(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
真皮表皮接合部に対する表皮基底層にあるケラチン生成細胞の接着を促進するための薬剤であって、アスパラギン酸マグネシウムからなる薬剤を、コラーゲンＩＶ合成刺激剤及びコラーゲンＶＩＩ合成刺激剤から選択される少なくとも１種のコラーゲン合成刺激剤とともに含有し、前記コラーゲンＩＶ合成刺激剤は、大豆サポニン、大豆サポゲノール（ｓａｐｏｇｅｎｏｌ）、大豆サポニン若しくは大豆サポゲノールに富む植物抽出物、並びに、メディカゴ・サティバの根由来のサポニンからなる群から選択され、前記コラーゲンＶＩＩ合成刺激剤は、ポテンティラ・エレクタ抽出物、及び、バーソレティアの抽出物からなる群から選択されることを特徴とする化粧学的組成物。
【請求項２】
前記接着を促進するための薬剤は、組成物の総重量に対し０．００１〜５重量％存在することを特徴とする請求項１記載の化粧学的組成物。
【請求項３】
前記接着を促進するための薬剤は、組成物の総重量に対し０．００１〜１重量％存在することを特徴とする請求項１記載の化粧学的組成物。
【請求項４】
前記コラーゲンＶＩＩ合成刺激剤はポテンティラ・エレクタ抽出物であることを特徴とする請求項１記載の化粧学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、皮膚老化作用を阻止する化粧学的処置方法及びそれを実行するのに特に適した新規化粧学組成物に関する。
真皮表皮接合部（ＤＥＪ）は、皮膚が適正に作用するのに必須である真皮及び表皮間の結合及び交換を確実にする複雑な構造であることが知られている。
化粧学的に許容される薬剤を使用して、真皮表皮接合部、特に、上記真皮表皮接合部の主要な構成物でありコラーゲンＩＶとも称されるＩＶ型コラーゲンに対する表皮基底層にあるケラチン生成細胞の接着を促進することからなる新規概念に相当する化粧学的処置方法により、皮膚老化を遅くする及び／若しくは治癒し、特にしわの深さを減少させ、及び／若しくは、その出現を遅くさせ、並びに／又は、皮膚の張性及び弾性を回復させ、並びに／又は、皮膚の張性及び弾性の減少を遅くすることが可能であることが発見された。
【０００２】
すなわち、その最も一般的な特徴によると、本特許出願は、真皮表皮接合部、特に上記接合部のコラーゲンＩＶに対する表皮基底層にあるケラチン生成細胞の接着を促進するための薬剤が少なくとも１種皮膚に付与されることを特徴とする、皮膚老化を遅くする及び／若しくは治癒し、特にしわの深さを減少させ、及び／若しくは、その出現を遅くさせ、並びに／又は、皮膚の張性及び弾性を回復させ、並びに／又は、皮膚の張性及び弾性の減少を遅くするための化粧学的処置方法を包含することを目的とする。
さらに、上記接着促進物質が、有効量のコラーゲンＩＶ合成刺激剤の少なくとも１種及び／又は有効量のコラーゲンＶＩＩ合成刺激剤の少なくとも１種と一緒に付与される場合、特に顕著な結果が本発明の範疇において得られることが示された。
【０００３】
「コラーゲンＩＶ又はコラーゲンＶＩＩ合成刺激剤」と言う表現は、本記述の範疇において、生合成を増加又は本物質の構成物タンパク質の分解酵素を阻害することにより、真皮表皮接合部でのコラーゲンＩＶを高濃度に生産又は維持することのできる薬剤のいずれかを意味するものと理解される。
本発明の１つの好適な実施形態において、上記接着促進物質は２価金属塩又は錯体、特にマグネシウム若しくは亜鉛の塩又は錯体、又は、２価金属塩又は錯体の混合物である。
２価金属塩又は錯体は、２価金属塩化物、又は、アミノ酸、例えばアスパラギン酸、アスパラギン、プロリン、グルタミン酸、メチオニン、ロイシン、ヒスチジン若しくはリシン、又は、炭素数２〜１２の脂肪族α−ヒドロキシ酸、特にクエン酸、グリコール酸、グルコン酸、リンゴ酸、乳酸若しくは２−ヒドロキシ酪酸等、化粧学的に許容される有機酸との２価金属塩又は錯体であることが好ましい。
