(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵素を含むコア、該コア上を被覆する水和バリア塩、および該水和バリア塩上を被覆する１以上のコーティング層を含む顆粒であって、前記バリア塩が、硫酸マグネシウム７水塩、硫酸亜鉛７水塩、硝酸マグネシウム６水塩および酢酸マグネシウム４水塩からなる群より選択されかつ0.25よりも高い水分活性を有することを特徴とする顆粒。
【請求項２】
前記バリア塩が、１以上の層において前記コアを被覆することを特徴とする請求項１記載の顆粒。
【請求項３】
前記バリア塩の水分活性が0.30よりも大きいことを特徴とする請求項１記載の顆粒。
【請求項４】
前記バリア塩の水分活性が0.35よりも大きいことを特徴とする請求項１記載の顆粒。
【請求項５】
請求項１記載の顆粒を製造する方法であって、
ａ）  酵素を含むコアを提供し、
ｂ）  前記コア上を、硫酸マグネシウム７水塩、硫酸亜鉛７水塩、硝酸マグネシウム６水塩および酢酸マグネシウム４水塩からなる群より選択されかつ0.25よりも高い水分活性を有する水和バリア塩で被覆し、
ｃ）  前記水和バリア塩の上に外側コーティングを施す、各工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
最近、酵素、特に微生物起源の酵素を使用することがますます一般的になってきた。酵素は、例えば、デンプン産業、酪農産業、および洗剤産業を含むいくつかの産業で用いられている。洗剤産業において、酵素、特にタンパク質分解酵素の使用により、特に利用できる酵素の粉塵に関連する健康上の害のために、洗剤工場の労働者にとって産業衛生学の関心が生じたことがよく知られている。
【０００２】
洗剤事業に酵素が導入されてから、この産業により、酵素の顆粒化およびコーティングにおける多くの進歩が提案されてきた。例えば、酵素の顆粒化に関する以下の特許を参照のこと：
米国特許第4,106,991号には、顆粒化が行われている組成物内に、微細なセルロース繊維を全組成物の乾燥重量に基づいて2-40重量％の量で含めることによる酵素顆粒の改良調製が記載されている。さらに、この特許には、蝋質物質を用いて顆粒の粒子を被覆できることが記載されている。
【０００３】
米国特許第4,689,297号には、最長の寸法が150-2,000マイクロメートルである粒状の水分散性コア；コア粒子の重量に対して10-35重量％の量である、コア粒子の周りの酵素の均一層；および酵素層を均一に囲む高分子の膜形成水溶性または水分散性コーティング剤の層を有する酵素含有粒子であって、酵素とコーティング剤との組合せがコア粒子の重量の25-55％である酵素含有粒子が記載されている。この特許に記載されたコア材料の例としては、粘土、デキストリンの層で被覆されたトウモロコシデンプンの層中に封じられた糖結晶、凝集ジャガイモデンプン、微粒状塩、凝集クエン酸三ナトリウム、皿上で結晶化された(pan crystallized)ＮａＣｌフレーク、ベントナイト顆粒または小球、ベントナイト含有粒子、カオリンおよび珪藻土またはクエン酸ナトリウム結晶が挙げられる。膜形成材料は、脂肪酸エステル、アルコキシル化アルコール、ポリビニルアルコールまたはエトキシル化アルキルフェノールであってもよい。
【０００４】
米国特許第4,740,469号には、1-35重量％の酵素と、100-500マイクロメートルの平均長さおよび0.05-0.7デニールの繊度を有する、0.5-30重量％の合成繊維材料と、残りの量の増量剤または充填剤とから実質的になる酵素顆粒組成物が記載されている。この顆粒組成物はさらに、ポリエチレングリコールのような溶融蝋質材料、および必要に応じて、二酸化チタンのような着色剤を含んでもよい。
【０００５】
米国特許第5,254,283号には、非水溶性の縦糸繊度(warp size)重合体の連続層により被覆された粒状材料が記載されている。米国特許第5,324,649号には、コア、酵素層および外側コーティング層を有する酵素含有顆粒が記載されている。その酵素層および必要に応じてコアと外側コーティング層はビニル重合体を含有する。
【０００６】
国際特許出願公開第WO91/09941号には、それによって酵素活性の少なくとも50％が酵素結晶として製剤中に存在する酵素含有製剤が記載されている。この製剤はスラリーまたは顆粒のいずれであっても差し支えない。
