(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物と、酸性ｐＨに緩衝化され、血漿のｐＨ未満の値であって、かつ、ダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物の安定性に影響を及ぼさない値に媒質のｐＨを固定することのできる医薬的に許容できる水溶液を添加剤として含むことを特徴とする、ダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物を含有する注入可能な組成物。
【請求項２】
添加剤が３から６の間のｐＨに緩衝化された任意の医薬的に許容できる溶液から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の注入可能な組成物。
【請求項３】
添加剤が、酸／塩基系により形成される任意の医薬的に許容できる溶液から選択され、ここで少なくとも１つの成分はｐＫａが３〜６にあり、かつ、前記系の達成されたｐＨが前記ｐＫａの領域内にあるかまたはそれ未満であることを特徴とする、請求項１または２に記載の注入可能な組成物。
【請求項４】
酸性ｐＨに緩衝化された水溶液のｐＨが3.5から５の間に固定されていることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の注入可能な組成物。
【請求項５】
酸性ｐＨに緩衝化された水溶液のｐＨが４から５の間に固定されていることを特徴とする、請求項４に記載の注入可能な組成物。
【請求項６】
酸性ｐＨに緩衝化された水溶液のｐＨが４に固定されていることを特徴とする、請求項４または５に記載の注入可能な組成物。
【請求項７】
添加剤が、１以上の医薬的に許容できる３〜６の範囲内のｐＫａの弱有機もしくは無機酸を、それらの共役塩基、強塩基または弱塩基と組み合わせて成る酸／塩基系により形成されるか、あるいは１以上の医薬的に許容できる強有機または無機酸を、ｐＫａが３〜６の範囲内の酸／塩基対に属する少なくとも１つの弱塩基と組み合わせて成る酸／塩基系により形成される任意の医薬的に許容できる溶液から選択されることを特徴とする、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の注入可能な組成物。
【請求項８】
酸／塩基系が、
１種以上の医薬的に許容できる弱有機酸と
ｉ）それらの共役塩基、
ｉｉ）他の弱酸の共役塩基、または
ｉｉｉ）水酸化ナトリウム
の組み合わせ物を含み、かつ、前記医薬的に許容できる弱有機酸がクエン酸、酢酸、乳酸、アミノ酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、安息香酸、ヒスチジン、グルタル酸、プロピオン酸、コハク酸、ギ酸、マレイン酸、アスパラギン酸、マロン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸およびリン酸から選択される、
ことを特徴とする、請求項７に記載の注入可能な組成物。
【請求項９】
酸／塩基系が、
１種以上の医薬的に許容できる弱有機酸の共役塩基を含み、かつ、前記共役塩基がメタンスルホン酸、塩酸、リン酸または硫酸と組み合わされており、かつ、前記医薬的に許容できる弱有機酸がクエン酸、酢酸、乳酸、アミノ酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、安息香酸、ヒスチジン、グルタル酸、プロピオン酸、コハク酸、ギ酸、マレイン酸、アスパラギン酸、マロン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸およびリン酸から選択される、
ことを特徴とする、請求項７に記載の注入可能な組成物。
【請求項１０】
酸／塩基系が、クエン酸、酢酸、乳酸、アミノ酸および／またはそれらの共役塩基を含むことを特徴とする、請求項８または９に記載の注入可能な組成物。
【請求項１１】
酸性ｐＨに緩衝化された水溶液が、表面活性剤も含むことを特徴とする、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の注入可能な組成物。
【請求項１２】
表面活性剤が、ポリオキシエチレン化ひまし油誘導体、ポリヒドロキシエチル化ソルビタンエステルおよびシレチンから選択されることを特徴とする、請求項１１に記載の注入可能な組成物。
【請求項１３】
