(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）の化合物：
【化１】
0004347906.tif 000010
をシュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ）微生物のジオキシゲナーゼ酵素により式（２）の化合物：
【化２】
0004347906.tif 000011
（これらの式中、
ａ、ｂ、ｃおよびｄはそれぞれＣＨであり；
Ｘは、ヒドロキシル基、アセトキシ基、ブロモ基、メチル基、クロロ基、又はアジド基であり；
Ｚは、ＣＨ2であり；
ｍは１である）
に変換する方法。
【請求項２】
ジオキシゲナーゼ酵素が全細胞中に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
液体媒質中において６〜８のｐＨで実施される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
式（１）の化合物が２−インダノール、２−アセトキシインダン、２−ブロモインダン、２−メチルインダン、２−クロロインダンまたは２−アジドインダンである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
（ａ）請求項１〜４のいずれか1項に記載の方法により式（２）の化合物を調製する工程と、
（ｂ）式（２）の化合物を酸の存在下で有機ニトリル化合物と反応させる工程と、を含む、式（２）の化合物を式（３）の化合物：
【化３】
0004347906.tif 000012
（これらの式中、
Ｒ2はＨまたは−ＣＯＲであり；
ａ、ｂ、ｃおよびｄはそれぞれＣＨであり；
ＺはＣＨ2であり；
ｍは１であり；
Ｘはヒドロキシル基、アセトキシ基、ブロモ基、メチル基、クロロ基、又はアジド基であり；Ｒはアルキル、アリールまたはアラルキルである）
に変換する方法。
【請求項６】
Ｒ2が−Ｈである式（３）の化合物：
【化４】
0004347906.tif 000013
の製造方法であって、
ｉ）式（１）の化合物をシュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ）微生物のジオキシゲナーゼ酵素により式（２）の化合物に変換し；
【化５】
0004347906.tif 000014
ii）式（２）の化合物を酸の存在下で有機ニトリル化合物と反応させることにより、式（２）の化合物をＲ2が−ＣＯＲである式（３）の化合物に変換し；
iii）塩基を用いて、Ｒ2が−ＣＯＲである式（３）の化合物をＲ2が−Ｈである式（３）の化合物に変換する；
（これらの式中、
ａ、ｂ、ｃおよびｄはそれぞれＣＨであり；
Ｘは、ヒドロキシル基、アセトキシ基、ブロモ基、メチル基、クロロ基、又はアジド基であり；Ｒは、アルキル、アリールまたはアラルキルであり；
Ｚは、ＣＨ2であり；
ｍは１である）
工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
本発明は、光学活性化合物、たとえば１−ヒドロキシ−２−置換インダンの製造方法、ならびにこれらの化合物を対応するアミドおよびアミノ化合物に変換する方法に関する。これらの光学活性化合物は、生物学的活性をもつ医薬および農薬、たとえばメルク・アンド・コ社のＬ−７３５，５２４のようなヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）感染に関係する酵素の阻害薬、およびその新規な類似体の合成に有用な、価値ある中間体である。
本発明の第１態様によれば、式（１）の化合物：
0004347906.tif 000002
をジオキシゲナーゼ酵素により式（２）の化合物：
0004347906.tif 000003
（これらの式中、
ａ、ｂ、ｃおよびｄはそれぞれ独立してＣＨおよびＣＹから選択されるか、またはａ、ｂ、ｃおよびｄのうち１つは窒素原子であり、他はすべてＣＨおよびＣＹから選択され；
Ｚは、ＣＨ2、ＣＨＲ、ＣＲＲ1、Ｏ、ＮＨ、ＮＲ、Ｓ、Ｃ＝ＯまたはＣＨＸであり；
Ｘおよび各Ｙは、独立してＨ以外の置換基であり；
ＲおよびＲ1は、それぞれ独立してアルキル、アリールまたはアラルキルであり；そして
ｍは０〜４の値を有する）
に変換する方法が提供される。
