(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
エルカンプリの熱水抽出物又は８０％エタノール抽出物を乾燥物として０．０００１〜０．００１重量％含有することを特徴とする副腎皮質刺激ホルモンを介して促進されるメラノサイトのチロシナーゼ活性阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エルカンプリの抽出物を含有し、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）を介して促進されるメラノサイトのチロシナーゼ活性に対して、特異的に拮抗し得る阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、紫外線により生じる皮膚の色素沈着症状の防止、改善を目的として、メラニンの生成を触媒するチロシナーゼの活性を阻害するものや、生成したメラニン色素を還元する作用を有する物質が検討され、皮膚外用剤に応用されてきた。また、皮膚への紫外線照射量を軽減させる目的で、パラアミノ安息香酸化合物やベンゾフェノン誘導体などの紫外線吸収剤や酸化チタン、酸化亜鉛などの紫外線遮蔽効果を有する粉体を含有する皮膚外用剤が応用されてきた。さらに、紫外線によるメラノサイトの活性化に、α-メラノサイト刺激ホルモン（α-ＭＳＨ）、エンドセリン、幹細胞成長因子（ＳＣＦ）、ヒスタミンなどのサイトカインや活性酸素などが関与していることが明らかになり、これらの因子を制御することによる色素沈着症状の防止、改善が検討されてきた。
【０００３】
しかしながら、近年、紫外線だけでなく、ストレスによっても色素沈着症状が引き起こされることが明らかにされてきた（非特許文献１参照）。一般に、ストレスによるシミの悪化は、紫外線によって引き起こされるシミと異なり、下垂体前葉で産生される副腎皮質刺激ホルモン（Ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｃ
Ｈｏｒｍｏｎｅ : ＡＣＴＨ）が関与すると考えられている。ＡＣＴＨは副腎皮質でのステロイドホルモンの産生を促進するホルモンであるが、α−ＭＳＨの前駆体であるとともに、それ自体もメラニン色素の生成を促進する性質を有し、ストレスなどにより分泌量が増加する特徴がある。
【非特許文献１】神永博子，四宮達郎，日皮会誌，１０７(５)：６１５−６２２，１９９７.
【０００４】
ストレスにより増加した血中のＡＣＴＨは、表皮に点在するメラノサイトの細胞膜表面にあるメラノコルチンレセプター−１に結合することで、メラノサイトが活性化すると考えられている。活性化されたメラノサイト内では、チロシナーゼ合成が促進され、メラニンの生成が高まり、これが色素沈着に繋がると考えられる。また、全身性の色素沈着症状があるａｄｄｉｓｏｎ病も、副腎機能が低下して過剰分泌した血中のＡＣＴＨが原因であり、内因性のＡＣＴＨが皮膚における色素沈着に関与している可能性が考えられる。このように、ストレスにより誘導されるメラノサイトの活性化は、ＡＣＴＨを介するメラノサイトの活性化が主体であり、従来の紫外線による皮膚の色素沈着症状の防止、改善を目的とした皮膚外用剤では十分な効果が期待できない場合もある。したがって、ストレスによる色素沈着症状の防止、改善には、ＡＣＴＨによるメラノサイトの活性化を防ぐことが重要であると考えられる。ＡＣＴＨによるメラノサイトの活性化を防ぐ成分としては、ｃｏｒｔｉｃｏｓｔａｔｉｎが報告されている（非特許文献２参照）が、不安定であるとともに、生体成分であり、精製が難しいなどの問題がある。
【非特許文献２】Ｉｎｏｕｅ Ｋ．， Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．， １２１：１６５−１７１， ２００３．
【０００５】
本発明で使用するエルカンプリとは、リンドウ科（Ｇｅｎｔｉａｎａｃｅａｅ）に属する植物で、学名をＧｅｎｔｉａｎａ ｐｒｏｓｔｒａｔａ（Ｇｅｎｔｉａｎａ
ａｌｂｏｒｏｓｅａとする説もある）という。南米アマゾン地帯に自生し、ペルーでは一般名でＨｅｒｃａｍｐｕｒｉと呼ばれている。強い苦味のある薬草で、その全草は胆汁排泄促進効果があり、痩せ薬や肝炎の治療薬等に用いられている。
【０００６】
なお、エルカンプリの抽出物については、チロシナーゼ阻害作用を有することおよびメラニン生成を抑制することが開示されている（特許文献１，２参照）。しかしながら、エルカンプリの抽出物にＡＣＴＨに対する阻害作用があり、その作用を介して、ストレスにより活性化されるメラニン生成を抑制することについてはこれまで報告されていない。
【特許文献１】特開平０８−１７５９６３号公報
【特許文献２】特開２００１−１０６６１９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明においては、ＡＣＴＨを介して促進されるメラノサイトのチロシナーゼ活性を抑制し、その結果、ストレスにより生じる色素沈着に対して有効な防止、改善効果を有するチロシナーゼ活性阻害剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
この様な事情により、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、エルカンプリの抽出物が、ＡＣＴＨにより促進されるメラノサイトのチロシナーゼ活性に対して優れた抑制効果を持つことを見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のエルカンプリの抽出物を含有する副腎皮質刺激ホルモンにより促進されるメラノサイトのチロシナーゼ活性阻害剤は、ストレスによって生じるＡＣＴＨに対して特異的に拮抗して、ＡＣＴＨを介して促進されるメラノサイトのチロシナーゼ活性を阻害することにより、ストレスによる色素沈着症状の防止、改善に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明で使用するエルカンプリの抽出物とは、エルカンプリの葉、茎、花、種子、果実、根茎、根等の植物体の一部または全草から抽出して得られるものである。好ましくは、葉もしくは茎の一方、もしくは両方の混合物から抽出して得られるものが良い。
