(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物においてIMPDH活性を阻害するための薬学的組成物の調製のための式Ｉの化合物の使用：
0004327910.tif 000029
である；ここで、各Aは、必要に応じて、R1、R4およびR5から選択される４個までの置換基を含有する；
各R1は、ハロゲン、CN、NO2、CF3、OCF3、OH、R3、OR3、1,2-メチレンジオキシ、1,2-エチレンジオキシ、SR3、S(O)R3、SO2R3、NH2、NHR3、N(R3)2、NR3R9、COOHまたはCOOR3である；
各R2は、
0004327910.tif 000030
である；そしてR2は、必要に応じて、２個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；
各R3は、独立して、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニルまたはアルキニルである；
各R4は、独立して、(C1〜C6)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C6)直鎖または分枝鎖アルケニルまたはアルキニルである；そして各R4は、必要に応じて、２個までの置換基を含有する、ここで：
該置換基の第一のものは、存在する場合、R1、R5またはR8であり、そして
該置換基の第二のものは、存在する場合、R1である；
各R5は、独立して、OR6、OC(O)R7、OC(O)R6、OC(O)OR7、OC(O)OR6、OC(O)N(R7)2、OP(O)(OR7)2、SR7、SR6、S(O)R7、S(O)R6、SO2R7、SO2R6、SO2N(R7)2、SO2NR6R7、SO3R7、C(O)R6、C(O)OR6、C(O)R7、C(O)OR7、NC(O)C(O)R7、NC(O)C(O)R6、NC(O)C(O)OR7、NC(O)C(O)N(R7)2、C(O)N(R7)2、C(O)N(OR7)R7、C(O)N(OR7)R6、C(NOR7)R7、C(NOR7)R6、N(R7)2、NR7C(O)R6、NR7C(O)R7、NR6C(O)R6、NR7C(O)OR7、NR7C(O)OR6、NR7C(O)N(R7)2、NR7C(O)NR6R7、NR7SO2R7、NR7SO2R6、NR7SO2N(R7)2、NR7SO2NR6R7、N(OR7)R7、N(OR7)R6、P(O)(OR7)N(R7)2およびP(O)(OR7)2から選択される；
R6は、環１個あたり５員〜６員からなる単環式または二環式の環系であり、ここで、該環系は、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、該N、OまたはSヘテロ原子のいずれかに隣接したCH2は、必要に応じて、C(O)で置換される；そして各R6は、必要に応じて、３個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；
各R7は、独立して、H、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニルである；そして各R7は、必要に応じて、R8である置換基を含有する；
R8は、環１個あたり５員〜６員からなる単環式または二環式の環系であり、ここで、該環系は、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、該N、OまたはSに隣接したCH2は、C(O)で置換され得る；そして各R8は、必要に応じて、H、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニル、1,2-メチレンジオキシ、1,2-エチレンジオキシおよび(CH2)n-R1から独立して選択される２個までの置換基を含有する；
ここで、ｎは、０、１または２である；
R9は、アミノ保護基である；
ここで、任意のR3、R4またはR7中の任意の炭素原子は、必要に応じて、O、S、SO、SO2、NHまたはN(C1〜C4)-アルキルにより置換される；
XおよびYは、独立して、CH2、CHR3、CHR4、O、S、NH、NR3、およびNR4から選択される；そして
ＺはO、S、NH、またはNR3である。
【請求項２】
以下を含有する薬学的組成物：
ａ．式Ｉの化合物：
0004327910.tif 000031
である；ここで、各Aは、必要に応じて、R1、R4およびR5から選択される４個までの置換基を含有する；
各R1は、ハロゲン、CN、NO2、CF3、OCF3、OH、R3、OR3、1,2-メチレンジオキシ、1,2-エチレンジオキシ、SR3、S(O)R3、SO2R3、NH2、NHR3、N(R3)2、NR3R9、COOHまたはCOOR3である；
各R2は、
0004327910.tif 000032
である；そしてR2は、必要に応じて、２個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；
各R3は、独立して、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニルまたはアルキニルである；
各R4は、独立して、(C1〜C6)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C6)直鎖または分枝鎖アルケニルまたはアルキニルである；そして各R4は、必要に応じて、２個までの置換基を含有する、ここで：
該置換基の第一のものは、存在する場合、R1、R5またはR8であり、そして
該置換基の第二のものは、存在する場合、R1である；
各R5は、独立して、OR6、OC(O)R7、OC(O)R6、OC(O)OR7、OC(O)OR6、OC(O)N(R7)2、OP(O)(OR7)2、SR7、SR6、S(O)R7、S(O)R6、SO2R7、SO2R6、SO2N(R7)2、SO2NR6R7、SO3R7、C(O)R6、C(O)OR6、C(O)R7、C(O)OR7、NC(O)C(O)R7、NC(O)C(O)R6、NC(O)C(O)OR7、NC(O)C(O)N(R7)2、C(O)N(R7)2、C(O)N(OR7)R7、C(O)N(OR7)R6、C(NOR7)R7、C(NOR7)R6、N(R7)2、NR7C(O)R6、NR7C(O)R7、NR6C(O)R6、NR7C(O)OR7、NR7C(O)OR6、NR7C(O)N(R7)2、NR7C(O)NR6R7、NR7SO2R7、NR7SO2R6、NR7SO2N(R7)2、NR7SO2NR6R7、N(OR7)R7、N(OR7)R6、P(O)(OR7)N(R7)2およびP(O)(OR7)2から選択される；
R6は、環１個あたり５員〜６員からなる単環式または二環式の環系であり、ここで、該環系は、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、該N、OまたはSヘテロ原子のいずれかに隣接したCH2は、必要に応じて、C(O)で置換される；そして各R6は、必要に応じて、３個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；
各R7は、独立して、H、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニルである；そして各R7は、必要に応じて、R8である置換基を含有する；
R8は、環１個あたり５員〜６員からなる単環式または二環式の環系であり、ここで、該環系は、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、該N、OまたはSに隣接したCH2は、C(O)で置換され得る；そして各R8は、必要に応じて、H、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニル、1,2-メチレンジオキシ、1,2-エチレンジオキシおよび(CH2)n-R1から独立して選択される２個までの置換基を含有する；
ここで、ｎは、０、１または２である；
R9は、アミノ保護基である；
ここで、任意のR3、R4またはR7中の任意の炭素原子は、必要に応じて、O、S、SO、SO2、NHまたはN(C1〜C4)-アルキルにより置換される；
XおよびYは、独立して、CH2、CHR3、CHR4、O、S、NH、NR3、およびNR4から選択される；そして
ＺはO、S、NH、またはNR3である；
ｂ．免疫抑制剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗真菌剤、抗生物質または抗血管過剰増殖剤から選択される追加試薬；ならびに
ｃ．薬学的に受容可能なアジュバント。
【請求項３】
哺乳動物のIMPDH媒介疾患を処置または予防するための薬学的組成物の調製のための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項４】
前記薬学的組成物が、さらに、免疫抑制剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗真菌剤、抗生物質または抗血管過剰増殖剤から選択される試薬を含有する、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記薬学的組成物が、免疫応答を抑制するために使用され、前記追加試薬が、存在する場合、免疫抑制剤である、請求項３または４に記載の使用。
【請求項６】
前記IMPDH媒介疾患が、自己免疫疾患である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記IMPDH媒介疾患が、ウイルス疾患であり、そして前記追加試薬が、存在する場合、抗ウイルス剤である、請求項３または４に記載の使用。
【請求項８】
前記IMPDH媒介疾患が、血管疾患であり、そして前記追加試薬が、存在する場合、抗血管過剰増殖剤である、請求項３または４に記載の化合物の使用。
【請求項９】
前記IMPDH媒介疾患が、癌であり、そして前記追加試薬が、存在する場合、抗癌剤である、請求項３または４に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
前記IMPDH媒介疾患が、炎症性疾患であり、そして前記追加試薬が、存在する場合、抗炎症剤である、請求項３または４に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
哺乳動物においてIMPDH活性を阻害するための組成物であって、該組成物は、式Ｉの化合物を含む：
0004327910.tif 000033
