(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
有機溶媒の存在下または非存在下、チロシンまたはその塩の水懸濁液中に式（Ｉ）
【化１】
0004275241.tif 000008
（式中、Ｘ1及びＸ2は同一または異なって、塩素、臭素またはヨウ素を表す）で表される２当量以上のハロアセチルハロゲン化物及び無機塩基水溶液を、同時に滴下して式（ＩＩ）
【化２】
0004275241.tif 000009
（式中、Ｘ1は前記と同義である）で表される N-ハロアセチルチロシンとし（以下、ハロアセチル化という）、これにアンモニウムイオンを反応させることを特徴とする式（ＩＩＩ）
【化３】
0004275241.tif 000010
で表される N-グリシルチロシン、その塩またはそれらの溶媒和物の製造方法。
【請求項２】
チロシンのハロアセチル化工程において、溶液の反応温度及びpHを各々-20〜30℃、8〜14に保つ請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
チロシンが L-体であり、N-ハロアセチルチロシンが N-ハロアセチル-L-チロシンであり、N-グリシルチロシンが N-グリシル-L-チロシンである請求項１または２記載の製造方法。
【請求項４】
N-グリシル-L-チロシンの溶媒和物が N-グリシル-L-チロシン二水和物である請求項３記載の製造方法。
【請求項５】
有機溶媒が芳香族炭化水素、ハロゲン化炭化水素、脂肪酸エステル、環状または非環状のエーテル化合物及びケトンからなる群より選択される溶媒もしくはそれらの混合溶媒である請求項１または２記載の製造方法。
【請求項６】
無機塩基が水酸化リチウム、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムからなる群より選択される塩基またはそれらの塩基の混合物である請求項１または２記載の製造方法。
【請求項７】
-20〜30℃の温度においてpHを8〜14の範囲で一定に保ちながら2〜6当量までのハロアセチルハロゲン化物及び無機塩基水溶液を同時に滴下する請求項１または２記載の製造方法。
【請求項８】
pHが11〜13である請求項７記載の製造方法。
【請求項９】
ハロアセチルハロゲン化物がクロロアセチルクロリドである請求項１〜８いずれかに記載の製造方法。
【請求項１０】
有機溶媒の存在下または非存在下、チロシンまたはその塩の水懸濁液中に式（Ｉ）
【化４】
0004275241.tif 000011
（式中、Ｘ1及びＸ2は前記と同義である）で表わされる 2当量以上のハロアセチルハロゲン化物及び無機塩基水溶液を、同時に滴下することを特徴とする式（ＩＩ）
【化５】
0004275241.tif 000012
（式中、Ｘ1は前記と同義である）で表される N-ハロアセチルチロシン、その塩またはそれらの溶媒和物の製造方法。
【請求項１１】
反応溶液の反応温度及びpHを各々-20〜30℃、8〜14に保つ請求項１０記載の製造方法。
【請求項１２】
チロシンが L-体であり、N-ハロアセチルチロシンが N-ハロアセチル-L-チロシンである請求項１０または１１記載の製造方法。
【請求項１３】
有機溶媒が芳香族炭化水素、ハロゲン化炭化水素、脂肪酸エステル、環状または非環状のエーテル化合物及びケトンからなる群より選択される溶媒もしくはそれらの混合溶媒である請求項１０または１１記載の製造方法。
【請求項１４】
無機塩基が水酸化リチウム、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムからなる群より選択される塩基またはそれらの塩基の混合物である請求項１０または１１記載の製造方法。
【請求項１５】
-20〜30℃の温度においてpHを8〜14の範囲で一定に保ちながら2〜6当量までのハロアセチルハロゲン化物及び無機塩基水溶液を同時に滴下する請求項１０または１１記載の製造方法。
【請求項１６】
pHが11〜13である請求項１５記載の製造方法。
【請求項１７】
ハロアセチルハロゲン化物がクロロアセチルクロリドである請求項１０〜１６いずれかに記載の製造方法。
【請求項１８】
請求項１〜１７いずれかに記載の製造方法により製造されたＮ−グリシルチロシンを含み、エタノール含量が１５〜５０体積パーセントである水溶液を調製し、該水溶液からＮ−グリシルチロシンを結晶化させることを特徴とする、Ｎ−グリシルチロシンの精製方法。
【請求項１９】