表面活性剤が、ポリソルベート80であることを特徴とする、請求項１１に記載の注入可能な組成物。
【請求項１４】
ダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物を含有する注入用溶液の調製を目的とする対になった区分室であって、一方にはダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物を含有する水溶液を、そして他方には酸性ｐＨに緩衝化され、血漿のｐＨ未満の値であって、かつ、ダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物の安定性に影響を及ぼさない値に媒質のｐＨを固定することができる医薬的に許容できる水溶液を添加剤として含むことを特徴とする、上記の対になった区分室。
【請求項１５】
ダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物が、少なくとも化学量論的量のメタンスルホン酸または塩酸が加えられ、そして３．５〜５の範囲内のｐＨであるダルホプリスチンおよびキヌプリスチンから成ることを特徴とする、請求項１ないし１３のいずれか１項に記載の注入可能な組成物。
【請求項１６】
酸性ｐＨに緩衝化され、媒質のｐＨを血漿のｐＨ未満の値であって、かつ、ダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物の安定性に影響を及ぼさない値に固定することができる任意の医薬的に許容できる水溶液から選択されるバッファー溶液の、キヌプリスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物の注入に伴う炎症症状、静脈炎、アレルギー反応または水腫の形成である静脈性の寛容できない作用に対する保護を目的とする医薬品を調製するための使用。
【請求項１７】
請求項１６に記載の使用であって、前記バッファー溶液が３から６の間のｐＨに緩衝化されていることを特徴とする、上記使用。
【請求項１８】
請求項１６または１７に記載の使用であって、前記バッファー溶液が酸／塩基系により形成される溶液から選択され、かつ、少なくとも１つの成分はそのｐＫａが３〜６の範囲内の医薬的に許容できる弱酸または弱塩基であり、そしてこの系で達成されるｐＨが前記ｐＫａの範囲またはそれ未満であることを特徴とする、上記使用。
【請求項１９】
請求項１６ないし１８のいずれか１項に記載の使用であって、前記バッファー溶液がｐＫａ３〜６の範囲内の１以上の医薬的に許容できる弱有機もしくは無機酸を、それらの共役塩基、強塩基または弱塩基と組み合わせて成る酸／塩基系により形成されるか、あるいは１以上の医薬的に許容できる強有機または無機酸を、ｐＫａが３〜６の範囲内の酸／塩基対に属する少なくとも１つの弱塩基と組み合わせて成る酸／塩基系により形成されることを特徴とする、上記使用。
【請求項２０】
請求項１６ないし１９のいずれか１項に記載の使用であって、前記バッファー溶液が、１種以上の医薬的に許容できる弱有機酸と
ｉ）それらの共役塩基、
ｉｉ）他の弱酸の共役塩基、または
ｉｉｉ）水酸化ナトリウム
の組み合わさった酸／塩基系であって、前記医薬的に許容できる弱有機酸がクエン酸、酢酸、乳酸、アミノ酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、安息香酸、ヒスチジン、グルタル酸、プロピオン酸、コハク酸、ギ酸、マレイン酸、アスパラギン酸、マロン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸およびリン酸から選択される酸／塩基系により形成されていることを特徴とする、上記使用。
【請求項２１】
請求項１６ないし１９のいずれか１項に記載の使用であって、前記バッファー溶液が、１種以上の医薬的に許容できる弱有機酸の共役塩基からなる酸／塩基系により形成されており、前記共役塩基がメタンスルホン酸、塩酸、リン酸または硫酸と組み合わされており、かつ、前記医薬的に許容できる弱有機酸がクエン酸、酢酸、乳酸、アミノ酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、安息香酸、ヒスチジン、グルタル酸、プロピオン酸、コハク酸、ギ酸、マレイン酸、アスパラギン酸、マロン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸およびリン酸から選択されることを特徴とする、上記使用。
