(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルコース、フラクトース又はスクロースを主成分とする糖を含む培地で培養することにより、培地中にエリスリトール、グリセリン及びリビトールを蓄積するトリコスポロノイデス・コウノスエンシス ７Ｅ−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２）株。
【請求項２】
トリコスポロノイデス・コウノスエンシス ７Ｅ−１ （ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２）株を、グルコース、フラクトース又はスクロースを主成分とし、糖濃度が２０〜６０％の培地で培養し、培地中に蓄積されたエリスリトール、グリセリン及びリビトールを採取することを特徴とする、エリスリトール、グリセリン及びリビトールの製造方法。
【請求項３】
培地の糖濃度が２０〜６０％で培養温度が２５〜４０℃の範囲内であることを特徴とする請求項２に記載のエリスリトール、グリセリン及びリビトールの製造方法。
【請求項４】
培地の糖濃度が３０〜５０％で培養温度が３５〜３９℃の範囲内であることを特徴とする請求項２に記載のエリスリトール、グリセリン及びリビトールの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は新規微生物及びそれを用いるポリオールの製造方法に関し、更に詳しくはトリコスポロノイデス属に属する新菌株であるトリコスポロノイデス・コウノスエンシス（Trichosporonoides kounosuensis）７Ｅ−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２）株及び該菌株を用いるポリオールの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
現在、ポリオール、特にエリスリトールを生産するために実用化されている微生物として、モニリエラ・トメントサ・バール・ポリニス（Moniliella tomentosa var. pollinis CBS 461.67）とトリコスポロノイデス・メガチリエンシス（Trichosporonoides megachiliensis SN-G42 FERM BP-1430）［オーレオバシデイウム（Aureobasidium sp. SN-G42 FERM P-8940と同じ）］等の２種類が知られている。前者には、糖類の発酵によりポリオールを工業的規模で製造する方法等（特公平６−３０５９１、同６−３０５９２、同６−３０５９３、同６−３０５９４）一連のポリオールの製造方法が知られている。また、後者にはエリスリトール生産能を有する新規微生物及びそれを用いる発酵によるエリスリトールの製造方法（特公平４−１１１８９、同４−６３５）等が知られている。
【０００３】
一方、トリコスポロノイデス属の微生物については、ブラジル国カンピナス大学のマリナ・Ａ・Ｙ・アオキ氏らによるスクロース及びブドウ糖からのエリスリトールへの変換の報告（BIOTECHNOLOGY LETTERS, Volume １５， No．４，ｐ．３８３−３８８，April １９９３）がある。この報告によると、グルコースからエリスリトールへの変換率が４３．０％、スクロースからエリスリトールへの変換率が３７．４％と高いものの、このときの培養液の糖濃度は１０％（Ｗ／Ｖ）と低く工業的規模での製造には問題がある。
【０００４】
更に、三菱化学の上田氏らはトリコスポロノイデス属の５菌種、即ちトリコスポロノイデス・オエドセファリス（Trichosporonoides oedocephalis CBS 649.66）、トリコスポロノイデス・マデイダ（Trichosporonoides madida CBS 240.79）、トリコスポロノイデス・ニグレッセンス（Trichosporonoides nigrescens CBS 268.81）、トリコスポロノイデス・スパスラタ（Trichosporonoides spathulata CBS 241.79）及びトリコスポロノイデス・メガチリエンシス（Trichosporonoides megachiliensis CBS 567.85）についてグルコースからエリスリトールが生成できることを報告している（特開平９−１５４５８９）。
