(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式
0004373671.tif 000011
（式中、ｎは１の整数であり、ｍは０〜２の整数であり、Ｘは水素原子を示す）で表されるマルトオリゴ糖誘導体又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩。
【請求項２】
ｎが１であり、ｍが０〜１の整数であり、Ｘが水素原子である、請求項１に記載のマルトオリゴ糖誘導体又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩。
【請求項３】
請求項１に記載のマルトオリゴ糖誘導体又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする、α−アミラーゼ阻害剤。
【請求項４】
ｎが１であり、ｍが０〜１の整数であり、Ｘが水素原子である、請求項３に記載のα−アミラーゼ阻害剤。
【請求項５】
請求項１に記載のマルトオリゴ糖誘導体又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする、過血糖症予防又は治療剤。
【請求項６】
ｎが１であり、ｍが０〜１の整数であり、Ｘが水素原子である、請求項５に記載の過血糖症予防又は治療剤。
【請求項７】
前記過血糖症が糖尿病である、請求項５又は６に記載の過血糖症予防又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、特定の構造を有するマルトオリゴ糖誘導体及びその用途に関する。さらに詳しくは、本発明は前記誘導体を有効成分として含有するα−アミラーゼ阻害剤、及び過血糖症、例えば糖尿病及びその合併症の疾患を予防又は治療するのに有用な医薬に関する。
背景技術
哺乳動物が摂取した炭水化物は、口腔及び胃内で唾液α−アミラーゼによりある程度消化（水解）され、次いで、十二指腸及び空腸内で膵α−アミラーゼにより本格的に消化されてオリゴ糖や二糖類となる。これらが更にグルコアミラーゼ、マルターゼなどのグルコシド加水分解酵素により加水分解され、最終的にはグルコースなどの単糖類となり、腸管膜上の繊毛から吸収される。このように、炭水化物の摂取後には、この吸収されたグルコースにより、一次的に血糖値が上昇するいわゆる過血糖症状が起こる。しかし、通常生体における恒常性維持システムによって、この上昇血糖値は一定の範囲に調整されこの症状は回復する。
ところが、食餌性過血糖症状が長時間持続したり、血糖値が異常に高値を示すなどの糖代謝異常となると、過血糖症と称される疾患となり、肥満症や糖尿病などの症例をもたらす。この肥満症は、過食による過血糖症状がインシュリンの多量の分泌を促進し、このために脂肪合成の増大及び脂肪分解の減少をもたらし、体内に脂肪が蓄積される結果発症する。一方、糖尿病は、過食による過血糖症状がインシュリンの多量の分泌を促進し、このためにインシュリンレセプターの感度低下や膵臓ランゲルハンス氏島β細胞疲弊をもたらして発症する。また、肥満症や糖尿病は、高脂血症、高血圧、動脈硬化症、自律神経障害、白内障など多くの重い合併症を引き起こすことが知られている。
このような過血糖症の有力な治療薬として、消化酵素阻害剤、例えばボグリボースを含有させた「ベイスン」（武田薬品工業（株）製）、アカルボースを含有させた「グルコバイ」（バイエル薬品（株）製）などが実際の臨床で用いられている。しかしながら、両化合物とも強力にグルコシダーゼを阻害することから、腹部膨満、鼓腸、放屁増加、軟便、下痢、腹痛などの副作用があるという欠点を有している。
発明の開示
本発明の目的は、従来の過血糖症の治療及び予防剤が有する前記した欠点がなく、ヒトα−アミラーゼを強く阻害して過血糖症、例えば糖尿病及びこれに起因する疾病などの予防及び治療に有効な成分、その有効成分を含有させたα−アミラーゼ阻害剤及び過血糖症の予防又は治療剤を提供することにある。
本発明者らは、前記目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、オリゴ糖の還元末端グルコースをデオキシノジリマイシンに変換し、そのデオキシノジリマイシン残基を１番目として数えて２〜４番目のグルコース残基の６位を疎水性基に変換したマルトオリゴ糖誘導体又はその水和物あるいはその生理学的に許容される塩（以下、「マルトオリゴ糖誘導体」と呼ぶ）が、α−アミラーゼ（膵液及び唾液腺由来α−アミラーゼ。以下、ヒト膵液由来のα−アミラーゼをＨＰＡ、ヒト唾液腺由来のα−アミラーゼをＨＳＡという）を強く阻害し、グルコースの消化吸収を抑制・遅延させること、またこれらの化合物を過血糖症の治療及び予防剤として用いることにより、前記した従来技術の欠点を克服できることを見いだし、これらの知見に基づいて本発明を完成するに至った。すなわち本発明は、次の一般式（１）
0004373671.tif 000002
