(57)【要約】  本発明は、免疫応答の刺激のため、ならびにアレルギー性疾患、アレルギー反応、炎症性疾患および炎症反応を処置するためまたは予防するための、方法および組成物を提供する。特に、本発明は、アレルギー反応を抑えることによって、アレルギー性疾患を予防または処置する免疫応答の誘導のための、ナノエマルション組成物およびそれを使用する方法を提供する。本発明の組成物および方法は、なかでも臨床用途（例えば、治療薬および予防薬（例えば、ワクチン接種））および研究用途に使途を見出されている。
2017534608.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象におけるアレルギー性疾患を処置するための方法であって、
ナノエマルションを基にしたワクチンの治療的に有効な量を上記対象に投与することを含んでいる、方法。
【請求項２】
ナノエマルションを基にしたワクチンの上記治療的に有効な量は、上記対象におけるアレルギー免疫応答を抑える、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ナノエマルションを基にしたワクチンの上記治療的に有効な量は、上記対象におけるＴｈ２型サイトカインの発現を抑える、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ナノエマルションを基にしたワクチンの上記治療的に有効な量は、上記対象におけるＴｈ２関連免疫グロブリンの発現を抑える、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ナノエマルションを基にしたワクチンの上記治療的に有効な量は、上記アレルギー性疾患に関連する異常なＴｈ２免疫応答を調節する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ナノエマルションを基にしたワクチンの上記治療的に有効な量は、上記対象におけるＴｈ１関連免疫応答を促し、上記対象におけるＴｈ２関連免疫応答を抑える、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
上記Ｔｈ１関連免疫応答は、ＩＦＮ−ガンマの促された発現である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
上記Ｔｈ１関連免疫応答は、ＴＮＦ−アルファの促された発現である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
上記Ｔｈ１関連免疫応答は、ＩＬ−１７の促された発現である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
上記Ｔｈ１関連免疫応答は、促されたＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＧ２ｂ発現である、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
抑えられた上記Ｔｈ２関連免疫応答は、Ｔｈ２サイトカインの抑えられた発現である、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
上記ナノエマルションを基にしたワクチンを投与することは、鼻腔内投与を含んでいる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
上記ナノエマルションは、正の表面電荷を含んでいる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
上記正の表面電荷は、上記ナノエマルションの内部へのカチオン性化合物の封入を介して得られる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
上記カチオン性化合物は、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
上記ナノエマルションは、油、水、エタノール、ポリソルベート界面活性剤およびカチオン性化合物を含んでいる、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
対象における炎症性疾患を処置するための方法であって、
ナノエマルションを基にしたワクチンの治療的に有効な量を上記対象に投与することを含んでいる、方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔連邦政府による資金提供を受けた研究または開発に関する陳述〕
本発明は、国立衛生研究所／国立アレルギー・感染症研究所によって授与されたＨＨＳＮ２７２２００９０００３１Ｃの下での政府の支援によってなされた。政府は本発明のいくらかの権利を有する。
【０００２】
〔技術分野〕
本発明は、免疫応答の刺激のため、ならびにアレルギー性疾患、アレルギー反応、炎症性疾患および炎症反応を処置するため、または予防するための、方法および組成物を提供する。特に、本発明は、アレルギー反応を抑えることによって、アレルギー性疾患を予防または処置する免疫応答の誘導のための、ナノエマルション組成物およびそれを使用する方法を提供する。本発明の組成物および方法は、なかでも臨床用途（例えば、治療薬および予防薬（例えばワクチン接種））および研究用途に使途を見出されている。
【０００３】
〔発明の背景〕
アレルギー性疾患（アレルギー性のアトピー性皮膚炎、蕁麻疹、アレルギー性鼻炎、および呼吸器アレルギー（例えば花粉アレルギー）など）、食物アレルギー、ならびにアレルギー性喘息は、米国および他の国々において深刻な健康問題として存在している。
【０００４】
さらに、花粉（花粉症）もしくは他の植物の成分、猫の毛および動物の毛、ほこり（ダニの落下物を含んでいるハウスダスト等）、昆虫の毒、食物（牛乳もしくはナッツなど）、または香水および化粧品の他の成分などの物質に対するアレルギー反応がよく知られており、人々の数が増えるにつれて問題が大きくなっている。
【０００５】
アレルギーに対する従来の処置は、薬剤（ステロイド、またはマスト細胞における炎症性物質の放出を阻害する他の種類の薬物など）を含んでいる。しかしこれらは、多くの好ましくない副作用をしばしば引き起こし、疾患の根本にある免疫学的原因に対応せず、かつ恩恵をもたらすためには対象に連続的に処方されなければならないという複数の欠点を有している。「経口免疫療法」は調整された環境下においてアレルゲンを含んだ食物を対象に与えるような、食物アレルギーに対する処置であり、食物アレルゲンに対していくらかの個人の敏感性を減じることができている。しかしこの手順によって、不快な食物の経口摂取は頻度が高くかつ長期間となり、深刻な有害な反応を生じさせる著しい危険性を有し、食物に対する、口を介した長期の寛容をたいてい誘導しない。
【０００６】
〔発明の概要〕
本発明は、免疫応答の刺激のためならびにアレルギー性疾患、アレルギー反応、炎症性疾患および炎症反応を処置するためまたは予防するための、方法および組成物を提供する。特に、本発明は、アレルギー反応を抑えることによって、アレルギー性疾患を予防または処置する免疫応答の誘導のための、ナノエマルション組成物およびそれを使用する方法を提供する。本発明の組成物および方法は、なかでも臨床用途（例えば、治療薬および予防薬（例えばワクチン接種））および研究用途に使途を見出されている。
【０００７】
一実施形態において、本発明は対象におけるアレルギー性疾患を処置するための方法であって、ナノエマルションを基にしたワクチンの治療的に有効な量を上記対象に投与することを含んでいる、方法を提供する。本発明は、任意の特定のアレルギー性疾患に限定されない。実際、本発明の組成物および方法は、種々のアレルギー性疾患を予防するためおよび／または処置するために利用されてもよく、当該アレルギー性疾患としては、本明細書に記載されているそれらが挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態において、本発明は、対象における炎症性疾患を処置するための方法であって、ナノエマルションを基にしたワクチンの治療的に有効な量を上記対象に投与することを含んでいる、方法を提供する。本発明は、任意の特定の炎症性疾患に限定されない。実際、本発明の組成物および方法は、種々の炎症性疾患を予防するためおよび／または処置するために利用されてもよく、当該炎症性疾患としては、本明細書に記載されているものが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、ナノエマルションを基にしたワクチンの上記治療的に有効な量は、上記対象におけるアレルギー免疫応答を抑える。本発明は、上記対象におけるアレルギー免疫応答を抑えることに関する種々の恩恵をもたらす。一実施形態において、治療的に有効な量のナノエマルションを基にしたワクチンは、上記対象におけるＴｈ２型サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３）の発現を抑える。一実施形態において、治療的に有効な量のナノエマルションを基にしたワクチンは、上記対象におけるＴｈ２関連免疫グロブリンの発現を抑える（例えば、ＩｇＧ１力価を減少させる）。他の実施形態において、ナノエマルションを基にしたワクチンの上記治療的に有効な量は、上記アレルギー性疾患に関連する異常なＴｈ２免疫応答を調節する。例えば、一実施形態において、ナノエマルションを基にしたワクチンの上記治療的に有効な量は、上記対象におけるＴｈ１関連免疫応答を促し、上記対象におけるＴｈ２関連免疫応答を抑える。一実施形態において、上記Ｔｈ１関連免疫応答は、ＩＦＮ−ガンマの促された発現である。他の実施形態において、上記Ｔｈ１関連免疫応答は、ＴＮＦ−アルファの促された発現である。さらなる他の実施形態において、上記Ｔｈ１関連免疫応答は、ＩＬ−１７の促された発現である。よりさらなる実施形態において、上記Ｔｈ１関連免疫応答は、促されたＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＧ２ｂ発現である。一実施形態において、ナノエマルションを基にしたワクチンは、ＩＦＮ−ガンマ、ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ−１７、ＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＧ２ｂの発現を促し、同時にＴｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５および／またはＩＬ−１３）の発現を抑える。一実施形態において、上記ナノエマルションを基にしたワクチンを投与することは、鼻腔内投与を含んでいる。本発明は、利用されるナノエマルションを基にしたワクチンの種類に限られない。実際、本明細書に記載されている任意の、ナノエマルションを基にしたワクチンまたは組成物が利用されてもよい。
【０００８】
本発明の他の実施形態において、宿主（ヒトを含んでいる）における免疫応答を生じさせる方法であって、本発明の免疫原性ナノエマルションアジュバント（例えば、単独、および／または１つ以上の抗原性成分（例えば微生物の病原体（例えば、細菌、ウイルスなど）、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、トキソイド、炭水化物、腫瘍特異的抗原）との組み合わせにおいて）を当該宿主へ投与する工程を含んでいる、方法が提供される。一実施形態において、ナノエマルションアジュバントの宿主対象への投与を介して獲得される宿主免疫応答は、液性免疫応答である。他の実施形態において、ナノエマルションアジュバントの宿主対象への投与を介して獲得される宿主の免疫応答は、細胞媒介性免疫応答である。
【０００９】
本発明は、ナノエマルションアジュバントとともに利用され得る（例えば、アレルギー性疾患の処置のためのナノエマルションを基にしたワクチンとして使用されるために）（例えば、ナノエマルションアジュバントと組み合わされる、ナノエマルションアジュバントと同時投与される、ナノエマルションアジュバントの前後に投与されるなど）抗原性成分（例えば、病原体、病原性成分、抗原、免疫原など）の種類によって限定されない。一実施形態において、病原体／免疫原は、ウイルス、細菌、真菌類、ならびにウイルス由来、細菌由来または真菌類由来の病原体の生成物から選択される。本発明は、特定のウイルスに限定されない。種々のウイルスの免疫原が意図され、Ａ型インフルエンザウイルス、トリインフルエンザウイルス、Ｈ５Ｎ１型インフルエンザウイルス、Ｈ１Ｎ１型インフルエンザウイルス、西ナイルウイルス、ＳＡＲＳウイルス、マールブルグウイルス、アレナウイルス、ニパウイルス、アルファウイルス、フィロウイルス、単純ヘルペスＩ型ウイルス、単純ヘルペスＩＩ型ウイルス、センダイウイルス、シンドビスウイルス、ワクチニアウイルス、パルボウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、サイトメガロウイルス、ヒトパピローマウイルス、ピコルナウイルス、ハンタウイルス、フニンウイルス、およびエボラウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。本発明は、特定の細菌に限定されない。種々の細菌の免疫原が意図され、Bacillus cereus、Bacillus circulansおよびBacillus megaterium、Bacillus anthracis、属Brucellaの細菌、Vibrio cholera、Coxiella burnetii、Francisella tularensis、Chlamydia psittaci、Ricinus communis、Rickettsia prowazekii、属Salmonellaの細菌、Cryptosporidium parvum、Burkholderia pseudomallei、Clostridium perfringens、Clostridium botulinum、Vibrio cholerae、Streptococcus pyogenes、Streptococcus agalactiae、Streptococcus pneumonia、Staphylococcus aureus、Neisseria gonorrhea、Haemophilus influenza、Escherichia coli、Salmonella typhimurium、Shigella dysenteriae、Proteus mirabilis、Pseudomonas aeruginosa、Yersinia pestis、Yersinia enterocolitica、およびYersinia pseudotuberculosisが挙げられるが、これらに限定されない。また本発明は、特定の真菌類に限定されない。種々の真菌類の免疫原が意図され、CandidaおよびAspergillusが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１０】
好ましい実施形態において、本明細書に規定されているナノエマルション組成物（例えば、ナノエマルションを基にしたワクチン）は、Ｔｈ１型応答に免疫応答を傾ける（skew）。いくつかの実施形態において、本明細書に規定されているナノエマルション組成物（例えば、ナノエマルションを基にしたワクチン）は、対象に投与される場合、均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２応答および／または極性化（polarization）（例えば、均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２応答を示すＩｇＧサブクラスの配分およびサイトカインの反応）をもたらす。従って、種々の免疫応答が、本発明のナノエマルション組成物（例えば、ナノエマルションを基にしたワクチン）を投与された対象において生じ得るおよび／または測定され得る。当該免疫応答としては、免疫系の細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞など）の活性化、増殖および／または分化；マーカーおよび／またはサイトカインの発現の上方制御または下方制御；ＩｇＡ力価、ＩｇＭ力価、ＩｇＥ力価、および／またはＩｇＧ力価の上昇；脾腫（例えば、増大される脾臓の細胞質）；過形成、種々の器官における混合性の細胞浸潤、および／または当該分野において知られている免疫刺激に関して評価され得る、免疫系の、他の応答（例えば、細胞の）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１１】
好ましい実施形態において、ナノエマルション組成物（例えば、ナノエマルションを基にしたワクチン）を投与することは、ナノエマルション組成物と対象の粘膜表面を接触させることを含んでいる。本発明は、接触させられる粘膜表面によって限定されない。いくつかの好ましい実施形態において、上記粘膜表面は、鼻粘膜を含んでいる。いくつかの実施形態において、上記粘膜表面は、膣粘膜を含んでいる。いくつかの実施形態において、投与することは、非経口投与を含んでいる。本発明は、規定されているナノエマルション組成物（例えば、ナノエマルションを基にしたワクチン）の投与のために選択される経路によって限定されない。いくつかの実施形態において、免疫応答を誘導することは、宿主対象（例えば、ヒトまたは動物の対象）において１つ以上の病原体（例えば、B. anthracis、ワクシニアウイルス、C. botulinum、Y. pestisおよび／またはＨＩＶ）に対して応答させるため（（例えば、それによって感染防御免疫がもたらされる）例えば、Ｔｈ１および／またはＴｈ１／Ｔｈ２の均衡のとれている反応を生じさせるため）に、上記宿主の免疫系を準備刺激する。いくつかの実施形態において、免疫は全身性免疫を含んでいる。いくつかの実施形態において、免疫は粘膜免疫を含んでいる。いくつかの実施形態において、免疫応答は、対象におけるＩＦＮ−γおよび／またはＴＮＦ−αの促された発現を含んでいる。いくつかの実施形態において、免疫応答は全身性のＩｇＧ応答を含んでいる。いくつかの実施形態において、免疫応答は粘膜のＩｇＡ応答を含んでいる。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本発明は宿主における免疫応答を誘導するための免疫原性組成物を提供する。当該宿主としては、ヒトが挙げられ、上記組成物は、（ａ）少なくとも１つの抗原および／または免疫原、ならびに（ｂ）ナノエマルションアジュバントを含んでいる。いくつかの実施形態において、上記組成物は、さらなるアジュバント（例えば、第２のナノエマルションアジュバントおよび／または非ナノエマルションアジュバント（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、毒素、または本明細書に記載されている他のアジュバント）を含んでいる。
【００１３】
本発明のさらなる他の態様において、対象における（例えば抗原に対する）免疫応答を（例えば、Ｔｈ１型反応および／またはＴｈ２型反応に向けて、および／または当該反応から離して）調節および／または誘導する方法が提供される。当該方法は、宿主対象および本発明のナノエマルション組成物（例えば、ナノエマルションを基にした組成物）を用意すること、ならびに免疫応答が、上記宿主において誘導される条件、および／または調節される条件において、上記ナノエマルション組成物を上記宿主対象に投与することを含んでいる。いくつかの実施形態において、宿主免疫応答は、上記ナノエマルションアジュバントに特異的である。いくつかの実施形態において、上記宿主免疫応答は、一方でＴｈ２型サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０など）の促された発現および／または活性を同時に欠いている、Ｔｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γおよび／またはＴＮＦ−αなど）の抑えられた発現および／または活性を含んでいる。いくつかの実施形態において、上記宿主免疫応答は、一方でＴｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γおよび／またはＴＮＦ−αなど）の促された発現および／または活性を同時に欠いている、Ｔｈ２型サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０など）の抑えられた発現および／または活性を含んでいる。いくつかの実施形態において、対象に投与されるナノエマルション組成物は、Ｔｈ２型サイトカインの発現および／または活性のレベルを超える程度まで促進しているＴｈ１型サイトカインの発現および／または活性を誘導する。例えば、いくつかの実施形態において、ナノエマルション組成物を投与された対象は、２倍を超えて、３倍、５倍を超えて、１０倍を超えて、２０倍を超えて、２５倍を超えて、３０倍を超えて、またはそれ以上に促されたＴｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γおよび／またはＴＮＦ−αなど）の発現を引き起こしている。いくつかの実施形態において、ナノエマルション組成物を投与された対象は、Ｔｈ１型サイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γおよび／またはＴＮＦ−αなど）の促された発現およびＴｈ２型サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０など）の抑えられた発現を引き起こしている。いくつかの実施形態において、上記宿主免疫応答は、促されたＩＬ−１７サイトカイン発現および／または活性を含んでいる。いくつかの実施形態において、上記宿主免疫応答は、上記ナノエマルション組成物を同時投与される抗原に特異的である。いくつかの実施形態において、上記宿主対象に、ナノエマルション組成物を（例えば抗原性成分（例えば、病原体の全細胞またはその構成要素）と組み合わせて）投与することは、上記ナノエマルション組成物の投与のないときに上記宿主対象において生じていないか、もしくは低いレベルにおいて生じている、１つ以上の抗体（例えば、ＩｇＧ抗体および／またはＩｇＡ抗体）の生成を、対象において誘導および／または促進する。本明細書に記載されているように、本発明の免疫原性のナノエマルションアジュバント組成物に含められ得る抗原および��または免疫原としては、微生物病原体、細菌、ウイルス、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、ペプチド、糖ペプチド、リポペプチド、トキソイド、炭水化物、および腫瘍特異抗原が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、２以上の抗原／免疫原の混合物が利用されてもよい。
【００１４】
いくつかの実施形態において、ナノエマルション組成物は、０．１〜５００μｇとの間におけるタンパク質抗原（例えば、病原体および／または免疫原性病原体成分の組換え体から誘導されている、または由来する）を含んでいるように製剤化される。しかし、本発明は、タンパク質抗原のこの量に限定されない。例えば、いくつかの実施形態において、５００μｇを超えるタンパク質抗原が、対象への投与のためのアジュバントに存在する。いくつかの実施形態において、０．１μｇ未満のタンパク質抗原が、対象への投与のためのアジュバントに存在する。一実施形態において、上記タンパク質抗原は、公知のアレルゲン（例えば、ピーナッツ抗原、本明細書に記載されているアレルゲン、または当該技術分野に知られている他の種類のタンパク質アレルゲン）である。
【００１５】
いくつかの実施形態において、病原体（例えばウイルス）は、ナノエマルションによって不活化され、それから、約１０〜１０７ｐｆｕとの間（例えば、約１０２ｐｆｕ、１０３ｐｆｕ、１０４ｐｆｕ、１０５ｐｆｕ、または１０６ｐｆｕ）の不活化された病原体が、対象に投与された用量において存在するような条件下において、当該対象に投与される。しかし、本発明は、投与されるナノエマルションアジュバントに存在する病原体の、この量に限定されない。例えば、いくつかの実施形態において、１０７ｐｆｕを超える（例えば、１０８ｐｆｕ、１０９ｐｆｕ、またはそれ以上の）不活化された病原体が、上記対象に投与される投与量において存在する。
【００１６】
一実施形態において、１０％のナノエマルション溶液を含んでいる組成物が、（例えば、ナノエマルションを基にしたワクチンにおいて）利用されている。しかし、本発明は、ナノエマルションのこの量（例えば百分率）に限定されない。いくつかの実施形態において、組成物は、１０％未満（例えば、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％またはそれ未満）のナノエマルションを含んでいる。いくつかの実施形態において、組成物は、１０％を超える（例えば、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％の、またはそれを超える）ナノエマルションを含んでいる。いくつかの実施形態において、利用されるナノエマルションは、本明細書に記載されている任意のナノエマルションである。一実施形態において、上記ナノエマルションは、油、水、界面活性剤（例えばポリソルベート界面活性剤）、アルコール（例えばエタノール）、およびカチオン性化合物（例えばハロゲンを含んでいるカチオン性化合物（例えば塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）））を含んでいる。一実施形態において、（例えば、単独および／または免疫原性成分との組み合わせにおける）ナノエマルションの投与から生じる免疫応答は、アレルギー性疾患の徴候もしくは症状を対象が示すことを防ぐか、またはアレルギー性疾患の、徴候、症状もしくは根本的な病因を処置する。
【００１７】
一実施形態において、ナノエマルション組成物は１つ以上の付加的なアジュバントをさらに含んでいる。本発明は、利用される付加的なアジュバントの種類によって限定されない。いくつかの実施形態において、上記付加的なアジュバントは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態において、上記さらなるアジュバントは、モノホスホリルリピドＡである。本発明における使途を見出している多くの他のアジュバントが、本明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、上記対象はヒトである。
【００１８】
〔図面の説明〕
以下の図面は、本明細書の一部分を形成し、本発明の一部の態様および実施形態をさらに明示するために含めれられている。本発明は、本明細書に示されている特定の実施形態の説明と組み合わせて、これらの図面のうち１つ以上を参照することによって、よりよく理解され得る。
【００１９】
図１は、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に向けられた、Ｔｈ２に極性化した免疫応答を誘導するため、およびＮＥによって免疫増強されたＨＢｓＡｇワクチンを用いた、確立されたその免疫応答を調節するために立てた免疫化予定を示す。
【００２０】
図２は、ＮＥを基にしたワクチンを用いて得られた、血清抗体反応の変化を示す。
【００２１】
図３は、ＮＥアジュバントを用いた鼻腔内免疫化がＴｈ１型サイトカインの産生を増加させたことを示す。脾細胞は、初回免疫から１２週間後のマウスから得られ、５μｇ／ｍｌのＨＢｓＡｇを用いて刺激された。サイトカイン分泌は、Luminexによって測定された。
【００２２】
図４は、Ｔｈ２媒介性疾患のオボアルブミンアレルギーモデルの本発明の実施形態の開発の間に実施された複数の実験にわたって立てた免疫化予定を示す。
【００２３】
図５は、Ｔｈ２媒介性疾患のオボアルブミンアレルギーモデルにおける、ＮＥを基にしたワクチンを用いた血清抗体応答の変化を示す。
【００２４】
図６は、ＮＥを基にしたワクチンを用いた鼻腔内免疫化が、Ｔｈ２サイトカインを分泌しているリンパ球の数を減少させ、かつＴｈ１細胞およびＴｈ１７細胞を増加させたことを示す。脾細胞は、初回免疫から１４週間後のマウスから得られ、５μｇ／ｍｌのオボアルブミンを用いて刺激された。サイトカイン分泌細胞の数は、ELISpotによって決定された。
【００２５】
図７は、Ａｌｕｍによって免疫増強されたＯＶＡワクチンのＩＰ投与が、強いＴｈ２サイトカイン発現、およびＩｇＧ１抗体の旺盛な発現を誘導したことを示す。
【００２６】
図８は、治療的なＮＥ−ＯＶＡワクチンを受けているマウスにおける炎症の予防を示す。
【００２７】
図９ＡおよびＢは、治療的なＮＥ−ＯＶＡワクチンを受けているマウスにおける粘膜生成の防止を示す。
【００２８】
〔定義〕
本発明の理解を容易にするために、いくつかの用語および語句が以下に規定されている。
【００２９】
本明細書に使用されるとき、「微生物」という用語は、微生物の任意の種または種類（細菌、ウイルス、古細菌、真菌類、原生動物、マイコプラズマ、プリオン、および寄生生物が挙げられるが、これらに限定されない）を表す。微生物という用語は、他の生物（例えば、動物（ヒトを含んでいる）および植物）に対する病原性をその内部およびそれ自身に有している生物、ならびに他の生物に対する直接の病原性または感染性を有していない、他の生物に対する病原性を有している作用物質を産生する生物の両方を包含する。
【００３０】
本明細書に使用されるとき、「病原体」という用語および文法上の同義語は、他の生物に直接に感染すること、または他の生物（例えば、病原性の毒素を産生する細菌など）において疾患を引き起こす作用物質を産生することによって、他の生物（例えば、動物および植物）において疾患状態（例えば、感染症、病理学的状態、疾患など）を引き起こす生物（例えば、生物学的な作用物質）（微生物が挙げられる）を表す。「病原体」としては、ウイルス、細菌、古細菌、真菌類、原生動物、マイコプラズマ、プリオン、および寄生生物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３１】
「細菌（bacteria）」および「細菌（bacterium）」という用語は、すべての原核生物（原核生物界における門のすべての範囲内にある生物が挙げられる）を表す。当該用語は、細菌であると考えられているすべての微生物（Mycoplasma、Chlamydia、Actinomyces、StreptomycesおよびRickettsiaなど）を包含することを意図している。すべての形態の細菌がこの定義の範囲に含まれており、当該細菌として、球菌、桿菌、スピロヘータ、スフェロプラスト、プロトプラストなどが挙げられる。
【００３２】
本明細書に使用されるとき、「真菌類」という用語は、真核生物（例えば、カビおよび酵母）を表して使用され、二形性の真菌類が挙げられる。
【００３３】
本明細書に使用されるとき、「疾患」および「病的状態」という用語は、本明細書に他に指定されていない限り、種または集団（例えばヒト）の構成員について正常または平均的とみなされる状態からの逸脱であって、その種または集団の個体の大多数に対して有害ではない条件下で、影響を受けた個体に対して有害である逸脱を記載するために、交換可能に使用される。このような逸脱は、対象またはその器官もしくは組織のうちいずれかの、正常な機能の発揮を妨げるかまたは変更する、正常な状態のあらゆる機能障害に関連付けられている状態、徴候および／または症状（例えば、下痢、吐き気、発熱、疼痛、水疱、吹出物、発疹、超免疫応答、過敏症、免疫抑制、炎症など）として明確に現れ得る。疾患または病的な状態は、微生物（例えば、病原体または他の感染性の作用物質（例えば、ウイルスまたは細菌））との接触によって引き起こされ得るか、またはもたらされ得、環境要因（例えば、アレルゲン、栄養不良、工業災害および／または気候）に対する反応であり得、生物の先天的な欠陥（例えば遺伝子異常）に対する反応、またはこれらおよび他の要因の組み合わせに対する反応であり得る。
【００３４】
「宿主」または「対象」という用語は、本明細書に使用されるとき、本発明の組成物および方法によって処置される（例えば、投与される）個体を表す。対象としては、哺乳類（例えば、ネズミ、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど）が挙げられるが、これらに限定されず、最も好ましくはヒトが挙げられる。本発明との関連において、「対象」という用語は、１つ以上の本発明の組成物（例えば、免疫応答を誘導するための組成物）を投与される予定の個体または投与されている個体を一般的に表す。
【００３５】
本明細書に使用されるとき、「不活化すること（inactivating）」および「不活化（inactivation）」という用語ならびに文法上の同義語は、微生物（例えば病原体（例えば、細菌またはウイルス））を表して使用されるとき、宿主における病的な反応および／または疾患を感染させるか、および／または引き起こす、微生物（例えば病原体（例えば、細菌またはウイルス））の殺傷、排除、中和、および／または能力の低減を表す。
【００３６】
本明細書に使用されるとき、「融合性（fusigenic）」という用語は、微生物の作用物質（例えば、細菌または微生物の胞子）の膜と融合できるエマルションを表すと意図されている。融合性エマルションの具体例は本明細書に記載されている。
【００３７】
本明細書に使用されるとき、「溶原性」という用語は、微生物の作用物質（例えばウイルス（例えば、ウイルスのエンベロープ）または細菌もしくは細菌の胞子）の膜を破壊できるエマルション（例えばナノエマルション）を表す。本発明の好ましい実施形態において、同一の組成物における溶原性の作用物質および融合性の作用物質の存在によって、単独の作用物質のいずれかと比較して増強された不活化作用が生じる。この改良された抗菌組成物を用いる（例えば、免疫応答を誘導するための（例えば、ワクチンとして使用される）方法および組成物は、本明細書に詳細に記載されている。
【００３８】
「エマルション」という用語は、本明細書に使用されるとき、古典的な水中油型もしくは油中水型の分散液または液滴、ならびに疎水性力の結果として形成され得る他の脂質構造を包含している。当該疎水性力は、水と混和しない油相が水相と混合されているときに、非極性残基（例えば、長い炭化水素鎖）を水から遠ざけ、極性頭部基を水に向けさせる。これらの他の脂質構造としては、単層、複層および多層の脂質小胞、ミセルならびにラメラ相が挙げられるが、これらに限定されない。同様に、「ナノエマルション」という用語は、本明細書に使用されるとき、小さな脂質構造を含んでいる水中油型の分散液を表す。例えば、いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約０．１から５ミクロン（例えば、直径が約１５０ｎｍ、２００ｎｍ、２５０ｎｍ、３００ｎｍ、３５０ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍまたはそれ以上）の平均粒径をともなっている液滴を有している油相を含んでいるが、より小さい粒径およびより大きい粒径が意図されている。「エマルション」および「ナノエマルション」という用語は本発明のナノエマルションを表すために、本明細書においてしばしば交換可能に使用される。
【００３９】
本明細書に使用されるとき、「接触させる」、「接触されている」、「曝露させる」および「曝露されている」という用語は、ナノエマルションおよび生きた微生物を表して使用される場合、（存在する場合は、）ナノエマルションが微生物または病原性の因子を不活化させるように、１つ以上のナノエマルションを微生物（例えば病原体）と接触させることを表す。本発明は、微生物の不活化のために使用されるナノエマルションの量または種類によって限定されない。本発明における使途を見出されている種々のナノエマルションが、本明細書およびその他（例えば、すべての目的のためにその全体が参照によって本明細書に援用される、米国特許出願第２００２００４５６６７号および第２００４００４３０４１号、ならびに米国特許第６，０１５，８３２号、第６，５０６，８０３号、第６，６３５，６７６号、および第６，５５９，１８９号に記載されているナノエマルション）に記載されている。（例えば、微生物を不活化するため（例えば、ウイルスの不活化）に充分な）ナノエマルションおよび（例えば抗原性組成物（例えば、免疫応答を誘導できる組成物）をもたらすために充分な）微生物の比率および量は、本発明において考慮されており、当該比率および量としては、本明細書に記載されているこれらが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４０】
「界面活性剤」という用語は、水による溶媒和をエネルギー的に選択する極性頭部基、および水によって充分に溶媒和されない疎水性尾部の両方を有している任意の分子を表す。「カチオン性界面活性剤」という用語は、カチオン性頭部基を有している界面活性剤を表す。「アニオン性界面活性剤」という用語は、アニオン性頭部基を有している界面活性剤を表す。
【００４１】
「親水性−親油性バランス指標数」および「ＨＬＢ指標数」という用語は、界面活性剤分子の化学構造をその表面活性と相関させるための指標を表す。ＨＬＢ指標数は、例えば、参照によって本明細書に援用される、Meyers（例えば、Meyers, Surfactant Science and Technology, VCH Publishers Inc., New York, pp. 231-245 (1992)を参照のこと）によって記載されるような経験的な種々の式によって計算され得る。適切な場合において本明細書に使用されるとき、界面活性剤のＨＬＢ指標数は、McCutcheonの第１巻：Emulsifiers and Detergents North American Edition, 1996（参照によって本明細書に援用される）において界面活性剤に割り当てられるＨＬＢ指標数である。市販の界面活性剤に対するＨＬＢ指標数は０から約７０またはそれ以上に分布している。水における高い可溶性および可溶性を高める特性を有している親水性界面活性剤は、程度の高い方の端にあり、一方で、油中水の良好な可溶化剤である水における低い溶解性を有する界面活性剤は程度の低い方の端にある。
【００４２】
本明細書に使用されるとき、「相互作用促進剤」という用語は、（例えば細菌（例えばグラム陰性細菌）の細胞壁を有している、またはウイルスのエンベロープ（例えば、ワクシニアウイルスのエンベロープ）を有している）微生物とのエマルションの相互作用を促進するために作用する化合物を表す。考慮される相互作用促進剤としては、キレート剤（例えば、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）など）および特定の生物学的な作用物質（例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）など）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
「緩衝液」または「緩衝剤」という用語は、溶液に添加された場合に、ｐＨの変化への抵抗を当該溶液に起こさせる材料を表す。
【００４４】
「還元剤」および「電子供与体」という用語は、第２の材料に電子を供与し、当該第２の材料の原子うち１つ以上の酸化状態を還元するための材料を表す。
【００４５】
「一価の塩」という用語は、金属（例えば、Ｎａ、ＫまたはＬｉ）が正味１＋の電荷（すなわち、電子よりも１つ多い陽子）を溶液において有している任意の塩を表す。
【００４６】
「二価の塩」という用語は、金属（例えば、Ｍｇ、ＣａまたはＳｒ）が正味２＋の電荷を溶液において有している任意の塩を表す。
【００４７】
「キレーター」または「キレート剤」という用語は、金属イオンに結合するために利用可能な孤立電子対を有している２つ以上の原子を有している任意の物質を表す。
【００４８】
「溶液」という用語は、水溶性または非水溶性の混合物を表す。
【００４９】
本明細書に使用されるとき、「免疫応答を誘導するための組成物」という用語は、（例えば、１回、２回、３回またはそれ以上（例えば、数週間、数ヶ月間または数年間を隔てて））いったん対象に投与されると、対象における免疫応答を、刺激する、生じさせる、および／または誘導する（例えば、現状の免疫応答（例えば、アレルギー免疫応答）を調節する微生物および／または疾患を引き起こし得る微生物（例えば、病原体）に対する全体的または部分的な免疫をもたらす）組成物を表す。本発明の好ましい実施形態では、組成物はナノエマルションおよび免疫原を含んでいる。さらに好ましい実施形態では、ナノエマルションおよび免疫原を含んでいる上記組成物は、他の化合物または作用物質（例えば、治療剤、生理学的に許容可能な液体、ゲル、担体、希釈剤、アジュバント、賦形剤、サリチル酸塩、ステロイド、免疫抑制剤、免疫刺激剤、抗体、サイトカイン、抗生物質、結合剤、充填剤、保存剤、安定化剤、乳化剤、および／または緩衝液が挙げられるが、これらに限定されない）の１つ以上を含んでいる。免疫応答は、（例えば、対象における、（例えば、病原微生物への曝露によって引き起こされる）感染しやすい状態(infectivity)、病的な状態もしくは瀕死の惹起を抑える免疫応答、または（例えば、病原微生物への曝露によって引き起こされる）対象における感染しやすい状態、病的な状態もしくは瀕死の惹起を防ぐ先天性免疫応答（例えば非特異的免疫応答）または獲得免疫応答（例えば後天性免疫応答）であってもよい。従って、いくつかの好ましい実施形態においては、ナノエマルションおよび免疫原を含んでいる組成物は、（（例えば、疾患に対する全体的もしくは部分的な免疫、または疾患の徴候、症状もしくは状態（例えば、アレルギー性疾患の徴候、症状もしくは状態）の全体的もしくは部分的な緩解（例えば抑制）を対象にもたらすことによって）例えば、疾患（例えばアレルギー性疾患）を予防するために、または緩解させるために）ワクチンとして対象に投与される。
【００５０】
