(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カンナビノイド、ビタミン、ホルモン、ステロイド、ステロイド拮抗剤、非ステロイド系抗炎症剤、抗真菌剤、抗菌剤、降圧剤、抗酸化剤、抗てんかん剤、抗ウイルス剤、抗がん剤、及び抗鬱剤からなる群から選ばれる親油性物質である第一成分0.01〜50重量％；少なくとも１種の固形脂肪である脂質である第二成分25〜50重量％；及び、少なくとも１種のリン脂質である第三成分2〜40重量％を含有することを特徴とする、親油性物質の経口投与用乾燥固形脂質組成物。
【請求項２】
更に凍結保護物質、易流動性付与剤、固形担体及び希釈剤からなる群から選択されたものを含む、請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項３】
前記固形脂肪が、いずれも25℃で固形であるトリグリセリド及びトリグリセリド混合物からなる群から選択される、請求の範囲第1項記載の組成物。
【請求項４】
前記リン脂質が、レシチンである、請求の範囲第1項記載の組成物。
【請求項５】
前記リン脂質の、総脂質に対する重量比が、0.1:1から2:1である、請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項６】
前記固形担体が、ヒュームド二酸化ケイ素を、該組成物の総固形重量の５〜50％の量含む、請求の範囲第２項記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物が、単位投与剤形で存在する、請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項８】
前記投与剤形が、ゼラチンカプセル剤、錠剤、及び該組成物の懸濁液を含有する飲料からなる群から選択される、請求の範囲第７項記載の組成物。
【請求項９】
前記親油性物質が、ビタミン及びホルモンからなる群から選択される、請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項１０】
前記親油性物質が、ステロイド、ステロイド拮抗剤、非ステロイド系抗炎症剤、抗真菌剤、抗菌剤、降圧剤、抗酸化剤、抗てんかん剤、抗ウイルス剤、抗がん剤、又は抗鬱剤である、請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項１１】
前記親油性物質が、カンナビノイド又はビタミンである、請求の範囲第１項記載の組成物。
【請求項１２】
下記の工程を含む、請求の範囲第1項記載の乾燥固形脂質組成物の製造法：
適当な有機溶媒中に、第一成分〜第三成分を溶解する工程；及びこの分散液を乾燥し、乾燥固形脂質組成物を生成する工程。
【請求項１３】
下記の工程を含む、請求の範囲第１項記載の乾燥固形脂質組成物の製造法：
適当な有機溶媒中に、第一成分〜第三成分を溶解する工程；
この溶媒を蒸発し、完全に乾固する工程；
こうして得られた乾燥固形脂質混合物を、水相で、水和し、水を溶媒とする脂質分散液を得る工程；
こうして得られた脂質分散液を、ホモジナイズして、粒度をサブミクロン値域まで小さくする工程；及びこのホモジナイズした分散液を乾燥し、乾燥固形脂質混合物を生成する工程。
【請求項１４】
前記乾燥が、該分散液の噴霧乾燥又は凍結乾燥によって達成される、請求の範囲第12又は13項記載の方法。
【請求項１５】
乾燥前に、前記分散液に、更に、凍結保護物質又は固形希釈剤を添加する工程を含む、請求の範囲第12又は13項記載の方法。
【請求項１６】
乾燥前に、更に、前記分散液に、合成界面活性剤又は乳化剤を添加し、液体媒質中の該組成物の再懸濁を補助する工程を含む、請求の範囲第12又は13項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、親油性化合物の乾燥脂質混合物を含有する組成物に関し、かつこれらの組成物の製造法及び使用法に関する。
発明の背景
水への溶解度が低い親油性物質は、貧弱な経口の生物学的利用率を有することが多い。これらの化合物は、本質的には疎水性であり、難湿性及び貧弱な溶解性を示す。これらの特性は明らかに、経口用固形剤形からのそれらの吸収における、律速段階を説明し、及びその結果として、それらの生物学的利用率のその後の低下を引き起こしている。
前述の問題点に対処するために、これらの親油性物質は、通常、食用油に溶解されるか、もしくは水中油型のエマルジョン又はミクロエマルジョン中に配合された、液体製剤の形状で投与される。しかし、これらの製剤であっても、これらの多くの経口生物学的利用率は、依然として非常に低いものである。従って、今日も、各物質について増大された経口の生物学的利用率をもたらす、安全かつ有用な製剤を提供するという、未解決の必要性が依然存在している。
補酵素Q10（CoQ10）は、化学的には、2,3-ジメトキシ-5-メチル-6-デカプレニル-1,4-ベンゾキノンと称され、かつユビキノン、及びビタミンQという名称でも公知であるが、これは脂溶性キノンとして分類され、天然に生じる補酵素である。これは、ミトコンドリアの呼吸鎖の必須成分として、及び従って細胞のエネルギー産生に必要な部分として、同定されている。更に詳細に述べると、これは、フラビンタンパク質及びシトクロムの間のレドックスリンクを構成し、かつ酸化的リン酸化の有効性を制御する、電子シャトルとして作用する。ユビキノンが存在しない場合、細胞は、あらゆる生体の多くの活動に必要なエネルギーを産生することができない。
