(57)【要約】  本発明は、臍帯血血漿を含む、角膜病変の処置のための新規な眼科用調製物を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
角膜病変の処置における薬剤として使用するための単離された臍帯血血漿。
【請求項２】
約０．２０〜０．４０ｎｇ／ｍｌの範囲のＥＧＦ、好ましくは約０．３０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦの濃度を有することを特徴とする、請求項１に記載された単離された臍帯血血漿。
【請求項３】
ヒトの角膜病変の処置における薬剤として使用するための、請求項１または２に記載された単離された臍帯血血漿。
【請求項４】
非ヒト哺乳動物の角膜病変の処置における薬剤として使用するための、請求項１または２に記載された単離された臍帯血血漿。
【請求項５】
前記非ヒト哺乳動物が、猫、犬および馬を含む群において選択される、請求項４に記載された単離された臍帯血血漿。
【請求項６】
前記角膜病変が、眼球乾燥症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、化学熱傷による損傷、神経栄養性角膜炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、リウマチ性関節炎、自己免疫を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の単離された臍帯血血漿。
【請求項７】
臍帯血血漿を含む眼科用組成物。
【請求項８】
さらに抗凝血剤を含む、請求項７に記載の臍帯血血漿を含む眼科用組成物。
【請求項９】
前記抗凝血剤が、クエン酸塩、リン酸塩、ブドウ糖またはその混合物を含む群において選択される、請求項８に記載の眼科用組成物。
【請求項１０】
前記抗凝血剤が、以下の組成を有する請求項８または９に記載の眼科用組成物：
【表１】
2017534605.tif 000004
【請求項１１】
前記抗凝血剤が、約１０〜６０％（容積／容積）の範囲、好ましくは、１５または２０または２５または３０または３５または４０または４５または５０または５５％（容積／容積）、さらに好ましくは、約５０％（容積／容積）の量で含まれている、請求項８〜１０の何れか１項に記載の眼科用組成物。
【請求項１２】
約０．１０〜０．２０ｎｇ／ｍｌの範囲のＥＧＦ、好ましくは、約０．１５ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ濃度を有することを特徴とする、請求項７〜１１の何れか１項に記載の眼科用組成物。
【請求項１３】
約１．５〜２．５ｍｌ、好ましくは、約２ｍｌの容積を有することを特徴とする、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の眼科用組成物。
【請求項１４】
角膜病変の処置における薬剤として使用するための、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の眼科用組成物。
【請求項１５】
ヒトの角膜病変の処置における薬剤として使用するための、請求項１４に記載の眼科用組成物。
【請求項１６】
非ヒト哺乳動物の角膜病変の処置における薬剤として使用するための、請求項１４に記載の眼科用組成物。
【請求項１７】
前記非ヒト哺乳動物が、猫、犬および馬を含む群において選択される、請求項１６に記載の眼科用組成物。
【請求項１８】
前記角膜病変が、眼球乾燥症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、化学熱傷による損傷、神経栄養性角膜炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、リウマチ性関節炎、自己免疫を含む、請求項１４〜１７の何れか１項に記載の眼科用組成物。
【請求項１９】
単離された臍帯血試料を抗凝血剤または抗凝固剤の混合物と接触させる工程を含む、請求項７〜１３の何れか１項に記載の眼科用組成物を調製するための方法。
【請求項２０】
得られた調製物を遠心分離にかける工程をさらに含む、請求項１９に記載の眼科用組成物を調製するための方法。
【請求項２１】
前記遠心分離が、約１５００〜２５００ｇの範囲、好ましくは約１７００〜２３００ｇの範囲、さらに好ましくは約１９００〜２１００ｇの範囲の回転速度で、約１０〜２０分の範囲、好ましくは約１３〜１７分の範囲、さらに好ましくは約１４〜１６分の範囲の期間行われる、請求項２０に記載の眼科用組成物を調製するための方法。
【請求項２２】
