(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
人間ならびに動物の緑内障あるいは頭痛の病気処置の薬剤組成物の調製に有効成分として、
N，N’-bis-（3-ヒドロキシプロピル）-トランス-2-ドデセンジアミド
N-パルミトイルエタノールアミド
N，N’-bis（2-ヒドロキシエチル）-トランス-2-ドデセンジアミド
N-パルミトイルエタノールアミド フォスフェ−ト
N-（2-ヒドロキシエチル）-10-ウンデセノイルアミド
N-パルミトイル-モルホリン
N-ラウロイル-モルホリン、および
N-ステアロイル-モルホリン
からなる群から選択される化合物を使用する方法。
【請求項２】
前記有効成分が0.1〜20ｍｇ／ｋｇ／日の用量で少なくとも３０日間投与せられる請求項１記載の使用する方法。
【請求項３】
前記有効成分が０．３〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で少なくとも３０日間投与せられる請求項１記載の使用する方法。
【請求項４】
前記薬剤組成物が経口的、非経口的、局所的あるいは経皮的に投与せられる請求項１記載の使用する方法。
【請求項５】
前記薬剤組成物が溶液あるいは懸濁液の形で静脈内、皮下あるいは筋肉内ル−トで非経口投与せられる請求項4記載の使用する方法。
【請求項６】
前記薬剤組成物が眼科用目薬あるいは固体、半固体フォ−ミュレ−ションの形、挿入用、ゲルあるいは軟膏の形で局所投与せられる請求項4記載の使用する方法。
【請求項７】
前記薬剤組成物が顆粒粉末、錠剤、ピルあるいはカプセルの形で経口投与せられる請求項4記載の使用する方法。
【請求項８】
前記薬剤組成物がクリ−ム、軟膏、ゲル、プラスタ−の形で局所的あるいは経皮的に投与され、前記有効成分が徐放性微粒子中に含まれる請求項4記載の使用する方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はカンナビノイド末梢レセプターの変調に関連した疾病の治療に、モノならびにビカルボン酸の、置換アミノアルコールまたはアミノエーテルとのアミド誘導体を治療目的で使用することに関する。
従来技術
カンナビノイドは印度大麻（カンナビス  サテイバ）中に存在する、約６０もの各種分子を包含する特定一群の精神に影響を及ぼす化合物で、その最も代表的なものはカンナビノール、カンナビジオールおよびテトラヒドロ  カンナビノールの各種異性体である。カンナビスの治療的作用効果が知られていたのは中国の古代王朝までさかのぼり、既に５０００年も前にカンナビスは喘息、偏頭痛およびある種の婦人科疾患の治療に用いられていた。こういった利用は以後確立され、１８５０年頃にはカンナビス抽出液は米国局方に収められ、１９４７年までそこに収載されていた。
カンナビノイドは各種の系および／または器管のレベルで種々の効果を及ぼすことができ、その最も重要な作用効果は中枢神経系ならびに心臓脈管系で認められている。事実、それらは気分、記憶、運動調整ならびに認識に影響を及ぼし、心博を増大しまた全身の動脈圧を変化させることが出来る。またカンナビノイドが眼内圧を低下させ呼吸ならびに内分泌系に影響を及ぼすことも衆知である（エルィー  ホリスター報告、ヘルス  アスペクト  オブ  カンナビス、ファルマコロジカル  レビュー  ３８巻、１〜２０頁、１９８６年  参照）。より近年にそれらが細胞ならびに体液免疫反応を抑制し、抗炎症性を有することが見出された。（ライフサイエンス  ２６巻、１９９１〜１９９５頁、１９８０年、エー  ダブリュ  ウイルス等、カンナビクロメンの抗炎症性作用  参照）。
しかしながら、その関連した精神に影響を及ぼす効果で依存癖ならびに常用性となる点および未だ充分には解明されていない種々の副作用（エル  イー  ホリスター  １９８６年  前述）のためカンナビスの治療的利用には論争のあるところである。
何世紀にもわたりカンナビスが使用されてきたのにもかかわらず、カンナビノイドの作用メカニズムはごく最近まで判っていなかった。１９９０年になって始めて、松田ならびに共同研究者がＧ−プロテイン結合ファミリーのレセプターに属するカンナビノイド  レセプターを確認し、かつクローンし、ＣＢ１がＧ１に結合されアデニレート  シクラーゼ作用を抑制し、また分娩感受性Ｇ−プロテインに結合されＣａ2+の流れを制御することを見出した。該レセプターは主として脳内および神経細胞ライン中に、また僅かながら末梢レベルに位置することが見出され、従って、その位置の観点から中枢レセプター（ＣＢ１）と呼ばれている（松田等、ネーチャー  ３４６巻、５６１〜５６４頁、１９９０年、ストラクチャ−オブ  カンナビノイド  レセプター  アンド  ファンクショナル  エクスプレッシオン  オブ  ザ  クローンド  ＣＤＮＡ）。レセプターの発見で特定の内生リガンドの存在が推定された。
事実、その後の研究で豚の脳から拮抗作用を示しうる、即ち競争的にカンナビノイド中枢レセプターに結合しうる物質が単離された。この物質は構造的研究、合成品との比較研究により確認されまたアラキドン酸のアミド誘導体、より詳しくは、アラキドニル  エタノールアミドであることが見出され、後日このものはアナンドアミドと称せられるに至った。このもの薬学的特徴から、幾分効力はおとるが、△９−ＴＨＣ（９位に二重結合をもつテトラヒドロ  カンナビノール）に類似の作用プロファイルをもち、その向神経作用に似ていることが実証された。この立証によりアナンドアミドはカンナビノイド中枢レセプターの内生リーガントであるとの結論に導かれた（シー  シー  フェルダー等、ＰＮＡＳ  ９０巻、７６５６〜７６６０頁、１９９３年；ピー  ビー  スミス等、Ｊ．ＰＥＴ  ２７０巻、２１９〜２２７頁  １９９４年）。
次の研究は、ＣＢ１レセプターに結合する種々の物質の単離に向けられ、これら物質は一群のアミド化合物に分類され、エル  ハヌス等によりアナドアミドと命名された（ジャーナル  オブ  ミディカル  ケミストリー  ３６巻、３０３２〜３０３４頁、１９９３年；カンナビノイド  レセプターに結合する脳内の２つの新規なる不飽和脂肪酸エタノールアミド）。アラキドン酸のエタノールアミド、但し、パルミチン酸のように脳内に内生的に存在する別の生化学的に重要な酸のエタノールアミドではないものがＣＢ１中枢レセプターを機能的に賦活しうることの発見は、ＣＢ１レセプターに親和力のある高度に不飽和な脂肪酸とエタノールアミンの他のアミドを確認することへと続いた。
カンナビノイドの多様な作用効果およびＣＢ１レセプター特殊分布が別のレセプター  サイトの存在を推定せしめることとなった。事実カンナビノイドに対する第２の別のレセプター、末梢レセプター（ＣＸ５あるいはＣＢ２）と称せられるものがクローンされた。
脾臓およびマクロファージ／大単核細胞中には存在するが中枢レベルには存在しない前記レセプターは、カンナビノイド誘発の神経に影響を及ぼさない効果を取りつぐことに役立つものとみなされた。（エス  ムンロ等、ネーチャー  ３６５巻、６１〜６５頁、１９９３年；カンナビノイドに対する末梢レセプター分子特性化）。この点に関し、△９−ＴＨＣの免疫抑制効果を誘発する能力が証明された。最近の研究結果で△９−ＴＨＣがマクロファージ作用で変質を引きおこし得ることが示された。事実、△９−ＴＨＣにさらすと賦活マクロファージの細胞活性を減じ、ＴＮＦ−αを合成し、放出し、細胞毒性として測定される。またマクロファージはＴＮＦ−α以外にいくつかの細胞溶解分子を放出するので、△９−ＴＨＣにとってターゲットと目されている（ケー  フィッシャー  ステンガー等、Ｊ．ＰＥＴ  ２６７巻、１５５８〜１５６５頁、１９９３年、腫瘍壊死ファクターαの△９−テトラヒドロ  カンナビノール抑制）。全ての上記証拠並びに免疫系でＣＢ２レセプターが差別的に広範囲に及び局在することは、前記レセプターが種々の性質の刺激、細菌ならびにビールス刺激に対する免疫ならびに消炎作用を媒介する特殊な役割をはたすことを立証するものである。
アナンドアミド、ＣＢ１中枢レセプターの内因リガンドは中枢レセプターに対するよりも約３０倍低い親和力でもってＣＢ２レセプターに結合可能で、このことは前記レセプターに対する別の内因リーガントの存在を示唆する（エル  エルアイバーセン；ネーチャー  ３６５巻、１２〜１３頁、１９９３年）。
既に述べた如くカンナビノイドの鎮痛、制吐、鎮痙、痙攣停止ならびに抗緑内障剤としての利用、及び近年見出された抗炎症剤としての利用は、カンナビノイドによる不都合な副作用ならびに精神に影響を及ぼす効果、さらには常用癖ならびに薬物依存性の故に推奨できない。（ダブリュ  エル  デューイ；カンナビノイド  ファルマコロジー  ３８巻（２）、１５１〜１７８頁、１９８６年）。双方のカンナビノイド  レセプターに無差別にアゴニストとして作用しうるある種の化合物が最近開発された。例えば  緑内障治療にジヒドロピロール−（１，２，３−ｄ，ｅ）−１．４−ベンゾオキサジン誘導体を使用すること（ＵＳＰ  ５１１２８２０）および各種神経病、偏頭痛、てんかん、緑内障等の治療に免疫調整剤あるいは向精神薬としてジフェニル−ピラゾール誘導体を使用すること（欧州特許５７６３５７）が知られている。しかしながら、これら化合物はＣＢ１中枢およびＣＢ２末梢レセプター双方に働き、著しい精神影響作用、常用癖、習慣性をもたらす。
カンナビノイドがレセプターメカニズムにより、特に種々の作用効果を媒介するレセプターに作用すること、および２つの中枢ならびに末梢レセプターは同族性が少ないことの発見に鑑み、レセプター  サブタイプに選択的に作用し、天然ならびに合成カンナビノイドの場合の如く双方のレセプターに無差別的ではなく作用する一群の薬剤の開発が重要であることは明白である。
カンナビノイド  レセプターにより媒介せられる薬理効果に関し今日まで実施せられた研究ではカンナビス誘導体の非精神影響作用効果は、ＣＢ２末梢レセプターにより媒介せられることを示している。また、ＣＢ２  レセプター位置測定では前記の非精神影響作用効果、即ち免疫系に及ぼす効果、抗炎症性、筋弛緩ならびに抗痛覚効果、および血圧上昇系への効果は前記レセプターにより媒介せられることが立証されている。
上記の証拠は明らかに、カンナビノイド末梢レセプターに選択的に作用しうる化合物で、従って前記レセプターの変調に関係した疾病に有効であり、中枢レベルでの精神に影響を及ぼす作用がなく、そういった作用に関する副作用例えば習慣性、常用癖のないものを得ることが、治療の観点から非常に重要であることが判る。
本発明者らは最近マストセル（乳腺細胞）顆粒減少プロセスの変調に有効で、神経系統障害および免疫的障害からの超大刺激により引きおこされるマスト  セル顆粒減少を制御することを意味する局所的拮抗質固有調整メカニズム手段に従い作用する一群のＮ−アシル誘導体を見出した。（ＡＬＩＡ＝オータコイド局部炎症拮抗）。前記化合物は欧州特許５５０００６号ならびに５５０００８号に記載の如く、神経障害および／または免疫的障害からの自己免疫疾患の治療、特に複合硬化乾癬症に有利に使用さられる。衆知の通り、自己免疫疾患の自己攻撃的病理現象は局部的組織損傷で生じ、そのマスト  セル中、特殊な免疫要求にかなう細胞が病因の中心的役割をはたす。
事実、マスト  セルは組織中に拡散した細胞質状集団で、その場で賦活され、いくつかの非常に細胞毒性の化学的媒介物を放出し、局部組織損傷の原因となる。マスト  セル活性は神経ならびに免疫媒介賦活システムにより、不自然に制御され、これはコルチコステロイド  ホルモンの如き全体的回路中に作用する抑制システムにより拮抗せられる。
出願人は、一群のＮ−アシル−アルカノールアミド特にＮ−アシル−モノエタノールアミドおよびＮ−アシル−ジエタノールアミドが、オ−タコイド型のメカニズムに従い局所的拮抗物質系としてマストセルに働きうることを見出した。従ってかかる化合物は例えば自己免疫病の如く急性あるいは慢性炎症に結びついた疾患の治療に好都合に使用せられる。
こういった群の化合物には、またＮ−（２−ヒドロキシエチル）−ヘキサデカンアミドあるいはＮ−パルミトイル  エタノールアミド（Ｎ−ＰＥＡ）があり、その活性は該化合物を含む抗リューマチ剤の脂質佐薬の包括的細胞保護作用確認を行っているとき１９５０年代に偶然発見された。かかる化合物の薬理作用は後日、各種薬剤により誘引される実験モデル損傷で、各種バクテリア毒素に対する動物の抵抗力を増大させる作用が研究され、こういった化合物の医薬開発へと導かれた。事実、チェコスロバキアで呼吸管の感染を抑制するのに適した錠剤型の薬剤が開発された。
そこで出願人は、Ｎ−ＰＥＡによりまた前述の各特許に記載されている広範な種類のＮ−アシル誘導体による薬理活性が一般的且つ適度な細胞保護作用に限られるものではなく、この種化合物はマスト  セル顆粒減少の変調に特に有効で、従って自己免疫症における自己侵略的作用に抑制効果を有し、炎症に関連した各種病因による疾患の細胞毒的作用ならびに障害に有効であることを見いだした。該化合物は従って、多数の炎症前メディエーターを含む予備形成マスト  セル、特に自己侵略的自己免疫プロセスに含まれる高度に細胞毒のサイトカイン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）を含む予備形成顆粒の非制御放出を抑制しうる。（アール  トムズ等、ジャーナル  オブ  ニューロイムノロジー  ３０巻、１６９〜１７７頁、１９９０年；ピー  ジー  クルーガー等、アクタ  ニューロ  スカンジ  ８１巻、３３１〜３３６頁、１９９０年）また種々の組織および器管のレベルでのレシーブプロセスでも同じである。さらにまた、本願と同一出願人の出願にかかる国際特許出願ＷＯ  ９５／２５５０９号には興奮性アミノ酸（ＥＡＡ）特にＮ−メチルＤ−アスパルテート（ＮＭＤＡ）のレセプターの超過大ならびに継続刺激による疾病の予防ならびに治療にモノおよびビカルボン酸のアミノアルコールとのＮ−アシル誘導体を利用することが記載されている。
本発明の要約
本発明者らは、アミノアルコールおよびアミノエーテルと脂肪族モノおよびビカルボン酸のアミドがカンナビノイド末梢レセプターＣＢ２に選択的に結合し、該レセプターを機能的に賦活しうることを見出した。
前記アミドは一段式（Ｉ）
0004216330.tif 000002
で表され、式中
R2およびR3は下記群のいずれかに属する。
Ａ）R2が１あるいはそれ以上のフェニルで任意的に置換されている、炭素数１〜２０の直鎖あるいは分岐鎖のヒドロキシアルキル残基で；R3がH，CH3あるいはR2と同じ基：
Ｂ）R2がアルキレン−ヒドロキシフェニル残基で、但し該芳香族環は任意的な１あるいはそれ以上の-OHおよび/または-OCH3で置換され、アルキレンは直鎖あるいは分岐鎖で炭素原子１〜２０を有し；R3がH，CH3あるいはR2と同じ基：
Ｃ）R2およびR3がそれらの結合している窒素原子とで、任意的な直鎖または分岐鎖アルキルで置換され得る炭素数５〜７の環状アミノエ−テル残基を形成する。
上記において、アルコ−ル官能基-OHは任意的に官能化され-OXとされてよく、ここにＸはアルキル、アシル、Ｏ−フォスフェ−ト、ビカルボン酸のアミアシル、アルキルスルフォネ−ト、サルフェ−ト、ジアルキルアミノアシルあるいはアミノアシルで、Ｘは一価あるいは多価無機イオンで任意的に塩化されうる。
置換基R1は下記のものでありうる。
１）炭素原子９〜２３、好ましくは１１〜１７の直鎖あるいは分岐鎖の、飽和あるいは二重結合１つを有する炭化水素残基、但し任意的に１あるいはそれ以上の-OH基で置換されうる；
２）式（II）