（式中、ｎは０〜２の整数であり、ｍは０〜２の整数であり、Ｘは水素原子又は疎水基を示す）で表されるマルトオリゴ糖誘導体である。また本発明は前記マルトオリゴ糖誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、α−アミラーゼ阻害剤である。さらにまた本発明は前記マルトオリゴ糖誘導体を有効成分として含有することを特徴とする、過血糖症の予防又は治療剤である。以下、本発明について詳細に説明する。
発明を実施するための最良の形態
本発明のマルトオリゴ糖誘導体とは、前記一般式（１）で表され、ｎは０〜２の整数であり、ｍは０〜２の整数であり、またＸは水素原子又は疎水基であるものをいう。前記の疎水基としては、例えばフッ素、塩素、臭素、沃素などのハロゲン原子、あるいは置換若しくは非置換のアルキルオキシ基、置換若しくは非置換のアルキルチオ基、置換若しくは非置換のアルキルスルホニル基、置換若しくは非置換のアルキルカルバモイル基、アジド基などが好ましく挙げられる。
本発明誘導体をα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症予防又は治療剤などとして用いる際には、後述するような理由から、一般式（１）中のｎは０〜２の整数であり、ｍは０〜２の整数であり、そしてＸが水素原子又はハロゲン原子であるもの又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩が好ましく、特にｎが１であり、ｍは０〜１、であり、Ｘが水素原子であるものが好ましい。
一般式（１）で表される本発明誘導体を製造するには、例えば下記一般式（２）
0004373671.tif 000003
（式中、ｐは０〜４の整数を示す）
で表されるマルトオリゴ糖誘導体、すなわちマルトオリゴシル・デオキシノジリマイシンを合成原料とすることにより、効率よく合成することができる。このマルトオリゴ糖誘導体は、例えば〔Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第５０巻、第６３９〜６４４頁、１９８６年〕に記載の方法で、市販のデオキシノジリマイシンを澱粉とバクテリア由来アミラーゼを用いてカップリングさせることにより合成することができる。また、他の方法としてはデオキシノジリマイシンをα−シクロデキストリンとシクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼを用いてカップリングさせ、必要によりグルコアミラーゼを作用させることにより効率よく合成することができる。
目的の本発明誘導体は、上記一般式（２）に示すマルトオリゴシル・デオキシノジリマイシンを原料として用い、必要により例えばクロロギ酸ベンジルにて環状アミノ基を保護した後、例えばピリジン中でｐ−トルエンスルホニル  クロライド（トシルクロライド）を反応させ、必要により６−トシルマルトオリゴシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシンを常法により単離し、これをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中で、例えばハロゲン化ナトリウムを反応させることにより、６−ハロゲン化マルトオリゴシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシンが得られる。また、この６−ハロゲン化マルトオリゴシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシンを、そのままアルカリ処理により脱保護することにより、６−ハロゲン化マルトオリゴシル・デオキシノジリマイシンを得ることができる。また、６−ハロゲン化マルトオリゴシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシンをパラジウムカーボンの存在下、水素ガスを添加して還元し、必要によりアルカリ処理を行ない、６−ハロゲン基も同時に還元することにより、６−デオキシマルトオリゴシル・デオキシノジリマイシンを得ることができる。
次いで、上記のようにして得られた本発明誘導体を、常法、例えば適宜な有機溶媒などを用いる析出法、イオン交換樹脂あるいはアミノプロピルシリカゲル、シリカゲル、活性炭などを用いるカラムクロマトグラフィー法などの処理を施すことにより、精製された目的の本発明誘導体を得ることができる。またｍが１又は２の化合物を優先的に合成するには、予めｍが０である化合物を合成し、それをα−シクロデキストリンとシクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼを用いてカップリングを行い、必要に応じてグルコアミラーゼ反応を行うことにより、効率よく合成することができる。