本明細書に使用されるとき、「アジュバント」という用語は、免疫応答（例えば粘膜免疫応答）を刺激し得る任意の物質を表す。いくつかのアジュバントは、免疫系の細胞の活性化を引き起こし得る（例えば、アジュバントは免疫細胞にサイトカインを産生および分泌させ得る）。免疫系の細胞の活性化を引き起こし得るアジュバントの例としては、本明細書に記載されているナノエマルションの製剤、ＱＳ２１（ＨＰＬＣ分画による２１番目のピークに溶出する糖脂質；キラヤ（Q. saponaria）の木の樹皮から精製されたサポニン（Aquila Biopharmaceuticals, Inc., Worcester, Mass）など）；ポリ（ジ（カルボキシレートフェノキシ）ホスファゼン（ＰＣＰＰ重合体；Virus Research Institute, USA）；モノホスホリルリピドＡなどのリポポリ多糖の誘導体（ＭＰＬ；Ribi ImmunoChem Research, Inc., Hamilton, Mont.）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ；Ribi）およびスレオニル−ムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ；Ribi）；ＯＭ−１７４（リピドＡに関連するグルコサミンジサッカリド；OM Pharma SA, Meyrin, Switzerland）；およびリーシュマニア伸長因子（精製されたリーシュマニアタンパク質；Corixa Corporation, Seattle, Wash.）が挙げられるが、これらに限定されない。従来のアジュバントは当該技術分野において知られており、例えば、リン酸アルミニウムまたはアルミニウムの水酸化物塩（「ａｌｕｍ」）が挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の組成物（例えば、ＨＩＶまたはそれらの免疫原性のエピトープ（例えばｇｐ１２０）を含んでいる組成物）は、例えば免疫応答をＴｈ１型反応および／またはＴｈ２型反応へと傾けるために、１つ以上のアジュバントと共に投与される。
【００５１】
本明細書に使用されるとき、例えば免疫応答を誘導するための組成物の、「免疫応答を誘導するために有効な量」という用語は、対象における免疫応答を刺激するため、生じさせるため、および／または誘導するために、（例えば、対象に投与される場合に）必要とされる投与量のレベルを表す。有効な量は、投与（例えば、同一の経路または異なる経路を介する）、処理または投与量の１つ以上において投与され得るが、特定の製剤または投与経路に限定されると意図されない。従って、例えば免疫応答を誘導するための組成物の、「治療的に有効な量」は、対象における治療的な補助を、刺激するため、生じさせるため、および／または誘導するために、（例えば、対象に投与される場合に）必要とされる組成物の投与量のレベルまたは量を表す。治療的に有効な量は、例えば同一または異なる経路を介する、投与、処理または投与量の１つ以上において投与され得るが、特定の製剤または投与経路に限定されると意図されない。
【００５２】
本明細書に使用されるとき、「上記対象が免疫応答を生じるような条件下」という用語は、（例えば、先天性または後天性）免疫応答の、定性的または定量的のいずれかの、誘導、生起および／または刺激を表す。
【００５３】
本明細書に使用されるとき、「免疫応答」という用語は、対象の免疫系による応答を表す。例えば、上記免疫応答は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の活性化、リンホカイン（例えば、サイトカイン（例えば、Ｔｈ１型またはＴｈ２型サイトカイン）またはケモカイン）の発現および／または分泌、マクロファージの活性化、樹状細胞の活性化、Ｔ細胞の活性化（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＮＫ細胞の活性化、および／またはＢ細胞の活性化（例えば、抗体の産生および／または分泌）における検出可能な変化（例えば促進）が挙げられるが、これらに限定されない。上記免疫応答のさらなる例としては、ＭＨＣ分子に対する免疫原（例えば抗原（例えば免疫原性ポリペプチド））の結合および細胞傷害性Ｔリンパ球（「ＣＴＬ」）反応の誘導、免疫原性ポリペプチドの由来する抗原に対する、Ｂ細胞反応（例えば抗体産生）の誘導および／またはヘルパーＴリンパ球反応の誘導および／または遅延型過敏性（ＤＴＨ）反応の誘導、免疫系の細胞（（例えば、任意の発達段階における）例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞（例えばプラズマ細胞）の増殖（例えば、細胞の集団の成長）、ならびに抗原提示細胞による抗原の促されたプロセシングおよび提示が挙げられる。免疫応答は、対象の免疫系が異物と認識する免疫原（例えば微生物（例えば病原体）に由来する非自己抗原または異物と認識された自己抗原）に対してであってもよい。従って、本明細書に使用されるとき、「免疫応答」は、任意の免疫応答の種類（先天性免疫応答（例えば、Ｔｏｌｌ受容体のシグナルカスケードの活性化）細胞媒介性免疫応答（例えばＴ細胞（例えば抗原特異的Ｔ細胞）および免疫系の非特異的細胞によって媒介される反応）および液性免疫応答（例えば、Ｂ細胞によって（例えば、プラズマ、リンパおよび／または組織液への抗体の産生および分泌によって）媒介される反応）が挙げられるが、これらに限定されない）を表すということが理解される。「免疫応答」という用語は、抗原および／または免疫原に対する、対象の免疫系の応答能のすべての態様（例えば免疫原（例えば病原体）に対する初期反応、同様に適応免疫応答の結果である後天性（例えば記憶）反応の両方）を包含すると意図されている。
【００５４】
本明細書に使用されるとき、「Ｔｏｌｌ受容体」および「ＴＬＲ」という用語は、病原体関連分子パターンと呼ばれる、病原体の特別なパターンを認識する受容体の分類（例えば、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０、ＴＬＲ１１）を表す（例えば、Janeway and Medzhitov, (2002) Annu. Rev. Immunol. 20, 197-216を参照のこと）。これらの受容体は、先天性の免疫細胞（例えば、好中球、単球、マクロファージ、樹状細胞）、および他の種類の細胞（内皮細胞など）において発現される。これらのリガンドとしては、細菌産物（ＬＰＳ、ペプチドグリカン、リポペプチド、およびＣｐＧ  ＤＮＡなど）が挙げられる。ＴＬＲは、外因性のリガンドに結合し、初期免疫応答を媒介することによって、侵入する微生物の排除をもたらす受容体である。ＴＬＲ誘発型シグナル経路は、炎症性サイトカインおよびケモカインの誘導される発現に重要である転写因子（ＮＦｋＢなど）の活性化を引き起こす。また、ＴＬＲは互いに相互作用する。例えば、ＴＬＲ２はＴＬＲ１またはＴＬＲ６と共に機能的なヘテロダイマーを形成し得る。ＴＬＲ２／１ダイマーは、ＴＬＲ２／６ダイマーとは異なるリガンド結合プロファイルを有している（Ozinsky et al., 2000）。いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントは、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２および／またはＴＬＲ４）を介して細胞シグナルを活性化させる。従って、本明細書に記載されている方法としては、対象に投与されたときに１つ以上のＴＬＲを活性化し、かつ対象における免疫応答（例えば、初期免疫応答および／または適応／後天性免疫応答）を刺激するナノエマルションアジュバント組成物（例えば、１つ以上の免疫原（例えば病原体（例えばウイルス（例えばＶＶ））を不活化させるタンパク質および／またはＮＥアジュバント）と任意に結合されるＮＥアジュバントを含んでいる組成物）が挙げられる。このようなアジュバントは、例えば、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲに結合しているＮＥアジュバント）と相互作用すること、またはＴＬＲへのリガンドの結合において起こる任意の下流の細胞経路を活性化させることによって、ＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２および／またはＴＬＲ４）を活性化し得る。また、本明細書に記載されている、ＴＬＲを活性化させるＮＥアジュバントは、ＴＬＲの外因性の任意のリガンドまたはＴＬＲの天然に存在する任意のリガンドの、利用可能性または可触性を増強する。１つ以上のＴＬＲを活性化させるＮＥアジュバントは、遺伝子の転写を変化させ得るか、ｍＲＮＡの転写を促し得るか、またはＴＬＲの細胞のプロセスを媒介することに関連するタンパク質の活性を促し得る。例えば、本明細書に記載されている１つ以上のＴＬＲ（例えば、ＴＬＲ２および／またはＴＬＲ４）を活性化させるＮＥアジュバントは、１つ以上のサイトカイン（例えば、ＩＬ−８、ＩＬ−１２ｐ４０および／またはＩＬ−２３）の発現を誘導し得る。
【００５５】
本明細書に使用されるとき、「免疫」という用語は、疾患を引き起こし得る微生物（例えば病原体）への曝露による疾患からの防御（例えば、疾患の徴候、症状または状態を防ぐことまたは低減すること（例えば抑制））を表す。免疫は、先天性（例えば、あらかじめ抗原に曝露されることなく存在する非適応性（例えば、後天性でない）免疫応答）および／または後天性／適応（例えば、抗原へのあらかじめの曝露に続いてＢ細胞およびＴ細胞によって媒介される免疫応答（例えば、抗原に対して、促された特異性および反応性を示す））であり得る。
【００５６】
本明細書に使用されるとき、「免疫原」および「抗原」という用語は、対象における免疫応答を誘導することができる作用物質（例えば微生物（例えば、細菌、ウイルスまたは真菌類）および／またはそれらの部分もしくは成分（例えばタンパク質抗原（例えば、ｇｐ１２０またはｒＰＡ）））を表す。好ましい実施形態において、免疫原は、本発明のナノエマルションとの組み合わせで投与される場合に、免疫原（例えば微生物（例えば、病原体または病原体の生成物））に対する免疫を誘導する。
【００５７】
本明細書に使用されるとき、「病原体の生成物」という用語は、病原体に由来する任意の成分または産物（ポリペプチド、ペプチド、タンパク質、核酸、膜の断片および多糖が挙げられるが、これらに限定されない）を表す。
【００５８】
本明細書に使用されるとき、「強化された免疫」という用語は、組成物（例えば、本発明の免疫応答を誘導するための組成物）を投与されていない対象における適応免疫および／または後天性免疫のレベルと比べて、組成物（例えば、本発明の免疫応答を誘導するための組成物）の投与を受けた対象における、所定の免疫原（例えば微生物（例えば病原体））に対する適応免疫および／または後天性免疫のレベルの増大を表す。
【００５９】
本明細書に使用されるとき、「精製される」または「精製すること」という用語は、試料または組成物からの、汚染物質または所望されない化合物の除去を表す。本明細書に使用されるとき、「実質的に精製される」という用語は、試料または組成物からの、約７０から９０％、最大で１００％の汚染物質または所望されない化合物の除去を表す。
【００６０】
本明細書に使用されるとき、「投与」および「投与すること」という用語は、本発明の組成物（例えば、免疫応答を誘導するための組成物（例えば、ナノエマルションおよび免疫原を含んでいる組成物））を対象に与える行為を表す。人体への投与経路の例としては、目（点眼）、口（経口）、皮膚（経皮）、鼻（経鼻）、肺（吸入）、口腔粘膜（頬側）、耳、直腸を介して、注入（例えば、静脈内、皮下、腹腔内など）によって、局所によってなどが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６１】
本明細書に使用されるとき、「同時投与」および「同時投与すること」という用語は、少なくとも２つの作用物質（例えば、ナノエマルションおよび免疫原ならびに１つ以上の他の作用物質（例えばアジュバント）を含んでいる組成物）または治療薬の対象への投与を表す。いくつかの実施形態において、２つ以上の作用物質または治療薬の同時投与は同時に行われる。他の実施形態において、第２の作用物質／治療薬に先立って第１の作用物質／治療薬が投与される。いくつかの実施形態において、同時投与は、同一または異なる経路の投与を介して行われ得る。用いられる種々の作用物質または治療薬の投与の製剤および／または経路は様々であってもよいことを当業者は理解する。同時投与に適切な投与量は、当業者によって容易に決定し得る。いくつかの実施形態において、作用物質または治療薬が同時投与される場合、それぞれの作用物質または治療薬は、それら単独での投与に適切な投与量よりも少ない投与量で投与される。従って、同時投与は、作用物質または治療薬の同時投与が潜在的に有害な（例えば、毒性がある）作用物質の必要な投与量を減らす実施形態および／または２以上の作用物質の同時投与が、作用物質のうちの１つの有益な効果についての対象の敏感性を、他の作用物質の同時投与を介してもたらす場合において、特に望ましい。他の実施形態において、同時投与は、２以上の異なる免疫原（例えば微生物（例えば病原体））に対する、対象における免疫応答を、同時または近い時間（例えば、対象が免疫応答を誘導するための第２、第３、またはそれ以上の組成物の連続した投与に有効である見込みのない場合）に誘導することが好ましい。
【００６２】
本明細書に使用されるとき、「局所に」という用語は、皮膚および／または粘膜細胞および組織（例えば、歯槽、頬側、舌、咀嚼器官、膣または鼻粘膜、ならびに中空器官または体腔を整列化する他の組織および細胞）の表面への、本発明の組成物（例えば、ナノエマルションおよび免疫原を含んでいる組成物）の使用を表す。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、局所エマルション、注入可能な組成物、摂取可能な溶液などの形態で投与される。例えば、経路が局所である場合、上記形態は、例えば、噴霧（例えば鼻腔噴霧）、クリームまたは他の粘性溶液（例えば、ポリエチレングリコール中の、ナノエマルションおよび免疫原を含んでいる組成物）であってもよい。
【００６４】
「薬学的に許容可能な」または「薬理学的に許容可能な」という用語は、本明細書に使用されるとき、対象に投与される場合は、有害な反応（例えば、毒性、アレルギー反応または免疫学的反応）を実質的に生じさせない組成物を表す。
【００６５】
本明細書に使用されるとき、「薬学的に許容可能な担体」という用語は、任意の標準的な薬学的な担体を表し、リン酸緩衝生理食塩溶液、水、および種々の種類の湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）、任意の溶剤およびすべての溶剤、分散媒体、コーティング剤、ラウリル硫酸ナトリウム、等張化剤および吸収遅延剤、崩壊剤（例えば、ジャガイモ澱粉または澱粉グリコール酸ナトリウム）、ポリエチレングリコールなどが挙げられるが、これらに限定されない。また、組成物は安定化剤および保存剤を含み得る。担体、安定化剤およびアジュバントの例は当該技術分野において記載されており、知られている（例えば、参照によって本明細書に援用される、Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, Pa. (1975)を参照のこと）。
【００６６】
本明細書に使用されるとき、「薬学的に許容可能な塩」という用語は、標的の対象において生理学的に許容される、本発明の組成物の任意の塩（例えば、酸または塩基との反応によって得られる）を表す。本発明の組成物の「塩」は、無機または有機の酸および塩基に由来してもよい。酸の例としては、塩酸、臭酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、スルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などが挙げられるが、これらに限定されない。シュウ酸などの他の酸は、それ自体が薬学的に許容可能ではないが、本発明の組成物およびそれらの薬学的に許容可能な酸付加塩を得るための中間体として有用な塩の調製において用いられてもよい。
【００６７】
塩基の例としては、アルカリ金属（例えばナトリウム）水酸化物、アルカリ土類金属（例えばマグネシウム）水酸化物、アンモニアおよび式ＮＷ４＋（式中、ＷはＣ１−４のアルキルである）の化合物などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
塩の例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ブチル酸塩、クエン酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩（palmoate）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、ウンデカン酸塩などが挙げられるが、これらに限定されない。塩の他の例としては、Ｎａ＋、ＮＨ４＋およびＮＷ４＋（式中、ＷはＣ１−４のアルキル基である）などの適切なカチオンと結合している、本発明の組成物のアニオンなどが挙げられる。治療用途に関して、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容可能であると考えられる。しかし、薬学的に許容できない酸および塩基の塩もまた、例えば、薬学的に許容可能な化合物の調製または精製において、使途を見出されてもよい。
【００６９】
治療用途に関して、本発明の組成物の塩は、薬学的に許容可能であると考えられる。しかし、薬学的に許容できない酸および塩基の塩もまた、例えば、薬学的に許容可能な組成物の調製または精製において、使途を見出されてもよい。
【００７０】
本明細書に使用されるとき、「疾患の危険性がある」という用語は、特定の疾患にかかり易い対象を表す。この傾向は遺伝的（例えば、遺伝的異常などの、疾患にかかる特定の遺伝的傾向）であってもよく、もしくは他の要因（例えば、環境状態、環境に存在する有害な化合物への曝露など）に起因してもよい。従って、本発明は任意の特定の危険性に限定される意図はなく（例えば、対象は単に他人と接触して交流することによって「疾患の危険性があ」ってもよい）、また、本発明は任意の特定の疾患に限定される意図もない。
【００７１】
「鼻への使用」は、本明細書に使用されるとき、鼻を通じて鼻腔経路もしくは副鼻腔経路またはその両方へ用いられることを意味する。用途は、例えば、液滴、噴霧、ミスト、コーティング剤またはそれらの混合によって、鼻腔経路または副鼻腔経路に適合させて行われてもよい。
【００７２】
「膣への使用」は、本明細書に使用されるとき、膣内または膣を通じて、膣粘膜を接触させるために用いられることを意味する。使用は、尿道、子宮頸管、円蓋、子宮または膣の周囲の他の部位を接触させてもよい。上記使用は、例えば、液滴、噴霧、ミスト、コーティング剤、潤滑剤またはそれらの混合によって、膣または周囲の組織に適合させて行われてもよい。
【００７３】
本明細書に使用されるとき、「キット」という用語は、材料を送達するための任意の送達系を表す。免疫原性因子（例えば、ナノエマルションおよび免疫原を含んでいる組成物）との関連において、このような送達系は、ある場所から他の場所への、免疫原性因子および／または補助的な試料（例えば、上記材料を使用するために記載された使用説明書など）の保存、輸送または送達を可能にする系を含んでいる。例えば、キットとしては、関連する免疫原性因子（例えばナノエマルション）および／または補助的な試料を含んでいる１つ以上の同封物（例えば箱）が挙げられる。本明細書に使用されるとき、「分割されたキット（fragmented kit）」という用語は、キットの全構成要素の一部をそれぞれ含んでいる２つ以上の別々の容器を含んでいる送達系を表す。当該容器は一緒または別々に、意図された被提供者へと送達されてもよい。例えば、第１の容器は特定の用途のために、ナノエマルションおよび免疫原を含んでいる組成物を含んでいてもよく、第２の容器は第２の作用物質（例えば、抗生物質または噴霧器）を含んでいる。実際、キットの全構成要素の一部をそれぞれ含んでいる２つ以上の別々の容器を含んでいる任意の送達系が「分割されたキット」という用語に含まれる。それに対して、「同梱されたキット（combined kit）」は、特定の用途に必要とされる免疫原性因子の構成要素のすべてを１つの容器（例えば、所望の構成要素の各々を収容している１つの箱）に含んでいる送達系を表す。「キット」という用語は、分割されたキットおよび同梱されたキットの両方を含んでいる。
【００７４】
〔発明の詳細な説明〕
アレルギー性疾患および炎症性疾患は、異常な免疫応答に関連している。
【００７５】
例えば、上皮細胞は、好酸球を引き付ける幹細胞の因子およびいくつかのケモカインなどの複数のサイトカインの放出によって、アレルギーの炎症および喘息を調節する重要な役割を担っている。２型ヘルパーＴ（Ｔｈ２）細胞は、（ＩｇＥを合成するためにＢ細胞を刺激する）ＩＬ−４およびＩＬ−１３、（好酸球の炎症に関連する）ＩＬ−５、ならびに（マスト細胞の増殖を刺激する）ＩＬ−９の放出によって、喘息における炎症性応答を調節する。
【００７６】
Ｔｈ２細胞は、アレルギーおよび喘息を有する多くの対象において優位であり、ＩＬ−４の影響下で分化の方向付けがされていない前駆Ｔ細胞から分化する。Ｔｈ２細胞は、Ｔｈ２サイトカインであるＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−９およびＩＬ−１３の放出を介して、アレルギー性炎症を調節する。Ｔｈ１細胞は、ＩＬ−１２およびＩＬ−２７の影響下で分化し、ＩＦＮ−γの放出を介してＴｈ２細胞を抑制する。Ｔｈ１７細胞は、ＩＬ−６およびＩＬ−２３の影響下で分化する。制御性Ｔ細胞は、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−１０の放出を介して他のＴｈ細胞を通常抑制し、アレルギー喘息において正常でない機能を有し得る。
【００７７】
ＩＬ−４は、分化の方向付けがされていないＴｈ０細胞からのＴｈ２細胞の分化において重要な役割を担っており、アレルゲンに対する初期の感作に重要であり得る。また、ＩｇＧの産生体からＩｇＥの産生体へのＢ細胞のアイソタイプスイッチングにも重要である。ＩＬ−１３は、ＩｇＥの分泌を誘導することおよび気道における構造変化を引き起こすことに関してＩＬ−４に類似しているが、Ｔｈ２細胞の分化を促進する役割を担っていない。ＩＬ−１３は、喘息の動物モデルにおける気道過敏性（ＡＨＲ）を誘導するだけでなく、慢性喘息に見られるいくつかの構造変化（杯細胞の過形成、気道平滑筋の増殖、および上皮下組織線維症など）を引き起こすため、喘息の処置への治療的な標的として一定の注目を集めている。ＩＬ−１３は、気道における構造細胞（上皮細胞など）から、複数のサイトカイン（ＣＣＬ１１（エオタキシンとも知られている）など）の発現を刺激することによって炎症を誘導する。ＩＬ−１３は、ＡＨＲおよび粘液の過分泌を誘導する。
【００７８】
マウスにおけるＩＬ−９の過剰発現は、好酸球に媒介される炎症、粘液の過分泌、肥満細胞症、ＡＨＲ、ならびに他のＴｈ２サイトカインおよびＩｇＥの促された発現を誘導する。ＩＬ−９の遮断は、感作したマウスのアレルゲンの惹起後の、肺好酸球増加症、粘液の過分泌、およびＡＨＲを阻害する。喘息の対象は、気道におけるＩＬ−９およびその受容体の促された発現を示す。
【００７９】
従って本発明は、免疫応答の刺激のため、ならびにアレルギー性疾患、アレルギー反応、炎症性疾患および炎症反応を処置するためまたは予防するための、方法および組成物を提供する。特に本発明は、アレルギー反応を抑えることによって、アレルギー性疾患を予防する免疫応答または処置する免疫応答の誘導のための、ナノエマルション組成物およびそれを使用する方法を提供する。本発明の組成物および方法は、なかでも臨床用途（例えば、治療薬および予防薬（例えばワクチン接種））および研究用途に使途を見出されている。
【００８０】
Ｔｈ２免疫応答は、ＩｇＥ抗体の産生および高いレベルのＴｈ２サイトカインによって特徴づけられ、いくつかの病原体、ならびにがん、大腸菌、喘息およびアレルギーに対する不十分な防御に関連している。近年使用されている多くのワクチンアジュバントは、Ｔｈ２反応を広く誘導する。Ｔｈ２からＴｈ１へと免疫応答を変えることを試みている免疫療法は、延長された免疫化の手順を一般的に求めており、長期のＴｈ１反応を誘導していない。従って、様々なナノエマルションアジュバントの（例えば、アレルギー性疾患、炎症性疾患および他のＴｈ２媒介性疾患との関連において）現状のＴｈ２の極性化した免疫応答を調節する能力、および（例えば、Ｔｈ２媒介性疾患に関連する徴候、症状もしくは状態を抑えるためまたは排除するため）均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ１７／Ｔｈ２プロファイルへと、Ｔｈ２の極性化した反応を変化させる能力および／または傾ける能力を評価するため、本発明の実施形態の開発の際、実験を実施した。
【００８１】
ナノエマルション（ＮＥ）は、旺盛なＩｇＡおよびＩｇＧの抗体反応ならびにＴｈ１／Ｔｈ１７細胞性免疫を誘導し、種々の呼吸器感染および粘膜感染に対する防御を引き起こすことが以前から観察されている。ＮＥを用いたＩＮ免疫化はＴｈ１型免疫応答を誘導できたが、Ｔｈ２サイトカインの反応はわずかに変化しただけであった（ワクチン接種の手順において上がりも下がりもしなかった）という観察の結果を基に、アレルギー性疾患または炎症性疾患との関連において、均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ１７／Ｔｈ２プロファイルへと、現状のＴｈ２の極性化した免疫を向かわせるために治療的なワクチンとしてＮＥは使用され得るか否かを試験した。
【００８２】
アレルギー性疾患のマウスモデルにおいてＴｈ２の極性化した免疫応答を確立するため、本発明の実施形態の開発の際、実験を実施した。この目的のため、第１のセットの実験を行い、より強くないＴｈ２免疫応答および／またはＴｈ１または均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２型反応へと確立されたＴｈ２免疫応答を調整し得るかどうかを決定することに努めた。実施例１に示されているように、ａｌｕｍアジュバントＢ型肝炎表面抗原（ＨＢ）を用いた筋肉内内在化、およびＮＥ−ＨＢを用いた続く単回のＩＮ内在化によってＴｈ２免疫応答は確立され、結果としてＴｈ１関連免疫応答（ＩＦＮ−ガンマ、ＴＮＦ−アルファ、ＩｇＧ２ａ、およびＩｇＧ２ｂ）およびＩＬ−１７が促されたが、一方で同時に、Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬ−４およびＩＬ−５）およびＩｇＧ１の存在が減少していた（実施例１を参照のこと）。
【００８３】
次に、アレルギー性疾患のマウスモデルを試験した。特に、オボアルブミンに対するアレルギー性過敏症のマウスモデルを確立し、ＮＥを基にしたワクチンもアレルギー性疾患（例えば、アレルギー性の過剰反応性／過敏症）に関連している旺盛なＴｈ２媒介性免疫応答を調節できるかどうかを決定するため、ナノエマルションを基にしたワクチンの能力を試験した。
【００８４】
実施例２に示されているように、本明細書に記載されているナノエマルションワクチンの投与を行った、オボアルブミンに対するアレルギー性過敏症のマウスモデルにおいて達成された顕著な恩恵が観察された。特に、Ｔｈ２アレルギー性免疫応答を確立するためにａｌｕｍアジュバントＯＶＡを投与され、引き続いてＮＥを基にしたワクチンを投与されたマウスは、著しく調節されたＴｈ２の極性化した免疫応答を示し、当該免疫応答は、Ｔｈ１免疫応答へと傾け、結果として、均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２免疫応答となっていることによって特徴づけられた（実施例２、図５および図６を参照のこと）。アレルギー性であり、疾患に関連している旺盛なＴｈ２免疫応答へと変えるＮＥを基にしたワクチンの能力は、そうすることを試みている文献に記載されている他の試験が失敗しているので、意外であった。しかし、本発明の実施形態の開発の際に実施された実験において蓄積されているデータは、（Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬ−４およびＩＬ−５）およびＩｇＧ１の旺盛な発現によって特徴づけられる）Ｔｈ２反応に関連した疾患から遠ざけて、（抑えられたＴｈ２反応および促されたＩＦＮ−ガンマ、ＴＮＦ−アルファ、ＩｇＧ２ａ、およびＩｇＧ２ｂならびにＩＬ−１７によって特徴づけられる）均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２反応へとアレルギー反応を調節するためのＮＥを基にしたワクチンを用いた鼻腔内内在化の能力を示す。
【００８５】
従って、好ましい実施形態において、本発明は対象におけるアレルギー性疾患を処置するための方法であって、ナノエマルションを基にしたワクチンの治療的に有効な量を上記対象に投与することを含んでいる、方法を提供する。一実施形態において、ＮＥを基にしたワクチンは、アレルギー性疾患、炎症性疾患、またはＴｈ２免疫に関連する任意の他の疾患の治療として、（例えば、アレルギー性疾患の根本にある）Ｔｈ２免疫応答を調節し（例えば、抑えて、または離して傾けて）、Ｔｈ１／Ｔｈ１７免疫を促進する（例えば、Ｔｈ１型免疫応答および／またはさらに均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２免疫応答へと傾ける）ために使用される。本発明は任意の特定のアレルギー性疾患に限定されない。実際、本発明の組成物および方法は、種々のアレルギー性疾患を予防および／または処置するために利用されてもよく、当該アレルギー性疾患としては、喘息、呼吸器アレルギー（例えば花粉アレルギー）、虫刺されによるアレルギー、アレルギー性鼻炎（花粉症）、食物アレルギー、薬物アレルギー、ラテックスアレルギー、アトピー性皮膚炎（湿疹）、または当該技術分野において公知のアレルギー性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態において、本発明は粘膜のナノエマルションを基にしたワクチン（例えば、対象への、特定のアレルギー（例えばピーナッツアレルギー）に対するワクチン接種）を用いて、存在するＴｈ２免疫応答を調節する方法を提供する。これは、ナノエマルションはアレルギー（例えばピーナッツ）に対するワクチンを人々に接種するために使用され得ることを意味する。他の実施形態において、本発明は、ＮＥワクチンを対象に接種する（例えば、鼻腔内投与する）ことによって、上記対象における（例えば、Ｔｈ２媒介性疾患の対象における）、Ｔｈ２の極性化した免疫応答をＴｈ１型免疫応答に向かわせる能力（例えば、Ｔｈ１型免疫応答へと傾ける能力および／またはより均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２免疫応答を生じさせる能力）をもたらす。一実施形態において、本発明は従来のアレルギーのワクチン接種（allergy shots）によって得られる恩恵よりも、より効果的な恩恵（例えば、より顕著に抑えられた徴候、症状もしくは疾患の原因、またはより持続的に抑えられた徴候、症状もしくは疾患の原因）をもたらす。
【００８６】
いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルション組成物の投与（例えば粘膜投与）は、液性免疫応答（例えば、特定の抗体の発達）および細胞性免疫応答（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球）の両方の誘導を準備刺激するか、可能とするかおよび／または促す（例えば、それによって、徴候、症状またはアレルギー性疾患の状態を改善する）。いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルション組成物は（例えば、ナノエマルションアジュバントを投与されている宿主における（例えば免疫応答（例えば、先天性免疫応答および、または適応免疫応答）を刺激および／または促進する）免疫刺激性のアジュバントとして）ワクチンに使用される。
【００８７】
さらに、いくつかの実施形態において、本発明の組成物（例えば、ＮＥアジュバントを含んでいる組成物）は、（例えば、対象に投与される場合に）液性免疫応答および粘膜免疫応答の両方を誘導する（例えば、液性免疫および、または粘膜免疫を生じさせる（例えば、それによって、徴候、症状またはアレルギー性疾患の状態を抑えるかもしくは予防する））。従って、いくつかの実施形態において、本発明の組成物の対象への投与は、結果として、１つまたは複数のアレルゲンおよび／またはアレルギー性物質（例えば、ピーナッツアレルゲン、虫に噛まれることまたは虫に刺されることによるアレルゲン呼吸器系アレルゲンなど）への曝露に対する防御を引き起こす。
【００８８】
いくつかの実施形態において、本発明は、他のアジュバント（例えば、組成物を投与される宿主における炎症、病的な状態、および／または不都合な副作用を引き起こすアジュバント）の使用に取って代わるナノエマルションアジュバント組成物を提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションアジュバントは、Ｔｈ１型アジュバントの代わりに免疫原性組成物（例えばワクチン）に利用される。いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションアジュバントは、宿主対象に投与される場合、不都合な副作用および／または好ましくない副作用を生じないで、従来のアジュバント組成物（例えば、コレラ毒、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、ａｌｕｍおよび／または本明細書に記載されている他のアジュバント）によって誘導される免疫応答と類似、同等、またはそれよりも優れた免疫応答（例えば、先天性免疫応答、細胞媒介性免疫応答、適応免疫応答および／または後天性免疫応答）をもたらす。
【００８９】
本発明は、任意の特定のナノエマルション、病原体またはアレルゲンに限定されない。例示的な免疫原性組成物（例えばワクチン組成物）および当該組成物を投与する方法は、以下にさらに詳細に記載されている。
【００９０】
＜Ｉ．ナノエマルション＞
本発明のいくつかの実施形態において、利用されるナノエマルション組成物は、抗菌作用を示している。例えば、ナノエマルション組成物は、細菌（栄養型形態および胞子の形態の両方）、ウイルスおよび真菌類を不活化することが示されている。本発明のいくつかの実施形態において、（例えば、免疫応答を誘導するため（例えば、ワクチンとしての使用のため）に）対象に投与される前のナノエマルションへの曝露によって病原体は不活化される。ナノエマルションアジュバント組成物は、細菌を不活化し易くするために使用され得る。実施形態の一部において、組成物は、特に、グラム陽性細菌を不活化することにおいて効果的である。好ましい実施形態において、細菌の不活化は、約５〜１０分後に起こる。従って、細菌は、エマルションに接触されてもよく、迅速な方法および効果的な方法で不活化されるであろう。細菌が直接エマルションに曝露される場合、接触と不活化との間の時間は、５〜１０分よりも少ないことが予想される。しかし、ナノエマルションが治療的な状況で用いられ、全身に用いられる場合、不活化はより長い時間にわたって起きてもよく、当該時間としては、使用後、５分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、６０分が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、さらなる実施形態においては、不活化が起こるまでに、２時間、３時間、４時間、５時間または６時間かかってもよい。
【００９１】
また、ナノエマルションは、本発明のワクチンを生成する利用のため、特定のグラム陰性細菌を迅速に不活化し得る。このような方法で、細菌を不活化しているエマルションは、細胞壁によってエマルションの相互作用を促す化合物とあらかじめ混合される。本発明のワクチン組成物におけるこれらの促進剤の利用は、本明細書において以下に記載されている。なお、特定のエマルション（例えば、促進剤を含んでいるエマルション）は、特定のグラム陽性細菌およびグラム陰性細菌に効果的であろう。
【００９２】
また、ナノエマルションは、本発明のナノエマルション組成物を生成する利用のため、対象におけるアレルギー反応を引き起こすアレルゲン、アレルギー性物質、または他の物質と共に混合され得る。このような方法で、アレルギー反応を引き起こすアレルゲン、アレルギー性物質、または他の物質は、本明細書に記載されているナノエマルションと共に混合される。任意に、本明細書に記載されている他の組成物は、ナノエマルション組成物へと混合される。
【００９３】
また、ナノエマルションアジュバントは、抗殺胞子剤（anti-sporicidals）として利用され得る。任意の論理に縛られることなく（機序の理解は本発明を実施するために必須ではなく、本発明は任意の特定の機序に限定されない）、これらのエマルションの殺胞子活性は、栄養型への完全な転換を起こすことなく、胞子がエマルションによる崩壊に対して敏感なままである発芽の開始を通して生じることが推測される。発芽の開始は、エマルションまたはその組成物の作用によって、媒介され得る。
【００９４】
本発明のいくつかの実施形態において使用される、細菌を不活化している水中油型のエマルションは、種々の細菌および細菌の胞子を接触によって不活化させるために使用され得る。例えば、現在記載されているエマルションは、バシラス属（Bacillus）を不活化させるために使用され得るが、例えば、B.cereus、B.circulansおよびB.megatetiumが挙げられる。また、属Clostridium（例えば、C.botulinumおよびC.tetani）が挙げられる。本発明のいくつかの実施形態において利用されるナノエマルションは、特定の生物兵器剤（例えばB.anthracis）を不活化させることに特に有用であってもよい。さらに、本発明の製剤は、C.perfringens、H.influenzae、N.gonorrhoeae、S.agalactiae、S.pneumonia、S.pyogenesならびに古典型コレラ菌（V.cholerae classical）およびエルトール型コレラ菌（V.cholerae Eltor）を駆除することにも利用が見出される。
【００９５】
本発明のナノエマルションアジュバント組成物は、抗ウイルス特性を有している。
【００９６】
さらに、本発明のいくつかの実施形態において使用されるナノエマルションアジュバントの他の特性としては、抗真菌活性を有していることが挙げられる。真菌類の感染の標準的な作用因子としては、種々の種の属Candidaおよび属Aspergillus、これらの種々の種類、ならびに他の作用因子が挙げられる。外因性の真菌類の感染は比較的稀ではあるが、全身性の真菌類の感染は、深刻な医学的な結果につながり得る。ヒトにおける真菌類の感染の発生率が増加しており、正常に機能しない免疫系を有している対象の数の増加に部分的に起因している。真菌類性疾患、特に全身性の場合は、正常に機能しない免疫系を有している対象に命にかかわり得る。
【００９７】
＜ＩＩ．ナノエマルションアジュバント組成物および免疫応答を誘導するための組成物＞
いくつかの実施形態において、本発明は、ナノエマルションアジュバント（例えば、単独および／または１つ以上の免疫原（例えば、不活化される病原体または病原体の生成物）、もしくはアレルゲン、アレルギー性物質、またはアレルギー反応を引き起こす他の物質との組み合わせ）を含んでいる、免疫応答を誘導するための組成物を提供する。本発明における使途を見出されている種々のナノエマルションは、本明細書およびそれ以外に記載されている（例えば、すべての目的について参照によってその全体が本明細書に援用される米国特許出願公開第２００２００４５６６７号および米国特許出願公開第２００４００４３０４１号、ならびに米国特許第６，０１５，８３２号、米国特許第６，５０６，８０３号、米国特許第６，６３５，６７６号および米国特許第６，５５９，１８９号に記載されているナノエマルションである）。
【００９８】
本発明のナノエマルションアジュバント（１つ以上の免疫原（例えば、病原体または病原体の生成物）もしくはアレルゲン、アレルギー性物質、またはアレルギー反応を引き起こす他の物質との組み合わせ）は、種々の送達方法を利用している任意の好適な量で組み合わせられ得る。任意の好適な薬学的製剤は、例えば本明細書に記載されているこれらを利用され得るが、これらに限定されない。好適な製剤は、任意の好適な方法を用いて免疫原性のために試験され得る。例えば、いくつかの実施形態において、免疫原性は特異的なＴ細胞反応（例えば、サイトカインのプロファイル）および抗体価を定量化することによって調べられる。また本発明のナノエマルション組成物は、感染性疾患の状態の動物モデルにおいて試験され得る。好適な動物モデル、病原体および免疫原性の検定法としては、本明細書に記載のこれらが挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
