(57)【要約】  本発明は、ボラ型両親媒性化合物および生物医学的適用のためのそれらの使用に関する。本発明は、特に、動物細胞またはヒト細胞の培養液として、または生物医学的用途の生体適合性材料として有用な低分子量ゲル（ＬＭＷＧ）を提供するためのボラ型両親媒性化合物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
Ｒ1−Ｘ−Ａ−Ｘ−Ｒ2      （Ｉ）
（式中
−Ｘは、酸素、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、又は−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり；
−Ａは、非置換であるか又は１つ以上のＣ1〜Ｃ12の直鎖状若しくは分枝状アルキル基によって置換される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖であり、あるいは部分的に又は完全にハロゲン化される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖を表し；
−Ｒ1及びＲ2は、同一であるか又は異なっていて、−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6を表し、ここで、
・ｎ、ｍおよびｐは、同一であるかまたは異なっていて、０〜１０であり；
・Ｒ3は、１〜４個の酸素原子または窒素原子を含むヘテロアリール基を表し；
・Ｒ4は、ヌクレオシジル基を表し；
・Ｒ5は、１〜４個のヘテロ原子を含むヘテロアリール基を表し；
・Ｒ6は、環状炭水化物の残基または前記炭水化物の誘導体を表す）
で表される化合物。
【請求項２】
Ｒ6の炭水化物の誘導体が、環状炭水化物に由来するオリゴ糖型グリカン、前記環状炭水化物のＮ−アシル誘導体、および前記環状炭水化物の保護された誘導体から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項３】
以下の条件：
−ｎ＝ｍ＝ｐ＝１であり；
−Ｒ3及びＲ5が、同一であるか又は異なっていて、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、及びイミダゾールからなる群から選択される、１〜４個の窒素原子を含有するヘテロアリール基を表し；
−Ｒ4が、アデノシン、デオキシアデノシン、グアノシン、デオキシグアノシン、チミジン、デオキシチミジン、ウリジン、デオキシウリジン、シチジンおよびデオキシシチジンから選択されるヌクレオシジル基を表し；
−Ｒ6が、Ｄ−グルコピラノース、Ｄ−ガラクトピラノース、Ｄ−マンノピラノース、Ｄ−フルクトピラノース、Ｄ−リボフラノース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルマンノサミン若しくはシアル酸、またはこれらの保護された誘導体から選択される環状炭水化物の残基を表す
のうち少なくとも１つを満たす、請求項１又は２に記載の式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項４】
−Ａが、Ｃ12の飽和炭化水素鎖を表し；
−Ｒ1が、水素、又は−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6であり；
−Ｒ2が、−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6であり；
−ｎ＝ｍ＝ｐ＝１であり；
−Ｒ3が、トリアゾール基であり；
−Ｒ4が、チミジンであり；
−Ｒ5が、トリアゾール基であり；及び
−Ｒ6が、Ｄ−グルコピラノシル又は２，３，４，６テトラ−Ｏ−保護−グルコピラノシルである、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項５】
−Ａが、部分的にフッ素化されるＣ10の炭化水素鎖を表し；
−Ｒ1及びＲ2が、−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6であり；
−ｎ＝ｍ＝ｐ＝１であり；
−Ｒ3が、トリアゾール基であり；
−Ｒ4が、チミジンであり；
−Ｒ5が、トリアゾール基であり；及び
−Ｒ6が、Ｄ−グルコピラノシルまたは２，３，４，６テトラ−Ｏ−保護−グルコピラノシルである、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項６】
Ｒ5が、ヌクレオシジル基のリボース環若しくはデオキシリボース環の５’位の炭素原子に−（ＣＨ2）pを介してＲ4に共有結合され、又はＲ5が、ヌクレオシジル基のリボース環若しくはデオキシリボース環の３’位の酸素原子に−（ＣＨ2）p−を介してＲ4に共有結合される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項７】
５’−［４−（１２−ヒドロキシドデカニルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−Ｎ−３−（１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルチミジン、
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン、
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［４−（オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−３’−Ｏ−１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルチミジン、
１，１０−ビス−２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９−ヘキサフルオロデカニル−５’−［４−（オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン、
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−メチルウレア）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン、
１１，１４−ビス−テトラデカニル−５’−［（４−メチルアミド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン、及び
１，１４−ビス−テトラデカニル−５’−［（４−メチルアミド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン
からなる群から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物。
【請求項８】
以下：
−両末端で式Ｒ1−Ｏ−Ａ−Ｏ−Ｒ2のアルカン−ジオールまたはフルオロアルカン−ジオールと、式Ｒ−（ＣＨ2）q−Ｃ≡ＣＨ（式中、ｑは１または２であり、Ｒはハロゲン化物、特に塩化物または臭化物である）で表されるアルキル化剤とを反応させ、
−得られた化合物と、Ｒ4の５’−アジド誘導体とを反応させ、
−得られた化合物中のＲ4のプリン若しくはピリミジン塩基またはユニバーサル塩基部分と、式Ｒ−（ＣＨ2）q−Ｃ≡ＣＨ（式中、ｑおよびＲは、上記で定義した通りである）で表されるアルキル化剤とを反応させて、Ｒ4のプリン若しくはピリミジン塩基またはユニバーサル塩基のＮ−アルキル化誘導体を得て、及び
−得られた化合物とＲ6の１−アジド誘導体とを反応させる（クリック反応）
ステップを含む、Ｘが酸素である、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物を調製するための方法。
【請求項９】
以下：
−式ＯＣＮ−Ａ−ＮＣＯのジイソシアナトアルカンと、ＮＨ2−ＣＨ2−Ｃ≡ＣＨ（プロパルギルアミン）又は末端アルキン基を含有する任意の第一級アミンとを反応させて、式（ＩＩ）：
ＣＨ≡Ｃ−ＣＨ2−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ａ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−Ｃ≡ＣＨ      （ＩＩ）
で表される化合物を得て、
−プリン若しくはピリミジン塩基またはユニバーサル塩基と、式Ｒ−（ＣＨ2）q−Ｃ≡ＣＨ（式中、ｑは１または２であり、Ｒはハロゲン化物、好ましくは臭化物または塩化物である）のアルキル化剤と反応させて、Ｒ4のプリンもしくはピリミジン塩基またはユニバーサル塩基のＮ−アルキル化誘導体を得て、
−得られた化合物とＲ6の１−アジド誘導体とを反応させ（クリック反応）、
−Ｒ4のリボースまたはデオキシリボース部分上の５’−ＯＨをアジドに変換し、得られた化合物を、式（ＩＩ）で表される化合物との第二のクリック反応に供する
ステップを含む、Ｘが−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−である、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物を調製するための方法。
【請求項１０】
式（ＩＶ）：
Ｒ7−Ｘ−Ａ−Ｘ−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−Ｒ7      （ＩＶ）
（式中
−Ｘは、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、
−Ａは、非置換であるか又は１つ以上のＣ1〜Ｃ12の直鎖状若しくは分枝状アルキル基によって置換される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖であり、あるいは部分的に又は完全にハロゲン化される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖を表し；
−Ｒ3は、１〜４個の酸素原子または窒素原子を含むヘテロアリール基を表し；
−Ｒ4は、ヌクレオシジル基を表し；
−Ｒ7は、Ｒ4のプリン、ピリミジンまたはユニバーサル塩基部分の窒素原子と共有結合によって連結される、式Ｒ−（ＣＨ2）q−Ｃ≡ＣＨ（式中、ｑは１又は２であり、Ｒはハロゲン化物である）で表されるアルキル化剤の残基であり、
−ｎ及びｍは、同一であるか又は異なっていて、０〜１０である）
で表される化合物。
【請求項１１】
式（Ｖ）：
Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6      （Ｖ）
（式中
−Ｒ4は、ヌクレオシジル基を表し；
−Ｒ5は、ヌクレオシジル基のピリミジン塩基またはプリン塩基の窒素原子に対する共有結合によって、Ｒ4に連結される、１〜４個のヘテロ原子を含むヘテロアリール基を表し；
−Ｒ6は、場合により置換される、環状炭水化物の残基または前記炭水化物の誘導体を表し；
−ｐは、０〜１０である）
で表される化合物。
【請求項１２】
