(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩と０．０１〜０．５ｗ／ｖ％の亜硫酸塩またはメタ重亜硫酸塩を含有する水性液剤。
【請求項２】
α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポイル−α−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−β−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−δ−アミノ酸およびＮ−α−リポイル−ε−アミノ酸からなる群から選ばれるものである、請求項１記載の水性液剤。
【請求項３】
α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸、Ｎ−α−リポイルアスパラギン酸、Ｎ−α−リポイルグリシン、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ−ｎ−酪酸、Ｎ−α−リポイル−６−アミノヘキサン酸、Ｎ−α−リポイルフェニルアラニン、Ｎ−α−リポイル−５−ハイドロキシトリプトファン、Ｎ−α−リポイルアントラニル酸、Ｎ−α−リポイルメチオニンおよびＮ−α−リポイルシステインからなる群から選ばれるものである、請求項１記載の水性液剤。
【請求項４】
亜硫酸塩が亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸水素ナトリウムまたは亜硫酸水素カリウムであり、メタ重亜硫酸塩がメタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重亜硫酸カリウムである請求項１記載の水性液剤。
【請求項５】
注射剤である請求項１〜４のいずれかに記載の水性液剤。
【請求項６】
点眼剤である請求項１〜４のいずれかに記載の水性液剤。
【請求項７】
化粧品である請求項１〜４のいずれかに記載の水性液剤。
【請求項８】
０．０１〜０．５ｗ／ｖ％の亜硫酸塩またはメタ重亜硫酸塩を添加することを特徴とする、α−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩を含有する水性液剤の不快臭の発生を抑制する方法。
【請求項９】
α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポイル−α−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−β−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−δ−アミノ酸およびＮ−α−リポイル−ε−アミノ酸からなる群から選ばれるものである、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸、Ｎ−α−リポイルアスパラギン酸、Ｎ−α−リポイルグリシン、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ−ｎ−酪酸、Ｎ−α−リポイル−６−アミノヘキサン酸、Ｎ−α−リポイルフェニルアラニン、Ｎ−α−リポイル−５−ハイドロキシトリプトファン、Ｎ−α−リポイルアントラニル酸、Ｎ−α−リポイルメチオニンおよびＮ−α−リポイルシステインからなる群から選ばれるものである、請求項８記載の方法。
【請求項１１】
亜硫酸塩が亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸水素ナトリウムまたは亜硫酸水素カリウムであり、メタ重亜硫酸塩がメタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重亜硫酸カリウムである請求項８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、α−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩を含有する水性液剤の安定化法並びに安定化されたα−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩を含有する水性液剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
α−リポ酸（別名：チオクト酸または６,８−ジチオオクタン酸）はミトコンドリアに存在する補酵素で、抗酸化能を有し、酸化ストレスによる種々の病態の治療、たとえば動脈硬化症および白内障の治療薬として注目されている。また、その還元型のジメルカプトオクタン酸は酸化型のグルタチオンやビタミンＣなどを還元再生させる作用がある。
【０００３】
一方、α−リポ酸誘導体として、α−リポ酸にグリシン、メチオニン、グルタミン酸、バリンなどがそれぞれ結合したα−リポイルアミノ酸が知られている（特公昭42-1286号）。また、特開2000-169371号公報にはα−リポイルアミノエチルスルホン酸のイミダゾール塩などのジチオラン誘導体が記載されており、これら化合物は酸化的ストレスによって起こる疾患、たとえば糖尿病や白内障などに有効であることが開示されている。
【０００４】
