(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0004272338.tif 000169
［式中、
ＸはＮまたはＣＨであり；
Ｒ1は水素原子、Ｃ1-6アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1-12アルコキシ、ニトロ、アミノ、Ｃ1-6アルキルスルホニルアミノ、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルアミノ、ジＣ1-6アルキルアミノ、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノまたは−Ｏ−(ＣＨ2)n−Ｒ11であり、
ここで、ｎは０〜６の整数であり、Ｒ11はビニル、ジフェニルメチル、Ｃ1-6アルカ
ノイルまたは場合によりＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、カルボキシル、ハロゲン
、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲン置換アルキル、
ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ3-6シク
ロアルキルアミノ、ベンジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−フェ
ニルおよび−Ｏ−フェニルから選ばれる１個以上の基で置換されていてもよい、ヘテ
ロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０〜３個の原子を有する３〜１０員の
飽和もしくは不飽和環である；
Ｒ2は水素原子、ヒドロキシ、ハロゲンまたはＣ1-6アルキルであり；
Ｒ3は水素原子；スチリル；
−ＣＲ31Ｒ32Ｒ33、
ここで、Ｒ31は水素原子またはＣ1-6アルキルであり、
Ｒ32は水素原子、α−アミノベンジル、ヘテロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選
ばれる０〜３個の原子を有する５〜８員の飽和環、または場合によりヒドロキシ、ア
ミノ、フェニル、Ｃ1-6アルコキシフェニル、ハロフェニルもしくはアミノフェニル
で置換されていてもよいＣ1-6アルキルであり、そして
Ｒ33は水素原子、アミノ、Ｃ1-6アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ2-6アルケニルオキ
シカルボニルアミノ、ピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノまたは９−フル
オレニルオキシカルボニルアミノであるか、あるいは
Ｒ32とＲ33は、隣接する炭素原子と共に、場合によりＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキ
シ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲ
ン置換アルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキル
アミノ、Ｃ3-8シクロアルキルアミノ、ベンジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6
アルキレン−フェニル、−Ｏ−フェニル、フェニル−Ｃ1-6アルキル、ジＣ1-6アルキ
ルアミノおよびピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニルから選ばれる１個以上の基で
置換されていてもよくまたは場合によりベンゼン環が融合していてもよい、ヘテロ原
子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０〜３個の原子を有する５〜８員の飽和環
を形成してもよい；あるいは
−ＮＲ34Ｒ35であり、
ここで、Ｒ34は水素原子またはＣ1-6アルキルであり、そしてＲ35は水素原子、Ｃ1-6
アルキルまたはヘテロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０〜３個の原子を
有する５〜８員の飽和環であり、あるいは
Ｒ34とＲ35は、隣接する窒素原子と共に、ＮＨ、ＳまたはＯ原子で中断されていても
よく且つ場合によりＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコ
キシカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲン置換アルキル、ニトロ、シア
ノ、ヒドロキシ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ3-8シクロアルキルア
ミノ、ベンジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−フェニル、−Ｏ−
フェニル、フェニル−Ｃ1-6アルキル、ジＣ1-6アルキルアミノおよびピペリジノ−Ｃ
1-6アルキルカルボニルから選ばれる１個以上の基で置換されていてもよい５〜８員
の飽和異項環を形成してもよい；
Ｒ4はカルバモイル、シアノ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルカルバモイル、Ｃ1-6アルキル、ヒドロキシＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルスルホニルアミノ−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ5-10アリール（ヒドロキシ）メチル、Ｃ5-10アリール−Ｃ1-6アルキレン、５〜１０員ヘテロアリール（ヒドロキシ）メチル、５〜１０員ヘテロアリール−Ｃ1-6アルキレンまたはヒドロキシと５〜７員の飽和環で置換されたメチルであり；あるいは
Ｒ3とＲ4は、ピリジン環中の炭素原子と共に、４〜１０員のモノシクロアルキルまたはビシクロアルキルを形成してもよく、該環は場合によりＮＨで中断されていてもよく且つ場合によりオキソ基で置換されていてもよく；そして
Ｒ5はアミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、ジＣ1-6アルキルアミノ、フェニルアミノ、ベンジルアミノ、ピペラジノ、Ｃ1-6アルカノイルアミノ、Ｃ1-6アルコキシ、ヒドロキシ、または場合によりヒドロキシ、アミノ、フェニル、Ｃ1-6アルコキシフェニル、ハロフェニルもしくはアミノフェニルで置換されていてもよいＣ1-6アルキルであり、あるいは
Ｒ4とＲ5は−ＣＨ2ＯＣＯＮＨ−、−ＣＨ2ＮＨＣＯＮＨ−、−ＣＯＮＨＣＯＮＨ−、−ＣＯＮ（フェニルもしくはメチル）ＣＯＮ（ＨもしくはＣＨ3）−、−Ｃ（ＮＨ2またはＮＨＣＯＣＨ3）＝Ｎ−ＮＨ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＣ2Ｈ5）ＣＯＮＨ−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＯＮＨ−および−ＣＨ2ＣＨ（ＣＯＯＣ2Ｈ5）ＣＯＮＨ−よりなる群から選ばれるブリッジを形成してもよい］
のピリジン誘導体またはその塩。
【請求項２】
ＸがＣＨであり；
Ｒ1が水素原子、ヒドロキシ、Ｃ1-12アルコキシまたは−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−Ｒ11であり、
ここで、Ｒ11はビニル、ジフェニルメチル、Ｃ1-6アルカノイル、場合によりＣ1-6
アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、カルボキシル、ハロゲン、Ｃ1-6アルコキシカルボニ
ル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲン置換アルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキ
シ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ3-8シクロアルキルアミノ、ベン
ジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−フェニルおよび−Ｏ−フェニ
ルから選ばれる１個以上の基で置換されていてもよいＣ5-10アリール、場合によりＣ
1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、カルボキシル、ハロゲン、Ｃ1-6アルコキシカル
ボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲン置換アルキル、ニトロ、シアノ、ヒド
ロキシ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ3-8シクロアルキルアミノ、
ベンジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−フェニルおよび−Ｏ−フ
ェニルから選ばれる１個以上の基で置換されていてもよい５〜１０員のヘテロアリー
ル、場合によりＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、カルボキシル、ハロゲン、Ｃ1-
6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲン置換アルキル、ニト
ロ、シアノ、ヒドロキシ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ3-8シクロ
アルキルアミノ、ベンジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−フェニ
ルおよび−Ｏ−フェニルから選ばれる１個以上の基で置換されていてもよく、場合に
よりＯ原子で中断されていてもよい３〜８員のシクロアルキル、またはＮＨおよび／
もしくはＯ原子で中断された５〜８員の飽和異項環であり；
Ｒ2が水素原子であり；
Ｒ3が水素原子；スチリル；
−ＣＲ31Ｒ32Ｒ33、
ここで、Ｒ31は水素原子またはＣ1-6アルキルであり、Ｒ32は水素原子または場合に
よりヒドロキシ、アミノ、フェニル、Ｃ1-6アルコキシフェニル、ハロフェニル、α
−アミノベンジルもしくはアミノフェニルで置換されていてもよいＣ1-6アルキルで
あり、そしてＲ33は水素原子、アミノまたはピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニル
アミノであり、あるいは
Ｒ32とＲ33は場合により置換されていてもよく、場合によりＮＨで中断されていても
よいＣ5-8シクロアルキルであって、該置換基がＣ1-6アルキル、フェニル−Ｃ1-6
アルキル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、ベンジルアミノ、ジＣ1-6アルキルアミ
ノ、カルバモイル、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、ピペリジノ−Ｃ1-
6アルキルカルボニルまたはＣ1-6アルキルスルホニルであり且つ該環はベンゼン環
と融合していてもよい；あるいは
−ＮＲ34Ｒ35であり、
ここで、Ｒ34は水素原子またはＣ1-6アルキルであり、そしてＲ35は水素原子、Ｃ1-
6アルキルまたは場合によりＮＨで中断されていてもよいＣ5-8シクロアルキルであ
り、あるいは
Ｒ34とＲ35が、隣接する窒素原子と共に、５〜８員の飽和異項環を形成してもよく、
該環はＮＨまたはＯ原子で中断されていてもよく且つ場合によりアミノまたはカルバ
モイルで置換されていてもよい；
Ｒ4はカルバモイル、シアノ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルカルバモイル、Ｃ1-6アルキル、ヒドロキシＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ−Ｃ1-6アルキレンまたはＣ1-6アルコキシＣ1-6アルキルであり；あるいは
Ｒ3とＲ4は、
【化２】
0004272338.tif 000170
を形成してもよく；そして
Ｒ5はアミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、フェニルアミノ、ベンジルアミノまたはＣ1-6アルカノイルアミノであるか、あるいは
Ｒ4とＲ5は−ＣＨ2ＯＣＯＮＨ−、−ＣＨ2ＮＨＣＯＮＨ−、−ＣＯＮＨＣＯＮＨ−、−ＣＯＮ（フェニルもしくはメチル）ＣＯＮ（ＨもしくはＣＨ3）−、−Ｃ（ＮＨ2もしくはＮＨＣＯＣＨ3）＝Ｎ−ＮＨ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＣ2Ｈ5）ＣＯＮＨ−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＯＮＨ−および−ＣＨ2ＣＨ（ＣＯＯＣ2Ｈ5）ＣＯＮＨ−よりなる群から選ばれるブリッジを形成してもよい、
請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項３】
請求項１記載の化合物またはその塩を活性成分とする医薬。
【請求項４】
請求項１記載の化合物またはその塩と一種以上の薬学的に許容される賦形薬からなる医薬組成物。
【請求項５】
請求項１記載の化合物またはその塩を活性成分とするＩκＢキナーゼβ阻害剤。
【請求項６】
請求項１記載の化合物またはその塩を活性成分とする抗炎症剤。
【請求項７】
喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、結膜炎、春季カタル、慢性関節リウマチ、全身性エリトマトーデス、乾癬、潰瘍性大腸炎、全身性炎症反応シンドローム（ＳＩＲＳ）、敗血症、多発性筋炎、皮膚筋炎（ＤＭ）、結節性多発関節炎（ＰＮ）、混合結合組織症（ＭＣＴＤ）、シェーグレン症候群、痛風からなる群から選択される病気の予防・治療に使用される請求項６の抗炎症剤。
【請求項８】
請求項１記載の化合物またはその塩を活性成分とする免疫抑制剤。
【請求項９】
請求項１記載の化合物またはその塩を活性成分とする虚血症治療剤。
【請求項１０】
請求項１記載の化合物またはその塩を活性成分とする抗腫瘍剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なピリジン誘導体、その誘導体の製造方法、その誘導体を含有する薬学的製剤に関する。本発明のピリジン誘導体は、ＩκＢキナーゼβ(ＩＫＫ−β、またはＩＫＫ−ベータ)活性を阻害することにより、ニュクレオファクターκＢ（ＮＦ-κＢ）活性を阻害する。その結果、ＮＦ−κＢ活性に関連する疾患の予防と治療に使用し得る。特に炎症性疾患の治療に使用し得る。
【０００２】
【従来の技術】
ＮＦ−κＢは、Ｒｅｌ／ＮＦ-κＢファミリーのポリペプチドの多様な組み合わせにより構成される、密接に関連するホモダイマーまたはヘテロダイマーの転写因子複合体のファミリーに属する。 ＮＦ-κＢおよび関連するファミリーメンバーは、免疫反応および炎症反応に関する５０以上の遺伝子の調節に関与する（Barnes PJ，Karin M, N.Engl. J. Med. 336, 1066-1071 (1997)）および(Baeuerle PA, Baichwal VR, Adv. Immunol. 65, 111-137 (1997))。 ほとんどの細胞では、ＮＦ−κＢは、５０ｋＤａおよび６５ｋＤａのサブユニットを含むヘテロダイマー(p５０／ＲｅｌＡ)として存在する。このヘテロダイマーは、ＩκＢファミリーのタンパク質と結びついて細胞質内に留められ、不活性型になっている。ＩκＢファミリーのタンパク質は、ＮＦ−κＢの核移行シグナルを遮断している。 細胞が、様々なサイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１）、ＣＤ４０リガンド、リポ多糖(ＬＰＳ)、酸化体、マイトジェン（例えばホルボールエステル）、あるいはウイルスで刺激されると、ＩκＢタンパクは、特定のセリン残基でリン酸化され、ポリユビキチン化され、プロテアソーム依存経路を介して分解される。ＩκＢから遊離して、活性型ＮＦ−κＢは、核移行できるようになり、核において特定の遺伝子特異的エンハンサー配列に選択的に結合する。ＮＦ−κＢで調節される遺伝子は、例えば、サイトカイン、細胞接着分子、および急性期タンパク質を含む炎症性メディエーターである。サイトカインおよび他のタンパク質は、次にシグナル伝達に関与し、さらにＮＦ−κＢを活性化する。
【０００３】
ＮＦ−κＢについての、炎症反応での役割については、喘息を含む気道炎症の研究により明らかになっている。例えば、ＮＦ−κＢのｐ５０サブユニット欠損マウスでは、好酸球増多症の気道炎症が起こりえず、また好酸球の増殖、分化、およびリクルートメントに必須のＩＬ−５とエオタキシンの産生も見られない。ｐ５０欠損マウスではまた、Ｔ細胞を炎症部位に移動させるのに重要な役割を持つケモカインであるＭＩＰ−１αおよびβの産生も見られない（Yang Lら、 J.Exp. Med. 188, 1739-1750 (1998)）。Ｈａｒｔ ＬＡ らは、喘息患者に由来する気道細胞ではＮＦ−κＢの活性が増加していることを開示する（Am. J. Respir. Crit. Care Med. 158, 1585-1592 (1998)）。Ｓｔａｃｅｙ ＭＡらは、埃ダニ（dust mite）の主なアレルゲンであるＤｅｒ ｐ１が、アレルギー性喘息患者に由来する気管支上皮細胞のＮＦ−κＢを活性化することを開示する（Biochem. Biophys. Res. Commun. 236, 522-526 (1997)）。Ｂａｒｎｅｓ Ｐおよび Ａｄｃｏｃｋ ＩＭは、気道炎症に関与することが知られている多くのタンパク質および因子（ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＴＮＦ−α、ＧＭ−ＣＳＦ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−３、ｉＮＯＳ、ＩＣＡＭ−１、およびＶＣＡＭ−１など）がＮＦ−κＢによって調節されていると示唆する（Trends Pharmacol.Sci. 18, 46-50 (1997)）。さらに、現在喘息の治療にもっとも有効とされるグルココルチコイドは、転写因子ＮＦ−κＢおよび活性化ペプチド１（ＡＰ１）と直接相互作用し、その活性を阻害することによって、気道炎症を抑制する（Barnes P Pulmon, Pharmacol.Therapeut. 10, 3-19 (1997)およびDumont Aら、Trends Biochem.Sci. 23, 233-235 (1998))。
【０００４】
ＮＦ−κＢの炎症性疾患における主要な役割はまた、リウマチの滑膜の研究により示唆されている。最近の免疫組織化学の研究では、ＮＦ−κＢが、リウマチの滑膜を含む細胞中で活性化されていることが示されている。さらに、ＮＦ−κＢは、ＴＮＦ−αの刺激に反応して、ヒト滑膜中で活性化されていることが示された（Roshak AK ら, J. Biol. Chem. 271, 31496-31501 (1996)）。
従って、ＮＦ−κＢ活性の阻害により、ステロイド剤と同等またはそれより優れた強い抗炎症作用が得られ、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、結膜炎、春季カタル、慢性関節リウマチ、全身性エリトマトーデス、乾癬、潰瘍性大腸炎、全身性炎症反応シンドローム（ＳＩＲＳ）、敗血症（Fischer, C.ら、J.Bio. Chem. 274:24625-24632 (1999)）、多発性筋炎、皮膚筋炎、結節性多発関節炎、混合結合組織症、シェーグレン症候群、痛風などを含む炎症の症状を改善する。
【０００５】
更に、ＮＦ−κＢが、新生物（悪性）形質転換に重要な役割を有することが、いくつかの研究により示されている。例えば、ＮＦ−κＢは、過剰発現、遺伝子増幅、遺伝子組換え、あるいは転座の結果、インビトロおよびインビボで細胞の形質転換に関与している（Mercurio, F.および Manning, A.M., Oncogene, 18:6163-6171 (1999)）。特定のヒトのリンパ様腫瘍細胞では、ＮＦ−κＢファミリーメンバーの遺伝子が組み換えられ、増幅されている。
ＮＦ−κＢは、アスピリンまたは他の非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤＳ）による処理により阻害される。これらの薬剤は、特定の腫瘍の開始および／または進行を阻害することが知られている（Mayo, M.W., Baldwin A.S., Biochmica et Biophysica Acta 1470 M55-M62 (2000)）。
【０００６】
ホジキンリンパ腫細胞系は、構成的に核のＮＦ−κＢ複合体を含み、非分解性のＩκＢα分子の過剰発現によるＮＦ−κＢ活性の阻害により、これらの細胞の増加と悪性化が阻害される（(Sovak MA ら、J.Clin.Invest., 100:2952-2960 (1997))。多くの乳がん細胞もまた、高いレベルの核ＮＦ−κＢＤＮＡ結合活性を有し、これらの細胞が培養で生存するための必須物質となっている（Nakshatri, Hら、Mol. Cell. Biol., 17:3629-3639 (1997)）。
更に、ＮＦ−κＢが活性化され、それによって脳虚血症の細胞壊死が促進されることが示されている（Nature medicine Vol. 5 No. 5, May 1999)。
最近2年間のうちで、ＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）複合体がシグナルに誘導されるＩκＢリン酸化に関与していることが分かった ((Mercurio, F., および Manning, A.M., Current Opinion in Cell Biology, 11:226-232(1999))、(Mercurio, F., および Manning, A.M., Oncogene, 18:6163-6171(1999))、 (Barnkett, M., および Gilmore T.D., Oncogene 18, 6910-6924(1999))、(Zandi, E., および Karin, M., 19:4547-4551(1999))、(Israel, A., trends in CELL BIOLOGY 10:129-133(2000))、および(Hatada, E.N, ら、 Current Opinion in Immunology, 12:52-58(2000))。この複合体は、すべての異なる刺激を統合しＮＦ−κＢの活性化に導く部位であると考えられる。ＩＫＫ複合体（分子量７００−９００ｋＤａ）は、ＩＫＫ−αおよびＩＫＫ−βという、ＩκＢキナーゼの２つのホモログ、ＮＦ−κＢを誘導する上流のキナーゼＮＩＫ、これらの３つのキナーゼを繋ぐスカホールドタンパク質ＩＫＡＰ、およびＩＫＫ−βと相互作用する調節サブユニットＩＫＫ−γを含む様々なタンパク質からなる。
【０００７】
ＩＫＫ-βは、７５６個のアミノ酸のセリン−トレオニンキナーゼであり、ＩＫＫ-αと５２％の相同性を有し、同じドメイン構造を有している。ＩＫＫ-βは、インビトロにおいて、ホモダイマーを形成し、細胞内でＩＫＫ−αとヘテロダイマーを形成する。ＩＫＫ−βはまた、ＩＫＫ−γ、ＩＫＡＰ、ＮＩＫおよびＩκＢαと相互作用する。組換え体ＩＫＫ−βは、ＩκＢαおよびＩκＢβの特定のセリン残基を同じ効率でリン酸化する。ＩＫＫ−βは、ＩＫＫ−αと比較すると、より高い構成的なキナーゼ活性を有する。このことは、ＩＫＫ−βの過剰発現により、ＮＦ−κＢ依存性リポーター遺伝子の転写が、ＩＫＫ−αと比較してより高く活性化されることと一致している。ＩＫＫ−βは、様々な刺激に反応して、多様な細胞系あるいは新鮮なヒト細胞中で活性化されていることが示されている。これらの刺激とは、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＬＰＳ、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激、プロテインキナーゼＣ、およびカルシニューリン、Ｂ細胞レセプター／ＣＤ４０リガンド刺激、およびバナジウム酸塩などである。ＩＫＫ−βは、リウマチ性関節炎あるいは骨関節炎の患者の滑膜から単離された線維芽細胞様滑膜細胞（ＦＬＳ）中で活性化されている。さらに、ＩＫＫ−βは、構造的に関連している上流のキナーゼのＭＥＫＫ−１およびＮＩＫにより、また所定のプロテインキナーゼＣアイソフォームにより活性化され得る。このことは、Ｔ−ループ（活性化ループ）中の特定のセリン残基リン酸化を通じて行われる可能性が高い。触媒的に不活性なＩＫＫ−βの変異体は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＬＰＳ、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激により、およびＭＥＫＫ１およびＮＩＫの過剰発現により、ＮＦ−κＢの活性化を阻害することが示されている。さらに、活性化ループに変異のあるＩＫＫ−βは、ＩＬ−１およびＴＮＦ−αのシグナルを阻害する。これらのことから、これらの経路中でのＩＫＫ−βの関与が、ＮＦ−κＢ活性化の結果を招くことが示唆される。
【０００８】
まとめると、ＩＫＫ−βの特異的な阻害により、ＮＦ−κＢ活性化が阻害され、それにより、喘息あるいはその他の疾患の原因を改善し得る、強力なインビボの抗炎症作用および免疫調節作用、または抗腫瘍作用および抗虚血作用が現れる。
【０００９】
Ｍａｎｎａ 等は下記の一般式で表される４，６−ジ置換３−シアノ−２−アミノピリジンを一般的な抗炎症、鎮痛、解熱剤として開示している（Eur J. Med. Chem. 34, 245-254 (1999))。
【化３】
0004272338.tif 000002
（式中、Ｒ’とＲ'’はＯＣＨ3とＯＣＨ3、ＣｌとＣｌ、ＨとＣｌ、ＨとＢｒ、ＨとＣＨ3、ＨとＯＣＨ3、ＨとＮＯ2、またはＨとＮ（ＣＨ3）2を意味する。）、および
【化４】
0004272338.tif 000003
【００１０】
Ｍａｎｎａ 等は該ピリジン環の４位が脂肪属基で置換されたピリジン誘導体を開示していないばかりか、上記公知のピリジン誘導体についてＩＫＫ−βキナーゼやＮＦ−κＢ阻害活性に触れていない。
ＮＦ−κＢに対する特異的、選択的阻害活性に基づく抗炎症作用を有する新規化合物の開発が望まれている。
【００１１】
発明の要約
本発明者らはピリジン誘導体の化学的修飾について鋭意研究の結果、本発明に係る新規化学構造の化合物がＩＫＫ−β阻害とサイトカイン阻害に基づく予期せぬ程の優れたＮＦ−κＢ阻害活性を有することを見出し、これらの知見に基づき本発明を完成した。
本発明は下記式（I）で示される新規ピリジン誘導体およびその塩を提供することに関する；
【化５】
0004272338.tif 000004
（式中、ＸはＮまたはＣＨであり；
