(57)【要約】合成のリパーゼ刺激ペプチドを含む組成物ならびに高トリグリセリド血症及び他の病態及び疾患をそれにより治療する方法が、本明細書において提供される。特に、アポＡ−Ｖのリパーゼ刺激活性またはその促進を示す合成のペプチド（ＡＶペプチド）及びペプチド模倣物（ＡＶペプチド模倣物）に加えて、その使用の方法が、提供される。全長ＡｐｏＡ−Ｖと１００％未満の配列同一性を有し、ＡＶ１９９−２２４と少なくとも５０％の配列同一性を備えた一部分を包含する、ペプチドまたはポリペプチドを含む、組成物が、本明細書において提供される。
2017537904.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号：１（全長ＡｐｏＡ−Ｖ）と１００％未満の配列同一性を有し、配列番号：８（ＡＶ１９９−２２４）と少なくとも５０％の配列同一性を備えた一部分を包含し、リパーゼ刺激活性を示す、合成のペプチドまたはポリペプチドを含む、組成物。
【請求項２】
前記ペプチドまたはポリペプチドが、配列番号：８と少なくとも８０％の配列類似性を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ペプチドまたはポリペプチドが、配列番号：３（ＡＶ１９９−２３７）と、１００％未満の配列同一性であるが、５０％を超える配列同一性を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記ペプチドまたはポリペプチドが、配列番号：３と少なくとも８０％の配列類似性を有する、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
配列番号：５（ＡＶ１９９−２３２）と、１００％未満の配列同一性であるが、５０％を超える配列同一性を備えたペプチドを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記ペプチドが、配列番号：５と少なくとも８０％の配列類似性を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ペプチドが、配列番号：１０と、１００％未満の配列同一性であるが、５０％を超える配列同一性を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
前記ペプチドが、配列番号：１０と少なくとも８０％の配列類似性を有する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記ペプチドが、配列番号：１１と、１００％未満の配列同一性であるが、５０％を超える配列同一性を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ペプチドが、配列番号：１１と少なくとも８０％の配列類似性を有する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ペプチドが、配列番号：１２と、１００％未満の配列同一性であるが、５０％を超える配列同一性を有する、請求項５に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ペプチドが、配列番号：１２と少なくとも８０％の配列類似性を有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ペプチドまたはポリペプチドが、配列番号：１（全長アポＡ−Ｖ）を超えて促進されたリパーゼ刺激活性を示す、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
以下のもの：（ａ）請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチドと；（ｂ）生理学的に許容されるバッファーまたは担体とを含む、医薬調製物。
【請求項１５】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチド及び機能的なペプチドまたはポリペプチドのセグメントを含む、融合ペプチドまたは融合ポリペプチド。
【請求項１６】
前記機能的なペプチドまたはポリペプチドのセグメントが、シグナリング部分、療法部分、局在化部分、検出可能部分、または単離／精製部分を含む、請求項１５に記載の融合ペプチドまたはポリペプチド。
【請求項１７】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項１８】
請求項１７に記載のポリヌクレオチドを含む、核酸ベクター。
【請求項１９】
プロモーター及び／または１つもしくは複数の発現エレメントを更に含む、請求項１８に記載の核酸ベクター。
【請求項２０】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチドを、高トリグリセリド血症または関連する病態もしくは疾患を患う被験体へ、投与することを含む、高トリグリセリド血症または該関連する病態もしくは疾患を治療する方法。
【請求項２１】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチドを、高トリグリセリド血症または関連する病態もしくは疾患のリスクがある被験体へ、投与することを含む、高トリグリセリド血症または該関連する病態もしくは疾患を防止する方法。
【請求項２２】
請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチドを、被験体へ投与することを含む、被験体におけるアテローム性動脈硬化及び／または心血管性疾患を治療または防止する方法。
【請求項２３】
（ａ）前記ペプチドまたはポリペプチドと、（ｂ）アテローム性動脈硬化及び／または心血管性疾患の治療及び／または防止のための療法及び／または療法剤とを、共投与することを含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
（ａ）及び（ｂ）が、同時に及び／または単一の医薬調製物中で投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
（ａ）及び（ｂ）が、並列して及び／または分離した医薬調製物中で投与される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
（ａ）請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチドを、（ｉ）トリグリセリドと（ｉｉ）トリグリセリド加水分解リパーゼとを含むサンプルへ、投与すること；または
（ｂ）（ｉ）請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドまたはポリペプチドと（ｉｉ）トリグリセリド加水分解リパーゼとを、トリグリセリドを含むサンプルへ、投与すること、
を含む、サンプル中のトリグルセリド濃度を低減させる方法。
【請求項２７】
前記トリグリセリド加水分解リパーゼが、リポタンパク質リパーゼ（ＬｐＬ）、内皮リパーゼ（ＥＬ）、及び肝性リパーゼ（ＨＬ）からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１４年１１月２１日に出願された米国仮特許出願シリアル番号第６２／０８２，９０２号の優先権を主張し、その全体は参照により本明細書に援用される。
【０００２】
合成のリパーゼ刺激ペプチドを含む組成物ならびに高トリグリセリド血症及び他の病態及び疾患をそれにより治療する方法が、本明細書において提供される。特に、アポＡ−Ｖのリパーゼ刺激活性またはその促進を示す合成のペプチド（ＡＶペプチド）及びペプチド模倣物（ＡＶペプチド模倣物）に加えて、その使用の方法が、提供される。
【背景技術】
【０００３】
主要な医薬市場にわたって３億５０００万人以上の人々が、高トリグリセリド血症（ＨＴＧ）（＞１５０ｍｇ／ｄＬのＴＧレベル；正常値は１００ｍｇ／ｄＬ）に影響を受け、それは複数の疾患（心血管性疾患、膵臓炎、糖尿病、及び肝脂肪変性が含まれる）についての重要な危険因子である。集団の約１〜２％は原発性ＨＴＧ（＞５００ｍｇ／ｄＬのＴＧ）を遺伝的に継承し、それは、重篤な臨床的な罹患率及び死亡率の転帰に関連する単一遺伝子性または多遺伝子性の障害のいずれかであり得る。ＨＴＧについての現在の治療は多数の標的外の効果があり、患者にとって推奨された目標を十分に達成しない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
合成のリパーゼ刺激ペプチドを含む組成物ならびに高トリグリセリド血症及び他の病態及び疾患をそれにより治療する方法が、本明細書において提供される。特に、アポＡ−Ｖのリパーゼ刺激活性またはその促進を示す合成のペプチド（ＡＶペプチド）及びペプチド模倣物（ＡＶペプチド模倣物）に加えて、その使用の方法が、提供される。
【０００５】
配列番号：１（全長ＡｐｏＡ−Ｖ）と１００％未満の配列同一性を有し、配列番号：８（ＡＶ１９９−２２４）と少なくとも５０％の配列同一性（例えば＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％）を備えた一部分を包含し、リパーゼ刺激活性を示す、ペプチドまたはポリペプチドを含む、組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、配列番号：８と、少なくとも８０％の配列類似性（例えば＞８０％、＞９０％、＞９５％）を備えた一部分を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、配列番号：３（ＡＶ１９９−２３７）と、１００％未満の配列同一性であるが、５０％を超える配列同一性（例えば＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、配列番号：３と、少なくとも８０％の配列類似性を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、配列番号：５（ＡＶ１９９−２３２）と、１００％未満の配列同一性であるが、５０％を超える配列同一性（例えば＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、天然アポＡ−Ｖ配列（例えば配列番号：１またはその一部分（例えば配列番号：５））と、１００％未満の配列同一性であるが、配列番号：５（ＡＶ１９９−２３２）、配列番号：１２（ＡＶ−Ｈ／Ｋ）、配列番号：２３（ＡＶ−Ｈ／Ｋ−２Ｆ）、配列番号：２６（ＡＶ−Ｈ／Ｋ−Ｃ６Ｓ）配列番号：２７（ＡＶ−Ｈ／Ｋ−Ａｃ／ＮＨ２）、及び／または配列番号：２８（ＡＶ−Ｈ／Ｋ−２Ｆ／ＨＡｒ）と、５０％以上の配列同一性（例えば＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％）を有する。
【０００６】
いくつかの実施形態において、組成物は、配列番号：５（ＡＶ１９９−２３２）と、１００％未満であるが、５０％を超える配列同一性（例えば＜１００％であるが、＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％）を備えたペプチドを含む。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号：５と、少なくとも５０％の配列類似性（例えば＞５０％＞、＞５５％、＞６０％、＞６５％、＞７０％、７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号：１０と、１００％未満であるが、５０％を超える配列同一性（例えば＜１００％であるが、＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号：１０と、少なくとも８０％の配列類似性（例えば＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％、１００％）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、配列番号：１０と、１００％の配列同一性を備えた一部分を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは配列番号：１０である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号：１１と、１００％未満の配列同一性であるが、５０％を超える配列同一性（例えば＜１００％であるが、＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号：１１と、少なくとも８０％の配列類似性（例えば＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％、１００％）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、配列番号：１１と、１００％の配列同一性を備えた一部分を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは配列番号：１１である。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号：１２と、１００％未満の配列同一性であるが、５０％を超える配列同一性（例えば＜１００％であるが、＞５０％、＞６０％、＞７０％、＞７５％、＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、配列番号：１２と、少なくとも８０％の配列類似性（例えば＞８０％、＞８５％、＞９０％、＞９５％、１００％）を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、配列番号：１２と、１００％の配列同一性を備えた一部分を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは配列番号：１２である。
【０００７】
いくつかの実施形態において、合成ＡＶペプチドは１０〜５０アミノ酸長（例えば１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、及びその中の任意の範囲（例えば２０〜４８、２２〜４６、２４〜４４、２６〜４２、２８〜４０、３０〜３８、３２〜３６））である。いくつかの実施形態において、合成ＡＶペプチドは、ペプチドの長さにわたって、野生型または天然のアポＡ−Ｖ配列からの、少なくとも１つの突然変異（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、またはそれ以上、及びその中の任意の範囲）を含む。いくつかの実施形態において、合成ＡＶペプチドは、ペプチドの長さにわたって、野生型または天然のアポＡ−Ｖ配列からの、少なくとも１つの非保存的突然変異（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、またはそれ以上、及びその中の任意の範囲）を含む。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、ペプチドの長さにわたって、野生型または天然のアポＡ−Ｖ配列からの、少なくとも１つの保存的突然変異（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、またはそれ以上、及びその中の任意の範囲）を含む。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、ペプチドの長さにわたって、野生型または天然のアポＡ−Ｖ配列からの、少なくとも１つの半保存的突然変異（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、またはそれ以上、及びその中の任意の範囲）を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、合成ＡＶペプチド配列を含んで提供される。
【０００８】
いくつかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも５アミノ酸長（例えば５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、及びその中の任意の範囲）であるアポＡ−Ｖの一部分（例えば配列番号：５）へ、１００％未満であるが、５０％を超える（例えば５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、及びその中の任意の範囲）配列同一性を有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、少なくとも１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、または３４アミノ酸長であるアポＡ−Ｖの一部分（例えば配列番号：５）へ、１００％未満であるが、５０％を超える（例えば５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、及びその中の任意の範囲）配列同一性を有する。
【０００９】
いくつかの実施形態において、例えば、実施例１、図３Ａ〜Ｃの記載、図４Ａ〜Ｄの記載、及び図８の記載中でそれぞれ説明されるアッセイのうちの１つまたは複数において、配列番号：１（全長アポＡ−Ｖ）と比較して、促進されたリパーゼ刺激活性を示すペプチド及び／またはポリペプチドを含む、組成物が、提供される。いくつかの実施形態において、ペプチド及び／またはポリペプチドは、配列番号：１と比較して、＞１０％増加した、＞２０％増加した、＞３０％増加した、＞４０％増加した、＞５０％増加した、＞６０％増加した、＞７０％増加した、＞８０％増加した、＞９０％増加した、＞２倍の、＞３倍の、＞４倍の、＞５倍の、＞６倍の、＞８倍の、＞１０倍の、または＞２０倍のリパーゼ刺激活性を示す。いくつかの実施形態において、配列番号：５（ＡＶ１９９−２３２）と比較して、促進されたリパーゼ刺激活性を示すペプチド及び／またはポリペプチドを含む、組成物が、提供される。いくつかの実施形態において、ペプチド及び／またはポリペプチドは、例えば、実施例１、図３Ａ〜Ｃの記載、図４Ａ〜Ｄの記載、及び図の記載中でそれぞれ説明されるアッセイのうちの１つまたは複数において、配列番号：５のうちの１つまたは両者と比較して、＞１０％増加した、＞２０％増加した、＞３０％増加した、＞４０％増加した、＞５０％増加した、＞６０％増加した、＞７０％増加した、＞８０％増加した、＞９０％増加した、＞２倍の、＞３倍の、＞４倍の、＞５倍の、＞６倍の、＞８倍の、＞１０倍の、または＞２０倍のリパーゼ刺激活性を示す。いくつかの実施形態において、ペプチドはαへリックスの特徴を示す。いくつかの実施形態において、二次的な構造予測技法により、前記ペプチドは、実質的または完全にαヘリックスであると同定される。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本明細書におけるペプチド及び／またはポリペプチドは、両親媒性αヘリックスを含む。いくつかの実施形態において、本明細書における両親媒性α−ヘリックスは、ＡＶ−１９９−２３２ペプチドのドメイン構成を示す（例えば図１１を参照）。本明細書における実施形態の開発の間に遂行された３Ｄ構造モデリング、バイオインフォマティクス、ならびに生化学的及び生物物理学的な実験から、ＡＶ１９９−２３２ペプチド及び活性のあるそのバリアント（及びかかるペプチドを含むポリペプチド）は、一次配列によってではなく、アミノ酸分類及びαヘリックス上の円周の所在位置（例えばαヘリックスのヘリカルホイール表現における空間的位置）によって定義される、４つのドメインを含むことが指摘される。ＡＶ−１９９−２３２ならびに関連するペプチド及びポリペプチドのドメインは、ドメイン１：Ａ１、Ｒ５、Ｒ１２、Ｌ１６、Ｋ１９、２３Ａ、３０Ｄ、及び３４Ｅ；ドメイン２：Ｒ２、Ｃ６、Ｋ１３、Ｋ１７、Ａ２０、Ｒ２４、及びＱ３１；ドメインＨ：Ｓ４、Ｔ１５、Ｈ２２、及びＲ３３；ならびにドメインＬ：Ｌ３、Ｖ７、Ｌ１０、Ｓ１１、Ｌ１４、Ａ１８、Ｌ２１、Ｉ２５、Ｎ２８、Ｌ２９、及びＬ３２である。