【請求項２２】
ａ）キヌプリスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物、およびｂ）酸性ｐＨに緩衝化され、媒質のｐＨを血漿のｐＨ未満の値であって、かつ、ダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物の安定性に影響を及ぼさない値に固定できる任意の医薬的に許容できる溶液を添加剤として含むことを特徴とするキット。
【請求項２３】
ダルホプリスチン／キヌプリスチンの組み合わせ物が、少なくとも化学量論的量のメタンスルホン酸または塩酸が加えられ、そして３．５〜５の範囲内のｐＨであるダルホプリスチンおよびキヌプリスチンから成ることを特徴とする、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
請求項２２または２３に記載キットであって、対になったビン、前記添加剤を含有する注入バックおよび凍結乾燥物を含有する１つまたは複数のビン、有効成分を含有する注入バックおよび前記添加剤を含有するビンもしくはアンプル、凍結乾燥物を含んで成る１以上のビンおよび前記添加剤を含有するビンもしくはアンプル、または２区分室のシリンジであることを特徴とする、上記キット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は注入部位に寛容できない副作用を伴うことなく、キヌプリスチンおよびダルホプリスチンの非経口投与を目的とする注入可能な医薬組成物に関する。
【０００２】
欧州特許出願公開第248,703号明細書は一般式：
【０００３】
【化１】
0004326148.tif 000002
【０００４】
のプリスチナマイシンI誘導体、ならびに構造
【０００５】
【化２】
0004326148.tif 000003
【０００６】
を有するプリスチナマイシンII誘導体とそれらの組み合わせ物を開示する。
【０００７】
プリスチナマイシンIの誘導体であるキヌプリスチン、およびプリスチナマイシンIIの誘導体であるダルホプリスチンは、シネルシド（Synercid:商標）の成分である。
【０００８】
【化３】
0004326148.tif 000004
【０００９】
シネルシド（商標）（キヌプリスチン／ダルホプリスチン）は、特にそのバンコマイシン−耐性微生物に対する抗菌活性が多くの報告で言及されている注入可能な30/70の組み合わせ物である［The Annals of Pharmacotherapy,29,1022-1026(1995)；Microbiol Drug resistance,1,223-234(1995)]。
【００１０】
単離された成分であるキヌプリスチンまたはダルホプリスチンの溶解性は、塩形態で得ることができる。キヌプリスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物を含んで成る安定化された医薬組成物の調製は大変難しいことが示されており、そして最終的には少なくとも化学量論的量のメタンスルホン酸または塩酸を、３．５〜５．５の範囲内のｐＨで加えることにより成された。該組成物はまた場合により張性剤および／または他の医薬的に許容できる補助剤を含む。
【００１１】
ダルホプリスチンおよびキヌプリスチンをそれらの塩の形態で含んで成る医薬組成物を調製するための試みは、１または他の分子が溶液または凍結乾燥状態では不安定であるという事実により成功しなかった。
【００１２】
上記のようなキヌプリスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物を含んで成る医薬組成物の注入（特に点滴による注入）は、注入部位の領域に局在する静脈性の寛容できない作用を伴い、これは処置の全中断までもたらす炎症症状、静脈炎、アレルギー反応あるいは水腫の形成で現れる。そのような状況は、シネルシド（商標）（キヌプリスチン／ダルホプリスチン）が現在、バンコマイシン−耐性微生物により引き起こされる大変重大な感染を処置するための中で唯一の既知の臨床的処置であることが示されているため大変憂慮される事態である。
【００１３】
