(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物がクリプトフィシン５５アセテート、クリプトフィシン５５スクシネート、クリプトフィシン５５（２’−ジ−ｔ−ブチルホスファチル）フェニルアセテート、クリプトフィシン５５（２’−ホスファチル）フェニルアセテート、クリプトフィシン５５ニコチノエート、クリプトフィシン５５ Ｎ−メチルピリジニウム、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−（Ｄ）−アラニネート、クリプトフィシン５５ ３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−（Ｄ）−アラニネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−グリシネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−ｂ−アラニネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−ｇ−アミノブチレート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−アラニネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｄ）−アラニネート、クリプトフィシン５５（Ｄ）−アラニネートおよびクリプトフィシン５５ Ｎａ−Ｎｅ−ジ−ｔ−Boc−（Ｌ）−リジネート、クリプトフィシン５５スクシネート tert−ブチルエステル、クリプトフィシン５５（２’−ジ−ｔ−ブチルホスファチル）フェニルアセテート、クリプトフィシン５５（２’−ホスファチル）フェニルアセテート、クリプトフィシン５５ニコチノエート、クリプトフィシン５５ Ｎ−メチルピリジニウム、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−（Ｄ）−アラニネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−フェニルアラニネート、クリプトフィシン５５（Ｌ）−フェニルアラニネート、クリプトフィシン５５（Ｌ）−ヒスチジネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−プロリネート、クリプトフィシン５５（Ｌ）−プロリネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−グリシネート、クリプトフィシン５５グリシネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−β−アラニネート、クリプトフィシン５５ β−アラニネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−γ−アミノブチレート、クリプトフィシン５５ γ−アミノブチレート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−アラニネート、クリプトフィシン５５（Ｌ）−アラニネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｄ）−アラニネート、クリプトフィシン５５（Ｄ）−アラニネート、クリプトフィシン５５ Ｎα−Ｎε−ジ−ｔ−Boc−（Ｌ）−リジネート、クリプトフィシン５５（Ｌ）−リジネート、クリプトフィシン５５ Ｎα−Ｎε−ジ−ｔ−Boc−（Ｄ）−リジネート、クリプトフィシン５５（Ｄ）−リジネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−γ−ｔ−ブチルエステル−（Ｌ）−グルタメート、クリプトフィシン５５（Ｌ）−α−グルタメート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−β−ｔ−ブチルエステル−アスパルテート、クリプトフィシン５５（Ｄ）−アスパルテート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−α−ｔ−ブチルエステル−（Ｌ）−グルタメート、クリプトフィシン５５（Ｌ）−γ−グルタメート、クリプトフィシン５５ Ｎ，Ｎ’−ジ−ｔ−Boc−（Ｓ）−２，３−ジアミノプロピオネート、クリプトフィシン５５（Ｓ）−２，３−ジアミノプロピオネート、クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−セリネート、クリプトフィシン５５（Ｌ）−セリネート��よびクリプトフィシン５５スクシネートからなる群から選択され、クリプトフィシン５５は下記構造によって示される化合物または製薬的に許容されるその塩。
【化１】
0004364944.tif 000385
【請求項２】
化合物が、下記式で示される、クリプトフィシン１２９、
【化２】
0004364944.tif 000386
下記式で示される、クリプトフィシン１３８、
【化３】
0004364944.tif 000387
下記式で示される、クリプトフィシン１３９、
【化４】
0004364944.tif 000388
下記式で示される、クリプトフィシン１４５、
【化５】
0004364944.tif 000389
下記式で示される、クリプトフィシン１４０および
【化６】
0004364944.tif 000390
下記式で示される、クリプトフィシン１４１
【化７】
0004364944.tif 000391
からなる群から選択される化合物または製薬的に許容されるその塩。
【請求項３】
化合物が、下記式で示される、クリプトフィシン１５２、
【化８】
0004364944.tif 000392
下記式で示される、クリプトフィシン１６０、
【化９】
0004364944.tif 000393
下記式で示される、クリプトフィシン２５５、
【化１０】
0004364944.tif 000394
下記式で示される、クリプトフィシン１５３、
【化１１】
0004364944.tif 000395
下記式で示される、クリプトフィシン１５４、
【化１２】
0004364944.tif 000396
下記式で示される、クリプトフィシン１６１、
【化１３】
0004364944.tif 000397
下記式で示される、クリプトフィシン２３４、
【化１４】
0004364944.tif 000398
下記式で示される、クリプトフィシン２３６、
【化１５】
0004364944.tif 000399
下記式で示される、クリプトフィシン２４７、
【化１６】
0004364944.tif 000400
下記式で示される、クリプトフィシン２５１および
【化１７】
0004364944.tif 000401
下記式で示される、クリプトフィシン２３８
【化１８】
0004364944.tif 000402
からなる群から選択される化合物または製薬的に許容されるその塩。
【発明の詳細な説明】
本発明は医薬および有機化学分野に関するものであり、抗微小管物質として有用な新規クリプトフィシン（cryptophycin）化合物群を提供する。
細胞成長の正常な制御下にない細胞の増殖によって特徴付けられる新生物疾患はヒトおよび他の哺乳類における主要な死亡原因である。ガン化学療法での臨床経験から、これらの疾患の処置のために新規でより有効な薬物が望まれることが示された。
真核細胞の微小管系は細胞骨格の主要な成分であり、動的な集合体および解離体である；これはチューブリンのヘテロ二量体であり、ポリマー化され、微小管を形成する。微小管は細胞構成、代謝および分裂の調節の鍵となる役割を果たしている。微小管の動的な状態はその正常な機能に不可欠である。細胞分裂に関して、チューブリンはポリマー化して微小管となり、有糸分裂紡錘体を形成する。
有糸分裂紡錘体の使用が完了すると、微小管は脱ポリマー化される。したがって、微小管のポリマー化または脱ポリマー化を乱し、それにより有糸分裂を阻害する物質は臨床で使用する最も有効ないくつかのガン化学治療剤を構成する。
さらに、本明細書中に特許請求している化合物は同様に、殺真菌性の性質を有している。さらに微小管系の崩壊能を有するこれらの物質は研究目的に有用である。
クリプトフィシン化合物の一部は文献に既知である；しかし、ほとんどの医薬用途には、より高い可溶性および安定性を有するクリプトフィシン化合物が望まれる。さらにクリプトフィシン化合物のより広いライブラリーはガン患者に別の処置の選択を提供できる。発明者らは現在、より多大な水溶性を提供でき、ならびに微小管系の崩壊能を有する新規化合物を発見した。本発明の化合物は新生物の処置に有用であり得る。この化合物は全合成方法を用いて製造でき、それゆえ医薬的に有用な物質として開発するのに非常に適している。
特許請求している本発明は式Ｉ：
0004364944.tif 000002
［Ａｒはフェニル、単純非置換芳香族、単純置換芳香族、置換ヘテロ芳香族基、非置換ヘテロ芳香族基、ヘテロサイクリック、Ｃ1−Ｃ12アルキル、Ｃ2−Ｃ12アルケニル、Ｃ2−Ｃ12アルキニル、ＮＲ51Ｒ52、ＣＯＲ52、ＯＲ53および式Ａｒ’：
0004364944.tif 000003
からなる群から選択され；
Ｒ51は水素およびＣ1−Ｃ3アルキルからなる群から選択され；
Ｒ52は水素およびＣ1−Ｃ3アルキルからなる群から選択され；
Ｒ53はＣ1−Ｃ12アルキルからなる群から選択され；
Ｒ54は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキル（Ｒ57’Ｒ57”Ｒ57”’）、単純非置換芳香族、単純置換芳香族、ヘテロサイクリック、フェニル、ハロゲン、４−（tert−ブチルジメチルシロキシ）ベンジルトリフェニルホスホニウム、ＣＯＯＲ57、ＰＯ3Ｈ、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｒ58、Ｎ（Ｒ59）Ｒ60、ＮＨＯＲ61、ＮＨＣＨＲ61’、ＣＮ、ＮＯ2、ハロゲン、ＯＲ62、ＣＨ2（Ｏ）Ｒ62’、−ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）Ｒ95、ＣＨ2Ｎ（Ｒ96）Ｒ96’、ＣＯＲ100、（Ｃ1−Ｃ6アルキル）ＯＲ100、
0004364944.tif 000004
およびＳＲ63からなる群から選択され；
Ｒ95は−Ｒ98ＮＨ2からなる群から選択され；
Ｒ96およびＲ96’は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、−Ｒ97ＮＨ2および−Ｒ99ＮＲ99’Ｒ99’’からなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｒ97はＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ98はＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ99はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ99’およびＲ99’’は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｒ100は水素およびＳｉ（Ｒ101Ｒ102Ｒ103）からなる群から選択され；
Ｒ101はＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ102はＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ103はＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ104はＣ（Ｏ）Ｃ1−Ｃ6アルキルＮ（Ｒ106）（Ｒ59）Ｒ60、Ｃ（Ｏ）Ｃ1−Ｃ6アルキルＮ+、縮合ビサイクリックおよびＮＨＲ105Ｎ（Ｒ106）（Ｒ59）Ｒ60からなる群から選択され；
Ｒ105はＣ（Ｏ）Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ106は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ（Ｏ）ＯＲ107からなる群から選択され；
Ｒ107は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、ＣＲ108Ｒ109Ｒ110からなる群から選択され；
Ｒ108は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ109は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ110は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ111は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよびＣ（Ｏ）ＯＲ107からなる群から選択され；
Ｒ55は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ（Ｒ57’Ｒ57”Ｒ57”’）、単純非置換芳香族、単純置換芳香族、フェニル、ＣＯＯＲ57、ＰＯ3Ｈ、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｒ58、ＮＲ59Ｒ60、ＮＨＯＲ61、ＮＨＣＨＲ61’、ＣＮ、ＮＯ2、ハロゲン、ＯＲ62およびＳＲ63からなる群から選択され；
Ｒ56は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ（Ｒ57’Ｒ57”Ｒ57”’）、単純非置換芳香族、単純置換芳香族、フェニル、ＣＯＯＲ57、ＰＯ3Ｈ、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｒ58、ＮＲ59Ｒ60、ＮＨＯＲ61、ＮＨＣＨＲ61’、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルＮＲ59Ｒ60、ＣＮ、ＮＯ2、ハロゲン、ＯＲ104、ＣＲ104、ＯＲ62およびＳＲ63からなる群から選択され；
Ｒ57は水素およびＣ1−Ｃ12アルキルからなる群から選択され；
Ｒ57’は水素、ハロゲンおよびＣ1−Ｃ12アルキルからなる群から選択され；
Ｒ57”は水素、ハロゲンおよびＣ1−Ｃ12アルキルからなる群から選択され；
Ｒ57”’は水素、ハロゲンおよびＣ1−Ｃ12アルキルからなる群から選択され；
Ｒ58は水素およびＣ1−Ｃ12アルキルからなる群から選択され；
Ｒ59は水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、tert−ブトキシカルボニル、カルボ−tert−ブトキシ（ｔ−ＢＯＣ）およびフルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群から選択され；
Ｒ60は水素および（Ｃ1−Ｃ6）アルキルからなる群から選択され；
Ｒ61は水素、ＯＲ64、ＣＨ2ＮＨＲ65、ＮＨＲ65’およびフルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群から選択され；
Ｒ61’は水素、ＯＲ64、ＣＨ2ＮＨＲ65、ＮＨＲ65’およびフルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群から選択され；
Ｒ62は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ62’は水素、ＯＨ、ＯＲ62およびＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ63は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ64は水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＣＨ2ＮＲ66Ｒ67からなる群から選択され；
Ｒ65は水素およびＣ1−Ｃ6アルキル、ＮＨ2およびフルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群から選択され；
Ｒ65’は水素およびＣ1−Ｃ6アルキル、ＮＨ2およびフルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群から選択され；
Ｒ66は水素およびＣ1−Ｃ6アルキル、およびフルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群から選択され；
Ｒ67は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルからなる群から選択され；
Ｒ1およびＲ2はハロゲン、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、アルキルチオ、ジアルキルスルホニウム、硫酸、リン酸、ＯＲ31、ＳＲ31、ＮＲ31、ＯＨ、ＳＨ、ＮＲ92、Ｒ93、ＮＲ94およびＮＨ2からなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｒ92、Ｒ93およびＲ94はＣ1−Ｃ6アルキルからなる群からそれぞれ独立して選択され；
ただし、Ｒ1およびＲ2からなる群から選択されるいずれか一方の基は、ＯＲ31、ＳＲ31、Ｒ31、ＯＨおよびＳＨからなる群から選択され；あるいは
Ｒ1およびＲ2はＣ−１８およびＣ−１９とともにいっしょになってエポキシド環、アジリジン環、エピスルフィド環、硫酸環、シクロプロピル環またはモノ（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−リン酸環を形成することもあり；あるいは
Ｒ1およびＲ2はいっしょになって、Ｃ−１８およびＣ−１９間に第２の結合を形成することもあり；
Ｒ3は低級アルキル基であり；
Ｒ4はＨまたはＯＨであり；
Ｒ5はＨまたはＯＨであり；
Ｒ4およびＲ5はいっしょになって、Ｃ13およびＣ14間に第２の結合を形成することもあり；
Ｒ6はベンジル、ヒドロキシベンジル、アルコキシベンジル、ハロヒドロキシベンジル、ジハロヒドロキシベンジル、ハロアルコキシベンジルまたはジハロアルコキシベンジル基、Ｂ環ヘテロ芳香族、置換ヘテロ芳香族、Ｂ環（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ3−Ｃ8）シクロアルキル、置換Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル、置換（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、式ＩＩＩ’：
0004364944.tif 000005
で示される基および式ＩＩＩ’’：
0004364944.tif 000006
で示される基からなる群から選択される置換分であり；
Ｒ7はＮＲ51Ｒ52、Ｒ53ＮＲ51Ｒ52、ＯＲ53、Ｈおよび低級アルキル基からなる群から選択され；
Ｒ51およびＲ52はＣ1−Ｃ3アルキルからなる群から独立して選択され；
Ｒ53はＣ1−Ｃ3アルキルであり；
Ｒ8はＨまたは低級アルキル基であり；あるいは
Ｒ7およびＲ8はシクロプロピル環を形成でき；
Ｒ9はＨ、低級アルキル基、不飽和低級アルキル、低級アルキル−Ｃ3−Ｃ5シクロアルキルおよびベンジルからなる群から選択され；
Ｒ10はＨまたは低級アルキル基であり；
Ｒ11は水素、ＯＨ、低級アルキル基、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジルおよびフェニルからなる群から選択され；
Ｒ14は水素および低級アルキルからなる群から選択され；
Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は水素、ＯＲ18、ハロ、ＮＲ18’Ｒ19’、ＮＯ2、ＯＰＯ3Ｈ2、ＯＲ19フェニル、ＳＣＨ2フェニル、ＣＯＮＨ2、ＣＯ2Ｈ、ＰＯ3Ｈ2、ＳＯ2Ｒ23およびＺＺからなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｒ18は水素、アリール、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ90およびフルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）からなる群から選択され；
Ｒ18’は水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルおよびＣ（Ｏ）Ｒ90’からなる群から選択され；
Ｒ19はＣ1−Ｃ6アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ90”およびフルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）であり；
Ｒ19’は水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルおよびＣ（Ｏ）Ｒ90”’からなる群から選択され；
Ｒ90、Ｒ90’、Ｒ90”およびＲ90”’は水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、ＯＲ91およびアリールからなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｒ91’は（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、アリールおよび水素からなる群から選択され；
Ｒ23は水素および（Ｃ1−Ｃ3）アルキルからなる群から選択され；
Ｒ30は水素またはＣ1−Ｃ6アルキルであり；あるいは
Ｒ30はＣ−１１におけるＮといっしょになって３〜７員サイクリック環を形成することもあり；
Ｒ31はＰ、Ｓ、（Ｃ1−Ｃ12）アルキル、Ｂ、Ｒ32およびＳｉからなる群から選択され；
Ｒ32はアミノ酸、炭水化物、アミノ糖、（サッカライド）q、Ｃ（Ｏ）Ｒ33および
0004364944.tif 000007
からなる群から選択され；
Ｒ33はＲ37Ｒ38、Ｒ38、Ｒ37Ｎ（Ｒ20’）Ｒ38、Ｒ37Ｎ（Ｒ20’）（Ｃ1−Ｃ6）アルキルＣ（Ｏ）Ｒ38、Ｒ37Ｎ（Ｒ20’）Ｃ（Ｏ）Ｒ38、Ｒ37Ｏ（Ｃ1−Ｃ6）アルキルＯ（Ｃ1−Ｃ6）アルキルＯ（Ｃ1−Ｃ6）アルキルＯ（Ｃ1−Ｃ6）アルキルおよびＲ37（ＮＲ18’Ｒ20’）Ｒ38からなる群から選択され；
Ｒ20’は水素、Ｃ1−Ｃ6アルキルおよび−ＣＯ2Ｒ21’からなる群から選択され；
Ｒ21’は水素および（Ｃ1−Ｃ6）アルキルからなる群から選択され；
Ｒ34は（Ｃ1−Ｃ4）アルキルであり；
Ｒ35は水素または（Ｃ1−Ｃ3）アルキルであり；
Ｒ36は水素、ＯＨ、ハロ、（Ｃ1−Ｃ3）アルキル、ＯＲ34、ＮＯ2、ＮＨ2およびヘテロ芳香族であり；
Ｒ37は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり；
Ｒ38はＣＯＯＲ39、
0004364944.tif 000008
ＮＨ2、（ＮＲ18’Ｒ20’）、ヘテロサイクリック、ヘテロ芳香族、ＯＨ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルおよびアミノ酸であり；
Ｒ39はＨまたは（Ｃ1−Ｃ6）アルキルであり；
Ｒ40、Ｒ41およびＲ42は水素、ＯＲ43、ハロ、ＮＨ2、ＮＯ2、ＯＰＯ（ＯＲ46）2、−ＯＲ44フェニルおよびＲ45からなる群からそれぞれ独立して選択され；
Ｒ43はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ44はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ45は非置換単純芳香族基および置換単純芳香族基からなる群から選択され；
Ｒ46はＨ、Ｎａ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルおよび−Ｃ（ＣＨ3）3からなる群から選択され；
Ｒ50は水素または
0004364944.tif 000009
であり；
ｎは０、１または２であり；
ｍは０、１または２であり；
ｐは０、１または２であり；
ｑは２、３または４であり；
ＸはＯ、Ｃ、Ｓ、ＮＨおよびアルキルアミノからなる群から選択され；
ＹはＣ、Ｏ、ＮＨ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2およびアルキルアミノからなる群から選択され；
Ｚは−（ＣＨ2）n−、−（ＣＨ2）p−Ｏ−（ＣＨ2）m−および（Ｃ3−Ｃ5）シクロアルキルからなる群から選択され；
ＺＺは単純非置換芳香族基および単純置換芳香族基からなる群から選択され；
ただし、Ｒ1がハロゲン、ＯＨ、ＯＲ31、ＳＨ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、アルキルチオ、ジアルキルスルホニウム、硫酸およびリン酸からなる群から選択され；
Ｒ2がＯＨ、ＮＨ2、ＮＲ31およびＳＨからなる群から選択され、あるいはＲ1およびＲ2がいっしょになってエポキシド環、アジリジン環、エピスルフィド環、硫酸環、シクロプロピル環またはモノアルキルリン酸環を形成し、あるいはＲ1およびＲ2がいっしょになって第２の結合を形成し；
Ｒ3が低級アルキルであり；
Ｒ4およびＲ5がＨであり、あるいはＲ4およびＲ5がいっしょになってＣ13およびＣ14間に二重結合を形成し；
Ｒ6がベンジル、ヒドロキシベンジル、アルコキシベンジル、ハロヒドロキシベンジル、ジアハロヒドロキシベンジル、ハロヒドロキシベンジルまたはジハロヒドロキシベンジルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9およびＲ10がそれぞれ独立してＨまたは低級アルキル基であり；ならびに
ＸおよびＹがそれぞれ独立してＯ、ＮＨまたはアルキルアミノであり；ならびに
Ｒ50が
0004364944.tif 000010
であり；
Ｒ11が水素である場合は、
ＡｒはＣ1−Ｃ12アルキル、Ｃ1−Ｃ12アルキニル、フェニル、単純非置換芳香族、置換芳香族、非置換ヘテロ芳香族および置換ヘテロ芳香族からなる群から選択されることはなく；あるいは
ＡｒがＣ1−Ｃ12アルキル、Ｃ1−Ｃ12アルキニル、フェニル、単純非置換芳香族、置換芳香族、非置換ヘテロ芳香族および置換ヘテロ芳香族からなる群から選択され；ならびに
Ｒ50が
0004364944.tif 000011
であり；ならびに
Ｒ11が水素である場合は、
Ｒ2はハロゲン、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、アルキルチオ、ジアルキルスルホニウム、硫酸、リン酸、ＯＲ31およびＳＲ31からなる群から選択され；あるいは
Ｒ1がハロゲン、ＯＨ、ＯＲ31、ＳＨ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、アルキルチオ、ジアルキルスルホニウム、硫酸およびリン酸からなる群から選択され；ならびに
Ｒ2がＯＨ、ＮＨ2、ＮＲ31およびＳＨからなる群から選択され；あるいは
Ｒ1およびＲ2がいっしょになってエポキシド環、アジリジン環、エピスルフィド環、硫酸環、シクロプロピル環またはモノアルキルリン酸環を形成し；あるいは
Ｒ1およびＲ2がいっしょになって第２の結合を形成し；ならびに
Ｒ3が低級アルキルであり；ならびに
Ｒ4がＨであり；ならびに
Ｒ5がＨであり；ならびに
Ｒ50が水素であり；ならびに
Ｒ11が水素である場合は、
ＡｒはＣ1−Ｃ12アルキル、Ｃ1−Ｃ12アルキニル、フェニル、単純非置換芳香族、置換芳香族およびヘテロ芳香族からなる群から選択されることはなく；あるいは
Ｒ1がハロゲン、ＯＨ、ＯＲ31、ＳＨ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、アルキルチオ、ジアルキルスルホニウム、硫酸およびリン酸からなる群から選択され；ならびに
Ｒ2がＯＨ、ＮＨ2、ＮＲ31およびＳＨからなる群から選択され；あるいは
Ｒ1およびＲ2がいっしょになってエポキシド環、アジリジン環、エピスルフィド環、硫酸環、シクロプロピル環またはモノアルキルリン酸環を形成し；あるいは
Ｒ1およびＲ2がいっしょになって第２の結合を形成し；ならびに
Ｒ3が低級アルキルであり；ならびに
Ｒ4がＨであり；ならびに
Ｒ5がＨであり；ならびに
Ｒ50が水素であり；ならびに
Ｒ11が水素であり；あるいは
Ｒ50が
0004364944.tif 000012
および水素からなる群から選択され；ならびに
Ｒ11がＯＨ、低級アルキル基、置換フェニル、ベンジル、置換ベンジルおよびフェニルからなる群から選択される場合は、
ＡｒはＣ1−Ｃ12アルキル、Ｃ1−Ｃ12アルキニル、フェニル、単純非置換芳香族、置換芳香族、置換ヘテロ芳香族および非置換ヘテロ芳香族からなる群から選択されることはなく；あるいは
Ｒ3が低級アルキル基であり；
Ｒ4およびＲ5がＨであり、あるいは
Ｒ4およびＲ5がいっしょになってＣ13およびＣ14間に二重結合を形成し；
Ｒ6がベンジル、ヒドロキシベンジル、アルコキシベンジル、ハロヒドロキシベンジル、ジハロヒドロキシベンジル、ハロヒドロキシベンジルまたはジハロヒドロキシベンジルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9およびＲ10がそれぞれ独立してＨまたは低級アルキル基であり；ならびに
ＸおよびＹがそれぞれ独立してＯ、ＮＨまたはアルキルアミノであり；ならびに
Ａｒが式Ａｒ’であり；ならびに
Ｒ54、Ｒ55、Ｒ56の１つがアルキルまたはハロゲンからなる群から選択され；ならびに
Ｒ1およびＲ2がいっしょになってエポキシド環、アジリジン環、エピスルフィド環、硫酸環、シクロプロピル環またはモノアルキルリン酸環を形成することもあり；あるいは
Ｒ1およびＲ2がいっしょになってＣ18およびＣ19間に第２の結合を形成することもあり；あるいは
Ｒ2がＯＨおよびＳＨからなる群から選択される場合は、
Ｒ54、Ｒ55およびＲ56の少なくとも２つはＣ1−Ｃ6アルキル、単純芳香族、フェニル、ＣＯＯＲ57、ＰＯ3Ｈ、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ2Ｒ58、ＮＲ59Ｒ60、ＮＨＯＲ61、ＮＨＣＨＲ61’、ＣＮ、ＮＯ2、ハロゲン、ＯＲ62およびＳＲ63からなる群から選択されなければならず；あるいは
Ｒ3が低級アルキルであり；
Ｒ4およびＲ5がＨであり、あるいは
Ｒ4およびＲ5がいっしょになってＣ13およびＣ14間に二重結合を形成し；
Ｒ6がＢ環ヘテロ芳香族、置換ヘテロ芳香族、Ｂ環（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ3−Ｃ8）シクロアルキル、置換Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル、置換（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、式ＩＩＩ’：
0004364944.tif 000013
で示される基および式ＩＩＩ’’：
0004364944.tif 000014
であり；ならびに
ＸおよびＹがそれぞれ独立してＯ、ＮＨまたはアルキルアミノである場合は、
Ａｒはフェニルまたは単純非置換もしくは置換芳香族もしくはヘテロ芳香族基、Ｃ1−Ｃ12アルキルおよびＣ1−Ｃ12アルキニルからなる群から選択されることはない］
で示される新規クリプトフィシン化合物または製薬的に許容されるその塩もしくは溶媒和物を提供する。
本発明は医薬製剤、有効量の式Ｉの化合物を用いて微小管系を崩壊させる方法、有効量の式Ｉの化合物を投与することを特徴とする哺乳類細胞の増殖を阻害する方法および有効量の式Ｉの化合物を投与することを特徴とする哺乳類の新生物の処置方法を提供する。
また、真菌に感染しているか、あるいは感染しやすい動物に抗真菌的に有効な量の式Ｉの化合物を投与することを特徴とする真菌感染の制御方法を提供する。
本明細書中に用いる用語「単純アルキル」は飽和または不飽和の、分枝鎖または直鎖であってもよいＣ1−Ｃ7アルキルを示すものとする。決してこれらに限定するものではないが、その例としてはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、プロペニル、エテニル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、メチル化されたブチル基、ペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、メチル化されたペンチル基、その他も包含する。用語「アルケニル」は二重結合を１個から３個有する前記定義のアルキル基を示す。用語「アルキニル」は少なくとも１個の三重結合を有する前記定義のアルキル基を示す。アルキニルが三重結合を１個だけを有するのは特に好ましい。ｎ’が２から１２までの整数である用語Ｃ1−Ｃn’アルキルは１個から指定された数までの炭素原子を有するアルキル基を意味する。このＣ1−Ｃn’アルキルは直鎖または分枝鎖であり得る。
本明細書中に用いる用語「Ｂ環Ｃ1−Ｃ6アルキル」は、Ｂ環Ｃ1−Ｃ6アルキル基が３個までの非炭素置換分を含んでいてもよい飽和、不飽和、分岐鎖および直鎖アルキルを表す。このような非炭素置換分はＯＨ、ＳＣＨ2フェニル、ＮＨ2、ＣＯ、ＣＯＮＨ2、ＣＯ2Ｈ、ＰＯ3Ｈ2、ＳＯ2Ｒ21（ここにＲ21は水素およびＣ1−Ｃ3アルキルから選択される）からなる群から選択されるのが好ましい。
本明細書中に用いる用語「アミノ酸」はアミノ基を含む有機酸を意味する。この用語は天然起源および合成の両方のアミノ酸を包含するので、そのアミノ基は必ずしもそうでなくてもよいが、酸の隣に結合する炭素に結合することができる。このアミノ酸置換分は有機酸官能基を経て母核分子に結合する。
本明細書中に用いる用語「炭水化物」は炭素、水素、および酸素からなる一群の置換基を示すが、その水素と酸素との比率は水と同じ比率であるか、または水と同じ比率に近いものである。用語「炭水化物」はさらにアルデヒドまたはケトン−アルコールであるか、または加水分解によってアルデヒドまたはケトンを産生する化合物を示す。用語「炭水化物」は当業者が一般に理解するものである。この用語は決してこれに限定するものではないが、例えばＣ12Ｈ22Ｏ11およびＣ6Ｈ10Ｏ5なども示す。
本明細書中に用いる用語「アミノ糖」は炭水化物分子上の可能な位置のどこかにアミノ置換分を１個から３個含有する炭水化物基を示す。
本明細書中に用いる用語「サッカライド」は二糖類または多糖類を形成するための炭水化物サブユニットを示す。この用語は決してこれに限定するものではないが、例えば乳糖、麦芽糖、ショ糖、果糖、澱粉、その他も意味する。
本明細書中に用いる用語「置換フェニル」は単純アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦおよびＩからなる群から独立に選択されたものであってもよい非水素置換分を１個から３個を有するフェニル基を示すものとする。
本明細書中に用いる用語「置換ベンジル」は単純アルキル、Ｃｌ、Ｂｒ、ＦおよびＩからなる群から独立に選択されたものであってもよい非水素置換分を１個から３個を有するベンジル基を示し、これらの置換分は可能な炭素原子のいずれに結合していてもよいものとする。いくつかの好ましい置換ベンジルを同様に記載する。本明細書中に用いる用語「アルコキシベンジル」はベンジル環の利用可能ないずれかの位置にアルコキシ置換分を有するベンジル基を表す。アルコキシ基は−）（Ｃ1−Ｃ3）アルキルであるのが最も好ましい。メトキシは特に好ましい。したがって、用語「ハロアルコキシベンジル」は、アルコキシ置換分に加えてハロ置換分を有するベンジル基を表す。それぞれのハロまたはアルコキシ基は利用可能ないずれかの炭素の位置に置換している。同様に、「ハロヒドロキシベンジル」はベンジル環の利用可能ないずれかの炭素においてハロ置換分をも有しているヒドロキシ置換ベンジル基を表す。最後に、用語「ジハロアルコキシベンジル」はベンジル環の利用可能ないずれかの炭素の位置でそれぞれ独立して置換している２個のハロ置換分をさらに有するアルコキシ置換ベンジルを表す。
本明細書中に用いる「Ｂ環ヘテロ芳香族基」は酸素、窒素および硫黄からなる群から選択される１個またはそれ以上の非炭素置換分を含有している芳香族環を表す。特に好ましいＢ環ヘテロサクリック基は
0004364944.tif 000015
［ここにＲ20は水素およびＣ1−Ｃ6アルキルから選択される］
からなる群から選択されるが、これらに限定されない。
「Ｂ環ヘテロ芳香族基」は
0004364944.tif 000016
からなる群から選択される置換分であるのが特に好ましい。
「置換芳香族」は単純アルキルおよびハロからなる群から選択される１〜３個の置換分で置換されている基を表す。
本明細書中に用いる用語「シクロアルキル」は飽和Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル基を示し、この基はＣ1−Ｃ3アルキル、ハロ、およびＯＲ22（ここにＲ22は水素およびＣ1−Ｃ3アルキルから選択される）からなる群から選択される０個から３個の置換分を有していてもよい。この置換分は可能な炭素原子のいずれに結合していてもよい。特に好適には、このシクロアルキルは置換または非置換のシクロヘキシルを示す。
本明細書中に用いる用語「低級アルコキシル基」は酸素原子に結合する１個から５個までの炭素原子を有するいずれかのアルキル基を意味する。本明細書中に用いる用語「低級アルキル基」は１個から６個までの炭素原子を有するアルキル基を意味し、直線状または非直線状炭化水素鎖を包含し、これらに限定するものではないが、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、メチル化されたブチル基、ペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、およびメチル化されたペンチル基などを含む。本明細書中に用いる用語「不飽和低級アルキル基」および「飽和低級アルキル基」は当業者が一般に用語「不飽和」および「飽和」と結び付ける意味を有する。用語「低級アルキル」は飽和および不飽和低級アルキル基の両方を表す。（例えば、飽和基は二重および三重結合を有しない。）本明細書中に用いる「アリル置換アルケン」は２〜７個の炭素原子を有するいずれかのアルケンであって、アルキル置換を含有しているものを意味する。
本明細書中に用いる用語「エポキシド環」は骨格が炭素２個および酸素原子１個から構成される三員環を意味する。本明細書中に用いる用語「アジリジン環」は骨格が炭素２個および窒素原子１個から構成される三員環を意味する。本明細書中に用いる用語「スルフィド環」は骨格が炭素２個および硫黄原子１個から構成される三員環を意味する。本明細書中に用いる用語「エピスルフィド環」は骨格が炭素２個および硫黄原子１個から構成される三員環を意味する。本明細書中に用いる用語「硫酸基」は炭素−炭素−酸素−硫黄−酸素骨格から構成されており、この硫黄原子に結合する追加の酸素原子２個を有する５員環を意味する。本明細書中に用いる用語「モノアルキルリン酸環」は炭素−炭素−酸素−リン−酸素骨格から構成されており、このリン原子に結合する追加の酸素原子２個を有し、その中の１個が低級アルキル基を保持している５員環を意味する。
本明細書中に用いる「単純非置換芳香族基」はモノサイクリックまたはビサイクリックの共役系内に４ｎ＋２電子を有する通常の芳香族環を示し、これに限定するものではないが、例えばフリル、ピロリル、チエニル、ピリジル、その他、またはビサイクリック系、これに限定するものではないが、例えばインドリルまたはナフチルなどである。
本明細書中に用いる「単純置換芳香族基」はハロゲンおよび低級アルキル基からなる群から選択される１個の基で置換された単純芳香族環を示す。
本明細書中に用いる「ヘテロ芳香族」は酸素、窒素および硫黄からなる群から選択される１個またはそれ以上の非炭素原子を含有している芳香族環を表す。最も好ましいヘテロ芳香族環は環上に３〜８員を有するものである。ヘテロ芳香族環の特に好ましい基は３〜６員を有するものである。ヘテロ芳香族基は環上に１〜３個の非炭素原子を有するのが特に好ましい。１個の酸素原子を含有している５員環は１つの好ましいヘテロ芳香族基であるが；この用語はいかなる意味においてもこの基に限定されない。
本明細書中に用いる用語「ヘテロサイクリック」は酸素、窒素および硫黄からなる群から選択される１個またはそれ以上の非炭素原子を含有しているサイクリック環を表す。ヘテロサイクリック環は飽和あるいは不飽和であってよい。さらにヘテロサイクリック環は互いに縮合し、ビサイクリック系またはトリサイクリック系を形成することもある。例えば、２個の二重結合を有している５員環または１個の二重結合を有している５員環であるが、これらに限定されない。ヘテロサイクリック環は非置換でよく、あるいはＣ1−Ｃ6アルキル、カルボニル、ハロゲンおよびＯＲ62からなる群からなる群から選択される１〜３個の置換分を有していてもよい。最も好ましいヘテロサイクリック環は環上に３〜８員を有するものである。ヘテロサイクリック環の特に好ましい基は３〜６員を有する。ヘテロサイクリック基は１−３個の非炭素原子を有するのが特に好ましい。好ましいヘテロサイクリック環の１つは１個の窒素、１個の硫黄、１個のメチル置換分および２個の二重結合を有する５員環である。
