(57)【要約】  本開示は、硫酸塩還元微生物のコロニーを計数するための、培養デバイスを提供する。このデバイスは、防水性基部と、この基部に取り付けられた防水性カバーシートと、それらの間に配置された増殖コンパートメントとを有する、本体部を含む。増殖コンパートメントは、周辺部及び開口部を有する。周辺部の一部分は、防水シールによって画定される。この部分は、周辺部の＞５０％を含み得る。増殖コンパートメント内には、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択された乾燥培地、若しくは硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬、及び乾燥した第１の酸素消去試薬が配置される。【選択図】図２Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
防水性基部、前記基部に取り付けられた防水性カバーシート、及び前記基部と前記カバーシートの間に配置された増殖コンパートメントを含む本体部であって、前記増殖コンパートメントが、周辺部と、前記増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部と、を有し、前記周辺部の一部分が防水シールによって画定され、前記部分が前記周辺部の＞５０％を含む、本体部と、
前記増殖コンパートメント内で前記基部に付着された、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤と、
硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬であって、前記増殖コンパートメント内に配置された指示試薬と、
前記増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第１の酸素消去試薬と、を備える、デバイス。
【請求項２】
前記増殖コンパートメント内に配置された乾燥培地を更に備え、
前記培地が、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択される、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
前記増殖コンパートメント内に配置された、有効量の乾燥した還元剤を更に備える、請求項１又は２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記第１の酸素消去試薬が前記基部に付着される、請求項１〜３のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項５】
生存可能微生物の存在を検出するための指示試薬を更に備え、
前記指示試薬が前記増殖コンパートメント内に配置される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項６】
前記増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第２の酸素消去試薬を更に備える、請求項１〜５のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項７】
前記指示試薬が、前記第１の酸素消去試薬又は第２の酸素消去試薬である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項８】
前記第１の酸素消去試薬、第２の酸素消去試薬、還元試薬、栄養素、指示試薬、及び前述の成分のうちの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される第１の乾燥成分が、前記基部に付着される、請求項１〜７のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項９】
前記第１の酸素消去試薬、第２の酸素消去試薬、還元試薬、栄養素、指示試薬、及び前述の成分のうちの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される第２の乾燥成分が、前記カバーシートに付着される、請求項１〜８のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記カバーシートが、前記増殖コンパートメントの少なくとも一部分内で前記カバーシート上に配置された第３の接着剤層を備え、
前記第２の乾燥成分が、前記増殖コンパートメント内で前記第３の接着剤層に付着される、請求項９に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記基部が、前記開口部の近位に第１のタブを更に備え、
前記第１のタブが、前記第１のタブに付着された第１の封鎖接着剤を備える、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１２】
前記冷水可溶性ゲル化剤が、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、キサンタンガム、グアーガム、ローカストビーンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１３】
前記第１の酸素消去試薬が、硫酸第二鉄アンモニウム、塩化第二鉄、第二鉄塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩からなる群から選択される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１４】
前記還元剤が、ジチオスレイトール、ジチオエリトリトール、チオグリコール酸の塩、及び前述の任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、請求項３に記載のデバイス。
【請求項１５】
前記防水シールが接着剤を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のデバイス。
【請求項１６】
デバイスであって、防水性基部と前記基部に取り付けられた防水性カバーシートの間に配置された増殖コンパートメントを含む本体部であって、前記増殖コンパートメントが、周辺部と、前記増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部と、を有し、前記周辺部の一部分が防水シールによって画定されており、前記部分が前記周辺部の＞５０％を含む、本体部と、前記増殖コンパートメント内で前記基部に付着された、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤と、前記増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第１の酸素消去試薬と、を備える、デバイスの増殖コンパートメント内に試料を堆積させることと、
硫酸塩還元微生物の増殖を促進する温度で前記デバイスをインキュベートすることと、
前記増殖コンパートメント内の前記硫酸塩還元微生物のコロニーの兆候を検出することと、を含む、方法。
【請求項１７】
前記増殖コンパートメント内に前記試料を堆積させる前に、前記増殖コンパートメントが、乾燥培地を含み、前記培地が、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記増殖コンパートメント内に前記試料を堆積させることが、前記増殖コンパートメント内に水性液体を堆積させることを更に含む、請求項１６又は１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記方法が、前記開口部を封止することを更に含む、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記デバイスをインキュベートすることが、７日間以下の期間にわたって前記デバイスをインキュベートすることを含む、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１４年８月２０日に出願された米国特許仮出願第６２／０３９，６３８号、及び２０１５年７月１日に出願された同第６２／１８７，２９３号に基づく優先権を主張するものであり、これらの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０００２】
［背景］
硫酸塩還元菌（ＳＲＢ）は、海水中、腐敗性有機物を含有する地表水中、並びに、海洋環境及び淡水環境内で見出される堆積物中に偏在している。ＳＲＢは、一般に嫌気性環境中で見出されるが、少なくとも一部のＳＲＢは、少なくとも低レベルの酸素を有する環境に耐え、その環境中で繁殖し得ることが報告されている。
【０００３】
ＳＲＢは、有機化合物又は分子水素を酸化させることによって、エネルギーを得る。それらの細菌は、硫酸塩を電子受容体として使用することにより、硫化水素（Ｈ２Ｓ）を産生する。硫化水素の産生は、金属（例えば、パイプの製造に使用されている金属）の腐食に寄与し得る。この腐食は、金属の崩壊をもたらし得るものであり、最終的には、金属パイプの補修管理の増大、若しくは機能不全をもたらし得る。生物起源硫化物はまた、コンクリートなどの他の材料の腐食も引き起こし得る。
【０００４】
硫酸塩還元菌を検出及び計数するための方法は、典型的には、嫌気性培地の調製、及び／又は、その培地の嫌気性雰囲気中でのインキュベーションを含む。近年では、ＳＲＢを検出するために、核酸増幅技術が使用されている。
【０００５】
ＳＲＢを培養するための簡易な方法の開発が試みられてきたが、ＳＲＢの計数に関する方法を改善する必要性が、依然として残されている。
【０００６】
［概要］
全般的に、本開示は、試料中の硫酸塩還元微生物の検出、及び任意選択的に、その計数に関する。特に、本開示は、好気性雰囲気中でＳＲＢを培養するためのデバイス、及びそのデバイスの使用方法に関する。ＳＲＢの増殖及び検出は、内蔵型の、修正環境生成培養デバイスを使用して遂行することできる。この修正環境生成デバイスは、ＳＲＢの増殖を促進する嫌気性の水性増殖培地を作り出すために、所定の体積の水性液体で活性化される。
【０００７】
本明細書に開示される本発明の培養デバイス及び方法は、酸素含有（例えば、通常の大気酸素含有）環境内で微生物をインキュベートする場合であっても、硫酸塩還元微生物の増殖、検出、及び鑑別を提供するものである。有利には、このことにより、硫酸塩還元微生物を培養するために典型的に必要とされる、特殊なインキュベーション設備及び試薬（例えば、嫌気ジャー、使い捨て嫌気菌用袋、パラジウム触媒、嫌気性グローブボックス）が不要となる。
【０００８】
一態様では、本開示は、硫酸塩還元微生物のコロニーを計数するための、培養デバイスを提供する。このデバイスは、防水性基部と、この基部に取り付けられた防水性カバーシートと、基部とカバーシートとの間に配置された増殖コンパートメントとを含む、本体部を備え得る。増殖コンパートメントは、周辺部と、その増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部とを有し得る。周辺部の一部分は、防水シールによって画定される。この部分は、周辺部の＞５０％を含み得る。このデバイスは、増殖コンパートメント内に配置された乾燥した冷水可溶性ゲル化剤、増殖コンパートメント内に配置された乾燥培地、及び増殖コンパートメント内に配置された乾燥した第１の酸素消去試薬を更に備え得る。乾燥培地は、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択することができる。いずれかの実施形態では、このデバイスは、任意選択的に、硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための、乾燥した指示試薬を備え得るものであり、この指示試薬は、増殖コンパートメント内に配置される。
【０００９】
別の態様では、本開示は、硫酸塩還元微生物のコロニーを計数するための、培養デバイスを提供する。このデバイスは、防水性基部と、この基部に取り付けられた防水性カバーシートと、基部とカバーシートとの間に配置された増殖コンパートメントとを含む、本体部を備え得る。増殖コンパートメントは、周辺部と、その増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部とを有し得る。周辺部の一部分は、防水シールによって画定される。この部分は、周辺部の＞５０％を含み得る。このデバイスは、増殖コンパートメント内に配置された乾燥した冷水可溶性ゲル化剤、増殖コンパートメント内に配置された指示試薬、及び増殖コンパートメント内に配置された乾燥した第１の酸素消去試薬を更に備え得る。指示試薬は、硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出することができる。いずれかの実施形態では、このデバイスは、任意選択的に、増殖コンパートメント内に配置された乾燥培地を備え得るものであり、指示試薬が、増殖コンパートメント内に配置され、乾燥培地は、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択される。
【００１０】
上記の実施形態のいずれかでは、このデバイスは、基部又はカバーシートに付着された支持体を更に備え得るものであり、この支持体の一部分は、増殖コンパートメント内に配置される。
【００１１】
更に別の態様では、本開示は、硫酸塩還元微生物を計数するための培養デバイスを提供する。このデバイスは、本体部、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤、乾燥培地、及び乾燥した第１の酸素消去試薬を備え得る。本体部は、平面状の防水性基材を含み得る。この基材は、周縁部と、離間配置された第１区画及び第２区画を含む第１主表面と、第１主表面の反対側の第２主表面と、第１区画を第２区画に対して重ね合わせて並置させる折り目とを備える。第１区画及び第２区画は、増殖コンパートメントの内壁部を画定し、この増殖コンパートメントは、周辺部と、その増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部とを備える。周辺部の一部分は、防水シールによって画定される。この部分は、周辺部の＞５０％を含む。冷水可溶性ゲル化剤は、増殖コンパートメント内の第１区画に付着させることができる。乾燥培地は、増殖コンパートメント内に配置することができ、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択される。第１の酸素消去試薬は、増殖コンパートメント内に配置することができる。
【００１２】
更に別の態様では、本開示は、硫酸塩還元微生物を計数するための培養デバイスを提供する。このデバイスは、本体部、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤、硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬、及び乾燥した第１の酸素消去試薬を備え得る。本体部は、平面状の防水性基材を含み得る。この基材は、周縁部と、離間配置された第１区画及び第２区画を含む第１主表面と、第１主表面の反対側の第２主表面と、第１区画を第２区画に対して重ね合わせて並置させる折り目とを備える。第１区画及び第２区画は、増殖コンパートメントの内壁部を画定し、この増殖コンパートメントは、周辺部と、その増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部とを備える。周辺部の一部分は、防水シールによって画定される。この部分は、周辺部の＞５０％を含む。冷水可溶性ゲル化剤は、増殖コンパートメント内の第１区画に付着させることができる。指示試薬は、増殖コンパートメント内に配置することができる。第１の酸素消去試薬は、増殖コンパートメント内に配置することができる。
【００１３】
上記の実施形態のいずれかでは、冷水可溶性ゲル化剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含み得る。上記の実施形態のいずれかでは、第１の酸素消去試薬は、硫酸第二鉄アンモニウム、塩化第二鉄、第二鉄塩、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩からなる群から選択することができる。
【００１４】
更に別の態様では、本開示は、硫酸塩還元微生物を検出又は計数するための方法を提供する。本方法は、デバイスの増殖コンパートメント内に試料を堆積させることと、硫酸塩還元微生物の増殖を促進する温度で、そのデバイスをインキュベートすることと、増殖コンパートメント内の硫酸塩還元微生物のコロニーの兆候を検出することとを含み得る。このデバイスは、防水性基部とその基部に取り付けられた防水性カバーシートとの間に配置された増殖コンパートメントを含む、本体部と、増殖コンパーメント内で基部に付着された、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤と、増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第１の酸素消去試薬とを備え得る。増殖コンパートメントは、周辺部と、その増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部とを有し得る。周辺部の一部分は、防水シールによって画定され、この部分は、周辺部の＞５０％を含む。
【００１５】
更に別の態様では、本開示は、硫酸塩還元微生物を検出又は計数するための方法を提供する。本方法は、デバイスの増殖コンパートメント内に試料を堆積させることと、硫酸塩還元微生物の増殖を促進する温度で、そのデバイスをインキュベートすることと、増殖コンパートメント内の硫酸塩還元微生物のコロニーの兆候を検出することとを含み得る。本体部は、平面状の防水性基材を含み得る。この基材は、周縁部と、離間配置された第１区画及び第２区画を含む第１主表面と、第１主表面の反対側の第２主表面と、第１区画を第２区画に対して重ね合わせて並置させる折り目とを備える。第１区画及び第２区画は、増殖コンパートメントの内壁部を画定し、この増殖コンパートメントは、周辺部と、その増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部とを備える。周辺部の一部分は、防水シールによって画定される。この部分は、周辺部の＞５０％を含む。冷水可溶性ゲル化剤は、増殖コンパートメント内の第１区画に付着させることができる。指示試薬は、増殖コンパートメント内に配置することができる。第１の酸素消去試薬は、増殖コンパートメント内に配置することができる。