請求項１〜１７いずれかに記載の製造方法により製造されたＮ−グリシルチロシンを５〜１０倍の重量の水に溶解させて得られる水溶液から、０〜５℃条件下、Ｎ−グリシルチロシンを結晶化することを特徴とする、Ｎ−グリシルチロシンの精製方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、輸液用成分として有用なジペプチドの一つである N-グリシル-L-チロシン二水和物を含む N-グリシルチロシンの効率的製造方法と N-グリシル-L-チロシン二水和物における特定の結晶形及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
アミノ酸あるいはそのジペプチドは、従来から輸液用成分として用いられている。N-グリシル-L-チロシンはアミノ酸の中で非常に水溶性の低い L-チロシンの溶解性を改善するために誘導体化されたものである。
【０００３】
N-グリシル-L-チロシンの製造方法は、ベリヒテ・デァ・ドイチェン・ケミッシェン・ゲゼルシャフト（Berichte der Deutschen Chemischen Gesellschaft）、2486頁（1904年）に開示されている。同文献によれば、L-チロシンに対して1.1当量のクロロアセチルクロリドと水酸化ナトリウム水溶液を用いて N-クロロアセチル-L-チロシンを取得した後に、アンモニア水と反応させることで N-グリシル-L-チロシンが製造されている。N-グリシル-L-チロシン製造時の合成中間体である N-クロロアセチル-L-チロシンの製造に関して、上記の方法での収率は50% である。また、同文献において、L-チロシンエチルエステルに対して、1.0当量のクロロアセチルクロリドを用いて N-クロロアセチル-L-チロシンエチルエステルを調製した後に、エステルを加水分解しN-クロロアセチル-L-チロシンを製造する方法が報告されている。この時の L-チロシンエチルエステルから N-クロロアセチル-L-チロシンへの合計収率は91%であり、L-チロシンからL-チロシンエチルエステルへの収率が85%であることを考慮すると、L-チロシンを出発原料した通算収率は77%である。このように L-チロシンエチルエステルを経由する N-グリシル-L-チロシンの製造方法の方が、L-チロシンを直接クロロアセチル化する製造方法に比べ収率が優れ有利であるが、工業的スケールでの製造において、 L-チロシンエチルエステルを経由する製造方法は、エステル化とその加水分解の工程を必要とし、直接クロロアセチル化を行う場合に比べ工程数が増え、効率的な製造方法とはいえない。
【０００４】
L-チロシンからの直接的ハロアセチル化による N-ハロアセチル-L-チロシンに関する上記以外の製造方法は、ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Journal of Organic Chemistry）、18巻、127頁（1953年）及び、同、18巻、1546頁（1953年）に記載されている。しかしながら、同文献における N-ハロアセチル-L-チロシンの製造方法は、酢酸エチル中、L-チロシンと1〜2当量のクロロアセチルクロリドを還流下反応させるもので、過酷な反応条件が必要である。また、その際の収率は59 %であり、効率的な製造方法とはいえない。
【０００５】
また、N-グリシル-L-チロシン二水和物の結晶構造については、クリスタル・ストラクチャー・コミニュケーション（Crystal Structure Communication）、１巻、301頁（1972年）に開示されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
N-グリシルチロシンを製造する際、その合成中間体であるN-ハロアセチルチロシンの製造方法に関して、チロシンから１工程でかつ収率よく取得する製造方法が求められている。
本発明の目的は、N-ハロアセチルチロシンを効率的に製造し、かつ該N-ハロアセチルチロシンをアンモニアを添加するアンモノリシス（必要により種々の無機塩を添加してもよい）に付すことにより、N-グリシルチロシンを効率的に製造することにある。また、N-グリシル-L-チロシン二水和物を医薬原体として用いる場合に必要な特定の結晶形の製造方法を与えることにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、有機溶媒の存在下または非存在下、チロシンまたはその塩の水懸濁液中に式（Ｉ）
【０００８】
【化６】
0004275241.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｘ1及びＸ2は同一または異なって、塩素、臭素またはヨウ素を表す）で表される２当量以上のハロアセチルハロゲン化物及び無機塩基水溶液を、同時に滴下して式（ＩＩ）
【００１０】
