(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体中の、アミラーゼと結合する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法。
【請求項２】
免疫学的測定法、あるいは酵素学的測定法により検体中の、アミラーゼと結合する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法。
【請求項３】
検体中の、アミラーゼと結合する免疫グロブリンを、支持体に固定したアミラーゼと結合せしめた後、上記アミラーゼと結合する免疫グロブリンと結合する物質の標識化物を結合させ、結合生成物の標識量を測定する工程を含む免疫学的測定法により検体中の、アミラーゼと結合する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法。
【請求項４】
検体中の、アミラーゼと結合する免疫グロブリンを、アミラーゼと結合せしめた後、検体のアミラーゼ活性を測定する工程を含む酵素学的測定法により検体中の、アミラーゼと結合する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法。
【請求項５】
アミラーゼがブタ・アミラーゼまたはウシ・アミラーゼである請求項１から４のいずれか１項記載のクローン病の検査方法。
【請求項６】
アミラーゼ、及びアミラーゼ活性測定用試薬または標識酵素活性測定用試薬を含む、検体中の、アミラーゼと結合する免疫グロブリンの存在を検出するクローン病の検査用キット。
【請求項７】
アミラーゼを固定した支持体；酵素標識化抗ヒトＩｇＧ抗体、酵素標識化抗ヒトＩｇＡ抗体、酵素標識化プロテインＡ、酵素標識化プロテインＧ及び酵素標識化ジャッカリンから成る群から選ばれる酵素標識化物、及び酵素活性測定用試薬を含み、免疫学的測定法により、検体中の、アミラーゼと結合する免疫グロブリンの存在を検出するクローン病の検査用キット。
【請求項８】
アミラーゼがブタ・アミラーゼまたはウシ・アミラーゼである請求項６又は請求項７記載のクローン病の検査用キット。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、クローン病の検査方法及び検査用キットに関する。さらに詳しくは、臨床検査分野において、免疫学的あるいは酵素学的方法により簡便、迅速に実施できるクローン病の検査方法及び検査用キットに関する。
従来の技術
炎症性腸疾患のうち、クローン病と潰瘍性大腸炎は、原因不明で特発性炎症性腸疾患として区分され、厚生省の難治性疾患として特定されている。診断は厚生省特定疾患難治性炎症性腸管調査研究班で作製された診断基準（案）に従ってなされている。具体的には、便培養などで感染性陽炎を除外した後、臨床所見、消化管造影検査、内視鏡検査、組織検査を組み合わせて行われている。しかし、これらの方法によっても診断が困難な症例も見られる。特にクローン病と潰瘍性大腸炎の鑑別に難渋する症例が多い。一方、診断の中心となる消化管造影検査や内視鏡検査は、患者の肉体的・精神的な苦痛を伴うことが多く、熟練した医師が必要とされている。このためクローン病や潰瘍性大腸炎の診断のための簡便で迅速かつ高精度で行える特異的な臨床検査法が世界的に求められている。
クローン病患者の血清には、抗好中球抗体（Ｔａｒｇａｎ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．：Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，９６，Ａ５０５，１９８９）や抗小腸抗体（Ｂａｇｃｈｉ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．：Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，５５，４４〜４８，１９８４）が、一方、潰瘍性大腸炎患者の血清には、抗トロポミオシン抗体（Ｄａｓ，Ｋ．ｎ．，ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５０，２４８７〜２４９３，１９９３）や抗カゼイン抗体（Ｋｎｏｆｌａｃｈ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．：Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，９２，４７９〜４８５，１９８７）あるいは抗ムチン抗体などの存在が報告されている。これらの中には、疾患特異的抗体と報告されているものもあるが、いずれの抗体検査も診断に応用されるに至っていない。というのは、クローン病や潰瘍性大腸炎に特異的な抗体と報告されていても例数が少ないケース（小腸タンパク、トロポミオシン、ムチン）あるいは特異性がない（好中球、カゼイン）など臨床検査に応用しうる程のデータが得られていないためである。上記のような視点から、特異的な血清抗体を応用して、クローン病や潰瘍性大腸炎の診断を、簡便、迅速かつ高精度に実施できる臨床検査方法を開発することは臨床上極めて重要と言える。