好ましいヘテロサイクリック基には
0004364944.tif 000017
が含まれるが、これに限定されない。
「置換ヘテロ芳香族」は単純アルキルおよびハロからなる群から選択される１〜３個の置換分で置換されている基を表す。
本明細書中に用いる「ハロゲン」または「ハロ」は周期律表で歴史的にハロゲンとして知られている基の構成員を示す。ハロゲン化方法には、これに限定するものではないが、ハロゲン化水素の付加反応、高温での置換、光ハロゲン化、その他を包含するが、これらの方法は当業者に既知である。特に好ましいハロゲンにはクロロ、フルオロおよびブロモが含まれるが、いかなる意味においてもこれらに限定されない。
本明細書中に用いる用語「アリール」は当業者がこの用語と一般に結び付ける意味を有する。したがって、この用語は芳香族炭化水素から１個の水素原子を除去することによって誘導される有機の基を意味する。例えばフェニル、トルイル、サリチルなどであるが、これらに限定されない。
本明細書中に用いる用語「哺乳類」は、高等脊椎動物の哺乳類を示すものとする。用語「動物」には、これに限定するものではないが、哺乳類、爬虫類、両生類、および魚類を包含するものとする。用語「哺乳類」は、これに限定するものではないが、ヒトを包含する。本明細書中に用いる用語「処置」は指定した病状の予防または一旦樹立した病状の緩和または排除を包含する。本明細書中に特許請求しているクリプトフィシン化合物は動物の保健の目的のため、ならびにヒト患者の処置のために有用であり得る。
化合物の所望のＲ6置換分はアミンを含有し、そのためこのＲ6置換分のアミン置換分はアミノ保護基を用いて保護しなければならない。当業者であれば標準的文献、例えば″Protective Groups in Organic Chemistry″, Plenum Press,(London and New York, 1973）； Greene, T.W.″Protective Groups in Organic Synthesis″, Wiley(New York, 1981）の方針を用いて適当なアミノ保護基を容易に選択できる。
本明細書中に用いる用語「誘導」は本発明の所望の化合物を得る当業者に既知の標準的な化学変形を表す。
特許請求している本発明の方法は全合成クリプトフィシン化合物の製造手段を提供する。市販されているアミノ酸を簡便にクリプトフィシン分子に環化することができる。
多くの既知のクリプトフィシン化合物が抗腫瘍活性の見込みを有するが、水溶性に乏しいことは薬物の静脈内投与の間に問題となり得る。このような問題は、本質的な毒性を有するクレモフォアのような可溶化界面活性剤の利用に関するものである。本発明は抗腫瘍活性およびより高い水溶性を有する新規クリプトフィシン化合物を提供する。このような化合物は望ましい可溶性および許容される強さを有する。
本発明の化合物を製造する工程は溶媒の存在下に完了するのが最も好ましい。当業者であれば標準的な方法論を用いて適当な溶媒を選択することができる。適切な不活性溶媒には当業者に既知の溶媒、例えばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）およびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）が含まれるがこれらに限定されない。ＤＭＦは特に好ましい。水に基づく溶媒は本明細書中に利用するいくつかの工程に適当であり得る。このような水性溶媒のｐＨは工程を促進するために望ましく調節することができる。
本発明のいくつかの代表的化合物を表にして提供するが、ここに挙げた化合物はいかなる意味においても本発明の範囲を限定するためのものではない。
0004364944.tif 000018
0004364944.tif 000019
さらに好ましい化合物は例えば、上記表Ｉに挙げた化合物であって、近接するＣｌおよびＯＲ基の位置が交換されたものであるが、これらに限定されない。例えば、塩基構造が以下のものである上記に挙げた同Ｒ置換分：
0004364944.tif 000020
注目すべき他の化合物は表Ｉに挙げたものであるが、ＡｒがフェニルのかわりにＡｒ’であり、Ａｒ’のパラ位においてＲ54はＯＣＨ3であり、Ｒ55およびＲ56はそれぞれ水素である。
注目すべきさらなる化合物は表Ｉに挙げたものであるが、分子のＹ位においてＮＨ基がＯと置換しているものである。例えば、本シリーズの１つの化合物は：
0004364944.tif 000021
である。
さらに好ましい化合物は例えば、上記表Ｉおよび近接するＣｌおよびＯＲの位置の交換によって示される化合物に挙げた化合物であって、指定したそれぞれの化合物がクリプトフィシン環の第６位におけるジェミナルジメチル基のかわりに１つのメチル基を有しているものであるが、これらに限定されない。例えば以下の２３を参照。
本発明の特に好ましい化合物はクリプトフィシン環の第６位においてジメチル基を有している。
本発明の好ましい化合物はＡｒがＡｒ’であり；Ｒ54、Ｒ55およびＲ56の１つだけがＯＣＨ3であり；Ｒ9およびＲ10がそれぞれメチルである表Ｉに表した化合物である。
一般に既知のシリル化物質を本発明の化合物の製造工程に用いる。例えば、Calvin, E.W.,″Silicon Reagents in Organic Synthesis″, Academic Press,（London, 1988）を参照。特に有用なシリル化物質には”トリ低級アルキルシリル”物質が含まれ、この用語はトリイソプロピルシリル、トリメチルシリルおよびトリエチルシリル、トリメチルシリルハライド、シリル化尿素、例えばビス（トリメチルシリル）尿素（ＢＳＵ）ならびにシリル化アミド、例えばＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ）を意味する。これらのうち、ＢＳＡが好ましい。
本発明のいくつかの好ましい特徴を以下の表に記載する。ここではこれらの特徴を独立して選択し、本発明の好ましい態様を提供できる。本発明はいかなる意味においても以下に記載の特徴に限定されない：
Ａ）Ｒ8はエチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルまたはイソペンチルであり；
Ｂ）Ｒ7はエチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチルまたはイソペンチルであり；
Ｃ）Ｒ7はＨであり、Ｒ8はメチルであり、Ｒ3はメチルであり、ならびにＸおよびＹは両方ともがＯであるわけではなく；
Ｄ）Ｒ3はエチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチルまたはイソペンチルであり；
Ｅ）Ｒ9はメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ペンチルまたはイソペンチルであり；
Ｆ）Ｒ10はメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ペンチルまたはイソペンチルであり；
Ｇ）Ｃ−３、Ｃ−６、Ｃ−７、Ｃ−１０、Ｃ−１６、Ｃ−１７およびＣ−１８からなる群から選択される基の少なくとも１つがＲ立体化学を有している（上記表Ｉに記載の番号付け）クリプトフィシン化合物；
Ｈ）Ｃ−３、Ｃ−６、Ｃ−７、Ｃ−１０、Ｃ−１６、Ｃ−１７およびＣ−１８からなる群から選択される基の少なくとも１つがＳ立体化学を有しているクリプトフィシン化合物；
Ｉ）Ａｒ’はＮＲ59Ｒ60、ＮＨＯＲ61およびＮＨＣＨＲ61’からなる群から選択される置換分を有しているフェニルであり；
Ｊ）Ｙがアルキルチオ、ＮＨおよびＯからなる群から選択される化合物；
Ｋ）ＹがＯであり、Ｒ7およびＲ10がそれぞれ水素であり；Ｒ9が低級アルキルであり；ならびにＲ1がハロである化合物；
Ｌ）Ｒ7およびＲ8はそれぞれメチルであり；
Ｍ）Ｒ7は水素であり；
Ｎ）Ｒ2はグリシネートであり；
Ｏ）Ｒ2はアシレートであり；
Ｐ）Ｒ1およびＲ2はエポキシド環を形成し；
Ｑ）Ｒ6はベンジル、ヒドロキシベンジル、アルコキシベンジル、ハロヒドロキシベンジルおよびジハロヒドロキシベンジルからなる群から選択され；
Ｒ）Ｒ4およびＲ5は二重結合を形成し；
Ｓ）ｎは０であり；Ｒ6は１つの置換分がハロゲンであり、１つの置換分がＯＲ12基（ここに、Ｒ12は低級アルキル）である置換ベンジルであり；
Ｔ）式Ｉの化合物を微小管系の崩壊に用い；
Ｕ）式Ｉの化合物を抗新生物剤として用い；
Ｖ）式Ｉの化合物を哺乳類のガンの処置に用い；
Ｗ）式Ｉの化合物を抗真菌物質として用い；
Ｘ）Ｒ6は式ＩＩＩ’であり、かつパラヒドロキシ置換されており；
Ｒ6は
0004364944.tif 000022
からなる群から選択され；
Ｚ）Ｚはｎが０である−（ＣＨ2）n−であり；
ＡＡ）Ｚはｎが２である−（ＣＨ2）n−であり；
ＢＢ）Ｚはｎが１である−（ＣＨ2）n−であり；
ＣＣ）Ｒ15、Ｒ16およびＲ17の少なくとも１つはＳＣＨ2フェニル、ＮＨ2、ＣＯ、ＣＯＮＨ2、ＣＯ2Ｈ、ＰＯ3Ｈ2およびＳＯ2Ｒ21（ここにＲ21は水素およびＣ1−Ｃ3アルキルから選択される）からなる群から選択され；
ＤＤ）Ａｒはフェニルであり；
ＥＥ）ＡｒはＯＨ、ＯＣＨ3、ハロおよびメチルからなる群からの１つまたは２つの置換分によって置換されているフェニルであり；
ＦＦ）Ｒ2はハロゲン、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、アルキルチオ、ジアルキルスルホニウム、硫酸、リン酸、ＯＲ31Ｒ32およびＳＲ31Ｒ32からなる群から選択され；
ＧＧ）Ｒ6はクリプトフィシン分子との結合点を考慮して、Ｚ基の第１炭素が
0004364944.tif 000023
であるＺであり；
式Ｉの化合物を真菌感染の処置に用い；
ＩＩ）Ｒ50は
0004364944.tif 000024
であり；
ＪＪ）Ｒ11は水素であり；
ＫＫ）Ｒ4およびＲ5はそれぞれ水素であり；
ＬＬ）Ａｒはパラエチル置換フェニルであり；
ＭＭ）Ａｒはパラメチル置換フェニルであり；
ＮＮ）ＹはＮＨであり；
ＯＯ）Ｒ3はメチルであり；
ＰＰ）Ｒ6は：
0004364944.tif 000025
からなる群から選択される。
本発明は対象に本明細書に開示する医薬的または動物薬的な組成物の有効量を投与して細胞の増殖を阻止することを包含する哺乳類細胞の過剰増殖に起因する病理学的状態の緩和方法を提供する。この発明の好適な態様の一つにおいては、本方法はさらにその病理学的状態を緩和することを指向する治療剤を少なくとも１種追加して対象に投与することを包含する。この発明の好適な態様の一つにおいては、その病理学的な状態が新生物の形成によって特徴付けられる。本発明のさらに好適な態様においてはこの新生物は乳腺、肺小胞、肺非小胞、大腸直腸、白血病、黒色腫、膵臓のアドレノカルチノマ、中枢神経系（ＣＮＳ）、卵巣、前立腺、軟部組織または骨、頭部または頚部の肉腫、膵臓および食道を含む胃部、胃、骨髄腫、膀胱、腎臓、甲状腺を含む神経内分泌、および非ホジキン病およびホジキン病などの新生物から構成される群から選択される。
本明細書中に用いる「新生物」は細胞の異常増殖である新生物を示し、この増殖は正常な増殖制限の対象にならないために発生する。本明細書中に用いる「抗新生物剤」は細胞の新生物的表現型を阻止し、除去し、遅延させ、または逆転する化合物、組成物、混合物、共混合物、または配合物のいずれかである。
抗有糸分裂剤はその作用の分子的機構に基づいて３群に分類される。第一の群はコルヒチンおよびコルセミドを含む薬剤からなり、チューブリンを封鎖することによって微小管の形成を阻止する。第二の群はビンブラスチンおよびビンクリスチンを含む薬剤からなり、チューブリンのパラクリスタル的集合形成を誘導する。ビンブラスチンおよびビンクリスチンは良く知られている抗ガン剤であって、その有糸分裂紡錘体微小管を崩壊する作用は過剰増殖細胞を優先的に阻害する。第三の群はタキソールを含む薬剤からなり、チューブリンの重合を促進して微小管を安定化させる。
多数の腫瘍細胞による薬剤耐性および多重薬剤耐性表現型の発現および新生物細胞に対する抗微小管薬剤の臨床的に証明された作用機序は薬剤非耐性新生物細胞に細胞毒性を示し、同様に薬剤耐性の表現型を有する新生物細胞に細胞毒性を示す抗微小管薬剤の開発を要求している。
ガンの治療に当たっては、化学療法、外科手術、放射線療法、生物学的応答修飾剤による治療、および免疫療法が現在使用されている。治療の各態様にはその分野における通常の当業者に知られている特定の適用があり、新生物細胞の完全な破壊に到達するための試みにはそれらの１種または全部を採用してもよい。さらに、組合せ的化学療法、すなわち式Ｉで示される化合物をその他の新生物剤と組み合わせて利用する化学療法も本発明の主題によって提供され、組合せ療法は単一の抗新生物剤よりも一般に有効性が高い。そこで、本発明の別の側面は前記の利点を提供する、非毒性付加塩を含む式Ｉで示される化合物少なくとも１種の治療的有効量を含む組成物を提供する。この組成物はまた生理学的に許容される液剤、ゲル剤、または固体担体、希釈剤、アジュバントおよび賦形剤と共に提供される。この担体、アジュバントおよび賦形剤は米国薬局方ＸＸＩＩ版、米国民医薬品集ＸＶＩＩ版、Ｕ．Ｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ・Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ社、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ（１９８９年）にも記載されている。その他の処置法は「ＡＨＦＳ・Ｄｒｕｇ・Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＡＨＦＳ社医薬品情報）」、１９９３年版、Ａｍｅｒｉｃａｎ・Ｈｏｓｐｉｔａｌ・Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ・Ｓｅｒｖｉｃｅ社、５２２〜６６０頁に記載されている。これらの文献はいずれも当業者に周知であり、容易に入手できる。
本発明はさらに、式Ｉで示される化合物少なくとも１種および別の抗新生物剤少なくとも１種を含有し、新生物病を処置するために使用される医薬的組成物を提供する。式Ｉで示される化合物と組合せて使用してもよい抗新生物薬剤には、「Ｍｅｒｃｋ・Ｉｎｄｅｘ（メルクインデックス）」、１１版、１６〜１７頁、Ｍｅｒｃｋ社（１９８９年）に記載されているものを包含する。この「Ｍｅｒｃｋ・Ｉｎｄｅｘ」は当業者に広く認められており、容易に入手可能である。
この発明の別の態様においては、抗新生物剤は、決してこれらに限定されるものではないが、メトトレキセート、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、シトシン・アラビノシド、ヒドロキシウレア、および２−クロロデオキシアデノシンから構成される群から選択されるものを包含するものであってもよい抗代謝剤であってもよい。本発明の別の態様においては、意図される抗新生物剤は、決してこれらに限定されるものではないが、シクロホスファミド、メファラン、ブスルファン、パラプラチン、クロロアンブシル、およびナイトロゲンマスタードから構成される群から選択されるものを包含するものであってもよいアルキル化剤である。さらに別の態様においては、この抗新生物剤は、決してこれらに限定されるものではないが、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソールおよびエトポシドから構成される群から選択されるものを包含するものであってもよい植物アルカロイドである。さらに別の態様においては、意図されるこの抗新生物剤は、決してこれらに限定されるものではないが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、マイトマイシンＣ、およびブレオマイシンから構成される群から選択されるものを包含するものであってもよい抗生物質である。さらに別の態様においては、意図するこの抗新生物剤は、決してこれらに限定されるものではないが、カルステロン、ディオモスタノボロン・プロピオネート、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストロラクトン、タモキシフェン、ポリエストラジオール・ホスフェート、メゲステロール・アセテート、フルタミド、ニルタミドおよびトリロタンから構成される群から選択されるものを包含するものであってもよいホルモンである。
さらに別の態様においては、意図されるこの抗新生物剤は、決してこれらに限定されるものではないが、Ｌ−アスパラギナーゼおよび、たとえばこれに限定するものではないがアムサクリンのようなアミノアクリジン誘導体から構成される群から選択されるものを包含するものであってもよい酵素である。その他の抗新生物剤には「Ｈａｎｄｂｏｏｋ・ｏｆ・Ｃａｎｃｅｒ・Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ（ガン化学療法ハンドブック）」、３版、Ｌｉｔｔｌｅ・Ｂｒｏｗｎ社（１９９１年）、Ｓｋｅｅｌ，Ｒｏｌａｎｄ・Ｔ．著、「Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ・Ｄｒｕｇｓ・ａｎｄ・Ｂｉｏｌｏｇｉｃ・Ｒｅｓｐｏｎｓｅ・Ｍｏｄｉｆｉｅｒ：Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｕｓｅ・ａｎｄ・Ｔｏｘｉｃｉｔｙ・ｏｆ・Ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ・Ｕｓｅｆｕｌ・Ａｇｅｎｔｓ（抗新生物剤および生物学的応答修飾剤：臨床的に有用な薬剤の分類、用法および毒性）」に掲載されているものを包含する。
これらの化合物および組成物は動物薬的使用の目的で哺乳類に投与することができる。例えば、家畜動物はヒトの臨床的患者と殆ど同一の方法で処置できる。一般に、治療的効果に必要な用量は使用の形態、投与の態様、ならびに個々の宿主の具体的な必要性に従って変動するものである。典型的にはその用量は約０．００１から１０００ｍｇ／ｋｇ宿主体重までの範囲、さらに通常には０．０１から１０ｍｇ／ｋｇ宿主体重までの範囲にある。または、これとは別に、これらの範囲内の用量は所望の利益が得られるまで、通常２４時間を超える長時間にわたって連続注入することによって投与できる。事実、薬剤用量ならびに投与経路は相対的な有効性、相対的な毒性、腫瘍の増殖特性および式Ｉで示される化合物が細胞周期におよぼす効果、薬剤の薬力学、患者の年齢、性、身体的状況、およびそれ以前の処置に基づいて選択しなければならず、これらは当業者が決定できる。
式Ｉで示される化合物は別の抗新生物剤とともに、または別の抗新生物剤なしに、そのままでまたは塩の型で治療用組成物に製剤化してもよい。医薬的に許容される非毒性塩は、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、第二鉄の水酸化物のような無機塩基から誘導されるもの、およびイソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカイン、その他のような有機塩基から誘導されるものであってもよい塩基の付加塩を包含する。許容される非毒性塩はまた遊離のカチオン性基との酸付加塩として形成されたものであってもよく、一般には例えば塩酸またはリン酸のような無機酸または、たとえば酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸、その他のような有機酸と共に形成されるものである。さらに本発明が当業者に提供する追加的賦形剤は、例えば米国薬局方に見出される。
ある担体がある治療用組成物に加えるために適当かどうかは採用する投与経路に依存する。例えば、抗新生物用組成物は経口投与用に製剤化してもよい。このような組成物は典型的には液剤または懸濁剤としてまたは固体の剤型中に製剤化される。通常、経口投与用製剤は結合剤、充填剤、担体、保存剤、安定化剤、乳化剤、緩衝剤、マンニトール、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、その他のような添加剤を含有する。これらの組成物は液剤、懸濁剤、錠剤、ピル剤、カプセル剤、持続性放出用製剤、または粉剤の形であってもよく、典型的には活性成分を１％から９５％含有する。さらに好ましくはこの組成物は約２％から約７０％の活性成分を含有する。
本発明の組成物は液剤、懸濁剤、または乳液剤のいずれかとして注射剤に製剤化してもよい。固体の製剤は注射の前に液体中に溶解し、または懸濁するのに適当である。このような注射剤は皮下注射、静脈注射、腹腔注射、筋肉内注射、クモ膜下注射、または胸膜腔内注射として投与してもよい。活性成分または添加剤には生理学的に許容され、活性成分と適合する希釈剤、担体、または賦形剤を混合することが多い。適当な希釈剤および賦形剤は、例えば水、食塩水、デキストロース、グリセリン、その他およびこれらの組合せである。これに加えて、所望ならばこれらの組成物は、たとえば湿潤化剤または乳化剤、安定化剤またはｐＨ緩衝化剤など少量の補助剤を含有していてもよい。
本発明はさらに、哺乳類細胞の増殖を阻止するために十分な量の式Ｉで示される化合物とこれらの細胞とを接触させることによって、哺乳類細胞の増殖を阻止するために式Ｉで示される化合物を使用する方法を提供する。好適な態様の一つは過剰増殖している哺乳類細胞の増殖を阻止する方法である。この発明の目的に関し、「過剰増殖している哺乳類細胞」は哺乳類細胞であって、増殖の特徴的な制限（例えばプログラムされた細胞死）の対象とならないものである。さらに好適な態様ではこの哺乳類細胞がヒトのものである。本発明はさらに式Ｉで示される化合物少なくとも１種および少なくとも１種の抗新生物剤と哺乳類細胞とを接触する方法を提供する。ここに意図する抗新生物剤の型は前記した。
本発明はさらに過剰増殖哺乳類細胞の増殖を阻止するために十分な量で、式Ｉで示される化合物とこの細胞とを接触させることによって多剤耐性表現型を含む薬剤耐性表現型を有する過剰増殖細胞の増殖を阻止するために、式Ｉで示される化合物を使用する方法を提供する。好適な態様ではこの哺乳類細胞がヒトのものである。本発明はさらに式Ｉで示される化合物および別の前記した抗新生物剤を少なくとも１種接触させる方法を提供する。
本発明は過剰増殖細胞の増殖を阻止するために対象に有効量の式Ｉで示される化合物を含有する医薬的組成物を投与することによって哺乳類細胞の過剰増殖に起因する病理学的状態、例えば新生物病、を緩和する方法を提供する。本明細書中に用いる「病理学的状態」は正常な増殖限定の対象とならない哺乳類細胞の増殖に起因する病理を示す。このような細胞の増殖は前記のような新生物に起因することもある。
さらに好適な態様ではこの新生物細胞はヒトのものである。本発明は式Ｉで示される化合物を他の治療剤ならびに他種の抗新生物剤と組合せて利用してそのような病理学的状態を緩和する方法を提供する。
特許請求している化合物の有効性は当業者に知られている標準的な方法を使用して評価できる。このような方法の数例は次の通りである：
本発明の化合物は病原性真菌に対して有用であることが発見されている。例えば、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ・ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを処置するための有用性は酵母窒素基デキストロース寒天培地を使用するＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ・ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓに対する検査結果で例示できる。このアッセイの実施においては、本発明の化合物をトゥイーン２０添加ジメチルスルホキシド中に溶解する。無菌蒸留水／１０％ＤＭＳＯで２倍段階希釈を行い、希釈アッセイ寒天プレートにおける最終薬剤濃度をＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ・ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓの拡大標本８４株に対して０．００８μｇ／ｍＬから１６．０μｇ／ｍＬまでの範囲とする。Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ・ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ分離株標本８４株に対する最小阻止濃度を測定して所望の抗真菌作用を示す。
本化合物をヒトの鼻咽頭ガン腫セルラインであるＫＢ、ヒトの結腸直腸アドレノカルチノマセルラインであるＬｏＶｏに対する最小阻止濃度についてコルベットアッセイ、Ｃｏｒｂｅｔｔ，Ｔ．Ｈ．ほか著、「Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ・Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ・Ｄｒｕｇｓ：Ｍｏｄｅｌｓ・ａｎｄ・Ｃｏｎｃｅｐｔｓ・ｆｏｒ・Ｄｒｕｇ・Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ・ａｎｄ・Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（細胞傷害性抗ガン剤：薬剤発見および開発のためのモデルと概念）」、３５〜８７頁、Ｋｌｕｗｅｒ・Ａｃａｄｅｍｉｃ・Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ：Ｎｏｒｗｅｌｌ、１９９２年参照、を用いてスクリーニングする。また、化合物の評価に使用されるＶａｌｅｒｉｏｔｅほか著、「Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ・ａｎｄ・Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ・ｏｆ・Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ・Ａｇｅｎｔｓ（抗ガン剤の発見と開発）」、Ｋｌｕｗｅｒ・Ａｃａｄｅｍｉｃ・Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｏｒｗｅｌｌ、１９９３年も参照。
最も活性の高い化合物はさらにコルベットアッセイを用いて、細胞型の異なる４種、例えばマウス白血病、マウス固形腫瘍、ヒトの固形腫瘍、および悪性度の低い繊維芽細胞に対する細胞毒性について評価される。
本化合物はさらにマウスに移植された、薬剤耐性腫瘍も含む、広範囲なマウスおよびヒトの腫瘍について評価される。
その後の評価には担腫瘍率Ｔ／Ｃ（処置動物での平均担腫瘍対非処置動物での平均担腫瘍）を用いる。Ｎａｔｉｏｎａｌ・Ｃａｎｃｅｒ・Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの基準によれば、４２％以下のＴ／Ｃ値は有効であると考えられ；Ｎａｔｉｏｎａｌ・Ｃａｎｃｅｒ・Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの基準によれば、１０％以下のＴ／Ｃ値は臨床用の可能性がある著効を有すると考えられる。
材料
ビンブラスチン、サイトカラシンＢ、テトラメチルロダミン・イソシアネート（ＴＲＩＴＣ）−ファロイジン、スルフロダミンＢ（ＳＲＢ）およびβ−チューブリンおよびビメンチンに対する抗体は有名な販売業者から入手できる。イーグル塩を含有するイーグルの基本培地（ＢＭＥ）およびウシ胎児血清（ＦＢＳ）も購入できる。
セルライン
ジャーカットＴ細胞白血病ラインおよびＡ−１０ラット大動脈平滑筋細胞はＡｍｅｒｉｃａｎ・Ｔｙｐｅ・Ｃｕｌｔｕｒｅ・Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手してＦＢＳ１０％と硫酸ゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬとを含有するＢＭＥ中で培養する。ヒトの卵巣ガン細胞（ＳＫＯＶ３）およびビンブラスチンに対する耐性から選択されたサブライン（ＳＫＶＬＢ１）はＯｎｔａｒｉｏ・Ｃａｎｃｅｒ・ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＶｉｃｔｏｒ・Ｌｉｎｇ博士から恵与された。これら両セルラインはＦＢＳ１０％と硫酸ゲンタマイシン５０μｇ／ｍＬとを含有するＢＭＥ中に保存する。Ｐ−グリコプロテイン−過剰発現細胞に対する選択圧を保持するためにＳＫＶＬＢ１細胞に継代培養の２４時間後にビンブラスチンを最終濃度１μｇ／ｍＬまで添加する。
細胞増殖および細胞周期休止アッセイ
細胞増殖アッセイはＳｋｅｈａｎらが記載した通りに行う。ジャーカット細胞については、培養物をＳｋｅｈａｎが記載した指定薬剤で処理し、血球計数計で計数して全細胞数を測定する。有糸分裂中の細胞百分率はＰＢＳ中で０．４％ギムザ染色し、続いてＰＢＳで迅速に洗浄することによって測定する。一処置当り少なくとも１０００個の細胞を有糸分裂像について評価し、計数した細胞の総数に対する有糸分裂像を示す細胞の比率として有糸分裂指数を算出する。
免疫螢光アッセイ
カバーグラス上のＢＭＥ／１０％ＦＢＳ中でＡ−１０細胞を全面成長近くまで増殖させる。ＰＢＳ中の化合物を指定最終濃度まで添加し、細胞をさらに２４時間インキュベートする。微小管および中間径フィラメントの染色のために、細胞を冷メタノールで固定し、１０％ウシ血清含有ＰＢＳとインキュベートして非特異的結合部位をブロックする。細胞をモノクローナルの抗−β−チューブリンまたはモノクローナルの抗−ビメンチンのいずれかと製造元が推奨する希釈率で３７℃で６０分間インキュベートする。続いて結合した一次抗体をフルオレッセイン結合ウサギ抗マウスＩｇＧと４５分間インキュベートして可視化する。このカバーグラスを顕微鏡スライドグラスに載せ、フルオレッセインに対するエピ螢光測定装置を装備したＺｅｉｓｓ社光学顕微鏡Ｉｌｌを使用して螢光パターンを検査し、写真撮影する。微小管の染色には、細胞を３％パラホルムアルデヒドで固定し、０．２％トリトンＸ−１００で透過性とし、ホウ水素化ナトリウム（１ｍｇ／ｍＬ）で化学的に還元する。次に１００ｎＭ ＴＲＩＴＣ−ファロイジン含有ＰＢＳを添加し、この混合物を３７℃で４５分間インキュベートする。ＰＢＳで細胞を迅速に洗浄した後、カバーグラスを載せ、直ちに前記のように写真撮影をする。
クリプトフィシンおよびビンブラスチンがジャーカット細胞の増殖および細胞周期に及ぼす効果
細胞増殖および有糸分裂中細胞百分率に及ぼすクリプトフィシン化合物およびビンブラスチンの効果について用量−応答曲線を測定する。
サイトカラシンＢ、ビンブラスチンおよびクリプトフィシンが細胞骨格に及ぼす効果
大動脈平滑筋（Ａ−１０）細胞をカバーグラス上で増殖させ、ＰＢＳ、２μＭサイトカラシンＢ、１００ｎＭビンブラスチンまたは１０ｎＭクリプトフィシン化合物で処理する。２４時間後、微小管およびビメンチン中間径フィラメントを間接的免疫螢光法によって可視化し、ミクロフィラメントをＴＲＩＴＣ−ファロイジンを使用して染色する。各薬剤の形態学的効果を検査する。非処理細胞は核周辺微小管形成中心で完成される繊細な微小管網を表示する。ビメンチン中間径フィラメントは細胞質全体に均等に分布していたが、ミクロフィラメントの束は細胞の主軸にそって濃縮していた。サイトカラシンＢはパラ結晶性残留物の蓄積を伴ってミクロフィラメントの完全な脱重合を起こした。この化合物は微小管または中間径フィラメントのいずれの分布にも影響を与えなかった。クリプトフィシン処理微小管およびビメンチン中間体では微小管の減少状態およびリメンチン中間径フィラメントの崩壊が観察される。
クリプトフィシンおよびビンブラスチンがタキソール安定化微小管に及ぼす効果
Ａ−１０細胞を（０μＭまたは１０μＭ）タキソールで３時間処理した後、ＰＢＳ、１００ｎＭビンブラスチンまたは１０ｎＭクリプトフィシン化合物を添加する。２４時間後、微小管の形成を前記のようにして免疫螢光法によって検査する。対照細胞でのものと比較して、タキソール処理細胞中の微小管は全般に、特に細胞極領域では、束状に集合していた。前記と同様に、非前処理細胞においてはビンブラスチンは微小管に完全な脱重合を起こした。しかしながら、タキソールで前処理すると、ビンブラスチンに応答する微小管の脱重合は予防された。同様にして、タキソールで前処理するとクリプトフィシン処理でも微小管は観察される。
ビンブラスチンおよびクリプトフィシンによる微小管脱重合の可逆性
Ａ−１０細胞を１００ｎＭビンブラスチンまたは１０ｎＭクリプトフィシンで２４時間処理すると微小管の完全な脱重合を起こす。次に細胞を洗浄し、薬剤不含培地中で１時間または２４時間インキュベートする。ビンブラスチンを除去した後、微小管は迅速に再重合を起こし、１時間後には明確なレベルの微小管を示し、２４時間後には形態学的に完全なレベルでの回復を示した。この細胞を本発明のクリプトフィシン化合物で処理し、クリプトフィシン化合物の除去後１時間または２４時間の時点で可視化して微小管の状態を観察する。
ビンブラスチンおよびクリプトフィシンの組合せが細胞増殖に及ぼす効果
ＳＫＯＶ３細胞をクリプトフィシンとビンブラスチンとの組合せで４８時間処理する。次に生存する細胞の百分率を測定して、各組合せについてＩＣ50を算出する。
ＳＫＯＶ３およびＳＫＶＬＢ１細胞に対するクリプトフィシン、ビンブラスチンおよびタキソールの毒性
ＳＫＶＬＢ１細胞はＰ−グリコプロテインを過剰に発現するので、抗ガン性天然物薬剤には耐性である。タキソール、ビンブラスチン、およびクリプトフィシン化合物がＳＫＯＶ３細胞およびＳＫＶＬＢ１細胞の増殖を阻止する性能を観察する。タキソールは、ＳＫＯＶ３細胞およびＳＫＶＬＢ１細胞に対するＩＣ50それぞれ１ｎＭおよび８０００ｎＭで、両セルラインの増殖を用量依存的に阻止した。ビンブラスチンも、ＳＫＯＶ３細胞およびＳＫＶＬＢ１細胞に対するＩＣ50それぞれ０．３５ｎＭおよび４２００ｎＭで、両セルラインの増殖を阻止した。本発明のクリプトフィシン化合物も、ＳＫＯＶ３細胞およびＳＫＶＬＢ１細胞に対するＩＣ50約１ｐＭから約１０００ｐＭで活性を示す。
上述の通り、本発明が微小管ネットワークの崩壊および有糸分裂の阻止によって作用する細胞増殖の強力な阻害剤である新規なクリプトフィシン化合物を提供することを証明できる。これらの研究でクリプトフィシン化合物は微小管の形成を崩壊させ、有糸分裂を含む正常な細胞機能を崩壊することを例証し得る。
例えばコルヒチンおよびビンカアルカロイドのような、古典的な抗微小管剤は細胞分裂を有糸分裂の段階で休止させる。これらの薬剤のいずれか一つが細胞増殖に及ぼす効果を本クリプトフィシン化合物のものと比較することは適当であると思われる。この目的のために、ビンカアルカロイドであるビンブラスチンを古典的な抗有糸分裂剤の代表として選択した。したがって、ジャーカットＴ細胞白血病セルラインの細胞増殖および細胞周期進行に及ぼすクリプトフィシン化合物およびビンブラスチンの効果を比較する。
抗有糸分裂効果は有糸分裂紡錘体内の微小管の崩壊によって共通に媒介されるので、クリプトフィシン化合物が細胞骨格の構造に及ぼす影響は螢光顕微鏡的に特性解析する。クリプトフィシン化合物またはビンブラスチンのいずれかで処理した細胞の免疫螢光染色の結果、両化合物が微小管の完全な喪失を引き起こすことが証明される。ＳＫＯＶ３細胞での同様な研究結果は、クリプトフィシン化合物の抗微小管効果は平滑筋セルラインに特有なものではないことを証明できる。
ヒトの結腸ガンＧＣ３のスクリーニング
９６ウェルプレートの選択したウェルにヒトの結腸ガンＧＣ３細胞（アッセイ培地１００μＬ中１×１０細胞／ウェル）を接種して、２４時間後に被験化合物を添加した。９６ウェルプレートの選択した他のウェルに細胞不含のアッセイ用培地を添加した。アッセイ用培地（ＲＭＰＩ−１６４０を培地に使用した；しかし、この細胞が生存できるものならばいずれの培地も許容されるであろうと思われる）に１０％ウシ胎児透析血清および２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液を添加した。
被験化合物は検査まで褐色ビン中に保存した。被験サンプルのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）希釈液を調製する直前にジメチルスルホキシド保存溶液（２００μｇ／ｍＬ）を新たに調製した。ジメチルスルホキシド溶液をＰＢＳで１：２０まで希釈し、最終濃度を１０μｇ／ｍＬとした。ＰＢＳを（前段のサンプル０．５ｍＬをＰＢＳ１ｍＬで）用いて１：３倍の連続希釈液を調製した。アッセイにはファルコン社２０５４チューブを使用した。
被験化合物の各希釈液１０μＬサンプルをＧＣ３プレートのウェルに三重に添加した。プレートを約３７℃で７２時間インキュベートした。ウェルの各々に３−［４，５−ジメチル−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウム・ブロミド塩（「ＭＴＴ」５ｍｇ／ＰＢＳｍＬ）貯蔵溶液１０μＬサンプルを添加した。プレートを３７℃で約１時間インキュベートした。プレートを遠心し、培地をウェルからデカンテーションして除去し、ウェルの各々に酸性イソプロパノール（イソプロパノール中０．０４Ｎ ＨＣｌ溶液）１００μＬを添加した。プレートを１時間以内に検査波長５７０ｎｍ（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘリーダー）で測定した。
式Ｉで示される化合物の評価は、本化合物が本明細書の請求項に記載する処置方法において有用であり得ることを示す。さらに本化合物は微小管系の崩壊のために有用であると思われる。
本発明の化合物の製造は活性エステルおよび、要すればそれに続くクロマトグラフィーおよび酸で誘導する脱保護を含む、数種のプロトコルを使用して完成できる。
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例えば、トリエチルアミンおよび４−ジメチルアミノピリジンの存在下に１（ここに太字の数は実施例段落に示す化合物番号を表す）を無水酢酸で処理し、フラッシュクロマトグラフィー後に８９％収率で３を得る。同様に、無水琥珀酸で処理した後、逆相ＨＰＬＣ精製することにより、１から４を製造できる。１のピリジン溶液をトリエチルアミンおよび４−ジメチルアミノピリジンの存在下、市販のニコチノイルクロライドに暴露し、次いでクロマトグラフィーおよび塩化水素処理することによって高い収率で７を得る。１を市販の２−フルオロ−１−メチルピリジニウム ｐ−トルエンスルホネートで処理し、次いで陰イオン交換（ｐ−トルエンスルホネートのかわりにアセテート）して逆相ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥するNicolaou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1994, 33の方法にしたがってピリジニウム塩８を４７％収率で製造する。エステル化合物５、９、１１、１３、１５、１７、１９および２１はすべて１および（５および９の場合を除いて）市販のＮ−ｔ−boc保護アミノ酸を４−ジメチルアミノピリジンの存在下に１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドで処理して位活性化することにより適度〜高収率で製造する。塩化水素塩１０、１２、１４、１６、１８、２０および２２はそれぞれ９、１１、１３、１５、１７、１９および２１からジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液で処理し、減圧下で溶媒を取り除くことによって高い収率で製造する。二ナトリウム塩６は５から塩酸誘導性のｔ−ブチルエステル分裂および水酸化ナトリウム処理によって誘導する。リン酸処理官能基を構築するため、Johns, Synthesis, 1988, 142の方法を特徴とする５工程配列によって、５の製造に必須の酸化合物２４を６３％収率で合成する。
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いくつかの新規複合体はＧＣ３腫瘍細胞モデルでのインビトロ細胞毒性についてアッセイされている。表２に示す結果から、このシリーズの化合物がクリプトフィシン５５（１）の活性と比べて良好から非常に優れた活性を有していることが明らかである。
タイプ２のいずれのエステル化合物（Ｒ1またはＲ2はカルボン酸から誘導される）の製造にも酸クロライド、無水物および一般の活性化物質（例えばカルボジイミド）を用いる種々の技術が含まれる。反応に用いるアルコール以外のいずれの溶媒を用いてもよい。エステル化を助けるためにいずれの弱塩基および／または触媒（アミン、カルボネート）を用いることも可能である。
