(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式で表されるコレステリルグルコピラノシド(I)を有効成分とし、該コレステリルグルコピラノシド(I)がα異性体であり、且つストレス潰瘍の治療剤であることを特徴とする熱ショック蛋白質誘導剤。
【化１】
0004322329.tif 000007
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、熱ショック蛋白質誘導剤、より具体的には脳神経疾患、心脈管系疾患、消化器系疾患、悪性腫瘍、感染症、臓器移植、腎不全、肝不全、網膜の紫外線障害、嚢胞性繊維症、多発性硬化症または老化の治療剤である熱ショック蛋白質誘導剤、さらに具体的には脳卒中後遺症、アルツハイマー病、虚血・再還流障害、外科手術前のプレコンヂショニング剤、ストレス潰瘍、急性膵炎、炎症性腸疾患、糖尿病、免疫賦活による悪性腫瘍治療剤、難治性感染症に対するアジュバント療法剤、拒絶抑制剤、生着率改善剤、さらには腎不全、肝不全、網膜の紫外線障害、嚢胞性繊維症、多発性硬化症または老化の等の予防・治療・改善剤に関する。
【０００２】
【発明の背景】
熱ショック蛋白質(ストレス蛋白質、Heat shock Protein、以下 HSP)は細胞の防御機構を司っており、ほ乳類を含む生物が、物理的、化学的、生理的あるいは精神心理的ストレス等の有害な環境変化を被った際に、細胞内に誘導される分子量約数万〜約100万の蛋白質である。
細胞はこれらのHSPを発現させることにより、それらのストレスに対応して自らを防御していると考えられている。従ってHSPを誘導することができれば、多彩な傷害因子に基づく各種疾患に対し、優れた治療効果・有効性が期待される。
さらにHSPは細胞内(生体内)物質であるため、誘導に伴って副作用が発現する可能性は低く、HSP誘導剤は臨床的にも優れた医薬と考えられる。
【０００３】
ストレスを受けた細胞は、HSPを発現・誘導することにより細胞の生存に必須な蛋白質(酵素)の保持・安定化を図ると共に、異常蛋白質の発現阻止や処理を促進することによって、結果として、外界の有害ストレスから生体を防御していると考えられている。HSPは急性のストレスに対する耐性の獲得のみならず、細菌の侵入や癌細胞の増殖、さらには精神的なストレスによって生じる全身のホメオスタシスの乱れに対しても防御能を誘導できることから、免疫賦活−生体防御能の増強効果も期待できる。
【０００４】
一方、各種脳神経疾患、心脈管系疾患、消化器系疾患、悪性腫瘍、感染症、臓器移植、腎不全、肝不全、網膜の紫外線障害、嚢胞性繊維症、多発性硬化症、老化等においては、いずれもまだ有効な治療剤がないのが現状であり、臨床上有用性の高い治療・改善薬が求められていた。
【０００５】
【従来技術】
例えば特開平4-261,192号公報には、4,9,11-トリエンステロイドを有効成分とする魚類のストレス防止用薬剤が開示されている。
【０００６】
【本発明が解決しようとする問題点】
しかし、特開平4-261,192号公報に記載された発明はステロイド誘導体に関するものであり、やはり安全性が確立されていない問題点があった。さらにヒトや動物における有用性は不明であった。
【０００７】
従って、実際には前記各種疾患の治療・改善に有用な効果を有し、かつ安全性にも優れたHSP誘導剤はまだないのが現状であり、新規な医薬品の開発が強く望まれていた。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、HSP誘導の機序研究に長年取り組み、またHSP誘導作用に基づく臨床上有用な治療・改善薬についても探索してきた。
その結果、意外にもHSPの誘導にあたっては、種々の外因・内因により、まずコレステリルグルコピラノシドが合成誘導され、これが細胞内メディエーターとなって、次いでHSPが誘導されることを見出した。
さらに、in vivo 寒冷拘束ストレス潰瘍モデルにおいて、コレステリルグルコピラノシドが抗潰瘍作用を有することも見出した。
これらの知見から、天然物であり下記化学式で表されるコレステリルグルコピラノシド(I)が、極めて優れたHSP誘導効果を有し、しかも安全性も高いことから、所期の目的を達成できることを見い出し本発明を完成するに至った。
【０００９】
【化２】
0004322329.tif 000002
【００１０】
従って本発明の目的は、HSP誘導作用に基づいて、従来臨床上有効な薬剤のなかった疾患の予防・改善・治療剤、より具体的には、脳神経疾患、心脈管系疾患、消化器系疾患、悪性腫瘍、感染症、臓器移植、腎不全、肝不全、網膜の紫外線障害、嚢胞性繊維症、多発性硬化症または老化の治療剤、さらに具体的には脳卒中後遺症、アルツハイマー病、虚血・再還流障害、外科手術前のプレコンヂショニング剤、ストレス潰瘍、急性膵炎、炎症性腸疾患、糖尿病、免疫賦活による悪性腫瘍治療剤、難治性感染症に対するアジュバント療法剤、拒絶抑制剤、生着率改善剤、さらには腎不全、肝不全、網膜の紫外線障害、嚢胞性繊維症、多発性硬化症または老化等に対する臨床上の有用性が高く、かつ安全性に優れた、新規な治療・改善剤を提供することにある。
