(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式Iの化合物、またはその溶媒和化合物、水和物もしくは薬学的に許容される塩：
【化１】
0004256160.tif 000186
式中、
WはR1またはR1S(O)2であり；
R1は
R2、
R2(CH2)tC(R12)2（ただしtは0〜3であり、かつR12はそれぞれ同じでも異なっていてもよい）、
R2CF2C(R12)2(CH2)q（ただしqは0〜2であり、R12はそれぞれ同じでも異なっていてもよい）、または
R2CH2C(R12)2(CH2)q（ただしqは0〜2であり、R12はそれぞれ同じでも異なっていてもよい）であり；
R2は
フェニル、ナフチル、もしくはビフェニル（ただしそれぞれ無置換または一つもしくは複数のC1〜4アルキル、C1〜4アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、CF3、またはOCF3で置換されている）、
Yは-NH-または-O-であり；
R3、R4、R5およびR6は独立して水素、C1〜12アルキル、ヒドロキシまたはハロゲンであり；
R11は水素であり；
R12は水素であり；
Bは
【化４】
0004256160.tif 000187
または
【化５】
0004256160.tif 000188
からなる群より選択され、
ただし
R7、R8、R9、およびR10は独立して水素またはC1〜12アルキルであり；
Xは-O-であり；
Ra、RbおよびRcは独立して水素またはC1〜12アルキルであり；
nは0から8であり；かつ
mは0から6であり；
R13は水素またはC1〜12アルキルであり；
R14およびR15は独立して水素、C1〜12アルキル、C3〜9シクロアルキル、ハロゲンまたはC1〜20アルコキシであり；かつ
R16およびR17は独立して水素またはC1〜12アルキルである。
【請求項２】
R3、R4、R5およびR6が独立して水素、C1〜12アルキルまたはハロゲンであり；
R11が水素であり；
R7、R8、R9およびR10が独立して水素またはC1〜12アルキルであり；
Ra、RbおよびRcが独立してC1〜12アルキルであり；
R13がC1〜12アルキルであり；
R14およびR15が独立してC1〜12アルキル、C3〜9シクロアルキルまたはC1〜20アルコキシであり；かつ
R16およびR17が独立してC1〜12アルキルである、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
Bが
【化９】
0004256160.tif 000189
である、請求項1記載の化合物。
【請求項４】
Bが
【化１０】
0004256160.tif 000190
である、請求項1記載の化合物。
【請求項５】
Yが-NH-である、請求項1〜4のいずれか一項記載の化合物。
【請求項６】
WがR1またはR1S(O)2（ただしR1はR2であり、R2はフェニル、ナフチルまたはビフェニル（ただし無置換または一つもしくは複数のC1〜4アルキル、C1〜4アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、CF3またはOCF3で置換されている）である）である、請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物。
【請求項７】
WがR1（ただしR1はR2またはR2CF2C(R12)2(CH2)qであり、かつR2はフェニル、ナフチルまたはビフェニル（ただし無置換または一つもしくは複数のC1〜4アルキル、C1〜4アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、CF3またはOCF3で置換されている）であり；R12は水素であり；かつqは0である）である、請求項1〜5のいずれか一項記載の化合物。
【請求項８】
R6がC1〜6アルキルまたはハロゲンである、請求項1および3〜7のいずれか一項記載の化合物。
【請求項９】
R6がメチル、クロロまたはフルオロである、請求項8記載の化合物。
【請求項１０】
R6がクロロであり、R3がフルオロまたはヒドロキシである、請求項9記載の化合物。
【請求項１１】
R11が水素である、請求項1および3〜10のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１２】
Ra、Rb、RcおよびR13がそれぞれ水素である、請求項1、3および5〜11のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１３】
R7、R8、R9およびR10のそれぞれが水素である、請求項1および3〜12のいずれか一項記載の化合物。
【請求項１４】
以下の一つ、またはその溶媒和化合物、水和物もしくは薬学的に許容される塩である、請求項1記載の化合物：
N-[2-アミジノアミノオキシ)エチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミド；
N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミド；
N-(6-アミノ-2,4-ジメチル(3-ピリジル))メチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミド；
N-[2-(アミジノアミノオキシ)エチル]-2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)アセトアミド；
N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)アセトアミド；
N-2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(3-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド；
N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-クロロ-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド；
N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-メチル-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド；
N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-ヒドロキシ-6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド；
N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-(2-ヒドロキシ-6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド；または
トルエン-3-スルホン酸 2-ヒドロキシ-3-[(2-グアニジノオキシ-エチルカルバモイル)-メチル]-4-メチル-フェニルエステル。
【請求項１５】
請求項1〜14のいずれか一項記載の化合物および薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
【請求項１６】
抗凝血物質、抗血小板物質または血栓溶解物質の少なくとも一つをさらに含む、請求項15記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
化合物が約0.1mgから約500mgの間の量で存在する、請求項15記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
採血、血液保存、または血液循環において用いられる医療用具であって、該医療用具に埋め込まれるか、または物理的に連結された、請求項1〜14のいずれか一項記載の化合物を含む医療用具。
【請求項１９】
カテーテル、ステント、血液透析機、採血シリンジもしくはチューブ、または輸血管である、請求項18記載の医療用具。
【請求項２０】
経口投与に適合化された、請求項15〜17のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
哺乳動物において異常タンパク質分解、血栓症、虚血、卒中、再狭窄、または炎症を治療するための薬剤の製造における、請求項1〜14のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項２２】
哺乳動物において、トロンビンの産生または作用のいずれかを伴う異常な静脈血栓症または動脈血栓症によって特徴づけられる状態を、治療または予防するための薬剤の製造における、請求項1〜14のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項２３】
タンパク質分解酵素の作用を阻害する薬剤の製造における、請求項1〜14のいずれか一項記載の化合物の使用。
【請求項２４】
酵素が、白血球好中球エラスターゼ、キモトリプシン、トリプシン、ウロキナーゼ、プラスミノゲン活性化因子、膵エラスターゼ、カテプシンG、トロンビン、または第Xa因子である、請求項23記載の使用。
【請求項２５】
インビトロにおいてタンパク質分解酵素の作用を阻害する方法であって、該酵素を請求項1〜14のいずれか一項記載の化合物に接触させる段階を含む方法。
【請求項２６】
酵素が、白血球好中球エラスターゼ、キモトリプシン、トリプシン、ウロキナーゼ、プラスミノゲン活性化因子、膵エラスターゼ、カテプシンG、トロンビン、または第Xa因子である、請求項25記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
発明の分野
本発明は、タンパク質分解酵素阻害剤として機能する新規化合物、特に新しい種類のトロンビン阻害剤に関する。
【０００２】
関連技術
プロテアーゼは単一の特定のペプチド結合でタンパク質を切断する酵素である。プロテアーゼは、セリン、チオールまたはシステイニル、酸性またはアスパルチル、および金属プロテアーゼの四つの一般的な種類に分類することができる（Cuypersら、J. Biol. Chem. 257：7086（1982））。プロテアーゼは、消化、血餅の形成および溶解、生殖、ならびに外来細胞および生物に対する免疫反応などの様々な生物活性にとって必要不可欠である。異常なタンパク質分解は、ヒトおよび他の哺乳動物におけるいくつかの疾患状態に関連している。ヒト好中球プロテアーゼ、エラスターゼおよびカテプシンGは、組織破壊によって特徴付けられる疾患状態の原因であるとされている。これらの疾患状態には、気腫、慢性関節リウマチ、角膜潰瘍、および糸球体腎炎が含まれる。（Barret、「薬物としての酵素阻害剤（Enzyme Inhibitors as Drugs）」、Sandler編、University Park Press、Baltimore、（1980））。プラスミン、C-1エステラーゼ、C-3コンバターゼ、ウロキナーゼ、プラスミノゲン活性化因子、アクロシン、およびカリクレインなどの他のプロテアーゼは哺乳動物の正常な正常な生体機能において主要な役割を果たしている。多くの場合、哺乳動物の治療経過において一つまたは複数のタンパク質分解酵素の機能を妨害することは有益である。
【０００３】
セリンプロテアーゼには、エラスターゼ（ヒト白血球）、カテプシンG、プラスミン、C-1エステラーゼ、C-3コンバターゼ、ウロキナーゼ、プラスミノゲン活性化因子、アクロシン、キモトリプシン、トリプシン、トロンビン、第Xa因子、およびカリクレインなどの酵素が含まれる。
【０００４】
ヒト白血球エラスターゼは炎症部位で多形核白血球によって放出され、したがっていくつかの疾患状態の原因である。カテプシンGはもう一つのヒト好中球セリンプロテアーゼである。これらの酵素の活性を阻害する能力を有する化合物は、痛風、慢性関節リウマチ、および他の炎症性疾患の治療、ならびに気腫の治療において有用な抗炎症作用を有すると考えられる。キモトリプシンおよびトリプシンは消化酵素である。これらの酵素の阻害剤は膵炎の治療において有用である。ウロキナーゼおよびプラスミノゲン活性化因子の阻害剤は、良性前立腺肥大症、前立腺癌、および乾癬などの過剰細胞増殖疾患状態の治療において有用である。
【０００５】
セリンプロテアーゼトロンビンは、止血および血栓症における中心的役割を果たし、かつ多元的タンパク質として、血小板、内皮細胞、平滑筋細胞、白血球、心臓、およびニューロンへのいくつかの作用を誘導する。内因性経路（接触活性化）または外因性経路（血漿の非内皮表面への曝露、血管壁への損傷または組織因子放出による活性化）のいずれかを通じての凝固カスケードの活性化により、トロンビンに集中する一連の生化学的事象が引き起こされる。トロンビンはフィブリノゲンを切断して、最終的には止血栓を生じ（血餅形成）、細胞表面トロンビン受容体の独特なタンパク質分解切断を通じて血小板を強力に活性化し（Coughlin、Seminars in Hematology 31（4）：270〜277（1994））、かつフィードバック機構を通じてそれ自体の産生を自己増幅する。したがって、トロンビン機能の阻害剤は心血管および非心血管疾患の宿主において治療の可能性を有する。
【０００６】
第Xa因子は凝固経路におけるもう一つのセリンプロテアーゼである。第Xa因子は第Va因子およびリン脂質膜上のカルシウムと結合し、それによりプロトロンビナーゼ複合体を形成する。このプロトロンビナーゼ複合体は次いで、プロトロンビンをトロンビンに変換する（Claeson、Blood Coagulation and Fibrinolysis 5：411〜436（1994）；Harker、Blood Coagulation and Fibrinolysis 5 (別冊1)：S47〜S58（1994））。直接のトロンビン阻害剤では新しいトロンビンがまだかなり生成されるため、第Xa因子の阻害剤はトロンビンを直接阻害する物質よりも有利であると考えられる（LefkovitsおよびTopol、Circulation 90（3）：1522〜1536（1994）；Harker、Blood Coagulation and Fibrinolysis 5 (別冊1)：S47〜S58（1994））。
【０００７】
血管内血栓のインビボ診断撮像法が報告されている。これらの撮像法は、放射性原子または常磁性原子で検出可能に標識された化合物を用いる。例えば、γ線放射体In-111で標識された血小板を血栓を検出するための造影剤として用いることができる（Thakur, M.L.ら、Thromb Res. 9：345（1976）；Powersら、Neurology 32：938（1982））。Tc-99mで標識された血栓溶解酵素ストレプトキナーゼが造影剤として提唱されている（Wong、米国特許第4,418,052号（1983））。γ線放射体I-125およびI-131で標識された黄色ブドウ球菌のフィブリン結合ドメイン由来タンパク質Aが造影剤として提唱されている（Pang、米国特許第5,011,686号（1991））。フィブリンに特異性を有し（フィブリノーゲンに比べて）、Tc-99mで標識されたモノクローナル抗体が造影剤として提唱されている（Bergerら、米国特許第5,024,829号（1991）；Deanら、米国特許第4,980,148号（1990））。血栓溶解により急性心筋梗塞の治療を受けた患者の磁気共鳴撮像法における常磁性造影剤、ジエチレントリアミンペンタ酢酸ガドリニウムの使用が報告されている（De Roos, A.ら、Int. J. Card. Imaging 7：133（1991））。放射性同位体標識および常磁性体標識されたα-ケトアミド誘導体も、血栓造影剤として提唱されている（Abelmanら、米国特許第5,656,600号）。
【０００８】
強力かつ選択的プロテアーゼ阻害剤であり、かつ現在利用可能なプロテアーゼ阻害剤よりも生物学的利用能が大きく、副作用が少ないような非ペプチド化合物が、まだ必要とされている。したがって、強力な阻害能力および哺乳動物への低毒性によって特徴付けられる、新しい種類の強力なプロテアーゼ阻害剤が、いくつかの哺乳動物タンパク質分解性疾患状態の治療を含む、様々な状態に対する有用な治療薬としての可能性を有している。
【０００９】
発明の概要
本発明は、式I（下記）を有する新規アミノピリジニル、アミノグアニジニル、およびアルコキシグアニジニル置換フェニルアセトアミドを目的とする。同様に、式Iの化合物の調製法も提供される。本発明の新規化合物はプロテアーゼ、特にキモトリプシン、トリプシン、トロンビン、プラスミンおよび第Xa因子などのトリプシン様セリンプロテアーゼの強力な阻害剤である。特定の化合物は、トロンビンの直接的で、選択的な阻害による抗血栓活性を示すか、または抗血栓活性を有する化合物を生成するために有用な中間体である。同様に、式Iの化合物の有効量を投与することにより、哺乳動物の異常タンパク質分解を阻害または治療する方法、および哺乳動物の血栓症、虚血、卒中、再狭窄または炎症を治療する方法も提供される。
【００１０】
本発明は、哺乳動物において血小板の損失を阻害するため、血小板凝集体の形成を阻害するため、フィブリンの生成を阻害するため、血栓形成を阻害するため、および塞栓形成を阻害するための組成物であって、薬学的に許容される担体中に式Iの化合物を含む組成物を含む。これらの組成物は、抗凝血物質、抗血小板物質、および血栓溶解物質を任意に含んでいてもよい。所望の阻害を行うために、血液、血液製剤、または哺乳動物臓器に組成物を加えることもできる。
【００１１】
同様に、哺乳動物の異常タンパク質分解を阻害または治療する方法、ならびに心筋梗塞；不安定狭心症；卒中；再狭窄；深在静脈血栓症；外傷、敗血症または腫瘍転移が原因の播種性血管内凝固；血液透析；心肺バイパス手術；成人呼吸障害症候群；内毒素性ショック；慢性関節リウマチ；潰瘍性大腸炎；硬化；転移；化学療法中の凝固性亢進；アルツハイマー病；ダウン症候群；眼内のフィブリン生成；および創傷治癒を治療する方法も提供される。本発明の化合物の他の使用とは、カテーテル、血液透析機、採血シリンジおよびチューブ、輸血管ならびにステントなどの採血、血液循環、および血液保存において用いられる装置の製造時に用いられる物質中に埋め込まれるまたは物理的に連結された、抗凝血物質としての使用である。
【００１２】
本発明は、本発明の化合物を共有または非共有結合で哺乳動物の表面に結合することにより、表面の血栓形成性を低下させる方法も含む。
【００１３】
もう一つの局面において、本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のために有用な組成物であって、体外で検出可能な本発明の化合物を含む組成物を含む。本発明の化合物および放射性原子または常磁性原子などの検出可能な標識を含む組成物が好ましい。
【００１４】
もう一つの局面において、本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のために有用な診断用組成物であって、薬学的に許容される担体および本発明の化合物または組成物の診断上有効な量を含む組成物を提供する。
【００１５】
もう一つの局面において、本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のために有用な方法を含む。
【００１６】
好ましい態様の詳細な説明
本発明の化合物は、下記の式Iの化合物：
【化１１】
0004256160.tif 000002
またはその溶媒和化合物、水和物もしくは薬学的に許容される塩を含む；
式中：
Wは水素、R1、R1OC(O)、R1C(O)、R1(CH2)sNHC(O)、R1S(O)2、または(R1)2CH(CH2)sNHC(O)（ただしsは0〜4である）であり；
R1は
R2、
R2(CH2)tC(R12)2（ただしtは0〜3であり、かつR12はそれぞれ同じでも異なっていてもよい）、
(R2)(OR12)CH(CH2)p（ただしpは1〜4である）、
(R2)2(OR12)C(CH2)p（ただしpは1〜4である）、
R2C(R12)2(CH2)t（ただしtは0〜3であり、R12はそれぞれ同じでも異なっていてもよく、かつ(R12)2はCと共にC3〜9シクロアルキルで表される環を形成してもよい）、
R2CF2C(R12)2(CH2)q（ただしqは0〜2であり、R12はそれぞれ同じでも異なっていてもよく、かつ(R12)2はCと共にC3〜9シクロアルキルで表される環を形成してもよい）、
R2CH2C(R12)2(CH2)q（ただしqは0〜2であり、R12はそれぞれ同じでも異なっていてもよく、かつ(R12)2はCと共にC3〜9シクロアルキルで表される環を形成してもよい）、
(R2)2CH(CH2)r（ただしrは0〜4であり、R2はそれぞれ同じでも異なっていてもよく、かつ(R2)2はCHと共にC3〜9シクロアルキル、C7〜12二環式アルキル、C10〜16三環式アルキル、または飽和でも不飽和でもよく、かつN、OおよびSからなる群より選択される1個から3個のヘテロ原子を含む、5員から7員単環式もしくは二環式の複素環で表される環を形成してもよい）、
R2O(CH2)p（ただしpは2〜4である）、
(R2)2CF(CH2)r（ただしrは0〜4であり、かつR2はそれぞれ同じでも異なっていてもよく、また(R2)2はCと共にC3〜9シクロアルキル、C7〜12二環式アルキル、C10〜16三環式アルキル、または飽和でも不飽和でもよく、かつN、OおよびSからなる群より選択される1個から3個のヘテロ原子を含む、5員から7員単環式もしくは二環式の複素環で表される環を形成してもよい）、
【化１２】
0004256160.tif 000003
【化１３】
0004256160.tif 000004
（ただしsは0または1である）、または
R2CF2C(R12)2であり；
R2は
フェニル、ナフチル、もしくはビフェニル（ただしそれぞれ無置換または一つもしくは複数のC1〜4アルキル、C1〜4アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、CF3、OCF3、COOH、CONH2、もしくはSO2NH2で置換されている）、
5員から7員単環式もしくは9員から10員二環式複素環もしくは非複素環（ただし飽和でも不飽和でもよく、複素環はN、OおよびSからなる群より選択される1個から4個のヘテロ原子を含み、かつ複素環または非複素環は無置換またはハロゲンもしくはヒドロキシで置換されている）、
C1〜12アルキル（ただし無置換または一つもしくは複数のヒドロキシ、COOH、アミノ、任意にC1〜3アルキル置換されたアリール、C3〜9シクロアルキル、CF3、N(CH3)2、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクロアルキルで置換されている）、
CF3、
C3〜9シクロアルキル（ただし無置換またはアリールで置換されている）、
C7〜12二環式アルキル、または
C10〜16三環式アルキルであり；
Yは-NH-または-O-であり；
R3、R4、R5およびR6は独立して水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたアラルキル、任意に置換されたヘテロアリール、ハロアルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ハロゲン、ハロアルコキシ、ヒドロキシアルキル、シアノ、ニトロ、-CO2Rx、-CH2ORxまたは-ORxであり
（ただしRxはそれぞれの場合に独立して水素、C1〜12アルキルまたはC3〜9シクロアルキルの一つであり、該C1〜12アルキル基またはC3〜9シクロアルキル基は一つまたは複数の不飽和を任意に有していてもよい）；
R11は水素、アルキル、またはアルケニルであり；
R12は
水素もしくはハロゲン、
フェニル、ナフチル、もしくはビフェニル（ただしそれぞれ無置換または一つもしくは複数のC1〜4アルキル、C1〜4アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、CF3、OCF3、COOH、もしくはCONH2で置換されている）、
5員から7員単環式もしくは9員から10員二環式複素環（ただし飽和でも不飽和でもよく、かつN、OおよびSからなる群より選択される1個から4個のヘテロ原子を含む）、
