(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
上側表面および下側表面を有するとともに前記上側表面の一部上に封じ込め境界を有するガラス、プラスチック若しくはセラミックのプレートを備え、
前記封じ込め境界はコーティングを備え、該コーティングはポリシロキサン、シリコーン若しくはシリコン流体の組成物を含み、前記封じ込め境界は生物学的試料を保持するために封じ込め領域の少なくとも一部を包囲し、前記封じ込め境界は、透明であり、かつ、０．００００２５４センチメートル未満の厚みを有することを特徴とする分析用プレート。
【請求項２】
前記封じ込め境界が着色されていることを特徴とする請求項１に記載の分析用プレート。
【請求項３】
前記封じ込め境界が目に見えないことを特徴とする請求項１に記載の分析用プレート。
【請求項４】
前記封じ込め境界は、前記プレートの一つの縁から他の縁まで延びる帯を含むことを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の分析用プレート。
【請求項５】
分析用プレートの使用方法において、
請求項１乃至４のいずれか一項に記載のガラス、プラスチック若しくはセラミックの分析用プレートを提供する段階と、
前記ガラス、プラスチック若しくはセラミックの分析用プレートの前記封じ込め領域に生物学的試料を付加する段階と、
を備えたことを特徴とする分析用プレートの使用方法。
【請求項６】
分析用プレートにコーティングを塗布する方法において、
ペン若しくはペン状の装置、又はリザーバおよび塗布用具端部を有する装置を備えた塗布用具であって、ポリシロキサン、シリコーン若しくはシリコン流体またはこれらの組み合わせが収容されている塗布用具を提供する段階と、
前記ポリシロキサン、シリコーン若しくはシリコン流体又はこれらの組み合わせをガラス、プラスチック若しくはセラミックの分析用プレートに塗布する段階と、
を備え、
前記ポリシロキサン、シリコーン若しくはシリコン流体又はこれらの組み合わせにより０．００００２５４センチメートル未満の厚みを有する透明なコーティングが前記分析用プレート上に形成され、前記透明なコーティングは生物学的試料を前記分析用プレートの表面に保持するためのものであることを特徴とする方法。
【請求項７】
前記塗布用具がペン若しくはペン状の装置であることを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記透明なコーティングが無色であることを特徴とする請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
前記透明なコーティングが着色されていることを特徴とする請求項６又は７に記載の方法。
【請求項１０】
前記透明なコーティングが目に見えないことを特徴とする請求項６乃至８のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の背景］
本発明は、全般的に顕微鏡のスライドグラス若しくは診断用プレートの様な分析用プレートの分野に関し、より詳しくはその上に境界を有している分析用プレートに関する。
【０００２】
標準的な顕微鏡スライドグラスおよび診断用ガラスプレートは、ガラスまたはプラスチック製の薄い矩形の板である。使用の際には、水性若しくは非水性の液体、液状試薬、生物学的流体および／または生物学的組織部分を含む試料は、スライドグラスまたは診断用ガラス製プレートの一部分の上に配置される。分析の前に、スライドグラス若しくはプレート上の試料は、乾燥され、定着剤の中に置かれ、または光、電子による強化された視覚化、または蛍光顕微鏡法、および／または人間の目による全体的な分析のための処理の前には生のままとされる。試料は、その自然なままの状態において分析され、または強化された視覚化のために一つ若しくは複数の液体染料を用いて処理する必要がある。分子生物学的技術による更なる処理は、例えば、モノクローナル、ポリクローナル抗体による処理、原位置における分子プローブによるハイブリッド化、および／またはそれらの液体検出試薬による処理を含む。型通りの分析またはスライドグラス若しくはプレートの操作の間、試料若しくは液状試薬はスライドグラスからこぼれ、スライドグラスの他の部分に動き若しくは移動し、および／またはスライドグラスが他の物に触れると「毛管現象で滲みだし」、その結果液状試料若しくは試薬の全部または一部を失うことになる。異なる試料若しくは液状試薬の、そのような偶然の若しくは望まれない混合若しくは混入を回避することが望まれている。