発明の開示
本発明の目的は、哺乳類、特にヒトのクローン病や潰瘍性大腸炎の診断を、簡便、迅速かつ高精度に実施できる臨床検査方法及びそれに使用する検査用キットを提供することである。
本発明の第１は、検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法である。
本発明の第２は、免疫学的測定法、あるいは酵素学的測定法により検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法である。
本発明の第３は、検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンを、支持体に固定したアミラーゼと反応せしめた後、上記アミラーゼと反応する免疫グロブリンと反応する物質の標識化物を反応させ、反応生成物の標識量を測定する工程を含む免疫学的測定法により検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法である。
本発明の第４は、検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンを、アミラーゼと反応せしめた後、反応生成物のアミラーゼ活性を測定する工程を含む酵素学的測定法により検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法である。
本発明の第５は、アミラーゼがブタ・アミラーゼまたはウシ・アミラーゼである上記クローン病の検査方法である。
本発明の第６は、アミラーゼ、及びアミラーゼ活性測定用試薬または標識酵素活性測定用試薬を含む、検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出するクローン病の検査用キットである。
本発明の第７は、アミラーゼを固定した支持体；酵素標識化抗ヒトＩｇＧ抗体、酵素標識化抗ヒトＩｇＡ抗体、酵素標識化プロテインＡ、酵素標識化プロテインＧ及び酵素標識化ジャッカリンから成る群から選ばれる酵素標識化物；及び酵素活性測定用試薬を含み、免疫学的測定法により、検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出するクローン病の検査用キットである。
本発明の第８は、アミラーゼがブタ・アミラーゼまたはウシ・アミラーゼである上記クローン病の検査用キットである。
発明を実施するための最善の態様
本発明者らは、哺乳類、特にヒトのクローン病の理想的な検査方法を求め、疫学的、免疫学的、生化学的研究を重ねた結果、クローン病患者の血中にアミラーゼと反応する免疫グロブリンが量的に有意に多く存在していることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、アミラーゼを用いて検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法を提供するものである。
アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在の検出法としては、酵素免疫測定法などの免疫学的測定法、あるいは酵素学的測定法のいずれを用いてもよい。
本発明に使用するアミラーゼとしては、異種のアミラーゼを使用する。ヒトのクローン病を検査する場合には、ヒト以外の異種のアミラーゼであればいずれを用いてもよい。例えば、食用の動物由来のアミラーゼ、すなわちブタ、ウシ、ニワトリ、ウマ由来のアミラーゼ等が好ましく、特に、ブタまたはウシ由来のアミラーゼが好適に用いられる。以下、本発明をヒトのクローン病の検査方法について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
本発明の方法に供する検体としては、ヒト体液のほとんどを用いることが可能であるが、例えば全血、血清、血漿、尿、だ液等が好ましい。特に好ましくは患者の血清または血漿である。
