(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
0004314742.tif 000007
［式中、Ｒ１は、
（Ａ）ＣＯＯＲ２ここでＲ２は、
１）水素または薬理学的に受け入れられる陽イオン、
２）炭素数１〜１２の直鎖アルキルまたは炭素数３〜１４の分岐アルキル、
３）−Ｚ−Ｒ３
ここでＺは原子価結合、またはＣｔＨ２ｔで表される直鎖または分岐アルキレンであり、ｔは１〜６の整数を示し、Ｒ３は炭素数３〜１２のシクロアルキルまたはＲ４の１〜３個で置換された炭素数３〜１２の置換シクロアルキルであり、Ｒ４は水素または炭素数１〜５のアルキル、
４）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ３
ここで、ｎは１〜５の整数、
５）−Ｚ−Ａｒ１
ここでＺは前記定義に同じ、Ａｒ１はフェニル、α−ナフチル、β−ナフチル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、α−フリル、β−フリル、α−チエニル、β−チエニルまたは置換フェニル（ここで置換基は少なくとも１個の塩素、臭素、フッ素、ヨウ素、トリフルオロメチル、炭素数１〜４のアルキル、ニトロ、シアノ、メトキシ、フェニル、フェノキシ、ｐ−アセトアミドベンズアミド、−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐｈ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２であるもの）、
６）−ＣｔＨ２ｔＣＯＯＲ４
ここでＣｔＨ２ｔ、Ｒ４は前記定義に同じ、
７）−ＣｔＨ２ｔＮ（Ｒ４）２
ここでＣｔＨ２ｔ、Ｒ４は前記定義に同じ、
８）−ＣＨ（Ｒ５）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６
ここでＲ５は水素またはベンゾイル、Ｒ６はフェニル、ｐ−ブロモフェニル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−ビフェニル、ｐ−ニトロフェニル、ｐ−ベンズアミドフェニル、２−ナフチル、
９）−ＣｐＨ２ｐ−Ｗ−Ｒ７
ここで、Ｗは−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲ７−、または−Ｃ≡Ｃ−であり、Ｒ７は水素、または炭素数１〜３０の直鎖もしくは分岐アルキルまたはアラルキルであり、ｐは１〜５の整数、または、
１０）−ＣＨ（ＣＨ２ＯＲ８）２
ここでＲ８は炭素数１〜３０のアルキルまたはアシル、
（Ｂ）−ＣＨ２ＯＨ
（Ｃ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２
ここでＲ９は水素、炭素数１〜１２の直鎖アルキル、炭素数３〜１２の分岐アルキル、炭素数３〜１２のシクロアルキル、炭素数４〜１３のシクロアルキルアルキレン、フェニル、置換フェニル（ここで置換基は上記（Ａ）５）の場合と同義）、炭素数７〜１２のアラルキルまたは−ＳＯ２Ｒ１０を表わし、Ｒ１０は炭素数１〜１０のアルキル、炭素数３〜１２のシクロアルキル、フェニル、置換フェニル（ここで置換基は上記（Ａ）５）の場合と同義）、炭素数７〜１２のアラルキルを表わし、２つのＲ９は同一でも異なっていてもよいが、一方が−ＳＯ２Ｒ１０を表わす場合は他のＲ９は−ＳＯ２Ｒ１０ではないものとする、または、
（Ｄ）−ＣＨ２ＯＴＨＰ（ＴＨＰはテトラヒドロピラニル基）であり、
Ａは、
１）−（ＣＨ２）ｍ−
２）−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−
３）−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−
４）−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−
５）−ＣＨ＝ＣＨ−
６）−Ｏ−ＣＨ２−または
７）−Ｃ≡Ｃ−であり、
ここで、ｍは１から３の整数を示し、
Ｙは、水素、炭素数１〜４のアルキル、塩素、臭素、フッ素、ホルミル、メトキシまたはニトロであり、
Ｂは、
−Ｘ−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）ＯＲ１３ 
ここで、Ｒ１１は水素、または炭素数１〜４のアルキルであり、Ｒ１３は水素、炭素数１〜１４のアシル、炭素数６〜１５のアロイル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、ｌ−エトキシエチルまたはｔ−ブチルであり、Ｘは、
１）−ＣＨ２−ＣＨ２−
２）−ＣＨ＝ＣＨ−
３）−Ｃ≡Ｃ−であり、
Ｒ１２は、
１）炭素数１〜１２の直鎮アルキル、炭素数３〜１４の分岐アルキルまたは、
２）−Ｚ−Ａｒ２
