(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の性質を有する酸化還元酵素。
（１）作用及び基質特異性：一般式（１−ａ）、（１−ｂ）、（１−ｃ）、（１−ｃ’）、（１−ｄ）で表される化合物に作用し、一般式（２−ａ）、（２−ｂ）、（２−ｃ）、（２−ｃ’）、（２−ｄ）で表される化合物をそれぞれ生成する。
（２）基質親和性：オイゲノールまたはフェナジンメトサルフェートに対するミカエリス定数は、それぞれ1.75または0.4ミリモル濃度である。
（３）至適ｐＨ：ｐＨ５．５付近。
（４）至適温度：５０℃。
（５）安定ｐＨ範囲：３０℃、３０分間の処理では、ｐＨ５から９まで安定である。
（６）各種金属塩による影響：二価鉄、銅、銀、水銀の塩により顕著に活性が阻害される。
（７）各種阻害剤の影響：ｐ-（クロロメルクリ）安息香酸、フェニルヒドラジンで活性が阻害される。
（８）分子量：分子量10,400のαサブニユット、分子量58,200のβサブユニット各１個ずつからなる分子量68,600のヘテロダイマー。
0004309969.tif 000015
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示す。）
0004309969.tif 000016
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ3は水素原子または水酸基を示す。）
0004309969.tif 000017
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ4は水素原子またはメチル基を示し、Ｒ5は炭素数１〜１０のアルキル基またはアミノメチル基を示す。）
0004309969.tif 000018
（式中、Ｒ1およびＲ2は相互に独立して水素原子、水酸基またはメトキシ基を示すが、Ｒ1とＲ2が同時に水素原子であることはなく、Ｒ5は炭素数１〜１０のアルキル基またはアミノメチル基を示す。）
0004309969.tif 000019
【請求項２】
シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas fluorescens）に属する菌株を、オイゲノールを含む栄養培地で培養し、該菌株の菌体中に産生した酵素を採取することにより得られ、少なくとも下記の反応式Ａ、Ｂ、Ｃに示す反応を触媒する請求項１記載の酵素。
0004309969.tif 000020
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ3は水素原子または水酸基を示し、Ｒ4は水素原子またはメチル基を示し、Ｒ5は炭素数１〜１０のアルキル基またはアミノメチル基を示す。）
【請求項３】
反応式Ｃで示される反応において、Ｒ4が水素原子である場合に不斉誘起反応を触媒する酵素である請求項２に記載の酵素。
【請求項４】
シュードモナス・フルオレッセンスに属する菌株がシュードモナス・フルオレッセンスE118（FERM P-15185）である請求項１または２に記載の酵素。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項記載の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記式Ａに示す反応により、一般式（１−ａ）で表されるｐ−アリルフェノール誘導体から一般式（２−ａ）で表される３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２−プロペノール誘導体を製造する方法。
0004309969.tif 000021
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示す。）
【請求項６】
請求項１〜４のいずれか１項記載の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記式Ｂに示す反応により、一般式（１−ｂ）で表されるｐ−ヒドロキシトルエン誘導体から一般式（２−ｂ）で表されるｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド誘導体を製造する方法。
0004309969.tif 000022
