(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物が、式（Ｉ’）
【化１】
0004288884.tif 000031
（式中、Ｒ４はヒドロキシル基、炭素数７〜２０のアラルキルオキシ基、−ＯＳｉ（Ｒ５Ｒ６Ｒ７）（ただし、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は互いに独立に、置換基を有していてもよい炭素数１〜２０個の直鎖状のアルキル基、分枝鎖状のアルキル基、環状のアルキル基、炭素数６〜２０個の芳香族炭化水素基、または環内に１〜５個の窒素原子、酸素原子もしくは硫黄原子を有するヘテロアリール基である）で表される基、炭素数１〜２０個のアルコキシル基が直鎖上または分枝上に１〜５個結合した基、リン酸塩基または−Ｓ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ８（ただし、Ｒ８は置換基を有していてもよい炭素数１〜２０個の直鎖状のアルキル基、分枝鎖状のアルキル基、環状のアルキル基、炭素数６〜２０個の芳香族炭化水素基、または環内に１〜５個の窒素原子、酸素原子もしくは硫黄原子を有するヘテロアリール基である）で表される基である）で表される１，２−ジオキセタン誘導体。
【請求項２】
請求項１記載の１，２−ジオキセタン誘導体を含有してなることを特徴とする化学発光試薬。
【請求項３】
請求項１に記載の１，２−ジオキセタン誘導体を分解し化学発光を生じさせることを特徴とする、発光方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法において、他のエンハンサーの非共存下に化学発光を生じさせることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項３または４に記載の発光方法を用いて、試料中の検出物質を測定することを特徴とする測定方法。
【請求項６】
請求項１に記載の１，２−ジオキセタン構造を有する化合物を、プロトン性溶媒中で他のエンハンサーの非共存下に発光させることを特徴とする発光方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法において、発光量子収率が１％以上であることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、１，２−ジオキセタン誘導体に関する。本発明の１，２−ジオキセタン誘導体は化学発光を誘導することができる化合物であり、例えば免疫測定等の基質として使用することができる。
【０００２】
【従来の技術】
１，２−ジオキセタン誘導体は、従来より種々合成されており、特に３位にスピロアダマンチル基が結合した化合物は化学発光基質として有用であることが知られている（例えば、特公平５−２１９１８号公報及び特公平５−４５５９０号公報参照）。また、本発明者らが既に製造したものとして、特開平８−２４５６１５号、特開平８−１６９８８５号、特開平８−１６５２８７号の各公報に記載の化合物が知られている。しかしながら、これらの１，２−ジオキセタン誘導体は、熱的な安定性については低いものであった。特開平９−２１６８８７号公報には、熱的安定性を改良した化合物が開示されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
１，２−ジオキセタン誘導体に関しては前記のように様々な検討がなされ、種々の化合物が創出されている。しかしながら、臨床検査等の分野で応用するためには化合物自体が安定で取扱いが容易であり、かつ高い効率で発光を行うことができる等の性質が要求され、従来の化合物よりもさらに優れた化合物の創出が望まれていた。
【０００４】
また、前記の特開平９−２１６８８７号公報記載の化合物をはじめ従来の化合物は、水系などのプロトン性溶媒中においてはその発光効率が著しく低下するものであり、実際に臨床検査における免疫測定に採用しても、測定条件がプロトン性溶媒である場合、実用に耐えうる程の強度を出すことが出来なかった。そこで、測定時には当該１，２−ジオキセタン誘導体以外の発光を増強させる物質をエンハンサーとして共存させなければならなかった。
【０００５】
エンハンサーとしては、カチオン性界面活性剤（たとえばセチルトリメチルアンモニウムブロマイド，セチルジメチルベンジルアンモニウムクロライド）、水溶性重合第四級オニウム塩［第四級アンモニウム塩，第四級スルホニウム塩，第四級ホスホニウム塩を含む。たとえばポリ（ビニルベンジルジメチルベンジルアンモニウムクロライド），ポリ（ビニルベンジルトリメチルアンモニウムクロライド），ポリ（ビニルベンジルトリブチルアンモニウムクロライド）］、天然高分子（たとえばほ乳類の血清アルブミン，免疫グロブリン，血清リポ蛋白質など）等が用いられていた。しかしこれらを使用すると、粘性が高くなるなど取り扱いには注意が必要であった。従って、プロトン性溶媒中においてもエンハンサーを用いることなく高い発光効率を示すことができる化合物があれば、より有用である。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本願発明者らは、前記のような状況の下、従来化合物よりもさらに優れた化合物を創出するために鋭意検討した結果、前記式（Ａ）および（Ｂ）で表されるイソオキサゾール環などの複素五員環を結合した芳香環置換基を有する１，２−ジオキセタン誘導体が、水などのプロトン性溶媒中においてもエンハンサーを用いなくとも高い発光効率を示すことを見出し本発明を完成したものである。
【０００７】
即ち本発明は、一般式（Ｉ）
【０００８】
【化７】
0004288884.tif 000002
【０００９】
で表される１，２−ジオキセタン誘導体（式中、Ｒ1、Ｒ2はそれぞれ独立に水素原子、アルキル基又はアリール基である。また、Ｒ1、Ｒ2は一体となり、ジオキセタン環にスピロ結合する環式又は多環式有機環基を形成することもできる。Ｒ3はアルキル基又はアリール基であり、Ｒ3とＲ1又はＲ2とが一体となってジオキセタン環とヘテロ原子を含む縮合環を形成してもよい。Ａｒは式（Ａ）
【００１０】
【化８】
0004288884.tif 000003
【００１１】
（式中、Ｒ4はヒドロキシル基、アルコキシル基、アラルキルオキシ基、−ＯＳｉ（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）（ただし、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は互いに独立にアルキル基又はアリール基である。）で表される基、リン酸塩基又は−Ｓ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ8（ただし、Ｒ8はアルキル基又はアリール基である。）で表される基である。Ｒ9及びＲ10は互いに独立に水素原子、アルキル基、アリール基又はハロゲン原子であり、Ｘはハロゲン原子であり、Ｖは酸素原子又は硫黄原子である。）で表される基、又は式（Ｂ）
【００１２】
【化９】
0004288884.tif 000004
【００１３】
（式中、Ｒ4は前記式（Ａ）のＲ4と同じである。Ｒ11及びＲ12は互いに独立に水素原子、アルキル基、アリール基又はハロゲン原子であり、Ｙはハロゲン原子であり、Ｗは酸素原子又は硫黄原子である。）で表される基である。）である。
【００１４】
また本発明は、上述の１，２−ジオキセタン誘導体を含有してなることを特徴とする化学発光試薬である。さらに本発明は、上述の１，２−ジオキセタン誘導体を分解し化学発光を生じさせることを特徴とする、発光方法である。更に本発明は、上述の発光方法を用いて、試料中の検出物質を測定することを特徴とする測定方法である。更に本発明は、１，２−ジオキセタン構造を有する化合物を、プロトン性溶媒中で他のエンハンサーの非共存下に発光させることを特徴とする発光方法である。以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００１５】