【００１１】
ドメイン内の残基が同一であることに加えて、本明細書における実施形態の開発の間に遂行された実験は、ドメイン１及びドメインＨ（及びドメイン２も）がリパーゼ活性の刺激における役割を有すること、ドメインＬが脂質の結合または相互作用における役割を有すること、ならびにドメイン２がヘパリン結合における役割を有することと一致する。しかしながら、本明細書における実施形態は、任意の特定の作用メカニズムに限定されておらず、作用メカニズムの理解はかかる実施形態の実践には必要ではない。いくつかの実施形態において、少なくとも２４アミノ酸（例えば２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、及びその間の任意の範囲）であり３３以下のアミノ酸が、配列番号：５に同一であるかまたは配列番号：５と保存的もしくは半保存的な置換であるアミノ酸配列を有する実質的にαヘリックスの領域を含む、合成ペプチドまたはポリペプチドを含む組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、リポタンパク質リパーゼ（ＬｐＬ）へ結合できる、及び／またはＬｐＬのリパーゼ活性を刺激できる。いくつかの実施形態において、少なくとも２４アミノ酸（例えば２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、及びその間の任意の範囲）は、配列番号：５に同一であるか、または配列番号：５と保存的置換である。いくつかの実施形態において、少なくとも２４アミノ酸（例えば２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、及びその間の任意の範囲）は、配列番号：５に同一である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、インビトロでＬｐＬへ結合できる、及び／または刺激する。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、インビボでＬｐＬへ結合できる、及び／または刺激する。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドはヘパリンを結合できる。
【００１２】
いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５中での位置に対応するアミノ酸は、（ｉ）配列番号：５中での対応する位置に同一、（ｉｉ）配列番号：５中での対応する位置と比較して保存的置換、（ｉｉｉ）配列番号：５中での対応する位置と比較して半保存的置換、及び／または（ｉｖ）配列番号：５中での対応する位置と比較して非保存的置換、である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５中での位置に対応するアミノ酸は、（ｉ）配列番号：５中での対応する位置に同一、（ｉｉ）配列番号：５中での対応する位置と比較して保存的置換、及び／または（ｉｉｉ）配列番号：５中での対応する位置と比較して半保存的置換、である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５中での位置に対応するアミノ酸は、（ｉ）配列番号：５中での対応する位置に同一、及び／または（ｉｉ）配列番号：５中での対応する位置と比較して保存的置換、である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５中での位置に対応するアミノ酸は、（ｉ）配列番号：５中での対応する位置に同一、である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５中での位置に対応する任意のアミノ酸（それは配列番号：５中での対応する位置に同一でなく、特定のアミノ酸であると指定されるかまたは１セットのアミノ酸から選択されなければ）は、配列番号：５中での対応する位置と比較して、保存的置換または半保存的置換である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５中での位置に対応する任意のアミノ酸（それは配列番号：５中での対応する位置に同一でなく、特定のアミノ酸であると指定されるかまたは１セットのアミノ酸から選択されなければ）は、配列番号：５中での対応する位置と比較して、保存的置換である。
【００１３】
いくつかの実施形態において、グループ化された残基のドメイン（ドメイン２）を含み、配列番号：５の位置２、６、１３、１７、２０、２４及び３１に対応する残基を含む、本明細書において記載される合成のペプチドまたはポリペプチドを含む、組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、ドメイン２はヘパリンへ結合できる。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置６に対応する残基は、システイン残基ではない。いくつかの実施形態において、配列番号：５の位置６に対応する残基は、配列番号：５中での対応する位置に同一ではない、ドメイン２中の唯一の残基である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置６に対応する残基は、Ｓ、Ｔ、Ｎ及びＱからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置６に対応する残基はＳである。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置６に対応する残基はＴである。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置６に対応する残基は、Ｙ及びＨからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置１３及び１７に対応する１つまたは両方の残基は、ホモリジン（ｈＬｙｓ）、Ｒ、ホモアルギニン（ｈＡｒｇ）、及びオルニチンからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置１７に対応する残基は、Ｑ、Ｎ及びＳからなる群から選択される。
【００１４】
いくつかの実施形態において、グループ化された残基のドメイン（ドメインＨ）を含み、該ドメインは配列番号：５の位置４、１５、２２及び３３に対応する残基を含む、本明細書において記載される合成のペプチドまたはポリペプチドを含む、組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置２２に対応する残基は、ヒスチジン残基ではない。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置２２に対応する残基は、Ｋ、ｈＬｙｓ、Ｒ、ｈＡｒｇ及びオルニチンからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、配列番号：５の位置２２に対応する残基はＫである。いくつかの実施形態において、配列番号：５の位置２２に対応する残基はｈＬｙｓである。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置４に対応する残基はＳである。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置４に対応する残基は、Ｔ、ＮまたはＧからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置１５及び３３に対応する残基は、それぞれＴ及びＲである。
【００１５】
いくつかの実施形態において、グループ化された残基の疎水性ドメイン（ドメインＬ）を含み、該ドメインは配列番号：５の位置３、７、１０、１１、１４、１８、２１、２５、２８、２９及び３２に対応する残基を含む、本明細書において記載される合成のペプチドまたはポリペプチドを含む、組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、疎水性ドメインの１つまたは複数の残基は、配列番号：５の対応する位置に同一ではない。いくつかの実施形態において、配列番号：５の非極性脂肪族残基に対応する疎水性ドメインの１つまたは複数の残基は、Ｆ、Ｙ及びＷからなる群から選択される非極性芳香族残基により置換される。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置１０に対応する残基は、非極性芳香族残基である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置１０に対応する残基は、Ｆである。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置２９に対応する残基は、非極性芳香族残基である。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチド中の、配列番号：５の位置２９に対応する残基は、Ｆである。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、配列番号：５中の対応する位置での残基に同一ではない、配列番号：５中での位置に対応する疎水性ドメイン中の１つまたは複数の残基を含む。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではない位置のうちの少なくとも１つは、Ｙである。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではない位置のうちの少なくとも２つは、Ｙである。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではない位置のうちの少なくとも２つは、Ｆ、Ｙ及びＷからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではない位置のうちの少なくとも１つは、Ｆである。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではない位置のうちの少なくとも２つは、Ｆである。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではない位置のうちの２つはＬ１０Ｆ及びＬ２９Ｆである。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではない位置のうちの少なくとも１つは、Ｗである。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではない位置のうちの少なくとも２つは、Ｗである。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではないアミノ酸のうちの少なくとも３つは、Ｆ、Ｙ及びＷからなる群から選択される非極性芳香族アミノ酸による、非極性脂肪族アミノ酸の置換である。いくつかの実施形態において、疎水性ドメイン中の同一ではないアミノ酸のうちの少なくとも１つは、異なる非極性脂肪族アミノ酸による、非極性脂肪族アミノ酸の置換である。
【００１６】
いくつかの実施形態において、グループ化された残基のドメイン（ドメイン１）を含み、該ドメインは配列番号：５の位置１、５、１２、１６、１９、２３、３０及び３４に対応する残基を含む、本明細書において記載される合成のペプチドまたはポリペプチドを含む、組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、配列番号：５のリジン残基に対応するドメイン１内の１つまたは複数の残基は、Ｒ、ｈＡｒｇ、及びｈＬｙｓからなる群から選択される残基により置換される。いくつかの実施形態において、配列番号：５のアルギニン残基に対応するドメイン１内の１つまたは複数の残基は、Ｋ、ｈＡｒｇ、及びｈＬｙｓからなる群から選択される残基により置換される。いくつかの実施形態において、Ｒ、Ｋ、ｈＡｒｇ、及びｈＬｙｓからなる群から選択される残基により置換された配列番号：５の１つまたは複数のアルギニンまたはリジン残基以外、ドメイン１中のすべての残基は配列番号：５中の対応する残基に同一である。いくつかの実施形態において、同一ではないアミノ酸のうちの少なくとも１つはｈＡｒｇまたはｈＬｙｓによるアルギニンの置換である。
【００１７】
いくつかの実施形態において、配列：ＡＲ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）（Ｓ／Ｔ／Ｎ／Ｇ）（Ｒ／Ｋ／ｈＬｙｓ／ｈＡｒｇ）（Ｃ／Ｓ／Ｔ／Ｎ／Ｑ／Ｙ／Ｈ）（Ｖ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＱＶ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）Ｓ（Ｒ／Ｋ／ｈＬｙｓ／ｈＡｒｇ）（Ｋ／Ｒ／ｈＡｒｇ／ｈＬｙｓ／Ｏｒｎ）（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＴＬ（Ｋ／Ｒ／ｈＡｒｇ／ｈＬｙｓ／Ｏｒｎ）（Ａ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）（Ｒ／Ｋ／ｈＬｙｓ／ｈＡｒｇ）Ａ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）（Ｈ／Ｋ／ｈＬｙｓ／Ｒ／ｈＡｒｇ／Ｏｒｎ）ＡＲ（Ｉ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＱＱＮ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＤＱ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＲＥ（配列番号：２９）と比較して、１０以下（例えば１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０、またはその間の範囲）の置換（例えば保存的置換、半保存的置換、非保存的置換）を有するが、配列番号：５と１００％未満の配列同一性である、配列を含む、ペプチド及びポリペプチドが、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、配列：ＡＲＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＱＶＸ１０ＳＸ１２Ｘ１３Ｘ１４ＴＬＸ１７Ｘ１８Ｘ１９ＡＸ２１Ｘ２２ＡＲＸ２５ＱＱＮＸ２９ＤＱＸ３２ＲＥ（配列中、Ｘ３は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ４は、Ｓ、Ｔ、Ｎ、またはＧであり；Ｘ５は、Ｒ、Ｋ、ｈＬｙｓ、またはｈＡｒｇであり；Ｘ６は、Ｃ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、またはＨであり；Ｘ７は、Ｖ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ１０は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ１２は、Ｒ、Ｋ、ｈＬｙｓ、またはｈＡｒｇであり；Ｘ１３は、Ｋ、Ｒ、ｈＡｒｇ、ｈＬｙｓ、またはＯｒｎであり；Ｘ１４は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ１７は、Ｋ、Ｒ、ｈＡｒｇ、ｈＬｙｓ、またはＯｒｎであり；Ｘ１８は、Ａ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ１９は、Ｒ、Ｋ、ｈＬｙｓ、またはｈＡｒｇであり；Ｘ２１は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ２２は、Ｈ、Ｋ、ｈＬｙｓ、Ｒ、ｈＡｒｇ、またはＯｒｎであり；Ｘ２５は、Ｉ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ２９は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ３２は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷである）（配列番号：２９）と比較して、１０以下（例えば１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１、０、またはその間の範囲）の置換（例えば保存的置換、半保存的置換、非保存的置換）を有するが、配列番号：５と１００％未満の配列同一性である、配列を含む、ペプチド及びポリペプチドが、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、配列番号：２９と１００％の配列同一性を有するが、配列番号：５と１００％未満の配列同一性である、配列を含む、ペプチド及びポリペプチドが、本明細書において提供される。
【００１８】
いくつかの実施形態において、デスアミノ修飾、Ｎ−低級アルキル修飾、Ｎ−ジ−低級アルキル修飾、拘束アルキル修飾及びＮ−アシル修飾からなる群から選択されるＮ末端修飾を含む、本明細書において記載される合成のペプチドまたはポリペプチドを含む、組成物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドのＣ末端は、アミド修飾、低級アルキルアミド修飾、拘束アルキル修飾、ジアルキルアミド修飾、及び低級アルキルエステル修飾からなる群から選択される修飾を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、（ａ）本明細書において（例えば先行するパラグラフにおいて）記載される、ＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドと；（ｂ）生理学的に許容されるバッファーまたは担体とを含む、医薬調製物が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、医薬調製物は、追加の療法剤（例えばＨＴＧ、関節硬化症、コレステロールの上昇、心疾患などの治療のための）を更に含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、（ａ）本明細書において（例えば先行するパラグラフにおいて）記載される、ＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドと、（ｂ）機能的なペプチドまたはポリペプチドのセグメントとを含む、融合ペプチドまたは融合ポリペプチドが、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、機能的なペプチドまたはポリペプチドのセグメントは、シグナリング部分、療法部分、局在化部分（例えば細胞インポートシグナル、核局在化シグナルなど）、検出可能部分（例えば蛍光性部分、造影剤）、または単離／精製部分（例えばストレプトアビジン、Ｈｉｓ６など）を含む。