しかし、これらα−リポイルアミノ酸の水溶液は経時的に硫化水素またはメルカプタンの不快臭を発生し、製剤化が困難であるという欠点がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明はα−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩を含有する水性液剤の安定化法並びに安定化されたα−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩を含有する水性液剤を提供する。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記のような状況下、本発明者らは種々検討を重ねた結果、α−リポイルアミノ酸およびそれらの薬理学的に許容される塩が亜硫酸塩またはメタ重亜硫酸塩を添加することにより安定化できることを見出し、さらに研究を進めて本発明を完成させた。
【０００７】
すなわち、本発明は、
(1)α−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩と亜硫酸塩またはメタ重亜硫酸塩を含有する水性液剤、
(2)α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポイル−α−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−β−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−δ−アミノ酸およびＮ−α−リポイル−ε−アミノ酸からなる群から選ばれるものである、上記(1)記載の水性液剤、
(3)α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸、Ｎ−α−リポイルアスパラギン酸、Ｎ−α−リポイルグリシン、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ−ｎ−酪酸、Ｎ−α−リポイル−６−アミノヘキサン酸、Ｎ−α−リポイルフェニルアラニン、Ｎ−α−リポイル−５−ハイドロキシトリプトファン、Ｎ−α−リポイルアントラニル酸、Ｎ−α−リポイルメチオニンおよびＮ−α−リポイルシステインからなる群から選ばれるものである、上記(1)記載の水性液剤、
(4)亜硫酸塩が亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸水素ナトリウムまたは亜硫酸水素カリウムであり、メタ重亜硫酸塩がメタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重亜硫酸カリウムである上記(1)記載の水性液剤、
(5)注射剤である上記(1)〜(4)のいずれかに記載の水性液剤、
(6)点眼剤である上記(1)〜(4)のいずれかに記載の水性液剤、
(7)化粧品である上記(1)〜(4)のいずれかに記載の水性液剤、
(8)亜硫酸塩またはメタ重亜硫酸塩を添加することを特徴とする、α−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩を含有する水性液剤の安定化法、
(9)α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポイル−α−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−β−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−δ−アミノ酸およびＮ−α−リポイル−ε−アミノ酸からなる群から選ばれるものである、上記(8)記載の安定化法、
(10)α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸、Ｎ−α−リポイルアスパラギン酸、Ｎ−α−リポイルグリシン、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ−ｎ−酪酸、Ｎ−α−リポイル−６−アミノヘキサン酸、Ｎ−α−リポイルフェニルアラニン、Ｎ−α−リポイル−５−ハイドロキシトリプトファン、Ｎ−α−リポイルアントラニル酸、Ｎ−α−リポイルメチオニンおよびＮ−α−リポイルシステインからなる群から選ばれるものである、上記(8)記載の安定化法、並びに
(11)亜硫酸塩が亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸水素ナトリウムまたは亜硫酸水素カリウムであり、メタ重亜硫酸塩がメタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重亜硫酸カリウムである上記(8)記載の安定化法に関する。
【０００８】
本発明に用いられる亜硫酸塩としては亜硫酸ナトリウムまたは亜硫酸カリウム、亜硫酸水素ナトリウムまたは亜硫酸水素カリウムなどが挙げられ、メタ重亜硫酸塩としてはメタ重亜硫酸ナトリウムまたはメタ重亜硫酸カリウムなどが挙げられる。必要に応じてこれら塩のうち２種以上を適宜組み合わせて含有させることもできる。
【０００９】