ここでＺは前記定義に同じ、Ａｒ２はフェニル、α−ナフチル、β−ナフチル、または少なくとも１個の塩素、臭素、フッ素、ヨウ素、トリフルオロメチル、炭素数１〜４のアルキル、ニトロ、シアノ、メトキシ、フェニルもしくはフェノキシ置換したフェニルを表わし、または、
３）−ＣｔＨ２ｔＯＲ１４ 
ここでＣｔＨ２ｔは前記定義に同じ、Ｒ１４は炭素数１〜６の直鎖アルキル、炭素数３〜６の分岐アルキル、フェニル、少なくとも１個の塩素、臭素、フッ素、ヨウ素、トリフルオロメチル、炭素数１〜４のアルキル、ニトロ、シアノ、メトキシ、フェニルもしくはフェノキシ置換したフェニル、シクロペンチル、シクロヘキシル、または、炭素数１〜４の直鎖アルキルの１〜４個で置換されたシクロペンチルまたはシクロヘキシルを表わし、または、
４）−Ｚ−Ｒ３
ここでＺ、Ｒ３は前記定義に同じ、または、
５）−ＣｔＨ２ｔ−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ１５）Ｒ１６
ここでＣｔＨ２ｔは前記定義に同じ、Ｒ１５、Ｒ１６は水素、メチル、エチル、プロピル、またはブチルを表わし、または、
６）−ＣｕＨ２ｕ−Ｃ≡Ｃ−Ｒ１７ 
ここでｕは１〜７の整数であり、ＣｕＨ２ｕは直鎖または分岐アルキレンを表わし、
Ｒ１７は炭素数１〜６の直鎖アルキルを表わし、
Ｅは、水素、または−ＯＲ１８
ここでＲ１８は炭素数１〜１２のアシル、炭素数７〜１５のアロイルまたはＲ２（ここでＲ２は前記定義に同じ）を表わし、
一般式はｄ体、ｌ体またはｄｌ体を表わす］
で表わされる４，８−インタ−ｍ−フェニレンプロスタグランジンＩ２誘導体または薬理学的に許容し得るその塩を有効成分とするＣ−Ｃケモカイン産生抑制剤。
【請求項２】
前記４，８−インタ−ｍ−フェニレンプロスタグランジンＩ２誘導体または薬理学的に許容し得るその塩がベラプロスト又は薬理学的に許容し得るその塩である請求項１記載のＣ−Ｃケモカイン産生抑制剤。
【請求項３】
Ｃ−ＣケモカインがＭＣＰ−１あるいはＭＣＰ−３である請求項１または２記載のＣ−Ｃケモカイン産生抑制剤。
【請求項４】
Ｃ−Ｃケモカインの産生抑制によって治療できる疾患が、急性重篤炎症、慢性難治性炎症、肺線維症、肺炎、ＡＲＤＳ、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ、痛風、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、クローン病、変形性関節炎、寄生虫症、臓器移植後の血管内膜肥厚、骨粗しょう症、臓器移植後の拒絶反応、子宮内膜症、好酸球性胃腸炎である請求項１〜３のいずれか１項に記載のＣ−Ｃケモカイン産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は、プロスタン酸誘導体を有効成分とするＣ−Ｃケモカイン産生抑制剤に関する。
【０００２】
【背景技術】
１９８７年に松島らがリポ多糖類刺激したヒト末梢血単核球培養上清から、好中球遊走因子であるＩＬ−８を単離した後、多くの白血球に対して遊走活性をもつ分子が精製、クローニングされた。これらの分子は共通の構造をもつことから、ケモカインと総称される。ケモカインのうち主要なものは、ヘパリンに対して親和性が高いこと、１００個程度のアミノ酸からなる前駆体として合成された後、７０個前後の成熟型として分泌されるという共通した特徴を有する。
【０００３】
ケモカインは一般に４つのシステインをもつ。このうち、最初の２つのシステインの間に１つのアミノ酸が入ったＣ−Ｘ−Ｃケモカインとアミノ酸が入らないＣ−Ｃケモカインに大別できる。Ｃ−Ｘ−Ｃケモカインはαケモカイン、Ｃ−Ｃケモカインはβケモカインとも呼ばれることがある。Ｃ−Ｃケモカインファミリーは互いにアミノ酸レベルで３０％程度のホモロジーを有し、４個のシステイン残基の位置が一致する一群の低分子量タンパクの総称である。
【０００４】
ＭＣＰ−１（Ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｒａｃｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ−１）は、単球走化活性化因子（ＭＣＡＦ）、ＧＤＣＦ（ｇｌｉｏｍａ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ）とも称され、アミノ酸７６個からなる蛋白質であり、４個のシステイン基を持つ。ＭＣＡＦとＭＣＰ−１およびＧＤＣＦについてはその同定と遺伝子クローニングが報告されている（Ｋ．Ｍａｔｓｕｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６９，１４８５−１４９０，１９８９．Ｙ．Ｆｕｒｕｔａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１５９，２４９−２５５，１９８９．Ｅ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，１８５０−１８５４，１９８９．Ｔ．Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２４４，４８７−４９３，１９８９．）。また、ＭＣＰ−１の製造方法もこれらの文献に記載されている。以下本発明ではＧＤＣＦ、ＭＣＡＦを含めてＭＣＰ−１と略称する。
