(57)【要約】本開示は、修飾ヌクレオシド、ヌクレオチド、及び核酸、並びにそれらを使用する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも２つの塩基が、５−トリフルオロメチル−シトシン及び１−メチル−プソイド−ウラシル；５−ヒドロキシメチル−シトシン及び１−メチル−プソイド−ウラシル；５−ブロモ−シトシン及び１−メチル−プソイド−ウラシル；５−トリフルオロメチル−シトシン及びプソイド−ウラシル；５−ヒドロキシメチル−シトシン及びプソイド−ウラシル；５−ブロモ−シトシン及びプソイド−ウラシル；シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；５−メチル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；５−トリフルオロメチル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；５−ヒドロキシメチル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；又は５−ブロモ−シトシン及び５−メトキシ−ウラシルである、ポリヌクレオチド。
【請求項２】
少なくとも２つの塩基が、５−トリフルオロメチル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；５−ヒドロキシメチル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；又は５−ブロモ−シトシン及び５−メトキシ−ウラシルである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
少なくとも２つの塩基が、５−ブロモ−シトシン及び５−メトキシ−ウラシルである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
少なくとも１つの塩基が、１，６−ジメチル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（１−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（２−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−アリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−エチニル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ビニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（任意選択で置換されたフェニル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アジド−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（任意選択で置換された−フェニル）−プソイド−ウラシル、６−アミノ−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、６−ブロモ−プソイド−ウラシル、６−ブチル−プソイド−ウラシル、６−クロロ−プソイド−ウラシル、６−シアノ−プソイド−ウラシル、６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−エトキシ−プソイド−ウラシル、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、６−エチル−プ
ソイド−ウラシル、６−フルオロ−プソイド−ウラシル、６−ホルミル−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、６−ヨード−プソイド−ウラシル、６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、６−メトキシ−プソイド−ウラシル、６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−メチル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−プロピル−プソイド−ウラシル、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１（４−ニトロ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ウラシル、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ウラシル、１−アミノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジル−プソイド−ウラシル、１−ブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピル−プソイド−ウラシル、１−エチル−プソイド−ウラシル、１−ヘキシル−プソイド−ウラシル、１−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ペンチル−プソイド−ウラシル、１−フェニル−プソイド−ウラシル、１−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ｐ−トルイル−プソイド−ウラシル、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、３−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−２−エタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−ｐ−安息香酸、Ｎ３−メチル−プソイド−ウラシル、５−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−カルボキシ−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルメチルエステル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）−ウラシル、２−アンヒドロ−シトシン、２−アンヒドロ−ウラシル、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシル、５−トリジュウテロメチル−６−ジュウテロ−ウラシル、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（２−フラニル）−ウラシル、８−トリフルオロメチル−アデニン、２−トリフルオロメチル−アデニン、３−デアザ−３−フルオロ−アデニン、３−デアザ−３−ブロモ−アデニン、３−デアザ−３−ヨード−アデニン、１−ヒドロキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−メトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−メトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，２−ジエトキシエチル）−プソイド
−ウラシル、１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、１−シアノメチル−プソイド−ウラシル、１−モルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−チオモルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジルオキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−プソイド−ウラシル、１−チオメトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−メタンスルホニルメチル−プソイド−ウラシル、１−ビニル−プソイド−ウラシル、１−アリル−プソイド−ウラシル、１−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−プロパルギル−プソイド−ウラシル、１−（４−フルオロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−クロロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ブロモベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ヨードベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−チオメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メタンスルホニルベンジル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−（４−メチル安息香酸）、プソイド−ウラシル１−（４−メチルベンゼンスルホン酸）、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−アジドベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ジメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ビス−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−アセチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロアセチル−プソイド−ウラシル、１−ベンゾイル−プソイド−ウラシル、１−ピバロイル−プソイド−ウラシル、１−（３−シクロプロピル−プロプ−２−イニル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸ジエチルエステル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸、プソイド−ウラシル１−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイド−ウラシル、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−ＰＥＧ２−プソイド−ウラシル、５−（Ｃ３〜８シクロアルキル）−シトシン、５−メチル−Ｎ６−アセチル−シトシン、５−（カルボキシメチル）−Ｎ６−トリフルオロアセチル−シトシントリフルオロメチルエステル、Ｎ６−プロピオニル−シトシン、５−モノフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメトキシ−シトシン、Ｎ６−（１，１，１−トリフルオロ−プロピオニル）−シトシン、４−アセチル−プソイド−イソシトシン、１−エチル−プソイド−イソシトシン、１−ヒドロキシ−プソイド−イソシトシン、又は１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシルである、ポリヌクレオチド。
【請求項５】
少なくとも１つの塩基が、１，６−ジメチル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（１−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（２−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−アリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−エチニル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ビニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４
−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（任意選択で置換されたフェニル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アジド−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（置換された−フェニル）−プソイド−ウラシル、６−アミノ−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、６−ブロモ−プソイド−ウラシル、６−ブチル−プソイド−ウラシル、６−クロロ−プソイド−ウラシル、６−シアノ−プソイド−ウラシル、６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−エトキシ−プソイド−ウラシル、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、６−エチル−プソイド−ウラシル、６−フルオロ−プソイド−ウラシル、６−ホルミル−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、６−ヨード−プソイド−ウラシル、６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、６−メトキシ−プソイド−ウラシル、６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−メチル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−プロピル−プソイド−ウラシル、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１（４−ニトロ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ウラシル、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ウラシル、１−アミノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジル−プソイド−ウラシル、１−ブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピル−プソイド−ウラシル、１−エチル−プソイド−ウラシル、１−ヘキシル−プソイド−ウラシル、１−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ペンチル−プソ
イド−ウラシル、１−フェニル−プソイド−ウラシル、１−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ｐ−トルイル−プソイド−ウラシル、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、３−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−２−エタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、又はプソイド−ウラシル−Ｎ１−ｐ−安息香酸である、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
少なくとも１つの塩基が、Ｎ３−メチル−プソイド−ウラシル、５−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−カルボキシ−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルメチルエステル、又は５−（カルボキシヒドロキシメチル）−ウラシルである、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
少なくとも１つの塩基が、２−アンヒドロ−シチジン又は２−アンヒドロ−ウラシルである、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
少なくとも１つの塩基が、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウラシル、又は５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシルである、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
少なくとも１つの塩基が、５−トリジュウテロメチル−６−ジュウテロ−ウラシル、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（２−フラニル）−ウラシル、Ｎ４−メチル−シトシン、８−トリフルオロメチル−アデニン、２−トリフルオロメチル−アデニン、３−デアザ−３−フルオロ−アデニン、３−デアザ−３−ブロモ−アデニン、又は３−デアザ−３−ヨード−アデニンである、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
少なくとも１つの塩基が、１−ヒドロキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−メトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−メトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，２−ジエトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、１−シアノメチル−プソイド−ウラシル、１−モルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−チオモルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジルオキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−プソイド−ウラシル、１−チオメトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−メタンスルホニルメチル−プソイド−ウラシル、１−ビニル−プソイド−ウラシル、１−アリル−プソイド−ウラシル、１−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−プロパルギル−プソイド−ウラシル、１−（４−フルオロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−クロロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ブロモベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ヨードベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−チオメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メタンスルホニルベンジル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−（４−メチル安息香酸）、プソイド−ウラシル１−（４−メチルベン
ゼンスルホン酸）、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−アジドベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ジメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ビス−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−アセチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロアセチル−プソイド−ウラシル、１−ベンゾイル−プソイド−ウラシル、１−ピバロイル−プソイド−ウラシル、１−（３−シクロプロピル−プロプ−２−イニル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸ジエチルエステル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸、プソイド−ウラシル１−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイド−ウラシル、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−プソイド−ウラシル、又は１−ビオチニル−ＰＥＧ２−プソイド−ウラシルである、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】
少なくとも１つの塩基が、５−シクロプロピル−シトシン、５−メチル−Ｎ６−アセチル−シトシン、５−（カルボキシメチル）−Ｎ６−トリフルオロアセチル−シトシントリフルオロメチルエステル、Ｎ６−プロピオニル−シトシン、５−モノフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメトキシ−シトシン、Ｎ６−（１，１，１−トリフルオロ−プロピオニル）−シトシン、４−アセチル−プソイド−イソシトシン、１−エチル−プソイド−イソシトシン、又は１−ヒドロキシ−プソイド−イソシトシンである、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】
少なくとも１つの塩基が、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシルである、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１３】
式ＶＩＩＩ〜ＸＩＩ：
【化１】
2017500034.tif 000293
の少なくとも１つの骨格部分を含み、
式中、点線は、任意選択の二重結合を表し；
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｕ及びＵ’の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）；
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ２”、Ｒ１、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；あるいは、Ｒ５は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、若しくはＲ２”の１つ又は複数と相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；あるいは、Ｒ４は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、Ｒ３、又はＲ５の１つ又は複数と相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；あるいは、Ｒ３は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”の１つ又は複数と相互に結合すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ９ヘテロシクリ
ルをもたらすことができ；ここで、前記任意選択の二重結合が存在する場合、Ｒ３は、存在せず；
ｍ’及びｍ”の各々は、独立に、０〜３の整数であり；
ｑ及びｒの各々は、独立に、０〜５の整数であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、水素、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は非存在である）；
Ｙ４の各々は、独立に、Ｈ、ヒドロキシル、保護ヒドロキシル、ハロ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、又は非存在であり；並びに
Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１４】
さらに、以下：
（ａ）少なくとも１つのコザック（Ｋｏｚａｋ）配列を任意選択的に含む５’ＵＴＲ；
（ｂ）３’ＵＴＲ；及び
（ｃ）少なくとも１つの５’キャップ構造
を含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１５】
少なくとも１つの５’キャップ構造が、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、又は２−アジド−グアノシンである、請求項１４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１６】
ポリＡ尾部をさらに含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１７】
前記ポリヌクレオチドが、目的のタンパク質をコードする、請求項１４〜１６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１８】
精製されている、請求項１〜１７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１９】
前記ポリヌクレオチドが、コドン最適化される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２０】
目的のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドであって、前記単離ポリヌクレオチドが、以下：
（ａ）例えば、少なくとも１つのコザック配列を含む５’ＵＴＲ；
（ｂ）３’ＵＴＲ；及び
（ｃ）少なくとも１つの５’キャップ構造
を含み、
ここで、少なくとも１つの塩基は、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、５−オキシ酢酸−メチルエステル−ウラシル、５−トリフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメチル−ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−メ
トキシ−カルボニル−メチル−ウラシル、５−オキシ酢酸−ウラシル、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）−ウラシル、２−アミノ−アデニン、８−アザ−アデニン、キサントシン、５−ブロモ−シトシン、５−アミノアリル−シトシン、５−ヨード−シトシン、８−ブロモ−アデニン、８−ブロモ−グアニン、Ｎ４−ベンゾイル−シトシン、Ｎ４−アミノ−シトシン、Ｎ６−Ｂｚ−アデニン、Ｎ２−イソブチル−グアニン、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−カルバモイルメチル−ウラシル、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、５−メチルジヒドロ−ウラシル、５−（１−プロピル）シトシン、５−エチニルシトシン、５−ビニル−ウラシル、（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−ウラシル、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−ウラシル、５−メトキシ−シトシン、５−ホルミル−ウラシル、５−シアノ−ウラシル、５−ジメチルアミノ−ウラシル、５−シアノ−シトシン、５−フェニルエチニル−ウラシル、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−シトシン、２−メルカプト−アデニン、２−アジド−アデニン、２−フルオロ−アデニン、２−クロロ−アデニン、２−ブロモ−アデニン、２−ヨード−アデニン、７−アミノ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン、２，４−ジヒドロピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、２，４−ジヒドロピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５，７−ジオン、ピロロシン、９−デアザ−アデニン、９−デアザ−グアニン、３−デアザ−アデニン、３−デアザ−３−クロロ−アデニン、１−デアザ−アデニン、５−ビニル−シトシン、５−フェニル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、５−（１−プロピニル）−ウラシル、５−（１−プロピニル）−シトシン、又は５−メトキシメチル−シトシンである、単離ポリヌクレオチド。
【請求項２１】
少なくとも１つの塩基が、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシルである、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２２】
少なくとも１つの塩基が、５−オキシ酢酸−メチルエステル−ウラシル、５−トリフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメチル−ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−メトキシ−カルボニル−メチル−ウラシル、５−オキシ酢酸−ウラシル、又は３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）−ウラシルである、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２３】
少なくとも１つの塩基が、２−アミノ−アデニン、８−アザ−アデニン、キサントシン、５−ブロモ−シトシン、又は５−アミノアリル−シトシンである、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２４】
少なくとも１つの塩基が、５−ヨード−シトシン、８−ブロモ−アデニン、８−ブロモ−グアニン、Ｎ４−ベンゾイル−シトシン、Ｎ４−アミノ−シトシン、Ｎ６−Ｂｚ−アデニン、又はＮ２−イソブチル−グアニンである、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】
少なくとも１つの塩基が、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−カルバモイルメチル−ウラシル、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、又は５−メチルジヒドロ−ウラシルである、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２６】
少なくとも１つの塩基が、５−（１−プロピニル）シトシン、５−エチニルシトシン、５−ビニル−ウラシル、（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−ウラシル、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−ウラシル、５−メトキシ−シトシン、５−ホルミル−ウラシル、５−シアノ−ウラシル、５−ジメチルアミノ−ウラシル、５−シアノ−シトシン、５−フェニルエチニル−ウラシル、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−シトシン、２−メルカプト−アデニン、２−アジド−アデニン、２−フルオロ−アデニン、２−クロロ−ア
デニン、２−ブロモ−アデニン、２−ヨード−アデニン、７−アミノ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン、２，４−ジヒドロピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、２，４−ジヒドロピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５，７−ジオン、ピロロシン、９−デアザ−アデニン、９−デアザ−グアニン、３−デアザ−アデニン、３−デアザ−３−クロロ−アデニン、又は１−デアザ−アデニンである、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２７】
少なくとも１つの塩基が、５−メトキシ−ウラシル、５−ビニル−シトシン、５−フェニル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、又は５−メトキシメチル−シトシンである、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
少なくとも１つの塩基が、５−ブロモ−シトシンである、請求項２０に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２９】
ポリＡ尾部をさらに含む、請求項２０〜２８のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３０】
前記ポリヌクレオチドが精製されている、請求項２０〜２９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３１】
前記少なくとも１つの５’キャップ構造が、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、又は２−アジド−グアノシンである、請求項２０〜３０のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３２】
前記ポリヌクレオチドがコドン最適化される、請求項２０〜３１のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３３】
式Ｉの化合物：
Ａ−Ｂ
式Ｉ
（式中、Ａは、以下：
【化２】
2017500034.tif 000294
であり；
式中、点線は、任意選択の二重結合を表し；
Ｕ及びＵ’の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）；
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ１、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；あるいは、Ｒ５は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、若しくはＲ２”の１つ又は複数と相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルを形成することができ；あるいは、Ｒ４は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、Ｒ３、又はＲ５の１つ又は複数と相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；あるいは、Ｒ３は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”の１つ又は複数と相互に結合すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；ここで、前記任意選択の二重結合が存在する場合、Ｒ３は、存
在せず；
ｍ’及びｍ”の各々は、独立に、０〜３の整数であり；
ｑ及びｒの各々は、独立に、０〜５の整数であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、水素、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は非存在である）；
Ｙ４及びＹ６の各々は、独立に、Ｈ、ヒドロキシル、保護ヒドロキシル、ハロ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、又は非存在であり；  
Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンであり；並びに
Ｂは、１，６−ジメチル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（１−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（２−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−アリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−エチニル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ビニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（任意選択で置換された−フェニル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アジド−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（任意選択で置換された−フェニル）−プソイド−ウラシル、６−アミノ−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、６−ブロモ−プソイド−ウラシル、６−ブチル−プソイド−ウラシル、６−クロロ−プソイド−ウラシル、６−シアノ−プソイド−ウラシル、６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−エトキシ−プソイド−ウラシル、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、６−エチル−プソイド−ウラシル、６−フルオロ−プソイド−ウラシル、６−ホルミル−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、６−ヨード−プソイド−ウラシル、６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、６−メトキシ−プソイ
ド−ウラシル、６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−メチル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−プロピル−プソイド−ウラシル、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１（４−ニトロ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ウラシル、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ウラシル、１−アミノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジル−プソイド−ウラシル、１−ブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピル−プソイド−ウラシル、１−エチル−プソイド−ウラシル、１−ヘキシル−プソイド−ウラシル、１−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ペンチル−プソイド−ウラシル、１−フェニル−プソイド−ウラシル、１−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ｐ−トルイル−プソイド−ウラシル、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、３−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−２−エタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−ｐ−安息香酸、Ｎ３−メチル−プソイド−ウラシル、５−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−カルボキシ−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルメチルエステル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、２−アンヒドロ−シトシン、２−アンヒドロ−ウラシル、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシル、５−トリジュウテロメチル−６−ジュウテロ−ウラシル、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（２−フラニル）−ウラシル、８−トリフルオロメチル−アデニン、２−トリフルオロメチル−アデニン、３−デアザ−３−フルオロ−アデニン、３−デアザ−３−ブロモ−アデニン、３−デアザ−３−ヨード−アデニン、１−ヒドロキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−メトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−メトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，２−ジエトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、１−シアノメチル−プソイド−ウラシル、１−モルホリノメチル−プソイド
−ウラシル、１−チオモルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジルオキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−プソイド−ウラシル、１−チオメトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−メタンスルホニルメチル−プソイド−ウラシル、１−ビニル−プソイド−ウラシル、１−アリル−プソイド−ウラシル、１−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−プロパルギル−プソイド−ウラシル、１−（４−フルオロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−クロロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ブロモベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ヨードベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−チオメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メタンスルホニルベンジル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−（４−メチル安息香酸）、プソイド−ウラシル１−（４−メチルベンゼンスルホン酸）、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−アジドベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ジメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ビス−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−アセチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロアセチル−プソイド−ウラシル、１−ベンゾイル−プソイド−ウラシル、１−ピバロイル−プソイド−ウラシル、１−（３−シクロプロピル−プロプ−２−イニル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸ジエチルエステル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸、プソイド−ウラシル１−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイド−ウラシル、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−ＰＥＧ２−プソイド−ウラシル、５−シクロプロピル−シトシン、５−メチル−Ｎ６−アセチル−シトシン、５−（カルボキシメチル）−Ｎ６−トリフルオロアセチル−シトシントリフルオロメチルエステル、Ｎ６−プロピオニル−シトシン、５−モノフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメトキシ−シトシン、Ｎ６−（１，１，１−トリフルオロ−プロピオニル）−シトシン、４−アセチル−プソイド−イソシトシン、１−エチル−プソイド−イソシトシン、１−ヒドロキシ−プソイド−イソシトシン、若しくは１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシルである）；
又はその塩。
【請求項３４】
Ｂが、１，６−ジメチル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（１−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（２−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−アリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−エチニル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ビニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（任意選択で置換されたフェニル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アジド−プ
ソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（置換された−フェニル）−プソイド−ウラシル、６−アミノ−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、６−ブロモ−プソイド−ウラシル、６−ブチル−プソイド−ウラシル、６−クロロ−プソイド−ウラシル、６−シアノ−プソイド−ウラシル、６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−エトキシ−プソイド−ウラシル、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、６−エチル−プソイド−ウラシル、６−フルオロ−プソイド−ウラシル、６−ホルミル−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、６−ヨード−プソイド−ウラシル、６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、６−メトキシ−プソイド−ウラシル、６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−メチル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−プロピル−プソイド−ウラシル、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１（４−ニトロ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ウラシル、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ウラシル、１−アミノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジル−プソイド−ウラシル、１−ブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピル−プソイド−ウラシル、１−エチル−プソイド−ウラシル、１−ヘキシル−プソイド−ウラシル、１−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ペンチル−プソイド−ウラシル、１−フェニル−プソイド−ウラシル、１−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ｐ−トルイル−プソイド−ウラシル、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオ
ロメチル−プソイド−ウラシル、３−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−２−エタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、又はプソイド−ウラシル−Ｎ１−ｐ−安息香酸である、請求項３３に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｂが、Ｎ３−メチル−プソイド−ウラシル、５−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−カルボキシ−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルメチルエステル、又は５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルである、請求項３３に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｂが、２−アンヒドロ−シトシン又は２−アンヒドロ−ウラシルである、請求項３３に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｂが、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウラシル、又は５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシルである、請求項３３に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｂが、５−トリジュウテロメチル−６−ジュウテロ−ウラシル、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（２−フラニル）−ウラシル、Ｎ４−メチル−シトシン、８−トリフルオロメチル−アデニン、２−トリフルオロメチル−アデニン、３−デアザ−３−フルオロ−アデニン、３−デアザ−３−ブロモ−アデニン、又は３−デアザ−３−ヨード−アデニンである、請求項３３に記載の化合物。
【請求項３９】
Ｂが、１−ヒドロキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−メトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−メトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，２−ジエトキシエチル）−プソイド−ウラシル、（±）１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、１−シアノメチル−プソイド−ウラシル、１−モルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−チオモルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジルオキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−プソイド−ウラシル、１−チオメトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−メタンスルホニルメチル−プソイド−ウラシル、１−ビニル−プソイド−ウラシル、１−アリル−プソイド−ウラシル、１−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−プロパルギル−プソイド−ウラシル、１−（４−フルオロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−クロロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ブロモベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ヨードベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−チオメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メタンスルホニルベンジル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−（４−メチル安息香酸）、プソイド−ウラシル１−（４−メチルベンゼンスルホン酸）、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−アジドベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ジメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ビス−ト
リフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−アセチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロアセチル−プソイド−ウラシル、１−ベンゾイル−プソイド−ウラシル、１−ピバロイル−プソイド−ウラシル、１−（３−シクロプロピル−プロプ−２−イニル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸ジエチルエステル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸、プソイド−ウラシル１−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイド−ウラシル、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−プソイド−ウラシル、又は１−ビオチニル−ＰＥＧ２−プソイド−ウラシルである、請求項３３に記載の化合物。
【請求項４０】
Ｂが、５−シクロプロピル−シトシン、５−メチル−Ｎ６−アセチル−シトシン、５−（カルボキシメチル）−Ｎ６−トリフルオロアセチル−シトシントリフルオロメチルエステル、Ｎ６−プロピオニル−シトシン、５−モノフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメトキシ−シトシン、Ｎ６−（１，１，１−トリフルオロ−プロピオニル）−シトシン、４−アセチル−プソイド−イソシトシン、１−エチル−プソイド−イソシトシン、又は１−ヒドロキシ−プソイド−イソシトシンである、請求項３３に記載の化合物。
【請求項４１】
Ｂが、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイドウラシルである、請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
Ａが、式ＩＩの構造を有する、請求項３３〜４１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４３】
ｍ’が、０である、請求項４２に記載の化合物。
【請求項４４】
ｍ”が、１である、請求項４２又は４３に記載の化合物。
【請求項４５】
Ｒ４が、水素である、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４６】
Ａが、以下：
【化３】
2017500034.tif 000295
式ＶＩＩ
であり、
式中、Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、１〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）；
Ｒ１”、Ｒ２”、及びＲ５の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；又は、Ｒ５は、Ｒ１”若しくはＲ２”の１つと相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルを形成することができ；あるいは；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；又は、Ｒ３は、Ｒ１”又はＲ２”の１つと相互に結合すると共に、これらが結合している炭素と一緒に、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；
ｑ及びｒの各々は、独立に、０〜５の整数であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、水素、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は非存在である）；
Ｙ４及びＹ６の各々は、独立に、Ｈ、ヒドロキシル、保護ヒドロキシル、ハロ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、又は非存在であり；並びに
Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンである、請求項４２〜４５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４７】
Ｒ２”が、ヒドロキシルである、請求項４２〜４４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４８】
Ｒ１”が、水素である、請求項４７に記載の化合物。
【請求項４９】
Ｒ３が水素であり、且つ、Ｒ５が水素である、請求項４７又は４８に記載の化合物。
【請求項５０】
Ｒ３が水素であり、且つ、Ｒ５が、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルである、請求項４７又は４８に記載の化合物。
【請求項５１】
前記任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルが、エチニルである、請求項５０に記載の化合物。
【請求項５２】
Ｒ５が、水素である、請求項４７又は４８に記載の化合物。
【請求項５３】
Ｒ３が、アジド、又は任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルである、請求項５２に記載の化合物。
【請求項５４】
Ｒ３が、アジドである、請求項５３に記載の化合物。
【請求項５５】
Ｒ３が、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、ここで、前記任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルは、エチニルである、請求項５３に記載の化合物。
【請求項５６】
Ｒ３が水素であり、且つ、Ｒ５が水素である、請求項４７に記載の化合物。
【請求項５７】
Ｒ１”が、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル又は任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルである、請求項５６に記載の化合物。
【請求項５８】
Ｒ１”が、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ここで、前記任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルは、トリフルオロメチルである、請求項５７に記載の化合物。
【請求項５９】
Ｒ１”が、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、ここで、前記任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルは、エチニルである、請求項５７に記載の化合物。
【請求項６０】
Ｒ２”が、水素である、請求項４２〜４６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６１】
Ｒ３が、水素である、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
Ｒ５が、水素である、請求項６０又は６１に記載の化合物。
【請求項６３】
Ｒ１”が、ハロ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、アジド、又はアミノである、請求項６０〜６２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６４】
前記ハロが、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードである、請求項６３に記載の化合物。
【請求項６５】
前記任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルが、チオメトキシである、請求項６３に記載の化合物。
【請求項６６】
Ｒ３が、水素である、請求項４２〜４６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６７】
Ｒ５が、水素である、請求項６６に記載の化合物。
【請求項６８】
Ｒ１”が、ヒドロキシである、請求項６６又は６７に記載の化合物。
【請求項６９】
Ｒ２”が、水素、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、又は任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルである、請求項６８に記載の化合物。
【請求項７０】
前記任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルが、トリフルオロメチルである、請求項６９に記載の化合物。
【請求項７１】
前記任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルが、エチニルである、請求項６９に記載の化合物。
【請求項７２】
Ｒ１”が、水素である、請求項６６又は６７に記載の化合物。
【請求項７３】
Ｒ２”が、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、アジド、又はアミノである、請求項７２に記載の化合物。
【請求項７４】
前記任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルが、チオメトキシである、請求項７３に記載の化合物。
【請求項７５】
Ｒ１”が、ハロである、請求項６６又は６７に記載の化合物。
【請求項７６】
前記ハロが、フルオロである、請求項７５に記載の化合物。
【請求項７７】
Ｒ２”が、ハロである、請求項７５又は７６に記載の化合物。
【請求項７８】
前記ハロが、フルオロである、請求項７７に記載の化合物。
【請求項７９】
Ｕが、Ｃ（ＲＵ）ｎｕである、請求項４２〜７８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８０】
ｎｕが、２である、請求項７９に記載の化合物。
【請求項８１】
各ＲＵが、水素である、請求項７９又は８０に記載の化合物。
【請求項８２】
ｑが、０であり；Ｙ６が、ヒドロキシルである、請求項４２〜８１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８３】
Ｒ５が、ヒドロキシルである、請求項４２〜８２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８４】
Ｙ５が、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレンである、請求項４２〜８３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８５】
前記任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレンが、メチレンである、請求項８４に記載の化合物。
【請求項８６】
ｒが、０であり、Ｙ６が、ヒドロキシルである、請求項４２〜８５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８７】
ｒが、３であり；Ｙ１及びＹ３が各々、Ｏであり；Ｙ４及びＹ６が、ヒドロキシルである、請求項４２〜８５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８８】
ｒが、３であり；各Ｙ１が、Ｏであり；Ｙ４及びＹ６が、ヒドロキシルである、請求項４２〜８５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８９】
少なくとも１つのＹ３が、Ｓである、請求項８８に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、修飾核酸を用いて細胞機能を調節する組成物及び方法を提供する。本発明の修飾核酸は、ペプチド、ポリペプチド又は多種のタンパク質をコードし得る。コードされた分子は、治療薬及び／又は診断薬として用いることができる。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質発現をもたらす従来の方法にはいくつかの問題がある。例えば、細胞に導入されたＤＮＡは、娘細胞（異種ＤＮＡが染色体に組み込まれているか否かにかかわらず）又は子孫によって受け継がれ得る。導入されたＤＮＡは、ある頻度で宿主細胞ゲノムＤＮＡに組み込まれて、宿主細胞ゲノムＤＮＡに改変及び／又は損傷をもたらす恐れがある。さらに、タンパク質が生成されるまでに複数のステップを実施しなければならない。いったん細胞内に入ると、ＤＮＡは、ＲＮＡに転写されることになる核内に輸送されなければならない。続いて、ＤＮＡから転写されたＲＮＡは、タンパク質に翻訳されることになる細胞質に進入しなければならない。このように複数のプロセシングステップが必要なため、目的のタンパク質の生成までにラグタイムが生じる。さらに、細胞においてＤＮＡ発現を達成することが困難になり；多くの場合、ＤＮＡは細胞内に進入するが、発現されないか、又は適切な割合若しくは濃度で発現されない。これは、ＤＮＡを初代細胞又は修飾細胞株などの細胞に導入する場合に特有の問題となり得る。
【０００３】
天然のＲＮＡは、４つの基本的リボヌクレオチド：ＡＴＰ、ＣＴＰ、ＵＴＰ及びＧＴＰから合成されるが、転写後には修飾ヌクレオチドを含有し得る。さらに、約百の異なるヌクレオシド修飾がＲＮＡにおいて同定されている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】ロゼンスキーＪ，クレイン，Ｐ（Ｒｏｚｅｎｓｋｉ，Ｊ，Ｃｒａｉｎ，Ｐ）及びマクロスキー，Ｊ．（ＭｃＣｌｏｓｋｅｙ，Ｊ．）ら著、１９９９年。ＲＮＡ修飾データベース（Ｔｈｅ  ＲＮＡ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｄａｔａｂａｓｅ）：１９９９年更新。核酸研究（Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ）第２７巻、ｐ．１９６〜１９７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
当分野では、核酸の細胞内翻訳の調節に的を絞った生物学的方法が求められている。本発明は、治療薬開発に有利な特性を付与する化学修飾を組み込んだｍＲＮＡ分子を提供することによって、この問題を解決する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は中でも、修飾が、核酸塩基、糖又は骨格になされる、修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸を提供する。
第１の態様において、本発明は、少なくとも２つの塩基が、５−トリフルオロメチル−シトシン及び１−メチル−プソイド−ウラシル；５−ヒドロキシメチル−シトシン及び１−メチル−プソイド−ウラシル；５−ブロモ−シトシン及び１−メチル−プソイド−ウラシル；５−トリフルオロメチル−シトシン及びプソイド−ウラシル；５−ヒドロキシメチル−シトシン及びプソイド−ウラシル；５−ブロモ−シトシン及びプソイド−ウラシル；シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；５−メチル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；５−トリフルオロメチル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；５−ヒドロキシメ
チル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；又は５−ブロモ−シトシン及び５−メトキシ−ウラシルである、ポリヌクレオチドを特徴とする。
【０００７】
一部の実施形態では、少なくとも２つの塩基は、５−トリフルオロメチル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；５−ヒドロキシメチル−シトシン及び５−メトキシ−ウラシル；又は５−ブロモ−シトシン及び５−メトキシ−ウラシルである。
【０００８】
別の実施形態では、少なくとも２つの塩基は、５−ブロモ−シトシン及び５−メトキシ−ウラシルである。
第２の態様では、少なくとも１つの塩基が、１，６−ジメチル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（１−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（２−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−アリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−エチニル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ビニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（任意選択で置換された−フェニル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アジド−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（任意選択で置換された−フェニル）−プソイド−ウラシル、６−アミノ−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、６−ブロモ−プソイド−ウラシル、６−ブチル−プソイド−ウラシル、６−クロロ−プソイド−ウラシル、６−シアノ−プソイド−ウラシル、６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−エトキシ−プソイド−ウラシル、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、６−エチル−プソイド−ウラシル、６−フルオロ−プソイド−ウラシル、６−ホルミル−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、６−ヨード−プソイド−ウラシル、６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、６−メトキシ−プソイド−ウラシル、６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−メチル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−プロピル−プソイド−ウラシル、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ウラシル、
１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１（４−ニトロ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ウラシル、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ウラシル、１−アミノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジル−プソイド−ウラシル、１−ブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピル−プソイド−ウラシル、１−エチル−プソイド−ウラシル、１−ヘキシル−プソイド−ウラシル、１−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ペンチル−プソイド−ウラシル、１−フェニル−プソイド−ウラシル、１−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ｐ−トルイル−プソイド−ウラシル、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、３−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−２−エタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−ｐ−安息香酸、Ｎ３−メチル−プソイド−ウラシル、５−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−カルボキシ−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルメチルエステル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、２−アンヒドロ−シトシン、２−アンヒドロ−ウラシル、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシル、５−トリジュウテロメチル−６−ジュウテロ−ウラシル、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（２−フラニル）−ウラシル、８−トリフルオロメチル−アデニン、２−トリフルオロメチル−アデニン、３−デアザ−３−フルオロ−アデニン、３−デアザ−３−ブロモ−アデニン、３−デアザ−３−ヨード−アデニン、１−ヒドロキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−メトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−メトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，２−ジエトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、１−シアノメチル−プソイド−ウラシル、１−モルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−チオモルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジルオキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−プソイド−ウラシル、１−チオメトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−メタンスルホニルメチル−プソイド−ウラシル、１−ビニル−プソイド−ウラシル、１−アリル−プソイド−ウラシル、１−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−プロパルギル−プソイド−ウラシル、１−（４−フルオロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−クロロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ブロモベンジル
）−プソイド−ウラシル、１−（４−ヨードベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−チオメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メタンスルホニルベンジル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−（４−メチル安息香酸）、プソイド−ウラシル１−（４−メチルベンゼンスルホン酸）、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−アジドベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ジメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ビス−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−アセチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロアセチル−プソイド−ウラシル、１−ベンゾイル−プソイド−ウラシル、１−ピバロイル−プソイド−ウラシル、１−（３−シクロプロピル−プロプ−２−イニル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸ジエチルエステル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸、プソイド−ウラシル１−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイド−ウラシル、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−ＰＥＧ２−プソイド−ウラシル、５−（Ｃ３〜８シクロアルキル）−シトシン、５−メチル−Ｎ６−アセチル−シトシン、５−（カルボキシメチル）−Ｎ６−トリフルオロアセチル−シトシントリフルオロメチルエステル、Ｎ６−プロピオニル−シトシン、５−モノフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメトキシ−シトシン、Ｎ６−（１，１，１−トリフルオロ−プロピオニル）−シトシン、４−アセチル−プソイド−イソシトシン、１−エチル−プソイド−イソシトシン、１−ヒドロキシ−プソイド−イソシトシン、又は１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシルである、ポリヌクレオチドを特徴とする。
【０００９】
一部の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、１，６−ジメチル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（１−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（２−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−アリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−エチニル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ビニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（任意選択で置換されたフェニル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アジド−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−
プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（置換された−フェニル）−プソイド−ウラシル、６−アミノ−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、６−ブロモ−プソイド−ウラシル、６−ブチル−プソイド−ウラシル、６−クロロ−プソイド−ウラシル、６−シアノ−プソイド−ウラシル、６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−エトキシ−プソイド−ウラシル、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、６−エチル−プソイド−ウラシル、６−フルオロ−プソイド−ウラシル、６−ホルミル−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、６−ヨード−プソイド−ウラシル、６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、６−メトキシ−プソイド−ウラシル、６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−メチル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−プロピル−プソイド−ウラシル、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１（４−ニトロ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ウラシル、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ウラシル、１−アミノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジル−プソイド−ウラシル、１−ブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピル−プソイド−ウラシル、１−エチル−プソイド−ウラシル、１−ヘキシル−プソイド−ウラシル、１−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ペンチル−プソイド−ウラシル、１−フェニル−プソイド−ウラシル、１−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ｐ−トルイル−プソイド−ウラシル、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、３−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−２−エタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、又はプソイド−ウラシル−Ｎ１−ｐ−安息香酸である。
【００１０】
別の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、Ｎ３−メチル−プソイド−ウラシル、５−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−カルボキシ−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルメチルエステル、又は５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルである。
【００１１】
特定の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、２−アンヒドロ−シチジン又は２−アンヒドロ−ウラシルである。
一部の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウラシル、又は５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシルである。
【００１２】
別の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、５−トリジュウテロメチル−６−ジュウテロ−ウラシル、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（２−フラニル）−ウラシル、Ｎ４−メチル−シトシン、８−トリフルオロメチル−アデニン、２−トリフルオロメチル−アデニン、３−デアザ−３−フルオロ−アデニン、３−デアザ−３−ブロモ−アデニン、又は３−デアザ−３−ヨード−アデニンである。
【００１３】
特定の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、１−ヒドロキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−メトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−メトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，２−ジエトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、１−シアノメチル−プソイド−ウラシル、１−モルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−チオモルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジルオキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−プソイド−ウラシル、１−チオメトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−メタンスルホニルメチル−プソイド−ウラシル、１−ビニル−プソイド−ウラシル、１−アリル−プソイド−ウラシル、１−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−プロパルギル−プソイド−ウラシル、１−（４−フルオロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−クロロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ブロモベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ヨードベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−チオメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メタンスルホニルベンジル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−（４−メチル安息香酸）、プソイド−ウラシル１−（４−メチルベンゼンスルホン酸）、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−アジドベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ジメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ビス−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−アセチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロアセチル−プソイド−ウラシル、１−ベンゾイル−プソイド−ウラシル、１−ピバロイル−プソイド−ウラシル、１−（３−シクロプロピル−プロプ−２−イニル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸ジエチルエステル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸、プソイド−ウラシル１−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド
−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイド−ウラシル、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−プソイド−ウラシル、又は１−ビオチニル−ＰＥＧ２−プソイド−ウラシルである。
【００１４】
一部の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、５−シクロプロピル−シトシン、５−メチル−Ｎ６−アセチル−シトシン、５−（カルボキシメチル）−Ｎ６−トリフルオロアセチル−シトシントリフルオロメチルエステル、Ｎ６−プロピオニル−シトシン、５−モノフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメトキシ−シトシン、Ｎ６−（１，１，１−トリフルオロ−プロピオニル）−シトシン、４−アセチル−プソイド−イソシトシン、１−エチル−プソイド−イソシトシン、又は１−ヒドロキシ−プソイド−イソシトシンである。
【００１５】
別の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシルである。
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、式ＶＩＩＩ〜ＸＩＩ：
【００１６】
【化１】
2017500034.tif 000002
の少なくとも１つの骨格部分を含み、
式中、点線は、任意選択の二重結合を表し；
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｕ及びＵ’の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）；
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ２”、Ｒ１、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７の各々
は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；あるいは、Ｒ５は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、若しくはＲ２”の１つ又は複数と相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；あるいは、Ｒ４は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、Ｒ３、又はＲ５の１つ又は複数と相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；あるいは、Ｒ３は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”の１つ又は複数と相互に結合すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；ここで、前記任意選択の二重結合が存在する場合、Ｒ３は、存在せず；
ｍ’及びｍ”の各々は、独立に、０〜３の整数であり；
ｑ及びｒの各々は、独立に、０〜５の整数であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、水素、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は非存在である）；
Ｙ４の各々は、独立に、Ｈ、ヒドロキシル、保護ヒドロキシル、ハロ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、又は非存在であり；並びに
Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンである。
【００１７】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、さらに、以下：
（ａ）例えば、少なくとも１つのコザック（Ｋｏｚａｋ）配列を含む５’ＵＴＲ；
（ｂ）３’ＵＴＲ；及び
（ｃ）少なくとも１つの５’キャップ構造
を含む。
【００１８】
別の実施形態では、少なくとも１つの５’キャップ構造は、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、又は２−アジド−グアノシンである。
【００１９】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ポリＡ尾部をさらに含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、目的のタンパク質をコードする。
他の実施形態では、ポリヌクレオチドを精製する。
【００２０】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドをコドン最適化する。
別の実施形態では、本発明は、目的のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドを特徴とし、単離ポリヌクレオチドは、以下：
（ａ）例えば、少なくとも１つのコザック配列を含む５’ＵＴＲ；
（ｂ）３’ＵＴＲ；及び
（ｃ）少なくとも１つの５’キャップ構造
を含み、
ここで、少なくとも１つの塩基は、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、５−オキシ酢酸−メチルエステル−ウラシル、５−トリフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメチル−ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−メトキシ−カルボニル−メチル−ウラシル、５−オキシ酢酸−ウラシル、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）−ウラシル、２−アミノ−アデニン、８−アザ−アデニン、キサントシン、５−ブロモ−シトシン、５−アミノアリル−シトシン、５−ヨード−シトシン、８−ブロモ−アデニン、８−ブロモ−グアニン、Ｎ４−ベンゾイル−シトシン、Ｎ４−アミノ−シトシン、Ｎ６−Ｂｚ−アデニン、Ｎ２−イソブチル−グアニン、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−カルバモイルメチル−ウラシル、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、５−メチルジヒドロ−ウラシル、５−（１−プロピル）シトシン、５−エチニルシトシン、５−ビニル−ウラシル、（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−ウラシル、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−ウラシル、５−メトキシ−シトシン、５−ホルミル−ウラシル、５−シアノ−ウラシル、５−ジメチルアミノ−ウラシル、５−シアノ−シトシン、５−フェニルエチニル−ウラシル、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−シトシン、２−メルカプト−アデニン、２−アジド−アデニン、２−フルオロ−アデニン、２−クロロ−アデニン、２−ブロモ−アデニン、２−ヨード−アデニン、７−アミノ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン、２，４−ジヒドロピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、２，４−ジヒドロピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５，７−ジオン、ピロロシン、９−デアザ−アデニン、９−デアザ−グアニン、３−デアザ−アデニン、３−デアザ−３−クロロ−アデニン、１−デアザ−アデニン、５−ビニル−シトシン、５−フェニル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、５−（１−プロピニル）−ウラシル、５−（１−プロピニル）−シトシン、又は５−メトキシメチル−シトシンである。
【００２１】
一部の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシルである。
他の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、５−オキシ酢酸−メチルエステル−ウラシル、５−トリフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメチル−ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−メトキシ−カルボニル−メチル−ウラシル、５−オキシ酢酸−ウラシル、又は３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）−ウラシルである。
【００２２】
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの塩基は、２−アミノ−アデニン、８−アザ−アデニン、キサントシン、５−ブロモ−シトシン、又は５−アミノアリル−シトシンである。
【００２３】
一部の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、５−ヨード−シトシン、８−ブロモ−アデニン、８−ブロモ−グアニン、Ｎ４−ベンゾイル−シトシン、Ｎ４−アミノ−シトシ
ン、Ｎ６−Ｂｚ−アデニン、又はＮ２−イソブチル−グアニンである。
【００２４】
他の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウラシル、５−カルバモイルメチル−ウラシル、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、又は５−メチルジヒドロ−ウラシルである。
【００２５】
他の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、５−（１−プロピニル）シトシン、５−エチニルシトシン、５−ビニル−ウラシル、（Ｚ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−ウラシル、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−ウラシル、５−メトキシ−シトシン、５−ホルミル−ウラシル、５−シアノ−ウラシル、５−ジメチルアミノ−ウラシル、５−シアノ−シトシン、５−フェニルエチニル−ウラシル、（Ｅ）−５−（２−ブロモ−ビニル）−シトシン、２−メルカプト−アデニン、２−アジド−アデニン、２−フルオロ−アデニン、２−クロロ−アデニン、２−ブロモ−アデニン、２−ヨード−アデニン、７−アミノ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン、２，４−ジヒドロピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、２，４−ジヒドロピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５，７−ジオン、ピロロシン、９−デアザ−アデニン、９−デアザ−グアニン、３−デアザ−アデニン、３−デアザ−３−クロロ−アデニン、又は１−デアザ−アデニンである。
【００２６】
一部の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、５−メトキシ−ウラシル、５−ビニル−シトシン、５−フェニル−シトシン、５−ジフルオロメチル−シトシン、又は５−メトキシメチル−シトシンである。
【００２７】
他の実施形態では、少なくとも１つの塩基は、５−ブロモ−シトシンである。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ポリＡ尾部をさらに含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドを精製する。
【００２８】
他の実施形態では、少なくとも１つの５’キャップ構造は、Ｃａｐ０、Ｃａｐ１、ＡＲＣＡ、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’−フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン、又は２−アジド−グアノシンである。
【００２９】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドをコドン最適化する。
別の態様では、本発明は、式Ｉの化合物：
Ａ−Ｂ
式Ｉ
（式中、Ａは、以下：
【００３０】
【化２】
2017500034.tif 000003
であり；
式中、点線は、任意選択の二重結合を表し；
Ｕ及びＵ’の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである）；
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ１、Ｒ２”、Ｒ３’、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、及びＲ７の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；あるいは、Ｒ５は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、若しくはＲ２”の１つ又は複数と相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルを形成することができ；あるいは、Ｒ４は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、Ｒ３、又はＲ５の１つ又は複数と相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；あるいは、Ｒ３は、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”の１つ又は複数と相互に結合すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；ここで、前記任意選択の二重結合が存在する場合、Ｒ３は、存
在せず；
ｍ’及びｍ”の各々は、独立に、０〜３の整数であり；
ｑ及びｒの各々は、独立に、０〜５の整数であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、水素、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は非存在である）；
Ｙ４及びＹ６の各々は、独立に、Ｈ、ヒドロキシル、保護ヒドロキシル、ハロ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、又は非存在であり；  
Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンであり；並びに
Ｂは、１，６−ジメチル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（１−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（２−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−アリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−エチニル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ビニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（任意選択で置換された−フェニル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アジド−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（任意選択で置換された−フェニル）−プソイド−ウラシル、６−アミノ−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、６−ブロモ−プソイド−ウラシル、６−ブチル−プソイド−ウラシル、６−クロロ−プソイド−ウラシル、６−シアノ−プソイド−ウラシル、６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−エトキシ−プソイド−ウラシル、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、６−エチル−プソイド−ウラシル、６−フルオロ−プソイド−ウラシル、６−ホルミル−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、６−ヨード−プソイド−ウラシル、６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、６−メトキシ−プソイ
ド−ウラシル、６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−メチル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−プロピル−プソイド−ウラシル、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１（４−ニトロ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ウラシル、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ウラシル、１−アミノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジル−プソイド−ウラシル、１−ブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピル−プソイド−ウラシル、１−エチル−プソイド−ウラシル、１−ヘキシル−プソイド−ウラシル、１−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ペンチル−プソイド−ウラシル、１−フェニル−プソイド−ウラシル、１−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ｐ−トルイル−プソイド−ウラシル、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、３−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−２−エタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−ｐ−安息香酸、Ｎ３−メチル−プソイド−ウラシル、５−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−カルボキシ−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルメチルエステル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、２−アンヒドロ−シトシン、２−アンヒドロ−ウラシル、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）２−チオ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシル、５−トリジュウテロメチル−６−ジュウテロ−ウラシル、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（２−フラニル）−ウラシル、８−トリフルオロメチル−アデニン、２−トリフルオロメチル−アデニン、３−デアザ−３−フルオロ−アデニン、３−デアザ−３−ブロモ−アデニン、３−デアザ−３−ヨード−アデニン、１−ヒドロキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−メトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−メトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，２−ジエトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、１−シアノメチル−プソイド−ウラシル、１−モルホリノメチル−プソイド−ウ
ラシル、１−チオモルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジルオキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−プソイド−ウラシル、１−チオメトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−メタンスルホニルメチル−プソイド−ウラシル、１−ビニル−プソイド−ウラシル、１−アリル−プソイド−ウラシル、１−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−プロパルギル−プソイド−ウラシル、１−（４−フルオロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−クロロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ブロモベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ヨードベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−チオメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メタンスルホニルベンジル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−（４−メチル安息香酸）、プソイド−ウラシル１−（４−メチルベンゼンスルホン酸）、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−アジドベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ジメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ビス−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−アセチル−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロアセチル−プソイド−ウラシル、１−ベンゾイル−プソイド−ウラシル、１−ピバロイル−プソイド−ウラシル、１−（３−シクロプロピル−プロプ−２−イニル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸ジエチルエステル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸、プソイド−ウラシル１−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイド−ウラシル、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−ＰＥＧ２−プソイド−ウラシル、５−シクロプロピル−シトシン、５−メチル−Ｎ６−アセチル−シトシン、５−（カルボキシメチル）−Ｎ６−トリフルオロアセチル−シトシントリフルオロメチルエステル、Ｎ６−プロピオニル−シトシン、５−モノフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメトキシ−シトシン、Ｎ６−（１，１，１−トリフルオロ−プロピオニル）−シトシン、４−アセチル−プソイド−イソシトシン、１−エチル−プソイド−イソシトシン、１−ヒドロキシ−プソイド−イソシトシン、若しくは１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシルである）；
又はその塩を特徴とする。
【００３１】
一部の実施形態では、Ｂは、１，６−ジメチル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（１−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−（２−プロピニル）−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−アリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−エチニル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−６−ビニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−（任意選択で置換されたフェニル）プソイド−ウラシル、１−メチル−６−アミノ−プソイド−ウラシル、１−メ
チル−６−アジド−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブロモ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−クロロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−シアノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−エチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フルオロ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ホルミル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ヨード−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−フェニル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−プロピル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、１−メチル−６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、６−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、６−（４−モルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（４−チオモルホリノ）−プソイド−ウラシル、６−（置換された−フェニル）−プソイド−ウラシル、６−アミノ−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、６−ブロモ−プソイド−ウラシル、６−ブチル−プソイド−ウラシル、６−クロロ−プソイド−ウラシル、６−シアノ−プソイド−ウラシル、６−ジメチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−エトキシ−プソイド−ウラシル、６−エチルカルボキシレート−プソイド−ウラシル、６−エチル−プソイド−ウラシル、６−フルオロ−プソイド−ウラシル、６−ホルミル−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシアミノ−プソイド−ウラシル、６−ヒドロキシ−プソイド−ウラシル、６−ヨード−プソイド−ウラシル、６−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、６−メトキシ−プソイド−ウラシル、６−メチルアミノ−プソイド−ウラシル、６−メチル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−プロピル−プソイド−ウラシル、６−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメトキシ−プソイド−ウラシル、６−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイド−ウラシル、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（２，４，６−トリメチル−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−２−カルボキシエチル）プソイド−ウラシル、１−（２−アミノ−エチル）プソイド−ウラシル、１−（３−アミノ−プロピル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−４−カルボキシブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−ブチル）プソイド−ウラシル、１−（４−アミノ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（４−メチル−ベンジル）プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロ−ベンジル）プソイド−ウラシル、１（４−ニトロ−フェニル）プソイド−ウラシル、１−（５−アミノ−ペンチル）プソイド−ウラシル、１−（６−アミノ−ヘキシル）プソイド−ウラシル、１−アミノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジル−プソイド−ウラシル、１−ブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロブチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘプチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロヘキシル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロオクチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロペンチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピルメチル−プソイド−ウラシル、１−シクロプロピル−プソイド−ウラシル、１−エチル−プソイド−ウラシル、１−ヘキシル−プソイド−ウラシル、１−イソ−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ペンチル−プソイド−ウラシル、１−フェニル−プソイド−ウラシル、１−プロピル−プソイド−ウラシル、１−ｐ−トルイル−プソイド−ウラシル、１−ｔｅｒｔ−ブチル−プソイド−ウラ
シル、１−トリフルオロメチル−プソイド−ウラシル、３−（任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル−Ｎ１−２−エタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−３−プロピオン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−４−ブタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−５−ペンタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−６−ヘキサン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−７−ヘプタン酸、プソイド−ウラシル−Ｎ１−メチル−ｐ−安息香酸、６−フェニル−プソイド−ウラシル、６−アジド−プソイド−ウラシル、又はプソイド−ウラシル−Ｎ１−ｐ−安息香酸である。
【００３２】
他の実施形態では、Ｂは、Ｎ３−メチル−プソイド−ウラシル、５−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−カルボキシ−メチル−アミノ−メチル−ウラシル、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルメチルエステル、又は５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシルである。
【００３３】
いくつかの実施形態では、Ｂは、２−アンヒドロ−シトシン又は２−アンヒドロ−ウラシルである。
一部の実施形態では、Ｂは、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウラシル、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシル、５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウラシル、又は５−（イソ−ペンテニルアミノメチル）−ウラシルである。
【００３４】
他の実施形態では、Ｂは、５−トリジュウテロメチル−６−ジュウテロ−ウラシル、５−（２−クロロ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（４−アミノ−フェニル）−２−チオ−シトシン、５−（２−フラニル）−ウラシル、Ｎ４−メチル−シトシン、８−トリフルオロメチル−アデニン、２−トリフルオロメチル−アデニン、３−デアザ−３−フルオロ−アデニン、３−デアザ−３−ブロモ−アデニン、又は３−デアザ−３−ヨード−アデニンである。
【００３５】
いくつかの実施形態では、Ｂは、１−ヒドロキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−メトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２−メトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２，２−ジエトキシエチル）−プソイド−ウラシル、１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｒ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、（２Ｓ）−１−（２−ヒドロキシプロピル）−プソイド−ウラシル、１−シアノメチル−プソイド−ウラシル、１−モルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−チオモルホリノメチル−プソイド−ウラシル、１−ベンジルオキシメチル−プソイド−ウラシル、１−（２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロピル）−プソイド−ウラシル、１−チオメトキシメチル−プソイド−ウラシル、１−メタンスルホニルメチル−プソイド−ウラシル、１−ビニル−プソイド−ウラシル、１−アリル−プソイド−ウラシル、１−ホモアリル−プソイド−ウラシル、１−プロパルギル−プソイド−ウラシル、１−（４−フルオロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−クロロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ブロモベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ヨードベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−チオメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−メタンスルホニルベンジル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−（４−メチル安息香酸）、プソイド−ウラシル１−（４−メチルベンゼンスルホン酸）、１−（２，４，６−トリメチルベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−ニトロベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（４−アジドベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ジメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−（３，４−ビス−トリフルオロメトキシベンジル）−プソイド−ウラシル、１−アセチル
−プソイド−ウラシル、１−トリフルオロアセチル−プソイド−ウラシル、１−ベンゾイル−プソイド−ウラシル、１−ピバロイル−プソイド−ウラシル、１−（３−シクロプロピル−プロプ−２−イニル）−プソイド−ウラシル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸ジエチルエステル、プソイド−ウラシル１−メチルホスホン酸、プソイド−ウラシル１−［３−（２−エトキシ）］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−（２−エトキシ）−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、プソイド−ウラシル１−［３−｛２−（２−［２−｛２（２−エトキシ）−エトキシ｝−エトキシ］−エトキシ）−エトキシ｝］プロピオン酸、１−｛３−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−プロピオニル｝プソイド−ウラシル、１−［３−（２−｛２−［２−（２−アミノエトキシ）−エトキシ］−エトキシ｝−エトキシ）−プロピオニル］−プソイド−ウラシル、１−ビオチニル−プソイド−ウラシル、又は１−ビオチニル−ＰＥＧ２−プソイド−ウラシルである。
【００３６】
一部の実施形態では、Ｂは、５−シクロプロピル−シトシン、５−メチル−Ｎ６−アセチル−シトシン、５−（カルボキシメチル）−Ｎ６−トリフルオロアセチル−シトシントリフルオロメチルエステル、Ｎ６−プロピオニル−シトシン、５−モノフルオロメチル−シトシン、５−トリフルオロメトキシ−シトシン、Ｎ６−（１，１，１−トリフルオロ−プロピオニル）−シトシン、４−アセチル−プソイド−イソシトシン、１−エチル−プソイド−イソシトシン、又は１−ヒドロキシ−プソイド−イソシトシンである。
【００３７】
他の実施形態では、Ｂは、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイド−ウラシルである。
いくつかの実施形態では、Ａは、式ＩＩの構造を有する。
【００３８】
一部の実施形態では、ｍ’は、０である。
他の実施形態では、ｍ”は、１である。
いくつかの実施形態では、Ｒ４は、水素である。
【００３９】
一部の実施形態では、Ａは、以下：
【００４０】
【化３】
2017500034.tif 000004
であり、
式中、Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、１〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ア
ルキルである）；
Ｒ１”、Ｒ２”、及びＲ５の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；又は、Ｒ５は、Ｒ１”若しくはＲ２”の１つと相互に結合して、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルを形成することができ；あるいは；
Ｒ３は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールであり；又は、Ｒ３は、Ｒ１”又はＲ２”の１つと相互に結合すると共に、これらが結合している炭素と一緒に、任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ１０炭素環又は任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ９ヘテロシクリルをもたらすことができ；
ｑ及びｒの各々は、独立に、０〜５の整数であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、水素、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール、又は非存在である）；
Ｙ４及びＹ６の各々は、独立に、Ｈ、ヒドロキシル、保護ヒドロキシル、ハロ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニル、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルケニル、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６ヘテロアルキニル、任意選択で置換されたアミノ、又は非存在であり；並びに
Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレン、又は任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンである。
【００４１】
一部の実施形態では、Ｒ２’は、ヒドロキシルである。
他の実施形態では、Ｒ１”は、水素である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、水素であり、Ｒ５は、水素である。
【００４２】
一部の実施形態では、Ｒ３は、水素であり、Ｒ５は、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルである。
他の実施形態では、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルは、エチニルである。
【００４３】
いくつかの実施形態では、Ｒ５は、水素である。
一部の実施形態では、Ｒ３は、アジド、又は任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルである。
【００４４】
他の実施形態では、Ｒ３は、アジドである。
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、ここで、前記任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルは、エチニルである。
【００４５】
一部の実施形態では、Ｒ３は、水素であり、Ｒ５は、水素である。
別の実施形態では、Ｒ１”は、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキル又は任意選択
で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルである。
【００４６】
いくつかの実施形態では、Ｒ１”は、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキルであり、ここで、前記任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキルは、トリフルオロメチルである。
【００４７】
一部の実施形態では、Ｒ１”は、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルであり、ここで、前記任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルは、エチニルである。
他の実施形態では、Ｒ２”は、水素である。
【００４８】
いくつかの実施形態では、Ｒ３は、水素である。
一部の実施形態では、Ｒ５は、水素である。
他の実施形態では、Ｒ１”は、ハロ、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、アジド、又はアミノである。
【００４９】
いくつかの実施形態では、ハロは、フルオロ、クロロ、ブロモ、又はヨードである。
一部の実施形態では、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルは、チオメトキシである。
【００５０】
他の実施形態では、Ｒ３は、水素である。
いくつかの実施形態では、Ｒ５は、水素である。
一部の実施形態では、Ｒ１”は、ヒドロキシである。
【００５１】
他の実施形態では、Ｒ２”は、水素、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、又は任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルである。
いくつかの実施形態では、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルは、トリフルオロメチルである。
【００５２】
一部の実施形態では、任意選択で置換されたＣ２〜Ｃ６アルキニルは、エチニルである。
他の実施形態では、Ｒ１”は、水素である。
【００５３】
いくつかの実施形態では、Ｒ２”は、チオール、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、アジド、又はアミノである。
一部の実施形態では、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキルは、チオメトキシである。
【００５４】
他の実施形態では、Ｒ１”は、ハロである。
いくつかの実施形態では、ハロは、フルオロである。
一部の実施形態では、Ｒ２”は、ハロである。
【００５５】
他の実施形態では、ハロは、フルオロである。
いくつかの実施形態では、Ｕは、Ｃ（ＲＵ）ｎｕである。
一部の実施形態では、ｎｕは、２である。
【００５６】
他の実施形態では、各ＲＵは、水素である。
いくつかの実施形態では、ｑは、０であり；Ｙ６は、ヒドロキシルである。
一部の実施形態では、Ｒ５は、ヒドロキシルである。
【００５７】
他の実施形態では、Ｙ５は、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレンである。
いくつかの実施形態では、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキレンは、メチレンである。
【００５８】
一部の実施形態では、ｒは、０であり、Ｙ６は、ヒドロキシルである。
他の実施形態では、ｒは、３であり；Ｙ１、Ｙ３、及びＹ４は各々、ＯＨであり；Ｙ６は、ヒドロキシルである。
【００５９】
いくつかの実施形態では、ｒは、３であり；Ｙ１及びＹ４は各々、ＯＨであり；Ｙ６は、ヒドロキシルである。
一部の実施形態では、少なくとも１つのＹ３は、Ｓである。
【００６０】
一部の実施形態では、核酸塩基は、天然の核酸塩基又は非天然の核酸塩基からなる群から選択される。
一部の実施形態では、天然の核酸塩基は、プソイドウラシル又はＮ１−メチルプソイドウラシルからなる群から選択される。
【００６１】
一部の実施形態では、ヌクレオシドは、プソイドウリジン（ψ）又は５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）ではない。
本発明は、単離及び／又は精製することができるポリヌクレオチドを提供する。これらのポリヌクレオチドは、１つ又は複数の目的のタンパク質をコードすることができ、Ａ、Ｇ、Ｕ若しくはＣヌクレオシド又はヌクレオチドの化学構造と比較して、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを含むｎ個の連結したヌクレオシド又はヌクレオチドの配列を含み得る。ポリヌクレオチドはまた、例えば、少なくとも１つのコザック配列を含む５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、及び少なくとも１つの５’キャップ構造を含有してもよい。単離されたポリヌクレオチドは、ポリＡ尾部をさらに含有してもよく、また、精製してもよい。
【００６２】
一部の実施形態では、修飾核酸又は１つ又は複数の個々のヌクレオシド若しくはヌクレオチドには複数の修飾が含まれる。例えば、ヌクレオシドに対する修飾は、核酸塩基、糖、及び／又はヌクレオシド間結合に対する１つ又は複数の修飾を含み得る。
【００６３】
少なくとも１つの修飾を有する一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：プソイドウリジン−α−チオ−ＭＰ、１−メチル−プソイドウリジン−α−チオ−ＭＰ、１−エチル−プソイドウリジン−ＭＰ、１−プロピル−プソイドウリジン−ＭＰ、１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−プソイドウリジン−ＭＰ、２−アミノ−アデニン−ＭＰ、キサントシン−ＭＰ、５−ブロモ−シチジン−ＭＰ、５−アミノアリル−シチジン−ＭＰ、又は２−アミノプリン−リボシド−ＭＰの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００６４】
少なくとも１つの修飾を有するいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：プソイドウリジン−α−チオ−ＭＰ、１−メチル−プソイドウリジン−α−チオ−ＭＰ、１−エチル−プソイドウリジン−ＭＰ、１−プロピル−プソイドウリジン−ＭＰ、５−ブロモ−シチジン−ＭＰ、５−アミノアリル−シチジン−ＭＰ、又は２−アミノプリン−リボシド−ＭＰの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００６５】
少なくとも１つの修飾を有する他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：プソイドウリジン−α−チオ−ＭＰ、１−メチル−プソイドウリジン−α−チオ−ＭＰ、又は５−ブロモ−シチジン−ＭＰの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００６６】
他の実施形態では、単離ポリヌクレオチドは、少なくとも２つの修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを含む。
少なくとも２つの修飾を有する特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、５−ブロモ−シチジン−ＭＰ及び１−メチル−プソイドウリジン−ＭＰの各々の少なくとも１つの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００６７】
少なくとも２つの修飾を有する他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、５−ブロモ−シチジン−ＭＰ及びプソイドウリジン−ＭＰの各々の少なくとも１つの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００６８】
少なくとも１つの修飾を有する一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：２−チオ−プソイドウリジン−ＭＰ、５−トリフルオロメチル−ウリジン−ＭＰ、５−トリフルオロメチル−シチジン−ＭＰ、３−メチル−プソイドウリジン−ＭＰ、５−メチル−２−チオ−ウリジン−ＭＰ、Ｎ４−メチル−シチジン−ＭＰ、５−ヒドロキシメチル−シチジン−ＭＰ、３−メチル−シチジン−ＭＰ、５−オキシ酢酸メチル−エステル−ウリジン−ＭＰ、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン−ＭＰ、５−メチルアミノメチル−ウリジン−ＭＰ、５−メトキシ−ウリジン−ＭＰ、Ｎ１−メチル−グアノシン−ＭＰ、８−アザ−アデニン−ＭＰ、２−チオ−ウリジン−ＭＰ、５−ブロモ−ウリジン−ＭＰ、２−チオ−シチジン−ＭＰ、α−チオ−シチジン−ＭＰ、５−アミノアリル−ウリジン−ＭＰ、α−チオ−ウリジン−ＭＰ、又は４−チオ−ウリジン−ＭＰの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００６９】
少なくとも２つの修飾を有する他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：５−トリフルオロメチル−シチジン−ＭＰ及び１−メチル−プソイドウリジン−ＭＰ；５−ヒドロキシメチル−シチジン−ＭＰ及び１−メチル−プソイドウリジン−ＭＰ；５−トリフルオロメチル−シチジン−ＭＰ及びプソイドウリジン−ＭＰ；又はＮ４−アセチル−シチジン−ＭＰ及び５−メトキシ−ウリジン−ＭＰの各々の少なくとも１つの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００７０】
少なくとも１つの修飾を有する一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：２−チオ−プソイドウリジン−ＭＰ、５−トリフルオロメチル−シチジン−ＭＰ、５−メチル−２−チオ−ウリジン−ＭＰ、５−ヒドロキシメチル−シチジン−ＭＰ、５−オキシ酢酸メチルエステル−ウリジン−ＭＰ、５−メトキシ−ウリジン−ＭＰ、Ｎ４−アセチル−シチジン−ＭＰ、２−チオ−ウリジン−ＭＰ、５−ブロモ−ウリジン−ＭＰ、α−チオ−シチジン−ＭＰ、５−アミノアリル−ウリジン−ＭＰ、又はα−チオ−ウリジン−ＭＰの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００７１】
少なくとも２つの修飾を有する他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：５−トリフルオロメチル−シチジン−ＭＰ及び１−メチル−プソイドウリジン−ＭＰ又は５−ヒドロキシメチル−シチジン−ＭＰ及び１−メチル−プソイドウリジン−ＭＰの各々の少なくとも１つの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００７２】
少なくとも１つの修飾を有する一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：２−チオ−プソイドウリジン−ＭＰ、５−トリフルオロメチル−シチジン−ＭＰ、５−メチル−２−チオ−ウリジン−ＭＰ、Ｎ４−メチル−シチジン−ＭＰ、５−ヒドロキシメチル−シチジン−ＭＰ、５−オキシ酢酸メチルエステル−ウリジン−ＭＰ、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン−ＭＰ、５−メトキシ−ウリジン−ＭＰ、Ｎ２−チオ−ウリジン−ＭＰ、５−ブロモ−ウリジン−ＭＰ、α−チオ−シチジン−ＭＰ、５−アミノアリル−ウリジン−ＭＰ、又はα−チオ−ウリジン−ＭＰの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００７３】
少なくとも１つの修飾を有する一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：２−チオ−プソイドウリジン−ＭＰ、５−トリフルオロメチル−シチジン−ＭＰ、５−ヒドロキシメチル−シチジン−ＭＰ、又は５−メトキシ−ウリジン−ＭＰの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００７４】
少なくとも２つの修飾を有する他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、以下：Ｎ４−アセチル−シチジン−ＭＰ及び５−メトキシ−ウリジン−ＭＰの各々の少なくとも１つの核酸塩基、糖、及びヌクレオシド間結合を含有する骨格部分を含む。
【００７５】
本発明はまた、本明細書に記載する修飾ポリヌクレオチドを含む医薬組成物も提供する。これらは、溶媒、水性溶媒、非水性溶媒、分散媒体、希釈剤、分散液、懸濁補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、防腐剤、脂質、リピドイドリポソーム、脂質ナノ粒子、コア−シェルナノ粒子、ポリマー、リポプレックス化ペプチド、タンパク質、細胞、ヒアルロニダーゼ、及びそれらの混合物も含有してよい。
【００７６】
さらに、本発明のポリヌクレオチド及び修飾核酸を使用する方法も提供される。この場合、ポリヌクレオチドは、当分野で公知のいずれの手段により製剤化してもよいし、又は内皮、皮下若しくは筋内経路による注射を含む複数の経路のいずれにより投与してもよい。
【００７７】
本発明の修飾核酸の投与は、２回以上の等量又は非等量の分割用量によって行ってもよい。一部の実施形態では、分割用量のポリヌクレオチドを投与することによって対象により生成されるポリペプチドのレベルは、単回投与として同じ１日総用量のポリヌクレオチドを投与することによって得られるレベルより高い。
【００７８】
修飾核酸又はコード化ポリペプチドの検出は、対象又は患者の体液中で実施してよく、その際、体液は、末梢血液、血清、血漿、腹水、尿、脳脊髄液（ＣＳＦ）、痰、唾液、骨髄、滑液、房水、羊水、耳垢、母乳、気管支肺胞洗浄液、精液、前立腺液、カウパー腺液若しくは前射精液、汗、糞便、毛髪、涙、嚢胞液、胸膜若しくは腹膜液、心膜液、リンパ液、糜汁、乳糜、胆汁、間質液、月経、膿、皮脂、嘔吐物、膣分泌物、粘膜分泌物、水様便、膵液、副鼻腔からの洗浄液、気管支肺吸引液、胚盤胞腔液（ｂｌａｓｔｏｃｙｌ  ｃａｖｉｔｙ  ｆｌｕｉｄ）並びに臍帯血からなる群から選択される。
【００７９】
一部の実施形態では、投与は、数時間、数日、数週、数ヵ月、若しくは数年の期間にわたる投薬レジメンに従って実施し、マルチニードル注射装置、カテーテル若しくはルーメン装置、及び超音波、電気装置又は放射線を用いた装置から選択される１つ又は複数の装置を用いることによって達成することができる。
【００８０】
核酸塩基の名称は、ヌクレオシド又はヌクレオチドの一部に関するとき、塩基に付与された名称に対応する。例えば、「プソイド−ウラシル」は、プソイドウリジンの核酸塩基を指し、「プソイド−イソシトシン」は、プソイドイソシチジンの核酸塩基を指す。
【００８１】
別に定義されていない限り、本明細書で用いる技術用語及び科学用語は全て、本発明が属する技術分野の通常の技術者により、一般に理解されているものと同じ意味を有する。本開示で使用するための方法及び材料を本明細書に記載するが；当分野で公知の他の好適な方法及び材料を用いることもできる。材料、方法、及び実施例は、例示的に過ぎず、限定を意図するものではない。本明細書で述べる刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、及びその他の参照文献は全て、それらの全体を参照により本明細書に組み込むものとする。矛盾が生じた場合には、定義を含む本明細書を優先する。
【００８２】
本開示の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【発明を実施するための形態】
【００８３】
本開示は、中でも、限定はしないが、細胞の集団に導入されると自然免疫応答の低減などの改善された治療特性を発揮する修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸を提供する。
【００８４】
細胞内翻訳の有効な調節及びポリペプチドをコードする核酸又はその断片のプロセシングを取り巻く無数の障壁に対処する治療法が依然として当分野で必要とされていることから、本発明者らは、特定の修飾ｍＲＮＡ配列が、免疫応答を単に回避、防止又は低減することを超える利点を有する治療薬として有望であることを明らかにしている。
【００８５】
本発明は、目的のポリペプチドをコードすると共に、当分野における問題の１つ又は複数を回避する構造的及び／又は化学的特徴、例えば、構造的及び機能的完全性を保持しながら、核酸ベースの治療薬を最適化し、発現の閾値を解決し、発現速度、半減期及び／若しくはタンパク質濃度を改善し、タンパク質局在化を最適化すると共に、免疫応答及び／若しくは分解経路などの有害な生物応答を回避する上で有用な特徴を有する核酸ベースの化合物又はポリヌクレオチド（例えば、修飾ｍＲＮＡ）を提供することによって、前述の必要性に対処する。
【００８６】
本発明によれば、目的のポリペプチドは、以下：米国特許出願公開第２０１３／０２５９９２４号明細書、同第２０１３／０２５９９２３号明細書明細書、国際公開第２０１３／１５１６６３号、同第２０１３／１５１６６９号、同第２０１３／１５１６７０号、同第２０１３／１５１６６４号、同第２０１３／１５１６６５号、同第２０１３／１５１７３６号、米国仮特許出願第６１／６１８，８６２号明細書、同第６１／６８１，６４５号明細書、同第６１／６１８，８７３号明細書、同第６１／６８１，６５０号明細書、同第６１／６１８，８７８号明細書、同第６１／６８１，６５４号明細書、同第６１／６１８，８８５号明細書、同第６１／６８１，６５８号明細書、同第６１／６１８，９１１号明細書、同第６１／６８１，６６７号明細書、同第６１／６１８，９２２号明細書、同第６１／６８１，６７５号明細書、同第６１／６１８，９３５号明細書、同第６１／６８１，６８７号明細書、同第６１／６１８，９４５号明細書、同第６１／６８１，６９６号明細書、同第６１／６１８，９５３号明細書、及び同第６１／６８１，７０４号明細書に開示されているもののいずれから選択してもよく、これらのポリペプチドは、その全体を参照により本明細書に組み込むものとする。
【００８７】
本明細書において、一部には、以下：組織での安定性及び／若しくはクリアランス、受容体取り込み及び／若しくは速度論、組成物による細胞到達、翻訳機構への関与、ｍＲＮＡ半減期、翻訳効率、免疫回避、タンパク質産生能力、分泌効率（適用可能な場合）、循環への到達可能性、タンパク質半減期並びに／又は細胞の状態、機能及び／若しくは活性の調節の１つ又は複数を改善するように化学的に修飾された、目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供される。
【００８８】
本発明の修飾ヌクレオシド、ヌクレオチド及び核酸（本明細書に教示する修飾の組み合わせを含む）は、優れた特性を有しているため、治療法としてより好適である。
当分野における「全か無か（ａｌｌ  ｏｒ  ｎｏｎｅ）」のモデルは、修飾ｍＲＮＡの治療有用性に関連する生物学的現象を説明する上で極めて不十分であることが判明している。本発明者らは、タンパク質産生を改善する目的で、修飾、又は修飾の組み合わせの性質、修飾率（％）を考慮し、２種以上のサイトカイン又は測定基準を調べることにより、
特定の修飾ｍＲＮＡの効果及びリスクプロフィールを決定することができると結論付けた。
【００８９】
本発明の一態様において、非修飾のものと比較して、修飾ｍＲＮＡの有効性を決定する方法は、本発明の外性核酸の投与によって発現がトリガーされる１つ又は複数のサイトカインの測定及び分析を含む。これらの値を非修飾核酸の投与、又はサイトカイン応答、ＰｏｌｙＩＣ、Ｒ−８４８などの標準的測定基準、又は当分野で公知の他の基準と比較する。
【００９０】
本明細書で詳しく説明する標準的測定基準の一例は、細胞、組織若しくは生物において産生されるコード化ポリペプチド（タンパク質）のレベル又は量と、修飾核酸の投与又はそれとの接触により細胞、組織若しくは生物において発現がトリガーされた１種又は複数（若しくは１群）のサイトカインのレベル又は量の比の測定である。このような比は、タンパク質：サイトカイン比又は「ＰＣ」比と呼ばれる。ＰＣ比が高いほど、修飾核酸（測定されるタンパク質をコードするポリヌクレオチド）は有効である。本発明の好ましい（サイトカインによる）ＰＣ比は、１超、１０超、１００超、１０００超、１０，０００超又はそれ以上である。異なる、又は非修飾構築物の修飾核酸よりも高いＰＣ比を有する修飾核酸が好ましい。
【００９１】
ＰＣ比はさらに、ポリヌクレオチドに存在する修飾率（％）によって特定することもできる。例えば、１００％修飾核酸に正規化して、サイトカイン（若しくはリスク）又はサイトカインプロフィールの関数としてのタンパク質産生を決定することができる。
【００９２】
一実施形態では、本発明は、修飾核酸（ポリヌクレオチド）のＰＣ比を比較することにより、様々な化学、サイトカイン又は修飾率（％）にわたって、いずれか特定の修飾ポリヌクレオチドの相対効力を決定する方法を提供する。
【００９３】
別の実施形態では、化学的に修飾したｍＲＮＡは、実質的に非毒性及び非突然変異原性である。
一実施形態では、修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸は、化学的に修飾することにより、自然免疫応答を引き起こし得る相互作用を妨害することができる。さらに、これらの修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸を用いて、ペイロード、例えば、検出可能薬剤又は治療薬を生物学的標的に送達することもできる。例えば、核酸塩基又は糖部分に結合したリンカーを介して、核酸をペイロード、例えば、検出可能薬剤又は治療薬に共有結合することができる。本明細書に記載する組成物及び方法は、細胞外及び細胞内のいずれでもｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｖｉｔｒｏで、並びに無細胞アッセイなどのアッセイにおいても用いることができる。
【００９４】
別の態様では、本開示は、ヌクレオチドの糖部分に位置する化学修飾を提供する。
別の態様では、本開示は、核酸のリン酸骨格に位置する化学修飾を提供する。
別の態様では、本開示は、化学修飾を含むヌクレオチドを提供し、ここで、このヌクレオチドは、対応する非修飾核酸により誘導される細胞の自然免疫と比較して、細胞の自然免疫を低減する。
【００９５】
別の態様では、本開示は、本明細書に記載する化合物を含む組成物を提供する。一部の実施形態では、本組成物は、反応混合物である。一部の実施形態では、本組成物は、医薬組成物である。一部の実施形態では、本組成物は、細胞培養物である。一部の実施形態では、本組成物は、ＲＮＡポリメラーゼ及びｃＤＮＡ鋳型をさらに含む。一部の実施形態では、本組成物は、アデノシン、シトシン、グアノシン、及びウラシルからなる群から選択されるヌクレオチドをさらに含む。
【００９６】
さらに別の態様では、本開示は、生理学的に活性の分泌タンパク質を含む医薬製剤を製造する方法を提供し、この方法は、ヒト細胞の第１集団を、本明細書に記載する方法により製造した製剤用核酸でトランスフェクトするステップを含み、ここで、分泌タンパク質は、ヒト細胞の第２集団に対して活性である。
【００９７】
一部の態様では、分泌タンパク質は、第２集団に存在する少なくとも１つの細胞の表面の受容体と相互作用することができる。
いくつかの実施形態では、抗体依存性細胞傷害性を誘導するタンパク質と一緒に、哺乳動物対象の免疫を増強する１種又は複数のタンパク質をコードする翻訳可能領域を含む１つ又は複数の核酸を含有する併用治療薬が提供される。
【００９８】
一実施形態では、本開示の化合物は安定していることが意図される。さらに、明瞭化のために、個別の実施形態に関して説明される本開示のいくつかの特徴は、組み合わせて単一の実施形態で提供することもできることが理解される。反対に、簡略化のために単一の実施形態に関して説明される本明細書の様々な特徴は、個別に、又は任意の好適な部分組み合わせで提供することもできる。
本発明の修飾ヌクレオチド、ヌクレオシド及びポリヌクレオチド
本明細書において、ヌクレオチド、ヌクレオシド又はポリヌクレオチド（本発明の核酸、例えば、ｍＲＮＡ分子など）に関して、用語「修飾」又は、場合によって、「修飾された」は、Ａ、Ｇ、Ｕ又はＣリボヌクレオチドに対する修飾を指す。概して、本明細書において、これらの用語は、天然に存在する５’末端ｍＲＮＡキャップ部分でのリボヌクレオチド修飾を指すものではない。ポリペプチドの場合、用語「修飾」は、２０アミノ酸の標準セット、すなわち部分）と比較した修飾を指す。
【００９９】
修飾は、多様な異なる修飾であってよい。核酸がｍＲＮＡである一部の実施形態では、コード領域、フランキング領域及び／又は末端領域は、１、２、若しくは３つ以上の（任意選択で異なる）ヌクレオシド又はヌクレオチド修飾を含み得る。一部の実施形態では、細胞に導入された修飾ポリヌクレオチドは、非修飾ポリヌクレオチドと比較して、細胞において分解の低減を呈示し得る。
【０１００】
ポリヌクレオチドは、例えば、糖、核酸塩基、又はヌクレオシド間結合に対する（例えば、連結リン酸／ホスホジエステル結合／ホスホジエステル骨格に対する）ものなど、任意の有用な修飾を含むことができる。いくつかの実施形態では、修飾（例えば、１つ又は複数の修飾）は、糖及びヌクレオシド間結合の各々に存在する。本発明の修飾は、リボ核酸塩基（ＲＮＡ）のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）（例えば、リボフラノシル環の２’ＯＨの２’Ｈへの置換）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）又はそれらのハイブリッド）への修飾であってよい。これ以外の修飾も本明細書に記載する。
【０１０１】
本明細書に記載するように、本発明のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）が導入された細胞の自然免疫応答を実質的に誘導しない。誘導される自然免疫応答の特徴としては、１）炎症促進性サイトカインの発現増大、２）細胞内ＰＲＲ（ＲＩＧ−Ｉ、ＭＤＡ５など、及び／又は３）タンパク質翻訳の終結若しくは低減が挙げられる。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、細胞内に導入された修飾核酸分子は、細胞内で分解されるのが望ましい場合もある。例えば、タンパク質産生の正確なタイミングが要望される場合には、修飾核酸分子の分解が好ましいであろう。このように、一部の実施形態では、本発明は、分解ドメインを含む修飾核酸分子を提供し、これは、細胞内で指定されたように作用
することができる。
【０１０３】
ポリヌクレオチドは、任意選択で、他の薬剤（例えば、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、ｔＲＮＡ、三重らせん形成を誘導するＲＮＡ、アプタマー、ベクターなど）を含有させることができる。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、１つ又は複数の修飾ヌクレオシド若しくはヌクレオチド（すなわち修飾ｍＲＮＡ分子）を有する１つ又は複数のメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含んでもよい。これらのポリヌクレオチドについての詳細は以下に述べる。
【０１０４】
ポリヌクレオチド
アデュリ（Ａｄｕｒｉ）ら（アデュリ（Ａｄｕｒｉ，Ｒ．）ら、ＲＮＡにおける天然に存在する修飾ヌクレオチドについてのＡＭＢＥＲ力場パラメータ（ＡＭＢＥＲ  ｆｏｒｃｅ  ｆｉｅｌｄ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｉｎ  ＲＮＡ）、化学理論及び計算ジャーナル（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ
Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ）、２００６年、第３巻（４）、ｐ．１４６４〜７５）によれば、以下のものを含む１０７の天然ヌクレオシドが存在する：１−メチルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン、２−メチルアデノシン、２−Ｏ−リボシルリン酸アデノシン、Ｎ６−メチル−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−アセチルアデノシン、Ｎ６−グリシニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイルアデノシン、１，２−Ｏ−ジメチルアデノシン、Ｎ６，２−Ｏ−ジメチルアデノシン、２−Ｏ−メチルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６，２−Ｏ−トリメチルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−メチルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、２−チオシチジン、３−メチルシチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−メチルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、リシジン、Ｎ４−アセチル−２−Ｏ−メチルシチジン、５−ホルミル−２−Ｏ−メチルシチジン、５，２−Ｏ−ジメチルシチジン、２−Ｏ−メチルシチジン、Ｎ４，２−Ｏ−ジメチルシチジン、Ｎ４，Ｎ４，２−Ｏ−トリメチルシチジン、１−メチルグアノシン、Ｎ２，７−ジメチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、２−Ｏ−リボシルリン酸グアノシン、７−メチルグアノシン、未修飾ヒドロキシワイブトシン、７−アミノメチル−７−デアザグアノシン、７−シアノ−７−デアザグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、４−デメチルワイオシン、エポキシクエオシン、ヒドロキシワイブトシン、イソワイオシン、Ｎ２，７，２−Ｏ−トリメチルグアノシン、Ｎ２，２−Ｏ−ジメチルグアノシン、１，２−Ｏ−ジメチルグアノシン、２−Ｏ−メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２，２−Ｏ−トリメチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２，７−トリメチルグアノシン、ペロキシワイブトシン、ガラクトシル−クエオシン、マンノシル−クエオシン、クエオシン、アルカエオシン、ワイブトシン、メチルワイオシン、ワイオシン、２−チオウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン、３−メチルウリジン、４−チオウリジン、５−メチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５−カルボキシメチルウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、５−ヒドロキシウリジン、５−メチルウリジン、５−タウリノメチルウリジン、５−カルバモイルメチルウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジンメチルエステル、ジヒドロウリジン、５−メチルジヒドロウリジン、５−メチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５−（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２−チオウリジン、３，２−Ｏ−ジメチルウリジン、５
−カルボキシメチルアミノメチル−２−Ｏ−メチルウリジン、５−カルボキシメチル−２−Ｏ−メチルウリジン、５−メトキシカルボニルメチル−２−Ｏ−メチルウリジン、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２−Ｏ−メチルウリジン、５，２−Ｏ−ジメチルウリジン、２−Ｏ−メチルウリジン、２−チオ−２−Ｏ−メチルウリジン、ウリジン５−オキシ酢酸、５−メトキシカルボニルメチルウリジン、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル、５−メトキシウリジン、５−アミノエチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチル−２−セレノウリジン、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオウリジン、５−タウリノメチル−２−チオウリジン、プソイドウリジン、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイドウリジン、１−メチルプソイドウリジン、３−メチルプソイドウリジン、２−Ｏ−メチルプソイドウリジン、イノシン、１−メチルイノシン、１，２−Ｏ−ジメチルイノシン及び２−Ｏ−メチルイノシン。これらの各々又はその修飾核酸塩基は、本発明の核酸の成分となり得る。
【０１０５】
本発明のポリヌクレオチドは、目的のポリペプチドをコードする連結ヌクレオシドの第１領域、第１領域の５’末端に位置する第１フランキング領域、並びに第１領域の３’末端に位置する第２フランキング領域を含む。
【０１０６】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（Ｉａ）若しくは式（Ｉａ−１）：
【０１０７】
【化４】
2017500034.tif 000005
又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、
式中、Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたアルキルである）；
−−−は、単結合であるか、又は存在せず；
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ２”、Ｒ３’、Ｒ４、及びＲ５の各々は、もし存在すれば、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、又は非存在であり；ここで、Ｒ３と、Ｒ１’、Ｒ１”
、Ｒ２’、Ｒ２”、若しくはＲ５の１つ又は複数（例えば、Ｒ１’とＲ３、Ｒ１”とＲ３、Ｒ２’とＲ３、Ｒ２”とＲ３、又はＲ５とＲ３）は相互に結合して、任意選択で置換されたアルキレン又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたヘテロシクリル（例えば、二環式、三環式、若しくは四環式ヘテロシクリル）をもたらすことができ；Ｒ５と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、若しくはＲ２”の１つ又は複数（例えば、Ｒ１’とＲ５、Ｒ１”とＲ５、Ｒ２’とＲ５、又はＲ２”とＲ５）は相互に結合して、任意選択で置換されたアルキレン又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたヘテロシクリル（例えば、二環式、三環式、若しくは四環式ヘテロシクリル）をもたらすことができ；並びにＲ４と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、Ｒ３、又はＲ５の１つ又は複数は相互に結合して、任意選択で置換されたアルキレン又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたヘテロシクリル（例えば、二環式、三環式、若しくは四環式ヘテロシクリル）をもたらすことができ；
ｍ’及びｍ”の各々は、独立に、０〜３（例えば、０〜２、０〜１、１〜３、又は１〜２）の整数であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたアルキレン、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアリール、又は非存在である）；
各Ｙ４は、独立に、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノであり；
各Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、メチレン）、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり；
ｎは、１〜１００，０００の整数であり；並びに
Ｂは、核酸塩基（例えば、プリン、ピリミジン、又はそれらの誘導体）であり、ここで、ＢとＲ１’、ＢとＲ２’、ＢとＲ１”、又はＢとＲ２”は、それらが結合された炭素と一緒になって、任意選択で二環式基（例えば、二環式ヘテロシクリル）を形成することができるか、あるいは、Ｂ、Ｒ１”、及びＲ３、又はＢ、Ｒ２”、及びＲ３は、任意選択で三環式若しくは四環式基（例えば、本明細書に記載する式（ＩＩｏ）〜（ＩＩｐ）のような三環式若しくは四環式ヘテロシクリル）を形成することができる。
【０１０８】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾リボースを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（Ｉａ−２）〜（Ｉａ−５）又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含む。
【０１０９】
【化５】
2017500034.tif 000006
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（Ｉｂ）又は（Ｉｂ−１）：
【０１１０】
【化６】
2017500034.tif 000007
又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、
式中、Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたアルキルである）；
−−−は、単結合であるか、又は存在せず；
Ｒ１’、Ｒ３、Ｒ３”、及びＲ４の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、又は非存在であり；ここで、Ｒ１と、Ｒ３’、又はＲ１とＲ３”は一緒になって、任意選択で置換されたアルキレン又は任意選択で置換されたヘ
テロアルキレンを形成する（例えば、ロックド核酸を生成する）ことができ；
各Ｒ５は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、又は非存在であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたアルキレン、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、又は任意選択で置換されたアリールである）；
各Ｙ４は、独立に、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノであり；
ｎは、１〜１００，０００の整数であり；並びに
Ｂは、核酸塩基である。
【０１１１】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（Ｉｃ）：
【０１１２】
【化７】
2017500034.tif 000008
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、
式中、
Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたアルキルである）；
−−−は、単結合であるか、又は存在せず；
Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３の各々は、独立に、核酸塩基（例えば、本明細書に記載するように、プリン、ピリミジン、又はそれらの誘導体）、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニルであり、ここで、Ｂ１、Ｂ２、及びＢ３のただ１つだけが、核酸塩基であり；
Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒ３、及びＲ５の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置
換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニルであり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたアルキレン、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、又は任意選択で置換されたアリールである）；
各Ｙ４は、独立に、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノであり；
各Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、メチレン）、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり；
ｎは、１〜１００，０００の整数であり；
ここで、Ｕを含む環は、１つ又は複数の二重結合を含み得る。
【０１１３】
特定の実施形態では、Ｕを含む環は、Ｕ−ＣＢ３Ｒｂ３又はＣＢ３Ｒｂ３−ＣＢ２Ｒｂ２の間に二重結合を含まない。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（Ｉｄ）：
【０１１４】
【化８】
2017500034.tif 000009
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、式中、Ｕは、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたアルキルである）；
各Ｒ３は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニルであり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたアルキレン、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、又は任意選択で置換されたアリールである）；
各Ｙ４は、独立に、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で
置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノであり；
各Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、メチレン）、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり；
ｎは、１〜１００，０００の整数であり；並びに
Ｂは、核酸塩基（例えば、プリン、ピリミジン、又はそれらの誘導体）である。
【０１１５】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（Ｉｅ）：
【０１１６】
【化９】
2017500034.tif 000010
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、
式中、Ｕ’及びＵ”の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり（ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたアルキルである）；
各Ｒ６は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニルであり；
各Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、メチレン若しくはエチレン）、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり；
ｎは、１〜１００，０００の整数であり；並びに
Ｂは、核酸塩基（例えば、プリン、ピリミジン、又はそれらの誘導体）である。
【０１１７】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（Ｉｆ）若しくは（Ｉｆ−１）：
【０１１８】
【化１０】
2017500034.tif 000011