しかしながら、培養温度範囲が２５〜３７℃（適温２７〜３５℃）と狭く、冷却に多量の水を必要とするなど、大規模生産には必ずしも有利とはいえない。特に、エリスリトール生産性が１３６．０ｇ／Ｌと最良の成績を示したトリコスポロノイデス・ニグレッセンスは残念ながら３７℃及びグルコース濃度５０％では生育を示さない事（後述）が知られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、ポリオール生産能の高い新規な微生物、特に比較的高い温度（３５〜３９℃）及び高い糖濃度（２０〜６０％）でもエリスリトール等のポリオールを多量に生成する微生物を提供することにある。また、本発明の別の目的はこの微生物を用いて安価にポリオールを製造する方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、ポリオール特にエリスリトールの生産能を有する新規微生物を見出すべく種々研究を行った結果、蜜蜂の巣より分離した新規微生物が上述した課題、即ち、培養温度３５〜３９℃、糖濃度２０〜６０％で良好な生育を示し、多量のポリオールを生成する事を見いだし本発明を完成した。
【０００７】
即ち、本発明は、グルコース、フラクトース又はスクロースを主成分とする糖を含む培地で培養することにより、培地中にエリスリトール、グリセリン及びリビトールを蓄積する、蜜蜂の巣より分離したトリコスポロノイデス属に属する新規微生物、更に詳しくはトリコスポロノイデス・コウノスエンシス ７Ｅ−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２）株に関する。更に、本発明は上記の微生物を、グルコース、フラクトース又はスクロースを主成分とし、糖濃度が２０〜６０％の培地で培養し、培養物からエリスリトール、グリセリン及びリビトールを採取する事を特徴とするエリスリトール、グリセリン及びリビトールの製造方法に関する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明に係る新規微生物は以下の方法により分離した。即ち、蜜蜂の巣を４０％のブドウ糖を含む培地で培養する事により耐糖性微生物を選抜し、更に培養温度を３５℃に設定する事により中温菌ないしは高温菌を選抜した。次いで、通常の微生物の分離方法にて純粋分離した微生物を３０％のグルコースを含む培地で培養し、培養物に蓄積されたポリオール量を測定する事によりポリオール生産能の高い本微生物、更に詳しくはトリコスポロノイデス・コウノスエンシス  ７Ｅ−１株を分離した。
この微生物は工業技術院生命工学工業技術研究所の特許微生物寄託センターに受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２として国際寄託されている（平成１０年１１月１２日に原寄託（寄託番号：ＦＥＲＭ  Ｐ−１６３０３、原寄託日：平成９年７月３日）より移管）。
【０００９】
本発明者により埼玉県鴻巣市の蜜蜂の巣より分離されたトリコスポロノイデス・コウノスエンシス  ７Ｅ−１株の菌学的性質は下記に詳述する通りである。トリコスポロノイデス  ・コウノスエンシス  ７Ｅ−１  の菌学的性情の試験はＮ．Ｊ．Ｗ．Ｋｒｅｇｅｒ−ｖａｎ  Ｒｉｊ  Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ編集“ザ・イースト・ア・タキソノミック・スタデー（The Yeasts, A Taxisonomic Study，Third  revised  and  enlarged  edition  ）”（1984年アムステルダムのエルスビーエル・サイエンス・パブリッシャ-ズ社（Elsevier  Science  Publishers  B.V.）出版）に準拠した。
【００１０】
１．培地上の生育状況
１）顕微鏡的所見
（ＹＭ液体培地２５℃、３日間培養）
栄養細胞の大きさ：４〜７．５×４〜１２μ
栄養細胞の形状：球形又は卵形又は楕円形
栄養細胞の形状：多極出芽
（ポテトグルコース寒天培地によるスライド培養、２５℃、７日間培養）
芽出分生子（Blastic conidia）：形成する
分裂子：形成する
偽菌糸：形成する
菌糸：形成する
２）液体培養（ＹＭ液体培地、２５℃培養）
表面生育：皮膜形成
濁度：透明又は微濁
沈査：大
培地の色：培養４日め頃より淡褐色に変化し、以後日数の経過とともに濃く変色する。
３）寒天培地（ＹＭ寒天培地、２５℃、２週間培養）
生育：良好
光沢：無し
色素：一週間以上培養すると、コロニー及び培地も暗褐色に変色する。
【００１１】
２．子嚢胞子の形成
ポテトグルコース寒天培地、コーンミール寒天培地、ＹＭ寒天培地、ゴロドコワ寒天培地及び酢酸培地で子嚢胞子を形成しない。
【００１２】
３．生理学的性質
酸素要求性                        好気的
生育温度                          ４２℃
最適生育温度                      ３１〜３７℃
生育ｐＨ                          ２〜１０．５
最適生育ｐＨ                      ５〜８
ＫＮＯ3の資化性                   有り
脂肪の分解                        無し