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ3は水素原子または水酸基を示す。）
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか１項記載の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記式Ｃに示す反応により一般式（１−ｃ）で表されるｐ−アルキルフェノール誘導体から一般式（２−ｃ）で表されるｐ−ヒドロキシベンジルアルコール誘導体を製造する方法。
0004309969.tif 000023
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ4は水素原子またはメチル基を示し、Ｒ5は炭素数１〜１０のアルキル基またはアミノメチル基を示す。）
【請求項８】
請求項１〜４のいずれか１項記載の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記式Ｃ’に示す反応により、一般式（１−ｃ’）で表されるアルキルフェノール誘導体から一般式（２−ｃ’）で表される光学活性ヒドロキシベンジルアルコール誘導体を製造する方法。
0004309969.tif 000024
（式中、Ｒ1およびＲ2は相互に独立して水素原子、水酸基またはメトキシ基を示すが、Ｒ1とＲ2が同時に水素原子であることはなく、Ｒ5は炭素数１〜１０のアルキル基またはアミノメチル基を示す。）
【請求項９】
請求項１〜４のいずれか１項記載の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記式Ｄに示す反応により一般式（１−ｄ）で表される化合物から一般式（２−ｄ）で表される化合物を製造する方法。
0004309969.tif 000025
【発明の詳細な説明】
〔技術分野〕
本発明は、シュードモナス・フルオレッセンス属に属する菌株の菌体から得られ、ｐ−ヒドロキシトルエン誘導体、ｐ−アルキルフェノール誘導体等の基質を酸化する反応を触媒する新規な酵素、及び該酵素を用いて、該基質から３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２−プロペノール誘導体、ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド誘導体、ｐ−アルキルフェノール誘導体、光学活性Ｓ（-）-１−（４−ヒドロキシフェニル）アルコール誘導体等を製造する方法に関する。
〔従来の技術〕
水および電子受容体の存在下で、オイゲノールに代表されるｐ−アリルフェノール誘導体等の基質のα位の二重結合を、隣に移動させ、このα位に水酸基を付加させる反応を触媒する酸化還元酵素は報告された例がなく、このような酵素を用いたコニフェリルアルコールに代表される３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２−プロペノール誘導体の製造法はいまだ知られていない。さらに、このような酵素の触媒する様々な反応についても報告された例はない。
また、従来３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２−プロペノール誘導体の１種であるコニフェリルアルコールは、医薬品、化粧品、香料、農薬、食品添加物、飼料添加物、液晶等の原料として広範な用途が期待されている物質であり、該コニフェリルアルコールはバニリン製造工程の副生成物として製造できることが知られている。しかしこの工程でできるコニフェリルアルコールの生成量は少ないため、コニフェリルアルコールは高価となり、広範な利用が妨げられてきた。
安価なオイゲノールを微生物に作用させてバニリン関連物質を製造する試みがなされているが（特開平５−２２７９８０号公報、アグリカリチュラル・バイオロジカル・ケミストリー４１巻９２５−９２９頁（１９７７年）及び同誌４７巻２６３９−２６４０頁（１９８３年））、いずれもバニリンまたはバニリン酸は生成するものの、コニフェリルアルコールの効率的な製造には成功していない。
水および電子受容体の存在下で、ｐ−アルキルフェノール誘導体を酸化して効率よく光学活性１−（４−ヒドロキシフェニル）アルコール誘導体を生成する反応を触媒する酸化還元酵素は報告された例がない。