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、
式中、Ｕ’及びＵ”の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＵ）ｎｕ、又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここで、ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、若しくは任意選択で置換されたアルキルであり（例えば、Ｕ’は、Ｏで、Ｕ”は、Ｎである）；
−−−は、単結合であるか、又は存在せず；
Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ１”、Ｒ２”、Ｒ３、及びＲ４の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、又は非存在であり；ここで、Ｒ１’とＲ３’、Ｒ１”とＲ３、Ｒ２’とＲ３、又はＲ２”とＲ３は一緒になって、任意選択で置換されたアルキレン又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンを形成する（例えば、ロックド核酸を生成する）ことができ；ｍ’及びｍ”の各々は、独立に、０〜３（例えば、０〜２、０〜１、１〜３、又は１〜２）の整数であり；
Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、−ＮＲＮ１−、任意選択で置換されたアルキレン、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアリール、又は非存在である）；
各Ｙ４は、独立に、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、ボラニル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノであり；
各Ｙ５は、Ｏ、Ｓ、Ｓｅ、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、メチレン）、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり；
ｎは、１〜１００，０００の整数であり；並びに
Ｂは、核酸塩基（例えば、プリン、ピリミジン、又はそれらの誘導体）である。
【０１１９】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｕを含む環は、１つ又は２つの二重結合を有する。
【０１２０】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１
）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｒ１、Ｒ１’、及びＲ１”の各々は、もし存在すれば、Ｈである。別の実施形態では、Ｒ２、Ｒ２’、及びＲ２”の各々は、もし存在すれば、独立に、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ若しくはエトキシ）、又は任意選択で置換されたアルコキシアルコキシである。特定の実施形態では、アルコキシアルコキシは、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’であり、式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）。一部の実施形態では、ｓ２は０であり、ｓ１は１又は２であり、ｓ３は０又は１であり、Ｒ’はＣ１〜６アルキルである。
【０１２１】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｒ２、Ｒ２’、及びＲ２”の各々は、もし存在すれば、Ｈである。別の実施形態では、Ｒ１、Ｒ１’、及びＲ１”の各々は、もし存在すれば、独立に、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ若しくはエトキシ）、又は任意選択で置換されたアルコキシアルコキシである。特定の実施形態では、アルコキシアルコキシは、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’であり、式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）。一部の実施形態では、ｓ２は０であり、ｓ１は１又は２であり、ｓ３は０又は１であり、Ｒ’はＣ１〜６アルキルである。
【０１２２】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５の各々は、独立に、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ若しくはエトキシ）、又は任意選択で置換されたアルコキシアルコキシである。特定の実施形態では、Ｒ３はＨであり、Ｒ４はＨであり、Ｒ５はＨであるか、又はＲ３、Ｒ４、及びＲ５は全てＨである。特定の実施形態では、Ｒ３は、Ｃ１〜６アルキルであり、Ｒ４は、Ｃ１〜６アルキルであり、Ｒ５は、Ｃ１〜６アルキルであるか、又はＲ３、Ｒ４、及びＲ５は全てＣ１〜６アルキルである。特定の実施形態では、Ｒ３及びＲ４はいずれもＨであり、Ｒ５はＣ１〜６アルキルである。
【０１２３】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｒ３及びＲ５は、相互に結合して、任意選択で置換されたアルキレン又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたヘテロシクリル（例えば、トランス−３’，４’類似体などの二環式、三環式、若しくは四環式ヘテロシクリルをもたらし、ここで、Ｒ３及びＲ５は、相互に結合して、ヘテロアルキレン（例えば、−（ＣＨ２）ｂ１Ｏ（ＣＨ２）ｂ２Ｏ（ＣＨ２）ｂ３−、ここで、ｂ１、ｂ２、及びｂ３の各々は、独立に、０〜３の整数である）を形成する。
【０１２４】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜
（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ）において、Ｒ３と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、又はＲ５の１つ又は複数は、相互に結合して、任意選択で置換されたアルキレン又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたヘテロシクリル（例えば、二環式、三環式、若しくは四環式ヘテロシクリルをもたらし、Ｒ３と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、Ｒ２”、又はＲ５の１つ又は複数は、相互に結合して、ヘテロアルキレン（例えば、−（ＣＨ２）ｂ１Ｏ（ＣＨ２）ｂ２Ｏ（ＣＨ２）ｂ３−、ここで、ｂ１、ｂ２、及びｂ３の各々は、独立に、０〜３の整数である）を形成する。
【０１２５】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｒ５と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、又はＲ２”の１つ又は複数は、相互に結合して、任意選択で置換されたアルキレン又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンを形成すると共に、これらが結合している炭素と一緒になって、任意選択で置換されたヘテロシクリル（例えば、二環式、三環式、若しくは四環式ヘテロシクリルをもたらし、Ｒ５と、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、又はＲ２”の１つ又は複数は、相互に結合して、ヘテロアルキレン（例えば、−（ＣＨ２）ｂ１Ｏ（ＣＨ２）ｂ２Ｏ（ＣＨ２）ｂ３−、式中、ｂ１、ｂ２、及びｂ３の各々は、独立に、０〜３の整数である）を形成する。
【０１２６】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、各Ｙ２は、独立に、Ｏ、Ｓ、又は−ＮＲＮ１−であり、ここで、ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアリールである。特定の実施形態では、Ｙ２は、ＮＲＮ１−であり、ここで、ＲＮ１は、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、若しくはｎ−プロピルなどのＣ１〜６アルキル）である。
【０１２７】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、各Ｙ３は、独立に、Ｏ又はＳである。
【０１２８】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｒ１は、Ｈであり；各Ｒ２は、独立に、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ若しくはエトキシ）、又は任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、ここで、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルであり、例えば、ｓ２は０であり、ｓ１は１若しくは２であり、ｓ３は０若しくは１であり、Ｒ’は、Ｃ１〜６アルキルである）であり；各Ｙ２は、独立に、Ｏ又は−ＮＲＮ１−であり、ここで、ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル
、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、又は任意選択で置換されたアリールであり（例えば、ＲＮ１は、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、若しくはｎ−プロピルなどのＣ１〜６アルキル）である）；並びに、各Ｙ３は、独立に、Ｏ又はＳ（例えば、Ｓ）である。別の実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ若しくはエトキシ）、又は任意選択で置換されたアルコキシアルコキシである。また別の実施形態では、各Ｙ１は、独立に、Ｏ又は−ＮＲＮ１−であり、ここで、ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、又は任意選択で置換されたアリールであり（例えば、ＲＮ１は、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、若しくはｎ−プロピルなどのＣ１〜６アルキル）である）；各Ｙ４は、独立に、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノである。
【０１２９】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、各Ｒ１は、独立に、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ若しくはエトキシ）、又は任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、ここで、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルであり、例えば、ｓ２は０であり、ｓ１は１若しくは２であり、ｓ３は０若しくは１であり、Ｒ’は、Ｃ１〜６アルキルである）であり；Ｒ２は、Ｈであり；各Ｙ２は、独立に、Ｏ又は−ＮＲＮ１−であり、ここで、ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、又は任意選択で置換されたアリールであり（例えば、ＲＮ１は、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、若しくはｎ−プロピルなどのＣ１〜６アルキル）である）；並びに、各Ｙ３は、独立に、Ｏ又はＳ（例えば、Ｓ）である。別の実施形態では、Ｒ３は、Ｈ、ハロ（例えば、フルオロ）、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ若しくはエトキシ）、又は任意選択で置換されたアルコキシアルコキシである。また別の実施形態では、各Ｙ１は、独立に、Ｏ又は−ＮＲＮ１−であり、ここで、ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、又は任意選択で置換されたアリールであり（例えば、ＲＮ１は、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキル（例えば、メチル、エチル、イソプロピル、若しくはｎ−プロピルなどのＣ１〜６アルキル）である）；並びに、各Ｙ４は、独立に、Ｈ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノである。
【０１３０】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｕを含む環は、β−Ｄ（例えば、β−Ｄ−リボ）立体配置である。
【０１３１】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜
（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｕを含む環は、α−Ｌ（例えば、α−Ｌ−リボ）立体配置である。
【０１３２】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、１つ又は複数のＢは、プソイドウリジン（ψ）又は５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）ではない。
【０１３３】
一部の実施形態では、ｎ個のＢ核酸塩基の約１０％〜約１００％は、ψ又はｍ５Ｃではない（例えば、ｎ個のＢの１０％〜２０％、１０％〜３５％、１０％〜５０％、１０％〜６０％、１０％〜７５％、１０％〜９０％、１０％〜９５％、１０％〜９８％、１０％〜９９％、２０％〜３５％、２０％〜５０％、２０％〜６０％、２０％〜７５％、２０％〜９０％、２０％〜９５％、２０％〜９８％、２０％〜９９％、２０％〜１００％、５０％〜６０％、５０％〜７５％、５０％〜９０％、５０％〜９５％、５０％〜９８％、５０％〜９９％、５０％〜１００％、７５％〜９０％、７５％〜９５％、７５％〜９８％、７５％〜９９％、及び７５％〜１００％が、ψ又はｍ５Ｃではない）。一部の実施形態では、Ｂは、ψ又はｍ５Ｃではない。
【０１３４】
ポリヌクレオチドの一部の実施形態（例えば、式（Ｉａ）〜（Ｉａ−５）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ−１）、（ＩＩａ）〜（ＩＩｐ）、（ＩＩｂ−１）、（ＩＩｂ−２）、（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−２）、（ＩＩｎ−１）、（ＩＩｎ−２）、（ＩＶａ）〜（ＩＶｌ）、及び（ＩＸａ）〜（ＩＸｒ））において、Ｂが、シトシン、グアニン、ウラシル及びアデニンから選択される非修飾核酸塩基であるとき、Ｙ１、Ｙ２、又はＹ３の少なくとも１つは、Ｏではない。
【０１３５】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾リボースを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（ＩＩａ）〜（ＩＩｃ）：
【０１３６】
【化１１】
2017500034.tif 000012
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含む。特定の実施形態では、Ｕは、Ｏ又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここで、ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、又は任意選択で置換されたアルキルである（例えば、Ｕは、−ＣＨ２−若しくは−ＣＨ−である）。他の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、又は非存在であり（例えば、Ｒ１及びＲ２は各々、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシであり；Ｒ３及びＲ４は各々、独立に、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキルであり；Ｒ５は、Ｈ又はヒドロキシである）、並びに
【０１３７】
【化１２】
2017500034.tif 000013
は、単結合又は二重結合である。
【０１３８】
特定の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（ＩＩｂ−１）〜（ＩＩｂ−２）：
【０１３９】
【化１３】
2017500034.tif 000014
又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含む。一部の実施形態では、Ｕは、Ｏ又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここで、ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、又は任意選択で置換されたアルキルである（例えば、Ｕは、−ＣＨ２−若しくは−ＣＨ−である）。他の実施形態では、Ｒ１’、Ｒ２’、及びＲ２の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、又は非存在である（例えば、Ｒ１’、Ｒ２’、及びＲ２は各々、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシ、例えば、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、アルキル、若しくはアルコキシである）。特定の実施形態では、Ｒ２又はＲ２’は、ヒドロキシ又は任意選択で置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、若しくは本明細書に記載のいずれか）である。
【０１４０】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（ＩＩｃ−１）〜（ＩＩｃ−４）：
【０１４１】
【化１４】
2017500034.tif 000015
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含む。
【０１４２】
一部の実施形態では、Ｕは、Ｏ又はＣ（ＲＵ）ｎｕであり、ここで、ｎｕは、０〜２の整数であり、各ＲＵは、独立に、Ｈ、ハロ、又は任意選択で置換されたアルキルである（例えば、Ｕは、−ＣＨ２−若しくは−ＣＨ−である）。一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、及びＲ３の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、チオ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、又は非存在である（例えば、Ｒ１及びＲ２は各々、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシ、例えば、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、アルキル、若しくはアルコキシであり；各Ｒ３は、独立に、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキルある））。特定の実施形態では、Ｒ２は、任意選択で置換されたアルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、若しくは本明細書に記載のいずれか）である。特定の実施形態では、Ｒ１は、任意選択で置換されたアルキルであり、Ｒ２は、ヒドロキシである。他の実施形態では、Ｒ１は、ヒドロキシであり、Ｒ２は、任意選択で置換されたアルキルである。別の実施形態では、Ｒ３は、任意選択で置換されたアルキルである。
【０１４３】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、非環式修飾リボースを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（ＩＩｄ）〜（ＩＩｆ）：
【０１４４】
【化１５】
2017500034.tif 000016
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、ここで、変数は上に定義した通りである。
【０１４５】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、非環式修飾ヘキシトールを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（ＩＩｇ）〜（ＩＩｊ）：
【０１４６】
【化１６】
2017500034.tif 000017
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含む。
【０１４７】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、縮小又は拡大リボース環を有する糖部分を
含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（ＩＩｋ）〜（ＩＩｍ）：
【０１４８】
【化１７】
2017500034.tif 000018
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１’、Ｒ１”、Ｒ２’、及びＲ２”の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、又は非存在であり；Ｒ２’及びＲ３又はＲ２”及びＲ３は、一緒になって、任意選択で置換されたアルキレン又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンを形成することができる。
【０１４９】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ロックされた（ｌｏｃｋｅｄ）修飾リボースを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（ＩＩｎ）：
【０１５０】
【化１８】
2017500034.tif 000019
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、式中、Ｒ３’は、Ｏ、Ｓ、又は−ＮＲＮ１−（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニ
ル、若しくは任意選択で置換されたアリールである）であり、Ｒ３”は、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、若しくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）又は任意選択で置換されたヘテロアルキレン（例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−、若しくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２−）である（例えば、Ｒ３’は、Ｏであり、Ｒ３”は、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、若しくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）である）。
【０１５１】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（ＩＩｎ−１）〜（ＩＩｎ−２）：
【０１５２】
【化１９】
2017500034.tif 000020
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、式中、Ｒ３’は、Ｏ、Ｓ、又は−ＮＲＮ１−（ＲＮ１は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、若しくは任意選択で置換されたアリールである）であり、Ｒ３”は、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、若しくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）又は任意選択で置換されたヘテロアルキレン（例えば、−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−、若しくは−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２−）である（例えば、Ｒ３’は、Ｏであり、Ｒ３”は、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、若しくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）である）。
【０１５３】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、四環式ヘテロシクリルを形成するロックされた（ｌｏｃｋｅｄ）修飾リボースを含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、又は第２フランキング領域）は、式（ＩＩｏ）：
【０１５４】
【化２０】
2017500034.tif 000021
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含み、式中、Ｒ１２ａ、Ｒ１２ｃ、Ｔ１’、Ｔ１”、Ｔ２’、Ｔ２”  、Ｖ１、及びＶ３は、本明細書に記載する通りである。
【０１５５】
ポリヌクレオチドを表す式のいずれも、本明細書に記載する１つ又は複数の核酸塩基を含み得る。
一実施形態では、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを調製する方法を提供し、ここで、ポリヌクレオチドは、本明細書で定義する式（Ｉａ）：
【０１５６】
【化２１】
2017500034.tif 000022
を有するｎ個のヌクレオシドを含み、
本方法は、本明細書で定義する式（ＩＩＩａ）：
【０１５７】
【化２２】
2017500034.tif 000023
の化合物をＲＮＡポリメラーゼ、及びｃＤＮＡ鋳型と反応させるステップを含む。
【０１５８】
一実施形態では、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを調製する方法を提供し、ここで、ポリヌクレオチドは、本明細書で定義する式（Ｉａ−１）：
【０１５９】
【化２３】
2017500034.tif 000024
を有するｎ個のヌクレオシドを含み、本方法は、本明細書で定義する式（ＩＩＩａ−１）：
【０１６０】
【化２４】
2017500034.tif 000025
の化合物をＲＮＡポリメラーゼ、及びｃＤＮＡ鋳型と反応させるステップを含む。
【０１６１】
別の実施形態では、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチドを含むポリヌクレオチド（例えば、修飾ｍＲＮＡ分子）を増幅する方法を提供し、本方法は、本明細書で定義する式（ＩＩＩａ−１）の化合物をプライマー、ｃＤＮＡ鋳型、及びＲＮＡポリメラーゼと反応させるステップを含む。
【０１６２】
一実施形態では、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを調製する方法を提供し、ここで、前記ポリヌクレオチドは、本明細書で定義する式（Ｉａ−２）：
【０１６３】
【化２５】
2017500034.tif 000026
を有するｎ個のヌクレオシドを含み、本方法は、本明細書で定義する式（ＩＩＩａ−２）：
【０１６４】
【化２６】
2017500034.tif 000027
の化合物をＲＮＡポリメラーゼ、及びｃＤＮＡ鋳型と反応させるステップを含む。
【０１６５】
別の実施形態では、本発明は、少なくとも１個のヌクレオチドを含むポリヌクレオチド（例えば、修飾ｍＲＮＡ分子）を増幅する方法を提供し、本方法は、本明細書で定義する式（ＩＩＩａ−２）の化合物をプライマー、ｃＤＮＡ鋳型、及びＲＮＡポリメラーゼと反応させるステップを含む。
【０１６６】
一部の実施形態では、反応を１〜７，０００回繰り返す。本明細書に記載の実施形態のいずれにおいても、Ｂは、本明細書に記載する任意の核酸塩基であってよい。
ポリヌクレオチドは、任意選択で、本明細書に記載する５’及び／又は３’フランキング領域を含み得る。
【０１６７】
修飾ヌクレオチド及びヌクレオシド
本発明はまた、ポリヌクレオチド、例えば、修飾ｍＲＮＡ（又はｍＲＮＡ）分子の構築ブロック、例えば、修飾リボヌクレオシド、修飾リボヌクレオチドも包含する。例えば、これらの構築ブロックは、本発明のポリヌクレオチドを調製する上で有用である。
【０１６８】
一部の実施形態では、構築ブロック分子は、式（ＩＩＩａ）若しくは（ＩＩＩａ−１）：
【０１６９】
【化２７】
2017500034.tif 000028
又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有し、式中、置換基は、本明細書に記載する通り（例えば、式（Ｉａ）及び（Ｉａ−１）について）であり、Ｂが、シトシン、グアニン、ウラシル及びアデニルから選択される非修飾核酸塩基であるとき、Ｙ１、Ｙ２、及びＹ３の少なくとも１つは、Ｏではない。
【０１７０】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、式（ＩＶａ）〜（ＩＶｂ）：
【０１７１】
【化２８】
2017500034.tif 000029
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有し、ここで、Ｂは、本明細書に記載する通り（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）である。
【０１７２】
特定の実施形態では、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、及び（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、又は（ｂ３０））と、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）を組み合わせる。特定の実施形態では、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、及び（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）又は（ｂ３２））と、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）を組み合わせる。特定の実施形態では、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）及び（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）と、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）を組み合わせる。特定の実施形態では、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）及び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）と、式（ＩＶａ）又は（ＩＶｂ）を組み合わせる。
【０１７３】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）：
【０１７４】
【化２９】
2017500034.tif 000030
又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記載する通り（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）である。
【０１７５】
特定の実施形態では、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、及び（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、又は（ｂ３０））と、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）の１つを組み合わせる。
【０１７６】
特定の実施形態では、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、及び（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）又は（ｂ３２））と、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）の１つを組み合わせる。
【０１７７】
特定の実施形態では、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）及び（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）と、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）の１つを組み合わせる。
特定の実施形態では、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）及び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）と、式（ＩＶｃ）〜（ＩＶｋ）の１つを組み合わせる。
【０１７８】
他の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、式（Ｖａ）若しくは（Ｖｂ）：
【０１７９】
【化３０】
2017500034.tif 000031
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有し、式中、変数は、本明細書に記載する通り（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）である。
【０１８０】
他の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）：
【０１８１】
【化３１】
2017500034.tif 000032
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記載する通り（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）である。
【０１８２】
特定の実施形態では、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、及び（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）
、（ｂ２８）、（ｂ２９）、又は（ｂ３０））と、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）の１つを組み合わせる。特定の実施形態では、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、及び（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）又は（ｂ３２））と、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）の１つを組み合わせる。
【０１８３】
特定の実施形態では、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）及び（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）と、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）の１つを組み合わせる。
特定の実施形態では、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）及び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）と、式（ＩＸａ）〜（ＩＸｄ）の１つを組み合わせる。
【０１８４】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）：
【０１８５】
【化３２】
2017500034.tif 000033
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記載する通り（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）である。
【０１８６】
特定の実施形態では、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、及び（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、又は（ｂ３０））と、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）の１つを組み合わせる。
【０１８７】
特定の実施形態では、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、及び（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）又は（ｂ３２））と、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）の１つを組み合わせる。
【０１８８】
特定の実施形態では、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）及び（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）と、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）の１つを組み合わせる。
特定の実施形態では、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）及び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）と、式（ＩＸｅ）〜（ＩＸｇ）の１つを組み合わせる。
【０１８９】
他の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）：
【０１９０】
【化３３】
2017500034.tif 000034
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有し、式中、Ｂは、本明細書に記載する通り（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）である。特定の実施形態では、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、及び（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、又は（ｂ３０））と、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）の１つを組み合わせる。特定の実施形態では、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、及び（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）又は（ｂ３２））と、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）の１つを組み合わせる。
【０１９１】
特定の実施形態では、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）及び（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）と、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）の１つを組み合わせる。特定の実施形態では、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）及び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）と、式（ＩＸｈ）〜（ＩＸｋ）の１つを組み合わせる。
【０１９２】
他の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）：
【０１９３】
【化３４】
2017500034.tif 000035
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有し、式中、各ｒ１及びｒ２は、独立に、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５）の整数であり、Ｂは、本明細書に記載する通り（例えば、（ｂ１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）である。
【０１９４】
特定の実施形態では、修飾ウラシル（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、及び（ｂ２８）〜（ｂ３１）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、又は（ｂ３０））と、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）の１つを組み合わせる。
【０１９５】
特定の実施形態では、修飾シトシン（例えば、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、及び（ｂ３２）〜（ｂ３６）のいずれか１つ、例えば、式（ｂ１０）又は（ｂ３２））と、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）の１つを組み合わせる。
【０１９６】
特定の実施形態では、修飾グアニン（例えば、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）及び（ｂ３７）〜（ｂ４０）のいずれか１つ）と、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）の１つを組み合わせる。特定の実施形態では、修飾アデニン（例えば、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）及び（ｂ４１）〜（ｂ４３）のいずれか１つ）と、式（ＩＸｌ）〜（ＩＸｒ）の１つを組み合わせる。
【０１９７】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、以下：
【０１９８】
【化３５】
2017500034.tif 000036
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体からなる群から選択することができ、式中、各ｒは、独立に、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５）の整数である。
【０１９９】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、以下：
【０２００】
【化３６】
2017500034.tif 000037
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体からなる群から選択することができ、式中、各ｒは、独立に、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５）の整数であり、ｓ１は、本明細書に記載する通りである。
【０２０１】
一部の実施形態では、核酸（例えば、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ポリヌクレオチド）に組み込むことができる前記構築ブロック分子は、修飾ウリジンである（例えば、以下：
【０２０２】
【化３７−１】
2017500034.tif 000038
【０２０３】
【化３７−２】
2017500034.tif 000039
【０２０４】
【化３７−３】
2017500034.tif 000040
【０２０５】
【化３７−４】
2017500034.tif 000041
【０２０６】
【化３７−５】
2017500034.tif 000042
【０２０７】
【化３７−６】
2017500034.tif 000043
【０２０８】
【化３７−７】
2017500034.tif 000044
【０２０９】
【化３７−８】
2017500034.tif 000045
【０２１０】
【化３７−９】
2017500034.tif 000046
【０２１１】
【化３７−１０】
2017500034.tif 000047
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体からなる群から選択され、式中、Ｙ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６、及びｒは、本明細書に記載する通りである（例えば、各ｒは、独立に、０〜５、例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５などの整数である））。
【０２１２】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる前記構築ブロック分子は、修飾シチジンである（例えば、以下：
【０２１３】
【化３８−１】
2017500034.tif 000048
【０２１４】
【化３８−２】
2017500034.tif 000049
【０２１５】
【化３８−３】
2017500034.tif 000050
【０２１６】
【化３８−４】
2017500034.tif 000051
【０２１７】
【化３８−５】
2017500034.tif 000052
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体からなる群から選択され、式中、Ｙ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６、及びｒは、本明細書に記載する通りである（例えば、各ｒは、独立に、０〜５、例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５などの整数である））。例えば、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、以下：
【０２１８】
【化３９】
2017500034.tif 000053
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体からなる群から選択することができ、式中、各ｒは、独立に、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５）の整数である。
【０２１９】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる前記構築ブロック分子は、修飾アデノシンである（例えば、以下：
【０２２０】
【化４０−１】
2017500034.tif 000054
【０２２１】
【化４０−２】
2017500034.tif 000055
【０２２２】
【化４０−３】
2017500034.tif 000056
【０２２３】
【化４０−４】
2017500034.tif 000057
【０２２４】
【化４０−５】
2017500034.tif 000058
【０２２５】
【化４０−６】
2017500034.tif 000059
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体からなる群から選択され、式中、Ｙ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６、及びｒは、本明細書に記載する通りである（例えば、各ｒは、独立に、０〜５、例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５などの整数である））。
【０２２６】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、修飾グアノシンである（例えば、以下：
【０２２７】
【化４１−１】
2017500034.tif 000060
【０２２８】
【化４１−２】
2017500034.tif 000061
【０２２９】
【化４１−３】
2017500034.tif 000062
【０２３０】
【化４１−４】
2017500034.tif 000063
【０２３１】
【化４１−５】
2017500034.tif 000064
【０２３２】
【化４１−６】
2017500034.tif 000065
【０２３３】
【化４１−７】
2017500034.tif 000066
【０２３４】
【化４１−８】
2017500034.tif 000067
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体からなる群から選択され、式中、Ｙ１、Ｙ３、Ｙ４、Ｙ６、及びｒは、本明細書に記載する通りである（例えば、各ｒは、独立に、０〜５、例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５などの整数である））。
【０２３５】
一部の実施形態では、化学修飾は、当該環のＣ−５でのＣ基（例えば、シトシン又はウラシルなどのピリミジンヌクレオシドの場合）のＮによる置換（例えば、Ｃ−５での＞ＣＨ基の＞ＮＲＮ１基による置換、ここで、ＲＮ１は、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキルである）を含んでよい。例えば、ポリヌクレオチドに組み込むことができる前記構築ブロック分子は、以下：
【０２３６】
【化４２】
2017500034.tif 000068
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体であってよく、式中、各ｒは、独立に、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５）の整数である。
【０２３７】
別の実施形態では、化学修飾は、シトシンのＣ−５での水素のハロ（例えば、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、若しくはＩ）又は任意選択で置換されたアルキル（例えば、メチル）による置換を含んでよい。例えば、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、以下：
【０２３８】
【化４３】
2017500034.tif 000069
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体であってよく、式中、各ｒは、独立に、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５）の整数である。
【０２３９】
また別の実施形態では、化学修飾は、Ｃ−４位のＮＨ２及びＣ−５位の炭素原子により形成される融合環を含んでもよい。例えば、ポリヌクレオチドに組み込むことができる構築ブロック分子は、以下：
【０２４０】
【化４４】
2017500034.tif 000070
、又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体であってよく、式中、各ｒは、独立に、０〜５（例えば、０〜３、１〜３、又は１〜５）の整数である。
【０２４１】
糖に対する修飾
ポリヌクレオチド（例えば、本明細書に記載するＲＮＡ、ｍＲＮＡ）に組み込むことができる修飾ヌクレオシド及びヌクレオチド（例えば、構築ブロック分子）は、リボ核酸の
糖に対して修飾することができる。例えば、２’ヒドロキシル基（ＯＨ）をいくつかの異なる置換基で修飾又は置換することができる。２’位での例示的な置換として、限定はしないが、以下のものが挙げられる：Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル；任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ６アルコキシ；任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールオキシ；任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ８シクロアルキル；任意選択で置換されたＣ３〜Ｃ８シクロアルコキシ；任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリールオキシ；任意選択で置換されたＣ６〜Ｃ１０アリール−Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、任意選択で置換されたＣ１〜Ｃ１２（ヘテロシクリル）オキシ；糖（例えば、リボース、ペントース、又は本明細書に記載するいずれか）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、−Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＯＲ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキルであり、ｎは、０〜２０（例えば、０〜４、０〜８、０〜１０、０〜１６、１〜４、１〜８、１〜１０、１〜１６、１〜２０、２〜４、２〜８、２〜１０、２〜１６、２〜２０、４〜８、４〜１０、４〜１６、及び４〜２０）の整数である）；「ロックド」核酸（ＬＮＡ）（２’ヒドロキシルは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン又はＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレン架橋により、同じリボース糖の４’炭素に連結されており、例示的架橋には、メチレン、プロピレン、エーテル、若しくはアミノ架橋が含まれる）；本明細書で定義するアミノアルキル；本明細書で定義するアミノアルコキシ；本明細書で定義するアミノ；並びに本明細書で定義するアミノ酸。
【０２４２】
一般に、ＲＮＡは、酸素を有する５員環である糖基リボースを含む。非制限的修飾ヌクレオチドの例として、以下のものが挙げられる：リボース中の酸素の置換（例えば、Ｓ、Ｓｅ、又はメチレン若しくはエチレンなどのアルキレンによる）；二重結合の付加（これによって、例えば、シクロペンテニル又はシクロヘキセニルでリボースを置換する）；リボースの環縮小（これによって、例えば、シクロブタン又はオキセタンの４員環を形成する）；リボースの環拡大（これによって、例えば、ホスホロアミデート骨格も有するアンヒドロヘキシトール、アルトリトール、マンニトール、シクロヘキサニル、シクロヘキセニル、及びモルホリノの場合のように、もう１つの炭素若しくはヘテロ原子を有する６又は７員環を形成する）；多環式形態（例えば、トリシクロ；並びに「ロックされていない（ｕｎｌｏｃｋｅｄ）」形態、例えば、グリコール核酸（ＧＮＡ）（例えば、Ｒ−ＧＮＡ若しくはＳ−ＧＮＡ、ここで、リボースは、ホスホジエステル結合に結合したグリコール単位により置換される）、トレオース核酸（ＴＮＡ、ここで、リボースは、α−Ｌ−トレオフラノシル−（３’→２’）により置換される）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ、ここで、２−アミノ−エチル−グリシン結合によって、リボース及びホスホジエステル骨格を置換する）。糖基はまた、リボース中の対応する炭素とは反対の立体化学的配置を有する１つ又は複数の炭素を含有してもよい。従って、ポリヌクレオチドは、糖として、例えば、アラビノースを含有するヌクレオチドを含み得る。
【０２４３】
核酸塩基に対する修飾
本開示は、修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドを提供する。本明細書に記載する場合、「ヌクレオシド」は、有機塩基（例えば、プリン若しくはピリミジン）又はその誘導体と組み合わせた、糖分子（例えば、ペントース若しくはリボース）又はその誘導体を含有する化合物として定義される（本明細書では「核酸塩基」とも呼ばれる）。本明細書に記載するように、「ヌクレオチド」は、リン酸基を含むヌクレオシドとして定義される。
【０２４４】
非制限的修飾の例として、アミノ基、チオール基、アリル基、ハロ基、又は本明細書に記載するいずれかが挙げられる。修飾ヌクレオチドは、本明細書に記載する任意の有用な方法（例えば、１つ又は複数の修飾若しくは非天然ヌクレオシドを含有させるための、化学的、酵素的、又は組換えによる）によって合成してよい。
【０２４５】
修飾核酸塩基対形成は、標準アデノシン−チミジン、アデノシン−ウラシル、又はグア
ノシン−シトシン塩基対だけではなく、ヌクレオチド及び／又は非標準若しくは修飾塩基を含む修飾ヌクレオチド間に形成される塩基対も包含し、ここで、水素結合ドナー及び水素結合アクセプターの構成が、非標準塩基及び標準塩基間、又は２つの相補的非標準塩基構造間の水素結合を可能にする。こうした非標準塩基対形成の一例は、修飾ヌクレオチドイノシン及びアデノシン、シトシン又はウラシル間の塩基対形成である。
【０２４６】
修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドは、修飾核酸塩基を含み得る。ＲＮＡにみいだされる核酸塩基の例として、限定はしないが、アデニン、グアニン、シトシン、及びウラシルが挙げられる。ＤＮＡにみいだされる核酸塩基の例として、限定はしないが、アデニン、グアニン、シトシン、及びチミンが挙げられる。これらの核酸塩基は、修飾するか、又は全体を置換することにより、増強された特性、例えば、ヌクレアーゼ耐性、安定性を有するポリヌクレオチドをもたらすことができ、これらの特性は、主溝結合パートナーの結合の破壊によって現れる。
【０２４７】
以下の表１は、各標準ヌクレオチドの化学面（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｆａｃｅ）を明らかにする。丸で囲った部分は、それぞれの化学領域を含む原子を示す。
【０２４８】
【表１】
2017500034.tif 000071
一部の実施形態では、Ｂは、修飾ウラシルである。例示的修飾ウラシルとして、式（ｂ１）〜（ｂ５）：
【０２４９】
【化４５】
2017500034.tif 000072
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するものが挙げられ、式中、
【０２５０】
【化４６】
2017500034.tif 000073
は、単結合又は二重結合であり；
Ｔ１’、Ｔ１”、Ｔ２’、及びＴ２”の各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、又は任意選択で置換されたチオアルコキシであり、あるいは、Ｔ１’、Ｔ１”、又はＴ２’及びＴ２”は、互いに結合して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、若しくはＳｅ（セレノ）を形成し；
Ｖ１及びＶ２の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｂ）ｎｖ、又はＣ（ＲＶｂ）ｎｖであり、ここで、ｎｖは、０〜２の整数であり、各ＲＶｂは、独立に、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたハロアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアミノアルキル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたアシルアミノアルキル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、又は任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ（例えば、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなど、本明細書に記載するいずれかの置換基により任意選択で置換された）であり；
Ｒ１０は、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたアミノ酸、ヒドロキシル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、又は任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任
意選択で置換されたカルボキシアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルキル、又は任意選択で置換されたカルバモイルアルキルであり；
Ｒ１１は、Ｈ又は任意選択で置換されたアルキルであり；
Ｒ１２ａは、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたカルボキシアルキル（例えば、任意選択で、ヒドロキシルにより置換された）、任意選択で置換されたカルボキシアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアミノアルキル、又は任意選択で置換されたカルバモイルアルキルであり；
Ｒ１２ｃは、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニルである。
【０２５１】
他の例示的修飾ウラシルとして、式（ｂ６）〜（ｂ９）：
【０２５２】
【化４７】
2017500034.tif 000074
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するものが挙げられ、式中、
【０２５３】
【化４８】
2017500034.tif 000075
は、単結合又は二重結合であり；
Ｔ１’、Ｔ１”、Ｔ２’、及びＴ２”の各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、又は任意選択で置換されたチオアルコキシであり、あるいは、Ｔ１’とＴ１”が互いに結合するか、又はＴ２’とＴ２”が互いに結合して（例えば、Ｔ２の場合と同様に）、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、若しくはＳｅ（セレノ）を形成するか、あるいは、Ｔ２は、独立に、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、若しくはＳｅ（セレノ）であり；
Ｗ１及びＷ２の各々は、独立に、Ｎ（ＲＷａ）ｎｗ、又はＣ（ＲＷｂ）ｎｗであり、ここで、ｎｗは、０〜２の整数であり、各ＲＷａは、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシであり；
各Ｖ３は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶａ）ｎｖ、又はＣ（ＲＶａ）ｎｖであり、ここで、ｎｖは、０〜２の整数であり、各ＲＶａは、独立に、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置
換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアルクヘテロシクリル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、又は任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルキル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチル若しくはスルホアルキルなどのＮ保護基で置換された）、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたアシルアミノアルキル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアシル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルキル（例えば、任意選択でヒドロキシル及び／又はＯ保護基で置換された）、任意選択で置換されたカルボキシアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアミノアルキル、又は任意選択で置換されたカルバモイルアルキル（例えば、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなど、本明細書に記載するいずれかの置換基により任意選択で置換された）であり；ここで、ＲＶａとＲ１２ｃは、それらが結合された炭素原子と一緒になって、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたアリール、又は任意選択で置換されたヘテロシクリル（例えば、５若しくは６員環）を形成することができ；
Ｒ１２ａは、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたカルボキシアルキル（例えば、任意選択で、ヒドロキシル及び／又はＯ−保護基により置換された）、任意選択で置換されたカルボキシアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアミノアルキル、任意選択で置換されたカルバモイルアルキル、又は非存在であり；
Ｒ１２ｂは、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたアルカリール、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアルクヘテロシクリル、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアコキシカルボニルアシル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルキル（例えば、任意選択でヒドロキシル及び／又はＯ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたカルボキシアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアミノアルキル、又は任意選択で置換されたカルバモイルアルキルであり；
Ｒ１２ｂとＴ１’、又はＲ１２ｂとＲ１２ｃは、互いに結合して、任意選択で置換されたヘテロシクリルを形成することができ；
Ｒ１２ｃは、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニルである。
【０２５４】
さらに別の例示的修飾ウラシルとしては、式（ｂ２８）〜（ｂ３１）：
【０２５５】
【化４９】
2017500034.tif 000076
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するものが挙げられ、式中
Ｔ１及びＴ２の各々は、独立に、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、若しくはＳｅ（セレノ）であり；
ＲＶｂ’及びＲＶｂ”は各々、独立に、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたハロアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、又は任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルキル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチル若しくはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたアシルアミノアルキル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアシル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルキル（例えば、任意選択でヒドロキシル及び／又はＯ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたカルボキシアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアミノアルキル、又は任意選択で置換されたカルバモイルアルキル（例えば、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなど、本明細書に記載するいずれかの置換基により任意選択で置換された）であり（例えば、ＲＶｂ’は、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキルであり、例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチル、若しくはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換されている）；
Ｒ１２ａは、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたカルバモイルアルキル、任意選択で置換されたアミノアルキル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチル、若しくはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニルであり；
Ｒ１２ｂは、Ｈ、任意選択で置換されたヒドロキシル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチル、若しくはスルホアルキルなどのＮ
−保護基で置換された）、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアシル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルキル、又は任意選択で置換されたカルバモイルアルキルである。
【０２５６】
特定の実施形態では、Ｔ１は、Ｏ（オキソ）であり、Ｔ２は、Ｓ（チオ）又はＳｅ（セレノ）である。別の実施形態では、Ｔ１は、Ｓ（チオ）で、Ｔ２は、Ｏ（オキソ）又はＳｅ（セレノ）である。一部の実施形態では、ＲＶｂ’は、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシである。
【０２５７】
別の実施形態では、Ｒ１２ａ及びＲ１２ｂは各々、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、又は任意選択で置換されたヒドロキシアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１２ａは、Ｈである。別の実施形態では、Ｒ１２ａ及びＲ１２ｂはいずれも、Ｈである。
【０２５８】
一部の実施形態では、ＲＶｂ’及びＲ１２ｂは各々、独立に、任意選択で置換されたアミノアルキル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチル、若しくはスルホアルキルなどのＮ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、又は任意選択で置換されたアシルアミノアルキル（例えば、本明細書に記載する任意のもの、例えば、トリフルオロアセチルなどのＮ−保護基で置換された）である。一部の実施形態では、任意選択で置換されたアミノアルキルのアミノ及び／又はアルキルは、以下：任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたスルホアルキル、任意選択で置換されたカルボキシ（例えば、Ｏ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたヒドロキシル（例えば、Ｏ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたカルボキシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたアルコキシカルボキシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換された）、又はＮ−保護基の１つ又は複数で置換されている。一部の実施形態では、任意選択で置換されたアミノアルキルは、任意選択で置換されたスルホアルキル又は任意選択で置換されたアルケニルで置換されている。一部の実施形態では、Ｒ１２ａ及びＲＶｂ”は、いずれもＨである。一部の実施形態では、Ｔ１は、Ｏ（オキソ）であり、Ｔ２は、Ｓ（チオ）又はＳｅ（セレノ）である。
【０２５９】
一部の実施形態では、ＲＶｂ’は、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキル又は任意選択で置換されたカルバモイルアルキルである。
特定の実施形態では、Ｒ１２ａ、Ｒ１２ｂ、Ｒ１２ｃ、又はＲＶａの任意選択の置換基は、ポリエチレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）か；あるいは、アミノ−プロピレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１であり、式中、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）である。
【０２６０】
一部の実施形態では、Ｂは、修飾シトシンである。例示的修飾シトシンとして、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）：
【０２６１】
【化５０】
2017500034.tif 000077
の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体が挙げられ、式中、
各Ｔ３”は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、又は任意選択で置換されたチオアルコキシであり、あるいは、Ｔ３’とＴ３”は、互いに結合して（例えば、Ｔ３の場合と同様に）、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、若しくはＳｅ（セレノ）を形成し；
各Ｖ４は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｃ）ｎｖ、又はＣ（ＲＶｃ）ｎｖであり、ここで、ｎｖは、０〜２の整数であり、各ＲＶｃは、独立に、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアルクヘテロシクリル、又は任意選択で置換されたアルキニルオキシ（例えば、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなど、本明細書に記載するいずれかの置換基により任意選択で置換された）であり；
各Ｖ５は、独立に、Ｎ（ＲＶｄ）ｎｖ、又はＣ（ＲＶｄ）ｎｖであり、ここで、ｎｖは、０〜１の整数であり、各ＲＶｄは、独立に、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアルクヘテロシクリル、又は任意選択で置換されたアルキニルオキシ（例えば、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなど、本明細書に記載するいずれかの置換基により任意選択で置換された）であり（例えば、Ｖ５は、−ＣＨ若しくはＮである）；
Ｒ１３ａ及びＲ１３ｂの各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアシル、任意選択で置換されたアシルオキシアルキル、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシであり、ここで、Ｒ１３ｂとＲ１４は一緒になって、任意選択で置換されたヘテロシクリルを形成し；
各Ｒ１４は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、チオール、任意選択で置換されたアシル、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたハロアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたアシルオキシアルキル、任意選択で置換されたアミノ（例えば、−ＮＨＲ、ここで、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール、若しくはホスホリル）、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアルクヘテロシクリル、任意選択で置換されたアミノア
ルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニルであり；
Ｒ１５及びＲ１６の各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、又は任意選択で置換されたアルキニルである。
【０２６２】
別の例示的修飾シトシンとして、式（ｂ３２）〜（ｂ３５）：
【０２６３】
【化５１】
2017500034.tif 000078
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体を有するものが挙げられ、式中、
Ｔ１及びＴ３の各々は、独立に、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、若しくはＳｅ（セレノ）であり；
Ｒ１３ａ及びＲ１３ｂの各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアシル、任意選択で置換されたアシルオキシアルキル、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシであり、ここで、Ｒ１３ｂとＲ１４は一緒になって、任意選択で置換されたヘテロシクリルを形成し；
各Ｒ１４は、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、チオール、任意選択で置換されたアシル、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたハロアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたアシルオキシアルキル、任意選択で置換されたアミノ（例えば、−ＮＨＲ、ここで、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール、若しくはホスホリル）、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアルクヘテロシクリル、任意選択で置換されたアミノアルキル（例えば、ヒドロキシアルキル、アルキル、アルケニル、又はアルキニル）、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニルであり；
Ｒ１５及びＲ１６の各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、又は任意選択で置換されたアルキニルである（例えば、Ｒ１５は、Ｈであり、Ｒ１６は、Ｈ、又は任意選択で置換されたアルキルである）。
【０２６４】
一部の実施形態では、Ｒ１５は、Ｈで、Ｒ１６は、Ｈ、又は任意選択で置換されたアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ１４は、Ｈ、アシル、又はヒドロキシアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ１４は、ハロである。一部の実施形態では、Ｒ１４及びＲ１５は、いずれもＨである。一部の実施形態では、Ｒ１５及びＲ１６は、いずれもＨである。一部の実施形態では、Ｒ１４、Ｒ１５及びＲ１６の各々は、Ｈである。別の実施形態では、Ｒ１３ａ及びＲ１３ｂの各々は、独立に、Ｈ、又は任意選択で置換されたアルキルである。
【０２６５】
修飾シトシンのさらに別の非限定的例として、式（ｂ３６）：
【０２６６】
【化５２】
2017500034.tif 000079
又はその薬学的に許容される塩若しくは立体異性体の化合物が挙げられ、式中、
各Ｒ１３ｂは、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアシル、任意選択で置換されたアシルオキシアルキル、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシであり、ここで、Ｒ１３ｂとＲ１４ｂは一緒になって、任意選択で置換されたヘテロシクリルを形成し；
Ｒ１４ａ及びＲ１４ｂは各々、独立に、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、チオール、任意選択で置換されたアシル、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたハロアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル（例えば、Ｏ−保護基で置換された）、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ、任意選択で置換されたアミノアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシアルコキシ、任意選択で置換されたアシルオキシアルキル、任意選択で置換されたアミノ（例えば、−ＮＨＲ、ここで、Ｒは、Ｈ、アルキル、アリール、ホスホリル、任意選択で置換されたアミノアルキル、又は任意選択で置換されたカルボキシアミノアルキルである）、アジド、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアルクヘテロシクリル、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、又は任意選択で置換されたアミノアルキニルであり；
Ｒ１５の各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、又は任意選択で置換されたアルキニルである。
【０２６７】
一部の実施形態では、Ｒ１４ｂは、任意選択で置換されたアミノ酸（例えば、任意選択で置換されたリシン）である。一部の実施形態では、Ｒ１４ａは、Ｈである。
一部の実施形態では、Ｂは、修飾グアニンである。例示的修飾グアニンとして、式（ｂ１５）〜（ｂ１７）：
【０２６８】
【化５３】
2017500034.tif 000080
又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体の化合物が挙げられ、式中、
Ｔ４’、Ｔ４”、Ｔ５’、Ｔ５”、Ｔ６’、及びＴ６”の各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシであり、ここで、Ｔ４’
とＴ４”（例えば、Ｔ４の場合と同様に）又はＴ５’とＴ５”又はＴ６’とＴ６”は、互いに結合して、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、若しくはＳｅ（セレノ）を形成し；
Ｖ５及びＶ６の各々は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｄ）ｎｖ、又はＣ（ＲＶｄ）ｎｖであり、ここで、ｎｖは、０〜２の整数であり、各ＲＶｄは、独立に、Ｈ、ハロ、チオール、任意選択で置換されたアミノ酸、シアノ、アミジン、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、任意選択で置換されたアルキニルオキシ（例えば、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなど、本明細書に記載するいずれかの置換基により任意選択で置換された）であり；
Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９ａ、Ｒ１９ｂ、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３、及びＲ２４の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、又は任意選択で置換されたアミノ酸である。
【０２６９】
例示的修飾グアニンとして、式（ｂ３７）〜（ｂ４０）：
【０２７０】
【化５４】
2017500034.tif 000081
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体の化合物が挙げられ、式中、
Ｔ４’の各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、又は任意選択で置換されたアルコキシであり、各Ｔ４は、独立に、Ｏ（オキソ）、Ｓ（チオ）、又はＳｅ（セレノ）であり；
Ｒ１８、Ｒ１９ａ、Ｒ１９ｂ、及びＲ２１の各々は、独立に、Ｈ、ハロ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたチオアルコキシ、任意選択で置換されたアミノ、又は任意選択で置換されたアミノ酸である。
【０２７１】
一部の実施形態では、Ｒ１８は、Ｈ、又は任意選択で置換されたアルキルである。別の実施形態では、Ｔ４は、オキソである。一部の実施形態では、Ｒ１９ａ及びＲ１９ｂの各々は、独立に、Ｈ、又は任意選択で置換されたアルキルである。
【０２７２】
一部の実施形態では、Ｂは、修飾アデニンである。例示的修飾アデニンとして、式（ｂ１８）〜（ｂ２０）：
【０２７３】
【化５５】
2017500034.tif 000082
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体の化合物が挙げられ、式中、
各Ｖ７は、独立に、Ｏ、Ｓ、Ｎ（ＲＶｅ）ｎｖ、又はＣ（ＲＶｅ）ｎｖであり、ここで、ｎｖは、０〜２の整数であり、各ＲＶｅは、独立に、Ｈ、ハロ、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルケニルオキシ、又は任意選択で置換されたアルキニルオキシ（例えば、アルキルについて（１）〜（２１）から選択されるものなど、本明細書に記載するいずれかの置換基により、任意選択で置換された）であり；
各Ｒ２５は、独立に、Ｈ、ハロ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたチオアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノであり；
Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂの各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアシル、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたカルバモイルアルキル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、又はポリエチレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’であり、ここで、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６若しくは１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、若しくは１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ若しくはＣ１〜２０アルキルである）；あるいは、アミノ−プロピレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１であり、ここで、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６若しくは１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、若しくは１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）であり；