【０００７】
国際特許出願公開第WO97/12958号には微細顆粒酵素組成物が開示されている。これらの顆粒は流動層凝集により製造され、この凝集により、酵素により被覆され、結合剤により互いに結合された多数の担体または種粒子を有する顆粒が得られる。
【０００８】
しかしながら、（上述したように）前記産業により提案されたこれらの進歩を考慮しても、追加の有益な特徴を有する低粉塵酵素顆粒が引き続き必要とされている。酵素顆粒化産業において必要とされている追加の有益な特徴は、低残留物顆粒配合物（ここで、低残留物は、衣類または他の材質上に不溶解残留物を著しく残す傾向が低減したこととして定義される）、および安定性の改善された配合物である。繊維質セルロースまたは縦糸繊度重合体のような多くの遅延放出剤または低粉塵剤により不溶性残留物が後に残るので、これらの所望の特徴全てを同時に達成することは、特に難しい課題である。
【０００９】
したがって、本発明の目的は、低粉塵であり、低残留物であり、非常に溶解性の高い、安定性の増大した酵素顆粒を提供することにある。本発明の別の目的は、そのような改良された顆粒を調製できる方法を提供することにある。
【００１０】
発明の概要
本発明の実施の形態の１つは、タンパク質コアおよび中位または高い水分活性を有する水和バリア材料を含む顆粒である。この水和バリア材料は、１つ以上の層中にあってもおよび／または前記タンパク質コア中に含まれても差し支えない。
【００１１】
本発明のさらなる実施の形態は、酵素コアおよび中位または高い水分活性を有する水和バリア材料を含む顆粒である。この水和バリア材料は、１つ以上の層中にあってもおよび／または前記酵素コア中に含まれても差し支えない。
【００１２】
別の実施の形態は、上述した顆粒を製造する方法である。
【００１３】
発明の詳細な説明
本発明は、低粉塵の、安定性が改善された顆粒を提供する。その顆粒は、タンパク質コアおよび中位または高い水分活性を有する水和バリア材料を含む。
【００１４】
「タンパク質コア」または「酵素コア」は、米国特許出願第08/995,457号に記載されているもののように均質なものからなっていてもまたは米国特許第5,324,649号に記載されているように層状になっていても差し支えない。
【００１５】
本発明の範囲に含まれるタンパク質としては、ホルモンまたは他の治療用タンパク質のような薬学的に重要なタンパク質および酵素のような産業的に重要なタンパク質が挙げられる。
【００１６】
任意の酵素または酵素の任意の組合せを本発明に用いてもよい。好ましい酵素としては、基質、例えば、汚れを加水分解できるような酵素が挙げられる。これらの酵素は、以下に限定されるものではないが、プロテアーゼ（細菌、菌類、酸性、中性またはアルカリ性）、アミラーゼ（アルファまたはベータ）、リパーゼ、セルラーゼおよびそれらの混合物を含むヒドロラーゼとして知られている。特に好ましい酵素は、サブチリシンおよびセルラーゼである。最も好ましいのは、ここに引用する、米国特許第4,760,025号、ヨーロッパ特許第130756B1号および国際特許出願公開第WO91/06637号に記載されているようなサブチリシン、およびジェネンコアインターナショナルから市販されているマルチフェクトL250(Multifect L250)（商標）およびプラダクス(Puradax)（商標）のようなセルラーゼである。本発明に使用しても差し支えない他の酵素としては、オキシダーゼ、トランスフェラーゼ、デヒドラターゼ、レダクターゼ、ヘミセルラーゼおよびイソメラーゼが挙げられる。
【００１７】
前述したように、前記バリア材料は、前記タンパク質への水および不活化物質の輸送を絶縁するまたは妨げるために、タンパク質コア上に１つ以上の層として被覆されてもまたはタンパク質コアの一部として生成されても差し支えない。バリア材料がタンパク質コアの一部である場合には、その材料は、コア全体に亘りまたはコア中の１つの層として分散されても差し支えない。
【００１８】
中位または高い水分活性を有する適切な水和バリア材料としては、無機酸または有機酸の塩、糖類、多糖類、脂質、タンパク質または合成高分子が挙げられ、好ましくは塩である。
【００１９】
