(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の、式（１）、（２）、（３）、（４）、または（５）：
【化１】
0004278323.tif 000011
で表される化合物。
【請求項２】
次の、式（１）、（２）、（３）、（４）、または（５）：
【化９】
0004278323.tif 000012
で表される化合物の少なくともいずれか一つを含む甘味用組成物。
【請求項３】
前記式（１）または（２）で表される化合物を含む請求項２に記載の甘味用組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は新規化合物、抽出物及びその用途に関し、より詳細には、マメ科ネムノキ属植物に含有され、甘味を有する新規化合物、抽出物及びその用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
タイにおいて"Cha Em Thai"とよばれているマメ科植物（Leguminosae）ネムノキ属（Albizzia）のmyriophyllaは、白くて芳香のある花を咲かせる。タイでは、この植物の幹（stem, wood）は、飲用して駆風、健胃、成長促進、去痰、目の炎症を抑える（腫れを抑える）、肌をきれいにする、喉の渇きを静める、歯茎からの出血を抑える等の作用があると報告されている。また、魚毒性（最低濃度は１０００ｐｐｍ）が確認されている。さらに、この植物の幹、枝、根には、甘味があることが知られている。
従来、この植物において、甘味物質を目的とする成分検索が行われ、ベトナム産のAlbizzia myriophyllaの樹皮からアルビジノサイド(Albizzinoside) Ａ等のリグナングリコシド類やアルカロイドのアルビジン(albizzine) Ａが単離、構造決定されたが、甘味成分ではなかったことが報告されている。
【０００３】
【課題を解決するための手段】
本発明の発明者は、マメ科植物ネムノキ属のmyriophyllaに含まれる成分について鋭意研究を行った結果、甘味を有する新規化合物を見出し、化学構造を決定することにより本発明の完成に至った。
すなわち、本発明によれば、式（１）〜式（６）
【化２】
0004278323.tif 000002
で表される化合物が提供される。
また、本発明によれば、上記化合物を少なくとも１種含有することからなるマメ科ネムノキ属のmyriophyllaの抽出物が提供される。
さらに、本発明によれば、上記化合物又は抽出物を含有する甘味剤が提供される。
【０００４】
【発明の実施の形態】
本発明の化合物は、上記式（１）〜式（６）で表された配糖体であるが、これらの配糖体は、抽出、分離、精製等の際に使用される溶媒との間で形成し得る誘導体（例えば、メチルエステル体）、金属塩（例えば、カルシウム塩）、高次化合物（例えば、水和物、アルコール和物等）であってもよい。
上記化合物又は上記化合物を含有する抽出物は、マメ科ネムノキ属のmyriophyllaから得ることができる。myriophyllaは、根、茎、花、葉等のいずれの部位を用いてもよいが、根と茎とを用いることが好ましい。この植物は、タイ、ベトナムをはじめとする東南アジア等に広く生育しており、産地によって、それに含有される成分の量に若干の差異はあるが、いずれの産地のものであってもよい。
上記化合物又は上記化合物を含有する抽出物は、低級脂肪族アルコールに可溶であり、低級脂肪族アルコール又はその水溶液で抽出することができる。低級脂肪族アルコールとしては、炭素数１〜３の脂肪族アルコールが挙げられ、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール等が挙げられる。なかでも、メタノールが好ましい。また、１〜５０重量％程度の低級脂肪族アルコールを含有する水溶液であってもよい。
【０００５】
抽出は、上記植物をそのまま、粉砕機等で粉砕して及び／又は乾燥し、１〜１０倍（重量）程度、好ましくは１〜５倍程度の低級脂肪族アルコール又はその水溶液を用いて行うことができる。抽出は、冷浸又は温浸のいずれで行ってもよいが、５０〜８５℃程度の温度で、振盪下又は非振盪下に、上述した植物を上述した溶媒に浸漬することによって行うことが適当である。振盪下に浸漬する場合には、３０分間〜１０時間程度行うことが適当であり、非振盪下に浸漬する場合は、１時間〜２０日間程度行うことが適当である。なお、抽出処理は、同一原料について１回のみ行ってもよいが、２回以上繰り返して行うことが好ましい。