尿素の分解                        有り
ゼラチンの液化                    有り
カロチノイドの生成                無し
有機酸の生成                      有り
エステルの生成                    有り
デンプン様物質の生成              無し
ビタミンの要求性                  有り
ジアゾニウムブルーＢの呈色反応    有り
耐浸透圧性の有無
塩化ナトリウム濃度１０％      有り（生育する）
塩化ナトリウム濃度１２％      無し（生育せず）
グルコース濃度６０％          有り（生育する）
【００１３】
４．糖の発酵性
グルコース                        有り
ラクトース                        無し
ガラクトース                      有り
メリビオース                      無し
ラフィノース                      無し
スクロース                        有り
マルトース                        有り
イヌリン                          無し
イノシトール                      無し
【００１４】
５．炭素化合物の資化性
Ｄ−アラビノース                  −
Ｌ−アラビノース                  ＋
Ｄ−リボース                      ＋
Ｄ−キシロース                    ＋
Ｄ−グルコース                    ＋
Ｄ−マンノース                    ＋
Ｄ−ガラクトース                  ＋
Ｌ−ラムノース                    −
Ｄ−フラクトース                  ＋
Ｌ−ソルボース                    −
マルートス                        ＋
スクロース                        ＋
ラクトース                        −
メリビオース                      −
セロビオース                      ＋
トレハロース                      −
ラフィノース                      −
メレジトース                      −
αーメチルーＤ−グルコシド        −
アルブチン                        ＋
エスクリン                        −
サリシン                          −
デキストリン                      ＋
可溶性デンプン                    ＋
イヌリン                          ＋
メタノール                        −
エタノール                        ＋
アドニトール（リビトール）        −
イノシトール                      −
エリスリトール                    ＋
Ｄ−マンニトール                  ＋
Ｄ−ソルビトール                  −
ズルシトール                      −
キシリトール                      ＋
グリセリン                        ＋
ＤＬー乳酸塩                      −
コハク酸塩                        ＋
クエン酸塩                        ＋
【００１５】
本菌株の上記諸性質を前記著作（The Yeasts, A Taxisonomic Study）の酵母の分類に照合するとトリコスポロン属（Trichosporon）に近似している。しかしながらジアゾニウムブルーＢの呈色反応、尿素分解、糖の発酵性及びＫＮＯ3の資化性等からトリコスポロン属のどの菌種とも合致せず異なっている。スタデイズ・イン・マイコロジイ  Ｎｏ．１９（Studies in Mycology No. 19）のＧ．Ｓ．ＤＥ  ＨＯＯＧ編集“ザ・ブラック・イースト，II：モニリエラ・アンド・アライド・ゼネラ（THE BLACK YEASTS, II: MONILIELLA AND ALLIED GENERA）”（1979年オランダのＣＢＳ出版（CBS:CENTRAALBUREAU VOOR SCHIMMELCULTURES））の分類方法の記載に照合すると、属の分類では芽出分生子（Blastic conidia）の長さ（が１０μｍ以上ではモニリエラ（Ｍｏｎｉｌｉｅｌｌａ）属に、１０μｍ以下はトリコスポロノイデス属に分類されている。本菌株の芽出分生子（Blastic conidia）は殆どが５〜７．５μｍの長さである事）からトリコスポロノイデス属に分類される。