H.Yalkowskyら、PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology,50(2),123-128(1996)は、心臓血管剤であるデキシベラパミルの投与により引き起こされる静脈炎の研究および改善を記載した。しかしこの治療薬はストレプトグラミンファミリーの化学構造とは大変ことなる化学構造を有し、そしてさらにその物理化学的に単独物の特性には何ら関連がない。
【００１４】
S.L.Guptaら、Journal of Pharmaceutical Science & Technology,48(2),86-91(1994)は、抗高血圧症薬であるアボット(Abbott) 72517 により生じる注入中の痛みおよび刺激を克服するために種々の系中でバッファーの使用効果を記載した。バッファーを含む医薬製剤も記載されている。しかしこれは各々がそれらの特定の性質を有する２種の組み合わせた分子というよりは単離された生成物であるだけでなく、わずかに成功の可能性を含む置き換えを可能とする化学的に類似する構造であるものでもない。さらにクエン酸または酢酸を用いてキヌプラスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物の安定な医薬組成物を調製することは不可能であった。
【００１５】
ここで今、キヌプラスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物を含んで成る医薬組成物の注入と組み合わせて添加剤を使用することにより、有効成分のこの組み合わせ物により付随する局在性の副作用を減らし、または全く排除できることが見いだされ、そしてこれが本発明の主題を構成し、これは組み合わせた各分子の大変異なる性質から推測して驚くべきことには、しかも１または他のこのような分子の特定の塩の不安定性に付随する難しさ（多くの分解不純物の出現）、かつまた特定のｐＨ値でのこのような有効成分のよくない溶解性にもかかわらず起こる。
【００１６】
このように該添加剤はキヌプラスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物の注入に付随する種々の寛容できない作用に関して保護的役割を有する。
【００１７】
このキヌプラスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物の製剤は、液体、凍結乾燥または凍結状態で与えられる。
【００１８】
凍結乾燥した製剤は使用時に注入可能な調製物用の水（ウォーター フィップ:water fip）に、または任意の適合性のある注入可能な媒質、特にグルコース溶液（例えば５％グルコース水溶液）に、あるいは限定するわけではないがデキストラン溶液、ポリビニルピロリドン溶液もしくはポリソルベート80溶液で溶解することができる。好適な方法によれば、製剤は今後「濃縮物」と呼ぶ濃縮された溶液（50〜250mg/ml、好ましくは約100mg/ml）を介することにより溶解し；この溶液は注入により投与するために、上記の注入可能な媒質中で使用時に希釈され；凍結乾燥物をウォーターフィップに溶解し、次にこのようにして得られた濃縮物を望ましい注入可能な媒質に希釈することも可能である。
【００１９】
凍結した製剤は最初に調製した溶液（５〜250mg/ml）から、または希釈した溶液（例えば凍結バックの調製に）から凍結することができる。それらを使用時に解凍し、そして必要があれば希釈する。
【００２０】
液体状態で与えられる溶液は、５〜250mg/mlの有効成分を含む。それらを使用時に0.5から10mg/mlの間の濃度に希釈する。
【００２１】
添加剤という用語は今後、酸性ｐＨに緩衝化され、血漿のｐＨ未満の値、特にキヌプリスチン／ダルホプリスチンの安定性が影響を受けない値、すなわち１および／または他の有効成分の即座の、または急速な分解をもたらさない値に媒質のｐＨを固定することができる任意の医薬的に許容できる水溶液から選択されるバッファー液を称すると理解される。好ましくは添加剤という用語は、３から６の間のｐＨに緩衝化された任意の医薬的に許容できる溶液を称すると理解される。
【００２２】
好ましくは、系中の少なくとも１種の成分が［３；６］の範囲内のｐＫａである医薬的に許容できる弱酸または弱塩基であり、しかも生成する系のｐＨが上記ｐＫａ範囲またはそれ未満である、酸／塩基系により形成される任意の医薬的に許容できる溶液を挙げることができる。
【００２３】
