(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
活性成分として下記（a）と（b）からなる脱色素活性成分を含むことを特徴とする皮膚美容術用組成物：
（a）   下記（i）と（ii）の酸混合物：
（i）   コウジ酸： 1〜15重量％
（ii）   グリコール酸： 20〜30重量％
（b）   下記を主成分とする植物抽出物          20〜35重量％
タンレックスＶＢ 2重量％
（没食子のタンニン酸の水性／
ブチレングリール抽出物）
ユキノシタ 1重量％
ナリンジン（グレープフルーツ抽出物） 0.75重量％
ソハクヒＢｇ 7.5重量％
（ブチレングリール抽出物）
トウグワ 13重量％
（ホワイトマルベリー）
レモンＢｇ 2.5重量％
（レモンのブチレングリール抽出物） 2.5重量％
残部は組成物に許容される担体。
【請求項２】
植物抽出物の活性成分が植物の茎、葉および／または根から水／アルコール媒体を用いた１段階の抽出で得られたものである請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
酸混合物（a）と植物抽出物由来の活性成分（b）との間の重量比が50／50〜70／30である請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
セラミドをさらに含む請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物の色素過剰治療に有効な薬剤の調製での使用。
【発明の詳細な説明】
本発明は脱色素活性
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を示す組成物およびその使用に関するものである。
褐色のしみはメラニン過剰によって起こる局部的な色素過剰である。
加齢と供に濃くなるあるいは現れてくるメラニンを含むしみは常に心理的なレベルにおいて堪え難い美容上の問題である。
色素過剰はその原因に応じて主として２つのグループに分類される：
（1）メラニン細胞の機能亢進に起因する色素過剰およびメラニン細胞拡散に起因する色素過剰
a）そばかす
通常、褐色のしみと呼ばれ、幼児期に主に透明な（色つやのよい）肌に現れ、表皮の露出した部分に局在する傾向を有する。太陽光線に曝されることによって濃くなる。
組織学的にはメラニン細胞の数は正常であるがメラニンの量が増加する。
b）ほくろ又は太陽ほくろ（solar lentigo）
非常に小さい円形且つ平坦なマークであって、黄褐色から黒色の色合いを有し、幼児期に現れる。非常に黒い色でない限り、そばかすと区別することは実際上不可能である。
c）老人性ほくろ
50歳を過ぎてから手の甲、前腕および顔に現れる褐色のマーク。組織学的には表皮基底層のメラニン色素過剰であり、メラニン細胞の増加を伴う。
d）黒皮症
ほとんどの場合額と頬に左右対称に広がる色素層であり、皮膚の浅黒い女性に多く現れる。次のような３つの場合に現れることがある：
妊娠中：褐色斑
エストロプロゲステロン剤摂取中
突発性（原因不明）
2）色素失調による色素過剰
これは光感作に続いて起こる色素過剰である。
これはチャーム（時計の鎖や腕輪につける小さな飾り）または香水による皮膚炎などの典型的な皮膚病である。これは褐色で幾分黒っぽいマークであり、香水や化粧品の塗布後に光に当たった部分に群れになった状態か連なった状態で発生し、数カ月で徐々に、あるいは突然消える。
従って、低濃度で優れた脱色素活性を示し且つ肌への残留許容限界の高い組成物が必要とされている。
従って、本発明の対象は主成分として脱色素活性を有する下記（a）と（b）とを組合せた皮膚の美容用組成物にある：
（a）下記（i）、（ii）の混合物：
（i）少なくとも一種のα-ヒドロキシル化された酸またはその誘導体
（ii）コウジ酸（acid kojique）、3,4-ジヒドロキシ桂皮酸（カフェー酸）、アゼライン酸、アミノ酪酸、フザリン酸、5-ヒドロキシ2-ヒドロキシメチル-γ-ピリドンおよびその誘導体で構成される群から選択される少なくとも一種類の化合物、
