(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水相と、
サイクロスポリンが溶解しているＣ8〜Ｃ12脂肪酸鎖含有合成中鎖トリグリセリド、不飽和遊離脂肪酸又はこれらの塩、リン脂質を含有する油相と、
からなり、エタノール及びプロピレングリコールから選択される添加剤を含まない水中油型エマルジョン。
【請求項２】
（ｉ）Ｃ8〜Ｃ12脂肪酸鎖含有合成中鎖トリグリセリド  １０〜４０wt%
（ｉｉ）サイクロスポリン  １〜１０wt%
（ｉｉｉ）天然又は合成リン脂質  １〜５wt%
（ｉｖ）不飽和遊離脂肪酸又はその塩類  ０．１〜１０wt%
（ｖ）場合によってはグリセリン、塩類、緩衝剤、非イオン性界面活性剤、酸化防止剤、浸透圧改質剤又は防腐剤をも含有する水相  残部
から構成され、エタノール及びプロピレングリコールから選択される添加剤を含まない水中油型エマルジョン。
【請求項３】
リン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、卵リン脂質、ダイズリン脂質およびこれらの組み合わせよりなる群から選択される、請求項１又は２に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項４】
不飽和遊離脂肪酸は、リノール酸、リノレン酸またはこれらの混合物である、請求項１又は２に記載の水中油型エマルジョン。
【請求項５】
サイクロスポリンは、サイクロスポリンAである、請求項１〜４のいずれかに記載の水中油型エマルジョン。
【請求項６】
天然トリグリセリドをさらに含む、請求項１〜５のいずれかに記載の水中油型エマルジョン。
【請求項７】
（１）サイクロスポリンの溶解度を高める量の不飽和遊離脂肪酸またはその塩およびリン脂質を添加したＣ8〜Ｃ12脂肪酸鎖含有合成中鎖トリグリセリドにサイクロスポリンを溶解して、油相を調製する工程；
（２）水、および場合によって酸化防止剤、防腐剤、浸透圧改質剤、塩類、グリセリン、非イオン界面活性剤を含有する水相を調製する工程；
（３）この油相と水相を混合し、この混合物を均質化条件に置いて、実質的にすべての粒子が１μｍ未満の大きさであるサイクロスポリン乳剤を調製する工程を含む、エタノール及びプロピレングリコールから選択される添加剤を含まないサイクロスポリン乳剤の調製方法。
【請求項８】
（４）工程（３）で調製した乳剤を加熱滅菌又はフィルター滅菌する工程をさらに含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
サイクロスポリン乳剤が請求項１〜６のいずれかに規定する水中油型エマルジョンである、請求項７又は８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
本発明は、水中油型エマルション中にサイクロスポリンを含有する薬剤組成物に関する。本発明は特に、中鎖（medium-chain）トリグリセリドおよび遊離脂肪酸を用いて油相中のサイクロスポリンの溶解度を高め、親油性キャリヤーとして潜在的に有毒な添加物の必要なしに、安定な加熱滅菌できる水中油型乳剤を調製することを特色とする。
発明の背景
免疫抑制活性をもつ一群の非極性環状オリゴペプチドであるサイクロスポリンは水中での溶解度がきわめて低く、したがって満足な量の薬物を含有する注射用製剤として配合するのが困難であるのは知られている。サイクロスポリンは、それらの溶解度が低いため、エタノールおよびポリオキシエチル化ヒマシ油［クレモフォア（cremophor）］のような潜在的に有毒な有機溶剤を含めた種々の非水性物質中に配合されている。
特許明細書に、親油性薬物の種々の配合物および製剤が記載されている。米国特許第4,073,943号（レトリンド）には、薬理活性をもつ油溶性物質の非経口投与性を高めるのに用いるキャリヤー系が記載されており、そのキャリヤー系は、薬理活性をもたないリポイドを親水性緩衝液中に分散した疎水相として含有する安定な水中油型エマルションである。リポイドは、１ミクロン未満の平均直径をもつ微細に分割された粒子としてエマルション中に分散している。有効物質は油溶性であり、主としてリポイドに溶解する。それらの組成物は植物性脂肪の親油性コアを含む。
上記のキャリヤー系では、薬物は親水相に若干溶解してもよいが、リポイドに可溶性でなければならない。この組成物は通常は、水溶液中に分散した薬効をもたない油または脂肪からなるであろう。安定なエマルションを得るためには、天然の、または合成による安定剤、たとえばホスファチド、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコールまたはポリグリセリンモノオレエートを含有させる必要がある。