本発明に用いられるα−リポイルアミノ酸はα−リポ酸とアミノ酸がアミド結合した構造を有している。本発明において、アミノ酸とは同一分子内にカルボキシル基とアミノ基を有する、いわゆるα−アミノ酸、β−アミノ酸、γ−アミノ酸、δ−アミノ酸、ε−アミノ酸、並びにアミノメチルシクロヘキサンカルボン酸およびアントラニル酸、並びに同一分子内にスルホン酸基とアミノ基を有するアミノエタンスルホン酸（タウリン）をいう。α−アミノ酸としては、たとえばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、メチオニン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アルギニン、リジン、ヒスチジン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒドロキシトリプトファンなどが例示される。β−アミノ酸としてはβ−アラニンが挙げられ、γ−アミノ酸としてはγ−アミノ−ｎ−酪酸（GABA）やカルニチンが挙げられ、δ−アミノ酸としては５−アミノレプリン酸や５−アミノ吉草酸、ε−アミノ酸としては６−アミノヘキサン酸が挙げられる。
【００１０】
本発明に用いられるα−リポイルアミノ酸の薬理学的に許容できる塩としては、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩およびカルシウム塩やマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩が挙げられるが、これら以外の塩であっても本発明の安定化法により適宜安定化することができる。
【００１１】
本発明に用いられるα−リポイルアミノ酸は、例えば次の合成法により、またはこれに準じて適宜合成することができる。
【００１２】
【化１】
0004259813.tif 000002
（式中、AはN結合したアミノ酸残基を示す。）
【００１３】
α−リポイルアミノ酸の合成法としては、アミノ酸の酸性基のカルボン酸を保護基としてエステル化し、α−リポ酸と脱水縮合剤で酸アミドとし、最後にケン化するのが一般的である。しかし、アミノエチルスルホン酸などの場合、この方法では合成するのが困難であるが、混合酸無水物法（MA法）により合成すると目的化合物のα−リポイルアミノ酸を高収率で得ることができる。すなわち、α−リポ酸を有機溶媒（たとえばクロロホルム、テトラヒドロフラン、アセトニトリルなど）に溶かし、これに３級アミン（トリエチルアミン、トリブチルアミンやＮ−メチルモルホリン（NMM）など）の存在下−15℃〜−5℃でハロゲン化炭酸エステル（クロル炭酸エチル、クロル炭酸ブチルなど）、イソブチルオキシカルボニルクロリド、塩化ジエチルアセチルまたは塩化トリメチルアセチルなどの混合酸無水物化試薬を反応させてα−リポ酸の混合酸無水物とする。反応時間は1〜2分から数10分程度である。さらにアミノ酸をアルカリ（水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなど）存在下でアルコール、水またはそれらの混液などの溶媒に溶かしたものを加えて反応させた後、適当な溶媒、たとえば水またはアルコールから再結晶させると、高収率でα−リポイルアミノ酸を得ることができる。
【００１４】
本発明の水性液剤に使用される溶媒としては、精製水、特に注射用蒸留水が挙げられる。
【００１５】
本発明の水性液剤には、通常用いられる緩衝剤、等張化剤、溶解補助剤、防腐剤、粘稠剤、キレート剤、芳香剤等の各種添加剤を適宜添加してもよい。
【００１６】
緩衝剤としては、たとえばリン酸緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酒石酸緩衝剤、酢酸緩衝剤などが挙げられる。
【００１７】
等張化剤としては、たとえばソルビトール、グルコース、マンニトールなどの糖類、グリセリン、プロピレングリコールなどの多価アルコール類、塩化ナトリウムなどの塩類などが挙げられる。
【００１８】
溶解補助剤としては、たとえばポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレンオキシステアリン酸トリグリセリド、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などの非イオン界面活性剤などが挙げられる。
【００１９】
防腐剤としては、たとえば塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウムなどの第４級アンモニウム塩類、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、ソルビン酸およびそれらの塩、チメロサール、クロロブタノール、デヒドロ酢酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００２０】
粘稠剤としては、たとえばポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースおよびそれらの塩などが挙げられる。
【００２１】
キレート剤としては、エデト酸ナトリウム、クエン酸などが挙げられる。
【００２２】
芳香剤としては、１−メントール、ボルネオール、カンフル、ユーカリ油などが挙げられる。
【００２３】
本発明の水性液剤は注射剤や点眼剤などとして使用される。注射剤として用いる場合、pHは通常約3.5〜8.5、好ましくは約6〜7に、点眼剤として用いる場合、pHは通常約3.5〜8.5、好ましくは約6〜7に調整する。
【００２４】
