(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式（Ｘ）で示されるクロマン誘導体。
（式中Ｒは１〜２０個の炭素原子をもつアルキル基またはアルケニル基を表す。）
【化１】
0004349663.tif 000012
【請求項２】
請求項１のクロマン誘導体を有効成分とするＮＧＦ産生誘導剤。
【請求項３】
以下の工程から成る請求項１記載のクロマン誘導体の製造法。
（Ａ）3,5-ジヒドロキシ安息香酸エステルの２個の水酸基を保護剤により保護する工程と、（Ｂ）工程Ａで生成した化合物のエステル基を還元して、ベンジルアルコール化合物を生成させる工程と、（Ｃ）工程Ｂで生成した化合物のベンゼン環の４位をハロゲン化する工程と、（Ｄ）工程Ｃで生成した化合物の水酸基とカルボン酸誘導体との間でエステル結合を形成させて、ベンジルカルボン酸エステル化合物を生成する工程と、（Ｅ）工程Ｄで生成した化合物のハロゲン原子が結合する炭素原子とαβ不飽和カルボニル化合物との反応により、４−（３−オキソブチル）ベンジルカルボン酸エステル化合物を生成する工程と、（Ｆ）工程Ｅで生成した化合物のベンゼン環の４位についた３−オキソブチル基の３位のカルボニル炭素と2-オキソ-4-メチル−3-ペンテニルホスホン酸誘導体とを縮合して、４−（3,7-ジメチル-5-オキソ-3,6-オクタジエニル)ベンジルカルボン酸エステル化合物を生成する工程と、（Ｇ）工程Ｆで生成した化合物の何れか一つの前記保護剤を脱離させた水酸基と、ベンゼン環の４位についた3,7-ジメチル-5-オキソ-3,6-オクタジエニル基の３位の炭素との間で分子内エーテル結合をさせて、５−ヒドロキシ−２−メチル−２−(４−メチル−２−オキソ−３−ペンテニル−７−クロマニルメチルカルボン酸エステルを生成する工程。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、低い濃度でＮＧＦの産生誘導作用を示し、脳機能障害の予防および治療薬として有用な、新規クロマン誘導体に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
神経成長因子（nerve growth factor;NGF)は、脳内の特に海馬や大脳皮質に多く存在しており、ＮＧＦｍＲＮＡレベルも同部で高いことが知られている。ＮＧＦは、コリン作動性ニューロンの生存、機能維持の必須の栄養因子として考えられていることから、同ニューロンの変性脱落が主要な病変とさせるアルツハイマー病の治療薬として活用し得る可能性が示唆されている。しかし、ＮＧＦは分子量約13,000の蛋白質であり、脳血液関門を通過しない。この観点から、抹消投与により脳血液関門を通過し得る低分子化合物であって、脳内のＮＧＦ産生、分泌を促進する化合物を見出すことが出来れば、これらの化合物により機能低下した前脳基底核コリン作動性神経細胞を賦活化し、脳の機能障害を改善出来ると期待される。従来、例えばカテコール誘導体、ドーパミン誘導体、ヒドロカフェイン酸、置換１、４ベンゾキノン誘導体等が、ＮＧＦ産生、分泌作用を有することが報告されている。そこで、各種神経細胞や脳神経細胞のＮＧＦ分泌を高める方策が種々試みられている。たとえば、カテコール化合物によるＮＧＦの分泌誘導試験がある。しかし、これらの化合物は作用強度や細胞毒性の点から未だに満足すべきものではない。
【０００３】
一方、本発明者は、ハリタケ科（Hydnaceae)、サンゴハリタケ属（Hericium erinaceum)の子実体中に存在するクロマン誘導体を単離抽出し、ＰＧＥ2（プロスタグランジンＥ2）産生抑制及びＮＧＦ（神経成長因子）産生誘導作用を有することを明らかにしている（特公平８−２６０１０号）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、低い濃度で有効にＮＧＦ産生を促進させる新規クロマン誘導体、及びその製造方法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記欠点を解決するため鋭意研究を行い、新規化合物であるクロマン誘導体を合成し、このクロマン誘導体が、低い有効濃度で脳に作用し得ることを明らかにした。即ち本発明は、新規クロマン誘導体を化学的に合成することに関するものである。また、新規クロマン誘導体を化学的に合成することにより、天然物から抽出した場合より多量のクロマン誘導体を、高い収率で得ることを可能とするものである。その結果、このクロマン誘導体用いた培養細胞への実験で、従来のＮＧＦ産生、分泌剤に比べて、１０倍以上低い濃度で、このクロマン誘導体がＮＧＦ産生、分泌作用を示すことを見いだし本発明を完成した。