ジオキシゲナーゼ酵素は、好ましくはナフタレンジオキシゲナーゼ酵素、またはより好ましくはトルエンジオキシゲナーゼ酵素である。ジオキシゲナーゼ酵素は、式（１）の化合物を式（２）の化合物に変換しうるいかなる形であってもよく、たとえば無細胞抽出液の形、合成された形、崩壊した細胞の形であってもよく、または好ましくはジオキシゲナーゼ酵素は全細胞中に存在するものである。ジオキシゲナーゼ酵素は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の種々の株（たとえば大腸菌ｐＫＳ  Ｔ１１クローン、J.Chem.Soc.Chem.Commun.1995,119-120に記載、シュードモナス・プチダ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ）ＮＣＩＭＢ  １７６７由来のトルエンジオキシゲナーゼ遺伝子を発現）および種々のPseudomonas putida微生物の全細胞中に存在するものである。式（１）の化合物を、Pseudomonas putida微生物、より好ましくはPseudomonas putidaの突然変異株ＮＣＩＭＢ  １１６８０（１９８１年１０月２日に寄託）またはＮＣＩＭＢ  １１７６７（１９８２年１２月１３日に寄託）、特にPseudomonas putida  ＵＶ４、殊にPseudomonas putida  ＮＣＩＭＢ  ８８５９（１９５７年２月に寄託、ＮＣＩＭＢ菌株カタログから入手できる）の存在下で式（２）の化合物に変換することが好ましい。Pseudomonas putidaの突然変異株ＮＣＩＭＢ  １１６８０およびＮＣＩＭＢ  １１７６７、ならびにPseudomonas putida  ＵＶ４の製造は、欧州特許第２５３，４８５号に記載されている。
式（２）の化合物が、ＯＨ基およびＸ基が結合している炭素原子間に二重結合をもつ対応する化合物に変換されるのを避けるために、本方法をｃｉｓジヒドロジオールデヒドロゲナーゼ酵素の不在下で実施することが好ましい。
Pseudomonas putida  ＵＶ４およびその使用は多数の刊行物に記載されている：たとえばTetrahedron Letters,vol 32,No.31,pp 3887-3890(1991)；J.Chem.Soc.Chem.Commun.pp 49-51(1993)；Tetrahedron:Asymmetry Vol 4,No.6,pp 1307-1324(1993)；J.Chem.Soc.Chem.Commun.pp 974-976(1993)；J.Am.Chem.Soc.116,pp 1147-1148(1994)；およびJ.Chem.Soc.Chem.Commun.pp 117-118(1995)。しかしこれらの刊行物のいずれにも、２−置換基をもつ式（１）の化合物を前記の立体化学的特性をもつ式（２）の化合物に変換する価値ある本発明方法は記載されていない。
各Ｘおよび各Ｙは独立して、好ましくはアルキル、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＳＨ、−ＳＲ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ1、−ＮＨＣＯＲ、−ＮＲＣＯＲ1、−ＣＮ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨＲ、−ＣＯＮＲＲ1、−ＮＯ2、−Ｎ3、−ＰＲＲ1、−Ｐ(Ｏ)ＲＲ1、−Ｐ(Ｏ)(ＯＨ)2、−Ｐ(Ｏ)(ＯＲＯＨ)、−Ｐ(Ｏ)ＯＲＯＲ1、−Ｓ(Ｏ)Ｒ、−ＳＯ2Ｒ、−ＳＯ2Ｈまたは−ＳＯ3Ｈ；より好ましくはアルキル、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＳＲ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ1、−ＣＮまたは−Ｎ3であり；これらにおいてＲおよびＲ1は、それぞれ独立してアルキル、アリールまたはアラルキルである。
好ましくはａ、ｂ、ｃおよびｄはすべてＣＹおよびＣＨから選択され、より好ましくはそれらはすべてＣＨであり、すなわちそれらが一部を形成する６員環はベンゼン環である。
ＺがＣＨ2、ＣＨＲ、ＮＨまたはＳである場合、操作中にＺ基のＨ原子の１つが−ＯＨで置換された誘導体が少量形成される可能性がある。たとえば次式の化合物