である；ここで、各Aは、必要に応じて、R1、R4およびR5から選択される４個までの置換基を含有する；
各R1は、ハロゲン、CN、NO2、CF3、OCF3、OH、R3、OR3、1,2-メチレンジオキシ、1,2-エチレンジオキシ、SR3、S(O)R3、SO2R3、NH2、NHR3、N(R3)2、NR3R9、COOHまたはCOOR3である；
各R2は、
0004327910.tif 000034
である；そしてR2は、必要に応じて、２個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；
各R3は、独立して、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニルまたはアルキニルである；
各R4は、独立して、(C1〜C6)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C6)直鎖または分枝鎖アルケニルまたはアルキニルである；そして各R4は、必要に応じて、２個までの置換基を含有する、ここで：
該置換基の第一のものは、存在する場合、R1、R5またはR8であり、そして
該置換基の第二のものは、存在する場合、R1である；
各R5は、独立して、OR6、OC(O)R7、OC(O)R6、OC(O)OR7、OC(O)OR6、OC(O)N(R7)2、OP(O)(OR7)2、SR7、SR6、S(O)R7、S(O)R6、SO2R7、SO2R6、SO2N(R7)2、SO2NR6R7、SO3R7、C(O)R6、C(O)OR6、C(O)R7、C(O)OR7、NC(O)C(O)R7、NC(O)C(O)R6、NC(O)C(O)OR7、NC(O)C(O)N(R7)2、C(O)N(R7)2、C(O)N(OR7)R7、C(O)N(OR7)R6、C(NOR7)R7、C(NOR7)R6、N(R7)2、NR7C(O)R6、NR7C(O)R7、NR6C(O)R6、NR7C(O)OR7、NR7C(O)OR6、NR7C(O)N(R7)2、NR7C(O)NR6R7、NR7SO2R7、NR7SO2R6、NR7SO2N(R7)2、NR7SO2NR6R7、N(OR7)R7、N(OR7)R6、P(O)(OR7)N(R7)2およびP(O)(OR7)2から選択される；
R6は、環１個あたり５員〜６員からなる単環式または二環式の環系であり、ここで、該環系は、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、該N、OまたはSヘテロ原子のいずれかに隣接したCH2は、必要に応じて、C(O)で置換される；そして各R6は、必要に応じて、３個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；
各R7は、独立して、H、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニルである；そして各R7は、必要に応じて、R8である置換基を含有する；
R8は、環１個あたり５員〜６員からなる単環式または二環式の環系であり、ここで、該環系は、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、該N、OまたはSに隣接したCH2は、C(O)で置換され得る；そして各R8は、必要に応じて、H、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニル、1,2-メチレンジオキシ、1,2-エチレンジオキシおよび(CH2)n-R1から独立して選択される２個までの置換基を含有する；
ここで、ｎは、０、１または２である；
R9は、アミノ保護基である；
ここで、任意のR3、R4またはR7中の任意の炭素原子は、必要に応じて、0、S、SO、SO2、NHまたはN(C1〜C4)-アルキルにより置換される；
XおよびYは、独立して、CH2、CHR3、CHR4、O、S、NH、NR3、およびNR4から選択される；そして
ＺはO、S、NH、またはNR3である。
【請求項１２】
哺乳動物のIMPDH媒介疾患を処置または予防するための、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
さらに、免疫抑制剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗真菌剤、抗生物質または抗血管過剰増殖剤から選択される試薬を含有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、免疫応答を抑制するために使用され、前記追加試薬が、存在する場合、免疫抑制剤である、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記IMPDH媒介疾患が、自己免疫疾患である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記IMPDH媒介疾患が、ウイルス疾患であり、そして前記追加試薬が、存在する場合、抗ウイルス剤である、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１７】
前記IMPDH媒介疾患が、血管疾患であり、そして前記追加試薬が、存在する場合、抗血管過剰増殖剤である、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１８】
前記IMPDH媒介疾患が、癌であり、そして前記追加試薬が、存在する場合、抗癌剤である、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１９】
前記IMPDH媒介疾患が、炎症性疾患であり、そして前記追加試薬が、存在する場合、抗炎症剤である、請求項１２または１３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の技術分野
本発明は、IMPDHを阻害する新規な種類の化合物に関する。本発明はまた、これらの化合物を含有する薬学的組成物に関する。本発明の化合物および薬学的組成物は、IMPDH酵素活性を阻害するのに特によく適合され、結果的に、IMPDH媒介プロセスのための治療剤として、有利に使用され得る。本発明はまた、本発明の化合物および関連化合物を用いて、IMPDHの活性を阻害する方法に関する。
発明の背景
生物におけるヌクレオチドの合成は、これらの生物中の細胞が分裂し複製するのに必要である。哺乳動物におけるヌクレオチド合成は、以下の２個の経路のうちの１個によって、達成され得る：デノボ合成経路またはサルベージ経路。異なる細胞型は、異なる範囲まで、これらの経路を使用する。
イノシン-5’-一リン酸脱水素酵素(IMPDH；EC 1.1.1.205)は、グアノシンヌクレオチドのデノボ合成に関与している酵素である。IMPDHは、イノシン-5’-一リン酸(IMP)のキサントシン-5’-一リン酸(XMP)へのNAD依存性酸化を触媒する[Jackson R.C.ら、Nature, 256, 331〜333頁,(1975)]。
IMPDHは、真核生物、細菌および原生動物に広範に分布している[Y. NatsumedaおよびS.F. Carr., Ann. N.Y. Acad., 696, 88〜93頁(1993)]。この原核生物種は、ヒトの酵素と、30〜40％の配列同一性を有している。種にかかわらず、この酵素は、基質および補因子の結合および生成物の放出の逐次(ordered)Bi-Bi反応配列に従う。第一に、IMPは、IMPDHに結合する。これに続いて、補因子NADが結合する。還元された補因子であるNADHは、次いで、その複合体から放出され、続いて、生成物であるXMPが放出される[S.F. Carrら、J. Biol. Chem., 268, 27286〜90頁(1993)；E.W. Holmesら、Biochim. Biophys. Acta, 364, 209〜217頁(1974)]。この機構は、殆どの他の公知のNAD依存性脱水素酵素の機構とは異なっており、これは、ランダムな順序の基質添加を有するか、またはNADが基質の前に結合する必要があるか、いずれかである。
ヒトIMPDHの２個のイソ型は、I型およびII型と命名されており、同定され配列決定されている[F.R. CollartおよびE. Huberman, J. Biol. Chem., 263, 15769〜15772頁,(1988)；Y. Natsumedaら、J. Biol. Chem., 265, 5292〜5295頁,(1990)]。それぞれは、51４個のアミノ酸であり、それらは、84％の配列同一性を共有している。IMPDHのI型およびII型の両方は、56kDaのサブユニット分子量で、溶液中にて活性四量体を形成する[Y. Yamadaら、Biochemistry, 27, 2737〜2745頁(1988)]。
グアノシンヌクレオチドのデノボ合成、従って、IMPDHの活性は、BおよびT-リンパ球において、特に重要である。これらの細胞は、マイトジェンまたは抗原に対する増殖応答を開始するのに必要な十分なレベルのヌクレオチドを産生するために、サルベージ経路よりもむしろデノボ経路に依存している[A.C. Allisonら、Lancet II, 1179,(1975)およびA.C. Allisonら、Ciba Found. Symp., 48, 207,(1977)]。それゆえ、IMPDHは、他の細胞の増殖を阻害することもなしに、免疫系を選択的に阻害する魅力的な標的である。
免疫抑制は、例えば、ホスファターゼカルシニュリン(シクロスポリンおよびFK-506により阻害される)；ジヒドロオロト酸脱水素酵素、ピリミジンの生合成に関与している酵素(レフルノミドおよびブレキナールにより阻害される)；キナーゼFRAP(ラパマイシンにより阻害される)；および熱ショックタンパク質hsp70(デオキシスペルグアリンにより阻害される)を含む種々の酵素を阻害することにより、達成されている。[B. D. Kahan, Immunological Reviews, 136, 29〜49頁(1993)；R. E. Morris, The Journal of Heart and Lung Transplantation, 12(6), S275〜S286頁(1993)を参照]
IMPDHのインヒビターもまた、公知である。米国特許第5,380,879号および第5,444,072号およびPCT公報WO 94/01105およびWO 94/12184は、ヒトIMPDHのＩ型(Ki＝33nM)およびII型(Ki＝９nM)の強力な非競合性で可逆的なインヒビターとして、ミコフェノール酸(MPA)およびその誘導体のいくつかを記述している。MPAは、マイトジェンまたは抗原に対するBおよびT-細胞の応答をブロックすることが立証されている[A.C. Allisonら、Ann. N. Y. Acad. Sci., 696, 63,(1993)]。