上記のようにして得られた一般式（１）で表される本発明誘導体で、Ｘが水素原子、ハロゲン原子などの疎水性基で修飾されたマルトオリゴ糖誘導体は、後述するごとく、ＨＰＡ及びＨＳＡに対して強い阻害作用を有する。本発明誘導体は、Ｘが非修飾、すなわちＯＨ基である化合物のアミラーゼ阻害活性と比較して、約５〜９倍の高い活性を有する。また、Ｘが非修飾の化合物は、腸管内に存在するグルコシダーゼ類に分解されやすいため、そのアミラーゼ阻害活性が大きく低下するが、一般式（１）で表される本発明誘導体は、Ｘが修飾されているため、腸管内において分解されにくく、本発明誘導体の活性が腸管内において長時間持続し、結果として、投与量を下げることができる。そしてまた修飾基Ｘは、アミラーゼとの親和性の関係上、疎水性基特に水素原子であるものが有利であり、またｎはアミラーゼとの親和性の関係上、０〜２、特に１であるものが有利であり、ｍは０〜２、特に０〜１であるものが有利である。
本発明誘導体は、このようにα−アミラーゼに対して強い阻害作用を有するので、これを有効成分とすることにより、α−アミラーゼ阻害剤として使用することができる。またそのような阻害作用を有する本発明誘導体は、動物の炭水化物の代謝を抑制するため、血糖上昇を抑制し、過血糖症、例えば糖尿病、肥満症及びこれらに起因する高脂血症、脂肪肝、自立神経障害、動脈硬化症、白内障などの予防又は治療剤、特に糖尿病の予防又は治療剤として有効である。
本発明のα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症の予防又は治療剤は、本発明誘導体、又はその水和物、また本発明誘導体を薬学的に許容できる酸もしくは塩基とで通常の方法により反応させて得られる任意の無毒性の塩としたものもまた用いることもできる。前記した酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などの無機酸、酢酸、リンゴ酸、クエン酸、アスコルビン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸などの有機酸が用いられ、また塩基としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムなどが用いられる。
本発明のα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症の予防又は治療剤は、本発明誘導体を、それら単一か若しくは必要により２種以上を組み合わせ、これを有効成分として含有させることにより調製される。また、本発明のα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症の予防又は治療剤は、本発明誘導体、又はこれに賦形剤、滑沢剤、希釈剤、安定剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、甘味剤、芳香剤、矯味剤、着色剤、保存剤、乳化剤、粘稠剤、基剤などの調合剤を併用し、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、座剤、注射剤、点滴剤その他の製剤の形とすることができる。これらの製剤の製造は常法により行われる。賦形剤としては、例えば通常用いられるバレイショデンプン、乳糖、結晶セルロース、マンニットなどが、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油などが、また甘味剤、芳香剤、矯味剤としては、例えば食塩、サッカリン、オレンジ油、クエン酸、メントール、リンゴ酸などが用いられる。
本発明のα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症の予防又は治療剤、糖尿病の予防又は治療剤の投与量は、投与方法と症状の程度、患者の年齢、体重などにより異なるが、通常、成人一人１日当たり、本発明誘導体として１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、好ましくは５０ｍｇ〜３００ｍｇの範囲が好ましく選ばれる。
投与方法は、経口的又は非経口的のいずれの方法でもよいが、経口的に投与するのが有利である。また前記した用途のほかに、本発明誘導体は、それ自体又は前記した調合剤などを適宜組み合わせて、これを食品、例えばコーヒー、清涼飲料水、果汁、ジャム、ビスケット、その他の食品に添加されることにより、α−アミラーゼ阻害効果を有する健康保持用の食品とすることもできる。以下に実施例を示し、本発明をさらに詳細に説明する。
実施例１［Ｏ−（６−ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（以下、ＤＯＧＧＤＮという）の製造］
下記の構造式（３）
0004373671.tif 000004