米国特許第4,298,594号（シアーズ）には、直径２５０〜１０００Åの非小胞形、もしくは直径約１９０〜約３００Åの小胞形、または非小胞形と小胞形の両方のミクロレザバー（microreservoir）状ビヒクル中に含有された有効物質の制御放出が記載されている。このビヒクルはリン脂質成分およびリン脂質非混和性の脂質成分から構成される。好ましいリン脂質非混和性の脂質には、トリグリセリドおよび／またはコレステロールエステルが含まれる。リン脂質非混和性の脂質は本質的にリン脂質二重層に非混和性でなければならない。非小胞形は脂肪エマルションであり、小胞形はリポソームである。
静脈投与用のサイクロスポリン含有薬剤配合物は、欧州特許出願公開EPO 0 570829 A1号（ディートル）に記載されている。それらの乳剤は、中鎖長トリグリセリド油、ならびに所望により植物油、リン脂質、非イオン界面活性剤およびイオン界面活性剤よりなる油性キャリヤー中の、サイクロスポリン微結晶からなる。親油性コア組成物は、所望により遊離脂肪酸またはそのナトリウム塩もしくはカリウム塩を含む天然油からなる。
本発明においては、親油性コア組成物は合成または誘導体トリグリセリド、および所望により遊離脂肪酸またはその塩類を含有し、これらは天然油より多量のサイクロスポリンを溶解することができ、サイクロスポリン有効装填量（payload）がより多い乳剤を調製することができる。本発明においては、サイクロスポリンは親油性コア中に完全に溶解する。
米国特許第4,725,442号（ヘインズ）には、アルカン、ジアルキルエステル、長鎖エステル、疎水性エステル、生体適合性シリコーン、生体適合性高分子量フルオロカーボン、油溶性ビタミンのような有機液体に溶解した実質的に水不溶性薬物の球を含有し、この液体および薬物がリン脂質の層で囲まれた、直径約１００Åないし１ミクロンのミクロドロップレット（microdroplet）が記載されている。
米国特許第5,342,625号（ハウエル）には、薬剤学的に許容しうるジエーテルもしくは部分エーテルまたは１，２−プロピレングリコールの親水相成分；親油相成分、たとえばエタノールなどの有機溶剤を含む、ミクロエマルション原濃縮液（preconcentrate）の形のサイクロスポリン含有薬剤組成物が記載されている。これを水で１：１に希釈すると、平均粒度約１，０００Å未満の水中油型ミクロエマルションが形成される。これらのミクロエマルションはトリグリセリドコアを含まず、またエマルションとは明らかに異なる。それらは自然に形成される（エネルギーを付加する必要がない）からである。
米国特許第4,990,337号（クリハラら）には、サイクロスポリンおよび中鎖モノ−またはジ−グリセリド混合物を含有する乳剤が記載されている。サイクロスポリンＡを可溶化するために中鎖トリグリセリドならびにモノ−およびジ−グリセリドを使用することにつき考察されている。クリハラは、トリグリセリドの使用は中鎖トリグリセリドであってもサイクロスポリンの溶解度が低いため許容できないと結論している。彼らは、サイクロスポリンは中間分子量脂肪酸のモノ−およびジ−グリセリド中において卓越した溶解度をもち、これらのグリセリドは水に容易に乳化し、したがってこれらは水中および水性媒質中でのサイクロスポリンの分散性を実質的に改良することができると報告している。しかし、モノ−およびジ−グリセリドが界面活性をもち、これが組織に対する刺激を高めて損傷を与えることは、一般に知られている。
本発明の目的は、高い薬物有効装填量をもつ、薬剤学的に許容しうるサイクロスポリン製剤を提供することである。
本発明の目的はさらに、エタノールおよびクレモフォアのような潜在的に有毒な有機溶剤を含まない、薬剤学的に許容しうるサイクロスポリン製剤を提供することである。
本発明の他の目的は、非経口的に使用できる、薬剤学的に許容しうるサイクロスポリン製剤を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、加熱滅菌できる、薬剤学的に許容しうるサイクロスポリン製剤を提供することである。
本発明の目的はさらに、このような製剤を調製する方法を提供することである。
発明の概要
本発明は、療法上有効な量のサイクロスポリンが溶解した合成中鎖トリグリセリド、リン脂質、ならびに所望により遊離脂肪酸またはその塩、非イオン界面活性剤、イオン界面活性剤、グリセリン、塩類、緩衝剤、防腐剤、浸透圧改質剤（osmotic modifier）および酸化防止剤を含有する、本質的に水中油型エマルションからなる薬剤組成物を含む。
本発明は、高濃度のサイクロスポリン（最高約７．５％  ｗ／ｗのサイクロスポリンＡ）を送達しうる無毒性賦形剤を含む安定な乳剤を提供する。本発明者らは、エタノール、プロピレングリコール、クレモフォアなどの潜在的に有毒な添加物の必要なしに、本明細書に定義する中鎖トリグリセリドがサイクロスポリンを可溶化して（約１５０〜２００ｍｇサイクロスポリンＡ／ｍＬ油）、安定な乳剤を形成することを見出した。脂質を安定剤として用いると、本発明の乳剤は加熱滅菌中、貯蔵中、ならびに振とう、振動、および４〜４０℃の熱サイクルの応力条件下で粒度安定性を維持する。