【０００５】
ＭＣＰ−１は、単球およびマクロファージ、リンパ球といった血球系の細胞のほかに、線維芽細胞、血管内皮細胞、平滑筋細胞、各種腫瘍細胞など様々な細胞から、ＩＬ−１、ＴＮＦ、ＩＦＮ−γ、ＬＰＳ、ホルボールエステル（ＴＰＡ）などの刺激により産生され、非常に強い単球及び／又はマクロファージの病原局所への集積をもたらすことが知られている。ＭＣＰ−１には他にも好塩基球やＴ細胞に対しても走化性や活性化能をもつ。
【０００６】
このＣ−Ｃケモカインに属する他のタンパクとしては、ＲＡＮＴＥＳ、ＬＤ７８、ＡＣＴ２、Ｉ−３０９、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＪＥ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＴＣＡ−３、ｅｏｔａｘｉｎなどが知られている。
【０００７】
これらのうち、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３（Ｋ．Ｂ．Ｍ．Ｒｅｉｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １０，１７７−１８０，１９８９）、ＲＡＮＴＥＳ（Ｐ．Ｎ．Ｂａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３２，２６８−２８４，１９９３）及びＪＥ（Ｂ．Ｊ．Ｒｏｌｌｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５，３７３８−３７４２，１９８８）には単球及び／又はマクロファージの病原局所への走化性をもたらす誘引作用をもつことが知られている。またＲＡＮＴＥＳは好塩基球・好酸球・Ｔ細胞に対しても強い遊走能を示し、慢性関節リウマチ、臓器移植後の血管内膜肥厚、臓器移植後の拒絶反応、アレルギー性疾患にも関与している。ＭＩＰ−１αは好塩基球・好酸球・Ｔ細胞・Ｂ細胞・ＮＫ細胞に対して遊走能を示すことが知られている。さらにｅｏｔａｘｉｎは好酸球を強く遊走させる。
【０００８】
好酸球および好塩基球の遊走の病的な亢進は急性重篤炎症、慢性難治性炎症、気管支喘息、アレルギー性疾患、寄生虫症、腫瘍、好酸球性胃腸炎、消化性潰瘍、心弁膜症、多発性硬化症、骨粗しょう症、臓器再潅流障害で多く認められる。また単球およびマクロファージが病原局所への遊走は一般的な炎症でも見られるが、特に急性重篤炎症、慢性難治性炎症、アレルギー性疾患において認められ、また、腎炎、肺線維症、動脈硬化、悪性腫瘍などでも認められる。糖尿病においては、動脈硬化などの大血管障害や、糖尿病性神経障害、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症などの合併症の原因となる細小血管障害が高頻度でおこることが知られているが、この血管障害にマクロファージが血管内皮細胞へ接着したり血管壁へ浸潤することが重要と考えられている。
【０００９】
肺疾患では肺内にマクロファージが増加することが知られており、肺の線維化にマクロファージが重要な役割を果たしている。さらに慢性関節リウマチ（ＲＡ）の患部にもマクロファージの集積が認められる。
【００１０】
従来、上記の個々の疾患に対しては、ステロイド剤あるいは非ステロイド性の抗炎症剤が用いられることがあるが、これらの薬剤は白血球の遊走を抑制するものの、同時に多種の細胞の機能を抑制するため、様々な重篤な副作用を示す欠点があることが知られている。
【００１１】
プロスタグランジン（ＰＧ）は天然に存在する多彩な生理活性を示す一群の化合物であり、共通のプロスタン酸骨格を有する。天然に存在するＰＧ類はその５員環の構造的な特徴によりＰＧＡ類，ＰＧＢ類，ＰＧＣ類，ＰＧＤ類，ＰＧＥ類，ＰＧＦ類，ＰＧＧ類，ＰＧＨ類，ＰＧＩ類，ＰＧＪ類に分類され、さらに不飽和や酸化の存在によって、１，２，３等のサブクラスに分類される。またこれらの合成類似体も多く知られている。このうちＰＧＩ誘導体のなかでも代表的なＰＧＩ２はプロスタサイクリンともよばれ（Ｎａｔｕｒｅ２６８巻６８８頁１９７６年参照）、強力な血小板凝集抑制作用及び末梢血管拡張作用を有する物質として知られている。このＰＧＩ２の不安定さを大幅に改善した化合物として、ＰＧＩ２の特徴的構造であるエキソエノールエーテル部分の構造をインタ−ｍ−フェニレン型に変換した骨格を有するＰＧＩ２誘導体が、特公平２−１２２２６号公告、特公平２−５７５４８号公告、特公平１−５３６７２号公告に記載されている。さらに、他のプロスタグランジンＩの安定性を増した化合物として、アタプロスト、イロプロスト、クリンプロスト、シプロステン、ナクサプロステン、タプロステン、シカプロスト、ピミルプロスト、ＣＨ−１６９、ＣＳ５７０が知られている（現代医療社 総説プロスタグランジンＮｏ．１ １２３頁１９９４年、明日の新薬 １５−ＩＶ−１８５頁１９９６年、明日の新薬 １５−ＩＩＩ−５５１頁１９９６年 参照）。しかしながら、これらのプロスタン酸誘導体がＣ−Ｃケモカイン産生を直接抑制する作用があることは知られていない。