さらに一層好ましくは、系はｐＫａが３〜６の範囲内の１以上の医薬的に許容できる弱有機または無機酸を、それらの共役塩基と、または強塩基と、もしくは弱塩基と組み合わせて成ることができ、あるいは系は１種以上の医薬的に許容できる強有機もしくは無機酸を、ｐＫａが３〜６の範囲内の酸／塩基対に属する少なくとも１種の弱塩基と組み合わせて成ることができる。
【００２４】
以下に与える酸（またはそれらの共役塩基）は、系の組成の一部を形成することができる酸の例である：クエン酸、酢酸、乳酸、アミノ酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、グルタミン酸、安息香酸、ヒスチジン、グルタル酸、プロピオン酸、コハク酸、ギ酸、マレイン酸、アスパラギン酸、マロン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、リン酸。このような酸はそれらの共役塩基と、別の弱酸の共役塩基と、または水酸化ナトリウムと組み合わせることができ；上記に挙げた酸の共役塩基は、適当ならばメタンスルホン酸、塩酸、リン酸または硫酸とも組み合わせることができる。
【００２５】
このような例の中でも、限定するわけではないが最も特に有利であるのはクエン酸、酢酸、乳酸、アミノ酸および／またはそれらの共役塩基である。
【００２６】
本発明によれば、場合により濃縮された溶液（濃縮物）または希釈された状態で再構成されたキヌプリスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物の製剤は、注入時にバッファー溶液と組み合わせることができる。この組み合わせは、濃度とバッファー溶液（必要ならば前以て希釈されている）との間で無関係に、注入バックに入れる前に行うことができる。この組み合わせはまた、希釈されたバッファー溶液を最初に形成するために前以てバッファー溶液が導入され、続いて濃縮物が導入される注入バック中で直接行うこともできる。別の態様によれば、バッファー溶液はまた有効成分の製剤をすでに含有するバックに導入することができる。この組み合わせはまた、１つは注入可能な媒質中に有効成分を含有し、そしてもう１つは注入可能な媒質中に溶解されたバッファー溶液を含有する、２つバックがＹ形のカーテルにより一緒に連結されている２つの注入バックを使用しても行うことができる。
【００２７】
さらに別の態様によれば、凍結乾燥物を直接希釈バッファー溶液を用いて再溶解し、そして混合物を次に例えば注入バック中で任意の適合性があり、かつ医薬的に許容できる注入可能な媒質中で直接的に再希釈することができ、あるいは凍結乾燥物はバッファー溶液をすでに含有する適合性のある注入可能な媒質中で直接希釈することにより再溶解することができる（例えば注入可能な媒質中に溶解したバッファーを含有する注入バック中で直接的に）。
【００２８】
有効成分の希釈溶液を含有する凍結バックを使用する時、この組み合わせ物はバッファー溶液をバックに直接導入することにより形成されるだろう。
【００２９】
患者に投与する有効成分（キヌプリスチン＋ダルホプリスチンの組み合わせ物）の用量は通常、５から15mg/kgの間、そして好ましくは５〜7.5mg/kgである。バッファー効果を表すために適当であり、しかも治療的寛容しきい値を越えないように限定され、そしてそのような容量のバッファー溶液の濃度と組み合わせることが好都合だろう。本発明の好適な観点に従い、酸＋塩基のモル濃度は、１〜500ml容量で0.005〜２モル／リットルの範囲であり、ｐＨは３から６の間、そしてより好ましくは3.5から５の間に固定される。好ましくはｐＨは４から５の間、そしてより特別には約４に固定される。特別な場合では、患者に１から15マイクロモルの間の用量を投与するように、このような溶液を希釈する必要があるかもしれない。
【００３０】
有効成分およびバッファー溶液を合わせた溶液は、注入により即座に投与するために十分適している。特にそれらは20℃で６時間、または４℃で24時間の間、認められる任意の分解無しに安定である。より特別には安定な溶液という用語は、25から30℃の間で少なくとも６時間後、乳光または粒子の出現（視覚による評価または光学密度の測定）を示さない溶液を称すると理解される。
【００３１】
キヌプリスチン／ダルホプリスチンの組み合わせ物を含んで成る安定化された医薬組成物は、キヌプリスチン、ダルホプリスチン、メタンスルホン酸または塩酸を同時または連続して水に溶解し、続いてｐＨを３．５〜５の範囲に調整し、かつ／または張性剤を添加および／または他の医薬的に許容できる補助剤を添加し、そして適当な場合には凍結乾燥および／凍結することにより調製する。