0004216330.tif 000003
で表される基、
式中R4は炭素原子８〜２２、好ましくは１０〜１６の直鎖あるいは分岐鎖の、飽和あるいは二重結合１つを有する炭化水素残基、但し任意的に１あるいはそれ以上の-OH基で置換されうる；R5およびR6はそれぞれR2およびR3と同じ基
従って本発明の目的は前記の誘導体あるいは、より可溶性および／または徐放性のその誘導体をカンナビノイド末梢アクセプタ−の変調に関連した哺乳動物の疾病治療薬剤組成物の有効成分として使用するにある。
図面の説明
図１はＡ）ラッテ脾臓、Ｂ）ラッチ腹膜マストセル  カルチャ−、Ｃ）ＲＢＬ−２Ｈ３セル  カルチャ−でのポリメラ−ゼ  チェ−ン  反応（ＰＣＲ）により増幅されたカンナビノイド末梢レセプタ−の特殊なハイアブリッド形成を示す。
図２は小脳の肉芽細胞（図２Ａ）および小脳（図２Ｂ）でのその場でのハイブリッド形成により検出される特殊  mRNA-CB2カンナビノイド末梢レセプタ−を示す。
発明の詳細
アミノアルコ−ルあるいはアミノエ−テルとモノおよびビカルボン酸のアミドがカンナビノイド末梢レセプタ−に選択的に作用し、前記レセプタ−の変調に関連した疾患治療に適しているとの本発明の特徴ならびに利点について以下詳細に述べる。
本発明者らはＮ−ＰＥＡの活性および本発明のアミド類の活性が従来衆知の如き包括的な細胞保護作用あるいはマストセル顆粒減少での抑制作用あるいは神経細胞での興奮性アミノ酸細胞毒への保護作用の止まらず、これらの化合物がカンナビノイド末梢レセプタ−の選択的賦活に重要且つ特殊な役割を演じていることを見いだした。
カンナビノイド末梢レセプタ−（ＣＢ２）の変調に関連した疾病の治療に有効で、あるいは前記レセプタ−の賦活により、細胞毒の必然的ネガチブな変調ならびに炎症前現象にたいし有利となる本発明のアミノアルコ−ルあるいはアミノエ−テルとモノならびにビカルボン酸のアミドは下記一般式（Ｉ）で定義せられる。
0004216330.tif 000004
R2およびR3がクラス（Ａ）に属する場合、R2は好ましくはそれが結合している窒素原子と共にモノエタノ−ルアミン、ジエタノ−ルアミン、２−ヒドロキシ−プロピルアミンあるいはジ−（ヒドロキシ−プロピル）−アミンの残基を形成し、これらの後２者の場合、対応する化合物（Ｉ）は光学活性体あるいはラセミ体であり得る。
アルコ−ル性残基R2およびR3がクラス（Ｂ）に属する場合、R2は好ましくはそれが結合している窒素原子と共にチラミンあるいは４−ヒドロキシ−３−メトキシ−ベンジルアミン残基を形成し、これらはいずれも光学活性体あるいはラセミ体であり得る。
アルコ−ル性残基R2および／またはR3がクラス（Ｃ）に属する場合、R2およびR3は好ましくはそれらが結合している窒素原子と共にモルホリン残基を形成する。ヒドロキシ基-OHは任意的に官能化されて-OXとすることが出来、Ｘはアルキル、好ましくはメチル、エチル；アシル好ましくは-CO-CH3，-CO-Ph；O-フォスフェ−ト好ましくは-PO3H2あるいは-PO2H-O-CH2-CH（OH）-CH2OH；ビカルボン酸のアミアシル好ましくは-CH2-CH2-COOH，-CO-（CH2）3-COOH；アルキルスルホネート好ましくは-SO2-CH3，-SO2-C6H5あるいは-SO2-C6H4-CH3；サルフェ−ト；ジアルキルアミノアシル好ましくは-CO-CH2−N（CH3）2；アミノアシル好ましくは-CO-CH（W）-NH2但しWは天然アミノ酸の側鎖であり、Ｘは一価あるいは二価無機イオン好ましくはＫ，Ｎａ，ＭｇあるいはＣａにより任意的に塩化せられる。
Ｘ基の機能はこれら化合物の水溶解性を大ならしめおよび／または薬剤活動性を改変しプロドラッグをあたえることにある。R1がクラス（１）に属する場合、それは隣接するカルボニルとでモノカルボン酸のアシル、好ましくはラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、パルミトオエイン酸およびオレイン酸のアシルを形成し、あるいはヒドロキシ基で置換された同族体例えばω−ヒドロキシパルミチン酸を形成する。
R1がクラス（２）に属する場合、R4は２つの隣接するカルボニルとでビカルボン酸の、好ましくはトラウマチン酸のアシルを形成する。
本発明生成物は各種の公知方法で、好ましくはアルカノ−ルアミンをカルボン酸と共に高温で溶融しアルカノ−ルアミドにするとか、アルカノ−ルアミンの窒素原子に適当なカルボン酸誘導体でアシル化するとか、あるいは酸のカルボキシルをアルキルクロロフォルメ−トで賦活し次いでアルカノ−ルアミンを用いてアミノリシスすることにより作られる。以下実施例により本発明のモノおよびビカルボン酸のアミドの製造例を示す。
実施例１
Ｎ−パルミトイル−［（Ｒ）−２−アミノ−２−フェニルエタノ−ル］の製造：
（Ｒ）−２−アミノ−２−フェニルエタノ−ル（１．３７ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水テトラヒドロフラン（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）を無水テトラヒドロフラン（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を蒸発乾固させた。粗残渣を水（２０ｍｌ）に溶かしエチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を水（１５ｍｌ）で２回洗い、これらを合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をｔ−ブチルメチルエ−テル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、ｔ−ブチルメチルエ−テル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８８％であった。
Ｎ−パルミトイル−［（Ｒ）−２−アミノ−２−フェニルエタノ−ル］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C24H41NO2
分子量                375.59
元素分析値            C=76.75%；H=11.00%；N=3.73%；O=8.52%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに> 10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  93-95℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−クロロホルム−アセトン
46/25/35；Rf=0.54
実施例２
Ｎ−パルミトイル−［（Ｓ）−２−アミノ−２−フェニルエタノ−ル］の製造：
（Ｓ）−２−アミノ−２−フェニルエタノ−ル（１．３７ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水テトラヒドロフラン（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）を無水テトラヒドロフラン（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を蒸発乾固させた。粗残渣を水（２０ｍｌ）に溶かしエチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を水（１５ｍｌ）で２回洗い、これらを合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をｔ−ブチルメチルエ−テル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、ｔ−ブチルメチルエ−テル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９１％であった。
Ｎ−パルミトイル−［（Ｓ）−２−アミノ−２−フェニルエタノ−ル］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶牲粉末
分子式                C24H41NO2
分子量                375.59
元素分析値            C=76.75%；H=11.00%；N=3.73%；O=8.52%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  92-94℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−クロロホルム−アセトン
40/25/35；Rf=0.54
実施例３
Ｎ−（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）−パルミトイルアミドの製造：
２−アミノ−１−フェニルエタノ−ル（１．３７ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水テトラヒドロフラン（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）を無水テトラヒドロフラン（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を蒸発乾固させた。粗残渣を水（２０ｍｌ）に溶かしエチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を水（１５ｍｌ）で２回洗い、これらを合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣を冷エタノ−ル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷エタノ−ル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９３％であった。Ｎ−（２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル）−パルミトイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C24H41NO2
分子量                375.59
元素分析値            C=76.75%；H=11.00%；N=3.73%；O=8.52%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  86-88℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−クロロホルム−アセトン
40/25/35；Rf=0.54
実施例４
Ｎ−パルミトイル−［（１Ｓ，２Ｓ）−（＋）−２−アミノ−１−フェニル−１，３−プロパンジオ−ル］の製造：
（１Ｓ，２Ｓ）−（＋）−２−アミノ−１−フェニル−１，３−プロパンジオ−ル（１．６７ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水ジメチルホルムアミド（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）を無水ジメチルホルムアミド（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を蒸発乾固させた。粗残渣を水（２０ｍｌ）に溶かしエチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を水（１５ｍｌ）で２回洗い、これらを合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣を冷エタノ−ル９５°（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷エタノ−ル９５°（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８９％であった。
Ｎ−パルミトイル−［（１Ｓ，２Ｓ）−（＋）−２−アミノ−１−フェニル−１，３−プロパンジオ−ル］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C25H43NO3
分子量                405.62
元素分析値            C=74.03%；H=10.68%；N=3.45%；O=11.83%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  81-83℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.72
実施例５
Ｎ−パルミトイル−［（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェドリン］の製造：
（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェドリン（１．５１ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水クロロホルム（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）を無水クロロホルム（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を蒸発乾固させた。粗残渣を水（２０ｍｌ）に溶かしエチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相をHCL 1N（１５ｍｌ）で２回さらに水（１５ｍｌ）で２回洗い、これらを合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣を冷アセトニトリル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷アセトニトリル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９３％であった。
Ｎ−パルミトイル−［（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェドリン］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C25H43NO2
分子量                389.62
元素分析値            C=77.07%；H=11.12%；N=3.59%；O=8.21%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  83-85℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.75
実施例６
Ｎ−ラウロイル−［（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェドリン］の製造：