ａｗとして記号で表される「水分活性」は、固相または液相の材料と平衡状態にある雰囲気の分数（fractional）相対湿度、すなわち、水蒸気の分圧の、同一温度で純水上に存在する水蒸気の分圧の比率を称する。水の分布がそれらの間で平衡に到達している全ての相において、水分活性は定義により等しい。「相対湿度」という用語は一般に、固体と平衡状態にある雰囲気中の水すなわち気相を説明するために用いられ、100％を閉じた系における純水の相対湿度とする、百分率で表される。したがって、任意の水分活性値に関して、％ＲＨ＝100＊ａｗにより与えられる対応相対湿度がある。
【００２０】
水分活性は、一般的に、材料の試料を、ロトロニックインストルメント社(Rotronic Instrument Corp.)（ニューヨーク州、ハンティントン）から入手できる水分活性システムモデルD2100のような水分活性メータの温度制御チャンバ内に配置し、測定値をディスプレイ上に示されるように平衡に到達させることにより、当該技術において知られた方法により容易に測定することができる。
【００２１】
「水和」バリア材料は、遊離形態または結合形態、もしくはそれら２つの組合せで水を含有する。水和の水は、コーティング過程中またはその後のいずれに加えても差し支えない。水和の程度は、材料それ自体並びにそれが施される温度、湿度および乾燥条件の関数となる。
【００２２】
「中位または高い」水分活性は、少なくとも0.25、好ましくは0.30より大きい、最も好ましくは0.35より大きい水分活性を含む。ここで称される水分活性は、顆粒が一度その上にバリア材料で被覆され（さらなるコーティングは有さない）たら、顆粒自体の水分活性である。さらなるコーティングは、別の層としてバリア材料の水分活性の正確な測定を妨害するかもしれない。
【００２３】
理論で拘束することを意図するものではないが、0.25より大きい水分活性を有する材料が、相対湿度が25％より大きい貯蔵条件下で水を取り込む駆動力が減少していると予測される。ほとんどの気候は25％よりも高い相対湿度を有する。多くの洗剤は、約0.3から約0.4までの範囲の水分活性を有する。顆粒の水分活性が、周囲の洗剤または貯蔵環境の水分活性よりも実際に高い場合、顆粒が水を取り込む駆動力が減少するはずであり、実際に、水はその顆粒からその周囲に移行することもある。顆粒の水分活性が洗剤の水分活性または対応する相対湿度よりも低い場合でさえ、バリア層中に存在する水は、水の量、それゆえ、顆粒により取り込まれ、タンパク質コアに影響を与える活性化物質の量を制限するシールドとして機能するであろう。
【００２４】
塩水和物の場合には、水和材料は、結晶化の結合水を有する結晶質塩水和物である。この水和物は、触って乾燥している顆粒を提供しながら、得られる被覆された顆粒が0.25を越えた、またはできるだけ高い水分活性を有するような様式で選択し、施すべきである。上述したような様式で、塩水和物、または任意の適切な水和バリア材料を施すことにより、顆粒が水をさらに取り込むいずれの駆動力をも減少させると予測される。重要な結果として、過硼酸塩または過酸化物の陰イオンのような、酵素活性にとって有害であるかもしれない物質を輸送する駆動力が除かれる。ビヒクルとしての水がない場合には、これらの物質は酵素コアに浸透しにくい。経験的なデータは、顆粒中の酵素活性は、酵素コアを安定な塩水和物で被覆することにより実質的に増大することを示している。
【００２５】
好ましい塩としては、硫酸マグネシウム７水塩、硫酸亜鉛７水塩、硫酸銅５水塩、リン酸ナトリウム二塩基性７水塩、硝酸マグネシウム６水塩、硼酸ナトリウム１０水塩、クエン酸ナトリウム２水塩および酢酸マグネシウム４水塩が挙げられる。
【００２６】
本発明の顆粒は、１つ以上のコーティング層を含んでも差し支えない。例えば、そのようなコーティング層は１つ以上の中間コーティング層であっても、またはそのようなコーティング層は１つ以上の外側コーティング層であっても、もしくはそれらの組合せであってもよい。コーティング層は、顆粒の末端用途に応じて、顆粒組成物中の多数の機能のいずれを果たしてもよい。例えば、コーティングは、タンパク質を漂白による酸化に対して抵抗性にしたり、顆粒を水性媒質中に導入するときに所望の溶解速度を与えたり、酵素の貯蔵安定度を向上させ、顆粒内で微生物が増殖する可能性を減少させるために周囲の水分に対するバリアを提供したりするであろう。
【００２７】