アジュバントは、昔から、炎症性物質（毒素または微生物成分など）から開発されてきており、シグナル経路およびサイトカインの産生を誘発することがわかってきた（例えば、Graham, B.S., Plos Medicine, 2006. 3(1): p. e57を参照のこと）。また、エンテロトキシン（コレラ毒など）を基にしたアジュバントは、鼻粘膜における炎症を誘導することならびに炎症性サイトカインの産生および嗅覚ニューロンに沿った嗅球へのワクチンの輸送に関連している（例えば、van Ginkel, F.W., et al., Infect Immun., 2005. 73(10): p. 6892-6902を参照のこと）。これらの毒素（NASALFLU, BERNA Biotech）の１つを基にしたインフルエンザのワクチンで処置された数名の対象は、おそらく嗅球内のワクチンに起因してベル麻痺を発症した（例えば、Mutsch, M., et al.,. New England Journal of Medicine, 2004. 350(9): p. 896-903を参照のこと）。この知見により、ＮＡＳＡＬＦＬＵが回収されることになった。その一方、いくつかの実施形態において、本発明は、動物における著しい炎症を生じることなく、また嗅球における組成物の痕跡のないナノエマルションアジュバント（例えば、Ｗ８０５ＥＣ、Ｐ４０７５ＥＣなど）を提供する。従って、本発明は、いくつかの実施形態において、病原体またはアレルゲン、注射針なしの粘膜投与を利用しているアレルギー性物質またはアレルギー反応を引き起こす他の物質に対する免疫応答（例えば免疫）を誘導すること、非ナノエマルションアジュバントを基にした（例えば、アルミニウムを基にした）ワクチンを注入することによって誘導されない粘膜および細胞性免疫応答と同様に従来のワクチンに匹敵する全身性免疫の誘導のための組成物および方法を提供する。
【０１００】
いくつかの実施形態において、本発明は免疫応答を誘導する方法およびこのような方法に有用な組成物（例えばナノエマルションアジュバント組成物）を提供する。いくつかの実施形態において、本発明によって提供される、宿主対象における免疫応答を誘導する方法は、ワクチン接種に使用される。例えば、いくつかの実施形態において、本発明はナノエマルションアジュバントおよび１つまたは複数の（例えば、複数の病原体（例えば、本発明のナノエマルションによって不活化される１つまたは複数の病原体および／または１つまたは複数のタンパク質および／または１つまたは複数の病原体に由来する（例えば、単離および／または組み換えによって作製される）ペプチド抗原）に由来する）免疫原を含んでいる組成物；および対象が１つまたは複数の病原体および／または免疫原に対する免疫応答を生じさせる条件で、上記対象に上記組成物を投与する（例えば、鼻から投与する）方法を提供する。いくつかの実施形態において、投与は粘膜投与を含んでいる。いくつかの実施形態において、免疫応答を誘導することは、対象における１つまたは複数の免疫原に対する免疫を誘導する。いくつかの実施形態において、上記免疫原に対する免疫応答を誘導することは、当該免疫原が由来する複数の病原体に対する免疫を誘導する。いくつかの実施形態において、免疫は全身性免疫を含んでいる。いくつかの実施形態において、免疫は粘膜免疫を含んでいる。いくつかの実施形態において、上記免疫応答は、（例えば、一価のワクチン製剤に匹敵する）上記免疫原に対する全身性のＩｇＧ反応を含んでいる。いくつかの実施形態において、上記免疫応答は上記免疫原に対する粘膜のＩｇＡ反応を含んでいる。いくつかの実施形態において、多価の免疫原性組成物に対する免疫応答は、均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２反応および／または極性化（例えば、均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２反応を示すＩｇＧサブクラスの配分およびサイトカインの反応）によって特徴づけられる。
【０１０１】
従って、本明細書に記載されているように、一実施形態において本発明は、免疫原性組成物を製剤化することに有用であり、例えばワクチンとして使用されることに好適であるアジュバント混合物を提供する。実施例１〜２に記載されているように、上記免疫原性組成物は、（例えば、サイトカインおよび他の免疫因子の産生を含んでいる）当該免疫原性組成物を投与される宿主（例えば宿主細胞）によって免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態において、アジュバント組成物は少なくとも１つの抗原（例えば、病原性抗原またはアレルギー性抗原）を含んでいるように製剤化される。抗原は、不活化される病原体、病原体またはアレルゲンの抗原性分画、アレルギー性物質またはアレルギー反応を引き起こす他の物質であってもよい。上記病原体は例えば、ウイルス、細菌または寄生生物であってもよい。上記病原体は、化学物質（例えばホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、ベータ−プロピオラクトン、エチレンイミンおよび誘導体など）、上記ナノエマルションアジュバント自体、または他の化合物によって、不活化されてもよい。また上記病原体は、ＵＶ放射、ガンマ放射、「熱ショック」およびＸ線放射などの物理的因子によって不活化されてもよい。病原体の抗原性分画は、化学的または物理的な分解方法を用いて、また好ましくは、それに続くクロマトグラフィー、遠心分離および同様の技術を用いた分画の分離によって生成され得る。あるいは、抗原またはハプテンは、有機合成方法または組換えＤＮＡ方法（例えば、ポリペプチドおよびタンパク質の場合）を用いて調製され得る。いくつかの実施形態において、本発明のアジュバント組成物は、市場で入手可能なワクチンと共に（例えば、さらに旺盛な免疫応答を生じさせるため、（例えば、Ｔｈ１型反応に向けて、Ｔｈ２型反応から離して）上記免疫応答を傾けるため、およびワクチンによって誘導される免疫応答の種類のバランスをとるため）同時投与される。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、本発明は、正の電荷を欠いている（例えば、（例えば、カチオン性化合物（例えばＣＰＣ）が存在しないために）正の表面電荷を欠いている）ナノエマルションアジュバントよりも免疫応答（例えば、先天性免疫応答および／または適応／後天性免疫応答）を誘導することにおいてより優れた効果を有している正の電荷を帯びた（例えば、（例えば、カチオン性化合物（例えばＣＰＣ）の存在によって）正の表面電荷を含んでいる）ナノエマルションアジュバントを提供する。機序の理解は本発明を実施するために必須ではなく、本発明は任意の特定の機序に限定されないが、いくつかの実施形態において、正の電荷（例えば、（例えば、上記ナノエマルションにおけるカチオン性化合物（例えばＣＰＣ）の存在による）正の表面電荷）を有しているナノエマルションアジュバントは、（例えば、上記エマルションの正の電荷を帯びた表面のため）正の電荷を帯びていないエマルションよりも優れた、（例えば、鼻腔内投与される際における）粘膜への接着性を有している。いくつかの実施形態において、正の電荷（例えば、上記ナノエマルションにおけるカチオン性化合物（例えばＣＰＣ）の存在による）正の表面電荷）を有しているナノエマルションアジュバントは、正の電荷を帯びていないナノエマルションよりも、食細胞（例えば、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞など）または他の細胞によってより容易に内在化される（（例えば、抗原提示細胞による）例えば、抗原のより優れた内在化、抗原のプロセシング、および／またはＢ細胞および／またはＴ細胞への抗原の提示につながる）。従って、いくつかの実施形態において、より優れた内在化および／または抗原のプロセシングおよび／またはＢ細胞および／またはＴ細胞への抗原の提示により、（例えば正の電荷（例えば、ナノエマルションにおけるカチオン性化合物（例えばＣＰＣ）の存在による正の表面電荷））を有しているナノエマルションにおける投与される抗原に対する）より強く、より旺盛な免疫応答につながる。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、本発明は上記アジュバントを投与される対象における好ましい免疫応答（例えば獲得免疫応答）を生じさせるナノエマルションアジュバントを提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本発明は、１つまたは複数の抗原と組み合わせられる場合および／または混合される場合に、Ｔｈ２型免疫応答から離れて、Ｔｈ１型免疫応答へと宿主免疫応答を歪曲させるナノエマルションアジュバントを提供する。特に、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、炭疽菌、およびＢ型肝炎ウイルスなどの種々の疾患に対する従来のａｌｕｍを基にしたワクチンはそれぞれ、（例えば、Ｔｈ２型サイトカインの促された発現およびＩｇＧ１抗体の産生に特徴づけられる）上記ワクチンを投与される対象における優位なＴｈ２型免疫応答を引き起こす。しかし、本発明のナノエマルションアジュバント組成物およびそれを用いる方法によって生成される免疫原性組成物（例えばワクチン）は、従来のワクチンを投与される宿主対象における従来観察されているＴｈ２型免疫応答に向かわせることができる。さらに、本発明はアレルギー性疾患の根本にある免疫応答に向かわせることおよび／または調節することができる組成物およびそれを使用する方法をも提供する。例えば、本発明の組成物および方法は、アレルギー性疾患、炎症性疾患またはＴｈ２免疫に関連する任意の他の疾患に対する治療として、（例えば、アレルギー性疾患の根本にある）Ｔｈ２免疫応答を調節し（例えば、Ｔｈ２免疫応答から離して傾け）、Ｔｈ１／Ｔｈ１７免疫を促進する（例えば、Ｔｈ１型免疫応答および／またはより均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２免疫応答へと傾ける）ことができる。
【０１０４】
従って、いくつかの実施形態において、本発明は、アレルギー免疫応答および／または炎症免疫応答を（例えば、Ｔｈ２型免疫応答から離れて、Ｔｈ１型免疫応答へと）傾けるためおよび／または向かわせるための、組成物および方法を提供する。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の免疫原／抗原に対する宿主免疫応答を、（例えば、Ｔｈ２型免疫応答から離して、Ｔｈ１型免疫応答に向けて）傾けることおよび／または向かわせることは、対象に投与される際のＴｈ２型免疫応答の生成に従来関連している１つ以上の抗原またはアレルゲン（例えば、組換え抗原、単離および／または精製される抗原、および／または殺傷させられる全体の病原体）を提供すること、本発明のナノエマルションと１つ以上の抗原またはアレルゲンを組み合わせること、および好ましい免疫応答を誘導するのに充分な状況下で治療的に有効な量のナノエマルション−抗原混合物またはナノエマルション−アレルゲン混合物を対象に投与することを含んでいる。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、本発明は防御を達成するために必要とされる、（例えば、組成物を含んでいる抗原の）ブースターの注入の数を減らすアジュバントを提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、血清変換を達成している被提供者の割合がより高いという結果となるようなアジュバントを提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、Ｔｈ１免疫応答へと獲得免疫を選択的に傾けることに有用なアジュバントを提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、多くの最新のワクチン接種計画が好ましく効果的ではない対象（例えば、非常に若い集団および／または非常に年老いた集団）における最適な反応を誘導するアジュバントを提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、異なる送達経路および別の種類の免疫の誘出を含んでいるワクチン接種の処方に必要とされる効果および安全性をもたらすアジュバントを提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、抗体反応を刺激し、毒性をほとんど有さず、免疫増強性およびこれらが誘導する免疫応答の種類をもたらすための抗原またはアレルゲンの範囲で利用され得るアジュバントを提供する。
【０１０６】
（ナノエマルション）
本発明は、用いられるナノエマルションアジュバントの種類に限定されない。実際、種々のナノエマルションアジュバントが、本発明において有用であることが考慮される。
【０１０７】
例えば、いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、（ｉ）水相、（ｉｉ）油相；および少なくとも１つのさらなる化合物を含んでいる。本発明のいくつかの実施形態において、これらのさらなる化合物は、組成物の水相および油相のいずれかに混合される。他の実施形態において、これらのさらなる化合物は、水相および油相の乳化の前の組成物に混合される。これらの実施形態の一部において、１つ以上の化合物は、現状のエマルション組成物に、その使用に先立って混合される。他の実施形態において、１つ以上のさらなる化合物は、現状のエマルション組成物に、組成物の迅速な使用に先立って混合される。
【０１０８】
本発明のナノエマルションの利用に好適なさらなる化合物としては、１つ以上の有機物、より詳細には、有機リン酸塩を基にした溶媒、界面活性剤および洗浄剤（detergent）、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物、発芽促進剤、相互作用促進剤、食品添加剤（例えば、香味料、甘味料、充填剤など）ならびに薬学的に許容可能な化合物（例えば担体）が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の組成物における利用について意図されている種々の化合物の例示的な特定の実施形態は、以下に示されている。特に記載されない限り、ナノエマルションは希釈されていない形態で記載されている。
【０１０９】
本発明のナノエマルションアジュバント組成物は、任意の特定のナノエマルションに限定されない。任意の数の好適なナノエマルション組成物は、本発明のワクチン組成物に利用されてもよく、当該ナノエマルション組成物としては、Hamouda et al., J. Infect Dis., 180:1939 (1999); Hamouda and Baker, J. Appl. Microbiol., 89:397 (2000)；およびDonovan et al., Antivir. Chem. Chemother., 11:41 (2000)に開示されている組成物が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の好ましいナノエマルションは、動物にとって無毒なナノエマルションである。好ましい実施形態において、本発明の方法に利用されるナノエマルションは、安定であり、長い貯蔵期間（例えば、一年またはそれ以上）の後でさえ分解しない。さらに、好ましいエマルションは、高温および凍結への曝露の後でさえ安定性を維持している。これは、極限状態（例えば、極端な熱および低温）で用いられる場合に特に有用である。
【０１１０】
本発明のいくつかの実施形態は、エタノールを含んでいる油相を用いる。例えば、いくつかの実施形態において、本発明のエマルションは、（ｉ）水相、ならびに（ｉｉ）有機溶媒としてエタノールを含んでいる油相、および任意に発芽促進剤、ならびに（ｉｉｉ）界面活性剤としてＴＹＬＯＸＡＰＯＬ（好ましくは２〜５％、より好ましくは３％）を含んでいる。この製剤は、微生物の不活化に対して高く効果的であり、哺乳類の対象に対して無刺激および無毒である（例えば、それゆえに粘膜表面への投与に使用され得る）。
【０１１１】
いくつかの他の実施形態において、本発明のエマルションは、第２のエマルション内で乳化される第１のエマルションを含んでおり、ここで、（ａ）第１のエマルションは、（ｉ）水相；ならびに（ｉｉ）油および有機溶媒を含んでいる油相；ならびに（ｉｉｉ）界面活性剤を含んでおり、（ｂ）第２のエマルションは、（ｉ）水相、（ｉｉ）含んでいるカチオン性化合物および油を含んでいる油相、ならびに（ｉｉｉ）界面活性剤を含んでいる。
【０１１２】
（例示的な製剤）
以下の記載は、組成物ＢＣＴＰおよびＸ８Ｗ６０ＰＣについての製剤を含む、例示的なエマルションの多数を提供する。ＢＣＴＰは、油中水型のナノエマルションを含んでおり、ここで、油相は、８０％の水中の、ダイズ油、リン酸トリ−ｎ−ブチル、およびＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００から作製された。Ｘ８Ｗ６０ＰＣは、Ｗ８０８ＰおよびＢＣＴＰの等容量の混合物を含んでいる。Ｗ８０８Ｐは、モノステアリン酸グリセロール、精製オヤステロール（oya sterols）（例えばＧＥＮＥＲＯＬステロール）、ＴＷＥＥＮ  ６０、ダイズ油、カチオン性イオンのハロゲンを含んでいるＣＰＣ、およびはっか油で作製されるリポソーム様の化合物である。ＧＥＮＥＲＯＬファミリーは、ポリエトキシ化されたダイズステロールの一群である（Henkel Corporation, Ambler, Pennsylvania）。本発明において有用な例示的なエマルションの製剤は、表１に提示されている。これらの特定の製剤は、参照によってそれらの全体が本明細書に援用される米国特許第５，７００，６７９号（ＮＮ）；米国特許第５，６１８，８４０号；米国特許第５，５４９，９０１号（Ｗ８０８Ｐ）；および米国特許第５，５４７，６７７号に見出されてもよい。他の特定のエマルションの製剤は、それらの全体が本明細書に援用される米国特許明細書第１０／６６９，８６５号を規定される。
【０１１３】
Ｘ８Ｗ６０ＰＣエマルションは、まず、Ｗ８０８ＰエマルションおよびＢＣＴＰエマルションを別々に作製することによって製造される。それから、これらの２つのエマルションの混合物は再乳化されて、Ｘ８Ｗ６０ＰＣと名付けられた新たなエマルションの組成物を生成する。このようなエマルションを生成する方法は、米国特許第５，１０３，４９７号および米国特許第４，８９５，４５２号に記載されている（参照によってそれらの全体が本明細書に援用される）。
【０１１４】
【表１】
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【０１１５】
以上に挙げられた組成物は単なる例示に過ぎず、当業者は成分の量を変更し、本発明の目的に好適なナノエマルション組成物に想到し得る。当業者は、水、および各組成物の成分（個々の油性担体、界面活性剤ＣＰＣおよび有機リン酸塩緩衝液）に対する油相の割合が変わってもよいことを理解する。
【０１１６】
ＢＣＴＰを含んでいる特定の組成物は４：１の水の油に対する割合を有しているが、ＢＣＴＰがより多い水相または少ない水相を有するように製剤化されてもよいことが理解される。例えば、いくつかの実施形態において、油相の各１部に対して３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の部の水相がある。同じことがＷ８０８Ｐの製剤についても当てはまる。同様に、リン酸トリ（Ｎ−ブチル）：ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００：ダイズ油の割合も、変更されてもよい。
【０１１７】
表１には、特定の量のモノオレイン酸グリセロール、ポリソルベート  ６０、ＧＥＮＥＲＯＬ  １２２、塩化セチルピリジニウム、およびＷ８０８Ｐの担体油が挙げられているが、これらは単なる例示に過ぎない。Ｗ８０８Ｐの特性を有しているエマルションは、異なる濃度のそれぞれのこれらの成分、または同じ機能を実現する全く異なる成分を有しているエマルションとして製剤化されてもよい。例えば、上記エマルションは、開始時の油相において約８０〜約１００ｇのモノオレイン酸グリセロールを有していてもよい。他の実施形態において、開始時の油相において約１５〜約３０ｇのポリソルベート  ６０を有していてもよい。さらなる他の実施形態において、組成物は、開始時の油相において約２０〜約３０ｇのＧＥＮＥＲＯＬステロールを含んでいてもよい。
【０１１８】
ナノエマルションの個々の成分（例えば、本発明の免疫原性組成物）は、病原体を不活化すること、およびエマルションエマルションの無毒性へ寄与することの両方に機能し得る。例えば、ＢＣＴＰにおける活性成分であるＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００は、１１％のＢＣＴＰと同等の濃度で、ウイルスに対してより小さく不活化する能力を示す。洗浄剤および溶媒への油相の添加は、同じ濃度の組織培養物におけるこれらの剤の毒性を低下させる。任意の論理に縛られることなく（機序の理解は本発明を実施するために必須ではなく、本発明は任意の特定の機序に限定されない）、ナノエマルションは、その成分と病原体との相互作用を促進させ、これによって、当該病原体の不活化を容易にし、個々の成分の毒性を低下させることが示唆されている。さらに、ＢＣＴＰのすべての成分が、ナノエマルションの構造においてではなく、１つの組成物において組み合わせられている場合、混合物は、当該成分がナノエマルションの構造において組み合わせられている場合ほどに病原体を不活化することにおいて有効ではない。
【０１１９】
類似の組成を有している製剤の分類で示されるさらなる多くの実施形態が以下に示されている。後述する組成物は、活性成分の種々の割合および混合物を列挙している。以下に列挙される製剤は例示であり、列挙される組成物の同様の比率の範囲の成分を含んでいるさらなる製剤が本発明の範囲内にあることを、当業者はよく理解するであろう。
【０１２０】
本発明の実施形態の一部において、ナノエマルションは、約３〜８体積％以上のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、約１体積％の塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、約６０〜７０体積％の油（例えばダイズ油）、約１５〜２５体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）、およびいくつかの製剤において１体積％未満の１ＮのＮａＯＨを含んでいる。これらの実施形態のいくつかはＰＢＳを含んでいる。これらのいくつかの実施形態における１ＮのＮａＯＨおよび／またはＰＢＳの添加は、約７．０〜約９．０、より好ましくは約７．１〜８．５の範囲のｐＨが実現されるように、ユーザーが製剤のｐＨを好都合に調節することを可能にする。例えば、本発明の一実施形態は、約３体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油および約２４体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＹ３ＥＣと表される）。他の類似の実施形態は、約３．５体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、および約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油および約２３．５体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＹ３．５ＥＣと表される）。さらなる他の実施形態は、約３体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、製剤のｐＨを約７．１にするような０．０６７体積％の１ＮのＮａＯＨ、約６４体積％のダイズ油、約２３．９３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＹ３ＥＣｐＨ７．１と表される）。さらなる他の実施形態は、約３体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、製剤のｐＨを約８．５にするような０．６７体積％の１ＮのＮａＯＨ、約６４体積％のダイズ油、約２３．３３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＹ３ＥＣｐＨ８．５と表される）。他の類似の実施形態は、約４体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、および約６４体積％のダイズ油、および約２３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＹ４ＥＣと表される）。さらなる他の実施形態において、製剤は、約８体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、および約６４体積％のダイズ油、および約１９体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＹ８ＥＣと表される）。さらなる実施形態は、約８体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油、および約１９体積％の１×ＰＢＳを含んでいる（本明細書においてＹ８ＥＣ  ＰＢＳと表される）。
【０１２１】
本発明のいくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のエタノール、および約１体積％のＣＰＣ、および約６４体積％の油（例えばダイズ油）、および約２７体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる（本明細書においてＥＣと表される）。
【０１２２】
いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％以上のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、約８体積％のリン酸トリブチル（ＴＢＰ）、および約６４体積％の油（例えばダイズ油）、および約２０体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる（本明細書においてＳ８Ｐと表される）。
【０１２３】
いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約１〜２体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約１〜２体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約７〜８体積％のエタノール、約１体積％の塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、約６４〜５７．６体積％の油（例えばダイズ油）、および約２３体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる。さらに、これらの製剤のいくつかは、約５ｍＭのＬ−アラニン／イノシン、および約１０ｍＭの塩化アンモニウムをさらに含んでいる。これらの製剤のいくつかはＰＢＳを含んでいる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ＰＢＳを添加することは、ユーザーが製剤のｐＨを好都合に調節することを可能にすることが考慮されている。例えば、本発明の一実施形態は、約２体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約２体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油、約２３体積％の水相ＤｉＨ２Ｏを含んでいる。他の実施形態において、製剤は、約１．８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約１．８体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約７．２体積％のエタノール、約０．９体積％のＣＰＣ、約５ｍＭのＬ−アラニン／イノシン、および約１０ｍＭの塩化アンモニウム、約５７．６体積％のダイズ油、残部の１×ＰＢＳを含んでいる（本明細書において９０％のＸ２Ｙ２ＥＣ／ＧＥと表される）。
【０１２４】
本発明の代替の実施形態において、ナノエマルションは、約５体積％以上のＴＷＥＥＮ  ８０、約８体積％以上のエタノール、約１体積％以上のＣＰＣ、約６４体積％の油（例えばダイズ油）、約２２体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＷ８０５ＥＣと表される）。本発明のさらなる他の代替の実施形態において、ナノエマルションは、約５体積％以上のＴＷＥＥＮ  ８０、約８体積％以上のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％の油（例えばダイズ油）、約２３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＷ８０５Ｅと表される）。
【０１２５】
いくつかの実施形態において、本発明は約５体積％以上のポロキサマー−４０７（Poloxamer-407）、約８体積％以上のエタノール、約１体積％以上のＣＰＣ、約６４体積％の油（例えばダイズ油）、および約２２体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＰ４０７５ＥＣと表される）。機序の理解は本発明を実施するために必須ではなく、本発明は任意の特定の機序に限定されないが、いくつかの実施形態において、ポロキサマー−４０７を含んでいるナノエマルションは、対象における免疫応答（例えば、肺における）を誘導しない、および／または増大しない。いくつかの実施形態において、本明細書において提供されるナノエマルション（例えばＰ４０７５ＥＣ）の種々の希釈液は、細菌を処置する（例えば、殺傷させることおよび／または成長を阻害することの）ために使用され得る。いくつかの実施形態において、希釈されていないナノエマルションが使用される。いくつかの実施形態において、ナノエマルションの１つの成分（例えばＣＰＣ）の所望の濃度を得るために、Ｐ４０７５ＥＣは希釈される（例えば、連続した２倍の希釈液で）。
【０１２６】
本発明のさらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約５体積％以上のＴＷＥＥＮ  ２０、約８体積％以上のエタノール、約１体積％以上のＣＰＣ、約６４体積％の油（例えばダイズ油）、および約２２体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＷ２０５ＥＣと表される）。
【０１２７】
本発明のさらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約２〜８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、約６０〜７０体積％の油（例えば、ダイズ油またはオリーブ油）、および約１５〜２５体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる。例えば、本発明は、約２体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のエタノール、約６４体積％のダイズ油、および約２６体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる製剤（本明細書においてＸ２Ｅと表される）を考慮している。他の類似の実施形態において、ナノエマルションは、約３体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のエタノール、約６４体積％のダイズ油、および約２５体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ３Ｅと表される）。またさらなる実施形態において、製剤は、約４体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のエタノール、約６４体積％のダイズ油、および約２４体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ４Ｅと表される）。さらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約５体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のエタノール、約６４体積％のダイズ油、および約２３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ５Ｅと表される）。いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約６体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のエタノール、約６４体積％のダイズ油、および約２２体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ６Ｅと表される）。本発明のまたさらなる実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のエタノール、約６４体積％のダイズ油、および約２０体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８Ｅと表される）。またさらなる実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のエタノール、約６４体積％のオリーブ油、および約２０％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８Ｅ  Ｏと表される）。さらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のエタノール、約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油、および約１９体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８ＥＣと表される）。
【０１２８】
本発明の代替の実施形態において、ナノエマルションは、約１〜２体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約１〜２体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約６〜８体積％のＴＢＰ、約０．５〜１体積％のＣＰＣ、約６０〜７０体積％の油（例えばダイズ）、約１〜３５体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる。さらに、これらの特定のナノエマルションは、約１〜５体積％のトリプチケースソイブロス（trypticase soy broth）、約０．５〜１．５体積％の酵母抽出物、約５ｍＭのＬ−アラニン／イノシン、約１０ｍＭの塩化アンモニウム、約２０〜４０体積％の乳幼児用液体ミルク（liquid baby formula）を含んでいてもよい。乳幼児用液体ミルクを含んでいるいくつかの実施形態において、当該乳幼児用液体ミルクは、カゼイン加水分解物（例えば、ＮｅｕｔｒａｍｉｇｅｎまたはＰｒｏｇｅｓｔｉｍｉｌなど）を含んでいる。これらの実施形態のいくつかにおいて、ナノエマルションは、さらに約０．１〜１．０体積％のチオ硫酸ナトリウム、および約０．１〜１．０体積％のクエン酸ナトリウムを含んでいる。これらの基本の成分を含んでいる類似の実施形態は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を水相として用いている。例えば、一実施形態は、約２体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約２体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油、および約２３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ２Ｙ２ＥＣと表される）。さらなる他の実施形態において、本発明に係る製剤は、約２体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約２体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％のＣＰＣ、約０．９体積％のチオ硫酸ナトリウム、約０．１体積％のクエン酸ナトリウム、約６４体積％のダイズ油、および約２２体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ２Ｙ２ＰＣ  ＳＴＳ１と表される）。他の類似の実施形態において、ナノエマルションは、約１．７体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約１．７体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約６．８体積％のＴＢＰ、約０．８５体積％のＣＰＣ、約２９．２体積％のＮＥＵＴＲＡＭＩＧＥＮ、約５４．４体積％のダイズ油、および約４．９体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書において８５％のＸ２Ｙ２ＰＣ／ｂａｂｙと表される）。本発明のさらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約１．８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約１．８体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約７．２体積％のＴＢＰ、約０．９体積％のＣＰＣ、約５ｍＭのＬ−アラニン／イノシン、約１０ｍＭの塩化アンモニウム、約５７．６体積％のダイズ油、および残部の体積％の０．１×ＰＢＳを含んでいる（本明細書において９０％のＸ２Ｙ２ＰＣ／ＧＥと表される）。さらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約１．８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約１．８体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約７．２体積％のＴＢＰ、約０．９体積％のＣＰＣ、および約３体積％のトリプチケースソイブロス、約５７．６体積％のダイズ油、および約２７．７体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書において９０％のＸ２Ｙ２ＰＣ／ＴＳＢと表される）。本発明の他の実施形態において、ナノエマ��ションは、約１．８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約１．８体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約７．２体積％のＴＢＰ、約０．９体積％のＣＰＣ、約１体積％の酵母抽出物、約５７．６体積％のダイズ油、および約２９．７体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書において９０％のＸ２Ｙ２ＰＣ／ＹＥと表される）。
【０１２９】
本発明のいくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約３体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％のＣＰＣ、約６０〜７０体積％の油（例えば、ダイズ油またはオリーブ油）、および約１５〜３０体積％の水相（ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる。本発明の実施形態の一部において、ナノエマルションは、約３体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のＴＢＰ、および約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ、および約２４体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＹ３ＰＣと表される）。
【０１３０】
