(57)【要約】本出願は、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の変異体、特にグリコシル化変異体、電荷変異体、酸性変異体、ＨＭＷＳ変異体、耐還元性架橋変異体、ならびに抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体及びその変異体（複数可）を含む組成物、その組成物を作製する方法、特徴付ける方法、及び使用する方法に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖可変領域の配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変領域の配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む抗ＩＬ−１７Ａ及び抗ＩＬ−１７Ｆ交差反応性抗体と、そのグリコシル化変異体と、を含む、組成物。
【請求項２】
前記グリコシル化が、前記重鎖可変領域においてである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記グリコシル化変異体が、１つの重鎖可変領域のみがグリコシル化されるヘテロ二量体変異体である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記グリコシル化変異体が、両方の重鎖変異体領域がグリコシル化されるホモ二量体変異体である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
前記グリコシル化が、前記重鎖可変領域ＣＤＲ２においてである、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記グリコシル化部位が、配列番号２のＡｓｎにある、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物中の前記グリコシル化変異体の量が、約４％以下である、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物中の前記グリコシル化変異体の量が、約２％以下である、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記重鎖可変領域が、配列番号７のアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記軽鎖可変領域が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記抗体が、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗体が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記グリコシル化変異体が、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）により検出され、特徴付けられ、かつ分析される、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物中の前記グリコシル化変異体の量が、ＳＥ−ＨＰＬＣにより測定されるとき約４％以下である、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物中の前記グリコシル化変異体の量が、ＳＥ−ＨＰＬＣにより測定されるとき約２％以下である、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、前記抗体の１つ以上の追加の変異体をさらに含み、前記追加の１つ以上の変異体が、高分子量種（ＨＭＷＳ）変異体、耐還元性（ＲＲ）架橋変異体、及び酸性変異体からなる群から選択される、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、ＲＲ架橋変異体をさらに含む、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物中の前記ＲＲ架橋変異体の量が、約３％以下である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物中の前記ＲＲ架橋変異体の量が、ＯＰ−ＳＥＣ（有機相サイズ排除クロマトグラフィー）またはＣＥ−ＳＤＳ（キャピラリー電気泳動−ＳＤＳ）により測定される、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物中の前記ＲＲ架橋変異体の量が、ＯＰ−ＳＥＣにより決定されるとき約３％以下である、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ＲＲ架橋が、ＣｙｓとＣｙｓとの間にある、請求項１６〜２０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物が、分子間または分子内ＲＲ架橋変異体を含む、請求項１６〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記ＲＲ架橋変異体が、重鎖−重鎖架橋を含む、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ＲＲ架橋変異体が、重鎖−軽鎖架橋を含む、請求項１６〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
前記ＲＲ架橋変異体が、光により誘発される、請求項１６〜２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記光が、周囲光である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記組成物が、ＨＭＷＳ変異体をさらに含む、請求項１６〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物中の前記ＨＭＷＳ変異体の量が、約１％以下である、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ＨＭＷＳ変異体の量が、ＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される、請求項２７または２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記組成物中の前記ＨＭＷＳ変異体の量が、ＳＥ−ＨＰＬＣにより決定されるとき約１％以下である、請求項２７〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記組成物が、酸性変異体をさらに含む、請求項１６〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３２】
前記組成物中の前記酸性変異体の量が、約４２％以下である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記酸性変異体の量が、画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）により決定される、請求項３１または３２に記載の組成物。
【請求項３４】
重鎖可変領域の配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変領域の配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗ＩＬ−１７Ａ及び抗ＩＬ−１７Ｆ交差反応性抗体を含む組成物であって、グリコシル化変異体、ＲＲ架橋変異体、ＨＭＷＳ変異体、または酸性変異体のうちの１つ以上を含む、前記組成物。
【請求項３５】
前記組成物が、ＲＲ架橋変異体を含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
前記組成物中の前記ＲＲ架橋変異体の量が、ＯＰ−ＳＥＣにより決定されるとき約３％以下である、請求項３４または３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記組成物が、ＨＭＷＳ変異体を含む、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３８】
前記組成物中の前記ＨＭＷＳ変異体の量が、ＳＥ−ＨＰＬＣにより決定されるとき約１％以下である、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記組成物が、酸性変異体を含む、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記組成物中の前記酸性変異体の量が、ｉｃＩＥＦにより決定されるとき約４２％以下である、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
前記組成物が、ＨＭＷＳ変異体、ＲＲ架橋変異体、及び酸性変異体を含む、請求項３４に記載の組成物。
【請求項４２】
前記組成物中の前記ＨＭＷＳ変異体の量が、ＳＥ−ＨＰＬＣにより決定されるとき約１％以下であり、前記組成物中の前記酸性変異体の量が、ｉｃＩＥＦにより決定されるとき約４２％以下であり、前記組成物中の前記ＲＲ架橋変異体の量が、ＯＰ−ＳＥＣにより決定されるとき約３％以下である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
グリコシル化変異体をさらに含む、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
前記組成物中の前記グリコシル化変異体の量が、ＳＥ−ＨＰＬＣにより決定されるとき約２％以下である、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
請求項１〜４４のいずれか一項に記載の組成物と、少なくとも薬学上許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項４６】
請求項４５に記載の薬学的組成物を含む容器と、前記薬学的組成物を使用してそれを必要とする患者を治療するためのその使用を指示する処方情報を含む添付文書と、を含む、製造物品。
【請求項４７】
免疫関連疾患、炎症性疾患、または細胞増殖関連疾患を治療する方法であって、それを必要とする対象に請求項４５に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
【請求項４８】
前記免疫関連疾患が、喘息、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、突発性肺線維症である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記細胞増殖関連疾患が、癌である、請求項４７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１４年１０月３１日に出願された米国仮出願第６２／０７３，５７４号に対して優先権の利益を主張し、その全体を参照することにより本明細書に組み込む。
【０００２】
配列表
本出願には、ＡＳＣＩＩ形式にて電子的に提出され、かつその全体が参照することにより本明細書に組み込まれる配列表が含まれている。２０１５年１０月２６日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ３２３７７ＷＯ＿ＰＣＴＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称であり、サイズは１３，７２７バイトである。
【０００３】
本発明は、抗ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ交差反応性抗体（抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体）の変異体に関する。特に、本発明は、グリコシル化変異体、酸性変異体、電荷変異体、高分子量種（ＨＭＷＳ）変異体、及び耐還元性（ＲＲ）架橋変異体に関する。本発明はさらに、単離変異体、抗体及びその変異体を含む組成物及び薬学的組成物、ならびに抗体及び変異体を含む製造物品、そしてその変異体及び組成物を作製、評価、及び特徴付ける方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
インターロイキン−１７（ＩＬ−１７またはＩＬ−１７Ａ）は、上皮細胞、内皮細胞、及び線維芽細胞を刺激して、ＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｇ−ＣＳＦ、及びＭＣＰ−１を含む他の炎症性サイトカイン及びケモカインを生成するＴ細胞由来炎症促進性分子である。Ｙａｏ，Ｚ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２２（１２）：５４８３−５４８６（１９９５）、Ｙａｏ，Ｚ．ら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３（６）：８１１−８２１（１９９５）、Ｆｏｓｓｉｅｚ，Ｆ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３（６）：２５９３−２６０３（１９９６）、Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｊ．ら，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．，１６（８）：６１１−７（１９９６）、Ｃａｉ，Ｘ．Ｙ．ら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ，６２（１）：５１−８（１９９８）、Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ，Ｄ．Ｖ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６０（７）：３５１３−２１（１９９８）、Ｌａａｎ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６２（４）：２３４７−５２（１９９９）、Ｌｉｎｄｅｎ，Ａ．ら，Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ，１５（５）：９７３−７（２０００）、及びＡｇｇａｒｗａｌ，Ｓ．ａｎｄ  Ｇｕｒｎｅｙ，Ａ．Ｌ．，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ．７１（１）：１−８（２００２）］を参照されたい。ＩＬ−１７Ａはまた、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１βを含む他のサイトカインと協同して、ケモカイン発現をさらに誘発する（Ｃｈａｂａｕｄ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１（１）：４０９−１４（１９９８））。
【０００５】
ＩＬ−１７Ａは、細胞内信号伝達により、ヒトマクロファージにおいてＣａ２＋流入及び［ｃＡＭＰ］ｉの還元を刺激することがさらに示されている（Ｊｏｖａｎｏｖｉｃら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６０：３５１３［１９９８］）。ＩＬ−１７で処理された線維芽細胞は、ＮＦ−κＢの活性化を誘発する［Ｙａｏら，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，３：８１１（１９９５），Ｊｏｖａｎｏｖｉｃら，上記参照］が、一方でそれで処理されたマクロファージは、ＮＦ−κＢ及び分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼを活性化する（Ｓｈａｌｏｍ−Ｂａｒｅｋら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２７４６７［１９９８］）。加えて、ＩＬ−１７は、骨及び軟骨の成長に関連する哺乳動物サイトカイン様因子７との配列類似性も共有する。ＩＬ−１７ポリペプチドが配列類似性を共有する他のタンパク質は、ヒト胚由来インターロイキン関連因子（ＥＤＩＲＦ）及びインターロイキン−２０である。
【０００６】
インターロイキン１７Ａは、サイトカインの新興群の原型メンバーとして認識される。ヒト及び他の脊椎動物ゲノムの大規模配列の決定は、ＩＬ−１７Ａに関連するタンパク質をコードし、よって、サイトカインの新しい群を定義する追加の遺伝子の存在を明らかにした。ヒト及びマウスにおいて、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、及びＩＬ−１７Ｆを含むＩＬ−１７群の少なくとも６つのメンバーが存在する。ＷＯ０１／４６４２０を参照されたい。ヒトＩＬ−１７Ｆをコードする遺伝子は、ＩＬ−１７に隣接して位置する（Ｈｙｍｏｗｉｔｚ，Ｓ．Ｇ．ら，Ｅｍｂｏ  Ｊ，２０（１９）：５３３２−４１（２００１））。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆは、約４４％のアミノ酸相同性を共有するが、一方でＩＬ−１７群の他のメンバーは、より限定された１５〜２７％のアミノ酸相同性を共有し、これは、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆが、ＩＬ−１７群内に全く別の下位群を形成することを示唆する（Ｓｔａｒｎｅｓ，Ｔ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７（８）：４１３７−４０（２００１）、Ａｇｇａｒｗａｌ，Ｓ．ａｎｄ  Ｇｕｒｎｅｙ，Ａ．Ｌ．，Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ，７１（ｌ）：１−８（２００２））。ＩＬ−１７群の各メンバーは、ホモ二量体を形成する。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆは加えて、ＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体を形成する。
【０００７】
ヒトＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体は、タンパク質構造及び細胞系活性検定法の両方においてヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆと区別可能な全く別の新しいサイトカインである。精製された組換えヒトＩＬ−１７ＡＦを標準として使用することにより、ヒトＩＬ−１７ＡＦ特異性ＥＬＩＳＡが生み出された。この特異性ＥＬＩＳＡの使用により、ヒトＩＬ−１７ＡＦの誘発発現が検出され、これは、ＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体が、培養物中で活性化ヒトＴ細胞から自然生成されることを確認した。それゆえ、ＩＬ−１７ＡＦは、単離された活性化ヒトＴ細胞の天然生成物として検出可能な全く別の新しいサイトカインであり、その組換え形態は、タンパク質構造及び細胞系検定法の両方において、関連するサイトカインとは異なり、かつ区別可能になるように特徴付けられている。例えば、ＵＳ２００６０２７０００３及びＷＯ２００８／０６７２２３を参照されたい。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆホモ二量体に類似して、ＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体サイトカインは、ＩＬ−１７ＲＡ／ＩＬ−１７ＲＣ受容体複合体を通って信号伝達すると報告されている（Ｗｒｉｇｈｔら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８１（４）：２７９９−８０５（２００８））。抗体アンタゴニストなどのＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆのアンタゴニスト（抗ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ交差反応性抗体、または抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体とも称される）が、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ関連障害を治療するために生み出された（例えば、ＵＳ８，７１５，６６９及びＵＳ８，７７１，６９７を参照されたく、参照することにより本明細書に組み込まれる）。
【発明の概要】
【０００８】
抗ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ交差反応性抗体は、重鎖可変ドメインのＤＹＡＭＨ（配列番号１）の配列を含むＣＤＲ１、ＧＩＮＷＳＳＧＧＩＧＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）の配列を含むＣＤＲ２、ＤＩＧＧＦＧＥＦＹＷＮＦＧＬ（配列番号３）の配列を含むＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変ドメインのＲＡＳＱＳＶＲＳＹＬＡ（配列番号４）の配列を含むＣＤＲ１、ＤＡＳＮＲＡＴ（配列番号５）の配列を含むＣＤＲ２、及びＱＱＲＳＮＷＰＰＡＴ（配列番号６）の配列を含むＣＤＲ３を含む。ＵＳ８，７１５，６６９を参照されたく、その全体が参照することにより本明細書に組み込まれる。抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体は、高親和性を有するヒトＩＬ−１７ＡＡホモ二量体、ＩＬ−１７ＦＦホモ二量体、及びＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体に結合し、ヒトＩＬ−１７ＡＡホモ二量体、ＩＬ−１７ＦＦホモ二量体、及びＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体誘発炎症促進性活性を中和する。典型的な完全長ヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆアミノ酸配列はそれぞれ、配列番号１２、及び配列番号１３に示される。本明細書に記載される抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の変異体は、今まで報告されたことがない。
【０００９】
本発明は、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の変異体、特にグリコシル化変異体、ＨＭＷＳ変異体、耐還元性（ＲＲ）架橋変異体、電荷変異体、及び酸性変異体に関する。
【００１０】
よって、第１の態様において、本発明は、重鎖可変領域の配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変領域の配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む抗ＩＬ−１７Ａ及び抗ＩＬ−１７Ｆ交差反応性抗体と、そのグリコシル化変異体と、を含む、組成物を提供する。ある特定の実施形態において、グリコシル化は、重鎖可変領域においてである。ある特定の実施形態において、抗体またはその変異体は、ＩｇＧクラスのものである。ある特定の実施形態において、抗体またはその変異体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４アイソタイプのものである。ある特定の実施形態において、抗体またはその変異体は、モノクローナル抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）である。ある特定の他の実施形態において、グリコシル化変異体は、１つの半抗体または１つの重鎖可変領域のみがグリコシル化されるヘテロ二量体変異体である。ある特定の実施形態において、グリコシル化変異体は、両方の半抗体または両方の重鎖変異体領域がグリコシル化されるホモ二量体変異体である。ある特定の実施形態において、グリコシル化は、重鎖可変領域のＣＤＲ２、好ましくは配列番号２のＡｓｎにおいてである。ある特定の実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含み、及び／または、軽鎖可変領域は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む。ある特定の他の実施形態において、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、若しくは１００％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び／または、配列番号１０のアミノ酸配列に対して少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、若しくは１００％の配列相同性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体は、抗ＩＬ１７−Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａと称される。ある特定の実施形態において、本組成物中のグリコシル化変異体の量は、４％以下である。ある特定の他の実施形態において、本組成物中のグリコシル化変異体の量は、２％以下のグリコシル化変異体である。ある特定の他の実施形態において、グリコシル化変異体は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）により検出され、特徴付けられ、かつ分析される。ある特定の実施形態において、本組成物中のグリコシル化変異体の量は、ＳＥ−ＨＰＬＣにより測定されるとき２％以下である。ある特定の実施形態において、本組成物中のグリコシル化変異体の量は、０％超である。ある特定の実施形態において、抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞において生成される。
【００１１】
さらに他の実施形態において、本組成物は、グリコシル化変異体を含み、抗体の１つ以上の追加の変異体をさらに含み、追加の変異体が、高分子量種（ＨＭＷＳ）変異体、耐還元性（ＲＲ）架橋変異体、及び酸性変異体からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞において生成される。
【００１２】
抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５２５３Ａは、Ａｍａｘ約４２０〜４４０ｎｍで変色（黄化）を引き起こすことが最初に観察され、高分子量種（ＨＭＷＳ）形成に関連付けられることが判明された異常な感光性を呈する。抗ＩＬ１７試料のＮ２パージは、変色及びＨＭＷＳ形成の両方を低減し、これは、酸化誘導処理を示唆した。電荷変異体分析、ＳＥ−ＨＰＬＣ、キャピラリー電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（ＣＥ−ＳＤＳ）、トリプシンペプチドマッピング、及び無傷／還元質量分析が含まれるが、これらに限定されない種々の生物分析技法を使用する抗体の感光性を特徴付けること。ＯＰ−ＳＥＣと呼称される新規の有機相サイズ排除クロマトグラフィー方法は、推定非還元性ＨＭＷＳ（ＮＲ−ＨＭＷＳまたはＲＲ−ＨＭＷＳ）の分画化及び濃化を可能にするために生み出され、それらは、光線誘発スクランブルジスルフィド結合架橋ペプチドと示された。架橋画分は、主に重鎖−重鎖（ＨＣ−ＨＣ）（＞９０％）スクランブルジスルフィドと、わずかな構成成分の重鎖−軽鎖（ＨＣ−ＬＣ）スクランブルジスルフィドとからなる。
【００１３】
よって、ある特定の実施形態において、本組成物は、ＲＲ架橋変異体をさらに含む。ある特定の他の実施形態において、本組成物中のＲＲ架橋変異体の量は、約１％以下〜約３％以下である。ある特定の他の実施形態において、本組成物中のＲＲ架橋変異体の量は、約３％以下である。ある特定の実施形態において、本組成物中のＲＲ架橋変異体の量は、還元抗体の還元ＯＰ−ＳＥＣ（有機相サイズ排除クロマトグラフィー）または還元ＣＥ−ＳＤＳ（キャピラリー電気泳動−ＳＤＳ）により測定される。ある特定の実施形態において、本組成物中のＲＲ架橋変異体は、還元ＣＥ−ＳＥＣにより決定されるとき約１％以下である。ある特定の実施形態において、本組成物中のＲＲ架橋変異体の量は、還元抗体のＯＰ−ＳＥＣにより決定されるとき約３％以下である。ある特定の実施形態において、ＲＲ架橋変異体は、ＣｙｓとＣｙｓとの間に架橋を含む。ある特定の他の実施形態において、ＲＲ架橋変異体は、ＴｒｐとＴｒｐとの間に架橋を含む。ある特定の実施形態において、架橋は、分子間または分子内架橋である。ある特定の実施形態において、ＲＲ架橋変異体は、重鎖−重鎖架橋を含む。ある特定の他の実施形態において、ＲＲ架橋変異体は、重鎖−軽鎖架橋を含む。ある特定の他の実施形態において、ＲＲ架橋変異体は、光、例えば周囲光により誘発される。
【００１４】
ある特定の他の実施形態において、本組成物は、ＨＭＷＳ変異体をさらに含む。ある特定の他の実施形態において、本組成物中のＨＭＷＳ変異体の量は、約１％以下である。ある特定の他の実施形態において、ＨＭＷＳ変異体の量は、ＳＥ−ＨＰＬＣにより決定される。ある特定の実施形態において、本組成物中のＨＭＷＳ変異体の量は、ＳＥ−ＨＰＬＣにより決定されるとき約１％以下である。
【００１５】
ある特定の実施形態において、本組成物は、酸性変異体をさらに含む。ある特定の実施形態において、本組成物中の酸性変異体の量は、約４２％以下である。ある特定の実施形態において、酸性変異体の量は、画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）により決定される。ある特定の実施形態において、本組成物中の酸性変異体の量は、ｉｃＩＥＦにより決定されるとき約４２％以下である。
【００１６】
さらなる態様において、本発明は、重鎖可変領域の配列番号１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変領域の配列番号４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む抗ＩＬ−１７Ａ及び抗ＩＬ−１７Ｆ交差反応性抗体を含む組成物を提供し、グリコシル化変異体、ＲＲ架橋変異体、ＨＭＷＳ変異体、及び酸性変異体のうちの１つ以上を含む。
【００１７】
ある特定の実施形態において、本組成物は、ＲＲ架橋変異体を含む。ある特定の実施形態において、本組成物中のＲＲ架橋変異体の量は、還元ＯＰ−ＳＥＣにより決定されるとき約３％以下である。ある特定の他の実施形態において、本組成物は、ＨＭＷＳ変異体を含む。ある特定の他の実施形態において、本組成物中のＨＭＷＳ変異体の量は、ＳＥ−ＨＰＬＣにより決定されるとき約１％以下である。ある特定の他の実施形態において、本組成物は、酸性変異体を含む。ある特定の他の実施形態において、本組成物中の酸性変異体の量は、画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）により決定されるとき約４２％以下である。ある特定の実施形態において、本組成物は、グリコシル化変異体、ＨＭＷＳ変異体、ＲＲ架橋変異体、及び酸性変異体を含み、ここで、本組成物中のグリコシル化変異体の量は、約２％以下であり、本組成物中のＲＲ架橋変異体の量は、約３％以下であり、本組成物中のＨＭＷＳ変異体の量は、約１％以下であり、本組成物中の酸性変異体の量は、約４２％以下である。
【００１８】
さらなる態様において、本発明は、本明細書に記載される組成物を含む薬学的組成物及び１つ以上の薬学上許容される賦形剤を提供する。ある特定の実施形態において、薬学的組成物は、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の主要種及びこれらの変異体を含む。
【００１９】
さらに別の態様において、本発明は、本明細書に記載される薬学的組成物を含む容器と、薬学的組成物を使用してそれを必要とする患者を治療するためのその使用を指示する処方情報を含む添付文書と、を含む、製造物品を提供する。
【００２０】
さらなる態様において、本発明は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の主要種及びこれらの１つ以上の変異体を含む組成物を生成することと、生成された組成物を１つ以上の分析検定法にかけて本組成物中の１つ以上の変異体の量を評価することと、を含む、本明細書に記載される組成物を作製する方法を提供する。ある特定の実施形態において、本方法は、生成された組成物を１回以上の精製にかけることをさらに含む。
【００２１】
さらに別の態様において、本発明は、自己免疫疾患若しくは障害などの免疫関連疾患若しくは障害、及び炎症性疾患若しくは障害、または細胞増殖関連疾患若しくは障害を治療する方法を提供し、それを必要とする対象に本明細書に記載される薬学的組成物を投与することを含む。ある特定の実施形態において、免疫関連疾患または障害には、全身性紅斑性狼瘡；リウマチ性関節炎；乾癬性関節炎；骨関節炎；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症；突発性炎症性筋疾患；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫溶血性貧血；自己免疫性血小板減少症；甲状腺炎；真性糖尿病；免疫媒介性腎臓疾患；多発性硬化症、突発性脱髄性多発性神経障害またはギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発性神経障害などの中枢及び末梢神経系の脱髄疾患；感染症、自己免疫慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎などの肝胆道疾患；炎症性腸疾患；潰瘍性大腸炎；クローン病；グルテン過敏性腸疾患；及びウィップル病；水疱性皮膚病；多形性紅斑及び接触皮膚炎；乾癬；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、及びじんましんなどのアレルギー性疾患；好酸球性肺炎、突発性肺線維症、及び過敏性肺臓炎などの肺の免疫性疾患；移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の他の実施形態において、免疫関連障害は、喘息、多発性硬化症、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、紅斑性狼瘡、乾癬、慢性閉塞性肺疾患、または突発性肺線維症である。
【００２２】
ある特定の他の実施形態において、細胞増殖関連障害は、結腸直腸癌、腎細胞癌（例えば、腎細胞癌腫）、黒色腫、膀胱癌、卵巣癌、乳癌（例えば、三種陰性の乳癌、ＨＥＲ２陽性乳癌、またはホルモン受容体陽性癌）、及び非小細胞肺癌（例えば、扁平上皮非小細胞肺癌または非扁平上皮非小細胞肺癌）であるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本開示の方法により治療される癌には、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本開示の方法により治療される癌には、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌種、及び肺の扁平上皮癌腫を含む）、黒色腫、腎細胞癌腫、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）（胃腸癌を含む）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌腫及び種々の型の頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非開裂細胞性ＮＨＬ、巨大病変性ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（脳腫瘍に関連付けられるものなど）、及びメイグス症候群に関連付けられる異常血管増殖が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、癌は、早期癌または進行期癌であり得る。いくつかの実施形態において、癌は、原発腫瘍であり得る。いくつかの実施形態において、癌は、上記の型の癌のいずれかを由来とする、第２の部位における転移性腫瘍であり得る。
【００２３】
上述されるいずれか及び全ての実施形態は、別途文脈が明確に示さない限り、本発明のいずれか及び全ての態様に適用する。異なる態様において、およびそれらの間にある全ての実施形態は、別途文脈が明確に規定しない限り、組み合わされ得る。
【００２４】