ユビキノンの名称は、偏在(ubiquitous)という単語に由来しており、実際にユビキノンは、殆ど全ての細胞において天然に生じる物質である。典型的には、この物質は、細胞のエネルギー産生工場である、ミトコンドリアと称される細胞小器官において発見されている。ミトコンドリアは、エネルギーを、栄養分物質から、その後あらゆる生体の活動に使用されるエネルギーへと転換する。
CoQ10は、これまでに、年齢に関連した退化に対する保護のための食事の補充剤として使用される可能性がある抗酸化剤として、及び多くの疾患の予防又は治療のための佐剤ビタミンとして確定されている。
補充的CoQ10は、更に、下記のシステム、状態又は疾患において、有益な影響を示すことも報告されている：歯周病、特定の血行障害、記憶障害、疲労、不規則な心拍動、高血圧、免疫不全、及び加齢過程である。更に補酵素Q10は、運動機能を改善することが可能であることが報告されている。
CoQ10は、長年酸化に抗して生体膜を保護することがわかっているにもかかわらず、これは、膜安定剤として作用する、天然の強力な脂溶性抗酸化剤として、再度興味を集めている。従ってこれは、脂質の過酸化を避け、かつ脂質の流動度を制御する−−おそらくフリーラジカルを取り除くことによって（Beyer R.E.の論文、フリーラジカル生成及び抗酸化における補酵素Qの関与、Free.Rad.Biol.Med.、8:545-565頁（1990年））。この物質の心疾患及び歯周病に対する有効作用の一部は、影響を受けた組織においてフリーラジカルを中和するその能力に起因するものであると仮定される。心疾患患者は、補酵素Q10の濃度が低く、かつ肝の補酵素Q10の産生能が、加齢に伴って減弱されることが示されている。
エネルギー産生における補酵素Q10の役割も、心臓の実際の筋肉組織が衰弱し、心臓が全身に血液を効率良く送り出すことが困難になる状態である心筋症の治療において明らかにされている。Mortensenらは、心筋症患者の長期の補酵素Q10治療の結果を発表した（Drugs under Experimental and Clinical Research、第11巻の8、581頁、1985年）。重度の心不全患者40例において、補酵素Q10で治療した場合に、69％が状態の改善を示した。補酵素Q10の心のポンプ能力に対する有益な作用は、明らかに心臓におけるエネルギー物質ATPの産生を増加するその能力によるものである。その後、増強された心臓は、全身に血液をより良く送り出すことができる。
多施設試験における心疾患の佐剤療法としての補酵素Q10の有効性も、報告されている（Lampertico M.及びComis S.の論文、補酵素Q10の心不全の佐剤療法としての有効性及び安全性に関するイタリアにおける多施設試験、Clin.Investig.、71:S129-133頁（1993年））。あらゆる心疾患の中で最も有病率が高いのは、動脈硬化症、心臓血管の硬化症及び冠動脈血栓症に合併することが多い状態である。補酵素Q10は更に、この疾患との戦いを補助し、かつ酸素不足が心臓筋肉組織を退化した症例における、ポンプ作用を増強することも提唱されている。
科学者たちは、食事補充剤補酵素Q10の歯周病に対する作用も調べている。例えば、ある研究において、120例以上の歯周病の歯科患者の組織標本を調べ、かつCoQ10の顕著な不足が認められた（Wilkinsonらの論文、補酵素Qの生物医学的及び臨床的側面、103-108頁、Elsevier/North Holland Biomedical Press、1980年）。患者が、CoQ10を含有する補充剤で治療された場合は、本疾患の進行が停止するのみならず、更に促進された組織の治癒も開始される。このような証拠は、本疾患の広がりが、補酵素Q10によって、しばしば遅延され、実際に、停止されることすらあることを示唆しているように思われる。
補酵素Q10は、冒された組織におけるエネルギー産生の増加により、治癒過程を、明らかに促進する。補酵素Q10は、更にフリーラジカルの有害な作用を中和するという、その抗酸化特性を基にした利益を提供することもある。
補酵素Q10は、培養された脳神経を、年齢に関連した及び外来の細胞毒が誘発した退化に対して保護することも示されている（Favit A.、Nicoletti F.、Soapagnini U.、及びCanonico P.L.の論文、ユビキノンによる培養神経の自然発生的及び外来細胞毒によって誘発された退化に対する保護、J.Cerebral Blood Flow and Metab.、12:638-645頁（1992年））。
補酵素Q10の毎日の推奨許容量は、決定されていない。しかしほとんどの専門家は、毎日の必要量が、ほぼ30〜60mgの間であることに、同意している。疾患を治療する場合には、通常100〜300mgの投与量が使用される。
CoQ10は、10個のイソプレノイド単位の長い側鎖のために、非常に親油性の化合物であり、かつ実際には水に不溶性である。従って、CoQ10の経口の生物学的利用率は、一般に非常に低く、かつその製剤の溶解速度に関連することが分かっている。従って、便利かつ有効な経口の生物学的利用率をもたらすのに適当な形でのこの物質の製剤は、非常に望ましい目的である。
エマルジョン及びミクロエマルジョンは、親油性薬剤の経口デリバリーのために有益な担体であり、水に不溶性の化合物の改善された経口の生物学的利用率をもたらすことが示されている（Tarr B.D.及びYalkowsky S.H.の論文、エマルジョン滴の大きさの低下による、ラットにおけるシクロスポリンの増強された腸吸収、Pharamc.Res.、6:40-43頁（1989年）；Charman S.A.、Charman W.N.、Rogge M.C.、Wilson T.D.、Dutko F.J.及びPouton C.W.の論文、薬物デリバリーシステムにおける自己乾燥脂質混合物：研究的親油性化合物の製剤及び生物薬剤学的評価、Pharmac.Res.、9:87-93頁、1992年）。