本発明のいくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約４〜８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約５〜８体積％のＴＢＰ、約３０〜７０体積％の油（例えば、ダイズ油またはオリーブ油）、および約０〜３０体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる。さらに、これらの実施形態の一部は、約１体積％のＣＰＣ、約１体積％の塩化ベンザルコニウム、約１体積％の臭化セチルイリジウム、約１体積％の臭化セチルジメチルエチルアンモニウム、５００μＭのＥＤＴＡ、約１０ｍＭの塩化アンモニウム、約５ｍＭのイノシン、および約５ｍＭのＬ−アラニンをさらに含んでいる。例えば、好ましい実施形態の一部において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約６４体積％のダイズ油、および約２０体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８Ｐと表される）。本発明の他の実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油、および約１９体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８ＰＣと表される）。さらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％のＣＰＣ、約５０体積％のダイズ油、および約３３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＡＴＢ−Ｘ１００１と表される）。さらなる他の実施形態において、製剤は、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約２体積％のＣＰＣ、約５０体積％のダイズ油、および約３２体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＡＴＢ−Ｘ００２と表される）。いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約４体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約４体積％のＴＢＰ、約０．５体積％のＣＰＣ、約３２体積％のダイズ油、および約５９．５体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書において５０％のＸ８ＰＣと表される）。いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約０．５体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油、および約１９．５体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８ＰＣ１／２と表される）。本発明のいくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約２体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油、および約１８体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８ＰＣ２と表される）。他の実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％の塩化ベンザルコニウム、約５０体積％のダイズ油、および約３３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８Ｐ  ＢＣと表される）。本発明の代替の実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％の臭化セチルイリジウム、約５０体積％のダイズ油、および約３３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８Ｐ  ＣＰＢと表される）。本発明の例示的な他の実���形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％の臭化セチルジメチルエチルアンモニウム、約５０体積％のダイズ油、および約３３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８Ｐ  ＣＴＡＢと表される）。またさらなる実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％のＣＰＣ、約５００μＭのＥＤＴＡ、約６４体積％のダイズ油、および約１５．８体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８ＰＣ  ＥＤＴＡと表される）。いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約１体積％のＣＰＣ、約１０ｍＭの塩化アンモニウム、約５ｍＭのイノシン、約５ｍＭのＬ−アラニン、約６４体積％のダイズ油、および約１９体積％のＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳを含んでいる（本明細書においてＸ８ＰＣ  ＧＥ１Ｘと表される）。本発明の他の実施形態において、ナノエマルションは、約５体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約５体積％のＴＢＰ、約１体積％のＣＰＣ、約４０体積％のダイズ油、および約４９体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ５Ｐ５Ｃと表される）。
【０１３１】
本発明のいくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約２体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約６体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約８体積％のエタノール、約６４体積％のダイズ油、および約２０体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ２Ｙ６Ｅと表される）。
【０１３２】
本発明のさらなる実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、および約８体積％のグリセロール、約６０〜７０体積％の油（例えば、ダイズ油またはオリーブ油）、および約１５〜２５体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる。特定のナノエマルション組成物（例えば、免疫応答を生じさせるために（例えば、ワクチンとしての利用のため）使用される）は、約１体積％のＬ−アスコルビン酸を含んでいる。例えば、特定の一実施形態は、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のグリセロール、約６４体積％のダイズ油。および約２０体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８Ｇと表される）。さらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約８体積％のグリセロール、約１体積％のＬ−アスコルビン酸、約６４体積％のダイズ油、および約１９体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８ＧＶＣと表される）。
【０１３３】
またさらなる実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、０．５〜０．８体積％のＴＷＥＥＮ  ６０、約０．５〜２．０体積％のＣＰＣ、約８体積％のＴＢＰ、約６０〜７０体積％の油（例えば、ダイズ油またはオリーブ油）および約１５〜２５体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる。例えば、特定の一実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約０．７０体積％のＴＷＥＥＮ  ６０、約１体積％のＣＰＣ、約８体積％のＴＢＰ、約６４体積％のダイズ油、および約１８．３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８Ｗ６０ＰＣ１と表される）。いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約０．７１体積％のＴＷＥＥＮ  ６０、約１体積％のＣＰＣ、約８体積％のＴＢＰ、約６４体積％のダイズ油、および約１８．２９体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＷ６００．７Ｘ８ＰＣと表される）。さらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、０．７体積％のＴＷＥＥＮ  ６０、約０．５体積％のＣＰＣ、約８体積％のＴＢＰ、約６４〜７０体積％のダイズ油、および約１８．８体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＸ８Ｗ６０ＰＣ２と表される）。さらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００、約０．７１体積％のＴＷＥＥＮ  ６０、約２体積％のＣＰＣ、約８体積％のＴＢＰ、約６４体積％のダイズ油、および約１７．３体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる。本発明の他の実施形態において、ナノエマルションは、約０．７１体積％のＴＷＥＥＮ  ６０、約１体積％のＣＰＣ、約８体積％のＴＢＰ、約６４体積％のダイズ油、および約２５．２９体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＷ６００．７ＰＣと表される）。
【０１３４】
本発明の他の実施形態において、ナノエマルションは、約６０〜７０体積％の油（例えば、ダイズ油またはオリーブ油）および約２０〜３０体積％の水相（例えばＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）にさらに、約８体積％のグリセロールまたは約８体積％のＴＢＰのいずれか、および約２体積％のジオクチルスルホコハク酸塩を含んでいる。例えば、いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約２体積％のジオクチルスルホコハク酸塩、約８体積％のグリセロール、約６４体積％のダイズ油、および約２６体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＤ２Ｇと表される）。他の関連する実施形態において、ナノエマルションは、約２体積％のジオクチルスルホコハク酸塩、および約８体積％のＴＢＰ、約６４体積％のダイズ油、および約２６体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＤ２Ｐと表される）。
【０１３５】
本発明のさらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約８〜１０体積％のグリセロール、および約１〜１０体積％のＣＰＣ、約５０〜７０体積％の油（例えば、ダイズ油またはオリーブ油）、および約１５〜３０体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる。さらに、これらの実施形態の一部において、ナノエマルションは、さらに約１体積％のＬ−アスコルビン酸を含んでいる。例えば、いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のグリセロール、約１体積％のＣＰＣ、約６４体積％のダイズ油、および約２７体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＧＣと表される）。いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約１０体積％のグリセロール、約１０体積％のＣＰＣ、約６０体積％のダイズ油、および約２０体積％の水相ＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＧＣ１０と表される）。本発明のさらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約１０体積％のグリセロール、約１体積％のＣＰＣ、約１体積％のＬ−アスコルビン酸、約６４体積％のダイズもしくは油、および約２４体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＧＣＶＣと表される）。
【０１３６】
本発明のいくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約８〜１０体積％のグリセロール、約８〜１０体積％のＳＤＳ、約５０〜７０体積％の油（例えば、ダイズ油またはオリーブ油）、および約１５〜３０体積％の水相（例えば、ＤｉＨ２ＯまたはＰＢＳ）を含んでいる。さらに、これらの実施形態の一部において、ナノエマルションはさらに約１体積％のレシチン、および約１体積％のｐ−ヒドロキシベンゼン酸メチルエステルを含んでいる。そのような製剤の例示的な実施形態は、約８体積％のＳＤＳ、８体積％のグリセロール、約６４体積％のダイズ油、および約２０体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＳ８Ｇと表される）。関連する製剤は、約８体積％のグリセロール、約８体積％のＳＤＳ、約１体積％のレシチン、約１体積％のｐ−ヒドロキシベンゼン酸メチルエステル、約６４体積％のダイズ油、および約１８体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＳ８ＧＬ１Ｂ１と表される）。
【０１３７】
本発明のさらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約４体積％のＴＷＥＥＮ  ８０、約４体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約１体積％のＣＰＣ、約８体積％のエタノール、約６４体積％のダイズ油、および約１９体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＷ８０４ＹＥＣと表される）。
【０１３８】
本発明のいくつかの実施形態において、ナノエマルションは、約０．０１体積％のＣＰＣ、約０．０８体積％のＴＹＬＯＸＡＰＯＬ、約１０体積％のエタノール、約７０体積％のダイズ油、および約１９．９１体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＹ．０８ＥＣ．０１と表される）。
【０１３９】
本発明のさらなる他の実施形態において、ナノエマルションは、約８体積％のラウリル硫酸ナトリウム、および約８体積％のグリセロール、約６４体積％のダイズ油、および約２０体積％のＤｉＨ２Ｏを含んでいる（本明細書においてＳＬＳ８Ｇと表される）。
【０１４０】
上述した特定の製剤は、本発明において使途を見出している種々のナノエマルションアジュバントを示すための単なる例示である。本発明は、上述の製剤の多くのバリエーションおよびさらなるナノエマルションが、本発明の方法における使途を見出すことを意図している。エマルションの候補物は、それらが好適か否かを容易に決定するために試験され得る。第１に、エマルションが形成され得るか否かを決定するために、本明細書に記載されている方法を用いて所望の成分が調製される。エマルションが形成され得ない場合、その候補物を不採用とする。例えば、４．５％のチオ硫酸ナトリウム、０．５％のクエン酸ナトリウム、１０％のｎ−ブタノール、６４％のダイズ油、および２１％のＤｉＨ２Ｏからなる組成物の候補物は、エマルションを形成しない。
【０１４１】
第２に、上記エマルションの候補物は、安定なエマルションを形成すべきである。意図されている利用（例えば、対象における免疫応答を生じさせるための）を許容する充分な期間、エマルションの形状を維持する場合に、エマルションは安定である。例えば、貯蔵、輸送などがなされるエマルションにとって、数ヶ月間から数年間にわたって組成物がエマルションの形態を維持することが所望されている。比較的不安定である典型的なエマルションは、一日以内に形態を損なうだろう。例えば、８％の１−ブタノール、５％のＴＷＥＥＮ  １０、６４％のダイズ油、および２２％のＤｉＨ２Ｏからなる組成物の候補物は、安定なエマルションを形成しない。安定であると示されているナノエマルションとしては、８体積％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、約８体積％のＴＢＰ、約６４体積％のダイズ油、および約２０体積％のＤｉＨ２Ｏ（本明細書においてＸ８Ｐと表される）；５体積％のＴＷＥＥＮ  ２０、約８体積％以上のエタノール、約１体積％以上のＣＰＣ、約６４体積％の油（例えばダイズ油）、および約２２体積％のＤｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣと表される）；０．０８％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．０８％のグリセロール、０．０１％の塩化セチルピリジニウム、９９％のバター、および０．８３％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書において１％のＸ８ＧＣ  Ｂｕｔｔｅｒと表される）；０．８％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．８％のグリセロール、０．１％の塩化セチルピリジニウム、６．４％のダイズ油、１．９％のｄｉＨ２Ｏ、および９０％のバター（本明細書において１０％のＸ８ＧＣ  Ｂｕｔｔｅｒと表される）；２％のＷ２０５ＥＣ、１％のＮａｔｒｏｓｏｌ  ２５０Ｌ  ＮＦ、および９７％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書において２％のＷ２０５ＥＣ  Ｌ  ＧＥＬと表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％の粘度７０の鉱物油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ  ７０  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｏｉｌと表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％の粘度３５０の鉱物油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ  ３５０  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｏｉｌと表される）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションは、数週間、数か月、または数年にわたって、安定である。
【０１４２】
第３に、上記エマルションの候補物は、意図されている利用についての有効性を有しているべきである。例えば、ナノエマルションは、所望のレベル（例えば、１ｌｏｇ、２ｌｏｇ、３ｌｏｇ、４ｌｏｇ・・・低減）まで病原体を不活化させなければならない（例えば、殺傷させなければならないかもしくは成長を阻害しなければならない）。本明細書に記載されている方法を用いて、所望の病原体に対して、特定のエマルションの候補物が適切であるかどうかを決定することが可能である。一般的に、これは、好適な対照のサンプル（例えば、水のような陰性対照）を用いた実験と並行した、１以上の期間にわたってエマルションに対して病原体を曝露し、ならびにエマルションが微生物を不活化させる（例えば、殺傷および／または無力化させる）か否かを決定すること、および不活化させるための程度を決定することに関する。例えば、１％の塩化アンモニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％のダイズ油、および２２％のｄｉＨ２Ｏからなる組成物の候補物は、有効なエマルションではないと示された。以下のエマルションの候補物は、本明細書に記載されている方法を用いて、有効であると示された；５％のＴＷＥＥＮ  ２０、５％の塩化セチルピリジニウム、１０％のグリセロール、６０％のダイズ油、および２０％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＧＣ５と表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、１０％のグリセロール、６４％のダイズ油、および２０％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＧＣと表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％のオリーブ油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ  Ｏｌｉｖｅ  Ｏｉｌと表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％の亜麻仁油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ  Ｆｌａｘｓｅｅｄ  Ｏｉｌと表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％のコーン油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ  Ｃｏｒｎ  Ｏｉｌと表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％のココナッツ油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ  Ｃｏｃｏｎｕｔｔ  Ｏｉｌと表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％の綿実油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ  Ｃｏｔｔｏｎ  Ｏｉｌと表される）；８％のデキストロース、５％のＴＷＥＥＮ  １０、１％の塩化セチルピリジニウム、６４％のダイズ油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５Ｃ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅと表される）；８％のＰＥＧ  ２００、５％のＴＷＥＥＮ  １０、１％の塩化セチルピリジニウム、６４％のダイズ油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５Ｃ  ＰＥＧ  ２００と表される）；８％のメタノール、５％のＴＷＥＥＮ  １０、１％の塩化セチルピリジニウム、６４％のダイズ油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５���  Ｍｅｔｈａｎｏｌと表される）；８％のＰＥＧ  １０００、５％のＴＷＥＥＮ  １０、１％の塩化セチルピリジニウム、６４％のダイズ油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５Ｃ  ＰＥＧ  １０００と表される）；２％のＷ２０５ＥＣ、２％のＮａｔｒｏｓｏｌ  ２５０Ｈ  ＮＦ、および９６％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書において２％のＷ２０５ＥＣ  Ｎａｓｔｒｏｓｏｌ  ２と表され、２％のＷ２０５ＥＣ  ＧＥＬとも呼ばれる）；２％のＷ２０５ＥＣ、１％のＮａｔｒｏｓｏｌ  ２５０Ｈ  ＮＦ、および９７％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書において２％のＷ２０５ＥＣ  Ｎａｓｔｒｏｓｏｌ  １と表される）；２％のＷ２０５ＥＣ、３％のＮａｔｒｏｓｏｌ  ２５０Ｈ  ＮＦ、および９５％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書において２％のＷ２０５ＥＣ  Ｎａｓｔｒｏｓｏｌ  ３と表される）；２％のＷ２０５ＥＣ、０．５％のＮａｔｒｏｓｏｌ  ２５０Ｈ  ＮＦ、および９７．５％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書において２％のＷ２０５ＥＣ  Ｎａｓｔｒｏｓｏｌ  ０．５と表される）；２％のＷ２０５ＥＣ、２％のＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ａ、および９６％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書において２％のＷ２０５ＥＣ  Ｍｅｔｈｏｃｅｌ  Ａと表される）；２％のＷ２０５ＥＣ、２％のＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋ、および９６％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書において２％のＷ２０５ＥＣ  Ｍｅｔｈｏｃｅｌ  Ｋと表される）；２％のＮａｔｒｏｓｏｌ、０．１％のＸ８ＰＣ、０．１×ＰＢＳ、５ｍＭのＬ−アラニン、５ｍＭのイノシン、１０ｍＭの塩化アンモニウム、およびｄｉＨ２Ｏ（本明細書において０．１％のＸ８ＰＣ／ＧＥ＋２％のＮａｔｒｏｓｏｌ）；２％のＮａｔｒｏｓｏｌ、０．８％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、０．８％のリン酸トリブチル、６．４％のダイズ油、０．１％の塩化セチルピリジニウム、０．１×ＰＢＳ、５ｍＭのＬ−アラニン、５ｍＭのイノシン、１０ｍＭの塩化アンモニウム、およびｄｉＨ２Ｏ（本明細書において１０％のＸ８ＰＣ／ＧＥ＋２％のＮａｔｒｏｓｏｌと表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％のラード、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ  Ｌａｒｄと表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のエタノール、６４％の鉱物油、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｏｉｌと表される）；０．１％の塩化セチルピリジニウム、２％のＮｅｒｏｌｉｄｏｌ、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、１０％のエタノール、６４％のダイズ油、および１８．９％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ０．１Ｎと表される）；０．１％の塩化セチルピリジニウム、２％のＦａｒｎｅｓｏｌ、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、１０％のエタノール、６４％のダイズ油、および１８．９％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ０．１Ｆと表される）；０．１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、１０％のエタノール、６４％のダイズ油、および２０．９％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＥＣ０．１と表される）；１０％の塩化セチルピリジニウム、８％のリン酸トリブチル、８％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、５４％のダイズ油、および２０��のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＸ８ＰＣ１０と表される）；５％の塩化セチルピリジニウム、８％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、８％のリン酸トリブチル、５９％のダイズ油、および２０％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＸ８ＰＣ５と表される）；０．０２％の塩化セチルピリジニウム、０．１％のＴＷＥＥＮ  ２０、１０％のエタノール、７０％のダイズ油、および１９．８８％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２００．１ＥＣ０．０２と表される）；１％の塩化セチルピリジニウム、５％のＴＷＥＥＮ  ２０、８％のグリセロール、６４％のＭｏｂｉｌ  １、および２２％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書においてＷ２０５ＧＣ  Ｍｏｂｉｌ  １と表される）；７．２％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、７．２％のリン酸トリブチル、０．９％の塩化セチルピリジニウム、５７．６％のダイズ油、０．１×ＰＢＳ、５ｍＭのＬ−アラニン、５ｍＭのイノシン、１０ｍＭの塩化アンモニウム、および２５．８７％のｄｉＨ２Ｏ（本明細書において９０％のＸ８ＰＣ／ＧＥと表される）；７．２％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、７．２％のリン酸トリブチル、０．９％の塩化セチルピリジニウム、５７．６％のダイズ油、１％のＥＤＴＡ、５ｍＭのＬ−アラニン、５ｍＭのイノシン、１０ｍＭの塩化アンモニウム、０．１×ＰＢＳおよびｄｉＨ２Ｏ（本明細書において９０％のＸ８ＰＣ／ＧＥ  ＥＤＴＡと表される）；ならびに７．２％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、７．２％のリン酸トリブチル、０．９％の塩化セチルピリジニウム、５７．６％のダイズ油、１％のチオ硫酸ナトリウム、５ｍＭのＬ−アラニン、５ｍＭのイノシン、１０ｍＭの塩化アンモニウム、０．１×ＰＢＳおよびｄｉＨ２Ｏ（本明細書において９０％のＸ８ＰＣ／ＧＥ  ＳＴＳと表される）。
【０１４３】
本発明の好ましい実施形態において、ナノエマルションは、（例えば、ヒト、植物または動物に対して）無毒であり、（例えば、ヒト、植物または動物に対して）無刺激であり、かつ（例えば、ヒト、植物、動物または環境に対して）非腐食性であり、さらに、他の作用物質（例えば免疫原（例えば、細菌、真菌類、ウイルス、および胞子）を含んでいる組成物）と混合される場合は、安定性を維持している。上述した多くのナノエマルションはこれらの適格性を満たしており、以下の記載は、無毒、無刺激、非腐食性、抗微生物性である、本発明の好ましい多くのナノエマルション（本項目のこれ以降において「無毒性ナノエマルション」と表される）を提供している。
【０１４４】
いくつかの実施形態において、上記無毒性ナノエマルションは、細菌およびそれらの胞子、エンベロープウイルスならびに真菌類に対して有効である広範な抗微生物剤としての使用のための、界面活性剤脂質調製物（ＳＬＰ）を含んでいる。好ましい実施形態において、これらのＳＬＰは、殺生活性を増強させるいくつかのイオンに加えて、油、洗浄剤、溶媒、およびハロゲンを含んでいるカチオン性化合物の混合物を含んでいる。これらのＳＬＰは、高い刺激性および／または毒性がある市販の殺菌剤および殺胞子剤に比べて、安定、無刺激、かつ無毒性の化合物であると特徴づけられている。
【０１４５】
無毒性のナノエマルションにおける利用のための成分としては、洗浄剤（例えば、ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００（５〜１５％）もしくはＴＲＩＴＯＮファミリーの他の構成、ＴＷＥＥＮ  ６０（０．５〜２％）もしくはＴＷＥＥＮファミリーの他の構成、またはＴＹＬＯＸＡＰＯＬ（１〜１０％））；溶剤（例えば、リン酸トリブチル（５〜１５％））；アルコール（例えば、エタノール（５〜１５％）またはグリセロール（５〜１５％））；油（例えば、ダイズ油（４０〜７０％））；ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物（例えば、塩化セチルピリジニウム（０．５〜２％）、臭化セチルピリジニウム（０．５〜２％））、または臭化セチルジメチルエチルアンモニウム（０．５〜２％））；第四級アンモニウム化合物（例えば、塩化ベンザルコニウム（０．５〜２％）、塩化Ｎ−アルキルジメチルベンジルアンモニウム（０．５〜２％））；イオン（塩化カルシウム（１ｍＭ〜４０ｍＭ）、塩化アンモニウム（１ｍＭ〜２０ｍＭ）、塩化ナトリウム（５ｍＭ〜２００ｍＭ）、リン酸ナトリウム（１ｍＭ〜２０ｍＭ））；ヌクレオチド（例えばイノシン（５０μＭ〜２０ｍＭ））；およびアミノ酸（例えばＬ−アラニン（５０μＭ〜２０ｍＭ））が挙げられるが、これらに特に限定されない。エマルションは例えば、高せん断のミキサーで３〜１０分間混合することによって調製される。上記エマルションは、８２℃で１時間混合される前に加熱されてもよく、加熱されなくてもよい。
【０１４６】
本発明の利用のための第四級アンモニウム組成物としては、Ｎ−アルキルジメチルベンジルアンモニウムサッカリネート（N-alkyldimethyl benzyl ammonium saccharinate）；１，３，５−トリアジン−１，３，５（２Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−トリエタノール；１−デカンアミニウム、Ｎ−デシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−クロリド（N-decyl-N, N-dimethyl-, chloride）（または）塩化ジデシルジメチルアンモニウム；塩化２−（２−（ｐ−（ジイソブチル）クレゾスキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム（2-(2-(p-(Diisobuyl)cresosxy)ethoxy)ehyl dimethyl benzyl ammonium chloride）；塩化２−（２−（ｐ−（ジイソブチル）フェノキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキル１または３ベンジル−１−（２−ヒドロキシエチル）−２−イミダゾリニウム（alkyl 1 or 3 benzyl-1-(2-hydroxethyl)-2-imidazolinium chloride）；塩化アルキルビス（２−ヒドロキシエチル）ベンジルアンモニウム；塩化アルキルデメチルベンジルアンモニウム（alkyl demethyl benzyl ammonium chloride）；塩化アルキルジメチル３，４−ジクロロベンジルアンモニウム（１００％Ｃ１２）；塩化アルキルジメチル３，４−ジクロロベンジルアンモニウム（５０％Ｃ１４、４０％Ｃ１２、１０％Ｃ１６）；塩化アルキルジメチル３，４−ジクロロベンジルアンモニウム（５５％Ｃ１４、２３％Ｃ１２、２０％Ｃ１６）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（１００％Ｃ１４）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（１００％Ｃ１６）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（４１％Ｃ１４、２８％Ｃ１２）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（４７％Ｃ１２、１８％Ｃ１４）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（５５％Ｃ１６、２０％Ｃ１４）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（５８％Ｃ１４、２８％Ｃ１６）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６０％Ｃ１４、２５％Ｃ１２）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６１％Ｃ１１、２３％Ｃ１４）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６１％Ｃ１２、２３％Ｃ１４）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６５％Ｃ１２、２５％Ｃ１４）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６７％Ｃ１２、２４％Ｃ１４）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６７％Ｃ１２、２５％Ｃ１４）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（９０％Ｃ１４、５％Ｃ１２）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（９３％Ｃ１４、４％Ｃ１２）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（９５％Ｃ１６、５％Ｃ１８）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（および）塩化ジデシルジメチルアンモニウム；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（脂肪酸中として）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（Ｃ１２〜Ｃ１６）；塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（Ｃ１２〜Ｃ１８）；アルキルジメチルベンジルおよび塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化アルキルジメチルジメチルベンジルアンモニウム；臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（９０％Ｃ１４、５％Ｃ１６、５％Ｃ１２）；臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（ダイズ��の脂肪酸中として混合されたアルキル基およびアルケニル基）；塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム（６０％Ｃ１４）；塩化アルキルジメチルイソプロピルベンジルアンモニウム（５０％Ｃ１２、３０％Ｃ１４、１７％Ｃ１６、３％Ｃ１８）；塩化アルキルトリメチルアンモニウム（５８％Ｃ１８、４０％Ｃ１６、１％Ｃ１４、１％Ｃ１２）；塩化アルキルトリメチルアンモニウム（９０％Ｃ１８、１０％Ｃ１６）；塩化アルキルジメチル（エチルベンジル）アンモニウム（Ｃ１２−１８）；塩化ジ−（Ｃ８−１０）−アルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルジメチルアンモニウム；塩化ジアルキルメチルベンジルアンモニウム；塩化ジデシルジメチルアンモニウム；塩化ジイソデシルジメチルアンモニウム；塩化ジオクチルジメチルアンモニウム；塩化ドデシルビス（２−ヒドロキシエチル）オクチル水素アンモニウム；塩化ドデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ドデシルカルバモイルメチルジネチルベンジルアンモニウム；塩化ヘプタデシルヒドロキシエチルイミダゾリニウム；ヘキサヒドロ−１，３，５−トリス（２−ヒドロキシエチル）−ｓ−トリアジン（hexahydro-1,3,5-thris(2-hydroxyethyl)-s-triazine）；塩化ミリスタルコニウム（および）クアット  ＲＮＩＵＭ  １４；塩化Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ヒドロキシプロピルアンモニウムポリマー；塩化ｎ−アルキルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ｎ−アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化ｎ−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム一水和物；塩化オクチルデシルジメチルアンモニウム；塩化オクチルドデシルジメチルアンモニウム；塩化オクチフェノキシエトキシエチルジメチルベンジルアンモニウム；オキシジエチレンビス（塩化アルキルジメチルアンモニウム）；第四級アンモニウム化合物、ジココアルキルジメチル、塩化物（dicoco alkyldimethyl, chloride）；塩化トリメトキシシリプロピルジメチルオクタデシルアンモニウム（Trimethoxysily propyl dimethyl octadecyl ammonium chloride）；トリメトキシシリルクアット、塩化トリメチルドデシルベンジルアンモニウム；塩化ｎ−ドデシルジメチルエチルベンジルアンモニウム；塩化ｎ−ヘキサデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ｎ−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ｎ−テトラデシルジメチルエチルベンジルアンモニウム；および塩化ｎ−オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４７】
１．水相
いくつかの実施形態において、エマルションは、水相を含んでいる。ある好ましい実施形態において、エマルションは、エマルションの総体積を基準として、約５〜５０、好ましくは１０〜４０、より好ましくは１５〜３０体積％の水相を含んでいる（が、他の濃度もまた考慮されている）。好ましい実施形態において、水相は、約４〜１０、好ましくは約６〜８のｐＨの水を含んでいる。水は、好ましくは脱イオン化されている（以下において「ＤｉＨ２Ｏ」とする）。いくつかの実施形態において、水相は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含んでいる。いくつかの好ましい実施形態において、水相は、滅菌されており、発熱物質なしである。
【０１４８】
２．油相
いくつかの実施形態において、エマルションは油相を含んでいる。ある好ましい実施形態において、本発明のエマルションの油相（例えば担体油）は、エマルション全体の体積を基準として、３０〜９０、好ましくは６０〜８０、より好ましくは６０〜７０体積％の油相を含んでいる（が、より高い濃度、およびより低い濃度もまた、本明細書に記載のエマルションにおける利用について見出される）。
【０１４９】
本発明のナノエマルションアジュバントにおける油は、化粧品的に、もしくは薬学的に許容可能な任意の油であり得る。油は、揮発性または不揮発性であり得て、動物油、植物油、天然油、合成油、炭化水素油、シリコーン油、それらの半合成誘導体、およびそれらの組み合わせ、から選択されてもよい。
【０１５０】
