(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
Ａ−Ｚ−Ｒ            （Ｉ）
［式中、
Ａは、Ｈ−Ｐ(Ｏ)(ＯＨ)−であり；
Ｚは、マンノース、グルコサミン、マンノースによりモノ置換されたマンノース、及び−Ｐ(Ｏ)(ＯＨ)−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＲ1Ｒ2（式中、Ｒ1およびＲ2は互いに独立に水素または(Ｃ1−Ｃ4)−アルキル−である）によりモノ置換されたマンノース、からなる群に由来する２〜５個の糖基であり；そして
Ｒは、イノシトール、イノシトールホスフェート、イノシトールシクロホスフェート及びイノシトールシクロチオホスフェートからなる群より選択される］
の化合物、およびその生理的に耐容性のある塩。
【請求項２】
請求項１に記載の式Ｉの化合物の製造方法において、保護された糖およびイノシトール前駆体から段階的にイノシトールグリカンを合成し、ついで基Ａを脱保護された−ＯＨ基に付加し、得られた化合物から他の官能基の保護のため一時的に導入した１または２以上の保護基を除去し、このようにして得られた式Ｉの化合物を必要に応じてその生理的に耐容性ある塩に変換する方法。
【請求項３】
請求項１に記載の式Ｉの化合物少なくとも１種の有効量の溶解型、無定形型または結晶型からなる医薬製剤。
【請求項４】
修飾または非修飾インスリンまたはインスリン誘導体少なくとも１種のある量を含有する請求項３記載の医薬製剤。
【請求項５】
請求項３または４記載の医薬製剤の製造方法において、式Ｉの化合物少なくとも１種を、生理的に許容される賦形剤および必要に応じて適当な添加剤および／または補助剤を用いて、適当な投与形態に形成することを特徴とする方法。
【請求項６】
修飾または非修飾インスリンまたはインスリン誘導体少なくとも１種を添加する請求項５記載の方法。
【請求項７】
請求項１に記載の式Ｉの化合物もしくは請求項２記載の方法によって得られた式Ｉの化合物少なくとも１種の糖尿病またはインスリン非依存性糖尿病の処置用医薬製剤の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、糖尿病の処置に適当なインスリン様作用を有するイノシトールグリカンに関する。
【０００２】
【従来の技術】
インスリンの代謝作用では同じくインスリン様作用を有する低分子量化合物の形成も起こることが知られている（ＵＳ４,４４６,０６４）。インスリン様作用を有する多数のイノシトールグリカン化合物がすでに提案されている（ＷＯ９６／１４０７５，ＪＰ６／２９３７９０，ＪＰ４／１２００８９）。
【０００３】
II型糖尿病、インスリン非依存性糖尿病は、末梢組織たとえば筋肉または脂肪組織のインスリン抵抗性を伴う。それによって低下するグルコースの利用はグルコース輸送およびそれに続く代謝過程のインスリン刺激の欠如により生じる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
インスリン様作用を有する活性化合物をさらに発見することを試み、本発明はインビトロにおいてインスリン様作用を有し、良好な血清安定性を示し、またインスリン抵抗性組織に対してもインスリン様作用をもち、したがって糖尿病の処置に適当である化合物を見出すことを目的として以下の化合物に到達した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
すなわち、本発明は、式I
Ａ−Ｚ−Ｒ                        （I）
のインスリン様作用をもつイノシトールグリカンおよび／または式Iの化合物の生理的に耐容性のある塩および／または式Iの化合物の立体異性型に関する。
【０００６】
上記式I中、
Ａは、基
１) Ｈ−Ｐ(Ｏ)(ＯＨ)−
２) Ｈ−Ｐ(Ｓ)(ＯＨ)−
３) ＨＯ−Ｐ(Ｓ)(ＯＨ)−
４) ＨＳ−Ｐ(Ｓ)(ＯＨ)−
５) (Ｃ1−Ｃ4)−アルキル−Ｐ(Ｏ)(ＯＨ)−
６) (Ｃ1−Ｃ4)−アルキル−Ｐ(Ｓ)(ＯＨ)−
７) Ｓ(Ｏ)2(ＯＲ1)−
８) Ｓ(Ｏ)(ＯＲ1)−
９) ＮＨ2−Ｃ(Ｏ)−
10) Ｒ1Ｒ2Ｎ-
