(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液より選ばれる原料を、固定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理することにより得られる画分である甘蔗由来のエキスを含む、生体内で発生するフリーラジカルを消去もしくは低減する剤。
【請求項２】
甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液より選ばれる原料を、固定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理することにより得られる画分である甘蔗由来のエキスを含む、フリーラジカル又は活性酸素を消去もしくは低減する剤。
【請求項３】
前記剤が、生体内で発生するフリーラジカル又は活性酸素を消去もしくは低減する、請求項２に記載の剤。
【請求項４】
甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液より選ばれる原料を固定担体としての合成吸着剤を充填したカラムに通液し、該合成吸着剤に吸着された成分を、水、メタノール、エタノールおよびこれらの混合物から選ばれる溶媒で溶出することにより得られる画分である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項５】
甘蔗由来のエキスが、甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液より選ばれる原料を、固定担体としてのイオン交換樹脂を充填したカラムでの親和力の差を利用したカラムクロマトグラフィー処理により分離して得られる画分のうち、波長４２０ｎｍの光を吸収する画分である請求項１〜３のいずれか１項に記載の剤。
【請求項６】
イオン交換樹脂が、陽イオン交換樹脂である請求項５記載の剤。
【請求項７】
陽イオン交換樹脂が、強酸性陽イオン交換樹脂である請求項６記載の剤。
【請求項８】
強酸性陽イオン交換樹脂が、ナトリウムイオン型もしくはカリウムイオン型である請求項７記載の剤。
【請求項９】
イオン交換樹脂が、ゲル型である請求項５〜８のいずれか一項記載の剤。
【請求項１０】
カラムクロマトグラフィー処理が疑似移動床式連続分離法で行われる請求項５〜９のいずれか一項記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、フリーラジカル又は活性酸素を消去もしくは低減する剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
抗酸化剤には、食品、飼料および化粧品に添加し、その品質を保持する目的で使用されるものと、その抗酸化剤を生体に投与することにより、生体内酸化により発生する活性酸素、フリーラジカル及び過酸化脂質を消去または低減し、つまり生体内酸化を防止または低減する目的で使用されるものがある。
【０００３】
食品、飼料または化粧品に含まれる油脂類、色素、その他の有効成分が保存中に酸化されると、製品の樹脂化、異臭発生、着色、変色、毒性物質の生成または栄養価の低下を引き起こす。このため、食品、飼料および化粧品には品質保持のための抗酸化剤が含有されていることが多い。このような抗酸化効果は、油脂の酸化抑制効果および色素退色抑制効果を試験することにより測定される。
【０００４】
このような目的で、従来主として食品、化粧品あるいは医薬品などの分野で用いられている抗酸化剤としては、例えば、トコフェロール（ビタミンＥ）、アスコルビン酸（ビタミンＣ）等の天然抗酸化剤や、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）などのフェノール系合成抗酸化剤が知られている。トコフェロールは油脂の抗酸化剤としてよく用いられるが、水に溶けにくいため用途が限られ、また肝心の抗酸化力があまり高くないためほかの抗酸化剤と併用するなどの必要があった。アスコルビン酸は、水溶性の抗酸化剤として用いられ油脂へは使用しにくく、また食品に用いる場合にその酸味が付与されることから食品の味を変えてしまい、また合成抗酸化剤と比較してその抗酸化力が劣るという欠点があった。一方、ＢＨＡやＢＨＴのような合成抗酸化剤は、その抗酸化力は強いが、その発ガン性や肺・肝臓への悪影響が指摘されていること等、安全性が疑問視されるようになった。このようなことから、抗酸化力の強い、汎用性の高い、天然の抗酸化剤の開発が望まれてきた。
【０００５】
従来、天然の抗酸化剤として以下のようなものが報告されている。ミカン科植物果皮の水または含水アルコール抽出物を有効成分として含有する抗酸化性組成物（特開平８−２５９９４５号公報）、ミカン科コブミカンの葉の抽出物を有効成分とする抗酸化剤組成物（特開平１１−１９９４２７号公報）、緑色植物の緑葉から抽出した抗酸化活性画分を配合した飲食品類（特開平１１−１２３０７１号公報）、成熟前期の麦類の緑葉に水に可溶性またはｎ−ヘキサンに不溶性で且つ含水率が８０％以下の含水エタノールに可溶性の画分であって、２−Ｏ−グルコシル−イソビテキシンを含有することを特徴とする麦類の緑葉の抗酸化活性画分（特開平５−６５４８０号公報）、ヤマモモ科ヤマモモ属植物から炭素数１から５までの脂肪族アルコール系有機溶媒および／またはその他の有機溶媒の１種以上を用いて抽出した抗酸化剤（特開平５−１５６２４９号公報）、冬葵子の溶媒抽出物を含む食品および化粧品（特開平９−５９１２７号公報）、クフェア属植物に含有される抗酸化性物質を極性溶媒で抽出、採取することを特徴とする抗酸化性物質の製造法（特開平６−２１２１５４号公報）、オリーブ植物溶媒抽出物の加水分解物を有効成分としてなる抗酸化剤（特開平９−７８０６１号公報）等が報告されている。また、ローズマリー抽出物、ヒマワリ種子抽出物、茶抽出物、ヤマモモ抽出物等が、この用途で上市されている。
【０００６】
従来一般に、抗酸化剤とは食品、飼料、化粧品などの酸化を防止する保存料であるととらえられていた。しかし、近年になって、これまで食品に用いられてきた抗酸化剤に、生体内酸化により発生するフリーラジカル、活性酸素及び過酸化脂質を消去または低減する抗酸化効果を有するものがあることが明らかになり、また生体内抗酸化力が強い天然抽出物の探索（Food & Food Ingredients Journal of Japan, 163, 19-29 (1995)、New Food Industry, 39(3), 17-24 (1997)、月刊フードケミカル1998-8, P.33-41）が行われるようになった。
【０００７】
生体内酸化により生成するフリーラジカルや活性酸素には様々なものが知られている。フリーラジカルは不対電子を持つ分子種の総称であるため、様々な生体内フリーラジカルが存在するが、活性酸素でもあるフリーラジカルとしてスーパーオキシドアニオン、ヒドロキシルラジカルが知られている。また、フリーラジカルではない活性酸素には、過酸化水素および一重項酸素が知られている。これらの中で一般に生体内抗酸化効果の指標として測定されるものは、１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）を用いたラジカル消去活性、スーパーオキシドアニオン消去活性、ヒドロキシルラジカルの消去活性および過酸化脂質生成抑制活性であり、一般にこれらの活性を有するものを生体内抗酸化力のある抗酸化剤と位置づけている（月刊フードケミカル1998-8, P.33-41）。
【０００８】
最近では、臨床レベルで食品による老化防止の可能性を評価する際に、遺伝子レベルにおける酸化的障害を測定する方法が研究されている。なかでも、生体内脂質過酸化反応の結果生じた活性酸素によるＤＮＡ中の核酸塩基（デオキシグアノシン）に対する攻撃の結果、８−ヒドロキシデオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ）が生成し、このＤＮＡ中に生じた８−ＯＨｄＧは、通常はＤＮＡ修復酵素により切り取られ、血中を経て最終的には尿中に排出されることが明らかになった。従って、血液や尿中の８−ＯＨｄＧ量を測定することにより老化防止効果を測定することができるが、この測定には免疫化学的な手法であるＥＬＩＳＡ法を用い、この方法はまだコストが高く、一般的な方法として確立されているわけではない。従って、現状では、生体内抗酸化効果の指標として、通常は前述のフリーラジカル消去活性および活性酸素消去活性等の測定を行っている。
【０００９】
現在、生体内酸化により引き起こされると考えられている疾患として、以下のものが知られている。脳・神経系疾患としては、脳浮腫、外傷性てんかん、脳虚血、パーキンソン病、脊髄損傷等が、目の疾患としては、白内障、網膜変性、未熟児網膜症等が、呼吸器系疾患としては、気管支喘息、肺気腫、肺繊維症、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、未熟児呼吸窮迫症候群（ＩＲＤＳ）等が、循環器系疾患としては、動脈硬化、心筋梗塞等が、消化器系疾患としては、潰瘍性大腸炎、ストレス性胃潰瘍、すい炎、消化管粘膜障害等が、皮膚疾患としては、紫外線障害、アトピー性皮膚炎、火傷、凍傷、床ずれ等が、腎臓疾患としては、腎炎、腎不全等が、その他の疾患としては、ガン、糖尿病、膠原病、リウマチ、アルツハイマー病、自己免疫疾患、ベーチェット病等が挙げられる。また、老化、老化による皮膚のしわや痴呆症も、生体内酸化によると考えられている。生体内酸化を防止又は低減する抗酸化剤は、このような疾患の予防・治療につながると考えられ、機能性食品あるいは健康食品として注目されるようになった。
【００１０】