カルバメート化合物９、１１、１３、１５、１７、１９および２１を対応する塩に変換することは強酸、いわゆる鉱酸、例えばハロゲン化水素、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸、または強有機酸、例えばトリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびメタンスルホン酸のいずれを用いても行うことできるであろう。同酸は対応する遊離塩基からタイプ７の塩を製造するのに用いることができるであろう。種々の対イオン（陽イオン）はいずれかのアルカリおよびアルカリ土類金属を含むタイプ６の塩を構成し得る。種々の対イオン（陰イオン）はタイプ８の塩、いわゆる酸の（有機または鉱物の）複合塩基のいずれかを構成しうる。
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本発明の他の化合物およびＧＣ３アッセイ結果を以下に示す：
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本発明の他の化合物をＧＣ３アッセイで試験したところ、１より小さい値〜約７００ｎＭまで、最も典型的には１００ｎＭより小さい範囲のＩＣ50値を有した。
２７、１および１２間の比較溶解度の予備実験の結果を表３に示す。これらの結果は１２の溶解度が高められていることを示す。
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水性ｐＨ範囲４〜８における１および１２間の比較安定性を室温で６時間測定した。これらの実験の結果から１２の水溶性および安定性プロファイルがより優れていることが示された。例えば、ｐＨ８においてクリプトフィシン５５は室温で１０ｍｇ／ｍＬの溶解度値を有したのに対し、１２は実質的に同じ条件下で３０ｍｇ／ｍＬの溶解度を示した。ｐＨ４においてクリプトフィシン５５は約５０ｍｇ／ｍＬの水性溶解度を有したが、クリプトフィシン５５の水性溶解度はｐＨが塩基性になるにつれて減少し、一方１２の水性溶解度は実験したｐＨ範囲にわたって実質的に安定なままであった。
可溶性および安定性実験の結果に基づいて、適当な非経口ビヒクルを選択し、１２の絶対可溶性／安定性を決定した。表４はこれらのビヒクルにおける１２の可溶性を示したものである。予備実験の結果により、製剤例６における１２の３週間までの許容される安定性が示される。
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したがって、界面活性剤または乳化剤を含まないビヒクルにおける高濃度の本発明の化合物を達成することが可能であり、そのためこれらの化合物の毒理学的および臨床的評価を容易にすることができるだろう。また、グリシネートエステル（１２）は生理的ｐＨ領域のより水性環境下において長期にわたってよりよい安定性を有し、これにより正常条件下に、化合物の寿命が高められたことが示される。保管用に１および２７の濃縮物を製造し、次いで投与前に希釈することが必要であるのに対して、本発明の化合物の溶液を製造してそのまま用いることができることは便利である。
式Ｉの化合物は式ＩＩ：
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［式中、
Ａｒ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10は上記式Ｉに記載の意味を有し
Ｒ13はｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣ）からなる群から選択され；
Ｒ24は
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（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、本明細書中では″ＮＨＳ″）、Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドおよびその塩、２−ニトロフェニル、４−ニトロフェニルおよび２，４−ジクロロフェニルからなる群から選択され；
ＸはＯ、ＮＨまたはアルキルアミノであり；
ＹはＯ、ＮＨまたはアルキルアミノである］
で示される化合物を用いて製造できる。
式ＩＩＩ：
0004364944.tif 000036
［式中、
Ｒ基および種々の置換分は本明細書中、上記定義のとおりであり、本明細書を通してそうである］
で示される化合物を式ＩＶ：
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［式中、
Ｒ25は式：
0004364944.tif 000038
の酸を伴い；
Ｒ27はＨ、Ｃ1−Ｃ12アルキルおよびアリールからなる群から選択される］
で示される化合物およびシリル化物質を接触させることによって製造できる。ビスＮ，Ｏ−トリメチルシリルアセトアミド（ＢＳＡ）は特に好ましいシリル化物質である。
本明細書中に用いる用語「活性エステル置換分」は指定した置換分を良好な解離基とする置換分を表す。適当な置換分は標準的な参考文献、例えば″Protective Groups in Organic Chemistry″, Plenum Press,（London and New York, 1973）；Greene, T.W.″Protective Groups in Organic Synthesis″, Wiley（New York, 1981）の方針を用いて選択できる。特にGreeneの180〜184ページを参照。特に好ましい活性エステル置換分基はＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）である。他の好ましい基には：
0004364944.tif 000039
（Ｏ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）、Ｏ−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドおよびその塩、Ｏ−２−ニトロフェニル、Ｏ−４−ニトロフェニルおよびＯ−２，４−ジクロロフェニル（ここに″Ｏ″はエステル官能基を形成するために必要な酸素基を表す）が含まれるがこれらに限定されない。
本明細書中に用いる用語「アミド」はアルカリ性条件を用いて分解させることができるアミド官能基を表す。例えば、この用語は−ＮＭｅ2を表すが、いかなる意味においてもこれに限定されない。他の方針については、例えばGreene, T.W.″Protecting Groups in Organic Synthesis″, Wiley（New York, 1981）参照。
本明細書中に用いる用語「活性エステル置換分」はＯＲ24置換分を良好な解離基とする置換分を表す。適当な置換分は標準的な参考文献、例えば″Protective Groups in Organic Chemistry″, Plenum Press,（London and New York, 1973）；Greene, T.W.″Protective Groups in Organic Synthesis″, Wiley（New York, 1981）の方針を用いて選択できる。特に好ましいＲ25基はＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）である。
本明細書中に記載の工程は溶媒の存在下に完了させるのが最も好ましい。当業者であれば上記工程に適当な溶媒を選択できる。不活性有機溶媒は特に好ましいが、一定の条件下では水性溶媒が適当であり得る。例えば、Ｒ27が水素であり、Ｒ13がＢＯＣである場合、溶媒としての水性塩基が効果的であろう。
式Ｉの化合物の所望のＲ6置換分がアミンを含有している場合、Ｒ6基のアミン置換分はアミノ保護基を用いて保護されなければならない。当業者であれば、例えば″Protective Groups in Organic Chemistry″, Plenum Press,（London and New York, 1973）；Greene, T.W.″Protective Groups in Organic Synthesis″, Wiley（New York, 1981）を含む標準的な参考文献の方針を用いて適当なアミノ保護基を容易に選択できる。
Ｒ27は酸性、中性または弱塩基性条件を用いて−ＣＯ2Ｒ27置換分を除去することができる基であるべきである。好ましいＲ27基には水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、トリクロロメチル、トリクロロエチルおよびメチルチオメチルが含まれるが、いかなる意味においてもこれらに限定されない。Ｒ27は水素であるのが特に好ましい。
当業者にさらなる方針を提供するため、以下の反応式を提供する：
式Ｉの化合物は式ＩＩ：
0004364944.tif 000040
［式中、
Ａｒ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10は上記式Ｉに記載の意味を有する。用語Ｒ11’は上記Ｒ11に対する定義のとおりであり；
Ｒ13は選択されるアミノ保護基であり；
Ｒ24は活性エステル置換分、アミド置換分、Ｏ−２−ニトロフェニル、Ｏ−４−ニトロフェニルおよびＯ−２，４−ジクロロフェニルからなる群から選択され；
ＸはＯ、ＮＨまたはアルキルアミノであり；
ＹはＣ、Ｏ、ＮＨ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2またはアルキルアミノである］
で示される化合物を用いて製造できる。
式ＩＩＩ：
0004364944.tif 000041
［式中、
Ｒ基および種々の置換分は本明細書中、上記のとおりであり、また本明細書を通してそうである］
で示される化合物を式ＩＶ：
0004364944.tif 000042
［式中、
Ｒ25は式：
0004364944.tif 000043
で示される酸を伴い；
Ｒ27はＨ、Ｃ1−Ｃ12アルキルおよびアリールからなる群から選択される］
で示される化合物およびシリル化物質を接触させることによって製造できる。ビスＮ，Ｏ−トリメチルアセトアミド（ＢＳＡ）は特に好ましいシリル化物質である。
Ｒ25に関して用いる用語「活性エステル置換分」はＯＲ24置換分を良好な解離基とする置換分を表す。適当な置換分は標準的な参考文献、例えば″Protective Groups in Organic Chemistry″, Plenum Press,（London and New York, 1973）；Greene, T.W.″Protective Groups in Organic Synthesis″, Wiley（New York, 1981）の方針を用いて選択できる。特に好ましいＲ25基はＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）である。
本明細書中に記載の工程は溶媒の存在下で完了させるのが最も好ましい。当業者であれば上記工程に適当な溶媒を選択できる。不活性有機溶媒は特に好ましいが、一定条件下では水性溶媒が適当であり得る。例えばＲ27が水素であり、Ｒ13がＢＯＣである場合、溶媒としての水性塩基は有効であろう。
式Ｉの化合物の望ましいＲ6置換分がアミンを含む場合、Ｒ6基のアミン置換分はアミノ保護基を用いて保護しなければならない。当業者であれば、例えば″Protective Groups in Organic Chemistry″, Plenum Press,（London and New York, 1973）；Greene, T.W.″Protective Groups in Organic Synthesis″, Wiley（New York, 1981）を含む標準的な参考文献の方針を用いて適当なアミノ保護基を容易に選択できる。
Ｒ27は酸性、中性または弱塩基性条件を用いて−ＣＯ2Ｒ27置換分を除去できる基であるべきである。好ましいＲ27基には水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、トリクロロメチル、トリクロロエチルおよびメチルチオメチルが含まれるが、いかなる意味においてもこれらに限定されない。Ｒ27は水素であるのが特に好ましい。
当業者にさらなる方針を提供するため、以下の反応式を提供する：
0004364944.tif 000044
0004364944.tif 000045
反応式Ｉ’に、ならびに本明細書中を通して用いるＲ1’はハロゲン、ＳＨ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアンモニウム、アルキルチオ、ジアルキルスルホニウム、硫酸、リン酸または保護ＯＨまたは保護ＳＨ基であり；Ｒ2はＯＨまたはＳＨであり；Ｒ26は保護しなければ一連の化学操作において反応し得るアルコール基を保護するため、一部の合成工程の間、導入されるアルコール保護基であり、次いで合成の後の段階で除去される。このような保護基を形成および除去するためのたくさんの反応は、例えば″Protective Groups in Organic Chemistry″, Plenum Press,（London and New York, 1973）；Greene, T.W.″Protective Groups in Organic Synthesis″, Wiley（New York, 1981）を含む多数の標準的な文献に記載されている。当業者であれば特に上記文献の方針により適当なアルコール保護基を選択できる。特に有用なアルコール保護基の１つはtert−ブチルジメチルシリル（ＴＢＳ）である。標準的方法を用いて上記反応の生成物を派生化し、他のクリプトフィシン化合物を得ることが可能である。
0004364944.tif 000046
一般的に本発明の工程は以下の示したとおりである：
0004364944.tif 000047
0004364944.tif 000048
［Ｒ6およびＲ11’は本明細書中を通し、本明細書中に定義のとおりである］。
標準的方法を用いて本明細書中に提供した反応式の生成物をさらに派生化し、さらなるクリプトフィシン化合物を得ることができる。
当業者であれば適当な出発物質および試薬を利用し、前記反応式および以下の実施例を参考にして所望の化合物を製造できる。
例えば以下のようにエステル出発物質を製造できる：
0004364944.tif 000049
0004364944.tif 000050
［Ｒ6は上記定義の意味を有する］。
さらなる方針を提供するため、以下の反応式を提供する。反応式、製造例および実施例において、当分野に一般に既知の略語を用いる。便宜上、これらの略語には以下のものが含まれる：
0004364944.tif 000051
当業者の便宜のため反応式の具体的な適用の１つを提供する本明細書中の製造例段落により、エステル化合物の製造反応式をさらに説明する。
0004364944.tif 000052
0004364944.tif 000053
0004364944.tif 000054
0004364944.tif 000055
［Ａｒ置換分は本明細書中に記載のとおりである］。合成反応式を例示したフェニル環だけに限定することを意図して反応式を例示したわけではない。逆に、当業者はこの工程を幅広く適用し、本明細書中に特許請求している化合物に所望の出発物質を得ることができる。
必要な反応時間はその出発物質および反応温度に関連する。上記工程に最適な反応時間は常に、短い反応時間が好ましいとされる処理量および長い反応時間が好ましいとされる最大収量の競合する目標を考慮して決定される妥協点である。
生合成経路を用いて本発明の化合物を製造できる。例えば、約０℃でＤＭＥ−Ｈ2Ｏ（２：１、１５．０ｍＬ）中のクリプトフィシン３（約０．２４mmol）の溶液をブロモスクシンイミド（約６５ｍｇ）で処理し、室温にまであたためる。約２４時間後、溶媒を除去し、残留物をＣＨ3ＣＮのような溶媒に溶解し、逆相ＨＰＬＣ（６５：３５ ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ、６ｍＬ／分が好ましい）にかけ、クリプトフィシン化合物の混合物を得る。この混合物を順相ＨＰＬＣ（１：１ヘキサン／酢酸エチル、３ｍＬ／分が好ましい）によって再クロマトグラフし、所望のクリプトフィシン化合物を得る。
同様に、クリプトフィシン３（約４０ｍｇ、０．０６３mmol）を２：１ ＤＭＥ／Ｈ2Ｏ（約６ｍＬ）に入れ、Ｎ−クロロスクシンイミド（０．０７５mmol）を加え、約６０−７０℃で約２４時間加熱する。ＮＣＳのさらなる量（８ｍｇ）を加え、約２４時間、加熱をさらに継続する。溶媒を除去し、残留物をＨＰＬＣ（３５％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ ６ｍＬ／分）にかけ、所望のクリプトフィシン化合物を得る。得られた混合物をメタノール／水（約４：１）を用いるＨＰＬＣによってさらに精製し、所望の精製クリプトフィシン化合物を得る。
本発明をさらに例示するために次の実施例を提供する。決して本発明の範囲を以下の実施例にまたは実施例で限定することを意図するものではない。
製造例１
第１工程：５−フェニル−ペンタン−２（Ｅ）−エン−酸メチルエステル．  ホスホノ酢酸トリメチルエステル（３７６ｇ、４１７ｍＬ、２．０７mol）のＴＨＦ（７５０ｍＬ）溶液を攪拌機およびＮ2導入口を装着した３Ｌの三頚丸底フラスコ中で０℃で撹拌した。冷却した溶液に、滴下漏斗からニートのテトラメチルグアニジン（２３９ｇ、２６０ｍＬ、２．０７mol）を滴加した。冷たい透明な薄黄色溶液を０℃で２５分間撹拌した。ヒドロシンナムアルデヒド（９０％、２５３ｇ、２４８ｍＬ、１．９mol）のＴＨＦ（１２５ｍＬ）溶液を反応溶液中に徐々に滴加した。添加完了後、反応物を１０時間撹拌して室温まで戻した。ＧＣは生成物と出発物質との比率９５：５を示した。反応容器に水５００ｍＬを添加し、反応物を一晩撹拌して二層とした。有機層を分離し、水層をｔ−ＢｕＯＭｅで抽出した。有機層を集め、ＭｇＳＯ4で乾燥し、次に減圧下に濃縮してオレンジ色油状物を得た。この粗製生成物を１２９℃／０．３ｍｍＨｇで蒸留し、透明な淡黄色油状物として３６０．５ｇ、収率９１．７％で得た。
0004364944.tif 000056
第２工程：５−フェニル−ペンタン−２（Ｅ）−エン−１−オール．  熱電対、攪拌機およびＮ2導入口を装着した１２Ｌの四頚丸底フラスコにエノエートエステル（３１０．５ｇ、１．５mol）のＴＨＦ（１．５Ｌ）溶液を注入し、ｉ−ＰｒＯＨ／ＣＯ2浴で−７１℃まで冷却した。反応容器にＤＩＢＡＬ（２．５Ｌ、トルエン中の１．５Ｍ溶液、３．７５mol）を反応温度が＜−５０℃に維持される速度で滴加した。添加完了後、反応物を＜−５０℃の反応温度で一晩撹拌した。１６時間後に、ＴＬＣ（３：１、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ、ＳｉＯ2）が出発物質の不在を示した。反応温度を−１５℃まで戻した。反応を徐々に１Ｎ ＨＣｌ（１５０ｍＬ）でクエンチした。この時、反応物はゼラチン状固形物になった。この半固形物をスパチュラを用いて壊し、１Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）を添加して混合物をより流動性にした。濃ＨＣｌ（６２５ｍＬ）を注入して二層系を形成させた。両層を分離し、生成物をｔ−ＢｕＯＭｅで抽出した。この有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧下に濃縮して透明な淡黄色油状物２４７．８ｇを得た。
この粗製生成物を１４５℃／０．２５ｍｍＨｇで蒸留して２０９．７ｇ、８６．２％を得た。
0004364944.tif 000057
第３工程：（２Ｓ，３Ｓ）−２，３−エポキシ−５−フェニル−１−ペンタノール．  攪拌機、熱電対およびＮ2導入口を装着した１Ｌの三頚丸底フラスコにＣＨ2Ｃｌ2（３５０ｍＬ）、３０ｇの乾燥４ÅモレキュラーシーブスおよびＬ−（＋）−酒石酸ジメチルエステル（７．６２ｇ、０．０３７mol）を添加した。得られた混合物を−２０℃まで冷却し、Ｔｉ（Ｏ−ｉ−Ｐｒ）4（９．２ｍＬ、０．０３１mol）で処理し、続いてｔ−ブチルヒドロペルオキシド（４．０Ｍ、ＣＨ2Ｃｌ2溶液、１８２ｍＬ、０．７８mol）を反応温度2 −２０℃に維持される速度で加えた。添加完了後、反応物をさらに３０分間撹拌した後、反応温度2 −２０℃に維持される速度でアリルアルコール（５０ｇ、０．３１mol）のＣＨ2Ｃｌ2（３０ｍＬ）溶液で処理した。反応物を同温で５時間撹拌し、次にろ過し、０℃の硫酸第一鉄七水和物（１３２ｇ）および酒石酸（４０ｇ）の水（４００ｍＬ）溶液中に入れた。この混合物を２０分間撹拌した後、分液漏斗に移し、ｔ−ＢｕＯＭｅ（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機層を集めてＮａＣｌ含有３０％ＮａＯＨ溶液と０℃で１時間撹拌した。再び両層を分離し、水層をｔ−ＢｕＯＭｅで抽出した。有機層を集めてブラインで洗い、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮して琥珀色油状物５２．８ｇを得た。
第４工程：（２Ｒ，３Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−メチル−５−フェニルペンタン−１−オール．  攪拌機、熱電対およびＮ2導入口を装着した５ Ｌの三頚丸底フラスコにヘキサン（１Ｌ）を添加し、０℃に冷却した。２．０Ｍ Ｍｅ3Ａｌのヘキサン溶液（８００ｍＬ、１．６mol）を添加し、続いて前記のエポキシド化合物（１２０ｇ、０．６７７mol）のヘキサン（２５０ｍＬ）／ＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍＬ）溶液を温度が２０℃以下に維持される速度で添加した。添加完了後、濁った反応混合物を５℃で３５分間撹拌し、１０％ＨＣｌ（３００ｍＬ）の溶液を滴加し、続いて濃ＨＣｌ（３５０ｍＬ）を添加した。両層を分離し、有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。減圧下で揮発性物質を除去した後、油状物１２２．１ｇを得た。
第５工程：トシル酸（２Ｒ，３Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−メチル−５−フェニルペンタン−１−イルエステル．  攪拌機および窒素導入口を装着した２Ｌの三頚丸底フラスコに前記ジオール化合物（５８ｇ、０．３０mol）、ジブチル錫オキシド（１．５ｇ、０．００６モル、２mol％）、塩化トルエンスルホニル（５７．５ｇ、０．３０mol）、ＣＨ2Ｃｌ2（５８０ｍＬ）およびトリエチルアミン（４２．０ｍＬ、０．３０mol）を添加した。得られた混合物を室温で２時間（反応は１時間以内に完了していたのだが）撹拌し、ろ過し、水洗し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。減圧下で揮発性物質を濃縮し、淡琥珀色油状物１０４．１ｇを得た。
第６工程：トシル酸（２Ｒ，３Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−３−メチル−５−フェニルペンタン−１−イルエステル．  前記トシラート化合物（１００ｇ、０．２９mol）およびトリエチルアミン（８１．０ｍＬ、０．５８mol）のＣＨ2Ｃｌ2（１２００ｍＬ）溶液をニートのＴＢＳ−ＯＴｆ（９９ｍＬ、０．４３mol）で滴加処理し、続いて、さらに２０分間撹拌を続けた。反応物をブラインで２回洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮乾固した。油状物を最少量のヘキサンに溶解し、シリカ床でろ過し、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（９：１）で溶出して僅かに琥珀色の油状物１３４ｇを得た。
第７工程：トシル酸（２Ｒ，３Ｒ，５ＲＳ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−３−メチル−５−ブロモ−５−フェニルペンタン−１−イルエステル．  攪拌機、還流冷却器および窒素導入口を装着した５Ｌの三頚丸底フラスコにＣＣｌ4（１６８０ｍＬ）、ＴＢＳ・Ｔｓ（１４０ｇ、０．３０mol）、ＮＢＳ（６５ｇ、０．３６５mol）およびＡＩＢＮ（１６．５ｇ、０．１０mol）を添加した。この混合物を撹拌しつつ高減圧下で脱気して脱ガスし、窒素を再充填（×３）した。この反応混合物を次に加熱還流すると色が暗褐色になった。１５分間激しく還流した後、反応混合物は明黄色になり、クロマトグラフィー分析は反応終了を示した。室温まで冷却後、反応物をろ過し、ろ液を濃縮乾固した。残留物をヘキサンに再溶解し、再度ろ過し、濃縮乾固し、琥珀色油状物として１７０．３ｇを得た。
第８工程：トシル酸（２Ｒ，３Ｒ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−３−メチル−５−フェニルペンタン−４（Ｅ）−エン−１−イルエステル．  攪拌機、還流冷却器および窒素導入口を装着した２Ｌの三頚丸底フラスコに前記ブロミド化合物（１００ｇ、０．１８６mol）のアセトニトリル（７００ｍＬ）溶液を添加した。ＤＢＵ（８３．６ｍＬ、０．５５７mol）を添加し、得られた暗褐色溶液を１５分間撹拌下に還流した。室温まで冷却後に、溶媒を減圧下に除去し、残留物をＣＨ2Ｃｌ2（２００ｍＬ）中で砕き、シリカ床を通してろ過した。揮発性物質を再度蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃに溶解し、水、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮乾固した。調製用ｍｐｌｃ（Ｐｒｅｐ・５００）クロマトグラフィーにより所望の不飽和化合物（５０．３ｇ、この４工程にわたって６０％収率）を得た。
第９工程：（３Ｓ，４Ｒ）−３−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−４−メチル−６−フェニルヘキサン−５（Ｅ）−エン−１−ニトリル．  このトシラート（５０ｇ、０．１１mol）をＤＭＳＯ（１Ｌ）に溶解し、ＫＣＮ（１４．２ｇ、０．２２mol）および水（２５ｍＬ）で処理し、得られた混合物を窒素下に６０℃で１８時間撹拌した。室温まで冷却後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）と水（１Ｌ）との間に分配した。水相をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で抽出し、有機層を集めてブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した。シリカでＣＨ2Ｃｌ2によりフラッシュクロマトグラフして所望のニトリル化合物を９２％収率で得た。
第１０工程：（５Ｓ，６Ｒ）−５−［（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ］−６−メチル−８−フェニルオクタ−２（Ｅ），７（Ｅ）−ジエン酸メチルエステル．  このニトリル化合物（１４．６７ｇ、４６．５mmol）をトルエン（２００ｍＬ）に溶解し、窒素下で−７８℃まで冷却した。激しく撹拌しながらこれに１．５Ｍ ＤＩＢＡＬトルエン溶液（３７．２ｍＬ、５５．８mmol）を滴加した。添加完了後、冷浴を除去し、反応物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を注意深く１Ｎ ＨＣｌに注入し、この混合物を室温で３０分間撹拌した。両層を分離し、有機相を酒石酸ナトリウムカリウム飽和水溶液（×２）、ブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した。揮発性物質を減圧下に除去し、粗製の淡黄色油状物を次の縮合反応に直接使用した。
前節からの粗製アルデヒド化合物をＴＨＦ（９０ｍＬ）に溶解し、窒素下に室温でホスホノ酢酸トリメチルエステル（９．０３ｍＬ、５５．８mmol）およびテトラメチルグアニジン（７．０ｍＬ、５５．８mmol）で処理した。反応混合物を１６時間撹拌し、次にＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）との間に分配した。水相をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で逆抽出し、有機相を集めて水、ブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した。揮発性物質を減圧下に除去し、粗製の黄色油状物（１７．０ｇ）をＣＨ2Ｃｌ2：シクロヘキサン（１：１〜２：１）を用いてクシリカゲルロマトグラフィーし、所望エステル化合物を１３．６７ｇ得た。収率：７８．５％。
製造例２
0004364944.tif 000058
メチルエステル化合物（２．６７３mmol）をアセトンに溶解し、次いで室温で１Ｎ ＬｉＯＨ水溶液（２６ｍＬ）を加えた。濁った混合物をアセトン（２０ｍＬ）でさらに希釈し、得られた黄色混合物を室温で２３．５時間攪拌した。この反応物をジエチルエーテル（４００ｍＬ）で希釈し、有機層を１Ｎ ＨＣｌ（１２０ｍＬ）、ブライン（２００ｍＬ）およびＨ2Ｏ（１６０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥し、減圧下で濃縮し、黄色油状物を得、これをカラムクロマトグラフィー（濃度勾配：５％ ＡｃＯＨ＋２０％−４０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、黄色油状物としてカルボン酸化合物を得た（９６０ｍｇ、１００％）。
0004364944.tif 000059
製造例３
0004364944.tif 000060
乾燥ジメチルホルムアミド（５．５０ｍＬ）中のカルボン酸化合物（２mmol）の攪拌溶液に１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（２．４mmol）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２．６mmol）を室温で加えた。この混合物を２８時間攪拌し、次いでＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ水溶液（２×５０ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、減圧下で濃縮し、油状物を得た。粗製の生成物をカラムクロマトグラフィー（濃度勾配：５−３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、淡黄色油状物として活性エステル化合物を得た（７２４ｍｇ、８０％）。
0004364944.tif 000061
製造例４
0004364944.tif 000062
ＣＨ3ＣＮ（１３０ｍＬ）中のシリルエーテル化合物（２．５０ｇ、５．４７mmol）の攪拌溶液に、４８％ＨＦ水溶液（１５ｍＬ）を０℃で加えた。この溶液を０℃で０．７５時間、次いで室温で４時間攪拌した。反応物をジエチルエーテル（３００ｍＬ）で希釈し、洗浄物が約ｐＨ７となるまでＨ2Ｏで洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧下で濃縮し、黄色残留物を得、これをＥｔ2Ｏから再結晶し、白色結晶としてアルコール化合物を得た（１．４６ｇ、７８％）。
0004364944.tif 000063
0004364944.tif 000064
実施例１
クリプトフィシン５５アセテート（３）の製造。  ０℃のメチレンクロライド６５９ｍＬ中の１（９３ｍｇ、０．１３mmol）の溶液にトリエチルアミン（５５ｍＬ、０．４０mmol）、４−ジメチルアミノピリジン（１．６ｍｇ、０．０１３mmol）および無水酢酸（１９ｍＬ、０．２０mmol）を加えた。０℃で１時間攪拌後、反応をメタノール１９ｍＬでクエンチし、０．５容量にまで濃縮し、直接フラッシュクロマトグラフィーカラム（フラッシュシリカゲル１９ｇ）にアプライした。酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で溶出し、白色泡沫として標題化合物８８ｍｇ（８９％）を得た：
0004364944.tif 000065
実施例２
クリプトフィシン５５スクシネート（４）の製造。  室温のメチレンクロライド３８３ｍＬ中の１（２７ｍｇ、０．０３８mmol）および無水琥珀酸（５．７ｍｇ、０．０５７mmol）の溶液にトリエチルアミン（１６ｍＬ、０．１１５mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（４．７ｍｇ、０．０３８mmol）を加えた。１９時間攪拌した後、さらに無水琥珀酸５．７ｍｇ（０．０５７mmol）および４−ジメチルアミノピリジン４．７ｍｇ（０．０３８mmol）を加え、次いでさらに２９時間攪拌した。反応物を１Ｎ塩酸水溶液０．５ｍＬで処理し、メチレンクロライド（３×０．５ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物をまとめ、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、白色泡沫とした。逆相ＨＰＬＣ7で精製し、白色泡沫として標題化合物１０ｍｇ（３２％）を得た：
0004364944.tif 000066
実施例３
クリプトフィシン５５（２’−ジ−ｔ−ブチルホスファチル）フェニルアセテート（５）の製造
室温の無水メチレンクロライド２５０ｍＬ中の１（０．１０２mmol）、２４（４６ｍｇ、０．１３４mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１０２mmol）の溶液にメチレンクロライド５０ｍＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２７ｍｇ、０．１３４mmol）の溶液を加えた。室温で６時間攪拌した後、反応物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１）１ｍＬで希釈し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、紫色泡沫とした。酢酸エチル−ヘキサン（４：１）で溶出するクロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ）により、白色泡沫として標題化合物８６ｍｇ（８２％）を得た：
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実施例４
クリプトフィシン５５（２’−ホスファチル）フェニルアセテート二ナトリウム塩（６）の製造
室温のメチレンクロライド４００ｍＬ中の５（８４ｍｇ、０．０８１mmol）の溶液に１，４−ジオキサン（８１ｍＬ、０．３３mmol）中の塩化水素４．０Ｍ溶液を加えた。この淡黄色溶液を室温で２時間攪拌した。減圧下で濃縮し、オフホワイト色泡沫とした後、粗製の二水素ホスフェートをテトラヒドロフラン６１４ｍＬに溶解し、５．００Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３３ｍＬ、０−１６３mmol）で処理した。１０分間攪拌した後、この混合物を減圧下で濃縮し、黄褐色泡沫とした。粗製の塩を熱アセトニトリル１ｍＬおよび熱水０．１ｍＬにとった。不溶物をろ過して除き、ろ液を減圧下で濃縮し、白色固形物として標題化合物６９ｍｇ（８７％）を得た：
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実施例５
クリプトフィシン５５ニコチノエート塩酸塩（７）の製造
室温のピリジン３５４ｍＬ中の１（５０ｍｇ、０．０７１mmol）の溶液にニコチノイルクロライド・塩酸（１５ｍｇ、０．０８５mmol）次いでトリエチルアミン（２３ｍＬ、０．１７０mmol）を加えた。１．５時間攪拌した後、４−ジメチルアミノピリジン（８．６ｍｇ、０．０７１mmol）を加えた。５時間攪拌した後、さらにトリエチルアミン（２３ｍＬ、０．１７０mmol）、４−ジメチルアミノピリジン（８．６ｍｇ、０．０７１mmol）およびニコチノイルクロライド・塩酸（１５ｍｇ、０．０８５mmol）をピリジンリンス５０ｍＬとともに加えた。１８時間攪拌した後、この反応物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液０．５ｍＬで処理し、メチレンクロライド（４×１ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物をまとめ、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、明褐色油状物とした。酢酸エチル−ヘキサン（１０：１）で溶出するクロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１４ｇ）により、遊離塩基化合物４９ｍｇ（８５％）を白色泡沫として得た。ニコチノエート化合物をメチレンクロライド１ｍＬに溶解し、ジエチルエーテル中の１．０Ｍ塩化水素溶液（９０ｍＬ、０．９０mmol）で処理した。無色透明の溶液を室温で５分間静置した。減圧下で溶媒を除去し、白色泡沫として標題化合物５１ｍｇを得た：
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実施例６
クリプトフィシン５５ Ｎ−メチルピリジニウム酢酸塩（８）の製造
０℃のメチレンクロライド７５１ｍＬ中の１（５３ｍｇ、０．０７５mmol）の溶液にトリエチルアミン（１３ｍＬ、０．０９０mmol）次いで２−フルオロ−１−メチルピリジニウム ｐ−トルエンスルホネート（２３ｍｇ、０．０８３mmol）を加えた。異相の反応混合物を室温にまであたため、３．５時間攪拌した時点でさらに２−フルオロ−１−メチルピリジニウム ｐ−トルエンスルホネート１１ｍｇ（０．０３９mmol）を加えた。１４．５時間攪拌した後、さらに２−フルオロ−１−メチルピリジニウム ｐ−トルエンスルホネート１１ｍｇ（０．０３９mmol）を加え、次いで２．５時間後にさらに２−フルオロ−１−メチルピリジニウム ｐ−トルエンスルホネート１１ｍｇ（０．０３９）およびトリエチルアミン１３ｍＬ（０．０９０）を加えた。さらに１時間攪拌した後、反応物を減圧下で濃縮し、オレンジ色泡沫とした。陰イオン交換（ｐ−トルエンスルホネートのかわりにアセテート）して逆相ＨＰＬＣ8で精製し、次いで凍結乾燥し、標題化合物３０ｍｇ（４７％）を白色固形物として得た：
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実施例７
クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−（Ｄ）−アラニネート（９）の製造
室温の無水メチレンクロライド１４３ｍＬ中の１（２３ｍｇ、０．０３３mmol）、Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−（Ｄ）−アラニン4C（１６ｍｇ、０．０４９mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（数個の結晶）の溶液にメチレンクロライド２０ｍＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１０ｍｇ、０．０４９mmol）の溶液を加えた。２時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（２：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（２：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１４ｇ、２：１ 酢酸エチル−ヘキサン）により標題化合物２９ｍｇ（８８％）を白色泡沫として得た：
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実施例８
クリプトフィシン５５ ３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−（Ｄ）−アラニネート塩酸塩（１０）の製造
室温のメチレンクロライド２６５ｍＬ中の９（２７ｍｇ、０．０２７mmol）の溶液に１，４−ジオキサン（３３ｍＬ、０．１３３mmol）中の４．０Ｍ塩化水素溶液を加えた。３時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物２６ｍｇ（５重量％ジオキサンを考慮して９６％）を白色泡沫として得た：
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実施例９
クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−グリシネート（１１）の製造