【０００６】
上記で得られる抽出物は、さらに酢酸エチルで抽出することが好ましい。抽出は、上記の抽出と同様に行うことができる。例えば、室温下、振盪下又は非振盪下に、低級脂肪族アルコール又はその水溶液により得られた抽出物又は後述するように濃縮した抽出物に対して、酢酸エチルを１〜３０（重量）倍程度加えて行うことが適当である。
抽出物は、任意に酢酸エチルでさらに抽出した後、濃縮することが好ましい。この際の濃縮は低温又は加温、かつ減圧下で行うことが好ましい。また、この濃縮は乾固するまで行ってもよいし、濃縮する前にろ過し、ろ液を濃縮して抽出物としてもよい。
【０００７】
得られた抽出物は、精製処理に付してもよい。精製処理は、クロマトグラフ法、イオン交換樹脂を使用する溶離法等を単独又は組み合わせて採用することができる。例えば、クロマトグラフ法としては、順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、遠心液体クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー等のいずれか又はそれらを組み合わせて行う方法が挙げられる。この際の担体、溶出溶媒等の精製条件は、各種クロマトグラフィーに対応して適宜選択することができる。例えば、薄層クロマトグラフィーの場合には、水―メタノール系の溶媒、高速液体クロマトグラフィーの場合にはメタノール−酢酸系の溶媒等を使用することができる。
【０００８】
本発明の方法によって得られる抽出物は、後述するように、砂糖の６００倍の甘味を有する結果が得られており、そのままの状態であるいは適当な媒体で希釈して甘味剤として使用することができる。
【０００９】
適当な媒体としては、例えば、乳糖、澱粉、デキストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成及び天然の珪酸アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリウム、乾燥酵母、酸化亜鉛、タルク、カオリン、硼酸末、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、沈降炭酸カルシウム、次没子酸ビスマス、硫酸アルミニウムカリウム末、グリセリン、プロピレングリコール、脂肪油、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、界面活性剤等が挙げられる。
なお、上記の甘味剤は、健康食品等の分野で広く採用されている公知の方法により適切な形態で製造することができる。
【００１０】
本発明の抽出物又は化合物の使用量は、濃縮、精製等の程度、使用目的等により適宜調節することができる。
【００１１】
【実施例】
以下、本発明の新規化合物及びそれらの作用についての実施例を、具体的に説明する。
マメ科ネムノキ属のmyriophyllaの抽出
マメ科植物（Leguminosae）ネムノキ属（Albizzia）のmyriophyllaの抽出方法の概要を図１に示す。
タイ産のマメ科植物（Leguminosae）ネムノキ属（Albizzia）のmyriophylla１．０ｋｇをメタノール（９９．９％）１０リットルに浸漬し、８０℃の加温環境下、３時間抽出した。この操作を３回繰り返した。得られた抽出物を合液し、メタノールを蒸発させることにより、メタノール抽出物を得た（１５１．５ｇ）。
【００１２】
次いで、得られたメタノール抽出物１２１．２ｇに、室温下、酢酸エチル及び水（１：１）を１０リットル加えて振り混ぜ、得られた酢酸エチル層及び水層をそれぞれ分液採取した。この操作を３回繰り返した。得られた酢酸エチル層及び水層はそれぞれ２４．６ｇ、９６．６ｇであった。なお、酢酸エチル層には、ルピニフォリン(lupinifolin)が含有されていた。また、水層についてシリカゲル６０Ｆ254（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝６：４：１）を用いた薄層クロマトグラフィーを行ったところ、Ｒｆ＝０．１〜０．９の位置にスポットを得た。
【００１３】