このような用途の抗酸化剤としては、ハンタイカイを水または含水有機溶媒で抽出して得られる抽出物を有効成分として含有する活性酸素消去剤（特開平８−２０５４４号公報）、植物種子又は胚芽類を焙煎した後、酵素処理したものに植物種子を加えて得られる組成物を非極性溶媒で洗浄し、その後不溶物を極性溶媒で抽出してなることを特徴とする抗活性酸素作用組成物（特開平４−１３９１３２号公報）、オウギより抽出したアスチルビンを含有することを特徴とする活性酸素消去剤（特開平６−６５０７４号公報）、キハダ果実を水、メタノール等の溶媒で抽出してなる抗酸化作用を有するエキス（特開平１０−１７４８５号公報）、新規ミント交配種のエッセンスからなる、活性酸素消去剤（特開平１０−６６４６５号公報）、植物繊維成分を含有する培地を用いて担子菌及び／又は子嚢菌の菌糸体を培養し、この培養物から抽出して得られた糖質、蛋白質、水溶性リグニンを主成分とすることを特徴とする生体の抗酸化機能増強剤（特開平１１−２２８４４１号公報）、アカミノキ、ウヤク、ウワウルシ、ジコッピ、シソ、テンチャ、ハス、ラベンダーから選ばれる１種以上の植物抽出物を含有することを特徴とする活性酸素消去剤（特開平１１−２７９０６９号公報）、カプサンチン又はその脂肪酸エステルを有効成分とする抗酸化剤（特開平１０−１９５４３３号公報）、ごまの植物体から誘導された増殖性細胞の培養物の溶媒抽出由来のスーパーオキシドディスムターゼ様活性物質（特開平４−２７５２２６号公報）等が報告されている。また、ルイボスティー抽出物、イチョウ葉乾燥エキス等が上市されている。
【００１１】
また、品質保持用の抗酸化効果と生体内抗酸化効果の両方を持つ抗酸化剤としては、香辛料植物の一種であるフェンネルの葉と茎から極性溶媒で抽出して得られた物質を有効成分とする抗酸化剤（特開平６−２９９１５１号公報）、ユキノシタ科のユキノシタ植物抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗酸化剤（特開平１０−４６１４２号公報）等が報告されている。また、茶抽出物、ブドウ種子抽出物等が上市されている。
【００１２】
また、近年の抗酸化剤に関する様々な研究により、ゴマ種子、菜種、小麦、大豆、ピーナツ、インゲン豆、レモン、プルーン、ユーカリ、セージ、ターメリック、シナモン等、様々な植物に抗酸化物質が含有されていることが報告されているが、多種の用途に対する抗酸化効果を確認しているものは少ない。
【００１３】
また、植物のうちサトウキビ関連の抗酸化剤として、沖縄産黒糖に５種類の抗酸化物質が存在することが報告されている（Biosci. Biotech. Biochem., 60(10), 1714-1716 (1996)）。また、黒糖のアセトンまたは塩化メチレンの抽出物の抗酸化効果も報告されている。しかし、これらの抗酸化力はリノール酸酸化に対して確認されているのみで他の抗酸化力に関しては確認されておらず、また黒糖以外の甘蔗抽出物の抗酸化力に関しては報告されていない。
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
従来報告されてきた品質保持用の抗酸化剤には、合成品と天然抽出物がある。合成品は安全性に問題があることから、天然で安全性の高い抗酸化剤が求められているが、天然の抗酸化剤にも様々な問題点があり、改善が求められている。
【００１５】
例えばハーブに属する植物の抽出物はハーブ独特の臭いが強く、製品に添加した場合にその臭いが製品についてしまうため、使用範囲が限られていた。また、トコフェロール、ゴマの抽出物、ヒマワリ種子抽出物のように基本的に脂溶性である抗酸化剤は、水溶系の製品に用いる場合にそのままでは使用しにくく、水溶性の抗酸化剤は油脂類には使用しにくいという欠点があった。また、特有の味や風味を有する抗酸化剤は、製品の味や風味に影響を与えるため使用範囲が限られていた。従って、広範囲の食品、飼料および化粧品に付与される味や臭いが許容される範囲内であり、わずかな投与量で酸化防止効果を示す天然の抗酸化剤が望まれている。
【００１６】
またこれまで知られている生体内抗酸化剤に関しても、様々な問題が存在する。従来、漢方やハーブまたは民間薬として知られているような植物の抽出物は、抗酸化効果以外の薬効を有し、その薬効による副作用が発現することがあった。このようなことから、従来より食品として扱われてきた、安全な植物由来の天然抗酸化剤が望まれている。
【００１７】
また、従来の天然抗酸化剤は、抗酸化剤の抽出目的で栽培され、使用されるため、コストが高いという問題もあった。
【００１８】
また従来の技術でも述べたように、抗酸化効果には油脂に対するもの、色素に対するもの、活性酸素以外のフリーラジカルに対するもの、フリーラジカルの活性酸素に対するもの、非ラジカルの活性酸素に対するものなど、様々な種類があるが、どの効果を有するのかにより、その用途は異なっている。従来の報告では、これらの効果の一部しか持たないため用途が限られていたり、効果の確認が不十分であったり、また効果と用途が適応していなかったりするものがあり、これらの効果を複合的に併せ持つことが確認されている、用途の広い抗酸化剤が望まれている。
【００１９】
また、黒糖中に存在する抗酸化物質が研究されているが、分離同定した５種類の抗酸化物質および溶媒抽出物の抗酸化力は油脂の酸化抑制効果を確認したのみで、他の抗酸化効果は確認していない。またこの物質は黒糖から微量成分として分離されるものであり、黒糖の製造工程で生成するものであるのか甘蔗自体にそもそも含有される成分であるのかも明らかになっていない。従って、これまでに甘蔗自体に抗酸化力を有する成分が存在することは明らかになっていなかった。
【００２０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、以上の問題点に鑑み、ヒトあるいは動物に安全な、低コストで製造できる、用途の広い抗酸化剤について鋭意検討を重ねてきたが、古来より食品として使用されている甘蔗を処理して得られるエキスが、フリーラジカル又は活性酸素を消去もしくは低減することを見いだし、本発明を完成した。
【００２１】
すなわち本発明は、甘蔗由来のエキスを有効成分とする、フリーラジカル又は活性酸素を消去もしくは低減する剤である。
本発明の剤は、甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液より選ばれる原料を、固定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理することにより得られる画分である甘蔗由来のエキスを含む。
【００２２】
甘蔗は本来蔗糖を得るためにその原料植物として栽培されるが、本発明はカラムクロマトグラフィーにより甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液より選ばれる原料からエキスを抽出するため、本発明のエキスを抽出しても蔗糖は従来と変わらない収率で甘蔗汁から回収することができ、従来の蔗糖製造を妨げることはない。つまり、本発明のエキスは甘蔗から蔗糖を除いた部分から得ることができるため、低コストで製造することができる。
【００２３】
本明細書において、「抗酸化効果」とは、食品、飼料あるいは化粧品、またはその原料の酸化を抑制・防止する、品質保持のための抗酸化効果と、その抗酸化剤をヒトあるいは動物に投与した際に、生体内で発生するフリーラジカルや活性酸素を消去または低減する、生体内酸化防止効果を包含する。「抗酸化剤」とはこのような抗酸化効果を有する剤である。
【００２４】
また、本発明における甘蔗汁は、甘蔗（サトウキビ）を圧搾して得られる圧搾汁、甘蔗を水で浸出して得られる浸出汁、または原糖製造工場における石灰処理をした清浄汁、濃縮汁を包含する。
【００２５】
本発明における甘蔗由来の糖蜜とは、結晶化工程で得られた砂糖結晶と母液の混合物を遠心分離にかけ、砂糖結晶と分離してえられる振蜜を意味し、たとえば、原糖製造工場における1番蜜、2番蜜、原糖廃蜜、および精製糖製造工場における洗糖蜜、1〜7番蜜、精糖廃蜜等が挙げられる。また、これらの糖蜜を原料としてアルコール発酵を行った分離液のように、糖蜜を脱糖処理したものも同様に用いることができる。
【００２６】
本発明における甘蔗の溶媒抽出液とは、甘蔗を汎用の有機溶媒で抽出した抽出液を濃縮、乾固後、水に再溶解した抽出液等を意味する。直上の有機溶媒としては、たとえばメタノールやエタノールなどのアルコール類が挙げられ、これらを単独でも組み合わせて使用しても良い。
【００２７】
本発明において、甘蔗由来のエキスとは、甘蔗を原料として得られたエキスである。
【００２８】
甘蔗由来のエキスは、甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液より選ばれる原料（以下で、単に原料ということがある）を固定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理して得られる画分である。更に好ましくは、原料を、固定担体としての合成吸着剤が充填されたカラムに通液し、該合成吸着剤に吸着された成分を、水、メタノール、エタノールおよびこれらの混合物から選ばれる溶媒で溶出することによって得られる画分、あるいは原料を、固定担体としてのイオン交換樹脂が充填されたカラムでの親和力の差を利用したカラムクロマトグラフィー処理により分離し、得られる画分のうち波長４２０ｎｍの光を吸収する画分であることが好ましい。
【００２９】
従来、甘蔗由来の原料、中間製品および製品の色価の評価は、波長４２０ｎｍの光の吸光度により行われている。この吸光度は、サンプルのｐＨにより若干影響されるので、通常、ｐＨを中性付近に調整してから吸光度を測定している。本発明において、吸光度は、サンプルのｐＨを６〜８の範囲に調整した後に測定されたものとする。実施例にあるように、得られた画分の凍結乾燥粉末０．２５ｇを０．５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．５）で溶解して全量を１００ｍｌにし、１ｃｍセルを用いて波長４２０ｎｍでの吸光度を測定したとき、吸光度が０．８以上の画分に本発明の高い効果が認められる。しかし、波長４２０ｎｍの吸光度は甘蔗由来の色素の量を示す値であって有効成分自体の量を示す値であるかどうかは不明であること、また原料となる甘蔗の産地や種類により甘蔗自体に含まれる色素の絶対量が異なることから、異なる甘蔗に由来する種々のエキスの間で効果と吸光度が必ずしも比例関係にあるわけではない。１つの原料から得られる複数の画分の吸光度を測定し、相対的に吸光度が高い画分が本発明の画分である。