【００１６】
本発明の上記実施形態のいずれかでは、増殖コンパートメント内に試料を堆積させる前に、その増殖コンパートメントは、乾燥培地を含み得るものであり、この培地は、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択される。本発明の上記の実施形態のいずれかでは、増殖コンパートメント内に試料を堆積させる前に、その増殖コンパートメントは、硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬を含み得る。本発明の上記実施形態のいずれかでは、増殖コンパートメント内に試料を堆積させることは、増殖コンパートメント内に水性液体を堆積させることを更に含み得る。本発明の上記実施形態のいずれかでは、本方法は、開口部を封止することを更に含み得る。
【００１７】
「好ましい」及び「好ましくは」という語は、特定の状況の下で特定の利益をもたらし得る、本発明の実施形態を指す。しかしながら、他の実施形態もまた、同じ状況又は他の状況の下で好ましい場合がある。更には、１つ以上の好ましい実施形態への言及は、他の実施形態が有用ではないことを暗示するものではなく、本発明の範囲から他の実施形態を排除することを意図するものではない。
【００１８】
用語「含む」及びその変化形は、これらの用語が本説明及び「特許請求の範囲」に現れる場合に、限定的な意味を有するものではない。
【００１９】
本明細書で使用するとき、「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、「少なくとも１つの」、及び「１つ以上の」は、互換的に使用される。それゆえ、例えば、栄養素（a nutrient）は、「１種以上の」栄養素を意味するものと解釈することができる。
【００２０】
用語「及び／又は」とは、列挙される要素のうちの１つ又は全て、あるいは、列挙される要素のうちの任意の２つ以上の組み合わせを意味する。
【００２１】
また本明細書では、端点による数の範囲の言及には、その範囲内に包含される全ての数が含まれる（例えば１〜５には、１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、５、などが含まれる）。
【００２２】
用語「微生物（microorganism）」又は「微生物（microbe）」とは、本明細書で使用するとき、単細胞又は多細胞生物であり得る、あらゆる微小生物を指す。この用語は、一般的に、限定するものではないが１種以上の細菌を含めた、好適な培地中で増殖及び繁殖することが可能な、あらゆる原核微小生物若しくは真核微小生物に言及するために使用される。本発明の範囲によって包含される微生物には、原核生物、すなわち細菌及び古細菌；並びに、原生動物、真菌類、酵母（例えば、嫌気性酵母）、藻類などを含む、真核生物の様々な形態が含まれる。用語「標的微生物」とは、検出されることが所望される、任意の微生物を指す。
【００２３】
用語「嫌気性微生物」又は「嫌気性菌」とは、本明細書で使用するとき、酸素に感受性であり、酸素の存在下では増殖することがない微生物を指す。嫌気性微生物又は嫌気性菌は、増殖のために酸素を必要としない、任意の生物である。嫌気性微生物には、偏性嫌気性菌及び通性嫌気性菌の双方が含まれる。偏性嫌気性菌は、大気中レベルの酸素に晒されると死滅する微生物である。通性嫌気性菌は、酸素が存在する場合には、好気的呼吸を行うことができるが、酸素が存在しない場合には、発酵又は嫌気的呼吸に切り替えることが可能な生物である。本発明の方法及びシステムは、偏性嫌気性菌及び通性嫌気性菌の双方の、集積並びに検出のために使用することが可能である。
【００２４】
微生物の「培養」又は「増殖」という用語は、本明細書で使用するとき、微生物を、それらの増殖を助成する条件下で、所定の培地中で繁殖させることによって、それらの微生物の増倍させる方法を指す。より具体的には、微生物の少なくとも１回の細胞分裂を促進する、好適な培地及び条件を提供する方法である。培地は、微生物増殖のために必要な、栄養素及び必須の物理的増殖パラメータの全てを含む、固体、半固体、若しくは液体の培地である。
【００２５】
用語「集積」とは、本明細書で使用するとき、特定の微生物の増殖に好都合な特定の属性及び既知の属性を有する、培地並びに条件を提供することによって、その特定の微生物の増殖を選択的に強化する、培養方法を指す。この集積培養の環境は、選択された微生物の増殖に好影響を与え、かつ／又は、他の微生物の増殖に悪影響を及ぼすものである。
【００２６】
「酸素消去試薬」及び「酸素消去剤」は、本明細書では、所与の環境から、酸素を消費し、枯渇させるか、又は酸素と反応することが可能な化合物を指すために、広義に使用される。好ましくは、この酸素消去試薬は、嫌気性微生物の増殖を遅延させることも、又は阻害することもない。
【００２７】
用語「還元剤」とは、本開示のデバイスの増殖コンパートメント内の、乾燥成分の水和によって形成された半固体培地の、Ｅｈ電位を低下させることが可能な物質を指す。
【００２８】
用語「炭素源」とは、本明細書で使用するとき、微生物によって代謝されることにより、その炭素源中の炭素原子の少なくとも一部分が、その微生物によってバイオマスへと変換され得るような物質を指す。
【００２９】
本発明の上記の「発明の概要」は、本発明の、開示される各実施形態又は全ての実装を説明することを意図するものではない。以下の説明は、例示的実施形態をより詳細に例示するものである。本出願の全体を通じたいくつかの箇所では、実施例の列挙を通じて指針が提供されており、これらの実施例を様々な組み合わせで使用することができる。いずれの場合にも、言及される列挙は、代表的な群としての役割のみを果たすものであり、排他的な列挙として解釈されるべきではない。
【００３０】
これらの実施形態及び他の実施形態の更なる詳細を、添付の図面及び以下の説明に記載する。他の特徴、目的、及び利点は、この説明及び図面、並びに「特許請求の範囲」から明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１Ａ】本開示による培養デバイスの一実施形態の平面図である。
【００３２】
【図１Ｂ】図１Ａの培養デバイスの、線１Ｂ−１Ｂに沿った分解側断面図である。
【００３３】
【図２Ａ】本開示による培養デバイスの代替的実施形態の平面図である。
【００３４】
【図２Ｂ】図２Ａの培養デバイスの分解側面図である。
【００３５】
【図３】本開示による培養デバイスの別の代替的実施形態の平面図である。
【００３６】
【図４Ａ】図３の培養デバイスの代替的実施形態の平面図である。
【００３７】
【図４Ｂ】図４Ａの培養デバイスの分解側面図である。
【００３８】
【図５Ａ】本開示による培養デバイスの別の代替的実施形態の平面図である。
【００３９】
【図５Ｂ】図５Ａの培養デバイスの分解側面図である。
【００４０】
【図６】本開示による一体型基部を備える培養デバイスの様々な図である。
【図７】本開示による一体型基部を備える培養デバイスの様々な図である。
【図８】本開示による一体型基部を備える培養デバイスの様々な図である。
【図９】本開示による一体型基部を備える培養デバイスの様々な図である。
【００４１】
【図１０】本開示の培養デバイスに接種するプロセスの一実施形態の、概略平面図である。
【００４２】
【図１１Ａ】本開示による培養デバイスを作製するプロセスの一実施形態の様々なステップの、概略平面図である。
【図１１Ｂ】本開示による培養デバイスを作製するプロセスの一実施形態の様々なステップの、概略平面図である。
【図１１Ｃ】本開示による培養デバイスを作製するプロセスの一実施形態の様々なステップの、概略平面図である。
【図１１Ｄ】本開示による培養デバイスを作製するプロセスの一実施形態の様々なステップの、概略平面図である。
【図１１Ｅ】本開示による培養デバイスを作製するプロセスの一実施形態の様々なステップの、概略平面図である。
【００４３】
［詳細な説明］
本開示のいずれかの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、以下の説明に記載されるか、若しくは以下の図面に例示される、構成の詳細及び構成要素の配置に、その適用が限定されるものではない点を理解されたい。本発明は、他の実施形態が可能であり、様々な方式で実践又は実施することが可能である。また、本明細書で使用される表現法及び用語法は、説明を目的とするものであり、限定するものとして見なされるべきではない点も理解されたい。「含む（including）」、「備える（comprising）」、若しくは「有する（having）」、及びこれらの変化形の本明細書での使用は、その後に列挙される項目、及びそれらの等価物、並びに更なる項目を包含することを意味する。別段の指示又は限定のない限り、用語「接続された」及び「結合された」、並びにそれらの変化形は、広義に使用され、直接的並びに間接的な接続及び結合の双方を包含するものである。更には、「接続された」及び「結合された」は、物理的又は機械的な接続若しくは結合に制限されるものではない。本開示の範囲から逸脱することなく、他の実施形態を利用することができ、構造的又は論理的な変更を加えることができる点を理解されたい。更には、「前方」、「後方」、「上部」、「底部」などの用語は、各要素の互いに対する関係を説明するためにのみ使用されるものであり、装置の特定の向きに言及することも、装置に必須若しくは必要な向きを指示又は暗示することも、あるいは、本明細書で説明される発明が、使用時にどのように使用、装着、表示、又は位置決めされるかを指定することも、決して意味するものではない。
【００４４】
本開示は、全般的に、試料中の硫酸塩還元微生物の検出、及び任意選択的に、その計数に関する。例えば、一部の実施形態では、本開示は、硫酸塩還元菌（ＳＲＢ）の増殖及び検出に関する。ＳＲＢの多様な群は、典型的には、嫌気性環境内で増殖する。現在では、偏性嫌気性の硫酸塩還元微生物の増殖及び検出は、デバイス自体を嫌気性環境内でインキュベートすることを必要としない、内蔵型の酸素低減環境生成培養デバイスを使用して、遂行することができる点が知られている。有利には、いずれかの実施形態では、本開示のデバイスは、硫酸塩還元菌と、他の形態の酸化硫黄化合物（例えば、亜硫酸水素塩）を還元する細菌とを識別する。
【００４５】
現在では、乾燥した再水和可能な内蔵型の酸素低減環境生成培養デバイスを作製可能であることが知られている。この培養デバイスは、培養デバイスの増殖コンパートメント内に配置され、所定の体積の水溶液中で再水和が可能な、有効量の実質的に乾燥した酸素消去試薬を含み、再水和時に、この酸素消去試薬は、酸素消費反応に関与することが可能である。更には、現在では、この酸素消費反応が、微耐気性微生物、微好気性微生物、又は偏性嫌気性の硫酸塩還元微生物の増殖を促進するために、十分な酸素を消費し得ることが知られている。更には、この培養デバイスは、インキュベーションの間、好気性環境内に保持することができ、その環境内で、この培養デバイスは、上述の微生物の増殖を促進するために、最大約８日間にわたって酸素低減環境を維持することができる。
【００４６】
対象となる細菌種は、海水、地表水（例えば、池、湖、又は川からのもの）、又は海洋源若しくは淡水源からの堆積物を含む試料などの、任意の供給源に由来し得る試験試料中で分析することができる。更には、試験試料は、石油鉱床、油井、石油を輸送するために使用されるパイプライン、又は石油を貯留するために使用される容器から得ることができる。
【００４７】
硫酸塩還元菌は、本質的に偏在性である。これらの細菌は、偏性嫌気性であり得るか、又は耐気性であり得る。偏性嫌気性の硫酸塩還元菌の非限定的な例としては、デスルホビブリオ種、及びデスルホトマクルム種が挙げられる。
【００４８】
一態様では、本開示は、酸素低減環境内で増殖する硫酸塩還元微生物を培養及び検出するための、培養デバイスを提供する。図１Ａ及び図１Ｂを参照すると、本開示の培養デバイス１００は、防水性基部１０、防水性カバーシート２０、及び基部１０とカバーシート２０との間に配置された増殖コンパートメント３０を含む、本体部５を備える。基部１０は、内側表面と、その内側表面の反対側の外側表面とを有する。カバーシート２０は、内側表面と、その内側表面の反対側の外側表面とを有する。いずれかの実施形態では、基部１０の内側表面は、カバーシート２０の内側表面と向き合う関係に配置される。
【００４９】
増殖コンパートメント３０は、開口部３４を含む周辺部３２を有する。開口部３４は、増殖コンパートメント３０への流体のアクセスを提供する。周辺部の一部分は、防水シール４０によって画定される。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の＞５０％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧８０％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧９０％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧９５％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧９８％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧９９％を含む。いずれかの実施形態では（例えば、このデバイスが接種された後の使用の間）、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の１００％を含む。
【００５０】
基部１０は、好ましくは、水を吸収しないか、又は他の方式で、水による悪影響を受けることのない材料（例えば、ポリエステル、ポリプロピレン、又はポリスチレン）で作製された、比較的剛性の防水フィルムである。基部１０は、好ましくは、気体酸素に対して実質的に非透過性の材料を使用して作製される。基部１０に関して好適な材料の非限定的な例としては、少なくとも約１５μｍ〜少なくとも約１８０μｍの厚さのポリエステルフィルム、少なくとも約１００μｍ〜少なくとも約２００μｍの厚さのポリプロピレンフィルム、及び、少なくとも約３００μｍ〜約３８０μｍの厚さのポリスチレンフィルムが挙げられる。他の好適な基部としては、エチレンビニルアルコールコポリマーフィルム、ポリビニルアルコールフィルム、及びポリ塩化ビニリデンフィルムが挙げられる。基部１０は、不透明、半透明とすることができ、又は、基部１０を通してコロニーを観察することが所望される場合には、この基部は透明にすることもできる。
【００５１】
カバーシート２０は、基部１０に取り付けられて（例えば、接着剤によって取り付けられて）、増殖コンパートメント３０を画定し、任意選択的に、このカバーシートが光透過性である場合には、輸送、保管、インキュベーション、及び／又はコロニー計数中に、その増殖コンパートメントが検視される。カバーシート２０は、好ましくは、水を吸収しないか、又は他の方式で、水による悪影響を受けることのない材料（例えば、ポリエステル、ポリプロピレン、又はポリスチレン）で作製された、比較的剛性の防水フィルムである。カバーシート２０は、培養デバイス１００を開放することなく、コロニーを計数することを容易にするために、好ましくは透明であり、微生物及び水蒸気に対して実質的に不浸透性である。
【００５２】
一般的に、カバーシートは、基部１０の作製に使用されたような材料で作製することができる。カバーシート２０は、好ましくは、気体酸素に対して実質的に非透過性の材料を使用して作製される。基部１０に関して好適な材料の非限定的な例としては、少なくとも約１５μｍ〜少なくとも約１８０μｍの厚さのポリエステルフィルム、少なくとも約１００μｍ〜少なくとも約２００μｍの厚さのポリプロピレンフィルム、及び、少なくとも約３００μｍ〜約３８０μｍの厚さのポリスチレンフィルムが挙げられる。他の好適な基部としては、エチレンビニルアルコールコポリマーフィルム、ポリビニルアルコールフィルム、及びポリ塩化ビニリデンフィルムが挙げられる。図１に示されるように、カバーシート２０は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の一部分に沿って延在する防水シール４０を介して、基部１０に結合される。
【００５３】
所与のタイプのポリマーフィルムを通過する酸素ガスの透過性は、そのポリマーフィルムの厚さを増大させることによって低減することができる点が、当業者には認識されるであろう。いずれかの実施形態では、本開示の基部及びカバーシートは、気体酸素に対して実質的に非透過性となる好適な厚さを有する、ポリマーフィルムである。
【００５４】
増殖コンパートメント３０は、基部１０とカバーシート２０との間の、培養デバイス１００内の任意のアクセス可能な場所に存在し得る。好ましくは、増殖コンパートメント３０の周辺部３２は、開口部３４を除いて、デバイス１００の周縁部８０から離間配置される。
【００５５】
本開示のデバイスは、増殖コンパートメント３０内で基部１０に付着された、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤を備える。好ましくは、このゲル化剤は、基部１０に、直接的又は間接的に付着される。任意選択的に、このゲル化剤は、デバイス１００のカバーシート２０に、直接的又は間接的に付着される。いずれかの実施形態では、このゲル化剤は、デバイス１００の増殖コンパートメント３０内の、基部１０の内側表面１０及び／又はカバーシート２０の内側表面上に、均一に分配することができる。
【００５６】
