(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
トロキシピドを有効成分とし、ウレアーゼを阻害することによる、抗ヘリコバクター・ピロリイ用薬。
【請求項２】
トロキシピドを有効成分とする、ヘリコバクター・ピロリイウレアーゼ阻害剤。
【請求項３】
トロキシピドを有効成分とする、好中球ミエロペルオキシダーゼ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はヘリコバクター・ピロリイに由来する好中球の遊走能、活性酸素の産生、ミエロペルオキシダーゼ活性及びウレアーゼ活性などを抑制し、ヘリコバクター・ピロリイが発症又は再発に関与する各種疾病、例えば消化管粘膜障害、高アンモニア血症、肝炎、肝硬変、胃癌、肝癌を予防あるいは治療する、トロキシピドを有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリイ用薬に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
抗ヘリコバクター・ピロリイ用薬としては、除菌の為の抗生物質などの抗菌剤、次硝酸ビスマス、ニトロイミダゾール系薬物、プロトンポンプ阻害剤あるいはプロトンポンプ阻害剤と抗菌剤との併用、さらにはプロトンポンプ阻害剤、抗菌剤及びニトロイミダゾール系薬物等との併用がある。しかし、これら併用療法は副作用や煩雑な服用方法のためコンプライアンスが悪く、また、抗菌剤による耐性菌の出現も示唆されている［医学のあゆみ、１７９巻，１号，１０３〜１０７ページ（１９９６）］等の問題点を含んでいる。
【０００３】
粘膜防御因子増強剤のトロキシピドは胃粘膜血流量増加作用、胃粘膜代謝賦活作用、胃粘膜構成成分正常化作用、胃粘膜内プロスタグランジン量増加作用等を有していることが知られており、既に胃炎や胃潰瘍の患者に医薬品として使用されている。しかしながら、トロキシピドが抗ヘリコバクター・ピロリイ作用を有することは知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
粘液層や粘膜上皮細胞に存在するヘリコバクター・ピロリイは粘膜上皮細胞からインターロイキン−８などのサイトカインを遊離させ、炎症細胞、特に好中球の遊走及び活性化を引き起こし、その結果活性酸素を産生する。また、ヘリコバクター・ピロリイ自身が有するウレアーゼによリアンモニアを産生する。さらにこれらの活性酸素とアンモニアによってよリ細胞障害性の高いモノクロラミンを生成し、これらが種々の病態を惹起する。したがって、ヘリコバクター・ピロリイを除菌すると同時にウレアーゼ活性や好中球の遊走、活性化を抑制することが望まれる。
【０００５】
本発明が解決しようとする課題は、ヘリコバクター・ピロリイが発症又は再発に関与する各種疾病、例えば消化管粘膜障害、高アンモニア血症、肝炎、肝硬変、胃癌、肝癌を予防あるいは治療する抗ヘリコバクター・ピロリイ用薬を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らが鋭意研究を進めたところ、トロキシピドに好中球の遊走能、活性酸素の産生、ミエロペルオキシダーゼ活性及びウレアーゼ活性などを抑制する作用があることを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明はトロキシピドを有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリイ用薬に関するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
トロキシピド［化学名：３−（３，４，５−トリメトキシベンズアミド）ピペリジン］を有効成分とする本発明の抗ヘリコバクター・ピロリイ用薬は、ヘリコバクター・ピロリイの持つ好中球の遊走、活性酸素の産生、ウレアーゼ活性、ミエロペルオキシダーゼ活性等を抑制する作用を併せ持った薬剤である。したがって、ヘリコバクター・ピロリイの生育を阻止すると同時に、各種疾病の成因を併せて抑制する。