【００１６】
種の分類方法の記載に照合すると、トリコスポロノイデス・オエドセファリス（Trichosporonoides oedocephalis CBS 649.66）は菌子柄（Stalk）の先端に同調的に分生子を形成するのに対して本菌は形成しない点で異なっている。コーンミール寒天培地（２５℃、２週間培養）でのコロニーの生育を比較するとトリコスポロノイデス・オエドセファリスはコロニーの直径が１５．５〜１７ｍｍと遅い生育を示し、コロニーの表面は黒褐色を呈し、気中菌糸の形成は観察されなかった。それに対して、本菌株はコロニーの直径が３１〜３４ｍｍと旺盛な生育を示し、コロニーの表面は旺盛な気中菌糸の形成により灰白色を呈した。
【００１７】
ポテトデキストロース寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いては、トリコスポロノイデス・オエドセファリスのコロニーの直径は２２〜２２．５ｍｍと中程度の生育を示し、コロニーの表面はしわ状で中心部は濃褐色、辺縁部は淡褐色を呈しており、コロニー表面の所々には薄く微弱な気中菌糸の形成が認められた。それに対して、本菌株はコロニーの直径が３３〜３４．５ｍｍと旺盛な生育を示した。また、コロニーの表面は平で旺盛な気中菌糸に覆われて灰白色を呈した。ＹＭ寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いては、トリコスポロノイデス・オエドセファリスのコロニーの直径は２２〜２３ｍｍと中程度の生育を示した。コロニーの表面はしわ状で褐色を呈し、辺縁部は白色〜淡褐色を呈し、コロニーの辺縁部の所々に気中菌糸の形成が認められた。それに対して、本菌株は生育が旺盛でコロニーの直径は３２〜３４ｍｍを示した。また、コロニーの表面は旺盛な気中菌糸に覆われて灰白色を呈した。炭素化合物の資化性に於いてはトリコスポロノイデス・オエドセファリスはＤーキシロース、キシリトール及びイヌリンを資化しないのに対し、本菌株はこれらを資化する点で異なっていた。
【００１８】
トリコスポロノイデス・スパスラタ（Trichosporonoides spathulata CBS 241.79）はスプーン型の菌子柄を形成するのに対して本菌株は形成しない。コーンミール寒天培地（２５℃、２週間培養）でのコロニーの生育を比較すると、トリコスポロノイデス・スパスラタはコロニーの直径が５０ｍｍ以上と巨大化するが淡黄褐色の極めて薄い生育で、しかも気中菌糸を形成しない点で本菌株（前掲）とは異なっていた。ポテトグルコース寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いては、トリコスポロノイデス・スパスラタのコロニーの直径は５１〜５３ｍｍと本菌株（前掲）以上に極めて旺盛な生育を示した。また、トリコスポロノイデス・スパスラタのコロニーの表面は中心から放射状にしわを形成し、中心部は濃褐色、辺縁部は淡褐色を呈し、コロニー表面の中心は濃く周辺に向かっては薄く疎らに灰白色の気中菌糸の形成するのに対し、本菌株は前に記したようにコロニー表面はしわが無く平滑で灰白色の良く生育した菌糸で覆われている点で異なっていた。
【００１９】
ＹＭ寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いても、トリコスポロノイデス・スパスラタのコロニーの直径は４４．５〜４７ｍｍと本菌株以上の旺盛な生育を示した。コロニーの表面は中央が僅かに盛り上がり中心付近から辺縁部に向かって放射状にしわを形成し、表面は全面純白の気中菌糸を形成するのに対し本菌株は前に示したように、気中菌糸は灰白色であった。炭素化合物の資化性に於いては、トリコスポロノイデス・スパスラタはメレジトース、ラフィノース、Ｄ−ソルビトール、ＤＬ−乳酸塩、エスクリン、及びサリシンを資化するのに対し、本菌株はそれらを資化しない点で異なっている。また、トリコスポロノイデス・スパスラタは培地にビタミンを要求せず、牛脂の分解性試験は陽性であるが本菌株はビタミン要求性であり、牛脂の分解性試験は陰性である。
【００２０】
トリコスポロノイデス・マデイダ（Trichosporonoides madida CBS 240.79）は菌糸を殆ど形成しない点で本菌株とは大きく異なっている。コーンミール寒天培地（２５℃、２週間培養）でのコロニーの生育を比較するとトリコスポロノイデス・マデイダはコロニーの直径が２３〜２５ｍｍと中程度の生育で、中心部は濃褐色を呈し、辺縁部は淡褐色で気中菌糸は形成しない。それに対して本菌株は生育も旺盛で、気中菌糸も良く形成する事は前に記したとうりである。