【００１１】
ここで本発明において有効成分であるコレステリルグルコピラノシド(I)とは、Cholesteryl Glucopyranosideを意味する。本化合物は分子内に不斉炭素原子を複数有するが、本発明においては限定されず、いずれの光学異性体でもよく、またラセミ体であってもよい。さらにブドウ糖部分とコレステロール部分の結合配位によりα異性体とβ異性体も存在し、本発明においては限定されない。しかし薬理活性上は、α異性体により優れた効果を期待することができる。
【００１２】
なおコレステリルグルコピラノシド(I)は、公知の天然由来化合物であり、試薬、工業原料等として入手することも可能であり、後述の製造例に従って合成することもできる。
α異性体； CAS登録番号:40653-08-5
β異性体； CAS登録番号:7073-61-2
【００１３】
次に本発明におけるコレステリルグルコピラノシド(I)のHSP誘導効果について、薬理実験例をもって具体的に示す。
【００１４】
【薬理実験例】
(1) ヒト正常繊維芽細胞における熱ストレス依存的コレステリルグリコシドの合成誘導
1) 方法
細胞は、ヒト繊維芽細胞株であるTIG-3細胞を用いた。37℃にて培養した細胞に、42℃の培地を添加して、熱ストレスを与えた。一定時間、42℃でインキュベーションした後、冷メタノール、続いてクロロホルム／メタノール混液を用いて脂質を抽出した。
脂質組成は、Silica Gel 60 HPTLCプレートを用いて分析した(展開溶媒はクロロホルム：メタノール：水=60:40:9,v/v)。
ストレスで誘導の見られた糖脂質の部分精製は、Silica Gel 60 HPTLCプレートを用いて、粘菌由来のステリルグリコシド(ポリフェラステロールモノグルコシド)に対応する部分をかき取って、抽出した。次に、Capcell Pak C18AG120カラムを用いてHPLCを行い(溶出溶媒；メタノール)、さらに精製した。スタンダードとしては、β-コレステリルグルコシド(合成品)を用いた。
ガスクロマトグラフィーによる分析は、部分精製した糖脂質をメタノリシス後、トリメチルシリル化し、GLC分析を行った。カラムは3% OV-101を用いた(糖：150-250℃の昇温分析、ステロール：250℃の恒温分析)。
エレクトロスプレーイオン化質量分析は、Mariner(日本パーセプティブ製)を用い、陰イオンモードにて解析した。試料は、0.1%のギ酸アンモニウムを含むメタノール：アセトニトリル(1:1)混液に溶かして注入した。
【００１５】
2) 結果
ヒト繊維芽細胞(TIG-3)において、熱ショックの時間に対応して増加する脂質スポットがTLCプレート上で観察された(図1参照)。熱ショック後、15、30分に一過的に出現し、60分後には消失した。また、このスポットは、オルシノール-H2SO4試薬および塩化第二鉄溶液により発色し、糖とステロールを含んだ脂質と推定された。
この物質の部分精製品を用いてのガスクロマトグラフィー分析から、本物質がコレステロールの配糖体であるコレステリルグルコシドであることが示唆された(図2、3参照)。さらに確認するために、質量分析法(EI/MS)にて解析した。その結果、図4に示すように、m/z 593.4のピークが強く認められた。m/z 593.4のピークは、合成標品β-コレステリルグルコシドを同一条件で分析した際にも観察されるピークであり、[cholesteryl glucoside + HCOO]-の分子量と一致する。以上から、ヒト繊維芽細胞において、熱ストレスに応答して糖脂質が合成誘導されることが示された。HSPの誘導に要する時間(1〜2時間)に比べ、本物質の誘導は15〜30分後と早く、ストレス応答の初期段階で重要な役割を果たしていることが考えられる。構造解析の結果、本糖脂質はコレステリルグルコシドであると同定された。グルコシド結合の立体配置については、逆相HPLCでのRf値が合成標品のβ-コレステリルグルコシドと一致したこと、また、本糖脂質はα-グルコシダーゼ処理では分解されず、β-グルコシダーゼ処理でグルコースとコレステロールに加水分解されることから、結合様式はβ-型であることが確認された。
【００１６】
(2) ヒト繊維芽細胞でのコレステリルグルコシド添加によるHSPの発現誘導
1) 方法
37℃にて培養したサブコンフルエント状態のTIG-3細胞を用いた。1-O-コレステリル-β-D-グルコピラノシドおよび1-O-コレステリル-α-D-グルコピラノシドは後述の製造例により合成した。これらコレステリルグルコシドの培地への添加に際して、脂質過酸化防止のためにα-トコフェロール(8.4μM)を同時に添加した。α-トコフェロールのみを添加した場合を対照実験とした。HSP70蛋白質の発現量は、抗HSP70抗体を用いたウエスタンブロット法にて解析した。
