(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ロドシュードモナス属カプシュラタス種ＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株と、乳酸菌とを、低級脂肪酸の存在下で培養することで、粘性物質を含む代謝産物を含有することを特徴とする健康食品。
【請求項２】
前記低級脂肪酸は、酢酸、プロピオン酸および乳酸の少なくとも一つである請求項１に記載の健康食品。
【請求項３】
バクテリオクロロフィルを、０．２重量％〜３．０重量％の範囲にて含有することを特徴とする請求項１または２に記載の健康食品。
【請求項４】
カロチノイド類を、０．５μｍｏｌ／ｇ〜７．５μｍｏｌ／ｇの範囲にて含有することを特徴とする請求項１から３の何れか１項に記載の健康食品。
【請求項５】
酸加水分解物における、グルコースの含有量が２．４重量％〜７．５重量％、リボースの含有量が０．３重量％〜１．１重量％、ラムノースの含有量が１．０重量％〜３．３重量％、フコースの含有量が０．６重量％〜２．６重量％であることを特徴とする請求項１から４の何れか１項に記載の健康食品。
【請求項６】
水洗後の酸加水分解物は、グルコースの含有量が０．８重量％〜３．３重量％、リボースの含有量が０．２重量％〜１．０重量％、ラムノースの含有量が０．４重量％〜２．０重量％、フコースの含有量が０．６重量％以下であることを特徴とする請求項１から５の何れか１項に記載の健康食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、健康維持や健康修復等に有用な紅色光合成細菌およびそれを用いた健康食品に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来、特開昭４７−２５３７９号公報には、紅色光合成細菌は、汚水の浄化処理に利用できることが開示されている。このような紅色光合成細菌とは、紅色無硫黄細菌（アシオロダーシェ、Athiorhodaceae) や紅色硫黄細菌（シオロダーシェ、Thiorhodaceae)である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
ところが、上記従来では、上記紅色光合成細菌を摂取すれば、健康維持や健康修復に対し有効であることについて何ら開示も示唆もされていない。
【０００４】
本発明は、健康維持や健康修復に有効な紅色光合成細菌の菌株および光合成細菌を用いた健康食品を提供することを目的とする。
【０００５】
本発明者等は、上記目的を達成すべく、種々の方法にて培養した上記紅色光合成細菌について、鋭意検討した結果、ある特定の条件下にて培養した紅色光合成細菌が健康維持や健康修復に有効であることを見出して、本発明を完成するに至った。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明の健康食品は、上記の目的を達成するために、ロドシュードモナス属カプシュラタス種ＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株と、乳酸菌とを、低級脂肪酸の存在下で培養することで、粘性物質を含む代謝産物を含有することを特徴としている。
【０００７】
上記構成によれば、ＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株を用いることにより、健康維持や健康修復といった優れた機能を有する健康食品を安定に得ることができる。
【０００８】
本発明の健康食品は、以上の目的を達成するために、前記低級脂肪酸が、酢酸、プロピオン酸および乳酸の少なくとも一つであることが望ましい。
【０００９】
上記構成によれば、健康状態を修復したり維持したりすることを、より一層確実化することができる。
【００１０】
本発明のさらに他の目的、特徴、および優れた点は、以下に示す記載によって十分わかるであろう。また、本発明の利益は、添付図面を参照した次の説明で明白になるであろう。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の実施の形態について説明すれば、以下の通りである。
【００１２】
本発明の健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）は、光合成細菌と、好ましくは乳酸菌とを含む菌体溶液を、上記光合成細菌から粘性物質を多量に生成するように培養して、その培養液から得られた光合成細菌の代謝産物を有するものである。つまり、上記健康食品は、上記の培養液を、例えば遠心分離によってろ過し、ろ液を除いた、光合成細菌の代謝産物を有する各菌体を含む残留物である濃縮菌体を乾燥、例えば凍結乾燥して得られたものである。