ポテトデキストロース寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いても本菌株とは異なっている。即ち、トリコスポロノイデス・マデイダのコロニーの直径は２２〜２４．５ｍｍと本菌株と異なり中程度の生育で、また、コロニーは黒褐色で表面はいくつかの塊状に盛り上がって生育し、気中菌糸の形成も認められない点でも本菌株とは異なっている。
【００２１】
ＹＭ寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いても、トリコスポロノイデス・マデイダのコロニーの直径は２１〜２２ｍｍと本菌株とは異なり中程度の生育であった。コロニーの表面も本菌株とは異なり粗く盛り上がり濃褐色を呈し、辺縁部は淡褐色であった。気中菌糸の形成も殆ど認められなかった。糖の発酵ではトリコスポロノイデス・マデイダはガラクトースとスクロースを発酵せず本菌株とは異なる。尚、スクロースの発酵性についてはＡ．Ｔ．ＭＡＲＴＩＮＥＺ（スタデイズ・イン・マイコロジイ  Ｎｏ．１９（Studies in Mycology No.19））の文献では陽性とあるが、G.Douglas及びInglisらの文献（G.Douglas Inglis, Lynne Sigler, Mark S. Goettel. TRICHOSPORONOIDES MEGACHILIENSIS, A NEW HYPHOMYCETE ASSOCIATED WITH ALFALFA LEAFCUTTER BEES, WITH NOTES ON TRICHOSPORONOIDES AND MONILIELLA. Mycologia, 84（4）, 1992, pp. 555-570）では陰性と報告されており、本発明者の試験結果とも一致したので陰性とした。炭素化合物の資化性に於いてはトリコスポロノイデス・マデイダはガラクトースとイヌリンを資化しない対し、本菌株はそれらを資化する点で異なっている。
【００２２】
前記したG.Douglas及びInglisらの文献の分類方法の記載に照合するとトリコスポロノイデス・ニグレッセンス（Trichosporonoides nigrescens CBS 268.81）は３７℃で生育せず、スクロースも発酵しない点で本菌株とは異なっている。また炭素化合物の資化性に於いてはトリコスポロノイデス・ニグレッセンスはＬ−アラビノース、Ｄ−キシロースを資化しな点とＤ−ソルビトールを資化する点で本菌株とは異なっている。コーンミール寒天培地（２５℃、２週間培養）でのコロニーの生育を比較するとトリコスポロノイデス・ニグレッセンスはコロニーの直径が９〜９．５ｍｍと弱い生育で本菌株とは異なっていた。またコロニー中心部は黒濃褐色を呈し、辺縁部は淡褐色で気中菌糸の形成は認められなかった。それに対して、本菌株は生育も旺盛で、また、気中菌糸も良く形成する事は前に記したとうりである。
【００２３】
ポテトデキストロース寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いても本菌株とは異なっている。即ち、トリコスポロノイデス・ニグレッセンスのコロニーの直径は１７．５〜１９ｍｍと本菌株と異なり中程度の生育で、コロニーは黒褐色で表面はいくつかの塊状に盛り上がって生育し、気中菌糸の形成は認められなかった。これらは本菌株とは異なる特徴である。ＹＭ寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いても、トリコスポロノイデス・ニグレッセンスのコロニーの直径は１３〜１４．５ｍｍと本菌株とは異なり遅い生育であった。コロニーの表面は濃褐色で表面はいくつかの塊状に盛り上がって生育し、気中菌糸の形成は認められなかった。これらの特徴も本菌株とは異なる特徴である。
【００２４】
同様に、前記G.Douglas及びInglisらの文献の分類方法の記載に照合するとトリコスポロノイデス・オーストラリエンス（Trichosporonoides australiense Ramirez（1989））は乳糖を発酵し、Ｌ−アラビノースとＤ−キシロースを資化しないが、本菌株は反対に乳糖を発酵せず、Ｌ−アラビノースとＤ−キシロースを資化する点で異なっている。また、トリコスポロノイデス・オーストラリエンスは耐糖性が低く、５０％のブドウ糖を含む培地には生育しないが本菌株は６０％のブドウ糖を含む培地でも良く生育する点で異なっている。また、トリコスポロノイデス・オーストラリエンスはウレアーゼを産生しない為、尿素を分解せず、ジアゾニウムブルーＢの呈色反応も陰性であるが本菌株は両方共に陽性である。
【００２５】