【００３０】
固定担体として合成吸着剤をカラムに充填してカラムクロマトグラフィーを行う場合は、本発明の効果の有効成分の合成吸着剤に対する親和性が非常に高いため、原料をカラムに通液したとき有効成分が合成吸着剤に吸着される。その後、溶媒で溶出を行うと、合成吸着剤に吸着された成分が脱着されて溶出される。一方、固定担体としてイオン交換樹脂を用いた場合には、本発明の効果の有効成分と樹脂との親和性は吸着ほど強いわけではない。有効成分とその他の成分のイオン交換樹脂に対する親和性の強さに差がある。原料をカラムに供給し、その後溶離液として水を流すことにより、有効成分とその他の成分の溶出速度の違いに基づいて両者を分離することができるのである。
【００３１】
このような甘蔗由来のエキスは、より具体的には例えば次のようにして得ることができる。
【００３２】
甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜または甘蔗の溶媒抽出液（以下、単に原料ということがある）を、固定担体を充填したカラムに通液する。上記原料は、そのまま、または水で任意の濃度に調整して、用いることができる。なお、異物除去のために、カラムで処理する前に、原料をろ過することが望ましい。ろ過の手法は特に限定されず、食品工業で広く使用されているスクリーンろ過、ケイソウ土ろ過、精密ろ過、限外ろ過等の手段を好ましく使用できる。
【００３３】
固定担体としては、合成吸着剤及びイオン交換樹脂が好ましい。
まず、固定担体として合成吸着剤を用いる方法の好ましい態様は、以下の通りである。
【００３４】
合成吸着剤としては、好ましくは有機系樹脂を用いることができ、例えば、芳香族系樹脂、アクリル酸系メタクリル樹脂、アクリロニトリル脂肪族系樹脂等が使用できる。さらに好ましくは芳香族系樹脂であり、特に無置換基型の芳香族系樹脂が使用できる。合成吸着剤として、例えばスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂の芳香族系樹脂等が使用でき、芳香族系樹脂としては、例えば疎水性置換基を有する芳香属系樹脂、無置換基型の芳香族系樹脂、無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂等の多孔性樹脂が使用できる。より好ましくは無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂が使用できる。そのような合成吸着剤は市販されており、例えばダイヤイオン（商標）HP-10、HP-20、HP-21、HP-30、HP-40、HP-50（以上、無置換基型の芳香族系樹脂、いずれも商品名、三菱化学株式会社製）；SP-825、SP-800、SP-850、SP-875、SP-70、SP-700（以上、無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂、いずれも商品名、三菱化学株式会社製）；SP-900（芳香族系樹脂、商品名、三菱化学株式会社製）；アンバーライト（商標）XAD-2、XAD-4、XAD-16、XAD-2000（以上、芳香族系樹脂、いずれも商品名、株式会社オルガノ製）；ダイヤイオン（商標）SP-205、SP-206、SP-207（以上、疎水性置換基を有する芳香族系樹脂、いずれも商品名、三菱化学株式会社製）；HP-2MG、EX-0021（以上、疎水性置換基を有する芳香族系樹脂、いずれも商品名、三菱化学株式会社）；アンバーライト（商標）XAD-7、XAD-8（以上、アクリル酸系エステル樹脂、いずれも商品名、株式会社オルガノ製）；ダイヤイオン（商標）HP1MG、HP2MG（以上、アクリル酸系メタクリル樹脂、いずれも商品名、三菱化学株式会社製）；セファデックス（商標）LH20、LH60（以上、架橋デキストランの誘導体、いずれも商品名、ファルマシア  バイオテク株式会社製）などが挙げられる。中でも、SP-850が特に好ましい。
【００３５】
固定担体の量は、カラムの大きさ、溶媒の種類、固定担体の種類などによって変化する。原料（甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液から選ばれる）の固形分に対して、０．０１〜5倍湿潤体積量が好ましい。
【００３６】
原料（甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液から選ばれる）を上記カラムに通すことにより、原料中の抗酸化効果を有する成分は固定担体に吸着され、蔗糖、グルコース、フラクトース及び無機塩類の大部分がそのまま流出する。
【００３７】
固定担体に吸着された成分を、溶媒により溶出する。ここで、抗酸化効果を有する成分を効率良く溶出するには、その前に残留する蔗糖、グルコース、フラクトースおよび無機塩類を水洗により充分に洗い流すことが好ましい。これにより、吸着されている抗酸化効果を有する成分をより効率良く回収することができる。溶出溶媒は、水、メタノール、エタノール及びこれらの混合物から選ばれる。溶出溶媒は水とアルコールの混合溶媒、特にエタノール−水混合溶媒が好ましく、さらに、室温において効率良く抗酸化効果を有する成分を溶出できるので、５０／５０〜６０／４０（体積／体積）エタノール−水混合溶媒が好ましい。さらに、カラム温度を上げることにより、エタノール−水混合溶媒のエタノール混合比を減らすことができ、目的とする抗酸化効果を有する成分を溶出することができる。この場合、カラム内は常圧もしくは加圧された状態である。このように、本発明の効果を有する成分は、前記溶媒で溶出される画分に存在する。溶出速度はカラムの大きさ、溶媒の種類、固定担体の種類等によって変化するので特に限定されないが、SV=0.1〜10ｈｒ−１が好ましい。なお、SV（Space Velocity、空間速度）は、１時間当たり樹脂容量の何倍量の液体を通液するかという単位である。
【００３８】
前記抗酸化効果を有する成分は、好ましくは次のようにして得ることができ、しかし下記に限定されない。すなわち、原料の固形分に対して０．０１〜5倍湿潤体積量の無置換基型の芳香族系樹脂を充填したカラムに、カラム温度６０〜９７℃にて原料を通液した後、カラム内を水洗し、ついでカラムに吸着されている成分を、カラム温度２０〜４０℃にて５０／５０〜６０／４０（体積／体積）エタノール−水混合溶媒で溶出させ、溶出開始時点から集めた溶出液の量が前記樹脂の４倍湿潤体積量以内に溶出する画分を回収する。
【００３９】
一方、固定担体としてイオン交換樹脂を用いる方法の好ましい態様は、以下の通りである。
【００４０】
イオン交換樹脂は、イオン交換の性質の観点から、陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂とに分類されるが、本発明では好ましくは陽イオン交換樹脂が使用できる。さらに好ましくは強酸性型のナトリウムイオン型またはカリウムイオン型の陽イオン交換樹脂が使用できる。またイオン交換樹脂は、樹脂の形態の観点からは、ゲル型樹脂と、ポーラス型、マイクロポーラス型などの多孔性樹脂とに分類されるが、本発明では好ましくはゲル型のイオン交換樹脂が使用できる。さらに好ましくは、強酸性型、ナトリウムイオン型またはカリウムイオン型であるゲル型の陽イオン交換樹脂が使用できる。そのようなイオン交換樹脂は市販されており、例えばダイヤイオン（商標）としてＳＫ１Ｂ、ＳＫ104、ＳＫ110、ＳＫ112、ＳＫ116（いずれも商品名、三菱化学株式会社）、ＵＢＫ530、ＵＢＫ550（クロマト分離用、いずれも商品名、三菱化学株式会社）、アンバーライト（商標）系として、アンバーライトＩＲ120Ｂ、ＩＲ120ＢＮ、ＩＲ124、ＸＴ1006、ＩＲ118、アンバーリスト31、クロマトグラフ用アンバーライトＣＧ120、ＣＧ6000（いずれも商品名、オルガノ株式会社）、ダウエックス（商標）として、ＨＣＲ-Ｓ、ＨＣＲ-Ｗ2、ＨＧＲ-Ｗ2、モノスフィアー650Ｃ、マラソンＣ600、50Ｗ×2、50Ｗ×4、50Ｗ×8（いずれも商品名、ダウ・ケミカル日本株式会社）、ムロマック50ＷＸ（商品名、室町化学工業株式会社）、ピュロライト（商標）として、Ｃ-100Ｅ、Ｃ-100、Ｃ-100×10、Ｃ-120Ｅ、ＰＣＲ433、ＰＣＲ563Ｋ、ＰＣＲ822、ＰＣＲ833、ＰＣＲ866、ＰＣＲ883、ＰＣＲ892、ＰＣＲ945（いずれも商品名、エイエムピー・アイオネクス株式会社）等が挙げられる。中でも、ＵＢＫシリーズが特に好ましい。
【００４１】
固定担体の量は、カラムの大きさ、固定担体の種類等によって変化する。原料の固形分に対して、好ましくは２〜１０，０００倍、より好ましくは5〜５００倍湿潤体積量である。
【００４２】
原料を上記カラムに通し、次に溶離液として水を用いてクロマトグラフィー処理し、得た多数の画分のうち波長４２０ｎｍの光を吸収する画分を分取して目的とするエキスを得ることができる。以下において、この方法をイオンクロマト分離ということがある。
【００４３】
通液条件は、原料の組成および固定担体の種類等によって変化する。溶離液として脱気処理した水を用い、単塔式回分分離法の場合、流速はＳＶ＝０．３〜１．０ｈｒ−１、サンプルの供与量は樹脂の１〜２０％、温度は４０〜７０℃が好ましい。この分離法により得た画分の夫々について、波長４２０ｎｍでの吸収、電気伝導度（塩分の量の尺度）、蔗糖、グルコースおよびフラクトースの濃度を分析し、時系列的にグラフに表すと、波長４２０ｎｍでの光吸収のピーク、電気伝導度のピーク、蔗糖および還元糖のピークの順にピークが現れる。後記の図１における画分３〜8を包含する非蔗糖画分全体（画分１〜9と画分１８〜３０を合わせたもの）は、有効成分の濃度はより低いが、同様にこれを本発明のエキスとして使用することができる。擬似移動床式連続分離法の場合、原料液供給量、溶離液流量、各画分抜き出し流量を、原料の組成、固定担体の種類、樹脂量に合わせて設定するため、一般的な通液条件を示すことができない。
【００４４】
原糖工場において２番蜜を原料として擬似移動床式連続分離法により得られる本画分の組成は、原料の種類およびイオン交換樹脂の分離能により変化するが、固形分当たりの蔗糖が６％以下、非糖分が９０％以上、見掛純糖率が１０％である。見掛純糖率は、固形分（ブリックス：Ｂｘ．）当たりの糖度（検糖計で測定した純蔗糖規定量に対する直接旋光度）の百分率である。