本発明の具体的な実施形態が、ある特定の好ましい実施形態の以下のより詳細な記述及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１Ａ】抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａの組成物のＳＥＣクロマトグラムであり、本組成物中で２％のピーク１を示す。
【図１Ｂ】拡大図を示す。
【図２】トリプシン及びＰＮＧａｓｅ消化後の濃化ピーク１のＳＥＣクロマトグラム。
【図３Ａ】ＰＮＧａｓｅで処理された濃化ピーク１のＬＣ−ＭＳ分析。図３Ａ：ＭＳ−ＴＩＣの結果は、濃化ピーク１のグリカンの除去が、クロマトグラムにおいて新しいピークを生成したことを示す。図３Ｂの上のパネルの生のＭＳデータは、未修飾非グリコシル化親トリプシンペプチドＨＣ４４〜６５の質量を示し、下のパネルは、Ａｓｎ５２がＡｓｐ５２により置き換えられた脱グリコシル化ＨＣ４４〜６５を示した。脱グリコシル化ペプチドは、予想通り、非グリコシル化ＨＣ４４〜６５ペプチドとは異なる保持時間を有し、わずかにより高い質量を有する。Ａｓｐ５２の存在は、収集ペプチドのＮ末端配列の決定により確認された。
【図３Ｂ】ＰＮＧａｓｅで処理された濃化ピーク１のＬＣ−ＭＳ分析。図３Ａ：ＭＳ−ＴＩＣの結果は、濃化ピーク１のグリカンの除去が、クロマトグラムにおいて新しいピークを生成したことを示す。図３Ｂの上のパネルの生のＭＳデータは、未修飾非グリコシル化親トリプシンペプチドＨＣ４４〜６５の質量を示し、下のパネルは、Ａｓｎ５２がＡｓｐ５２により置き換えられた脱グリコシル化ＨＣ４４〜６５を示した。脱グリコシル化ペプチドは、予想通り、非グリコシル化ＨＣ４４〜６５ペプチドとは異なる保持時間を有し、わずかにより高い質量を有する。Ａｓｐ５２の存在は、収集ペプチドのＮ末端配列の決定により確認された。
【図４Ａ】抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａの光線誘発変色。図４Ａ、ＩＣＨ指針の下、０時間、６時間、及び２４時間の光曝露における観察可能な変色の写真画像。図４Ｂ、２４時間の光曝露ＭＣＡＦ５３５２ＡのＵＶ可視分光プロファイル。光曝露された抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ試料において観察されたＡｂｓｍａｘ約４３０ｎｍでの固有のＵＶ吸光プロファイル。類似の色変化が、より長時間の曝露ではあるが周囲光曝露で観察される（データは示されていない）。
【図４Ｂ】抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａの光線誘発変色。図４Ａ、ＩＣＨ指針の下、０時間、６時間、及び２４時間の光曝露における観察可能な変色の写真画像。図４Ｂ、２４時間の光曝露ＭＣＡＦ５３５２ＡのＵＶ可視分光プロファイル。光曝露された抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ試料において観察されたＡｂｓｍａｘ約４３０ｎｍでの固有のＵＶ吸光プロファイル。類似の色変化が、より長時間の曝露ではあるが周囲光曝露で観察される（データは示されていない）。
【図５Ａ】ＳＥＣにより観察された光線誘発高分子量種形成（ＨＭＷＳ）。図５Ａ、光曝露された抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の無傷サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析。図５Ｂ、定量分析は、ＨＭＷＳ形成と光曝露との間の直線的相関性を示した。
【図５Ｂ】ＳＥＣにより観察された光線誘発高分子量種形成（ＨＭＷＳ）。図５Ａ、光曝露された抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の無傷サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）分析。図５Ｂ、定量分析は、ＨＭＷＳ形成と光曝露との間の直線的相関性を示した。
【図６Ａ】耐還元性架橋種を同定するための、新規の有機相サイズ排除クロマトグラフ（ＯＰ−ＳＥＣ）の使用。図６Ａ：ＤＴＴで処理された光曝露された抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ  ＭＣＡＦ５３５２ＡのＯＰ−ＳＥＣ分析。図６Ｂ：定量分析は、耐還元性架橋種形成と光曝露との間の直線的相関性を示した。次いで、架橋種を画分収集により濃化した。
【図６Ｂ】耐還元性架橋種を同定するための、新規の有機相サイズ排除クロマトグラフ（ＯＰ−ＳＥＣ）の使用。図６Ａ：ＤＴＴで処理された光曝露された抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ  ＭＣＡＦ５３５２ＡのＯＰ−ＳＥＣ分析。図６Ｂ：定量分析は、耐還元性架橋種形成と光曝露との間の直線的相関性を示した。次いで、架橋種を画分収集により濃化した。
【図７Ａ】ＭＣＡＦ５３５２Ａの電荷変異体における光線誘発の増加。図７Ａ：ｉｃＩＥＦ分析を使用して検出された光曝露を受けたときの電荷変異体。図７Ｂ：定量分析は、酸性電荷変異体の増加を示した。
【図７Ｂ】ＭＣＡＦ５３５２Ａの電荷変異体における光線誘発の増加。図７Ａ：ｉｃＩＥＦ分析を使用して検出された光曝露を受けたときの電荷変異体。図７Ｂ：定量分析は、酸性電荷変異体の増加を示した。
【図８Ａ】分子内及び分子間架橋の両方に関するエビデンス。図８Ａ、還元抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２試料のＯＰ−ＳＥＣ分析。図８Ｂ、定量分析は、それぞれ分子内及び分子間架橋の両方を示す、ＳＥＣ主要ピーク及びＨＭＷＳ画分の両方においてＮＲ（非還元性、またはＲＲ、耐還元性）−ＨＭＷＳを示した。
【図８Ｂ】分子内及び分子間架橋の両方に関するエビデンス。図８Ａ、還元抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２試料のＯＰ−ＳＥＣ分析。図８Ｂ、定量分析は、それぞれ分子内及び分子間架橋の両方を示す、ＳＥＣ主要ピーク及びＨＭＷＳ画分の両方においてＮＲ（非還元性、またはＲＲ、耐還元性）−ＨＭＷＳを示した。
【図９Ａ】トリプシンマッピングにより分析された部位特異性光線誘発酸化。図９Ａ、メチオニン酸化の定量分析、図９Ｂ、最も影響を受けやすいトリプトファン酸化の定量分析、図９Ｃ、トリプトファン酸化種全体の定量分析。
【図９Ｂ】トリプシンマッピングにより分析された部位特異性光線誘発酸化。図９Ａ、メチオニン酸化の定量分析、図９Ｂ、最も影響を受けやすいトリプトファン酸化の定量分析、図９Ｃ、トリプトファン酸化種全体の定量分析。
【図９Ｃ】トリプシンマッピングにより分析された部位特異性光線誘発酸化。図９Ａ、メチオニン酸化の定量分析、図９Ｂ、最も影響を受けやすいトリプトファン酸化の定量分析、図９Ｃ、トリプトファン酸化種全体の定量分析。
【図１０】部位特異性酸化のレベルと、ＳＥＣにより決定されるときのＨＭＷＳと、ＯＰ−ＳＥＣにより決定されるときのＲＲ架橋種との間の直接相関。
【図１１Ａ】ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳ分析は、架橋種組成物を示した。図１１Ａ：還元ＯＰ−ＳＥＣから分画／濃化された架橋種の完全ＭＳ。図１１Ｂ：重鎖−重鎖（ＨＣ−ＨＣ）推定架橋種を示す拡大ＭＳ、及び図１１Ｃ：重鎖−軽鎖（ＨＣ−ＬＣ）推定架橋種を示す拡大ＭＳ。
【図１１Ｂ】ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳ分析は、架橋種組成物を示した。図１１Ａ：還元ＯＰ−ＳＥＣから分画／濃化された架橋種の完全ＭＳ。図１１Ｂ：重鎖−重鎖（ＨＣ−ＨＣ）推定架橋種を示す拡大ＭＳ、及び図１１Ｃ：重鎖−軽鎖（ＨＣ−ＬＣ）推定架橋種を示す拡大ＭＳ。
【図１１Ｃ】ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳ分析は、架橋種組成物を示した。図１１Ａ：還元ＯＰ−ＳＥＣから分画／濃化された架橋種の完全ＭＳ。図１１Ｂ：重鎖−重鎖（ＨＣ−ＨＣ）推定架橋種を示す拡大ＭＳ、及び図１１Ｃ：重鎖−軽鎖（ＨＣ−ＬＣ）推定架橋種を示す拡大ＭＳ。
【図１２Ａ】Ｎ２パージが変色、ＨＭＷＳ、及び架橋種形成を低減し、これは、変色、ＨＭＷＳ形成、及びＲＲ架橋が酸化過程に関連することを示す。図１２Ａ、Ｎ２パージによる変色の低下が観察された（差込図）Ｎ２パージされた試料のＳＥＣ分析、図１２Ｂ、Ｎ２パージされた試料の還元ＯＰ−ＳＥＣ分析。
【図１２Ｂ】Ｎ２パージが変色、ＨＭＷＳ、及び架橋種形成を低減し、これは、変色、ＨＭＷＳ形成、及びＲＲ架橋が酸化過程に関連することを示す。図１２Ａ、Ｎ２パージによる変色の低下が観察された（差込図）Ｎ２パージされた試料のＳＥＣ分析、図１２Ｂ、Ｎ２パージされた試料の還元ＯＰ−ＳＥＣ分析。
【図１３Ａ】Ｎ２パージが、全般的な酸化を低減した。図１３Ａ、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ  Ａｂ  ＭＣＡＦ５３５２ＡのＦｃ、ＬＣ（軽鎖）、及びＦａｂ領域の全般的な酸化のＲＰ−ＨＰＬＣ分析、図１３Ｂ、定量分析は、Ｎ２パージによるＦｃ−酸化の著しい低減を示した。
【図１３Ｂ】Ｎ２パージが、全般的な酸化を低減した。図１３Ａ、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ  Ａｂ  ＭＣＡＦ５３５２ＡのＦｃ、ＬＣ（軽鎖）、及びＦａｂ領域の全般的な酸化のＲＰ−ＨＰＬＣ分析、図１３Ｂ、定量分析は、Ｎ２パージによるＦｃ−酸化の著しい低減を示した。
【図１４Ａ】ＮａＮ３−処理は、一重項酸素誘導処理を示唆する。図１４Ａは、変色とＮａＮ３処理濃度との間の直接相関を示す。図１４Ｂ、ＳＥＣにより測定されたＨＭＷＳ形成及びＯＰ−ＳＥＣにより測定されるときの架橋形成におけるＮａＮ３処理の保護効果。
【図１４Ｂ】ＮａＮ３−処理は、一重項酸素誘導処理を示唆する。図１４Ａは、変色とＮａＮ３処理濃度との間の直接相関を示す。図１４Ｂ、ＳＥＣにより測定されたＨＭＷＳ形成及びＯＰ−ＳＥＣにより測定されるときの架橋形成におけるＮａＮ３処理の保護効果。
【図１５Ａ−１】Ｏ１８標識ワークフロー及びＭＳ／ＭＳを使用した、光曝露されたＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２ＡにおけるＲＲ架橋ペプチドの同定。図１５Ａ−１及び図１５Ａ−２、Ｃ２３２（ヒンジ）とＣ３７３（Ｆｃ）（それぞれ出現する順番で、配列番号１４及び１５）との間のヒンジ−Ｆｃ  ＲＲ架橋ジスルフィド結合、図１５Ｂ−１及び図１５Ｂ−２、Ｃ２３５（ヒンジ）とＣ９６（Ｆａｂ）（それぞれ出現する順番で、配列番号１６及び１５）との間のヒンジ−Ｆａｂ  ＲＲ架橋ジスルフィド結合。
【図１５Ａ−２】Ｏ１８標識ワークフロー及びＭＳ／ＭＳを使用した、光曝露されたＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２ＡにおけるＲＲ架橋ペプチドの同定。図１５Ａ−１及び図１５Ａ−２、Ｃ２３２（ヒンジ）とＣ３７３（Ｆｃ）（それぞれ出現する順番で、配列番号１４及び１５）との間のヒンジ−Ｆｃ  ＲＲ架橋ジスルフィド結合、図１５Ｂ−１及び図１５Ｂ−２、Ｃ２３５（ヒンジ）とＣ９６（Ｆａｂ）（それぞれ出現する順番で、配列番号１６及び１５）との間のヒンジ−Ｆａｂ  ＲＲ架橋ジスルフィド結合。
【図１５Ｂ−１】Ｏ１８標識ワークフロー及びＭＳ／ＭＳを使用した、光曝露されたＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２ＡにおけるＲＲ架橋ペプチドの同定。図１５Ａ−１及び図１５Ａ−２、Ｃ２３２（ヒンジ）とＣ３７３（Ｆｃ）（それぞれ出現する順番で、配列番号１４及び１５）との間のヒンジ−Ｆｃ  ＲＲ架橋ジスルフィド結合、図１５Ｂ−１及び図１５Ｂ−２、Ｃ２３５（ヒンジ）とＣ９６（Ｆａｂ）（それぞれ出現する順番で、配列番号１６及び１５）との間のヒンジ−Ｆａｂ  ＲＲ架橋ジスルフィド結合。
【図１５Ｂ−２】Ｏ１８標識ワークフロー及びＭＳ／ＭＳを使用した、光曝露されたＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２ＡにおけるＲＲ架橋ペプチドの同定。図１５Ａ−１及び図１５Ａ−２、Ｃ２３２（ヒンジ）とＣ３７３（Ｆｃ）（それぞれ出現する順番で、配列番号１４及び１５）との間のヒンジ−Ｆｃ  ＲＲ架橋ジスルフィド結合、図１５Ｂ−１及び図１５Ｂ−２、Ｃ２３５（ヒンジ）とＣ９６（Ｆａｂ）（それぞれ出現する順番で、配列番号１６及び１５）との間のヒンジ−Ｆａｂ  ＲＲ架橋ジスルフィド結合。
【図１６Ａ】図１６Ａの例示は、完全長抗体における既知のジスルフィド結合を示す。図１６Ｂは、データベース検索（Ｍａｓｓ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ）により対象抗体において同定された光誘発耐還元性スクランブルジスルフィド結合を列挙する。２つのスクランブルジスルフィド結合が確認され、他のものが、Ｏ１８標識で陽性と検出され、これは、光誘発ＲＲ架橋変異体におけるそれらの存在を示唆する。これらのスクランブルジスルフィドのうちのいくつかは、ヒンジ領域を伴う。図１６Ｂ．
【図１６Ｂ】図１６Ａの例示は、完全長抗体における既知のジスルフィド結合を示す。図１６Ｂは、データベース検索（Ｍａｓｓ  Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔｅ）により対象抗体において同定された光誘発耐還元性スクランブルジスルフィド結合を列挙する。２つのスクランブルジスルフィド結合が確認され、他のものが、Ｏ１８標識で陽性と検出され、これは、光誘発ＲＲ架橋変異体におけるそれらの存在を示唆する。これらのスクランブルジスルフィドのうちのいくつかは、ヒンジ領域を伴う。図１６Ｂ．
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本明細書に記載される全ての刊行物、特許、及び特許出願が、全ての目的のために、参照することにより明白に組み込まれる。
【００２７】
Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別途文脈が規定しない限り、複数形の参照物を含む。
【００２８】
抗体の「グリコシル化変異体」は、本明細書で使用される場合、可変領域内でグリコシル化されない抗体の主要種と比較して抗体の可変領域に結合する１つ以上の炭水化物部分を有する抗体である。一実施形態において、グリコシル化変異体は、抗体の１つまたは両方の重鎖に結合するオリゴ糖構造を有する。ある特定の実施形態において、グリコシル化部位は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ２（配列番号２）のアミノ酸残基、またはＶＨのアミノ酸残基５２のＡｓｎにある。ある特定の実施形態において、両方の重鎖可変領域は、グリコシル化される（ホモ二量体変異体）。ある特定の他の実施形態において、２つの重鎖可変領域のうちの１つのみが、グリコシル化される（ヘテロ二量体変異体）。ある特定の実施形態において、重鎖可変領域内でＡｓｎに共有結合するオリゴ糖は、グリコシル化変異体の中でも異種であり得る。
【００２９】
用語「抗ＩＬ−１７Ａ及び抗ＩＬ−１７Ｆ交差反応性抗体」、「抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体」、または「抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ交差反応性抗体」は、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、及びＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体に結合し、かつそれらを中和する抗体を指す。
【００３０】
本明細書の用語「主要種抗体」または「野生型抗体」は、本組成物中で数量的に優勢な抗体分子である、組成物中の抗体アミノ酸配列構造を指す。好ましくは、主要種抗体は、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、及びＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体に結合し、かつそれらを中和する抗体などの抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体である。一実施形態において、主要種抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号２）、及びＣＤＲ−Ｈ３（配列番号３）、ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号５）、及びＣＤＲ−Ｌ３（配列番号６）を含むものである。ある特定の実施形態において、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体は、配列番号７の配列を含む重鎖可変領域、及び／または配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一実施形態において、主要種抗体は、ＭＣＡＦ５３５２Ａである。
【００３１】
本明細書の「無傷抗体」は、２つの抗原結合領域及び１つのＦｃ領域を含むものである。ある特定の実施形態において、無傷抗体は、機能的Ｆｃ領域を有する。一実施形態において、「無傷ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａ」は、Ｃ末端Ｌｙｓを有さないＦｃグリカンを含む、ＬＣ／ＭＳにより測定されるとき約１４８，７２４Ｄａの分子量を有する。
【００３２】
抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の「低分子量種」または「ＬＭＷＳ」変異体は、主要種または無傷抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体のものより少ない分子量を有する抗体の断片を含む。ある特定の実施形態において、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２ＡのＬＭＷＳ変異体は、主要種または無傷抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａのものより少ない分子量を有する抗体の断片を含む。ＬＭＷＳは、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）及び／またはドデシル硫酸ナトリウムによる非還元キャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）により検出され得る。
