(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式で表されるエクチナサイジン７８６。
【化１】
0004334194.tif 000007
【請求項２】
エクチナサイジア種に属する群体ホヤを均質化（ホモジナイズ）した後、リン酸緩衝液を用いてｐＨを５．５〜７．５に保ちながらシアン化カリウムで処理し、そのメタノール抽出液からクロマトグラフィー法により分離精製することによるエクチナサイジン７８６の取得方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はエクチナサイジン７４３の安定等価体である新規なエクチナサイジン類化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
カリブ海に生息する群体ホヤ、エクチナサイジア種タービナータ(Ecteinascidia turbinate)のエタノールエキスがインビボにおいて強力な抗腫瘍活性を示すことが約４０年前に報告されて以来、そこに含まれる成分の検索が米国イリノイ大学のラインハルト(Rinehart)教授のグループによって精力的に行われ、その結果、下記構造式で表されるエクチナサイジン７４３(Ecteinascidin743,Et743)が単離され、絶対配置を含めて構造決定されている(例えばSakai, R. et al. J. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1992, 89, 11456-11460を参照)。エクチナサイジン７４３は強力な抗腫瘍活性を有することから、現在、欧米諸国において抗癌剤としてのフェーズ２の臨床試験が行われている。
【０００３】
【化２】
0004334194.tif 000002
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、エクチナサイジン７４３は天然から極微量にしか取得することができないことに加え、α−アミノアルコール官能基を有しているので化学的に不安定な物質である。従ってその大量供給は必ずしも容易なことではなく、実用的供給方法の開発とともにその安定等価体の探索が望まれている。
そこで、本発明においては、エクチナサイジン７４３の安定等価体である新規なエクチナサイジン類化合物を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記の点に鑑み、本発明は下記構造式で表されるエクチナサイジン７８６である。また、本発明はエクチナサイジア種に属する群体ホヤを均質化（ホモジナイズ）した後、リン酸緩衝液を用いてｐＨを５．５〜７．５に保ちながらシアン化カリウムで処理し、そのメタノール抽出液からクロマトグラフィー法により分離精製することによるエクチナサイジン７８６の取得方法である。
【０００６】
【化３】
0004334194.tif 000003
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明のエクチナサイジン７８６はエクチナサイジア種に属する群体ホヤを均質化（ホモジナイズ）した後、リン酸緩衝液を用いてｐＨを５．５〜７．５に保ちながらシアン化カリウムで処理し、そのメタノール抽出液からクロマトグラフィー法により分離精製することにより取得される。クロマトグラフィー法は、例えば、カラムクロマトグラフィーや薄層クロマトグラフィーなど、天然有機化合物の分離精製のために通常使用されるものを使用して行われる。カラムクロマトグラフィーにおいては、例えば、順相系であるＴＳＫ−Ｇ３０００Ｓ、ダイヤイオンＨＰ−２０、セファデックスＬＨ−２０、ＤＥＡＥセファデックス、逆相系のＲＰ−１８などが使用できる。また、薄層クロマトグラフィーにおいてはシリカゲルのほか、ＲＰ−１８などが使用できる。
【０００８】
以下、本発明を実施例にて詳細に説明するが、本発明は以下の記載に何ら限定されるものではない。
【０００９】
【実施例】
図１に示す基本工程手順にてエクチナサイジン７８６を取得した。詳細は以下の通りである。
【００１０】
工程１：
２０００年３月〜７月、タイ国プーケット島東岸の水深１ｍ〜５ｍから群体ホヤ、エクチナサイジア種スルストニ（Ecteinascidia thurstoni）（湿重量３８ｋｇ）を採取し、これをメタノール（２０Ｌ）中で均質化（ホモジナイズ）した後、リン酸緩衝液にてｐＨを７．０に保ちながらシアン化カリウム（２５ｇ）を徐々に添加してから５時間攪拌した。その後、析出物をろ過して除くことによりメタノール抽出液を得た。
【００１１】
工程２：
上記のメタノール抽出液を濃縮して得た水を含むメタノール濃縮液（２Ｌ）に酢酸エチル（８Ｌ）を加えて分配して酢酸エチル抽出液を得た。
【００１２】
工程３：
