(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物における心不整脈の治療又は予防用の医薬組成物であって、１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存的及び／又は速度依存的遮断をもたらし、ＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）が徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化及び非活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも１０倍低い化合物であって、該化合物が、
（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物；
２−（ジフェニルホスフィニルメチル）−４’−フルオロ−３，５，３’−トリメチルビフェニル；
６−（４−クロロフェニルチオ）−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；及び
２−（４−メチルフェニル）−５−メチル−３−オキソ−６−（４−メチルフェニルチオ）−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；
からなる群より選択されるピリダジノンもしくはホスフィン酸化物化合物、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物もしくは結晶形態であるものを含む医薬組成物。
【請求項２】
上室頻脈性不整脈の治療又は予防用の医薬組成物であって、１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存的及び／又は速度依存的遮断をもたらし、ＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）が徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化及び非活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも１０倍低い化合物であって、該化合物が、
（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物；
２−（ジフェニルホスフィニルメチル）−４’−フルオロ−３，５，３’−トリメチルビフェニル；
６−（４−クロロフェニルチオ）−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；及び
２−（４−メチルフェニル）−５−メチル−３−オキソ−６−（４−メチルフェニルチオ）−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；
からなる群より選択されるピリダジノンもしくはホスフィン酸化物化合物、又はその薬学的に許容し得る塩、水和物もしくは結晶形態であるものを含む医薬組成物。
【請求項３】
心房性不整脈の治療及び／又は予防用の医薬組成物であって、１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存的及び／又は速度依存的遮断をもたらし、ＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）が徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも１０倍低い化合物であって、該化合物が、
（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物；
２−（ジフェニルホスフィニルメチル）−４’−フルオロ−３，５，３’−トリメチルビフェニル；
６−（４−クロロフェニルチオ）−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；及び
２−（４−メチルフェニル）−５−メチル−３−オキソ−６−（４−メチルフェニルチオ）−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；
からなる群より選択されるピリダジノン又はホスフィン酸化物化合物、又はそれらの薬学的許容し得る塩、水和物もしくは結晶形態であるものを含む医薬組成物。
【請求項４】
心房粗動又は心房細動の治療及び／又は予防用の医薬組成物であって、１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存的及び／又は速度依存的遮断をもたらし、ＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）が徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化及び非活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも１０倍低い化合物であって該化合物が、
（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物；
２−（ジフェニルホスフィニルメチル）−４’−フルオロ−３，５，３’−トリメチルビフェニル；
６−（４−クロロフェニルチオ）−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；及び
２−（４−メチルフェニル）−５−メチル−３−オキソ−６−（４−メチルフェニルチオ）−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；
からなる群より選択されるピリダジノン又はホスフィン酸化物化合物、又はそれらの薬学的許容し得る塩、水和物もしくは結晶形態であるものを含む医薬組成物。
【請求項５】
心房細動の治療又は予防用の医薬組成物であって、１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存的及び／又は速度依存的遮断をもたらし、ＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）が徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化及び非活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも約１０倍低い化合物であって、該化合物が、
（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物；
２−（ジフェニルホスフィニルメチル）−４’−フルオロ−３，５，３’−トリメチルビフェニル；
６−（４−クロロフェニルチオ）−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；及び
２−（４−メチルフェニル）−５−メチル−３−オキソ−６−（４−メチルフェニルチオ）−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル；
からなる群より選択されるピリダジノン又はホスフィン酸化物化合物、又はそれらの薬学的許容し得る塩、水和物もしくは結晶形態であるものを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本願は、心房性不整脈の治療又は予防方法であって、ヒト心房の超高速活性化遅延整流Ｋ+電流（ultra-rapidly-activating delayed rectifier Ｋ+ current:ＩKur）を頻度依存的又は速度依存的様式で遮断するブロッカーであり、かつ速い心拍数で優先的に遮断して必要なときにその効果を実現し、又は最大化する化合物を用いる方法を開示する。
心房粗動及び／又は心房細動（ＡＦ）は臨床実務において最も一般的な持続性心不整脈であり、加齢に伴って罹患率が増加するように思われる、現在、毎年１００万人を上回る米国人がＡＦに罹患し、心血管疾患に関する全ての入院の５％超に相当し、かつ米国において毎年８０，０００件を上回る発作の原因となっている。ＡＦが致命的な不整脈であることはほとんどないが、多くの病的状態の原因であり、鬱血性心不全又は血栓塞栓症の発症のような合併症につながり得る。現在利用可能なクラスＩ及びクラスＩＩＩ抗不整脈剤はＡＦの再発率を低下させるが、心室性プロ不整脈（ｐｒｏａｒｒｈｙｔｈｍｉａ）を含む様々な潜在的な副作用のため、用途が限られる。現在の治療が不適切で副作用を伴うため、新規の治療アプローチの開発に対する要求が明らかに存在する。
様々な抗不整脈剤が現在市場で入手可能であるが、満足のいく効力及び高い安全範囲の両者を有するものは得られていない。例えば、Ｖａｕｇｈａｎ−Ｗｉｌｌｉａｍｓの分類スキーム（“Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  ｄｒｕｇｓ”，Ｃａｒｄｉａｃ  Ａｒｒｈｙｔｈｍｉａｓ，Ｅ．Ｓａｎｄｏｅ，Ｅ．Ｆｌｅｎｔｅｄ−Ｊｅｎｓｅｎ，Ｋ．Ｏｌｅｓｅｎ編；Ｓｗｅｄｅｎ，Ａｓｔｒａ，Ｓｏｄｅｒｔａｌｊｅ，ｐｐ４４９−４７２，１９８１）による、活動電位の最大上昇速度（Ｖmax）を選択的に阻害するクラスＩの抗不整脈剤は心室細動の予防には不適切である。加えて、これらには安全性に関する問題があり、すなわち、これらは心筋の収縮を抑制し、かつ興奮伝導の阻害により不整脈を誘発する傾向を有する。それぞれクラスＩＩ及びＩＶに属するβ−アドレナリン作動性受容体ブロッカー及びカルシウムチャンネル（ＩCa）アンタゴニストは、それらの効果が特定の型の不整脈に限定されるか、又は特定の心血管疾患患者におけるそれらの心臓抑制特性のために禁忌であるという欠点を有する。しかしながら、それらの安全性はクラスＩの抗不整脈剤よりは高い。
クラスＩＩＩの抗不整脈剤は、最大上昇速度（Ｖmax）を大きく抑制することなく活動電位の持続時間（ＡＰＤ）を選択的に長期化する薬物である。このクラスの利用可能な薬物は数が限られている。ソタロール及びアミオダロンのような例が興味深いクラスＩＩＩの特性を有することが示されている（Ｓｉｎｇｈ  Ｂ．Ｍ．，Ｖａｕｇｈａｎ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｅ．Ｍ．，“Ａ  ｔｈｉｒｄ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  ａｃｔｉｏｎ：  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ａｔｒｉａｌ  ａｎｄ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｏｎｓ  ｏｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｍｕｓｃｌｅ  ｏｆ  ＭＪ１９９９  ａｎｄ  ＡＨ３７４７”，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １９７０；３９：６７５−６８９及びＳｉｎｇｈ  Ｂ．Ｎ．，Ｖａｕｇｈａｎ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  Ｅ．Ｍ．，“Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｍｉｏｄａｒｏｎｅ，ａ  ｎｅｗ  ａｎｔｉ−ａｎｇｉｎａｌ  ｄｒｕｇ，ｏｎ  ｃａｒｄｉａｃ  ｍｕｓｃｌｅ”，Ｂｒ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １９７０；３９：６５７−６６７）が、これらは選択的クラスＩＩＩ剤ではない。ソタロールはクラスＩＩ（β−アドレナリン作動性遮断）効果をも有し、これは心臓の抑制を生じる可能性があって特定の感受性患者においては禁忌である。アミオダロンも、複数の電気生理学的作用を有するために選択的クラスＩＩＩ抗不整脈剤ではなく、副作用によって大きく制限される（Ｎａｄｅｍａｎｃｅ，Ｋ．，“Ｔｈｅ  Ａｍｉｏｄａｒｏｎｅ  Ｏｄｅｓｓｅｙ”，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９２；２０：１０６３−１０６５）。このクラスの薬物は心室細動の予防において有効であるものと期待される。選択的クラスＩＩＩ剤は、定義によると、クラスＩ抗不整脈剤で見られるような活動電位の伝導を阻害することによる心筋の抑制又は不整脈の誘発を生じるとは見なされていない。
クラスＩＩＩ剤は、心臓の活動電位持続時間（ＡＰＤ）を長期化することにより心筋不応性を増加させる。理論的には、心臓活動電位の長期化は、内向き電流（すなわち、Ｎａ+又はＣａ2+流；以下、それぞれ、ＩNa及びＩCa）を高めることにより、又は外向きの再分極カリウムＫ+流を減少させることにより達成することができる。遅延整流（Ｉk）Ｋ+流は活動電流が平坦である期間の全再分極プロセスに関与する主な外向き電流であり、それに対して、一過性の外向き（Ｉto）及び内向き整流（ＩK1）Ｋ+流はそれぞれ再分極の急速初期及び終末相の原因である。細胞の電気生理学的研究により、ＩKが薬理学的及び動力学的に異なる２つのＫ+流サブタイプ、ＩKr（急速に活性化及び非活性化）及びＩKs（徐々に活性化及び非活性化）からなることが示されている。（Ｓａｎｇｕｉｎｅｔｔｉ及びＪｕｒｋｉｅｗｉｃｚ，“Ｔｗｏ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｒｅｃｔｉｆｉｅｒ  Ｋ＋  ｃｕｒｒｅｎｔ．  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｂｌｏｃｋ  ｂｙ  Ｃｌａｓｓ  ＩＩＩ  ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  ａｇｅｎｔｓ”，Ｊ  Ｇｅｎ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  １９９０，９６：１９５−２１５）。