得られた水層を、ＯＤＳカラムを用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、分離状態を確認しながら、移動相として水→６０％メタノールと、組成を切り替えて分離し、６つのフラクションを得た。
得られた６つのフラクションのうち、フラクション３として得られた分画についてシリカゲル６０Ｆ254（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝６：４：１）を用いた薄層クロマトグラフィーを行ったところ、Ｒｆ＝０．４〜０．７の位置にスポットを得た。
【００１４】
さらに、フラクション３として得られた分画を、ＳｉＯ2カラムを用いたカラムクロマトグラフィーにより、分離状態を確認しながら、移動相としてＣＨＣｌ3−メタノール−水（１５：３：１（ｖ／ｖ））→（６：４：１（ｖ／ｖ））と、組成比を切り替えて分離し、アルビジアサポニン(albizziasaponin) A（０．２ｇ）を得た。
また、フラクション４として得られた分画から、液体クロマトグラフ装置（島津製作所製：ＨＰＬＣ装置、送液ポンプ：ＬＣ−１０ＡＳ、示差屈折計：ＲＩＤ−６Ａ、ＹＭＣ−ＰＡＣ  Ｐｈカラム：２０×２５０ｍｍｉ．ｄ．、流速：９．０ｍｌ／分、圧力：１８０ｋｇｆ／ｃｍ2）と、移動相としてメタノール７０％水溶液−酢酸１％とを用いて、アルビジアサポニンA（５．９ｇ）を分離した。
【００１５】
フラクション５として得られた分画を、ＯＤＳカラムを用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、分離状態を確認しながら、移動相として７０％メタノールを用いて分離し、４つのフラクションを得た。
得られた４つのフラクションのうち、フラクション５−２の分画についてシリカゲル６０Ｆ254（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝６：４：１）を用いた薄層クロマトグラフィーを行ったところ、Ｒｆ＝０．２〜０．４の位置にスポットを得た。
【００１６】
さらに、フラクション５−２として得られた分画から、液体クロマトグラフ装置（島津製作所製：ＨＰＬＣ装置、送液ポンプ：ＬＣ−１０ＡＳ、示差屈折計：ＲＩＤ−６Ａ、ＹＭＣ−ＰＡＣ  Ｐｈカラム：２０×２５０ｍｍｉ．ｄ．、流速：９．０ｍｌ／分、圧力：１８０ｋｇｆ／ｃｍ2）と、移動相として(i)メタノール７０％水溶液−酢酸１％又は(ii)アセトアニリル３５％水溶液−酢酸１％を用いて、上記式（１）、（３）〜（５）の化合物及びリコリセサポニン(licoricesaponin) F3をそれぞれ得た（アルビジアサポニンA：３．６ｇ、アルビジアサポニンC：０．０５ｇ、アルビジアサポニンD：０．１ｇ、アルビジアサポニンE：０．１ｇ、リコリセサポニンF3：０．０５ｇ）。
【００１７】
フラクション５−３として得られた分画から、液体クロマトグラフ装置（島津製作所製：ＨＰＬＣ装置、送液ポンプ：ＬＣ−１０ＡＳ、示差屈折計：ＲＩＤ−６Ａ、ＹＭＣ−ＰＡＣ  Ｐｈカラム：２０×２５０ｍｍｉ．ｄ．、流速：９．０ｍｌ／分、圧力：１８０ｋｇｆ／ｃｍ2）と、移動相としてメタノール７５％水溶液−酢酸１％を用いて、上記式（２）、（６）の化合物及びユンガノサイド(yunganoside) B1をそれぞれ得た（アルビジアサポニンB：０．８ｇ、ミリオフィロサイド(myriophyloside)：０．０３ｇ、ユンガノサイドB1：０．０２ｇ）。
式（１）〜式（６）の化合物の物性を以下に示す。
なお、式（１）〜式（６）の各化合物の構造式の決定は、ＮＭＲ法により行った。
【００１８】
・式（１）：アルビジアサポニンA
無色微細結晶、[α]D24  −２８．２°（ｃ＝０．１、MeOH)、
FAB−MS：計算値C48H73O20 （M＋H)+ ９６９．４７
実測値                  ９６９．４７
計算値C48H72O20Na（M＋Na)+ ９９１．４５
実測値                   ９９１．４５
IR(KBｒ）：3453, 2940, 1760, 1640, 1047 cm-1
1H-NMR(500MHz, ピリジン、δ）、13C-NMR(125MHz, ピリジン、δc）
【化３】
0004278323.tif 000003
【００１９】
・式（２）：アルビジアサポニンB
無色微細結晶、[α]D24  ＋４．６°（ｃ＝０．１、MeOH)、
FAB−MS：計算値C48H74O20Na（M＋Na)+ ９９３．４７