C1〜12アルキル（ただし無置換または一つもしくは複数のヒドロキシ、COOH、アミノ、C6〜14アリール、ヘテロアリール、もしくはヘテロシクロアルキルで置換されている）、
CF3、
C3〜9シクロアルキル、
C7〜12二環式アルキル、または
C10〜16三環式アルキルであり；
Bは
【化１４】
0004256160.tif 000005
または
【化１５】
0004256160.tif 000006
からなる群より選択され、
ただし
R7、R8、R9、およびR10は独立して水素、アルキル、アラルキル、アリール、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキルもしくはカルボキシアルキルであり；
またはR7およびR8は共に-(CH2)u-を形成し（ただしuは2から7、好ましくは2から5であり、R9およびR10は前述のように定義される）；
またはR9およびR10は共に-(CH2)v-を形成し（ただしvは2から7、好ましくは2から5であり、R7およびR8は前述のように定義される）；
またはR7およびR9は共に-(CH2)y-を形成し（ただしyは0（結合）または1から7、好ましくは0〜4であり、R8およびR10は前述のように定義される）；
Xは-O-、-NR18-、または-CH=N-（ただしNはNR13に結合されており、R18は水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、該アルキル、シクロアルキルまたはアリールはアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アリール、ヘテロアリール、アシルアミノ、シアノまたはトリフルオロメチルで任意に置換されている）であり；
Ra、RbおよびRcは独立して水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アルコキシカルボニルオキシ、シアノまたは-CO2Rw（ただしRwはC1〜12アルキル、C3〜9シクロアルキル、C6〜14アリール、C6〜14アル(C1〜12)アルキル、
【化１６】
0004256160.tif 000007
または
【化１７】
0004256160.tif 000008
で、ただしReおよびRfは独立して水素、C1〜6アルキル、C2〜6アルケニルまたはC6〜14アリールであり、Rgは水素、C1〜6アルキル、C2〜6アルケニルまたはC6〜14アリールであり、Rhは水素、C1〜6アルキル、C2〜6アルケニルまたはC6〜14アリールであり、かつRiはC6〜14アル(C1〜12)アルキルまたはC1〜12アルキルである）であり；
nは0から8であり；かつ
mは0から6であり；
R13は水素、アルキル、アルケニル、アラルキル、アリール、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキルまたはカルボキシアルキルであり；
R14およびR15は独立して水素、アルキル、シクロアルキル、ハロゲンまたはアルコキシであり；かつ
R16およびR17は独立して水素、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アルコキシカルボニル、シアノまたは-CO2Rj（ただしRjはC1〜12アルキル、C3〜9シクロアルキル、C6〜14アリール、C6〜14アル(C1〜12)アルキル、ハロ(C1〜12)アルキルまたは
【化１８】
0004256160.tif 000009
ただしRe、RfおよびRgは独立して水素またはC1〜12アルキルである）である。
【００１７】
本発明の範囲内の化合物は、
R3、R4、R5およびR6は独立して水素、C1〜12アルキル、C3〜9シクロアルキル、ハロゲン、C2〜20アルケニル、C2〜20アルキニル、任意に置換されたC6〜14アリール、任意に置換されたC6〜14アル(C1〜12)アルキル、任意に置換されたヘテロアリール、ハロ(C1〜12)アルキル、C1〜12アルコキシ、C6〜14アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、ハロ(C1〜20)アルコキシまたはヒドロキシ(C1〜12)アルキルであり；
R11は水素、C1〜12アルキルまたはC2〜20アルケニルであり；
R7、R8、R9およびR10は独立して水素、C1〜12アルキル、C6〜14アル(C1〜12)アルキル、C6〜14アリール、ヒドロキシ(C1〜12)アルキル、アミノ(C1〜12)アルキル、モノ(C1〜12)アルキルアミノ(C1〜12)アルキル、ジ(C1〜12)アルキルアミノ(C1〜12)アルキル、またはカルボキシ(C1〜12)アルキルであり；
R18はC1〜12アルキル、C3〜9シクロアルキルまたはC6〜14アリール（ただしそれぞれは、アミノ、モノ(C1〜12)アルキルアミノ、ジ(C1〜12)アルキルアミノ、C1〜20アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシ、C1〜20アルコキシカルボニル、C6〜14アリールオキシカルボニル、C6〜14アル(C1〜20)アルコキシカルボニル、C6〜14アリール、C5〜10ヘテロアリール、アシルアミノ、シアノまたはトリフルオロメチルで任意に置換されている）であり；
Ra、RbおよびRcは独立してC1〜12アルキル、C1〜20アルコキシ、C6〜14アリールオキシ、C6〜14アル(C1〜20)アルコキシ、またはC1〜20アルコキシカルボニルオキシであり；
R13はC1〜12アルキル、C1〜20アルコキシ、C6〜14アリールオキシまたはC1〜20アルコキシカルボニルであり；
R14およびR15は独立してC1〜12アルキル、C3〜9シクロアルキルまたはC1〜20アルコキシであり；かつ
R16およびR17は独立してC1〜12アルキル、C1〜20アルコキシ、C6〜14アリールオキシまたはC1〜20アルコキシカルボニルである化合物を含む。
【００１８】
前述の式Iの好ましい化合物は、Yが-NH-または-SO2NH-である化合物である。
【００１９】
前述の式Iの化合物の好ましい亜属は、Bが
【化１９】
0004256160.tif 000010
（ただし、R7〜R10、R13およびRa〜Rcは前述のように定義される）である化合物である。
【００２０】
前述の式Iの化合物のもう一つの好ましい亜属は、Bが
【化２０】
0004256160.tif 000011
（ただしR9、R10およびR14〜R17は前述のように定義される）である化合物である。
【００２１】
前述の式Iの好ましい化合物は、WがR1（ただしR1はR2であり、R2は任意に置換されたフェニル、任意に置換されたナフチルまたはアリールで置換されたC1〜7アルキルのいずれかである）である化合物である。
【００２２】
前述の式Iの好ましい化合物は、R1がR2CF2C(R12)2(CH2)qである化合物である。
【００２３】
前述の式Iの好ましい化合物は、R6がC1〜6アルキルまたはハロゲンである化合物である。第三の好ましい亜属内のより好ましい化合物は、R6がクロロであり、R3がフルオロである化合物を含む、R6がメチルまたはクロロである化合物である。
【００２４】
前述の式Iの好ましい化合物は、R11が水素である化合物である。
【００２５】
式IのRa、RbおよびRcの好ましい値は独立して水素、ヒドロキシ、C1〜6アルキル、C1〜6アルコキシ、シアノまたは-CO2Rwで、ただしそれぞれの場合にRwはC1〜4アルキル、C4〜7シクロアルキルまたはベンジルオキシカルボニルの一つであることが好ましい。Ra、RbおよびRcの適当な値には、水素、メチル、エチル、プロピル、n-ブチル、ヒドロキシ、メトキシ、エトキシ、シアノ、-CO2CH3、-CO2CH2CH3および-CO2CH2CH2CH3が含まれる。最も好ましい態様において、Ra、RbおよびRcはそれぞれ水素である。
【００２６】
またRa、RbおよびRcにおいては、Rwが
【化２１】
0004256160.tif 000012
または
【化２２】
0004256160.tif 000013
の一つである-CO2Rw基が好ましく、ただしRe〜Rjは前述のように定義される。Ra、RbおよびRcが-CO2RwでありかつRwがこれらの部分の一つの一つである場合、得られる化合物は望ましい製剤および生物学的利用能上の特徴を有するプロドラッグである。Re、RfおよびRhのそれぞれの好ましい値は水素であり、Rgはメチルであり、かつRiの好ましい値にはベンジルおよびtert-ブチルが含まれる。
【００２７】
好ましい化合物は式Iの化合物であり、ここでR7、R8、R9およびR10が独立して水素、C1〜6アルキル、C6〜10アル(C1〜6)アルキル、C6〜10アリール、C2〜10ヒドロキシアルキルまたはC2〜7カルボキシアルキルの一つである。R7、R8、R9およびR10の有用な値としては、水素、メチル、エチル、プロピル、n-ブチル、ベンジル、フェニルエチル、2-ヒドロキシエチル、3-ヒドロキシプロピル、4-ヒドロキシブチル、2-カルボキシメチル、3-カルボキシエチルおよび4-カルボキシプロピルが含まれる。他の好ましい化合物は、R7およびR8またはR9およびR10が共に-(CH2)y-（ここでyが2である）を形成する化合物である。
【００２８】
XがNR18である場合の好ましい化合物は、R18が水素またはアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルコキシ、ヒドロキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、カルボアルコキシ、フェニル、シアノ、トリフルオロメチル、アセチルアミノ、ピリジル、チオフェニル、フリル、ピロリルもしくはイミダゾリルの一つ、二つもしくは三つ、好ましくは一つで任意に置換されたC1〜6アルキルである化合物である。
【００２９】
R18の適当な値には水素、メチル、エチル、プロピル、n-ブチル、ベンジル、フェネチル、2-ヒドロキシエチル、3-ヒドロキシプロピル、4-ヒドロキシブチル、カルボキシメチルおよびカルボキシエチルが含まれる。
【００３０】
最も好ましい化合物は、Xが酸素である化合物である。
【００３１】
R6は水素、C1〜3アルキル、ハロゲン、またはC1〜2アルコキシを表してもよい。R6は好ましくはC1〜3アルキル、例えばメチル、またはハロゲン、例えば塩素、臭素もしくはフッ素である。
【００３２】
R3、R4、R5およびR6は独立して、水素、ヒドロキシ、C1〜3アルキル、ハロゲン、またはC1〜2アルコキシを表してもよい。好ましくはR3はフッ素およびヒドロキシである。
【００３３】
式Iのnの好ましい値には、0から6、より好ましくは0から4、最も好ましくは0、1または2が含まれる。mの好ましい値には、0から4、より好ましくは0、1、2または3が含まれる。
【００３４】
本発明は、本発明の一連の選択された化合物における構造上の不斉性の結果生じる立体異性体および光学異性体、例えば鏡像異性体の混合物ならびに個々の鏡像異性体およびジアステレオマーを含むと考えられることも理解されるべきである。本発明の化合物は多形結晶形を有していてもよく、すべての多形結晶形は本発明に含まれる。
【００３５】
式Iの化合物は溶媒和、特に水和されていてもよい。水和は化合物または化合物を含む組成物の製造中に起こりうり、または水和は化合物の吸湿性によって経時的に起こることもある。
【００３６】
式Iの範囲内の特定の化合物は、プロドラッグと呼ばれる誘導体である。「プロドラッグ」という用語は、既知の直接作用薬物の誘導体であって、その薬物に比べて送達特性および治療的価値が増強されており、酵素的または化学的な方法によって活性薬物に変換される誘導体を意味する。有用なプロドラッグとは、Ra、Rb、Rcおよび/またはRdが-CO2Rw（ここでRwが前述のように定義される）であるようなプロドラッグである。米国特許第5,466,811号およびサウルニアー（Saulnier）ら、Bioorg. Med. Chem. Lett. 4：1985〜1990（1994）参照。
【００３７】
任意の構成要素または式Iにおいて任意の変量が複数回出現する場合、それぞれの出現時の定義は、他のすべての出現時の定義とは無関係である。また、置換基および/または変量の組み合わせは、そのような組み合わせによって安定な化合物が得られる場合にのみ許容される。
【００３８】
もう一つの局面において、本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のために有用な組成物であって、体外で検出可能な本発明の化合物を含む組成物を含む。好ましい組成物は、本発明の化合物および放射性原子または常磁性原子などの検出可能な標識を含む組成物である。
【００３９】
もう一つの局面において、本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のために用いられる診断用組成物であって、薬学的に許容される担体および本発明の化合物または組成物の診断上有効な量を含む組成物を提供する。
【００４０】
もう一つの局面において、本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のために有用な方法を含む。
【００４１】
好ましい局面によると、有用な化合物は、R1置換基がI-125、I-131またはI-123などの放射性ヨウ素原子などの検出可能な標識で置換されている化合物である。この局面において、R1は好ましくはパラI-123置換、パラI-125置換もしくはパラI-131置換を有するフェニル、またはメタI-123置換、メタI-125置換もしくはメタI-131置換を有するベンジルである。
【００４２】
検出可能な標識は、適当な配位子（L）が、直接または二価の連結基A''を介してR1置換基に結合されている、放射性または常磁性キレートであってもよい。または、-A''-L基が式IのW基の代わりとなる。適当な配位子とは、放射性または常磁性金属イオンをキレート化することができる有機部分を意味する。
【００４３】
これらの化合物において、二価の連結基A''は、遊離アミノ基およびキレート手段に共有結合することができる基を含む。例えば、A''は、-C(=S)-、-C(=O)-、-C(=NH)-(CH2)6-C(=NH)-、-C(=O)-(CH2)6-C(=O)-、
【化２３】
0004256160.tif 000014
などであってもよい。
【００４４】
同様に、式Iで表される化合物において、キレート配位子（ligand）Lは、放射性原子または常磁性原子のいずれかに共有結合または非共有結合することができる基を含む。キレート手段とは、放射性原子または常磁性原子と錯体を形成するために通常用いられるものを含む。これらには、3個から12個、好ましくは3個から8個のメチレンホスホン酸基、メチレンカルボヒドロキサム酸基、カルボキシエチリデン基、または特にカルボキシメチレン基を含むキレート手段が含まれ、これらの基は窒素原子に結合される。酸基の一つまたは二つだけが窒素原子に結合されている場合、その窒素はそのような基を有するもう一つの窒素に、任意に置換されたエチレン基または窒素もしくは酸素もしくは硫黄原子で分離された四つまでの別々のエチレン単位で結合される。完成手段としては、ジエチレントリアミン-N,N,N',N'',N''-五酢酸（DTPA）が好ましい。DTPAは当技術分野において放射性原子インジウム-111（In-111）、テクネチウム-99m（Tc-99m）、および常磁性原子ガドリニウム（Gd）のキレート手段として公知である。カウ（Khaw）ら、Science 209：295（1980）；パイク（Paik）C.H.ら、米国特許第4,652,440号（1987）；グリース（Gries）,H.ら、米国特許第4,957,939号（1990）。好ましいキレート配位子Lは、1-(p-アミノベンジル)-ジエチレントリアミン五酢酸である。キレート手段としては、スルフヒドリルまたはアミン部分を含む化合物も含まれ、任意の組み合わせにおけるその総数は少なくとも四つである。これらのスルフヒドリルまたはアミン部分は、少なくとも二つの原子（炭素、窒素、酸素、または硫黄であってもよい）によって互いに分離されている。キレート手段Lにとって特に好ましいのは、当技術分野においてTc-99mのキレート手段として公知のメタロチオネインである。
【００４５】
本明細書においてそれ自体で、または他の基の一部として用いられる「アルキル」という用語は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、t-ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、4,4-ジメチルペンチル、オクチル、2,2,4-トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシルなどの炭素12個までの直鎖および分枝鎖両方の基を意味する。好ましくはアルキルは1個から6個の炭素原子である。
【００４６】
「アルケニル」という用語は本明細書において、鎖長がそれに限定されるわけではないが、炭素原子2個〜20個の直鎖または分枝鎖基であって、エテニル、1-プロペニル、2-プロペニル、2-メチル-1-プロペニル、1-ブテニル、2-ブテニルなどを含むが、これらに限定されるわけではない基を意味するために用いられる。好ましくは、アルケニル鎖は炭素原子2個から10個の長さで、より好ましくは炭素原子2個から8個、最も好ましくは炭素原子2個から4個の長さである。
【００４７】
「アルキニル」という用語は本明細書において、鎖長がそれに限定されるわけではないが、炭素原子2個〜20個の直鎖または分枝鎖基であって、鎖内に二つの炭素原子間の三重結合が少なくとも一つあり、アセチレン、1-プロピレン、2-プロピレンなどを含むがこれらに限定されるわけではない基を意味するために用いられる。好ましくは、アルキニル鎖は炭素原子2個から10個の長さで、より好ましくは炭素原子2個から8個、最も好ましくは炭素原子2個から4個の長さである。
【００４８】
置換基としてアルケニル部分またはアルキニル部分がある、本明細書のすべての場合において、不飽和結合、すなわちビニレンまたはアセチレン結合は、好ましくは窒素、酸素または窒素部分に直接結合されていない。
【００４９】
「アルコキシ」という用語は本明細書において、鎖長がそれに限定されるわけではないが、酸素原子に結合された、炭素原子1個〜20個の直鎖または分枝鎖基であって、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシなどを含むがこれらに限定されるわけではない基を意味するために用いられる。好ましくは、アルコキシ鎖は炭素原子1個から10個の長さで、より好ましくは炭素原子1個から8個の長さである。
【００５０】
本明細書においてそれ自体で、または他の基の一部として用いられる「アリール」という用語は、フェニル、ナフチルまたはテトラヒドロナフチルなどの、環部分に6個から14個の炭素、好ましくは環部分に6個〜10個の炭素を含む単環式または二環式芳香族基を意味する。
【００５１】
本明細書において用いられる「ヘテロアリール」という用語は、5個から14個の環原子；環の配列中に共有される6個、10個または14個のπ電子を有し；かつ炭素原子と、1個、2個または3個の酸素、窒素または硫黄ヘテロ原子とを含む基を意味する（ヘテロアリール基の例は、チエニル、ベンゾ[b]チエニル、ナフト[2,3-b]チエニル、チアントラニル、フリル、ピラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾキサゾリル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチイニル、2H-ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、3H-インドリル、インドリル、インダゾリル、プリニル、4H-キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、4αH-カルバゾリル、カルバゾリル、β-カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、イソチアゾリル、フェノチアジニル、イソキサゾリル、フラザニルおよびフェノキサジニル基である）。
【００５２】
本明細書においてそれ自体で、または他の基の一部として用いられる「アラルキル」または「アリールアルキル」という用語は、ベンジル、フェニルエチルまたは2-ナフチルメチルなどの、アリール置換基を有する前述のC1〜12アルキル、好ましくはC1〜6アルキル基を意味する。
【００５３】
本明細書においてそれ自体で、または他の基の一部として用いられる「シクロアルキル」という用語は、3個から9個の炭素原子、好ましくは3個から7個の炭素原子を含むシクロアルキル基を意味する。典型的な例はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルおよびシクロノニルである。
【００５４】
「C7〜12二環式アルキル」という用語は、ビシクロ[2.2.1]ヘプチル（ノルボルニル）、ビシクロ[2.2.2]オクチル、1,1,3-トリメチルビシクロ[2.2.1]ヘプチル（ボルニル）などを含むことが意図される。
【００５５】
「C10〜16三環式アルキル」という用語は、トリシクロ[5,2,1,02,6]デシル、アダマンチルなどを含むことが意図される。
【００５６】
本明細書においてそれ自体で、または他の基の一部として用いられる「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、塩素、臭素、フッ素またはヨウ素を意味し、塩素およびフッ素が好ましい。
【００５７】
本明細書においてそれ自体で、または他の基の一部として用いられる「モノアルキルアミン」という用語は、1個から12個、好ましくは1個から6個の炭素原子を有する一つのアルキル基で置換されたアミノ基を意味する。
【００５８】
本明細書においてそれ自体で、または他の基の一部として用いられる「ジアルキルアミン」という用語は、それぞれ1個から12個、好ましくは1個から6個の炭素原子を有する二つのアルキル基で置換されたアミノ基を意味する。
【００５９】
本明細書において用いられる「ヒドロキシアルキル」という用語は、一つまたは複数のヒドロキシル部分で置換された、前述のアルキル基のいずれかを意味する。
【００６０】
本明細書において用いられる「カルボキシアルキル」という用語は、一つまたは複数のカルボン酸部分で置換された、前述のアルキル基のいずれかを意味する。
【００６１】
本明細書において用いられる「複素環（heterocycle）」または「複素環（heterocyclic ring）」という用語は、特に記載のある場合を除き、安定な5員から7員単環式もしくは二環式または安定な7員から10員二環式の複素環構造であって、そのいかなる環も飽和でも不飽和でもよく、かつ炭素原子と、N、OおよびSからなる群より選択される一つから三つのヘテロ原子とからなり、ただし窒素および硫黄ヘテロ原子は任意に酸化されていてもよく、かつ窒素ヘテロ原子は任意に三級化されていてもよく、また、前述の定義の任意の複素環がベンゼン環に縮合されている任意の二環式の基を含む複素環構造を意味する。特に有用なものは、一つの酸素もしくは硫黄、一つから三つの窒素原子、または一つの酸素もしくは硫黄と一つまたは二つの窒素原子の組み合わせを含む環である。複素環は、安定な構造を作るいかなるヘテロ原子または炭素原子で結合されていてもよい。そのような複素環の例には、ピペリジニル、ピペラジニル、2-オキソピペラジニル、2-オキソピペリジニル、2-オキソピロロジニル、2-オキソアゼピニル、アゼピニル、ピロリル、4-ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソキサゾリル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、キヌクリジニル、イソチアゾリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、チアジアゾリル、ベンゾピラニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、フリル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロピラニル、チエニル、ベンゾチエニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、およびオキサジアゾリルが含まれる。モルホリノはモルホリニルと同じである。