（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェドリン（１．５１ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水クロロホルム（５０ml）に０℃で溶解した。ラウロイルクロライド（２．１９ｇ；１０mmol）を無水クロロホルム（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ml）で２回、次いで水（１５ｍｌ）で２回洗った。水性相をクロロホルム（１５ｍｌ）で２回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣を冷アセトニトリル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷アセトニトリル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８９％であった。
Ｎ−ラウロイル−［（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェドリン］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C21H35NO2
分子量                333.51
元素分析値            C=75.63%；H=10.58%；N=4.20%；O=9.59%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  72-74℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.70
実施例７
Ｎ−パルミトイル−［（１Ｒ，２Ｓ）−（−）−ノルエフェドリン］の製造：
（１Ｒ，２Ｓ）−（−）−ノルエフェドリン（１．５１ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水クロロホルム（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）を無水クロロホルム（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を真空下、蒸発乾固させた。粗残渣をを水（２０ｍｌ）に溶かしエチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（１５ｍｌ）で２回，次に水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。冷アセトニトリル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷アセトニトリル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９０％であった。
Ｎ−パルミトイル−［（１Ｒ，２Ｓ）−（−）−ノルエフェドリン］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C25H43NO2
分子量                389.62
元素分析値            C=77.07%；H=11.12%；N=3.59%；O=8.21%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  82-84℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.56
実施例８
Ｎ−ラウロイル−［（１Ｒ，２Ｓ）−（−）−ノルエフェドリン］の製造：
（１Ｒ，２Ｓ）−（−）−ノルエフェドリン（１．５１ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水クロロホルム（５０ml）に０℃で溶解した。ラウロイルクロライド（２．１９ｇ；１０mmol）を無水クロロホルム（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ml）で２回、次いで水（１５ｍｌ）で２回洗った。水性相をクロロホルム（１５ｍｌ）で２回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣を冷アセトニトリル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷アセトニトリル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８９％であった。
Ｎ−ラウロイル−［（１Ｒ，２Ｓ）−（−）−ノルエフェドリン］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C21H35NO2
分子量                333.51
元素分析値            C=75.63%；H=10.58%；N=4.20%；O=9.59%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  72-74℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.70
実施例９
Ｎ−パルミトイル−［（Ｓ）−（−）−２−アミノ−３−フェニル−１−プロパノ−ル］の製造：
（Ｓ）−（−）−２−アミノ−３−フェニル−１−プロパノ−ル（１．５１ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水テトラヒドロフラン（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）を無水テトラヒドロフラン（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を蒸発乾固させた。粗残渣を水（２０ｍｌ）に溶かしエチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（１５ｍｌ）で２回、水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣を冷エタノ−ル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷エタノ−ル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９４％であった。
Ｎ−パルミトイル−［（Ｓ）−（−）−２−アミノ−３−フェニル−１−プッパノ−ル］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C25H43NO2
分子量                389.62
元素分析値            C=77.07%；H=11.12%；N=3.59%；O=8.21%
有機溶媒溶解性        CHCl3に    >10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  96-98℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.70
実施例１０
Ｎ−パルミトイル−［（Ｒ）−（＋）−２−アミノ−３−フェニル−１−プロパノ−ル］の製造：
（Ｒ）−（＋）−２−アミノ−３−フェニル−１−プロパノ−ル（１．５１ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水テトラヒドロフラン（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）を無水テトラヒドロフラン（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を蒸発乾固させた。粗残渣を水（２０ｍｌ）に溶かしエチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（１５ｍｌ）で２回、水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣を冷エタノ−ル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷エタノ−ル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８９％であった。
Ｎ−パルミトイル−〔（Ｒ）−（＋）−２−アミノ−３−フェニル−１−プッパノ−ル］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C25H43NO2
分子量                389.62
元素分析値            C=77.07%；H=11.12%；N=3.59%；O=8.21%
有機溶媒溶解性        CHCl3に    >10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  96-98℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.70
実施例１１
Ｎ−（ｐ−ヒドロキシフェニルエチル）−ラウロイルアミドの製造：
チラミン（１．３７ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）をイソプロパノ−ル（５０ml）に−５℃で溶解した。ラウロイルクロライド（2.19g；10mmol）を無水クロロホルム（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を蒸発乾固させ、残渣をエチルアセテ−ト（20ml）に溶かした。得られた溶液を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回、水（１５ｍｌ）で２回洗った。水性相をエチルアセテ−ト（１５ｍｌ）で２回抽出した。有機相を合わせ骨炭で脱色し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をｔ−ブチル−メチル−エ−テル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷ｔ−ブチル−メチル−エ−テル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８９％であった。
Ｎ−（ｐ−ヒドロキシフェニルエチル）−ラウロイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C20H33NO2
分子量                319.49
元素分析値            C=75.19%；H=10.41%；N=4.38%；O=10.02%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  93-95℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.68
実施例１２
Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−ラウロイルアミドの製造：
３−アミノ−１−プロパノ−ル（０．７５ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水エチルアセテ−ト（５０ml）に０℃で溶解した。ラウロイルクロライド（2.19g；10mmol）を無水エチルアセテ−ト（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温で更に５時間攪拌した。得られた懸濁液を水（２０ｍｌ）で３回抽出し、水性相を再度エチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、約２０ｍｌまで濃縮した。この溶液を０℃で結晶化させ、結晶をろ過して分離し、エチルアセテ−ト（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９５％であった。
Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−ラウロイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C15H31NO2
分子量                257.42
元素分析値            C=69.99%；H=12.14%；N=5.44%；O=12.43%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  77-79℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.52
実施例１３
Ｎ，Ｎ’−ビス−（３−ヒドロキシプロピル）−トランス−２−ドデセンジアミドの製造：
トラウマチン酸（２．２８ｇ；１０mmol）を無水ジメチルフォルムアミド（４０ｍｌ）にピリジン（２ｍｌ）を加えて０℃で溶解した。この溶液にＮ−ヒドロキシサクシンイミド（２．５３ｇ；２２ｍｍｏｌ）とジシクロヘキシルカルボジイミド（４．１２ｇ；２０ｍｍｏｌ）とを加え、得られた混合物を０℃で２時間攪拌した。生成せるウレアをろ過して除去した。サクシンイミドエステルを含む溶液を再び０℃で攪拌し、３−アミノ−１−プロパノ−ル（２．２５ｇ；３０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で一夜攪拌し、真空下に蒸発乾固させた。残渣を２回水（６０ｍｌ）から結晶化させた。結晶をろ過して分離し、水（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９２％であった。
Ｎ，Ｎ’−ビス−（３−ヒドロキシプロピル）−トランス−２−ドデセンジアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C18H34N2O4
分子量                342.48
元素分析値            C=63.13%；H=10.01%；N=8.18%；O=18.69%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >５mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  142-143℃
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル−水−NH3（28%）
80/25/2/1；Rf=0.59
実施例１４
Ｎ−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−パルミトイルアミドの製造：
パルミチン酸（２．５７ｇ；１０mmol）と２−（メチルアミノ）−エタノ−ル（１．１３ｇ；１５mmol）の混合物を還流冷却器を付したフラスコに仕込みオイルバスで１６０℃に６時間加熱した。混合物を冷却し、エチルアセテ−ト（１００ml）に溶かし０．１Ｎ  ＮａＯＨ（２０ml）で２回、０．１Ｎ  ＨＣｌ（２０ml）で２回、さらに水（２０ml）で２回抽出した。水性相をエチルアセテ−ト（１０ml）で２回洗った。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をシリカゲル  カラム  クロマトグラフィ−で、クロロフォルム−メタノ−ル  ８５／１５で溶離させて精製した。生成物を含むフラクションを合わせ、蒸発乾固させた。これを真空乾燥させた。反応収率は約８０％であった。
