(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の性質を有する乳由来の塩基性タンパク質画分を有効成分とする、皮膚のコラーゲン産生促進作用を有する美肌剤。
1) ソジウムドデシルサルフェート−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）によると分子量 3,000〜80,000の範囲の数種のタンパク質よりなる。
2) 95重量％以上がタンパク質であって、その他少量の脂肪、灰分を含む。
3) タンパク質は主としてラクトフェリン及びラクトパーオキシダーゼよりなる。
4) タンパク質のアミノ酸組成は、リジン、ヒスチジン、アルギニン等の塩基性アミノ酸を15重量％以上含有する。
【請求項２】
乳由来の塩基性タンパク質画分が、乳または乳由来の原料を陽イオン交換樹脂に接触させて塩基性タンパク質を吸着させ、この樹脂に吸着した画分を塩濃度0.1M〜1Mの溶出液で溶出して得られる画分である請求項１記載の、皮膚のコラーゲン産生促進作用を有する美肌剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の乳由来の塩基性タンパク質画分をタンパク質分解酵素で分解して得られる塩基性ペプチド画分を有効成分とする、皮膚のコラーゲン産生促進作用を有する美肌剤。
【請求項４】
タンパク質分解酵素がペプシン、トリプシン、キモトリプシン及びパンクレアチンよりなる群から選択される少なくとも１種のタンパク質分解酵素である請求項３記載の、皮膚のコラーゲン産生促進作用を有する美肌剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚の荒れ、シワ、弾性低下等を防止するのに有用な美肌剤、美肌用飲食品及び化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、皮膚の老化に関する研究が進められ、皮膚老化の原因としてマクロ的には、加齢による新陳代謝の減衰によるもののほかに、太陽光(紫外線)、乾燥、酸化等の作用が複雑に関与していることが確認されてきた。これらの因子による作用によって、真皮の最も主要なマトリックス成分であるコラーゲン繊維が著名に減少していることが明らかとなってきた。コラーゲン繊維によって保たれていた皮膚のハリや、弾力性といった張力保持機構が紫外線等の作用によって、破壊されると、皮膚はシワやたるみを増し、老化した状態になる。また、コラーゲンはその分子中に水分を保持することができ、それにより、皮膚をしっとりとした状態に保つにも役立っているから、外的因子により、コラーゲンが破壊されると肌は、乾燥し、荒れた状態になる。
以上のことから、真皮層の重要な成分の一つであるコラーゲンの生合成を促進させることにより、皮膚の老化を防止でき、しかも安全性の点でも問題のない美肌剤が望まれていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、これらの問題点を鑑み、広く食品素材に含まれているコラーゲン産生促進作用を示す物質について、鋭意、探索を進めていたところ、乳由来の塩基性タンパク質画分あるいはその塩基性タンパク質画分をペプシンやパンクレアチンなどのタンパク質分解酵素で分解して得られる塩基性ペプチド画分が、皮膚のコラーゲン量を増加させることができることを見出した。そして、この塩基性タンパク質画分や塩基性ペプチド画分を美肌剤、美肌用飲食品及び化粧料の有効成分として利用できることを見出し、本発明を完成するに至った。
したがって、本発明は、この皮膚コラーゲン産生促進活性を有する乳由来の塩基性タンパク質画分あるいは塩基性ペプチド画分を有効成分とする美肌剤を提供することを課題とする。また、本発明は、これらの画分を配合した美肌用飲食品や化粧料を提供することを課題とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明の美肌剤の特徴は、乳由来の塩基性タンパク質画分あるいはその塩基性タンパク質画分をタンパク質分解酵素で分解して得られる塩基性ペプチド画分を有効成分とすることにある。この乳由来の塩基性タンパク質画分は、牛乳、人乳、山羊乳、羊乳など哺乳類の乳から得られるものであり、また、この塩基性ペプチド画分は、乳由来の塩基性タンパク質画分にタンパク質分解酵素を作用させて得ることができるものである。
【０００５】
この乳由来の塩基性タンパク質画分は、後述する試験例１〜４に示したように次の性質を有している。
1) ソジウムドデシルサルフェート−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）によると分子量 3,000〜80,000の範囲の数種のタンパク質よりなる。