【０００９】
【実施例】
以下に実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
【００１０】
実施例１
トロキシピドによるウレアーゼ活性抑制作用
ウレアーゼによってヘリコバクター・ピロリイがアンモニアを産生し消化管粘膜障害を引き起こす。したがって、ウレアーゼ活性を抑制することによって、ヘリコバクター・ピロリイのアンモニア産生を抑制することができる。そこでトロキシピドがヘリコバクター・ピロリイのウレアーゼ活性を抑制するか否かを検討した。臨床分離株で得られたヘリコバクター・ピロリイを１０％馬脱繊維血含有ブルセラ寒天培地で３日間培養した後、さらに２．５％仔牛胎児血清含有ブルセラ培地で２日間培養し、遠心分離して得た菌体に、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム及び１ｍＭ２−メルカプトエタノール含有リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を加えて超音波処理して菌体を破壊し、菌体内抽出液を得た。これにリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）で希釈したトロキシピドの１Ｎ塩酸溶液（１×１０-6、１×１０-5、１×１０-4Ｍ）におけるウレアーゼ活性を、インドフェノール法により測定した。なお、陽性対照薬にはヒドロキサム酸Ｌ−アルギニン塩酸塩を用いて行った。
【００１１】
その結果トロキシピドは１×１０-6から１×１０-4Ｍの濃度において濃度に依存して、ウレアーゼ活性を抑制し、５０％抑制濃度値は５．６×１０-5Ｍであった。ウレアーゼ活性値の測定結果を図１に示す。
【００１２】
実施例２
トロキシピドによる好中球遊走能抑制作用
ヘリコバクター・ピロリイやインターロイキン−８による好中球遊走能の亢進は活性酸素の産生を介して粘膜障害を引き起こす。したがって、好中球遊走能を抑制することによって粘膜障害を抑制することができる。そこでトロキシピドが好中球遊走能を抑制するか否かを検討した。モルモットに２％カゼインナトリウム液を腹腔内投与して得た好中球浮遊液を用い、N-formyl-Met-Leu-Phe（ｆＭＬＰ）の１×１０-8Ｍ、recombinant human interleukin-8（ｒｈ−ＩＬ−８）の１×１０-8ｇ／ｍｌ、platelet activating factor（ＰＡＦ）の１×１０-8Ｍ及びハンクス液で抽出したヘリコバクター・ピロリイ菌体内抽出液の１／９希釈液にて好中球遊走能の亢進を誘引し、これにトロキシピドの溶液を添加して、Ｂｏｙｄｅｎの改良法により好中球の遊走を測定した。
【００１３】
その結果トロキシピドは１×１０-8から１×１０-4Ｍの濃度において濃度に依存して好中球の遊走を抑制した。トロキシピドの１×１０-5Ｍにおける抑制率はｆＭＬＰに対して２３．０±２．８％、ｒｈ―ＩＬ−８に対して２９．６±３．５％、ＰＡＦに対して４９．０±７．８％、ヘリコバクター・ピロリイ菌体内抽出液に対して４２．７±１０．２％であった。ｆＭＬＰに対する好中球遊走の測定結果を図２に、ｒｈ―ＩＬ−８に対する測定結果を図３に、ＰＡＦに対する測定結果を図４に、ヘリコバクター・ピロリイ菌体内抽出液に対する測定結果を図５に示す。
【００１４】
実施例３
トロキシピドによる活性酸素の産生に対する抑制作用
モルモット好中球浮遊液を用い、ｒｈ−ＩＬ−８の１×１０-8ｇ／ｍｌ及びハンクス液で抽出したヘリコバクター・ピロリイ菌体内抽出液の１／１８０希釈液で活性酸素を産生させ、これにトロキシピドの溶液を添加して化学発光法（ＭＣＬＡ）により、活性酸素の量を測定した。なお、陽性対照薬にはスーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）を用いた。
【００１５】