適切なコーティングとしては、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースのようなセルロース誘導体、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、キトサン、アラビアゴム、キサン、カラゲナン、ラテックスポリマー、および腸溶コーティングが挙げられる。さらに、コーティング剤は、同一または異なる範疇の他の活性化剤と共に用いてもよい。
【００２８】
顆粒のコーティング層中に含める適切なＰＶＡとしては、低粘度から高粘度までの、部分的に加水分解されたＰＶＡ、完全に加水分解されたＰＶＡおよび中位に加水分解されたＰＶＡが挙げられる。好ましくは、外側のコーティング層は、低粘度の部分的に加水分解されたＰＶＡを含む。有用かもしれない他のビニルポリマーとしては、ポリ酢酸ビニルおよびポリビニルピロリドンが挙げられる。有用なコポリマーとしては、例えば、ＰＶＡとメチルメタクリレートとのコポリマーおよびＰＶＰとＰＶＡとのコポリマーが挙げられる。
【００２９】
本発明のコーティング層は、さらに以下の成分を１つ以上含んでもよい：可塑剤、増量剤、潤滑剤、顔料、および必要に応じての追加の酵素。本発明のコーティング層に有用な適切な可塑剤は、例えば、糖類、糖アルコール、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のようなポリオール、尿素、グリコール、プロピレングリコールまたはクエン酸トリエチル、フタル酸ジブチルまたはジメチルもしくは水のような他の既知の可塑剤を含む可塑剤である。本発明のコーティング層に有用な適切な顔料としては、以下に限定されないが、二酸化チタンまたは炭酸カルシウムのような微細な白色体質顔料や、着色顔料や、着色染料や、それらの組合せが挙げられる。好ましくは、そのような顔料は、溶解するときに、低残留物の顔料である。適切な増量剤としては、ショ糖のような糖類、マルトデキストリンおよびコーンシロップのようなデンプン加水分解物、カオリンおよびベントナイトのような粘土、およびタルクが挙げられる。適切な潤滑剤としては、ネオドール(Neodol)のような非イオン性界面活性剤、獣脂アルコール、脂肪酸、ステアリン酸マグネシウムのような脂肪酸塩および脂肪酸エステルが挙げられる。
【００３０】
本発明の外側コーティング層は、好ましくは、被覆顆粒の約1-25重量％を構成する。
【００３１】
本発明の顆粒には、補助成分を加えてもよい。補助成分としては：金属塩；可溶化剤；活性剤；酸化防止剤；染料；阻害剤；結合剤；芳香剤；硫酸アンモニウム、クエン酸アンモニウム、尿素、塩酸グアニジン、炭酸グアニジン、スルファミド酸グアニジン、二酸化チオ尿素、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、グリシン、グルタミン酸ナトリウム等のようなアミノ酸、ウシ血清アルブミン、カゼイン等のようなタンパク質などのような酵素保護剤／掃去剤；陰イオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、陽イオン界面活性剤および長鎖脂肪酸塩を含む界面活性剤；ビルダー；アルカリまたは無機電解質；漂白剤；青味剤および蛍光染料および白色体質顔料；および凝集阻害剤を含んでもよい。
【００３２】
ここに記載した顆粒は、パンコーティング、流動層コーティング、流動層凝集、小球形成(prilling)、ディスク顆粒化、スプレイ乾燥、押出し、遠心押出し、球形成(spheronization)、ドラム顆粒化、高剪断凝集、またはこれらの技法の組合せを含む、酵素顆粒化の当業者に知られている方法により製造してもよい。
【００３３】
以下の実施例は、代表的なものであり、制限を意図するものではない。当業者は、ここの教示に基づく他のタンパク質、タンパク質コア、酵素、酵素コア、種粒子、方法およびコーティング剤を選択しても差し支えない。
【００３４】
実施例
実施例１．硫酸マグネシウム被覆プロテアーゼ顆粒の安定性
Ａ．Deseret60流動層コータ(fluidized bed coater)中に、54.1ｋｇのショ糖／デンプン非パレイル(pareil)種を装填し、流動化した。これらのコア上に、62.9ｇ／ｋｇのサブチリシンプロテアーゼを含有する75.8ｋｇのプロテアーゼＵＦ濃縮物を以下の条件下で吹き付けた（範囲は、特定のランプ(ramp)時間の過程に亘る初期値と最終値を示す）：
ランプ時間：          80分間