【００１２】
本発明の目的は、これまでの既存薬では有効でなかったり、重篤な副作用を示す疾患である単球及び／又はマクロファージ、好酸球、好塩基球などの白血球の異常集積又は活性化を特徴とする疾患の予防及び治療薬を提供することである。
【００１３】
【発明の開示】
本発明は、プロスタン酸誘導体を有効成分とするＣ−Ｃケモカイン産生抑制剤である。
【００１４】
【発明を実施するための最良の形態】
本発明のプロスタン酸誘導体とは、プロスタン酸骨格を有するＰＧＡ類，ＰＧＢ類，ＰＧＣ類，ＰＧＤ類，ＰＧＥ類，ＰＧＦ類，ＰＧＧ類，ＰＧＨ類，ＰＧＩ類，ＰＧＪ類のいずれの誘導体であってもよく、また不飽和や酸化の存在によって分類される、１，２，３等のサブクラスのいずれの誘導体であってもよい。また天然だけでなくいかなる合成類似体も含む。さらに一般にプロスタン酸の基本骨格の炭素数は２０であるが、本発明のプロスタン酸での炭素数は特に規定されない。本発明で好ましく用いられるＰＧＩ誘導体は、ＰＧＩ１誘導体、ＰＧＩ２誘導体、ＰＧＩ３誘導体またはそれらの塩のいずれでも良いが、好ましくはＰＧＩ２誘導体またはその塩が用いられる。さらに好ましくは下記一般式（Ｉ）
【００１５】
【化２】
0004314742.tif 000002
【００１６】
［式中、Ｒ１は、
（Ａ）ＣＯＯＲ２ここでＲ２は、
１）水素または薬理学的に受け入れられる陽イオン、
２）炭素数１〜１２の直鎖アルキルまたは炭素数３〜１４の分岐アルキル、
３）−Ｚ−Ｒ３
ここでＺは原子価結合、またはＣｔＨ２ｔで表される直鎖または分岐アルキレンであり、ｔは１〜６の整数を示し、Ｒ３は炭素数３〜１２のシクロアルキルまたはＲ４の１〜３個で置換された炭素数３〜１２の置換シクロアルキルであり、Ｒ４は水素または炭素数１〜５のアルキル、
４）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ３
ここで、ｎは１〜５の整数、
５）−Ｚ−Ａｒ１
ここでＺは前記定義に同じ、Ａｒ１はフェニル、α−ナフチル、β−ナフチル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、α−フリル、β−フリル、α−チエニル、β−チエニルまたは置換フェニル（ここで置換基は少なくとも１個の塩素、臭素、フッ素、ヨウ素、トリフルオロメチル、炭素数１〜４のアルキル、ニトロ、シアノ、メトキシ、フェニル、フェノキシ、ｐ−アセトアミドベンズアミド、−ＣＨ＝Ｎ−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｐｈ、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ３または−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ２であるもの）、
６）−ＣｔＨ２ｔＣＯＯＲ４
ここでＣｔＨ２ｔ、Ｒ４は前記定義に同じ、
７）−ＣｔＨ２ｔＮ（Ｒ４）２
ここでＣｔＨ２ｔ、Ｒ４は前記定義に同じ、
８）−ＣＨ（Ｒ５）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ６
ここでＲ５は水素またはベンゾイル、Ｒ６はフェニル、ｐ−ブロモフェニル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−ビフェニル、ｐ−ニトロフェニル、ｐ−ベンズアミドフェニル、２−ナフチル、
９）−ＣｐＨ２ｐ−Ｗ−Ｒ７
ここで、Ｗは−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＲ７−、または−Ｃ≡Ｃ−であり、Ｒ７は水素、または炭素数１〜３０の直鎖もしくは分岐アルキルまたはアラルキルであり、ｐは１〜５の整数、または、
１０）−ＣＨ（ＣＨ２ＯＲ８）２
ここでＲ８は炭素数１〜３０のアルキルまたはアシル、
（Ｂ）−ＣＨ２ＯＨ
（Ｃ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２
ここでＲ９は水素、炭素数１〜１２の直鎖アルキル、炭素数３〜１２の分岐アルキル、炭素数３〜１２のシクロアルキル、炭素数４〜１３のシクロアルキルアルキレン、フェニル、置換フェニル（ここで置換基は上記（Ａ）５）の場合と同義）、炭素数７〜１２のアラルキルまたは−ＳＯ２Ｒ１０を表わし、Ｒ１０は炭素数１〜１０のアルキル、炭素数３〜１２のシクロアルキル、フェニル、置換フェニル（ここで置換基は上記（Ａ）５）の場合と同義）、炭素数７〜１２のアラルキルを表わし、２つのＲ９は同一でも異なっていてもよいが、一方が−ＳＯ２Ｒ１０を表わす場合は他のＲ９は−ＳＯ２Ｒ１０ではないものとする、または、