エマルジョン、リポソーム、ミクロ粒子及びナノ粒子の形状で、脂質を用いる補酵素Q10の製剤が、これまでに明らかにされている。下記特許に開示されているように、これらの公知の脂質製剤は、水性基剤中に分散された粒子を含み、かつ主に静脈内投与を含む、様々な投与経路に適している：国際特許公開第WO 95/05164号、これは、水性懸濁液中のミクロ粒子及びナノ粒子を開示している；米国特許第4,824,669号、これは、脂肪エマルジョンを開示している；米国特許第4,636,381号、これは、リポソームを開示している；及び、米国特許第4,483,873号、これは、水性分散液又は溶液を開示している。
他の補酵素Q10の脂質製剤も、改善された経口の生物学的利用率に関して、下記特許で明らかにされている：国際特許公開第WO 86/04503号、これは、高い割合の合成界面活性剤を、脂肪又はポリエチレングリコールと共に用いている；日本国特許第63188622号、これは、補酵素Q10、中鎖脂肪酸モノグリセリンエステル、及び任意成分の植物油を開示している；及び、米国特許第4,684,520号、これは、補酵素Q10とリン脂質の混合物を提供している。
カンナビノイドは、水溶解度が非常に悪い親油性物質類のひとつの例である。カンナビノイド類、例えばΔ1-テトラヒドロカンナビノール（Δ1-THC）、Δ6-テトラヒドロカンナビノール（Δ6-THC）、Δ9-テトラヒドロカンナビノール（Δ9-THC）、カンナビノール、カンナビジオール、及びそれらの代謝物は、疎水性の高い脂溶性化合物であり、かつ条件によっては、２又は３μg／ml以下の程度でのみ、水溶液中に溶解することができる（Garret及びHuntの論文、J.Pharm.Sci.、63:1056-1064頁（1974年））。
一般に、経口投与後のカンナビノイド類の全身の利用率は低く、かつ経口摂取後のテトラヒドロカンナビノール（THC）のヒトの生物学的利用率の平均推定値は、使用した担体に応じて、６〜12％を変動する。例えば、ゴマ油製剤中20mgのTHCを経口投与した後の最高血漿中濃度は、ほぼ10ng/mlである（Wallらの論文、Clin.Pharmacol.Ther.、34:352-363頁（1983年））。
デキサナビノールと称される（＋）-（3S,4S）-7-ヒドロキシ-Δ6-テトラヒドロカンナビノール-1,1-ジメチルヘプチル（HU-211とも称される）は、米国特許第4,876,276号及び第5,521,215号に、卒中、頭部外傷、及び心停止に関連した脳損傷の多作用療法（multiple-action treatment）において、新たな神経保護活性を有する、合成精神不活性カンナビノイドとして、開示されている。デキサナビノールである（＋）-（3S,4S）-7-ヒドロキシ-Δ6-テトラヒドロカンナビノール-1,1-ジメチルヘプチルの化学構造を、式Iに示す。
式I
0004219403.tif 000002
デキサナビノールは、実際に水に不溶性（50μg／ml未満）の、非常に親油性の化合物であり、かつ、他の親油性薬剤と同様に、貧弱な経口の生物学的利用率を示す。
発明の要約
本発明は、親油性物質の経口デリバリーで有用な、乾燥固形脂質組成物、並びにこのような組成物の製造法及び使用法に関連している。
本発明の乾燥固形脂質混合物は、哺乳類に投与した場合に、治療効果を提供するのに十分な量の親油性物質の第一成分；少なくとも１種の固形脂肪を含む脂質の第二成分；及び、少なくとも１種のリン脂質である第三成分を含み、ここで第二及び第三の成分は、哺乳類に投与された場合の、親油性物質の経口の生物学的利用率を増大するのに十分な量で存在する。
本発明の好ましい実施態様に従って、これらの乾燥固形脂質混合物は、有利なことに、１種以上の抗酸化剤、凍結保護物質又は易流動性付与剤（free-flow imparting agent）を含む。
本発明の乾燥固形脂質混合物は、予想外に高い薬物添加（drug-loading）効率及び親油性化合物に関する増大された経口の生物学的利用率が示されている。
本発明は、更に、下記の工程を含む、このような乾燥固形脂質混合組成物の製造法に関する：
適当な有機溶媒中で、該親油性物質を、少なくとも１種の固形脂肪及び少なくとも１種のリン脂質を含む脂質成分と一緒に溶解する工程；
この溶媒を蒸発乾固する工程；
この乾燥固形脂質混合物を、水相により、機械的に振盪しながら、水和し、水を溶媒とする脂質分散液を得る工程；
得られた脂質分散液を、高圧ホモジナイゼーションなどにより、ホモジナイズし、粒度をサブミクロン値域まで低下する工程；及び
このサブミクロン分散液を乾燥する工程である。
別の実施態様において、本発明の乾燥固形脂質混合物は、有機溶媒中に溶解された脂質混合物を、直接乾燥することによって製造される。例えば、固形脂質混合物製剤は、噴霧乾燥又は凍結乾燥し、硬ゼラチンカプセル剤又は錠剤のような、固形投与剤形の調製に適した乾燥した組成物を得ることができる。これらの固形投与剤形は、更に、凍結保護物質、抗酸化剤、易流動性付与剤、界面活性剤及び／又は乳化剤を含むことができる。
これらの脂質組成物は、食事栄養補充剤CoQ10のような、食事補充剤又は食品添加剤の親油性化合物の経口デリバリーのために、もしくは、非常に水への溶解度が低い、デキサナビノールのような、いずれか適当な親油性薬剤又は化合物のために都合が良い。
【図面の簡単な説明】
図１は、市販のENERGYCO（登録商標）CoQ10ゼラチンカプセル（Herbamed-Assutech Ltd.、レボット、イスラエル）、及び実施例１〜5において説明されたように調製され（表１及び２）かつゼラチンカプセル中に充填されたCoQ10−乾燥脂質混合物からの、類似胃液中での、CoQ10のin vitroにおける放出を示す。