【００４５】
また、単塔式回分分離法により得られる本画分は、２番蜜を原料として得られた画分の場合、固形分（凍結乾燥固形分）当たりのポリフェノール量が約５％、電気伝導度塩分が約４４．７％、糖分は約５％である。
【００４６】
抗酸化効果の有効成分である物質は、波長４２０ｎｍの吸収のピーク部分の画分に多く含まれることは明らかであるが、有効成分自体が４２０ｎｍの吸収を持つかどうかは現在のところ明らかではない。
【００４７】
上記のように、甘蔗からカラムクロマトグラフィー処理により得られたエキスを、慣用の手段（減圧下での溶媒除去、凍結乾燥など）により濃縮して、本発明の効果を有する成分を得ることができる。このようにして得られた本発明の効果を有する成分は、固形分２０％以上に濃縮した液状または粉末状で保存することができる。保存は、特に液状の場合、冷蔵保存が好ましい。
【００４８】
本発明の甘蔗由来のエキスは、食品、飼料および化粧品の成分の酸化を防止する、保存料としての酸化防止剤であるだけではなく、ヒトや動物の体内で起こる酸化により生成するフリーラジカルや活性酸素を消去または低減する、生体内抗酸化効果も有する。
【００４９】
本発明の甘蔗由来のエキスは、後述の実施例１、２、および実施例６〜１７に示すように、色素の退色防止効果および脂質の自動酸化抑制効果を示した。これらの効果は、食品、飼料および化粧品の酸化防止剤としての代表的な効果であり、これらの効果を有する抗酸化剤は食品の酸化防止剤として有効である。
【００５０】
また、本発明の甘蔗由来のエキスは、後述の実施例２〜５に示すように、ヒドロキシルラジカル消去効果、スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）様活性、ＤＰＰＨ法によるラジカル消去効果および脂質の自動酸化抑制効果という、生体内ラジカルおよび活性酸素消去効果を示した。これらの効果を有する抗酸化剤は、生体内抗酸化剤として有効である。
【００５１】
本発明の甘蔗由来のエキスは、食品に添加することにより、その酸化を防止することができる。このような食品としては、例えば油脂類として、コーン油、菜種油、綿実油、大豆油、サフラワー油、ヒマワリ油、ごま油、小麦胚芽油、ひまし油、コーヒー油、カシューナッツ油、カカオビーンズ油、ピーナツ油、魚油、パーム油、パーム核油、ラード、牛脂、鶏油等の動植物油脂やこれらの動植物油脂類の部分水素添加油脂または完全水素添加油脂、オレイン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸等の不飽和脂肪酸およびそのエステルまたはその不飽和アルコールに対して使用できるばかりか、バター、マーガリン、ショートニング、ドレッシング等の油脂加工食品に使用することができる。また、油脂を多く含む食品、例えば、ドーナツ、油揚げ、油揚げ菓子、チョコレート、即席ラーメン等に添加使用することができる。
【００５２】
その他食品としては、おかき、せんべい、おこし、まんじゅう、飴等の和菓子、クッキー、ビスケット、クラッカー、パイ、スポンジケーキ、カステラ、ドーナツ、ワッフル、プリン、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリーム、チョコレート、チョコレート菓子、キャラメル、キャンディー、チューインガム、ゼリー、ホットケーキ、パン等の各種洋菓子、ポテトチップス等のスナック菓子、アイスクリーム、アイスキャンディー、シャーベット等の氷菓、乳酸飲料、乳酸菌飲料、濃厚乳性飲料、果汁飲料、無果汁飲料、果肉飲料、健康飲料、透明炭酸飲料、果汁入り炭酸飲料、果汁着色炭酸飲料等の清涼飲料水、緑茶、紅茶、インスタントコーヒー、ココア、缶コーヒー、業務用コーヒー等の嗜好飲料、発酵乳、加工乳、チーズ等の乳製品、豆乳などの大豆加工食品、マーマレード、ジャム、果実のシロップ漬け等の果実加工食品、フラワーペースト、ピーナツペースト、フルーツペースト等のペースト類、漬物類、ハム、ソーセージ、ベーコン、ドライソーセージ、ビーフジャーキー等の畜肉製品、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、蒲鉾、竹輪、はんぺん、てんぷら、ウニやイカの塩辛、魚の干物、魚の燻製品、鰹、鯖、鮪等の節類等の魚介類製品、海苔、小魚、貝類、スルメ、山菜、茸、昆布等で作られる佃煮類、即席カレー、レトルトカレー、缶詰カレー等のカレー類、固形ブイヨン、蛎油、焼肉のたれ、カレールー、シチュールー、スープの素、だしなどの各種調味料類、油脂を有する各種レンジ食品および冷凍食品などの各種食品に使用することができる。
【００５３】
また本発明のエキスを添加することにより、飼料の酸化を防止することができる。そのような飼料としては、例えばドッグフード、キャットフード等のペット用飼料、家畜用飼料、養殖魚介類用飼料などが挙げられる。
【００５４】
また本発明のエキスを添加することにより、化粧品の酸化を防止することができる。そのような化粧品としては、化粧水、乳液、ローション、クリーム、美容液、ローション、オイル、パック、リップクリームなどの基礎化粧料、ヘアートニック、ヘアーリキッド等の整髪料、育毛・養毛料等の頭髪化粧品、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドー、アイライナー、マスカラ、アイブロウライナー等のメークアップ化粧料等に使用することができる。
【００５５】
本発明の抗酸化剤は、ヒトの生体内酸化により発生する活性酸素やフリーラジカルを消去または低減する、生体内抗酸化剤として使用することができる。このような用途での本発明の抗酸化剤は、活性酸素およびフリーラジカル消去剤として投与されるが、その摂取方法としては、機能性食品の形で経口摂取するか、あるいは化粧品の形で皮膚から摂取する。このような機能性食品としては、一般食品に本発明のエキスを添加した機能性食品、およびカプセル状、粉末状、顆粒状、固形状、ゲル状（ゼリー）、ドリンク状等の健康食品が挙げられる。また、皮膚から摂取する場合の化粧品としては、化粧水、乳液、ローション、クリーム、美容液、オイル、パック、リップクリームなどの基礎化粧品、ヘアートニック、ヘアーリキッド等の整髪料、育毛・養毛料等の頭髪化粧品等の、皮膚に直接塗布する化粧品に使用できる。
【００５６】
本発明の抗酸化剤の添加量および投与量は、品質保持のための酸化防止剤として用いる場合と、生体内で発生するフリーラジカルや活性酸素を消去・低減する生体内抗酸化剤として用いる場合とで異なり、また甘蔗由来のエキスの精製度、形態等によって異なるので特に限定されない。また、品質保持のための酸化防止剤として用いる場合には、添加する食品、飼料および化粧品に含まれる油脂や色素等の酸化する物質の種類や量、また他の抗酸化剤と併用して使用する場合にはその配合比により、添加量は影響される。しかし、製造例１〜４で得た甘蔗由来のエキス粉末を他の抗酸化剤と併用しないで添加する場合の、通常の添加量としては０．０００２〜2重量％であり、好ましくは０．００２〜０．０５％である。また、生体内抗酸化剤として用いる場合には、製造例１〜４で得た甘蔗由来のエキス粉末を用いる場合には、成人において、通常の投与量としては１日当たり２５０〜２０００ｍｇであり、好ましくは５００〜１０００ｍｇである。
【００５７】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に解説するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００５８】
製造例1
原料製造工場の製造工程にて得られた甘蔗の圧搾汁（固形分１８．６％）約１０００リットルを、ジュースヒーターで８０℃に加温し、管型限外ろ過（ＭＨ−２５型、有効膜面積２ｍ２×３本、分画分子量１０万、ダイセル化学工業株式会社製）でろ過処理して、約７５０リットルの処理液を得た。
合成吸着剤ＳＰ−８５０（商品名、三菱化学株式会社）１５リットルを、ウォータージャケット付きのカラム（カラムサイズ：内径１７．０ｃｍ、高さ１００ｃｍ）に充填し、これに前記の圧搾汁ろ過処理液を、流速７５リットル／時間（ＳＶ＝５ｈｒ−１）の速度で通液した。なお、圧搾汁ろ過処理液通液中は、ウォータージャケットに、６５℃の水を常に循環させた。次に、４５リットルのイオン交換水を、流速３０リットル／時間（ＳＶ＝２ｈｒ−１）でカラムに通液して洗浄した。イオン交換水で洗浄後、カラムから溶出した画分についての糖類の検出を行ったところ、ハンドレフブリックス（Ｂｘ．）計（アタゴ株式会社製、Ｎ−１Ｅ型）において、Ｂｘ．が約０になっているのが確認された。その後、溶出溶媒として３０リットルの５５％エタノール水溶液（エタノール／水＝５５／４５（体積／体積））を流速３０リットル／時間（ＳＶ＝２ｈｒ−１）にてカラムに通液して、合成吸着剤に吸着した成分を溶出させた。その後イオン交換水を３０リットル／時間（ＳＶ＝２ｈｒ−１）で通液した。なお、溶出溶媒およびその後のイオン交換水通液中は、ウォータージャケットに、２５℃の水を常に循環させた。５５％エタノール水溶液でカラムから溶出した溶出液および、その後のイオン交換水を２０分間流して得られた溶出液を混合し、濃縮機にて約２０倍に減圧濃縮した後、１晩凍結乾燥して、茶色の粉末（甘蔗由来のエキス）４３５ｇを得た。
【００５９】
製造例2
原糖製造工場の製造工程にて得られた清浄汁（固形分１１．５％）約６２０リットルを限外ろ過処理せずにそのまま使用した以外は製造例１と同様にして、カラム処理を行った。得られた溶出液を濃縮機にて約２０倍に減圧濃縮した後、１晩凍結乾燥して、茶褐色の粉末（甘蔗由来のエキス）２１０ｇを得た。
【００６０】
製造例3
原糖工場において、結晶缶にて２回蔗糖結晶を回収し、遠心分離により結晶を除いた振蜜である２番蜜を原料として、陽イオン交換樹脂を充填した分離糖を用いた擬似移動床式連続分離法により、イオン交換カラムクロマト分離を行った。原料の調製からイオン交換クロマト分離までの工程は連続的に行われるため、各工程の液の固形分濃度や組成は時間と共に若干変動するが、以下の濃度や組成は定常運転における測定値である。