好適な油には、鉱物油、スクアレン油、香味油、シリコン油、エッセンシャル油、不水溶性ビタミン、ステアリン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸オクチル、パルミチン酸セチル、トリデシルベヘネート、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジオクチル、アントラニル酸メチル（Menthyl anthranhilate）、オクタン酸セチル、サルチル酸オクチル、ミリスチン酸イソプロピル、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール・セトールズ（neopentyl glycol dicarpate cetols）、Ｃｅｒａｐｈｙｌｓ（登録商標）、オレイン酸デシル、アジピン酸ジイソプロピル、乳酸Ｃ１２−１５アルキル、乳酸セチル、乳酸ラウリル、ネオペンタン酸イソステアリル、乳酸ミリスチル、ステアロイルステアリン酸イソセチル、ステアロリルステアリン酸オクチルドデシル、炭化水素油、イソパラフィン、流動パラフィン、イソドデカン、ペトロラタム、アルガン油、キャノーラ油、ラー油、ココナッツ油、コーン油、綿実油、亜麻仁油、ブドウ種子油、カラシ油、オリーブ油、ヤシ油、パーム核油、ピーナッツ油、松の実油、ケシ油、カボチャ種子油、米ヌカ油、サフラワー油、茶油、トリュフ油、植物油、杏仁（核）油、ホホバ油（ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓの種子油）、ブドウ種子油、マカダミア油、小麦胚種油、アーモンド油、菜種油、ヒョウタン油、ダイズ油、ゴマ油、ヘーゼルナッツ油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、大麻油、ボア油、クキナッツ油、アボカド油、クルミ油、魚油、ベリー油、オールスパイス油、ネズ油、種子油、アーモンド種子油、アニス種子油、セロリ種子油、クミン種子油、ナツメグ種子油、葉油、バジル葉油、ローリエ油、桂皮油、コモンセージ葉油、ユーカリ葉油、レモングラス葉油、メラレウカ葉油、オレガノ葉油、パチョリ葉油、ペパーミント葉油、松葉油、ローズマリー葉油、スペアミント葉油、ティーツリー葉油、タイム葉油、ウィンターグリーン葉油、花油、カモミール油、クラリーセージ油、チョウジ油、ゼラニウム花油、ヒソップ花油、ジャスミン花油、ラベンダー花油、マヌカ花油、マルホラム花油、オレンジ花油、バラ花油、イラン−イラン花油、樹皮油、カシア樹皮油、シナモンバーク油、サッサフラス樹皮油、木油、カンファー木油、シーダー木油、ローズウッド油、ビャクダン油）、地下茎（ショウガ）木油、松ヤニ油、乳香油、ミルラ油、皮油、ベルガモット皮油、グレープフルーツ皮油、レモン皮油、ライム皮油、オレンジ皮油、タンジェリン皮油、根油、バレリアン（吉草）油、オレイン酸、リノレイン酸、オレイルアルコール、イソステアリルアルコールそれらの半合成誘導体、およびそれらの組み合わせ、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５１】
油は、揮発性シリコーン成分のような、シリコーン成分をさらに含んでもよく、当該シリコーン成分は、シリコーン成分中の単独の油であり得るか、または、他のシリコーンおよび非シリコーンの揮発性および不揮発性油、と組み合わせられ得る。好適なシリコーン成分には、メチルフェニルポリシロキサン、シメチコン、ジメチコン、フェニルトリメチコン（またはその有機修飾された種類）、重合体シリコーンのアルキル化誘導体、セチルジメチコン、ラウリルトリメチコン、重合体シリコーンの水酸化誘導体、例えば、ジメチコノール、揮発性シリコーン油、環状および直鎖シリコーン、シクロメチコン、シクロメチコンの誘導体、ヘキサメチルシクロトリシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、揮発性直鎖ジメチルポリシロキサン、イソヘキサデカン、イソエイコサン、イソテトラコサン、ポリイソブテン、イソオクタン、イソデカン、それらの半合成誘導体、およびそれらの組み合わせ、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５２】
揮発性油は有機溶媒であり得るか、もしくは、揮発性油は有機溶媒に添加されて存在し得る。好適な揮発性油には、テルペン、モノテルペン、セスキテルペン、駆風薬（carminative）、アズレン、メントール、カンファー、ツジョン、チモール、ネロール、リナロール、リモネン、ゲラニオール、ペリリルアルコール、ネロリドール、ファルネソール、イランゲン、ビサボロール、ファルネセン、アスカリドール、ケンポジ油、シトロネラル、シトラール、シトロネロール、カマズレン、ノコギリソウ（yarrow）、グアイアズレン（guaiazulene）、カモミール、半合成誘導体、またはそれらの組み合わせ、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５３】
本発明の一態様において、シリコーン成分における揮発性油は、油相における油と異なる。
【０１５４】
いくつかの実施形態において、油相は、エマルションの全体積を基準として、３〜１５、好ましくは５〜１０体積％の有機溶媒を含んでいる。本発明は任意の特定の機序に限定されないが、エマルションにおいて用いられた有機リン酸塩を基とした溶媒は、病原体の膜における脂質を除去するかもしくは崩壊させることに役立つ、と考えられる。従って、微生物の膜におけるステロールまたはリン脂質を除去する任意の溶媒は、本発明の方法における利用について見出される。好適な有機溶媒には、有機リン酸塩を基とした溶媒またはアルコールが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの好ましい実施形態において、無毒性のアルコール（例えばエタノール）は、溶媒として使用される。油相、および油相中に供給される任意のさらなる化合物は、好ましくは滅菌されており、発熱物質なしである。
【０１５５】
３．界面活性剤（Surfactants）および洗浄剤（Detergents）
いくつかの実施形態において、エマルションは、界面活性剤または洗浄剤をさらに含んでいる。いくつかの好ましい実施形態において、エマルションは、約３〜１５％、好ましくは約１０％の１つ以上の界面活性剤または洗浄剤を含んでいる（が、他の濃度もまた考慮されている）。本発明は任意の特定の機序に限定されないが、界面活性剤がエマルション中に存在する場合には、界面活性剤は、エマルションを安定化することを助ける、と考えられる。非イオン性（非アニオン性）およびイオン性界面活性剤の両方が考慮される。さらに、界面活性剤のＢＲＩＪファミリーからの界面活性剤は、本発明の組成物における利用について見出される。界面活性剤は、水相または油相のどちらにも供給され得る。エマルションとの使用に適した界面活性剤は、水中油型エマルションの形成を促進することが可能である他の乳化化合物に加えて、アニオン性および非イオン性の種々の界面活性剤を含んでいる。一般的に、乳化化合物は、相対的に親水性であり、乳化化合物の混合物は、必要な品質を達成するために使用され得る。いくつかの製剤において、非イオン性界面活性剤は、イオン性（例えば石鹸型）乳化剤よりも非イオン性界面活性剤が、広い範囲のｐＨにしっかりとより適合でき、より安定なエマルションをしばしば形成する、という点で、イオン性乳化剤を超える利点を有する。
【０１５６】
本発明のナノエマルションアジュバントにおける界面活性剤は、薬学的に許容可能なイオン性界面活性剤、薬学的に許容可能な非イオン性界面活性剤、薬学的に許容可能なカチオン性界面活性剤、薬学的に許容可能なアニオン性界面活性剤、または薬学的に許容可能な両性イオン界面活性剤であり得る。
【０１５７】
例示的な有用な界面活性剤は、Applied Surfactants: Principles and Applications. Tharwat F. Tadros, Copyright 8 2005 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim ISBN: 3-527-30629-3）に記載されており、当該文献は、参照によって具体的に援用される。さらに、界面活性剤は、薬学的に許容可能なイオン性高分子界面活性剤、薬学的に許容可能な非イオン性高分子界面活性剤、薬学的に許容可能なカチオン性高分子界面活性剤、薬学的に許容可能なアニオン性高分子界面活性剤、または薬学的に許容可能な両性イオン高分子界面活性剤、であり得る。高分子界面活性剤の例は、複数の（少なくとも１つの）ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）側鎖を有するポリ（メチルメタクリレート）骨格のグラフト共重合体、ポリヒドロキシステアリン酸、アルコキシル化されたアルキルフェノールホルムアルデヒド縮合物、脂肪酸疎水性物質を有するポリアルキレングリコール修飾されたポリエステル、ポリエステル、それらの半合成誘導体、またはそれらの組み合わせ、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５８】
表面活性剤または界面活性剤は、極性またはイオン性の親水性部分と結合した、非極性の疎水性部分（通常、８〜１８の炭素原子を有している、直鎖もしくは分鎖の、炭化水素鎖またはフッ化炭素鎖）から成る両親媒性分子である。親水性部分は、非イオン性、イオン性、または両性イオンであり得る。極性またはイオン性の頭部基は、双極子またはイオン双極子相互作用を介して、水分子と強く相互作用するのに対して、炭化水素鎖は、水性環境において、水分子と弱く相互作用する。親水性基の性質に基づいて、界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、両性イオン、非イオン性、および重合体の界面活性剤に分類される。
【０１５９】
好適な界面活性剤には、９〜１０ユニットのエチレングリコールを含んでいるエトキシル化ノニルフェノール、８ユニットのエチレングリコールを含んでいるエトキシル化ウンデカノール、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、エトキシル化水素化リシン油、ラウリル硫酸ナトリウム、エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのジブロック共重合体、エチレンオキシド−プロピレンオキシドブロック共重合体、およびエチレンオキシドとプロピレンオキシドとを基にした四官能性ブロック共重合体、グリセリルモノエステル、カプリン酸グリセリル、カプリル酸グリセリル、グリセリルコケート（Glyceryl cocate）、エルカ酸グリセリル、グリセリルヒドロキシステレート（Glyceryl hydroxysterate）、イソステアリン酸グリセリル、グリセリルラノレート、ラウリン酸グリセリル、リノール酸グリセリル、ミリスチン酸グリセリル、オレイン酸グリセリル、ＰＡＢＡグリセリル、パルミチン酸グリセリル、リシノール酸グリセリル、ステアリン酸グリセリル、グリセリルチグリコレート（Glyceryl thiglycolate）、ジラウリン酸グリセリル、ジオレイン酸グリセリル、ジミリスチン酸グリセリル、ジステアリン酸グリセリル、グリセリルセスイオレエート（Glyceryl sesuioleate）、グリセリルステアレートラクテート（Glyceryl stearate lactate）、ポリオキシエチレンセチル／ステアリルエーテル（Polyoxyethylene cetyl/stearyl ether）、ポリオキシエチレンコレステロールエーテル、ポリオキシエチレンラウレートまたはジラウレート、ポリオキシエチレンステアレートまたはジステアレート、ポリオキシエチレン脂肪エーテル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンミリスチルエーテル、ステロイド、コレステロール、ベタシトステロール（Betasitosterol）、ビサボロール、アルコールの脂肪酸エステル、ミリスチン酸イソプロピル、アリファチ（Aliphati）−イソプロピルｎ−ブチレート、ｎ−ヘキサン酸イソプロピル、ｎ−デカン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、アルコキシル化アルコール、アルコキシル化された酸、アルコキシル化されたアミド、アルコキシル化された糖誘導体、天然の油およびワックスのアルコキシル化された誘導体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロック共重合体、ノノキシノール−１４、ＰＥＧ−８ラウレート、ＰＥＧ−６ココアミド、ＰＥＧ−２０メチルグルコースセスキステアレ−ト、ＰＥＧ４０ラノリン、ＰＥＧ−４０ヒマシ油、ＰＥＧ−４０硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレン脂肪エーテル、グリセリルジエステル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンミリスチルエーテル、およびポリオキシエチレンラウリルエーテル、ジラウリン酸グリセリル、グリセリルジミステート（glyceryl dimystate）、ジステアリン酸グリセリル、それらの半合成誘導体、それらの混合物���が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６０】
さらなる好適な界面活性剤には、非イオン性脂質、例えば、ラウリン酸グリセリル、ミリスチン酸グリセリル、ジラウリン酸グリセリル、ジミリスチン酸グリセリル、それらの半合成誘導体、およびそれらの混合物、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６１】
さらなる実施形態において、界面活性剤は、約２〜約１００基の範囲にあるポリオキシエチレンの頭部基を有するポリオキシエチレン脂肪エーテルであるか、もしくは、Ｒ５−−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｙ−ＯＨの構造（ここで、Ｒ５は、約６〜約２２の炭素原子を有している、枝分かれしたアルキル基、または枝分かれしていないアルキル基であり、ｙは、約４〜約１００の間、好ましくは約１０〜約１００の間、である）を有するアルコキシル化アルコールである。好ましくは、アルコキシル化アルコールは、Ｒ５がラウリル基であり、ｙが２３の平均値を有する、種類である。異なる実施形態において、界面活性剤は、ラノリンアルコールのエトキシル化誘導体である、アルコキシル化アルコールである。好ましくは、ラノリン脂肪酸アルコールのエトキシル化誘導体は、ラネス−１０（laneth-10）であり、当該ラネス−１０は、１０の平均エトキシル化値を有する、ラノリン脂肪酸アルコールのポリエチレングリコールエーテルである。
【０１６２】
非イオン性界面活性剤には、エトキシル化界面活性剤、エトキシル化されたアルコール、エトキシル化されたアルキルフェノール、エトキシル化された脂肪酸、エトキシル化されたモノアルカオルアミド（monoalkaolamide）、エトキシル化されたソルビタンエステル、エトキシル化された脂肪アミノ（fatty amino）、エチレンオキシド−プロピレンオキシド共重合体、ビス（ポリエチレングリコールビス（イミダゾイルカルボニル））、ノノキシノール−９、ビス（ポリエチレングリコールビス（イミダゾイルカルボニル））、Ｂｒｉｊ（登録商標）３５、Ｂｒｉｊ（登録商標）５６、Ｂｒｉｊ（登録商標）７２、Ｂｒｉｊ（登録商標）７６、Ｂｒｉｊ（登録商標）９２Ｖ、Ｂｒｉｊ（登録商標）９７、Ｂｒｉｊ（登録商標）５８Ｐ、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ、デカエチレングリコールモノドデシルエーテル、Ｎ−デカノイル−Ｎ−メチルグルカミン、ｎ−デシル  アルファ−Ｄ−グルコピラノシド、デシル  ベータ−Ｄ−マルトピラノシド、ｎ−ドデカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、ｎ−ドデシル  アルファ−Ｄ−マルトシド、ｎ−ドデシル  ベータ−Ｄ−マルトシド、ｎ−ドデシル  ベータ−Ｄ−マルトシド、ヘプタエチレングリコールモノデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘプタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、ｎ−ヘキサデシル  ベータ−Ｄ−マルトシド、ヘキサエチレングリコールモノドデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ヘキサエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、Ｉｇｅｐａｌ  ＣＡ−６３０、Ｉｇｅｐａｌ  ＣＡ−６３０、メチル−６−Ｏ−（Ｎ−ヘプチルカルバモイル）−アルファ−Ｄ−グルコピラノシド、ノナエチレングリコールモノドデシルエーテル、Ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミン、Ｎ−ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミン、オクタエチレングリコールモノデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノドデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、オクタエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、オクチル−ベータ−Ｄ−グルコピラノシド、ペンタエチレングリコールモノデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノドデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノヘキシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクタデシルエーテル、ペンタエチレングリコールモノオクチルエーテル、ポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、ポリエチレングリコールエーテルＷ−１、ポリオキシエチレン１０トリデシルエーテル、ポリオキシエチレン１００ステアレート、ポリオキシエチレン２０イソヘキサデシルエーテル、ポリオキシエチレン２０オレイルエーテル、ポリオキシエチレン４０ステアレート、ポリオキシエチレン５０ステアレート、ポリオキシエチレン８ステアレート、ポリオキシエチレンビス（イミダゾリルカルボニル）、ポリオキシエチレン２５プロピレングリコールステアレート、キラヤ属樹皮由来のサポニン、Ｓｐａｎ（登録商標）２０、Ｓｐａｎ（登録商標）４０、Ｓｐａｎ（登録商標）６０、Ｓｐａｎ（登録商標）６５、Ｓｐａｎ（登録商標）８０、Ｓｐａｎ（登録商標）８５、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、Ｔｙｐｅ１５−Ｓ−１２、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、Ｔｙｐｅ１５−Ｓ−３０、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、Ｔｙｐｅ１５−Ｓ−５、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、Ｔｙｐｅ１５−Ｓ−７、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、Ｔｙｐｅ１５−Ｓ−９、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、ＴｙｐｅＮＰ−１０、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、ＴｙｐｅＮＰ−４、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、ＴｙｐｅＮＰ−４０、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、ＴｙｐｅＮＰ−７、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、ＴｙｐｅＮＰ−９、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、ＴｙｐｅＴＭＮ−１０、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ、ＴｙｐｅＴＭＮ−６、テトラデシル−ベータ−Ｄ−マルトシド、テトラエチレングリコールモノデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノドデシルエーテル、テトラエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、トリエチレングリコールモノデシルエーテル、トリエチレングリコールモノドデシルエーテル、トリエチレングリコールモノヘキサデシルエーテル、トリエチレングリコールモノオクチルエーテル、トリエチレングリコールモノテトラデシルエーテル、Ｔｒｉｔｏｎ  ＣＦ−２１、Ｔｒｉｔｏｎ  ＣＦ−３２、Ｔｒｉｔｏｎ  ＤＦ−１２、Ｔｒｉｔｏｎ  ＤＦ−１６、Ｔｒｉｔｏｎ  ＧＲ−５Ｍ、Ｔｒｉｔｏｎ  ＱＳ−１５、Ｔｒｉｔｏｎ  ＱＳ−４４、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１０２、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１５、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１５１、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−２００、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−２０７、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１６５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−３０５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４０５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−４５、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−７０５−７０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）２１、ＴＷＥＥＮ（登録商標）４０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６１、ＴＷＥＥＮ（登録商標）６５、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８１、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８５、チロキサポール、ｎ−ウンデシル  ベータ−Ｄ−グルコピラノシド、それらの半合成誘導体、またはそれらの組み合わせ、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６３】
さらに、非イオン性界面活性剤は、ポロキサマーであり得る。ポロキサマーは、ポリオキシエチレンのブロック、続いてポリオキシプロピレンのブロック、続いてポリオキシエチレンのブロック、から作製される重合体である。ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンの平均ユニット数は、重合体に使われる数に基づいて変化する。例えば、最も小さい重合体であるポロキサマー１０１は、平均２ユニットのポリオキシエチレンを有するブロック、平均１６ユニットのポリオキシプロピレンを有するブロック、続いて平均２ユニットのポリオキシエチレンを有するブロック、から成る。ポロキサマーは、無色の液体およびペーストから白色固体までの範囲にわたる。化粧品およびパーソナルケア製品において、ポロキサマーは、肌の汚れおとし剤、入浴製品、シャンプー、ヘアコンディショナー、口腔洗浄液、アイメイク除去剤、ならびに、他の肌製品および毛髪製品、の製剤として使用される。ポロキサマーの例には、ポロキサマー１０１、ポロキサマー１０５、ポロキサマー１０８、ポロキサマー１２２、ポロキサマー１２３、ポロキサマー１２４、ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８２、ポロキサマー１８３、ポロキサマー１８４、ポロキサマー１８５、ポロキサマー１８８、ポロキサマー２１２、ポロキサマー２１５、ポロキサマー２１７、ポロキサマー２３１、ポロキサマー２３４、ポロキサマー２３５、ポロキサマー２３７、ポロキサマー２３８、ポロキサマー２８２、ポロキサマー２８４、ポロキサマー２８８、ポロキサマー３３１、ポロキサマー３３３、ポロキサマー３３４、ポロキサマー３３５、ポロキサマー３３８、ポロキサマー４０１、ポロキサマー４０２、ポロキサマー４０３、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１０５ベンゾエート、およびポロキサマー１８２ジベンゾエート、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６４】
好適なカチオン性界面活性剤としては、第四級アンモニウム化合物、塩化アルキルトリメチルアンモニウム化合物、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム化合物、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物、例えば塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウム、塩化ベンジルジメチルテトラデシルアンモニウム、臭化ベンジルドデシルジメチルアンモニウム、ベンジルトリメチルアンモニウムテトラクロロイオデート（Benzyltrimethylammonium tetrachloroiodate）、臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム、臭化ドデシルエチルジメチルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、臭化エチルヘキサデシルジメチルアンモニウム、ジラード試薬（Girard's reagent）Ｔ、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ポリオキシエチレン（１０）−Ｎ−タロウ−１，３−ジアミノプロパン、臭化トンゾニウム、臭化トリメチル（テトラデシル）アンモニウム、１，３，５−トリアジン−１，３，５（２Ｈ，４Ｈ，６Ｈ）−トリエタノール、１−デカンアミニウム、Ｎ−デシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−、クロリド、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化２−（２−（ｐ−（ジイソブチル）クレゾスキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム、塩化２−（２−（ｐ−（ジイソブチル）フェノキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキル１または３ベンジル−１−（２−ヒドロクスエチル）−２−イミダゾリニウム（Alkyl 1 or 3 benzyl-1-(2-hydroxethyl)-2-imidazolinium chloride）、塩化アルキルビス（２−ヒドロキシエチル）ベンジルアンモニウム、塩化アルキルデメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチル３，４−ジクロロベンジルアンモニウム（１００％Ｃ１２）、塩化アルキルジメチル３，４−ジクロロベンジルアンモニウム（５０％Ｃ１４、４０％Ｃ１２、１０％Ｃ１６）、塩化アルキルジメチル３，４−ジクロロベンジルアンモニウム（５５％Ｃ１４、２３％Ｃ１２、２０％Ｃ１６）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（１００％Ｃ１４）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（１００％Ｃ１６）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（４１％Ｃ１４、２８％Ｃ１２）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（４７％Ｃ１２、１８％Ｃ１４）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（５５％Ｃ１６、２０％Ｃ１４）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（５８％Ｃ１４、２８％Ｃ１６）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６０％Ｃ１４、２５％Ｃ１２）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６１％Ｃ１１、２３％Ｃ１４）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６１％Ｃ１２、２３％Ｃ１４）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６５％Ｃ１２、２５％Ｃ１４）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６７％Ｃ１２、２４％Ｃ１４）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（６７％Ｃ１２、２５％Ｃ１４）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（９０���Ｃ１４、５％Ｃ１２）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（９３％Ｃ１４、４％Ｃ１２）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（９５％Ｃ１６、５％Ｃ１８）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジデシルジメチルアンモニウム、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（Ｃ１２−１６）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム（Ｃ１２−１８）、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチルジメチルベンジルアンモニウム、臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（９０％Ｃ１４、５％Ｃ１６、５％Ｃ１２）、臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム（ダイズ油の脂肪酸中として混合されたアルキル基およびアルケニル基）、塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム（６０％Ｃ１４）、塩化アルキルジメチルイソプロピルベンジルアンモニウム（５０％Ｃ１２、３０％Ｃ１４、１７％Ｃ１６、３％Ｃ１８）、塩化アルキルトリメチルアンモニウム（５８％Ｃ１８、４０％Ｃ１６、１％Ｃ１４、１％Ｃ１２）、塩化アルキルトリメチルアンモニウム（９０％Ｃ１８、１０％Ｃ１６）、塩化アルキルジメチル（エチルベンジル）アンモニウム（Ｃ１２−１８）、塩化ジ−（Ｃ８−１０）−アルキルジメチルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、塩化ジアルキルメチルベンジルアンモニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化ジイソデシルジメチルアンモニウム、塩化ジオクチルジメチルアンモニウム、塩化ドデシルビス（２−ヒドロキシエチル）オクチル水素アンモニウム、塩化ドデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ドデシルカルバモイルメチルジネチルベンジルアンモニウム、塩化ヘプタデシルヒドロキシエチルイミダゾリニウム、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリス（２−ヒドロキシエチル）−ｓ−トリアジン、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリス（２−ヒドロキシエチル）−ｓ−トリアジン、塩化ミリスタルコニウム（および）クアット  ＲＮＩＵＭ  １４、塩化Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ヒドロキシプロピルアンモニウムポリマー、塩化ｎ−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム一水和物、塩化オクチルデシルジメチルアンモニウム、塩化オクチルドデシルジメチルアンモニウム、塩化オクチフェノキシエトキシエチルジメチルベンジルアンモニウム、オキシジエチレンビス（塩化アルキルジメチルアンモニウム）、第四級アンモニウム化合物、ジココアルキルジメチル、塩化物（dicoco alkyldimethyl, chloride）、塩化トリメトキシシリプロピルジメチルオクタデシルアンモニウム（Trimethoxysily propyl dimethyl octadecyl ammonium chloride）、トリメトキシシリルクアット、塩化トリメチルドデシルベンジルアンモニウム、それらの半合成誘導体、およびそれらの組み合わせ、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６５】
例示的な、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物には、ハロゲン化セチルピリジニウム、ハロゲン化セチルトリメチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルエチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化セチルトリブチルホスホニウム、ハロゲン化ドデシルトリメチルアンモニウム、またはハロゲン化テトラデシルトリメチルアンモニウム、が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態の一部において、好適な、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物には、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルベンジルジメチルアンモニウム、臭化セチルピリジニウム（ＣＰＢ）、臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、臭化セチイジメチルエチルアンモニウム（cetyidimethylethylammonium bromide）、臭化セチルトリブチルホスホニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、および臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム、が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態の一部において、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物は、ＣＰＣであるが、本発明の組成物は、特定の含んでいるカチオン性化合物を有する製剤に限定されない。
【０１６６】
好適なアニオン性界面活性剤には、カルボキシレート、サルフェート、スルホネート、ホスフェート、ケノデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸ナトリウム塩、コール酸、ウシまたはヒツジ胆汁、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、デオキシコール酸、デオキシコール酸メチルエステル、ジギトニン、ジギトキシゲニン、Ｎ，Ｎ−ジメチルドデシルアミン  Ｎ−オキシド、ドキュセートナトリウム塩、グリコケノデオキシコール酸ナトリウム塩、グリココール酸水和物、合成、グリココール酸ナトリウム塩水和物、合成、グリコデオキシコール酸一水和物、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコデオキシコール酸ナトリウム塩、グリコリトコール酸３−サルフェート二ナトリウム塩、グリコリトコール酸エチルエステル、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、Ｎ−ラウロイルサルコシン溶液、Ｎ−ラウロイルサルコシン溶液、ドデシル硫酸リチウム、ドデシル硫酸リチウム、ドデシル硫酸リチウム、ルゴール溶液、Ｎｉａｐｒｏｏｆ４、Ｔｙｐｅ４、１−オクタンスルホン酸ナトリウム塩、１−ブタンスルホン酸ナトリウム、１−デカンスルホン酸ナトリウム、１−デカンスルホン酸ナトリウム、１−ドデカンスルホン酸ナトリウム、１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム無水物、１−ヘプタンスルホン酸ナトリウム無水物、１−ノナンスルホン酸ナトリウム、１−プロパンスルホン酸ナトリウム一水和物、２−ブロモエタンスルホン酸ナトリウム、コール酸ナトリウム水和物、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム一水和物、ドデシル硫酸ナトリウム、ヘキサンスルホン酸ナトリウム無水物、オクチル硫酸ナトリウム、ペンタスルホン酸ナトリウム無水物、タウロコール酸ナトリウム、タウロケノデオキシコール酸ナトリウム塩、タウロデオキシコール酸ナトリウム塩一水和物、タウロハイオデオキシコール酸ナトリウム塩水和物（Taurohyodeoxycholic acid sodium salt hydrate）、タウロリトコール酸３−サルフェート二ナトリウム塩、タウロウルソデオキシコール酸ナトリウム塩、Ｔｒｉｚｍａ（登録商標）ドデシルサルフェート、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、ウルソデオキシコール酸、それらの半合成誘導体、およびそれらの組み合わせ、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６７】
好適な両性イオン界面活性剤には、Ｎ−アルキルベタイン、ラウリルアミンドプロピルジメチルベタミン（lauryl amindo propyl dimethyl betaine）、アルキルジメチルグリシネート、Ｎ−アルキルアミノプロピオネート、ＣＨＡＰＳ、最低限９８％（ＴＬＣ）、ＣＨＡＰＳ、シグマウルトラ、最低限９８％（ＴＬＣ）、ＣＨＡＰＳ、電気泳動用、最低限９８％（ＴＬＣ）、ＣＨＡＰＳＯ、最低限９８％、ＣＨＡＰＳＯ、シグマウルトラ、ＣＨＡＰＳＯ、電気泳動用、３−（デシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホネート内塩、３−ドデシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホネート内塩、シグマウルトラ、３−（ドデシルジメチルアンモニオ）プロパンスルホネート内塩、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルミリスチルアンモニオ）プロパンスルホネート、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルオクタデシルアンモニオ）プロパンスルホネート、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルオクチルアンモニオ）プロパンスルホネート内塩、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルパルミチルアンモニオ）プロパンスルホネート、それらの半合成誘導体、およびそれらの組み合わせ、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６８】
本発明は、本明細書に開示されている界面活性剤に限定されない。本発明の組成物において有用なさらなる界面活性剤および洗浄剤は、参考資料（例えば、McCutheon's Volume 1: Emulsions and Detergents（North American Edition, 2000）、を含むが、これに限定されない）および市販の情報源から確認されてもよい。
【０１６９】
４．ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物