図２は、ENERGYCO（登録商標）CoQ10ゼラチンカプセル及び実施例５において説明されたように調製され、かつゼラチンカプセル中に充填されたCoQ10−乾燥脂質混合物を経口投与した後の、CoQ10のヒト血漿中濃度を示す。
図３は、実施例８（表３）に説明されたように調製され、かつ硬ゼラチンカプセル中に充填された、粉末の乾燥脂質組成物（製剤AY-122-62-1、AY-122-62-2、AY-122-62-3）からの、類似胃液中でのデキサナビノールのin vitroでの放出パターンを示す。
図４は、実施例８に説明されたように調製された（表３）、粉末状の乾燥脂質組成物（製剤AY-122-62-3）の経口投与後（30mg/kg 薬剤、n=7）の、デキサナビノールのラットの血漿中濃度を示す。
発明の詳細な説明
本発明は、親油性物質の経口デリバリーのための乾燥固形脂質組成物、並びにこのような組成物の製造法及び使用法に関する。
本発明の乾燥固形脂質混合物は、３種の主成分で構成される：親油性物質、少なくとも１種の固形脂肪を含有する脂質又は脂質混合物、及び１種以上のリン脂質である。都合が良いことに、本発明の乾燥脂質混合物は、更に、抗酸化剤、凍結保護物質又は易流動性付与剤を含むことができる。
広範な範囲の親油性物質のいずれかを、これらの混合物において使用することができる。例としては、親油性薬剤、ビタミン、及びホルモンである。これらの親油性物質は、ステロイド、ステロイド拮抗薬、非ステロイド系抗炎症剤、抗真菌剤、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗がん剤、降圧剤、抗酸化剤、抗てんかん剤及び抗鬱剤などを含む。非常に貧弱な水への溶解度、及び経口投与剤形で利益があるが、低い経口の生物学的利用率を持つ親油性薬剤の別の例は、神経ホルモンメラトニン、抗真菌剤アムホテリシンB、抗がん剤エトポシド、更にはタモキシフェン及びその類似体である。より具体的な化合物は、デキサナビノールで代表されるカンナビノイド類、及びビタミン、補酵素Q10で代表される、酵素又は補酵素である。好ましい親油性物質は、室温（25℃）での水への溶解度が、＜200μg／mlであり、より好ましくは＜50μg／mlであるものである。
この最終乾燥固形脂質混合物中の親油性物質の含有量は、該混合物の総固形重量の約0.01〜50％範囲、より好ましくは該混合物の総固形重量の約5〜40％の範囲、更により好ましくは該混合物の総固形重量の約7〜30％の範囲であることができる。
下記の説明及びクレームにおいて、用語“固形脂肪”は、いずれかの脂質又は脂質混合物が、ほぼ25℃で、固形又は液体の結晶相を示すようなものであることを意味する。
室温で固形であるトリグリセリドは、前述の脂質混合物の調製のために好ましい脂肪である。この固形トリグリセリドは、通常合成トリグリセリドとして入手可能な、１種の純粋なトリグリセリドからなるか、もしくはいくつかのトリグリセリドの混合物であることができる。天然原料から単離された脂肪は、通常トリグリセリドの混合物としてのみ入手可能である。このような天然の混合物は、この混合物の融解特性が、約25℃で固形又は液体結晶相を示すようなものであるという条件で、乾燥脂質混合物の調製に適している。
本発明の乾燥脂質混合物の調製に適した固形脂肪として、鎖の長さがC-10-C18の範囲である天然の偶数かつ分枝していない脂肪酸からなるトリグリセリド、又は天然の飽和の、偶数の分枝していない脂肪酸の微晶質グリセロールトリエステル、例えばトリカプリン、トリラウリン、トリミスリチン、トリパルミチン、及びトリステアリンなどがあげられる。
前述の最終乾燥脂質混合物中の固形トリグリセリドの含有量は、該混合物の総固形重量の約20〜75％の範囲であり、より好ましくは該混合物の総固形重量の約25〜50％の範囲であり、更により好ましくは該混合物の総固形重量の約30〜45％の範囲である。
本発明の乾燥脂質混合物の第三成分を構成する好ましいリン脂質は、天然のリン脂質、例えば：ダイズレシチン、卵レシチン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、ジホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、カルジオリピンなど；合成のリン脂質、例えば、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジミリストイル−ホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルコリンなど；及び、水素化された又は部分的に水素化されたレシチン及びリン脂質である。
リン脂質成分は、飽和もしくは不飽和のいずれかであることができ、かつ約25℃より高い又は低いのいずれかの、ゲル液相転移温度を有することができる。卵又はダイズのホスファチジルコチン（卵又はダイズPC）は、室温よりも十分に低い転移温度を有するリン脂質の例である。ジミリストイルホスファチジルコリン（DMPC）は、室温よりもわずかに低い転移温度を有する。ジパルミトイル及びジステアロイルホスファチジルコチン（DPPC及びDSPC）は、室温よりも十分に高い、実際には、生理的温度（ほぼ37℃）以上でさえあるような、転移温度を有するリン脂質の例である。容認できる乾燥脂質混合物は、これら及び他の多くのリン脂質で製造することができる。