室温の無水メチレンクロライド４９０ｍＬ中の１（１１８ｍｇ、０．１６７mmol）、Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−グリシン（４４ｍｇ、０．２５１mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（２．０ｍｇ、０．０１６７mmol）の溶液にメチレンクロライド６７ｍＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（５２ｍｇ、０．２５１mmol）の溶液を加えた。５０分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１９ｇ、３：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物１３８ｍｇ（９６％）を白色泡沫として得た：
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実施例９
クリプトフィシン５５グリシネート塩酸塩（１２）の製造
室温のメチレンクロライド４７１ｍＬ中の１１（１２２ｍｇ、０．２４１mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の４．０Ｍ塩化水素溶液（１７８ｍＬ、０．７０７mol）を加えた。１時間２０分攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１２０ｍｇ（７重量％ジオキサンを考慮して９９％）を白色泡沫として得た：
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実施例１０
クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ｂ−アラニネート（１３）の製造
室温の無水メチレンクロライド４００ｍＬ中の１（１０２ｍｇ、０．１４５mmol）、Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ｂ−アラニン（４１ｍｇ、０．２１７mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（１８ｍｇ、０．１４５mmol）の溶液にメチレンクロライド８２ｍＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（４５ｍｇ、０．２１７mmol）を加えた。３．５時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル２１ｇ、２：１次いで４：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物１２１ｍｇ（９５％）を自色泡沫として得た：
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実施例１１
クリプトフィシン５５ ｂ−アラニネート塩酸塩（１４）の製造
室温のメチレンクロライド４５２ｍＬ中の１３（１１９ｍｇ、０．１３６mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の４．０Ｍ塩化水素溶液（１７０ｍＬ、０．６７９mmol）を加えた。２時間１５分攪拌した後、白濁した反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１１０ｍｇ（４重量％ジオキサンを考慮して９６％）を白色泡沫として得た：
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実施例１２
クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−ｇ−アミノブチレート（１５）の製造
室温の無水メチレンクロライド１５０ｍＬ中の１（４８ｍｇ、０．０６８mmol）、Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−４−アミノ酪酸（１８ｍｇ、０．０８８mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（８ｍｇ、０．０６８mmol）の溶液にメチレンクロライド５０ｍＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１８ｍｇ、０．０８８mmol）の溶液を加えた。４５分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、５分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ、３：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物５５ｍｇ（９０％）を白色泡沫として得た：
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実施例１３
クリプトフィシン５５ ｇ−アミノブチレート塩酸塩（１６）の製造
室温のメチレンクロライド２９７ｍＬ中の１５（５３ｍｇ、０．０５９mmol）の溶液にジエチルエーテル中の１．０Ｍ塩化水素溶液（２９７ｍＬ、０．２９７mmol）を加えた。出発物質を白色ペーストとして沈殿させ、これをさらにメチレンクロライド１５０ｍＬに再溶解した。４時間攪拌した後、塩化水素溶液５９ｍＬ（０．０５９mmol）を追加した。さらに１４時間攪拌を継続し、反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物４９ｍｇ（１００％）を白色泡沫として得た：
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実施例１４
クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−（Ｌ）−アラニネート（１７）の製造
室温の無水メチレンクロライド４００ｍＬ中の１（１０３ｍｇ、０．１４６mmol）、Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−（Ｌ）−アラニン（４１ｍｇ、０．２１９mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（１８ｍｇ、０．１４６mmol）の溶液にメチレンクロライド８７ｍＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（４５ｍｇ、０．２１９mmol）の溶液を加えた。５時間５０分間攪拌した後、白濁した反応混合物をさらにＮ−ｔ−Ｂｏｃ−（Ｌ）−アラニン５．５ｍｇ（０．０２９mmol）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド６．０ｍｇ（０．０２９mmol）および数個の４−ジメチルアミノピリジン結晶で処理した。さらに１時間攪拌した後、反応物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル２２ｇ、１．５：１次いで２：１次いで４：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物９６ｍｇ（７５％）を白色泡沫として得た：
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実施例１５
クリプトフィシン５５（Ｌ）−アラニネート塩酸塩（１８）の製造
室温のメチレンクロライド３６１ｍＬ中の１７（９５ｍｇ、０．１０８mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の４．０Ｍ塩化水素溶液（１３５ｍＬ、０．５４molを加えた。２．５時間攪拌した後、白濁した反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物９０ｍｇ（６重量％ジオキサンを考慮して９６％）を白色泡沫として得た：
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実施例１６
クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−（Ｄ）−アラニネート（１９）の製造
室温の無水メチレンクロライド１３０ｍＬ中の１（２５ｍｇ、０．０３５mmol）、Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−（Ｄ）−アラニン（１０ｍｇ、０．０５３mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．４ｍｇ、０．００３５mmol）の溶液にメチレンクロライド４７ｍＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１１ｍｇ、０．０５３mmol）の溶液を加えた。５．５時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ、２：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物２６ｍｇ（８３％）を白色泡沫として得た：
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実施例１７
クリプトフィシン５５（Ｄ）−アラニネート塩酸塩（２０）の製造
室温のメチレンクロライド２７４ｍＬ中の１８（２４ｍｇ、０．０２７mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の４．０Ｍ塩化水素溶液（３４ｍＬ、０．１３７mmol）を加えた。３．５時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物２４ｍｇ（８重量％ジオキサンを考慮して１００％）を白色泡沫として得た：
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実施例１８
クリプトフィシン５５ Ｎａ−Ｎｅ−ジ−ｔ−Ｂｏｃ−（Ｌ）−リジネート（２１）の製造
室温の無水メチレンクロライド４００ｍＬ中の１（１０５ｍｇ、０．１４９mmol）、Ｎａ−Ｎｅ−ジ−ｔ−Ｂｏｃ−（Ｌ）−リジン（６７ｍｇ、０．１９３mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（１８ｍｇ、０．１４９mmol）の溶液にメチレンクロライド９６ｍＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（４０ｍｇ、０．１９３mmol）の溶液を加えた。４時間攪拌した後、白濁した反応混合物をさらにメチレンクロライド１００ｍＬ中のＮａ−Ｎｅ−ジ−ｔ−Ｂｏｃ−（Ｌ）−リジン１０ｍｇ（０．０３０mmol）および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド６．１ｍｇ（０．０３０mmol）の溶液で処理した。さらに１時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、白色泡沫とし、Ｎａ−Ｎｅ−ジ−ｔ−Ｂｏｃ−（Ｌ）−リジン３４ｍｇ（０．０９７mmol）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド２０ｍｇ（０．０９７mmol）および４−ジメチルアミノピリジン９．１ｍｇ（０．０７５mmol）を用いた上記条件に再び付した。１．５時間攪拌した後、反応物を上記のように処理し、粗製の白色泡沫を得た。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル２１ｇ、１：１次いで４：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物１１２ｍｇ（７３％）を白色泡沫として得た：
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実施例１９
クリプトフィシン５５（Ｌ）−リジネート二塩酸塩（２２）の製造
室温のメチレンクロライド３４５ｍＬ中の２１（１０７ｍｇ、０．１０３mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の４．０Ｍ塩化水素溶液（１５５ｍＬ、０．６２１mmol）を加えた。４時間攪拌した後、白濁した反応混合物をろ過した。白色固形物を集め、メチレンクロライド（２×１ｍＬ）で洗浄し、減圧下、室温で乾燥し、標題化合物８７ｍｇ（９３％）を得た：
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実施例２０
２’−（ジ−ｔ−ブチルホスファチル）フェニルアセテート（２４）の製造
０℃のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５．２ｍＬ中の２’−ヒドロキシフェネチルアルコール（１．０５ｇ、７．６０mmol）の溶液にイミダゾールおよびtert−ブチルジメチルシリルクロライド（１．２６ｇ、８．３４mmol）を加えた。０℃で４０分間および室温で４５分間攪拌した後、さらにイミダゾール１１５ｍｇ（２．２８mmol）およびtert−ブチルジメチルシリルクロライド２２９ｍｇ（１．５２mmol）を加えた。反応物をさらに１５分間攪拌した時点で、tert−ブチルメチルエーテル１５０ｍＬを加えた。この混合物を冷１Ｎ塩酸水溶液（１×１５ｍＬ）次いで水（１×１５ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、黄色油状物とした。ヘキサン−酢酸エチル（５：１）で溶出するクロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル７０ｇ）により、１°シリルエーテル化合物１．８１ｇ（９４％）を淡いオフホワイト色の油状物として得た。室温のテトラヒドロフラン２ｍＬ中のシリルエーテル化合物（５０６ｍｇ、２．００mmol）およびジ−tert−ブチル ジエチルホスホルアミダイト（９３％を６００ｍＬ、２．００mmol）の溶液に１−Ｈ−テトラゾール（４２１ｍｇ、６．０１mmol）を加えた。４５分間攪拌した後、反応混合物を−１０℃にまで冷却し、メチレンクロライド３．６ｍＬ中のｍ−クロロ過安息香酸（９９％を４５０ｍｇ、２．６１mmol）の溶液ですばやく処理した。白濁した反応物を室温にまであたため、１５分間攪拌した。反応物を１０％重亜硫酸ナトリウム水溶液４ｍＬでクエンチし、１０分間強く攪拌し、tert−ブチルメチルエーテルで希釈し、１０％重亜硫酸ナトリウム水溶液（２×１０ｍＬ）次いで０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、無色の油状物（９４１ｍｇ）とし、これを次の工程に直接用いた。粗製のホスフェート化合物をテトラヒドロフラン１０ｍＬに溶解し、０℃にまで冷却し、テトラヒドロフラン中のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライドの１Ｍ溶液（２．４ｍＬ、２．４mmol）で処理した。０℃で２０分間および室温で１．５時間攪拌した後、反応物をtert−ブチルメチルエーテル６０ｍＬで希釈し、水（１×１０ｍＬ）次いでブライン（１×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、黄色油状物を得た。酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で溶出するクロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル５０ｇ）により１°アルコール化合物５２５ｍｇ（７９％）をオフホワイト色油状物として得た。室温のアセトニトリル−四塩化炭素（１：１、１．４９ｍＬ）中のアルコール化合物（１２３ｍｇ、０．３７２mmol）の溶液に水（１．１ｍＬ）次いで過ヨウ素酸ナトリウム（２３９ｍｇ、１．１２mmol）およびルテニウム（ＩＩＩ）クロライド水和物（１．８ｍｇ、０．００８２mmol）を加えた。この褐色の混合物を室温で５５分間、高速に攪拌した。減圧下で濃縮し、クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル８ｇ、１０％メタノール−酢酸エチルで溶出）にかけ、標題化合物１０９ｍｇ（８５％）を紫色油状物として得た：
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実施例２１
実施例２１−２６の化合物は実質的に本明細書中、上記の方法を用いて製造できる。
クリプトフィシン−１２９の特性
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実施例２２
クリプトフィシン−１３８の特性
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実施例２３
クリプトフィシン−１３９の特性
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実施例２４
クリプトフィシン−１４５の特性
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実施例２５
クリプトフィシン−１４０の特性
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実施例２６
クリプトフィシン−１４１の特性
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実施例２７
反応式１実験
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−７８℃のＣＨ2Ｃｌ2５０ｍＬ中のアルケン化合物１（１．１５ｇ、３．５mmol）の溶液にピリジン（０．３ｍＬ、３．９mmol）およびＣＨ2Ｃｌ2中のスーダンレッド７Ｂの０．１％溶液０．９８ｍＬを加えた。赤色が黄色に変わるまでオゾン気泡をゆっくりと吹き込んだ。この反応の進行はＴＬＣでモニターした。完了時点で亜鉛粉末（１．６３ｇ、２４．９mmol）および氷酢酸３．４ｍＬを加えた。氷浴を除去し、混合物をゆっくりと室温にまであたため、さらに２時間攪拌した。反応混合物をセライトを通してろ過し、ＣｕＳＯ４（３×３０ｍＬ）次いで水（３×２０ｍＬ）および最後にＮａＨＣＯ3飽和水溶液（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、所望のアルデヒド化合物０．９３７ｇ（８８％）を得、これをさらに精製することなしに次の工程に用いた。
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メチルリチウム（９．６ｍＬ、１４．４mmol）を臭化リチウムと複合体形成したジエチルエーテル中の１．５Ｍ溶液として、ＴＨＦ１２０ｍＬ中の２，５−ジメチルベンジルトリフェニルホスホニウムクロライドの−７８℃溶液に滴加した。この溶液をゆっくりと０℃にまであたため、再び−７８℃にまで冷却した。ＴＨＦ４０ｍＬ中のアルデヒド化合物２を−７８℃のイリド化合物に滴加した。この混合物を−７８℃で１５分間攪拌し、次いでゆっくりと室温にまであたためた。室温に１時間置いた後、飽和ＮＨ4Ｃｌ（５０ｍＬ）を加え、溶液をエーテルで抽出した。エーテル層を水（２×５０ｍＬ）次いでブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。Ｅ：Ｚ異性体の混合物である粗製のスチレン化合物を２％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いたシリカゲルで精製し、透明な油状物２．３２ｇ（５８％）を得た。
ベンゼン１２０ｍＬ中、チオフェノール（０．３ｍＬ）および１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（ＶＡＺＯ）（０．１６ｇ）の存在下にＥ：Ｚ混合物を８時間還流した。次いでこの溶液を室温にまで冷却し、減圧下に濃縮し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２−５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、純粋なＥ異性体２．２ｇ（９５％）を透明な油状物として得た：
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ＴＨＦ１０ｍＬ中のエステル化合物３（２．２ｇ、５．４６mmol）の溶液に２Ｍ ＫＯＨ溶液１１ｍＬを加えた。強く攪拌しながら、得られた混合物を６５℃で２４時間加熱した。室温にまで冷却し、２Ｍ ＨＣｌ溶液１１ｍＬを加え、得られた混合物をさらに３０分間強く攪拌した。この混合物に酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、層を分離した。水層をさらに酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、５０％ブライン（３×３０ｍＬ）で洗浄し，Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、所望の酸化合物２．１２ｇ（１００％）を濃黄色油状物として得た：
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ＤＭＦ７ｍＬ中の酸化合物４（２．１２ｇ、５．４６mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（２．９ｍＬ、１６．４mmol）の０℃溶液にジフェニルホスフィニッククロライド（１．１ｍＬ、６．０１mmol）を滴加した。０℃で５分間、室温で３０分間攪拌した後、ＤＭＦ７ｍＬ中の３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−Ｄ−アラニン−２，２，２−トリクロロエチルエステル化合物５のＴＦＡ塩を滴加した。得られた混合物を室温で２時間攪拌し、水１００ｍＬに注ぎ、ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をまとめ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、セライトを通してろ過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０−３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、白色泡沫としてアミド化合物６ ２．８６ｇ（７２％）を得た：
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実施例２７
反応式１実験
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−７８℃のＣＨ2Ｃｌ2５０ｍＬ中のアルケン化合物１（１．１５ｇ、３．５mmol）の溶液にピリジン（０．３ｍＬ、３．９mmol）およびＣＨ2Ｃｌ2中のスーダンレッド７Ｂの０．１％溶液０．９８ｍＬを加えた。赤色が黄色に変わるまでオゾン気泡をゆっくりと吹き込んだ。この反応の進行はＴＬＣでモニターした。完了時点で亜鉛粉末（１．６３ｇ、２４．９mmol）および氷酢酸３．４ｍＬを加えた。氷浴を除去し、混合物をゆっくりと室温にまであたため、さらに２時間攪拌した。反応混合物をセライトを通してろ過し、ＣｕＳＯ４（３×３０ｍＬ）次いで水（３×２０ｍＬ）および最後にＮａＨＣＯ3飽和水溶液（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、所望のアルデヒド化合物０．９３７ｇ（８８％）を得、これをさらに精製することなしに次の工程に用いた。
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メチルリチウム（９．６ｍＬ、１４．４mmol）を臭化リチウムと複合体形成したジエチルエーテル中の１．５Ｍ溶液として、ＴＨＦ１２０ｍＬ中の２，５−ジメチルベンジルトリフェニルホスホニウムクロライドの−７８℃溶液に滴加した。この溶液をゆっくりと０℃にまであたため、再び−７８℃にまで冷却した。ＴＨＦ４０ｍＬ中のアルデヒド化合物２を−７８℃のイリド化合物に滴加した。この混合物を−７８℃で１５分間攪拌し、次いでゆっくりと室温にまであたためた。室温に１時間置いた後、飽和ＮＨ4Ｃｌ（５０ｍＬ）を加え、溶液をエーテルで抽出した。エーテル層を水（２×５０ｍＬ）次いでブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。Ｅ：Ｚ異性体の混合物である粗製のスチレン化合物を２％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いたシリカゲルで精製し、透明な油状物２．３２ｇ（５８％）を得た。
ベンゼン１２０ｍＬ中、チオフェノール（０．３ｍＬ）および１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（ＶＡＺＯ）（０．１６ｇ）の存在下にＥ：Ｚ混合物を８時間還流した。次いでこの溶液を室温にまで冷却し、減圧下に濃縮し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２−５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、純粋なＥ異性体２．２ｇ（９５％）を透明な油状物として得た：
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ＴＨＦ１０ｍＬ中のエステル化合物３（２．２ｇ、５．４６mmol）の溶液に２Ｍ ＫＯＨ溶液１１ｍＬを加えた。強く攪拌しながら、得られた混合物を６５℃で２４時間加熱した。室温にまで冷却し、２Ｍ ＨＣｌ溶液１１ｍＬを加え、得られた混合物をさらに３０分間強く攪拌した。この混合物に酢酸エチル（５０ｍＬ）を加え、層を分離した。水層をさらに酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、５０％ブライン（３×３０ｍＬ）で洗浄し，Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、所望の酸化合物２．１２ｇ（１００％）を濃黄色油状物として得た：
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ＤＭＦ７ｍＬ中の酸化合物４（２．１２ｇ、５．４６mmol）およびジイソプロピルエチルアミン（２．９ｍＬ、１６．４mmol）の０℃溶液にジフェニルホスフィニッククロライド（１．１ｍＬ、６．０１mmol）を滴加した。０℃で５分間、室温で３０分間攪拌した後、ＤＭＦ７ｍＬ中の３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−Ｄ−アラニン−２，２，２−トリクロロエチルエステル化合物５のＴＦＡ塩を滴加した。得られた混合物を室温で２時間攪拌し、水１００ｍＬに注ぎ、ジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をまとめ、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、セライトを通してろ過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０−３０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、白色泡沫としてアミド化合物６ ２．８６ｇ（７２％）を得た：
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実施例２９
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上記手法を用いて、アルデヒド化合物２ ２．５ｇおよび３−メチルベンジルトリフェニルホスホニウムクロライド５．０ｇからエステル化合物（２．１ｇ）を６５％収率で製造した：
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上記手法を用いてエステル化合物２．０ｇから酸化合物（１．９３ｇ）を１００％収率で製造した：
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上記手法を用いて、酸化合物１．９３ｇからアミド化合物（２．９ｇ）を７２％収率で製造した：
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上記手法を用いて、出発アミド化合物２．４ｇからアルコール化合物（２．０ｇ）を１００％収率で製造した：
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上記手法を用いて、出発アルコール化合物２．０ｇから基質（２．３ｇ）を７６％収率で製造した。
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上記手法を用いて、出発カルバメート化合物２．２ｇからスチレン化合物（０．８６ｇ）を５４％収率で製造した。
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実施例３０
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上記手法を用いて、出発スチレン化合物０．６６７ｇから標題化合物であるｂエポキシド化合物（０．２０ｇ）を２９％収率で製造した。
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実施例３１
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−６０℃のＣＨＣｌ3 ５．０ｍＬ中のｂエポキシド化合物（０．１ｇ、０．１４７mmol）の溶液にクロロトリメチルシラン（０．０９３ｍＬ、０．７４mmol）を加えた。この溶液を−６０℃で３０分間および室温で１．５時間攪拌した後、減圧下で濃縮した。得られたsynおよびantiクロロヒドリンの５０：５０混合物を含む残留物を逆相ＨＰＬＣによって精製し、所望のトランス異性体０．０２８ｇ（２７％）を得た：
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実施例３２
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上記手法を用いて、アルデヒド化合物２ ３．３９ｇおよび４−メトキシベンジルトリフェニルホスホニウムクロライド７．７ｇからエステル化合物（２．７５ｇ）を５４％収率で製造した：
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上記手法を用いて、エステル化合物１．７ｇから酸化合物（１．５８ｇ）を９６％収率で製造した：
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上記手法を用いて酸化合物１．５８ｇからアミド化合物（２．０９ｇ）を７０％収率で製造した：
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上記手法を用いて、出発アミド化合物１．６３ｇからアルコール化合物（１．３５ｇ）を９８％収率で製造した：
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上記手法を用いて、出発アルコール化合物１．２６ｇから基質（１．６９ｇ）を８９％収率で製造した：
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上記手法を用いて、出発カルバメート化合物１．４３ｇからスチレン生成物（０．６７６ｇ）を６５％収率で製造した：
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実施例３３
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ＴＨＦ１２０ｍＬ中のtert−ブトキシド（１．１７ｇ、１０．５mmol）の０℃溶液にｐ−ニトロ−ベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド（５．０ｇ、１０．５mmol）を少量ずつ３０分間かけて加えた。この混合物を０℃で１時間攪拌した。ＴＨＦ２０ｍＬ中のアルデヒド化合物２を前もって形成したイリド化合物に滴加した。この混合物を０℃で１５分間攪拌し、次いでゆっくりと室温にまであたため、一晩攪拌した。ＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液（５０ｍＬ）を加え、溶液を酢酸エチルで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。Ｅ：Ｚ異性体の混合物である粗製スチレン化合物を２％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用いてシリカゲルで精製し、黄色油状物としてＺ異性体０．５ｇおよびＥ異性体１．１ｇ（４２％）を得た：
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上記手法を用いて、酸化合物２．５５ｇからアミド化合物（３．０６ｇ）を６５％収率で製造した：
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上記手法を用いて、出発アルコール化合物２．５４ｇから基質（３．３ｇ）を８７％収率で製造した：
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上記手法を用いて、出発カルバメート化合物１．７７ｇからスチレン生成物（０．５５ｇ）を４２％収率で製造した：
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実施例３４
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実施例３５
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実施例３６
反応式２より
−７８℃のＣＨ2Ｃｌ2 ９．０ｍＬ／ＭｅＯＨ １．０ｍＬ中のアルケン化合物１７（０．３ｇ、０．５０mmol）に２−ピコリン（０．０７ｍＬ、０．０７４mmol）を加えた。この溶液を１．２当量のオゾンで処理し、得られたオゾニド化合物をジメチルスルフィド（１．１ｍＬ、２．２mmol）でクエンチした。この混合物をゆっくりと室温にまであたため、一晩攪拌した。この溶液を水（２×２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、アルデヒド化合物１８ ０．２５１ｇ（８７％）を得た：
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実施例３７
反応式３より
ＤＭＥ３ｍＬおよびＨ2Ｏ２．０ｍＬ中のクリプトフィシン５３（０．１５ｇ、０．２３mmol）の溶液に濃Ｈ2ＳＯ4を５滴加えた。この混合物を一晩攪拌し、Ｈ2ＳＯ4をさらに５滴加え、攪拌をさらに２４時間継続した。すべての反応性がなくなるまで、飽和ＮａＨＣＯ3をゆっくりと加え、この混合物をＣＨ2Ｃｌ2で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、２％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）で精製し、ジオール化合物０．１３ｇを得た。ＴＨＦ４．０ｍＬおよびＨ2Ｏ２．０ｍＬ中のこのジオール化合物の混合物にＮａＩＯ4（０．１４４ｇ、０．６７５mmol）を加えた。得られた混合物を一晩室温で攪拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、Ｈ2Ｏ５ｍＬを加え、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出した。有機層をまとめ、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、アルデヒド化合物１８ ０．１０ｇ（７７％）を得た。
−７８℃のＴＨＦ３．０ｍＬ中の４−ヒドロキシメチルベンジルトリフェニルホスホニウムクロライド（０．２３ｇ、０．４mmol）で保護したＴＩＰＳ化合物に１．６Ｍ ｎ−ブチルリチウム溶液０．２５ｍＬを滴加した。この混合物をゆっくりと０℃にまであたため、さらに１０分間攪拌した。ＴＨＦ４．０ｍＬ中、−７８℃でアルデヒド化合物１８に０．１３Ｍオレンジ色イリド化合物溶液２．５ｍＬを滴加した。得られた混合物を−７８℃で２時間および室温で３０分間攪拌した。飽和ＮＨ4Ｃｌ（２０ｍＬ）を酢酸エチル（１０ｍＬ）とともに加え、層を分離し、有機層を水（３×１０ｍＬ）およびブラインで洗浄した。最後にＭｇＳＯ4で乾燥し、有機相をろ過し、減圧下で濃縮し、得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、７０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、所望のスチレン化合物０．０９ｇ（６２％）を得た。
実施例３８
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ＤＭＥ３０ｍＬ中のクリプトフィシン５３（２．０ｇ、２．９９mmol）の溶液に２Ｍ過塩素酸水溶液（１５ｍＬ、３０mmol）を加え、得られた混合物を６時間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ3（５０ｍＬ）で注意深く中和し、この混合物をＣＨ2Ｃｌ2（４×１００ｍＬ）で抽出し、有機層をまとめ、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によって精製し、３：１anti／syn混合物としてジオール化合物１９（１．５ｇ）を７２％収率で得た。
ＴＨＦ２０ｍＬおよび水１５ｍＬ中のジオール化合物（１．０ｇ、１．４６mmol）の溶液にＮａＩＯ4（１．９ｇ、８．９mmol）を加え、この混合物を窒素下で一晩攪拌した。減圧下でＴＨＦの大半を除去し、残留物を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＣＨ2Ｃｌ2（４×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物をまとめ、ブライン（１×２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。その固形物をトルエン１００ｍＬに溶解することによって、残留したベンズアルデヒド化合物を除去し、次いでロータリー蒸発装置を用い、４０℃でトルエンを除去した。さらに２回トルエンから蒸発させ、黄色泡沫としてアルデヒド化合物１８（０．８２８ｇ）を９８％収率で得た。得られたアルデヒド化合物をさらに精製することなしに用い、安定性の理由から−２３℃で保存した：
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実施例３９
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−５０℃のＴＨＦ１００ｍＬ中の４−（トリイソプロピルシロキシメチル）ベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド（７．６ｇ、１２．２mmol）に１．５Ｍ ｎ−ブチルリチウム溶液８．０ｍＬ（８．１ｍＬ、１２．２mmol）を滴加した。この混合物をゆっくりと室温にまであたため、さらに３０分間攪拌した。ＴＨＦ１００ｍＬ中、−７８℃のアルデヒド化合物１８（２．９５ｇ、５．１mmol）にダブルチップ（tipped）ニードルで赤色イリド化合物溶液を滴加した。得られた混合物を−７８℃で３時間および室温で４５分間攪拌した。飽和ＮＨ4Ｃｌ（１００ｍＬ）を酢酸エチル（１００ｍＬ）とともに加えた。層を分離し、水層を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、水（３×４０ｍＬ）およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。得られた黄色残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、１０−２０−５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、所望のスチレン化合物３．６ｇ（８４％）を白色固形物かつＥ：Ｚ異性体の混合物として得た。
異性体の混合物を（７．３ｇ、８．７mmol）をベンゼン２４０ｍＬ中に溶解し、１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（ＶＡＺＯ）（０．３２ｇ、０．８７mmol）およびチオフェノール（３．７ｍＬ、４．０mmol）の存在下に加熱還流した。５時間還流した後、この溶液を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５−５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、Ｅ異性体２０ ６．７ｇ（９２％）を白色固形物として得た：