【００１７】
2) 結果
有機合成したβ型のコレステリルグルコシド(10μM)を、温度は一定に保ちながらTIG-3細胞の培養上清へ添加した結果、30分後にはHSP70の発現が十分に誘導されていた(図5A参照)。なお、熱ストレスによるHSP70の誘導には1〜2時間を要すること(図5B参照)と比較して、早い誘導であった。
α-コレステリルグルコシドを10μM添加した場合も30分以内にHSP70の誘導が認められ(図6参照)、このHSP誘導活性には、グルコシド結合の立体配位は影響しないことがわかった。次に、用量依存性について検討した結果、図7に示すように、0.1μMの添加量でもHSP70が誘導されることが示された。
以上から、ヒト由来繊維芽細胞のストレス応答において、コレステリルグルコシドが新規の脂質性メディエーターとして関与する可能性が示唆された。熱ストレスに限らず、酸化ストレスなど他の各種ストレスにおいても機能していることが予想される。最近、虚血や温熱耐性、自己免疫疾患など各種病態おけるHSPの役割が注目されており、コレステリルグルコシドの発見とその機能の解析は、これら病態治療への可能性からも重要である。
【００１８】
(3) 寒冷拘束ストレス潰瘍に対するコレステリルグルコシドの効果
1) 方法
体重180-200gのSD系ラット(雌)を用い、金網製拘束ケージに入れ、4℃の低温恒温室内でストレス負荷した。2時間後、動物を頚椎脱臼致死させ、胃を摘出した。薬物(α-コレステリルグルコシド、β-コレステリルグルコシド、ゲラニルゲラニルアセトン)は、5%アラビアゴムと0.6% Tween 80で乳化したものを、ストレスを負荷する30分前に各100mg/Kgの用量で経口投与した。各群の動物は4匹とした。
摘出した胃に10mlの生理食塩水を注入し、5%フォルマリン液中に約5分間浸して胃を固定した。胃を大弯に沿って切開し、スケール付き実体顕微鏡下(×10)にて潰瘍の数と長さを計測し、その総和(潰瘍計数：UI)を求めた。
【００１９】
2) 結果
寒冷拘束ストレス潰瘍に対し、α-コレステリルグルコシドおよびβ-コレステリルグルコシドはいずれもコントロールに比べ有意な抑制作用を示した。さらにこの効果は、消化性潰瘍治療剤であるゲラニルゲラニルアセトンの効果に優っていた(図8参照)。
【００２０】
次に本発明化合物の投与剤型としては、例えば散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤などの経口製剤、軟膏、貼付剤等の外用剤、坐剤および注射用製剤等が挙げられる。製剤化の際には、通常の製剤担体を用いて常法により製造することができる。
【００２１】
すなわち経口製剤を製造するにあたっては、コレステリルグルコピラノシド(I)と賦形剤、さらに必要に応じて酸化防止剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤等とする。
【００２２】
賦形剤としては、例えば乳糖、コーンスターチ、白糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビット、結晶セルロース、二酸化ケイ素などが、結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、メチルセルロース、エチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、シェラック、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリプロピレングリコール・ポリオキシエチレン・ブロックポリマー、メグルミンなどが、崩壊剤としては、例えば澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸カルシウム、デキストリン、ペクチン、カルボキシメチルセルロース・カルシウム等が、滑沢剤としては、例えばタルク、ポリエチレングリコール、シリカ、硬化植物油等が、着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが、矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香散、ハッカ油、竜脳、桂皮末等が用いられる。これらの錠剤・顆粒剤には糖衣、その他必要により適宜コーティングすることはもちろん差支えない。
【００２３】
また注射用製剤を製造する際には、コレステリルグルコピラノシド(I)にpH調整剤、溶解剤、等張化剤などと、必要に応じて溶解補助剤、安定化剤、酸化防止剤などを加えて、常法により製剤化する。
【００２４】
外用剤を製造する際の方法は限定されず、常法により製造することができる。すなわち製剤化にあたり使用する基剤原料としては、医薬品、医薬部外品、化粧品等に通常使用される各種原料を用いることが可能である。
【００２５】