乾燥脂質混合物は、総脂質に対するリン脂質のモル比が、約0.1〜0.75（約10〜75mol％）、より習慣的には約0.1〜0.5（約10〜50mol％）の範囲で、調製することができる。総脂質に対するリン脂質のモル比は、典型的には約0.1:1から2:1の範囲で、普通は約0.1:1から1:1で、しばしば約0.2:1から0.9:1であり、頻繁には0.2:1から0.8:1で、及び通常は0.25:1から0.5:1の範囲であることができる。
総脂質に対するリン脂質の比は、重量を基に、少なくとも0.1:1から2:1であり、かつ好ましくは0.2:1から1:1である。この比は、普通は約0.4:1から1.5:1の範囲に、頻繁には約0.5:1から1.25:1の範囲に収まる。
最終乾燥固形脂質混合物中のリン脂質の含有量は、通常該混合物の総固形重量の約2〜40％の範囲であり、より好ましくは約5〜35％であり、更により好ましくは該混合物の総固形重量の約10〜30％である。
本発明の乾燥固形脂質混合物は、任意に１種以上の追加の抗酸化剤を含むことができる。抗酸化剤は、不飽和脂質又は他の成分からの、酸化的分解生成物、例えば過酸化物などの生成を減少する。このような好ましい抗酸化物の例は、ビタミンE族の一員である、α−トコフェロール、又はその誘導体（トコフェロールスクシナートなど）であるが、これらに限定されるわけではない。ヒトの摂取が安全である、当該技術分野において公知の多くの他の抗酸化剤を、使用することができ、例えば、ブチルヒドロキシトルエン（BHT）である。前述の最終乾燥固形脂質混合物中の抗酸化剤の含有量は、通常該混合物の総固形重量の約0.01〜5％の範囲であり、より好ましくは該混合物の総固形重量の約0.05〜3％であり、更に好ましくは該混合物の総固形重量の約0.1〜1％である。
乾燥固形脂質混合物は、都合が良いことに、この乾燥固形CoQ10−脂質混合物の調製において使用される凍結乾燥又は噴霧乾燥工程での製剤の保存のために、更に当該技術分野で公知の凍結保護物質、例えば糖質又はアミノ酸化合物を、含むことができる。
好ましい凍結保護物質は、ブドウ糖、ショ糖、乳糖、麦芽糖、及びトレハロース；デキストロース、デキストリン及びシクロデキストリンのような、多糖類；及びポリビニルピロリドン（PVP）のような、天然でないポリマーを含む。米国特許第5,472,706号に開示されたような、アミノ酸を含む、別の種類の凍結保護物質も使用することができる。前述の乾燥固形脂質混合物中の総固形分に対する凍結保護物質の好ましい範囲は、約0.1〜50重量％である。乾燥固形脂質混合物の調製においては、約20〜40％の範囲の最終重量％が、通常使用される。
本発明の乾燥固形脂質混合物は、更に、易流動性付与剤として利用するために、当該技術分野で公知の、いずれか適当な無毒の担体又は希釈粉末を含有することができる。このような添加物の一般的例は、二酸化ケイ素、デンプン、乳糖、ショ糖、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、及びリン酸ニカルシウムである。この混合物を、錠剤又は丸剤に製剤する場合には、持続作用又は徐放性の放出をもたらす投与剤形を提供するために、この錠剤又は丸剤を、コーティングするか、もしくは、別の状況では当該技術分野で公知の医薬として許容できる物質と共に配合することができる。この乾燥固形脂質混合物は、ゼラチンカプセル剤においても調製することができる。
前述の乾燥固形脂質混合物の好ましい実施態様に従って、更にヒュームド二酸化ケイ素である、CAB-O-SIL（登録商標）（Cabot Corp.、イリノイ州、米国）のような、ヒュームドシリカを、更に混合することができる。この化合物は、非常に小さい粒度及び大きい表面積を有する粉末材料である。ヒュームドシリカは、粉末混合物の易流動性を促進し、かつ該混合物がケーク又は粒状になるのを防止する、乾燥滑剤として作用することができる。この化合物の易流動性、抗ケーキング及び目詰まり防止特性は、いくつかの作用の結果である。例えば、シリカ凝集塊の超顕微鏡的寸法は、これらを、他の乾燥薬剤のより大きい粒子の間を容易に移動することができるようにし、殆どの場合、ヒュームドシリカは、恐らくこれらの粉末粒子の表面にコーティングを形成する。更にこのヒュームドシリカ層は、バルク引張り強さ及び剪断強さを低下する一方で、該粒子の静電帯電を中和する。
ヒュームドシリカは、他の粉末と混合した後、該製品粒子の中又は表面に存在することがある水分を、一部又は全て吸着する。その結果、このヒュームドシリカの凝集塊は、他の粒子が、互いに接触することを妨げ、次に別の状況ではより大きい粒及びケーキの形成に繋がるような核を形成することを防止する。この間隔及び潤滑の作用は、加工装置のバルブ、噴霧ヘッド、貯蔵容器の開口部、バッグ及びドラムの噴出口、並びにエアゾールのノズル孔のような穴を通じての、物質の移動を保つことを助ける。
殆ど粉末状の物質は、最終生成物中のヒュームドシリカの濃度が約0.5〜50％の範囲（総固形重量）であるように添加することによって、易流動性を維持することができる。最適濃度は、小規模工程で試行錯誤することで決定される。最終生成物中のヒュームドシリカのより好ましい重量％は、約1〜40％（総固形重量）の範囲である。既にケーキになっている粉末であっても、通常ヒュームドシリカ中にこれを混合することによって、易流動性をもたらすことができる（総固形重量の約2％以下）。ヒュームドシリカの表面積が途方もなく大きいことが、非常に少量で有効な作用をもたらす理由である。
べとついた又は粘着性の粉末を超えるように加工することができない生成物は、最終仕上げ工程として、適量のヒュームドシリカを添加することによって、易流動性をもたらすことができる。ヒュームドシリカは、同じく噴霧乾燥又は凍結乾燥した生成物において、易流動性を促進するために使用することができる。