【００１３】
このようにして得られた健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）は、後述するよう
に、毒性がなく、常時、服用しても何ら副作用を示さなかった。その上、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）は、１日当たり３０ｍｇ〜３６０ｍｇ、より好ましくは６０ｍｇ〜２４０ｍｇを１回ないし４回、より望ましくは４回に分けて（朝、昼、夕、就寝前）、非健常者が常時、例えば１週間から６ヵ月間服用することにより、上記非健常者の健康状態の改善が観察された。上記非健常者としては、末期ガン患者、リンパ腫患者、重度の糖尿病患者、重度のうつ病患者、重度の心臓病患者、重度の皮膚病患者（アトピー性皮膚炎を含む）、インポテンツ、てんかん、高血圧症（低血圧を含む）、慢性便秘、慢性下痢、不眠症、生理痛、急性肺炎、自律神経失調症、脳梗塞、および大腸ポリープなどが挙げられる。上記服用は非健常者や担当医師の承諾を得た上で行われた。
【００１４】
このことから、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）は、その作用機序については不明であるが、患者の自己免疫機能を向上させるものと想定され、服用した患者において、健康状態の修復に有効性を有するものである可能性が示唆された。また、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）は、健康人が摂取しても、健康維持に有効であることが示唆された。
【００１５】
光合成細菌としては、紅色光合成細菌である紅色無硫黄細菌−アシオロダーシェ(Athiorhodaceae)科のロドシュードモナス属（Rhodopseudomonus) 、より好ましくはロドシュードモナス属カプシュラタス種(Rhodopseudomonas capsulatas) 、特に好ましくは、微生物の国際寄託当局に対し寄託した、ロドシュードモナス属カプシュラタス種ＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株が挙げられる。
【００１６】
上記国際寄託当局は、経済産業省産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所であり、そのあて名が日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）である。上記のＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株は、１９９９年１１月１８日（原寄託日）に上記国際寄託当局に国内寄託した微工研菌寄第Ｐ−１７６５４号から、２００１年１月１８日に上記原寄託よりブダペスト条約に基づく寄託への移管請求によって国際寄託されたものである。寄託者の氏名はバイオケム工業株式会社（代表取締役社長  戸田  順博）である。寄託者のあて名は、日本国兵庫県神戸市兵庫区和田山通１丁目２−２５−Ｄ４０７である。
【００１７】
乳酸菌としては、ラクトバチルス属やストレプトコッカス属を挙げることができる。ラクトバチルス属としては、Lactobacillus bulgalicus、Lactobacillus acidophilus が挙げられる。ストレプトコッカス属としてはStreptococcus lactis、Streptococcus thermophilusが挙げられる。
【００１８】
以下に、上記菌体溶液の培養条件を示す。まず、培養条件として、主として低級脂肪酸（飽和脂肪酸および不飽和脂肪酸の少なくとも一方）等の有機物を含む培養液（ｐＨ６．０〜ｐＨ８．５）および菌体を投入した透明培養槽に、光を３０００ルクス〜１００００ルクスを照射しながら、温度を２３℃〜３９℃にて、嫌気的に培養すれば、遅くとも約７２時間にて培養は定常期に達し、その培養液から濃縮菌体を採取できる。上記培養液には、バイオティン（Biotin) 、サイアミン(Thiamin) 、ニコチン酸が成長因子として含まれている。
【００１９】
この培養条件について、さらに詳しく説明すると以下の通りである。まず、栄養源混合槽において、(NH4)2SO4 、KH2PO4、MgSO4 ・7H2O、NaCl、NaHCO3、酵母エキス（上記成長因子を含む）等の培養基の混合液よりなる基礎培地を調製し、紅色無硫黄細菌を培養する場合には、この基礎培地にさらに酢酸、プロピオン酸、乳酸等の低級脂肪酸をＮａ塩として加え、培養液（例えばｐＨ７．０）とする。また、紅色硫黄細菌を培養する場合には、前述の基礎培地に、さらにNa2S・9H2Oを加え、ＫＯＨ溶液で調節して培養液（ｐＨ８．２〜ｐＨ８．５）とすればよい。