Ｒ1は水素原子、Ｃ1-6アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1-12アルコキシ、ニトロ、アミノ、Ｃ1-6アルキルスルホニルアミノ、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルアミノ、ジＣ1-6アルキルアミノ、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ、または
−Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｒ11であり、
但し、ｎは０−６の整数、Ｒ11はビニル、ジフェニルメチル、Ｃ1-6アルカノイル、または置換されていることもある３−１０員の飽和または不飽和環で、ヘテロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０−３個の原子を有する環を意味し；
【００１２】
Ｒ2は水素原子、ヒドロキシ、ハロゲン、またはＣ1-6アルキルであり；
Ｒ3は水素原子；置換されていることもあるスチリル；
−ＣＲ31Ｒ32Ｒ33、
但し、Ｒ31は水素原子、またはＣ1-6アルキル、
Ｒ32は水素原子、α−アミノベンジル、ヘテロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０〜３個の原子を有する５〜８員の飽和環、置換されていることもあるＣ1-6アルキル、および
Ｒ33は水素原子、アミノ、Ｃ1-6アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ2-6アルケニルオキシカルボニルアミノ、ピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ、または９−フルオレニルオキシカルボニルアミノを意味し、または
Ｒ32とＲ33は、隣接する炭素原子と共に、置換されていることもあり、あるいはベンゼン環が融合することもある、ヘテロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０−３個の原子を有する５−８員の飽和環を形成してもよく；あるいは
−ＮＲ34Ｒ35であり、
但し、Ｒ34は水素原子またはＣ1-6アルキル、およびＲ35は水素原子、Ｃ1-6アルキル、またはヘテロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０−３個の原子を有する５−８員の飽和環を意味し、または
Ｒ34とＲ35は、隣接する窒素原子と共に、５−８員の飽和異項環を形成し、該環はＮＨ、Ｓ原子またはＯ原子で中断されていてもよく、そして置換されていてもよく；
【００１３】
Ｒ4は水素原子、カルバモイル、シアノ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルカルバモイル、Ｃ1-6アルキル、ヒドロキシＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルスルホニルアミノ−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ5-10アリール（ヒドロキシ）メチル、Ｃ5-10アリール−Ｃ1-6アルキレン、５−１０員ヘテロアリール（ヒドロキシ）メチル、５−１０員ヘテロアリール−Ｃ1-6アルキレン、またはヒドロキシと５−７員の飽和環で置換されたメチルであり；または
Ｒ3とＲ4は、そのピリジン環中の炭素原子と共に、４−１０員のモノシクロアルキルまたはビシクロアルキルを形成してもよく、該環はＮＨで中断されていてもよく、そしてオキソ基で置換されていてもよく；そして
【００１４】
Ｒ5はアミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、ジＣ1-6アルキルアミノ、フェニルアミノ、ベンジルアミノ、ピペラジノ、Ｃ1-6アルカノイルアミノ、Ｃ1-6アルコキシ、ヒドロキシ、またはヒドロキシ、アミノ、フェニル、Ｃ1-6アルコキシフェニル、ハロフェニルもしくはアミノフェニルで置換されていてもよいＣ1-6アルキルであり、または
Ｒ4とＲ5は、そのピリジン環中の炭素原子と共に、ヘテロ原子として少なくとも１個の窒素原子を有し、置換されていてもよい５−７員の飽和または不飽和環を形成してもよい。）。
【００１５】
上で定義された各環またはＣ1-6アルキルの任意の置換基は制限されず、当業者に公知、公用のいかなる置換基でもよい。
本発明の化合物は、驚くべきことに優れたＩＫＫ−βキナーゼ阻害活性とサイトカイン阻害活性を示す。従って、これらの化合物は、殊にＮＦ−κＢ阻害剤として、そして、特にＮＦ−κＢに依存する疾病の治療に有用な医薬、あるいは医薬組成物の製造に有用である。
【００１６】
更に具体的には、本発明のピリジン誘導体はＩＫＫ−βキナーゼ活性を阻害するので、ＮＦ−κＢ活性が関与する以下の病気の予防と治療に有用である。
喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、結膜炎、春季カタル、慢性関節リウマチ、全身性エリトマトーデス、乾癬、潰瘍性大腸炎、全身性炎症反応シンドローム（ＳＩＲＳ）、敗血症、多発性筋炎、皮膚筋炎（ＤＭ）、結節性多発関節炎（ＰＮ）、混合結合組織症（ＭＣＴＤ）、シェーグレン症候群、痛風などを含む炎症性症候群。
本発明の化合物は、また虚血や腫瘍のような病気の予防と治療に有用である。何故ならばこれらの病気もＩＫＫ−βキナーゼおよびＮＦ−κＢ活性に関わっているからである。
【００１７】
式（I）の好ましい化合物は、
ＸはＣＨまたはＮであり；
Ｒ1は水素原子、Ｃ1-6アルキル、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1-12アルコキシ、ニトロ、アミノ、Ｃ1-6アルキルスルホニルアミノ、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルアミノ、ジＣ1-6アルキルアミノ、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノまたは
−Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｒ11であり、
但し、ｎは０−６の整数、Ｒ11はビニル、ジフェニルメチル、Ｃ1-6アルカノイル、または置換されていることもある３−１０員の飽和または不飽和環で、ヘテロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０−３個の原子を有する環を意味し、その際の３−１０員の飽和または不飽和環の好ましい置換基は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、カルボキシル、ハロゲン、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲン置換アルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ3-8シクロアルキルアミノ、ベンジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−フェニル、および−Ｏ−フェニルから選ばれる1個以上の基であり；
【００１８】
Ｒ2は水素原子、ヒドロキシ、ハロゲン、またはＣ1-6アルキルであり；
Ｒ3は水素原子；置換されていることもあるスチリル；
−ＣＲ31Ｒ32Ｒ33、
但し、Ｒ31は水素原子、またはＣ1-6アルキル、
Ｒ32は水素原子、Ｃ1-6アルキル、該基はヒドロキシ、アミノ、フェニル、Ｃ1-6アルコキシフェニル、ハロフェニルまたはアミノフェニルで置換されていてもよい、α−アミノベンジル、またはヘテロ原子としてＳ、ＯおおびＮ原子から選ばれる０−３個の原子を有する５−８員の飽和環、および
Ｒ33は水素原子、アミノ、Ｃ1-6アルコキシカルボニルアミノ、Ｃ2-6アルケニルオキシカルボニルアミノ、ピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ、または９−フルオレニルオキシカルボニルアミノを意味し、または
Ｒ32とＲ33が、ヘテロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０−３個の原子を有する、置換されていることもある５−８員の飽和環を形成していてもよく、その際の好ましい置換基は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲン置換アルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ3-8シクロアルキルアミノ、ベンジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−フェニル、−Ｏ−フェニル、フェニル−Ｃ1-6アルキル、ジＣ1-6アルキルアミノ、およびピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニルから選ばれる1個以上の基であり、あるいは該環はベンゼン環と融合していてもよく；または
【００１９】
−ＮＲ34Ｒ35、
但し、Ｒ34は水素原子またはＣ1-6アルキル、およびＲ35は水素原子、Ｃ1-6アルキル、またはヘテロ原子としてＳ、ＯおよびＮ原子から選ばれる０−３個の原子を有する５−８員の飽和環を意味し、または
Ｒ34とＲ35が隣接する窒素原子と共に、５−８員の飽和異項環を形成し、該環はＮＨ、Ｓ原子またはＯ原子で中断されていてもよく、そして置換されていてもよく、そして好ましい該置換基は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲン置換アルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアルキルアミノ、Ｃ3-8シクロアルキルアミノ、ベンジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−フェニル、−Ｏ−フェニル、フェニル−Ｃ1-6アルキル、ジＣ1-6アルキルアミノ、およびピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニルから選ばれる1個以上の基であり、あるいは該環はベンゼン環と融合していてもよく；
【００２０】
Ｒ4は水素原子、カルバモイル、シアノ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルカルバモイル、Ｃ1-6アルキル、ヒドロキシＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルスルホニルアミノ−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ−Ｃ1-6アルキレン、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ5-10アリール（ヒドロキシ）メチル、Ｃ6-10アリール−Ｃ1-6アルキレン、５−１０員ヘテロアリール（ヒドロキシ）メチル、または５−１０員ヘテロアリール−Ｃ1-6アルキレンであり；または
Ｒ3とＲ4は、そのピリジン環中の炭素原子と共に、４−１０員のモノシクロアルキルまたはビシクロアルキルを形成し、該環はＮＨで中断されていてもよく、そしてオキソ基で置換されていてもよい；そして
【００２１】
Ｒ5はアミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、ジＣ1-6アルキルアミノ、フェニルアミノ、ベンジルアミノ、ピペラジノ、またはＣ1-6アルカノイルアミノであり、または
Ｒ4とＲ5は、ピリジン環中の炭素原子と共に、ヘテロ原子として少なくとも１個の窒素原子を有する置換基を有していてもよい５−７員の飽和または不飽和環を形成してもよく、好ましい該置換基は、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルスルホニル、ハロゲン置換アルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、フェニル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、Ｃ3-8シクロアルキルアミノ、ベンジルアミノ、カルバモイル、−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−フェニル、−Ｏ−フェニル、フェニル−Ｃ1-6アルキル、ジＣ1-6アルキルアミノ、およびピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニルから選ばれる1個以上の基であり、あるいは該環はベンゼン環と融合していてもよい。
【００２２】
式（Ｉ）の化合物の更に好ましい化合物は、式（Ｉ）において、
ＸはＣＨであり；
Ｒ1は水素原子、ヒドロキシ、Ｃ1-12アルコキシ、または
−Ｏ−Ｃ1-6アルキレン−Ｒ11であり、
但し、Ｒ11はビニル、ジフェニルメチル、Ｃ1-6アルカノイル、置換されていることもあるＣ5-10アリール、または置換されていることもある５−１０員のヘテロアリール、置換されていることもあり、Ｏ原子で中断されていることもある３−８員シクロアルキル、またはＮＨおよび／またはＯ原子で中断された５−８員の飽和異項環を意味し；
【００２３】
Ｒ2は水素原子であり；
Ｒ3は水素原子；置換されていることもあるスチリル；
−ＣＲ31Ｒ32Ｒ33、
但し、Ｒ31は水素原子、またはＣ1-6アルキル、およびＲ32は、ヒドロキシ、アミノ、フェニル、Ｃ1-6アルコキシフェニル、ハロフェニル、α−アミノベンジルまたはアミノフェニルで置換されていることもあるＣ1-6アルキル、または水素原子および
Ｒ33は水素原子、アミノ、またはピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノを意味し、または
Ｒ32とＲ33は、置換されていることもあり、あるいはＮＨで中断されていてもよいＣ5-8シクロアルキルを形成していてもよく、該置換基はＣ1-6アルキル、フェニル−Ｃ1-6アルキル、アミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、ベンジルアミノ、ジＣ1-6アルキルアミノ、カルバモイル、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、ピペリジノ−Ｃ1-6アルキルカルボニル、またはＣ1-6アルキルスルホニルであり、該環はベンゼン環と融合していてもよく；または
【００２４】
−ＮＲ34Ｒ35、
但し、Ｒ34は水素原子またはＣ1-6アルキル、およびＲ35は水素原子、Ｃ1-6アルキル、またはＮＨで中断されていてもよいＣ5-8シクロアルキルを意味し、または
Ｒ34とＲ35が隣接する窒素原子と共に、５−８員の飽和異項環を形成してもよく、該環はＮＨまたはＯ原子で中断されていてもよく、そしてアミノまたはカルバモイルで置換されていてもよく；
Ｒ4はカルバモイル、シアノ、カルボキシル、Ｃ1-6アルコキシカルボニル、Ｃ1-6アルキルカルバモイル、Ｃ1-6アルキル、ヒドロキシＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルキルカルボニルアミノ−Ｃ1-6アルキレン、またはＣ1-6アルコキシＣ1-6アルキルであり；または
Ｒ3とＲ4は、
【化６】
0004272338.tif 000005
を形成してもよく；そして
【００２５】
Ｒ5はアミノ、Ｃ1-6アルキルアミノ、フェニルアミノ、ベンジルアミノ、またはＣ1-6アルカノイルアミノであり、または
Ｒ4とＲ5は、−ＣＨ2ＯＣＯＮＨ−、−ＣＨ2ＮＨＣＯＮＨ−、−ＣＯＮＨＣＯＮＨ−、−ＣＯＮ（フェニルまたはメチル）ＣＯＮ（ＨまたはＣＨ3）−、−Ｃ（ＮＨ2またはＮＨＣＯＣＨ3）＝Ｎ−ＮＨ−、−ＮＨＣＯＮＨ−、−ＣＨ＝Ｃ（ＣＯＯＣ2Ｈ5）ＣＯＮＨ−、−ＣＨ2ＣＨ2ＣＯＮＨ−、および−ＣＨ2ＣＨ（ＣＯＯＣ2Ｈ5）ＣＯＮＨ−からなる群から選ばれる１つのブリッジを意味してもよい。
【００２６】
ここで使用される「アリール」とは１ないし２環からなる炭素数５−１０の芳香族基を意味する。
ここで使用される「ヘテロアリール」とはＯ、ＮおよびＳ原子から選ばれる少なくとも1個のヘテロ原子を有し、１ないし２環からなる炭素数２−９の芳香族基を意味する。
ここで使用される「Ｃ1-12アルコキシ」とは−Ｏ−直鎖あるいは分枝鎖状の炭素数１−１２のアルキルを意味する。
【００２７】
本発明の好ましい化合物は以下の化合物である；
２−[６−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）−４−（３−ピペリジニル）−２−ピリジニル]フェノール、
２−[６−アミノ−５−メチル−４−（３−ピペリジニル）−２−ピリジニル]−フェノール、
７−（２−ヒドロキシフェニル）−５−（３−ピペリジニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド[２,３−ｄ][１,３]オキサジン−２−オン、
２−アミノ−６−（２，６−ジヒドロキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリル、
２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）−６−ヒドロキシフェニル−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリル、
２−[６−アミノ−５−（メトキシメチル）−４−（３−ピペリジニル）−２−ピリジニル]フェノール、
７−（２−ヒドロキシフェニル）−５−（３−ピペリジニル）ピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−２，４−（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン、
２−アミノ−６−（２−ヒドロキシ−６−プロポキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリル、
【００２８】
２−[６−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）−４−（３−ピペリジニル）−２−ピリジニル]−３−（ベンジルオキシ）フェノール、
２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）−６−ヒドロキシフェニル−４−（４−ピペリジニル）ニコチノニトリル、
７−[（２−ベンジルオキシ）−６−ヒドロキシフェニル]−５−（３−ピペリジニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド[２,３−ｄ][１,３]オキサジン−２−オン、
２−アミノ−６−[２−ヒドロキシ−６−（テトラヒドロ−２−フラニルメトキシ）フェニル]−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリル、
２−アミノ−６−[２−（シクロプロピルメトキシ）−６−ヒドロキシフェニル]−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリル、
７−（２−ヒドロキシフェニル）−２−オキソ−５−（３−ピペリジニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル、
７−（２−ヒドロキシフェニル）−５−（３−ピペリジニル）−３，４−ジヒドロピリド[２,３−ｄ]ピリミジン−２（１Ｈ）−オン、
７−（２−ヒドロキシフェニル）−５−（３−ピペリジニル）−３，４−ジヒドロピリド−１，８−ナフチリジン−２（１Ｈ）−オン、
Ｎ−｛[２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）−３−ピリジニル]メチル｝アセタミド、
２−[６−アミノ−５−（ヒドロキシメチル）−４−（３−ピペリジニル）−２−ピリジニル]−３−プロポキシフェノール、
７−[（２−ヒドロキシ）−６−プロポキシフェニル]−５−（３−ピペリジニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド[２,３−ｄ][１,３]オキサジン−２−オン、および
２−アミノ−４−（２−アミノエチル）−６−[２−（ベンジルオキシ）−６−ヒドロキシフェニル]ニコチノニトリル、およびその薬学的に許容される塩。
【００２９】
本発明の式（Ｉ）の化合物は、限定されることなく、種々の公知の方法を組み合わせることによって製造し得る。
いくつかの例においては、原料や中間体として使用される化合物の、アミノ基、カルボン酸基、水酸基のような１つ以上の置換基は当業者に公知の保護基で有利に保護される。その保護基の例は、ＧｒｅｅｎｅとＷｕｔｓ著ＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）の「保護基」の章で記載されている。
【００３０】
下記式（Ｉ−ａ）の化合物またはその塩は、
【化７】
0004272338.tif 000006
（式中、Ｘ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は前掲に同じ。）
例えば、以下の反応Ａで製造できる。
【００３１】
下記式（II）の化合物は
【化８】
0004272338.tif 000007
（式中、Ｒ1およびＲ2は前掲に同じ。）
式Ｒ3−ＣＨＯ（III）のアルデヒド、式Ｒ4−ＣＨ2ＣＮ（IV）のニトリルおよび酢酸アンモニアのようなアンモニウム塩と反応させられる。式（II）の化合物の水酸基は、ベンジル、シリルのような適切な保護基で保護して反応を行い、後で脱保護する。
【化９】
0004272338.tif 000008
【００３２】
この反応は無溶媒、あるいはジオキサン、テトラヒドロフランのようなエーテル類、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素、アセトニトリルのようなニトリル類、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセタミドのようなアミド類、ジメチルスルホキサイドのようなスルホキサイド類等の溶媒中で行うことができる。
反応温度は反応に供される化合物に基づき適当に決められる。通常、約５０−２００℃である。反応時間は通常、３０分から４８時間で、好ましくは１から２４時間である。
【００３３】
式（II）と（III）の化合物は市場から入手しうるか、あるいは公知の方法で製造しうる。
別法として、下記式（I-b）の化合物またはその塩は、
【化１０】
0004272338.tif 000009
（式中、Ｘ、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は前掲に同じ。ＹはＣ1-12アルキルまたはＲ11−（ＣＨ2）n−を意味し、Ｒ11とｎは前掲に同じ。）
【００３４】
次の反応Ｂで得ることができる。
【化１１】
0004272338.tif 000010
【００３５】
反応Ｂでは、式（II−ａ）の化合物はアルデヒド（III）、ニトリル（IV）および酢酸アンモニアと反応Ａと同じ条件下反応させ、式（V）の化合物を得ることができる。式（II−ａ）の化合物のベンジル保護基は他の適当な保護基で置き換えることもできる。該保護基は反応後脱離される。化合物（V）は、ついでＬ−Ｙ（Ｌは塩素、臭素、沃素などのハロゲン、ベンゼンスルホニルオキシ、ポリスルホニルオキシ、ｐ−トルエンスルホニルオキシなどのＣ6-10アリールスルホニルオキシ、メタンスルホニルオキシなどのＣ1-4アルキルスルホニルオキシの如き脱離基を意味する。）と反応される。化合物（V）とＬ−Ｙの反応は、例えばメタノール、エタノールのようなアルコール類、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）のようなエーテル類、アセトニトリルのようなニトリル類、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセタミドのようなアミド類、ジメチルスルホキサイドのようなスルホキサイド類等の溶媒中で行うことができる。必要に応じて、上記の溶媒を２種以上混合し用いてもよい。
【００３６】
化合物（V）とＬ−Ｙとの反応温度は反応に供される化合物に基づき適宜決められるが、通常は約−１０から２００℃、好ましくは約１０から８０℃である。反応時間は通常、３０分から４８時間で、好ましくは１から２４時間である。反応は塩基の存在下有利に進行する。塩基の例は、水素化ナトリウム、水素化カリウムのようなアルカリ金属水素化物、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのような炭酸塩、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムのような炭酸水素塩、トリエチルアミンのような有機アミンである。
【００３７】
別法として、下記式（I-ｃ）の化合物は
【化１２】
0004272338.tif 000011
（式中、Ｘ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ34およびＲ35は前掲に同じ。）
以下の反応Ｃで製造される。
【化１３】
0004272338.tif 000012
【００３８】
まず、式（VI）の化合物は、二硫化炭素とＲ40−Ｌ（Ｒ40はＣ1-6アルキルを、Ｌは上記で定義した脱離基を意味する。）と反応させ、式（VII）の化合物が得られる。式（VI）の化合物のベンジル保護基は他の適当な保護基で置き換えることもできる。本反応は塩基、例えば水素化ナトリウムとジメチルアセタミドの組み合わせの存在下有利に進行する。
生じた化合物（VII）はシアノアセタミドと溶媒と塩基の存在下反応させる。ついで、化合物（VIII）は酸化されて化合物（IX)が得られる。化合物（IX)は溶媒中塩基の存在下クロロアセタミドのようなハロゲノアセタミドと反応される。生じた化合物（X)をＮＨＲ34Ｒ35（Ｒ34とＲ35は前掲に同じ。）と反応させ、最後に、生成物を塩基と反応させ、脱保護して、化合物（Ｉ−ｃ）を製造する。
【００３９】
各反応工程で使用される溶媒は、例えばジオキサン、テトラヒドロフランのようなエーテル類、ベンゼン、トルエン、キシレンのような芳香族炭化水素、アセトニトリルのようなニトリル類、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセタミドのようなアミド類、ジメチルスルホキサイドのようなスルホキサイド類等の溶媒であり、これらは単独でも混合して用いてもよい。
反応で使用される塩基の例は、水素化ナトリウム、水素化カリウムのようなアルカリ金属水素化物、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドのようなアルカリ金属アルコキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのような炭酸塩、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムのような炭酸水素塩、トリエチルアミンのような有機アミンである。
【００４０】
