(57)【要約】  本発明は、Ｍｐｓ−１キナーゼ阻害剤のプロドラッグ誘導体、および疾患の治療および／または予防のためのそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）の化合物、または該化合物のＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物。
【化１】
2017537116.tif 000073
［式中、
ＲＡは、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｒ６を表し；
Ｒ１は、メトキシ−および２，２，２−トリフルオロエトキシ−から選択される基を表し；
Ｒ２は、
【化２】
2017537116.tif 000074
から選択される基を表し、
「＊」は、Ｒ２が結合しているフェニル環への結合箇所を示し；
Ｒ３は、水素原子またはメチル−基を表し；
Ｒ４およびＲ５は互いから独立に、水素原子またはＣ１−Ｃ３−アルキル−基を表し；
Ｒ６は、水素原子またはＣ１−Ｃ６−アルキル−基を表す。］
【請求項２】
ＲＡが、
Ｒ６−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
Ｒ６−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
および
Ｒ６−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（Ｈ）（Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）２）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−
から選択される基を表す請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＲＡが、
【化３】
2017537116.tif 000075
から選択される基を表し、
「＊」が、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＲＡが、
【化４】
2017537116.tif 000076
から選択される基を表し、
「＊」が、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
前記化合物が、一般式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、（Ｉｅ）または（Ｉｆ）によって特徴付けられる請求項１から４のいずれか１項に記載の化合物。
【化５】
2017537116.tif 000077
2017537116.tif 000078
【請求項６】
［（｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝［７−（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル］カルバモイル）オキシ］メチル３−メチル−Ｌ−バリネート；
または該化合物のＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
疾患の治療または予防に使用するための、請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物または該化合物のＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、特にはそれの医薬として許容される塩、またはそれらの混合物。
【請求項８】
請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物または該化合物のＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、特にはそれの医薬として許容される塩、またはそれらの混合物、ならびに医薬として許容される希釈剤もしくは担体を含む医薬組成物。
【請求項９】
疾患の予防または治療のための、請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物または該化合物のＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、特にはそれの医薬として許容される塩、またはそれらの混合物の使用。
【請求項１０】
疾患の予防または治療のための医薬を製造するための、請求項１から６のいずれか１項に記載の化合物または該化合物のＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、特にはそれの医薬として許容される塩、またはそれらの混合物の使用。
【請求項１１】
前記疾患が、制御されない細胞成長、増殖および／または生存、不適当な細胞免疫応答、または不適当な細胞炎症応答の疾患、特には制御されない細胞成長、増殖および／または生存、不適当な細胞免疫応答、または不適当な細胞炎症反応にＭｐｓ−１が介在している疾患、さらに特に、制御されない細胞成長、増殖および／または生存、不適当な細胞免疫応答、または不適当な細胞炎症応答の疾患が血液腫瘍、固形腫瘍および／またはそれらの転移である疾患、例えば、血液系腫瘍、固形腫瘍および／またはこれらの転移、例えば、白血病および骨髄異形成症候群、悪性リンパ腫、頭頸部腫瘍（脳腫瘍および脳転移を含む）、胸部腫瘍（非小細胞および小細胞肺腫瘍を含む）、胃腸腫瘍、内分泌腫瘍、乳房および他の婦人科腫瘍、泌尿器腫瘍（腎臓、膀胱および前立腺腫瘍を含む）、皮膚腫瘍、および肉腫、および／またはこれらの転移である請求項７、９または１０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｍｐｓ−１キナーゼ阻害剤のプロドラッグ誘導体、ならびに疾患の治療および／または予防のためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｍｐｓ−１（単極紡錘体１）キナーゼ（チロシントレオニンキナーゼ、ＴＴＫとしても知られている）は、有糸分裂チェックポイント（紡錘体チェックポイント、紡錘体形成チェックポイントとしても知られている）の活性化において重要な役割を果たし、それによって有糸分裂中の適切な染色体分離を確保する二重特異性Ｓｅｒ／Ｔｈｒキナーゼである［Ａｂｒｉｅｕ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ，  ２００１，  １０６，  ８３−９３］。全ての分裂細胞が、確実に複製した染色体を二つの娘細胞に等しく分離しなければならない。有糸分裂に入ると、染色体はその動原体で紡錘体装置の微小管に結合する。有糸分裂チェックポイントは、未結合動原体が存在する限り活性であり、有糸分裂細胞が分裂後期に入り、それによって未結合染色体があるにもかかわらず細胞分裂を完了させることを阻止する監視機構である［Ｓｕｉｊｋｅｒｂｕｉｊｋ  ＳＪ  ａｎｄ  Ｋｏｐｓ  ＧＪ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，  ２００８，  １７８６，  ２４−３１；Ｍｕｓａｃｃｈｉｏ  Ａ  ａｎｄ  Ｓａｌｍｏｎ  ＥＤ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  ２００７，  ８，  ３７９−９３］。いったん全ての動原体が正しい両糸性（ａｍｐｈｉｔｅｌｉｃ）、すなわち、双極性様式で紡錘体と結合したら、チェックポイントが満たされ、細胞が分裂後期に入り、有糸分裂を進行する。有糸分裂チェックポイントは、ＭＡＤ（有糸分裂停止欠損、ＭＡＤ１−３）およびＢｕｂ（ベンゾイミダゾールにより抑制されない発芽、Ｂｕｂ１−３）ファミリーのメンバー、モータータンパク質ＣＥＮＰ−Ｅ、Ｍｐｓ−１キナーゼならびに他の構成要素を含むいくつかの必須タンパク質の複雑なネットワークからなり、これらの多くは増殖している細胞（例えば、癌細胞）および組織で過剰発現している［Ｙｕａｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２００６，  １２，  ４０５−１０］。有糸分裂チェックポイントシグナル伝達におけるＭｐｓ−１キナーゼ活性の必須の役割は、ｓｈＲＮＡサイレンシング、遺伝生化学ならびにＭｐｓ−１キナーゼの化学阻害剤によって示されている［Ｊｅｌｌｕｍａ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＬｏｓ  ＯＮＥ，  ２００８，  ３，  ｅ２４１５；Ｊｏｎｅｓ  ＭＨ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ２００５，  １５、１６０−６５；Ｄｏｒｅｒ  ＲＫ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ２００５，  １５，  １０７０−７６；Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，  ２００５，  ６，  ８６６−７２］。
【０００３】
低下した不完全な有糸分裂チェックポイント機能と異数性および腫瘍形成を結びつける十分な証拠が存在する［Ｗｅａｖｅｒ  ＢＡ  ａｎｄ  Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  ＤＷ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２００７，  ６７，  １０１０３−５；Ｋｉｎｇ  ＲＷ，  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，  ２００８，  １７８６，  ４−１４］。対照的に、有糸分裂チェックポイントの完全な阻害は、腫瘍細胞における重度の染色体不分離（ｍｉｓｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ）およびアポトーシス誘発をもたらすと認識されている［Ｋｏｐｓ  ＧＪ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，  ２００５，  ５，  ７７３−８５；Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｍ  ａｎｄ  Ｍｅｄｅｍａ  ＲＨ，  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ，  ２００６，  ５，  １５９−６３；Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｍ  ａｎｄ  Ｂａｓｔｉａｎｓ  Ｈ，  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｕｐｄａｔｅｓ，  ２００７，  １０，  １６２−８１］。
【０００４】
そのため、Ｍｐｓ−１キナーゼまたは有糸分裂チェックポイントの他の構成要素の薬理的阻害による有糸分裂チェックポイントの抑止は、固形腫瘍、例えば、癌腫および肉腫および白血病およびリンパ系悪性腫瘍または制御されない細胞増殖を伴う他の障害を含む増殖性障害の治療のための新規な手法に相当する。
【０００５】
Ｍｐｓ−１キナーゼの阻害効果を示す種々の化合物が先行技術で開示されており、ＷＯ２００９／０２４８２４Ａ１には、増殖性障害を治療するためのＭｐｓ−１の阻害剤として２−アニリノプリン−８−オンが開示されている。ＷＯ２０１０／１２４８２６Ａ１には、Ｍｐｓ−１キナーゼの阻害剤として置換イミダゾキノキサリン化合物が開示されている。ＷＯ２０１１／０２６５７９Ａ１には、Ｍｐｓ−１阻害剤として置換アミノキノキサリンが開示されている。ＷＯ２０１１／０６４３２８Ａ１、ＷＯ２０１１／０６３９０７Ａ１、ＷＯ２０１１／０６３９０８Ａ１およびＷＯ２０１２／１４３３２９Ａ１は、［１，２，４］−トリアゾロ−［１，５−ａ］−ピリジンおよびＭｐｓ−１キナーゼを阻害するためのその使用に関する。
【０００６】
［１，２，４］−トリアゾロ−［１，５−ａ］−ピリジンに関する上記特許出願は、化合物の半数阻害濃度（ＩＣ５０）によって表される、化合物の、Ｍｐｓ−１キナーゼを阻害する有効性に主に注目している。
【０００７】
さらに、当業者であれば分かるように、化合物の薬らしさを決定するさらに多くの因子が存在する。前臨床試験の目的は、ヒト臨床試験の前に例えば、安全性、毒性、薬物動態および代謝パラメータを評価することである。化合物の薬らしさを評価するための一つの重要な因子は代謝安定性である。化合物の代謝安定性は、例えば、化合物を例えば、ラット、イヌおよび／またはヒトの肝ミクロソームの懸濁物と共にインキュベートすることによって決定することができる（詳細については、実験の部を参照する。）。
【０００８】
癌を治療するための化合物の薬らしさを評価するための別の重要な因子は、例えば、ＨｅＬａ細胞増殖アッセイで決定することができる細胞増殖の阻害である（詳細については、実験の部を参照する。）。
【０００９】
医薬品の患者への送達成功も障害の治療において極めて重要である。既知の生理活性特性を有する多くの臨床薬の使用は、例えば、有効成分の静脈投与を困難にする薬物の極めて低い水溶性によって制限される。
【００１０】
静脈（ｉ．ｖ．）投薬は、医薬品を患者の静脈に直接与える方法を指す。静脈投薬法には、注射器を用いて急速な注射（プッシュ）によって医薬品を静脈内に与えること、静脈内セカンダリラインを用いて特定の時間にわたって間欠的に医薬品を与えること、または主静脈液に連続的に混合した医薬品を与えることなどがあり得る。
【００１１】
静脈投薬の主な目的は、医薬品に対する急速な全身反応を開始することである。これが医薬品を送達する最も速い方法の一つである。体が薬物を直ちに利用できる。静脈法を用いることによって、体に送達される薬物の実際の量を制御することがより容易になり、治療反応のための血中薬物レベルを維持することもより容易になる。
【００１２】
多くの薬物は、水溶性が低い結果として、しばしば共溶媒医薬媒体中で、またはプロドラッグとして製剤される。
【００１３】
プロドラッグは、作用部位に達する前または後に化学的または酵素的攻撃によって体内で親薬剤に変換される誘導体に化学的に変換された活性薬物である。活性薬物を不活性型に変換する工程は薬物潜伏化（ｄｒｕｇ  ｌａｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ）と呼ばれる。プロドラッグは、担体連結プロドラッグおよび生体前駆体（ｂｉｏｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）であることができる。担体連結プロドラッグは、活性分子と輸送部分の一時的結合から生じる。このようなプロドラッグは、親活性薬物と比べてあまり活性でないまたは不活性である。輸送部分は、その無毒性および効率的動態での有効成分の放出を確保する能力で選択される。他方、生体前駆体は有効成分を代謝産物として放出する代謝酵素に対する基質になることができる新規な分子を産生することによってそれ自体が有効成分の分子修飾から生じる。
【００１４】
プロドラッグは、薬物の薬物動態を変化させ、薬物の安定性および溶解度を改善し、毒性を低下させ、特異性を増加させ、および／または薬理効果の持続時間を増加させるよう調製される。薬物動態を変化させることにより、薬物の吸収、分布、生体内変換および／または排出を増加させることによって薬物の生物学的利用能が増加する。
【００１５】
プロドラッグの設計においては、以下の因子を考慮することが重要である：ａ）担体と薬物との間の結合が通常は共有結合である、ｂ）プロドラッグは不活性であるか、有効成分ほど活性でない、ｃ）プロドラッグ合成は高価であってはならない、ｄ）プロドラッグは薬物の可逆的または生体可逆的（ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ）誘導体でなければならない、およびｅ）担体部分は放出された時に非毒性および不活性でなければならない。