本発明の１つの現時点で好適な実施形態において、上記２価金属塩又は錯体は、アスパラギン酸マグネシウム又は塩化マグネシウムである。
本発明の方法の１つの特定の特徴によれば、上記接着促進物質は、組成物の総量に対し、０．０００１〜５重量％、好ましくは０．００１〜１重量％の間の量で存在する組成物の形態で付与される。
【０００４】
コラーゲンＩＶ合成刺激剤のいずれもが、本発明による方法の範疇で使用することができる。
本発明の１つの現時点で好適な実施形態において、コラーゲンＩＶ合成刺激剤は、大豆サポニン及び大豆サポゲノール、好ましくはＡ型若しくはＢ型のもの、並びに、そのような化合物に富む植物抽出物、好ましくは大豆（グリシン・マックス）又はアルファルファ（メディカゴ・サティバ）の抽出物から選択される。
別の好ましい実施形態において、コラーゲンＩＶ合成刺激剤は、メディカゴ・サティバの根由来のサポニンの全種類である。
同様に、コラーゲンＶＩＩ合成刺激剤のいずれもが、本発明による方法の範疇で使用することができる。
本発明の１つの現時点で好適な実施形態において、コラーゲンＶＩＩ合成刺激剤は、ポテンティラ・エレクタ抽出物である。
別の好ましい実施形態において、コラーゲンＶＩＩ合成刺激剤は、バーソレティア、特にバーソレティア・エクセルサの抽出物である。
【０００５】
第２の特徴として、本特許出願は、上記記載の方法を実施するのに特に適した新規化粧学的組成物を包含することを目的とする。
本組成物は、真皮表皮接合部、特に上記接合部のコラーゲンＩＶに対する表皮基底層にあるケラチン生成細胞の接着を促進するための薬剤を少なくとも１種有効量で含有し、上記薬剤は、有効量のコラーゲンＩＶ合成刺激剤を少なくとも１種及び／又は有効量のコラーゲンＶＩＩ合成刺激剤を少なくとも１種と一緒にしたマグネシウム若しくは亜鉛の塩又は錯体から選択されるものであることを本質的な特徴とする。
本組成物において、様々な接着促進物質、及び、コラーゲンＩＶ合成又はコラーゲンＶＩＩ合成刺激剤は、本発明の方法の一般的記載の範疇において上述されているものである。
本発明の組成物は、有利に皮膚の細胞外マトリックスの構成物の合成を促進する物質を少なくとも１種の有してもよい。
【０００６】
さらに、本発明の組成物は、ビタミン、特にグループＡ（レチノール）及びグループＣのビタミン、エステル、特にパルミチン酸塩、プロピオン酸等のその誘導体、トコフェノール、キサンチン、特にカフェイン又はテオフィリン、レチノイド、特にビタミンＡ酸、センテリア・アジアチカ、アジアチック及びマデカシック酸、並びに、アジアチコシド又はマデカソシド等のそのグリコシル化誘導体、シーゲスベッキア・オリエンタリス、コミホラ・ムクルの抽出物並びにエリオボチヤ・ジャポニカの抽出物、ポリシロキサン、シラノール及びシリコン等の化粧学的に許容されるシリコン誘導体、炭素数３〜１２の脂肪族α−ケト酸、特にピルビン酸、炭素数２〜１２の脂肪族α−ヒドロキシ酸、特にクエン酸、グリコール酸、リンゴ酸及び乳酸、アミノ酸、特にアルギニン、シトルリン及びスレオニン、並びに、セラミド、グリコセラミド、スフィンゴシン誘導体、特にＩＩ及びＩＩＩ型セラミド、リン脂質、ホォルスコリン及びその誘導体、コレウスの抽出物、テホロシアの抽出物、エラスターゼ阻害剤、特にエラグ酸及び大豆ペプチド、コラゲナーゼ阻害剤、特に植物ペプチド及びコプチディスの根の抽出物、シュクテラリア・バイカレンシス・ジョーギの根の抽出物等の抽出物、ヴォゴニン、バイカリン及びバイカレイン等のフラボノイド、イチョウ・ビローバ、モスラ・チネンシス、サルビア・オフィシナリス及びシナノマム・カッシアの葉の水−エタノール抽出物、カメリア・シネンシスのカテキン抽出物並びにテオブロマ・カカオの豆外皮の水抽出物、抗炎症剤、特にホスホリパーゼＡ２阻