本明細書中で「アルキル基」とは、置換基を有していてもよい炭素数１〜２０個の直鎖状、分枝鎖状または環状のアルキル基をいい、そのアルキル基は、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、イコサニルの直鎖の基及び前記のアルキル基が適宜分枝状に結合した基、またはそれらが環状となった基をいう。前記の有していてもよい置換基とは、例えば、ヒドロキシル基、アルコキシル基、アリール基等である。そのアルコキシル基としては、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、メトキシエトキシ、メトキシプロポキシ、エトキシエトキシ、エトキシプロポキシ、メトキシエトキシエトキシ基等の炭素数１〜２０個のアルコキシル基が直鎖状又は分枝状に１〜５個結合したもの等を挙げることができる。また前記アリール基としては、例えば、フェニル、ナフチル基等の炭素数６〜２０個の芳香族炭化水素基、及び、フリル、チエニル、ピリジル基等の環内に１〜５個の窒素原子、酸素原子又は硫黄原子を有するヘテロアリール基等を挙げることができる。
【００１６】
また、本明細書中で「アルコキシル基」とは、前記したアルキル基に置換してもよいアルコキシル基と同じものを挙げることができ、「アリール基」とは、これも前記したアルキル基に置換してもよいアリール基と同じものを挙げることができる。さらに、本願明細書中で「多環式有機環基」とは、Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ、ハロゲン及びハロ−Ｃ1〜Ｃ10アルキルの中から独立して選択した１〜１０個の基で任意に置換された炭素原子数６〜３０の多環式アルキレンであり、例えばアダマンチル基、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル等である。また、その多環式有機環基の任意の炭素にハロゲン原子、アルキル基、アリール基、シアノ基、アミド基、アルコキシ基あるいはカルボキシル基が結合していても構わない。「アラルキルオキシ基」とは、ベンジルオキシ、フェネチルオキシ基等の炭素数７〜２０の基であり、「ハロゲン原子」とはフッ素、塩素、臭素等である。
【００１７】
また一般式（Ｉ）において、Ｒ3とＲ1またはＲ2とが一体となってジオキセタン環とヘテロ原子を含む縮合環を形成する場合としては、例えばジオキセタン環とフラン環との縮合環、またはジオキセタン環とピラン環との縮合環を例示することができる。
【００１８】
本発明においては、上記一般式（Ｉ）においてＡｒが式（ａ）
【００１９】
【化１０】
0004288884.tif 000005
【００２０】
（式中、Ｒ4、Ｒ9、Ｒ10、Ｘ及びＶは前記式（Ａ）のＲ4、Ｒ9、Ｒ10、Ｘ及びＶと同じである。）で表される基、または式（ｂ）
【００２１】
【化１１】
0004288884.tif 000006
【００２２】
（式中、Ｒ4、Ｒ11、Ｒ12、Ｙ及びＷは前記式（Ｂ）のＲ4、Ｒ11、Ｒ12、Ｙ及びＷと同じである。）で表される基であるものが好ましい。
【００２３】
上記一般式（Ｉ）において、Ｒ3とＲ1又はＲ2とが一体となってジオキセタン環とフラン環の縮合環を形成している場合が好ましく、より好ましくは、Ｒ3と縮合環を形成していないＲ2又はＲ1が炭素数３〜４のアルキル基である。中でも、一般式（Ｉ’）
【００２４】
【化１２】
0004288884.tif 000007
【００２５】
（式中、Ｒ4は前記と同様）で表される化合物は、特に好ましいものである。
【００２６】
本発明の前記一般式（Ｉ）で表される１，２−ジオキセタン誘導体は、一般式（ＩＩ）
【００２７】
【化１３】
0004288884.tif 000008
【００２８】
（式中、Ｒ1〜Ｒ3は一般式（Ｉ）のＲ1〜Ｒ3と同じであり、Ｒ41はアルコキシル基又はアラルキルオキシ基である。また、（Ｒ41）Ａｒは、式（Ａ'）
【００２９】
【化１４】
0004288884.tif 000009
【００３０】
（式中、Ｒ9、Ｒ10、Ｘ及びＶは前記式（Ａ）のＲ9、Ｒ10、Ｘ及びＶと同じであり、Ｒ41は前記一般式（ＩＩ）のＲ41と同じである。）で表される基又は式（Ｂ'）
【００３１】
【化１５】
0004288884.tif 000010
【００３２】
（式中、Ｒ11、Ｒ12、Ｙ及びＷは前記式（Ｂ）のＲ11、Ｒ12、Ｙ及びＷと同じであり、Ｒ41は前記一般式（ＩＩ）のＲ41と同じである。））で表されるＲ41で置換されたアリール基を有するエノールエーテル誘導体から下記反応式に従って製造することができる。
【００３３】
【化１６】
0004288884.tif 000011
【００３４】
（式中、Ｒ1〜Ｒ3及びＲ41は前記一般式（Ｉ）（ＩＩ）のＲ1〜Ｒ3及びＲ41と同じである。Ｒ42は−ＯＳｉ（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）（ただし、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は前記と同じである。）で表される基又は式
【００３５】
【化１７】
0004288884.tif 000012
【００３６】
（式中、Ｒ13及びＲ14はアルカリ金属、四級アンモニウム塩又はアルキル基であり、Ｒ13及びＲ14が一体となり環を形成してもよい基である。）で表される基である。一般式（ＩＩＩ）で表される化合物の（ＨＯ）Ａｒで表される基は、一般式（ＩＩ）の置換基Ｒ41の位置と同じ位置にＯＨ基を有するものであり、一般式（ＩＶ）の（Ｒ42）Ａｒは、一般式（ＩＩ）の置換基Ｒ41の位置と同じ位置に置換基Ｒ42を有するものである。）
（第１工程）本工程は、前記一般式（ＩＩ）で表される化合物の脱保護反応を行い一般式（ＩＩＩ）で表される化合物を製造するものである。脱保護反応に供する化合物としては、前記一般式（ＩＩ）（ここでＲ1〜Ｒ3は前記と同じであり、Ｒ41はヒドロキシル基の保護基（好ましくは、メトキシ基又はベンジルオキシ基である。）である。）で表される化合物で、本反応は当業者に熟知された方法、即ちアルキルチオールのアニオンを反応させ行うかあるいは水素添加反応に付すことにより行うことができるが、どちらの反応を選択するかは脱保護すべき基により適宜選択すればよい。
【００３７】
（第２工程）本工程は、前記一般式（ＩＩＩ）で表される化合物に、シリルオキシ基あるいはリン酸基形成のため対応するハロゲン化トリアルキルシランあるいはハロゲン化ホスフェートを反応させ、一般式（ＩＶ）で表される化合物を製造するものである。本工程において、例えばリン酸基導入のためクロロエチレンホスフェートを反応させた場合には、シアン化ナトリウムでシアノエチルホスフェートのナトリウム塩に変換し、さらにシアノエチル基を脱離し、アンモニウムナトリウム塩に変換することができる。このアンモニウム  ナトリウム塩は、例えば炭酸水素ナトリウムと反応させることにより容易にジナトリウム塩に変換できる。
【００３８】
（第３工程）本工程は一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で表される化合物を一重項酸素と反応させ、前記一般式（Ｉ）で表される１，２−ジオキセタン誘導体を製造するものである。一重項酸素との反応は、前記一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で表されるエノールエーテル誘導体を、メチレンブルー、ローズベンガル、テトラフェニルポルフィン（ＴＰＰ）等の光増感剤の共存下、酸素雰囲気の下で可視光照射を行うことにより達成される。このとき、溶媒はジクロロメタン、ジクロロエタン、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素又はメタノール、エタノール等のアルコール等を用いることができる。なお、反応は−８０℃〜室温で行うことが好ましい。
【００３９】
前記一般式（ＩＩ）で表されるエノールエーテル誘導体の製造方法は、例えば、下記の方法を挙げることができる。
【００４０】
【化１８】
0004288884.tif 000013
【００４１】
（式中、Ｒ1〜Ｒ3及びＲ41は前記一般式（Ｉ）（ＩＩ）のＲ1〜Ｒ3及びＲ41と同じである。Ｒ15及びＲ16はアルキル基あるいはＲ15及びＲ16が一体となり環を形成してもよい基である。）
（第１Ａ工程）本工程は、一般式（１Ａ）で表される芳香族カルボン酸エステルと一般式（２Ａ）で表されるケトンとを反応させ、一般式（ＩＩ）で表されるエノールエーテル誘導体を製造するものである。反応はチタンの存在下に行うことを必須の要件とするものである。通常、チタンは塩化チタン等のハロゲン化チタンを水素化リチウムアルミニウム等の還元剤及びトリエチルアミン等の塩基を用いて還元状態を形成させ、反応に供することが好ましい。反応を行うにあたってはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の有機エーテル中で行うことができる。反応は０〜１００℃で進行するが、ＴＨＦの還流下に行うことが操作及び反応性の観点から好ましい。
【００４２】