【００２１】
いくつかの実施形態において、本明細書において（例えば先行するパラグラフにおいて）記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチドが、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、本明細書において（例えば先行するパラグラフにおいて）記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、核酸ベクター（例えばプラスミド、バクミド、ウイルスベクター（例えばＡＡＶ））が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、ベクターは、プロモーター及び／または１つまたは複数の発現エレメント（例えば転写エンハンサー、翻訳開始部位、内部リボソーム侵入部位など）を更に含む。いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるポリヌクレオチドまたはベクターを、被験体またはサンプルへ投与することを含む方法（例えば高トリグリセリド血症の治療のための、トリグリセリド濃度の低減のためのなど）が提供される。
【００２２】
いくつかの実施形態において、本明細書において（例えば先行するパラグラフにおいて）記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドを、高トリグリセリド血症または関連する病態もしくは疾患（例えばアテローム性動脈硬化、心疾患、急性膵炎など）を患う被験体へ、投与することを含む、高トリグリセリド血症または該関連する病態もしくは疾患を治療する方法が、本明細書において提供される。
【００２３】
いくつかの実施形態において、本明細書において（例えば先行するパラグラフにおいて）記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドを、高トリグリセリド血症または関連する病態もしくは疾患（例えばアテローム性動脈硬化、心疾患、急性膵炎など）のリスク（例えば家族歴、遺伝的素因、トリグリセリドの上昇、生活習慣、年齢、性別など）がある被験体へ、投与することを含む、高トリグリセリド血症または該関連する病態もしくは疾患を防止する方法が、本明細書において提供される。
【００２４】
いくつかの実施形態において、本明細書において（例えば先行するパラグラフにおいて）記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドを、被験体へ投与することを含む、被験体におけるアテローム性動脈硬化及び／または心血管性疾患を治療または防止する方法が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、投与は、（ａ）前記ペプチドまたはポリペプチドと、（ｂ）アテローム性動脈硬化及び／または心血管性疾患の治療及び／または防止のための療法及び／または療法剤とを、共投与することを含む。いくつかの実施形態において、（ａ）及び（ｂ）は、同時に及び／または単一医薬調製物中で投与される。いくつかの実施形態において、（ａ）及び（ｂ）は、並列して及び／または分離した医薬調製物中で投与される。
【００２５】
いくつかの実施形態において、（ａ）本明細書において（例えば先行するパラグラフにおいて）記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドを、（ｉ）トリグリセリドと（ｉｉ）トリグリセリド加水分解リパーゼとを含むサンプルへ、投与すること；または（ｂ）（ｉ）本明細書において（例えば先行するパラグラフにおいて）記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドと（ｉｉ）トリグリセリド加水分解リパーゼとを、トリグリセリドを含むサンプルへ、投与すること、を含む、サンプル中のトリグルセリド濃度を低減させる方法が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、トリグリセリド加水分解リパーゼは、リポタンパク質リパーゼ（ＬｐＬ）、内皮リパーゼ（ＥＬ）、及び肝性リパーゼ（ＨＬ）からなる群から選択される。
【００２６】
いくつかの実施形態において、高トリグリセリド血症または関連する病態もしくは疾患（例えばアテローム性動脈硬化、心疾患、急性膵炎など）の治療のための、本明細書において記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドの使用が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、医薬品としての使用のための、本明細書において記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドが、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、高トリグリセリド血症または関連する病態もしくは疾患（例えばアテローム性動脈硬化、心疾患、急性膵炎など）の治療における使用のための、ＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドが、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、高トリグリセリド血症または関連する病態もしくは疾患（例えばアテローム性動脈硬化、心疾患、急性膵炎など）の治療のための医薬品の製造のための、本明細書において記載されるＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドの使用が、本明細書において提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１Ａ】ヒトアポＡ−Ｖタンパク質配列（成熟タンパク質；ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ６Ｑ７８８；配列番号：１）。様々な集団中で同定されており、高トリグリセリド血症（ＨＴＧ）と関連する、欠失及び複数の突然変異を強調表示する。
【図１Ｂ】残基１９９〜２５９内のアポＡ−Ｖの機能喪失型突然変異／欠失クラスター。この領域が可能性のあるＬｐＬ刺激ドメインを保有し得ることを指摘する。高トリグリセリド血症及び／またはＣＡＤに結び付けられるアポＡ−Ｖのすべての公知の配列バリアントのマッピングは、残基１９９〜２５９内にクラスター化し、垂線及び星印の突然変異は、アポＡ−ＶのＬｐＬ刺激活性を低減させることがこれまでに報告された突然変異を表わす。
【図１Ｃ】アポＡ−Ｖについての３Ｄモデル（Ｐｈｙｒｅ２）はαヘリックスリッチな構造を予測する。
【図１Ｄ】試験ペプチドＡＶ１９９−２３７は、推定上のロイシンジッパーモチーフ（配列番号：２０）を含有する。
【図２Ａ】（Ｓｅｒ２３２＿Ｌｅｕ２３５）ｄｅｌ及びｌｅｕ２５３Ｐｒｏ  ＳＮＰｓの所在位置を強調表示する、Ｐｈｙｒｅ２によるアポＡ−Ｖの予測される３Ｄ構造。
【図２Ｂ】公知のタンパク質構造攪乱物質である、Ｐ及びＡリッチな配列（α−ヘリックスブレーカー）を、括弧でくくって示したタンパク質配列（配列番号：２）。合成ペプチドＡＶ１９９−２３７（配列番号：３）についての鋳型は、視覚的検査によって選択された。ペプチドの番号付けは成熟タンパク質に基づく（シグナルペプチドは除く）。
【図３】〔図３Ａ〕蛍光発生性ＴＧ類似体のＥｎｚＣｈｅｋ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用するリポタンパク質リパーゼ（ＬｐＬ）活性アッセイ。酵素反応混合物は、１００μｌのトリス緩衝食塩水（ＴＢＳ）、１％のＢＳＡ、ｐＨ７．８、０．０１５％のＺｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ  ３−１４、及び１μＭのＥｎｚＣｈｅｋ基質中の、濃度を増加させたＬｐＬで構成された。反応を蛍光（λｅｘ＝４８２ｎｍ、λｅｍ＝５１５ｎｍ）によってモニターし、時間に対する相対的蛍光単位（ＲＦＵ）をプロットした。
【００２８】
〔図３Ｂ〕ＢＯＤＩＰＹ標識脂肪酸（ＢＯＤＩＰＹ−ＦＡ）を使用して、リパーゼにより生成された生成物濃度を決定した。
【００２９】
〔図３Ｃ〕Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｉｎｃ．から購入したＥｎｚＣｈｅｋ基質（Ｅ３３９５５）の構造。
【図４】肝細胞（ＨｅｐＧ２）及び単球（ＲＡＷ２６７．４）の株化細胞においてアッセイされたリパーゼ活性。ＨｅｐＧ２培養において、反応はＴＧ基質の細胞表面接触に依存した。細胞からの反応媒質の除去は、産物の更なる産生を停止させ、細胞に戻すことにより反応は再開始された（Ａ）。ヘパリン（細胞表面からリパーゼを除去することが公知である）によるＨｅｐＧ２細胞の前洗浄も、ＴＧ基質の加水分解率を低減させた（Ｂ）。両方の細胞（Ｃ）及び純粋なＬｐＬ（Ｄ）は、異なるリポタンパク質（ＶＬＤＬ、ＬＤＬ及びＨＤＬ）のアポタンパク質含有量に感受性があった。
【図５】ＡＶ１９９−２３７ペプチドは、ＬｐＬ活性を刺激したが、それはＴＧリッチリポタンパク質の存在下においてのみであった。ペプチドがＶＬＤＬまたはＬＤＬのいずれかにより最初にインキュベーション（Ｂ）されなかったならば、ＬｐＬへ添加したペプチド（１０μＭ）は酵素活性を増加させなかった（パネルＡ）。ＶＬＤＬまたはＬＤＬのいずれかの追加は、アポＣ−ＩＩＩ含有量に起因してＬｐＬ活性の低減を引き起こした。ＡＶ１９９−２３７  ＬｐＬ刺激活性を、ＬｐＬの別の活性化因子であるアポＣ−ＩＩペプチド（Ｃ−ＩＩ５０−７９）に比べた（Ｃ）。ＡＶ１９９−２３７ペプチドはＶＬＤＬの存在下においてＬｐＬ活性を刺激したが、ＡＶ２５０−２８８は刺激しなかった（Ｄ、Ｅ）。
【図６】〔図６Ａ〕ＡＶ１９９−２３７ペプチドは、培養における生肝細胞の肝性リパーゼ（ＨＬ）の活性の刺激に効果的であった。
【００３０】
〔図６Ｂ〕細胞へのＡＶ１９９−２３７（１０μＭ）の追加はＨＬ活性をおよそ２．８倍増加させ、反応がモニターされた全７５分間の期間にわたって持続された。
【図７】ＡＶ残基１９９〜２８８をリパーゼ刺激活性についてスクリーニングして、ＬｐＬ活性の刺激に必要な最小ペプチド配列を決定した。相対活性を＋＋、＋、及び−により示す。
【図８】完全なリパーゼ刺激活性（Ｂ、Ｄ）を保有する最小ペプチド配列（Ａ）の決定。ＡＶ１９９−２３７をＡＶ１９９−２３２へ５残基短縮することは活性の促進をもたらす一方で、更なる長さの低減は活性に対する負の効果があった。アッセイは、インビトロのＬｐＬアッセイ（Ｂ）または肝細胞（ＨｅｐＧ２）細胞培養（Ｄ）への１０μＭのペプチドの添加によって遂行された。２４ウェルの組織培養プレート中で、細胞を、２００μＬのＴＢＳ、１．５％のＢＳＡ、０．２％のｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ  ３−１４、１μＭ  ＥｎｚＣｈｅｋ基質中で、３７℃で１時間インキュベーションした。ＡＶ１９９−２３２は、ＬｐＬを発現することが公知である生ＴＨＰ−１マクロファージの培養においても活性があった（Ｃ）。
【図９】ＡＶ１９９−２３２は基質への親和性の改善によってＬｐＬ活性を刺激する。リパーゼ反応を異なる基質濃度（０〜２５μＭ）により遂行して（Ａ、Ｃ、Ｄ）、ＬｐＬ酵素活性、＋／−ＶＬＤＬ（１０μｇ／ｍｌ）、及び＋／−ＡＶ１９９−２３２（２．５μＭ）の反応速度パラメーターを決定した。（Ｂ）ＶＬＤＬの追加により基質についての酵素親和性は５．３倍低減し、それはアポＣ−ＩＩＩによる阻害と一致する。ＡＶ１９９−２３２は、Ｖｍａｘ及びＫｍのわずかな変化のみを示した。ＡＶ１９９−２３２＋ＶＬＤＬは、ＬｐＬの基質への見かけ上の親和性を７．８倍増加させる。反応速度パラメーターは、Ｍｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｅｎ酵素反応速度式へのＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェア曲線のフィッティングを使用して決定された。
【図１０】〔図１０Ａ〕ＡＶ１９９−２３２は、ヘパリンを結合するα−ヘリックスペプチドである。ペプチドの折り畳み及び立体配座は、円偏光二色性分光法（Ａ）によって実験的に分析され、約４２％がαヘリックスであると計算され、それはヘパリンの結合に際して約７６％へ増加した。
【００３１】
〔図１０Ｂ〕Ｐｈｙｒｅ２を使用するコンピューター内での３Ｄモデリングも、ペプチドがαヘリックスへとエネルギー的に折り畳まれ得ることを指摘した。
【図１１】〔図１１Ａ〕ＡＶ１９９−２３２の構造的な表示。円偏光二色性解析に一致する３Ｄ構造モデル（＞８８％αヘリックスであると予測される（ｐｒｅｄｉｃｔｐｒｏｔｅｉｎ．ｏｒｇ））。
【００３２】
〔図１１Ｂ〕ＡＶ１９９−２３２の構造的な表示。Ｈｅｌｉｑｕｅｓｔ２フリーウェアを使用して生成されたヘリカルホイール表示により、４つの別個のドメイン（１、２、Ｈ及びＬ）が明らかにされる。
【００３３】
〔図１１Ｃ〕ＡＶ１９９−２３２の構造的な表示。個別のドメインの各々中の対象となるいくつかの重要な残基を強調表示するＡＶ１９９−２３２の一次配列。
【図１２】ドメインの重要性を調査するため、選択した残基置換を備えたペプチドを合成して、ドメインを個別に「ノックアウト」した。
【図１３】ドメイン１及びドメイン２中のノックアウト置換を備えたＡＶ１９９−２３２ペプチドの、リパーゼ刺激能力（Ａ）及びヘパリン結合能力（Ｂ）。リパーゼ活性はドメイン１及びドメイン２の両方に大きく依存する一方で、ヘパリン結合はドメイン２を要求するように思われる。
【図１４】ドメインＨ中のＨ残基のＫによる置換（ＡＶ−Ｈ／Ｋ）は、ＡＶ１９９−２３２のリパーゼ刺激能力を実質的に改善した。ＶＬＤＬの非存在下において、ＡＶ−Ｈ／ＫはＬｐＬ活性を１．６倍刺激した（Ａ／Ｃ）。ＬｐＬへ添加する前にＶＬＤＬと共にインキュベーションした場合に、ＡＶ−Ｈ／ＫはＬｐＬ活性を８倍刺激し、ＡＶ１９９−２３２に対して４４％増加した（Ｂ／Ｄ）。ペプチドはすべて１０μＭの濃度で比べた。
【図１５】〔図１５Ａ〕ＡＶ１９９−２３２はＶＬＤＬを結合する。
【００３４】
〔図１５Ｂ〕ペプチド−リポタンパク質複合体はＬｐＬ活性を刺激する。
【図１６】脂質結合面の調整はリパーゼ刺激パフォーマンスを改善する。
【図１７】リパーゼ刺激活性について試験された例示的なＡＶペプチドの要約。配列を、リパーゼ活性に対する相対的影響と共に示す。
【図１８】リパーゼ刺激活性に対するＡＶ−１９９−２３２（配列番号：５）残基の相対的影響を評価する、アラニンスキャニング。
【図１９】ＬｐＬ及びＡＶ−１９９−２３２の３Ｄ構造を、Ｐｈｙｒｅ２続いてＧａｌａｘｙＷＥＢでの分子精密化を使用して、ホモロジーベースのモデリングによって生成した。
【図２０】ＣｌｕｓＰｒｏ  ２．０（Ｂ）を使用する、ＬｐＬへのアポＣ−ＩＩＩの分子ドッキング。
【図２１】ＣｌｕｓＰＲｏ２．０を使用する、ＬｐＬへのＡＶ１９９−２３２の分子ドッキング。
【図２２】ＬｐＬ：ＡＶ１９９−２３２の相互作用を安定化する接触残基の分子モデリング予測。
【図２３】〔図２３Ａ〕白血球のＬｐＬ活性は検出可能であり、ＡＶ１９９−２３２ペプチド刺激へ応答性である。
【００３５】
〔図２３Ｂ〕白血球のＬｐＬ活性は検出可能であり、ＡＶ１９９−２３２ペプチド刺激へ応答性である。
【００３６】
〔図２３Ｃ〕白血球のＬｐＬ活性は検出可能であり、ＡＶ１９９−２３２ペプチド刺激へ応答性である。
【００３７】
〔図２３Ｄ〕ＡＶ１９９−２３２は、正常血漿及び脂質異常症血漿の存在下においてＬｐＬ活性を刺激する。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
定義
本明細書において使用される時、以下の用語は、特別に明瞭に述べられない限り、以下の意味を有するものと定義される。
【００３９】
「アミノ酸」という用語は、特別の指示のない限り、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、及びアミノ酸類似体のすべてのＤ及びＬの立体異性体（それらの構造がかかる立体異性形状を可能にするならば）におけるものを指す。
【００４０】
天然のアミノ酸には、アラニン（ＡｌａまたはＡ）、アルギニン（ＡｒｇまたはＲ）、アスパラギン（ＡｓｎまたはＮ）、アスパラギン酸（ＡｓｐまたはＤ）、システイン（ＣｙｓまたはＣ）、グルタミン（ＧｌｎまたはＱ）、グルタミン酸（ＧｌｕまたはＥ）、グリシン（ＧｌｙまたはＧ）、ヒスチジン（ＨｉｓまたはＨ）、イソロイシン（ＩｌｅまたはＩ）、ロイシン（ＬｅｕまたはＬ）、リジン（ＬｙｓまたはＫ）、メチオニン（ＭｅｔまたはＭ）、フェニルアラニン（ＰｈｅまたはＦ）、プロリン（ＰｒｏまたはＰ）、セリン（ＳｅｒまたはＳ）、スレオニン（ＴｈｒまたはＴ）、トリプトファン（ＴｒｐまたはＷ）、チロシン（ＴｙｒまたはＹ）及びバリン（ＶａｌまたはＶ）が含まれる。
【００４１】
非天然アミノ酸には、アゼチジンカルボン酸、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、β−アラニン、ナフチルアラニン（「ｎａｐｈ」）、アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、第三級ブチルグリシン（「ｔＢｕＧ」）、２，４−ジアミノイソ酪酸、デスモシン、２，２’−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、ホモプロリン（「ｈＰｒｏ」または「ｈｏｍｏＰ」）、ヒドロキシリシン、アロヒドロキシリシン、３−ヒドロキシプロリン（「３Ｈｙｐ」）、４−ヒドロキシプロリン（「４Ｈｙｐ」）、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルアラニン（「ＭｅＡｌａ」または「Ｎｉｍｅ」）、Ｎ−アルキルグリシン（「ＮＡＧ」）（Ｎ−メチルグリシンが含まれる）、Ｎ−メチルイソロイシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシン（「ＮＡＰＧ」）（Ｎ−メチルペンチルグリシンが含まれる）、Ｎ−メチルバリン、ナフチルアラニン、ノルバリン（「Ｎｏｒｖａｌ」）、ノルロイシン（「Ｎｏｒｌｅｕ」）、オクチルグリシン（「ＯｃｔＧ」）、オルニチン（「Ｏｒｎ」）、ペンチルグリシン（「ｐＧ」または「ＰＧｌｙ」）、ピペコリン酸、チオプロリン（「ＴｈｉｏＰ」または「ｔＰｒｏ」）、ホモリジン（「ｈＬｙｓ」）、及びホモアルギニン（「ｈＡｒｇ」）が含まれるが、これらに限定されない。
【００４２】
「アミノ酸類似体」という用語は、Ｃ末端カルボキシ基、Ｎ末端アミノ基及び側鎖官能基のうちの１つまたは複数が、化学的に可逆的または不可逆的にブロックされるか、またはそうでなければ別の官能基へ修飾された、天然アミノ酸または非天然アミノ酸を指す。例えば、アスパラギン酸−（β−メチルエステル）は、アスパラギン酸のアミノ酸類似体であり；Ｎ−エチルグリシンは、グリシンのアミノ酸類似体であり；またはアラニンカルボキサミドはアラニンのアミノ酸類似体である。他のアミノ酸類似体には、メチオニンスルホキシド、メチオニンスルホン、Ｓ−（カルボキシメチル）−システイン、Ｓ−（カルボキシメチル）−システインスルホキシド、及びＳ−（カルボキシメチル）−システインスルホンが含まれる。
【００４３】