【００１６】
プロドラッグは通常、ａ）活性薬物のエステル、ヘミエステル、炭酸エステル、硝酸エステル、アミド、ヒドロキサム酸、カーバメート、イミン、マンニッヒ塩基およびエナミンの形成、ｂ）アゾ、グリコシド、ペプチドおよびエーテル官能基による薬物の官能化、ｃ）薬物のポリマー、塩、錯体、ホスホルアミド、アセタール、ヘミアセタールおよびケタール型の使用によって製造される（例えば、Ａｎｄｒｅｊｕｓ  Ｋｏｒｏｌｋｏｖａｓ’ｓ，  ″Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ″，  ｐｐ．９７−１１８参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】ＷＯ２００９／０２４８２４Ａ１
【特許文献２】ＷＯ２０１０／１２４８２６Ａ１
【特許文献３】ＷＯ２０１１／０２６５７９Ａ１
【特許文献４】ＷＯ２０１１／０６４３２８Ａ１
【特許文献５】ＷＯ２０１１／０６３９０７Ａ１
【特許文献６】ＷＯ２０１１／０６３９０８Ａ１
【特許文献７】ＷＯ２０１２／１４３３２９Ａ１
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Ａｂｒｉｅｕ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ，  ２００１，  １０６，  ８３−９３
【非特許文献２】Ｓｕｉｊｋｅｒｂｕｉｊｋ  ＳＪ  ａｎｄ  Ｋｏｐｓ  ＧＪ，  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，  ２００８，  １７８６，  ２４−３１
【非特許文献３】Ｍｕｓａｃｃｈｉｏ  Ａ  ａｎｄ  Ｓａｌｍｏｎ  ＥＤ，  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，  ２００７，  ８，  ３７９−９３
【非特許文献４】Ｙｕａｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２００６，  １２，  ４０５−１０
【非特許文献５】Ｊｅｌｌｕｍａ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＬｏｓ  ＯＮＥ，  ２００８，  ３，  ｅ２４１５
【非特許文献６】Ｊｏｎｅｓ  ＭＨ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ２００５，  １５、１６０−６５
【非特許文献７】Ｄｏｒｅｒ  ＲＫ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  ２００５，  １５，  １０７０−７６
【非特許文献８】Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ＥＭＢＯ  Ｒｅｐｏｒｔｓ，  ２００５，  ６，  ８６６−７２
【非特許文献９】Ｗｅａｖｅｒ  ＢＡ  ａｎｄ  Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  ＤＷ，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２００７，  ６７，  １０１０３−５
【非特許文献１０】Ｋｉｎｇ  ＲＷ，  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ，  ２００８，  １７８６，  ４−１４
【非特許文献１１】Ｋｏｐｓ  ＧＪ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，  ２００５，  ５，  ７７３−８５
【非特許文献１２】Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｍ  ａｎｄ  Ｍｅｄｅｍａ  ＲＨ，  Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅ，  ２００６，  ５，  １５９−６３
【非特許文献１３】Ｓｃｈｍｉｄｔ  Ｍ  ａｎｄ  Ｂａｓｔｉａｎｓ  Ｈ，  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  Ｕｐｄａｔｅｓ，  ２００７，  １０，  １６２−８１
【非特許文献１４】Ａｎｄｒｅｊｕｓ  Ｋｏｒｏｌｋｏｖａｓ’ｓ，  ″Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ″，  ｐｐ．９７−１１８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
従って本発明の目的は、高い薬らしさを特徴とし、静脈投与することができるＭｐｓ−１キナーゼ阻害化合物またはそのプロドラッグ誘導体を同定することであった。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明は、下記一般式（Ｉ）の化合物、またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関するものである。
【化１】
2017537116.tif 000002
【００２１】
式中、
ＲＡは、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｒ６を表し；
Ｒ１は、メトキシ−および２，２，２−トリフルオロエトキシ−から選択される基を表し；
Ｒ２は、
【化２】
2017537116.tif 000003
【００２２】
から選択される基を表し、
「＊」は、Ｒ２が結合しているフェニル環への結合箇所を示し；
Ｒ３は、水素原子またはメチル−基を表し；
Ｒ４およびＲ５は互いから独立に、水素原子またはＣ１−Ｃ３−アルキル−基を表し；
Ｒ６は、水素原子またはＣ１−Ｃ６−アルキル−基を表す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本文で言及される用語は、以下の意味を有する。
【００２４】
「ハロゲン原子」または「ハロ−」という用語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味するものと理解されるべきである。
【００２５】
「Ｃ１−Ｃ６−アルキル」という用語は、１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有する直鎖または分岐の飽和一価炭化水素基、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソ−プロピル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソ−ペンチル、２−メチルブチル、１−メチルブチル、１−エチルプロピル、１，２−ジメチルプロピル、ネオ−ペンチル、１，１−ジメチルプロピル、４−メチルペンチル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、２−エチルブチル、１−エチルブチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチルもしくは１，２−ジメチルブチル基、またはこれらの異性体を意味するものと理解されるべきである。特に、前記基は、１、２、３または４個の炭素原子を有する（「Ｃ１−Ｃ４−アルキル」）、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソ−プロピル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル基、さらに特に１、２または３個の炭素原子を有する（「Ｃ１−Ｃ３−アルキル」）、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル−またはイソ−プロピル基である。
【００２６】
本明細書で使用される場合、「脱離基」という用語は、結合電子を持って安定な種として化学反応で置換される原子または原子の群を指す。好ましくは、脱離基は、ハロ、特にクロロ、ブロモまたはヨード、メタンスルホニルオキシ−、ｐ−トルエンスルホニルオキシ−、トリフルオロメタンスルホニルオキシ−、ノナフルオロブタンスルホニルオキシ−、（４−ブロモ−ベンゼン）スルホニルオキシ−、（４−ニトロ−ベンゼン）スルホニルオキシ−、（２−ニトロ−ベンゼン）−スルホニルオキシ−、（４−イソプロピル−ベンゼン）スルホニルオキシ−、（２，４，６−トリ−イソプロピル−ベンゼン）−スルホニルオキシ−、（２，４，６−トリメチル−ベンゼン）スルホニルオキシ−、（４−ｔｅｒｔブチル−ベンゼン）スルホニルオキシ−、ベンゼンスルホニルオキシ−および（４−メトキシ−ベンゼン）スルホニルオキシ−を含む基から選択される。
【００２７】
本明細書で使用される場合、「ＰＧ１」という用語は、ヒドロキシ基のための保護基、例えば、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ  １９９９に記載されているＴＭＳ基またはＴＢＤＰＳ基（ＴＭＳ＝トリメチルシリル）、ＴＢＤＰＳ＝ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル）を指す。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「ＰＧ２」という用語は、アミノ基のための保護基、例えば、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第３版、Ｗｉｌｅｙ  １９９９に記載されているＢｏｃ基（Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）を指す。
【００２９】
本発明は、下記一般式（Ｉ）の化合物またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関するものである。
【化３】
2017537116.tif 000004
【００３０】
式中、
ＲＡは、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｒ６を表し；
Ｒ１は、メトキシ−および２，２，２−トリフルオロエトキシ−から選択される基を表し；
Ｒ２は、
【化４】
2017537116.tif 000005
【００３１】
から選択される基を表し、
「＊」は、Ｒ２が結合しているフェニル環への結合箇所を示し；
Ｒ３は、水素原子またはメチル−基を表し；
Ｒ４およびＲ５は互いから独立に、水素原子またはＣ１−Ｃ３−アルキル−基を表し、
Ｒ６は、水素原子またはＣ１−Ｃ６−アルキル−基を表す。
【００３２】
ＲＡは、Ｒ６−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−を表す。
【００３３】
好ましい実施形態において、ＲＡは、
Ｒ６−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
Ｒ６−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
および
Ｒ６−Ｃ（Ｒ３）（ＮＨ２）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ（Ｈ）（Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）２）−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−
から選択される基を表す。
【００３４】
別の好ましい実施形態において、ＲＡは、
【化５】
2017537116.tif 000006
2017537116.tif 000007
【００３５】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００３６】
別の好ましい実施形態において、ＲＡは、
【化６】
2017537116.tif 000008
2017537116.tif 000009
【００３７】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００３８】
別の好ましい実施形態において、ＲＡは、
【化７】
2017537116.tif 000010
2017537116.tif 000011
【００３９】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００４０】
Ｒ１は、メトキシ−および２，２，２−トリフルオロエトキシ−から選択される基を表す。
【００４１】
好ましい実施形態において、Ｒ１は２，２，２−トリフルオロエトキシ−基を表す。
【００４２】
別の好ましい実施形態において、Ｒ１はメトキシ−基を表す。
【００４３】
Ｒ２は、
【化８】
2017537116.tif 000012
【００４４】
から選択される基を表し、
「＊」は、Ｒ２が結合しているフェニル環への結合箇所を示す。
【００４５】
好ましい実施形態において、Ｒ２は、
【化９】
2017537116.tif 000013
【００４６】
から選択される基を表し、
「＊」は、Ｒ２が結合しているフェニル環への結合箇所を示す。
【００４７】
別の好ましい実施形態において、Ｒ２は
【化１０】
2017537116.tif 000014
【００４８】
を表し、
「＊」は、Ｒ２が結合しているフェニル環への結合箇所を示す。
【００４９】
別の好ましい実施形態において、Ｒ２は
【化１１】
2017537116.tif 000015
【００５０】
を表し、
「＊」は、Ｒ２が結合しているフェニル環への結合箇所を示す。
【００５１】
別の好ましい実施形態において、Ｒ２は−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３基を表す。
【００５２】
Ｒ３は水素原子またはメチル−基を表す。
【００５３】
好ましい実施形態において、Ｒ３は水素原子を表す。
【００５４】
別の好ましい実施形態において、Ｒ３はメチル−基を表す。
【００５５】
Ｒ４およびＲ５は互いから独立に、水素原子またはＣ１−Ｃ３−アルキル−基を表す。
【００５６】
好ましい実施形態において、Ｒ４およびＲ５は互いから独立に、水素原子またはメチル−またはイソ−プロピル−基を表す。
【００５７】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４は水素原子またはＣ１−Ｃ３−アルキル−基を表し、Ｒ５は水素原子を表す。
【００５８】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４は水素原子またはメチル−またはイソ−プロピル−基を表し、Ｒ５は水素原子を表す。
【００５９】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ水素原子を表す。
【００６０】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４はメチル−基を表し、Ｒ５は水素原子を表す。
【００６１】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４はイソ−プロピル−基を表し、Ｒ５は水素原子を表す。
【００６２】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４は水素原子またはＣ１−Ｃ３−アルキル−基を表す。
【００６３】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４は水素原子またはメチル−基を表す。