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実施例４０
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３−クロロペルオキシ安息香酸（０．２７ｇ、１．５９mmol）をＣＨ2Ｃｌ2２０ｍＬ中のスチレン化合物２０（１．２５ｇ、１．４９mmol）の０℃溶液に加えた。この溶液を０℃で１時間および室温で一晩攪拌した。これを減圧下で濃縮し、得られたエポキシド化合物を逆相ＨＰＬＣによって分離し、βエポキシド化合物２２ ０．６７ｇ（５７％）を白色固形物として得た：
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実施例４１
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テトラブチルアンモニウムフルオライド（０．１４ｍＬ、０．１４mmol）の１．０Ｍ ＴＨＦ溶液をＴＨＦ３．５ｍＬ中のβエポキシド化合物２２（０．１ｇ、０．１１７mmol）の０℃溶液に加えた。この溶液を室温にまであたため、攪拌をさらに２０分間継続し、次いで水（１０ｍＬ）および酢酸エチル（２０ｍＬ）を加えた。層を分離し、水層をＣＨ2Ｃｌ2（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、遊離のアルコール化合物を得た。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、７０−１００％ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）で精製し、純粋なアルコール化合物２３ ０．０６８ｇ（８４％）を白色固形物として得た：
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実施例４２
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ＣＨ2Ｃｌ2２．０ｍＬ中のアルコール化合物２３（０．０８ｇ、０．１１４mmol）、Ｎ−（tert−ブトキシカルボニル）グリシン（０．０３４ｇ、０．１９４mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．００４ｇ、０．０３４mmol）の０℃溶液に１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（０．０４０ｇ、０．１９４mmol）を加えた。この混合物を０℃で１０分間および室温で４５分間攪拌し、ろ過し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、７０−８０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、エステル化合物０．０７ｇ（７２％）を白色固形物として得た：
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実施例４３
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トリメチルシリルクロライド（０．０９ｍＬ、０．７５mmol）をＣＨＣｌ3５．０ｍＬ中のｂエポキシド化合物２４（０．１６ｇ、０．１８７mmol）の−６０℃溶液に加えた。−６０℃〜−４０℃の間で２時間攪拌した後、さらにＴＭＳＣｌ ０．０９ｍＬを加え、攪拌を３時間継続した。この溶液を室温にまであたため、濃縮し、逆相調製用ＨＰＬＣ（５５：４５）ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏによって精製し、得られた２種のクロロヒドリンを分離した。この精製により所望のクロロヒドリン化合物２５ ０．０５８ｇ（３５％）を得た：
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実施例４４
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１，４−ジオキサン中の塩化水素４Ｍ溶液（０．０８ｍＬ、０．３３mmol）をＣＨ2Ｃｌ2０．２ｍＬ中のグリシネート化合物２５（０．０５８ｇ、０．０６５mmol）の溶液に加えた。得られた混合物を室温で３時間攪拌し、減圧下で濃縮し、３日間減圧下に置いて１，４−ジオキサンを除去し、定量的収量で所望の塩酸塩化合物２６を得た：
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実施例４５
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ＣＨ2Ｃｌ2０．７ｍＬ中のクロロヒドリン化合物２５（０．１４ｇ、０．１６mmol）、Ｎ−（tert−ブトキシカルボニル）グリシン（０．０４１ｇ、０．２４mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．００２ｇ、０．０１６mmol）に１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（０．０４９ｇ、０．２４mmol）を加えた。得られた混合物を室温で１時間攪拌し、酢酸エチルを用いてろ過し、減圧下で濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５０−６０−７０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、二グリシネート化合物２７ ０．１５８ｇ（９７％）を白色固形物として得た：
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実施例４６
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１，４−ジオキサン中の塩化水素４Ｍ溶液（０．１ｍＬ、０．４２mmol）をＣＨ2Ｃｌ2０．２ｍＬ中の二グリシネート化合物２７（０．０４４ｇ、０．０４２mmol）の溶液に加えた。得られた混合物を室温で３時間攪拌し、減圧下で濃縮し、３日間減圧下に置いて残留する１，４−ジオキサン除去し、定量的収量で所望の塩酸塩化合物２８を得た：
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実施例４７
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断片Ｃ’の遊離酸（０．２２ｇ、１．０２mmol）、ＤＭＡＰ（０．０３２ｇ、０．２６mmol）およびＤＣＣ（０．２１ｇ、１．０２mmol）の混合物をＣＨ2Ｃｌ2６．５ｍＬ中、０℃で３０分間攪拌した。ＣＨ2Ｃｌ2６．０ｍＬ中の遊離アルコール化合物２９（０．３５ｇ、０．５１mmol）を滴加した。この混合物を０℃で１０分間および室温で２４時間攪拌し、最後に３時間加熱還流し、室温にまで再冷却した。この反応混合物を減圧下で濃縮し、ＥｔＯＡｃを用い、セライトを通してろ過した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、６０−７０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、上記エステル化合物０．３８ｇ（８５％）を白色固形物として得た：
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実施例４８
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３−クロロペルオキシ安息香酸（０．０９２ｇ、０．５４mmol）をＣＨ2Ｃｌ2９．０ｍＬ中の出発スチレン化合物（０．４５ｇ、０．５１mmol）の０℃溶液に加えた。この溶液を０℃で１時間および室温で一晩攪拌した。これを減圧下で濃縮し、得られたエポキシド化合物をＣＨＣｌ3１０ｍＬに溶解し、−６０℃にまで冷却した。
新たに蒸留したＴＭＳＣｌ（０．２５ｍＬ、１．９５mmol）をこの−６０℃溶液に加え、混合物を１時間攪拌した。さらにＴＭＳＣｌ（０．５ｍＬ、３．９mmol）を加えて、−６０℃〜−４０℃間においてさらに２時間攪拌を継続した。この溶液を室温にまであたため、さらにＴＭＳＣｌ（０．２５ｍＬ、１．９５mmol）を加えた。室温で３０分間攪拌した後、この溶液を濃縮し、調製用ＨＰＬＣで精製し、得られたクロロヒドリン化合物を分離した。この精製により、所望のクロロヒドリン化合物０．１ｇ（２２％）を得た：
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実施例４９
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１，４−ジオキサン中の塩化水素４Ｍ溶液（０．１１ｍＬ、０．４３mmol）をＣＨ2Ｃｌ2０．３５ｍＬ中のクロロヒドリン（０．０８ｇ、０．０８６mmol）の溶液に加えた。得られた混合物を室温で３時間攪拌し、減圧下で濃縮し、３日間減圧下に置いて１，４−ジオキサンを除去し、定量的収量で所望の塩酸塩化合物（上記）（０．０７５ｇ）を得た：
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実施例５０
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スチレン化合物２０についての上記手法にしたがって、アルデヒド化合物１８（１．０ｇ、１．７３mmol）および３−メチルベンジルトリフェニルホスホニウムクロライド（０．８８６ｇ、２．２mmol）からスチレン化合物（上記）（０．６７ｇ）を５８％収率で製造した：
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実施例５１
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３−クロロペルオキシ安息香酸（０．１９ｇ、１．１mmol）をＣＨ2Ｃｌ2５．０ｍＬ中のスチレン化合物（上記）（０．６６７ｇ、１．０mmol）に加えた。得られた溶液を一晩攪拌し、減圧下で濃縮し、βのほうが多い１．８：１の比でβおよびαエポキシド化合物を得た。２種のエポキシド化合物を逆相ＨＰＬＣ（７０：３０）ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏによって分離し、主にβエポキシド化合物０．２０ｇを白色固形物として得た：
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実施例５２
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−６０℃のＣＨＣＬ3５．０ｍＬ中のβエポキシド化合物（上記）（０．１ｇ、０．１４７mmol）の溶液にクロロトリメチルシラン（０．０９３ｍＬ、０．７４mmol）を加えた。この溶液を−６０℃で３０分間および室温で１，５時間攪拌した後、減圧下で濃縮した。得られたsynおよびantiクロロヒドリンの５０：５０混合物を含有する残留物を逆相ＨＰＬＣによって精製し、所望のトランス異性体０．０２８ｇ（２７％）を得た：
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実施例５３
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スチレン化合物２０についての上記手法にしたがって、アルデヒド化合物１８（０．２ｇ、０．３４５mmol）および３，４−ジメチルベンジルトリフェニルホスホニウムクロライド（０．２６ｇ、０．６２mmol）からスチレン化合物（上記）（０．０９５ｇ）を６３％収率で製造した：
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実施例５４
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上記手法にしたがって、３−クロロペルオキシ安息香酸（０．０８１ｇ、０．４７mmol）を用い、スチレン化合物（上記）（０．３ｇ、０．４４mmol）から本βエポキシド化合物（０．０６ｇ）を２０％収率で製造した：
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実施例５５
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０℃のＣＨ2Ｃｌ2２．４ｍＬ中のスチレン化合物（上記）（０．４９２ｇ、０．７２mmol）の溶液に３−クロロペルオキシ安息香酸（０．１３７ｇ、０．７９mmol）およびトルエン（１．２ｍＬ）を加え、０℃で３０分間攪拌を継続した。氷浴を除去し、反応物を室温で２４時間攪拌した。ＣＨ2Ｃｌ2１０ｍＬで希釈した後、この溶液を１０％Ｎａ2ＳＯ3（１×１０ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（１×１０ｍＬ）、１０％ＮａＨＣＯ3（１×１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥した。濃縮し、２：１の比のｂ／ａ粗製エポキシド化合物の混合物を得た。
この粗製エポキシド化合物（０．４４５ｇ、０．６３８mmol）を乾燥ＣＨＣｌ3１０ｍＬに溶解し、−６０℃にまで冷却し、トリメチルシリルクロライド（０．２ｍＬ、１．５mmol）で処理した。攪拌を９０分間継続し、この溶液を減圧下で濃縮した。粗製のクロロヒドリン化合物を逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ）によって精製し、白色固形物として生成物（上記）（０．１１５ｇ）を２１％収率で得た：
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実施例５６
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スチレン化合物２０についての上記手法にしたがって、アルデヒド化合物１８（０．５ｇ、０．８７mmol）および４−メトキシベンジルトリフェニルホスホニウムクロライド（０．４７ｇ、１．１２mmol）からスチレン化合物（上記）（０．２１ｇ）を３６％収率で製造した：
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実施例５７
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スチレン化合物（上記）（０．３ｇ、０．４４mmol）にアセトン１９ｍＬ、Ｈ2Ｏ９ｍＬ、ＣＨ2Ｃｌ2９ｍＬおよび固形ＮａＨＣＯ3（１．２ｇ、１４．５mmol）を加え、この混合物を０℃にまで冷却した。オキソン（１．０８ｇ、１．８mmol）水溶液９ｍＬを調製し、冷スチレン混合物に加えた（２ｍＬ）。０℃で３０分間強く攪拌した後、オキソン溶液をもう２ｍＬ加え、さらに３０分後、もう２．０ｍＬを加え、総量６ｍＬのオキソン溶液とした。反応進行を逆相ＨＰＬＣによってモニターし、２．５時間攪拌した後に完了が観察された。０℃で静置し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）で反応をクエンチし、さらにまたＣＨ2Ｃｌ2５０ｍＬを加えた。層を分離し、有機層を１０％Ｎａ2ＳＯ3水溶液（５０ｍＬ）、次いで飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（５０ｍＬ）、次いでブラインで洗浄し、最後にＮａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。ｂおよびａエポキシド化合物の混合物を逆相ＨＰＬＣ（４５：５５）ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏによって分離し、ｂエポキシド化合物０．１２ｇを白色固形物として３９％収率で得た：
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実施例５８
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スチレン化合物２０についての上記手法にしたがって、アルデヒド化合物１８（０．９１１ｇ、１．５７mmol）および４−（tert−ブチルジメチルシロキシ）ベンジルトリフェニルホスホニウムクロライド（１．７ｇ、３．２７mmol）からスチレン化合物（上記）（０．６４９ｇ）を５３％収率で製造した。
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実施例５９
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乾燥ＴＨＦ４ｍＬ中のシリル保護フェノール化合物（０．０８４ｇ、０．１０７mmol）の−７０℃溶液にテトラブチルアンモニウムフルオライド（ＴＢＡＦ）の１．０Ｍ ＴＨＦ溶液（０．１１ｍＬ、０．１１mmol）を加えた。淡黄色溶液を−７０℃で３０分間攪拌し、次いで飽和ＮＨ4Ｃｌ２ｍＬでクエンチし、ＣＨ2Ｃｌ2（３×２５ｍＬ）で抽出した。有機抽出物をまとめ、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製の生成物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、５０−１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、所望のアルコール化合物（０．０６７ｇ）を白色固形物として９３％収率で得た：
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実施例６０
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トルエン２ｍＬ中の断片Ｃ’酸化合物（０．０４０ｇ、０．１８４mmole）およびカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）（０．０４０ｇ、０．２５mmole）の溶液を窒素下、４５℃で４５分間加熱した。トルエン１ｍＬ中のアルコール化合物（上記）（０．１０ｇ、０．１５mmole）を加えた後、反応物を再び４５℃で４時間加熱した。室温にまで冷却し、反応混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、０．１Ｎ ＨＣｌ（１×１０ｍＬ）、水（１×１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（１×１０ｍＬ）およびブライン（１×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、粗製のエステル化合物を黄色泡沫として得た。放射状ＰＬＣ（シリカゲル、５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、純粋なエステル化合物（０．０９７）ｇを黄色固形物として７５％収率で得た：
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実施例６１
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スチレン化合物（上記）（０．２７６ｇ、０．３２mmol）にアセトン１２ｍＬ、Ｈ2Ｏ６ｍＬ、ＣＨ2Ｃｌ2６．０ｍＬおよび固形ＮａＨＣＯ3（０．８４ｇ、１０mmol）を加え、この混合物を０℃にまで冷却した。Ｈ2Ｏ６．０ｍＬ中のオキソン（０．７８ｇ、１．２７mmol）の溶液を製造し、冷スチレン混合物に加えた（２ｍＬ）。０℃で３０分間強く攪拌した後、オキソン溶液をもう２ｍＬ加え、さらに３０分後、もう２．０ｍＬを加え、総量６ｍＬのオキソン溶液とした。反応進行を逆相ＨＰＬＣによってモニターし、２．５時間攪拌した後に完了が観察された。０℃で静置し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液（５０ｍＬ）で反応をクエンチし、さらにまたＣＨ2Ｃｌ2５０ｍＬを加えた。層を分離し、有機層を１０％Ｎａ2ＳＯ3水溶液（５０ｍＬ）、次いでＮａＨＣＯ3飽和水溶液（５０ｍＬ）、次いでブラインで洗浄し、最後にＮａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、粗製のエポキシド化合物０．２７２ｇを黄色泡沫として得た。
−６０℃のＣＨ2Ｃｌ2４ｍＬ中のこのエポキシド化合物の溶液にトリメチルシリルクロライド（０．２ｍＬ、１．５４mmol）を加えた。−６０℃で３時間後、０．１Ｎ ＨＣｌ５ｍＬを加えてすべてのトリメチルシリルエーテル化合物を加水分解し、この混合物を室温にまであたためた。層を分離し、有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製のクロロヒドリン化合物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、５０−６０−７０−１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）および最後に逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ）によって２回精製し、生成物（上記）（０．０９０ｇ、３１％）を白色固形物として得た：
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実施例６２
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ＣＨ2Ｃｌ2（０．２５ｍＬ）中のＢＯＣ保護アミン化合物（上記）（０．０７０ｇ、０．０６７mmol）に１，４−ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ溶液（０．１ｍＬ、０．４mmol）を加えた。室温で２時間攪拌した後、減圧下で溶媒を除去し、得られた残留物を高度の減圧下に２日間置き、生成物を白色固形物（０．０６２ｇ）として９５％収率で得た：
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実施例６３
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ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液であるテトラブチルアンモニウムフルオライド（ＴＢＡＦ）（４．０ｍＬ、４．１mmol）をＴＨＦ１２０ｍＬ中の保護アルコール化合物２０（３．１ｇ、３．６９mmol）の−７８℃溶液に滴加した。この溶液を−７８℃で１０分間攪拌し、乾燥氷浴を除去し、室温にまであたためた。室温で３０分間置いた後、反応を水（８０ｍＬ）および酢酸エチル（１００ｍＬ）でクエンチした。層を分離し、水層をＣＨ2Ｃｌ2（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮し、遊離のアルコール化合物を得た。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５０−７０−１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、純粋なアルコール化合物２９ ２．５１ｇ（９９％）を白色固形物として得た：
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実施例６４
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ＴＨＦ２．０ｍＬ中のアルコール化合物２９（０．１３ｇ、０．１９mmol）の溶液にトリフェニルホスフィン（０．０６５ｇ、０．２５mmol）、フタリミド（０．０３７ｇ、０．２５mmol）および最後にジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ）（０．０４ｍＬ、０．２５mmol）を加えた。得られた黄色溶液を室温で２時間攪拌し、Ｈ2Ｏ（１０ｍＬ）およびＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍＬ）でクエンチした。水層をＣＨ2Ｃｌ2で（２×１０ｍＬ）で抽出し、有機層をまとめ、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。得られた残留物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、５０−６０−７０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製し、フタリミド化合物３０（０．１４ｇ）を白色固形物として９０％収率で得た：
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実施例６５
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ＥｔＯＨ１．８ｍＬ中のフタリミド化合物３０（０．１ｇ、０．１２３mmol）にｎ−ブチルアミン（０．０４ｍＬ、０．３６９mmol）を加えた。この溶液を７５℃で２日間加熱し、減圧下で濃縮し、放射状ＰＬＣ（シリカゲル、１０−２５％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によって精製し、遊離のアミン化合物３１（０．０４８ｇ）を５７％収率で得た。
実施例６６
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ＤＭＦ１．５ｍＬ中のＮ−（tert−ブトキシカルボニル）サルコシン（０．０７ｇ、０．３７mmol）に１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ）（０．０５ｇ、０．３７mmol）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド・塩酸（ＥＤＣＩ）（０．０７１ｇ、０．３７mmol）を加えた。室温で４５分間攪拌した後、ダブルチップ（tipped）ニードルによってＤＭＦ２．５ｍＬ中のアミン化合物３１（０．１７ｇ、０．２５mmol）をこの溶液に滴加した。得られた混合物をさらに３時間攪拌し、Ｈ2Ｏ（１０ｍＬ）でクエンチし、ＣＨ2Ｃｌ2（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物をまとめ、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。得られた粗製の生成物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、７０−８０−１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、所望のアミド化合物３２（０．１５ｇ）を白色固形物として７１％収率で得た：
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実施例６７
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上記手法にしたがって、ＣＨ2Ｃｌ2１．２ｍＬ中のｍＣＰＢＡ（０．０７２ｇ、０．４２mmol）を用いてアミド化合物３２（０．３４ｇ、０．３９８mmol）をエポキシド化し、ｂおよびａエポキシド化合物を２：１比で得た。得られたエポキシド化合物の粗製混合物（０．３ｇ、０．３４５mmol）をＣＨＣｌ3に溶解し、−６０℃にまで冷却した。ＴＭＳＣｌ（０．２２ｍＬ、１．７３mmol）を加え、溶液を−５０℃〜−２０℃間で２時間攪拌した。さらにＴＭＳＣｌ（０．４４ｍＬ、０．１７３mmol）を加え、溶液を室温にまであたためた。この溶液を減圧下で濃縮し、得られた生成物をカラムクロマトグラフィー（７０−８０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で２回、放射状ＰＬＣ（シリカゲル、２−５％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）で２回精製し、トランスクロロヒドリン化合物３４（０．１ｇ）を白色固形物として４８％収率で得た：
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実施例６８
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上記手法にしたがって、１，４−ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌを用い、ＢＯＣ保護アミン化合物３４（０．０４５ｇ、０．０５mmol）の塩酸塩化合物３５（０．０４１ｇ）を定量的収量で製造した：
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実施例６９
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ＴＨＦ１０ｍＬ中の水素化ナトリウム（６０％懸濁物）（０．０４１ｇ、１．０mmol）および４−カルボメトキシベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド（０．５ｇ、１．０mmol）の懸濁液を６５℃で１時間加熱し、冷却して室温にまで戻した。このオレンジ色混合物を−７８℃のＴＨＦ（１０ｍＬ）中のアルデヒド化合物１８（０．４６ｇ、０．７９mmol）に滴加した。得られた溶液を室温にまであたため、さらに２時間攪拌し、飽和ＮＨ4Ｃｌ（３０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）でクエンチした。層を分離し、水層をさらにＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物をまとめ、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製のスチレン化合物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５０−６５％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、純粋なスチレン化合物（０．１２９ｇ）を２３％収率で得た：
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実施例７０
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スチレン化合物（上記）（０．４２ｇ、０．５９mmol）にアセトン３０ｍＬ、Ｈ2Ｏ１５ｍＬ、ＣＨ2Ｃｌ2１５ｍＬおよび固形ＮａＨＣＯ3（１．７ｇ、２０．２mmol）を加え、この混合物を０℃にまで冷却した。オキソン（１．４ｇ、２．３mmol）水溶液１２ｍＬを調製し、冷スチレン混合物に加えた（２ｍＬ）。０℃で３０分間強く攪拌した後、さらにオキソン溶液２ｍＬを加え、この溶液を室温にまであたためた。さらに２ｍＬのオキソン溶液を２時間毎に１２ｍＬが消費されるまで加えた。反応物を合計で５時間攪拌し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液（５０ｍＬ）およびＣＨ2Ｃｌ2５０ｍＬでクエンチした。層を分離し、有機層を１０％Ｎａ2ＳＯ3水溶液（５０ｍＬ）、次いでＮａＨＣＯ3飽和水溶液（５０ｍＬ）次いでブラインで洗浄し、最後にＮａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製の混合物を逆相ＨＰＬＣ（４５：５５）ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏによって精製し、ｂおよびａエポキシド化合物０．１４ｇ（３３％収率）およびビスエポキシド化混合物０．１４ｇを得た。
ｂ／ａエポキシド化合物の混合物（０．１４ｇ、０．１９mmol）をＣＨＣｌ3３．０ｍＬに溶解し、−６０℃にまで冷却した。クロロトリメチルシラン（０．１ｍＬ、０．７７mmol）をこの−６０℃溶液に加え、混合物を１．５時間攪拌した。さらにＴＭＳＣｌ（０．１ｍＬ、０．７７mmol）を加え、溶液を室温にまであたためた。室温で１時間攪拌した後、この溶液を濃縮し、放射状ＰＬＣ（１−２％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によって精製し、所望のクロロヒドリン化合物（上記）０．０４４ｇ（３０％収率）を白色固形物として得た：
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実施例７１
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ＣＨ2Ｃｌ2８．５ｍＬ中のアルコール化合物２３（０．３２ｇ、０．４６mmol）の０℃溶液に固形ＮａＨＣＯ3（０．１９ｇ、２．２９mmol）、トリフェニルホスフィン（０．１８ｇ、０．６９mmol）および最後にＮ−クロロスクシンイミド（０．０９２ｇ、０．６９mmol）を加えた。この混合物を０℃で２０分間攪拌し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液（２０ｍＬ）でクエンチした。層を分離し、水層をＣＨ2Ｃｌ2（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、ブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製の黄色固形物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、２０−５０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、ベンジルクロライド化合物３６ ０．２６ｇを白色固形物として７９％収率で得た：
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実施例７２
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ジエチルアミン（０．０９ｍＬ、０．８４mmol）をＴＨＦ０．３ｍＬ中のベンジルクロライド化合物３６（０．０３ｇ、０．０４２mmol）に加えた。この混合物を室温で一晩攪拌し、ＮａＨＣＯ3飽和水溶液（５ｍＬ）でクエンチした。水層をＣＨ2Ｃｌ2（３×５ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、ブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製の黄色固形物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、５０−７０−８０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、アミン化合物３７ ０．０２６ｇを白色固形物として８２％収率で得た：
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実施例７３
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ＣＨＣｌ3０．８ｍＬ中のエポキシド化合物３７（０．０５ｇ、０．０６６mmol）の−６６℃溶液に１，４−ジオキサン中のＨＣｌ４Ｍ溶液（０．０４ｍＬ、０．１６６ｍＬ）を滴加した。この混合物を−６６℃で１０分間攪拌した時点で、乾燥氷浴を除去し、溶液をゆっくりと室温にまであたためた。減圧下で溶媒を除去し、得られた塩を高度の減圧下に３日間置き、残留ジオキサンを除去し、所望のクロロヒドリン化合物３８のみを定量的収量で０．０５４ｇ得た：
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実施例７４
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上記手法にしたがって、ベンジルクロライド化合物３６（０．１５ｇ、０．２１mmol）およびＮ−（tert−ブトキシカルボニル）ピペラジン（０．１９５ｇ、１．０５mmol）からエポキシド化合物（上記）（０．１４７ｇ）を８１％収率で製造した：
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実施例７５
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ＣＨＣｌ3３．０ｍＬ中のエポキシド化合物（上記）（０．１３５ｇ、０．１５６mmol）の−６６℃溶液にトリメチルシリルクロライド（０．１６ｍＬ、１．２ｍＬ）を滴加した。この混合物を−６６℃で２時間攪拌し、さらにＴＭＳＣｌを加えた（０．１６ｍＬ、１．２ｍＬ）。さらに−６６℃で１時間置いた後、氷浴を除去し、溶液をゆっくりと室温にまであたためた。減圧下で溶媒を除去し、得られた固形物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、２−５％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によって精製し、クロロヒドリン化合物（上記）０．１３ｇを９２％収率で得た：
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実施例７６
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上記手法にしたがって、１，４−ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ（０．３２ｍＬ、１．３mmol）を用い、ＢＯＣ保護ピペリラジン（０．１２２ｇ、０．１３mmol）の二塩酸塩化合物（０．１１６ｇ）を定量的収量で製造した：
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実施例７７
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上記手法にしたがって、ベンジルクロライド化合物３６（０．１６ｇ、０．２２mmol）およびtert−ブチル−Ｎ−（２−アミノエチル）カルバメート（０．３５ｇ、２．２２mmol）からエポキシド化合物（上記）（０．１５ｇ）を７８％収率で製造した：
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実施例７８
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ＣＨ2Ｃｌ2０．９ｍＬ中のエポキシド化合物（上記）（０．０６５ｇ、０．０７６mmol）の−７８℃溶液に１，４−ジオキサン中の４Ｍ ＨＣｌ（０．０９ｍＬ、０．３８mmol）を滴加した。この溶液を−７８℃で３０分間攪拌し、次いでゆっくりと室温にまであたためた。これを室温でさらに２時間攪拌し、減圧下で濃縮し、クロロヒドリン化合物（上記）（０．０６３ｇ）を定量的収量で得た：
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実施例７９
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スチレン化合物２０についての上記手法にしたがって、アルデヒド化合物１８（１．０ｇ、１．７３mmol）および４−（エチル−２−tert−ブチルジメチルシロキシ）ベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド（１．２３ｇ、２．０８mmol）からスチレン化合物（上記）（１．２ｇ）をＥ：Ｚ異性体の混合物として８６％収率で製造した。
この異性体の混合物をトルエン（５０ｍＬ）に溶解し、１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（ＶＡＺＯ）（０．０４０ｇ、０．１６mmol）およびチオフェノール（０．０６１ｍＬ、０．５９mmol）の存在下に３時間加熱還流した。濃縮後、残留物を放射状ＰＬＣ（２０−７５％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、Ｅ異性体（０．８１３ｇ、６８％）を白色泡沫として得た：
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実施例８０
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ピリジン（０．０６ｍＬ、０．７６mmol）、次いでデス−マーチン（Dess-Martin）試薬（０．１６１ｇ、０．３７９mmol）をＣＨ2Ｃｌ2４．５ｍＬ中のスチレン化合物（上記）（０．１３５ｇ、０．１８９mmol）の０℃遊離アルコール化合物に加えた。この混合物を０℃で３０分間、室温で２０分間攪拌し、次いでＥｔＯＡｃを用い、セライトを通してろ過し、最後に減圧下で濃縮した。粗製の生成物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、８０−１００％ ＥｔＯＡｃ／ＣＨ2Ｃｌ2）によってすばやく精製し、所望のアルデヒド化合物（０．０８ｇ）を白色固形物として５９％収率で得た：