ｄ−ソタロール、ドフェチリド（ｄｏｆｅｔｉｌｉｄｅ）（ＵＫ−６８，７９８）、アルモカラント（ａｌｍｏｋａｌａｎｔ）（Ｈ２３４／０９）、Ｅ−４０３１及びメタンスルホンアミド−Ｎ−［１’−６−シアノ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフタレニル）−３，４−ジヒドロ−４−ヒドロキシスピロ［２Ｈ−１−ベンゾピラン−２，４’−ピペリジン］−６−イル］、（＋）−、一塩化物（ＭＫ−４９９）を含む現在開発中のクラスＩＩＩ抗不整脈剤は、排他的でない場合には主として、ＩKrを遮断する。とは言うものの、アミオダロンはＩKsのブロッカーであり（Ｂａｌｓｅｒ  Ｊ．Ｒ．Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｐ．Ｂ．，Ｈｏｎｄｅｇｈｅｍ，Ｌ．Ｍ．及びＲｏｄｅｎ，Ｄ．Ｍ．“Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｉｍｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｕｔｗａｒｄ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｉｎ  ｇｕｉｎｅａ  ｐｉｇ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｍｙｏｃｙｔｅｓ：Ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｑｕｉｎｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  ａｍｉｏｄａｒｏｎｅ”，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．１９９１，６９：５１９−５２９）、ＩNa及びＩCaも遮断し、甲状腺機能を果たし、非特異的アドレナリン作動性ブロッカーと同様であり、酵素ホスホリパーゼの阻害剤として作用する（Ｎａｄｅｍａｎｅｅ，Ｋ．“Ｔｈｅ  Ａｍｉｏｄａｒｏｎｅ  Ｏｄｅｓｓｅｙ”，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９２；２０：１０６３−１０６５）。したがって、不整脈を治療するその方法は不明である。
回帰性興奮（興奮旋回）は、ヒトの上室性不整脈の基層をなす重要な機構であることが示されている。回帰性興奮は、複数の興奮旋回を開始させて維持し、同時に共存させてＡＦを持続させるため、遅い伝導速度と十分に簡潔な不応期間との臨界バランスを必要とする。ＡＰＤを長期化することによって心筋の不応性を増加させることは興奮回帰性不整脈を予防し、及び／又は終了させる。ｄ−ソタロール及びドフェチリドのような現在開発中の最も選択的なクラスＩＩＩ抗不整脈剤は、排他的でない場合には主として、ＩKr、ヒトの心房及び心室の両者に見出されるＩKの急速活性化成分を遮断する。
これらのＩKrブロッカーは伝導それ自体には影響を及ぼすことなく心房及び心室の両者におけるＡＰＤ及び不応性を増加させるため、理論的には、これらはＡＦのような不整脈を治療するための潜在的に有用な薬剤を代表する。これらの薬剤は、ゆっくりとした心拍でのプロ不整脈の危険性が高まっているという障害を有する。例えば、これらの化合物を用いた場合、トーサデス・デ・ポインテス（ｔｏｒｓａｄｅｓ  ｄｅ  ｐｏｉｎｔｅｓ）、すなわち、通常心電図のＱＴ間隔の過剰の長期化に関係付けられ、したがって“後天性ＱＴ延長症候群（ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｌｏｎｇ  ＱＴ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）”と呼ばれる特定の型の多型心室性頻脈が観察されている（Ｒｏｄｅｎ，Ｄ．Ｍ．“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ  ｏｆ  Ｃｌａｓｓ  ＩＩＩ  Ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ａｍ  Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ，１９９３；７２：４４Ｂ−４９Ｂ）。このゆっくりした心拍で拡大する効果は“逆頻度依存性”と呼ばれ、頻度非依存性もしくは頻度依存性作用とは対照的である（Ｈｏｎｄｅｇｈｅｍ，Ｌ．Ｍ．，“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｌａｓｓ  ＩＩＩ  Ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  Ａｇｅｎｔｓ”，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｃａｒｄｉｏｌ．２０（Ｓｕｐｐｌｅ．２）：Ｓ１７−Ｓ２２）。
遅延整流（ＩKs）のゆっくりと活性化する成分は、心室性不整脈に関連するＩKrブロッカーの制限の幾つかを潜在的に克服する。しかしながら、そのゆっくりとした活性化の動態のため、心房再分極化におけるＩKsの役割は心房の比較的短いＡＰＤのために制限される可能性がある。したがって、心室性不整脈の場合にＩKsブロッカーが異なる利点をもたらす可能性があるものの、上室頻脈性不整脈（ＳＶＴ）に影響を及ぼすそれらの能力は最少であるものと考えられる。
大部分の現在利用可能なクラスＩＩＩ抗不整脈剤の別の主な欠点又は制限は、徐脈もしくはゆっくりとした心拍で、又はその間にそれらの効果が増大し、又は顕著になり、これがそれらのプロ不整脈に対する潜在性に寄与することである。他方、頻脈又はこれらの薬剤もしくは薬物が意図し、かつ最も必要とされる状態の間、それらはその効果の大部分を失う。この速い心拍での効果の喪失又は減少は“逆頻度依存性”（Ｈｏｎｄｅｇｈｅｍ及びＳｎｙｄｅｒｓ，“Ｃｌａｓｓ  ＩＩＩ  ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｈａｖｅ  ａ  ｌｏｔ  ｏｆ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｂｕｔ  ａ  ｌｏｎｇ  ｗａｙ  ｔｏ  ｇｏ：  Ｒｅｄｕｅｃｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ  ａｎｄ  ｄａｎｇｅｒｓ  ｏｆ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｕｓｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ”，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ（１９９０），８１：６８６−６９０；  Ｓａｄａｎａｇａら，“Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＱＲＳ  ｐｒｏｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｕｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＱＴ  ｐｒｏｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌａｓｓ  ＩＩＩ  ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｖａｌｕｅ  ｉｎ  ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  ｅｆｆｉｃａｃｙ”，Ａｍｅｒ  Ｈｅａｒｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ（１９９３）１２６：１１４−１２１）又は“逆速度依存性”（Ｂｒｅｔａｎｏ，“Ｒａｔｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｌａｓｓ  ＩＩＩ  ａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｅａｒｔ”，Ｆｕｎｄａｍ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（１９９３）７：５１−５９；  Ｊｕｒｋｉｅｗｉｃｚ及びＳａｎｇｕｉｎｅｔｔｉ，“Ｒａｔｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｐｒｏｌｏｎｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ａｃｔｉｏｎ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ  ｂｙ  ａ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｎｉｌｉｄｅ  ｃｌａｓｓ  ＩＩＩ  ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  ａｇｅｎｔ：  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｌｏｃｋ  ｏｆ  ｒａｐｉｄｌｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｒｅｃｔｉｆｉｅｒ  Ｋ＋  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｂｙ  ｄｏｆｅｔｉｌｉｄｅ”，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ（１９９３）７２：７５−８３）と呼ばれている。したがって、大部分の現在のクラスＩＩＩ抗不整脈剤が有するものとは対照的に頻度依存性もしくは速度依存性プロフィールを有する薬剤は、安全性が改善されているだけではなく、効力が高められているはずである。
無傷のヒト心房筋細胞においては、持続性の外向き電流Ｉsus又はＩsoとしても知られる超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）が同定されている。この電流は、ヒトの心臓から単離され、かつヒト（ＨＥＫ−２９３）細胞系において安定に発現された場合、ヒトＫ+チャンネルクローン（ｈＫｖ１．５、ＨＫ２）によって示されるものに等しい特性及び動態を有し（Ｗａｎｇら，“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｏｕｔｗａｒｄ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｉｎｈｕｍａｎ  ａｔｒｉａｌ  ｍｙｏｃｙｔｅｓ．  Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｒｅｃｔｉｆｉｅｒ  Ｋ＋  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｓｉｍｉｌａｒ  ｔｏ  Ｋｖ１．５  ｃｌｏｎｅｄ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｃｕｒｒｅｎｔｓ”，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．１９９３；７３：１０６１−１０７６；Ｆｅｄｉｄａら，“Ｉｄｅｎｔｉｔｙ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｄｅｌｙｅｄ  ｒｅｃｔｉｆｉｅｒ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｈｅａｒｔ  ｗｉｔｈ  ａ  ｃｌｏｎｅｄ  Ｋ＋  ｃｈａｎｎｅｌ  ｃｕｒｒｅｎｔ”，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．１９９３，７３：２１０−２１６；  Ｓｎｙｄｅｒｓら，“Ａ  ｒａｐｉｄｌｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｌｏｗｌｙ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｃｌｏｎｅｄ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｈｅａｒｔ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｆｔｅｒ  ｓｔａｂｌｅ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ”，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９３，１０１：５１３−５４３）、元来はラットの脳からクローン化されている（Ｓｗａｎｓｏｎら，“Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃＤＮＡ  ａｎｄ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ｃｌｏｎｅｓ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｔｈｒｅｅ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｒｅｃｔｉｆｉｅｒ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌｓ  ｉｎ  ｒａｔ  ｂｒａｉｎ”，Ｎｅｕｒｏｎ  １９９０，４：９２９−９３９）。