Ｎ−メチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−パルミトイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色無定形粉末
分子式                C19H39NO2
分子量                313.52
元素分析値            C=72.79%；H=12.54%；N=4.47%；O=10.20%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
n-オクタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                      −
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル−水−NH3（28%）
80/25/2/1；Rf=0.80
実施例１５
２−（Ｎ−パルミトイルアミノ）−１，３−プロパンジオ−ルの製造：
２−アミノ−１，３−プロパンジオ−ル（０．９１ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水テトラヒドロフラン（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）を無水テトラヒドロフラン（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を蒸発乾固させた。粗残渣を水（２０ｍｌ）に溶かしエチルアセテ−ト（２０ｍｌ）で２回抽出した。有機相を水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣を冷エタノ−ル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、エタノ−ル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８９％であった。
２−（Ｎ−パルミトイルアミノ）−１，３−プロパンジオ−ルの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C29H39NO3
分子量                329.52
元素分析値            C=69.25%；H=11.93%；N=4.25%；O=14.57%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >５mg/ml
エタノ−ルに>５mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  124.5-126.5℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.48
実施例１６
Ｎ−パルミトイルエタノ−ルアミン  グリセロフォスフェ−トの製造：
グリセロフォスフォリルエタノ−ルアミン（２．１５ｇ；１０mmol）を、０．５Ｍ  ＮａＯＨ（４０ml）とクロロホルム（２０ml）の混液に０℃で連続攪拌下に懸濁させた。この混合物にパルミトイルクロライド（２．７５ｇ；１０mmol）を３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で一夜攪拌し、次いでＨＣｌで酸性にした。有機相を分取し、水相をクロロホルム（１０ｍｌ）で２回抽出した。有機抽出液を水（１０ｍｌ）で２回洗い、前記の有機相と合わせ蒸発乾固させた。粗生成物をシリカゲル  カラム  クロマトグラフィ−で、クロロホルム−メタノ−ル−水  ７０／３０／３．５  溶離液を使用し精製した。純粋な生成物を含むフラクションを合わせ、蒸発乾固させ残渣を真空乾燥させた。反応収率は約８６％であった。
Ｎ−パルミトイルエタノ−ルアミン  グリセロフォスフェ−トの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色無定形粉末
分子式                C21H44NO7P
分子量                453.55
元素分析値            C=55.61%；H=9.78%；N=3.06%；O=24.69%；P=6.83%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
（フォスフェ−トバッファ−５０mM,pH7.4に>１mg/ml）
融点                          −
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル−水−NH3（28%）
50/40/7/3；Rf=0.85
実施例１７
Ｎ，Ｎ’−ビス−（４−ヒドロキシブチル）−トランス−２−ドデセンジアミドの製造：
トラウマチン酸（２．２８ｇ；１０mmol）を無水ジメチルフォルムアミド（４０ｍｌ）にピリジン（２ｍｌ）を加えて０℃で溶解した。この溶液にＮ−ヒドロキシサクシンイミド（２．５３ｇ；２２ｍｍｏｌ）とジシクロヘキシルカルボジイミド（４．１２ｇ；２０mmol）とを加え、得られた混合物を０℃で２時間攪拌した。生成せるウレアをろ過して除去した。サクシンイミドエステルを含む溶液を再び０℃で攪拌し、４−アミノ−１−ブタノ−ル（２．６７ｇ；３０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で一夜攪拌し、真空下に蒸発乾固させた。残渣を２回水（６０ｍｌ）から結晶化させた。結晶をろ過して分離し、水（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９２％であった。
Ｎ，Ｎ’−ビス−（４−ヒドロキシブチル）−トランス−２−ドデセンジアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C20H38N2O4
分子量                370.53
元素分析値            C=64.83%；H=10.34%；N=7.56%；O=17.27%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >５mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  150-152℃
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル−水−NH3（28%）
80/25/2/1；Rf=0.60
実施例１８
Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−ラウロイルアミドの製造：
４−アミノ−１−ブタノ−ル（０．８９ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）をエチルアセテ−ト（５０ml）に−５℃で溶解した。ラウロイルクロライド（2.19g；10mmol）を無水エチルアセテ−ト（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１夜攪拌し、１Ｎ  ＨＣｌ（２０ml）で２回、水（１５ｍｌ）で２回洗った。水性相をエチルアセテ−ト（１５ｍｌ）で２回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空下に蒸発させた。残渣をｔ−ブチル−メチル−エ−テル（３０ｍｌ）で結晶化させ、生成物をろ過して分離し、冷ｔ−ブチル−メチル−エ−テル（５ｍｌ）で２回洗い、真空乾燥させた。反応収率は約９２％であった。
Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−ラウロイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C16H33NO2
分子量                271.45
元素分析値            C=70.80%；H=12.25%；N=5.16%；O=11.79%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  93-95℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.60
実施例１９
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−パルミトレイルアミドの製造：
パルミトレイン酸（２．５４ｇ；１０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．０９６ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）を無水クロロホルム（１００ｍｌ）に溶かした液を窒素気流下に、−１０℃で攪拌し、この液に、イソブチルクロロフォルメ−ト（１．４４ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）の無水クロロホルム（５０ｍｌ）溶液を３０分を要して滴下した。得られた混合液を−１０℃で１時間更に０℃で１時間攪拌した。この混合液にエタノ−ルアミン（０．９ｇ）を１０分間で滴下し、０℃で２時間攪拌した後蒸発乾固した。残渣をシリカゲル  カラム  クロマトグラフィ−で、クロロホルム−メタノ−ル  ９８／２  ｖ／ｖで溶離させ精製した。生成物を含む溶出液フラクションを合わせ、蒸発乾固した。残渣をアセトニトリル（３０ｍｌ）で結晶化させ、生成物をろ過して分離し、真空乾燥させた。反応収率は約９２％であった。
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−パルミトレイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C18H35NO2
分子量                297.48
元素分析値            C=72.68%；H=11.86%；N=4.71%；O=10.76%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  55-57℃
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム／メタノ−ル／水−NH3（28%）
80/25/2/1；Rf=0.79
実施例２０
Ｎ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）−オレオイルアミドの製造：
オレイン酸（２．８３ｇ；１０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１ｍｍｏｌ）を０℃でジメチルフォルムアミド（３０ｍｌ）に溶かし、イソブチルクロロフォルメ−ト（１．４４ｇ；１０．５ｍｍｏｌ）を加えた。えられた溶液を０℃で２０分攪拌し、次に４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミン塩酸塩（１．９０ｇ；１０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１ｍｍｏｌ）を加え、０℃で一夜攪拌した。得られた混合物に水（９０ｍｌ）を加え、エチルアセテ−ト（４０ｍｌ）で３回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回と水（１５ｍｌ）で２回洗浄し、有機相を合わせ、骨炭で脱色し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をシリカゲル  カラム  クロマトグラフィ−で、ヘキサン−エチルアセテ−ト−酢酸７０／３０／０．５で溶離させ精製した。生成物を含む溶出液フラクションを合わせ、蒸発乾固した。反応収率は約９０％であった。
Ｎ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）−オレオイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色無定形粉末
分子式                C26H43NO3
分子量                417.64
元素分析値            C=74.78%；H=10.38%；N=3.35%；O=11.49%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                          −
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.66
実施例２１
Ｎ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）−パルミトイルアミドの製造：
４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミド塩酸塩（１．９０ｇ；１０ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（２．２６ｇ；２２ｍｍｏｌ）を０℃でジメチルフォルムアミド（３０ｍｌ）に溶かした。パルミトイルクロライド（２．７５ｇ；１０ｍｍｏｌ）をジメチルフォルムアミド（１５ｍｌ）に溶かした溶液を攪拌下、３０分を要して滴下した。得られた混合液を０℃で一夜攪拌し、水（９０ｍｌ）を加え、ｔ−ブチル−メチル−エ−テル（４０ｍｌ）で３回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回と水（１５ｍｌ）で２回洗浄し、有機相を合わせ、骨炭で脱色し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をｔ−ブチル−メチル−エ−テル（３０ｍｌ）から結晶化させ、冷ｔ−ブチル−メチル−エ−テル（５ｍｌ）で２回洗い、真空で乾燥させた。
反応収率は約８９％であった。
Ｎ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）−パルミトイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C24H41NO3
分子量                391.60
元素分析値            C=73.61%；H=10.55%；N=3.58%；O=12.26%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                          −
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.65
実施例２２
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ラウロイルアミドの製造：
ラウリン酸（２．００ｇ；１０mmol）とエタノ−ルアミン（０．９１６ｇ；１５mmol）の混合物を還流冷却器を付したフラスコに入れオイルバスで１６０℃に６時間加熱した。反応混合物を直接８０％エタノ−ル（５０ｍｌ）から結晶化させた。結晶をろ別し８０％冷エタノ−ル（１０ｍｌ）で３回洗い、真空乾燥させた。
反応収率は約９０％であった。
