(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
「亀山1号」を種菌とする人工栽培品であるハタケシメジの子実体からなる血糖降下剤であって、該子実体の濃縮抽出液が凍結乾燥された成分が次の性質：
（１）色と形態：黄褐色の粉末
（２）化学成分：糖含量30％〜90％、蛋白質含量5％〜15％
（３）溶解性：水溶性
を有する抽出物であることを特徴とする血糖降下剤。
【請求項２】
「亀山1号」を種菌とする人工栽培品であるハタケシメジの子実体からなる血糖降下剤の製造方法であって、菌糸が栽培容器内に蔓延した時期に、微細粒子からなる鉱物質で栽培容器の開口部を被覆してハタケシメジを栽培し、該ハタケシメジの子実体をイオン交換水と共に抽出釜に入れて加熱抽出し、固液分離後、濃縮抽出液を凍結乾燥して抽出物を得ることを特徴とする血糖降下剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ハラタケ目キシメジ科シメジ属のハタケシメジ（Lyophyllum decastes（Fr.）Ｓing.）からなる血糖降下作用を有するハタケシメジ抽出物及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖尿病は、慢性高血糖と、それに伴う毛細血管障害に起因して引き起こされる各種合併症（網膜症、神経障害、腎症、免疫不全等）とを総称したもので、現在、わが国における糖尿病患者は６００万人にのぼり、治療を受けていなくても糖尿病と疑われる「境界型」の人や潜在的糖尿病などの予備軍を含めると、１０００万人〜１２００万人に達するといわれている。糖尿病には大別してインスリン依存型の病態を表わすＩ型糖尿病と、インスリン非依存型の病態を表わすII型糖尿病があるが、特に、II型糖尿病は、糖尿病の９０％以上を占める。一般に高血糖状態は中年以降で発見され、高血糖状態が何年も続く場合が多く、一般に食事、運動療法が治療の基礎となる。従って、日常の食事を摂りながらも摂取できるII型糖尿病の治療薬が望まれる。
【０００３】
また、わが国では糖尿病治療中の患者の４割強が経口血糖降下薬の投与を受けている。しかしながら、これらの経口血糖降下薬（特にスルホニル尿素剤＜ＳＵ剤＞、ピグアナイド剤、スルホンアミド剤）等は、造血器障害、肝機能障害、胃腸障害などの副作用が多く、医師の指示なしでは服用が難しいのが現状である。従って、長期的な服用を考慮した場合、副作用の面からも安全で安価なII型糖尿病の治療薬が待望される。一方、キノコから抽出される成分の血糖降下作用については、マイタケ、アガリクス茸（ヒメマツタケ）、ヤマブシタケ等で報告されているが、ハタケシメジの抽出物に血糖降下作用があることはこれまでに知られていない。
【０００４】
また、人工栽培品の担子菌の場合、培地成分や培養方法によって担子菌中の成分が大きく変わることが知られており、天然物品や栽培方法の違った人工栽培品と同様の生理活性効果が期待できるとは限らない。そして、ハタケシメジの「亀山1号」を種菌とする人工栽培品の抽出物が強い血糖降下作用があることはこれまでに知られていない。
【０００５】
一方、ハタケシメジのその他の生理活性については、制癌剤の製造方法として「ハタケシメジ抽出物を活性成分とする免疫賦活剤及び抗腫瘍剤」が特開平１１−３０２１９１号公報に記載されており、血圧調節剤の製造方法として「血圧調節剤及びその製造方法」が特開２００１−１３１０８２号公報に記載されており、放射線障害予防剤の製造方法として「放射線障害予防剤及び治療剤ならびにその製造方法」が特願２００１−２０２０１７号に記載されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