この超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）は、Ｋｖ１．５と命名されたクローン化カリウムチャンネルに対する天然の対応物に相当するものと信じられ、ヒト心房には存在するものの、ヒト心室には存在しないものと思われる。さらに、その活性化の迅速性及び制限されたゆっくりとした不活性化のため、ＩKurはヒト心房における再分極に大きく寄与するものと信じられる。したがって、ＩKurは遮断するが心臓の他のＫ+チャンネルに対してはほとんど、もしくは全く効果がない化合物であるＩKurの特異的ブロッカーは、他の現在用いられ、又は開発されている薬剤の欠点及び不利な点を克服するであろう。心室の再分極を遅延させることなく、ヒトの心房において選択的に再分極を遅延させ、かつ不応性を長期化させることにより、選択的ＩKurブロッカーは脱分極及び現在のクラスＩＩＩ薬物での治療の間に観察される後天性ＱＴ延長症候群の後に不整脈を発生させることがないであろう。
ここで提示される心房性不整脈の治療方法はより高い安全性及び効力を提供し、その上、速い心拍での治療を、この型の治療が最も望ましい場合に、ＩKurの“頻度依存性（use-dependent）”及び／又は“速度依存性（rate-dependent）”遮断により優先的に提供する。
発明の概要
上室頻脈性不整脈を治療又は予防する方法であって、ヒト心房の超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）を頻度依存性及び／又は速度依存性の様式で遮断し、かつ速い心拍で優先的に遮断して必要なときにそれらの効果を第一に実現し、又は最大化する化合物の使用を包含する方法が開示される。
加えて、ヒト心房の超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）を頻度依存性及び／又は速度依存性の様式で遮断し、かつ高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKr）、徐活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKs）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1、の遮断の少なくとも約１０倍の選択率を有する化合物が心房対心室不応性期間を優先的かつ選択的に長期化することが見出されている。
特には、約１μＭ以下の濃度で頻度依存的及び／又は速度依存的遮断を示す化合物による超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の遮断を包含する、哺乳類動物における心不整脈の治療又は予防方法が提示される。
より具体的には、約１μＭ以下の濃度で頻度依存的及び／又は速度依存的遮断を示す化合物による超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の遮断を包含する、哺乳類動物における心不整脈の治療又は予防方法が提示され、ＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）は徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化及び非活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも約１０倍低い。
これらの治療又は予防方法を例証する化合物の中にあるのはピリダジノン及びホスフィン酸化物並びにそれらの誘導体であり、これらは頻度依存的及び／又は速度依存的遮断を示し、かつ高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKr）、徐活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKs）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を大きく上回る選択性でヒト心房の超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）を選択的に遮断し、したがって心不整脈の治療において有効である。
発明の詳細な説明
上室頻脈性不整脈の治療又は予防方法であって、約１μＭ以下の濃度でヒト心房の超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存的及び／又は速度依存的遮断を示す化合物の使用を包含する方法が開示される。
より具体的には、頻度依存的及び／又は速度依存的遮断を示し、かつ約１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）を選択的に遮断する化合物の使用を包含する上室頻脈性不整脈の治療又は予防法法が開示され、ＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）は徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化及び非活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも約１０倍低い。
加えて、哺乳類動物における心不整脈の治療又は予防方法であって、約１μＭ以下の濃度でヒト心房の超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存的及び／又は速度依存的遮断を示す化合物の使用を包含する方法が提示される。
より具体的には、約１μＭ以下の濃度で頻度依存的及び／又は速度依存的遮断を示す化合物による超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の遮断を包含する、哺乳類動物における心不整脈の治療又は予防方法が提示され、ＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）は徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化及び非活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも約１０倍低い。
“超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKs）の遮断”が意味するところは、以下に“イン・ビトロでのイオン流の電位固定測定”、Ｂ項に定義される条件を用いる単離されたヒト心房筋細胞における測定での、時間依存性の正味の外向き電流の減少である。
“ＩKurの選択的遮断”が意味するところは、約１μＭ以下の濃度で単離されたヒト心房筋細胞において測定されるＩKur電流を５０％遮断する（ＩＣ50として定義される）化合物であり、このＩKurを５０％遮断する濃度はＩKs及び／又はＩKr及び／又はＩK1の５０％遮断を生じるのに要する濃度より少なくとも約１０倍低い。
ここで用いられる場合、“治療（ｔｒｅａｔｉｎｇ）”又は“治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）”という用語は、標的である状態、すなわち、上室頻脈性不整脈、心不整脈、心房粗動、心房不整脈及び／又は心房細動の重篤性の終止及び／又は低減を指す。
“頻度依存性遮断”が意味するところは、外向きＫ+流の遮断が使用に伴って、又は心臓細胞の反復脱分極の間に増加することである。したがって、外向きＫ+流の“頻度依存性遮断”は、パルスの連続もしくは列の状態の連続的な脱分極の各々又は所定の割合もしくは頻度で誘導される脱分極に従って次第に大きな程度で生じる遮断である。例えば、約１Ｈｚの頻度での約１０回の脱分極の連続の間、遮断の量がその連続の第１パルスよりも第１０パルスについて大きい場合、その遮断は“頻度依存性”である。“速度依存性”遮断が意味するところは、外向きＫ+流の遮断がより速い脱分極速度又は心拍でより大きい程度に、又は優先的に生じることである。例えば、約１及び約３Ｈｚの頻度で誘導される約１０秒の長さの脱分極の連続の間、その１０秒の連続の最後のパルスの間の電流の遮断の量が約１Ｈｚよりも約３Ｈｚで大きい場合にその遮断は“速度依存性”である。化合物は“頻度依存性”及び“速度依存性”遮断の両者を示してもよい。
頻度依存性及び／又は速度依存性遮断は、心房頻脈性不整脈の治療に提唱される外向きＫ+流のブロッカーの重要かつ望ましい特性である。理想的な薬剤は高速時に排他的に、又は優先的に遮断し、それにより必要なときにのみその効果を発揮する。これは、外向きＫ+流の遮断は速い心拍で必要とされ、それに対してゆっくりとした、又は正常な心拍での遮断は不必要であって、望ましくない副作用を誘発する可能性があるためである。
“ヒト心房の超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKru）を、高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKr）、徐活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKs）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1より高い選択性で選択的に遮断する”が意味するところは、ヒト心房の超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）を、この流れ及び高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKr）、徐活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKs）もしくは内向き整流Ｋ+流、ＩK1のいずれか、もしくは全てが遮断されたときに生じる副作用を低減するのに必要とされる特異性をもって遮断する特定の化合物の能力に本発明の方法が依存することである。すなわち、本発明の利点は、上室頻脈性不整脈の優れた治療だけではなく、より特異性の劣る、又は他の治療方法の結果生じる副作用の低減にもある。
本発明の別の態様において、心房不整脈の治療及び／又は予防方法であって、約１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存性及び／又は速度依存性遮断をもたらす化合物の投与を包含する方法が提示される。
本発明のさらなる態様において、心房不整脈の治療及び／又は予防方法であって、約１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存性及び／又は速度依存性遮断をもたらす化合物の投与を包含する方法が提示され、このＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）は徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも約１０倍低い。
本発明の別の態様において、心房粗動又は心房細動の治療及び／又は予防方法であって、約１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存性及び／又は速度依存性遮断をもたらす化合物の投与を包含する方法が提示される。
本発明のさらなる態様において、心房粗動又は心房細動の治療及び／又は予防方法であって、約１μＭ以下の濃度で超高速活性化遅延整流Ｋ+流（ＩKur）の頻度依存性及び／又は速度依存性遮断をもたらす化合物の投与を包含する方法が開示され、このＩKurを５０％遮断する濃度（ＩＣ50）は徐活性化遅延整流カリウムＫ+流（ＩKs）、高速活性化及び非活性化遅延整流カリウム流（ＩKr）又は内向き整流Ｋ+流、ＩK1を遮断する濃度より少なくとも約１０倍低い。
これらの治療又は予防方法を例証する化合物の中には、下記式Ｉで示されるもののようなピリダジノン又はそれらの薬学的に許容し得る塩、水和物又は結晶形態がある。
0004227198.tif 000002
ここで、
Ｒ1及びＲ2は以下から選択され：
（１）アリール、ここでアリールは各環に７つまでの構成要素を有する安定な単環式もしくは二環式炭素環であって、少なくとも１つの環が芳香族であるものと定義され、
（２）３つまでの置換基Ｘ、Ｙ、及びＺが存在していてもよい置換アリールであって、ここでＸ、Ｙ及びＺは以下から独立に選択され：