いずれかの実施形態では、このゲル化剤は、基部１０に付着された第１の乾燥コーティング１４として、デバイス内に提供することができる。いずれかの実施形態では、第１の乾燥コーティング１４は、増殖コンパートメント３０内の、基部１０に付着された第１の接着剤層１２に付着させることができる。第１の乾燥コーティング１４で使用するための好適なゲル化剤としては、冷水可溶性の、天然ゲル化剤及び合成ゲル化剤が挙げられる。アルギン、カルボキシメチルセルロース、タラガム、ヒドロキシエチルセルロース、グアーガム、ローカストビーンガム、キサンタンガムなどの天然ゲル化剤、及び、ポリアクリルアミド、ポリウレタン、ポリエチレンオキシドなどの合成ゲル化剤、並びにこれらの混合物組が、一般的に好適である。適切なゲル化剤は、本開示並びに米国特許第４，５６５，７８３号、同第５，０８９，４１３号、及び同第５，２３２，８３８号の開示による教示に従って、選択することができる。他の好ましいゲル化剤としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロースが挙げられ、これらのゲル化剤は、個別的に有用なものであるか、又は好ましくは、上述のゲル化剤のうちの１つなどの、別のゲル化剤と組み合わせて有用なものである。
【００５７】
それゆえ、いずれかの実施形態では、本開示のデバイス１００は、任意選択的に、増殖コンパートメント３０内の、基部１０の内側表面の少なくとも一部分又は全てに付着された、第１の乾燥コーティング１４を備え得る。第１の乾燥コーティング１４は、存在する場合には、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤を含み得る。任意選択的に、第１の接着剤層１２が、基部１０に付着され、第１の乾燥コーティングの少なくとも一部分が、増殖コンパートメント３０内で、この第１の接着剤層に付着される。
【００５８】
カバーシート２０は、いずれのコーティングも含み得ない（図示せず）。あるいは、デバイス１００が、増殖コンパートメント３０内に、基部１０の内側表面１０に付着された第１の乾燥コーティング１４を有さない場合には、又は、デバイス１００が、基部１０に付着された第１の乾燥コーティング１４を有する場合にも、カバーシート２０は、増殖コンパートメント内でそのカバーシート２０に付着された、第２の乾燥コーティング２４を備え得る。第２の乾燥コーティング２４は、存在する場合には、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤を含み得る。任意選択的に、第２の接着剤層２２が、カバーシート２０に付着され、第２の乾燥コーティング２４の少なくとも一部分が、増殖コンパートメント３０内で、この第２の接着剤層に付着される。いずれかの実施形態では、第２の接着剤層２２の一部分を使用して、増殖コンパートメント３０の周辺部３２に、防水シールを形成することができる。
【００５９】
任意選択的に、第１の乾燥コーティング及び／又は第２の乾燥コーティングは、冷水復元性であり、酸素消去試薬（以下で論じられる）、若しくはゲル化剤の冷水ゲル化特性を実質的に阻害せず、硫酸塩還元微生物の増殖を促進する、任意の栄養素又は栄養培地を含み得る。この培養デバイス内で使用するために好適な、具体的な栄養素又は培地は、そのデバイス内で増殖される微生物に応じて異なり得るものであり、当業者によって容易に選択されるであろう。好適な栄養培地の非限定的な例は、本明細書の実施例５で説明されるような、約７．３のｐＨを有する、Ｂａｃｔｏ（商標）Ｔｒｙｐｔｏｎｅ、Ａｍｒｅｓｃｏ  Ｓｏｙｔｏｎｅ、Ｂａｃｔｏ  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ、ＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ、乳酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ＮａＣｌ、ＮＨ４Ｃｌを含む。一般的に、そのような栄養素は、冷水可溶性である。細菌の増殖を支援するための好適な栄養素は、当該技術分野において既知であり、限定するものではないが、酵母抽出物、ペプトン、糖類、好適な塩などが挙げられる。いずれかの実施形態では、第１の乾燥コーティング及び／又は第２の乾燥コーティングは、この培養デバイス内で他の方式で増殖することが可能な、別の微生物又は微生物群よりも、硫酸塩還元微生物又は硫酸塩還元微生物群の増殖を促進する、選択剤（例えば、栄養素、抗生物質、及びこれらの組み合わせ）を更に含み得る。様々な他の配合物を使用することが可能であり、それにより本発明の範囲が損なわれるものではないことが、当業者には認識されるであろう。
【００６０】
好ましくは、第１の乾燥コーティング１４が、主として乾燥粉末及び乾燥粉末凝集体からなる場合、第１のコーティング１４は、基部１０の内側表面の少なくとも一部分上に配置された、第１の接着剤層１２上に配置される。第１の乾燥コーティング１４は、配合プロセス、接着剤コーティングプロセス、及び液体コーティングプロセス、並びに／あるいは、例えば米国特許第４，５６５，７８３号、同第５，０８９，４１３号、及び同第５，２３２，８３８号で説明される乾式コーティングプロセスを使用して、基部１０上に、又は任意選択的な第１の接着剤層１２上に堆積させることができ、上記の文献は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００６１】
好ましくは、第２の乾燥コーティング２４が、主として乾燥粉末及び乾燥粉末凝集体からなる場合、第２のコーティング２４は、カバーシート２０の内側表面の少なくとも一部分上に配置された、第２の接着剤層２２上に配置される。第２の乾燥コーティング２４は、配合プロセス、接着剤コーティングプロセス、及び液体コーティングプロセス、並びに／あるいは、例えば米国特許第４，５６５，７８３号、同第５，０８９，４１３号、及び同第５，２３２，８３８号で説明される乾式コーティングプロセスを使用して、カバーシート２０上に、又は任意選択的な第２の接着剤層２２上に堆積させることができ、上記の文献は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００６２】
増殖コンパートメント３０は、基部１０の内側表面とカバーシート２０の内側表面との間に配置される容積として画定され、その容積は、第１の乾燥コーティング１４及び／又は第２の乾燥コーティング２４の少なくとも一部分を包含する。それゆえ、水性液体が増殖コンパートメント内に分配されると、その水性液体は、存在する場合には第１の乾燥コーティング１４、及び／又は存在する場合には第２の乾燥コーティング２４の、少なくとも一部分と流体接触する。いずれかの実施形態では、非接種培養デバイスの増殖コンパートメント３０の厚さは、約０．２ｍｍ〜約３ｍｍとすることができる。本開示の接種済み培養デバイスの増殖コンパートメント３０の厚さは、例えば、その培養デバイス内に堆積される水性液体（図示せず）の体積、及び試料（図示せず）に関連付けられる固体（例えば、懸濁粒子及び／又はメンブレンフィルタ）の存在に応じて変化し得る。いずれかの実施形態では、接種済み培養デバイスの増殖コンパートメントの厚さは、約１ｍｍ〜約５ｍｍとすることができる。
【００６３】
本開示の培養デバイスは、有効量の１種以上の乾燥した酸素消去試薬を更に備える。この１種以上の酸素消去試薬は、増殖コンパートメント内に配置され、任意選択的に、本明細書で論じられるように、増殖コンパートメント内の接着剤層に付着される。「乾燥した」とは、本明細書で使用するとき、その試薬が実質的に水を含まないことを意味する。語句「実質的に水を含まない」とは、周囲環境と平衡化された時点で、その材料（例えば、粉末として、又は脱水された水性コーティングとして提供されるもの）のおよその含水量以下の含水量を有する、試薬を指す。
【００６４】
任意選択的に、本開示の培養デバイスは、緩衝剤成分、還元剤、及び／又は指示試薬などの、他の乾燥した再水和可能成分を更に備え得る。
【００６５】
少なくとも２種の乾燥成分（例えば、ゲル化剤、及び１種以上の酸素消去試薬若しくは還元剤）が、本明細書で説明されるように、培養デバイスの増殖コンパートメント内への、試料材料の導入（例えば、接種）の前、導入中、又は導入後に、水性液体で水和される。典型的には、試料材料及び／又は水性液体は、周囲条件で（すなわち、好気性気体環境で）培養デバイスの増殖コンパートメント内に導入される。それゆえ、好気条件下で増殖コンパートメントに試料が接種された後、その培養デバイスの増殖コンパートメント内の水性液体は、第１の溶存酸素濃度を含む。培養デバイス内の１種以上の酸素消去試薬は、増殖コンパートメント内の水性液体中の第１の溶存酸素濃度を、その第１の溶存酸素濃度よりも実質的に低い、第２の溶存酸素濃度に低減する機能を果たす。この接種済み培養デバイスの増殖コンパートメント内の溶存酸素濃度の低減により、培養デバイス内での偏性嫌気性微生物又は微好気性微生物の増殖が促進される。
【００６６】
いずれかの実施形態では、この１種以上の酸素消去試薬の有効量、及びその濃度は、その１種以上の酸素消去試薬を、培養デバイスの増殖コンパートメント内の所定の体積の水性液体と流体接触させた約１２０分以内に、第１の溶存酸素濃度から第２の溶存酸素濃度への低減が生じるように選択される。いずれかの実施形態では、この１種以上の酸素消去試薬の有効量、及びその濃度は、その酸素消去試薬を、培養デバイスの増殖コンパートメント内の所定の体積の水性液体と流体接触させた約６０分以内に、第１の溶存酸素濃度から第２の溶存酸素濃度への低減が生じるように選択される。いずれかの実施形態では、この１種以上の酸素消去試薬の有効量、及びその濃度は、その酸素消去試薬を、培養デバイスの増殖コンパートメント内の所定の体積の水性液体と流体接触させた約３０分以内に、第１の溶存酸素濃度から第２の溶存酸素濃度への低減が生じるように選択される。
【００６７】
いずれかの実施形態では、第１の溶存酸素濃度から第２の溶存酸素濃度への低減は、周囲温度（例えば、約１６度Ｃ）以上、約８０度Ｃ以下の温度で生じる。それゆえ、本開示による方法のいずれかの実施形態では、その酸素消去試薬を、培養デバイスの増殖コンパートメント内の所定の体積の水性液体と流体接触させた後に、第１の溶存酸素濃度を第２の溶存酸素濃度まで低減させるために、その培養デバイスを昇温（すなわち、周囲温度を上回る温度）でインキュベートする必要はない。
【００６８】
微生物を培養するために好適な期間内に、本開示の培養デバイスの増殖コンパートメントから除去される酸素の量は、とりわけ、その培養デバイスの増殖コンパートメント内の、１種以上の酸素消去試薬の量に依存することが、当業者には認識されるであろう。本開示による増殖コンパートメント内の、酸素消去試薬の量を調節することによって、微耐気性微生物を培養するように、又は偏性嫌気性微生物を培養するように、その培養デバイスを構成することができる。
【００６９】
例えば、アスコルビン酸（例えば、Ｌ−アスコルビン酸及びその塩）、酸素消費反応を触媒する酵素、第一鉄塩、亜硫酸金属塩、亜硫酸水素塩、及びメタ重亜硫酸塩を含めた、数多くの酸素消去試薬が既知である。本開示による好適な酸素消去試薬は、低酸素又は嫌気性の局所環境を培養デバイス内に作り出すために十分な酸素を消費して、そのデバイス内で培養される微生物と流体連通することが可能な量及びタイプの反応生成物を、それらの微生物の増殖を実質的に阻害することなく生成する。いずれかの実施形態では、この酸素消去試薬は、約１マイクロモル／１０ｃｍ２〜約１５マイクロモル／１０ｃｍ２の量で、増殖コンパートメント内に配置される。
【００７０】
好ましくは、いずれかの実施形態では、この１種以上の酸素消去試薬は、乾燥粉末の形態で提供される。より好ましくは、いずれかの実施形態では、この１種以上の酸素消去試薬は、１００マイクロメートル以下の直径を有する粒子から本質的になる、一定の粒度分布を有する粒子の集合を形成するように製粉及び分類された、乾燥粉末として提供される。有利には、１００マイクロメートル以下の直径を有する粒子として提供される酸素消去試薬は、このデバイスが所定の体積の水性液体で接種され、任意選択的に開口部が封止された場合に、増殖コンパートメント内に嫌気性環境を作り出して維持するため（例えば、最大で約２４時間のインキュベーション、最大で約４８時間のインキュベーション、最大で約７２時間のインキュベーション、最大で４日間のインキュベーション、最大で５日間のインキュベーション、最大で７日間のインキュベーション、少なくとも２４時間のインキュベーション、少なくとも４８時間のインキュベーション、少なくとも７２時間のインキュベーション、少なくとも４日間のインキュベーション、少なくとも５日間のインキュベーション、少なくとも７日間のインキュベーション）に有効な量で、基部又はカバーシートに付着させる（例えば、基部又はカバーシート上にコーティングされた接着剤層に付着させる）ことができる。
【００７１】
カバーシート２０上に配置された、任意選択的な接着剤層２２内で使用される接着剤は、基部１０上に配置された、任意選択的な接着剤層１２内で使用される接着剤と同じものか、又は異なるものとすることができる。更には、カバーシート２０上に配置された、第２の乾燥コーティング２４は、基部１０上に配置された、第１の乾燥コーティング１４と同じものか、又は異なるものとすることができる。カバーシート２０上のコーティングは、基部に向き合う表面全体を覆うことができるが、好ましくは、培養デバイス１００の増殖コンパートメント３０の少なくとも一部分を画定する、この内側表面の少なくとも一部分を覆うものである。
【００７２】
いずれかの実施形態では、選択剤を、乾燥コーティングとしてデバイス内に配置するか、又は任意選択的に、増殖コンパートメント内部の接着剤層中に溶解させることができる。
【００７３】
任意選択的に、本開示の培養デバイスは、培養デバイス内の酸素を示すための手段を更に備える。好ましくは、この手段は、デバイス内に存在する酸素の量（例えば、所定の閾値量又は相対量）を示すことが可能である。有利には、この手段は、酸素消去試薬が、培養デバイスの増殖コンパートメント内の酸素を、微好気性微生物、微耐気性微生物、又は偏性嫌気性微生物の増殖を促進する濃度まで適切に枯渇させたかどうか、あるいは、いつ枯渇させたかを示すことができる。培養デバイス内の酸素を検出するための手段は、当技術分野において既知であり、例えば、レドックス色素（例えば、メチレンブルー）及び酸素消光性蛍光色素が挙げられる。
【００７４】
この手段は、デバイスの内部に酸素が存在しないことを示す、発光化合物とすることができる。好適な酸素指示薬は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，６８９，４３８号（Ｋｅｎｎｅｄｙら）に開示されている。本開示の培養デバイス用の指示薬として適切な発光化合物は、酸素によって消光される発光を呈するものである。より正確には、この指示薬は、それらの励起周波数に晒されると、酸素濃度に反比例する放射で発光する。この指示薬は、デバイス内部の別の層、若しくは別の層の一部分上に、コーティング、積層、又は押出成形することができる。そのような層は、増殖コンパートメント内に配置することができ、任意選択的に、１つ以上の他の酸素透過層によって、増殖コンパートメントから隔てられる。酸素を示すための好適な化合物としては、オクタエチルポルフィリン、テトラフェニルポルフィリン、テトラベンゾポルフィリン、クロリン、又はバクテリオクロリンの金属誘導体が挙げられる。他の好適な化合物としては、パラジウムコプロポルフィリン（ＰｄＣＰＰ）、白金及びパラジウムのオクタエチルポルフィリン（ＰｔＯＥＰ、ＰｄＯＥＰ）、白金及びパラジウムのテトラフェニルポルフィリン（ＰｔＴＰＰ、ＰｄＴＰＰ）、カンファーキノン（ＣＱ）、並びにエリトロシンＢ（ＥＢ）などのキサンテン系色素が挙げられる。他の好適な化合物としては、２，２′−ビピリジン、１，１０−フェナントロリン、４，７−ジフェニル−１，１０−フェナントロリンなどの配位子を有する、ルテニウム錯体、オスミウム錯体、及びイリジウム錯体が挙げられる。これらの好適な例としては、トリ（４，７，−ジフェニル−１，１０−フェナントロリン）ルテニウム（ＩＩ）パークロレート、トリ（２，２′−ビピリジン）ルテニウム（ＩＩ）パークロレート、トリ（１，１０−フェナントロリン）ルテニウム（ＩＩ）パークロレートなどが挙げられる。
【００７５】
本開示の培養デバイスは、脱イオン水で水和されると、その水を、特定の微生物群を培養し、任意で選択的に集積する、好適な培養である所定のｐＨにさせる、増殖コンパートメント内に配置された乾燥した緩衝試薬を、任意選択的に含む。例えば、いずれかの実施形態では、所定のｐＨは、約５．２〜約７．８とすることができる。いずれかの実施形態では、所定のｐＨは、６．３５以下（例えば、約４．５〜約６．３５）とすることができる。
【００７６】
本開示のデバイス内で使用される緩衝試薬としては、約８．０以下のｐＫａを有する、任意の微生物適合性緩衝剤が挙げられる。この緩衝試薬の酸性部及び塩基性部は、所定の体積の脱イオン水が緩衝試薬と接触する場合に、増殖コンパートメント内でのｐＨが、特定の微生物若しくは微生物群の増殖又は検出に関して好適となるような比率で、培養デバイス内に存在する。好適な緩衝試薬としては、例えば、金属リン酸塩（例えば、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸カルシウム）、金属酢酸塩（例えば、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム、酢酸カルシウム）、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸及び２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸ナトリウム、並びにコハク酸及びコハク酸ナトリウムが挙げられる。所定の体積の水性液体（例えば、試料を含む）が増殖コンパートメント内に堆積されて、デバイスが閉鎖された場合に形成される、水性混合物の所望のｐＨを達成するために、酸性の緩衝試薬と塩基性の緩衝試薬との比率を調節することができる点が、当業者には認識されるであろう。
【００７７】