【００３３】
「高分子量種」または「ＨＭＷＳ」変異体は、主要種または無傷抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体より大きい分子量を有する抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の調製物を含む。ある特定の実施形態において、ＨＭＷＳ変異体は、無傷または主要種抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａよりも大きい分子量を有する（例えば、無傷抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａが約１４８，７２４Ｄａの分子量を有する）抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａの調製物を含む。ＨＭＷＳは、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）及び／またはドデシル硫酸ナトリウムによる非還元キャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）により検出され得る。ある特定の実施形態において、ＨＭＷＳは、光誘発ＨＭＷＳである。
【００３４】
アミノ酸配列変異体抗体は、主要種抗体とは異なるアミノ酸配列を有する抗体である。通常、アミノ酸配列変異体は、主要種抗体と少なくとも約７０％の相同性を保有し、好ましくは、それらは、主要種抗体と少なくとも約８０％、及びより好ましくは少なくとも約９０％相同することになる。ある特定の実施形態において、アミノ酸配列変異体は、主要種抗体に対して、少なくとも約７０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９２％、約９５％、約９８％、約９９％の配列相同性を保有することになる。アミノ酸配列変異体は、主要種抗体のアミノ酸配列内またはこれに隣接したある特定の位置に、置換、欠失、及び／または追加を保有する。本明細書のアミノ酸配列変異体の例には、脱アミド化抗体変異体、その１つまたは２つの軽鎖上にアミノ末端リーダー伸長（例えば、ＶＨＳ−）を有する抗体、その１つまたは２つの重鎖上にＣ末端リジン残基を有する抗体などが含まれ、重鎖及び／または軽鎖のアミノ酸配列に対する変化物の組み合わせが含まれる。
【００３５】
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換型突然変異生成に対する目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「典型的な置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照して下にさらに記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され、生成物が、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、またはＡＤＣＣ若しくはＣＤＣの改善についてスクリーニングされてもよい。
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アミノ酸は、次の一般的な側鎖特性に従って分類され得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【００３６】
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うことになる。
【００３７】
「脱アミド化」抗体は、その１つ以上のアスパラギン残基が、例えば、アスパラギン酸、サクシンイミド、またはイソアスパラギン酸に誘導体化されるものである。
【００３８】
「酸性変異体」は、主要種抗体より酸性である主要種抗体の変異体である。酸性変異体は、主要種抗体に対して、負電荷を得ているか、または正電荷を失っている。ある特定の実施形態において、酸性変異体は、メチオニンまたはトリプトファン酸化の結果として起こり得る。かかる酸性変異体は、電荷に従ってタンパク質を分離するイオン交換クロマトグラフィーなどの、分離方法を使用して分解され得る。主要種抗体の酸性変異体は、カチオン交換クロマトグラフィーにより分離すると主要ピークより早く溶出する。
【００３９】
「電荷変異体」は、所定のｐＨで主要種抗体とは異なる総電荷を運搬する変異体を指す。電荷変異体は、酸性変異体（負電荷を得ているか、または正電荷を失っている変異体）または塩基性変異体（正電荷を得ているか、または負電荷を失っている変異体）であり得る。一実施形態において、抗体の１つ以上のアミノ酸残基における修飾（複数可）は、主要種抗体と比較して電荷変異体の異なる総電荷をもたらす。
【００４０】
「耐還元性（ＲＲ）架橋変異体」は、ジチオスレイトールなどの還元剤により、重鎖及び軽鎖に化学的に還元され得ない主要種抗体の変異体を指す。ＲＲ架橋変異体は、非還元性（ＮＲ）架橋変異体とも称される。かかる変異体は、還元剤で組成物を処理すること、及び本明細書に記載されるドデシル硫酸ナトリウムによるキャピラリー電気泳動（ＣＥ−ＳＤＳ）、または有機相サイズ排除クロマトグラフィー（ＯＰ−ＳＥＣ）などの、タンパク質サイズを評価する方法を使用して、得られた組成物を評価することにより査定され得る。ある特定の実施形態において、ＲＲ架橋変異体は、光、例えば周囲光への曝露により生じる。ある特定の他の実施形態において、ＲＲ架橋は、ＣｙｓとＣｙｓ残基との間か、またはＴｒｐとＴｒｐ残基との間で起こる。ある特定の実施形態において、ＲＲ架橋は、分子間、例えば、１つの抗体分子と別の抗体分子との間で起こり、ある特定の他の実施形態において、ＲＲ架橋は、分子内、例えば、１つの完全長抗体分子内で起こる。
【００４１】
「Ｃ末端リジン変異体」は、その重鎖のＣ末端にリジン（Ｋ）残基を含む変異体を指す。
【００４２】
「メチオニン酸化変異体」は、中に１つ以上の酸化メチオニン残基、例えば、配列番号９の配列を含む完全長重鎖に従って酸化Ｍｅｔ２５８、Ｍｅｔ３６４、及び／またはＭｅｔ４３４を含む変異体を指す。
【００４３】
「トリプトファン酸化変異体」は、中に１つ以上の酸化トリプトファン残基を含む変異体を指す。ある特定の実施形態において、トリプトファン酸化変異体は、配列番号７の配列を含むＶＨ配列に従って重鎖可変領域のＷ５３、Ｗ１０８、及び配列番号８の配列を含むＶＬ配列に従って軽鎖可変領域のＷ９４から選択される１つ以上のトリプトファン残基の酸化を含む。
【００４４】
本明細書の用語「抗体」は、最も広範な意味で使用され、種々の抗体構造を包含し、所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、本組成物は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体であるＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む。ある特定の他の実施形態において、抗体は、二重特異性抗体または多重特異性抗体である。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体または多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる結合特異性を有し、結合特異性のうちの１つは、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、及びＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体に対する。
【００４５】
「抗体断片」は、無傷抗体が結合する抗原を結合する、無傷抗体の一部を含む無傷抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆａｂ′−ＳＨ、Ｆ（ａｂ′）２；ダイアボディ；線状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【００４６】
抗体の「クラス」は、その重鎖により保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。抗体には５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちの数個は、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００４７】
本明細書の用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部分を含有する、免役グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ（配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖の例においては、それぞれＣｙｓ２３２及びＰｒｏ２３６）。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジンは、存在する場合もあれば、しない場合もある。本明細書で別途指定がない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵ番号付け方式に従う。
【００４８】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般に、ＶＨ（またはＶＬ）において次の配列、ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４で出現する。
【００４９】
用語「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように互換的に使用される。
【００５０】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」は、互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれる。子孫の核酸含量は親細胞と完全に同一でない場合があるが、突然変異体を含有し得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異体子孫が、本明細書に含まれる。
【００５１】
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞により生成されたかまたはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する抗体のアミノ酸配列、あるいは他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。
【００５２】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、同一であり、かつ／または同じエピトープに結合するが、例えば、自然発生突然変異体を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の生成中に起こる、想定される変異体抗体は例外であり、かかる変異体は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基を対象とする。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免役グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むが、これらに限定されない、様々な技法により作製されてもよく、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の典型的な方法が、本明細書に記載されている。
【００５３】
用語「超可変領域」は、本明細書で使用されるとき、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（例えば、軽鎖可変ドメインでは残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、及び８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインでは３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））からのアミノ酸残基、及び／または「超可変ループ」（例えば、軽鎖可変ドメインでは残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、及び９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインでは２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））からの残基を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【００５４】
非ヒト（例えば、齧歯動物）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ抗体である。ヒト化抗体は、概ねヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、及び機能性を有するマウス、ラット、ウサギ、若しくは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基により置き換えられる。一部の事例において、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基により置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾を行って、抗体の性能がさらに改良される。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、超可変ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものも含むことになる。さらなる詳細について、Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。
【００５５】
本明細書の用語「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は多様であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基からまたはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで広がると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付け方式による残基４４９）は、例えば、抗体の生成若しくは精製中、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することにより除去され得る。したがって、無傷抗体の組成物は、全てのＫ４４９残基が除去された抗体集団、Ｋ４４９残基が除去されていない抗体集団、及びＫ４４９残基を有する抗体と有さない抗体との混合物を有する抗体集団を含み得る。
【００５６】
別途示されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に従って本明細書において番号付けされ、参照することにより本明細書に明白に組み込まれる。「ＫａｂａｔのＥＵ指数」は、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。
【００５７】
「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を保有する。典型的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、貪食性、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方制御などが含まれる。かかるエフェクター機能は一般に、結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされるＦｃ領域を必要とし、種々の検定法を使用して、査定され得る。
【００５８】
「天然配列Ｆｃ領域」は、自然に見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２  Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３  Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域、ならびに自然発生するそれらの変異体が含まれる。
【００５９】
「裸の抗体」は、細胞毒性部分または放射標識などの異種性分子に複合されていない抗体である。
【００６０】
「免疫複合体」は、細胞毒性剤を含むが、これに限定されない１つ以上の異種性分子（複数可）に複合される抗体である。
【００６１】
「分析検定法」は、組成物中の分析物（例えば、抗体変異体）の存在または量を質的に査定及び／または数量的に測定する検定法である。検定法にかけられる組成物は、薬学的組成物を含む精製組成物であり得る。
【００６２】
「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、個体または対象は、ヒトである。
【００６３】
本明細書で使用される場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」などのその文法上の変形形態）は、治療されている個体の自然経過を変えることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程中に行うことができる。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の低減、病状の寛解または緩和、及び緩解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本発明の主要種抗体及びその変異体を含む抗体組成物は、疾患の発達を遅らせるか、または疾患の進行を減速させるために使用される。
【００６４】
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」は、必要である投薬量及び時間において、所望の治療的または予防的結果を達成するための有効な量を指す。