反応温度は反応に供される化合物に基づき適宜決められるが、特に断らない限り、１０から２００℃である。各工程の反応時間は通常、３０分から４８時間で、好ましくは１から２４時間である。
該ピリジン環の２位のアミノ基は、必要に応じ、常法に従い修飾し、アルキルアミノ、アルカノイルアミノのような他の基に変換できる。
Ｒ5が必要により置換されたアルキルである本発明の化合物（I）は常法に従い製造できる。
【００４１】
式（Ｉ−ａ）、（Ｉ−ｂ）および（Ｉ−ｃ）の化合物は、更に反応させて該ピリジン環の２位あるいは３位の置換基を修飾することができる。
式（Ｉ）の化合物またはその塩が幾何異性、および／または配座異性体を有するときは、その分離された異性体および混合物も本発明の範囲に含まれる。
式（Ｉ）の化合物またはその塩がその構造中に不斉炭素を有するときは、その光学異性体およびラセミ体混合物も本発明の範囲に含まれる。
式（Ｉ）の化合物の代表的塩は、本発明の化合物と鉱酸または有機酸、あるいは有機塩基または無機塩基との反応で形成される塩であり、そのような塩は酸付加塩および塩基付加塩としてそれぞれ公知である。
【００４２】
酸付加塩を形成する酸は、特に限定されないが、硫酸、リン酸、塩酸、臭化水素酸、沃化水素酸などの無機酸、特に限定されないが、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、蓚酸、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などの有機酸である。
塩基付加塩は、特に限定されないが、水酸化アンモニア、アルカリ金属水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩などの無機塩基、あるいは特に限定されないが、エタノールアミン、トリエチルアミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどの有機塩基から誘導されるものである。無機塩基の例は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウムなどである。
【００４３】
そのような塩の例は、式（Ｉ）の化合物の、硫酸塩、ピロ硫酸塩、硫酸水素塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩酸塩、臭化水素塩、沃化水素塩、酢酸塩、プロピオネート、デカノエート、カプリレート、アクリレート、ホルメート、イソブチレート、カプロエート、ヘプタノエート、プロピオレート、オキザレート、マロネート、サクシネート、スベレート、セバケート、フマレート、マレエート、ブチン−１,４−ジオエート、ヘキシン−１,６−ジオエート、ベンゾエート、クロロベンゾエート、メトキシベンゾエート、フタレート、スルホネート、キシレンスルホネート、フェニルアセテート、フェニルプロピオネート、フェニルブチレート、シトレート、ラクテート、γ−ヒドロキシブチレート、グリコレート、タータレート、メタンスルホネート、プロパンスルホネート、ナフタレン−１−スルホネート、ナフタレン−２−スルホネート、マンデレートなどである。好ましい酸付加塩は、特に限定されないが、塩酸、臭化水素酸のような鉱酸で形成される塩、および、特に限定されないが、マレイン酸、メタンスルホン酸のような有機酸で形成される塩である。ナトリウム塩およびカリウム塩の形は、特に好ましい塩基付加塩である。
【００４４】
本発明の化合物は、特に限定されないが、通常の錠剤、腸溶錠、カプセル剤、ピル、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンク剤、液剤、懸濁剤、シロップ、固体あるいは液状のエアロゾル剤および乳濁剤のような経口剤形で投与してよい。
本発明の化合物は、特に限定されないが、薬学の分野の当業者に良く知られている、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内などの投与剤形で非経口的に投与してもよい。本発明の化合物は適切な経鼻用佐薬の局所使用を介する経鼻投与形態で、あるいは当業者に公知の経皮分配システムを使用して、経皮的に投与されうる。
本発明の化合物の投与計画は、特に限定されないが、年齢、体重、性別、患者の医学的コンディション、患者の病状、投与経路、患者の代謝・排泄機能のレベル、採用される投与形態、投与される特定の化合物および塩を含む種々の要素の観点から、当業者によって選定される。
【００４５】
本発明の化合物は投薬前に、一種またはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤と共に製剤（処方）されるのが好ましい。該賦形剤は、キャリアー、希釈剤、芳香剤、甘味剤、滑沢剤、溶解剤、懸濁剤、結合剤、錠剤崩壊剤、カプセル用材のような不活性物質である。
本発明の他の態様は、本発明の化合物と、製剤に際して他の成分と相容性があり、被投薬者に有害でない一種またはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的製剤である。本発明の薬学的製剤は治療的有効量の本発明の化合物と一種またはそれ以上の薬学的に許容される賦形剤を混合することによって製造される。本発明の組成物を製造するに際して、活性成分を希釈剤と混合してもよく、あるいはカプセル、サッチェ、ペイパー、または包装剤の形でもよいキャリアーに包み込んでもよい。キャリアーは希釈剤を兼ねてもよく、それはビヒクルとして機能する固体、半固体または液状物でもよく、あるいは錠剤、ピル、散剤、ローゼンジ、エリキシル剤、懸濁剤、乳化剤、液剤、シロップ剤、エアロゾル剤、例えば活性成分の１０重量％までを含む軟膏剤、軟・硬ゼラチンカプセル剤、坐剤、殺菌注射用液剤および殺菌包装散剤の形にできる。
【００４６】
経口投与用に、活性成分は、特に限定されないが、乳糖、デンプン、蔗糖、ブドウ糖、炭酸ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、メチルセルロースなどの非毒性の薬学的に許容されるキャリアーと混合してもよい。更に必要に応じて、トウモロコシ、デンプン、メチルセルロース、カンテン、ベントナイト、キサンタンガム、アルギン酸などの崩壊剤、更に必要に応じて、ゼラチン、アラビアゴム、天然の糖、β−ラクトーズ、トウモロコシ甘味剤、天然ガム、合成ガム、トラガント、アルギン酸ナトリウム、ＣＭＣ、ポリエチレングリコール、ワックスなどの結合剤、更に必要に応じて、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、タルクなどの滑沢剤を共に加えてもよい。
【００４７】
散剤に関しては、キャリアーを細かく砕き、細かく砕いた活性成分と混合してもよい。
活性成分は、適切な量の結合性を有するキャリアーと混合し、所望の形と大きさに圧縮し、錠剤を作製する。
散剤および錠剤は好ましくは、本発明の化合物である活性成分を約１−９９重量％含有する。適切な固形キャリアーはマグネシウムカルボキシメチルセルロース、低融点ワックスおよびココアバターである。
殺菌液剤には懸濁剤、乳化剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。活性成分は、殺菌水、殺菌有機溶媒、またはそれらの混合液のような薬学的に許容されるキャリアーに溶解、懸濁される。
【００４８】
活性成分はポリエチレングリコール水溶液のような適切な有機溶媒にも溶解することができる。他の組成物は細かく砕いた活性成分をデンプンまたはＣＭＣナトリウム水溶液、あるいは適切なオイルに分散させて作製できる。
剤形は、ヒトあるいは他の哺乳類に投与するに適した、単位量を含む物理的に分離した単位投与剤型でよい。単位投与剤型は１カプセル、１錠剤あるいは多数のカプセル、錠剤である。「単位量」は、所望の治療効果を、生み出すよう計算された本発明の活性成分の予め決められた賦形剤を含めた量である。単位量における活性成分の量は関与する特定の処置に応じて、約０．１から１０００ｍｇまたはそれ以上に変更、調節してよい。
【００４９】
示された効果のために使用される、本発明の典型的経口用量は、約０．０１から約１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．１から３０ｍｇ／ｋｇ／日、最も好ましくは０．５から１０ｍｇ／ｋｇ／日である。非経口投与の場合には、約０．００１から約１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．０１から１ｍｇ／ｋｇ／日の量を投与することが有利であると一般的に証明されている。本発明の化合物は１日単回投与でもよく、１日量を数回に分割して投与してもよい。経皮分配形態をとるときには、勿論投与は継続的に行われる。
本発明の化合物の効果は以下の検定法、薬理試験で確認された。
【００５０】
[ＩＫＫ−βキナーゼ阻害活性］
ＩＫＫ−βキナーゼタンパクの調製
ヒトＩＫＫ−βのオープンリーディングフレームをコードするｃＤＮＡフラグメントを、刊行物に記載されている配列（Woronicz JDら  (1997) Science 278, 866-869）から設計された対のプライマーを使用して、ＰＣＲにより作成した。鋳型は、Ｅｌｏｎｇａｓｅ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ (商標名ライフテクノロジー)クイッククローンｃＤＮＡ（クローンテック）から入手した。ＰＣＲで得られたＤＮＡフラグメントをゲル精製し、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔにサブクローニングした。ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中にクローニングされたｃＤＮＡフラグメントを、ｐｃＤＮＡ３．１／ＨｉｓＣ ＫｐｎＩ／ＮｏｔＩ中に挿入し、それをｐＶＬ１３９３ＳｍａＩ／ＸｂａＩ（ファーミンゲン）に移して、バキュロウイルストランスファーベクターを構築した。次に、このベクターを、リニアーのバキュロウイルス（商標名バキュロゴールド、ファーミンゲン）と共に使用して、Ｓｆ２１細胞（インビトロゲン、サンディエゴ、カルフォルニア）をトランスフェクトした。
【００５１】
得られた組換えバキュロウイルスをＳｆ２１細胞中でクローニングし増幅させ、ＴＮＭ−ＦＨ昆虫細胞培地（Life Technologies，Inc）中で浮遊培養した（１Ｌ三角 フラスコ、27℃、１３０rpm）。この培地には、１０％ＦＣＳ、５０ｇ／ｍｌゲンタマイシン、０．１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ−６８（Life Technologies，Inc）を補充してあった。この増幅した高力価のウイルスを、感染多重度５で、標準の手順（Crossen R，Gruenwald S(1997) バキュロウイルス発現ベクターシステムインストラクションマニュアル、ファーミンゲンコーポレーション）に従い、Ｓｆ２１細胞に感染させて、48時間後に回収した。細胞を溶解させ、ポリヒスチジンと融合させたＩＫＫ-βのキメラタンパク（ＨｉｓタグＩＫＫ-ベータ）を調製した。
【００５２】
（２）精製ＧＳＴ−ＩκＢα融合タンパクの調製
グルタチオントランスフェラーゼ（ＧＳＴ）とＩκＢαのアミノ酸残基１から５４との融合タンパク質をコードする塩基配列を、ＩＰＴＧ誘導性プロモーターのコントロール下に含む発現ベクターを構築した。この発現ベクターを大腸菌に導入し、形質転換体を培養し溶解させて、ＧＳＴ−ＩκＢα融合タンパク質を得た。得られたＧＳＴ−ＩκＢα融合タンパク質を、キナーゼアッセイの為に精製しビオチン化した。
【００５３】
ＩＫＫ-β活性の測定
ＩＫＫ-βの９６穴フォーマットキナーゼアッセイを、本発明の化合物の阻害活性をテストするのに用いた。まず、５μｌの試験化合物を、２．５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の存在下、Ｕ字型底９６穴プレート（ファルコン）のそれぞれのウェルに加えた。バックグラウンド（ＢＧ）および全リン酸化（ＴＰ）のコントロールウエルには、５μｌの２．５％ＤＭＳＯを入れた。組換えＩＫＫ-β（最終濃度０．６μｇ／ｍｌ）およびビオチン−ＧＳＴ−ＩκＢα（１−５４）（最終濃度０．２μＭ）を、２ｘキナーゼバッファβ（４０ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）、４０ｍＭ ＭｇＣｌ2、４０ｍＭ β−グリセロフォスフェート、４０ｍＭ ｐ−ニトロフェニルフォスフェート、２ｍＭ ＥＤＴＡ、４０ｍＭ クリアチンフォスフェート、２ｍＭ Ｎａ3ＶＯ4、０．２ｍｇ／ｍｌＢＳＡ、２ｍＭ ＤＴＴ、および０．８ｍＭフェニルメチルスルフォニルフルオライド）２５μｌで希釈し、９６穴プレートに移した。ビオチン−ＧＳＴ−ＩκＢα（１−５４）を、ＩＫＫ−β非存在下で２５μｌの２ｘキナーゼバッファβに入れ、ＢＧウエルに移した。次に、この混合液に、２０μＭの１２．５μＭのＡＴＰ、６２．５μＣｉ／ｍｌ［γ−33Ｐ］ＡＴＰ（アマーシャムファルマシアバイオテク）を加えて、得られた混合液を室温にて２時間インキュベートした。
【００５４】
キナーゼ反応を１５０μｌのターミネーションバッファ（１００ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍｇ／ｍｌＢＳＡ、０．２ｍｇＮａＮ3）を加えることによって止めた。１５０μｌの反応混合液を、ストレプトアビジンでコートしたホワイトＭＴＰ（Steffens Biotechniche Analysen GmbH #08114E14.FWD）に移し、ビオチン化基質を捕捉した。１時間のインキュベートの後、ＭＷ−９６プレートウォッシャー（ＢｉｏＴｅｃ）を使用して、０．１％（ｗ／ｖ）ツイーン２０と０．９％ＮａＣｌとを含む３００μｌの洗浄バッファで５回洗浄することによって、結合していない放射能を除去した。結合した放射能は、１７０μｌＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−ＰＳシンチレーションカクテル（Packard）を加えて、ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンターを使用して測定した。
【００５５】
［選択性を調べる為のＳｙｋチロシンキナーゼ阻害アッセイ］
（１）Ｓｙｋタンパクの調製
ヒトＳｙｋのオープンリーディングフレームをコードするｃＤＮＡフラグメントを、ヒトＢｕｒｋｉｔｔリンパ腫Ｂ細胞系Ｒａｊｉ（アメリカンタイプカルチャーコレクション）の全ＲＮＡから、ＲＴ−ＰＣＲ法を利用してクローニングした。ｃＤＮＡフラグメントを、ｐＡｃＧ２Ｔ（ファーミンゲン、サンディエゴ、カルフォルニア）に挿入して、バキュロウイルストランスファーベクターを構築した。次に、このベクターを、リニアーのバキュロウイルス（商標名バキュロゴールド、ファーミンゲン）と共に使用して、Ｓｆ２１細胞（インビトロゲン、サンディエゴ、カルフォルニア）をトランスフェクトした。
【００５６】
得られた組換えバキュロウイルスをＳｆ２１細胞中でクローニングし増幅させた。この増幅した高力価のウイルスをＳｆ２１細胞に感染させて、ＧＳＴと融合させたＳｙｋキナーゼのキメラタンパクを調製した。
【００５７】
得られたＧＳＴ−Ｓｙｋを、グルタチオンカラム（アマシャムファルマシアバイオテックＡＢ、アップサラ、スウエーデン）を使用して、製造元の指示に従って、精製した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、タンパク質の純度が９０％より大きいことを確認した。
【００５８】
（２）ペプチドの合成
次に、２つのチロシン残基を含む３０残基のペプチドフラグメント、ＫＩＳＤＦＧＬＳＫＡＬＲＡＤＥＮＹＹＫＡＱＴＨＧＫＷＰＶＫＷをペプチド合成機で合成した。次にこのフラグメントのＮ末端をビオチン化し、ビオチン化活性ループペプチド（ＡＬ）を得た。
【００５９】
Ｓｙｋチロシンキナーゼ活性の測定
以下のすべて試薬は、Ｓｙｋキナーゼアッセイバッファ（５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．１ｍＭ Ｎａ3ＶＯ4、０．１％ＢＳＡ、１ｍＭ ＤＴＴ）で希釈した。まず、３．２μｇＧＳＴ−Ｓｙｋおよび０．５μｇのＡＬを含む混合液（３５μｌ）を、９６穴プレート中のそれぞれのウエル中に入れた。次に、２．５％ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）の存在下の試験化合物（５μｌ）をそれぞれのウエルに加えた。この混合液に、３００μＭのＡＴＰ（１０μｌ）を加えて、キナーゼの反応を開始させた。最終的な反応混合液（５０μｌ）は、０．６５ｎＭ ＧＳＴ−Ｓｙｋ、３μＭ ＡＬ、３０μＭ ＡＴＰ、試験化合物、０．２５％ＤＭＳＯおよびＳｙｋキナーゼアッセイバッファからなる。
【００６０】
混合液を室温にて１時間インキュベートし、反応を１２０μｌのターミネーションバッファ（５０ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、５００ ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ＢＳＡ）を加えることによって止めた。反応混合液を、ストレプトアビジンでコートしたプレートに移し、室温で３０分間インキュベートし、ビオチン−ＡＬをプレートに結合させた。プレートを、０．０５％ツイーン２０を含むトリスバッファ生理食塩水（ＴＢＳ）（５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１３８ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ）で３回洗浄した後、１００μｌの抗体溶液を加え、室温で６０分間インキュベートした。抗体溶液は、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１３８ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌ、１％ＢＳＡ、予めアマシャムファルマシアのキットを使用してユーロピウムでラベルしておいた、６０ｎｇ／ｍｌ抗ホスホチロシンモノクローナル抗体４Ｇ１０（アップステートバイオテクノロジー）からなる。洗浄後、１００μｌのエンハンスメント溶液（アマシャムファルマシアバイオテック）を加え、次に時間分解蛍光度をマルチラベルカウンターＡＲＶＯ（Ｗａｌｌａｃ Ｏｙ， フィンランド）で、励起３４０ｎｍおよび放出６１５ｎｍで、４００ｍｓｅｃのディレイ および４００ｍｓｅｃのウインドウで測定した。
【００６１】
［ＴＮＦ-αに応答してＡ５４９細胞から産生されるＲＡＮＴＥＳの測定］
（１）Ａ５４９細胞の調製
Ａ５４９ヒト肺上皮細胞系（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ−８８５）を、１０％ＦＣＳ（ギブコ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、および２ｍＭグルタミン（培養培地）を添加したダルベッコ改良イーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ、ニッケンバイオメディカルインステチュート）中で保持した。４万個（４×１０4）の細胞（８０μｌ／ウエル）を９６穴平底組織培養プレート（ファルコン＃３０７２）のそれぞれのウエルに植えた。プレートを２時間放置し、細胞をそれぞれのウエルの底に接着させた。それぞれのウエルに、１０μｌの溶媒（１％ＤＭＳＯ）、１％ＤＭＳＯ中における試験化合物の逐次希釈、またはレファレンスとして５ｎＭデキサメサゾン（１％ＤＭＳＯ中）を加えた。混合液（９０μｌ／ウェル）を３７℃にて１時間インキュベートした。１時間後、１μｇ／ｍｌＴＮＦ-α（培地中１０μｌ）を混合液に加え、１００μｌの反応混合液を得た。反応混合液を２４時間培養し、１００ｎｇ/ｍｌＴＮＦ-αで細胞を刺激した。刺激なしの溶媒のみの細胞も同様に調製した。
【００６２】
(２）エンザイムイムノアッセイ
次に、各ウェルの上清中に細胞から放出されるＲＡＮＴＥＳの濃度を定量的サンドイッチエンザイムイムノアッセイ法により決定した。まず、２μｇ／ｍｌマウス抗ｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ、＃ｍＡｂ６７８）（ＰＢＳバッファ、ｐＨ７．４，１００μｌ中）を９６穴ＮＵＮＣフルオロプレート（Nalge Nunc，ニューヨークＵＳＡ）（最終２００ｎｇ／ウェル）に入れ、プレートを一晩４℃にて放置し、抗体でプレートを被覆した。プレートのそれぞれのウェルを、３５０μｌの洗浄バッファ（０．０５％ツイーン２０、０．８５％ ＮａＣｌ、および２５mＭ トリス・ＨＣｌ、ｐＨ７．４）で３回洗浄した。被覆した抗体を安定化させる為、１％ＢＳＡ（シグマ、９９％純度、１００ｇ）、５％スクロース（ナカライテスク、９９％純度、５００ｇ）、０．０２％アジド（ナカライテスク、１００％純度、５００ｇ）をそれぞれのウェルに入れ（２００μｌ）、プレートを４時間放置した。次に、上記（1）で調製した細胞培養液の上清５０μｌを、抗体で被覆された９６穴ＮＵＮＣフルオロプレートに入れた。組換えヒトＲＡＮＴＥＳ（ペプロテック、インコーポレーテッド #300-06）をＲＡＮＴＥＳ産生量を決める標準として使用した（１から１０ｎｇ／ｍｌのリニアレンジ）。 ユウロピウムラベルしたマウス抗ｈｕＲＡＮＴＥＳモノクローナル抗体（６０ｎｇ／ｍｌＲ＆Ｄシステムズ＃ｍＡｂ２７８）を、１％ＢＳＡおよび０．０５％ツイーン２０を補充したＰＢＳに入れ、それぞれのウエルに入れた（５０μｌ）。反応混合液を、４時間室温にてインキュベートした。洗浄バッファ（０．０５％ツイーン２０、０．８５％ ＮａＣｌ、および２５mＭ トリス・ＨＣｌ、ｐＨ７．４、３５０μｌ）で、セラウォッシャー（Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈ，＃ＭＷ−９６Ｒ）を使用して５回洗浄した後、エンハンスメント溶液（ＤＥＬＦＩＡ，＃１２４４−４０５，１００μｌ／ウェル）をそれぞれのウェルに入れた。このプレートを穏やかな振盪で室温で１０分間インキュベートした。蛍光強度をＤＥＬＦＩＡフルオリメータ（Ｗａｌｌａｃ）を使用して、測定した。励起３４０ｎｍおよび放出６１５ｎｍで測定した。
【００６３】
［抗体刺激に応答してJurkatＴ細胞から産生されるＩＬ−２の測定］
抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体刺激に応答してJurkatＴ細胞（Ｅ６−１クローン、ＡＴＣＣ＃ＴＩＢ−１５２）から産生されるＩＬ−２産生を測定した。
【００６４】
（１）固定化抗体の調製
最初に、抗ＣＤ３抗体（４００ｎｇ／ウェル ニチレイ、１００μｌダルベッコＰＢＳ中、４μ／ｍｌ）を９６穴プレート（ファルコン＃３０７２）に入れ、プレートを２時間室温にて放置し、抗体でコートした。プレート中のそれぞれのウェルを、２５０μｌのＰＢＳで３回洗浄した。
【００６５】
（２）Ｊｕｒｋａｔ細胞培養の調製
ＪｕｒｋａｔＴ細胞を、１０％熱不活性化胎児ウシ血清、２ｍＭＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリンＧ、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ１６４０培地（培養培地）で培養した。２０万個（２×１０5）の細胞（１９０μｌ／ウェル）を９６穴Ｕ底組織培養プレート（ファルコン＃３０７７）のそれぞれのウェルに植えた。それぞれのウェルに、１０μｌの溶媒（０．２％ＤＭＳＯ）、０．２％ＤＭＳＯ中における試験化合物の逐次希釈、またはレファレンスとして２５ｎＭシクロスポリンＡ（０．２％ＤＭＳＯ中）を加えた。混合液（２００μｌ／ウェル）を３７℃にて１時間、加湿された５％ＣＯ2雰囲気下でインキュベートした。
【００６６】
（３）細胞の刺激
上記（２）で得られた反応混合液（１００μｌ）を、上記（１）で調製した抗体を固定化したウェルに入れた。このウェルに、抗ＣＤ２８抗体（ニチレイ、ＫＯＬＴ−２、細胞培養培地中６μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）および２．５μｇ／ｍｌヤギ抗マウスκ鎖抗体（Bethyl Laboratories，（Cat＃Ａ９０−１１９Ａ）、培養培地中、１０μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）。それぞれのウェル中の反応混合液を３７℃で２４時間インキュベートし、固相化した抗ＣＤ３抗体（４００ｎｇ／ウェル）および抗ＣＤ２８抗体（１．５μｇ／ｍｌ）で細胞を刺激し、次に細胞上のレセプターを抗マウスκ鎖抗体（２．５μｇ／ｍｌ）で架橋した。
【００６７】
ＩＬ−２産生の測定
次に反応混合液の上清を回収した。上清中のＩＬ−２濃度を、商標名ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡディベロップメントキット（GenzymeTechne，ミネアポリス、USA）で、製造元の指示に従って測定した。まず、２μｇ／ｍｌのマウス抗ｈｕＩＬ−２抗体（ＰＢＳバッファ中、１００μｌ）を、９６穴プレート（NUNC，商標名Maxisorp）に入れ、そしてプレートを４℃にて一晩放置し、抗体でコートした。プレートの各ウェルを、３５０μｌの洗浄バッファ（ＰＢＳ，０．０５％ツイーン２０（ナカライテック）を含む）で、セラウォッシャー（Ｂｉｏ−Ｔｅｃｈ，＃ＭＷ−９６Ｒ）を使用して３回洗浄した。それぞれのウェルに、１％ＢＳＡ（シグマ）を含むＰＢＳ、０．０５％ツイーン２０（希釈バッファ）２５０μｌを加えた。室温での２時間のインキュベーションの後、バッファを捨て、５０μｌの培養培地を加えた。次に上記（３）で調製した刺激を受けた細胞培養液の上清５０μｌを、マウス抗huＩＬ−２抗体で被覆した９６穴プレート中に入れた。
【００６８】
組換えヒトＩＬ−２（Genzyme Techne）をＩＬ−２産生量を定量する標準として使用した（２００から５，４００ｐｇ／ｍｌのリニアレンジ）。反応混合液を室温にて１時間インキュベートした。 ５回の洗浄の後、１００μｌのビオチン化ラビット抗ＩＬ−２抗体（Genzyme Techne，１．２５μ／ｍｌ希釈バッファ中）をそれぞれのウェルに入れ、１時間室温でインキュベートした。５回の洗浄の後、１００μｌのストレプトアビジン結合ホースラディッシュペルオキシダーゼ（Genzyme Techne，希釈液中１／１０００）をそれぞれのウェルに入れた。２０分後、プレートのそれぞれのウェルを洗浄バッファ（３５０μｌ／ウェル）で５回洗浄した。基質とＨ2Ｏ2（ＴＭＢＺペルオキシダーゼ検出キット、ＳＵＭＩＬＯＮ＃ＭＬ−１１２０Ｔ）を混合液に加え、そして混合液を室温で放置した。反応は、１０分後に２ＮのＨ2ＳＯ4を加えることにより停止させた。４５０ｎｍの光学濃度を、マイクロプレートリーダー（ラボシステムズ、マルチスキャンマルチソフト）を使用して測定した。各サンプルのＩＬ−２産生の定量は、それぞれのサンプルと標準曲線との光学濃度を比較することで行った。
【００６９】
［マウスＬＰＳ-誘導ＴＮＦ−α産生］