その結果トロキシピドは１×１０-4から１×１０-3Ｍで活性酸素の産生を抑制した。トロキシピドの１×１０-4Ｍにおける抑制率はｒｈ−ＩＬ−８に対して４１．７±２．９％、ヘリコバクター・ピロリイ菌体内抽出液に対して２１．５±１２．０％であった。ｒｈ−ＩＬ−８に対する測定結果を図６に、ヘリコバクター・ピロリイ菌体内抽出液に対する測定結果を図７示す。
【００１６】
実施例４
トロキシピドによるミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性に対する抑制効果
好中球は脱顆粒によりＭＰＯを放出し、そのＭＰＯはＨ2Ｏ2ラジカルから細胞毒性の強い次亜塩素酸ラジカルを生成する。この条件下でアンモニアが存在すると組織障害作用の強いモノクロラミンが生成する。したがってＭＰＯ活性を抑制することによって、粘膜障害を抑制することができる。そこでヒト喀痰ＭＰＯ及びモルモット好中球に０．５％ヘキサデシルトリメトキシアンモニウムブロマイド溶液を加え、これを超音波処理して抽出したＭＰＯを用い、これらにトロキシピドの溶液を添加して、Ｋｒａｗｉｓらの方法によりＭＰＯ活生を測定した。なお、陽性対照薬としてカタラーゼを用いた。
【００１７】
その結果トロキシピドは１×１０-6から１×１０-4Ｍの濃度において濃度依存的にＭＰＯ活性を抑制し、１×１０-5Ｍにおける抑制率はヒト喀痰ＭＰＯに対して３４．９±５．５％、モルモットＭＰＯに対して２１．６±６．３％であった。ヒト喀痰におけるＭＰＯ活性の測定結果を図８に、モルモット好中球浮遊液におけるＭＰＯ活性の測定結果を図９に示す。
【００１８】
【発明の効果】
本発明の抗ヘリコバクター・ピロリイ用薬によれば、ヘリコバクター・ピロリイ感染に起因する各種疾病には自ら産生するウレアーゼ活性により生成するアンモニアが深く関与しており、このウレアーゼ活性を抑制することにより、菌の生存に必要なアンモニアの産生を抑制して、菌の生育やアンモニアによる胃粘膜障害の発症あるいは再発する疾患を予防あるいは抑制する効果を示す。さらに、好中球の遊走能の抑制、活性酸素の産生抑制及びＭＰＯ活性の抑制などの作用を持つことから、胃炎及び胃潰瘍等の治療及び再発防止の目的の他、高アンモニア血症、肝炎、肝硬変、胃癌、肝癌等の予防又は治療の目的で長期間安全に投与できる薬剤を提供することができる。また、別な抗菌剤等を併用しなくて済むことが期待できることから、副作用の軽減、医療費の抑制及び患者へのコンプライアンスも向上する。
【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例１で得られたトロキシピド、陽性対照薬及び対照のウレアーゼ活性の測定結果を示すグラフ。
【図２】  実施例２で得られたｆＭＬＰに対するトロキシピド及び対照の好中球遊走の測定結果を示すグラフ。
【図３】  実施例２で得られたｒｈ―ＩＬ−８に対するトロキシピド及び対照の好中球遊走の測定結果を示すグラフ。
【図４】  実施例２で得られたＰＡＦに対するトロキシピド及び対照の好中球遊走の測定結果を示すグラフ。
【図５】  実施例２で得られたヘリコバクター・ピロリイ菌体内抽出液に対するトロキシピド及び対照の好中球遊走の測定結果を示すグラフ。
【図６】  実施例３で得られたｒｈ―ＩＬ−８に対するトロキシピド、陽性対照薬及び対照の活性酸素量の測定結果を示すグラフ。
【図７】  実施例３で得られたヘリコバクター・ピロリイ菌体内抽出液に対するトロキシピド、陽性対照薬及び対照の活性酸素量の測定結果を示すグラフ。
【図８】  実施例４で得られたトロキシピド、陽性対照薬及び対照のヒト喀痰由来ＭＰＯ活性の測定結果を示すグラフ。
【図９】  実施例４で得られたトロキシピド、陽性対照薬及び対照のモルモット好中球由来ＭＰＯ活性の測定結果。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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