免疫学的測定法としては、いずれの方法を用いてもよいが、酵素免疫測定法、イムノクロマトグラフィー法などが好ましい。いずれの方法も検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンを、支持体に固定したアミラーゼと反応せしめた後、上記アミラーゼと反応する免疫グロブリンと反応する物質の標識化物を反応させ、反応生成物の標識量を測定する工程を含む。酵素免疫測定法は、酵素標識化物を用いて、反応生成物の標識量を酵素活性により測定する。イムノクロマトグラフィー法は、着色粒子標識化物を用いて、反応生成物の標識量を着色量により測定する。
本発明には反応生成物の標識量、すなわち検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在量を容易に数値化できる酵素免疫測定法が好適に用いられる。酵素免疫測定法には、検体中のアミラーゼと反応する免疫グロブリンを、支持体に固定したアミラーゼと反応せしめた後、上記アミラーゼと反応する免疫グロブリンと反応する物質、好ましくは抗ヒト免疫グロブリン抗体、プロテインＡ、プロテインＧ又はジャッカリンの酵素標識化物を反応させ、反応生成物の標識量を酵素活性により測定する工程を含む方法が適している。支持体としては、たとえば、ポリスチレン樹脂、ポリカーボネート樹脂、シリコン樹脂、ナイロン樹脂などプラスチックやガラスが適している。この支持体へアミラーゼを固定する方法は物理吸着であってもよいし、化学的結合であってもよい。標識用酵素としては、ペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼが好適である。
一方、酵素学的測定法としては、検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンがアミラーゼの活性を阻害することを測定原理とした方法が用いられる。アミラーゼ活性の阻害度を測定するのに最も簡便な方法は試験管内反応法である。すなわち、試験管内で既知濃度のアミラーゼ液を検体と１：１に混合し、一定時間放置後、混合液のアミラーゼ活性を公知の活性測定法（Ｔｈｏｌｌａ，Ｊ．Ａ．，ｅｔ  ａｌ：Ｔｈｅ  Ｅｎｚｙｍｅ（３ｒｄ  ｅｄ．），５，１１５−１８９，１９７１）により測定する。活性測定法はいずれの方法を用いてもよいが、４−ニトロフェニル−マルトヘプタオシドやρ−ニトロフェニルベンジル−α−マルトペンタオシドなどの合成基質を用いた血中アミラーゼ測定キットが好適に用いられる。アミラーゼ活性の阻害度は、混合液のアミラーゼ活性から、別途測定した２倍希釈検体のアミラーゼ活性と２倍希釈アミラーゼ液のアミラーゼ活性をそれぞれ差し引くことにより算出する。
また、血中にはアミラーゼと反応する免疫グロブリンによって阻害されないヒト・アミラーゼ活性が認められる。従って、本発明には、検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンをアミラーゼと反応せしめた後、血清タンパク質分離用担体を用いてヒト・アミラーゼと分離し、反応生成物のアミラーゼ活性の阻害度を測定する工程を含む方法も好適に用いられる。血清タンパク質分離用担体としては、セルロースアセテート膜、アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲル、デキストランゲルなどが適している。この担体上での分離法としては、電気泳動法、液体クロマトグラフィー法などが用いられるが、本発明では簡便、迅速さの点から電気泳動法が好適である。
本発明は、さらに、アミラーゼ、及びアミラーゼ活性測定用試薬または標識酵素活性測定用試薬を含む、検体中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出するクローン病の検査用キットを提供するものである。
免疫学的測定法が酵素免疫測定法の場合、本発明の検査用キットは、アミラーゼを固定した支持体；酵素標識化抗ヒトＩｇＧ抗体、酵素標識化抗ヒトＩｇＡ抗体、酵素標識化プロテインＡ、酵素標識化プロテインＧ及び酵素標識化ジャッカリンからなる群から選ばれる酵素標識化物；及び標識酵素活性測定用試薬を含む。
酵素学的測定法が試験管内反応法の場合、本発明の検査用キットは、アミラーゼ、及びアミラーゼ活性測定用試薬を含む。
酵素学的測定法が電気泳動法の場合、本発明の検査用キットは、アミラーゼ、アミラーゼ活性測定用試薬であるブルースターチの他に、血清タンパク質分離用担体であるセルロースアセテート膜を含む。
本発明のクローン病検査用キットはさらに、緩衝液、標準血清などを含むことができる。
次に、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、これによって本発明が限定されるものではない。
実施例
実施例１  酵素免疫測定法による血液中のブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在の検出