【００６５】
「容器」は、薬学的組成物または組成物を入れておくかまたは含有するために使用され得る物を指す。本明細書の容器の例には、バイアル、注射器、点滴バッグなどが含まれる。
【００６６】
「点滴バッグ」または「ＩＶバッグ」は、患者の静脈を介して投与され得る溶液を入れておくことができるバッグである。一実施形態において、この溶液は、生理食塩液である（例えば、約０．９％または約０．４５％のＮａＣｌ）。任意に、ＩＶバッグは、ポリオレフィンまたはポリ塩化ビニルから形成される。
【００６７】
「バイアル」は、液体または凍結乾燥調製物を入れておくのに好適な容器である。一実施形態において、バイアルは、単回使用バイアル、例えば、栓を有する２０ｃｃの単回使用バイアルである。
【００６８】
「添付文書」は、食品医薬局（ＦＤＡ）または他の監督当局の指令により、全ての処方薬の包装中に入れる必要がある折り込み印刷物である。折り込み印刷物は一般に、薬の商標、その一般名、及びその作用機序を含み、その適応症、禁忌症、警告、用法注意、副作用、及び投薬形態を記述し、推奨される投薬量、時間、及び投与の経路に関する使用説明を含む。
【００６９】
「薬学的組成物」は、薬学的活性薬（例えば、本明細書で開示されるものなどの、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａ及びその変異体形態）及びヒト患者に安全に投与され得る１つ以上の「薬学的活性賦形剤」（例えば、緩衝剤、安定剤、浸透圧改質剤、防腐剤、界面活性剤など）を含む組成物である。かかる組成物は、例えば液体、または凍結乾燥されてよい。ある特定の実施形態において、本組成物は、１つ以上の追加の活性薬をさらに含む。
【００７０】
用語「免疫関連疾患」は、哺乳動物の免疫系の構成要素が、哺乳動物において罹患を引き起こすか、媒介するか、またはそうでなければ、罹患の一因となる疾患を意味する。免疫応答の刺激または介入が、疾患の進行において緩和効果を有する疾患も含まれる。免疫媒介性炎症性疾患、非免疫媒介性炎症性疾患、感染性疾患、免疫不全疾患、腫瘍症などが、この用語に含まれる。
【００７１】
用語「Ｔ細胞媒介性疾患」は、Ｔ細胞が、哺乳動物において罹患に直接的または間接的に媒介するか、またはそうでなければ罹患の一因となる疾患を意味する。Ｔ細胞媒介性疾患は、細胞媒介性効果、リンホカイン媒介性効果などに関連付けられ得、さらにＢ細胞が、例えば、Ｔ細胞により分泌されるリンホカインにより刺激される場合、Ｂ細胞に関連付けられる効果をもたらす。
【００７２】
本発明に従って治療され得る免疫関連及び炎症性疾患のいくつかは、免疫またはＴ細胞媒介性であり、それらの例には、全身性紅斑性狼瘡；リウマチ性関節炎；若年性慢性関節炎；脊椎関節症；全身性硬化症（強皮症）；突発性炎症性筋疾患（皮膚筋炎、多発性筋炎）；シェーグレン症候群；全身性脈管炎；サルコイドーシス；自己免疫溶血性貧血（免疫汎血球減少症、発作性夜間血色素尿症）；自己免疫性血小板減少症（突発性血小板減少性紫斑病、免疫媒介性血小板減少症）；甲状腺炎（グレーブス病、橋本甲状腺炎、若年性リンパ球性甲状腺炎、萎縮性甲状腺炎）；真性糖尿病；免疫媒介性腎臓疾患（糸球体腎炎、尿細管間質性腎炎）；多発性硬化症、突発性脱髄性多発性神経障害またはギランバレー症候群、及び慢性炎症性脱髄性多発性神経障害などの中枢及び末梢神経系の脱髄疾患；感染性肝炎（肝炎Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及び他の非肝炎性ウイルス）、喘息、自己免疫慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、及び硬化性胆管炎などの肝胆道疾患；潰瘍性大腸炎、クローン病、グルテン過敏性腸疾患、及びウィップル病を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；水疱性皮膚病、多形性紅斑、及び接触皮膚炎を含む自己免疫または免疫媒介性皮膚病；乾癬；喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、食物過敏症、及びじんましんなどのアレルギー性疾患；好酸球性肺炎、突発性肺線維症、及び過敏性肺臓炎などの肺の免疫性疾患；移植片拒絶及び移植片対宿主病を含む移植関連疾患が含まれる。ＡＩＤＳ（ＨＩＶ感染）、肝炎Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、及びＥ、ヘルペスなどのウイルス性疾患、細菌感染症、真菌感染症、原虫感染症、及び寄生虫感染症を含む感染症。
【００７３】
用語「細胞増殖関連障害」または「細胞増殖性障害」または「増殖性障害」は、ある程度の異常細胞増殖に関連付けられる障害を指す。ある特定の実施形態において、細胞増殖性障害は、癌である。いくつかの実施形態において、細胞増殖性障害は、腫瘍である。
【００７４】
「腫瘍」は、本明細書で使用される場合、悪性または良性に関わらず、全ての腫瘍性細胞成長及び増殖、ならびに前癌性及び癌性細胞及び組織を指す。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、及び「腫瘍」は、本明細書で参照される場合、相互排他的ではない。
【００７５】
いくつかの実施形態において、本開示の方法により治療される癌には、結腸直腸癌、腎細胞癌（例えば、腎細胞癌腫）、黒色腫、膀胱癌、卵巣癌、乳癌（例えば、三種陰性の乳癌、ＨＥＲ２陽性乳癌、またはホルモン受容体陽性癌）、及び非小細胞肺癌（例えば、扁平上皮非小細胞肺癌または非扁平上皮非小細胞肺癌）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本開示の方法により治療される癌には、癌腫、リンパ腫、芽腫、肉腫、及び白血病が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本開示の方法により治療される癌には、扁平上皮細胞癌、肺癌（小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺の腺癌種、及び肺の扁平上皮癌腫を含む）、黒色腫、腎細胞癌腫、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）（胃腸癌を含む）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌腫または子宮癌腫、唾液腺癌腫、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌腫及び種々の型の頭頸部癌、ならびにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽細胞性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非開裂細胞性ＮＨＬ、巨大病変性ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症を含む）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、ならびに母斑症、浮腫（脳腫瘍に関連付けられるものなど）、及びメイグス症候群に関連付けられる異常血管増殖が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、癌は、早期癌または進行期癌であり得る。いくつかの実施形態において、癌は、原発腫瘍であり得る。いくつかの実施形態において、癌は、上記の型の癌のいずれかを由来とする、第２の部位における転移性腫瘍であり得る。
【００７６】
「組換え」タンパク質は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）宿主細胞などの遺伝子改変宿主細胞により生成されるものである。
【００７７】
「製造規模」は、ＦＤＡまたは他の監督当局により承認された商業的方法を使用する、商業規模、例えば、１２，０００リットル（Ｌ）以上におけるタンパク質薬剤（例えば、抗体）の生成を指す。
【００７８】
「精製すること」は、タンパク質Ａクロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用カラムクロマトグラフィーなどの１つ以上の精製ステップを指す。
【００７９】
「単離された」変異体は、１つ以上の精製または分析手順により主要種または野生型の抗体から分離されている変異体を指す。かかる単離変異体は、その生物活性及び／または効能に関して評価され得る。
【００８０】
ＩＩ．抗体組成物
（ａ）主要種抗体
本明細書の抗体組成物は、ヒトＩＬ−１７Ａと、ＩＬ−１７Ｆと、ＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体とを結合する抗体（抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体）を含む。ある特定の実施形態において、抗体は、ヒト抗体である。ある特定の他の実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、例えば、ヒト可変重ドメイン中に組み込まれる非ヒト源由来の超可変領域を含み得る。指定されない場合、可変ドメインの番号付けは、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載される番号付け方式に従う。
【００８１】
ある特定の実施形態において、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１（配列番号１）、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号２）、及びＣＤＲ−Ｈ３（配列番号３）、ＣＤＲ−Ｌ１（配列番号４）、ＣＤＲ−Ｌ２（配列番号５）、及びＣＤＲ−Ｌ３（配列番号６）を含む。本発明は、例えば、修飾が抗体の親和性を本質的に維持するか、または改善する、それらのＣＤＲ残基のアミノ酸修飾も企図する。例えば、本発明の方法で使用するための抗体変異体は、上記の可変重ＣＤＲ配列において約１〜約７または約５つのアミノ酸置換を有し得る。かかる抗体変異体は、親和性成熟により調製され得る。ヒト化抗体または親和性成熟抗体の種々の形態が、企図される。あるいは、ヒト化抗体または親和性成熟抗体は、無傷ＩｇＧ１抗体などの無傷抗体であり得る。
【００８２】
ある特定の実施形態において、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体は、配列番号７の配列を含む重鎖可変領域、及び／または配列番号８の配列を含む軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態において、抗ＩＬ−１７ＡＦ抗体は、配列番号９の配列を含む重鎖、及び／または配列番号１０の配列を含む軽鎖を含む。ある特定の実施形態において、Ｃ末端Ｌｙｓは任意に、重鎖に存在する。
配列番号７（ＶＨ）
2017537891.tif 000003
配列番号８（ＶＬ）
2017537891.tif 000004
配列番号９（ＨＣ）
2017537891.tif 000005
配列番号１０（ＬＣ）
2017537891.tif 000006
配列番号１２（リーダー配列を有する完全長ヒトＩＬ−１７Ａ、スイスプロット受託番号Ｑ１６５５２．１）
2017537891.tif 000007
配列番号１３（リーダー配列を有する完全長ヒトＩＬ−１７Ｆ、スイスプロット受託番号Ｑ９６ＰＤ４．３）
2017537891.tif 000008
【００８３】
（ｂ）グリコシル化変異体
一態様において、本発明は、単離された形態、濃化された形態、またはグリコシル化変異体及び主要種抗体を含む組成物におけるグリコシル化変異体抗体を提供する。ある特定の実施形態において、グリコシル化は、ＣＤＲ−Ｈ２（配列番号２）のＡｓｎ残基上のＮ結合型グリコシル化である。ある特定の実施形態において、本組成物中のグリコシル化変異体の量は、約１０％以下（ｎｏ  ｍｏｒｅ  ｔｈａｎ）（すなわち、以下（ｅｑｕａｌ  ｏｒ  ｌｅｓｓ  ｔｈａｎ））、約９％以下、約８％以下、約７％以下、約６％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、または約１％以下である。ある特定の実施形態において、本組成物中のグリコシル化変異体の量は、約２％以下である。ある特定の実施形態において、本組成物中のグリコシル化の量は、ＬＣ−ＭＳにより決定される。高レベルのグリコシル化変異体を含有する抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体組成物は、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、及び／若しくはＩＬ−１７ＡＦに対する減少結合、及び／若しくは減少中和活性、ならびに／または増加免疫原性、ならびに／または増加血清クリアランスを呈する。
【００８４】
（ｃ）ＬＭＷＳ及びＨＭＷＳ変異体
本発明は、単離された形態、濃化された形態、またはＬＭＷＳ及び／若しくはＨＭＷＳ変異体及び主要種抗体を含む組成物における抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体の低分子量種（ＬＭＷＳ）変異体及び／または高分子量種（ＨＭＷＳ）変異体を提供する。ＬＭＷＳ及びＨＭＷＳ変異体は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、及び／またはキャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（ＣＥ−ＳＤＳ）が含まれるが、これらに限定されない種々の技法を使用して単離され得、特徴付けられ得、かつ定量化され得る。
【００８５】
ＳＥ−ＨＰＬＣ検定法（例えば、実施例２のような）を使用すると、組成物中の主要種抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体及びＨＭＷＳ変異体またはＬＭＷＳ変異体の量は、
主要ピーク：≧約９８．９％、例えば、≧約９９．１％、≧約９４．９％、例えば、≧約９５．０％。
ＨＭＷＳ：≦約１％、例えば、≦約０．８％、≦約４．９％、例えば、≦約４．６％。
ＬＭＷＳ：≦約０．５％、例えば、≦約０．３％、≦約０．２％、例えば、≦約０．１％であり得る。
【００８６】
ある特定の実施形態において、組成物中のＨＭＷＳ変異体の量は、約１０％以下（ｎｏ  ｍｏｒｅ  ｔｈａｎ）（または以下（ｅｑｕａｌ  ｏｒ  ｌｅｓｓ  ｔｈａｎ））、約９％以下、約８％以下、約７％以下、約６％以下、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、または約１％以下である。ある特定の実施形態において、組成物中のＬＭＷＳ変異体の量は、約２％以下（ｎｏ  ｍｏｒｅ  ｔｈａｎ）（または以下（ｅｑｕａｌ  ｏｒ  ｌｅｓｓ  ｔｈａｎ））、約１％以下、約０．５％以下、約０．３％以下、または約０．１％以下である。ある特定の実施形態において、本組成物中のＨＭＷＳ変異体またはＬＭＷＳ変異体の量は、ＳＥＣ（またはＳＥ−ＨＰＬＣ）により測定される。ある特定の実施形態において、本組成物は、ＳＥＣにより測定されるとき約１％以下のＨＭＷＳ変異体及び／または約０．１％以下のＬＭＷＳ変異体を含む。ある特定の実施形態において、ＨＭＷＳ変異体は、光曝露により誘発される。高レベルのＨＭＷＳ変異体を含有する抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体組成物は、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、及び／若しくはＩＬ−１７ＡＦに対する減少結合及び／若しくは中和活性、ならびに／または増加免疫原性、ならびに／または増加血清クリアランスを呈する。
【００８７】
（ｄ）ＲＲ架橋変異体
本発明は、単離された形態、濃化された形態、またはＲＲ架橋変異体及び主要種抗体を含む組成物における抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の耐還元性（ＲＲ）架橋変異体に関する。ＲＲ架橋変異体は、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＨＰＬＣ）、有機相ＳＥＣ（ＯＰ−ＳＥＣ）、及び／またはキャピラリー電気泳動ドデシル硫酸ナトリウム（ＣＥ−ＳＤＳ）が含まれるが、これらに限定されない種々の技法を使用して単離され得、特徴付けられ得、かつ定量化され得る。ＯＰ−ＳＥＣは、試料がＤＴＴなどの還元剤で処理されているとき、還元ＯＰ−ＳＥＣとも称され得る。ある特定の実施形態において、架橋は、光曝露により誘発される。ある特定の実施形態において、架橋は、ＣｙｓとＣｙｓ残基との間にある。ある特定の他の実施形態において、架橋は、ＴｒｐとＴｒｐ残基との間にある。架橋は、分子間及び分子内架橋であり得る。
【００８８】
ある特定の実施形態において、本組成物中のＲＲ架橋変異体の量は、約６％以下（ｎｏ  ｍｏｒｅ  ｔｈａｎ）、すなわち以下（ｅｑｕａｌ  ｏｒ  ｌｅｓｓ  ｔｈａｎ）、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、または約１％以下である。ある特定の実施形態において、本組成物中のＲＲ架橋変異体の量は、還元ＯＰ−ＳＥＣにより決定される。ある特定の実施形態において、本組成物中のＲＲ架橋変異体の量は、還元ＯＰ−ＳＥＣにより決定されるとき約３％以下である。ある特定の実施形態において、高レベルのＲＲ架橋変異体を含有する抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体組成物は、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、及び／若しくはＩＬ１７ＡＦに対する減少結合、及び／若しくは減少中和活性、ならびに／または増加免疫原性、ならびに／または増加血清クリアランスを呈する。
【００８９】
（ｅ）酸性変異体
本発明は、単離された形態、濃化された形態、または酸性変異体及び主要種抗体を含む組成物における抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体の酸性変異体にも関する。酸性変異体は、画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）、またはｐＨ勾配式ＩＥＣ分析が含まれるが、これらに限定されない種々の技法を使用して単離され得、特徴付けられ得、かつ定量化され得る。