５’−デオキシ−Ｎ−３−（１−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）チミジンおよび５’−アジド−Ｎ−３−（１−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）チミジンから選択される、請求項１１に記載の式（Ｖ）で表される化合物。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）で表される１つ以上の化合物から形成されるハイドロゲル。
【請求項１４】
０．１〜１０ｗｔ％、特に１〜５ｗｔ％の式（Ｉ）で表される化合物を含有する、式（Ｉ）で表される化合物の水溶液から形成されることにより特徴付けられる、請求項１３に記載のハイドロゲル。
【請求項１５】
式（Ｉ）で表される１つ以上の化合物；または式（Ｉ）で表される１つ以上の化合物と、１つ以上のグリコシル−ヌクレオシド−脂質（ＧＮＬ）および／またはグリコシル−ヌクレオシド−フルオロ脂質（ＧＮＦ）との混合物；または他には式（Ｉ）で表される１つ以上の化合物と、１つ以上のタンパク質又は糖タンパク質、例えば、コラーゲンまたはヒアルロン酸との混合物であって、場合により、１つ以上のＧＮＬ又はＧＮＦを含有する混合物を含むことにより特徴付けられる、請求項１３または１４に記載のハイドロゲル。
【請求項１６】
細胞培地としての請求項１３または１４に記載のハイドロゲルの使用。
【請求項１７】
細胞が真核細胞である、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
細胞が幹細胞である、請求項１６に記載の使用。
【請求項１９】
組織工学、細胞療法、または腹部骨盤外科手術後の癒着形成予防のための生体適合性材料として使用するための請求項１３〜１５のいずれか１項に記載のハイドロゲル。
【請求項２０】
ゲル内に封入される有効成分の放出制御送達のための生体適合性材料として使用するための請求項１３〜１５のいずれか１項に記載のハイドロゲル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ボラ型（ｂｏｌａ）両親媒性化合物及び生物医学的応用のためのその使用に関する。
【０００２】
本発明は、特に細胞、特に単離された幹細胞の培地として有用である、低分子量ゲル（ＬＭＷＧ）を提供するためのボラ型両親媒性化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
毒性がなく、使い易く、細胞適合性であり、注射可能であり、分解性であるハイドロゲルは、細胞培地として有用な生体材料である。
【０００４】
幹細胞培養に使用することができる生体適合性の人工マトリックスの開発は、細胞培養工学および／または再生医療において大きな課題として残されている。これまでに開発されたゲル足場の大部分は、天然源または化学合成のいずれかに由来するポリマー材料を伴う。しかしながら、ポリマーは、しばしば、乏しい生体適合性、毒性、生分解性、前炎症性活性などを含むいくつかの制限を受ける。あるいは、小分子ベースのハイドロゲルは、生物学的および機械的特性及び／又は機能を回復することができる再生医療戦略のための新しい強力なツールとして、現在、登場している。
【０００５】
したがって、本発明は、細胞培養、特に幹細胞培養に適した、ヌクレオ脂質から誘導された新規なボラ型両親媒性化合物、及び新世代の低分子量ゲル（ＬＭＷＧ）に関する。ボラ型両親媒性ベースのハイドロゲルマトリックスは、要求される以下の特性：無毒性、使い易さ、注射可能性、および生体適合性レオロジー（チキソトロピー性状）を示す。
【０００６】
ボラ型両親媒性物質は、親水性頭部基に両端で共有結合した１つまたは２つの疎水性鎖で構成される。古細菌の膜に見出され得るこの種の分子構造は、ナノ材料の合成から薬物または遺伝子の送達に及ぶ多くの用途に用いられてきた。
【０００７】
ＬＭＷＧを形成するためのグリコシル−ヌクレオシド−脂質（ＧＮＬ）およびグリコシル−ヌクレオシド−フルオロ脂質（ＧＮＦ）の使用が報告されている。
【０００８】
ＧＮＬは、ＧＮＬベースのリポソームの幹細胞への内在化を促進するのに有用であると報告されている（Ｌ．Ｌａｔｘａｇｕｅら，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１１，４７，１２５９８−１２６００）。
【０００９】
核酸送達用のＧＮＬ超分子アセンブリーおよびＧＮＬベースのゲルは、Ｇ．Ｇｏｄｅａｕら，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２００９，１−３において研究された。
【００１０】
ＧＮＦベースのゲルは、幹細胞が凝集体を形成し、単離された幹細胞の生存および成長とは明らかに適合しない、幹細胞培養とのみ適合性があると報告されている（Ｓ．Ｚｉａｎｅら，Ｅｕｒ．Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｍａｔｈ．，２０１２，２３，１４７−１６０）。
【００１１】
新規のグリコシル化ヌクレオシドベースのボラ型両親媒性（ＧＮＢＡ）化合物は、低分子量ゲルを提供するのに特に適したものとする特定の物理化学的特性を示すことが現在見出されている。
【発明の概要】
【００１２】
したがって、本発明は、式（Ｉ）：
Ｒ1−Ｘ−Ａ−Ｘ−Ｒ2      （Ｉ）
（式中
−Ｘは、酸素、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、又は−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり；
−Ａは、非置換であるか又は１つ以上のＣ1〜Ｃ12の直鎖状若しくは分枝状アルキル基によって置換される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖であり、あるいは部分的に又は完全にハロゲン化される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖を表し；
−Ｒ1及びＲ2は、同一であるか又は異なっていて、水素又は−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6を表し、ここで、
・ｎ、ｍおよびｐは、同一であるかまたは異なっていて、０〜１０であり；
・Ｒ3は、１〜４個の酸素原子または窒素原子を含むヘテロアリール基を表し；
・Ｒ4は、ヌクレオシジル基を表し；
・Ｒ5は、１〜４個のヘテロ原子を含むヘテロアリール基を表し；
・Ｒ6は、環状炭水化物の残基または前記炭水化物の誘導体を表し、
ただし、Ｒ1およびＲ2は同時に水素ではない）
で表される化合物に関する。
【００１３】
好ましくは、Ａは、非置換であるか又は１つ以上のＣ1〜Ｃ12の直鎖状若しくは分枝状アルキル基によって置換される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ18の炭化水素鎖、より好ましくはＣ12又はＣ14の炭化水素鎖であり；
あるいは、Ａは、部分的に又は完全にハロゲン化される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ18の炭化水素鎖、より好ましくはＣ10又はＣ12の炭化水素鎖である。
【００１４】
好ましくは、本発明は、式（Ｉ）（Ｒ4は、ヌクレオシジル基を表す）で表される化合物に関する。
【００１５】
好ましくは、Ｒ1及びＲ2は、同一であるかまたは異なっていて、−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6を表す。
【００１６】
好ましい実施形態によれば、本発明は、式（Ｉ）：
Ｒ1−Ｘ−Ａ−Ｘ−Ｒ2      （Ｉ）
（式中
−Ｘは、酸素、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、又は−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり；
−Ａは、非置換であるか又は１つ以上のＣ1〜Ｃ12の直鎖状若しくは分枝状アルキル基によって置換される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖であり、あるいは部分的に又は完全にハロゲン化される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖を表し；
−Ｒ1及びＲ2は、同一であるか又は異なっていて、−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6を表し、ここで、
・ｎ、ｍおよびｐは、同一であるかまたは異なっていて、０〜１０であり；
・Ｒ3は、１〜４個の酸素原子または窒素原子を含むヘテロアリール基を表し；
・Ｒ4は、ヌクレオシジル基を表し；
・Ｒ5は、１〜４個のヘテロ原子を含むヘテロアリール基を表し；
・Ｒ6は、環状炭水化物の残基または前記炭水化物の誘導体を表す）
で表される化合物に関する。
【００１７】
Ｒ5は、ヌクレオシドのリボース環またはデオキシリボース環の５’位の炭素原子に、あるいはヌクレオシドのリボース環またはデオキシリボース環の３’位の酸素原子に−（ＣＨ2）P−を介してＲ4と共有結合することができる。
【００１８】
「１〜４個の酸素原子または窒素原子を含有するヘテロアリール基」とは、１〜４個の酸素原子または窒素原子によって中断された、５〜１２個の原子を含有する、単環式または二環式、芳香族または部分不飽和の炭素環式基を指し、例えば、フラン、ピラゾール、オキサゾール、オキサジアゾール、イソキサゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、イミダゾール、ピリジン、ピリミジン、ピリダジン、ピラジン、ベンゾフラン、インドール、キノレイン、イソキノリン、クロマン、ナフチリジンまたはベンゾジアジン基から選択され得て、トリアゾールが好ましい。
【００１９】
「部分的または完全にハロゲン化された炭化水素鎖」とは、一部又は全部の水素原子が、フッ素、ヨウ素、塩素または臭素などのハロゲン原子（好ましくはフッ素）で置換された飽和または不飽和のアルキル鎖を指す。
【００２０】
「ヌクレオシジス基」は、プリン若しくはピリミジン塩基、または該プリンもしくはピリミジン塩基の誘導体、または非天然の単環式もしくは二環式の複素環式塩基に連結されたリボースまたはデオキシリボース部分からなる基を指し、塩基は全て、場合により置換されてもよい。
【００２１】
プリン塩基は、例えば、アデニン、グアニンおよびヒポキサンチンからなる群から選択され得る。
【００２２】
ピリミジン塩基は、例えば、チミン、ウラシル及びシトシンからなる群から選択され得て、チミンが好ましい。
【００２３】
「非天然のモノまたはビシクロ複素環式塩基」とは、例えば、３−ニトロピロール、４−ニトロイミダゾールまたは５−ニトロインドールなどのユニバーサル塩基を意味する。
【００２４】
「任意に置換される」とは、プリンもしくはピリミジン塩基、または非天然の複素環式塩基が、例えば、ハロゲン、アミノ基、カルボキシ基、カルボニル基、カルボニルアミノ基、ヒドロキシ、アジド、シアノ、アルキル、シクロアルキル、ペルフルオロアルキル、アルキルオキシ（例えば、メトキシ）、オキシカルボニル、ビニル、エチニル、プロピニル、アシル基などから選択される少なくとも１つの置換基によって置換され得ることを意味する。
【００２５】