害剤、鎮静剤、特に甘草抽出物、グリシルヒチン酸及びグリシルヒチン酸アンモニウム、水和剤、特にポリオール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセロール及びヒアルロン酸、伸展線を阻止する為の薬剤、特にトチノキ及びエスシンの抽出物、微小循環を保護又は向上させる為の薬剤、特にイチョウ・ビロバ由来のビオフラボノイド、イソドン、アミ・ビスナーガ抽出物、ビスナジン及びラスゴゲニン、遊離ラジカル阻害剤、特にＰＣＯ（プロシアニド・オリゴマー）及びその誘導体等のポリフェノール、並びに、植物抽出物、特にカークマ・ロンガの抽出物、５−α−還元剤阻害剤、特に、ピゲウム・アフリカナム抽出物等の抗脂漏剤、並びに、セファランチン及びメチルニコチネート等の血液微小循環刺激剤からなる群より選択される物質を少なくとも１種含有してもよい。
【０００７】
本発明の組成物は、太陽フィルター、特にＵＶＡフィルター、ＵＶＢフィルター、特別に酸化チタン、酸化亜鉛、オキシベンゾン、Ｐａｒｓｏｌ  ＭＣＸ、Ｐａｒｓｏｌ  １７９８及び野菜由来のフィルター等を単独で又は組み合わせた太陽の有害な影響から皮膚を保護する為の物質、ＤＮＡに生じた障害を制限する為の物質、特にアスコルビン酸、その誘導体及び／又はフォトニル（Ｐｈｏｔｏｎｙｌ）（登録商標）等のチミジンダイマーの形成を制限するもの、並びに、メラニン又はチロシナーゼ合成阻害剤等しみを除去するのに資する物質から選択される物質も含有することもできる。
【０００８】
本発明のその他の目的、効果及び利点は、実施した試験に関する数個の実施例で言及した以下の説明の記載より、当業者に明確に明らかになるであろう。また、化粧剤処方は単に説明の為に与えられるものであって、本発明の範囲を制限するものでない。
他に示さない限り、実施例中、全てのパーセンテージは重量単位である。
【０００９】
実施例１
真皮表皮接合部に対するケラチン生成細胞の接着を促進する為に、本試験では塩化又はアスパラギン酸マグネシウムからなる本発明の薬剤を用いた、ＩＶ型コラーゲンに対する普通ヒトケラチン生成細胞の接着に関する試験
本試験の目的は、真皮表皮結合部に対するケラチン生成細胞の接着を促進する為の本発明の薬剤の効能を示すことにあり、上記薬剤は好ましくは塩化又はアスパラギン酸マグネシウムからなるものである。
本範疇において、上記試験は以下の様式で実施した：
１．ＩＶ型コラーゲンで接着表面を被覆
マイクロプレート（ファルコン）のウェルを滅菌ＩＶ型ヒトコラーゲン（シグマ）６μｇ／ｃｍ２で覆った。
めいめいのウェルを、シグマ社の牛アルブミンＢＳＡの４ｍｇ／ｍｌ溶液とともに、＋４℃で一晩インキュベートした。
それから、ウェルをギブコ社のリン酸緩衝液ＰＢＳ（リン酸緩衝塩水）で２度洗浄した。
【００１０】
２．普通ヒトケラチン生成細胞の培養液の調製
上皮細胞は、５３歳の女性カフカス人の供与者の乳房部分由来の手術に基づく健康な皮膚から得られた。
皮膚断片を、０．２５％ｗ／ｖトリプシン中で１８時間、＋４℃でインキュベートして、真皮と上皮を分離して、攪拌して上皮細胞の懸濁液を得た。トリプシンは、ギブコ社の胎児ウシ血清ＦＣＳで中和した。
その細胞を表面領域７５ｃｍ２とするフラスコ中に接種して、ギブコ社のケラチン生成細胞増殖培地Ｋ−ＳＦＭ中で集密点まで培養して、継代培養した。
コラーゲン基質への接着の実験に使用した細胞は、最初の一次培養以上継代培養しなかった（Ｐ０及びＰ１と称する）。
３．塩化マグネシウム又はアスパラギン酸マグネシウムからなる、本発明の製品を用いたケラチン生成細胞の処理
トリプシン（０．１％〜０．０２％ｗ／ｖ  ＥＤＴＡ含有トリプシン、ギブコ社）を、ケラチン生成細胞培地に添加し、本発明に従った０．２５、０．５、１ｍＭ塩化マグネシウム又は０．２５ｍＭアスパラギン酸マグネシウムを含有する２ｍＭ  Ｌ−グルタミン及び４ｍｇ／ｍｌＢＳＡが添加されたギブコ社のＥ１９９液に細胞懸濁液を静置した。