各Ｒ２７は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノであり；
各Ｒ２８は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、又は任意選択で置換されたアルキニルであり；
各Ｒ２９は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアシル、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたカルバモイルアルキル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノである。
【０２７４】
例示的修飾アデニンとして、式（ｂ４１）〜（ｂ４３）：
【０２７５】
【化５６】
2017500034.tif 000083
、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは立体異性体の化合物が挙げられ、式中、
各Ｒ２５は、独立に、Ｈ、ハロ、チオール、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたチオアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノであり；
Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂの各々は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアシル、任意選択で置換されたアミノ酸、任意選択で置換されたカルバモイルアルキル、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキル、任意選択で置換されたヒドロキシアルケニル、任意選択で置換されたヒドロキシアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、又はポリエチレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、ここで、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６若しくは１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、若しくは１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ若しくはＣ１〜２０アルキルである）；あるいは、アミノ−プロピレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１、ここで、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６若しくは１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、若しくは１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素若しくは任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）であり；
各Ｒ２７は、独立に、Ｈ、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたチオアルコキシ、又は任意選択で置換されたアミノである。
【０２７６】
一部の実施形態では、Ｒ２６ａは、Ｈであり、Ｒ２６ｂは、任意選択で置換されたアルキルである。一部の実施形態では、Ｒ２６ａ及びＲ２６ｂの各々は、独立に、任意選択で置換されたアルキルである。特定の実施形態では、Ｒ２７は、独立に、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、又は任意選択で置換されたチオアルコキシである。別の実施形態では、Ｒ２５は、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルコキシ、又は任意選択で置換されたチオアルコキシである。
【０２７７】
特定の実施形態では、Ｒ２６ａ、Ｒ２６ｂ、又はＲ２９の任意選択の置換基は、ポリエチレングリコール基（例えば、−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’、ここで、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６若しくは１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、若しくは１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ若しくはＣ１〜２０アルキルである）；又は、アミノ−プロピレングリコール基（例えば、−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１、ここで、ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６若しくは１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、若しくは１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素若しくは任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）である。
【０２７８】
一部の実施形態では、Ｂは、式（ｂ２１）：
【０２７９】
【化５７】
2017500034.tif 000084
を有するものでもよく、式中、Ｘ１２は、独立に、Ｏ、Ｓ、任意選択で置換されたアルキレン（例えば、メチレン）、又は任意選択で置換されたヘテロアルキレンであり、ｘａは、０〜３の整数であり、Ｒ１２ａ及びＴ２は、本明細書に記載する通りである。
【０２８０】
一部の実施形態では、Ｂは、式（ｂ２２）：
【０２８１】
【化５８】
2017500034.tif 000085
を有するものでもよく、式中、Ｒ１０’は、独立に、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルキル、又は任意選択で置換されたカルバモイルアルキルであり、Ｒ１１、Ｒ１２ａ、Ｔ１、及びＴ２は、本明細書に記載する通りである。
【０２８２】
一部の実施形態では、Ｂは、式（ｂ２３）：
【０２８３】
【化５９】
2017500034.tif 000086
を有するものでもよく、式中、Ｒ１０は、任意選択で置換されたヘテロシクリル（例えば
、任意選択で置換されたフリル、任意選択で置換されたチエニル、又は任意選択で置換されたピロリル）、任意選択で置換されたアリール（例えば、任意選択で置換されたフェニル若しくは任意選択で置換されたナフチル）、又は本明細書に記載するいずれかの置換基（例えば、Ｒ１０の）であり；Ｒ１１（例えば、Ｈ又は本明細書に記載するいずれかの置換基）、Ｒ１２ａ（例えば、Ｈ又は本明細書に記載するいずれかの置換基）、Ｔ１（例えば、オキソ又は本明細書に記載するいずれかの置換基）、及びＴ２（例えば、オキソ又は本明細書に記載するいずれかの置換基）は、本明細書に記載する通りである。
【０２８４】
一部の実施形態では、Ｂは、式（ｂ２４）：
【０２８５】
【化６０】
2017500034.tif 000087
を有するものでもよく、式中、Ｒ１４’は、独立に、任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたアルキニル、任意選択で置換されたアリール、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアルカリール、任意選択で置換されたアルクヘテロシクリル、任意選択で置換されたアミノアルキル、任意選択で置換されたアミノアルケニル、任意選択で置換されたアミノアルキニル、任意選択で置換されたアルコキシ、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルケニル、任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルキニル、又は任意選択で置換されたアルコキシカルボニルアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルコキシ、任意選択で置換されたカルボキシアルキル、又は任意選択で置換されたカルバモイルアルキルであり、Ｒ１３ａ、Ｒ１３ｂ、Ｒ１５、及びＴ３は、本明細書に記載する通りである。
【０２８６】
一部の実施形態では、Ｂは、式（ｂ２５）：
【０２８７】
【化６１】
2017500034.tif 000088
を有するものでもよく、式中、Ｒ１４’は、任意選択で置換されたヘテロシクリル（例えば、任意選択で置換されたフリル、任意選択で置換されたチエニル、又は任意選択で置換されたピロリル）、任意選択で置換されたアリール（例えば、任意選択で置換されたフェニル若しくは任意選択で置換されたナフチル）、又は本明細書に記載するいずれかの置換基（例えば、Ｒ１４若しくはＲ１４’の）であり；ここで、Ｒ１３ａ（例えば、Ｈ又は本明細書に記載するいずれかの置換基）、Ｒ１３ｂ（例えば、Ｈ又は本明細書に記載するいずれかの置換基）、Ｒ１５（例えば、Ｈ又は本明細書に記載するいずれかの置換基）、及びＴ３（例えば、オキソ又は本明細書に記載するいずれかの置換基）は、本明細書に記載
する通りである。
【０２８８】
一部の実施形態では、Ｂは、シトシン、グアニン、アデニン、及びウラシルからなる群から選択される核酸塩基である。一部の実施形態では、Ｂは、以下：
【０２８９】
【化６２】
2017500034.tif 000089
であってもよい。
【０２９０】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾ウラシルである。修飾ウラシルを有する例示的核酸塩基及びヌクレオシドとして、以下のものが挙げられる：プソイドウリジン（ψ）、ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、６−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオ−ウリジン（ｓ２Ｕ）、４−チオ−ウリジン（ｓ４Ｕ）、４−チオ−プソイドウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、５−ヒドロキシ−ウリジン（ｈｏ５Ｕ）、５−アミノアリル−ウリジン、５−ハロ−ウリジン（例えば、５−ヨード−ウリジン又は５−ブロモ−ウリジン）、３−メチル−ウリジン（ｍ３Ｕ）、５−メトキシ−ウリジン（ｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウリジン５−オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５−カルボキシメチル−ウリジン（ｃｍ５Ｕ）、１−カルボキシメチル−プソイドウリジン、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジン（ｃｈｍ５Ｕ）、５−カルボキシヒドロキシメチル−ウリジンメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕ）、５−メトキシカルボニルメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５−アミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−ウリジン（ｍｎｍ５Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−メチルアミノメチル−２−セレノ−ウリジン（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５−カルバモイルメチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオ−ウリジン（ｃｍｎｍ５ｓ２Ｕ）、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−プソイドウリジン、５−タウリノメチル−ウリジン（ｔｍ５Ｕ）、１−タウリノメチル−プソイドウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン（ｔｍ５ｓ２Ｕ）、１−タウリノメチル−４−チオ−プソイドウリジン、５−メチル−ウリジン（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１−メチル−プソイドウリジン（ｍ１ψ）、５−メチル−２−チオ−ウリジン（ｍ５ｓ２Ｕ）、１−メチル−４−チオ−プソイドウリジン（ｍ１ｓ４ψ）、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、３−メチル−プソイドウリジン（ｍ３ψ）、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、ジヒドロウリジン（Ｄ）、ジヒドロプソイドウリジン、５，６−ジヒドロウリジン、５−メチル−ジヒドロウリジン（ｍ５Ｄ）、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−メトキシ−ウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、Ｎ１−メチル−プソイドウリジン、３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）ウリジン（ａｃｐ３Ｕ）、１−メチル−３−（３−アミノ−３−カルボキシプロピル）プソイドウリジン（ａｃｐ３ψ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）ウリジン（ｉｎｍ５Ｕ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２−チオ−ウリジン（ｉｎ
ｍ５ｓ２Ｕ）、α−チオ−ウリジン、２’−Ｏ−メチル−ウリジン（Ｕｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２’−Ｏ−メチル−プソイドウリジン（ψｍ）、２−チオ−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｍｃｍ５Ｕｍ）、５−カルバモイルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５−カルボニルメチルアミノメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２−Ｏ−ジメチル−ウリジン（ｍ３Ｕｍ）、５−（イソペンテニルアミノメチル）−２’−Ｏ−メチル−ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１−チオ−ウリジン、デオキシチミジン、２’−Ｆ−アラ−ウリジン、２’−Ｆ−ウリジン、２’−ＯＨ−アラ−ウリジン、５−（２−カルボメトキシビニル）ウリジン、及び５−［３−（１−Ｅ−プロペニルアミノ）ウリジン。
【０２９１】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾シトシンである。修飾シトシンを有する例示的核酸塩基及びヌクレオシドとして、以下のものが挙げられる：５−アザ−シチジン、６−アザ−シチジン、プソイドイソシチジン、３−メチル−シチジン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４−アセチル−シチジン（ａｃ４Ｃ）、５−ホルミル−シチジン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４−メチル−シチジン（ｍ４Ｃ）、５−メチル−シチジン（ｍ５Ｃ）、５−ハロ−シチジン（例えば、５−ヨード−シチジン）、５−ヒドロキシメチル−シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１−メチル−プソイドイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−プソイドイソシチジン、２−チオ−シチジン（ｓ２Ｃ）、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−プソイドイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−プソイドイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、α−チオ−シチジン、２’−Ｏ−メチル−シチジン（Ｃｍ）、５，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４−アセチル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’−Ｏ−ジメチル−シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５−ホルミル−２’−Ｏ−メチル−シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１−チオ−シチジン、２’−Ｆ−アラ−シチジン、２’−Ｆ−シチジン、及び２’−ＯＨ−アラ−シチジン。
【０２９２】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾アデニンである。修飾アデニンを有する例示的核酸塩基及びヌクレオシドとして、以下のものが挙げられる：２−アミノ−プリン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノ−６−ハロ−プリン（例えば、２−アミノ−６−クロロ−プリン）、６−ハロ−プリン（例えば、６−クロロ−プリン）、２−アミノ−６−メチル−プリン、８−アジド−アデノシン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノ−プリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチル−アデノシン（ｍ１Ａ）、２−メチル−アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−メチル−アデノシン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｉ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニル−アデノシン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｉｏ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６−グリシニルカルバモイル−アデノシン（ｇ６Ａ）、Ｎ６−トレオニルカルバモイル−アデノシン（ｔ６Ａ）、Ｎ６−メチル−Ｎ６−トレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍ６ｔ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６−ジメチル−アデノシン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｈｎ６Ａ）、２−メチルチオ−Ｎ６−ヒドロキシノルバリルカルバモイル−アデノシン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６−アセチル−アデノシン（ａｃ６Ａ）、７−メチル−アデニン、２−メチルチオ−アデニン
、２−メトキシ−アデニン、α−チオ−アデノシン、２’−Ｏ−メチル−アデノシン（Ａｍ）、Ｎ６，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’−Ｏ−トリメチル−アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−アデノシン（ｍ１Ａｍ）、２’−Ｏ−リボシルアデノシン（リン酸塩）（Ａｒ（ｐ））、２−アミノ−Ｎ６−メチル−プリン、１−チオ−アデノシン、８−アジド−アデノシン、２’−Ｆ−アラ−アデノシン、２’−Ｆ−アデノシン、２’−ＯＨ−アラ−アデノシン、及びＮ６−（１９−アミノ−ペンタオキサノナデシル）−アデノシン。
【０２９３】
一部の実施形態では、修飾核酸塩基は、修飾グアニンである。修飾グアニンを有する例示的核酸塩基及びヌクレオシドとして、以下のものが挙げられる：イノシン（Ｉ）、１−メチル−イノシン（ｍ１Ｉ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４−デメチル−ワイオシン（ｉｍＧ−１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ）、未修飾ヒドロキシワイブトシン（ＯｈｙＷ＊）、７−デアザ−グアノシン、キューオシン（Ｑ）、エポキシキューオシン（ｏＱ）、ガラクトシル−キューオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル−キューオシン（ｍａｎＱ）、７−シアノ−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７−アミノメチル−７−デアザ−グアノシン（ｐｒｅＱ１）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン（ｍ７Ｇ）、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチル−イノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇ）、Ｎ２−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−グアノシン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７−ジメチル−グアノシン（ｍ２，２，７Ｇ）、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、α−チオ−グアノシン、２’−Ｏ−メチル−グアノシン（Ｇｍ）、Ｎ２−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１−メチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ１Ｇｍ）、Ｎ２，７−ジメチル−２’−Ｏ−メチル−グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’−Ｏ−メチル−イノシン（Ｉｍ）、１，２’−Ｏ−ジメチル−イノシン（ｍ１Ｉｍ）、２’−Ｏ−リボシルグアノシン（リン酸塩）（Ｇｒ（ｐ））、１−チオ−グアノシン、Ｏ６−メチル−グアノシン、２’−Ｆ−アラ−グアノシン、及び２’−Ｆ−グアノシン。
【０２９４】
一部の実施形態では、ヌクレオチドを修飾することができる。例えば、このような修飾は、アルキル（例えば、メチル）若しくはハロで、ウラシル又はシトシンのＣ−５上の水素を置換することを含む。
【０２９５】
ヌクレオチドの核酸塩基は、独立に、プリン、ピリミジン、プリン若しくはピリミジン類似体から選択することができる。例えば、核酸塩基は、各々、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、又はヒポキサンチンから独立に選択することができる。別の実施形態では、核酸塩基はまた、例えば、１塩基の天然及び合成誘導体を含んでもよく、こうした誘導体として、以下のものが挙げられる：ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６−メチル及びその他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２−プロピル及びその他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−プロピニルウラシル及びシトシン、６−アゾウラシル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ（例えば、８−ブロモ）、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル及びその他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチル及びその他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メチ
ルグアニン及び７−メチルアデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、デアザグアニン、７−デアザグアニン、３−デアザグアニン、デアザアデニン、７−デアザアデニン、３−デアザアデニン、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、イミダゾ［１，５−ａ］１，３，５−トリアジノン、９−デアザプリン、イミダゾ［４，５−ｄ］ピラジン、トリアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン、ピラジン−２−オン、１，２，４−トリアジン、ピリダジン；並びに１，３，５−トリアジン。ヌクレオチドを略語Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ若しくはＵを用いて表すとき、各文字は、代表的塩基及び／又はその誘導体を指し、例えば、Ａは、アデニン又はアデニン類似体、例えば、７−デアザアデニンを含む）。
【０２９６】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、式ＸＩ：
【０２９７】
【化６３】
2017500034.tif 000090
の化合物であり、
式中、
【０２９８】
【化６４】
2017500034.tif 000091
は、単結合又は二重結合を示し；
−−−は、任意選択の単結合を示し；
【０２９９】
【化６５】
2017500034.tif 000092
が単結合を示すとき、Ｕは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲａ、若しくは−ＣＲａＲｂ−であり、又は
【０３００】
【化６６】
2017500034.tif 000093
が二重結合を示すとき、Ｕは、−ＣＲａ−であり；
Ｚは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、若しくはＣ６〜２０アリールであるか、又は
【０３０１】
【化６７】
2017500034.tif 000094
が二重結合を示すとき、Ｚは、存在せず；あるいは、
Ｚは、−ＣＲａＲｂ−であって、Ａとの結合を形成し；
Ａは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨＲ（Ｒ＝アルキル若しくはアリール若しくはホスホリル）、硫酸塩、−ＮＨ２、Ｎ３、アジド、−ＳＨ、アミノ酸、又は１〜１２個のアミノ酸を含むペプチドであり；
Ｄは、Ｈ、ＯＨ、ＮＨＲ（Ｒ＝アルキル若しくはアリール若しくはホスホリル）、−ＮＨ２、−ＳＨ、アミノ酸、１〜１２個のアミノ酸を含むペプチド、又は式ＸＩＩ：
【０３０２】
【化６８】
2017500034.tif 000095
の基であり；
あるいは、ＡとＤは、それらが結合された炭素原子と一緒に、５員環を形成し；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｙ１の各々は、独立に、−ＯＲａ１、−ＮＲａ１Ｒｂ１、及び−ＳＲａ１から選択され；
Ｙ２及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、−ＣＲａＲｂ−、−ＮＲｃ、Ｓ、又はＣ、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１つ又は複数の原子を含むリンカーから選択され；
ｎは、０、１、２、又は３であり；
ｍは、０、１、２、又は３であり；
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、若しくはＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基であり；
Ｒａ１及びＲｂ１は、各々独立に、Ｈ又はカウンターイオンであり；
−ＯＲｃ１は、約１のｐＨでＯＨであるか、又は−ＯＲｃ１は、生理学的ｐＨで、Ｏ−であり；
但し、変数Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｕ、Ｚ、Ｙ２及びＹ３を含む環は、リボースではあり得ないものとする。
【０３０３】
一部の実施形態では、Ｂは、シトシン、グアニン、アデニン、及びウラシルからなる群から選択される核酸塩基である。
一部の実施形態では、核酸塩基は、ピリミジン又はその誘導体である。
【０３０４】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、式ＸＩ−ａ：
【０３０５】
【化６９】
2017500034.tif 000096
の化合物である。
【０３０６】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、式ＸＩ−ｂ：
【０３０７】
【化７０】
2017500034.tif 000097
の化合物である。
【０３０８】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、式ＸＩ−ｃ１、ＸＩ−ｃ２、又はＸＩ−ｃ３：
【０３０９】
【化７１】
2017500034.tif 000098
の化合物である。
【０３１０】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、式ＸＩ：
【０３１１】
【化７２】
2017500034.tif 000099
の化合物であり、
式中、
【０３１２】
【化７３】
2017500034.tif 000100
は、単結合又は二重結合を示し；
−−−は、任意選択の単結合を示し；
【０３１３】
【化７４】
2017500034.tif 000101
が単結合を示すとき、Ｕは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲａ、若しくは−ＣＲａＲｂ−であり、又は
【０３１４】
【化７５】
2017500034.tif 000102
が二重結合を示すとき、Ｕは、−ＣＲａ−であり；
Ｚは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、若しくはＣ６〜２０アリールであるか、又は
【０３１５】
【化７６】
2017500034.tif 000103
が二重結合を示すとき、Ｚは、存在せず；あるいは、
Ｚは、−ＣＲａＲｂ−であって、Ａとの結合を形成し；
Ａは、Ｈ、ＯＨ、硫酸塩、−ＮＨ２、−ＳＨ、アミノ酸、又は１〜１２個のアミノ酸を含むペプチドであり；
Ｄは、Ｈ、ＯＨ、−ＮＨ２、−ＳＨ、アミノ酸、１〜１２個のアミノ酸を含むペプチド、又は式ＸＩＩ：
【０３１６】
【化７７】
2017500034.tif 000104
の基であり；
あるいは、ＡとＤは、それらが結合された炭素原子と一緒に、５員環を形成し；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｙ１の各々は、独立に、−ＯＲａ１、−ＮＲａ１Ｒｂ１、及び−ＳＲａ１から選択され；
Ｙ２及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、−ＣＲａＲｂ−、−ＮＲｃ、Ｓ、又はＣ、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１つ又は複数の原子を含むリンカーから選択され；
ｎは、０、１、２、又は３であり；
ｍは、０、１、２、又は３であり；
Ｂは、式ＸＩＩＩ；
【０３１７】
【化７８】
2017500034.tif 000105
の核酸塩基であり；
式中、
Ｖは、Ｎ又は陽荷電ＮＲｃであり；
Ｒ３は、ＮＲｃＲｄ、−ＯＲａ、又は−ＳＲａであり；
Ｒ４は、Ｈであるか、又は任意選択でＹ３との結合を形成することができ；
Ｒ５は、Ｈ、−ＮＲｃＲｄ、又は−ＯＲａであり；
Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、若しくはＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基であり；
Ｒａ１及びＲｂ１は、各々独立に、Ｈ又はカウンターイオンであり；
−ＯＲｃ１は、約１のｐＨでＯＨであるか、又は−ＯＲｃ１は、生理学的ｐＨで、Ｏ−である。
【０３１８】
一部の実施形態では、Ｂは、
【０３１９】
【化７９】
2017500034.tif 000106
であり；
式中、
Ｒ３は、−ＯＨ、−ＳＨ、又は
【０３２０】
【化８０】
2017500034.tif 000107
である。
【０３２１】
一部の実施形態では、Ｂは、
【０３２２】
【化８１】
2017500034.tif 000108
である。
【０３２３】
一部の実施形態では、Ｂは、
【０３２４】
【化８２】
2017500034.tif 000109
である。
【０３２５】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオチドは、式Ｉ−ｄ：
【０３２６】
【化８３】
2017500034.tif 000110
の化合物である。
【０３２７】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオチド（例えば、合成に使用されるもの）は、以下：
【０３２８】
【化８４−１】
2017500034.tif 000111
【０３２９】
【化８４−２】
2017500034.tif 000112
、又はその薬学的に許容される塩からなる群から選択される化合物である。
【０３３０】
一部の実施形態では、修飾ヌクレオチド（例えば、合成に使用されるもの）は、以下：
【０３３１】
【化８５−１】
2017500034.tif 000113
【０３３２】
【化８５−２】
2017500034.tif 000114
【０３３３】
【化８５−３】
2017500034.tif 000115
、又はその薬学的に許容される塩からなる群から選択される化合物である。
【０３３４】
ヌクレオシド間結合に対する修飾
ポリヌクレオチド分子に組み込むことができる修飾ヌクレオチドは、ヌクレオシド間結合（例えば、リン酸骨格）に対して修飾することができる。本明細書において、ポリヌクレオチド骨格に関連して、「リン酸塩」及び「ホスホジエステル」という用語は、置き換え可能に使用される。骨格リン酸基は、酸素原子の１つ又は複数を別の置換基で置き換え
ることによって修飾することができる。
【０３３５】
修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドは、本明細書に記載するような別のヌクレオシド間結合による非修飾リン酸部分の大規模な（ｗｈｏｌｅｓａｌｅ）置換を含んでもよい。修飾リン酸基の例として、限定はしないが、ホスホロチオエート、ホスホロセレネート、ボラノリン酸、ボラノリン酸エステル、リン酸水素、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、リン酸アルキル又はアリール、及びホスホロトリエステルが挙げられる。ホスホロジチオエートは、硫黄により置換された両方の非結合酸素を有する。リン酸リンカーはまた、窒素（架橋ホスホロアミデート）、硫黄（架橋ホスホロチオエート）、及び炭素（架橋メチレン−ホスホン酸）による結合酸素の置換によって修飾することもできる。
【０３３６】
修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドは、ボラン部分（ＢＨ３）、硫黄（チオ）、メチル、エチル及び／又はメトキシによる非架橋酸素の１つ又は複数の置換を含んでもよい。非限定的例として、同じ位置（例えば、アルファ（α）、ベータ（β）又はガンマ（γ）位置）の２つの非架橋酸素を硫黄（チオ）及びメトキシで置換することができる。
【０３３７】
非天然ホスホロチオエート骨格結合によるＲＮＡ及びＤＮＡに安定性（例えば、エキソヌクレアーゼ及びエンドヌクレアーゼに対して）を付与するために、リン酸部分（例えば、α−チオリン酸）のα位置の酸素原子の１つ又は複数の置換を実施する。ホスホロチオエートＤＮＡ及びＲＮＡは、増大したヌクレアーゼ耐性を有するため、後に細胞環境においてより長い半減期を有する。特定の理論に拘束されることを意図しないが、ホスホロチオエート結合ポリヌクレオチド分子はまた、細胞の自然免疫分子の結合／活性化が弱いために、自然免疫応答を低減することも予想される。
【０３３８】
特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、α−チオ−ヌクレオシド（例えば、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−アデノシン、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−シチジン（α−チオ−シチジン）、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−グアノシン、５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−ウリジン、又は５’−Ｏ−（１−チオホスフェート）−プソイドウリジン）が挙げられる。
【０３３９】
本発明に従い使用することができる他のヌクレオシド間結合で、リン原子を含有しないヌクレオシド間結合を含むものを以下に記載する。
修飾糖、核酸塩基、及びヌクレオシド間結合の組み合わせ
本発明のポリヌクレオチドは、糖、核酸塩基、及び／又はヌクレオシド間結合に対する修飾の組み合わせを含んでもよい。これらの組み合わせは、本明細書に記載するいずれか１つ又は複数の修飾を含んでよい。例えば、本明細書に（例えば、式（ｂ１）〜（ｂ４３）又は本明細書に記載するいずれか他の式に）記載する核酸塩基のいずれかと、本明細書において式（Ｉａ）、（Ｉａ−１）〜（Ｉａ−３）、（Ｉｂ）〜（Ｉｆ）、（Ｉｉａ）〜（Ｉｉｐ）、（Ｉｉｂ−１）、（Ｉｉｂ−２）、（Ｉｉｃ−１）〜（Ｉｉｃ−２）、（Ｉｉｎ−１）、（Ｉｉｎ−２）、（Ｉｖａ）〜（Ｉｖｌ）、及び（Ｉｘａ）〜（Ｉｘｒ）に記載するヌクレオチドのいずれかを組み合わせることができる。
【０３４０】
ポリヌクレオチド分子の合成
本発明に従い用いるためのポリヌクレオチド分子は、本明細書に記載するように、任意の有用な技術に従って調製することができる。本明細書に開示するポリヌクレオチド分子の合成に用いられる修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドは、以下の一般的方法及び手順を用いて、容易に入手可能な出発材料から調製することができる。典型的な、又は好ましい処理条件（例えば、反応温度、時間、反応体のモル比、溶媒、圧力など）が提供されている場合、当業者は、さらに別の処理条件を最適化し、展開させることができるであろう。最適反応条件は、使用する具体的反応体又は溶媒によって変動し得るが、こうした条件は
、常用的な最適化手順によって当業者が決定することができる。
【０３４１】
本明細書に記載するプロセスは、当分野で公知の任意の好適な方法に従いモニターすることができる。例えば、生成物形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈ若しくは１３Ｃ）、赤外分光法、分光測光（例えば、ＵＶ−可視光）、又は質量分析法などの分光手段により、あるいは、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）又は薄層クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーによってモニターすることができる。
【０３４２】
本発明のポリヌクレオチド分子の調製は、多様な化学基の保護及び脱保護を必要とし得る。保護及び脱保護の必要性、並びに適切な保護基の選択は、当業者により容易に決定することができる。保護基の化学は、例えば、グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）ら著、「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、第２版、ワイリー・アンド・サンズ社（Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）、１９９１年（これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）においてみいだすことができる。
【０３４３】
本明細書に記載するプロセスの反応は、好適な溶媒において実施することができ、こうした溶媒は、有機合成の分野の技術者が容易に選択することができる。好適な溶媒は、反応が実施される温度、すなわち溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度まで変動し得る温度で、出発材料（反応体）、中間体、又は生成物と実質的に非反応性であってよい。１種の溶媒又は２種以上の溶媒の混合物中で所与の反応を実施することができる。特定の反応ステップに応じて、特定の反応ステップに好適な溶媒を選択することができる。
【０３４４】
修飾ヌクレオチド又は核酸（例えば、ポリヌクレオチド又は修飾ｍＲＮＡ分子）のラセミ混合物の分割を当分野で公知の多数の方法のいずれかにより実施することができる。方法の一例として、光学的に活性の塩形成有機酸である「キラル分割剤」を用いる分別再結晶法が挙げられる。分別再結晶法のための好適な分割剤は、例えば、光学活性酸、例えば、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸又は多様な光学活性カンファースルホン酸のＤ及びＬ型がある。ラセミ混合物の分割は、光学活性分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）を充填したカラムでの溶離によっても実施することができる。好適な溶離溶媒の組成は、当業者が決定することができる。
【０３４５】
修飾ヌクレオシド及びヌクレオチド（例えば、構築ブロック分子）は、オガタ（Ｏｇａｔａ）ら著、有機化学会誌（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）、第７４巻、ｐ．２５８５〜２５８８、２００９年；プルマル（Ｐｕｒｍａｌ）ら著、核酸研究（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．）第２２巻（１）、ｐ．７２〜７８、１９９４年；フクハラ（Ｆｕｋｕｈａｒａ）ら著、生化学（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、第１巻（４）、ｐ．５６３〜５６８、１９６２年；並びにシュウ（Ｘｕ）ら著、テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）、第４８巻（９）、ｐ．１７２９〜１７４０、１９９２年（これらは各々、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の合成方法に従って調製することができる。
【０３４６】
本発明のポリヌクレオチドは、分子の全長に沿って均質に修飾しても、均質に修飾しなくてもよい。例えば、１つ又は複数、又は全タイプのヌクレオチド（例えば、プリン若しくはピリミジン、又はＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃの１つ又は複数、又は全部）を本発明のポリヌクレオチド、又はその所与の予め定めた配列領域において均質に修飾してもよいし、又はしなくてもよい。一部の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド（又はその所与の配列領域）における全てのヌクレオチドＸを修飾し、ここで、Ｘは、ヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つ、又は以下の組み合わせ：Ａ＋Ｇ、Ａ＋Ｕ、Ａ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ、Ｇ＋Ｃ、Ｕ＋Ｃ、Ａ＋Ｇ＋Ｕ、Ａ＋Ｇ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ＋Ｃ若しくはＡ＋Ｇ＋Ｃのいずれか１つであって
よい。
【０３４７】
異なる糖修飾、ヌクレオチド修飾、及び／又はヌクレオシド間結合（例えば、骨格構造）が、ポリヌクレオチドにおける様々な位置に存在してもよい。当業者であれば、ヌクレオチド類似体又は他の修飾が、ポリヌクレオチドの機能が実質的に低減しないような、ポリヌクレオチドのあらゆる位置に位置してもよいことは理解されよう。また、修飾は、５’又は３’末端修飾であってもよい。ポリヌクレオチドは、約１％〜約１００％修飾ヌクレオチド（全ヌクレオチド含量、又はヌクレオチドの１つ又は複数のタイプ、すなわちＡ、Ｇ、Ｕ若しくはＣのどれか１つ又は複数のいずれかに関して）又はその間のパーセンテージ（例えば、１％〜２０％、１％〜２５％、１％〜５０％、１％〜６０％、１％〜７０％、１％〜８０％、１％〜９０％、１％〜９５％、１０％〜２０％、１０％〜２５％、１０％〜５０％、１０％〜６０％、１０％〜７０％、１０％〜８０％、１０％〜９０％、１０％〜９５％、１０％〜１００％、２０％〜２５％、２０％〜５０％、２０％〜６０％、２０％〜７０％、２０％〜８０％、２０％〜９０％、２０％〜９５％、２０％〜１００％、５０％〜６０％、５０％〜７０％、５０％〜８０％、５０％〜９０％、５０％〜９５％、５０％〜１００％、７０％〜８０％、７０％〜９０％、７０％〜９５％、７０％〜１００％、８０％〜９０％、８０％〜９５％、８０％〜１００％、９０％〜９５％、９０％〜１００％、及び９５％〜１００％）を含有してもよい。
【０３４８】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ピリミジン（例えば、修飾ウラシル／ウリジン／Ｕ又は修飾シトシン／シチジン／Ｃ）を含む。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド分子中のウラシル又はウリジン（概して：Ｕ）は、修飾ウラシル又は修飾ウリジンの約１％〜約１００％（例えば、修飾ウラシル又は修飾ウリジンの１％〜２０％、１％〜２５％、１％〜５０％、１％〜６０％、１％〜７０％、１％〜８０％、１％〜９０％、１％〜９５％、１０％〜２０％、１０％〜２５％、１０％〜５０％、１０％〜６０％、１０％〜７０％、１０％〜８０％、１０％〜９０％、１０％〜９５％、１０％〜１００％、２０％〜２５％、２０％〜５０％、２０％〜６０％、２０％〜７０％、２０％〜８０％、２０％〜９０％、２０％〜９５％、２０％〜１００％、５０％〜６０％、５０％〜７０％、５０％〜８０％、５０％〜９０％、５０％〜９５％、５０％〜１００％、７０％〜８０％、７０％〜９０％、７０％〜９５％、７０％〜１００％、８０％〜９０％、８０％〜９５％、８０％〜１００％、９０％〜９５％、９０％〜１００％、及び９５％〜１００％）で置換してもよい。修飾ウラシル又はウリジンは、単一のユニークな構造を有する化合物により、又は様々な構造（例えば、本明細書に記載するように、２、３、４又はそれ以上のユニークな構造）を有する複数の化合物により、置換してもよい。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド分子中のシトシン又はシチジン（概して：Ｃ）は、修飾シトシン又は修飾シチジンの約１％〜約１００％（例えば、修飾シトシン又は修飾シチジンの１％〜２０％、１％〜２５％、１％〜５０％、１％〜６０％、１％〜７０％、１％〜８０％、１％〜９０％、１％〜９５％、１０％〜２０％、１０％〜２５％、１０％〜５０％、１０％〜６０％、１０％〜７０％、１０％〜８０％、１０％〜９０％、１０％〜９５％、１０％〜１００％、２０％〜２５％、２０％〜５０％、２０％〜６０％、２０％〜７０％、２０％〜８０％、２０％〜９０％、２０％〜９５％、２０％〜１００％、５０％〜６０％、５０％〜７０％、５０％〜８０％、５０％〜９０％、５０％〜９５％、５０％〜１００％、７０％〜８０％、７０％〜９０％、７０％〜９５％、７０％〜１００％、８０％〜９０％、８０％〜９５％、８０％〜１００％、９０％〜９５％、９０％〜１００％、及び９５％〜１００％）で置換してもよい。修飾シトシン又はシチジンは、単一のユニークな構造を有する化合物により、又は様々な構造（例えば、本明細書に記載するように、２、３、４又はそれ以上のユニークな構造）を有する複数の化合物により、置換してもよい。
【０３４９】
一部の実施形態では、本開示は、式（Ｉａ−１）：
【０３５０】
【化８６】
2017500034.tif 000116
を有するｎ個の連結したヌクレオシドを含むポリヌクレオチド（例えば、第１領域、第１フランキング領域、若しくは第２フランキング領域）を合成する方法を提供し、この方法は、
ａ）式（ＩＶ−１）：
【０３５１】
【化８７】
2017500034.tif 000117
のヌクレオチドを式（Ｖ−１）：
【０３５２】
【化８８】
2017500034.tif 000118
（Ｙ９は、Ｈ、ヒドロキシル、ホスホリル、ピロリン酸塩、硫酸塩、アミノ、チオール、任意選択で置換されたアミノ酸、又はペプチド（例えば、２〜１２アミノ酸を含む）であり；Ｐ１、Ｐ２、及びＰ３は各々、独立に、好適な保護基であり；
【０３５３】
【化８９】
2017500034.tif 000119
は、固体支持体を示す）
のホスホロアミダイト化合物と反応させることにより、式（ＶＩ−１）：
【０３５４】
【化９０】
2017500034.tif 000120
のポリヌクレオチドを取得するステップ；
ｂ）式（Ｖ）のポリヌクレオチドを酸化又は硫化することにより、式（ＶＩＩ−１）：
【０３５５】
【化９１】
2017500034.tif 000121
のポリヌクレオチドを取得するステップ；並びに
ｃ）保護基を除去することにより、式（Ｉａ）のポリヌクレオチドを取得するステップを含む。
【０３５６】
一部の実施形態では、ステップａ）及びｂ）は、１〜約１０，０００回反復する。一部の実施形態では、方法は、Ａ、Ｃ、Ｇ及びＵアデノシン、シトシン、グアノシン、及びウラシルからなる群から選択されるヌクレオチドをさらに含む。一部の実施形態では、核酸塩基は、ピリミジン又はその誘導体であってよい。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、翻訳可能である。
【０３５７】
ポリヌクレオチドの他の成分は、任意選択であり、一部の実施形態においては有益である。例えば、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）及び／又は３’ＵＴＲが提供され、ここで、これらのいずれか又は両方が、独立に、１つ又は複数の異なるヌクレオチド修飾を含有してもよい。このような実施形態において、ヌクレオチド修飾は、翻訳可能な領域にも存在して
よい。さらに、コザック配列を含有するポリヌクレオチドも提供される。
【０３５８】
ヌクレオチドの組み合わせ
修飾ヌクレオチド及び修飾ヌクレオチド組み合わせのさらなる例を以下の表２に掲載する。修飾ヌクレオチドのこれらの組み合わせを用いて、本発明のポリヌクレオチドを形成することができる。別に注記しない限り、修飾ヌクレオチドは、本発明のポリヌクレオチドの天然ヌクレオチドに対して完全に置換されていてもよい。非限定的例として、本明細書に記載する修飾ヌクレシチドで、天然ヌクレオチドウリジンを置換してもよい。別の非限定的例では、天然ヌクレオチドウリジンは、本明細書に開示する修飾ヌクレオシドの少なくとも１つで部分的に（例えば、約０．１％、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％若しくは９９．９％）置換してもよい。
【０３５９】
【表２−１】
2017500034.tif 000122
【０３６０】
【表２−２】
2017500034.tif 000123
いくつかの修飾ヌクレオチド及びヌクレオチド組み合わせが探究されている。これらの知見は、米国仮特許出願第６１／４０４，４１３号明細書、米国特許出願第１３／２５１，８４０号明細書、米国特許出願第１３／４８１，１２７号明細書、国際公開第２０１２０４５０７５号、米国特許出願公開第２０１２０２３７９７５号明細書、並びに国際公開第２０１２０４５０８２号が挙げられる。
【０３６１】
修飾ヌクレオチドの組み合わせのさらに別の例を以下の表３に掲載する。これらの修飾ヌクレオチドの組み合わせを用いて、本発明のポリヌクレオチドを形成することができる。
【０３６２】
【表３】
2017500034.tif 000124
一部の実施形態では、シトシンの少なくとも２５％が、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、又は（ｂ３２）〜（ｂ３５）（例えば、式（ｂ１０）若しくは（
ｂ３２）の化合物の少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％）の化合物により置換されている。
【０３６３】
一部の実施形態では、ウラシルの少なくとも２５％が、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、又は（ｂ２８）〜（ｂ３１）（例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、若しくは（ｂ３０）の化合物の少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％）の化合物により置換されている。
【０３６４】
一部の実施形態では、シトシンの少なくとも２５％が、式（ｂ１０）〜（ｂ１４）、（ｂ２４）、（ｂ２５）、又は（ｂ３２）〜（ｂ３５）（例えば、式（ｂ１０）若しくは（ｂ３２））の化合物により置換され、且つ、ウラシルの少なくとも２５％が、式（ｂ１）〜（ｂ９）、（ｂ２１）〜（ｂ２３）、又は（ｂ２８）〜（ｂ３１）（例えば、式（ｂ１）、（ｂ８）、（ｂ２８）、（ｂ２９）、又は（ｂ３０））（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％）の化合物により置換されている。
【０３６５】
リンカー及びペイロードを含む修飾
ヌクレオチドの核酸塩基は、任意の化学的に適切な位置で、ペイロード、例えば、検出可能薬剤又は治療薬に共有結合させることができる。例えば、核酸塩基は、デアザ−アデノシン又はデアザ−グアノシンであってよく、リンカーをデアザ−アデノシン又はデアザ−グアノシンのＣ−７若しくはＣ−８位置に結合させることができる。別の実施形態では、核酸塩基は、シトシン又はウラシルであってよく、リンカーをシトシン又はウラシルのＮ−３若しくはＣ−５位に結合させることができる。以下のスキーム１は、例示的な修飾ヌクレオチドを表し、ここで、核酸塩基、アデニンは、７−デアザアデニンのＣ−７炭素でリンカーに結合している。さらに、スキーム１は、ｍＲＮＡの３’末端に組み込まれたリンカー及びペイロード（例えば、検出可能薬剤）を有する修飾ヌクレオチドも表す。ジスルフィド切断と、プロパルギルエステルへのチオール基の１，２−付加により、検出可能薬剤が放出される。残った構造（例えば、スキーム１において、ｐＡｐＣ５Ｐａｒｇとして表される）は、阻害剤である。修飾ヌクレオチドの構造についての理論的根拠は、テザリングされた阻害剤が、第２の塩基を組み込むポリメラーゼの能力を立体的に妨害するというものである。従って、テザーが、上記の機能に影響を及ぼすのに十分長いこと、並びに阻害剤が、成長するポリヌクレオチド鎖中への第２及び後続のヌクレオチドを阻害又は妨害する立体化学配向にあることが極めて重要である。
【０３６６】
【化９２】
2017500034.tif 000125
リンカー
本明細書で用いる「リンカー」という用語は、例えば、１０〜１，０００原子からなる原子団を指し、これは、限定はしないが、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、
スルフォキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンなどの原子又は原子団から構成され得る。リンカーは、第１末端で核酸塩基又は糖部分上の修飾ヌクレオシド若しくはヌクレオチドに、及び第２末端でペイロード、例えば、検出可能薬剤若しくは治療薬に結合することができる。リンカーは、核酸配列への組み込みを妨害しないように十分な長さを有する。
【０３６７】
リンカーに組み込むことができる化学基の例として、限定はしないが、アルキル、アルケン、アルキン、アミド、エーテル、チオエーテル、又はエステル基が挙げられる。リンカー鎖はまた、飽和、不飽和若しくは芳香環の一部も含んでよく、こうした環には、多環及び複素環があり、ここで、複素環式芳香環は、１〜４個のヘテロ原子、Ｎ、Ｏ若しくはＳを含有するアリール基である。リンカーの具体的な例として、限定はしないが、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール、及びデキストランポリマーが挙げられる。
【０３６８】
例えば、リンカーは、エチレン又はプロピレングリコールモノマー単位、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、又はテトラエチレングリコールを含み得る。一部の実施形態では、リンカーは、二価アルキル、アルケニル、及び／又はアルキニル部分を含んでよい。リンカーは、エステル、アミド、又はエーテル部分を含んでもよい。
【０３６９】
別の例は、リンカー内に切断可能な部分、例えば、ジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）又はアゾ結合（−Ｎ＝Ｎ−）などを含み、これらは、還元剤又は光分解を用いて切断することができる。リンカーに組み込まれ、修飾ヌクレオチドに結合した切断可能な結合は、切断されると、ヌクレオチド上に、例えば、短い「スカー（ｓｃａｒ）」又は化学修飾をもたらす。例えば、切断後、ヌクレオチド塩基上に生じたスカーは、修飾ヌクレオチドの一部を形成し、ポリヌクレオチド鎖に組み込まれるが、これは、非反応性であるため、化学的に中和する必要はない。これによって、核酸ポリマー鋳型の配列決定中に、より容易に後続のヌクレオチドを組み込むことができる。例えば、条件として、ジスルフィド結合の切断のためのトリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）及び／又は他の還元剤の使用が挙げられる。アミド結合を含む選択的に切断可能な結合は、例えば、ＴＣＥＰ若しくは他の還元剤、及び／又は光分解の使用により切断することができる。エステル結合を含む選択的に切断可能な結合は、例えば、酸性又は塩基性加水分解によって切断することができる。
【０３７０】
ペイロード
本明細書に記載する方法及び組成物は、生物学的標的にペイロードを送達する上で有用である。ペイロードは、例えば、標識（例えば、発蛍光団などの検出可能薬剤）、又は治療目的（例えば、細胞毒素又はその他の治療薬）のために用いることができる。
【０３７１】
ペイロード：治療薬
一部の実施形態では、ペイロードは、細胞毒素、放射性イオン、化学療法薬、又はその他の治療薬などの治療薬である。細胞毒素又は細胞毒性物質は、細胞に有害な任意の物質を含む。例として、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、ミトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルチシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロパノロール、プロマイシン、メイタンシノイド、例えば、メイタンシノール（米国特許第５，２０８，０２０号明細書を参照）、ＣＣ−１０６５（米国特許第５，４７５，０９２号、同第５，５８５，４９９号、同第５，８４６，５４５号明細書を参照）並びにこれらの類似体又は相同体が挙げられる。放射性イオンとして、限定はしないが、ヨウ素（例えば、ヨウ素１２５又は
ヨウ素１３１）、ストロンチウム８９、リン、パラジウム、セシウム、イリジウム、リン酸塩、コバルト、イットリウム９０、サマリウム１５３及びプラセオジミウムが挙げられる。他の治療薬として、限定はしないが、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、ＣＣ−１０６５、メルファラン、カムスチン（ＢＳＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ミトマイシンＣ、及びシス−ジクロロジアミンプラチナム（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（旧名：ダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧名：アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、及びアントラマイシン（ＡＭＣ））、並びに抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール及びメイタンシノイド）が挙げられる。
【０３７２】
ペイロード：検出可能薬剤
検出可能な物質の例として、多種多様な有機小分子、無機化合物、ナノ粒子、酵素若しくは酵素基質、蛍光材料、発光材料、生物発光材料、化学発光材料、放射性材料、及び造影剤が挙げられる。こうした任意選択で検出可能な標識として、例えば、限定はしないが、以下のものが挙げられる：４−アセトアミド−４’−イソチオシアナトスチルベン−２，２’−ジスルホン酸；アクリジン及び誘導体：アクリジン、アクリジンイソチオシアネート；５−（２’−アミノエチル）アミノナフタレン−１−スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）；４−アミノ−Ｎ−［３−ビニルスルホニル）フェニル］ナフタルイミド−３，５ジスルホネート；Ｎ−（４−アニリノ−ｌ−ナフチル）マレイミド；アントラニルアミド；ＢＯＤＩＰＹ；ブリリアントイエロー（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｙｅｌｌｏｗ）；クマリン及び誘導体；クマリン、７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ、クマリン（Ｃｏｕｍａｒｉｎ）１２０）、７−アミノ−４−トリフルオロメチルクルアリン（クマラン（Ｃｏｕｍａｒａｎ）１５１）；シアニン色素；シアノシン；４’６−ジアミニジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）；５’５”−ジブロモピロガロール−スルホナフタレイン（ブロモピロガロールレッド）；７−ジエチルアミノ−３−（４’−イソチオシアナトフェニル）−４−メチルクマリン；ジエチレントリアミン五酢酸塩；４，４’−ジイソチオシアナトジヒドロ−スチルベン−２，２’−ジスルホン酸；４，４’−ジイソチオシアナトスチルベン−２，２’−ジスルホン酸；５−［ジメチルアミノ］−ナフタレン−１−スルホニル塩化物（ＤＮＳ、ダンシルクロリド）；４−ジメチルアミノフェニルアゾフェニル−４’−イソチオシアネート（ＤＡＢＩＴＣ）；エオシン及び誘導体；エオシン、エオシンイソチオシアネート、エリスロシン及び誘導体；エリスロシンＢ、エリスロシン、イソチオシアネート；エチジウム；フルオレセイン及び誘導体；５−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、５−（４，６−ジクロロトリアジン−２−イル）アミノフルオレセイン（ＤＴＡＦ）、２’，７’−ジメトキシ−４’，５’−ジクロロ−６−カルボキシフルオレセイン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ＱＦＩＴＣ、（ＸＲＩＴＣ）；フルオレスカミン；ＩＲ１４４；ＩＲ１４４６；マラカイトグリーン（Ｍａｌａｃｈｉｔｅ  Ｇｒｅｅｎ）イソチオシアネート；４−メチルウンベリフェロンオルトクレゾールフタレイン；ニトロチロシン；パラロサニリン；フェノールレッド（Ｐｈｅｎｏｌ  Ｒｅｄ）；Ｂ−フィコエリスリン；ｏ−フタルジアルデヒド；ピレン及び誘導体；ピレン、酪酸ピレン、スクシンイミジル１−ピレン；酪酸量子ドット；リアクティブレッド（Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｒｅｄ）４（チバクロン（Ｃｉｂａｃｒｏｎ）（商標）ブリリアントレッド（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｒｅｄ）３Ｂ−Ａ）ローダミン及び誘導体：６−カルボキシ−Ｘ−ローダミン（ＲＯＸ）、６−カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、リサミンローダミンＢ、塩化スルホニルローダミン（Ｒｈｏｄ）、ローダミンＢ、ローダミン１２３、ローダミンＸイソチオシアネート、スルホローダミンＢ、スルホローダミン１０１、スルホローダミン１０１の塩化��ルホニル誘導体（テキサスレッド（Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ）；Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’テトラメチル−６−カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）；テトラメチルローダ
ミン；テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）；リボフラビン；ロゾール酸；テルビウムキレート誘導体；シアニン−３（Ｃｙ３）；シアニン−５（Ｃｙ５）；シアニン−５．５（Ｃｙ５．５）、シアニン−７（Ｃｙ７）；ＩＲＤ７００；ＩＲＤ８００；アレキサ（Ａｌｅｘａ）６４７；ラジョルタブルー（Ｌａ  Ｊｏｌｔａ  Ｂｌｕｅ）；フタロシアニン；及びナフタロシアニン。一部の実施形態では、検出可能な標識は、Ｃｙ５及びＣｙ３などの蛍光色素である。
【０３７３】
発光材料の例として、ルミノールが挙げられ；生物発光材料の例として、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びイクオリンが挙げられる。
【０３７４】
好適な放射性材料の例として、直接若しくは間接的のいずれかで検出可能な１８Ｆ、６７Ｇａ、８１ｍＫｒ、８２Ｒｂ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ、２０１Ｔｌ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、３Ｈ、９９ｍＴｃ（例えば、過テクネチウム酸塩（テクネチウム酸塩（ＶＩＩ）、ＴｃＯ４?）、あるいは、電波放射の直接計数又はシンチレーション計
数により検出可能な他の放射性同位体が挙げられる。
【０３７５】
さらに、造影剤、例えば、ＭＲＩ又はＮＭＲ、Ｘ線ＣＴ、ラマンイメージング、光干渉断層撮影、光吸収イメージング、超音波イメージング、又はサーマルイメージング用の造影剤を用いることができる。例示的造影剤として、金（例えば、金ナノ粒子）、ガドリニウム（例えば、キレート化Ｇｄ）、酸化鉄（例えば、超常磁性酸化鉄（ＳＰＩＯ）、単結晶酸化鉄ナノ粒子（ＭＩＯＮ）、及び超微小超常磁性酸化鉄（ＵＳＰＩＯ））、マンガンキレート（例えば、Ｍｎ−ＤＰＤＰ）、硫酸バリウム、ヨウ素化造影剤（イオヘキソール）、マイクロバブル、又はパーフルオロカーボンを用いることもできる。
【０３７６】
一部の実施形態では、検出可能薬剤は、活性化の際に検出可能になる検出不能前駆物質である。例として、蛍光性テトラジン−蛍光構築物（例えば、テトラジン−ＢＯＤＩＰＹ
ＦＬ、テトラジン−オレゴングリーン（Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ）４８８、又はテトラジン−ＢＯＤＩＰＹ  ＴＭＲ−Ｘ）又は酵素活性化蛍光性物質（例えば、ＰＲＯＳＥＮＳＥ（ＶｉｓＥｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ））が挙げられる。
【０３７７】
化合物が酵素により、例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、又はルシフェラーゼで標識される場合、酵素標識は、適切な基質から産物への変換の決定により検出される。
【０３７８】
これらの組成物を用いることができるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイとしては、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、免疫蛍光、酵素免疫検定（ＥＩＡ）、放射線免疫検定（ＲＩＡ）、及びウェスタンブロット分析が挙げられる。
【０３７９】
本明細書に記載するもの以外の標識も本開示により考慮され、他の光学的に検出可能な標識などが含まれる。標識は、切断可能なリンカーの切断時に、組み込まれた塩基から標識を除去することができるように、標準的化学を用いて、任意の位置で、本開示の修飾ヌクレオチドに結合することができる。
【０３８０】
ペイロード：細胞透過性ペイロード
一部の実施形態では、修飾ヌクレオチド及び修飾核酸は、組成物の細胞内送達を促進する細胞透過性部分若しくは薬剤であり得るペイロードも含有してよい。例えば、組成物は、細胞内空間への送達を促進する細胞透過性ペプチド配列、例えば、ＨＩＶ由来ＴＡＴペプチド、ペネトラチン、トランスポルタン、又はｈＣＴ由来細胞透過性ペプチドを含んでよく、例えば、以下を参照されたい：カロン（Ｃａｒｏｎ）ら著、２００１年、分子療法（Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．）、第３巻（３）、ｐ．３１０〜８；ランゲル（Ｌａｎｇｅｌ）著
、細胞透過性ペプチド：製法及び適用（Ｃｅｌｌ−Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、（ＣＲＣプレス（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）、ボカ・ラトン（Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ）、ＦＬ  ２００２年）；エル−アンダルッシ（Ｅｌ−Ａｎｄａｌｏｕｓｓｉ）ら著、２００５年、最新製薬設計（Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．）、第１１巻（２８）、ｐ．３５９７〜６１１；並びにデスヘイズ（Ｄｅｓｈａｙｅｓ）ら著、２００５年、細胞及び分子ライフサイエンス（Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．）、第６２巻（１６）、ｐ．１８３９〜４９。組成物はまた、細胞内空間への組成物の送達を促進する細胞透過性物質（例えば、リポソーム）を含むように製剤化することもできる。
【０３８１】
ペイロード：生物学的標的
特定のリガンドが存在するか、又はそのようなリガンドを作製することができる任意の生物学的標的に、ペイロードを送達するために、本明細書に記載する修飾ヌクレオチド及び修飾核酸を使用することができる。リガンドは、生物学的標的に共有又は非共有のいずれかで結合することができる。
【０３８２】
例示的生物学的標的として、バイオポリマー、例えば、抗生物質、ＲＮＡ及びＤＮＡのような核酸、タンパク質、酵素が挙げられ；例示的タンパク質としては、酵素、受容体、及びイオンチャンネルが挙げられる。一部の実施形態では、標的は、組織又は細胞型特異的マーカ、例えば、選択した組織又は細胞型に特異的に発現されるタンパク質である。一部の実施形態では、標的は、限定はしないが、細胞膜受容体及び核受容体などの受容体であり；より具体的な例としては、Ｇタンパク質結合受容体、細胞細孔タンパク質、輸送タンパク質、表面発現抗体、ＨＬＡタンパク質、ＭＨＣタンパク質及び成長因子受容体が挙げられる。
【０３８３】
修飾ヌクレオチドの合成
本明細書に開示する修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドは、以下の一般的方法及び手順を用いて、容易に入手可能な出発材料から調製することができる。典型的又は好ましい処理条件（すなわち、反応温度、時間、反応体のモル比、溶媒、圧力など）が与えられている場合、別に記載のない限り、他の処理条件を使用することもできることは理解される。最適反応条件は、使用する具体的反応体又は溶媒によって変動し得るが、こうした条件は、常用的な最適化手順によって当業者が決定することができる。
【０３８４】
本明細書に記載するプロセスは、当分野で公知の任意の好適な方法に従いモニターすることができる。例えば、生成物の形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈ若しくは１３Ｃ）赤外分光法、分光測光（例えば、ＵＶ−可視光）、又は質量分析法などの分光手段により、あるいは、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）又は薄層クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーによってモニターすることができる。
【０３８５】
修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドの調製は、多様な化学基の保護及び脱保護を必要とし得る。保護及び脱保護の必要性、並びに適切な保護基の選択は、当業者により容易に決定することができる。保護基の化学は、例えば、グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）ら著、「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、第２版、ワイリー・アンド・サンズ社（Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）、１９９１年（これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）においてみいだすことができる。
【０３８６】
本明細書に記載するプロセスの反応は、好適な溶媒において実施することができ、こうした溶媒は、有機合成の分野の技術者が容易に選択することができる。好適な溶媒は、反応が実施される温度、すなわち溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度まで変動し得る温度で
、出発材料（反応体）、中間体、又は生成物と実質的に非反応性であってよい。１種の溶媒又は２種以上の溶媒の混合物中で所与の反応を実施することができる。特定の反応ステップに応じて、特定の反応ステップに好適な溶媒を選択することができる。
【０３８７】
修飾ヌクレオシド及びヌクレオチドのラセミ混合物の分割は、当分野で公知の多様な方法のいずれかにより実施することができる。方法の一例として、光学的に活性の塩形成有機酸である「キラル分割酸」を用いる分別再結晶法が挙げられる。分別再結晶法のための好適な分割剤の例として、光学活性酸、例えば、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸又は様々な光学活性カンファースルホン酸のＤ及びＬ型がある。ラセミ混合物の分割は、光学活性分割剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）を充填したカラムでの溶離によっても実施することができる。好適な溶離溶媒の組成は、当業者が決定することができる。
【０３８８】
修飾核酸
本開示は、核酸（又はポリヌクレオチド）を提供し、このようなものとして、本明細書に記載する１つ又は複数の修飾ヌクレオシド（「修飾核酸」と呼ばれる）又はヌクレオチドを含有するｍＲＮＡなどのＲＮＡが挙げられ、これらは、ｍＲＮＡを導入した細胞の自然免疫応答の実質的誘導の欠如などの有用な特性を有する。これらの修飾核酸は、タンパク質産生の効率、核酸の細胞内保持、及び接触細胞の生存率を増強すると共に、低い免疫原性を有するため、こうした特性を有するこれらの核酸も、本明細書において「増強された核酸」と呼ばれる。
【０３８９】
「核酸」という用語は、その最も広い意味で、オリゴヌクレオチド鎖であるか、又はそれに組み込むことができる任意の化合物及び／又は物質を包含する。これに関連して、核酸という用語は、ポリヌクレオチドと類義語として用いられる。本開示に従い用いられる例示的な核酸として、限定はしないが、本明細書に詳述するように、１つ又は複数のＤＮＡ、メッセンジャーｍＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、そのハイブリッド、ＲＮＡｉ誘導剤、ＲＮＡｉ剤、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、触媒ＤＮＡ、三重らせん形成を誘導するＲＮＡ、アプタマー、ベクターなどを含むＲＮＡが挙げられる。
【０３９０】
翻訳可能な領域と、１つ、２つ、又は３つ以上の異なるヌクレオシド修飾とを含有する修飾核酸が提供される。一部の実施形態では、修飾核酸は、対応する非修飾核酸と比較して、核酸が導入された細胞中での低い分解を呈示する。例示的な核酸として、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、又はそれらのハイブリッドが挙げられる。好ましい実施形態では、修飾核酸は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む。本明細書に記載するように、本開示の核酸は、ｍＲＮＡが導入された細胞の自然免疫応答を実質的に誘導しない。
【０３９１】
いくつかの実施形態では、例えば、タンパク質生成の正確なタイミングが要望される場合、細胞に導入される修飾核酸を細胞内で分解することが望ましい。従って、本開示は、細胞内で指定の様式で作用させることができる分解ドメインを含有する修飾核酸を提供する。
【０３９２】
核酸の他の成分は任意選択であり、一部の実施形態では、有益である。例えば、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）及び／又は３’ＵＴＲが提供され、ここで、これらのいずれか一方又は両方が、独立に、１つ又は複数の異なるヌクレオシド修飾を含んでもよい。こうした実施形態では、ヌクレオシド修飾は、翻訳可能な領域内に存在してもよい。さらに、コザック配列を含有する核酸も提供される。
【０３９３】
これに加えて、核酸から切除することができる１つ又は複数のイントロンヌクレオチド配列を含有する核酸も提供される。
さらに、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含有する核酸が提供される。ＩＲＥＳは、単独のリボソーム結合部位として作用するか、又はｍＲＮＡの複数のリボソーム結合部位の１つとして役立ち得る。２つ以上の機能性リボソーム結合部位を含有するｍＲＮＡは、リボソームにより独立に翻訳されるいくつかのペプチド又はポリペプチドをコードし得る（「多シストロン性ｍＲＮＡ」）。ＩＲＥＳを含む核酸が提供される場合、さらに、第２の翻訳可能な領域が任意選択で提供される。本開示に従い用いることができるＩＲＥＳ配列の例として、限定はしないが、ピコルナウイルス（ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｕｓｅｓ）（例えば、ＦＭＤＶ）、ペストウイルス（ｐｅｓｔ  ｖｉｒｕｓ）（ＣＦＦＶ）、ポリオウイルス（ｐｏｌｉｏ  ｖｉｒｕｓ）（ＰＶ）、脳心筋炎ウイルス（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）（ＥＣＭＶ）、口蹄疫ウイルス（ｆｏｏｔ−ａｎｄ−ｍｏｕｔｈ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｖｉｒｕｓ）（ＦＭＤＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ブタコレラウイルス（ｃｌａｓｓｉｃａｌ  ｓｗｉｎｅ  ｆｅｖｅｒ  ｖｉｒｕｓ）（ＣＳＦＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ｓｉｍｉａｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ）（ＳＩＶ）又はコオロギ麻痺ウイルス（ｃｒｉｃｋｅｔ  ｐａｒａｌｙｓｉｓ  ｖｉｒｕｓ）（ＣｒＰＶ）が挙げられる。
【０３９４】
一部の実施形態では、核酸は、式ＸＩ−ａ：
【０３９５】
【化９３】
2017500034.tif 000126
の化合物であり、
式中、
【０３９６】
【化９４】
2017500034.tif 000127
は、任意選択の二重結合を示し；
−−−は、任意選択の単結合を示し；
【０３９７】
【化９５】
2017500034.tif 000128
が単結合を示すとき、Ｕは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲａ、若しくは−ＣＲａＲｂ−であり、又は
【０３９８】
【化９６】
2017500034.tif 000129
が二重結合を示すとき、Ｕは、−ＣＲａ−であり；
Ａは、Ｈ、ＯＨ、ホスホリル、ピロリン酸塩、硫酸塩、−ＮＨ２、−ＳＨ、アミノ酸、又は２〜１２個のアミノ酸を含むペプチドであり；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｙ１の各々は、独立に、−ＯＲａ１、−ＮＲａ１Ｒｂ１、及び−ＳＲａ１から選択され；
Ｙ２及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、−ＣＲａＲｂ−、ＮＲｃ、Ｓ、あるいはＣ、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１つ又は複数の原子を含むリンカーから選択され；
Ｒａ及びＲｂは各々、独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、又はＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基であり；
Ｒａ１は、Ｈであり；
−ＯＲｃ１は、約１のｐＨでＯＨであるか、又は−ＯＲｃ１は、生理学的ｐＨで、Ｏ−であり；
Ｂは、核酸塩基であり；
但し、変数Ａ、Ｂ、Ｕ、Ｙ２及びＹ３を含む環は、リボースではあり得ないものとする。
【０３９９】
一部の実施形態では、Ｂは、式ＸＩＩ−ａ、ＸＩＩ−ｂ、又はＸＩＩ−ｃ：
【０４００】
【化９７】
2017500034.tif 000130
の核酸塩基であり、
式中、
【０４０１】
【化９８】
2017500034.tif 000131
は、単結合又は二重結合を示し；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｕ及びＷは各々、独立に、ＣＨ又はＮであり；
Ｖは、Ｏ、Ｓ、Ｃ若しくはＮであり；
ここで、ＶがＣのとき、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロ、又は−ＯＲｃであり、ここで、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、及びＣ２〜６アルキニルは各々、独立に、任意選択で−ＯＨ、−ＮＲａＲｂ、−ＳＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｃ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒｃ、又は−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲｃで置換されており；
また、ＶがＯ、Ｓ若しくはＮのとき、Ｒ１は、存在せず；
Ｒ２は、Ｈ、−ＯＲｃ、−ＳＲｃ、−ＮＲａＲｂ、又はハロであり；
あるいは、Ｖが、Ｃのとき、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している炭素原子と一緒に、ハロ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＲａＲｂ、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ２〜２０アルケニル、Ｃ２〜２０アルキニル、Ｃ１〜２０アルコキシ、若しくはＣ１〜２０チオアルキルから選択される１〜４個の置換基で任意選択で置換された５又は６員環を形成することができ；
Ｒ３は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルであり；ここで、
【０４０２】
【化９９】
2017500034.tif 000132
が、二重結合を示すとき、Ｒ４は、存在せず、あるいは、Ｎ−Ｒ４は、一緒になって、Ｃ１〜２０アルキルで置換された陽荷電Ｎを形成し；
Ｒａ及びＲｂは各々、独立に、Ｈ、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ２〜２０アルケニル、Ｃ２〜２０アルキニル、若しくはＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ２〜２０アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基である。
【０４０３】
一部の実施形態では、Ｂは、式ＸＩＩ−ａ１、ＸＩＩ−ａ２、ＸＩＩ−ａ３、ＸＩＩ−ａ４、又はＸＩＩ−ａ５：
【０４０４】
【化１００】
2017500034.tif 000133
の核酸塩基である。
【０４０５】
一部の実施形態では、核酸塩基は、ピリミジン又はその誘導体である。
一部の実施形態では、核酸は、式ＸＩ−ａの複数の構造的にユニークな化合物を含有する。
【０４０６】
一部の実施形態では、シトシンの少なくとも２５％が、式ＸＩ−ａの化合物により置換されている（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％）。
【０４０７】
一部の実施形態では、ウラシルの少なくとも２５％が、式ＸＩ−ａの化合物により置換されている（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％）。
【０４０８】
一部の実施形態では、シトシンの少なくとも２５％とウラシルの２５％が、式ＸＩ−ａ
の化合物により置換されている（例えば、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、又は約１００％）。
【０４０９】
一部の実施形態では、核酸は、翻訳可能である。
一部の実施形態では、核酸が、例えば、本明細書に記載するように、リンカー及びペイロードで修飾されたヌクレオチドを含む場合、リンカー及びペイロードで修飾されたヌクレオチドは、上記核酸の３’末端上にある。
【０４１０】
主溝相互作用パートナー
本明細書に記載する場合、「主溝相互作用パートナー」という用語は、ヌクレオチド又は核酸の主溝面との相互作用（例えば、結合）によって、ＲＮＡリガンドを検出し、これに応答するＲＮＡ認識受容体を指す。このように、本明細書に記載する修飾ヌクレオチド又は核酸を含むＲＮＡリガンドは、主溝結合パートナーとの相互作用を低減するため、自然免疫応答、又は炎症促進性サイトカインの発現及び分泌、若しくはその両方を低減する。
【０４１１】