【００２０】
次に、この培養液を栄養源混合槽より密閉照明式培養槽に移して、光合成細菌として、例えば紅色無硫黄細菌−アシオロダーシェ(Athiorhodaceae)であるロドシュードモナス属カプシュラタス種ＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株を密閉照明式培養槽に移植する。
【００２１】
この場合に、培養液に代えて有機酸を発生せしめた、し尿、または焼酎廃液を直接密閉照明式培養槽に入れてもよい。なお、この種の光合成細菌は、前記培養液を形成する有機酸等の以外に、種々の従属栄養細菌と共存すれば、澱粉、葡萄糖、蔗糖、アルコール、その他の高分子の炭水化物も代謝してよく生育する。このことから、前記の培養液に、これら高分子の炭水化物を添加すると共に、密閉照明式培養槽に光合成細菌と共に種々の従属栄養細菌、例えば、前述の乳酸菌を移植すれば、より一層効果的である。なおまた、密閉照明式培養槽において、光合成細菌を培養する際に発生する水素ガスは、タンクに貯蔵して燃料として使用すればよい。
【００２２】
続いて、密閉照明式培養槽において最高度に培養せられた菌体溶液は、連続式遠心分離機により菌体を集めて濃縮菌体とし、しかる後、上記濃縮菌体を凍結乾燥により菌体乾燥物を得る。上述の操作において、培養後の菌体溶液を連続式遠心分離機に移す際、全溶液の、例えば２０％を培養槽中に常に残して、これに栄養源混合槽で調整された培養液を追加していけば同一の光合成細菌を連続的に採取することができる。
【００２３】
なお、この方法において、密閉照明式培養槽を用いるのは、光合成細菌が嫌気的雰囲気、照明条件下（３０００ルクス〜１００００ルクス）において最もよく増殖するからである。また、密閉照明式培養槽内に対し、培養液を攪拌する攪拌装置を設けてもよい。攪拌装置を設けることにより、菌体の生育速度を向上できる。
【００２４】
【実施例】
以下に、光合成細菌の培養の実施例を以下に示す。まず、栄養源混合槽において、水１×103 ｃｍ3 （１リットル）に対して、
(NH4)2SO4     ０．３ｇ
KH2PO4        ０．５ｇ
MgSO4 ・7H2O  ０．２ｇ
NaCl         ０．５ｇ
NaHCO3        ０．２ｇ
酵母エキス    ０．０１ｇ
となるように、以上の各栄養源を混合して基礎培地を調製し、さらに、Na塩とした酢酸０．４重量％、蔗糖５重量％を加えて、例えばｐＨ７．０に調整して培養液とし、それを密閉照明式培養槽に移した。
【００２５】
この培養槽は、ガラス等の透明な材質で円筒形に形成され、その外周に等間隔に設置せられた蛍光灯により内部が均等に照明されるようになっていると共に、培養槽内に培養槽の半径の大きさを有する羽を備えた攪拌機が設置されている。よって、上記培養槽は、嫌気的雰囲気の下に光合成細菌を大量、かつ容易に培養できるようになっている。
【００２６】
次に、ロドシュードモナス属カプシュラタス種ＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株の溶液（菌濃度１０6 cell／ｃｍ3 ）を、全培養槽の溶液当たり２０％（ｖ／ｖ）移植し、少量の乳酸菌（菌種Lactobacillus bulgalicus、菌濃度１０6 cell／ｃｍ3 ）を接種して、培養温度３０℃、１００００ルクスの照明下で毎分１３回の回転速度で攪拌したところ、８時間後には光合成細菌の生育が最高（定常期）となった。このとき、培養槽では、光合成細菌の生育と共に、大量の粘性物質が生成していた。
【００２７】
この培養液を連続式遠心分離機（シャープレス・タイプ）に入れて菌体を集めて濃縮し、この濃縮菌体を凍結乾燥して、菌体を得た。得られた菌体は、培養液１×103 ｃｍ3 （１リットル）当たり約５ｇの割合で培養・採取でき、後述するように非常に活性を有していた。
【００２８】
次に、凍結乾燥の工程について詳しく説明する。まず、得られた濃縮菌体（約１０11cell／ｃｍ3 ）は、冷凍庫にて一旦冷凍保存している。凍結乾燥するときは、例えば、上記濃縮菌体４×103 ｃｍ3 （４リットル）を自然解凍（約１２時間）した後、１．２×103 ｃｍ3 （１．２リットル）用の吸引瓶９本に対し、それぞれ、互いにほぼ均等となるように分注する（１瓶当たり約４４０ｃｍ3 ）。
【００２９】