【００６２】
「ヘテロ原子」という用語は、本明細書において酸素原子（「O」）、硫黄原子（「S」）または窒素原子（「N」）を意味するために用いられる。ヘテロ原子が窒素である場合、これはNRaRb部分を形成することができ、ただしRaおよびRbは互いに独立して水素もしくはC1からC8アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素と一緒になって飽和もしくは不飽和5員環、6員環、もしくは7員環を形成することが理解されると考えられる。
【００６３】
スキーム1〜スキーム8は、式Iの化合物の合成系路の概略を示している。
【００６４】
【化２４】
スキーム1
0004256160.tif 000015
【００６５】
スキーム1において、テトラヒドロフラン（THF）などの適当な溶媒中、1,2,3-トリフルオロ-4-ニトロベンゼンなどのフッ化ニトロベンゼン1と、マロン酸ジエチルなどの置換または無置換マロン酸エステルの金属塩との反応の後、酸加水分解に続いて加熱による脱カルボン酸を行うことにより、ベンゼン環に酢酸側鎖を導入して、化合物2を生成する（Yokomoto, M,W.ら、欧州特許公開出願第0470578A1号（1991））。THFなどの適当な溶媒中、ボラン（BH3）-THF錯体および水素化ホウ素ナトリウム（NaBH4）などの典型的な還元条件下で、2のカルボキシル基をヒドロキシル基に変換して、アルコール3を得る（Yokomoto, M,W.ら、上記）。ジメチルスルホキシド（DMSO）およびトルエンなどの適当な溶媒中で還流しながら、化合物3のフッ素を、tert-ブチルアミンなどの適当な求核剤で芳香族求核置換することにより、環のニトロ基のパラ位に適当な官能基を導入して、化合物4を得る（Yokomoto, M,W.ら、上記）。化合物4のtert-ブチルなどの窒素保護基を、還流濃塩酸（HCl）などの標準的条件下で除去して、化合物5を生成する（Yokomoto, M,W.ら、上記）。トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン（DIEA）などの塩基存在下、ジクロロメタン（DCM）中の塩化アセチルなどの当技術分野において公知の標準的条件下で、化合物5のヒドロキシル基をアセチルなどの適当な保護基（Greene, T.W.、およびWuts, P.G.M.、「有機合成における保護基（Protecting Groups in Organic Synthesis）」、第2版、John Wiley and Sons, Inc.、ニューヨーク（1991））で遮蔽して、化合物6を得る。DCMなどの適当な溶媒中、活性化カルボニル化合物ACOClと化合物6とのカップリングにより、化合物7を生成する。
【００６６】
【化２５】
スキーム2
0004256160.tif 000016
【００６７】
スキーム2において、エタノールまたはメタノール中、活性炭担持パラジウム存在下、水素による接触水素添加などの典型的な条件下でのアリールニトロ化合物7の還元により、アリールアミン8を得る。メタノール中、炭酸カリウム（K2CO3）水溶液などの塩基性条件下での加水分解により、化合物8のアセチル保護基を除去して（アミノ基操作の前に化合物の溶解性を高めるため）、化合物9を得る。亜硝酸ナトリウム（NaNO2）およびHClの後、塩化第一銅（I）（CuCl）などの適当な試薬によるザントマイヤー型反応（（a）Gunstone, F.D.ら、Org. Syn. Collect Vol. 1、Wiley、ニューヨーク州ニューヨーク（1941）、p.170；（b）Yokomoto, M,W.ら、欧州特許公開出願第0470578A1号（1991））、または亜硝酸tert-ブチル（t-BuONO）および塩化第二銅（II）（CuCl2）などの適当な試薬による置換脱アミノ（Doyle, M.P.ら、J. Org. Chem. 42：2426（1977））によって、化合物9の中心骨格に所望のR6を導入して、化合物10を得る。アリールアミン9のアミノ基は、アレンジアゾニウム塩中間体からパラジウム触媒存在下、炭素-炭素カップリング条件下でメチル基に変換することができる（Kikukawa, K.ら、J. Org. Chem. 48：1333（1983））。次に化合物10を、BH3などの適当な還元剤で還元して、Yが-NH-である化合物11の所望の断片WYを生成する。DCM中、三酸化硫黄ピリジン錯体（SO3・ピリジン）などの酸化剤により11を酸化して、アルデヒド12を生じる。標的化合物の中心および左断片の構築は、リン酸二水素ナトリウム（NaH2PO4）およびDMSO存在下、亜塩素酸ナトリウム（NaClO2）などの適当な酸化条件下でのアルデヒド12のカルボン酸13へのさらなる酸化によって最終的に達成される（Dalcanale, E.ら、J. Org. Chem. 51：567（1986））。
【００６８】
【化２６】
スキーム3
0004256160.tif 000017
【００６９】
スキーム3において、N,N-ジメチルホルムアミド（DMF）などの適当な溶媒中、カストロ試薬（BOP）などの典型的なペプチドカップリング試薬およびDIEAなどの塩基存在下で、酸13を保護O-グアニジルアミン（Tianbao Luら、国際公開公報第99/26926号（1999））またはアミノピリジニルアミン（Sanderson, P.E.ら、国際公開公報第97/01338号（1997））などの適当なアミン14とカップリングさせ、アミド15を生成する。任意に、BがO-グアニジンの場合はトリフルオロ酢酸（TFA）のDCM溶液、またはBがアミノピリジンの場合はHClの1,4-ジオキサン溶液などの、典型的な脱保護条件下でtert-(ブトキシ)カルボニル（Boc）などの保護基を除去して、それぞれ遊離のO-グアニジンまたはアミノピリジンを生成することができる。
【００７０】
【化２７】
スキーム4
0004256160.tif 000018
【００７１】
スキーム4において、濃硫酸中96％硝酸などの標準的条件を用い、フェニル酢酸誘導体16をベンゼン環のメタ位でニトロ化して（Sindelarら、Coll. Czechoslov. Chem. Commun. 42：2231（1977））、ニトロ化合物17を得る。次いで、化合物17のカルボン酸基を、塩化オキサリルと、続くアルコールPOHとの反応によるエステルへの変換などの、当技術分野において公知の標準的条件（Greene, T.W.、およびWuts, P.G.M.、「有機合成における保護基（Protective Groups in Organic Synthesis）」、第2版、John Wiley and Sons、ニューヨーク（1991））を用いて保護し、エステル18（Pは典型的なカルボン酸保護基）を得る。エタノールなどの適当な溶媒中、塩化第一スズ（II）などの適当な試薬を用いて、ニトロ基の還元を行い、得られたアミン19をDCMなどの溶媒中、アシル化剤（W=R1C(O)）または塩化ベンジルスルホニルなどのスルホニル化剤（W=R1S(O)2）およびN-メチルモルホリンなどの適当な塩基と反応させて、N置換-アミノフェニル酢酸エステル20（Y=-NH-）を生成する。水性水酸化物による加水分解などの、当技術分野において公知の標準的条件（Greene, T.W.、およびWuts, P.G.M.、「有機合成における保護基（Protective Groups in Organic Synthesis）」、第2版、John Wiley and Sons、ニューヨーク（1991））を用いてカルボン酸基を脱保護し、酸13（Y=-NH-）を得る。次いでこれをスキーム3のとおりにアミン14とカップリングさせ、脱保護して、フェニルアセトアミド15（Y=NH）を生成する。
【００７２】
【化２８】
スキーム5
0004256160.tif 000019
【００７３】
スキーム5において、スキーム3の方法などの標準的ペプチドカップリング法を用い、ニトロフェニル酢酸17をエタノールアミンなどのアミノアルコール21にカップリングさせて、アルコール22を得る。THFなどの適当な溶媒中、トリフェニルホスフィンおよびジエチルアゾジカルボン酸塩などの標準的試薬（Mitsunobu, O.、Synthesis 1：1（1981））を用いてN-ヒドロキシフタルイミドにカップリングさせることにより、アルコールを保護アルコキシアミンに変換して化合物23を得、これを次いでエタノールなどの適当な溶媒中、炭素担持パラジウム(0)による水素添加などの典型的還元条件下でアニリン24に変換する。次いで、スキーム4のとおりにアミンをアシル化またはスルホニル化して中間体25を得、エタノール/THF中の水性メチルアミンなどの当技術分野において公知の標準的条件（Greene, T.W.、およびWuts, P.G.M.、「有機合成における保護基（Protective Groups in Organic Synthesis）」、第2版、John Wiley and Sons、ニューヨーク（1991））を用いてアルコキシアミンを脱保護する。N,N'-ビス(tert-ブトキシカルボニル)-S-メチルチオ尿素（Bergeron, R.J.およびMcManis, J.S.、J. Org. Chem. 52：1700（1987））またはN-Ra-N'-Rb,Rc-1H-ピラゾール-1-カルボキサミジン（Bernatowicz, M.S.ら、Tetrahedron Lett. 34：3389（1993））などの標準的グアニジニル化試薬により、得られたアルコキシアミン26のグアニジニル化を行い、グアニジンを任意にスキーム3のとおりに脱保護して、最終標的27を得る。
【００７４】
【化２９】
スキーム6
0004256160.tif 000020
【００７５】
スキーム6において、ケトン、アルデヒド（R11=H）、またはカルボン酸（R11=OH）出発物質28を、ボラン-THFなどの適当な試薬で還元してアルコール29を得、次いでこれをDCMなどの適当な溶媒中、塩化メタンスルホニルなどの塩化スルホニルとの反応によって、よりよい脱離基に変換し、化合物30を生成する。還流アセトニトリル中のシアン化カリウムなどの標準的条件下でスルホン酸エステルをシアン化物で置換してニトリル31を得、次いでこれを水性水酸化物などの典型的な試薬で加水分解する。得られた酸17とアミン14とのカップリングをスキーム3のとおりに行って中間体32を得、ニトロ基をスキーム4または5のとおりに還元してアニリン33を得る。これをスキーム4のとおりにアシル化またはスルホン化し、グアニジンをスキーム3のとおりに任意に脱保護して、最終標的15（Y=NH）を得る。
【００７６】
【化３０】
スキーム7
0004256160.tif 000021
【００７７】
スキーム7において、ニトロフェノール34を、DMFなどの極性非プロトン溶媒中、ハロゲン化アリル35および炭酸セシウムなどの適当な塩基でアルキル化して中間体36を得、次いでこれを加熱による芳香族クライゼン転移により化合物37に変換する。DMFなどの溶媒中、臭化ベンジルおよび炭酸セシウムなどの典型的試薬を用いてフェノールを保護し、38（Pは典型的なヒドロキシル保護基）を得、ニトロ基をスキーム4または5のとおりに還元してアニリン39を生成する。アニリン39をスキーム4のとおりに中間体40に変換し、アルケンを、ジオキサン/水中、過ヨウ素酸ナトリウムおよび四酸化オスミウムに続き、ジョーンズ試薬などの標準的条件を用いて酸化的に切断し、酸41を得る。次いでこれをアミン14にカップリングさせ、グアニジンを任意にスキーム3のとおりに脱保護し、フェノール基を、エタノールなどの適当な溶媒中、炭素担持パラジウム(0)による水素添加などの標準的条件を用いて任意に脱保護し、標的化合物42を生成する。
【００７８】
【化３１】
スキーム8
0004256160.tif 000022
【００７９】
スキーム8において、モノ保護カテコール43を、DCMなどの溶媒中、トリエチルアミンなどの塩基存在下、塩化メタ-トルエンスルホニルなどの試薬W-Clでスルホニル化して、化合物44を得る。DCM中三臭化ボロンなどの標準的条件を用いて保護基を除去し、得られたフェノール45をハロゲン化アリル35でアルキル化して46を得、フェノール47に転移させ、スキーム7のとおりに保護して中間体48を得る。アルケンを、アセトニトリル/水中、過ヨウ素酸ナトリウムおよび塩化ルテニウム（III）（Ashby, E.C.およびGoel, A.B.、J. Org. Chem. 46：3936（1981））に続き、ジョーンズ試薬などの標準的条件を用いて酸化的に切断し、酸49を得、次いでこれをアミン14にカップリングさせ、任意にスキーム3および7のとおりに脱保護して、標的化合物50を生成する。
【００８０】
式Iの化合物の薬学的に許容される塩（水もしくは脂溶性または分散性生成物の形）には、通常の非毒性塩または、例えば、無機もしくは有機酸もしくは塩基から形成される四級アンモニウム塩が含まれる。そのような酸付加塩の例には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、およびウンデカン酸塩が含まれる。塩基性塩には、アンモニウム塩、ナトリウムおよびカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩、N-メチル-D-グルカミンなどの有機塩基との塩、ならびにグアニジニル部分との塩を含む、アルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩が含まれる。同様に、塩基性窒素含有基を、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピル、およびブチルなどのハロゲン化低級アルキル；硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミルなどの硫酸ジアルキル；塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルなどの長鎖ハロゲン化物；臭化ベンジルおよびフェネチルなどのハロゲン化アラルキルならびにその他などの物質で四級化することもできる。酸付加塩を形成するために好ましい酸には、HCl、酢酸およびトリフルオロ酢酸が含まれる。
【００８１】
本発明の化合物は、金属、酸性、チオールおよびセリンプロテアーゼの新しい種類の強力な阻害剤である。本発明の範囲内の化合物によって阻害されるセリンプロテアーゼの例には、気腫の病因に関係するとされているタンパク質分解酵素、白血球好中球エラスターゼ；消化酵素、キモトリプシンおよびトリプシン；白血球に関与するキモトリプシン様プロテアーゼ、膵エラスターゼおよびカテプシンG；血液凝固経路のタンパク質分解酵素、トロンビンおよび第Xa因子が含まれる。金属プロテアーゼ、サーモリシンおよび酸性プロテアーゼ、ペプシンの阻害も、本発明の化合物の企図された使用である。本発明の化合物は、好ましくは、トリプシン様プロテアーゼを阻害するために用いられる。
【００８２】
それらの最終使用適用のために、本発明の化合物の酵素阻害特性の効力および他の生化学的パラメーターは、当業者には公知の標準的生化学法により容易に確認される。例えば、キモトリプシンおよびトリプシンを阻害する化合物の最終使用適用は、膵炎の治療においてである。それらの特定の最終使用適用のための実際の用量範囲は、当然のことながら、治療を受ける患者または動物の、担当診断医が調べた疾患状態の性質および重症度に応じて異なる。有効な治療効果のための有用な用量範囲は、一日に1kgあたり約0.01mgから10mgであると予想される。
【００８３】
トロンビンを阻害する能力によって特徴づけられる本発明の化合物は、いくつかの治療目的のために用いることができる。トロンビン阻害剤として、本発明の化合物はトロンビン産生を阻害する。したがって、これらの化合物は、トロンビンの産生または作用のいずれかに関与する異常な静脈または動脈血栓症によって特徴づけられる状態の治療または予防のために有用である。これらの状態には、深在静脈血栓症；敗血症性ショック、ウイルス感染症および癌の間に生じる播種性血管内凝固障害；心筋梗塞；卒中；冠動脈バイパス；眼内のフィブリン生成；股関節置換；および血栓溶解療法または経皮的冠動脈形成術（PCTA）のいずれかから生じた血栓形成が含まれるが、これらに限定されるわけではない。他の使用には、カテーテル、血液透析機、採血シリンジおよびチューブ、ならびに輸血管などの採血、血液循環、および血液保存において用いられる装置の製造時に用いられる物質中に埋め込まれるか、または物理的に連結された抗凝血物質としての前記トロンビン阻害剤の使用が含まれる。本発明の化合物は、体外血液循環における抗凝血物質として用いることもできる。
【００８４】
ステントは、再狭窄を減少させるが、血栓形成性であることが明らかにされている。ステントの血栓形成性を低下させる戦略は、ステント表面にトロンビン阻害物質をコーティング、埋め込み、吸着、または共有結合することである。本発明の化合物をこの目的のために用いることができる。本発明の化合物を、ステント材料としての可溶性および/または生物分解性ポリマーに結合させる、またはその中に埋め込む、ならびにその後にステント材料上にコーティングすることができる。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド-フェノール、ポリヒドロキシエチル-アスパルタミド-フェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド-ポリリシン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーが含まれうる。欧州特許出願第761251号、欧州特許出願第604,022号、カナダ特許第2,164,684号ならびに国際公開公報第96/11668号、国際公開公報第96/32143号および国際公開公報第96/38136号参照。
【００８５】
平滑筋細胞、内皮細胞および好中球などの細胞型の受容者に対するトロンビンの効果によって、本発明の化合物は、成人呼吸障害症候群；炎症反応；創傷治癒；再灌流損傷；アテローム性動脈硬化症；ならびにバルーン血管形成術、粥腫切除、および動脈ステント設置後の再狭窄の治療または予防においてさらに用いられる。
【００８６】
本発明の化合物は、新生物および転移ならびにアルツハイマー病およびパーキンソン病などの神経変性疾患の治療において有用でありうる。
【００８７】
トロンビン阻害剤として用いる場合、本発明の化合物を、一日一回または2回〜4回の分割した用量での投与法で、体重1kgあたり約0.1mgから約500mg、好ましくは0.1mgから10mgの間の用量範囲内の有効量で投与することができる。
【００８８】
トロンビン阻害剤として用いる場合、本発明の化合物は、組織プラスミノゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、およびウロキナーゼなどの血栓溶解剤との組み合わせで用いることもできる。加えて、本発明の化合物は、フィブリノーゲンアンタゴニストおよびトロンボキサン受容体アンタゴニストなどであるが、これらに限定されるわけではない、他の抗血栓剤または抗凝血剤との組み合わせで用いることもできる。
【００８９】
トロンビン阻害剤は、標的指向可能な薬物担体としての可溶性ポリマーと結合させることもできる。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシ-プロピルメタクリルアミド-フェノール、ポリヒドロキシエチル-アスパルタミド-フェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシド-ポリリシンが含まれる。さらに、トロンビン阻害剤は、薬物の制御放出を達成するのに有用な類の生物分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸とのコポリマー、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーにカップリングさせることもできる。
【００９０】
ヒト白血球エラスターゼは、炎症部位で多形核白血球によって放出され、したがっていくつかの疾患状態の原因である。本発明の化合物は、痛風、慢性関節リウマチ、および他の炎症性疾患の治療、ならびに気腫の治療において有用な抗炎症作用を有すると予想される。本発明の化合物の白血球エラスターゼ阻害特性は、以下に記載の方法によって評価される。カテプシンGも、関節炎、痛風および気腫、加えて糸球体腎炎および肺の感染症が原因の肺侵襲の疾患状態に関係づけられている。その最終使用適用において、式Iの化合物の酵素阻害特性は当技術分野において公知の標準的生化学法により容易に確認される。
【００９１】
本発明の範囲内の化合物のカテプシンG阻害特性は、下記の方法によって評価される。部分的に精製されたヒトカテプシンGの調製物はバウ（Baugh）ら、Biochemistry 15：836（1979）の方法によって得られる。白血球顆粒は白血球エラスターゼおよびカテプシンG（キモトリプシン様活性）の調製物の主な原料である。白血球を溶解し、顆粒を分離する。白血球顆粒を0.20M酢酸ナトリウム（pH4.0）で抽出し、抽出物を0.05M NaClを含む0.05Mトリス緩衝液（pH8.0）、4℃で一晩透析する。タンパク質画分が透析中に沈殿し、これを遠心沈降によって分離する。この画分は白血球顆粒のキモトリプシン様活性の大部分を含む。各酵素に対し特異的な基質、すなわちN-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-p-ニトロアニリドおよびSuc-Ala-Ala-Pro-Phe-p-ニトロアニリドを調製する。後者は白血球エラスターゼでは加水分解されない。酵素調製物を0.50M NaCl、10％ジメチルスルホキシド、および基質としての0.0020M Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-p-ニトロアニリドを含む0.10M Hepes緩衝液（pH7.5）2.00mL中でアッセイする。p-ニトロアニリド基質の加水分解を405nm、25℃でモニターする。
【００９２】
本発明の化合物の好中球エラスターゼ阻害剤として、およびカテプシンG阻害剤としての適用のために有用な用量範囲は、担当診断医が調べた疾患状態の性質および重症度に応じて異なり、一日に体重1kgあたり0.01mgから10mgの範囲が前述の疾患状態に対して有用である。
【００９３】
ウロキナーゼまたはプラスミノゲン活性化因子を阻害する本発明の化合物は、過剰細胞増殖疾患状態の治療において有用である可能性がある。したがって、本発明の化合物は良性前立腺肥大症および前立腺癌の治療、乾癬の治療、ならびに堕胎薬としても有用であり得る。それらの最終使用適用のために、本発明の化合物の酵素阻害特性の効力および他の生化学的パラメーターは、当技術分野において公知の標準的生化学法により容易に確認される。この適用のための実際の用量範囲は、治療を受ける患者または動物の、担当診断医が調べた疾患状態の性質および重症度に応じて異なる。有効な治療効果のための一般的用量範囲は、一日に1kgあたり約0.01mgから10mgであると予想される。
【００９４】
本発明の化合物のその他の使用には、市販の試薬酵素の作用部位濃度についての分析が含まれる。例えば、キモトリプシンは、膵液および糞便中のキモトリプシン活性の臨床定量において用いるための標準的試薬として供給される。そのようなアッセイは、胃腸および膵疾患の診断用である。膵エラスターゼも、血漿中のα1-アンチトリプシン定量のための試薬として市販されている。血漿α1-アンチトリプシンの濃度はいくつかの炎症性疾患の経過中に上昇し、α1-アンチトリプシン欠乏は肺疾患の発生率上昇に関与している。本発明の化合物は、試薬として市販されているエラスターゼの滴定標準化によるこれらのアッセイの精度および再現性を高めるために用いることができる。米国特許第4,499,082号参照。
【００９５】