トリコスポロノイデス・メガチリエンシス（Trichosporonoides megachiliensis CBS 567.85）は硝酸塩を資化せず、Ｌーアラビノース、Ｄ−キシロース、キシリトール、イヌリンなども資化しない点で本菌株とは異なっている。コーンミール寒天培地（２５℃、２週間培養）でのコロニーの生育を比較するとトリコスポロノイデス・メガチリエンシスはコロニーの直径が２８〜２９．５ｍｍと本菌株に近い生育をするが、表面は平で黒褐色の薄い生育となり気中菌糸の形成は極めて薄く貧弱である。それに対して、本菌株の気中菌糸はコロニー基部の褐色の色彩が見えない程よく形成し、コロニー表面を灰白色にしている。
【００２６】
ポテトデキストロース寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いても本菌株とは異なっている。即ち、トリコスポロノイデス・メガチリエンシスのコロニーの直径は２５〜２７ｍｍと本菌株に近い生育を示しすが、本菌株とは異なりコロニーは殆ど気中菌糸を形成せず、表面は平坦で黒褐色を呈していた。また、本菌株とは異なり、コロニーの辺縁部はコロニーの先端が培地中に放射状に伸張し、いが栗状の独特の形態を呈した。ＹＭ寒天培地（２５℃、２週間培養）に於いては、トリコスポロノイデス・メガチリエンシスのコロニーの直径は２９．８〜３０．５ｍｍと本菌株とほぼ同等の旺盛な生育を示した。しかし、気中菌糸の形成は表面の一部、コロニーによっては表面の半分程度で、コロニーの表面全面に気中菌糸を形成する本菌株とは異なっている。
【００２７】
従って、本菌株はトリコスポロノイデス属に属するが、これまでに報告された菌種、即ち、トリコスポロノイデス・オエドセファリス、トリコスポロノイデス・スパスラタ、トリコスポロノイデス・マデイダ、トリコスポロノイデス・ニグレッセンス、トリコスポロノイデス・オーストラリエンス及びトリコスポロノイデス・メガチリエンシスとは異なる新種である。本発明者は、この新種をトリコスポロノイデス・コウノスエンシスと名付けた。上記新種の他、該新種に自然もしくは人工的手段、例えば紫外線照射、突然変異誘起剤による処理によって変異させた変異株も、ポリオール生産能を有する限り本発明に包含される。
【００２８】
本菌株の培養は炭素源、窒素源、無機塩類等を含む液体培地を用いて好気的条件下に行われる。
炭素源としてはグルコース、フラクトース、スクロース等の糖類及びこれら糖類を含む澱粉糖化液、甘藷糖蜜、甜菜糖蜜等の糖質が使用される。培地の糖濃度は２０〜６０％、好ましくは３０〜５０％である。
窒素源としては微生物により利用可能な窒素化合物、例えば酵母エキス、ペプトン、麦芽エキス、コーンスチープリカー、アンモニア水、アンモニウム塩類、尿素、硝酸塩類等が使用される。
無機塩としてはリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、カリウム塩、鉄塩、マンガン塩等が適宜使用される。
【００２９】
培養は通常、培養温度２５〜４０℃、好ましくは３５〜３９℃で３〜１０日間行われ、培養により培地中に主としてエリスリトール、グリセリン及びリビトールを含むポリオールが蓄積される。ポリオール合計の収率は、例えば培地中のグルコース濃度３０Ｗ／Ｖ％の場合、４３．７％である。
培地中に蓄積されたポリオールを採取する方法は公知の方法に従って行えばよい、例えば菌体を濾過あるいは遠心分離によって除去し、イオン交換樹脂処理法、吸着クロマトグラフィー法、溶媒抽出法あるいは濃縮冷却晶析法その他の方法を適宜組み合わせることにより行われる。また、不純物の除去には通常用いられる活性炭脱色処理法、再結法で精製しても良い。
【００３０】
【実施例】
次に、本発明の実施例について具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００３１】
実施例１（培養温度とポリオール産生量の比較）
トリコスポロノイデス・コウノスエンシス  ７Ｅ−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２）株を酵母エキス培地（グルコース  ３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌し、３５℃で３日間振とう培養した。次いで得られた培養液を、同酵母エキス培地を分注しておいたＬ型培養管に、培地量の２％になるように接種し、振とう温度勾配培養装置（アドバンテック東洋株式会社、モデルＴＮ−２１４８）を用いて、振とう数６０回／分、温度１５．９〜４６．２℃の範囲で６日間培養し、培養温度の違いによるポリオールの産生量（ｇ／Ｌ）の比較を行った。ポリオールの産生量及び培養液中の残存グルコース量は高速液体クロマトグラフィ（島津製作所、モデルＲＩＤ−６Ａ）で培養液中の量を測定することにより算出した。また、培養液中の菌の増殖性は培養液の濁度（６６０ｎｍの吸光度×培養液の希釈倍数）で表示して比較した。その結果を表１に示した。