いくつかの場合、これは、本来のエマルジョン、懸濁液又は溶液に投入されるか、もしくは、遅れて混合される。ヒュームドシリカは、粉末化され及びペレット化された生成物が、後にケーキングするのを防ぐためのコーティングにも使用される。
この最終固形脂質混合物中の二酸化ケイ素の含有量は、通常該混合物の総固形重量の約5〜40％の範囲である。
本発明の乾燥薬剤−脂質混合物は、下記に示した限定を意図しない実施例で説明された様々な方法で、調製することができる。
実施例
実施例１：水性分散液からの凍結乾燥による乾燥CoQ10−脂質混合物の調製
この実施例は、水性分散液からの凍結乾燥による、乾燥CoQ10−脂質混合物の調製について説明している。この製剤の最終乾燥組成を、表１に示した。
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ユビキノン（補酵素Q10）は、Global Marketing Associates,Inc.（サンフランシスコ、CA）から得た。D-αトコフェロールスクシナートは、メルク（ドイツ）から購入した。レシチンは、リポイドKG（ドイツ）から入手した。トリカプリンは、ハル（ドイツ）から得た。CAB-O-SILは、Cabot Corp.から入手した。CoQ10を、ジクロロメタン中に、脂質試薬（リン脂質、トコフェロールスクシナート及び固形トリグリセリド）と共に溶解した。この溶媒を、完全に乾固するまで蒸発し、かつ次にこの乾燥固形脂質混合物を、水相で、機械的に振盪することにより、水和した。得られた脂質分散液を、EMULSTIFLEX（登録商標）C-30高圧ホモジナイザー（Avestin Inc.、カナダ）を用い、高圧ホモジネーション（800bar）により、結果的にホモジネートし、粒度をサブミクロンの値域まで小さくした。得られた乾燥CoQ10−脂質調製物に、凍結保護物質、ショ糖（40重量％水溶液）、及び易流動性付与剤、CAB-O-SILヒュームド二酸化ケイ素（水中5重量％懸濁液）を添加し、その後この配合物を、Christ凍結乾燥器（ドイツ）を用いて、凍結乾燥した。総脂質に対するリン脂質の重量比は、0.33:1であった。最終のCoQ10乾燥−脂質粉末を、硬ゼラチンカプセルに充填した。
実施例２：t-ブタノール溶液からの直接凍結乾燥による乾燥CoQ10−脂質混合物の調製
この実施例は、t-ブタノール溶液からの直接の凍結乾燥による、乾燥CoQ10−脂質混合物の調製について説明している。この製剤の乾燥組成の最終的範囲を、表2に示した。
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全ての試薬は、t-ブタノール（2-メチル-2-プロパノール）中に、共に溶解し、かつこの溶液を、凍結乾燥により、20時間、凍結し乾燥した。総脂質に対するリン脂質の重量比は、約0.33:1から0.35:1であった。水性基剤中に迅速に分散可能な乾燥CoQ10−脂質粉末が、得られた。
実施例３：二重凍結乾燥法による乾燥CoQ10−脂質混合物の調製
この実施例は、二重凍結乾燥法による、実施例２に説明された組成の、乾燥CoQ10−脂質混合物の調製について説明している。最初に、全ての試薬は、t-ブタノール中に、共に溶解し、かつこの溶液を、凍結乾燥により、20時間、凍結し乾燥した。その後、この乾燥CoQ10−脂質粉末を、マルチリスト（multiwrist）振盪器（LabLine）を用いて、機械的に振盪することにより、混合物全てが、該水相中に均質に分散されるまで、水で水和した。その後この分散液は、Polytron PT3000（Kinematica、AG）を用いて、5分間、17,000rpmでホモジナイズした。次にこの調製物を、Microlab 70 Gaulin又はEMULSIFLEX（登録商標）ホモジナイザーを用いて、高圧ホモジナイゼーションに晒した。
得られた乾燥CoQ10−脂質調製物、凍結保護物質、ショ糖（40重量％水溶液）、及び易流動性付与剤、CAB-O-SILヒュームド二酸化ケイ素（水中5重量％懸濁液）を添加し、その後この配合物を、Christ凍結乾燥器（ドイツ）を用いて、凍結乾燥した。最終の乾燥CoQ10−脂質粉末を、硬ゼラチンカプセルに充填した。
実施例4：直接噴霧乾燥による乾燥CoQ10−脂質混合物の調製
実施例1と同じ組成の乾燥CoQ10−脂質混合物を、全ての試薬を、エタノール：水の1:1溶液に直接溶解し、この混合物を、Yamato Pulvis GA32ミニ噴霧乾燥器を用いて、噴霧乾燥することによって調製した。この乾燥条件は：流量7ml／分、入口温度130℃、出口温度80℃、及び乾燥風量0.45m3／分であった。CoQ10−脂質混合物を含有する均質な乾燥粉末が、得られた。
実施例5：水性分散液の高圧ホモジナイゼーション後の噴霧乾燥による乾燥CoQ10−脂質混合物の調製
この実施例は、全ての試薬の、10％エタノールを含有する水溶液中への、Polytron PT 3000（Kinematica、AG）を用いた分散（17,000rpmで５分間）による、実施例１に説明した組成の乾燥CoQ10−脂質混合物の調製について説明している。その後この調製物を、Microlab 70 Gaulin又はEMULSIFLEX（登録商標）ホモジナイザーを用いて、高圧ホモジナイゼーションに晒した。
得られた配合物を、Yamato Pulvis GA32ミニ噴霧乾燥器を用いて、噴霧乾燥した。この乾燥条件は：流量7ml／分、入口温度150℃、出口温度75℃、及び乾燥風量0.5m3／分であった。このCoQ10−脂質混合物を含有する均質な乾燥粉末が、得られた。
実施例6：CoQ10−乾燥脂質混合物からのCoQ10のin vitroでの放出