【００６４】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４はを水素原子表す。
【００６５】
別の好ましい実施形態において、Ｒ４はメチル−基を表す。
【００６６】
別の好ましい実施形態において、Ｒ５は水素原子を表す。
【００６７】
Ｒ６は水素原子またはＣ１−Ｃ６−アルキル−基を表す。
【００６８】
好ましい実施形態において、Ｒ６はＣ１−Ｃ６−アルキル−基を表す。
【００６９】
別の好ましい実施形態において、Ｒ６は水素原子またはＣ１−Ｃ４−アルキル−基を表す。
【００７０】
別の好ましい実施形態において、Ｒ６はＣ１−Ｃ４−アルキル−基を表す。
【００７１】
別の好ましい実施形態において、Ｒ６はイソ−プロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、およびＨ３Ｃ−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−から選択される基を表す。
【００７２】
上記態様のさらなる実施形態では、本発明は、Ｎ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物の形態である上記実施形態のいずれかによる式（Ｉ）の化合物に関する。
【００７３】
理解すべき点として、本発明は、上記の好ましい実施形態の任意の組み合わせに関するものでもある。
【００７４】
組み合わせのいくつかの例を以下で示す。しかしながら、本発明はこれらの組み合わせに限定されない。
【００７５】
好ましい実施形態において、本発明は、
ＲＡが、
【化１２】
2017537116.tif 000016
2017537116.tif 000017
【００７６】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示し；
Ｒ１が、メトキシ−および２，２，２−トリフルオロエトキシ−から選択される基を表し；
Ｒ２が、
【化１３】
2017537116.tif 000018
【００７７】
から選択される基を表し、
「＊」は、Ｒ２が結合しているフェニル環への結合箇所を示す、上記の式（Ｉ）の化合物、またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関する。
【００７８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、（Ｉｅ）または（Ｉｆ）の化合物またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関する。
【化１４】
2017537116.tif 000019
2017537116.tif 000020
【００７９】
式中、
ＲＡは、
【化１５】
2017537116.tif 000021
【００８０】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００８１】
別の好ましい実施形態において、本発明は、式（Ｉａ）の化合物またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関する。
【化１６】
2017537116.tif 000022
【００８２】
式中、
ＲＡは、
【化１７】
2017537116.tif 000023
2017537116.tif 000024
【００８３】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００８４】
別の好ましい実施形態において、本発明は、式（Ｉｂ）の化合物またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関する。
【化１８】
2017537116.tif 000025
【００８５】
式中、
ＲＡは、
【化１９】
2017537116.tif 000026
2017537116.tif 000027
【００８６】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００８７】
別の好ましい実施形態において、本発明は、式（Ｉｃ）の化合物またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関する。
【化２０】
2017537116.tif 000028
【００８８】
式中、
ＲＡは、
【化２１】
2017537116.tif 000029
2017537116.tif 000030
【００８９】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００９０】
別の好ましい実施形態において、本発明は、式（Ｉｄ）の化合物またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関する。
【化２２】
2017537116.tif 000031
【００９１】
式中、
ＲＡは、
【化２３】
2017537116.tif 000032
2017537116.tif 000033
【００９２】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００９３】
別の好ましい実施形態において、本発明は、式（Ｉｅ）の化合物またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関する。
【化２４】
2017537116.tif 000034
【００９４】
式中、
ＲＡは、
【化２５】
2017537116.tif 000035
【００９５】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００９６】
別の好ましい実施形態において、本発明は、式（Ｉｆ）の化合物またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはそれらの混合物に関する。
【化２６】
2017537116.tif 000036
【００９７】
式中、
ＲＡは、
【化２７】
2017537116.tif 000037
2017537116.tif 000038
【００９８】
から選択される基を表し、
「＊」は、ＲＡが結合している窒素原子への結合箇所を示す。
【００９９】
理解すべき点として、本発明は、上記の一般式（Ｉ）の化合物の本発明の任意の実施形態または態様内の任意の部分的組み合わせに関するものである。
【０１００】
さらに、本発明は、下記の本文の実施例セクションで開示される一般式（Ｉ）の化合物を網羅する。
【０１０１】
本発明はまた、本発明の化合物の全ての適当な同位体変種も含む。本発明の化合物の同位体変種は、少なくとも１個の原子が同じ原子番号を有するが、自然状態で通常または支配的に見られる原子質量とは異なる原子質量を有する原子によって置き換えられているものとして定義される。本発明の化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ（重水素）、３Ｈ（トリチウム）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３２Ｐ、３３Ｐ、３３Ｓ、３４Ｓ、３５Ｓ、３６Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２９Ｉおよび１３１Ｉが挙げられる。本発明の化合物の特定の同位体変種、例えば、３Ｈまたは１４Ｃなどの１種または複数の放射性同位体が組み込まれたものは、薬剤および／または基質組織分布研究に有用である。トリチウム標識、および炭素−１４、すなわち１４Ｃ同位体は、その製造の容易さおよび検出性のために特に好まれる。さらに、重水素などの同位体による置換は、大きな代謝安定性から生じる特定の治療上の利点、例えば、イン・ビボ半減期の増加または投与必要量の減少を与え得るので、状況によっては好まれ得る。本発明の化合物の同位体変種は一般的に、例示的方法などによって当業者により知られている従来手順によってまたは適当な試薬の適当な同位体変種を使用して以下の実施例に記載される製造によって製造することができる。
【０１０２】
さらに、本発明の化合物は、本発明の化合物の少なくとも１個の窒素が酸化されているという点で定義されるＮ−オキサイドとして存在することができる。本発明は、全てのこのような可能なＮ−オキサイドを含む。
【０１０３】
本発明はまた、本明細書に開示される化合物の有用な形態、例えば、水和物、溶媒和物、塩、特に医薬として許容される塩、および共沈物に関する。
【０１０４】
本発明の化合物は水和物または溶媒和物として存在することができ、本発明の化合物は例えば、化合物の結晶格子の構造要素として極性溶媒、特に水、メタノールまたはエタノールを含む。極性溶媒、特に水の量は、化学量論比または非化学量論比で存在し得る。化学量論的溶媒和物の場合、例えば、水和物、半−、（セミ−）、モノ−、セスキ−、ジ−、トリ−、テトラ−、ペンタ等の溶媒和物、または水和物がそれぞれ可能である。本発明は、全てのこのような水和物または溶媒和物を含む。
【０１０５】
さらに、本発明の化合物は、遊離型で、例えば、遊離塩基もしくは遊離酸もしくは両性イオンとして存在することができる、または塩型で存在することができる。前記塩は任意の塩、有機または無機付加塩のいずれか、特に薬学で一般に使用される任意の医薬として許容される有機または無機付加塩であることができる。
【０１０６】
「医薬として許容される塩」という用語は、本発明の化合物の比較的非毒性の無機または有機酸付加塩を指す。例えば、Ｓ．  Ｍ．  Ｂｅｒｇｅ，  ｅｔ  ａｌ．  ″Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ″，  Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  １９７７，  ６６，  １−１９を参照する。
【０１０７】
本発明の化合物の適当な医薬として許容される塩は、例えば、十分に塩基性の、鎖中または環内に窒素原子を有する本発明の化合物の酸付加塩、例えば、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、重硫酸、リン酸または硝酸による酸付加塩、または有機酸、例えば、ギ酸、酢酸、アセト酢酸、ピルビン酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、ウンデカン酸、ラウリル酸、安息香酸、サリチル酸、２−（４−ヒドロキシベンゾイル）−安息香酸、ショウノウ酸、ケイヒ酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、パモ酸、ペクチニン酸、過硫酸、３−フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、２−ヒドロキシエタンスルホネート、イタコン酸、スルファミン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ドデシル硫酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ナフタリンジスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、アジピン酸、アルギン酸、マレイン酸、フマル酸、Ｄ−グルコン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、スルホサリチル酸、ヘミ硫酸またはチオシアン酸による酸付加塩であり得る。
【０１０８】
さらに、十分に酸性の本発明の化合物の別の適当な医薬として許容される塩は、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウムもしくはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウムもしくはマグネシウム塩、アンモニウム塩または生理学的に許容されるカチオンを与える有機塩基による塩、例えば、Ｎ−メチル−グルカミン、ジメチル−グルカミン、エチル−グルカミン、リジン、ジシクロヘキシルアミン、１，６−ヘキサジアミン、エタノールアミン、グルコサミン、サルコシン、セリノール、トリス−ヒドロキシ−メチル−アミノメタン、アミノプロパンジオール、ｓｏｖａｋ塩基、１−アミノ−２，３，４−ブタントリオールによる塩である。さらに、本発明による化合物は、例えば、低級ハロゲン化アルキル（塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルならびにブチルなど）；硫酸ジアルキル（硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミルなど）；長鎖ハロゲン化物（塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルならびにステアリルなど）；ハロゲン化アラルキル（臭化ベンジルおよびフェネチルなど）などの剤による塩基性窒素含有基の四級化によって得ることができる四級アンモニウムイオンによる塩を形成し得る。適当な四級アンモニウムイオンの例には、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、テトラ（ｎ−プロピル）アンモニウム、テトラ（ｎ−ブチル）アンモニウムまたはＮ−ベンジル−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムがある。
【０１０９】
当業者であれば、特許請求の化合物の酸付加塩が、いくつかの既知の方法のいずれかを介して化合物と適当な無機酸または有機酸の反応によって製造され得ることをさらに認識するだろう。あるいは、本発明の酸性化合物のアルカリおよびアルカリ土類金属塩は、種々の既知の方法を介して本発明の化合物を適当な塩基と反応させることによって製造される。
【０１１０】
本発明は、単一の塩として、または任意の比の前記塩の任意の混合物として本発明の化合物の全ての可能な塩を含む。
【０１１１】
さらに、本発明は、本発明の化合物の全ての可能な結晶型または多形を、単一多形としてまたは任意の比の複数の多形の混合物として含む。
【０１１２】
別の態様によると、本発明は、本明細書の実験セクションで記載されるステップを含む、本発明の化合物を製造する方法を網羅する。
【０１１３】
本発明はまた、本発明の１以上の化合物を含む医薬組成物に関する。これらの組成物を利用して、それを必要とする患者に投与することによって所望の薬理的効果を達成することができる。本発明の目的のために、患者は、特定の状態または疾患についての治療を必要とする、ヒトを含む哺乳動物である。そのため、本発明は、医薬として許容される担体と、医薬として有効な量の本発明の化合物またはその塩とで構成される医薬組成物を含む。医薬として許容される担体は、好ましくは担体に起因するいかなる副作用も有効成分の有益な効果を無効にしないように、有効成分の有効な活性と調和した濃度で、患者に比較的非毒性および無害である担体である。化合物の医薬として有効な量は、好ましくは、治療されている特定の状態に対して結果をもたらすまたは影響を及ぼす量である。
【０１１４】
本発明の化合物はまた、非経口的に、すなわち、皮下に、静脈に、眼内に、関節滑液嚢内に、筋肉にまたは腹腔内に、医薬として許容される界面活性剤（石鹸もしくは洗剤など）、懸濁剤（ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースもしくはカルボキシメチルセルロースなど）、または乳化剤および他の医薬補助剤を用いてまたは用いないで、好ましくは滅菌液体または液体の混合物、例えば、水、生理食塩水、ブドウ糖液および関連する糖液、アルコール（エタノール、イソプロパノールもしくはヘキサデシルアルコールなど）、グリコール（プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコールなど）、グリセロールケタノール（２，２−ジメチル−１，１−ジオキソラン−４−メタノールなど）、エーテル（ポリ（エチレングリコール）４００など）、オイル、脂肪酸、脂肪酸エステルまたは脂肪酸グリセリド、またはアセチル化脂肪酸グリセリドであり得る医薬担体を含む生理的に許容される希釈剤中の注射可能な投与量の化合物として投与することもできる。