（b）トウグワ（murier blanc）、カンゾウ（reglisse）、スカルキャップ（scutelaria）、グレープフルーツ、カバノキ、ヒース、ストロベリーツリー、クマコケモモ、レモン、レタス、大型褐藻（コンブ）、キュウリ、ヤクヨウニンジン、ホップ、トウモロコシ、ナツシロギク、セージ（sauge）、大豆、スピルリナ、ライム、フェロシアスアロエ、ユキノシタ、ブラッドウォート（sanguisorba）、ホーレン（hoelen）、ウッドローズ（rose fruit）、α−オリザノール、ワレモコウ（burnet）、イチョウ、タンレックス（tanlex）VB、エクリプサアルバ（Eclipsa  alba）から選択される少なくとも一種類の植物の抽出物に由来する少なくとも一つの活性成分（ただし、組成物がコウジ酸およびカンゾウを含む場合には、他の植物抽出物成分を少なくとももう一種類含有する）
（a）に記載の酸からアスコルビン酸を除外するのが望ましい。（i）および（ii）に記載の酸誘導体の中では塩、主としてアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩とアンモニウム塩が挙げられる。誘導体としてはさらに、エステル、主として砂糖などのポリオールとのエステルを挙げることができ、特に、同じポリオール上に２つの酸誘導体を有する混合エステルを挙げることができる。
使用可能なα−ヒドロキシル化された酸としてはマレイン酸、クエン酸、乳酸およびグリコール酸が挙げられ、その含有率は組成物全体の重量に対して0.1〜45％にするのが有利である。
本発明においてより有利な結果をもたらす酸（ii）はコウジ酸、３，４-ジヒドロキシ桂皮酸（カフェー酸）または5-ヒドロキシ-2-ヒドロキシメチル-γ-ピリドンであり、最後に挙げた化合物が特に好ましい。従って、脱色素組成物のα-ヒドロキシル化されていない酸の部分をこれらの化合物またはその塩（単独または混合物）で構成するのが有利である。
特に有利な組み合わせとしてはコウジ酸と、ワレモコウと、エクリプサアルバとの混合物からなる組合せがある。後者はα-ヒドロキシル化された酸（必要に応じてさらに他の植物抽出成分）と組合せることができる。
植物抽出物の活性成分は植物または植物の一部から抽出で得られるが、活性成分が同定されている場合には化学合成によって入手することもできる。この合成は完全合成または半合成にすることができる。
活性成分はトウグワ、カンゾウ、スカッテラリア（scuttellaria）、グレープフルーツ、カバノキ、ヒース、ストロベリーツリー、クマコケモモ、レタス、大豆、フェロシアスアロエ、ユキノシタ、ローズフルーツ、ワレモコウおよび／またはエクリプサアルバ（Eclipsa alba）から得られる植物抽出物から得るのが好ましい。
抽出によって得る場合、植物抽出物の活性成分は植物の茎、葉および／または根から水／アルコール媒体を用いた１段階の抽出によって得ることができる。大抵の場合、活性成分とその他の成分とを含む水／アルコール抽出物をそのまま用いることができるが、抽出物中に不要または有毒な成分がある場合には、選択的沈殿、溶媒抽出および／またはクロマトグラフィー等の公知の方法で除去することは当然できる。
活性成分の組成は２つの部分の活性、特に植物活性成分の活性に応じて大きく変えるころができ、酸混合物が活性成分の0.1〜99重量％を構成し、植物抽出物が残りの部分を構成するようにすることができる。
酸部分と植物抽出物の活性成分との重量比は50／50〜70／30であるのが好ましい。
本発明の組成物は他の活性成分を含むことができるが、それらについては上記比率に含まれないものとする。
従って、本発明の一つの観点から、本発明組成物はセラミド、ベクトライジング高分子または浸透促進成分から選択される少なくとも一種の化合物をさらに含有することができる。
既に述べたように、酸混合物は少なくとも部分的に糖エステルにグラフトされていても良い。
最終的な組成物中の活性成分含有率は１〜20％にするのが好ましい。
本発明による組成物は下記配合にすることができる：
コウジ酸：                          1〜15％
グリコール酸：                      20〜30％
タンレックスＶＢ、ユキノシタ、ナリンジン
（Naringin）、ソハクヒBg（Sohakuhi Bg）、トウグワ、
レモンBgから得られる植物抽出物      20〜35％、
残部はこの組成物に適した担体。