図１は、類似胃液における、乾燥CoQ10−脂質混合物製剤及び市販の製品ENERGYCO（登録商標）CoQ10（Herbamed-Assutech Ltd.、レボット、イスラエル）からのCoQ10のin vitroでの放出パターンを示している。
乾燥CoQ10−脂質混合物製剤から、及び等量のCoQ10を含有する市販の製品からのCoQ10のin vitroでの薬物放出は、硬ゼラチンカプセル剤を、沈降時に（assink）、１％のTween 80を含有する類似胃液50ml（150mM NaCl、pH1.2、37℃）中に置くことによって測定した。マグネット棒で、緩徐な攪拌を生じた。あらかじめ定めた時間間隔で、試料を、放出媒質から採取し、2.7μmのワットマンGFろ紙を使ってろ過し、かつ前述のUV法を用いて、CoQ10濃度を分析した。
市販製品、乾燥脂質混合物製剤、及び試験した放出媒質において、ドール試薬（イソプロパノール：ヘプタン：水、45:36:17）による抽出及び検量線を用いる270nmでの吸光度測定によって、放出されたCoQ10の量を測定した。CoQ10試料（0.5ml）は、ドール試薬3.5mlに添加し、完全に混合し、かつ室温で10分間かけて、２相に分離した。CoQ10は、ドール試薬のヘプタンの上部相に選択的に抽出され、その後吸光度測定のために、石英キュベットに移した。
実施例１の乾燥脂質混合物製剤からの非常に顕著な放出（２時間後50％）と比べて、市販の製品からのCoQ10の放出％は、非常に低かった。ENERGYCO（登録商標）CoQ10硬カプセル剤１錠は、米粉と混合されたCoQ10  50mgを含有している。類似胃液中のカプセル剤の崩壊後に、CoQ10の大きい凝集塊又は集団（cluster）、並びに膨潤した米粉が認められた。これらの知見は、該放出媒質への低いCoQ10の溶解を説明することができる。粒度は、消化管からの薬物吸収の速度及び程度に関する決定因子であるので、この結果は、市販の製品からのCoQ10の経口の生物学的利用率が低いことを示している。これらの特性は、類似胃液中で迅速に分散可能な、１本発明の乾燥脂質混合物製剤と対比されるべきである。
実施例7：硬ゼラチンカプセル剤に充填されたCoQ10−乾燥脂質混合物投与後のCoQ10のヒトでの経口の生物学的利用率
遊離のCoQ10製品及びCoQ10−乾燥脂質混合物製剤を含有する50mgの硬ゼラチンカプセル剤の経口摂取に関するヒトの経口の生物学的利用率試験の結果は、図２に示した。
CoQ10を、遊離化合物（各ENERGYCO（登録商標）CoQ10、Herbamed-Assutech Ltd.、レボット、イスラエル）又は乾燥脂質混合物製剤のいずれかで含有する硬ゼラチンカプセル剤を、ヒト志願者に経口投与した。CoQ10分析のための血漿検体を、投与前及び投与の１時間後に、採取した。
血漿検体中のCoQ10は、HPLC（Grossi G.、Bargossi A.M.、Fiorella P.L.、及びPiazzi S.の論文、血漿中補酵素Q10の測定に関する改善されたHPLC法、J.Chromat.、593:217-226頁（1992年））により、同定しかつ定量した。血液検体は、EDTAを入れたプラスチック製試験管に採取した。冷却しない遠心機における遠心分離により、血漿を分離し、分析時まで-20℃で保存した。CoQ10は、血漿から、ヘキサンで抽出した。蒸発乾固した後、HPLCのために、試料をイソプロパノールに溶解した。移動相は、メタノール：イソプロパノール（4:1）からなった。検出は、UV検出器により、波長275nmで行った。
実施例1の乾燥脂質混合物−CoQ10製剤では、投与後１時間で、CoQ10血漿濃度の上昇が認められたのに対し、市販のCoQ10製品では、非常に低い血漿濃度が認められ、このことは、in vitroにおける放出の結果を裏付けている。この実験結果は、図２に示した。
実施例8：直接噴霧乾燥による粉末デキサナビノール−脂質混合物の調製
この実施例は、表３に示された組成であり、かつ直接噴霧乾燥により調製された、粉末デキサナビノール−脂質混合物の調製について説明している。
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脂質成分は全て、エタノールに溶解した。Cab-O-Silは、5％分散液で、前述のエタノール性溶液に添加し（最終的なエタノール：水の体積比は、2:1）、かつこの混合物を、40℃で数分間振盪した。その後、この混合物を、Yamato Pulvis GA32ミニ噴霧乾燥機を用いて、噴霧乾燥した。乾燥条件は、以下であった：流量7ml／分、入口温度130℃、出口温度80℃、及び乾燥風量0.45m3／分であった。リン脂質の総脂質に対する重量比は、0.33:1であった。デキサナビノール−脂質混合物を含有する、均質な乾燥した迅速に分散可能な粉末が得られた。
実施例9：粉末の乾燥脂質組成物からのデキサナビノールのin vitroでの放出
粉末の乾燥脂質組成物からのデキサナビノールのin vitroでの薬剤放出は、該薬剤を含有する1号硬ゼラチンカプセル剤を、類似胃液50ml（150mM NaCl、pH1.2、37℃、沈降時に、Tween 80を含有）中に置くことによって測定した。マグネット棒で、緩徐な攪拌を生じた。あらかじめ定めた時間間隔で、試料を、放出媒質から採取し、2.7μmのPTFEろ紙（ワットマン）を使ってろ過した。
デキサナビノールは、ポンプ、UV検出器及び自動試料採取器を装備したKontron装置を用い、HPLCにより測定した。この方法の典型的クロマトグラフィー条件を以下にまとめた：