本開示の培養デバイスは、任意選択的に、指示試薬を含む。好適な指示試薬（例えば、塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ））は、培養デバイス内に存在する、実質的に全ての微生物を検出することができる。任意選択的に、この指示試薬は、鑑別指示薬とすることができ、すなわち、この指示試薬は、特定の微生物を他の微生物から識別する。好適な指示試薬としては、例えば、微生物の硫化水素の産生を検出する指示薬（例えば、硫酸第一鉄アンモニウム、蛍光Ｈ２Ｓプローブ）、微生物の存在を検出するための、ｐＨ指示薬、発色性酵素基質、及び蛍光性酵素基質が挙げられる。この指示薬は、酸素消去試薬を実質的に阻害するべきではない。いずれかの実施形態では、指示試薬は、乾燥コーティングとしてデバイス内に配置するか、又は任意選択的に、増殖コンパートメント内部の接着剤層中に溶解させることができる。
【００７８】
本開示の培養デバイスは、乾燥した酸素消去試薬の代わりに、又はそれに加えて、任意選択的に還元試薬を含む。好適な還元試薬は、増殖培地の酸化還元電位を低下させ、それにより嫌気性微生物の増殖を促進するために有用である。好適な還元剤としては、例えば、チオグリコール酸ナトリウム、Ｌ−システイン、ジチオスレイトール、ジチオエリトリトール、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
【００７９】
いずれかの実施形態では、増殖コンパートメントは、１ミリリットルの水性液体の体積で水和されるように、寸法設定することができる。水は、１ミリリットル当たり約０．５４μモルの溶存酸素を含む。それゆえ、第１の乾燥コーティング及び／又は第２の乾燥コーティングは、好ましくは、約２２℃〜約４２℃で１２０分以下の期間内に、０．５４μモルの酸素を消費するために十分な酸素消去試薬を、少なくとも含む。より好ましくは、第１の乾燥コーティング及び／又は第２の乾燥コーティングは、好ましくは、約２２℃〜約４２℃で１２０分以下の期間内に、０．５４μモルよりも多くの酸素を消費するために十分な酸素消去試薬を、少なくとも含む。いずれかの実施形態では、増殖コンパートメントは、約２〜約１０ミリリットルの水性液体の体積を受容して、その体積で水和されるように寸法設定することができる。それらの状況では、水性試料中の酸素を消費するために、更なる量の酸素消去試薬が必要とされることが、当業者には認識されるであろう。
【００８０】
いずれかの実施形態では、第１の乾燥コーティング及び／又は第２の乾燥コーティングは、色素（例えば、ｐＨ指示薬）、架橋剤、試薬（例えば、選択試薬、又は発色性若しくは蛍光性の酵素基質などの指示試薬）、又は上述の成分のうちの任意の２つ以上の組み合わせなどの、任意数の他の成分を含み得る。例えば、一部の用途では、微生物増殖の指示薬（例えば、硫化水素の産生を検出する指示薬、ｐＨ指示薬、発色性酵素基質、レドックス色素）を、第１の乾燥コーティング及び／又は第２の乾燥コーティング内、あるいは第１の乾燥コーティング及び／又は第２の乾燥コーティングを付着させる接着剤中に組み込むことが望ましい。好適な色素としては、増殖する微生物によって代謝されるか、又は他の方式で、増殖する微生物と反応し、そうすることにより、それらのコロニーを、可視化を容易にするために着色又は蛍光させるものが挙げられる。そのような色素としては、塩化トリフェニルテトラゾリウム、ｐ−トリルテトラゾリウムレッド、テトラゾリウムバイオレット、ベラトリルテトラゾリウムブルー及び関連色素、並びに５−ブロモ−４−クロロインドリルホスフェートの二ナトリウム塩が挙げられる。他の好適な色素としては、ニュートラルレッドなどの、微生物が増殖する間のｐＨ変化に敏感なものが挙げられる。
【００８１】
少なくとも１つの乾燥コーティングは、特定の微生物学的試験を実施するために必要な試薬を、任意選択的に含み得る。例えば、抗生物質感受性試験を実施するために、抗生物質を含めることができる。微生物の同定のために、特定のタイプの微生物の存在下で色が変化する、鑑別試薬を含めることができる。
【００８２】
本発明の培養デバイスは、様々な技術を使用して調製することができる。一般的に、デバイスは、手作業によって、あるいは、例えば本明細書並びに米国特許第４，５６５，７８３号、同第５，０８９，４１３号、及び同第５，２３２，８３８号で説明されるように、通常の実験室設備を使用して、作製することができる。
【００８３】
第１の接着剤層及び／又は第２の接着剤層で使用することが可能な、好適な感圧性接着剤の非限定な例は、９０／１０のモル比の２−メチルブチルアクリレート／アクリル酸のコポリマーである。使用することが可能な他の好ましい感圧性接着剤としては、９５／５若しくは９４／６のモル比のイソオクチルアクリレート／アクリル酸、及びシリコーンゴムが挙げられる。水に晒されると乳白色（例えば、不透明）になる接着剤は、あまり好ましいものではないが、不透明な基部と共に、又はコロニーの可視化が必要とされない状況で、使用することが可能である。高融点の物質上に低融点の物質がコーティングされている熱活性接着剤、及び／又は、ゴム糊などの水活性接着剤もまた既知であり、本発明で使用することができる。コロニーの可視化を容易にするために、上述のような指示試薬を組み込む場合、一般的には、粉末としてよりも、接着剤又はブロスコーティング混合物中に、その指示試薬を組み込むことが好ましい。
【００８４】
第１の接着剤層又は第２の接着剤層は、基部又はカバーシートの上面上に（例えば、ナイフコータを使用して）コーティングされることにより、好ましくは、その接着剤に付着される乾燥粉末又は凝集粉末の粒子の平均直径未満の厚さで、接着剤層が形成される。一般的には、基材（例えば、本明細書で説明される第１又はカバーシート）に粒子を付着させるために十分ではあるが、その接着剤中に粒子が完全に埋没するほど多量ではない接着剤が、コーティングされる。一般的には、厚さ約５μｍ〜約１２μｍの接着剤層が好適である。
【００８５】
好ましくは、第１の乾燥コーティング及び／又は第２の乾燥コーティング内にゲル化剤が含まれる場合、そのゲル化剤は、所定量の、例えば１〜３ｍＬ以上の水又は水性試料が増殖コンパートメント内に定置されると、ヒドロゲルが形成されるような量で含まれる。例えば、２０．３ｃｍ２の表面積にわたって実質的に均一に散布された、０．０２５ｇ〜０．０５０ｇの粉末グアーガムは、１〜３ｍＬの水性試料で復元されると、十分に粘稠な培地をもたらすことになる。粉末粒子のサイズを使用して、単位面積当たりのコーティング重量を制御することができる。
【００８６】
いずれかの実施形態では、第１の乾燥コーティング又は第２の乾燥コーティングは、硫酸塩還元微生物の増殖を促進するための、１種以上の栄養素及び／又は培地を含み得る。このコーティングが、粉末又は粉末凝集体から本質的になる場合、付着粉末培地中の栄養素に対する、ゲル化剤の好ましい比率は、そのデバイス上で増殖される具体的な微生物によって決定される。しかしながら、一般的な目的に関しては、約４：１〜約５：１（重量基準での、全栄養素に対する全ゲル化剤）の比率が好ましい。付着粉末培地中の粉末は、実質的に均一な層の適用に関して好適な任意の手段によって、接着剤層（例えば、第１の接着剤層１２及び／又は第２の接着剤層２２）に適用することができる。粉末の層を適用するための好適な方法の例としては、シェーカ型デバイスの使用、又は粉末アプリケータの使用が挙げられる。
【００８７】
硫酸塩還元微生物の増殖及び検出のために、本開示のデバイス内で使用するための好適な栄養素又は培地が、当業者には認識されるであろう。好適な栄養素の非限定的な例としては、ペプトンの供給源（例えば、肉抽出物、肉ペプトン）、酵母抽出物、カゼインの酵素消化物、及び炭水化物（例えば、乳酸）が挙げられる。いずれかの実施形態では、炭水化物は、特定の硫酸塩還元微生物によって利用される、非発酵性栄養素とすることができる。好ましくは、炭水化物は、その微生物の増殖（バイオマス生産）を促進するために十分に多い量で、デバイス内に存在する。
【００８８】
本開示の培養デバイスを使用する場合、存在する微生物のコロニーの正確な計数が望まれる場合がある。それゆえ、いずれかの実施形態では、本開示の培養デバイスは、基部上に、又は代替的にはカバーシート上に、グリッドパターンを備え得る。このグリッドパターンは、例えば米国特許第４，５６５，７８３号に開示される正方形のグリッドパターンなどの、正方形のグリッドパターンを含み得る。このグリッドパターンは、例えば、印刷方法などの任意の好適なプロセスによって、第１又はカバーシート上に作り出すことができる。
【００８９】
別の態様では、本開示は、上記の実施形態のいずれかの、内蔵型嫌気性環境生成培養デバイスを作製する方法を提供する。本方法は、冷水可溶性ゲル化剤を、基部の一部分上に付着させることを含む。このゲル化剤は、基部に付着される際に、乾燥している（例えば、実質的に水を含まない粒子の形態の）ものとすることができ、又は、このゲル化剤は、液体コーティング（例えば、水性液体コーティング）として基部に付着させ、その後、実質的に水を含まない状態に乾燥させることもできる。本方法は、基部をカバーシートに（例えば、感圧性接着剤を介して）取り付けることを更に含む。任意選択的に、基部をカバーシートに取り付けることは、防水シールを形成することを更に含む。
【００９０】
この基部は、付着ゲル化剤の少なくとも一部分が、基部とカバーシートとの間に配置された増殖コンパートメントに向き合うように、カバーシートに隣接して位置決めされる。任意選択的に、いずれかの実施形態では、第１の接着剤層を、基部に（例えば、当該技術分野において既知のコーティングプロセスを使用して）塗布することができ、冷水可溶性ゲル化剤を、この第１の接着剤層に付着させることができる。
【００９１】
代替的実施形態では、冷水可溶性ゲル化剤は、基部にゲル化剤を付着させるために説明されたプロセスのいずれかによって、カバーシートに付着させることができる。ゲル化剤が液体コーティングされる場合には、付着ゲル化剤を乾燥させることは、当該技術分野において既知の、数多くのプロセスによって実行することができる。このコーティングは、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，６０１，９９８号で説明されるプロセスに従って、オーブン（例えば、重力式オーブン、対流式オーブン）内で乾燥させることができる。好ましくは、付着ゲル化剤は、実質的に水を含まなくなるまで乾燥される。本明細書で使用するとき、「実質的に乾燥した」、「実質的に水を含まない」などの語句は、周囲環境と平衡化された時点で、脱水されたコーティングの凡その含水量以下の含水量を有する、コーティングを指す。
【００９２】
本方法は、第１の酸素消去試薬及び／又は第２の酸素消去試薬、緩衝剤成分、培地、還元剤、指示試薬、並びに選択剤からなる群から選択される、１種以上の他の乾燥成分を堆積させることを更に含む。いずれかの実施形態では、酸素消去試薬及び緩衝系の成分の、いずれか一方若しくは全てを、乾燥粉末として、増殖コンパートメント内に堆積させることができる。任意選択的に、酸素消去試薬及び緩衝系の、いずれか一方若しくは全ては、増殖コンパートメント内の接着剤（例えば、本明細書で説明されるような、第１の接着剤層又は第２の接着剤層）に付着させることができる。他の任意選択的成分（例えば、指示試薬、選択剤、栄養素）もまた、増殖コンパートメント内に堆積させることができ、任意選択的に、接着剤層に付着させることができる。
【００９３】
付着ゲル化剤が、基部とカバーシートとの間に配置された増殖コンパートメントに向き合うように、基部をカバーシートに隣接させて位置決めすることは、様々な方式で実行することができる。ゲル化剤の一部分が増殖コンパートメントに重なり合うように、基部及びカバーシートを互いに隣接させて位置決めすることの代表的な例を、図１〜図３に示す。この重なり合う構成により、操作者が、基部とカバーシートとの間に水性液体を堆積させることによって、その増殖コンパートメント内に存在する、ゲル化剤、酸素消去試薬、及び他の乾燥成分を、流体連通させることが可能となる点を見て取ることができる。
【００９４】
いずれかの実施形態では、本開示の培養デバイスは、その培養デバイスの開口部の近位で、接着剤層に解放可能に付着された、任意選択的な取り外し可能タブを備え得る。図２Ａ及び図２Ｂは、デバイスの開口部３４に隣接して、第１の接着剤層１２及び第２の接着剤層２２にそれぞれ付着されている、複数の取り外し可能タブ（それぞれ、タブ５０及びタブ５１）を備える、培養デバイス２００の一実施形態を示す。これらの取り外し可能タブは、デバイスが接種されて、それらのタブが操作者によって取り外される後まで、第１の接着剤層及び第２の接着剤層が、保管及び取り扱いの間に互いに付着する（また、それにより開口部を封止する）ことを防ぐ。
【００９５】
取り外し可能タブ５０及びタブ５１は、そのタブ材料と接着剤層との強力な付着を防ぐために、剥離コーティング（例えば、低付着性の裏糊）を上に塗布することが可能な、任意の好適な材料（例えば、紙、ポリマーフィルム）から作製することができる。
【００９６】
本開示によるデバイスの増殖コンパートメントは、例えば、図１Ａの矩形の増殖コンパートメントなどの、様々な形状を有し得る。他の好適な形状としては、限定するものではないが、円形、卵形、多角形、星形、及び不規則形状の増殖コンパートメントが挙げられる。図３は、開口部３４を備える多角形の増殖コンパートメントを有する、培養デバイス３００の一実施形態を示し、この開口部３４は、増殖コンパートメント３０の周辺部の約１０％未満を画定する。
【００９７】
図４Ａ及び図４Ｂは、図３の培養デバイス３００の様々な図を示し、デバイス３００は、複数の取り外し可能タブ（それぞれ、タブ５０及びタブ５１）を更に備える。
【００９８】
いずれかの実施形態では、本開示によるデバイスは、乾燥成分（例えば、ゲル化剤、１種以上の酸素消去試薬、還元剤）のうちの少なくとも１つを支持体に付着させ、その後、増殖コンパートメント内で、その支持体を基部又はカバーシートに付着させることによって、製作することができる。図５Ａ及び図５Ｂは、この支持体を備える、培養デバイス３００の一実施形態を示す。
【００９９】
デバイス３００は、本明細書で上述されたような基部１０及びカバーシート２０を有する、本体部６を備える。基部１０には、本明細書で上述されたような第１の接着剤層１２が付着される。カバーシート２０には、本明細書で上述されたような第２の接着剤層２２が付着される。第１の接着剤層１２には、任意選択的な支持体６０が付着される。支持体６０には、任意選択的な第３の接着剤層６２を介して、本明細書で説明されたような第１の乾燥コーティング１４が付着される。第２の接着剤層２２には、任意選択的な支持体７０が付着される。支持体７０には、任意選択的な第４の接着剤層７２を介して、本明細書で上述されたような第２の乾燥コーティング２４が付着される。いずれかの実施形態では、本開示によるデバイスは、第１の支持体６０（及び、その上の乾燥コーティング）、第２の支持体７０（及び、その上の乾燥コーティング）、あるいは、第１の支持体及び第２の支持体の双方と、それらの上の乾燥コーティングとを備え得る。
【０１００】
第１の支持体及び第２の支持体は、基部又はカバーシート用の材料として使用するための、本明細書で説明される任意の好適な材料を使用して、製作することができる。第３の接着剤層及び第４の接着剤層は、第１の接着剤層又は第２の接着剤層で使用するための、本明細書で説明される任意の好適な接着剤を含み得る。
【０１０１】
図５Ａ及び図５Ｂの本発明のデバイス３００は、基部、カバーシート、及び支持体用の薄膜フィルム基材を使用して、かつロールツーロールプロセスを使用して、容易にコーティング及び組み立てが可能であることが、現在では知られている。
【０１０２】
本開示によるデバイスは、あるいは、カバーシート及び基部の双方を形成する、一体型基材を使用して構築可能であることが、現在では知られている。これらの実施形態では、コーティングは、一体型の実質的に平坦な基材に塗布され、この基材は、その後、防水シールと、その一体型基材の２つの部分の間に配置される増殖コンパートメントとを作り出すために、折り畳まれる。
【０１０３】
図６〜図９は、本開示のデバイス４００の一実施形態を示し、このデバイスは、一体型基材から構築される。デバイス４００は、防水性基材１１を含む本体部８を備える。この防水性基材は、第１主表面８１と、第１主表面の反対側の第２主表面８７とを有する。第１主表面８１は、第１区画８２と、第１区画から離間配置された第２区画８４とを備える。本体部８は、縁部８９と、第１区画８２を第２区画８４に対して重ね合わせて並置させる折り目８６とを、更に備える。
【０１０４】
第１区画８２及び第２区画８４は、増殖コンパートメント３０の内壁部を画定し、増殖コンパートメント３０は、周辺部３２と、その増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部３４とを備える。周辺部３２の一部分は、防水シール４０によって画定され、この部分は、周辺部の＞５０％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の＞５０％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧８０％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧９０％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧９５％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧９８％を含む。いずれかの実施形態では、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の≧９９％を含む。いずれかの実施形態では（例えば、このデバイスが接種された後の使用の間）、この部分は、増殖コンパートメント３０の周辺部３２の１００％を含む。
【０１０５】