シメジなどの茸類から制癌剤等の生理活性効果を有する薬剤を製造する方法では、安定した効果を維持することが困難であった。たとえば、天然物品の担子菌と人工栽培品の担子菌とでは、同様の生理活性効果が期待できるとは限らない。また、人工栽培品の担子菌の場合でも、培地成分や培養方法によって担子菌中の成分が大きく変わることが知られている。そのため、栽培方法の違った人工栽培品の担子菌においても同様の生理活性効果が異なる場合がある。このように、茸の種類がたとえ同じでも安定した効果を維持することは極めて困難であった。
【０００７】
ハタケシメジの高収穫かつ効率的な人工栽培方法は、王子製紙株式会社森林資源研究所により既に確立されており（特公平５−１５４０４号公報、特許１９６９５３４号）、本法を用いてハタケシメジの「亀山１号」を種菌とする人工栽培品を安価に供給できるようになっている。
【０００８】
当発明者は、この「亀山１号」を種菌とする人工栽培品を使用することで、
血糖値の上昇を抑制する安定した効果が期待できると研究を進めた結果、このハタケシメジの「亀山1号」を種菌とする人工栽培品の抽出物に、新たにII型糖尿病の発症および血糖値の上昇を抑制する作用を有し、しかも副作用がなく、安全性の高い血糖降下作用に有効な成分を見出した。
【０００９】
そこで本発明は、上述の諸事情に鑑み創出されたもので、特に、II型糖尿病の発症および血糖値の上昇を抑制する作用を有し、しかも副作用のなく、安全性の高い血糖降下作用を有するハタケシメジ抽出物及びその製造方法の提供を目的とするものである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
上述の目的を達成すべく本発明は、「亀山1号」を種菌とする人工栽培品であるハタケシメジの子実体からなる血糖降下剤であって、該子実体の濃縮抽出液が凍結乾燥された成分が次の性質：（１）色と形態：黄褐色の粉末（２）化学成分：糖含量30％〜90％、蛋白質含量5％〜15％（３）溶解性：水溶性を有する抽出物によって達成される。
【００１２】
本発明における血糖降剤の製造方法は、「亀山1号」を種菌とする人工栽培品であるハタケシメジの子実体からなる血糖降下剤の製造方法であって、菌糸が栽培容器内に蔓延した時期に、微細粒子からなる鉱物質で栽培容器の開口部を被覆してハタケシメジを栽培し、該ハタケシメジの子実体をイオン交換水と共に抽出釜に入れて加熱抽出し、固液分離後、濃縮抽出液を凍結乾燥して抽出物を得ることにある。
【００１４】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態を詳細に説明すると、本発明血糖降下剤は、ハタケシメジの水抽出物を有効成分とするものである。
【００１５】
ハタケシメジ（Lyophyllum decastes（Fr.）Ｓing.）は、ハラタケ目キシメジ科シメジ属のキノコで、香りマツタケ味シメジと呼ばれ珍重されるホンシメジに最も近縁のキノコであり、ホンシメジと同様に歯ごたえが良く美味である。天然品は、庭先や畑などの比較的身近な場所に株状に発生する（今関六也、本郷次雄：原色日本菌類図鑑（１）、保育社、１９８７年）。また、免疫賦活作用による抗腫瘍効果が高いこと（卯川ら、J. Biosci. Bioeng. , Vol. 90, 98-104, 2000）や血圧降下作用に関係するACE阻害活性が高いこと（卯川ら、日本食品科学工学会誌, Vol. 48, 58-63, 2001 ）が報告されている。しかし、ハタケシメジの水抽出物が血糖降下作用を有することは全く知られていない。
【００１６】
ハタケシメジからの抽出は、これらを生のまま、あるいは乾燥して粉砕後、水(熱水を含む)を用いて行われ、必要に応じて有機溶媒と水とが組み合わされて用いられてもよい。有機溶媒としてはメタノール、エタノール、n-ブタノール、酢酸エチル等が用いられる。加熱する場合は、減圧下、常圧下、加圧下のいずれでもよいが、抽出効率は加圧下で高温処理する方がよい。加熱温度は６０〜２６０℃の範囲で実施可能である。抽出処理後のハタケシメジ抽出物は濃縮・乾燥工程を経て０．５％〜１００％の抽出エキスとして得られる。抽出エキスの濃縮方法は加熱濃縮法、減圧濃縮法、エタノール沈殿による濃縮方法のいずれでもよい。また、濃縮された抽出エキスの乾燥は、風乾法、加熱乾燥法、噴霧乾燥法、凍結乾燥法のいずれ、あるいはこれらの複数の組み合わせでもよい。