（Ｄ）−ＣＨ２ＯＴＨＰ（ＴＨＰはテトラヒドロピラニル基）であり、
Ａは、
１）−（ＣＨ２）ｍ−
２）−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−
３）−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ−
４）−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−
５）−ＣＨ＝ＣＨ−
６）−Ｏ−ＣＨ２−または
７）−Ｃ≡Ｃ−であり、
ここで、ｍは１から３の整数を示し、
Ｙは、水素、炭素数１〜４のアルキル、塩素、臭素、フッ素、ホルミル、メトキシまたはニトロであり、
Ｂは、
−Ｘ−Ｃ（Ｒ１１）（Ｒ１２）ＯＲ１３ 
ここで、Ｒ１１は水素、または炭素数１〜４のアルキルであり、Ｒ１３は水素、炭素数１〜１４のアシル、炭素数６〜１５のアロイル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル、ｌ−エトキシエチルまたはｔ−ブチルであり、Ｘは、
１）−ＣＨ２−ＣＨ２−
２）−ＣＨ＝ＣＨ−
３）−Ｃ≡Ｃ−であり、
Ｒ１２は、
１）炭素数１〜１２の直鎮アルキル、炭素数３〜１４の分岐アルキルまたは、
２）−Ｚ−Ａｒ２
ここでＺは前記定義に同じ、Ａｒ２はフェニル、α−ナフチル、β−ナフチル、または少なくとも１個の塩素、臭素、フッ素、ヨウ素、トリフルオロメチル、炭素数１〜４のアルキル、ニトロ、シアノ、メトキシ、フェニルもしくはフェノキシ置換したフェニルを表わし、または、
３）−ＣｔＨ２ｔＯＲ１４ 
ここでＣｔＨ２ｔは前記定義に同じ、Ｒ１４は炭素数１〜６の直鎖アルキル、炭素数３〜６の分岐アルキル、フェニル、少なくとも１個の塩素、臭素、フッ素、ヨウ素、トリフルオロメチル、炭素数１〜４のアルキル、ニトロ、シアノ、メトキシ、フェニルもしくはフェノキシ置換したフェニル、シクロペンチル、シクロヘキシル、または、炭素数１〜４の直鎖アルキルの１〜４個で置換されたシクロペンチルまたはシクロヘキシルを表わし、または、
４）−Ｚ−Ｒ３
ここでＺ、Ｒ３は前記定義に同じ、または、
５）−ＣｔＨ２ｔ−ＣＨ＝Ｃ（Ｒ１５）Ｒ１６
ここでＣｔＨ２ｔは前記定義に同じ、Ｒ１５、Ｒ１６は水素、メチル、エチル、プロピル、またはブチルを表わし、または、
６）−ＣｕＨ２ｕ−Ｃ≡Ｃ−Ｒ１７ 
ここでｕは１〜７の整数であり、ＣｕＨ２ｕは直鎖または分岐アルキレンを表わし、
Ｒ１７は炭素数１〜６の直鎖アルキルを表わし、
Ｅは、水素、または−ＯＲ１８
ここでＲ１８は炭素数１〜１２のアシル、炭素数７〜１５のアロイルまたはＲ２（ここでＲ２は前記定義に同じ）を表わし、
一般式はｄ体、ｌ体またはｄｌ体を表わす］
で表わされる４，８−インタ−ｍ−フェニレンプロスタグランジンＩ２誘導体または薬理学的に許容し得るその塩が用いられる。
【００１７】
本発明の好ましいプロスタグランジンＩ誘導体の具体例としては、下記構造式で表されるベラプロスト又はその塩、
【００１８】
【化３】
0004314742.tif 000003
【００１９】
アタプロスト、イロプロスト、クリンプロスト、シプロステン、ナクサプロステン、タプロステン、シカプロスト、ピミルプロスト、ＣＨ−１６９、ＣＳ５７０等が挙げられるが、特にこれらに限定されない。
【００２０】
本発明のプロスタン酸誘導体は、公知の方法で製造することができる。例えば一般式（Ｉ）で表される化合物またはその塩は、特公平１−５３６７２号公報に記載されている方法により製造することができる。
【００２１】
上述のように、本発明のプロスタン酸誘導体は、白血球の遊走を促進するＣ−Ｃケモカインの産生を抑制することによって、病原局所への走化性を抑制する。
【００２２】
本発明での代表的なＣ−Ｃケモカインとして、ＭＣＰ−１を挙げることができる。ＭＣＰ−１は、単球およびマクロファージ、リンパ球といった血球系の細胞のほかに、線維芽細胞、血管内皮細胞、平滑筋細胞、各種腫瘍細胞など様々な細胞から、ＩＬ−１、ＴＮＦ、ＩＦＮ−γ、ＬＰＳ、ホルボールエステル（ＴＰＡ）などの刺激により産生されることが報告されている。他のＣ−Ｃケモカインとして、ＲＡＮＴＥＳ、ＬＤ７８、ＡＣＴ２、Ｉ−３０９、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＪＥ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＴＣＡ−３、ｅｏｔａｘｉｎなどがあげられるがこれらに限定されない。
【００２３】
本発明者らはプロスタン酸誘導体の作用を詳細に検討することにより、これらの化合物がＣ−Ｃケモカイン産生抑制を有することを明らかにし本発明を完成した。本発明によって治療することのできる疾患はＣ−Ｃケモカインの異常産生にともなう、白血球特に単球及び／又はマクロファージ、好酸球、好塩基球さらにはリンパ球の異常集積に関連する疾患であれば特に限定されない。
【００２４】