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ラウロイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C14H29NO2
分子量                243.39
元素分析値            C=69.09%；H=12.01％；N=5.76%；0=13.15%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
クロロホルムに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  85-87℃
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル−水NH3（28%）
80/25/2/1；Rf=0.83
実施例２３
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ステアロイルアミドの製造：
ステアリン酸（２．８５ｇ；１０mmol）とエタノ−ルアミン（０．９１６ｇ；１５mmol）の混合物を還流冷却器を付したフラスコに入れオイルバスで１６０℃に６時間加熱した。反応混合物を直接９５％エタノ−ル（５０ｍｌ）から結晶化させた。結晶をろ別し９５％冷エタノ−ル（１０ｍｌ）で３回洗い、真空乾燥させた。
反応収率は約９０％であった。
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ステアロイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C20H41NO2
分子量                327.55
元素分析値            C=73.34%；H=12.62%；N=4.28%；O=9.77%
有機溶媒溶解性        クロロホルムに  >５mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  98-100℃
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル−水NH3（28%）
80/25/2/1；Rf=0.87
実施例２４
Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−パルミトアミドの製造：
パルミチン酸（２．７５ｇ；１０mmol）とプロパノ−ルアミン（１．１３ｇ；１５mmol）の混合物を還流冷却器を付したフラスコに入れオイルバスで１６０℃に６時間加熱した。反応混合物を直接９５％エタノ−ル（５０ｍｌ）から結晶化させた。結晶をろ別し９５％冷エタノ−ル（１０ｍｌ）で３回洗い、真空乾燥させた。
反応収率は約８０％であった。
Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）−パルミトアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C19H39NO2
分子量                313.53
元素分析値            C=72.79%；H=12.54%；N=4.47%；0=10.21%
有機溶媒溶解性        DMSO  に      >３mg/ml
n-オクタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  91-93℃
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル
95/5；Rf=0.40
実施例２５
Ｎ−パルミトイルエタノ−ルアミドの製造：
イ−  テイ  ロ−エ等の方法（Ｊ．Ａ．Ｃ．Ｓ  74, 3442-3443, 1952）に従い、エタノ−ルアミンとパルミチン酸とを還流してＮ−パルミトイルエタノ−ルアミドを合成した。即ちパルミチン酸（１ｍｏｌ）をエタノ−ルアミン（１．５ｍｏｌ）とエチルエ−テル中で窒素雰囲気中５−６時間反応させた。
反応生成物を反応混合物から抽出し、９５％エタノ−ルから０℃で結晶化させた。
Ｎ−ＰＥＡの融点は９４−９５℃であることが見いだされた。
Ｎ−パルミトイルエタノ−ルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            結晶性粉末
分子式                C18H37NO2
分子量                299.48
元素分析植            C=72.19%；H=12.45%；N=4.68%；O=10.69%
有機溶媒溶解性        温CH3OH，CHCl3，DMSOに可溶
水溶解性              不溶
融点                  94-95℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−クロロホルム
9/1；Rf=0.75
実施例２６
Ｎ，Ｎ’−ビス−（２−ヒドロキシエチル）−トランス−２−ドデセンジアミドの製造：
トラウマチン酸（４．５７ｇ；２０mmol）とトリエチルアミン（４．２６ｇ；４２mmol）を無水ＴＨＦ（１５０ｍｌ）に加え、−１０℃で攪拌し、これをイソブチルクロロフォルメ−ト（５．７４ｇ；４２mmol）をＴＨＦ（５０ｍｌ）にとかした液に３０分を要して滴下した。得られた混合物を−１０℃で２時間、さらに０℃で１５時間攪拌し、ここにエタノ−ルアミン（３．５ｇ）を３０分を要して滴下した。０℃でさらに６時間攪拌した後得られた懸濁液をろ過した。ろ液を捨て、固体を真空乾燥させた。得られた粗生成物を水（１００ｍｌ）から結晶化させ、結晶をろ取し、水（２０ｍｌ）で３回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約７８％であった。
Ｎ，Ｎ’−ビス−（３−ヒドロキシエチル）−トランス−２−ドデセンジアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C16H30N2O4
分子量                314.43
元素分析値            C=61.12%；H=9.62%；N=8.91%；O=20.35%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              95℃で    >10mg/ml
融点                  134-136℃
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル−水−NH3（28%）
80/25/2/1；Rf=0.57
実施例２７
Ｎ−パルミトイルエタノ−ルアミド  フォスフェ−トの製造：
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−パルミトイルエタノ−ルアミド（３．０ｇ；１０mmol）を無水メタンスルフォン酸（１０ｍｌ）に加え、０℃で攪拌して溶解し、これにリン酸無水物（２．１２ｇ；１５mmol）を加えた。碍られた混合物を０℃で２５時間攪拌し、反応混合物にエ−テルを加えて生成物を沈殿せしめた。沈殿物を遠心分離で分取し、真空乾燥し、冷水で洗い、再び真空で乾燥させた。得られた粗生成物を加温ｔ−ブチル−メチル−エ−テル（５０ｍｌ）で洗い、イソプロパノ−ル（５０ｍｌ）から結晶化させた。結晶をろ取し、冷イソプロパノ−ル（１０ｍｌ）で３回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８３％であった。
Ｎ−パルミトイルエタノ−ルアミド  フォスフェ−トの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C18H38NO5P
分子量                379.48
元素分析値            C=56.9%；H=10.09%；N=3.69%；O=21.08%；P=8.16%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない（フォスフェ−トバッファ−（50mM）,pH7.4，NaCl 0.9%に>１mg/ml）
融点                            −
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル−水−NH3（28%）
50/40/7/3；Rf=0.38
実施例２８
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−１０−ウンデセノイルアミドの製造：
１０−ウンデセノン酸（１．８４ｇ；１０mmol）を無水メタノ−ル（３０mmol）に溶解し、無水  H+スルフォン樹脂  ダウエックス５０Ｘ８（登録商標名）を加えた。混合物を３０℃で７２時間攪拌した。樹脂をろ別し、ろ液を蒸発乾固し、残渣にエタノ−ルアミン（０．９１６ｇ）を加え６０℃で２０時間攪拌した。反応混合物を直接メタノ−ル−水  ２／１（５０ｍｌ）から結晶化させ、結晶をろ過して分取し、冷水（１０ml）で３回洗い、最後に真空乾燥させた。反応収率は約７０％であった。
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−１０−ウンデセノイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色無定形粉末
分子式                C13H25NO2
分子量                227.35
元素分析値            C=68.68%；H=11.08%；N=6.16%；O=14.07%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  68.5-70.5℃
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル−水−NH3（28%）
88/25/2/1；Rf=0.57
実施例２９
Ｎ−パルミトイル−モルホリンの製造：
モルホリン（０．８７ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水ジメチルフォルムアミド（５０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７４ｇ；１０mmol）の溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液を減圧下に蒸発乾固させた。粗残渣を水に懸濁させて洗い、７０％冷エタノ−ル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、７０％冷エタノ−ル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９２％であった。
Ｎ−パルミトイル−モルホリンの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C20H39NO2
分子量                325.53
元素分析値            C=73.79%；H=12.08%；N=4.30%；0=9.83%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
熱エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  45-46℃
ＴＬＣ                溶離液：クロロホルム−メタノ−ル
95/5；Rf=0.94
実施例３０
Ｎ−パルミトイル−［Ｒ（−）−２−アミノ−１−プロパノ−ル］の製造：
Ｒ（−）−２−アミノ−１−プロパノ−ル（０．７５ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１ｇ；１１mmol）を無水テトラヒドロフラン（３０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７５ｇ；１０mmol）を無水テトラヒドロフラン（１５ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１夜攪拌し、水（９０ｍｌ）を加え、エチルアセテ−ト（４０ｍｌ）で３回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回洗い、水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をメタノ−ル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷メタノ−ル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８９％であった。
Ｎ−パルミトイル−［Ｒ（−）−２−アミノ−１−プロパノ−ル］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C19H39NO2
分子量                313.52
元素分析値            C=72.79%；H=12.54%；N=4.47%；O=10.21%
有機溶媒溶解性        エタノ−ルに>10mg/ml
DMSO  に    >５mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  87-89℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.63
実施例３１
Ｎ−パルミトイル−［Ｓ（＋）−２−アミノ−１−プロパノ−ル］の製造：
Ｓ（＋）−２−アミノ−１−プロパノ−ル（０．７５ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１ｇ；１１mmol）をクロロホルム（３０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７５ｇ；１０mmol）をクロロホルム（１５ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１夜攪拌し、水（６０ｍｌ）を加え、有機相を分け、水相をクロロホルム（２５ｍｌ）で２回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回洗い、水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をメタノ−ル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷メタノ−ル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９３％であった。
Ｎ−パルミトイル−［Ｓ（＋）−２−アミノ−１−プロパノ−ル］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C19H39NO2
分子量                313.52
元素分析値            C=72.79%；H=12.54%；N=4.47％；O=10.21%
有機溶媒溶解性        エタノ−ルに>10mg/ml
DMSO  に    >５mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  87-89℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.63