【０００６】
即ち、本発明は一般式（Ｘ）
【０００７】
【化２】
0004349663.tif 000002
（式中Ｒは１〜２０個の炭素原子をもつアルキル基またはアルケニル基を表す）で示されるクロマン誘導体である。
【０００８】
また、本発明は、更に上記クロマン誘導体を有効成分とするＮＧＦ産生誘導剤である。
さらに本発明は、更に上記クロマン誘導体を製造する方法である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
＜１＞本発明のクロマン誘導体
上記一般式（Ｘ）において、Ｒはアルキル基またはアルケニル基である。アルキル基は、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチル、ノニル、デシル、など炭素数が１〜２０個の直鎖または分岐鎖状のアルキル基等であるが、炭素数が１０から２０であるのが好ましい。アルケニル基は、例えばエテニル、１−プロペニル、３−メチル−２−ブテニル、２、４−ジメチル−２、６−オクタジエニルなど炭素数残基が２〜２０の炭化水素残基等であるが、炭素数が１０から２０であるのが好ましい。
【００１０】
一般式（Ｘ）で表される代表的化合物としては、５−ヒドロキシ−２−メチル−２−（４−メチル−２−オキソ−３−ペンテニル）−７−クロマニルメチルパルミテート、５−ヒドロキシ−２−メチル−２−（４−メチル−２−オキソ−３−ペンテニル）−７−クロマニルメチルステアレート、５−ヒドロキシ−２−メチル−２−（４−メチル−２−オキソ−３−ペンテニル）−７−クロマニルメチルリノレート等がある。
【００１１】
＜２＞本発明のクロマン誘導体の製造方法
本発明のクロマン誘導体の製造方法の一例を以下に示す。本発明のクロマン誘導体は図１及び図２に示すように、工程（Ａ）から工程（Ｇ）までの７段階の工程により製造することができる。
【００１２】
本発明のクロマン誘導体を製造する際の出発物質である3,5-ジヒドロキシ安息香酸エステル[化合物（Ｉ）]は、3,5-ジヒドロキシ安息香酸を常法によりエステル化して得ることができる。尚、3,5-ジヒドロキシ安息香酸は、安息香酸をジスルフォン化し、これをアルカリ融解して得ることができる。化合物(Ｉ)は3,5-ジヒドロキシ安息香酸のアルキルエステル(-CO2R)であれば特に限定されず、メチル、エチル、プロピル又はブチルエステル（R：CH3,C2H5,C3H7,C4H9)等何れでも良いが、反応性の点からメチルエステルまたはエチルエステルが好ましい。
【００１３】
【化３】
0004349663.tif 000003
【００１４】
工程（Ａ）
化合物(II)は、化合物(Ｉ)に、２〜１０当量の保護剤を加え２個の水酸基を保護することにより得ることができる。ここで、保護剤は、２個の水酸基を保護して、塩基性溶媒中で安定であり、かつ酸により加水分解されて脱離するものをいう。具体的には、エーテル結合を形成するもの、クロロトリメチルシラン、３、４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン、クロロメチルメチルエーテル等が好ましい。反応に用いる溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジクロロエタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、ヘキサン、酢酸エチルなどの非プロトン性溶媒が好ましく、これらを適宜使用する。反応は氷冷下から室温で行うのが好ましい。また、化合物(Ｉ)と保護剤との混合は攪拌しながら少量ずつ行うのが良い。また、反応補充剤として、Ｐ−トルエンスルフォン酸ピリジウム（以下「ＰＰＴＳ」と略す）等の酸触媒を加えるのが好ましい。その後、常法に従って後処理をすることによって化合物(II)を得ることができる。
【００１５】
【化４】
0004349663.tif 000004
【００１６】
工程（Ｂ）
