(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(１)
【化１】
0004373510.tif 000004
で表される化合物。
【請求項２】
式(２)
【化２】
0004373510.tif 000005
で表される化合物。
【請求項３】
それぞれ式(１)および式(２)で表される１８β,１９β−ジアセチルオキシ−１８α,１９α−エポキシ−３,１３（１６）,１４−クレロダトリエン−２−オン（エスクレンチンＡ）および／または１８β,１９β−ジアセチルオキシ−１８α,１９α−エポキシ−３,１２,１４−クレロダトリエン−２β−イソバレリルオキシ−６β,７α−ジオール（エスクレンチンＢ）をサミダセア（Samydaceae）科に属する植物から単離する方法であって、該植物材料対有機溶媒の重量部比率１：２〜１０でその植物材料をｐＨ５〜８において有機溶媒で抽出し、その溶媒抽出物から式(１)および／または式(２)の化合物を回収することからなる前記方法。
【請求項４】
サミダセア（Samydaceae）科に属する植物が、カセアリア・エスクレンタ（Casearia esculenta）である請求項３記載の方法。
【請求項５】
植物材料が小枝を含有する請求項３または４記載の方法。
【請求項６】
抽出を石油エーテル、次にジクロロメタンで行う請求項３〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
抽出を、植物材料対有機溶媒の重量部比率１：５で行う請求項３〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
抽出をｐＨ７で行う請求項３〜７のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明はサミダセア（Samydaceae）科に属する植物、特にカセアリア・エスクレンタ（Casearia esculenta）から得られる化合物である１８β,１９β−ジアセチルオキシ−１８α,１９α−エポキシ−３,１３（１６）,１４−クレロダトリエン−２−オン（エスクレンチンＡ）および１８β，１９β−ジアセチルオキシ−１８α,１９α−エポキシ−３,１２,１４−クレロダトリエン−２β−イソバレリルオキシ−６β,７α−ジオール（エスクレンチンＢ）、それらの製造方法並びに医薬の製造におけるそれらの使用に関する。
【０００２】
リウマチ様関節炎は人口の約１％が罹患している慢性炎症性変性疾患である。例えばメトトレキサート、スルファサラジン、金塩またはシクロスポリンのような疾患緩和剤による薬物療法は、関節破壊を減少させかつその疾患を遅らせることが分かっている。しかし、今日の疾患緩和剤全てには副作用があり、どの剤も疾患が非常に攻撃的である場合にはその疾患を完全に停止させたり、または十分に遅らせたりすることはできない。例えば１Ｌ−１およびＴＮＦ−αのようなサイトカインは炎症過程の主要なメディエーターであり、リウマチ様関節炎患者の滑液中に検出されている。サイトカインの形成または放出を阻害する化合物は、その炎症過程の中断に主要な役割を果たし、ついにはリウマチ様関節炎の長期間にわたる緩解をもたらすことがある。
【０００３】
エスクレンチンＡおよびエスクレンチンＢはサイトカイン阻害剤であるということができる。それらはジテルペン群に属し、下記の式(１)および式(２)で表される。
【０００４】
【化３】
0004373510.tif 000002
【０００５】
エスクレンチンＡおよびエスクレンチンＢは、化学的にはそれぞれ１８β,１９β−ジアセチルオキシ−１８α,１９α−エポキシ−３,１３（１６）,１４−クレロダトリエン−２−オンおよび１８β,１９β−ジアセチルオキシ−１８α,１９α−エポキシ−３,１２,１４−クレロダトリエン−２β−イソバレリルオキシ−６β,７α−ジオールとして記載され得る。式(１)および式(２)の化合物の相対立体化学は、結合定数および核オーバーハウザー効果（ＮＯＥ）の研究に基づいて立証されている。分子式のサーチキーを使用するケミカルアブストラクト文献サーチによれば、式(１)および式(２)の化合物の双方は新規であることが立証された。
【０００６】
サミダセア科は３種の属にわたって分布された約１５０の植物種からなる。これらの中で、カセアリア種のいくつかおよびホマリウム・ゼイラニカム（Homalium zeylanicum）はインドで生長していることが見いだされた。これらの属の植物種の形態学的詳細および分布は文献（J.H.Hooker, “Flora of British India", Vol. II, p.590-598）に記載されている。