続いて、予め、メタノール等の不凍液を満たした予備凍結槽（−４５℃）にて、プリフリーザーを用いて、上記吸引瓶を回転させながら上記吸引瓶の底部を不凍液に接触させ、上記吸引瓶内の濃縮菌体を、吸引瓶の内壁に沿って薄膜を形成するように再度凍結させる（吸引瓶内での凍結菌体の厚さ約８ｍｍに設定、凍結時間約２０分）。凍結した濃縮菌体は９本すべて凍結が完了するまで冷凍庫にて保存しておく。
【００３０】
その後、凍結乾燥機のトラップ内を冷却し（−４５℃）、その１時間後（つまりトラップ内の冷却完了後）に真空ポンプを作動させる。真空ポンプの真空計が２６Ｐａ以下、好ましくは４〜６Ｐａに低下するのを確認後、上記各吸引瓶をトラップに連結する。続いて、各吸引瓶と真空ポンプとをトラップを介して連通して、各吸引瓶内の凍結菌体の乾燥を室温（２０℃〜３０℃）下にて開始する。乾燥時間は、室温にもよるが、約４０時間程度である。なお、上記では、濃縮菌体の乾燥法として、凍結乾燥法を用いた例を挙げたが、他の乾燥法として、スプレイドライ法を用いることもできる。
【００３１】
得られた乾燥菌体は、例えば、プロペラ式粉砕機（サンプルミル）等を用いて、プロペラの回転数１５０００ｒｐｍ程度にて粉砕して粉末化する。他の粉末化方法としては、例えばジェットミル法、またはボールミル法が挙げられる。
【００３２】
このような粉末化された乾燥菌体を、そのまま健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）として用いてもよいし、服用に便利なように、錠剤化してもよい。錠剤化の方法としては、例えば、高速回転式錠剤機を用いることができる。この錠剤化の際には、乳糖などの賦形剤や、粘着剤や、ステアリン酸マグネシウム等の離型剤を用いずとも錠剤化できる。なお、必要に応じて、服用量の調節のために賦形剤を用いてもよい。
【００３３】
上記では、ロドシュードモナス属カプシュラタス種ＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株を用いた例を挙げたが、他の光合成細菌、例えば、紅色硫黄細菌（シオロダーシェ、Thiorhodaceae)科のクロマチューム（Chromatium) 属ビノサム(vinosum) 種や、紅色無硫黄細菌（アシオロダーシェ、Athiorhodaceae) 科のロドスピリラム（Rhodospirillum）属ルブラム(Rubrum)種を用いることもできる。
【００３４】
健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）におけるバクテリオクロロフィルおよびカロチノイド類の各定量方法については、加藤栄らの「光合成研究法」（協立出版）（１９８１）に基づいて行った。
【００３５】
バクテリオクロロフィルの定量方法を以下に示す。まず、乾燥した健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）である検体を約１０ｍｇ採取して秤量し、生理食塩水１００ｍｍ3 （μｌ）に懸濁し、さらに、アセトン：メタノール〔７：２（ｖ／ｖ）〕４．９ｃｍ3 加えて、バクテリオクロロフィルを抽出した後、その抽出液を適宜希釈し、その希釈液の７７０ｎｍにおける吸光度を測定した。バクテリオクロロフィルの濃度は次式（１）によって算出した。
【００３６】
バクテリオクロロフィル（μｇ／ｃｍ3 ）＝１２．１５Ａ770 …（１）
以下に、本健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）を上述した方法にて作製した、５ロットの各検体１．ないし５．に関するバクテリオクロロフィルの定量をそれぞれ行い、それらの結果を以下の表１に示した。
【００３７】
【表１】
0004207108.tif 000002
【００３８】
なお、表１のＡ770 にて示した吸光度（７７０ｎｍ）は、抽出原液（５ｃｍ3 ）への換算値である。この結果から、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）におけるバクテリオクロロフィルの含有量（重量％）は、０．２〜３．０、好ましくは０．６〜１．９であることが判る。
【００３９】
なお、バクテリオクロロフィルの定量においては、吸光度の測定を７７０ｎｍ（赤色領域）で行っているので、上記希釈液にカロチノイド類が含まれていても、バクテリオクロロフィルの測定結果には何ら影響しないことが判る。
【００４０】
次に、カロチノイド類の定量方法を以下に示す。まず、乾燥した健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）である検体を約１０ｍｇ採取して秤量し、メタノール中に懸濁し、１分間、煮沸抽出した後、氷で冷却し遠心分離により上清を回収した。沈殿は再びメタノール中に懸濁し、抽出液が無色になるまで抽出を、例えば３回繰り返した。
