(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンを注射剤全量に対して３〜６０ｍｇ／ｍＬ及びエタノールを含む注射剤。
【請求項２】
エタノールを注射剤全量に対して、１０〜７０ｖ／ｖ％含むことを特徴とする請求項１に記載の注射剤。
【請求項３】
ｐＨが２．０〜６．５である請求項１又は２に記載の注射剤。
【請求項４】
ｐＨが３．０〜４．５である請求項１から３のいずれかに記載の注射剤。
【請求項５】
製剤学的に許容される安定化剤を含んでいる請求項１から４のいずれかに記載の注射剤。
【請求項６】
製剤学的に許容される安定化剤を注射剤全量に対して、０．０１〜１ｍｇ／ｍｌ含むことを特徴とする請求項５に記載の注射剤。
【請求項７】
製剤学的に許容される安定化剤が、キレート化剤である請求項５又は６に記載の注射剤。
【請求項８】
キレート化剤がエチレンジアミン、エデト酸カルシウム２ナトリウム、エデト酸２ナトリウムから選ばれる１種以上である請求項７に記載の注射剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は下記式（Ｉ）
0004302990.tif 000002
（式中、Ｒ１は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ２は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ１及びＲ２は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ３は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を主成分とし、これを高濃度に含む注射剤に関するものである。更に詳しくは、長期安定な上述のピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分とする高濃度注射剤に関するものである。
背景技術
上述のピラゾロン誘導体の１つである３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン（一般名「エダラボン」、商品名「ラジカット」：三菱ウェルファーマ株式会社製造・販売。以下、エダラボンと呼ぶ。）は、３−メチル−１−フェニル−５−ピラゾロンとも呼ばれており、脳血管障害の各種動物モデル実験で優れた有効性が認められ、これまで有用な医薬品がなかった脳卒中、脳腫瘍、頭部外傷の急性期にしばしば見られる脳虚血、脳浮腫等の脳血管障害時の治療薬等として、その臨床的応用がきわめて期待されている化合物である（脳機能正常化作用（特公平５−３１５２３号公報）、過酸化脂質生成抑制作用（特公平５−３５１２８号公報））。エダラボンを有効成分とした注射剤の開発も行われており、例えば亜硫酸塩、亜硫酸水素塩及び、ピロ亜硫酸塩から選ばれる１種以上及びシステイン類を含有するエダラボンの水溶液であって、かつ該溶液のｐＨは２．５〜６．０の範囲にあることを特徴とする注射剤がある（特公平７−１２１８６１号公報）。
現在、エダラボンは脳保護剤（点滴剤）として、すでに臨床において使用されており、１日２本のアンプルが必要とされている。今後、別の疾患にエダラボンを使用する場合には、更に多くの本数を使用しなくてはならない可能性もある。このように現行処方では、少なくても１日当たり２本以上のアンプルまたはバイアルの製剤の調剤が必要とされている。しかしながら、事故を起こしてはならない医療現場においては調剤行為をなるべく少なくし、製剤の使用性を向上させることが望まれている。また、製品保管時も複数本のアンプルまたはバイアルを使用する製剤はより多くの保管場所が必要である等、メーカー及び医療従事者の両者において好ましくない。
以上のことから高濃度のエダラボンを含み、全容量が少ない製剤、すなわち高濃度少容量の溶液注射剤の開発が望まれていた。しかし、エダラボンは水に溶けにくく（２ｍｇ／ｍＬ  ２５℃）、かつ水溶液中の濃度上昇に伴い、その化学的安定性が低下する、また、粉末状態と比較すると水溶液中では酸化を受け分解しやすいという性質を有している。従って、エダラボンを医薬品として長期的に安定化させ、かつ水への飽和溶解度を越えた量を含んだ注射剤の製剤化は困難であり、このような製剤は現在までのところ実現されていない。
発明の開示
本発明者らはピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分とする高濃度少容量の溶液注射剤について鋭意検討したところ、注射剤に用いることが可能な製剤学的に許容されている種々の添加剤の中で、エタノールが優れた溶解補助効果を有し、ピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の水への溶解度を大幅に上回ることを見いだした。さらにエタノールは注射剤としての安全性が高く、ピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物との反応性が低いことから優れた溶解補助剤であることが判明した（試験例１）。しかし、ピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を高濃度に溶解した後、その化学的安定性を確認したところ、溶液に着色が見られ何らかの反応が起っているものと思われた。そこでさらに検討を重ねたところ、安定化剤の添加により、高濃度に溶解されたピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の安定性を著しく向上することを見出し（試験例２）、本発明を完成した。