（ａ）水素
（ｂ）無置換であるか、又は以下から選択される１つ以上の置換基で置換されているＣ1-10アルキル：
（ｉ）アリール、
（ｉｉ）置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である置換アリール、
（ｉｉｉ）ヘテロアリール、ここでヘテロアリールは各環に７つまでの構成要素を有する安定な単環式もしくは二環式炭素環であって、少なくとも１つの環が芳香族であり、かつ１ないし４個の炭素原子がＮ、Ｏ及びＳからなる群より選択されるヘテロ原子で置換されているものと定義され、
（ｉｖ）置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である置換ヘテロアリール、
（ｖ）アリール上の置換基がＸ’Ｙ’、及びＺ’である無置換又は置換アリールオキシ、
（ｖｉ）アリール上の置換基がＸ’Ｙ’、及びＺ’である無置換又は置換ヘテロアリールオキシ、
（ｖｉｉ）Ｃ1-6アルコキシ、
（ｖｉｉｉ）−ＯＣＯＣ1-6アルキル、
（ｉｘ）−ＯＣＯ2Ｃ1-6アルキル、
（ｘ）−ＮＯ2、
（ｘｉ）Ｒ3及びＲ4が独立に以下から選択される−ＮＲ3Ｒ4：
（ａ’）水素、
（ｂ’）無置換の、もしくは以下から選択される１つ以上の置換基で置換されているＣ1-6アルキル：
（ｉ’）無置換の、もしくはＸ’、Ｙ’及びＺ’で置換されているアリール、
（ｉｉ’）無置換の、もしくはＸ’、Ｙ’及びＺ’で置換されているヘテロアリール、
（ｉｉｉ’）−ＯＨ、
（ｉｖ’）−ＯＲ5、
（ｖ’）−Ｃ1-6アルコキシ、
（ｖｉ’）−ＣＯ2Ｈ、
（ｖｉｉ’）オキソ、
（ｖｉｉｉ’）−Ｃ3-7シクロアルキル、
（ｉｘ’）−Ｃ1-6アルキル−ＯＨ、
（ｘ’）−Ｃ1-6アルキル−ＯＲ5、
（ｃ’）又は、Ｒ3及びＲ4並びにそれらが結合するＮは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）p、ＮＲ6からなるものから独立に選択される１つもしくは２つのさらなるヘテロ原子を含んでいてもよい無置換又は置換３ないし７員複素環を形成していてもよく、ここでＲ6は水素もしくはＣ1-6アルキルであり、かつｐは０、１もしくは２であり；例えば、モルホリン、チオモルホリン、ピペリジン又はピペリジンであり、
（ｘｉｉ）−ＮＲ3ＣＯＣ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｘｉｉｉ）−ＮＲ3ＣＯ2Ｃ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｘｉｖ）−ＮＲ3ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｖ）−ＯＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｖｉ）−ＣＨＯ、
（ｘｖｉｉ）−ＣＯ2Ｈ、
（ｘｖｉｉｉ）−ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｉｘ）−ＯＨ、
（ｘｘ）−ＯＲ5、
（ｘｘｉ）−ＯＣ1-6アルキルＯＨ、
（ｘｘｉｉ）−ＯＣ1-6アルキルＯＲ5、
（ｘｘｉｉｉ）オキソ、
（ｃ）アルキル炭素の１つ以上が−ＮＲ3−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）p−、−ＣＯ2−、−Ｏ2Ｃ−、−ＣＯＮＲ3−、−ＮＲ3ＣＯ−、−ＮＲ3ＣＯＮＲ4−、−ＣＨ（ＯＨ）−、アルケニル又はアルキニルから選択される基によって置換され、該アルキルは無置換であっても以下のものから選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよいＣ1-10アルキル：
（ｉ）アリール、
（ｉｉ）置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である置換アリール、
（ｉｉｉ）ヘテロアリール、
（ｉｖ）置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である置換ヘテロアリール、
（ｖ）アリール上の置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である無置換もしくは置換アリールオキシ、
（ｖｉ）アリール上の置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である無置換もしくは置換ヘテロアリールオキシ、
（ｖｉｉ）Ｃ1-6アルコキシ、
（ｖｉｉｉ）−ＯＣＯＣ1-6アルキル、
（ｉｘ）−ＯＣＯ2Ｃ1-6アルキル、
（ｘ）−ＮＯ2、
（ｘｉ）Ｒ3及びＲ4が上に定義されている−ＮＲ3Ｒ4、
（ｘｉｉ）−ＮＲ3ＣＯＣ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｘｉｉｉ）−ＮＲ3ＣＯ2Ｃ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｘｉｖ）−ＮＲ3ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｖ）−ＯＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｖｉ）−ＣＨＯ、
（ｘｖｉｉ）−ＣＯ2Ｈ、
（ｘｖｉｉｉ）−ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｉｘ）−ＯＨ、
（ｘｘ）−ＯＲ5、
（ｘｘｉ）−ＯＣ1-6アルキルＯＨ、
（ｘｘｉｉ）−ＯＣ1-6アルキルＯＲ5、
（ｘｘｉｉｉ）オキソ、
（ｄ）無置換であるか、又は以下から選択される１つ以上の置換基で置換されているＣ1-10アルコキシ：
（ｉ）アリール、
（ｉｉ）置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である置換アリール、
（ｉｉｉ）ヘテロアリール、
（ｉｖ）置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である置換ヘテロアリール、
（ｖ）アリール上の置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である無置換もしくは置換アリールオキシ、
（ｖｉ）アリール上の置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である無置換もしくは置換ヘテロアリールオキシ、
（ｖｉｉ）Ｃ1-6アルコキシ、
（ｖｉｉｉ）−ＯＣＯＣ1-6アルキル、
（ｉｘ）−ＯＣＯ2Ｃ1-6アルキル、
（ｘ）−ＮＯ2、
（ｘｉ）Ｒ3及びＲ4が上に定義されている−ＮＲ3Ｒ4、
（ｘｉｉ）−ＮＲ3ＣＯＣ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｘｉｉｉ）−ＮＲ3ＣＯ2Ｃ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｘｉｖ）−ＮＲ3ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｖ）−ＯＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｖｉ）−ＣＨＯ、
（ｘｖｉｉ）−ＣＯ2Ｈ、
（ｘｖｉｉｉ）−ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｉｘ）−ＯＨ、
（ｘｘ）−ＯＲ5、
（ｘｘｉ）−ＯＣ1-6アルキルＯＨ、
（ｘｘｉｉ）−ＯＣ1-6アルキルＯＲ5、
（ｘｘｉｉｉ）オキソ、
（ｅ）アルキル炭素の１つ以上が−ＮＲ3−、−Ｏ−、−Ｓ（Ｏ）p−、−ＣＯ2−、−Ｏ2Ｃ−、−ＣＯＮＲ3−、−ＮＲ3ＣＯ−、−ＮＲ3ＣＯＮＲ4−、−ＣＨ（ＯＨ）−、アルケニル又はアルキニルから選択される基によって置換され、該アルキルは無置換であっても以下のものから選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよいＣ1-10アルキル：
（ｉ）アリール、
（ｉｉ）置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である置換アリール、
（ｉｉｉ）ヘテロアリール、
（ｉｖ）置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である置換ヘテロアリール、
（ｖ）アリール上の置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である無置換もしくは置換アリールオキシ、
（ｖｉ）アリール上の置換基がＸ’、Ｙ’及びＺ’である無置換もしくは置換ヘテロアリールオキシ、
（ｖｉｉ）Ｃ1-6アルコキシ、
（ｖｉｉｉ）−ＯＣＯＣ1-6アルキル、
（ｉｘ）−ＯＣＯ2Ｃ1-6アルキル、
（ｘ）−ＮＯ2、
（ｘｉ）Ｒ3及びＲ4が上に定義されている−ＮＲ3Ｒ4、
（ｘｉｉ）−ＮＲ3ＣＯＣ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｘｉｉｉ）−ＮＲ3ＣＯ2Ｃ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｘｉｖ）−ＮＲ3ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｖ）−ＯＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｖｉ）−ＣＨＯ、
（ｘｖｉｉ）−ＣＯ2Ｈ、
（ｘｖｉｉｉ）−ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｘｉｘ）−ＯＨ、
（ｘｘ）−ＯＲ5、
（ｘｘｉ）−ＯＣ1-6アルキルＯＨ、
（ｘｘｉｉ）−ＯＣ1-6アルキルＯＲ5、
（ｘｘｉｉｉ）オキソ、
（ｆ）アリール、
（ｇ）置換基がＸ’、Ｙ’又はＺ’である置換アリール、
（ｈ）アリールオキシ、
（ｉ）置換基がＸ’、Ｙ’又はＺ’である置換アリールオキシ、
（ｊ）ハロゲン、
（ｋ）−ＮＯ2、
（ｌ）Ｒ3及びＲ4が上に定義される−ＮＲ3Ｒ4、
（ｍ）−ＮＲ3ＣＯＣ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｎ）−ＮＲ3ＣＯ2Ｃ1-6アルキル−Ｒ4、
（ｏ）−ＮＲ3ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｐ）−ＯＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｑ）−ＣＮ、
（ｒ）−ＣＨＯ、
（ｓ）−ＣＯ2Ｈ、
（ｔ）−ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｕ）−ＣＦ3、
（ｖ）Ｒ7が水素、Ｃ1-6アルキル、トリフルオロメチル、もしくはフェニルであり、かつｐが０、１もしくは２である−Ｓ（Ｏ）pＲ7、
（ｘ）Ｒ8及びＲ9がＣ1-3アルキルであるか、又は一緒にエチルもしくはプロピル架橋を形成する−ＣＨ（ＯＲ8）（ＯＲ9）、
（ｙ）Ｒ3が上に定義され、かつｎが１もしくは２であるＲ3Ｃ（Ｏ）n−、
（ｚ）ＯＨ、
（ａ”）ＯＲ5、及び
（ｂ”）−Ｒ5；
又は、Ｘ、Ｙ及びＺのうちのいずれか２つが結合して５、６もしくは７個の環原子を有する飽和環を形成してもよく、該環原子は１つもしくは２つの酸素原子を含み、残りの環原子は炭素であり、例えば、ジオキソラニル又はジオキサニルであり；
Ｘ’、Ｙ’及びＺ’は以下のものから独立に選択され：
（ａ）水素、
（ｂ）Ｃ1-6アルキル、
（ｃ）Ｃ2-6アルケニル、
（ｄ）ハロゲン、
（ｅ）Ｒ3、Ｒ4、及びｍが上に定義される通りである−ＮＲ3Ｒ4、
（ｆ）−ＣＮ、
（ｇ）−ＣＨＯ、
（ｈ）−ＣＯ2Ｈ、
（ｉ）−ＣＯＮＲ3Ｒ4、
（ｊ）−ＣＦ3、
（ｋ）Ｒ7が水素、Ｃ1-6アルキル、トリフルオロメチル、又はフェニルであり、かつｐが０、１もしくは２である−Ｓ（Ｏ）pＲ7、
（ｌ）−ＯＨ、
（ｍ）−ＯＲ5、及び
（ｎ）−Ｒ5；
Ｒ5は以下のものから選択され：
（ａ）Ｍ+が正に帯電した無機もしくは有機対イオンである−ＰＯ（ＯＨ）Ｏ-Ｍ+、
（ｂ）−ＳＯ3-Ｍ+、
（ｃ）ｑが１−３である−ＣＯ（ＣＨ2）qＣＯ2-Ｍ+、及び
（ｄ）Ｒ6及びＲ7が上に定義される通りであり、かつアルキルが無置換であるか、又は以下のものから選択される１つ以上の置換基で置換されている−ＣＯ−Ｃ1-6アルキル−ＮＲ6Ｒ7：
（ｉ）ヒドロキシ、
（ｉｉ）Ｃ1-6アルコキシ、
（ｉｉｉ）Ｒ16及びＲ17が以下のものから独立に選択される−ＮＲ16Ｒ17：
（ａ’）水素、及び
（ｂ’）Ｃ1-6アルキル、
（ｉｖ）Ｒ6が上に定義される通りである−ＣＯＯＲ6、
（ｖ）フェニル、
（ｉｖ）置換基がＸ、Ｙ及びＺである置換フェニル、
ｖｉｉ）ヘテロアリール、
（ｖｉｉｉ）−ＳＨ、及び
（ｉｘ）−Ｓ−Ｃ1-6アルキル；
Ｍはｐが上に定義されるＳ（Ｏ）pであり；並びに
ｎは１又は２である。
これらの方法を例証するさらなる化合物は、下記式ＩＩによって示されるもののようなホスフィン酸化物又はそれらの薬学的に許容し得る塩、水和物もしくは結晶形態である。
0004227198.tif 000003
ここで、
Ｒ1aはフェニルであり；
Ｒ2aはアリールであり；
Ｒ3aは以下のものから選択され：
ａ）アリール基が無置換であっても、ハロ及びＣ1−Ｃ3アルキルから独立に選択される１つないし４つの置換基で置換されていてもよいＣ1−Ｃ6アルキル−アリール、及び