このようにして得られた化合物(II)を水素化アルミニウムリチウム（ＬＤＡ)で還元することにより、化合物(III)を得ることができる。還元剤は、カルボン酸エステルをアルコールまで還元できるものであれば良いが、水素化アルミニウムリチウムが好ましい。化合物(II)を、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン(THF）等の乾燥溶剤に溶解または懸濁させて、次いで、前記化合物(II)に対して、１〜２当量の水素化アルミニウムリチウムを加えて、０℃からその溶媒の沸点までの間の適宜な温度で１時間から１２時間攪拌すると還元が終了する。その後、常法に従って後処理をすることによって化合物(III)を得ることができる。
【００１７】
【化５】
0004349663.tif 000005
【００１８】
工程（Ｃ）
このようにして得られた化合物(III)は各種ハロゲン化剤(例えば、１，２−ジハロゲン化エタン Ｙ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｙ : Ｙはハロゲン基を表す）により、化合物(IV)とすることができる。このハロゲン化は、塩素化、臭素化、ヨウ素化等をいうが、ヨウ素化が好ましい。ヨウ素化には、各種ヨウ素化剤を用いることができるが、1,2 ジヨードエタン等を使用するのが好ましい。溶媒としては、ベンゼン、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、四塩化炭素、ヘキサンなどの安定な非プロトン性溶媒が好ましく、これらを適宜使用する。また、tert-ブチルリチウム[（ＣＨ3）3ＣＬｉ]等のアルキルリチウム等や、テトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）等の３級アミンを加えるのが好ましい。他の副産物の生成を少なくするため、反応は−５０度から−８０℃の適宜な温度で行うのが好ましい。反応時間は１時間〜６時間であるのが好ましい。その後、常法に従って後処理をすることによって化合物(IV)を得ることができる。
【００１９】
【化６】
0004349663.tif 000006
【００２０】
工程（Ｄ）
このようにして得られた化合物（IV）とカルボン酸誘導体とを反応させて、化合物(Ｖ)を得ることができる。ここで、カルボン酸誘導体とは、カルボン酸、酸ハロゲン化物、酸無水物、アミド、エステル等をいうが、反応性等の点からカルボン酸を使用するのが好ましい。カルボン酸は、炭素数１から２１までの直鎖及び分岐カルボン酸が好ましく、酢酸、酪酸等の他、パルミチン酸（ｎ＝１６）、ステアリン酸（ｎ＝１８）等があり、また、炭素結合中に２重結合を含むリノール酸等も含まれる。化合物(IV)とカルボン酸誘導体の割合は、化合物(IV)に対し、１から１０当量のカルボン酸誘導体を加えるのが好ましい。溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、ヘキサン、酢酸エチルなどの非プロトン性の溶媒が適当であり、これらを適宜使用する。エステルを効率よく合成するため、反応は、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）とジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を加えた系で行うのが好ましい。反応は反応効率の点から氷冷下から室温で、１時間から５時間攪拌しながら行うのが好ましい。その後、常法に従って後処理をすることによって化合物(Ｖ)を得ることができる。
【００２１】
【化７】
0004349663.tif 000007
【００２２】
工程（Ｅ）
化合物(VII)は、上記方法により得られた化合物(Ｖ)と１〜１０当量の化合物(VI)とを反応させることにより得ることができる。化合物(VI)は、化合物（Ｖ）中のハロゲン原子が結合する炭素原子との反応により、３−オキソブチル基となるものをいい、メチルビニルケトン、３−ブテン−２−オール等があるが、反応性の点からメチルビニルケトンが好ましい。必要ならば、ジメチルホルムアミド等の不活性溶媒を適宜加えて行う。また、反応補助剤として、ピリジン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン等の３級アミンを適宜加え、また、酢酸パラジウム、トリフェニルフォスフィン（ＰＰｈ3）等の反応触媒を加えて行うのが好ましい。また、反応効率の点から、反応は窒素またはアルゴンで置換してから行うのが好ましい。反応温度は室温から２００℃までであれば良いが、１００℃以上１５０℃以下が好ましい。反応時間は１時間〜５時間であるのが好ましい。その後、常法に従って後処理をすることによって化合物(VII)を得ることができる。