「環状炭水化物の残基またはその炭水化物の誘導体」とは、例えば、Ｄ−グルコピラノース、Ｄ−ガラクトピラノース、Ｄ−マンノピラノース、Ｄ−フルクトピラノース若しくはＤ−リボフラノース、またはそれに由来するオリゴ糖型グリカン、並びにそれらのＮ−アシル誘導体、特にそれらのＮ−アセチル誘導体、例えば、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルマンノサミン若しくはシアル酸、またはその保護された誘導体、例えば、Ｏ−アシル誘導体、特にＯ−アセチル誘導体から選択され得る５員又は６員のオシジック（ｏｓｉｄｉｃ）環の残基を指し、Ｄ−グルコピラノースが好ましい。
【００２６】
具体的には、本発明は、式（Ｉ）で表される化合物を指し、ここで、少なくとも１つの以下の条件を満たす。
−ｎ＝ｍ＝ｐ＝１である；
−Ｒ3及びＲ5が、同一であるか又は異なっていて、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、及びイミダゾールからなる群から選択される、１〜４個の窒素原子を含有するヘテロアリール基を表す；
−Ｒ4が、アデノシン、デオキシアデノシン、グアノシン、デオキシグアノシン、チミジン、デオキシチミジン、ウリジン、デオキシウリジン、シチジンおよびデオキシシチジンから選択されるヌクレオシジル基を表す；
−Ｒ6が、Ｄ−グルコピラノース、Ｄ−ガラクトピラノース、Ｄ−マンノピラノース、Ｄ−フルクトピラノース、Ｄ−リボフラノース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルマンノサミン若しくはシアル酸、またはこれらの保護された誘導体から選択される環状炭水化物の残基を表す
【００２７】
式（Ｉ）で表される好ましい化合物は、Ｘが酸素である化合物である。
【００２８】
あるいは、対象とする式（Ｉ）で表される化合物は、Ｘが−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−である化合物である。
【００２９】
式（Ｉ）で表される好ましい化合物は、
−Ａが、Ｃ12又はＣ14の飽和炭化水素鎖を表し；
−Ｒ1が、水素、又は−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6であり；
−Ｒ2が、−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6であり；
−ｎ＝ｍ＝ｐ＝１であり；
−Ｒ3が、トリアゾール基であり；
−Ｒ4が、チミジンであり；
−Ｒ5が、トリアゾール基であり；及び
−Ｒ6が、β−Ｄ−グルコピラノシルまたは２，３，４，６−テトラ−Ｏ−保護−グルコピラノシル、好ましくは２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−グルコピラノシルである、化合物である。
【００３０】
式（Ｉ）で表される他の好ましい化合物は、
−Ａが、部分的にフッ素化されるＣ10の炭化水素鎖を表し；
−Ｒ1及びＲ2が、水素、又は−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6であり；
−ｎ＝ｍ＝ｐ＝１であり；
−Ｒ3が、トリアゾール基であり；
−Ｒ4が、チミジンであり；
−Ｒ5が、トリアゾール基であり；及び
−Ｒ6が、β−Ｄ−グルコピラノシルまたは２，３，４，６−テトラ−Ｏ−保護−グルコピラノシル、好ましくは２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−グルコピラノシルである、化合物である。
【００３１】
好ましい実施形態によれば、Ｒ5は、ヌクレオシジル基のリボース環またはデオキシリボース環の５’位の炭素原子に対して−（ＣＨ2）p−を介してＲ4に共有結合している。
【００３２】
あるいは、Ｒ5は、ヌクレオシジル基のリボース環またはデオキシリボース環の３’位の酸素原子に対して−（ＣＨ2）p−を介してＲ4に共有結合している。
【００３３】
式（Ｉ）で表される特に好ましい化合物は、以下の通りである。
５’−［４−（１２−ヒドロキシドデカニルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−Ｎ−３−（１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルチミジン、
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン、
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［４−（オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−３’−Ｏ−１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルチミジン、
１，１０−ビス−２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９−ヘキサフルオロデカニル−５’−［４−（オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン、
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−メチルウレア）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン、
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−メチルウレア）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン、
１１，１４−ビス−テトラデカニル−５’−［（４−メチルアミド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン、及び
１，１４−ビス−テトラデカニル−５’−［（４−メチルアミド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン。
【００３４】
Ｘが酸素である式（Ｉ）で表される化合物は、以下：
−両末端で式Ｒ1−Ｏ−Ａ−Ｏ−Ｒ2のアルカン−ジオールまたはフルオロアルカン−ジオールと、式Ｒ−（ＣＨ2）q−Ｃ≡ＣＨ（式中、ｑは１または２であり、Ｒはハロゲン化物、特に塩化物または臭化物である）で表されるアルキル化剤とを反応させ、
−得られた化合物と、Ｒ4の５’−アジド誘導体とを反応させ、
−得られた化合物中のＲ4のプリン若しくはピリミジン塩基またはユニバーサル塩基部分と、式Ｒ−（ＣＨ2）q−Ｃ≡ＣＨ（式中、ｑおよびＲは、上記で定義した通りである）で表されるアルキル化剤とを反応させて、Ｒ4のプリン若しくはピリミジン塩基またはユニバーサル塩基のＮ−アルキル化誘導体を得て、及び
−得られた化合物とＲ6の１−アジド誘導体とを反応させる（クリック反応）
ステップを含む方法によって得ることができる。
【００３５】
Ｘが酸素であり、Ｒ3および／またはＲ5がトリアゾールでない式（Ｉ）で表される化合物を得ることを目的として、当業者は、所望のＲ3及び／又はＲ5複素環を得るために、ディールス−アルダー反応などの適切な付加環化反応を選ぶことができる。
【００３６】
以下の反応条件が好ましい：
−アルキル化反応が水素化ナトリウムの存在下で行われる；
−クリック反応は、４０℃で激しく撹拌しながら水とジクロロメタンとの１：１（ｖ／ｖ）の混合物を用いて、または１０％ＣｕＳＯ4および２０％アスコルビン酸とともに６０〜６５℃で水とＴＨＦとの１：１（ｖ／ｖ）の混合物を用いて行われる。
【００３７】
所望であれば、Ｒ1とＲ2の一方が水素を表し、他方が−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6である式（Ｉ）で表される非対称化合物の合成は、Ｒ4の５’−アジド誘導体でクリックされたモノアルキル化された出発物質から開始するように行うことができる。得られた化合物に存在するプリンまたはピリミジン塩基部分と、式Ｒ−ＣＨ2−Ｃ≡ＣＨのアルキル化剤との後続反応、その後のＲ6の１−アジド誘導体との第２のクリック反応により、式（Ｉ）で表される所望の非対称化合物が得られる。
【００３８】
Ｘが−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ビスウレア化合物）である式（Ｉ）で表される化合物は、以下：
−式ＯＣＮ−Ａ−ＮＣＯのジイソシアナトアルカンと、ＮＨ2−ＣＨ2−Ｃ≡ＣＨ（プロパルギルアミン）または末端アルキン基を含有する任意の第一級アミンとを反応させ、式（ＩＩ）：
ＣＨ≡Ｃ−ＣＨ2−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ａ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−Ｃ≡ＣＨ      （ＩＩ）
で表される化合物を得て、
−プリンもしくはピリミジン塩基またはユニバーサル塩基と、式Ｒ−（ＣＨ2）q−Ｃ≡ＣＨ（ここで、ｑは１または２であり、Ｒはハロゲン化物、好ましくは臭化物または塩素である）のアルキル化剤とを反応させ、Ｒ4のプリンもしくはピリミジン塩基またはユニバーサル塩基のＮ−アルキル化誘導体を得て、
得られた化合物と、Ｒ6の１−アジド誘導体とを反応させて（クリック反応）、
−Ｒ4のリボースまたはデオキシリボース部分の５’−ＯＨ基をアジドに変換させ、及び得られた化合物を、式（ＩＩ）で表される化合物との第２のクリック反応に供する
ステップを含む方法によって得ることができる。
【００３９】
以下の反応条件が好ましい：
−プリン若しくはピリミジン塩基又はユニバーサル塩基とＲ−ＣＨ2−Ｃ≡ＣＨとのアルキル化反応が塩基性条件下で行われる；
−第１のクリック反応がＣｕ（Ｉ）で触媒され、水とｔｅｒｔ−ブタノールの１：１（ｖ／ｖ）混合物において、好ましくは６０℃にて、好ましくは１０％ＣｕＳＯ4及び２０％アスコルビン酸を用いて行われる；
−Ｒ4のリボース又はデオキシリボース部分の５’−ＯＨ基のアジドへの変換は、例えば、トリフェニルホスフィン（ＰＰｈ3）などの有機リン化合物、例えば、四臭化物（ＣＢｒ4）およびアジ化ナトリウム（ＮａＮ3）などのハロゲン化炭素を用いて行うことができる。
【００４０】
Ｘが−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ビスアミド化合物）である式（Ｉ）で表される化合物は、以下のステップを含む方法によって得ることができる：
−式ＨＯＯＣ−Ａ−ＣＯＯＨの対応するジカルボン酸と塩化チオニルからインサイチュで調製されるアルカン二酸塩化物と、ＮＨ2−ＣＨ2−Ｃ≡ＣＨ（プロパルギルアミン）または末端アルキン基を含有する任意の第一級アミンとを反応させ、式（ＩＩＩ）：
ＣＨ≡Ｃ−ＣＨ2−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ａ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−ＣＨ2−Ｃ≡ＣＨ      （ＩＩＩ）
で表される化合物を得る。
【００４１】
以下のステップは、式（Ｉ）で表されるビスウレア化合物を得るための上記のステップと同じである。
【００４２】
さらに、本発明は、式（ＩＶ）：
Ｒ7−Ｘ−Ａ−Ｘ−（ＣＨ2）n−Ｒ3−（ＣＨ2）m−Ｒ4−Ｒ7      （ＩＶ）