【０００３】
したがって、試料若しくは試料を処理する際に使用する液体をスライドグラス若しくはプレート上の特定の領域に閉じ込めておく手段をスライドグラスが有することが有利である。このことは、一つ若しくは複数の窪み若しくは「凹部」を有するスライドグラス若しくはプレートを創り出すことによって以前に達成されている。これに対して、物理的な障壁若しくは疎水性の材料を境界を設ける様にスライドグラスの表面に塗布することにより、プレート上に塗布された液体を境界で囲まれた領域内に閉じこめることもできる。そのような境界は、テフロン、塗料、ワックス、パラフィン、エポキシ樹脂の皮膜、または他の樹脂材料、または塗料を含む。これらの材料はそれぞれ、ガラス表面より上方にある距離、例えばテフロン層では一般的に約０．００２５４〜約０．００６３５センチメートル（約０.００１〜約０.００２５インチ）の高さを有して延在する盛り上がった境界を生じさせる厚みを有した境界に帰結する。これらの盛り上がった領域は一般的に不透明であり、その結果スライドグラスの透明性が失なわれる。これらの盛り上がった境界が液体の閉じ込めについてはいくらか有効であるという事実にもかかわらず、ガラス若しくはプレートの透明度を保ちながらその上に液体を閉じこめることができるスライドグラス若しくはプレートに対する必要性が存在し続けている。本発明の目的は、そのようなスライドグラスを提供することにある。
【０００４】
［発明の要約］
本発明は、液体若しくは液体試料の移動を妨げるための封じ込め境界であって、実質的に透明であるとともにスライドグラス若しくはプレートの表面と実質的に同一平面であり、かつスライドグラスまたはプレート表面の一部のみを覆う境界を有した顕微鏡スライドグラス若しくは診断用プレートの様な分析用プレートを意図している。
【０００５】
［発明の詳細な説明］
本発明は、液体若しくは液体試料の移動を妨げるための封じ込め境界であって、実質的に透明であるとともに、スライドグラス若しくはプレートの表面と実質的に同一平面であり、かつスライドグラスまたはプレート表面の一部のみを覆う境界を有した顕微鏡スライドグラス若しくは診断用プレートの様な分析用プレートを意図している。
【０００６】
本願明細書で用いる「分析用プレート」という用語は、例えば試料の顕微鏡分析や診断分析若しくは比較に用いられる顕微鏡スライドグラスおよび診断用プレートの様なタイプのプレートを言う。分析用プレートは、一般的に澄んだガラス若しくはプラスチックから生成されるが、セラミック材料から形成することもできる。本願明細書で用いられるときに、「プレート」および「スライドグラス」という用語は互換性を有することが意図される。
【０００７】
ここで図１Ａおよび図１Ｂを参照すると、全体を表す参照符号１０を有したガラス製の顕微鏡スライドグラスが示されている。スライドグラス１０は、当業者にとって周知である普通の長さ、幅および厚さを有している。スライドグラス１０は、上側表面１２および下側表面１４を有している。上側表面１２の一部に配置されたものは液体封じ込め境界１６であり、図１Ａの実施例においては長方形状の形状を有している。本願明細書で用いられる「液体封じ込め境界」若しくは「封じ込め境界」という用語は、水性若しくは非水性の液体がそれを横断して通過することを妨げる透明な境界を言う。封じ込め境界１６は、スライドグラス１０の上側表面１２の封じ込め領域１８を囲んでいる。封じ込め境界１６は、封じ込め領域１８に対して液体障壁を形成する。液体若しくは液体試料（図示せず）が分析のためにスライドグラス１０の封じ込め領域１８上に配置されると、封じ込め境界１６は液体若しくは液体試料が広がり、封じ込め領域１８から漏出しまたは移動することを防止して、試料をスライドグラス１０上の区別された閉じ込め位置に保持する。本願明細書で用いられる「液体若しくは液体試料」という用語は、スライドグラス上に局所化されることが望まれる液体材料若しくは液体生物学的試料（例えば血液、尿、血漿または髄液）を言うことが意図される。
【０００８】