【００２３】
【化８】
0004349663.tif 000008
【００２４】
【化９】
0004349663.tif 000009
【００２５】
工程（Ｆ）
このようにして得られた化合物(VII)と１〜５当量の化合物(VIII)とを、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサン、アセトニトリル、ヘキサンなどの溶媒中で、５０℃〜１００℃の温度で、３時間から８時間加熱することにより化合物(IX)を得ることができる。なお、この反応を位置選択的に行わせるため、化合物(VIII)は、ホスホン酸誘導体である２−オキソ−４−メチル−３−ペンテニルホスホン酸エステルを用いるのが好ましく、具体的には、２−オキソ−４−メチル−３−ペンテニルホスホン酸のアルキルエステル（メチルエステル又はエチルエステル等をいう）がある。反応には、水素化ナトリウム（ＮａＨ）、アルキルリチウム等の強塩基と無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）等の溶媒を適宜組み合わせて使用するのが好ましい。反応系は窒素またはアルゴンで置換し、また加熱環流した条件で、反応を行わせるのが好ましい。その後、常法に従って後処理をすることによって化合物(IX)を得ることができる。
【００２６】
【化１０】
0004349663.tif 000010
【００２７】
【化１１】
0004349663.tif 000011
【００２８】
工程（Ｇ）
このようにして得られた化合物(IX)をメタノール、エタノール、イソプロパノール等の溶媒に溶解または懸濁させ、適量の塩酸等の酸触媒を加え０〜６０℃の適宜な温度で１〜８時間攪拌することにより、本発明の新規クロマン誘導体である化合物(Ｘ)が得ることができる。
【００２９】
＜３＞クロマン誘導体を有効成分とするＮＧＦ産生誘導剤
本発明の一般式（Ｘ）で表されるクロマン誘導体はＮＧＦ産生誘導剤として使用することができる。このクロマン誘導体を、培養細胞に投与するとＮＧＦ産生誘導活性を示した。また、培養細胞中で有効なＮＧＦ産生誘導活性を示すのに、従来報告されているエピネフリンは培養細胞中で１０〜４００μＭ使用する必要があるのに対し、本発明のクロマン誘導体は０．３〜０．８μＭという低い濃度の使用で同様の効果を示した。即ち、このクロマン誘導体は、従来のＮＧＦ産生誘導剤よりも１０倍以上低い有効濃度領域でＮＧＦ産生誘導活性を示すことが明らかとなった。
【００３０】
更に、脳機能障害の予防および治療薬が脳内で作用するためには、薬物が血液脳関門等を通過することが必要となる。通常薬物を投与した場合、血液脳関門等の影響を受けて薬物の移行性が悪くなり、投与薬物の１部のみが脳内へ移行して作用するに過ぎないと解される。従って、低い濃度であっても作用してＮＧＦ活性を増加させるという本発明のクロマン誘導体は、高等動物に投与した場合、血液脳関門等の影響を受けて移行性が悪くなり比較的少量（細胞中で０．３〜０．８μＭ）しか脳細胞に移行しない場合であっても、脳内でＮＧＦ濃度を十分増加させることができると解される。また、クロマン誘導体は構造上脂溶性が高いため、従来のＮＧＦ産生誘導剤に比べて脳への移行も良好であると推察される。これらを総合すると、本クロマン誘導体を高等動物に投与した場合に、比較的少量であっても脳内のＮＧＦ濃度を十分増加させ、その結果として、中枢神経退行性疾患の進行防止及び治療薬として有効に作用し得ると推察される。また、低濃度で作用するため、細胞毒性等の投与に伴う副作用も比較的少ないと解される。
【００３１】
従って、クロマン誘導体またはクロマン誘導体を含有しているＮＧＦ産生、分泌剤は、中枢神経退行性疾患、特にアルツハイマー病等に対して有効な進行防止及び治療剤となり得ると推察される。また、その対象疾患としては、アルツハイマー病の他、糖尿病、家族性自立神経障害、神経繊維腫瘍、神経芽細胞腫、褐色細胞腫等がある。
【００３２】
また、本発明の化合物を中枢神経退行性疾患の進行防止及び治療剤として使用する場合、公知の方法に従って経口的若しくは非経口的に投与することができる。経口的に投与する場合、成人１日当たり、１〜１００ｍｇを１回又は数回に分割し、例えば、錠剤、顆粒剤、懸濁剤、カプセル剤等として、また非経口的に投与する場合、０．１〜１０ｍｇを１回又は数回に分割し、例えば注射剤、座剤、輸液用等の張液剤として投与することができる。