本発明の水性液剤の製造法は、液剤の種類によって異なるが、各液剤について公知の方法を適宜用いることができる。
【００２５】
本発明のα−リポイルアミノ酸を含有する水性液剤は、注射剤や点眼剤などとして、酸化ストレスによる種々の疾患、たとえば虚血性心疾患、脳虚血、動脈硬化症、糖尿病、白内障などの予防・治療に有用である。
【００２６】
本発明の水性液剤は約0.01〜5.0(w/v)%のα−リポイルアミノ酸に対し、亜硫酸塩またはメタ重亜硫酸塩を約0.001〜1.0(w/v)%、好ましくは約0.01〜0.5(w/v)%を含有してなる。
【００２７】
本発明に用いられるα−リポイルアミノ酸を上記のような疾患の予防・治療剤として使用する際の投与量は、使用するα−リポイルアミノ酸の種類、患者の体重や年齢、対象とする疾患の種類やその状態および投与方法などによっても異なるが、たとえば注射剤の場合成人1日1回約1mg〜約30mg程度投与するのがよい。また、点眼剤の場合は、成人1日数回、1回数滴、濃度が約0.01〜5(w/v)%の点眼剤を投与するのがよい。
【００２８】
本発明のα−リポイルアミノ酸を含有する水性液剤には、本発明の目的に反しない限り、その他の同種または別種の薬効成分を適宜含有させてもよい。
【００２９】
また、本発明の水性液剤は紫外線吸収（紫外線照射による紅斑の抑制、日焼け防止など）、美肌、美白（しみ、そばかすなどの原因であるメラニン色素の沈着防止など）および抗シワを目的とし、またはその他の化粧品成分の安定化を目的として、ローション剤や化粧水などの化粧品としても使用される。化粧品として本発明の水性液剤を用いる場合、通常化粧品に用いられる成分を適宜添加させることができる。
【００３０】
【実施例】
次に、参考例および実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
【００３１】
参考例１  Ｎ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸ナトリウム
DL−α−リポ酸6.2gをクロロホルム60mLに溶かし、トリエチルアミン3.2gを加えて−5℃に冷却して置き、これにクロル炭酸エチル3.3gを徐々に滴下し、滴下終了15分後にこれにアミノエタンスルホン酸4.5gおよび水酸化ナトリウム1.5gをメタノール60mLに溶かしたものを一挙に加えて、その温度で15分間、さらに室温に戻して1時間攪拌させた。次に、これに水酸化ナトリウム1.5gをメタノール50mLに溶かした溶液を加えて、減圧下で溶媒を1/3になるまで濃縮させ、これにエタノール60mLを加えて析出した結晶を濾取した。これを水−メタノールから再結晶させて、目的化合物のナトリウム塩の白色結晶5.8gを得た。融点235〜237℃。TLC、Rf＝0.53（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝4:1:2）
【００３２】
元素分析：  C10H17NO4S3Na・H2Oとして
理論値：  C，34.08  H，5.43  N，3.97
実測値：  C，34.23  H，5.54  N，3.80
【００３３】
参考例２  Ｎ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸カリウム
参考例１の水酸化ナトリウムを水酸化カリウム4.0gに代えて参考例１と同様に反応処理してこれを水/メタノールから再結晶させて、目的化合物のカリウム塩の白色結晶6.5gを得た。融点240〜242℃。
【００３４】
参考例３  Ｎ−α−リポイルアミノエタンスルホン酸カルシウムおよびマグネシウム
参考例１で得られたナトリウム塩を水に溶かし、スルホン酸樹脂で脱塩して遊離酸として、これらに炭酸カルシウムまたは塩基性炭酸マグネシウムで、それぞれ中和させて、それぞれ水溶性のカルシウム塩またはマグネシウム塩を得た。それぞれ融点300℃以上。
【００３５】
参考例４  Ｎ−α−リポイル−６−アミノヘキサン酸ナトリウム
DL−α−リポ酸4.2gおよび６−アミノヘキサン酸3.0gを用いて、参考例１と同様に反応させエタノールから再結晶させて、目的化合物の黄色がかった白色結晶3.0gを得た。融点200〜202℃（分解）。TLC、Rf=0.84（クロロホルム：メタノール：水＝5:4:1)
【００３６】
参考例５  Ｎ−α−リポイルアスパラギン酸ジナトリウム
DL−α−リポ酸4.2gおよびＬ−アスパラギン酸2.9gを用いて、参考例１と同様に反応処理して、水/メタノールから再結晶させて、目的化合物の白色結晶4.5gを得た。融点300℃以上。TLC、Rf=0.47（クロロホルム：メタノール：水＝4:1:2）
【００３７】
参考例６  Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ−ｎ−酪酸ナトリウム
DL−α−リポ酸4.2gおよびγ−アミノ−ｎ−酪酸2.3gを用いて、参考例１と同様に反応処理して、エタノールから再結晶させて、目的化合物のナトリウム塩4.0gを得た。融点235℃付近から徐々に分解。TLC、Rf=0.76（クロロホルム：メタノール：水＝4:1:2）
【００３８】
参考例７  Ｎ−α−リポイルグリシンナトリウム
DL−α−リポ酸4.2gおよびグリシン1.9gを用いて、参考例１と同様に反応処理して、メタノール/エタノールから再結晶させて、目的化合物の淡黄色結晶4.5gを得た。融点218〜220℃（分解）。TLC、Rf=0.64（クロロホルム：メタノール：水＝4:1:2）