【００９０】
ある特定の実施形態において、組成物中の酸性変異体の量は、約４５％以下（すなわち、未満の同等）、約４２％以下、約４０％以下、約３８％以下、約３５％以下、約３２％以下、約３０％以下、約２８％以下、約２５％以下、または約２０％以下、約３０％〜約４２％、約３１％〜約４２％、約３２％〜約４２％、約３３％〜約４２％、約３４％〜約４２％、約３５％〜約４２％、約３７％〜約４２％、約３９％〜約４２％、または約４０％〜約４２％である。ある特定の実施形態において、本組成物中の酸性変異体の量は、ｉｃＩＥＦにより決定される。ある特定の実施形態において、組成物中の酸性変異体の量は、ｉｃＩＥＦにより決定されるとき約４２％以下である。ある特定の実施形態において、本組成物中の主要ピークの量は、少なくとも約５０％、少なくとも約５４％、少なくとも約５６％、少なくとも約５８％、少なくとも約５９％、少なくとも約６０％、少なくとも約６１％、少なくとも約６３％、少なくとも約６６％、少なくとも約６８％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％以上である。ある特定の実施形態において、本組成物中の酸性変異体には、糖化変異体、グリコシル化変異体、脱アミド化変異体、ジスルフィド還元変異体、シアル酸化変異体、及び非還元性変異体のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、または５つが含まれ得る。ある特定の実施形態において、酸性変異体は、光曝露により誘発される。ある特定の実施形態において、高レベルの酸性変異体を含有する抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体組成物は、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、及び／若しくはＩＬ１７ＡＦに対する減少結合、及び／若しくは減少中和活性、ならびに／または増加免疫原性、ならびに／または増加血清クリアランスを呈する。
【００９１】
一般に、本組成物中に存在する変異体の量は、精製により影響を受け得る。精製方法の選択は、本組成物中に存在する各々の変異体の量を増加または低下し得る。一般的に使用される精製方法には、タンパク質Ａ親和性カラム、疎水性相互作用クロマトグラフィー、サイズ排除カラム、及びイオン交換カラムクロマトグラフィーが含まれるが、これらに限定されない。
【００９２】
（ｆ）免疫複合体
ある特定の実施形態において、本組成物は、化学療法剤若しくは化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素活性毒素、またはその断片）、または放射性同位体などの１つ以上の細胞毒性剤に複合される抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む免疫複合体を含む。
【００９３】
一実施形態において、免疫複合体は、抗体が１つ以上の薬に複合される、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ  ０  ４２５  ２３５  Ｂ１号を参照されたい）；モノメチルアウリスタチン薬部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）などのアウリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号及び同第５，７８０，５８８号、ならびに同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン；カリチアマイシン、またはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）、ならびにＬｏｄｅら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照されたい）；ダウノマイシンまたはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙら，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８−３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖら，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）、Ｎａｇｙら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら，Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：１５２９−１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５が含まれるが、これらに限定されない抗体薬複合体（ＡＤＣ）である。
【００９４】
別の実施形態において、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンシンタンパク質、アメリカヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンが含まれるが、これらに限定されない、酵素活性毒素またはその断片に複合される本明細書に記載される抗体を含む。
【００９５】
別の実施形態において、免疫複合体は、放射性原子に複合されて放射性複合体を形成する本明細書に記載される抗体を含む。様々な放射性同位体が、放射性複合体の生成のために利用可能である。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が含まれる。放射性複合体が検出のために使用されるとき、それは、シンチグラフィー研究のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ若しくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（別名、磁気共鳴画像法、ＭＲＩ）のためのスピン標識、例えば、再度ヨード−１２３、ヨード−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄を含み得る。
【００９６】
抗体及び細胞毒性剤の複合体は、Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、サクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジサクシニミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）などの様々な二機能性タンパク質結合剤を使用して作製され得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製され得る。炭素−１４標識化１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体に複合させるための、典型的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞中で細胞毒性薬を放出するのを容易にする「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）が使用され得る。
【００９７】
本明細書の免疫複合体またはＡＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびに（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから市販されるＳＶＳＢ（サクシニミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋剤試薬で調製されたかかる複合体を明白に企図するが、これらに限定されない。
【００９８】
ＩＩＩ．製造及び分析方法
本発明の一実施形態に従って、（１）本組成物中のグリコシル化変異体の量を測定すること、ならびに／または（２）本組成物中のＲＲ架橋変異体の量を測定すること、ならびに／または（３）本組成物中のＨＭＷＳ変異体及び／若しくはＬＭＷＳ変異体の量を測定すること、ならびに／または（４）本組成物中の酸性変異体の量を測定すること、のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体組成物を評価するための方法が提供される。任意に、４つ全ての分析検定法が、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体及びその変異体を含む組成物について行われる。
【００９９】
本発明は、（１）抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体及び１つ以上のその変異体を含む組成物を生成することと、（２）そのように生成された組成物を１つ以上の分析検定法（複数可）にかけて、その中の変異体（複数可）の量を評価することと、を含む、組成物を作製するための方法にも関する。分析検定法（複数可）は、（ｉ）グリコシル化変異体、ならびに／または（ｉｉ）ＲＲ架橋変異体、ならびに／または（ｉｉｉ）ＨＭＷＳ変異体及び／若しくはＬＭＷＳ変異体、ならびに／または（ｉｖ）酸性変異体のうちのいずれか１つ以上の量を評価及び定量化し得る。よって、これらの変異体のうちの１つ、２つ、３つ、または４つが、分析され得る。ある特定の実施形態において、このように生成された本組成物は、光曝露から保護される。
【０１００】
ある特定の実施形態において、分析検定法は、ヘテロ二量体及び／若しくはホモ二量体変異体、ならびに／またはＨＭＷＳ変異体、ならびに／またはＲＲ架橋変異体、ならびに／または酸性変異体を含むグリコシル化変異体を評価するか、定量化するか、または単離する。例えば、分析検定法は、ＳＥ−ＨＰＬＣ、ＯＰ−ＳＥＣ、またはｉｃＩＥＦ、イオン交換カラムクロマトグラフィー、逆相（ＲＰ）ＨＰＬＣ、ＬＣ／ＭＳ、ペプチドマッピング分析、トリプシンマッピングのＬＣ／ＭＳ分析、またはＬＣ／ＭＳが続くトリプシンマッピングのペプチド−Ｎ−グリコシダーゼ消化、キャピラリー電気泳動レーザー誘発蛍光検出（ＣＥ−ＬＩＦ）、２−アミノ−ベンズアミド（２−ＡＢ）標識、及び２−アミノ安息香酸（２−ＡＡ）標識を含み得るが、これらに限定されない。
【０１０１】
加えて、本方法は、本組成物中のグリコシル化変異体、及び／またはＨＭＷＳ変異体、及び／またはＲＲ架橋変異体、及び／または酸性変異体の量を測定して、本組成物のＩＬ−１７Ａ、若しくはＩＬ−１７Ｆ、及び／若しくはＩＬ−１７ＡＦに対する結合親和性、ならびに／または本組成物のＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、及び／若しくはＩＬ−１７ＡＦ誘発活性の阻害性中和効果を決定することと、本組成物中のグリコシル化変異体、及び／またはＨＭＷＳ変異体、及び／またはＲＲ架橋変異体、及び／または酸性変異体の量がそれぞれ許容範囲内であることを確認することと、を含む、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体組成物の生物活性を評価することを含む。ある特定の実施形態において、結合親和性は、例えば、ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ、またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）により決定され得る。
【０１０２】
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０１０３】
一実施形態において、Ｋｄは、放射性標識抗原結合検定法（ＲＩＡ）により測定される。一実施形態において、ＲＩＡは、目的の抗体及びその抗原のＦａｂバージョンと共に行われる。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、標識化されていない抗原の滴定シリーズの存在下で、（１２５Ｉ）標識化抗原の最小濃度でＦａｂを平衡化することにより測定され、次いで、抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉する（例えば、Ｃｈｅｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。検定法のための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）多坑井型プレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングされ、続いて、室温（約２３℃）で２〜５時間、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンで遮断される。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）において、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］抗原は、目的のＦａｂの連続希釈液と混合される（例えば、Ｐｒｅｓｔａら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における、抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致）。次いで、目的のＦａｂは、一晩インキュベートされるが、確実に平衡に到達するように、インキュベーションはより長い期間（例えば、約６５時間）継続され得る。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、捕捉プレートに移す。次いで、溶液を除去し、ＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））でプレートを８回洗浄する。プレートが乾燥すると、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートを、１０分間、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）で数える。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合検定法において使用するために選定する。
【０１０４】
別の実施形態に従って、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴検定法を使用して測定され得る。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用する検定法が、約１０の応答単位（ＲＵ）で固定化抗原ＣＭ５チップを用いて、２５℃で行われる。一実施形態において、供給業者の指示に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシサクシニミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を、ｐＨ４．８の１０ｍＭの酢酸ナトリウムで５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈した後、５μＬ／分の流量で注入して、結合されたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成する。抗原の注入後、１モルのエタノールアミンを注入して、未反応の基をブロックする。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中に、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流量で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、会合及び解離センサーグラムを同時に適合させることにより、単純一対一ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して計算する。平衡状態解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。オン速度が、上記の表面プラズモン共鳴検定法によって、１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計において測定される、増加濃度の抗原の存在下で、ｐＨ７．２のＰＢＳ中２５℃で、２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、決定することができる。
【０１０５】
本方法は任意に、本組成物を１つ以上の薬学上許容される賦形剤と組み合わせて、薬学的組成物を作製することをさらに含む。加えて、薬学的組成物は、製造物品を作製するように、（例えば、その使用者に癌を治療するための薬学的組成物の使用を指示する処方情報を含む）添付文書と一緒に包装される。
【０１０６】
ＩＶ．薬学的組成物
抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体及び１つ以上のその変異体を含む薬学的組成物は、任意の薬学上許容される賦形剤と共に所望の精製度を有する組成物を混合することにより（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））、一般に凍結乾燥製剤または水溶液の形態で保管用に調製される。抗体結晶も企図される（米国特許出願第２００２／０１３６７１９号を参照されたい）。薬学上許容される賦形剤は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントにとって毒性ではなく、ヒスチジン酢酸塩などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。インビボ投与のために使用される薬学的組成物は、無菌であるべきである。これは、無菌ろ過膜によるろ過により容易に果たされる。
【０１０７】
Ｖ．治療用途及び使用
本明細書に記載される組成物は、免疫関連、または炎症性疾患、または癌などの細胞増殖関連疾患を治療するためにそれを必要とする個体に投与され得る。
【０１０８】