11) Ｒ1Ｒ2Ｎ−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−
12) Ｒ1Ｏ−ＳＯ2−ＮＨ−
13) (Ｃ1−Ｃ4)−アルキル−ＳＯ2−
14) (Ｃ1−Ｃ4)−アルキル−Ｓ(Ｏ)−または
15) Ｒ1−Ｓ−
（式中、Ｒ1およびＲ2は互いに独立に水素または(Ｃ1−Ｃ4)−アルキル−である）であり、
Ｚは、
１) ２〜６個の糖基、
２) ２〜６個の糖基であって互いに独立に次の基によってモノないしヘキサ置換されたもの、
2.1  メチル
2.2  糖基
2.3  二糖基
2.4  −ＳＯ2−ＯＨ
2.5  −Ｃ(Ｏ)−ＮＲ1Ｒ2
2.6  −Ｃ(Ｏ)−(Ｃ1−Ｃ4)−アルキル−
2.7  −Ｐ(Ｏ)(Ｈ)ＯＨ−
2.8  −Ｐ(Ｏ)(ＯＨ)2
2.9  −Ｐ(Ｓ)(Ｈ)ＯＨ−
2.10 −Ｐ(Ｓ)(ＯＨ)2
2.11 −Ｐ(Ｓ)(ＳＨ)(ＯＨ)
2.12 −Ｐ(Ｏ)(ＯＨ)−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＲ1Ｒ2、または
2.13 その２〜６個の糖基間のグリコシル結合が１〜６回−ＣＨ2−もしくは−Ｓ−で置換されている２〜６個の糖基
（式中、Ｒ1およびＲ2は互いに独立に水素または(Ｃ1−Ｃ4)−アルキル−である）であり、
Ｒは、
１) イノシトール
２) イノシトールホスフェート
３) イノシトールチオホスフェート
４) イノシトールシクロホスフェート
５) イノシトールシクロチオホスフェート
６) 互いに独立に
6.1 ホスフェートもしくは
6.2 チオホスフェート
によりモノもしくはジ置換されたＲ２）〜５）に定義された群からの基、
７) 互いに独立に
7.1 シクロホスフェートもしくは
7.2 シクロチオホスフェート
によりモノもしくはジ置換されたＲ２)〜５）に定義された群からの基、または
８) ２つの隣接したＯＨ基が
8.1 −ＣＨ2−ＳＯ2−ＮＨ−
によって置換されたイノシトール、
である。
【０００７】
式Iの好ましい化合物は、
Ａは、
１) Ｈ−Ｐ(Ｏ)(ＯＨ)−
２) Ｓ(Ｏ)2(ＯＲ1)−または
３) ＮＨ2−Ｃ(Ｏ)−
であり、
Ｚは、
１) 以下の群、
1.1 マンノース
1.2 グルコース
1.3 グルコン酸
1.4 ガラクトン酸（galactonic acid）
1.5 マンノン酸（mannonic acid）
1.6 グルコサミン
1.7 フルクトースもしくは
1.8 ガラクトースからなる群に由来する２〜６個の糖基または
２) Ｚ1.1〜Ｚ1.8に定義された基に由来し、互いに独立に
2.1 メチル
2.2 マンノース
2.3 グルコサミン
2.4 ジマンノースもしくは
2.5 マンノース−グリコサミン（２個の糖基マンノースとグリコサミンの間のグリコシド結合は２つの糖の炭素原子１−３、１−２または１−６の間にある）によってモノないしヘキサ置換された２〜６個の糖基、
であり、
Ｒは、
１) イノシトール
２) イノシトールホスフェート
３) イノシトールチオホスフェート
４) イノシトールシクロチオホスフェートまたは
５) イノシトールシクロホスフェート
である化合物である。
【０００８】
式Iのとくに好ましい化合物は、
Ａは、Ｈ−Ｐ(Ｏ)(ＯＨ)−であり、
Ｚは、
１) 1.1 マンノースもしくは
1.2 グルコサミン
からなる群に由来する２〜４個の糖基または
２) 2.1 マンノースもしくは
2.2 マンノースにより一置換されたグルコサミン
からなる群に由来する２〜４個の糖基であり、
Ｒは、
１）イノシトール、
２）イノシトールホスフェートまたは
３）イノシトールシクロホスフェート
である化合物である。
【０００９】
糖基は、炭素原子３〜７個を有するアルドースおよびケトースに由来し、ＤまたはＬシリーズのいずれに属してもよい化合物を意味し、これらにはまたアミノ糖およびウロン酸も包含されると理解すべきである。その例としては、グルコース、マンノース、フルクトース、ガラクトース、リボース、エリトロース、グリセルアルデヒド、セドヘプツロース、グルコサミン、ガラクトサミン、グルクロン酸、ガラクツロン酸、グルコン酸、ガラクトン酸またはマンノン酸を挙げることができる。
【００１０】
