(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化１ないし化４のいずれかで表されるサポニンの１種または２種以上を主たる有効成分として含有することを特徴とする抗菌剤（但し、各式においてＲ１およびＲ２は一方が水素原子であり他方はメチル基である。Ｇｌｃはβ−Ｄ−グルコース残基を、Ｇａｌはβ−Ｄ−ガラクトース残基を、Ｘｙｌはβ−Ｄ−キシロース残基を、それぞれ示す。）。
【化１】
0004263817.tif 000009
【化２】
0004263817.tif 000010
【化３】
0004263817.tif 000011
【化４】
0004263817.tif 000012
【請求項２】
サポニンがユッカより得られたものである請求項１記載の抗菌剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、食品、医薬品、化粧料等の分野において有害酵母の増殖阻止のために使用可能な天然物系抗菌剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
微生物類の繁殖による変質や腐敗を起こしやすい食品、医薬品、化粧料等の保存性向上のために配合する抗菌剤としては、従来各種の合成品や天然物由来のものが使用されているが、人の口や皮膚を経由して体内に入ることが多い上記用途の抗菌剤としては合成品よりも安全性の高い天然物由来のものが好ましい。また、天然物由来のものも、添加対象物の色、匂い、味、物性等には悪影響を及ぼさないものであることが望まれる。
【０００３】
しかしながら、細菌類に対して有効な天然物系抗菌剤は幾つか提供されているが、真菌類とくに酵母に対して優れた活性を示す天然物系抗菌剤は少ない。
【０００４】
酵母に対して有効な天然物系抗菌剤の一例は、リュウゼツラン科の低木植物・ユッカ（Ｙｕｃｃａ）の抽出物から単離された幾つかのスピロスタン型ステロイドサポニンを有効成分とするものである（特開平７−１４９６０８号公報）。上記ステロイドサポニンは抗酵母活性が強力であり且つ強い味や匂いを有するものでもないから、特に食品用途に有用な抗菌剤となる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、ユッカ抽出物構成成分とその抗菌活性について詳細な検討を加えた結果、ユッカ抽出物中にはほかにも未確認の抗酵母活性物質が存在することを知った。
本発明の目的は、ユッカ抽出物から新規な抗酵母活性物質を単離しそれを有効成分とする抗菌剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、本発明者らによりユッカ抽出物から新たに単離され且つ優れた抗菌作用が確認された下記化５〜化８のスピロスタン型ステロイドサポニンを主たる有効成分とする抗菌剤を提供するものである（但し、各式においてＲ１およびＲ２は一方が水素原子であり他方はメチル基である。Ｇｌｃはβ−Ｄ−グルコース残基を、Ｇａｌはβ−Ｄ−ガラクトース残基を、Ｘｙｌはβ−Ｄ−キシロース残基を、それぞれ示す。）。
【０００７】
【化５】
0004263817.tif 000002
【０００８】
【化６】
0004263817.tif 000003
【０００９】
【化７】
0004263817.tif 000004
【００１０】
【化８】
0004263817.tif 000005
【００１１】
上記４種類のサポニン（以下、サポニンＹＳＭと総称する）は、いずれも酵母に対して優れた抗菌作用を示す。また、食品用の抗菌剤に要求される他の特性、たとえば熱や光に対する安定性、味、匂い等においても問題がない。
【００１２】
サポニンＹＳＭは前述のようにユッカ抽出物から初めて単離されたものであるが、ユッカ以外の植物体、たとえばユッカと同じリュウゼツラン科の植物や近縁のユリ科、ヤマノイモ科、ヒガンバナ科、ヤシ科、パイナップル科等の単子葉植物、ゴマノハグサ科、ナス科、ニガキ科、マメ科等の植物中にも存在する可能性があり、したがって、サポニンＹＳＭを含有するものであればいずれも本発明の抗菌剤構成成分の抽出原料とすることができる。しかしながら、ユッカは入手が容易であり且つサポニンの抽出とその後の精製が容易であるなど、有利な性質を備えているので、抽出原料として好ましい。
