(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
多糖誘導体を有効成分とする分離剤を用いた液体クロマトグラフィーによる光学異性体の分離において、逆相条件下で塩基性移動相を用いることを特徴とする光学異性体分離法。
【請求項２】
塩基性移動相が水と水溶性有機溶媒の混合液に塩基性化合物を添加した溶液である請求項１記載の光学異性体分離法。
【請求項３】
塩基性化合物が塩基性無機塩である請求項２記載の光学異性体分離法。
【請求項４】
塩基性無機塩がリン酸塩である請求項３記載の光学異性分離法。
【請求項５】
リン酸塩がＫ2ＨＰＯ4、Ｎａ3ＰＯ4又はこれらの混合物である請求項４記載の光学異性体分離法。
【請求項６】
塩基性無機塩がホウ酸塩である請求項３記載の光学異性分離法。
【請求項７】
ホウ酸塩がＮａ2Ｂ4Ｏ7 又はこれとＨ3ＢＯ3の混合物である請求項６記載の光学異性体分離法。
【請求項８】
多糖誘導体が多糖のカルバメート誘導体である請求項１〜７のいずれか一項に記載の光学異性体分離法。
【請求項９】
多糖のカルバメート誘導体がアミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）である請求項８記載の光学異性体分離法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、多糖誘導体を有効成分とする分離剤を用いた液体クロマトグラフィーによる光学異性体の分離法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
よく知られているように、化学的には同じ化合物であっても、その光学異性体は、通常、生体に対する作用を異にする。したがって、医薬、農薬、生化学関連産業の分野において、単位当たりの薬効向上、副作用・薬害防止などのために、光学的に純粋な化合物を調製することは極めて重要である。光学異性体の混合物を分離、すなわち光学分割するためには、優先晶出法、ジアステレオマー法、クロマトグラフィー法、酵素を用いる方法、分離膜を用いる方法などがある。なかでも、クロマトグラフィー法は、簡便に、効率よく光学分離ができるため、一般に広く採用されている。
【０００３】
光学分割のためのクロマトグラフィー法において、カラムに充填する分離剤としては、光学活性なポリメタクリル酸エステル、光学活性なポリアクリルアミド、光学活性なクラウン化合物、光学活性なアミノ酸誘導体、多糖誘導体などが挙げられる。なかでも、多糖誘導体を用いた分離剤は、分離能や汎用性に優れており、多くの化合物の光学分割に利用されている。これらの多糖誘導体を用いた分離剤は、米国特許第４，８１８，３９４号、米国特許第４，８６１，８７２号、米国特許第４，９１２，２０５号、米国特許第５，２０２，４３３号などに開示されている。
【０００４】
しかし、これらの多糖誘導体からなる分離剤を用いた光学分割条件は、たとえば、ヘキサン／２−プロパノール混液などの有機溶媒を移動相とするいわゆる順相条件が主である。しかるに、順相条件では、極性の強い化合物を溶離することは困難である。しかも、医薬品には極性の強い化合物が多くある。したがって、順相条件のみでは、全ての化合物に対して、十分な光学分割を行うことはできなかった。このため、逆相条件による光学分割法も、これ迄に開発されている。逆相条件下の移動相として、米国特許第４，８１８，３９４号にエタノール／水、特開平３−２７，３２６号公報に水溶性有機溶媒と水または各種塩類を含む緩衝液の混液が記載されている。しかしながら、これらの移動相は、中性または酸性の条件であって、この条件では、十分な光学分割ができない化合物が多くあった。
【０００５】
従って、本発明が解決しようとする課題は、従来の逆相条件では、十分に光学分割できなかった化合物を光学分割可能とする光学異性体分離法を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、鋭意研究を重ねた結果、逆相条件下で塩基性の移動相を用いることにより、上記の課題が解決されることを見出した。すなわち、本発明は、多糖誘導体を有効成分とする分離剤を用いた液体クロマトグラフィーによる光学異性体の分離において、逆相条件下で塩基性移動相を用いることを特徴とする光学異性体分離法である。
逆相条件とは水を含む移動相を用いることである。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明における多糖誘導体の原料となる多糖は、合成多糖、天然多糖、及び天然変性多糖のいずれかを問わず、光学活性であれば、いかなるものでもよいが、好ましいのは、高純度の多糖が容易に得られるセルロース、アミロース、β−１，４−キトサン、キチン、β−１，４−マンナン、β−１，４−キシラン、イヌリン、α−１，３−グルカン、β−１，３−グルカンである。これら多糖の数平均重合度（一分子中に含まれるピラノース環またはフラノース環の平均数）は、５以上であり、特に上限はないが、５００以下であることが取り扱いの容易さにおいて好ましい。
【０００８】
本発明に用いられる多糖誘導体は、上記多糖の有する水酸基上の水素原子の一部あるいは全部、好ましくは８５％以上を置換基で置換したもので、エステル誘導体、カルバメート誘導体、エーテル誘導体等が挙げられる。好ましいのはカルバメート誘導体であり、さらに好ましいのは芳香族カルバメート誘導体である。好ましい具体例として、アミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）、セルローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）、セルローストリス（４−メチルベンゾエート）などを挙げることができる。
【０００９】
上記の多糖誘導体を分離剤として用いるには、そのものを粒子状にするか、またはシリカゲルなどの担体に担持する。通常、担体に担持されたものが多く使用される。
【００１０】
本発明における塩基性の移動相は、水と水溶性有機溶媒の混合液に塩基性化合物を添加したものである。水と水溶性有機溶媒の混合割合は、水／水溶性有機溶媒＝90／10〜40／60（体積比）の範囲が好ましい。また塩基性化合物の添加量は水に対して10〜100 ミリモルが好ましい。
【００１１】
本発明に用いられる水溶性有機溶媒として好ましいのは、アセトニトリル、メタノール、エタノール、２−プロパノールなどである。塩基性化合物としては、無機化合物でも有機化合物でもよい。具体的には、リン酸塩、炭酸塩、ホウ酸塩などの塩基性無機塩、四級アンモニウム水酸化物、三級オキソニウム水酸化物、四級ホスホニウム水酸化物、二級ヨードニウム水酸化物などの水酸化物が挙げられる。中でも、Ｋ2ＨＰＯ4、Ｎａ3ＰＯ4又はこれらの混合物などの塩基性リン酸塩、Ｎａ2Ｂ4Ｏ7 又はこれとＨ3ＢＯ3の混合物などの塩基性ホウ酸塩が好ましい。
【００１２】
【発明の効果】
本発明により、従来の逆相条件では、十分に光学分割できなかった化合物が光学分割できるようになり、光学分割対象物の範囲が広がった。
【００１３】
【実施例】
以下、本発明を実施例および比較例によって詳述するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
なお、実施例、比較例中に用いられるパラメーターｋ' 及びαは以下のように定義される。
【００１４】
【数１】
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【００１５】
【数２】
0004320065.tif 000003
【００１６】
実施例１
移動相として、ｐＨ10 20ミリモルＫ2ＨＰＯ4−Ｎａ3ＰＯ4水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝70／30（体積比）の混合液を用いて、プロプラノロールの光学異性体を分離した。カラムとしては、アミローストリス（３，５−ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル上に担持した固定相を充填した長さ15ｃｍ、内径0.46ｃｍのステンレスカラムを用いた。移動相流速は0.5 ｍｌ／ｍｉｎ．、カラム温度は25℃とした。溶離する光学異性体の検出は紫外検出器を用い、波長は254 ｎｍとした。分離結果として、クロマトグラムを図１に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表１に示した。