特定のタンパク質精製中の特定のタンパク質抽出物中のプロテアーゼ活性は、タンパク質分離法の結果を複雑にし、損なう可能性がある、繰り返し起こる問題である。そのような抽出物中に存在する特定のタンパク質は、様々なタンパク質分解酵素に堅く結合する本発明の化合物によって精製段階中に阻害することができる。
【００９６】
本発明の薬学的組成物は、本発明の化合物の有益な効果を経験しうるいかなる動物にも投与することができる。そのような動物の中で主要なものはヒトであるが、本発明はそのように限定されることを意図していない。
【００９７】
本発明の薬学的組成物は、それらの所期の目的を達成するいかなる手段によっても投与することができる。例えば、投与は非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮、口腔内、または眼内の経路によるものでありうる。代わりに、または同時に、投与は経口経路によるものでありうる。投与される用量は受容者の年齢、健康、および体重、同時に治療を行っていればその種類、治療の頻度、および所期の効果の性質によって異なる。
【００９８】
薬理活性のある化合物に加えて、新しい薬学的調製物は、活性化合物を薬学的に用いうる調製物に加工することを助ける賦形剤および補助剤を含む、適当な薬学的に許容される担体を含むことができる。
【００９９】
本発明の薬学的調製物は、それ自体が公知の、例えば、通常の混合、造粒、糖衣錠形成、溶解、または凍結乾燥法による様式で製造される。したがって、経口で用いるための薬学的調製物は、活性化合物を固体賦形剤と組み合わせ、得られた混合物を任意に粉砕し、かつ錠剤または糖衣錠の核を得るために望まれるか、または必要であれば適当な補助剤を加えた後に、顆粒混合物を加工することによって得ることができる。
【０１００】
ヒトへの投与に適した本発明の組成物のために、「賦形剤」という用語は、その全体が本明細書に参照として組み込まれる、「薬学的賦形剤のハンドブック（Handbook of Pharmaceutical Excipients）」、米国薬剤師会、第二版（1994）記載の賦形剤を含むことが意図されるが、これらに限定されるわけではない。適当な賦形剤は、特に、糖類、例えば、乳糖もしくはショ糖、マンニトールもしくはソルビトール、セルロース調製物および/またはリン酸カルシウム、例えば、リン酸三カルシウムもしくはリン酸水素カルシウムなどの充填剤、ならびに例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および/またはポリビニルピロリドンを用いたデンプンペーストなどの結合剤である。望まれる場合は、前述のデンプンおよびカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩などの崩壊剤を加えることもできる。補助剤は、特に、流動調節剤および滑沢剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸またはステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウムなどのその塩、および/あるいはポリエチレングリコールである。糖衣錠の核は、望まれる場合には、胃液に抵抗性の適当なコーティングを施して提供される。この目的のために、濃縮糖溶液を用いることができ、これは任意にアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、および/または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適当な有機溶媒または溶媒混合物を含んでいてもよい。胃液に抵抗性のコーティングを生成するために、酢酸フタル酸セルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの適当なセルロース調製物の溶液が用いられる。例えば、特定のため、または活性化合物用量の組み合わせを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠コーティングに染料または色素を加えることもできる。
【０１０１】
経口で用いることができる他の薬学的調製物には、ゼラチン製の押し込みばめ（push-fit）カプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤で作られた密封軟カプセルが含まれる。押し込みばめカプセルは活性化合物を顆粒の形で含むことができ、活性化合物を乳糖などの充填剤、澱粉などの結合剤、および/またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、ならびに任意に安定化剤と混合することもできる。軟カプセルでは、活性化合物は好ましくは、脂肪油または流動パラフィンなどの適当な液体中に溶解または懸濁される。加えて、安定化剤を加えることもできる。
【０１０２】
非経口投与に適した製剤には、水溶性型、例えば、水溶性の塩、塩基性溶液およびシクロデキストリン封入複合体での活性化合物の水溶液が含まれる。特に好ましい塩基性塩は、例えば、トリス、水酸化コリン、ビス-トリスプロパン、N-メチルグルカミン、またはアルギニンと調製されたアンモニウム塩である。一つまたは複数の修飾または非修飾シクロデキストリンを用いて、本発明の化合物を安定化し、かつその水溶性を高めることができる。この目的のために有用なシクロデキストリンは、米国特許第4,727,064号、第4,764,604号、および第5,024,998号に開示されている。
【０１０３】
加えて、適当な油性注射用懸濁液としての活性化合物の懸濁液を投与することもできる。適当な親油性溶媒または媒体には、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド、あるいはポリエチレングリコール-400（化合物はPEG-400に可溶性である）が含まれる。水性注射用懸濁液は、懸濁液の粘度を高める物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、および/またはデキストランを含むこともできる。任意に、懸濁液は安定化剤を含んでいてもよい。
【０１０４】
式Iの化合物は、交換反応を用いて放射性ヨウ素で標識することができる。放射性ヨウ素の非放射性ヨウ素との交換は当技術分野において公知である。または、放射性ヨウ素標識化合物を対応するブロモ化合物からトリブチルスズ中間体を介して調製することもできる。米国特許第5,122,361号を参照されたく、この開示は参照として本明細書に組み込まれる。
【０１０５】
本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のために有用な組成物であって、放射性原子と複合体形成した式Iの化合物からなる組成物も含む。
【０１０６】
式Iの化合物に対して、適当な放射性原子にはCo-57、Cu-67、Ga-67、Ga-68、Ru-97、Tc-99m、In-111、In-113m、Hg-197、Au-198、およびPb-203が含まれる。いくつかの放射性原子は放射化学撮像法で用いるために優れた性質を有している。特に、テクネチウム-99m（Tc-99m）は、その核の性質のために、理想的な撮像用放射性原子である。レニウム-186および-188も、撮像を可能にするγ放射を有している。好ましい組成物は放射性原子、Tc-99mを含む。
【０１０７】
式Iの化合物は、本発明の組成物を提供するために、当技術分野において公知の多くの技術のいずれを用いても標識することができる。例えば、これらの化合物は、ジエチレン-トリアミン五酢酸（DTPA）またはメタロチオネインなどのキレート剤によって標識することができ、これらのキレート剤はいずれも式Iの化合物に共有結合することができる。
【０１０８】
一般に、テクネチウム-99mを含む本発明の組成物は、テクネチウム-99mと還元剤および水溶性配位子との水性混合物を生成し、次いでこの混合物を式Iで表される本発明の化合物と接触させることにより調製される。例えば、本発明の造影剤化合物は、テクネチウム-99m（酸化状態）をキレート手段を有する本発明の化合物と、還元剤存在下で反応させて、還元状態（IV価またはV価の状態）のテクネチウム-99mとの安定な複合体を形成することによって調製される。
【０１０９】
本発明の組成物の一つの態様は、DTPAキレート手段を有する式Iの化合物をテクネチウム-99mで標識することによって調製される。これは、本発明の化合物の所定の量（5μgから0.5mg）を、クエン酸緩衝液およびスズ還元剤を含む水溶液と合わせ、次いで新しく溶解した、所定のレベルの放射能（15mCi）を含む過テクネチウム酸ナトリウムを加えることによって達成することができる。混合物を室温でインキュベートした後、反応混合物を滅菌フィルター（0.2ミクロン〜0.22ミクロン）を通して遮蔽シリンジに充填し、次いで望まれる場合には注射用に0.9％生理食塩水中に供給する。
【０１１０】
本発明の組成物のもう一つの態様は、メタロチオネインキレート手段を有する式Iの化合物をテクネチウム-99mで標識することによって調製される。これは、水性過テクネチウム酸ナトリウム-99mを水性グルコヘプトン酸スズと合わせてテクネチウム-99m（還元状態）と二つのグルコヘプトン酸塩分子との可溶性複合体を形成し、次いでこの溶液を、それに結合されたメタロチオネインを有する式Iの化合物と合わせることによって達成することができる。混合物を、グルコヘプトン酸塩複合体からのテクネチウム-99mを式Iの化合物のメタロチオネインと交換することが可能な条件下で一定期間インキュベートした後、本発明のテクネチウム標識組成物が形成される。
【０１１１】
この方法で用いるための還元剤は、テクネチウム-99mをその酸化状態からIV価もしくはV価の状態に還元するため、またはレニウムをその酸化状態から還元するために生理学的に許容される。用いることができる還元剤は、塩化スズ、フッ化スズ、グルコヘプトン酸スズ、酒石酸スズ、および亜ジチオン酸ナトリウムである。好ましい還元剤はスズ還元剤、特に塩化スズまたはグルコヘプトン酸スズである。還元剤の量は、テクネチウム-99mを還元状態で式Iの化合物のキレート手段に結合させるために、この放射性同位体を還元するのに必要な量である。例えば、塩化スズ（SnCl2）が還元剤で、1μg/mL〜1,000μg/mLの範囲で用いることができる。
【０１１２】
クエン酸複合体はテクネチウム-99mと、安定なテクネチウム-99m-クエン酸複合体を速やかに形成する。式Iの化合物と接触すると、クエン酸複合体からのテクネチウム-99mの式Iの化合物のキレート手段への、実質的に定量的な転移が迅速かつ緩和な条件下で達成される。クエン酸（クエン酸ナトリウムとして）の量は、約0.5mg/mlから媒質に溶解できる最大量までの範囲でありうる。クエン酸の好ましい量は15μg/mlから30μg/mlの範囲である。
【０１１３】
キレート手段を有する式Iの化合物の量は、0.001mg/mLから約3mg/mLの範囲、好ましくは約0.017mg/mLから約0.15mg/mLの範囲でありうる。最後に、過テクネチウム酸塩の形のテクネチウム-99mは好ましくは約1mCi〜50mCiの量で用いることができる。本発明の化合物1mgあたりのmCiの量は好ましくは約30〜150である。
【０１１４】
式Iの化合物と金属イオン-転移配位子複合体との間の反応は、好ましくは水溶液中、式Iの化合物が安定であるpHで実施される。「安定」とは、化合物が可溶性を維持し、そのα-トロンビンに対する阻害活性を保持していることを意味する。通常、反応のpHは約5から9で、6〜8を上回るpHが好ましい。テクネチウム-99m-クエン酸複合体および式Iの化合物を、好ましくは約20℃から約60℃、最も好ましくは約20℃から約37℃の温度で、金属イオンがクエン酸複合体から式Iの化合物のキレート手段に転移することができる十分な時間インキュベートする。一般に、これらの条件下で転移反応を完了するには、1時間未満で十分である。
【０１１５】
本発明の別の組成物には、In-111標識された本発明の化合物が含まれる。
【０１１６】
本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のために有用な本発明の化合物の組成物であって、常磁性原子と複合体形成した式Iで表される化合物からなる組成物も含む。
【０１１７】
好ましい常磁性原子は、原子番号21から29、42、44および58から70の元素の二価または三価のイオンである。適当なイオンには、クロム（III）、マンガン（II）、鉄（III）、鉄（II）、コバルト（II）、ニッケル（II）、銅（II）、プラセオジム（III）、ネオジム（III）、サマリウム（III）およびイッテルビウム（III）が含まれる。非常に強い磁気モーメントのため、ガドリニウム（III）、テルビウム（III）、ジソプロシウム（III）、ホルミウム（III）、およびエルビウム（III）が好ましい。常磁性原子として特に好ましいのはガドリニウム（III）である。
【０１１８】
本発明の組成物を、式Iの化合物を常磁性原子と合わせることによって調製することができる。例えば、適当な常磁性原子の金属酸化物または金属塩（例えば、硝酸塩、塩化物または硫酸塩）を水およびメチル、エチルまたはイソプロピルアルコールなどのアルコールからなる媒質に溶解または懸濁する。この混合物を等モル量の式Iの化合物の同様の水性媒質溶液に加え、撹拌する。反応混合物を、反応が完了するまで中等度に加熱してもよい。生成した不溶性組成物はろ過によって単離することができ、一方、可溶性組成物は溶媒の蒸発によって単離することができる。本発明の組成物にキレート手段上の酸基がまだ存在する場合は、無機または有機塩基、およびアミノ酸をも加えて、酸性複合体を中性複合体に変換し、均質な組成物の単離または精製を助けることができる。有機塩基または塩基性アミノ酸、ならびにナトリウム、カリウムまたはリチウムの水酸化物、炭酸塩または重炭酸塩を中和剤として用いることができる。
【０１１９】
本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のために有用な診断用組成物であって、薬学的に許容される担体および式Iの化合物由来の組成物の診断上有効な量を含む組成物も含む。
【０１２０】
一回の用量として必要とされる組成物の「診断上有効な量」とは、投与経路、治療中の哺乳動物の種類、および考慮中の特定の哺乳動物の身体的特徴に応じて異なる。この用量を決定するためのこれらの因子およびその関係は、医学診断分野の技術者には公知である。同様に、診断上有効な量および投与法は、最適な効果を得るために調整することができるが、医学分野の技術者であれば認識していると考えられる、体重、食事、併用薬物療法および他の因子に応じて異なる。いずれにしても、撮像のための用量は問題の血栓部位で造影剤の存在を検出するために十分でなければならない。典型的には、放射線撮像では、本発明の薬学的組成物位置によって提供される用量が約5μCiから20μCi、好ましくは約10μCiである必要があると考えられる。磁気共鳴撮像では、提供される用量が常磁性原子と複合体形成した式Iの化合物約0.001mmol/kgから5mmol/kg、好ましくは約0.005mmol/kgから0.5mmol/kgである必要があると考えられる。いずれの場合にも、実際の用量が血栓の位置に応じて異なることは、当技術分野において公知である。
【０１２１】
インビボでの使用のための「薬学的に許容される担体」とは薬学的技術分野において公知で、例えば、「レミントンの薬科学（Remington's Pharmaceutical Science）」、Mack Publishing Co.（A.R.Gennaro編1985）に記載されている。本発明の薬学的組成物を薬学的に許容される担体と調合して、注射投与用の滅菌溶液または懸濁液を提供することができる。特に、注射剤は、液剤もしくは懸濁剤、注射前に液剤もしくは懸濁剤とするのに適した固体剤形、または乳剤のいずれかとしての通常の剤形で調製することができる。適当な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、マンニトール、乳糖、レシチン、アルブミン、グルタミン酸ナトリウム、システイン塩酸塩などである。加えて、望まれる場合には、注射用薬学的組成物は少量の湿潤剤、pH緩衝剤などの非毒性補助剤を含んでいてもよい。望まれる場合には、吸収促進調製物（例えば、リポソーム）を用いることもできる。
【０１２２】
本発明は、保存または投与のために調製された診断用組成物も含む。これらは、保存剤、安定化剤および色素をさらに含む。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびp-ヒドロキシ安息香酸を保存剤として加えることができる。同上、1449。加えて、抗酸化剤および懸濁化剤を用いてもよい。
【０１２３】
本発明のインビボ撮像法は、血栓の有無、サイズ、退縮または増大を検出またはモニターするための以前の撮像技術を上まわるいくつかの利点も提供する。特に、本発明は、血栓に関連するトロンビンに堅く結合された化合物、組成物および診断用組成物を提供し、それにより、結合していない造影剤から生じる循環放射能または常磁性による「バックグラウンド」を低下させる。さらに、本発明の化合物、組成物および診断用組成物の冠動脈内投与によるインビボ撮像は、これらの造影剤は血栓に結合されたトロンビンをただちに飽和させると考えられるため、ほぼ即時的であると予想される。
【０１２４】
したがって、本発明は、哺乳動物の血栓のインビボ撮像のための方法であって、以下の段階を含む方法も含む：
（1）哺乳動物に本発明の化合物、組成物、または診断用組成物の診断上許容できる量を投与する段階；および
（2）血管内の血栓を検出する段階。
【０１２５】
本明細書において用いられる「インビボ撮像」という用語は、哺乳動物の血栓の検出法、ならびに哺乳動物の血栓のサイズ、位置および数、ならびに血栓の溶解または成長のモニタリングに関する。
【０１２６】
この方法により化合物、組成物、または診断用組成物をインビボで使用する際に、「投与」とは全身または局所のいずれかを標的とする様式で、非経口的に達成される。全身投与は、本発明の診断用組成物による化合物、組成物を便利かつ到達可能な静脈または動脈に注射することによって達成される。これには、前肘（ankecubutal）静脈による投与が含まれるが、これに限定されることはない。局所を標的とする投与は、本発明の化合物、組成物、または診断用組成物を、注射部位の遠位に血栓を含むことが疑われる静脈または動脈の近位の血流中に注射することにより達成される。これには、冠動脈血栓を撮像するための冠動脈血管系、脳血管系の血栓を撮像するための頚動脈、または脚の深在静脈血栓を撮像するための足静脈への直接注射が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【０１２７】
同様に、本発明の組成物の血栓部位への送達様式は、「投与」という用語の範囲内であると考えられる。例えば、哺乳動物に、それに結合されたキレート手段を有する式Iによって表される化合物と、その後に放射性原子を注射し、それにより放射性原子と複合体形成した式の化合物を含む組成物を血栓部位でインビボ形成することができる。または、放射性原子と複合体形成した式の化合物を含む組成物を哺乳動物に注射することもできる。
【０１２８】
本発明の方法で用いられる化合物、組成物、または診断用組成物の「診断上有効な量」とは、前述のとおり、投与経路、治療中の哺乳動物の種類、および治療中の特定の哺乳動物の身体的特徴に応じて異なる。この用量を決定するためのこれらの因子およびその関係は、医学診断分野の技術者には公知である。いずれにしても、インビボ撮像のための用量は問題の血栓部位で造影剤の存在を検出するために十分でなければならない。典型的には、放射線撮像では、本発明の診断用組成物によって提供される用量が約5μCiから20μCi、好ましくは約10μCiである必要があると考えられる。磁気共鳴撮像では、診断組成物によって提供される用量が常磁性原子と複合体形成した式Iの化合物約0.001mmol/kgから5mmol/kg、好ましくは約0.005mmol/kgから0.5mmol/kgである必要があると考えられる。いずれの場合にも、実際の用量が血栓の位置に応じて異なることは、当技術分野において公知である。
【０１２９】
撮像による血栓の検出は、そのような血栓に局在化する放射性原子または常磁性原子の存在によって可能となる。
【０１３０】
本発明の組成物および診断用組成物に結合された放射性原子は、好ましくはガンマカメラなどのγ放射線を検出することができる放射線検出手段を用いて撮像される。典型的には、放射線撮像カメラは変換媒質（高エネルギーγ線が吸収されて電子に置き換わり、電子はそれが軌道状態に戻るときに光子を放出する）、空間検出室に配列された光電検出器（放出された光子の位置を調べるため）、および検出室内で検出された光子を分析し、画像を作成する回路を用いる。
【０１３１】
本発明の組成物および診断用組成物に結合された常磁性原子は、磁気共鳴撮像（MRI）装置で検出される。そのような装置では、患者体内の原子の核スピンベクトルをアラインするために強磁場を用いる。磁場は血栓に局在する常磁性原子の存在によって妨害され、患者の像を核の平衡アライメントへの回復として読み取る。
【０１３２】
下記の実施例は、本発明の方法および組成物の例示であって、限定的なものではない。当業者に通常起こりうりかつ明らかである様々な条件およびパラメーターの、その他の適当な改変および適合化は、本発明の精神および範囲の内である。
【０１３３】
実施例
実施例1
N-[2-(アミジノアミノオキシ)エチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化３２】
0004256160.tif 000023
1.  2,2-ジフルオロ-2-フェニル酢酸エチル（Middleton, W.ら、J. Org. Chem. 42：2883（1980））。
PhCF2CO2Et
ベンゾイルギ酸エチル（12.5g、70.0mmol）およびジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（DAST、18.5mL、140mmol）の混合物を外界温度で48時間撹拌し、次いで氷上に注いだ。生成したオイルを、ジクロロメタン（DCM）中に取り、H2Oで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルの短いカラムで、50％DCM/ヘキサン溶出によりろ過した。ろ液を濃縮して、表題化合物を褐色の液体として得た（12.3g、収率88％）。
0004256160.tif 000024
【０１３４】
2.  2,2-ジフルオロ-2-フェニル酢酸
PhCF2CO2H
前段階で調製した2,2-ジフルオロ-2-フェニル酢酸エチル（6.0g、30mmol）の1N NaOH（36mL、36mmol）懸濁液を外界温度で撹拌した。36時間後、反応混合物はほぼ均質になった。混合物を1N HCl（36mL）で酸性化し、DCMで二回抽出した。抽出物を合わせ、H2Oで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、表題化合物を淡黄色固体として得た（3.85g、収率81％）。これをそれ以上精製することなく用いた。
【０１３５】
3.  2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセチルクロリド
PhCF2COCl
前段階で調製した2,2-ジフルオロ-2-フェニル酢酸（0.8g、5.06mmol）を加えたフラスコに、氷浴中、アルゴン雰囲気下で塩化オキサリル（5mL）を加え、反応混合物を15分間撹拌した。ジメチルホルムアミド（DMF）（37mg、0.506mmol）のDCM溶液（0.5mL）を加えた。2時間後、氷浴をはずし、混合物を1時間撹拌し続けた。溶媒を蒸発させ、DCMを加え、次いで減圧下で蒸発させて表題化合物を得た（0.88g、収率98％）。これをそれ以上精製することなく、ただちに用いた。
【０１３６】
4.  2-(2,3-ジフルオロ-6-ニトロフェニル)酢酸（Yokomoto, M,W.ら、1991、欧州特許第0470578A1号）
【化３３】
0004256160.tif 000025