一態様において、薬品として使用するための本明細書に提供される組成物が提供される。さらなる態様において、免疫関連、または炎症性疾患、または細胞増殖関連疾患を治療するのに使用するための組成物が提供される。ある特定の実施形態において、治療方法で使用するための組成物が提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、個体に有効量の組成物を投与することを含む、免疫関連疾患、または炎症性疾患、または細胞増殖関連疾患を有する個体を治療する方法で使用するための、本明細書に記載される組成物を提供する。１つのかかる実施形態において、本方法は、例えば以下に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤の有効量を個体に投与することをさらに含む。
【０１０９】
さらなる態様において、本発明は、免疫関連疾患、または炎症性疾患、または細胞増殖関連疾患を治療するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、かかる免疫関連疾患、または炎症性疾患、または細胞増殖関連疾患を有する個体に本明細書に記載される組成物の有効量を投与することを含む。１つのかかる実施形態において、本方法は、以下に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤の有効量を個体に投与することをさらに含む。
【０１１０】
さらなる態様において、本発明は、例えば、上記の治療方法のいずれかで使用するための、本明細書に提供される組成物のいずれかを含む医薬製剤を提供する。一実施形態において、薬学的製剤は、本明細書に提供される組成物のいずれかと、薬学上許容される担体と、を含む。別の実施形態において、薬学的製剤は、本明細書に提供される組成物のいずれかと、例えば、以下に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤と、を含む。
【０１１１】
本発明の組成物は、治療において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用され得る。例えば、本発明の組成物は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与され得る。ある特定の実施形態において、追加の治療剤は、アンタゴニスト抗体、アゴニスト抗体、化学療法剤、または細胞毒性剤である。
【０１１２】
上述されたかかる併用療法は、（２つ以上の治療剤が同じかまたは別個の製剤中に含まれる）組み合わせ投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の組成物の投与は、追加の治療剤または薬剤の投与の前、それと同時、及び／またはその後に起こり得る。一実施形態において、本発明の組成物の投与及び追加の治療剤の投与は、互いに約１か月以内、または約１週間、２週間、若しくは３週間以内、または約１日、２日、３日、４日、５日、若しくは６日以内に発生する。本発明の組成物は、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
【０１１３】
ＶＩ．製造物品
本明細書の製造物品の一実施形態は、本明細書の組成物または薬学的組成物を含有するバイアル、注射器、または点滴（ＩＶ）バッグなどの容器を含む。任意に、本製造物品は、本明細書の前項による本組成物の使用方法を記載する処方情報を含む添付文書をさらに含む。ある特定の実施形態において、本製造物品は、光曝露から保護される。
【０１１４】
以下の実施例は、本発明の特定の実施形態及び種々のその使用を例示する。それらは、説明を目的として記載されているに過ぎず、本発明を限定すると解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１１５】
実施例１  抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ  Ａｂ  ＭＣＡＦ５３５２Ａのグリコシル化変異体
抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａを、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞により生成した。抗体を、Ｔｏｓｏｈ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＳＥＣ  ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷｘｌ（７．８×３００ｍｍ、５μｍ）カラムを使用して、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムで行われるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）にかけた。イソクラティック実行時間は、周囲温度で移動相緩衝剤（０．２モルのＫ２ＨＰＯ４、０．２５Ｍ  ＫＣｌ、ｐＨ６．２）を使用して、０．５ｍＬ／分で３０分であった。移動相緩衝剤中で希釈された５０μｇの抗体を、各分析用に注入し、２８０ｎｍで監視した。クロメレオンソフトウェアパッケージ（Ｄｉｏｎｅｘ）を使用して、データを分析した。
【０１１６】
図１Ａ及び図１Ｂで示されるように、追加のピーク（ピーク１）が、主要Ａｂピークよりわずかに大きい分子量により、ＳＥＣ分析において明らかであった。ＬＣ−ＭＳ（液体クロマトグラフィー質量分光測定）データは、ピーク１が、およそ２４００〜３０００Ｄａの範囲である質量追加との種の異種混合物であること確認した（データは示されていない）。質量追加は、Ｆａｂ重鎖領域に局所化されている（データは示されていない）。試料のＳＥＣ分析は、本組成物が約２％のピーク１を含むことを示す。ピーク１は、ＤＴＴ処理に対して抵抗性であった（データは示されていない）。
【０１１７】
ペプチドマッピングＬＣ−ＭＳデータは、Ｎ結合型グリコシル化が、ピーク１の存在の理由となることを示唆した（データは示されていない）。濃化ピーク１試料を、トリプシンで処理した後に、３７℃で一晩ＰＮＧａｓｅ（ペプチド−Ｎ−グリコシダーゼ、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）で処理した。図２で示されるように、新しいピークが、ＰＮＧａｓｅ消化の後に現れ、これは、ペプチドＨＣ４４〜６５におけるＮ結合型グリコシル化を示す。
【０１１８】
次に、Ｆａｂ上のグリコシル化部位を決定した。トリプシンペプチドＨＣ４４〜６５は、ＮＷＳがＮ結合型グリコシル化に対する共通配列を示す配列
2017537891.tif 000009
（配列番号１１、下線のＨＣ  ＣＤＲ２配列）を含有する。濃化ピーク１のトリプシンマップのＬＣ−ＭＳ分析は、ＰＮＧａｓｅ処理の後の追加のピークの質量がわずかに増加し、ＰＮＧａｓｅ消化の結果としてＡｓｎのＡｓｐへの転換と一致することを示した。図３Ａ〜Ｂを参照されたい。収集されたペプチドのＮ末端配列の決定により、脱グリコシル化ＨＣ４４〜６５におけるＡｓｐ５２の存在が確認された。およそ３０個の異なるグリコペプチド質量が質量スペクトルにおいて観察され、正確な質量構造別割当は、多くのグリカンがシアル酸化される可能性があり、それが、ピーク１の酸性の性質を実証することを示した（データは示されていない）。
【０１１９】
ＨＣ  ＣＤＲ２において約９０％のグリコシル化変異体を含む抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の組成物は、低減された効能を示した。ピーク１またはグリコシル化変異体−濃化抗体試料によるＩＬ−１７Ａ／Ｆ結合を、２％のグリコシル化変異体を有する組成物を有する試料と比較した。多様な濃度の抗体標準、対照、及び試料を、ＩＬ−１７ＡＡ、またはＩＬ−１７ＦＦ、またはＩＬ−１７ＡＦでコーティングされた９６ウェルプレートに添加した。結合ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を、抗ヒトＨＲＰ及びＴＭＢ基質溶液で検出した。ＯＤで現れる結果をＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体濃度に対してプロットし、参照材料に対して抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体試料（複数可）の活性を推測するために４つのパラメータ曲線あてはめプログラムを使用する。２％のグリコシル化変異体を含む参照材料を１００％として割り当て、相対効能として結果を報告する。
【０１２０】
以下の表２で示されるように、ＨＣ  ＣＤＲ２におけるグリコシル化の存在は、ＥＬＩＳＡにより測定されるときＩＬ−１７ＡＡ、ＩＬ−１７ＦＦ、及びＩＬ−１７ＡＦへの結合をかなり減少させた。
2017537891.tif 000010
【０１２１】
結果は、２％超えのグリコシル化変異体を有する抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含有する試料が、２％のグリコシル化変異体を有する試料と比較してかなりの減少結合活性を呈することを示す。
【０１２２】
実施例２  抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ  Ａｂ  ＭＣＡＦ５３５２Ａの光線誘発変色は、ＨＭＷＳ形成に関する。
【０１２３】
抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａは、周囲実験室光などの光への曝露による、変色（黄化）、耐還元性（ＲＲ）架橋、及びＨＭＷＳ形成を引き起こし得る異常な感光性を呈する。感光性特性をさらに理解するために、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を、ＩＣＨ指針条件（Ｓｕｎ  Ｔｅｓｔ）下で光曝露にかけ、電荷変異体分析、サイズ排除分析、ペプチドマッピング、及び質量分光測定分析により評価した。
【０１２４】
光ストレス性試料の調製
抗体試料を、以下のＩＣＨ指針条件を使用して、Ａｔｌａｓ  Ｓｕｎｔｅｓｔ  ＣＰＳ＋光ボックスを使用して調製した。照度レベル＝２５０ワット／平方メートル、総ＵＶ線量＝５３８ワット時／平方メートル、総可視線量＝１，３２０，０００ルクス時／平方メートル。曝露時間は、示される通りであった。
【０１２５】
画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）分析を使用する電荷変異体分析
電荷変異体分析を、１００μｍ  ｉｄ  ×５ｃｍ長さのＦｃコーティングフルオロカーボンキャピラリー（ＰＮ１０１７０１、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を備えるｉＣＥ２８０分析機器を使用して行った。両性電解質溶液は、以下の通りの調製物であった。７００μＬの１％メチルセルロース溶液（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｉｍｐｌｅ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）、２３７μＬの精製Ｈ２Ｏ、１ｍＬの５モルの尿素、４４μＬのファルマライト８〜１０．５（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、１９μＬのファルマライト５〜８（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｗａｕｋｅｓｈａ，ＷＩ）、８μＬのｐＩマーカー５．５（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ）、８μＬのｐＩマーカー９．７７（Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔｏｒｏｎｔｏ，ＯＮ）。１６０μＬの両性電解質溶液を、４０μＬの１ｍｇ／ｍＬのカルボキシペプチダーゼ（ＣｐＢ）処理後の抗体（１：１００、ＣｐＢ対抗体、３７℃で２０分間）と混合した。焦準条件は、１５００Ｖで１分間、その後３０００Ｖで１０分間であり、次に２８０ｎｍの吸光検出を行った。
【０１２６】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ、ＳＥ−ＬＣまたはＳＣ−ＨＰＬＣとも称される）を、Ｔｏｓｏｈ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＳＥＣ  ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷｘｌ（７．８×３００ｍｍ、５μｍ）カラムを使用して、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣシステムで行った。イソクラティック実行時間は、周囲温度で移動相緩衝剤（０．２モルのＫ２ＨＰＯ４、０．２５モルのＫＣｌ、ｐＨ６．２）を使用して、０．５ｍＬ／分で３０分であった。移動相緩衝剤中で希釈した５０μｇの抗体を、各分析用に注入し、２８０ｎｍで監視した。クロメレオンソフトウェアパッケージ（Ｄｉｏｎｅｘ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）を使用して、データを分析した。
【０１２７】
有機相サイズ排除クロマトグラフィー（ＯＰ−ＳＥＣ）
有機相ＳＥＣを、連続した２つのＴｏｓｏｈ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅサイズ排除クロマトグラフィーＴＳＫｇｅｌ  ＳｕｐｅｒＳＷ３０００（２×３００ｍｍ、４μｍ）カラムを使用して、Ａｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣシステムで行った。イソクラティック実行時間は、７０℃で有機移動相緩衝剤（Ｈ２Ｏ中６０％のＡＣＮ（アセトニトリル）、０．１％ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸））を使用して、０．２５ｍＬ／分で４５分であった。全ての試料を、２０ｍＭのトリス（ｐＨ７．５）緩衝剤の１ｍＬ中１ｍｇ／ｍＬ濃度で調製した。ｍＡｂの還元を、３７℃で１５分間１０ｍＭのＤＴＴ中で試料をインキュベートすることにより行い、その後、ジスルフィド結合再形成を防止するために２０μＬの０．１％ＴＦＡを添加した。２５μｇのｍＡｂを、各分析用に注入し、２８０ｎｍで監視した。クロメレオンソフトウェアパッケージ（Ｄｉｏｎｅｘ）を使用して、データを分析した。
【０１２８】
ＱＴＯＦ  Ｐｒｅｍｉｅｒ質量分光計（Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を、陽性エレクトロスプレーイオン化モードで動作させ、ＯＰ−ＳＥＣ−ＭＳ分析のためのＨＰＬＣシステムにオンライン接続した。機器制御及びデータ分析を、Ｗａｔｅｒｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェアパッケージ（バージョン４．１）（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用して行った。多荷電イオンのデコンボリューションを、ＭａｓｓＬｙｎｘで提供されたＭａｘＥｎｔ  １ソフトウェアを用いて行った。
【０１２９】
キャピラリー電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（ＣＥ−ＳＤＳ）
キャピラリー電気泳動−ドデシル硫酸ナトリウム（ＣＥ−ＳＤＳ）を、以下の通り行った。試料を、蛍光色素である５カルボキシテトラメチルローダミンサクシニミジルエステルで誘導体化した。ゲルろ過（ＮＡＰ−５カラムを使用する）を通して遊離色素を除去した後、非還元試料を、ＳＤＳ／４０ｍＭのヨードアセトアミドを添加し、７０℃で５分間加熱することにより調製した。還元試料の分析のために、誘導体化された試料を、ＳＤＳと混合して、１モルのジチオスレイトールを含有する１％（体積／体積）の最終濃度である１０μＬの溶液にして、７０℃で２０分間加熱した。調製した試料を、分析の間中２０℃に維持された５０μｍの内径３１．２ｃｍの溶融シリカキャピラリーを使用して、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＰｒｏｔｅｏｍｅＬａｂ  ＰＡ８００システムで分析した。試料を、１０ｋＶで４０秒間、電気運動注入によりキャピラリー中に導入した。篩媒体としてＣＥ−ＳＤＳ実行緩衝剤を使用して、−１５ｋＶの定電圧で分離を実施した。４８８ｎｍで動作するアルゴンイオンレーザーを、５６０ｎｍで監視された出射信号を得られる蛍光励起のために使用した。
【０１３０】
ＲＣＭ（還元ｃ−カルボキシメチル化）トリプシンペプチドマッピング及びＲＰ−ＨＰＬＣ−ＭＳ分析
完全長抗体試料を、変性緩衝剤（６モルのグアニジン、３６０ｍｍのトリス、２ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ８．６）中に入れて希釈し、１０ｍＭのＤＴＴの存在下で、４５℃で１０分間インキュベートすることにより還元した。Ｓ−カルボキシメチル化を、２０ｍＭのヨード酢酸ナトリウムの存在下で、４５℃で１０分間試料をインキュベートすることによる還元後にシステインをキャップするために行い、次いで、４０ｍＭのＤＴＴを用いて室温でクエンチした。次いで、試料を、ＮＡＰ−５カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に装填することにより脱塩し、８００ｕＬのトリプシン消化緩衝剤（２０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０）で溶出した。試料を、３％のトリプシン（重量／重量、Ｒｏｃｈｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて３７℃で３．５時間消化した。ＴＦＡを０．３％の最終濃度に添加して、消化を停止した。トリプシンペプチドを、ＰＨＥＮＯＭＥＮＥＸ  ＪＵＰＩＴＥＲ（商標）Ｃ−１８カラム（２×２５０ｍｍ、５μｍ、３００Å）を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣを使用して分離した。ペプチド溶出を、０．２５ｍＬ／分の流量で２１５分にわたって、１００％溶剤Ａ（Ｈ２Ｏ、０．１％ＴＦＡ）〜４５％溶剤Ｂ（ＡＣＮ、０．１％ＴＦＡ）の勾配式を使用して行った。２１４ｎｍで観察されたクロマトグラフピークの質量分光測定分析を、陽イオンモードで動作するＯＲＢＩＴＲＡＰ  ＥＬＩＴＥ（商標）質量分光計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で行った。データ分析を、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェアで行った。