使用する基剤原料として具体的には、例えば動植物油、鉱物油、エステル油、ワックス類、高級アルコール類、脂肪酸類、シリコン油、界面活性剤類、アルコール類、多価アルコール類、水溶性高分子類、粘土鉱物類、精製水などの原料が挙げられ、さらに必要に応じ、pH調整剤、酸化防止剤、キレート剤、防腐防黴剤、着色料、香料などを添加することができるが、本発明にかかる外用剤の基剤原料はこれらに限定されない。また必要に応じて血流促進剤、殺菌剤、消炎剤、細胞賦活剤、ビタミン類、アミノ酸、保湿剤、角質溶解剤等の成分を配合することもできる。なお上記基剤原料の添加量は、通常外用剤の製造にあたり設定される濃度になる量である。
【００２６】
本発明におけるコレステリルグルコピラノシド(I)の臨床投与量は、対象疾患、症状、重症度、年齢、合併症などによって異なり限定されず、また投与経路などによっても異なるが、通常成人１日あたり0.01mg〜2000mgであり、好ましくは0.1mg〜1500mgであり、さらに好ましくは1mg〜1000mgであり、これを経口、静脈内、筋肉内、経直腸または経皮投与する。
【００２７】
次に、本発明にかかるコレステリルグルコピラノシド(I)について、その製造例を以下に掲げる。ただし本発明にかかるコレステリルグルコピラノシド(I)が、これらに限定されないことはいうまでもない。
【００２８】
【製造例】
製造例１ コレステリル 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-α-D-グルコピラノシドの合成
【００２９】
【化３】
0004322329.tif 000003
【００３０】
（式中、Bnはベンジル基を意味する。）
アルゴン雰囲気下、トリフルオロメタンスルホン酸銅(II)(0.69g,1.9mmol)とモレキュラーシーブス4A(3.8g)の混合物に、ジエチルエーテル／ジクロロメタン混合溶媒[v/v=5/1](10ml)を加えて攪拌した。得られた懸濁液を-78℃に冷却し、これに2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-β-D-グリコピラノシル 2-ピリジンカルボキシレート(0.52g,0.80mmol)およびコレステロール(0.34g,0.80mmol)の上記混合溶媒(20ml)を加えた。反応混合物を攪拌下2時間で室温まで昇温した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30ml)を加えて反応を停止し、不溶物を濾去した後、得られた混合物を酢酸エチル(100ml×3)で抽出した。有機層を水(100ml)および飽和食塩水(100ml)で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別し、減圧下溶媒を留去した後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒：ヘキサン/酢酸エチル=3/1〜2/1)で精製して標題化合物0.52gを白色結晶として得た。収率71%。
【００３１】
1H-NMR(400MHz,CDCl3)：δ(ppm) 7.38-7.24(m,18H),7.14-7.12(m,2H),5.28(m,1H),5.01(d,1H,J=10.99Hz),4.93(d,1H,J=3.66Hz),4.83(d,1H,J=10.99Hz),4.82(d,1H,J=10.99Hz),4.77(d,1H,J=12.09Hz),4.65(d,1H,J=12.09Hz),4.61(d,1H,J=12.09Hz),4.46(d,1H,J=10.99Hz),4.45(d,1H,J=12.09Hz),4.00(dd,1H,J=9.53,9.16Hz),3.87(ddd,1H,9.16,3.66,1.84Hz),3.74(dd,1H,J=10.62,1.84Hz),3.64(dd,1H,J=9.89,9.16Hz),3.63(dd,1H,J=10.62,1.84Hz),3.55(dd,1H,J=9.53,3.66Hz),3.47(m,1H),2.42(m,1H),2.27(m,1H)2.06-0.94(m,29H),1.01(s,3H),0.92(d,3H,J=6.60Hz),0.87(d,6H,J=6.59Hz),0.63(s,3H)
IR(KBr,cm-1):3027,2930,1560,1497,1374,1165,1112,1072,1052,1036,755,731,697
MS(EI)  908(M+)
m.p.  142-143℃
[α]D23  +50.4°(c=0.72,CHCl3)
【００３２】
製造例２ コレステリル 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-β-D-グルコピラノシドの合成
【００３３】
【化４】
0004322329.tif 000004
【００３４】
（式中、Bnはベンジル基を意味する。）