ｂ）置換基が（Ｃ1−Ｃ5アルキル）nである無置換もしくは置換ベンジル；
ｎは０、１、２、３及び４から選択される。
これらの方法を例証する具体的な化合物は：
0004227198.tif 000004
（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物、化合物“Ａ”とも呼ばれる；
0004227198.tif 000005
２−（ジフェニルホスフィニルメチル）−４’−フルオロ−３，５，３’−トリメチルビフェニル、化合物“Ｂ”とも呼ばれる；
0004227198.tif 000006
６−（４−クロロフェニルチオ）−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル、化合物“Ｃ”とも呼ばれる；及び
0004227198.tif 000007
２−（４−メチルフェニル）−５−メチル−３−オキソ−６−（４−メチルフェニルチオ）−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル、化合物“Ｄ”とも呼ばれる；
又はそれらの薬学的に許容し得る塩、水和物もしくは結晶形態である。
本発明の化合物は非対称中心を有していてもよく、ラセミ化合物、ラセミ混合物及び個々のジアステレオマーとして存在することができ、光学異性体を含む全ての可能性のある異性体が本発明に含まれる。いずれの構成要素においても可変要素（例えば、アリール、ｎ、Ｒ1a、Ｒ2等）が２回以上現れる場合、出現毎のその定義は他の全ての出現から独立している。また、置換基及び／又は可変要素の組み合わせは、そのような組み合わせが安定な化合物を生じる場合にのみ許容することができる。
ここで用いられる場合、“アルキル”は指定された数の炭素原子を有する分岐鎖及び直鎖の両者の飽和脂肪族炭化水素基を含むことが意図され；“アルコキシ”は酸素架橋を介して結合する指示された数の炭素原子を有するアルキル基を表す。ここで用いられる“ハロゲン”又は“ハロ”はフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを意味する。
ここで用いられる場合、“アリール”は、少なくとも１つの環が芳香族である、各環に７つまでの構成要素を有する安定な単環式もしくは二環式炭素環を意味することが意図されている。このようなアリール要素の例にはフェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントリル又はアセナフチルが含まれる。“アリルオキシ”という用語は、結合点が酸素部分を介するものである、上に定義されるアリール基を意味することが意図されている。
ここで用いられる場合、“ヘテロアリール”は、少なくとも１つの環が芳香族であり、かつ１ないし４個の炭素原子がＮ、Ｏ、及びＳからなる群より選択されるヘテロ原子で置換されている、各環に７つまでの構成要素を有する安定な単環式又は二環式炭素環を意味することが意図されている。このような複素環要素の例には、ベンズイミダゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾキサゾリル、クロマニル、シンノリニル、ジヒドロベンゾフリル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、スルホン、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインドリニル、インキノリニル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、キノキサリニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チエノフリル、チエノチエニル、及びチエニルが含まれるが、これらに限定されるものではない。“ヘテロアリールオキシ”という用語は、結合点が酸素部分を介するものである、上に定義されるヘテロアリール基を意味することが意図されている。
置換基から（例えば、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4等から）環系に引かれる直線は、その指示される結合が置換可能な環炭素原子のいずれにも結合可能であることを示す。
本発明の化合物の薬学的に許容し得る塩には、例えば非毒性無機もしくは有機酸から形成される、本発明の化合物の通常の非毒性塩が含まれる。例えば、このような通常の非毒性塩には、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸等から誘導されるもの：及び有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸等から調製される塩が含まれる。
本発明の化合物の薬学的に許容し得る塩は、塩基性部分を含む本発明の化合物から通常の化学的方法により合成することができる。一般には、これらの塩はイオン交換クロマトグラフィーにより、又は適切な溶媒もしくは溶媒の様々な組み合わせ中で遊離塩基を化学量論的量もしくは過剰の所望の塩形成無機もしくは有機酸と反応させることにより調製する。
本発明の化合物の生成に用いられる反応は、文献から知ることができるように、又はその実験手順において例証されるように、エステル加水分解、保護基の開裂のような他の標準操作に加えて、スキームＡ−Ｃに示される反応を用いることにより準備される。それぞれ１９９６年４月９日及び１９９７年９月２７日に発行された米国特許第５，５０６，２２８号及び第５，６７０，５０４号の開示は参照することによりここに組み込まれる。
これらの反応を直線的な配列で用いて本発明の化合物を得ることが可能であり、又はこれらを断片の合成に用い、続いてそれらをこれらのスキームに記述されるアルキル化反応により結合させることができる。
反応スキームＡ
0004227198.tif 000008
酢酸ナトリウム水溶液のような塩基の存在下における市販の３−クロロペンタン−２，４−ジオン（１）とアリールジアゾニウム塩（２）との反応により、ＳE1型機構による酢酸の喪失と共にクロロアセチルヒドロゾン（ｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｙｌｈｙｄｒｏｚｏｎｅ）誘導体（３）が得られる［Ｏｒｇ．Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  １０，１−１４２（１９５９）；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８４，１４３−１７８（１９７９）］。これらのジアゾニウム塩は、アリールアミンを塩酸のような酸中の亜硝酸ナトリウムと反応させ、又は塩化ニトロシルと直接反応させることにより都合よく調製することができる［Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２６，５１４９，２０５３（１９６１）；Ｏｒｇ．Ｓｙｎ．，４３，１２（１９６３）］。
反応スキームＢ
0004227198.tif 000009
ＤＭＦのような溶媒中で、トリエチルアミンのような塩基の存在下において、クロロアセチルヒドラゾン（３）をアリールメルカプタン（４）と反応させることによりチオエーテル（５）が得られる。その代わりに、Ｐｏｌｉｓｈ  Ｊ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６４，７４１（１９９０）に言及されるように、メルカプタンのナトリウム塩を調製し、それを（３）に添加することができる。
反応スキームＣ
0004227198.tif 000010
酢酸アンモニウムを用いるクネベナーゲル条件下で化合物（５）をシアノ酢酸エチルと反応させることによりピリダジノン類似体（６）が生成する。この型の芳香族置換は、環化を成功させるために、高温での促進条件を必要とすることがある。
上室性不整脈を治療又は予防し、洞律動を維持しようとする現在の治療には様々な問題が伴い、これには不完全もしくは乏しい効力、プロ不整脈を含む併発心室効果、死亡率の増加及び非心臓性の副作用が含まれる。より危険性の高いプロ不整脈及び他の副作用の幾つかは、現在用いられている抗不整脈剤の多くのナトリウムチャンネル遮断特性に関係するものと思われる。遅延整流Ｋ+流、ＩK（ＩKrもしくはＩKsのいずれか、又はその両者）を選択的に遮断する他の新たな薬剤が研究途上であるが、これらの薬剤は心房の不応性に選択的に影響を及ぼすわけではなく、反対に心室にも影響を及ぼし、そのため心房性不整脈を治療するために投与している間の心室性プロ不整脈の可能性を保持する。今や、約１μＭ以下の濃度で単離された筋細胞において測定されるＩKur電流の５０％（ＩＣ50）を選択的に遮断し、かつＩKs、ＩKr及びＩK1の遮断を少なくとも約１０上回る選択比を示す化合物が、現在のクラスＩＩＩ薬物での治療の間に観察される不整脈誘発性後脱分極及びＱＴ延長症候群の基礎をなす心室の再分極における遅延を生じることなく、心房における再分極を遅延させることにより不応性の長期化をもたらす治療を生じることが見出されている。
例示される化合物の抗不整脈剤としての特異性及び有用性は、ヒトＫｖ１．５を発現するＣＨＯ細胞並びにイン・ビトロでの単離ヒト心房筋細胞及びモルモット単離心室筋細胞における以下の電位固定研究により示される。
イン・ビトロでのイオン電流の電位固定測定
Ａ．ＣＨＯ細胞におけるＫｖ１．５の測定
ＣＨＯ細胞におけるＫｖ１．５の発現：
ヒト胎児心臓ライブラリーから単離されたＫｖ１．５をコードするｃＤＮＡを、ＨｉｎｄＩＩＩ−ＸｂａＩ断片としてｐｃＤＮＡ／Ｎｅｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にサブクローン化した。
ＣＨＯＫＩ細胞を２．７×１０4細胞／６０ｍｍシャーレでプレーティングし、３７℃で、５％ＣＯ2環境下において３日間インキュベートした。その後、細胞を２回洗浄し、３ｍｌのＯＰｔｉＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）で覆った。プラスミド／ＤＯＴＡＰ溶液（ＯｐｔｉＭＥＭ  １ｍｌ中に５ｍｇのｐｃＤＮＡ／Ｎｅｏ中のＫｖ１．５及び３０ｍｇのＤＯＴＡＰ形質移入試薬（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）からなる）を渦攪拌しながら各プレートに滴下により添加した。プレートを一晩インキュベートし、その培地を１０％ＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ）、１，０００Ｕ／ｍｌペニシリン、１，０００ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、及び２ｍＭグルタミン（Ｇｉｂｃｏ）を補足した５ｍｌのＦ１２（Ｇｉｂｃｏ）に交換した。さらに２日後、これらの細胞をトリプシン処理し、１００ｍｍシャーレの１ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８（Ｇｉｂｃｏ）を含む補足Ｆ１２培地に再度プレーティングした。トランスフェクトされていない細胞が死ぬまで培地を毎日交換した。個々のクローンから細胞を成長させ、86ＲＢ流出検定及び電位固定プロトコルの両者を用いてＫｖ１．５の発現について試験した。次に、最も高い発現レベルを示す系を連続希釈により再クローン化した。これらの細胞を培養状態で維持し、各実験の日に穏やかなトリプシン処理により新たに単離した。
電位固定技術：
カバーグラス上に塗布したＣＨＯ細胞を、倒立顕微鏡のステージ上に載置した１ｍｌチャンバーに入れ、以下の溶液を用いて２−３ｍｌ／分で灌流した、１３２ＮａＣｌ、４ＫＣｌ、１．２ＭｇＣｌ2、１０ＨＥＰＥＳ（正式名：Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸）、１１．１グルコース。幾つかの実験においてはＣａＣｌ2（０．５−１．８ｍＭ）が存在していたが、Ｋｖ１．５に対する効果はなかった。全ての実験は、Ｌ型Ｃａ2+チャンネルの比較的特異的なブロッカー、ニソルジピン（０．４ｍＭ−１．０ｍＭ）の存在下で実施した。パッチクランプ技術を用いて全細胞構成におけるイオン電流を記録した。２段階プラー（two stage puller）を用いて、方孔（１．０ｍｍ  ｏ．ｄ．）ホウケイ酸キャピラリー管からパッチピペットを得た。ピペットに以下の溶液（ｍＭ／Ｌ表示）を充填した：１１０Ｋ−グルコネート（１１０Ｋ−Ｇｌｕｃｏｎａｔｅ）又はＫ−アスパルテート（Ｋ−Ａｓｐａｒｔａｔｅ）、２０ＫＣｌ、５ＭｇＡＴＰ、５ＥＧＴＡ、５−１０ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２。電極は、この溶液を充填したときに３ないし１０Ｍオームの範囲をとるチップ抵抗を有していた。密封した後、穏やかに吸引することにより膜を裂開して全細胞構成を形成し、微小電極ホルダーの吸引ポートに気密管を介して接続する１ｍｌ気密シリンジを用いて、このピペットで陰圧を維持した。直列抵抗は７０−８５％補償した。アキソパッチ（Ａｘｏｐａｔｃｈ）２００Ａ増幅器（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又はリスト（Ｌｉｓｔ）ＥＰＣ−７クランプ増幅器（Ｌｉｓｔ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ）を用いて５ｋＨｚで電流をサンプリングし、１ｋＨｚでローパスフィルター処理をした。データの獲得及び分析はｐＣｌａｍｐソフトウェア（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）及びＩＢＭ互換４８６コンピュータを用いて行った。