実施例３２
Ｎ−パルミトイル−［Ｒ（−）−１−アミノ−２−プロパノ−ル］の製造：
Ｒ（−）−１−アミノ−２−プロパノ−ル（０．７５ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１ｇ；１１mmol）を無水テトラヒドロフラン（３０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７５ｇ；１０mmol）を無水テトラヒドロフラン（１５ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１夜攪拌し、水（９０ｍｌ）を加え、エチルアセテ−ト（４０ｍｌ）で３回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回洗い、水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をメタノ−ル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷メタノ−ル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約９２％であった。
Ｎ−パルミトイル−［Ｒ（−）−１−アミノ−２−プロパノ−ル］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C19H39NO2
分子量                313.52
元素分析値            C=72.79%；H=12.54%；N=4.47%；O=10.21%
有機溶媒溶解性        エタノ−ルに>５mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  88-90℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.63
実施例３３
Ｎ−パルミトイル−［Ｓ（＋）−１−アミノ−２−プロパノ−ル］の製造：
Ｓ（＋）−１−アミノ−２−プロパノ−ル（０．７５ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１ｇ；１１mmol）をクロロホルム（３０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７５ｇ；１０mmol）をクロロホルム（１５ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１夜攪拌し、水（６０ｍｌ）を加え、有機相を分け、水相をクロロホルム（２５ｍｌ）で２回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回洗い、水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をメタノ−ル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷メタノ−ル（５ｍｌ）で２回洗浄し、真空乾燥させた。反応収率は約８８％であった。
Ｎ−パルミトイル−［Ｓ（＋）−１−アミノ−２−プロパノ−ル］の物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C19H39NO2
分子量                313.52
元素分析値            C=72.79%；H=12.54%；N=4.47%；O=10.21%
有機溶媒溶解性        エタノ−ルに>５mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  87-89℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.63
実施例３４
Ｎ−（ｐ−ヒドロキシ−フェニルエチル）−パルミトイルアミドの製造：
２−（４−ヒドロキシ−フェニル）−エチルアミン（１．３７ｇ；１０mmol）とトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）をテトラヒドロフラン（３０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７５ｇ；１０mmol）をテトラヒドロフラン（１５ml）に溶解した溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で一夜攪拌し、水（９０ｍｌ）を加え、ｔ−ブチル−メチルエ−テルで３回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回、次いで水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、動物カ−ボンで脱色し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をｔ−ブチル−メチルエ−テル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過で分離し、冷ｔ−ブチル−メチルエ−テル（５ｍｌ）で２回洗い真空乾燥させた。反応収率は約８８％であった。
Ｎ−（ｐ−ヒドロキシ−フェニルエチル）−パルミトイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色無定形粉末
分子式                C24H41NO2
分子量                375.60
元素分析値            C=76.75%；H=11.00%；N=3.73%；O=8.52%
有機溶媒溶解性        DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  105-106℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.64
実施例３５
Ｎ−（２−メトキシ−エチル）−パルミトイルアミドの製造：
２−メトキシ−エチルアミン（０．９ｇ；１２mmol）とトリエチルアミン（１．５２ｇ；１５mmol）をテトラヒドロフラン（３０ml）に０℃で溶解した。パルミトイルクロライド（２．７５ｇ；１０mmol）をテトラヒドロフラン（１５ml）に溶解した溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で一夜攪拌し、水（９０ｍｌ）を加え、エチルアセテ−ト（４０ｍｌ）で３回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回、次いで水（１５ｍｌ）で２回洗い、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。残渣をｔ−ブチル−メチルエ−テル（３０ｍｌ）から結晶化させた。生成物をろ過で分離し、冷ｔ−ブチル−メチルエ−テル（５ｍｌ）で２回洗い真空乾燥させた。反応収率は約９３％であった。
Ｎ−（２−メトキシ−エチル）−パルミトイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色無定形粉末
分子式                C19H39NO2
分子量                313.52
元素分析値            C=72.79%；H=12.54%；N=4.47%；O=10.21%
有機溶媒溶解性        エタノ−ルに>10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  73-75℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.65
実施例３６
Ｎ−ラウロイル−モルホリンの製造：
モルホリン（０．８７ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水テトラヒドロフラン（５０ml）に０℃で溶解した。ラウロイルクロライド（２．１９ｇ；１０mmol）の無水テトラヒドロフラン（２０ml）溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間、次いで室温でさらに５時間攪拌した。得られた懸濁液に水（９０ｍｌ）を加えｔ−ブチル−メチルエ−テル（４０ｍｌ）で３回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ｍｌ）で２回、水（１５ｍｌ）で２回洗浄し、有機相を合わせ、動物炭で脱色し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、真空蒸発させた。
残渣をシリカ  ゲル  カラム  クロマトグラフィ−により、溶離液としてヘキサン／エチルアセテ−ト／酢酸80/20/0.5の混液を使用し精製した。純粋生成物を含むフラクションを集め、蒸発乾固させた。残渣を真空乾燥させた。
反応収率は約９０％であった。
Ｎ−ラウロイル−モルフォリンの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            潮解性無定形粉末
分子式                C16H31NO2
分子量                269.43
元素分析値            C=71.33%；H=11.60%；N=5.20%；O=11.88%
有機溶媒に対する
溶解性                DMSO  に>10mg/ml
エタノ−ルに  >10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  21℃
ＴＬＣ                溶離液：ヘキサン−エチルアセテ−ト−酢酸
75/24/1；Rf=0.25
実施例３７
Ｎ−ステアロイル−モルフォリンの製造：
モルフォリン（０．８７ｇ；１０mmol）およびトリエチルアミン（１．１３ｇ；１１mmol）を無水ジメチルフォルムアミド（５０ml）に０℃で溶解した。ステアロイルクロライド（３．０２ｇ；１０mmol）を無水ジメチルフォルムアミド（２０ml）に溶かした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分を要して滴下した。得られた混合物を０℃で１時間更に室温で２０時間攪拌した。得られた懸濁液を真空で蒸発乾固した。粗生成物を水に懸濁して洗い、先ず冷エタノ−ル（３０ml）から、次にｔ−ブチル−メチル−エ−テル（３０ml）から結晶化させた。生成物をろ過して分離し、冷ｔ−ブチル−メチル−エ−テル（５ml）で２回洗い、真空乾燥させた。
反応収率は約８９％であった。
Ｎ−ステアロイル−モルフォリンの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C22H43NO2
分子量                325.59
元素分析値            C=74.73%；H=12.26%；N=3.96%；O=9.05%
有機溶媒に対する
溶解性                熱エタノ−ルに  >10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  60-61℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.67
実施例３８
１，１０−ビス−モルフォリニルカルボニル−トランス−１−デセンの製造：
トラウマチン酸（２．２８ｇ；１０mmol）をピリジン（２ml）と共に無水ジメチルフォルムアミド（４０ml）に０℃で溶解させた。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２．５３ｇ；２２mmol）とジシクロヘキシルカルボジイミド（４．１２ｇ；２０mmol）を加え、得られた混合物を０℃で２時間攪拌した。生成せるウレアをろ別して捨て、スクシンイミドエステルを含む液をさらに０℃で攪拌し、モルフォリン（２．６１ｇ；３２mmol）を加えた。得られた混合物を３０℃で一夜攪拌し、真空下に蒸発乾固せしめた。粗生成物を水（４０ml）に溶かしエチルアセテ−ト（４０ml）で３回抽出した。有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで脱水し真空蒸発させた。残渣をｔ−ブチル−メチル−エ−テル（５０ml）から２回結晶化させた。生成物をろ取し、冷ｔ−ブチル−メチル−エ−テル（５ml）で２回洗い、真空乾燥した。
反応収率は約８９％であった。
１，１０−ビス−モルフォリニルカルボニル−トランス−１−デセンの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C20H34N2O4
分子量                366.51
元素分析値            C=65.54%；H=9.35%；N=7.64%；O=17.46%
有機溶媒に対する
溶解性                DMSO  に      >10mg/ml
エタノ−ルに  >10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  85-87℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.55
実施例３９
Ｎ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）−ステアロイルアミドの製造：
４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジルアミン塩酸塩（１．９０ｇ；１０mmol）とトリエチルアミン（２．２６ｇ；２２mmol）をジメチルフォルムアミド（３０ml）に０℃で溶解させた。ステアロイルクロライド（３．０３ｇ；１０mmol）をジメチルフォルムアミド（１５ml）にとかした溶液を０℃で連続攪拌下に３０分をようして滴したした。得られた混合物を０℃で一夜攪拌し、水（９０ml）を加え、ｔ−ブチル−メチル−エ−テル（４０ml）で３回抽出した。有機相を１Ｎ  ＨＣｌ（２０ml）で２回、次に水（１５ml）で２回洗い、有機相を合わせ、動物炭で脱色し、無水硫酸ナトリウムで脱水し真空蒸発させた。残渣をｔ−ブチル−メチル−エ−テル（３０ml）から結晶化させた。生成物をろ取し、冷ｔ−ブチル−メチル−エ−テル（５ml）で２回洗い、真空乾燥した。
反応収率は約９１％であった。
Ｎ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシベンジル）−ステアロイルアミドの物理化学的性質は下記の通りであった。
物理的状態            白色結晶性粉末
分子式                C26H45NO3
分子量                419.65
元素分析値            C=74.42%；H=10.81%；N=3.34%；O=11.44%
有機溶媒に対する
溶解性                DMSO  に    >10mg/ml
エタノ−ルに  >10mg/ml
水溶解性              殆ど溶けない
融点                  87-89℃
ＴＬＣ                溶離液：トルエン−エタノ−ル−酢酸