【００１７】
本発明で得られるハタケシメジ抽出物は、次の性質を有する。
（イ）色と形態：黄褐色の粉末
（ロ）化学成分：糖含量３０％〜９０％、蛋白質含量５％〜１５％
（ハ）溶解性：水溶性
【００１８】
本発明で得られるハタケシメジ抽出物は、極めて毒性が低く、経口投与での急性毒性をＩＣＲ系雄性および雌性マウスについて調べたところ、3000mg/kg(p.o.)でも死亡例はなかった。
【００１９】
本発明で得られるハタケシメジ抽出物は、医薬品、健康食品または食品の形態で提供される。医薬品として用いる場合には、散剤、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル、液剤などの形で提供され、健康食品として用いられる場合には、前述の散剤、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル、液剤などの形のうち、医薬品と混同しない前提で使用が許可された形状で提供される。また、食品として用いられる場合には、顆粒（スープ）の他、ガム、キャンディ、ゼリー、錠菓、飲料などの形で提供される。医薬品として用いられる場合には、経口投与、非経口投与、吸入、経直腸投与、局所投与などにより投与される。非経口投与には、皮下注射、静脈内投与、筋肉内投与、鼻孔内投与または注入などが含まれる。用いられる量は、一般に１回当り約0.1〜200mg/kg体重の範囲内であり、通常１日に1〜5回投与される。ただし、正確な用量は、患者の年令、体重、症状、投与経路などを考慮して、前記範囲内から決められる。
【００２０】
本発明のハタケシメジ抽出物は、そのまま使用してもよく、また賦形剤あるいはその他の健康食品、医薬品と混合しても良い。混合する場合には、３０〜９０wt％の割合で混合することが望ましい。
【００２１】
【実施例】
実施例１. ハタケシメジの人工栽培：
バーク堆肥（中日本農産（株）社製）：米ぬか：カニ殻を絶乾重量比 １００：２０：４の割合で混合した後、含水率を６２％にした培養基を８５０ｍｌ容のポリプロピレン製栽培ビンに６２０ｇ充填した。ビン内の培養基全体に空気を補給し、菌糸の生育を良好にするためにビン開口部から底部まで直径２ｃｍの大きさの穴をあけ、高圧殺菌釜（１２０℃、1時間）で殺菌した。培養基の温度を25℃以下に冷却した後クリーンルーム内でハタケシメジ「亀山1号」を植菌した。
【００２２】
室温２３℃、湿度８０％（ＲＨ）に調整した室内で５０日培養し、培養基に菌糸を充分に蔓延させた。菌掻きを行い、水分を補給した後、前記のバーク堆肥で開口部を１〜２ｃｍの厚さになるように被覆した。さらに、被覆した培養ビンを室温２１℃、湿度８０％（ＲＨ）の室内で７日培養した。次に、菌糸が侵入していない表層部の被覆部を除去し、室温１７℃、湿度９５％（ＲＨ）、照度１５０ルックスの条件に調整した室内で栽培を継続し、種菌接種後７５日の培養で１ビン当り１２０ｇの子実体を収穫した。
【００２３】
実施例２. ハタケシメジの水抽出物の製造：
前記のように収穫した人工栽培のハタケシメジの子実体５００ｇを抽出釜に入れ５Ｌのイオン交換水を加え、１時間加熱抽出し、固液分離後、濃縮した。濃縮後抽出液を凍結乾燥することにより抽出エキスを得た。
【００２４】
実施例３. II型糖尿病モデルマウスにおける血糖降下試験：