（第１Ｂ工程）本工程は一般式（１Ｂ）で表されるアリールメチルホスホネートと前記一般式（２Ｂ）で表されるケトンとを反応させ前記一般式（ＩＩ）で表されるエノールエーテル誘導体を製造するものである。
【００４３】
前記一般式（１Ｂ）で表されるアリールメチルホスホネートは前記特公平５−４５５９０号に記載の方法に従い容易に製造することができる化合物である。ジイソプロピルアミンをブチルリチウム等を用いてリチウムアミドを形成させ、反応に供することが好ましい。反応を行うにあたってはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の有機エーテル中で行うことができる。反応は−７８℃〜室温で行うことが好ましい。
【００４４】
前記一般式（ＩＩ）で表される化合物がジヒドロフラン誘導体の場合の製造方法は、例えば、下記の方法を挙げることができる。
【００４５】
【化１９】
0004288884.tif 000014
【００４６】
（式中、Ｒ17、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、及びＲ21はそれぞれ独立に水素原子、アルキル基又はアリール基である。またＲ18とＲ19、Ｒ20とＲ21、Ｒ17とＲ19、Ｒ17とＲ20、及びＲ18とＲ20は一体となり、それぞれ独立に環状アルキル基を形成することができる。Ｒ41は前記と同じである。Ｒ22はハロゲン原子、置換スルホニルオキシ基又はヒドロキシル基である。）。
【００４７】
（第１Ｃ工程）本工程は、前記一般式（１Ｃ）で表される化合物を前記一般式（２Ｃ）で表される化合物と反応させることによって前記一般式（３Ｃ）で表される化合物を製造するものである。反応は当業者に熟知された、いわゆる、ウィリアムソン合成により達成することができる。ここで、一般式（１Ｃ）で表される化合物の置換基Ｒ22がハロゲン原子又は置換スルホニルオキシ基である場合は直接反応に付し、Ｒ22がヒドロキシル基である場合には、一旦反応系中でハロゲン化トシル等によりスルホニルオキシ基に変換してから反応に付すことで本工程を達成することができる。
【００４８】
（第２Ｃ工程）本工程は、前記一般式（３Ｃ）で表される化合物を酸化することによって、前記一般式（４Ｃ）で表される化合物を製造するものである。本工程における酸化は、クロム系酸化剤又は活性化剤を用いることにより行うことができる。前記クロム系酸化剤としてはピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）、ピリジニウムジクロロクロメート（ＰＤＣ）等を用いることができ、この時、溶媒はジクロロメタン等のハロゲン化炭化水素を用いることができる。また、前記活性化剤を用いる場合は、Ｐｙ・ＳＯ3／トリエチルアミン／ＤＭＳＯ、Ａｃ2Ｏ／ＤＭＳＯ系等のような溶媒との組み合わせで反応を行うことができる。
【００４９】
（第３Ｃ工程）本工程は、前記一般式（４Ｃ）で表される化合物を閉環させ、前記一般式（５Ｃ）で表される化合物を製造するものである。反応はリチウムジイソプロピルアミド等の２級アミンのリチウム塩又はｔ−ブトキシカリウム等の塩基を用いて行うものである。溶媒としては、ＴＨＦ、ＤＭＳＯ等の有機溶媒を用いることができ、０℃〜室温で、１〜５時間反応を行うことが好ましい。
【００５０】
（第４Ｃ工程）本工程は、前記一般式（５Ｃ）で表される化合物を臭素化し、前記一般式（６Ｃ）で表される化合物を製造するものである。反応は、Ｎ−ブロモスクシンイミド等の臭素化剤を用いることにより達成される。溶媒としては、含水ＴＨＦ、ジオキサン、ＤＭＦ等の有機溶媒を用いて行うことができる。
【００５１】
（第５Ｃ工程）本工程は、前記一般式（６Ｃ）で表される化合物を脱水することによって、前記一般式（７Ｃ）で表される化合物を製造するものである。反応はピリジン等の塩基の存在下、塩化チオニルを作用させるか又はリン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の酸を触媒として用いることができる。溶媒としては、塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素又はトルエン等の芳香族炭化水素を用いることができ、作用させる試薬によって、適宜選択することができる。
【００５２】
（第６Ｃ工程）本工程は前記一般式（７Ｃ）で表される化合物から前記一般式（ＩＩ’）で表される化合物を製造するものである。反応は前記一般式（７Ｃ）で表される化合物の臭素を置換することにより目的の置換基を導入した前記一般式（ＩＩ’）で表される化合物を製造するものである。置換アミノ基を導入するには、ブチルリチウム等のリチウム塩を用い、カルボキシル基を導入し、次いでカルボニルイミダゾールを縮合剤として用い、アミン又はアンモニアと反応させることによって行うことができる。さらに、上記反応によって製造されたアミドから、例えば、オキサゾリン環を有する化合物とするには、置換又は無置換のエタノールアミンを作用させることにより行うことができる。また、アシル基を導入するには、前記と同様にブチルリチウム等のリチウム塩を用い、Ｎ−メチルホルムアニリドと反応させるか又はアセトアルデヒド、ベンズアルデヒド等のアルデヒドと反応させた後、二酸化マンガン等の酸化剤により、ヒドロキシルβ基を酸化させることによって達成される。ここで、アシル基を導入した化合物は、アシル基をヒドロキシイミノ基に変換し、そのジアニオンと相当するアミドまたはエステルを反応させ、脱水を経てイソオキサゾール環を形成できる。別の方法としては、アシル基を導入した化合物をβ−ジケトンタイプの置換基に変換し、そこにヒドロキシアミンを反応させイソオキサゾール環を形成できる。
【００５３】
前記一般式（ＩＩ）で表される化合物がジヒドロピラン誘導体の場合の製造方法は、例えば、下記の方法を挙げることができる。
【００５４】
【化２０】
0004288884.tif 000015
【００５５】
（式中、Ｒ23、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28及びＲ29はそれぞれ独立に水素原子、アルキル基又はアリール基である。またＲ24とＲ25、Ｒ26とＲ27、Ｒ28とＲ29、Ｒ23とＲ24、Ｒ23とＲ26、Ｒ23とＲ28、Ｒ24とＲ26、Ｒ24とＲ28、及びＲ26とＲ28は一体となり、それぞれ独立に環状アルキル基を形成することができる。Ｒ41及びＲ22は前記と同じである。）。
【００５６】
（第１Ｄ工程、第２Ｄ工程、第３Ｄ工程、第４Ｄ工程、第５Ｄ工程及び第６Ｄ工程）これらの工程によって前記一般式（７Ｄ）で表される化合物を製造する方法は、前記第１Ｃ工程、第２Ｃ工程、第３Ｃ工程、第４Ｃ工程、第５Ｃ工程及び第６Ｃ工程と同様にして達成することができる。
【００５７】
本発明の一般式（Ｉ）で表される１，２−ジオキセタン誘導体は、アルカリ性条件下で化学発光を伴ってカルボニル化合物に分解するほか、アリールエステラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ等のエステラーゼ（カルボン酸エステルヒドロラーゼ）、アルカリ性フォスファターゼ等の酵素、テトラブチルアンモニウムフルオライド等のフッ素化合物、酸性又はアミン化合物によって、化学発光を伴って分解する。
【００５８】
従って、一般式（Ｉ）で表される１，２−ジオキセタン誘導体は化学発光試薬となる。この化学発光を伴う１，２−ジオキセタン誘導体の分解は、他のエンハンサーの共存下に行ってもよく、また他のエンハンサーの非共存下に行ってもよい。一般式（Ｉ）で表される１，２−ジオキセタン誘導体は、化学発光を伴う分解がプロトン性溶媒中で行われても、かつ他のエンハンサーの非共存下で行われても高い発光量子収率を示すことが特徴の１つである。発光量子収率としては１％以上が好ましく、更に好ましくは１０％以上、とりわけ２０％以上のものが好ましい。
【００５９】
また本発明の化学発光試薬は、試料中の検出物質の濃度を求めることを目的とするあらゆる測定法に利用でき、例えば免疫測定法における免疫測定試薬として利用することができるほか、酵素検定法；化学検定法；ヌクレオチドプローブ法等にも用いることができる。
【００６０】
上記免疫測定法における検出物質としては、例えば、ｈＣＧ、ＴＳＨ、ＬＨ等のホルモン、ＡＦＰ、ＣＥＡ等の癌関連物質、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ−Ｉ等のウイルス抗原並びにその抗体及び核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）等を挙げることができる。
【００６１】