【０１３１】
無傷及び還元質量分析
この検定法の目的は、無傷抗体の分子量、ならびに還元抗体の重鎖及び軽鎖の分子量を確認することであった。試料を、タンパク質チップ（ＩＩ）４３ｍｍ×７５μｍ、Ｚｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ８、５μｍのカラムを使用する、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＥＳＩ−ＴＯＦ（ＣｈｉｐＴＯＦ）を使用して分析した。無傷試料を、５％のアセトニトリル／０．１％のギ酸中０．１ｍｇ／ｍＬで調製し、Ａｇｌｉｅｎｔ  ＥＳＩ−ＴＯＦを使用して分析した。還元試料を、６０℃で１０分間、２０ｍｇ／ｍＬのＴＣＥＰで処理し、次いで、５％のアセトニトリル／０．１％のギ酸中０．０５ｍｇ／ｍＬで調製し、Ａｇｌｉｅｎｔ  ＥＳＩ−ＴＯＦを使用して分析した。試料を、分析用に０．０５μＬで注入した。無傷及び還元質量を、Ｍａｓｓ  Ｈｕｎｔｅｒソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｓｕｉｔ）を使用してデコンボリュートした。
【０１３２】
Ｏ１８標識を使用する架橋ペプチド同定
試料を、以下を除いて、上述されるように調製及び分析した。ＮＡＰ−５の脱塩手順の後、試料を半分に分けて、遠心濃縮機で乾燥させた。次いで、試料を、ＬＣ−ＭＳグレードＨ２Ｏ１６またはＨ２Ｏ１８（９９．７％の原子精製度）中で復元し、適切なＨ２Ｏ中で復元された凍結乾燥トリプシンを用いて上述されるようにトリプシン処理した。ＲＰ−ＨＰＬＣ分析を、上記の通り行った。全ての親イオンを、高衝突誘起解離（ＨＣＤ）を使用して断片化し、高質量精度分析のためのＦｏｕｒｉｅｒ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ（ＦＴ）分析機器を使用して、関連遷移が検出された。
【０１３３】
天然トリプシンマッピングを使用するスクランブルジスルフィド架橋
試料を、変性緩衝剤（７モルのグアニジン、０．１ｍＭの酢酸ナトリウム、１０ｍＭのＮ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）、ｐＨ５．５）中に入れて希釈し、３７℃で２時間インキュベートした。次いで、試料を、ＮＡＰ−５カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上に装填することにより脱塩し、７００ｕＬのトリプシン消化緩衝剤（０．１Ｍのトリス、１ｍＭの塩化カルシウム、ｐＨ７．５）で溶出した。試料を、１０％のアセトニトリルの存在下で、１０％のトリプシン（重量／重量、Ｒｏｃｈｅ組換え）を用いて３７℃で一晩消化した。消化試料を、３７℃で３０分間、１５ｍＭのトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）の存在下で還元するために半分（４００μＬ）に分けた。追加の２５％のＴＦＡを、非還元及び還元の両方の試料に添加した。
【０１３４】
結果
光曝露は、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の光線誘発変色及び耐還元性ＨＭＷＳ形成を引き起こす。
図４で示されるように、光に曝露された抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａは、Ａｍａｘ約４３０ｎｍで顕著な光線誘発黄化を呈した。感光性が、周囲実験室光及びＩＣＨ指針の光条件の両方に対して観察された。吸光度は、トリプトファン酸化により予想された吸光度（３１５ｎｍ〜３７０ｎｍの吸光度）と比較して相当に赤色移動する。様々な時点で光に曝露された試料をまず、標準ＳＥＣ方法を使用して分析し、無傷タンパク質におけるＨＭＷＳ形成の程度を決定した。ＳＥＣデータは、光線誘発凝集体において線状増加があり、２４時間時点で３０％近くのＨＭＷＳに到達したことを示した（図５）。ペプチド側鎖の酸化は、タンパク質の局所環境に影響を与え得、疎水部の曝露及び非特異性凝集を引き起こす。観察された凝集体の性質を調査するために、新規の有機相ＳＥＣ（ＯＰ−ＳＥＣ）方法が、光曝露試料の還元構成成分を分析するために生み出された。図６で見られるように、光曝露抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ試料は、無傷タンパク質と重鎖との間に溶出した明らかな非還元性種を含有した。この種は、ＳＥＣにおいて見られるＨＭＷＳ（図５Ｂ）と類似の様式で、光曝露で線状に増加することが観察された（図６Ｂ）。２４時間の光曝露において、この耐還元性または非還元性ＨＭＷＳ（ＲＲ−ＨＭＷＳまたはＮＲ−ＨＭＷＳ）は、観察される全体の種のうちの約１６％に到達する。ＲＲ−ＨＭＷＳの存在も、ＣＥ−ＳＤＳにより確認された（データは示されていない）。
【０１３５】
光曝露は、抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２Ａの酸性電荷変異体を増加した。
ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体上の光曝露の全般的な効果を理解するために、ｉｃＩＥＦ分析を行って、電荷変異体の変化を監視した。ｉｃＩＥＦ分析は、塩基性変異体への効果はほとんどないが、光曝露を受けたときの酸性変異体の著しい増加を示す（図７）。ｉｃＩＥＦデータは、塩基性電荷変異体の増加がないことを確認する。１つ以上の機序に限定することなく、酸性変異体は、Ｍｅｔ及び／またはＴｒｐ酸化に関連する可能性がある。
【０１３６】
光誘発ＨＭＷＳは、分子間及び分子内架橋の両方を含有する。
ＯＰ−ＳＥＣ方法により観察されたＮＲ−ＨＭＷＳが分子間架橋であるかどうかを決定するために、ＳＥＣ検定法による無傷ＨＭＷＳ凝集体及び主要ピークを収集し、ＯＰ−ＳＥＣ方法を使用してこれらの画分を分析した。ＳＥＣによるＨＭＷＳ画分は、ＲＲ−ＨＭＷＳ中で３倍近くの濃化を示したが、ＳＥＣによる主要ピーク画分は、ＲＲ−ＨＭＷＳ全体で低下した（図８）。このデータは、分子間及び分子内両方の架橋が光曝露後に起こっていたが、ＳＥＣ収集主要ピークよりもＳＥＣ収集凝集体中に著しくより架橋された種が存在することを示し、これは、主に分子間架橋が起こっていたことを示唆する。
【０１３７】
メチオニン及びトリプトファン酸化が、２４時間の光ストレス後に、トリプシンペプチドマッピングにより検出される。
トリプシン消化物を、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを使用して分析し、天然ペプチドに対する酸化ペプチド中のＭｅｔ及びＴｒｐ酸化の量を定量化するために、抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣ）を使用した。光線誘発酸化に最も影響を受けやすい残基は、Ｆｃ領域で見られる３つのＭｅｔ残基であった（配列番号９によるＭ２５８、Ｍ３６４、Ｍ４３４）（図９Ａ）。３つのＴｒｐ残基、すなわち、ＨＣのＣＤＲ中の２つ（配列番号７または配列番号９によるＷ５３及びＷ１０８）及びＬＣのＣＤＲ中の１つ（配列番号８または配列番号１０によるＷ９４）は、広範囲にわたる酸化を呈した（図９Ｂ）。全ての３つのＴｒｐ残基は、全体的な酸化において線状増加を呈したが、各々は、多様な量の個別の酸化種を表した（図９Ｃ）。Ｗ５３及びＷ１０８の全体的な酸化程度は、ほぼ同一であったが、ジヒドロキシトリプトファン転換の速度は、Ｗ１０８のよりも４倍高かった（Ｗ１０８及びＷ５３に関してそれぞれ、０．４５％のｏｘ／時間対０．１１％のｏｘ／時間）。Ｗ９４は、最も影響を受けやすいＴｒｐ残基であり、全体的な酸化は、Ｗ５３及びＷ１０８の２．５倍近くである。加えて、Ｗ９４は、他の２つのＴｒｐ残基と比較して著しい量のキヌレニン種を呈した。図１０で示されるように、３つのトリプトファン（ＬＣ  Ｗ９４、ＨＣ  Ｗ５６、及びＨＣ  Ｗ１０８）は、光線誘発酸化に対して著しく影響を受けやすいことを表す。これらの変異体の光誘発増加は、全体的なＨＭＷＳ形成及びＲＲ架橋種の増加、ならびに着色の質的増加にも対応する。
【０１３８】
光誘発ＨＭＷＳは、優勢な重鎖−重鎖架橋変異体及びより程度の低い重鎖−軽鎖架橋変異体までを含有する。
ＯＰ−ＳＥＣ光ストレス試料の画分を、ＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳを使用して、より精密な分析のために収集した。デコンボリュートされたＥＳＩ−ＴＯＦ−ＭＳデータは、２４時間の光曝露の後、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体ＭＣＡＦ５３５２ＡのＨＣ及びＬＣの両方において著しい酸化があったこと、ならびにＲＲ−ＨＭＷＳ画分が、主に約１０２ｋＤａの質量を有する種、及び程度の低い、約７４．５ｋＤａの質量を有する種を含有したことを示す（図１１Ｂ〜Ｃ）。これらの結果は、ＯＰ−ＳＥＣ−ＭＳデータと一致し、ＨＣ−ＨＣ及びＨＣ−ＬＣの両方の共有架橋を示唆した。
【０１３９】
実施例３  光線誘発着色及びＨＭＷＳ形成は、活性酸素種（ＲＯＳ）誘導処理である。
まず、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の感光性が酸化に因るものかどうかを調査するために、抗体試料を、光曝露の２４時間前にＮ２ガスでパージした。ＨＭＷＳ及び架橋種の両方の低減と結びつく、変色の程度における可視の低下がＮ２−パージ試料で観察された（図１２）。これは、ＲＰ−ＨＰＬＣ酸化検定法により分析されるように、全般的な酸化の低減と相互に関連があった（以下及び図１３を参照されたい）。
【０１４０】
全般的な酸化の検出及び定量化を、逆相（ＲＰ）−ＨＰＬＣ検定法を使用して行った。試料を、ｐＨ８．０、５０ｍＭのトリス中１ｍｇ／ｍＬ濃度で調製し、３７℃で４時間、ＦａｂＲＩＣＡＴＯＲ（登録商標）（ＩｄｅＳ）（Ｇｅｎｏｖｉｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）（抗体１００μｇ当たり５０単位）で消化した。次いで、消化した試料を、３７℃で３０分間、２０ｍＭのＤＴＴ（８Ｍのグアニジン、５０ｍＭのトリス、ｐＨ８．０）で還元した。次いで、ＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）を、分析前に２５ｍＭの最終濃度に添加した。還元された消化物を、ＢｉｏＢａｓｉｃ  Ｐｈｅｎｙｌ（商標）カラム（２．１×１５０ｍｍ、５μｍ、３００Å）（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣを使用して分離した。ペプチド溶出を、０．３ｍＬ／分の流量で１９分にわたって、６８％溶剤Ａ（Ｈ２Ｏ、０．１％ＴＦＡ）〜５５％溶剤Ｂ（ＡＣＮ、０．１％ＴＦＡ）の勾配式を使用して行った。
【０１４１】
試料を、ＲＯＳの関連を調査するために、０．１〜１００ｍＭの範囲である、ＮａＮ３の濃度の存在下で、光に曝露した。ＮａＮ３が、抗体の光線酸化における保護効果を提供したが、ＮａＮ３の濃度と、変色の程度と、ＲＲ  ＨＭＷＳ形成／ＲＲ架橋形成との間の直接相関もあったことが観察された（図１４）。結果として、抗体は、λｍａｘ約４３０ｎｍで可視領域において強い吸光度をもたらす、周囲実験室光及びＩＣＨ指針の光条件の両方に対する固有の感光性を表す。この吸光度は、トリプトファン酸化により予想された吸光度（３１５ｎｍ〜３７０ｎｍの吸光度）と比較して相当に赤色移動する。ＮａＮ３の添加は、線量依存性様式で４３０ｎｍの吸光度を低減することにより保護効果を提供し、この固有の吸光度が、光線誘発一重項酸素由来の活性酸素種の副産物であり、架橋種の形成が、光線誘発一重項酸素から生じ、変色が、架橋種に直接的に関連することを強く示した。
【０１４２】
実施例４  Ｏ１８標識を使用する架橋ペプチドの同定
Ｏ１８標識に関する概念は、以下の分析の順序に従う：１）Ｈ２Ｏ１６及びＨ２Ｏ１８の存在下のトリプシン消化、２）Ｃ末端トリプシンカルボン酸への４つのＯ１８分子の組み込みによる推定ジペプチドの同定（Ｈ２Ｏ１６消化試料と比較して＋８Ｄａの質量シフト）、３）プロテアーゼ特異性制約条件に基づく、部分的なペプチド配列を同定するためのコンピュータを用いた断片質量データベース検索、４）完全推定ペプチドまでの拡大、５）関連する架橋の化学作用及び残基の演繹。この方法を使用して、分子量分子質量＝３８８９．００４１Ｄａを有する架橋親イオンの高質量精度ペプチド断片を、コンピュータで分析し、後の推定ペプチドが観察され、ヒンジ（Ｃ２３２）とＦｃ（Ｃ３７３）との間に同定された架橋ペプチドが確認された（図１５Ａ−１及び１５Ａ−２）。同じ方法を使用して、分子量分子質量＝４０５９．９６４５Ｄａを有する第２の架橋親イオンの高質量精度ペプチド断片を、コンピュータで分析し、後の推定ペプチドが観察された。ヒンジとＦａｂとの間の架橋ペプチドが同定され、架橋部位がヒンジ（Ｃ２３５）とＦａｂ（Ｃ９６）との間にあることが確認された（図１５Ｂ−１及び１５Ｂ−２）。追加のＲＲ架橋Ｃｙｓ残基が、ＬＣ／ＭＳペプチドマッピングにより同定及び確認された（図１６Ｂ）。
【０１４３】
実施例５  変異体の活性検定法
本明細書に記載される変異体の生物活性及び効能が分析される。変異体の結合及び中和活性が、本開示を通して記載され、かつ当技術分野で既知の検定法により試験される。例えば、ＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体、及び／またはＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体への変異体の結合親和性は、上述されるＥＬＩＳＡ検定法または、例えば、ＵＳ８，７１５，６６９及びＵＳ８，７９０，６４２に記載されるようなＢＩＡＣＯＲＥ（商標）検定法により決定され得る（あらゆる目的のために、参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）。簡潔に述べると、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体変異体の結合親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−３０００機器を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＲＰ）により測定され得る。抗体は、およそ２００応答単位（ＲＵ）を達成するようにＣＭ５バイオセンサチップ上にコーティングされたマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＢＲ−１００８−３９）により捕捉される。動態測定のために、２倍に連続希釈した（０．９８ｎＭ〜１２５ｎＭ）ヒトＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、またはＩＬ−１７Ａ／Ｆが、２５℃で、３０μｌ／分の流量でＰＢＴ緩衝剤（０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を有するＰＢＳ）中に注入され得る。サイトカインは、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓなどの商業供給源を通して入手可能である。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純一対一ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して計算される。平衡状態解離定数（ＫＤ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。本明細書に記載される単離及び／または濃化変異体は、抗ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の主要種または抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体の優勢的に主要な種を含む組成物と比較して減少結合親和性を示す。
【０１４４】
変異体の活性を中和することは、ＩＬ−１７ＡまたはＦ誘発サイトカイン誘発、例えば、ＩＬ６またはＧ−ＣＳＦの阻害を評価することにより決定され得る。例えば、ヒト新生児包皮線維芽細胞（インビトロゲン）を、１日目に２×１０４細胞／１５０μｌの媒体／ウェルで９６ウェルプレートに播種する。媒体を、２日目に媒体（１５０μｌ）を含有するサイトカイン／抗体で置き換える。好適な量（例えば、５ｎｇ／ｍｌ）の組換えヒトＩＬ−１７Ａホモ二量体、ＩＬ−１７Ｆホモ二量体（例えば、５０ｎｇ／ｍｌ）、及びＩＬ−１７ＡＦヘテロ二量体（例えば、２５ｎｇ／ｍｌ）が、使用され得る。上澄部を、２４時間後に採取し、Ｇ−ＣＳＦ誘発を測定するためにＧ−ＣＳＦ  ＥＬＩＳＡを行った。データを、ＰＲＩＳＭ内にプロットし、同じソフトウェアを使用してＩＣ５０／９０値を計算する。１つ以上のグリコシル化変異体、酸性変異体、ＨＭＷＳ変異体、及びＲＲ架橋変異体は、抗ＩＬ１７Ａ／Ｆ抗体の主要種と比較して減少中和活性を示す。
【０１４５】
前述の開示は、本発明のある特定の特異的な実施形態を強調し、それと等価な全ての修正または代替が、添付の特許請求の範囲に記載される本発明の真意及び範囲内にあることを理解されたい。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ】
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【図１０】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１１Ｃ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ−１】
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【図１５Ａ−２】
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【図１５Ｂ−１】
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【図１５Ｂ−２】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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