１）ブタ・アミラーゼを固定した支持体の調製
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）にて１０μｇ／ｍｌとなるよう希釈したブタ・膵アミラーゼ（シグマ社製、Ａ６２２５）を９６穴マイクロプレート（コースター社製）の各々のウェルに０．２ｍｌずつ加え、４℃で一晩反応させた。反応後、各ウェルの液を除去した後、洗浄のためＰＢＳを０．２５ｍｌずつ加え撹拌後、液を除去した。この洗浄操作を３回繰り返した後、マスキング試薬として０．１％スキムミルク加ＰＢＳを０．２５ｍｌ加え、３７℃、１時間インキュベートした。マスキングの後、各ウェル内の液を除去し、保存液として０．１％ＮａＮ３、０．１％スキムミルク加ＰＢＳを各ウェルに０．２５ｍｌずつ加え、４℃で保存した。
２）血中ブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在の検出
ヒト血清中のブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在の検出にはサンドイッチ法を用いた。すなわち、先に作製したブタ・アミラーゼ固相化マイクロプレートの保存液を除去した後、あらかじめ０．０５％スキムミルク加ＰＢＳで８０倍に希釈しておいた被検血清または血漿を各ウェルに０．２ｍｌずつ加え、マイクロプレートミキサーにて約１分間撹拌の後、３７℃、１時間反応させた。各ウェルの液を除去した後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０加ＰＢＳ０．２５ｍｌにより３回洗浄を行った。次に、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体を至適濃度に希釈し、各ウェルに０．２ｍｌずつ加え、再び３７℃、１時間反応させた。反応後、液を除去し再度洗浄を行い、各ウェル中の液を完全に除去した後、基質液（０．０１％過酸化水素加１．５ｍｇ／ｍｌ  ｏ−フェニレンジアミン水溶液）を０．２ｍｌ加え、室温にて１０分間反応させた。３．５Ｎ硫酸を各ウェルに０．０５ｍｌ添加することで反応を停止させた。反応停止したプレートはマイクロプレート用比色計（バイオラッド社製）で吸光値（４９２ｎｍの吸光値−６３０ｎｍの吸光値）を測定した。
３）反応性の確認
クローン病患者血清２検体と健常者血清１検体を用いて、血清希釈倍率を４０〜１２８０倍に変えた時の反応性の確認を行った。表１に結果を示した。クローン病患者血清は血清希釈にともない吸光値の低下が認められた。健常者血清では８０倍以上では著しい低下は認められなかった。この結果より測定時の血清希釈倍率は８０倍と決定した。
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４）再現性の確認
クローン病患者血清と健常者血清を用いて同時再現性と測定日間再現性の確認を行った。表２に同時再現性を示した。変動係数は１．７〜３．３％であった。また表３に測定日間再現性を示した。変動係数は１．８〜３．８％であった。
いずれの試験においても十分な再現性が得られ、またクローン病患者と健常者の吸光値は、有意水準１％で有意な差が見られた。
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実施例２  潰瘍性大腸炎、その他の疾病との比較
クローン病（７５例）、潰瘍性大腸炎（８４例）、胃潰瘍・十二指腸潰瘍、マクロアミラーゼ血症なとその他疾病（４８例）の患者血清及び健常者血清（３０例）について実施例１に示した方法を用いてブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在の検出を行った。結果を散布図として図１に示した。図中の各点は３回の測定値の平均値である。この結果に基づいて、クローン病患者と、潰瘍性大腸炎患者、その他疾病患者、健常者との有意差検定を行ったところ、いずれもクローン病患者の血清ブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在量が有意に高値を示した。また、健常者血清の測定値の平均値（０．１０５）と標準偏差（０．０３１）から設定したカットオフ値（０．１６７、平均値＋２×標準偏差）を基準にしてブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリン陽性の例数を比較すると、クローン病２３例、潰瘍性大腸炎１例であった。これらの結果より、本測定法をクローン病の鑑別診断に利用できることが示された。
実施例３  酵素学的測定法（試験管内反応法）による血液中のブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在の検出