【００１３】
次に、本発明の抗菌剤構成成分であるサポニンＹＳＭをユッカから単離する方法について詳述する。
【００１４】
ユッカは、地下部、地上部（種子を含む）とも、抽出原料として使用することができる。原料は適当な大きさに粉砕してから、水、親水性有機溶媒またはこれらの混合物で抽出処理する。抽出用の親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール等の低級アルコール；グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール；アセトン等が好ましい。抽出方法に制限はなく、簡単には、常温ないし沸騰点付近の温度に維持した溶媒中に原料を浸漬しておけばよい。
【００１５】
溶剤抽出によらずにステロイドサポニン含有エキスを得る方法として、新鮮な植物体を原料にして搾汁する方法もある。
【００１６】
得られたユッカ抽出物は、サポニンＹＳＭの含有率が高いものであれば、活性炭による脱色処理、脱臭処理等の簡単な精製を施すだけで本発明の抗酵母剤として使用することができる。
【００１７】
サポニンＹＳＭを濃縮もしくは単離するには、上記ユッカ抽出物を液一液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離等、サポニンを濃縮するのに有効な精製手段を適宜採用して精製、分画を行う。サポニンＹＳＭの含有率を高くするほど、活性が強く着色やにおいの少ない抗菌剤を製造することができる。
【００１８】
サポニンＹＳＭの抗酵母活性は、アルカリ性よりはｐＨ５前後の弱酸性において強く、中性での活性に比べても約２倍の強さを示す。水溶液は、単なるユッカ抽出物のそれよりも着色が少なく、澄明性にもすぐれている。
【００１９】
本発明の抗菌剤は、医薬品、化粧品（医薬部外品を含む）、食品等の有効成分として、または保存性向上剤として、広い分野で利用可能である。本発明の抗菌剤の有効成分であるサポニンＹＳＭは安定性がよく溶解性も良い化合物であるから、これを配合して食品、医薬品、化粧品等を製造するのに格別の困難はない。
【００２０】
本発明の抗菌剤を食品の保存性向上のために使用する場合は、その食品の製造原料または製造工程の任意の段階で、混入、塗布、噴霧、浸漬等の方法により、食品に添加するか付着させる。
【００２１】
本発明の抗菌剤の好適使用量は、その組成、剤形、添加対象物の種類等によって異なるが、一般的には、添加対象物中での濃度がサポニンＹＳＭとして約０．０００１〜０．１重量％になるように使用することが望ましい。
【００２２】
本発明の抗菌剤は、その用途に応じて、粉剤、粒剤、乳剤、水和剤等、任意の剤形で利用に供することができる。その場合、他の抗菌剤、保存料その他任意の成分と共に製剤化しても差支えない。併用可能なものの例を挙げると、合成品では安息香酸またはその塩類、オルトフェニルフェノールまたはその塩類、ジフェニル、ソルビン酸またはその塩類、チアベンダゾール、デヒドロ酢酸またはその塩類、パラオキシ安息香酸アルキルエステル類、プロピオン酸またはその塩類、さらし粉、次亜塩素酸またはその塩類、ビタミンＢ１ラウリル硫酸塩等があり、天然物由来のものでは、アニスエキス、エゾウコギエキス、カワラヨモギエキス、しらこたん白、ヒノキエキス、ホオノキエキス、ε−ポリリジン、レンギョウエキス、カンゾウエキス、クローブエキス、セージエキス、ピメンタエキス、プロポリスエキス、ペパーエキス、ローズマリーエキス、アチートエキス、イチジク葉エキス、オレガノエキス、カルダモンエキス、キャラウェイエキス、柑橘種子エキス、クミンエキス、クランペリーエキス、クワエキス、ケイヒエキス、コウジ酸、ササエキス、サフランエキス、サンショウエキス、シソエキス、シナモンエキス、ショウガエキス、（ヤナギ）タデエキス、チャエキス、タイムエキス、ターメリックエキス、ダイズエキス、トウガラシエキス、ナツメグエキス、ニンニクエキス、バジルエキス、ハッカエキス、バニラエキス、パプリカエキス、ブドウ果皮エキス、フェンネルエキス、ベニコウジ分解物、ペパーミントエキス、ホコツシエキス、ホップエキス、マジョラムエキス、メースエキス、モウソウチクエキス、モミガラエキス、ユーカリエキス、ワサビエキス、リゾチーム、ローレルエキス等がある。