0004327910.tif 000002
免疫抑制剤(例えば、MPA)は、移植拒絶および自己免疫疾患の処置に有用な薬剤である。[R. E. Morris, Kidney Intl., 49, Suppl. 53, S-26,(1996)]。しかしながら、MPAは、望ましくない薬理学的特性(例えば、消化管に対する毒性および乏しいバイオアベイラビリティ)により、特徴づけられる。[L. M. Shawら、Therapeutic Drug Monitoring, 17, 690〜699頁,(1995)]。
ヌクレオシドアナログ(例えば、チアゾフリン、リバビリンおよびミゾリビン)もまた、IMPDHを阻害する[L. Hedstromら、Biochemistry, 29, 849〜854頁(1990)]。これらの化合物は、IMPDHの競合インヒビターであるが、この酵素に対する特異性に欠けるという欠点がある。
ミコフェノール酸モフェチル(mycophenolate mofetil)は、インビボで遊離MPAを急速に解放するプロドラッグであるが、最近では、腎移植に伴う急性腎同種移植片の拒絶を予防することが認められている。[L. M. Shawら、Therapeutic Drug Monitoring, 17, 690〜699頁,(1995)；H. W. Sollinger, Transplantation, 60, 225〜232頁(1995)]。しかしながら、いくつかの臨床的な観察により、この薬剤の治療上の可能性が制限されている。[L. M. Shawら、Therapeutic Drug Monitoring, 17, 690〜699頁,(1995)]。MPAは、インビボでの不活性グルクロニドへと急速に代謝される。[A. C., Allison and E.M.Eugui, Immunological Reviews, 136, 5〜28頁(1993)]。このグルクロニドは、次いで、腸肝再循環を受けて、消化管でのMPAの蓄積が起こり、ここでは、それは、この免疫系においてそのIMPDH阻害活性を発揮し得ない。これは、この薬剤のインビボ効力を効果的に低下させるが、その望ましくない胃腸副作用を増加する。
IMPDHは、他の代謝事象において、一定の役割を果たすことも公知である。急速に増殖するヒト白血病細胞株および他の腫瘍細胞株において、増加したIMPDH活性が認められており、このことは、免疫抑制性だけでなく抗癌性の化学療法のための標的としてのIMPDHを示している[M. Nagaiら、Cancer Res., 51, 3886〜3890頁,(1991)]。IMPDHはまた、平滑筋細胞の増殖において、一定の役割を果たすことが示されており、このことは、IMPDHのインヒビター(例えば、MPAまたはラパマイシン)が、再狭窄または他の過剰増殖性の血管疾患を予防するのに有用であり得ることを示している[C. R. Gregoryら、Transplantation, 59, 655〜61頁(1995)；PCT公報WO 94/12184；およびPCT公報WO 94/01105]。
さらに、IMPDHは、一部のウイルス細胞株での、ウイルス複製において、一定の役割を果たすことが示されている。[S. F. Carr, J. Biol. Chem., 268, 27286〜27290頁(1993)]。リンパ球および腫瘍細胞株に対するアナログでは、このウイルス複製プロセスにおいて、サルベージ経路よりもむしろデノボ経路が重要であることを暗示している。
このIMPDHインヒビターであるリバビリンは、現在では、Ｃ型肝炎ウイルス(HCV)およびＢ型肝炎ウイルス(HBV)の感染および疾患の処置について評価されている。リバビリンは、HBVおよびHCVの処置において、インターフェロンの持続効能を高める。しかしながら、リバビリンの治療上の可能性は、単一療法では持続的な応答がないことおよび広範な細胞毒性によって、制限されている。
それゆえ、薬理学的特性が改良された強力なIMPDHインヒビターに対する必要性が存在している。このようなインヒビターは、免疫抑制剤、抗癌剤、抗血管過剰増殖剤、抗炎症剤、抗真菌剤、抗乾癬剤および抗ウイルス剤として、治療上の可能性がある。
発明の要旨
本発明は、IMPDHのインヒビターとして有用な化合物およびそれらの薬学的に受容可能な誘導体を提供する。これらの化合物は、単独で、または他の治療剤または予防剤(例えば、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗生物質、および移植拒絶および自己免疫疾患の治療または予防のための免疫抑制剤)と組み合わせて、使用され得る。さらに、これらの化合物は、単独で、または他の試薬と組み合わせて、抗ウイルス、抗腫瘍、抗癌、抗炎症、抗真菌、抗乾癬、免疫抑制および再狭窄治療レジメのための治療剤および予防剤として、有用である。
本発明はまた、本発明の化合物を含有する薬学的組成物ならびに、免疫抑制剤と共に追加のIMPDH化合物を含有する多成分組成物を提供する。本発明はまた、IMPDHの阻害のために、本発明の化合物ならびに他の関連化合物を使用する方法を提供する。
本発明の化合物ならびに本発明の方法で使用される化合物は、MPAおよびその誘導体とは異なる代謝プロフィールを示す。この相違のために、本発明の方法およびそこで使用される化合物は、IMPDH媒介疾患のための治療法として、有利であり得る。これらの利点には、全体的に高められた治療上の利点および有害な副作用の低下が含まれる。
発明の詳細な説明
本明細書中で記述の発明をさらに充分に理解し得るために、以下の詳細な説明を示す。この説明では、以下の略語を使用する：
名称            試薬またはフラグメント
Ac              アセチル
Me              メチル
Et              エチル
Bn              ベンジル
CDI             カルボニルジイミダゾール
DIEA            ジイソプロピルエチルアミン
DMAP            ジメチルアミノピリジン
DMF             ジメチルホルムアミド
DMSO            ジメチルスルホキシド
EDC             1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩
EtOAc           酢酸エチル
THF             テトラヒドロフラン
本明細書中では、以下の用語を使用する：
そうでないことが明白に述べられていなければ、本明細書中で使用する-SO2-および-S(O)2-との用語は、スルホンまたはスルホン誘導体(すなわち、そのSに結合した両方の付加基)を意味し、スルフィネートエステルを意味しない。
ハロまたはハロゲンとの用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素の基を意味する。
免疫抑制剤との用語は、免疫応答阻害活性を有する化合物または薬剤を意味する。このような試薬の例には、シクロスポリンＡ、FK506、ラパマイシン、レフルノミド、デオキシスペルグアリン、プレドニゾン、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、OKT3、ATAG、インターフェロンおよびミゾリビンが挙げられる。
インターフェロンとの用語は、全ての型のインターフェロンを意味し、これには、α型、β型およびγ型が含まれるが、これらに限定されない。
IMPDH媒介疾患とは、IMPDH酵素がその疾患の代謝経路において調節的な役割を果たす任意の疾患状態を意味する。IMPDH媒介疾患の例には、移植拒絶および自己免疫疾患(例えば、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、若年性糖尿病、喘息および炎症性腸疾患ならびに、炎症性疾患、癌、ウイルス複製疾患および血管疾患)が挙げられる。
例えば、本発明の化合物、組成物およびそれらを使用する方法は、移植拒絶(例えば、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓(島細胞)、骨髄、角膜、小腸および皮膚同種移植片および心臓弁異種移植片)および自己免疫疾患(例えば、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、若年性糖尿病、喘息、炎症性腸疾患(クローン病、潰瘍性大腸炎)、狼瘡、糖尿病、ミリタス(mellitus)重症筋無力症、乾癬、皮膚炎、湿疹、脂漏、肺炎、眼のブドウ膜炎、肝炎、グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、ベーチェットまたはシェーグレン(Sjorgen)症候群(ドライアイ/口渇)、悪性または炎症溶血性貧血(immunohaemolytic anaemia)、特発性副腎不全、多腺性自己免疫症候群、および糸球状腎炎、硬皮症、扁平苔癬、ビテリゴ(viteligo)(皮膚の脱色)、自己免疫性甲状腺炎、および肺胞炎)、炎症性疾患(例えば、変形性骨関節炎、急性膵炎、慢性膵炎、喘息および成人呼吸窮迫症候群)の治療ならびに、癌および腫瘍(例えば、固形腫瘍、リンパ腫および白血病)、血管疾患(例えば、再狭窄、狭窄および関節硬化症)、およびウイルス性DNAおよびRNA複製疾患の治療で使用され得る。
さらに、IMPDH酵素はまた、細菌中に存在することが公知であり、それゆえ、細菌の増殖が制御され得る。本明細書中で記述したIMPDHインヒビター化合物、組成物および方法は、それ自体、単独で、または他の抗生物質と組み合わせて、細菌感染の治療または予防で有用であり得る。
本明細書中で使用する「処置する」との用語は、患者の特定障害の症状の緩和または特定の障害に付随して確認できる測定値の改善を意味する。本明細書中で使用する「患者」との用語は、ヒトを含む哺乳動物を意味する。
「HBV」、「HCV」および「HGV」との用語は、それぞれ、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスおよびＧ型肝炎ウイルスを意味する
１実施態様によれば、本発明は、哺乳動物でのIMPDH活性を阻害する方法を提供し、該方法は、該哺乳動物に、次式Ｉの化合物を投与する工程を包含する：
0004327910.tif 000003
ここで：