乾燥した冷水可溶性ゲル化剤が、増殖コンパートメント３０の、これらの区画の少なくとも一方（例えば、第１区画又は第２区画８４）に付着される。このゲル化剤は、第１のコーティング１４の一部として提供することができ、任意選択的に、第１区画８２に付着された第１の接着剤層１２に付着させることができる。あるいは、又は更には、このゲル化剤は、第２のコーティング２４の一部として提供することができ、任意選択的に、第２区画８４に付着された第２の接着剤層２２に付着させることができる。いずれかの実施形態では、第１の接着剤層及び第２の接着剤層、並びに第１のコーティング及び第２のコーティングは、本明細書で上述された通りである。
【０１０６】
いずれかの実施形態では、乾燥した酸素消去試薬、及び／又は、硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬（例えば、乾燥指示試薬）が、増殖コンパートメント３０内に配置される。いずれかの実施形態では、酸素消去試薬、及び／又は、硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬は、遊離粉末として、増殖コンパートメント３０内に配置することができ、あるいは、第１区画８２に付着される第１の乾燥コーティング１４の一部、及び／又は第２区画８４に付着される第２の乾燥コーティング２４の一部とすることもできる。
【０１０７】
いずれかの実施形態では、デバイス４００は、本明細書で上述されたような、乾燥した還元剤、指示試薬、栄養素若しくは培地、及び／又は緩衝試薬を更に備え得る。
【０１０８】
いずれかの実施形態では、デバイス４００の第１の乾燥コーティング１４及び／又は第２の乾燥コーティング２４は、本明細書で上述されたような支持体（図示せず）に付着させることができる。
【０１０９】
デバイスが組み立てられた後、そのデバイスに試料を接種することができる。図１０は、接種される培養デバイス５００の一実施形態を示す。デバイス５００は、開口部３４が増殖コンパートメント３０の上方にある状態で位置決めされる。液体試料が、例えば、ピペットを介して、開口部３４を通じて移送される。任意選択的に、この試料が増殖コンパートメントに移送された後、本明細書で説明されたように開口部３４が封止され、デバイス５００は、硫酸塩還元微生物の増殖を促進する温度でインキュベートされる。
【０１１０】
図１１Ａ〜図１１Ｅは、本開示によるデバイスを作製する方法の一実施形態を示す。いずれかの実施形態では、実質的に平面状の防水性基部１０は、主表面上にコーティングされた、第１の感圧性接着剤の層１２を有する。好適な基部及び接着剤は、本明細書で上述されている。第１の接着剤層１２の上にコーティングを適用する前に、シート様マスク９５が、基部１０上の第１の接着剤層１２に適用（例えば、積層）される。マスク９５は、周縁部、中央開放区域、及び、この開放区域から周辺部３２に延びる間隙部を有する。基部１０上に定置されると、マスク９５の開口部及び間隙部は、第１の接着剤層１２の一部分を露出させる。円形の形状を有するものとして示されているが、この開放区域は、数多くの好適な形状（例えば、円形、正方形、卵形、楕円形、矩形、多角形など）のうちのいずれかを有し得ることが想到される。
【０１１１】
マスク９５は、例えば、紙又はプラスチックフィルムのシートを含めた、様々な材料から製作することができる。好ましくは、マスク９５は、第１の接着剤層１２に対して定置される側が、低付着性の裏糊でコーティングされる。この低付着性の裏糊（図示せず）は、接着剤と基部との結合を崩壊させることなく、接着剤からマスクを取り外すことを容易にする。マスク９５が、第１の接着剤層１２に適用された後、第１の乾燥コーティング１４（例えば、ゲル化剤、酸素消去試薬、及び／又は、本明細書で上述されたような他の乾燥成分などの、粉末材料のコーティング）が、露出した接着剤に適用される。図４ｃは、マスク９５によって覆われていない接着剤の部分に付着している、第１の乾燥コーティング１４を示す。
【０１１２】
第１の乾燥コーティング１４を適用した後、過剰な粉末を任意選択的に（例えば、振動によって）除去することができ、マスク９５が取り外される。マスク９５を取り外すことにより、図１１Ｄに示されるように、基部１０上の、残部のコーティングされていない第１の接着剤層１２が露出する。本開示によるデバイスの調製を完了するために、露出した第１の接着剤層１２を覆うように寸法設定されたカバーシート２０が、図１１Ｅに示されるように、（例えば、図示されないが、ローラーを使用して）接着剤に積層される。このデバイスは、デバイスの縁部に沿った開口部３４を通じて液体試料（図示せず）が中に導入される、増殖コンパートメント３０を備える。
【０１１３】
更に別の態様では、本開示は、硫酸塩還元微生物を検出する方法を提供する。本方法は、本明細書で説明される培養デバイスの、いずれかの実施形態を使用する。
【０１１４】
いずれかの実施形態では、本方法は、試料及び所定の体積の水性液体を、開口部を介して増殖コンパートメント内に堆積させることと、任意選択的に開口部を封止することと、増殖コンパートメント内での微生物コロニーの形成を可能にするために十分な期間にわたって、培養デバイスをインキュベートすることと、その微生物コロニーを検出することとを含む。任意選択的に、この試料は、所定の体積の水性液体を含み得るか、又は、所定の体積の水性液体中に懸濁させることができる。いずれかの実施形態では、所定の体積の水性液体と共に試料を増殖コンパートメント内に堆積させることは、その培養デバイスの増殖コンパートメント内に封入された（例えば、外部の気体環境から隔離された）半固体状の微生物培地を形成することを含む。
【０１１５】
いずれかの実施形態では、培養デバイスの水和及び／又は接種に使用される、所定の体積の水性液体は、約０．１ミリリットル〜約１００ミリリットルである。いずれかの実施形態では、培養デバイスの水和及び／又は接種に使用される、所定の体積の水性液体は、約１ミリリットル〜約２０ミリリットルである。いずれかの実施形態では、培養デバイスの水和及び／又は接種に使用される、所定の体積の水性液体は、約１ミリリットルである。いずれかの実施形態では、培養デバイスの水和及び／又は接種に使用される、所定の体積の水性液体は、約２ミリリットルである。いずれかの実施形態では、培養デバイスの水和及び／又は接種に使用される、所定の体積の水性液体は、約３ミリリットルである。いずれかの実施形態では、培養デバイスの水和及び／又は接種に使用される、所定の体積の水性液体は、約４ミリリットルである。いずれかの実施形態では、培養デバイスの水和及び／又は接種に使用される、所定の体積の水性液体は、約５ミリリットルである。いずれかの実施形態では、培養デバイスの水和及び／又は接種に使用される、所定の体積の水性液体は、約１０ミリリットルである。いずれかの実施形態では、培養デバイスの増殖領域の水和に使用される水性液体は、結果的に３．９ｃｍ２の増殖領域当たり約１ミリリットル〜２０．３ｃｍ２の増殖領域当たり約１ミリリットルの液体となるような面積にわたって分配される。
【０１１６】
本方法のいずれかの実施形態では、増殖コンパートメント内に所定の体積を定置することは、その増殖コンパートメント内に試料を同時に定置することを含む。例えば、この試料は、液体（例えば、微生物汚染に関して試験される、水又は飲料の試料）とすることができ、あるいは、この試料は、液体キャリア又は希釈液中に懸濁された、固体若しくは半固体の試料とすることもできる。
【０１１７】
あるいは、いずれかの実施形態では、増殖コンパートメント内に所定の体積を定置することは、その増殖コンパートメント内に試料を同時に定置することを含まない。例えば、この試料は、所定の体積の（好ましくは、無菌の）液体キャリア又は希釈液が、培養デバイスの増殖コンパートメント内に定置される前、若しくは定置された後に、増殖コンパートメント内に定置される、液体、固体、又は半固体の材料を含み得る。
【０１１８】
有利には、この培養デバイスは、好気性環境内（すなわち、空気中）での水和及び／接種が可能である。典型的には、デバイスの水和に使用される水性液体（試験される試料材料を含み得るもの）が、基部とカバーシートと間の増殖コンパートメント上にピペットで滴下される。この所定の体積の水性液体が、増殖コンパートメント内に堆積された後、その培養デバイスは、任意選択的に、（例えば、存在する場合には、１つ以上の取り外し可能タブを取り外して、開口部の封止のために使用可能な接着剤層を露出させることによって）封止される。任意選択的に、ＰＥＴＲＩＦＩＬＭ（商標）培養デバイスの接種に使用されるものと同様の、平坦又は凹状のスプレッダを使用して、増殖コンパートメント全域にわたって水性液体を均等に分配することができる。
【０１１９】
本方法のいずれかの実施形態では、増殖コンパートメント内に所定の体積を定置することは、その増殖コンパートメント内に試料を同時に定置することを含み得る。これらの実施形態では、試料は、水性液体を含む場合があり、かつ／又は、試料は、水性液体（例えば、緩衝液又は無菌培養液）中に希釈若しくは懸濁される場合もある。
【０１２０】
あるいは、いずれかの実施形態では、増殖コンパートメント内に所定の体積を定置することは、その増殖コンパートメント内に試料を同時に定置することを含まない。これらの実施形態では、所定の体積の水性液体は、増殖コンパートメント内に試料を定置する前、又は定置した後に、増殖コンパートメント内に定置する（例えば、図１０に示されるように、ピペットで滴下する）ことができる。例えば、メンブレンフィルタ（図示せず）上に試料を捕捉させることができ、そのメンブレンフィルタは、ゲル化剤が水性液体で水和される前、又は水和された後に、増殖コンパートメント内に定置される。
【０１２１】
本方法のいずれかの実施形態では、増殖コンパートメント内に試料を定置することは、その増殖コンパートメント内に１種以上の添加剤を定置することを含む。この１種以上の添加剤は、試料と共に、又は別個に、増殖コンパートメント内に定置することができる。この１種以上の添加剤は、本方法での様々な機能を実行することができる。例えば、いずれかの実施形態では、１種以上の添加剤は、デバイス内の硫酸塩還元微生物の増殖を促進する、栄養素及び／又は培地を含み得る。そのような栄養素及び培地は、当該技術分野において周知であり、培養される具体的な微生物に基づいて選択することができる。これらの栄養素及び培地は、酸素消去試薬を実質的に阻害するべきではない。このことは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１５／０６１２１３号の、実施例２〜３で説明されるような酸素センサを使用することによって、容易に試験することができる。
【０１２２】
あるいは、又は更には、いずれかの実施形態では、添加剤は、少なくとも１種の他の微生物（例えば、非硫酸塩還元微生物）よりも、ある種の硫酸塩還元微生物の増殖に好都合な、１種以上の選択剤（例えば、抗生物質、塩）を含む。あるいは、又は更には、いずれかの実施形態では、添加剤は、硫酸塩還元微生物の存在を検出するための指示試薬（例えば、硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬、ｐＨ指示薬、レドックス指示薬、発色性酵素基質、蛍光性酵素基質）を含む。硫酸塩還元微生物を検出するために有用な選択剤及び指示試薬が、当業者には認識されるであろう。これらの選択剤及び／又は指示薬は、酸素消去試薬を実質的に阻害するべきではない。このことは、上述のような酸素センサを使用することによって、容易に試験することができる。
【０１２３】
増殖コンパートメント内の水性液体によって接触されると、これらの乾燥成分（例えば、酸素消去試薬、緩衝試薬、栄養素、指示試薬、還元剤、及び／又は選択剤）及び水性液体は、第１の溶存酸素の濃度を含む混合物を形成する。
【０１２４】
いずれかの実施形態では、この増殖コンパートメント内の水性混合物中での第１の溶存酸素の濃度は、偏性嫌気性微生物、微好気性微生物、及び／又は微耐気性微生物の増殖を実質的に阻害する濃度となり得る。これらの実施形態では、それらの成分を水性流体連通させると、酸素消去反応が開始されることにより、増殖コンパートメント内の水性液体中での第１の溶存酸素の濃度は、その第１の濃度よりも低い（例えば、第１の濃度よりも、少なくとも約５０％低い、少なくとも約６０％低い、少なくとも約７０％低い、少なくとも約８０％低い、少なくとも約９０％低い、少なくとも約９５％低い、少なくとも約９８％低い、少なくとも約９９％低い、又は９９％超で低い）第２の濃度まで低減される。
【０１２５】
いずれかの実施形態では、第１の溶存酸素の濃度を第２の溶存酸素の濃度まで低減させることは、増殖コンパートメント内の水性混合物中の溶存酸素を、嫌気性微生物（例えば、耐気性菌又は偏性嫌気性菌）の増殖を支援するために十分に低い、第２の濃度まで低減させることを含み得る。
【０１２６】
いずれかの実施形態では、第１の溶存酸素の濃度を第２の溶存酸素の濃度まで低減させることは、混合物が形成された後約１２０分以内に、その溶存酸素を、増殖コンパートメント内の水性混合物中での第２の濃度まで低減させることを含む。いずれかの実施形態では、第１の溶存酸素の濃度を第２の溶存酸素の濃度まで低減させることは、混合物が形成された後約９０分以内に、その溶存酸素を、増殖コンパートメント内の水性混合物中での第２の濃度まで低減させることを含む。いずれかの実施形態では、第１の溶存酸素の濃度を第２の溶存酸素の濃度まで低減させることは、混合物が形成された後約６０分以内に、その溶存酸素を、増殖コンパートメント内の水性混合物中での第２の濃度まで低減させることを含む。いずれかの実施形態では、第１の溶存酸素の濃度を第２の溶存酸素の濃度まで低減させることは、混合物が形成された後約４５分以内に、その溶存酸素を、増殖コンパートメント内の水性混合物中での第２の濃度まで低減させることを含む。いずれかの実施形態では、第１の溶存酸素の濃度を第２の溶存酸素の濃度まで低減させることは、混合物が形成された後、約３０分以内に、その溶存酸素を、増殖コンパートメント内の水性混合物中での第２の濃度まで低減させることを含む。
【０１２７】
試料材料がデバイス内に定置される前に、培養デバイスが水和される場合には、そのデバイスを再び開放して培養材料を接種する前に、冷水可溶性ゲル化剤を、任意選択的に、数分間から約３０分間以上にわたって（例えば、室温で）水和させ、ゲルを形成することができる。このゲル化剤が水和されて、ゲルを形成する期間中に、酸素消去試薬が、本明細書で論じられたように、水和されたゲル化剤中の溶存酸素の濃度を、第１の濃度から、嫌気性の硫酸塩還元微生物の増殖を促進する第２の濃度まで低減させる。
【０１２８】
培養デバイスの増殖コンパートメントが水和される前、又は水和された後に、当技術分野において既知の様々な方法で、試料材料を増殖コンパートメントと接触させることができる。いずれかの実施形態では、試料材料は、その試料材料を増殖コンパートメント内に堆積させることによって、増殖コンパートメントと接触される。このことは、例えば、ピペット滴下によって、試料材料の採取に使用されたスワブで増殖コンパートメントに（例えば、開口部を介して）接触することによって（例えば、表面をスワブで塗布することによって）、接種ループ又は接種針で（例えば、線条接種技術を使用して）増殖コンパートメントに接触することによって、あるいは、試料採取具（例えば、スワブ、スポンジ、又はメンブレンフィルタ）を増殖コンパートメント内に直接定置することによって、行うことができる。試料が堆積され、培養デバイスが任意選択的に（培養デバイス内に目視可能な気泡を混入させないように注意を払って）封止された後に、酸素消去試薬が、増殖コンパートメント内の溶存酸素を枯渇させる。
【０１２９】
本方法のいずれかの実施形態では、増殖コンパートメント内に試料が定置され、任意選択的に封止された後、その培養デバイスは、一定の期間（例えば、所定の期間）にわたってインキュベートされる。インキュベーション条件（例えば、インキュベーション温度）は、当業者には周知であるように、微生物の増殖率に影響を及ぼし得る。例えば、より低温（例えば、約２５℃未満）でのインキュベーションは、低温微生物の検出を可能にし得る。より高温（例えば、約３０℃、約３２℃、約３５℃、約３７℃）でのインキュベーションは、特定の中温性微生物の、より急速な増殖を促進し得る。
【０１３０】
一部の実施形態では、接種の後、少なくとも約１６時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約２４時間、又は少なくとも約４８時間にわたって、培養デバイスをインキュベートすることができる。一部の実施形態では、培養デバイスは、約２４時間以下、約４８時間以下、又は約７２時間以下で、インキュベートすることができる。特定の好ましい実施形態では、培養デバイスは、約２４時間〜約４８時間インキュベートされる。いずれかの実施形態では、増殖コンパートメント内で増殖している微生物コロニーの検出又は計数の前に、約７２時間、約９６時間、約１２０時間、約７日間、又は約８日間にわたって、培養デバイスをインキュベートして、その培養デバイス内の酸素低減環境を維持することができる。いずれかの実施形態では、微生物コロニーの形成が可能となる十分な期間にわたって、培養デバイスをインキュベートすることは、好気性雰囲気中で、その期間にわたって培養デバイスをインキュベートする（すなわち、培養デバイスは、インキュベーションのために酸素低減容器又はグローブボックス内には定置されない）ことを含む。
【０１３１】
本方法は、接種済み培養デバイスをインキュベートした後に、微生物コロニーを検出することを更に含む。微生物コロニーは、当技術分野において既知の様々な技術によって、培養デバイス内で検出することができる。好適なインキュベーション期間の後、観察可能なコロニーが存在しないこと、増殖指示薬（例えば、ｐＨ指示薬、発色性酵素基質、ＴＴＣなどのレドックス指示薬、蛍光性酵素基質）に変化がないこと、及び発酵性炭化水素の代謝に関連付けられる気泡が増殖培地中に存在しないことによって、その培養デバイス内に微生物が存在しないことを検出することができる。
【０１３２】