本明細書において使用される時、「ペプチド」という用語は、ペプチド結合によって一緒に連結されるアミノ酸の短いポリマーを指す。他のアミノ酸ポリマー（例えばタンパク質、ポリペプチドなど）とは対照的に、ペプチドはアミノ酸約５０以下の長さである。ペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、アミノ酸類似体、及び／または修飾アミノ酸を含み得る。ペプチドは、天然に存在するタンパク質のサブ配列または非天然（合成）配列であり得る。
【００４４】
本明細書において使用される時、「変異ペプチド」という用語は、「野生型」配列と称される天然に存在する最も一般的なバリアントとは別のアミノ酸配列を有する、ペプチドのバリアントを指す。変異ペプチドは、変異タンパク質もしくは変異ポリペプチドのサブ配列（例えば天然で最も一般的な配列ではない、天然に存在するタンパク質のサブ配列）であり得るか、または天然に存在するタンパク質もしくは天然に存在するポリペプチドのサブ配列ではないペプチドであり得る。例えば、「変異アポＡ−Ｖペプチド」は、アポＡ−Ｖの変異バージョンのサブ配列であり得るか、または天然に存在するアポＡ−Ｖタンパク質において見出されない別の配列であり得る。
【００４５】
本明細書において使用される時、「合成ペプチド」という用語は、天然ペプチド及び／または天然タンパク質において見出されるものとは別のアミノ酸配列を有するペプチドを指す。合成タンパク質は、野生型（すなわち最も多い）バージョンまたはその変異バージョンのいずれかの、天然に存在するタンパク質のサブ配列ではない。例えば、「合成アポ−Ｖペプチド」（「ｓＡＶペプチド」）は、天然に存在するアポＡ−Ｖのサブ配列ではない。「合成ペプチド」は、本明細書において使用される時、任意の好適な方法（例えば組換え発現、化学合成、酵素的合成など）によって生成または合成することができる。
【００４６】
「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃ）」または「ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）」という用語は、タンパク質またはペプチドに由来する配列をまねる、ペプチド様分子を指す。ペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃ）またはペプチド模倣物（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）は、アミノ酸構成要素及び／または非アミノ酸構成要素を含有することができる。ペプチド模倣物の例には、化学的に修飾したペプチド、ペプトイド（側鎖はα炭素ではなくペプチド骨格の窒素原子へ付加される）、βペプチド（アミノ基はα炭素ではなくβ炭素へ結合される）などが含まれる。
【００４７】
本明細書において使用される時、「保存的」アミノ酸置換は、類似の化学的特性（サイズまたは荷電等）を有する別のアミノ酸による、ペプチドまたはポリペプチド中のアミノ酸の置換を指す。本開示の目的のために、以下の８群：
１）アラニン（Ａ）及びグリシン（Ｇ）；
２）アスパラギン酸（Ｄ）及びグルタミン酸（Ｅ）；
３）アスパラギン（Ｎ）及びグルタミン（Ｑ）；
４）アルギニン（Ｒ）及びリジン（Ｋ）；
５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、及びバリン（Ｖ）；
６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）；
７）セリン（Ｓ）及びスレオニン（Ｔ）；ならびに、
８）システイン（Ｃ）及びメチオニン（Ｍ）
の各々は、互いについて保存的置換であるアミノ酸を含有する。
【００４８】
天然に存在する残基は一般的な側鎖特性に基づいたクラスへと分類され、例えば、極性、正（ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）及びアルギニン（Ｒ））；極性、負（アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ））極性、中性（セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ））；非極性、脂肪族（アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、メチオニン（Ｍ））；非極性、芳香族（フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ））；プロリン及びグリシン；ならびにシステインである。本明細書において使用される時、「半保存的」アミノ酸置換は、同じクラス内の別のアミノ酸によるペプチドまたはポリペプチド中のアミノ酸の置換を指す。
【００４９】
いくつかの実施形態において、特別の定めのない限り、保存的または半保存的なアミノ酸置換は、天然残基へ類似の化学的特性を有する天然に存在しないアミノ酸残基も包含し得る。これらの非天然残基は、生物学的系中での合成によってではなく、典型的には化学的ペプチド合成によって取り込まれる。これらには、ペプチド模倣物及びアミノ酸部分の他の反転型（ｒｅｖｅｒｓｅｄ  ｆｏｒｍ）または逆転型（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｆｏｒｍ）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書における実施形態は、いくつかの実施形態において、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、及び／またはアミノ酸類似体へ限定され得る。
【００５０】
非保存的置換は、１つのクラスのメンバーを別のクラスからのメンバーで交換することを包含し得る。
【００５１】
本明細書において使用される時、「配列同一性」という用語は、２つのポリマー配列（例えばペプチド、ポリペプチド、核酸など）が、モノマーサブユニットの同じ連続的な組成物を有する程度を指す。「配列類似性」という用語は、２つのポリマー配列（例えばペプチド、ポリペプチド、核酸など）が、保存的及び／または半保存的なアミノ酸置換のみで異なる程度を指す。「パーセント配列同一性」（または「パーセント配列類似性」）は、（１）比較のウィンドウ（例えばより長い配列の長さ、より短い配列の長さ、指定されたウィンドウなど）にわたる２つの最適に整列させた配列を比較すること、（２）同一の（または類似する）モノマーを含有する（例えば、同じアミノ酸が両方の配列において起こる、類似のアミノ酸が両方の配列において起こる）位置の数を決定して、一致した位置の数を得ること、（３）比較ウィンドウ（例えばより長い配列、より短い配列の長さ、指定されたウィンドウの長さ）中の位置の総数によって、一致した位置の数を割ること、及び（４）結果に１００を掛けてパーセント配列同一性またはパーセント配列類似性を得ることによって計算される。例えば、ペプチドＡ及びＢが両者とも２０アミノ酸長であり、１つの位置以外のすべてで同一のアミノ酸を有するならば、ペプチドＡ及びペプチドＢは９５％の配列同一性を有する。同一ではない位置でのアミノ酸が同じ生物物理学的特徴を共有する（例えば両者が酸性である）ならば、そのときペプチドＡ及びペプチドＢは１００％の配列類似性を有するだろう。別の例として、ペプチドＣが２０アミノ酸長であり、ペプチドＤが１５アミノ酸長であり、ペプチドＤ中の１５アミノ酸のうちの１４アミノ酸が、ペプチドＣの一部分のアミノ酸に同一であるならば、そのときペプチドＣ及びＤは７０％の配列同一性を有するが、ペプチドＤはペプチドＣの至適比較ウィンドウに対して９３．３％の配列同一性を有する。「パーセント配列同一性」（または「パーセント配列類似性」）を本明細書において計算する目的のために、整列させた配列中の任意のギャップはその位置でミスマッチとして処理する。
【００５２】
本明細書において使用される時、「グループ化された残基」という用語は、三次元空間において物理的に一緒に配置されるペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質内の１セットのアミノ酸を指す。グループ化された残基は、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質の一次配列中で連続的であっても、または連続的でなくてもよい。残基は、球状ドメイン中でグループ化され得るか、同じ表面上に存在し得るか、またはペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質内の二次構造（例えばαヘリックス）もしくは三次構造の同じ端部もしくは側面上に提示され得る。いくつかの実施形態において、物理的に一緒に配置されることに加えて、グループ化された残基は、残基特徴（例えばサイズ及び極性荷電など）のある程度の類似性も示す。
【００５３】
本明細書において使用される時、「被験体」という用語は、ヒト及び非ヒト動物（例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、家禽、魚類、甲殻類など）を含むが、これらに限定されない、任意の動物を広く指す。本明細書において使用される時、「患者」という用語は、典型的には疾患または病態について治療されている被験体を指す。
【００５４】
本明細書において使用される時、「効果的な量」という用語は、組成物（例えば合成ペプチド）の有益なまたは所望される結果を達成するのに十分な量を指す。効果的な量は、１つまたは複数の投与、適用または投薬量で投与することができ、特定の製剤または投与経路へ限定されるとは意図されない。
【００５５】
本明細書において使用される時、「投与」及び「投与すること」という用語は、薬物、プロドラッグ、または他の薬剤もしくは療法用の治療（例えば合成のペプチド）を、被験体、またはインビボの細胞、インビトロの細胞もしくはエクスビボ細胞、組織及び器官へ、与える行為を指す。ヒト身体への例示的な投与経路は、脳のくも膜または脊髄（髄腔内）下の空間、眼（眼用）、口（経口）、皮膚（局所または経皮）、鼻（鼻腔）、肺（吸入）、口腔粘膜（頬側）、耳、直腸、膣を介するもの、注射（例えば静脈内、皮下、腫瘍内、腹腔内など）によるもの、及び同種のものであり得ある。
【００５６】
本明細書において使用される時、「共投与」及び「共投与すること」という用語は、少なくとも２つの薬剤（複数可）（例えば多重合成ペプチドまたは合成ペプチド及び別の療法剤）または療法の被験体への投与を指す。いくつかの実施形態において、２つまたはそれ以上の薬剤または療法の共投与は並列である。他の実施形態において、第１の薬剤／療法は第２の薬剤／療法の前に投与される。当業者は、使用される様々な薬剤または療法の製剤及び／または投与経路が変動し得ることを理解する。共投与に適切な投薬量は、当業者によって容易に決定することができる。いくつかの実施形態において、薬剤または療法が共投与される場合、それぞれの薬剤または療法は、単独での投与に適切であるよりも少ない投薬量で投与される。したがって、薬剤もしくは療法の共投与が有害な（例えば毒性のある）可能性のある薬剤（複数可）の必須の投薬量を低下させる場合に、及び／または、２つもしくはそれ以上の薬剤の共投与が他の薬剤の共投与経由で薬剤のうちの１つの有益な効果への被験体の感作をもたらす場合に、複数の実施形態において共投与は特に所望される。
【００５７】
本明細書において使用される時、「治療」という用語は、有益であるかまたは意図された臨床結果を得ることへのアプローチを意味する。有益であるかまたは意図された臨床結果には、症状の緩和、疾患の重症度の低減、疾患もしくは病態の根本原因の阻害、進行していない状態での疾患の安定、疾患の進行の遅延、及び／または疾患病態の改善もしくは緩和が含まれ得る。
【００５８】
本明細書において使用される時、「医薬組成物」という用語は、組成物をインビトロ、インビボ、またはエクスビボでの診断用または療法用の使用に特に好適にする、不活性または活性のある担体と活性のある薬剤（例えば合成ＡＶペプチド）の組み合わせを指す。
【００５９】
「薬学的に許容される」または「薬理学的に許容される」という用語は、本明細書において使用される時、被験体へ投与された場合の有害反応（例えば、毒性、アレルギー、または免疫反応）を実質的に産生しない組成物を指す。
【００６０】
本明細書において使用される時、「薬学的に許容される担体」という用語は、任意の標準的な医薬担体を指し、これらには、リン酸緩衝食塩水溶液、水、エマルション（例えば油／水または水／油エマルション等）、及び様々なタイプの湿潤剤、任意及びすべての溶媒、分散物媒質、コーティング、ラウリル硫酸ナトリウム、等張剤及び吸収遅延剤、崩壊剤（例えばジャガイモデンプンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）、ならびに同種のものが含まれるが、これらに限定されない。組成物は安定剤及び保存剤も含むことができる。担体、安定剤及びアジュバントの例については、例えばＭａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９７５）（その全体は参照により本明細書に援用される）を参照されたい。
【００６１】
本明細書において使用される時、「拘束アルキル」という用語は、分岐状、環式、融合されたアルキル基、ならびにアダマンチル基を指す。
【００６２】
本明細書において使用される時、「低級アルキル」という用語は、Ｃ１−Ｃ４のアルキル基（例えばメチル基、エチル基、プロピル、及びブチル基）を指す。
【００６３】
本明細書における多くの実施形態が、非制限的な「含むこと」という文言を使用して記載される。かかる実施形態は、かかる文言を使用して、あるいは請求または記載され得る、複数の制限的な「からなる」実施形態及び／または「から本質的になる」実施形態を包含する。
【００６４】
発明を実施するための形態
合成のリパーゼ刺激ペプチドを含む組成物ならびに高トリグリセリド血症及び他の病態及び疾患をそれにより治療する方法が、本明細書において提供される。特に、アポＡ−Ｖのリパーゼ刺激活性またはその促進を示す合成のペプチド（ＡＶペプチド）及びペプチド模倣物（ＡＶペプチド模倣物）に加えて、その使用の方法が、提供される。
【００６５】
リパーゼのサブセット（リポタンパク質リパーゼ（ＬｐＬ）、内皮リパーゼ（ＥＬ）、及び肝性リパーゼ（ＨＬ）が含まれる）のトリグリセリド（ＴＧ）加水分解活性を、本明細書において記載されるアッセイのうちの１つまたは複数において、刺激する（例えば配列番号：１、配列番号：３、配列番号：５などに関して少なくとも２倍（例えば＞２倍、＞３倍、＞４倍、＞５倍、＞６倍、＞７倍、＞８倍、＞９倍、＞１０倍もしくはそれ以上、またはその中の範囲）で）、合成ペプチド（アポＡ−Ｖペプチドまたは同義的にＡＶペプチド）が、本明細書において提供される。これらのリパーゼは、例えば血漿中の循環ＴＧの濃度を低減する細胞表面酵素である。これらのリパーゼ（例えばＬｐＬ、ＥＬ、ＨＬなど）の酵素活性の刺激は、血漿ＴＧレベルの低減をもたらし、高トリグリセリド血症（ＨＴＧ）として公知の臨床的に上昇したＴＧについて高度に特異的な療法用の治療を提供する。
【００６６】
トリグリセリド（トリアシルグリセリド、ＴＧとも）は、エステル結合によって連結されるグリセロール及び３−脂肪酸からなるタイプの脂質である。ＴＧは植物油及び動物脂の主成分であり、脂肪酸はすべての主要栄養素のうちで最も高いエネルギー密度であり、炭水化物（例えばグルコース及びグリコーゲン）よりも約２．２倍多いカロリーエネルギーを含有する。ヒトにおいて、血漿ＴＧ濃度は通常は約１００〜１５０ｍｇ／ｄＬで維持される。しかしながら、ＴＧレベルは過去３０年にわたって着実に上昇しており、現在工業化世界中の集団の約３分の１で血漿ＴＧが慢性的に上昇していることが推定される。高トリグリセリド血症（ＨＴＧ）として公知であるこの病態には、多くの原因（生活習慣／栄養学及び医薬物及び遺伝学が含まれる）があり得、冠動脈疾患（ＣＡＤ）（虚血性脳卒中、心疾患が含まれる）、メタボリック症候群及び膵臓炎について認識される危険因子である（＞５００ｍｇ／ｄＬ）（Ｄｏ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４５，１３４５−１３５２；その全体は参照により本明細書に援用される）。高トリグリセリド血症（ＨＴＧ）が、インシュリン抵抗性及び糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）ならびに癌を発達させる危険因子であるという強い指摘もある。正確なメカニズムは明らかではないが、高トリグリセリド血症（ＨＴＧ）は、ＬＤＬコレステロールの増加及びＨＤＬコレステロールの減少と関連し、それはアテローム生成促進的な脂質異常症にも寄与し、異常なリポタンパク質プロセシングに起因する可能性が高い。ＨＴＧに罹患する患者を異なる重症度のカテゴリーへと分類することができ、これらのカテゴリーへと分類される集団のパーセンテージは、多くの臨床研究において推定された（Ｄｏ，Ｒ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．４５，１３４５−１３５２；Ｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）Ａｒｃｈ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１６９，５７２−５７８；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１０７，８９１−８９７；それらの全体は参照により本明細書に援用される）。
【００６７】
ＴＧは、主としてリパーゼ、リポタンパク質リパーゼ（ＬｐＬ）、内皮リパーゼ（ＥＬ）、及び肝性リパーゼ（ＨＬ）のファミリー（それはヘパラン硫酸との高親和性相互作用によって細胞表面へつながれる）の酵素作用を介して、血中循環から消去される。これらのリパーゼは、今度は血中循環中でＴＧリッチリポタンパク質（キロミクロン、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ及びＨＤＬ）を結合し、ＴＧを遊離脂肪酸及びモノアシルグリセロール（それは細胞によって容易に取り上げられ、代謝される）へと加水分解する。リパーゼ酵素活性は、リポタンパク質と会合する多くの置換可能なアポリポタンパク質（アポ）によって影響を受ける。おそらく、最もよく特徴が明らかにされているものは、それぞれリパーゼ活性を刺激及び阻害するアポＣ−ＩＩ及びアポＣ−ＩＩＩである。
【００６８】
いくつかの実施形態において、高トリグリセリド血症、トリグルセリドレベルの増加、心血管性疾患、関節硬化症、急性膵炎、糖尿病、肝脂肪変性、ならびに／または関連する疾患及び病態のうちの１つまたは複数を治療または防止する、組成物、キット、系、及び／または方法が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、トリグリセリドの加水分解は組成物及び本明細書において記載される方法によって活性化される。いくつかの実施形態において、トリグリセリド加水分解タンパク質（例えばリポタンパク質リパーゼ（ＬｐＬ）、内皮リパーゼ（ＥＬ）、及び肝性リパーゼ（ＨＬ））及び／または経路は、本明細書において記載される組成物及び方法によって活性化される。いくつかの実施形態において、組成物及び方法は、高トリグリセリド血症、トリグルセリドレベルの増加、心血管性疾患、関節硬化症、急性膵炎、糖尿病、肝脂肪変性、ならびに／または関連する疾患及び病態の治療及び／または防止において利用される。いくつかの実施形態において、組成物及び方法は、高トリグリセリド血症、トリグルセリドレベルの増加、心血管性疾患、関節硬化症、急性膵炎、糖尿病、肝脂肪変性、ならびに／または関連する疾患及び病態の治療及び／または防止において有用なペプチド及びポリペプチドについてのスクリーニングにおいて利用される。