そして、コラーゲンＩＶで覆った基質への接着を行う過程の前に、ケラチン生成細胞を３０分間、＋４℃でインキュベートした。
【００１１】
４．ＩＶ型コラーゲン対するケラチン生成細胞の接着の測定
ケラチン生成細胞を、ギブコ社の２ｍＭ  Ｌ−グルタミン及び４ｍｇ／ｍｌＢＳＡ（牛血清アルブミン）を含有するギブコ社のＥ１９９液中に、９３０００細胞／ｃｍ２の密度で、めいめいのウェルへ接種した。
１時間、＋４℃でのインキュベーション後、ウェルをＰＢＳで洗浄して、接着細胞を０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で溶解して、細胞タンパク質を比色定量方法及びビシンコニニック酸（ｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）（シグマ社のＢＣＡ）で定量した。
較正は、０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で溶解したＢＳＡで並行して行い、光学濃度（ＯＤ）値をウェル当たりのタンパク質にマイクログラム（μｇ）単位で変換することができた。
５．統計分析
接着Ａを培養ウェル当たりの細胞タンパク質をマイクログラムで表し、表Ｉで示された値は６ウェルから得られる生成物濃度当たりの平均値に相当し、生成物は未処理の細胞、０．２５ｍＭ濃度の塩化若しくはアスパラギン酸マグネシウムで処理した細胞、０．５ｍＭ濃度の塩化マグネシウムで処理した細胞、１ｍＭ濃度の塩化マグネシウムで処理した細胞である。
処理及び未処理の細胞間のこの接着値を、有意水準を評価する為に、ｐ＝０．０５しきい値のスチューデントｔ−検定により比較した。
５３歳の供与者のケラチン生成細胞での実験より、結果を得た。
【００１２】
【表１】
0004299463.tif 000002
【００１３】
上記表Ｉで示された結果は、コントロール培養物と比較して、０．２５ｍＭ濃度の塩化マグネシウム存在下のＩＶ型コラーゲンに対するケラチン生成細胞の接着に増加があるが、１ｍＭのものについては統計学的に有意なものにすぎなかった。
１ｍＭ濃度の塩化マグネシウムから得られた接着のパーセンテージ増加は、＋３１であった。
アスパラギン酸マグネシウムに関する限り、これもケラチン生成細胞の接着を促進するが、塩化マグネシウムより強力なものであった。事実、接着の増加は、０．２５ｍＭ濃度より高く有意であった。
０．２５ｍＭ濃度でのアスパラギン酸マグネシウムで得られた接着の増加パーセンテージは、＋５４であった。
この条件下で、このマグネシウム塩、及び、より特別にアスパラギン酸マグネシウムは、低投与量で高度に有為な結果が得られ、低濃度で、すなわち良い安全度でその使用を可能にするので、特に価値あることが示された。
【００１４】
本発明の実施例２
１．アンチ−リンクルクリームの組成
Ｌ−アスパラギン酸マグネシウム                 ０．３ｇ
ポテンチラ・エレクタの乾燥抽出物             ０．０１ｇ
ヒルアロン酸（ナトリウム塩）                   ０．０６ｇ
グリセロール                                   ５．１５ｇ
センテラ・アジアチカの全体乾燥抽出物           ０．１ｇ
パルミチン酸ビタミンＡ溶液（１００万ＩＵ／ｇ） ０．１ｇ
ビタミンＥ酢酸                                 ０．５ｇ
ペリラ乾燥抽出物                               ０．５ｇ
香料及び保存料を加えたＯ／Ｗ乳化物賦形剤    合計して１００ｇ
【００１５】
２．そのアンチ−リンクル効果の評価の為の本化粧学的組成物の試験
Ａ−原理