【００２３】
【実施例】
製造実施例
ユッカ・シジゲラ（Ｙｕｃｃａ  ｓｃｈｉｄｉｇｅｒａ）の根茎部１ｋｇにエタノール１０リットルを加え、沸騰水浴中で２時間、還流下に加熱した。得られた抽出液を減圧下に濃縮したのち乾燥して、ユッカ抽出物２０１ｇを得た。
【００２４】
このユッカ抽出物を水３リットルに溶解し、ダイヤイオンＨＰ−２０樹脂（三菱化学）３リットルのカラムに通液、次いで水、４０％含水メタノール、６０％含水メタノール、８０％含水メタノール、９５％含水メタノール（濃度はいずれもメタノール濃度）、および１００％メタノールを、それぞれ１０リットルずつ、順次通液して分画した。これにより、水溶出画分７２ｇ、４０％含水メタノール溶出画分８ｇ、６０％含水メタノール溶出画分４１ｇ、８０％含水メタノール溶出画分４２ｇ、９５％含水メタノール溶出画分１９ｇ、１００％のメタノール溶出画分２ｇを得た。
【００２５】
次に、強い抗菌活性が認められた９５％メタノール溶出画分１８ｇをとり、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール／水＝３０／１０／１および４０／１０／１による２段展開）およびＯＤＳカラムクロマトグラフィー（アセトニトリル／水＝７４／２６および８０／２０による２段展開）により更に分画し、得られた画分中の４種の画分より下記のサポニンを確認した。
【００２６】
【表１】
0004263817.tif 000006
ＹＳＭ−１          １１０
ＹＳＭ−２          １１０
ＹＳＭ−３          １６０
ＹＳＭ−４        １４３０
【００２７】
試験例
前記製造実施例によるユッカエタノール抽出物およびサポニン類について、下記の酵母５種類に対する抗菌活性を、ポテトデキストロース寒天培地を用いた寒天培地希釈法における最小生育阻止濃度・ＭＩＣを求めることにより測定した。
【００２８】
Ａ：Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
Ｂ：Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ
Ｃ：Ｈａｎｓｅｎｕｌａ  ａｎｏｍａｌａ
Ｄ：Ｐｉｃｈｉａ  ｎａｋａｚａｗａｅ
Ｅ：Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ  ｈａｎｓｅｎｉｉ
なお、培養は温度３０℃で２日間行い、生育の有無は肉眼で判定した。
また、前記製造実施例でＹＳＭ−１〜ＹＳＭ−４と共に単離された他の２種類のサポニン（参考例１，２）についても同様の測定を行なった。
結果を表２に示す（抗菌活性が強いほど最小生育阻止濃度・ＭＩＣは小さい）。
【００３０】
【表２】
0004263817.tif 000007
注：参考例１  下記化９におけるＲ１とＲ２が共通の基・メチレン基であるもの参考例２  下記化９におけるＲ１とＲ２の一方がメチル基であり他方が水素
原子であるもの
参考例３  Ｒ１とＲ２が共通の基・メチレン基である以外は化８のサポニン
（サポニンＹＳＭ−４）と同じ構造のもの
【００３１】
【化９】
0004263817.tif 000008
【００３２】
表２から、サポニンＹＳＭが単なるユッカ抽出物よりもはるかに強い抗酵母活性を示し、ユッカ抽出物の抗酵母活性の原因物質の一つであることがわかる。
【００３３】
サポニンＹＳＭと化学構造が類似するステロイドサポニンでも、参考例１，２のように糖部分が二糖であるものや２位に水酸基を有するものは活性が弱い。
【００３４】
参考例３のサポニンは、１２位のカルボニル基をメチレン基まで還元すると前記特開平７−１４９６０８号公報に記載されている強力な抗酵母活性物質・サポニンＹＳ−１となるものであるが、このままでは活性が弱い。
【００３５】
【発明の効果】
上述のように、ユッカから分離されたサポニンＹＳＭを主たる有効成分とする本発明の抗菌剤は酵母類に対して強力な抗菌活性を示す。したがって、完全滅菌が困難な食品等に本発明の抗菌剤を使用すれば、安全な天然物系抗菌剤のみによる大幅な保存性向上が可能になる。