2) 95重量％以上がタンパク質であって、その他少量の脂肪、灰分を含む。
3) タンパク質は主としてラクトフェリン及びラクトパーオキシダーゼよりなる。
4) タンパク質のアミノ酸組成は、リジン、ヒスチジン、アルギニン等の塩基性アミノ酸を15重量％以上含有する。
【０００６】
このような塩基性タンパク質画分は、例えば、脱脂乳や乳清などの乳原料を陽イオン交換樹脂と接触させて塩基性タンパク質を吸着させ、この樹脂に吸着した塩基性タンパク質画分を0.1M〜1Mの塩濃度の溶出液で溶出、この溶出画分を回収し、逆浸透(RO)膜や電気透析(ED)法などにより脱塩及び濃縮し、必要に応じて乾燥することにより得ることができる。
【０００７】
また、乳由来の塩基性タンパク質画分を得る方法としては、乳または乳由来の原料を陽イオン交換体に接触させて塩基性タンパク質を吸着させた後、この陽イオン交換体に吸着した塩基性タンパク質画分を、pH５を越え、イオン強度 0.5を越える溶出液で溶出して得る方法（特開平5-202098号公報）、アルギン酸ゲルを用いて得る方法（特開昭 61-246198号公報）、無機の多孔性粒子を用いて乳清から得る方法（特開平 1-86839号公報）、硫酸化エステル化合物を用いて乳から得る方法（特開昭 63-255300号公報）などが知られており、本発明では、このような方法で得られた塩基性タンパク質画分を用いることができる。
【０００８】
また、乳由来の塩基性ペプチド画分は、塩基性タンパク質画分と同様のアミノ酸組成を有しており、例えば、上記の方法で得られた乳由来の塩基性タンパク質画分にペプシン、トリプシン、キモトリプシンなどのタンパク質分解酵素を作用させ、さらに必要に応じ、パンクレアチンなどのタンパク質分解酵素を作用させることにより、平均分子量 4,000以下のペプチド組成物として得ることができる。
【０００９】
本発明の美肌剤は、経口投与或いは塗布で、美肌効果を発揮する。皮膚のハリや弾力性といった張力保持機構は、コラーゲン繊維によって保たれているが、紫外線等の作用によって、破壊されると、皮膚はシワやたるみを増し、老化した状態になる。また、コラーゲンはその分子中に水分を保持することができ、それにより、皮膚をしっとりとした状態に保つにも役立っているから、外的因子により、コラーゲンが破壊されると、肌は、乾燥し、荒れた状態になる。本発明の美肌剤は、真皮層の重要な成分の一つであるコラーゲンの生合成を促進させることにより、皮膚の老化や乾燥を防止する。
本発明の美肌剤を経口投与するに際しては、有効成分の乳由来の塩基性タンパク質画分あるいは塩基性ペプチド画分をそのままの状態で用いることもできるが、常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤などに製剤化して用いることもできる。さらには、これらの塩基性タンパク質画分や塩基性ペプチド画分をそのままあるいは製剤化した後、これを栄養剤や飲食品などに配合することも可能である。また、ビタミンＣなど従来からコラーゲン産生に有効な作用をもつと考えられている成分とともに塩基性タンパク質画分や塩基性ペプチド画分を配合すれば、いっそうの美肌作用が期待できる。なお、乳由来の塩基性タンパク質画分あるいは塩基性ペプチド画分は、比較的熱に対して安定なので、乳由来の塩基性タンパク質画分あるいは塩基性ペプチド画分を含む原料を通常行われるような条件で加熱殺菌することも可能である。
【００１０】
本発明の美肌剤を塗布するに際しては、その使用目的に応じて、通常用いられる公知の成分に配合することによって、液剤、固形剤、半固形剤等の各種剤形に調製することが可能で、好ましい組成物として軟膏、ゲル、クリーム、スプレー剤、貼付剤、ローション、粉末、顆粒剤、錠剤等が挙げられる。例えば、本発明の皮膚コラーゲン合成促進剤をワセリン等の炭化水素、ステアリルアルコール、ミリスチン酸イソプロピル等の高級脂肪酸低級アルキルエステル、ラノリン等の動物性油脂、グリセリン等の多価アルコール、グリセリン脂肪酸エステル、モノステアリン酸ポリエチレングリコールの界面活性剤、無機塩、蝋、樹脂、水および要すればパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸ブチル等の防腐剤に混合することによって、化粧品や医薬品を製造することができる。
【００１１】
本発明の美肌剤の経口投与による有効量は、年齢、治療効果及び病態などにより異なるが、ラットを用いた動物実験の結果によると、皮膚コラーゲン産生促進作用を示すためには塩基性タンパク質画分あるいは塩基性ペプチド画分をラット体重1kg当たり20mg以上摂取する必要があることが判った。したがって、通常、成人一人当たり一日20mg以上の塩基性タンパク質画分あるいは塩基性ペプチド画分を摂取すれば効果が期待できるので、この必要量を確保できるよう飲食品に配合したり、医薬として投与すれば良い。