【０１１５】
本発明の非経口組成物は、代表的には溶液中に約０．５重量％から約２５重量％の有効成分を含む。有利には保存剤および緩衝剤を使用してもよい。注射部位での刺激を最小化するまたは排除するために、このような組成物は、好ましくは約１２から約１７の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有するノニオン系界面活性剤を含んでもよい。このような製剤中の界面活性剤の量は、好ましくは約５重量％から約１５重量％に及ぶ。界面活性剤は上記ＨＬＢを有する単一成分であってもよいし、または所望のＨＬＢを有する２種以上の成分の混合物であってもよい。
【０１１６】
非経口製剤に使用される界面活性剤の例には、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、例えば、モノオレイン酸ソルビタン、およびプロピレンオキサイドとプロピレングリコールの縮合により形成されるエチレンオキサイドと疎水性基剤の高分子量付加物がある。
【０１１７】
医薬組成物は、滅菌注射水系懸濁剤の形態であってもよい。このような懸濁剤は、適当な分散または湿潤剤および懸濁剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントガムおよびアラビアガム；天然ホスファチド、例えば、レシチン、アルキレンオキサイドと脂肪酸の縮合物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、エチレンオキサイドと長鎖脂肪族アルコールの縮合物、例えば、ヘプタデカ−エチレンオキシセタノール、エチレンオキサイドと脂肪酸およびヘキシトール由来の部分エステルの縮合物、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール、またはエチレンオキサイドと脂肪酸およびヘキシトール無水物由来の部分エステルの縮合物、例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンである得る分散または湿展剤を用いて既知の方法により製剤することができる。
【０１１８】
滅菌注射製剤はまた、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の滅菌注射溶液または懸濁液であってもよい。使用され得る希釈剤および溶媒は、例えば、水、リンゲル液、等張食塩水および等張グルコース溶液である。
【０１１９】
本発明による医薬組成物を以下の通り示すことができる：
滅菌静注溶液：本発明の所望の化合物の５ｍｇ／ｍＬ溶液を滅菌注射用水を用いて製造することができ、必要に応じてｐＨを調整する。この溶液を投与するために滅菌５％ブドウ糖を用いて１から２ｍｇ／ｍＬに希釈し、約６０分間にわたって静注輸液として投与する。
【０１２０】
上記のように、化合物ＡがＭｐｓ−１を有効に阻害することが分かり、そのため、制御されない細胞成長、増殖および／または生存、不適当な細胞免疫応答、あるいは不適当な細胞炎症反応、あるいは制御されない細胞成長、増殖および／または生存、不適当な細胞免疫応答、あるいは不適当な細胞炎症反応を伴う疾患（特に、制御されない細胞成長、増殖および／または生存、不適当な細胞免疫応答、あるいは不適当な細胞炎症反応は、Ｍｐｓ−１によって媒介されている）、例えば、血液系腫瘍、固形腫瘍および／またはこれらの転移、例えば、白血病および骨髄異形成症候群、悪性リンパ腫、頭頸部腫瘍（脳腫瘍および脳転移を含む）、胸部腫瘍（非小細胞および小細胞肺腫瘍を含む）、胃腸腫瘍、内分泌腫瘍、乳房および他の婦人科腫瘍、泌尿器腫瘍（腎臓、膀胱および前立腺腫瘍を含む）、皮膚腫瘍、および肉腫、ならびに／あるいはこれらの転移の疾患の治療または予防のために使用され得る。
【０１２１】
そのため、別の態様によると、本発明は、上記の疾患の治療または予防に使用するための、本明細書に記載および定義される一般式（Ｉ）の化合物、またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、特にその医薬として許容される塩、またはこれらの混合物を網羅する。
【０１２２】
そのため、本発明の別の特定の態様は、疾患を予防または治療するための、上記の一般式（Ｉ）の化合物、またはそれのＮ−オキサイド、水和物、溶媒和物もしくは塩、特にその医薬として許容される塩、またはこれらの混合物の使用である。
【０１２３】
そのため、本発明の別の特定の態様は、疾患を治療または予防するための医薬組成物を製造するための、上記一般式（Ｉ）の化合物の使用である。
【０１２４】
本発明の文脈、特に本明細書で使用される「不適当な細胞免疫応答または不適当な細胞炎症反応」の文脈内の「不適当な」という用語は、好ましくは正常より小さいまたは大きい、また前記疾患の病理に関連する、それの原因である、またはそれをもたらす応答を意味するものと理解されるべきである。
【０１２５】
本発明は、哺乳動物の過剰増殖障害を治療するために、本発明の化合物およびその組成物を使用する方法に関する。化合物を利用して細胞増殖および／または細胞分裂を阻害する、遮断する、低減する、減少させる等、ならびに／あるいはアポトーシスをもたらすことができる。この方法は、障害を治療するのに有効な量の本発明の化合物、またはその医薬として許容される塩、異性体、多形、代謝産物、水和物、溶媒和物もしくはエステル等を、ヒトを含む、それを必要とする哺乳動物に投与するステップを含む。過剰増殖障害には、それだけに限らないが、例えば、乾癬、ケロイドおよび皮膚に影響を及ぼす他の過形成、前立腺肥大症（ＢＰＨ）、固形腫瘍（乳房、気道、脳、生殖器、消化管、尿路、目、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、副甲状腺の癌およびこれらの遠隔転移など）が含まれる。これらの障害にはリンパ腫、肉腫および白血病も含まれる。
【０１２６】
乳癌の例には、浸潤性乳管癌、浸潤性小葉癌、非浸潤性乳管癌および非浸潤性小葉癌などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１２７】
気道の癌の例には、小細胞および非小細胞肺癌、ならびに気管支腺腫および胸膜肺芽腫などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１２８】
脳癌の例には、脳幹および視床下部（ｈｙｐｏｐｈｔａｌｍｉｃ）膠腫、小脳および大脳星状細胞腫、髄芽腫、上衣腫、ならびに神経外胚葉および松果体腫瘍などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１２９】
男性生殖器の腫瘍には、前立腺および精巣癌などがあるが、これらに限定されるものではない。女性生殖器の腫瘍には、子宮内膜、子宮頸部、卵巣、膣および外陰癌、ならびに子宮の肉腫などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３０】
消化管の腫瘍には、肛門、結腸、結腸直腸、食道、胆嚢、胃、膵臓、直腸、小腸および唾液腺癌などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３１】
尿路の腫瘍には、膀胱、陰茎、腎臓、腎盂、尿管、尿道およびヒト乳頭状腎臓癌などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３２】
目の癌には、眼内黒色腫および網膜芽細胞腫などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３３】
肝癌の例には、肝細胞癌（線維層板型の変形を伴うまたは伴わない肝臓細胞癌）、胆管癌（肝内胆管癌）および混合肝細胞性胆管癌などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３４】
皮膚癌には、扁平上皮癌、カポジ肉腫、悪性黒色腫、メルケル細胞皮膚癌および非黒色腫皮膚癌などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３５】
頭頸部癌には、喉頭、下咽頭、鼻咽頭、中咽頭癌、および口腔癌および扁平細胞などがあるが、これらに限定されるものではない。リンパ腫には、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ホジキン病および中枢神経系のリンパ腫などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３６】
肉腫には、軟組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫および横紋筋肉種などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３７】
白血病には、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病および有毛細胞白血病などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１３８】
これらの障害はヒトにおいてよく特徴付けられているが、他の哺乳動物でも類似の病因で存在し、本発明の医薬組成物を投与することによって治療することができる。
【０１３９】
本文書の全体で述べられている「治療すること」または「治療」という用語は、慣習的に使用され、例えば、癌などの疾患または障害の状態等と戦う、これを緩和する、低減する、軽減する、改善する目的での対象の管理またはケアである。
【０１４０】
本発明はまた、脳卒中、心不全、肝腫大、心拡大、糖尿病、アルツハイマー病、嚢胞性線維症、異種移植片拒絶症状、敗血症ショックまたは喘息など（これらに限定されるものではない）の異常なマイトジェン細胞外キナーゼ活性に関連する障害を治療する方法も提供する。
【０１４１】
有効量の本発明の化合物を使用して、上記背景セクションで言及された疾患（例えば、癌）を含むこのような障害を治療することができる。それにもかかわらず、このような癌および他の疾患は、作用機序および／またはキナーゼと障害との間の関係とは無関係に、本発明の化合物により治療することができる。
【０１４２】
「異常なキナーゼ活性」または「異常なセリントレオニンキナーゼ活性」という句は、キナーゼをコードする遺伝子または遺伝子がコードするポリペプチドの任意の異常な発現または活性を含む。このような異常な活性の例としては、遺伝子またはポリペプチドの過剰発現；遺伝子増幅；恒常的活性型または機能亢進性キナーゼ活性をもたらす突然変異；遺伝子突然変異、欠失、置換、付加などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１４３】
本発明はまた、有効量の、その塩、多形、代謝産物、水和物、溶媒和物、プロドラッグ（例えば、エステル）およびそのジアステレオマー型を含む本発明の化合物を投与する段階を含む、特にマイトジェン細胞外キナーゼのキナーゼ活性を阻害する方法も提供する。細胞（例えば、イン・ビトロ）、または哺乳動物対象、特に治療を必要とするヒト患者の細胞においてキナーゼ活性を阻害することができる。
【０１４４】
式（Ｉ）のプロドラッグ化合物の一般的合成
以下の段落は、下記の図式に示した式（Ｉ）の化合物を製造するのに好適な合成手法を説明するものである。
【０１４５】
下記の経路に加えて、有機合成の技術分野の当業者の一般的知識に従って、他の経路を使用して標的化合物を合成してもよい。そのため、以下の図式で例示される変換の順序は限定的であることを意図しておらず、種々の図式からの適当な合成ステップを組み合わせて追加の合成順序を形成することができる。さらに、例示の変形の前および／または後で、示される置換基のいずれかの相互変換を行うことができる。これらの修飾は、例えば、官能基の還元もしくは酸化、ハロゲン化、金属化、金属触媒カップリング反応、置換または当業者に知られている他の反応などであり得る。これらの変換には、置換基のさらなる相互変換を可能にする官能基を導入するものが含まれる。特に、以下の合成経路は、保護基の導入および切断を包含する。適当な保護基ならびにその導入および切断は当業者に周知であり（例えば、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．  Ｇ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ,  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ,  ４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ,  Ｗｉｌｅｙ  ２００６参照）、より具体的には保護基にはＰＧ１（上に定義されるヒドロキシのための保護基）およびＰＧ２（上に定義されるアミノのための保護基）などの基が含まれる。
【０１４６】
具体的な例を後の段落で記載する。さらに、当業者に周知であるように、２以上の連続段階を、前記段階間で後処理を行うことなく、例えば、「ワンポット」反応で行ってもよい。
【０１４７】
図式１は、式（Ｖ）（式中、Ｒ１およびＲ２は一般式（Ｉ）の化合物について定義される通りである）の中間体からの一般式（Ｉ）の化合物の合成を概説している。中間体（Ｖ）の製造は、実験節に記載されるように行うことができる。中間体（Ｖ）を、エーテル、例えば、テトラヒドロフランなどの適当な溶媒中で水素化ナトリウムなどの適当な塩基によって脱プロトン化し、その後、式（ＶＩ）（式中、Ｒ４およびＲ５は一般式（Ｉ）の化合物について定義される通りであり、ＬＧは上に定義される脱離基、好ましくはクロロを表す）のクロロホルメートと反応させるとカーバメート（ＶＩＩ）が得られる。式（ＶＩ）のクロロホルメートは当業者に周知であり、いくつかの場合、市販されている。前記カーバメート（ＶＩＩ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの適当な溶媒中、式（ＶＩＩＩ）（式中、ＰＧ２は上記で定義のアミノ基のための保護基、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）またはｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）を表し、Ｍ＋はアルカリ陽イオンまたはアンモニウム塩、好ましくはセシウムなどの一価陽イオンを表す。）のカルボキシレート塩と反応させて式（ＩＸ）の中間体を得る。この置換を、触媒量のヨウ化ナトリウムまたはヨウ化カリウムなどのヨウ化物塩の存在下で行って、それによって脱離基ＬＧを原位置でヨウ化物に変換することもできる。あるいは、脱離基ＬＧを置換反応の前にヨウ化物に変換することができる。次いで、中間体（ＩＸ）を、ボロン酸誘導体（Ｘ）（式中、ＲＥは水素または互いに独立に、Ｃ１−Ｃ６−アルキル−を表す、あるいは一緒になってＣ２−Ｃ６−アルキレン−基、例えば−Ｃ（ＣＨ３）２−Ｃ（ＣＨ３）２−を形成する）を伴うスズキカップリングに供する。スズキカップリングは当業者に周知であり、好ましくは、カップリングは、配位子／触媒としてジシクロヘキシル（２′,６′−ジメトキシビフェニル−２−イル）ホスフィンおよび酢酸パラジウム、またはＰｄ２ｄｂａ３を用い、塩基としてリン酸カリウム一水和物またはリン酸カリウムを用い、そして溶媒としてトルエンもしくはＮ−メチルピロリジンまたはトルエンとＮ−メチルピロリジンの混合物用いて行う。その後、カップリング生成物（ＸＩ）を（必要に応じて）例えば、塩酸で処理することによって脱保護してＢｏｃ基を除去して、一般式（Ｉ）の化合物を得る。一般式（Ｉ）の化合物は、代表的には塩、好ましくはＨＣｌ塩またはＴＦＡ塩として単離される。