上記免疫測定法としては、例えば、上記のような検出物質に対する特異的結合性を有する物質に上記酵素をあらかじめ結合させておき、これと検出物質を含む試料を混合し、一定時間反応させて、試料中の検出物質とそれに結合性を有する物質とを結合させる工程、及び、結合したか又は結合しなかった結合性を有する物質の量を求める工程より行うことができる。前記結合したか又は結合しなかった結合性を有する物質の量を求める工程は、酵素と本発明の１，２−ジオキセタン誘導体とを反応させ、酵素量に比例して１，２−ジオキセタン誘導体からの発光強度が増大するので、この発光強度を測定することによって該物質の濃度を求めることができる。
【００６２】
本発明の１，２−ジオキセタン誘導体を含有する免疫測定試薬及びそれを用いた前記のような免疫測定も本発明の一つである。
【００６３】
本発明の一般式（Ｉ）で表される１，２−ジオキセタン誘導体は、量子収率の高い安定な発光効率を示すことができ、かつ熱的安定性が高く、冷蔵保存によっては１年後に分解産物が全く見られない程安定な化合物である。よって、発光の測定を簡便に効率良く行うことができ、例えば、臨床検査の分野等で有用である。
【００６４】
【実施例】
以下、実施例及び参考例により本発明を詳細に説明する。しかし本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
【００６５】
（参考例１）
【００６６】
【化２１】
0004288884.tif 000016
【００６７】
窒素雰囲気下、０℃で６０％水素化ナトリウム２．１２ｇ（５３．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ８０ｍＬに懸濁した溶液にＤＭＦ１５ｍＬに溶解した２，２，４，４−テトラメチル−１，３−ペンタンジオール（化合物〔２〕）７．０５ｇ（４４．１ｍｍｏｌ）を３０分間かけて滴下し、さらに３０分間撹拌した。この溶液に、ＤＭＦ１５ｍＬに溶解した３−メトキシベンジルクロライド（化合物〔１〕）９．０７ｇ（５７．９ｍｍｏｌ）を３０分かけて滴下した後１２時間撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液に投じ酢酸エチルで抽出した。抽出層を飽和食塩水で洗浄、無水硫酸マグネシウム乾燥後濃縮した。濃縮物をシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの１０：１混合溶媒で流しだしたところ１−（３−メトキシベンジルオキシ）−２，２，４，４−テトラメチル−３−ペンタノール（化合物〔３〕）を１０．７ｇ、収率８６．７％で無色油状物として得た。
【００６８】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．０３（ｓ，９Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），１．０７（ｓ，３Ｈ），３．２３（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．２５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４３（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），４．４８（ｓ，２Ｈ），６．８１−６．９１（ｍ，３Ｈ），７．２３−７．２８（ｍ，１Ｈ）ｐｐｍ
ＩＲ（ｌｉｑｕｉｄ  ｆｉｌｍ）；３５０２，２９５４，２８７０，１４８９，１４５７，１２６７，１０８０，１０５３ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；２８０（Ｍ+，２），１３５（３１），１２１（１００），１０７（８），９１（９），６９（１３），５５（１４）。
【００６９】
（参考例２）
【００７０】
【化２２】
0004288884.tif 000017
【００７１】
窒素雰囲気下、室温でセライト９．９ｇおよび１−（３−メトキシベンジルオキシ）−２，２，４，４−テトラメチル−３−ペンタノール（化合物〔３〕）４．６１ｇ（１６．５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン７５ｍＬに加え撹拌した。この溶液にＰＣＣ４．２６ｇ（１９．７ｍｍｏｌ）を加え７時間撹拌した後、ＰＣＣ８００ｍｇ（３．７１ｍｍｏｌ）をさらに加え一晩撹拌した。反応混合物にエーテルを加えセライト濾過した。濾液を濃縮し、シリカゲルカラムにかけヘキサンと酢酸エチルの１０：１の混合溶媒で流しだしたところ、１−（３−メトキシベンジルオキシ）−２，２，４，４−テトラメチル−３−ペンタノン（化合物〔４〕）を４．３２ｇ、収率９４．４％で無色油状物として得た。
【００７２】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．２３（ｓ，９Ｈ），１．２８（ｓ，６Ｈ），３．５０（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），４．４７（ｓ，２Ｈ），６．７８−６．８８（ｍ，３Ｈ），７．２３（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ
ＩＲ（ｌｉｑｕｉｄ  ｆｉｌｍ）；２９５９，２８７０，１６５８，１４８０，１４６６，１４５８，１２６７，１１０８，１０４９ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；２７８（Ｍ+，１００），２２２（５０），１２１（３１），９７（５），５５（８）。
【００７３】
（参考例３）
【００７４】
【化２３】
0004288884.tif 000018
【００７５】
窒素雰囲気下、室温で無水ＴＨＦ１５ｍＬにジイソプロピルアミン１．５０ｍＬ（１１．４ｍｍｏｌ）および１．６Ｍブチルリチウムヘキサン溶液６．６０ｍＬ（１０．６ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。この溶液に−７８℃で、ＴＨＦ１０ｍＬに溶解した１−（３−メトキシベンジルオキシ）−２，２，４，４−テトラメチル−３−ペンタノン（化合物〔４〕）１．４８ｇ（５．３２ｍｍｏｌ）を加え２時間撹拌した。反応溶液を徐々に室温に昇温しながら３時間２０分間撹拌した。反応混合物を飽和食塩水に投じ酢酸エチルで抽出した。抽出層を飽和食塩水で洗浄、無水硫酸マグネシウム乾燥後濃縮した。濃縮物をシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの１：２混合溶媒で流しだしたところ３−ｔ−ブチル−３−ヒドロキシ−２−（３−メトキシフェニル）−４，４−ジメチル−２，３，４，５−テトラヒドロフラン（化合物〔５〕）が１．３０ｇ、収率８７．８％で得られた。
融点；８３．０−８３．５℃（無色粒状晶、ヘキサンと酢酸エチルより再結晶）。
【００７６】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ０．９０（ｂｒｏａｄ  ｓ，９Ｈ），１．１９（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，３Ｈ），１．９２（ｓ，１Ｈ），３．８０（ｑAB，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），５．００（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｄｄ，Ｊ＝７．８  ａｎｄ  ２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２１（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ
ＩＲ（ｌｉｑｕｉｄ  ｆｉｌｍ）；３４９３，２９６２，２８８１，１５９１，１４８１，１２７８，１０７０，１０４８ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；２７８（Ｍ+，１），２６０（２９），２４５（１００），２０３（１２），１８９（４５），１３５（５２），１２１（１０），１０７（１１），７７（９），５５（３３）。
【００７７】
（参考例４）
【００７８】
【化２４】
0004288884.tif 000019
【００７９】