主溝相互作用（例えば、結合）パートナーの例として、限定はしないが、以下のヌクレアーゼ及びヘリカーゼが挙げられる。膜内では、ＴＬＲ（トール様受容体）３、７、及び８は、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡに応答することができる。細胞質内では、ＤＥＸ（Ｄ／Ｈ）ヘリカーゼ及びＡＴＰａｓｅのサブファミリー２クラスのメンバーが、ＲＮＡを感知して、抗ウイルス応答を開始することができる。これらのヘリカーゼとしては、ＲＩＧ−Ｉ（レチノール酸誘導性遺伝子Ｉ）及びＭＤＡ５（黒色腫分化関連遺伝子５）が挙げられる。他の例として、ラボラトリー・オブ・ジェネティクス・アンド・フィジオロジー（ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｏｆ  ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ）２（ＬＧＰ２）、ＨＩＮ−２００ドメイン含有タンパク質、又はヘリカーゼドメイン含有タンパク質が挙げられる。
【０４１２】
自然免疫応答の阻止又は低減
「自然免疫応答」という用語は、概してウイルス又は細菌起原の外性一本鎖核酸に対する細胞の応答を含み、これは、サイトカイン発現及び放出、特にインターフェロン、及び細胞死の誘導を伴う。また、自然細胞免疫応答の際のタンパク質合成も低減される。外性核酸の導入によりトリガーされる細胞内の自然免疫応答を排除することは有利ではあるが、本開示は、こうした応答を完全に排除することなく、インターフェロンシグナル伝達などの免疫応答を実質的に低減するｍＲＮＡなどの修飾核酸を提供する。一部の実施形態では、免疫応答は、対応する非修飾核酸により誘導される免疫応答と比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．９％、又は９９．９％超、低減される。このような低減は、１型インターフェロンの発現若しくは活性レベル又はインターフェロン調節遺伝子、例えば、トール様受容体（例えば、ＴＬＲ７及びＴＬＲ８）の発現により測定することができる。また、自然免疫応答の誘導の低減又は欠如は、細胞集団に対する修飾ＲＮＡの１回又は複数回の投与後の細胞死の減少によっても測定することができ；例えば、細胞死は、対応する非修飾核酸で観測された細胞死頻度よりも、１０％、２５％、５０％、７５％、８５％、９０％、９５％、又は９５％超少ない。さらに、細胞死は、修飾核酸と接触させた細胞の５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％、１％、０．１％未満、又は０．０１％未満に影響し得る。
【０４１３】
一部の実施形態では、ポリヌクレオチド及び／又はｍＲＮＡ分子などの修飾核酸は、レ
シピエント細胞又は生物による免疫応答を誘導しないか、又は最小限にしか誘導しないような方法で修飾する。こうした免疫応答トリガー若しくは活性化の回避又は防止は、本発明の修飾ポリヌクレオチドの新規の特徴である。
【０４１４】
本開示は、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、又はｉｎ  ｖｉｖｏでの、標的細胞集団に修飾核酸の反復導入（例えば、トランスフェクション）を提供する。細胞集団と接触させるステップは、１回又は複数回（例えば、２、３、４、５若しくは６回以上）反復してよい。一部の実施形態では、細胞集団を修飾核酸と接触させるステップは、細胞集団内のタンパク質翻訳の予定効率が達成されるのに十分な回数反復する。核酸修飾によって得られる標的細胞集団の細胞傷害性が低減されれば、こうした反復トランスフェクションは、多種多様な細胞型においてｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｖｏで達成可能である。
【０４１５】
ポリペプチド変異体
参照ポリペプチド配列と特定の同一性を有する変異型ポリペプチドをコードする核酸が提供される。「同一性」という用語は、当分野で公知のように、２つ以上のペプチドの配列間の関係を指し、これらの配列を比較することによって決定される。当分野では、「同一性」は、ペプチド間の配列の関連度も意味し、これは、２つ以上のアミノ酸残基の鎖同士のマッチの数により決定される。「同一性」は、特定の数学モデル又はコンピュータプログラム（すなわち、「アルゴリズム」）により処理されるギャップアラインメント（もしあれば）を含む２つ以上の配列の小さい方同士の等しいマッチの割合（％）を示す。関連ペプチドの同一性は、公知の方法により容易に計算することができる。こうした方法として、限定はしないが、以下に記載されているものが挙げられる：分子計算生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、レスク，Ａ．Ｍ．（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．）編、オックスフォード・ユニバーシティ・プレス（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９８８年；バイオコンピューティング：インフォーマティックス及びゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）、スミス，Ｄ．Ｗ．（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．）編、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９３年；配列データのコンピュータ解析（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ）、第１部、グリフィン，Ａ．Ｍ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．）及びグリフィン，Ｈ．Ｇ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．）編、ヒューマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、ニュージャージー（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）、１９９４年；分子生物学による配列分析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、フォン・ハインチェ，Ｇ．（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．）著、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７年；配列分析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）、グリブスコフ，Ｍ．（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．）及びデブロー，Ｊ．（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）編、Ｍ．ストックトン・プレス（Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９１年；カリロ（Ｃａｒｉｌｌｏ）ら著、応用数学ＳＩＡＭ会誌（ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．）、第４８巻、ｐ．１０７３、１９８８年。
【０４１６】
一部の実施形態では、ポリペプチド変異体は、参照ポリペプチドと同じか又は類似の活性を有する。あるいは、その変異体は、参照ポリペプチドに対して、改変された（例えば、増大又は低減した）活性を有する。概して、本開示の特定のポリヌクレオチド又はポリペプチドの変異体は、本明細書に記載する、当業者には周知の配列アラインメントプログラム及びパラメータにより測定した場合、該当する特定の参照ポリヌクレオチド又はポリペプチドに対して、少なくとも約４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９
６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上の配列同一性を有する。
【０４１７】
当業者には認識されるように、タンパク質断片、機能性タンパク質ドメイン、及び相同タンパク質もまた本開示の範囲に含まれると考えられる。例えば、本開示には、参照タンパク質の任意のタンパク質断片（参照ポリペプチドより少なくとも１アミノ酸残基短いが、それ以外は同一のポリペプチド配列）で、長さが１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００又は１００超アミノ酸の断片が提供される。別の例では、本明細書に記載する配列のいずれかと約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、又は約１００％同一である約２０、約３０、約４０、約５０、又は約１００アミノ酸の区間を含む任意のタンパク質を本開示に従い使用することができる。特定の実施形態において、本開示に従い使用しようとするタンパク質配列は、本明細書に記載又は参照する配列のいずれかに示されるように、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上の突然変異を含む。
【０４１８】
ポリペプチドライブラリー
ヌクレオシド修飾を含むポリヌクレオチドライブラリーも提供され、ここで、ポリヌクレオチドは、個別に、抗体、タンパク質結合パートナー、スカフォールドタンパク質、及び当分野では公知の他のポリペプチドなどのポリペプチドをコードする第１核酸配列を含有する。好ましくは、ポリヌクレオチドは、標的細胞宿主への直接導入に好適な形態のｍＲＮＡであり、これが、次にはコード化ポリペプチドを合成する。
【０４１９】
いくつかの実施形態では、タンパク質の複数の変異体（各々、異なるアミノ酸修飾を含む）を生成して、試験することにより、薬物動態、安定性、生体適合性、及び／若しくは生物活性、又は発現レベルなどの生物物理学的特性に関する最良の変異体を決定する。こうしたライブラリーは、１０、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、又は１０９超の考えられる変異体（１つ又は複数の残基の置換、欠失、及び１つ又は複数の残基の挿入を含む）を含有し得る。
【０４２０】
ポリペプチド−核酸複合体
適正なタンパク質翻訳は、ｍＲＮＡに結合したいくつかのポリペプチド及び核酸の物理学的凝集を伴う。本開示により、１つ又は複数のヌクレオシド修飾（例えば、少なくとも２つの異なるヌクレオシド修飾）を有する翻訳可能なｍＲＮＡと、ｍＲＮＡに結合した１つ又は複数のポリペプチドとを含有するタンパク質−核酸複合体が提供される。一般に、複合体が導入された細胞の自然免疫応答を阻止又は低減する上で有効な量でタンパク質が提供される。
【０４２１】
翻訳不可能な修飾核酸
本明細書に記載するように、実質的に翻訳不可能な配列を有するｍＲＮＡが提供される。こうしたｍＲＮＡは、哺乳動物対象に投与される場合、ワクチンとして有効である。
【０４２２】
また、１つ又は複数の非コード領域を含有する修飾核酸も提供される。こうした修飾核酸は、概して翻訳されないが、リボソームタンパク質若しくは輸送ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）のような１つ又は複数の翻訳機構成分に結合して、これらを隔離することにより、細胞におけるタンパク質発現を有効に低減することができる。修飾核酸は、低分子核小体ＲＮＡ（ｓｎｏ−ＲＮＡ）、ミクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）又はＰｉｗｉ−相互作用ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）を含有し得る。
【０４２３】
修飾核酸の合成
本開示に従い使用する核酸は、任意の利用可能な技術に従って調製することができ、そのような技術として、限定はしないが、化学合成、酵素合成（一般に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ
転写と呼ばれる）、長い前駆体の酵素又は化学切断などが挙げられる。ＲＮＡを合成する方法は当分野において公知である（例えば、以下を参照されたい：ゲイト，Ｍ．Ｊ．（Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．）（編）、「オリゴヌクレオチド合成：実用的アプローチ（Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ）」、オックスフォード（Ｏｘｆｏｒｄ）［オックスフォードシャー（Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ）］、ワシントン、ＤＣ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）：ＩＲＬプレス（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８４年；並びにヘルデウィジン，Ｐ．（Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．）（編）、「オリゴヌクレオチド合成：方法及び適用（Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、分子生物学による方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、第２８８巻（ニュージャージー州クリフトン（Ｃｌｉｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．））ニュージャージー州トトワ（Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．）：ヒューマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、２００５年；これらはいずれも、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０４２４】
修飾核酸は、分子の全長にわたって均質に修飾する必要はない。様々なヌクレオチド修飾及び／又は骨格構造が、核酸の様々な位置に存在してもよい。当業者であれば、ヌクレオチド類似体又はその他の修飾が、核酸の機能が実質的に低減しないような核酸の任意の位置に位置してよいことは理解されよう。修飾はまた、５’又は３’末端修飾であってもよい。核酸は、最小１つ、最大１００％の修飾ヌクレオチド、又はその間の任意のパーセンテージ、例えば、少なくとも５％の修飾ヌクレオチド、少なくとも１０％の修飾ヌクレオチド、少なくとも２５％の修飾ヌクレオチド、少なくとも５０％の修飾ヌクレオチド、少なくとも８０％の修飾ヌクレオチド、又は少なくとも９０％の修飾ヌクレオチドを含有し得る。例えば、核酸は、ウラシル又はシトシンなどの修飾ピリミジンを含有してもよい。一部の実施形態では、核酸中のウラシルの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも１００％が、修飾ウラシルで置換されている。修飾ウラシルは、単一のユニークな構造を有する化合物により置換することができ、あるいは、異なる構造（例えば、２、３、４又はそれ以上のユニークな構造）を有する複数の化合物によって置換することもできる。一部の実施形態では、核酸中のシトシンの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％又は少なくとも１００％が、修飾シトシンで置換されている。修飾シトシンは、単一のユニークな構造を有する化合物により置換することができ、あるいは、異なる構造（例えば、２、３、４又はそれ以上のユニークな構造）を有する複数の化合物によって置換することもできる。
【０４２５】
概して、本開示の修飾ｍＲＮＡの最も短い長さは、ジペプチドをコードするのに十分なｍＲＮＡ配列の長さであってよい。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、トリペプチドをコードするのに十分である。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、テトラペプチドをコードするのに十分である。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、ペンタペプチドをコードするのに十分である。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、ヘキサペプチドをコードするのに十分である。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、ヘプタペプチドをコードするのに十分である。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、オクタペプチドをコードするのに十分である。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、ノナペプチドをコードするのに十分である。別の実施形態では、ｍＲＮＡ配列の長さは、デカペプチドをコードするのに十分である。
【０４２６】
修飾核酸がコードすることができるジペプチドの例として、限定はしないが、カルノシン及びアンセリンが挙げられる。
別の実施形態では、ｍＲＮＡは、３０ヌクレオチドを超える長さである。別の実施形態では、ＲＮＡ分子は、３５ヌクレオチドを超える長さである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４５ヌク
レオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも５５ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも９０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１２０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも３５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも７００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも９００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも３０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも５０００ヌクレオチド、又は５０００ヌクレオチド超である。
【０４２７】
例えば、本明細書に記載する修飾核酸は、核酸合成の当業者には周知の方法を用いて調製することができる。
一部の実施形態では、本開示は、ヌクレオチドを含む核酸配列を調製する方法（例えば、酵素的）を提供し、核酸配列は、式ＸＩ−ａ：
【０４２８】
【化１０１】
2017500034.tif 000134
の化合物を含み、
ここで、
ヌクレオチドは、低減した結合親和性を有し；
【０４２９】
【化１０２】
2017500034.tif 000135
は、任意選択の二重結合を示し；
−−−は、任意選択の単結合を示し；
【０４３０】
【化１０３】
2017500034.tif 000136
が、単結合を示すとき、Ｕは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲａ、若しくは−ＣＲａＲｂ−であり、又は
【０４３１】
【化１０４】
2017500034.tif 000137
が、二重結合を示すとき、Ｕは、−ＣＲａ−であり；
Ａは、Ｈ、ＯＨ、ホスホリル、ピロリン酸塩、硫酸塩、−ＮＨ２、−ＳＨ、アミノ酸、又は２〜１２個のアミノ酸を含むペプチドであり；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｙ１の各々は、独立に、Ｏ、−ＮＲａ１、及びＳＲから選択され；
Ｙ２及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、−ＣＲａＲｂ−、−ＮＲｃ、Ｓ、あるいは、Ｃ、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１つ又は複数の原子を含むリンカーから選択され；
Ｒａ及びＲｂは各々、独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、又はＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基であり；
Ｒａ１は、Ｈであり；
−ＯＲｃ１は、約１のｐＨでＯＨであるか、又は−ＯＲｃ１は、生理学的ｐＨで、Ｏ−であり；
Ｂは、核酸塩基であり；
但し、変数Ａ、Ｂ、Ｕ、Ｙ２及びＹ３を含む環は、リボースではあり得ないものとする。
【０４３２】
式ＸＩＩＩ：
【０４３３】
【化１０５】
2017500034.tif 000138
（Ｙ１の各々は、独立に、−ＯＲａ１、−ＮＲａ１Ｒｂ１、及び−ＳＲａ１から選択され
；ここで、Ｒａ１及びＲｂ１は各々、独立に、Ｈ又はカウンターイオンである）
の化合物をＲＮＡポリメラーゼ、及びｃＤＮＡ鋳型と反応させるステップを含む方法。
【０４３４】
一部の実施形態では、反応を１〜約７，０００回反復する。
一部の実施形態では、Ｂは、式ＸＩＩ−ａ、ＸＩＩ−ｂ、又はＸＩＩ−ｃ：
【０４３５】
【化１０６】
2017500034.tif 000139
の核酸塩基であり、
式中、
【０４３６】
【化１０７】
2017500034.tif 000140
は、単結合又は二重結合を示し；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｕ及びＷは各々、独立に、ＣＨ又はＮであり；
Ｖは、Ｏ、Ｓ、Ｃ若しくはＮであり；
Ｖが、Ｃのとき、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロ、又は−ＯＲｃであり、ここで、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、及びＣ２〜６アルキニルは各々、任意選択で、−ＯＨ、−ＮＲａＲｂ、−ＳＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｃ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒｃ、又は−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲｃにより置換されており；
また、Ｖが、Ｏ、Ｓ若しくはＮのとき、Ｒ１は、存在せず；
Ｒ２は、Ｈ、−ＯＲｃ、−ＳＲｃ、−ＮＲａＲｂ、又はハロであり；
Ｖが、Ｃのとき、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している炭素原子と一緒に、ハロ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＲａＲｂ、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ２〜２０アルケニル、Ｃ２〜２０アルキニル、Ｃ１〜２０アルコキシ、若しくはＣ１〜２０チオアルキルから選択される１〜４個の置換基により任意選択で置換された５又は６員環を形成することができ；
Ｒ３は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルであり；
【０４３７】
【化１０８】
2017500034.tif 000141
が、二重結合を示すとき、Ｒ４は、存在せず、又はＮ−Ｒ４は、一緒になって、Ｃ１〜２０アルキルで置換された陽荷電Ｎを形成し；
Ｒａ及びＲｂは各々、独立に、Ｈ、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ２〜２０アルケニル、Ｃ２〜２０アルキニル、若しくはＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ２〜２０アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基である。
【０４３８】
一部の実施形態では、Ｂは、式ＸＩＩ−ａ１、ＸＩＩ−ａ２、ＸＩＩ−ａ３、ＸＩＩ−ａ４、又はＸＩＩ−ａ５：
【０４３９】
【化１０９】
2017500034.tif 000142
の核酸塩基である。
【０４４０】
一部の実施形態では、本方法は、アデノシン、シトシン、グアノシン、及びウラシルからなる群から選択されるヌクレオチドをさらに含む。
一部の実施形態では、核酸塩基は、ピリミジン又はその誘導体である。
【０４４１】
別の実施形態では、本開示は、核酸を増幅する方法を提供し、この方法は、
式ＸＩ−ｄ：
【０４４２】
【化１１０】
2017500034.tif 000143
の化合物を反応させるステップを含み、
式中、
【０４４３】
【化１１１】
2017500034.tif 000144
は、単結合又は二重結合を示し；
−−−は、任意選択の単結合を示し；
【０４４４】
【化１１２】
2017500034.tif 000145
が単結合を示すとき、Ｕは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲａ−、若しくは−ＣＲａＲｂ−であり、又は
【０４４５】
【化１１３】
2017500034.tif 000146
が二重結合を示すとき、Ｕは、−ＣＲａ−であり；
Ｚは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、若しくはＣ６〜２０アリールであるか、又は
【０４４６】
【化１１４】
2017500034.tif 000147
が二重結合を示すとき、Ｚは、存在せず；あるいは、
Ｚは、−ＣＲａＲｂ−であって、Ａとの結合を形成し；
Ａは、Ｈ、ＯＨ、ホスホリル、ピロリン酸塩、硫酸塩、−ＮＨ２、−ＳＨ、アミノ酸、又は１〜１２個のアミノ酸を含むペプチドであり；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｙ１の各々は、独立に、−ＯＲａ１、−ＮＲａ１Ｒｂ１、及び−ＳＲａ１から選択され；
Ｙ２及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、−ＣＲａＲｂ−、−ＮＲｃ、Ｓ、あるいは、Ｃ、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１つ又は複数の原子を含むリンカーから選択され；
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒａ及びＲｂは、各々独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、又はＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基であり；
Ｒａ１及びＲｂ１は、各々独立に、Ｈ又はカウンターイオンであり；
−ＯＲｃ１は、約１のｐＨでＯＨであるか、又は−ＯＲｃ１は、生理学的ｐＨで、Ｏ−であり；
但し、変数Ａ、Ｂ、Ｕ、Ｚ、Ｙ２及びＹ３を含む環は、プライマー、ｃＤＮＡ鋳型、及びＲＮＡポリメラーゼを含むリボースではあり得ないものとする。
【０４４７】
一部の実施形態では、Ｂは、
式ＸＩＩ−ａ、ＸＩＩ−ｂ、又はＸＩＩ−ｃ：
【０４４８】
【化１１５】
2017500034.tif 000148
の核酸塩基であり、
式中、
【０４４９】
【化１１６】
2017500034.tif 000149
は、単結合又は二重結合を示し；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｕ及びＷは各々、独立に、ＣＨ又はＮであり；
Ｖは、Ｏ、Ｓ、Ｃ若しくはＮであり；
Ｖが、Ｃのとき、Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、ハロ、又は−ＯＲｃであり、ここで、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、及びＣ２〜６アルキニルは各々、任意選択で、−ＯＨ、−ＮＲａＲｂ、−ＳＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｃ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒｃ、又は−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲｃにより置換されており；
また、Ｖが、Ｏ、Ｓ若しくはＮのとき、Ｒ１は、存在せず；
Ｒ２は、Ｈ、−ＯＲｃ、−ＳＲｃ、−ＮＲａＲｂ、又はハロであり；
あるいは、Ｖが、Ｃのとき、Ｒ１及びＲ２は、それらが結合している炭素原子と一緒に、ハロ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＲａＲｂ、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ２〜２０アルケニル、Ｃ２〜２０アルキニル、Ｃ１〜２０アルコキシ、若しくはＣ１〜２０チオアルキルから選択される１〜４個の置換基により任意選択で置換された５又は６員環を形成することができ；
Ｒ３は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルであり；ここで、
【０４５０】
【化１１７】
2017500034.tif 000150
が、二重結合を示すとき、Ｒ４は、存在せず、又はＮ−Ｒ４は、一緒になって、Ｃ１〜２０アルキルで置換された陽荷電Ｎを形成し；
Ｒａ及びＲｂは各々、独立に、Ｈ、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ２〜２０アルケニル、Ｃ２〜２０アルキニル、又はＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜２０アルキル、Ｃ２〜２０アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基である。
【０４５１】
一部の実施形態では、Ｂは、式ＸＩＩ−ａ１、ＸＩＩ−ａ２、ＸＩＩ−ａ３、ＸＩＩ−ａ４、又はＸＩＩ−ａ５：
【０４５２】
【化１１８】
2017500034.tif 000151
の核酸塩基である。
【０４５３】
一部の実施形態では、本方法は、アデノシン、シトシン、グアノシン、及びウラシルか
らなる群から選択されるヌクレオチドをさらに含む。
一部の実施形態では、核酸塩基は、ピリミジン又はその誘導体である。
【０４５４】
一部の実施形態では、本開示は、製剤用核酸を合成する方法を提供し、この方法は、以下：
ａ）目的の製剤用タンパク質をコードする相補性デオキシリボ核酸（ｃＤＮＡ）を用意するステップ；
ｂ）ヌクレオチドを選択するステップ、及び
ｃ）製剤用核酸が合成される条件下で、用意したｃＤＮＡ及び選択したヌクレオチドをＲＮＡポリメラーゼと接触させるステップ
を含む。
【０４５５】
別の実施形態では、製剤用核酸は、リボ核酸（ＲＮＡ）である。
本開示のさらに別の態様では、修飾核酸は、固相合成方法を用いて調製することができる。
【０４５６】
一部の実施形態では、本開示は、式ＸＩ−ａ：
【０４５７】
【化１１９】
2017500034.tif 000152
の化合物を含む核酸を合成する方法を提供し、
式中、
【０４５８】
【化１２０】
2017500034.tif 000153
は、任意選択の二重結合を示し；
−−−は、任意選択の単結合を示し；
【０４５９】
【化１２１】
2017500034.tif 000154
が、単結合を示すとき、Ｕは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲａ−、若しくは−ＣＲａＲｂ−であり、又は
【０４６０】
【化１２２】
2017500034.tif 000155
が、二重結合を示すとき、Ｕは、−ＣＲａ−であり；
Ａは、Ｈ、ＯＨ、ホスホリル、ピロリン酸塩、硫酸塩、−ＮＨ２、−ＳＨ、アミノ酸、又は２〜１２個のアミノ酸を含むペプチドであり；
Ｘは、Ｏ又はＳであり；
Ｙ１の各々は、独立に、Ｏ、−ＮＲａ１、及びＳから選択され；
Ｙ２及びＹ３の各々は、独立に、Ｏ、−ＣＲａＲｂ−、ＮＲｃ、Ｓ、あるいは、Ｃ、Ｏ、Ｎ、及びＳからなる群から選択される１つ又は複数の原子を含むリンカーから選択され；
Ｒａ及びＲｂは各々、独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、又はＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基であり；
Ｒａ１は、Ｈであり；
−ＯＲｃ１は、約１のｐＨでＯＨであるか、又は−ＯＲｃ１は、生理学的ｐＨで、Ｏ−であり；
Ｂは、核酸塩基であり；
但し、変数Ａ、Ｂ、Ｕ、Ｙ２及びＹ３を含む環は、リボースではあり得ないものとし；
方法は、以下：
ａ）式ＸＩＩＩ−ａ：
【０４６１】
【化１２３】
2017500034.tif 000156
（Ｙ１’の各々は、独立に、−ＯＲａ１、−ＮＲａ１Ｒｂ１、及び−ＳＲａ１から選択され；ここで、Ｒａ１及びＲｂ１は各々、独立に、Ｈ又はカウンターイオンである）
のヌクレオチドを式ＸＩＩＩ−ｂ：
【０４６２】
【化１２４】
2017500034.tif 000157
（
【０４６３】
【化１２５】
2017500034.tif 000158
は、固体支持体を示し；
Ｐ１、Ｐ２及びＰ３は各々、独立に、好適な保護基である）
のホスホロアミダイト化合物と反応させることにより、式ＸＩＶ−ａ：
【０４６４】
【化１２６】
2017500034.tif 000159
の核酸を取得するステップ；
ｂ）式ＸＩＶ−ａの核酸を酸化又は硫化することにより、式ＸＩＶｂ：
【０４６５】
【化１２７】
2017500034.tif 000160
の核酸を取得するステップ；並びに
ｃ）保護基を除去することにより、式ＸＩ−ａの核酸を取得するステップ
を含む。
【０４６６】
一部の実施形態では、本方法は、アデノシン、シトシン、グアノシン、及びウラシルからなる群から選択されるヌクレオチドをさらに含む。
一部の実施形態では、Ｂは、式ＸＩＩＩ：
【０４６７】
【化１２８】
2017500034.tif 000161
の核酸塩基であり、
式中、
Ｖは、Ｎ又は陽荷電ＮＲｃであり；
Ｒ３は、ＮＲｃＲｄ、−ＯＲａ、又は−ＳＲａであり；
Ｒ４は、Ｈ、又はＹ３との結合を形成し；
Ｒ５は、Ｈ、−ＮＲｃＲｄ、又は−ＯＲａであり；
Ｒａ及びＲｂは各々、独立に、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、Ｃ２〜１２アルキニル、又はＣ６〜２０アリールであり；
Ｒｃは、Ｈ、Ｃ１〜１２アルキル、Ｃ２〜１２アルケニル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリコール基、又はアミノ−ポリエチレングリコール基である。
【０４６８】
一部の実施形態では、ステップａ）及びｂ）を１〜約１０，０００回反復する。
５’キャッピング
ｍＲＮＡの５’キャップ構造は、ｍＲＮＡの安定性を高める核酸排出に関与し、ｍＲＮＡキャップ結合タンパク質（ＣＢＰ）に結合するが、これは、ＣＢＰとポリ（Ａ）結合タンパク質の結合を介して、細胞内のｍＲＮＡ安定性及び翻訳能力を担い、成熟環状ｍＲＮＡ種を形成する。このキャップはさらに、ｍＲＮＡスプライシング工程中の５’近位イントロン除去の除去も補助する。
【０４６９】
内在性ｍＲＮＡ分子は、５’−末端にキャッピングしていてもよく、これにより、ｍＲＮＡの末端グアノシンキャップ残基と５’末端転写センスヌクレオチドとの間に５’−ｐｐｐ−５’−三リン酸結合が生じる。続いて、この５’−グアニル酸キャップはメチル化して、Ｎ７−メチル−グアニル酸残基を生成することができる。ｍＲＮＡの５’末端の末端及び／又は末端前（ａｎｔｅｔｅｒｍｉｎａｌ）の転写ヌクレオチドのリボース糖も、任意選択で２’−Ｏ−メチル化してよい。グアニル酸キャップ構造の加水分解及び切断による５’−キャップ除去は、ｍＲＮＡ分子などの核酸分子を分解のためにターゲティングすることができる。
【０４７０】
本発明の核酸に対する修飾は、キャップ除去を阻止する加水分解抵抗性のキャップ構造を生成し得ることから、ｍＲＮＡの半減期が延長される。キャップ構造の加水分解には５’−ｐｐｐ−５’ホスホロジエステル結合の切断が必要であるため、キャッピング反応の間、修飾ヌクレオチドを使用することができる。例えば、ニューイングランドバイオラボ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ）（マサチューセッツ州イプスウィッチ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ））のワクチニアキャッピング酵素（Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｃａｐｐｉｎｇ  Ｅｎｚｙｍｅ）をα−チオ−グアノシンヌクレオチドと一緒に、製造者の指示に従い使用して、５’−ｐｐｐ−５’キャップ内にホスホロチオエート結合を形成することができる。α−メチル−ホスホネート及びセレノ−リン酸ヌクレオチドなどの別の修飾グアノシンヌクレオチドを使用してもよい。
【０４７１】
別の修飾として、限定はしないが、糖環の２’−ヒドロキシル基のｍＲＮＡの５’−末端及び／又は５’−末端前のヌクレオチドのリボース糖の２’−Ｏ−メチル化（前述の通り）が挙げられる。複数の異なる５’−キャップ構造を用いて、ｍＲＮＡ分子などの核酸
分子の５’−キャップを生成することができる。
【０４７２】
５’キャップ構造としては、国際公開第２００８１２７６８８号、同第２００８０１６４７３号、及び同第２０１１０１５３４７号に記載のものが挙げられ、これらの５’キャップ構造は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０４７３】
キャップ類似体は、本明細書では合成キャップ類似体、化学キャップ、化学キャップ類似体又は構造的若しくは機能性キャップ類似体とも呼ばれ、キャップ機能を保持しながら、その化学構造は天然の（すなわち内在性、野生型又は生理学的）５’−キャップとは異なる。キャップ類似体は、化学的（すなわち非酵素的）又は酵素的に合成することができ、また／核酸分子に結合してもよい。
【０４７４】
例えば、アンチリバースキャップ類似体（Ａｎｔｉ−Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｃａｐ  Ａｎａｌｏｇ）（ＡＲＣＡ）キャップは、５’−５’−三リン酸基で連結された２つのグアニンを含み、一方のグアニンは、３’−Ｏ−メチル基と共にＮ７メチル基を含む（すなわち、Ｎ７，３’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’−三リン酸−５’−グアノシン（ｍ７Ｇ−３’ｍｐｐｐ−Ｇ；同様に、３’Ｏ−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇとも呼ばれる）。他方の非修飾グアニンの３’−Ｏ原子は、キャッピングされた核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ又はｍｍＲＮＡ）の５’−末端ヌクレオチドに連結される。Ｎ７−及び３’−Ｏ−メチル化グアニンは、キャッピングされた核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ又はｍｍＲＮＡ）の末端部分を付与する。
【０４７５】
別の例示的なキャップは、ｍＣＡＰであり、これは、ＡＲＣＡに類似しているが、２’−Ｏ−メチル基をグアノシン上に有する（すなわち、Ｎ７，２’−Ｏ−ジメチル−グアノシン−５’−三リン酸−５’−グアノシン、ｍ７Ｇｍ−ｐｐｐ−Ｇ）。
【０４７６】
一実施形態では、キャップは、ジヌクレオチドキャップ類似体である。非限定的例として、ジヌクレオチドキャップ類似体は、様々なリン酸位置で、ボラノリン酸基又はホスホロセレノエート基により修飾してもよく、このようなジヌクレオチドキャップ類似体として、例えば、米国特許第８，５１９，１１０号に記載のものがあり、そのキャップは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０４７７】
別の実施形態では、キャップ類似体は、当分野で公知の、及び／又は本明細書に記載するキャップ類似体のＮ７−（４−クロロフェノキシエチル）置換ジヌクレオチド形態である。キャップ類似体のＮ７−（４−クロロフェノキシエチル）置換ジヌクレオチド形態の非限定的例として、Ｎ７−（４−クロロフェノキシエチル）−Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ及びＮ７−（４−クロロフェノキシエチル）−ｍ３’−ＯＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇキャップ類似体がある（例えば、コア（Ｋｏｒｅ）ら著、生物有機及び医薬品化学（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、２０１３年、第２１巻、ｐ．４５７０〜４５７４に記載の様々なキャップ類似体およびキャップ類似体の合成方法を参照のこと；そのキャップは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。別の実施形態では、本発明のキャップ類似体は、４−クロロ／ブロモフェノキシエチル類似体である。
【０４７８】
キャップ類似体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応において核酸分子の同時キャッピングを可能にするが、転写物の最大２０％がキャッピングされないままである。このことと、内因性の細胞転写機構により産生された核酸の内在性５’−キャップ構造とのキャップ類似体の構造的相違が、翻訳能力の低下及び細胞安定性の低下を招き得る。
【０４７９】
本発明の修飾核酸は、より真正な５’−キャップ構造を生成するために、転写後にも酵
素を用いてキャッピングしてよい。本明細書で用いる場合、「より真正」という用語は、構造的又は機能的に内因性又は野生型の特徴と酷似しているか、又はそれを模倣した特徴を指す。すなわち、「より真正」な特徴は、従来技術の合成の特徴又は類似体などと比較して、内因性、野生型、天然若しくは生理学的な細胞機能及び／又は構造をよりよく表しているか、あるいは、１つ又は複数の点に関して対応する内因性、野生型、天然若しくは生理学的な特徴よりも性能が優れている。本発明のより真正な５’キャップ構造の非限定的な例は、中でも、当分野で公知の合成５’−キャップ構造（又は野生型、天然若しくは生理学的５’−キャップ構造）と比較して、キャップ結合タンパク質の結合増大、半減期の延長、５’エンドヌクレアーゼに対する感受性の低下及び／又は５’キャップ除去の低減を有するものである。例えば、組換えワクチニアウイルスキャッピング酵素（Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃａｐｐｉｎｇ  Ｅｎｚｙｍｅ）及び組換え２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ酵素は、ｍＲＮＡの５’−末端ヌクレオチドとグアニンキャップヌクレオチドの間に標準５’−５’−三リン酸結合を形成することができ、ここで、キャップグアニンは、Ｎ７メチル化を含み、ｍＲＮＡの５’−末端ヌクレオチドは、２’−Ｏ−メチルを含んでいる。このような構造をキャップ１構造と称する。このキャップは、例えば、当分野で公知の他の５’キャップ類似体と比較して、より高度な翻訳能力及び細胞安定性、並びに細胞の炎症促進性サイトカインの活性化の低下をもたらす。キャップ構造は、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ、ｐＮ２ｐ（キャップ０）、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ（キャップ１）、７ｍＧ（５’）−ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮ２ｍｐ（キャップ２）及びｍ（７）Ｇｐｐｐｍ（３）（６，６，２’）Ａｐｍ（２’）Ａｐｍ（２’）Ｃｐｍ（２）（３，２’）Ｕｐ（キャップ４）を含む。
【０４８０】
修飾核酸は、転写後キャッピングすることができ、また、このプロセスは、より高効率であることから、ほぼ１００％の修飾核酸をキャッピングすることができる。このことは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの転写反応過程でキャップ類似体がｍＲＮＡに連結される場合の約８０％とは対照的である。
【０４８１】
本発明によれば、５’末端キャップは、内在性キャップ又はキャップ類似体を含んでもよい。本発明によれば、５’末端キャップは、グアニン類似体を含んでもよい。有用なグアニン類似体としては、イノシン、Ｎ１−メチル−グアノシン、２’フルオロ−グアノシン、７−デアザ−グアノシン、８−オキソ−グアノシン、２−アミノ−グアノシン、ＬＮＡ−グアノシン，及び２−アジド−グアノシンが挙げられる。
【０４８２】
一実施形態では、本明細書に記載する核酸は、修飾５’キャップを含んでもよい。５’キャップに対する修飾は、ｍＲＮＡの安定性を高め、ｍＲＮＡの半減期を延長し得ると共に、ｍＲＮＡ翻訳効率を高めることができる。修飾５’キャップとして、限定はしないが、以下の修飾の１つ又は複数を挙げることができる：キャッピングされたグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）の２’及び／若しくは３’位での修飾、メチレン部分（ＣＨ２）による糖環酸素の置換（これによって炭素環が生成された）、キャップ構造の三リン酸架橋部分での修飾、又は核酸塩基（Ｇ）部分での修飾。
【０４８３】
修飾することができる５’−キャップ構造として、限定はしないが、本明細書に記載するキャップ、例えば、以下：
【０４８４】
【化１２９】
2017500034.tif 000162
のキャップ依存性翻訳のための基質構造を有するＣａｐ０、又は以下：
【０４８５】
【化１３０】
2017500034.tif 000163
のキャップ依存性翻訳のための基質構造を有するＣａｐ１
が挙げられる。
【０４８６】
非限定的例として、修飾５’−キャップは、以下に示すキャップ依存性翻訳のための基質構造を有するものであってもよい：
【０４８７】
【化１３１−１】
2017500034.tif 000164
【０４８８】
【化１３１−２】
2017500034.tif 000165
【０４８９】
【化１３１−３】
2017500034.tif 000166
（Ｒ１及びＲ２は、表４に定義する）
【０４９０】
【表４】
2017500034.tif 000167
2017500034.tif 000168
又は
【０４９１】
【化１３２】
2017500034.tif 000169
（Ｒ１及びＲ２は、表５に定義する）
【０４９２】
【表５】
2017500034.tif 000170
表４において、「ＭＯＭ」は、メトキシメチルを、「ＭＥＭ」はメトキシエトキシメチルを、「ＭＴＭ」は、メチルチオメチルを、「ＢＯＭ」は、ベンジルオキシメチルを、また「ＭＰ」は、モノホスホネートをそれぞれ表す。表４及び５において、「Ｆ」は、フッ素を、「Ｃｌ」は、塩素を、「Ｂｒ」は、臭素を、また「Ｉ」は、ヨウ素をそれぞれ表す。
【０４９３】
非限定的例において、修飾５’キャップは、以下に示すワクシニアｍＲＮＡキャッピング酵素のための基質構造を有するものであってもよい：
【０４９４】
【化１３３−１】
2017500034.tif 000171
【０４９５】
【化１３３−２】
2017500034.tif 000172
（Ｒ１及びＲ２は、表６に定義する）
【０４９６】
【表６−１】
2017500034.tif 000173
【０４９７】
【表６−２】
2017500034.tif 000174
又は
【０４９８】
【化１３４】
2017500034.tif 000175
（Ｒ１及びＲ２は、表７に定義する）
【０４９９】
【表７】
2017500034.tif 000176
表６において、「ＭＯＭ」は、メトキシメチルを、「ＭＥＭ」はメトキシエトキシメチルを、「ＭＴＭ」は、メチルチオメチルを、「ＢＯＭ」は、ベンジルオキシメチルを、また「ＭＰ」は、モノホスホネートをそれぞれ表す。表６及び７において、「Ｆ」は、フッ素を、「Ｃｌ」は、塩素を、「Ｂｒ」は、臭素を、また「Ｉ」は、ヨウ素をそれぞれ表す。
【０５００】
修飾キャッピング構造基質の別の非限定的例において、酵素活性を生み出す成分（例えば、限定はしないが、Ｓ−アデノシルメチオニン（ＡｄｏＭｅｔ）など）と一緒にワクシニアキャッピング酵素の存在下で、ＣＡＰ−１１２〜ＣＡＰ−２２５を添加することにより、ｍＲＮＡのための修飾キャップを形成することができる。
【０５０１】
一実施形態において、メチレン部分（ＣＨ２）による糖環酸素の置換（これにより炭素環が生成された）は、Ｃ−Ｎ結合が酸又は酵素加水分解に対して耐性であるため、ホスホリラーゼに対して、Ｃ−Ｎ結合に高い安定性をもたらすことができる。メチレン部分はまた、三リン酸架橋部分の安定性を高め得るため、ｍＲＮＡの安定性も高める。非限定的例として、キャップ依存性翻訳のためのキャップ基質構造は、例えば、限定はしないが、ＣＡＰ−０１４及びＣＡＰ−０１５などの構造及び／又は限定はしないが、ＣＡＰ−１２３及びＣＡＰ−１２４などのワクシニアｍＲＮＡキャッピング酵素のためのキャップ基質構造を有し得る。別の例では、ＣＡＰ−１１２〜ＣＡＰ−１２２及び／又はＣＡＰ−１２５〜ＣＡＰ−２２５は、メチレン部分（ＣＨ２）で糖環酸素を置換すること（これによって
炭素環が生成された）により修飾することができる。
【０５０２】
別の実施形態では、三リン酸架橋は、硫黄（チオ）、ボラン（ＢＨ３）部分、メチル基、エチル基、メトキシ基及び／又はその組み合わせによる少なくとも１つの酸素の置換によって修飾してもよい。この修飾は、デキャッピング酵素に対するｍＲＮＡの安定性を高め得る。非限定的例として、キャップ依存性翻訳のためのキャップ基質構造は、例えば、限定はしないが、ＣＡＰ−０１６〜ＣＡＰ−０２１などの構造及び／又は、限定はしないが、ＣＡＰ−１２５〜ＣＡＰ−１３０などのワクシニアｍＲＮＡキャッピング酵素のためのキャップ基質構造を有し得る。別の例では、ＣＡＰ−００３〜ＣＡＰ−０１５、ＣＡＰ−０２２〜ＣＡＰ−１２４及び／又はＣＡＰ−１３１〜ＣＡＰ−２２５は、硫黄（チオ）、メチレン部分（ＢＨ３）、メチル基、エチル基、メトキシ基及び／又はこれらの組み合わせで、三リン酸架橋酸素の少なくとも１つを置換することにより、三リン酸架橋上で修飾することができる。
【０５０３】
一実施形態では、ＣＡＰ−００１〜１３４及び／又はＣＡＰ−１３６〜ＣＡＰ−２２５を修飾することにより、ＣＡＰ−１３５に類似したチオグアノシン類似体としてもよい。チオグアノシン類似体は、本明細書に記載するように、限定はしないが、三リン酸部分での修飾（例えば、チオ、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、ＯＣＨ３、Ｓ及びＳとＯＣＨ３）、本明細書に記載するような６−チオグアノシンの２’及び／若しくは３’位での修飾、並びに／又は糖環酸素の置換（これにより炭素環が生成された）などの追加的修飾を含んでもよい。
【０５０４】
一実施形態では、ＣＡＰ−００１〜１２１及び／又はＣＡＰ−１２３〜ＣＡＰ−２２５を修飾することにより、ＣＡＰ−１２２に類似した修飾５’キャップとしてもよい。修飾５’キャップは、本明細書に記載するように、限定はしないが、三リン酸部分での修飾（例えば、チオ、ＢＨ３、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、ＯＣＨ３、Ｓ及びＳとＯＣＨ３）、本明細書に記載するような６−チオグアノシンの２’及び／若しくは３’位置での修飾、並びに／又は糖環酸素の置換（これにより炭素環が生成された）などの追加的修飾を含んでもよい。
【０５０５】
一実施形態では、５’キャップ修飾は、ＧＴＰの２’又は３’位置でのビオチンの結合又は共役であってもよい。
別の実施形態では、５’キャップ修飾は、ＣＦ２修飾三リン酸部分を含んでもよい。
【０５０６】
別の実施形態では、本明細書に記載するキャップ構造のあらゆる三リン酸架橋は、四リン酸又は五リン酸架橋で置換してもよい。四リン酸及び五リン酸含有架橋及びその他のキャップ修飾の例は、ジェミエリティ，Ｊ．（Ｊｅｍｉｅｌｉｔｙ，Ｊ．）ら著、ＲＮＡ、２００３年、第９巻、ｐ．１１０８〜１１２２；グルツィエン−ノガルスカ，Ｅ．（Ｇｒｕｄｚｉｅｎ−Ｎｏｇａｌｓｋａ，Ｅ．）ら著、分子生物学による方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）、２０１３年、第９６９巻、ｐ．５５〜７２；グルツィエン，Ｅ．（Ｇｒｕｄｚｉｅｎ，Ｅ．）ら著、ＲＮＡ、２００４年、第１０巻、ｐ．１４７９〜１４８７に記載されており、これらのキャップ修飾は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０５０７】
末端アーキテクチャ修飾：ステムループ
一部の実施形態では、本発明の核酸は、限定はしないが、ヒストンステムループなどのステムループを含んでもよい。ステムループは、約２５又は約２６ヌクレオチド長のヌクレオチド配列でもよく、例えば、限定はしないが、国際公開第２０１３１０３６５９号に記載されている配列番号７〜１７が挙げられ、そのステムループは、参照により本明細書に組み込まれる。ヒストンステムループは、コード領域に対して３’側に（例えば、コー
ド領域の３’末端に）位置してよい。非限定的例として、ステムループは、本明細書に記載する核酸の３’末端に位置してもよい。
【０５０８】
一実施形態では、ステムループは、第２末端領域に位置してもよい。非限定的例として、ステムループは、第２末端領域の非翻訳領域（例えば、３’ＵＴＲ）内に位置してもよい。
【０５０９】
一実施形態では、ヒストンステムループを含む核酸（例えば、限定はしないが、ｍＲＮＡなど）は、少なくとも１つの鎖終止ヌクレオシドの付加により安定させてもよい。特定の理論に拘束されることは意図しないが、少なくとも１つの鎖終止ヌクレオシドの付加によって核酸の分解を減速し得るため、核酸の半減期を延長することができる。
【０５１０】
一実施形態では、鎖終止ヌクレオシドは、限定はしないが、国際公開第２０１３１０３６５９号に記載されているものであってもよく、その鎖終止ヌクレオシドは、参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、本発明で用いることができる鎖終止ヌクレオシドとして、限定はしないが、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−デオキシウリジン、３’−デオキシシトシン、３’−デオキシグアノシン、３’−デオキシチミン、２’，３’−デオキシヌクレオシド、例えば、２’，３’−ジデオキシアデノシン、２’，３’−ジデオキシウリジン、２’，３’−ジデオキシトシン、２’，３’−ジデオキシグアノシン、２’，３’−ジデオキシチミン、２’−デオキシヌクレオシド、又は−Ｏ−メチルヌクレオシドが挙げられる。
【０５１１】
別の実施形態では、ヒストンステムループを含む核酸（例えば、限定はしないが、ｍＲＮＡなど）は、核酸の３’領域に対する修飾により安定化してもよく、これによって、オリゴ（Ｕ）の付加を阻止及び／又は阻害することができる（例えば、国際公開第２０１３１０３６５９号を参照のこと：その３’領域に対する修飾は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５１２】
また別の実施形態では、ヒストンステムループを含む核酸（例えば、限定はしないが、ｍＲＮＡなど）は、３’−デオキシヌクレオシド、２’，３’−ジデオキシヌクレオシド、３’−０−メチルヌクレオシド、３’−０−エチルヌクレオシド、３’−アラビノシドにおいて終止するオリゴヌクレオチド、並びに当分野で公知の及び／又は本明細書に記載の他の修飾ヌクレオシドの付加により安定化することもできる。
【０５１３】
一実施形態では、本発明の核酸は、ヒストンステムループ、ポリＡ尾部配列及び／又は５’キャップ構造を含んでもよい。ヒストンステムループは、ポリＡ尾部配列の前及び／又は後であってもよい。ヒストンステムループ及びポリＡ尾部配列を含む核酸は、本明細書に記載する鎖終止ヌクレオシドを含んでもよい。
【０５１４】
別の実施形態では、本発明の核酸は、ヒストンステムループと５’キャップ構造を含んでもよい。５’キャップ構造として、限定はしないが、本明細書に記載の及び／又は当分野で公知のものを挙げることができる。
【０５１５】
一実施形態では、保存ステムループ領域は、本明細書に記載のｍｉＲ配列を含んでもよい。非限定的例として、ステムループ領域は、本明細書に記載のｍｉＲ配列のシード配列を含んでもよい。別の非限定的例では、ステムループ領域は、ｍｉＲ−１２２シード配列を含んでもよい。
【０５１６】
別の実施形態では、保存ステムループ領域は、本明細書に記載のｍｉＲ配列を含んでもよいし、また、ＴＥＥ配列を含んでもよい。
一実施形態では、ｍｉＲ配列及び／又はＴＥＥ配列の組み込みは、ステムループ領域の形状を変化させ、これによって翻訳が増大及び／又は低減し得る（例えば、ケデ（Ｋｅｄｄｅ）ら著、「ｐ２７−３’ＵＴＲにおけるプミリオ誘導のＲＮＡ構造スイッチは、ｍｉＲ−２２１及びｍｉＲ−２２接近性を制御する（Ａ  Ｐｕｍｉｌｉｏ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＲＮＡ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｓｗｉｔｃｈ  ｉｎ    ｐ２７−３’ＵＴＲ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｍｉＲ−２２１  ａｎｄ  ｍｉＲ−２２  ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）」、ネイチャー・セル・バイオロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、２０１０年を参照のこと；そのｍｉＲ配列及び／又はＴＥＥ配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５１７】
一実施形態では、核酸は、少なくとも１つのヒストンステムループ及びポリＡ配列又はポリアデニル化シグナルを含んでもよい。少なくとも１つのヒストンステムループ及びポリＡ配列又はポリアデニル化シグナルをコードする核酸配列の非限定的例は、国際公開第２０１３１２０４９７号、同第２０１３１２０６２９号、同第２０１３１２０５００号、同第２０１３１２０６２７号、同第２０１３１２０４９８号、同第２０１３１２０６２６号、同第２０１３１２０４９９号及び同第２０１３１２０６２８号に記載されており、これらの配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一実施形態では、ヒストンステムループ及びポリＡ配列又はポリアデニル化シグナルをコードする核酸は、病原体抗原又はその断片をコードし得るが、そのようなものとして、例えば、国際公開第２０１３１２０４９９号及び同第２０１３１２０６２８号に記載の核酸配列があり、そのいずれの配列も、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、ヒストンステムループ及びポリＡ配列又はポリアデニル化シグナルをコードする核酸は、治療用タンパク質をコードし得るが、そのようなものとして、例えば、国際公開第２０１３１２０４９７号及び同第２０１３１２０６２９号に記載の核酸配列があり、そのいずれの配列も、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一実施形態では、ヒストンステムループ及びポリＡ配列又はポリアデニル化シグナルをコードする核酸は、腫瘍抗原又はその断片をコードし得るが、そのようなものとして、例えば、国際公開第２０１３１２０５００号及び同第２０１３１２０６２７号に記載の核酸配列があり、そのいずれの配列も、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、ヒストンステムループ及びポリＡ配列又はポリアデニル化シグナルをコードする核酸は、アレルゲン性抗原又は自己免疫自己抗原をコードし得るが、そのようなものとして、例えば、国際公開第２０１３１２０４９８号及び同第２０１３１２０６２６号に記載の核酸配列があり、そのいずれの配列も、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０５１８】
末端アーキテクチャ修飾：３’ＵＴＲ及び三重らせん
一実施形態では、本発明の核酸は、修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の３’末端に三重らせんを含んでもよい。本発明の核酸の３’末端は、三重らせんを単独で、又はポリＡ尾部と組み合わせて含んでもよい。
【０５１９】
一実施形態では、本発明の核酸は、少なくとも第１及び第２Ｕリッチ領域、第１及び第２領域とＡリッチ領域との間の保存ステムループ領域を含んでもよい。第１及び第２Ｕリッチ領域とＡリッチ領域が結合して、核酸の３’末端に三重らせんを形成し得る。この三重らせんは、核酸を安定化し、核酸の翻訳効率を増大し、及び／又は３’末端を分解から保護し得る。例示的三重らせんとして、限定はしないが、転移関連肺腺癌転写物１（ＭＡＬＡＴ１）、ＭＥＮ−β及びポリアデニル化核（ＰＡＮ）ＲＮＡの三重らせん配列を含む（ウィルツ（Ｗｉｌｕｓｚ）ら著、遺伝子と発生（Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、２０１２年、第２６巻、ｐ．２３９２〜２４０７を参照のこと）。一実施形態では、本発明の修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の３’末端は、ＴＴＴＴＴＣＴＴＴＴ（配列番号１）を含む第１Ｕリッチ領域、ＴＴＴＴＧＣＴＴＴＴＴ（配列番号２）又はＴＴＴＴＧＣＴＴＴＴ（配列番号３）を含む第２Ｕリッチ領域、ＡＡＡＡＡＧＣＡ
ＡＡＡ（配列番号４）を含むＡリッチ領域を含む。別の実施形態では、本発明の核酸の３’末端は、第１Ｕリッチ領域、保存領域、第２Ｕリッチ領域及びＡリッチ領域を含む三重らせん形成構造を含む。
【０５２０】
一実施形態では、三重らせんは、クローバ葉構造の前に、ＭＡＬＡＴ１配列の切断から形成され得る。特定の理論に拘束されることは意図しないが、ＭＡＬＡＴ１は、長いノンコーディングＲＮＡであり、これが切断されると、三重らせん及びｔＲＮＡクローバ葉構造を形成する。続いて、ＭＡＬＡＴ１転写物は核スペックルに局在し、ｔＲＮＡ様クローバ葉は細胞質に局在する（ウィルツ（Ｗｉｌｕｓｚ）ら著、細胞（Ｃｅｌｌ）、２００８年、第１３５巻（５）、ｐ．９１９〜９３２）。
【０５２１】
非限定的例として、ＭＡＬＡＴ１配列を含む本発明の核酸の末端は、クローバ葉構造からのＲＮａｓｅＰ切断後、三重らせん構造を形成することができ、これは、核酸を安定化する（パート（Ｐｅａｒｔ）ら著、「非ｍＲＮＡ３’末端形成：いかにして残りの半分が生存するか（Ｎｏｎ−ｍＲＮＡ  ３’  ｅｎｄ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ｈｏｗ  ｔｈｅ  ｏｔｈｅｒ  ｈａｌｆ  ｌｉｖｅｓ）」；ＷＩＲＥｓ  ＲＮＡ  ２０１３年）。
【０５２２】
一実施形態では、本明細書に記載する核酸又はｍＲＮＡは、ＭＡＬＡＴ１配列を含む。別の実施形態では、核酸又はｍＲＮＡは、ポリアデニル化されていてもよい。また別の実施形態では、核酸又はｍＲＮＡは、ポリアデニル化されていないが、非修飾核酸又はｍＲＮＡと比較して、分解に対する高い耐性を有する。
【０５２３】
一実施形態では、本発明の核酸は、第２フランキング領域（例えば、３’ＵＴＲ）にＭＡＬＡＴ１配列を含み得る。非限定的例として、ＭＡＬＡＴ１配列は、ヒト又はマウス由来であってよい。
【０５２４】
別の実施形態では、ＭＡＬＡＴ１配列のクローバ葉構造はまた、ＲＮａｓｅＺ及びＣＣＡ付加酵素によるプロセシングを受けて、ｍａｓｃＲＮＡ（ＭＡＬＡＴ１関連低分子細胞質ＲＮＡ）と呼ばれるｔＲＮＡ様構造を形成し得る。非限定的例として、ｍａｓｃＲＮＡは、タンパク質若しくはその断片をコードし得るか、及び／又はマイクロＲＮＡを含み得る。ｍａｓｃＲＮＡは、本明細書に記載する少なくとも１つの化学修飾を含んでもよい。
【０５２５】
末端アーキテクチャ修飾：ポリＡ尾部
ＲＮＡプロセシングの間、分子の安定性を高めるために、通常、アデニンヌクレオチドの長鎖（ポリＡ尾部）をメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子に付加する。転写の直後、転写物の３’末端が切断されて、３’ヒドロキシルを放出する。次に、ポリＡポリメラーゼが、アデニンヌクレオチドの鎖をＲＮＡに付加する。このプロセスは、ポリアデニル化と呼ばれ、長さが１００〜２５０残基であるポリＡ尾部を付加する。
【０５２６】
３’末端での鎖終止ヌクレオシドの組み込みによるＲＮＡの安定化の方法は、国際公開第２０１３１０３６５９号に記載のものがあり、その鎖終止ヌクレオシドは、本明細書に組み込まれる。
【０５２７】
ユニークなポリＡ尾部長さによって、本発明の修飾ＲＮＡにいくつかの利点がもたらされ得る。
一般に、本発明のポリＡ尾部の長さは、３０ヌクレオチドより長い。別の実施形態では、ポリＡ尾部の長さは、３５ヌクレオチドより長い。別の実施形態では、この長さは、少なくとも４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも４５ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも５５ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では
、この長さは、少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも９０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１２０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも２５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも３５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも４５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも７００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも９００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１７００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも１８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１９００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも２０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも２５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、この長さは、少なくとも３０００ヌクレオチドである。
【０５２８】
一部の実施形態では、核酸又はｍＲＮＡは、約３０〜約３，０００ヌクレオチド（例えば、３０〜５０、３０〜１００、３０〜２５０、３０〜５００、３０〜７５０、３０〜１，０００、３０〜１，５００、３０〜２，０００、３０〜２，５００、５０〜１００、５０〜２５０、５０〜５００、５０〜７５０、５０〜１，０００、５０〜１，５００、５０〜２，０００、５０〜２，５００、５０〜３，０００、１００〜５００、１００〜７５０、１００〜１，０００、１００〜１，５００、１００〜２，０００、１００〜２，５００、１００〜３，０００、５００〜７５０、５００〜１，０００、５００〜１，５００、５００〜２，０００、５００〜２，５００、５００〜３，０００、１，０００〜１，５００、１，０００〜２，０００、１，０００〜２，５００、１，０００〜３，０００、１，５００〜２，０００、１，５００〜２，５００、１，５００〜３，０００、２，０００〜３，０００、２，０００〜２，５００、及び２，５００〜３，０００）を含む。
【０５２９】
一実施形態では、ポリＡ尾部は、本明細書に記載の修飾ＲＮＡ分子において、長さが８０ヌクレオチド、１２０ヌクレオチド、１６０ヌクレオチドであってよい。
別の実施形態では、ポリＡ尾部は、本明細書に記載の修飾ＲＮＡ分子において、長さが２０、４０、８０、１００、１２０、１４０又は１６０ヌクレオチドであってよい。
【０５３０】
一実施形態では、ポリＡ尾部は、修飾ＲＮＡ分子全体の長さに対して設計する。この設計は、修飾ＲＮＡのコード領域の長さ、修飾ＲＮＡ（ｍＲＮＡなど）の特定の特徴若しくは領域の長さ、又は修飾ＲＮＡから発現される最終産物の長さに基づいて行ってよい。修飾ＲＮＡの任意の別の特徴（例えば、ポリＡ尾部を含むｍＲＮＡ部分以外の）と比較すると、ポリＡ尾部は、別の特徴よりも長さが１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、
８０、９０又は１００％長くなり得る。また、ポリＡ尾部は、それが属する修飾ＲＮＡの画分として設計してもよい。これに関連して、ポリＡ尾部は、構築物の全長又は構築物の全長からポリＡ尾部を引いたものの１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、又は９０％以上であってもよい。
【０５３１】
一実施形態では、発現を増強するために、ポリＡ結合タンパク質のための核酸又はｍＲＮＡの操作結合部位及び／又は共役を用いてもよい。操作結合部位は、センサー配列であってもよく、これは、核酸及び／又はｍＲＮＡの局所微小環境のリガンドの結合部位として作動し得る。非限定的例として、核酸及び／又はｍＲＮＡは、ポリＡ結合タンパク質（ＰＡＢＰ）及びその類似体の結合親和性を改変するために少なくとも１つの操作結合部位を含んでもよい。少なくとも１つの操作結合部位の組み込みによって、ＰＡＢＰ及びその類似体の結合親和性が増大し得る。
【０５３２】
さらに、ポリＡ尾部の３’末端での修飾ヌクレオチドを用いて、３’末端を介して複数の別個の核酸又はｍＲＮＡをＰＡＢＰ（ポリＡ結合タンパク質）に連結してもよい。トランスフェクション実験を、適切な細胞株において実施することができ、タンパク質産生は、トランスフェクション後１２時間、２４時間、４８時間、７２時間及び７日目に、ＥＬＩＳＡによりアッセイすることができる。非限定的例として、トランスフェクション実験を用いて、少なくとも１つの操作結合部位の付加の結果として、結合親和性のＰＡＢＰ又はその類似体に対する作用を評価することもできる。
【０５３３】
一実施形態では、ポリＡ尾部を用いて、翻訳開始を調節することもできる。特定の理論に拘束されることは意図しないが、ポリＡ尾部は、ＰＡＢＰを動員し、これが、次に翻訳開始複合体と相互作用することができるため、タンパク質合成には不可欠であり得る。
【０５３４】
別の実施形態では、ポリＡ尾部はまた、本発明において、３’−５’エキソヌクレアーゼ消化から保護するために使用することもできる。
一実施形態では、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、ポリＡ−Ｇカルテット（Ｑｕａｒｔｅｔ）を含むように設計する。Ｇカルテットは、４つのグアニンヌクレオチドの環状水素結合アレイであり、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方でＧリッチ配列により形成することができる。この実施形態では、Ｇカルテットは、ポリＡ尾部の末端で組み込まれている。その結果得られた核酸又はｍＲＮＡは、様々な時点で、安定性、タンパク質産生、及び半減期などの他のパラメータについてアッセイしてもよい。ポリＡ−Ｇカルテットは、１２０ヌクレオチドのポリＡ尾部のみを使用して認められるタンパク質産生の少なくとも７５％に相当するタンパク質産生をもたらすことがみいだされている。
【０５３５】
一実施形態では、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、ポリＡ尾部を含んでもよく、また、鎖終止ヌクレオシドの付加によって安定化することもできる。ポリＡ尾部を含む核酸及び／又はｍＲＮＡは、５’キャップ構造をさらに含んでもよい。
【０５３６】
別の実施形態では、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、ポリＡ−Ｇカルテットを含んでもよい。ポリＡ−Ｇカルテットを含む核酸及び／又はｍＲＮＡは、５’キャップ構造をさらに含んでもよい。
【０５３７】
一実施形態では、ポリＡ尾部又はポリＡ−Ｇカルテットを含む核酸又はｍＲＮＡを安定化するために用いることができる鎖終止ヌクレオシドは、限定はしないが、国際公開第２０１３１０３６５９号に記載されているものであってもよく、その鎖終止ヌクレオシドは、参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、本発明で用いることができる鎖終止ヌクレオシドとして、限定はしないが、３’−デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’−デオキシウリジン、３’−デオキシシトシン、３’−デオキシグアノシン、３
’−デオキシチミン、２’，３’−ジデオキシヌクレオシド、例えば、２’，３’−ジデオキシアデノシン、２’，３’−ジデオキシウリジン、２’，３’−ジデオキシトシン、２’，３’−ジデオキシグアノシン、２’，３’−ジデオキシチミン、２’−デオキシヌクレオシド、又は−Ｏ−メチルヌクレオシドが挙げられる。
【０５３８】
別の実施形態では、ポリＡ尾部又はポリＡ−Ｇカルテットを含む核酸（例えば、限定はしないが、ｍＲＮＡなど）は、核酸の３’領域に対する修飾により安定化してもよく、これによって、オリゴ（Ｕ）の付加を阻止及び／又は阻害することができる（例えば、国際公開第２０１３１０３６５９号を参照されたい：その修飾は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５３９】
また別の実施形態では、ポリＡ尾部又はポリＡ−Ｇカルテットを含む核酸（例えば、限定はしないが、ｍＲＮＡなど）は、３’−デオキシヌクレオシド、２’，３’−ジデオキシヌクレオシド、３’−０−メチルヌクレオシド、３’−０−エチルヌクレオシド、３’−アラビノシドにおいて終止するオリゴヌクレオチド、並びに当分野で公知の及び／又は本明細書に記載の他の修飾ヌクレオシドの付加により安定化することもできる。
【０５４０】
５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ及び翻訳エンハンサーエレメント（ＴＥＥ）
一実施形態では、ポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲは、少なくとも１つの翻訳エンハンサーポリヌクレオチド、翻訳エンハンサーエレメント、翻訳（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ）エンハンサーエレメント（集合的に「ＴＥＥ」と呼ぶ）を含んでもよい。非限定的例として、ＴＥＥは、転写プロモータと開始コドンとの間に位置してよい。５’ＵＴＲに少なくとも１つのＴＥＥを含むポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡは、５’ＵＴＲにキャップを含んでもよい。さらに、キャップ依存性又はキャップ非依存性翻訳を受けるポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲに、少なくとも１つのＴＥＥを配置してもよい。
【０５４１】
「翻訳（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ）エンハンサーエレメント」又は「翻訳エンハンサーエレメント」という用語（集合的に「ＴＥＥ」と呼ぶ）は、ｍＲＮＡから産生されるポリペプチド又はタンパク質の量を増加する配列を指す。
【０５４２】
一態様では、ＴＥＥは、限定はしないが、キャップ依存性又はキャップ非依存性翻訳などの核酸の翻訳活性を促進することができるＵＴＲにおける保存エレメントである。これらの配列の保存は、ヒトを含む１４種について、パネック（Ｐａｎｅｋ）ら（核酸研究（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２０１３年、ｐ．１〜１０；その全体が参照により本明細書に組み込まれる）により既に明らかにされている。
【０５４３】
非制限的一例では、既知のＴＥＥは、Ｇｔｘホメオドメインタンパク質の５’リーダにあってもよい（チャッペル（Ｃｈａｐｐｅｌｌ）ら著、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、第１０１巻、ｐ．９５９０〜９５９４、２００４年）。
【０５４４】
別の非限定的例では、ＴＥＥは、米国特許出願公開第２００９０２２６４７０号明細書において配列番号１〜３５、米国特許出願公開第２０１３０１７７５８１号明細書において配列番号１〜３５、国際公開第２００９０７５８８６号において配列番号１〜３５、国際公開第２０１２００９６４４号において配列番号１〜５、及び７〜６４５、国際公開第１９９９０２４５９５号において配列番号１、米国特許第６３１０１９７号明細書において配列番号１、並びに米国特許第６８４９４０５号明細書において配列番号１として、それぞれ開示されている。
【０５４５】
また別の非限定的例では、ＴＥＥは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、ＨＣＶ−ＩＲＥＳ又はＩＲＥＳエレメント、例えば、限定はしないが、米国特許第７４６８２７５号明細書、米国特許出願公開第２００７００４８７７６号及び同第２０１１０１２４１００号明細書、並びに国際公開第２００７０２５００８号及び同第２００１０５５３６９号（これらの各々のＴＥＥ配列は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものであってもよい。ＩＲＥＳエレメントとして、限定はしないが、チャペル（Ｃｈａｐｐｅｌｌ）ら（米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、第１０１巻、ｐ．９５９０〜９５９４、２００４年）及びチョウ（Ｚｈｏｕ）らにより（ＰＮＡＳ、第１０２巻、ｐ．６２７３〜６２７８、２００５年）、並びに米国特許出願公開第２００７００４８７７６号及び同第２０１１０１２４１００号明細書及び国際公開第２００７０２５００８号（これらの各々のＩＲＥＳ配列は、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている、Ｇｔｘ配列（例えば、Ｇｔｘ９−ｎｔ、Ｇｔｘ８−ｎｔ、Ｇｔｘ７−ｎｔ）を挙げることができる。
【０５４６】
「翻訳（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ）エンハンサーポリヌクレオチド」又は「翻訳エンハンサーポリヌクレオチド配列」は、本明細書で例示する、及び／又は当分野で開示されている（例えば、米国特許第６３１０１９７号、同第６８４９４０５号、同第７４５６２７３号、同第７１８３３９５号、同第２００９０２２６４７０号明細書、米国特許出願公開第２００７００４８７７６号、同第２０１１０１２４１００号、同第２００９００９３０４９号、同第２０１３０１７７５８１号明細書、国際公開第２００９０７５８８６号、同第２００７０２５００８号、同第２０１２００９６４４号、同第２００１０５５３７１号、同第１９９９０２４５９５号、並びに欧州特許第２６１０３４１Ａ１号及び同第２６１０３４０Ａ１号明細書を参照されたい：これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）１つ又は複数の特定のＴＥＥ、又はそれらの変異体、相同体若しくは機能性誘導体を含むポリヌクレオチドである。特定のＴＥＥの１つ又は複数のコピーが、ポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡに存在してよい。翻訳エンハンサーポリヌクレオチド中のＴＥＥは、１つ又は複数の配列セグメントにおいて構成することができる。配列セグメントは、本明細書に例示する特定のＴＥＥの１つ又は複数を保有することができ、その際、各ＴＥＥは、１つ又は複数のコピーに存在する。複数の配列セグメントが１つの翻訳エンハンサーポリヌクレオチドに存在するとき、これらは、均一又は異種のいずれであってもよい。従って、１翻訳エンハンサーポリヌクレオチド中の複数の配列セグメントは、本明細書に例示する特定のＴＥＥの同一又は異なるタイプ、特定のＴＥＥの各々の同一又は異なる数のコピー、及び／又は各配列セグメント内のＴＥＥの同一又は異なる構成を保有し得る。
【０５４７】
一実施形態では、ポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡは、以下に記載されている少なくとも１つのＴＥＥを含んでもよい：国際公開第１９９９０２４５９５号、同第２０１２００９６４４号、同第２００９０７５８８６号、同第２００７０２５００８号、同第１９９９０２４５９５号、欧州特許出願公開第２６１０３４１Ａ１号及び同第２６１０３４０Ａ１号明細書、米国特許第６３１０１９７号、同第６８４９４０５号、同第７４５６２７３号、同第７１８３３９５号、米国特許出願公開第２００９０２２６４７０号、同第２０１１０１２４１００号、同第２００７００４８７７６号、同第２００９００９３０４９号、及び同第２０１３０１７７５８１号明細書（これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。ＴＥＥは、ポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲに配置してもよい。
【０５４８】
別の実施形態では、ポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡは、以下に記載されているＴＥＥと少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少な
くとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％の同一性を有する少なくとも１つのＴＥＥを含み得る：米国特許出願公開第２００９０２２６４７０号、同第２００７００４８７７６号、同第２０１３０１７７５８１号、及び同第２０１１０１２４１００号明細書、国際公開第１９９９０２４５９５号、同第２０１２００９６４４号、同第２００９０７５８８６号、及び同第２００７０２５００８号、欧州特許出願公開第２６１０３４１Ａ１号及び同第２６１０３４０Ａ１号明細書、米国特許第６３１０１９７号、同第６８４９４０５号、同第７４５６２７３号、同第７１８３３９５号明細書（これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５４９】
一実施形態では、ポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５又は６０超のＴＥＥ配列を含み得る。本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＴＥＥ配列は、同じ、又は異なるＴＥＥ配列のいずれであってもよい。ＴＥＥ配列は、１回、２回、又は３回超反復されるＡＢＡＢＡＢ若しくはＡＡＢＢＡＡＢＢＡＡＢＢ若しくはＡＢＣＡＢＣＡＢＣ又はその変形などのパターンであってもよい。これらのパターンにおいて、各文字、Ａ、Ｂ、又はＣは、ヌクレオチドレベルの異なるＴＥＥ配列を表す。
【０５５０】
一実施形態では、５’ＵＴＲは、２つのＴＥＥ配列を隔てるためのスペーサを含んでもよい。非限定的例として、スペーサは、１５ヌクレオチドスペーサ及び／又は当分野で公知の他のスペーサであってよい。別の非限定的例として、５’ＵＴＲは、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回又は１０回以上反復されるＴＥＥ配列−スペーサモジュールを含んでもよい。
【０５５１】
別の実施形態では、２つのＴＥＥ配列を隔てるスペーサは、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの翻訳を調節することができる、当分野では公知の他の配列、例えば、限定はしないが、本明細書に記載のｍｉＲ配列（例えば、ｍｉＲ結合部位及びｍｉＲシード）を含んでもよい。非限定的例として、２つのＴＥＥ配列を隔てるために用いられるスペーサは各々、異なるｍｉＲ配列又はｍｉＲ配列の成分（例えば、ｍｉＲシード配列）を含んでもよい。
【０５５２】
一実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＴＥＥは、以下の文献に開示されているＴＥＥ配列の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は９９％超を含んでもよい：米国特許出願公開第２００９０２２６４７０号、同第２００７００４８７７６号、同第２０１３０１７７５８１号及び同第２０１１０１２４１００号明細書、国際公開第１９９９０２４５９５号、同第２０１２００９６４４号、同第２００９０７５８８６号及び同第２００７０２５００８号、欧州特許出願公開第２６１０３４１Ａ１号及び同第２６１０３４０Ａ１号明細書、米国特許第６３１０１９７号、同第６８４９４０５号、同第７４５６２７３号、及び同第７１８３３９５号（これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体を参照により本明細書に組み込まれる
）。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＴＥＥは、以下の文献に開示されているＴＥＥ配列の５〜３０ヌクレオチド断片、５〜２５ヌクレオチド断片、５〜２０ヌクレオチド断片、５〜１５ヌクレオチド断片、５〜１０ヌクレオチド断片を含有してもよい：米国特許出願公開第２００９０２２６４７０号、同第２００７００４８７７６号、同第２０１３０１７７５８１号及び同第２０１１０１２４１００号明細書、国際公開第１９９９０２４５９５号、同第２０１２００９６４４号、同第２００９０７５８８６号及び同第２００７０２５００８号、欧州特許出願公開第２６１０３４１Ａ１号及び同第２６１０３４０Ａ１号明細書、米国特許第６３１０１９７号、同第６８４９４０５号、同第７４５６２７３号、及び同第７１８３３９５号（これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５５３】
一実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＴＥＥは、以下の文献に開示されているＴＥＥ配列の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％又は９９％超を含んでもよい：チャッペル（Ｃｈａｐｐｅｌｌ）ら著（米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、第１０１巻、ｐ．９５９０〜９５９４、２００４年）及びチョウ（Ｚｈｏｕ）ら著（ＰＮＡＳ、第１０２巻、ｐ．６２７３〜６２７８、２００５年）、ウェレンシーク（Ｗｅｌｌｅｎｓｉｅｋ）らにより開示された補足表１及び補足表２（「ヒトキャップ非依存性翻訳増強エレメントのゲノムワイドプロファイリング（Ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃａｐ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ−ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ）」、ネイチャー・メソッド（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）、２０１３年；ＤＯＩ：１０．１０３８／ＮＭＥＴＨ．２５２２）。別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲにおけるＴＥＥは、以下の文献に開示されているＴＥＥ配列の５〜３０ヌクレオチド断片、５〜２５ヌクレオチド断片、５〜２０ヌクレオチド断片、５〜１５ヌクレオチド断片、５〜１０ヌクレオチド断片を含有してもよい：チャッペル（Ｃｈａｐｐｅｌｌ）ら著（米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、第１０１巻、ｐ．９５９０〜９５９４、２００４年）及びチョウ（Ｚｈｏｕ）ら著（ＰＮＡＳ、第１０２巻、ｐ．６２７３〜６２７８、２００５年）、ウェレンシーク（Ｗｅｌｌｅｎｓｉｅｋ）らにより開示された補足表１及び補足表２（「ヒトキャップ非依存性翻訳増強エレメントのゲノムワイドプロファイリング（Ｇｅｎｏｍｅ−ｗｉｄｅ  ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｃａｐ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ−ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ｅｌｅｍｅｎｔｓ）」、ネイチャー・メソッド（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）、２０１３年；ＤＯＩ：１０．１０３８／ＮＭＥＴＨ．２５２２）（これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５５４】