65/30/5；Rf=0.66
既に述べた如く、本発明に係る一般式（Ｉ）で表されるモノならびにビカルボン酸のアミノアルコ−ルおよびアミノエ−テルとのアミド類はＣＢ２末梢レセプタ−に選択的に結合し、競争的アゴニストとして作用し、前記レセプタ−から天然ならびに既に公知の合成カンナビノイドを移動させる。また、前記アミドはＣＢ２レセプタ−を機能的に賦活し、カンナビノイドの精神に影響を及ぼす作用がない生物学的効果を擬態しまたカンナビノイドの一種より高度のあるいはそれと匹敵しうるポテンシイで作用する。
出願入はまた驚くべきことにマストセルにＣＢ２カンナビノイド末梢レセプタ−が存在することを見いだした。さらにまた、出願人は予期せぬことにＣＢ２カンナビノイド末梢レセプタ−がまた非免疫細胞あるいは組織に機能的に表れ、特に神経系で小脳の顆粒に機能的に表れ、かかるレセプタ−がまた非免疫細胞機能を調節しうることも見いだした。この極めて重要な点を以下に詳細に説明する。
Ａ）マストセルならびに非免疫細胞でのＣＢ２レセプタ−の確認：
ＣＢ２カンナビノイド末梢レセプタ−がマストセルならびに非免疫細胞（即ちニュ−ロン）に存在することを証明するため、該レセプタ−にたいするメッセンジャ−ＲＮＡの存在を、ラット腹膜マストセルの初代培養液中、ラットソリド腫瘍（ラット  バソフィリック  リュ−ケミア  ＲＢＬ）からの塩基好性肥満細胞ライン中，ならびにマウス小脳顆粒培養液中で、比較として前記レセプタ−の存在が確認されているラット脾臓ホモゲネ−ト組織を用い、試験研究した。ポリメラ−ゼ  チェ−ン  反応およびin situハイブリダイゼ−ション法がもちいられた。
▲１▼  ポリメラ−ゼ  チェ−ン  反応（ＰＣＲ）により増幅されるカンナビノイド末梢レセプタ−特異的ハイブリダイゼ−ション
組織ならびに細胞からの全mRNAの抽出
チュムチンキ−およびサッキィの方法（アナリチカル  バイオケミストリ−162巻156-159，1987）に従い、ラット腹膜マストセル、ＲＢＬ−２Ｈ３セル、およびラット脾臓から全ＲＮＡを抽出した。
５Ｘ１０6マストセル、セルＲＢＬ−２Ｈ３、あるいは５０mgの脾臓をそれぞれグアナジニウム  イソティオシアネ−ト  ５Ｍ（６００μl）と共に１．５mlポリプロピレン管エッペンドルフ（安全ロック型、登録商標名）中でホモゲナイズした。各管に２Ｍ  酢酸ナトリウム、ｐＨ５（６０μl）と、バッファ−トリス−HCl 1M，pH7.0に飽和したフェノ−ル（６００μl）を加えた。これらサンプルを渦混合器（ヘイドルプン、タイプ  REAX 2000（登録商標名））で短時間攪拌し、次いでクロロフォルム−イソアミルアルコ−ル（４９：１  ｖ／ｖ）（１２０μl）を加えた。渦混合器で１５秒かきまぜ氷中で１５分インキュベ−ションした後、サンプルを４℃で１５，０００xgで１５分遠心分離し、６００μlの上部水性液を下部の有機相の界面と全く接触しないよう注意しながら取り出し、別の管に移した。尚有機相は捨てた。水性相にイソプロパノ−ル（６００μl）を加え、振りまぜてから、該サンプルを−２０℃で少なくとも６０分インキュベ−トし、４℃で１５，０００xgで５分間遠心分離した。上澄液は捨てた。このペレットを８０％エタノ−ルで、次に無水エタノ−ルで洗い、濃縮乾固し、再び水（２０μl）に懸濁させた。このサンプル２μlを２６０nmの波長でＲＮＡ濃度の分光光度計測定に、また１％でアガロ−ズ  ゲル上でのエチジウム  ブロマイドによる視覚化試験に使用した。
ＣＢ２レセプタ−のポリメラ−ゼ  チェ−ン反応（ＰＣＲ）による逆転写ならびに増幅
上記サンプル各々から全ＲＮＡ１μgを取り出し、ミュアライン  モロニ−白血病ウイ−ルスの逆転写酵素と５０pmolの合成オリゴヌクレオチド  ＳＢＱ  ＩＤ  ＮＯ：１シ−ケンス  ５’−ＴＡＧＧＴＡＧＧＡＧＡＴＣＡＡＧＣＧ−３’（カンナビノイド末梢レセプタ−についてのmRNAコ−ド（ムンロ等ネ−チャ−365  61-65，1993）に対し補助的ならびに逆対応）を全容量２０μlで用いる、レオン等のＰＮＡＳ，91 3739-3743，1994記載の方法による逆転写に供した。３７℃で１時間反応させた後、水で転写生成物の容量を１００μlとし、その１／４をＰＣＲで増幅試験に供した。前記操作は５００μlの薄い壁の試験管に下記組成の溶液を１００μlまでいれたものの中で実施された。
50  mM TRIS HCl，pH8.3，25℃
75  mM KCl
2.5 mM MgCl2
10  mM DTT（ジチオトレイト−ル）
0.2 mM dATP，dCTP，dGTPおよびdTTP
50 pmol センス  プライマ−SEQ ID NO:2（5’-TTTCACGGTGTGGACTCC-3’）
50 pmol アンチセンス  プライマ−SEQ ID NO:3（5’-TAGGTAGGAGATCAAGCG-3’）
0.551 Taq Pol（Taq  ポリメラ−ゼ）2.T U/μl
（ポリメラ−ゼ  ストッフェル  フラグメント、セタス／パ−キン・エルマ−（登録商標名））
3%      フォルムアミド
プライマ−はカンナビノイド末梢レセプタ−に特異的であった。ＰＣＲは下記手順に従いセタス／パ−キン・エルマ−（登録商標名）のモデル９６００装置中で３５熱サイクル実施された。
温度                時間
９５℃              １  分
５４℃              １  分
７２℃              １  分
反応が終了したら３０μlの反応液を増幅生成物を可視的ならしめるため１％アガロ−スゲル上で電気泳動させ、次に２つのＰＣＲプライマ−へのインナ−プロ−ベ  ハイブリダイゼ−ションのためナイロン  フィルタ−上で転写され不動化された。
インナ−オリゴヌクレオチドを用いての特異的ハイブリダイゼ−ション
放射性トレ−サ−でラベルされたカンナビノイド末梢レセプタ−の増幅シ−ケンスに補完的な合成オリゴヌクレオチド SEQ 1D NO:4を用いたハイブリダイゼ−ションで増幅生成物の正体を調べた。
SEQ 1D NO:4のシ−ケンスは下記の通りであった。
0004216330.tif 000005
放射性ラベリングは５pmolインナ−オリゴヌクレオチドを用い３７℃で１時間下記の如く実施された。
33 pmol（α32P）-dATPニュ−イングランド  ヌクレア−）
20 U  タ−ミナル  デオキシヌクレオチド  トランスフェラ−ゼ（ＵＳバイオケミカル）
100 mM  ナトリウム  カコデイレ−ト（pH7.2）
2 mM  CoCl2
0.2 mM  2-メルカプトエタノ−ル
最終容積  20  μl
ラベルされた生成物はセファデックスＧ−５０（登録商標名）カラムでのクロマトグラフィ−により精製され、ＰＣＲ増幅生成物にとってのフィルタ−を含むハイブリダイゼ−ション溶液に加えられた。ハイブリダイゼ−ションと洗浄はサムブルック、フリツシュおよびマニアチス（モレキュラ  クロ−ニング、ア  ラボラトリ−  マニュアル、コ−ルド  スプリング  ハ−バ−  ラボラトリ−  プレス  １９８９に記載の如く標準条件下に実施された。
ハイブリダイズド  フィルタ−は、カンビノイド末梢レセプタ−  メッセンジャ−の増幅バンドの検出用オ−トラジオグラフ  フィルムに露出された。
▲２▼  mRNA−末梢カンナビノイド  レセプタ−  in situハイブリダイゼ−ション
成育雄マイス（２０−２２ｇ）の脳を２−メチル−ブタン中−８０℃で冷凍し、クリオスタットで薄片を作り、１２ｍｍ冠状セクションをポリ−Ｌ−リジン被覆スライド上に融解固定した。全てのセクションを４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）中で固定し、グレ−ドの異なる一連のエタノ−ル中で脱水した。なおこれはクロロホルム中での５分のインキュベ−ションと空気乾燥を含む。
ポリ−Ｌ−リジン被覆カバ−スリップ上で培養したマウス小脳顆粒（ビトロ−ＤＩＶ中１５日）は４％ＰＦＡ中で固定され、ＰＢＳで２回洗浄し、４℃で４８時間７０％エタノ−ル中で透析され、より高濃度のエタノ−ル中で脱水され空気乾燥せしめられた。ＣＨ２−特異的mRNAを検出するため、ムンロ等１９９３年、文献は前述）に従い合成オリゴヌクレオチド（４５mers）CB2（SEQ ID NO：4 5’-GGTGACGAGAGCTTTGTAGGTAGGTGGGTAGCACAGACATAGGTA-3が選ばれた。コントロ−ル  セクションにはランダム  シ−ケンスが利用された。全てのオリゴヌクレオチドは１０9 cpm/mgの特異アクテイビテイになるようタ−ミナル  デオキシヌクレオチジル−トランスフェラ−ゼ（ファルマキア）を用い35S-dATP（NEN）でテ−ルされた。全てのセクションが湿潤室中１．５  １０７ｄｐｍ／ｍｌの標準溶液（＊）中４２℃で一夜ハイブリダイズされた。これらセクションを次に１Ｘ  ＳＳＣ／０．１％（＊＊）ＳＤＳ中５５℃で３０分間１回、次に順次１ＸＳＳＣ中５５℃で１５分間２回、０．１ＸＳＳＣで２５℃で３０分間、オ−トクレ−ブ水で２分間洗い、エタノ−ルで脱水し、空気乾燥させた。スライドを次にフォトエマルジョン（イルフォ−ド  Ｋ５  希釈１：１  水）に漬け、４℃で５週間露出させ、現像（イルフォ−ド  フェニゾ−ル）し、定着（イルフォ−ドハイパム）させ、クレジル  バイオレットによりカウンタ−ステインさせた。
標準液調整
（＊）  ハイブリダイゼーション  カクテル  フォルムアミド：５ml，５０％；ＳＳＣ  ２０ｘ：２ml，４ｘ；デンハード  ５０ｘ：０．２ml；１ｘラウリル−サカロジル  ２０％：０．５ml，１％；デストラン  サルフェート：１ｇ，１０％；２００mM  フオスフェート  バッファーpH７．０：１ml，２０mM，水−ＤＥＰＣ適量で１０mlに、０．４５μｍフィルターを用いてろ過、−２０℃で貯蔵。
（＊＊）  クエン酸ナトリウム溶液ＳＣＳ  ２０ｘ塩化ナトリウム  １７５．３ｇおよびクエン酸ナトリウム８８．２ｇを８００ml  ＤＥＰＣ−水に溶解；ＮａＯＨ  １０ＭをpH７．２にするため使用。オートクレーブ操作のためＤＥＰＣ−水適量を加え１０００mlにする。
オートラジオグラフィ検査でラット腹腔マストセルおよびカズンＲＢＬ−２Ｈ３セル、小脳顆粒および小脳が脾臓プレパレーションと同様に末梢カンナビノイドレセプターＣＢ２に特異的なｍＲＮＡを示すことが判った。この知見は図１および２に明示されている。図１は（Ａ）ラット脾臓、（Ｂ）ラット腹腔マストセル培養液および（Ｃ）ＲＢＬ−２ＨＳ細胞培養液で、ポリメラーゼ  チェーン反応（ＰＣＲ）により増幅されたカンナビノイド末梢レセプターの特異ハイブリダイゼーションを示している。図２は、特異的ｍＲＮＡ−ＣＢ２末梢カンナビノイドレセプターｉｎ  ｓｉｔｕ  ハイブリダイゼーションを示す。
Ｂ）  結合効力検定
レセプターが機能的に表れるか否か、また本発明目的をなすアミドが特異的ならびに競争的方法で、ＣＢ２レセプターに結合しうるか否かをチェックする目的で特異的結合効力検定を実施した。この際レセプターに親和力のあることが知られているカンナビノイドと、またＣＢ１レセプターの内生リーガントであるアナンドアミドと比較した。
ａ）  ＲＢＬ−２Ｈ３セルの血漿膜の調整
−８０℃で冷凍したＲＢＬ−２Ｈ３セル（１００×１０6）を、０．２５％ｗ／ｖのトリプシン  インヒビター  タイプII−Ｓ：ソイ  ビーン（シグマ社、登録商標名）を加えたトリス−ＨＣＬバッファー液５０mM（pH７．４）の４mlと共に溶かした。セルをこのバッファーに再度懸濁させ物質化した。物質液を１，５００×ｇ，４℃で１０分間遠心分離した。得られた上澄液を集め、沈殿を先のバッファー４mlに再度懸濁させた。再懸濁した沈殿を物質化し、再び１，５００xg，４℃で５〜１０分間遠心分離に付した。得られた上澄液を前の上澄液と合わせ、５，０００xgで１０分遠心分離した。遠心分離の後、上澄液を集め、さらに４０，０００xg，４℃で３０分遠心分離した。得られた沈殿を上述のバッファー液０．５mlで脂肪酸フリーの１％牛血清アルブミンを加えたものに再度懸濁した。得られた懸濁液を４０，０００xg，４℃で３０分間遠心分離させた。得られた沈殿を集め、再度５０mMトリスＨＣＬ，１mMトリス−ＥＤＴＡ，３mM ＭｇＣｌ2を含むバッファー液、pH７．４に懸濁させ、プロティック濃度約１μｇ／μｌのものとした。このプレパレーションをフレッシュで、あるいは−８０℃で冷凍して数日以内に用いた。
ｂ）  ＲＢＬ−２Ｈ３セル膜の調製に際しての結合効力検定条件
ラベル  レセプター  アゴニスト  ３Ｈ−ＷＩＮ  ５５，２１２−２（ニューイングランド  ヌクレアーにより販売されている比放射能  ４４Ci／mmol）の飽和曲線：シラン化プラスチック管に順次、最終容積０．５mlまでの結合バッファー（５０mMトリスＨＣｌ，１mMトリス−ＢＤＴＡ，３mMＭｇＣｌ2，０．５％  ｗ／ｖ牛血清アルブミン脂肪酸フリー）０．５から２０nM（最終）まで順次減少量の３Ｈ−ＷＩＮ  ５５，２１２−２および３０μｇのａ）で作られた膜プロテインを入れた。得られた結合混合物を攪拌下に３０℃で６０分インキュベートし、４０，０００xg，２０℃で１５分間遠心分離した。
遠心分離のあと、上澄液の一部を取り、膜に連合しないリーガントの濃度を計算した。上澄液を除き、沈殿を０．５％牛血清アルブミンを含む１ml  ＰＢＳ（フオスフェート  バッファー液）で洗い、エタノールと１％トライトンＸ−１００（登録商標名）（５０／５０  ｖ／ｖ）の混液５０μlにとり、３７℃で２０分間インキュベートし、再度懸濁させた。
再懸濁物にシンチレーター液（３ml）を加えて混合し、β−カウンター中に５分間入れた。「非特異的結合」を標価するため、予めきめられた試験管に先ずラベルを付さないレセプター  アゴニスト  ＷＩＮ  ５５，２１２−２を最終濃度１５Ｍで入れ、次にラベルしたリーガントを入れた。この結合はＫｄ＝５〜１０nM，Ｂｍａｘ＝１００〜２５０pMを与える。
３Ｈ−ＷＩＮ  ５５，２１２−２結合転位
こういった競争のため３Ｈ−ＷＩＮ  ５５，２１２−２を３μＭの濃度で使用した。非放射性ＷＩＮ  ５５，２１２−２（１μＭ）が特異結合を抑制するのに用いられた。コンペテイター  ナビロン［３−（１，１−ジメチルヘプチル）−６，６ａ，７，８，１０，１０ａ−ヘキサヒドロ−１−ヒドロキシ−６，６−ジメチル−９Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］−ピラン−９−オン］およびアナンドアミドが０．１％エタノールに溶かされ、他方本発明目的の化合物が０．１％ＤＭＳＯに溶解せしめられた。
コンペテイターがラベル付リーガントより前に結合混合物に加えられた。いづれの場合にも参考特異結合の評価のために、エタノールおよびＤＭＳＯが全結合、特異結合およびコンペテイター不存在のものに同じ最終濃度で加えられた。
上述の結合効力検定で、レセプター圧出法が完全且つ機能的である証拠が得られた。第１表および第２表のデータから本発明に係るアミド誘導体はアナンドアミドおよびカンナビノイド  ナビロンと同様、レセプターに結合し、各々異なるポテンシーで合成放射性リーガント  ＷＩＮ  ５５，２１２−２と競争しうることが判る。
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Ｃ）  生物学的活動力分析
特殊刺激により誘発せられるＣＢ２  レセプター作用賦活に由来する生物学的活動力、特に本発明アミドがセロトニン  リリースを抑制する能力がＲＢＬ培養物で既知ポテンシーのカンナビノイドおよびアナンドアミドと比較して評価された。