【００４１】
メタノール抽出液に、その抽出液と等量のエーテルと、２倍量の水とを加えてエーテル抽出を行った後、分取したエーテル溶液を脱水した。得られたエーテル溶液を６ｃｍ3 にメスアップ後、そのエーテル溶液の吸収スペクトルを測定した。
【００４２】
その吸収スペクトルの４００〜５５０ｎｍの範囲内での最大吸収極大波長を求め、その最大吸収極大波長における吸光度を測定し、その吸光度から次式（２）により、カロチノイド類の含有量を算出した。
【００４３】
ｃ＝Ｄ・ｖ／１．４×１０5               …（２）
ｃ：カロチノイド類の含有量（ｍｏｌ）、Ｄ：最大吸収極大における吸光度、ｖ：エーテル溶液の容量（１０3 ｃｍ3 つまり１リットル）、１．４×１０5 ：カロチノイドの平均分子吸光係数。
【００４４】
カロチノイド類の吸収極大は４００〜５５０ｎｍの範囲内に存在するので、上記エーテル抽出液の吸収スペクトル（図１参照）から、上記範囲内での最大吸収極大波長を測定し、その最大吸収極大波長での吸光度に基づきカロチノイド類を定量した。
【００４５】
前述の各検体１．〜５．に関するカロチノイド類の各定量結果を以下の表２に示した。また、検体１．の吸収スペクトルを図１に示したが、他の検体２．〜５．の吸収スペクトルも同様のパターンを示していた。
【００４６】
この表２の結果から、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）のカロチノイド類の含有量（μｍｏｌ／ｇ）は、０．５〜７．５、好ましくは２．４〜４．０であることが判る。
【００４７】
【表２】
0004207108.tif 000003
【００４８】
また、図１の結果から、可視領域の６００ｎｍ以上においては、吸光度が測定されていないことから、上記エーテル抽出液には、バクテリオクロロフィルは、多くとも検出限界未満しか含まれていないことが判る。
【００４９】
よって、上記のカロチノイド類の定量方法においては、バクテリオクロロフィルが健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）に含まれていても、上記のカロチノイド類の定量に対し何ら影響しないことが判る。
【００５０】
次に、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）の各検体１．〜５．およびそれらの各水洗後試料について、それぞれ酸加水分解した後、高速液体クロマトグラフ法により以下の各中性単糖の定量を行った。
【００５１】
その定量方法を以下に示す。まず、水洗後試料の調製は、各検体約０．５ｇを秤量して遠心管に投入し、水２５ｃｍ3 を加えて攪拌し、超音波抽出を３分間行った後、遠心分離（１２，０００ｒｐｍ、５分間）して、上澄み液を除去した。遠心管中の残留物に水２５ｃｍ3 加え、同様に水洗処理をさらに２回繰り返した。
【００５２】
残留物に対し、水分除去のためにアセトン２５ｃｍ3 を加えて、攪拌後、遠心分離（１２，０００ｒｐｍ、５分間）して、上澄み液を除去した。遠心管内に残留したアセトンを窒素気流下で蒸散させた後、一晩風乾したものを水洗後試料とした。
【００５３】
次に、試験溶液の調整について説明する。まず、各検体０．３ｇ〜０．６ｇまたは各水洗後試料０．３ｇ〜０．６ｇを秤量した後、それらに７２％硫酸４ｃｍ3 を加えて、室温で１時間（水洗試料については２時間）攪拌した。
【００５４】
続いて、水１１２ｃｍ3 にて希釈し（硫酸濃度：４％）、オートクレーブ中（１２１℃）で１時間加水分解した。室温まで冷却し、３０ｗ／ｖ％水酸化ナトリウム水溶液で中和した後、水で２００ｃｍ3 に定容し、ろ過（No. 5B、アドバンテック東洋株式会社製）し、さらに孔径０．４５μｍのメンブランフィルターでろ過して得られたろ液を試験溶液とした。
【００５５】
試験溶液中の各単糖（グルコース、リボース、ラムノース、フコース）の含量を、液体クロマトグラフ法により測定した。その結果を表３に示した。測定結果は、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）１００ｇ中の含有量（ｇ）を示す。
【００５６】
【表３】
0004207108.tif 000004
【００５７】
上記表３中の、ＮＤの表記は、含有量が検出限界（０．２ｇ／１００ｇ）未満であることを示す。
【００５８】