【００６９】
いくつかの実施形態において、高トリグリセリド血症、トリグルセリドレベルの増加、ならびに／または関連する疾患及び病態の治療または防止のための医薬組成物、ペプチド、タンパク質、ポリペプチド、核酸をコードするペプチド、タンパク質及びポリペプチド、前述のものの分子複合体などが、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチド及びＡＶポリペプチド（例えば全長アポＡ−Ｖ（配列番号：１）の１００％未満の配列同一性のもの、または全長アポＡ−Ｖの断片（例えば配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、またはその短縮型バージョン）などを含む）が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、ペプチドは合成ペプチドである。いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるポリペプチドまたはペプチドは、当技術分野における当業者に公知の方法によって調製される。例えば、ペプチドまたはポリペプチドは、固相ポリペプチド合成技法（例えばＦｍｏｃまたはＢｏｃ化学）を使用して合成することができる。あるいは、ペプチドまたはポリペプチドは、組換ＤＮＡ技術を使用して（例えば、細菌発現系または真核生物発現系を使用して）生成することができる。さらに、ペプチドまたはポリペプチドは被験体内で発現され得る（例えば適切なベクターの投与に続いて）。したがって、かかる方法を促進するために、ポリペプチドをコードする配列を含む遺伝子ベクター（例えばプラスミド及びウイルスベクターなど（例えばＡＡＶ））に加えて、かかるベクターを含む宿主細胞が、本明細書において提供される。さらに、かかる方法経由で生成されたペプチド及びポリペプチドが、本明細書において提供される。
【００７０】
いくつかの実施形態において、アポＡ−Ｖベースのペプチド及びポリペプチドならびにそれに関連する組成物（例えばアポＡ−Ｖベースのペプチド及びポリペプチドの模倣物、アポＡ−Ｖベースのペプチド及びポリペプチドをコードする核酸など）の投与が提供される。いくつかの実施形態において、トリアシルグリセリドの分解（例えば加水分解など）を促進するペプチド及びポリペプチド、またはそうでなければ本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドの投与が、本明細書において提供される。かかるペプチド及びポリペプチドの例には、配列番号：２〜２９からなる群から選択されるものが含まれる。いくつかの実施形態において、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：２９のうちの１つまたは複数を含むかまたはそれらからなる、ペプチドまたはポリペプチドが、提供される。いくつかの実施形態において、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、配列番号：１７、配列番号：１８、配列番号：１９、配列番号：２０、配列番号：２１、配列番号：２２、配列番号：２３、配列番号：２４、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７、配列番号：２８、配列番号：２９のうちの１つへ少なくとも５０％の配列同一性（例えば少なくとも６０％の配列同一性、少なくとも７０％の配列同一性、少なくとも８０％の配列同一性、少なくとも９０％の配列同一性、少なくとも９５％の配列同一性など）を含む、ペプチドまたはポリペプチドが、提供される。いくつかの実施形態において、ペプチド及びポリペプチドは、野生型配列（例えば配列番号：１〜８）からの少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、ＡＲＬＳＲＣＶＱＶＬＳＲ（Ｘ１）ＬＴＬ（Ｘ２）ＡＫＡＬ（Ｘ３）ＡＲＩＱＱＮＬＤＱＬＲＥ（式中、Ｘ１、Ｘ２及びＸ３は独立して任意のアミノ酸である）（配列番号：１５）；ＡＲＬＳＲＣＶＱＶＬＳＲ（Ｂ１）ＬＴＬ（Ｂ２）ＡＫＡＬ（Ｂ３）ＡＲＩＱＱＮＬＤＱＬＲＥ（式中、Ｂ１、Ｂ２及びＢ３は独立して任意の酸性アミノ酸及び／または荷電アミノ酸である）（配列番号：１６）；ＡＲＬＳＲＣＶＱＶＬＳＲ（Ｋ／Ｑ）ＬＴＬ（Ｋ／Ｑ）ＡＫＡＬ（Ｈ／Ｋ／Ｑ）ＡＲＩＱＱＮＬＤＱＬＲＥ（配列番号：１７）を含む。いくつかの実施形態において、前述のアポＡ−ＶペプチドまたはアポＡ−Ｖポリペプチドのうちの１つまたは複数の投与（例えば被験体へ、細胞へ、サンプルへなど）を含む方法が、本明細書において提供される。
【００７１】
本明細書における実施形態の開発の間に遂行された実験は、ＡＶ１９９−２３２（配列番号：５）がＬｐＬ活性を至適に誘導するためのアポＡ−Ｖ（配列番号：１）の最小の一部分であることを実証した。実験（生化学的変異解析、コンピューターによる研究及び分子モデリング、及びアラニンスキャニングが含まれる）により、ＡＶ１９９−２３２の様々な残基が示され、それらは、（１）リパーゼ刺激に最小限に関わるもの、（２）リパーゼ刺激に中程度に関わるもの、及び（３）リパーゼ刺激に高度に関わるもの、である。実験により、天然のＡＶ１９９−２３２配列と比較して置換された特定の残基が、ＡＶペプチドの１つまたは複数の特徴（例えばＬｐＬの活性化、可溶性、脂質結合、ヘパリン結合など）の促進を提供する（または提供し得る）ことも示される。いくつかの実施形態において、１つまたは複数の非天然の置換を備えたＡＶ１９９−２３２配列（例えば配列番号：５）を含む、ＡＶペプチドが提供される。
【００７２】
いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、本明細書におけるデータがリパーゼ活性刺激に最小限に関わることを示す位置で、配列番号：５と比較して保存的置換、半保存的置換、及び／または非保存的置換を含む。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、本明細書におけるデータがリパーゼ活性刺激に最小限に関わることを示す位置で、配列番号：５と比較して保存的置換及び／または半保存的置換を含む。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、本明細書におけるデータがリパーゼ活性刺激に最小限に関わることを示す位置で、配列番号：５と比較して保存的置換を含む。
【００７３】
いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、本明細書におけるデータがリパーゼ活性刺激に中程度に関わることを示す位置で、配列番号：５と比較して保存的置換、半保存的置換、及び／または特定の非保存的置換を含む。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、本明細書におけるデータがリパーゼ活性刺激に中程度に関わることを示す位置で、配列番号：５と比較して保存的置換及び／または半保存的置換を含む。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、本明細書におけるデータがリパーゼ活性刺激に中程度に関わることを示す位置で、配列番号：５と比較して保存的置換を含む。
【００７４】
いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、本明細書におけるデータがリパーゼ活性刺激に高度に関わることを示す位置で、配列番号：５と比較して保存的置換、半保存的置換を含む、及び／または置換を含まない。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、本明細書におけるデータがリパーゼ活性刺激に高度に関わることを示す位置で、配列番号：５と比較して保存的置換を含むか、または置換を含まない。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドは、本明細書におけるデータがリパーゼ活性刺激に高度に関わることを示す位置で、配列番号：５と比較して置換を含まない。
【００７５】
いくつかの実施形態において、本明細書における実施形態の開発の間に遂行された様々な実験は、特定の残基または残基のクラスへの置換（例えば、保存的、半保存的、非保存的）がリパーゼ活性の刺激を促進する残基（例えばリパーゼ活性刺激に、最小限に、中程度に、または高度に関わる）を示す。ＡＶ１９９−２３２ペプチド内の様々なかかる位置は本明細書において記載される実験及びデータから明らかである。特に有益であり得る特定の置換は、配列番号：２９：ＡＲ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）（Ｓ／Ｔ／Ｎ／Ｇ）（Ｒ／Ｋ／ｈＬｙｓ／ｈＡｒｇ）（Ｃ／Ｓ／Ｔ／Ｎ／Ｑ／Ｙ／Ｈ）（Ｖ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＱＶ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）Ｓ（Ｒ／Ｋ／ｈＬｙｓ／ｈＡｒｇ）（Ｋ／Ｒ／ｈＡｒｇ／ｈＬｙｓ／Ｏｒｎ）（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＴＬ（Ｋ／Ｒ／ｈＡｒｇ／ｈＬｙｓ／Ｏｒｎ）（Ａ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）（Ｒ／Ｋ／ｈＬｙｓ／ｈＡｒｇ）Ａ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）（Ｈ／Ｋ／ｈＬｙｓ／Ｒ／ｈＡｒｇ／Ｏｒｎ）ＡＲ（Ｉ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＱＱＮ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＤＱ（Ｌ／Ｆ／Ｙ／Ｗ）ＲＥ；またはＡＲＸ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＱＶＸ１０ＳＸ１２Ｘ１３Ｘ１４ＴＬＸ１７Ｘ１８Ｘ１９ＡＸ２１Ｘ２２ＡＲＸ２５ＱＱＮＸ２９ＤＱＸ３２ＲＥ（配列中、Ｘ３は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ４は、Ｓ、Ｔ、Ｎ、またはＧであり；Ｘ５は、Ｒ、Ｋ、ｈＬｙｓ、またはｈＡｒｇであり；Ｘ６は、Ｃ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、またはＨであり；Ｘ７は、Ｖ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ１０は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ１２は、Ｒ、Ｋ、ｈＬｙｓ、またはｈＡｒｇであり；Ｘ１３は、Ｋ、Ｒ、ｈＡｒｇ、ｈＬｙｓ、またはＯｒｎであり；Ｘ１４は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ１７は、Ｋ、Ｒ、ｈＡｒｇ、ｈＬｙｓ、またはＯｒｎであり；Ｘ１８は、Ａ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ１９は、Ｒ、Ｋ、ｈＬｙｓ、またはｈＡｒｇであり；Ｘ２１は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ２２は、Ｈ、Ｋ、ｈＬｙｓ、Ｒ、ｈＡｒｇ、またはＯｒｎであり；Ｘ２５は、Ｉ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ２９は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷであり；Ｘ３２は、Ｌ、Ｆ、Ｙ、またはＷである）から明らかである。
【００７６】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載される実験及び解析は、配列番号：２９中で許容される様々な置換がペプチドのリパーゼ刺激活性を促進するかまたは有意に減少しないことを指摘する。他の置換も本明細書において記載されるデータによって示すことができ、本明細書における実施形態の範囲内である。
【００７７】
いくつかの実施形態において、表１（実施例８）は、本明細書における実施形態の範囲内である、配列番号：５と比較した置換を提供する。
【００７８】
実施形態は、本明細書において記載される特定の置換によって限定されない。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される限定（例えば脂肪族ヘリックス、ＬｐＬ刺激、類似のドメイン構成など）を満たし、明瞭に記載されない置換を有するペプチドは、本明細書における実施形態の範囲内である。
【００７９】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるペプチドは更に修飾される（例えば標準的なアミノ酸の置換、欠失、または追加；化学的修飾；など）。当分野において了解されている修飾には、Ｎ末端修飾、Ｃ末端修飾（それはタンパク質分解性劣化からペプチドを保護する）、アミド基のアルキル化、炭化水素「ステープル留め（ｓｔａｐｌｉｎｇ）」（例えばαへリックス立体配座を安定化するため）が含まれる。いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるペプチドは、例えば荷電残基の保存的残基置換（ＫからＲへ、ＲからＫへ、ＤからＥへ、及びＥからＤへ）によって修飾することができる。いくつかの実施形態において、かかる保存的置換は、特異性及び／またはリパーゼ刺激パフォーマンスを改善する目標により、リパーゼ及びヘパリンの結合部位に、例えば微妙な変化を提供する。例えば、Ｒ残基がリッチなペプチドは、Ｋがリッチなペプチドよりも高い親和性でヘパリンを結合する傾向がある。末端カルボキシ基の修飾には、アミド修飾、低級アルキルアミド修飾、拘束アルキル（例えば、分岐状、環式、融合、アダマンチル）アルキル修飾、ジアルキルアミド修飾、及び低級アルキルエステル修飾が、限定されずに含まれる。低級アルキルはＣ１−Ｃ４アルキルである。さらに、１つまたは複数の側基または末端基はペプチド化学の当業者に公知の保護基によって保護することができる。αアミノ酸の炭素は、モノメチル化またはジメチル化され得る。
【００８０】
いくつかの実施形態において、１つまたは複数のペプチド内ジスルフィド結合は、ペプチド内に導入される（例えば２つのシステインの間で（例えばＣ６と置換されたシステイン、２つの置換されたシステイン、ＡＶペプチド配列の外部の１つまたは２つのシステインなど））。いくつかの実施形態において、ペプチド内ジスルフィド結合の存在はペプチドを安定化する。
【００８１】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載される任意の実施形態は、当分野において了解される様々な修飾を備えた、本明細書において記載されるＡＶペプチドに対応するＡＶペプチド模倣物を含み得る。いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるペプチド配列中の残基は、類似の特徴（例えば、疎水性から疎水性へ、中性から中性へなど）を有するアミノ酸、または他の所望される特徴（例えば、より酸性、より疎水性、かさ高さが少ない、よりかさ高いなど）を有するアミノ酸により、置換され得る。いくつかの実施形態において、非天然アミノ酸（または標準的な２０アミノ酸以外の天然に存在するアミノ酸）は、所望される特性を達成するために置換される。
【００８２】
いくつかの実施形態において、生理学的条件下で正に荷電した側鎖を有する残基、または正に荷電した側鎖が所望される場合の残基は、リジン、ホモリジン、δ−ヒドロキシリシン、ホモアルギニン、２，４−ジアミノ酪酸、３−ホモアルギニン、Ｄ−アルギニン、アルギナル（アルギニン中のＣＯＯＨが−ＣＨＯによって置き換えられる）、２−アミノ−３−グアニジノプロピオン酸、ニトロアルギニン（Ｎ（Ｇ）−ニトロアルギニン）、ニトロソアルギニン（Ｎ（Ｇ）−ニトロソアルギニン）、メチルアルギニン（Ｎ−メチル−アルギニン）、ε−Ｎ−メチルリシン、アロ−ヒドロキシリシン、２，３−ジアミノプロピオン酸、２，２’−ジアミノピメリン酸、オルニチン、対称性ジメチルアルギニン、非対称性ジメチルアルギニン、２，６−ジアミノヘキシン酸（ｄｉａｍｉｎｏｈｅｘｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ｐ−アミノ安息香酸及び３−アミノチロシン及びヒスチジン、１−メチルヒスチジンならびに３−メチルヒスチジンが含まれるが、これらに限定されない残基により置換される。
【００８３】
中性残基は生理学的条件下で荷電されない側鎖を有する残基である。極性残基は、好ましくは側鎖中に少なくとも１つの極性基を有する。いくつかの実施形態において、極性基は、ヒドロキシル基、スルフヒドリル基、アミン基、アミド基及びエステル基、または水素橋の形成を許容する他の基から選択される。
【００８４】
いくつかの実施形態において、生理学的条件下で中性／極性である側鎖を有する残基、または中性側鎖が所望される場合の残基は、アスパラギン、システイン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、シトルリン、Ｎ−メチルセリン、ホモセリン、アロ−スレオニン、３，５−ジニトロ−チロシン、及びβ−ホモセリンが含まれるが、これらに限定されない残基により置換される。
【００８５】
非極性疎水性側鎖を有する残基は、好ましくは０を超える（特に３を超える）疎水性インデックスにより、生理学的条件下で荷電されない残基である。いくつかの実施形態において、非極性疎水性側鎖は、１〜１０（好ましくは２〜６）の炭素原子を有する、アルキル残基、アルキレン残基、アルコキシ残基、アルケノキシ残基、アルキルスルファニル残基及びアルケニルスルファニル残基、または５〜１２の炭素原子を有するアリール残基から選択される。いくつかの実施形態において、非極性疎水性側鎖を有する残基、または非極性疎水性側鎖が所望される場合の残基は、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、アラニン、フェニルアラニン、Ｎ−メチルロイシン、ｔｅｒｔ−ブチルグリシン、オクチルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン１−アミノシクロヘキシルカルボキシル酸、Ｎ−メチルイソロイシン、ノルロイシン、ノルバリン、及びＮ−メチルバリンが含まれるが、これらに限定されない残基により置換される。
【００８６】