（式中
−Ｘは、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−であり、
−Ａは、非置換であるか又は１つ以上のＣ1〜Ｃ12の直鎖状若しくは分枝状アルキル基によって置換される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖であり、あるいは部分的に又は完全にハロゲン化される、直鎖状若しくは分枝状の飽和又は不飽和のＣ4〜Ｃ30の炭化水素鎖を表し；
−Ｒ3は、１〜４個の酸素原子または窒素原子を含むヘテロアリール基を表し；
−Ｒ4は、ヌクレオシジル基を表し；
−Ｒ7は、Ｒ4のプリン、ピリミジンまたはユニバーサル塩基部分の窒素原子と共有結合によって連結される、式Ｒ−（ＣＨ2）q−Ｃ≡ＣＨ（式中、ｑは１又は２であり、Ｒはハロゲン化物である）で表されるアルキル化剤の残基であり、
−ｎ及びｍは、同一であるか又は異なっていて、０〜１０である）
で表される化合物に関する。
【００４３】
Ｒは、好ましくは塩化物又は臭化物であり、ｑは、好ましくは１である。
【００４４】
式（ＩＶ）で表される化合物は、Ｘが酸素である式（Ｉ）で表される化合物を得るための合成中間体として有用である。
【００４５】
式（Ｉ）中のＡ、Ｒ3およびＲ4に関して上述した好ましい特徴の全ては、式（ＩＶ）にもあてはまる。
【００４６】
式（ＩＶ）で表される好ましい化合物は、以下のものである。
−ｎ＝ｍ＝１であり；
−Ｒ3は、トリアゾール基であり；
−Ｒ4は、チミジンであり；
−Ｒ7は、プロパルギルである。
【００４７】
特に、対象とする式（ＩＶ）で表される化合物は、以下の通りである。
５’−［４−（（１２−プロパルギルオキシドデカニルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−Ｎ−３−プロパルギルチミジン、
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）］−５’−デオキシ−Ｎ−３−プロパルギルチミジン、および
１，１０−ビス−２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９−ヘキサフルオロデカニル−５’−［４−（オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−プロパルギル−５’−デオキシチミジン。
【００４８】
さらに、本発明は、式（Ｖ）：
Ｒ4−（ＣＨ2）p−Ｒ5−Ｒ6      （Ｖ）
（式中
−Ｒ4は、ヌクレオシジル基を表し；
−Ｒ5は、ヌクレオシジル基のピリミジン塩基またはプリン塩基の窒素原子に対する共有結合によって、Ｒ4に連結される、１〜４個のヘテロ原子を含むヘテロアリール基を表し；
−Ｒ6は、場合により置換される、環状炭水化物の残基または前記炭水化物の誘導体を表し；
−ｐは、０〜１０である）
で表される化合物に関する。
【００４９】
好ましくは、Ｒ4は、トリアゾール基である。
【００５０】
好ましくは、Ｒ5はチミジニルであり、Ｒ4はＲ5の３位で窒素に連結される。
【００５１】
「場合により置換される」とは、環状炭水化物またはその誘導体が、例えば、ハロゲン、アミノ基、カルボキシ基、カルボニル基、カルボニルアミノ基、ヒドロキシル基、アジド、シアノ、アルキル、シクロアルキル、ペルフルオロアルキル、アルキルオキシ（例えば、メトキシ）、オキシカルボニル、ビニル、エチニル、プロピニル、アシル基などから選ばれる少なくとも１つの置換基によって置換され得ることを意味する。
【００５２】
式（Ｖ）で表される化合物は、式（Ｉ）（式中、Ｘは、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−または−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−である）で表される化合物を得るための合成中間体として有用である。
【００５３】
式（Ｉ）中のＲ4、Ｒ5およびＲ7に関して上述した好ましい特徴の全ては、式（Ｖ）にもあてはまる。
【００５４】
式（Ｖ）で表される好ましい化合物は、以下のものである。
−Ｐ＝１であり；
−Ｒ3は、トリアゾール基であり；
−Ｒ5は、チミジンであり；または
−Ｒ6は、２，３，４，６テトラ−Ｏ−保護−グルコピラノシルの残基である。
【００５５】
特に、対象とする式（Ｖ）で表される化合物は、以下の通りである。
５’−デオキシ−Ｎ−３−（１−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）チミジン、および
５’−アジド−Ｎ−３−（１−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）チミジン。
【００５６】
本発明はまた、少なくとも１つの式（Ｉ）で表される化合物から形成される生体適合性ハイドロゲルに関する。特に、これらのハイドロゲルは、例えば、０．１〜１０ｗｔ％の式（Ｉ）で表される化合物、特に１〜５ｗｔ％を含有することができる、式（Ｉ）で表される化合物の水溶液から形成される。
【００５７】
本発明による生体適合性ハイドロゲルは、１つ以上の式（Ｉ）で表される化合物、または１つ以上の式（Ｉ）で表される化合物と１つ以上のグリコシル−ヌクレオシド（単数又は複数）−脂質（単数又は複数）（ＧＮＬとも呼ばれる）との混合物、および／またはグリコシル−ヌクレオシド（単数又は複数）−フルオロ脂質（単数又は複数）（ＧＮＦとも呼ばれる）を含むことができる。
【００５８】
また、本発明による生体適合性ハイドロゲルは、１つ以上の式（Ｉ）で表される化合物と１つ以上のタンパク質（単数又は複数）または糖タンパク質（単数又は複数）、例えば、コラーゲンまたはヒアルロン酸、との混合物、および場合により、１つ以上のＧＮＬまたはＧＮＦとの混合物を含むことができる。
【００５９】
「生体適合性」は、宿主生物によって十分に許容され、宿主生物の生物学的機能に対するいずれもの拒絶反応、毒性反応、損傷または有害な作用を引き起こさない物質として理解される。
【００６０】
本発明による生体適合性ハイドロゲルは、例えば、式（Ｉ）で表される化合物を溶解するまで、例えば４０℃〜５０℃の温度で加熱し、溶液を室温まで徐々に冷却させることによって調製することができる。
【００６１】
また、式（Ｉ）で表される化合物について上述した好ましい特徴はすべて、そこから形成されるハイドロゲルにあてはまる。
【００６２】
本発明はまた、式（Ｉ）で表される化合物から形成されたハイドロゲルの細胞培養液としての使用、特に、動物細胞またはヒト細胞の培養液としての使用に関する。
【００６３】
本発明によるハイドロゲルは、真核細胞、特に幹細胞培養のための培養液として特に適している。実際に、これらのハイドロゲルは、分離した形態で幹細胞の培養を可能にし、一方、ＧＮＦから形成されたものなどの、既存のＬＭＷＧを使用する場合、幹細胞のクラスターの形成が観察された。単離された真核細胞、特に幹細胞の培養は、現在、幹細胞に対して行われている広範な研究の観点から、非常に有益かつ有望である。有利には、式（Ｉ）で表される化合物から形成されるハイドロゲルは、特定の粘弾性を有する。実際に、適用周波数の関数としての貯蔵弾性率Ｇ’（弾性率とも呼ばれる）および損失弾性率Ｇ’’（粘性弾性率とも呼ばれる）の変化に関するレオロジー研究が行われた。Ｇ’は、各振動で蓄積され、放出されるエネルギー量を示し、Ｇ’’は、熱で消散されるエネルギーに対応する。驚くべきことに、貯蔵弾性率Ｇ’は、安定したゲルの形成を示す損失弾性率Ｇ’’よりも高いことが見出された。理論に束縛されることは望まないが、この高い弾性率は、単離された幹細胞の接着および増殖において役割を果たすと仮定することができる。
【００６４】
さらに、式（Ｉ）で表される化合物から形成されたハイドロゲルは、チクソトロピー挙動を有し、したがって、シリンジによって送達され得て、外科的使用を可能にすることが見出されている。実際には、上記ハイドロゲルは、高い歪みが適用された後にそのゲル挙動および強度を回復することができる。
【００６５】
特に、本発明によるハイドロゲルは、以下の生物医学用途において生体適合性材料として使用することができる：
−組織工学、例えば、骨再生のために使用することができる、例えば、ゲル−細胞複合体を注入することによる；
−細胞治療、例えば、細胞が活性分子を生成するゲル−細胞複合体を注入することによる；
−腹部−骨盤外科手術後の癒着形成の防止、例えば、適用部位に留まり、隣接する組織間の障壁として機能するゲルを注入することによる。
【００６６】
また、本発明による生体適合性ハイドロゲルは、例えば：
−有効成分が注射部位の近くで（例えば、化学療法のための局所投与）および／または血流中でゆっくりと拡散することを可能にする、ゲル内に閉じ込められた有効成分の制御放出送達のために；
−例えば、電気的に刺激可能なデバイスのカプセル化などの送達デバイスをホストするために、薬物送達用の生体適合性材料として使用することができる。
【００６７】
本発明は、以下の実施例によって非限定的に支持される。市販のすべての試薬および溶媒（Ｆｌｕｋａ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ａｌｆａ−Ａｅｓａｒ）をさらに精製することなく使用した。無水条件を必要とする反応では、不活性雰囲気（窒素またはアルゴン）下で乾燥溶媒（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用した。
【００６８】
分析用薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、蛍光指示薬（Ｍｅｒｃｋ）を用いて、予めコーティングしたシリカゲルＦ２５４プレート上で行われた。化合物の検出は、ＵＶ光（２５４ｎｍ）を用いて、続いてエタノール中の１０％濃度のＨ2ＳＯ4溶液による噴霧により、その後、加熱、または１％水性ＫＭｎＯ4、その後の加熱によって達成された。
【００６９】
カラムクロマトグラフィーは、フラッシュシリカゲル（０．０４〜０．０６３ｍｍ、Ｍｅｒｃｋ）またはすぐに使用できるＣｈｒｏｍａｂｏｎ  ＲＳ４０フラッシュクロマトグラフィーカラム（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ）を用いて行われた。すべての化合物は、1Ｈおよび13Ｃ核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）（Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＤＰＸ−３００分光計、３００．１３ＭＨｚで1Ｈおよび７５．４６ＭＨｚで13Ｃ）を用いて特徴付けられた。帰属は、1Ｈ−1Ｈ  ＣＯＳＹ、ＤＥＰＴおよびＨＳＱＣ実験によって行われた。化学シフト（δ）は、テトラメチルシランまたは残留溶媒ピーク（ＣＨＣｌ3：1Ｈ：７．２６、13Ｃ：７７．０）に対して百万分率（ｐｐｍ）で与えられる。カップリング定数Ｊは、ヘルツ（Ｈｚ）で与えられる；ピーク多重度は、以下のように報告される：ｓ＝一重項、ｂｓ＝広域一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｍ＝多重項。
【００７０】