８週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスを、コントロールグループと処置グループとの２つのグループに分けた。０．９％の生理食塩中に２００μｇ／マウスのＬＰＳを含む溶液をコントロールのマウスに腹腔内投与した。処置グループのマウスでは、ＬＰＳ投与の３０分前に、本発明の化合物を腹腔内投与した。ペントバルビタール（８０ｍｇ/ｋｇ，腹腔内）で軽麻酔下、ＬＰＳ投与の９０分後に処置グループのマウスおよびコントロールグループのマウスの下大静脈から採血し、２％ＥＤＴＡ溶液を含む９６穴プレートに回収した。血漿を、４℃１０分１８００rpmの遠心分離で分離し、次に１％ＢＳＡを含むリン酸バッファ生理食塩水（ｐＨ７．４）で４倍に希釈した。サンプル中のＴＮＦ−α濃度は、ＥＬＩＳＡキット（ファーミンゲン、サンディエゴ、 CA）を用いて定量した。
それぞれのグループからの５匹のマウスのＴＮＦ-αの平均した値を求め、ＴＮＦ-αの抑制率を計算した。処置したマウスでは、コントロールマウスと比較して、ＴＮＦ-αレベルの有為な減少が見られた。この結果から、本発明の化合物は、ＬＰＳ誘導サイトカイン活性を抑制し得ることが示される。
【００７０】
インビトロの試験結果および細胞アッセイ（Ａ５４９およびJurkat）の結果を以下の実施例および表に示す。データは、固相合成で得られ約４０％から９０％の純度の化合物に対応している。実際的な理由から、化合物を以下の４つの活性のクラスに分類する。
【００７１】
インビトロＩＣ50＝Ａ≦０．５μＭ＜Ｂ≦２μＭ＜Ｃ≦１０μＭ＜Ｄ
【００７２】
細胞ＩＣ50＝Ａ≦１μＭ＜Ｂ≦１０μＭ＜Ｃ
【００７３】
本発明の化合物はまた、優れた選択性を示し、そして、インビボのアッセイで強い活性を示す。
【実施例】
実施例
本発明は以下に実施例の形で詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を定義するものとして、解釈されるべきでない。
下記の実施例において、全ての量的値は、特に断らない限り、重量％である。Ｍａｓｓの測定はＭＡＴ９５（Ｆｉｎｎｉｇａｎ  ＭＡＴ）で行った。
【００７４】
出発物質の製法：
[出発物質１Ａ］
【化１４】
0004272338.tif 000013
アセトン（１．００Ｌ）中の２−ヒドロキシアセトフェノン（６８．１ｇ、０．５００ｍｏｌ）、ベンジルブロマイド（６５．４ｍｌ、９４．１ｇ、０．５５０ｍｏｌ）および炭酸カリウム（１０３ｇ、０．７５０ｍｏｌ）の混合物を加熱還流した。１晩処理後、揮発性物を減圧下留去し、残渣を得た。得られた残渣を酢酸エチルと水の混合液に溶解した。生じた混液を酢酸エチルで抽出した。抽出液を食塩水で洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後、揮発性物を減圧下留去し、粗生成物を得た。これを減圧下蒸留精製して、無色油状物（１００ｇ、収率８８％）を得た。
【００７５】
[出発物質１Ｂ］
１−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]エタノン（６.７９ｇ、３０ｍｍｏｌ）のエーテル（２００ｍｌ）溶液に臭素（５．００ｇ、３１ｍｍｏｌ）のエーテル（２０ｍｌ）溶液を加えた。反応混液を３０分間撹拌した。混合物をエーテル（１００ｍｌ）で希釈、飽和炭酸水素水溶液（１００ｍｌ）、ついで食塩水（１００ｍｌ）で洗浄した。有機層を合し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をエーテルとヘキサンの溶液で洗浄し、１−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−２−ブロモエタン（８．４２ｇ、収率９２％）を得た。
【化１５】
0004272338.tif 000014
（出発物質１Ｂ）
この物質（２．５９ｇ、８．５ｍｍｏｌ）とピリジン（１．３７ｍｌ、１７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液に、テトラブチルアンモニウム  ハイドロゲンジフルオライド（４．７８ｇ、１７ｍｍｏｌ）を加え、２２時間還流撹拌した。混液をエーテル（２５０ｍｌ）で希釈し、１Ｎ塩酸水溶液（１００ｍｌ）、ついで食塩水（１００ｍｌ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフ（ヘキサン／酢酸エチル４：１）で精製し、、目的物質（６８８ｍｇ、収率３３％）を得た。
【００７６】
[出発物質１Ｃ］
【化１６】
0004272338.tif 000015
２’−ヒドロキシアセトフェノン （５．０００ｇ、３６．７２４ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２００ｍｌ）の溶液に、撹拌下炭酸カリウム（７．６１３ｇ、５５．０８６ｍｍｏｌ）を加えた。混液を５０℃で３０分間撹拌した。この混液に４−ニトロベンジルブロマイド（８．７２７ｇ、４０．３９６ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で１２時間撹拌した。これに炭酸カリウム（０．５０８ｇ、３．６７２ｍｍｏｌ）と４−ニトロベンジルブロマイド（０．７９３ｇ、３．６７２ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で１２時間撹拌した。室温に冷却後、減圧下濃縮し、酢酸エチルで希釈した。有機層を水洗し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。生じた残渣をヘキサンで洗浄し、所望の化合物（８．９００ｇ、収率８９％）を白色固体として得た。
【００７７】
[出発物質１Ｄ］
ベンジルブロマイドをメトキシベンジルクロライドに代える以外は、出発物質１Ａの製法と同様にして、メトキシベンジルアセトフェノンを製造した。
【化１７】
0004272338.tif 000016
【００７８】
[出発物質２］
【化１８】
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（出発物質２）
（２’,６’−ジヒドロキシ）アセトフェノン（２５．０ｇ、１６４ｍｍｏｌ）、ベンジルブロマイド（４０ｍｌ、３３７ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１３６ｇ、９８６ｍｍｏｌ）およびヨウ化ナトリウム（２．５ｇ、１６ｍｍｏｌ）をアセトン（５００ｍｌ）に懸濁し、１晩撹拌し、還流した。混液を減圧下濃縮し、酢酸エチル（５００ｍｌ）と水（２５０ｍｌ）で希釈し、酢酸エチル（２００ｘ２）で抽出した。有機層を合し、食塩水（１００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮した。残渣をろ取し、ヘキサンで洗浄して、目的物（２４．９ｇ、収率４６％）を得た。
【００７９】
[出発物質３］
【化１９】
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リチウムアルミニウムハイドライド（２．４４ｇ、６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍｌ）懸濁液に、メチル１−ベンジル−５−オキソ−３−ピロリジンカルボン酸エステル（５．００ｇ、２１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌した。これに水（２，５ｍｌ）、１５％水酸化ナトリウム水溶液（２．５ｍｌ）および水（７．５ｍｌ）を順次加え、この混液をセライトパッドでろ過した。濾液を減圧下濃縮して、目的物（４．１６ｇ、収率約１００％）を得た。
【化２０】
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【００８０】
Ｐｄ（ＯＨ）2（０．４ｇ）のメタノール（３０ｍｌ）懸濁液に、（１−ベンジル−３−ピロリジニル）メタノール（４．１６ｇ、２１ｍｍｏｌ）を加えた。混液を２４時間水素雰囲気下撹拌した。反応混液を酢酸エチル（２００ｍｌ）で希釈し、ついでセライトパッドでろ過した。濾液を減圧下濃縮して、目的物（２．３３ｇ、収率約１００％）を得た。
【化２１】
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【００８１】
３−ピロリジニルメタノール（２．３３ｇ、２１ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（４．８ｍｌ、３５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（６０ｍｌ）溶液に、ジ（ｔｅｒｔ−ブチル）ジ炭酸エステル（５．３ｇ、２４ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混液を室温で２６時間撹拌した。反応混液を酢酸エチル（２００ｍｌ）で希釈し、ついで１Ｎ塩酸（１００ｍｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）、食塩水（１００ｍｌ）で順次洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル３−（ヒドロキシメチル）−１−ピロリジンカルボン酸エステル（４．０６ｇ、収率９６％）を得た。
ｔｅｒｔ−ブチル３−（ヒドロキシメチル）−１−ピロリジンカルボン酸エステル（４．０ｇ、２０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍｌ）、ジメチルスルホキサイド（２０ｍｌ）およびトリエチルアミン（１６．９ｍｌ、１２１ｍｍｏｌ）に溶解し、アルゴン雰囲気下０℃で、Ｓトリオキサイド−ピリジン錯化合物（９．６３ｇ、６０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混液を室温で１時間撹拌し、エーテル（２００ｍｌ）と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）で抽出した。水層を分離し、更にこれをエーテル（１００ｍｌｘ２）で抽出した。二つのエーテル層を合し、これを１Ｎ塩酸水溶液（１００ｍｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）、食塩水（１００ｍｌ）で順次洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下濃縮して、目的物（５．３２ｇ、収率約１００％）を得た。
【００８２】
[出発物質４］
【化２２】
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３−ピペリジンカルボン酸（１００．０００ｇ、７７４．２３３ｍｍｏｌ）のジオキサン（４００ｍｌ）溶液を０℃に冷却し、撹拌下、これに２Ｎ水酸化ナトリウム（４００ｍｌ、８００ｍｍｏｌ）とジ（ｔｅｒｔ−ブチル）ジ炭酸エステル（１６８．９７８ｇ、７７４．２３３ｍｍｏｌ）を加えた。混液を０℃から室温で１２時間撹拌後、減圧下濃縮した。残渣を水で希釈し、１Ｎ塩酸水溶液で酸性（ｐＨ３−４）にした。生じた白色固体を濾取し、これを酢酸エチル／水に溶かし、有機層を分離した。これを硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。生じた固体をヘキサンに懸濁し、濾取して、所望の化合物（１５６ｇ、収率約８８％）を白色粉末として得た。
【化２３】
0004272338.tif 000022
【００８３】
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ピペリジンカルボン酸（７．０００ｇ、３０．５３１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２００ｍｌ）溶液に撹拌下、トリエチルアミン（４．６８１ｍｌ、３３．５８４ｍｍｏｌ）を加えた。０℃に冷却後、これにベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェイト（１５．８８５ｇ、３０．５３１ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシアミン（３．２７６ｇ、３３．５８４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．２５５ｍｌ、３０．５３１ｍｍｏｌ）を順次加えた。混液を室温で１２時間撹拌した。反応混液をジクロロメタンで希釈し、１Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および食塩水で順次洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。生じた残渣をシリカゲルカラム（クロロホルム／酢酸エチル＝１０／１−９／１）で精製して白色固体として、所望の化合物（８．０５０ｇ、収率９６％）を得た。
【化２４】
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【００８４】
リチウムアルミニウムハイドライド（４．３５５ｇ、１１４．７４３ｍｍｏｌ）をジエチルエーテル（５００ｍｌ）に懸濁し、これを冷却（−１５℃）、撹拌下ｔｅｒｔ−ブチル３−｛[メトキシ（メチル）アミノ]カルボニル｝−１−ピペリジン−カルボキシレート（２５．０００ｇ、９１．７９５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５０ｍｌ）溶液を３０分間、滴下した。反応を１Ｎ硫酸水素カリウム水溶液（３００ｍｌ）で終了させた。生成物をジエチルエーテルと酢酸エチルで抽出し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣（所望の物質）（２２．５６ｇ、収率約１００％）を更に精製することなく次の工程に使用した。
【００８５】
[出発物質５］
【化２５】
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ニペコチン酸（３．０ｇ、２３．３ｍｍｏｌ）のジオキサン（１２ｍｌ）溶液を冷却し、撹拌下、これに２Ｎ水酸化ナトリウム（２４．０ｍｌ、４８．０ｍｍｏｌ）を加えた。ついで、クロロ炭酸ベンジルエステル（３．９６ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１２ｍｌ）溶液を０℃で滴下した。反応混合物を０℃から室温で３時間撹拌した。混液を減圧下濃縮し、残渣を水で希釈し、１Ｎ塩酸で酸性（ｐＨ３−４）にした。混液を酢酸エチルで抽出し、有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、蒸発させた。白色固体をヘキサンで洗浄し、１−[（ベンジルオキシ）カルボニル]−３−ピペリジンカルボン酸（４．４ｇ、収率７１％）を白色固体として得た。
【化２６】
0004272338.tif 000025
【００８６】
１−[（ベンジルオキシ）カルボニル]−３−ピペリジンカルボン酸（４．０ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（５０ｍｌ）溶液を冷却（−１５℃から−２０℃）し、撹拌下、これにメチルモルホリン（２ｍｌ）を加えた。この混液にクロロ蟻酸イソブチルエステル（２．２８ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液を−１５℃から−２０℃で滴下し、２０分間撹拌した。混液にメチルモルホリン（２ｍｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液を加えた後、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドリキシルアミン塩酸塩（１．６３ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）を−１５℃から−２０℃で滴下した。反応混液を室温まで加温し、１６時間撹拌した。反応混液を減圧下濃縮し、酢酸エチルと水で分配し、有機層を分取し、１Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム、および食塩水で、順次洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、３−｛[メトキシ（メチル）アミノ]カルボニル｝−１−ピペリジンカルボン酸ベンジルエステル（４．７ｇ、収率約１００％）を無色油状物として得た
【化２７】
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【００８７】
リチウムアルミニウムハイドライド（０．７０ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）に懸濁させ、これを冷却（−７８℃）、これにベンジル３−｛[メトキシ（メチル）アミノ]カルボニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（４．５ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液をアルゴン雰囲気下、滴下した。反応混液を−７８℃で４５分間撹拌した。反応を０．５Ｎ硫酸水素カリウム水溶液（１３０ｍｌ）で終了させた。生成物をエーテルで抽出、抽出液をを硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮し、目的の物質（０．５４ｇ、収率８２％）を無色油状物として得た。
【００８８】
[出発物質６］
【化２８】
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３−アミノシクロヘキサンカルボン酸（１０．０ｇ、６９．８ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１００ｍｌ）溶液と２Ｎ水酸化ナトリウム（１００ｍｌ）の混合液に、０℃でＢｏｃ2Ｏ（１５．２ｇ、６９．８ｍｍｏｌ）を加えた。これを室温で１．５時間撹拌し、ついで２Ｎ塩酸で中和した。生じた混液を減圧で濃縮し、１，４−ジオキサンを除去した。残渣の水溶液を２Ｎ塩酸で酸性にし、酢酸エチルで抽出した。抽出液を食塩水で、洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣の固体をｎ−ヘキサンで粉砕し、３−[（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ]シクロヘキサンカルボン酸（８．００ｇ、収率４７％）を白色個体として得た。
【化２９】
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【００８９】
３−[（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ]シクロヘキサンカルボン酸（５．００ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（３．１ｍｌ、２２．２ｍｍｏｌ）を加え、混液を０℃に冷却した。ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェイト（１０．７ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシアミン塩酸塩（２．２１ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．２ｍｌ、２３．０ｍｍｏｌ）を順次加えた。生じた混液を１８時間室温で撹拌した。反応混液をジクロロメタンで希釈し、１Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、および食塩水で順次洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、蒸発させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１：１）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛[メトキシ（メチル）アミノ]カルボニル｝シクロヘキシルカルバメート（５．３９ｇ、収率９２％）を無色油状物として得た。
【化３０】
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【００９０】
水素化ナトリウム（６０％、３４０ｍｇ、８．３８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）の懸濁液にｔｅｒｔ−ブチル３−｛[メトキシ（メチル）アミノ]カルボニル｝シクロヘキシルカルバメート（２．００ｇ、６．９８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液を滴下した。ヨウ化メチル（１．０９ｇ、７．６８ｍｍｏｌ）を添加後、混液を０．５時間６０℃で撹拌した。混液を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、この抽出液を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１：１）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−[３−（Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルカルバモイル）シクロヘキシル]−Ｎ−メチルカルバメート（１．９４ｇ、収率９３％）を無色油状物として得た。
【化３１】
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（出発物質６）
【００９１】
ＬｉＡｌＨ4（３８０ｍｇ、９．９ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（４０ｍｌ）の懸濁液に、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−[３−（Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチルカルバモイル）シクロヘキシル]−Ｎ−メチルカルバメート（２．３８ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（４０ｍｌ）溶液を０℃で１０分間かけて加えた。反応混液を０℃で０．５時間撹拌し、１Ｎ硫酸水素カリウム（１００ｍｌ）で反応を停止させた。有機層を分離し、硫酸マグネシウムで乾燥し、蒸発させ、ｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミルシクロヘキシル（メチル）カルバメート（１．６６ｇ、収率８７％）を無色油状物として得、これを精製することなく次工程で使用した。
【００９２】
[出発物質７］
【化３２】
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エチルニペコテート（７．８６ｇ、５０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１２０ｍｌ）溶液を氷水で冷却し、これにジ−ｔｅｒｔ−ブチル  ジ炭酸エステル（１１．４６ｇ、５２．５ｍｍｏｌ）を加えた。生じた混液を室温で４時間撹拌した。反応混液を５％炭酸水素ナトリウム水溶液に加え、これを硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、蒸発させ、化合物（１２．８ｇ、収率約１００％）を得た。
【化３３】
0004272338.tif 000032
【００９３】
リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）（２３．３ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦの溶液を撹拌し、これにピペリジン−１，３−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル３−エチルエステル（３ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）を−７８℃で加え、ついで−５０℃で２時間撹拌した。この混液にヨウ化メチル（１．９８ｇ、１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を−５０℃で加えた。反応液を撹拌し、室温に加温し、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて反応を停止させた。大部分のＴＨＦを留去し、残渣をエーテルで抽出、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（溶出溶媒：ヘキサン／酢酸エチル＝９：１）で精製して、淡黄色油状物（２．２７ｇ、収率７２％）を得た。
【化３４】
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【００９４】
ｔｅｒｔ−ブチル３−エトキシカルボニル−３−メチル−ピペリジン−１−カルボキシレート（２．３ｇ、８．４８ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液に１．２５当量のＬｉＢＨ4[２Ｍ（ＴＨＦ中）、１０．６ｍｍｏｌ）を−２０℃で滴下し、１晩撹拌し、室温に加温した。反応混液を氷水で冷却し、１Ｎ塩酸水溶液で酸性（ｐＨ：５−６）にした。大部分のＴＨＦを減圧で留去し、酢酸エチルで抽出、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、蒸発させた。粗生成物をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝４：１−３：１）で精製して、無色油状のアルコール（１．５ｇ、収率７８％）を得た。
【化３５】
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【００９５】
ｔｅｒｔ−ブチル３−ヒドロキシメチル−３−メチル−ピペリジン−１−カルボキシレート（１．５ｇ、６．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタンの氷水冷却溶液に、ＤＭＳＯ（７．１ｇ、９１．６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（５．５ｍｌ、３９．８ｍｍｏｌ）、およびＳトリオキサイド−ピリジン錯化合物（３．１ｇ、１９．９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を１時間室温で撹拌した。反応混液をエーテルで希釈し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝５：１−４：１）で精製して、所望の化合物（１．３ｇ、収率８６％）を無色油状物として得た。
【００９６】
[出発物質８］
【化３６】