いくつかの実施形態において、エマルションは、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物をさらに含んでいる。いくつかの好ましい実施形態において、エマルションは、エマルションの総重量を基準として、約０．５〜１．０重量％、またはより多くの、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物を含んでいる（が、他の濃度もまた考慮されている）。好ましい実施形態において、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物は、油相とあらかじめ混合されていることが好ましいが、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物は、別個の製剤において、エマルション組成物と組み合わせて提供されてもよい、と理解されるべきである。好適なハロゲンを含んでいる化合物は、塩化物、フッ化物、臭化物、およびヨウ化物イオン、を含む化合物から選択されてもよい。好ましい実施形態において、好適な、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物には、ハロゲン化セチルピリジニウム、ハロゲン化セチルトリメチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルエチルアンモニウム、ハロゲン化セチルジメチルベンジルアンモニウム、ハロゲン化セチルトリブチルホスホニウム、ハロゲン化ドデシルトリメチルアンモニウム、またはハロゲン化テトラデシルトリメチルアンモニウム、が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態の一部において、好適な、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物には、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、塩化セチルトリメチルアンモニウム、塩化セチルベンジルジメチルアンモニウム、臭化セチルピリジニウム（ＣＰＢ）、および臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）、臭化セチイジメチルエチルアンモニウム（cetyidimethylethylammonium bromide）、臭化セチルトリブチルホスホニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、および臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム、が含まれるが、これらに限定されない。好ましい実施形態の一部において、ハロゲンを含んでいるカチオン性化合物は、ＣＰＣであるが、本発明の組成物は、任意の特定の含んでいるカチオン性化合物を有する製剤に限定されない。
【０１７０】
５．発芽促進剤
本発明の他の実施形態において、ナノエマルションは、発芽促進剤をさらに含んでいる。いくつかの好ましい実施形態において、エマルションは、約１ｍＭ〜１５ｍＭ、より好ましくは約５ｍＭ〜１０ｍＭの１つ以上の発芽促進化合物を含んでいる（が、他の濃度もまた考慮される）。好ましい実施形態において、発芽促進化合物は、エマルションの形成に先立って、水相中に供給される。本発明は、発芽促進剤がナノエマルション組成物に添加される場合には、ナノエマルションの殺胞子特性が促進される、ということを考慮している。本発明はさらに、そのような発芽促進剤は、中性のｐＨ（ｐＨ６〜８の間であり、好ましくはｐＨ７）の近くで殺胞子活性を開始する、ということを考慮している。そのような中性のｐＨのエマルションは、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて希釈することによって、もしくは、中性のエマルションの調製によって、得られることが可能である。ナノエマルションの殺胞子活性は、胞子が発芽を開始するときに、優先的に生じる。
【０１７１】
実施形態の一部において、本発明のワクチンに利用されるエマルションは殺胞子活性を有する、ということが実証されている。本発明は任意の特定の機序に限定されず、かつ、機序の理解は本発明を実施するために必要とされないが、エマルションの融合性成分は発芽を開始するために作用し、そして、栄養型形態への転換が完了する前に、エマルションの溶原性の成分は新たに発芽する胞子を溶解するために作用する、と考えられる。従って、エマルションのこれらの成分は、エマルションによる崩壊に対して胞子が感受性であるようにするために、協力して作用する。発芽促進剤の添加は、例えば、殺胞子活性が生じる速度を高速化することによって、エマルションの抗殺胞子活性をさらに促進する。
【０１７２】
細菌の内生胞子および真菌類の胞子の発芽は、増大した代謝、ならびに、熱および化学反応に対する減少した抵抗性、と関連する。発芽が生じるためには、胞子は、環境が発育（vegetation）および繁殖を支援することに適している、ということを感じ取らなければならない。アミノ酸Ｌ−アラニンは、細菌の胞子の発芽を刺激する（例えば、Hills, J. Gen. Micro. 4:38 (1950); and Halvorson and Church, Bacteriol Rev. 21:112 (1957)を、参照のこと）。Ｌ−アラニンおよびＬ−プロリンはまた、真菌類の胞子の発芽を開始させると報告されている（Yanagita, Arch Mikrobiol 26:329 (1957)）。グリシンおよびＬ−アラニンのような、単純α−アミノ酸は、代謝において中心的な位置を占める。α−アミノ酸のアミノ基転移または脱アミノ化は、代謝および生育のために必要とされる、糖原性炭水化物またはケト原性炭水化物、ならびに窒素を生じる。例えば、Ｌ−アラニンのアミノ基転移または脱アミノ化によって、解糖代謝（エムデン−マイヤーホフ（Embden-Meyerhof）経路）の最終産物であるピルビン酸が生じる。ピルビン酸デヒドロゲナーゼ複合体によるピルビン酸の酸化によって、アセチル−ＣｏＡ、ＮＡＤＨ、Ｈ＋、およびＣＯ２が生じる。アセチル−ＣｏＡは、ミトコンドリアの電子伝達系を順に供給する、トリカルボン酸サイクル（クレブス回路）のための開始基質である。アセチル−ＣｏＡはまた、脂肪酸合成、ならびにステロール合成のための根本的な炭素源である。単純α−アミノ酸は、発芽およびそれに付随する代謝活性のために必要とされる、窒素、ＣＯ２、糖原性等価物および／またはケト原性等価物を提供することができる。
【０１７３】
ある実施形態において、本発明の好適な発芽促進物質には、α−アミノ酸（グリシン、およびアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、リシン、フェニルアラニン、チロシンのＬ−光学異性体を含む）、ならびにそれらのアルキルエステル、が含まれるが、これらに限定されない。発芽に対するアミノ酸の効果についてのさらなる情報は、米国特許第５，５１０，１０４号（参照によってそれらの全体が本明細書に援用される）において見出だされ得る。いくつかの実施形態において、グルコース、フルクトース、アスパラギン、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、塩化アンモニウム（ＮＨ４Ｃｌ）、塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）、および塩化カルシウム（ＫＣｌ）の混合物もまた、使用されてもよい。本発明の好ましい実施形態の一部において、製剤は、発芽促進剤Ｌ−アラニン、ＣａＣｌ２、イノシン、およびＮＨ４Ｃｌを含んでいる。いくつかの実施形態において、組成物は、１つ以上の、一般的な形態の成長培地（例えばトリプチケースソイブロス（trypticase soy broth）など）をさらに含んでおり、当該成長培地は、当該成長培地自身が発芽促進剤および緩衝液を、さらに含んでも、もしくは含まなくてもよい。
【０１７４】
上述の化合物は、単に例示的な発芽促進剤であり、他の公知の発芽促進剤が、本発明のいくつかの実施形態において利用されるナノエマルションに使途を見出されるだろうということが、理解される。発芽促進剤の候補は、本発明の組成物内部への封入のための、２つの基準を満たすべきである：本明細書中に開示されているエマルションに関連させることが可能であるべきであり、かつ本明細書に開示されているエマルション中に組み込まれた場合に、標的の胞子の発芽速度を増加させるべきである。当業者は、特定の作用物質が発芽促進剤として作用する所望の機能を有しているか否かを決定することが可能であり、これは、（１）本明細書中に開示されているナノエマルションとの組み合わせで、そのような作用物質を対象に用いること、および、（２）混合物によって接触させた場合の標的の不活化と、作用物質を含んでいない本発明の組成物による類似の標的の不活化とを比較することによって、である。発芽を増加させ、それ故に生物の生育を減退させるかもしくは阻害する任意の作用物質は、本明細書中に開示されているナノエマルション組成物における使用のために、好適な促進剤であると考えられる。
【０１７５】
さらに他の実施形態において、中性のエマルション組成物への発芽促進剤（または成長培地）の添加は、本発明のワクチン組成物における使用のために、エンベロープウイルス、グラム陰性細菌、およびグラム陽性細菌、に加えて細菌胞子、の不活化において有用である組成物を生成する。
【０１７６】
６．相互作用促進剤
さらに他の実施形態において、ナノエマルションは、組成物の相互作用を促すことが可能である化合物（すなわち、（例えば標的の病原体（例えば、Vibrio、Salmonella、ShigellaおよびPseudomonasのようなグラム陰性細菌の細胞壁）との）「相互作用促進剤」）の１つ以上を含んでいる。好ましい実施形態において、相互作用促進剤は、好ましくは油相とあらかじめ混合される；しかしながら、他の実施形態において、相互作用促進剤は、乳化後に、組成物との組み合わせにおいて供給される。ある好ましい実施形態において、相互作用促進剤は、キレート剤（例えば緩衝液（例えばトリス緩衝液）中の、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、またはエチレンビス（オキシエチレンニトリロ）テトラ酢酸（ＥＧＴＡ）など）である。キレート剤は、単に例示的な相互作用促進化合物であることが理解される。実際、（例えば、微生物の作用物質、病原体、ワクチン、などとの）本発明のいくつかの実施形態において使用されているナノエマルションの相互作用を促す他の作用物質が考慮される。特に好ましい実施形態において、相互作用促進剤は、約５０〜約２５０μＭの濃度である。当業者は、特定の作用物質が、相互作用促進剤として作用する所望の機能を有しているか否かを決定することが可能であり得て、これは、（１）本発明の組成物との組み合わせにおいて、そのような作用物質を対象に用いること、および、（２）混合物によって接触させた場合の標的の不活化と、作用物質を含んでいない本発明の組成物による類似の標的の不活化とを比較することによって、である。細菌とエマルションとの相互作用を促し、それ故に、相対的にその非存在下におけるパラメータと比較して、細菌の生育を減退させるかもしくは阻害する任意の作用物質は、相互作用促進剤であると考えられる。
【０１７７】
いくつかの実施形態において、ナノエマルションへの相互作用促進剤の添加は、ワクチン組成物における使用のために、エンベロープウイルス、いくつかのグラム陽性細菌、およびいくつかのグラム陰性細菌を不活化することにおいて有用である組成物を生成する。
【０１７８】
７．第四級アンモニウム化合物
いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションは、第四級アンモニウムを含んでいる化合物を含んでいる。例示的な第四級アンモニウム化合物には、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、アルキルジメチルベンジルおよびジアルキルジメチルアンモニウムクロリド（Alkyl dimethyl benzyl and dialkyl dimethyl ammonium chloride）、塩化Ｎ，Ｎ−ジメチル−２−ヒドロキシプロピルアンモニウムポリマー、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化ｎ−アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ｎ−アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、塩化ｎ−アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ｎ−テトラデシルジメチルベンジルアンモニウム一水和物、塩化ｎ−アルキルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリス（２−ヒドロキシエチル）−ｓ−トリアジン、塩化ミリスタルコニウム（および）クアット  ＲＮＩＵＭ  １４、塩化アルキルビス（２−ヒドロキシエチル）ベンジルアンモニウム、塩化アルキルデメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチル３，４−ジクロロベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウム、アルキルジメチルベンジルジメチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチルジメチベンジルアンモニウム、臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム、臭化アルキルジメチルエチルアンモニウム、塩化アルキルジメチルエチルベンジルアンモニウム、塩化アルキルジメチルイソプロピルベンジルアンモニウム、塩化アルキルトリメチルアンモニウム、塩化アルキル１または３ベンジル−１−（２−ヒドロキシエチル）−２−イミダゾリニウム、塩化ジアルキルメチルベンジルアンモニウム、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化２−（２−（ｐ−（ジイソブチル）クレゾスキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム、塩化２−（２−（ｐ−（ジイソブチル）フェノキシ）エトキシ）エチルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ジオクチルジメチルアンモニウム、塩化ドデシルビス（２−ヒドロキシエチル）オクチル水素アンモニウム、塩化ドデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ドデシルカルバモイルメチルジネチルベンジルアンモニウム、塩化ヘプタデシルヒドロキシエチルイミダゾリニウム、ヘキサヒドロ−１，３，５−トリス（２−ヒドロキシエチル）−ｓ−トリアジン、塩化オクチルデシルジメチルアンモニウム、塩化オクチルドデシルジメチルアンモニウム、塩化オクチフェノキシエトキシエチルジメチルベンジルアンモニウム、オキシジエチレンビス（塩化アルキルジメチルアンモニウム）、第四級アンモニウム化合物、ジココアルキルジメチル、塩化物、トリメトキシシリルクアット、および塩化トリメチルドデシルベンジルアンモニウム、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７９】
８．他の成分
いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバント組成物は、所望の特性または機能性をナノエマルションに提供する、さらなる化合物を１つ以上含んでいる。これらの成分は、ナノエマルションの水相中または油相中に組み込まれてもよく、および／または、乳化に先立ってまたは乳化に続いて、添加されてもよい。例えば、いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、フェノール（例えば、トリクロサン、フェニルフェノール）、酸性化剤（例えばクエン酸（例えば、１．５〜６％）、酢酸、レモンジュース）、アルキル化剤（例えば水酸化ナトリウム（例えば、０．３％））、緩衝液（例えば、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、および特定のｐＨを維持するために有用な他の緩衝液）、ハロゲン（例えば、ポリビニルピロリドン、次亜塩素酸ナトリウム、過酸化水素）をさらに含んでいる。
【０１８０】
ナノエマルションを作製するための例示的な技術を以下に記載する。さらに、多くの具体的な、しかし例示的な製剤の製剤表もまた、本明細書中に示す。
【０１８１】
いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントは、免疫原（例えば、病原体および／または病原体成分（例えば、精製された、単離された、および／もしくは組換え体の、病原体ペプチドならびに／またはタンパク質））を含んでいる組成物の投与の前、投与と同時、または投与の後に、対象に投与される。本発明は、免疫原を含んでいる組成物の、任意の１つの特別な種類の使用に限定されない。実際、（例えば、免疫応答を生じさせるために（例えば、ワクチンとしての使用のために）利用される）免疫原を含んでいる種々の組成物は、本発明のナノエマルションアジュバントと共に利用されてもよい。いくつかの実施形態において、免疫原を含んでいる組成物は、病原体（例えば、殺傷させられた病原体）、病原体成分、または、それらの単離された部分、精製された部分、および／もしくは組換え体の部分を含んでいる。従って、いくつかの実施形態において、免疫原を含んでいる組成物は、微生物の病原体または病原体成分を含んでいる。上記細菌には、Bacillus cereus、Bacillus circulans、およびBacillus megaterium、Bacillus anthracis、属Brucellaの細菌、Vibrio cholera、oxiella burnetii、Francisella tularensis、Chlamydia psittaci、Ricinus communis、Rickettsia prowazekii、属Salmonellaの細菌（例えばS. typhi）、属Shigellaの細菌、Cryptosporidium parvum、Burkholderia pseudomallei、Clostridium perfringens、Clostridium botulinum、Vibrio cholerae、Streptococcus pyogenes、Streptococcus agalactiae、Streptococcus pneumonia、Staphylococcus aureus、Neisseria gonorrhea、Haemophilus influenzae、Escherichia coli、Salmonella typhimurium、Shigella dysenteriae、Proteus mirabilis、Pseudomonas aeruginosa、Yersinia pestis、Yersinia enterocolitica、およびYersinia pseudotuberculosis）、が含まれるが、これらに限定されない。他の実施形態において、免疫原を含んでいる組成物は、ウイルスの病原体または病原体成分を含んでいる。上記ウイルスには、インフルエンザＡウイルス、トリインフルエンザウイルス、Ｈ５Ｎ１インフルエンザウイルス、西ナイルウイルス、ＳＡＲＳウイルス、マールブルグウイルス、アレナウイルス、ニパウイルス、アルファウイルス、フィロウイルス、単純ヘルペスＩ型ウイルス、単純ヘルペスＩＩ型ウイルス、センダイ、シンドビス、ワクシニア、パルボウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、サイトメガロウイルス、ヒトパピローマウイルス、ピコルナウイルス、ハンタウイルス、フニンウイルス、およびエボラウイルス）が含まれるが、これらに限定されない。またさらなる実施形態において、免疫原を含んでいる組成物は、真菌類の病原体または病原体成分を含んでいる。上記真菌類には、Candida albicnasおよびparapsilosis、Aspergillus fumigatusおよびniger、Fusarium spp、Trychophyton sppが含まれるが、これらに限定されない。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントは、ペプチド（例えば、米国特許第４，６０１，９０３号；第４，５９９，２３１号；第４，５９９，２３０号；および第４，５９６，７９２号（当該文献のそれぞれは、参照によって本明細書に援用される）によって例示されているような、一般的に当業者に既知のペプチド）を含んでいるワクチンの投与の前、投与と同時、または投与の後に、対象に投与される。
【０１８３】
（製剤化技術）
本発明のナノエマルションは、標準的なエマルション形成技術を用いて形成され得る。要約すると、水中油ナノエマルションを得るために、相対的に高いせん断力で（例えば、高油圧力および高機械力を用いて）油相は水相と混合される。エマルションは、油相：水相が、約１：９〜５：１、好ましくは約５：１〜３：１、最も好ましくは４：１の体積対体積に基づく範囲で、油相を水相と混合することによって形成される。油相および水相は、エマルションを形成するために十分なせん断力を生み出すことが可能である任意の装置（例えば、フレンチプレス、または高せん断ミキサー（例えば、ＦＤＡに承認された高せん断ミキサーはAdmix, Inc.（マンチェスター、ニューハンプシャー州）から入手可能である））を用いて、混合され得る。そのようなエマルションを生成する方法は、参照によってその全体が本明細書に援用される、米国特許第５，１０３，４９７号および第４，８９５，４５２号、ならびに米国特許出願公開第２００７００３６８３１号、第２００６０２５１６８４号、および第２００５０２０８０８３号に記載されている。
【０１８４】
好ましい実施形態において、本発明の方法において使用される組成物は、水性の連続的な相（例えば水）中に分散されている、油性の不連続な相の液滴、を含んでいる。好ましい実施形態において、本発明のナノエマルションは、安定であり、長い貯蔵期間（例えば、一年以上を超える期間）の後でさえ、分解しない。さらに、いくつかの実施形態において、ナノエマルションは抗原との組み合わせの後（例えば、いくつかの実施形態において３か月を超える間、いくつかの実施形態において６か月を超える間、いくつかの実施形態において１２か月を超える間、いくつかの実施形態において１８か月を超える間）安定である。好ましい実施形態において、本発明のナノエマルションは、（例えば、粘膜表面へ噴霧するもしくは接触させる、飲み込まれる、吸入される、などを介して）対象に投与される場合には、無毒であり、安全である。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、エマルションの一部分は、脂質構造（単層の、多層の、およびパウクリアメラー（paucliamellar）の脂質小胞、ミセル、ならびにラメラ相、が含まれるが、これらに限定されない）の形態であってもよい。
【０１８６】
一般的に、好ましい無毒性ナノエマルションは、以下によって特徴づけられる：より大きい直径またはより小さい直径のナノエマルションが考慮されるが、それらは、直径に関して約２００〜８００ｎｍである；電荷は成分に依存している；それらは、それらの生物致死活性を維持した状態で、比較的長期間（例えば２年以下）の間、安定である；それらは、洗浄剤および溶媒の毒性を顕著に低下させるそれらの油の内容物に、少なくとも部分的に起因して、それらの個々の成分と比較して、無刺激および無毒である；それらは、例えば０．１％のような低い濃度において有効である；それらは、ほとんどの栄養細菌（グラム陽性の生物およびグラム陰性の生物を含む）、真菌類、ならびにエンベロープウイルスおよび非エンベロープウイルスに対して、１５分における、抗微生物作用（例えば９９．９９％の殺傷）を有している；ならびに、それらは、発芽促進剤とともに生成された場合には、１〜４時間における、殺胞子活性（例えば９９．９９％の殺傷）を有する。
【０１８７】
本発明は、本発明の組成物が投与される対象の種類によって限定されない。本発明は、本発明のナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物の特定の製剤によって限定されない。実際、本発明のナノエマルションを含んでいる組成物は、ナノエマルションに加えて、１つ以上の異なる作用物質を含んでもよい。これらの作用物質または補助因子には、アジュバント、界面活性剤、添加剤、緩衝液、可溶化剤、キレーター、油、塩、治療剤、薬物、生理活性物質、抗菌剤、および抗微生物剤（例えば、抗生物質、抗ウイルス薬など）、が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションを含んでいる組成物は、ナノエマルションが免疫反応を誘導する能力を高める、作用物質および／または補助因子を含んでいる。いくつかの好ましい実施形態において、１つ以上の補助因子または作用物質の存在により、免疫反応を誘導するために必要とされるナノエマルションの量が低減される。本発明は、本発明の治療剤において用いられる補助因子または作用物質の種類によって限定されない。
【０１８８】
いくつかの実施形態において、ナノエマルション組成物において使用される補助因子または作用物質は、生理活性物質である。例えば、いくつかの実施形態において、生理活性物質は、細胞（例えば、ＣＦＴＲを発現している細胞）において有用な生理活性物質であってもよい。生理活性物質は、本明細書に使用されるとき、放射性標識および蛍光標識のような、診断用薬を含む。生理活性物質はまた、細胞（例えば、ＣＦＴＲを発現している細胞）の代謝に影響を与える分子を含み、当該分子には、ペプチド、核酸、ならびに、他の天然の薬剤分子および合成の薬剤分子、が含まれる。生理活性物質は、アドレナリン作動性物質；副腎皮質ステロイド；副腎皮質からの抑制剤；アルコール反応制止剤（alcohol deterrent）；アルドステロン拮抗薬；アミノ酸；アンモニア解毒薬；同化作用剤；強壮剤；鎮痛剤；アンドゲン；麻酔、添加物；麻酔薬；食欲抑制薬；拮抗薬；下垂体前葉抑制剤；駆虫剤；抗ニキビ剤；抗アドレナリン作用性剤；抗アレルギー剤；抗アメーバ剤；抗アンドロゲン剤；抗貧血剤；抗アンギナ剤；抗不安症剤；抗関節炎剤；抗喘息剤；抗アテローム性動脈硬化剤；抗菌剤；抗胆石剤；抗胆石産生剤；抗コリン作用薬；抗凝結薬；抗コクシダル剤；抗痙攣薬；抗うつ薬；抗糖尿病薬；抗下痢剤；抗利尿薬；解毒剤；鎮吐剤；抗癲癇作用剤；抗エストロゲン剤；抗線維素溶解薬；抗真菌剤；抗緑内障剤；抗血友病薬；抗出血剤；抗ヒスタミン薬；抗高脂血症剤；抗高乳酸血症；抗高血圧薬；抗低血圧剤；抗感染薬；局所用の抗感染薬；抗炎症薬；抗角質化剤；抗マラリア薬；抗微生物薬；抗片頭痛剤；抗有糸分裂剤；抗カビ剤、制嘔吐剤、抗腫瘍剤、抗好中球減少症剤、抗肥満抑制剤；駆虫薬（antiparasitic）；抗パーキンソン病剤；抗逆蠕動剤、抗肺炎球菌剤；抗増殖性物質；抗前立腺肥大剤；抗原虫薬；止痒剤；抗精神病薬；抗リウマチ剤；抗住血吸虫剤；抗脂漏剤；抗分泌剤；抗痙攣薬；抗血栓剤；鎮咳薬；抗潰瘍剤；抗尿路結石剤；抗ウイルス薬；食欲抑制剤；良性前立腺過形成治療剤；血糖調節剤；骨吸収阻害剤；気管支拡張薬；炭酸脱水酵素阻害薬；心抑制薬；心臓保護剤；強心薬；心・血管作動薬；胆汁分泌促進薬；コリン作用薬；コリン作動薬；コリンエステラーゼ不活化剤；抗コクシジウム薬；認知アジュバント；認知改善薬；抑制薬；診断補助薬；利尿薬；ドーパミン作用薬；外部寄生虫撲滅薬；催吐薬；酵素阻害剤；エストロゲン；線維素溶解剤；蛍光剤；フリー酸素ラジカルスカベンジャー；胃腸運動性効果剤；グルココルチコイド；性腺刺激因子；発毛誘発剤；止血薬；ヒスタミンＨ２受容体拮抗薬；ホルモン；コレステロール低下剤；血糖降下薬；脂質低下薬；血圧降下剤；造影剤；免疫剤；免疫調節剤；免疫調節剤；免疫賦活剤；免疫抑制剤；インポテンス治療添加剤；阻害剤；角質溶解剤；ＬＨＲＨ作用薬；肝臓異常処置；ルテオリジン；記憶アジュバント；精神能力促進剤；気分調節剤；粘液溶解薬；粘膜保護材；散瞳薬；鼻づまりの薬；神経筋遮断薬；神経保護剤；ＮＭＤＡ拮抗薬；非ホルモンのステロール誘導体；分娩促進剤；プラスミノゲン活性化因子；血小板活性化因子拮抗薬；血小板凝集阻害剤；脳卒中後および頭部外傷後の心的外傷処置剤（post-stroke and post-head trauma treatment）；増強剤；プロゲスチン；プロスタグランジン；前立腺成長阻害剤；甲状腺刺激ホルモン前駆体（prothyrotropin）；向精神薬；肺表面；放射性物質；調節剤；弛緩薬；再分配剤；抗疥癬薬；硬化剤；鎮痛剤；鎮痛作用睡眠薬；選択的アデノシンＡ１拮抗薬；セロトニン拮抗薬；セロトニン阻害剤；セロトニン受容体拮抗薬；ステロイド；誘発剤；抑制剤；症候性多発性硬化症（symptomatic multiple sclerosis）；共力剤；甲状腺ホルモン；甲状腺阻害剤；甲状腺ホルモン様剤；精神安定剤；筋委縮性側索硬化症剤；脳虚血剤；パジェット病剤；不安定狭心症剤；尿酸排出剤；血管収縮薬；血管拡張薬；傷薬；創傷治癒剤；キサンチンオキシダーセ阻害剤、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１８９】
抗菌薬として有用な分子には、本発明の方法および組成物によって送達され得る。本発明のナノエマルションを含んでいる組成物との同時投与における利用について見出されてもよい抗生物質は、殺菌性および／もしくは静菌性である（例えば、細菌の複製を阻害するか、もしくは、感染する生物の生存のために必要な細菌の成分の合成を阻害する）、作用物質または薬を含むが、これに限定されない。上記作用物質または薬は、アルメシリン、アムジノシリン、アミカシン、アモキシシリン、アンフォマイシン、アンフォテリシンＢ、アンピシリン、アザシチジン、アザセリン、アジスロマイシン、アズロシリン、アズトレオナム、バカンピシリン、バシトラシン、ベンジルペニシロイル−ポリリジン、ブレオマイシン、カンジシジン、カプレオマイシン、カルベニシリン、セファクロル、セファドロキシル、セファマンドール、セファゾリン、セフジニル、セフェピム、セフィキシム、セフィネノキシム（cefinenoxime）、セフィネタゾール（cefinetazole）、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォタキシム、セフォテタン、セフォチアム、セフォキシチン、セフピラミド、セフポドキシム、セフプロジル、セフスロジン、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフロキシム、セファセトリル、セファレキシン、セファログリシン、セファロリジン、セファロチン、セファピリン、セフラジン、クロラムフェニコール、クロルテトラサイクリン、シラスタチン、シンナマイシン、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クラブラン酸、クリンダマイシン、クリオキノール、クロキサシリン、コリスチメタート、コリスチン、シクラシリン、シクロセリン、シクロスポリン、シクロ−（Ｌｅｕ−Ｐｒｏ）、ダクチノマイシン、ダルババンシン、ダルフォプリスチン、ダプトマイシン、ダウノルビシン、デメクロサイクリン、デトルビシン、ジクロキサシリン、ジヒドロストレプトマイシン、ジリスロマイシン、ドキソルビシン、ドキシサイクリン、エピルビシン、エリスロマイシン、エベミノマイシン、フロキサシリン、フォスフォマイシン、酸、ゲミフロキサシン、ゲンタマイシン、グラミシジン、グリセオフルビン、ヘタシリン、イダルビシン、イミペネム、イセガナン、イベルメクチン、カナマイシン、ラスパルトマイシン、リネゾリド、リノコマイシン、ロラカルベフ、マガイニン、メクロサイクリン、メロペネム、メタサイクリン、メチシリン、メズロシリン、ミノサイクリン、マイトマイシン、モエノマイシン、モキサラクタム、モキシフロキサシン、マイコフェ酸、ナフシリン、ナタマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ニフィマイシン、ニトロフラントイン、ノボビオシン、オレアンドマイシン、オリタバンシン、オキサシリン、オキシテトラサイクリン、パロモマイシン、ペニシラミン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、フェネチシリン、ピペラシリン、プリカマイシン、ポリマイキシンＢ、プリスチナマイシン、キヌプリスチン、リファブチン、リファムピン、リファマイシン、ロリテトラサイクリン、シソミシン、スペクトリノマイシン、ストレプトマイシン、ストレプトゾシン、スルバクタム、スルタミシリン、タクロリムス、タゾバクタム、テイコプラニン、テリスロマイシン、テトラサイクリン、チカルシリン、チゲサイクリン、トブラマイシン、トロレアンドマイシン、ツニカマイシン、チルスリシン、バンコマイシン、ビダラビン、バイオマイシン、ヴァージニアマイシン、ＢＭＳ−２８４、７５６、Ｌ−７４９、３４５、ＥＲ−３５、７８６、Ｓ−４６６１、Ｌ−７８６、３９２、ＭＣ−０２４７９、Ｐｅｐ５、ＲＰ５９５００、およびＴＤ−６４２４、が含まれるが、これらに限定されない。
【０１９０】
いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションを含んでいる組成物は、１つ以上の粘膜付着剤（例えば、参照によってその全体が本明細書に援用される、米国特許出願公開第２００５０２８１８４３号を参照のこと）を含んでいる。本発明は、利用される粘膜付着剤の種類によって限定されない。実際、種々の粘膜付着剤は、本発明において有用であると考えられ、当該粘膜付着剤には、ポリ（アクリル酸）の架橋誘導体（例えば、カルボポールおよびポリカルボフィル）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖（例えば、アルギネートおよびキトサン）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、レクチン、線毛タンパク質、およびカルボキシメチルセルロース、が含まれるが、これらに限定されない。機序の理解は本発明を実施するために必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されないが、いくつかの実施形態において、粘膜付着剤の使用（例えば、ナノエマルションを含んでいる組成物において）は宿主対象における免疫応答を高める。これは、粘膜付着剤の不使用におけるナノエマルションへの曝露期間、および／または曝露量と比較して、粘膜付着剤が使用される場合の、対象が経験するナノエマルションへの曝露期間、および／または量の増加に起因する。
【０１９１】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、滅菌された水性調製物を含んでいてもよい。許容可能な媒体および溶媒には、水、リンゲル液、リン酸緩衝生理食塩水および等張塩化ナトリウム水溶液が含まれるが、これらに限定されない。さらに、滅菌された不揮発性油は、溶媒または懸濁溶剤として従来通り用いられる。この目的のために、合成モノ（またはジ）グリセリドを含む、任意の無刺激性の不揮発性鉱物油または不揮発性非鉱物油が用いられてもよい。さらに、オレイン酸のような脂肪酸は、注射可能医薬品の調製における利用について見出される。粘膜経路、肺経路、皮下経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、または他の経路を介した投与について好適な担体製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Paに見ることができる。
【０１９２】
本発明のナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物は、治療的に、もしくは予防薬として使用され得る。本発明のナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物は、多くの異なる送達経路および方法を介して、対象に投与され得る。
【０１９３】
例えば、本発明の組成物は、多くの方法によって（例えば、粘膜的に、もしくは肺経路によって）対象に投与され得る。上記方法には、溶液中に懸濁し、表面に塗布すること；溶媒中に懸濁し、スプレー噴霧器を使用して表面上に噴霧すること；粘膜付着剤と混合し、表面（例えば、粘膜表面もしくは肺表面）上に塗布する（例えば、噴霧するか、もしくは薄く塗る）こと；鼻用もしくは肺用塗布具に載置し、もしくは含浸させ、塗布すること；放出制御機構によって塗布すること；噴霧器を使用して塗布すること、エアゾールにして散布すること、リポソームとして塗布すること；またはポリマー上に塗布することが含まれるが、これらに限定されない。
【０１９４】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、粘膜投与される（例えば、標準的な技法を用いて。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 19th edition, 1995（例えば粘膜送達技法（鼻腔粘膜、肺粘膜、膣粘膜、直腸粘膜についての技法を含む）について）、ならびに、欧州特許公開第５１７，５６５号およびIllum et al., J. Controlled Rel., 1994, 29:133-141（例えば、鼻腔内投与の技法について）を参照のこと。それぞれの文献は、その全体が参照によって本明細書に援用される）。あるいは、本発明の組成物は、標準的な技法を用いて、皮膚投与または経皮投与してもよい（例えば、Remington: The Science arid Practice of Pharmacy, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 19th edition, 1995を参照のこと）。本発明は、投与経路によって限定されない。
【０１９５】
鼻腔内投与および肺の投与の方法は、当該技術分野において知られており、上記方法には、処置されるべき対象の鼻咽頭鼻部内への、液滴状または噴霧状のナノエマルションの投与が含まれる。いくつかの実施形態において、霧化またはエアロゾル化されている、ナノエマルションを含んでいる組成物が提供される。経口投与用の腸溶性製剤（胃耐性カプセルなど）、直腸内投与または膣内投与用の坐剤もまた、もまた、本発明の一部を形成している。本発明の組成物はまた、経口経路を介して投与されてもよい。このような状況下において、ナノエマルションを含んでいる組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤を含んでもよく、および／または、アルカリ性緩衝液、もしくは腸溶性カプセルを包含してもよい。鼻腔内送達用のための製剤は、デキストランまたはシクロデキストラン、およびサポニンを、アジュバントとしてともに含んでいてもよい。
【０１９６】
好ましい実施形態において、本発明のナノエマルションは、肺送達経路および／または手段を介して投与される。いくつかの実施形態において、ナノエマルションを含んでいる水溶液は、溶液を形成するために、穏やかに、かつ十分に混合される。溶液は、滅菌され密封された容器の中に、（例えば、０．２ミクロンのろ過材を通して）濾過され、滅菌される。滅菌の条件下で、溶液は、液滴（例えば、０．１〜１０ミクロン）を作製するために、適切に小さい穴を通過させられる。
【０１９７】
粒子は、多くの異なる任意の塗布器を使用して、投与されてもよい。製造および投与のための好適な方法は、以下に記載されている：米国特許第６，５９２，９０４号；第６，５１８，２３９号；第６，４２３，３４４号；第６，２９４，２０４号；第６，０５１，２５６号および第５，９９７，８４８号（ＩＮＨＡＬＥ（現在はＮＥＫＴＡＲ））；および米国特許第５，９８５，３０９号；ＲＥ３７，０５３；米国特許第６，４３６，４４３号；第６，４４７，７５３号；第６，５０３，４８０号；および第６，６３５，２８３号（Edwards, et al. (ＭＩＴ，ＡＩＲ））（当該文献のそれぞれは、本明細書に援用される）。
【０１９８】
従って、いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、肺送達によって投与される。例えば、本発明の組成物は、吸入を介して、対象（例えばヒト）の肺に送達され得る（例えば、Adjei, et al. Pharmaceutical Research 1990; 7:565-569；Adjei, et al. Int. J. Pharmaceutics 1990; 63:135-144；Braquet, et al. J. Cardiovascular Pharmacology 1989 143-146；Hubbard, et al. (1989) Annals of Internal Medicine, Vol. III, pp. 206-212；Smith, et al. J. Clin. Invest. 1989;84:1145-1146；Oswein, et al. "Aerosolization of Proteins", 1990; Proceedings of Symposium on Respiratory Drug Delivery II Keystone, Colorado; Debs, et al. J. Immunol. 1988; 140:3482-3488；および米国特許第５，２８４，６５６号（Platz, et al.）（当該文献のそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に援用される）、を参照のこと）。全身性の効果のための、薬物の肺送達のための方法および組成物は、米国特許第５，４５１，５６９号（Wong, et al.）に記載されており、当該文献は参照によって本明細書に援用される（また、米国特許第６，６５１，６５５号（Licalsi et al.）（当該文献は、参照によってその全体が本明細書に援用される）、を参照のこと）。いくつかの実施形態において、ナノエマルションを含んでいる組成物は、１つ以上の経路または手段によって、対象に投与（例えば、肺経路ならびに粘膜経路を介して投与）される。