いくつかの実施形態において、ペプチド及びポリペプチドは、単離及び／または精製される（または実質的に単離及び／または実質的に精製される）。したがって、かかる実施形態において、ペプチド及び／またはポリペプチドは実質的に単離された形状で提供される。いくつかの実施形態において、例えばペプチド及び／またはポリペプチドは、固相ペプチド合成の結果として他のペプチド及び／またはポリペプチドから単離される。あるいは、ペプチド及び／またはポリペプチドは、組換え体産生からの細胞溶解後に他のタンパク質から実質的に単離することができる。タンパク質精製の標準的な方法（例えばＨＰＬＣ）を用いて、ペプチド及び／またはポリペプチドを実質的に精製することができる。いくつかの実施形態において、本発明は、所望される使用に依存して、多くの製剤でペプチド及び／またはポリペプチドの調製物を提供する。例えば、ポリペプチドが実質的に単離される（または他のタンパク質からほぼ完全に単離される）場合、保管（例えば冷却条件下、または凍結条件下で）に好適な媒質溶液中で製剤化することができる。かかる調製物は、バッファー、保存剤、凍結防止剤（例えばトレハロース等の糖）等の保護剤などを含有し得る。かかる調製物の形状は、溶液、ゲルなどであり得る。いくつかの実施形態において、アポＡ−Ｖペプチド及び／またはアポＡ−Ｖポリペプチドは、凍結乾燥された形状で調製される。さらに、かかる調製物は、他の所望される薬剤（小分子または他のペプチド、ポリペプチドもしくはタンパク質等）を含むことができる。実際、本明細書において記載されるペプチド及び／またはポリペプチドの異なる実施形態の混合物を含む、かかる調製物が提供され得る。
【００８７】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるペプチド配列のペプチド模倣物バージョンまたはそのバリアントが、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、ペプチド模倣物は、そのペプチド等価物の極性（または非極性、疎水性など）、三次元サイズ、及び機能性（生物活性）を保持するが、ペプチド結合のすべてまたは一部分が置き換えられる（例えばより安定的な連結によって）、実体によって、特徴づけられる。いくつかの実施形態において、「安定的」は、加水分解酵素による化学的分解または酵素による分解に対してより耐性であることを指す。いくつかの実施形態において、アミド結合を置き換える結合（例えばアミド結合代用物）は、アミド結合のいくつかの特性（例えば立体配座、立体的なかさ、静電的な特徴、水素結合についての能力など）を保存する。「Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ」、Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ，Ｌａｒｓｅｎ，Ｌｉｌｊｅｆｏｒｓ  ａｎｄ  Ｍａｄｓｅｎ（Ｅｄｓ）１９９６，Ｈｏｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄの１４章。出版者は、ペプチド模倣物のデザイン及び合成のための技法の一般的な考察を提供し、その全体は参照により本明細書に援用される。好適なアミド結合代用物には、Ｎ−アルキル化（Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，１９９５，４６，４７；その全体は参照により本明細書に援用される）、レトロ逆転アミド（Ｃｈｏｒｅｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｍ．，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ，１９９３，２６，２６６；その全体は参照により本明細書に援用される）、チオアミド（Ｓｈｅｒｍａｎ  Ｄ．Ｂ．ａｎｄ  Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９９０，１１２，４３３；その全体は参照により本明細書に援用される）、チオエステル、ホスホネート、ケトメチレン（Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｒ．Ｖ．ａｎｄ  Ｋｉｍ，Ｈ．Ｏ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，６０，５１０７；その全体は参照により本明細書に援用される）、ヒドロキシメチルエン、フルオロビニル（Ａｌｌｍｅｎｄｉｎｇｅｒ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，１９９０，３１，７２９７；その全体は参照により本明細書に援用される）、ビニル、メチレンアミノ（Ｓａｓａｋｉ，Ｙ  ａｎｄ  Ａｂｅ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９７  ４５，１３；その全体は参照により本明細書に援用される）、メチレンチオ（Ｓｐａｔｏｌａ，Ａ．Ｆ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１９９３，１３，１９；その全体は参照により本明細書に援用される）、アルカン（Ｌａｖｉｅｌｌｅ，Ｓ．ｅｔ．ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，１９９３，４２，２７０；その全体は参照により本明細書に援用される）及びスルホンアミド（Ｌｕｉｓｉ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９９３，３４，２３９１；その全体は参照により本明細書に援用される）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８８】
アミド結合の置き換えに加えて、ペプチド模倣物は、ジペプチド模倣物構造またはトリペプチド模倣物構造によるより大きな構造的部分の置き換えを包含することができ、この事例において、ペプチド結合を含む模倣物部分（アゾール由来模倣物等）は、ジペプチド代替物として使用することができる。好適なペプチド模倣物には還元されたペプチドが含まれ、その場合アミド結合は、還元剤（例えばボランまたは水素化アルミニウムリチウム等のヒドリド試薬）による処理によってメチレンアミンへ還元される。かかる還元は、分子の全体的なカチオン性を増加させることという追加の利点を有する。
【００８９】
他のペプチド模倣物には、例えばアミド官能化ポリグリシンの段階的な合成によって形成されるペプトイドが含まれる。いくつかのペプチド模倣物骨格は、それらのペプチド前駆体（パーメチル化されたペプチド等）から容易に入手可能であり、好適な方法は、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９４）９１，１１１３８−１１１４２中のＯｓｔｒｅｓｈ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．によって記載され、その全体は参照により本明細書に援用される。
【００９０】
いくつかの実施形態において、ペプチドは使用の前に処理されるかまたは条件付けられる。例えば、アポＡ−Ｖペプチドは超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）と共にインキュベーションすることができる。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドを、ヘパリン、合成リポタンパク質、リポソームまたは患者自身のリポタンパク質と共にインキュベーションして、バイオアベイラビリティー及び治療法有効性を促進することができる。
【００９１】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるペプチドは、他のペプチドまたはポリペプチドとの融合物として提供される。かかる融合物は、アポＡ−Ｖペプチド及び追加のペプチド／ポリペプチドをコードする組換ＤＮＡから発現させることができるか、または化学合成によって形成することができる。例えば、融合物は、アポＡ−Ｖペプチド、ならびに興味のある酵素、ルシフェラーゼ、ＲＮａｓｉｎもしくはＲＮａｓｅ、及び／もしくはチャンネルタンパク質（例えばイオンチャンネルタンパク質）、受容体、膜タンパク質、細胞質タンパク質、核タンパク質、構造タンパク質、リンタンパク質、キナーゼ、シグナリングタンパク質、代謝タンパク質、ミトコンドリアタンパク質、受容体会合タンパク質、蛍光タンパク質、酵素基質、転写因子、選択可能マーカータンパク質、核酸結合タンパク質、細胞外基質タンパク質、分泌タンパク質、受容体リガンド、血清タンパク質、反応性システインを備えたタンパク質、輸送タンパク、標的化配列（例えばミリスチル化配列）、ミトコンドリア局在化配列、または核局化在配列を含むことができる。追加のペプチド／ポリペプチドは、アポＡ−ＶペプチドのＮ末端及び／またはＣ末端へ融合することができる。一実施形態において、融合タンパク質は、アポＡ−ＶペプチドのＮ末端で第１のペプチド／ポリペプチド及びＣ末端で別の（異なる）ペプチド／ポリペプチドを含む。随意に、融合物中のエレメントは、コネクター配列、例えば好ましくは少なくとも２つのアミノ酸残基を有するもの（１３及び４０または５０までのアミノ酸残基を有するもの等）によって分離される。本発明の融合タンパク質中のコネクター配列の存在は、おそらく融合物中の各々のエレメントのために柔軟性（自律性）を提供するコネクター配列に起因して、融合物中でのいずれかエレメント（例えばアポＡ−Ｖペプチド）の機能を、個々のエレメントの機能と比較して実質的に改変しない。特定の実施形態において、コネクター配列は、酵素によって認識される配列であるか、または光切断できる。例えば、コネクター配列はプロテアーゼ認識部位を含み得る。
【００９２】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載される１つまたは複数のＡＶペプチド及びＡＶポリペプチド（例えば、トリグリセリド加水分解リパーゼの活性化の促進を示す、配列番号：５と１００％未満の配列同一性を有する、など）及び薬学的に許容される担体からなる医薬組成物が、本明細書において提供される。活性のあるペプチドまたはポリペプチドを供給することができる任意の担体（例えば担体内のペプチドまたはポリペプチドの破壊なしに）は好適な担体であり、かかる担体は当技術分野において周知である。いくつかの実施形態において、組成物は任意の好適な経路による投与のために製剤化され、それらの経路には、経口的（例えば錠剤、カプセル、顆粒または粉末の形状で等）、舌下、頬側、非経口的（皮下、静脈内、筋肉内、皮内、または胸骨内の注射または点滴による（例えば滅菌注射可能な水性または非水性の溶液または懸濁物などとして）等）、経鼻的（吸入噴霧等による鼻粘膜への投与が含まれる）、局所的（クリームまたは軟膏の形状で等）、経皮的（経皮パッチによる等）、経直腸的（坐剤の形状で等）などが含まれるが、これらに限定されない。
【００９３】
いくつかの実施形態において、高トリグリセリド血症を患う（またはそのリスクがある）患者及び／または治療（または防止的療法）を必要とする患者を治療する方法が、本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、本明細書において記載される少なくとも１つのＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチドを含む医薬組成物は、病態を治療するのに十分な量及び位置で、かかる患者へ送達される。いくつかの実施形態において、ペプチド及び／またはポリペプチド（またはかかるものを含む医薬組成物）は全身的または局所的に患者へ送達することができ、治療のための最も適切な送達経路、時間経過、及び投薬量を確認することは、かかる患者を治療する医療専門家の通常の技能内であるだろう。患者を最も好ましく治療する適用方法が、かかる症状を実質的に緩和または消失さえさせることが認識されるだろう。しかしながら、多くの治療でのように、患者の疾患または障害の症状が、本発明の方法の間に、その後に、またはそうでなければその結果として、確認可能な程度へ治まるならば、本発明の方法の適用は成功していると考えられる。
【００９４】
医薬組成物は、薬学的に許容される担体及び随意の賦形剤、アジュバントなどと共に製剤化される形状で、優れた薬学的実践に従って投与することができる。ＡＶペプチドベースの医薬組成物は、固体投薬形状、半固体投薬形状、または液体投薬形状（粉末、溶液、エリキシル、シロップ、懸濁物、クリーム、ドロップ、ペースト及び噴霧等）の形状であり得る。当業者が認識するように、選択された投与経路（例えばピル、注射など）に依存して、組成物形状は決定される。一般に、活性のある薬学的なペプチドまたはポリペプチドの容易かつ正確な投与の達成に単位投薬形状を使用することが好まれる。一般に、治療法的に効果的な薬学的化合物は、全組成物の重量で約０．５％〜約９９％の範囲の濃度レベルで（例えば所望される単位用量の提供に十分な量で）、かかる投薬形状である。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、単一用量または複数の用量で投与することができる。特定の投与経路及び投薬量レジメンは、治療される個人の病態及び該個人の治療への応答と調和して当業者によって決定されるだろう。いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドベースの医薬組成物は、ＡＶペプチドまたはＡＶポリペプチド（例えば配列番号：２の一部分と１００％未満の配列同一性を含むなど）及び１つまたは複数の非毒性の薬学的に許容される担体、アジュバントまたはベヒクルを含む、被験体への投与のための単位投薬形状で提供される。かかる材料と組み合わせて単一投薬形状を産生することができる活性のある成分の量は、上記のような様々な因子に依存して変動するだろう。多様な材料が薬学技術分野で入手可能であるので、本発明の組成物中の担体、アジュバント及びベヒクルとして使用することができる。注射可能調製物（油性溶液、懸濁物またはエマルション等）は、好適な分散剤または湿潤剤及び沈澱防止剤を必要に応じて使用して、当技術分野において公知であるように製剤化することができる。滅菌注射可能調製物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒（滅菌済みの非発熱性水または１，３−ブタンジオール等）を用いることができる。用いることができる他の許容されるベヒクル及び溶媒の中には、５％のデキストロース注射、リンガー液及び等張塩化ナトリウム注射液（米国薬局方／国民医薬品集中で記載されるような）がある。加えて、滅菌済み固定油は、溶媒または懸濁媒質として従来通りに用いることができる。この目的のために、任意の無味無臭の固定油を使用することができ、これらには、合成のモノグリセリド、ジグリセリドまたはトリグリセリドが含まれる。脂肪酸（オレイン酸等）も、注射可能組成物の調製において使用することができる。
【００９５】
実質的にαヘリックスのペプチド領域を包含する本明細書において開示されるペプチド及びポリペプチドは、化学的改変（アミド化、糖鎖付加、アシル化、硫酸化、リン酸化、アセチル化及び環化等）によって更に誘導体化されてもよい。かかる化学的改変は、化学的または生化学的な方法論を介して、加えてインビボのプロセスを介して、またはその任意の組み合わせで、与えることができる。
【００９６】
ある特定の実施形態において、本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドは、末端アミノ基の修飾によって誘導体化される。かかる修飾には、デスアミノ修飾、Ｎ−低級アルキル修飾、Ｎ−ジ−低級アルキル、拘束アルキル（例えば、分岐状、環式、融合、アダマンチル）修飾、及びアシル部分がＣ６−Ｃ２０アルキルであるＮ−アシル修飾が、限定されずに含まれる。
【００９７】
ある特定の実施形態において、本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドは、末端カルボキシル基の修飾によって誘導体化される。かかる修飾には、低級アルキルがＣ１−Ｃ４アルキルである、アミド修飾、低級アルキルアミド修飾、拘束アルキル（例えば、分岐状、環式、融合、アダマンチル）アルキル修飾、ジアルキルアミド修飾、及び低級アルキルエステル修飾が、限定されずに含まれる。さらに、１つまたは複数の側基または末端基はペプチド化学の当業者に公知の保護基によって保護することができる。αアミノ酸の炭素は、モノメチル化またはジメチル化され得る。
【００９８】
様々な実施形態において、本明細書において開示されるペプチド及びポリペプチドは、１つまたは複数のポリマーまたは小分子置換基へのコンジュゲーションによって誘導体化される。
【００９９】
これらの実施形態のうちの特定のものにおいて、本明細書において記載される合成のペプチド及びポリペプチドは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）へのカップリングによって誘導体化される。カップリングは公知のプロセスを使用して遂行することができる。Ｉｎｔ．Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，６８：１（１９９８）；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，６：１５０（１９９５）；及びＣｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓ．，９：２４９（１９９２）（そのすべてはそれらの全体を参照することによって本明細書に援用される）を参照されたい。当業者は、それゆえ、本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドへの１つまたは複数のポリエチレングリコールポリマーの連結のためのかかる周知の技法を利用することができるだろう。好適なポリエチレングリコールポリマーは、典型的には商業的に入手可能であるか、または当業者に周知の技法によって作製することができる。ポリエチレングリコールポリマーは好ましくは５００〜２０，０００の間の分子量を有し、分岐鎖または直鎖のポリマーであり得る。
【０１００】
本明細書において記載されるペプチドまたはポリペプチドへのＰＥＧの付加は、アミノ基、カルボキシル基またはチオール基へのカップリングによって達成することができる。これらの基は典型的にはＮ末端及びＣ末端であり、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸及びシステインとして天然に存在するアミノ酸の側鎖上にあるだろう。固相ペプチド化学技法によって本開示のペプチド及びポリペプチドを調製することができるので、直交保護基によるジアミノ基及びジカルボン酸基を含有する多様な部分は、ＰＥＧへのコンジュゲーションのための導入することができる。
【０１０１】
本開示は、本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドのポリエチレングリコール以外の１つまたは複数のポリマーへのコンジュゲーションも提供する。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドは、様々な長さのポリアミノ酸（例えばポリ−ｈｉｓ、ポリ−ａｒｇ、ポリ−ｌｙｓなど）及び／または脂肪酸鎖のＮ末端もしくはＣ末端またはアミノ酸残基側鎖へのコンジュゲーションもしくは連結、またはそれらの付加によって誘導体化される。ある特定の実施形態において、本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドは、米国特許第６，５５２，１６７号（その全体は参照により本明細書に援用される）中で記載されるように、ポリアミド鎖（特に正確な長さのポリアミド鎖）の添加によって誘導体化される。さらに他の実施形態において、ペプチド及びポリペプチドは、米国特許第５，３５９，０３０号及び第５，６８１，８１１号（それらの全体は参照により本明細書に援用される）中で記載されるように、アルキルＰＥＧ部分の添加によって修飾される。
【０１０３】