３−ｔ−ブチル−３−ヒドロキシ−２−（３−メトキシフェニル）−４，４−ジメチル−２，３，４，５−テトラヒドロフラン（化合物〔５〕）２．１６ｇ（７．７７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ２０ｍＬとＨ2Ｏ２ｍＬの混合溶媒に加え０℃で撹拌した。この溶液にＮＢＳ１．５４ｇ（８．６５ｍｍｏｌ）を加え徐々に室温にしながら一晩撹拌した後、さらにＮＢＳ１４０ｍｇ（０．７８７ｍｍｏｌ）を加え６時間撹拌した。反応混合物を飽和食塩水に投じ酢酸エチルで抽出した。抽出層をチオ硫酸ナトリウム水溶液および飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウム乾燥後濃縮した。濃縮物を酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒より結晶化したところ、２−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−３−ｔ−ブチル−３−ヒドロキシ−４，４−ジメチル−２，３，４，５−テトラヒドロフラン（化合物〔６〕）が１．３２３ｇ、収率４７．７％で得られた。
【００８０】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ０．８９（ｓ，９Ｈ），１．２０（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．９２（ｓ，１Ｈ），３．８０（ｑAB，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），４．９８（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝８．１  ａｎｄ  ２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；３５８（Ｍ+＋２，２．４），３５６（Ｍ+，２．５），３４０（１９），３３８（２０），３２５（７９），３２３（８４），２１５（７３），２１３（６７），２０１（１８），１９９（１９），１０９（１０），５５（１００）。
【００８１】
（参考例５）
【００８２】
【化２５】
0004288884.tif 000020
【００８３】
室温、窒素雰囲気下で無水トルエン３０ｍＬに、４−ｔ−ブチル−５−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−４−ヒドロキシ−３，３−ジメチル−２，３，４，５−テトラヒドロフラン（化合物〔６〕）４．６８ｇ（１３ｍｍｏｌ）を加え、１０分撹拌した。この反応溶液にｐ−トルエンスルホン酸１水和物０．２７ｇ（１．４ｍｍｏｌ、０．１当量）を加え、１２０℃にして３０分撹拌した。反応溶液を室温まで戻し、これを酢酸エチルと飽和食塩水の混合溶液に投じ、抽出を行った。得られた有機層を飽和食塩水にて洗浄した。この有機層を硫酸マグネシウムにて乾燥し、濃縮した。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの２：１混合溶媒にて流しだしたところ４−ｔ−ブチル−５−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔７〕）を３．７８ｇ（１１．２ｍｍｏｌ）、収率８５％で無色油状物として得た。
【００８４】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．０６（ｓ，９Ｈ），１．３３（ｓ，６Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．９（ｓ，３Ｈ），６．７９（ｄｄ，Ｊ＝７．９  ａｎｄ  １．６Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ
ＩＲ（ｌｉｑｕｉｄ  ｆｉｌｍ）；２９５７，２８６６，１７３９，１６５０，１５７０，１４８０，１３９２，１２３７，１０４９，１０２５，７９５ｃｍ-1Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；３４０（Ｍ+＋２，２６），３３８（Ｍ+，２６），３２５（９７），３２３（１００），２８３（６），２８２（３），２８１（４），１８７（７），１８５（５），１７２（４），１７０（３），７７（７），５５（６７）。
【００８５】
（参考例６）
【００８６】
【化２６】
0004288884.tif 000021
【００８７】
窒素雰囲気下、室温において、４−ｔ−ブチル−５−（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔７〕）５．０５ｇ（１４．８８ｍｍｏｌ）を溶かしたＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液に、−７８℃にて１．６３Ｍブチルリチウムヘキサン溶液（１０．５ｍＬ，１７．１ｍｍｏｌ）を加え、１５分撹拌した後、ヘキサンに溶解したアセトアルデヒド（１４．０ｍＬ，４５．１ｍｍｏｌ）を加え、３０分撹拌した。その反応溶液に少量のＨ2０を滴下して反応を停止し、飽和塩化アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）に投じ、酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出を行った。水層を酢酸エチル（１００ｍＬ）で再度抽出を行い、先の有機層と合わせ、飽和食塩水（２００ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色油状物（４．９３ｇ）として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの４：１混合溶媒にて流しだしたところ、目的の４−ｔ−ブチル−５−〔４−（１−ヒドロキシエチル）−３−メトキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔８〕）を無色固体（３．７３ｇ，１２．２５ｍｍｏｌ，８２．３％）として得た。
【００８８】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．０６（ｓ，９Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），１．４９（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），２．６０（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），５．０８（ｐｅｎｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７９（ｓ，ｌＨ），６．９０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ
13ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ２２．９，２７．４，３２．４，３２．５，４７．１，６６．３，８３．０，１１１．９，１２２．５，１２５．５，１２５．６，１３３．３，１３６．２，１４９．８，１５６．０ｐｐｍ
ＩＲ（ＫＢｒ）；３４９１，２９６２，２８７０，１６５１，１６０４，１４６１，１４０２，１２２９，１１２９，１０８８，８５９ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；３０４（Ｍ+，５），３０３（９），２８７（１９），２７１（１００），１７７（１４），１６１（６９），１４９（１０），１３５（１１），１１１（２３），５５（８８）。
【００８９】
（参考例７）
【００９０】
【化２７】
0004288884.tif 000022
【００９１】
窒素雰囲気下、室温において、４−ｔ−ブチル−５−〔４−（１−ヒドロキシエチル）−３−メトキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔８〕）（１．０２ｇ，３．３５１ｍｍｏｌ）を溶解させたＤＭＳＯ（１０ｍＬ）とＴＨＦ（５ｍＬ）の溶液に、トリエチルアミン（１．６５ｍＬ，１１．８ｍｍｏｌ）、ピリジン三酸化硫黄錯体（１．６０ｇ，１０．１ｍｍｏｌ）を加えて一時間撹拌した。その反応溶液を飽和食塩水（５０ｍＬ）に投じ、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出を行った。水層を酢酸エチル（５０ｍＬ）で再度抽出を行い先の有機層と合わせ、飽和食塩水（１００ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色油状物（１．０２ｇ）として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの４：１混合溶媒にて流しだしたところ、目的の５−（４−アセチル−３−メトキシフェニル）−４−ｔ−ブチル−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔９〕）を無色固体（９４３ｍｇ，３．１１８ｍｍｏｌ，９３．０％）として得た。