約１００〜４００ｇの範囲、好ましくは約１５０〜３５０ｇの範囲、さらに好ましくは約１５０〜２５０ｇの範囲の回転速度で、約５〜２０分の範囲、好ましくは約７〜１５分の範囲、さらに好ましくは約９〜１１分の範囲の期間行われる遠心分離の予備的工程が先行する、請求項１９〜２１の何れか１項に記載の眼科用組成物を調製するための方法。
【請求項２３】
最終調製物を、ＥＧＦ約０．１０〜０．２０ｎｇ／ｍｌ、好ましくはＥＧＦ約０．１５ｎｇ／ｍｌの濃度にまで希釈する工程をさらに含む、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の眼科用組成物を調製するための方法。
【請求項２４】
前記遠心分離工程または前記予備的遠心分離工程の前に、単離された臍帯血試料の選別のための工程を含み、この工程は、移植に適した造血幹細胞の含有量の代理として有核細胞総数を調べること、および任意に、梅毒、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、細菌、菌類用マーカーに関して検査すること、を含む請求項１９〜２３の何れか１項に記載の眼科用組成物を調製するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、角膜病変の処置のための新規な眼科用調製物に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
角膜病変および眼の他の病状の処置のための調製物は知られている。
【０００３】
例えば、人工涙液は合成された組成物であり、その目的は眼の表面の潤滑を維持することである。それは液体またはゲルの形態であり、ヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロースまたは他の類似の誘導体のようなゲル化ポリマー、および塩を含む。それはまた、マイボーム腺液の組成を模倣するために脂肪およびリン脂質を含むことができる。
【０００４】
また、血清を含む眼科用組成物も提案されている；血清とはフィブリノーゲンが除かれた血液の液体部分として定義される。
【０００５】
特に、自己の血清の使用は、高い適合性を有し、同種異系の血清による病原体の伝染の危険を減少させるため、好ましいと考えられてきた。
【０００６】
しかし、炎症促進性サイトカインおよび自己抗体のような異常な炎症メディエーターの存在による不利益が存在し得、その場合、それにより患者を有害な因子に曝す可能性がある。
【０００７】
加えて、特定の状況においては、年配または子供の患者からの血液試料の収集が問題となり得る。
【０００８】
さらに、最近、点眼薬の調製のための臍帯血血清の使用も提案された。
【０００９】
先行技術文献であるＫｙｕｎｇ−Ｃｈｕｌ  Ｙｏｏｎ  ｅｔ  ａｌ．  （Ｃｏｒｎｅａ、  ２００６）には、重度の眼球乾燥症候群を患っている３１人の患者の処置のための、臍帯血血清点眼薬の効果的な適用が記載されている。
【００１０】
Ｈａｎ−Ｊｉｎ  Ｏｈ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、  ２０１２）には、眼の化学熱傷のマウスモデルにおいて、臍帯血血清点眼薬により実施された実験が開示されている。
【００１１】
Ｖｅｒｓｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｏｒｎｅａ、  Ａｐｒｉｌ  ２０１３）には、角膜病変に冒された患者において使用される、臍帯血血清からの標準化された点眼薬の製造のための、品質管理および手順が記載されている。
【００１２】
本発明の目的は、目の病状を処置するための眼科用組成物の調製のための生物物質の代替的ソースを提供することである。
【発明の概要】
【００１３】
発明の概要
驚くべきことに、臍帯血からの血漿が、角膜病変の処置のための眼科用組成物の調製のソースとして使用できることが見いだされた。
発明の目的
第一の目的によれば、本発明は、角膜病変の処置のための薬剤としての、臍帯血由来の血漿の使用を開示する。
【００１４】
特に、この血漿は、医学または獣医学的用途に用いられる。
【００１５】
更なる目的において、臍帯血血漿を含む眼科用組成物が開示される。
【００１６】
本発明のさらなる目的は、臍帯血血漿を含む調製物を得る方法の提供である。
発明の詳細な説明
第一の目的によれば、角膜病変の処置のための薬剤としての臍帯血由来の血漿の使用が開示される。
【００１７】
特に、この薬剤は、哺乳動物、好ましくはヒトに適用できる。
【００１８】
本発明の代替の実施態様において、前記薬剤は、非ヒト哺乳動物、好ましくは犬、猫および馬を含む群において選択される非ヒト哺乳動物の処置のために用いることができる。
【００１９】
本明細書では、血漿は、血液の液体部分として定義される。
【００２０】