0004347906.tif 000004
が下記の混合物に変換される：
0004347906.tif 000005
１Ｓ−ヒドロキシ−２−ケトインダンおよび２Ｒ−ヒドロキシ−２−ケトインダンが副成分として形成される。
Ｒ、Ｒ1、Ｘ、ＹまたはＺのうちいずれか１つがアルキルであるか、またはアルキルを含む場合、このアルキルは好ましくはＣ1〜Ｃ10−アルキル、より好ましくはＣ1〜Ｃ6−アルキル、特にメチルである。ＲまたはＲ1のいずれかがアリールであるか、またはアリールを含む場合、このアリールは好ましくはフェニルである。ＲまたはＲ1のいずれかがアラルキルであるか、またはアラルキルを含む場合、このアラルキルは好ましくはフェニルＣ1〜Ｃ6アルキル、より好ましくはフェニルＣ1〜Ｃ4アルキル、特にベンジルである。
Ｚは好ましくはＣＨ2である。
ｍは好ましくは０、１、２、３または４、より好ましくは１または２である。
特に好ましい方法には、２−置換インダンである式（１）の化合物、特にａ、ｂ、ｃおよびｄがすべてＣＨであり；Ｘが−ＯＨ、−ＯＣＯ（Ｃ1〜Ｃ4−アルキル）、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｎ3またはＣＨ3であり；ＺがＣＨ2であり、かつｍが１である化合物が用いられる。式（２）の化合物は、好ましくは２−置換インダン−１−オールである。
ジオキシゲナーゼ酵素を用いて式（１）の化合物を式（２）の化合物に変換する方法は、生物学的変換（biotransformation）法であるとみなすことができる。この方法は、液体媒質中、好ましくは水性媒質中、特に緩衝化された水性媒質中で実施するのが好ましい。好適な緩衝剤は、無機物質または有機物質のいずれであってもよく、媒質のｐＨを好ましくは６〜８の範囲内、より好ましくは６．５〜７．５の範囲内、特にｐＨ７．２に調整するものが好ましい。緩衝剤は好ましくは無機物質、より好ましくはリン酸アルカリ金属塩、特にリン酸カリウムである。特に好ましい緩衝液は０．１Ｍリン酸カリウムである。
本方法のｐＨは所望により、塩基、好ましくは無機塩基、より好ましくはアルカリ金属水酸化物、たとえば希水酸化カリウム水溶液の断続的供給により、ｐＨ７．２に維持してもよい。
ＮＡＤＨを再循環させる補助基質を、所望により液体媒質に添加してもよい。好ましい補助基質はα−ケト酸およびそれらのアルカリ金属塩、たとえばピルビン酸およびピルビン酸ナトリウム、ならびにアルコール類、たとえばエタノール、イソプロパノールまたは糖類、たとえばグルコースである。
本方法は式（１）の化合物の酸化を伴い、酸素源は通常は分子状酸素である。したがって操作中に酸素を、たとえば空気の形で、好ましくは連続的に液体媒質中へ吹き込み、好ましくは酸素を飽和濃度にする。
本方法は、好ましくは０℃〜１００℃、より好ましくは２０℃〜４５℃、特に２８℃〜３２℃の温度で実施される。
ガスクロマトグラフィーなどの技術を用いて生成物の蓄積速度と出発物質の濃度により判定した好適な期間、操作を実施した時点で、好都合な手段により、たとえば遠心分離もしくは濾過によって微生物を除去することにより、および／または反応物を５℃より低い温度に冷却することにより、操作を停止することができる。この操作は数時間または多数日間、たとえば１時間から１週間を要するであろう。式（２）の生成物をいずれか好都合な手段で、たとえば、好ましくはハロカーボン系溶剤（たとえばＣＨ2Ｃｌ2）、芳香族溶剤（たとえばトルエン）またはエステル（たとえば酢酸エチル）を用いる溶剤抽出により単離することができる。この操作の生成物を、たとえば再結晶またはクロマトグラフィーにより、特にシリカゲルおよび溶離液、たとえばエーテル、アルカンまたはそれらの混合物を用いる調製用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、さらに精製することができる。
本発明の第２態様によれば、式（２）の化合物を酸の存在下で有機ニトリル化合物と反応させることにより、式（２）の化合物を式（３）の化合物：
0004347906.tif 000006