即ち、本発明の要旨は以下に示す通りである。
１．下記式（Ｉ）
0004302990.tif 000003
（式中、Ｒ１は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ２は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ１及びＲ２は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ３は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を注射剤全量に対して３〜６０ｍｇ／ｍＬ含むことを特徴とする注射剤。
２．ピラゾロン誘導体が３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである上記注射剤。
３．エタノールを含んでいる上記注射剤。
４．エタノールを注射剤全量に対して、１０〜７０ｖ／ｖ％含むことを特徴とする上記注射剤。
５．ｐＨが２．０〜６．５である上記注射剤。
６．ｐＨが３．０〜４．５である上記注射剤。
７．製剤学的に許容される安定化剤を含んでいる上記注射剤。
８．製剤学的に許容される安定化剤を注射剤全量に対して、０．０１〜１ｍｇ／ｍｌ含むことを特徴とする上記注射剤。
９．製剤学的に許容される安定化剤が、キレート化剤である上記注射剤。
１０．キレート化剤がエチレンジアミン、エデト酸カルシウム２ナトリウム、エデト酸２ナトリウムから選ばれる１種以上である上記注射剤。
上述した注射剤の製造方法例を以下に示す。まず、エタノールにピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を添加溶解する。これとは別にｐＨ２．０〜６．５に調製した緩衝液に、安定化剤を添加溶解した溶液を作製し、両溶液を攪拌混合する。攪拌後ｐＨが大きく変化した時には再度適当な酸またはアルカリを用いてｐＨを２．０〜６．５に調整する。その後、溶液の滅菌を行い、適当な容器（アンプル、バイアル等）に密閉充填を行い本発明の注射剤を得ることができる。
本発明に用いるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の濃度は溶解補助剤として配合するエタノール添加量により３ｍｇ〜６０ｍｇ／ｍＬの範囲で調製可能である。よって、溶解補助剤として添加するエタノールの濃度は、溶解させたいピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の濃度により調整すればよいが、低すぎるとピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の溶解補助効果が薄れる。逆に高すぎると揮発性が高くなるので液量の調整が困難になったりする等、本注射剤の製造時に問題となる。従って、エタノール濃度は本注射剤全量に対して１０〜７０ｖ／ｖ％、好ましくは１５〜５５ｖ／ｖ％、より好ましくは２０〜４０ｖ／ｖ％とする。添加する安定化剤としては、製剤学的に許容されているものであれば全て使用可能であるが、キレート化剤を用いることが好ましい。本発明で用いるキレート化剤としては、製剤学的に許容されているものであれば全て使用可能であるが、エチレンジアミン、エデト酸カルシウム２ナトリウム、エデト酸２ナトリウムを用いることが好ましく、エデト酸２ナトリウムを用いることがより好ましい。安定化剤の濃度としては０．０１〜１ｍｇ／ｍＬ、特に０．０５〜０．５ｍｇ／ｍＬが好ましい。安定化剤の添加量が上記範囲以下だと、ピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の安定化効果が不十分となり、また上記範囲以上だと安定化効果は頭打ちとなり、また安全性の観点からも好ましくない。本注射剤のｐＨの調整には注射剤として製剤学的に許容される緩衝剤、例えばクエン酸またはその塩、リン酸またはその塩、酢酸またはその塩等を使用し、ピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の安定性を考慮し、ｐＨ２．０〜６．５、特にｐＨ３．０〜４．５に調整することが好ましい。また、本注射剤は、必要に応じて製剤学的に許容される等張化剤、保存剤等を用いて調製することも可能である。
発明を実施するための最良の形態
以下、本発明を更に詳細に説明するが、本発明は、その要旨を越えない限り、以下の実施例等によって何ら限定されるものではない。
＜実施例１＞
６０ｍＬのエタノールにエダラボン１ｇを添加溶解する。これとは別に１４０ｍＬの注射用水にエデト酸２ナトリウム、クエン酸１水和物、クエン酸３ナトリウムをそれぞれ、２０ｍｇ、４２０ｍｇ、２９４ｍｇを添加し溶解する。上記の２溶液を混合攪拌し、１ｍｏｌ／Ｌ塩酸を用いて混合溶液のｐＨを３．６に調整した後、注射用水で２００ｍＬに全量調整を行い、メンブランフィルターで無菌的に濾過を行う。この溶液を１０ｍＬ用のバイアルに充填し、容器のヘッドスペースの空気を窒素で置換した後、ゴム栓、アルミキャップで密閉して注射剤を得た（エダラボン濃度５ｍｇ／ｍｌ）。
＜実施例２＞
実施例１のクエン酸１水和物、クエン酸３ナトリウムのかわりに、リン酸を１９６ｍｇ用い、他は実施例１と同様の方法で注射剤を得た。