本発明のために、角膜病変は、例えば：眼球乾燥症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、化学熱傷による損傷、神経栄養性角膜炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、リウマチ性関節炎および自己免疫病を含むものを意味する。
【００２１】
好ましい実施態様において、眼球乾燥症候群は、涙液減少、涙欠乏症、眼の乾燥症、乾性角結膜炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、眼の類天疱瘡、眼瞼縁炎、アレルギー性結膜炎、潰瘍形成のような一以上の他の病状を伴うか、または、ウイルス性結膜炎、レーザーインサイチュ―角膜曲率形成術（ＬＡＳＩＫ）を含む角膜手術、白内障手術、コンタクトレンズ装用、ビデオディスプレー作業活動の結果であるか、もしくは加齢によるものであり得る。
【００２２】
ここに記載の血漿のソースは、出生後の胎盤中に残存している血液により代表される。
【００２３】
本発明がヒトに適用される場合、これは出産後の胎盤中の幼児血液により代表される。
【００２４】
角膜病変の処置において用いられるためには、それは本願の更なる目的に従い、処理されなければならない。
【００２５】
特に、単離臍帯血試料を、まず、収集し、そして抗凝血剤または抗凝血剤の混合物と接触させる。
【００２６】
好ましい実施態様によれば、前記抗凝血剤は、クエン酸塩、リン酸塩、ブドウ糖を含む群において選択される。
【００２７】
さらに好ましい実施態様によれば、混合物は、クエン酸塩、リン酸塩およびブドウ糖を含む（これはＣＰＤ溶液として知られている。）。
【００２８】
さらに、特に、ＣＰＤ溶液は、以下の組成物であってよい：
【００２９】
【表１】
2017534605.tif 000002
【００３０】
前記抗凝血剤または抗凝血剤の混合物とそれらの量は、組成物の約１０〜６０％（容積／容積）の範囲に包含される。
【００３１】
好ましい実施態様において、前記剤または剤の混合物は、約１５または２０または２５または３０または３５または４０または４５または５０または５５％（容積／容積）、さらに好ましくは約５０％（容積／容積）の量含まれる。
【００３２】
組成物は、それから遠心分離にかけられる。
【００３３】
本発明の第一の実施態様によれば、遠心分離は、約１、５００〜２、５００ｇの範囲、好ましくは約１、７００〜２、３００ｇの範囲、そしてさらに好ましくは、約１、９００〜２、１００ｇの範囲の回転で行われる。
【００３４】
好ましい態様において、前記工程は、約１０〜２０分の範囲、好ましくは約１３〜１７分の範囲、そしてさらに好ましくは約１４〜１６分の範囲の期間行われる。
【００３５】
それから、上清血漿は、（そのような産物の保存および収容に適した特性を有する）空の袋に移され、それから本発明の眼科用組成物が調製される。
【００３６】
例えば、適切な製剤のために、臍帯血血漿調製物は、好ましくは約０．１０〜０．２０  ｎｇ／ｍｌの上皮成長因子（ＥＧＦ）濃度に希釈される。
【００３７】
好ましい実施態様において、希釈は、約０．１５ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ最終濃度を得るために行われる。
【００３８】
上記の最終濃度は、抗凝固調製物の添加によって、収集された試料に生じる希釈を考慮したものである。
【００３９】
前記希釈は、好ましくは１：２と１：１，３の間である。
【００４０】
代替の実施態様によれば、血漿試料の調製は、二重工程処理であり、上記の工程の前に予備的な遠心分離を含む。
【００４１】
特に、前記予備的工程は、約１００〜４００ｇ、好ましくは約１２０〜３５０ｇの範囲、およびさらに好ましくは約１５０〜２５０ｇの範囲の回転速度で行われる。
【００４２】
好ましい実施態様において、遠心分離工程は、約５〜２０分の範囲、好ましくは約７〜１５分の範囲、およびさらに好ましくは約９〜１１分の範囲の期間行われる。
【００４３】
利点として、代替の二重工程処理は、臍帯血血漿だけでなく、臍帯血血小板ゲルの調製に適した血小板濃度を得ることができる。
【００４４】
開示された前記方法により得られた調製物は、例えば、眼球乾燥症候群、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、化学熱傷により生じた損傷、神経栄養性角膜炎、シェーグレン症候群、全身性硬化症、リウマチ性関節炎および自己免疫のような角膜病変の処置のために投与することができる。
【００４５】
特に、それはヒトならびに、例えば、猫、犬および馬のような非ヒト哺乳動物に投与することができる。
【００４６】
したがって、本発明は、獣医学分野においても適用を見出すことができる。