封じ込め境界１６を形成するために用いられるコーティング材料は、スライドグラス１０に塗布されたときに好ましくは透明であり若しくは澄んでいる材料から成るが、スライドグラス上の位置を示すために色を有しても良いし、当業者によってスライドグラス１０の下側表面１４および／または上側表面１２上に印刷された、上側表面１２上の液体封じ込め境界１６の位置を表す情報（線または番号または記号）を有していても良い。封じ込め境界１６は乾燥すると分子層を形成し、したがってスライドグラス１０の上側表面１２に対して実質的に同一平面（レベル）である。封じ込め境界１６はしたがって上側表面１２から上方に肉眼で見える程度に盛り上がることはない。実際、封じ込め境界１６は、好ましくは約０．００００２５４センチメートル（約０．００００１インチ）未満の厚みを有する。コーティングがスライドグラスに塗布され、それによって封じ込め境界が形成され、かつスライドグラスが乾燥すると、スライドグラスは磨かれ若しくは（例えばキシレン、アルコール、またはアセトンまたは研究所で用いられる一般的な他の溶媒によって）化学的に処理されて封じ込め境界が澄んで見えないようにされ、それによって境界は顕微鏡を介して見たときにスライドグラスの屈折率が変わらないようにする。
【０００９】
好ましい実施形態においては、封じ込め境界１６を形成するコーティング材料は、揮発性の溶媒に溶解する液状の防水剤化合物からなる組成物である。特に好ましい実施例において、前記組成物は、公知の方法で溶媒と混ぜ合わされたアルキルポリシロキサンおよび無機酸からなる。そのような混合物は米国特許第３，５７９，５４０号に記載されているが、その明細書はこの参照によってその全体が本願明細書に引用されたものとする。ガラス表面および官能基に対して不変に若しくは少なくとも実質的に不変に固着する本発明に基づく他のポリシロキサン、シリコンおよびシリコン流体もまた考えられるとともに公知であり、かつ商業上利用可能である。ポリシロキサン酸混合物が特に好ましいけれども、ガラス、プラスチック若しくはセラミック製のスライドグラスまたはプレートのうちの少なくとも１つの表面に固着することができるとともに、本願明細書および請求の範囲に記載されるような実質的に盛り上がらない分子層を形成し、かつ本発明における使用が適切であるいかなる材料もまた、当業者によってよく理解される。
【００１０】
コーティングは、表面に液体を塗布するための公知技術、例えばブラシをかけたり、拭ったり、スタンプ装置を用いたり、スプレーしたり若しくはスライドグラスまたはプレートに塗布するコーティング剤が充填された（ペン状の）装置を用いた（後に詳述される）塗布によって、スライドグラス１０に塗布することができる。
【００１１】
封じ込め境界１６のためのコーティング塗布の代わりの方法においては、スライドグラス１０（図示せず）の上側表面１２の一部に盛り上がった帯として付加される、シリコーンゴムのような除去可能な材料の盛り上がった層を分析用スライドグラスに設けることができる。処理のための液体若しくは液体試料を塗布する前に、盛り上がったシリコーンの帯をスライドグラス１０の上側表面１２から剥がすと、本発明による封じ込め境界１６を含む残余のコーティングが残る。盛り上がったシリコーンゴムの帯が剥がされて封じ込め境界１６が残った後に、分析用プレートは本発明に基づいて用いられる。
【００１２】
本発明の特徴的な他の特性は、封じ込め境界１６を形成するためにコーティングをスライドグラス１０に塗布するとともにコーティング材料をその上で乾燥させた後には、封じ込め境界１６が摩耗および化学的除去および物理的な除去、例えば洗ったり、こすったり、酸、アルカリ、有機溶剤および水性溶剤に対する浸漬に対して高い抵抗力を有するということである。スライドグラス１０は、したがって、その機能を失うことなく繰り返して用いることができる。
【００１３】
本発明のスライドグラス１０の封じ込め境界１６はテフロンの境界若しくは他の物理的な障壁を有する従来技術のスライドグラスからさらに区別される。すなわち、そのような従来技術のスライドグラスの表面は、テフロンコーティングがそのスライドグラスに（例えば、接着剤を用いて）固着できるように前もって処理されなければならず、したがって溶剤が接着剤を溶解させるとともに、剥離および／または境界の液体封じ込めの完全性の減失による境界の有効性の減少を生じさせる。テフロン、エポキシまたは塗料のコーティングを用いるスライドグラスの境界は、本発明によるスライドグラス上の境界とは異なり、一般的に不透明であり、かつスライドグラスの表面から盛り上がっているが、本発明においてはガラスと封じ込め境界１６を構成するコーティングとの間に介在する層（例えば接着剤）がない。さらに、そのような従来技術のスライドグラスの境界は、それらの縁部に沿った試薬の非特異結合の問題があり、試料に対して干渉が生じる。その一つの例は、非特異蛍光干渉である。