選択した実施形態において、本明細書において開示されるペプチド及びポリペプチドは、アルブミン及びゼラチンを含むポリマーへのコンジュゲーションによって誘導体化される。Ｇｏｍｂｏｔｚ  ａｎｄ  Ｐｅｔｔｉｔ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，６：３３２−３５１，１９９５（その全体は参照により本明細書に援用される）を参照されたい。
【０１０４】
更なる実施形態において、本明細書において開示されるペプチド及びポリペプチドは、免疫グロブリンまたは免疫グロブリンフラグメント（抗体Ｆｃ領域等）へコンジュゲートまたは融合される。
【０１０５】
様々な実施形態において、本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドは、短鎖アルキル及び拘束アルキル（例えば分岐状基、環式基、融合基、アダマンチル基）及び芳香族基が含まれる小分子置換基の付加によって誘導体化される。
【０１０６】
ある特定の実施形態において、本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドは、Ｃ５−Ｃ９の直鎖もしくは分岐状のアルキル側鎖またはシクロアルキル基を含む、アルキルグリシンアミノ酸類似体を含む。一実施形態において、ペプチドまたはポリペプチドは、Ｃ６−Ｃ８の直鎖または分岐状のアルキル側鎖を含む、アルキルグリシンを含む。別の実施形態において、ポリペプチドは、Ｃ８の直鎖アルキル側鎖を含む、オクチルグリシン（オクチル−グリシン）を含む。
【０１０７】
本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドは、様々な無機酸及び有機酸及び塩基による塩として調製することができる。かかる塩には、有機酸及び無機酸により（例えばＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３ＰＯ４、トリフルオロ酢酸、酢酸、蟻酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、マレイン酸、フマル酸及びカンファースルホン酸により）、調製される塩が含まれる。塩基により調製される塩には、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えばナトリウム及びカリウム塩）、アルカリ土類塩（例えばカルシウム及びマグネシウム塩）、及び亜鉛塩が含まれる。塩は、溶媒もしくは媒質（塩が不溶性である）中で、または溶媒（その後真空下でまたは凍結乾燥によって除去される水等）中で、適切な塩基または酸の１当量以上と産物の遊離酸形状または遊離塩基形状を反応させることによって、または好適なイオン交換樹脂上で別のイオンと既存の塩のイオンを交換することによって等の従来の手段によって形成することができる。
【０１０８】
本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドは、その薬学的に許容される塩及び／または錯体として製剤化することができる。薬学的に許容される塩には、酸付加塩（硫酸塩、塩酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩、及びキナ塩酸を含有しているもの等）が含まれる。薬学的に許容される塩は、酸（塩酸、硫酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸及びマロン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、及びキナ酸等）から得ることができる。かかる塩は、例えば、溶媒もしくは媒質（塩が不溶性である）中で、または溶媒（その後真空下でまたは凍結乾燥によって除去される水等）中で、適切な塩基または酸の１当量以上と産物の遊離酸形状または遊離塩基形状を反応させることによって、または好適なイオン交換樹脂上で別のイオンと既存の塩のイオンを交換することによって調製することができる。
【０１０９】
本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドは、本開示の方法と併用した使用のための医薬組成物として製剤化することができる。本明細書において開示される組成物は、好都合には、非経口投与（皮下、筋肉内及び静脈内の投与が含まれる）、鼻腔投与、経肺投与、または経口投与に好適な製剤の形状で提供することができる。各々のかかる投与経路のためのペプチド及びポリペプチドの好適な製剤は、標準的な製剤論（例えばＥ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で記載される。Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｊ．ａｎｄ  Ｈａｎｓｏｎ，Ｍ．Ａ．「Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  Ｎｏ．１０，Ｓｕｐｐ．４２：２Ｓ（１９８８）も参照されたい。
【０１１０】
本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドのうちの特定のものは、水中で実質的に不溶性、大部分の薬学的に許容されるプロトン性溶媒及び植物油中で難溶性であり得る。ある特定の実施形態において、シクロデキストリンを水可溶性促進剤として添加することができる。シクロデキストリンには、αシクロデキストリン、βシクロデキストリン、及びγシクロデキストリンのメチル、ジメチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシエチル、グルコシル、マルトシル及びマルトトリオシル誘導体が含まれる。例示的なシクロデキストリンの可溶性促進剤は、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＢＣＤ）であり、上述の組成物のうちの任意のものへ添加して、ペプチドまたはポリペプチドの水可溶性特徴を更に改善することができる。一実施形態において、組成物は、０．１％〜２０％のＨＰＢＣＤ、１％〜１５％のＨＰＢＣＤ、または２．５％〜１０％のＨＰＢＣＤを含む。用いられる可溶性促進剤の量は、組成物中の本開示のペプチドまたはポリペプチドの量に依存するだろう。ある特定の実施形態において、ペプチドは、非水性極性非プロトン性溶媒（ＤＭＳＯ、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）またはＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）等）中で製剤化することができる。
【０１１１】
いくつかの事例において、投与のための単一の組成物または溶液中でペプチドまたはポリペプチド及び他の活性のある薬剤を一緒に提供することは好都合だろう。他の事例において、追加の薬剤を前記ポリペプチドと分離して投与することがより有利であり得る。
【０１１２】
使用のために、本明細書において記載されるペプチド及びポリペプチドの医薬組成物は、単一の投与のために効果的なペプチドまたはポリペプチドの量を含有する単位投薬形状で提供することができる。皮下投与のために有用な単位投薬形状には、前充填されたシリンジ及び注射器が含まれる。
【０１１３】
いくつかの実施形態において、ＡＶペプチド／ＡＶポリペプチドは、医薬組成物中で提供される、及び／または１つまたは複数の追加の療法剤と共に共投与される（並列してまたは連続して）。かかる追加の薬剤は、トリグルセリドレベルの更なる低減、または関連する問題（例えばコレステロールレベルの上昇及び高血圧など）、病態もしくは疾患の治療のためのものであり得る。追加の薬剤には、フィブリン酸誘導体、ナイアシン、ω−３脂肪酸、ホルモン剤（例えばメトレレプチン（ＭＹＡＬＥＰＴ））、スタチン（例えばシンバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチンなど）、抗血小板剤（例えばアスピリン、クロピドグレル、ジピリダモール、チクロピジンなど）、抗凝固剤（例えばワルファリン（クーマディン）及びヘパリン）、糖尿病の治療のための医薬物（例えばスルホニル尿素、ビグアニド、メグリチニド、チアゾリジンジオン、ＤＰＰ−４阻害剤、ＳＧＬＴ２阻害剤、αグルコシダーゼ阻害薬、胆汁酸封鎖剤など）、インスリン、ＧＬＰ−１ペプチド（例えばＶＩＣＴＯＺＡ）などが含まれ得るが、これらに限定されない。
【０１１４】
いくつかの実施形態において、ＡＶペプチドベースの本明細書において記載される組成物は、キットの一部として提供される。いくつかの実施形態において、本発明のキットは、１つまたは複数のアポＡ−Ｖ−ベースのペプチドまたはポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、キットは、１つまたは複数の追加の組成物（例えば医薬組成物）との共投与のために構成されるＡＶペプチドベースの組成物を含む。いくつかの実施形態において、１つまたは複数のＡＶペプチドベースの組成物は、トリグリセリドの低減、または高トリグリセリド血症または関連する疾患もしくは病態の治療または防止の効果的な促進のための１つまたは複数の他の薬剤と共に共投与される。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、トリグルセリド濃度の低減、分解（例えば加水分解）の促進、ならびに／または高トリグリセリド血症、心血管性疾患、関節硬化症、急性膵炎、糖尿病、肝脂肪変性及び／もしくは関連する疾患及び病態の治療もしくは防止のための、ＡＶペプチドベースの組成物が提供される。記載された特色及び実施形態の様々な修飾、組換え、及び変動は、本発明の範囲及び趣旨から逸脱せずに、当業者へ明らかであろう。具体的な実施形態が記載されたが、請求の範囲に記載される本発明は、かかる特定の実施形態に過度に限定されるべきでないことを理解すべきである。実際、関連する分野における当業者へ明らかな、記載されたモード及び実施形態の様々な修飾は、以下の請求項の範囲内であることが意図される。
【０１１６】
本明細書において述べられるように、いくつかの実施形態において、高トリグリセリド血症を治療する方法が提供される。この方法は、血液トリグルセリドレベルを低減させるのに十分な量で、スケジュールで、及び継続期間で、本明細書において記載されるようなペプチドまたはポリペプチドを、高トリグリセリド血症に罹患する患者へ投与することを含む。
【０１１７】
ある特定の実施形態において、患者は、超高トリグリセリド血症（本明細書において≧８８５ｍｇ／ｄＬを提供する治療の前の非空腹時血漿トリグリセリド（「ＴＧ」）レベルとして定義される）を有する。いくつかの実施形態において、患者は、重症高トリグリセリド血症（５００〜８８５ｍｇ／ｄＬの間の治療前ＴＧレベルとして定義される）を有する。いくつかの実施形態において、患者は、難治性高トリグリセリド血症（２００ｍｇ／ｄＬ〜５００ｍｇ／ｄＬの間の治療の前のＴＧレベルとして定義される）を有する。他の実施形態において、治療の前の患者は、ボーダーラインの高トリグリセリド血症（１５０ｍｇ／ｄＬ〜２００ｍｇ／ｄＬの間）を有する。ルーチンの実施形態において、患者は、本明細書において提供される治療の開始の前に、１つまたは複数の他の療法剤により治療されたにもかかわらず、高トリグリセリド血症を有するだろう。
【０１１８】
ある特定の実施形態において、患者はカイロミクロン血症を有するだろう。いくつかの実施形態において、患者は正常を超えるＬＤＬ−ｃレベルを有するだろう。いくつかの実施形態において、患者は正常未満のレベルのＨＤＬ−ｃを有するだろう。
【０１１９】
いくつかの実施形態において、患者は膵臓炎を有するだろう。いくつかの実施形態において、患者は糖尿病を有するだろう。ある特定の実施形態において、患者はメタボリック症候群を有するだろう。何人かの患者は肝脾腫大を有するだろう。何人かの患者は非アルコール性脂肪性肝炎（「ＮＡＳＨ」）を有するだろう。何人かの患者はリポジストロフィー（例えば、先天性、全身性、後天性、部分的など）を有するだろう。
【０１２０】
ある特定の実施形態において、患者は成人である。他の実施形態において、患者は小児である。
【０１２１】
様々な実施形態において、ポリペプチドは、治療の開始の直前のレベルと比較して、トリグルセリドレベルを少なくとも５％、１０％、１５％、２０％もしくは２５％またはそれ以上減少させるのに十分な量で、スケジュールで、及び継続期間で、投与される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、トリグルセリドレベルを少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％または５０％減少させるのに十分な量で、投薬スケジュールで、及び継続期間で、投与される。特定の実施形態において、ポリペプチドは、トリグルセリドレベルを少なくとも５５％、６０％、６５％、少なくとも約７０％またはそれ以上低減させるのに十分な量で、スケジュールで、及び時間で、投与される。
【０１２２】
ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、１日あたり５０マイクログラム（「ｍｃｇ」）、１日あたり６０ｍｃｇ、１日あたり７０ｍｃｇ、１日あたり７５ｍｃｇ、１日あたり１００ｍｃｇ、１日あたり１５０ｍｃｇ、１日あたり２００ｍｃｇ、または１日あたり２５０ｍｃｇの量（投薬頻度にかかわらず１日の相当用量として表現される）で投与される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、１日あたり５００ｍｃｇ、１日あたり７５０ｍｃｇ、または１日あたり１ミリグラム（「ｍｇ」）の量で投与される。なお更なる実施形態において、ポリペプチドは、１日あたり１〜１０ｍｇ（１日あたり１ｍｇ、１日あたり１．５ｍｇ、１日あたり１．７５ｍｇ、１日あたり２ｍｇ、１日あたり２．５ｍｇ、１日あたり３ｍｇ、１日あたり３．５ｍｇ、１日あたり４ｍｇ、１日あたり４．５ｍｇ、１日あたり５ｍｇ、１日あたり５．５ｍｇ、１日あたり６ｍｇ、１日あたり６．５ｍｇ、１日あたり７ｍｇ、１日あたり７．５ｍｇ、１日あたり８ｍｇ、１日あたり８．５ｍｇ、１日あたり９ｍｇ、１日あたり９．５ｍｇ、または１日あたり１０ｍｇが含まれる）（投薬頻度にかかわらず毎日の相当用量として表現される）の量で投与される。
【０１２３】
様々な実施形態において、ポリペプチドは毎月の投薬スケジュールで投与される。他の実施形態において、ポリペプチドは隔週で投与される。さらに他の実施形態において、ポリペプチドは毎週投与される。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは毎日（「ＱＤ」）投与される。選択した実施形態において、ポリペプチドは１日２回（「ＢＩＤ」）投与される。
【０１２４】
典型的な実施形態において、ポリペプチドは、少なくとも３か月、少なくとも６か月、少なくとも１２か月、またはそれ以上の間投与される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、少なくとも１８か月、２年、３年、またはそれ以上の間投与される。
【０１２５】
典型的な実施形態において、ポリペプチドは非経口的に投与される。いくつかの非経口的実施形態において、ポリペプチドは皮下に投与される。いくつかの非経口的実施形態において、ポリペプチドは筋肉内に投与される。さらに他の実施形態において、ポリペプチドは静脈内に投与される。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは真皮下に移植された浸透圧ミニポンプ（Ｉｎｔａｒｃｉａ）によって投与される。
【０１２６】
さらに他の実施形態において、ポリペプチドは鼻腔内に投与される。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは吸入によって投与される。さらに他の実施形態において、ポリペプチドは、経口投与、頬側投与、または舌下投与される。
【０１２７】
他の実施形態において、ポリペプチドは経皮的に投与される。
【０１２８】
特定の好ましい実施形態において、ポリペプチドは、０．５〜５．０ｍｇの量で１日あたり１回の皮下注射によって少なくとも６か月間投与される。
【０１２９】
典型的な実施形態において、ポリペプチドは、トリグルセリドレベルを低減させるようにデザインした食餌への補助剤として投与される。
【０１３０】
様々な実施形態において、ポリペプチドは少なくとも１つの追加の療法剤と組み合わせて投与される。典型的にはかかる実施形態において、追加の療法剤は分離した組成物として投与される。これらの実施形態のうちの特定のものにおいて、追加の療法剤は、本明細書において記載されるポリペプチドとは異なる投与経路によって及び／または異なる投薬スケジュールで投与される。
【０１３１】
組み合わせた実施形態のうちの特定のものにおいて、少なくとも１つの追加の薬剤のうちの少なくとも１つは、ナイアシン；ω−３多価不飽和脂肪酸；フィブラート；ミポメルセン；及びアリポジーン・チパルボベックからなる群から選択される。特定の実施形態において、ω−３多価不飽和脂肪酸は、イコサペンタエチル；ω−３カルボン酸；及びω−３−酸エチルエステルからなる群から選択される。ある特定の実施形態において、少なくとも１つの追加の薬剤のうちの少なくとも１つは、スタチンである。ある特定の実施形態において、スタチンは、プラバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、テニバスタチン、及びピタバスタチンからなる群から選択される。
【実施例】
【０１３２】
実施例１
アポＡ−Ｖ中のリパーゼ刺激ドメイン
アポＡ−Ｖは３４３アミノ酸の比較的大きなタンパク質であり、３つの活性（脂質結合、ヘパリン／受容体結合、及びリパーゼ活性化）が割り当てられる（図１）。特に興味深いものは、リパーゼ活性を刺激するアポＡ−Ｖ中のドメイン（複数可）であり、ヒト集団中で同定された多くの突然変異はその所在位置の解明を支援してきた。ＨＴＧに罹患する患者における３つの無関係なＡＰＯＡ５突然変異を特徴づける、Ｍｅｎｄｏｚａ−Ｂａｒｂｅｒａ及び共同研究者による最近の重要な研究（Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．（２０１４）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．３４，２２５４−２２６０；その全体は参照により本明細書に援用される）は、アポＡ−Ｖのリパーゼ刺激活性を有意に損なう（Ｓｅｒ２３２−Ｌｅｕ２３５）ｄｅｌ及びＬｅｕ２５３Ｐｒｏを同定した。この欠失は、正に荷電した残基に富み、強いヘパラン硫酸結合能力を備え、細胞表面結合のために必要であると示された、これまでに報告された４２アミノ酸の配列に対応した（Ｎｉｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４６，３８９６−３９０４；その全体は参照により本明細書に援用される）。Ｐｒｏ残基（Ｌｅｕ２５３Ｐｒｏにおける）は、１残基位置のみを置き換えるが、タンパク質構造攪乱物質と判断され、おそらく周辺領域に影響を与えるタンパク質立体配座中に有意な変化を導入するだろう。この領域は、残基１９２〜２３８を欠失した組換えアポＡ−Ｖの脂質の結合及びリパーゼ活性の活性化の能力が減少したことを示す、古い報告にも対応する（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００６）Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄｓ  １４３，２２−２８；その全体は参照により本明細書に援用される）。