被検血清１００μｌとブタ・膵アミラーゼ溶液１００μｌ（約１０００〜２０００単位）を混合し、室温で、２時間から一夜放置した後、ｐ−ニトロフェニルベンジル−α−マルトペンタオシドを基質とするアミラーゼ測定キット（Ｌタイプワコーアミラーゼ、和光純薬社製）と、自動分析装置（日立７３５０）を用いて、混合液のアミラーゼ活性を測定した。また、被検血清およびブタ・膵アミラーゼ溶液をそれぞれ生理食塩水で２倍希釈した液のアミラーゼ活性を測定した。アミラーゼ活性の阻害度は、（混合液の活性）−（２倍希釈被検血清の活性）−（２倍希釈ブタ・膵アミラーゼ溶液の活性）により算出し、失活活性として表した。本測定法によりクローン病（８６例）、潰瘍性大腸炎（８６例）、胃腸疾患、肝疾患などその他疾病の患者および健常者（２５例）の血清について測定を行った。その結果、健常者血清のアミラーゼ失活活性はいずれも０から−３０単位／ｌの範囲内であった。そこで、−３０単位／ｌをカットオフ値とすると、失活活性が陽性の例数は、クローン病患者血清２９例に対して、潰瘍性大腸炎患者血清１例、その他疾病および健常者血消０例であった。したがって、本測定法によっても血中のブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出でき、クローン病の鑑別診断に利用できることが示された。
実施例４  酵素学的測定法（電気泳動法）による血液中のブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在の検出
１）セルロースアセテート膜電気泳動法
０．２６Ｍトリス・ホウ酸緩衝液（ｐＨ９．１）にて平衡化したセルロースアセテート膜（商品名タイタン、ヘレナ研究所製）に、アプリケーターを用いて、ブタ・膵アミラーゼを約６００単位／ｍｌとなるように添加した被検血清あるいは生理食塩水（対照）を０．３μｌ塗布した。泳動用緩衝液は、陽極側に０．２６Ｍトリス・ホウ酸緩衝液（ｐＨ９．１）、陰極側にベロナール緩衝液（ｐＨ８．６）を用いた。泳動は１２０Ｖで２時間行った。
２）アミラーゼ活性阻害の測定
ブルースターチ（ネオアミラーゼテスト「第一」第一化学薬品社製）０．８ｇを５．５ｍｌの水に溶解し、基質溶液とした。泳動後のセルロースアセテート膜をトレイの上に置き、ブルースターチ５．５ｍｌを膜上に均一にのせ別のトレイでふたをし、３７℃、４０〜５０分間インキュベートした。反応後、メタノールでブルースターチを洗い落とし、セルロースアセテート膜をメタノール中に入れ、１０分間静置した。ブタ・アミラーゼ阻害活性は、ブルースターチが分解して生じた青色バンドの色の濃さと泳動パターンの変化によって目視判定した。実施例３で示した血清を用いて試験を行った結果、失活活性陽性であったクローン病患者血清にブタ・アミラーゼを添加した液は、いずれも対照と比べてブタ・アミラーゼ活性が低下した活性バンドを示したり、ヒト・マクロアミラーゼ血症に特徴的なテーリングなどの異常泳動パターンに類似した泳動パターンを示した。一方、潰瘍性大腸炎患者血清や健常者血清にブタ・アミラーゼを添加した液は、いずれも対照と同等のブタ・アミラーゼ活性バンドを示した。したがって、本測定法によっても血中のブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出できることが示された。
実施例５  酵素免疫測定法による血液中のウシ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在の検出
１）ウシ・アミラーゼの精製
ウシ・アミラーゼの精製は次のように行った。以下の操作は全て４℃以下で行った。牛膵アセトン粉（Ｐａｎｃｒｅａｓ  ａｃｅｔｏｎｅ  ｐｏｗｄｅｒ，Ｂｏｖｉｎｅ：シグマ社製）２ｇに５ｍＭ  ＣａＣｌ２、５０  ｍＭ  ＮａＣｌを含む０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．２）［緩衝液Ａ］４０ｍｌを加えて１５分間撹拌した。１１，４００×ｇ、１０分間遠心して上清を回収し、硫酸アンモニウムを添加して６５％飽和にした。２５，６００×ｇ、１５分間遠心して得られた沈殿を緩衝液Ａで溶解した２０％飽和硫酸アンモニウム溶液３０ｍｌに溶解した。不溶物を遠心して除去した後、あらかじめ２０％飽和硫酸アンモニウム溶液を含む緩衝液Ａで平衡化したＢｕｔｙｌ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ  ６５０Ｃ（東ソー社製）のカラム（２．１×７．３ｃｍ）に負荷した。２０％飽和硫酸アンモニウム溶液を含む緩衝液Ａでカラムを洗浄した後、１０％飽和硫酸アンモニウム溶液を含む緩衝液Ａ、緩衝液Ａで順次溶出した。アミラーゼ活性を有する画分を回収し、６０％飽和になるように硫酸アンモニウムを添加した。２５，６００×ｇ、１５分間遠心して得られた沈殿をウシ・アミラーゼ精製品とした（酵素活性：１３０単位、タンパク質量：３．９８ｍｇ）。