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１，３−シクロヘキサンジカルボン酸（１０ｇ、５８ｍｍｏｌ）のメタノール（５０ｍｌ）溶液に濃硫酸（２ｍｌ）を加えた。混液を４時間室温で撹拌した。これを減圧で濃縮し、ついで酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で分別した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、ジメチル１，３−シクロヘキサンジカルボキシレート（１１．６ｇ、収率約１００％）を無色油状物として得た。ジメチル１，３−シクロヘキサンジカルボキシレート（１１．６ｇ、５７．９ｍｍｏｌ）のメタノール（５８ｍｌ）溶液に１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（５８ｍｌ）を０℃で１時間かけて滴下した。生じた混液を０℃で０．５時間、室温で２時間撹拌した。混液を減圧で濃縮し、残渣溶液を酢酸エチルと水で分配した。水層を分離し、濃塩酸（１５ｍｌ）で酸性にし、食塩で飽和化し、そして酢酸エチルで抽出した。抽出液を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）、蒸発させた。残渣のオイルをカラムクロマトグラフィで精製して、３−（メトキシカルボニル）シクロヘキサンカルボン酸（６．１６ｇ、収率５７％）を無色油状物として得た。
【化３７】
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【００９７】
３−（メトキシカルボニル）シクロヘキサンカルボン酸（１．２５ｇ、６．７１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液を−７８℃に冷却し、これにＢＨ3・Ｍｅ2Ｓ（０．７ｍｌ、７．３８ｍｍｏｌ）を加えた。生じた混液を−７８℃から室温で１晩撹拌した。反応を飽和塩化アンモニア水溶液で停止させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。カラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝２：１）で精製して、メチル３−（ヒドロキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（８４５ｍｇ、収率７３％）を無色油状物として得た。このメチル３−（ヒドロキシメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（８４０ｍｇ、４．８８ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン（４．４ｍｌ、３２ｍｍｏｌ）とＤＭＳＯ（１０ｍｌ）の溶液にＳトリオキサイド−ピリジン錯化合物（２．５６ｇ、１６．１ｍｍｏｌ）を加えた。混液を室温で１時間撹拌し、反応混液を酢酸エチルと水で分配した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。カラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝２：１）で精製して、メチル３−ホルミルシクロヘキサンカルボキシレート（７９５ｍｇ、収率９６％）を淡黄色油状物として得た。
【００９８】
[出発物質９］
【化３８】
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メトキシメチルホスホニウムクロライド（５．１４ｇ、１５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１８ｍｌ）の懸濁液に、カリウムｔｅｒｔ−ブトキサイド（１．９８ｇ、１５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、混液を０℃で０．５時間撹拌した。これにｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミル−１−ピペリジンカルボキシレート（２．１３ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍｌ）溶液を−２０℃で滴下し、生じた混液を０℃から室温で１晩撹拌した。混液をトルエンと水で分配した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。カラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５：１）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル３−（２−メトキシエテニル）−１−ピペリジンカルボキシレート（１．１６ｇ、収率４８％）を無色油状物として得た。
【化３９】
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【００９９】
ｔｅｒｔ−ブチル３−（２−メトキシエテニル）−１−ピペリジンカルボキシレート（１．１６ｇ、４．８１ｍｍｏｌ）を９０％蟻酸（２ｍｌ）に溶解した。混液を室温で４０分間撹拌した。ついで混液を酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で分配した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。カラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４：１）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル３−（２−オキソエチル）−１−ピペリジンカルボキシレート（６５２ｍｇ、収率６０％）を無色油状物として得た。
【０１００】
[出発物質１０］
【化４０】
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"Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ" ３１６（１９８３） および"Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．" ４８ １３７５（１９８３） に従って合成した３−ヒドロキシピコリノニトリル（３．００ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（５．４０ｇ、３９．１ｍｍｏｌ）およびベンジルブロマイド（５．１０ｇ、２９．８ｍｍｏｌ）をアセトン（１５０ｍｌ）に懸濁し、これを室温で２０時間撹拌した。反応混液をろ過し、ろ液を蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／３から１／２）で精製し、そして酢酸エチル／ｎ−ヘキサン＝１／４から再結晶して、無色粉末（４．３５４ｇ、収率８３％）を得た。
【化４１】
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【０１０１】
３−ベンジルオキシピコリノニトリル（２．５０ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液を氷浴で冷やし、これにＴＨＦ（１５０ｍｌ、１３８ｍｍｏｌ）中の０．９２Ｍ  メチルマグネシウムブロマイドを加え、０℃で３０分間、ついで室温で４時間撹拌した。反応混合物を水（２０００ｍｌ）に注ぎ、１０％硫酸（５００ｍｌ）で酸性にした。３０分間撹拌後、反応混液に重曹（１００ｇ）をゆっくり加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３：１）で精製して、無色油状物（２．４９ｇ、収率９２％）を得た。
【０１０２】
実施例１−１
２’−ベンジルオキシアセトフェノン（出発物質１Ａ） （１０．０００ｇ、４４．１９３ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミル−１−ピペリジンカルボキシレート（出発物質４） （１０．３６８ｇ、４４．６１３ｍｍｏｌ）、マロノニトリル（３．２１２ｇ、４８．６１３ｍｍｏｌ）および酢酸アンモニウム（１７．０３３ｇ、２２０．９６７ｍｍｏｌ）をトルエン（５０ｍｌ）に加え、これを１５０℃で２時間撹拌した。室温まで冷却し、反応混液を酢酸エチルで希釈した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。濃縮液をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル／ヘキサン＝１／２）で精製し、そして残渣（黄色油状物）をエタノールから再結晶して、所望の化合物（５．８３ｇ、収率２７％）を白色固体として得た。
【化４２】
0004272338.tif 000041
【０１０３】
酢酸エチル（３０ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（２．１６０ｇ、４．４５７ｍｍｏｌ）と１０％Ｐｄ−Ｃ（０．７２０ｇ）の混合物を水素雰囲気下（３気圧）で２日間室温で撹拌した。混合物をセライトパッドでろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。残渣をジエチルエーテルから再結晶し、所望の化合物（０．１８０ｇ、収率１０％）を白色固体として得た。
【化４３】
0004272338.tif 000042
【０１０４】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１７０ｇ、０．４３１ｍｍｏｌ）のジオキサン（３０ｍｌ）溶液（澄明）を撹拌下、４Ｎ塩酸（３ｍｌのジオキサン中）を加えた。混液を１２時間室温で撹拌した。生じた結晶をろ取し、これをジオキサンで洗浄し、２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリル（０．０７５ｇ、収率５３％）を得た。
分子量：３３０．８２
Ｍａｓｓスペクトル：２９５
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ／（Ｊｕｒｋａｔ）−Ａ
【０１０５】
実施例１−２
【化４４】
0004272338.tif 000043
出発物質１および３を使用して、実施例１−１と同様に処理して、２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ピロリジニル）ニコチノニトリルを得た。
分子量：３９４．３６
Ｍａｓｓスペクトル：２８１
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５９４）−Ａ／（Ｊｕｒｋａｔ）−Ｂ
【０１０６】
実施例１−３
【化４５】
0004272338.tif 000044
出発物質１および７を使用して、実施例１−１と同様に処理して、２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−メチルピペリジン−３−イル）ニコチノニトリル塩酸塩を得た。
分子量：３４４．８５
ビトロにおける活性度：Ｂ
細胞活性度：（Ａ５９４）−Ｂ
【０１０７】
実施例１−４
【化４６】
0004272338.tif 000045
出発物質１Ｂおよび４を使用して、実施例１−１と同様に処理して、２−アミノ−５−フルオロ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリルを得た。
分子量：４２６．３７
Ｍａｓｓスペクトル：３１３
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５９４）−Ｂ／（Ｊｕｒｋａｔ）−Ｂ
【０１０８】
実施例１−５
【化４７】
0004272338.tif 000046
出発物質１Ａおよび６を使用して、実施例１−１と同様に処理して、２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−[３−メチルアミノシクロヘキシル]ニコチノニトリル塩酸塩を得た。
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５９４）−Ｂ
【０１０９】
実施例１−６
【化４８】
0004272338.tif 000047
出発物質１Ａおよび８を使用して、実施例１−１と同様に処理して、メチル３−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]シクロヘキサンカルボキシレートを得た。
分子量：３５１．４１
Ｍａｓｓスペクトル：３５２
ビトロにおける活性度：Ｄ
【０１１０】
実施例１−７
【化４９】
0004272338.tif 000048
メチル３−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]シクロヘキサンカルボキシレート（１５１ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）の２Ｎ水酸化ナトリウム（１ｍｌ）とＴＨＦ（２ｍｌ）の懸濁液を６０℃で４時間撹拌した。反応混液を１Ｎ塩酸（２ｍｌ）で中和し、ついで水で希釈した。生じた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄し、乾燥（６０℃、２時間、減圧下）し、３−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]シクロヘキサンカルボン酸（１０５ｍｇ、収率７２％）を黄色固体として得た。
分子量：３３７．３８
Ｍａｓｓスペクトル：３３８
ビトロにおける活性度：Ｂ
細胞活性度：（Ａ５９４）−Ｃ
【０１１１】
実施例１−８から１−３８
上記の実施例１−１ないし１−７に記載の方法に準じて、表１に示した化合物（実施例１−８から１−３８まで）を合成した。
【０１１２】
【表１−１】
0004272338.tif 000049
【０１１３】
【表１−２】
0004272338.tif 000050
【０１１４】
【表１−３】
0004272338.tif 000051
【０１１５】
【表１−４】
0004272338.tif 000052
【０１１６】
【表１−５】
0004272338.tif 000053
【０１１７】
【表１−６】
0004272338.tif 000054
【０１１８】
【表１−７】
0004272338.tif 000055
【０１１９】
実施例２−１
出発物質１Ｃおよび４を使用して、実施例１−１と同様に処理して、ｔｅｒｔブチル３−（２−アミノ−３−シアノ−６−｛２−[（４−ニトロベンジル）オキシ]フェニル｝−４−ピリジニル）−１−ピペリジンカルボキシレートを合成した。
ｔｅｒｔブチル３−（２−アミノ−３−シアノ−６−｛２−[（４−ニトロベンジル）オキシ]フェニル｝−４−ピリジニル）−１−ピペリジンカルボキシレート（０．３００ｇ、０．５６６ｍｍｏｌ）のジオキサン（５ｍｌ）溶液（澄明）を撹拌下、これに４Ｎ塩酸（５ｍｌのジオキサン中）を加えた。混液を１２時間室温で撹拌した。生じた沈殿をろ取し、ジオキサンで洗浄し、所望の物質（０．１３０ｇ、収率４９％）を得た。
【化５０】
0004272338.tif 000056
【０１２０】
２−アミノ−６−｛２−[（４−ニトロベンジル）オキシ]フェニル｝−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリル塩酸塩（０．４００ｇ、０．８５８ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍｌ）に懸濁し、冷却（０℃）し、撹拌下アルゴン雰囲気中プロピオンアルデヒド（０．０８１ｍｌ、１．１１６ｍｍｏｌ）とナトリウムシアノボロハイドライド（０．０７０ｇ、１．１１６ｍｍｏｌ）を加えた。混液を室温下、１時間撹拌し、プロピオンアルデヒド（０．０８１ｍｌ、１．１１６ｍｍｏｌ）を混液に加え、室温で３時間撹拌した。反応を水を加えて停止させた。酢酸エチルで抽出、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、ろ液を濃縮した。残渣ををジイソプロピルエーテル／酢酸エチルから再結晶して、所望の化合物（０．１３８ｇ、収率３４％）を黄色無晶形として得た。
【化５１】
0004272338.tif 000057
【０１２１】
酢酸エチル（５０ｍｌ）中の２−アミノ−６−｛２−[（４−ニトロベンジル）オキシ]フェニル｝−４−（１−プロピル−３−ピペリジニル）ニコチノニトリル（０．１３０ｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）と１０％Ｐｄ−Ｃ（０．０５０ｇ）の混合物を水素雰囲気下１２時間室温で撹拌した。反応混合物をセライトパッドでろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（シリカゲル、クロロホルム／メタノール＝１０／１）で精製して、所望の化合物（０．０１０ｇ、収率１１％）を白色固体として得た。
【化５２】
0004272338.tif 000058
【０１２２】
２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（１−プロピル−３−ピペリジニル）ニコチノニトリル（０．０１０ｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）のジオキサン（１ｍｌ）溶液を撹拌下、これに４Ｎ塩酸（２ｍｌのジオキサン中）を加えた。生じた沈殿をろ取し、所望の物質（０．００２ｇ、収率１８％）を黄色固体として得た。
分子量：３７２．９０
Ｍａｓｓスペクトル：３３７
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５９４）−Ｂ
【０１２３】
実施例２−２から２−６
実施例２−２の製法に準じて、表２に示した化合物を合成した。
【０１２４】
【表２】
0004272338.tif 000059
【０１２５】
実施例３−１
【化５３】
0004272338.tif 000060
臭化銅(II）（１．１０６ｇ、４．９５３ｍｍｏｌ）とｔｅｒｔ−ブチル亜硝酸エステル（０．７３６ｍｌ、６．１９１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３０ｍｌ）中で混合し、これを１５分間６５℃で撹拌した。この混合物に、実施例１−１の方法の途中で得た、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（２．０００ｇ、４．１２７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍｌ）溶液を加えた。混液を６５℃で２時間撹拌し、反応混液を酢酸エチルで希釈し、有機層を１Ｎ塩酸水溶液、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をジエチルエーテルから再結晶して、所望の化合物（１．０１０ｇ、収率４５％）を白色固体として得た。
【化５４】
0004272338.tif 000061
【０１２６】
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−２−ブロモ−３−シアノ−４−ピリジニル）−１−ピペリジンカルボキシレート（０．３００ｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液を撹拌下、これにトリエチルアミン（０．２２９ｍｌ、１．３４１ｍｍｏｌ）とベンジルアミン（０．１４７ｇ、１．３６７ｍｍｏｌ）を加えた。混液を７０℃で１２時間撹拌した。水を加えて反応を停止させ、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。濃縮物ををシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１−２／１）で精製して、所望の化合物（０．２９０ｇ、収率９２％）を黄色無晶形で得た。
【化５５】
0004272338.tif 000062
【０１２７】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をエタノールに懸濁し、ろ過して、所望の化合物（０．１５０ｇ、収率６１％）を白色固体として得た。
【化５６】
0004272338.tif 000063
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−（ベンジルアミノ）−３−シアノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル）−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１４５ｇ、０．２９９ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理した。生じた固体をろ取し、２−（ベンジルアミノ）−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリル塩酸塩（０．０７５ｇ、収率６０％）を得た。
分子量：４２０．９５
Ｍａｓｓスペクトル：３８５
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ／（Ｊｕｒｋａｔ）−Ｂ
【０１２８】
実施例３−２
【化５７】
0004272338.tif 000064
実施例３−１の方法の途中で得た、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−２−ブロモ−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１００ｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２ｍｌ）溶液を撹拌下、これにプロピルアミン（０．１０８ｇ、１．８２３ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．０３８ｍｌ、０．２７３ｍｍｏｌ）を加えた。混液を４０℃で１２時間撹拌した。水を加えて反応を停止させ、生じた反応混液を酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。濃縮物をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）で精製して、所望の化合物を（０．１０４ｇ、収率約１００％）を無色油状物として得た。
【化５８】
0004272338.tif 000065
【０１２９】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をジエチルエーテルで洗浄して、所望の化合物（０．１１２ｇ、収率約１００％）を白色固体として得た。
【化５９】
0004272338.tif 000066
ｔｅｒｔ−ブチル３−[３−シアノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−２−（プロピルアミノ）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１１０ｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理した。生じた固体をろ取し、所望の化合物（０．０６２ｇ、収率６６％）を得た。
分子量：３７２．９０
Ｍａｓｓスペクトル：３３７
ビトロにおける活性度：Ｃ
細胞活性度：Ｃ
【０１３０】
実施例３−３
【化６０】
0004272338.tif 000067
実施例１−１の方法の途中で得ることができる、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．５００ｇ、１．０３２ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍｌ）の溶液を０℃に冷却し、撹拌下これにアセチルクロライド（０．２５７ｇ、３．６１１ｍｍｏｌ）を加えた。混液を０℃から室温で３時間撹拌した。アセチルクロライド（０．２２０ｍｌ、３．０９５ｍｍｏｌ）を混液に加え、これを室温で５時間撹拌した。水を加えて反応を停止させ、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝９／１−４／−１／２／１）で精製し、所望の化合物とジ−アシル化化合物の混合物を得た。混合物をＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、１Ｎアンモニア水溶液（１ｍｌ）で処理し、そして室温で１時間撹拌した。反応混液を酢酸エチルで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して、所望の化合物（０．４３２ｇ、収率８０％）を白色無晶形で得た。
【化６１】
0004272338.tif 000068
【０１３１】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をエタノールから再結晶して、所望の化合物（０．１１０ｇ、収率３１％）を黄色固体として得た。
【化６２】
0004272338.tif 000069
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−（アセチルアミノ）−３−シアノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１００ｇ、０．２２９ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理した。生じた固体をろ取し、ジオキサンで洗浄し、Ｎ−[３−シアノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）−２−ピリジニル]アセタミド塩酸塩（０．１０１ｇ、収率約１００％）を得た。
分子量：３７２．８６
Ｍａｓｓスペクトル：３３７
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１３２】
実施例３−４から３−６
実施例３−１ないし実施例３−３の製法に準じて、表３に示した化
合物を合成した。
【０１３３】
【表３】
0004272338.tif 000070
【０１３４】
実施例４−１
出発物質１Ａ（３．５００ｇ、１５．４７ｍｍｏｌ）、出発物質４（３．２９９ｇ、１５．４７ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルシアノアセテート（２．１８４ｇ、１５．４７ｍｍｏｌ）、酢酸アンモニア（３．５７７ｇ、４６．４０ｍｍｏｌ）および１，２−ジメトキシエタン（１７ｍｌ）の混合物を３．５時間加熱還流した。室温まで冷却後混液を減圧下濃縮し、残渣を酢酸エチルと水で分配した。分離した有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣ををシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）で精製して、所望の化合物を（１．８９２ｇ、収率２２％）を得た。
【化６３】
0004272338.tif 000071