微生物のコロニーに関連付けられる酸性域は、視覚的に、及び／又は撮像システムを使用することによって、検出することができる。例えば、培地が、ｐＨ指示薬としてブロムクレゾールパープルを含む方法では、その培地は、ほぼ中性のｐＨでは、紫色又は灰色の外観を呈することになる。微生物が増殖して、培地中の炭水化物（例えば、グルコース）を発酵させるにつれ、ブロムクレゾールパープル指示薬は、その増殖している細菌のコロニーに隣接して黄色を呈することになる。例えば、培地が、ｐＨ指示薬としてクロロフェノールレッドを含む方法では、その培地は、ほぼ中性のｐＨでは、赤色又は紫色の外観を呈することになる。微生物が、培地中の炭水化物を発酵させるにつれ、クロロフェノールレッド指示薬は、その増殖している微生物コロニーに隣接して黄色を呈することになる。
【０１３３】
気泡は、増殖コンパートメント内に存在し、かつ微生物のコロニーに関連付けられる（例えば、そのコロニーに接触しているか、又はコロニーから約１ｍｍ以下の距離の範囲内にある）場合には、視覚的に、及び／又は撮像システムを使用することによって、検出することができる。これらの気泡は、可視のコロニー、及び／又は、微生物のコロニーに隣接する領域内でのｐＨ指示薬の色の変化によって検出可能である酸性域に、関連付けることができる。これらの気泡は、例えば、炭水化物の嫌気発酵によって産生された、二酸化炭素を含み得る。
【０１３４】
上記実施形態のいずれかでは、本方法は、培養デバイスの画像を取得することを更に含み得る。これらの実施形態では、硫酸塩還元微生物のコロニーの有無を検出することは、培養デバイスの画像を表示すること、印刷すること、又は分析することを含む。撮像システムは、撮像デバイスを含むものであり、プロセッサを含む場合もある。一部の実施形態では、撮像デバイスは、ラインスキャナ又はエリアスキャナ（例えば、カメラ）を含み得る。撮像デバイスは、単色（例えば、白黒）スキャナ、又は多色（例えば、カラー）スキャナを含み得る。有利には、単色撮像システムは、より高い解像度の画像を提供することができ、このことにより、結果の精度を向上させ、かつ／又は、培養デバイス内の微生物の存在を検出するために必要な時間を低減することができる。
【０１３５】
一部の実施形態では、撮像システムは、照明システムを更に含む。照明システムは、少なくとも１つの広域スペクトル可視光源（例えば、「白色」灯）を含み得る。一部の実施形態では、照明システムは、少なくとも１つの狭域スペクトル可視光源（例えば、比較的狭い帯域幅の、例えば赤色光、緑色光、又は青色光などの可視光を放射する、発光ダイオード）を含み得る。特定の実施形態では、照明システムは、予め選択された波長（例えば、約５２５ｎｍ）の発光ピークを有する、狭域スペクトル可視光源（例えば、発光ダイオード）を含み得る。
【０１３６】
この画像は、培養デバイスの増殖コンパートメント内の成分（例えば、微生物コロニー、増殖培地、及び指示薬）によって反射された光から取得することができ、又は、この画像は、培養デバイスの増殖コンパートメント内の成分を透過した光から取得することもできる。好適な撮像システム、及び対応する照明システムは、例えば、国際公開第２００５／０２４０４７号、並びに米国特許出願公開第２００４／０１０１９５４号及び同第２００４／０１０２９０３号で説明されており、これらの文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。好適な画像システムの非限定的な例としては、３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｐａｕｌ，ＭＮ）から入手可能なＰＥＴＲＩＦＩＬＭ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（ＰＰＲ）、Ｓｐｉｒａｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｎｏｒｗｏｏｄ，ＭＡ）から入手可能なＰＥＴＲＩＳＣＡＮ  Ｃｏｌｏｎｙ  Ｃｏｕｎｔｅｒ、並びに、Ｓｙｎｂｉｏｓｉｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｕ．Ｋ．）から入手可能なＰＲＯＴＯＣＯＬ及びＡＣＯＬＹＴＥプレートスキャナが挙げられる。
【０１３７】
一部の実施形態では、画像を取得することは、波長偏重画像を取得することを含む。例えば、撮像システムは、撮像デバイスによって収集された光を偏重させる、偏重フィルタを含み得る。フィルタ素子は、当該技術分野において既知であり、「カットオフ」フィルタ（すなわち、指定された特定の波長を上回るか又は下回る光波長が通過することを可能にする、フィルタ）、及び「バンドパス」フィルタ（すなわち、指定された特定の上限値と下限値との間の光波長が通過することを可能にする、フィルタ）の双方を含む。偏重フィルタは、照明光源と培養デバイスとの間に位置決めすることができる。あるいは、又は更には、偏重フィルタは、培養デバイスと撮像デバイスとの間に位置決めすることができる。
【０１３８】
［例示的実施形態］
実施形態Ａは、
防水性基部、該基部に取り付けられた防水性カバーシート、及びそれらの間に配置された増殖コンパートメントを含む本体部であって、該増殖コンパートメントが、周辺部と、該増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部とを有し、周辺部の一部分が防水シールによって画定され、この部分が周辺部の＞５０％を含む、本体部と、
上記増殖コンパートメント内で基部に付着された、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤と、
上記増殖コンパートメント内に配置された乾燥培地であって、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択される乾燥培地と、
上記増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第１の酸素消去試薬と、を備える、デバイスである。
【０１３９】
実施形態Ｂは、デバイスが、硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬を備え、該指示試薬が増殖コンパートメント内に配置される、実施形態Ａのデバイスである。
【０１４０】
実施形態Ｃは、
防水性基部、該基部に取り付けられた防水性カバーシート、及びそれらの間に配置された増殖コンパートメントを含む本体部であって、該増殖コンパートメントが、周辺部と、該増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部と、を有し、周辺部の一部分が防水シールによって画定され、この部分が周辺部の＞５０％を含む、本体部と、
上記増殖コンパートメント内で基部に付着された、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤と、
硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬であって、増殖コンパートメント内に配置された指示試薬と、
上記増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第１の酸素消去試薬と、を備える、デバイスである。
【０１４１】
実施形態Ｄは、増殖コンパートメント内に配置された乾燥培地を更に備え、
この培地が、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択される、実施形態Ｃの培養デバイスである。
【０１４２】
実施形態Ｅは、本体部が実質的に２次元的である、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１４３】
実施形態Ｆは、増殖コンパートメント内に配置された、有効量の乾燥した還元剤を更に備える、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１４４】
実施形態Ｇは、還元剤が基部に付着される、実施形態Ｆのデバイスである。
【０１４５】
実施形態Ｈは、第１の酸素消去試薬が基部に付着される、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１４６】
実施形態Ｉは、培地が有機炭素源を含む、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１４７】
実施形態Ｊは、有機炭素源が非発酵性である、実施形態Ｉのデバイスである。
【０１４８】
実施形態Ｋは、生存可能微生物の存在を検出するための指示試薬を更に備え、この指示試薬が増殖コンパートメント内に配置される、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１４９】
実施形態Ｌは、増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第２の酸素消去試薬を更に備える、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１５０】
実施形態Ｍは、第２の酸素消去試薬が防水性基部に付着される、実施形態Ｌのデバイスである。
【０１５１】
実施形態Ｎは、指示試薬が、第１の酸素消去試薬又は第２の酸素消去試薬である、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１５２】
実施形態Ｏは、第１の酸素消去試薬、第２の酸素消去試薬、還元試薬、栄養素、指示試薬、及び前述の成分のうちの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される第１の乾燥成分が、基部に付着される、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１５３】
実施形態Ｐは、基部が、増殖コンパートメントの少なくとも一部分内で、その上に配置された第１の接着剤層を備え、
第１の乾燥成分が、増殖コンパートメント内で第１の接着剤層に付着される、実施形態Ｏのデバイスである。
【０１５４】
実施形態Ｑは、第１の支持体を更に備え、
第１の乾燥成分が第１の支持体に付着され、第１の支持体が、増殖コンパートメント内で第１の接着剤層に付着される、実施形態Ｏのデバイスである。
【０１５５】
実施形態Ｒは、第１の支持体が、その上にコーティングされた第２の接着剤層を備え、
第１の乾燥成分が第２の接着剤層に付着される、実施形態Ｑのデバイスである。
【０１５６】
実施形態Ｓは、第１の酸素消去試薬、第２の酸素消去試薬、還元試薬、栄養素、指示試薬、及び前述の成分のうちの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される第２の乾燥成分が、カバーシートに付着される、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１５７】
実施形態Ｔは、
カバーシートが、増殖コンパートメントの少なくとも一部分内で、その上に配置された第３の接着剤層を備え、
第２の乾燥成分が、増殖コンパートメント内でその第３の接着剤層に付着される、実施形態Ｓのデバイスである。
【０１５８】
実施形態Ｕは、第２の支持体を更に備え、
第２の乾燥成分が第２の支持体に付着され、その第２の支持体が、増殖コンパートメント内で第２の接着剤層に付着される、実施形態Ｔのデバイスである。
【０１５９】
実施形態Ｖは、第２の支持体が、その上にコーティングされた第４の接着剤層を備え、
第２の乾燥成分が第４の接着剤層に付着される、実施形態Ｕのデバイスである。
【０１６０】
実施形態Ｗは、基部が、開口部の近位に第１のタブを更に備える、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１６１】
実施形態Ｘは、第１のタブが、そのタブに付着された第１の封鎖接着剤を備える、実施形態Ｗのデバイスである。
【０１６２】
実施形態Ｙは、第１の封鎖接着剤に解放可能に付着された第１の剥離ライナを更に備える、実施形態Ｘのデバイスである。
【０１６３】
実施形態Ｚは、カバーシートが、開口部の近位に第２のタブを更に備える、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１６４】
実施形態ＡＡは、第２のタブが、そのタブに付着された第２の封鎖接着剤を備える、実施形態Ｚのデバイスである。
【０１６５】
実施形態ＡＢは、第２の封鎖接着剤に解放可能に付着された第２の剥離ライナを更に備える、実施形態ＡＡのデバイスである。
【０１６６】
実施形態ＡＣは、
平面状の防水性基材を含む本体部であって、上記基材が、周縁部と、離間配置された第１区画及び第２区画を含む第１主表面と、第１主表面の反対側の第２主表面と、第１区画を第２区画に対して重ね合わせて並置させる折り目と、を有し、第１区画及び第２区画が、上記増殖コンパートメントの内壁部を画定しており、上記増殖コンパートメントが、周辺部、及び上記増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部を有し、上記周辺部の一部分が防水シールによって画定され、この部分が周辺部の＞５０％を含む、本体部と、
増殖コンパートメント内の第１区画に付着された、冷水可溶性ゲル化剤と、
増殖コンパートメント内に配置された乾燥培地であって、硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択される、培地、又は、硫酸塩還元菌による硫化水素産生を検出するための、指示試薬であって、増殖コンパートメント内に配置された、指示試薬と、
増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第１の酸素消去試薬と、を備える、デバイスである。
【０１６７】
実施形態ＡＤは、本体部が実質的に２次元的である、実施形態ＡＣのデバイスである。
【０１６８】
実施形態ＡＥは、増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した還元剤を更に備える、実施形態ＡＣ又は実施形態ＡＤのデバイスである。
【０１６９】
実施形態ＡＦは、培地が有機炭素源を含む、実施形態ＡＣ〜実施形態ＡＥのうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１７０】
実施形態ＡＧは、有機炭素源が非発酵性である、実施形態ＡＦのデバイスである。
【０１７１】
実施形態ＡＨは、増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第２の酸素消去試薬を更に備える、実施形態ＡＣ〜実施形態ＡＧのうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１７２】
実施形態ＡＩは、デバイスが、培地及び指示試薬を備え、
それらの培地及び指示試薬が、双方とも増殖コンパートメント内に配置される、実施形態ＡＣ〜実施形態ＡＨのうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１７３】
実施形態ＡＪは、第１の酸素消去試薬、第２の酸素消去試薬、還元試薬、培地、指示試薬、及び前述の成分のうちの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される第１の乾燥成分が、平面状の防水性基材の第１区画に付着される、実施形態ＡＣ〜実施形態ＡＩのうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１７４】
実施形態ＡＫは、平面状の防水性基材が、第１区画の少なくとも一部分上に配置された、第１の接着剤層を備え、
第１の乾燥成分が、増殖コンパートメント内で第１の接着剤層に付着される、実施形態ＡＪのデバイスである。
【０１７５】
実施形態ＡＬは、第１の支持体を更に備え、
第１の乾燥成分が第１の支持体に付着され、第１の支持体が、増殖コンパートメント内で第１の接着剤層に付着される、実施形態ＡＪのデバイスである。
【０１７６】
実施形態ＡＭは、第１の支持体が、その上にコーティングされた第２の接着剤層を備え、
第１の乾燥成分が第２の接着剤層に付着される、実施形態ＡＬのデバイスである。
【０１７７】
実施形態ＡＮは、第１の酸素消去試薬、第２の酸素消去試薬、還元試薬、培地、指示試薬、及び前述の成分のうちの任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される第２の乾燥成分が、平面状の防水性基材の第２区画に付着される、実施形態ＡＣ〜実施形態ＡＭのうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１７８】
実施形態ＡＯは、
防水性基材が、第２区画の少なくとも一部分上に配置された第３の接着剤層を備え、
第２の乾燥成分が、増殖コンパートメント内で第３の接着剤層に付着される、実施形態ＡＮのデバイスである。
【０１７９】
実施形態ＡＰは、第２の支持体を更に備え、
第２の乾燥成分が第２の支持体に付着され、その第２の支持体が、増殖コンパートメント内で第２の接着剤層に付着される、実施形態ＡＮのデバイスである。
【０１８０】
実施形態ＡＱは、第２の支持体が、その上にコーティングされた第４の接着剤層を備え、
第２の乾燥成分が第４の接着剤層に付着される、実施形態ＡＰのデバイスである。
【０１８１】
実施形態ＡＲは、この部分が、周辺部の少なくとも８０％を含む、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１８２】
実施形態ＡＳは、この部分が、周辺部の少なくとも９０％を含む、実施形態ＡＲのデバイスである。
【０１８３】
実施形態ＡＴは、この部分が、周辺部の少なくとも９５％を含む、実施形態ＡＳのデバイスである。
【０１８４】
実施形態ＡＵは、この部分が、周辺部の１００％を含む、実施形態ＡＴのデバイスである。
【０１８５】
実施形態ＡＶは、冷水可溶性ゲル化剤が、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、キサンタンガム、グアーガム、ローカストビーンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１８６】
実施形態ＡＷは、第１の酸素消去試薬が水溶性である、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１８７】