表３の結果から、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）における、未水洗の検体の酸加水分解物では、グルコースの含有量（重量％）が２．４〜７．５、より好ましくは３．５〜６．５の範囲内、リボースの含有量（重量％）が０．３〜１．１、より好ましくは０．４〜１．０の範囲内、ラムノースの含有量（重量％）が１．０〜３．３、より好ましくは１．２〜３．０の範囲内、フコースの含有量（重量％）が０．６〜２．６、より好ましくは０．８〜２．４の範囲内であることが判る。
【００５９】
また、上記の表３の結果から、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）における、水洗後の検体の酸加水分解物では、グルコースの含有量（重量％）が０．８〜３．３、より好ましくは１．０〜３．０の範囲内、リボースの含有量（重量％）が０．２〜１．０、より好ましくは０．３〜０．９の範囲内、ラムノースの含有量（重量％）が０．４〜２．０、より好ましくは０．５〜１．６の範囲内、フコースの含有量（重量％）が０．６以下、より好ましくは０．５以下であることが判る。
【００６０】
次に、本発明の健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）について急性経口毒性試験（限度試験）を行った。つまり、上記健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）を検体として、ＯＥＣＤ（Organization for Economic Cooperation and Development)化学物質試験指針（１９８７）に準拠し、マウスを用いて、上記検体に対する急性経口毒性試験（限度試験）を行った。
【００６１】
試験群には２，０００ｍｇ／ｋｇの用量の検体を、対照群には溶媒対照として精製水を雌雄マウスに単回経口投与した。その結果、試験動物に異常および死亡例は認められなかった。したがって、検体のマウスにおける単回経口投与によるＬＤ50値は、雌雄共に２，０００ｍｇ／ｋｇ以上であるものと考えられた。
【００６２】
その試験について以下に説明する。まず、健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）である検体を精製水に懸濁し１００ｍｇ／ｃｍ3 の試験液を調製した。
【００６３】
試験動物は以下の通りである。まず、４週齢のＩＣＲ系雌雄マウスを日本エスエルシー株式会社から購入し、約１週間の予備飼育を行って一般状態に異常がないことを確認した後、試験に使用した。試験動物はポリカーボネート製ケージに各５匹収容し、室温２３±２℃、照明時間１２時間／日に設定した飼育室において飼育した。飼料〔マウス，ラット用固型飼料；ラボＭＲストック、日本農産工業株式会社製〕および飲料水（水道水）は自由に摂取させた。
【００６４】
試験方法は以下の通りである。まず、試験群および対照群ともに雌雄それぞれ１０匹を用いた。投与前に約４時間試験動物を絶食させた。体重を測定した後、試験群には雌雄ともに検体投与量として２，０００ｍｇ／ｋｇの用量となる試験液を胃ゾンデを用いて強制単回経口投与した。対照群においては雄に０．６ｃｍ3 、雌に０．５ｃｍ3 の精製水を同様に投与した。
【００６５】
観察期間は１４日間とし、投与日は頻回、翌日から１日１回の観察を行った。投与後、７日後および１４日後に体重を測定し、ｔ−検定により有意水準５％で群間の比較を行った。観察期間終了時に試験動物すべてを剖検した。試験結果は、以下の表４の通りであった。表４におけるカッコ内は個体数を示す。
【００６６】
【表４】
0004207108.tif 000005
【００６７】
上記試験において観察期間中に死亡例は雌雄共に認められなかった。雌雄とも観察期間中に異常は見られなかった。投与後、７日後、および１４日後の体重測定では、雌雄とも各群間で体重増加に差は、表４に示すように見られなかった。観察期間終了時の剖検では、雌雄とも全ての試験動物の主要臓器に異常は見られなかった。
【００６８】
ＯＥＣＤ化学物質試験指針（１９８７）によれば、２０００ｍｇ／ｋｇの用量で死亡例が認められた場合は、ＬＤ50値を求める詳細な試験が必要であると指示されている。
【００６９】
しかし、上記の試験結果では、この用量で死亡例は見られず、剖検時にも異常は見られなかった。したがって、検体のマウスにおける単回経口投与によるＬＤ50値は、雌雄ともに２０００ｍｇ／ｋｇ以上であるものと考えられた。
【００７０】
このことから、本発明の健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）は、常用しても人体に悪影響を及ぼさないことも明らかになった。