高分解能電子噴霧イオン化質量スペクトル（ＨＲ  ＥＳＩ−ＭＳ）は、ＱＳｓａｔ  Ｅｌｉｔｅ質量分析計（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上のＣＥＳＡＭＯ（Ｂｏｒｄｅａｕｘ、Ｆｒａｎｃｅ）により実施された。装置は、ＥＳＩ源を備え、スペクトルはネガティブモードで記録された。エレクトロスプレー針を４５００Ｖに維持し、室温で操作した。サンプルは、ＬＣポンプからの２００μＬ／分のメタノール流内に１０μＬのサンプルループを通過させた注入により導入された。
【００７１】
以下の省略形を用いる：
ＤＣＭ  ジクロロメタン
ＤＭＦ  ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＴＢＡＩ  ヨウ化テトラブチルアンモニウム
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン
【００７２】
「製造例」と題された以下の実施例は、式（Ｉ）で表される化合物を調製するために使用される合成中間体の調製を記載する。次に、式（Ｉ）で表される化合物の調製およびその適用を「実施例」として記載する。存在する場合、「製造例」または「実施例」の表題化合物に付随する数字は、図１，２および３のスキームに示されるものを指す。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】図１は、Ｘが酸素である式（Ｉ）で表される化合物について、製造例および実施例で使用される合成スキームを示す。
【図２】図２は、Ｘが−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−である式（Ｉ）で表される化合物について、製造例および実施例において使用される合成スキームを示す。
【図３】図３は、Ｘが−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−である式（Ｉ）で表される化合物について、製造例および実施例で使用される合成スキームを示す。
【図４】図４は、化合物５および６から得られたハイドロゲルの周波数掃引結果を示す。
【図５】図５は、化合物６から得られたハイドロゲルのステップひずみ測定を示す。
【図６】図６は、ヒト間葉系幹細胞に対するＭＴＴ試験による化合物６の細胞傷害性の測定を示す。
【図７ａ】図７は、化合物６ベースのゲル中で増殖させたラット骨芽細胞（Ａ）におけるアラマーブルー代謝をモニターすることによる化合物６の細胞適合性を示す。
【図７ｂ】図７は、化合物６ベースのゲル中で増殖させヒト幹細胞ＡＳＣ（Ｂ）におけるアラマーブルー代謝をモニターすることによる化合物６の細胞適合性を示す。
【図８】図８は、ヒト肝癌細胞ＨｕＨ−７（比較例）におけるＭＴＴ試験によるＧ．Ｇｏｄｅａｕら、Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，２００９年、３４、５１２７−５１３０頁の化合物ＧＮＬの細胞毒性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
製造例１
１，１２−ジプロパルギルオキシデカン（２）
無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）中の化合物１（市販）（５ｇ、２４．７ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に、撹拌下、小片の水素化ナトリウム（鉱油中５５％、６．５ｇ、１４８．２ｍｍｏｌ）を添加した。臭化プロパルギル（トルエン中８０％ｗ／ｗ、１１ｇ、７４．１ｍｍｏｌ）、続いてＴＢＡＩ（０．９１ｇ、２．４ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１５時間撹拌を続けた。メタノール（１０ｍＬ）で反応を停止させ、さらに３０分間撹拌した。ＤＣＭ（２００ｍＬ）の添加後、溶液を水（３×５０ｍＬ）、次いでブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、有機層を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。生成物２をシリカゲル（ヘキサン／酢酸エチル１００／０、次いで９７／３）で精製後に単離し、無色液体を得た。収量：４．４８ｇ（６５％）。
【００７５】
【化１】
2017531654.tif 000002
【００７６】
【化２】
2017531654.tif 000003
【００７７】
製造例２
１２−プロパルギルオキシドデカン−１−オール（７）
無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の化合物１（市販）（４ｇ、２０ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に、撹拌下、小片の水素化ナトリウム（鉱油中５５％、２．５ｇ、１０９ｍｍｏｌ）を添加した。臭化プロパルギル（トルエン中８０ｗ／ｗ％、９ｇ、６０ｍｍｏｌ）を滴下し、低温で１２時間撹拌を続けた。反応混合物を減圧下で濃縮した。得られた混合物を水に注ぎ、ＤＣＭで抽出した。抽出物を合わせ、水（３×５０ｍＬ）、次いでブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。生成物７をシリカゲル（ヘキサン／酢酸エチル６／４）で精製後に単離し、褐色固体を得た。収量：２．２４ｇ（４６％）。
【００７８】
【化３】
2017531654.tif 000004
【００７９】
【化４】
2017531654.tif 000005
【００８０】
製造例３
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）］−５’−デオキシチミジン（３）
１４０ｍＬのＴＨＦ／Ｈ2Ｏ（１：１）中の製造例２で得られた７（１．５０ｇ、５．３９ｍｍｏｌ）および５’−アジド−５’−デオキシチミジン（３．０２ｇ、１１．３０ｍｍｏｌ）の溶液に硫酸銅１７２ｍｇ、１．０７ｍｍｏｌ）、続いてアスコルビン酸ナトリウム（４２７ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃で２０時間撹拌した。室温に冷却した後、溶媒を減圧下で除去した。得られた固体を洗浄液が無色になるまで水で洗浄し、次いでエタノールで洗浄した。高真空下で乾燥させた後、得られた白色固体をさらに精製することなく次の工程で使用した。収量：４．００ｇ（９１％）。
【００８１】
【化５】
2017531654.tif 000006
【００８２】
【化６】
2017531654.tif 000007
【００８３】
製造例４
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）］−５’−デオキシ−Ｎ−３−プロパルギルチミジン（４）
無水ＤＭＦ（１２０ｍＬ）中の製造例３で得られた化合物３（３．５０ｇ、４．３０ｍｍｏｌ）の溶液に炭酸ナトリウム（１．７ｇ、１２．９２ｍｍｏｌ）、続いて臭化プロパルギル（トルエン中８０ｗ／ｗ％、１．９２ｇ、１２．９２ｍｍｏｌ）およびＴＢＡＩ（０．１６ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２０時間撹拌し、次いでＤＣＭ（２００ｍＬ）に注ぎ、水（３×５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。生成物は、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１００：０〜９６：４）で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製され、白色固体泡状物として得た。収量：３．０７ｇ（７７％）。
【００８４】
【化７】
2017531654.tif 000008
【００８５】
【化８】
2017531654.tif 000009
【００８６】
製造例５
５’−［４−（（１２−ヒドロキシドデカニルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシチミジン（８）８０ｍＬのＴＨＦ／Ｈ2Ｏ（１：１）中の製造例１で得られた化合物７（２．２３ｇ、９．３０ｍｍｏｌ）の脱気溶液に、５’−アジド−５’−デオキシチミジン（２．４８ｇ、９．３０ｍｍｏｌ）、硫酸銅（０．１５ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）およびアスコルビン酸ナトリウム（０．３７ｇ、１．８６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃で３時間撹拌した。真空中でＴＨＦを除去した後、水性混合物を濾過し、得られた黄色固体を水で洗浄し、次いでＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１）で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物を白色固体として溶出させた。収量：３．８８ｇ（８２％）。
【００８７】
【化９】
2017531654.tif 000010
【００８８】
【化１０】
2017531654.tif 000011
【００８９】
製造例６
５’−［４−（（１２−ヒドロキシドデカニルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−Ｎ−３−プロパルギルチミジン（９）
無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）中の製造例５で得られた化合物８（１．２７ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（０．６９ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）およびＴＢＡＩ（０．０９ｇ、２．５ｍｍｏｌ）、続いて臭化プロパルギル（トルエン中８０ｗ／ｗ％、１．１９ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。得られた黄色油状物を水（５０ｍＬ）に注ぎ、ＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水（５０ｍＬ）、次いでブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、溶媒を真空中で除去した。粗生成物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、表題化合物を粘稠な黄色油状物として溶出し、放置して結晶化（白色固体）させた。収量：１．２０ｇ（８７％）。
【００９０】
【化１１】
2017531654.tif 000012
【００９１】
【化１２】
2017531654.tif 000013
【００９２】
製造例７
５’−［４−（（１２−プロパルギルオキシドデカニルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−Ｎ−３−プロパルギルチミジン（１０）