２）ウシ・アミラーゼを固定した支持体の調製および測定
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）にて１０μｇ／ｍｌとなるよう希釈したウシ・膵アミラーゼ精製品を９６穴マイクロプレート（コースター社）の各ウェルに０．２ｍｌずつ加え、４℃で一晩反応させた後、実施例１と同様にウシ・アミラーゼ固相化マイクロプレートを作成し、ヒト血清を検体として測定を行った。
３）反応性の確認
クローン病患者血清３検体と健常者血清３検体を用いて、血清希釈倍率８０倍で反応性の確認を行った。表４に結果を示した。クローン病患者血清は健常者血清よりも高い値を示した。
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４）潰瘍性大腸炎、その他の疾病との比較
クローン病（３０例）、潰瘍性大腸炎（１３例）、胃潰瘍・十二指腸潰瘍、マクロアミラーゼ血症なとその他疾病（８例）の患者血清および健常者血清（１８例）について実施例５に示した方法を用いて測定を行った。測定結果を散布図として図２に示した。この結果に基づいて、クローン病患者と、潰瘍性大腸炎患者、その他疾病患者、健常者との有意差検定を行ったところ、いずれもクローン病患者の血清ウシ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在量が有意に高値を示した。また、健常者血清の測定値の平均値（０．０５２）と標準偏差（０．０２６）から設定したカットオフ値（０．１０４、平均値＋２×標準偏差）を基準にしてウシ・アミラーゼと反応する免疫グロブリン陽性の例数を比較すると、クローン病１９例のみであり、他の疾患では認められなかった。これらの結果より、血清ウシ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在の検出がクローン病の鑑別診断に利用できることが示された。
産業上の利用可能性
本発明は、アミラーゼを用いて、免疫学的測定法、あるいは酵素学的測定法により血液中の、アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出することを特徴とするクローン病の検査方法及び検査用キットを提供するものである。実施例から明らかなように、本発明の検査方法及び検査用キットを用いれば、簡便、迅速なクローン病の診断、特に潰瘍性大腸炎との鑑別診断が可能となる。
【図面の簡単な説明】
図１は、酵素免疫測定法により、クローン病（ＣＤ、７５例）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ、８４例）、胃潰瘍・十二指腸潰瘍、マクロアミラーゼ血症などその他疾病（Ｏｔｈｅｒ、４８例）の患者血清および健常者血清（Ｎｏｒｍａｌ、３０例）中のブタ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出した結果を散布図として表した図である。＊、＊＊はクローン病患者と潰瘍性大腸炎患者、胃潰瘍・十二指腸潰瘍、マクロアミラーゼ血症などその他疾病患者および健常者との統計学的有意差を表す（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）。０．１６７は健常者血清の測定値から決定したカットオフ値である。
図２は、酵素免疫測定法により、クローン病（ＣＤ、３０例）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ、１３例）、胃潰瘍・十二指腸潰瘍、マクロアミラーゼ血症などその他疾病（Ｏｔｈｅｒ、８例）の患者血清および健常者血清（Ｎｏｒｍａｌ、１８例）中のウシ・アミラーゼと反応する免疫グロブリンの存在を検出した結果を散布図として表した図である。＊、＊＊はクローン病患者と潰瘍性大腸炎患者、胃潰瘍・十二指腸潰瘍、マクロアミラーゼ血症などその他疾病患者および健常者との統計学的有意差を表す（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）。０．１０５は健常者血清の測定値から決定したカットオフ値である。
【図１】
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【図２】
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