実測値                   ９９３．４７
IR(KBｒ）：3453, 2930, 1730, 1645, 1047 cm-1
1H-NMR(500MHz, ピリジン、δ）、13C-NMR(125MHz, ピリジン、δc）
【化４】
0004278323.tif 000004
【００２０】
・式（３）：アルビジアサポニンC
白色粉末、[α]D24  −１２．６°（ｃ＝０．１、MeOH)、
FAB−MS：計算値C54H84O24Na （M＋Na)+ １１３９．５３
実測値                        １１３９．５３
IR(KBｒ）：3453, 2926, 1739, 1632, 1078, 1048 cm-1
1H-NMR(500MHz, ピリジン、δ）、13C-NMR(125MHz, ピリジン、δc）
【化５】
0004278323.tif 000005
【００２１】
・式（４）：アルビジアサポニンD
無色微細結晶、[α]D24  −１３．３°（ｃ＝０．１、MeOH)、
FAB−MS：計算値C53H82O23Na（M＋Na)+ １１０９．５１
実測値                   １１０９．５２
IR(KBｒ）：3445, 2930, 1743, 1078, 1043 cm-1
1H-NMR(500MHz, ピリジン、δ）、13C-NMR(125MHz, ピリジン、δc）
【化６】
0004278323.tif 000006
【００２２】
・式（５）：アルビジアサポニンE
無色微細結晶、[α]D24  −１１．３７°（ｃ＝０．１、MeOH)、
FAB−MS：計算値C53H80O24Na（M＋Na)+ １１２３．４９
実測値                   １１２３．５０
IR(KBｒ）：3445, 2933, 1736, 1655, 1078, 1047 cm-1
1H-NMR(500MHz, ピリジン、δ）、13C-NMR(125MHz, ピリジン、δc）
【化７】
0004278323.tif 000007
【００２３】
【表１】
0004278323.tif 000008
【００２４】
【表２】
0004278323.tif 000009
【００２５】
・式（６）：ミリオフィロサイド
黄色粉末、[α]D24  −１１８．５２°（ｃ＝０．１、MeOH)、
FAB−MS：計算値C43H56O19Na（M＋Na)+ ８９９．３３
実測値                       ８９９．３３
UV[MeOH, nm(logε)]：202(5.2), 267(5.2), 275(5.2), 301(4.6), 314(4.7)
IR(KBｒ）：3432, 1645, 1630, 1062 cm-1
1H-NMR(500MHz, DMSO、δ）、13C-NMR(125MHz, DMSO、δc）
【化８】
0004278323.tif 000010
【００２６】
アルビジアサポニンA 、Bの甘味評価
アルビジアサポニンAは水に溶解するが、甘味倍数が高くないため、サンプルそのものの利き味を行った。アルビジアサポニンBは水への溶解性が低いため、０．１％アルビジアサポニンB水溶液４０ｇにエタノールを０．１ｍｌ加えてサンプル液を調製した（サンプル液の濃度：０．００６％水溶液）また、砂糖水を３．２〜４．０％まで等間隔の濃度で調製した。
パネラーにアルビジアサポニンA B水溶液がどの砂糖水に相当するかを選択させ、アルビジアサポニンA B水溶液の甘味倍数を求めた。
その結果、アルビジアサポニンAでは、パネラー全員の平均値から、アルビジアサポニンの甘味倍数は砂糖に対して約５倍であった。なお、パネラーから、アルビジアサポニンA 水溶液は口に含んだ直後、すぐに渋みのようなものが感じられ、その後に甘味を感じたとの評価が得られた。
【００２７】
またアルビジアサポニンBでは、パネラー全員の平均値から、アルビジアサポニンBの甘味倍数は砂糖に対して約６００倍であった。なお、パネラーから、アルビジアサポニンB 水溶液は口に含んだ直後の甘味は非常に弱いが、時間の経過とともに強い甘味の発現が感じられ、グリチミン（登録商標）より甘味の発現が遅いとの評価が得られた。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明のマメ科ネムノキ属のミリオフィロサイドの抽出方法を説明するための概略図である。
【図１】
0004278323.tif 000013