アルゴン雰囲気下、トリフルオロメタンスルホン酸スズ(II)(0.79mg,1.9mmol)とモレキュラーシーブス4A(0.38g)の混合物に、アセトニトリル／ジクロロメタン混合溶媒[v/v=1.7/1](10ml)を加えて攪拌した。得られた懸濁液を-50℃に冷却し、これに2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-β-D-グリコピラノシル 2-ピリジンカルボキシレート(0.52g,0.80mmol)およびコレステロール(0.34g,0.80mmol)の上記混合溶媒(20ml)を加えた。反応混合物を攪拌下2時間で0℃まで昇温した。反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(30ml)を加えて反応を停止し、不溶物を濾去した後、得られた混合物を酢酸エチル(100ml×3)で抽出した。有機層を水(100ml)および飽和食塩水(100ml)で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別し、減圧下溶媒を留去した後、得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(展開溶媒：ヘキサン/酢酸エチル＝3/1〜2/1)で精製して標題化合物0.58gを白色結晶として得た。収率80%。
【００３５】
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ(ppm) 7.37-7.16(m,20H),4.97(d,1H,J=10.99Hz),4.92(d,1H,J=10.63Hz),4.81(d,1H,J=10.62Hz),4.78(d,1H,J=10.63Hz),4.72(d,1H,J=10.99Hz),4.60(d,1H,J=12.09Hz),4.55(d,1H,J=12.09Hz),4.53(d,1H,J=10.62Hz),4.50(d,1H,J=7.69Hz),3.73(dd,1H,J=10.62,1.83Hz),3.64(dd,1H,J=10.62,5.12Hz),3.63(dd,1H,9.16,9.16Hz),3.64-3.53(m,2H),3.54(dd,1H,J=9.53,8.79Hz),3.45(ddd,1H,J=9.00,5.12,1.83Hz),3.44(dd,1H,J=9.16,7.70Hz),2.45-0.94(m,28H),1.03(s,3H),0.92(d,3H,J=6.59Hz),0.87(d,6H,J=6.60Hz),0.63(s,3H)
IR(KBr,cm-1):3087,3029,2929,1497,1358,1330,1279,1255,1243,1208,1133,1069,1028,917,737,696
MS(EI)  908(M+)
m.p.  124-125℃
[α]D23  +0.3°(c=2.48,CHCl3)
【００３６】
製造例３ コレステリル α-D-グルコピラノシドの合成
【００３７】
【化５】
0004322329.tif 000005
【００３８】
アルゴン雰囲気下、-78℃でアンモニアガスを液化(100ml)し、これに金属リチウム(0.36mg,52mmol)を10分割してゆっくりと加えた。得られた青色溶液にコレステリル 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-α-D-グルコピラノシド(0.50g,0.55mmol)のテトラヒドロフラン(20ml)溶液を30分かけて滴下した。反応液をさらに-78℃で3時間攪拌した後、塩化アンモニウム(7.0g)を少量づつ加えて反応を停止した。得られた混合物を室温まで昇温してアンモニアを蒸発させた後、水(200ml)および酢酸エチル／2-プロパノール混合溶媒[v/v=2/1](150ml)を加えて15分間攪拌した。有機層を分離し、水層をさらに上記の混合溶媒(150ml×2)で抽出した。有機層を飽和食塩水(100ml)で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別し、減圧下溶媒を留去した後、得られた粗結晶をエタノールから再結晶することにより標題化合物0.24gを白色結晶として得た。収率81%。
【００３９】
1H-NMR(400MHz,pyridine-d5):δ(ppm) 5.51(d,1H,J=3.56Hz),5.32(d,1H,J=4.95Hz),4.72-4.37(m,4H),4.24(t,1H,J=9.24Hz),4.16(dd,1H,J=9.74,3.80Hz),3.81(m,1H),2.72(dd,1H,J=13.20,2.97Hz),2.52(m,1H),2.12(m,1H),2.13-0.75(m,29H),0.95(d,3H,J=6.27Hz),0.92(s,3H),0.88(d,6H,J=6.60Hz),0.64(s,3H)
MS(FAB)  549(M+H+)
m.p.  239-240℃(dec.)