流体供給速度：        0.6-1.0リットル／分
噴霧圧：              75ｐｓｉ（5.2×105Ｐａ）
入口空気温度：        85-92℃
出口空気温度：        50℃
流動化空気速度：      18ｍ3／分
22.2ｋｇの水に22.2ｋｇの硫酸マグネシウム７水塩を加えることにより硫酸マグネシウムの溶液を調製し、流動層の温度を50℃に近いがそれよりわずかに低い温度に維持するように注意しながら、最終的な顆粒の20％が硫酸マグネシウム７水塩となるように、この溶液を以下の条件下で酵素被覆コア上に吹き付けた：
ランプ時間：          40分間
流体供給速度：        0.6-1.7リットル／分
噴霧圧：              45ｐｓｉ（3.1×105Ｐａ）
入口空気温度：        70-84℃
出口空気温度：        48-50℃
流動化空気速度：      18ｍ3／分
最後に、6.35ｋｇのエルバノール(Elvanol)51-05ポリビニルアルコール、7.94ｋｇの二酸化チタンおよび1.59ｋｇのネオドール(Neodol)23-6.5T非イオン性界面活性剤を50.12ｋｇの水中に溶解させることにより、ポリマーコーティング溶液を調製し、以下の条件下で塩被覆酵素コア上に吹き付けた：
傾斜時間：            10分間、次いで、100分間に亘り一定
流体供給速度：        0.6リットル／分
噴霧圧：              75ｐｓｉ（5.2×105Ｐａ）
入口空気温度：        50℃
出口空気温度：        75-80℃
流動化空気速度：      18ｍ3／分
採取した顆粒は、約40ｇ／ｋｇの酵素濃度を有していた。
【００３５】
Ｂ．加速安定性試験
漂白剤含有洗浄剤に配合された多くの酵素顆粒の安定性は一般的に優れており、30-37℃の温度および70％から80％の相対湿度での６週間に亘る活性の損失が約10-20％以下である。しかしながら、顆粒配合物の開発およびスクリーニングを補助するために、相対的な顆粒安定性を試験する加速手段があることが望ましい。加速安定性試験（ＡＳＴ）の条件は、実際の貯蔵または輸送中に酵素顆粒または洗浄剤がいままでに遭遇したであろう条件よりもずっと厳しい。このＡＳＴは、そうしなければ、数週間または数ヶ月に亘り明白にならないであろう、配合物間の差を識別するために設計された「ストレス試験」である。
【００３６】
この試験において、試験洗浄剤ベースを以下の成分から調製した：
72％  WFK-1洗浄剤ベース
（ドイツ国、クレフェルド(Krefeld)の、
Reinigunstechnologie e.V., WFK）
25％  過ホウ酸ナトリウム１水塩
（ニュージャージー州、アレンデールパークの、
デガッサ社(Degussa Corp.)）
3％  TAED漂白活性剤（テトラアセチルエチレンジアミン）
（英国、モスチン(Mostyn)の、
ワーウィックインターナショナル(Warwick International)）
試験すべき各々の酵素試料について、１グラムの試験ベースおよび30ｍｇの酵素顆粒を15ｍｌのコニカル管に加え、キャップをした管を5-8回手で逆さにすることにより混合することによって、３つの同一の管を調製した。1/16インチのドリルの刃で管のキャップに孔を開けた。これら３つの管の内の１つを直ちにアッセイし、他の２つを、50℃および70％の相対湿度に設定した湿度チャンバ内で貯蔵した。貯蔵した２つの管の内の１つを１日間貯蔵した後にアッセイし、第２のものを３日間貯蔵した後にアッセイした。残りの活性を最初の元の活性で割ることにより、１日後および３日後について、百分率で表された貯蔵安定性が報告された。
【００３７】
各々の管に、20μｌのカタラーゼHP L5000（ニューヨーク州、ロチェスターのジェネンコアインターナショナル）を含有する30ｍｌの0.25ＭのＭＥＳ  ｐＨ5.5を加え、40分間に亘りインキュベートして、過ホウ酸塩を不活化させることにより、酵素活性を測定した。この後、10μｌの試験管混合物および10μｌのｓＡＡＰＦプロテアーゼ基質を980μｌの0.1Ｍのトリス  ｐＨ8.6に加え、３分間に亘り25℃でインキュベートし、410ｎｍでの吸光度を測定することにより、酵素をアッセイした。次いで、吸光度対時間の傾斜に希釈係数および特定のプロテアーゼの既知の吸光度係数をかけて、ｍｇ／ｍｌの濃度として酵素活性を得た。