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実施例８１
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テトラヒドロフラン（３．２ｍＬ）およびＨ2Ｏ（３．２ｍＬ）をアルデヒド化合物（上記）（０．０８ｇ、０．１１２mmol）に加え、この混合物を０℃にまで冷却した。また引き続いて２−メチル−２−ブテン（３．２ｍＬ）、次いでＮａＣｌＯ2（０．０８１ｇ、０．８９６mmol）およびＮａＨ2ＰＯ4Ｈ2Ｏ（０．１３９ｇ、１．０mmol）を加えた。この混合物を室温にまであたため、５時間強く攪拌した。この溶液をＣＨ2Ｃｌ2１０ｍＬで希釈し、層を分離した。水層をＣＨ2Ｃｌ2（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機抽出物をまとめ、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗製の生成物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、５−１０−２５％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によって２回精製し、カルボン酸化合物（上記）０．０３ｇを白色固形物として３７％収率で得た：
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実施例８２
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−７８℃のＴＨＦ１０ｍＬ中の［（２−メチル−４−チアゾリル）メチル］トリフェニルホスホニウムクロライド（０．４９６ｇ、１．２mmol）の混合物にｎ−ブチルリチウムの１．６Ｍ溶液（０．８ｍＬ、１．２mmol）を滴加した。この混合物をゆっくりと室温にまであたため、さらに４５分間攪拌した。−７８℃のＴＨＦ１５ｍＬ中のアルデヒド化合物１８（０．５ｇ、０．８６５mmol）にオレンジ色イリド化合物溶液をダブルチップ（tipped）ニードルによって滴加した。得られた混合物を−７８℃で２時間および室温で１．５時間攪拌した。飽和ＮＨ4Ｃｌ（３０ｍＬ）を酢酸エチル（３０ｍＬ）とともに加え、層を分離し、水層を酢酸エチル（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層をまとめ、水（２×２０ｍＬ）およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。得られた黄色残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、５０−７０−８０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）を用いて精製し、酸化トリフェニルホスフィンとともに所望のスチレン化合物０．４ｇを得た。ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏ（５０：５０）を用いた逆相ＨＰＬＣによって酸化トリフェニルホスフィンを容易に除去し、純粋なチアゾール化合物（上記）０．２ｇ（３４％）を白色固形物として得た：
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実施例８３
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スチレン化合物（上記）（０．２５ｇ、０．３７mmol）にアセトン１５ｍＬ、Ｈ2Ｏ６ｍＬ、ＣＨ2Ｃｌ2６ｍＬおよび固形ＮａＨＣＯ3（１．０ｇ、１１．９mmol）を加え、この混合物を０℃にまで冷却した。オキソン（０．９２ｇ、１．５mmol）水溶液８ｍＬを製造し、冷スチレン混合物に加えた（２ｍＬ）。０℃で３０分間強く攪拌した後、さらに２ｍＬのオキソン溶液を加え、さらに３０分後、もう２ｍＬを加え、オキソン溶液の総量を６ｍＬとした。反応の進行を逆相ＨＰＬＣによってモニターし、２．０時間攪拌した後に完了が観察された。０℃で静置し、反応をＮａＨＣＯ3飽和水溶液（４０ｍＬ）およびＣＨ2Ｃｌ2４０ｍＬでクエンチした。層を分離し、有機層を１０％Ｎａ2ＳＯ3水溶液（４０ｍＬ）、次いでＮａＨＣＯ3飽和水溶液（４０ｍＬ）次いでブラインで洗浄し、最後にＮａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。ｂおよびａエポキシド化合物（５４：４６）の混合物を逆相ＨＰＬＣ（５０：５０）ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏによって分離し、ｂエポキシド化合物（上記）０．０９ｇを白色固形物として３５％収率で得た：
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実施例８４
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スチレン化合物２０についての上記手法にしたがって、アルデヒド１８（１．３ｇ、２．２mmol）および２−フルオロベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド（１．７ｇ、３．８mmol）からスチレン化合物（上記）（０．５ｇ）を３３％収率で製造した：
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実施例８５
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０℃のＣＨ2Ｃｌ2１．３ｍＬ中のスチレン化合物（上記）（０．２６ｇ、０．３８７mmol）の溶液に３−クロロペルオキシ安息香酸（０．０７ｇ、０．４１mmol）およびトルエン（０．６５ｍＬ）を加え、攪拌を０℃で３０分間継続した。氷浴を除去し、反応物を室温で２４時間攪拌した。濃縮後、残留物を逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ）によって精製し、ｂ−エポキシド化合物（上記）を白色泡沫（０．０５８ｇ、回収したスチレン化合物を考慮して２４％）として得た：
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実施例８６
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スチレン化合物２０についての上記手法にしたがって、アルデヒド化合物１８（２．０ｇ、３．４５mmol）および３−フルオロベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド（１．９２ｇ、４．２５mmol）からＥ／Ｚ混合物であるスチレン化合物（上記）（０．８５ｇ）を３７％収率で製造した。この異性体の混合物をベンゼン（２５ｍＬ）に溶解し、１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（ＶＡＺＯ）（０．０４ｇ、０．１６mmol）およびチオフェノール（０．０６ｍＬ、０．５８mmol）の存在下に２０時間加熱還流した。濃縮後、残留物を放射状ＰＬＣ（２０−１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、Ｅ異性体（０．６５２ｇ、７７％）を白色泡沫として得た：
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実施例８７
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０℃のＣＨ2Ｃｌ2３．０ｍＬ中の上記スチレン化合物（０．６２２ｇ、０．９２７mmol）の溶液に３−クロロペルオキシ安息香酸（０．１７０ｇ、０．９８５mmol）およびトルエン（５ｍＬ）を加え、攪拌を０℃で３０分間継続した。氷浴を除去し、反応物を室温で２２時間攪拌した。濃縮後、残留物を逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ）によって精製し、ｂ−エポキシド化合物（上記）を黄色泡沫（０．０６７ｇ、１１％）として得た：
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実施例８８
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スチレン化合物２０についての上記手法にしたがって、アルデヒド化合物１８（１．５ｇ、２．６mmol）および４−フルオロベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド（１．４ｇ、３．１mmol）からＥ／Ｚ混合物であるスチレン化合物（上記）（１．２４ｇ）を７１％収率で製造した。この異性体の混合物をベンゼン（４０ｍＬ）に溶解し、１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（ＶＡＺＯ）（０．０５０ｇ、０．２０mmol）およびチオフェノール（０．０７６ｍＬ、０．７４mmol）の存在下に２４時間加熱還流した。濃縮後、残留物を放射状ＰＬＣ（２０−１００％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、Ｅ異性体（１．０６ｇ）を白色泡沫として得たが、これはＮＭＲによると酸化トリフェニルホスフィンを含んでいた。サンプル０．１５０ｇを逆相ＨＰＬＣ（６０：４０）ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏによって精製し、純粋な固形物０．０９２ｇを得た：
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実施例８９
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０℃のＣＨ2Ｃｌ2４．５ｍＬ中のスチレン化合物（上記）（０．９０６ｇ、１．３５mmol）の溶液に３−クロロペルオキシ安息香酸（０．２５ｇ、１．４５mmol）およびトルエン（２．２ｍＬ）を加え、攪拌を０℃で３０分間継続した。氷浴を除去し、反応物を室温で２３時間攪拌した。ＣＨ2Ｃｌ2２０ｍＬで希釈した後、反応混合物を１０％Ｎａ2Ｓ2Ｏ5（１×１０ｍＬ）、水（１×１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ3（１×１０ｍＬ）およびブライン（１×１０ｍＬ）で洗浄し、最後にＮａ2ＳＯ4で乾燥した。ろ過し、濃縮し、生成物０．８１４ｇをｂ／ａエポキシド化合物の混合物として得た。そのうち０．２３ｇを逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ）によって精製し、ｂ−エポキシド化合物（上記）０．０７３ｇを白色泡沫として得た：
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実施例９０
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ジオキサン中のＨＣｌの４Ｍ溶液（０．４ｍＬ、１．６mmol）をＣＨ2Ｃｌ2３０ｍＬ中のｂ−エポキシド化合物（上記）（０．４４ｇ、０．６４mmol）の−７０℃溶液に５分間かけて滴加した。−７０℃でさらに２時間攪拌した後、溶液を減圧下で濃縮した。粗製の生成物を放射状ＰＬＣ（シリカゲル、３０−５０−１００％ ＥｔＯＡｃ／ＣＨ2Ｃｌ2）、次いで逆相ＨＰＬＣ（５０：５０）ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏによって精製し、所望のクロロヒドリン化合物（上記）０．１５２ｇ（３３％）を白色泡沫として得た：
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実施例９１
クリプトフィシン−１５１、−１５２、−１５３、−１５４、−１５５、−１５６、−１５９、−１６０、−１６１、−１６６、−１６７、−１７２、−１８１、−１８８、２３４、２３６、２３８、２４７、２５１および２５５。
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クリプトフィシン−１０８を種々のトリフェニルホスホランとカップリングさせるのに適した典型的な手法を、例示的な実施例として、クリプトフィシン−１５２の製造を用いて以下に記載する。
クリプトフィシン−１５２：  ＴＨＦ（５．７ｍＬ）中のシンナミルトリフェニルホスホニウムクロライド（０．３１１ｇｍ、０．７５０mmol）を−７８℃にてブチルリチウム（２．５Ｍヘキサン溶液３００μＬ、０．７５０mmol）で処理することによってシンナミルトリフェニルホスホランを製造し、この内容物を室温にまでゆっくりとあたためた。この反応混合物からのシンナミルトリフェニルホスホラン（１．４６ｍＬ、０．１８２mmol）を−７８℃のＴＨＦ（３ｍＬ）中のアルデヒド化合物（６８．６ｍｇ、０．１２２mmol）にゆっくりと加え、攪拌を２時間継続した。この反応混合物を室温にまであたため、飽和ＮＨ4Ｃｌ（５ｍＬ）、次いで水（１５ｍＬ）で処理し、酢酸エチル（４０ｍＬ）で抽出した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させた。残留物を小さいＯＤＳカラムにアプライし、１：１ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮおよび１：３ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮで溶出させた。後者のフラクションを蒸発させ、クリプトフィシン−１５２およびそのＺ異性体（Ｅ／Ｚ ７：３、６４．３ｍｇ、８０％）を得た。
同じ実験手法を用いてアルデヒド化合物（クリプトフィシン−１０８）を１−ナフチルメチルトリフェニルホスホラン、３−メトキシベンジルトリフェニルホスホラン、３，５−ジメトキシベンジルトリフェニルホスホラン、メトキシメチルトリフェニルホスホラン、２，４−ジメチルベンジルトリフェニルホスホラン、３−フランメチルトリフェニルホスホラン、ｐ−トリフルオロメチルベンジルトリフェニルホスホラン、２−メチルベンジルトリフェニルホスホラン、３，５−ジメチルベンジルトリフェニルホスホラン、２−ナフチルメチルトリフェニルホスホラン、２−フルオロベンジルトリフェニルホスホラン、３，５−ジフルオロベンジルトリフェニルホスホラン、４−ヒドロキシメチルベンジルトリフェニルホスホラン、４−（ｔ−Ｂｏｃ−アミノメチル）ベンジルトリフェニルホスホラン、３−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノ）ベンジルトリフェニルホスホランおよびフェニルチオメチルトリフェニルホスホニウムと反応させ、それぞれクリプトフィシン−１５１、−１５３、−１５４、−１５６、−１５９、−１６０、−１６１、−１６６、−１６７、−１７２、−１８１、−１８８、−２３４、−２３６、−２４７および２５５を得た。
メトキシメチルトリフェニルホスホラン、３−フランメチルトリフェニルホスホランおよび４−ヒドロキシメチルベンジルトリフェニルホスホランの製造にフェニルリチウムを用いたことを除いて、イリド化合物を対応するトリフェニルホスホニウムクロライドまたはブロミド塩から製造する際の塩基としてブチルリチウムを用いた。
ヒドロキシメチルトリフェニルホスホミウムブロミド、ｎ−ブチルリチウムおよびクリプトフィシン−１０８を用いた同様の反応では予期しなかった同族体であるクリプトフィシン−１５５を得た。
カルボキシメチル同族体であるクリプトフィシン−２５１を製造するために、わずかに修飾した手法を適用した。４−（カルボキシメチル）ベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド（０．２８９ｇ、０．５９mmol）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を−７８℃で５分間、フェニルリチウム（１．８Ｍ、６５３μＬ；１．１８mmol）で処理し、氷水浴のフラスコに移した。３０分後、この反応混合物０．９ｍＬを−７８℃のＴＨＦ３ｍＬ中のクリプトフィシン−１０８（３５ｍｇ）を含むフラスコにゆっくりと加え、内容物を２時間攪拌した。この反応混合物を１Ｎ ＨＣｌ（１ｍＬ）で酸性化し、水（３０ｍＬ）を加え、酢酸エチル（３０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させた。残留物を１：１ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮおよび３５：６５ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮで溶出するＯＤＳシリカフラッシュクロマトグラフィーにかけた。後者のフラクションを蒸発させ、逆相ＨＰＬＣカラム（Econosil Ｃ１８、１０μ、２５０×２２ｍｍ、６ｍＬ／分、３５：６５ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ）で精製し、クリプトフィシン−２５１の不純なサンプルを得、最後にこれを他の逆相クロマトグラフィー（Econosil Ｃ１８、１０μ、２５０×１０ｍｍ、３ｍＬ／分、２：３ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ中の酢酸０．５％溶液）によって精製し、クリプトフィシン−２５１（１０ｍｇ）を得た。
スチレン同族体の製造に関する鍵となる実験データおよび細胞毒性データを表１および表２にまとめる。
トリフェニルホスホニウム塩：  シンナミルトリフェニルホスホニウムクロライド、１−ナフチルメチルトリフェニルホスホニウムクロライド、メトキシメチルトリフェニルホスホニウムクロライドおよび２−メチルベンジルトリフェニルホスホニウムブロミドは市販されているが、３−メトキシベンジルトリフェニルホスホニウムクロライド、３，５−ジメトキシベンジルトリフェニルホスホニウムクロライド、２，４−ジメチルベンジルトリフェニルホスホニウムクロライドはトリフェニルホスフィンをトルエン中で４時間、少し過剰の対応するクロライドと還流することによって製造した。４−トリフルオメチルベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド、３−フロンメチルトリフェニルホスホニウムブロミド、２−ナフチルメチルトリフェニルホスホニウムブロミド、３，５−ジフルオロベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド、４−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）ベンジルトリフェニルホスホニウムブロミド、４−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノメチル）ベンジルトリフェニルホスホニウムブロミドおよび３−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノ）ベンジルトリフェニルホスホニウムブロミドは対応するブロミド化合物をトルエン中、室温で１２時間、トリフェニルホスフィンで処理することによって製造した。４−（カルボキシメチル）ベンジルトリフェニルホスホニウムブロミドはブロミド化合物を５：１トルエン／ＴＨＦ溶液中、室温で４８時間トリフェニルホスフィンで処理することによって製造した。３−フロンメタノール、２−ナフタレンメタノールおよび３−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノ）ベンジルアルコールをＴＨＦ中、−７８℃においてＰＢｒ3で処理することによって、それぞれ３−フルオロメチルブロミド、２−ナフタレネル（naphthalenel）メチルブロミドおよび３−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノ）ベンジルブロミドを製造したref。３−フロンメタノールおよび２−ナフタレンメタノールは市販されている。３−アミノベンジルアルコールの市販サンプルから３−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノ）ベンジルアルコールを製造した。以下の実験手法を用いて４−ヒドロキシメチル安息香酸メチルエステルおよび４−アミノメチル安息香酸の市販サンプルからそれぞれ４−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）ベンジルブロミドおよび４−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノメチル）ベンジルブロミドを製造した。
４−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）ベンジルブロミド：  ジクロロメタン（１５ｍＬ）中の４−ヒドロキシメチル安息香酸メチルエステル（２ｇｍ）およびトリエチルアミン（３．３６ｍＬ）の混合物を−７８℃においてｔ−ブチルジメチルシリルトリフラート（４．４７ｇｍ）で処理した。３０分後、内容物を室温にまであたため、攪拌をさらに３０分間継続した。水（３０ｍＬ）および酢酸エチル（６０ｍＬ）を反応混合物に加え、有機層を０．３Ｍ ＫＨＳＯ4、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、ろ過した。溶媒を蒸発させ、残留物を１０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで溶出するシリカカラムフラッシュクロマトグラフィーにかけ、４−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）安息香酸メチルエステル（３．３ｇｍ、９５％収率）を得た。
ジエチルエーテル（２０ｍＬ）に拡散させた水素化リチウムアルミニウム（０．２１ｇｍ）をアルゴン下、−７８℃に冷却し、ジエチルエーテル１０ｍＬ中の４−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）安息香酸メチルエステル（２．０５ｇｍ）で滴下処理した。３０分後、酢酸エチル（２ｍＬ）を加えて過剰の水素化物をクエンチし、次いで飽和塩化アンモニウム（１．５ｍＬ）を加えた。沈殿物をろ過によって分離し、エーテルで洗浄した。溶媒を蒸発させ、４−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）ベンジルアルコール（１．７１ｇｍ、９３％収率）を得た。
４−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）ベンジルアルコール（１．７ｇｍ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶解し、−７８℃においてホスホラストリブロミド（０．６０９ｇｍ）で処理した。３０分後、反応物をジエチルエーテル（８０ｍＬ）で希釈し、飽和重炭酸ナトリウム（３０ｍＬ）、水およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。エーテル層を蒸発させ、残留物（２．０ｇｍ）を５％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを溶出液として用いるシリカフラッシュクロマトグラフィーにかけ、４−（ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル）ベンジルブロミド（１．０５ｇｍ、４９％収率）を得た。
４−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノメチル）ベンジルブロミド：  トリエチルアミン−ジメチルホルムアミド（foramido）（１：９、７．５ｍＬ）中のジ−ｔ−ブチルジカルボネート（２．１８ｇ、１０mmol）の溶液に室温で４−（アミノメチル）安息香酸（０．７５ｇ、５mmol）を加え、反応混合物を４０−５０℃で１０分間あたためた。このアミノ酸を溶解した後、室温でもう１時間攪拌を継続した。溶媒を減圧下で取り除き、残留物を希釈ＨＣｌで酸性化し（ｐＨ＞２）、すぐにＥｔＯＡｃで抽出し、有機層をＭｇＳＯ4で乾燥した。溶媒を取り除いた後に得られた残留物をエーテル中で３０分間、過剰の（ジアザルド（diazald）から製造した）ジアゾメタンで処理し、過剰のジアゾメタンを酢酸によって分解した。溶媒除去後に得られた残留物をヘキサン／ＥｔＯＡｃ（９：１）を溶出に用いてシリカカラム（２０ｇ）クロマトグラフし、メチル４−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノメチル）ベンゾエート（１．０７ｇ、８１％収率）を得た。
−７８℃のエーテル（５ｍＬ）中のＬｉＡｌＨ4（６０ｍｇ、１．５mmol）の冷懸濁液にエーテル（５ｍＬ）中のメチル４−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノメチル）ベンゾエート（０．８ｇ、３mmol）の溶液を滴加し、内容物を室温にまであたためた。３時間後、さらなる量のＬｉＡｌＨ4（１００ｍｇ）を加え、室温でさらに１０分間反応を継続した。過剰のＬｉＡｌＨ4をＥｔＯＡｃ次いで飽和塩化アンモニウム（１．０ｍＬ）で破壊した。沈殿した固形物をろ過し、エーテルで洗浄した。ろ液を蒸発させ、４−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノメチル）ベンジルアルコール（２５０ｍｇ、３５％）を得た。
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の４−（Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノメチル）ベンジルアルコール（２５０ｍｇ、１．１mmol）の溶液を−７８℃で２時間、ホスホラストリブロミド（３０μＬ、０．３２mmol）で処理した。この後、反応を固形ＮａＨＣＯ3（５０ｍｇ）でクエンチし、ろ過し、固形物を取り除き、ろ液を蒸発させ、４−（ｔ−Ｂｏｃ−アミノメチル）ベンジルブロミド（３００ｍｇ、９５％）を得た。
対応するＥ／Ｚ混合物を酢酸エチル／エチルエーテル溶液中で結晶化することによって所望のＥ異性体を分離した。印象的なＥ／Ｚ選択性を有しないシンナミルおよび他の少ない同族体の場合、シンナミル同族体であるクリプトフィシン−１５２について記載の以下の例示的手法を用いて粗製の混合物を異性化に付す。
異性化：  クリプトフィシン−１５２およびそのシス異性体の混合物（Ｅ／Ｚ ７：３、６２ｍｇ、０．１０mmol）をベンゼン（３ｍＬ）に溶解し、チオフェノール（１０μＬ、０．１０mol）および１，１’−アゾビス（シクロヘキサンカルボニトリル）（１２ｍｇ、０．０５mmol）とともに還流した。１６時間後、この混合物を室温にまであたため、小さいシリカカラムにアプライした。カラムをジクロロメタンで洗浄し、この化合物を１：１ 酢酸エチル／ジクロロメタンで溶出させた。溶媒を蒸発させ、クリプトフィシン−１５１（５３ｍｇ、８５％）を得たが、これにはまだ約５％のシス異性体が混入していた。
クリプトフィシン−１５１：
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1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１５２：
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1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１５３：
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1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１５４：
0004364944.tif 000250
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１５５：
0004364944.tif 000251
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000252
ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000253
aおよびbシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−１５６：
0004364944.tif 000254
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１５９：
0004364944.tif 000255
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１６０：
0004364944.tif 000256
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１６１：
0004364944.tif 000257
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１６６：
0004364944.tif 000258
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１６７：
0004364944.tif 000259
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１７２：
0004364944.tif 000260
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１８１：
0004364944.tif 000261
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−１８８：
0004364944.tif 000262
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−２３４：  クリプトフィシン−２３４および１５％のそのＺ異性体を含む混合物（５８．３ｍｇ）をＥｔＯＡＣ／エチルエーテル溶液中、繰り返し結晶化し、クリプトフィシン−２３４（４７ｍｇ）およびそのＺ異性体（１１ｍｇ）を得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000263
他のシグナルによって不明瞭
0004364944.tif 000264
a交換可能；13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000265
aおよびbシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−２３６：1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000266
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000267
★は溶媒シグナルの下にかくれている。
クリプトフィシン−２３８：  ＴＨＦ（１．５ｍＬ）中のクリプトフィシン−２３４（１４ｍｇ）を０℃においてテトラブチルアンモニウムフルオライド溶液（２５μＬ、１Ｍ ＴＨＦ溶液）で処理した。１時間後、飽和ＮＨ4Ｃｌ（５ｍＬ）次いで水（１５ｍＬ）を反応混合物に加え、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ層をＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させた。残留物をＣＨ2Ｃｌ2およびＥｔＯＡｃを溶出液として用い、小さいシリカカラムで精製した。後者のフラクションを蒸発させ、クリプトフィシン−２３８（１１．８ｍｇ）を得た。ＥＩＭＳ  m/z（相対強度）６６８／６７０（３／０．５），４１２／４１４（３８／１４），２５７（２９），１９５／１９７（２５／１０），（高分解能）ＥＩＭＳ  m/z ６６８．２８９８（calcd for Ｃ36Ｈ45ＣｌＮ2Ｏ8，Δ−３．４mmu）
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000268
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000269
aおよびbシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−２４６：  ＣＨ2Ｃｌ2（５０μＬ）中のクリプトフィシン−２３６（９ｍｇ、０．０１２mmol）を室温においてジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（２０μＬ、０．０８mmol）で処理した。１時間後、溶媒を蒸発させ、残留物をメタノール／水（１：１）を溶出に用いる小さいＣ１８シリカカラムでの（Alltech、５００ｍｇ）フラッシュクロマトグラフィーにかけた。溶媒蒸発後の最初のフラクション（３ｍＬ）より、クリプトフィシン−２４６（７ｍｇ、８５％）を得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000270
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000271
aシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−２５０：  ジクロロメタン（８０μＬ）中のクリプトフィシン−２４７（５．１ｍｇ）を塩酸（４０μＬ、４Ｎジオキサン溶液）で処理した。２時間後、反応混合物を濃縮し、水で希釈し、短いＯＤＳカラムに通した。カラムを水（５ｍＬ）次いでＣＨ3ＣＮ（３ｍＬ）で洗浄した。後者のフラクションを蒸発させ、クリプトフィシン−２５０（５ｍｇ）を得た。これを逆相ＨＰＬＣ（Econosil Ｃ１８、２５ｃｍ×１０ｍｍ、１０μ、３５％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、４ｍＬ／分）で精製し、純粋なサンプル（４ｍｇ、ｔR １８分）を得た。ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ（相対強度）６５３／６５５（１５／１０），５３３（３３），２４２（４８），１９５／１９７（３６／１３）；高分解能  ＥＩＭＳ  ｍ／ｚ ６５３．２８６５（calcd for Ｃ35Ｈ44ＣｌＮ3Ｏ7，Δ０．３mmu）
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000272
クリプトフィシン−２５１：
0004364944.tif 000273
1Ｈ ＮＭＲデータ、表３参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表４参照。
クリプトフィシン−２５５：1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000274
0004364944.tif 000275
ＣＤＣｌ3中で記録したスペクトル；化学シフトは表に指定した炭素に位置するプロトンまたはメチルまたはメトキシまたはヒドロキシメチル官能基についてのものである。クリプトフィシン−３の対応する値に対し、ユニットＢおよびＣのプロトンについての化学シフトは±０．２ｐｐｍの範囲内であり、カップリング定数は±０．５Ｈｚの範囲内である。
１５１についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：３’，４’＝８．３；５’，６’＝８．０；７’，８’＝８．１；１５２についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：６，７＝８．７；７，８＝１５．３；８，９＝１０．５；９，１０＝１５．７；２’，３’＝３’，４’＝４’，５’＝５’，６’＝７．４；１５３についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：２’，４’＝２’，６’＝２．０；４’，５’＝５’，６’＝７．９；１５４についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：２’，４’＝４’，６’＝２．２；１５６のユニットＡの８−ＯＣＨ３についてのδは３．５１；１５６についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：６，７＝９．３；７，８＝１２．６；１５９についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：５’，６’＝８．３；１６１についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：２’，３’＝４’，５’＝８．１；２５１についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：２’３’＝５’，６’＝８．２；
表の残りのプロトンについて観察されたカップリング定数は、３の対応する値に対し±０．５Ｈｚの範囲内である。
0004364944.tif 000276
0004364944.tif 000277
0004364944.tif 000278
ＣＤＣｌ3中で記録したスペクトル  ユニットＢおよびユニットＣにおける炭素についての化学シフトは、クリプトフィシン−３の値に対し±０．５ｐｐｍの範囲内である。★シグナルはＣＤＣｌ3シグナルに隠れており；★★シグナルは観察できなかった。†シグナルはユニットＡの８−ＯＣＨ3についてのものであり；１つの欄中のaシグナルは交換可能である。クリプトフィシン−１５３のユニットＡの３’−ＯＣＨ3炭素はδ５５．１で共鳴し、３’−および５’−ＯＣＨ3炭素はδ５５．３で共鳴した。１５９の２’および４’−ＣＨ3カーボンシグナルはそれぞれδ１９．７およびδ２０．９で観察された。１６６の２’−ＣＨ3炭素シグナルはδ１９．８で観察された。１６７の３’および５’−ＣＨ3炭素シグナルはδ２１．２で観察された。４’−ＣＨ2ＣＯＯＨのメチレンおよびカルボキシル炭素はそれぞれδ４０．４および１７４．５で観察された。
実施例９２
エポキシド同族体
クリプトフィシン−１５７、１５８、１６４、１６５、１６８、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７７、１７８、１７９、１８０、１８２、１８３、２００、２４２および２６９。
0004364944.tif 000279
スチレン同族体のエポキシド化手法の概要：  ジクロロメタン３ｍＬ中のスチレン同族体（０．１mmol）およびｍ−クロロペルオキシ安息香酸（０．３mmol）の溶液を室温で攪拌した。１６時間後、反応混合物をジクロロメタン（３ｍＬ）で希釈し、リン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ８、５ｍＬ）で洗浄し、反応の間に生成した３−クロロ安息香酸を取り除いた。有機層を分離し、ジメチルスルフィド（２０μＬ）で処理し、過剰の過酸をクエンチし、もう一度緩衝液で洗浄した。ジクロロメタン層を分離し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させ、減圧下に２４時間置いた。残留物を逆相カラム（Econosil Ｃ１８、１０μ、２５０ｍｍ×２２ｍｍ、３５％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、６ｍＬ／分）でのＨＰＬＣにかけ、ＲＲおよびＳＳ−エポキシド化合物を得た。
実験の詳細および細胞毒性データは表３にまとめてある。
クリプトフィシン−１５７および−１５８：  クリプトフィシン−１５１をｍ−ＣＰＢＡで処理し、逆相ＨＰＬＣを用いて生成物を単離し、クリプトフィシン−１５７および−１５８を得た。
クリプトフィシン−１５７：
0004364944.tif 000280
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１５８：
0004364944.tif 000281
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１６４および−１６５：  ジクロロメタン３ｍＬ中のクリプトフィシン−１５２（５３ｍｇ、０．０８mmol）およびｍ−クロロペルオキシ安息香酸（１５ｍｇ、０．０８７mmol）の溶液を室温で１６時間攪拌した。この反応混合物を同じ試案および精製手法に付し、化合物１６４／１６５Ａおよび１６４／１６５Ｂ（それぞれ５ｍｇ）、出発物質（１０ｍｇ）および他の分解産物を得た。その全体構造を分析し、クリプトフィシン−１６４および−１６５としたが、この化合物のエポキシド部分の立体化学を割り当てることはできなかった。