一実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲで用いられるＴＥＥは、ＩＲＥＳ配列、例えば、限定はしないが、米国特許第７４６８２７５号明細書及び国際公開第２００１０５５３６９号（これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものである。
【０５５５】
一実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲで用いられるＴＥＥは、米国特許出願公開第２００７００４８７７６号及び同第２０１１０１２４１００号明細書、並びに国際公開第２００７０２５００８号及
び同第２０１２００９６４４号（これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法により同定することができる。
【０５５６】
一実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲで用いられるＴＥＥは、米国特許第７４５６２７３号及び同第７１８３３９５号明細書、米国特許出願公開第２００９００９３０４９号明細書、並びに国際公開第２００１０５５３７１号（これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている転写調節エレメントであってもよい。転写調節エレメントは、当分野で知られているがこれに限定されない方法であって、米国特許第７４５６２７３号及び同第７１８３３９５号明細書、米国特許出願公開第２００９００９３０４９号明細書、並びに国際公開第２００１０５５３７１号（これらの各々の転写調節エレメントは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法により同定することができる。
【０５５７】
また別の実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲで用いられるＴＥＥは、米国特許第７４５６２７３号及び同第７１８３３９５号明細書、米国特許出願公開第２００９００９３０４９号明細書、並びに国際公開第２００１０５５３７１号（これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているオリゴヌクレオチド又はその部分である。
【０５５８】
本明細書に記載する少なくとも１つのＴＥＥを含む５’ＵＴＲは、限定はしないが、ベクター系又は核酸ベクターなどのモノシストロニック配列に組み込んでもよい。非限定的例として、ベクター系及び核酸ベクターは、米国特許第７４５６２７３号及び同第７１８３３９５号明細書、米国特許出願公開第２００７００４８７７６号、同第２００９００９３０４９号及び同第２０１１０１２４１００号明細書、並びに国際公開第２００７０２５００８号及び同第２００１０５５３７１号に記載されているものを含んでもよく、これらの各々のＴＥＥ配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０５５９】
一実施形態では、本明細書に記載するＴＥＥは、ポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの５’ＵＴＲ及び／又は３’ＵＴＲに位置してもよい。３’ＵＴＲに位置するＴＥＥは、５’ＵＴＲに位置するＴＥＥ及び／又は５’ＵＴＲへの組み込みのために記載されるＴＥＥと同じであってもよいし、及び／又は異なっていてもよい。
【０５６０】
一実施形態では、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの３’ＵＴＲは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、少なくとも２４、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５又は６０超のＴＥＥ配列を含み得る。本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの３’ＵＴＲにおけるＴＥＥ配列は、同じ、又は異なるＴＥＥ配列のいずれであってもよい。ＴＥＥ配列は、１回、２回、又は３回超反復されるＡＢＡＢＡＢ若しくはＡＡＢＢＡＡＢＢＡＡＢＢ若しくはＡＢＣＡＢＣＡＢＣ又はその変形などのパターンであってよい。これらのパターンにおいて、各文字、Ａ、Ｂ、又はＣは、ヌクレオチドレベルで異なるＴＥＥ配列を表す。
【０５６１】
一実施形態では、３’ＵＴＲは、２つのＴＥＥ配列を隔てるためのスペーサを含んでもよい。非限定的例として、スペーサは、１５ヌクレオチドスペーサ及び／又は当分野で公知の他のスペーサであってよい。別の非限定的例として、３’ＵＴＲは、その３’ＵＴＲ
において少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回又は１０回以上反復されるＴＥＥ配列−スペーサモジュールを含んでもよい。
【０５６２】
別の実施形態では、２つのＴＥＥ配列を隔てるスペーサは、本発明のポリヌクレオチド、一次構築物、修飾核酸及び／又はｍｍＲＮＡの翻訳を調節することができる、当分野では公知の他の配列、例えば、限定はしないが、本明細書に記載のｍｉＲ配列（例えば、ｍｉＲ結合部位及びｍｉＲシード）を含んでもよい。非限定的例として、２つのＴＥＥ配列を隔てるために用いられるスペーサは各々、異なるｍｉＲ配列又はｍｉＲ配列の成分（例えば、ｍｉＲシード配列）を含んでもよい。
【０５６３】
一実施形態では、ｍｉＲ配列及び／又はＴＥＥ配列の組み込みは、ステムループ領域の形状を変化させ、これは、翻訳を増大及び／又は低減し得る。（例えば、ケデ（Ｋｅｄｄｅ）ら著、「ｐ２７−３’ＵＴＲにおけるプミリオ誘導のＲＮＡ構造スイッチは、ｍｉＲ−２２１及びｍｉＲ−２２接近性を制御する（Ａ  Ｐｕｍｉｌｉｏ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＲＮＡ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｓｗｉｔｃｈ  ｉｎ  ｐ２７−３’ＵＴＲ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｍｉＲ−２２１  ａｎｄ  ｍｉＲ−２２  ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）」、ネイチャー・セル・バイオロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、２０１０年を参照のこと）。
【０５６４】
異種５’ＵＴＲ
５’ＵＴＲは、本発明の修飾核酸（ｍＲＮＡ）、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸とのフランキング領域として提供してもよい。５’ＵＴＲは、本発明の修飾核酸（ｍＲＮＡ）、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸に存在するコード領域に対して相同的又は異種のいずれであってもよい。複数の５’ＵＴＲをフランキング領域に含有させてもよく、これらは、同じ配列でも、異なる配列から成るものあってよい。フランキング領域の任意の部分（皆無を含む）は、コドン最適化してもよく、独立に、コドン最適化前及び／又は後に、１つ又は複数の異なる構造的若しくは化学修飾を含有してもよい。
【０５６５】
米国仮特許出願第６１／７７５，５０９号明細書の長い表（Ｌｅｎｇｔｙ  Ｔａｂｌｅ）２１、及び米国仮特許出願第６１／８２９，３７２号明細書の長い表（Ｌｅｎｇｔｙ  Ｔａｂｌｅ）２１及び表２２（これらの配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）には、本発明の修飾核酸（ｍＲＮＡ）、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の開始コドン及び終止コドンの一覧が掲載されている。表２１では、各５’ＵＴＲ（５’ＵＴＲ−００５〜５’ＵＴＲ６８５１１）が、そのネイティブ又は野生型（相同性）転写物に対するそれぞれの開始及び終止部位により同定されている（ＥＮＳＴ：ＥＮＳＥＭＢＬデータベースで用いられる識別番号）。
【０５６６】
本発明のポリヌクレオチド、一次構築物又はｍｍＲＮＡの１つ又は複数の特性を改変するために、本発明の修飾核酸（ｍＲＮＡ）、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸のコード領域とは異種である５’ＵＴＲを操作により本発明の化合物に組み込む。次に、本発明の修飾核酸（ｍＲＮＡ）、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸を細胞、組織又は生物に投与した後、タンパク質レベル、局在化及び／又は半減期などの結果を測定することにより、異種５’ＵＴＲが、本発明の修飾核酸（ｍＲＮＡ）、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸に付与し得る有益な作用を評価する。Ａ、Ｔ、Ｃ若しくはＧなどの１つ又は複数のヌクレオチドを末端に付加するか、又はこれを除去した５’ＵＴＲの変異体を使用してもよい。５’ＵＴＲはまた、コドン最適化されていても、又は本明細書に記載する任意の方法で修飾されていてもよい。
【０５６７】
マイクロＲＮＡ結合部位の組み込み
一実施形態では、本発明の修飾核酸（ｍＲＮＡ）、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸は、ポリペプチドだけではなく、センサー配列もコードし得る。センサー配列としては、例えば、マイクロＲＮＡ結合部位、転写因子結合部位、構造化ｍＲＮＡ配列及び／又はモチーフ、内在性核酸結合分子のプソイド−受容体として作用するように操作された人工結合部位が挙げられる。少なくとも１つのセンサー配列を含むポリヌクレオチドの非限定的例は、２０１３年１月１７日に提出された同時係属及び共有米国仮特許出願第６１／７５３，６６１号明細書、２０１３年１月１８日に提出された米国仮特許出願第６１／７５４，１５９号明細書、２０１３年３月１４日に提出された米国仮特許出願第６１／７８１，０９７号明細書、２０１３年５月３１日に提出された米国仮特許出願第６１／８２９，３３４号明細書、２０１３年６月２７日に提出された米国仮特許出願第６１／８３９，８９３号明細書、２０１３年７月３日に提出された米国仮特許出願第６１／８４２，７３３号明細書、及び２０１３年７月２３日に提出された米国仮特許出願第６１／８５７，３０４号明細書に記載されており、これらの各々の配列は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０５６８】
一実施形態では、標的細胞又は組織のマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）プロファイリングを実施して、細胞又は組織中のｍｉＲＮＡの存在又は非存在を決定する。
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、長さが１９〜２５ヌクレオチドのノンコーディングＲＮＡであり、これは、核酸分子の３’ＵＴＲに結合して、核酸分子安定性を低減するか、又は翻訳を阻害するかのいずれかによって遺伝子発現を下方制御する。発明の修飾核酸（ｍＲＮＡ）、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸は、１つ又は複数のマイクロＲＮＡ標的配列、マイクロＲＮＡ配列、又はマイクロＲＮＡシードを含んでもよい。こうした配列は、米国特許出願公開第２００５／０２６１２１８号明細書及び米国特許出願公開第２００５／００５９００５号明細書（これらのｍｉＲＮＡは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に教示されているものなどの任意の公知のマイクロＲＮＡと一致するものでもよい。
【０５６９】
マイクロＲＮＡ配列は、「シード」領域、すなわち成熟マイクロＲＮＡの２〜８位の領域にある配列を含み、この配列は、ｍｉＲＮＡ標的配列に対して完全なワトソン−クリック（Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ）相補性を有する。マイクロＲＮＡシードは、成熟マイクロＲＮＡの２〜８位又は２〜７位を含み得る。一部の実施形態では、マイクロＲＮＡシードは、７ヌクレオチド（例えば、成熟マイクロＲＮＡのヌクレオチド２〜８）を含み得るが、ここで、対応するｍｉＲＮＡ標的におけるシード相補性部位は、マイクロＲＮＡ１位と向かい合うアデニン（Ａ）によりフランキングされている。一部の実施形態では、マイクロＲＮＡシードは、６ヌクレオチド（例えば、成熟マイクロＲＮＡのヌクレオチド２〜７）を含み得るが、ここで、対応するｍｉＲＮＡ標的におけるシード相補性部位は、マイクロＲＮＡ１位と向かい合うアデニン（Ａ）によりフランキングされている。例えば、グリムソン  Ａ（Ｇｒｉｍｓｏｎ  Ａ）、ファー  ＫＫ（Ｆａｒｈ  ＫＫ）、ジョンストン
ＷＫ（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ  ＷＫ）、ギャレット−エンジェレ  Ｐ（Ｇａｒｒｅｔｔ−Ｅｎｇｅｌｅ  Ｐ）、リム  ＬＰ（Ｌｉｍ  ＬＰ）、バーテル  ＤＰ（Ｂａｒｔｅｌ  ＤＰ）著；分子細胞生物学（Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．）、２００７年７月６日；第２７巻（１）、ｐ．９１〜１０５を参照されたい。マイクロＲＮＡシードの塩基は、標的配列との完全な相補性を有する。該当するマイクロＲＮＡが入手可能であれば、本発明の核酸又はｍＲＮＡの３’ＵＴＲにマイクロＲＮＡ標的配列を操作により組み込みことによって、分解又は翻訳低減のための分子をターゲティングすることができる。このプロセスは、核酸分子送達時のオフターゲット効果の危険性を低減し得る。マイクロＲＮＡ、マイクロＲＮＡ標的領域の同定、並びに生物学におけるそれらの発現パターン及び役割が報告されている（ボナウアー（Ｂｏｎａｕｅｒ）ら著、カレント・ドラッグ・ターゲット（Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ）、２０１０年、第１１巻、ｐ．９４３〜９４９；アナンド（Ａｎａｎｄ）及びチェレシュ（Ｃｈｅｒｅｓｈ）著、カレント・オピニオン・ヘマトロジー（Ｃ
ｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ）、２０１１年、第１８巻、ｐ．１７１〜１７６；コントレラス（Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ）及びラオ（Ｒａｏ）著、白血病（Ｌｅｕｋｅｍｉａ）、２０１２年、第２６巻、ｐ．４０４〜４１３（２０１１年１２月２０日、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１１．３５６）；バーテル（Ｂａｒｔｅｌ）著、細胞（Ｃｅｌｌ）、２００９年、第１３６巻、ｐ．２１５〜２３３；ランドグラフ（Ｌａｎｄｇｒａｆ）ら著、「細胞（Ｃｅｌｌ）」、２００７年、第１２９巻、ｐ．１４０１〜１４１４；ジェントナー（Ｇｅｎｔｎｅｒ）及びナルジニ（Ｎａｌｄｉｎｉ）著、組織抗原（Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ．）、２０１２年、第８０巻、ｐ．３９３〜４０３、並びにその全ての参照文献；これらの各々のｍｉＲＮＡは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５７０】
例えば、ｍＲＮＡを肝臓に送達することを意図しないのに、そこに到達してしまう場合、修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の３’ＵＴＲにｍｉＲ−１２２の１つ又は複数の標的部位が組み込まれていれば、肝臓に豊富なマイクロＲＮＡであるｍｉＲ−１２２が、目的の遺伝子の発現を阻害することができる。様々なマイクロＲＮＡの１つ又は複数の結合部位の導入は、修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の寿命、安定性、及びタンパク質翻訳をさらに低減するように操作することができる。本明細書で用いる場合、「マイクロＲＮＡ部位」という用語は、マイクロＲＮＡ標的部位若しくはマイクロＲＮＡ認識部位、又はマイクロＲＮＡが結合若しくは会合する任意のヌクレオチド配列を指す。「結合する（こと）」は、伝統的なワトソン−クリックハイブリダイゼーションの法則に従うか、あるいは、マイクロＲＮＡ部位での、又はそれに隣接した標的配列とマイクロＲＮＡの任意の安定な会合を表し得ると理解すべきである。
【０５７１】
反対に、本発明の修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の目的のために、マイクロＲＮＡ結合部位は、特定の組織におけるタンパク質発現を増大するために、それらが自然に発生する配列から取り出す（すなわち除去する）ことができる。例えば、肝臓におけるタンパク質発現を改善するために、ｍｉＲ−１２２結合部位を除去することができる。
【０５７２】
一部の実施形態では、本発明の修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸は、特定の細胞、例えば、限定はしないが、正常及び／若しくは癌細胞（例えば、ＨＥＰ３Ｂ又はＳＮＵ４４９）に細胞傷害性若しくは細胞保護性ｍＲＮＡ治療薬を向かわせるために、３’ＵＴＲに少なくとも１つのｍｉＲＮＡ結合部位を含んでもよい。
【０５７３】
別の実施形態では、本発明の修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸は、特定の細胞、例えば、限定はしないが、正常及び／若しくは癌細胞（例えば、ＨＥＰ３Ｂ又はＳＮＵ４４９）に細胞傷害性若しくは細胞保護性ｍＲＮＡ治療薬を向かわせるために、３’ＵＴＲに３つのｍｉＲＮＡ結合部位を含んでもよい。
【０５７４】
複数の組織における発現の調節は、１つ又はいくつかのマイクロＲＮＡ部位の導入又は除去によって達成することができる。マイクロＲＮＡ結合部位の除去若しくは挿入、又は任意の組み合わせの決定は、疾患におけるマイクロＲＮＡ発現パターン及びそれらのプロファイリングに左右される。
【０５７５】
マイクロＲＮＡが、ｍＲＮＡを調節し、それによりタンパク質発現を調節することがわかっている組織の例として、限定はしないが、肝臓（ｍｉＲ−１２２）、筋肉（ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０８）、内皮細胞（ｍｉＲ−１７−９２、ｍｉＲ−１２６）、骨髄性細胞（ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１６、ｍｉＲ−２１、ｍｉＲ−２２３、ｍｉＲ−２４、ｍｉＲ−２７）、脂肪組織（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−３０ｃ）、心臓（ｍｉＲ−１ｄ、ｍｉＲ−１４９）、腎臓（ｍｉＲ−１９２、
ｍｉＲ−１９４、ｍｉＲ−２０４）、及び肺上皮細胞（ｌｅｔ−７、ｍｉＲ−１３３、ｍｉＲ−１２６）が挙げられる。
【０５７６】
具体的には、マイクロＲＮＡは、免疫細胞（造血細胞とも呼ばれる）、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、樹状細胞及びマクロファージ）、マクロファージ、単球、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、顆粒球、ナチュラルキラー細胞などに差次的に発現することがわかっている。免疫細胞特異的マイクロＲＮＡは、免疫原性、自己免疫、感染に対する免疫−応答、炎症、並びに遺伝子療法及び組織／臓器移植後の不要な免疫応答に関与している。免疫細胞特異的マイクロＲＮＡはまた、造血細胞（免疫細胞）の発生、増殖、分化及びアポトーシスの多くの様態も調節する。例えば、ｍｉＲ−１４２及びｍｉＲ−１４６は、もっぱら免疫細胞に発現され、特に骨髄性樹状細胞に豊富である。外性核酸分子に対する免疫応答は、送達された遺伝子構築物の３’ＵＴＲにｍｉＲ−１４２結合部位を添加することによって遮断され、組織及び細胞への、より安定した遺伝子輸送を可能にする。ｍｉＲ−１４２は、抗原提示細胞における外性ｍＲＮＡを効率的に分解し、形質導入された細胞の細胞傷害性排除を抑制する（アンノイ  Ａ（Ａｎｎｏｎｉ  Ａ）ら著、血液（ｂｌｏｏｄ）、２００９年、第１１４巻、ｐ．５１５２〜５１６１；ブラウン  ＢＤ（Ｂｒｏｗｎ  ＢＤ）ら著、ネイチャー・メディシン（Ｎａｔ  ｍｅｄ．）、２００６年、第１２巻（５）、ｐ．５８５〜５９１；ブラウン  ＢＤ（Ｂｒｏｗｎ  ＢＤ）ら著、「血液（ｂｌｏｏｄ）」、２００７年、第１１０巻（１３）、ｐ．４１４４〜４１５２、これらの各々のｍｉＲＮＡは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５７７】
抗原媒介性免疫応答は、外来の抗原によりトリガーされた免疫応答を指すことができ、外来の抗原は、生物に侵入すると、抗原提示細胞によりプロセシングされて、抗原提示細胞の表面に示される。Ｔ細胞は、提示された抗原を認識して、抗原を発現する細胞の細胞傷害性排除を誘導することができる。
【０５７８】
本発明のポリペプチドの３’−ＵＴＲにｍｉＲ−１４２結合部位を導入すると、ｍｉＲ−１４２媒介性ｍＲＮＡ分解を介して、抗原提示細胞における遺伝子発現を選択的に抑制することができ、ＡＰＣ（例えば、樹状細胞）における抗原提示を制限し、これにより、ポリヌクレオチドの送達後の抗原媒介性免疫応答を阻止することができる。従って、ポリヌクレオチドは、細胞傷害性排除をトリガーすることなく、標的組織又は細胞に安定して発現される。
【０５７９】
一部の実施形態では、免疫細胞、特に抗原提示細胞において発現されることがわかっているマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに操作により組み込むことによって、免疫細胞特異的マイクロＲＮＡが発現されない非免疫細胞ではポリヌクレオチドの発現を維持しながら、抗原媒介性免疫応答を抑制するマイクロＲＮＡ媒介性ＲＮＡ分解によって、ＡＰＣにおけるセンサー−シグナルポリヌクレオチドの発現を抑制することができる。例えば、肝臓特異的タンパク質発現により引き起こされる免疫原性反応を阻止するために、ｍｉＲ−１２２結合部位を除去すると共に、ｍｉＲ−１４２（及び／又はｍｉＲ−１４６）結合部位をポリヌクレオチドの３−ＵＴＲに操作により組み込むことができる。
【０５８０】
ＡＰＣ及びマクロファージにおけるｍＲＮＡの選択的分解及び抑制をさらに駆動するために、ポリヌクレオチドは、３−ＵＴＲに別の負の調節エレメントを単独で、又はｍｉｒ−１４２及び／又はｍｉｒ−１４６結合部位と組み合わせて含んでもよい。非限定的例として、１つの制御エレメントは、構成性崩壊要素（ＣＤＥ）である。
【０５８１】
免疫細胞特異的マイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−２−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ａ−３ｐ、ｈｓａ−７ａ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｃ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｅ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｅ−５ｐ、ｈｓ
ａ−ｌｅｔ−７ｇ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｉ−５ｐ、ｍｉＲ−１０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１１８４、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−１−−３ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−２−−５ｐ、ｈｓａ−ｌｅｔ−７ｆ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２７９、ｍｉＲ−１３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３２−３ｐ、ｍｉＲ−１３２−５ｐ、ｍｉＲ−１４２−３ｐ、ｍｉＲ−１４２−５ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１４６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１４７ａ、ｍｉＲ−１４７ｂ、ｍｉＲ−１４８ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１４８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５０−３ｐ、ｍｉＲ−１５０−５ｐ、ｍｉＲ−１５１ｂ、ｍｉＲ−１５５−３ｐ、ｍｉＲ−１５５−５ｐ、ｍｉＲ−１５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１６−１−３ｐ、ｍｉＲ−１６−２−３ｐ、ｍｉＲ−１６−５ｐ、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１８１ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１８２−３ｐ、ｍｉＲ−１８２−５ｐ、ｍｉＲ−１９７−３ｐ、ｍｉＲ−１９７−５ｐ、ｍｉＲ−２１−５ｐ、ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−５ｐ、ｍｉＲ−２２３−３ｐ、ｍｉＲ−２２３−５ｐ、ｍｉＲ−２２１−３ｐ、ｍｉＲ−２２１−５ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２４−１−５ｐ、ｍｉＲ−２４−２−５ｐ、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−１−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−２６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２７ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２７ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２８−３ｐ、ｍｉＲ−２８−５ｐ、ｍｉＲ−２９０９、ｍｉＲ−２９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ−１−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｂ−２−５ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−２９ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ−３３１−５ｐ、ｍｉＲ−３３９−３ｐ、ｍｉＲ−３３９−５ｐ、ｍｉＲ−３４５−３ｐ、ｍｉＲ−３４５−５ｐ、ｍｉＲ−３４６、ｍｉＲ−３４ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３６３−３ｐ、ｍｉＲ−３６３−５ｐ、ｍｉＲ−３７２、ｍｉＲ−３７７−３ｐ、ｍｉＲ−３７７−５ｐ、ｍｉＲ−４９３−３ｐ、ｍｉＲ−４９３−５ｐ、ｍｉＲ−５４２、ｍｉＲ−５４８ｂ−５ｐ、  ｍｉＲ５４８ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｉ、ｍｉＲ−５４８ｊ、ｍｉＲ−５４８ｎ、ｍｉＲ−５７４−３ｐ、ｍｉＲ−５９８、ｍｉＲ−７１８、ｍｉＲ−９３５、ｍｉＲ−９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ−３ｐ及びｍｉＲ−９９ｂ−５ｐ。さらに、新規のマイクロＲＮＡが、ミクロアレイハイブリダイゼーション及びミクロトーム分析により、当分野において免疫細胞中にみいだされている（ジマ
ＤＤ（Ｊｉｍａ  ＤＤ）ら著、血液（Ｂｌｏｏｄ）、２０１０年、第１１６巻、ｐ．ｅ１１８〜ｅ１２７；バズ  Ｃ（Ｖａｚ  Ｃ）ら著、ＢＭＣゲノミクス（ＢＭＣ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ）、２０１０年、第１１巻、ｐ．２８８、これらの各々のｍｉＲＮＡは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５８２】
肝臓に発現されることがわかっているマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ｍｉＲ−１０７、ｍｉＲ−１２２−３ｐ、ｍｉＲ−１２２−５ｐ、ｍｉＲ−１２２８−３ｐ、ｍｉＲ−１２２８−５ｐ、ｍｉＲ−１２４９、ｍｉＲ−１２９−５ｐ、ｍｉＲ−１３０３、ｍｉＲ−１５１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１５１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１５２、ｍｉＲ−１９４−３ｐ、ｍｉＲ−１９４−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２９６−５ｐ、ｍｉＲ−５５７、ｍｉＲ−５８１、ｍｉＲ−９３９−３ｐ、ｍｉＲ−９３９−５ｐ。任意の肝臓特異的マイクロＲＮＡからのマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに導入するか、又はポリヌクレオチドから除去することにより、肝臓におけるポリヌクレオチドの発現を調節することができる。肝臓におけるタンパク質発現に対する免疫反応を阻止するために、肝臓特異的マイクロＲＮＡ結合部位を単独で、又はさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）マイクロＲＮＡ結合部位と組み合わせて、操作することができる。
【０５８３】
肺に発現されることがわかっているマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ｌｅｔ−７ａ−２−３ｐ、ｌｅｔ−７ａ−３ｐ、ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ，ｍｉＲ−１２６−５ｐ、ｍｉＲ−１２７−３ｐ、ｍｉＲ−１２７−５ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１３４、ｍｉＲ−１８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１８ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１８ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１８ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２４−１−５ｐ、ｍｉＲ−２４−２−５ｐ、ｍｉＲ−２４−３ｐ、ｍｉＲ−２９６−３ｐ、ｍｉＲ−２９６−５ｐ、ｍｉＲ−３２−３ｐ、ｍｉＲ−３３７−３ｐ、ｍｉＲ−３３７−５ｐ、ｍｉＲ−３８１−３ｐ、ｍｉＲ−３８１−５ｐ。任意の肺特異的マイクロＲＮＡからのマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに導入するか、又はポリヌクレオチドから除去することにより、肺におけるポリヌクレオチドの発現を調節することができる。肺におけるタンパク質発現に対する免疫反応を阻止するために、肺特異的マイクロＲＮＡ結合部位を単独で、又はさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）マイクロＲＮＡ結合部位と組み合わせて、操作することができる。
【０５８４】
心臓に発現されることがわかっているマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１４９−３ｐ、ｍｉＲ−１４９−５ｐ、ｍｉＲ−１８６−３ｐ、ｍｉＲ−１８６−５ｐ、ｍｉＲ−２０８ａ、ｍｉＲ−２０８ｂ、ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−２９６−３ｐ、ｍｉＲ−３２０、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−４５１ｂ、ｍｉＲ−４９９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−４９９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−４９９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４９９ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−７４４−３ｐ、ｍｉＲ−７４４−５ｐ、ｍｉＲ−９２ｂ−３ｐ及びｍｉＲ−９２ｂ−５ｐ。任意の心臓特異的マイクロＲＮＡからのマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに導入するか、又はポリヌクレオチドから除去することにより、心臓におけるポリヌクレオチドの発現を調節することができる。心臓におけるタンパク質発現に対する免疫反応を阻止するために、心臓特異的マイクロＲＮＡ結合部位を単独で、又はさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）マイクロＲＮＡ結合部位と組み合わせて、操作することができる。
【０５８５】
神経系に発現されることがわかっているマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ｍｉＲ−１２４−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−１−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１２５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２７１−３ｐ、ｍｉＲ−１２７１−５ｐ、ｍｉＲ−１２８、ｍｉＲ−１３２−５ｐ、ｍｉＲ−１３５ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３５ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１３５ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１３５ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１３７、ｍｉＲ−１３９−５ｐ、ｍｉＲ−１３９−３ｐ、ｍｉＲ−１４９−３ｐ、ｍｉＲ−１４９−５ｐ、ｍｉＲ−１５３、ｍｉＲ−１８１ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−１８１ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−１８３−３ｐ、ｍｉＲ−１８３−５ｐ、ｍｉＲ−１９０ａ、ｍｉＲ−１９０ｂ、ｍｉＲ−２１２−３ｐ、ｍｉＲ−２１２−５ｐ、ｍｉＲ−２１９−１−３ｐ、ｍｉＲ−２１９−２−３ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−１−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−２−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｄ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｄ−５ｐ、ｍｉＲ−３２９、ｍｉＲ−３４２−３ｐ、ｍｉＲ−３６６５、ｍｉＲ−３６６６、ｍｉＲ−３８０−３ｐ、ｍｉＲ−３８０−５ｐ、ｍｉＲ−３８３、ｍｉＲ−４１０、ｍｉＲ−４２５−３ｐ、ｍｉＲ−４２５−５ｐ、ｍｉＲ−４５４−３ｐ、ｍｉＲ−４５４−５ｐ、ｍｉＲ−４８３、ｍｉＲ−５１０、ｍｉＲ−５１６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−５４８ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−５７１、ｍｉＲ−７−１−３ｐ、ｍｉＲ−７−２−３ｐ、ｍｉＲ−７−５ｐ、ｍｉＲ−８０２、ｍｉＲ−９２２、ｍｉＲ−９−３ｐ及びｍｉＲ−９−５ｐ。神経系に富化されたマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下：ｍｉＲ−１３２−３ｐ、ｍｉＲ−１３２−３ｐ、ｍｉＲ−１４８ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１４８ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１５１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−
１５１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１２−３ｐ、ｍｉＲ−２１２−５ｐ、ｍｉＲ−３２０ｂ、ｍｉＲ−３２０ｅ、ｍｉＲ−３２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３２３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３２４−５ｐ、ｍｉＲ−３２５、ｍｉＲ−３２６、ｍｉＲ−３２８、ｍｉＲ−９２２を含む、ニューロンに特異的に発現されるもの、並びに、限定はしないが、以下：ｍｉＲ−１２５０、ｍｉＲ−２１９−１−３ｐ、ｍｉＲ−２１９−２−３ｐ、ｍｉＲ−２１９−５ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０６５−３ｐ、ｍｉＲ−３０６５−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｅ−５ｐ、ｍｉＲ−３２−５ｐ、ｍｉＲ−３３８−５ｐ、ｍｉＲ−６５７を含む、グリア細胞に特異的に発現されるものがさらに挙げられる。任意のＣＮＳ特異的マイクロＲＮＡからのマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに導入するか、又はポリヌクレオチドから除去することにより、神経系におけるポリヌクレオチドの発現を調節することができる。神経系におけるタンパク質発現に対する免疫反応を阻止するために、神経系特異的マイクロＲＮＡ結合部位を単独で、又はさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）マイクロＲＮＡ結合部位と組み合わせて、操作することができる。
【０５８６】
膵臓に発現されることがわかっているマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ｍｉＲ−１０５−３ｐ、ｍｉＲ−１０５−５ｐ、ｍｉＲ−１８４、ｍｉＲ−１９５−３ｐ、ｍｉＲ−１９５−５ｐ、ｍｉＲ−１９６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１４−３ｐ、ｍｉＲ−２１４−５ｐ、ｍｉＲ−２１６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２１６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３７５、ｍｉＲ−７−１−３ｐ、ｍｉＲ−７−２−３ｐ、ｍｉＲ−４９３−３ｐ、ｍｉＲ−４９３−５ｐ及びｍｉＲ−９４４。任意の膵臓特異的マイクロＲＮＡからのマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに導入するか、又はポリヌクレオチドから除去することにより、膵臓におけるポリヌクレオチドの発現を調節することができる。膵臓におけるタンパク質発現に対する免疫反応を阻止するために、膵臓特異的マイクロＲＮＡ結合部位を単独で、又はさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）マイクロＲＮＡ結合部位と組み合わせて、操作することができる。
【０５８７】
さらに、腎臓に発現されることがわかっているマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下のものがさらに挙げられる：ｍｉＲ−１２２−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１９２−３ｐ、ｍｉＲ−１９２−５ｐ、ｍｉＲ−１９４−３ｐ、ｍｉＲ−１９４−５ｐ、ｍｉＲ−２０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２０４−３ｐ、ｍｉＲ−２０４−５ｐ、ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−２１６ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２１６ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２９６−３ｐ、ｍｉＲ−３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−１−３ｐ、ｍｉＲ−３０ｃ−２−３ｐ、ｍｉＲ３０ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３２４−３ｐ、ｍｉＲ−３３５−３ｐ、ｍｉＲ−３３５−５ｐ、ｍｉＲ−３６３−３ｐ、ｍｉＲ−３６３−５ｐ及びｍｉＲ−５６２。任意の腎特異的マイクロＲＮＡからのマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに導入するか、又はポリヌクレオチドから除去することにより、腎臓におけるポリヌクレオチドの発現を調節することができる。腎臓におけるタンパク質発現に対する免疫反応を阻止するために、腎特異的マイクロＲＮＡ結合部位を単独で、又はさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）マイクロＲＮＡ結合部位と組み合わせて、操作することができる。
【０５８８】
さらに、筋肉に発現されることがわかっているマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下のものがさらに挙げられる：ｌｅｔ−７ｇ−３ｐ，ｌｅｔ−７ｇ−５ｐ、ｍｉＲ−１、ｍｉＲ−１２８６、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１４０−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−３ｐ、ｍｉＲ−１４３−５ｐ、ｍｉＲ−１４５−３ｐ、ｍｉＲ−１４５−５ｐ、ｍｉＲ−１８８−３ｐ、ｍｉＲ−１８８−５ｐ、ｍｉＲ−２０６、ｍｉＲ−２０８ａ、ｍｉＲ−２０８ｂ、ｍｉＲ−２５−３ｐ及びｍｉＲ−２５−５ｐ。任意の筋肉特異的マイクロＲＮＡからのマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに導入するか、又は
ポリヌクレオチドから除去することにより、筋肉におけるポリヌクレオチドの発現を調節することができる。筋肉におけるタンパク質発現に対する免疫反応を阻止するために、筋肉特異的マイクロＲＮＡ結合部位を単独で、又はさらに免疫細胞（例えば、ＡＰＣ）マイクロＲＮＡ結合部位と組み合わせて、操作することができる。
【０５８９】
マイクロＲＮＡは、内皮細胞、上皮細胞及び脂肪細胞などの様々な細胞型において、差次的に発現される。例えば、内皮細胞に発現されるマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ｌｅｔ−７ｂ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１００−３ｐ、ｍｉＲ−１００−５ｐ、ｍｉＲ−１０１−３ｐ、ｍｉＲ−１０１−５ｐ、ｍｉＲ−１２６−３ｐ、ｍｉＲ−１２６−５ｐ、ｍｉＲ−１２３６−３ｐ、ｍｉＲ−１２３６−５ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１３０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１７−５ｐ、ｍｉＲ−１７−３ｐ、ｍｉＲ−１８ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１８ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９ａ−３ｐ、ｍｉＲ−１９ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１９ｂ−１−５ｐ、ｍｉＲ−１９ｂ−２−５ｐ、ｍｉＲ−１９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２０ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２０ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２１７、ｍｉＲ−２１０、ｍｉＲ−２１−３ｐ、ｍｉＲ−２１−５ｐ、ｍｉＲ−２２１−３ｐ、ｍｉＲ−２２１−５ｐ、ｍｉＲ−２２２−３ｐ、ｍｉＲ−２２２−５ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２９６−５ｐ、ｍｉＲ−３６１−３ｐ、ｍｉＲ−３６１−５ｐ、ｍｉＲ−４２１、ｍｉＲ−４２４−３ｐ、ｍｉＲ−４２４−５ｐ、ｍｉＲ−５１３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−９２ａ−１−５ｐ、ｍｉＲ−９２ａ−２−５ｐ、ｍｉＲ−９２ａ−３ｐ、ｍｉＲ−９２ｂ−３ｐ及びｍｉＲ−９２ｂ−５ｐ。多くの新規マイクロＲＮＡが、大規模シーケンス解析から内皮細胞においてみいだされている（ボエレンクル（Ｖｏｅｌｌｅｎｋｌｅ  Ｃ）ら著、ＲＮＡ、２０１２年、第１８巻、ｐ．４７２〜４８４、このｍｉＲＮＡは、参照により本明細書に組み込まれる）。任意の内皮細胞特異的マイクロＲＮＡからのマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに導入するか、又はポリヌクレオチドから除去することにより、様々な状態における内皮細胞でのポリヌクレオチドの発現を調節することができる。
【０５９０】
別の例として、上皮細胞で発現するマイクロＲＮＡには、限定はしないが、呼吸器線毛上皮細胞に特異的な、ｌｅｔ−７ｂ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２４６、ｍｉＲ−２００ａ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ａ−５ｐ、ｍｉＲ−２００ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−２００ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３３８−３ｐ、ｍｉＲ−４２９、ｍｉＲ−４５１ａ、ｍｉＲ−４５１ｂ、ｍｉＲ−４９４、ｍｉＲ−８０２及びｍｉＲ−３４ａ、ｍｉＲ−３４ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３４ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−４４９ａ、ｍｉＲ−４４９ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−４４９ｂ−５ｐ；肺上皮細胞に特異的な、ｌｅｔ−７ファミリー、ｍｉＲ−１３３ａ、ｍｉＲ−１３３ｂ、ｍｉＲ−１２６；腎上皮細胞に特異的な、ｍｉＲ−３８２−３ｐ、ｍｉＲ−３８２−５ｐ、並びに角膜上皮細胞に特異的なｍｉＲ−７６２が挙げられる。任意の上皮細胞特異的マイクロＲＮＡからのマイクロＲＮＡ結合部位をポリヌクレオチドに導入するか、又はポリヌクレオチドから除去することにより、様々な状態における上皮細胞でのポリヌクレオチドの発現を調節することができる。
【０５９１】
さらに、マイクロＲＮＡの大集団は胚性幹細胞に濃縮され、幹細胞の自己再生、並びに神経細胞、心臓細胞、造血細胞、皮膚細胞、骨形成原細胞、及び筋肉細胞などの様々な細胞系譜の発生及び／又は分化を制御する（クップサミー  ＫＴ（Ｋｕｐｐｕｓａｍｙ  ＫＴ）ら著、カレント・モレキュラー・メディシン（Ｃｕｒｒ．Ｍｏｌ  Ｍｅｄ）、２０１３年、第１３巻（５）、ｐ．７５７〜７６４；ビジガル  ＪＡ（Ｖｉｄｉｇａｌ  ＪＡ）及びベンチュラ  Ａ（Ｖｅｎｔｕｒａ  Ａ）、癌生物学セミナー（Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．）、２０１２年、第２２巻（５〜６）、ｐ．４２８〜４３６；ゴフ  ＬＡ（Ｇｏｆｆ  ＬＡ）ら著、プロス・ワン（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ）、２００９年、第４巻、ｐ．ｅ７１９２；モーリン  ＲＤ（Ｍｏｒｉｎ  ＲＤ）ら著、ゲノム研究（Ｇｅｎｏｍｅ
Ｒｅｓ）、２００８年、第１８巻、ｐ．６１０〜６２１；ヨー  ＪＫ（Ｙｏｏ  ＪＫ）ら著、幹細胞発生（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  Ｄｅｖ．）、２０１２年、第２１巻（１１）、ｐ．２０４９〜２０５７、これらの各々のｍｉＲＮＡは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。胚性幹細胞に豊富なマイクロＲＮＡとして、限定はしないが、ｌｅｔ−７ａ−２−３ｐ、ｌｅｔ−ａ−３ｐ、ｌｅｔ−７ａ−５ｐ、ｌｅｔ７ｄ−３ｐ、ｌｅｔ−７ｄ−５ｐ、ｍｉＲ−１０３ａ−２−３ｐ、ｍｉＲ−１０３ａ−５ｐ、ｍｉＲ−１０６ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−１０６ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−１２４６、ｍｉＲ−１２７５、ｍｉＲ−１３８−１−３ｐ、ｍｉＲ−１３８−２−３ｐ、ｍｉＲ−１３８−５ｐ、ｍｉＲ−１５４−３ｐ、ｍｉＲ−１５４−５ｐ、ｍｉＲ−２００ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−２００ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−２９０、ｍｉＲ−３０１ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３０１ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ａ−３ｐ、ｍｉＲ−３０２ａ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−３０２ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−３０２ｃ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ｄ−３ｐ、ｍｉＲ−３０２ｄ−５ｐ、ｍｉＲ−３０２ｅ、ｍｉＲ−３６７−３ｐ、ｍｉＲ−３６７−５ｐ、ｍｉＲ−３６９−３ｐ、ｍｉＲ−３６９−５ｐ、ｍｉＲ−３７０、ｍｉＲ−３７１、ｍｉＲ−３７３、ｍｉＲ−３８０−５ｐ、ｍｉＲ−４２３−３ｐ、ｍｉＲ−４２３−５ｐ、ｍｉＲ−４８６−５ｐ、ｍｉＲ−５２０ｃ−３ｐ、ｍｉＲ−５４８ｅ、ｍｉＲ−５４８ｆ、ｍｉＲ−５４８ｇ−３ｐ、ｍｉＲ−５４８ｇ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｉ、ｍｉＲ−５４８ｋ、ｍｉＲ−５４８ｌ、ｍｉＲ−５４８ｍ、ｍｉＲ−５４８ｎ、ｍｉＲ−５４８ｏ−３ｐ、ｍｉＲ−５４８ｏ−５ｐ、ｍｉＲ−５４８ｐ、ｍｉＲ−６６４ａ−３ｐ、ｍｉＲ−６６４ａ−５ｐ、ｍｉＲ−６６４ｂ−３ｐ、ｍｉＲ−６６４ｂ−５ｐ、ｍｉＲ−７６６−３ｐ、ｍｉＲ−７６６−５ｐ、ｍｉＲ−８８５−３ｐ、ｍｉＲ−８８５−５ｐ、ｍｉＲ−９３−３ｐ、ｍｉＲ−９３−５ｐ、ｍｉＲ−９４１、ｍｉＲ−９６−３ｐ、ｍｉＲ−９６−５ｐ、ｍｉＲ−９９ｂ−３ｐ、及びｍｉＲ−９９ｂ−５ｐが挙げられる。予測された多くの新規のマイクロＲＮＡが、ヒト胚性幹細胞における大規模シーケンシングによって発見されている（モーリン  ＲＤ（Ｍｏｒｉｎ  ＲＤ）ら著、ゲノム研究（Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ）、２００８年、第１８巻、ｐ．６１０〜６２１；ゴフ  ＬＡ（Ｇｏｆｆ  ＬＡ）ら著、プロス・ワン（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ）、２００９年、第４巻、ｐ．ｅ７１９２；バー  Ｍ（Ｂａｒ  Ｍ）ら著、幹細胞（Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ）、２００８年、第２６巻、ｐ．２４９６〜２５０５、これらの各々のｍｉＲＮＡは、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０５９２】
一実施形態では、胚性幹細胞特異的マイクロＲＮＡの結合部位をポリヌクレオチドの３−ＵＴＲに含有させるか、又はそこから除去することにより、胚性幹細胞の発生及び／若しくは分化の調節、変性状態にある幹細胞の老化（例えば、変性疾患）の阻害、又は疾患状態にある幹細胞（例えば、癌幹細胞）の老化及びアポトーシスの刺激を行うことができる。
【０５９３】
様々な癌細胞／組織及び他の疾患におけるマイクロＲＮＡの差次的な発現をプロファイルするために、当分野では多くのマイクロＲＮＡ発現研究が行われている。あるマイクロＲＮＡは、特定の癌細胞において異常に過剰発現し、他のマイクロＲＮＡは低発現する。例えば、マイクロＲＮＡは、癌細胞（国際公開第２００８／１５４０９８号、米国特許出願公開第２０１３／００５９０１５号、同第２０１３／００４２３３３号明細書、国際公開第２０１１／１５７２９４号）；癌幹細胞（米国特許出願公開第２０１２／００５３２２４号明細書）；膵臓癌及び疾患（米国特許出願公開第２００９／０１３１３４８号、同第２０１１／０１７１６４６号、同第２０１０／０２８６２３２号明細書、米国特許第８３８９２１０号明細書）；喘息及び炎症（米国特許第８４１５０９６号明細書）；前立腺癌（米国特許出願公開第２０１３／００５３２６４号明細書）；肝細胞癌（国際公開第２０１２／１５１２１２号、米国特許出願公開第２０１２／０３２９６７２号明細書、国際公開第２００８／０５４８２８号、米国特許第８２５２５３８号明細書）；肺癌細胞（国際公開第２０１１／０７６１４３号、同第２０１３／０３３６４０号、同第２００９／０７０６５３号、米国特許出願公開第２０１０／０３２３３５７号明細書）；皮膚Ｔ細胞リ
ンパ腫（国際公開第２０１３／０１１３７８号）；結腸直腸癌細胞（国際公開第２０１１／０２８１７５６号、同第２０１１／０７６１４２号）；癌陽性リンパ節（ｃａｎｃｅｒ
ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅｓ）（国際公開第２００９／１００４３０号、米国特許出願公開第２００９／０２６３８０３号明細書）；上咽頭癌（欧州特許第２１１２２３５号明細書）；慢性閉塞性肺疾患（米国特許出願公開第２０１２／０２６４６２６号、同第２０１３／００５３２６３号明細書）；甲状腺癌（国際公開第２０１３／０６６６７８号）；卵巣癌細胞（米国特許出願公開第２０１２／０３０９６４５号明細書、国際公開第２０１１／０９５６２３号）；乳癌細胞（国際公開第２００８／１５４０９８号、国際公開第２００７／０８１７４０号、米国特許出願公開第２０１２／０２１４６９９号明細書）、白血病及びリンパ腫（国際公開第２００８／０７３９１５号、米国特許出願公開第２００９／００９２９７４号、同第２０１２／０３１６０８１号、同第２０１２／０２８３３１０号明細書、国際公開第２０１０／０１８５６３号）において差次的に発現する（これらの各々のｍｉＲＮＡは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０５９４】
非限定的な例として、特定の癌及び／又は腫瘍細胞において過剰発現するマイクロＲＮＡ部位は、目的のポリペプチドをコードし、癌細胞における過剰発現マイクロＲＮＡによって抑制された発現を回復するポリヌクレオチドの３−ＵＴＲから除去することができるため、対応する生物学的機能、例えば、転写刺激及び／又は抑制、細胞周期停止、アポトーシス、並びに細胞死を改善することができる。マイクロＲＮＡ発現が上方制御されていない正常細胞及び組織は影響されないままとなる。
【０５９５】
マイクロＲＮＡはまた、血管新生などの複雑な生物学的プロセスを制御することができる（ｍｉＲ−１３２）（アナンド（Ａｎａｎｄ）及びチェレシュ（Ｃｈｅｒｅｓｈ）著、カレント・オピニオン・ヘマトロジー（Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ）、２０１１年、第１８巻、ｐ．１７１〜１７６）。本発明の修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸において、そのようなプロセスに関与するマイクロＲＮＡのための結合部位は、生物学的に関連する細胞型又は関連する生物学プロセスの状況に、修飾核酸の発現、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸発現を適合させるために、除去又は導入することができる。これに関連して、ｍＲＮＡは栄養要求性ｍＲＮＡとして定義される。
【０５９６】
マイクロＲＮＡ遺伝子調節は、限定はしないが、周辺配列の種、配列の型（例えば、異種、相同性、及び人工的）、周辺配列における調節因子、並びに／又は周辺配列における構造要素などの、マイクロＲＮＡ周辺の配列に影響され得る。マイクロＲＮＡは、５’ＵＴＲ及び／又は３’ＵＴＲに影響され得る。非限定的な例として、非ヒト３’ＵＴＲは、目的のポリペプチドの発現に対するマイクロＲＮＡ配列の調節作用を、同じ配列型のヒト３’ＵＴＲに比して増大させることができる。
【０５９７】
一実施形態では、５’−ＵＴＲの他の調節エレメント及び／又は構造エレメントが、マイクロＲＮＡ媒介遺伝子制御に影響を及ぼし得る。調節エレメント及び／又は構造エレメントの一例は、５’ＵＴＲにおける構造化ＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）であり、これは、翻訳を伸長因子の結合がタンパク質翻訳を開始するのに必要である。この５’ＵＴＲにおける二次構造化要素に結合するＥＩＦ４Ａ２は、マイクロＲＮＡ媒介遺伝子発現に必要である（メイジャー  ＨＡ（Ｍｅｉｊｅｒ  ＨＡ）ら著、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２０１３年、第３４０巻、ｐ．８２〜８５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。マイクロＲＮＡ媒介遺伝子調節を増強するために、この構造化５’−ＵＴＲを含むように、本発明の修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸をさらに修飾することができる。
【０５９８】
少なくとも１つのミクロＲＮＡ部位を本発明の修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の３’ＵＴＲに組み込むことができる。これに関連して、少なくとも２つ、少なく
とも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０又はそれ以上のミクロＲＮＡ部位を本発明のリボ核酸の３’ＵＴＲに組み込むことができる。一実施形態では、修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸に組み込まれたミクロＲＮＡ部位は、同じであってもよいし、又は異なるミクロＲＮＡ部位であってもよい。別の実施形態では、修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸に組み込まれたミクロＲＮＡ部位は、身体において同じ又は異なる組織をターゲティングし得る。非限定的例として、修飾核酸ｍＲＮＡの３’ＵＴＲへの組織、細胞型、又は疾患特異的ミクロＲＮＡ結合部位の導入により、特定の細胞型（例えば、肝細胞、骨髄性細胞、内皮細胞、癌細胞など）における発現の程度を低減することができる。
【０５９９】
一実施形態では、ミクロＲＮＡ部位は、操作により、３’ＵＴＲの５’末端付近、３’ＵＴＲの５’末端と３’末端のほぼ中間及び／又は３’ＵＴＲの３’末端付近に配置することができる。非限定的例として、ミクロＲＮＡ部位は、操作により、３’ＵＴＲの５’末端付近、及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端のほぼ中間に配置することができる。別の非限定的例として、ミクロＲＮＡ部位は、操作により、３’ＵＴＲの３’末端付近、及び３’ＵＴＲの５’末端と３’末端のほぼ中間に配置することができる。さらに別の非限定的例として、ミクロＲＮＡ部位は、操作により、３’ＵＴＲの５’末端付近、及び３’ＵＴＲの３’末端付近に配置することができる。
【０６００】
別の実施形態では、３’ＵＴＲは、４つのミクロＲＮＡ部位を含み得る。ミクロＲＮＡ部位は、完全なミクロＲＮＡ結合部位、ミクロＲＮＡシード配列及び／又はシード配列なしのミクロＲＮＡ結合部位配列であってよい。
【０６０１】
一実施形態では、本発明の核酸は、抗原提示細胞による抗原提示を弱めるために、少なくとも１つのミクロＲＮＡ部位を含むように操作してもよい。ミクロＲＮＡは、完全なミクロＲＮＡ配列、ミクロＲＮＡシード配列、シード配列なしのミクロＲＮＡ配列、又はこれらの組み合わせであってよい。非限定的例として、核酸に組み込まれるミクロＲＮＡは、造血系に特異的であり得る。別の非限定的例として、抗原提示を弱めるために本発明の核酸に組み込まれるミクロＲＮＡは、ｍｉＲ−１４２−３ｐである。
【０６０２】
一実施形態では、対象の様々な組織で発現されるミクロＲＮＡを含むように、核酸を操作してもよい。非限定的例として、本発明の修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸は、対象の肝臓及び腎臓における修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の発現を調節するために、ｍｉＲ−１９２及びｍｉＲ−１２２を含むように操作してもよい。別の実施形態では、修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸は、同じ細胞について２つ以上のミクロＲＮＡ部位を含むように操作してもよい。例えば、本発明の修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸は、対象の内皮細胞における修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の発現を調節するために、ｍｉＲ−１７−９２及びｍｉＲ−１２６を含むように操作してもよい。
【０６０３】
一実施形態では、本発明のシグナルをコードする修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸（本明細書では、ポリヌクレオチドとも呼ばれる）によりコードされる標的ポリペプチドに関連する治療濃度域及び又は差次的発現を改変してもよい。例えば、当該細胞のｍｉＲＮＡシグネチャーによって、癌細胞において細胞死シグナル（又は正常細胞では生存シグナル）がより高度に発現されるように、ポリヌクレオチドを設計することができる。癌細胞が、特定のｍｉＲＮＡをより低レベルで発現する場合、そのｍｉＲＮＡ（又は複数のｍｉＲＮＡ）の結合部位をコードするポリヌクレオチドをより高度に発現させる。従って、ポリヌクレオチドによりコードされる標的ポリペプチドは、細胞死をトリガー又は誘導するタンパク質として選択される。同じｍｉＲＮＡのよる高度の発現を有する隣接
の非癌細胞は、３’ＵＴＲにコードされた結合部位又は「センサー」とｍｉＲＮＡ結合の作用によって、ポリヌクレオチドが、より低レベルで発現されるため、コードされた細胞死シグナルによる影響は少なくなる。反対に、細胞生存又は細胞保護シグナルを癌細胞及び非癌細胞を含む組織に送達することもでき、そこで、ｍｉＲＮＡは、癌細胞においてより高度の発現を有し、その結果、癌細胞には生存シグナルがより低く、且つ、正常細胞には生存シグネチャーがより大きくなる。従来のパラダイムに従う様々なシグナルを有する複数のポリヌクレオチドを設計し、投与してもよい。
【０６０４】
一実施形態では、少なくとも１つのセンサー配列を核酸に組み込み、核酸を製剤化することにより、核酸の発現を制御することができる。非限定的例として、核酸にｍｉＲ−１２２結合部位を組み込み、カチオン性脂質ＤＬｉｎ−ＫＣ２−ＤＭＡを含む脂質ナノ粒子に製剤化することにより、核酸を正位腫瘍にターゲティングすることができる。
【０６０５】
本発明によれば、当分野の他のポリペプチドコード分子の欠損を回避するように、ポリヌクレオチドを修飾してもよい。従って、この実施形態では、ポリヌクレオチドを修飾ポリヌクレオチドと呼ぶ。
【０６０６】
様々な細胞型におけるミクロＲＮＡの発現パターンの理解によって、修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸（ポリヌクレオチドなど）は、特定の細胞型において、又は特定の生物学的条件下で、より標的化された発現のために操作することができる。組織特異的ミクロＲＮＡ結合部位の導入により、ある組織において、又はある生物学的条件下で、タンパク質発現のために最適となる修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸を設計することができる。
【０６０７】
操作した修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸を用いて、トランスフェクション実験を適切な細胞株で実施することができ、また、トランスフェクション後の様々な時点でタンパク質産生をアッセイすることができる。例えば、異なるミクロＲＮＡ結合部位−操作核酸又はｍＲＮＡで細胞をトランスフェクトし、関連タンパク質に対するＥＬＩＳＡキットを用いて、トランスフェクションから６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間及び７日後に産生されたタンパク質をアッセイすることができる。また、製剤化した修飾核酸、増強された修飾ＲＮＡ又はリボ核酸の組織特異的発現の変化を調べるために、ミクロＲＮＡ結合部位操作分子を用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏ実験を実施することもできる。
【０６０８】
これらの検査に有用となり得る細胞株の非限定的例として、ＡＴＣＣ（バージニア州マナサス（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ））からのものが挙げられ、これは、以下を含む：ＭＲＣ−５、Ａ５４９、Ｔ８４、ＮＣＩ−Ｈ２１２６［Ｈ２１２６］、ＮＣＩ−Ｈ１６８８［Ｈ１６８８］、ＷＩ−３８、ＷＩ−３８  ＶＡ−１３亜系２ＲＡ、ＷＩ−２６  ＶＡ４、Ｃ３Ａ［ＨｅｐＧ２／Ｃ３Ａ、Ｈｅｐ  Ｇ２の誘導体（ＡＴＣＣ  ＨＢ−８０６５）］、ＴＨＬＥ−３、Ｈ６９ＡＲ、ＮＣＩ−Ｈ２９２［Ｈ２９２］、ＣＦＰＡＣ−１、ＮＴＥＲＡ−２  ｃｌ．Ｄ１［ＮＴ２／Ｄ１］、ＤＭＳ  ７９、ＤＭＳ  ５３、ＤＭＳ  １５３、ＤＭＳ  １１４、ＭＳＴＯ−２１１Ｈ、ＳＷ  １５７３［ＳＷ−１５７３，ＳＷ１５７３］、ＳＷ  １２７１［ＳＷ−１２７１、ＳＷ１２７１］、ＳＨＰ−７７、ＳＮＵ−３９８、ＳＮＵ−４４９、ＳＮＵ−１８２、ＳＮＵ−４７５、ＳＮＵ−３８７、ＳＮＵ−４２３、ＮＬ２０、ＮＬ２０−ＴＡ［ＮＬ２０Ｔ−Ａ］、ＴＨＬＥ−２、ＨＢＥ１３５−Ｅ６Ｅ７、ＨＣＣ８２７、ＨＣＣ４００６、ＮＣＩ−Ｈ２３［Ｈ２３］、ＮＣＩ−Ｈ１２９９、ＮＣＩ−Ｈ１８７［Ｈ１８７］、ＮＣＩ−Ｈ３５８［Ｈ−３５８，Ｈ３５８］、ＮＣＩ−Ｈ３７８［Ｈ３７８］、ＮＣＩ−Ｈ５２２［Ｈ５２２］、ＮＣＩ−Ｈ５２６［Ｈ５２６］、ＮＣＩ−Ｈ７２７［Ｈ７２７］、ＮＣＩ−Ｈ８１０［Ｈ８１０］、ＮＣＩ−Ｈ８８９［Ｈ８８９］、ＮＣＩ−Ｈ１１５５［Ｈ１１５５］、ＮＣＩ−Ｈ１４０４［Ｈ１４０４］、
ＮＣＩ−Ｎ８７［Ｎ８７］、ＮＣＩ−Ｈ１９６［Ｈ１９６］、ＮＣＩ−Ｈ２１１［Ｈ２１１］、ＮＣＩ−Ｈ２２０［Ｈ２２０］、ＮＣＩ−Ｈ２５０［Ｈ２５０］、ＮＣＩ−Ｈ５２４［Ｈ５２４］、ＮＣＩ−Ｈ６４７［Ｈ６４７］、ＮＣＩ−Ｈ６５０［Ｈ６５０］、ＮＣＩ−Ｈ７１１［Ｈ７１１］、ＮＣＩ−Ｈ７１９［Ｈ７１９］、ＮＣＩ−Ｈ７４０［Ｈ７４０］、ＮＣＩ−Ｈ７４８［Ｈ７４８］、ＮＣＩ−Ｈ７７４［Ｈ７７４］、ＮＣＩ−Ｈ８３８［Ｈ８３８］，ＮＣＩ−Ｈ８４１［Ｈ８４１］、ＮＣＩ−Ｈ８４７［Ｈ８４７］、ＮＣＩ−Ｈ８６５［Ｈ８６５］、ＮＣＩ−Ｈ９２０［Ｈ９２０］、ＮＣＩ−Ｈ１０４８［Ｈ１０４８］、ＮＣＩ−Ｈ１０９２［Ｈ１０９２］、ＮＣＩ−Ｈ１１０５［Ｈ１１０５］、ＮＣＩ−Ｈ１１８４［Ｈ１１８４］、ＮＣＩ−Ｈ１２３８［Ｈ１２３８］、ＮＣＩ−Ｈ１３４１［Ｈ１３４１］、ＮＣＩ−Ｈ１３８５［Ｈ１３８５］、ＮＣＩ−Ｈ１４１７［Ｈ１４１７］，ＮＣＩ−Ｈ１４３５［Ｈ１４３５］、ＮＣＩ−Ｈ１４３６［Ｈ１４３６］、ＮＣＩ−Ｈ１４３７［Ｈ１４３７］、ＮＣＩ−Ｈ１５２２［Ｈ１５２２］、ＮＣＩ−Ｈ１５６３［Ｈ１５６３］、ＮＣＩ−Ｈ１５６８［Ｈ１５６８］、ＮＣＩ−Ｈ１５７３［Ｈ１５７３］、ＮＣＩ−Ｈ１５８１［Ｈ１５８１］、ＮＣＩ−Ｈ１６１８［Ｈ１６１８］、ＮＣＩ−Ｈ１６２３［Ｈ１６２３］、ＮＣＩ−Ｈ１６５０［Ｈ−１６５０，Ｈ１６５０］、ＮＣＩ−Ｈ１６５１［Ｈ１６５１］、ＮＣＩ−Ｈ１６６６［Ｈ−１６６６，Ｈ１６６６］、ＮＣＩ−Ｈ１６７２［Ｈ１６７２］、ＮＣＩ−Ｈ１６９３［Ｈ１６９３］、ＮＣＩ−Ｈ１６９４［Ｈ１６９４］、ＮＣＩ−Ｈ１７０３［Ｈ１７０３］、ＮＣＩ−Ｈ１７３４［Ｈ−１７３４，Ｈ１７３４］、ＮＣＩ−Ｈ１７５５［Ｈ１７５５］、ＮＣＩ−Ｈ１７５５［Ｈ１７５５］、ＮＣＩ−Ｈ１７７０［Ｈ１７７０］、ＮＣＩ−Ｈ１７９３［Ｈ１７９３］、ＮＣＩ−Ｈ１８３６［Ｈ１８３６］、ＮＣＩ−Ｈ１８３８［Ｈ１８３８］、ＮＣＩ−Ｈ１８６９［Ｈ１８６９］、ＮＣＩ−Ｈ１８７６［Ｈ１８７６］、ＮＣＩ−Ｈ１８８２［Ｈ１８８２］、ＮＣＩ−Ｈ１９１５［Ｈ１９１５］、ＮＣＩ−Ｈ１９３０［Ｈ１９３０］、ＮＣＩ−Ｈ１９４４［Ｈ１９４４］、ＮＣＩ−Ｈ１９７５［Ｈ−１９７５，Ｈ１９７５］、ＮＣＩ−Ｈ１９９３［Ｈ１９９３］、ＮＣＩ−Ｈ２０２３［Ｈ２０２３］、ＮＣＩ−Ｈ２０２９［Ｈ２０２９］、ＮＣＩ−Ｈ２０３０［Ｈ２０３０］、ＮＣＩ−Ｈ２０６６［Ｈ２０６６］、ＮＣＩ−Ｈ２０７３［Ｈ２０７３］、ＮＣＩ−Ｈ２０８１［Ｈ２０８１］、ＮＣＩ−Ｈ２０８５［Ｈ２０８５］、ＮＣＩ−Ｈ２０８７［Ｈ２０８７］、ＮＣＩ−Ｈ２１０６［Ｈ２１０６］、ＮＣＩ−Ｈ２１１０［Ｈ２１１０］、ＮＣＩ−Ｈ２１３５［Ｈ２１３５］，ＮＣＩ−Ｈ２１４１［Ｈ２１４１］、ＮＣＩ−Ｈ２１７１［Ｈ２１７１］、ＮＣＩ−Ｈ２１７２［Ｈ２１７２］、ＮＣＩ−Ｈ２１９５［Ｈ２１９５］、ＮＣＩ−Ｈ２１９６［Ｈ２１９６］、ＮＣＩ−Ｈ２１９８［Ｈ２１９８］、ＮＣＩ−Ｈ２２２７［Ｈ２２２７］、ＮＣＩ−Ｈ２２２８［Ｈ２２２８］、ＮＣＩ−Ｈ２２８６［Ｈ２２８６］、ＮＣＩ−Ｈ２２９１［Ｈ２２９１］、ＮＣＩ−Ｈ２３３０［Ｈ２３３０］、ＮＣＩ−Ｈ２３４２［Ｈ２３４２］、ＮＣＩ−Ｈ２３４７［Ｈ２３４７］、ＮＣＩ−Ｈ２４０５［Ｈ２４０５］、ＮＣＩ−Ｈ２４４４［Ｈ２４４４］、ＵＭＣ−１１，ＮＣＩ−Ｈ６４［Ｈ６４］、ＮＣＩ−Ｈ７３５［Ｈ７３５］、ＮＣＩ−Ｈ７３５［Ｈ７３５］、ＮＣＩ−Ｈ１９６３［Ｈ１９６３］、ＮＣＩ−Ｈ２１０７［Ｈ２１０７］、ＮＣＩ−Ｈ２１０８［Ｈ２１０８］、ＮＣＩ−Ｈ２１２２［Ｈ２１２２］、Ｈｓ  ５７３．Ｔ、Ｈｓ  ５７３．Ｌｕ、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５、ＢＥＡＳ−２Ｂ、Ｈｅｐ  Ｇ２、Ｔｅｒａ−１、Ｔｅｒａ−２、ＮＣＩ−Ｈ６９［Ｈ６９］、ＮＣＩ−Ｈ１２８［Ｈ１２８］、ＣｈａＧｏ−Ｋ−１、ＮＣＩ−Ｈ４４６［Ｈ４４６］、ＮＣＩ−Ｈ２０９［Ｈ２０９］、ＮＣＩ−Ｈ１４６［Ｈ１４６］、ＮＣＩ−Ｈ４４１［Ｈ４４１］、ＮＣＩ−Ｈ８２［Ｈ８２］、ＮＣＩ−Ｈ４６０［Ｈ４６０］、ＮＣＩ−Ｈ５９６［Ｈ５９６］、ＮＣＩ−Ｈ６７６Ｂ［Ｈ６７６Ｂ］、ＮＣＩ−Ｈ３４５［Ｈ３４５］、ＮＣＩ−Ｈ８２０［Ｈ８２０］、ＮＣＩ−Ｈ５２０［Ｈ５２０］、  ＮＣＩ−Ｈ６６１［Ｈ６６１］、ＮＣＩ−Ｈ５１０Ａ［Ｈ５１０Ａ，ＮＣＩ−Ｈ５１０］、ＳＫ−ＨＥＰ−１、Ａ−４２７、Ｃａｌｕ−１、Ｃａｌｕ−３、Ｃａｌｕ−６、ＳＫ−ＬＵ−１、ＳＫ−ＭＥＳ−１、ＳＷ  ９００［ＳＷ−９００、ＳＷ９００］、Ｍａｌｍｅ−３Ｍ、及びＣａｐａｎ−１。
【０６０９】
一部の実施形態では、修飾されたメッセンジャーＲＮＡは、既知シード配列と１００％同一性を有するか、又はシード配列と１００％未満の同一性を有するミクロＲＮＡ結合領域部位を組み込むように設計することができる。シード配列は、ミクロＲＮＡ結合親和性を低減し、従って、ｍＲＮＡ転写物の下方制御の低減をもたらすように、部分的に突然変異させることができる。本質的に、標的ｍＲＮＡとミクロＲＮＡシードとのマッチ又はミスマッチの度合いは、タンパク質発現を調節するミクロＲＮＡの能力をさらに細かく調整するレオスタットとして作用することができる。さらに、ミクロＲＮＡ結合部位の非シード領域における突然変異も、ミクロＲＮＡがタンパク質発現を調節する能力に影響を及ぼし得る。
【０６１０】
一実施形態では、ステムループのループにｍｉＲ配列を組み込んでもよい。
別の実施形態では、ステムループのループにｍｉＲシード配列を組み込んでもよく、また、ステムループの５’又は３’ステムにｍｉＲ結合部位を組み込んでもよい。
【０６１１】
一実施形態では、ステムループのステムの５’末端にＴＥＥを組み込んでもよく、また、ステムループのステムにｍｉＲシードを組み込んでもよい。別の実施形態では、ステムループのステムの５’末端にＴＥＥを組み込んでもよく、ステムループのステムにｍｉＲシードを組み込んでもよく、また、ステムの３’末端又はステムループ後の配列にｍｉＲ結合部位を組み込んでもよい。ｍｉＲシード及びｍｉＲ結合部位は、同じ及び／又は異なるｍｉＲ配列を対象とするものであってよい。
【０６１２】
一実施形態では、ｍｉＲ配列及び／又はＴＥＥ配列の組み込みは、ステムループ領域の形状を変化させ、これによって翻訳が増大及び／又は低減し得る。（例えば、ケデ（Ｋｅｄｄｅ）ら著、「ｐ２７−３’ＵＴＲにおけるプミリオ誘導ＲＮＡ構造スイッチは、ｍｉＲ−２２１及びｍｉＲ−２２接近性を制御する（Ａ  Ｐｕｍｉｌｉｏ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＲＮＡ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｓｗｉｔｃｈ  ｉｎ  ｐ２７−３’ＵＴＲ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｍｉＲ−２２１  ａｎｄ  ｍｉＲ−２２  ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）」、ネイチャー・セル・バイオロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、２０１０年を参照のこと；その配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０６１３】
一実施形態では、ｍｉＲ配列及び／又はＴＥＥ配列の組み込みは、ステムループ領域の形状を変化させ、これによって翻訳が増大及び／又は低減し得る。（例えば、ケデ（Ｋｅｄｄｅ）ら著、「ｐ２７−３’ＵＴＲにおけるプミリオ誘導ＲＮＡ構造スイッチは、ｍｉＲ−２２１及びｍｉＲ−２２接近性を制御する（Ａ  Ｐｕｍｉｌｉｏ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ＲＮＡ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｓｗｉｔｃｈ  ｉｎ  ｐ２７−３’ＵＴＲ  ｃｏｎｔｒｏｌｓ  ｍｉＲ−２２１  ａｎｄ  ｍｉＲ−２２  ａｃｃｅｓｓｉｂｉｌｉｔｙ）」、ネイチャー・セル・バイオロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、２０１０年を参照のこと；その配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０６１４】
一実施形態では、５’ＵＴＲは、少なくとも１つのミクロＲＮＡ配列を含み得る。ミクロＲＮＡ配列は、限定はしないが、１９又は２２ヌクレオチド配列及び／又はシードなしのミクロＲＮＡ配列であってもよい。
【０６１５】
一実施形態では、５’ＵＴＲにおけるミクロＲＮＡ配列を用いて、本明細書に記載する核酸及び／又はｍＲＮＡを安定化することができる。
別の実施形態では、５’ＵＴＲにおけるミクロＲＮＡ配列を用いて、限定はしないが、開始コドンなどの翻訳開始部位の接近性を低減することもできる。マツダ（Ｍａｔｓｕｄａ）ら（プロス・ワン（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ）、２０１０年、第１１巻（５）、ｐ．ｅ１５０５７；その配列は、参照により本明細書に組み込まれる）は、第１コドン（ＡＵＧ）に対する接近性を低減するために、アンチセンスロックド核酸（ＬＮＡ）オリゴヌクレオチ
ドと、開始コドン（−４〜＋３７（ＡＵＧコドンのＡは＋１である））周辺のエキソン接合部複合体（ＥＪＣ）を使用した。マツダ（Ｍａｔｓｕｄａ）は、ＬＮＡ又はＥＪＣで開始コドン周辺の配列を改変することにより、核酸又はｍＲＮＡの効率、長さ及び構造安定性が影響されることを明らかにした。本発明の核酸又はｍＲＮＡは、翻訳開始部位への接近性を低減するために、翻訳開始部位付近に、マツダ（Ｍａｔｓｕｄａ）らが記載したＬＮＡ又はＥＪＣではなく、ミクロＲＮＡ配列を含み得る。翻訳開始部位は、ミクロＲＮＡ配列の前後又はその配列内のいずれであってもよい。非限定的例として、翻訳開始部位は、シード配列又は結合配列などのミクロＲＮＡ配列内に配置してもよい。別の非限定的例として、翻訳開始部位は、シード配列又はｍｉｒ−１２２結合部位などのｍｉＲ−１２２配列内に配置してもよい。
【０６１６】
一実施形態では、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、抗原提示細胞による抗原提示を弱めるために、少なくとも１つのミクロＲＮＡを含むように操作してもよい。ミクロＲＮＡは、完全なミクロＲＮＡ配列、ミクロＲＮＡシード配列、シード配列なしのミクロＲＮＡ配列、又はこれらの組み合わせであってよい。非限定的例として、本発明の核酸又はｍＲＮＡに組み込まれるミクロＲＮＡは、造血系に特異的であってよい。別の非限定的例として、抗原提示を弱めるために本発明の核酸又はｍＲＮＡに組み込まれるミクロＲＮＡは、ｍｉＲ−１４２−３ｐである。
【０６１７】
一実施形態では、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、目的の細胞におけるコード化ポリペプチドの発現を弱めるために、少なくとも１つのミクロＲＮＡを含有してもよい。非限定的例として、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、肝臓における目的のコード化ポリペプチドの発現を弱めるために、少なくとも１つのｍｉＲ−１２２を含有してよい。別の非限定的例として、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、少なくとも１つのｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４２−３ｐシード配列、シードなしのｍｉＲ−１４２−３ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４２−５ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４２−５ｐシード配列、シードなしのｍｉＲ−１４２−５ｐ結合部位、ｍｉＲ−１４６結合部位、ｍｉＲ−１４６シード配列、及び／又はシード配列なしのｍｉＲ−１４６結合部位を含有してもよい。
【０６１８】
一実施形態では、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、免疫細胞中のｍＲＮＡ治療薬を選択的に分解して、治療薬送達によって引き起こされる不要な免疫原性反応を抑制するために、３’ＵＴＲに少なくとも１つのミクロＲＮＡ結合部位を含んでもよい。非限定的例として、ミクロＲＮＡ結合部位は、抗原提示細胞においてより不安定な修飾核酸であってもよい。これらのミクロＲＮＡの非限定的例として、ｍｉｒ−１４２−５ｐ、ｍｉｒ−１４２−３ｐ、ｍｉｒ−１４６ａ−５ｐ、及びｍｉｒ−１４６−３ｐが挙げられる。
【０６１９】
一実施形態では、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、ＲＮＡ結合タンパク質と相互作用し得る核酸又はｍＲＮＡの領域に少なくとも１つのミクロＲＮＡ配列を含む。
ＲＮＡ結合タンパク質（ＲＢＰ）のためのＲＮＡモチーフ
ＲＮＡ結合タンパク質（ＲＢＰ）は、例えば、限定はしないが、ＲＮＡスプライシング、局在化、翻訳、ターンオーバ、ポリアデニル化、キャッピング、修飾、輸出及び局在化などの同時転写及び転写後遺伝子発現の多くの様態を調節することができる。限定はしないが、ＲＮＡ認識モチーフ（ＲＲ）及びｈｎＲＮＰＫ−相同性（ＫＨ）ドメインなどのＲＮＡ結合ドメイン（ＲＢＤ）は、典型的に、ＲＢＰとそれらのＲＮＡ標的同士の配列結合を調節する（レイ（Ｒａｙ）ら、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１３年、第４９９巻、ｐ．１７２〜１７７；その配列は、参照により本明細書に組み込まれる）。一実施形態では、標準ＲＢＤは、短いＲＮＡ配列に結合し得る。別の実施形態では、標準ＲＢＤは、構造ＲＮＡを認識することができる。
【０６２０】
一実施形態では、目的のｍＲＮＡの安定性を高めるために、ＨｕＲをコードするｍＲＮ
Ａを目的のｍＲＮＡと一緒に、細胞又は組織に同時トランスフェクト又は同時注入することができる。また、これらのタンパク質は、目的のｍＲＮＡにｉｎ  ｖｉｔｒｏでテザリングした後、一緒に細胞に投与することもできる。ポリＡ尾部結合タンパク質、ＰＡＢＰは、真核翻訳開始因子ｅＩＦ４Ｇと相互作用して、翻訳開始を刺激する。これらのＲＢＰをコードするｍＲＮＡをｍＲＮＡ薬剤と一緒に同時投与する、及び／又はこれらのタンパク質をｍＲＮＡ薬剤にｉｎ  ｖｉｔｒｏでテザリングした後、タンパク質結合ｍＲＮＡを細胞に投与することにより、ｍＲＮＡの翻訳効率を高めることができる。同じコンセプトは、多種の翻訳因子及び促進因子をコードするｍＲＮＡ、並びにＲＮＡ安定性及び／又は翻訳効率に影響を与えるタンパク質自体とのｍＲＮＡの同時投与にも拡大することができる。
【０６２１】
一実施形態では、核酸及び／又はｍＲＮＡは、限定はしないが、ＲＮＡ結合ドメイン（ＲＢＤ）などの少なくとも１つのＲＮＡ結合モチーフを含んでもよい。
一実施形態では、ＲＢＤは、レイ（Ｒａｙ）ら（ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１３年、第４９９巻、ｐ．１７２〜１７７；そのＲＢＤは、参照により本明細書に組み込まれる）により記載されるＲＢＤ、その断片又は変異体のいずれであってもよい。
【０６２２】
一実施形態では、本発明の核酸又はｍＲＮＡは、少なくとも１つのＲＮＡ結合ドメイン（ＲＢＤ）のための配列を含んでもよい。本発明の核酸又はｍＲＮＡが、２つ以上のＲＢＤを含むとき、ＲＢＤは、同じ種、又は同じ構造クラス由来である必要はない。
【０６２３】
一実施形態では、少なくとも１つのフランキング領域（例えば、５’ＵＴＲ及び／又は３’ＵＴＲ）は、少なくとも１つのＲＢＤを含んでよい。別の実施形態では、第１フランキング領域及び第２フランキング領域の両方が、少なくとも１つのＲＢＤを含んでもよい。ＲＢＤは、同じであってもよいし、又はＲＢＤの各々が、他のＲＢＤに対して少なくとも６０％の配列同一性を有してもよい。非限定的例として、少なくとも１つのＲＢＤは、本発明の核酸又はｍＲＮＡの３’ＵＴＲの前後及び／又は３’ＵＴＲ内のいずれに配置してもよい。別の非限定的例として、少なくとも１つのＲＢＤは、３’ＵＴＲの最初の３００ヌクレオシドの前又はこのヌクレオシド内に配置してもよい。
【０６２４】
別の実施形態では、本発明の核酸及び／又はｍＲＮＡは、連結したヌクレオシドの最初の領域に少なくとも１つのＲＢＤを含んでもよい。ＲＢＤは、コード領域（例えば、ＯＲＦ）の前後及び／又はその領域内に配置してもよい。
【０６２５】
また別の実施形態では、連結したヌクレオシドの最初の領域及び／又は少なくとも１つのフランキング領域は、少なくとも１つのＲＢＤを含んでよい。非限定的例として、連結したヌクレオシドの最初の領域は、スプライシング因子に関連するＲＢＤを含んでもよく、また、少なくとも１つのフランキング領域は、安定性及び／又は翻訳因子に関するＲＢＤを含んでもよい。
【０６２６】
一実施形態では、本発明の核酸及び／又はｍＲＮＡは、核酸又はｍＲＮＡのコード及び／又は非コード領域に位置する少なくとも１つのＲＢＤを含んでもよい。
一実施形態では、本発明の核酸及び／又はｍＲＮＡの安定性を高めるために、少なくとも１つのＲＢＤを少なくとも１つのフランキング領域に組み込んでもよい。
【０６２７】
一実施形態では、限定はしないが、開始コドンなどの翻訳開始部位の接近性を低減するために、ＲＮＡ結合タンパク質モチーフにおけるミクロＲＮＡ配列を用いてもよい。本発明の核酸又はｍＲＮＡは、翻訳開始部位への接近性を低減するために、翻訳開始部位付近に、マツダ（Ｍａｔｓｕｄａ）らが記載したＬＮＡ又はＥＪＣではなく、ミクロＲＮＡ配列を含み得る。翻訳開始部位は、ミクロＲＮＡ配列の前後でも又はこの配列内であっても
よい。非限定的例として、翻訳開始部位は、シード配列又は結合配列などのミクロＲＮＡ配列内に配置してもよい。別の非限定的例として、翻訳開始部位は、シード配列又はｍｉｒ−１２２結合部位などのｍｉＲ−１２２配列内に配置してもよい。
【０６２８】
別の実施形態では、アンチセンスロックド核酸（ＬＮＡ）オリゴヌクレオチド及びエキソン接合部複合体（ＥＪＣ）をＲＮＡ結合タンパク質モチーフに使用してもよい。ＬＮＡ及びＥＪＣは、第１開始コドン（ＡＵＧ）に対する接近性を低減するために、開始コドンの周辺（−４〜＋３７（ＡＵＧコドンのＡは＋１である））で使用することができる。
【０６２９】
コドン最適化