【００３８】
出口空気温度を３回の別々の過程の各々において40℃、60℃および70℃の設定値に制御したことを除いて、上記Ａに記載した過程をさらに３回繰り返した。硫酸マグネシウムバリアコーティングを施した後に、４つのバッチ全てから試料を取り出し、表１に報告したように、ロトロニック水分活性システム中で顆粒の水分活性を測定した。上述した加速安定性試験に従って、最終のポリマーコーティングを施した後に、顆粒の内の２つをWFK-1洗浄剤配合物中に入れ、孔の開けられたキャップを備えた管中に、50℃および70％の相対湿度で３日間に亘り貯蔵した。この湿度チャンバから管を取り出し、１日後と３日後にアッセイした。パーセントで表した維持活性が表１に報告されている。これらの結果は、硫酸マグネシウムが50℃の出口温度で被覆された顆粒が、70℃で被覆された顆粒よりも著しく安定であり、このより安定な顆粒は、0.35よりも大きい水分活性を有したが、それほど安定ではない顆粒は、著しく低い水分活性を有したことを示している。
【００３９】
【表１】
0004367743.tif 000002
実施例２．クエン酸ナトリウム被覆プロテアーゼ顆粒の安定性
Ａ．ベクター60コータ(Vector 60 coater)中で、25ｋｇのショ糖／デンプン非パレイル(pareil)種を流動化し、この流動化したコア上に、65.9ｇ／Ｌおよび18.3％の全固体の濃度を有する30.9ｋｇのサブチリシンプロテアーゼ濃縮物を以下の条件下で吹き付けた：
ランプ時間：          55分間
流体供給速度：        0.5-0.9リットル／分
噴霧圧：              75ｐｓｉ（5.2×105Ｐａ）
入口空気温度：        60-95℃
出口空気温度：        50℃
流動化空気速度：      24ｍ3／分
19.7ｋｇの水に13.2ｋｇのクエン酸三ナトリウム２水塩を加えることによりクエン酸三ナトリウムの溶液を調製し、流動層の温度を50℃に近い温度に維持するように注意しながら、最終的な顆粒の25％がクエン酸三ナトリウム２水塩となるように、この溶液を以下の条件下で酵素被覆コア上に吹き付けた：
ランプ時間：          23分間
流体供給速度：        0.6-1.9リットル／分
噴霧圧：              75ｐｓｉ（5.2×105Ｐａ）
入口空気温度：        60-95℃
出口空気温度：        50℃
流動化空気速度：      24ｍ3／分
最後に、2.94ｋｇのメトセルＨＰＭＣ(Methocel HPMC)、0.98ｋｇのポリエチレングリコール（分子量600）、2.06ｋｇの二酸化チタンおよび0.59ｋｇのネオドール23-6.5T非イオン性界面活性剤を55.88ｋｇの水中に溶解させることにより、ポリマーコーティング溶液を調製し、以下の条件下で塩被覆酵素コア上に吹き付けた：
傾斜時間：            10分間、次いで、80分間に亘り一定
流体供給速度：        0.5-0.7リットル／分
噴霧圧：              75ｐｓｉ（5.2×105Ｐａ）
入口空気温度：        75-80℃
出口空気温度：        60℃
流動化空気速度：      18ｍ3／分
採取した顆粒は、49.5ｋｇの重量および約40ｇ／ｋｇの酵素濃度を有していた。
【００４０】
Ｂ．上述した過程を同一条件下で繰り返すが、出口空気温度は70℃の設定値に制御した。クエン酸ナトリウムバリアコーティングを施した後に、試料を両方のバッチから取り出し、表２に報告したように、ロトロニック水分活性システム中で顆粒の水分活性を測定した。最後のポリマーコーティングを施した後、２種類の顆粒を自動皿洗浄剤ベース中に入れ、密封した管内に37℃で84日間に亘り貯蔵した。管を湿度チャンバから取り出し、14日後、42日後および84日後にアッセイした。パーセントで表した維持された活性が表２に報告されている。これらの結果は、クエン酸ナトリウムが50℃の出口温度で被覆された顆粒は、70℃で被覆された顆粒よりも著しく安定であり、そのより安定な過理由が0.25より大きい水分活性を有したが、それほど安定ではない顆粒が著しく低い水分活性を有したことを示している。
【００４１】
【表２】
0004367743.tif 000003