Aは、飽和、不飽和または部分飽和した単環式または二環式の環系であり、該環系は、必要に応じて、N、OおよびSから選択した４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、各Aは、必要に応じて、R1、R4およびR5から選択した４個までの置換基を含有する；
各Rは、ハロゲン、CN、NO2、CF3、OCF3、OH、R3、OR3、1,2-メチレンジオキシ、1,2-エチレンジオキシ、SR3、S(O)R3、SO2R3、NH2、NHR3、N(R3)2、NR3R9、COOHまたはCOOR3である；
各R2は、独立して、R1、または環１個あたり５員〜６員からなる単環式の環系であり、ここで、該環系は、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、該N、OまたはSに隣接したCH2は、C(O)で置換され得る；そして各R2は、必要に応じて、２個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；
各R3は、独立して、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニルまたはアルキニルである；
各R4は、独立して、(C1〜C6)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C6)直鎖または分枝鎖アルケニルまたはアルキニルである；そして各R4は、必要に応じて、２個までの置換基を含有する、ここで：
該置換基の第一のものは、存在する場合、R1、R5またはR8であり、そして
該置換基の第二のものは、存在する場合、R1である；
各R5は、独立して、OR6、OC(O)R7、OC(O)R6、OC(O)OR7、OC(O)OR6、OC(O)N(R7)2、OP(O)(OR7)2、SR7、SR6、S(O)R7、S(O)R6、SO2R7、SO2R6、SO2N(R7)2、SO2NR6R7、SO3R7、C(O)R6、C(O)OR6、C(O)R7、C(O)OR7、NC(O)C(O)R7、NC(O)C(O)R6、NC(O)C(O)OR7、NC(O)C(O)N(R7)2、C(O)N(R7)2、C(O)N(OR7)R7、C(O)N(OR7)R6、C(NOR7)R7、C(NOR7)R6、N(R7)2、NR7C(O)R6、NR7C(O)R7、NR6C(O)R6、NR7C(O)OR7、NR7C(O)OR6、NR7C(O)N(R7)2、NR7C(O)NR6R7、NR7SO2R7、NR7SO2R6、NR7SO2N(R7)2、NR7SO2NR6R7、N(OR7)R7、N(OR7)R6、P(O)(OR7)N(R7)2、P(O)(OR7)2、P(O)(N(R7)2)2およびP(O)(OR7)R7から選択される；
R6は、環１個あたり５員〜６員からなる単環式または二環式の環系であり、ここで、該環系は、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、任意の該N、OまたはSヘテロ原子に隣接したCH2は、必要に応じて、C(O)で置換される；そして各R6は、必要に応じて、３個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；
各R7は、独立して、H、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、または(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニルである；そして各R7は、必要に応じて、R8である置換基を含有する；
R8は、環１個あたり５員〜６員からなる単環式または二環式の環系であり、ここで、該環系は、必要に応じて、N、OまたはSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し、ここで、該N、OおよびSに隣接したCH2は、C(O)で置換され得る；そして各R8は、必要に応じて、H、(C1〜C4)直鎖または分枝鎖アルキル、(C2〜C4)直鎖または分枝鎖アルケニル、1,2-メチレンジオキシ、1,2-エチレンジオキシおよび(CH2)n-R1から独立して選択される２個までの置換基を含有する；
ここで、ｎは、０、１または２である；
R9は、アミノ保護基である；そして
ここで、任意のR3、R4またはR7中の任意の炭素原子は、必要に応じて、O、S、SO、SO2、NHまたはN(C1〜C4)-アルキルにより置換される。
「置換された」との用語は、所定の構造内の１個以上の水素基を、特定の群から選択される基で置換することを意味する。１個より多い水素基が、同様の特定の群から選択される置換基で置換され得る場合、これらの置換基は、各位置において、同一かまたは異なるかいずれかであり得る。
「環１個あたり５員〜６員からなる単環式または二環式の環系」との用語は、５員または６員の単環式の環および８員、９員および10員の二環式の環構造を意味し、ここで、各環内の各結合は、化学的に実現可能な任意の飽和度を有し得る。このような構造が置換基を含有するとき、これらの置換基は、他に特定されていなければ、この環系の任意の位置にあり得る。
特定されているように、このような環系は、必要に応じて、N、OまたはSから選択される４個までのヘテロ原子を含有し得る。これらのヘテロ原子は、得られる化合物が化学的に安定である限り、これらの環系内の任意の炭素原子を置換し得る。
「アミノ保護基」との用語は、窒素原子に結合され得る適切な化学基を意味する。「保護された」との用語は、指定した官能基が適切な化学基(保護基)に結合される場合を意味する。適切なアミノ保護基および保護基の例は、T.W. GreeneおよびP.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, ２版、John Wiley and Sons(1991)；L. FieserおよびM. Fieser, Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1994)；L. Paquette編、Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1995)で記述されており、そして本発明で使用される特定の化合物の一部で例示されている。
好ましくは、式Ｉの化合物を使用する方法では、各Aは、必要に応じて、R1、R4およびR5から選択される４個までの置換基を含有し、好ましくは、ここで、少なくとも１個の置換基は、存在する場合、R4およびR5から選択される；また、好ましくは、ここで、Aは、４個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；また、好ましくは、ここで、Aは、４個までの置換基を含有し、１個の置換基は、存在する場合、R4およびR5から選択され、残りの置換基は、存在する場合、独立して、R1から選択される。
より好ましくは、式Ｉの化合物を使用する方法において、Aは、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有する単環式の芳香族環系であり、ここで、各Aは、必要に応じて、R1、R4およびR5から選択される４個までの置換基を含有し、好ましくは、ここで、少なくとも１個の置換基は、存在する場合、R4およびR5から選択される；また、好ましくは、ここで、Aは、４個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；また、好ましくは、ここで、Aは、４個までの置換基を含有し、１個の置換基は、存在する場合、R4およびR5から選択され、残りの置換基は、存在する場合、独立して、R1から選択される。
また、より好ましくは、式Ｉの化合物を使用する方法において、Aは、必要に応じて、N、OおよびSから選択される４個までのヘテロ原子を含有する二環式の芳香族環系であり、ここで、各Aは、必要に応じて、R1、R4およびR5から選択される４個までの置換基を含有し、好ましくは、ここで、少なくとも１個の置換基は、存在する場合、R4およびR5から選択される；また、好ましくは、ここで、Aは、４個までの置換基を含有し、各置換基は、独立して、R1から選択される；また、好ましくは、ここで、Aは、４個までの置換基を含有し、１個の置換基は、存在する場合、R4およびR5から選択され、残りの置換基は、存在する場合、独立して、R1から選択される。
より好ましくは、式Ｉの化合物を使用する方法において、これらの方法では、この化合物は、次式の構造を有する：
0004327910.tif 000004
ここで、
R10、R11、R12およびR13は、それぞれ独立して、R1およびR4から選択され、ここで、R10、R11、R12およびR13の１個だけは、同時に、R4であり得る；そして
XおよびYは、独立して、CH2、CHR3、CHR4、O、S、NH、NR3、NR4、CH、CR3、CR4およびNから選択される。
本発明はまた、IMPDHの阻害において有用な化合物を提供する。１実施態様によれば、これらの化合物は、上記式Ｉの構造および定義を有する。好ましくは、本発明は、上記式IIの構造および定義を有する化合物を提供する。
より好ましくは、本発明は、式IIIの化合物を提供する：
0004327910.tif 000005
ここで：
R1、R10、R11、R12、R13、XおよびYは、式IIで定義したとおりであり、そしてZは、O、S、NHまたはNR3であり、ここで、R3は、式Ｉで定義したとおりである。
他の実施態様によれば、本発明は、式IVの化合物を提供する：
0004327910.tif 000006
ここで、R1、R2、A、XおよびYは、式IIについて定義したとおりである。
表Ｉは、本発明の好ましい個々の化合物、および本発明の組成物および方法で使用される好ましい化合物を列挙する。
0004327910.tif 000007
0004327910.tif 000008
0004327910.tif 000009
0004327910.tif 000010
本発明の化合物は、１個またはそれ以上の不斉炭素原子を含有し得、それゆえ、ラセミ化合物およびラセミ混合物、単一鏡像異性体、ジアステレオマー混合物および個々のジアステレオマーとして、生じ得る。これらの化合物のこのような異性体形状の全ては、明らかに、本発明に含まれる。各不斉炭素は、ＲまたはＳの立体配置であり得る。
本発明で想定される置換基および変数の組み合わせは、安定な化合物の形成を生じるのみのものである。本明細書中で使用される「安定な」との用語は、製造できるのに充分な安定性を有する化合物であって、本明細書中で詳述した目的(例えば、哺乳動物への治療上または予防上の投与またはアフィニティークロマトグラフィー用途での使用)に有用な充分な期間にわたって、化合物の完全性を維持する化合物を意味する。典型的には、このような化合物は、40℃以下の温度で、水分または他の化学的に反応性の条件無しに、少なくとも１週間にわたって安定である。