クリプトフィシン−１６４／１６５Ａ：1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000282
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000283
クリプトフィシン−１６４／１６５Ｂ：1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000284
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000285
クリプトフィシン−１６８および−１６９：  クリプトフィシン−１５３をｍ−ＣＰＢＡで処理し、逆相ＨＰＬＣを用いて生成物を単離し、クリプトフィシン−１６８および−１６９を得た。
クリプトフィシン−１６８：
0004364944.tif 000286
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１６９：1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１７０および１７１：  クリプトフィシン−１５９をｍ−ＣＰＢＡで処理し、逆相ＨＰＬＣを用いて生成物を単離し、クリプトフィシン−１７０および−１７１を得た。
クリプトフィシン−１７０：
0004364944.tif 000287
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１７１：
0004364944.tif 000288
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１７３および１７４：  クリプトフィシン−１７１をｍ−ＣＰＢＡで処理し、逆相ＨＰＬＣを用いて生成物を単離し、クリプトフィシン−１７３および−１７４を得た。
クリプトフィシン−１７３：
0004364944.tif 000289
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１７４：1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１７７および１７８：  クリプトフィシン−１６６をｍ−ＣＰＢＡで処理し、逆相ＨＰＬＣを用いて生成物を単離し、クリプトフィシン−１７７および−１７８を得た。
クリプトフィシン−１７７：
0004364944.tif 000290
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１７８：
0004364944.tif 000291
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１７９および１８０：  クリプトフィシン−１６７をｍ−ＣＰＢＡで処理し、クリプトフィシン−１５１のエポキシド化についての上記手法と同じ手法を用いて生成物を単離し、クリプトフィシン−１７９および−１８０を得た。
クリプトフィシン−１７９：
0004364944.tif 000292
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１８０：
0004364944.tif 000293
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１８２および１８３：  クリプトフィシン−１８１をｍ−ＣＰＢＡで処理し、逆相ＨＰＬＣを用いて生成物を単離し、クリプトフィシン−１８２および−１８３を得た。
クリプトフィシン−１８２：
0004364944.tif 000294
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−１８３：
0004364944.tif 000295
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−２００：  クリプトフィシン−１８８をｍ−ＣＰＢＡで処理し、１２時間後に追加量の過酸（３当量）を加え、攪拌を３６時間継続したことを除き、同じ一般的手法を用いて生成物を単離し、クリプトフィシン−２００およびＳＳ−エポキシド化合物を得た。
クリプトフィシン−２００：
0004364944.tif 000296
1Ｈ ＮＭＲデータ、表６参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表７参照。
クリプトフィシン−２４２：  クリプトフィシン−２３６をｍ−ＣＰＢＡで処理し、同じ一般的手法を用いて生成物を単離し、クリプトフィシン−２４２およびそのＳＳ−エポキシド化合物を得た。クリプトフィシン−２４２を順相ＨＰＬＣ（Econosil、Ｓｉ、２５０×１０ｍｍ、１０μ、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：１、３ｍＬ／分、ｔR：８１分）によって精製した。
クリプトフィシン−２４２；1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000297
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000298
同じ上付き文字のaおよびbシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−２６９：  アセトン（１．２ｍＬ）中のクリプトフィシン−２４３（６ｍｇ）を反応バイアル中、室温で、強く攪拌しながら、固形Ｋ2ＣＯ3で処理した。１２時間後、この反応混合物をろ過し、溶媒を蒸発させた。ＣＨ2Ｃｌ2およびＥｔｏＡｃ混合物を用い、短いシリカカラムで残留物を精製し、クリプトフィシン−２６９（５．１ｍｇ）を得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000299
同じ上付き文字のaシグナルは交換可能である。
0004364944.tif 000300
ＣＤＣｌ3中で記録したスペクトル；化学シフトは表に指定した炭素に位置するプロトンまたはメチルまたはメトキシ官能基についてのものである。クリプトフィシン−１における値に対して、ユニットＢおよびＣにおけるプロトンについての化学シフトは±０．２ｐｐｍの範囲内であり、カップリング定数は±０．５Ｈｚの範囲内である。
１５７についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：２’，３’＝３’，４’＝７．７；５’，６’＝６’，７’＝７’，８’＝７．９；５’，７’＝１．５；６’，８’＝１．１；１６８についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：４’，５’＝５’，６’＝８．０；１７３についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：３’，４’＝８．５；１’，３’＝１．４；５’，６’＝７’，８’＝８．３；
１５８、１６９および１７４のアリールセグメントのプロトンについて観察されるカップリング定数はそれぞれ１５７、１６８および１７３の値に対して±０．５Ｈｚの範囲内である。表中の残りのプロトンについて観察されるカップリング定数は、クリプトフィシン−１の値に対し±０．５Ｈｚの範囲内である。
0004364944.tif 000301
0004364944.tif 000302
ＣＤＣｌ3中で記録したスペクトル  ユニットＢおよびＣにおける炭素についての化学シフトは、クリプトフィシン−１における値に対し、±０．５ｐｐｍの範囲内である。★シグナルはＣＤＣｌ3シグナルに埋もれている。★★シグナルは観察できなかった。１つの欄中の同じ上付き文字を有する†、aおよびbシグナルは交換可能である。１６８および１６９の両者における３’−ＯＣＨ3シグナルはｄ５５．３で観察された。１７０の２’および４’−ＣＨ3炭素シグナルはそれぞれｄ１８．９および２１．０で観察された。１７７および１７８の２’−ＣＨ3炭素はそれぞれｄ１９．０および１８．９で共鳴した。１７９の３’および５’−ＣＨ3シグナルはｄ２１．３で観察され、１８０の３’および５’−ＣＨ3シグナルは２１．２で観察された。
実施例９３
クロロヒドリン同族体
クリプトフィシン−１６３、１８４、１８５、１８６、１８７、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、２１２、２１６、２１７、２２２、２２３、２２４、２４３、２５２、２５３、２６３、２６４、２６５、２７２および２７３。
0004364944.tif 000303
0004364944.tif 000304
クリプトフィシン−１６３：  ０℃のＣＨ2Ｃｌ2（１．５ｍＬ）中のクリプトフィシン−８１（１２ｍｇ、０．０１８mmol）の溶液にｍ−ＣＰＢＡ（５ｍｇ、０．０２９mmol）次いで酢酸中のＨＣｌ（１．０Ｍ溶液、２５μＬ）を加え、温度を室温にまで上げ、６時間攪拌を継続した。溶媒を蒸発させ、次いでＨ2ＯおよびＣＨ3ＣＮ混合物を用い、残留物をＣ１８シリカカラム（１２ｃｍ×１ｃｍ）フラッシュクロマトグラフし、クロロヒドリン化合物の混合物（１２ｍｇ、９３％）を得た。逆相ＨＰＬＣでの精製を試みたところ、部分的加水分解を導き、ジオール化合物となった。しかし、順相ＨＰＬＣ（Econosil シリカ、２５０ｍｍ×１０ｍｍ、１：１ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製では、クリプトフィシン−１６３（ｔR ３７．２分、３．０ｍｇ）が得られた。プロトンおよび炭素ＮＭＲデータをそれぞれ表９および表１０に挙げた。
クリプトフィシン−１８４、−１８５、−１８６、−１８７および２２４：  上記クリプトフィシン−１５２の製造手法と同じ手法を用いて、３，４−ジメチルベンジルトリフェニルホスホニウムクロライドおよび２，３−ジメチルベンジルトリフェニルホスホニウムクロライドの混合物（７：３）を３，４−および２，３−ジメチルベンジルトリフェニルホスホランに変換し、次いでクリプトフィシン−１０８で処理した。４つのスチレン異性体の分離不可能な混合物を６８％総収率で得た。ＣＨ2Ｃｌ2（３ｍＬ）中のこの混合物（４５ｍｇ）を室温においてｍ−ＣＰＢＡ（２５ｍｇ）で処理し、１５分間攪拌下に置いた。溶媒を除去し、残留物をＨＰＬＣ（Econosil Ｃ１８、２５０×２２ｍｍ、７：３ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、６ｍＬ／分）にかけ、２つのフラクションＩ（ｔR ５４．０分、２０ｍｇ）およびＩＩ（ｔR ６１．５分、１２ｍｇ）を集めた。ＣＨ2Ｃｌ2（２．０ｍＬ）中のフラクションＩ（９ｍｇ）を−７８℃においてＴＭＳＣｌ（４０μＬ）で処理し、温度を徐々に室温にまで上げた。３時間後、溶媒を蒸発させ、逆相ＨＰＬＣで（Econsil Ｃ１８、１０ｍ、２５０×２２ｍｍ、３５：６５ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、６ｍＬ／分）クロマトグラフし、クリプトフィシン−１８６（ｔR ５７．８分、４．７ｍｇ）、クリプトフィシン−２２４（ｔR ７４．５分、２．３ｍｇ）およびクリプトフィシン−１８４（ｔR ７８．２分、２．６ｍｇ）を得た。同様の手法によりフラクションＩＩをＴＭＳＣｌで処理し、化合物を分離して、クリプトフィシン−１８５（ｔR ６５．０分、０．７ｍｇ）およびクリプトフィシン−１８７（ｔR ６９．２分、８．０ｍｇ）を得た。
クリプトフィシン−１８４：
0004364944.tif 000305
プロトンおよび炭素データはそれぞれ表９および表１０に挙げた。
クリプトフィシン−１８５：
0004364944.tif 000306
プロトンおよび炭素データはそれぞれ表９および表１０に挙げた。
クリプトフィシン−１８６：
0004364944.tif 000307
プロトンおよび炭素データはそれぞれ表９および表１０に挙げた。
クリプトフィシン−１８７：
0004364944.tif 000308
プロトンおよび炭素データはそれぞれ表９および表１０に挙げた。
クリプトフィシン−２２４：
0004364944.tif 000309
プロトンおよび炭素データはそれぞれ表９および表１０に挙げた。
クリプトフィシン−１９１、１９２、−１９３、−１９４、−１９５、−２１２、−２１６、−２１７、−２２２および−２２３：
クロロヒドリン化合物の製造手法の概要：  クロロホルム中のＲＲ−エポキシド化合物の溶液を−６０℃にまで冷却し、過剰のトリメチルシリルクロライド（１０当量）で処理した。２時間後、溶媒を蒸発させ、残留物を逆相ＨＰＬＣ（Econosil Ｃ１８、１０μ、３５％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、３ｍＬ／分）で精製し、トランスおよびシスクロロヒドリン化合物を得た。
クリプトフィシン−１９１，１９２、−１９３、−１９４、−１９５、−２１２、−２１６、−２１７、−２２２、−２２３および２２４の製造に関する実験の詳細および細胞毒性を表８にまとめた。
クリプトフィシン−１９５：
0004364944.tif 000310
1Ｈ ＮＭＲデータ、表９参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表１０参照。
クリプトフィシン−２１２：
0004364944.tif 000311
1Ｈ ＮＭＲデータ、表９参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表１０参照。
クリプトフィシン−２１６：
0004364944.tif 000312
アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000313
クリプトフィシン−２１７：
0004364944.tif 000314
アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000315
クリプトフィシン−２２２：
0004364944.tif 000316
1Ｈ ＮＭＲデータ、表９参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表１０参照。
クリプトフィシン−２２３：
0004364944.tif 000317
1Ｈ ＮＭＲデータ、表９参照；13Ｃ ＮＭＲデータ、表１０参照。
クリプトフィシン−２４３：
クリプトフィシン−２３８のエポキシド化：  クリプトフィシン−２３８（１１．８ｍｇ）をジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶解し、ＭＣＰＢＡ（９．６ｍＬ）で処理した。１５時間後、この反応混合物をジクロロメタン（３ｍＬ）で希釈し、０．１Ｍリン酸緩衝液ｐＨ８（３ｍＬ）で洗浄した。有機層をジメチルスルフィド（１０μＬ）で処理し、緩衝液での洗浄を繰り返した。有機層を蒸発させ、残留物（１２ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣ（Econosil Ｃ１８、２５ｃｍ×２２ｍｍ、１０μ、３５％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、６ｍＬ／分）で精製したがうまくいかず、ＲＲおよびＳＳエポキシド化合物の混合物（６．２ｍｇ）を得た。
ＴＭＳＣｌでの処理：  この混合物をクロロホルム（１ｍＬ）に溶解し、−６０℃においてＴＭＳＣｌ（１５μＬ）で処理した。２時間後、溶媒を蒸発させ、残留物（７ｍｇ）を順相ＨＰＬＣ（Econosil Ｓｉ、２５ｃｍ×１０ｍｍ、１０μ、８５％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、４ｍＬ／分）にかけた。３０分の時点で集めたフラクションを逆相ＨＰＬＣ（Econosil Ｃ１８、２５ｃｍ×１０ｍｍ、１０μ、４５％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、３ｍＬ／分）でさらに精製し、クリプトフィシン−２４３（２．４ｍｇ）を得た。
クリプトフィシン−２４３：1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000318
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000319
同じ上付き文字のaおよびbシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−２５２および２５３：
クリプトフィシン−２４７のエポキシド化：  クリプトフィシン−２４７（１２ｍｇ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、ＭＣＰＢＡ（９．８ｍｇ）で処理した。１５時間後、反応混合物をジクロロメタン（３ｍＬ）で希釈し、ｐＨ８の０．１Ｍリン酸緩衝液（３ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、ジメチルスルフィド（１５ｍＬ）を加えた後、再び緩衝液での洗浄を繰り返した。有機層を蒸発させ、残留物（１１．５ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣ（Econosil Ｃ１８、２５ｃｍ×１０ｍｍ、１０μ、３５％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、３ｍＬ／分）で精製し、大部分のＲＲ−エポキシド化合物（５ｍｇ）および少量のＳＳ−エポキシド化合物（３ｍｇ）を得た。
ＲＲ−エポキシド化合物：1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000320
アミノ基の脱保護およびクロロヒドリン化合物の製造：  ジクロロメタン（１００μＬ）中のＲＲ−エポキシド化合物（８．０ｍｇ）の溶液を塩酸（５０μＬ、４Ｎジオキサン溶液）で処理した。３０分後、溶媒を蒸発させ、残留物を逆相ＨＰＬＣ（Econosil Ｃ１８、２５ｃｍ×１０ｍｍ、１０μ、４０％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、３．５ｍＬ／分）で精製し、クリプトフィシン−２５２（５ｍｇ、ｔR 分）およびクリプトフィシン−２５３（２ｍｇ、ｔR 分）を得た。
クリプトフィシン−２５２細胞毒性データ：セルライン（クリプトフィシン−１に対する＃の強度比）
ＫＢ（１．２０）およびＬｏＶｏ（１．２５）
クリプトフィシン−２５２：
0004364944.tif 000321
1Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000322
クリプトフィシン−２５３：1Ｈ ＮＭＲ（ＭｅＯＨ）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000323
クリプトフィシン−２６３、２６４および２６５：
クリプトフィシン−２４２およびそのＳＳ−エポキシド化合物（２６ｍｇ）の混合物をＣＨ2Ｃｌ2（５ｍＬ）に溶解し、−７８℃においてＴＭＳＣｌ（１．０Ｍ ＣＨ2Ｃｌ2溶液、１２０μＬ）で処理した。３時間後、溶媒を蒸発させ、残留物（２７ｍｇ）を逆相ＨＰＬＣ（Econosil Ｃ１８、２５０ｍｍ×２２ｍｍ、１０μ、６５：３５ ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ、６ｍＬ／分）にかけ、クリプトフィシン−２６４（６．０ｍｇ、ｔR ４３分）およびクリプトフィシン−２６３および２６５の混合物（１５．８ｍｇ、ｔR ５９分）を得た。クリプトフィシン−２６３および２６５を順相ＨＰＬＣ（Econosil シリカ、２５０ｍｍ×１０ｍｍ、１０μ、５５：４５ ＥｔｏＡｃ／ヘキサン、３ｍＬ／分）によって分離し、クリプトフィシン−２６５（７．１ｍｇ、５１分）およびクリプトフィシン−２６３（７．８ｍｇ、７９．０分）を得た。
0004364944.tif 000324
クリプトフィシン−２６３：1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000325
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000326
同じ上付き文字のaおよびbシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−２６４：1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000327
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000328
同じ上付き文字のaおよびbシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−２６５：1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000329
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000330
同じ上付き文字のaおよびbシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−２７２：  ＣＨ2Ｃｌ2（３０μＬ）中のクリプトフィシン−２６３（４．９ｍｇ、０．００６mmol）を室温において、ジオキサン中の４Ｎ ＨＣｌ（３０μＬ、０．０１２mmol）で処理した。３時間後、溶媒を除去し、残留物を減圧下に２日間置き、残ったわずかなジオキサンを除去し、クリプトフィシン−２７２（４．４ｍｇ、９８％）を得た。
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）アミノまたはヒドロキシ酸ユニットδ（炭素位、多重度；Ｊ（Ｈｚ））
0004364944.tif 000331
13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）ユニットδ（炭素位）
0004364944.tif 000332
aシグナルは交換可能である。
クリプトフィシン−２７３：  ３−クロロ過安息香酸（１２８ｍｇ）を０℃のＣＨ2Ｃｌ2（８ｍＬ）中のクリプトフィシン−２３４（１４６ｍｇ）の溶液に加えた。この溶液をゆっくりと室温にまであたため、１２時間攪拌を継続した。反応混合物をＣＨ2Ｃｌ2（７ｍＬ）で希釈し、リン酸緩衝液（２×１０ｍＬ、０．１Ｍ、ｐＨ８）で洗浄した。有機層を分離し、ジメチルスルフィド（５０ｍＬ）で処理して過剰の過酸をクエンチし、再び緩衝液で洗浄した。有機層を蒸発させ、残留物を逆相ＨＰＬＣ（２５０ｍｍ×２２ｍｍ、１０μ、１５％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ、６ｍＬ／分）にかけ、ＲＲ−エポキシド化合物（７４ｍｇ、５０％）を得た。
0004364944.tif 000333
ＴＨＦ（３ｍＬ）中のこのエポキシド化合物（７４ｍｇ）の溶液をＣＨ2Ｃｌ2中のテトラブチルアンモニウムフルオライドの１Ｍ溶液１１５μＬで処理した。１．５時間後、この反応混合物に飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液を加え、ＥｔｏＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物をＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させた。５０−１００％ ＥｔｏＡｃ／ＣＨ2Ｃｌ2を用い、小さいシリカカラムで残留物を精製し、クリプトフィシン−２６９（６２ｍｇ、９８％）を得た。
0004364944.tif 000334
ＣＨ2Ｃｌ2（３ｍＬ）中のクリプトフィシン−２６９（６２ｍｇ）、Ｎ−（ｔ−Ｂｏｃ）グリシン（３０ｍｇ）およびＤＭＡＰ（８ｍｇ）の溶液にＤＣＣ（１６０μＬ、０℃の１Ｍ ＣＨ2Ｃｌ2溶液）を加えた。この反応混合物を０℃で１５分間および室温で２時間攪拌した。この後、この混合物をろ過し、減圧下で濃縮した。７５−３０％ Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮを用い、残留物をＯＤＳシリカフラッシュクロマトグラフィーにかけ、クリプトフィシン−２６９のＮ−ｔ−Ｂｏｃ−グリシネートエステル化合物（６４．４ｍｇ、８５％）を得た。
0004364944.tif 000335
−６０℃のクロロホルム（３ｍＬ）中のこのグリシネートエステル化合物（６４．４ｍｇ）の溶液にＣＨ2Ｃｌ2中のＴＭＳＣｌの１Ｍ溶液２００μＬを加えた。１時間後、溶媒を蒸発させ、４０−９０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを用い、小さいシリカカラムで残留物を精製し、グリシネート化合物のトランスクロロヒドリン化合物（６０ｍｇ、８９％）を得た。
0004364944.tif 000336
ジクロロメタン（０．２５ｍＬ）中のこのクロロヒドリン化合物（５５ｍｇ）の溶液を１，４−ジオキサン中の塩化水素４Ｍ溶液（０．１ｍＬ）で処理した。得られた混合物を室温で２時間攪拌し、減圧下で濃縮し、凍結乾燥機で４８時間乾燥した。クリプトフィシン−２７３を白色固形物として得た。
0004364944.tif 000337
0004364944.tif 000338
ＣＤＣｌ3中で記録したスペクトル；  化学シフトは表に指定した炭素に位置するプロトンまたはメチルまたはメトキシ官能基についてのものである。クリプトフィシン−８のプロトンについての値に対し、ユニットＢおよびＣのプロトンについての化学シフトは±０．２ｐｐｍの範囲内であり、カップリング定数は±０．５Ｈｚの範囲内である。１６３についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：２’，３’＝５’，６’＝８．７；１８６についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：２’，６’＝２．０；５’，６’＝７．７；１９３および１９４についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：３’，４’＝８．５；１９５についてのＪ（Ｈ，Ｈ）（Ｈｚ）：２’，３’＝３’，４’＝７．９；２’，６’＝４’，６’＝２．４；
表中、残りのプロトンについて観察されたカップリング定数は、クリプトフィシン−８のプロトンについての値に対し、±０．５Ｈｚの範囲内である。
２１２についてのＪ（ＨＨ）およびＪ（Ｈ，Ｆ）（Ｈｚ）：３’−Ｆ，４−Ｈ＝４−Ｈ，５−Ｆ＝８．７；２’，４’＝４’，６’＝２．３．
0004364944.tif 000339
ＣＤＣｌ3中で記録したスペクトル。  ユニットＢおよびユニットＣの炭素についての化学シフトは、クリプトフィシン−８の値に対し±０．５ｐｐｍの範囲内である。★シグナルはサンプルが少量であったために観察できなかった。†アサインメントは仮のものである。★★は溶媒シグナルと合わせたものである。１６３の４−ＯＭｅ炭素およびまた１９５の４−ＯＭｅ炭素はδ５５．３で共鳴した。１８５の２’−Ｍｅおよび３’−Ｍｅ炭素はそれぞれδ１５．０および２０．９で現れた。１８６の３’−Ｍｅおよび４’−Ｍｅ炭素はそれぞれδ１９．６および１９．９で観察された。同炭素は１８７ではそれぞれδ１９．５および１９．８で観察され、２２４ではδ１９．５および１９．８で観察された。２２３の３’および５’−Ｍｅ炭素は２１．３で観察された。
実施例９４
表１（以下）に記載の２’（以下）の一般基Ｒはエーテル置換分およびいくつかのアシル置換分からなる。エステル化技術を用い、新規クリプトフィシン同族体を中〜高収率で製造した。Mulzer, J., Trost B.M. Fleming, I., Ed. Comprehensive Organic Synthesis, 6:323-380,（Pergamon press: Oxford, 1991）；Benz, G. Trost, B.M., Fleming, I, Ed., Comprehensive Organic Synthesis, 6:381-417,（Pergamon press: Oxford, 1991）参照。対応するｔ−ブチルカルバメートを塩酸で処理してアミン化合物の塩酸塩を高収率で製造し、一方、６’を塩酸誘導性のｔ−ブチルエステル分解および水酸化ナトリウム処理して二ナトリウム塩７’を誘導した。Nicolaou, Nicolauo, ら、Angew. Chem.Int. Ed. Engl., 33:1583+（1994）の方法にしたがって、１’からピリジニウム塩９’を製造した。
0004364944.tif 000340
表１に記載の複合体の製造は、典型的に活性化エステル方法論、次いで要すればクロマトグラフィーおよび酸誘導性脱保護が関与するいくつかの手順にしたがう。したがって、トリエチルアミンおよび４−ジメチルアミノピリジンの存在下に１’を無水酢酸で処理し、フラッシュクロマトグラフィー後に収率８９％の３’を得る。同様に、１’を無水琥珀酸で処理し、次いで逆相ＨＰＬＣ精製7して５’を製造できる。一方、モノ−ｔ−ブチルエステル化合物４’を酸で処理して５’を高収率で製造する。トリエチルアミンおよび４−ジメチルアミノピリジンの存在下、１’のピリジン溶液を市販のニコチノイルクロライド・塩酸に暴露し、次いでクロマトグラフィーおよび塩化水素処理して８’を高収率で得る。１’を市販の２−フルオロ−１−メチル−ピリジニウム ｐ−トルエンスルホネートで処理し、次いで陰イオン交換（ｐ−トルエンスルホネートをかわりにアセテート）して逆相ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥するNicolau（ibid）の方法にしたがってピリジニウム塩化合物９’を４７％収率で製造する。１’および（４’、６、１０’、４３’および４５’の場合を除いて）市販のＮ−ｔ−ｂｏｃ保護アミノ酸を４−ジメチルアミノピリジンの存在下に１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドで処理して活性化し、残りのすべてのエステル化合物を中〜高収率で製造する。ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液で処理し、減圧下で溶媒を取り除いて、塩酸塩を高収率で製造する。６’を塩酸誘導性のｔ−ブチルエステル分解および水酸化ナトリウム処理して、二ナトリウム塩７’を誘導する。リン酸官能基を組立てるJohnsの方法を特色とする５工程配列によって、５’の製造に必須の酸化合物２４’を６３％収率で製造する。Perich, J.W.；Johns R.B.ら、Synthesis 1988: 142。
0004364944.tif 000341
本明細書中、上記のようにＧｃ３腫瘍細胞モデルにおけるインビトロ細胞毒性についていくつかの新規複合体をアッセイした。これらの結果を以下の表２に示す：
0004364944.tif 000342
安定性実験は水性ｐＨ４〜８の範囲で行い、無傷のまま残留する生成物の百分率を決定した。
ｔ−ブチルカルバメート化合物の対応する塩化合物への変換は、いずれの強酸、いわゆるハロゲン化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、過塩素酸を含む鉱酸、またはトリフルオロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびメタンスルホン酸のような強有機酸によっても実行できる。同酸を用い、対応する遊離塩基からタイプ８’の塩を製造できる。種々の対イオン（陽イオン）はいずれかのアルカリ金属およびアルカリ土類金属を含むタイプ７’の塩を構成し得る。種々の対イオン（陰イオン）はタイプ９’の塩、いわゆる（有機または無機の）酸の複合塩基のいずれかを構成し得る。
クリプトフィシン−５５酢酸塩（３’）（ＬＳＮ ３６２３７６）の製造。
０℃のメチレンクロライド６５９μＬ中の１’（９３ｍｇ、０．１３mmol）の溶液にトリエチルアミン（５５μＬ、０．４０mmol）、４−ジメチルアミノピリジン（１．６ｍｇ、０．０１３mmol）および無水酢酸（１９μＬ、０．２０mmol）を加えた。０℃で１時間攪拌した後、メタノール１９μＬで反応をクエンチし、０．５容量にまで濃縮し、直接フラッシュクロマトグラフィーカラム（フラッシュシリカゲル１９ｇ）にアプライした。酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で溶出し、標題化合物８８ｍｇ（８９％）を白色泡沫として得た：
0004364944.tif 000343
クリプトフィシン５５スクシネート tert−ブチルエステル（４’）（ＬＳＮ ３８４６６５）の製造。  室温の無水メチレンクロライド８５０μＬ中の１’（１３３ｍｇ、０．１８８mmol）、琥珀酸モノ−tert−ブチルエステル10（６６ｍｇ、０．３７７mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（２．３ｍｇ、０．０１９mmol）の溶液にメチレンクロライド９２μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（７８ｍｇ、０．３７７mmol）の溶液を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応物をセライト１５０ｍｇで処理し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）１ｍＬで希釈し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、オフホワイト色油状物とした。酢酸エチル−ヘキサン（２：１）で溶出するクロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル２５ｇ）により、標題化合物１５７ｍｇ（９７％）を白色泡沫として得た：
0004364944.tif 000344
クリプトフィシン５５スクシネート（５’）（ＬＳＮ ３７７０９２）のクリプトフィシン５５スクシネート tert−ブチルエステルからの製造。  室温のメチレンクロライド４９１μＬ中の４’（１２７ｍｇ、０．１４７mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（１８４μＬ、０．７３７mmol）を加えた。この溶液を室温で５時間攪拌した。減圧下で濃縮し、標題化合物１１９ｍｇ（１００％）を白色泡沫として得た。
クリプトフィシン５５スクシネート（５’）（ＬＳＮ ３７７０９２）の無水琥珀酸塩からの製造。  室温のメチレンクロライド３８３μＬ中の１’（２７ｍｇ、０．０３８mmol）および無水琥珀酸（５．７ｍｇ、０．０５７mmol）の溶液にトリエチルアミン（１６μＬ、０．１１５mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（４．７ｍｇ、０．０３８mmol）を加えた。１９時間攪拌した後、さらに無水琥珀酸５．７ｍｇ（０．０５７mmol）および４−ジメチルアミノピリジン４．７ｍｇ（０．０３８mmol）を加え、次いでさらに２９時間攪拌した。反応物を１Ｎ塩酸水溶液０．５ｍＬで処理し、メチレンクロライド（３×０．５ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物をまとめ、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、白色泡沫とした。逆相ＨＰＬＣ7で精製し、標題化合物１０ｍｇ（３２％）を白色泡沫として得た：
0004364944.tif 000345
クリプトフィシン５５（２’−ジ−ｔ−ブチルホスファチル）フェニルアセテート（６’）（ＬＳＮ ３７９４０７）の製造。  室温の無水メチレンクロライド２５０μＬ中の１’（０．１０２mmol）、２４’（４６ｍｇ、０．１３４mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（１２ｍｇ、０．１０２mmol）の溶液にメチレンクロライド５０μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（２７ｍｇ、０．１３４mmol）の溶液を加えた。室温で６時間攪拌した後、反応物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１）１ｍＬで希釈し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、紫色泡沫とした。酢酸エチル−ヘキサン（４：１）で溶出するクロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ）によって、標題化合物８６ｍｇ（８２％）を白色泡沫として得た：
0004364944.tif 000346
２’−（ジ−ｔ−ブチルホスファチル）フェニル酢酸（２４’）（ＬＳＮ ３７９４０２）の製造。  ０℃のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５．２ｍＬ中の２’−ヒドロキシフェネチルアルコール（１．０５ｇ、７．６０mmol）の溶液にイミダゾール（６２１ｍｇ、９．１１mmol）およびtert−ブチルジメチルシリルクロライド（１．２６ｇ、８．３４mmol）を加えた。０℃で４０分間および室温で４５分間攪拌した後、さらにイミダゾール１５５ｍｇ（２．２８mmol）およびtert−ブチルジメチルシリルクロライド２２９ｍｇ（１．５２mmol）を加えた。この反応物をさらに１５分間攪拌した時点で、tert−ブチルメチルエーテル１５０ｍＬを加えた。冷１Ｎ塩酸水溶液（１×１５ｍＬ）、次いで水（１×１５ｍＬ）で混合物を洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮して黄色油状物とした。ヘキサン−酢酸エチル（５：１）で溶出するクロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル７０ｇ）により、一級シリルエーテル化合物１．８１ｇ（９４％）をかすかにオフホワイト色の油状物として得た。室温のテトラヒドロフラン２ｍＬ中のシリルエーテル化合物（５０６ｍｇ、２．００mmol）およびジ−tert−ブチルジエチルホスホルアミダイト（９３％の６００μＬ、２．００mmol）の溶液に１−Ｈ−テトラゾール（４２１ｍｇ、６．０１mmol）を加えた。４５分間攪拌した後、反応混合物を−１０℃にまで冷却し、メチレンクロライド３．６ｍＬ中のｍ−クロロ過安息香酸（９９％の４５０ｍｇ、２．６１mmol）ですばやく処理した。白濁した反応物を室温にまであたため、１５分間攪拌した。反応を１０％重亜硫酸ナトリウム水溶液４ｍＬでクエンチし、１０分間強く攪拌し、tert−ブチルメチルエーテル１５ｍＬで希釈し、１０％重亜硫酸ナトリウム水溶液（２×１０ｍＬ）次いで０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、無色の油状物（９４１ｍｇ）とし、これを直接次の工程で使用した。粗製のホスフェート化合物をテトラヒドロフラン１０ｍＬに溶解し、０℃にまで冷却し、テトラヒドロフラン中のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライド１Ｍ溶液（２．４ｍＬ、２．４mmol）で処理した。０℃で２０分間および室温で１．５時間攪拌した後、反応物をtert−ブチルメチルエーテル６０ｍＬで希釈し、水（１×１０ｍＬ）次いでブライン（１×１０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、黄色油状物とした。酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で溶出するクロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル５０ｇ）により、１°アルコール化合物５２５ｍｇ（７９％）をオフホワイト色油状物として得た。室温のアセトニトリル−四塩化炭素（１：１、１．４９mmol）中のアルコール化合物（１２３ｍｇ、０．３７２mmol）の溶液に水（１．１ｍＬ）次いで過ヨウ素酸ナトリウム（２３９ｍｇ、１．１２mmol）およびルテニウム（ＩＩＩ）クロライド水和物（１．８ｍｇ、０．００８２mmol）を加えた。褐色混合物を室温で５５分間高速に攪拌した。減圧下で濃縮し、クロマトグラフ（フラッシュシリカゲル８ｇ、１０％メタノール−酢酸エチルで溶出）して、標題化合物１０９ｍｇ（８５％）を紫色油状物として得た：
0004364944.tif 000347