Ｋｖ１．５発現電流の測定：
Ｋｖ１．５の電流を、−８０ｍＶの保持電位から＋４０ｍＶへの１５０ｍｓの分極試験パルスにより誘発した。試験薬剤の効果は定常段階で評価した。データを対照電流の振幅から遮断％として分析した。Ｋｖ１．５の振幅は、試験パルスの最後での時間依存性の正味の外向き電流の振幅として、保持電流レベルに対して測定した。休止状態及び頻度依存性遮断のＩＣ50は、１Ｈｚで搬送される一連の１０の連続パルスの間に、それぞれ第１及び第１０パルスから決定した。全ての実験は室温で行った（２２−２４℃）。
Ｂ．ヒト心房筋細胞におけるＩKurの測定
ヒト心房筋細胞の単離：
心肺バイパスを受けた患者より得られた右心耳の検体から、Ｆｅｒｍｉｎｉ  Ｂ、Ｗａｎｇ  Ｚ、Ｄｕａｎ  Ｄ及びＮａｔｔｅｌ  Ｓ．、“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｒａｔｅ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｔａｎｓｉｅｎｔ  ｏｕｔｗａｒｄ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｉｎ  ｒａｂｂｉｔ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ａｔｒｉｕｍ”Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６３：Ｈ１７４７−Ｈ１７５４（１９９２）によって記述される手順の変法を用いて、ヒト筋細胞を単離した。全ての組織はテンプル大学医学部施設ガイドラインに従って集めた。全ての心房検体は切除時に眼視で正常であった。組織試料を、（ｍＭ／Ｌ表示で）５０ＫＨ2ＰＯ4、８ＭｇＳＯ4、１０ＮａＨＣＯ3、５アデノシン、２５タウリン、１４０グルコース、及び１００マンニトールを含む冷（０−４℃）心臓麻痺溶液、ｐＨ７．４に素早く浸漬し、１００％Ｏ2で泡立てた。検体を刻んで０．５−１ｍｍの立方体とし、（ｍＭ／Ｌ表示で）１３７ＮａＣｌ、５ＫＨ2ＰＯ4、１ＭｇＳＯ4、１０タウリン、１０グルコース、５ＨＥＰＥＳ及び０．１ＥＧＴＡ（正式名：エチレングリコール−ビス（ｂ−アミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸を含む超低カルシウム洗浄液、ｐＨ７．４（２２−２４℃）を収容する５０ｍｌ円錐管に移した。この組織を、１００％Ｏ2で連続的に泡立てることにより５分間穏やかに攪拌した。次に、この組織を、（ｍＭ／Ｌ表示で）１３７ＮａＣｌ、５ＫＨ2ＰＯ4、１ＭｇＳＯ4、１０タウリン、１０グルコース、及び５ＨＥＰＥＳを含み、０．１％ウシアルブミン、１５ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼＣＬＳ  ＩＩ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）、及び１．０ｍｇ／ｍｌ  ＸＸＩＶ型プロテアーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）を補足した５ｍｌの溶液、ｐＨ７．４中でインキュベートし（３７℃）、１００％Ｏ2で連続的に泡立てた。４０分後に上清を除去して廃棄した。その後、その塊を、同じイオン組成ではあるがコラーゲン及び１００ｍＭ  ＣａＣｌ2のみを補足した溶液においてインキュベートした。１０−２０分毎に培地の顕微鏡検査を行い、単離された細胞の数及び質を決定した。収量が最大であると思われたとき、その組織塊を、（ｍＭ／Ｌ表示で）２５ＫＣｌ、１０ＫＨ2ＰＯ4、２５タウリン、０．５ＥＧＴＡ、２２グルコース、５５グルタミン酸、及び０．１％ウシアルブミンを含む改変クラフトブリューエ（Ｋｒａｆｔｂｒｕｈｅ）溶液、ｐＨ７．３（２２−２４℃）に懸濁させ、大孔パスツールピペットを用いて穏やかに摩砕した。その上清を５０ｍｌ遠心管に集めた。この細胞懸濁液を１０００ｒｐｍで２分間遠心し、得られたペレットを、（ｍＭ／Ｌ表示で）１３２ＮａＣｌ、４ＫＣｌ、１．２ＭｇＣｌ2、１０ＨＥＰＥＳ及び１１．１グルコースを含む０．２ｍＭ  ＨＢＳ溶液、ｐＨ７．２に再懸濁した。細胞を単離後２−２４時間以内に用いた。
電位固定技術：
単離されたヒト心房筋細胞を含む小アリコートの溶液を、倒立顕微鏡のステージ上に載置された１ｍｌチャンバーに入れた。５分間、細胞をチャンバーの底部に固着させた。ＩKurを記録するため、ヒト心房筋細胞をＫｖ１．５に用いたものと同じイオン組成の溶液で灌流した。時には、ＩNaを阻止するためにＮａＣｌをＮＭＤＧ（正式名：Ｎ−メチル−ｄ−グルカミン）で置き換えた代替外部溶液を用いた。ＮＭＤＧにはＩKurに対する効果がなく、これらの２つ条件を用いたＩKurの遮断の程度に著しい定量的相違はなかった。
−５０ｍＶの保持電位から＋４０ｍＶへの１５０ｍｓの分極試験パルスを用いて電流を誘発し、Ｉto及びＩNaを不活性化した。ＩKurの振幅は、試験パルスの最後での時間依存性電流の振幅として、保持電流レベルに対して測定した。Ｋｖ１．５と同様に、全ての薬物の効果は定常状態の変化が達成されたときにのみ研究し、データは対照電流からの遮断％として分析した。休止状態及び頻度依存性遮断のＩＣ50は、１Ｈｚで搬送される一連の１０の連続パルスの間に、第１及び第１０パルスから決定した。全ての実験は室温（２２−２４℃）で行った。
Ｃ．頻度依存性及び速度依存性遮断の測定
頻度依存性及び速度依存性遮断は、ＣＨＯ細胞及びヒト心房筋細胞において、それぞれ、−８０ｍＶ及び−５０ｍＶの保持電位から＋４０ｍＶの試験電位への１５０ミリ秒長の分極パルスの連続の間に誘発される電流を測定することにより評価した。パルスは、３０秒の間隔の後に１Ｈｚ（１０パルス）又は３Ｈｚ（３０パルス）の周波数で搬送される１０秒の長さの連続で印加した。電流の遮断パーセントは、所定のパルスの間に薬剤によって生じる電流の振幅の、そのパルスでの対照電流の振幅に対する減少％として定義される。休止状態遮断は、３０秒の休止期間の後の連続における第１パルスの間の電流の遮断である。頻度依存性遮断は、所定の速度又は周波数で搬送されるパルス又は脱分極の連続又は列において連続する脱分極の各々に従って生じる程度が次第に大きくなる遮断である。したがって、１Ｈｚの周波数での１０の脱分極の連続の間で、頻度依存性遮断はその連続の第１パルスの遮断（休止遮断）に対する第１０パルスの遮断の量の割合として評価される。速度依存性遮断は、より速い脱分極速度又は心拍でより高い程度に、又は優先的に生じる遮断である。したがって、速度依存性遮断は、３Ｈｚ対１Ｈｚで、１０秒の連続の最終パルスの間の電流の遮断の量の割合として評価される。したがって、１未満（＜１）の割合が頻度依存性及び速度依存性遮断を示すものであり、この割合が低いほど頻度及び速度依存性の程度が高い。
Ｄ．モルモット心室筋細胞におけるＩKs、ＩKr及びＩK1の測定
細胞の調製：
モルモットの心室筋細胞を、Ｍｉｔｒａら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２４９：Ｈ１０５６−６０（１９８５）に記述される手順の変法を用いて単離した。切除した心臓を大動脈を介して（逆行性に）１０ｍｌ／分の速度で、酸素添加し、暖めた（３７℃）以下に記述される溶液を用いて灌流した。心臓は、最初に、ｍＭ表示で１３２ＮａＣｌ、４ＫＣｌ、１．２ＭｇＣｌ2、１０ＨＥＰＥＳ、５グルコースを含むタイロード液、ｐＨ＝７．２を用いて７分間灌流した。次に、この心臓を、１５０単位／ｍｌのＩＩ型コラゲナーゼ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）及び０．５単位／ｍｌのＸＩＶ型プロテアーゼ（Ｓｉｇｍａ）を含む同じ名目上はＣａ2+非含有の溶液で８分間灌流した。この灌流液に続いて、０．２ｍＭ  ＣａＣｌ２を含むタイロード溶液（酵素を含まず）で５分間灌流した。消化した心室を小片に切断し、細胞が視覚的に分散するまで穏やかに振盪した。これらの細胞を、単離後８時間以内、使用時まで室温で保存した。
微小電極の製造：
Ｇｉｌｅｓ，Ｗ．Ｒ．及びＳｈｉｂａｒａ，Ｅ．Ｆ．，“Ｖｏｌｔａｇｅ  ｃｌａｍｐ  ｏｆ  ｂｕｌｌ−ｆｒｏｇ  ｃａｒｄｉａｃ  ｐａｃｅｍａｋｅｒ  ｃｅｌｌｓ：  ａ  ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐａｔａｓｓｉｕｍ  ｃｕｒｒｅｎｔｓ”，Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３６８：２６５−２９２（１９８５）に記述される吸引微小電極技術を細胞の電位固定に用いた。２段階プラーを用いることにより、方孔（１．０ｍｍ  ｏ．ｄ．）ホウケイ酸キャピラリー管から微小電極を作製した。ピペットに０．５Ｍ  Ｋグルコネート、２５ｍＭ  ＫＣｌ及び５ｍＭ  Ｋ2ＡＴＰを充填した。この電極は、この溶液を充填したときに３ないし７Ｍオームの抵抗を有していた。全細胞記録モードを確立した後、微小電極ホルダーの吸引ポートに気密管を介して接続された１ｍｌ気密シリンジを用いて、このピペットで陰圧を維持した。これにより、ピペット溶液での細胞の透析が最小限に抑えられた。
電位固定技術：
Ｋ+流を記録するためには、これらの細胞を０．４ｍＭニソルジピンを含むＣａ2+非含有タイロード溶液に浸漬した。ニソルジピンはＬ型Ｃａ2+チャンネルの比較的特異的なブロッカーであり、この濃度ではＫ+流に対する効果を持たない（Ｋａｓｓ，Ｒ．Ｓ．，“Ｎｉｓｏｌｄｉｐｉｎｅ：  ａ  ｎｅｗ，ｍｏｒｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃａｌｃｉｕｍ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｂｌｏｃｋｅｒ  ｉｎ  ｃａｒｄｉａｃ  Ｐｕｒｋｉｎｊｅ  ｆｉｂｅｒｓ”，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２２３：４４６−４５６，１９８２）。Ｃａ2+流を記録するためには、これらの細胞を、ニソルジピンを含まずに１．８ｍＭ  Ｃａ2+を含むタイロード溶液に浸漬した。細胞チャンバーは、３５±１℃の温度を維持しながら、１−２ｍｌ／分の速度で、溶液で灌流した。リストＥＰＣ−７クランプ増幅器を単離細胞の電位固定に用いた。直列電圧は４０−７０％補償し、電流は１ｋＨｚのカットオフ周波数でローパスフィルター処理した。データの獲得及び分析はｐＣｌａｍｐソフトウェア（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）及びＡＳＴ３８６もしくは４８６コンピュータのいずれかを用いて行った。様々な電圧パルスプロトコルを用いて３つの型のＫ+流：内向き整流（ＩK1）、高速活性化遅延整流（ＩKr）及び徐活性化遅延整流（ＩKs）を測定した（Ｓａｎｇｕｉｎｅｔｔｉ  Ｍ．Ｃ．及びＪｕｒｋｉｅｗｉｃｚ，Ｎ．Ｋ．，“Ｔｗｏ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｏｆ  ｃａｒｄｉａｃ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｒｅｃｔｉｆｉｅｒ  Ｋ+  ｃｕｒｒｅｎｔ：  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｂｌｏｃｋ  ｂｙ  Ｃｌａｓｓ  ＩＩＩ  ａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃ  ａｇｅｎｔｓ”，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  １９９０；９６：１９４−２１４）。データは対照膜電流からの遮断％として分析した。
溶液：
ニソルジピンはポリエチレングリコール２００中の４ｍＭ貯蔵溶液として調製した。この系列において試験した化合物はジメチルスルホキシド中の１０ｍＭ貯蔵溶液として調製した。用いられた最終濃度では、ポリエチレングリコール２００及びジメチルスルホキシドのいずれにも測定される膜電流に対する効果はなかった。
結果
表１に示されるように、化合物“Ａ”、“Ｂ”、“Ｃ”及び“Ｄ”はＣＨＯ細胞におけるｈＫｖ１．５及びヒト心房筋細胞におけるＩKurの頻度依存性遮断をもたらした。加えて、化合物“Ａ”、“Ｂ”及び“Ｃ”はＣＨＯ細胞におけるｈＫｖ１．５の速度依存性ブロッカーである。ヒト心房筋細胞においては、化合物“Ａ”が速度依存性であった。
表１．チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において発現したｈＫｖ１．５及びヒト心房筋細胞におけるＩKurの頻度及び速度依存性ブロッカー。ＣＨＯ細胞におけるｈＫｖ１．５の遮断については、＜１の頻度依存性及び速度依存性比によって示されるように、化合物“Ａ”、“Ｂ”、“Ｃ”及び“Ｄ”が頻度依存性であり、化合物“Ａ”、“Ｂ”及び“Ｃ”が速度依存性である。同様に、ヒト心房筋細胞においては、４種類の化合物の全てが頻度依存性を示し、化合物“Ａ”が速度依存性であった。