二糖は、２個の糖単位から構成される糖を意味する。三糖、四糖、五糖または六糖は３〜６個の糖のアセタール様結合によって形成される。この場合の結合はα−またはβ−型のいずれであってもよい。糖の間の結合は、それぞれの糖の炭素原子１と炭素原子６、炭素原子１と炭素原子２および炭素原子１と炭素原子４を介して行われるのが好ましい。糖の間の結合はα−型が好ましい。
【００１１】
ＡのＺへの結合は、たとえばＺの酸素原子の１つもしくはＺの炭素原子の１つを介して、好ましくはＺのＣＨ2基の炭素原子を介して行われる。Ａ１０）〜１２）の基の結合は好ましくはＺの炭素原子を介して行われ、Ａの他の結合は好ましくはＺの酸素原子を介して行われる。
【００１２】
ＲのＺへの結合は、二糖、三糖、四糖、五糖または六糖の結合と同様に行われる。さらにＲからＺへの結合は、１または２回以上−ＣＨ2−または−Ｓ−で置換されてもよい。
【００１３】
糖が置換されている場合には、置換は好ましくは糖のＯＨ基の水素原子に行われる。
【００１４】
インスリン抵抗性組織の語は、たとえば、もうインスリン受容体が全く含まれていないラット脂肪細胞を意味するものとして理解すべきである。
【００１５】
本発明の化合物は１個もしくは２個以上のホスフェート基を含有していてもよく、これらはまたホスフェート保護基によりさらに誘導体化されていてもよい。ホスフェート保護基は、たとえばフェニル、ベンジルまたはヒドロキシプロピルニトリルである（Houben Weyl, Methoden der Organischen Chemie 12/1 または12/2巻；Teilheimer, Synthetic Methods of Organic Chemistry, 45巻）。
【００１６】
式Iの化合物の生理的に耐容性のある塩はとくに、医薬的に利用可能なまたは非毒性の塩を意味するものとして理解すべきである。このような塩はたとえば、酸性の基たとえばリン酸基または硫酸基を含む式Iの化合物からは、Ｎａ、Ｋ、ＭｇおよびＣａのようなアルカリ金属またはアルカリ土類金属ならびにたとえばトリエチルアミンおよびトリス（２−ヒドロキシエチル）アミンのような生理的に耐容性ある有機アミンにより形成される。塩基性の基たとえばアミノ基を含む式Iの化合物は、たとえば塩酸、硫酸もしくはリン酸のような無機酸および有機カルボン酸もしくはスルホン酸たとえば酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマール酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸と塩を形成する。塩基性基および酸性基が同数存在する化合物は第三の塩成分とは無関係に内部塩を形成する。
【００１７】
【発明の実施の形態】
本発明はさらに、式Iの化合物の製造方法において、保護された糖およびイノシトール前駆体から段階的にイノシトールグリカンを合成し、ついで基Ａを付加し、得られた化合物から他の官能基の保護のために一時的に導入された１または２以上の保護基を除去し、このようにして得られた式Iの化合物を必要に応じてその生理的に耐容性のある塩に変換する方法に関する。
【００１８】
二糖〜多糖の合成は既知の方法によって行われる［H.Paulsen, Angew. Chem. Int. Ed. 21 (1982) p.155］。オリゴ糖の合成にはトリクロロアセトイミダート法の使用が好ましい［R.R.Schmidt, Angew.Chem.Int. Ed. 25 (1986) 212-235；T.Ogawa, Tetrahedron Lett. 31 (1990) 2439-2442］。
【００１９】
ホスフェートの合成は，Ｈ−ホスフェートおよびホスホロアミダイト法を用いて実施される［W.Bannwathら, Helvetica Chemica Acta, 70 (1987), 175-186；L.A.Slotin, Synthesis (1977), 737-752］。
【００２０】
糖のヒドロキシル基に対して本質的に使用可能な保護基には、以下の保護基、すなわちベンジル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、トリチル、tert−ブチルジメチルシリル、ベンジリデン、シクロヘキシリデンまたはイソプロピリデン保護基がある。
【００２１】