【０１９９】
本発明の実施における使用のためにさらに考慮されているのは、医薬物質の肺送達および／または鼻粘膜送達のために設計されている広範囲の機械装置（噴霧器、軽量式吸入器、および粉末吸入器、が含まれるが、これらに限定されない。上記はすべて、当業者によく知られている）である。本発明の実施にとって好適な市販の装置の、いくつかの具体例は、ＵＬＴＲＡＶＥＮＴ噴霧器（Mallinckrodt Inc., St. Louis, Mo.）；ＡＣＯＲＮ  ＩＩ噴霧器（Marquest Medical Products, Englewood, Colo.）；ＶＥＮＴＯＬＩＮ計量式吸入器（Glaxo Inc., Research Triangle Park, N.C.）；およびＳＰＩＮＨＡＬＥＲ粉末吸入器（Fisons Corp., Bedford, Mass.）である。そのような装置の全ては、治療剤の分配のために好適な製剤の使用を必要とする。典型的に、それぞれの製剤は、用いられる装置の種類に対して特有であり、通常の希釈剤、アジュバント、界面活性剤、担体、および／または、治療に有用である他の作用物質に加えて、適切な推進燃料物質の使用を含んでもよい。また、リポソーム、マイクロカプセルもしくはマイクロスフィア、封入複合体、または他の種類の担体の使用が考慮されている。
【０２００】
従って、いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションを含んでいる組成物は、粘膜経路、筋肉内経路、腹腔内経路、皮内経路、経皮経路、肺経路、静脈内経路、皮下経路、または、本明細書に説明されている他の投与経路によって、ナノエマルションを含んでいる組成物を投与することにより、疾患に罹りやすい対象、または疾患に罹患している対象を防御および／または処置するために用いられうる。ナノエマルションおよび／または、ナノエマルションを有している同時投与される作用物質の全身投与の方法には、従来のシリンジおよび針、または弾道送達のために設計されている装置（例えば、参照によって本明細書に援用される、ＷＯ９９／２７９６１を参照のこと）、または無針型圧力液体噴射装置（例えば、米国特許第４，５９６，５５６号、米国特許第５，９９３，４１２号を参照のこと。それぞれの文献は参照によって本明細書に援用される）、または経皮パッチ（例えば、ＷＯ９７／４８４４０、ＷＯ９８／２８０３７を参照のこと。それぞれの文献は参照によって本明細書に援用される）が含まれ得る。いくつかの実施形態において、本発明は、本発明のナノエマルション組成物が予め充填されている、全身投与のための送達装置を提供する。
【０２０１】
上述した様に、本発明は、本発明の組成物を投与される対象の種類によって、限定されない。実際、多種多様の対象が、本発明の組成物の投与から恩恵を得られる、と意図されている。好ましい実施形態において、対象はヒトである。いくつかの実施形態において、ヒトの対象は、微生物または、アレルギー性物質もしくは原料に曝露されているか、もしくは曝露されそうな、任意の年齢（例えば、成人、小児、幼児、など）である。いくつかの実施形態において、ヒトの対象は、病原性の微生物への直接的な曝露をより受けそうな対象、または病原体への曝露の後に、疾患の徴候もしくは症状をより示しそうな対象（例えば、ＣＦまたは喘息の対象、軍隊に属する対象、公務員、頻繁に旅行するひと、学校もしくはデイケアセンターにて参加している人または働いているひと、医療従事者、高齢者、免疫不全症のひと、および緊急事態業務従事者（例えば、警察官、消防士、ＥＭＴ従事者））である。いくつかの実施形態において、一般社会の任意の一構成員、または全ての構成員は、（例えば、疾患の発症または蔓延を予防するために）本発明の組成物を投与され得る。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の組成物および方法は、人々（例えば、地域、市、州、および／または国の人々）の自分自身の健康のため、当該人々の集団を処置するため、および／または動物（例えば、トリ、ウシ、ヒツジ、ブタ、など）からヒトへ蔓延した疾患の危機を予防するかもしくは減らすため利用される。いくつかの実施形態において、対象は、非ヒトの哺乳類（例えば、ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、もしくは他の家畜；またはマウス、ラット、ウサギ、もしくは他の動物）である。いくつかの実施形態において、本発明の組成物および方法は、（例えば、研究動物を用いた）研究場面に利用される。
【０２０２】
本発明のナノエマルションを含んでいる組成物は、微生物の感染を防ぐために、治療薬または予防薬として、（（例えば、肺および／または粘膜経路を介して）例えば対象に）投与され得る。
【０２０３】
本発明の組成物は、薬学的組成物に従来見出されている他の補助成分を、さらに含んでもよい。従って、例えば、組成物は、さらなる、相性の良い、薬学的に有効な材料（例えば、抗化膿剤、収斂剤、局所麻酔薬、または抗炎症剤）を含んでもよく、もしくは、本発明の組成物の種々の投与形態の物理的な製剤化において有用である、さらなる材料（例えば、色素、香料添加剤、保存剤、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤、および安定化剤）を含んでもよい。しかしながら、そのような材料は、添加される場合に、好ましくは、本発明の組成物の成分の生物活性を、不当に妨げない。製剤は、滅菌されることが可能であり、望まれる場合には、ナノエマルションと有害に相互作用しない助剤（例えば、潤滑剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝液、着色剤、香味剤および／または芳香物質など）と混合され得る。いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルション組成物は、薬学的に許容可能な塩の形態において、投与される。使用されるとき、塩は薬学的に許容可能であるべきであるが、薬学的に許容可能ではない塩は、その薬学的に許容可能な塩を調製するために、都合よく用いられてもよい。そのような塩には、下記の酸から調製される塩が含まれるが、これらに限定されない：塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、蟻酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。また、そのような塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類の塩（例えば、カルボン酸の群のナトリウム、カリウムまたはカルシウムの塩）として調製され得る。
【０２０４】
好適な緩衝剤としては、酢酸および塩（１〜２％ｗ／ｖ）；クエン酸および塩（１〜３％ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）；ならびにリン酸および塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）、が含まれるが、これらに限定されない。好適な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム(０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）；パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）およびチメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）、が含まれてもよい。
【０２０５】
いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物は、１つ以上の抗生物質と同時投与される。例えば、１つ以上の抗生物質は、ナノエマルションを含んでいる組成物の投与とともに、投与の前および／または投与の後投与されてもよい。本発明は、同時投与される抗生物質の種類によって限定されない。実際、種々の抗生物質が同時投与され得る。上記抗生物質としては、β−ラクタム抗生物質、ペニシリン（例えば、天然のペニシリン、アミノペニシリン、ペニシリナーゼ耐性ペニシリン、カルボキシペニシリン、ウレイドペニシリン）、セファロスポリン（第１世代、第２世代および第３世代のセファロスポリン）、および他のβ−ラクタム（例えば、イミペネム、モノバクタム）、β−ラクタマーゼ阻害剤、バンコマイシン、アミノグリコシドおよびスペクチノマイシン、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、エリスロマイシン、リンコマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、メトロニダゾール、ポリミキシン、ドキシサイクリン、キノロン（例えばシプロフロキサシン）、スルホンアミド、トリメトプリムならびにキノリンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２０６】
多種多様の抗微生物剤が、現在、細菌感染、真菌類感染、およびウイルス感染の処置における使用のために、利用可能である。そのような薬物の一般的な分類、およびそれらの作用機序について包括的な学術論文について、当業者は、Goodman & Gilman's "The Pharmacological Basis of Therapeutics" Eds. Hardman et al., 9th Edition, Pub. McGraw Hill, chapters 43 through 50, 1996（参照によってその全体が本明細書に援用される）を参照すればよい。一般的に、これら作用物質としては、細胞壁の合成を阻害する作用物質（例えば、ペニシリン、セファロスポリン、シクロセリン、バンコマイシン、バシトラシン）；およびイミダゾール抗真菌剤（例えば、ミコナゾール、ケトコナゾールおよびクロトリマゾール）；微生物の細胞膜の崩壊に対して直接的に作用する作用物質（例えば、ポリミキシンおよびコリスチメタートのような洗浄剤、ならびに抗真菌剤ニスタチンおよびアンフォテリシンＢ）；タンパク質合成を阻害するためにリボソームサブユニットに影響を与える作用物質（例えば、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、エリスロマイシンおよびクリンダマイシン）；タンパク質合成を変化させ、細胞死に導く作用物質（例えば、アミノグリコシド）；核酸の代謝に影響を与える作用物質（例えば、リファマイシンおよびキノロン）；代謝拮抗物質（例えば、トリメトプリムおよびスルホンアミド）；ＤＮＡ合成のために必須のウイルス酵素の阻害に作用する核酸類似物（例えば、ジドブジン、ガンシクロビル、ビダラビンおよびアシクロビル）、が含まれる。抗微生物薬の種々の組み合わせが用いられてもよい。
【０２０７】
本発明はまた、１つ以上のさらなる活性剤および／または抗感染剤を有しているナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物の同時投与に関する方法を含む。同時投与の手順において、作用物質は、同時に投与、または順次に投与されてもよい。一実施形態において、本明細書に記載された組成物は、（複数の）他の活性剤に先立って投与される。薬学的製剤および投与の様式は、本明細書に記載されているこれらのうちのいずれかであってもよい。さらに、同時投与される２つ以上の作用物質は、それぞれ、異なる様式（例えば経路）または異なる製剤を用いて投与されてもよい。同時投与されるべきさらなる作用物質は、当該技術分野において公知の作用物質のうちのいずれかであり得る。当該作用物質としては、現在、臨床に使用されている作用物質が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０８】
いくつかの実施形態において、ナノエマルションを含んでいる組成物は、２つ以上の経路を介して、対象に投与される。例えば、対象は、粘膜投与（例えば、鼻粘膜投与、または本明細書に記載された他の粘膜経路）を受けること、および、さらに、１つ以上の他の投与経路（例えば肺投与（例えば、噴霧器、吸入器、または本明細書に記載された他の方法））を受けることによる恩恵を受けてもよい。
【０２０９】
他の送達系としては、持続放出性、遅延放出性または徐放性の送達系が含まれ得る。そのような系は、組成物の繰り返される投与を回避することが可能であり、これは、対象および医療者への利便性を増大させる。多くの種類の放出送達系が利用可能であり、当業者にとって知られている。それらとしては、重合体を基にした系（例えばポリ（ラクチド−グリコリド）、コポリオキサレート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリヒドロキシ酪酸、およびポリ無水物）が含まれる。薬物を含んでいる前述の重合体のマイクロカプセルは、例えば、参照によって本明細書に援用される、米国特許第５，０７５，１０９号に記載されている。送達系にはまた、以下の非重合体の系が含まれる：ステロールを含んでいる脂質（例えば、コレステロール、コレステロールエステル）、および脂肪酸または中性脂肪（例えば、モノ−ジ−およびトリ−グリセリド）；ヒドロゲルの放出系；サイラスティック（sylastic）系；ペプチドを基にした系；ワックス被覆；従来の結合剤および賦形剤を用いた圧縮錠；および部分的に融合した埋込片；など。具体的な例には、以下の（ａ）および（ｂ）が含まれるが、これらに限定されない：（ａ）本発明の作用物質が、マトリクス（例えば、米国特許第４，４５２，７７５号、第４，６７５，１８９号および第５，７３６，１５２号（上記文献のそれぞれは、参照によって本明細書に援用される）に記載のマトリクス）にある形態において含まれている侵食性の系；ならびに（ｂ）活性成分が、重合体（例えば、参照によってそれぞれ本明細書に援用される米国特許第３，８５４，４８０号、第５，１３３，９７４号および第５，４０７，６８６号（上記文献のそれぞれは、参照によって本明細書に援用される）に記載の重合体）から制御された割合において浸透する、拡散系、さらに、ポンプに基づく機械設備の送達系が使用されることが可能であり、それらのうちのいくつかは、埋込みに適合されている。
【０２１０】
本発明は、使用されるナノエマルションの量によって限定されない。上記量は、用いられる特定のナノエマルションに依存して変化してもよく、上記量は、対象ごとに、いくらかの要因に依存して変化し得る。上記いくらかの要因には、対象の種、年齢、および全体的な状態（例えば健康）、ならびに投与の様式、が含まれるが、これらに限定されない。対象における免疫応答を誘導するために対象に投与される、ナノエマルションの適切な量を決定するための手順は、当業者によって、既知の手段を用いて、容易に決定され得る。
【０２１１】
いくつかの実施形態において、（例えば、ナノエマルションを含んでいる組成物の、それぞれの投与量は、１〜４０％のナノエマルションを含んでおり、いくつかの実施形態において、２０％のナノエマルションを含んでおり、いくつかの実施形態において２０％未満（例えば、１５％、１０％、８％、５％、またはそれ未満）を含んでおり、ならびに、いくつかの実施形態において２０％を超えるナノエマルション（例えば、２５％、３０％、３５％、４０％またはそれを超えるナノエマルション）を含んでいる、ことが予想される。具体的な投与のための最適な量は、本明細書に記載された免疫応答の観測を含んでいる、標準的な研究を用いて、当業者によって確定され得る。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、（例えば、ナノエマルションを含んでいる組成物の、それぞれの投与量は、ナノエマルションの重量で、０．００１〜４０％であるか、またはそれを超える（例えば、０．００１〜１０％、０．５〜５％、１〜３％、２％、６％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％またはそれを超える）ことが、予想される。
【０２１３】
同様に、本発明は、ナノエマルションが対象に（例えば、免疫のプライミングを誘導するために）投与される期間によって、限定されない。いくつかの実施形態において、ナノエマルションは、毎日、１回以上（例えば、２回、３回、４回、またはそれを超えて）投与される。いくつかの実施形態において、ナノエマルションを含んでいる組成物は、１日につき１回以上、免疫応答の好適なレベルが生じるまで、および／または免疫応答が持続されるまで、投与される。いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションを含んでいる組成物は、対象への投与に先立って希釈され得る、濃縮された用量として製剤化される。例えば、濃縮された組成物の希釈物は、対象が、任意の１つ以上の特定の投与量を受け取るように、対象に投与されてもよく、当該特定の投与量は、本明細書中に規定されている。いくつかの実施形態において、濃縮された組成物の希釈物は、対象が、濃縮された組成物中に存在する０．５〜５０％のナノエマルション、を含んでいる組成物を（例えば、単回の投与で）投与されるように、作製されてもよい。濃縮された組成物は、多数の患者が本発明の組成物を投与されるかもしれない場面（例えば病院）において、有用であると考えられる。いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションを含んでいる組成物（例えば濃縮された組成物）は、１週間を超えて、いくつかの実施形態において２週間を超えて、いくつかの実施形態において３週間を超えて、いくつかの実施形態において４週間を超えて、いくつかの実施形態において５週間を超えて、ならびにいくつかの実施形態において６週間を超えて、室温で安定である。
【０２１４】
投与単位は、いくつかの要因（対象の体重、年齢、および健康状態、が含まれるが、これらに限定されない）に基づいて、比例的に増加または減少し得る。さらに、投与単位は、それに続く投与のため、増加または減少し得る。
【０２１５】
本発明の組成物および方法は、研究場面を含む種々の場面、における使用について見出されるであろうことが意図されている。例えば、本発明の組成物および方法はまた、免疫系の研究（例えば適応的免疫応答（例えば保護的免疫応答（例えば、粘膜の免疫または全身性の免疫））の特徴づけ）における使用について見出される。本発明によって提供される組成物および方法の使用は、ヒトおよび非ヒトの対象、ならびにこれらの対象からの試料を包含しており、これらの対象を用いた研究用途もまた、包含している。本発明の組成物および方法はまた、ナノエマルション、免疫原、および他の成分の研究ならびに最適化において、また、新規成分のためのスクリーニングによって、有用である。従って、本発明は、任意の特定の対象および／または応用場面に限定されないことが、意図されている。
【０２１６】
製剤は、肺送達経路、粘膜送達経路、および他の送達経路の研究のために開発されたいくらかの動物モデルにおいて、インビボにおいて、試験され得る。直ちに明らかになるように、本発明の組成物は、ウイルス、細菌、寄生生物、および真菌類によって引き起こされる、多種多様の疾患および感染の予防および／または処置にとって、有用である。組成物は、上述のように、予防的または治療的に使用され得るだけでなく、組成物はまた、抗体、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方、の調製のために、ならびに、所定の抗原の免疫精製のために、使用され得る。
【０２１７】
一実施形態において、本発明のアジュバント混合物は、免疫原性組成物の生成のために有用である。当該免疫原性組成物は、抗原特異的抗体を産生するために使用されることが可能であり、当該抗原特異的抗体は、診断の実施形態に基づいた免疫測定において、上記抗原の特異的な同定において有用である。そのような免疫測定には、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ＲＩＡｓ、および他の非酵素結合型の抗体結合測定法または当該技術分野において既知の手順、が含まれる。ＥＬＩＳＡ測定法において、抗原特異的抗体は、選択された表面（例えば、ポリスチレンのマイクロタイタープレートのウェルの表面）上に固定化される。不完全に吸着した抗体を取り除くために洗浄した後、試験試料に対して異抗原的に中性であることが知られている非特異的なタンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはカゼインの溶液）が、上記選択された表面に結合されてもよい。これによって、固定化している表面上の、非特異的な吸着部位のブロッキングが可能となり、それ故に、上記表面上に対する抗原の非特異的な結合によって引き起こされるバックグラウンドを低減できる。固定化されている表面は、その後、免疫複合体（抗原／抗体）形成を助長する方法において、試験されるべき試料（例えば、臨床的材料または生物学的材料）と接触させられる。これには、試料を希釈剤（例えば、ＢＳＡ、ウシガンマグロブリン（ＢＧＧ）および／またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）／ＴＥＥＮ）と希釈することが含まれてもよい。試料はそれから、例えば約２５〜３７℃の慣例のような温度において、約２〜４時間、インキュベートされてもよい。インキュベーションに続いて、試料と接触した表面は、免疫複合体にならなかった材料を除去するために洗浄される。洗浄の手順には、溶液（例えば、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ、またはホウ酸塩緩衝液）を用いて洗浄することが含まれてもよい。
【０２１８】
試験試料における抗原と、結合した抗原特的な抗体特異的な抗体との間の、特定の免疫複合体の形成、およびそれに続く洗浄に続いて、免疫複合体形成の存在および、免疫複合体形成の量までもが、抗原に対して特異性を有している二次抗体を、免疫複合体にさらすことによって、決定されてもよい。検出手段を提供するために、二次抗体は、関連した活性（例えば酵素活性であり、当該酵素活性は、例えば、適切な色素生産性物質とのインキュベートによって、着色を生成するだろう）を有してもよい。定量化は、その後、例えば可視スペクトル分光光度計を使用して色生成の程度を測定することによって、達成されてもよい。さらなる実施形態において、本発明は、抗原特異的抗体を含んでいる診断のキットを包含し、当該抗体は、本発明に基づいて生成された免疫原性組成物、を用いた宿主の免疫法によって産生される。
【０２１９】
いくつかの実施形態において、本発明は、ナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物を含んでいるキットを提供する。いくつかの実施形態において、キットは、組成物を投与するための装置をさらに提供する。本発明は、キットに含まれている装置の種類によって限定されない。いくつかの実施形態において、装置は、本発明の組成物の肺への使用（例えば、鼻吸入器、または鼻噴霧器（nasal mister））のために構成される。いくつかの実施形態において、キットは、ナノエマルションを含んでいる組成物を、濃縮された形態（例えば、対象への投与に先立って希釈され得る）で含んでいる。
【０２２０】
いくつかの実施形態において、キットの構成要素のすべては、単一の容器（例えば、バイアルまたはチューブ）に存在する。いくつかの実施形態において、キットの構成要素のそれぞれは、単一の容器（例えば、バイアルまたはチューブ）中に配置されている（例えば、ナノエマルションアジュバントは１つの容器中に存在しており、免疫原は、第２の、別個の容器に存在する）。いくつかの実施形態において、キットの構成要素の１つ以上は、単一の容器（例えば、バイアルまたはチューブ）中に配置されており、同じキットの他の構成要素は、別個の容器（例えば、バイアルまたはチューブ）中に配置されている。いくつかの実施形態において、キットは緩衝液を含んでいる。いくつかの実施形態において、キットは使用のために取扱説明書をさらに含んでいる。
【０２２１】
（動物モデル）
いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバント組成物（例えば免疫応答を生じるための（例えば、アジュバントおよび／またはワクチンとして使用するための）は、感染症の動物モデルにおいて試験される。十分に練られた動物モデルの使用によって、ヒトの対象への投与の前に、ワクチンの有効性および安全性を評価する方法が提供されている。疾患の動物モデルの例は、表２に示されている。これらの動物は（例えば、Jackson Laboratories Charles River、Portage、 MIから）市販されている。
【０２２２】
Bacillus cereus（Bacillus anthracisの近縁種である）の動物モデルは、本発明の炭疽菌ワクチンを試験するために、利用される。両方の細菌は、胞子を形成するグラム陽性の桿菌であり、それぞれの細菌によって引き起こされる疾患の症候群は、主に、毒素の産生に起因しており、感染した宿主に対するこれら毒素の結果である（Brown et al., J. Bact., 75:499 (1958)；Burdon and Wende, J. Infect Dis., 107:224 (1960)；Burdon et al., J. Infect. Dis., 117:307 (1967)）。Bacillus cereus感染は、Bacillus anthracisによって引き起こされる疾患の症候群と類似した症状を呈する。マウスは、B. cereusの毒素の効果に対して、速やかに屈すると報告されており、急性感染症に対して有用なモデルである。モルモットは、B. cereusの皮下感染に続く皮膚病変を呈し、当該皮膚障害は、炭疽菌の皮膚反応の形態と類似している。
【０２２３】
マウスおよびモルモットの両方におけるClostridium perfringensの感染は、抗生物質の薬剤のインビボ試験のためのモデル系として、使用されている（Stevens et al., Antimicrob. Agents Chemother., 31:312 (1987)；Stevens et al., J. Infect. Dis., 155:220 (1987)；Alttemeier et al., Surgery, 28:621 (1950)；Sandusky et al., Surgery, 28:632 (1950)）。Clostridium tetaniは、種々の哺乳類種において、感染し、疾患を引き起こすことが、良く知られている。マウス、モルモット、およびウサギは、全て、実験的に使用されている（Willis, Topley and Wilson's Principles of Bacteriology, Virology and Immunity. Wilson, G., A. Miles, and M.T. Parker, eds. pages 442-475 1983）。
【０２２４】
Vibrio choleraeの感染は、マウス、モルモット、およびウサギにおいて、首尾よく起こっている。公開された報告によれば、通常の腸内細菌叢を変更することが、これらの実験用宿主における確立された感染にとって好ましい。これは、通常の腸内細菌叢を抑制するために抗生物質を投与することによって、ならびに、いくつかの場合には、動物に餌を与えないことによって、成し遂げられる（Butterton et al., Infect. Immun., 64:4373 (1996)；Levine et al., Microbiol. Rev., 47:510 (1983)；Finkelstein et al., J. Infect. Dis., 114:203 (1964)；Freter, J. Exp. Med., 104:411 (1956)；およびFreter, J. Infect. Dis., 97:57 (1955)）。
【０２２５】
Shigella flexneriiの感染は、マウス、およびモルモットにおいて、首尾よく起こっている。ビブリオの感染の場合と同じように、これらの実験用宿主において感染の確立に役立てるために、通常の腸内細菌叢が変更されることが好ましい。これは、通常の腸内細菌叢を抑制するために抗生物質を投与することによって、ならびに、いくつかの場合には、動物に餌を与えないことによって、成し遂げられる（Levine et al., Microbiol. Rev., 47:510 (1983)；Freter, J. Exp. Med., 104:411 (1956)；Formal et al., J. Bact., 85:119 (1963)；LaBrec et al., J. Bact. 88:1503 (1964)；Takeuchi et al., Am. J. Pathol., 47:1011 (1965)）。
【０２２６】
マウスおよびラットは、Salmonella typhimuriumおよびSalmonella enteriditisを用いた実験的な研究に、広く使用されている（Naughton et al., J. Appl. Bact., 81:651 (1996)；Carter and Collins, J. Exp. Med., 139:1189 (1974)；Collins, Infect. Immun., 5:191 (1972)；Collins and Carter, Infect. Immun., 6:451 (1972)）。
【０２２７】
マウスおよびラットは、センダイウイルスの感染のための、十分に確立された実験モデルである（Jacoby et al., Exp. Gerontol., 29:89 (1994)；Massion et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 9:361 (1993)；Castleman et al., Am. J. Path., 129:277 (1987)；Castleman, Am. J. Vet. Res., 44:1024 (1983)；Mims and Murphy, Am. J. Path., 70:315 (1973)）。
【０２２８】
マウスのシンドビスウイルスの感染は、通常、生まれたてのマウスの大脳内の接種によって、成し遂げられる。あるいは、離乳したばかりのマウスは、足蹠において皮下に接種される（Johnson et al., J. Infect. Dis., 125:257 (1972)；Johnson, Am. J. Path., 46:929 (1965)）。
【０２２９】
動物は、輸送から３〜５日間、休息のために収容され、実験における使用の前に、新たな住環境に順化させられることが好ましい。それぞれの実験の開始において、コントロール動物が犠牲にされ、基準のパラメータを確立するために、組織が採取される。動物は、任意の好適な方法（例えば、短期の処置のためのイソフルオランの吸入、または、より長期の処置のためのケタミン／キシラジンの注射が含まれるが、これらに限定されない）によって麻酔される。
【０２３０】
【表２】
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【０２３１】
（アジュバントおよびワクチンの評価についての検定法）
いくつかの実施形態において、同じものを含んでいるナノエマルションアジュバントおよび／またはワクチンは、様々な好適なモデル系のうち１つを用いて評価される。例えば、細胞媒介性免疫応答はインビトロにおいて評価され得る。さらに、病原体の攻撃に対する免疫応答および免疫を、インビボにおいて評価するために、動物モデルは使用されてもよい。任意の好適な動物モデルは利用されてもよく、当該動物モデルには、表２に記載されている動物モデルが含まれるが、これらに限定されない。
【０２３２】
動物系においてナノエマルションワクチンを試験する前に、病原体を不活化するために十分な、ナノエマルションへの病原体の曝露量が調べられる。病原体（例えば細菌の胞子）は、免疫化を可能にするために十分に中和されるために、ナノエマルションによる不活化のためにより長い期間を必要とすることが考えられる。不活化に必要とされる期間は、任意の好適な方法（以下に解説する具体例において記載されている方法が含まれるが、これらに限定されない）を用いて調べられてもよい。
【０２３３】
さらに、エマルション開発されたワクチン（emulsion-developed vaccines）の安定性は、ワクチンの長期にわたる有効性を確保するために、特に長期にわたり保存条件が評価される。また、ワクチンの安定性および免疫原性を向上させることが可能である、他の安定化材料（例えば樹状重合体）の能力はまた、評価される。
【０２３４】
所定のナノエマルション／病原体のワクチンが製剤化されて、結果として病原体の不活化がいったん生じると、免疫応答を引き出し、免疫を付与することが可能であるワクチンの能力は、最適化される。ワクチンの有効性を評価するための方法の非限定的な例は、以下の実施例１４に記載されている。例えば、ワクチンのタイミングおよびワクチンの投与量は、変更されることが可能であり、最も有効な投与量および投与予定が決定され得る。免疫応答のレベルは、血清抗体レベルの測定によって定量化される。さらに、Ｈ３−チミジンの取り込みを測定することによって増殖活性を監視するために、インビトロアッセイが用いられる。増殖に加えて、Ｔｈ１およびＴｈ２のサイトカイン反応（例えば、ＩＬ−２、ＴＮＦ−γ、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、などを含んでいるレベルが挙げられるが、これらに限定されない）は、免疫応答を定量的に評価するために、測定される。
【０２３５】
最後に、動物モデルは、ナノエマルションの粘膜用のワクチンの効果を評価するために、利用される。精製された病原体は、エマルションにおいて混合され（もしくは、エマルションは、感染前の動物と接触させられ）、投与され、免疫応答が測定される。予防のレベルは、その後、特定の病原体を用いた動物の抗原投与、および続く疾患の症状のレベルを調べること、によって評価される。免疫のレベルは、ブースター免疫（booster immunizations）の必要性および間隔を決定するために、長期にわたって測定されてる。
【０２３６】
＜ＩＩＩ．治療薬および予防薬＞
さらに、好ましい実施形態において、本発明のナノエマルションアジュバント組成物は、（例えば対象に投与された場合に）自然免疫応答および適応／獲得免疫応答（例えば、全身性免疫および粘膜免疫の両方）を誘導する。従って、いくつかの好ましい実施形態において、対象への本発明の組成物の投与は、病原体への曝露（例えば、粘膜曝露）に対する防御、という結果を招く。機序の理解は本発明の実施に必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されないが、粘膜投与（例えばワクチン接種）は、病原体感染（例えば、粘膜表面にて起こる）に対する防御をもたらす。分泌性のＩｇＡ反応、および、粘膜表面において進入する病原体に対する防御、を刺激することは、これまで困難であると示されている（例えば、Mestecky et al, Mucosal Immunology.  3ed edn. (Academic Press, San Diego, 2005)を参照のこと）が、本発明は、対象における病原体からの粘膜免疫（例えば、防御的なＩｇＡ反応）を刺激する組成物および方法を提供する。
【０２３７】
いくつかの実施形態において、本発明は、粘膜ワクチンとしての役目を果たすために、組成物（例えば、ＮＥおよび免疫原性タンパク質抗原を有している組成物を提供する。この材料は、ＮＥおよび病原体に由来するタンパク質を用いて容易に生成され得て、粘膜免疫および全身性免疫の両方を誘導する。この製剤を迅速に生成することができる能力、および、粘膜の（例えば鼻または膣の）滴下注入法を介して当該製剤を投与することができる能力は、大規模な投与（例えば、町、村、市、州または国家の集団への）に使用され得るワクチンを提供する。
【０２３８】
いくつかの好ましい実施形態において、本発明は、免疫応答を生じるための組成物を提供し、当該組成物は、ＮＥおよび免疫原（例えば、精製されているか、単離されているか、もしくは合成のタンパク質、またはこれらの誘導体、バリアントもしくは類似物；またはナノエマルションによって不活化されている病原体の１つ以上の血清型）を含んでいる。対象に投与された場合に、本発明の組成物は、対象の内部における免疫原／病原体に対する免疫応答を刺激する。機序の理解は本発明の実施に必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されないが、いくつかの実施形態において、免疫応答の発生（例えば、ナノエマルションおよび免疫原を含んでいる組成物の投与から生じる）は、対象に全体的または部分的な免疫（（例えば、病原体によって引き起こされる）例えば、疾患の徴候、症状または状態からの）をもたらす、自然免疫および／または適応／獲得免疫を、刺激する。任意の特定の理論に縛られることなく、本発明の免疫原性組成物への曝露後における、疾患からの防御および／または免疫（例えば、疾患の徴候、症状または状態を予防するか、もしくは減弱させる（例えば抑制する）ことが可能である、対象の免疫系の能力）は、適応（例えば、獲得）免疫応答（例えば、本発明の免疫原を含んでいるＮＥへの曝露に続く、Ｂ細胞およびＴ細胞によって媒介される免疫応答（例えば、病原体に対して、増強された特異性および反応性を示す免疫応答）に起因している。したがって、いくつかの実施形態において、本発明の組成物および方法は、病原体と関連する徴候、症状または状態を予防するか、もしくは減弱させるために、予防的または治療的に使用される。
【０２３９】
いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントは、単独で投与される。いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントは、他の作用物質（例えば、薬学的に許容可能な担体、他のアジュバント、賦活剤など）の１つ以上を含んでいる。いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントは、液性免疫応答を誘導するように投与される。いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントは、液性応答ではなくむしろ、細胞性（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球）免疫応答を誘導するように投与される。いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントは、細胞性免疫応答および液性免疫応答の両方を誘導する。
【０２４０】
本発明は、（例えば、単独、または免疫原と一緒に）本発明のナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物の特定の製剤によって限定されない。実際、本発明のナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物は、ナノエマルションアジュバントに加えて、１つ以上の異なる作用物質を含んでもよい。これらの作用物質または補助因子には、さらなるアジュバント、界面活性剤、添加剤、緩衝液、可溶化剤、キレーター、油、塩、治療剤、薬物、生理活性物質、抗菌剤、および抗微生物剤（例えば、抗生物質および抗ウイルス剤など）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物は、免疫応答を誘導することができる、ナノエマルションアジュバントの能力を高める作用物質および／または補助因子を含んでいる。いくつかの好ましい実施形態において、１つ以上の補助因子または作用物質の存在により、免疫応答（例えば、防御的な免疫応答（例えば、防御的な免疫法））の誘導に必要とされるナノエマルションアジュバントの量が低減される。いくつかの実施形態において、１つ以上の補助因子または作用物質の存在は、免疫応答を、細胞性（例えばＴ細胞媒介性）免疫応答または液性（例えば抗体媒介性）免疫応答へと傾けるために使用され得る。本発明は、本発明の治療剤に使用される補助因子または作用物質の種類によって限定されない。
【０２４１】
アジュバントは、Vaccine Design--the Subunit and Adjuvant Approach, edited by Powell and Newman, Plenum Press, New York, 1995に一般的に記載されている。本発明は、（例えば、ナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物（例えば、薬学的組成物）における使用のために）利用されるアジュバントの種類によって限定されない。例えば、いくつかの実施形態において、好適なアジュバントには、アルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウムゲル（ａｌｕｍ）またはリン酸アルミニウム）が含まれる。いくつかの実施形態において、アジュバントは、カルシウム、鉄または亜鉛の塩であってもよく、またはアシル化されたチロシン、もしくはアシル化された糖、カチオン性に誘導体化された多糖、もしくはアニオン性に誘導体化された多糖、またはポリホスファゼン、の不溶性の懸濁物であってもよい。
【０２４２】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物（例えば、免疫原を有する組成物、または有さない組成物）は、Ｔｈ１型反応に向けて、誘導するおよび／または傾ける、１つ以上のさらなるアジュバントを含んでいる。
【０２４３】
一般的に、免疫応答は、免疫系の細胞と抗原との相互作用を通じて、抗原に対して生じる。免疫応答は、２つのカテゴリ：液性免疫応答および細胞媒介性免疫応答（例えば、それぞれ、防御における抗体および細胞性のエフェクター機構によって特徴付けられている）に大きく分類されてもよい。反応のこれらのカテゴリは、Ｔｈ１型反応（細胞媒介性反応）およびＴｈ２型免疫応答（液性反応）と名づけられている。