【００３２】
【表１】
0004301612.tif 000002
【００３３】
実施例２（グルコースの濃度とポリオール産生量）
トリコスポロノイデス・コウノスエンシス  ７Ｅ−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２）株を酵母エキス培地（グルコース  ３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌し、３５℃で３日間振とう培養した。続いて、得られた種培養液を、予め三角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、即ち、グルコースの濃度を２０、３０、４０、５０Ｗ／Ｖ％に調製した酵母エキス培地（酵母エキス培地を基本にＣ／Ｎ比は一定）に培地量の２％接種し、振とう数２２０回／分、３５℃で培養した。培養は、培地中のグルコースが殆ど消費されるまで（１１５〜１５７時間）培養した。培養によるポリオールの産生量は培養液を高速液体クロマトグラフィ（島津製作所、モデルＲＩＤ−６Ａ）で測定することにより算出した。その結果を表２に示した。表中の対Glu 収率は消費されたグルコースに対するポリオール合計の収率を表す。
【００３４】
【表２】
0004301612.tif 000003
【００３５】
実施例３（スクロースの濃度とポリオール産生量）
トリコスポロノイデス・コウノスエンシス  ７Ｅ−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２）株を酵母エキス培地（グルコース  ３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌し、３５℃で３日間振とう培養した後、予め三角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、即ち、スクロースの濃度を２０、３０、４０、５０Ｗ／Ｖ％に調製したスクロース酵母エキス培地（酵母エキス培地を基本にＣ／Ｎ比は一定）に培地量の２％接種し、振とう数２２０回／分、３５℃で培養した。培養は、培地中のスクロースが殆ど消費されるまで（１１５〜１５７時間）行った。培養によるポリオールの産生量は培養液を高速液体クロマトグラフィ（島津製作所、モデルＲＩＤ−６Ａ）で測定することにより算出した。その結果を表３に示した。表中の対Suc 収率は消費されたスクロース対するポリオール合計の収率を表す。
【００３６】
【表３】
0004301612.tif 000004
【００３７】
実施例４（フラクトースとポリオール産生量）
トリコスポロノイデス・コウノスエンシス  ７Ｅ−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２）株を酵母エキス培地（グルコース  ３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌し、３５℃、３日間振とう培養した後、予め三角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、即ち、フラクトースの濃度を４０Ｗ／Ｖ％に調製したフラクトース酵母エキス培地（酵母エキス培地を基本にＣ／Ｎ比は一定）に培地量の２％接種し、振とう数２２０回／分、３５℃で１０日間培養した。その結果、培地中にポリオール（エリスリトール、グリセリン及びリビトールの合計）が１９２．１（ｇ／Ｌ）産生した。
【００３８】
実施例５
トリコスポロノイデス・コウノスエンシス  ７Ｅ−１（ＦＥＲＭ ＢＰ−６５７２）株を酵母エキス培地（グルコース  ３０Ｗ／Ｖ％、酵母エキス１Ｗ／Ｖ％）に植菌し、３５℃、３日間振とう培養した。その後、予め三角フラスコに分注しておいた糖濃度試験用培地、即ち、グルコースの濃度を３０又は４０Ｗ／Ｖ％に調製した酵母エキス培地（酵母エキス培地を基本にＣ／Ｎ比は一定）に培地量の２％接種し、振とう数２２０回／分、３８.５℃で培養した。培養は、培地中のグルコースが全て消費されるまで（１１３又は１４３時間）行った。培養によるポリオールの産生量は培養液を高速液体クロマトグラフィ（島津製作所、モデルＲＩＤ−６Ａ）で測定することにより算出した。その結果、濃度３０％のグルコース培地ではポリオール合計の収率が４３．７％で濃度４０％の培地ではポリオール合計の収率が４４．０％であった。
【００３９】
【発明の効果】
本発明に係る新規微生物は、従来公知のトリコスポロノイデス属のいずれの種とも違った分類学上の性質を有し、しかも、エリスリトールなどのポリオールの生産能が高い有用な微生物である。また、本微生物を用いることによりエリスリトールなどのポリオールを効率よく製造することができる。