【０１３３】
高トリグリセリド血症及び／またはＣＡＤへ結びつけられるアポＡ−Ｖのすべての公知の配列バリアントのマッピングから、突然変異が残基１９９〜２５９内でクラスター化することが明らかにされる（図１Ｂ）。アポＡ−Ｖについての３Ｄモデルを推定し、αヘリックスリッチな構造が予測される（図１Ｃ）。残基１９９〜２５９は、短いループによって接続される分離した２つのαヘリックスへと構成されるようである。続いて行われる実験は、構成に部分的に基づくようにデザインされ、例えば残基１９９〜２３７（ＡＶ１９９−２３７）及び残基２５０〜２８８（ＡＶ２５０−２８８）にわたる２つのペプチドの合成及び試験であった。
【０１３４】
アポＡ−Ｖの３Ｄ構造は解明されておらず、したがって、本明細書において記載される実施形態の開発の間に遂行された実験において、ｗｅｄベースのサーバー（Ｐｈｙｒｅ２）を使用して、残基２００〜２４５が、αヘリックスへと折り畳まれランダムな折畳まれていない構造ではないようであることを示した、３Ｄ構造を予測する（図２）。配列の検査により、このドメインがヘリックスブレーカー残基（Ｐ、Ｇ）によってタンパク質配列の残りから分離され、αヘリックスの端部を画定したことが明らかにされた。
【０１３５】
リパーゼ刺激物を探索するために、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓによって供給される商業的に入手可能な蛍光発生性ＴＧ基質（ＥｎｚＣｈｅｋ）を使用して、リパーゼアッセイを行った（図３）。プロトコールは、ｐＨ及びデタージェントのわずかな修飾によりＢａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．５２，８２６−８３２；その全体は参照により本明細書に援用される）から適合させた。インビトロのアッセイのために、ＬｐＬ（ＳＩＧＭＡ）を、９６ウェルの黒色マイクロタイタープレート中で調製された、２０ｍＭのトリスＨＣｌ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％のＢＳＡ、０．０１５％のＺｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ  ３−１４、ｐＨ７．８、１μＭのＥｎｚＣｈｅｋ基質中で０．１２μｇ／ｍｌへ希釈した。いくつかのアッセイのために、プレートを３７℃で１０分間インキュベーションした。それぞれ４８２ｎｍ及び５１５ｎｍの励起／放射波長を使用して、Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｈ１  Ｍｕｌｔｉ−Ｍｏｄｅ  Ｒｅａｄｅｒ中で、検出を遂行した。アッセイは、このアッセイがｎｍｏｌ／ＬのＬｐＬに感受性があり、酵素濃度を増加させると直線状であることを示し、基質濃度が限定ではないことを指摘した。さらに、ＢＯＤＩＰＹ−Ｃ１２脂肪酸を使用して産生された産物を定量化して、酵素反応のモル率を決定することができた。アッセイは非毒性の基質及び低量の中性界面活性剤を使用するので、生細胞でこのアッセイを使用することは可能である（図４）。アッセイされたリパーゼ活性は、肝細胞の表面からのリパーゼ（ＨＬ）の除去（ヘパリン前洗浄による）、ならびに単離されたリポタンパク質、ＶＬＤＬ、ＬＤＬ及びＨＤＬの調製物中に存在するアポリポタンパク質の両方に感受性があった。
【０１３６】
実施例２
合成ペプチド
合成され（図２Ｂ）、ＬｐＬ活性に対する影響について試験された（図５Ａ〜Ｂ）第１のペプチドは、ＡＶ１９９−２３７であった。最初に、ペプチドがＬｐＬへ添加された場合、活性の変化は観察されなかった。しかしながら、ＬｐＬへ添加する前の超低比重リポタンパク質（ＶＬＤＬ）によるペプチドのインキュベーションに際して、加水分解活性は約４倍増加した。ＶＬＤＬの存在下（図５Ｅ）または非存在下（図５Ｄ）において、ＡＶ２５０−２８８の刺激活性は、ほとんどまたはまったく観察されなかった。しかしながら、生細胞のアッセイにおいて、ＡＶペプチドのリパーゼ刺激活性はＶＬＤＬを要求せず、ペプチドがリパーゼに直接作用していることを示唆する（図６及び８）。ＡＶ１９９−２３７による活性のこの増加は、同様にＬｐＬ活性を増加させることがこれまでに報告されたアポＣ−ＩＩペプチド（Ｃ−ＩＩ５０−７９）で観察された活性の増加を上回った。高濃度で、アポＣ−ＩＩはリパーゼ活性を阻害することも報告されている。
【０１３７】
ＡＶ１９９−２３７は細胞培養におけるリパーゼ活性の刺激においても非常に効果的であった（図６）。肝性リパーゼ（ＨＬ）は約３倍増加し、効果は飽和可能であり、ペプチドがリパーゼの特異的且つ有限のセットに対して作用することと一致している。ＬｐＬ及びＨＬは別のリパーゼであるので、この観察はユニークでもあり、アポＣ−ＩＩ（それはＨＬに対して影響がない）とは異なり、アポＡ−Ｖ及びそのペプチド模倣物はＬｐＬ及びＨＬの両方を刺激できることを示唆する。さらに注目すべきことは、細胞培養におけるＨＬの刺激が少なくとも７５分間（アッセイの停止）持続したことである。
【０１３８】
リパーゼ刺激機能がより短いペプチド配列に局在化するかどうかを決定するために、短縮されたペプチドのシリーズを生成してリパーゼアッセイを試験した（図７Ｂ、７Ｄ）。ＬｐＬのインビトロ及び細胞培養の両方のアッセイにおいて実行された試験は、ＡＶ１９９−２３７を５残基短縮することができ、もたらされたＡＶ１９９−２３２ペプチドが完全活性化を保有し、実際にはいくぶんより強力であることを明らかにした（図８）。
【０１３９】
実施例３
ＬｐＬ酵素反応速度及びＡＶ１９９−２３２
ＬｐＬ活性の反応速度パラメーター（例えばＶｍａｘ及びＫｍ）に対するＡＶ１９９−２３２の影響を調査した（図９Ａ〜Ｂ）。ＶＬＤＬの追加は、基質へのＬｐＬ親和性を約５倍低減させる（Ｋｍを増加させる）ことが観察された。これはＶＬＤＬのアポＣ−ＩＩＩ含有量のためであった。しかしながら、ＡＶ１９９−２３２（２．５μＭ）の追加は、Ｋｍをほぼ８倍実質的に改善し、ＡＶ１９９−２３２がＬｐＬへおそらく結合すること及びその活性部位をアロステリックに刺激することを指摘する。ＡＶ１９９−２３２はＶＬＤＬ中のアポＣ−ＩＩＩの存在下においても機能的であった。ＬｐＬ反応速度に対する異なるリポタンパク質の効果を比較した（図９Ｄ）。ＨＤＬまたはＬＤＬのどちらもＫｍに対して有意な効果がなかった。
【０１４０】
交互に起こる極性残基及び非極性残基からなるＡＶ１９９−２３２の配列中に周期性があることを考慮して、ペプチドが両親媒性のαヘリックスへと折り畳まれる可能性を調査した（図１０）。ＡＶ１９９−２３２及びＡＶ１９９−２３７の両方を円偏光二色性分光法によって分析し、ＡＶ１９９−２３２がαヘリックス構造を含有することが見出され、ヘパリンの追加に際して増加したヘリックスの性質は、ヘパリン結合活性を実証する。コンピューター内の解析も高いαヘリックス含有量を予測した。これらのデータは、ＡＶペプチドのヘリカルホイール提示（それはアポリポタンパク質中の機能的ドメイン構成の可視化を支援するために使用される一般的なツールである）の使用を有効にした。ヘリカルホイールとしてのＡＶ１９９−２３２の表示から、３または４の離散的なドメインを明らかにされた（図１１）。ペプチドの両親媒性の性質は、ヘリックスの反対側へ構成された極性残基及び非極性残基（ドメインＬ）により明らかであった。ドメインＬはＶＬＤＬへの結合に関与する。ドメイン１、ドメイン２及びドメインＨは、また極性側面上に同定された。
【０１４１】
リパーゼ活性化のためのこれらのドメインの重要性の可能性を調査するために、荷電した残基の限定されたセットをαヘリックス構造と適合性のある極性非荷電残基により置き換えたペプチドのシリーズをデザインした（図１２）。ドメイン１及びドメイン２は、ＡＶ１９９−２３２の活性に高度に関わる。Ｄｏｍ１（Ｄｏｍ１ＫＯ；Ｒ１２Ｑ／Ｄ３０Ｓ）及びＤｏｍ２（Ｄｏｍ２ＫＯ；Ｋ１３Ｑ／Ｋ１７Ｑ）中の置換は、ＬｐＬ刺激活性の有意な低減をもたらした（図１３）。Ｄｏｍ１（Ｅ３４Ｋ）はＡＶ１９９−２３２活性に影響を及ぼさず、Ｅ３４が機能的役割果たさないことを示唆する（図１３Ａ）。ＤｏｍＬ（ＤｏｍＬＫＯ；Ｌ１０Ｑ／Ｌ２１Ｑ／Ｌ２９Ｑ）内の置換は活性の中等度の低減をもたらした（図１３Ａ）。ＡＶ１９９−２３２のＤｏｍ１ＫＯ及びＤｏｍ２ＫＯのヘパリン結合活性を、濃度を増加させたペプチドをヘパリン−セファロース４Ｂカラム（０．２ｍＬ）へ適用することによって比較した（図１３Ｂ）。これらの変異ペプチドの試験は、ドメイン１がＬｐＬの活性化のために必要であり、ドメイン２がヘパリン結合部位を保有し、高度にＬｐＬの活性化にも関わることを実証した（図１３）。
【０１４２】
他のアミノ酸とは異なり、リパーゼがアンカーされる細胞表面のすぐ近くで見出すことができるわずかに酸性のｐＨで、中性電荷から正電荷へ変化することができる唯一の残基であるので、ドメインＨも興味を持たれた。ＨをＫにより置き換えたＡＶ１９９−２３２ペプチド（ＡＶ−Ｈ／Ｋ）を合成し、リパーゼ刺激に対する影響を評価した（図１４）。ＡＶ−Ｈ／Ｋは、ＶＬＤＬの非存在下において約１．６倍及びＶＬＤＬの存在下において約８倍、ＬｐＬ活性を増加させることができ、それはＡＶ１９９−２３２の活性の４４％の促進に対応する。
【０１４３】
リパーゼ刺激についてデザイン及び試験された主要なペプチドの要約を、図１７中でリストする。ＣＤ解析及びコンピューター内の予測の両方は、本明細書において記載されるＡＶペプチドについて高度に構成されたαヘリックス構造を強く支持する。この構造情報は、ＡＶ１９９−２３２においてこれまでに認識されていない４つのドメインの同定を可能にし、それは本明細書において記載される実施形態の開発の間に遂行された実験と一致し、そのうちの２つ（ドメイン１及びドメインＨ）はリパーゼ活性の直接刺激のために極めて重要である。加えて、脂質結合ドメインＬも、ＶＬＤＬの取りこみによる活性の改善によって実証されるように、活性のために重要である。この後者の観察は、治療法剤としてのＡＶペプチドの開発のために、多くのプラスの意味合いを持つ。第１に、ＴＧは、ＶＬＤＬ及び他のＴＧリッチリポタンパク質中で通常はパッケージングされ血中循環し、このデータは、ＡＶペプチドがこれらのリポタンパク質と会合することを示唆する。第２に、リポタンパク質へのこの親和性は、それらのインビボでのバイオアベイラビリティーを有意に改善することができた。最終的に、ＡＶペプチドは、ＶＬＤＬにおけるアポＣ−ＩＩＩの阻害及びこの活性のためにおそらく重要なアポＣ−ＩＩＩへの接近を克服することができた。生細胞系において、及びリパーゼファミリーのうちの異なるメンバー（例えばＬｐＬ及びＨＬ）でも、ＡＶペプチドが作用する能力から、ＡＶペプチドが、インビボでの強い存在感及びＨＴＧへの治療法上の影響を有し得ることも指摘される。最終的に、ドメインＨ中のＨのＫによる置換は、ＡＶ１９９−２３２ペプチドのパフォーマンスを実質的に改善した。本明細書において記載される実施形態の実施形態の開発の間に遂行された実験に基づいて、本明細書において記載される範囲内の他の修飾がパフォーマンスを同様に改善し得ることが企図される。
【０１４４】
実施例４
ＡＶ１９９−２３２がＶＬＤＬを結合し、ペプチドリポタンパク質複合体がＬｐＬ活性を刺激することを実証するために、本明細書における実施形態の開発の間に実験を遂行した。ＶＬＤＬ（１００μｇ）をＡＶ１９９−２３２（５０μｇ）と共にインキュベーションし、セファロースＣＬ−４Ｂカラム上でゲル濾過によって複合体を遊離ペプチドから単離した（図１５Ａ）。ＶＬＤＬ：ＡＶ１９９−２３２複合体を含有するボイド分画（Ｖｏ）は、ＬｐＬ活性の刺激に効果的であった（図１５Ｂ）。
【０１４５】
ＡＶ−Ｈ／ＫペプチドのドメインＬにおいて重要な残基を変異させる効果を同定するために、本明細書における実施形態の開発の間に実験を遂行した。結果から、本明細書におけるＡＶペプチドの脂質結合面を調整する置換がリパーゼ刺激パフォーマンスの改善に有用であることが指摘される。ＡＶ−Ｈ／Ｋ（配列番号：２３）中のＬ１０Ｆ及びＬ２９Ｆの置換は、リパーゼ刺激活性において約２倍の改善をもたらす一方で、Ｌ１０Ｑ、Ｌ２１Ｑ及びＬ２９Ｑの置換（配列番号：２２）はリパーゼ刺激活性を低減させた（図１６Ａ、Ｂ）。Ｌドメイン中でのＬからＦへ及びＬからＱへの置換は、ＶＬＤＬへの結合をそれぞれ増加及び減少させることが予測される。ペプチド（８０μｇ／ｍｌ）を、ＬｐＬ及び基質の追加の前にＶＬＤＬ（２０μｇ／ｍｌ）と共にプレインキュベーションした。リパーゼ反応を、室温で１６分間連続的にモニターしたか（Ａ）、または３７℃で１０分間インキュベーションした（Ｂ）。
【０１４６】
実施例５
ＡＶ１９９−２３２のアラニンスキャン
ＡＶ１９９−２３２の個々の残基の側鎖同一性の相対的重要度を決定するために、本明細書における実施形態の開発の間に実験を遂行した。この目的に向けて、アラニンスキャニングをＡＶ１９９−２３２ペプチドで遂行し、各々の残基をアラニン残基により個別に置き換え（既にアラニンである位置１、１８、２０及び２３以外は）、もたらされたペプチドのリパーゼ刺激活性を評価した（図１８）。リパーゼ刺激活性が有意に低減した位置は、ＬｐＬへの直接結合のために重要なもの、またはＡＶ１９９−２３２中のＬｐＬ刺激残基の正確なポジショニングの支援において間接的な構造的役割を果たすもの、のいずれかとして、同定される。これらのデータに基づいて、残基は、３つのカテゴリー：（１）アラニンによる置き換えがＡＶ１９９−２３２のリパーゼ刺激活性の＞７５％をもたらす残基、（２）アラニンによる置き換えがＡＶ１９９−２３２のリパーゼ刺激活性の２５〜７５％をもたらす残基、及び（３）アラニンによる置き換えがＡＶ１９９−２３２のリパーゼ刺激活性の＜２５％をもたらす残基、へと大まかに分類される。アラニンスキャンの結果（ｒｓｓｕｌｋｔｓ）は、これらの３つのカテゴリーへと分類される残基の側鎖が、（１）リパーゼ刺激に最小限に関わるもの、（２）リパーゼ刺激に中程度に関わるもの、及び（３）リパーゼ刺激に高度に関わるもの、であることを指摘する。最も高度に関わる残基は、図１８中のＡＶ１９９−２３２配列中で下線が引かれる。これらの結果は、本明細書において提示された、生化学的研究（実施例２及び３）、分子モデリング研究（実施例６）、及びバイオインフォマティクス（実施例８）のデータと一致する。
【０１４７】
実施例６
分子モデリング及び３Ｄドッキング
ＬｐＬ（左側）及びＡＶ１９９−２３２（右側）についての３Ｄ構造は、Ｐｈｙｒｅ２続いてＧａｌａｘｙＷＥＢでのモデル精密化を使用して、ホモロジーベースのモデリングによって生成された（図１９）。ＬｐＬを異なる機能的領域を強調する２つのポーズで示す。触媒三残基（Ｓ１３２、Ｄ１５６、Ｈ２４１）は、触媒ポケットをカバーする蓋（ｌｉｄ）として機能し、基質認識における役割を果たす、関連する２２の残基のループによる「ポケット」中に位置する（図１９、左側／上部）。ＡＶ１９９−２３２モデルを、ドメインＬ（下方に面する疎水性脂質結合ドメイン）により示す（図１９、右側）。
【０１４８】
ＬｐＬへのアポＣ−ＩＩＩの結合を評価するために、ＣｌｕｓＰｒｏ  ２．０（ｃｌｕｓｐｒｏ．ｂｕ．ｅｄｕ／ｌｏｇｉｎ．ｐｈｐ）を使用して分子ドッキング実験を遂行した（図２０）。リボン図で示されるＬｐＬ及びアポＣ−ＩＩＩを、球体形式の側鎖により示す。アポＣ−ＩＩＩ（ＰＤＢ  ＩＤ：２ＪＱ３）について、ドッキングは、蓋配列の近位端に並列するアポＣ−ＩＩＩのＮ末端配列とリパーゼ触媒部位の付近に予測される。
【０１４９】
ＬｐＬへのＡＶ１９９−２３２の結合を評価するために、ＣｌｕｓＰｒｏ  ２．０（ｃｌｕｓｐｒｏ．ｂｕ．ｅｄｕ／ｌｏｇｉｎ．ｐｈｐ）を使用して分子ドッキング実験を遂行した。上位にランクされるポーズ（最も高いクラスタ番号）を提示し（図２１及び２２）、ＬｐＬ（リボン（図２１）または骨格（図２２））：ＡＶ１９９−２３２（側鎖球体）複合体を示す（左側パネル）。相互作用は、約４Å以下の間隔で、塩橋または水素結合のいずれかを形成する側鎖によって安定化することができる。ＬｐＬ：ＡＶ１９９−２３２接触ポイントの検査から、ＡＶ１９９−２３２：ＬｐＬの相互作用を安定化する最大７つの残基ペアリングを指摘され（右側パネル）；それらは、（１）Ｒ２−Ｄ２３４（２．２Å）、（２）Ｌ３−Ｌ２３６（４．８Å）、（３）Ｋ１３−Ｅ６２（１．９Å）、（４）Ｋ１７−Ｄ２５（１．７Å）、（５）Ｋ１９−Ｅ１１（３．１Å）、（５ｂ）Ｈ２２−Ｅ１１（４．２Å）、（６）Ｒ２４−Ｅ２４（２．１Å）、及び（７）Ｒ３３−Ｅ３５（１．８Å）である。これらのペアリングは、本明細書において提示された他の実験（例えばアラニンスキャニングの結果）と高度に一致する（図１８）。
【０１５０】
実施例７
ＬｐＬ活性のインビボでの刺激
ＡＶペプチドがヒト血液サンプル中でのＬｐＬ活性の刺激に活性があり、したがってインビボで刺激性であると予想されることを実証するために、本明細書における実施形態の開発の間に実験を遂行した。図２３Ａは、新鮮ヒト血液から単離された生白血球におけるＬｐＬが、ＡＶ１９９−２３２処理に応答することを実証する。ヘパリンによる細胞表面ＬｐＬの除去は活性を低減させた。ＡＶ−Ｈ／Ｋは、ヒト血漿の存在下においてＬｐＬを刺激する（図２３Ｂ）。
【０１５１】
血漿は、アポＣ−ＩＩＩとリポタンパク質及びＡＮＧＰＴ４（ＬｐＬ活性の公知の阻害剤）を含有する。しかしながら、生白血球におけるＬｐＬ活性はＡＶ１９９−２３２によって刺激された（図２３Ｃ）。ＡＶ１９９−２３２は正常血漿及び脂質異常症血漿の存在下においてＬｐＬ活性を刺激する（図２３Ｄ）。ＡＶ１９９−２３２を正常者からの全血漿及び糖尿病／脂質異常症血漿と共にインキュベーションし、次いでＴＧリッチリポタンパク質（Ｌｐ）をＰＥＧ−８０００沈殿によって単離し、ＬｐＬアッセイにを添加した（３０μｇ／ｍｌ）。実験から、ＡＶ１９９−２３２は血漿中のＬｐＬと会合し活性化することが実証される。
【０１５２】
実施例８
ＡＶ１９９−２３２のホモロジー解析
ホモロジー検索を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａｂａｓｅから行って、ＡＶ１９９−２３２ペプチド配列に対するオルソログを同定し、及び類似の配列の中で変動がないか、または置換が許容可能であるか、のいずれかである残基を同定した。ＮＣＢＩ  ＢＬＡＳＴＰウェブサイト上でデフォルトパラメーターを使用した。結果を表１中で体系化して、ＡＶ１９９−２３２ペプチド中の残基について好適なアミノ酸置換のセットを同定する。
【０１５３】
【表１】
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2017537904.tif 000004
【０１５４】
以下にリストされた及び／または本明細書において提供されたすべての出版物及び特許は、それらの全体の参照によって援用される。本発明の記載された組成物及び方法の様々な修飾及び変動は、本発明の範囲及び趣旨から逸脱せずに当業者に明らかであろう。本発明は特に好ましい実施形態に関して記載されたが、請求の範囲に記載される本発明は、かかる特定の実施形態に過度に限定されるべきでないことを理解すべきである。実際、関連する分野における当業者へ明らかな、本発明の実行のために記載されたモードの様々な修飾は、本発明の範囲内であることが意図される。
【０１５５】
参照文献
以下の参照文献（そのうちのいくつかは名称および／または番号によって上で引用される）は、それらの全体の参照により本明細書に援用される。
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
2017537904000001.app
【国際調査報告】
2017537904.tif 000032
2017537904.tif 000033