【化７】
0004275241.tif 000003
【００１１】
（式中、Ｘ1は前記と同義である）で表される N-ハロアセチルチロシンとし（ハロアセチル化）、これにアンモニウムイオンを反応させることを特徴とする式（ＩＩＩ）
【００１２】
【化８】
0004275241.tif 000004
【００１３】
で表される N-グリシルチロシン、その塩またはそれらの溶媒和物の製造方法に関する。
上記製造方法において、チロシンのハロアセチル化工程における反応の温度を-20〜30℃に、またpHを8〜14の範囲に保つのが好ましい。
本発明は、有機溶媒の存在下または非存在下、チロシンまたはその塩の水懸濁液中に上記の式（Ｉ）で表される２当量以上のハロアセチルハロゲン化物及び無機塩基水溶液を、同時に滴下することを特徴とする上記の式（ＩＩ）で表される N-ハロアセチルチロシン、その塩またはそれらの溶媒和物の製造方法に関する。
【００１４】
上記製造方法において、反応の温度を-20〜30℃に、またpHを8〜14の範囲に保つのが好ましい。
また、本発明は、エタノール含量が10〜99％（体積%）である水−エタノール混合溶媒から結晶化することを特徴とする、粉末Ｘ線回折において回折角2θ°及び回折相対強度［（）内に%Ｉ／Ｉ0で表す］の回折パターンが実験誤差の範囲内で：7.96 (22), 15.20 (26), 15.86 (16), 18.92 (26), 19.96 (14), 21.16 (54), 21.52 (24), 23.08 (17), 23.84 (100), 26.44 (17), 27.08 (22), 28.88 (20), 31.64 (20), 33.72 (9), 35.28 (11)、である N-グリシル-L-チロシン二水和物の結晶（以後、上記の結晶形を結晶形Aという）の製造方法に関する。
【００１５】
さらに、本発明は、粉末Ｘ線回折で、回折角2θ°及び回折相対強度［（）内に%Ｉ／Ｉ0で表す］の回折パターンが実験誤差の範囲内で：7.36 (16), 9.48 (17), 10.12 (23), 11.24 (100), 13.80 (14), 14.72 (19), 15.32 (58), 22.16 (59), 22.56 (37), 23.08 (56), 25.56 (31), 26.84 (28), 28.76 (39), 29.72 (38), 33.12 (22), 34.16 (23)、である N-グリシル-L-チロシン二水和物の結晶（以後、上記の結晶形を結晶形Bという）及び水溶液から本結晶を得る製造方法に関する。
【００１６】
【発明の実施の形態】
N-グリシルチロシンの製造において、用いられるチロシンは D-体、L-体、DL-体のいずれでもよい。輸液用成分として有用なジペプチドは N-グリシル-L-チロシンであり、それを得るためには L-チロシンが用いられる。チロシンはそのまま、あるいは塩として用い、好ましい塩としては二ナトリウム塩、一塩酸塩等が挙げられる。
【００１７】
N-ハロアセチルチロシンの製造に用いられる有機溶媒としては、好ましくは芳香族炭化水素、ハロゲン化炭化水素、脂肪酸エステル、環状または非環状のエーテル化合物及びケトンからなる群より選択される溶媒もしくはそれらの混合溶媒が用いられる。またその際にハロアセチルハロゲン化物と同時に滴下される無機塩基は、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウムからなる群より選択される塩基またはそれらの塩基の混合物であることが望ましい。該反応で用いられるハロアセチルハロゲン化物の量は好ましくはチロシンに対して２当量以上、より好ましくは２〜６当量である。反応温度は-20〜30℃が保たれることが望ましいが、さらに好ましくは-10〜10℃が適温である。反応液のpHは8〜14の範囲で一定に保たれることが望ましい。さらに好適なpHの範囲は 11〜13である。
【００１８】
該反応においてクロロアセチルクロリドは好ましいハロアセチルハロゲン化物の一つである。
【００１９】