本明細書中で使用するように、本発明の化合物は、式Ｉ〜IVの化合物を含めて、薬学的に受容可能な誘導体またはそれらのプロドラッグを含有するように定義される。「薬学的に受容可能な誘導体またはプロドラッグ」とは、本発明の化合物の任意の薬学的に受容可能な塩、エステル、エステルの塩、または他の誘導体であって、レシピエントに投与した場合、本発明の化合物を(直接または間接に)提供できるものを意味する。特に好ましい誘導体およびプロドラッグには、本発明の化合物が、(例えば、経口投与した化合物を血液により急速に吸収させることにより)、哺乳動物に投与される場合、このような化合物の生体利用能を高めたもの、または親種と比較して、親化合物の生体区画(例えば、脳またはリンパ系)への送達を高めたものがある。好ましいプロドラッグには、水溶性または腸膜を通る活性輸送を高めた基を式Ｉ〜IVの構造に付加した誘導体が挙げられる。
本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩には、薬学的に受容可能な無機および有機の酸および塩基から誘導されるものが挙げられる。適切な酸塩の例には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩(palmoate)、ペクチニン酸塩(pectinate)、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラートおよびウンデカン酸塩が挙げられる。他の酸(例えば、シュウ酸)は、それ自体は薬学的に受容可能ではないものの、本発明の化合物およびそれらの薬学的に受容可能な酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製で、使用され得る。
適切な塩基から誘導した塩には、アルカリ金属(例えば、ナトリウム、カリウム)、アルカリ土類金属(例えば、マグネシウム)、アンモニウムおよびN-(C1-4アルキル)4+塩が挙げられる。
本発明はまた、本明細書中で開示した化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化を想定している。このような四級化により、水溶性または油溶性または水分散性または油分散性の生成物を得ることができる。
本発明の化合物は、従来技術を用いて合成され得る。有利には、これらの化合物は、容易に入手できる出発物質から便利に合成される。
一般に、式Ｉ〜IVの化合物は、好都合には、一般合成スキーム１〜２で図示した方法によって、得られる。
一般合成スキーム１(以下を参照)では、A、B、C、D置換アニリンは、所望のアミンを得るのに標準的な条件下にて、R10、R11、R12、R13置換ハロ置換複素環と反応される。このプロセスにおいて、A、B、C、DおよびR10、R11、R12、R13は、この芳香環上の任意の位置にて、上記式Ｉ〜IVの化合物について列挙した環置換基により例示されるように、１個以上の独立置換基(またはそれらの適切に保護された変異体)であり得る。さらに、このハロ脱離基は、あるいは、任意の適切な等価物、例えば、メシレートまたはトシラートであり得る。
0004327910.tif 000011
0004327910.tif 000012
代替合成経路は、一般合成スキーム２(上記参照)で図示される。R1、R2置換アニリンは、標準的な条件下にて、対応するチオイソシアネートに転化される。この生成物は、次いで、アニリンで処理されるが、この場合、R10、R11、R12、R13は、この芳香族環上の任意の位置にて、上記式Ｉ〜IVの化合物について列挙した環置換基により例示されるように、１個以上の独立置換基(またはそれらの適切に保護した変異体)であり得、そしてXおよびYは、式Ｉ〜IVの化合物で例示したとおりであり、所望の置換アミン生成物を与える。
当業者によって理解され得るように、上記合成スキームは、本出願で記述し請求した化合物が合成され得る全ての手段の包括的なリストを含むことを意図していない。さらなる方法は、当業者に明らかである。加えて、上記の種々の合成工程は、所望の化合物を得るための代替配列または順序で、行なわれ得る。
本発明の化合物は、選択的生物学的特性を増強するために適切な官能基(functionality)を付加することによって修飾され得る。このような修飾は当該分野において公知であり、そして所定の生物学的区画(例えば、血液、リンパ系、中枢神経系)内への生物学的浸透を増加させ、経口アベイラビリティを増加させ、注射により投与できるように溶解性を増加させ、代謝を変化させ、そして排泄率を変化させる修飾を包含する。
本発明の新規化合物はIMPDHに対するリガンドである。従って、これらの化合物はIMPDH酵素を標的化し、そして阻害し得る。阻害は様々な方法により測定され得、これには例えば、IMP脱水素酵素HPLCアッセイ(IMPおよびNADからのXMPおよびNADHの酵素産生を測定する)ならびにIMP脱水素酵素分光光度的アッセイ(NADからのNADHの酵素産生を測定する)が挙げられる。[C.Monteroら、Clinica Chimica Acta, 238, 169-178頁(1995)]。
本発明の薬学的組成物は以下を含む：式IもしくはIVの化合物またはこれらの薬学的に受容可能な塩；免疫抑制剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗真菌剤、抗生物質、または抗血管過剰増殖化合物(antivascular hyperproliferation compound)から選択されるさらなる薬物；および任意の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクル。本発明の別の組成物は以下を含む：式I〜IVの化合物またはこれらの薬学的に受容可能な塩；および薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクル。このような組成物は、必要に応じて、免疫抑制剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、抗真菌剤、抗生物質、または抗血管過剰増殖化合物から選択されるさらなる薬物を含む。
用語「薬学的に受容可能なキャリアまたはアジュバント」は、本発明の化合物と一緒に患者に投与され得、本発明の化合物の薬理学的活性を破壊せず、そして治療量の化合物を送達するのに十分な用量で投与された場合、非毒性である、キャリアまたはアジュバントを意味する。
本発明の薬学的組成物において用いられ得る薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントおよびビヒクルは、以下を含むがこれらに限定されない：イオン交換剤、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、dα-トコフェロールポリエチレングリコール1000スクシネートのような自己乳化剤薬物送達系(self-emulsifying drug delivery system)(SEDDS)、Tweenまたは他の同様のポリマー性送達マトリックスのような薬学的剤形で用いられる界面活性剤、ヒト血清アルブミンのような血清タンパク質、リン酸塩のような緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩、または電解質、例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイドシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂。α-、β-、およびγ-シクロデキストリンのようなシクロデキストリン、またはヒドロキシアルキルシクロデキストリンのような化学的に修飾された誘導体(2-および3-ヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンを含む)、または他の可溶化された誘導体はまた、式I〜IVの化合物の送達を向上させるために有利に用いられ得る。
本発明の薬学的組成物は、経口、非経口、吸入スプレー、局所、経直腸、経鼻、経頬、経膣、またはインプラントされたリザーバを介して投与され得る。本発明者らは、経口投与または注射による投与を好む。本発明の薬学的組成物は、任意の従来の非毒性薬学的受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルを含み得る。いくつかの場合において、処方物のpHは、薬学的に受容可能な酸、塩基、または緩衝剤を用いて、処方された化合物またはその送達形態の安定性を向上させるために調節され得る。本明細書中で用いられる用語非経口は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液包内、胸骨内、鞘内、病変内および頭蓋内注射または注入技術を包含する。
薬学的組成物は、例えば、滅菌注射用水性または油性の懸濁液のような滅菌注射用調製物の形態であり得る。この懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤(例えば、Tween 80のような)および懸濁剤を用いる、当該分野で公知の技術に従って処方され得る。滅菌注射用調製物はまた、非毒性非経口受容可能な希釈液または溶媒の滅菌注射用溶液または懸濁液(例えば、1,3-ブタンジオール溶液のような)であり得る。使用され得る受容可能なビヒクルおよび溶媒には、マンニトール、水、リンゲル液、および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌不揮発性油が、溶媒または懸濁媒体としで慣習的に使用される。この目的のために、任意の低刺激性不揮発性油が使用され得、これには合成モノグリセリドまたはジグリセリドが挙げられる。脂肪酸(例えば、オレイン酸およびそのグリセリド誘導体)は注射剤の調製に有用であり、これはオリーブ油またはヒマシ油のような天然の薬学的に受容可能な油であり、特にそのポリオキシエチル化形態である。これらの油の溶液または懸濁液はまた以下を含み得る：長鎖アルコール希釈剤もしくは分散剤(例えば、Pharmacopeia Helvetica, Ph. Helv.に記載されるもの)、もしくは同様のアルコール、またはカルボキシメチルセルロースもしくは同様の分散剤(これは、薬学的に受容可能な剤形の処方(例えば、エマルジョンおよび/または懸濁液)で一般に使用され得る)。他の一般に使用される界面活性剤(例えば、TweenまたはSpan)および/または他の同様の乳化剤または薬学的に受容可能な固体、液体、もしくは他の剤形の製造において一般的に使用されるバイオアベイラビリティエンハンサーはまた、処方の目的のために使用され得る。