氷浴中のNaH（11.3g、60％油分散物、282mmol）のテトラヒドロフラン（THF）（35mL）懸濁液にマロン酸ジエチル（45.2g、42.9mL、282mmol）のTHF溶液（70mL）を、反応温度が20℃未満に維持されるように1時間かけて加えた。添加中に白色固体がいくらか沈殿した。前述の反応混合物に1,2,3-トリフルオロ-4-ニトロベンゼン（25.0g、141mmol）のTHF溶液（35mL）を、反応温度が10℃未満に維持されるように1時間かけて加えた。氷浴をはずし、混合物を外界温度で2時間撹拌した。反応溶液に酢酸（18mL）を加え、THFを減圧下で蒸発させた。クロロホルム（200mL）、H2O（250mL）、および濃HCl（18mL）を加えた。有機層を分離し、濃縮し、4N HCl（45mL）および酢酸（35mL）と混合し、14時間還流させた。反応混合物を室温まで冷却した。冷却時に沈殿した固体をろ去し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、MeOH（70mL）に溶解した。活性炭で処理した後、溶媒を蒸発させ、結晶性残渣をイソプロピルエーテルで洗浄し、ろ過して、表題化合物を白色固体として得た（17.6g、収率58％）。
0004256160.tif 000026
【０１３７】
5.  2-(2,3-ジフルオロ-6-ニトロフェニル)エタノール（Yokomoto, M,W.ら、欧州特許第0470578A1号（1991））
【化３４】
0004256160.tif 000027
0℃未満に冷却したTHF（12mL）中のNaBH4（3.60g、95.4mmol）の混合物に、前段階で調製した2-(2,3-ジフルオロ-6-ニトロフェニル)酢酸（10.9g、50.2mmol）のTHF溶液（4mL）を1時間かけて加えた。この混合物に三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート錯体（16.5mL、131mmol）のTHF溶液（24mL）を、反応温度を10℃未満に維持しながら1時間かけて加えた。添加後、反応混合物を氷上で15分間、次いで外界温度で20分間撹拌し続けた。DCM（180mL）およびH2O（140mL）の混合物にNaHCO3（15g、179mmol）を加えた。反応混合物を前述のNaHCO3溶液にゆっくり加え、一晩撹拌した。有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、表題化合物を淡褐色オイルとして得た（10.1g、収率99％）。
0004256160.tif 000028
【０１３８】
6.  2-{3-[(tert-ブチル)アミノ]-2-フルオロ-6-ニトロフェニル}エタノール（Yokomoto, M,W.ら、欧州特許第0470578A1号（1991））
【化３５】
0004256160.tif 000029
前段階で調製した2-(2,3-ジフルオロ-6-ニトロフェニル)エタノール（6.00g、29.6mmol）、tert-ブチルアミン（18.6mL、1.77mmol）、DMSO（30mL）、およびトルエン（5mL）の混合物を16時間加熱還流させた。外界温度まで冷却後、褐色溶液をH2O（300mL）に注ぎ、沈積した黄色結晶をろ過し、H2Oで二回洗浄した。黄色固体をCHCl3（70mL）に溶解し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでヘキサンから結晶化させて、表題化合物を黄色固体として得た（4.70g、収率62％）。
0004256160.tif 000030
【０１３９】
7.  2-(3-アミノ-2-フルオロ-6-ニトロフェニル)エタノール（Yokomoto, M,W.ら、欧州特許第0470578A1号（1991））
【化３６】
0004256160.tif 000031
前段階で調製した2-{3-[(tert-ブチル)アミノ]-2-フルオロ-6-ニトロフェニル}エタノール（3.9g、15mmol）の濃HCl溶液（40mL）を2時間還流させた。室温まで冷却後、混合物を酢酸エチル（6×50mL）で抽出した。抽出物を合わせ、飽和NaHCO3（二回）および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して粗生成物を固体として得た。固体をヘキサン中で粉砕し、ろ過し、高減圧下で乾燥して、表題化合物を黄色固体として得た（2.8g、収率93％）。
0004256160.tif 000032
【０１４０】
8.  2-(3-アミノ-2-フルオロ-6-ニトロフェニル)エチルアセテート
【化３７】
0004256160.tif 000033
氷浴中のDIEA（1.80mL、10.6mmol）および前段階で調製した2-(3-アミノ-2-フルオロ-6-ニトロフェニル)エタノール（0.88g、4.40mmol）のTHF溶液（10mL）に、塩化アセチル（319μL、4.49mmol）のTHF溶液（5mL）を加えた。1.5時間撹拌後、氷浴をはずし、混合物を外界温度で一晩撹拌し続けた。塩化アセチル（63μL、0.88mmol）を追加し、混合物をさらに16時間撹拌した。溶媒を除去し、混合物をDCMおよびH2Oの間で分配した。有機層を分離し、水層をDCMで逆抽出した。有機層を合わせ、H2Oで（二回）洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、EtOAc/DCM（0％、1％、2％、および5％）で溶出して、表題化合物を黄色固体として得た（0.73g、収率69％）。
0004256160.tif 000034
【０１４１】
9.  2-[3-(2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセチルアミノ)-2-フルオロ-6-ニトロフェニル]エチルアセテート
【化３８】
0004256160.tif 000035
DIEA（1.49mL、8.55mmol）および前段階で調製した2-(3-アミノ-2-フルオロ-6-ニトロフェニル)エチルアセテート（690mg、2.85mmol）のDCM溶液（6mL）に、実施例1の段階3の方法に従って調製した2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセチルクロリド（0.99g、5.20mmol）のDCM溶液（3mL）を加えた。24時間撹拌後、混合物を濃縮し、DCMおよびH2Oの間で分配した。有機層を分離し、水層をDCMで抽出した。有機層を合わせ、H2Oおよび生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、EtOAc/DCM（0％、2.5％、および5％）で溶出して、表題化合物を橙色オイルとして得た（1.04g、収率92％）。
0004256160.tif 000036
【０１４２】
10.  2-[2-アミノ-5-(2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセチルアミノ)-6-フルオロフェニル]エチルアセテート
【化３９】
0004256160.tif 000037
エタノール（17mL）中、前段階で調製した2-[3-(2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセチルアミノ)-2-フルオロ-6-ニトロフェニル]エチルアセテート（0.84g、2.12mmol）およびパラジウム触媒（226mg、10％/活性炭、0.212mmol）の混合物を、水素バルーン下で3.5時間水素添加した。混合物をセライト（珪藻土）によりろ過し、MeOHで洗浄した。ろ液および洗液を合わせて濃縮し、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、EtOAc/DCM（5％、10％、および20％）で溶出して、表題化合物を白色固体として得た（0.713g、収率92％）。
0004256160.tif 000038
質量分析（LCMS、ESI）C18H18F3N2O3の計算値（M+H）：367.1。実測値：367.1。
【０１４３】
11.  N-[4-アミノ-2-フルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]-2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセトアミド
【化４０】
0004256160.tif 000039
前段階で調製した2-[2-アミノ-5-(2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセチルアミノ)-6-フルオロフェニル]エチルアセテート（0.67g、1.84mmol）のMeOH溶液（19mL）に、K2CO3（280mg、2.03mmol）の水溶液（4.8mL）を滴下した。混合物を45分間撹拌し、次いで1N HClで中和した。MeOHを蒸発させ、混合物をEtOAcで二回抽出した。抽出物を合わせ、H2Oで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、表題化合物を淡黄色固体として得た（0.55g、収率92％）。
0004256160.tif 000040
質量分析（LCMS、ESI）C16H16F3N2O2の計算値（M+H）：325.1。実測値：325.3。
【０１４４】
12.  N-[4-クロロ-2-フルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]-2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセトアミド（Yokomoto, M,W.ら、1991、欧州特許第0470578A1号）
【化４１】
0004256160.tif 000041
6N HCl（9mL）中、前段階の方法に従って調製したN-[4-アミノ-2-フルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]-2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセトアミド（1.63g、5.00mmol）の懸濁液を氷浴中で冷却し、次いでNaNO2（434mg、6.30mmol）の水溶液（2.4mL）を5分間かけて加えた。30分後、酢酸（2.9mL）および濃HCl（2.9mL）を加え、反応混合物を1時間撹拌した。この混合物にCuCl（848mg、8.55mmol）の濃HCl溶液（5mL）を20分間かけて加えた。氷浴中で3時間撹拌後、反応混合物をEtOAc（200mL×3）で抽出した。抽出物を合わせ、H2O（二回）および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、EtOAc/DCM（0％、2.5％、および5％）で溶出して、表題化合物を淡橙色オイルとして得た（0.845g、収率48％）。
0004256160.tif 000042
質量分析（LCMS、ESI）C16H14ClF3NO2の計算値（M+H）：344.1。実測値：344.2。
【０１４５】
13.  2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}エタノール
【化４２】
0004256160.tif 000043
前段階の方法に従って調製したN-[4-クロロ-2-フルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]-2,2-ジフルオロ-2-フェニルアセトアミド（1.05g、3.06mmol）のTHF溶液（12mL）に、0℃、アルゴン雰囲気下でボラン-THF錯体のTHF溶液（12.3mL、12.3mmol、1.0M）を10分間かけて加え、反応混合物を氷浴がなくなる（expired）まで撹拌し続けた。反応混合物を20時間加熱還流させ、室温まで冷却した。K2CO3（1.7g、12mmol）の水溶液（12mL）を加え、THFを減圧除去し、混合物をDCMで（三回）抽出した。抽出物を合わせ、生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、EtOAC/DCM（0％および2.5％）で溶出して、表題化合物を無色オイルとして得た（815mg、収率81％）。
0004256160.tif 000044
質量分析（LCMS、ESI）C16H16ClF3NOの計算値（M+H）：330.1。実測値：330.3。
【０１４６】
14.  2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}エタナール
【化４３】
0004256160.tif 000045
氷浴中のDCM（140mL）中、DMSO（1.03mL、14.5mmol）、DIEA（1.99mL、11.4mmol）、および前段階の方法に従って調製した2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}エタノール（1.45g、4.4mmol）の溶液に、三酸化硫黄ピリジン錯体（1.82g、11.4mmol）を加え、同じ温度で3.5時間撹拌した。混合物をDCM（300mL）で希釈し、10％クエン酸（三回）、H2O、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、表題化合物を橙色オイルとして得（1.43g、収率99％）、これをそれ以上精製することなく用いた。
【０１４７】
15.  2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}酢酸（Dalcanale, E.ら、J. Org. Chem.、51：567（1986）））
【化４４】
0004256160.tif 000046
前段階で調製した2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}エタナール（1.43g、4.37mmol）のDMSO溶液（4.5mL）およびNaH2PO4（141mg、1.18mmol）の水溶液（1.7mL）の混合物を撹拌しながら、これに塩化ナトリウム（692mg、6.11mmol）の水溶液（6.1mL）を30分間かけて加えた。添加後、混合物を外界温度で一晩撹拌し、10M HClでpH1まで酸性化し、DCMで（三回）抽出した。抽出物を合わせ、H2Oおよび生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥して、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM（0％、2％、および4％）で溶出して、表題化合物を淡褐色固体として得た（0.77g、収率51％）。
0004256160.tif 000047
質量分析（LCMS、ESI）C16H14ClF3NO2の計算値（M+H）：344.1。実測値：344.4。
【０１４８】
16.  2-アザ-3-{[2-(2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセチルアミノ)エトキシ]アミノ}-3-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]プロパ-2-エン酸tert-ブチル
【化４５】
0004256160.tif 000048
氷浴中の前段階で調製した2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}酢酸（28mg、82μmol）のDMF溶液（0.3mL）にBOP（58mg、130μmol）、[N,N'-ジ(tert-ブトキシカルボニル)]-2-アミノエトキシグアニジンのHCl塩（36mg、102μmol）（Tianbao Luら、国際公開公報第99/26926号（1999））、およびDIEA（42mg、33μmol）のDMF溶液（0.1mL）を加えた。氷浴がなくなった後、反応混合物を外界温度で一晩撹拌し続けた。溶媒を蒸発させ、得られた残渣を飽和NaHCO3およびDCMの間で分配した。水相をDCMで抽出し、有機層を合わせ、10％KHSO4、H2O、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM（1％）で溶出して、表題化合物を無色オイルとして得た（44mg、収率83％）。
0004256160.tif 000049
質量分析（LCMS、ESI）C29H38ClF3N5O6の計算値（M+H）：644.2。実測値：644.1。
【０１４９】
17.  N-[2-(アミジノアミノオキシ)エチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化４６】
0004256160.tif 000050
前段階で調製した2-アザ-3-{[2-(2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセチルアミノ)エトキシ]アミノ}-3-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]プロパ-2-エン酸tert-ブチル（44mg、68μmol）のTFA/DCM溶液（2mL、2/3）を室温で4時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、得られた残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM中0.05％TFA（5％および10％）で溶出して、表題化合物を白色固体として得た（37mg、収率98％）。
0004256160.tif 000051
質量分析（LCMS、ESI）C19H22ClF3N5O2の計算値（M+H）：444.1。実測値：444.2。
【０１５０】
実施例2
N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミド塩酸塩
【化４７】
0004256160.tif 000052
1.  2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}-N-({6-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]-2-メチル(3-ピリジル)}メチル)アセトアミド
【化４８】
0004256160.tif 000053
実施例1の段階15で調製した2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}酢酸（516mg、1.5mmol）のDMF溶液（8.0mL）に、N-[5-(アミノメチル)-6-メチル(2-ピリジル)](tert-ブトキシ)カルボキサミド（498mg、2.1mmol）（Sanderson, P.E.ら、国際公開公報第97/01338号（1997））、BOP（1.06g、2.4mmol）、およびDIEA（0.78mL、4.5mmol）を加えた。18時間撹拌後、アミン（107mg、450μmol）を追加し、混合物を18時間撹拌し続けた。溶媒を蒸発させ、反応混合物をDCMおよび飽和NaHCO3の間で分配した。有機層を分離し、水層をDCMで抽出した。有機層を合わせ、10％KHSO4（二回）、H2O、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM（0％、1.5％、および2.5％）で溶出して、表題化合物を淡褐色の泡として得た（770mg、収率91％）。
0004256160.tif 000054
質量分析（LCMS、ESI）C28H31ClF3N4O3の計算値（M+H）：563.2。実測値：562.9。
【０１５１】
2.  N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミド塩酸塩
【化４９】
0004256160.tif 000055
前段階で調製した2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}-N-({6-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]-2-メチル(3-ピリジル)}メチル)アセトアミド（770mg、1.37mmol）を加えたフラスコに、HClの1,4-ジオキサン溶液（5mL、20mmol、4.0M）を加えた。外界温度で1.5時間撹拌後、固体がいくらか沈殿した。MeOH（1mL）のDCM溶液（3mL）を加えて固体を溶解し、混合物をさらに4時間撹拌した。溶媒を除去し、得られた残渣をDCM（5mL×2）、エーテル（8mL×2）で洗浄し、高減圧下で乾燥して、表題化合物を淡褐色固体として得た（620mg、収率91％）。
0004256160.tif 000056
質量分析（LCMS、ESI）C23H23ClF3N4Oの計算値（M+H）：463.1。実測値：463.7。
【０１５２】
実施例3
N-[(6-アミノ-2,4-ジメチル(3-ピリジル))メチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミド塩酸塩
【化５０】
0004256160.tif 000057
1.  2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}-N-({6-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]-2,4-ジメチル(3-ピリジル)}メチル)アセトアミド
【化５１】
0004256160.tif 000058
実施例1の段階15で調製した2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}酢酸（25mg、73μmol）のDMF溶液（0.25mL）に、BOP（52mg、116μmol）、DIEA（38mg、295mol）のDMF溶液（0.1mL）、およびN-[5-(アミノメチル)-4,6-ジメチル(2-ピリジル)](tert-ブトキシ)カルボキサミド（23mg、91μmol）（Sanderson, P.E.ら、国際公開公報第97/01338号（1997））を加えた。外界温度で2日間撹拌後、アミン（7mg、28μmol）、BOP（16mg、36μmol）、およびDIEA（9mg、70μmol）を追加し、混合物をさらに16時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、得られた残渣を飽和NaHCO3およびDCMの間で分配した。有機層を分離し、水層をDCMで抽出した。有機層を合わせ、10％クエン酸、H2O、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM（0％、1％、2％）で溶出して、表題化合物を淡褐色固体として得た（18.5mg、収率44％）。
0004256160.tif 000059
質量分析（LCMS、ESI）C29H33ClF3N4O3の計算値（M+H）：577.0。実測値：577.1。
【０１５３】
2.  N-[(6-アミノ-2,4-ジメチル(3-ピリジル))メチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミド塩酸塩
【化５２】
0004256160.tif 000060
前段階で調製した2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}-N-({6-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]-2,4-ジメチル(3-ピリジル)}メチル)アセトアミド（18.5mg、32μmol）に、HClの1,4-ジオキサン溶液（4.0M、0.5mL、2mmol）を加えた。外界温度で3時間撹拌後、固体が沈殿した。MeOH（0.1mL）のDCM溶液（1mL）を加えて固体を溶解した。さらに2時間撹拌後、反応混合物を濃縮して褐色の固体を得、これをエーテルおよびDCMで洗浄し、減圧下で乾燥して、表題化合物を淡褐色固体として得た（16.2mg、収率77％）。
0004256160.tif 000061
質量分析（LCMS、ESI）C24H25ClF3N4Oの計算値（M+H）：477.2。実測値：477.5。
【０１５４】
実施例4