（式中、Ｒ2は−Ｈまたは−ＣＯＲであり、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、Ｒ、Ｘ、Ｚおよびｍは前記に定めたものである）に変換する方法が提供され、その際好ましくは１−位の絶対立体配置は保持される。ＸがＯＨ、−ＮＨ2、ＳＨ、Ｃｌ、Ｂｒまたは−ＮＨＲ（ここでＲは前記に定めたものである）である場合、本方法は１−位の絶対立体配置を保持した状態で良好に進行し、これはＸが前記に述べた他の置換基のいずれかである場合にも、その化合物の性質および用いる条件に応じて起こりうる。
有機ニトリル化合物は好ましくはアルキル、アリールまたはアラルキルニトリルである。有機ニトリルがアルキルニトリルである場合、それは好ましくはＣ1〜6−アルキルニトリル、より好ましくはＣ1〜4−アルキルニトリル、特にアセトニトリルである。酸は無機酸、たとえば硫酸、塩酸、硝酸もしくはリン酸、または有機酸、たとえばスルホン酸、特にメタンスルホン酸もしくはトリルスルホン酸であればよい。酸は好ましくは無機酸、特に硫酸である。
この反応は液体媒質中で実施でき、好ましくは有機ニトリル化合物中で実施される。好ましくは式（２）の化合物は、本発明の第１態様に記載の方法で製造されたものである。
（２）から（３）へ変換する方法は、好ましくは−１０℃〜１００℃の温度、より好ましくは−５℃〜７０℃の温度、特には−５℃〜２５℃の温度で実施される。
式（３）の生成物は、いずれか好都合な手段で、たとえば氷水に注入し、水酸化ナトリウム水溶液などの無機塩基で中和し、そして水−非混和性有機溶剤、たとえばハロカーボン系溶剤（たとえばＣＨ2Ｃｌ2）、芳香族溶剤（たとえばトルエン）またはエステル（たとえば酢酸エチル）で抽出することにより、反応混合物から単離できる。式（３）の生成物は、所望によりクロマトグラフィー、または再結晶、たとえばエステルもしくはケトン、たとえば酢酸エチルもしくはペンタノンからの再結晶により精製することができる。
本発明の他の態様によれば、Ｒ2が−ＣＯＲである式（３）の化合物（Ｒは前記に定めたものである）を、好ましくは塩基により、Ｒ2が−Ｈである式（３）の化合物に変換する方法が提供される。好ましくは式（３）の化合物は、本発明の第２態様の方法で製造されたものである。
塩基は、好ましくはアルカリ金属水酸化物、より好ましくは水酸化カリウム、特に水酸化カリウム水溶液である。好ましい水溶液は、水中１〜５０重量％、より好ましくは１〜２０重量％の塩基を含む。この反応は好ましくは２０℃〜１５０℃の温度、より好ましくは塩基水溶液の還流温度で実施される。生成物は反応混合物からいずれか好都合な手段で、たとえば塩析により、または水混和性有機溶剤、好ましくは酢酸エチルなどのエステルで抽出することにより、反応混合物から単離できる。この生成物は、液体媒質、たとえばヘキサンなどのアルカンからの結晶化により精製することができる。
本発明の他の態様によれば、Ｒ2が−Ｈである式（３）の化合物の製造方法であって、
ｉ）式（１）の化合物をジオキシゲナーゼ酵素により、好ましくはＰｓｅｕｄｏ ｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ微生物により、式（２）の化合物に変換し；
ii）好ましくは式（２）の化合物を酸の存在下で有機ニトリル化合物と反応させることにより、式（２）の化合物をＲ2が−ＣＯＲである式（３）の化合物に変換し（好ましくは１−位の絶対立体配置を保持した状態で）；
iii）Ｒ2が−ＣＯＲである式（３）の化合物を、好ましくは塩基により、Ｒ2が−Ｈである式（３）の化合物に変換する
工程を含む方法が提供される。その際、式（１）、（２）および（３）の化合物は前記に定めたものである。
本発明の方法によれば、式（２）および（３）の化合物を、通常は８５％を越え、または９５％すら越える高い鏡像異性体過剰（ｅｅ）で製造することができる。
本発明は、請求項１２〜１６に定める化合物をも提供する。ａ、ｂ、ｃ、ｄ、Ｙ、Ｘ、ｍ、Ｒ、Ｒ1およびＺの好ましいものは、本発明の第１態様に関して記載したものであり、ただしＸはＯＨでない。
本発明を以下の実施例によりさらに説明する。
実施例１
２−インダノールの生物学的変換（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  Ｐｕｔｉｄａ  ＵＶ４による）
ｉ）微生物の供給源