本発明にはさらに、サイクロスポリンの溶解度をさらに高めるために（約３００〜４５０ｍｇサイクロスポリンＡ／ｍＬ油）、中鎖トリグリセリドに遊離脂肪酸またはその塩を添加することが伴う。
特に好ましい薬剤組成物は、Ｃ8〜Ｃ12脂肪酸鎖を含む合成中鎖トリグリセリド約１０〜約４０％、このトリグリセリドに溶解したサイクロスポリン約１〜約１０％  ｗ／ｗ；サイクロスポリンの溶解度を高めるための天然または合成のリン脂質約１〜約５％  ｗ／ｗ、不飽和遊離脂肪酸またはその塩類約０．１〜約１０％  ｗ／ｗから構成され；残部は、グリセリン、塩類、緩衝剤、界面活性剤、酸化防止剤または防腐剤をも所望により含有する水相である、本質的に水中油型エマルションである。
好ましくは合成中鎖トリグリセリドはＣ8〜Ｃ10脂肪酸鎖を含み、特に合成中鎖トリグリセリドはＣ8脂肪酸鎖を含む。
本発明は安定なサイクロスポリン乳剤を調製する方法であって、サイクロスポリンの溶解度を高める量の不飽和遊離脂肪酸またはその塩およびリン脂質を添加した合成中鎖トリグリセリドにサイクロスポリンを溶解して、油相を調製し；水、グリセリンを含有し、かつ所望によりイオンまたは非イオン界面活性剤をも含有する水相を調製し；この油相と水相を混合し、この混合物を均質化条件に置いて、実質的にすべての粒子が１μｍ未満の大きさである安定なサイクロスポリン乳剤を調製し；そしてこの乳剤を加熱滅菌する工程を含む方法をも包含する。
発明の詳細な記述
サイクロスポリンは、主として臓器移植において主にそれらの免疫抑制活性で知られている一群の薬理活性をもつ物質である。真菌源からクロマトグラフィーにより無定形粉末として単離したサイクロスポリンＡが最も一般的であるが、サイクロスポリンＢ〜Ｉが確認され、種々の合成類似体が製造されている。好ましいものはサイクロスポリンＡ、Ｂ、ＤおよびＧである（The Merck Index、第11版、2759）。本発明の配合物は約０．１〜約１０％  ｗ／ｗ、好ましくは少なくとも約１％、理想的には約２．５〜約７．５％のサイクロスポリンを含有しうる。
脂質成分は天然または合成のいかなるリン脂質であってもよく、たとえばホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、リゾリン脂質、卵もしくはダイズリン脂質、またはその組合わせである。リン脂質は加塩または脱塩されていてもよい。脂質成分はコレステロール、スフィンゴミエリン、または上記脂質成分のいずれかの組合わせを含有してもよい。脂質成分は普通は約１〜約１０％  ｗ／ｗ、好ましくは約１〜約５％  ｗ／ｗであろう。
水相は、主として水、およびグリセリン、塩類、緩衝剤、浸透圧改質剤などである。非イオンまたはイオン界面活性剤、酸化防止剤および防腐剤が存在してもよい。
本発明組成物中に用いる合成中鎖トリグリセリドは、Ｃ8〜Ｃ12脂肪酸鎖、好ましくはＣ8〜Ｃ10脂肪酸鎖、望ましくは主にＣ8脂肪酸鎖を含むこと、あるいは他の誘導体（合成）トリグリセリド、たとえばミグリオール（MIGLYOL）８１０、ミグリオール８１８およびミグリオール８１２
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またはラブラフィル（ＬＡＢＲＡＦＩＬ）Ｍ１９４４ｃｓ
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であることを特色とする。トリグリセリドは天然トリグリセリドと合成トリグリセリドの混合物であってもよい。
不飽和の遊離脂肪酸または脂肪酸塩類、たとえばリノール酸（９，１２−オクタデカジエン酸）およびリノレン酸（９，１２，１５−オクタデカトリエン酸）が、０．１〜約１０％、理想的には１〜約５％の量で存在してもよい。これらの酸、特にリノール酸またはリノレン酸の使用により、中鎖トリグリセリド油中でのサイクロスポリンの溶解度が高まる。
本発明者らは、多様な天然油および合成トリグリセリド中におけるサイクロスポリンＡの溶解度を測定した。その結果は、サイクロスポリンＡが長鎖トリグリセリドより中鎖トリグリセリドに、より可溶性であることを示す。
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合成トリグリセリドを用いると天然油と対照的に、サイクロスポリンの有効装填量が大幅に増加する。さらに、合成によるトリグリセリド源は化学的に均質であり、不純物がより少なくかつ既知であり、バッチ間の変動が少ない。
本発明者らは、遊離脂肪酸、たとえばリノール酸およびリノレン酸をトリグリセリドに添加することにより、サイクロスポリンの溶解度がさらに高まることを見出した。市販の非経口乳剤の多くは、乳剤の安定性を高めるためにｐＨ９またはその付近に調製されている。従来法と対照的に、不飽和遊離脂肪酸、たとえばリノール酸およびリノレン酸を含有する乳剤中でのサイクロスポリンの溶解度増大は、約４．０〜約７．０のｐＨで達成されることを本発明者らは見出した。遊離脂肪酸の添加により、乳剤の安定性も改良される。