【００１２】
本発明の美肌剤の塗布による有効量は、剤形により異なるが、適用する組成物全量を基準として好ましくは、0.001％〜2重量％となるように、塩基性タンパク質画分あるいは塩基性ペプチド画分を配合すればよい。ただし、入浴剤のように使用時に希釈されるものは、さらに配合量を増やすことができる。
次に、実施例及び試験例を示して本発明を詳細に説明する。
【００１３】
【実施例１】
陽イオン交換樹脂のスルホン化キトパール（富士紡績株式会社製）400gを充填したカラム（直径５cm×高さ30cm）を脱イオン水で十分洗浄した後、このカラムに未殺菌脱脂乳40リットル(pH 6.7)を流速25ml/minで通液した。通液後、このカラムを脱イオン水で十分洗浄し、 0.98M塩化ナトリウムを含む 0.02M炭酸緩衝液(pH 7.0)で樹脂に吸着した塩基性タンパク質画分を溶出した。そして、この溶出液を逆浸透(RO)膜により脱塩して、濃縮した後、凍結乾燥して粉末状の塩基性タンパク質画分 21gを得た。
【００１４】
【試験例１】
実施例１で得られた塩基性タンパク質画分について、ソジウムドデシルサルフェート−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)により測定したところ、分子量は 3,000〜80,000の範囲に分布していた。
【００１５】
【試験例２】
実施例１で得られた塩基性タンパク質画分について、成分組成を分析した。その結果を表１に示す。この表に示すとおり、この画分のほとんどはタンパク質である。
【００１６】
【表１】
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【００１７】
【試験例３】
実施例１で得られた塩基性タンパク質画分について、6N塩酸で 110℃、24時間加水分解した後、アミノ酸分析装置（L-8500型、日立製作所製） でそのアミノ酸組成を分析した。その結果を表２に示す。この塩基性タンパク質画分には、アミノ酸組成中15重量％以上の塩基性アミノ酸が含まれている。
【００１８】
【表２】
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【００１９】
【実施例２】
陽イオン交換樹脂のＳＰトーヨーパール（東ソー株式会社製）30kgを充填したカラム（直径 100cm×高さ10cm）を脱イオン水で十分洗浄した後、このカラムに121℃で30秒間加熱殺菌したチーズホエー3t(pH 6.2)を流速10リットル/minで通液した。通液後、このカラムを脱イオン水で十分洗浄し、0.9M塩化ナトリウムを含む0.1Mクエン酸緩衝液(pH 5.7)で樹脂に吸着した塩基性タンパク質画分を溶出した。そして、この溶出液を電気透析(ED)法により脱塩し、濃縮した後、凍結乾燥して粉末状の塩基性タンパク質画分183gを得た。
【００２０】
【実施例３】
実施例１で得られた塩基性タンパク質画分 50gを蒸留水10リットルに溶解した後、1％パンクレアチン（シグマ社製）を添加し、37℃で2時間反応させた。反応後、80℃で10分間加熱処理して酵素を失活させた後、塩基性ペプチド画分48.3g を得た。
【００２１】
【試験例４】
実施例１で得られた塩基性タンパク質画分および実施例３で得られた塩基性ペプチド画分について、ラットを用いた動物実験によりコラーゲン産生促進作用を調べた。7週齢のWistar系雄ラットを、生理食塩水投与群（A群）、実施例1で得られた塩基性タンパク質画分をラット体重1kg当たり20mg投与する群（B群）、実施例1で得られた塩基性タンパク質画分をラット体重1kg当たり200mg投与する群（C群）、実施例3で得られた塩基性ペプチド画分をラット体重1kg当たり20mg投与する群（D群）、実施例3で得られた塩基性ペプチド画分をラット体重1kg当たり200mg投与する群（E群）の5試験群（n=6）に分け、それぞれを毎日1回ゾンデで投与して10週間飼育した。
【００２２】
皮膚のコラーゲン量については、真皮をNimniらの方法(Arch. Biochem. Biophys, 292頁, 1967年参照)に準じて処理した後、可溶性画分に含まれるヒドロキシプロリン量を測定した。ヒドロキシプロリンはコラーゲンのみに含まれる特殊なアミノ酸で、コラーゲンを構成する全アミノ酸の約10％を占めることからコラーゲン量の推定ができる。(浅野隆司ら  Bio  Industory， 12頁, 2001年参照)その結果を表3に示す。
【００２３】
【表３】
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【００２４】