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“Ｎ”は、指定された濃度での各化合物に対する実験の数を表す。
同一条件下で得られた対照電流に対する遮断％として表された休止状態遮断は第１パルスから決定したものであり、これに対して頻度依存性遮断％は１Ｈｚで搬送される一連の１０の連続パルス（１０秒の連続）の間に第１０パルスについて測定した。速度依存性遮断％は３Ｈｚで搬送される一連の３０の連続パルス（３０秒の連続）の間に第３０パルスから決定した。頻度依存性遮断は、１Ｈｚでの連続の第１パルスについての遮断（休止状態遮断）に対する第１０パルスについての遮断の量の比として評価する。速度依存性遮断は、３Ｈｚ対１Ｈｚでの１０秒の連続の最終（それぞれ、第３０対第１０）パルスの間の電流の遮断の量の比として評価する。電流は、−８０ｍＶ（ＣＨＯ細胞）もしくは−５０ｍＶ（ヒト心房）の保持電位から＋４０ｍＶへの１５０ｍｓの分極パルスにより誘発した。
表２に示されるように、化合物“Ａ”、“Ｂ”、“Ｃ”及び“Ｄ”はＣＨＯ細胞におけるｈＫｖ１．５及びヒト心房筋細胞におけるＩKurの選択的遮断をもたらしたが、他の心臓のＫ+チャンネルの遮断は最小であるか、又は存在しなかった。
表２．化合物“Ａ”、“Ｂ”、“Ｃ”及び“Ｄ”を用いて示されるようにモルモット心室筋細胞において測定された、他の心臓のＫ+流、ＩK1、ＩKr及びＩKsに対してチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞において発現したｈＫｖ１．５及びヒト心房筋細胞におけるＩKurに選択的なブロッカー。
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休止状態遮断のＩＣ50は、１Ｈｚで搬送される一連の１０の連続パルスの間の第１パルスから決定した。電流は、−８０ｍＶ（ＣＨＯ細胞）もしくは−５０ｍＶ（ヒト心房）の保持電位から＋４０ｍＶへの１５０ｍｓの分極パルスにより誘発した。
心臓のＫ+チャンネル、ＩK1、ＩKr及びＩKsの遮断に対する選択性は、モルモット心室筋細胞において従来記述される通りに決定した（ＵＳ５，４２８，０３１）。
本発明の不整脈を治療又は予防する新規方法においては、適切な化合物又はそれらの薬学的に許容し得る塩を、１日当たりに体重ｋｇ当たり約０．１ないし約５０ｍｇ、好ましくは１日当たりに体重ｋｇ当たり約１．０ないし約３０ｍｇの範囲の量を一回用量又は２ないし４分割した用量で投与する。
本発明の化合物は、単独の活性成分として、又は他の抗不整脈剤もしくは他の心血管剤と組み合わせて投与することができる。既述の投与量の本発明の化合物又はそれらの薬学的に許容し得る塩を経口、腹腔内、皮下、筋肉内、経皮、舌下又は静脈内投与する。これらは好ましくは経口で、例えば、当該技術分野において認められる手順により調製される錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェファー、チューインガム等の形態で投与する。このような治療上有用な組成物又は調製品中の活性化合物の量は、適切な投与量が得られるようなものである。
実施例
以下の例は本発明を説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。
実施例１
（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物（化合物“Ａ”）の合成
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表題の化合物の合成はＪ．Ｄ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ及びＷ．Ｆ．Ｍａｓｌｅｒにより“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｍｅｔｈｙｌ−  ａｎｄ  ｎｅｏｍｅｎｔｈｙｌｄｉｐｈｅｎｙｌ−ｐｈｏｓｐｈｉｎｅ”（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９７４），３９（２），ｐ２７０−２）に報告されており、これは参照することによりここに組み込まれる。
実施例２
２−（ジフェニルホスフィニルメチル）−４’−フルオロ−３，５，３’−トリメチルビフェニル（化合物“Ｂ”）の合成
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２．９０グラム（１２ミリモル）の２−（４−フルオロ−３−メチルフェニル）−４，６−ジメチルベンズアルデヒド（Ｓｔｏｋｋｅｒ，Ｊｏｕｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．２９  ｐ．１７０，１９８６に従って調製）を、エタノール（２０ｍＬ）中０℃で、０．４５４グラム（１２ミリモル）の水素化ホウ素ナトリウムを用いて還元した。この反応物を１時間攪拌し、塩化アンモニウム水溶液で反応を停止させ、その混合物をエーテルで抽出した。その有機部分を乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濃縮して２．９０グラムの２−（４−フルオロ−３−メチルフェニル）−４，６−ジメチルベンジルアルコールを油として得、これは静置することで固化した。この粗製固体を１．３１ｍＬの塩化チオニルで処理し、水蒸気浴で１時間加熱した。室温に冷却した後、その粗製混合物を水中に取り、エーテルで抽出した。そのエーテルを水で洗浄して乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濃縮して油状残滓を得、それをシリカゲルクロマトグラフィー（２５％塩化メチレン／７５％ヘキサン）で精製することにより２−（４−フルオロ−３−メチルフェニル）−４，６−ジメチルベンジル塩化物を固体として得た。
２．０６グラム（７．８４ミリモル）の２−（４−フルオロ−３−メチルフェニル）−４，６−ジメチルベンジル塩化物をジフェニルホスフィン酸エチル（２．０８グラム、９．０１ミリモル）で処理し、１５０℃に３時間加熱した。室温に冷却した後、この粗製混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０％アセトン／９０％塩化メチレン）により精製し、適切な画分を濃縮し、エーテル／ヘキサンから再結晶して表題の化合物を得た（ＭＰ１０９−１１１℃）。
実施例３
６−（４−クロロフェニルチオ）−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル（化合物“Ｃ”）の合成
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１−クロロ−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノンの調製
１Ｎ塩酸９６０ｍｌ中１６．７５ｇ（０．１３６モル）の４−メトキシアミノベンゼンの激しく攪拌した懸濁液を５℃に冷却し、水２００ｍｌに溶解した１５．８ｇの亜硝酸ナトリウムを滴下することにより処理した。添加の間、温度を５℃±１℃に維持した。添加が完了した後、この反応混合物を冷却下でさらに３０分間攪拌した。この反応混合物のｐＨを固体酢酸ナトリウム（７２ｇ）で４．５に調整した。得られた混合物をメタノール２００ｍｌに溶解した２４ｇ（０．１７８モル）の３−クロロ−２，４−ペンタンジオンを滴下することにより処理した。添加が完了した後、この反応混合物を続く１時間にわたって室温に暖めた。
この懸濁液を３−３００ｍｌのエチルエーテルで抽出した。合わせた抽出物を４容積の水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させて濾過した。その濾液を真空中で蒸発させて２９グラムの暗色油を得た。その残滓をｎ−ヘキサン：酢酸エチル（２：１）（約４００ｍｌ）に溶解し、その溶液を１０００ｇのシリカゲルに通した。ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（３：１）で溶出することで１−クロロ−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノン、ｍｐ１１４−１１６℃（ヘキサン）を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：２．５３（ｓ、３Ｈ）、３．７９（ｓ、３Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２４（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、２Ｈ）、８．３６（ブロードｓ、１Ｈ）；
ＰＢＢＩ−ＮＨ3／ＣＩ−ＭＳ  Ｃ10Ｈ11ＣｌＮ2Ｏ2について算出（２２６．６）；実測：２２７（Ｍ＋１）、１２３
１−［（４−クロロフェニル）チオ］−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパンの調製
エタノール４００ｍｌ中３１．７ｇ（０．１３９モル）の１−クロロ−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノンの懸濁液を２３．４ｇ（０．１６１モル）の４−クロロチオフェノール、次いで２３．４ｍｌのトリエチルアミンで処理した。この懸濁液を還流温度で２時間加熱して冷却した。得られた懸濁液を濾過し、その沈殿を冷エタノールで１回洗浄した。その固体を真空中で乾燥させて１−［（４−クロロフェニル）チオ］−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパン、ｍｐ１１１．５−１１３．５℃を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：２．５５（ｓ、３Ｈ）、３．８０（ｓ、３Ｈ）、６．８８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、７．１９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、７．１３（ｍ、４Ｈ）、９．２（ブロードｓ、１Ｈ）
ＰＢＢＩ−ＮＨ3／ＣＩ−ＭＳ  Ｃ16Ｈ15ＣｌＮ2ＳＯ2について算出（３３４．８）；実測：３３５（Ｍ＋１）、２３４、１２４
６−［（４−クロロフェニル）チオ］−２，３−ジヒドロ−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−４−ピリダジンカルボニトリルの調製
クライゼン蒸留ヘッド及び磁気攪拌を備えるフラスコに、３２．６ｇ（０．０９７モル）の１−［（４−クロロフェニル）チオ］−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパン、２４．８ｍｌのシアノ酢酸エチル及び１２．２ｇの酢酸アンモニウムのよく混合した混合物を入れた。この混合物を窒素雰囲気下において１６０℃で３０分間加熱した。この反応混合物を冷却し、塩化メチレンに溶解した。その有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液及び水で連続的に洗浄した。その有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で蒸発させて半純粋生成物を得た。その残滓を１９００ｍｌのエタノールから再結晶して６−［（４−クロロフェニル）チオ］−２，３−ジヒドロ−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−４−ピリダジンカルボニトリル、ｍｐ１４６−１４８℃（ＥｔＯＨ）を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）２．１５（ｓ、３Ｈ）、２．５３（ｓ、３Ｈ）、６．８４（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．３３（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）、７．４０（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、２Ｈ）。
ＰＢＢＩ−ＮＨ3／ＣＩ−ＭＳ  Ｃ19Ｈ14ＣｌＮ3Ｏ2Ｓについて算出（３８３．８）；実測３８３（Ｍ＋１）
実施例４
２−（４−メチルフェニル）−５−メチル−３−オキソ−６−（４−メチルフェニルチオ）−２，３−ジヒドロピリダジン−４−カルボニトリル（化合物“Ｄ”）の合成
0004227198.tif 000016
１−クロロ−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノンの調製
１Ｎ塩酸９６０ｍｌ中１６．７５ｇ（０．１３６モル）の４−メトキシアミノベンゼンの激しく攪拌した懸濁液を５℃に冷却し、水２００ｍｌに溶解した１５．８ｇの亜硝酸ナトリウムを滴下することにより処理した。添加の間、温度を５℃±１℃に維持した。添加が完了した後、この反応混合物を冷却下でさらに３０分間攪拌した。この反応混合物のｐＨを固体酢酸ナトリウム（７２ｇ）で４．５に調整した。得られた混合物をメタノール２００ｍｌに溶解した２４ｇ（０．１７８モル）の３−クロロ−２，４−ペンタンジオンを滴下することにより処理した。添加が完了した後、この反応混合物を続く１時間にわたって室温に暖めた。