【０００７】
本発明の一つの特徴によれば、前記の式(１)および式(２)の化合物並びにそれらの医薬的に許容し得る誘導体が提供される。
本発明者等によれば、式(１)および式(２)の化合物はサミダセア科に属する植物、特にカセアリア・エスクレンタから溶媒抽出され得ることが見いだされた。したがって、本発明の一つの目的はサミダセア科に属する植物、特にカセアリア・エスクレンタからの式(１)および式(２)の新規化合物の単離方法を提供することである。
【０００８】
したがって、本発明の第２の特徴によれば、サミダセア科に属する植物、特にカセアリア・エスクレンタから、それぞれ式(１)および式(２)で表される薬理学的に活性な新規の１８β,１９β−ジアセチルオキシ−１８α,１９α−エポキシ−３,１３（１６）,１４−クレロダトリエン−２−オン（エスクレンチンＡ）および／または１８β,１９β−ジアセチルオキシ−１８α,１９α−エポキシ−３,１２,１４−クレロダトリエン−２β−イソバレリルオキシ−６β,７α−ジオール（エスクレンチンＢ）並びにそれらの医薬的に許容し得る誘導体を製造する方法を提供することである。その方法は該植物材料対有機溶媒の重量部比率１：２〜１０でその植物材料をｐＨ５〜８において有機溶媒で抽出し、その溶媒抽出物から式(１)および／または式(２)の化合物を回収し、次いで場合により、式(１)および／または式(２)の化合物をその医薬的に許容し得る誘導体に変換することからなる。
【０００９】
本発明のさらに別の特徴としては、式(１)および／または式(２)の化合物を薬学的に許容し得る補助剤および／または賦形剤とともに含有する医薬組成物、および慢性炎症またはガンの治療用医薬の製造のための式(１)または式(２)の化合物の使用を挙げることができる。
【００１０】
植物材料としては植物の種々の部分、すなわち葉、小枝、茎樹皮、茎木部、根樹皮および根木部、好ましくは小枝を挙げることができる。カセアリア・エスクレンタの小枝はインド国ムンバイ（Mumbai,India）近辺で収集された。この種の保証された試料は、ヘキストマリオンルセル社のリサーチセンターの植物標本室（the Herbarium of Research Centre, Hoechst Marion Roussel Limited, Mulund(W), Mumbai-400080, India）に保存されている。
【００１１】
本発明方法で使用する有機溶媒は、例えば石油エーテル（ヘキサン）、酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルムまたは低級アルコール例えばメタノール、エタノール、イソプロパノールもしくはブタノールである。抽出は石油エーテル次にジクロロメタンで行うのが好ましい。抽出は植物材料対有機溶媒の重量部比率１：５で行うのが好ましい。抽出はｐＨ７で行うのが好ましい。
【００１２】
本発明の活性物質、エスクレンチンＡおよびエスクレンチンＢは、例えば以下の技法、すなわち標準の相クロマトグラフィー（固定相としてアルミナまたはシリカゲルを使用し、そして溶離剤として例えば石油エーテル、酢酸エチル、クロロホルム、メタノールまたはこれらの組み合わせを使用する）、逆相クロマトグラフィー〔固定相として逆相シリカゲル例えばＲＰ−１８とも称されるジメチルオクタデシルシリルシリカゲルまたはＲＰ−８とも称されるジメチルオクチルシリルシリカゲルを使用し、そして溶離剤として例えば水、バッファーすなわちリン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩（ｐＨ２〜８）および有機溶媒例えばメタノール、アセトニトリルまたはアセトンまたはこれら溶媒の組み合わせを使用する〕、ゲル透過クロマトグラフィー〔溶媒例えばメタノール、クロロホルムまたは酢酸エチルまたはそれらの組み合わせ中で樹脂例えばSephadex LH-20（Pharmacia Chemical Industries, Sweden）、TSKgel Toyopearl HW（TosoHass, Tosoh Corporation, Japan）を、または水中でSephadex G-10およびG-25を使用する〕のいずれかを用いる分別により、または例えば水およびクロロホルムのような２種以上の溶媒からなる二相溶離剤を使用する向流クロマトグラフィーにより抽出物から回収することができる。これらの技法は繰り返し使用してもよいし、または相異なる技法の組み合わせを使用してもよい。好ましい方法は逆相変性シリカゲル（ＲＰ−18）次にシリカゲルでのクロマトグラフィーである。