【化２８】
2017537116.tif 000039
【０１４８】
図式１：中間体（Ｖ）からの式（Ｉ）のプロドラッグ化合物の合成
実験の部
以下の表は、この段落および実施例セクションで使用される略語を列挙するものである。ＮＭＲピーク形態はスペクトラムで見られる通りに記述しており、可能なより高次の効果は考慮していない。
【表１】
2017537116.tif 000040
2017537116.tif 000041
2017537116.tif 000042
2017537116.tif 000043
【０１４９】
本発明の方法により製造された化合物および中間体は精製を必要とし得る。有機化合物の精製は当業者に周知であり、同化合物を精製するいくつかの方法が存在し得る。場合により、精製は必要でない場合もある。場合により、結晶化によって化合物を精製することができる。場合により、適当な溶媒を用いて不純物を攪拌することができる。場合により、例えば、Ｓｅｐａｒｔｉｓ製の予備充填シリカゲルカートリッジ、例えば、Ｉｓｏｌｕｔｅ（登録商標）Ｆｌａｓｈシリカゲル（シリカゲルクロマトグラフィー）またはＩｓｏｌｕｔｅ（登録商標）Ｆｌａｓｈ  ＮＨ２シリカゲル（アミノ相−シリカゲルクロマトグラフィー）を適当なクロマトグラフィーシステム、例えば、Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒ  ＩＩ（Ｓｅｐａｒｔｉｓ）またはＩｓｏｌｅｒａシステム（Ｂｉｏｔａｇｅ）および溶離液、例えば、ヘキサン／酢酸エチルまたはＤＣＭ／メタノールの勾配と組み合わせて使用して、クロマトグラフィー、特にフラッシュクロマトグラフィーによって化合物を精製することができる。場合により、例えば、ダイオードアレイ検出器および／またはオンラインエレクトロスプレーイオン化質量分析計を搭載したＷａｔｅｒｓ自動精製装置を適当な予備充填逆相カラムおよび溶離液、例えば、トリフルオロ酢酸、ギ酸またはアンモニア水などの添加剤を含み得る水およびアセトニトリルの勾配と組み合わせて使用して、分取ＨＰＬＣによって化合物を精製することができる。
【０１５０】
光学異性体は、従来法によるラセミ混合物の分割、例えば、光学活性酸もしくは塩基を用いたジアステレオマー塩の形成または共有結合性ジアステレオマーの形成によって得ることができる。適当な酸の例には、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジトルオイル酒石酸およびカンファースルホン酸がある。ジアステレオマーの混合物は、当技術分野で知られている方法、例えば、クロマトグラフィーまたは分別結晶によって、その物理的および／または化学的違いに基づいて個々のジアステレオマーに分離することができる。その後、光学活性塩基または酸を分離したジアステレオマー塩から遊離させる。光学異性体の別の分離法は、エナンチオマーの分離を最大化するために選択してもよい、従来の誘導体化を用いるまたは用いない、キラルクロマトグラフィー（例えば、キラルＨＰＬＣカラム）の使用を含む。適当なキラルＨＰＬＣカラムは、Ｄｉａｃｅｌによって製造されており、例えば、数ある中でも全て日常的に選択可能なＣｈｉｒａｃｅｌ  ＯＤおよびＣｈｉｒａｃｅｌ  ＯＪがある。誘導体化を用いるまたは用いない酵素分離も有用である。本発明の光学活性化合物はさらに、光学活性出発物質を利用したキラル合成によっても得ることができる。
【０１５１】
本文中、特に実験セクションにおいて、本発明の中間体および実施例の合成について、化合物を対応する塩基または酸による塩型として言及する場合、それぞれの製造および／または精製工程によって得られる前記塩型の正確な化学量論的組成は、ほとんどの場合、未知である。
【０１５２】
特に指定しない限り、例えば、「塩酸塩」、「トリフルオロアセテート」、「ナトリウム塩」または「ｘＨＣｌ」、「ｘＣＦ３ＣＯＯＨ」、「ｘＮａ＋」などの化学名または構造式の接尾辞は、化学量論的指定としてではなく、単なる塩型として理解されるべきである。
【０１５３】
分析ＵＰＬＣ−ＭＳを以下の通り行った。
【０１５４】
ＬＣ−ＭＳ方法：
方法１：
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣＭＳ  ＺＱ４０００；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ、５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水＋０．０５体積％ギ酸、溶離液Ｂ：アセトニトリル＋０．０５体積％ギ酸勾配：０−１．６分１−９９％Ｂ、１．６−２．０分９９％Ｂ；流量０．８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤ走査：２１０−４００ｎｍ；ＥＬＳＤ。
【０１５５】
方法２：
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＳ  ＳＱＤ  ３００１；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ、５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水＋０．１体積％ギ酸（９５％）、溶離液Ｂ：アセトニトリル、勾配：０−１．６分１−９９％Ｂ、１．６−２．０分９９％Ｂ；流量０．８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤ走査：２１０−４００ｎｍ；ＥＬＳＤ。
【０１５６】
方法３：
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣＭＳ  ＳＱＤ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ、５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水＋０．０５体積％ギ酸（９５％）、溶離液Ｂ：アセトニトリル＋０．０５体積％ギ酸（９５％）、勾配：０−１．６分１−９９％Ｂ、１．６−２．０分９９％Ｂ；流量０．８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤ走査：２１０−４００ｎｍ；ＥＬＳＤ。
【０１５７】
方法４：
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＳ  ＳＱＤ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水＋０．１体積％ギ酸（９９％）、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０−１．６分１−９９％Ｂ、１．６−２．０分９９％Ｂ；流量０．８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤ走査：２１０−４００ｎｍ；ＥＬＳＤ。
【０１５８】
方法５：
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣＭＳ  ＳＱＤ３００１；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ、５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水＋０．２体積％アンモニア（３２％）、溶離液Ｂ：アセトニトリル、勾配：０−１．６分１−９９％Ｂ、１．６−２．０分９９％Ｂ；流量０．８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤ走査：２１０−４００ｎｍ；ＥＬＳＤ。
【０１５９】
方法６
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＳ  ＳＱＤ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７  ５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水＋０．２体積％アンモニア（３２％）、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０−１．６分１−９９％Ｂ、１．６−２．０分９９％Ｂ；流量０．８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤ走査：２１０−４００ｎｍ；ＥＬＳＤ。
【０１６０】
方法７
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ−ＭＳ  ＺＱ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７  ５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水＋０．１体積％ギ酸（９９％）、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０−１．６分１−９９％Ｂ、１．６−２．０分９９％Ｂ；流量０．８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤ走査：２１０−４００ｎｍ；ＥＬＳＤ。
【０１６１】
方法８：
装置：Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣＭＳ  ＳＱＤ；カラム：Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨ  Ｃ１８  １．７μｍ、５０×２．１ｍｍ；溶離液Ａ：水＋０．２体積％アンモニア（３２％）、溶離液Ｂ：アセトニトリル；勾配：０−１．６分１−９９％Ｂ、１．６−２．０分９９％Ｂ；流量０．８ｍＬ／分；温度：６０℃；注入：２μＬ；ＤＡＤ走査：２１０−４００ｎｍ；ＥＬＳＤ。
【０１６２】
中間体実施例０１．０１．
エチル［（４−クロロピリジン−２−イル）カルバモチオイル］カーバメート
【化２９】
2017537116.tif 000044
【０１６３】
２−アミノ−４−クロロピリジン（１０．１ｇ）のジオキサン（１００ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにエトキシカルボニルイソチオシアネート（１１．１ｇ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。白色固体が沈殿した。ヘキサン（２５ｍＬ）を加え、白色固体を濾取して、標題化合物８．０ｇを得た。溶液を減圧下に濃縮し、残留物を酢酸エチルから再結晶して、追加の標題化合物８．５ｇを得た。
【０１６４】
中間体実施例０１．０２．
７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン
【化３０】
2017537116.tif 000045
【０１６５】
ヒドロキシル塩化アンモニウム（１３．９ｇ）をメタノール（７０ｍＬ）に懸濁させ、エタノール（６５ｍＬ）およびヒューニッヒ塩基（２１．１ｍＬ）を室温で加えた。混合物を加熱して６０℃とし、エチル［（４−クロロピリジン−２−イル）カルバモチオイル］カーバメート（９．０ｇ）を少量ずつ加え、混合物を６０℃で２時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、水（１５０ｍＬ）を加えた。固体を濾取し、エタノールで洗浄し、真空乾燥した。シリカゲルクロマトグラフィーによって、標題化合物４．２ｇを得た。
【０１６６】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝６．１４（２Ｈ）、６．９２（１Ｈ）、７．５０（１Ｈ）、８．５５（１Ｈ）。
【０１６７】
中間体実施例０１．０３．
｛４−［（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）アミノ］−３−メトキシフェニル｝（３−フルオロアゼチジン−１−イル）メタノン
【化３１】
2017537116.tif 000046
【０１６８】
７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン（１９０ｍｇ）のトルエン（７ｍＬ）およびＮＭＰ（０．７ｍＬ）中懸濁液を撹拌しながら、それに（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）（３−フルオロアゼチジン−１−イル）メタノン（３７３ｍｇ）、クロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２′，４′，６′−トリ−イソ−プロピル−１，１′−ビフェニル）［２−（２−アミノエチル）フェニル］パラジウム（ＩＩ）メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル付加物（２８ｍｇ）、Ｘ−Ｐｈｏｓ（１６ｍｇ）および粉末リン酸カリウム・１水和物（０．６０ｇ）を加え、フラスコを２回脱気し、アルゴンを充填し戻した。混合物を１６時間加熱還流した。炭酸カリウムの半飽和溶液を加え、混合物をジクロロメタンおよびメタノールの混合物で抽出した。有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、溶媒を減圧下に除去した。混合物を濾過し、減圧下に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーによって、標題化合物１２０ｍｇを得た。
【０１６９】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝３．９１（３Ｈ）、３．９４−４．８０（４Ｈ）、５．２６−５．５９（１Ｈ）、７．１５（１Ｈ）、７．２３−７．３３（２Ｈ）、７．８２（１Ｈ）、８．２１−８．３６（１Ｈ）、８．４６（１Ｈ）、８．８５（１Ｈ）。
【０１７０】
中間体実施例０１．０４．
７−クロロ−Ｎ−［２−メトキシ−４−（メチルスルホニル）フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン
【化３２】
2017537116.tif 000047
【０１７１】
７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン（３００ｍｇ）および１−ブロモ−２−メトキシ−４−（メチルスルホニル）ベンゼン（５４３ｍｇ）を原料として、中間体実施例０１．０３．の製造手順と同様にして中間体実施例０１．０４．を製造した。収量：標題化合物２３６ｍｇ。
【０１７２】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝３．１８（３Ｈ）、３．９７（３Ｈ）、７．１７（１Ｈ）、７．４４（１Ｈ）、７．５３（１Ｈ）、７．８６（１Ｈ）、８．４３（１Ｈ）、８．７５（１Ｈ）、８．８７（１Ｈ）。
【０１７３】
中間体実施例０１．０５．
７−クロロ−Ｎ−［４−（メチルスルホニル）−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン
【化３３】
2017537116.tif 000048
【０１７４】
７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン（１００ｍｇ）および１−ブロモ−４−（メチルスルホニル）−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）ベンゼン（２２７ｍｇ）を原料として、中間体実施例０１．０３．の製造手順と同様にして中間体実施例０１．０５．を製造した。収量：標題化合物５０ｍｇ。