光学活性１−（４−ヒドロキシフェニル）アルコール誘導体は、医薬品、化粧品、香料、農薬、液晶等の合成原料として広範な用途が期待されている物質である。特に血管拡張剤のキラル・シントンとして用いられる。
〔発明の開示〕
本発明が解決しようとする課題は、水及び電子受容体の存在下で、オイゲノール等の基質のα位の二重結合を隣に移動させ、このα位に水酸基を付加させる反応を触媒する新規な酸化還元酵素、および該酵素を用いてコニフェリルアルコールをはじめとする有用な化合物を効率よく製造する方法を提供することである。さらに、該酵素が触媒する様々な有機反応を利用して３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２−プロペノール誘導体、ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド誘導体、光学活性１−（４−ヒドロキシフェニル）アルコール誘導体等の化合物を製造する方法を提供することである。
本発明は以下の性質を有する酸化還元酵素を提供するものである。
（１）作用：水の存在下で、オイゲノールのα位の二重結合を隣に移動させ、α位に水酸基を付加することによってコニフェリルアルコールを生成する。
（２）基質特異性：一般式（１−ａ）、（１−ｂ）、（１−ｃ）、（１−ｃ’）、（１−ｄ）で表される化合物に作用し、一般式（２−ａ）、（２−ｂ）、（２−ｃ）、（２−ｃ’）、（２−ｄ）で表される化合物をそれぞれ生成する。
（３）基質親和性：オイゲノールまたはフェナジンメトサルフェートに対するミカエリス定数は、それぞれ1.75または0.4ミリモル濃度である。
（４）至適ｐＨ：ｐＨ５．５付近。
（５）至適温度：５０℃。
（６）安定ｐＨ範囲：３０℃、３０分間の処理では、ｐＨ５から９まで安定である。
（７）各種金属塩による影響：二価鉄、銅、銀、水銀の塩により顕著に活性が阻害される。
（８）各種阻害剤の影響：ｐ-（クロロメルクリ）安息香酸、フェニルヒドラジンで活性が阻害される。
（９）分子量：分子量10,400のαサブユニット、分子量58,200のβサブユニット各１個ずつからなる分子量68,600のヘテロダイマー。
本発明はさらに以下の性質を有する酸化還元酵素を提供するものである。
シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas fluorescens）に属する菌株をオイゲノールを含む栄養培地で培養し、該菌株の菌体中に産生した酵素を採取することにより得られ、少なくとも下記の反応式Ａ、Ｂ、Ｃに示す反応を触媒する酵素。
0004309969.tif 000002
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ3は水素原子または水酸基を示し、Ｒ4は水素原子またはメチル基を示し、Ｒ5は炭素数１〜１０のアルキル基またはアミノメチル基を示す。）
本発明の好ましい酵素は、反応式Ｃで示される反応において、Ｒ4が水素原子である場合に不斉誘起反応を触媒する酵素である。
本発明の好ましい酵素は、シュードモナス・フルオレッセンスに属する菌株がシュードモナス・フルオレッセンスＥ118（FERM P-15185）である上記の酵素である。
本発明はまた、上述の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記反応式Ａに示す反応により、一般式（１−ａ）で表されるｐ−アリルフェノール誘導体から、一般式（２−ａ）で表される３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）−２−プロペノール誘導体を製造する方法を提供するものである。
0004309969.tif 000003
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示す。）
本発明はまた、上述の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記反応式Ｂに示す反応により、一般式（１−ｂ）で表されるｐ−ヒドロキシトルエン誘導体から、一般式（２−ｂ）で表されるｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド誘導体を製造する方法を提供するものである。
0004309969.tif 000004