本発明のポリヌクレオチド、その領域若しくは部分又はサブ領域は、コドン最適化してもよい。コドン最適化方法は、当分野では公知であり、いくつかの目標の１つ又は複数を達成する試みにおいて有用となり得る。これらの目標として、以下のものが挙げられる：標的生物及び宿主生物におけるコドン使用頻度を一致させて、適正なフォールディングを確実にし、ＧＣ含量を偏らせて、ｍＲＮＡ安定性を高める、又は二次構造を減少させ、遺伝子構築若しくは発現を損傷しうるタンデム反復コドン又は塩基ランを最小限にし、転写及び翻訳制御領域をカスタマイズし、タンパク質輸送（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）配列を挿入又は除去し、コード化タンパク質における翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を除去／付加し、タンパク質ドメインを付加、除去又はシャッフルし、制限部位を挿入又は欠失させ、リボソーム結合部位及びｍＲＮＡ分解部位を修飾すること、タンパク質の様々なドメインが適正にフォールディングできるように翻訳速度を調節すること、あるいは、ポリヌクレオチド内で問題の二次構造を減少又は排除すること。コドン最適化、アルゴリズム及びサービスは、当分野では公知であり、非限定的例として、ジーンアート（ＧｅｎｅＡｒｔ）（ライフ・テクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））、ＤＮＡ２．０（カリフォルニア州メンローパーク（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ））からのサービス及び／又は専有の方法が挙げられる。一実施形態では、最適化アルゴリズムを用いて、ＯＲＦ配列を最適化する。各アミノ酸についてのコドンオプションを表８に記載する。
【０６３０】
【表８】
2017500034.tif 000177
「コドン最適化」は、開始ヌクレオチド配列の少なくとも１つのコドンを、宿主生物の豊富なポリペプチドの集団において、より頻繁に使用されるコドンで置換することによる、開始ヌクレオチド配列の修飾を指す。表９は、ヒトについてのコドン使用頻度を含む（コドン使用頻度データベース：［［ｗｗｗ．］］ｋａｚｕｓａ．ｏｒ．ｊｐ／ｃｏｄｏｎ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｓｈｏｗｃｏｄｏｎ．ｃｇｉ？ｓｐｅｃｉｅｓ＝９６０６＆ａａ＝１＆ｓｔｙｌｅ＝Ｎ）。
【０６３１】
豊富なタンパク質の集団について決定される、それぞれのアミノ酸についてより頻繁に、又は最も頻繁に使用されるコドンを含む開始ヌクレオチド配列の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０、又は少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも４％、少なくとも６％、少なくとも８％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも６０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％のコドン、又は全コドンの置換により、ポリペプチドの発現を増大するために、コドン最適化を用いることができる。
【０６３２】
一実施形態では、修飾ヌクレオチド配列は、各アミノ酸について、それぞれの宿主細胞の豊富タンパク質の最も頻繁に使用されるコドンを含有する。
【０６３３】
【表９】
2017500034.tif 000178
一実施形態では、ヌクレオチド配列をコドン最適化した後、これを、制限部位を含む領域についてさらに評価してもよい。配列から制限部位を除去するために、制限部位領域内の少なくとも１つのヌクレオチドを別のヌクレオチドで置換してもよいが、ヌクレオチドの置換によって、コドン最適化ヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列は改変されることになる。
【０６３４】
本発明の一部の実施形態において有益と考えられ得る特徴は、ポリペプチドの領域によりコードしてもよく、こうした領域は、ポリペプチドをコードする領域の上流（５’）又は下流（３’）のいずれであってもよい。これらの領域は、タンパク質コード領域又はオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）のコドン最適化前及び／又は後に、ポリヌクレオチドに組み込んでもよい。ポリヌクレオチドが、５’及び３’フランキング領域の両方を含有する必要はない。こうした特徴の例として、限定はしないが、非翻訳領域（ＵＴＲ）、コザック配列、オリゴ（ｄＴ）配列、及び検出可能タグが挙げられ、ＸｂａＩ認識を有し得る複数のクローニング部位を含んでもよい。
【０６３５】
一部の実施形態では、５’ＵＴＲ及び／又は３’ＵＴＲ領域は、フランキング領域として提供してもよい。複数の５’又は３’ＵＴＲをフランキング領域に含有させてもよく、これらは、同じ配列でも、又は異なる配列から成るものでもよい。フランキング領域の任意の部分（皆無を含む）は、コドン最適化してもよく、独立に、コドン最適化前及び／又は後に、１つ又は複数の異なる構造的若しくは化学修飾を含有してもよい。
【０６３６】
最適化（所望であれば）後に、ポリヌクレオチド成分を再構成して、限定はしないが、プラスミド、ウイルス、コスミド、及び人工染色体などのベクターに形質転換する。例えば、本明細書に記載する方法により、最適化ポリヌクレオチドを再構成して、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母、ニューロスポラ（ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、トウモロコシ、ショウジョウバエ（ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）などに形質転換すると、そこに多コピープラスミド様又は染色体構造が形成する。
【０６３７】
修飾核酸の使用
治療薬
本明細書に記載する修飾核酸は、治療薬として用いることができる。例えば、本明細書に記載する修飾核酸を動物又は対象に投与することができ、そこで、修飾核酸は、ｉｎ  ｖｉｖｏで翻訳されて、動物又は対象において治療ペプチドを産生する。従って、本明細書において、ヒト及び他の哺乳動物における疾患若しくは状態の治療又は予防のための組成物、方法、キット、及び試薬が提供される。本開示の活性治療薬として、修飾核酸、修飾核酸又は修飾核酸から翻訳されたポリペプチドを含有する細胞、修飾核酸から翻訳されたポリペプチド、修飾核酸又は修飾核酸から翻訳されたポリペプチドを含有する細胞と接触させた細胞、修飾核酸含有細胞を含む組織、並びに修飾核酸含有細胞を含む組織を含有する臓器が挙げられる。
【０６３８】
本明細書に記載する修飾核酸を用いて、細胞集団にポリペプチドを産生成するように、合成又は組換えポリヌクレオチドの翻訳を誘導する方法が提供される。このような翻訳は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、培養下、又はｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれでも可能である。少なくとも１つのヌクレオシド修飾を有する核酸と、ポリペプチドをコードする翻訳可能領域とを含有する有効量の組成物と、細胞集団を接触させる。上記集団は、核酸が、細胞集団の１つ又は複数の細胞に局在化して、組換えポリペプチドが核酸から細胞に翻訳されるような条件下で接触させる。
【０６３９】
組成物の有効量は、少なくとも部分的に、標的組織、標的細胞型、投与手段、核酸の物理学的特性（例えば、修飾核酸のサイズ及び程度）、及びその他の決定因子に基づいて提供される。概して、組成物の有効量は、細胞中の効率的なタンパク質産生、好ましくは対応する非修飾核酸を含有する組成物より効率的な産生をもたらす。効率増加は、細胞トランスフェクションの増大（すなわち、核酸で形質転換した細胞のパーセンテージ）、核酸からのタンパク質翻訳の増大、核酸分解の低減（例えば、修飾核酸からのタンパク質翻訳の延長により示される）、あるいは、宿主細胞の自然免疫応答の低減又は治療有用性の改善によって証明され得る。
【０６４０】
本開示の態様は、それを必要とする哺乳動物対象において組換えポリペプチドのｉｎ  ｖｉｖｏ翻訳を誘導する方法に関する。この方法では、少なくとも１つのヌクレオシド修飾を有する核酸と、ポリペプチドをコードする翻訳可能領域とを含有する有効量の組成物を、本明細書に記載する送達方法を用いて、対象に投与する。核酸が、対象の１つ又は複数の細胞に局在化して、組換えポリペプチドが核酸から細胞に翻訳されるような量並びにそれ以外の条件下で、核酸を提供する。核酸が局在化する細胞、又は細胞が存在する組織は、核酸投与の１回又は複数回ラウンドによりターゲティングすることができる。
【０６４１】
本開示の他の態様は、修飾核酸を含有する細胞の哺乳動物対象への移植に関する。哺乳動物対象への細胞の移植は、当業者には周知であり、例えば、局所移植（例えば、局所若しくは皮下投与）、臓器送達若しくは全身注射（例えば、静脈内注射若しくは吸入）、並びに薬学的に許容される担体を用いた細胞の製剤化などが挙げられる。修飾核酸を含有する組成物は、筋内、動脈内、腹腔内、静脈内、鼻内、皮下、内視鏡により、経皮、又は髄腔内投与のために製剤化される。一部の実施形態では、組成物は、徐放のために製剤化される。
【０６４２】
治療薬を投与する対象は、疾患、障害、又は有害な状態に罹患しているか、それらを発生するリスクがある。これらの基準に基づいて対象を認定、診断、及び分類する方法が提供され、こうした方法として、臨床診断、バイオマーカレベル、ゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）、及び当分野では公知の他の方法が挙げられる。
【０６４３】
いくつかの実施形態では、投与した修飾核酸は、１つ又は複数の組換えポリペプチドの産生を指令し、これは、組換えポリペプチドが翻訳される細胞で実質的に存在しない機能活性を付与する。例えば、失われた機能活性は、天然での酵素、構造、又は遺伝子調節活性であり得る。
【０６４４】
他の実施形態では、投与した修飾核酸は、１つ又は複数の組換えポリペプチドの産生を指令し、これらは、組換えポリペプチドが翻訳される細胞で実質的に存在しないポリペプチド（又は複数のポリペプチド）を置換する。このような非存在は、コード遺伝子又はその調節経路の遺伝子突然変異に起因し得る。他の実施形態では、投与した修飾核酸は、１つ又は複数の組換えポリペプチドの産生を指令して、組換えポリペプチドが翻訳される細胞に存在するポリペプチド（又は複数のポリペプチド）の量を補足するようにする。あるいは、組換えポリペプチドは、細胞の表面に存在するか、又は細胞から分泌される内在性タンパク質の活性に拮抗するように機能する。通常、内在性タンパク質の活性は、例えば、改変された活性若しくは局在化を引き起こす内在性タンパク質の突然変異のために、対象にとって有害である。さらに、組換えポリペプチドは、細胞の表面に存在するか、又は細胞から分泌される生物学的部分の活性に直接若しくは間接的に拮抗する。拮抗される生物学的部分の例として、脂質（例えば、コレステロール）、リポタンパク質（例えば、低密度リポタンパク質）、核酸、炭水化物、又は低分子毒素が挙げられる。
【０６４５】
本明細書に記載する組換えタンパク質は、細胞内、恐らく核などの特定のコンパートメント内での局在化のために操作するか、あるいは、細胞からの分泌又は細胞の細胞膜への転位のために操作する。
【０６４６】
本明細書に記載するように、本開示の修飾核酸の有用な特徴は、外性核酸に対する細胞の自然免疫応答を低減、回避、防止又は排除する能力である。細胞又は細胞の集団における免疫応答の滴定、低減又は排除を実施する方法が提供される。一部の実施形態では、翻訳可能領域及び少なくとも１つのヌクレオシド修飾を含む第１用量の第１外性核酸を含有する第１組成物と細胞を接触させ、第１外性核酸に対する細胞の自然免疫応答のレベルを決定する。続いて、第２用量の第１外性核酸を含む第２組成物と細胞を接触させるが、第２用量は、第１用量と比較して少ない量の第１外性核酸を含有する。あるいは、第１用量の第２外性核酸と細胞を接触させる。第２外性核酸は、１つ又は複数の修飾ヌクレオシドを含有してよく、それらは、第１外性核酸と同じでも、異なってもよく、あるいは、第２外性核酸は、修飾ヌクレオシドを含有していなくてもよい。第１組成物及び／又は第２組成物と細胞を接触させるステップは、１回又は複数回反復してもよい。さらに、細胞中のタンパク質産生（例えば、タンパク質翻訳）の効率を任意選択により決定し、目標のタンパク質産生効率が達成されるまで、第１及び／又は第２組成物で細胞を再トランスフェクトしてもよい。
【０６４７】
疾患及び状態の治療薬
欠失タンパク質活性を置換するか、又は異常タンパク質活性を解消することにより、欠失又は異常タンパク質活性を特徴とする疾患の症状を治療又は予防する方法が提供される。ウイルスＤＮＡベクターと比較して、修飾ｍＲＮＡの導入後のタンパク質産生の開始が急速であるため、本開示の化合物は、敗血症、発作、及び心筋梗塞などの急性疾患を治療する上で特に有利である。さらに、本開示の修飾ｍＲＮＡの転写調節が欠如していることは、タンパク質産生の正確な滴定が達成可能であるという点で有利である。多くの疾患は、タンパク質活性が失われた（又は、適正なタンパク質産生が起こらないほど実質的に減少した）ことを特徴とする。このようなタンパク質は、存在しない可能性があるか、非常に低い量しか存在しないか、又は実質的に非機能性である。本開示は、本明細書に記載の修飾核酸を含有する核酸若しくは細胞ベースの治療薬を導入することにより、対象におけ
るこうした状態又は疾患を治療する方法を提供し、ここで、修飾核酸は、対象の標的細胞から失われたタンパク質活性に代わるタンパク質をコードする。
【０６４８】
異機能又は異常タンパク質活性を特徴とする疾患として、限定はしないが、癌及び増殖性疾患、遺伝病（例えば、嚢胞性線維症）、自己免疫疾患、糖尿病、神経変性疾患、心血管疾患、及び代謝疾患が挙げられる。本開示は、本明細書に記載の修飾核酸を含有する核酸若しくは細胞ベースの治療薬を導入することにより、対象におけるこうした状態又は疾患を治療する方法を提供し、ここで、修飾核酸は、対象の細胞に存在する異常タンパク質活性に拮抗するか、あるいは、これを解消するタンパク質をコードする。
【０６４９】
異機能性タンパク質の具体例として、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子のミスセンス又はナンセンス突然変異体であり、これらは、それぞれ、ＣＦＴＲタンパク質の異機能又は非機能性タンパク質変異体を産生し、これが、嚢胞性線維症を引き起こす。
【０６５０】
従って、有効量のＣＴＦＲポリペプチドが細胞中に存在するような条件下で、機能性ＣＦＴＲポリペプチドをコードする翻訳可能領域を有する修飾核酸と、患者の細胞を接触させることにより、哺乳動物対象の嚢胞性線維症を治療する方法が提供される。好ましい標的細胞は、肺などの上皮細胞であり、投与方法は、標的組織を考慮して決定する；すなわち、肺送達の場合には、吸入による投与のためにＲＮＡ分子を製剤化する。
【０６５１】
別の実施形態では、本開示は、対象の細胞集団に、ソルチリン（Ｓｏｒｔｉｌｉｎ）（ゲノム研究により近年特性決定されたタンパク質）を導入し、これによって、対象の脂質異常症を改善することにより、対象の脂質異常症を治療する方法を提供する。ＳＯＲＴ１遺伝子は、トランスゴルジネットワーク（ＴＧＮ）膜貫通タンパク質（ソルチリンと呼ばれる）をコードする。遺伝学研究から、５人の個体のうち１人が、ＳＯＲＴ１遺伝子の１ｐ１３遺伝子座に一塩基多型を有しており、これによって、対象は、低レベルの低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）及び超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）を有しやすくなる。約３０％の人に存在するマイナー対立遺伝子のコピーは各々、ＬＤＬコレステロールを８ｍｇ／ｄＬ改変するのに対し、集団の約５％に存在するマイナー対立遺伝子の２コピーは、ＬＤＬコレステロールを１６ｍｇ／ｄＬ減少させる。また、マイナー対立遺伝子の保有者は、心筋梗塞のリスクが４０％低いことも判明している。マウスでの機能性ｉｎ  ｖｉｖｏ研究から、マウス肝臓組織におけるＳＯＲＴ１の過剰発現が、有意に低い（８０％も低い）ＬＤＬコレステロールレベルを招いたこと、並びにＳＯＲＴ１のサイレンシングによって、ＬＤＬコレステロールが約２００％増加したことが判明している（ムスヌル  Ｋ（Ｍｕｓｕｎｕｒｕ  Ｋ）ら著、「非コード変異体から１ｐ１３コレステロール遺伝子座でのＳＯＲＴ１を介した表現型へ（Ｆｒｏｍ  ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ  ｖａｒｉａｎｔ  ｔｏ
ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｖｉａ  ＳＯＲＴ１  ａｔ  ｔｈｅ  １ｐ１３  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｌｏｃｕｓ）」、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１０年；第４６６巻、ｐ．７１４〜７２１）。
【０６５２】
細胞核酸送達の方法
本開示の方法は、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、又は培養下での細胞集団への核酸送達を増強する。例えば、複数の宿主細胞（例えば、酵母又は哺乳動物細胞などの真核細胞）を含有する細胞培養物を、少なくとも１つのヌクレオシド修飾と、任意選択で翻訳可能領域とを有する増強された核酸を含む組成物と接触させる。この組成物は、一般に、トランスフェクション試薬、又は宿主細胞への増強された核酸取り込みの効率を高める他の化合物も含有する。増強された核酸は、対応する非修飾核酸に比して、細胞集団における保持の増強を示す。増強された核酸の保持は、非修飾核酸よりも高い。一部の実施形態では、これは、非修飾核酸の保持より、少なくとも約５０％、７５％、９０％、９５％、１
００％、１５０％、２００％又は２００％超高い。このような保持の利点は、増強された核酸を用いた１ラウンドのトランスフェクションにより達成され得るか、又は反復ラウンドのトランスフェクション後に達成することができる。
【０６５３】
一部の実施形態では、増強された核酸は、１つ又は複数の別の核酸と一緒に標的細胞集団に送達する。このような送達は、同時であってもよいし、又は増強された核酸を送達した後、１つ又は複数の別の核酸を送達する。１つ又は複数の別の核酸は、修飾核酸又は非修飾核酸のいずれであってもよい。増強された核酸の存在が、細胞集団の自然免疫応答を実質的に誘導しないこと、さらに、自然免疫応答が、その後の非修飾核酸の存在によっても活性化されないことは理解される。これに関して、標的細胞集団に存在することが要望されるタンパク質が、非修飾核酸から翻訳される場合、増強された核酸自体は、翻訳可能領域を含有しなくてもよい。
【０６５４】
ターゲティング部分
本開示の一実施形態では、ｉｎ  ｖｉｖｏ若しくはｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれかで細胞を特定の組織空間にターゲティングするか、又は特定の部分と相互作用する機能を果たすタンパク質結合パートナー又は細胞の表面上の受容体を発現するための修飾核酸が提供される。好適なタンパク質結合パートナーとして、抗体及びその機能性断片、スカフォールドタンパク質、又はペプチドが挙げられる。さらに、脂質、炭水化物、又は他の生物学的部分の合成及び細胞外局在化を指令するために、修飾核酸を使用することもできる。
【０６５５】
永久遺伝子発現サイレンシング
哺乳動物対象において遺伝子発現をエピジェネティックにサイレンシングする方法であって、翻訳可能領域が、配列特異的ヒストンＨ３メチル化を指令して、ヘテロクロマチン形成を開始すると共に、遺伝子のサイレンシングのために特定の遺伝子周辺の遺伝子転写を低減することができる１つ又は複数のポリペプチドをコードする核酸を含む方法。例えば、ヤヌス（Ｊａｎｕｓ）キナーゼ２遺伝子の機能獲得型突然変異は、骨髄増殖性疾患のファミリーの原因となる。
【０６５６】
生物学的標的への検出可能薬剤又は治療薬の送達
本明細書に記載する修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸は、生物学的標的に対する物質（「ペイロード」）の送達が要望されるいくつかの様々なシナリオ、例えば、標的の検出のための検出可能薬剤の送達、又は治療薬の送達のシナリオで用いることができる。検出方法としては、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏ両方でのイメージング方法、例えば、免疫組織化学、生物発光イメージング（ＢＬＩ）、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）、電子顕微鏡検査、Ｘ線断層撮影、ラマンイメージング、光干渉断層法、吸光イメージング、サーマルイメージング、蛍光反射イメージング、蛍光顕微鏡検査、蛍光分子断層撮影、核磁気共鳴イメージング、Ｘ線撮影、超音波イメージング、光音響イメージング、ラボアッセイ、又はタグ付け／染色／イメージングが必要なあらゆる状況におけるものが挙げられる。
【０６５７】
例えば、本明細書に記載する修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳ細胞）を再プログラムするのに用いることができ、次にこれを用いて、トランスフェクトした細胞を、クラスター中の全細胞と比較して、直接追跡することができる。別の例では、リンカーを介して修飾核酸に結合させてから、蛍光標識した薬剤を用いて、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、細胞内で薬剤を追跡することができる。他の例として、細胞への可逆性薬剤送達における修飾核酸の使用がある。
【０６５８】
本明細書に記載する修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸は、ペイロード、例えば、特定の細胞小器官への検出可能な薬剤又は治療薬の細胞標的に使用できる。
例示的な細胞内標的として、高度ｍＲＮＡプロセシングのための核局在化、又は阻害剤を含有するｍＲＮＡに連結した核局在化配列（ＮＬＳ）を挙げることができる。
【０６５９】
さらに、本明細書に記載する修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸は、例えば、生きた動物における細胞又は組織に治療薬を送達するために用いることができる。例えば、本明細書に記載する修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸を用いて、癌細胞を殺傷するための高極性化学療法薬を送達することができる。リンカーを介して治療薬に結合させた修飾核酸は、メンバー透過を促進することにより、治療薬が細胞内に進入して、細胞内標的に到達することを可能にする。
【０６６０】
別の例では、修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸は、切断可能なリンカーを介してウイルス阻害ペプチド（ＶＩＰ）に結合させることができる。切断可能なリンカーは、ＶＩＰ及び色素を細胞に放出する。別の例では、修飾ヌクレオシド、修飾ヌクレオチド、及び修飾核酸は、リンカーを介してＡＤＰ−リボシレート（いくつかの細菌毒素、例えば、コレラ毒素、ジフテリア毒素、及び百日咳毒素の作用の原因となる）に結合させることができる。これらの毒素タンパク質は、ヒト細胞における標的タンパク質を修飾するＡＤＰ−リボシルトランスフェラーゼである。例えば、コレラ毒素ＡＤＰ−リボシレートＧタンパク質は、小腸の内膜から大量の液体分泌を引き起こし、これによって、生命を脅かす下痢を招く。
【０６６１】
医薬組成物
本開示は、修飾ｍＲＮＡから産生されたタンパク質を提供する。医薬組成物は、任意選択で１つ又は複数の別の治療活性物質を含んでもよい。一部の実施形態によれば、必要とする対象に送達しようとする１つ又は複数のタンパク質をコードする修飾核酸を含む医薬組成物を投与する方法が提供される。一部の実施形態では、組成物は、ヒトに投与する。本開示の目的のために、「活性成分」という用語は、概して、本明細書に記載するタンパク質、タンパク質コード又はタンパク質含有複合体を指す。
【０６６２】
本明細書に記載する医薬組成物の説明は、主として、ヒトへの投与に適した医薬組成物に関するが、当業者であれば、こうした組成物が、あらゆる種類の動物への投与にも概ね適していることは理解されよう。組成物を様々な動物への投与に好適にする目的での、ヒトへの投与に適した医薬組成物の改変は、十分に理解されており、通常の獣医学薬理学者は、もしあれば、あくまで通常の実験でこうした改変を設計及び／又は実施することができる。医薬組成物の投与が考慮される対象として、限定はしないが、ヒト及び／若しくは他の霊長類；畜牛、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌ、マウス、及び／若しくはラットなどの商業的に価値のある哺乳動物を含む哺乳動物；並びに／又はニワトリ、アヒル、ガチョウ、及び／若しくは七面鳥などの商業的に価値のある鳥類を含む鳥類が挙げられる。
【０６６３】
本明細書に記載する医薬組成物の製剤は、薬理学の分野で公知の、又は当分野で今後開発される任意の方法によって調製してよい。一般に、こうした調製方法は、賦形剤及び／又は１つ又は複数の他の補助成分と活性成分を結合させた後、必要及び／又は所望であれば、生成物を所望の単回又は複数回投与単位に成形及び／又はパッケージングするステップを含む。
【０６６４】
本開示に従う医薬組成物は、１単位用量、及び／若しくは複数の単位用量として、調製、パッケージングしてもよいし、並びに／又は大量販売してもよい。本明細書で用いる場合、「単位用量」とは、予定量の活性成分を含む医薬組成物の個別の量である。活性成分の量は、一般に、対象に投与される活性成分の投与量及び／又はそのような投与量の好都合な部分、例えば、そうした投与量の２分の１若しくは３分の１に等しい。
【０６６５】
本開示に従う医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容される賦形剤、及び／又は別の成分の相対量は、治療対象のアイデンティティー、サイズ、及び／又は状態に応じて、さらには、組成物を投与する経路に応じて変動する。例として、組成物は、０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含有し得る。
【０６６６】
医薬組成物は、さらに、薬学的に許容される賦形剤を含んでもよく、こうした賦形剤は、本明細書で使用されるように、所望の特定の投与形態に合わせて、あらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、又は他の液体ビヒクル、分散若しくは懸濁補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘若しくは乳化剤、防腐剤、固体結合剤、潤滑剤などを含む。「レミントンの薬学の科学及び実施（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版、Ａ．Ｒ．ジェナーロ（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ）著、（リンピコット（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ）、ウィリアムズ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）及びウィルキンス（Ｗｉｌｋｉｎｓ）、メリーランド州バルチモア（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）、２００６年）は、医薬組成物の製剤化に使用される各種賦形剤及びその調製のための公知の技術を開示している。任意の従来の賦形剤媒体が、特定の物質又はその誘導体と不適合性である（例えば、何らかの望ましくない生物学的作用を生み出すか、あるいは、医薬組成物のいずれか他の成分と有害な様式で相互作用するなどにより）場合を除いて、その使用は、本開示の範囲に含まれるものとする。
【０６６７】
一部の実施形態において、薬学的に許容される賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％純粋である。一部の実施形態では、賦形剤は、ヒトにおける使用及び獣医学用途のために承認されている。一部の実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬局（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）により承認されている。一部の実施形態では、賦形剤は、医薬品グレードである。一部の実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ：Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）、欧州薬局方（ＥＰ：Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）、英国薬局方（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）及び／又は国際薬局方（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）の基準を満たしている。
【０６６８】
医薬組成物の製造に用いられる薬学的に許容される賦形剤として、限定はしないが、不活性希釈剤、分散及び／又は造粒剤、界面活性剤及び／又は乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、潤滑剤、及び／又は油が挙げられる。こうした賦形剤は、任意選択で医薬組成物に含有させてよい。ココアバター及び坐薬用ろうのような賦形剤、着色料、コーティング剤、甘味料、香味料及び／又は香料は、製剤者の判断に従って、組成物中に存在してもよい。
【０６６９】
例示的な希釈剤として、限定はしないが、以下：炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウムラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、トウモロコシデンプン、粉砂糖など、及び／又はこれらの組み合わせが挙げられる。
【０６７０】
例示的な造粒剤及び／又は分散剤として、限定はしないが、以下：ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、タピオカデンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、クレイ、アルギン酸、グアーガム、甘橘ジュース粕（ｃｉｔｒｕｓ  ｐｕｌｐ）、寒天、ベントナイト、セルロース及び木製品、天然海綿、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、ケイ酸塩、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル−ピロリドン）（クロスポビドン）、ナトリウムカルボキシメチルデンプン（デンプングリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース（クロスカルメロース）、メチルセ
ルロース、アルファ化デンプン（スターチ１５００）、微結晶性デンプン、水不溶性デンプン、カルシウムカルボキシメチルセルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（ビーガム（Ｖｅｅｇｕｍ））、ラウリル硫酸ナトリウム、第四級アンモニウム化合物など、及び／又はこれらの組み合わせが挙げられる。
【０６７１】
例示的な界面活性剤及び／又は乳化剤として、限定はしないが、以下：天然の乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカンス、コンドラックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ろう、及びレシチン）、コロイド性粘土（例えば、ベントナイト［ケイ酸アルミニウム］及びビーガム（Ｖｅｅｇｕｍ）（登録商標）［ケイ酸アルミニウムマグネシウム］）、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量のアルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、エチレングリコールジステアレート、グリセリルモノステアレート、及びプロピレングリコールモノステアレート、ポリビニルアルコール）、カルボマー（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、及びカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミテート［スパン（Ｓｐａｎ）（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアレート［スパン（Ｓｐａｎ）（登録商標）６０］、ソルビタントリステアレート［スパン（Ｓｐａｎ）（登録商標）６５］、グリセリルモノオレエート、ソルビタンモノオレエート［スパン（Ｓｐａｎ）（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート［Ｍｙｒｊ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油、ポリエトキシル化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアリン酸、及びソルトール（Ｓｏｌｕｔｏｌ）（登録商標））、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル、（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［Ｂｒｉｊ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、トリエタノールアミンオレイン酸、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（登録商標）Ｆ６８、ポロキサマー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウムなど、及び／又はこれらの組み合わせが挙げられる。
【０６７２】
例示的な結合剤として、限定はしないが、以下：デンプン（トウモロコシデンプン及びデンプンペースト）；ゼラチン；糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、モラッセ、ラクトース、ラクチトール、マンニトール）；天然及び合成ガム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモスのエキス、パンワーガム（ｐａｎｗａｒ  ｇｕｍ）、ガティガム、イサゴール殻皮の粘液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシルエチルセルロース、ヒドロキシルプロピルセルロース、ヒドロキシルプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、アルミニウムマグネシウム（ビーガム（Ｖｅｅｇｕｍ）（登録商標））、及びカラマツアラボガラクタン（ｌａｒｃｈ  ａｒａｂｏｇａｌａｃｔａｎ））；アルギン酸塩；ポリエチレンオキシド；ポリエチレングリコール；無機カルシウム塩；ケイ酸；ポリメタクリレート；ろう；水；アルコールなど：並びにこれらの組み合わせが挙げられる。
【０６７３】
例示的な防腐剤は、限定はしないが、以下：抗酸化剤、キレート剤、抗菌保存料、抗真菌保存料、アルコール性保存料、酸性保存料、及び／又はその他の保存料を含んでよい。例示的な抗酸化剤として、限定はしないが、以下：アルファトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及び／又は亜硫酸ナトリウムが挙げられる。例示的なキレート剤としては、以下：エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、及び／又はエデト酸三ナトリウムが挙げられる。例示的な抗菌防腐剤として、限定はしないが、以下：塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、及び／又はチメロサールが挙げられる。例示的な抗真菌防腐剤として、限定はしないが、以下：ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、及び／又はソルビン酸が挙げられる。例示的なアルコール性防腐剤として、限定はしないが、以下：エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシ安息香酸塩、及び／又はフェニルエチルアルコールが挙げられる。例示的な酸性防腐剤として、限定はしないが、以下：ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータカロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、及び／又はフィチン酸が挙げられる。その他の防腐剤として、限定はしないが、以下：トコフェロール、酢酸トコフェロール、デテロキシムメシレート、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエンド（ｈｙｄｒｏｘｙｔｏｌｕｅｎｅｄ）（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、グリダント・プラス（Ｇｌｙｄａｎｔ  Ｐｌｕｓ）（登録商標）、フェノニップ（Ｐｈｅｎｏｎｉｐ）（登録商標）、メチルパラベン、ジャーマル（Ｇｅｒｍａｌｌ）（登録商標）１１５、ジャーマベン（Ｇｅｒｍａｂｅｎ）（登録商標）ＩＩ、ネオロン（Ｎｅｏｌｏｎｅ）（商標）、カトン（Ｋａｔｈｏｎ）（商標）、及び／又はユーキシル（Ｅｕｘｙｌ）（登録商標）が挙げられる。
【０６７４】
例示的な緩衝剤として、限定はしないが、以下：クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、二塩基性リン酸カルシウム、リン酸、三塩基性リン酸カルシウム、リン酸水酸化カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、二塩基性リン酸カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱性物質除去蒸留水、等張性食塩水、リンゲル液、エチルアルコールなど、及び／又はこれらの組み合わせが挙げられる。
【０６７５】
例示的な潤滑剤として、限定はしないが、以下：ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、グリセリルベハネート（ｇｌｙ
ｃｅｒｙｌ  ｂｅｈａｎａｔｅ）、水素化植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムなど、及び／又はこれらの組み合わせが挙げられる。
【０６７６】
例示的な油として、限定はしないが、以下：アーモンド、アプリコットカーネル、アボカド、ババス、ベルガモット、クロスグリの種子、ルリヂサ、ケード、カモミール、キャノーラ、キャラウェイ、カルナウバロウ、ヒマシ、シナモン、ココアバター、ココナッツ、タラの肝臓、コーヒー、トウモロコシ、綿実、エミュー、ユーカリ、月見草、魚、亜麻仁、ゲラニオール、ヒョウタン、ブドウの種子、ハシバミの実、ヒソップ、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ、ククイの実、ラバンジン、ラベンダー、レモン、リツェアクベバ、マカデミアナッツ、マロー、マンゴーの種子、メドウフォームの種子、ミンク、ナツメグ、オリーブ、オレンジ、オレンジラフィー、パーム、パーム核、ピーチカーネル、ピーナッツ、ケシの実、カボチャの種子、ナタネ、米ぬか、ローズマリー、ベニバナ、サンダルウッド、サスクアナ（ｓａｓｑｕａｎａ）、キダチハッカ、サジー、ゴマ、シアバター、シリコーン、ダイズ、ヒマワリ、ティーツリー、アザミ、ツバキ、ベチバー、クルミ、及び小麦胚芽油が挙げられる。例示的な油として、限定はしないが、以下：ステアリン酸ブチル、トリ（カプリル酸）グリセリド、トリ（カプリン酸）グリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、及び／又はこれらの組み合わせが挙げられる。
【０６７７】
経口及び非経口投与のための液体剤形として、限定はしないが、薬学的に許容される乳剤、ミクロ乳剤、溶液、懸濁液、シロップ及び／又はエリキシルが挙げられる。液体剤形は、活性成分に加えて、当分野で一般に使用されている不活性希釈剤、例えば、水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（例えば、綿実油、ピーナッツ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、並びにそれらの混合物を含むことができる。経口組成物は、不活性希釈剤のほかに、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味料、香味料及び香料などの補助剤を含有してよい。非経口投与のための特定の実施形態において、クレモホル（Ｃｒｅｍｏｈｏｒ）（登録商標）、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、及び／又はこれらの組合せなどの安定剤と、組成物を混合する。
【０６７８】
好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて、注射可能製剤、例えば、無菌注射可能な水性又は油性懸濁液を公知の技術により製剤化することができる。無菌注射可能製剤は、例えば１，３−ブタンジオールの溶液などの無毒性の非経口的に許容される希釈剤及び／又は溶媒中の無菌注射可能溶液、懸濁液及び／又はエマルジョンであってよい。使用できる許容可能なビヒクル及び溶媒としては、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．及び等張性塩化ナトリウム溶液が挙げられる。無菌の不揮発性油は、通常、溶媒又は懸濁媒体として使用されている。この目的のために、合成モノ又はジグリセリドを含む任意の無刺激性不揮発性油を使用することができる。オレイン酸などの脂肪酸を注射薬の製造に使用することができる。
【０６７９】
例えば、細菌捕捉フィルタを介した濾過によって、及び／又は使用前に無菌水若しくは他の無菌注射可能媒体に溶解若しくは分散させることができる無菌固体組成物の形態で滅菌剤を含有させることによって、注射可能製剤を滅菌することができる。
【０６８０】
活性成分の効果を長く持続させるために、多くの場合、皮下又は筋肉内注射からの活性
成分の吸収を緩徐にすることが望ましい。これは、難水溶性の結晶性又は非結晶性材料の液体懸濁液の使用によって達成することができる。このとき、薬物の吸収速度は、その溶解速度によって変動するが、この溶解速度は、結晶サイズ及び結晶形状に左右され得る。あるいは、非経口投与された薬剤の吸収の遅延は、薬剤を油媒体に溶解又は懸濁させることによって達成される。注入可能なデポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマーを用いて、薬剤のマイクロカプセルマトリックスを形成することにより製造する。薬剤とポリマーの比及び使用する特定のポリマーの性質に応じて、薬剤放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）がある。デポー注入可能製剤は、身体組織と適合性であるリポソーム又はミクロエマルジョン中に薬剤を閉じ込めることによって調製する。
【０６８１】
直腸又は膣投与のための組成物は、典型的には、坐薬であり、これは、組成物と、周囲温度では固体であるが、体温では液体であるため、直腸又は膣腔において溶解し、活性成分を放出するココアバター、ポリエチレングリコール又は坐薬用ろうなどの好適な無刺激の賦形剤とを混合することによって調製することができる。
【０６８２】
経口投与のための固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸剤、粉剤及び顆粒剤が挙げられる。こうした固体剤形において、活性成分は、クエン酸ナトリウム若しくはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１つの不活性の薬学的に許容される賦形剤、及び／又は充填剤若しくは増量剤（例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸）、結合剤（例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、及びアカシア）、保湿剤（例えば、グリセロール）、崩壊剤（例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ若しくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウム）、溶解遅延剤（例えば、パラフィン）、吸収促進剤（例えば、第四級アンモニウム化合物）、湿潤剤（例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロール）、吸収剤（例えば、カオリン及びベントナイトクレイ）、及び潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、硫酸ラウリルナトリウム）、並びにこれらの混合物と混合する。カプセル剤、錠剤及び丸剤の場合は、剤形は緩衝剤を含有してもよい。
【０６８３】
ラクトース又は乳糖、並びに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて、類似のタイプの固体組成物を軟質及び硬質の充填ゼラチンカプセル中の充填剤として使用することができる。医薬製剤分野で公知の腸溶性コーティング及び他のコーティングなどのコーティング及びシェルを用いて、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤及び顆粒剤の固体剤形を調製することができる。これらは、任意選択で乳白剤を含有してもよく、１種又は複数の活性成分のみを、又は、任意選択で遅延様式で、腸管の特定の部分において優先的に放出する組成物から成るものであってもよい。使用することができる包埋組成物の例としては、ポリマー物質及びろうが挙げられる。ラクトース又は乳糖、並びに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて、類似タイプの固体組成物を軟質及び硬質の充填ゼラチンカプセルにおける充填剤として使用することができる。
【０６８４】
組成物の局所及び／又は経皮投与のための剤形としては、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入剤及び／又はパッチ剤が挙げられる。一般に、活性成分は、必要に応じて、無菌条件下で、医薬として許容される賦形剤及び／又はあらゆる必要な防腐剤及び／又は緩衝剤と混合する。さらに、本開示は、多くの場合、身体への化合物の制御送達をもたらすという付加的な利点を有する経皮パッチ剤の使用も考慮する。こうした剤形は、例えば、化合物を適正な媒体に溶解及び／又は分注させることによって調製することができる。これに代わり、又は加えて、速度制御膜を設けるか、並びに／又は化合物をポリマーマトリックス及び／若しくはゲルに分散させるかのいずれ
かによって、速度を制御することができる。
【０６８５】
本明細書に記載の皮内医薬組成物を送達するのに用いられる好適なデバイスとしては、米国特許第４，８８６，４９９号；同第５，１９０，５２１号；同第５，３２８，４８３号；同第５，５２７，２８８号；同第４，２７０，５３７号；同第５，０１５，２３５号；同第５，１４１，４９６号；及び同第５，４１７，６６２号明細書に記載されているものなどの短針デバイスが挙げられる。ＰＣＴ国際公開第９９／３４８５０号に記載されているものなどの、皮膚への針の有効貫入長さを制限するデバイス、及びその機能的同等物によって皮内組成物を投与してもよい。液体ジェット式注射器、及び／又は角質層を貫通し、真皮に到達する噴流を生成する針を介して液体組成物を真皮に送達するジェット式注射デバイスが好適である。ジェット式注射デバイスは、例えば、米国特許第５，４８０，３８１号；同第５，５９９，３０２号；同第５，３３４，１４４号；同第５，９９３，４１２号；同第５，６４９，９１２号；同第５，５６９，１８９号；同第５，７０４，９１１号；同第５，３８３，８５１号；同第５，８９３，３９７号；同第５，４６６，２２０号；同第５，３３９，１６３号；同第５，３１２，３３５号；同第５，５０３，６２７号；同第５，０６４，４１３号；同第５，５２０，６３９号；同第４，５９６，５５６号；同第４，７９０，８２４号；同第４，９４１，８８０号；同第４，９４０，４６０号明細書；及びＰＣＴ国際公開第９７／３７７０５号及び同第９７／１３５３７号に記載されている。圧縮ガスを使用して、粉末状のワクチンを皮膚の外層から真皮へと加速させる弾道（ｂａｌｌｉｓｔｉｃ）粉末／粒子送達デバイスが好適である。これに代わり、又は加えて、従来の注射器を皮内投与の古典的なマントー（ｍａｎｔｏｕｘ）法に使用してもよい。
【０６８６】
局所投与に好適な製剤として、限定はしないが、リニメント、ローション、クリームなどの水中油形及び／若しくは油中水形エマルジョン、軟膏及び／若しくはペースト、及び／若しくは溶液及び／若しくは懸濁液などの液体並びに／又は半液体製剤が挙げられるが、それらに限定されない。局所投与可能な製剤は、例えば、約１％から約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含有し得るが、活性成分の濃度は、溶媒への活性成分の固溶限界と同じくらい高くてもよい。局所投与のための製剤は、本明細書に記載する別の成分の１種又は複数をさらに含有してもよい。
【０６８７】
医薬組成物は、口腔を介した肺投与に好適な製剤として調製、パッケージング及び／又は販売することができる。こうした製剤は、活性成分を含有し、且つ、約０．５ｎｍ〜約７ｎｍ又は約１ｎｍ〜約６ｎｍの範囲の直径を有する乾燥粒子を含むものでもよい。こうした組成物は、好都合には、推進剤の流れを誘導して、粉末を分散させることができる乾燥粉末リザーバを含むデバイスを用いた、並びに／又は密閉容器内で低沸点推進剤に溶解及び／若しくは懸濁させた活性成分を含むデバイスなどの自己推進溶媒／粉末分配容器を用いた投与のための乾燥粉末の形態である。こうした粉末は、粒子の少なくとも９８重量％が０．５ナノメートルを超える直径を有し、粒子の少なくとも９５数量％が７ｎｍ未満の直径を有する粒子を含む。あるいは、粒子の少なくとも９５重量％が１ｎｍを超える直径を有し、粒子の少なくとも９０数量％が６ｎｍ未満の直径を有する。乾燥粉末組成物は、糖などの固体微粉希釈剤を含有してもよく、好都合には、単位剤形で提供される。
【０６８８】
低沸点推進剤は、一般に、大気圧で６５°Ｆ（１８．３℃）を下回る沸点を有する液体推進剤を含む。概して、推進剤は、組成物の５０％〜９９．９％（ｗ／ｗ）を構成することができ、活性成分は、組成物の０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）を構成することができる。推進剤は、液体の非イオン性及び／又は固体のアニオン性界面活性剤及び／又は（活性成分を含む粒子と同程度の粒径を有し得る）固体希釈剤などの別の成分をさらに含有してもよい。
【０６８９】
肺送達のために製剤化される医薬組成物は、溶液及び／又は懸濁液の液滴の形態で活性成分を提供することができる。こうした製剤は、活性成分を含む、任意選択で無菌の水性及び／又は希アルコール性溶液及び／又は懸濁液として調製、パッケージング及び／又は販売することができ、好都合には、任意の噴霧及び／又は霧化デバイスを用いて投与することができる。こうした製剤は、１種又は複数の別の成分をさらに含有してもよく、こうした成分として、限定はしないが、サッカリンナトリウムなどの香味料、揮発性油、緩衝剤、界面活性剤、及び／又はメチルヒドロキシベンゾエートなどの防腐剤が挙げられる。この投与経路によって提供される液滴は、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均直径を有するものでよい。
【０６９０】
肺送達に有用である本明細書に記載の製剤は、医薬組成物の鼻内送達に有用である。鼻内投与に好適な別の製剤は、活性成分を含み、且つ、約０．２μｍ〜５００μｍの平均粒径を有する粗粉末である。こうした製剤は、鼻から吸い込む様式で、すなわち、鼻孔近くに保持した粉末の容器から鼻腔を介した高速吸入によって投与される。
【０６９１】
鼻投与に好適な製剤は、例えば、わずか約０．１％（ｗ／ｗ）の少量から、１００％（ｗ／ｗ）もの活性成分を含むことができ、本明細書に記載する別の活性成分の１種又は複数を含有してもよい。医薬組成物は、口腔投与に好適な製剤として調製、パッケージング及び／又は販売することができる。こうした製剤は、例えば、従来の方法を用いて製造された錠剤及び／又はロゼンジ剤の形態であってもよく、例えば０．１％〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み、残りが、経口溶解性及び／又は分解性組成物、並び任意選択で、本明細書に記載する別の成分の１種又は複数を含む。あるいは、口腔投与に好適な製剤は、活性成分を含む、粉末並びに／又はエアロゾル化及び／若しくは霧化溶液並びに／又は懸濁液を含有してもよい。このような粉末化、エアロゾル化及び／又はエアロゾル化製剤は、分散されると、約０．１ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲の平均粒径及び／又は液滴径を有することができ、本明細書に記載するいずれかの別の成分の１種又は複数をさらに含有してもよい。
【０６９２】
医薬組成物は、眼投与に好適な製剤として調製、パッケージング及び／又は販売することができる。こうした製剤は、例えば、水性又は油性液体賦形剤中に活性成分の０．１／１．０％（ｗ／ｗ）溶液及び／又は懸濁液を含む点眼薬の形態であってもよい。このような点眼薬は、緩衝剤、塩、及び／又は本明細書に記載するいずれかの別の成分の１種又は複数をさらに含有してもよい。有用である他の眼投与可能な製剤としては、活性成分を微結晶形態及び／又はリポソーム製剤として含有するものが挙げられる。点耳薬及び／又は点眼薬は、本開示の範囲に含まれると考えられる。
【０６９３】
薬剤の製剤化及び／又は製造に関する一般的考慮事項は、「レミントン：薬学の科学及び実施（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）」、第２１版、リンピコット（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ）、ウィリアムズ（Ｗｉｌｌｉａｍｓ）及びウィルキンス（Ｗｉｌｋｉｎｓ）、２００５年（参照により本明細書に組み込まれる）にみいだすことができる。
【０６９４】
投与
本開示は、必要とする対象に本開示に従うタンパク質又は複合体を投与するステップを含む方法を提供する。タンパク質若しくは複合体、又はそれらの医薬、イメージング、診断、若しくは予防用組成物は、疾患、障害、及び／又は状態（例えば、作業記憶障害に関する疾患、障害、及び／若しくは状態）を予防、治療、診断、又はイメージングするのに有効な任意の量及び任意の投与経路を用いて、対象に投与することができる。必要となる正確な量は、対象の種、年齢及び全般的な状態、疾患の重症度、具体的な組成物、その投与方法、その活性様式などに応じて、対象毎に変動し得る。本開示に従う組成物は、典型
的には、投与の容易さ及び投与量の均一性のために投与単位形態で製剤化する。しかし、本発明の組成物の１日の総投与量が、担当医によって適正な医学的判断の範囲内で決定されることは理解されよう。任意の特定の患者についての具体的な治療有効、予防有効、又は適切なイメージング用量レベルは、治療対象となる障害、及び障害の重症度；使用する具体的な活性成分の活性；使用する具体的な組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別及び食餌；投与時間、投与経路、及び使用する具体的な化合物の排泄速度；治療の継続期間；使用する具体的な化合物と組み合わせて、又はそれと同時に用いられる薬剤；並びに医療分野で周知の同様の要因を含む多種多様な要因に左右されることになる。
【０６９５】
送達しようとするタンパク質及び／又はその医薬、予防、診断、若しくはイメージング組成物は、哺乳動物（例えば、ヒト、家畜、ネコ、イヌ、マウス、ラットなど）の動物に投与することができる。一部の実施形態では、その医薬、予防、診断、若しくはイメージング組成物は、ヒトに投与される。
【０６９６】
本開示に従う、送達しようとするタンパク質及び／又はその医薬、予防、診断、若しくはイメージング組成物は、任意の経路で投与することができる。一部の実施形態では、タンパク質及び／又はその医薬、予防、診断、若しくはイメージング組成物は、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、皮下、心室内、経皮、皮内、直腸、膣内、腹腔内、局所（例えば、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、及び／又は液滴による）、粘膜、鼻、口腔、経腸、硝子体、腫瘍内、舌下を含む、様々な経路の１つ又は複数の経路によって；気管内点滴、気管支点滴、及び／若しくは吸入によって；経口スプレー、経鼻スプレー及び／若しくはエアロゾルとして、並びに／又は門脈カテーテルを介して投与することができる。一部の実施形態では、タンパク質若しくは複合体、及び／又はその医薬、予防、診断、若しくはイメージング組成物は、全身静脈内注射により投与する。具体的実施形態では、タンパク質若しくは複合体、及び／又はその医薬、予防、診断、若しくはイメージング組成物は、静脈内及び／又は経口投与することができる。具体的実施形態では、タンパク質若しくは複合体、及び／又はその医薬、予防、診断、若しくはイメージング組成物は、タンパク質若しくは複合体が、血液脳関門、血管関門、又はその他の上皮関門を通過することを可能にする方法で投与してもよい。
【０６９７】
しかし、本開示は、薬剤送達の科学の起こり得る進歩を考慮に入れて、あらゆる適切な経路による、タンパク質若しくは複合体、及び／又はその医薬、予防、診断、若しくはイメージング組成物の送達を包含する。
【０６９８】
概して、最も適切な投与経路は、送達しようとする少なくとも１種の薬剤と結合させたタンパク質若しくはタンパク質を含む複合体の性質（例えば、胃腸管、血管などの環境内でのその安定性）、患者の状態（例えば、患者が経口投与に耐えられるかどうか）などを含む様々な要因に左右されることになる。本開示は、薬剤送達の科学の起こり得る進歩を考慮に入れて、あらゆる適切な経路による、医薬、予防、診断、又はイメージング組成物の送達を包含する。
【０６９９】
いくつかの実施形態では、本開示に従う組成物は、所望の治療、診断、予防、又はイメージング効果を得るために、１日１回又は複数回、１日当たり体重の約０．０００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、又は約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇを送達するのに十分な投与レベルで投与することができる。１日３回、１日２回、１日１回、１日おき、３日毎、毎週、２週間毎、３週間毎、又は４週間毎に所望の用量を送達することができる。いくつかの実施態様では、複数回の投与（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、
１４回又は１５回以上の投与）を用いて、所望の用量を送達することができる。
【０７００】
タンパク質又は複合体は、１種又は複数の治療、予防、診断、又はイメージング薬剤と組み合わせて用いてもよい。「〜と組み合わせて」とは、複数の薬剤を同時に投与するか、及び／又は一緒に送達するために製剤化しなければならないことを意味するわけではないが、これらの送達方法は、本開示の範囲に含まれる。組成物は、１種又は複数の別の所望の治療薬若しくは医療手順と同時に、又はその前に、又はその後に投与することができる。概して、各薬剤は、その薬剤について決定された用量及び／又は時間スケジュールで投与されることになる。一部の実施形態では、本開示は、医薬、予防、診断、又はイメージング組成物と、それらの生物学的利用能を改善し、それらの代謝を抑制及び／又は改変し、それらの排泄を阻害し、並びに／又は体内でのそれらの分布を改変する薬剤とを組み合わせた送達を包含する。
【０７０１】
さらに、組み合わせて使用する治療、予防、診断、又はイメージング活性剤は、単一組成物として一緒に投与するか、又は異なる組成物として個別に投与してもよいことも理解されよう。概して、組み合わせて使用する薬剤は、それらが個々に用いられるレベルを超えないレベルで使用されることが想定される。一部の実施態様では、組み合わせて使用するレベルは、個々に用いられるレベルより小さくなる。
【０７０２】
併用レジメンで使用する療法（治療薬又は手順）の特定の組み合わせは、所望の治療薬及び／又は手順の適合性並びに達成しようとする治療効果を考慮に入れることになる。また、使用する療法は、同じ疾患について所望の効果を達成することもできるし（例えば、本開示に従う癌治療に有用な組成物は、化学療法薬と同時に投与してもよい）、又は異なる効果（例えば、いずれかの有害な作用の制御）を達成することもできる。
【０７０３】
キット
本開示は、本開示の方法を好都合及び／又は有効に実施するための様々なキットを提供する。典型的には、キットは、ユーザが、対象の複数の治療を実施する、及び／又は複数の実験を実施することを可能にする上で十分な量及び／又は数の成分を含む。
【０７０４】
一態様では、本開示は、タンパク質産生のためのキットを提供し、これは、翻訳可能領域と核酸修飾とを含有する第１単離核酸（核酸は、第１単離核酸が導入された細胞の自然免疫応答の誘導を回避又は防止することができる）、パッケージング及び指示書を含む。
【０７０５】
一態様では、本開示は、タンパク質産生のためのキットを提供し、これは、以下：標的細胞に導入されると、翻訳可能領域によりコードされる所望の量のタンパク質を産生するのに有効な量で供給される、翻訳可能領域を含有する第１単離修飾核酸；細胞の自然免疫応答を実質的に阻害するのに有効な量で供給される、阻害核酸を含有する第２核酸；並びにパッケージング及び指示書を含む。
【０７０６】
一態様では、本開示は、タンパク質産生のためのキットを提供し、これは、翻訳可能領域と核酸修飾とを含有する第１単離核酸（核酸は、細胞ヌクレアーゼによる分解の低減を示す）、並びにパッケージング及び指示書を含む。
【０７０７】
一態様では、本開示は、タンパク質産生のためのキットを提供し、これは、翻訳可能領域と少なくとも２つの異なるヌクレオシド修飾とを含有する第１単離核酸（核酸は、細胞ヌクレアーゼによる分解の低減を示す）、並びにパッケージング及び指示書を含む。
【０７０８】
一態様では、本開示は、タンパク質産生のためのキットを提供し、これは、翻訳可能領域と少なくとも１つのヌクレオシド修飾とを含有する第１単離核酸（核酸は、細胞ヌクレ
アーゼによる分解の低減を示す）；阻害核酸を含有する第２核酸；並びにパッケージング及び指示書を含む。
【０７０９】
一態様では、第１単離核酸は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）を含む。一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、以下：ピリジン−４−オンリボヌクレオシド、５−アザ−ウリジン、２−チオ−５−アザ−ウリジン、２−チオウリジン、４−チオ−プソイドウリジン、２−チオ−プソイドウリジン、５−ヒドロキシウリジン、３−メチルウリジン、５−カルボキシメチル−ウリジン、１−カルボキシメチル−プソイドウリジン、５−プロピニル−ウリジン、１−プロピニル−プソイドウリジン、５−タウリノメチルウリジン、１−タウリノメチル−プソイドウリジン、５−タウリノメチル−２−チオ−ウリジン、１−タウリノメチル−４−チオ−ウリジン、５−メチル−ウリジン、１−メチル−プソイドウリジン、４−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、２−チオ−１−メチル−プソイドウリジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドウリジン、２−チオ−１−デアザ−プソイドウリジン、ジヒドロウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、２−チオ−ジヒドロウリジン、２−チオ−ジヒドロプソイドウリジン、２−メトキシウリジン、２−メトキシ−４−チオ−ウリジン、４−メトキシ−プソイドウリジン、４−メトキシ−２−チオ−プソイドウリジン、又は本明細書に開示するいずれかからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
【０７１０】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、以下：５−アザ−シチジン、プソイドイソシチジン、３−メチル−シチジン、Ｎ４−アセチルシチジン、５−ホルミルシチジン、Ｎ４−メチルシチジン、５−ヒドロキシメチルシチジン、１−メチル−プソイドイソシチジン、ピロロ−シチジン、ピロロ−プソイドイソシチジン、２−チオ−シチジン、２−チオ−５−メチル−シチジン、４−チオ−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−プソイドイソシチジン、４−チオ−１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、１−メチル−１−デアザ−プソイドイソシチジン、ゼブラリン、５−アザ−ゼブラリン、５−メチル−ゼブラリン、５−アザ−２−チオ−ゼブラリン、２−チオ−ゼブラリン、２−メトキシ−シチジン、２−メトキシ−５−メチル−シチジン、４−メトキシ−プソイドイソシチジン、４−メトキシ−１−メチル−プソイドイソシチジン、又は本明細書に開示するいずれかからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
【０７１１】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、以下：２−アミノ−プリン、２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−８−アザ−アデニン、７−デアザ−２−アミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２−アミノプリン、７−デアザ−２，６−ジアミノプリン、７−デアザ−８−アザ−２，６−ジアミノプリン、１−メチルアデノシン、Ｎ６−メチル−アデノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデノシン、Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−（シス−ヒドロキシイソペンテニル）アデノシン、Ｎ６−グリシニルカルボニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、２−メチルチオ−Ｎ６−トレオニルカルバモイルアデノシン、Ｎ６，Ｎ６−ジメチルアデノシン、７−メチルアデニン、２−メチルチオ−アデニン、２−メトキシ−アデニン、又は本明細書に開示するいずれかからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
【０７１２】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、以下：イノシン、１−メチル−イノシン、ワイオシン、ワイブトシン、７−デアザ−グアノシン、７−デアザ−８−アザ−グアノシン、６−チオ−グアノシン、６−チオ−７−デアザ−グアノシン、６−チオ−デアザ−８−アザ−グアノシン、７−メチル−グアノシン、６−チオ−７−メチル−グアノシン、７−メチルイノシン、６−メトキシ−グアノシン、１−メチルグアノシン、Ｎ２−メチルグアノシン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチルグアノシン、８−オキソ−グアノシン、７−メチル−８−オキソ−グアノシン、１−メチル−６−チオ−グアノシン、Ｎ２−メチル−６−チオ−グアノシ
ン、Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−６−チオ−グアノシン、又は本明細書に開示するいずれかからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオシドを含む。
【０７１３】
別の態様では、本開示は、タンパク質産生のための組成物を提供し、これは、翻訳可能領域と１つのヌクレオシド修飾とを含有する第１単離核酸（核酸は、細胞ヌクレアーゼによる分解の低減を示す）、及び第１核酸の翻訳可能領域の翻訳に好適な哺乳動物細胞を含む。
【０７１４】
定義
本明細書における様々な箇所で、本開示の化合物の置換基は、群又は範囲で開示される。本開示が、こうした群及び範囲のメンバーの各々及び全ての個別の部分組み合わせを含むことは具体的に意図される。例えば、用語「Ｃ１〜６アルキル」は、メチル、エチル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、及びＣ６アルキルを個別に開示することが具体的に意図される。
【０７１５】
約：本明細書で用いる場合、用語「約」は、記載した値の＋／−１０％を意味する。
組み合わせて投与される：本明細書で用いる場合、用語「組み合わせて投与される」又は「併用投与」は、２種以上の薬剤を対象に同時に投与するか、又は患者に対する各薬剤の作用の重複が存在しうるような間隔で投与することを意味する。一部の実施形態では、薬剤は、互いに約６０、３０、１５、１０、５、又は１分以内の間隔で投与される。一部の実施形態では、薬剤の投与は、併用（例えば、相乗）効果が達成されるように、互いに十分に近い間隔で実施する。
【０７１６】
動物：本明細書で用いる場合、用語「動物」は、動物界の任意のメンバーを指す。一部の実施形態では、「動物」は、あらゆる発達過程のヒトを指す。一部の実施形態では、「動物」は、あらゆる発達過程の非ヒト動物を指す。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、畜牛、霊長類、又はブタ）である。一部の実施形態では、動物として、限定はしないが、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、及び蠕虫が挙げられる。一部の実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子組換え動物、又はクローンである。
【０７１７】
目的の抗原又は所望の抗原：本明細書で用いる場合、用語「目的の抗原又は所望の抗原」は、本明細書に記載する抗体又はその断片、突然変異体、変異体、及び改変物により免疫特異的に結合される、本明細書に記載のタンパク質及び他の生体分子を含む。目的の抗原の例として、限定はしないが、インスリン、インスリン様成長因子、ｈＧＨ、ｔＰＡ、サイトカイン、例えば、インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、インターフェロン（ＩＦＮ）α、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮω若しくはＩＦＮτ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、例えば、ＴＮＦα及びＴＮＦβ、ＴＮＦγ、ＴＲＡＩＬ；Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１及びＶＥＧＦが挙げられる。
【０７１８】
およそ：本明細書で用いる場合、用語「およそ」又は「約」は、１つ又は複数の対象の値に適用されるとき、記載された参照値と類似の値を指す。いくつかの実施形態では、用語「およそ」又は「約」は、別に記載されているか、又は文脈から別の解釈が明らかでないかぎり（但し、このような数値が考えられる値の１００％を超える場合を除く）、記載された参照値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、又はそれ以下の値の両方向（超又は未満）の範囲を指す。
【０７１９】
〜と会合（結合）した：本明細書で用いる場合、用語「〜と会合（結合）した」、「共役した」、「連結した」、「結合した」、及び「テザリングした」は、２つ以上の部分に関して用いられるとき、これらの部分が、もう１つの部分と、直接、又は連結物質として働く１つ又は複数の別の部分を介して、物理的に結合又は連結することにより、ある構造を形成し、この構造は、これが用いられる条件（例えば、生理学的条件）下で、その部分が物理的に結合した状態を保持するように十分に安定していることを意味する。「会合（結合）」は、厳密に、直接の共有化学結合によるものである必要はない。これはまた、「会合（結合）した」実体が物理的に結合した状態を保持するように十分に安定したイオン若しくは水素結合又はハイブリダイゼーションベースの結合を示す場合もある。
【０７２０】
生体適合性：本明細書で用いる場合、用語「生体適合性」は、免疫系による傷害、毒性又は拒絶反応のリスクをほとんど若しくは全くもたらさずに、生存細胞、組織、臓器若しくは系統と適合性であることを意味する。
【０７２１】
生分解性：本明細書で用いる場合、用語「生分解性」は、生物の作用により無害の産物に分解され得ることを意味する。
生物活性：本明細書で用いる場合、用語「生物活性」は、生体系及び／又は生物において活性を有する任意の物質の特徴を指す。例えば、生物に投与されると、生物に生物学的作用を及ぼす物質は、生物活性であると考えられる。特定の実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、ポリペプチドの一部でも、生物活性であるか、又は生物活性とみなされる活性を模倣する場合、生物活性と考えられ得る。
【０７２２】
化学用語：以下に、「アシル」から「チオール」までの様々な化学用語の定義を記載する。
本明細書で用いる用語「アシル」は、本明細書で定義するカルボニル基を介して親分子基に結合した、本明細書で定義する水素又はアルキル基（例えば、ハロアルキル基）を表し、例として、ホルミル（すなわち、カルボキシアルデヒド基）、アセチル、トリフルオロアセチル、プロピオニル、ブタノイルなどが挙げられる。例示的な非置換アシル基は、１〜７、１〜１１、又は１〜２１個の炭素を含む。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換される。
【０７２３】
本明細書で用いる用語「アシルアミノ」は、本明細書で定義するアミノ基（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基（例えば、ハロアルキル基）であり、ＲＮ１は、本明細書に定義する通りである）を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するアシル基を表す。例示的な非置換アシルアミノ基は、１〜４１個の炭素（例えば、１〜７、１〜１３、１〜２１、２〜７、２〜１３、２〜２１、又は２〜４１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、若しくは４個の置換基でさらに置換され、並びに／又はアミノ基は、−ＮＨ２若しくは−ＮＨＲＮ１であり、ここで、ＲＮ１は、独立に、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキル、アリール、アシル（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、若しくは本明細書に記載するその他）、又はアルコキシカルボニルアルキルであり、各ＲＮ２は、Ｈ、アルキル、又はアリールであってよい。
【０７２４】
本明細書で用いる用語「アシルアミノアルキル」は、本明細書で定義するアルキル基（すなわち、−アルキル−Ｎ（ＲＮ１）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基（例えば、ハロアルキル基）であり、ＲＮ１は、本明細書に定義する通りである）を介して親分子基に結合したアミノ基に結合した、本明細書で定義するアシル基を表す。例示的な非置換アシルアミノ基は、１〜４１個の炭素（例えば、１〜７、１〜１３、１〜２１、２〜７、２〜１３、２
〜２１、又は２〜４１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、若しくは４個の置換基でさらに置換され、並びに／又はアミノ基は、−ＮＨ２若しくは−ＮＨＲＮ１であり、ここで、ＲＮ１は、独立に、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキル、アリール、アシル（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、若しくは本明細書に記載するその他）、又はアルコキシカルボニルアルキルであり、各ＲＮ２は、Ｈ、アルキル、又はアリールであってよい。
【０７２５】
本明細書で用いる用語「アシルオキシ」は、酸素原子（すなわち、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基である）を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するアシル基を表す。例示的な非置換アシルオキシ基は、１〜２１個の炭素（例えば、１〜７又は１〜１１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換される。
【０７２６】
本明細書で用いる用語「アシルオキシアルキル」は、アルキル基（すなわち、−アルキル−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基である）を介して親分子基に結合した酸素原子に結合した、本明細書で定義するアシル基を表す。例示的な非置換アシルオキシアルキル基は、１〜２１個の炭素（例えば、１〜７又は１〜１１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル基は、独立に、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換される。
【０７２７】
本明細書で用いる用語「アルカリール」は、本明細書で定義するアルキレン基を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するアリール基を表す。例示的な非置換アルカリール基は、７〜３０個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、Ｃ１〜１０アルク−Ｃ６〜１０アリール、若しくはＣ１〜２０アルク−Ｃ６〜１０アリールのように、７〜１６又は７〜２０個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキレン基及びアリール基は各々、それぞれの基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。接頭辞「アルク」が前に付く他の基も同様に定義され、ここで、「アルク」は、別に注記のない限り、Ｃ１〜６アルキレンを指し、結合される化学構造は、本明細書に定義する通りである。
【０７２８】
用語「アルクシクロアルキル」は、本明細書で定義するアルキレン基（例えば、１〜４、１〜６、１〜１０、又は１〜２０個の炭素のアルキレン基）を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するシクロアルキル基を表す。一部の実施形態では、アルキレン及びシクロアルキルは各々、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７２９】
用語「アルケニル」は、別に指定されない限り、１つ又は複数の炭素−炭素二重結合を含む、炭素数２〜２０（例えば、２〜６、２〜１０個の炭素）の一価直鎖若しくは分枝鎖基を表し、例としては、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニルなどが挙げられる。アルケニルは、シス及びトランス異性体の両方を含む。アルケニル基は、任意選択で、本明細書に定義するアミノ、アリール、シクロアルキル、又はヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、又は本明細書に記載する例示的アルキル置換基のいずれかから独立に選択される１、２、３、又は４個の置換基で置換してもよい。
【０７３０】
用語「アルケニルオキシ」は、別に指定されない限り、式−ＯＲ（Ｒは、Ｃ２〜２０アルケニル基（例えば、Ｃ２〜６若しくはＣ２〜１０アルケニル）である）の化学置換基を
表す。例示的なアルケニルオキシ基としては、エテニルオキシ、プロペニルオキシなどがある。一部の実施形態では、アルケニル基は、本明細書で定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換することができる。
【０７３１】
用語「アルクヘテロアリール」は、本明細書で定義するアルキレン基を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するヘテロアリール基を表す。例示的な非置換アルクヘテロアリール基は、炭素数２〜３２（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール、Ｃ１〜１０アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール、若しくはＣ１〜２０アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリールのように、炭素数２〜２２、２〜１８、２〜１７、２〜１６、３〜１５、２〜１４、２〜１３、若しくは２〜１２）である。一部の実施形態では、アルキレン及びヘテロアリールは各々、それぞれの基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。アルクヘテロアリール基は、アルクヘテロシクリル基のサブセットである。
【０７３２】
用語「アルクヘテロシクリル」は、本明細書で定義するアルキレン基を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するヘテロシクリル基を表す。例示的な非置換アルクヘテロシクリル基は、炭素数２〜３２（例えば、Ｃ１〜１０アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル、Ｃ１〜１０アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル、若しくはＣ１〜２０アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリルのように、炭素数２〜２２、２〜１８、２〜１７、２〜１６、３〜１５、２〜１４、２〜１３、若しくは２〜１２）である。一部の実施形態では、アルキレン及びヘテロアリールは各々、それぞれの基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７３３】
用語「アルコキシ」は、別に指定されない限り、式−ＯＲ（Ｒは、Ｃ１〜２０アルキル基（例えば、Ｃ１〜６若しくはＣ１〜１０アルキル）である）の化学置換基を表す。例示的なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ−プロポキシ及びイソプロポキシ）、ｔ−ブトキシなどである。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に定義する１、２、３、若しくは４個の置換基（例えば、ヒドロキシ又はアルコキシ）でさらに置換することができる。
【０７３４】
用語「アルコキシアルコキシ」は、アルコキシ基で置換されたアルコキシ基を表す。例示的な非置換アルコキシアルコキシ基は、２〜４０個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜１０アルコキシ−Ｃ１〜１０アルコキシ、若しくはＣ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルコキシのように、２〜１２又は２〜２０個の炭素）を含む。一部の実施形態では、各アルコキシ基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７３５】
用語「アルコキシアルキル」は、アルコキシ基で置換されたアルキル基を表す。例示的な非置換アルコキシアルキル基は、２〜４０個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシ−Ｃ１〜１０アルキル、若しくはＣ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルキルのように、２〜１２又は２〜２０個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルキル及びアルコキシは各々、それぞれの基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７３６】
本明細書で用いる用語「アルコキシカルボニル」は、カルボニル原子（例えば、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、Ｈ又は任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基である）を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するアルコキシを表す。例示的な非置換アルコキシカルボニルは、１〜２１個の炭素（例えば、１〜１１又は１〜７個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アルコキシ基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換される。
【０７３７】
本明細書で用いる用語「アルコキシカルボニルアシル」は、本明細書で定義するアルコキシカルボニル基（例えば、−Ｃ（Ｏ）−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基である）で置換された、本明細書で定義するアシル基を表す。例示的な非置換アルコキシカルボニルアシルは、３〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ１〜６アシル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜１０アシル、若しくはＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜２０アシルのように、３〜１０、３〜１３、３〜１７、３〜２１又は３〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、各アルコキシ及びアルキル基は、独立に、各基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換される。
【０７３８】
本明細書で用いる用語「アルコキシカルボニルアルコキシ」は、本明細書で定義するアルコキシカルボニル基（例えば、−Ｏ−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜６、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜２０アルキル基である）で置換された、本明細書で定義するアルコキシ基を表す。例示的な非置換アルコキシカルボニルアルコキシは、３〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜１０アルコキシ、若しくはＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜２０アルコキシのように、３〜１０、３〜１３、３〜１７、３〜２１又は３〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、各アルコキシ基は、独立に、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換される。
【０７３９】