本発明の薬学的組成物は、任意の経口的に受容可能な剤形で経口投与され得、この剤形には、カプセル剤、錠剤、エマルジョン、ならびに水性懸濁液、分散液および溶液が挙げられるが、これらに限定されない。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用されるキャリアには乳糖およびコーンスターチが挙げられる。滑沢剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム)もまた、典型的には添加される。カプセル剤形態での経口投与の場合、有用な希釈剤には乳酸および乾燥コーンスターチが挙げられる。水性懸濁液および/またはエマルジョンは、経口投与され、活性成分は油相に懸濁または溶解され得、乳化剤および/または懸濁剤と合わせられる。所望であるならば、特定の甘味剤および/または矯味剤および/または着色剤が添加され得る。
本発明の薬学的組成物はまた、直腸投与のための坐薬の形態で投与され得る。これらの組成物は、本発明の化合物と、室温で固体であるが、直腸温度で液体であり、それ故、直腸で溶けて活性成分を放出する適切な非刺激性賦形剤とを混合することによって調製され得る。このような物質には、ココアバター、蜜蝋、およびポリエチレングリコールが挙げられるがこれらに限定されない。
本発明の薬学的組成物の局所投与は、所望の処置が局所適用により容易に到達可能な領域または器官に関与する場合に、特に有用である。皮膚への局所適用の場合、薬学的組成物は、キャリアに懸濁または溶解された活性成分を含有する適切な軟膏を用いて処方されるべきである。本発明の化合物の局所投与のためのキャリアには、鉱物油、流動パラフィン(liquid petroleum)、白色ワセリン(white petroleum)、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、および水が挙げられるがこれらに限定されない。あるいは、薬学的組成物は、適切な乳化剤とともにキャリアに懸濁または溶解された活性化合物を含有する適切なローションまたはクリームを用いて処方され得る。適切なキャリアには、鉱物油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート60、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール(cetearyl alcohol)、2-オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学的組成物はまた、直腸坐剤処方によるかまたは適切な浣腸剤処方で、下部腸管に局所的に適用され得る。局所経皮パッチはまた、本発明に含まれる。
本発明の薬学的組成物は、経鼻エアゾールまたは吸入によって投与され得る。このような組成物は、薬学的処方の分野で周知の技術に従って調製され、そしてベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティを向上するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および/または当該分野で公知の他の溶解剤または分散剤を用いて、生理食塩水の溶液として調製され得る。
本明細書中で記載されるIMPDH阻害化合物の１日当たり約0.01mg/kg体重と約100mg/kg体重との間、好ましくは１日当たり約0.5mg/kg体重と約75mg/kg体重との間の投薬量レベルが、IMPDH媒介疾患の予防または処置のための単独療法および/または併用療法において有用である。典型的には、本発明の薬学的組成物は、１日当たり約１〜約５回、あるいは連続的注入として投与される。このような投与は、慢性治療または急性治療として用いられ得る。単一剤形を生成するためにキャリア物質と合わせられ得る活性成分の量は、処置される宿主および投与の特定の様式に依存して変化する。典型的調製物は、約５％〜約95％の活性化合物(w/w)を含有する。好ましくは、このような調製物は、約20％〜約80％の活性化合物を含有する。
本発明の組成物が式I〜IVのIMPDHインヒビターと、１種以上の追加の治療剤または予防剤との配合を包含する場合、IMPDHインヒビターおよび添加剤の両方は、単独療法レジメンで標準的に投与される投薬量の約10〜100％、より好ましくは約10〜80％の投薬量レベルで存在すべきである。添加剤は、複合投薬レジメンの一部として、本発明の化合物とは別々に投与され得る。あるいはこれらの薬剤は単一剤形の一部であり得、単一組成の本発明の化合物とともに混合され得る。
１つの実施態様によれば、本発明の薬学的組成物は、追加の免疫抑制剤を含む。追加の免疫抑制剤の例には以下が挙げられるがこれらに限定されない：シクロスポリンＡ、FK506、ラパマイシン(rapamycin)、レフルノミド、デオキシスペルグアリン(deoxyspergualin)、プレドニゾン、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル(mycophenolate mofetil)、OKT3、ATAG、インターフェロン、およびミゾリビン。
別の実施態様によると、本発明の薬学的組成物は、抗癌剤をさらに含み得る。抗癌剤の例には以下が挙げられるがこれらに限定されない：シスプラチン、アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、アムサクリン、ミトキサントロン、テニポシド(tenipaside)、タキソール、コルヒチン、シクロスポリンＡ、フェノチアジン、インターフェロン、およびチオキサンテン(thioxanthere)。
別の他の実施態様によると、本発明の薬学的組成物は、抗ウイルス剤をさらに含有する。抗ウイルス剤の例には以下が挙げられるがこれらに限定されない：サイトベン(cytovene)、ガンシクロビル、ホスホノギ酸三ナトリウム(trisodium phosphonoformate)、リバビリン、d4T、ddI、AT、およびアシクロビル。
さらに別の他の実施態様によれば、本発明の薬学的組成物は、抗血管過剰増殖剤をさらに含み得る。抗血管過剰増殖剤の例としては以下が挙げられるがこれらに限定されない：HMG Co-A還元酵素インヒビター(例えば、ロバスタチン)、トロンボキサンA2合成酵素インヒビター、エイコサペンタノン酸、シプロステン、トラピジル、ACEインヒビター、低分子量ヘパリン、ミコフェノール酸、ラパマイシン、および5-(3’-ピリジニルメチル)ベンゾフラン-2-カルボキシレート。
患者の状態を改善する場合、必要であれば、本発明の化合物、組成物または組み合わせの維持用量が投与され得る。引き続いて、投与の用量もしくは頻度またはその両方が、症状の関数として、症状が所望のレベルまで緩和されて処置が中断されるべきである場合に、改善された状態が維持されるレベルまで減少され得る。しかしながら、患者は疾病症状が再発する際に、長期の断続的処置を必要とし得る。
当業者は、上記の用量よりも低いまたは高い用量が必要とされ得ることを理解する。任意の特定の患者に特異的な投薬量および処置レジメンは、様々な因子に依存し、これには以下が含まれる：用いられる特定の化合物の活性、年齢、体重、身体全体の健康状態、性別、食事、投与時間、排泄率、薬物併用、感染の重症度および経過、感染に対する患者の意向、および処置する医師の判断。
別の実施態様において、本発明は、哺乳動物におけるIMPDH媒介疾患を処置または予防するための方法を提供し、この方法は、上記哺乳動物に、上記の薬学的組成物および組み合わせのいずれかを投与する工程を包含する。薬学的組成物が活性成分として本発明のIMPDHインヒビターのみを含有する場合、このような方法は、上記哺乳動物に、抗炎症剤、免疫抑制剤、抗癌剤、抗ウイルス剤、または抗血管過剰増殖化合物から選択される薬物を投与する工程をさらに包含し得る。このような添加剤は、IMPDHインヒビター組成物の投与前、投与と同時、または投与後に、哺乳動物に投与され得る。
好ましい実施態様においては、これらの方法は、哺乳動物における免疫応答の抑制に有用である。このような方法は以下を含む疾患を処置または予防するのに有用である：移植拒絶(例えば、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓(島細胞)、骨髄、角膜、小腸、および皮膚同種移植片、および心臓弁異種移植片)、対宿主性移植片病、および自己免疫疾患(例えば、慢性関節リュウマチ)、多発性硬化症、若年性糖尿病、喘息、炎症性腸疾患(クローン病、潰瘍性大腸炎(ulcerative colitus))、狼瘡、糖尿病、ミリタス(mellitus)重症筋無力症、乾癬、皮膚炎、湿疹、脂漏、肺炎、眼のブドウ膜炎、肝炎、グレーヴズ病、橋本甲状腺炎、ベーチェットまたはシェーグレン(Sjorgen)症候群(ドライアイ／口渇)、悪性または免疫溶血性(immunohaemolytic)貧血(anaemia)、特発性副腎不全、多腺性自己免疫症候群、糸球体腎炎、硬皮症、扁平苔癬、ビテリゴ(viteligo)(皮膚の脱色)、自己免疫性甲状腺炎、および肺胞炎。
これらの方法は、哺乳動物に、式I〜IVのいずれかの化合物および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与する工程を包含する。好ましい実施態様において、この特定の方法は、上記哺乳動物に、追加の免疫抑制剤および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与するさらなる工程を包含する。
あるいは、本法は、上記哺乳動物に、式I〜IVの化合物；追加の免疫抑制剤および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与する工程を包含する。
別の好ましい実施態様においては、これらの方法は、哺乳動物におけるウイルス複製を阻害するのに有用である。このような方法は、例えば、以下によって引き起こされるDNAおよびRNAウイルス疾患を処置または予防するのに有用である：HTLV-1およびHTLV-2、HIV-1およびHIV-2、鼻咽頭癌ウイルス、黄熱、デング熱、HBV、HCV、HGV、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、日本脳炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ライノウイルスおよびヘルペスウイルス(例えば、エプスタイン-バー)、サイトメガロウイルス、単純ヘルペス、１型および２型ヘルペス、または６型ヘルペス。[米国特許第5,380,879号を参照のこと]。