【０１７５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝３．１９（３Ｈ）、５．００（２Ｈ）、７．１８（１Ｈ）、７．５８−７．７１（２Ｈ）、７．８６（１Ｈ）、８．４４（１Ｈ）、８．７０（１Ｈ）、８．８１−８．９２（１Ｈ）。
【０１７６】
中間体実施例０１．０６．
｛４−［（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）アミノ］−３−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝（３−フルオロアゼチジン−１−イル）メタノン
【化３４】
2017537116.tif 000049
【０１７７】
７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン（２５０ｍｇ）および［４−ブロモ−３−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル］（３−フルオロアゼチジン−１−イル）メタノン（６０７ｍｇ）を原料として、中間体実施例０１．０３．の製造手順と同様にして中間体実施例０１．０６．を製造した。収量：標題化合物１９８ｍｇ。
【０１７８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝３．９３−４．７２（４Ｈ）、４．９３（２Ｈ）、５．３２−５．５５（１Ｈ）、７．１６（１Ｈ）、７．３６−７．４３（２Ｈ）、７．８３（１Ｈ）、８．２７−８．３３（１Ｈ）、８．４１（１Ｈ）、８．８１−８．９０（１Ｈ）。
【０１７９】
中間体実施例０１．０７．
アゼチジン−１−イル｛４−［（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）アミノ］−３−メトキシフェニル｝メタノン
【化３５】
2017537116.tif 000050
【０１８０】
７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン（１９０ｍｇ）およびアゼチジン−１−イル（４−ブロモ−３−メトキシフェニル）メタノン（３５０ｍｇ）を原料として、中間体実施例０１．０３．の製造手順と同様にして中間体実施例０１．０７．を製造した。収量：標題化合物１３０ｍｇ。
【０１８１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝２．２７（２Ｈ）、３．８８−３．９４（３Ｈ）、３．９７−４．４７（４Ｈ）、７．１５（１Ｈ）、７．２３−７．３１（２Ｈ）、７．８３（１Ｈ）、８．２８（１Ｈ）、８．４２（１Ｈ）、８．７９−８．９３（１Ｈ）。
【０１８２】
中間体実施例０２．０１．
Ｒａｃ−メチル２−（４−フルオロフェニル）プロパノエート
【化３６】
2017537116.tif 000051
【０１８３】
ジイソプロピルアミン（１３．０ｇ）のテトラヒドロフラン（１６０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにｎ−ブチルリチウムのヘキサン中溶液（５１．４ｍＬ；ｃ＝２．５Ｍ）を−７８℃で加えた。溶液を０℃で１５分間撹拌した。溶液を冷却して−７８℃とし、テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）に溶かした（４−フルオロフェニル）酢酸メチル（１８．０ｇ）の溶液を加えた。溶液を−７８℃で３０分間撹拌した。ヨウ化メチル（１０．０ｍＬ）を−７８℃で加え、溶液を１時間以内で昇温させて０℃とした。水を加え、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、溶媒を減圧下に除去した。シリカゲルクロマトグラフィーによって、標題化合物１８．９ｇを得た。
【０１８４】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．３４（ｄ、３Ｈ）、３．５５（ｓ、３Ｈ）、３．７９（ｑ、１Ｈ）、７．０８−７．１５（ｍ、２Ｈ）、７．２５−７．３２（ｍ、２Ｈ）。
【０１８５】
中間体実施例０２．０２
Ｒａｃ−２−（４−フルオロフェニル）プロパン酸
【化３７】
2017537116.tif 000052
【０１８６】
中間体実施例０２．０１．（１８．９ｇ）のエタノール（２００ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに水（２００ｍＬ）に溶かした水酸化カリウム（３５ｇ）の溶液を加えた。混合物を０℃で４時間撹拌した。ｐＨ５に達するまで塩酸（ｃ＝４．０Ｍ）を加え、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を分離し、溶媒を減圧下に除去して、標題生成物１５．６４ｇを得た。粗生成物を、それ以上精製せずに用いた。
【０１８７】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．３１（ｄ、３Ｈ）、３．６６（ｑ、１Ｈ）、７．０５−７．１５（ｍ、２Ｈ）、７．２４−７．３３（ｍ、２Ｈ）、１２．３０（ｓ、１Ｈ）。
【０１８８】
中間体実施例０２．０３．
（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパン酸
【化３８】
2017537116.tif 000053
【０１８９】
中間体実施例０２．０２．（２３．６ｇ）の還流酢酸エチル（２５０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに（１Ｓ）−１−フェニルエタンアミン（１７．３５ｇ）の酢酸エチル中溶液を加えた。混合物を１時間以内で放冷して室温とした。白色固体を濾取し、酢酸エチルで洗浄し、真空乾燥して固体２７．５ｇを得た。固体を還流酢酸エチル４００ｍＬから再結晶した。混合物を放冷して室温とした。白色固体を濾取し、酢酸エチルで洗浄し、真空乾燥して、固体１８．３ｇを得た。その固体を還流酢酸エチルから２回再結晶化した（３５０ｍＬ；３００ｍＬ）。白色固体を濾取し、酢酸エチルで洗浄し、真空乾燥して、固体１０．５１ｇを得た。その固体を水に溶かし、ｐＨ５に達するまで塩酸（ｃ＝２．０Ｍ）を加え、反応混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、溶媒を減圧下に除去して、標題生成物５．６ｇを得た。粗生成物を、それ以上精製せずに用いた。
【０１９０】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝１．３１（ｄ、３Ｈ）、３．６６（ｑ、１Ｈ）、７．０５−７．１６（ｍ、２Ｈ）、７．２４−７．３３（ｍ、２Ｈ）、１２．２８（ｂｒｓ、１Ｈ）。
【０１９１】
［α］Ｄ２０：−７９．３°（ＤＭＳＯ中）。
【０１９２】
分析キラルＨＰＬＣによるエナンチオマー純度の測定：
カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ−Ｈ  １５０×４．６；流量：１．００ｍＬ／分；溶媒：Ａ：ヘキサン、Ｂ：２−プロパノール（０．１％ギ酸含有）；溶媒混合物：８０％Ａ＋２０％Ｂ。操作時間：３０分。保持時間：３．４１分;ＵＶ２５４ｎｍ；エナンチオマー比：９９．８％：０．２％。
【０１９３】
中間体実施例０２．０４．
（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］プロパンアミド
【化３９】
2017537116.tif 000054
【０１９４】
４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）アニリン（１．０ｇ）のＤＭＦ（４５ｍＬ）およびジクロロメタン（９０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに重炭酸ナトリウム（７６６ｍｇ）、（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパン酸（８４４ｍｇ）およびＨＡＴＵ（２．６ｇ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌した。水を加え、混合物を３０分間撹拌した。重炭酸ナトリウムの半飽和溶液を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、脱水し（硫酸ナトリウム）、溶媒を減圧下に除去した。シリカゲルクロマトグラフィーによって、標題化合物１．５３ｇを得た。
【０１９５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝１．２３（１２Ｈ）、１．３７（３Ｈ）、３．７４−３．８７（１Ｈ）、７．０６−７．１６（２Ｈ）、７．３１−７．４２（２Ｈ）、７．５１−７．６１（４Ｈ）、１０．１２（１Ｈ）。
【０１９６】
中間体実施例０２．０５
（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）ボロン酸
【化４０】
2017537116.tif 000055
【０１９７】
（４−アミノフェニル）ボロン酸塩酸塩（２．００ｇ）のＤＭＦ（４２ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに重炭酸ナトリウム（２．９ｇ）、（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパン酸（２．０４ｇ）およびＨＡＴＵ（６．５８ｇ）を加えた。混合物を室温で７２時間撹拌した。水（１４０ｍＬ）を加え、混合物を２時間撹拌した。白色沈殿を濾取し、水で洗浄し、真空乾燥して、標題化合物２．８６ｇを得た。
【０１９８】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝１．３９（３Ｈ）、３．８４（１Ｈ）、７．０８−７．２１（２Ｈ）、７．３５−７．４４（２Ｈ）、７．５２（２Ｈ）、７．６９（２Ｈ）、７．８８（２Ｈ）、１０．０７（１Ｈ）。
【０１９９】
中間体実施例０２．０６．
（２Ｒ）−Ｎ−［４−（２−アミノ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−７−イル）フェニル］−２−（４−フルオロフェニル）プロパンアミド
【化４１】
2017537116.tif 000056
【０２００】
７−ブロモ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン（１００ｍｇ；ＣＡＳ−ＲＮ［８８２５２１−６３−３］；Ａｌｌｉｃｈｅｍ  ＬＬＣ,  ＵＳＡ；Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ,  ＭＤから市販；製造はＷＯ２０１０／０２０３６３Ａ１に記載）の１−プロパノール（３ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに炭酸カリウム溶液（０．７ｍＬ、ｃ＝２Ｍ）、（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）ボロン酸（２０２ｍｇ）、トリフェニルホスフィン（１２ｍｇ）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（３３ｍｇ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。追加のトリフェニルホスフィン（１２ｍｇ）およびＰｄＣｌ２（ＰＰｈ３）２（３３ｍｇ）を加え、混合物をさらに４時間加熱還流した。反応混合物をアミノ相−シリカゲルカラムで濾過し、溶媒を減圧下に除去した。シリカゲルクロマトグラフィーによって、標題化合物１５０ｍｇを得た。
【０２０１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝１．４２（３Ｈ）、３．８６（１Ｈ）、５．９７（２Ｈ）、７．０８−７．２５（３Ｈ）、７．３５−７．４９（２Ｈ）、７．５８（１Ｈ）、７．６３−７．８３（４Ｈ）、８．５３（１Ｈ）、１０．２１（１Ｈ）。
【０２０２】
参考実施例０１．０１．
（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−［４−（２−｛［２−メトキシ−４−（メチルスルホニル）フェニル］アミノ｝［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−７−イル）フェニル］プロパンアミド
【化４２】
2017537116.tif 000057
【０２０３】
（２Ｒ）−Ｎ−［４−（２−アミノ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−７−イル）フェニル］−２−（４−フルオロフェニル）プロパンアミド（１００ｍｇ）のトルエン（４ｍＬ）およびＮＭＰ（０．２ｍＬ）中懸濁液を撹拌しながら、それに１−ブロモ−２−メトキシ−４−（メチルスルホニル）ベンゼン（１０６ｍｇ）、クロロ（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２′，４′，６′−トリ−イソ−プロピル−１，１′−ビフェニル）［２−（２−アミノエチル）フェニル］パラジウム（ＩＩ）メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル付加物（２２ｍｇ）、Ｘ−Ｐｈｏｓ（１３ｍｇ）および粉末リン酸カリウム・１水和物（２８３ｍｇ）を加え、フラスコを２回脱気し、アルゴンを充填し戻した。混合物を１６時間加熱還流した。混合物を濾過し、減圧下に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーと次に分取逆相ＨＰＬＣによって、標題化合物１０ｍｇを得た。
【０２０４】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝１．４４（３Ｈ）、３．２０（３Ｈ）、３．８８（１Ｈ）、４．００（３Ｈ）、７．１２−７．２４（２Ｈ）、７．４０−７．５０（４Ｈ）、７．５６（１Ｈ）、７．７５（２Ｈ）、７．８６（２Ｈ）、７．９２（１Ｈ）、８．５２（１Ｈ）、８．６３（１Ｈ）、８．８６（１Ｈ）、１０．２８（１Ｈ）。
【０２０５】
参考実施例０１．０２．
（２Ｒ）−Ｎ−｛４−［２−（｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−メトキシフェニル｝アミノ）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−７−イル］フェニル｝−２−（４−フルオロフェニル）プロパンアミド
【化４３】
2017537116.tif 000058
【０２０６】
｛４−［（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）アミノ］−３−メトキシフェニル｝（３−フルオロアゼチジン−１−イル）メタノン（１１０ｍｇ）のトルエン（４．０ｍＬ）およびＮＭＰ（０．４ｍＬ）中懸濁液を撹拌しながら、それに（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）ボロン酸（１２６ｍｇ）、粉末リン酸カリウム・１水和物（２４８ｍｇ）、ジシクロヘキシル（２′，６′−ジメトキシビフェニル−２−イル）ホスフィン（２４ｍｇ）およびＰｄ（ＯＡｃ）２（６．６ｍｇ）を加え、フラスコを２回脱気し、アルゴンを充填し戻した。混合物を２時間加熱還流した。反応混合物を濾過し、溶媒を減圧下に除去した。アミノ相シリカゲルクロマトグラフィーによって固体を得て、それをエーテルで磨砕して、標題化合物１５０ｍｇを得た。