【０１３５】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。生じた固体をエタノールに懸濁し、ろ取し、エタノールで洗浄し、減圧で乾燥して、所望の化合物（０．３２２ｇ、収率３８％）を得た。
【化６４】
0004272338.tif 000072
【０１３６】
ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−４−[１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ピペリジニル]−６−（２−ヒドロキシフェニル）ニコチネート（０．０５０ｇ、０．１０６ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、目的の塩酸塩（０．０３４ｇ、収率７９％）を得た。
分子量：４０５．９２
Ｍａｓｓスペクトル：３７０
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１３７】
実施例４−２
【化６５】
0004272338.tif 000073
実施例４−１で得たｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）ニコチネート塩酸塩（０．０２３ｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）のメチレンクロライド（１．０ｍｌ）溶液にトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（１．ｍｌ）を加えた。６時間撹拌後混液を減圧で濃縮した。残渣を１，４−ジオキサン（３．０ｍｌ）に溶かし、塩酸の１,４−ジオキサン溶液（４Ｎ、０．２ｍｌ）で処理した。生じた沈殿をアルゴン雰囲気下ろ取し、１，４−ジオキサンとアセトニトリルで洗浄し、減圧で乾燥し、所望の化合物（０．０２０ｇ、収率１００％）を得た。
分子量：３４９．８２
Ｍａｓｓスペクトル：３１４
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１３８】
実施例４−３
【化６６】
0004272338.tif 000074
実施例４−１で得たｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−４−[１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ピペリジニル]−６−（２−ヒドロキシフェニル）ニコチネート（０．２００ｇ、０．４２６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３．０ｍｌ）の冷却（０℃）溶液にアルゴン雰囲気下ＬｉＢＨ4（０．０１９ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１晩撹拌後、水で反応を停止させ、酢酸エチルと０．５Ｎ塩酸で抽出した。分離した有機層を水と食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）で精製して、所望の化合物（０．１６１ｇ、収率９５％）を得た。
【化６７】
0004272338.tif 000075
【０１３９】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−（ヒドロキシメチル）−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１６０ｇ、０．４０１ｍｍｏｌ）の１,４−ジオキサン溶液（３．０ｍｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、所望の化合物（０．１３２ｇ、収率９８％）を得た。
分子量：３３５．８４
Ｍａｓｓスペクトル：２６４
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ／Ｊｕｒｋａｔ−Ｂ
【０１４０】
実施例４−４
【化６８】
0004272338.tif 000076
実施例４−１の方法の途中で得られうるｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル−４−[１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ピペリジニル]ニコチネート（２．５９０ｇ、４．６２７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍｌ）の冷却（０℃）溶液にＬｉＢＨ4（０．２０２ｇ、９．２５５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で撹拌後、水で反応を停止させ、酢酸エチルと水で抽出した。分離した有機層を水と食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝２／３）で精製して、所望の化合物（０．９０４ｇ、収率４０％）を得た。
【化６９】
0004272338.tif 000077
【０１４１】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル）−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．９００ｇ、１．８３８ｍｍｏｌ）のメチレンクロライド（２０ｍｌ）溶液に酸化マンガン（IV）（３．２０ｇ、３６．８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で４０分間撹拌後、混液をろ過した。ろ液を減圧で濃縮し、生じた固体を酢酸エチルとヘキサンから再結晶し、所望の化合物（０．６５１ｇ、収率７３％）を得た。
【化７０】
0004272338.tif 000078
【０１４２】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）で精製して、所望の化合物（０．５３６ｇ、収率約１００％）を得た。
【化７１】
0004272338.tif 000079
【０１４３】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−ホルミル−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１００ｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（２．０ｍｌ）溶液にアルゴン雰囲気下塩酸の１，４−ジオキサン溶液（４Ｎ、２．０ｍｌ）を加え、１時間室温で撹拌した。混液をエチルエーテルで希釈し、上澄液を傾斜した。沈殿をエチルエーテルで２度洗浄し、減圧で乾燥して、淡黄色固体を得た。これをメタノール（２．０ｍｌ）に溶解し、氷浴で冷却した。ついで、これにナトリウムシアノボロハイドライド（０．０４７ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下加えた。混液を室温まで加温し、１晩撹拌を続けた。生じた混液を減圧下濃縮し、残渣をメチレンクロライド（２．０ｍｌ）とＴＨＦ（２．０ｍｌ）の混液に溶かした。これにトリエチルアミン（０．１４０ｍｌ、１．００６ｍｍｏｌ）、ついでジ−ｔｅｒｔ−ブチルジ炭酸エステル（０．１１０ｇ、０．５０３ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。生じた混液を酢酸エチルと水で分配した。分離した有機層を食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）で精製して、所望の化合物（０．０３３ｇ、収率４７％）を得た。
【化７２】
0004272338.tif 000080
【０１４４】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−３−（メトキシメチル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０２５ｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、所望の化合物を得た。
分子量：３４９．８６
Ｍａｓｓスペクトル：３１４
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ
【０１４５】
実施例４−５
実施例４−４方法の途中で得たｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレートを出発原料として使用した。
【化７３】
0004272338.tif 000081
【０１４６】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１０４ｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．０８９ｍｌ、０．６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．０ｍｌ）の冷却（０℃）溶液にトリホスゲン（０．０４４ｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌後、混液を室温まで加温し、更に１時間撹拌した。水で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出した。分離した有機層を食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝５／３）で精製して、所望の化合物（０．０５８ｇ、収率５３％）を得た。
【化７４】
0004272338.tif 000082
【０１４７】
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛７−[２−ベンジルオキシ）フェニル]−２−オキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド[２，３−ｄ][１,３]オキサジン−５−イル｝−１−ピペラジンカルボキシレート（０．０５０ｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（３．０ｍｌ）の溶液を炭素担持パラジウム（１０％、０．１０ｇ）の存在下１気圧で１晩水素化した。生じた混液をセライトでろ過し、酢酸エチルとＴＨＦで洗浄した。ろ液を合し、減圧で濃縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）で精製して、所望の化合物（０．０２７ｇ、収率７３％）を得た。
【化７５】
0004272338.tif 000083
【０１４８】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０２５ｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、所望の化合物（０．０１７ｇ、収率８２％）を得た。
分子量：３１９．８４
Ｍａｓｓスペクトル：２８４
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ／Ｊｕｒｋａｔ−Ｂ
【０１４９】
実施例４−６
【化７６】
0004272338.tif 000084
実施例４−４の方法の途中で得た、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル−３−ホルミル−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（４００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．０ｍｌ）の冷却（−２０℃）溶液にメチルマグネシウムブロマイドのＴＨＦ溶液（７．３８ｍｌ、７．３８ｍｏｌ）を滴下した。混液を２時間−２０℃で撹拌、塩化アンモニアで反応を停止させた。混液を酢酸エチルと水で抽出し、飽和食塩水で洗い、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝３／２）で精製して、黄色の油状物（３５６ｍｇ、収率８６％）を得た。
【化７７】
0004272338.tif 000085
【０１５０】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去し、淡黄色の油状物（１４７ｍｇ、収率９６％）を得た。
【化７８】
0004272338.tif 000086
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−（１−ヒドロキシエチル）−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（３０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、黄色固体（２０ｍｇ、収率７８％）を得た。
分子量：３４９．８６
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１５１】
実施例４−７
【化７９】
0004272338.tif 000087
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−（ヒドロキシメチル）−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．２９７ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（０．２２６ｍｌ、２．２３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３．００ｍｌ）の冷却（０℃）溶液にトリホスゲン（０．２２１ｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌後、混液を室温まで加温し、更に１時間撹拌した。炭酸水素ナトリウム水溶液で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を塩化アンモニア、水、飽和食塩水で順次洗い、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。生じた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝３／２）で精製して、淡黄色固体（４６．２ｍｇ、収率１４．６％）を得た。
【化８０】
0004272338.tif 000088
【０１５２】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[７−（２−ヒドロキシフェニル）−２−オキソ−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド[２，３−ｄ][１,３]オキサジン−５−イル]−１−ピペリジンカルボキシレート（４５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１．０ｍｌ）溶液に４Ｎ塩酸（２．０ｍｌ）を加えた。混液を１時間室温で撹拌した。混液をろ過し、生じた白色固体を１，４−ジオキサンで洗浄し、７−（２−ヒドロキシフェニル）−５−（３−ピペリジニル）−１，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピリド[２，３−ｄ][１,３]オキサジン−２−オン塩酸塩（２２．８ｍｇ、収率６０％）を得た。
分子量：３６１．８３
Ｍａｓｓスペクトル：３２６
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ／Ｊｕｒｋａｔ−Ｂ
【０１５３】
実施例４−８
【化８１】
0004272338.tif 000089
実施例４−４で得たｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−（ヒドロキシメチル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０５０ｇ、０．１０２ｍｍｏｌ）のトルエン（１．０ｍｌ）の冷却（０℃）溶液にジフェニルホスホリルアジド（０．０２４ｍｌ、０．１１２ｍｍｏｌ）、ついで１，８−ジアザビシクロ[５．４．０．]ウンデカ−７−エン（０．０１７ｍｌ、０．１１２ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後混液を室温まで加温し、２時間撹拌を続けた。混液を減圧で濃縮し、残渣を酢酸と水で分配し、分離した有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）で精製して、所望の化合物（０．０３８ｇ、収率７２％）を得た。
【化８２】
0004272338.tif 000090
【０１５４】
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−３−（アジドシメチル）−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０３０ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１．０ｍｌ）の溶液を炭素担持パラジウム（１０％、０．０１５ｇ）の存在下１気圧で１晩水素化した。生じた混液をろ過し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を合し、減圧で濃縮して、所望の化合物を得た。これを更に精製することなく次工程で使用した。
【化８３】
0004272338.tif 000091
【０１５５】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−（アミノメチル）−６−（２−ヒドロキシフェニル]−４−ピリジニル−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０２０ｇ、０．０５０ｍｍｏｌ）の冷却(０℃）ＴＨＦ（２．０ｍｌ）溶液にアルゴン雰囲気下１，１’−カルボニルジイミダゾール（０．００９ｇ、０．０５５ｍｏｌ）を加えた。１５分撹拌後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で反応を停止させた。混液を酢酸エチルと飽和塩化アンモニアで分配し、有機層を分離し、水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣を酢酸エチル（２．０ｍｌ）に溶解した。混合物を６０℃で１時間加熱し、ついで室温に戻した。生じた沈殿をろ取、酢酸エチルで洗浄し、減圧で乾燥して、所望の化合物（０．００７ｇ、収率３３％）を得た。
【化８４】
0004272338.tif 000092
【０１５６】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[７−（２−ヒドロキシフェニル）−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド[２，３−ｄ]ピリミジン−５−イル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．００６ｇ、０．０１４ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、所望の化合物（０．００５ｇ、収率９８％）を得た。
分子量：３６０．８４６７
Ｍａｓｓスペクトル：３２５
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：Ｂ
【０１５７】
実施例４−９
【化８５】
0004272338.tif 000093
実施例４−４の方法の途中で得た、ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−ホルミル−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１６０ｇ、０．４０３ｍｍｏｌ）、マロン酸ジエチル（１．２９０ｇ、８．０５１ｍｍｏｌ）とエタノール（５．０ｍｌ）の混合物にピペリジン（０．３９８ｍｌ、４．０２５ｍｍｏｌ）を加え、１晩加熱還流した。混液を室温に戻し、エタノールで希釈した。生じた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄し、減圧下乾燥し、所望の化合物（０．１３６ｇ、収率６９％）を得た。
【化８６】
0004272338.tif 000094
【０１５８】
エチル５−[１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ピペリジニル]−７−（２−ヒドロキシフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボキシレート（０．０５０ｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２．０ｍｌ）の冷却（０℃）溶液にアルゴン雰囲気下ＬｉＢＨ4（０．００４ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。混液を室温まで加温し、３時間撹拌を続けた。水で反応を停止させ、酢酸エチルと飽和塩化アンモニア溶液で分配した。分離した有機層を水と食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝３／２）で精製して、所望の化合物（０．０２７ｇ、収率５４％）を得た。
【化８７】
0004272338.tif 000095
【０１５９】
エチル５−[１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ピペリジニル−７−（２−ヒドロキシフェニル]−２−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボキシレート（０．０２４ｇ、０．０４８ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、所望の化合物（０．０１９ｇ、収率９１％）を得た。
分子量：４３１．９２
Ｍａｓｓスペクトル：３９６
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ
【０１６０】
実施例４−１０
【化８８】
0004272338.tif 000096
エチル７−（２−ヒドロキシフェニル）−２−オキソ−５−（３−ピペリジニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボキシレート塩酸塩（０．０１２ｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）の２．５Ｎ塩酸（３．０ｍｌ）溶液を４時間加熱、還流した。室温まで冷却後、混液を減圧下濃縮した。残渣をアセトニトリルで洗浄し、減圧下乾燥して所望の化合物（０．００７ｇ、収率７０％）を得た。
分子量：３５９．８６
Ｍａｓｓスペクトル：３２４
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ
【０１６１】
実施例４−１１
実施例４−９の方法の途中で得た５−[１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ピペリジニル−７−（２−ヒドロキシフェニル]−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−１，８−ナフチリジン−３−カルボキシレートを脱保護し、下記の化合物を得た。
【化８９】
0004272338.tif 000097
分子量：４２９．９１
Ｍａｓｓスペクトル：３９４
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１６２】
実施例５−１
１−｛２−[（４−メトキシベンジル）オキシ]フェニル）エタノン（１４．２ｇ、５５．４ｍｍｏｌ）、ベンジル３−ホルミル−１−ピペリジンカルボキシレート（１３．７ｇ、５５．４ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチルシアノアセテート（７．８ｇ、５５．４ｍｍｏｌ）および酢酸アンモニア（９．８ｇ、１６６．１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（６０ｍｌ）溶液を３．５時間撹拌下還流した。室温まで冷却後、混液を酢酸エチルと水で分配し、分離した有機層を水と食塩水で洗い、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−４−｛１−[（ベンジルオキシ）カルボニル]−３−ピペリジニル｝−６−｛２−[（４−メトキシベンジル）オキシ]フェニル｝ニコチネート（４．８９ｇ、収率１４％）を淡黄色油状物として得た。
【化９０】
0004272338.tif 000098
【０１６３】
ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−４−｛１−[（ベンジルオキシ）カルボニル]−３−ピペリジニル｝−６−｛２−[（４−メトキシベンジル）オキシ]フェニル｝ニコチネート（０．９５ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍｌ）の溶液にトリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）を加え、１晩室温で撹拌した。混液を減圧で濃縮し、残渣をトルエンで希釈し、ついで減圧で濃縮し、過剰のトリフルオロ酢酸を共沸蒸留で除き、化合物（１．１ｇ、収率約１００％）を得た。
【化９１】
0004272338.tif 000099
２−アミノ−４−｛１−[（ベンジルオキシ）カルボニル]−３−ピペリジニル｝−６−（２−ヒドロキシフェニル）ニコチン酸（１．１ｇ、２．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）とメタノール（５ｍｌ）の溶液にトリメチルシリルジアゾメタン（４．０ｍｌ）を室温で滴下した。反応混液を１．５時間室温で撹拌、反応を酢酸を加えて停止させた。混液を酢酸エチルと水で分配し、分離した有機層を食塩水で洗い、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝３／１）で精製して、黄色固体を得た。この固体をジクロロメタン／ヘキサンから再結晶で精製し、純品（０．３９ｇ、収率３４％）を得た。
【化９２】
0004272338.tif 000100
【０１６４】
メタノール（２．０ｍｌ）およびＴＨＦ（１．０ｍｌ）溶液にメチル２−アミノ−４−｛１−[（ベンジルオキシ）カルボニル]−３−ピペリジニル｝−６−（２−ヒドロキシフェニル）ニコチネート（６０ｍｇ、０．１３０ｍｍｏｌ）と１０％Ｐｄ−Ｃ（２００ｍｇ）を加えた。混液を室温で水素雰囲気下６．５時間撹拌した。混液をセライトでろ過し、メタノールとＴＨＦで洗浄した。ろ液を減圧で濃縮し、残渣を分取ＴＬＣ（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製して、黄色固体物質（１６ｍｇ、収率４０％）を得た。