メラニンは紫外線の有害な影響から肌を保護する。本発明の組成物がメラニンの生成を低下させるという事実を考慮して、肌が保護無しで太陽に曝された時に受けるダメージを回避するために効果の高いサンプロテクト剤を化粧品組成物に添加するのが有利である。
そのようなサンプロテクト剤は当業者に周知の有機および／または無機フィルターにすることができる。そのようなフィルターとしては金属酸化物粒子すなわちチタン、鉄、セリウム、アルミニウムなどの粒子やタルク粒子を挙げることができる。
フィルターの種類、その含有率およびその粒度は最終的に必要な配合物の粘稠度によって決定される。
本発明の組成物は主としてローション、ジェル、乳液、クリーム、滑剤の状態で提供され、製薬学および／または美容術で許容可能な適当なキャリヤを含むことができる。そのようなキャリヤとしては当業者に周知の保存料、抗酸化剤、着色物質、香料、界面活性剤、増粘剤を挙げることができる。さらに、活性アジュバントおよび／またはその他の活性成分を含むこともできる。
以下の実施例は、本発明を具体的に説明するためのものであって、本発明の範囲を限定するものではない。
以下の実施例では下記図面を参照する：
図１：各種組成物の脱色素作用の肉眼による測定
図２：塗布領域の色素外観に対する組織試験での処理効果
図３：各種脱色素処理の効果の比較
実施例１
本発明組成物の調製
組成物の活性成分は下記の通り：
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操作方法
水の一部に保存料とグリコール酸、さらにコウジ酸を溶解し、75℃に加熱してゆっくりと（ii）を添加する。
以下の実施例では実施例１の配合物を《Bruni clear》という。
実施例２
チロシナーゼ活性に対する各種化合物の作用のインビトロ比較試験
シングレット酸素および紫外線の非存在下における試験
1.  試験原理
チロシンは下記反応を触媒することができる：
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１つの仮説（この仮説によって本発明はなんら限定されるものではない）として、本発明の組成物は各種成分間の相乗作用によってチロシナーゼの多機能阻害剤として挙動することが考えられる。事実、メラニン合成の最初の２ステップは、チロシナーゼがチロシンに作用し、その後にL-ドパに作用するというものである。従って、チロシナーゼ活性の阻害によってメラニン合成が遮断される。
本発明組成物の利点の１つは酵素反応を可逆的に遮断する競合阻害剤として機能することにある。すなわち、本発明組成物は酵素の構造を変化させずに、天然のチロシナーゼ基質またはドパと競合するだけである。
下記試験では分光光度計を用いて475nmで定量可能な着色化合物であるドパクロムを定量することによってチロシナーゼ阻害を測定することができる。
また、酵素反応速度を測定してチロシナーゼの酵素活性に対する各化合物の影響を検討する。
反応はpH7のリン酸バッファー中で行う。チロシナーゼを基質であるL-ドパと接触させる。反応媒体に被験分子を添加することができる。
さらに、試験区（被験分子を含む）の光学密度の分単位の変化を対照区（被験分子を含まない）と比較する。
被験分子のチロシン活性に対する影響が得られる。
結果は対照区の活性を100％として％で示す。
2.  プロトコル
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ドパクロムの生成を475nmで３分間追跡する。
3.  インビトロにおけるチロシナーゼの阻害結果
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実施例３
10％のBruni clearを含むクリームの処方
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実施例４
10％のBruni clearを含むクリームと、5％のハイドロキノンを含むクリームの脱色素活性の検討
実施例３に従ってクリームを調製し、実施例３の処方の活性成分を５％のハイドロキノンまたは1.5％のコウジ酸でそれぞれ置換し、水の割合のみを変化させる。
この研究は