無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の製造例５で得られた化合物８（２ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）溶液に水素化ナトリウム（鉱油中５５％、０．９０ｇ、２２ｍｍｏｌ）を添加した。１５分後、ＴＢＡＩ（０．１３５ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加し、続いて少量の臭化プロパルギル（トルエン中８０ｗ／ｗ％、１．６３ｇ、１１ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で５時間、次いで室温で一晩撹拌を継続した。撹拌し、氷上で冷却しながら、反応を水（１０ｍＬ）で停止させ、溶液を減圧下で濃縮した。茶色残渣を水（２００ｍＬ）に溶解し、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（３×１００ｍＬ）および１０％ＫＣｌ水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、真空中で溶媒を除去した。粗生成物を酢酸エチルで溶出するシリカゲルのクロマトグラフィーにより精製し、黄色油状物として得た。収量：０．８７ｇ（４０％）。
【００９３】
【化１３】
2017531654.tif 000014
【００９４】
【化１４】
2017531654.tif 000015
【００９５】
製造例８
１，１’−（ドデカン−１，１２−ジイル）ビス（３−［プロパルギル］尿素）（１２）
無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の１，１２−ジイソシアナトドデカン（０．５３ｍＬ、２ｍｍｏｌ）の溶液にプロパルギルアミン（０．３０ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。混合物を室温で１６時間撹拌した。沈殿物をろ過し、ＤＣＭで十分に洗浄して、過剰のプロパルギルアミンを除去した。乾燥後、生成物を白色固体として得た。収率：（９９％）。
【００９６】
【化１５】
2017531654.tif 000016
【００９７】
【化１６】
2017531654.tif 000017
【００９８】
製造例９
Ｎ−３−プロパルギルチミジン（１３）
無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のチミジン（３ｇ、１２．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（２．５８ｇ、１８．５８ｍｍｏｌ）、臭化プロパルギル（トルエン中８０ｗ／ｗ％、２．０７ｍＬ、１８．５８ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を室温で２日間撹拌した。真空中でＤＭＦを除去した後、残渣を酢酸エチル（１００ｍＬ）に溶解し、次いで水（３×３０ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。得られた油状物をさらに精製することなく次の工程で使用した。収量：３ｇ（８６％）。
【００９９】
【化１７】
2017531654.tif 000018
【０１００】
【化１８】
2017531654.tif 000019
【０１０１】
製造例１０
【０１０２】
【化１９】
2017531654.tif 000020
【０１０３】
５’−デオキシ−Ｎ−３−（１−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）チミジン（１４）
８０ｍＬのｔｅｒｔ−ブタノール／Ｈ2Ｏ（１：１）中の製造例９で得られた１３（２．８０ｇ、１０ｍｍｏｌ）および２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルアジド（３．７３ｇ、１０ｍｍｏｌ）に硫酸銅（１５９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）およびアスコルビン酸ナトリウム（３９６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃で２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留固体を酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解し、次いで水（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、酢酸エチルで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、白色固体として得た。収量：５．３３ｇ（８２％）。
【０１０４】
【化２０】
2017531654.tif 000021
【０１０５】
【化２１】
2017531654.tif 000022
【０１０６】
製造例１１
【０１０７】
【化２２】
2017531654.tif 000023
【０１０８】
５’−アジド−Ｎ−３−（１−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）チミジン（１５）
無水ＤＭＦ（６ｍＬ）中の製造例１０で得られた１４（１ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）の溶液にＰＰｈ3（０．４８ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）、ＮａＮ3（０．５０ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）およびＣＢｒ4（０．６１ｇ、１．８４ｍｍｏｌ）を連続して添加した。２４時間撹拌した後、メタノール（１．５ｍＬ）で反応を停止させ、さらに３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、生成物をシリカゲルでの精製（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １００／０、次いで９７／３）後に、白色固体として単離した。収量：１．３１ｇ（７７％）。
【０１０９】
【化２３】
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【０１１０】
【化２４】
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【０１１１】
製造例１２
１，１’−（テトラデカン−１，１４−ジイル）ビス（３−［プロパルギル］アミド）（１８）
乾燥ＤＣＭ中のヘキサデカン二酸（４．３４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、塩化チオニル（９．１２ｍｍｏｌ、２．１当量）およびトリエチルアミン（１３．０２ｍｍｏｌ、３当量）を滴下した。混合物を室温で１時間激しく撹拌した。次に、プロパルギルアミン（９．５５ｍｍｏｌ、２．２当量）をゆっくり添加した。１６時間撹拌した後、混合物を濾過し、粗生成物を水およびエタノールで十分に洗浄した。収率：３６％。
【０１１２】
【化２５】
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【０１１３】
【化２６】
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【０１１４】
実施例１
５’−［４−（１２−ヒドロキシドデカニルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−Ｎ−３−（１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルチミジン（５）
２０ｍＬのＴＨＦ／Ｈ2Ｏ（１：１）中の製造例６で得られた化合物９（１．１８２ｇ、２．０ｍｍｏｌ）および１−アジド−β−Ｄ−グルコピラノース（０．５３４ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の脱気溶液に硫酸銅（３２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加し、続いてアスコルビン酸ナトリウム（８０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃で２０時間撹拌した。室温に冷却した後、溶媒を減圧下で除去した。得られた緑色固体をメタノールに溶解し、セライトで濾過し、得られた溶液を減圧下で濃縮し、シリカゲルのカラムに適用した。生成物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９：１〜８：２）で溶出した。収量：０．８４ｇ（５５％）。
【０１１５】
【化２７】
2017531654.tif 000028
【０１１６】
【化２８】
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【０１１７】
実施例２
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン（６）
１２ｍＬのＴＨＦ／Ｈ2Ｏ（１：１）中の製造例４で得られた４（２００ｍｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）および１−アジド−β−Ｄ−グルコピラノース（１１１ｍｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）の溶液に硫酸銅（１４ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を添加し、続いてアスコルビン酸ナトリウム（５３ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物をマイクロ波反応器（還流冷却器を備えた開放容器）中で２００Ｗにて７５℃で５分間撹拌しながら照射した。得られた粗製の混合物を減圧下で濃縮し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（８：２〜７：３）で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製し、５、続いて６を得た。収量：５、１６ｍｇ（９．５％）；６、１７７ｍｇ（５８％）。
【０１１８】
【化２９】
2017531654.tif 000030
【０１１９】
【化３０】
2017531654.tif 000031
【０１２０】
実施例３
５’−［４−（（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）ドデカニルオキシ）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］チミジン（１１）