【００９２】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．０７（ｓ，９Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），２．６１（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，２Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝７．８ａｎｄ  １．３Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ２７．３，３１．８，３２．４，３２．４，４７．３，５５．５，８３．８，１１３．１，１２２．４，１２６．４，１２７．７，１２９．９，１４１．８，１４８．８，１５８．４，１９９．４ｐｐｍ
ＩＲ（ＫＢｒ）；２９５７，２８６８，１６７６，１６００，１５６０，１４６３，１４０１，１２３２，１０５３ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；３０２（Ｍ+，２７），２８７（１００），２３１（４０），２０３（１４），１７７（７８），１４９（９），１３５（６），５５（４８）。
【００９３】
（参考例８）
【００９４】
【化２８】
0004288884.tif 000023
【００９５】
室温にて５−（４−アセチル−３−メトキシフェニル）−４−ｔ−ブチル−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔９〕）（１．３５ｇ，４．４６４ｍｍｏｌ）を溶かしたエタノール（１５ｍＬ）溶液に、炭酸水素ナトリウム（５６２ｍｇ，６．６９ｍｍｏｌ）を加えた後、塩酸ヒドロキシルアミン（４７２ｍｇ，６．７９ｍｍｏｌ）を加え、９０℃にして３０分還流した。その反応溶液を飽和食塩水（５０ｍＬ）に投じ、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出を行った。水層を酢酸エチル（５０ｍＬ）で再度抽出を行い、先の有機層と合わせ飽和食塩水（１００ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色固体（１．３８ｇ）として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの４：１混合溶媒にて流しだしたところ、目的の４−ｔ−ブチル−５−〔４−（１−ヒドロキシイミノエチル）−３−メトキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔１０〕）を無色固体（１．１１ｇ，３．４９７ｍｍｏｌ，７８．３％）として得た。
【００９６】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．０７（ｓ，９Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９０（ｄｄ，Ｊ＝７．６ａｎｄ  １．４Ｈｚ，１Ｈ），７．２３−７．２７（ｍ，１Ｈ），７．８１（ｂｒ−ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ
13ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１５．１，２７．４，３２．４，３２．５，４７．２，５５．５，８３．１，１１２．６，１２２．３，１２５．９，１２６．４，１２８．８，１３８．１，１４９．５，１５６．５，１５６．９ｐｐｍ
ＩＲ（ＫＢｒ）；３２２８，２９６３，２８６５，１６０２，１５６１，１３９６，１３１１，１２２６，１０５１，９３０ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；３１７（Ｍ+，２９），３０２（１００），２８６（３２），２７０（１３），２６０（１０），２４６（１８），２３０（１１），２１４（１４），１９２（１４），１７６（７），５７（４）。
【００９７】
（参考例９）
【００９８】
【化２９】
0004288884.tif 000024
【００９９】
窒素雰囲気下、室温において、４−ｔ−ブチル−５−〔４−（１−ヒドロキシイミノエチル）−３−メトキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔１０〕）（９８０ｍｇ，３．０８７ｍｍｏｌ）を溶かしたＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を、−７８℃にて１．６１Ｍブチルリチウムヘキサン溶液（４．２０ｍＬ，６．７６ｍｍｏｌ）を加え、５分間撹拌した。そこにトリフルオロ酢酸Ｓ−エチルエステル（０．５０ｍＬ，８．９０ｍｍｏｌ）を加え、徐々に室温に戻して一昼夜撹拌した。その反応溶液を飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ）に投じ、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出を行った。水層を酢酸エチル（５０ｍＬ）で再度、抽出を行い、先の有機層と合わせ、飽和食塩水（１００ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色油状物（１．２５ｍｇ）として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの４：１混合溶媒にて流しだしたところ、目的の４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−５−ヒドロキシイソオキサゾリン−３−イル）−３−メトキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔１１〕）を無色固体（８４１ｍｇ，２．０３４ｍｍｏ１，６５．９％）として得た。
【０１００】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．０７（ｓ，９Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），３．４９（ｂｒ−ｓ，１Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｄ，Ｊ＝１８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８９（ｓ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝８．０ａｎｄ  １．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ２７．３，３２．５，３２．５，４５．４，４７．３，５５．６，８３．１，１０３．１（ｑ，Ｊ＝３３．７Ｈｚ），１１３．０，１１６．４，１２２．０（ｄ，Ｊ＝２８３．３Ｈｚ），１２２．８，１２６．７，１２８．７，１４０．１，１４８．５，１５５．７，１５７．０ｐｐｍ
ＩＲ（ＫＢｒ）；３３２９，２９６２，２８７３，１６０５，１４６６，１４１０，１１８５，１０５０，１００５，８６０ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；４１３（Ｍ+，２９），３９８（１００），３８０（２８），３４２（２６），３２４（１２），２８８（３５），２７０（６０），２１４（２２），１６０（２２），５７（８）。
【０１０１】
（参考例１０）
【０１０２】
【化３０】
0004288884.tif 000025
【０１０３】