これらの方法は、哺乳動物に、式I〜IVのいずれかの化合物および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与する工程を包含する。好ましい実施態様においては、この特定の方法は、上記哺乳動物に、追加の抗ウイルス剤および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与するさらなる工程を包含する。
あるいは、本方法は、上記哺乳動物に、式I〜IVの化合物；追加の抗ウイルス剤および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与する工程を包含する。
別の他の好ましい実施態様において、これらの方法は、哺乳動物における血管細胞性過剰増殖を阻害するのに有用である。このような方法は、再狭窄、狭窄、動脈硬化、および他の過剰増殖性血管障害を包含する疾患を処置または予防するのに有用である。
これらの方法は、哺乳動物に、式I〜IVのいずれかの化合物および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与する工程を包含する。好ましい実施態様において、この特定の方法は、上記哺乳動物に、追加の抗血管過剰増殖剤および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与するさらなる工程を包含する。
あるいは、本方法は、上記哺乳動物に、式I〜IVの化合物；追加の抗血管過剰増殖剤および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与する工程包含する。
別の他の好ましい実施態様において、これらの方法は、哺乳動物における腫瘍および癌を阻害するのに有用である。このような方法は、腫瘍および悪性疾患(例えば、リンパ腫、白血病、および他の形態の癌)を包含する疾患の処置または予防に有用である。
これらの方法は、哺乳動物に、式I〜IVのいずれかの化合物および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与する工程を包含する。好ましい実施態様においては、この特定の方法は、上記哺乳動物に、追加の抗腫瘍剤または抗癌剤および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与するさらなる工程を包含する。
あるいは、本法は、上記哺乳動物に、式I〜IVの化合物；追加の抗腫瘍剤または抗癌剤および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与する工程を包含する。
別の他の好ましい実施態様においては、これらの方法は、哺乳動物における炎症および炎症性疾患を阻害するのに有用である。このような方法は、変形性関節症、急性膵炎、慢性膵炎、喘息、および成人呼吸窮迫症候群を包含する疾患の処置または予防に有用である。
これらの方法は、哺乳動物に、式I〜IVのいずれかの化合物および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与する工程を包含する。好ましい実施態様においては、この特定の方法は、上記哺乳動物に、抗炎症剤および薬学的に受容可能なアジュバントを含有する組成物を投与するさらなる工程を包含する。
本発明がより完全に理解されるために、以下の実施例を記載する。これらの実施例は例示の目的のみであり、いかなる方法でも本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。
一般的な物質および方法
全ての温度を、摂氏で記録する。薄層クロマトグラフィー(TLC)を、0.25mm厚E. Merckシリカゲル60 F254プレートおよび示した溶媒系での溶出を用いて、行った。化合物の検出を、このプレートを適切な視覚化剤(例えば、ホスホモリブデン酸の10％エタノール溶液またはニンヒドリンの0.1％エタノール溶液)で処理することに続いて、加熱、および/または適切なときにUV光またはヨウ素蒸気に暴露することにより、行った。分析用HPLCを、Rainin Mycrosorb-MV、５μCyano逆相カラム(3.9mm×150mm)を用いて、1.0mL/分の流速および水(0.1％ TFA)中の５〜100％アセトニトリル(0.1％ TFA)の溶媒グラジエントで行った。HPLC保持時間を、分で記録した。NMRスペクトルデータを、示した溶媒中にて、Bruker AMX500を用いて得た。
IMP脱水素酵素HPLCアッセイは、IMPおよびNADからのXMPおよびNADHの酵素的生成のための本発明者らの標準的な条件に従ったが、４個の全ての成分を分離するためのイオン対試薬を用いて、C18カラムでの高圧液体クロマトグラフィーを使用する。次いで、その反応度を、得られた生成物ピーク面積から測定する。このアッセイは、290nMと340nMとの間のUV-可視領域にて著しい吸光度を有する化合物の阻害プロフィールを測定するのに、特に有用である。
この反応混合物は、典型的には、0.1M KPi；pH 8.0、0.1M KCl、0.5mM EDTA、２mM DTT、および各0.2mMのIMPおよびNADを含有する。この溶液を、37℃で10分間インキュベートする。この反応は、20〜100nMの最終濃度までの酵素の添加により開始され、そして10分間進行される。割り当てた時間の後、この反応を、0.01mMの最終濃度までのミコフェノール酸の添加により、クエンチする。
転化度は、4.6×10mmの寸法のRainin Microsorb ODSカラムC18-200および0.1M KPi(pH 6.0)中の硫酸テトラブチルアンモニウム(５mM)を含有する溶媒系を用いた０〜30％メタノールグラジエントでのHPLCにより、15分間にわたって、モニターする。同様の溶媒系は、ハロ−IMP誘導体の精製について、先に使用されている。[L. C. AntionioおよびJ. C. Wu, Biochemistry, 33, 1753〜1759(1994)]。４個の成分を検出するために、254nMに設定したUVモニターを使用し、そしてその生成物ピークを、基質の転化度を測定するために、積算する。
インヒビターの分析のために、問題の化合物を、20mMの最終濃度までDMSOに溶解し、そして２〜５％(v/v)の容量にて、所望の濃度で、最初のアッセイ混合物に添加する。この反応を、酵素の添加により開始し、10分後、上記のようにクエンチする。HPLC分析後、この生成物の面積は、DMSOだけで試験化合物を含有しないコントロールアッセイと比較して、転化度を測定するために使用する。IC50またはKi値は、Hendersonの強束縛式(tight-binding equation)に対する転化対濃度の曲線の非線形最小二乗適合から、決定する。[P. J. F. Henderson, Biochem. J., 127, 321(1972)]。
本発明者らは、Magasanikにより最初に報告された方法を適応して、IMPDHに対する各化合物の阻害定数を測定した。[B. Magasanik, H. S. Moyed, およびL. B. Gehring J. Biol. Chem., 226, p.339(1957)]。
式I〜IVの化合物がIMPDHを阻害できる限り、それらは、明らかにIMPDH媒介疾患の処置に対して、臨床的な有用性を有する。これらの試験は、この化合物がインビボでIMPDHを阻害する能力を予測している。
実験の部
代表的な例の合成：
実施例１
化合物５の合成
0004327910.tif 000013
氷酢酸(95mL)、無水酢酸(95mL、1mole)および2-メトキシ-4-ニトロトルエン(10ｇ、50mmole)の０℃溶液に、滴下様式で、濃H2SO4(14.2mL)を添加した。完全に添加したとき、120分間にわたって、CrO3(16.67ｇ、167mmole)を少しずつ添加した。０℃でのさらに15分間の攪拌に続いて、この反応混合物を氷に注ぎ、得られた沈殿物を濾過により単離し、冷H2Oでリンスした。ヘキサン中15〜50％ EtOAcのグラジエントを用いて溶出するフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、白色固体として、8.14ｇ(51％)のA1を得た。その1H NMRは、所望の構造のものに一致していた。
0004327910.tif 000014
A1(81.94ｇ、307mmole)のジオキサン(100mL)攪拌懸濁液を濃HCl(20mL)で処理し、そして還流状態で一晩加熱した。周囲温度まで冷却すると、生成物A2は、収量40.65ｇ(73.1％)で、淡黄色の結晶性固体として、沈殿した。その濾液を約80mLの容量まで濃縮し、ヘキサンの添加により、溶液から、二番目の収量の生成物結晶を追い出して、8.91ｇ(16.0％)を得た。両方のバッチを1H NMRおよびTLC分析により同定し、それは所望物質のものと一致していた。A2の全収量は、49.56ｇ(89.1％)であった。
0004327910.tif 000015
A2(456mg、2.51mmole)、トシルメチルイソシアニド(490mg、2.51mmole)およびK2CO3(347mg、251mmole)の溶液をメタノールに溶解し、そして1.5時間、還流状態まで加熱した。次いで、この生成物混合物を減圧下で濃縮し、CH2Cl2に再溶解し、水およびブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、そして減圧下で再度濃縮した。精製した生成物A3は、再結晶(Et2O/ヘキサン)により得、375mg(68％)を生じた。その1H NMRは、所望構造のものと一致していた。
0004327910.tif 000016
A3(4.214ｇ、19.1mmole)のEtOAc(150mL)溶液を10％ Pd/C(1.05ｇ、A3の25重量％)で処理し、そして40psi H2(g)(Parr Hydrogenation Apparatus)に一晩かけた。この反応混合物を濾過し、そして減圧下で濃縮した。純粋な生成物A4は、収量3.4ｇ(93％)で、30〜40％ EtOAc/ヘキサンのグラジエントで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより得た。その1H NMRは、所望構造のものと一致していた。