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ3は水素原子または水酸基を示す。）
本発明はさらにまた、上述の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記式Ｃに示す反応により、一般式（１−ｃ）で表されるｐ−アルキルフェノール誘導体から、一般式（２−ｃ）で表されるｐ−ヒドロキシベンジルアルコール誘導体を製造する方法を提供するものである。
0004309969.tif 000005
（式中、Ｒ1は水素原子、水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ2は水酸基またはメトキシ基を示し、Ｒ4は水素原子またはメチル基を示し、Ｒ5は炭素数１〜１０のアルキル基またはアミノメチル基を示す。）
本発明はまた、上述の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記式Ｃ’に示す反応により、一般式（１−ｃ’）で表されるアルキルフェノール誘導体から一般式（２−ｃ’）で表される光学活性ヒドロキシベンジルアルコール誘導体を製造する方法を提供するものである。
0004309969.tif 000006
（式中、Ｒ1およびＲ2は相互に独立して水素原子、水酸基またはメトキシ基を示すが、Ｒ1とＲ2が同時に水素原子であることはなく、Ｒ5は炭素数１〜１０のアルキル基またはアミノメチル基を示す。）
本発明はまた、上述の酵素を触媒として使用し、水および電子受容体の存在下、下記式Ｄに示す反応により、一般式（１−ｄ）で表される化合物から一般式（２−ｄ）で表される化合物を製造する方法を提供するものである。
0004309969.tif 000007
〔発明を実施するための最良の形態〕
本発明の酵素を得るには、まず、該酵素を生産する菌体であるシュードモナス・フルオレッセンスに属する菌株を、オイゲノールを含んだ培養液で好気的に培養する。培養液は、オイゲノールを含んでいて本菌が生育するものであればいかなるものでも良いが、好ましくは、オイゲノールを０．１から０．４％（ｖ／ｖ）、しょ糖０．５から３％（ｗ／ｖ）、ペプトン０．０５から０．２％（ｗ／ｖ）、硫酸マグネシウム７水塩０．０１から０．１％（ｗ／ｖ）、硫酸第一鉄７水塩０．０５から０．２％（ｗ／ｖ）、酵母エキス０．１〜１％（ｗ／ｖ）及び金属塩混液０．０５から０．２％（ｖ／ｖ）を含み、ｐＨ６．５から８．０のものが用いられる。金属塩混液は脱イオン水１Ｌ中に塩化カルシウム２水塩０．４ｇ、ほう酸０．３ｇ，硫酸銅５水塩０．０４ｇ，よう化カリウム０．１ｇ，硫酸マンガン７水塩０．４ｇ，モリブデン酸ナトリウム２水塩０．２ｇを溶かした溶液からなるものが好ましい。培養は２０〜３５℃で１８ないし７２時間通気撹拌培養する。得られた培養液を遠心分離またはろ過などして得られた菌体を１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁し、この菌体懸濁液を超音波破砕機、もしくは菌体破砕機にかけて菌体を破砕し、粗酵素液を得る。
得られた粗酵素液を硫酸アンモニウムによる塩析処理、および／またはイオン交換、ゲル濾過、疎水性などの各種のカラムクロマトグラフィー法で処理し、高純度の酵素標品を得る。こうして、ＳＤＳポリアクリルアミド・ゲル電気泳動で単一と認められる精製酵素標品が得られる。この酵素（本酵素）の酵素化学的諸性質を以下に述べる。
〔本酵素の酵素化学的性質〕
（１）作用：水の存在下で、オイゲノールのα位の二重結合を隣に移動させ、α位に水酸基を付加することによってコニフェリルアルコールを生成する作用を持つ。
（２）基質特異性：反応式Ａ〜Ｄに示すように一般式（１−ａ）、（１−ｂ）、（１−ｃ）、（１−ｃ’）、（１−ｄ）で表される化合物に作用し、一般式（２−ａ）、（２−ｂ）、（２−ｃ）、（２−ｃ’）、（２−ｄ）で表される化合物をそれぞれ生成する。電子受容体としてチトクロームＣ、2,6-ジクロロインドフェノール、フェナジンメトサルフェートなどが用いられる。
（３）基質親和性：オイゲノールまたはフェナジンメトサルフェートに対するミカエリス定数は、それぞれ1.75または0.4ミリモル濃度である。
（４）至適ｐＨ：ｐＨ５．５付近。
（５）至適温度：５０℃。
（６）安定ｐＨ範囲：３０℃、３０分間の処理では、ｐＨ５から９まで安定である。