本化粧品の「目尻のしわ」に対するアンチ−リンクル効果の評価の為に、時間０、及び、上記組成物をクリームの形状で１日２回２８日間投与した後で、皮膚のネガティブ・レプリカを作成した。
本レプリカは、閃光により照射し、めいめいのしわの影をつくり、ＭＯＮＡＤＥＲＭ（Ｍｏｎａｃｏ社）により開発された「カンチリデス（Ｑｕａｎｔｉｒｉｄｅｓ）」と称される、市販されている画像分析ソフトウエアを用いて分析した。
Ｂ−装置
Ｂ．１−痕跡を得る為に
内径２４ｍｍ及び外形４０ｍｍの３Ｍ社のばんそうこうを使用した。
酵素と組み合わせたシリコン重合体に基づいたＦＬＥＸＩＣＯ ＵＫ社の製品Ｓｉｌｆｌｏ（登録商標）を痕跡を得るのに使用した。
Ｂ．２−痕跡を分析する為に
以下使用した：
−ＣＯＨＵ４９１０−ＲＳ１７０、及び、固定焦点レンズ及び１８Ｘ１０８ｍｍＦ２．５マニュアルズームレンズ装備の高解像、超低騒音カメラであるＣＣＩＲ単色ＣＣＤカメラ；
−実時間高解像画像収得カード；
−投射角３５°のモナスポット閃光照射ランプ
−カイザーＲＳ１三脚、４５０Ｘ５００ｍｍ抗反射マット黒板、及び、ＲＡ１投影脚装備のセンチメートル単位で目盛り付けされた１０００ｍｍ高度調節可能なカラム
−レプリカを位置づけ、方向付ける為の特別の支柱
−上記カンチリデスソフトウェア
−マイクロコンピュー ター及びプリンター
Ｃ−プロトコル
１．ボランティア
２９人の女性及び１人の男性からなる３４〜５９歳の３０人の被験者が選ばれた。
【００１６】
２．試験物
試験物は、セクション１で上述したクリーム形態の組成物とした。
３．塗布
化粧学組成物を、２８日間、顔の一方の側頭部（目尻のしわ）全体に朝晩１日２回塗布した。塗布量は、被験者の習慣によるが、１ｃｍ２当たり約１．５〜２ｍｇと推定される。もう一方の「無処理の」側頭部をコントロールとした。
試験開始前３日間、試験期間中ずっと、その他の化粧品を処理部分、無処理部分上に使用しなかった。
４．実験条件
温度：２０〜２２℃
相対湿度：４０〜５０％
コントロール及び処理部分の痕跡は、時間０及び２８日の処理後に得た。絆創膏を試験部分全体に配置した。使用直前に酵素２、３滴（Ｓｉｌｆｌｏ（登録商標）３ｇ当たり３滴）を混合したＳｉｌｆｌｏ（登録商標）の薄膜を、絆創膏で範囲を定めた部分の内側に塗布した。その軟膏は、気泡が形成しないように注意して広げなければならない。４分３０秒の乾燥時間で軟膏を重合後、絆創膏を顔から剥がし、レプリカにそれを移した。試験終了後、その痕跡をカンチリデスソフトウエアで分析した。
【００１７】
Ｄ．試験したパラメーター
めいめいの被験者及び顔の各側に対する、Ｄ０（最初の塗布１日前）及びＤ２８（塗布２８日）の画像分析機による痕跡の処理により、皮膚のしわの状態を表す以下のパラメーターを計算することができる：
ａ）ｍｍ２で表されるしわの全体表面部分
ｂ）しわの数
ｃ）ｍｍで表されるしわの全体長さ
ｄ）ｍｍで表される平均長さ；及び
ｅ）μｍで表される平均深さ
Ｅ．結果の処理：処理側及びコントロール側の変化
１．計算
パラメータの平均変量
以下で各側、及び、各パラメータについて計算した。
【００１８】
【数１】
0004299463.tif 000003
【００１９】
式中、ｍ（ｔ）＝時間ｔにおける試験したパラメータの平均値
ｍ（０）＝時間０における試験したパラメータの平均値
２．統計学的有意性
ウイルコクソン試験
少人数である被験者を考慮でき、人体内の生物学パラメータの生体内試験に適用できる、無パラメータのウイルコクソン試験を使用した。
一連の対の比較は、以下のように行った：相違を各対で評価し、そして絶対値を増分次数で定めた；相違が０である場合を除き、それが正か負かも各々示された。
考えうる量は以下の通りである：
Ｍ＝負の相違の等級の総計
Ｐ＝正の相違の等級の総計
Ｔ＝Ｍ又はＰの、２つの合計の小さい方
ｎ＜１０人に認められる有意性限度が、１０％以下である。
