(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
気管支、肺、気管、および／または中咽頭内のリンパ輪を侵す感染症を治療および／または予防するための薬剤溶液であって、前記薬剤溶液が、口腔および／または咽頭への局所的な施用として投与される薬剤溶液を製造するための、気道感染症を引き起こす抗原または病原体に対するトリの抗体の使用。
【請求項２】
気道感染症が、細菌、ウイルスまたは真菌により引き起こされる請求項１に記載のトリの抗体の使用。
【請求項３】
気道感染症がシュードモナス属の細菌種によって引き起こされる請求項２記載のトリの抗体の使用。
【請求項４】
薬剤溶液が、うがいおよび／または嚥下によって投与される請求項１〜３のいずれかに記載のトリの抗体の使用。
【請求項５】
感染症に対する高い感受性をもっているヒトに投与するための薬剤溶液である請求項１〜４のいずれかに記載のトリの抗体の使用。
【請求項６】
感染症に対する高い感受性が、嚢胞性腺維症に由来するものである請求項５記載のトリの抗体の使用。
【発明の詳細な説明】
発明の技術分野
本発明は、気道感染症を治療、および／または予防するために、感染性抗原に対してトリの抗体を使用することに関する。本抗体は、口腔、および／または咽頭に局所的に施用して投与する。
発明の背景
ニワトリなどの家禽類は、それらを免疫した因子に対して、高力価の抗体を卵の中に産生することがよく知られている（４）。いくつかの試みとして、トリの抗体を用いて、さまざまな動物の消化管における、細菌またはウイルスによる感染症の予防または治療が行われていて、有望な結果が得られている（１２−１７）が、トリの抗体、またはその他の生物に由来する抗体が、哺乳動物あるいはヒトで、気道感染症の予防または治療に用いられていたということを明らかにした科学文献はない。従来、気道感染症は、抗生物質のような通常の治療法で治療されている。抗体が使われない理由は、気道感染を治療するにあたって、抗体を投与できる方法が見つかっていないからである。非常に驚くべきことに、本発明者らは、口腔、および／または咽頭への局所的な施用によって抗体を投与することにより、気道感染症の治療ができることを発見した。
発明の概要
本発明は、気道感染症を予防および／または治療するための薬剤を製造するために、トリの抗体、および／または、抗原と結合するそれらの断片を使用することを初めて示している。
非常に驚くべきことに、本発明は、好ましくは、うがいおよび／または嚥下することによって、口腔、および／または咽頭に局所的に施用することにより抗体を投与すれば、トリの抗体を用いて、気道感染症を予防および／または治療できることを教示している。本発明者らは、ヒトに対する臨床実験によって、このことを明らかにした。
本発明は、気道感染、すなわち、鼻腔、副鼻腔、中咽頭内のリンパ輪、喉頭、気管、気管支、細気管支、および／または肺胞、すなわち、呼吸器系統を下に向かうすべての部位における、シュードモナス属（Pseudomonas）、および／またはそれに近縁の微生物によって起こる感染症を治療することに関する。
本発明に係る、気道感染症の治療および／または予防法は、治療法が穏やかで、有害な副作用を伴わないため、感染に対する感受性が高まった人や、感染症に罹る危険性が高まった人にとって、特に適している。
発明の詳細な説明
気道感染症を治療するための抗体の使用を試験するために、本発明者らは、嚢胞性腺維症（cyctic fibrosis、ＣＦ）を患っている患者グループを選んだ。これらの患者は、緑膿菌（シュードモナス・アエルギノーサ、Pseudomonas aeruginosa）による気道感染症に再感染したり、慢性感染したりして、感染に対する感受性が高まっている。嚢胞性腺維症の患者は、今までのところ、不成功に終わったり、有害な副作用をともなう従来からの治療法である抗生物質療法に頼らざるを得なかった。