Pseudomonas putida  ＵＶ４は、Pseudomonas putida  ＮＣＩＭＢ  １１７６７由来の突然変異微生物である（ＮＣＩＭＢはナショナル・コレクション・オブ・インダストリアル・アンド・マリン・バクテリア社、23 St.Macher Drive,Aberdeen,米国,AB2 IRY、である）。Pseudomonas putida  ＵＶ４の調製については、欧州特許ＥＰ第０  ２５３  ４８５  Ｂ１号、４頁５５行〜５頁４１行（突然変異株Ｄ）に記載されており、これは引用により本明細書中に取り込むものとする。
ii）Pseudomonas  putida  ＵＶ４の増殖
Pseudomonas putida  ＵＶ４は、炭素源としてピルビン酸ナトリウムを含む最少塩類寒天平板上に維持された。最少塩類培地は下記のものから成った：
溶液Ａ：２ｇ  ＫＨ2ＰＯ4
２ｃｍ3  ビシュニアク（Vishniac）微量元素
８００ｃｍ3の蒸留水に溶解し、ｐＨ７．０に調整
溶液Ｂ：３ｇ  ＮＨ4Ｃｌ
０．４ｇ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ
２００ｃｍ3の蒸留水に溶解
４部の溶液Ａを１部の溶液Ｂと混合する。
ビシュニアク微量元素溶液は下記に従って調製された：
５０ｇのＥＤＴＡを７５０ｃｍ3の蒸留水に溶解し、２Ｍ  ＫＯＨでｐＨ８．０に調整した。
次いで他の成分を下記の順序で溶解した：
２．２０ｇ  ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ
５．５４ｇ  ＣａＣｌ2
５．０６ｇ  ＭｎＣｌ2・７Ｈ2Ｏ
５．００ｇ  ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ
１．１０ｇ  （ＮＨ4）6Ｍｏ7Ｏ24・４Ｈ2Ｏ
１．５７ｇ  ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ
１．６１ｇ  ＣｏＣｌ2・６Ｈ2Ｏ
最終ｐＨを６．０の値に調整し、容量を１リットルに調整し、次いで４℃で暗所に保存した。
最少塩類寒天平板は下記に従って調製された：
８ｇのバクト（Bacto）寒天および４００ｃｍ3の溶液Ａを５００ｍｌのボトルに装入
１００ｃｍ3の溶液Ｂを１５０ｍｌのボトルに装入
２０ｃｍ3の１２．５％ピルビン酸ナトリウム溶液を５０ｃｍ3のボトルに装入
これら３本のボトルを１２１℃、１５ｐｓｉで１５分間、オートクレーブ処理した。ボトルを放冷し、次いでＢとピルビン酸ナトリウムをＡに添加し、ペトリ皿平板に注入した。これらの平板を硬化させ、次いで４℃に保存した。
使用前にこれらの平板を紫外線乾燥キャビネット内で乾燥させた。
単一コロニーを用いて、最少塩類培地５０ｃｍ3および炭素源としての１２．５％ピルビン酸ナトリウム２ｃｍ3を入れた２５０ｃｍ3のフラスコに接種した。細胞を３０℃でオービタルシェーカー上において約１２時間のバッチ培養により増殖させ、次いで最少塩類培地５００ｃｍ3および炭素源としての１２．５％グルコン酸ナトリウム２０ｃｍ3を入れた２リットルのフラスコへの接種に用いた。
約１２時間の増殖後に、この２リットルのフラスコを、下記のものを含有する（７リットルの水中に）１０リットルの発酵槽（可使容量＝７．８リットル）への接種に用いた：
３５ｇ  Ｄ−グルコース
１４ｃｍ3  ビシュニアク微量元素溶液
１４ｇ  ＫＨ2ＰＯ4
１４ｇ  ＮＨ4Ｃｌ
２．８ｇ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ
温度を３０℃に制御し、ｐＨを７．２に制御して、細胞を約１２時間増殖させた。３％ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）溶液を消泡剤として用い、起泡量を減らすのに必要な場合に添加した。
iii）生物学的変換
発酵槽の細胞密度が光学濃度（６００ｎｍにおいて）４〜５に達した時点で、グルコース最少塩類培地（ＧＭＳ）を連続的に添加して設定ｄＯ2％水準を２０〜８０％に維持した。ＧＭＳは下記のものからなっていた(１リットルの水中):
７５ｇ  Ｄ−グルコース
２ｇ  ＫＨ2ＰＯ4
２ｃｍ3  ビシュニアク微量元素溶液
３ｇ  ＮＨ4Ｃｌ
０．４ｇ  ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ
０．５ｇ  （ＮＨ4）2ＳＯ4ＦｅＳＯ4・６Ｈ2Ｏ
ｄＯ2％がその設定水準に戻った時点で、少量の２−インダノール（１３．５ｇ／時、８時間）を一定の間隔でブロスに注入した。