【００１４】
本発明の顕微鏡スライドグラスは、その上に封じ込め境界１６を有するスライドグラス１０だけから成っているが、いくつかの実施形態において、スライドグラスはその上に書き込みをし若しくはそこにラベルを貼り付けるための別個の記録表面をさらに有することができる。図２ａおよび２ｂは、全体が参照番号１０ａによって表わされるそのようなスライドグラスを示している。スライドグラス１０ａは、スライドグラス１０ａの「霜のように白くなった」部分、（すなわち、スライドグラス１０ａのエッチングされ若しくは摩滅された部分）である記録表面２０を有している。そのようなスライドグラスの他の実施例において、記録表面２０は不透明なエポキシ若しくは塗布されたコーティングである。記録表面を形成する他の手段は、当業者にとって明らかである。図２Ａは本発明の他の実施例をさらに示しているが、全体が参照番号２２によって表わされる封じ込め境界は、スライドグラス１０ａに示された箱状のパターンを形成するのではなくて、スライドグラスの一方の縁部から他方に延在する一対の帯を構成している。図３は、封じ込め領域がスライドグラス１０ｂの上側表面１２上に完全な「箱」を形成する封じ込め境界２４である点を除いて、本質的にスライドグラス１０ａと同一であるスライドグラス１０ｂを示している。図４は、本発明の他の実施例を示し、スライドグラス１０ｃは一対の別個の封じ込め領域２８を構成する封じ込め境界２６を有している。別個の封じ込め領域２８はしたがって、一対の封じ込め領域２８を分離している封じ込め境界２６の一部３０によって混合が防止される別個の試料を封じ込めることができる。図面には具体的に示されないが、当業者によって良く理解されるように、スライドグラス１０ｃは複数の試料を保持するための２つより大きな数の複数の別個の封じ込め領域２８を備えるように作成することもできる。図５は、封じ込め領域３４を囲む一対の円形の封じ込め境界３２を有するスライドグラス１０ｄを示している。スライドグラス１０ｄの他の実施例においては、単一の円形の封じ込め境界３２を有し、または複数の円形の封じ込め境界３２を有する。図６は、横切るように延在して一対の三角形状の封じ込め領域４０を形成する対角線境界３８を有した封じ込め境界３６を備えたスライドグラス１０ｅを示している。スライドグラス１０ｅの他の実施例は、単一の三角形状の封じ込め領域４０のみを有し、または複数の封じ込め領域４０を有する。さらに、封じ込め領域の形状が本願明細書の図面に示されたものに限定されないことは、当業者によって良く理解される。封じ込め領域は、他の形状、例えば卵形、星、楕円、五角形、六角形、台形または非幾何学的で空想的な形状とすることができる。さらに、単一のスライドグラスは、例えば、一つの円形と一つの箱形、若しくは円形と箱形の組み合わせからなる、１つ以上の特別な形状の封じ込め境界をその上に有することができる。
【００１５】
上記から明らかなように、本願明細書で考慮される各スライドグラスは、スライドグラスの個別のおよび所定の部分に液体若しくは液体試料を保持するという特定の目的のために、その表面の一部のみがコーテング材料でコーティングされている。
【００１６】
本発明の他の実施例においては、本願明細書で考慮される一つ若しくは複数の顕微鏡スライドグラス若しくはプレートを、試料の顕微鏡分析において用いる他の構成要素と共にキットとして供給することができる。前記他の構成要素は、染色剤、染料、モノクローナルおよびポリクローナル抗体を含む分子生物学的試薬、および分子プローブおよびそれらの検出試薬、および他の水性および非水性の処理試薬を含むがこれらには限定されない、当業者が一般に用いる着色剤および試薬からなる。    水性および非水性の処理試薬の実例は、キシレン、トルエン、アセトン、および有機若しくは無機溶剤、およびアルコール、生物学的緩衝液、および抗体用の試薬、および分子プローブおよびそれらの検出試薬を含む。
【００１７】