嚢胞性腺維症（ＣＦ）に罹った患者の気道に、緑膿菌が慢性的に住み着くことが、この疾患の罹病率と死亡率を高くしている主要な原因である。嚢胞性腺維症の患者の喀痰から緑膿菌が一旦分離されたら、それを取り除くのは困難である。この菌が定着した非常に初期の段階で、強力な抗生物質治療を行なうことによって、ほんの一時的に菌を駆除することができるが、菌はすぐに復活する（１−３）。培養物が緑膿菌陽性となる初期に、シプロフロキサシンの経口投与とコリスチンの吸入とを、３週間毎日行なうことによって、１４人のＣＦ患者を治療したという、コペンハーゲンのＣＦセンターからの報告（２）が、これまでの中でもっとも良好な結果である。治療後、これらのＣＦ患者は、２７ヶ月後まで調べられた（全部で２１４ヶ月；平均１５．３ヶ月）。この間に、２人の患者で、緑膿菌が慢性的にコロニー化する（６個の喀痰の培養物が一貫して細菌に対して陽性になることと定義されている）ようになり、また、２１４の喀痰培養のうち、４９の喀痰培養が、緑膿菌陽性であった（＝２３％）。コペンハーゲンでの別の研究によると、ＣＦ患者の９８．３％において、抗シュードモナス化学療法の一連のコースを終えた４ヶ月後にはすでに、喀痰培養で緑膿菌が再出現していたことが報告されている（３）。
ニワトリの卵は１個あたり、１００ｍｇ以上の抗体を含んでいる。これらの抗体は、ニワトリで産生され、卵の中に運搬されるため、それらが高濃度で見出されるのである。殺した特定の細菌またはそれらの断片によってニワトリを繰り返し免疫することによって、細菌に対する高力価の特異的抗体を作出した。殺した緑膿菌によってニワトリを繰り返し免疫することによって、緑膿菌に対する特異的抗体を作出した。これらのニワトリの卵を用いて、特異的抗体濃縮物の溶液を作った。
抗体は、抗原に結合する抗体部分であるＦab断片、および抗原結合性をもたないＦｃ断片という２つの部分からなる。免疫グロブリンの経口投与の基本となるのは、細菌の付着を阻害することと、病原菌によって産生される毒素の中和とを行なうことにある。したがって、全ＩｇＹ分子、および抗原と結合するそれらの断片が上記の機能をもつことから、これらのいずれによっても予防的な効果がもたらされる。実際、このことは、抗ＣＦＡ／ＩのＦab断片が、血清の非切断免疫グロブリン画分とほとんど同じくらい効果的に、体液の分泌（下痢）を抑制することを観察した、AhrenとSvennerholm（５）の研究によって、示されている。したがって、ニワトリのＩｇＹのＦab断片は、細菌感染に対して、全ＩｇＹ分子と同じような防御的機能を有するはずである。
哺乳動物（例えば、ウシ）由来の抗体とは対照的に、卵由来の抗体（６）は、ヒトの補体系を活性化することがない（７）。活性化された補体因子は、炎症反応の非常に効果的なメディエイターとなるから、このことは極めて大きな長所である。さらに、卵由来の抗体は、リューマチ因子（８）、ヒトＦｃレセプター（９）、細菌性Ｆｃレセプター（１０）、またはヒト抗マウスＩｇＧ抗体（１１）と反応しないため、それらを使用しても安全である。
以下の実施例は、本発明を制限することなしに、さらに具体化して例示したものである。
実施例Ｉ
緑膿菌対するトリの抗体の調製。