これによると、10週間後の可溶性画分中ヒドロキシプロリン量は、A群に比べ、B群、C群、D群およびE群で有意に高い値を示した。
このことから、塩基性タンパク質画分および塩基性ペプチド画分には皮膚コラーゲン産生促進作用があることが明らかとなり、美肌剤として有用であることが示唆された。
また、この皮膚コラーゲン産生促進作用は塩基性タンパク質画分または塩基性ペプチド画分をラット体重1kg当たり最低20mg投与した場合に認められることが明らかとなった。
【００２５】
【００２６】
【実施例４】
表４に示す組成の美肌用飲料を製造した。製造した飲料の風味は良好で、常温1年間保存によっても風味が劣化することはなく、沈殿等の問題もなかった。
【００２７】
【表４】
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【００２８】
【実施例５】
表５に示す組成のドウを作成し、成形した後、焙焼して美肌用ビスケットを製造した。
【００２９】
【表５】
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【００３０】
【実施例６】
表６に示す組成の美肌剤を製造した。
【００３１】
【表６】
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【００３２】
【試験例５】
実施例１で得られた塩基性タンパク質画分および実施例３で得られた塩基性ペプチド画分について、正常ヒト線維芽細胞株〔白人女性の皮膚より採取されたCCD45SK(ATCCRL  1506)〕を用いた実験によりコラーゲン産生促進作用を調べた。10容量％ウシ胎児血清(以下FBSと略記)含有MEM培地（大日本製薬社製、10‐101）を用いて、正常ヒト線維芽細胞株を4×104個/穴/0.4mlとなるように24穴プレートに播種して、5％炭酸ガス、飽和水蒸気下、37℃で24時間培養した後、0.6容量％FBS含有MEM培地に置換した。そして、実施例１で得られた塩基性タンパク質画分および実施例３で得られた塩基性ペプチド画分を、各ウェルに0.1容量％となるように添加して、24時間培養した後、β―アミノプロピオニトリルを50μg/mL、トリチウム-L-プロリンを1μCi/mlとなるように添加して、さらに24時間培養して培養液を得た。このようにして得られた培養液より、Websterらの方法(Analytical  Biochemistry,220頁,1979年参照)に従いコラーゲン画分を分画し、コラーゲン画分に取り込まれた放射能を測定した。なお、対照としては、塩基性タンパク質画分及び塩基性ペプチド画分を添加しないで同様の試験を行った。その結果を表７に示す。
【００３３】
【表７】
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【００３４】
これによると、塩基性タンパク質画分及び塩基性ペプチド画分を添加した群は、塩基性タンパク質画分及び塩基性ペプチド画分を添加していない群に比べて2倍程度のコラーゲン産生促進能を示した。
このことから、塩基性タンパク質画分および塩基性ペプチド画分には、皮膚線維芽細胞に働きかけ、コラーゲン産生促進作用があることが明らかとなり、美肌剤として有用であることが示唆された。
【００３５】
【実施例７】
表８に示す組成の化粧水を常法により製造した。
【００３６】
【表８】
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【００３７】
【実施例８】
表９に示す組成のクリームを常法により製造した。
【００３８】
【表９】
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【００３９】
【試験例６】
実施例７で得られた化粧水及び実施例８で得られたクリームを用いて、実使用テストを行った。比較品としては、実施例７及び８の配合で塩基性タンパク質画分を除いたものを用いた。
顔面のタルミや小ジワが認められる乾燥肌を有する成人女子40人を、それぞれ10人ずつ無作為に4群（A〜D群）に分け、A群の顔面には本発明品の化粧水を、B群の顔面には比較品の化粧水を、C群の手指には本発明品のクリームを、D群の手指には比較品のクリームを、それぞれ1日2回通常の使用状態と同様に塗布してもらった。その結果、本発明品の化粧水は、比較品の化粧水に比べて、乾燥感の改善、肌荒れ改善が顕著であり、美肌効果に優れていることが実証された。また、本発明品のクリームについても、比較品のクリームに比べて、顕著な改善がみられ、肌荒れなどの自然増悪抑制効果を有することが明らかとなった。
【００４０】
【発明の効果】
本発明の美肌剤、美肌用飲食品及び化粧水は、皮膚のコラーゲン産生を促進させる作用を有し、皮膚老化の予防や治療に有用である。