【０２０７】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝１．４４（３Ｈ）、３．８２−３．９８（４Ｈ）、３．９８−４．７７（４Ｈ）、５．３１−５．５９（１Ｈ）、７．１８（２Ｈ）、７．２４−７．３５（２Ｈ）、７．３７−７．５０（３Ｈ）、７．７５（２Ｈ）、７．８０−７．９５（３Ｈ）、８．２９−８．４８（２Ｈ）、８．８３（１Ｈ）、１０．２７（１Ｈ）。
【０２０８】
参考実施例０１．０３．
（２Ｒ）−Ｎ−｛４−［２−（｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝アミノ）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−７−イル］フェニル｝−２−（４−フルオロフェニル）プロパンアミド
【化４４】
2017537116.tif 000059
【０２０９】
｛４−［（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）アミノ］−３−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝（３−フルオロアゼチジン−１−イル）メタノン（７０ｍｇ）および（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）ボロン酸（６１ｍｇ）を原料として、参考実施例０１．０２の製造手順と同様にして参考実施例０１．０３．を製造した。収量：標題化合物７３ｍｇ。
【０２１０】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝１．４４（３Ｈ）、３．８９（１Ｈ）、３．９６−４．７６（４Ｈ）、４．９６（２Ｈ）、５．３４−５．５９（１Ｈ）、７．１３−７．２２（２Ｈ）、７．３９−７．４８（５Ｈ）、７．７５（２Ｈ）、７．８１−７．８７（２Ｈ）、７．８９（１Ｈ）、８．２８（１Ｈ）、８．３８−８．４４（１Ｈ）、８．８４（１Ｈ）、１０．２８（１Ｈ）。
【０２１１】
参考実施例０１．０４．
（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−（４−｛２−［（６−メトキシ−１，１−ジオキシド−２，３−ジヒドロ−１−ベンゾチオフェン−５−イル）アミノ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−７−イル｝フェニル）プロパンアミド
【化４５】
2017537116.tif 000060
【０２１２】
参考実施例０１．０４．の化合物は、本明細書に記載の方法と同様にして製造することができる。
【０２１３】
参考実施例０１．０５．
（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）−Ｎ−［４−（２−｛［４−（メチルスルホニル）−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル］アミノ｝［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−７−イル）フェニル］プロパンアミド
【化４６】
2017537116.tif 000061
【０２１４】
７−クロロ−Ｎ−［４−（メチルスルホニル）−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−アミン（５０ｍｇ）および（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）ボロン酸（５１ｍｇ）を原料として、参考実施例０１．０２の製造手順と同様にして参考実施例０１．０５．を製造した。収量：標題化合物２０ｍｇ。
【０２１５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝１．４２（３Ｈ）、３．１９（３Ｈ）、３．８７（１Ｈ）、５．０２（２Ｈ）、７．１２−７．２０（２Ｈ）、７．３９−７．４６（３Ｈ）、７．６２−７．６７（２Ｈ）、７．７４（２Ｈ）、７．８１−７．８８（２Ｈ）、７．９１（１Ｈ）、８．５３（１Ｈ）、８．６０（１Ｈ）、８．８５（１Ｈ）、１０．２７（１Ｈ）。
【０２１６】
参考実施例０１．０６．
（２Ｒ）−Ｎ−［４−（２−｛［４−（アゼチジン−１−イルカルボニル）−２−メトキシフェニル］アミノ｝［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−７−イル）フェニル］−２−（４−フルオロフェニル）プロパンアミド
【化４７】
2017537116.tif 000062
【０２１７】
アゼチジン−１−イル｛４−［（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）アミノ］−３−メトキシフェニル｝メタノン（１２０ｍｇ）および（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）ボロン酸（１４４ｍｇ）を原料として、参考実施例０１．０２の製造手順と同様にして参考実施例０１．０６．を製造した。収量：標題化合物３０ｍｇ。
【０２１８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）、δ［ｐｐｍ］＝１．４２（３Ｈ）、２．２５（２Ｈ）、３．８２−３．９４（４Ｈ）、４．０３（２Ｈ）、４．３６（２Ｈ）、７．１２−７．２０（２Ｈ）、７．２２−７．２９（２Ｈ）、７．３５−７．４６（３Ｈ）、７．７３（２Ｈ）、７．８０−７．８９（３Ｈ）、８．２９（１Ｈ）、８．３３（１Ｈ）、８．８１（１Ｈ）、１０．２６（１Ｈ）。
【０２１９】
中間体実施例ＩｎｔＰ０１．０１
クロロメチル（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝カーバメート
【化４８】
2017537116.tif 000063
【０２２０】
｛４−［（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）アミノ］−３−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝（３−フルオロアゼチジン−１−イル）メタノン（１２０ｍｇ）のＴＨＦ（６ｍＬ）およびＮＭＰ（２．８ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに室温で水素化ナトリウム（オイル中５５重量％；５９ｍｇ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。クロルギ酸クロロメチル（６１μＬ）を０℃で加え、混合物を室温で１時間撹拌した。塩化アンモニウムの半飽和溶液を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を脱水し（硫酸ナトリウム）、溶媒を減圧下に除去した。シリカゲルクロマトグラフィーによって、標題化合物７５ｍｇを得た。
【０２２１】
中間体実施例ＩｎｔＰ０１．０２
（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３，３−ジメチルブタン酸セシウム
【化４９】
2017537116.tif 000064
【０２２２】
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−メチル−Ｌ−バリン（４．０８ｇ）のメタノール（３６ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それにｐＨ７に達するまで炭酸セシウム水溶液を加え（炭酸セシウム約２．８５ｇの水（３６ｍＬ）中溶液）、溶液を３０分間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、トルエンを加え、溶媒を減圧下に再度除去して、標題化合物６．３４ｇを得た。
【０２２３】
中間体実施例ＩｎｔＰ０１．０３
｛［（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝カルバモイル］オキシ｝メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−メチル−Ｌ−バリネート
【化５０】
2017537116.tif 000065
【０２２４】
クロロメチル（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝カーバメート（７０ｍｇ）のＤＭＦ（３．０ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３，３−ジメチルブタン酸セシウム（１０９ｍｇ）を加え、混合物を室温で７２時間撹拌した。塩化アンモニウムの半飽和溶液を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、脱水し（硫酸ナトリウム）、溶媒を減圧下に除去した。シリカゲルクロマトグラフィーによって、標題化合物６８ｍｇを得た。
【０２２５】
中間体実施例ＩｎｔＰ０１．０４
［（｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝［７−（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル］カルバモイル）オキシ］メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−メチル−Ｌ−バリネート
【化５１】
2017537116.tif 000066
【０２２６】
｛［（７−クロロ［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝カルバモイル］オキシ｝メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−メチル−Ｌ−バリネート（６５ｍｇ）のトルエン（１．６ｍＬ）およびＮＭＰ（０．１６ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）ボロン酸（３４．５ｍｇ）、粉末リン酸カリウム・１水和物（６８ｍｇ）、ジシクロヘキシル（２′，６′−ジメトキシビフェニル−２−イル）ホスフィン（６．６ｍｇ）および酢酸パラジウム（３．６ｍｇ）を加え、フラスコを２回脱気し、アルゴンを充填し戻した。混合物を加熱して１００℃として２０分間経過させた。反応混合物をシリカゲルカラムで濾過し、溶媒を減圧下に除去して固体を得て、それをヘキサンおよびジクロロメタンの混合物で磨砕して、標題化合物４７ｍｇを得た。
【０２２７】
本発明の化合物
実施例１．１．
［（｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝［７−（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル］カルバモイル）オキシ］メチル３−メチル−Ｌ−バリネート塩酸塩
【化５２】
2017537116.tif 000067
【０２２８】
［（｛４−［（３−フルオロアゼチジン−１−イル）カルボニル］−２−（２，２，２−トリフルオロエトキシ）フェニル｝［７−（４−｛［（２Ｒ）−２−（４−フルオロフェニル）プロパノイル］アミノ｝フェニル）［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル］カルバモイル）オキシ］メチルＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−３−メチル−Ｌ−バリネート（４４ｍｇ）のジクロロメタン（１ｍＬ）およびメタノール（０．３ｍＬ）中溶液を撹拌しながら、それに塩酸のジオキサン中溶液（０．２４ｍＬ；ｃ＝４．０Ｍ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去した。固体残留物をジクロロメタンおよびヘキサンの混合物で３回磨砕し、各回において溶媒を除去し、固体を真空乾燥して、標題化合物３２ｍｇを得た。
【０２２９】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ［ｐｐｍ］＝０．９４−１．０１（ｍ、９Ｈ）、１．４１（ｄ、３Ｈ）、３．８２−３．９６（ｍ、２Ｈ）、３．９９−４．１９（ｍ、１Ｈ）、４．３１−４．６９（ｍ、３Ｈ）、４．８３（ｑ、２Ｈ）、５．３３−５．５６（ｍ、１Ｈ）、５．８５（ｄ、１Ｈ）、５．９５（ｄ、１Ｈ）、７．１１−７．１９（ｍ、２Ｈ）、７．３３−７．４７（ｍ、５Ｈ）、７．５２（ｄｄ、１Ｈ）、７．７１−７．８５（ｍ、４Ｈ）、７．９７（ｄ、１Ｈ）、８．４４（ｄ、３Ｈ）、８．８６（ｄ、１Ｈ）、１０．３８（ｓ、１Ｈ）。
【０２３０】
ＬＣ−ＭＳ（方法２）：Ｒｔ＝１．１５分;ＭＳ（ＥＳＩポジティブ）ｍ／ｚ＝８３８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２３１】
生物アッセイ：増殖アッセイ
培養腫瘍細胞（ＭＣＦ７、ホルモン依存性ヒト乳癌細胞、ＡＴＣＣ  ＨＴＢ２２；ＮＣＩ−Ｈ４６０、ヒト非小細胞肺癌細胞、ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−１７７；ＤＵ１４５、ホルモン非依存性ヒト前立腺癌細胞、ＡＴＣＣ  ＨＴＢ−８１；ＨｅＬａ−ＭａＴｕ、ヒト子宮頸癌細胞、ＥＰＯ−ＧｍｂＨ、ベルリン；ＨｅＬａ−ＭａＴｕ−ＡＤＲ、多剤耐性ヒト子宮頸癌細胞、ＥＰＯ−ＧｍｂＨ、ベルリン；ＨｅＬａヒト頸部腫瘍細胞、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２；Ｂ１６Ｆ１０マウスメラノーマ細胞、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−６４７５）を１０％ウシ胎児血清を補充したそれぞれの増殖培地２００μＬに９６ウェルマルチタイタープレート中５０００個細胞／ウェル（ＭＣＦ７、ＤＵ１４５、ＨｅＬａ−ＭａＴｕ−ＡＤＲ）、３０００個細胞／ウェル（ＮＣＩ−Ｈ４６０、ＨｅＬａ−ＭａＴｕ、ＨｅＬａ）または１０００個細胞／ウェル（Ｂ１６Ｆ１０）の密度で蒔いた。２４時間後、１プレート（０ポイントプレート）の細胞をクリスタルバイオレットで染色し（以下参照）、他のプレートの培地を、試験物質を種々の濃度（０μＭ、ならびに０．０１から３０μＭの範囲；溶媒ジメチルスルホキシドの最終濃度は０．５％とした）で添加した新鮮な培養培地（２００μＬ）に取り替えた。細胞を試験物質の存在下で４日間インキュベートした。細胞をクリスタルバイオレットで染色することによって細胞増殖を測定した：室温で１５分間、２０μＬ／測定点の１１％グルタルアルデヒド溶液を添加することによって細胞を固定した。固定細胞の水による３回洗浄サイクル後、プレートを室温で乾燥させた。１００μＬ／測定点の０．１％クリスタルバイオレット溶液（ｐＨ３．０）を添加することによって細胞を染色した。染色細胞の水による３回洗浄サイクル後、プレートを室温で乾燥させた。１００μＬ／測定点の１０％酢酸溶液を添加することによって染料を溶解した。５９５ｎｍの波長での測光によって吸光度を測定した。測定値を０ポイントプレート（＝０％）の吸光度および未処理（０μｍ）細胞（＝１００％）の吸光度値に正規化することによって、細胞数の変化（％）を計算した。４パラメータ適合によってＩＣ５０値を測定した。
【０２３２】
上記の参考実施例は、ＨｅＬａ細胞増殖アッセイ（上記）で測定される以下のＩＣ５０値によって特徴付けられる。
【表２】
2017537116.tif 000068
【０２３３】
Ｍｐｓ−１キナーゼアッセイ
ヒトキナーゼＭｐｓ−１はビオチン化基質ペプチドをリン酸化する。リン酸化産物の検出は、供与体としてのユーロピウム標識抗ホスホセリン／トレオニン抗体から受容体としての架橋アロフィコシアニン（ＳＡ−ＸＬｅｎｔ）で標識したストレプトアビジンへの時間分解蛍光共鳴エネルギー転移（ＴＲ−ＦＲＥＴ）によって行う。化合物をキナーゼ活性の阻害について試験する。
【０２３４】