【００３３】
例えば、錠剤とする場合、吸着剤としては結晶性のセルロース、軽質無水ケイ酸等を用い、賦活化剤としてはトウモロコシデンプン、乳糖、リン酸カルシウム、ステアリン酸等が用いられる。また、注射剤としする場合、化合物の水溶液または綿実油、トウモロコシ油、ラッカセイ油、オリーブ油等を用いた懸濁性水溶液、さらにはHCO-60等の界面活性剤等を用いた乳濁液として使用することもできる。
【００３４】
【実施例】
以下、本発明を実施例により更に具体的に説明する。
【００３５】
【実施例１】
本発明のクロマン誘導体の製造
本発明のクロマン誘導体の製造例を図１及び図２に従って説明する。
工程（Ａ）[3,5-ビス−(テトラヒドロピラニル-2-オキシ)安息香酸メチルの合成]
乾燥した５００ｍｌのナス型フラスコに、3,5-ジヒドロキシ安息香酸メチル 5.04g(30mmol)、Ｐ−トルエンスルフォン酸ピリジウム[PPTS、0.23g(0.9mmol)]を入れ、セプタムキャップを付けた。系内をアルゴンで置換し、無水ジクロロメタン（ＣＨ2Ｃｌ2）６０ｍｌをシリンジでセプタムキャップより加えた。この溶液を氷冷し、攪拌下、3,4−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン 8.2ml(90mmol)をシリンジで５分間かけて滴下した。室温に戻してから４時間攪拌後、1.5N 水酸化ナトリウム（NaOH）40mlを加えた。攪拌後、有機層を分離して水で洗った。前記有機層を無水硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ4）で乾燥させた後、溶媒を留去して得られる残査（11.3g)を3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）安息香酸メチルの粗精製物として次の反応に用いた。
【００３６】
工程（Ｂ）[3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルアルコールの合成]
乾燥した200mlの三つ口フラスコに、水素化アルミニウムリチウム[LAH、 2.28g(60mmol)]を入れ、乾燥管付の冷却管及びセプタムキャップを取り付けた。更にこのフラスコに、無水テトラヒドロフラン（THF）70ml を加え、攪拌下、前記3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）安息香酸メチル(粗精製物）を含む無水THF(50ml)溶液をシリンジでセプタムキャップより２０分間かけて滴下した。室温で５時間攪拌後、反応液に水10mlと3N NaOH 3mlを滴下し、更に１時間攪拌した。減圧濾過により不溶物を除いた後、濾液を濃縮し、残査にジクロロメタン（ＣＨ2Ｃｌ2）100mlを加えた。この有機層を水20mlで洗った後、無水MgSO4で乾燥させた。そして、この有機層から溶媒を留去し、得られる残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン-酢酸エチル＝１：１）にて精製し、3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルアルコール（無色油状物）8.64g(収率93%)を得た。
【００３７】
1H−NMR(CDCl3/TMS)δ(ppm):1.44-2.14(m,13H),3.56-4.03(m,4H),4.62(s,2H),5.41(d,J=2.9Hz,2H),6.71(s,3H)
【００３８】
工程（Ｃ）[4-ヨード-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルアルコールの合成]