【０２４４】
免疫応答の刺激は、干渉（例えば免疫原への曝露）に対する免疫系の細胞または成分の直接的または間接的な反応を結果として生じ得る。免疫応答は、多くの方法において評価され得る。当該方法には、免疫系の細胞（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、ＡＰＣｓ、マクロファージ、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞など）の活性化、増殖または分化；マーカーおよびサイトカインの発現の上方制御または下方制御；ＩｇＡ力価、ＩｇＭ力価またはＩｇＧ力価の上昇；脾腫（増大した脾臓の細胞質を含む）；種々の臓器における過形成および混合性の細胞浸潤が含まれる。免疫刺激について評価され得る、免疫系の他の反応、細胞および成分は、当該分野において知られている。
【０２４５】
機序の理解は本発明の実施に必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されないが、いくつかの実施形態において、本発明の組成物および方法は、（例えばマクロファージ、樹状細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞による）サイトカインの発現および分泌を誘導する（例えば、実施例８を参照のこと）。特定のサイトカインの発現の調節は局所的または全身性に生じ得る。サイトカインのプロファイルは、免疫応答におけるＴ細胞の調節性機能およびエフェクター機能を決定し得ることが知られている。いくつかの実施形態において、Ｔｈ１型のサイトカインが誘導され得て、したがって本発明の免疫刺激性の組成物は、細胞傷害性Ｔ細胞を含んでいる、Ｔｈ１型の抗原特異的な免疫応答を促進し得る。サイトカインはＴ細胞反応を導く役割を果たす。ヘルパー（ＣＤ４＋）Ｔ細胞は、他の免疫系細胞（Ｂ細胞および他のＴ細胞を含む）に作用する可溶性の因子の産生を通して、哺乳類の免疫応答を組織化している。成熟ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞のほとんどは、２つのサイトカインのプロファイル、Ｔｈ１またはＴｈ２、の一方を発現している。Ｔｈ１型のＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦおよび高レベルのＴＮＦ−αを分泌する。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦおよび低レベルのＴＮＦ−αを発現する。Ｔｈ１型のサイトカインは、細胞媒介性免疫、および液性免疫の両方を促進し、上記液性免疫は、マウスにおけるＩｇＧ２ａおよびヒトにおけるＩｇＧ１についての、免疫グロブリンのクラススイッチングによって特徴付けられている。また、Ｔｈ１反応は遅延型の過敏性および自己免疫疾患と関連してもよい。Ｔｈ２型のサイトカインは、初期の液性免疫を誘導し、ＩｇＧおよびＩｇＥへのクラススイッチングを誘導する。Ｔｈ１反応と関連している抗体のアイソタイプは、一般的に、中和能およびオプソニン化能を有しており、Ｔｈ２反応と関連している抗体はアレルギー反応とより関連している。
【０２４６】
種々の因子は、Ｔｈ１型反応またはＴｈ２型反応のいずれかへ向けて免疫応答を傾けることに影響することが示されている。最もよく特徴づけられている調節因子はサイトカインである。ＩＬ−１２およびＩＦＮ−γは、陽性のＴｈ１調節因子であり、陰性のＴｈ２調節因子である。ＩＬ−１２はＩＦＮ−γ産生を促進し、ＩＦＮ−γはＩＬ−１２に正のフィードバックをもたらす。ＩＬ−４およびＩＬ−１０は、Ｔｈ２サイトカインプロファイルの確立、およびＴｈ１サイトカインの産生の下方制御のために重要であると考えられる。
【０２４７】
したがって、いくつかの好ましい実施形態において、本発明は対象におけるＴｈ１型の免疫応答を刺激する方法を提供する。当該方法は、本明細書で記載されたナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物（例えば、免疫原を有する組成物、または有さない組成物を対象に投与することを包含している。
【０２４８】
Ｔｈ１型の免疫原の種々の他の種類が、例えばアジュバントとして、本発明の組成物および方法において使用され得て、これらとしては、以下のものが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、モノホスホリルリピドＡ（例えば、特に３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ））が使用される。３Ｄ−ＭＰＬは、Ribi Immunochem、Montanaによって製造されている周知のアジュバントである。化学的には、４、５または６位のアシル化された側鎖のいずれかを有している３−デ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡの混合物として、しばしば供給されている。いくつかの実施形態において、ジホスホリルリピドＡおよびそれらの３−Ｏ−脱アシル化バリアントが使用される。これらの免疫原のそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に援用される、独国特許第２１２２２０４号に記載の方法によって精製および調製され得る。他の精製された合成のリポ多糖が記載されている（例えば、米国特許第６，００５，０９９号および欧州特許第０７２９４７３号；Hilgers et al., 1986, Int.Arch.Allergy.Immunol., 79(4):392-6；Hilgers et al., 1987, Immunology, 60(1):141-6；ならびに欧州特許第０５４９０７４号（上記文献のそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に援用される）を参照のこと）。いくつかの実施形態において、３Ｄ−ＭＰＬは、微粒子製剤の形態（例えば直径０．２μｍ未満の小さな粒径を有している）において使用される（参照によってその全体が本明細書に援用される欧州特許第０６８９４５４号に記載されている）。
【０２４９】
いくつかの実施形態において、サポニンが本発明の組成物における免疫原（例えばＴｈ１型のアジュバント）として使用される。サポニンは、良く知られたアジュバントである（例えば、Lacaille-Dubois and Wagner (1996) Phytomedicine vol 2 pp 363-386を参照のこと）。例示的なサポニンには、Ｑｕｉｌ  Ａ（南アメリカの樹木Ｑｕｉｌｌａｊａ  Ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの樹皮に由来する）およびそれらの断片が含まれる（例えば、米国特許第５，０５７，５４０号；Kensil, Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2):1-55；および欧州特許第０３６２２７９号（上記文献のそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に援用される）を参照のこと）。また、本発明において有用であると考えられるのは、溶血性のサポニンＱＳ７、ＱＳ１７およびＱＳ２１（Ｑｕｉｌ  ＡのＨＰＬＣ精製された画分）である（例えば、Kensil et al. (1991). J. Immunology 146,431-437、米国特許第５，０５７，５４０号、国際公開第９６／３３７３９号、国際公開第９６／１１７１１号および欧州特許第０３６２２７９号（上記文献のそれぞれは、参照によってその全体が本明細書に援用される）を参照のこと）を参照のこと）。また、有用であると考えられるのは、ＱＳ２１とポリソルベートまたはシクロデキストリンとの組合せである（例えば、参照によってその全体が本明細書に援用される国際公開第９９／１０００８号を参照のこと）。
【０２５０】
いくつかの実施形態において、非メチル化のＣｐＧジヌクレオチド（「ＣｐＧ」）を含んでいる免疫原性のオリゴヌクレオチドが本発明におけるアジュバントとして使用される。ＣｐＧは、ＤＮＡに存在するシトシン−グアノシンジヌクレオチドモチーフの略語である。ＣｐＧは、全身性経路および粘膜経路の両方によって投与された場合に、アジュバントと同様であることが、当該技術分野において知られている（例えば、参照によってそれらの全体が本明細書に援用される、国際公開第９６／０２５５５号、欧州特許第４６８５２０号、Davis et al., J.Immunol, 1998, 160(2):870-876、McCluskie and Davis, J.Immunol., 1998, 161(9):4463-6、および米国特許出願公開第２００５０２３８６６０号を参照のこと）。例えば、いくつかの実施形態において、免疫刺激性の配列はプリン−プリン−Ｃ−Ｇ−ピリミジン−ピリミンジンであり、ここでＣＧモチーフはメチル化されていない。
【０２５１】
機序の理解は本発明を実施するために必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されない。しかし、いくつかの実施形態において、１つ以上のＣｐＧオリゴヌクレオチドの存在によって、ナチュラルキラー細胞（上記細胞はＩＦＮ−γを産生する）およびマクロファージを含む、種々の免疫サブセットが活性化される。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、免疫応答を誘導するための本発明の組成物に製剤化される。いくつかの実施形態において、ＣｐＧの自由溶液は、抗原と同時投与される（例えば、ＮＥ溶液中に存在する（例えば、ＷＯ９６／０２５５５を参照のこと。参照によって本明細書に援用される））。いくつかの実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、抗原に対して共有結合されている（例えば、ＷＯ９８／１６２４７を参照のこと。参照によって本明細書に援用される）。あるいは、上記実施形態において、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、水酸化アルミニウムなどの担体とともに製剤化される（例えば、Brazolot-Millan et al., Proc.Natl.AcadSci., USA, 1998, 95(26), 15553-8を参照のこと）。
【０２５２】
いくつかの実施形態において、アジュバント（完全フロイントアジュバントおよび不完全フロイントアジュバントなど）、サイトカイン（例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４など）、マクロファージコロニー刺激因子、腫瘍壊死因子など）、バクテリア性ＡＤＰリボシル化毒素のデオキシ化変異体（コレラ毒素（ＣＴ）、百日咳毒素（ＰＴ）またはＥ．Ｃｏｌｉ熱不安定性毒素（ＬＴ）（特にＬＴ−Ｋ６３（野生型のアミノ酸の６３位が、リジンに置換されている）、ＬＴ−Ｒ７２（野生型のアミノ酸の７２位が、アルギニンに置換されている）、ＣＴ−Ｓ１０９（野生型のアミノ酸の１０９位が、セリンに置換されている）およびＰＫ−Ｋ９／Ｇ１２９（野生型アミノ酸の９位がリジンに置換されており、１２９位がグリシンに置換されている））など（例えば、ＷＯ９３／１３２０２およびＷＯ９２／１９２６５を参照のこと。それぞれの文献は、参照によって本明細書に援用される））、および他の免疫原性物質（例えば、本発明の組成物の効果を促進する免疫原性物質）は、本発明のＮＥおよび免疫原を含んでいる組成物とともに用いられる。
【０２５３】
本発明において用いられるアジュバントのさらなる例には、ポリ（ジ（カルボキシラートフェノキシ）ホスファゼン（ＰＣＰＰポリマー；Virus Research Institute, USA）、リポ多糖類の誘導体（モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ；Ribi ImmunoChem Research, Inc., Hamilton, Mont.）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ；Ribi）およびスレオニル−ムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ；Ribi）など）、ＯＭ−１７４（グルコサミンジサッカリド類に関連しているリピドＡ；OM Pharma SA, Meyrin, Switzerland）、およびリーシュマニア伸長因子（精製されているリーシュマニアタンパク質；Corixa Corporation, Seattle, Wash.）が包含されている。
【０２５４】
アジュバントは、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物に加えられてもよい。あるいは、上記アジュバントは、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物との組み合わせまたは同時投与に先立って、担体（例えば、リポソームまたは金属塩（例えばアルミニウム塩（例えば水酸化アルミニウム）））とともに製剤化されてもよい。
【０２５５】
いくつかの実施形態において、ナノエマルジョンアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、１つのさらなるアジュバントを含んでいる。他の実施形態において、ナノエマルジョンアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、２つ以上のさらなるアジュバントを含んでいる（例えば、ＷＯ９４／００１５３、ＷＯ９５／１７２１０、ＷＯ９６／３３７３９、ＷＯ９８／５６４１４、ＷＯ９９／１２５６５、ＷＯ９９／１１２４１およびＷＯ９４／００１５３を参照のこと。それぞれの文献は、その全体が参照によって本明細書に援用される）。
【０２５６】
いくつかの実施形態において、本明細書に説明されている、本発明のＮＥアジュバントを含んでいる組成物（例えば、免疫原を含んでいる組成物または含んでいない組成物）は、１つ以上の粘膜接着剤（例えば、米国特許出願第２００５０２８１８４３を参照のこと。その全体が参照によって本明細書に援用される）を含んでいる。本発明は、利用されている粘膜接着剤の種類によって限定されない。実際には、種々の粘膜接着剤が本発明において有用であると考えられている。上記粘膜接着剤には、ポリ（アクリル酸）の架橋誘導体（例えば、カルボポールおよびポリカルボフィル）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖類（例えば、アルギナートおよびキトサン）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、レクチン、線毛タンパク質およびカルボキシメチルセルロースが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、上記ＮＥアジュバントの１つ以上の成分は、粘膜接着剤として機能する（例えば、単独、または、上記ＮＥアジュバントの他の成分との組み合わせで）。機序の理解は本発明を実施するために必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されない。しかし、いくつかの実施形態において、粘膜接着剤の使用（例えば、ＮＥおよび免疫原を含んでいる組成物における）は、対象（例えば、本発明の組成物を投与される対象）における免疫応答（例えば、先天性免疫応答および／または獲得性免疫応答）の誘導を促進する。これは、粘膜接着剤が用いられないときの免疫原への曝露期間および／または曝露量と比較した、粘膜接着剤が用いられるときに対象が受けるＮＥアジュバントおよび／または免疫原への曝露期間および／または曝露量の増加のためである。
【０２５７】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、滅菌した水性調製物を含んでいてもよい。許容可能な担体および溶媒には、水、リンゲル液、リン酸緩衝塩類溶液、および等張塩化ナトリウム溶液が含まれるが、これらに限定されない。さらに、滅菌した不揮発性油が、溶媒または懸濁媒として、従来採用されている。上記の目的のために、任意の無刺激性の不揮発性鉱物油または不揮発性非鉱物油を採用してよい。このような油には、合成モノ（またはジ）グリセリド(synthetic mono-ordi-glycerides)が含まれる。さらに、脂肪酸（オレイン酸など）は、注射可能医薬品の調製に用いられる。粘膜経路、皮下経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路または他の経路を介した投与に適した担体の製剤化は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa.に見ることができる。
【０２５８】
本発明のナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、治療的に（例えば、免疫応答を促進するために）用いることができ、あるいは予防薬として（例えば、免疫化（例えば、疾患の徴候または症状を予防すること）のために）用いることができる。本発明のナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、多くの異なる送達経路および方法を介して、対象に対して投与することができる。
【０２５９】
例えば、本発明の組成物は、多くの方法によって、対象に対して投与する（例えば粘膜（例えば、鼻粘膜、膣粘膜など）的に）ことができる。上記方法は、溶液中に懸濁し、表面に塗布すること；溶液中に懸濁し、噴霧器を用いて表面に噴霧すること；粘膜接着剤と混合し、表面（例えば粘膜表面）に塗布する（例えば、噴霧するもしくは薄く塗る）こと；鼻用塗布具および／または膣用塗布具に載置しもしくは含浸させ、塗布すること；放出制御機構によって塗布すること；リポソームとして塗布すること；または、ポリマーに塗布することを含むが、これらに限定されない。
【０２６０】
いくつかの好ましい実施形態において、本発明の組成物は、粘膜投与される（例えば、標準的な技法を用いて。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 19th edition, 1995（例えば、粘膜送達技法（鼻腔粘膜、肺粘膜、膣粘膜、直腸粘膜についての技法を含む）について）、ならびに、欧州特許公開第５１７，５６５号およびIllum et al., J. Controlled Rel., 1994, 29:133-141（例えば、鼻腔内投与の技法について）を参照のこと。それぞれの文献は、その全体が参照によって本明細書に援用される）。あるいは、本発明の組成物は、標準的な技法を用いて、皮膚投与または経皮投与してもよい（例えば、Remington: The Science arid Practice of Pharmacy, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 19th edition, 1995を参照のこと）。本発明は、投与経路によって限定されない。
【０２６１】
いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、疾患が疑われる対象または疾患に罹患している対象を、本発明の組成物の粘膜経路（例えば、口腔／消化管内経路および／または鼻腔内経路）を介する投与によって、防御または治療するために用いてもよい。他の粘膜経路には、膣内経路および直腸内経路が含まれる。本発明の好ましい実施形態において、鼻腔内経路の投与が用いられる（本明細書では「鼻腔内投与」または「鼻腔内ワクチン接種」と呼ぶ）。鼻腔内ワクチン接種の方法は、当該技術分野において広く知られている。上記方法には、免疫化されるべき対象の咽頭鼻部内への、液滴状または噴霧状のワクチンの投与が含まれる。いくつかの実施形態において、霧化またはエアロゾル化されている、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物が提供される。経口投与用の腸溶性製剤（胃耐性カプセルなど）、直腸内投与または膣内投与用の坐剤もまた、本発明の一部を形成している。本発明の組成物はまた、経口経路を介して投与されてもよい。このような状況においては、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤、および／またはアルカリ性緩衝液もしくは腸溶性カプセルを含んでいてもよい。鼻腔内送達用の製剤は、デキストランまたはシクロデキストランならびにサポニンを、アジュバントとしてともに含んでいてもよい。
【０２６２】
本発明の組成物はまた、膣内経路を介して投与されてもよい。このような場合、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、薬学的に許容可能な賦形剤および／または乳化剤、ポリマー（例えばカルボポール）、ならびに他の公知の膣用クリームおよび坐剤の安定剤を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、直腸内経路を介して投与されてもよい。このような場合、ＮＥおよび免疫原を含んでいる組成物は、直腸用坐剤を製剤化するための技術分野において公知の賦形剤および／または蝋、ならびにポリマーを含んでいてもよい。
【０２６３】
いくつかの実施形態において、ワクチン接種のプライミングおよびブースティングの両方のために、同じ投与経路（例えば粘膜投与）が選択される。いくつかの実施形態において、免疫応答を刺激するために、（例えば、同時に、もしくはその代わりに、連続的に）複数の投与経路が用いられる（例えば、本発明のナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物を用いて）。
【０２６４】
例えば、いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、ワクチン接種計画のプライミングまたはブースティングのいずれかにおいて、対象の粘膜表面に対して投与される。あるいは、いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、ワクチン接種計画のプライミングまたはブースティングのいずれかにおいて、全身投与される。いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、ワクチン接種計画のプライミングにおいては粘膜投与を通じて対象に対して投与され、ワクチン接種計画のブースティングにおいては全身投与を通じて対象に対して投与される。いくつかの実施形態において、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物は、ワクチン接種計画のプライミングにおいては全身投与を通じて対象に対して投与され、ワクチン接種計画のブースティングにおいては粘膜投与を通じて対象に対して投与される。全身投与経路の例には、非経口投与、筋肉内投与、皮内投与、経皮投与、皮下投与、腹腔内投与または静脈内投与が含まれるが、これらに限定されない。ＮＥおよび免疫原を含んでいる組成物は、予防目的および治療目的の両方のために用いられてもよい。
【０２６５】
したがって、いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物は、粘膜経路、筋肉内経路、腹腔内経路、皮内経路、経皮経路、肺経路、静脈内経路、皮下経路、または本明細書に説明されている他の投与経路によってナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物を投与することにより、疾患が疑われる（または疾患に罹患している）対象を防御および／または処置するために用いられうる。アジュバント調製物の全身投与の方法には、従来のシリンジおよび針、または固体ワクチンの弾道送達のために設計されている装置（例えば、ＷＯ９９／２７９６１を参照のこと。参照によって本明細書に援用される）、または無針型圧力液体噴射装置（例えば、米国特許第４，５９６，５５６号、米国特許第５，９９３，４１２号を参照のこと。それぞれの文献は参照によって本明細書に援用される）、または経皮パッチ（例えば、ＷＯ９７／４８４４０、ＷＯ９８／２８０３７を参照のこと。それぞれの文献は参照によって本明細書に援用される）が含まれうる。本発明はまた、皮膚に塗布されている抗原の免疫原性を促進するために用いられてもよい（経皮送達または経皮送達(transdermal or transcutaneous delivery)。例えば、ＷＯ９８／２０７３４、ＷＯ９８／２８０３７を参照のこと。それぞれの文献は参照によって本明細書に援用される）。したがって、いくつかの実施形態において、本発明は、全身投与のための送達装置を提供する。上記送達装置には、本発明のアジュバント組成物が予め充填されている。
【０２６６】
いくつかの実施形態において、それぞれの投与量（例えば、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物の（例えば免疫応答（例えば、防御的な免疫応答（例えば防御免疫））を誘導するために、対象に対して投与される））には、０．０５〜５０００μｇそれぞれの免疫原（例えば、組換えおよび／または精製タンパク質）が含まれていることが予期される。いくつかの実施形態において、それぞれの投与量には、１〜５００μｇの免疫原（例えば、組換えおよび／または精製タンパク質）が含まれ；いくつかの実施形態において、それぞれの投与量には３５０〜７５０μｇの免疫原が含まれ；いくつかの実施形態において、それぞれの投与量には５０〜２００μｇの免疫原が含まれ；いくつかの実施形態において、それぞれの投与量には２５〜７５μｇの免疫原が含まれる、ことが予期される。いくつかの実施形態において、それぞれの投与量には、免疫応答を生じさせるために充分な量の上記免疫原が含まれている。対象に投与されたとき、その量の免疫原によって上記対象における免疫応答が生じるかぎり、投与量における上記免疫原の効果的な量は、数値化される必要がない。具体的な投与のための（例えば免疫応答（例えば、防御的な免疫応答（例えば防御免疫））を誘導するための）最適な量は、対象における抗体価および他の反応の観測を含んでいる標準的な研究を行うことで、当業者により確定されうる。
【０２６７】
いくつかの実施形態において、それぞれの投与量（例えば、ナノエマルションアジュバントおよび免疫原を含んでいる組成物の（例えば、免疫応答を誘導およびするために(to induce and immune response)対象に投与される））は、０．００１〜１５重量％またはそれ以上（例えば、０．００１〜１０重量％、０．５〜５重量％、１〜３重量％、２重量％、６重量％、１０重量％、１５重量％またはそれ以上）の免疫原（例えば、不活化されている細菌もしくはウイルス、または、組換えおよび／または精製タンパク質）であることが期待される。いくつかの実施形態において、最初の投与またはプライミング投与の投与量には、続くブースター投与よりも多くの免疫原が含まれている。
【０２６８】
いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物は、対象への投与に先立って希釈できる、濃縮投与量で製剤化される。例えば、濃縮組成物の希釈物は、本明細書に記載されている１つ以上の何らかの特定の投与量を対象が受けるように、上記対象に対して投与されてもよい。いくつかの実施形態において、濃縮組成物の希釈物は、上記濃縮組成物に存在するナノエマルションアジュバントの約０．１〜５０％を含んでいる組成物が、対象に投与される（例えば、１回の投与量において）ように調製されてもよい。いくつかの好ましい実施形態において、対象は、上記濃縮組成物中に存在するＮＥおよび免疫原の１％を含んでいる組成物を、１回の投与量で投与される。濃縮組成物は、多数の対象が本発明の組成物を投与されうる状況（例えば、予防接種所(immunization clinic)、病院、学校など）において、有用であると考えられる。いくつかの実施形態において、本発明のナノエマルションアジュバントを含んでいる組成物（例えば、濃縮組成物）は、室温にて、１週間以上安定であり；いくつかの実施形態において、２週間以上安定であり；いくつかの実施形態において、３週間以上安定であり；いくつかの実施形態において、４週間以上安定であり；いくつかの実施形態において、５週間以上安定であり；いくつかの実施形態において、６週間以上安定である。
【０２６９】
一般的に、本発明のエマルション組成物は、少なくとも０．００１％〜１００％、好ましくは０．０１〜９０％のエマルションを、液体組成物１ｍＬ当たり含む。上記製剤は、約０．００１％、約０．００２５％、約０．００５％、約０．００７５％、約０．０１％、約０．０２５％、約０．０５％、約０．０７５％、約０．１％、約０．２５％、約０．５％、約１．０％、約２．５％、約５％、約７．５％、約１０％、約１２．５％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％または約１００％のエマルションを、液体組成物１ｍＬあたり含みうることが予想される。上記に列挙されている任意の２つの数の間の範囲は、特に本発明の範囲内に含まれると考えられる、と理解されるべきである。投与量における若干の変更は、特定の病原体の状態および免疫化される対象の状態に応じて、必然的に発生する。
【０２７０】
いくつかの実施形態において、本発明の組成物の最初の投与（例えば、最初のワクチン接種）の後、１回目、２回目、３回目、４回目、５回目、６回目、７回目、８回目、９回目、１０回目および／または１０回目以上の投与に続いて、対象は、１回以上のブースター投与を受けてもよい（例えば、約２週間後、約３週間後、約４週間後、約５週間後、約６週間後、約７週間後、約８週間後、約１０週間後、約３箇月後、約４箇月後、約６箇月後、約９箇月後、約１年後、約２年後、約３年後、約５年後、約１０年後に）。機序の理解は本発明を実施するために必須ではなく、本発明は任意の特定の作用機序に限定されない。しかし、いくつかの実施形態において、ブースター投与における免疫原の再導入によって、対象における全身性免疫を強化できる。ブースターは、最初の免疫応答のために与えられた同じ製剤で行ってもよいし、上記免疫原を含んでいる別の製剤で行ってもよい。投与計画はまた、少なくとも一部において、上記対象の必要によって決定され、かつ実務家の判断に応じて決定される。
【０２７１】
投与単位は、いくつかの因子に基づいて、比例的に増減しうる。上記因子には、上記対象の体重、年齢、健康状態が含まれるが、これらに限定されない。さらに投与単位は、続く投与（例えば、ブースター投与）の間、増減しうる。
【０２７２】
本発明の免疫原を含んでいる組成物は、感染性および／または疾患の原因となる物質の性質が知られている場合（例えば、防御免疫を引き出そうとするために）にも、感染性および／または疾患の原因となる物質の性質が知られていない場合（例えば新興疾患（例えば、パンデミック規模の（例えば、インフルエンザまたは他の疾患の爆発的流行））において）にも、用いられる。例えば、まだ同定されていない（例えば、疾患に罹患している者から単離および／または培養されているが、感染性および／または疾患の原因となる物質の遺伝的、生化学的または他の特性が不明である）新興の感染性および／または疾患の原因となる物質に関連している感染の、処置または予防における本発明の組成物の使用を、本発明は意図している。
【０２７３】
〔実施例〕
以下の実施例は、本発明の好ましい一部の実施形態および態様を例示する役割を果たしており、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【０２７４】
［実施例１］
Ｔｈ２免疫応答は、ＩｇＥ抗体の産生および高レベルのＴｈ２サイトカインによって特徴づけられ、いくつかの病原体、ならびにがん、大腸炎、喘息およびアレルギーに対する不適当な防御に関連している。最も広くに用いられているワクチンアジュバントは、Ｔｈ２反応を一般に誘導する。Ｔｈ２からＴｈ１に免疫応答を変化させるために試みられている免疫療法は、長期の投与／免疫化プロトコルを一般に要し、持続するＴｈ１反応を誘導しない。そこで、Ｔｈ２に傾いている現状の免疫応答（例えば、アレルギー、炎症性疾患、および他のＴｈ２媒介性疾患との関連における）を調節し、かつ均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ１７／Ｔｈ２プロファイルに向かって変化させる、および／または傾ける（例えば、Ｔｈ２媒介性疾患に関連している徴候、症状または病的な状態を緩和または消失させるために）、種々のナノエマルションアジュバントの能力を評価するために、本発明の実施形態の開発の間に複数の実験を実施した。
【０２７５】
いくつかの異なる動物モデルを分析した。１つのモデルにおいて、免疫化予定を、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に対するＴｈ２に傾いている免疫応答を誘導するために立てた。上記免疫化予定を、図１に示す。マウスを、図１に示されているように筋肉内（ＩＭ）または鼻腔内（ＩＮ）への、水酸化アルミニウム（Ａｌｕｍ）に吸収されているか、または２０％のナノエマルション（ＮＥ）において製剤化されている２０μｇのＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）を用いて免疫化した。利用したＮＥ（Ｗ８０５ＥＣ、本明細書に記載されている）は、油、水、エタノール、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ）８０および塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）を含んでいた。Ａｌｕｍ免疫増強されたワクチンは、ＩＭ投与され、ＮＥを基にしたワクチンは、ＩＮ投与された。血清ＩｇＧサブクラスの力価を、ＨＢｓＡｇ特異的なＥＬＩＳＡによって、屠殺のときに測定した。
【０２７６】
図２および図３に示されているように、Ａｌｕｍ免疫増強されたワクチンのＩＭ投与は、強いＴｈ２サイトカイン発現、およびＩｇＧ１抗体の旺盛な発現を誘導した。ＮＥを基にしたワクチンのＩＮ投与は、Ｔｈ１サイトカイン発現の強発現、ならびにＩｇＧ２ａ抗体およびＩｇＧ２ｂ抗体の顕著な発現によって特徴づけられるＴｈ１型免疫応答を、誘導した。
【０２７７】
しかし、図１に示されているように、マウスが、Ｔｈ２免疫応答を確立するために０日目および１週間目にａｌｕｍ免疫増強されたＨＢｓＡｇを投与されるが、続いて７週間目に、ＮＥを基にしたワクチンを投与される場合、ＮＥを基にしたワクチンは、Ｔｈ２に極性化されている、確立された免疫応答を、Ｔｈ１免疫応答に向かってふたたび方向づけ、均衡のとれている免疫応答（図２および３を参照）を生じた。したがって、ａｌｕｍ免疫増強されたＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）を用いた筋肉内の免疫化によって確立されたＴｈ２免疫応答を、ＮＥ−ＨＢｓを用いた続く単回のＩＮ免疫化によって調節でき、促されたＴｈ１関連免疫応答（ＩＦＮ−ガンマ、ＴＮＦ−アルファ、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）およびＩＬ−１７と同時に、抑えられたＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４およびＩＬ−５）およびＩｇＧ１を生じた。
【０２７８】
［実施例２］
ＮＥを基にしたワクチンが、上記ａｌｕｍ免疫増強されたＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓ）を用いた筋肉内の免疫化によって確立されたＴｈ２免疫応答を調節する能力を示したので、ＮＥを基にしたワクチンがまた、アレルギー性疾患（例えば、アレルギー性の過剰反応性／過敏症）に関連する旺盛なＴｈ２媒介性免疫応答を調節し得るか否かを決定するために、本発明の実施形態の開発の間に、さらなる複数の実験を実施した。
【０２７９】
オボアルブミンに対するアレルギー性の過敏症のマウスモデルを用いた。マウスを、図４に示されているように、水酸化アルミニウム（ａｌｕｍ）に吸収されているか、または２０％のＷ８０５ＥＣナノエマルション（ＮＥ）において製剤化されている２０μｇのオボアルブミン（ｏｖａ）を用いて、免疫化した。Ａｌｕｍ免疫増強されたワクチンをＩＰ投与し、ＮＥを基にしたワクチンをＩＮ投与した。血清ＩｇＧサブクラスを説明するための変化、ＩｇＥおよびＩｇＡの力価ならびに気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）におけるＩｇＡを、ｏｖａに特異的なＥＬＩＳＡによって測定した。
【０２８０】
図５、図６および図７に示されているように、Ａｌｕｍ免疫増強されたＯＶＡワクチンのＩＰ投与は、強いＴｈ２サイトカイン発現およびＩｇＧ１抗体の旺盛な発現を誘導した。ＮＥを基にしたワクチンのＩＮ投与は、Ｔｈ１サイトカインの強発現、ならびにＩｇＧ２ａ抗体、ＩｇＧ２ｂ抗体およびＩｇＥ抗体の顕著な発現に特徴づけられる、均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２型免疫応答を、誘導した。
【０２８１】
しかし、マウスが、Ｔｈ２免疫応答を確立するためにａｌｕｍ免疫増強されたＯＶＡを投与されるが、続いてＮＥを基にしたワクチンを投与される場合、ＮＥを基にしたワクチンは、Ｔｈ２に極性化されている、確立された免疫応答を、Ｔｈ１に向けてはっきりと調節し、均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２免疫応答を生じた（図５および図６を参照）。アレルギー性疾患に関連する旺盛なＴｈ２免疫応答を変化させる、ＮＥを基にしたワクチンの能力は、そうすることを試みている文献に記載されている他の試験が失敗しているので、意外であった。これまでのところ、ＯＶＡアレルギーモデルを用いて蓄積されているデータは、疾患に関連するＴｈ２応答（Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３）およびＩｇＧ１の旺盛な発現によって特徴づけられる）から遠ざけて、均衡のとれているＴｈ１／Ｔｈ２応答（抑えられたＩｇＥおよびＴｈ２応答、ならびに促されたＩＦＮ−ガンマ、ＴＮＦ−アルファ、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＡ、ＩＬ−１０およびＩＬ−１７によって特徴づけられる）に向けて、アレルギー性の応答を調節する、ＮＥを基にしたワクチンを用いたＩＮ免疫化の能力を、明らかに示している。
【０２８２】
アレルギー性の応答の発生に対する防御を決定するために、マウスを、ＯＶＡを用いた吸入誘発試験に供した。肺組織の組織病理学的分析を、炎症および粘液産生を評価するために使用した（図８および図９を参照）。肺切片のヘマトキシリンおよびエオシン染色は、ＩＰの、Ａｌｕｍ免疫増強されたＯＶＡを用いて感作されているマウスの肺における塊状の単核細胞の炎症を明らかにし、この炎症は、治療的なＮＥ−ＯＶＡワクチンを受けたマウスにおいて、大きく抑えられた。図９に示されているように、肺切片の過ヨウ素酸Schiff染色によって評価されていたときの、ＮＥワクチンによる粘液産生の類似の抑制があった。治療的なＮＥワクチンを受けているマウスは、重篤度、および粘液を産生している気道の百分率の両方における顕著な低下を有していた。これらのデータは、ＩＮの、ＮＥを基にしたワクチンを用いた治療的な免疫化が、ＯＶＡアレルゲンに対する曝露によるアレルギー性の応答の発生から、感作されているマウスを防御することを、明らかに証明している。
【０２８３】
以上の記載に述べられている全ての刊行物および特許は、参照によって本明細書に援用される。説明されている本発明の組成物および方法の、種々の変更および変形は、本発明の範囲および特質から逸脱することなく、当業者にとって明らかである。本発明は、好ましい特定の実施形態に関して説明されているが、請求されている通りの発明は、そのような特定の実施形態に不当に限定されるべきではないことが、理解されるべきである。実際に、関連する技術分野における当業者にとって自明な、本発明を実施するための、説明されている形態の種々の変更は、本発明の本発明の範囲内にあると意図される。
【図面の簡単な説明】
【０２８４】
【図１】Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に向けられた、Ｔｈ２に極性化した免疫応答を誘導するため、およびＮＥによって免疫増強されたＨＢｓＡｇワクチンを用いた、確立されたその免疫応答を調節するために立てた免疫化予定を示す。
【図２】ＮＥを基にしたワクチンを用いて得られた、血清抗体反応の変化を示す。
【図３】ＮＥアジュバントを用いた鼻腔内免疫化がＴｈ１型サイトカインの産生を増加させたことを示す。
【図４】Ｔｈ２媒介性疾患のオボアルブミンアレルギーモデルの本発明の実施形態の開発の間に実施された複数の実験にわたって立てた免疫化予定を示す。
【図５】Ｔｈ２媒介性疾患のオボアルブミンアレルギーモデルにおける、ＮＥを基にしたワクチンを用いた血清抗体応答の変化を示す。
【図６】ＮＥを基にしたワクチンを用いた鼻腔内免疫化が、Ｔｈ２サイトカインを分泌しているリンパ球の数を減少させ、かつＴｈ１細胞およびＴｈ１７細胞を増加させたことを示す。
【図７】Ａｌｕｍによって免疫増強されたＯＶＡワクチンのＩＰ投与が、強いＴｈ２サイトカイン発現、およびＩｇＧ１抗体の旺盛な発現を誘導したことを示す。
【図８】治療的なＮＥ−ＯＶＡワクチンを受けているマウスにおける炎症の予防を示す。
【図９】治療的なＮＥ−ＯＶＡワクチンを受けているマウスにおける粘膜生成の防止を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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