２番蜜はブリックス（Ｂｘ．）が約８５であった。この濃度はカラムクロマト処理を行うには高いため、ブリックス約５０に希釈した。これに消石灰、炭酸ソーダを添加して不純物を凝集させ、ケイソウ土ろ過を行った。得られたろ液は、ブリックス４７．３、糖度（Ｐｏｌ．）２３．６、純糖率（Ｐｕｒｉｔｙ）４９．９、還元糖分２．５％であった。
ろ液をイオン交換クロマトグラフィーの原料として用いた。
陽イオン交換樹脂としてＵＢＫ５３０（三菱化学株式会社）を用いた擬似移動床式連続分離法によるイオン交換クロマトグラフィーを行った。樹脂を充填した分離塔は８分割されており、１塔当たりの樹脂量は６．５ｍ３である。原料液と溶離液（水）の供給、および蔗糖画分と非蔗糖画分の抜き出し位置を一定時間毎に切り替えることにより、連続的に供給、抜き出しを行った。定常時の既定値は、供給流量３ｍ３／時間、溶離水流量１３．５ｍ３／時間、非蔗糖画分抜き出し流量１２．１３ｍ３／時間、蔗糖画分抜き出し流量４．３７ｍ３／時間、切り替え時間２６７秒であった。このクロマトグラフィー処理により、蔗糖画分と非蔗糖画分が分離された。これらは夫々、後述の図１における画分１０〜１７、および画分１〜９と画分１８〜３０とを合わせたものに相当する。蔗糖画分は蔗糖が固形分当たり約８７％（ＨＰＬＣ分析による）でブリックスは約３５であり、この画分を、清浄汁と混合して製糖本工程に戻し、再び蔗糖を回収する操作を行った。また、得られた非蔗糖画分は、蔗糖分が約０．３％（ＨＰＬＣ分析による）でブリックスが約８であった。この非蔗糖画分を濃縮缶により濃縮し、ブリックス４０．０、糖度（Ｐｏｌ．）２．３、純糖率（Ｐｕｒｉｔｙ）５．８、還元糖分５．４％とした。この非蔗糖画分を、後の試験に用いるため、１晩凍結乾燥処理に付した。得られた凍結乾燥粉末０．２５ｇを０．５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．５）で１００ｍｌ溶液にし、波長４２０ｎｍでの吸光度を測定した。吸光度は１．１１であった。
【００６１】
製造例４
原糖工場で得られた２番蜜処理液を原料として、単塔式回分分離法によるイオン交換カラムクロマトグラフィー処理を行った。
原料として使用した２番蜜処理液は、２番蜜を希釈後、炭酸ソーダによる清浄処理、ケイソウ土ろ過を行ったものである。この原料液の分析値は、ブリックス４７．４、糖度（Ｐｏｌ．）２３．２、純糖率（Ｐｕｒｉｔｙ）４８．９、還元糖分３．２％であった。
この原料を用いて、ＦＰＬＣシステム（ファルマシア株式会社製）を用いた単塔式回分分離法によるイオン交換クロマトグラフィーによる分画分離を行った。カラムにゲル型の強酸性陽イオン交換樹脂ＵＢＫ５３０、ナトリウムイオン型（商品名、三菱化学株式会社）５００ｍｌを充填した。カラムは内径２６ｍｍ、高さ１０００ｍｍで、フローアダプター付きであった。通液条件は、溶離液として脱気した蒸留水を用い、流速ＳＶ＝０．５ｈｒ−１（４．１７ｍｌ／分）、温度６０℃で行った。
約２５ｍｌの原料をカラムに供与した。分画条件は、原料供与３０分後から溶出液の回収を開始し、試験管１本当たり３．６分間（約１５ｍｌ／本）回収し、全部で３０本回収した。
得られた３０画分についての波長４２０ｎｍの吸光度、電気伝導度、および糖濃度を測定し、図１に示した。ここで、吸光度測定のためには、０．５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．５）２ｍｌに各画分０．１ｍｌを加えて試料とした。電気伝導度測定のためには、各画分を蒸留水で０．５％に希釈して試料とした。糖濃度はＨＰＬＣにより測定された。
各ピークと抗酸化効果の関係を調べるため、波長４２０ｎｍの吸光ピーク部分を４つに、また蔗糖のピーク部分を３つに、蔗糖のピーク以降を１つにまとめた。すなわち、画分３および４を合わせてサンプル１に、画分５および６を合わせてサンプル２に、画分７および８を合わせてサンプル３に、画分９および１０を合わせてサンプル４に、画分１１および１２を合わせてサンプル５に、画分１３および１４を合わせてサンプル６に、画分１５および画分１６を合わせてサンプル７に、画分１７〜３０を合わせてサンプル８とした。画分１および２は溶出される成分がほとんどないため、廃棄した。各サンプルを１晩凍結乾燥して、粉末とした。得られた凍結乾燥粉末０．２５ｇを０．５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．５）に溶解して、１００ｍｌとし、波長４２０ｎｍでの吸光度を測定した。また、凍結乾燥固形分の分配比率、電導度灰分（塩分）、蔗糖、グルコースおよびフラクトース含量、ポリフェノール量も測定した。電導度灰分は、電気伝導度と既知の硫酸灰分の関係の検量線から係数を求め算出したもの、蔗糖、グルコースおよびフラクトース含量はＨＰＬＣ分析により求めたものを、それぞれ各サンプルの固形分重量に対する比（％）として示した。ポリフェノール含量は、カテキン水溶液を標準溶液として検量線を引き、フェノール試薬で反応させて波長７６５ｎｍの吸光度を測定するフォリン−チオカルト法により測定し、カテキン換算の値として示した。また、凍結乾燥固形分の分配比率は、全サンプルの固形分重量の合計に対する各サンプルの固形分重量の比（％）である。
各サンプルの分液結果を以下の表１に示した。また、イオン交換樹脂によるクロマトグラフィーチャートを図1に示す。
サンプル８の吸光度は０．８６と比較的高かったが、これはテーリングした成分を集めたものだからである。他のサンプルは２画分ずつを一緒にしたものであるのに対し、サンプル８は１４画分を合わせたものである。従って、４２０ｎｍの吸光度は高いが、この画分だけを本効果の画分として回収するのは効率が悪い。
糖分含量から、サンプル１〜3が非蔗糖分画分に相当し、サンプル４〜８が蔗糖分画分に相当することがわかる。
【００６２】
【表１】
0004358957.tif 000002
試験例1  甘蔗由来のエキスの急性毒性試験
製造例1で得られたエキス粉末を使用して、ラットを用いた単回経口投与毒性試験を行った。Sprauge-Dawley系ＳＰＦラット（Crj:CD(SD)）の雌雄各１６匹を５週令で入手し、約１週間検疫・馴化飼育した後、健康な動物を選び、６週令で試験に供した。投与時の体重範囲は雄で１５７〜１７１ｇ、雌で１２３〜１３３ｇであった。
飼育条件は、動物は温度２３±３℃、相対湿度５０±２％、換気回数１時間１０〜１５回、照明１日１２時間の飼育室で、固形飼料（ＣＦＲ−１（商品名）、オリエンタル酵母株式会社）および飲料水を自由に摂取させて飼育した。
投与前１晩（約１６時間）絶食させたラットに、一定の投与容量１０ｍｌ／ｋｇ体重にて、所定濃度の甘蔗由来のエキス粉末を１回強制経口投与した。対照群の動物には滅菌蒸留水のみを同様に投与した。なお、絶食後の再給餌は投与６時間後に実施した。
投与量は、２００ｍｇ／ｋｇおよび１０００ｍｇ／ｋｇの２用量とし、これに対照群を加えて計３群を使用した。１群の動物数は雌雄共５匹とした。
結果を以下の表２に示す。
【００６３】
【表２】
0004358957.tif 000003
投与後１４日間が経過した後、雌雄とも最大量の１０００ｍｇ／ｋｇでも、ラットの死亡は認められなかったので、致死量は１０００ｍｇ／ｋｇを上回るものと推定される。
飼育中いずれのラットにおいても異常は認められず、さらに各被検液投与群の雌雄の体重は、対照群とほぼ同等であった。また、いずれのラットにおいても、解剖学的検査の結果、体外表、頭部、胸部および腹部の器官・組織に異常は見られなかった。
以上の結果から、製造例１で得られたエキス粉末をラットに単回経口投与毒性試験を行ったときの毒性は極めて弱いものと考えられる。
【００６４】
実施例１（色素の退色抑制試験）
本発明の有効成分の色素の退色抑制試験を、β−カロチンの光による劣化退色を測定することより調べた。
まず、異性化糖２０．０％、クエン酸２水和物０．４３％、クエン酸ナトリウム２水和物１．２３％、β−カロチン６．５６ppmの水溶液（カロチンモデルジュース）を調製した。β−カロチン試薬は水に溶けにくいため、水溶性バイオカロチン０２（商品名、協和醗酵工業（株）製）を用い、これを上記のβ−カロチン濃度になるように添加した。これに、製造例１または３で製造したエキスを、２５０ppmまたは５００ppm添加した。陽性対照としてビタミンＣ、カテキンを１００ppm、２５０ppm添加したものも用意した。また、ブランクとして、抗酸化剤を添加しない系も用意した。調製した抗酸化剤添加または無添加のモデルジュースを３６℃、１５０００ルクスで保存し、保存開始時、保存３日後、４日後、６日後、７日後の波長４６０ｎｍにおける吸光度を測定し、その経時変化を調べた。色素残存率は、保存開始時の吸光度の値を１００％とし、ブランクの吸光度の下限値を０％とした、吸光残存率で示した。
結果を以下の表３及び図２に示した。
【００６５】
【表３】
0004358957.tif 000004
結果に示すように、本発明のエキスは退色抑制効果があることが明らかになった。
【００６６】
実施例２（脂質の過酸化抑制試験）
本発明の有効成分の脂質の過酸化抑制効果を、特開平８−２０５４４号公報より引用したA.Jitoeらの方法（Journal of Agricultural and Food Chemistry, Vol.40, pp.1337-1340 (1992)）を一部改変した方法により調べた。脂質としてはリノール酸を用い、チオシアン酸法により調べた。本法は、リノール酸の過酸化物により、第一鉄イオンが第二鉄イオンに酸化されることを利用し、生成した第二鉄イオンをチオシアン錯塩として比色する方法である。
９９．５重量％エタノール４ｍｌ、９９．５重量％エタノールに溶解した２．５３重量％リノール酸溶液４．１０４ｍｌ、５０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．０）８ｍｌおよび蒸留水３．８９６ｍｌに、製造例１または３で得た本発明の有効成分を添加した反応混合液を、スクリューキャップ付きの５０ｍｌ容量のバイアル中に入れ、暗黒化６０℃のインキュベーター中に放置した。陽性対照として、本発明のエキスの代わりにビタミンＣ、カテキンまたはα−トコフェロールを添加したものを用意した。