（７）各種金属塩による影響：表１に示すように、二価鉄、銅、銀、水銀の塩により顕著に活性が阻害される。
0004309969.tif 000008
（８）各種阻害剤の影響：表２に示すように、ｐ-（クロロメルクリ）安息香酸、フェニルヒドラジンで活性が阻害される。
0004309969.tif 000009
0004309969.tif 000010
（９）分子量：ＳＤＳ−ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動により59,000、超遠心分析により110,000であり、同一サブユニット２個から成るダイマーであると推察されたが、ＴＯＦ−ＭＳを使用したより精密な分析の結果、分子量10,400のαサブユニット、分子量58,200のβサブユニット各１個ずつからなる分子量68,600のヘテロダイマーであることが判明した。
（１０）酵素活性の測定：
２００ミリモル濃度のオイゲノールのn-オクタン溶液５０μＬ、５０ミリモル濃度のフェナジンメトサルフェート水溶液２００μＬ、１モル濃度のリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）５０μＬ、および脱イオン水６７５μＬからなる酵素活性測定用反応液の入った試験管に、酵素液２５μＬを加えて３０℃で２０分間振盪し、メタノールを１ｍＬ加えることで反応を停止させ、ついで得られた反応液を遠心分離し、上清を高速液体クロマトグラフィーにかけて、コニフェリルアルコールのピークを検出し定量する。
高速液体クロマトグラフィーは、サイズが４．６×１５０ｍｍのＯＤＳ  Ｃ１８カラムを用い、メタノール：脱イオン水：酢酸＝４５：５２：３の成分比（容積比）の溶出液を毎分１．０ｍＬの流速で流して展開し、２８０ｎｍでの吸光度を検出する。標準のコニフェリルアルコールの保持時間である3.6分付近のピークをコニフェリルアルコールとする。
本酵素の活性の１単位は１分間に１μｍｏｌのコニフェリルアルコールを生成させる酵素活性のことである。
本酵素を用いる一般式（２−ａ）で表される化合物の製造法をコニフェリルアルコールの製造法を例として説明する。
前記の酵素活性測定用反応液から緩衝液を除いた組成のもの（２００ミリモル濃度のオイゲノールのn-オクタン溶液５０μＬ、５０ミリモル濃度のフェナジンメトサルフェート水溶液２００μＬ、および脱イオン水６７５μＬ）を、希硫酸あるいはアンモニア水を滴下してｐＨを５から７に調節し、２５℃から５５℃の温度で１５分間から１８０分間、攪拌する。反応終了後、酢酸エチル、クロロホルム、塩化メチレンもしくはエチルエーテル等の有機溶媒で反応液からコニフェリルアルコールを抽出し、シリカゲルクロマトグラフィー、逆相液体クロマトグラフィー、もしくは真空蒸留等の手段で精製し、必要ならば活性炭で脱色し、真空乾燥して無色のコニフェリルアルコール粉末を得る。
同様にして、一般式（１−ａ）で表される化合物から一般式（２−ａ）で表される化合物を、一般式（１−ｂ）で表される化合物から一般式（２−ｂ）で表される化合物を、一般式（１−ｃ）で表される化合物から一般式（２−ｃ）で表される化合物を、一般式（１−ｃ’）で表される化合物から一般式（２−ｃ’）で表される化合物を、一般式（１−ｄ）で表される化合物から一般式（２−ｄ）で表される化合物をそれぞれ製造することができる。また、一般式（１−ｃ）においてＲ4が水素原子である場合は、不斉誘起反応となり、光学活性化合物を生成する。
本発明により上記各化合物を製造する際に使用される水は、溶媒および酵素原子供給源としてだけでなく、酵素反応における電子供与体として作用する。
本発明において、水および電子受容体の使用量は、それぞれ反応させる基質のモル数と等しいかそれ以上のモル数である。通常水は溶媒として使用するので大過剰で使用される。
〔実施例〕
つぎに、実施例により本発明を具体的に説明する。本発明はこれらの実施例にのみ限定されるものではない。
実施例１