室温において、４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−５−ヒドロキシイソオキサゾリン−３−イル）−３−メトキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔１１〕）（９２２ｍｇ，２．２３０ｍｍｏｌ）を溶かしたトルエン（１０ｍＬ）溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（４５．８ｍｇ，０．２４１ｍｍｏｌ）を加え、１３０℃にして１時間還流した。その反応溶液を飽和重曹水（５０ｍＬ）に投じ、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出を行った。水層を酢酸エチル（５０ｍＬ）で再度、抽出を行い、先の有機層と合わせ、飽和食塩水（１００ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色固体（９３０ｍｇ）として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの４：１混合溶媒にて流しだしたところ、目的の４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−３−イソオキサゾリル）−３−メトキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔１２〕）を無色固体（７４８ｍｇ，１．９８３ｍｍｏ１，８８．９％）として得た。
【０１０４】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．０９（ｓ，９Ｈ），１．３６（ｓ，６Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄｄ，Ｊ＝７．８ａｎｄ  １．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ）ｐｐｍ
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ２７．４，３２．５，３２．５，４７．３，５５．７，８３．６，１０６．８（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ），１１３．０，１１５．８，１１８．０（ｄ，Ｊ＝２６９．８Ｈｚ），１２２．９，１２６．４，１２８．８，１４０．２，１４８．８，１５６．６．１５７．８（ｑ，Ｊ＝４２．０Ｈｚ），１５９．８ｐｐｍ
ＩＲ（ＫＢｒ）；２９６１，２８７０，１６０６，１４５０，１３１３，１１７８，１１５２，１０５２，９６７，８３４ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；３９５（Ｍ+，２２），３８０（１００），３４５（１６），３３８（１９），３２４（２５），２７０（５３），２４４（１０），２２８（７），２１４（９），１６０（１３），１４９（１０），５７（１５）。
【０１０５】
（参考例１１）
【０１０６】
【化３１】
0004288884.tif 000026
【０１０７】
窒素雰囲気下、０℃において、水素化ナトリウム６０％、１３５ｍｇ（３．３８ｍｍｏｌ）を懸濁させたＤＭＦ（３ｍＬ）にエタンチオール（０．４０ｍＬ，５．４０ｍｍｏｌ）を加え、１５分間撹拌した。その反応溶液に４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−３−イソオキサゾリル）−３−メトキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔１２〕）（６６４ｍｇ，１．６７９ｍｍｏｌ）を溶解させたＤＭＦ（３ｍＬ）溶液を滴下し、１４０℃にして１時問加熱した。その反応溶液を飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍＬ）に投じ、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出を行った。水層を酢酸エチル（５０ｍＬ）で再度、抽出を行い、先の有機層と合わせ、飽和食塩水（１００ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮し、残留物を淡黄色固体（６７１ｍｇ）として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンと酢酸エチルの４：１混合溶媒にて流しだしたところ、目的の４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−３−イソオキサゾリル）−３−ヒドロキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔１３〕）を無色固体（５３３ｍｇ，１，３９８ｍｍｏｌ，８３．３％）として得た。
【０１０８】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．０８（ｓ，９Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），３．８９（ｓ，２Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝８．１ａｎｄ１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．８４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），１０．６（ｓ，１Ｈ）
ｐｐｍ
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ２７．３，３２．５，３２．５，４７．４，８３．３，１０９．２，１１８．７（ｑ，Ｊ＝２６６．８Ｈｚ），１１９．１，１２１．６，１２６．０，１２７．５（ｄ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），１３８．４（ｑ，Ｊ＝４４．５Ｈｚ），１４２．１，１４８．４，１５７．３，１６３．
０ｐｐｍ
ＩＲ（ＫＢｒ）；３３５５，３１４８，２９６０，２８６８，１６２９，１５７６，１４９４，１３３０，１１７９，１１４７，１０５２，７６５ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；３８１（Ｍ+，６１），３６６（１００），３２４（６），３１０（８８），２７８（１１），２５６（８５），２２８（１８），２００（１７），５７（１９）。
【０１０９】
（実施例１）
【０１１０】
【化３２】
0004288884.tif 000027
【０１１１】
酸素雰囲気下、０℃において、４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−３−イソオキサゾリル）−３−ヒドロキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔１３〕）（８０．０ｍｇ，０．２０９８ｍｍｏｌ）を溶かしたＣＨ2Ｃ１2（５ｍＬ）溶液に、ＴＰＰ（２．１ｍｇ）を加えた後、ナトリウムランプを照射し、３０分撹拌した。その反応溶液を濃縮し、残留物を緑色固体（８１．２ｍｇ）として得た。これをシリカゲルカラムにかけ、ヘキサンとジエチルエーテルの２０：１混合溶媒にて流しだしたところ、目的の４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−３−イソオキサゾリル）−３−ヒドロキシフェニル〕−４，４−ジメチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［３．２．０］ヘプタン（化合物〔１４〕）を淡黄色固体（７５．３ｍｇ，０．１８２２ｍｍｏｌ，８６．８％）として得た。
【０１１２】
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１．０２（ｓ，９Ｈ），１．１７（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｓ，３Ｈ），３．８５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝８．３ａｎｄ１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），１０．６７（ｓ，１Ｈ）ｐｐｍ
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）；δ１８．５，２５．１，２７．０，３６．８，４５．７，８０．５，１０５．４，１１０．３，１１５．９，１１７．９，１１８．７（ｑ，Ｊ＝２６７．０Ｈｚ），１１９．７，１２６．０，１２７．５（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），１３８．７（ｑ，Ｊ＝４４．５Ｈｚ），１４１．８，
１５７．３，１６２．７ｐｐｍ