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によって行われ、色素沈着を有するネズミについてBruni clear（登録商標）およびAK1.5％と呼ばれる２種類の新規な脱色素クリームの効果を5％のハイドロキノンよりなる対照区（＋）および市販の参考クリームとの比較で評価することを目的とするものである。
肉眼による観点では、対照区（＋）、参考製品およびクリームAK1.5に比べて、クリームBruni clear（登録商標）が最も優れた脱色素効果を示した。
さらに、組織学的レベルでは、クリームBruni clear（登録商標）の活性は対照区（＋）と同程度であり、クリームAK1.5％よりも高く、参考製品よりも高い。
この結果を考慮して、クリームBruni clear（登録商標）は少なくとも対照区（＋）と同等であり且ついずれの場合も試験した他の配合物および参考製品よりも高い色素脱失活性を有すると考えられる。
さらに、12週間の塗布後にも目立った皮膚の病変が報告されていないことから、クリームBruni clear（登録商標）のトレランスが高いと思われることは特筆すべきことである。ハイドロキノンは2％以上の投与量で使用することが法律で禁止されていることにも注意されたい。
実施例５
マウスにおける脱色素活性の研究
1.  材料および方法
1.1.  動物
Centre de Recherches et d’Elevage de Oncins IFFA CREDO（B.P.0109,69592 L’Arbresle Cedex）から入手した色素沈着を有するC3H系統のオスのマウスを用いて試験を行った。これらの動物は以前に他の試験に使用されたことはなく、試験開始時点の平均体重は約20ｇであった。
1.2.  ケージおよび餌の条件
試験の一週間前、挨を取り除いたおがくずを入れたポリプロピレン製のケージに標準的な生息環境条件（温度20±2℃、24時間のうち12時間光を当てる）で動物を入れ、餌（No.404粒子状の齧歯類専用餌：UAR,7 rue Gallieni 91360 Villemoisson-sur-Orge）と水道水を十分に与えた。
1.3.  操作方法
動物群の準備および構成
動物をランダムに６匹ずつ下記４つの群に分けた：
（a）グループ1または対照区（＋）：5％のハイドロキノンを含む乳液o/wで処理した６匹の動物で構成される。
（b）グループ2：製品CD1（＝Bruni clear（登録商標））で処理した６匹の動物で構成される。
（c）グループ3：製品CD2すなわち1％のコウジ酸で処理した6匹の動物で構成される。
（d）グループ4：直接市場から調達した参考売薬（Depigmenten（登録商標）、製造番号10405）で処理した6匹の動物で構成される
（e）５番目のグループは、ワセリンよりなるプラシーボ調製物を用いて処理した4匹の動物で構成され、これを正常な色素沈着の対照区として使用して各種処理の効果を評価した。
処理
被験調製物の適量を動物の尾の皮膚に塗布した後、活性成分を確実に浸透させるために弱いマッサージを行う方法で、1週間に6日の割合で連続12週間に渡って動物を処理した。
実施した試験
（a）色素脱失の強度の肉眼による評価
試験中定期的（一週間に１度）および試験終了後、塗布領域を観察して、色素脱失の強度を下記評価スケールを用いて盲検法で評価した：
肉眼試験における色素脱失強度の数値評価：
色素脱失無し                                        0
不明瞭な色素脱失                                    1
小さいが非常に明確な色素脱失斑が見られる            2
正常な着色領域の残る中程度の色素脱失                3
皮膚の着色が均一に失われる比較的強い色素脱失        4
完全な色素脱失（白色皮膚）                          5
（b）局部的なトレランスの評価
上記試験と平行して、塗布領域レベルで皮膚の状態を観察し、被験物質について肌へのトレランスを評価した。
（c）組織学的試験
肉眼による観察試験の終了後、動物を犠牲にして皮膚の塗布領域レベルの生検を行った。
組織学的検体の検査は、動物への処理の割当順序を知らない試験者によって盲検法で行った。
1.4.  結果の表現と組織的分析
肉眼による評価