この懸濁液を３−３００ｍｌのエチルエーテルで抽出した。合わせた抽出物を４容積の水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させて濾過した。その濾液を真空中で蒸発させて２９グラムの暗色油を得た。その残滓をｎ−ヘキサン：酢酸エチル（２：１）（約４００ｍｌ）に溶解し、その溶液を１０００ｇのシリカゲルに通した。ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（３：１）で溶出することで１−クロロ−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノン、ｍｐ１１４−１１６℃（ヘキサン）を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：２．５３（ｓ、３Ｈ）、３．７９（ｓ、３Ｈ）、６．８９（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２４（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、２Ｈ）、８．３６（ブロードｓ、１Ｈ）；
ＰＢＢＩ−ＮＨ3／ＣＩ−ＭＳ  Ｃ10Ｈ11ＣｌＮ2Ｏ2について算出（２２６．６）；実測：２２７（Ｍ＋１）、１２３
１−クロロ−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノンを生成するためのより好ましい方法は以下の通りである。５Ｎ塩酸４００ｍｌ中４９．２ｇ（０．３３９モル）の４−メトキシアミノベンゼンの激しく攪拌した懸濁液を０℃に冷却し、水１００ｍｌに溶解した３０．４ｇ（０．４４０モル）の亜硝酸ナトリウムを滴下することにより処理した。この添加の間、温度を０−５℃±１℃に維持した。添加が完了した後、この反応混合物を０℃±１℃でさらに３０分間攪拌した。
この冷溶液を、−８℃±−１℃に予め冷却した、ピリジン２８０ｍｌ及び水２８０ｍｌ中に溶解した５４ｇ（０．４０１モル）の３−クロロ−２，４−ペンタンジオンの激しく攪拌した溶液に徐々に注ぎ入れた。氷浴を取り除き、得られた黄色懸濁液を５℃±１℃で３０分間攪拌して５００ｍｌの水で希釈した。黄色固体を濾過により集め、３００ｍｌの水で洗浄した（４回）。その湿潤粗製生成物を５００ｍｌの塩化メチレンに溶解した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させて濾過し、真空中で蒸発させて５６．４５ｇの１−クロロ−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノンを得た。この生成物の純度はさらなる利用に十分なものであった。シリカゲルでのクロマトグラフィーによりさらなる精製をなし、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（３：１）を用いて溶出することで１−クロロ−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノン、ｍｐ１１４−１１６℃（ヘキサン）を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：２．５３（ｓ、３Ｈ）、３．７９（ｓ、３Ｈ）６．８９（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２４（ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、２Ｈ）、８．３６（ブロードｓ、１Ｈ）；
ＰＢＢＩ−ＮＨ3／ＣＩ−ＭＳ  Ｃ10Ｈ11ＣｌＮ2Ｏ2について算出（２２６．６）；実測：２２７（Ｍ＋１）、１２３
１−［（４−メチルフェニル）チオ］−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノンの調製
エタノール４００ｍｌ中３１．７ｇ（０．１３９モル）の１−クロロ−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノンの懸濁液を２３．４ｇの４−メチルチオチオフェノール及び２３．４のトリエチルアミンで処理した。この懸濁液を還流温度で２時間加熱して冷却した。得られた懸濁液を濾過し、その沈殿を冷エタノールで１回洗浄した。その固体を真空中で乾燥させて１−［（４−メチルフェニル）チオ］−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノン、ｍｐ１２４−１２７℃を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）：２．４１（ｓ、３Ｈ）、２．５４（ｓ、３Ｈ）、３．７８（ｓ、３Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．１２（ｍ、６Ｈ）、９．２０（ブロードｓ、１Ｈ）
６−［（４−メチルフェニル）チオ］−２，３−ジヒドロ−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−４−ピリダジンカルボニトリルの調製
４４０ｍｇ（１．４０ミリモル）の１−［（４−メチルフェニル）チオ］−１−［（４−メトキシフェニル）ヒドラゾノ］−２−プロパノン、３７０μｌのシアノ酢酸エチル及び１７８ｍｇの酢酸アンモニウムのよく混合し、時期的に攪拌した混合物を、窒素雰囲気下において１６０℃で３０分間加熱した。この反応混合物を冷却し、塩化メチレンに溶解した。その有機層を飽和重炭酸ナトリウム水溶液及び水で連続的に洗浄した。その有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で蒸発させて半純粋生成物を得た。その残滓をエタノールから再結晶して６−［（４−メチルフェニル）チオ］−２，３−ジヒドロ−２−（４−メトキシフェニル）−５−メチル−３−オキソ−４−ピリダジンカルボニトリル、ｍｐ１４８−１４９℃（ＥｔＯＨ）を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）２．３５（ｓ、３Ｈ）、２．５２（ｓ、３Ｈ）、３．７８（ｓ、３Ｈ）、６．８２（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、２Ｈ）、７．１８（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、７．３４（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）、７．３６（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、２Ｈ）。
実施例５
麻酔したイヌにおける化合物“Ａ”のイン・ビボ心臓電気生理学的及び抗不整脈効果
心拍、平均動脈圧、心電図の間隔並びに心房、房室（ＡＶ）結節及び心室の電気生理学的パラメータに対する効果をクロラロース麻酔したイヌにおいて評価することができる。双極性心外膜電極を、電気的ペーシングのために、並びに心房、心室及び房室（ＡＶ）結節の興奮閾値及び不応期間を測定するための追加刺激（ｅｘｔｒａｓｔｉｍｕｌｉ）を誘導するために、左心房、右心房及び左心室に縫合することができる。以下の心臓伝導及び不応性の指標を、試験薬剤を累積的に静脈内投与する前後に、２．５Ｈｚのペーシング周波数（ＣＬ４００ミリ秒）で決定することができる：心房相対（ＡＲＲＰ、２×ＡＥＴ）及び有効（ＡＥＲＰ、１０×ＡＥＴ）不応期間；心室相対（ＶＲＲＰ、２×ＶＥＴ）及び有効（ＶＥＲＰ、１０×ＶＥＴ）不応期間；ＡＨ間隔、ＡＶ結節伝導の指標；ＨＶ間隔、Ｈｉｓ−心室伝導時間の指標；Ｐ−Ａ間隔、心房内伝導の指標；及びＨ−ＥＧ間隔、心室伝導の指標；及び整調したＥＣＧ  ＱＴ間隔。ＡＶ結節機能的不応期間（ＡＶＮＦＲＰ）及びＳＡ伝導時間（ＳＡＣＴ）は、洞律動の間に心房追加刺激を誘導し、心室の応答を監視することにより決定することができる。心電図の間隔は洞律動の間に決定することができる；速度補正ＥＣＧ  ＱＴc間隔はＱＴc＝ＱＴ（ミリ秒）／√Ｒ−Ｒ（秒）として算出した。試験薬剤は１、３及び１０ｍｇ／ｋｇの累積的ｉ．ｖ．用量として投与することができ、各用量は１５分にわたってＰＥＧ−２００のビヒクルに含めて投与する。各々のイヌに注射した直後に、血行動態的、心電図的及び心臓電気生理学的測定を行うことができる。
実施例６
麻酔したイヌにおける心房粗動の終止
進行中の心房粗動を終止させる試験化合物の潜在能力を、ペントバルビタール麻酔した心房粗動のイヌモデルにおいて評価することができる。このモデルにおいては、大静脈間切開及び右心房を横切っての切開部の接続を含んでなるＹ字型外科的損傷に続いて心房粗動を誘導することができる。心房のペーシングのため、及び局所的な心房の活性化を記録するため、双極性心外膜電極を下大動脈及び右心房に配置することができる。心房の電気的バーストペーシング（１４−２０Ｈｚ）により、イヌにおいて持続性心房粗動を開始させることができる。心房不整脈の心房サイクル長は１０５−１８２ミリ秒の範囲（すなわち、約３３０−５７０心房サイクル／分）であることが示されている。ＰＥＧ−２００ビヒクル単独の静脈内大量瞬時投与は進行中の心房不整脈に対して何ら効果がないことが３匹の動物の全てにおいて示されている。
実施例７
化合物“Ａ”の頻度依存性遮断の測定
１Ｈｚの周波数で搬送される１０の脱分極電圧ステップの連続によりＫｖ１．５及びＩKurを誘発した。その連続の第１及び最終（第１０）パルスの間の遮断の程度を比較することにより頻度依存性を評価し、（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物はＣＨＯ細胞におけるＫｖ１．５を第１及び最終パルスについて、それぞれ、２９０ｎＭ及び７３ｎＭのＩＣ50値で遮断した。同様の結果がＩKurで得られた。例えば、ヒト心房筋細胞において測定されるＩKurは、（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物により、第１及び最終パルスについて１９８ｎＭ及び７０ｎＭのＩＣ50値で遮断された。これらの結果は強い頻度依存性プロフィールを示し、この方法が、心房粗動及び／又は細動の間に典型的に遭遇する心房速度、例えば、３５０ないし６００拍／分でより高い遮断をもたらし得ることを示唆する。また、これらの結果は、反復脱分極又は頻度依存性が化合物の推定効力に大きな影響を及ぼし得ることを示す。この治療方法はより速い心拍でより良好な遮断を潜在的にもたらすため、効力及び患者による許容度はより高いものと期待される。
実施例８
化合物“Ａ”の速度依存性遮断の測定
ＣＨＯ細胞及びヒト心房筋細胞において、それぞれ−８０ｍＶ及び−５０ｍＶの保持電位から＋４０ｍＶの試験電位への１５０ミリ秒長の脱分極パルスの連続により、Ｋｖ１．５及びＩKurを誘発した。パルスは、３０秒の休止間隔の後に１Ｈｚ（１０パルス）又は３Ｈｚ（３０パルス）の周波数で搬送される１０秒の長さの連続で印加した。電流の遮断パーセント（％）は、所定のパルスの間に薬剤によって生じた、試験パルスの最後での時間依存性電流の振幅のそのパルスについての対照電流の振幅に対する減少％として定義される。速度依存性遮断は、より速い脱分極速度又は心拍でより高い程度に、又は優先的に生じる遮断である。したがって、速度依存性遮断は、３（第３０パルス）Ｈｚ対１Ｈｚ（第１０パルス）での１０秒の連続の最終パルスの間の電流の遮断の量の比として評価される。１未満（＜１）の比は速度依存性遮断を示すものであり、この比が低いほど速度依存性の程度が高い。３０ｎＭの濃度の化合物“Ａ”（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物はＣＨＯ細胞におけるＫｖ１．５を１及び３Ｈｚでそれぞれ平均３８．５％及び５７．５％遮断して０．６７の速度依存比を生じ、これは遮断の程度が１Ｈｚよりも３Ｈｚでより大きく、したがって速度依存性であったことを示す。同様に、１００ｎＭの濃度の化合物“Ａ”（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物はＣＨＯ細胞におけるＫｖ１．５を１及び３Ｈｚでそれぞれ平均６４．６％及び８２．９％遮断して０．７８の速度依存比を生じ、これは速度依存性がこの化合物の様々な濃度で明らかであることを示す。同様の結果がヒト心房筋細胞において測定されるＩKurで得られた。例えば、３０ｎＭの濃度の化合物“Ａ”（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキシル）ジフェニルホスフィン酸化物はヒト心房筋細胞におけるＩKurを１及び３Ｈｚでそれぞれ平均３３％及び４８．４％遮断して０．６８の速度依存比を生じ、それに対して１００ｎＭの濃度ではＩKurを１及び３Ｈｚでそれぞれ５９．７％及び７５．７％遮断して０．７９の速度依存比を生じる。これらの結果は強い速度依存性プロフィールを示し、この方法が、粗動及び／又は心房細動の間に典型的に遭遇する心房速度、例えば、３５０ないし６００拍／分でより大きな遮断をもたらし得ることを示唆する。また、これらの結果は、刺激速度が化合物の推定効力に強く影響を及ぼし得ることも示す。この治療方法はより速い心拍でより良好な遮断をもたらすため、効力及び患者による許容度はより高いものと期待される。