ＩＲ（ＫＢｒ）；３１４４，２９７５，２８９８，１６１３，１５５０，１４９４，１３７１，１３３１，１２１９，１１４９，１０３５，９５９，８７２ｃｍ-1
Ｍａｓｓ（ｍ／ｚ，％）；４１３（Ｍ+，１），３８１（１３），３６６（２０），３５７（２８），３２８（７），２７３（３３），２５６（１００），２２８（１３），２００（１４），５７（２５）。
【０１１３】
（実施例２）
実施例１で得られた４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−３−イソオキサゾリル）−３−ヒドロキシフェニル〕−４，４−ジメチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［３．２．０］ヘプタン（化合物〔１４〕）の１．００×１０-5Ｍアセトニトリル溶液１ｍＬを、テトラブチルアンモニウムフルオライドの１．００×１０-2Ｍ  ＤＭＳＯ溶液２ｍＬに４０℃で加え、そのときの発光を蛍光分析計で測定した。このときの発光量子収率は０．４４と見積もられ、発光の半減期は１４００秒、λmaxは４８１ｎｍであった。
【０１１４】
（実施例３）
実施例１で得られた４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−３−イソオキサゾリル）−３−ヒドロキシフェニル〕−４，４−ジメチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［３．２．０］ヘプタン（化合物〔１４〕）の１．００×１０-4Ｍアセトニトリル溶液１ｍＬを、水酸化ナトリウムの０．１Ｎ溶液２ｍＬに４０℃で加え、そのときの発光を蛍光分析計で測定した。このときの発光量子収率は０．３９と見積もられ、発光の半減期は２７００秒、λmaxは４７９ｎｍであった。
【０１１５】
（実施例４）
実施例１で得られた４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−３−イソオキサゾリル）−３−ヒドロキシフェニル〕−４，４−ジメチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［３．２．０］ヘプタン（化合物〔１４〕）の１．００×１０-3Ｍアセトニトリル溶液０．１ｍＬを、水酸化ナトリウムの０．１Ｎ溶液２ｍＬ＋蒸留水０．９ｍＬに４０℃で加え、そのときの発光を蛍光分析計で測定した。このときの発光量子収率は０．２４と見積もられ、発光の半減期は１２００秒、λmaxは４７６ｎｍであった。
【０１１６】
（参考例１２）
【０１１７】
【化３３】
0004288884.tif 000028
【０１１８】
窒素雰囲気下、０℃において、ジクロロメタン３０ｍＬにピリジン１．８４ｍＬ（２２．８ｍｍｏｌ）を加え、さらにオキシ塩化リン１．３３ｍＬ（１４．３ｍｍｏｌ）を加え１５分間攪拌した。その反応溶液に４−ｔ−ブチル−５−〔４−（５−トリフルオロメチル−３−イソオキサゾリル）−３−ヒドロキシフェニル〕−３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロフラン（化合物〔１３〕）（１．４４ｇ，３．７８ｍｍｏｌ）を溶解させたジクロロメタン（１２ｍＬ）溶液を滴下し、０℃にして２時問攪拌し、さらに徐々に室温に戻して一昼夜攪拌した。
【０１１９】
反応溶液をふたたび０℃に冷却し、ピリジン３．６８ｍＬ（４５．５ｍｍｏｌ）を加え、さらにエチレンシアノヒドリン３．２０ｍＬ（４７．３ｍｍｏｌ）を加え、徐々に室温に戻して一昼夜攪拌した。その反応溶液を純水（５０ｍＬ）に投じ、酢酸エチル（５０ｍＬ）で抽出を行った。水層を酢酸エチル（５０ｍＬ）で再度、抽出を行い、先の有機層と合わせ、純水（１００ｍＬ×３）で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、濃縮したところ、目的の、リン酸−５−（３−ｔ−ブチル−４，４−ジメチル−４，５−ジヒドロフラン−２−イル）−２−(５−トリフルオロメチルイソオキサゾール−３−イル）フェニルエステル ビス−（２−シアノエチル）エステル（化合物〔１５〕）を淡黄色油状物（２．１０ｇ，３．７０ｍｍｏｌ，９８．１％）として得た。
【０１２０】
1ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3 ）；δ１．０８（ｓ，９Ｈ），１．３５（ｓ，６Ｈ），２．８０（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｓ，２Ｈ），４．４５（ｍ，４Ｈ），７．３３（ｄｄ，１Ｈ），７．５３（ｄ，１Ｈ），７．６３（ｄ，１Ｈ），８．０９（ｄｄ，１Ｈ），ｐｐｍ。
【０１２１】
（参考例１３）
【０１２２】
【化３４】
0004288884.tif 000029
【０１２３】
室温において、リン酸−５−（３−ｔ−ブチル−４，４−ジメチル−４，５−ジヒドロフラン−２−イル）−２−(５−トリフルオロメチルイソオキサゾール−３−イル）フェニルエステル ビス−（２−シアノエチル）エステル（化合物〔１５〕）（１．２０ｇ，２．１１ｍｍｏｌ）を溶かしたメタノール（４０ｍＬ）溶液に２８％ナトリウムメチラート・メタノール溶液（１．６ｍＬ）加え１時間３０分攪拌した。その反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２．０ｍＬ）加え、さらに３０分攪拌後、濃縮することにより白色の固体を得た。この固体にメタノール（２０ｍＬ）を加え、不溶物を濾過にて取り除いた。濾液を濃縮したところ、目的の、リン酸モノ−［５−（３−ｔ−ブチル−４，４−ジメチル−４，５−ジヒドロフラン−２−イル）−２−(５−トリフルオロメチルイソオキサゾール−３−イル）フェニル］エステル ジナトリウム塩（化合物〔１６〕）を白色固体（０．６９ｇ，１．３７ｍｍｏｌ，６４．５％）として得た。
【０１２４】
1ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）；δ１．１１（ｓ，９Ｈ），１．３４（ｓ，６Ｈ），３．８３（ｓ，２Ｈ），６．９８（ｄｄ，１Ｈ），７．７８（ｄ，１Ｈ），７．８５（ｄ，１Ｈ），８．０５（ｄ，１Ｈ），ｐｐｍ。
【０１２５】
（実施例５）
【０１２６】
【化３５】
0004288884.tif 000030
【０１２７】
酸素雰囲気下、０℃において、リン酸モノ−［５−（３−ｔ−ブチル−４，４−ジメチル−４，５−ジヒドロフラン−２−イル）−２−(５−トリフルオロメチルイソオキサゾール−３−イル）フェニル］エステル ジナトリウム塩（化合物〔１６〕）（６５．０ｍｇ，０．１２９ｍｍｏｌ）を溶かしたメタノール（４ｍＬ）とジクロロメタン（１５ｍＬ）の混合溶液に、ＴＰＰ（２．０ｍｇ）を加えた後、ナトリウムランブを照射し、２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、濃縮物にメタノールを加えて不溶物を０．４５μｍのポリテトラフルオロエチレン製のフィルターで濾過し、再度濃縮した。濃縮物を純水（１．５ｍｌ）に溶解し、ポリマー系逆相Ｃ１８の分取用カラムを用いてＨＰＬＣにかけ、水とアセトニトリルで溶出させた画分を凍結乾燥したところ、目的の、リン酸モノ−［５−（５−ｔ−ブチル−４，４−ジメチル−２，６，７−トリオキサビシクロ［３．２．０］ヘプト−１−イル）−２−(５−トリフルオロメチルイソオキサゾール−３−イル）フェニル］エステル ジナトリウム塩（化合物〔１７〕）を白色固体（５２．０ｍｇ，０．０９７ｍｍｏｌ，７５．３％）として得た。
【０１２８】
1ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）；δ１．０４（ｓ，９Ｈ），１．１４（ｓ，３Ｈ），１．４４（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｄ，１Ｈ），４．４９（ｄ，１Ｈ），７．３３（ｄｄ，１Ｈ），７．７９（ｄ，１Ｈ），７．９１（ｄｄ，１Ｈ），８．３５（ｄ，１Ｈ）ｐｐｍ。
【０１２９】
【発明の効果】
本発明の１，２−ジオキセタン誘導体（Ｉ）は、量子収率の高い安定な発光を示すことができ、かつ熱的安定性が高いため冷蔵保存によっては１年後に分解産物が全く見られないほど安定な化合物である。よって、発光の測定を簡便に効率良く行うことができ、例えば、臨床検査の分野等で有用である。また本発明の１，２−ジオキセタン誘導体（Ｉ）は、高い熱的安定性と高い発光効率を併せ持つだけでなく、プロトン性溶媒中においてエンハンサー自体及びエンハンサーを加える操作等を省くことができるため費用、時間の節約をすることができる。