【００１１】
また、本発明で使用するエルカンプリの抽出物は、エルカンプリを抽出溶媒と共に浸漬または加熱した後、濾過し、必要ならば濃縮して得られる。抽出溶媒としては、例えば、水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）、炭化水素（ヘキサン、ペンタン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）、アセトニトリル等があげられる。これらの溶媒は単独で用いても２種以上を混合して用いてもよい。好ましくは、水あるいは水溶性溶媒（水と任意の割合で混合可能な溶媒。例えば、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）のうち１種または２種以上の溶媒を用いるのがよい。抽出物はそのまま用いてもよいし、溶媒を一部、または全部留去して用いてもよい。
【００１２】
本発明に用いるエルカンプリの抽出物は、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パップ剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、シャンプー、リンス、トリートメント、トニック等が挙げられる。
【００１３】
本発明に用いるエルカンプリの抽出物の配合量は、乾燥物として０．０００１〜０．００１重量％含有することが好ましい。添加の方法については、予め加えておいても製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【実施例１】
【００１４】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量は重量％を示す。
【００１５】
製造例１  エルカンプリ熱水抽出物
エルカンプリの茎と葉２０ｇに４００ｍＬの水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、不溶物を濾過し、その濾液を濃縮し、乾固してエルカンプリ熱水抽出物４．３ｇを得た。
【００１６】
製造例２  エルカンプリエタノール抽出物
エルカンプリの葉１００ｇに９００ｍＬの８０％エタノールを加え、常温で７日間抽出した後、不溶物を濾過し、その濾液を濃縮乾固してエルカンプリエタノール抽出物３３ｇを得た。
【００１７】
製造例３  エルカンプリ１，３−ブチレングリコール抽出物
エルカンプリの全草の乾燥物３０ｇに１０００ｍＬの１，３−ブチレングリコールと水の混合液（１：１）を加え、常温で１０日間抽出した後、不溶物を濾過し、エルカンプリ１，３−ブチレングリコール抽出物９５０ｇを得た。
【実施例２】
【００１８】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例をあげる。
【００１９】
実験例１  ＡＣＴＨによるメラノサイトの活性化に対する抑制試験
ＡＣＴＨによるメラノサイトの活性化抑制効果を下記の条件にて測定した。つまり、メラノサイトとしてＢ−１６マウスメラノーマ細胞を用い、ＡＣＴＨを添加して促進されるメラノサイトの活性化を、メラノサイトのチロシナーゼ合成量を指標に測定した。この反応系に試料を加え、チロシナーゼ合成量の生成抑制率を算出して、ＡＣＴＨによるメラノサイトの活性化抑制効果とした。
【００２０】
Ｂ−１６マウスメラノーマ細胞を９６ｗｅｌｌ ｍｉｃｒｏ−ｐｌａｔｅに１ｗｅｌｌあたり３．２×１０４個播種し、１％ＦＣＳを含むＥａｇｌｅ‘ｓ ＭＥＭ培養液で３７℃、５％ＣＯ２条件下、２日間培養した。次に、１または１０μｇ／ｍＬのエルカンプリ抽出物および４０ｎＭ  ＡＣＴＨを添加した１％ＦＣＳを含むＥａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭ培養液に培地交換し、さらに２日間培養した。その後、細胞内に生成されたチロシナーゼの活性を比色定量した。すなわち、培地を除いた後、ＰＢＳで洗浄し、５０μＬの１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ ＰＢＳ溶液を加え、３０分間撹拌して細胞を溶解し、溶解液のチロシナーゼ活性およびタンパク量を測定した。チロシナーゼ活性は、２５μＬの１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００ ＰＢＳの細胞溶解液に１００μＬの０．２５％Ｌ−ＤＯＰＡ溶液を加え、３７℃で３時間インキュベートし、４５０ｎｍの吸光度を測定し、別途測定したタンパク量で補正した。得られたチロシナーゼ生成量について、コントロールに対する試料添加時のチロシナーゼ生成量の減少率から、メラノサイトの活性化抑制率を算出した。
【００２１】
これらの試験結果を表１に示した。その結果、エルカンプリ抽出物には優れたＡＣＴＨによるメラノサイトの活性化に対する抑制効果が認められた。また、ＡＣＴＨを加えずに同様の試験を行った結果、エルカンプリ抽出物は、試料濃度1及び１０μｇ／ｍＬにおいて、メラノサイトのチロシナーゼ合成量には影響を及ぼしていなかった。したがって、ＡＣＴＨを介さずに直接エルカンプリ抽出物がメラノサイトに与える効果は非常に小さく、本試験は、エルカンプリ抽出物のＡＣＴＨによるメラノサイトの活性化に対する阻害効果をみているといえる。
【表１】
0004216173.tif 000002
【産業上の利用可能性】
【００２２】
本発明の活用例として、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができる。その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液などがあげられ、外用することにより、ストレスに由来する色素沈着症状の防止、改善効果が期待される。