このような疾患の例としては、循環器障害、炎症、アレルギー性疾患、及び腎疾患を挙げることができる。より具体的には急性重篤炎症、慢性難治性炎症、腎炎、糸球体腎炎、腎盂炎、糖尿病性腎症、肺線維症、肺炎、ＡＲＤＳ、線維腫、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、痛風、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、クローン病、変形性関節炎、寄生虫症、好酸球性胃腸炎、動脈硬化、ＰＴＣＡを含む冠動脈手術後の動脈再閉塞、心筋梗塞、悪性上皮癌転移及び悪性肉腫転移、および糖尿病性細血管障害、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性大血管障害、変形性関節炎を挙げることができる。
【００２５】
本発明におけるプロスタン酸誘導体の投与量は成人に対して０．００１〜１０００ｍｇ／人を１日１〜３回である。本発明のＣ−Ｃケモカイン産生抑制剤は、１種または数種のプロスタン酸誘導体をそのまま用いても良いが、以下に示す添加剤を含む固形物の形で経口投与することもできる。
【００２６】
添加剤としては例えば賦形剤、例えば澱粉類、ラクトース、スクロース、葡萄糖、マンニトール、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム等：結合剤、例えば、澱粉類、デキストリン、アラビアゴム、トラガンド、メチルセルロース、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等：崩壊剤、例えば、澱粉類、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース等、滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク等：着色剤、香料等があげられる。
【００２７】
本発明で用いるプロスタン酸誘導体は各種剤形により使用できるが、具体的には錠剤、糖衣錠、粉末、顆粒、トローチ剤、カプセル剤、丸剤、シロップ剤、スプレー剤などの従来用いられる剤形が挙げられる。また、殺菌溶液の形で非経口的に投与しても良く、また他の溶質、例えば液を等張にするに十分な塩化ナトリウムまたはグルコース等を用いることもできる。本発明のＣ−Ｃケモカイン産生抑制剤は上記経口用の製剤の他、各種注射剤、座剤など非経口的にも幅広い投与法を応用できる。
【００２８】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
【００２９】
実施例１
ヒト単球・マクロファージ系細胞ＴＨＰ−１のＭＣＰ−１産生量に対する作用：
ヒト単球・マクロファージ系白血病細胞ＴＨＰ−１を用いてベラプロストナトリウム（ＢＰＳ）のＭＣＰ−１産生に対する作用を検討した。ＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ社より入手）よりリポポリサッカライド（ＬＰＳ：Ｄｉｆｃｏ社）反応性亜株を分離し、フラスコ内で１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ社）で培養した。１２ウエルプレートにＴＨＰ−１細胞（１×１０６ｃｅｌｌｓ）を分注し、細胞の活性化にはＬＰＳ １０μｇ／ｍｌを使用した。ＢＰＳはＬＰＳ刺激の５分前に添加した。刺激２４時間後に、細胞上清を得てＭＣＰ−１産生量の測定は、ヒトＭＣＰ−１エライザキット（Ｒ＆Ｄ社）を用いて実施した。産生量の算出はキットにあるＭＣＰ−１スタンダードを用いて３１．２〜２０００ｐｇ／ｍｌの範囲で検量線を作成し、これを基に算出した。この結果、ＢＰＳはＬＰＳ １０μｇ／ｍｌによって誘発されたＴＨＰ−１細胞のモノサイト遊走因子の産生を用量依存的に抑制した（第１図）。
【００３０】
実施例２
ヒト単球・マクロファージ系細胞ＴＨＰ−１のＭＣＰ−１ｍ−ＲＮＡ発現に対する作用：
ヒト単球・マクロファージ系白血病細胞ＴＨＰ−１を用いてＢＰＳのＭＣＰ−１産生に対する作用をｍＲＮＡ発現量を指標として検討した。ＴＨＰ−１細胞よりＬＰＳ反応性亜株を分離し、フラスコ内で１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。直径１０ｃｍのシャーレにＴＨＰ−１細胞を１×１０６ｃｅｌｌｓを分注し、細胞の活性化にはＬＰＳ １０μｇ／ｍｌを使用した。ＢＰＳはＬＰＳ刺激５分前に添加した。刺激２４時間後に、ＬｉＣｌ−Ｕｒｅａ溶液（６Ｍ Ｕｒｅａ／３Ｍ ＬｉＣｌ／５ｍＭ ＥＤＴＡ／０．１Ｍ ２ＭＥ）にてＴｏｔａｌＲＮＡを抽出し、ＴＥ溶液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ／１ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）に溶解した後、フェノール／クロロホルムで除タンパクしてから、エタノール沈殿にて回収した。ＲＮＡはホルムアルデヒド変性１％アガロースゲルに展開し、Ｈｙｂｏｎｄ−Ｎフィルター（アマシャム社）にトランスファーした後、３２Ｐラベル化したヒトＭＣＰ−１のプローブを用いて、ＭＣＰ−１ｍＲＮＡを検出した。検出はＸ線フィルムまたはイメージングフィルムを用いて、ＢＡＳ２０００により発現量を数値化した。この結果、ＢＰＳはＬＰＳ刺激によるＴＨＰ−１細胞のＭＣＰ−１ｍＲＮＡの発現を用量依存的に抑制した（第２図）。