N-[2-(アミジノアミノオキシ)エチル]-2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化５３】
0004256160.tif 000062
1.  2-(4-フルオロナフチル)-2-オキソ酢酸エチル
【化５４】
0004256160.tif 000063
n-ブチルリチウムの溶液（THF中で2.5M、20mL、50mmol）を-78℃に冷却し、1-ブロモ-4-フルオロナフタレン（11.25g、50mmol）のTHF溶液（40mL）をゆっくり加え、混合物を1時間撹拌した。反応混合物を-20℃に加温し、次いで-78℃のシュウ酸ジエチル（29.2g、200mmol）のTHF溶液（40mL）に加えた。室温までゆっくり加温した後、EtOAc（100mL）、10％HCl（50mL）、および水（50mL）を加え、相を分離した。水層をEtOAc（2×100mL）で抽出し、有機層を合わせ、生理食塩水（50mL）で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒および過剰のシュウ酸ジエチルを高減圧下で蒸発させた後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（DCM：ヘキサン=1：1）で精製して、表題化合物を白色固体として得た（9.4g、収率76％）。
0004256160.tif 000064
【０１５５】
2.  2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)酢酸エチル
【化５５】
0004256160.tif 000065
前段階で調製した2-(4-フルオロナフチル)-2-オキソ酢酸エチル（9.4g、38.2mmol）のDCM溶液（60mL）に、DAST（16.1g、100mmol）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、氷にゆっくり注ぎ、DCM（3×50mL）で抽出した。有機層を合わせ、生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（DCM：ヘキサン=1：1）で精製して、表題化合物を淡褐色オイルとして得た（9.7g、収率95％）。
0004256160.tif 000066
【０１５６】
3.  2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)酢酸
【化５６】
0004256160.tif 000067
前段階で調製した2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)酢酸エチル（9.6g、35.8mmol）のメタノール溶液（20mL）およびTHF溶液（20mL）に、NaOH（2.0g、50mmol）の水溶液（40mL）を加えた。反応混合物を室温で2時間撹拌した。メタノールおよびTHFを減圧下で蒸発させた後、水相を10％HClを用いてpH2まで酸性化し、DCM（3×50mL）で抽出した。抽出物を合わせ、生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、表題化合物を灰白色固体として得た（8.1g、収率94％）。
0004256160.tif 000068
【０１５７】
4.  2-{3-[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)アセチルアミノ]-2-フルオロ-6-ニトロフェニル}エチルアセテート
【化５７】
0004256160.tif 000069
DIEA（7.8mL）および実施例1の段階8のとおりに調製した2-(3-アミノ-2-フルオロ-6-ニトロフェニル)エチルアセテート（4.6g、19mmol）のDCM溶液（60mL）に、2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)アセチルクロリド（前段階で調製した2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)酢酸を塩化オキサリルと還流させることにより調製）（7.8g、30mmol）のDCM溶液（40mL）を加えた。混合物を室温で1時間撹拌した。DCM（100mL）を追加し、得られた混合物を10％クエン酸（3×40mL）および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーによりDCMで溶出して精製し、表題化合物を黄色オイルとして得た（5.3g、収率61％）。
0004256160.tif 000070
【０１５８】
5.  2-{2-アミノ-5-[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)アセチルアミノ]-6-フルオロフェニル}エチルアセテート
【化５８】
0004256160.tif 000071
エタノール（50mL）およびTHF（50mL）中、前段階で調製した2-{3-[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)アセチルアミノ]-2-フルオロ-6-ニトロフェニル}エチルアセテート（4.9g、10.5mmol）およびPd/C（10％、500mg）の混合物を、水素雰囲気下で5時間撹拌した。反応混合物をセライトによりろ過し、THFおよびMeOHで洗浄した。ろ液および洗液を合わせて減圧濃縮し、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、EtOAc/DCM（0％から20％）で溶出して、表題化合物を灰白色固体として得た（3.8g、収率83％）。
0004256160.tif 000072
【０１５９】
6.  N-[4-アミノ-2-フルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]-2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)アセトアミド
【化５９】
0004256160.tif 000073
前段階で調製した2-{2-アミノ-5-[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)アセチルアミノ]-6-フルオロフェニル}エチルアセテート（3.8g、8.8mmol）のMeOH（40mL）およびTHF溶液（20mL）に、K2CO3（1.68g、12mmol）の水溶液（30mL）を加えた。混合物を室温で3時間撹拌した。水（50mL）を追加し、得られた混合物をEtOAc（3×50mL）で抽出した。抽出物を合わせ、生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧濃縮して、表題化合物を灰白色固体として得た（3.3g、収率96％）。
0004256160.tif 000074
【０１６０】
7.  N-[4-クロロ-2-フルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]-2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)アセトアミド（Doyle, M.P.ら、J. Org. Chem. 42：2426（1977））
【化６０】
0004256160.tif 000075
塩化第二銅（1.84g、13.7mmol）を加えたフラスコに、亜硝酸tert-ブチル（1.46g、12.8mmol、90％、Aldrich）のアセトニトリル溶液（35mL）をアルゴン雰囲気下で加えた。得られた緑色反応混合物を氷浴中で0℃に冷却し、前段階の方法に従って調製したN-[4-アミノ-2-フルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]-2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)アセトアミド（3.58g、9.13mmol）のアセトニトリル溶液（60mL）を45分間かけて加えた。0℃でさらに6時間撹拌後、得られた褐色混合物を外界温度まで戻し、次いで20％HCl水溶液（160mL）に注ぎ、DCMで（三回）抽出した。抽出物を合わせ、20％HCl、H2O、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、EtOAc/DCM（0％から2.5％）で溶出して、表題化合物を白色固体として得た（2.1g、収率56％）。
0004256160.tif 000076
質量分析（LCMS、ESI）C20H15ClF4NO2の計算値（M+H）：412.1。実測値：412.6。
【０１６１】
8.  2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)エタノール
【化６１】
0004256160.tif 000077
前段階の方法に従って調製したN-[4-クロロ-2-フルオロ-3-(2-ヒドロキシエチル)フェニル]-2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)アセトアミド（1.9g、4.6mmol）のTHF溶液（19mL）に、0℃でBH3・THF錯体の溶液（19.4mL、19.4mmol、THF中で1.0M）を20分間かけて滴下し、反応混合物を氷浴がなくなるまで撹拌し続けた。次いで、反応混合物を75℃から80℃の油浴中で3時間加熱還流させ、外界温度で一晩撹拌を続けた。NaHCO3（1.63g、19.4mmol）の水溶液（20mL）を加え、THFを蒸発させ、得られた混合物をDCMで二回抽出した。抽出物を合わせ、H2Oおよび生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、EtOAC/DCM（0％、1％、1.5％）で溶出して、表題化合物を白色固体として得た（805mg、収率44％）。
0004256160.tif 000078
質量分析（LCMS、ESI）C20H17ClF4NOの計算値（M+H）：398.1。実測値：398.3。
【０１６２】
9.  2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)エタナール
【化６２】
0004256160.tif 000079
氷浴中のDCM（55mL）中、DMSO（470mg、6.0mmol）、DIEA（823μL、4.74mmol）、および前段階で調製した2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)エタノール（723mg、1.82mmol）の溶液に、三酸化硫黄ピリジン錯体（754mg、4.74mmol）を加えた。3.5時間撹拌後、反応混合物をDCM（110mL）で希釈した。有機層を分離し、水層をDCM（100mL）で抽出した。有機層を合わせ、10％クエン酸（三回）、H2O、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して、表題化合物を橙色オイルとして得た（722mg、定量的収率）。
0004256160.tif 000080
【０１６３】
10.  2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)酢酸
【化６３】
0004256160.tif 000081
前段階で調製した2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)エタナール（722g、1.82mmol）のDMSO溶液（3.6mL）およびNaH2PO4（74mg、0.55mmol）の水溶液（0.9mL）の混合物を撹拌しながら、これに塩化ナトリウム（309mg、2.73mmol、80％）の水溶液（3.0mL）を30分間かけて滴下した。添加後、混合物を外界温度で48時間撹拌し、10M HClでpH1まで酸性化し、DCMで（三回）抽出した。抽出物を合わせ、H2Oおよび生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥して、減圧濃縮した。得られた残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM（0％、1％、1.5％、および2％）で溶出して、出発物質アルデヒド2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)エタナール（165mg、収率23％）および表題化合物（570mg、収率76％）を固体として得た。
0004256160.tif 000082
【０１６４】
11.  2-アザ-3-({2-[2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)アセチルアミノ]エトキシ}アミノ)-3-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]プロパ-2-エン酸tert-ブチル
【化６４】
0004256160.tif 000083
氷浴中の、前段階で調製した2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)酢酸（570mg、1.39mmol）のDMF溶液（7.5mL）に、BOP（981mg、2.22mmol）、[N,N'-ジ(tert-ブトキシカルボニル)]-2-アミノエトキシグアニジンのHCl塩（689mg、1.94mmol）、およびDIEA溶液（0.96mL、5.55mmol）を加えた。氷浴がなくなった後、混合物を外界温度で一晩撹拌し続けた。BOP（123mg、0.28mmol）および[N,N'-ジ(tert-ブトキシカルボニル)]-2-アミノエトキシグアニジンのHCl塩（98mg、0.28mmol）を追加し、反応混合物を24時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、得られた残渣を飽和NaHCO3およびDCMの間で分配した。有機層を分離し、水層をDCMで抽出した。有機層を合わせ、10％KHSO4、H2O、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM（0％、0.5％、および1％）で溶出して、表題化合物を白色の泡として得た（720mg、収率73％）。
0004256160.tif 000084
質量分析（LCMS、ESI）C33H39ClF4N5O6の計算値（M+H）：712.2。実測値：712.3。
【０１６５】
12.  N-[2-(アミジノアミノオキシ)エチル]-2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化６５】
0004256160.tif 000085
前段階で調製した2-アザ-3-({2-[2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)アセチルアミノ]エトキシ}アミノ)-3-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]プロパ-2-エン酸tert-ブチル（720mg、1.01mmol）のTFA/DCM溶液（2：3、30mL）を外界温度で4時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、得られた残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM中0.05％TFA（5％および10％）で溶出して、表題化合物を淡褐色の泡として得た（626mg、収率99％）。
0004256160.tif 000086
質量分析（LCMS、ESI）C23H23ClF4N5O2の計算値（M+H）：512.1。実測値：512.2。
【０１６６】
実施例5
N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)アセトアミド塩酸塩
【化６６】
0004256160.tif 000087
1.  2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)-N-({6-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]-2-メチル(3-ピリジル)}メチル)アセトアミド
【化６７】
0004256160.tif 000088
実施例4の段階10の方法に従って調製した2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)酢酸（15mg、37μmol）のDMF溶液（0.3mL）に、BOP（26mg、58μmol）、N-[5-(アミノメチル)-6-メチル(2-ピリジル)](tert-ブトキシ)カルボキサミド（12mg、51μmol）、およびDIEA（19mg、146μmol）のDMF溶液（0.1mL）を加えた（Sanderson, P.E.ら、国際公開公報第97/01338号（1997））。混合物を一晩撹拌し、溶媒を蒸発させ、得られた混合物を飽和NaHCO3およびDCMの間で分配した。有機層を分離し、水層をDCMで抽出した。有機層を合わせ、10％KHSO4、H2O、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、次いでシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM（0.3％、0.6％、および1％）で溶出して、表題化合物を白色固体として得た（11mg、収率49％）。
0004256160.tif 000089
質量分析（LCMS、ESI）C32H32ClF4N4O3の計算値（M+H）：631.2。実測値：631.1。
【０１６７】
2.  N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)アセトアミド塩酸塩
【化６８】
0004256160.tif 000090
前段階で調製した2-(3-{[2,2-ジフルオロ-2-(4-フルオロナフチル)エチル]アミノ}-6-クロロ-2-フルオロフェニル)-N-({6-[(tert-ブトキシ)カルボニルアミノ]-2-メチル(3-ピリジル)}メチル)アセトアミド（10mg、16μmol）のHCl溶液（0.5mL、1,4-ジオキサン中で4.0M）を外界温度で2時間撹拌した。MeOH/DCM溶液（25％、0.4mL）を加え、混合物を一晩撹拌し続けた。溶媒を蒸発させ、得られた褐色残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーに供し、MeOH/DCM（2.5％、5％、および10％）で溶出して、固体生成物を得た。これをDCM（0.5mL）中、HCl溶液（0.01mL、1,4-ジオキサン中で4.0M、40μmol）と5分間撹拌して処理し、溶媒を蒸発させて、表題化合物を白色固体として得た（6.2mg、収率69％）。
0004256160.tif 000091
質量分析（LCMS、ESI）C27H24ClF4N4Oの計算値（M+H）：531.1。実測値：531.6。
【０１６８】
実施例6
N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(3-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化６９】
0004256160.tif 000092
1.  N-(2-ヒドロキシエチル)-2-(3-ニトロフェニル)アセトアミド
【化７０】
0004256160.tif 000093
3-ニトロフェニル酢酸（3.21g、17.7mmol）、エタノールアミン（2.8g、46mmol）、およびトリエチルアミン（3.0mL、22mmol）の無水DMF溶液（110mL）に、ベンゾトリアゾール-1-イルオキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（PyBOP、9.37g、18.0mmol）の無水DMF溶液（80mL）を加えた。外界温度（窒素雰囲気下）で16時間撹拌した後、反応混合物を減圧濃縮し、DCMに溶解してろ過した。ろ液を10％クエン酸水溶液、飽和NaHCO3水溶液、pH7緩衝液、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥してろ過した。ろ液を蒸発させ、次いでフラッシュクロマトグラフィー（10％メタノール/DCM）で精製して、表題化合物を淡黄色固体として得た（1.02g、26％）。
0004256160.tif 000094
【０１６９】
2.  N-[2-(N'-フタルイミジル)ヒドロキシエチル]-2-(3-ニトロフェニル)アセトアミド
【化７１】
0004256160.tif 000095
前段階の生成物（1.02g、4.55mmol）、N-ヒドロキシフタルイミド（0.76g、4.64mmol）、およびトリフェニルホスフィン（1.22g、4.65mmol）の、無水THF溶液（100mL）に、アザジカルボン酸ジエチル（0.75mL、4.77mmol）をシリンジから加えた。外界温度（窒素雰囲気下）で一晩撹拌した後、反応混合物を減圧濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（40％酢酸エチル/DCM）で精製して、不純生成物を得て、これをDCMに溶解し、冷却してろ過した。ろ液を蒸発させ、次いでフラッシュクロマトグラフィー（66％〜100％酢酸エチル/ヘキサン）で精製して、表題化合物を白色固体として得た（0.86g、51％）。
0004256160.tif 000096
【０１７０】
3.  N-[2-(N'-フタルイミジル)ヒドロキシエチル]-2-(3-アミノフェニル)アセトアミド
【化７２】
0004256160.tif 000097
前段階の生成物（0.66g、1.80mmol）および炭素担持10％パラジウム（15mg）のエタノール：THF脱気溶液（1：1、40mL）を、水素雰囲気下、外界温度で撹拌した。6時間後、反応混合物をセライトによりろ過し、ろ液を蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（5％メタノール/DCM）で精製して、表題化合物を黄色固体として得た（0.20g、33％）。
0004256160.tif 000098
質量分析（MALDI-TOF、α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸マトリクス）C18H17N3O4の計算値：362.1（M+Na）、340.1（M+H）。実測値：362.2、340.3。
【０１７１】
4.  N-[2-(N'-フタルイミジル)ヒドロキシエチル]-2-(3-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド
【化７３】
0004256160.tif 000099
前段階の生成物（0.20g、0.58mmol）の氷冷無水DCM溶液（50mL）に、塩化α-トルエンスルホニル（0.11g、0.58mmol）の無水DCM溶液（20mL）および、続いてN-メチルモルホリン（0.10mL、0.91mmol）を加えた。外界温度で16時間撹拌した後、さらに塩化α-トルエンスルホニル（0.07g、0.36mmol）およびN-メチルモルホリン（0.10mL、0.91mmol）を追加し、反応混合物をさらに4時間撹拌して、減圧下で蒸発させた。残渣をDCMに溶解し、10％クエン酸水溶液、pH7緩衝液および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過し、ろ液を蒸発させて、表題化合物を淡黄色固体として得た（0.20g、69％）。
0004256160.tif 000100
【０１７２】
5.  N-[2-(アミノオキシ)エチル]-2-(3-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド
【化７４】
0004256160.tif 000101