式Iの化合物およびそれらの生理的に耐容性のある塩は、糖尿病またはインスリン非依存性糖尿病の処置のための医薬製剤用の活性化合物として主として使用される。
【００２２】
したがって、本発明はまた、式Iの化合物少なくとも１種および／またはその生理的に耐容性のある塩少なくとも１種の溶解型、無定形型および／または結晶型、好ましくは無定形型および／または結晶型からなる医薬製剤に関する。
【００２３】
医薬製剤は、ｐＨ約３.０〜９.０好ましくは約５.０〜８.５の注射用溶液または懸濁液であることが好ましく、適当な等張化剤、適当な防腐剤および必要に応じて適当な緩衝剤、ならびに必要に応じてさらにデポ用基剤を、すべて滅菌水性溶液または懸濁液で含有する。活性化合物以外のすべての製剤構成成分が製剤の賦形剤を形成する。適当な等張化剤は、たとえば、グリセロール、グルコース、マンニトール、ＮａＣｌ、カルシウムまたはマグネシウム化合物たとえばＣａＣｌ2またはＭｇＣｌ2である。適当な防腐剤はたとえばフェノール、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコールおよび／またはｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルである。
【００２４】
とくにｐＨを約５.０〜８.５に調整するために使用できる緩衝物質はたとえば、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムまたはリン酸ナトリウムである。そのほかに、生理的に許容される希酸（通常ＨＣｌ）またはアルカリ（通常ＮａＯＨ）もｐＨの調整に適している。
【００２５】
本発明の製剤の作用プロフィルを変動させる目的で、修飾（ＥＰ−Ｂ 132 769およびＥＰ−Ｂ 132 770参照）および／または非修飾インスリン、好ましくはウシ、ブタまたはヒトインスリン、とくにヒトインスリンも添加できる。
【００２６】
医薬製剤は、式Iの化合物少なくとも１種をおよび／またはその生理的に耐容性のある塩少なくとも１種を、必要に応じて修飾および／または非修飾インスリンまたはインスリン誘導体とともに、生理的に許容される賦形剤および必要に応じて適当な添加剤および補助剤を用いて、適当な投与形態に形成させることによって製造される。
【００２７】
【実施例】
本発明を以下の実施例によりさらに詳細に説明する。
実施例１：
反応経過は実施例１の末尾の反応式によって示される通りである。
化合物３の合成
２００mlの乾燥メチレンクロリドおよび４００mlの乾燥ｎ−ヘプタン中に６０ｇ（９４ミリモル）の１［T. G. Mayer, B. Kratzer, R. R. Schmidt, Angew. Chem.106 (1994) 2289-93］および２１.２ｇ（４２.４ミリモル）の２［A. Termin, R. R. Schmidt, Liebigs Ann. Chem. (1989) 789-795］を溶解する。７０ｇの乾燥モレキュラーシーブ（０.４nm）を加えたのち、混合物を室温で１５分間攪拌する。メチレンクロリド中０.０５Ｍトリメチルシリルトリフルオロメタン−スルホン酸（以下の操作においては触媒溶液と記述する）５mlをついで添加する。１５分後に、３００mlのｎ−ヘプタン／酢酸エチル（１：１）を加え、混合物をシリカゲルを通してろ過する。シリカゲルをｎ−ヘプタン／酢酸エチル（１：１）により洗浄し、ついでろ液を濃縮する。フラッシュクロマトグラフィーにより精製すると、４１.０ｇ（９９％）の３が無色の油状物として得られる。ＴＬＣ：ｎ−ヘプタン／酢酸エチル（１：１），Ｒf＝０.６，ＭＳ：(Ｍ＋Ｌi)+＝９８１.１，Ｃ55Ｈ67Ｎ3Ｏ11Ｓi として計算してＭ＝９７４.２１。
【００２８】
イミダート４の合成