２４ｍＬのＴＨＦ／Ｈ2Ｏ（６：４）中の製造例７で得られた化合物１０（０．８７ｇ、１．４９ｍｍｏｌ）の脱気溶液に１−アジド−β−Ｄ−グルコピラノース（０．６２ｇ、３．００ｍｍｏｌ）、硫酸銅（１２０．００ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）およびアスコルビン酸ナトリウム（４７．８０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃で３時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去した後、得られた緑色固体をメタノールに溶解し、セライトを通して濾過し、得られた溶液を減圧下で濃縮し、シリカゲルのカラムに適用した。生成物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（８：２）で溶出した。収量：０．８１ｇ（５４％）。
【０１２１】
【化３１】
2017531654.tif 000032
【０１２２】
【化３２】
2017531654.tif 000033
【０１２３】
実施例４
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［４−（オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−５’−デオキシ−３’−Ｏ−１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルチミジン
【０１２４】
【化３３】
2017531654.tif 000034
【０１２５】
３０ｍＬのＴＨＦ／Ｈ2Ｏ（２：１）中の製造例１で得られた７（１３９．０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の脱気溶液に５’−アジド−５’−デオキシ−３’−Ｏ−１−（（β−Ｄ−グルコピラノシドテトラアセテート）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチルチミジン［Ｌ．Ｌａｔｘａｇｕｅ，Ａ．Ｐａｔｗａ，Ｅ．Ａｍｉｇｕｅｓ，Ｐ．Ｂａｒｔｈｅｌｅｍｙ，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  １８（２０１３）１２２４１−６３］、硫酸銅（１５．９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）およびアスコルビン酸ナトリウム（３９．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６５℃で６時間、次いで室温で一晩撹拌した。真空中で溶媒を除去した後、残りの粗製材料をシリカゲルのカラムに適用した。生成物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）で溶出し、次いでＺｅｍｐｌｅｎ脱アセチル化に供した。収量：３０１ｍｇ（４６％）。
【０１２６】
【化３４】
2017531654.tif 000035
【０１２７】
【化３５】
2017531654.tif 000036
【０１２８】
実施例５
１，１０−ビス−２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９−ヘキサフルオロデカニル−５’−［４−（オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン
【０１２９】
【化３６】
2017531654.tif 000037
【０１３０】
図１に示される類似したセットの反応、すなわち、プロパルギル化／アジドチミジンカップリング／核酸塩基プロパルギル化に供された市販の２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９−ヘキサデカフルオロ−１，１０−デカンジオール（７８２．００ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）から得られた、１５ｍＬのＴＨＦ／Ｈ2Ｏ（２：１）中の１，１０−ビス−２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９−ヘキサフルオロデカニル−５’−［４−（オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−プロパルギル−５’−デオキシチミジンの脱気溶液に１−アジド−１−デオキシグルコピラノース、硫酸銅（２６．９０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）およびアスコルビン酸ナトリウム（４３．４０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃で一晩撹拌した。減圧下で溶媒を除去した後、残った粗製材料を水で洗浄し、濾液を減圧下で濃縮した。油状残渣をシリカゲルのカラムに適用した。生成物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（８：２、次に７：３）で溶出した。収量：５１４．００ｍｇ（４８％）。
【０１３１】
【化３７】
2017531654.tif 000038
【０１３２】
【化３８】
2017531654.tif 000039
【０１３３】
実施例６
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−メチルウレア）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン（１６）
３６ｍＬのｔｅｒｔ−ブタノール／Ｈ2Ｏ（１：１）中の製造例１１で得られた１５（１ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、製造例８で得られた化合物１２（２４３ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、硫酸銅（３３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）およびアスコルビン酸ナトリウム（５３ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を７５℃で２０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留固体をＤＣＭ（１５０ｍＬ）に溶解し、次いで水（３×５０ｍＬ）で洗浄した。有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。粗生成物を、酢酸エチル／ＭｅＯＨ（１０：０〜９０：１０）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、白色固体として得た。収量：０．９０ｇ（７８％）。
【０１３４】
【化３９】
2017531654.tif 000040
【０１３５】
【化４０】
2017531654.tif 000041
【０１３６】
実施例７
１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−メチルウレア）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン（１７）
２０ｍＬのメタノール無水物中の実施例６で調製した化合物１６（０．４９ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ナトリウムメトキシドの溶液（メタノール中１Ｍ、０．２ｍＬ）を滴下した。６０℃で１時間加熱した後、アンバーライトＩＲＣ−５０を添加して、Ｎａ+からＨ+イオンに変換した。同じ温度で２０分後、レジンを濾過により除去し、メタノールで洗浄した。濾液を濃縮し、生成物をＭｅＯＨ：ＣＨ2Ｃｌ2（３０：７０から５０：５０）で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色固体として得た（収率：７９％、０．３１ｇ）。
【０１３７】
【化４１】
2017531654.tif 000042
【０１３８】
実施例８
１，１４−ビス−テトラデカニル−５’−［（４−メチルアミド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン（１９）
３６ｍＬのｔｅｒｔ−ブタノール／Ｈ2Ｏ（１：１）中の化合物１８（０．２４ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）および化合物１５（１ｇ、１．４７ｍｍｏｌ、２．２当量）の溶液に、アスコルビン酸ナトリウム（５３ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ、０．４当量）、続いて硫酸銅五水和物（３３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、０．２当量）を添加した。混合物を７５℃で２４時間撹拌した。
【０１３９】
室温に冷却した後、溶媒を減圧下で除去した。得られた固体をＤＣＭに溶解し、溶液を水で洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過し、濃縮した。生成物を酢酸エチル／ＭｅＯＨ（１００：０〜８０：２０）で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色固体として得た（収率：７６％、０．８７ｇ）。
【０１４０】
【化４２】
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【０１４１】
【化４３】
2017531654.tif 000044
【０１４２】
実施例９
１，４−ビス−テトラデカニル−５’−［（４−メチルアミド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジン（２０）
２０ｍＬの無水メタノール中の実施例８で調製した化合物１９（０．６４ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液にナトリウムメトキシドの溶液（メタノール中１Ｍ、０．２ｍＬ）を滴下した。４５℃で３０分間加熱した後、アンバーライトＩＲＣ−５０を添加して、Ｎａ+からＨ+イオンに変換した。同じ温度で２０分後、レジンを濾過により除去し、メタノールで洗浄した。濾液を濃縮し、生成物をＭｅＯＨ：ＣＨ2Ｃｌ2（３０：７０から５０：５０）で溶出するシリカゲルのカラムクロマトグラフィーにより精製して、白色固体として得た（収率：８４％、０．４６ｇ）。
【０１４３】
【化４４】
2017531654.tif 000045
【０１４４】
【化４５】
2017531654.tif 000046
【０１４５】
実施例１０：ゲル化試験
実施例１および２で得られた１．５重量％の化合物５および６を含有する水性分散液（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水、１８μΩ／ｃｍ）を溶解するまで（４５℃で）加熱し、他に記述がなければ室温まで徐々に冷却した。得られた固体凝集塊は、試験管を逆さまにしたときに容器の反転に対して安定であり、化合物５および６がゲルを形成することを示している。
【０１４６】
実施例１１：レオロジー