【００４７】
さらなる実施態様によれば、本発明は、角膜病変の処置のための組成物を提供する。
【００４８】
特に、前記組成物は、点眼薬、軟膏、スプレー液または他の適切な剤形の形態であってよい。
【００４９】
好ましい実施態様において、眼科用組成物は、それぞれが適切な単一用量自己投与のために適した複数の分割量を意図してもよい。
【００５０】
前記の目的のために、血漿調製物の約２ｍｌの分割量が、特に点眼薬のために、好ましく調製される。
【００５１】
この本発明の眼科用組成物の調製の手順は、遠心分離または予備的遠心分離の前の適切な上流処理を含む。
【００５２】
実際上、ドナーを選択する必要があり、病変の不存在および／または特定のマーカーの存在をチェックするための試験が試料に関して行われる。
【００５３】
例えば、梅毒、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＢＶ、細菌および菌類のマーカーの同定に関する試験が行われる。
【００５４】
本発明の好ましい実施態様によれば、実際上、臍帯血の試料は、本発明の眼科用組成物の調製のソースとして用いられ、造血性の移植には適していないものである。
【００５５】
特に、臍帯血試料を収集した後、試料を臨床的使用から除く一般的基準の存在を無視して、生物成分の量をチェックし全有核細胞の数（造血幹細胞数の代理）が造血移植目的には不充分である場合、その後、試料は上記のように処理される。
【００５６】
特に、処理前の全有核細胞の数が１０００〜１５００ｘ１０６を下回る場合は、造血幹細胞の数は、移植目的には不十分であると考えられる。
【００５７】
いかなる場合も、本発明によって処理された臍帯血試料は、少なくとも４０〜５０ｍｌであることが好ましい。
【００５８】
本発明の更なる実施態様によれば、非ヒト哺乳動物における角膜病変の処置における臍帯血血漿の使用が開示される。
【００５９】
前記の目的のために、臍帯血は非ヒト哺乳動物から得られ、好ましい実施態様において非哺乳動物は、犬、猫および馬を含む群において選択される。
【００６０】
前記組成物の調製のために、上記と同一の方法が適用できる。
【発明を実施するための形態】
【００６１】
例
臍帯血血漿からの眼用製剤の調製
血液血漿
ヒト臍帯血の試料は、適切なドナーから、以下の抗凝固剤を含む袋に収集された：
【００６２】
【表２】
2017534605.tif 000003
【００６３】
生物成分の存在が造血移植には不十分であることをチェックした後、試料は、低速（２２０ｇで１０分間）の第一の遠心分離にかけられる。
【００６４】
赤血球細胞が分離され、上清の血小板に富む血漿は高速（２、０００ｇで１５分間）で遠心分離工程にかけられる。
【００６５】
血小板に富む画分が分離され、血小板に乏しい血漿画分におけるＥＧＦの濃度がチェックされる。
【００６６】
試料の希釈は、最終ＥＧＦ濃度が０．１５ｎｇ／ｍｌになるまで行われる。
【００６７】
それぞれ２ｍｌの分割量が使用のために調製された。
【００６８】
上記のことから、提案された発明の利点は、直接的に明白であろう。
【００６９】
特に、臍帯血血漿は、成長因子の驚くほど優れた生物的ソースであり、治癒のスピードの予期せぬ増大に寄与する。
【００７０】
それに加えて、患者からの自家末梢血の収集を、避けることができる。
【００７１】
それにより、ある種の患者からの低コンプライアンスに関連する多くの問題を、有利に克服することができる。
【００７２】
本発明の更なる利点は、臍帯血血漿からの点眼薬または他の眼科用組成物の調製は、病院における日々の処理に中に完全かつ良好に統合することができることである。
【００７３】
実際に、提供物から収集された臍帯血は、移植目的のためには限られた程度にのみ役立ちうるものであり、これは、たった１０％の場合にのみ、試料中の造血幹細胞の量が血液疾患の処置のために適したものであるからである。
【００７４】
したがって、ここに開示された発明の重要な利点は、そうでなければ９０％の場合に廃棄される産物を使用することができることである。
【００７５】
更に重要な側面としては、本発明が、他方では、血清試料を収集し扱うことを要するが、試料の個々の収集のための現在の手順の変更を要しないことである。
【００７６】
特に、抗凝固剤を含む公知の袋の使用を含む条件を適用することができる。
【００７７】
加えて、開示された血漿試料を得るための方法は、同時に、他の有用な目的で使用できる産物である臍帯血血小板ゲルの調製を可能とする。
【００７８】
上記のように、本発明は、医学および獣医学分野の双方における病変の処置のための適用を見出すことができる。
【国際調査報告】
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