４日後、各反応液０．１ｍｌに、７５重量％エタノール−水混合液９．７ｍｌおよび３０重量％チオシアン酸アンモニウム水溶液０．１ｍｌを加えた。これに、０．０２Ｍ塩化第一鉄になるよう３．５％塩酸で溶解した液０．１ｍｌを加えて、正確に３分後の５００ｎｍにおける吸光度（Ｍ）を測定した。さらに、対照として、本発明の有効成分または陽性対照の成分を添加しない場合の吸光度（Ｎ）を測定して、次式：
脂質過酸化抑制率（％）＝（Ｍ−Ｎ）／Ｍ×１００
より各成分の脂質過酸化抑制率を計算した。
結果を表４に示した。
【００６７】
【表４】
0004358957.tif 000005
表４からわかるように、本発明のエキスは、脂質過酸化抑制効果を示すことが明らかである。
【００６８】
実施例３（ヒドロキシルラジカル（ＯＨ・）消去試験）
本発明の有効成分のヒドロキシルラジカル消去効果を、特開平８−２０５４４号公報より引用したB. Halliwellらのデオキシリボース法（Analytical Biochemistry，Vol.165, pp.215-219 (1987)）を一部改変した方法により調べた。本法は、フェントン試薬（過酸化水素と鉄（II）塩を混合した酸化呈色試薬）より発生するヒドロキシルラジカルとデオキシリボースとの反応により生じるマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）を、チオバルビツール酸（ＴＢＡ）と反応させることにより赤色反応物を生成させ、この生成量を５３２ｎｍにおける吸光度（ＴＢＡ値）を測定することによって求めるものである。この系にヒドロキシルラジカル消去効果を有する物質が存在すると、ＭＤＡの生成量が減少し、ＴＢＡ値が減少するので、本発明の有効成分無添加時のＴＢＡ値に対する本発明の有効成分添加時のＴＢＡ値から、ＭＤＡ生成阻害率を求め、本発明の有効成分のヒドロキシルラジカル消去率とした。
２００ｍＭＫＨ２ＰＯ４−ＫＯＨバッファー（ｐＨ７．４）０．２ｍｌ、２８ｍＭデオキシリボース水溶液０．２ｍｌ、１０ｍＭＨ２Ｏ２０．２ｍｌ、1ｍＭＦｅＣｌ３水溶液０．２ｍｌ、１ｍＭアスコルビン酸水溶液０．２ｍｌ、１．０４ｍＭＥＤＴＡ水溶液０．２ｍｌ、精製水０．６ｍｌおよび検体溶液（製造例１または３で得たエキスを、反応液中の最終濃度が後記表５に示す濃度になるように水で希釈した溶液）０．２ｍｌからなる混合液を、３７℃で１時間反応させた後、２０％トリクロル酢酸水溶液２ｍｌおよび０．６７％ＴＢＡ水溶液１ｍｌを加え、沸騰水浴中で１０分間加熱した。放冷後、５３２ｎｍにおける吸光度（Ｅ）を測定し、ＴＢＡ値を求めた。検体混合液のブランクとして、１０ｍＭＨ２Ｏ２の代わりに精製水を加えた混合液を用いて同様に吸光度（Ｆ）を測定した。さらに、対照として検体溶液の代わりに精製水を加えた場合の吸光度（Ｇ）、また対照のブランクとして検体溶液の代わりに精製水を加えかつ１０ｍＭＨ２Ｏ２の代わりに精製水を加えた場合の吸光度（Ｈ）を測定して、次式：
ヒドロキシルラジカル消去率（％）＝[（Ｇ−Ｈ）−（Ｅ−Ｆ）]／（Ｇ−Ｈ）×１００より本発明の有効成分のヒドロキシルラジカル消去率を計算した。
以上の結果を表５に示した。
【００６９】
【表５】
0004358957.tif 000006
表５からわかるように、本発明のエキスはヒドロキシルラジカル消去効果を示すことが明らかである。
【００７０】
実施例４（スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）様活性測定試験）
ＳＯＤは、スーパーオキシドアニオン（Ｏ２−・）を基質として２Ｏ２−・＋２Ｈ２→Ｈ２Ｏ２＋Ｏ２の反応を触媒する酵素であるが、酵素以外のもの（ＳＯＤ様物質）がこのスーパーオキシドアニオン消去活性を有する場合にはＳＯＤ様活性と示す。
本実施例では、ＳＯＤ様活性をＳＯＤテストワコー（商品名、和光純薬工業株式会社製）を用いて測定した。この方法はＮＢＴ還元法と言われ、その原理は以下の通りである。キサンチンにキサンチンオキシダーゼが作用するとスーパーオキシドアニオンが生成し、生成したスーパーオキシドアニオンは共存するニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）を還元し、ジホルマザンを形成するが、反応液中にＳＯＤあるいはＳＯＤ様物質が存在すると、スーパーオキシドアニオンの一部は過酸化水素と酸素（Ｏ２）に不均化され、ジホルマザン形成が減少する。このジホルマザン形成の減少の程度を、阻害率として求め、また標準ＳＯＤで阻害率の検量線を作成することにより、試料のＳＯＤ様活性として算出することができる。
キットの構成は、発色試薬：０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８．０）、０．４０ｍＭキサンチン溶液、０．２４ｍＭニトロブルーテトラゾリウム溶液、酵素液：０．０４９Ｕ／ｍｌキサンチンオキシダーゼ−０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８．０）、ブランク液：０．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８．０）、反応停止液：６９ｍＭドデシル硫酸ナトリウムである。測定方法としては、まず検体として、本発明のエキス（製造例１〜４のエキス）水溶液０．１ｍｌに発色試薬１．０ｍｌ、酵素液１．０ｍｌを添加し、３７℃で正確に２０分間インキュベートし、反応停止液２．０ｍｌを添加し反応を停止させた。この反応液を良く振り混ぜた後、波長５６０ｎｍの吸光度を測定し、この値をＥＳとした。次に、ブランクとしてエキスの溶液の代わりに蒸留水０．１ｍｌを用い、同様に吸光度を測定した値をＥＢとした。また、検体ブランクとして、検体と同濃度のエキス溶液０．１ｍｌを用い、酵素液の代わりにブランク液を添加した系で検体と同様の反応をおこない、吸光度を測定した値をＥＳＢとした。試薬ブランクとして、検体ブランク測定の系のエキス溶液の代わりに蒸留水０．１ｍｌを用い、検体ブランクと同様の測定を行った値をＥＢＢとした
。次式：
阻害率（％）＝［（ＥＢ−ＥＢＢ）−（ＥＳ−ＥＳＢ）］／（ＥＢ−ＥＢＢ）×１００
よりジホルマザン形成阻害率を求めた。
また、標準ＳＯＤを用いて、ジホルマザン形成阻害率とＳＯＤ活性の検量線を作成し、これより本発明のエキスのＳＯＤ様活性を算出した。
以上の結果を表６に示した。
【００７１】
【表６】
0004358957.tif 000007
製造例４のサンプル１〜７のうち、サンプル１〜３に高いＳＯＤ様活性が認められ、サンプル４〜７のＳＯＤ様活性は非常に低かった。すなわち、イオン交換クロマトグラフィーにより糖蜜を処理した際の溶出画分３〜８が活性の高い画分、画分９以降が活性の低い画分であることが明らかになった。サンプル８は固形分の少ない画分を集めたものであり、固形分の回収率が悪いことから、活性の測定を行わなかった。
表６からわかるように、本発明のエキスはＳＯＤ様活性を示すことが明らかである。
【００７２】
実施例５（ＤＰＰＨ法によるラジカル消去試験）
ＤＰＰＨラジカルは溶液中で安定なラジカルとして知られており、抗酸化剤との反応性をラジカルの減少量や減少速度から調べる方法に用いられる。ＤＰＰＨラジカルは、活性酸素ではないので、この方法により活性酸素以外のラジカル消去能があるのかどうかを調べることができる。ＤＰＰＨラジカルは波長５１７ｎｍの吸収を持ち、ＤＰＰＨラジカルが還元されＤＰＰＨ−Ｈになるとこの吸収が減少する。本実施例では、ＤＰＰＨラジカル消去活性を、Yamaguchiらの方法（Biosci. Biotechnol. Biochem., 62(6), 1201-1204,1998）を参考にして測定した。
【００７３】
本発明のエキスを５００ｍｇ／リットル、３００ｍｇ／リットル、２００ｍｇ／リットル、１００ｍｇ／リットル、５０ｍｇ／リットルになるように１００ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．４）に溶解したものを検液とした。この検液２ｍｌに５００μＭＤＰＰＨ−エタノール溶液を２ｍｌ添加し、激しく攪拌した。２０分間暗所に放置し、波長５１７ｎｍの吸光度を測定した。ブランクとして、検液の代わりに１００ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌバッファーを用いた系でも同様に吸光度を測定し、得られた吸光度の値を１００％とした。ブランクの吸光度の５０％の値を示す抗酸化剤の濃度を求めた。
結果を以下の表７に示した。
【００７４】
【表７】
0004358957.tif 000008
製造例４のサンプル１〜７のうち、サンプル１〜３に高いラジカル消去活性が認められ、サンプル４〜７のラジカル消去活性は非常に低かった。すなわち、イオン交換クロマトグラフィーにより糖蜜を処理した際の溶出画分３〜８が活性の高い画分、画分９以降が活性の低い画分であることが明らかになった。サンプル８は固形分の少ない画分を集めたものであり、固形分の回収率が悪いことから測定を行わなかった。
以上のことから、本発明のエキスはＤＰＰＨラジカル消去効果を示すことが明らかである。
【００７５】
実施例６（品質保持目的、芋かりんとう）
材料
干し甘藷            ４Ｋｇ
揚げ油（菜種油）    １．８リットル
衣がけ白蜜
上白糖      ２Ｋｇ
水          ８００ｍｌ
水飴        １００ｇ
食塩        １０ｇ
製造例１または３のエキス     １ｇ
上白糖、水、水飴、食塩、本発明のエキスを一緒に煮詰め、１１０℃に煮詰まったら火を弱め、８０℃で保温する。浅底の鍋に油を入れ、１８０℃で干し甘藷を狐色になるまで揚げた。次に攪拌鍋を弱火にかけ、余熱のあるうちに揚げた芋を入れ、作っておいた白蜜を徐々にかけてゆっくり攪拌し、蜜が充分乾かないうちに天板にあげ、乾きはじめたら１本ずつバラバラにほぐし、完全にさまして仕上げた。また、比較としてエキスを添加しないものも同様に製造した。得られた芋かりんとうを種類別にポリプロピレン製の袋に入れ、１袋に１つずつ５ｇ個包装のシリカゲル（新越化成工業（株）製）を入れ、３カ月保存した後、エキス添加のものと無添加のものの味質を比較した。