【００３１】
実施例３
ヒト末梢血由来単球のＭＣＰ−１産生に対する作用：
ヒト末梢血由来単球を用いてＢＰＳのＭＣＰ−１産生に対する作用を検討した。健常人のヘパリン加末梢血をヒストパック（シグマ社）に重層し、遠心操作により単核球層を得た。抗ＣＤ３と抗ＣＤ１９のマグネティックビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社）と反応させ、ＭＡＣＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社）を用いたネガティブセレクション法により単球を精製した。得られた単球を１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌになるようＲＰＭＩ１６４０培地で再浮遊させた。４８ウエルプレートに細胞を分注し、細胞の活性化にはＬＰＳ １０ｎｇ／ｍｌを使用した。ＢＰＳはＬＰＳ刺激の５分前に添加した。刺激２４時間後に、細胞上清を得てモノサイト遊走因子の産生量の測定は、ヒトＭＣＰ−１エライザキットを用いて実施した。産生量の算出はキットにあるＭＣＰ−１スタンダードを用いて３１．２〜２０００ｐｇ／ｍｌの範囲で検量線を作成し、これを基に算出した。この結果、ＢＰＳはＬＰＳ １０ｎｇ／ｍｌによって誘発されたヒト末梢血単球のＭＣＰ−１の産生を抑制した（第３図）。
【００３２】
実施例４
ヒト単球・マクロファージ系細胞ＴＨＰ−１のＭＣＰ−３産生に対する作用：
ヒト単球・マクロファージ系白血病細胞ＴＨＰ−１を用いてＢＰＳのＭＣＰ−３産生に対する作用を検討した。ＴＨＰ−１細胞よりＬＰＳ反応性亜株を分離し、フラスコ内で１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。１２ウエルプレートにＴＨＰ−１細胞（１×１０６ｃｅｌｌｓ）を分注し、細胞の活性化にはＬＰＳ １０μｇ／ｍｌを使用した。ＢＰＳはＬＰＳ刺激５分前に添加した。刺激２４時間後に、細胞上清を得てＭＣＰ−３の産生量の測定は、我々が開発したＭＣＰ−３量の検出方法を用いて実施した。ＭＣＰ−３産生量の算出はＭＣＰ−３スタンダードを用いて０．１９５〜１２．５ｎｇ／ｍｌの範囲で検量線を作成し、これを基に算出した。この結果、ＢＰＳはＬＰＳ １０μｇ／ｍｌによって誘発されたＴＨＰ−１細胞のＭＣＰ−１だけでなく、ＭＣＰ−３の産生を用量依存的に抑制した（第４図）。
【００３３】
実施例５
糖尿病ラットにおけるＬＰＳ誘発血中ＭＣＰ−１量に対するＢＰＳ投与の効果：
ＳＤ系雄性ラットにストレプトゾトシンを４５ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与することによって糖尿病を誘発した。誘発後８週目にＬＰＳを２ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与し、投与前、投与後３および６時間後の血中ＭＣＰ−１量を測定した。ＢＰＳの経口投与はＬＰＳ投与３０分前におこなった。また正常群として糖尿病群と同一週齢のラットを用いた。第１表に結果を示す。糖尿病ラットでは正常ラットに比べ、ＬＰＳを投与したときのＭＣＰ−１産生が有意に亢進していた。ＢＰＳ投与群ではこのＭＣＰ−１産生は有意に抑制され、ＢＰＳが糖尿病によるＭＣＰ−１の産生異常を改善することが、ｉｎ ｖｉｖｏの実験で示された。同様の糖尿病ラットを用いて、座骨神経の神経伝導速度を測定したところ、ＢＰＳは糖尿病によって低下した神経伝導速度を有意に改善した（第５図）。
【００３４】
【表１】
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【００３５】
実施例６
ヒト単球・マクロファージ系細胞ＴＨＰ−１のＭＣＰ−１産生に対する作用：
実施例１と同様な方法でプロスタグランジンＩ２（ＰＧＩ２）プロスタグランジンＥ１（ＰＧＥ１）およびプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）のＭＣＰ−１産生に対する作用を検討した。この結果、ＰＧＩ２、ＰＧＥ１およびＰＧＥ２はＭＣＰ−１産生を抑制した（第６図）。
【００３６】
実施例７
ヒト単球・マクロファージ系細胞ＴＨＰ−１のＭＣＰ−１産生に対する作用：
実施例１と同様な方法で下表の化合物のＭＣＰ−１産生に対する作用を検討した。化合物の作用は抑制率で示した。この結果、これらの化合物はＭＣＰ−１産生を抑制した（第２表）。
【００３７】
【表２】