【００３２】
該組成物は、より特別にはメタンスルホン酸または塩酸により酸性化された水にキヌプリスチン成分を、そして次にダルホプリスチン成分を溶解し、続いて適当である場合にはｐＨを３．５〜５の範囲内に調整し、かつ／または張性剤の添加および／または他の医薬的に許容できる補助剤を添加することにより調製する。適当ならばそれらを凍結乾燥および／または凍結する。溶液の調製および分配は一般に０℃から室温の間、好ましくは低温で行い、この温度は調製時間およびｐＨに依存する。この工程は好ましくは10℃未満で行う。このような安定化された医薬組成物は、特に滅菌濾過により場合により滅菌する。
【００３３】
安定化された医薬組成物が医薬的に許容できる補助剤を含む時、この補助剤は共溶媒、安定化剤、低温保護剤、乾燥剤、増量剤および張性剤から選択される。限定するわけではないが、共溶媒および可溶化剤はポリエチレングリコール（ポリエチレングリコール300および400)、プロピレングリコール、エタノールおよび例えばポリソルベート80またはポリオキシエチレン化誘導体（クレモホル:cremophors)のような表面活性剤から選択され；増量剤および低温保護剤は特に単糖類（例えばグルコース、マンニトール、フルクトースまたはソルビトール）、二糖類（例えばシュクロース、ラクトース、トレハロースまたはマルトース）または水溶性ポリマー（例えばデキストラン、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチン）から選択され；安定化剤は特に酸化防止剤等から選択され；張性剤は特にグルコース、塩化ナトリウム、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、フルクトースまたはデキストラン40および70から選択される。
【００３４】
本発明によれば、バッファー溶液は通常使用されている既知の方法に従い、特に水酸化ナトリウムを予め定めた量の酸に、3.5から５の間までの所望のｐＨまで加え、続いてウォーター フィップを所望の容量まで加えることにより調製することができる。このような溶液はまた、例えば表面活性剤のような１以上の適合性があり、かつ医薬的に許容できる補助剤も含むことができる。
【００３５】
使用できる表面活性剤の中でも、限定するわけではないがポリオキシエチレン化ひまし油誘導体（例えば、クレモホル）、ポリヒドロキシエチル化ソルビタンエステル（ポリソルベートのような、例えばポリソルベート80）またはレシチンを挙げることができる。
【００３６】
そのような補助剤をバッファー溶液中で使用する時、このような薬品はそれらが有効成分溶液およびバッファー溶液を含んで成る最終的な組み合わせ物中で、１mgのダルホプリスチン／キヌプリスチン組み合わせ物あたり１〜25mgの総量を構成するように導入される。
【００３７】
キヌプリスチン／ダルホプリスチン組み合わせ製剤および添加剤用の提示キットも本発明の内容に入ると考えられる。任意の形態の提示キットが適当であり、特に例えば双子−ビンの形態の提示用、添加剤を含有する注入バックおよび凍結乾燥物を含有するビン（１つまたは複数）の形態の提示用、有効成分を含有する注入バックおよび添加剤を含有するビンまたはアンプルの形態の提示用、凍結乾燥物を含んで成る１以上のビンおよび添加剤のビンまたはアンプルを包含する提示用であることができる。２−区分シリンジ（two-compartment syringe)のようなデバイスも、特に適すると示すことができる。
【００３８】
本発明は、他の溶解性プリスチナマイシン誘導体、特にアミノ鎖を持つ誘導体にも応用できると理解される。例えば欧州特許第133,097号、同第135,410号、同第191,662号および同第248,703号明細書に記載されているような誘導体にも応用することができる。
【００３９】
【実施例】
以下の実施例は限定することを意図するものではなく、本発明をどのように実施することができるかを示している。
試験１
バッファー溶液は、2.55gのクエン酸１水和物および2.59gのクエン酸三ナトリウム２水和物から100mlにウォーター フィップ(water fip.)で調製する。このように調製した溶液は、4.0のｐＨおよび約210ミリモル／リットルのクエン酸モル濃度を有する。
【００４０】