0004327910.tif 000017
A4(250mg、1.3mmole)の10mL塩化メチレン溶液を、1,1’-チオカルボニルジ-2(1H)-ピリドン(302mg、1.3mmole)で処理した。得られた溶液を室温で10分間攪拌し、次いで、水で１回、そして0.5N HClで１回洗浄した。その有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。得られたオイルA5を、直ちに使用した。
0004327910.tif 000018
ベンゼン44mL中の化合物A5(1.3mmole)を、フェニレンジアミン(140mg、1.3mmole)で処理した。得られた溶液を15分間、還流状態まで加熱し、その時点で、ジシクロヘキシルカルボジイミド405mg(1.95mmole)を添加した。還流を、５時間継続した。室温まで冷却した後、濾過により、沈殿物５(270mg、２工程で68％)を単離した。質量スペクトル分析は、所望構造のものと一致していた。1H NMR(500MHz, d6-DMSO)δ11(s, 1H)、9.7(s, 1H)、8.3(s, 1H)、7.65(d, 2H)、7.55(d, 1H)、7.4(s, 1H)、7.3(bd, 2H)、7.0(bs, 2H)、3.95(s, 3H)。
実施例２
化合物８の合成
0004327910.tif 000019
A4(500mg、2.63mmol)および2-クロロベンゾキサゾール(0.2ml、1.75mmol)のDMF(２mL)溶液を100℃まで加熱し、そして一晩攪拌した。この反応混合物を酢酸エチルおよび２N HClで希釈した。層を分配し、その有機抽出物をMgSO4で乾燥した。これらの有機物を真空中で濃縮し、その残留物を中圧液体クロマトグラフィー(１：99MeOH/CH2Cl2での溶出)により精製して、淡黄色の固形物として、54mg(13％)の８を得た；TLC：Rf＝0.20(３：97MeOH/CH2Cl2)。1HNMR(500MHz, CDCl3)δ9.2(bs), 8.0(s), 7.85(d), 7.7-7.55(m), 7.45(d), 7.35-7.1(m), 4.15(s)。
実施例３
化合物９の合成
0004327910.tif 000020
A4(500mg、2.63mmol)および2-クロロベンゾチアゾール(0.2ml、1.5mmol)のDMF(２mL)溶液を100℃まで加熱し、そして一晩攪拌した。この反応混合物を酢酸エチルおよび２N HClで希釈した。層を分配し、その有機抽出物をMgSO4で乾燥した。これらの有機物を真空中で濃縮し、その残留物を中圧液体クロマトグラフィー(１：99MeOH/CH2Cl2での溶出)により精製して、淡黄色の固形物として、176mg(41％)の９を得た；TLC：Rf＝0.23(３：97MeOH/CH2Cl2)。1HNMR(500MHz, CDCl3)δ8.1(bs), 8.0(s), 7.85(d), 7.75(d), 7.6(s), 7.5(s), 7.45(t), 7.25(t)7.15(d)4.1(s)。
実施例４
化合物15の合成
0004327910.tif 000021
2-ブロモ-5-ニトロアニソール(1.0ｇ、4.3mmol)および銅(Ｉ)シアニド(388mg、4.3mmol)のDMF(５mL)溶液を、４時間にわたって、150℃まで加熱した。この生成物混合物を周囲温度まで冷却し、そして水に注いだ。得られた沈殿物を濾過し、CH2Cl2に溶解し、乾燥し(MgSO4)、そして濃縮して、634mg(83％)の収量で、褐色の固形物B1を得た。その1H NMRは、所望構造のものと一致していた。
0004327910.tif 000022
B1(192mg、1.08mmol)およびSnCl2・2H2O(729mg、3.23mmol)をエタノール(５mL)中で合わせ、そして１時間にわたって、75℃まで加熱した。この反応混合物を周囲温度まで冷却し、酢酸エチルで希釈し、そして飽和NaHCO3(水溶液、乳濁液を崩壊させるように、２N NaOHで希釈した)で２回洗浄し、水で１回洗浄した。乾燥(MgSO4)し、そして濃縮して、140mg(88％)の収量で、橙色の固形物B2を得た。その1H NMRは、所望構造のものと一致していた。
0004327910.tif 000023
化合物15は、化合物５と類似の様式で調製し、ここで、B2(50mg、0.34mmol)は、46.5mg(52％)の収量で、15を生じた。TLC：Rf＝0.22(ヘキサン中60％ EtOAc)。1HNMR(500MHz, CDCl3)δ11.24(s,1H), 10.12(s,1H), 7.68(s,1H), 7.61(d,1H), 7.52(d,1H), 7.41(bd,1H), 7.32(bd,1H) 7.05(m,2H), 3.92(s,3H)。
実施例５
化合物25の合成
0004327910.tif 000024
2-ニトロフェノール(45mmol)のDMF(10mL)溶液に、粉末化したK2CO3(56mmol)および臭化アリル(55mmol)を添加した。この混合物を周囲温度で１時間攪拌し、エーテルで希釈し、そして水(３回)およびブライン(１回)で洗浄した。得られた生成物溶液を乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮してC1を得、これを、さらに精製することなく、使用した。
0004327910.tif 000025
C2(45mmol、ニート)を、窒素下にて、180℃で一晩加熱した。周囲温度まで冷却して、その粗生成物混合物をエーテルに溶解させ、そして２N NaOH(水溶液)で抽出した。この水性部分を０℃まで冷却し、酸性化し(２N HCl)、そしてエーテルで抽出した。この抽出物をブラインで洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮して、C2(15.5mmol)を得た。その1H NMRは、所望構造のものと一致していた。
0004327910.tif 000026
C3(2.2mmol)をエタノールに溶解し、そして還流状態まで一晩加熱しながら、鉄(粉末、11mmol)および濃HCl(１mL)で処理した。この混合物を周囲温度まで冷却し、デカントし、NaHCO3(水溶液)で塩基化し、そして酢酸エチルで抽出した。この抽出物をブラインで洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、そして濃縮して、褐色のオイルを得た。シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中の20％酢酸エチルで溶出する)による精製により、暗黒色のオイルとして、248mg(1.2mmol、76％)の収量で、C3を得た。その1H NMRは、所望構造のものと一致していた。
0004327910.tif 000027
化合物25は、化合物５と類似の様式で調製し、ここで、C3(78mg、0.526mmol)およびA5(0.53mmol)は、24mg(13％)の収量で、25を生じた。TLC：Rf＝0.28(CH2Cl2中３％CH3OH)。1HNMR(500MHz, CDCl3)δ9.73(br s,1H), 8.11(s,1H), 7.89(d,1H), 7.78(d,1H), 7.54(dd,1H), 7.47(s,1H), 7.34(d,1H), 7.20(t,1H), 7.00(d,1H), 6.08(m,1H), 5.10(m,2H), 4.08(s,3H), 3.60(d,2H)。
実施例６
IMPDH活性阻害アッセイ
本発明者らは、以下のプロトコルを使用して、表IIで列挙した化合物の阻害定数を測定した。
IMP脱水素酵素活性は、Magasanikにより最初に報告された方法を適応して、分析した。[Magasanik, B. Moyed, H. S.およびGehring L. B.(1957)J. Biol Chem. 226, 339]。酵素活性を、NADH(ε340は、6220M-1cm-1)の形成による340nmでの吸光度の増加をモニターすることにより、分光光度的に測定した。この反応混合物は、15〜50nMの濃度で、0.1M Tris(pH 8.0)、0.1M KCl、3mM EDTA、2mM DTT、0.1M IMPおよび酵素(IMPDHヒトII型)を含有していた。この溶液を37℃で10分間インキュベートする。この反応を、0.1Mの最終濃度までNADを添加することにより開始し、その初期速度は、340nmでの吸光度の線形増加を10分間追跡することにより、測定する。標準的な分光光度計(経路長1cm)での読みのために、キュベットでの最終容量は、1.0mlにする。このアッセイはまた、96ウェルマイクロタイタープレートフォーマットに適合させた；この場合、全ての試薬の濃度は同じにし、その最終容量は、200μlに低下させる。
インヒビターの分析のために、問題の化合物を、20mMの最終濃度まで、DMSOに溶解し、そして２〜５％(v/v)の最終容量で、この酵素でのプレインキュベーションのために、この初期アッセイ混合物に添加する。この反応は、NADの添加により開始し、その初期速度は、上のように測定する。Kiの決定は、変化量のインヒビターの存在下での初期速度を測定し、そしてHendersonの強束縛式を用いてデータを適合させることにより、行う[Henderson, P. J. F.(1972)Biochem. J. 127, 321]。
これらの結果は、表IIに示す。Ki値は、nMで表わす。範疇「A」は、0.01〜500nmの活性を示し、範疇「B」は、501〜5,000nmの活性を示し、範疇「C」は、5,001〜15,000nmの活性を示し、範疇「D」は、15,000nmより高い活性を示す。「ND」との名称は、所定の化合物が試験されなかった場合に使用される。
0004327910.tif 000028
実施例15
抗ウイルスアッセイ
化合物の抗ウイルス効率は、種々のインビトロおよびインビボアッセイで評価され得る。例えば、化合物は、インビトロウイルス複製アッセイで試験され得る。インビトロアッセイは、全細胞または単離した細胞成分を使用し得る。インビボアッセイには、ウイルス疾患のための動物モデルが含まれる。このような動物モデルの例には、HBVまたはHCVのためのげっ歯類モデル、HBVのためのウッドチャック肝炎モデル、およびチンパンジーHCV感染が挙げられるが、これらに限定されない。
本発明者らは、本発明の多数の実施態様を記述しているが、本発明者らの基本的な構成は、本発明の生成物および方法を使用する他の実施態様を提供するために改変され得ることが明らかである。