４１ｇ（４２.０ミリモル）の３を４００mlのテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）および９mlの酢酸に溶解する。１ＭのＴＢＡＦ／ＴＨＦ溶液７０mlを加えたのち、混合物を室温に８時間放置する。凍結させて（−３０℃で１６時間）酢酸を除去し、ろ液を濃縮したのち、フラッシュクロマトグラフィーで精製する。脱保護化合物の収量３４.１ｇ（９４％）。これを３００mlの乾燥メチレンクロリドに溶解する。５０mlのトリクロロアセトニトリルおよび２０ｇの炭酸カリウムを加えたのち、混合物を室温で４時間攪拌する。これをシリカゲルを通してろ過し、シリカゲルをｎ−ヘプタン／酢酸エチル（１：１）で洗浄し、ろ液を濃縮する。粗収量：４２.１ｇ。ＴＬＣ：ｎ−ヘプタン／酢酸エチル（２：１），Ｒf＝０.５。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）イミダートの特性シグナル；σ＝８.７８ (ＮＨ)および５.３６ (アノマー，β−イミダート）。
【００２９】
三糖６の合成
３３.２ｇ（３３.０ミリモル）の４および１３.３ｇ（２５.０ミリモル）の５（R.Aneja, S.G.Aneja, A.Parra, Tetrahedron, Asymmetry 6（1995）17-18；C.J.J. Elie, R.Verduyn, C.E.Dreef, D.M.Braunts, G. A. van der Marel, J. H.van Boom, Tetrahedron, 46 (1990) 8243-54）を、１２０mlの乾燥メチレンクロリドおよび３６０mlの乾燥ｎ−ヘプタンに溶解する。１００ｇのモレキュラーシーブを加えたのち、混合物を室温で１５分間攪拌する。これをアルゴン下−２０℃に冷却し、ついで２０mlの触媒溶液で処理する。３０分後、混合物を室温に放置して解凍させる。後処理のためには、それをシリカゲルを通してろ過し、シリカゲルをｎ−ヘプタン／酢酸エチル（１：１）によって洗浄する。ろ液を濃縮し、粗生成物（４６.２ｇ）をメチレンクロリド１５０mlに溶解する。４００mlのメタノールおよび１５mlの１Ｍ ＮａＯＭｅ／ＭｅＯＨ溶液を加えたのち、混合物を室温に１６時間放置する。溶液を１mlの水で処理し、濃縮する。得られた油状物を酢酸エチル５０mlに溶解し、２００mlのｎ−ヘプタン／酢酸エチル（１：１）で希釈しシリカゲルを通してろ過する。濃縮後、残留物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製する。アノマー混合物として、白色の泡状物が収量３２.５ｇ（９７％）で得られる。ＴＬＣ：ｎ−ヘプタン／酢酸エチル（２：１），Ｒf＝０.５，ＭＳ：(Ｍ＋Ｌi)+＝１３３６.７；分子量計算値，Ｃ80Ｈ87Ｎ3Ｏ15としてＭ＝１３３０.５９。
【００３０】
三糖７の合成
アノマー混合物６は単に、誘導体７としてクロマトグラフィーにより容易に分離できる。３２.４ｇ（２４.４ミリモル）の６を２００mlのメチレンクロリドに溶解する。０.５Ｍ ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（５００mlのＭｅＯＨ中ＡｃＣｌ １７.５mlから）５００mlおよび２０mlのエチレングリコールを加えたのち、混合物を室温に１７時間放置する。濃縮後、残留物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。得られた生成物（２６.９ｇ，８８％）を３００mlのメチレンクロリドに溶解する。３.０ｇのイミダゾールおよび４.６ｇのＴＢＤＭＳＣｌを加える。室温に１６時間放置したのち、混合物を５００mlのｎ−ヘプタン／酢酸エチル（２：１）で希釈しシリカゲルを通してろ過する。シリカゲルをｎ−ヘプタン／酢酸エチル（２：１）で洗浄し、ろ液を濃縮する。得られた粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製する。収量は２１.１ｇ（７２％）の７および６.３ｇ（２２％）のα生成物である。ＴＬＣ：ｎ−ヘプタン／酢酸エチル（２：１），７のＲf＝０.５，α生成物のＲf＝０.３．ＭＳ：(Ｍ＋Ｌi)+＝１３７０.６，Ｃ80Ｈ93Ｎ3Ｏ15Ｓi として計算してＭ＝１３６４.７１。
【００３１】
三糖８の合成
２１.２ｇ（１５.５ミリモル）の７を６０mlのメチレンクロリドおよび１８０mlのジメトキシプロパンに溶解する。２５０mgのＴｓＯＨを加え、混合物を室温に１時間放置する。２mlのトリメチルアミンを加えたのち濃縮すると、２３.１ｇの粗生成物が得られる。これを１５０mlのＴＨＦに溶解し、３０mlの１Ｍ ＴＢＡＦ／ＴＨＦ溶液で処理する。１６時間後に濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製する。収量：２０.０ｇ（９９％）の８，白色泡状物。ＴＬＣ：ｎ−ヘプタン／酢酸エチル（２：１），Ｒf＝０.４，ＭＳ：(Ｍ＋Ｌi)+＝１２９６.７；Ｃ77Ｈ83Ｎ3Ｏ15として計算してＭ＝１２９０.５１。