Ｎ末端ＧＳＴ標識ヒト全長組換えＭｐｓ−１キナーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｋａｒｓｌｒｕｈｅ、ドイツから購入、カタログ番号ＰＶ４０７１）を使用した。キナーゼ反応の基質として、アミノ酸配列ＰＷＤＰＤＤＡＤＩＴＥＩＬＧ（アミド型のＣ末端、Ｂｉｏｓｙｎｔｈａｎ  ＧｍｂＨ、ベルリンから購入）のビオチン化ペプチドを使用した。
【０２３５】
アッセイのために、試験化合物のＤＭＳＯ中１００倍濃縮溶液５０ｎＬを黒色低容積３８４ウェルマイクロタイタープレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ、Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ、ドイツ）にピペットで入れて、Ｍｐｓ−１のアッセイ緩衝液［０．１ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．７、０．０５％ＢＳＡ、０．００１％Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７］中溶液２μＬを添加し、混合物を２２℃で１５分間インキュベートして、キナーゼ反応の開始前に試験化合物とＭｐｓ−１の予備結合を可能にした。次いで、１６．７アデノシン三リン酸（ＡＴＰ、１６．７μＭ⇒５μＬアッセイ体積中最終濃度は１０μＭである）およびペプチド基質（１．６７μＭ⇒５μＬアッセイ体積中最終濃度は１μＭである）のアッセイ緩衝液中溶液３μＬを添加することによってキナーゼ反応を開始し、得られた混合物を２２℃で６０分の反応時間インキュベートした。アッセイにおけるＭｐｓ−１の濃度は酵素のロットの活性に応じて調整し、線形範囲のアッセイを有するよう適当に選択し、代表的な濃度は約１ｎＭ（５μＬのアッセイ体積中最終濃度）の範囲にあった。ＨＴＲＦ検出試薬の溶液（１００ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．４、０．１％ＢＳＡ、４０ｍＭ  ＥＤＴＡ、１４０ｎＭストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔ［＃６１ＧＳＴＸＬＢ、Ｆａ．  Ｃｉｓ  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｍａｒｃｏｕｌｅ、フランス］、１．５ｎＭ抗ホスホ（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）−ユーロピウム抗体［＃ＡＤ０１８０、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＬＡＳ、Ｒｏｄｇａｕ−Ｊｕｇｅｓｈｅｉｍ、ドイツ］３μＬを添加することによって反応を停止した。
【０２３６】
得られた混合物を２２℃で１時間インキュベートしてリン酸化ペプチドと抗ホスホ（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）−ユーロピウム抗体を結合させた。その後、ユーロピウム標識抗ホスホ（Ｓｅｒ／Ｔｈｒ）抗体からストレプトアビジン−ＸＬｅｎｔへの共鳴エネルギーを測定することによって、リン酸化基質の量を評価した。そのため、３５０ｎｍでの励起後の６２０ｎｍおよび６６５ｎｍでの蛍光発光をＶｉｅｗｌｕｘ  ＴＲ−ＦＲＥＴリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＬＡＳ、Ｒｏｄｇａｕ−Ｊｕｇｅｓｈｅｉｍ、ドイツ）で測定した。「ブランク補正正規化比」（Ｖｉｅｗｌｕｘ固有の読み取り値、６６５ｎｍおよび６２２ｎｍでの発光の従来の比と類似のもの、ここでは比を計算する前にブランクおよびＥｕ供与体のクロストークを、６６５ｎｍシグナルから減じる）をリン酸化基質の量の尺度とみなした。データを正規化した（阻害剤を用いない酵素反応＝０％阻害、酵素を用いない全ての他のアッセイ成分＝１００％阻害）。試験化合物を、２０μＭから１ｎＭの範囲の１０の異なる濃度で（２０μＭ、６．７μＭ、２．２μＭ、０．７４μＭ、０．２５μＭ、８２ｎＭ、２７ｎＭ、９．２ｎＭ、３．１ｎＭおよび１ｎＭ、希釈系列は、連続１：３希釈により１００倍濃縮原液のレベルでアッセイの前に調製）、各濃度につき二連の値で同じマイクロタイタープレートで試験し、４パラメータ適合によりＩＣ５０値を計算した。
【０２３７】
上記の参考実施例は、（上記の）Ｍｐｓ−１キナーゼアッセイで決定される以下のＩＣ５０値によって特徴付けられる。
【表３】
2017537116.tif 000069
【０２３８】
紡錘体形成チェックポイントアッセイ
紡錘体形成チェックポイントにより、有糸分裂中の適切な染色体分離が確保される。有糸分裂に入ると、染色体が凝縮し始め、これはセリン１０上のヒストンＨ３のリン酸化によって達成される。セリン１０上のヒストンＨ３の脱リン酸化は分裂後期に始まり、分裂終期の初期に終了する。したがって、セリン１０上のヒストンＨ３のリン酸化を有糸分裂中の細胞のマーカーとして利用することができる。ノコダゾールは、微小管不安定化物質である。例えば、ノコダゾールは微小管動態に干渉し、紡錘体形成チェックポイントを起動する。細胞はＧ２／Ｍ移行で有糸分裂に停止し、セリン１０上のリン酸化ヒストンＨ３を示す。Ｍｐｓ−１阻害剤による紡錘体形成チェックポイントの阻害は、ノコダゾールの存在下で有糸分裂妨害を無効化し、細胞が有糸分裂を早期に完了する。この変化は、セリン１０上のヒストンＨ３のリン酸化を有する細胞の減少によって検出される。この減少を、本発明の化合物が有糸分裂急進を誘発する能力を決定するためのマーカーとして使用する。
【０２３９】
ヒト頸部腫瘍細胞系ＨｅＬａ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）の培養細胞を１％（体積基準）グルタミン、１％（体積基準）ペニシリン、１％（体積基準）ストレプトマイシンおよび１０％（体積基準）ウシ胎児血清を補充した２μＬダルベッコ培地（ｗ／ｏフェノールレッド、ｗ／ｏピルビン酸ナトリウム、ｗ  １０００ｍｇ／ｍＬグルコース、ｗ  ピリドキシン）に３８４ウェルマイクロタイタープレート中２５００個細胞／ウェルの密度で蒔いた。３７℃で一晩のインキュベーション後、０．１μｇ／ｍＬの最終濃度の１０μＬ／ウェルノコダゾールを細胞に添加した。２４時間のインキュベーション後、細胞を細胞周期進行のＧ２／Ｍ期で停止した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に可溶化した試験化合物を種々の濃度（０μＭ、ならびに０．００５μＭから１０μＭの範囲；溶媒ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％（体積基準）でとした）で添加した。細胞を試験化合物の存在下３７℃で４時間インキュベートした。その後、細胞を４℃で一晩リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中４％（体積基準）パラホルムアルデヒドで固定し、次いで、室温で２０分間ＰＢＳ中０．１％（体積基準）Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ（商標）１００で透過処理し、室温で１５分間ＰＢＳ中０．５％（体積基準）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロックした。ＰＢＳで洗浄した後、２０μＬ／ウェルの抗体溶液（抗ホスホヒストンＨ３クローン３Ｈ１０、ＦＩＴＣ；Ｕｐｓｔａｔｅ、カタログ番号１６−２２２；１：２００希釈）を細胞に添加し、これを室温で２時間インキュベートした。その後、細胞をＰＢＳで洗浄し、２０μＬ／ウェルのＨＯＥＣＨＳＴ３３３４２染料溶液（５μｇ／ｍＬ）を細胞に添加し、細胞を暗所中室温で１２分間インキュベートした。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、次いで、ＰＢＳで覆い、分析まで４℃で保管した。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＯＰＥＲＡ（商標名）Ｈｉｇｈ−Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓリーダーを用いて画像を取得した。Ｃｅｌｌ  Ｃｙｃｌｅアプリケーションモジュールを利用してＭｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｅｖｉｃｅｓ製の画像解析ソフトウェアＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ（商標名）を用いて画像を解析した。このアッセイでは、ＨＯＥＣＨＳＴ３３３４２とセリン１０上のリン酸化ヒストンＨ３の両標識を測定した。ＨＯＥＣＨＳＴ３３３４２はＤＮＡを標識するので、細胞数を計数するために使用する。セリン１０上のリン酸化ヒストンＨ３の染色により、有糸分裂細胞の数を測定する。Ｍｐｓ−１の阻害により、不適切な有糸分裂進行を示すノコダゾールの存在下での有糸分裂数が減少する。４パラメータロジスティック回帰分析によって各試験化合物についてのＩＣ５０値を決定することにより、アッセイの生データをさらに分析した。
【０２４０】
ｐＨ７．４の緩衝液中での安定性
試験化合物０．３ｍｇをジメチルスルホキシド０．１ｍＬおよびアセトニトリル０．４ｍＬに溶解する。完全に溶解するために、試料溶液を含むＨＰＬＣバイアルを約２０秒間超音波処理する（ｓｏｎｉｆｉｅｄ）。次いで、緩衝液１．０ｍＬを添加し、試料を再度超音波浴で処理する。
【０２４１】
緩衝液の調製
塩化ナトリウム９０ｇ、リン酸二水素カリウム１３．６１ｇおよび１Ｍ水酸化ナトリウム溶液８３．３５ｇをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ水を用いて１リットルにし、次いで、１：１０希釈する。
【０２４２】
試料溶液の１０μＬ分をＨＰＬＣによって分析して３７℃で２４時間の期間にわたって試験化合物の量を測定する。ピーク面積（％）を定量に使用する。
【０２４３】
ＨＰＬＣ法：
ＤＡＤ（Ｇ１３１５Ｂ）、バイナリポンプ（Ｇ１３１２Ａ）、オートサンプラ（Ｇ１３２９Ａ）、カラムオーブン（Ｇ１３１６Ａ）、サーモスタット（Ｇ１３３０Ｂ）を備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００；カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００  Ｃ１８、２５０ｍｍ×４ｍｍ、５μｍ；カラム温度：３７℃；溶離液Ａ：水＋過塩素酸５ｍＬ／リットル、溶離液Ｂ：アセトニトリル。
【０２４４】
勾配：
０分９８％Ａ、２％Ｂ→０から３．０分８５％Ａ、１５％Ｂ→３．０から８．０分５０％Ａ、５０％Ｂ→８．０から１６．０分５０％Ａ、５０％Ｂ→１６．０から２０．０分１０％Ａ、９０％Ｂ→２０．０から２１．０  １０％Ａ、９０％Ｂ→２１．０から２４．０分９８％Ａ、２％Ｂ→２４．０から２５．０分９８％Ａ、２％Ｂ；流量：１．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０２４５】
開始時のピーク面積に対する異なる時点でのピーク面積（Ｆ）の比を代表的な実施例について表１に示す。
【０２４６】
表１：ｐＨ７．４の緩衝液中の安定性
【表４】
2017537116.tif 000070
【０２４７】
ラットおよびヒト血漿中のイン・ビトロ安定性（ＨＰＬＣ検出）
試験化合物１ｍｇをジメチルスルホキシド１．２５ｍＬに溶解する。次いで、水１．２５ｍＬを添加する。この試料溶液０．５ｍＬをヘパリン化した３７℃の温血漿０．５ｍＬ（ｗｉｓｔａｒラット血漿またはヒト血漿）と混合する。直ちに最初の試料（１０μＬ）をＨＰＬＣ分析用に採取する。インキュベーション開始最大４時間後の期間に、１０μＬ小分けサンプルを３０、６０、９０、１２０および２４０分後に採取し、試験化合物の量を測定する。
【０２４８】
ＨＰＬＣ法：
ＤＡＤ（Ｇ１３１５Ａ）、バイナリポンプ（Ｇ１３１２Ａ）、オートサンプラ（Ｇ１３２９Ａ）、カラムオーブン（Ｇ１３１６Ａ）、サーモスタット（Ｇ１３３０Ｂ）を備えるＡｇｉｌｅｎｔ  １１００；カラム：Ｋｒｏｍａｓｉｌ  １００  Ｃ１８、２５０ｍｍ×４ｍｍ、５μｍ；カラム温度：４５℃；溶離液Ａ：水＋過塩素酸５ｍＬ／リットル、溶離液Ｂ：アセトニトリル。
【０２４９】
勾配：
０分９８％Ａ、２％Ｂ→０から３．０分８５％Ａ、１５％Ｂ→３．０から８．０分５５％Ａ、４５％Ｂ→８．０から１６．０分５５％Ａ、４５％Ｂ→１６．０から２０．０分１０％Ａ、９０％Ｂ→２０．０から２１．０  １０％Ａ、９０％Ｂ→２１．０から２４．０分９８％Ａ、２％Ｂ→２４．０から２５．０分９８％Ａ、２％Ｂ；流量：１．５ｍＬ／分；ＵＶ検出：２２２ｎｍ。
【０２５０】
開始時のピーク面積に対するそれぞれの時点でのピーク面積（Ｆ）の比は残りの親化合物を示すので、記載される実験条件下での安定性を示している。
【０２５１】
表２：ラット血漿中でのイン・ビトロ安定性
【表５】
2017537116.tif 000071
【０２５２】
表３：ヒト血漿中でのイン・ビトロ安定性
【表６】
2017537116.tif 000072
【０２５３】
イン・ビトロでの代謝安定性の測定
（肝臓インビボ血液クリアランス（ＣＬ）および最大経口バイオアベイラビリティ（Ｆｍａｘ）の計算を含む）
イン・ビトロでの試験化合物の代謝安定性を、０．５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度および３７℃において、１μＭの試験化合物を１００ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７．４（ＮａＨ２ＰＯ４×Ｈ２Ｏ＋Ｎａ２ＨＰＯ４×２Ｈ２Ｏ）中で懸濁肝ミクロソームと共にインキュベートすることによって測定した。リン酸緩衝液、ｐＨ７．４中に１．２ｍｇ  ＮＡＤＰ、３ＩＵグルコース−６−リン酸脱水素酵素、１４．６ｍｇグルコース−６−リン酸および４．９ｍｇ  ＭｇＣｌ２を含有する補因子混合物を添加することによって反応を活性化した。
【０２５４】
インキュベーション中の有機溶媒を０．２％未満のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および１％未満のメタノールに限定した。インキュベーション中、ミクロソーム懸濁物を連続的に振盪し、一定分量を２、８、１６、３０、４５および６０分にとり、これに等体積の冷メタノールを直ちに添加した。試料を−２０℃で一晩凍結し、その後３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、上清をＬＣＭＳ／ＭＳ検出を有するＡｇｉｌｅｎｔ  １２００  ＨＰＬＣシステムによって分析した。
【０２５５】
試験化合物の半減期を濃度−時間プロットから決定した。半減期から、固有クリアランスを計算した。追加のパラメータである肝血流、特定の肝臓重量およびミクロソームタンパク質含量と一緒に、肝臓インビボ血液クリアランス（ＣＬ）および最大経口生物学的利用能（Ｆｍａｘ）を異なる種について計算した。以下のパラメータ値を使用した：肝血流−１．３リットル／時間／ｋｇ（ヒト）、２．１リットル／時間／ｋｇ（イヌ）、４．２リットル／時間／ｋｇ（ラット）；特定の肝臓重量−２１ｇ／ｋｇ（ヒト）、３９ｇ／ｋｇ（イヌ）、３２ｇ／ｋｇ（ラット）；ミクロソームタンパク質含量−４０ｍｇ／ｇ。
【０２５６】
記載のアッセイでは、ミクロソームの第Ｉ相代謝のみ、例えば、代表的にはチトクロムＰ４５０酵素およびフラビンモノオキシゲナーゼ（ＦＭＯ）による酸化還元反応ならびにエステラーゼによる加水分解反応（エステルおよびアミド）が反映される。
【国際調査報告】
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