各試験で決定された肉眼によるスコアを、Kruskal-Wallisのノンパラメトリック試験を用いて総合的に分析した。
組織学的結果
活性処理を施されていないマウスでは、倍率×40で、体毛形成によって縁取られたリング状構造の存在が観察された。このリング状構造の数は検体あたり52から106であった。
この結果の解釈については、次のように考えられる。つまり、そのようなリングの正常な色素沈着外観は、上皮の基底層にメラニン細胞が蓄積すると供にメラニン色素が角質層を介して移動し、その下にある真皮でごくわずかなメラノファージの状態で穏やかな色素再摂取が起こることによって形成される。
色素沈着評価は下記で行った：
（a）検査すべきリングの総数を記録する。
（b）上記基準に基づいて正常な色素沈着を示すリングの数を記録する
（c）反対に全く色素沈着を示さないリングの数を記録する
（d）最後に色素過剰リングの数を推定する
リング内および上皮エッジにメラニン細胞および色素が全く存在しない場合を色素沈着無しと定義した。
低色素（hypopigmentation）はさまざまであるが、基底層のメラニン細胞の明らかな欠乏、角質層を介しての色素の移動が見られないこと、およびその下の真皮においてしばしばより多量の色素の摂取が起こることによって特徴付けられよう。
解釈方法は各調製物について下記1〜3を示す沈着部
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の割合を評価する方法である：
１  正常な色素沈着
２  部分的な色素沈着
３  色素沈着なし
さらに、下記数値スケールを用いて色素沈着の変化に応じて沈着部に重み（cotations）（C）を割り当てた。
組織学的試験における皮膚沈着部の色素沈着の数値評価：
正常な色素沈着：      0
部分的な色素沈着：    1
色素沈着無し：        2
各調製物について、評価付けの合計を観察した沈着部の数で割った値に相当する脱色素指数を計算した。
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ここで、G＝個々のリングの評価付け
N＝リング総数
各処理グループ内の分布の正常さを確認した後、Duncanの試験によって補完される分散分析によって得られた値と比較し、平均値間の隔たりの有意性の度合いを決定した。
有意性
各種の統計学的試験の有意性はp≦0.05で保持された。
2.  結果
2.1  肉眼による観察
各動物群の平均値の経時的な変化を図1に示す。この図１を検討することによっていずれの処理でも色素脱失作用は3週間経過後に多少とも明らかになることが判る。その後、約6週間は弱く不明瞭な色素脱失状態が続くことが判る。6週間後から、特にクリームCD1および対照区（＋）について色素脱失効果が顕著になり、その後は統計的に見て他の2つの処理との差が生じる。色素脱失効果は第10週〜11週の間も依然として増加する（全ての処理について）。処理の最終週ではクリームCD1についてのみ皮膚の色素脱失の向上が見られた。
2.2.  組織学的分析
図2は塗布領域の色素沈着外観に対する処理の影響を示す。対照区（＋）グループおよびクリームCD1で処理したグループの調製物は他の2つの動物グループの調製物に比べて色素沈着のない上皮沈着部および色素の少ない上皮沈着部の数が多いと言うことができる。
色素脱失の評価平均値を比較すると（図3）、クリームCD2および同時に試験した参考製品に比べて、クリームCD1および対照区（＋）は明らかに高い効果を示す（70〜80％以上）。以上の結果は肉眼による観察と完全に一致する。
2.3.  局部的トレランス
肉眼による検査の際、試験期間を通じて許容限界を超えたことを示す症状は全く現れなかった。
しかし、組織学的試験では対照区（＋）のマウス1匹とCD1グループのマウス1匹について、表面に多核白血球の蓄積を伴う錯角化症が見られた。さらに参考製品で処理した2匹の動物に錯角化症を伴う深刻な表皮肥厚が観察された。これら2匹の動物のうち一方は、ひだおよび皮膚リングの欠損を示した。
3.  結論
本試験の目的は、色素沈着を有するマウスについて、CD1およびCD2と呼ばれる2種類の新規色素脱失クリームの効果を、5％のハイドロキノンよりなる対照区（＋）および市販の参考クリームと比較して評価することにある。
