抽出した。この溶媒抽出液を濃縮乾固して３．７２ｇの乾固物を得た。シリカゲルクロマトグラフィーでこの乾固物を精製して、ヘキサン−酢酸エチル（２：８）溶出画分に、５１４ｍｇの精製ＳＭＴＰ−６を得た。
【０００８】
実施例２：一般式（ＩＩＩ）においてｎ＝４で選択される化合物ＳＭＴＰ−８の生産と単離
スタキボトリス・ミクロスポラＩＦＯ３００１８株を、１ｍｇ／ｍｌのリジンを添加した１００ｍｌのＡ培地を含む５００ｍｌ容三角フラスコに接種して、２５℃で６日間培養した。この培養濾液中には、ＳＭＴＰ−７が２４０μｇ／ｍｌ蓄積した。培養濾液１．６リットルに酢酸エチル４リットルを加えＳＭＴＰ−８を抽出した。この溶媒抽出液を濃縮乾固して０．７５ｇの乾固物を得た。シリカゲルクロマトグラフィーでこの乾固物を精製して、酢酸エチル−メタノール（１００：０〜９０：１０）溶出画分に、１４３ｍｇの精製ＳＭＴＰ−８を得た。
【０００９】
【発明の効果】
本発明により、重要な生理活性を有する種々の構造を持つトリプレニルフェノール化合物の一群を、大量に選択的かつ簡便に生産することが可能となる。また、これらの化合物から血栓症の治療と予防に有効な化合物を選択し、それを薬剤として利用することができる。