シネルシド（商標）（70/30のダルホプリスチン／キヌプリスチン組み合わせ物）のビンを、550mgの70/30のダルホプリスチン／キヌプリスチン組み合わせ物の凍結乾燥物から、５mlのウォーター フィップを加えることにより再構成する。
【００４１】
この溶液１mlを、上記で調製した24mlのバッファー溶液に導入する。手で均質にした後、溶液は0.22μm孔のフィルター（ミリポア：Millipore  ミレックス(Millex) SLGVフィルター）を通す滅菌濾過に供する。溶液の化学的安定性は許容できる。
試験の説明−ラットの尾のモデル：
シネルシド（商標）をラットの尾の静脈に皮内注射し、10日間観察し、４mg/mlの濃度で赤くなり、そして次に壊死を生じる。赤みは注射上の点に２〜３日で間現れ、そして続いて４〜６日で壊死する。
【００４２】
血腫、紅斑、水腫および壊死を１〜４の尺度で評価する［１＝最小：２＝軽度；３＝中程度；４＝重度］。全体的な重篤度は、４つの観察の中で観察された最高の採点に関して評価する。耐容の評価は、同一の処置を受けたすべての動物について、得られた採点の平均により表す。
試験の実施および結果：
上記のように作成した溶液を、記載した様式でラットに投与する。実験結果はすべての副作用（赤み、壊死および尾の損失）が、５％グルコース溶液中のシネルシド（商標）の同用量を受容した対照ラットと比較した時に排除された。
【００４３】
【表１】
0004326148.tif 000005
【００４４】
ダルホプリスチン／キヌプリスチン凍結乾燥物は、以下のように調製することができる：
【００４５】
125mg/mlのキヌプリスチン／ダルホプリスチン（30/70）を含有し、メタンスルホン酸（約１６．７ｍｇ）で４．７５のｐＨに酸性化された１リットルの溶液を、冷蔵ユニットを備えた溶解タンク中の810gの注入可能調製物用の水に導入することにより調製する。
【００４６】
製造中は溶液を０から６℃の間の温度に冷蔵する。16.4gのメタンスルホン酸を加え、続いて連続して37.5gのキヌプリスチン（機械的撹拌により溶解）、そして87.5gのダルホプリスチン(これも機械的撹拌により溶解）を加える。
【００４７】
溶液のｐＨは１N メタンスルホン酸溶液を用いて4.75に調整する。溶液を注入調製物用の水で１リットルとする（1030g）。
【００４８】
この溶液を濾過滅菌し（0.22μmフィルター）、ビンに分配し［ビンあたり500mgのキヌプリスチン／ダルホプリスチン(30/70)］、そして次に凍結乾燥する［凍結：温度−30℃から−50℃；凍結速度約0.5#／分。昇華：0.5ミリバールの圧。２次乾燥圧（約３０ミリバール）温度４０℃］。
【００４９】
試験２〜５
試験１のように操作し、そして５％グルコース溶液を含むバッファー溶液で希釈し、次の結果を得る：
【００５０】
【表２】
0004326148.tif 000006
【００５１】
実験結果は、すべての副作用（赤み、壊死および尾の損失）が、５％グルコース溶液中のシネルシド（商標）の同用量を受容した対照ラットと比較した時に排除されたか、または大きく減少したことを示す。
試験６
上記試験１と同一の試験を行い、0.35mlの99％酢酸、1.92gの酢酸ナトリウム３水和物および0.19gの塩化ナトリウムを含有するバッファー溶液を調製し、ウォーターフィップで100mlとする。このように調製した溶液は5.02のpＨを有する。
【００５２】
上記のように溶液を滅菌濾過した後に、溶液の化学的安定性は許容できる。
試験７：臨床試験
１時間、250ml容量の５％グルコース水溶液中で取り込まれる7.5mg/kg用量のシネルシド(商標)(70/30ダルホプリスチン／キヌプリスチン）の用量は、i.v.経路を介して臨床的に使用される単位容量に相当する。
【００５３】
20mM／リットルの酸性クエン酸バッファー溶液を調製し(1051mgのクエン酸１水和物を含有する５mMの250ml溶液）。
【００５４】
48時間の処置は通常、静脈性の寛容できない反応が現れるのに十分である。
【００５５】
１群あたり８個体を選択する。処置停止の基準は、有意な疼痛、静脈の硬化、または患者もしくは研究者が処置の停止を決定をしたことに基づくと予め定めておく。
【００５６】
２日間の処置後に疼痛が体験され、そして紅斑が注入部位で観察されたが、静脈血栓の現象は観察されず、そして処置の中断は必要なかった。定めた手順に従うこの試験の結論は、この濃度のクエン酸バッファーに対する一般的なトレランスにおける改善であると特記される。