肉眼的な観点から見ると、クリームCD1は、対照区（＋）、参考製品およびクリームCD2に比べて最も高い色素脱失効果を示した。一方、組織学的レベルでは、クリームCD1は対照区（＋）と同程度であってクリームCD2よりもはるかに高く、参考製品よりも優れた活性を示した。
以上の結果を考慮して、クリームCD1は、少なくとも対照区（＋）と同等且ついずれの場合も試験に供した他の配合物（CD2）および参考製品よりも高い色素脱失活性を有すると考えることができる。
さらに、12週間の施用後に深刻な皮膚へのダメージが見られないことから、CD1クリームのトレランスが高いことが示されたことも特筆すべきことである。
実施例６
ヒトでの試験
1.  選択基準
包含基準
顔またはその他の露出部分に褐色斑、老人性ほくろ、色素マークを有する18〜75歳の患者
除外基準
先天的な色素マーク
太陽への同時暴露
UV装置への暴露
光感作薬、例えばテトラサイクリンまたはフェノチアジンなどの摂取
処理方法
クリームCD1-MSJとプラシーボCMPを、同じ割り当て（各グループ9人ずつ）で同じチューブで施用する。
1日に2回ずつ60日間、しみ部に塗布する。試験周期はD0（最初の日），D21（21日目），D45（45日目），D60（60日目）とした。
評価基準は、臨床的観察、患者からのアドバイスおよび研究者のアドバイスを伴う医師のモニタリングに基づいた。
効果の判定
下記段階付けされたスケールを用いて評価した：
D0での評価（基本条件）          D21,D45,D60における評価
6=+++++=非常に強い色素沈着      6=色素脱失なし
5=++++=強い色素沈着             5=不明瞭な色素脱失
4=+++=中程度の色素沈着          4=中程度の色素脱失
3=++=弱い色素沈着               3=良好な色素脱失
2=+=非常に弱い色素沈着          2=優れた色素脱失
1=±=ほとんど目に見えない色素沈着      1=非常に優れた色素脱失
0=0=色素沈着なし                0=しみが全く見えない非常に優れた色素脱失
トレランスの評価
いくつかの現象（刺激、赤いしみ、やけど、ひりひりする感覚、表皮剥離、アレルギー）について、臨床観察記録を用いて評価した。
0=非常に優れたトレランス
1=優れたトレランス
2=低いトレランス
3=非常に低いトレランス
結果の表現および統計学的分析
各試験で得られた効果に関する評価をノンパラメトリックなWilcoxonの試験を用いて総合的に分析した。
2.結果
処理の効果の分析
色素脱失の強度評価から得られる結果を下記の表に示す。
この表から、色素脱失作用は治療21日目に明らかになることが判る。その後、45日目まで色素脱失作用の向上が見られる。この時点以降、色素脱失効果はD0に対して最も有意なものとなる（p≦0.01）。
0004248021.tif 000011
一般的に言って、患者の多くは最後の診察（60日目）に来なかった。なぜなら、いずれの場合も45日目には早くも初期の病変がほぼ消失したからである。
プラシーボを塗布したグループでは、全く効果がなかったために全ての患者が最初の数日間で治療を中断した。治療を施したグループとプラシーボグループとの間の効果の大きな差は、活性成分を投与したグループとプラシーボグループとがほぼ即時に判ってしまったことにより、結果的に二重盲検法を暴露したことになる。
局部的なトレランスの分析
そのようにして得られた塗布領域レベルにおける治療のトレランスに関する結果は、総じて非常に優れたものであった。治療中、刺激、赤み、ひりひり感、アレルギー、痛み、やけどおよび表皮剥離が起こらなかったことは、クリームBrunidlear（登録商標）の非常に優れた長期許容性を示すものである。
【図面の簡単な説明】
図１  アスタリスクは統計学的に有意な差を意味する。各プロットはそれぞれ6匹の動物の個々の評価の平均に相当する。
図２  各棒グラフ内の区画は色素沈着の異なる皮膚沈着部の割合を示す。
図３  各棒グラフはそれぞれ6匹の動物に関する標準偏差によって修正した個々の値の平均を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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