【００１７】
比較例１
移動相として、Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ＝70／30（体積比）の混合液を用いて、プロプラノロールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図２に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表１に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００１８】
比較例２
移動相として、0.5 モルＮａＣｌＯ4水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝70／30（体積比）の混合液を用いて、プロプラノロールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図３に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表１に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００１９】
【表１】
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【００２０】
実施例２
移動相として、ｐＨ10 20ミリモルＫ2ＨＰＯ4−Ｎａ3ＰＯ4水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝70／30（体積比）の混合液を用いて、アルプレノロールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図４に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表２に示した。
【００２１】
比較例３
移動相として、Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ＝70／30（体積比）の混合液を用いて、アルプレノロールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図５に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表２に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００２２】
比較例４
移動相として、0.5 モルＮａＣｌＯ4水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝70／30（体積比）の混合液を用いて、アルプレノロールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図６に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表２に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００２３】
【表２】
0004320065.tif 000005
【００２４】
実施例３
移動相として、ｐＨ10 20ミリモルＫ2ＨＰＯ4−Ｎａ3ＰＯ4水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝70／30（体積比）の混合液を用いて、ピンドロールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図７に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表３に示した。
【００２５】
比較例５
移動相として、Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ＝70／30（体積比）の混合液を用いて、ピンドロールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図８に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表３に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００２６】
比較例６
移動相として、0.5 モルＮａＣｌＯ4水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝70／30（体積比）の混合液を用いて、ピンドロールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図９に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表３に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００２７】
【表３】
0004320065.tif 000006
【００２８】
実施例４
移動相として、ｐＨ９ 20ミリモルＮａ2Ｂ4Ｏ7−Ｈ3ＢＯ3水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝60／40（体積比）の混合液を用いて、ネホパムの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図１０に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表４に示した。
【００２９】
比較例７
移動相として、ｐＨ4.7  0.1モルＫＰＦ6水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝60／40（体積比）の混合溶媒を用いて、ネホパムの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図１１に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表４に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００３０】
【表４】
0004320065.tif 000007
【００３１】
実施例５
移動相として、ｐＨ９ 20ミリモルＮａ2Ｂ4Ｏ7−Ｈ3ＢＯ3水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝60／40（体積比）の混合液を用いて、クロルプレナリンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図12に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表５に示した。
【００３２】
比較例８
移動相として、ｐＨ4.7  0.1モルＫＰＦ6水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝60／40（体積比）の混合溶媒を用いて、クロルプレナリンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図１３に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表５に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００３３】
【表５】
0004320065.tif 000008
【００３４】
実施例６
移動相として、ｐＨ９ 20ミリモルＮａ2Ｂ4Ｏ7−Ｈ3ＢＯ3水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合液を用いて、メチキセンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図１４に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表６に示した。
【００３５】
比較例９