【００３２】
四糖１０の合成
２０.０ｇ（１５.４ミリモル）の８と１５.０ｇ（２３.５ミリモル）の９［T.G.Mayer, B.Kratzer, R.R.Schmidt, Angew.Chem. 106 (1994) 2289-93］を化合物６の場合の操作と同様に反応させると、２０.３ｇ（７６％）の四糖１０が白色泡状物として得られる。ＴＬＣ：ｎ−ヘプタン／酢酸エチル（２：１），Ｒf＝０.６，ＭＳ：(Ｍ＋Ｌi)+＝１７７０，Ｃ107Ｈ115Ｎ3Ｏ20として計算してＭ＝１７６３.０９。
【００３３】
五糖１２の合成
２０.３ｇ（１１.８ミリモル）の１０と１２.０ｇ（２０.３ミリモル）の１１［T.G.Mayer, B.Kratzer, R.R.Schmidt, Angew.Chem. 106 (1994) 2289-93］を化合物６の場合の操作と同様に反応させると、１９.４ｇ（８０％）の脱アシル生成物が得られる。この生成物を２００mlのメチレンクロリドに溶解し、３.４ｇ（５０.０ミリモル）のイミダゾールで処理する。６.０ｇ（４０.０ミリモル）のＴＢＤＭＳＣｌを加え、混合物を室温で１５時間攪拌する。５mlのメタノールを加えたのち、１０分間放置し、ついで２００mlのｎ−ヘプタン／酢酸エチル（１：１）で希釈しシリカゲルを通してろ過する。シリカゲルを２００mlのｎ−ヘプタン／酢酸エチル（１：１）でさらに洗浄し、ろ液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製する。白色泡状物としての１２の収量：１９.４ｇ（９５％）。ＴＬＣ：ｎ−ヘプタン／酢酸エチル（２：１），Ｒf＝０.７，ＭＳ：(Ｍ＋Ｌi)+＝２２２６；Ｃ133Ｈ151Ｎ3Ｏ25Ｓｉとして計算してＭ＝２２１９.７５。
【００３４】
六糖１４の合成
１９.４ｇ（８.９ミリモル）の１２および１４.０ｇ（２０.０ミリモル）の１３［T.G.Mayer,B.Kratzer, R.R.Schmidt, Angew．Chem. 106 (1994) 2289-93］を１００mlの乾燥メチレンクロリドおよび３００mlの乾燥ｎ−ヘプタンに溶解する。４０ｇのモレキュラーシーブ（０.４nm）を加えたのち、混合物を室温で１５分間攪拌する。１０mlの触媒溶液を加え、混合物をさらに１５分間攪拌する。後処理のためには、それをシリカゲルを通してろ過し、シリカゲルをｎ−ヘプタン／酢酸エチル（１：１）で洗浄する。ろ液を濃縮すると、３３ｇの粗生成物が得られる。これを２００mlのメチレンクロリドに溶解し、メタノール中０.５Ｍ ＨＣｌ ５００mlで処理する。室温に２時間置いたのち、混合物を濃縮し、ついでメチレンクロリドを加えて数回濃縮する。得られた中間体を ２００mlのメチレンクロリドに溶解し、３.４ｇ（５０ミリモル）のイミダゾールおよび６.０ｇ（４０ミリモル）のＴＢＤＭＳＣｌで処理する。１６時間後、混合物を化合物１２の場合と同様にして後処理する。白色泡状物としての１４の収量２０.２ｇ（８５％）。ＴＬＣ：ｎ−ヘプタン／酢酸エチル（２：１），Ｒf＝０.３，ＭＳ：(Ｍ＋Ｌi)+＝２６６９；Ｃ161Ｈ177Ｎ3Ｏ30Ｓｉとして計算してＭ＝２６６２.２６。
【００３５】
化合物１５の合成
３０.０ｇのトリアゾールを８００mlの乾燥ＴＨＦに溶解する。１３.５mlのオキシ塩化リンを１０℃で滴下して加える。ついで６０mlのトリエチルアミンを滴下して加え、混合物を室温で１５分間攪拌する。沈殿をろ過し、少量の乾燥ＴＨＦで洗浄する。ろ液を１９.１ｇ（７.２ミリモル）の１４に加える。この溶液を１００mlに濃縮する。１５分後５００mlの酢酸エチルで希釈し１００mlの水で２回洗浄する。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、ろ過し、濃縮する。フラッシュクロマトグラフィーに付すと、１９.０ｇ（９７％）の環状ホスフェート誘導体が白色泡状物として得られる。ＴＬＣ：メチレンクロリド／メタノール／３３％ＮＨ3（１００／７／１），Ｒf＝０.