チロシンのハロアセチル化反応は、芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン等）、ハロゲン化炭化水素（例えば、クロロホルム、塩化メチレン、1,2-ジクロロエタン等）、脂肪酸エステル（例えば、酢酸エチル、酢酸イソプロピル等）、環状または非環状エーテル化合物（例えば、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等）及びケトン（例えば、アセトン、エチルメチルケトン等）のうち単独もしくは混合した有機溶媒の存在下もしくは非存在下に行われるが、有機溶媒はチロシンに対し、0.5〜30倍量（重量／重量）、好ましくは0.5〜5倍量用いる。また、水はチロシンに対し 1〜30倍量（重量／重量）、好ましくは3〜5倍量（重量／重量）溶媒として使用する。反応温度は-20〜30℃、好ましくは-10〜10℃で行い、pHを8〜14、好ましくは11〜13に保ちながら行う。反応後、水層の pH を3以下、好ましくは1〜2に調整することで結晶化させる。その後に濾過により結晶を単離し、N-ハロアセチルチロシンを高収率で取得する。この製造方法は、これまでに報告されている製造方法と比較し、チロシンから１工程で取得でき、かつ高収率での取得が可能である。出発物質のチロシンの光学純度が生成物において保たれることは言うまでもない。
【００２０】
N-ハロアセチルチロシンから N-グリシルチロシンへの製造は、ベリヒテ・デァ・ドイチェン・ケミッシェン・ゲゼルシャフト（Berichte der Deutschen Chemischen Gesellschaft）、2486頁（1904年）及びジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（Journal of Organic Chemistry）、18巻、127頁（1953年）記載の方法に準じて行う。
【００２１】
アンモノリシスに用いられるアンモニウムイオンソースとしてはアンモニア水、アンモニア、炭酸水素アンモニウム、炭酸アンモニウム等が挙げられ、N-ハロアセチルチロシンに対し10〜100当量、好ましくは20〜100当量が用いられる。
また、上述した製造方法における目的化合物は、有機合成化学で常用される精製法（例えば、再結晶、クロマトグラフィー、レジン処理等）により精製することができる。遊離のN-グリシルチロシンまたはN-ハロアセチルチロシンだけでなく、それらの塩としても、またこれらの水和物を含む溶媒和物としても有機合成化学で常用される方法によって得ることができる。エタノール含量が10〜99%（体積%）、好ましくは15〜50%である水−エタノール混合溶媒を N-グリシル-L-チロシンに対して8〜30倍量（重量／重量）、好ましくは9〜15倍量用いて、0〜5℃で1分〜100時間かけて結晶化すれば、N-グリシル-L-チロシン二水和物として、IR、粉末 X線粉末回折、TG-DTA（示差熱・熱重量同時測定）等の結晶形の区別に用いる分析方法で再現性よく特定のスペクトルを示す結晶（結晶形A）が取得される。一方、N-グリシル-L-チロシンに対して、水を5〜30倍量（重量／重量）、好ましくは5〜10倍量用いて0〜5℃で20時間以上かけて、好ましくは20〜100時間かけて結晶化する場合、N-グリシル-L-チロシン二水和物として、IR、粉末 X線回折、TG-DTA（示差熱・熱重量同時測定）等の結晶形の区別に用いる分析方法で、水−エタノール混合溶媒を用いた場合とは異なる特定のスペクトルを示す結晶（結晶形B）が再現性よく取得される。
【００２２】
【実施例】
以下に本発明の実施例及び参考例を示す。
実施例１
N-クロロアセチル-L-チロシンの製造
蒸留水（1200mL）、4N水酸化ナトリウム水溶液（900mL）及びトルエン（600mL）を混合した後に、L-チロシン（600g，3.31mol）を添加し懸濁させ、-5〜0 ℃まで冷却した。この懸濁液にクロロアセチルクロリド（792mL，9.93 mol）とトルエン（792mL）の混合溶液と10 N水酸化ナトリウム水溶液を、pH12〜12.6、反応温度5℃以下に保つように同時滴下を行った。滴下終了後、濃塩酸によりpH8.5に調整し、分液により水層を取得した。この水層でのN-クロロアセチル-L-チロシンの生成率は92.6%であった。この水層を濃塩酸でpH1.5に調整することで析出する結晶を濾取した。得られた結晶を蒸留水（600mL）で懸濁させ、氷冷した後に析出結晶を濾取し、標記化合物（707g，2.74mol，82.8%）を得た。
【００２３】
融点：  154℃（分解）
0004275241.tif 000005
赤外吸収スペクトル（KBr, cm-1）： 3290, 1707, 1659, 1556, 1516, 1452, 1231, 1105
プロトン核磁気共鳴スペクトル (DMSO-d6, δppm)： 2.80（dd, J=8.6, 3.9Hz, 1H), 2.95（dd, J=5.0, 13.9Hz, 1H), 4.06（s, 2H), 4.37（ddd, J=5.0, 8.2, 8.3Hz, 1H), 6.65（d, J=8.4Hz, 2H), 6.99（d, J=8.4Hz, 2H), 8.40（d, J=7.9Hz, 1H), 9.21（br, 1H).