ホルムアルデヒド固定によって緑膿菌を殺した。殺した細菌を、０．９％のＮａＣｌで洗滌して、−２０℃で凍結した。０．５ｍＬの細菌を、０．５ｍＬのフロイントの不完全アジュバントと混合して、家禽用のニワトリを筋肉内に、免疫化するのに用いた。各免疫化の間を２週間開けて、ニワトリを４回免疫した。最初の免疫期間の８週間が経過してから、卵を集め始め、その後集め続けた。さらに、ニワトリには、過免疫状態を維持するために、２−３ヶ月ごとに追加免疫を行った。AkitaとNakai、１９９３（１８）に記載されている水希釈法によって抗体を精製した。遠心分離によって沈殿物を取り除いた後、上清を３０−７０ｍＬずつに分けて−２０℃で凍結した。最終調製物の抗体力価を免疫ブロッティングによってチェックした。
実施例II
症例報告
緑膿菌が、気道で最初にコロニー化したときに、抗生物質のシプロフロキサシンの経口投与と、抗生物質のコリスチンまたはトブラマイシンの吸入によって、２人のＣＦ患者を３週間治療した。抗生物質の治療と同時に、実施例１に記載された溶液による毎日のうがい（２分間）と、その後に緑膿菌に対する特異抗体を飲み下すこととを開始した。この３週間の後、上記の方法にしたがって、全部で３０ヶ月以上の間（それぞれ、２６ヶ月と４ヶ月）患者に抗体を与え続けたが、抗生物質は与えなかった。治療期間中の喀痰培養はすべて、緑膿菌に対して陰性であった。（２８個中陽性は０個＝０％；これは、前記で参照したコペンハーゲンでの実験結果が、２１４個中４９個＝２３％  ｐ＜０．００５、に比肩するはずである）。このように、ＣＦ患者の気道における、緑膿菌の完全な除去が成し遂げられた。この結果は、本発明にしたがって、緑膿菌に対する抗体でうがいし、抗体を飲み下すことによって行われる治療が、細菌の慢性的なコロニー化を阻止するのに有効であることを強く示唆している。抗体は嚥下されると、腸内のタンパク質分解酵素によって分解され、血液によって運搬されることはないため、この効果は、口腔および／または咽頭でのトリの抗体の局所的な効果による可能性が非常に高い。
これらの患者について、投与量は、好ましくは、１日あたり約５０ｍｇのＩｇＹである。溶液への細菌の混入を予防する処置がとられ、その後、−２０℃で保存した。ＣＦ患者に頼んで、３０-７０ｍＬの溶液が入った瓶を毎朝フリーザーから取り出して、夕方にこの溶液で２分間うがいをしてから、その後で飲み込むようにしてもらった。
症例１．  ２１才の女性ＣＦ患者。
出生時の、胎便中のアルブミン（１７９ｍｇのアルブミン／ｇ胎便の乾燥重量）によるスクリーニング、およびその後の汗試験（Ｎａ  １０１、Ｃｌ  １２２ｍｍｏｌ／ｋｇ汗）によって診断された。すでに、出生後３週間で、重篤な摂食障害を抱えていた。便通が頻繁で、かなりひどく嘔吐したため、食欲は盛んであるにも拘らず、体重が３４３０ｇから２９３０ｇまで減少した。適正な治療（膵臓酵素、授乳、ビタミン補給、ミスト・テント、理学療法、および、気道感染が起こる度の抗ブドウ球菌性抗生物質投与）が開始されてからは、体重が増え始め、すっかり快方に向かっていった。身長は、最終身長の１６９ｃｍになるまで、常に、その年齢の平均身長よりも僅かに高かった。体重は、大抵は、その年齢の平均であったが、７〜８才のときにひどく落ち込み、１５才になるまで平均体重に戻らなかった。最近の２年間は、体重は約５３ｋｇで、すなわち、ＢＭＩ（ボディーマス指数）は１８．６である。７才半の時から、痰の中に常に黄色ブドウ球菌（スタフィロコッカス・オーレウス、Staphylococcus aureus）が見られ、また、時には、インフルエンザ菌（ヘモフィルス・インフルエンザ、Haemophilus influenza）またはプロテウス・ミラビリス（Proteus mirabilis）も見られた。この患者の胸部Ｘ線は、典型的なＣＦ変化が僅かずつではあるが、確実に進行していることを示しており、また、肺機能は、約７５％のＦＶＣ（努力肺活量）までに、そして、ＦＥＶ１（１秒間あたりの努力呼気肺活量）は、１９才で期待される値の約５０％までに、ゆっくりと低下していった。この患者に、最初の緑膿菌のコロニー化が起きたのは、１９８９年の１１月であった。これは、各１４日間からなる２つの期間に、アザクタムとゲンタマイシンとを静脈注射し、さらに、第２の期間の間にはシプロフロキサンを経口投与することによって、効果的に治療された。その後、この患者の喀痰培養は、１９９４年８月までは、黄色ブドウ球菌とインフルエンザ菌という初期のパターンに戻っていた。同時に、セフタジジムとトブラマイシンとを静脈注射するという１４日間のコースの後に、細菌は消失していた。