３，ＭＳ：(Ｍ＋２Ｌi−Ｈ)+＝２７３７；Ｃ161Ｈ174Ｎ3Ｏ32ＰＳi として計算してＭ＝２７２４.２２．環状ホスフェートを３５０mlのＴＨＦに溶解して、１００mlのＴＢＡＦ（ＴＨＦ中１Ｍ）を添加する。２０時間後に、混合物を濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製する。収量：１８.１ｇ（９９％）の１５が白色泡状物として得られる。ＴＬＣ：メチレンクロリド／メタノール／３３％ＮＨ3（１００／７／１），Ｒf＝０.３（出発原料と同一の移動性），(Ｍ＋２Ｌi−Ｈ)+＝２６２２；Ｃ155Ｈ162Ｎ3Ｏ32Ｐとして計算してＭ＝２６０９.９６。
【００３６】
化合物１６の合成
１４ｇの亜リン酸をピリジンと４回濃縮し、ついで２００mlの乾燥ピリジンに取る。１６mlのピバロイルクロリドを１０℃で滴下して加える。この反応溶液を室温に１５分間放置する。１８.１ｇ（６.９ミリモル）の１５を、上述の反応溶液に導入する。１時間後、２００mlのトルエンおよび１５０mlのメチレンクロリド／メタノール／３３％ＮＨ3（３０／１０／３）で希釈する。濃縮後、残ったピリジンをトルエンとさらに３回留去する。残留物を２００mlのメチレンクロリド／メタノール（２０：１）に懸濁する。不溶の成分をろ過し、５０mlのメチレンクロリド／メタノール（２０：１）で２回洗浄する。ろ液を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製する。保護された最終生成物の収量１６.９ｇ（９１％）。ＴＬＣ：メチレンクロリド／メタノール／３３％ＮＨ3（１００／７／１），Ｒf＝０.２５；ＭＳ：(Ｍ＋３Ｌi−２Ｈ)+＝２６９１；Ｃ155Ｈ163Ｎ3Ｏ34Ｐ2として計算してＭ＝２６７３.９４．脱保護には６００mlのアンモニアを−７８℃で濃縮する。これに４.７ｇ（２０４ミリモル）のナトリウムを溶かす。この溶液を３００mlの乾燥ＴＨＦで希釈し、１６.９ｇ（６.３ミリモル）の保護された最終生成物を１００mlの乾燥ＴＨＦに溶かして反応温度−７８℃において徐々に滴下して加える。１５分の反応時間後に（青色が消えてはならない）、混合物を注意深く１０ｇの塩化アンモニウムで処理する。青色が消えたならば、混合物を注意深く１００mlの水および３００mlのメタノールで希釈する。放置して解凍させ、ついで約１５０mlに濃縮する。この溶液を２Ｌのメチレンクロリド／メタノール／３３％ＮＨ3（３／３／１）で希釈し、フラッシュシリカゲルカラム（シリカゲル７００ml）に添加する。これを３Ｌのメチレンクロリド／メタノール／３３％ＮＨ3（３／３／２）、ついで３Ｌのメチレンクロリド／メタノール／３３％ＮＨ3（３／３.５／３）によって溶出する。混合物をついでｎ−ブタノール／エタノール／水／３３％ＮＨ3（２／２／２／１）を用いてクロマトグラフィーに付すと生成物が溶出する。白色固体としての１６の収量：５.５ｇ（７８％）。ＴＬＣ：（２／２／２／１），Ｒf＝０.４；(Ｍ＋Ｈ)+＝１１１６.５；Ｃ36Ｈ63ＮＯ34Ｐ2として計算してＭ＝１１１５.８３．31Ｐ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）σ＝１６.３ppm（環状ホスフェート），７.９（Ｈ−ホスフェート）。
【００３７】
【化１】
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【００３８】
【化２】
0004299378.tif 000003
【００３９】
【化３】
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【００４０】
【化４】
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【００４１】
【化５】
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【００４２】
実施例２：
化合物Ａ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，ＨおよびＩは実施例１の方法と同様にして調製される。以下の表１に構造式、実験式およびマススペクトルを示す。
【００４３】
【表１】