その結果、本発明のエキスを添加しない芋かりんとうは過酸化物に由来する異臭がするが、エキスを添加したものは、異臭がしなかった。
【００７６】
実施例７（品質保持目的、バタースカッチ）
材料
グラニュー糖    １４０ｇ
水飴            １００ｇ
バター            ２０ｇ
水                ４０ｇ
食塩                ０．６ｇ
香料（曽田香料（株）バターフレーバーCA-01282）     ０．３ｍｌ
製造例１または３のエキス       ０．０５ｇ
香料以外の材料を全部合わせ、常圧下で１５０℃まで煮詰めた。香料を添加して均一に混合し、厚さ７ｍｍに伸ばし、完全に冷える前に１．５ｃｍ×２．５ｃｍに切り分けた。
また、比較のためにエキスを添加しないものも同様に製造した。得られたバタースカッチを種類別にポリプロピレンの袋に入れ、3ヵ月保存した後、エキス添加のものと無添加のものの味質を比較した。
その結果、本発明のエキスを添加しない芋かりんとうは過酸化物に由来する異臭がするが、エキスを添加したものは異臭がしなかった。
【００７７】
実施例８（品質保持目的、アイスクリーム）
材料
牛乳          ３００ｇ
生クリーム      ７５ｇ
全卵          １１２．５ｇ
グラニュー糖  １１２．５ｇ
製造冷１または３のエキス      ０．３ｇ
香料（曽田香料（株）メープルエッセンス93H-839）   ４５μｌ
全卵をボールに割りほぐし、生クリームを合わせて良く混合し、これを▲１▼とした。牛乳にグラニュー糖を入れ、加温しながら溶解し、これを▲２▼とした。▲１▼と▲２▼を混合して漉し、急冷し、これをアイスクリーマー（（株）愛工舎製作所製）に注ぎ入れ、攪拌羽が止まるまで（約９０分間）冷却・攪拌を続けた。カップに注ぎ入れ、−３０℃の冷凍庫で硬化させた。また、比較のためエキスを添加しないものを同様に製造した。アイスクリームが硬化していることを確認したら、−２０℃の冷凍庫に移し、６ヶ月間保存し、エキスを添加したものと添加しないものの味質の違いを確認した。
その結果、エキスを添加しないアイスクリームは過酸化物に由来する異臭がするが、エキスを添加したものは、異臭を感じなかった。
【００７８】
実施例９（品質保持、中華クッキー：杏仁酥）
材料
薄力粉              １６０ｇ
ベーキングパウダー      ２ｇ
ショートニング        ７０ｇ
上白糖                ７０ｇ
全卵                  ３５ｇ
重曹                １ｇ
水                  ７．５ｇ
アーモンドスライス    １０ｇ
製造例１または３のエキス     ０．１ｇ
つや出し用卵          １７．５ｇ
粒アーモンド          １６粒
小麦粉、ベーキングパウダー、本発明のエキスを合わせて篩にかけた。ボールにショートニングを入れ、泡だて器でクリーム状になるまで良く混ぜ、砂糖を加えて良くすり混ぜた。全卵を少しずつ加えて混ぜ、ふんわりしてきたら水で溶いた重曹を入れ、薄力粉、アーモンドスライスを加えてさっくり混ぜ合わせ、生地とした。打ち粉をした台に生地を取り出して、軽くまとめ細長い棒状にし、１６等分した。一つずつ丸めた後手のひらで平たくのばし、天板に分量外のサラダオイルを塗って並べ、中心を指でへこませてつや出し用溶き卵を塗った。中央に粒アーモンドをのせた。１７０℃に熱したオーブンに入れ、充分膨れて細かいひび割れが生じ、狐色に焼けるまで（約１２分間）焼いた。また、比較のためエキスを添加しない系でも同様に製造を行った。得られた杏仁酥を種類ごとにポリプロピレン製チャック付き袋に入れ、一袋に１つずつ５ｇ個包装のシリカゲル（新越化成工業（株）製）を入れ、1ヵ月間保存し、エキスを添加したものと添加していないものの味質の比較を行った。
その結果、エキス無添加のものは過酸化物に由来する異臭があり、また油くさい味がしたが、エキス添加のものは異臭が無く、油くささも感じなかった。
【００７９】
実施例１０（品質保持、さつま揚げ）
材料
たら   正味３００ｇ
木綿豆腐      ２００ｇ
ａ
しょうが        １０ｇ
全卵            ２５ｇ
醤油            １８ｇ
味噌            １８ｇ
酒              １５ｇ
上白糖          ２７ｇ
片栗粉          ２０ｇ
製造例１または３のエキス  ０．３ｇ
サラダオイル   ２リットル
たらは三枚に卸して骨を取り、２ｃｍに切った。豆腐はさっと茹で、布巾に包んで水気を絞った。クッキングカッター（東芝（株）製、ＣＱ−２２型）に、茹でた豆腐、たら、ａの材料を加え、５０秒ほど混ぜ、ボールにあけ、３．５ｃｍ×５ｃｍ×７ｍｍ（短径×長径×厚さ）程度の小判形に成形し、サラダオイルで揚げた。また比較のため、エキスを添加しない系でも同様に製造した。得られたさつま揚げを１つずつポリ塩化ビニリデン製のラップに包み、種類ごとにポリエチレン製チャック付き袋に入れ、−２０℃で3カ月間保存した後取り出し、解凍後、においと味質の評価を行った。
その結果、本発明のエキスを添加しないさつま揚げは油やけ臭があったが、エキスを添加したさつま揚げは油やけ臭を感じなかった。
【００８０】
実施例１１（品質保持、ハンバーグ生地）
材料
牛豚合びき肉      ２００ｇ
刻み玉ねぎ          ６０ｇ
玉ねぎ炒め用サラダオイル     ６ｇ
生パン粉            ２０ｇ
牛乳                ４０ｍｌ
全卵                ２５ｇ
食塩                  １．３ｇ
製造例１または３のエキス     ０．１５ｇ
玉ねぎは熱した油でしっとりするまで炒め、広げて冷まし、▲１▼とした。パン粉に牛乳をかけ、湿らせ、▲２▼とした。ひき肉に食塩を加え混ぜ合わせ、さらに卵、▲１▼および▲２▼を加え、良く練り混ぜ合わせた。これを４等分し、厚さ１ｃｍの丸型に整え、ポリ塩化ビニリデン製のラップに１つずつ包み、ポリエチレン製チャック付き袋に入れて−２０℃で冷凍した。また比較のため、エキスを添加しない系でも同様に製造を行い、−２０℃で同様に冷凍した。そのまま−２０℃で１ヵ月間保存し、解凍後、生地のにおいを比較した。
その結果、エキスを添加しないものは肉の脂が酸化したことによる異臭があったが、エキスを添加したものは異臭を感じなかった。
【００８１】
実施例１２（品質保持、乳化タイプドレッシング）
材料
サラダオイル      ８６ｇ
玉ねぎのおろし汁    ５ｇ
レモン汁            ７．５ｇ
りんご酢          ５０ｇ
食塩                ２．６ｇ
白こしょう          ０．７ｇ
グルタミン酸ナトリウム  ０．１５ｇ
コハク酸ナトリウム      ０．０７ｇ
グルコース              ０．７５ｇ
上白糖              １．８ｇ
水    １０ｍｌ
乳化剤：サンソフトQ-182S（商品名、太陽化学（株）製） ０．５ｇ
レシチン：サンレシチンA-1（商品名、太陽化学（株）製） ０．４５ｇ
増粘多糖類：ネオソフトXO（商品名、太陽化学（株）製） ０．０４５ｇ
製造例１または３のエキス   ０．０５ｇ
ボールに乳化剤（サンソフト）を入れ、１０ｍｌの水で良く溶かしておいた。これに、玉ねぎのおろし汁、レモン汁、りんご酢、食塩、白こしょう、グルタミン酸ナトリウム、コハク酸ナトリウム、グルコース、上白糖、レシチン、増粘多糖類、本発明のエキスを順にハンドミキサーで攪拌しながら添加していった。均一になったら、ハンドミキサーで攪拌しながら、サラダオイルを徐々に添加し、乳化させ、２００ｍｌ容のドレッシング用ペットボトルに入れた。また比較のため、エキスを添加しないドレッシングを同様に製造した。得られたドレッシングを５℃の冷蔵庫に２ヵ月間保存し、保存期間中、蓋を開け、閉め、ビンを良く振るという操作を３日に１回行った。保存後に、エキス添加・無添加のドレッシングの味質とにおいの比較を行った。
その結果、エキスを添加したものは異味・異臭を感じなかったが、エキス無添加のものは過酸化物由来の異臭と玉ねぎ臭が混ざり合った異臭があった。
【００８２】
実施例１３（品質保持、煮干ふりかけ）
材料
煮干      ４０ｇ
ごま塩（丸美屋食品工業（株）製）   ７０ｇ
製造例１または３のエキスの１０％水溶液   ４ｍｌ
煮干を浅皿にいれ、５００Ｗの電子レンジで９０秒間加熱、乾燥させた。これをクッキングカッター（東芝（株）製、ＣＱ−２２型）に入れ、エキスの水溶液４ｍｌをまわしかけ、１分間ほぼ均一になる程度まで粉砕した。これをボールに開け、ごま塩と混ぜ、ポリエチレン製チャック付き袋に入れ、５ｇ個包装のシリカゲル（新越化成工業（株）製）を1袋に１つ入れ、室温保存した。また比較のため、本発明のエキスを添加しない系でも同様に製造を行い、同様に保存した。２週間保存後、ふりかけの味質、においの評価を行った。
その結果、エキスを添加しないものは魚臭さ、油やけの異臭があったが、エキスを添加したものは異臭を感じなかった。
【００８３】
実施例１４（品質保持、化粧水）
配合
Ａ  エタノール      ８ｇ
ポリオキシエチレン(60)硬化ヒマシ油   ０．５ｇ
酢酸トコフェロール     ０．０１ｇ
メチルパラベン     ０．２ｇ
Ｂ  精製水    ８３ｇ
製造例1または3のエキス    ０．００２ｇ
クエン酸      ０．０５ｇ
クエン酸ナトリウム     ０．１ｇ
グリセリン      ４ｇ
１、３−ブチレングリコール    ４ｇ
Ａに示す成分をエタノールに混合・溶解し、これをエタノール相とした。またＢに示す成分を精製水に混合・溶解し、水相とした。その後、エタノール相と水相とをホモミキサー（（株）日本精機製作所製）に入れ混合し、化粧水を得た。また比較のため、エキスを添加しない系でも同様に化粧水を製造した。得られた化粧水をそれぞれ２等分しガラス瓶に詰め、それぞれ一本は４０℃で、残り１本は０℃で１ヵ月間保存し、０℃保存のものは変質がほとんどないと考え、０℃保存したものと４０℃保存したもののにおいの差を保存による変化として評価した。