しかし、１９９５年の１月にはすでに、緑膿菌が喀痰の中に再び発見された。この時点で、コペンハーゲンモデル（２）にしたがって、シプロフロキサシン、７５０ｍｇ×３の経口投与とコリスチン、２００万単位×２の吸引による投与を３週間行なうという抗生物質コースを施し、それと同時に、緑膿菌に対するトリの抗体のうがいと嚥下を開始することに決定した。それ以来、抗体の摂取を毎日続けている（すでに２６ヶ月）。緑膿菌の新たな出現は見られず、この患者の喀痰の中の細菌のパターンは通常に戻っている。この患者は、血清中に、緑膿菌に対するどのような沈降素も抗体もったことはなかった。彼女の血中には、治療による副作用も見られていない（赤血球、および白血球、血小板、肝臓酵素、およびクレアチニン値）。この患者の胸部Ｘ線は、肺機能試験と同じく（ＦＶＣは依然７５％で、ＦＥＶ１は、今のところ予測値の４５％）、１９９５年以来本質的には変化していない。この患者は、非常に活発な女性で、彼女の仕事量（１５０ワット）は、彼女の重篤な病気を考慮すれば非常に良好と考えるべきである。
症例２．  １７才の少女ＣＦ患者。
生後２年間、閉塞性気管支炎を繰り返し、しばしばグリース状の、悪臭の強い、緩い便をして、体重増加が少なかった（２才の時の体重が９．５ｋｇ）。その時点で、汗試験を行なって、ＣＦという診断が下された。そして、集中的な治療が行われた。この患者の体重は平均値に戻ったが、身長は、−２ＳＤ曲線を辿り、１５１ｃｍで停止した。この患者の主な問題は、「遠位性腸閉塞症候群（ＤＩＯＳ）」というタイプの再発性の腹痛であった。この患者の肺は、常に非常に良好であった。胸部Ｘ線は、極く僅かな変化しか示しておらず、肺機能試験はすべて、その年齢と身長にとっての平均値か、それを上回っていた（例外はＲＶ（残気量）：１，１４＝予想量の１８６％である）。この患者の仕事量（１２０ワット）は、ほとんど正常値である。この患者の喀痰培養は、１９９６年の１１月までは、常に、黄色ブドウ菌および／またはインフルエンザ菌の存在を示していたが、この時になって初めて、緑膿菌の存在を示した。そして、すぐに、この患者は、シプロフロキサシン、７５０ｍｇ×２の経口投与と、トブラマイシン３２０ｍｇ×２の吸引吸入（コリスチンは使用できない）による投与を３週間行なうというコースを取った。それと同時に、緑膿菌に対するトリの抗体のうがいと嚥下とを開始し、それ以来ずっと継続している。シュードモナス菌は根絶され、それ以後（現時点で４ヶ月）、喀痰の中には通常の細菌がいるだけである。彼女は、健康な状態が続いている。
同じように良好な結果が、この他９人の患者でも得られており、本発明にしたがって、緑膿菌に対するトリの抗体によって同菌の気道感染を治療することによる予防効果と治療効果とが強く示唆されている。上記の２人の患者の治療期間中の３０個の喀痰培養において、緑膿菌陽性の培養物は見られなかった。これとは対照的に、上記で参照したコペンハーゲンでの研究では、２３％の陽性培養物があり、これらの患者の７５〜１００％までが、本発明におけると同じ調査期間の間に、少なくとも１つの陽性培養物を示した。
参照文献
0004298797.tif 000002
0004298797.tif 000003
0004298797.tif 000004