レオロジー測定は、鋼板−プレート形状（直径２０ｍｍ）のＭａｌｖｅｒｎ  Ｋｉｎｅｘｕｓ  Ｐｒｏ＋レオメーターで行った。下部プレートにはペルチェ温度制御システムが装備されており、他に指示がない限り、すべてのサンプルは２５±０．０１℃で試験された。溶媒トラップを用いて均一な温度を確保し、水の蒸発を防止した。プレート間に０．３ｍｍのギャップ距離を維持した。（実施例で得られた）化合物５（実施例１）および６（実施例２）に基づくゲルを５５℃で加熱し、得られた液体をレオメーターに入れ、正弦振動にかけた。すべての測定は、線形粘弾性領域（ＬＶＲ）内で実施された。この目的のために、線形粘弾性レジームを達成するための実験条件は、１Ｈｚの角周波数（６．２８３ｒａｄ／ｓ）で０．０１〜１０％の振幅ひずみ掃引を行うことによって決定された。
【０１４７】
図４は、０．０３％の一定の歪みで化合物５および６（２３．１０ｍＭ）から得られたハイドロゲルの周波数掃引結果を示す。
【０１４８】
図５は、６．２８３ｒａｄ／ｓの固定角周波数で１％（ｗ／ｖ）の化合物６から得られたハイドロゲルのステップひずみ測定値を示す。この実験をその再現性を検証するために少なくとも３回繰り返した。
【０１４９】
これらの結果は、本発明によるハイドロゲルのチクソトロピー挙動を示す。提供される機械的エネルギーはゲルを不安定にし、これは、サンプルの老化を引き起こすことなく（Ｇ’およびＧ’’係数のいくつかの応力／復元が観察された）、機械的ストレスが止まると自動的に再生することができる。
【０１５０】
ゾル−ゲル転移温度（Ｔgel）
ゲル−ゾル転移温度の決定はまた、レオロジーによって決定することができる。ハイドロゲル（実施例２の３％生成物６、ｗ／ｖ）を２５℃から６０℃（３℃／分）まで徐々に加熱した。印加する振動応力は、一定の周波数（１Ｈｚ）で５Ｐａに設定された。ゾル−ゲル転移点は、ゲルが液体になった温度として採用された。この融解温度は、粘弾性率（Ｇ’とＧ’’）の交点で達する。この値は、ゲル状態（３７℃）での細胞培養と適合する４６℃である。
【０１５１】
実施例１２：細胞傷害性および細胞適合性
実施例２の化合物６、すなわち１，１２−ビス−ドデカニル−５’−［（４−オキシメチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）］−Ｎ−３−［１−（（β−Ｄ−グルコピラノシド）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］−５’−デオキシチミジンを用いて実験を行った。
【０１５２】
ａ）細胞培養−ｈＡＳＣの単離および培養
間葉系幹細胞をヒト脂肪組織から単離した。ヒトの皮下脂肪は、Ｂｏｒｄｅａｕｘ  Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎ  ＣＨＵ（Ｂｏｒｄｅａｕｘ、Ｆｒａｎｃｅ）で股関節手術を受けた２０歳〜８０歳の健康な患者から得た。脂肪塊を他の組織から分離し、滅菌ＰＢＳで洗浄し、細断し、１時間３０分、穏やかに撹拌しながら３７℃で０．１％（ｗ／ｖ）コラゲナーゼＩ型（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ、Ｌａｋｅｗｏｏｄ、ＮＪ、ＵＳＡ）と共にインキュベートした。濾過および遠心分離後、上部液体層を除去し、残った間質血管画分（ＳＶＦ）をＥＬＢ（赤血球溶解緩衝液；１５５ｍＭ  ＮＨ4Ｃｌ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）、５．７ｍＭ  Ｋ2ＨＰＯ4、７．４ｍＭ  Ｋ2ＨＰＯ4・３Ｈ2Ｏ、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ（全てＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ））で洗浄し、次いで遠心分離した。ペレットを１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｌｏｎｚａ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を補充したＤＭＥＭ  Ｆ１２培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｅｒｇｙ  Ｐｏｎｔｏｉｓｅ、Ｆｒａｎｃｅ）に再懸濁し、１００、７０および４０μｍの細胞ストレーナー（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ、ＵＳＡ）を連続して用いて濾過した。細胞をプレートし、３７℃、５％ＣＯ2で培養した。培地は２日ごとに交換した。
【０１５３】
ｂ）細胞培養−Ｄ１−ＯＲＬ−ＵＶＡ
１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含むＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中でＤ１−ＯＲＬ−ＵＶＡ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ−１２４２４）を培養した。培地は２日ごとに交換した。
【０１５４】
ｃ）ｈＡＳＣまたはＤ１播種による３Ｄ足場の調製
すべてのインビトロアッセイでは、化合物６から得られたハイドロゲルを３％（ｗ／ｖ）の濃度で調製した。化合物６の粉末を撹拌下（９００ｒｐｍ）、２５℃で４５分間、ＰＢＳ１×に可溶化した。その後、ゲルが形成されたとき、室温で撹拌せずに３〜４時間放置した。細胞播種を可能にするために、ゲルを５５℃で３０分間加熱した。溶液が得られたら、それを３７℃に急冷し、１ｍＬあたり１００万個の細胞濃度で１０μＬの細胞懸濁液と完全に混合した。最後に、細胞化ハイドロゲルを撹拌下（６００ｒｐｍ）、２５℃で４５分間維持した。この期間の後、培地を添加し（２５０μＬ／チューブ）、チューブを制御された雰囲気（５％ＣＯ2、３７℃）でインキュベートした。
【０１５５】
ｄ）化合物６の細胞傷害性およびＢＯＬＡゲル細胞適合性の評価
化合物６の細胞毒性は、細胞代謝活性（ＭＴＴアッセイ）の測定によって評価された。この試験は、生きた細胞のミトコンドリア酵素のコハク酸デヒドロゲナーゼによってホルマザンに還元される臭化テトラゾリウムＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）を使用する。この減少は、黄色から紫色−青色への色の変化をもたらす。色の濃さは、生きている細胞の量に比例する。
【０１５６】
細胞（ｈＡＳＣまたはＤ１）を９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）に１０，０００細胞／ｃｍ2の密度で播種した。生成物６を培養培地中の５μＭ〜５ｍＭの濃度で可溶化した。
【０１５７】
インキュベーションの７２時間後にＭＴＴアッセイを行った。陽性対照として、ＧＮＢＡを含まない培地を使用した。陰性対照として、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００を培地に添加した。結果を陽性対照の代謝活性の百分率として表した。吸光度を５３０ｎｍの波長で測定し、６３０ｎｍでのバックグラウンドを減算した。
【０１５８】
化合物６の細胞傷害性は、化合物６の濃度を増加させてインキュベートした４８時間後のヒト間葉系幹細胞（ＡＳＣ）の代謝活性を測定するためにＭＴＴ試験によって決定された。結果は、ＢＯＬＡ不含細胞培養培地からなる陽性対照の百分率として示された。**：ｐ＜０．０１（マンホイットニーＵ検定）。
【０１５９】
結果は、図６に示され、化合物６は、最大約１ｍＭの濃度で無毒性であることを示す。
【０１６０】
また、アラマーブルー代謝活性アッセイを用いて細胞生存率を評価した。ＰＢＳ１Ｘ中に０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で懸濁したレサズリンナトリウム塩溶液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を培養培地で１／１０（ｖ／ｖ）に希釈した。溶液を各ウェル（２５０μＬ）に添加し、３７℃で３時間インキュベートした。この時間の後、励起５３０ｎｍおよび発光５９０ｎｍの波長で蛍光を測定した。３つのサンプルを各実験について分析した。結果を図７Ａに示す。
【０１６１】
細胞適合性は、化合物６ベースのゲル中で増殖させたラット骨芽細胞（Ａ）またはヒトＡＳＣ（Ｂ）におけるアラマーブルー代謝をモニターすることによって決定された。結果は、１日目に得られた値の百分率として示される。*：ｐ＜０．０５；**：ｐ＜０．０１（マンホイットニーＵ検定）。
【０１６２】
結果を図７Ｂに示す。
【０１６３】
カルセイン−ＡＭおよびエチジウムホモダイマー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＵＳＡ）を用いた生／死滅染色を使用することにより、生存率を１、４および７日後に評価した。ゲル内に播種された細胞は、１．２５μＬカルセイン−ＡＭおよび５μＬ  ＥｔｈＤ−１を補充したハンクス培地中で３７℃にて１時間インキュベートされた。共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ  ＴＣＳ  ＳＰＥ）を用いてサンプルを観察した。
【０１６４】
２週間での生／死染色は、緑色（生存）細胞の大部分を示した。
【０１６５】
結果は、化合物６が細胞傷害性ではなく、細胞培養培地として使用される場合には、良好な細胞適合性を有することを示す。
【０１６６】
実施例１３（比較例）：Ｇ．Ｇｏｄｅａｕら，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．，２００９．３４．５１２７−５１３０の化合物ＧＮＬの細胞毒性Ｇ．Ｇｏｄｅａｕら（５１２７頁右欄）に開示された化合物ＧＮＬの毒性は、細胞死を測定するために、ＭＴＴアッセイによってヒト肝癌細胞ＨｕＨ−７において評価された。
【０１６７】
Ｈｕｈ−７細胞は、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび１％非必須アミノ酸を補充したＤＭＥＭ培地中で３７℃にて、５％ＣＯ2雰囲気中で増殖させた。全ての培養試薬をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。ウェルあたり２０００個のＨｕｈ−７細胞を９６ウェルプレートに播種し、翌日、完全増殖培地中の化合物ＧＮＬの濃度を増加させながらインキュベートした。化合物の存在下で５日後、生細胞を比色計ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって定量した。生存率の結果を図８に示す。
【０１６８】
結果は、ＧＮＬ化合物が１００μＭ以下の濃度では有意な毒性を有していないことを示している。より高い濃度では、毒性はすぐに重大になり、細胞の１００％が２００μＭの濃度で死滅した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７ａ】
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【図７ｂ】
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【図８】
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【国際調査報告】
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