さらに、乳剤の物理的安定性は非イオン界面活性剤またはイオン界面活性剤の添加によって高めることができる。これらの非イオン界面活性剤は薬剤学的に許容しうるものであり、エタノールまたはクレモフォアのような潜在的に有毒な溶剤を含有しない。
次表には、市販の種々の合成油および混合脂質中におけるサイクロスポリンの溶解度（ｍｇ／ｍＬ、室温）を報告する：
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リノール酸中におけるサイクロスポリンの溶解度はきわめて高いが、リノール酸は単独で乳剤配合物中に用いるには酸性が強すぎる。これは、合成中鎖トリグリセリドと組み合わせて用いると、油相中におけるサイクロスポリンの溶解度を高める。
ミグリオール中性油［ヒュルス、ニュージャージー州ピスカッタウェイ］は、中鎖脂肪酸のエステルである。中鎖Ｃ8〜Ｃ10脂肪酸を得るためには、ヤシ油を加水分解し、得られた脂肪酸混合物を分画する。次いでこの脂肪酸混合物をグリセリンまたは他の多価アルコールでエステル化する。したがってミグリオールは合成であり（ときには非天然と言う）、天然トリグリセリドではない。
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ラブラファク・リポフィルＷＬ１３４９［ガッテフォッセ、ニュージャージー州ウェストウッド］はヤシ油から分離した合成中鎖トリグリセリド混合物（大部分はＣ8とＣ10）である。
本発明の乳剤は以下により調製される：適量のサイクロスポリンを、希望する油または油混合物に希望する温度で溶解する。同様にこの混合物にリン脂質を添加し、分散させる。この油溶液を、非イオンまたはイオン界面活性剤を含有するかまたは含有しない、酸化防止剤を含有するかまたは含有しない、防腐剤を含有するかまたは含有しない、グリセリン水溶液に添加する。次いで得られた混合物を希望するｐＨに調整し、希望する圧力で、希望する粒度（一般に体積加重平均粒度５００ｎｍ未満）が得られるまで、バッチ式または連続サイクルで均質化する。ラニー（Rannie）ホモジナイザー（ＡＰＶ）およびミクロフルイダイザー（マイクロフルイディクス・システムズ）を含めて、数種のホモジナイザーを使用できる。得られた乳剤をさらにｐＨ調整し、フィルター滅菌または加熱滅菌することができる。
実施例１
以下の成分を含むサイクロスポリンＡ脂肪酸乳剤配合物を均質化により調製した：
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下記により油相を調製した：サイクロスポリンＡをトリグリセリド（ミグリオール８１０）およびリノール酸混合物に分散させた。この混合物に卵リン脂質およびジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）を添加して油相に分散させ、成分が溶解するまで６０〜７０℃に加熱した。グリセリンを含有する水相に、この油相を添加し、十分に混合した。得られた混合物の初期ｐＨは約３〜４であった。水酸化ナトリウムを添加して、最終ｐＨ５．５にした。次いで混合物を均質化し、加熱滅菌した。得られた代表的乳剤の粒度範囲は以下のとおりであった。
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実施例２
実施例１の方法で、より高いｐＨを相殺するためにリノール酸およびミグリオイルを増量した、以下の成分を含むサイクロスポリン含有乳剤を調製した：
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比較例３
実施例１の方法で、遊離脂肪酸を用いずに、以下の成分を含むサイクロスポリン含有乳剤を調製した：
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比較例４
実施例１の方法で、非イオン界面活性剤を用い、遊離脂肪酸を用いずに、以下の成分を含むサイクロスポリン含有乳剤を調製した：
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実施例５
実施例１の方法で、非イオン界面活性剤を用いて、以下の成分を含むサイクロスポリン含有乳剤を調製した：
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比較例６
実施例１の方法で、天然および合成トリグリセリドを用いて、以下の成分を含むサイクロスポリン含有乳剤を調製した：
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