実施形態ＡＸは、第１の酸素消去試薬が、硫酸第二鉄アンモニウム、塩化第二鉄、第二鉄塩、亜硫酸塩、及び亜硫酸水素塩からなる群から選択される、先行の実施形態のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１８８】
実施形態ＡＹは、第２の酸素消去試薬が水溶性である、実施形態Ｌ又は実施形態ＡＨのデバイスである。
【０１８９】
実施形態ＡＺは、第２の酸素消去試薬が、アスコルビン酸及びその塩、並びに、酸素分子を消費する反応を触媒することが可能な酵素からなる群から選択される、実施形態ＡＹのデバイスである。
【０１９０】
実施形態ＢＡは、還元剤が、ジチオスレイトール、ジチオエリトリトール、チオグリコール酸の塩、及び前述の任意の２つ以上の組み合わせからなる群から選択される、実施形態Ｆ又は実施形態ＡＥのデバイスである。
【０１９１】
実施形態ＢＢは、防水性シールが接着剤を含む、先行の実施形態のうちのいずれか１つ、先行の請求項のうちのいずれか１つのデバイスである。
【０１９２】
実施形態ＢＣは、接着剤が感圧性接着剤を含む、実施形態ＢＢのデバイスである。
【０１９３】
実施形態ＢＤは、
デバイスであって、防水性基部とその基部に取り付けられた防水性カバーシートとの間に配置された増殖コンパートメントを含む本体部であって、該増殖コンパートメントが、周辺部と、該増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部と、を有し、周辺部の一部分が防水シールによって画定され、この部分が周辺部の＞５０％を含む、本体部と、増殖コンパートメント内で基部に付着された、乾燥した冷水可溶性ゲル化剤と、増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第１の酸素消去試薬と、を備える、デバイスの増殖コンパートメント内に試料を堆積させることと、
硫酸塩還元微生物の増殖を促進する温度でデバイスをインキュベートすることと、
増殖コンパートメント内の硫酸塩還元微生物のコロニーの兆候を検出することと、を含む、方法である。
【０１９４】
実施形態ＢＥは、
デバイスであって、平面状の防水性基材を含む本体部であって、この基材が、周縁部と、離間配置された第１区画及び第２区画を含む第１主表面と、第１主表面の反対側の第２主表面と、第１区画を第２区画に対して重ね合わせて並置させる折り目と、を有し、第１区画及び第２区画が、増殖コンパートメントの内壁部を画定しており、上記増殖コンパートメントが、周辺部、及び上記増殖コンパートメントへの液体のアクセスを提供する開口部を有し、周辺部の一部分が防水シールによって画定されており、この部分が周辺部の＞５０％を含む、本体部と、増殖コンパートメント内の第１区画に付着された、冷水可溶性ゲル化剤と、増殖コンパートメント内に配置された、乾燥した第１の酸素消去試薬と、を備える、デバイスの増殖コンパートメント内に試料を堆積させることと、
硫酸塩還元微生物の増殖を促進する温度で、デバイスをインキュベートすることと、
増殖コンパートメント内の硫酸塩還元微生物のコロニーの兆候を検出することと、を含む、方法である。
【０１９５】
実施形態ＢＦは、増殖コンパートメント内に試料を堆積させる前に、その増殖コンパートメントが乾燥培地を含み、該培地が硫酸塩還元菌の増殖を促進するように選択される、実施形態ＢＤ又は実施形態ＢＥの方法である。
【０１９６】
実施形態ＢＧは、増殖コンパートメント内に試料を堆積させる前に、その増殖コンパートメントが、硫酸塩還元菌による硫化水素の産生を検出するための指示試薬を含む、実施形態ＢＣ〜実施形態ＢＦのうちのいずれか１つの方法である。
【０１９７】
実施形態ＢＨは、増殖コンパートメント内に試料を堆積させることが、増殖コンパートメント内に水性液体を堆積させることを更に含む、実施形態ＢＣ〜実施形態ＢＧのうちのいずれか１つの方法である。
【０１９８】
実施形態ＢＩは、試料が水性液体中に配置される、実施形態ＢＨの方法である。
【０１９９】
実施形態ＢＪは、増殖コンパートメント内に水性液体を堆積させることが、所定の体積の水性液体を堆積させることを含む、実施形態ＢＨ又は実施形態ＢＩの方法である。
【０２００】
実施形態ＢＫは、所定の体積を堆積させることが、約０．１ｍＬ〜約１００ｍＬを堆積させることを含む、実施形態ＢＪの方法である。
【０２０１】
実施形態ＢＬは、方法が、開口部を封止することを更に含む、実施形態ＢＣ〜実施形態ＢＫのうちのいずれか１つの方法である。
【０２０２】
実施形態ＢＭは、デバイスをインキュベートすることが、７日間以下の期間にわたってデバイスをインキュベートすることを含む、実施形態ＢＣ〜実施形態ＢＬのうちのいずれか１つの方法である。
【０２０３】
実施形態ＢＮは、デバイスをインキュベートすることが、９６時間以下の期間にわたってデバイスをインキュベートすることを含む、実施形態ＢＭの方法である。
【０２０４】
実施形態ＢＯは、デバイスをインキュベートすることが、７２時間以下の期間にわたってデバイスをインキュベートすることを含む、実施形態ＢＮの方法である。
【０２０５】
実施形態ＢＰは、デバイスをインキュベートすることが、４８時間以下の期間にわたってデバイスをインキュベートすることを含む、実施形態ＢＯの方法である。
【０２０６】
実施形態ＢＱは、デバイスをインキュベートすることが、２４時間以下の期間にわたってデバイスをインキュベートすることを含む、実施形態ＢＰの方法である。
【０２０７】
本発明の目的及び利点が、以下の実施例によって更に示されるが、これらの実施例で言及される特定の材料及びその量、並びに他の条件及び詳細は、本発明を過度に限定するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【０２０８】
実施例１：デバイスの構築（パターンコーティング、片面）
【０２０９】
７５μｍ（３．０ミル）のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１で説明されるイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）でコーティングした。７．６２ｃｍ×１０．１６ｃｍ（３インチ×４インチ）の正方形が中央から除去された、シリコーンコーティング紙剥離ライナ（Ｄ＃６３  ＢＬ  ＫＦＴ、Ｈ／Ｏ  ５４８４４０／０００；Ｌｏｐｒｅｘ  ＧｍｂＨ（Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を使用して、接着剤の辺縁をマスクした。露出している接着剤を、冷水可溶性ゲル化剤及び酸素消去剤／還元剤の様々な混合物（表１）で、粉末コーティングした。この粉末を均一に適用し、そのフィルムを手で振盪することによって、接着剤層から余剰の粉末を除去した後、続いて剥離ライナを除去した。このフィルムの粉末コーティング部分の７．６２ｃｍ（３インチ）の側の一方の上方の接着剤に、シリコーンコーティング紙剥離ライナのストリップを付着させた。次いで、１片の１２５μｍ（５ミル）のＰＥＴフィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、残余の露出した接着剤に積層することにより、１つの端部に封止を防ぐ剥離ライナを備える、パウチを形成した。
【０２１０】
実施例２：デバイスの構築（パターンコーティング、両面）
【０２１１】
７５μｍ（３．０ミル）ミルのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１で説明されるイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）でコーティングした。７．６２ｃｍ×１０．１６ｃｍ（３インチ×４インチ）の正方形が中央から除去された、シリコーンコーティング紙剥離ライナを使用して、接着剤の辺縁をマスクした。露出している接着剤を、冷水可溶性ゲル化剤及び酸素消去剤／還元剤の様々な混合物（表１）で、粉末コーティングした。この粉末を均一に適用し、そのフィルムを手で振盪することによって、接着剤層から余剰の粉末を除去した後、続いて剥離ライナを除去した。このフィルムの粉末コーティング部分の７．６２ｃｍ（３インチ）の側の一方の上方の接着剤に、シリコーンコーティング紙剥離ライナのストリップを付着させた。この方式で、付着剥離ライナを備える、２つの粉末コーティングフィルムを作製し、それらの粉末コーティング部分が内側を向いて重なり合い、かつ付着剥離ライナも同様に重なり合う状態で、一体に積層させた（図２を参照）。
【０２１２】
実施例３：デバイスの構築（粉末コーティング支持基材、片面）
【０２１３】
７５μｍ（３．０ミル）のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１で説明されるイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）でコーティングした。この接着剤を、冷水可溶性ゲル化剤及び酸素消去剤／還元剤の様々な混合物（表１）で、粉末コーティングした。この粉末を均一に適用し、そのフィルムを手で振盪することによって、接着剤層から余剰の粉末を除去した。この粉末コーティングフィルムを、７．６２ｃｍ×１０．１６ｃｍ（３インチ×４インチ）の矩形に切り出して、１０．１６ｃｍ×１２．７ｃｍ（４インチ×５インチ）の１片の接着剤コーティングＰＥＴの中心に定置した。この粉末コーティング支持フィルムの７．６２ｃｍ（３インチ）の側の一方の上方の、接着剤コーティングフィルムに、シリコーンコーティング紙剥離ライナのストリップを付着させた。次いで、１片の１２５μｍ（５ミル）のＰＥＴフィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、残余の露出した接着剤に積層することにより、１つの端部に封止を防ぐ剥離ライナを備える、パウチを形成した。
【０２１４】
実施例４：デバイスの構築（粉末コーティング支持基材、両面）
【０２１５】
７５μｍ（３．０ミル）のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１で説明されるイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）でコーティングした。この接着剤を、冷水可溶性ゲル化剤及び酸素消去剤／還元剤の様々な混合物（表１）で、粉末コーティングした。この粉末を均一に適用し、そのフィルムを手で振盪することによって、接着剤層から余剰の粉末を除去した。この粉末コーティングフィルムを、７．６２ｃｍ×１０．１６ｃｍ（３インチ×４インチ）の矩形に切り出して、１０．１６ｃｍ×１２．７ｃｍ（４インチ×５インチ）の１片の接着剤コーティングＰＥＴの中心に定置した。この粉末コーティング支持フィルムの７．６２ｃｍ（３インチ）の側の一方の上方の、接着剤コーティングフィルムに、シリコーンコーティング紙剥離ライナのストリップを付着させた。この方式で、２つの構築物を作製し、それらの粉末コーティング支持フィルムが内側を向いて重なり合い、かつ付着剥離ライナも同様に重なり合う状態で、一体に積層させた（図５を参照）。
【０２１６】
実施例５：デバイスの構築（１つの粉末コーティング及び１つのブロスコーティング支持体、両面）
【０２１７】
７５μｍ（３．０ミル）のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１で説明されるイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）でコーティングすることによって、この構築物の部品１を作製した。この接着剤を、冷水可溶性ゲル化剤及び酸素消去剤／還元剤の様々な混合物（表１）で、粉末コーティングした。この粉末を均一に適用し、そのフィルムを手で振盪することによって、接着剤層から余剰の粉末を除去した。この粉末コーティングフィルムを、７．６２ｃｍ×１０．１６ｃｍ（３インチ×４インチ）の矩形に切り出して、１０．１６ｃｍ×１２．７ｃｍ（４インチ×５インチ）の１片の接着剤コーティングＰＥＴの中心に定置した。この粉末コーティング支持フィルムの７．６２ｃｍ（３インチ）の側の一方の上方の、接着剤コーティングフィルムに、シリコーンコーティング紙剥離ライナのストリップを付着させた。
【０２１８】
７５μｍ（３．０ミル）のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、培地配合物（１０ｇ／ＬのＢＤ  Ｂａｃｔｏ  Ｔｒｙｐｔｏｎｅ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｃｏｒｐ（Ｎｅｗ  Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＮＪ））、１０ｇ／ＬのＡｍｒｅｓｃｏ  Ｓｏｙｔｏｎｅ（Ａｍｒｅｓｃｏ（Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ））、２ｇ／ＬのＢＤ  Ｂａｃｔｏ  Ｙｅａｓｔ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｃｏｒｐ（Ｎｅｗ  Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＮＪ））、４ｇ／ＬのＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ））、８ｍＬ／Ｌの６０％乳酸ナトリウムシロップ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、５ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、１０ｇ／ＬのＮａＣｌ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ））、０．２ｇ／ＬのＮＨ４Ｃｌ（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ））、８ｇ／ＬのＭ１５０  Ｇｕａｒを、ｐＨをＮａＯＨを使用して７．３とし、高剪断力下で混合したもの）で、厚さ３００μｍ（１２．０ミル）にコーティングした後、続いて溶媒オーブン内に、１８０℃で１０分間置くことによって、この構築物の部品２を作製した。７．６２ｃｍ×１０．１６ｃｍ（３インチ×４インチ）の１片のブロスコーティングＰＥＴを切り出して、１０．１６ｃｍ×１２．７ｃｍ（４インチ×５インチ）の１片の接着剤コーティングＰＥＴの中心に定置した。このブロスコーティング支持フィルムの７．６２ｃｍ（３インチ）の側の一方の上方の、接着剤コーティングフィルムに、シリコーンコーティング紙剥離ライナのストリップを付着させた。
【０２１９】
この構築物の部品１及び部品２を、粉末コーティングを内向きに、ブロスコーティングを内向きにして、付着剥離ライナも同様に重なり合う状態で積層させた（図５を参照）。このことにより、対向する粉末コーティング面とブロスコーティング面とが、剥離ライナによって１つの側が開放されたまま保たれている、内部微生物増殖コンパートメントを有するパウチ構築物がもたらされた。
【０２２０】
実施例６：硫酸塩還元菌の保存培養株の増殖及び維持
【０２２１】
ＳＲＢの保存培養株である、デスルホビブリオ・デスルフリカンス（ＡＴＣＣ＃２９５７７；アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））、及びデスルホビブリオ・ブルガリス（ＡＴＣＣ＃２９５７９；アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））を、改質乳酸ナトリウム培地（１ｇのＹｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｃｏｒｐ（Ｎｅｗ  Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＮＪ））、１ｇのＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ））、０．４ｇのＮＨ４Ｃｌ（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ））、０．０１ｇのＫ２ＨＰＯ４（ＭＰ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＬＬＣ（Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ））、５ｇのＮａＣｌ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ））、０．１ｇのアスコルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、４ｍＬの乳酸ナトリウム（６０％）（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））を、ｐＨをＮａＯＨ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））を使用して７．３とし、ブチルゴム栓及びアルミニウム製クリンプを使用するＢａｌｃｈ管内で、窒素９７％／水素３％の雰囲気下でオートクレーブ処理した直後に、管に封入したもの）中で増殖させて維持した。１ｍＬガスシリンジを使用して、この改質乳酸ナトリウム培地の管内に、１／１００に希釈して戻すことによって、週１回、培養株を継代培養した。培養株を３０℃で４８時間にわたってインキュベートし、次いで、更に５日間にわたって４℃に保った。第６継代の後、培養株を廃棄して、冷凍保存株から新たに接種した。
【０２２２】
実施例７：デバイスの接種
【０２２３】
実施例１〜５のデバイスに、以下の通り接種した。試料（５ｍＬ又は１０ｍＬのいずれか）を、直接注入するか、又は１０ｍＬ無菌ピペットを使用することによって、これらのデバイス内に定置した。剥離ライナを除去して、これらのデバイスを、増殖区域の頂部に試料を押し上げ、かつ空気を排除するために、２つの平行なプレキシガラス板の間でスライドさせた。この時点で露出している、デバイスの口部のＰＳＡを一体に押圧することにより、シール部を形成して、これらのデバイスを、インキュベーションのために平置きした。インキュベーションは、細菌増殖のための時間を考慮して、最大１０日間にわたって３０℃で実行した。細菌の硫化水素の産生と、培地中に存在する鉄との組み合わせからの、不溶性の硫化鉄沈殿物の形成から生じる、小さい黒色斑点として、コロニーが可視化された。