その結果、エキスを添加していない化粧水の場合、４０℃保存のものは明らかに異臭があり、０℃保存のものと差があったが、エキスを添加した化粧水は４０℃で保存したものと０℃保存のものとの間に、差が感じられなかった。
【００８４】
実施例１５（品質保持、クリーム）
Ａ  精製水    ６０ｇ
製造例１または３のエキス    ０．０５ｇ
１、３−ブチレングリコール  １０ｇ
グリセリン    １０ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム    ０．１ｇ
Ｂ  セトステアリルアルコール    ７ｇ
スクワラン    ８０ｇ
蜜ロウ      ６ｇ
還元ラノリン   １０ｇ
エチルパラベン     ０．６ｇ
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノパルミテート   ４ｇ
ステアリン酸モノグリセリド    ４ｇ
Ａの成分を加温しながら精製水に溶解し、すべて溶解したら７５℃に保ち、これを水相とした。Ｂの成分を加熱溶解し、すべて溶解したら７５℃に保ち、これを油相とした。両相を７５℃に保ったまま、水相に油相を徐々に加えながら、ホモミキサー（（株）日本精機製作所製）で攪拌し、均一に乳化した後、かき混ぜながら３０℃まで冷却してクリームを得た。また比較のため、エキスを添加しないクリームも同様に製造した。クリームは５０ｇずつ５０ｍｌ容バイアル瓶に入れ、エキス添加・無添加それぞれの１本を４０℃で保存し、もう１本を０℃で保存し、保存後のクリームのにおいの評価を行った。０℃保存のクリームは品質にほとんど変化が無いものとし、０℃保存のものと４０℃保存のものとの差を保存による差と考え比較した。
その結果、エキス無添加のクリームは４０℃保存により明らかに変質し、酸化による異臭が感じられたが、エキスを添加したクリームは４０℃保存によっても品質の変化はほとんど感じられなかった。
【００８５】
実施例１６（品質保持、ヘアトニック）
配合
Ａ  エタノール     １１０ｇ
ポリオキシエチレン（８）オレイルエーテル     ４ｇ
天然ビタミンE        ０．１ｇ
Ｂ  精製水       ７５ｇ
製造例1または3のエキス       ０．０２ｇ
グリセリン         １０ｇ
Ａの成分をエタノールに添加し、均一になるまで溶解し、これをエタノール相とした。また、Ｂの成分を精製水に添加し、均一になるまで溶解し、これを水相とした。エタノール相と水相をホモミキサー（（株）日本精機製作所製）に入れ混合し、ヘアトニックを得た。また比較のためエキスを添加しない系でも同様にヘアトニックを製造した。得られたヘアトニックは７０ｍｌずつ１００ｍｌ容のバイアル瓶に分注し、エキス添加のものと無添加のもののそれぞれ１本を４０℃で保存し、他の１本を０℃で保存した。保存開始から1ヵ月後に、０℃保存のものと４０℃保存のもののにおいを評価した。０℃保存では品質の変化はほとんど無いと考え、０℃保存のものと４０℃保存のもののにおいの差を保存による差とした。
その結果、エキスを添加しないヘアトニックの４０℃保存したものは、０℃保存のものと比較して酸化による異臭が認められたが、エキスを添加したものは、４０℃保存のものと０℃保存のものとではほとんど差が認められなかった。
【００８６】
実施例１７（品質保持、養魚用飼料）
配合
北洋魚粉   ６３０ｇ
魚肝末     ５０ｇ
カゼイン   １００ｇ
溶性デンプン   １５０ｇ
ビタミン混合物１）    ３０ｇ
主要ミネラル混合物２）   ４０ｇ
コーン油     ５０ｇ
製造例１または３のエキス     １ｇ
１）改変ハルバー処方、２）高知大学処方を使用
配合成分を混合し、押し出し造粒機（不二パウダル（株）、商品名：スパルタンリューザーＲＭＯ-2Ｈ）で顆粒化後、５０℃で乾燥し、養魚用飼料を調製した。比較のためエキスを添加していない飼料を同様に調製した。得られた飼料をポリエチレン製チャック付き袋に入れ、３５℃で２ヵ月間保存し、保存後の飼料のにおいを評価した。
その結果、エキスを添加していない飼料は酸化による異臭が感じられたが、エキスを添加したものは異臭を感じなかった。
以下に、生体内酸化によリ発生する活性酸素およびラジカル消去剤としての製剤例を挙げる。
【００８７】
製剤例１（カプセル剤）
配合                    重量部
製造例１または３のエキス ２０
コーンスターチ  １５
タルク     ８
ステアリン酸マグネシウム   ３
上記成分を混合し、６０メッシュの篩を通して粒度を調製した後、ゼラチンカプセル（日本薬局方＃０）に３００ｍｇずつ充填してカプセル剤を製造した。
【００８８】
製剤例２（散剤）
配合                    重量部
製造例１または３のエキス   １
バレイショデンプン    １
乳糖      ２
上記成分を混合し、一包当たり５００ｍｇの散剤を製造した。
【００８９】
製剤例３（錠剤）
配合                        重量部
製造例１または３のエキス  １６０
Ｄ−マンニトール     ９０
結晶セルロース     ５０
バレイショデンプン     ３０
カルボキシメチルセルロースカルシウム   １６
タルク        ５
ステアリン酸マグネシウム      ３
上記成分を混合し、６０メッシュの篩を通して粒度を調整した後、打錠機を用いて１錠当り５００ｍｇの錠剤を製造した。
【００９０】
製剤例４（グミ）
配合
製造例１または３のエキス    １０．６ｇ
グラニュー糖・水飴溶液１）  １９５ｇ
ゼラチン溶液２）     ４８．８ｇ
水       １１ｇ
１）水飴は、酵素糖化水飴(Bx.88.4)を用い、糖固形分比でグラニュー糖：水飴＝４：６になるように加熱溶解により糖液を作成し、Bx.90に調整したもの。
２）ゼラチン（新田ゼラチン（株）製、商品名：AP-250）を用い、ゼラチン重量の１．３倍量の水でゼラチンを６０℃で加熱溶解したもの。
グラニュー糖・水飴溶液を９０℃まで冷却した。これにエキスを添加・溶解し、ゼラチン溶液を添加・混合し、均一になるまで混合した。１４０℃で２時間乾燥後デシケーターで放冷したコーンスターチで作ったモールディングスターチへ充填し、２０℃、相対湿度５０％で２４時間固化させた後、型からはずし、グミを得た。
【００９１】
製剤例５（ドリンク剤）
配合                        重量部
製造例1または3のエキス   ０．５
異性化糖     ５
蜂蜜      ５
クエン酸     ０．０３
ＤＬ−リンゴ酸    ０．０２
精製水    ５０
上記成分を水に溶解し、５０ｍｌ容バイアル瓶に入れ１１５℃、５分間のオートクレーブ殺菌を行った。
【００９２】
製剤例６（バニシングクリーム）
配合                        重量部
Ａ  製造例１または３のエキス   １
プロピレングリコール   ２．５
硫酸マグネシウム    ０．２
メチルパラベン    ０．２
精製水   ３１．７
Ｂ  ワセリン   ３０
流動パラフィン  ２０
パラフィン     ７
ラノリン     ４
セスキオレイン酸ソルビタン   ４
上記成分のＡを７５℃に、Ｂを７３℃にそれぞれ加温溶解し、Ａ成分をＢ成分へ攪拌しながら徐々に加え、ホモミキサー（（株）日本精機製作所製）で乳化し、攪拌しながら急冷してクリームを得た。
【００９３】
製剤例７（パック）
配合                        重量部
ポリビニルアルコール   １５
Ａ  製造例１または３のエキス     ５
精製水     ６６．５
グリセリン       ５
プロピレングリコール     ４
Ｂ  エタノール       ８
ポリオキシエチレン（15）オレイルエーテル   １
メチルパラベン      ０．２
精製水にエキスを溶解し、ここに残りのＡ成分を入れ、室温で均一に溶解した後、ポリビニルアルコールを徐々に加えて分散させ、８０℃に加熱し、溶解した。これを冷却し、あらかじめＢ成分を混合し，均一にしたものを加えて混合し、パックを製造した。
【００９４】
製剤例８（ヘアトニック）
配合                        重量部
Ａ  エタノール     １１０
ポリオキシエチレン（8）オレイルエーテル       ４
天然ビタミンE        ０．１
Ｂ  精製水       ７５
製造例1または3のエキス       ７
グリセリン       １０
Ａの成分をエタノールに添加し、均一になるまで溶解し，これをエタノール相とした。
また、Ｂの成分を精製水に添加し、均一になるまで溶解し、これを水相とした。エタノール相と水相をホモミキサー(（株）日本精機製作所製)に入れ混合し、ヘアトニックを得た。
【００９５】
製剤例９（入浴剤）
配合                        重量部
製造例１または３のエキス   ５
炭酸水素ナトリウム  ５１
硫酸ナトリウム  ３１
塩化ナトリウム  １４
上記成分を混合し、入浴剤を得た。
【００９６】
【発明の効果】
本発明によれば、甘蔗由来のエキスを食品、飼料、化粧品および生体内の酸化を防止または抑制する抗酸化剤として使用することができる。しかも、甘蔗由来のエキスは植物由来であり、古来より生甘蔗あるいは黒糖などの含蜜糖として食してきた天然物であるため、ヒトおよび動物の健康を害することなく安全で、しかも甘蔗栽培の本来の目的である砂糖の生産と並行して行うことができるため低コストで生産することができる。また、天然物であるにもかかわらずその抗酸化効果は高く、少量で作用し、また汎用性が高いため産業上非常に有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】製造例４で行ったイオン交換樹脂を用いた分離により得た画分の吸光度、電気伝導度および糖濃度を示すグラフ。
【図２】実施例１の色素の退色抑制試験における吸光度の残存率の経時変化を示すグラフ。
【図１】
0004358957.tif 000009
【図２】
0004358957.tif 000010