で表されるマルトシル・デオキシノジリマイシン（以下、ＧＧＤＮという）（１．５ｇ，３．１ｍｍｏｌ）を蒸留水４０ｍｌに溶解し、そこに炭酸水素ナトリウム（７８１ｍｇ，９．３ｍｍｏｌ）及びクロロギ酸ベンジル（１．０ｇ，６．２ｍｍｏｌ）を加え撹拌下、室温にて７時間反応を行った。反応終了後、反応液をＯＤＳクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ→１０％エタノール，グラジエント）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍結乾燥を行い、下記の構造式（４）を有する。マルトシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシン（１．１ｇ，１．８ｍｍｏｌ，５７％）を得た。
0004373671.tif 000005
次いで、前記と同様な方法で得たマルトシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシン（１．９ｇ，３．１ｍｍｏｌ）をピリジン３０ｍｌに溶解し、トシルクロライド（８８６ｍｇ，４．７ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下２日間反応を行った。反応終了後、蒸留水１５ｍｌを加え反応を停止させた後、濃縮乾固を行い、残渣を少量の蒸留水に溶解し、この溶液をＯＤＳクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ→５０％エタノール，グラジエント）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍結乾燥を行い、下記の構造式（５）を有する無色の粉末６２−Ｏ−トシルマルトシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシン（７８０ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ，３２％）を得た。
0004373671.tif 000006
次に、得られた６２−Ｏ−トシルマルトシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシン（２８０ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド３０ｍｌに溶解し、ヨウ化ナトリウム（５００ｍｇ，３．３ｍｍｏｌ）を加え撹拌下、８０℃にて８時間反応を行った。反応終了後、反応液をＯＤＳクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ→３０％  エタノール，グラジエント）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍結乾燥を行い、下記の構造式を有する無色の粉末６２−ヨードマルトシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシン（１６０ｍｇ，０．２８ｍｍｏｌ，７８％）を得た。
0004373671.tif 000007
次に、得られた６２−ヨードマルトシル・Ｎ−カルボベンゾキシデオキシノジリマイシン（１００ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を蒸留水１０ｍｌに溶解し、パラジウム−活性炭（Ｐｄ１０％，１０ｍｇ）を加え、撹拌下で水素ガスを添加し、室温にて１６時間反応を行った。反応終了後、パラジウム−活性炭をセライトろ過し、ろ液に１Ｎ  ＮａＯＨ溶液２ｍｌを添加し、撹拌下４０℃にて３時間さらに反応を行った。反応終了後、反応液を１Ｎ  ＨＣｌ溶液にて中和し、濃縮後、濃縮液をＣＧ５０イオン交換樹脂（ＮＨ４＋）カラムクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏにて溶出）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍結乾燥を行い、下記の構造式（７）を有する無色の粉末Ｏ−（６−ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（６０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，９１％）を得た。
0004373671.tif 000008
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１．２９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，Ｈ−６ｃ），２．５７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．７  ａｎｄ  １１．４Ｈｚ，Ｈ−１ａ），２．７３−２．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５），３．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．７  ａｎｄ  ５．１Ｈｚ，Ｈ−１ａ），３．１９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−４ａ），３．５１−４．０２（ｍ），５．３５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｈ−１ｂ−ｃ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１９．３９（−ＣＨ３），５１．２５（Ｃ−５ａ），１０２．７  ａｎｄ  １０２．９（Ｃ−１ｂ−ｃ）．