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【００３８】
実施例８
ヒト末梢血由来単球のＭＣＰ−１産生に対する作用：
実施例３と同様な方法でヒト末梢血由来単球を分離し、この単球を１２−０−Ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｒｂｏｌ １３−ａｃｅｔａｔｅ（ＴＰＡ）２５ｎＭで刺激することによってＭＣＰ−１産生を誘発した。このＭＣＰ−１産生に対するＢＰＳの作用を検討した。その結果、ＴＰＡ刺激により産生された２２４．７ｐｇ／１×１０６ｃｅｌｌｓのＭＣＰ−１は、ＢＰＳ １００ｎＭによって１８４ｐｇ／１×１０６ｃｅｌｌｓに減少し、ＢＰＳはＴＰＡ刺激によるＭＣＰ−１産生を抑制することが確認された。
【００３９】
実施例９
ヒト末梢血由来単球のＭＣＰ−１産生量に対する作用：
実施例３および実施例８と同様な方法でヒト末梢血由来単球を用いて、ＬＰＳまたＴＰＡ刺激によるＭＣＰ−１産生に対するプロスタグランジンＪ２（ＰＧＪ２）の作用を検討した。ＰＧＪ２は刺激１分前に添加した。その結果、ＰＧＪ２は両刺激によるＭＣＰ−１産生を抑制した（第３表）。
【００４０】
【表３】
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【００４１】
実施例１０
ヒト単球・マクロファージ系細胞ＴＨＰ−１のＲＡＮＴＥＳ産生に対する作用：
実施例１と同様な方法でＴＨＰ−１細胞を調整し、ＬＰＳ刺激によりＲＡＮＴＥＳ産生を誘発した。ＲＡＮＴＥＳ産生量の測定はヒトＲＡＮＴＥＳエライザキット（Ｒ＆Ｄ社）を用いて実施した。ＲＡＮＴＥＳ産生に対するＰＧＪ２の作用を検討した。その結果、ＬＰＳ刺激により産生された５１７７ｐｇ／５×１０５ｃｅｌｌｓのＲＡＮＴＥＳは、ＰＧＪ２１０μＭによって２４０３ｐｇ／５×１０５ｃｅｌｌｓに減少し、ＰＧＪ２はＬＰＳ刺激によるＲＡＮＴＥＳ産生を抑制することが確認された。
【００４２】
実施例１１
ラット糸球体腎炎モデルにおける腎臓中ＭＣＰ−１産生とマクロファージ浸潤に対する作用：
腎糸球体基底膜に対する抗体の投与によりラット糸球体腎炎モデルを作成した。ラットは雄性ＷＫＹラット９週令を日本チャールズリバーより購入して用いた。抗体はラット糸球体基底膜をウサギに免役することにより得た。抗体投与後４日目以降から尿中タンパク量が増え始め、投与後１１日目までにプラトーに達し、その後はラットが死亡するまで変化しなかった。また病理所見からも半月体形成などの糸球体病変が確認され、抗糸球体基底膜抗体投与により不可逆的な糸球体腎炎モデルが作成できた。抗体投与後の日数の経過とともに腎臓内のＭＣＰ−１産生が増加し、マクロファージなどの白血球の浸潤が認められた。ＢＰＳは１ｍｇ／ｋｇを連日経口投与し、これらのＭＣＰ−１産生とマクロファージ浸潤に対する作用を検討した。ＭＣＰ−１産生はラット腎臓よりメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を精製し、定量ＰＣＲによってＭＣＰ−１ｍＲＮＡの発現量を定量した。またマクロファージ浸潤は抗マクロファージ抗体（ＥＤ−１）を用いて免疫染色し、糸球体内の浸潤マクロファージを顕微鏡下でカウントした。抗体投与後４日目および７日目において蒸留水投与群とＢＰＳ投与群を比較すると、後者はＭＣＰ−１ｍＲＮＡ発現の抑制と平行して糸球体１個あたりのマクロファージの浸潤を顕著に抑制した（第７図ａおよびｂ）。同様の糸球体腎炎モデルで、抗体投与後４日目と７日目の尿中タンパク量に対するＢＰＳの作用を検討した。その結果、ＢＰＳは両日とも有意に尿中タンパク量を減少させた（第８図）。
【００４３】
【産業上の利用可能性】
プロスタン酸誘導体は、Ｃ−Ｃケモカイン産生抑制作用を持ち、循環器障害、炎症、アレルギー性疾患、腎疾患等の治療に有効である。
【図面の簡単な説明】
第１図は、ＬＰＳ刺激によるＴＨＰ−１細胞のＭＣＰ−１産生に対するＢＰＳの作用を示す。
第２図は、ＬＰＳ刺激によるＴＨＰ−１細胞のＭＣＰ−１ｍＲＮＡ発現量に対するＢＰＳの作用を示す。
第３図は、ＬＰＳ刺激によるヒト末梢血単球のＭＣＰ−１産生に対するＢＰＳの作用を示す。
第４図は、ＬＰＳ刺激によるＴＨＰ−１細胞のＭＣＰ−３産生量に対するＢＰＳの作用を示す。
第５図は、ストレプトゾトシン誘発糖尿病ラットの神経伝導速度に対するＢＰＳ投与の効果を示す。
第６図はＬＰＳ刺激によるＴＨＰ−１細胞のＭＣＰ−１産生量に対する各種ＰＧの作用を示す。
第７図は、糸球体腎炎モデルにおける糸球体へのマクロファージの浸潤（第７図ａ）と、腎ＭＣＰ−１遺伝子発現の変化（第７図ｂ）に対するＢＰＳ投与の効果を示す。
第８図は、糸球体腎炎モデルにおける尿中タンパク量に対するＢＰＳ投与の効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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