乾燥した200mlのナス型フラスコに、3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルアルコール 2.16(7mmol)を入れ、セプタムキャップを付けた。系内をアルゴンで置換し、無水エーテル 50ｍｌをシリンジでセプタムキャップより加えた。この溶液をドライアイス−アセトン浴で、−７８℃に冷却し、攪拌下、1.0 mol/Lの tert-ブチルリチウム[（ＣＨ3）3ＣＬｉ]を含むヘキサン溶液15ml(15mmol)をシリンジで１５分間かけて滴下し、次いで、テトラメチルエチレンジアミン  2.1ml(14mmol)を５分間かけて滴下した。温度を徐々に０℃まで上げた後、ドライアイス−アセトン浴で−５０℃に冷却して、1,2-ジヨードエタン[(ＩＣＨ2ＣＨ2Ｉ）2.56g(9mmol)]を含むTHF(15ml)溶液をシリンジで滴下した。１時間攪拌後、飽和チオ硫酸ナトリウム水溶液100mlを加えた。前記溶液の有機層を分離し、無水ＭｇＳＯ4を加えて乾燥させた後、溶媒を留去し、得られる残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン-酢酸エチル＝３：２）にて精製し、4-ヨード-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルアルコール（無色固体）1.71g(収率56%)を得た。
【００３９】
1H−NMR(CDCl3/TMS)δ(ppm):1.47-2.31(m,13H),3.53-3.97(m,4H),4.63(s,2H),5.57(d,J=3.3Hz,2H),6.76(s,2H)
【００４０】
工程（Ｄ）[4-ヨード-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルパルミテートの合成]
乾燥した30mlのナス型フラスコに、4-ヨード-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルアルコール 1.09g(2.5mmol)、パルミチン酸 0.77g(16.8mmol)、4-ジメチルアミノピリジン(DMAP) 0.03g(0.25mmol)を入れ、セプタムキャップを付けた。系内をアルゴンで置換し、無水ジクロロメタン（ＣＨ2Ｃｌ2）15mlをシリンジでセプタムキャップより加えた。この溶液を氷冷し、攪拌下、ジシクロヘキシルカルボジイミド[DCC、0.03g(2.8mmol)]を含む無水ジクロロメタン[ＣＨ2Ｃｌ2(5ml)]溶液をシリンジで５分間かけて滴下した。その後氷浴をはずし、室温で３時間攪拌後反応液を濾過し、濾液を減圧濃縮した。この濃縮した濾液から得られた残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン-エーテル＝４：１）にて精製し、4-ヨード-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルパルミテート（無色油状物）1.68g(収率100%)を得た。
【００４１】
1H−NMR(CDCl3/TMS)δ(ppm):0.88(t,J=6.6Hz,3H),1.25(m,24H),1.53-2.28(m,14H),2.23(t,J=7.5Hz,2H),3.56-3.96(m,4H),5.03(s,2H),5.55(s,2H),6.73(s,2H)
【００４２】
工程（Ｅ）[4-（3-オキソブチル）-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルパルミテートの合成]
ねじ付試験管に 4-ヨード-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルパルミテート 0.67g(1mmol)、メチルビニルケトン 0.33ml(4mmol)、トリエチルアミン 0.55ml(4mmol)、酢酸パラジウム[Ｐｄ（ＯＡｃ）2、22mg(0.1mmol)]、トリフェニルフォスフィン[ＰＰｈ3、52mg(0.2mmol)]を入れ、窒素置換した後キャップを締め、ブロックバスを用いて１２０℃、３時間加熱した。放冷後、エーテル10mlを加え、攪拌した後濾過した。濾液を減圧濃縮し、得られる残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン-エーテル）にて精製した。ヘキサン-エーテル＝3:1の画分より、4-（3-オキソブチル）ヨード-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルパルミテート（無色油状物）0.31g(収率50%)を得た。
【００４３】
1H−NMR(CDCl3/TMS)δ(ppm):0.88(t,J=6.6Hz,3H),1.25(m,24H),1.52-2.06(m,14H),2.16(s,3H),2.33(t,J=7.5H,2H),2.64(m,2H),2.97(m,2H),3.57-3.94(m,4H),5.02(s,2H),5.41(s,2H),6.77(s,2H)