【０２２４】
実施例８：両面粉末構築物内でのアスコルビン酸を使用する硫酸塩還元菌の増殖
【０２２５】
表１からの粉末コーティング混合物１〜９を使用して、実施例４のデバイスを構築した。実施例６からのデスルホビブリオ・デスルフリカンス（ＡＴＣＣ＃２９５７７）及びデスルホビブリオ・ブルガリス（ＡＴＣＣ＃２９５７９）の保存培養株を、表２で説明される好気性培地中に段階希釈した。５ｍＬの量の１０−６希釈物を接種して、実施例７で詳述されたように、デバイスをインキュベートした。９６時間後、ＳＲＢの増殖に関してデバイスを試験し、その結果を表３に報告した。
【０２２６】
実施例９：両面粉末構築物内での第一鉄を使用する硫酸塩還元菌の増殖
【０２２７】
表１からの粉末コーティング混合物１及び１０〜１２を使用して、実施例４のデバイスを構築した。実施例６からのデスルホビブリオ・ブルガリス（ＡＴＣＣ＃２９５７９）の保存培養株を、表４で説明される好気性培地中に段階希釈した。５ｍＬの量の１０−５希釈物を接種して、実施例７で詳述されたように、デバイスをインキュベートした。７２時間後、ＳＲＢの増殖に関してデバイスを試験し、その結果を表３に報告した。
【０２２８】
実施例１０：代替的支持ウェブ形状を有するデバイスの構築
【０２２９】
図３に示される代替的支持ウェブ形状で、実施例３のデバイスを構築した。
【０２３０】
実施例１１：代替的支持ウェブ形状を有するデバイスの構築
【０２３１】
図３に示される代替的支持ウェブ形状で、実施例４のデバイスを構築した。
【０２３２】
実施例１２：代替的支持ウェブ形状を有するデバイスの構築
【０２３３】
図３に示される代替的支持ウェブ形状で、実施例５のデバイスを構築した。
【０２３４】
実施例１３：両面粉末／ブロス構築物内での第一鉄を使用する硫酸塩還元菌の増殖
【０２３５】
表１からの粉末コーティング混合物１１を使用して、実施例５のデバイスを構築した。実施例６からのデスルホビブリオ・ブルガリス（ＡＴＣＣ＃２９５７９）の保存培養株を、リン酸緩衝生理食塩水（Ｓｉｇｍａ）中に段階希釈した。５ｍＬの量の１０−５、１０−６、及び１０−７希釈物を接種して、実施例７で詳述されたように、デバイスをインキュベートした。１２０時間後、ＳＲＢの増殖に関してデバイスを試験し、その結果を表３に報告した。
【０２３６】
実施例１４：異なるゲル強度を使用する硫酸塩還元菌の増殖
【０２３７】
表１からの粉末コーティング混合物２を使用して、実施例３のデバイスを構築した。実施例６からのデスルホビブリオ・デスルフリカンス（ＡＴＣＣ＃２９５７７）及びデスルホビブリオ・ブルガリス（ＡＴＣＣ＃２９５７９）の保存培養株を、表２で説明される好気性培地中に段階希釈した。２、３、４、又は５ｍＬの量の１０−７希釈物を接種して、実施例７で詳述されたように、デバイスをインキュベートした。７２時間後、ＳＲＢの増殖に関してデバイスを試験し、その結果を表５に報告した。
【０２３８】
比較実施例１：総菌数薄膜フィルム培養デバイスの構築
【０２３９】
７５μｍ（３．０ミル）のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１で説明されるイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）でコーティングした。この接着剤を、表１からの混合物２で粉末コーティングした。この粉末を均一に適用し、そのフィルムを手で振盪することによって、接着剤層から余剰の粉末を除去した。この粉末コーティングフィルムを、７．６２ｃｍ×１０．１６ｃｍ（３インチ×４インチ）の矩形に切り出した。２つの矩形を、粉末面を内側に向け、両面テープを使用して、一方の７．６２ｃｍ（３インチ）の側に沿って接合した。
【０２４０】
比較実施例２：スペーサを有する薄膜フィルム培養デバイスの構築
【０２４１】
７５μｍ（３．０ミル）のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（Ｍｅｌａｎｅｘ  ４５４、Ｔｅｋｒａ（Ｎｅｗ  Ｂｅｒｌｉｎ，ＷＩ））を、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１で説明されるイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）でコーティングした。この接着剤を、表１からの混合物２で粉末コーティングした。この粉末を均一に適用し、そのフィルムを手で振盪することによって、接着剤層から余剰の粉末を除去した。この粉末コーティングフィルムを、７．６２ｃｍ×１０．１６ｃｍ（３インチ×４インチ）の矩形に切り出した。
【０２４２】
１００μｍ（４ミル）ミルのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルム（ＬＡＢプレート底部フィルム？）を、米国特許第５，４０９，８３８号の実施例１で説明されるイソオクチルアクリレート／アクリルアミド感圧性接着剤（ＰＳＡ）でコーティングした。直径６センチメートルの円が除去された、シリコーンコーティング紙剥離ライナを使用して、この接着剤をマスクした。露出している接着剤を、表１からの混合物２で粉末コーティングした。この粉末を均一に適用し、そのフィルムを手で振盪することによって、接着剤層から余剰の粉末を除去した後、続いて剥離ライナを除去した。直径６１ｍｍの円形開口部を有する発泡体スペーサ（発泡ポリスチレン；幅７６ｍｍ×長さ１０２ｍｍ×厚さ０．５７ｍｍ）を、第１の層の接着剤コーティング面に接着積層した。この接着スペーサを有する粉末コーティングフィルムを、７．６２ｃｍ×１０．１６ｃｍ（３インチ×４インチ）の矩形に切り出した。
【０２４３】
２つの上述のフィルムを、粉末面を内側に向け、両面テープを使用して、一方の７．６２ｃｍ（３インチ）の側に沿って接合した。
【０２４４】
比較実施例３：薄膜フィルム培養デバイス内でのＳＲＢの増殖
【０２４５】
比較実施例１のデバイスを構築し、実施例６からのデスルホビブリオ・デスルフリカンス（ＡＴＣＣ＃２９５７７）の保存培養株を、アスコルビン酸オキシダーゼ（Ｃａｌｚｙｍｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓａｎ  Ｌｕｉｓ  Ｏｂｉｓｐｏ，ＣＡ））を４Ｕ／ｍＬの最終濃度まで添加した、表２で説明される好気性培地中に段階希釈した。上部フィルムを持ち上げて、底部フィルムの中央に試料を分注し、上部フィルムを穏やかに下に戻して定置することによって、３ｍＬの１０−５、１０−６、及び１０−７希釈物を接種した。周囲雰囲気中で、又は、９７％のＮ２、３％のＨ２のガスでパージした嫌気性チャンバ内のいずれかで、３０℃でプレートをインキュベートした。７２時間後、ＳＲＢの増殖に関してデバイスを試験し、その結果を表６に報告した。
【０２４６】
比較実施例４：薄膜フィルム培養デバイス内でのＳＲＢの増殖
【０２４７】
比較実施例２のデバイスを構築し、実施例６からのデスルホビブリオ・デスルフリカンス（ＡＴＣＣ＃２９５７７）の保存培養株を、アスコルビン酸オキシダーゼ（Ｃａｌｚｙｍｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓａｎ  Ｌｕｉｓ  Ｏｂｉｓｐｏ，ＣＡ））を４Ｕ／ｍＬの最終濃度まで添加した、表２で説明される好気性培地中に段階希釈した。上部フィルムを持ち上げて、底部フィルムの中央に試料を分注し、上部フィルムを穏やかに下に戻して定置することによって、３ｍＬの量の１０−５、１０−６、及び１０−７希釈物を接種した。周囲雰囲気中で、又は、９７％のＮ２、３％のＨ２のガスでパージした嫌気性チャンバ内のいずれかで、３０℃でプレートをインキュベートした。７２時間後、ＳＲＢの増殖に関してデバイスを試験し、その結果を表６に報告した。
【０２４８】
実施例１５：パウチ様培養デバイスの構築及び使用
【０２４９】
実施例３のデバイスを構築したが、ただし、裏打ちフィルムは、７５μｍ（３ミル）ＰＥＴの代わりに、４８ｇａのＰＥＴ／９８ｇａのＷＯＰＰ／．０００３５”（８．９マイクロメートル）の箔／２ミル（５１マイクロメートル）のＢａｒｅｘ（Ｔｅｃｈｎｉｐａｑ（Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｌａｋｅ，ＩＬ））とし、粉末コーティング混合物は、以下の通りとした；５ｇのＭ１５０  Ｇｕａｒ（ＤｕＰｏｎｔ  Ｄａｎｉｓｃｏ（Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ，Ｄｅｎｍａｒｋ））、８９．３ｇのＦｏｒｔｅｆｉｂｅｒ  ＨＢ  Ｕｌｔｒａ（Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ））、３ｇのＦｅＳＯ４−７Ｈ２Ｏ（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ））、０．６０ｇのアスコルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、１．５ｇのチオグリコール酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、０．６０ｇのＣａＳＯ４（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ））。ＦｅＳＯ４−７Ｈ２Ｏ及びアスコルビン酸ナトリウムは、表１と同様に製粉した。実施例６からのデスルホビブリオ・デスルフリカンス（ＡＴＣＣ＃２９５７７）及びデスルホビブリオ・ブルガリス（ＡＴＣＣ＃２９５７９）の保存培養株を、以下の好気性培地中に段階希釈した；０．５６ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４（ＭＰ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＬＬＣ（Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ））、０．１１ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４（ＭＰ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＬＬＣ（Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ））、１．０ｇ／ＬのＮＨ４Ｃｌ（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ））、３．０ｇ／ＬのＭｇＳＯ４−７Ｈ２Ｏ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ））、４．０ｍＬ／Ｌの６０％乳酸Ｎａ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、１．０ｇ／ＬのＢａｃｔｏ  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｃｏｒｐ（Ｎｅｗ  Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＮＪ））、１ｇ／ＬのＢａｃｔｏ  Ｔｒｙｐｔｏｎｅ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｃｏｒｐ（Ｎｅｗ  Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＮＪ））、１ｍｇ／ＬのＲｅｓａｚｕｒｉｎ（ＭＰ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＬＬＣ（Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ））、１０ｍＬ／ＬのＡＴＣＣ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｍｉｘ（アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ））、１０ｍＬ／ＬのＡＴＣＣ  Ｔｒａｃｅ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｍｉｘを、ｐＨを水酸化ナトリウムを使用して７．３に調節し、濾過滅菌したもの。５ｍＬの量の１０−６及び１０−７希釈物を接種して、実施例７で詳述されたように、デバイスをインキュベートした。９６時間後、ＳＲＢの増殖に関してデバイスを試験した。この時点で、双方の菌株は良好に増殖し、単一コロニーが容易に計数された。
【０２５０】
表１．粉末コーティング組成．全ての値は、グラムで表される。Ｃ６Ｈ７ＮａＯ６（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））、及びＦｅＳＯ４−７Ｈ２Ｏ（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ（Ｃｅｎｔｅｒ  Ｖａｌｌｅｙ，ＰＡ））は、結晶形で入手し、混合及び粉末コーティングの前に、＜１００μｍの平均粒径に製粉した。ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、Ｆｏｒｔｅｆｉｂｅｒ  ＨＢ  Ｕｌｔｒａ）は、Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）より入手した。
【表１】
2017525367.tif 000003
【０２５１】
表２．ＳＲＢ培地組成．ｐＨは水酸化ナトリウムを使用して７．３に調節し、濾過滅菌した。
【表２】
2017525367.tif 000004
【０２５２】
表３．アスコルビン酸又は第一鉄を使用するデバイス内でのＳＲＢの増殖所与のデバイスに関して、ＳＲＢの複数の希釈物が接種される場合は、その希釈物を丸括弧内に示す。
【表３】
2017525367.tif 000005
＋＋＋＝プレート全域にわたる繁茂、単一コロニーが容易に計数可能
＋＋＝増殖がプレートの縁部の周りでは若干抑制された状態で存在し、単一コロニーが計数可能
＋＝増殖がプレートの縁部の周りでは著しく抑制された状態で存在し、コロニーは識別困難
−＝黒色沈殿物は観察されず
ＴＮＴＣ＝計数不能多数
ＮＤ＝測定せず
【０２５３】
表４．ＳＲＢ培地組成ｐＨは水酸化ナトリウムを使用して７．３に調節し、濾過滅菌した。
【表４】
2017525367.tif 000006
【０２５４】
表５．様々なゲル強度を有するデバイス内でのＳＲＢの増殖
【表５】
2017525367.tif 000007
＋＋＋＝プレート全域にわたる繁茂、単一コロニーが容易に計数可能
＋＋＝増殖がプレートの縁部の周りでは若干抑制された状態で存在し、単一コロニーが計数可能
＋＝増殖がプレートの縁部の周りでは著しく抑制された状態で存在し、コロニーは識別困難
−＝黒色沈殿物は観察されず
【０２５５】
表６．従来の薄膜フィルム培養デバイス構築物内でのＳＲＢの増殖
【表６】
2017525367.tif 000008
＋＋＋＝プレート全域にわたる繁茂、単一コロニーが容易に計数可能
＋＋＝増殖がプレートの縁部の周りでは若干抑制された状態で存在し、単一コロニーが計数不能
＋＝増殖がプレートの縁部の周りでは著しく抑制された状態で存在し、コロニーは識別困難
−＝黒色沈殿物は観察されず
【０２５６】
本明細書に引用される、全ての特許、特許出願、及び公開公報、並びに電子的に入手可能な資料の開示内容の全体が、参照により組み込まれる。本出願の開示と本明細書に組み込まれたいずれかの文書の開示との間に、いずれかの矛盾が存在する場合には、本出願の開示が優先されるものとする。上述の詳細な説明及び実施例は、理解を明瞭にするためにのみ与えられている。それらにより、不要な限定をするものと理解されるべきではない。本発明は、図示及び説明された厳密な詳細に限定されるものではないが、これは、当業者には明白な変形例は、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲に包含されるためである。
【０２５７】
全ての見出しは、読者の便宜を図るためのものであり、特に指定のない限り、その見出しの後に続く文面の意味を限定するために使用されるべきではない。
【０２５８】
本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な修正を加えることができる。これらの実施形態及び他の実施形態は、以下の特許請求の範囲に含まれるものである。
【図１Ａ】
2017525367.tif 000009
【図１Ｂ】
2017525367.tif 000010
【図２Ａ】
2017525367.tif 000011
【図２Ｂ】
2017525367.tif 000012
【図３】
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【図４Ａ】
2017525367.tif 000014
【図４Ｂ】
2017525367.tif 000015
【図５Ａ】
2017525367.tif 000016
【図５Ｂ】
2017525367.tif 000017
【図６】
2017525367.tif 000018
【図７】
2017525367.tif 000019
【図８】
2017525367.tif 000020
【図９】
2017525367.tif 000021
【図１０】
2017525367.tif 000022
【図１１Ａ】
2017525367.tif 000023
【図１１Ｂ】
2017525367.tif 000024
【図１１Ｃ】
2017525367.tif 000025
【図１１Ｄ】
2017525367.tif 000026
【図１１Ｅ】
2017525367.tif 000027
【国際調査報告】
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