上記の酢酸エチル抽出液を濃縮した後、得られた残留物（２０ｇ）にメタノール（１５０ｍＬ）およびヘキサン（６００ｍＬ）を加えて分配し、下層よりメタノール抽出液を得た。
【００１３】
工程４：
上記のメタノール抽出液を濃縮して得られた残留物（１２ｇ）からセファデックスＬＨ−２０を用いてクロロホルム−メタノール１：１溶媒で溶出される画分を得、続いて酢酸エチルで溶出される画分を得、最後にヘキサン−酢酸エチル９：１溶媒で溶出される画分を得た。
【００１４】
工程５：
工程４で得られた画分（３５０ｍｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにアプライし、ヘキサン−酢酸エチル４：１溶媒を用いて分離精製することにより、２種類の結晶性物質を得た。それぞれをメタノール再結晶することにより無色結晶物質Ａ（６０．７ｍｇ）と無色結晶物質Ｂ（２２５．０ｍｇ）を得た。
【００１５】
構造解析の結果、無色結晶性物質Ａは、分子式Ｃ40Ｈ42Ｎ4Ｏ11Ｓで表される新規なエクチナサイジン類化合物であるエクチナサイジン７８６(Et786)であることが判明した。エクチナサイジン７８６の物理化学的性状は以下の通りである。
【００１６】
mp 197-199℃ (dec)
[α]D20 -156.9 (c 0.6, CHCl3)
CD Δεnm (c 0.13 mmol/L, methanol, 24℃) 0 (314), -13.0 (291), -2.3 (247), -60.1 (223), 0 (214), +70.6 (207)
HR-FABMS m/z (NBA) calcd. for C40H43N4O11S (M+H), 787.2649, found 787.2652 (+0.3 mmu).
IR (KBr) 3430, 2930, 2250w, 1760, 1730, 1620, 1590 cm-1.
1H-NMR(500MHz)と13C-NMR(125MHz)は表１を参照のこと(CDCl3)。
【００１７】
【表１】
0004334194.tif 000004
【００１８】
エクチナサイジン７８６の構造式を以下に示す（原子ナンバリングは表１に対応）。
【００１９】
【化４】
0004334194.tif 000005
【００２０】
また、無色結晶性物質Ｂは、既にラインハルト教授のグループによって報告されている分子式Ｃ40Ｈ42Ｎ4Ｏ10Ｓで表されるエクチナサイジン７７０(Et770)（米国特許第５０８９２７３号）と旋光度の符合を除いて各種スペクトルデータが一致することが判明した。
【００２１】
エクチナサイジン７７０の構造式を以下に示す（原子ナンバリングは表１に対応）。
【００２２】
【化５】
0004334194.tif 000006
【００２３】
上記の方法によれば、シアン化カリウム処理によりエクチナサイジン７４３の２１位の水酸基がシアノ基に変換されることから化学的に不安定なα−アミノアルコール官能基が化学構造的に解消される。エクチナサイジン７８６はエクチナサイジン７７０のＳ−オキサイド体であるが、エクチナサイジン７８６は、例えば、１）パラジウム触媒を用いた水素添加処理、２）メタノールなどの溶媒中での塩化チタン（ＩＩＩ）水溶液処理、３）アセトン中でのヨウ化ナトリウムや無水トリフルオロ酢酸を用いた還元処理などによりエクチナサイジン７７０に変換可能であり、エクチナサイジン７７０は、例えば、含水アセトニトリル中での硝酸銀処理によりエクチナサイジン７４３に変換可能であることから、エクチナサイジン７８６はエクチナサイジン７４３の製造中間体としての安定等価体として有用な化合物となる。また、以下のようにエクチナサイジン７８６自体も優れた抗腫瘍活性を有する。この際、エクチナサイジン７８６はエクチナサイジン７７０に比べて水やアルコールなどの高極性溶媒に対する溶解性に優れているという特性を有するので、水溶性製剤化が容易となるといった効果が期待される。
【００２４】
エクチナサイジン７８６の抗腫瘍活性：
10％ウシ胎児血清を含むMcCoy's 5A培地を用いてインビトロ培養により維持したヒト大腸癌細胞株HCT116（ATCCより入手）のシングルセルサスペンジョンをマイクロプレート中に注入し（2×103cell/well）、ここに各種濃度のエクチナサイジン７８６を加え、４日間培養した後、細胞計測キット（同仁化学研究所社製）を用いて細胞増殖の程度を測定し、対照群と比較して細胞増殖を50％阻害するエクチナサイジン７８６の濃度（IC50）を求めたところ、0.014μMという高い抗腫瘍活性を示す数値であった。
【００２５】
【発明の効果】
本発明によれば、エクチナサイジン７４３の安定等価体である新規なエクチナサイジン類化合物であるエクチナサイジン７８６が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】  エクチナサイジン７８６を取得するための基本工程手順。
【図１】
0004334194.tif 000008