【００４４】
工程（Ｆ）[4-（3,7-ジメチル-5-オキソ-3,6-オクタジエニル)-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベンジルパルミテートの合成]
乾燥した30mlのナス型フラスコに、60% 水素化ナトリウム(NaH) 0.23g(5.6mmol)入れ、これに無水テトラヒドロフラン(THF)2mlを加えて、NaHをTHFに懸濁させた。次に、（2-オキソ-4-メチル-3-ペンテニル）-ホスホン酸ジメチル 1.07g(5.2mmol)を含む無水THF(3ml)溶液をシリンジで滴下し、室温で30分間攪拌した。更に、4-（3-オキソブチル）-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ）−ベイジルパルミテート 2.95g(4.7mmol)を含む無水THF(4ml)溶液をシリンジで滴下した。冷却管を取り付けた後系内をアルゴンで置換し、５時間加熱環流した。放冷後反応液にエーテル50mlを加えた後水20mlで洗った。反応液を無水ＭｇＳＯ4で乾燥した後、溶媒を留去した。そして、反応液から得られる残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン-エーテル）にて精製した。ヘキサン-エーテル＝3:1の画分より、4-（3,7-ジメチル-5-オキソ-3,6-オクタジエニル)-3,5-ビス−(テトラヒドロピラニル-2-オキシ)−ベンジルパルミテート(淡黄色油状物）0.36g(収率11%)を得た。
【００４５】
1H−NMR(CDCl3/TMS)δ(ppm):0.88(t,J=6.6Hz,3H),1.25(m,24H),1.88(s,3H),1.51-2.08(m,14H),2.16(s,3H),2.26(s,3H),2.34(t,J=7.5Hz,2H),2.86(m,2H),3.55-3.96(m,4H),5.02(s,2H),5.43(d,J=2.6Hz,2H),6.04(m,2H),6.78(s,2H)
【００４６】
工程（Ｇ）[ラセミ-5-ヒドロキシ-2-メチル-2-(4-メチル-2-オキソ-3-ペンテニル)-7-クロマニルメチルパルミテートの合成]
10mlのナス型フラスコに、4-（3,7-ジメチル-5-オキソ)-3,5-ビス−（テトラヒドロピラニル-2-オキシ)−ベンジルパルミテート 0.35g(0.5mmol)入れ、次にイソプロピルアルコール（i-PrOH）5mlを加えた。更に、この溶液に3N HCl 0.5mlを加えた後、室温で５時間攪拌した。その後、反応液に水 20mlを加えた後、ジクロロメタン[ＣＨ2Ｃｌ2（10ml×3)]で反応生成物を抽出した。抽出した有機層を合わせて、無水MgSO4で乾燥させた後、溶媒を留去した。有機層から得られる残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン-エーテル＝2：１）にて精製し、ラセミ-5-ヒドロキシ-2-メチル-2-(4-メチル-2-オキソ-3-ペンテニル)-7-クロマニルメチルパルミテート（無色油状物）0.20g(収率76%)を得た。
【００４７】
1H−NMR(CDCl3/TMS)δ(ppm):0.88(t,J=6.2Hz,3H),1.25(m,24H),1.40(s,3H),1.81-2.07(m,2H),1.88(s,3H),2.14(s,3H),2.34(t,J=7.5Hz,2H),2.62(m,2H),2.65(d,J=13.5Hz,1H),2.75(d,J=13.5Hz,1H),4.96(s,2H),6.10(s,1H),6.35(s,1H),6.41(s,1H)
【００４８】
【実施例２】
マウス脳アストログリア細胞に対するＮＧＦ産生、分泌促進作用の評価