クリプトフィシン５５（２’−ホスファチル）フェニルアセテート二ナトリウム塩（７’）（ＬＳＮ ３７４１２２）の製造。  室温のメチレンクロライド４００μＬ中の６’（８４ｍｇ、０．０８１mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（８１μＬ、０．３３mmol）を加えた。かすかに黄色の溶液を室温で２時間攪拌した。減圧下で濃縮してオフホワイト色泡沫とした後、粗製の二水素ホスフェート化合物をテトラヒドロフラン６１４μＬに溶解し、５．００Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３３μＬ、０．１６３mmol）で処理した。１０分間攪拌した後、混合物を減圧下で濃縮し、黄褐色泡沫とした。粗製の塩を熱アセトニトリル１ｍＬおよび熱水０．１ｍＬにとった。不溶物をろ過して除去し、ろ液を減圧下で濃縮し、標題化合物６９ｍｇ（８７％）を白色固形物として得た：
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クリプトフィシン５５ニコチノエート塩酸塩（８’）（ＬＳＮ ３６８２６５）の製造。  室温のピリジン３５４μＬ中の１’（５０ｍｇ、０．０７１mmol）の溶液にニコチノイルクロライド・塩酸（１５ｍｇ、０．０８５mmol）次いでトリエチルアミン（２３μＬ、０．１７０mmol）を加えた。１．５時間攪拌した後、４−ジメチルアミノピリジン（８．６ｍｇ、０．０７１mmol）を加えた。５時間攪拌した後、さらにトリエチルアミン（２３μＬ、０．１７０mmol）、４−ジメチルアミノピリジン（８．６ｍｇ、０．０７１mmol）およびニコチノイルクロライド・塩酸（１５ｍｇ、０．０８５mmol）をピリジンリンス５０μＬとともに加えた。１８時間攪拌した後、反応物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液０．５ｍＬで処理し、メチレンクロライド（４×１ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物をまとめ、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、淡褐色油状物とした。酢酸エチル−ヘキサン（１０：１）で溶出するクロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１４ｇ）により、遊離塩基化合物４９ｍｇ（８５％）を白色泡沫として得た。ニコチノエート化合物をメチレンクロライド１ｍＬに溶解し、ジエチルエーテル中の塩化水素１．０Ｍ溶液（９０μＬ、０．０９０mmol）で処理した。無色透明の溶液を室温で５分間静置した。減圧下で溶媒を除去し、標題化合物５１ｍｇを白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−メチルピリジニウム酢酸塩（９’）（ＬＳＮ ３６６５５０）の製造。  ０℃のメチレンクロライド７５１μＬ中の１’（５３ｍｇ、０．０７５mmol）の溶液にトリエチルアミン（１３μＬ、０．０９０mmol）次いで２−フルオロ−１−メチルピリジニウム ｐ−トルエンスルホネート（２３ｍｇ、０．０８３mmol）を加えた。異相混合の反応混合物を室温にまであたため、３．５時間攪拌し、その時点でさらに２−フルオロ−１−メチルピリジニウム ｐ−トルエンスルホネート１１ｍｇ（０．０３９mmol）を加えた。１４．５時間攪拌した後、さらに２−フルオロ−１−メチルピリジニウム ｐ−トルエンスルホネート１１ｍｇ（０．０３９mmol）を加え、次いで２．５時間後、さらに２−フルオロ−１−メチルピリジニウム ｐ−トルエンスルホネート１１ｍｇ（０．０３９mmol）およびトリエチルアミン１３μＬ（０．０９０）を加えた。さらに１時間攪拌した後、反応物を減圧下で濃縮し、オレンジ色泡沫とした。陰イオン交換（ｐ−トルエンスルホネートのかわりにアセテート）して、逆相ＨＰＬＣ8で精製し、次いで凍結乾燥して、標題化合物３０ｍｇ（４７％）を白色固形物として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−（Ｄ）−アラニネート（１０’）（ＬＳＮ ３８２０４９）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１４３μＬ中の１’（２３ｍｇ、０．３３mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−（Ｄ）−アラニン4c（１６ｍｇ、０．０４９mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（数個の結晶）の溶液にメチレンクロライド２０μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１０ｍｇ、０．０４９mmol）の溶液を加えた。２時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（２：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（２：１）洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグフフィー（フラッシュシリカゲル１４ｇ、２：１ 酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物２９ｍｇ（８８％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ ３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−（Ｄ）−アラニネート塩酸塩（１１’）（ＬＳＮ ３８２０４８）の製造。  室温のメチレンクロライド２６５μＬ中の１０’（２７ｍｇ、０．０２７mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（３３μＬ、０．１３３mmol）を加えた。３時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物２６ｍｇ（５重量％ジオキサンを考慮して９６％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−フェニルアラニネート（１２’）（ＬＳＮ ３８２２３５）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１６５μＬ中の１’（２９ｍｇ、０．０４１mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−Ｌ）−フェニルアラニン（１６ｍｇ、０．０６２mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．５ｍｇ、０．００４１mmol）の溶液にメチレンクロライド４２μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１３ｍｇ、０．０６２mmol）の溶液を加えた。４０分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（２：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（２：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１２ｇ、２：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物２０ｍｇ（５０％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｌ）−フェニルアラニネート塩酸塩（１３’）（ＬＳＮ ３８２２３６）の製造。  室温のメチレンクロライド１８９μＬ中の１２’（１８ｍｇ、０．０１９mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（２４μＬ、０．０９４mmol）を加えた。４時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１５ｍｇ（２重量％ジオキサンを考慮して８８％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｌ）−ヒスチジネート二塩酸塩（１５’）（ＬＳＮ ３８４０４６）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１００μＬ中の１’（１９ｍｇ、０．０２７mmol）、Ｎ，Ｎ’−ジ−ｔ−Boc−（Ｌ）−ヒスチジンベンゼン複合体（１８ｍｇ、０．０４０mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．３ｍｇ、０．００２７mmol）の溶液にメチレンクロライド３５μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（８．３ｍｇ、０．０４０mmol）の溶液を加えた。６０分間攪拌した後、さらにＮ，Ｎ’−ジ−ｔ−Boc−（Ｌ）−ヒスチジンベンゼン複合体１８ｍｇ（０．０４０mmol）および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド８．３ｍｇ（０．０４０mmol）を加えた。白濁した反応混合物をさらに４時間攪拌し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１３ｇ、３：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、Ｎ，Ｎ’−ジ−ｔ−Boc化合物（１４’）１７ｍｇ（６１％）を白色泡沫として得た。室温のメチレンクロライド１６０μＬ中の１４（１７ｍｇ、０．０１６mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（２４μＬ、０．０９８mmol）を加えた。５時間攪拌した後、白濁した反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１５．７ｍｇ（４重量％ジオキサンを考慮して１００％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−プロリネート（１６’）（ＬＳＮ ３８２９２６）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１００μＬ中の１’（１９ｍｇ、０．０２７mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−プロリン（８．７ｍｇ、０．０４０mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．３ｍｇ、０．００２７mmol）の溶液にメチレンクロライド３５μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（８．３ｍｇ、０．０４０mmol）の溶液を加えた。４５分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ、３：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物１１ｍｇ（４６％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｌ）−プロリネート塩酸塩（１７’）（ＬＳＮ ３８２９２７）の製造。  室温のメチレンクロライド１２２μＬ中の１６’（１１ｍｇ、０．０１２mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（１５μＬ、０．０６１mmol）を加えた。５時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１０ｍｇ（１００％）を白色固形物として得た：
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クリプトフィシン−５５ Ｎ−ｔ−Boc−グリシネート（１８’）（ＬＳＮ ３７９４０３）の製造。  室温の無水メチレンクロライド４９０μＬ中の１’（１１８ｍｇ、０．１６７mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−グリシン（４４ｍｇ、０．２５１mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（２．０ｍｇ、０．０１６７mmol）の溶液にメチレンクロライド６７μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（５２ｍｇ、０．２５１mmol）の溶液を加えた。５０分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１９ｇ、３：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物１３８ｍｇ（９６％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５グリシネート塩酸塩（１９’）（ＬＳＮ ３６８４２２）の製造。  室温のメチレンクロライド４７１μＬ中の１８’（１２２ｍｇ、０．１４１mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（１７８μＬ、０．７０７mmol）を加えた。１時間２０分攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１２０ｍｇ（７重量％ジオキサンを考慮して９９％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−β−アラニネート（２０’）（ＬＳＮ ３７９４０４）の製造。  室温の無水メチレンクロライド４００μＬ中の１’（１０２ｍｇ、０．１４５mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−β−アラニン（４１ｍｇ、０．２１７mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（１８ｍｇ、０．１４５mmol）の溶液にメチレンクロライド８２μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（４５ｍｇ、０．２１７mmol）の溶液を加えた。３．５時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル２１ｇ、２：１次いで４：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物１２１ｍｇ（９５％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ β−アラニネート塩酸塩（２１’）（ＬＳＮ ３７７７１８）の製造。  室温のメチレンクロライド４５２μＬ中の２０’（１１９ｍｇ、０．１３６mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（１７０μＬ、０．６７９mmol）を加えた。２時間１５分攪拌した後、白濁した反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１１０ｍｇ（４重量％ジオキサンを考慮して９６％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−γ−アミノブチレート（２２’）（ＬＳＮ ３７９４０１）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１５０μＬ中の１’（４８ｍｇ、０．０６８mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−４−アミノ酪酸（１８ｍｇ、０．０８８mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（８ｍｇ、０．０６８mmol）の溶液にメチレンクロライド５０μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１８ｍｇ、０．０８８mmol）の溶液を加えた。４５分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、５分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ、３：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物５５ｍｇ（９０％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ γ−アミノブチレート塩酸塩（２５’）（ＬＳＮ ３６８５１３）の製造。  室温のメチレンクロライド２９７μＬ中の２２’（５３ｍｇ、０．０５９mmol）の溶液にジエチルエーテル中の塩化水素１．０Ｍ溶液（２９７μＬ、０．２９７mmol）を加えた。出発物質を白色ペーストとして沈殿させ、さらにメチレンクロライド１５０μＬを用いて再溶解した。４時間攪拌した後、さらに塩化水素溶液５９μＬ（０．０５９mmol）を加えた。攪拌をさらに１４時間継続し、反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物４９ｍｇ（１００％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−アラニネート（２６’）（ＬＳＮ ３７９４０５）の製造。  室温の無水メチレンクロライド４００μＬ中の１’（１０３ｍｇ、０．１４６mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−アラニン（４１ｍｇ、０．２１９mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（１８ｍｇ、０．１４６mmol）の溶液にメチレンクロライド８７μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（４５ｍｇ、０．２１９mmol）の溶液を加えた。５時間５０分攪拌した後、白濁した反応混合物をさらにＮ−ｔ−Boc−（Ｌ）−アラニン５．５ｍｇ（０．０２９mmol）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド６．０ｍｇ（０．０２９mmol）および数個の４−ジメチルアミノピリジン結晶で処理した。さらに１時間攪拌した後、反応物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル２２ｇ、１．５：１次いで２：１次いで４：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物９６ｍｇ（７５％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｌ）−アラニン塩酸塩（２８’）（ＬＳＮ ３７７７１９）の製造。  室温のメチレンクロライド３６１μＬ中の２６’（９５ｍｇ、０．１０８mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（１３５μＬ、０．５４２mmol）を加えた。２．５時間攪拌した後、白濁した反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物９０ｍｇ（６重量％ジオキサンを考慮して９６％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｄ）−アラニネート（２９’）（ＬＳＮ ３８２４２６）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１３０μＬ中の１’（２５ｍｇ、０．０３５mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−（Ｄ）−アラニン（１０ｍｇ、０．０５３mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．４ｍｇ、０．００３５mmol）の溶液にメチレンクロライド４７μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１１ｍｇ、０．０５３mmol）の溶液を加えた。５．５時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ、２：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物２６ｍｇ（８３％）を白色泡沫として得た。
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クリプトフィシン５５（Ｄ）−アラニネート塩酸塩（３０’）（ＬＳＮ ３８２４２５）の製造。  室温のメチレンクロライド２７４μＬ中の２９’（２４ｍｇ、０．０２７mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（３４μＬ、０．１３７mmol）を加えた。３．５時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物２４ｍｇ（８重量％ジオキサンを考慮して１００％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎａ−Ｎε−ジ−ｔ−Boc−（Ｌ）−リジネート（３１’）（ＬＳＮ ３７９４０６）の製造。  室温の無水メチレンクロライド４００μＬ中の１’（１０５ｍｇ、０．１４９mmol）、Ｎａ−Ｎε−ジ−ｔ−Boc−（Ｌ）−リジン（６７ｍｇ、０．１９３mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（１８ｍｇ、０．１４９mmol）の溶液にメチレンクロライド９６μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（４０ｍｇ、０．１９３mmol）の溶液を加えた。４時間攪拌した後、白濁した反応混合物をさらにＮａ−Ｎε−ジ−ｔ−Boc−（Ｌ）−リジン１０ｍｇ（０．０３０mmol）および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド６．１ｍｇ（０．０３０mmol）のメチレンクロライド溶液１００μＬで処理した。さらに１時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３；１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、白色泡沫とし、Ｎａ−Ｎε−ジ−ｔ−Boc−（Ｌ）−リジン３４ｍｇ（０．０９７mmol）、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド２０ｍｇ（０．０９７mmol）および４−ジメチルアミノピリジン９．１ｍｇ（０．０７５mmol）を用い、再び上記条件に付した。１．５時間攪拌した後、反応物を上記のように処理し、粗製の白色泡沫とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル２１ｇ、１：１次いで４：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物１１２ｍｇ（７３％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｌ）−リジネート二塩酸塩（３２’）（ＬＳＮ ３７７５６２）の製造。  室温のメチレンクロライド３４５μＬ中の３１’（１０７ｍｇ、０．１０３mmol）の溶液に１、４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（１５５μＬ、０．６２１mmol）を加えた。４時間攪拌した後、白濁した反応混合物をろ過した。白色固形物を集め、メチレンクロライド（２×１ｍＬ）で洗浄し、減圧下、室温で乾燥し、標題化合物８７ｍｇ（９３％）を得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎａ−Ｎε−ジ−ｔ−Boc−（Ｄ）−リジネート（３３’）（ＬＳＮ ３８２５０４）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１４０μＬ中の１’（２４ｍｇ、０．０３５mmol）、Ｎａ−Ｎε−ジ−ｔ−Boc−（Ｄ）−リジン（２４７ｍｇ、０．０６９mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．４ｍｇ、０．００３５mmol）の溶液にメチレンクロライド３０μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１４ｍｇ、０．０６９mmol）の溶液を加えた。７０分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、オフホワイト色油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ、２：１／酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物３０ｍｇ（８７％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｄ）−リジネート二塩酸塩（３４’）（ＬＳＮ ３７７５０３）の製造。  室温のメチレンクロライド１８１μＬ中の３３’（２８ｍｇ、０．０２７mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（４１μＬ、０．１６２mmol）を加えた。５．５時間攪拌した後、白濁した反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物２５ｍｇ（４．５重量％ジオキサンを考慮して９６％）を白色固形物として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−γ−ｔ−ブチルエステル−（Ｌ）−グルタメート（３５’）（ＬＳＮ ３８２３６６）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１５０μＬ中の１’（２７ｍｇ、０．０３８mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−グルタミン酸γ−ｔ−ブチルエステル（１７ｍｇ、０．０５７mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．５ｍｇ、０．００３８mmol）の溶液にメチレンクロライド４１μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１２ｍｇ、０．０５７mmol）の溶液を加えた。６０分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル／ヘキサン（２：１、２ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（２：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、オフホワイト色油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ、１：１酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物２８ｍｇ（７４％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｌ）−α−グルタメート塩酸塩（３６’）（ＬＳＮ ３８２３６７）の製造。  室温のメチレンクロライド２３２μＬ中の３５’（２３ｍｇ、０．０２３mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（２９μＬ、０．１１６mmol）を加えた。８．５時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物２０ｍｇ（３重量％ジオキサンを考慮して９７％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−β−ｔ−ブチルエステル−（Ｌ）−アスパルテート（３７’）（ＬＳＮ ３８２５０１）およびクリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−β−ｔ−ブチルエステル−（Ｄ）−アスパルテート（３９’）（ＬＳＮ ３８７０４０）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１．０ｍＬ中の１’（１７６ｍｇ、０．２４９mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−アスパラギン酸 β−ｔ−ブチルエステル（１４４ｍｇ、０．４９９mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（２．０ｍｇ、０．０６６mmol）の溶液にメチレンクロライド２００μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１０３ｍｇ、０．４９９mmol）の溶液を加えた。４５分間攪拌した後、白濁した反応混合物をセライト８８ｍｇで処理し、酢酸エチル−ヘキサン（３：１、２ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、オフホワイト色油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル３０ｇ、２：１酢酸エチル−ヘキサン）により、混合フラクションとともに純粋な３７’（低Ｒｆ）を得た。混合フラクションをクロマトグラフ（フラッシュシリカゲル２５ｇ、１：１次いで２：１次いで３：１酢酸エチル−ヘキサン）し、純粋な３９’（高Ｒｆ）とともにより多くの純粋な３７’を得た。純粋な３７’を含むすべてのフラクションをまとめ、１４９ｍｇ（６１％）を白色泡沫として得た一方、純粋な３９’を含むすべてのフラクションをまとめ、５６ｍｇ（２３％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｌ）−アスパルテート塩酸塩（３８’）（ＬＳＮ ３８２５０２）の製造。  室温のメチレンクロライド４９８μＬ中の３７’（１４６ｍｇ、０．１４９mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（３７４μＬ、１．４９mmol）を加えた。１９時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１３１ｍｇ（２重量％ジオキサンを考慮して１００％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｄ）−アスパルテート塩酸塩（４０’）（ＬＳＮ ３８７０３９）の製造。  室温のメチレンクロライド２７１μＬ中の３９’（５３ｍｇ、０．０５４mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（１３６μＬ、０．５４２mmol）を加えた。１４時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物４７ｍｇ（６重量％ジオキサンを考慮して９４％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−α−ｔ−ブチルエステル−（Ｌ）−グルタメート（４１’）（ＬＳＮ ３８２５７２）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１２０μＬ中の１’（２３ｍｇ、０．０３３mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−グルタミン酸 α−ｔ−ブチルエステル（１５ｍｇ、０．０４９mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．４ｍｇ、０．００３３mmol）の溶液にメチレンクロライド４０μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１０ｍｇ、０．０４９mmol）の溶液を加えた。４５分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、オフホワイト色油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ、２：１酢酸エチル−ヘキサン）により標題化合物２４ｍｇ（７５％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｌ）−γ−グルタメート塩酸塩（４２’）（ＬＳＮ ３８２５１４）の製造。  室温のメチレンクロライド２１２μＬ中の４１’（２１ｍｇ、０．０２１mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（５３μＬ、０．２１２mmol）を加えた。２３．５時間攪拌した後、反応混合物をメタノールで希釈し、小さいセライトのプラグに通した。減圧下で濃縮し、標題化合物２０ｍｇ（６重量％ジオキサンを考慮して１００％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ，Ｎ’−ジ−ｔ−Boc−（Ｓ）−２，３−ジアミノプロピオネート（４３’）（ＬＳＮ ３８２７６５）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１１０μＬ中の１’（２１ｍｇ、０．０３０mmol）、Ｎ，Ｎ’−ジ−ｔ−Boc−（Ｓ）−２，３−ジアミノプロピオン酸（１８ｍｇ、０．０６０mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．３ｍｇ、０．００３０mmol）の溶液にメチレンクロライド３９μＬ中のジシクロヘキシルカルボジイミド（１２ｍｇ、０．０６０mmol）の溶液を加えた。７０分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、オフホワイト色油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１５ｇ、２：１酢酸エチル−ヘキサン）により、標題化合物２４ｍｇ（８０％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｓ）−２，３−ジアミノプロピオネート二塩酸塩（４４’）（ＬＳＮ ３８２７６４）の製造。  室温のメチレンクロライド２１１μＬ中の４３’（２１ｍｇ、０．０２１mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（４２μＬ、０．１６９mmol）を加えた。５時間攪拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１８．５ｍｇ（３重量％ジオキサンを考慮して１００％）を白色固形物として得た：
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クリプトフィシン５５ Ｎ−ｔ−Boc−（Ｌ）−セリネート（４５’）（ＬＳＮ ３８４３４０）の製造。  室温の無水メチレンクロライド２００μＬ中の１’（３８ｍｇ、０．０５３mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−Ｏ−tert−ブチルジメチルシリル（Ｌ）−セリン11（５１ｍｇ、０．１６０mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．６ｍｇ、０．００５３mmol）の溶液にメチレンクロライド６９μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（３３ｍｇ、０．１６０mmol）を加えた。４時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（２：１、１ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（２：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とし、これを直接次の工程に用いた。室温のテトラヒドロフラン２６８μＬ中の粗製のシリルエーテル化合物（５４ｍｇ、０．０５４mmol）の溶液にフッ化水素−ピリジン（ＨＦ・ピリジン（Aldrich）０．５ｇ、テトラヒドロフラン４ｍＬおよびピリジン１ｍＬから製造）のストック溶液２６８μＬを加えた。４時間攪拌した後に、さらにストックＨＦ−ピリジン溶液６７μＬを加えた。３０分間攪拌した後、反応物を重炭酸ナトリウム飽和水溶液０．６ｍＬで処理し、酢酸エチル（１ｍＬ×３）で洗浄した。有機層をまとめ、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）し、ろ過し、減圧下で濃縮し、かすかに黄色の泡沫とした。クロマトグラフィー（３：１次いで６：１酢酸エチル−ヘキサンで溶出するフラッシュＳｉＯ2１６ｇ）により、標題化合物２６ｍｇ（４４％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５（Ｌ）−セリネート塩酸塩（４６’）（ＬＳＮ ３８４３３９）の製造。  室温のメチレンクロライド２９１μＬ中の４５’（２６ｍｇ、０．０２９mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（３６μＬ、０．１４６mmol）を加えた。２．５時間攪拌した後、無色透明の反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物２３ｍｇ（２重量％ジオキサンを考慮して９４％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５グリシジルグリシネート塩酸塩（４７’）（ＬＳＮ ３８７７５０）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１２８μＬおよびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２８μＬ中の１’（１８ｍｇ、０．０２６mmol）、Ｎ−ｔ−Boc−グリシジルグリシン（１２ｍｇ、０．０５１mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．３ｍｇ、０．００２６mmol）の溶液にメチレンクロライド２８μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１１ｍｇ、０．０５１mmol）を加えた。３時間攪拌した後、さらにＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３０μＬ中のＮ−ｔ−Boc−グリシジルグリシン２４ｍｇ（０．１０２mmol）および１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド２２ｍｇ（０．１０２mmol）を加えた。１．５時間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、無色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１２ｇ、１％メタノールの酢酸エチル溶液）により、白色泡沫１２ｍｇを得、これをこのまま次の工程に用いた。上記からの得た室温のメチレンクロライド１３０μＬ中のＮ−Boc−グリシジルグリシネート（１２ｍｇ、０．０１３mmol）の溶液に１，４−ジオキサン中の塩化水素４．０Ｍ溶液（１６μＬ、０．０６５mmol）を加えた。３．５時間攪拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し、標題化合物１１ｍｇ（１００％）を白色泡沫として得た：
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クリプトフィシン５５ ３，６，９−トリオキサ（tioxa）デカノエート（４８’）（ＬＳＮ ３８７４１４）の製造。  室温の無水メチレンクロライド１００μＬ中の１’（１８ｍｇ、０．０２６ｍｇ）、３，６，９−トリオキサデカン酸（７．８μＬ、０．０５１mmol）および４−ジメチルアミノピリジン（０．３ｍｇ、０．００２６mmol）の溶液にメチレンクロライド２８μＬ中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１１ｍｇ、０．０５１mmol）の溶液を加えた。３０分間攪拌した後、白濁した反応混合物を酢酸エチル−ヘキサン（３：１、０．５ｍＬ）で希釈し、１０分間攪拌し、セライトのプラグを通してろ過し、酢酸エチル：ヘキサン（３：１）で洗浄した。ろ液および洗浄液を減圧下で濃縮し、オフホワイト色の油状物とした。クロマトグラフィー（フラッシュシリカゲル１２ｇ、酢酸エチル中の２％メタノール）により、標題化合物１９ｍｇ（８６％）を白色泡沫として得た：
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