本発明のアミド誘導体の特異結合および／または作用効果が評価された。比較のため次のものが用いられた。天然カンナビノイドの内、テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）の３種の異性体△８ＴＨＣ，△９−ＴＨＣおよび１１−ノル−△８−ＴＨＣ−９；合成カンナビノイドの内ナビロンおよびＷＩＮ  ５５，２１２−２、ならびにＣＢ１内生リーガント、アナンドアミド。
ＲＢＬ−２Ｈ３セル培養物の調製
ＲＢＬ−２Ｈ３セル培養が最低必須イーグルス  メディウム（ＭＥＭ）および４mMグルタミン、１００u/mlペニシリンならびに２０％下活性化胎児子牛血清（ＤＦＣＳ）の存在下にフラスコ（ファルコン、登録商標名）中、３７℃で５％ＣＯ2の雰囲気で実施された。
ＲＢＬ−２Ｈ３セル感作ならびに賦活
各試験で、セルを０．５mMＥＤＴＡを含むpH７．２のＰＢＳを有するフラスコから移し、５０mg/lのゲンタマイシンと１０％ＦＣＳを含む、ＲＰＭＩ−１６４０メディウム（コード６５０４、シグマ社）の存在下ウェル中に、１００，０００セル／１００μメディウム／ウェルの濃度で接種した。さらに、接種中、前記セルに１μCi／ml  ３Ｈ−セロトニン（５−ヒドロキシ−トリプタミン  ５ＨＴ，２６．４Ci／mmol，ニューイングランド  ヌクレアー）を添加してセロトニンを負荷させ、次いで１８時間（３７℃、５％ＣＯ2）インキュベートした。３Ｈ−セロトニンの存在下での１８時間インキュベーションの後、培養媒体液を除き、セルをＤＮＰ（ＡＤＮＰ）に対するマウス  モノクロナール抗体（ＩｇＥ）０．３μg/mlを含むＰＩＰＥＳ（Ｎ，Ｎ’ド−ビス−（２−エタンスルホニル）−ピペラジン、コード３７６８、シグマ社）−バッファー食塩水（１００μｌ／ウェル）、pH７．１の存在下に１時間（３７℃、５％ＣＯ2）感作した。感作媒体を除いた後、セルにジニトロフェニルと結合させた人間アルブミン０．１μg/ml（ＤＮＰ−ＨＳＡ）を含み、あるいは含まない（コントロール）さらに、天然あるいは合成カンナビノイドあるいは日本発明のアミド誘導体を含むＰＩＰＥＳ（１００μｌ／ウェル）pH７．１を３７℃、１５５分間加えて賦活させ、あるいは賦活させない（コントロール）処理を行った。インキュベーションの後、メデュウムを集め、遠心分離してＤＮＰ−ＨＳＡ−刺激され、あるいは刺激されないセルから放出された３Ｈ−セロトニン量を測定した。また平行して、セル中に存在する３Ｈ−セロトエン量を測定するため粘着セルをＰＢＳに１％トライトンＸ−１００（登録商標名）を加えた液（１００μｌ／ウェル）で溶解せしめた。いづれの場合にも、３Ｈ−セロトニンの量はキャンベラ  パッカード  １９００ＴＲ（登録商標名）のβ−カウンターを用い液体シンチログラフィーならびに放射能計数により測定した。
ＲＢＬ−２Ｈ３セル賦活中でのカンナビノイドあるいは本発明に係る誘導体の添加
ＤＮＰ感作セルでのＤＮＰ−ＨＳＡ−誘発３Ｈ−セロトニン放出に対する本発明のアミド誘導体（ＤＭＳＯストック溶液）およびカンナビノイドの、アナンドアミド（エタノール  ストック溶液）存在下あるいは不存在下の効果を評価した。この目的のため、アナンドアミドを添加しあるいは添加しないカンナビノイドあるいは本発明のアミド誘導体を所望濃度でセル賦活メジウム（ＰＩＰＥＳ±ＤＮＰ−ＨＳＡ）に加えた。いづれの場合にも、このメジウムを全最終濃度を一定に保ち（０．２％溶媒）つつ、３７℃に１５分間インキュベートした。
本発明のアミドは、０．２％ＤＭＳＯおよび０．１％無水エタノールにとかした。但し、Ｎ−パルミトイル−エタノールアミドは１％ＤＭＳＯと０．１％エタノールに溶かした。
ＲＢＬ−２Ｈ３セル賦活後の３Ｈ−セロトニン  ネット  リリースの量決定
各種サンプルでの３Ｈ−セロトニン放出量は、下記式で計算した。
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式中、ｄｐｍは毎分当たりの原子核崩壊を表す。
本発明のアミドの効力は、３Ｈ−セロトニン  ネット  リリースの％（即ちＤＮＰ−ＨＳＡ  不存在下でのリリース％を差引いた後の％）あるいは、３Ｈ−セロトニン  リリース抑制％として示された。
本発明のアミド誘導体ならびにカンナビノイドの機能的効力についての評価試験結果が第２表に示されている。これらのデータは天然カンナビノイドの△８−テトラヒドロカンナビノール（△８−ＴＨＣ）および△９−テトラヒドロカンナビノール（△９−ＴＨＣ）、合成カンナビノイドのナビロンおよびラベル付レセプター  アゴニスト  ＷＩＮ  ５５，２１２−２は、セロトニン  リリースとして測定されたＲＢＬセル免疫的賦活を濃度依存的に抑制しうることを示している。実施例１、２５および２７の化合物はマストセル賦活により誘発される効果を抑制し、カンナビノイドの１種より高度のあるいはそれに匹敵しうる効力を示す。
反対に、アナンドアミドおよび実施例１９および２８の化合物はアシル部に２つ二重結合をもつＮ−（２−ヒドロキシエチル）−リノーレイルアミドと同様、セロトニン  リリースに影響を及ぼすことは出来ず、比較として第３表に報告されている。これらのデータはレセプター機能的賦活での特異な構造上での選択性を示しており、飽和カルボン酸から誘導される化合物がレセプター賦活に続く機能的効力を表すのにより強力であることを示している。
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アナンドアミドと天然あるいは合成カンナビノイドを共にインキュベーションするとか、実施例１、９、１０、２４〜２７、３６および３９の誘導体と共にインキュベーションすると、第４表に示される如く本発明のアミドならびにカンナビノイドのセロトニン  リリース抑制能力が減じる。
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第５表のデータは、アナンドアミドと天然あるいは合成カンナビノイドを共にインキュベーションするとか、本発明のアミド誘導体と共にインキュベーションするとアナンドアミドのポテンシーが減少し、アナンドアミドが末梢レセプターに競争的拮抗作用をもたらすことを示している。従って、第１表に示した如くアナンドアミドは末梢レセプターに結合親和力を有しているが、生物学的効果を誘発することができず、レセプターに対する争奪によりカンナビノイドの保護作用と機能的に拮抗する。
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末梢レセプターでのアナンドアミドの争奪的拮抗作用は第６表に示される如く、完全態分子により働くもので、アナンドアミド代謝物によるものではない。
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密接な構造−作用関係の証拠として、第７表に示される如くアナンドアミドに似たＮ−（２−ヒドロキシエチル）−パルミトレイルアミド（実測値９）は生物学的効果を示すことなく、末梢レセプターに結合親和力を示し（第１表に示した）、また、レセプターとの争奪でカンナビノイドの保護作用に機能的に拮抗する。
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第４表および第８表の実験データは、レセプター特異性ならびに効力の度合は本発明に係るアミド誘導体のアシルならびにアミン部双方の性質に関係していることを示している。事実、実験データではレセプター賦活に関し構造−効力特異性を示している。特に前記データは、飽和カルボン酸誘導体が最も強力な作用効果を示しうること、他方、いくつかの不飽和点が存在すると末梢レセプターを機能的に賦活し得なくなることを証明している。
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上記の実験データは、カンナビノイドの精神に影響を及ぼすことのない作用を媒介する、ＣＢ２末梢レセプターの選択的賦活での正確な構造−作用効果相関関係を立証するものである。
より正確に言えば、飽和アシル鎖を有する化合物はＣＢ２末梢レセプターに結合し非常に該レセプターを機能的に賦活することができる。これに反して、アシル鎖に１以上の二重結合を有する化合物はＣＢ２レセプターに対する親和力はあるが、該レセプターを機能的に賦活することができず、従って部分争奪牲レセプター拮抗剤として作用する。
この構造的特異性の証拠として、出願人により明示したように末梢レセプターを機能的に賦活しうるパルミトイル  エタノールアミドは、中枢レセプターに結合しカンナビノイドの精神に影響を及ぼす作用と類似の作用を及ぼすことは出来ず、他方ポリ不飽和アシル鎖を有する化合物はこれとは逆である（サイエンス  ２５８、１９４６〜１９４９、１９９２；ダブリュ  エー  デバン等、カンナビノイド  レセプターに結合する脳成分の単離ならびに構造）。
また上記の実験結果はマストセルがカンナビノイド末梢レセプターを表示すること、また本発明に係るアミド誘導体がＣＢ２レセプターの争奪拮抗物質として作用し、その前記レセプターに対する親和力は天然および合成カンナビノイドの親和力より大あるいはいづれにせよそれと匹敵しうることを示している。
重要なことに、出願人は非免疫セルも機能的にカンナビノイド末梢レセプターＣＢ２を表し、これは例えば小脳顆粒、小脳、心臓および肺中にみとめられることを見出した。
前記の結果は、治療上の観点から非常に興味深いものであり、事実本発明のアミドは、カンナビノイドが悪い意味で有効なあらゆる疾患の治療に適しており、ＣＢ２末梢レセプターにのみ作用し、習慣性とか常用癖のような望ましからざる作用といったＣＢ１中枢レセプターにより媒介される作用がない。
換言すれば、その特異性の故に、本発明のアミド誘導体はＣＢ２カンナビノイド末梢レセプターに選択的に結合し、それを機能的に賦活することができる。従って、それらはＣＢ２カンナビノイド末梢レセプターの異常変調あるいは該レセプターの賦活のため必然的に細胞毒素の陰性変調あるいは前炎症性現象を生じることに関連した、あるいはいづれにせよサイトカイン、ニューロカインあるいは酵素リリースに関連した、あるいは第２メッセンジャー賦活に関連した病気の治療に重要な治療手段を構成する。
従って、前記化合物の利用は、例えば
痛覚変性を併う病気
多発性硬化症および筋萎縮性側索硬化症の如き、神経系の変性病に関連した筋痙攣
免疫系障害に関連した病気
心臓血管、ならびに眼圧障害（過大圧）、緑内障および頭痛、
嘔気、治療時の嘔気
ウィールス（ＨＩＶ）および細菌脳髄膜症、細菌性髄膜炎、チトメガロバイラスによる髄膜炎の如き、生物学的薬剤による病状
老人性痴呆、アルツハイマーおよびパーキンソンズ病の如き慢性変性病状と関連する合併悪液質症候
脈管改造と関連した心臓血管病状、即ちステント適用を含む血管形成術後の再狭窄アテローム性動脈硬化症および心臓麻痺
喘息を含む慢性呼吸障害
の如き、前記レセプターの変調に起因する病気の治療のための医薬調剤に特に有用である。
その効果の点から本発明に係るアミド誘導体は人間および動物の病気の治療のための医薬製造に好適である。
有効投与量は投与方法ならびに適用法、病気の程度に応じ変えられる。また患者の年齢、体重、健康状態によっても異なる。いづれにせよ、その使用量は少なくとも３０日間使用するとして、０．１〜２０mg/kg/die好ましくは、０．３〜１０mg/kg/dieである。
有効成分として本発明に係るアミドを含む医薬組成物は製薬的に許容しうる助剤を含み、処置さるべき病気に最も好適な形で前記有効成分を投与できいづれにせよその有効成分をできるだけ生物学的に利用せしめうる。
特に全般的な静注、皮下注射ならびに腹腔内投与用の注射溶液あるいは懸濁液、目薬の形での眼病治療溶液、挿入形態の固体あるいは半固体フォーミュレーション、ゲル、軟膏が意図される。経口用フォーミュレーションに関しては、顆粒、錠剤、ピル、カプセルが好ましい。経皮投与用としてはクリーム軟膏、ゲル、プラスター、尚、有効成分は除放性微粒子中に含まれる、が好ましい。
実施例４０    注射用バイアル
各バイアル中に下記を含む。
実施例９の化合物                                       20mg
マンニトール                                           12mg
ナトリウム  メタサルファイト                          1.3mg
ベンジン  アルコール                                   80mg
プロピレン  グリコール                                400mg
苛性ソーダ                                       pH7にする適量
注射可能フォーミュレーションのための水           2mlにする適量
実施例４    錠剤
各錠剤は下記を含む。
実施例９の化合物                                      50mg
二塩基性カルシウム  フォスフェート  ２水和物        135.2mg
微粒子セルロース                                      36mg
とうもろこし澱粉                                     7.2mg
ステアリン酸マグネシウム                             1.8mg
水添植物油                                           1.2mg
沈降シリカ                                           0.6mg
ヒドロキシ  プロピレン  エチル  セルロース           4.7mg
二酸化チタン                                         0.3mg
実施例４２    目薬
各ボトルは下記を含む。
実施例２７の化合物                                    25mg
ボラックス                                            15mg
ホウ酸                                                75mg
ポリ  ソルベート  ８０                                15mg
ラクトース                                            80mg
フェノール                                           3.9mg
ジナトリウム  エデテート                               5mg
水                                             5mlにする適量
実施例４３    ソフトカプセル
各カプセルは下記を含む。
実施例１の化合物                                     100mg
佐薬：ピーナツオイル  Ｏ．Ｐ．                       100mg
カプセルの組成
ゼラチンＯ．Ｐ．、グリセリンＯ．Ｐ．、天然塗料Ｅ１２
【図１】
0004216330.tif 000018
【図２Ａ】
0004216330.tif 000019
【図２Ｂ】
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