ブロスを回収し、１００００ｒｐｍで４℃において１１分間の遠心分離により細胞を分離した。残存する上清を４℃に保存した。
粗生成物を酢酸エチルで培養培地から抽出し、酢酸エチルを蒸発させると、(−)−ｃｉｓ−(１Ｓ,２Ｒ)−１,２−ジヒドロキシインダン（５０ｇ，４１％）が得られ、これを分離剤としてのシリカゲルおよび溶離剤としての４０％ジエチルエーテル／６０％石油エーテル（沸点４０〜６０℃）混合物を用いる調製用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により、他の代謝産物および出発物質から分離した。生成物は［α］D＝４８°を示した。光学的に純粋な物質との［α］Dの比較、およびTet.Lett.1992,33,1241に記載のＭＴＰＡ法により、光学的純度は＞９８％ｅｅ（鏡像異性体過剰）と判定された。
実施例２
２−インダノールの生物学的変換（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ  ＮＣＩＭＢ  ８８５９による）
ｉ）微生物の供給源
Pseudomonas putida  ＮＣＩＭＢ  ８８５９は、ナショナル・コレクション・オブ・インダストリアル・アンド・マリン・バクテリア社、23 St.Macher Drive,Aberdeen,スコットランド,AB2 1RY、から凍結乾燥培養物として入手された。
ii）Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ  ＮＣＩＭＢ  ８８５９の増殖
最少塩類寒天平板上で蓋上にナフタレンを添加して培養物を増殖させ、生存性を維持するために一定の間隔で継代培養した。Pseudomonas putida ＮＣＩＭＢ ８８５９の増殖は、最少塩類寒天平板中および２５０ｃｍ3のボトル中に、１２．５％ピルビン酸ナトリウムの代わりに２ｇ／ｌのナフタレンを用いた点以外はPseudomonas putida  ＵＶ４と同様である。
iii）生物学的変換
工程ii）の微生物を２５０ｃｍ3の振盪フラスコ内で３０℃において１２時間増殖させた時点で、２−インダノール（０．１ｇ）をＤ−グルコース（６ｇ）と共に添加し、フラスコの振盪をさらに４時間続けた。
前記の実施例１、工程iii）に従って粗生成物を抽出および精製して、(−)−ｃｉｓ−(１Ｓ,２Ｒ)−１,２−ジヒドロキシインダン（１０ｍｇ）を得た。
実施例３〜７
ｃｉｓ−(１Ｓ,２Ｒ)−２−置換インダン−１−オールの製造
実施例１の操作を反復し、ただし２−インダノールの代わりに第２欄に示した基質を用い、第３欄に示した生成物を得た。収率と特性データを最終欄に示す。
0004347906.tif 000007
実施例８
0004347906.tif 000008
硫酸（２．９ｍｌ，１８Ｍ，５２．４８ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（１０．２ｍｌ）中の(−)−ｃｉｓ−(１Ｓ,２Ｒ)−１,２−ジヒドロキシインダン（０．５ｇ，３．３５ｍｍｏｌ）に−５℃で除々に（１時間）添加した。反応混合物を室温にまで昇温させ、一夜撹拌した。反応混合物を氷／酢酸エチル１：１（２０ｍｌ）に装入して反応停止し、水酸化ナトリウム溶液でｐＨを７に調製した。
水相と有機相を分離し、下側の水層に塩を添加したのち酢酸エチルで抽出した（５０ｍｌで３回）。
有機相を合わせて無水ＭｇＳＯ4で乾燥させ、容量を約１５ｍｌに減少させた。生成物は自発的に結晶化し、これを濾過により採集して、(−)−ｃｉｓ−(１Ｓ,２Ｒ)−１−アセトアミド−２−ヒドロキシインダン（６００ｍｇ，７０％）を得た。融点１６５〜１６６℃、［α］D＝＋４５°（ＣＨＣｌ3）。
実施例９
0004347906.tif 000009
実施例８で得た生成物（０．１ｇ，０．５２ｍｍｏｌ）を、水酸化カリウム（１０ｃｍ3，１０％ｗ／ｖ）と共に８時間加熱還流した。この水溶液を塩化ナトリウムで飽和し、次いで酢酸エチルで抽出（１５ｃｍ3で３回）することにより、アミン生成物を単離した。抽出液を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で溶剤を除去して、粗製１−アミノ−２−ヒドロキシインダンを得た。これを酢酸エチル／ヘキサンから再結晶した。
収量０．０６８ｇ（８８％）、融点１１６〜１１７℃、［α］D−６４°（ＣＨＣｌ3）。