カラム：メルク50980スーパースフェア100RP-18、75×4mm、4μm、移動相：30％リン酸バッファー（0.01M KH2PO4、pH3.0）：70％アセトニトリル（V/V）、流量：1ml／分、検出器波長：280nm、注入容量：20μl、カラム温度：室温、保持時間：約5.8分、運転時間：約9分。
図３は、実施例8に記されたように調製され（表３）、かつ硬ゼラチンカプセルに充填された、粉末の乾燥脂質組成物（製剤AY-122-62-1、AY-122-62-2、AY-122-62-3）からの、類似胃液中でのデキサナビノールのin vitroでの放出パターンを示している。これら３種の試験した製剤は、デキサナビノールの重量％が、総固形物に対し薬物12〜30％と異なっていた。80〜100％の非常に迅速なデキサナビノールの放出パターンが、最初の10から20分の間に認められた。
実施例10：硬ゼラチンミニカプセルに充填された粉末乾燥脂質組成物の投与後のデキサナビノールのラットでの経口の生物学的利用率
デキサナビノール乾燥−脂質混合物を、硬ゼラチンミニカプセル（Torpac,NJ、米国）に充填し、かつラットにおける経口の生物学的利用率試験を行った。雄のスプラーグ−ダルウェイ系ラット（220〜260g、n=7）に、デキサナビノール製剤を、用量30mg／kgで、経口投与した。血液検体を、0、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、8.0、及び24時間の時間間隔で採取した。これらの検体は、10,000rpmで5分間遠心分離し、かつ血漿を分離し、血漿中デキサナビノール濃度の分析時まで、-20℃で保存した。血漿中デキサナビノールの測定は、HPLCで行った。クロマトグラフィーの条件は、実施例3に示したものであった。-20℃で保存した血漿検体は、解凍し、以下のように、1:4で希釈した：血漿検体150μlを、1.8mlのエッペンドルフチューブに移し、かつアセトニトリル150μlを添加した。この検体を、激しく攪拌し、微量遠心機（microfuge）により、10,000rpmで10分間遠心分離した。透明な上清をHPLCガラス製コニカルバイアルに移した。デキサナビノール血漿中濃度の算出のために、検量線を用いた。ゼロ時の検体について得られたピーク面積の平均値（ブランク値）を減じることで、検体のピーク面積の補正を行った。
図4は、実施例8に記されたように調製した粉末乾燥脂質組成物（製剤AY-122-62-3）（表3）を、ラットに投与（薬物30mg／kg、n=7）した後の、ラット血漿中のデキサナビノール濃度の経口での薬物速度論を示している。
非常に有意な血漿中のデキサナビノール濃度が得られ、このことは、該薬物−脂質混合物製剤からのデキサナビノールの経口吸収が増強されたことを示し、かつ該製剤の良好な水への分散能を指摘している。これらの特性は、おそらく、消化管からのこの薬剤の取込みを促進するであろう。２時間後（tmax）に、最高薬物濃度（Cmax）約1.3mg／mlが得られた。
実施例11：飲用の製品又は飲料として迅速に再構成された水に分散可能な粉末の形状のCoQ10の固形脂質混合物
ヒトの消費に便利に使用することができる、補酵素Q10を含有する飲料製品が、提供されている。理想的な水を主成分にしたCoQ10飲料は、CoQ10が、消化管を通じて効果的に吸収され、かつその有益な特性を示すことができるために、水性基剤中に、実質的に均質に分散、懸濁又は溶解された、この補充剤を含有しなければならない。本願明細書において説明した固形脂質組成物は、水又はいずれか他の水性基剤中に再構成される、サッシェに充填された粉末乾燥脂質混合物の形状のCoQ10飲料製品の製造に関するそれらの適合性についても試験した。
飲料として容認できるためには、CoQ10脂質混合物製剤は、迅速に水に分散可能な粉末であるように最適化されなければならない。この目的を達成するために、粒度分布範囲が小さい、微粉かつ易流動性の粉末材料が、得られなければならない。この結論には、様々な界面活性剤及び乳化剤で処理した場合の、該混合物の化学的及び物理的安定性を調べる一連の実験の結果として到達した。
CoQ10及び様々な界面活性剤の水で再構成可能な粉末乾燥固形脂質混合物又は固形脂質組成物を含有する製剤も、実施例1〜5に記した方法に従い、直接噴霧乾燥又は凍結乾燥により調製した。いくつかの代表的界面活性剤を、下記一覧に従って、CoQ10の固形脂質混合物を用いて、試験した：
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前記界面活性剤を含有するCoQ10−脂質組成物を、水と混合し、かつ分散可能な水性懸濁液を迅速に形成した。このような補酵素Q10固形脂質組成物は、より好ましくは、フレッシュ又は容器に詰められたフルーツジュース又はいずれか他の市販の飲料のような、美味な液体又は飲料中に分散される。
これらの界面活性剤化合物は、該固形脂質混合物の最初の組成物に直接添加されるか、もしくは、該乾燥粉末の最終再構成のための液体として使用される水性基剤に添加される。先に列記した物質に加え、当該技術分野で公知の他の合成界面活性剤又は乳化剤も、この分散液に、液体基剤中の該組成物の再構成を助けるために、乾燥前に添加することができる。これらの材料の量は、典型的には、約0.1〜15重量％の範囲であろう。これらの乾燥CoQ10−脂質混合物は、更に、典型的に食料品において使用される種類の他の追加の賦形剤、例えば糖質、防腐剤、着色剤及び香料を含むこともできる。当業者は、このような物質の特定の種類及び濃度が、常用されていることを承知している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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