分子量：２９５．３４
Ｍａｓｓスペクトル：２９６
ビトロにおける活性度：Ｂ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１６５】
実施例５−２
【化９３】
0004272338.tif 000101
２−アミノ−４−｛１−[（ベンジルオキシ）カルボニル]−３−ピペリジニル｝−６−（２−ヒドロキシフェニル）ニコチン酸（７５０ｍｇ、１．６７６ｍｍｏｌ）、メチルアミン塩酸塩（２３０ｍｇ、３．３５２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３４０ｍｇ、３．３５ｍｍｏｌ）、および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３６０ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３９０ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を０℃でアルゴン雰囲気下加えた。混液を室温で１晩撹拌した。混液を酢酸エチルで抽出し、水と食塩水で洗い、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１）で精製して、化合物（３３７ｍｇ、収率４４％）を淡黄色固体として得た。
【化９４】
0004272338.tif 000102
【０１６６】
ベンジル３−｛２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−３−（Ｎ−メチルカルバモイル]−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（１３０ｍｇ、０．２７４ｍｍｏｌ）のメタノール（２ｍｌ）とＴＨＦ（２ｍｌ）の溶液にＰｄ−Ｃ（１８０ｍｇ）を加えた。室温で水素雰囲気下１晩撹拌した。反応混液をセライトでろ過し、ＴＨＦで洗浄し、減圧で濃縮した。残渣を酢酸エチルで希釈し、４Ｎ塩酸１，４−ジオキサン溶液を加えた。生じた黄色沈殿をアセトニトリルで洗い、固体を集め減圧で乾燥して、物質（１０ｍｇ、収率８１％）を得た。
分子量：３６２．８６
Ｍａｓｓスペクトル：３２７
ビトロにおける活性度：Ｂ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１６７】
実施例５−３
実施例５−２と同様の製法で下記の化合物を得た。
【化９５】
0004272338.tif 000103
分子量：３８８．８５７２
Ｍａｓｓスペクトル：３５３
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１６８】
実施例６−１
実施例１−１の方法の途中で得たｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[２−ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレートを出発物質として使用した。
【化９６】
0004272338.tif 000104
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−（２−ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．３００ｇ、０．６１９ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍｌ）懸濁液を撹拌下、これに水酸化カリウム（０．６９５ｇ、１２．３８１ｍｍｏｌ）のエタノール（２０ｍｌ）溶液を加えた。混液を７０℃まで加温、７０℃で６０時間撹拌した。室温まで冷やし、反応混液を水に注ぎ、生じた固体をろ過し、減圧で乾燥して、所望の物質（０．２２６ｇ、収率７３％）を白色無晶形として得た。
【化９７】
0004272338.tif 000105
【０１６９】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をエタノールに懸濁し、ろ過して、所望の化合物（０．０４５ｇ、収率４６％）を白色固体として得た。
【化９８】
0004272338.tif 000106
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−（カルバモイル）−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０４０ｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、所望の化合物（０．００８ｇ、収率２４％）を黄色固体として得た。
分子量：３４８．８４
Ｍａｓｓスペクトル：３１３
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１７０】
実施例６−２
実施例６−１で得たｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノカルバモイル−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−カルバモイル−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレートを出発物質として使用した。
【化９９】
0004272338.tif 000107
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−カルバモイル−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．４００ｇ、０．８００ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）の冷却（０℃）溶液に、トリエチルアミン（０．５０ｍｌ、３．５８ｍｍｏｌ）とトリホスゲン（０．３５４ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混液を１２時間室温で撹拌した。水で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１−１／１）で精製し、エタノールから再結晶して、所望の物質（０．４０６ｇ、収率９７％）を白色固体として得た。
【化１００】
0004272338.tif 000108
【０１７１】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をエタノールで洗浄して、所望の化合物（０．０３６ｇ、収率２９％）を白色固体として得た。
【化１０１】
0004272338.tif 000109
ｔｅｒｔ−ブチル３−[７−（２−ヒドロキシフェニル]−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド[２，３−ｄ]ピリミジン−５−イル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０３６ｇ、０．８０ｍｍｏｌ）のジオキサン（３ｍｌ）溶液を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、７−（２−ヒドロキシフェニル）−５−（３−ピペリジニル）ピリド[２，３−ｄ]ピリミジン−２，４（１Ｈ,３Ｈ）−ジオン塩酸塩（０．０１６ｇ、収率５２％）を黄色固体として得た。
分子量：３７４．８３
Ｍａｓｓスペクトル：３３９
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：Ｃ
【０１７２】
実施例６−３
【化１０２】
0004272338.tif 000110
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−カルバモイル−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１００ｇ、０．１９９ｍｍｏｌ）のジオキサンとピリジンの溶液に、撹拌下フェニルイソシアネート（０．０４７ｇ、０．３９８ｍｍｏｌ）を加えた。混液を１４０℃で１２時間撹拌した。室温まで冷却後生じた固体（尿素）をろ去し、ろ液を減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィで精製して、所望の物質（０．０９０ｇ、収率７８％）を白色無晶形で得た。
【化１０３】
0004272338.tif 000111
【０１７３】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をエタノールで洗浄して、所望の化合物（０．０６０ｇ、収率８３％）を白色固体として得た。
【化１０４】
0004272338.tif 000112
ｔｅｒｔ−ブチル３−[７−（２−ヒドロキシフェニル）−２，４−ジオキソ−３−フェニル−１，２，３，４−テトラヒドロピリド[２，３−ｄ]ピリミジン−５−イル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０５０ｇ、０．１００ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、７−（２−ヒドロキシフェニル）−３−フェニル−５−（３−ピペリジニル）ピリド[２，３−ｄ]ピリミジン−２，４（１Ｈ,３Ｈ）−ジオン塩酸塩（０．０１６ｍｇ、収率３７％）を黄色固体として得た。
分子量：４５０．９３
Ｍａｓｓスペクトル：４１５
ビトロにおける活性度：Ｂ
細胞活性度：Ｃ
【０１７４】
実施例６−４
実施例６−２で得たｔｅｒｔ−ブチル３−｛７−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド[２，３−ｄ]ピリミジン−５−イル｝−１−ピペリジンカルボキシレートを使用した。
【化１０５】
0004272338.tif 000113
【０１７５】
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛７−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド[２，３−ｄ]ピリミジン−５−イル｝−１−ピペリジンカルボキシレートのＴＨＦ溶液を冷却（０℃）撹拌下、これに水素化ナトリウム（０．０３６ｇ、０．９４６ｍｍｏｌ）とヨウ化メチル（０．０５９ｍｌ、０．９４６ｍｍｏｌ）を加えた。混液を室温で５時間撹拌した。水素化ナトリウム（０．００４ｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）とヨウ化メチル（０．０１３ｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）を混液に加え、室温で１２時間撹拌した。反応を水で停止させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１−２／１）で精製し、所望の物質（０．１５０ｇ、収率５７％）を得た。
【化１０６】
0004272338.tif 000114
【０１７６】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をエタノールで洗浄し、減圧で乾燥して、所望の化合物（０．０１９ｇ、収率１６％）を白色固体として得た。
【化１０７】
0004272338.tif 000115
【０１７７】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[７−（２−ヒドロキシフェニル）−１，３−ジメチル−２，４−ジオキソ−１，２，３，４−テトラヒドロピリド[２，３−ｄ]ピリミジン−５−イル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０１５ｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）のジオキサン（３ｍｌ）の懸濁溶液に４Ｎ塩酸ジオキサン（３ｍｍｌ）溶液を撹拌下加え、これを室温で１２時間撹拌した。生じた固体をろ取し、ジオキサンで洗浄して、所望の化合物（０．００５ｇ、収率３９％）を黒色固体として得た。
分子量：４０２．８８
Ｍａｓｓスペクトル：３６７
ビトロにおける活性度：Ｄ
【０１７８】
実施例６−５
【化１０８】
0004272338.tif 000116
実施例３−１の方法の途中で得たｔｅｒｔ−ブチル３−｛６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−２−ブロモ−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．３００ｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）をヒドラジン（３ｍｌ）に懸濁し、これを８０℃で１時間撹拌した。１，４−ジオキサンを加えたとき、混液は澄明な液に変化し、３０分間１００℃で撹拌した。反応を水で停止させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をエタノールから再結晶し、所望の物質（０．２１０ｇ、収率７２％）を黄色固体として得た。
【化１０９】
0004272338.tif 000117
【０１７９】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン／酢酸エチル＝２／１−１／１）で精製して、所望の化合物（０．０８０ｇ、収率４９％）を橙色固体として得た。
【化１１０】
0004272338.tif 000118
ｔｅｒｔ−ブチル３−[３−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ [３，４−ｂ]ピリジン−４−イル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．０７５ｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（３ｍｌ）の溶液に４Ｎ塩酸のジオキサン（３ｍｌ）溶液を撹拌下加えた。混液を室温で１２時間撹拌し、生じた固体をろ取し、２−[３−アミノ−４−（３−ピペリジニル）−１Ｈ−ピラゾロ [３，４−ｂ]ピリジン−６−イル]フェノール塩酸塩（０．０６２ｇ、収率９８％）を得た。
分子量：３４５．８３
Ｍａｓｓスペクトル：３１０
ビトロにおける活性度：Ｃ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１８０】
実施例６−６
0004272338.tif 000119
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛３−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−１Ｈ−ピラゾロ [３，４−ｂ]ピリジン−４−イル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．２００ｇ、０．４００ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍｌ）の冷却（０℃）溶液に、ピリジン（１ｍｌ）とアセチルクロライド（０．０３５ｇ、０．４４０ｍｍｏｌ）を加えた。混液を０℃で１時間撹拌し、水で反応を停止させ、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮した。残渣をジイソプロピルエーテルから再結晶し、所望の物質（０．１８０ｇ、収率８３％）を白色固体として得た。
【化１１１】
0004272338.tif 000120
【０１８１】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をエタノールに懸濁し、ろ過して、所望の化合物（０．１２０ｇ、収率８２％）を白色固体として得た。
【化１１２】
0004272338.tif 000121
ｔｅｒｔ−ブチル３−[３−（アセチルアミノ）−６−（２−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−ピラゾロ [３，４−ｂ]ピリジン−４−イル]−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１１５ｇ、０．２６０ｍｍｏｌ）を実施例１−１に記載の方法と同様にして、塩酸で処理して、Ｎ−［６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）−１Ｈ−ピラゾロ [３，４−ｂ]ピリジン−３−イル]アセタミド塩酸塩（０．０９７ｇ、収率９６％）を得た。
分子量：３８７．８７
Ｍａｓｓスペクトル：３５２
ビトロにおける活性度：Ｄ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｃ
【０１８２】
実施例７−１
【化１１３】
0004272338.tif 000122
実施例４−１の方法の途中で得たｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−４−[１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ピペリジニル]ニコチネート（１．５ｇ、２．６８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍｌ）の溶液にトリフルオロ酢酸（１０ｍｌ）を室温で加えた。混液を２時間室温で撹拌し、減圧で濃縮した。残渣をトルエンで希釈し、減圧で濃縮し、過剰のトリフルオロ酢酸を共沸蒸留で除去した。残渣を１，４−ジオキサンで希釈し、それに４Ｎ塩酸を加えた。生成物（１．３ｇ、収率約１００％）を塩酸塩として単離せず、次工程に使用した。
【０１８３】
２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−４−３−（ピペリジニル）ニコチン酸（１．３３ｇ、３．３０ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン／水（１０ｍｌ／５ｍｌ）溶液に１Ｎ水酸化ナトリウム（３．３ｍｌ）とジ−ｔｅｒｔブチルジ炭酸エステル（０．７９ｇ、３．６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。０℃から室温で１晩撹拌を続け、反応混液を減圧で濃縮した。残渣を１Ｎ塩酸で酸性にし、酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣（１．１２ｇ、収率約６８％）を更に精製することなく次工程で使用した。
【０１８４】
２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−４−[１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−ピペリジニル]ニコチン酸（０．９７ｇ、１．９３６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１０ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（０．２４ｇ、２．４２ｍｍｏｌ）とジフェニルホスホリルアジド（０．６７ｇ、２．４２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混液を３．５時間撹拌還流した。室温まで冷却後、減圧で濃縮した。生じた残渣を酢酸エチルで希釈し、水と食塩水で洗浄し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。生じた褐色残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ジクロロメタン／メタノール＝１０／１）で精製して、化合物（０．５３１ｇ、収率５５％）を黄色油状物として得た。
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛５−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ[４，５−ｂ]ピリジン−７−イル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（７０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１０ｍｌ）溶液に１０％Ｐｄ−Ｃ（１６５ｍｇ）を加えた。室温で水素雰囲気下１晩撹拌した。セライトでろ過し、Ｐｄ−Ｃを除き、ろ液を減圧で濃縮した。生じた固体をエーテルで洗い、減圧で乾燥して、物質（２０ｍｇ、収率３５％）を白色固体として得た。
【化１１４】
0004272338.tif 000123
【０１８５】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[５−（２−（ヒドロキシフェニル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ[４，５−ｂ]ピリジン−７−イル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（２０ｍｇ、０．１０４１ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理した。白色沈殿をヘキサンで洗い、減圧で乾燥し、化合物（５ｍｇ、収率３２％）を得た。
分子量：３４６．８２
Ｍａｓｓスペクトル：３１１
ビトロにおける活性度：Ｃ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０１８６】
実施例７−２
【化１１５】
0004272338.tif 000124
実施例５−１で得た２−アミノ−４−｛１−[（ベンジルオキシ）カルボニル]−３−ピペリジニル｝−６−（２−（ヒドロキシフェニル]ニコチン酸（６００ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（３８０ｍｇ、１．６７６ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（８ｍｌ）溶液に、ジフェニルホスホリルアジド（４６０ｍｇ、１．６７６ｍｍｏｌ）を撹拌下、室温で加えた。混液を１晩撹拌還流した。室温まで冷却後、反応混液を減圧で濃縮し、酢酸エチルで抽出し、水と食塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ジクロロメタン／メタノール＝１９／１）で精製して、化合物（２０４ｍｇ、収率３４％）を淡黄色固体として得た。
【化１１６】
0004272338.tif 000125
【０１８７】
プロピオン酸（３３０ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）とプロピオン酸無水物
（３２０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）の混合物に、ベンジル３−[５−（２−（ヒドロキシフェニル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾ[４，５−ｂ]ピリジン−７−イル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（１００ｍｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）を加えた。５分後混液に塩化マグネシウムを加えた。反応混液を１４５℃で１晩撹拌還流した。６０℃に冷やし、これにメタノール（１ｍｌ）を加えた。混液を６０℃で５．５時間撹拌した。室温まで冷却し、反応混液を酢酸エチルで抽出し、ついで飽和炭酸水素ナトリウム、食塩水で洗い、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣を分取ＴＬＣ（酢酸エチル）で精製して、化合物（２５ｍｇ、収率２４％）を淡黄色油状物として得た。
【化１１７】
0004272338.tif 000126
【０１８８】
ベンジル３−[２−エチル−５−（２−（ヒドロキシフェニル）−３Ｈ−イミダゾ[４，５−ｂ]ピリジン−７−イル]−１−ピペリジンカルボキシレート（３０ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（４ｍｌ）溶液に１０％Ｐｄ−Ｃ（９０ｍｇ）を加えた。室温で水素雰囲気下４時間撹拌した。ろ過してＰｄ−Ｃを除き、ろ液を減圧で濃縮した。残渣を１，４−ジオキサンで希釈、４Ｎ塩酸の１，４−ジオキサン溶液を加えた。黄色沈殿をシアノメチルで洗い、固体を集め、減圧で乾燥して、物質（２ｍｇ、収率１２％）を得た。
分子量：３５８．８７４４
Ｍａｓｓスペクトル：３２３
ビトロにおける活性度：Ｄ
細胞活性度：Ｃ
【０１８９】
実施例８−１
出発原料２と出発原料４を用い、実施例１−１と同様に反応して、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[２，６−ビス（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（３．５４ｇ、収率３０％）を製造した。
【化１１８】
0004272338.tif 000127
【０１９０】
酢酸エチル（５０ｍｌ）と酢酸（５ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[２，６−ビス（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（３．４６ｇ、５．９ｍｍｏｌ）と１０％Ｐｄ−Ｃ（６００ｍｇ）の懸濁液を室温で水素雰囲気下２日間撹拌した。反応混液をＴＨＦ（２００ｍｌ）で希釈し、セライトパッドでろ過し、ろ液を減圧で濃縮した。残渣を酢酸エチルとヘキサンで洗浄して、生成物（１．８２ｇ、収率７６％）を得た。
【化１１９】
0004272338.tif 000128
【０１９１】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２，６−ジヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理した。生じた残渣をろ過し、酢酸エチルとヘキサンの混液で洗い、化合物（１２３ｍｇ、収率７３％）を得た。
分子量：３４６．８１９６
Ｍａｓｓスペクトル：３１１
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ
【０１９２】
実施例８−２
【化１２０】
0004272338.tif 000129
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２，６−ジヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（３００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）、ベンジルブロマイド（０．１ｍｌ、０．８０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３０３ｍｇ、２．１９ｍｍｏｌ）をアセトン（１５ｍｌ）とＴＨＦ（１５ｍｌ）の溶液に懸濁し、室温で２日間撹拌した。反応混液を減圧で濃縮し、ついで酢酸エチル（１００ｍｌ）と水（１００ｍｌ）に溶解した。混液を酢酸エチル（１００ｍｌｘ２）で抽出した。有機層を合し、食塩水（１００ｍｌ）で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧で濃縮した。粗生成物をカラムクロマトグラフィ（ヘキサン／酢酸エチル＝４／１−２／１−１／１）で精製して、化合物（２３９ｍｇ、収率６５％）を得た。