【００２４】
参考例１
N-クロロアセチル-L-チロシン製造時のクロロアセチルクロリドの当量数の比較  4N水酸化ナトリウム水溶液（15mL）とトルエン（10mL）を混合した後に、L-チロシン（10g，55.2mmol）を添加し懸濁させ、-5〜0℃まで冷却した。この懸濁液にクロロアセチルクロリドとトルエンの1:1の混合溶液と4N水酸化ナトリウム水溶液を、pH12〜12.5、反応温度5℃以下に保つように同時滴下を行った。滴下終了後、分液により水層を取得した。この水層でのN-クロロアセチル-L-チロシンの生成率を測定した。
【００２５】
その結果を下表に示す。
【００２６】
【表１】
0004275241.tif 000006
【００２７】
実施例２
N-グリシル-L-チロシン二水和物の製造と結晶形A調製法
28%アンモニア水（4000mL）と蒸留水（1000mL）に炭酸水素アンモニウム（1289g）を35℃で溶解させた後に、N-クロロアセチル-L-チロシン（700g，2.72mol）と蒸留水（700mL）を添加し40℃で5時間攪拌した。反応混合物を減圧濃縮し過剰のアンモニアを除去した後に、45℃で濃塩酸を用いてpHを5.5に調整し徐冷した。結晶析出後、更に氷冷し、濾取することで N-グリシル-L-チロシンの粗結晶（600g，脱水物含量補正値489g, 2.05mol, 75.4%）を得た。
ここで取得した粗結晶（589g，脱水物含量補正値480g, 2.01mol）を蒸留水（9600mL）に40℃で溶解し、弱塩基性レジン（WA-30 OH型, 960mL）に通塔し、目的物を含む画分を集めた。この水溶液を2667mLまで減圧濃縮し、エタノールを1333mL添加し再結晶させた。得られた結晶を減圧乾燥し、標記化合物（482 g，1.76mol, 87.5%）を得た。
【００２８】
融点：  277℃（分解）
0004275241.tif 000007
赤外吸収スペクトル（KBr, cm-1）： 3361, 1668, 1537, 1458, 1421, 1389, 1240, 1148, 1115
プロトン核磁気共鳴スペクトル（DMSO-d6, δppm)： 2.75 (dd, J=7.4, 13.6Hz, 1H), 2.96 (dd, J=4.3, 13.6Hz, 1H), 3.29 (d, J=16.4Hz, 1H), 3.43 (d, J=16.4Hz,1H), 4.22 (m, 1H), 6.63 (d, J=7.3Hz, 2H), 6.96 (d, J=7.7Hz, 2H), 8.21 (m, 1H)
粉末X線回折［回折角（2θ°）、（）内は相対強度比（%Ｉ／Ｉ0）を示す］： 7.96 (22), 15.20 (26), 15.86 (16), 18.92 (26), 19.96 (14), 21.16 (54), 21.52 (24), 23.08 (17), 23.84 (100), 26.44 (17), 27.08 (22), 28.88 (20), 31.64 (20), 33.72 (9), 35.28 (11)
【００２９】
実施例３
N-グリシル-L-チロシン二水和物の結晶形B調製法
実施例２において取得した N-グリシル-L-チロシン二水和物（118.5g，脱水物含量補正値100.0g, 0.432mol）を蒸留水（600mL）に25℃で懸濁し、その後、5℃で46時間晶析した。得られた結晶を減圧乾燥し、標記化合物（106.4 g，0.388mol, 89.8%）を得た。
融点：  277℃ (分解）
赤外吸収スペクトル (KBr, cm-1）： 3327, 1653, 1545, 1516, 1462, 1445, 1414, 1379, 1253, 1107
粉末X線回折［回折角（2θ°）、（）内は相対強度比（%Ｉ／Ｉ0）を示す］： 7.36 (16), 9.48 (17), 10.12 (23), 11.24 (100), 13.80 (14), 14.72 (19), 15.32 (58), 22.16 (59), 22.56 (37), 23.08 (56), 25.56 (31), 26.84 (28), 28.76 (39), 29.72 (38), 33.12 (22), 34.16 (23)
【００３０】
【発明の効果】
本発明によれば、輸液用成分として有用なジペプチドの一つである N-グリシル-L-チロシン二水和物を、その合成中間体である N-ハロアセチルチロシンの製造を簡便にかつ収率よくすることで、これまで知られている製造方法に比し、通算収率よく効率的に製造できる。また本発明により、N-グリシル-L-チロシン二水和物を、水−エタノール混合溶媒或いは水から結晶化を行うことで、それぞれ異なる粉末 X線回折パターンを示す特定の結晶（結晶形Aあるいは結晶形B）として得ることができる。