理論値（Ｃ１８Ｈ３３ＮＯ１３・０．５Ｈ２Ｏ）：Ｃ，４５．００；Ｈ，７．１３；Ｎ，２．９２．実測値Ｃ，４４．９５；Ｈ，６．９６；Ｎ，３．００．
実施例２［Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（６−ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（以下、ＧＤＯＧＧＤＮという）の製造］
実施例１と同様な方法で得たＤＯＧＧＤＮ（１００ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）及びα−シクロデキストリン１ｇを１０ｍｍｏｌリン酸緩衝液（ＰＨ７．０）３０ｍｌに溶解し、そこにシクロデキストリングルコシルトランスフェラーゼ（５００μｌ，天野製薬製：商品名「コンチザイム」）を添加し、３７℃で８時間撹拌下で反応させ、反応終了後、反応液を１００℃で３０分煮沸することにより反応を停止させた。氷冷後、グルコアミラーゼ（２０ｍｇ，１１００Ｕ，キッコーマン社製）を添加し、さらに６時間反応させた。反応終了後、反応液を１００℃で３０分煮沸することにより反応を停止させた。反応液をセライトろ過し、濃縮後濃縮液をＣＧ５０イオン交換樹脂（ＮＨ４＋）カラムクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏにて溶出）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍結乾燥を行い、下記の構造式（８）を有する無色の粉末Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（６−ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−ｄｅｏｘｙｎｏｊｉｒｉｍｙｃｉｎ（７０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ，５２％）を得た。
0004373671.tif 000009
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１．２８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−６ｃ），２．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．８  ａｎｄ  １１．４Ｈｚ，Ｈ−１ａ），２．７３−２．８４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５），３．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．７  ａｎｄ  ５．１Ｈｚ，Ｈ−１ａ），３．１９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−４ａ），３．５１−４．０２（ｍ），５．３２〜５．４２（ｍ，３Ｈ，Ｈ−１ｂ−ｄ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ：１９．４０（−ＣＨ３），５１．２６（Ｃ−５ａ），１０２．５，１０２．８，ａｎｄ  １０２．９（Ｃ−１ｂ−ｄ）．
理論値（Ｃ２４Ｈ４３ＮＯ１８・１．０Ｈ２Ｏ）：Ｃ，４４．２４；Ｈ，６．９６；Ｎ，２．１５．実測値Ｃ，４４．１２；Ｈ，６．９５；Ｎ，２．２１．
実施例３  （試験管内アミラーゼ活性阻害試験）
（１）ヒトα−アミラーゼ液の調製
市販のＨＰＡ及びＨＳＡに精製水を加え、３５０ＩＵ／ｌの濃度に溶解してα−アミラーゼ液とした。なお、この市販のヒトα−アミラーゼは、「キャリブザイム・ＡＭＹ」（国際試薬（株）製）を使用した。また、α−アミラーゼの活性は、市販α−アミラーゼ測定試薬「ネオ・アミラーゼテスト  第一」（第一化学薬品（株）製）の検量線に従った。
（２）阻害剤溶液の調製
実施例１及び２に記載したと同様の方法で得られたＤＯＧＧＤＮ、ＧＤＯＧＧＤＮ及び活性比較用サンプルのＧＧＤＮを用いて、各々の最終濃度が５ｍＭ〜０．０００１ｍＭとなるように精製水で阻害剤溶液を調製した。
（３）阻害剤溶液のヒトα−アミラーゼ阻害活性（ＩＣ５０値）の測定