＜比較例１＞
１００ｍＬのエタノールにエダラボン１ｇを添加溶解し、注射用水で２００ｍＬに全量調整を行い、メンブランフィルターで無菌的に濾過を行う。この溶液を１０ｍＬ用のバイアルに充填し、容器のヘッドスペースの空気を窒素で置換した後、ゴム栓、アルミキャップで密閉して注射剤を得た。
＜比較例２＞
２００ｍＬのエタノール溶液にエダラボン１ｇを添加溶解し、メンブランフィルターで無菌的に濾過を行う。この溶液を１０ｍＬ用のバイアルに充填し、容器のヘッドスペースの空気を窒素で置換した後、ゴム栓、アルミキャップで密閉して注射剤を得た。
＜比較例３＞
比較例１のエタノールのかわりにプロピレングリコールを用い、他は実験例１と同様の方法で注射剤を得た。
＜比較例４＞
比較例１のエタノールのかわりにＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドを用い、他は実験例１と同様の方法で注射剤を得た。
＜比較例５＞
実施例１のエデト酸２ナトリウムを用いることなく、他は実施例１と同様の方法で注射剤を得た。
＜比較例６＞
実施例１のエデト酸２ナトリウムの代わりにチオグリセロール５０ｍｇを用い、他は実施例１と同様の方法で注射剤を得た。
＜比較例７＞
実施例１のエデト酸２ナトリウムの代わりに、Ｌ−システイン塩酸塩１水和物、亜硫酸水素ナトリウムをそれぞれ７０ｍｇ、１４０ｍｇ用い、さらにクエン酸１水和物、クエン酸３ナトリウムの代わりに、リン酸を１９６ｍｇ用い、他は実施例１と同様の方法で注射剤を得た。
＜試験例１＞
「エダラボンの各種溶解補助剤への溶解度及びエダラボンとの反応性の確認」
静脈内注射剤の溶解補助剤として汎用されているエタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドのいずれか５ｍｌに注射用水を５ｍＬ添加攪拌した。得られた溶解補助剤水溶液にエダラボンを添加し、４℃の恒温槽にて一昼夜スターラーを用いて泡立たない程度の一定速度で攪拌した。攪拌終了後、溶解していないエダラボンを目視で確認して各溶液がエダラボンの飽和水溶液であることを確認した。その後、４℃で保存しておいたメンブランフィルター（孔径０．４５μｍ）を用いて速やかに濾過し、濾液中に含まれるエダラボン量を以下に示すＨＰＬＣ法により測定した。また各種溶解補助剤の注射剤として１日に静脈内に投与された最大使用量（医薬品添加物事典２０００（薬事日報社）、１２７、２６４、２２９−２３０頁、エタノールの使用実績はバイエル社ニモトップ（ＮＩＭＯＴＯＰ）ＩＶ（登録商標）で用いられている量から算出した。）をあわせて記載し、エダラボンの溶解補助効果を数値として算出した。結果を表１に示す。
ＨＰＬＣ測定方法とその条件
内部標準物質にパラアミノ安息香酸エチルを用いた内標法による液体クロマトグラフ（ＬＣ）法により、内標準物質のピーク面積値に対するエダラボンのピーク面積の比から、エダラボンの濃度を測定した。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２４０ｎｍ）
カラム：内径約４ｍｍ、長さ約１５ｃｍのステンレス管に５μｍのオクタデシルシリル化シリカゲルを充填したものを５０℃付近の一定温度で使用
移動相：１０ｍＭ酢酸水溶液・メタノール混液（３：１）をアンモニア水でｐＨ５．５に調整した溶液
流量：エダラボンの保持時間が約８分になるように調整した
0004302990.tif 000004
さらに比較例１〜４で得られた注射剤を６０℃の恒温槽に保存し、溶液の着色具合を経時的に確認した（表２）。
0004302990.tif 000005
以上の結果より、エタノールはエダラボンの優れた溶解補助剤であり、なおかつ溶液の着色がおこっていないことからエダラボンとの反応性が低く、優れた添加剤であることが判明した。
＜試験例２＞
「エダラボンの安定化剤として安定化剤が優れていることの確認」
実施例１〜２及び比較例５〜７で得られた注射剤を４０℃及び６０℃の恒温槽に保存し、分解物生成量の経時変化を以下に示すＨＰＬＣ法により測定し、一定期間保存後の分解物生成量の合計を表３に示した。
ＨＰＬＣ測定方法とその条件
液体クロマトグラフ（ＬＣ）法によりエダラボンのピーク面積値に対する各類縁分解物質の面積値の合計を百分率％により全分解物量を表した（２条件で実施）。
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２４０ｎｍ）
カラム：内径約４ｍｍ、長さ約１５ｃｍのスステンレス管に５μｍのオクタデシルシリル化シリカゲルを充填したものを４０℃付近の一定温度で使用
移動相：（１）水・メタノール・氷酢酸混液（１００：１００：１）
（２）１０ｍＭ酢酸水溶液・メタノール混液（３：１）をアンモニア水
でｐＨ５．５に調整した溶液
流量：（１）エダラボンの保持時間が約４分になるように調整した
（２）エダラボンの保持時間が約１１分になるように調整した
0004302990.tif 000006
安定化剤を添加することで長期安定性に優れた注射剤の調製が可能であることが判明した。
産業上の利用可能性
以上のように、本発明に係る注射剤はピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分とする高濃度少容量の溶液注射剤であり、長期安定性、製品の保管及び製剤の使用性に優れている。
なお、本出願は日本国特許出願番号：特願２００１−１４１６８３号に基づく優先権を主張して出願されたものである。