日本エスエルシー株式会社より、自然発症糖尿病マウスＫＫ−Ａyの６週令雄を購入し、温度22±1℃、湿度55±5 ％の飼育室内で更に１〜２週間予備飼育した後、７〜８週令で検体投与に入った。なお、ＫＫ−Ａyマウスとは、糖尿病を自然発症することが１９６２年に報告されたＫＫマウスに肥満遺伝子Ａyを導入したもので、II型糖尿病のモデル動物である。このＫＫ−Ａyマウスは、４週令から肥満と高血糖を示し、７〜８週齢で重度な肥満・高血糖を発現することから、糖尿病患者の大多数を占めるII型糖尿病の発症機構の解明の研究に用いられ、特に、抗糖尿病薬のスクリーニングの解明研究に適したモデル動物である。７〜８週齢で高血糖状態であることを確認後、実施例２で示しているハタケシメジ抽出物を100 mg/kgおよび500 mg/kgの割合で胃ゾンデを用いて強制経口投与した。なお、対照群は同量の水道水のみを強制経口投与した。投与前および投与後４，７，１０時間後にマウス眼窩より採血し、グルコースＣ−IIテストワコー (和光純薬工業社製)により血糖値を測定した。さらに、同様に予備飼育後、実施例２で示しているハタケシメジ抽出物を500 mg/kgの割合で3週間連続経口投与し、各週において血糖値を測定した。なお、予備飼育および試験飼育中において、普通固型飼料(船橋農場製Ｆ−２飼料)および飲料水は自由摂取させた。得られた結果(N＝３〜７)を、次の表１および表２に示した。
【００２５】
【表１】
0004269547.tif 000002
各点は平均値±標準誤差で示している。
＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１で投与前に対して有意差あり。
♯Ｐ＜０．０５でControlに対して有意差あり。
【００２６】
【表２】
0004269547.tif 000003
各点は平均値±標準誤差で示している。
♯Ｐ＜０．０５でControlに対して有意差あり。
【００２７】
表１から、ハタケシメジ抽出物の単回投与実験では、ハタケシメジ抽出物500 mg/kgの投与でControl群に対して、投与7時間後に有意（ｐ<0.05）な血糖値の低下がみられたことがわかる。さらに、表２から、3週間の経口投与実験では、Control群は徐々に血糖値が増加しているのに対し、ハタケシメジ抽出物500 mg/kg投与群では、投与2週目より血糖値の低下を示し、3週目においても持続的な血糖低下作用を示したことがわかる。
【００２８】
実施例４. インスリン負荷試験：
実施例３で示したＫＫ−Ａyマウスにおけるハタケシメジ抽出物3週間連続投与による血糖降下試験の後、インスリン負荷試験を行った。18時間絶食した後、インスリン0.5 Ｕ/kgを皮下投与し、インスリン投与前および投与後30、60、120分に採血し、血糖値を測定した。得られた結果を表３に示した。
【００２９】
【表３】
0004269547.tif 000004
各点は平均値±標準誤差で示している。
＊Ｐ＜０．０５で投与前に対して有意差あり。
表３から、投与前の血糖値がハタケシメジ投与群でControl群と比較して低下傾向にあることがうかがえる。これは、3週間、ハタケシメジを投与したことで、マウスの空腹時血糖が通常より低下していることによると考えられる。また、インスリン負荷後30分に血糖値の低下がみられた。さらに、Control群では投与60分後に投与前と比較して有意な低下がみられたが、ハタケシメジ抽出物投与群では、投与前と比較して有意な低下はみられず、30分後の値とほぼ近い値になった。このことから、ハタケシメジ抽出物の投与でインスリン抵抗性が改善されることが示された。
【００３０】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明のハタケシメジから抽出された血糖降下剤によれば、II型糖尿病を発症した動物に対して、血糖値を低下させて、症状を改善する顕著な効果を発揮する。したがって、特にII型糖尿病に対する予防、改善効果が期待できる。さらに、日常の食事を取りながらも簡単に摂取でき、かつ副作用の面からも安全な糖尿病薬や健康食品が提供される。
【００３１】
また、「亀山１号」を種菌とする人工栽培品のハタケシメジを使用することで極めて安定した効果を維持することが可能になった。