上述したように、封じ込め境界はペン若しくはペン状の装置を用いて塗布できるが、その一つの例が図７に示されている。このペンは、参照番号５０によって表わされるとともに、本願明細書の他の部分に記載された液体コーティング（例えばポリシロキサン）を含んでいるリザーバ（図示せず）をその内部に有するボディー５２を備えている。ペン５０は、塗布器端部５４と、この塗布器端部５４においてコーティング材料が蒸発し若しくは乾燥することを防止するキャップ５６とを更に備えている。ペン５０またはキャップ５６は、例えばポケットに止めるための手段を有することもできる。塗布用具の端部は、ブラシ、モップ、ラバーチップ若しくは塗布用ペン等、当業者に公知の他の任意の装置とすることができる。
【００１８】
本願明細書において意図されるように、本願明細書に記載された封じ込め境界を有するユーザ固有の「境界を設けたスライドグラス」を個別に製作するために、ユーザはこのペンを用いることができる。そのような方法で塗布された境界は、先に述べたように、実質的に不変であるとともにキシレンのような有機溶剤による除去に対して抵抗性を有する。使用の際には、ユーザはポリシロキサン材料の層をスライドグラスに塗布し、乾燥を許容し、水性若しくは非水性の液体または組織学的な材料または他の生物学的試料を塗布し、および試料を分析するための公知の種々の処理ステップ（例えば、染色剤および有機溶剤による処理）を実行する。処理ステップで用いる有機溶剤による処理は、本願明細書において請求される耐久性を有した封じ込め境界に対して実質的に影響を有しない。本発明のペン塗布用具は、公知の他のペン塗布用具（例えばＰＡＰペン）とは異なる。そのような従来のペンは、摩耗若しくは擦れに対する抵抗力を有しないばかりでなく有機溶剤に対する抵抗力も有しない脂っこい若しくは油性の層、すなわち物理的に拭き取られ若しくは摩滅するとともにキシレンのようなほとんどの有機溶剤に対して抵抗力を有しない層をスライドグラスに塗布するためにのみ用いられるからである。本願明細書に記載されたペン５０を用いることによって設けられる封じ込め境界は、摩滅および有機溶媒による除去に対して抵抗力を有する。
【００１９】
ユーザは、正の電荷をスライドグラスに与えるコーティングによって処理される前に、ポリシロキサン材料をスライドグラスに塗布することを望むことができる。好ましくはポリシロキサンを塗布する前に、その上に封じ込め境界が位置することが望まれるスライドグラスの領域からそのような帯電コーティングが取り除かれる。帯電コーティングは、物理的な摩滅若しくは化学的な除去によって取り除くことができる。帯電コーティングを除去するための化学薬品（例えば有機若しくは無機の酸または塩基）は、ポリシロキサン材料を塗布する前にスライドグラスに塗布することができる。これに対して、帯電コーティングを除去するための化学薬品およびポリシロキサンは同時に塗布することができる。例えば、コーティングおよびポリシロキサンを除去するための化学薬品は、単一の調合品として一緒に塗布することができる。
【００２０】
本願明細書に記載された実例は、本発明の範囲を制限することを意図しない。
【００２１】
構造および種々の構成要素の作動、本願明細書に記載された要素および組立またはステップまたは本願明細書に記載された方法の各ステップの順序は、下記の請求の範囲において定義される本発明の範囲から離れることなく変更することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】  本発明に基づいて作成された顕微鏡スライドグラスの平面図。
【図１Ｂ】  図１Ａのスライドグラスの側面図。
【図２Ａ】  本発明に基づいて作成された他の実施例の顕微鏡スライドグラスの平面図。
【図２Ｂ】  図２Ａのスライドグラスの側面図。
【図３】  本発明に基づいて作成された他の実施例の顕微鏡スライドグラスの平面図。
【図４】  本発明に基づいて作成された他の実施例の顕微鏡スライドグラスの平面図。
【図５】  本発明に基づいて作成された他の実施例の顕微鏡スライドグラスの平面図。
【図６】  本発明に基づいて作成された他の実施例の顕微鏡スライドグラスの平面図。
【図７】  本発明に基づいて用いられるペンの平面図。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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