ＨＰＡ若しくはＨＳＡ液１００μｌに、精製水３．０ｍｌ、阻害剤溶液１．０ｍｌ及び「ネオアミラーゼテスト  第一」〔第一化学薬品（株）製〕ブルースターチ１錠を加えてミキサーで約１０秒間撹拌後、３７℃で３０分間加温した後、０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１．０ｍｌを加えて撹拌を行い、反応を止め、遠心分離（１，５００Ｇ，５分）を行い、その上清について６２０ｎｍにおける吸光度を測定した。ブランクとして、阻害剤溶液の代わりに精製水を用いた。その結果を表１に示す。なお、ＩＣ５０値とは、ＨＰＡ若しくはＨＳＡ液の活性を５０％阻害するのに必要な阻害物質の最終濃度（ｍＭ）を意味する。
0004373671.tif 000010
表１に示すとおり、グルコース残基の６位をデオキシに変換した本発明のマルトオリゴ糖誘導体（ＤＯＧＧＤＮ及びＧＤＯＧＧＤＮ）は、グルコース残基６位が非修飾であるＧＧＤＮと比較し、ＨＰＡ及びＨＳＡに対する阻害活性が５〜９倍に増強されている。したがって、強い阻害作用を有する本発明のマルトオリゴ糖誘導体は、これを有効成分として用いれば、α−アミラーゼ阻害剤とし得ることがわかる。
実施例４（α−アミラーゼ阻害剤の抗糖尿病作用）
（１）使用動物
市販の体重２５．５〜３０．９ｇの健常マウス〔Ｃｒｊ：ＣＤ−１（ＩＣＲ）日本チャールス・リバー社製〕
（２）実験方法
投与群には、あらかじめ２０時間絶食させたマウス各群５匹に、ＤＯＧＧＤＮ、及び糖質としてコーンスターチを滅菌蒸留水で液状にし、経口投与して強制摂取させた。投与群には、体重１Ｋｇ当たり、ＤＯＧＧＤＮ１０ｍｇ、５ｍｇ、又は１ｍｇ、及びコーンスターチ２０００ｍｇを投与した。また対照群には、ＤＯＧＧＤＮを投与しない以外は、前記と同様にして調製し、摂取させた。
そして、摂取前及び摂取して０．５、１．０、１．５、２．０、３．０、４．０時間経過後のマウスの眼窩静脈叢より採血を行い、血中グルコース量〔血糖値（ｍｇ／ｄｌ）〕を測定し、コーンスターチ摂取後の血糖値上昇に対する抑制効果、すなわち抗糖尿病作用を調べた。その結果を図１に示す。なお、血糖値上昇に対する抑制効果は、ｔ−検定により判定した。また血中グルコース濃度は、血糖値測定機「アントセンス」〔バイエル・三共（株）製〕を用いて測定した。また、図１中、●は対照群、■はＤＯＧＧＤＮ（１ｍｇ／Ｋｇ）、▲はＤＯＧＧＤＮ（５ｍｇ／Ｋｇ）、◆はＤＯＧＧＤＮ（１０ｍｇ／Ｋｇ）、また、＊はＰ＜０．０５、＊＊はＰ＜０．０１、＊＊＊はＰ＜０．００１を意味する。
図１からわかるように、本発明誘導体であるＤＯＧＧＤＮの投与群は、対照群に比して有意に血糖値の上昇を抑制するので、ＤＯＧＧＤＮが、糖尿病の予防または治療剤として有効であることが分かる。なお、投与後の各マウスの排便を観察したところ、投与群では下痢、軟便などの副作用は観察されなかった。
実施例５（凍結乾燥粉末状α−アミラーゼ阻害剤）
ＤＯＧＧＤＮ  ２．４ｇを１０ｍｌの生理食塩水に溶解し、メンブランフィルターを用いて無菌的にろ過を行い、ろ液を滅菌したガラス容器に０．１ｍｌずつ充填し、これを密栓して凍結乾燥し、粉末状のα−アミラーゼ阻害剤とした。
実施例６（経口用錠剤）
下記（１）〜（４）に示す各成分を調製した。
（１）ＤＯＧＧＤＮ              ６ｇ
（２）マンニット              ２０ｇ
（３）バレイショデンプン      ４７ｇ
（４）ステアリン酸マグネシウム  ３ｇ
上記（１）と（２）を混合し、これに（３）を１０％デンプン糊として加え、粒状化し、これをＮｏ．６０メッシュ（Ｂ．Ｓ．）のふるいを通し、更にＮｏ．１６メッシュ（Ｂ．Ｓ．）のふるいで選別し、この粒子を（４）と混合した後、打錠機で直径１０ｍｍ、１錠当りの重量が５００ｍｇの錠剤とし、本発明の過血糖症若しくは糖尿病の予防・治療剤（経口用錠剤）とした。
実施例７（カプセル剤）
ＧＤＯＧＧＤＮ  ５ｇ、バレイショデンプン５ｇ、乳糖５ｇ及び結晶セルロース１ｇをよく混和し、カプセルに充填し、有効成分として１カプセル中に本発明誘導体を５０ｍｇ含有する、カプセル状の本発明の過血糖症若しくは糖尿病の予防・治療剤を調製した。
実施例８（内用液剤）
ＤＯＧＧＤＮ  １ｇに、安息香酸（４５ｖ／ｖエタノール）０．１ｍｌ及び精製水を加えて全量を１０ｍｌとし、本発明の過血糖症若しくは糖尿病の予防・治療剤（内用液剤）を調製した。
実施例９（注射剤）
滅菌したＤＯＧＧＤＮ  ０．５ｇを注射用蒸留水に溶解して全量を３０ｍｌとし、１アンプルに３．０ｍｌの割合で無菌的に封入し、本発明の過血糖症若しくは糖尿病予防・治療用の注射剤とした。
発明の効果
前記一般式（１）で表される本発明のマルトオリゴ糖誘導体は、α−アミラーゼに対して強い阻害作用を有し、しかも下痢、軟便などの副作用もないので、本誘導体を有効成分として含有させれば、α−アミラーゼ阻害剤、又は過血糖症、例えば糖尿病、肥満症及びこれらに起因する高脂血症、脂肪肝、自律神経障害、動脈硬化症、白内障などの予防又は治療剤、特に糖尿病の予防又は治療剤として優れた薬効が得られる。
【図面の簡単な説明】
図１は投与したＤＯＧＧＤＮの濃度及びそれを摂取後の経過時間と、マウスの眼窩静脈叢より採血した血液中の血糖値（ｍｇ／ｄｌ）との関係を示す。
【図１】
0004373671.tif 000012