【００１３】
エスクレンチンＡおよびエスクレンチンＢは経口、筋肉内または静脈内投与され得る。エスクレンチンＡおよびエスクレンチンＢを活性物質として含有する医薬もまた本発明の課題である。該医薬はこれらの新規化合物を１種以上の薬理学的に許容し得る補助剤および／または賦形剤例えば充填剤、乳化剤、潤滑剤、遮蔽用香料、着色剤またはバッファー物質と混合し、次いで適当な医薬形態例えば錠剤、コーティング錠剤、カプセル剤または非経口用の懸濁液もしくは溶液に変換することにより調製され得る。
【００１４】
補助剤および／または賦形剤の例としてはトラガカント、ラクトース、タルク、寒天、ポリグリコール、エアタノールおよび水を挙げることができる。また、活性物質をそのまま、賦形剤または希釈剤なしで、適当な剤形例えばカプセル剤として投与することも可能である。
【００１５】
式(１)および式(２)の化合物は、それらの医薬的に許容し得る誘導体例えばエステルおよびエーテルに変換され得る。エステルは式(２)の化合物を触媒の存在下でカルボン酸と反応させることにより、または式(２)の化合物を酸クロライドのようなアシル化剤で処理することにより製造することができる。エステル製造のその他の方法は文献“Advanced Organic Synthesis, 4th Edition, J.March, John Wiley & Sons,1992”に記載されている。
【００１６】
エーテルは式(２)の化合物から、塩基性条件下でアルキル化剤と反応させることにより製造することができる。エーテル製造のその他の方法は文献“Advanced Organic Synthesis, 4th Edition, J.March, John Wiley & Sons,1992”に記載されている。
【００１７】
式(１)の化合物は、文献“Advanced Organic Synthesis, 4th Edition, J.March, John Wiley & Sons,1992”に記載のような種々の還元剤を用いて対応するアルコールに還元することができ、そのアルコールはさらに、式(２)の化合物で前述したようにしてエステルおよびエーテルに変換することができる。
以下に本発明を実施例により説明するが、それらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００１８】
実施例  １
カセアリア・エスクレンタの乾燥し、粉砕した小枝を順次、石油エーテルおよびジクロロメタンで抽出した。小枝対各々の溶媒の比率は小枝１kg：溶媒６.５リットルであった。合一したジクロロメタン抽出物を３５℃で１０〜１００mmの減圧下において濃縮して粗製材料（200ｇ）を得た。これは、アジュバント関節炎のペルパーモデル（Perper's model）〔参照：The use of standardized adjuvant arthritis assay to differetiate between antiinflammatory and immunosuppressive agents. R.J. Perper, B.Alvarez, C.Colombo and H.Schroder, Proc.Soc.Exp.Biol.Med., 137, 506(1971)〕で１日に２０mg／kgを１２日間投与すると抗関節炎活性を示すものであった。この粗製材料の１８ｇをそれぞれ６ｇずつ３個に別々に分けて逆相シリカゲル（ＲＰ−18)（275ｇ）のカラム（高さ：７cm；直径：10.5cm）に装填した。そのカラムを真空下で順次、水中の５０％メタノール５００ml、水中の６０％、８０％および９０％の各メタノールそれぞれ１リットル並びに最後にメタノールで溶離した。流速は１５ml／分に維持した。各フラクションを２５０mlサイズで集めた。水中の８０％メタノール中で溶離した活性フラクションを合一し、３５℃で１０〜１００mmの減圧下で濃縮し、次いで凍結乾燥して富化材料８ｇを得た。
【００１９】