【化１２１】
0004272338.tif 000130
【０１９３】
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛２−アミノ−６−[（２−（ベンジルオキシ）−６−ヒドロキシフェニル]−３−シアノ−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（２３９ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）のジオキサン（２５ｍｌ）溶液に４Ｎ塩酸のジオキサン（２５ｍｌ）溶液を加えた。反応混液を室温で１晩撹拌し、生じた残渣をろ取し、酢酸エチルとヘキサンの混液で洗浄し、化合物（１８４ｍｇ、収率８８％）を得た。
分子量：４３６．９５
Ｍａｓｓスペクトル：４０１
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ
【０１９４】
実施例８−３から８−４５
上記実施例８−２に記載の方法に準じて、表４に示す実施例８−３から８−４５までの化合物を合成した。
【０１９５】
【表４−１】
0004272338.tif 000131
【０１９６】
【表４−２】
0004272338.tif 000132
【０１９７】
【表４−３】
0004272338.tif 000133
【０１９８】
【表４−４】
0004272338.tif 000134
【０１９９】
【表４−５】
0004272338.tif 000135
【０２００】
【表４−６】
0004272338.tif 000136
【０２０１】
【表４−７】
0004272338.tif 000137
【０２０２】
【表４−８】
0004272338.tif 000138
【０２０３】
【表４−９】
0004272338.tif 000139
【０２０４】
実施例９−１
【化１２２】
0004272338.tif 000140
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２，６−ジヒドロキシフェニル]−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（３００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８ｍｌ）の撹拌溶液に、炭酸カリウム（５０５ｍｇ、３．６５ｍｍｏｌ）と１−ブロモプロパン（７３μｌ、０．８０ｍｍｏｌ）を加えた。５０℃で２０時間撹拌を続けた。混液を減圧で濃縮し、残渣を酢酸エチル（１００ｍｌ）で希釈し、水と食塩水（１００ｍｌ）で洗い、硫酸マグネシウムで乾燥し、抽出液を減圧で濃縮した。ついで残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝７／３）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２−ヒドロキシ−６−プロポキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（２５８ｍｇ、収率７８％）を淡黄色固体として得た。
【化１２３】
0004272338.tif 000141
【０２０５】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２−ヒドロキシ−６−プロポキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（２５７ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を実施例１−１の方法と同様にして塩酸で処理し、２−アミノ−６−（２−ヒドロキシ−６−プロポキシフェニル）−４−（３−ピペリジニル）ニコチノニトリル塩酸塩（３８８ｍｇ、収率９８％）を淡黄色固体で得た。
分子量：３８８．９０
Ｍａｓｓスペクトル：３５３
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ
【０２０６】
実施例９−２から９−２４
上記実施例９−１に記載の方法に準じて、表５に示す実施例９−２から９−２４までの化合物を合成した。
【０２０７】
【表５−１】
0004272338.tif 000142
【０２０８】
【表５−２】
0004272338.tif 000143
【０２０９】
【表５−３】
0004272338.tif 000144
【０２１０】
【表５−４】
0004272338.tif 000145
【０２１１】
【表５−５】
0004272338.tif 000146
【０２１２】
実施例１０−１
【化１２４】
0004272338.tif 000147
２−（ベンジルオキシ）アセトフェノン（５．６６ｇ、２５ｍｍｏｌ）のトルエン（４０ｍｌ）溶液に二硫化炭素（６．０ｍｌ、９９．８ｍｍｏｌ）とヨウ化メチル（１０ｍｌ、２４５ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液に、水素化ナトリウム（６０％懸濁液、２．００ｇ、５０ｍｍｏｌ）とＮ，Ｎ−ジメチルアセタミド（１０ｍｌ）を加えた。生じた混液を室温で１時間撹拌し、２時間還流した。室温に冷却し、反応液をジクロロメタンと水で分配し、有機層を分離し、水洗し、乾燥し、蒸発させた。残渣の固体をジイソプロピルエーテルで砕き、１−[２−（ベンジル）フェニル]−３，３−ビス（メチルチオ）−２−プロペン−１−オン（５．１７ｇ、収率６３％）を薄黄色固体で得た。
【化１２５】
0004272338.tif 000148
【０２１３】
シアノアセタミド（１．２７ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）の２−プロパノール（５０ｍｌ）懸濁液に水素化ナトリウム（６０％懸濁液、０．６０５ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）を加えた。混液を室温で１０分間撹拌し、これに１−[２−（ベンジル）フェニル]−３，３−ビス（メチルチオ）−２−プロペン−１−オン（５．００ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）を一度で加えた。得られた混液を４時間還流した。室温に冷却後、１Ｎ塩酸で希釈した。生じた沈殿をろ取し、エタノールで洗浄して、６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−４−（メチルチオ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロニコチノニトリル（４．４３ｇ、収率８４％）を黄色結晶性固体で得た。
【化１２６】
0004272338.tif 000149
【０２１４】
６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−４−（メチルチオ）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ニコチノニトリル（４．００ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液に、ｍ−クロロ過安息香酸（ｍＣＰＢＡ）（６９％、３．４５ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を一度に０℃で加えた。反応混液を０℃から室温で１時間撹拌し、Ｎａ2Ｓ2Ｏ3・５Ｈ2Ｏ（５ｇ）を含む飽和炭酸水素ナトリウム（８０ｍｌ）で反応を停止させ、ジクロロメタンで希釈した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウムで洗い、乾燥し、蒸発させた。残渣の固体をジイソプロピルエーテルで粉砕し、６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−４−（メチルスルフィニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−ニコチノニトリル（４．００ｇ、収率９６％）を黄色固体で得た。
【化１２７】
0004272338.tif 000150
【０２１５】
６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−４−（メチルスルフィニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３−ピリジンカルボニトリル（２．９７ｇ、８．１６ｍｍｏｌ）、ブロモアセタミド（１．２７ｇ、９．２１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１．４３ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍｌ）混液を６０℃で１．５時間撹拌した。反応混液を水に注ぎ、生じた沈殿をろ取し、得られた固体をアセトンで洗い、２−｛６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−３−シアノ−４−（メチルスルフィニル）−２−ピリジニル]オキシ｝アセタミド（２．０９ｇ、収率６１％）を固体で得た。
【化１２８】
0004272338.tif 000151
【０２１６】
２−｛[６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−３−シアノ−４−（メチルスルフィニル）−２−ピリジニル]オキシ｝アセタミド（３００ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）とモルホリン（１．０ｍｌ）の混合物を１３０℃で１時間撹拌、ついで水を加えた。生じた沈殿をろ取し、減圧で乾燥し、２−｛[６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−３−シアノ−４−（４−モルホリニル）−２−ピリジニル]オキシ｝アセタミド（３０４ｍｇ、収率９６％）を黄色固体で得た。
【化１２９】
0004272338.tif 000152
【０２１７】
２−｛[６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−３−シアノ−４−（４−モルホリニル）−２−ピリジニル]オキシ｝アセタミド（３１８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液に炭酸カリウム（１９８ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を加え、これを１３０℃で２４時間撹拌した。混液を酢酸エチルと水で分配し、有機層を食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、カラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３／１−２／１）で精製し、ジイソプロピルエーテルで砕き、２−アミノ−６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−４−（４−モルホリニル）ニコチノニトリル（１４１ｍｇ、収率５１％）を白色固体で得た。
【化１３０】
0004272338.tif 000153
【０２１８】
ついで、ベンジル基を実施例１−１の方法と同様にして除去した。残渣をエタノールで砕き、減圧で乾燥して、２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（４−モルホリニル）ニコチノニトリル（６８ｍｇ、収率７６％）を固体で得た。
分子量：２９６．３３
Ｍａｓｓスペクトル：２９７
ビトロにおける活性度：Ｂ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｃ
【０２１９】
実施例１０−２
0004272338.tif 000154
実施例１０−１方法で製造した２−｛６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−３−シアノ−４−（メチルスルフィニル）−２−ピリジニル]オキシ｝アセタミド（５００ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）とイソニペコタミド（２２８ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）溶液を１３０℃で５時間撹拌した。冷後混液を酢酸エチルと水で分配し、有機層を食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、１−｛２−（２−アミノ−２−オキソエトキシ）−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−４−ピペリジンカルボキサミド（４８５ｍｇ、収率８４％）を固体で得た。
【化１３１】
0004272338.tif 000155
【０２２０】
１−｛２−（２−アミノ−２−オキソエトキシ）−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−４−ピペリジンカルボキサミド（４８５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（２８０ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２．５ｍｌ）溶液を１３０℃で２８時間撹拌した。冷却後、混液を水で希釈し、生じた沈殿をろ取し、エタノールとジクロロメタンで洗浄して、１−｛２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−４−ピペリジンカルボキサミド（１１９ｍｇ、収率２８％）を固体で得た。
【化１３２】
0004272338.tif 000156
【０２２１】
１−｛２−アミノ−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−４−ピリジニル｝−４−ピペリジンカルボキサミド（６６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）とチオアニソール（０．１８１ｍｌ、１．５４ｍｍｏｌ）のＴＦＡ（２ｍｌ）溶液を２日間室温で撹拌し、溶媒を蒸発させた。残渣を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で希釈した。生じた沈殿をろ取し、ジクロロメタンと水で洗浄して、１−[２−アミノ−３−シアノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル｝−４−ピペリジンカルボキサミド（１９ｍｇ、収率３６％）を固体で得た。
分子量：３３７．３８
Ｍａｓｓスペクトル：３３８
ビトロにおける活性度：Ｂ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｃ
【０２２２】
実施例１０−３
0004272338.tif 000157
１−[（ベンジルオキシ）カルボニル]−３−ピペリジンカルボン酸（３．００ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン（１．５６ｍｌ、１１．４ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブタノール（３０ｍｌ）溶液に、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）（２．４６ｍｌ、１１．４ｍｍｏｌ）を加え、これを２１時間還流した。室温に冷却後、減圧で濃縮し、残渣を酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で分配し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４／１−３／１）で精製して、ベンジル３−[（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ]−１−ピペリジンカルボキシレート（２．２２ｇ、収率５８％）を固体で得た。
【化１３３】
0004272338.tif 000158
【０２２３】
ベンジル３−[（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ]−１−ピペリジンカルボキシレート（２．２５ｇ、６．７３ｍｍｏｌ）と１０％Ｐｄ−Ｃ（０．２２９ｇ）のエタノール（２０ｍｌ）混合液を室温で水素雰囲気下（１気圧）１４時間撹拌した。触媒をセライトパッドでろ過して除き、ろ液を減圧で濃縮して、ｔｅｒｔ−ブチル３−ピペリジニルカルバメート（１．２２ｇ、収率９１％）を得た。
生じたｔｅｒｔ−ブチル３−ピペリジニルカルバメートと２−｛[６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−３−シアノ−４−（メチルスルフィニル）−２−ピリジニル]オキシ｝アセタミドを出発物質として使用して、実施例１０−１に記載の方法と同様にして、２−アミノ−４−（３−アミノ−１−ピペリジニル）−６−（２−（ヒドロキシフェニル）ニコチノニトリル塩酸塩を製造した。
【化１３４】
0004272338.tif 000159
分子量：３４５．８３
Ｍａｓｓスペクトル：３１０
ビトロにおける活性度：Ｂ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｂ
【０２２４】
実施例１０−４
【化１３５】
0004272338.tif 000160
２−｛[６−[２−（ベンジロキシ）フェニル]−３−シアノ−４−（メチルスルフィニル）−２−ピリジニル]オキシ｝アセタミド（５００ｍｇ、１．１９ｍｏｌ）とｔｅｒｔ−ブチル３−アミノ−１−ピペリジンカルボキシレート（５５５ｍｇ、２．７７ｍｏｌ）のＤＭＦ（０．６ｍｌ）混液を１３０℃で２４時間撹拌した。冷却後、混液を酢酸エチルと水で分配し、有機層を水と食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、そしてシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１／１）で精製して、ｔｅｒｔ−ブチル３−（｛２−（カルバモイルメトキシ）−６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル−３−シアノ−４−ピリジニル｝アミノ）−１−ピペリジンカルボキシレート（３６０ｍｇ、収率６４％）を泡状で得た。生成した化合物を用いて、実施例１０−２に記載の方法と同様にして、２−アミノ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−（３−ピペリジニルアミノ）ニコチノニトリル塩酸塩を製造した。
【化１３６】
0004272338.tif 000161
分子量：３４５．８３
Ｍａｓｓスペクトル：３１０
ビトロにおける活性度：Ａ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ａ
【０２２５】
実施例１０−５から１０−９
上記実施例１０−１から１０−４に記載の方法に準じて、表６に示す実施例１０−５から１０−９までの化合物を合成した。
【０２２６】
【表６】
0004272338.tif 000162
【０２２７】
実施例１１
【化１３７】
0004272338.tif 000163
ＤＭＦ（５．０ｍｌ）をオキザリルクロライド（３．６３ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）のシアノメチル（５．００ｍｌ）溶液に室温で加えた。１０分後、２−（４−メトキシフェニルメトキシ）アセトフェノン（３．３３ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍｌ）溶液を加えた。生じた溶液を１晩撹拌した。反応混液にマロノニトリル（１．０３ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）、ついでトリエチルアミン（７．２５ｍｌ、５．２６ｇ、５２．０ｍｍｏｌ）を加え、生じた反応混液を１晩撹拌した。反応混液を水に注ぎ、エーテルで抽出した。抽出液を食塩水で洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後揮発物を減圧で除去して、褐色残渣を得た。これを１５０ｇのシリカゲルに通し、純粋の目的物と稍不純物を含有する目的物を得た。後者の物質を、さらにシリカゲルカラムクロマトグラフィ（５０ｇクロロホルム）で精製して、所望の物質（１．２７ｇ、収率２７％）を得た。
【化１３８】
0004272338.tif 000164
【０２２８】
２−（（２Ｚ）−３−（ジメチルアミノ)−３−｛２−[（４−メトキシベンジル）オキシ]フェニル｝−２−プロペニリデン）マロノニトリル（１．２６ｇ、３．５１ｍｍｏｌ）のメタノール溶液をドライアイス−アセトン浴で冷却し、これに液体アンモニアを加え、混合物を封管チューブに入れ１２０℃（浴）で１晩加熱した。反応混液を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。抽出液を食塩水で洗い、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後揮発物を減圧で除去して、粗生成物を得た。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：酢酸エチル＝７０：３０）で精製して、所望の物質（０．０５０ｇ、収率４．３％）を得た。
【化１３９】
0004272338.tif 000165
【０２２９】
２−アミノ−６−（｛２−[（４−メトキシベンジル）オキシ]フェニル｝ニコチノニトリル（０．０５０ｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）、ＴＦＡ（３．００ｍｌ）、アニソール（０．５０ｍｌ）および水（０．５０ｍｌ）の混合物を１晩室温で撹拌した。この反応混液にトルエンを加え、揮発物を減圧で除去した。得られた残渣をＴＨＦに溶解し、ついでヘキサンを加え沈殿を生ぜしめた。沈殿をろ取し、ヘキサンで洗い、減圧で乾燥して、所望の物質（０．０２６ｇ、収率８２％）を得た。
分子量：２１１．２３
Ｍａｓｓスペクトル：２１２
ビトロにおける活性度：Ｂ
細胞活性度：（Ａ５４９）−Ｃ
【０２３０】
実施例１２
【化１４０】
0004272338.tif 000166
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−２−ブロモ−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．３００ｇ、０．５４７ｍｍｏｌ）のメタノール（１０ｍｌ）溶液を撹拌下ナトリウムメトキサイド（０．０８９ｇ、１．６４１ｍｍｏｌ）を加えた。混液を４８時間撹拌還流した。室温に冷却し、水で反応を停止させた。反応混液を酢酸エチルで処理し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧で濃縮した。残渣をエタノールから再結晶し、所望の物質（０．０９５ｇ、収率３９％）を得た。
分子量：３４５．８３
ビトロにおける活性度：Ｃ
【０２３１】
実施例１３
【化１４１】
0004272338.tif 000167
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−２−ブロモ−３−シアノ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（０．１００ｇ、０．１８２ｍｍｏｌ）と１０％Ｐｄ−Ｃ（０．１００ｇ）の酢酸エチル（１０ｍｌ）混合液を室温で水素雰囲気下、６日間撹拌した。反応混液をセライトパッドでろ過し、ろ液を減圧で濃縮し、残渣を、分取シリカゲルプレート（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で精製して、所望の物質（２１ｍｇ、収率２９％）を得た。
分子量：３１５．８１
ビトロにおける活性度：Ｃ
【０２３２】
実施例１４
１−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]エタノン（３．５０ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル３−ホルミル−１−ピペリジンカルボキシレート（３．３０ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）、ｎ−ブチルシアノアセテート（２．１８ｇ、１５．５ｍｍｏｌ）および酢酸アンモニア（３．４８ｇ、４６．４ｍｍｏｌ）の１,４−ジオキサン（１７ｍｌ）混合液を１晩還流した。室温に冷却後、減圧で濃縮した。残渣を酢酸エチルと水で抽出し、分離した有機層を飽和食塩水で洗い、減圧で濃縮した。生じた沈殿を酢酸エチルに懸濁し、ろ取し、乾燥して、ｔｅｒｔ−ブチル３−｛６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−２−ヒドロキシ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（２．７５ｇ、収率３７％）を得た。
ｔｅｒｔ−ブチル３−｛６−[２−（ベンジルオキシ）フェニル]−３−シアノ−２−ヒドロキシ−４−ピリジニル｝−１−ピペリジンカルボキシレート（２００ｍｇ、０．４１２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５．０ｍｌ）溶液に１０％Ｐｄ−Ｃ（２５０ｍｇ）を加えた。これを室温で水素雰囲気下、１晩撹拌した。混液をろ過し、減圧で濃縮した。生じた固体をジエチルエーテルで洗浄し、乾燥して、ｔｅｒｔ−ブチル３−[３−シアノ−２−ヒドロキシ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル]−１−ピペリジンカルボキシレート（１２２ｍｇ、収率７５％）を得た。
【０２３３】
ｔｅｒｔ−ブチル３−[３−シアノ−２−ヒドロキシ−６−（２−ヒドロキシフェニル）−４−ピリジニル−１−ピペリジンカルボキシレート（１２０ｍｇ、０．３０７ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（６．０ｍｌ）溶液に、４Ｎ塩酸（６．０ｍｌ）を加えた。混液を１時間室温で撹拌した。生じた固体をろ取し、１，４−ジオキサンで洗浄し、減圧で乾燥して、所望の物質を得た。
【化１４２】
0004272338.tif 000168
分子量：３３１．８０
Ｍａｓｓスペクトル：２９６
ビトロにおける活性度：Ｄ