【００７１】
以下に，ロドシュードモナス属カプシュラタス種の形態的特徴、生育条件、および生理的性質について述べる。
【００７２】
ａ．形態的特徴
一本の鞭毛を有して極めて運動性に富み、普通には短杆状菌（幅０．５μ×長さ１．０μ）であるが、培養液の種類、培養期間によっては長杆状菌（幅０．５μ〜０．７μ×長さ６．０μ）のものがでてくる。すなわち多形現象を示すことである。
【００７３】
ｂ．生育条件
各種培地における生育状態（嫌気的照明条件下）を以下に示す。
【００７４】
肉汁                  ＋            乳酸                ＋＋
ペプトン水            ＋＋＋        コハク酸            ＋
馬鈴薯培地            −            リンゴ酸            ＋
シオサルフェイト      −            酪酸                ＋＋
（Thiosulfate)                      クロトン酸          ＋
アラニン（Alanine)    ＋            ピルビン酸          ＋＋
リューシン(Leucine)   −            エタノール          ＋
アスパラギン          ＋            マンニトール        −
（Asparagine)                       (Mannitol)
アスパラギン酸        −            ソルビトール        −
グルタミン酸          ＋            （Sorbitol)
酒石酸                −            マンノース          −
クエン酸              −            （Mannose)
グルタール酸          ＋            果糖                −
酢酸                  ＋            グリセロール        −
プロピオン酸          ＋＋＋        （Glycerol)         −
（何れも基質については０．２重量％濃度を使用）
注：＋＋＋  →  生育良好
＋    →  生育可能
−    →  生育不可能
ｃ．生理的性質
1)最適生育条件
ｐＨ７．２、温度２７℃、嫌気的照明１００００ルクス
2)生育しうる条件
ｐＨ６．０〜ｐＨ８．５、温度２３℃〜３９℃、好気〜嫌気暗黒条件〜照明条件
3)グラム染色性
陰性
4)抗酸性
有
5)インドールの生成
無
6)硫化水素の生成
無
7)窒素ガスを固定する能力
有
8)硝酸塩培地では硝酸を還元してＮ2 ↑ガス化するという窒素固定とは全く逆の脱窒作用も行う
9)カタラーゼの生成
有
10)ゼラチンの液化
無
11)澱粉の加水分解
無
12)還元型メチレンブルー、還元型メチル（又はベンジル）バイオロジエン色素の酸化能力
有
13)バイオティン（Biotin) 、サイアミン(Thiamin) 、ニコチン酸を成長因子として要求する。
【００７５】
尚、発明を実施するための最良の形態の項においてなした具体的な実施態様または実施例は、あくまでも、本発明の技術内容を明らかにするものであって、そのような具体例にのみ限定して狭義に解釈されるべきものではなく、本発明の精神と次に記載する特許請求の範囲内で、色々に変更して実施することができるものである。
【００７６】
【発明の効果】
本発明の健康食品は、以上のように、ロドシュードモナス属カプシュラタス種ＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株と、乳酸菌とを、低級脂肪酸の存在下で培養することで、粘性物質を含む代謝産物を含有する構成である。
【００７７】
それゆえ、上記構成は、ＦＥＲＭＢＰ−７４３４菌株であることにより、優れた健康維持機能や健康修復機能を有する健康食品を安定に提供できる。
【００７８】
本発明の健康食品は、前記低級脂肪酸が、酢酸、プロピオン酸および乳酸の少なくとも一つである構成である。
【００７９】
それゆえ、上記構成によれば、服用することにより健康状態を維持したり、修復したりできる健康食品をより一層確実に提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の健康食品（ＴＦＫ−ＲＣ）の検体１．における、カロチノイド類の定量に用いるエーテル溶液の吸収スペクトルを示すグラフである。
【図１】
0004207108.tif 000006