前段階の生成物（0.19g、0.39mmol）をエタノール：THF（1：1、20mL）に溶解し、40％メチルアミン水溶液（10mL）と外界温度で1時間反応させた。反応混合物を減圧下で蒸発させ、Waters Sep-Pak（5gシリカ、DCM：酢酸エチル=1：1）で精製して、不純黄色固体を得た。次いでこれを調製用薄層クロマトグラフィー（10％メタノール/DCM）で精製して、表題化合物を白色固体として得た（0.10g、72％）。
0004256160.tif 000102
質量分析（MALDI-TOF、α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸マトリクス）C17H21N3O4Sの計算値：386.1（M+Na）。実測値：386.6。
【０１７３】
6.  N-[2-({N,N'-ジ[tert-ブトキシカルボニル]}グアニジノオキシ)エチル]-2-(3-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド
【化７５】
0004256160.tif 000103
前段階の生成物（89mg、0.24mmol）および[N,N'-ジ(tert-ブトキシカルボニル)]アミジノピラゾール（86mg、0.28mmol）のDMF溶液（5mL）を外界温度で4日間撹拌した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（5％メタノール/DCM）で精製して、不純黄色オイルを得た。次いでこれを調製用薄層クロマトグラフィー（5％メタノール/DCM）で精製して、表題化合物を無色固体として得た（72mg、49％）。
0004256160.tif 000104
【０１７４】
7.  N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(3-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化７６】
0004256160.tif 000105
前段階の生成物（72mg、0.12mmol）をDCM（5mL）に溶解し、トリフルオロ酢酸（2mL）と外界温度で4時間反応させた。反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物を調製用薄層クロマトグラフィー（20％メタノール/DCM）で精製して、表題化合物を淡黄色ワックスとして得た（44mg、71％）。
0004256160.tif 000106
質量分析（MALDI-TOF、α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸マトリクス）C18H23N5O4Sの計算値：428.1（M+Na）、406.2（M+H）。実測値：428.4、406.4。
【０１７５】
実施例7
N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-クロロ-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化７７】
0004256160.tif 000107
1.  2-クロロ-5-ニトロフェニル酢酸一水和物
【化７８】
0004256160.tif 000108
2-クロロフェニル酢酸（10.0g、58.6mmol）の濃硫酸溶液（40mL）を-10℃に冷却し、発煙硝酸（2.80mL、66.7mmol）の濃硫酸溶液（7.2mL）とゆっくり反応させた。2.5時間後、反応混合物を氷水（400mL）上にゆっくり注ぎ、粗いフィルターフリットによりろ過し、冷水で一回洗浄し、フリット上で一晩乾燥して、表題化合物を白色固体として得た（13.5g、98％）。プロトンNMRスペクトルの積分により、生成物が約0.2当量の2-クロロフェニル酢酸を含むことが判明したが、薄層クロマトグラフィーによりこれは生成物から分離不可能であることが示された。
0004256160.tif 000109
【０１７６】
2.  2-(3-アミノ-6-クロロフェニル)酢酸エチル
【化７９】
0004256160.tif 000110
前段階の生成物（4.14g、17.7mmol）をDCM（70mL）に懸濁させ、塩化オキサリル（4.0mL、46mmol）および数滴のDMFと反応させた。外界温度で1時間撹拌して反応物を均質にし、試薬等級のエタノール（30mL）を加え、反応混合物をさらに30分間撹拌した。粗生成物を減圧下で蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（10％から15％酢酸エチル/ヘキサン）で精製して、表題化合物を淡黄色オイルとして得た（4.6g）。プロトンNMRにより生成物が約0.8当量のシュウ酸ジエチルを含むことが判明したが、これは薄層クロマトグラフィーでは特定することができなかった。
0004256160.tif 000111
【０１７７】
3.  2-(3-アミノ-6-クロロフェニル)酢酸エチル
【化８０】
0004256160.tif 000112
前段階の生成物（2.00g、8.21mmol）の試薬等級（reagent grade）エタノール溶液（50mL）を、塩化スズ（II）二水和物（9.40g、41.7mmol）と外界温度で反応させた。16時間後、反応混合物を減圧下で濃縮し、DCMに溶解し、ろ過した。ろ液を水および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を蒸発させ、次いでフラッシュクロマトグラフィー（40％酢酸エチル/ヘキサン）で精製して、表題化合物を淡黄色オイルとして得た（0.53g、30％）。
0004256160.tif 000113
【０１７８】
4.  2-(2-クロロ-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)酢酸エチル
【化８１】
0004256160.tif 000114
前段階の生成物（0.50g、2.32mmol）および塩化α-トルエンスルホニル（0.74g、3.88mmol）のDCM溶液（40mL）と、N-メチルモルホリン（0.80mL、7.3mmol）を外界温度で3時間撹拌し、希HCl、水、および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（5％酢酸エチル/DCM）で精製して、表題化合物を淡黄色固体として得た（0.693g、81％）。
0004256160.tif 000115
質量分析（MALDI-TOF、α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸マトリクス）C17H18NO4SClの計算値：390.1（M+Na）。実測値：390.7。
【０１７９】
5.  2-(2-クロロ-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)酢酸
【化８２】
0004256160.tif 000116
前段階の生成物（0.69g、1.87mmol）の水：THF溶液（1：1、20mL）を、水酸化カリウム（0.52g、9.32mmol）と外界温度で20時間反応させた。THFを減圧下で蒸発させた後、残った水層を1N HClでpH3まで酸性化し、DCMおよびエーテルで抽出した。合わせた有機層を生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。次いで、ろ液を減圧下で蒸発させて、表題化合物を白色固体として得た（0.586g、92％）。
0004256160.tif 000117
質量分析（MALDI-TOF、α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸マトリクス）C15H14NO4SClの計算値：378.0（M+Na）、362.0（M+H）。実測値：378.8、362.9。
【０１８０】
6.  N-[2-({N,N'-ジ-[tert-ブトキシカルボニル]}グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-クロロ-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド
【化８３】
0004256160.tif 000118
前段階の生成物（0.21g、0.60mmol）および[N,N'-ジ(tert-ブトキシカルボニル)]-2-アミノエトキシグアニジン（Tianbao Luら、国際公開公報第99/26926号（1999））（0.19g、0.60mmol）の無水THF溶液（50mL）を、BOP（0.33g、0.75mmol）およびトリエチルアミン（0.25mL、1.8mmol）と外界温度で16時間反応させた。反応物を減圧下で蒸発させ、DCMに溶解し、pH7緩衝液および生理食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過した。ろ液を蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー（5％メタノール/DCM）で精製して、表題化合物を橙色固体として得た（0.380g、98％）。
0004256160.tif 000119
質量分析（MALDI-TOF、ゲンチジン酸マトリクス）C28H38N5O8SClの計算値：662.2（M+Na）、440.1（M-2Boc+H）。実測値：661.7、439.9。
【０１８１】
7.  N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-クロロ-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化８４】
0004256160.tif 000120
前段階の生成物（0.375g、0.586mmol）のDCM溶液（10mL）を、トリフルオロ酢酸（5mL）と外界温度で16時間反応させた。反応混合物を減圧下で蒸発させ、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（20％メタノール/DCM）で精製して、表題化合物を淡黄色固体として得た（0.326g、100％）。
0004256160.tif 000121
質量分析（MALDI-TOF、α-シアノ-4-ヒドロキシケイ皮酸マトリクス）C18H22N5O4SClの計算値：462.1（M+Na）、440.1（M+H）。実測値：461.9、439.9。
【０１８２】
実施例8
N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-メチル-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化８５】
0004256160.tif 000122
1.  (2-メチル-5-ニトロフェニル)メタノール
【化８６】
0004256160.tif 000123
2-メチル-5-ニトロ安息香酸（2.00g、11.0mmol）を窒素雰囲気下で加温し、無水THF（25mL）に溶解し、ボランのTHF中1N溶液（16.5mL）で処理した。外界温度で18時間撹拌した後、炭酸カリウム（1.8g、13mmol）の水溶液（50mL）で反応停止し、THFを減圧下で除去した。残った水溶液をDCMで抽出し、有機層をpH7緩衝液および生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を蒸発させて、表題化合物を淡黄色固体として得た（1.76g、95％）。
0004256160.tif 000124
【０１８３】
2.  (2-メチル-5-ニトロフェニル)メチルメチルスルホネート
【化８７】
0004256160.tif 000125
前段階の生成物（1.74g、10.4mmol）のDCM溶液（50mL）を0℃に冷却し、塩化メタンスルホニル（0.90mL、11.6mmol）およびトリエチルアミン（1.75mL、12.6mmol）で処理した。30分間撹拌した後、反応混合物を外界温度まで加温し、さらに30分間撹拌し、pH7緩衝液上に注いだ。相を分離し、有機層を生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を蒸発させて、表題化合物を淡黄色オイルとして得た（2.53g、99％）。
0004256160.tif 000126
【０１８４】
3.  2-(2-メチル-5-ニトロフェニル)エタンニトリル
【化８８】
0004256160.tif 000127
前段階の生成物（2.48g、10.1mmol）およびシアン化カリウム（2.00g、30.7mmol）をアセトニトリル（100mL）中で8時間還流させ、次いで外界温度まで冷却して、一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で蒸発させ、DCMに溶解し、ろ過した。ろ液をpH7緩衝液および生理食塩水で洗浄し、蒸発させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル=1：1溶離剤）で精製して、表題化合物を黄色固体として得た（1.27g、71％）。
0004256160.tif 000128
【０１８５】
4.  2-(2-メチル-5-ニトロフェニル)酢酸
【化８９】
0004256160.tif 000129
前段階の生成物（1.27g、7.21mmol）のメタノール溶液（30mL）に、水酸化カリウム（4.06g、72.4mmol）の水溶液（30mL）を加えた。反応混合物を一晩加熱還流させ、メタノールを減圧下で除去した。残った水層を3N HClで酸性化してろ過し、固体をジエチルエーテルで洗浄し、ろ液を分離した。水層をDCMおよびジエチルエーテルで洗浄し、合わせた有機層を生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を蒸発させて、表題化合物を橙色固体として得た（0.84g、60％）。
0004256160.tif 000130
【０１８６】
5.  N-[2-({N,N'-ジ-[tert-ブトキシカルボニル]}グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-メチル-5-ニトロフェニル)アセトアミド
【化９０】
0004256160.tif 000131
前段階の生成物（0.27g、1.40mmol）、BOP（0.70g、1.58mmol）、トリエチルアミン（0.50mL、3.60mmol）、および[N,N'-ジ(tert-ブトキシカルボニル)]2-アミノエトキシグアニジン（Tianbao Luら、国際公開公報第99/26926号（1999））（0.44g、1.38mmol）の無水DMF溶液を、外界温度で一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（5％メタノール/DCM溶離剤）で精製して、表題化合物を淡橙色固体として得た（0.63g、92％）。
0004256160.tif 000132
【０１８７】
6.  N-[2-({N,N'-ジ-[tert-ブトキシカルボニル]}グアニジノオキシ)エチル]-2-(3-アミノ-6-メチルニトロフェニル)アセトアミド
【化９１】
0004256160.tif 000133
前段階の生成物（0.29g、0.58mmol）および炭素担持10％パラジウム(0)（0.06g）を試薬エタノール（50mL）に溶解し、窒素および減圧で脱気し、水素バルーン（balloon）下、外界温度で撹拌した。4時間後、反応混合物をセライトによりろ過し、フリットをメタノールで洗浄し、ろ液を減圧下で蒸発させて、表題化合物を得た（0.27g、100％）。
0004256160.tif 000134
【０１８８】
7.  N-[2-({N,N'-ジ-[tert-ブトキシカルボニル]}グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-メチル-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド
【化９２】
0004256160.tif 000135
前段階の生成物（0.27g、0.58mmol）、塩化α-トルエンスルホニル（0.18g、0.96mmol）、およびN-メチルモルホリン（0.20mL、1.82mmol）をDCM（20mL）中、外界温度で撹拌した。2時間後、反応混合物を追加のDCMで希釈し、希HCl、飽和重炭酸ナトリウム水溶液、pH7緩衝液および生理食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を減圧下で濃縮して、表題化合物を淡黄色固体として得た（0.35g、97％）。
0004256160.tif 000136
【０１８９】
8.  N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-メチル-5-{[ベンジルスルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミドトリフルオロ酢酸塩
【化９３】
0004256160.tif 000137
前段階の生成物（0.35g、0.56mmol）をDCM（10mL）に溶解し、外界温度でトリフルオロ酢酸（3mL）処理した。16時間後、反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物を10gのウォーターズ（Waters）シリカSep-Pak（登録商標）（5％から20％メタノール/DCM勾配溶出）で精製して、表題化合物を淡黄色固体として得た（0.27g、89％）。
0004256160.tif 000138
質量分析（MALDI-TOF、ゲンチジン酸マトリクス）C19H25N5O4Sの計算値：442.2（M+Na）、420.2（M+H）。実測値：442.5、420.6。
【０１９０】
実施例9
N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-ヒドロキシ-6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド塩酸塩
【化９４】
0004256160.tif 000139
1.  4-メチル-1-ニトロ-2-プロパ-2-エニルオキシベンゼン
【化９５】
0004256160.tif 000140
5-メチル-2-ニトロフェノール（2.00g、13.1mmol）、臭化アリル（1.30mL、15.0mmol）、および炭酸セシウム（5.5g、17mmol）のDMF溶液（100mL）を外界温度で撹拌した。20時間後、反応混合物をろ過し、フリットをメタノールで洗浄し、ろ液を減圧下、50℃で蒸発させた。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル=4：1次いで2：1の溶離剤）で精製して、表題化合物を黄色オイルとして得た（2.39g、95％）。これは3日間外界温度で放置後に結晶化した。
0004256160.tif 000141
【０１９１】
2.  3-メチル-6-ニトロ-2-プロパ-2-エニルフェノール
【化９６】
0004256160.tif 000142
前段階のとおりに調製した4-メチル-1-ニトロ-2-プロパ-2-エニルオキシベンゼン（7.11g、36.8mmol）をニートで200℃、窒素雰囲気下で3時間加熱し、外界温度まで冷却し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：DCM=1：1溶離剤）で精製して、表題化合物を橙色オイルとして得た（5.04g、71％）。
0004256160.tif 000143
【０１９２】
3.  1-メチル-4-ニトロ-3-(フェニルメトキシ)-2-プロパ-2-エニルベンゼン
【化９７】
0004256160.tif 000144
前段階の生成物（5.02g、26.0mmol）、臭化ベンジル（3.40mL、28.6mmol）、および炭酸セシウム（17.2g、52.8mmol）のDMF溶液（100mL）を外界温度で20時間撹拌した。溶液をろ過し、ろ液を減圧下で濃縮し、粗生成物をシリカに吸着させた。これを短いシリカ床上に注ぎ、DCMで溶出し、溶出液を蒸発させて、表題化合物を黄色オイルとして得た（7.20g、98％）。
0004256160.tif 000145
【０１９３】
4.  4-メチル-2-(フェニルメトキシ)-3-プロパ-2-エニルフェニルアミン
【化９８】
0004256160.tif 000146
前段階の生成物（0.55g、1.94mmol）および塩化スズ（II）二水和物（2.89g、12.8mmol）を試薬等級エタノール（40mL）中、外界温度で撹拌した。20時間後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を飽和重炭酸ナトリウムおよびDCMの間で分配した。得られた乳濁液をろ過し、固体および水層を追加のDCMで洗浄し、合わせた有機層を生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。次いでろ液を蒸発させ、表題化合物を橙色オイルとして得た（0.51g、90％）。
0004256160.tif 000147
【０１９４】
5.  [4-メチル-2-(フェニルメトキシ)-3-プロパ-2-エニルフェニル][(3-メチルフェニル)スルホニル]アミン
【化９９】
0004256160.tif 000148
前段階の生成物（0.49g、1.92mmol）をDCM（10mL）に溶解し、外界温度で塩化m-トルエンスルホニル（0.37g、1.96mmol）およびN-メチルモルホリン（0.25mL、2.27mmol）処理した。18時間後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（DCM溶離剤）で精製して、表題化合物を淡黄色オイルとして得た（0.72g、92％）。
0004256160.tif 000149
【０１９５】
6.  2-(6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}-2-(フェニルメトキシ)フェニル)エタノール
【化１００】
0004256160.tif 000150
前段階の生成物（0.71g、1.74mmol）を1,4-ジオキサン（25mL）に溶解し、過ヨウ素酸ナトリウム（1.50g、7.01mmol）の水溶液（12mL）および2-メチル-2-プロパノール中、四酸化オスミウムの2.5重量％溶液（0.25mL、0.02mmol）で処理した。外界温度で4時間撹拌した後、反応物をDCMで希釈し、5％重亜硫酸ナトリウム水溶液、水、および生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して黄色オイルを得、これをそれ以上精製することなく用いた。
【０１９６】
7.  2-(6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}-2-(フェニルメトキシ)フェニル)酢酸
【化１０１】
0004256160.tif 000151
前段階の生成物のアセトン溶液（25mL）に、二クロム酸ナトリウム（0.79g、2.64mmol）および濃硫酸（1.5mL、28mmol）の水溶液（25mL）を加え、反応混合物を外界温度で3日間撹拌した。メタノール（3mL）を加えて、さらに15分間撹拌した後、有機溶媒を減圧下で除去し、残った水層をDCMで抽出した。DCM層を生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、次いでろ液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（10％メタノール/DCM）で精製して、表題化合物を淡黄色固体として得た（0.51g、段階5から69％）。
0004256160.tif 000152
質量分析（LCMS、正ESI）C23H23NO5Sの計算値：448.1（M+Na）、425.1（M+H）。実測値：448.1、425.9。
【０１９７】
8.  N-[2-({N,N'-ジ-[tert-ブトキシカルボニル]}グアニジノオキシ)エチル]-2-(6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}-2-(フェニルメトキシ)フェニル)アセトアミド
【化１０２】
0004256160.tif 000153