[α]D20  +66.2°(c=1.20,pyridine)
【００４０】
製造例４ コレステリル β-D-グルコピラノシドの合成
【００４１】
【化６】
0004322329.tif 000006
【００４２】
アルゴン雰囲気下、-78℃でアンモニアガスを液化(100ml)し、これに金属リチウム(0.36mg,52mmol)を10分割してゆっくりと加えた。得られた青色溶液にコレステリル 2,3,4,6-テトラ-O-ベンジル-β-D-グルコピラノシド(0.50g,0.55mmol)のテトラヒドロフラン(20ml)溶液を30分かけて滴下した。反応液をさらに-78℃で3時間攪拌した後、塩化アンモニウム(7.0g)を少量づつ加えて反応を停止した。得られた混合物を室温まで昇温してアンモニアを蒸発させた後、水(200ml)および酢酸エチル／2-プロパノール混合溶媒[v/v=2/1](150ml)を加えて15分間攪拌した。有機層を分離し、水層をさらに上記の混合溶媒(150ml×2)で抽出した。有機層を飽和食塩水(100ml)で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。乾燥剤を濾別し、減圧下溶媒を留去した後、得られた粗結晶をエタノールから再結晶することにより標題化合物0.25gを白色結晶として得た。収率84%。
【００４３】
1H-NMR(400MHz,pyridine-d5):(ppm) δ5.34(d,1H,J=5.28Hz),5.06(d,1H,J=7.59Hz),4.57(dd,1H,J=11.88,2.31Hz),4.42(dd,1H,11.88,5.28Hz),4.29(m,2H),4.15-3.88(m,3H),2.73(dd,1H,J=12.87,2.97Hz),2.47(m,1H),2.13(m,1H),2.02-0.80(m,29H),0.95(d,3H,J=6.27Hz),0.93(s,3H),0.88(d,6H,J=6.60Hz),0.64(s,3H)
MS(FAB)  549(M+H+)
m.p.  282-283℃(dec.)
[α]D20  -49.1°(c=1.30,pyridine)
【００４４】
以上詳述したごとく、本発明にかかるコレステリルグルコピラノシド(I)は、極めて優れたHSP誘導能を有し、各種疾患に有効であることが明らかである。
また本発明にかかるコレステリルグルコピラノシド(I)の安全性の高さも併せて考えると、本発明は、臨床上極めて優れた有用性が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ヒト繊維芽細胞(TIG-3)での熱ストレスによる糖脂質組成の時間変化をTLC上にて観察した図である。
【図２】  ストレス誘導された糖脂質のガスクロマトグラフィー・チャートを示した図である。
【図３】  ストレス誘導された糖脂質のガスクロマトグラフィー・チャートを示した図である。
【図４】  エレクトロスプレーイオン化質量分析(ESI/MS)による細胞由来コレステリルグルコシド測定チャートを示した図である。
【図５】  TIG-3細胞培養上清へのβ-コレステリルグルコシド添加によるHSP70の誘導(経時変化)を観察した図である。
【図６】  TIG-3細胞培養上清へのα-コレステリルグルコシド添加によるHSP70の誘導(経時変化)を観察した図である。
【図７】  TIG-3細胞培養上清へのβ-あるいはα-コレステリルグルコシド添加によるHSP70の誘導(用量依存性)を観察した図である。
【図８】  寒冷拘束ストレス潰瘍に対するα-、β-コレステリルグルコシド、およびゲラニルゲラニルアセトンの効果(UI)を示した図である。（平均±標準誤差で示す。*p<0.05, **P<0.01 vs Control）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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