シュードモナス・フルオレッセンスＥ118 FERM P-15185をオイゲノール０．１５％（ｖ／ｖ）、しょ糖１％（ｗ／ｖ）、ペプトン０．１％（ｗ／ｖ）、りん酸２カリウム０．２％（ｗ／ｖ）、硫酸マグネシウム７水塩０．０５％、酵母エキス０．０３％（ｗ／ｖ）、硫酸第一鉄７水塩０．１％（ｗ／ｖ）及び金属塩混合液０．１％（ｖ／ｖ）を含みｐＨを７．０に調整した培養液２０Ｌを、５４時間、通気撹拌培養した。金属塩混液は、脱イオン水１Ｌ中に、塩化カルシウム２水塩０．４ｇ、ほう酸０．３ｇ、硫酸銅５水塩０．０４ｇ、よう化カリウム０．１ｇ、硫酸マンガン７水塩０．４ｇ、モリブデン酸ナトリウム２水塩０．２ｇを溶かしたものを用いた。培養液を遠心分離して得られた菌体を生理食塩水で洗浄し、１０ｍＭりん酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）３００ｍｌに懸濁した。この菌体懸濁液から以下に記述するように、本酵素を抽出し精製した。表３に精製のスキームを示す。
菌体懸濁液を超音波破砕機で処理し菌体を破砕し、遠心分離して得られた上清２１４０ｍｇ（総活性２７０単位）を無細胞抽出液とした。これに硫酸アンモニウムを加えて３０から５０％（ｗ／ｖ）の硫安飽和濃度画分１３１０ｍｇ（総活性２２８単位）を得た。この画分を、ＤＥＡＥ−セファセル（ファルマシア社製品）のカラムにかけ、活性画分５８ｍｇ（総活性１１５単位）を得た。活性画分に硫酸アンモニウムを加えて４０から８０％（ｗ／ｖ）の硫安飽和濃度画分３７．２ｍｇ（総活性１０２単位）を得た。この画分を、フェニルセファローズ、ＤＥＡＥ−セファローズ、オクチルセファローズ（いずれもファルマシア社製品）のカラムに順次かけて、クロマトグラフィーを行い、最終的に、０．４ｍｇ（総活性１２．１単位）の酵素標品を得た。この標品はＳＤＳ−ポリアクリルアミド・ゲル電気泳動で単一であった。
なお、無細胞抽出液から、最終的に比活性は２０９倍上昇し、回収率は４．５％であった。
0004309969.tif 000011
実施例２
２００ミリモル濃度のオイゲノールのn-オクタン溶液５０ｍＬ、５０ミリモル濃度のフェナジンメトサルフェート水溶液２００ｍＬ及び脱イオン水７２５ｍＬの入った還流器付きの反応容器に、実施例１に準拠して作製した２回目の硫安塩析を終えた酵素液２５ｍＬ（２０単位）を加えて、希硫酸を自動的に滴下することでｐＨを５．５に維持しながら、５０℃で２時間攪拌した。反応液に酢酸エチルを８００ｍＬ加えて抽出し、得られた酢酸エチル層をロータリーエバポレーターで２０ｍＬに濃縮してシリカゲルカラムにかけた。メタノール：クロロホルム（１：１）の溶媒で流出してくる画分を集めて、室温で真空乾燥し、融解温度７４℃の無色粉末１．６ｇを得た。収率は８９％であった。この粉末をＧＣＭＳ分析にかけ、親ピークを測定したところ、１８０ｍ／ｚで、標準のコニフェリルアルコールと一致した。赤外吸収スペクトルも標準のコニフェリルアルコールと一致し、コニフェリルアルコールと同定した。
実施例３
実施例２と同様にして、表４〜５に示すように各基質から対応する生成物を製造した。各生成物はＧＣＭＳ分析、赤外吸収スペクトル分析等で同定した。光学活性はキラルセルOBカラムを用いる高速液体クロマトグラフィーで、移動相にｎ−ヘキサン：ｎ−プロパノール（９：１）を、ピークの検出には紫外線検出器および旋光度検出器を用いて行った。各基質に対する活性は、オイゲノールを基質とした場合を１００とした相対活性で示した。
0004309969.tif 000012
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実施例４
さらに本発明の酵素は、下記の反応式Ｄで示される反応にも活性を示し、実施例２と同様にして式（１−ｄ）で表される基質から式（２−ｄ）で表される化合物を製造することができた。またこの反応は不斉誘起反応であることが確認された。
0004309969.tif 000014
〔産業上の利用可能性〕
本発明は、基質のα位の二重結合の転移を伴ってこのα位に水酸基を付加させて不飽和アルコール等を製造する反応を触媒する酵素であり、かかる酵素を用いて、コニフェリルアルコールを始めとする各種の3-（p-ヒドロキシフェニル）-2-プロペノール誘導体、p-ヒドロキシベンズアルデヒド誘導体や光学活性1-（4-ヒドロキシフェニル）アルコール誘導体を効率的に製造することができる。
〔寄託された微生物への言及〕
寄託機関の名称  日本国通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所
宛て名（住所）  日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号
寄託日          平成７年９月１４日
受託番号        FERM P-15185