古川らの方法（Biochemical and Biophysical Reaserch Comunications 136.55〜63,1986)に従い、胎生後期（１９日令）ラット皮質初代アストログリア細胞を１０％牛胎児血清を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）で培養（１〜２週間、３日毎に培地交換）し、コンフルエントに達したところで、トリプシンとＥＤＴＡにより処理した。これにより細胞を分散させた後、遠心して上清を除き沈殿の一部を少量の培地に懸濁させた、別の培養皿に、二次培養細胞として蒔いた。この二次培養細胞を１０％牛胎児血清を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）で培養（１〜２週間、３日毎に培地交換）し、コンフルエントに達したところで、０.５％牛血清アルブミンを含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＥＭＥ）に変えて数日培養した。その後本発明の各種濃度のクロマン誘導体を含んだ培地に交換して２４時間培養した。培養後に、培地を回収し、古川らの方法（Journal of Neurochemistry, 40,734〜744,1983)によるエンザイムノアッセイ法でＮＧＦ濃度を測定した。即ち、ＮＧＦ産生誘導活性の測定には、初代培養細胞を一世代継代させた後の二次培養細胞を用いて評価した。
【００４９】
ここで、上記培地に加えたクロマン誘導体は以下のように調製した。本発明物質であるクロマン誘導体は、１００ｍｇ/mlとなるようジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させて、これを標準溶液とした。次に、この標準溶液１体積（1v/v)に対して、ＤＭＳＯを２体積(2v/v)を加え、濃度が33.3mg/mlである３倍希釈溶液(3v/v)を調製した。更に、ＤＭＳＯによる３倍希釈の操作を順次繰り返すことで、最終的には、７段階目の希釈サンプル（０．０５mｇ/ml）までの、各種濃度のサンプル溶液を調製した。これらの各種濃度のサンプル溶液、合計８本（100, 33.3, 11.1, 3.7, 1.24, 0.41, 0.14, 0.05 mg/ml)を、後に示す実験に用いた。各々のサンプル溶液は、０．５％牛血清アルブミン含有ダルベッコ変法イーグル培地において、１０００倍に希釈された状態になるよう適量添加され、これを被験サンプルとした。即ち、培地中においては、１００μg/ml〜０．０５μg/mlの範囲でクロマン誘導体が存在する条件下でＮＧＦ濃度を測定した。
【００５０】
尚、コントロールとしては、１００％ＤＭＳＯを０．５％牛血清アルブミン含有ダルベッコ変法イーグル培地に添加し、培地中において１０００倍に希釈され状態になるよう適量添加してＮＧＦ濃度を測定した。
【００５１】
図３に、本発明物質であるクロマン誘導体を添加した培養細胞中のＮＧＦ濃度の増加率を示した。横軸はクロマン誘導の培養細胞中での濃度を示す。結果は、被験物質を含まない培地において培養した対照の培養培地中のＮＧＦ濃度に対する、クロマン誘導体を添加した培養細胞中のＮＧＦ濃度の増加率として示した。この結果から、クロマン誘導体を、実験培養細胞中で０．４１μg/ml 及び０．１４μg/mlとなる濃度で使用した場合は、コントロールに比べて、実験培養細胞中でのＮＧＦ濃度は１．９倍増加した。また、クロマン誘導体を投与して培養した対照群のＮＧＦ濃度と、クロマン誘導体を投与しないで培養した対照群（コントロール）のＮＧＦ濃度との間で、ダンカン法を用いて統計学的検定を行った結果、危険率５％以下で、クロマン誘導体を０．４１μg/ml 及び０．１４μg/mlとなる濃度で使用した場合、有意差が認められた（図３におけるアスタリスク（＊）参照）。
【００５２】
【比較例１】
また、被験化合物の陽性対照として、従来からＮＧＦ産生効果が知られているエピネフリンについても、クロマン誘導体と同様の濃度について同様の試験をしたところ、エピネフリンを実験培養細胞中で１００μg/ml及び３３μg/mlとなるように使用した場合、コントロールに比べて実験培養細胞中でのＮＧＦ濃度が１．９倍となった。
【００５３】
【発明の効果】
本発明は、低い濃度で有効にＮＧＦ産生を促進させる新規クロマン誘導体を提供することができた。更に、この新規クロマン誘導体を製造する方法を提供することもできた。
【図面の簡単な説明】
【図１】  クロマン誘導体を製造する工程の前半の図である。
【図２】  クロマン誘導体を製造する工程の後半の図である。
【図３】  クロマン誘導体を添加した培養細胞中のＮＧＦ濃度の増加率を示す図である。アスタリスク（＊）はダンカン法による検定の結果、コントロールに対して危険率５％以下で、統計学上の有意差を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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