前段階の生成物（0.32g、0.75mmol）、BOP（0.34g、0.77mmol）、トリエチルアミン（0.25mL、1.80mmol）、および[N,N'-ジ(tert-ブトキシカルボニル)]-2-アミノエトキシグアニジン（Tianbao Luら、国際公開公報第99/26926号（1999））（0.27g、0.76mmol）のDMF溶液（15mL）を、外界温度で一晩撹拌した。反応物を減圧下で濃縮し、残渣をDCMに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム、水、および生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（7％メタノール/DCM溶離剤）で精製して、表題化合物を淡黄色固体として得た（0.41g、76％）。
0004256160.tif 000154
【０１９８】
9.  N-[2-({N,N'-ジ-[tert-ブトキシカルボニル]}グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-ヒドロキシ-6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}フェニル）アセトアミド
【化１０３】
0004256160.tif 000155
前段階の生成物（0.41g、0.57mmol）および炭素担持10％パラジウム(0)（60mg）を試薬等級エタノール（20mL）に溶解し、窒素および減圧で脱気し、水素バルーン下、外界温度で4時間撹拌した。反応混合物をセライトによりろ過し、フリットをメタノールで洗浄し、ろ液を減圧下で蒸発させ、残渣を調製用薄層クロマトグラフィー（5％メタノール/DCM溶離剤）で精製して、表題化合物を淡黄色固体として得た（13.0mg、4％）。
0004256160.tif 000156
【０１９９】
10.  N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]-2-(2-ヒドロキシ-6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド塩酸塩
【化１０４】
0004256160.tif 000157
前段階の生成物（13.0mg、0.02mmol）をDCM（5mL）に溶解し、外界温度でトリフルオロ酢酸（1mL）処理した。16時間後、反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物を調製用薄層クロマトグラフィー（12％メタノール/DCM溶離剤、アンモニアで飽和）で精製した。得られた生成物をエタノール中の4N HClで処理し、ろ過し、ろ液を蒸発させ、次いで固体をジエチルエーテルで洗浄し、減圧乾燥して、表題化合物を黄褐色固体として得た（5.0mg、52％）。
0004256160.tif 000158
質量分析（LCMS、正ESI）C19H25N5O5Sの計算値：436.1（M+H）。実測値：436.2。
【０２００】
実施例10
N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-(2-ヒドロキシ-6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド塩酸塩
【化１０５】
0004256160.tif 000159
1.  N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-(6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}-2-(フェニルメトキシ)フェニル)アセトアミド
【化１０６】
0004256160.tif 000160
実施例9、段階7の生成物（0.18g、0.42mmol）、BOP（0.21g、0.47mmol）、トリエチルアミン（0.25mL、1.80mmol）、および2-アミノ-5-アミノメチル-6-メチルピリジン二塩酸塩（Sanderson, P.E.ら、国際公開公報第97/01338号（1997））（0.10g、0.48mmol）をDMF（10mL）に溶解し、外界温度で2時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配溶出：10％から15％のメタノール/DCM）で精製して不純生成物を得、これをDCMに溶解し、飽和重炭酸ナトリウム、水、および生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して、ろ過した。ろ液を蒸発させて、表題化合物を淡黄色固体として得た（0.23g、99％）。
0004256160.tif 000161
質量分析（LCMS、正ESI）C30H32N4O4Sの計算値：545.2（M+H）。実測値：545.2。
【０２０１】
2.  N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-(2-ヒドロキシ-6-メチル-3-{[(3-メチルフェニル)スルホニル]アミノ}フェニル)アセトアミド塩酸塩
【化１０７】
0004256160.tif 000162
前段階の生成物（0.22g、0.41mmol）および炭素担持10％パラジウム(0)（0.03g）をエタノール：THF（2：1、30mL）に溶解し、窒素および減圧で脱気し、水素バルーン下、外界温度で撹拌した。7時間後、反応混合物をセライトによりろ過し、フリットをメタノールで洗浄し、ろ液を減圧下で濃縮した。残渣をエタノール中4N HCl（約3mL）で処理し、高減圧下で蒸発させ、DCMに溶解し、ろ過し、ろ液を再度高減圧下で蒸発させて、表題化合物を淡ベージュ色固体として得た（0.14g、71％）。
0004256160.tif 000163
質量分析（LCMS、正ESI）C23H26N4O4Sの計算値：455.2（M+H）。実測値：455.2。
【０２０２】
実施例11
トルエン-3-スルホン酸 2-ヒドロキシ-3-[(2-グアニジノオキシ-エチルカルバモイル)-メチル]-4-メチル-フェニルエステル。
【化１０８】
0004256160.tif 000164
1.  2-メトキシ-4-メチルフェニル3-メチルベンゼンスルホネート
【化１０９】
0004256160.tif 000165
塩化m-トルエンスルホニル（0.53g、2.78mmol）および2-メトキシ-4-メチルフェノール（0.38g、2.75mmol）のDCM溶液（10mL）を、トリエチルアミン（0.5mL、3.6mmol）で処理し、外界温度で撹拌した。18時間後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をヘキサン：DCM=1：1に溶解し、ろ過し、ろ液を高減圧下で蒸発させて、表題化合物を白色固体として得た（0.79g、99％）。
0004256160.tif 000166
【０２０３】
2.  2-ヒドロキシ-4-メチルフェニル3-メチルベンゼンスルホネート
【化１１０】
0004256160.tif 000167
前段階の生成物（0.79g、2.72mmol）をDCM（10mL）に溶解し、-78℃に冷却し、窒素雰囲気下、DCM中1N三臭化ホウ素（3.0mL）で処理した。10分後、ドライアイス浴をはずし、反応混合物を外界温度まで加温しながらさらに1時間撹拌した。水でゆっくり反応停止した後、反応混合物を追加のDCMで希釈し、生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を減圧下で濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（勾配溶出：50％〜33％〜0％のヘキサン/DCM）で精製して、表題化合物を白色結晶性固体として得た（0.51g、68％）。
0004256160.tif 000168
【０２０４】
3.  4-メチル-2-プロパ-2-エニルオキシフェニル3-メチルベンゼンスルホネート
【化１１１】
0004256160.tif 000169
前段階の生成物（0.51g、1.83mmol）、臭化アリル（0.20mL、2.30mmol）、および炭酸セシウム（0.77g、2.40mmol）のDMF溶液（25mL）を外界温度で16時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をDCMに溶解し、ろ過し、ろ液を1N KOH水溶液、水、及び生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した。ろ液を蒸発させて、表題化合物を黄色オイルとして得た（0.54g、93％）。
0004256160.tif 000170
【０２０５】
4.  2-ヒドロキシ-4-メチル-3-プロパ-2-エニルフェニル3-メチルベンゼンスルホネート
【化１１２】
0004256160.tif 000171
前段階の生成物（0.54g、1.70mmol）をニートで200℃、6時間加熱し、外界温度まで冷却し、フラッシュカラムクロマトグラフィーで二回（まず、DCM：ヘキサン=2：1、次いでヘキサン：酢酸エチル=4：1溶離剤）精製して、表題化合物を無色オイルとして得た（84mg、16％）。
0004256160.tif 000172
【０２０６】
5.  4-メチル-2-(フェニルメトキシ)-3-プロパ-2-エニルフェニル3-メチルベンゼンスルホネート
【化１１３】
0004256160.tif 000173
前段階の生成物（68mg、0.21mmol）および炭酸セシウム（0.19g、0.58mmol）をDMF（5mL）に溶解し、外界温度で臭化ベンジル（0.05mL、0.42mmol）処理した。3日後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（DCM溶離剤）で精製して、表題化合物を黄色オイルとして得た（50mg、58％）。
0004256160.tif 000174
【０２０７】
6.  4-メチル-3-(2-オキソエチル)-2-(フェニルメトキシ)フェニル-3-メチルベンゼンスルホネート
【化１１４】
0004256160.tif 000175
前段階の生成物（50mg、0.12mmol）および過ヨウ素酸ナトリウム（0.12g、0.56mmol）のアセトニトリル：水溶液（5：1、12mL）に、塩化ルテニウム（III）水和物（8mg、0.04mmol）を加えた。反応混合物を外界温度で6時間撹拌し、DCMで希釈し、5％重亜硫酸ナトリウム水溶液、水、および生理食塩水で洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を蒸発させて表題化合物を粗オイルとして得、これをそれ以上精製することなく用いた。
【０２０８】
7.  2-{6-メチル-3-[(3-メチルフェニル)スルホニルオキシ]-2-(フェニルメトキシ)フェニル}酢酸
【化１１５】
0004256160.tif 000176
前段階の生成物をアセトン（5mL）に溶解し、外界温度で二クロム酸ナトリウム（65mg、0.22mmol）および濃硫酸（1mL）の水溶液（4mL）で処理した。3日間撹拌した後、アセトンを減圧下で除去し、残った水層をDCMで抽出した。有機相を生理食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、次いでろ液を蒸発させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（8％メタノール/DCM溶離剤）で精製して、表題化合物を白色固体として得た（45mg、段階5から88％）。
0004256160.tif 000177
【０２０９】
8.  3-({N-[2-({N,N'-ジ-[tert-ブトキシカルボニル]}グアニジノオキシ)エチル]カルバモイル}メチル)-4-メチル-2-(フェニルメトキシ)フェニル3-メチルベンゼンスルホネート
【化１１６】
0004256160.tif 000178
前段階の生成物（45mg、0.11mmol）、BOP（48mg、0.11mmol）、および[N,N'-ジ(tert-ブトキシカルボニル)]-2-アミノエトキシグアニジン（Tianbao Luら、国際公開公報第99/26926号（1999））（39mg、0.11mmol）のDMF溶液（5mL）に、トリエチルアミン（0.2mL、1.4mmol）を加えた。外界温度で18時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（DCM：酢酸エチル=3：1溶離剤）で精製して、表題化合物を無色オイルとして得た（61mg、79％）。
0004256160.tif 000179
【０２１０】
9.  3-({N-[2-({N,N'-ジ-[tert-ブトキシカルボニル]}グアニジノオキシ)エチル]カルバモイル}メチル)-2-ヒドロキシ-4-メチルフェニル3-メチルベンゼンスルホネート
【化１１７】
0004256160.tif 000180
前段階の生成物（61mg、0.08mmol）および炭素担持10％パラジウム(o)（20mg）をTHF、メタノール、および水（1：1：1、50mL）に溶解し、窒素および減圧で脱気し、水素バルーン下、外界温度で激しく撹拌した。18時間後、反応混合物をセライトによりろ過し、フリットをメタノールで洗浄し、ろ液を蒸発させ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（10％酢酸エチル/DCM溶離剤）で精製して、表題化合物を無色固体として得た（40mg、74％）。
0004256160.tif 000181
【０２１１】
10.  3-({N-[2-(グアニジノオキシ)エチル]カルバモイル}メチル)-2-ヒドロキシ-4-メチルフェニル3-メチルベンゼンスルホネート塩酸塩
【化１１８】
0004256160.tif 000182
前段階の生成物（40mg、0.06mmol）をDCM（4mL）に溶解し、外界温度でニートのトリフルオロ酢酸（1.5mL）で処理した。3時間後、反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を調製用薄層クロマトグラフィー（溶離剤としてアンモニアガスで飽和させた20％メタノール/DCM）で精製し、エタノール中の4N HClで処理し、ろ過した。ろ液を蒸発させ、ジエチルエーテルで洗浄し、高減圧下で乾燥して、表題化合物を淡黄色固体として得た（17mg、57％）。
0004256160.tif 000183
質量分析（LCMS、正ESI）C19H24N4O6Sの計算値：437.1（M+H）。実測値：437.3。
【０２１２】
実施例12
錠剤調製
下記の活性化合物をそれぞれ25.0mg、50.0mg、および100.0mg含む錠剤を、下記のとおりに調製する：
a.N-[2-(アミジノアミノオキシ)エチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミドトリフルオロ酢酸塩；および
b.N-[(6-アミノ-2-メチル(3-ピリジル))メチル]-2-{3-[(2,2-ジフルオロ-2-フェニルエチル)アミノ]-6-クロロ-2-フルオロフェニル}アセトアミド塩酸塩。
0004256160.tif 000184
【０２１３】
すべての活性化合物、セルロース、およびトウモロコシデンプンの一部を混合し、造粒して10％トウモロコシデンプンペーストとする。得られた顆粒をふるい分け、乾燥し、残りのトウモロコシデンプンおよびステアリン酸マグネシウムと混合する。得られた顆粒を次いで圧縮して、一錠中に活性成分をそれぞれ25.0mg、50.0mg、および100.0mg含む錠剤とする。
【０２１４】
実施例13
静脈内投与液剤調製
前述の実施例1および実施例2の活性化合物の静脈内投与剤形を下記のとおりに調製する。
0004256160.tif 000185
【０２１５】
上記の量を用いて、あらかじめ調製した塩化ナトリウム、クエン酸、およびクエン酸ナトリウムの注射用蒸留水（water for injection）溶液（米国薬局方/国民医薬品集1995年版、USP、United States Pharmacopeial Convention, Inc.発行、Rockville、Maryland（1994））の1636ページを参照されたい）に活性化合物を室温で溶解させる。
【０２１６】
実施例14
精製酵素のインビトロ阻害
試薬：
すべての緩衝塩はシグマケミカル社（Sigma Chemical Company）（St.Louis、MO）から入手し、入手可能な最高純度のものであった。酵素基質、N-ベンゾイル-Phe-Val-Arg-p-ニトロアニリド（Sigma B7632）、N-ベンゾイル-Ile-Glu-Gly-Arg-p-ニトロアニリド塩酸塩（Sigma B2291）、N-p-トシル-Gly-Pro-Lys-p-ニトロアニリド（Sigma T6140）、N-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Phe-p-ニトロアニリド（Sigma S7388）およびN-CBZ-Val-Gly-Arg-p-ニトロアニリド（Sigma C7271）はSigmaから入手した。N-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Arg-p-ニトロアニリド（BACHEML-1720）およびN-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Val-p-ニトロアニリド（BACHEM L-1770）はバッチェム（BACHEM）（King of Prusia、PA）から入手した。
【０２１７】
ヒトα-トロンビン、ヒト第Xa因子およびヒトプラスミンはエンザイムリサーチラボラトリーズ（Enzyme Research Laboratories）（South Bend、Indiana）から入手した。ウシα-キモトリプシン（Sigma C4129）、ウシトリプシン（Sigma T8642）およびヒト腎細胞ウロキナーゼ（Sigma U5004）はシグマ（Sigma）から入手した。ヒト白血球エラスターゼはエラスチンプロダクツ（Elastin Products）（Pacific、MO）から入手した。
【０２１８】
Ki測定：
すべてのアッセイは被験化合物がペプチドp-ニトロアニリド基質の酵素触媒加水分解を阻害する能力に基づいている。典型的Ki測定において、基質をDMSO中で調製し、50mM HEPES、200mM NaClからなるアッセイ緩衝液（pH7.5）で希釈する。各基質の最終濃度を以下に示す。一般に、基質濃度は実験的に求めたKm値よりも低い。被験化合物を1.0mg/mlのDMSO溶液として調製する。希釈液はDMSO中で調製し、200倍の濃度範囲を含む8段階の最終濃度を作る。酵素溶液はアッセイ緩衝液中、下記の濃度で調製する。
【０２１９】
典型的Ki測定において、96穴プレートの各ウェルに基質溶液280μL、被験化合物溶液10μLをピペットで加え、プレートをMolecular Devicesプレートリーダー中で>15分間、温度37℃で平衡化させる。10mLアリコートの酵素を加えることにより反応を開始し、405nmの吸光度増加を15分間記録する。全基質加水分解の10％未満に対応するデータを計算に用いた。被験化合物を含まない試料の速度（時間の関数としての吸光度変化率）の比を、被験化合物を含む試料の速度で除し、被験化合物濃度の関数としてプロットする。データを線形回帰に適合させ、直線の傾きの値を計算する。傾きの逆数が実験的に求めたKi値である。
【０２２０】
トロンビン：
トロンビン活性を、基質N-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Arg-p-ニトロアニリドを加水分解する能力として評価した。基質溶液を、アッセイ緩衝液中、32mM（32mM<<Km=180mM）の濃度で調製した。最終DMSO濃度は4.3％であった。精製ヒトα-トロンビンをアッセイ緩衝液で15nMの濃度に希釈した。最終試薬濃度は次のとおりであった：［トロンビン］=0.5nM、［基質N-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Arg-p-ニトロアニリド］=32mM。
【０２２１】
第X因子［FXa］：
FXa活性を、基質N-ベンゾイル-Ile-Glu-Gly-Arg-p-ニトロアニリド塩酸塩を加水分解する能力として評価した。基質溶液をアッセイ緩衝液中、51mM（51<<Km=1.3mM）の濃度で調製した。最終DMSO濃度は4.3％であった。精製ヒト第X因子をアッセイ緩衝液で300nMの濃度に希釈した。最終試薬濃度は次のとおりであった：［FXa］=10nM、［N-ベンゾイル-Ile-Glu-Gly-Arg-p-ニトロアニリド塩酸塩］=51mM。
【０２２２】
プラスミン：
プラスミン活性を、N-p-トシル-Gly-Pro-Lys-p-ニトロアニリドを加水分解する能力として評価した。基質溶液をアッセイ緩衝液中、37mM（37mM<<Km=243mM）の濃度で調製した。最終DMSO濃度は4.3％であった。精製ヒトプラスミンをアッセイ緩衝液で240nMの濃度に希釈した。最終試薬濃度は次のとおりであった：［プラスミン］=8nM、［N-p-トシル-Gly-Pro-Lys-p-ニトロアニリド］=37mM。
【０２２３】
キモトリプシン：
キモトリプシン活性を、N-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Phe-p-ニトロアニリドを加水分解する能力として評価した。基質溶液をアッセイ緩衝液中、14mM（14mM<<Km=62mM）の濃度で調製した。最終DMSO濃度は4.3％であった。精製ウシキモトリプシンをアッセイ緩衝液で81nMの濃度に希釈した。最終試薬濃度は次のとおりであった：［キモトリプシン］=2.7nM、［N-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Phe-p-ニトロアニリド］=14mM。
【０２２４】
トリプシン：
トリプシン活性を、N-ベンゾイル-Phe-Val-Arg-p-ニトロアニリドを加水分解する能力として評価した。基質溶液をアッセイ緩衝液中、13mM（13mM<<Km=291mM）の濃度で調製した。最終DMSO濃度は4.3％であった。精製ウシトリプシンをアッセイ緩衝液で120nMの濃度に希釈した。最終試薬濃度は次のとおりであった：［トリプシン］=4nM、［N-ベンゾイル-Phe-Val-Arg-p-ニトロアニリド］=13mM。
【０２２５】
エラスターゼ：
エラスターゼ活性を、N-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Val-p-ニトロアニリドを加水分解する能力として評価した。基質溶液をアッセイ緩衝液中、19mM（19mM<<Km=89mM）の濃度で調製した。最終DMSO濃度は4.3％であった。精製ヒト白血球エラスターゼをアッセイ緩衝液で750nMの濃度に希釈した。最終試薬濃度は次のとおりであった：［エラスターゼ］=25nM、［N-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Val-p-ニトロアニリド］=19mM。
【０２２６】
ウロキナーゼ：
ウロキナーゼ活性を、N-CBZ-Val-Gly-Arg-p-ニトロアニリドを加水分解する能力として評価した。基質溶液をアッセイ緩衝液中、100mM（100mM<Km=1.2mM）の濃度で調製した。最終DMSO濃度は4.3％であった。精製ヒト腎ウロキナーゼをアッセイ緩衝液で1.2mMの濃度に希釈した。最終試薬濃度は次のとおりであった：［ウロキナーゼ］=40nM、［N-CBZ-Val-Gly-Arg-p-ニトロアニリド］=100mM。
【０２２７】
結果より、実施例1から実施例11の化合物は0.0028μMから20μMの間のヒトトロンビンに関するKi値を有することが判明した。実施例5の化合物は0.0028μMのKiを有する。
【０２２８】
本発明を詳細に説明してきたが、本発明またはその任意の態様の範囲に影響することなく、条件、製剤、および他のパラメーターの広範かつ同等の範囲内で同じことを実施可能であることが、当業者により理解されると考えられる。本明細書において引用されるすべての特許および出版物は、その全体が参照として本明細書に完全に組み込まれる。