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【００４４】
【表２】
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【００４５】
【表３】
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【００４６】
【表４】
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【００４７】
実施例３：
薬理活性
本発明の式Iの化合物の生物学的活性は、ラットからの単離脂肪細胞を用いて測定した。
ラットからの脂肪細胞の調製は以下のように実施した。すなわち、Wistarラット（１６０〜１８０ｇ，食餌の制限なし）の副睾丸の白色脂肪組織を、コラーゲナーゼで消化し、得られた単離脂肪細胞をろ過によって非消化組織から分離し、Krebs−Ringer−Henseleit緩衝液（ＫＲＨ緩衝液）を用い数回浮遊させて洗浄した。
【００４８】
Ａ) 脂肪の生合成
この試験は、グルコースの輸送ならびにインスリンシグナル伝達カスケードに含まれるトリグリセライド（グリセロール−３−Ｐ合成、エステル化）／リン脂質／脂肪酸合成を促進する、グルコースのトルエン可溶性産物（トリグリセライド、リン脂質、脂肪酸）へのインスリン刺激性変換を測定するものである。この試験ではグルコース濃度２.５ｍＭにおいて、エステル化（グルコースの輸送を含むグリセロール−３−Ｐ合成ではない）が脂肪生合成を律速する。
【００４９】
ＫＲＨ緩衝液中ラット脂肪細胞２００μl（３×１０5細胞／ml）を、インスリン（１０ng／ml）または本発明の式Iの化合物（最終容量１ml）の存在下または不存在下に、１００μlのＤ−[３−3Ｈ]グルコース（２５ｍＭ，０.４μＣi）とともに３７℃で９０分間インキュベートする。トルエン可溶性シンチレーションカクテル（１０ml）を加えて、細胞を崩壊させ、脂質を水溶性の生成物およびインキュベーション培地から分離する。相分離後、脂質生成物に取り込まれた放射能を、水相を除去しないで直接シンチレーション測定によって定量する（[3Ｈ]脂質 [dpm×１０-3]）。この放射能から対照値（細胞を除くほかは同一条件下のインキュベーション）を差し引く。脂肪の合成速度は１２０分まで直線状である。最大刺激係数−これはインスリンを加えた場合のインキュベーション結果とインスリンを加えなかった場合のインキュベーション結果の比である−を１００％とする。「％Insmax」の単位で示される百分率データは、このように定義された最大刺激係数の部分である。ＥＣ50の語は式Iの各化合物によって達成される５０％最大刺激が観察される式Iの化合物の濃度を示す。
【００５０】
Ｂ) グルコース輸送
ＫＲＨ緩衝液１００μl中ラット脂肪細胞（力価５×１０5細胞／ml）をインスリンまたは本発明の式Iの化合物とともに穏やかに振盪しながら３７℃で１５分間インキュベートする。１５μlの２−[3Ｈ]デオキシグルコース（０.３ｍＭ，０.２μＣi）を加えたのち、インキュベーションを室温で継続する。特定の時間（０〜２０分）経過後に１００μlの試験バッチを採取し、予め２５０μlのジノニルフタレートを添加した反応容器（容量４００μl）に移す。遠心分離（１５,０００×ｇ、１分）後、試験管を油層のレベルで切断して、油層より下部のインキュベーション培地の細胞を油層から分離し、シンチレーション容器に移す。５mlの水溶性のシンチレーション液を加えたのち放射能を測定する。この細胞結合総放射能を、細胞中への受動的拡散および細胞間隙への夾雑による [3Ｈ]デオキシグルコースについて補正するために、対照値（グルコース輸送阻害剤のサイトカラシンＢの存在下のインキュベーション）を差し引く。初期（刺激）グルコース輸送速度は１５分まで直線状である。最大刺激係数−これはインスリンを加えた場合のインキュベーション結果とインスリンを加えなかった場合のインキュベーション結果の比である−を１００％とする。「％Insmax」およびＥＣ50はＡ）脂肪の生合成において定義した通りである。
【００５１】
【表５】
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