この富化材料６ｇをシリカゲル（200〜300メッシュ）を詰めたガラスカラム（高さ：２５cm；直径：６cm）でさらに分別して、式(１)および式(２)を有する２種の活性物質を分離した。このカラムを０.１５kg／cm3の圧力下で、石油エーテル中の２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％および７５％の酢酸エチルのそれぞれ１.５リットル並びに最後に酢酸エチルで溶離した。流速を７〜８ml／分に維持し、各フラクションを２５０mlサイズで集めた。式(１)の化合物は石油エーテル中の３０％酢酸エチル中に溶離し、一方、式(２)の化合物は石油エーテル中の４５％酢酸エチル中に溶離した。式(１)および式(２)の化合物を含有するフラクションを別々にプールし、３５℃で１０〜１００mmの減圧下において濃縮乾固して式(１)の半精製化合物（1.05ｇ）および式(２)の半精製化合物（0.745ｇ）を得た。
【００２０】
式(１)の化合物（1.05ｇ）をシリカゲルカラム（４×25cm）により、クロロホルム中酢酸エチルの段階勾配を使用してさらに精製した。すなわち、そのカラムを０.１５kg／cm3の圧力下で、クロロホルム（500ml）、クロロホルム中の１％酢酸エチル（250ml）、クロロホルム中の１.５％酢酸エチル（250ml）、クロロホルム中の２％酢酸エチル（500ml）、クロロホルム中の３％酢酸エチル（250ml）、クロロホルム中の４％酢酸エチル（500ml）およびクロロホルム中の５％酢酸エチル（500ml）で溶離した。流速は５〜６ml／分に維持した。各フラクションを５０mlサイズで集めた。２〜４％酢酸エチル中に溶離した式(１)の化合物を含有する各フラクションを合一し、３５℃で１０〜１００mmの減圧下において濃縮乾固して式(１)の化合物３４０mgを得た。最後にこれを各バッチで、石油エーテル中の１６％酢酸エチルを溶離用に用いた１mm厚さのシリカゲル被覆プレート上でのクロマトトロン（Chromatotron）により、３ml／分の流速で精製して式(１)の精製化合物（0.12ｇ）を得た。
【００２１】
式(２)の化合物（0.6ｇ）を、クロロホルム中の３％メタノールを溶離用に用いたシリカゲルカラム（高さ：25.5cm；直径：3.7cm）での中圧液体クロマトグラフィー（MPLC）によりさらに精製した。流速は２５ml／分に維持した。各フラクションを５０mlサイズで集めた。式(２)の化合物を含有する各フラクションを合一し、３５℃で１０〜１００mmの減圧下において濃縮乾固して式(２)の半精製化合物０.３９ｇを得た。最後にこれを、クロロホルム中の３％メタノールを溶離用に用いた１mm厚さのシリカゲル被覆プレート上でのクロマトトロン（Chromatotron）により、３ml／分の流速で精製して式(２)の精製化合物（0.12ｇ）を得た。
【００２２】
式(１)および式(２)の化合物の純度を、１ml／分の流速で２５分間、水中の５０％アセトニトリルから１００％アセトニトリルの勾配を用いたEurosphere 100−Ｃ18カラム（４mm×250mm）でのＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）および２２０nmでのＵＶ検出により調べた。
式(１)および式(２)で表されるエスクレンチンＡおよびエスクレンチンＢの物理化学的性質は、下記の表１に要約されているとおりである。
【００２３】
【表１】
0004373510.tif 000003
【００２４】
エスクレンチンＡおよびエスクレンチンＢは、ヒト単核細胞中で１Ｌ−１αおよびＴＮＦ−αのＬＰＳ刺激による放出に対して興味深い活性を示した。さらに、両化合物はＨｅＬａ細胞系およびＶｅｒｏ細胞系に対して細胞毒性を有することが見いだされ、それ故に抗ガン剤としても有用である可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【図１】エスクレンチンＡのＩＲスペクトルを示す。
【図２】エスクレンチンＡの 1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図３】エスクレンチンＡの 13Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】エスクレンチンＢのＩＲスペクトルを示す。
【図５】エスクレンチンＢの 1Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図６】エスクレンチンＢの 13Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す。
【図１】
0004373510.tif 000006
【図２】
0004373510.tif 000007
【図３】
0004373510.tif 000008
【図４】
0004373510.tif 000009
【図５】
0004373510.tif 000010
【図６】
0004373510.tif 000011