【００３９】
参考例８  Ｎ−α−リポイルフェニルアラニン
DL−α−リポ酸4.2gおよびＬ−フェニルアラニン3.5gを用いて、参考例１と同様に反応させ、溶媒を留去させた後、塩酸酸性として酢酸エチルで抽出し、水洗後、酢酸エチルを留去した。残渣結晶をエタノール／イソプロピルエーテルから再結晶させて、目的化合物の淡黄色結晶5.4gを得た。融点154〜156℃（分解）。TLC、Rf=0.86（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝4:1:2）
【００４０】
参考例９  Ｎ−α−リポイル−５−ハイドロキシトリプトファン
DL−α−リポ酸4.2gおよびＬ−５−ハイドロキシトリプトファン5.0gを用いて、参考例８と同様に反応処理して、目的化合物の白色結晶6.4gを得た。融点118〜120℃。TLC、Rf=0.85（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝4:1:2）
【００４１】
参考例１０  Ｎ−α−リポイルアントラニル酸ナトリウム
DL−α−リポ酸4.2gおよびアントラニル酸3.2gを用いて、参考例１と同様に反応処理して、目的化合物の白色結晶3.6gを得た。融点300℃以上。TLC、Rf=0.89（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝4:1:2）
【００４２】
参考例１１  Ｎ−α−リポイルメチオニン
DL−α−リポ酸4.2gおよびＬ−メチオニン3.5gを用いて、参考例８と同様に反応処理して、目的化合物の淡黄色結晶4.0gを得た。融点108〜109℃以上。TLC、Rf=0.81（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝4:1:2）
【００４３】
参考例１２  Ｎ−α−リポイルシステインナトリウム
DL−α−リポ酸4.2gおよびトリエチルアミン2.2gをテトラハイドロフラン60mLに溶解して−5℃に冷却して置き、攪拌下、これにクロル炭酸エチル2.3gを徐々に滴下し、滴下終了後、さらに６分後にＬ−システイン2.6gおよびトリエチルアミン2.5gを水20mLに溶かした溶液を加えて、参考例１と同様に反応させた後、塩酸酸性として酢酸エチルで抽出し水洗後、酢酸エチルを留去させ、残渣をエタノールに溶かし、これに水酸化ナトリウム／メタノール溶液を徐々に加えてpH7として析出する白色結晶を濾取し、水／エタノールから再結晶させて、目的化合物の白色結晶4.3gを得た。融点150℃付近から徐々に分解。TLC、Rf=0.72（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝4:1:2）
【００４４】
0004259813.tif 000003
上記基本処方に、亜硫酸水素ナトリウムを0%、0.01%、0.1%（w/v）になるように添加した。
その結果、30℃、１ヶ月後の臭気の程度は亜硫酸水素ナトリウム0%（w/v）の場合を＋4とすると、0.01、0.1%（w/v）でそれぞれ+1、0であった。
0004259813.tif 000004
【００４５】
一方、グルタチオンおよびシステインの水溶液の場合、亜硫酸塩を添加するとかえって臭気が増大した。
【００４６】
実施例２  注射剤
基本処方
α−リポイルアミノエタンスルホン酸ナトリウム          5.0g
Ｄ−マンニトール                                      2.0g
注射用蒸留水                                        全量100mL
上記基本処方にメタ重亜硫酸ナトリウム0%（w/v）および0.1%（w/v）になるように添加し、上記の基準で臭気の程度を評価した。
その結果、30℃、１ヶ月後の臭気の程度はメタ重亜硫酸ナトリウム0%（w/v）の場合を＋4とすると、0.1%（w/v）では0であった。
【００４７】
実施例３  点眼剤
Ｎ−α−リポイルシステインナトリウム                  0.5g
亜硫酸水素ナトリウム                                  0.1g
ホウ酸                                                0.7g
塩化ナトリウム                                        0.5g
ｐ−オキシ安息香酸メチル                              0.026g
ｐ−オキシ安息香酸プロピル                            0.014g
滅菌精製水                                          全量100mL
上記の基準で臭気の程度を評価した。30℃、１カ月後の臭気の程度は、実施例１と殆ど同じであった。
【００４８】
【発明の効果】
本発明のα−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩の安定化法によれば、硫化水素やメルカプタンなどの発生を効果的に抑制する。したがって、本発明の水性液剤は注射剤、点眼剤および化粧品などとして有利に用いられる。