ｎ ≧１０人に認められる有意性限度が、５％以下である。
ウイルコクソン試験は、処理側の変化とコントロール側の変化で比較する為、相違する時間での２点の相違（ｍ（ｔ）−ｍ（０））に適用された。
ウイルコクソン試験は、各側の時間に対する変化を比較する為、時間０での生の値（ｍ（０））に適用された。
【００２０】
３．結果
実験から得られる結果を、以下の表ＩＩで示した。
コントロール及び処理側は、時間０で同等である。
小見出し「全体変量」で４段落で示された値は、処理した側での変量及びコントロール側の変量との間の相違に相当する。
【００２１】
【表２】
0004299463.tif 000004
【００２２】
Ｅ．結論
本発明の組成物を、２８日間１日２度塗布した後、処置した目尻のしわの変化を、コントロールの目尻のしわの変化と比較して、大小のしわの有為な減少及びその形成の減少が明らかになった：しわの全体表面面積は２６％、その数は３１％、その全体長さは３０％減少した。
【００２３】
本発明の実施例３：Ｗ／Ｏアンチリンクルナイトクリーム
アスパラギン酸マグネシウム              ０．３ｇ
ポテンチラ・エレクタの乾燥抽出物      １ｇ
グリセロール                            ５ｇ
プロピレングリコール                    ２ｇ
セラミドＩＩＩ                          ０．０４ｇ
ＵＶフィルター                          ９ｇ
メチルシラノールマルロネート            ０．０５ｇ
ペリラ・フルテッセンスの乾燥抽出物      １ｇ
センテラ・アジアチカの乾燥抽出物        ０．５ｇ
大豆ペプチド                            １ｇ
パルミチン酸レチノール                  ０．２ｇ
Ｗ／Ｏ乳化物賦形剤              合計して１００ｇ
【００２４】
本発明の実施例４：しわの出現を遅延し阻止する引き締めクリーム
アスパラギン酸マグネシウム              ０．２ｇ
グリセロール                            ５ｇ
プロピレングリコール                    ２ｇ
セラミドＩＩ                            ０．０４ｇ
パーソルＭＣＸ                          ５ｇ
オキシベンゾン                          ３ｇ
メチルシラノールマルロネート            ０．０５ｇ
マデカッソシド                          ０．５ｇ
レチノール                              ４０００ＩＵ
メディカゴ・サティバ由来のサポニン      ０．０２ｇ
パルミチン酸レチノール                  ０．０４ｇ
Ｏ／Ｗ乳化物賦形剤                  合計して１００ｇ
【００２５】
本発明の実施例５：アンチリンクル引き締めジェル
グルコン酸亜鉛                          ０．３ｇ
ベッソレチア・エレクタの乾燥抽出物      ０．３ｇ
大豆サポニン                            ０．０５ｇ
パルミチン酸レチノール                  ０．０６ｇ
α−トコフェノール酢酸                  ０．１ｇ
乳酸                                    １．５ｇ
グリコール酸                            ０．２ｇ
エタノール                              ５ｇ
ゲル賦形剤                            合計して１００ｇ