移動相として、ｐＨ4.7  0.1モルＫＰＦ6水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合溶媒を用いて、メチキセンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図１５に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表６に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００３６】
【表６】
0004320065.tif 000009
【００３７】
実施例７
移動相として、ｐＨ９ 20ミリモルＮａ2Ｂ4Ｏ7−Ｈ3ＢＯ3水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合液を用いて、ペリソキサールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図１６に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表７に示した。
【００３８】
比較例１０
移動相として、ｐＨ4.7  0.1モルＫＰＦ6水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合溶媒を用いて、ペリソキサールの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図１７に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表７に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００３９】
【表７】
0004320065.tif 000010
【００４０】
実施例８
移動相として、ｐＨ９ 20ミリモルＮａ2Ｂ4Ｏ7−Ｈ3ＢＯ3水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合液を用いて、トルペリソンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図１８に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表８に示した。
【００４１】
比較例１１
移動相として、ｐＨ4.7  0.1モルＫＰＦ6水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合溶媒を用いて、トルペリソンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図１９に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表８に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００４２】
【表８】
0004320065.tif 000011
【００４３】
実施例９
移動相として、ｐＨ９ 20ミリモルＮａ2Ｂ4Ｏ7−Ｈ3ＢＯ3水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合液を用いて、エペリソンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図２０に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表９に示した。
【００４４】
比較例１２
移動相として、ｐＨ4.7  0.1モルＫＰＦ6水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合溶媒を用いて、エペリソンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図２１に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表９に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００４５】
【表９】
0004320065.tif 000012
【００４６】
実施例１０
移動相として、ｐＨ９ 20ミリモルＮａ2Ｂ4Ｏ7−Ｈ3ＢＯ3水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合液を用いて、プロパフェノンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図２２に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表１０に示した。
【００４７】
比較例１３
移動相として、ｐＨ4.7  0.1モルＫＰＦ6水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合溶媒を用いて、プロパフェノンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図２３に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表１０に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００４８】
【表１０】
0004320065.tif 000013
【００４９】
実施例１１
移動相として、ｐＨ９ 20ミリモルＮａ2Ｂ4Ｏ7−Ｈ3ＢＯ3水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合液を用いて、プロフェナミンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図２４に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表１１に示した。
【００５０】
比較例１４
移動相として、ｐＨ4.7  0.1モルＫＰＦ6水溶液／ＣＨ3ＣＮ＝40／60（体積比）の混合溶媒を用いて、プロフェナミンの光学異性体を分離した。実験条件は実施例１と同様にした。分離結果として、クロマトグラムを図２５に示し、両エナンチオマーの保持時間、容量比及び分離係数を表１１に示した。両エナンチオマーは、分離できなかった。
【００５１】
【表１１】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例１で得たプロプラノロールのクロマトグラムである。
【図２】  比較例１で得たプロプラノロールのクロマトグラムである。
【図３】  比較例２で得たプロプラノロールのクロマトグラムである。
【図４】  実施例２で得たアルプレノロールのクロマトグラムである。
【図５】  比較例３で得たアルプレノロールのクロマトグラムである。
【図６】  比較例４で得たアルプレノロールのクロマトグラムである。
【図７】  実施例３で得たピンドロールのクロマトグラムである。
【図８】  比較例５で得たピンドロールのクロマトグラムである。
【図９】  比較例６で得たピンドロールのクロマトグラムである。
【図１０】  実施例４で得たネホパムのクロマトグラムである。
【図１１】  比較例７で得たネホパムのクロマトグラムである。
【図１２】  実施例５で得たクロルプレナリンのクロマトグラムである。
【図１３】  比較例８で得たクロルプレナリンのクロマトグラムである。
【図１４】  実施例６で得たメチキセンのクロマトグラムである。
【図１５】  比較例９で得たメチキセンのクロマトグラムである。
【図１６】  実施例７で得たペリソキサールのクロマトグラムである。
【図１７】  比較例１０で得たペリソキサールのクロマトグラムである。
【図１８】  実施例８で得たトルペリソンのクロマトグラムである。
【図１９】  比較例１１で得たトルペリソンのクロマトグラムである。
【図２０】  実施例９で得たエペリソンのクロマトグラムである。
【図２１】  比較例１２で得たエペリソンのクロマトグラムである。
【図２２】  実施例１０で得たプロパフェノンのクロマトグラムである。
【図２３】  比較例１３で得たプロパフェノンのクロマトグラムである。
【図２４】  実施例１１で得たプロフェナミンのクロマトグラムである。
【図２５】  比較例１４で得たプロフェナミンのクロマトグラムである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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