本明細書で用いる用語「アルコキシカルボニルアルキル」は、本明細書で定義するアルコキシカルボニル基（例えば、−アルキル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜２０、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜６アルキル基である）で置換された、本明細書で定義するアルキル基を表す。例示的な非置換アルコキシカルボニルアルキルは、３〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜１０アルキル、若しくはＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ１〜２０アルキルのように、３〜１０、３〜１３、３〜１７、３〜２１、又は３〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、各アルキル及びアルコキシ基は、独立に、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換される。
【０７４０】
本明細書で用いる用語「アルコキシカルボニルアルケニル」は、本明細書で定義するアルコキシカルボニル基（例えば、−アルケニル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜２０、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜６アルキル基である）で置換された、本明細書で定義するアルケニル基を表す。例示的な非置換アルコキシカルボニルアルケニルは、４〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ２〜１０アルケニル、若しくはＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ２〜２０アルケニルのように、４〜１０、４〜１３、４〜１７、４〜２１、又は４〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、各アルキル、アルケニル及びアルコキシ基は、独立に、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換される。
【０７４１】
本明細書で用いる用語「アルコキシカルボニルアルキニル」は、本明細書で定義するアルコキシカルボニル基（例えば、−アルキニル−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、ここで、Ｒは、任意選択で置換されたＣ１〜２０、Ｃ１〜１０、若しくはＣ１〜６アルキル基である）で置換された、本明細書で定義するアルキニル基を表す。例示的な非置換アルコキシカルボニルアルケニルは、４〜４１個の炭素（例えば、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル−Ｃ２〜６アル
キニル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル−Ｃ２〜１０アルキニル、若しくはＣ１〜２０アルコキシカルボニル−Ｃ２〜２０アルキニルのように、４〜１０、４〜１３、４〜１７、４〜２１、又は４〜３１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、各アルキル、アルキニル及びアルコキシ基は、独立に、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換される。
【０７４２】
本明細書で用いる用語「アルキル」は、別に指定のない限り、炭素数１〜２０（例えば、１〜１０又は１〜６）の直鎖及び分枝鎖飽和基の両方を包含する。アルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−及びイソ−プロピル、ｎ−、ｓｅｃ−、イソ−及びｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチルなどが挙げられ、以下（１）〜（２１）からなる群から独立に選択される１、２、３個、又は炭素数２以上のアルキル基の場合には、４個の置換基で置換してもよい：（１）Ｃ１〜６アルコキシ；（２）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（３）本明細書で定義するアミノ（例えば、非置換アミノ（すなわち、−ＮＨ２）又は置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２、ここで、ＲＮ１は、アミノについて定義した通りである）；（４）Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ；（５）アジド；（６）ハロ；（７）（Ｃ２〜９ヘテロシクリル）オキシ；（８）任意選択でＯ−保護基で置換されたヒドロキシ；（９）ニトロ；（１０）オキソ（例えば、カルボキシアルデヒド又はアシル）；（１１）Ｃ１〜７スピロシクリル；（１２）チオアルコキシ；（１３）チオール；（１４）任意選択でＯ−保護基で置換された−ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡは、以下：（ａ）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）のポリエチレングリコール、及び（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）のアミノ−ポリエチレングリコールからなる群から選択される；（１５）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＢ’ＲＣ’、ここで、ＲＢ’及びＲＣ’の各々は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１６）−ＳＯ２ＲＤ’、ここで、ＲＤ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）ヒドロキシからなる群から選択される；（１７）−ＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’、ここで、ＲＥ’及びＲＦ’の各々は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１８）−Ｃ（Ｏ）ＲＧ’、ここで、ＲＧ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）のポリエチレングリコール、及び（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）のアミノ−ポリエチレングリコールからなる群から選択される；（１９）−ＮＲＨ’Ｃ（Ｏ）
ＲＩ’、ここで、ＲＨ’は、以下：（ａ１）水素及び（ｂ１）Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ＲＩ’は、以下：（ａ２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）のポリエチレングリコール、及び（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）のアミノ−ポリエチレングリコールからなる群から選択される；（２０）−ＮＲＪ’Ｃ（Ｏ）ＯＲＫ’、ここで、ＲＪ’は、以下：（ａ１）水素及び（ｂ１）Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ＲＫ’は、以下：（ａ２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）のポリエチレングリコール、及び（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）のアミノ−ポリエチレングリコールからなる群から選択される；並びに（２１）アミジン。一部の実施形態では、これらの基の各々は、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。例えば、Ｃ１−アルカリールのアルキレン基は、それぞれのアリーロイル置換基を付与するオキソ基でさらに置換することができる。
【０７４３】
本明細書で用いる用語「アルキレン」及び接頭辞「アルク−」は、２個の水素原子の除去により、直鎖又は分枝鎖飽和炭化水素から得られる飽和二価炭化水素基を表し、例として、メチレン、エチレン、イソプロピレンなどが挙げられる。用語「Ｃｘ〜ｙアルキレン」及び接頭辞「Ｃｘ〜ｙアルク−」は、ｘ〜ｙ個の炭素を有するアルキレン基を表す。ｘの例示的な値は、１、２、３、４、５、及び６であり、ｙの例示的な値は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、又は２０である（例えば、Ｃ１〜６、Ｃ１〜１０、Ｃ２〜２０、Ｃ２〜６、Ｃ２〜１０、又はＣ２〜２０アルキレン）。一部の実施形態では、アルキレンは、アルキル基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７４４】
本明細書で用いる用語「アルキルスルフィニル」は、−Ｓ（Ｏ）−基を介して親分子基に結合した、アルキル基を表す。例示的な非置換アルキルスルフィニル基は、炭素数１〜６、１〜１０、又は１〜２０である。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７４５】
本明細書で用いる用語「アルキルスルフィニルアルキル」は、アルキルスルフィニル基で置換された、本明細書で定義するアルキル基を表す。例示的な非置換アルキルスルフィニルアルキル基は、炭素数２〜１２、２〜２０、又は２〜４０である。一部の実施形態では、各アルキル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換す
ることができる。
【０７４６】
本明細書で用いる用語「アルキニル」は、１つの炭素−炭素三重結合を含む、炭素原子数２〜２０（例えば、２〜４、２〜６、又は２〜１０個の炭素）の一価直鎖若しくは分枝鎖基を表し、例としては、エチニル、１−プロピニルなどが挙げられる。アルキニル基は、任意選択で、本明細書に定義するアリール、シクロアルキル、若しくはヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、又は本明細書に記載する例示的アルキル置換基のいずれかから独立に選択される１、２、３、又は４個の置換基で置換してもよい。
【０７４７】
用語「アルキニルオキシ」は、別に指定のない限り、式−ＯＲ（Ｒは、Ｃ２〜２０アルキニル基（例えば、Ｃ２〜６若しくはＣ２〜１０アルキニル）である）の化学置換基を表す。例示的なアルキニルオキシ基としては、エチニルオキシ、プロピニルオキシなどがある。一部の実施形態では、アルキニル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ヒドロキシ基）でさらに置換することができる。
【０７４８】
本明細書で用いる用語「アミジン」は、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２基を表す。
本明細書で用いる用語「アミノ」は、−Ｎ（ＲＮ１）２を表し、ここで、各ＲＮ１は、独立に、Ｈ、ＯＨ、ＮＯ２、Ｎ（ＲＮ２）２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、Ｎ−保護基、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリール、アルカリール、シクロアルキル、アルクシクロアルキル、カルボキシアルキル（例えば、任意選択でＯ−保護基により置換されたもの、例えば、任意選択で置換されたアリールアルコキシカルボニル基若しくは本明細書に記載するいずれか）、スルホアルキル（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、若しくは本明細書に記載するその他）、アルコキシカルボニルアルキル（例えば、任意選択でＯ−保護基により置換されたもの、例えば、任意選択で置換されたアリールアルコキシカルボニル基若しくは本明細書に記載するいずれか）、ヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、又はアルクヘテロシクリル（例えば、アルクヘテロアリール）であり、前記ＲＮ１基は各々、各基について本明細書に定義するように、任意選択で置換することができ；あるいは、２つのＲＮ１は、結合して、ヘテロシクリル又はＮ−保護基を形成し、また、各ＲＮ２は、独立に、Ｈ、アルキル、又はアリールである。本発明のアミノ基は、非置換アミノ（すなわち、−ＮＨ２）又は置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２）であってよい。好ましい実施形態では、アミノは、−ＮＨ２又は−ＮＨＲＮ１であり、ここで、ＲＮ１は、独立に、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、ＮＲＮ２２、ＳＯ２ＯＲＮ２、ＳＯ２ＲＮ２、ＳＯＲＮ２、アルキル、カルボキシアルキル、スルホアルキル、アシル（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、若しくは本明細書に記載するその他）、アルコキシカルボニルアルキル（例えば、ｔ−ブトキシカルボニルアルキル）又はアリールであり、また、各ＲＮ２は、Ｈ、Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、又はＣ６〜１０アリールであってよい。
【０７４９】
本明細書で用いる用語「アミノ酸」は、側鎖、アミノ基、及び酸基（例えば、−ＣＯ２Ｈのカルボキシ基又は−ＳＯ３Ｈのスルホ基）を有する分子を指し、ここで、アミノ酸は、側鎖、アミノ基、又は酸基（例えば、側鎖）によって親分子基に結合している。一部の実施形態では、アミノ酸は、カルボニル基によって親分子基に結合しており、ここで、側鎖又はアミノ基は、カルボニル基に結合している。例示的な側鎖として、任意選択で置換されたアルキル、アリール、ヘテロシクリル、アルカリール、アルクヘテロシクリル、アミノアルキル、カルバモイル、及びカルボニルアルキルが挙げられる。例示的なアミノ酸としては、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、ヒドロキシノルバリン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、ピロリシン、セレノシステイン、セリン、タウリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、及びバリンが挙げられる。アミノ酸基は、任意選択で、以下（１）〜（２１）から
なる群から独立に選択される１、２、３個、又は炭素数２以上のアミノ酸基の場合には、４個の置換基で置換してもよい：（１）Ｃ１〜６アルコキシ；（２）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（３）本明細書で定義するアミノ（例えば、非置換アミノ（すなわち、−ＮＨ２）又は置換アミノ（すなわち、−Ｎ（ＲＮ１）２、ここで、ＲＮ１は、アミノについて定義した通りである）；（４）Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ；（５）アジド；（６）ハロ；（７）（Ｃ２〜９ヘテロシクリル）オキシ；（８）ヒドロキシ；（９）ニトロ；（１０）オキソ（例えば、カルボキシアルデヒド又はアシル）；（１１）Ｃ１〜７スピロシクリル；（１２）チオアルコキシ；（１３）チオール；（１４）−ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡは、以下：（ａ）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）のポリエチレングリコール、及び（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）のアミノ−ポリエチレングリコールからなる群から選択される；（１５）−Ｃ（Ｏ）ＮＲＢ’ＲＣ’、ここで、ＲＢ’及びＲＣ’の各々は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；
（１６）−ＳＯ２ＲＤ’、ここで、ＲＤ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）ヒドロキシからなる群から選択される；（１７）−ＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’、ここで、ＲＥ’及びＲＦ’の各々は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１８）−Ｃ（Ｏ）ＲＧ’、ここで、ＲＧ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ）水素、（ｅ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）のポリエチレングリコール、及び（ｈ）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）のアミノ−ポリエチレングリコールからなる群から選択される；（１９）−ＮＲＨ’Ｃ（Ｏ）ＲＩ’、ここで、ＲＨ’は、以下：（ａ１）水素及び（ｂ１）Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ＲＩ’は、以下：（ａ２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）のポリエチレングリコール、及び（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であ
り、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）のアミノ−ポリエチレングリコールからなる群から選択される；（２０）−ＮＲＪ’Ｃ（Ｏ）ＯＲＫ’、ここで、ＲＪ’は、以下：（ａ１）水素及び（ｂ１）Ｃ１〜６アルキルからなる群から選択され、ＲＫ’は、以下：（ａ２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル）、（ｂ２）Ｃ２〜２０アルケニル（例えば、Ｃ２〜６アルケニル）、（ｃ２）Ｃ６〜１０アリール、（ｄ２）水素、（ｅ２）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、（ｆ２）アミノ−Ｃ１〜２０アルキル、（ｇ２）−（ＣＨ２）ｓ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＯＲ’（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、Ｒ’は、Ｈ又はＣ１〜２０アルキルである）のポリエチレングリコール、及び（ｈ２）−ＮＲＮ１（ＣＨ２）ｓ２（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｓ１（ＣＨ２）ｓ３ＮＲＮ１（ｓ１は、１〜１０（例えば、１〜６又は１〜４）の整数であり、ｓ２及びｓ３の各々は、独立に、０〜１０（例えば、０〜４、０〜６、１〜４、１〜６、又は１〜１０）の整数であり、各ＲＮ１は、独立に、水素又は任意選択で置換されたＣ１〜６アルキルである）のアミノ−ポリエチレングリコールからなる群から選択される；並びに（２１）アミジン。一部の実施形態では、これらの基の各々は、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。
【０７５０】
本明細書で用いる用語「アミノアルコキシ」は、本明細書で定義するアミノ基により置換された、本明細書で定義するアルコキシ基を表す。アルキル及びアミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、例えば、カルボキシからなる群から選択される）でさらに置換することができる。
【０７５１】
本明細書で用いる用語「アミノアルキル」は、本明細書で定義するアミノ基により置換された、本明細書で定義するアルキル基を表す。アルキル及びアミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、並びに（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、例えば、カルボキシ、及び／又はＮ−保護基からなる群から選択される）でさらに置換することができる。
【０７５２】
本明細書で用いる用語「アミノアルケニル」は、本明細書で定義するアミノ基により置換されたアルケニル基を表す。アルケニル及びアミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、並びに（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、例えば、カルボキシ、及び／又はＮ−保護基からなる群から選択される）でさらに置換することができる。
【０７５３】
本明細書で用いる用語「アミノアルキニル」は、本明細書で定義するアミノ基により置換されたアルキニル基を表す。アルキニル及びアミノは、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、並びに（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、例えば、カルボキシ、及び／又はＮ−保護基からなる群から選択される）でさらに置換することができる。
【０７５４】
本明細書で用いる用語「アリール」は、１つ又は２つの芳香環を有する単環式、二環式、若しくは多環式炭素環を表し、その例としては、フェニル、ナフチル、１，２−ジヒドロナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル、アントラセニル、フェナントレニ
ル、フルオレニル、インダニル、インデニルなどが挙げられ、これらは、任意選択で、以下（１）〜（２７）からなる群から独立に選択される１、２、３、４、又は５個の置換基で置換してもよい：（１）Ｃ１〜７アシル（例えば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル−Ｃ１〜６アルキル、アミノ−Ｃ１〜６アルキル、アジド−Ｃ１〜６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１〜６アルキル、ハロ−Ｃ１〜６アルキル（例えば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１〜６アルキル、ニトロ−Ｃ１〜６アルキル、又はＣ１〜６チオアルコキシ−Ｃ１〜６アルキル）；（３）Ｃ１〜２０アルコキシ（例えば、Ｃ１〜６アルコキシ、例えば、ペルフルオロアルコキシ）；（４）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６〜１０アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３〜８シクロアルキル；（１０）Ｃ１〜６アルク−Ｃ３〜８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１〜１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１〜２０チオアルコキシ（例えば、Ｃ１〜６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ’ＲＣ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ’及びＲＣ’は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ’は、以下：（ａ）アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｃ）アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’、ここで、ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ’及びＲＦ’は、独立に、以下：（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される；（２１）チオール；（２２）Ｃ６〜１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３〜８シクロアルコキシ；（２４）Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ；（２５）Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（２６）Ｃ２〜２０アルケニル；並びに（２７）Ｃ２〜２０アルキニル。一部の実施形態では、これらの基の各々は、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。例えば、Ｃ１−アルカリール又はＣ１−アルクヘテロシクリルのアルキレン基は、それぞれ、アリーロイル及び（ヘテロシクリル）オイル置換基を付与するオキソ基でさらに置換することができる。
【０７５５】
本明細書で用いる用語「アリールアルコキシ」は、酸素原子を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するアルカリール基を表す。例示的な非置換アリールアルコキシ基は、７〜３０個の炭素（例えば、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜１０アルコキシ、若しくはＣ６〜１０アリール−Ｃ１〜２０アルコキシのように、７〜１６、又は７〜２０個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アリールアルコキシ基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７５６】
本明細書で用いる用語「アリールアルコキシカルボニル」は、カルボニルを（例えば、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−アルキル−アリール）介して親分子基に結合した、本明細書で定義するアリールアルコキシ基を表す。例示的な非置換アリールアルコキシ基は、８〜３１個の炭素（例えば、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜６アルコキシ−カルボニル、Ｃ６〜１０アリール−Ｃ１〜１０アルコキシ−カルボニル、若しくはＣ６〜１０アリール−Ｃ１〜２０アルコキシ−カルボニルのように、８〜１７、又は８〜２１個の炭素）を含む。一部の実施形態では、アリールアルコキシカルボニル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７５７】
用語「アリールオキシ」は、別に指定のない限り、式−ＯＲ’（Ｒ’は、炭素数６〜１８のアリール基である）の化学置換基を表す。一部の実施形態では、アリール基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７５８】
本明細書で用いる用語「アリーロイル」は、カルボニル基を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するアリール基を表す。例示的な非置換アリーロイル基は、炭素数７〜１１である。一部の実施形態では、アリール基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７５９】
用語「アジド」は、−Ｎ３基を表し、これは、−Ｎ＝Ｎ＝Ｎとしても表示することができる。
本明細書で用いる用語「二環式」は、芳香族又は非芳香族のいずれであってもよい２つの環を有する構造を指す。二環式構造は、本明細書で定義するスピロシクリル基、並びに１つ又は複数の架橋を共有する２つの環を含み、ここで、このような架橋は、１原子を含んでもよいし、又は２、３、若しくは４個以上の原子を含有する鎖を含んでもよい。例示的な二環式基としては、以下のものが挙げられる：二環式カルボシクリル基（第１及び第２環は、本明細書で定義するカルボシクリル基である）；二環式アリール基（第１及び第２環は、本明細書で定義するアリール基である）；二環式ヘテロシクリル基（第１環は、ヘテロシクリル基であり、第２環は、カルボシクリル（例えば、アリール）又はヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）基である）；並びに二環式ヘテロアリール基（第１環は、ヘテロアリール基であり、第２環は、カルボシクリル（例えば、アリール）又はヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）基である）。一部の実施形態では、二環式基は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、及びアリール基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７６０】
本明細書で用いる用語「ボラニル」は、−Ｂ（ＲＢ１）３を表し、ここで、各ＲＢ１は、独立に、Ｈ及び任意選択で置換されたアルキルからなる群から選択される。一部の実施形態では、ボラニル基は、アルキルについて本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７６１】
本明細書で用いる用語「炭素環式」及び「カルボシクリル」は、任意選択で置換されたＣ３〜１２単環式、二環式、又は三環式構造を指し、この構造において、環が、炭素原子により環が形成され、これは、芳香族又は非芳香族のいずれであってもよい。炭素環式構造としては、シクロアルキル、シクロアルケニル、及びアリール基が挙げられる。
【０７６２】
本明細書で用いる用語「カルバモイル」は、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（ＲＮ１）２を表し、ここで、各ＲＮ１の意味は、本明細書に記載する「アミノ」の定義にみいだされる。
本明細書で用いる用語「カルバモイルアルキル」は、本明細書で定義するカルバモイル基により置換された、本明細書で定義するアルキル基を表す。アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７６３】
本明細書で用いる用語「カルバミル」は、構造−ＮＲＮ１Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ又は−ＯＣ（＝Ｏ）Ｎ（ＲＮ１）２を表し、ここで、各ＲＮ１の意味は、本明細書に記載する「アミノ」の定義にみいだされ、Ｒは、本明細書で定義する通りのアルキル、シクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、アルカリール、ヘテロシクリル（例えば、ヘテロアリール）、又はアルクヘテロシクリル（例えば、アルクヘテロアリール）である。
【０７６４】
本明細書で用いる用語「カルボニル」は、Ｃ（Ｏ）基を表し、これは、Ｃ＝Ｏとしても表示される。
用語「カルボキシアルデヒド」は、構造−ＣＨＯを有するアシル基を表す。
【０７６５】
本明細書で用いる用語「カルボキシ」は、−ＣＯ２Ｈを意味する。
本明細書で用いる用語「カルボキシアルコキシ」は、本明細書で定義するカルボキシ基で置換された、本明細書で定義するアルコキシ基を表す。アルコキシ基は、アルキル基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができ、また、カルボキシ基は、任意選択で、１つ又は複数のＯ−保護基により置換することができる。
【０７６６】
本明細書で用いる用語「カルボキシアルキル」は、本明細書で定義するカルボキシ基で置換された、本明細書で定義するアルキル基を表す。アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができ、また、カルボキシ基は、任意選択で、１つ又は複数のＯ−保護基により置換することができる。
【０７６７】
本明細書で用いる用語「カルボキシアミノアルキル」は、本明細書で定義するカルボキシ基で置換された、本明細書で定義するアミノアルキル基を表す。カルボキシ、アルキル、及びアミノは各々、それぞれの基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、ＣＯ２ＲＡ’、ここで、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、並びに（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール、例えば、カルボキシ、及び／又はＮ−保護基、及び／又はＯ−保護基からなる群から選択される）でさらに置換することができる。
【０７６８】
本明細書で用いる用語「シアノ」は、−ＣＮ基を表す。
用語「シクロアルコキシ」は、別に指定のない限り、式−ＯＲ（Ｒは、Ｃ３〜８シクロアルキル基である）の化学置換基を表す。シクロアルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。例示的な非置換シクロアルコキシ基は、炭素数３〜８である。一部の実施形態では、シクロアルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７６９】
本明細書で用いる用語「シクロアルキル」は、別に指定のない限り、３〜８個の炭素を有する、一価飽和若しくは不飽和非芳香環式炭化水素を表し、その例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ビシクロヘプチルなどが挙げられる。シクロアルキル基が、１つの炭素−炭素二重結合を含むとき、シクロアルキル基は、「シクロアルケニル」基と呼ぶことができる。例示的なシクロアルケニル基としては、シクロペンテニル、シクロヘキセニルなどが挙げられる。本発明のシクロアルキル基は、任意選択で、以下：（１）Ｃ１〜７アシル（例えば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル−Ｃ１〜６アルキル、アミノ−Ｃ１〜６アルキル、アジド−Ｃ１〜６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１〜６アルキル、ハロ−Ｃ１〜６アルキル（例えば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１〜６アルキル、ニトロ−Ｃ１〜６アルキル、又はＣ１〜６チオアルコキシ−Ｃ１〜６アルキル）；（３）Ｃ１〜２０アルコキシ（例えば、Ｃ１〜６アルコキシ、例えば、ペルフルオロアルコキシ）；（４）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ１〜６アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３〜８シクロアルキル；（１０）Ｃ１〜６アルク−Ｃ３〜８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１〜１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１〜２０チオアルコキシ（例えば、Ｃ１〜６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ’（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ’は、以下：（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールから
なる群から選択される）；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ’ＲＣ’（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ’及びＲＣ’は、独立に、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ６〜１０アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される）；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ’（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ’は、（ａ）Ｃ６〜１０アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される）；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ’及びＲＦ’の各々は、独立に、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ６〜１０アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される）；（２１）チオール；（２２）Ｃ６〜１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３〜８シクロアルコキシ；（２４）Ｃ６〜１０アリール−Ｃ６〜１０アリコキシ；（２５）Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（２６）オキソ；（２７）Ｃ２〜２０アルケニル；並びに（２８）Ｃ２〜２０アルキニルで置換することができる。一部の実施形態では、これらの基の各々は、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。例えば、Ｃ１−アルカリール又はＣ１−アルクヘテロシクリルのアルキレン基は、それぞれ、アリーロイル及び（ヘテロシクリル）オイル置換基を付与するオキソ基でさらに置換することができる。
【０７７０】
本明細書で用いる用語「ジアステレオマー」は、互いの鏡像ではない立体異性体を意味し、これらは、互いに重なり合わない。
本明細書で用いる薬剤の用語「有効量」は、有益又は所望の結果、例えば、臨床結果をもたらすのに十分な量であり、そのため、「有効量」は、これが適用される状況に応じて変動する。例えば、癌を治療する薬剤を投与する状況では、薬剤の有効量は、例えば、薬剤の投与なしで得られた応答と比較して、本明細書に定義する通りの癌の治療を達成するのに十分な量である。
【０７７１】
本明細書で用いる用語「鏡像体」は、本発明の化合物のそれぞれ個別の光学活性形態を意味し、少なくとも８０％（すなわち、一方の鏡像体が少なくとも９０％、且つ他の鏡像体が多くとも１０％）、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９８％の光学純度又は鏡像体過剰率（当分野で標準的方法により決定される）を有する。
【０７７２】
本明細書で用いる用語「ハロ」は、臭素、塩素、ヨウ素、及びフッ素から選択されるハロゲンを表す。
本明細書で用いる用語「ハロアルコキシ」は、ハロゲン基（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ）により置換された、本明細書に定義するアルコキシ基を表す。ハロアルコキシは、１、２、３個、又は炭素数２以上のアルキル基の場合には、４個のハロゲンで置換してよい。ハロアルコキシ基としては、ペルフルオロアルコキシ基（例えば、−ＯＣＦ３）、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＨ２Ｆ、−ＯＣＣｌ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、−ＯＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ）ＣＨ３、及び−ＯＣＨＩＣＨ３が挙げられる。一部の実施形態では、ハロアルコキシ基は、アルキル基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７７３】
本明細書で用いる用語「ハロアルキル」は、ハロゲン基（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩ）によって置換された、本明細書に定義するアルキル基を表す。ハロアルキルは、１、２、３個、又は炭素数２以上のアルキル基の場合には、４個のハロゲンで置換してよい。ハロアルキル基としては、ペルフルオロアルキル基（例えば、−ＣＦ３）、−ＣＨＦ２、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＣｌ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ２Ｂｒ）ＣＨ３、及び−ＣＨＩＣＨ３が挙げられる。一部の実施形態では、ハロアルキル基は、アルキル基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７７４】
本明細書で用いる用語「ヘテロアルキレン」は、構成炭素原子の１つ又は２つが、窒素、酸素、又は硫黄により置換された、本明細書で定義するアルキレン基を指す。一部の実施形態では、ヘテロアルキレン基は、アルキレン基について本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７７５】
本明細書で用いる用語「ヘテロアリール」は、本明細書で定義するヘテロシクリルのサブセットを表し、これらは、芳香族である：すなわち、これらは、単環又は多環式環系内に４ｎ＋２π個の電子を含有する。例示的な非置換ヘテロアリール基は、炭素数１〜１２（例えば、１〜１１、１〜１０、１〜９、２〜１２、２〜１１、２〜１０、又は２〜９）である。一部の実施形態では、ヘテロアリールは、ヘテロシクリル基について本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換される。
【０７７６】
本明細書で用いる用語「ヘテロシクリル」は、別に指定のない限り、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立に選択される１、２、３、又は４個のヘテロ原子を含有する、５、６、又は７員環を表す。５員環は、０〜２個の二重結合を有し、６及び７員環は、０〜３個の二重結合を有する。例示的な非置換ヘテロシクリル基は、炭素数１〜１２（例えば、１〜１１、１〜１０、１〜９、２〜１２、２〜１１、２〜１０、又は２〜９）である。「ヘテロシクリル」という用語はまた、１個又は複数の炭素及び／若しくはヘテロ原子が、単環式環、例えば、キヌクリジニル基の２つの非隣接メンバーを架橋する架橋多環式構造を有する複素環式化合物も表す。用語「ヘテロシクリル」は、前述した複素環式環のいずれかが、１、２、又は３つの炭素環、例えば、アリール環、シクロヘキサン環、シクロヘキセン環、シクロペンタン環、シクロペンテン環、又は別の単環式複素環、例えば、インドリル、キノリル、イソキノリル、テトラヒドロキノリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニルなどに融合している、二環式、三環式、及び四環式基を包含する。融合したヘテロシクリルの例として、トロパン及び１，２，３，５，８，８ａ−ヘキサヒドロインドリジンが挙げられる。複素環式基としては、ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル、ピラゾリル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピリジル、ピペリジニル、ホモピペリジニル、ピラジニル、ピペラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、オキサゾリル、オキサゾリジニル、イソキサゾリル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾリル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、インドリル、インダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、キノキサリニル、ジヒドロキノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、フタラジニル、ベンズイミダソリル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、ベンゾチアジアゾリル、フリル、チエニル、チアゾリジニル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサジアゾリル（例えば、１，２，３−オキサジアゾリル）、プリニル、チアジアゾリル（例えば、１，２，３−チアジアゾール）、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロインドリル、ジヒドロキノリル、テトラヒドロキノリル、テトラヒドロイソキノリル、ジヒドロイソキノリル、ピラニル、ジヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾチエニルなどが挙げられ、１つ又は複数の二重結合が水素で還元又は置換された、これらのジヒドロ及びテトラヒドロ形態も含む。さらに別の例示的なヘテロシクリルとしては、以下：２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−オキサゾリル；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−イミダゾリル；２，３，４，５−テトラヒドロ−５−オキソ−１Ｈ−ピラゾリル（例えば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２−フェニル−５−オキソ−１Ｈ−ピラゾリル）；２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−１Ｈ−イミダゾリル（例えば、２，３，４，５−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−５−メチル−５−フェニル−１Ｈ−イミダゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−１，３，４−オキサジアゾリル（例えば、２，３−ジヒドロ−２−チオキソ−５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾリル）；４，５−ジヒドロ−５−オキソ−１Ｈ−トリアゾリル（例えば、４，５−ジヒドロ−
３−メチル−４−アミノ５−オキソ−１Ｈ−トリアゾリル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリジニル（例えば、１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３，３−ジエチルピリジニル）；２，６−ジオキソ−ピペリジニル（例えば、２，６−ジオキソ−３−エチル−３−フェニルピペリジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソピリジミニル；１，６−ジヒドロ−４−オキソピリミジニル（例えば、２−（メチルチオ）−１，６−ジヒドロ−４−オキソ−５−メチルピリミジン−１−イル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソピリミジニル（例えば、１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３−エチルピリミジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソ−ピリダジニル（例えば、１，６−ジヒドロ−６−オキソ−３−エチルピリダジニル）；１，６−ジヒドロ−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル（例えば、１，６−ジヒドロ−５−イソプロピル−６−オキソ−１，２，４−トリアジニル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリル（例えば、３，３−ジメチル−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−インドリル及び２，３−ジヒドロ−２−オキソ−３，３’−スピロプロパン−１Ｈ−インドール−１−イル）；１，３−ジヒドロ−１−オキソ−２Ｈ−イソ−インドリル；１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソ−インドリル；１Ｈ−ベンゾピラゾリル（例えば、１−（エトキシカルボニル）−１Ｈ−ベンゾピラゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル（例えば、３−エチル−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−ベンゾオキサゾリル（例えば、５−クロロ−２，３−ジヒドロ−２−オキソ−ベンゾオキサゾリル）；２，３−ジヒドロ−２−オキソ−ベンゾオキサゾリル；２−オキソ−２Ｈ−ベンゾピラニル；１，４−ベンゾジオキサニル；１，３−ベンゾジオキサニル；２，３−ジヒドロ−３−オキソ，４Ｈ−１，３−ベンゾチアジニル；３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル（例えば、２−メチル−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−３Ｈ−キナゾリニル）；１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３Ｈ−キナゾリニル（例えば、１−エチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−２，４−ジオキソ−３Ｈ−キナゾリニル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジオキソ−７Ｈ−プリニル（例えば、１，２，３，６−テトラヒドロ−１，３−ジメチル−２，６−ジオキソ−７Ｈ−プリニル）；１，２，３，６−テトラヒドロ−２，６−ジオキソ−１Ｈ−プリニル（例えば、１，２，３，６−テトラヒドロ−３，７−ジメチル−２，６−ジオキソ−１Ｈ−プリニル）；２−オキソベンズ［ｃ，ｄ］インドリル；１，１−ジオキソ−２Ｈ−ナフト［１，８−ｃ，ｄ］イソチアゾリル；並びに１，８−ナフチレンジカルボキサミドが挙げられる。別の複素環式基としては、３，３ａ，４，５，６，６ａ−ヘキサヒドロ−ピロロ［３，４−ｂ］ピロール−（２Ｈ）−イル、及び２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−イル、ホモピペラジニル（又はジアゼパニル）、テトラヒドロピラニル、ジチアゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、オキセパニル、チエパニル、アゾカニル、オキセカニル、及びチオカニルが挙げられる。複素環式基はまた、式：
【０７７７】
【化１３５】
2017500034.tif 000179
の基も含み、
式中、
Ｅ’は、−Ｎ−及び−ＣＨ−からなる群から選択され；Ｆ’は、−Ｎ＝ＣＨ−、−ＮＨ−ＣＨ２−、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−、−ＮＨ−、−ＣＨ＝Ｎ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ２−，−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＯＣＨ２−、−Ｏ−、及び−Ｓ−からなる群から選択され；Ｇ’は、−ＣＨ−及び−Ｎ−からなる群から選択される。本明細書に記載するヘテロシクリル基のいずれも、任意選択で、
以下（１）〜（２９）からなる群から独立に選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基で置換することができる：（１）Ｃ１〜７アシル（例えば、カルボキシアルデヒド）；（２）Ｃ１〜２０アルキル（例えば、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ−Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６アルキルスルフィニル−Ｃ１〜６アルキル、アミノ−Ｃ１〜６アルキル、アジド−Ｃ１〜６アルキル、（カルボキシアルデヒド）−Ｃ１〜６アルキル、ハロ−Ｃ１〜６アルキル（例えば、ペルフルオロアルキル）、ヒドロキシ−Ｃ１〜６アルキル、ニトロ−Ｃ１〜６アルキル、又はＣ１〜６チオアルコキシ−Ｃ１〜６アルキル）；（３）Ｃ１〜２０アルコキシ（例えば、ペルフルオロアルコキシなどのＣ１〜６アルコキシ）；（４）Ｃ１〜６アルキルスルフィニル；（５）Ｃ６〜１０アリール；（６）アミノ；（７）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリール；（８）アジド；（９）Ｃ３〜８シクロアルキル；（１０）Ｃ１〜６アルク−Ｃ３〜８シクロアルキル；（１１）ハロ；（１２）Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ２〜１２ヘテロアリール）；（１３）（Ｃ１〜１２ヘテロシクリル）オキシ；（１４）ヒドロキシ；（１５）ニトロ；（１６）Ｃ１〜２０チオアルコキシ（例えば、Ｃ１〜６チオアルコキシ）；（１７）−（ＣＨ２）ｑＣＯ２ＲＡ’（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＡ’は、（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、（ｃ）水素、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される）；（１８）−（ＣＨ２）ｑＣＯＮＲＢ’ＲＣ’（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＢ’及びＲＣ’は、独立に、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される）；（１９）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＲＤ’（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＤ’は、（ａ）Ｃ１〜６アルキル、（ｂ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｃ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される）；（２０）−（ＣＨ２）ｑＳＯ２ＮＲＥ’ＲＦ’（ｑは、０〜４の整数であり、ＲＥ’及びＲＦ’は、独立に、（ａ）水素、（ｂ）Ｃ１〜６アルキル、（ｃ）Ｃ６〜１０アリール、及び（ｄ）Ｃ１〜６アルク−Ｃ６〜１０アリールからなる群から選択される）；（２１）チオール；（２２）Ｃ６〜１０アリールオキシ；（２３）Ｃ３〜８シクロアルコキシ；（２４）アリールアリコキシ；（２５）Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロシクリル（例えば、Ｃ１〜６アルク−Ｃ１〜１２ヘテロアリール）；（２６）オキソ；（２７）（Ｃ１〜１２ヘテロシクリル）イミノ；（２８）Ｃ２〜２０アルケニル；並びに（２９）Ｃ２〜２０アルキニル。一部の実施形態では、これらの基の各々は、本明細書に記載するように、さらに置換することができる。例えば、Ｃ１−アルカリール又はＣ１−アルクヘテロシクリルのアルキレン基は、それぞれ、アリーロイル及び（ヘテロシクリル）オイル置換基を付与するオキソ基でさらに置換することができる。
【０７７８】
本明細書で用いる用語「（ヘテロシクリル）イミノ」は、イミノ基を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するヘテロシクリル基を表す。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【０７７９】
本明細書で用いる用語「（ヘテロシクリル）オキシ」は、酸素原子を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するヘテロシクリル基を表す。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【０７８０】
本明細書で用いる用語「（ヘテロシクリル）オイル」は、カルボニル基を介して親分子基に結合した、本明細書で定義するヘテロシクリル基を表す。一部の実施形態では、ヘテロシクリル基は、本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基で置換することができる。
【０７８１】
本明細書で用いる用語「炭化水素」は、炭素及び水素原子のみから構成される基を表す。
本明細書で用いる用語「ヒドロキシ」は、−ＯＨ基を表す。一部の実施形態では、ヒドロキシ基は、アルキルについて本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、Ｏ−保護基）で置換することができる。
【０７８２】
本明細書で用いる用語「ヒドロキシアルケニル」は、ただ１つのヒドロキシ基がアルキル基の１炭素原子に結合し得るという条件で、１〜３個のヒドロキシ基により置換された、本明細書で定義するアルケニル基を表し、例として、ジヒドロキシプロペニル、ヒドロキシイソペンテニルなどが挙げられる。一部の実施形態では、ヒドロキシアルケニル基は、アルキルについて本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、Ｏ−保護基）で置換することができる。
【０７８３】
本明細書で用いる用語「ヒドロキシアルキル」は、ただ１つのヒドロキシ基がアルキル基の１炭素原子に結合し得るという条件で、１〜３個のヒドロキシ基により置換された、本明細書で定義するアルキル基を表し、例として、ヒドロキシメチル、ジヒドロキシプロピルなどが挙げられる。一部の実施形態では、ヒドロキシアルキル基は、アルキルについて本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、Ｏ−保護基）で置換することができる。
【０７８４】
本明細書で用いる用語「ヒドロキシアルキニル」は、ただ１つのヒドロキシ基がアルキル基の１炭素原子に結合し得るという条件で、１〜３個のヒドロキシ基により置換された、本明細書で定義するアルキニル基を表す。一部の実施形態では、ヒドロキシアルキニル基は、アルキルについて本明細書に定義する１、２、３、又は４個の置換基（例えば、Ｏ−保護基）で置換することができる。
【０７８５】
本明細書で用いる用語「異性体」は、本発明の任意の化合物の互変異性体、立体異性体、鏡像体、又はジアステレオマーを意味する。本発明の組成物は、１つ又は複数のキラル中心及び／又は二重結合を有してもよく、従って、立体異性体、例えば、二重結合異性体（すなわち、幾何Ｅ／Ｚ異性体）又はジアステレオマー（例えば、鏡像体（すなわち、（＋）若しくは（−））又はシス／トランス異性体）として存在する。本発明によれば、本明細書に示す化学構造、従って、本発明の化合物は、対応する立体異性体の全て、すなわち、立体異性体的に純粋な形態（例えば、幾何的に純粋、鏡像体的に純粋、又はジアステレオマーとして純粋な）と、鏡像体及び立体異性体混合物、例えば、ラセミ混合物の両方を包含する。本発明の化合物の鏡像体及び立体異性体混合物は、典型的に、公知の方法によりその成分鏡像体又は立体異性体に分割することができ、こうした方法として、キラル相ガスクロマトグラフィー、キラル相高性能液体クロマトグラフィー、キラル塩複合体の結晶化、キラル溶媒での化合物の結晶化がある。鏡像体及び立体異性体は、公知の不斉合成方法により、立体異性体的に又は鏡像体的に純粋な中間体、試薬、及び触媒から取得することもできる。
【０７８６】
本明細書で用いる用語「Ｎ−保護アミノ」は、本明細書で定義する１つ又は２つのＮ−保護基に結合した、本明細書で定義する基を表す。
本明細書で用いる用語「Ｎ−保護基」は、合成工程中の不要な反応からアミノ基を保護することを意図する基を表す。一般に用いられるＮ−保護基は、グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）著、「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、第３版、（ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（Ｊｏｈｏｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９１年）に開示されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。Ｎ−保護基としては、以下のものが挙げられる：アシル、アリーロイル、又はカルバミル基、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−
ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイル、並びに保護若しくは非保護Ｄ，Ｌ又はＤ，Ｌアミノ酸のようなキラル補助基、例えば、アラニン、ロイシン、フェニルアラニンなど；スルホニル含有基、例えば、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルなど；カルバメート形成基、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニリル）−１−メチルエトキシカルボニル、α、α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドロキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２、−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルなど、アルカリール基、例えば、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルなど、並びにシリル基、例えば、トリメチルシリルなど。好ましいＮ−保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、アラニル、フェニルスルホニル、ベンジル、ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、及びベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）である。
【０７８７】
本明細書で用いる用語「ニトロ」は、−ＮＯ２基を表す。
本明細書で用いる用語「Ｏ−保護基」は、合成工程中の不要な反応から、酸素含有（例えば、フェノール、ヒドロキシル、又はカルボニル）基を保護することを意図する基を表す。一般に用いられるＯ−保護基は、グリーン（Ｇｒｅｅｎｅ）著、「有機合成における保護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、第３版、（ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（Ｊｏｈｏｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９１年）に開示されており、これは、参照により本明細書に組み込まれる。例示的なＯ−保護基として、以下のものが挙げられる：アシル、アリーロイル、又はカルバミル基、例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、ｔ−ブチルメチルシリル、トリ−イソ−プロピルシリルオキシメチル、４，４’−ジメトキシトリチル、イソブチリル、フェノキシアセチル、４−イソプロピルペヘノキシアセチル、ジメチルホルムアミジノ、及び４−ニトロベンゾイル；アルキルカルボキシ基、例えば、アシル、アセチル、プロピオニル、ピバロイルなど；任意選択で置換されたアリールカルボニル基、例えば、ベンゾイル；シリル基、例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリ−イソ−プロピルシリルオキシメチル（ＴＯＭ）、トリイソプロピルシリルなど：ヒドロキシルとのエーテル形成基、例えば、メチル、メトキシメチル、テトラヒドロピラニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、トリチルなど；アルコキシカルボニル、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｎ−イソプロポキシカルボニル、ｎ−ブチルオキシカルボニル、イソブチルオキシカルボニル、ｓｅｃ−ブチルオキシカルボニル、ｔ−ブチルオキシカルボニル、２−エチルヘキシルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、メチルオキシカルボニルなど；アルコキシアルコキシカルボニル基、例えば、メトキシメトキシカルボニル、エトキシメトキシカルボニル、２−メトキシエトキシカルボニル、２−エトキシエトキシカルボニル、２−ブトキシエトキシカルボニル、２−メト
キシエトキシメトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、プロパルギルオキシカルボニル、２−ブテンオキシカルボニル、３−メチル−２−メチル−２−ブテンオキシカルボニルなど；ハロアルコキシカルボニル、例えば、２−クロロエトキシカルボニル、２−クロロエトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルなど；任意選択で置換されたアリールアルコキシカルボニル基、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−メチルベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２，４−ジニトロベンジルオキシカルボニル、３，５−ジメチルベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、フルオレニルメチルオキシカルボニルなど；並びに任意選択で置換されたアリールオキシカルボニル基、例えば、フェノキシカルボニル、ｐ−ニトロフェノキシカルボニル、ｏ−ニトロフェノキシカルボニル、２，４−ジニトロフェノキシカルボニル、ｐ−メチル−フェノキシカルボニル、ｍ−メチルフェノキシカルボニル、ｏ−ブロモフェノキシカルボニル、３，５−ジメチルフェノキシカルボニル、ｐ−クロロフェノキシカルボニル、２−クロロ−４−ニトロフェノキシ−カルボニルなど）；置換されたアルキル、アリール、及びアカリールエーテル（例えば、トリチル；メチルチオメチル；メトキシメチル；ベンジルオキシメチル；シロキシメチル；２，２，２、−トリクロロエトキシメチル；テトラヒドロピラニル；テトラヒドロフラニル；エトキシエチル；１−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］エチル；２−トリメチルシリルエチル；ｔ−ブチルエーテル；ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、及びニトロベンジル）；シリルエーテル（例えば、トリメチルシリル；トリエチルシリル；トリイソプロピルシリル；ジメチルイソプロピルシリル；ｔ−ブチルジメチルシリル；ｔ−ブチルジフェニルシリル；トリベンジルシリル；トリフェニルシリル；及びジフェニルメチルシリル）；炭酸塩（例えば、メチル、メトキシメチル、９−フルオレニルメチル；エチル；２，２，２、−トリクロロエチル；２−（トリメチルシリル）エチル；ビニル、アリル、ニトロフェニル；ベンジル；メトキシベンジル；３，４−ジメトキシベンジル；及びニトロベンジル）；カルボニル保護基（例えば、ジメチルアセタール、１，３−ジオキソランなどのアセタール及びケタール基；アシラール基；並びに１，３−ジチアン、１，３−ジチオランなどのジチアン基）；カルボン酸保護基（例えば、メチルエステル、ベンジルエステル、ｔ−ブチルエステル、オルトエステルなどのエステル基；及びオキサゾリン基。
【０７８８】
本明細書で用いる用語「オキソ」は、＝Ｏを表す。
本明細書で用いる用語「ペルフルオロアルキル」は、アルキル基に結合した各水素ラジカルが、フッ化物ラジカルによって置換されている、本明細書で定義するアルキル基を表す。ペルフルオロアルキル基の例として、トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチルなどが挙げられる。
【０７８９】
本明細書で用いる用語「ペルフルオロアルコキシ」は、アルコキシ基に結合した各水素ラジカルが、フッ化物ラジカルによって置換されている、本明細書で定義するアルコキシ基を表す。ペルフルオロアルコキシ基の例として、トリフルオロメトキシ、ペンタフルオロエトキシなどが挙げられる。
【０７９０】
本明細書で用いる用語「スピロシクリル」は、その両端が、親基の同じ炭素原子に結合されて、スピロ環状基を形成するＣ２〜７アルキレンジラジカル、並びにまた、その両端が、同じ原子に結合しているＣ１〜６ヘテロアルキレンジラジカルを表す。スピロシクリル基を形成するヘテロアルキレンラジカルは、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立に選択される１、２、３、若しくは４個のヘテロ原子を含有することができる。一部の実施形態では、スピロシクリル基は、ジラジカルが結合している炭素原子を除いて、１〜７個の炭素を含む。本発明のスピロシクリル基は、任意選択で、シクロアルキル及び／又はヘテロシクリル基に関する任意選択の置換基として本明細書に記載する１、２、３、若し
くは４個の置換基で置換してもよい。
【０７９１】
本明細書で用いる用語「立体異性体」は、化合物（例えば、本明細書に記載するいずれかの式の化合物）が有し得るあらゆる異なる異性体並びに配座異性体形態、特に、基本的分子構造の考えられるあらゆる立体化学及び配座異性体形態、あらゆるジアステレオマー、鏡像体及び／又は配座異性体を指す。本発明のいくつかの化合物は、異なる互変異性体形態で存在し得るが、その全てが、本発明の範囲に含まれる。
【０７９２】
本明細書で用いる用語「スルホアルキル」は、−ＳＯ３Ｈのスルホ基により置換された、本明細書で定義するアルキル基を表す。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができ、また、スルホ基は、１つ又は複数のＯ−保護基（例えば、本明細書に記載するもの）でさらに置換することができる。
【０７９３】
本明細書で用いる用語「スルホニル」は、−Ｓ（Ｏ）２−基を表す。
本明細書で用いる用語「チオアルカリール」は、式−ＳＲ（Ｒは、アルカリール基である）の化学置換基を表す。一部の実施形態では、アルカリール基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７９４】
本明細書で用いる用語「チオアルクヘテロシクリル」は、式−ＳＲ（Ｒは、アルクヘテロシクリル基である）の化学置換基を表す。一部の実施形態では、アルクヘテロシクリル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７９５】
本明細書で用いる用語「チオアルコキシ」は、式−ＳＲ（Ｒは、本明細書で定義するアルキル基である）の化学置換基を表す。一部の実施形態では、アルキル基は、本明細書に記載する１、２、３、又は４個の置換基でさらに置換することができる。
【０７９６】
化合物：本明細書で用いる用語「化合物」は、示される構造のあらゆる立体異性体、幾何異性体、互変異性体、及び同位体を包含することを意味する。
本明細書に記載する化合物は、非対称（例えば、１つ又は複数の立体中心を有する）であってよい。別に記載されていない限り、鏡像体及びジアステレオマーなどのあらゆる立体異性体が意図される。非対称置換炭素を含有する本開示の化合物は、光学活性又はラセミ形態で単離することができる。光学活性出発材料から光学活性形態を調製する方法は、ラセミ混合物の分割又は立体選択的合成によるものなど、当分野では公知である。本明細書に記載する化合物には、オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体が存在し、こうした安定な異性体は全て、本開示において考慮される。本開示の化合物のシス及びトランス幾何異性体が記載されているが、これらは、異性体の混合物又は分離異性体形態として単離してもよい。
【０７９７】
本開示の化合物はまた、互変異性体も含む。互変異性形態は、プロトンの同時転位を伴う、単結合と隣接する二重結合との交換（ｓｗａｐｐｉｎｇ）によりもたらされる。互変異性形態は、同じ実験式及び総電荷を有する異性体プロトン化状態であるプロトン互変異性体（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｉｃ  ｔａｕｔｏｍｅｒ）を包含する。プロトン互変異性体の例としては、ケトン−エノールの組み合わせ、アミド−イミド酸の組み合わせ、ラクタム−ラクチムの組み合わせ、アミド−イミド酸の組み合わせ、エナミン−イミンの組み合わせ、並びにプロトンが複素環系の２つ以上の位置を占有し得る環状形態、例えば、１Ｈ−及び３Ｈ−イミダゾール、１Ｈ−、２Ｈ−及び４Ｈ−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−及び２Ｈ−イソインドール、並びに１Ｈ−及び２Ｈ−ピラゾールを包含する。互変異性形態は、平衡状態にあるか、又は適切な置換によって１つの形態へと立体的に固定（ｓｔｅ
ｒｉｃａｌｌｙ  ｌｏｃｋ）することができる。
【０７９８】
本開示の化合物は、中間体又は最終化合物において生じる、原子の同位体の全てをも包含する。「同位体」とは、同じ原子番号を有するが、核内の異なる中性子数のために、異なる質量数を有する原子を指す。例えば、水素の同位体には、トリチウム及び重水素がある。
【０７９９】
本開示の化合物は、常用的方法により、溶媒和又は水和物を形成するための溶媒又は水分子と組み合わせて調製することができる。
保存された：本明細書で用いる用語「保存された」は、比較する２つ以上の配列の同じ位置において改変されない状態で存在するものである、ポリヌクレオチド配列又はポリペプチド配列それぞれのヌクレオチド又はアミノ酸残基を指す。相対的に保存されたヌクレオチド又はアミノ酸は、同配列の他所に出現するヌクレオチド又はアミノ酸に比して、より近縁の配列間で保存されているものである。
【０８００】
一部の実施形態では、２つ以上の配列は、これらが互いに１００％同一であれば、「完全に保存されている」と言われる。一部の実施形態では、２つ以上の配列は、これらが互いに少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、又は少なくとも９５％同一であれば、「高度に保存されている」と言われる。一部の実施形態では、２つ以上の配列は、これらが互いに約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％、約９８％、又は約９９％同一であれば、「高度に保存されている」と言われる。一部の実施形態では、２つ以上の配列は、これらが互いに少なくとも３０％同一、少なくとも４０％同一、少なくとも５０％同一、少なくとも６０％同一、少なくとも７０％同一、少なくとも８０％同一、少なくとも９０％同一、少なくとも９５％同一であれば、「保存されている」と言われる。一部の実施形態では、２つ以上の配列は、これらが互いに約３０％同一、約４０％同一、約５０％同一、約６０％同一、約７０％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、約９８％同一、又は約９９％同一であれば、「保存されている」と言われる。配列の保存は、オリゴヌクレオチド又はポリペプチドの全長に適用してもよいし、又はその一部、領域若しくは特徴に適用してもよい。
【０８０１】
環状又は環状化：本明細書で用いる用語「環状」は、連続的ループの存在を指す。環状分子は、環状である必要はなく、連結して、サブユニットの非開裂鎖を形成するだけでよい。本発明のｍＲＮＡのような環状分子は、単一単位又は多量体のいずれであってもよいし、又は複合体若しくはより高次構造の１つ又は複数の成分を含んでもよい。
【０８０２】
静細胞性：本明細書で用いる用語「静細胞性」は、細胞（例えば、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生体、プリオン、又はこれらの組み合わせの成長、分裂、又は増殖を阻害、低減、抑制することを指す。
【０８０３】
細胞傷害性：本明細書で用いる用語「細胞傷害性」は、細胞（例えば、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）、細菌、ウイルス、真菌、原生動物、寄生体、プリオン、又はこれらの組み合わせを殺傷するか、又はこれらに対して傷害、有毒、若しくは致死的作用を引き起こすことを指す。
【０８０４】
送達：本明細書で用いる「送達」は、化合物、物質、実体、部分、カーゴ又はペイロードを送達する行為又はその様式を指す。
送達剤：本明細書で用いる「送達剤」は、標的細胞に対するポリヌクレオチドのｉｎ  ｖｉｖｏ送達を少なくとも部分的に促進する任意の物質を指す。
【０８０５】
不安定化（された）：本明細書で用いる用語「不安定な」、「不安定化する」又は「領
域を不安定化する」は、同じ領域又は分子の出発、野生型若しくはネイティブ形態よりも不安定な領域又は分子を意味する。
【０８０６】
検出可能標識：本明細書で用いる「検出可能標識」は、Ｘ線撮影法、蛍光、化学発光、酵素活性、吸光などの当分野では公知の方法により容易に検出される別の実体を付着させるか、組み込んだ、若しくはそれと結合させた１つ又は複数のマーカ、シグナル、又は部分を指す。検出可能標識としては、放射性同位体、発蛍光団、発色団、酵素、色素、金属イオン、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン及びハプテンなどのリガンド、量子ドットなどが挙げられる。検出可能標識は、本明細書に開示するペプチド又はタンパク質のいずれの位置に配置してもよい。これらは、アミノ酸、ペプチド、若しくはタンパク質内であってもよいし、又はＮ−若しくはＣ−末端に位置してもよい。
【０８０７】
消化：本明細書で用いる用語「消化」は、より小さな細片又は成分に分解することを意味する。ポリペプチド又はタンパク質に関して述べる場合、消化によってペプチドの産生が起こる。
【０８０８】
遠位：本明細書で用いる用語「遠位」は、中心から、又は目的の地点若しくは領域から離れて位置することを意味する。
コード化タンパク質切断シグナル：本明細書で用いる「コード化タンパク質切断シグナル」は、タンパク質切断シグナルをコードするヌクレオチド配列を指す。
【０８０９】
操作された：本明細書で用いる場合、本発明の実施形態は、それらが、出発点、野生型又はネイティブ分子から変化した特徴又は特性（構造若しくは化学的いずれにかかわらず）を有するように設計されていれば、「操作されている」。
【０８１０】
発現：本明細書で用いる場合、核酸配列の「発現」は、以下のイベントの１つ又は複数を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の生成（例えば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／又は３’末端プロセシング）；（３）ポリペプチド又はタンパク質へのＲＮＡの翻訳；並びに（４）ポリペプチド又はタンパク質の翻訳後修飾。
【０８１１】
特徴：本明細書で用いる「特徴」は、特徴、特性、又は独特の要素を指す。
製剤：本明細書で用いる「製剤」は、少なくともポリヌクレオチド及び送達剤を含む。
断片：本明細書で用いる「断片」は、一部分を指す。例えば、タンパク質の断片は、培養細胞から単離した完全長タンパク質を消化することにより得られるポリペプチドを含み得る。
【０８１２】
機能性：本明細書で用いる「機能性生体分子」は、それが特徴とする特性及び／又は活性を呈示する形態での生体分子である。
相同性：本明細書で用いる用語「相同性」は、ポリマー分子同士、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／若しくはＲＮＡ分子）同士並びに／又はポリペプチド分子同士の全体的関連度を指す。一部の実施形態では、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、若しくは９９％同一であるか、又は類似していれば、互いに「相同的」であると考えられる。用語「相同的」は、必然的に少なくとも２つの配列（ポリヌクレオチド又はポリペプチド配列）同士の比較を指す。本発明によれば、２つのポリヌクレオチド配列は、これらがコードするポリペプチドが、少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１区間について、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、若しくは９９％であれば、相同的であると考えられる。一部の実施形態では、相同的ポリヌクレオチド配列は、少なくとも４〜５の一意的に指定された
アミノ酸の区間をコードする能力によって特徴付けられる。長さ６０ヌクレオチド未満のポリヌクレオチド配列の場合、相同性は、少なくとも４〜５の一意的に指定されたアミノ酸の区間をコードする能力によって決定される。本発明によれば、２つのタンパク質配列は、これらのタンパク質が、少なくとも約２０アミノ酸の少なくとも１区間について少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％同一であれば、相同的であると考えられる。
【０８１３】
同一性：本明細書で用いる用語「同一性」は、ポリマー分子同士、例えば、オリゴヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／若しくはＲＮＡ分子）同士並びに／又はポリペプチド分子同士の全体的関連度を指す。２つのポリヌクレオチドの同一性（％）の計算は、例えば、最適な比較の目的のために２つの配列をアラインメントすることにより実施することができる（例えば、最適アラインメントのために、第１及び第２核酸配列の一方又は両方にギャップを導入し、比較の目的で非同一配列を無視することができる）。いくつかの実施形態では、比較のためにアラインメントする配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は１００％である。次に、対応するヌクレオチド位置のヌクレオチドを比較する。第１配列の位置が、第２配列の対応する位置と同じヌクレオチドによって占められていれば、これらの分子は、その位置で同一である。２つの配列同士の同一性（％）は、２つの配列の最適アラインメントのために導入する必要があるギャップの数、及び各ギャップの長さを考慮に入れて、配列が共有する同一位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列同士の同一性（％）の決定は、数学アルゴリズムを用いて達成することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列同士の同一性（％）は、以下の文献に記載されているものなどの方法を用いて決定することができる：分子計算生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ）、レスク，Ａ．Ｍ．（Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．）編、オックスフォード・ユニバーシティ・プレス（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９８８年；バイオコンピューティング：インフォーマティックス及びゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ
ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）、スミス，Ｄ．Ｗ．（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．）編、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９３年；分子生物学による配列分析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）、フォン・ハインチェ，Ｇ．（ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．）、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）、１９８７年；配列データのコンピュータ解析（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ
ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ）、第１部、グリフィン，Ａ．Ｍ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．）及びグリフィン，Ｈ．Ｇ．（Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．）編、ヒューマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）、ニュージャージー（Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）、１９９４年；並びに配列分析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）、グリブスコフ，Ｍ．（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．）及びデブロー（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）編、Ｍ．ストックトン・プレス（Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、１９９１年。例えば、２つのヌクレオチド同士の同一性（％）は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたメイヤー（Ｍｅｙｅｒｓ）及びミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）のアルゴリズム（ＣＡＶＩＯＳ，１９８９、４：１１−７）を用いて決定することができ、その場合、ＰＡＭ１２０重量残基表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを使用する。あるいは、２つのヌクレオチド同士の同一性（％）は、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを用いて、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを用いて決定することもできる。配列同士の同一性（％）を決定するために一般に使用される方法として、限定はしないが、カリロ，Ｈ．（Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．）、及びリップマン，Ｄ．（Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．）ら著、応用数学ＳＩＡＭ会誌（ＳＩＡＭ  Ｊ．
Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．）、第４８巻、ｐ．１０７３、１９８８年（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているものがある。同一性を決定するための技術は、一般に入手可能なコンピュータプログラムに集成されている。２つの配列同士の相同性を決定するための例示的なコンピュータソフトウェアとして、限定はしないが、ＧＣＧプログラムパッケージ、デブロー，Ｊ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．）ら著、核酸研究（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第１２巻（１）、ｐ．３８７、１９８４年），ＢＬＡＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＮ、及びＦＡＳＴＡ（アルトシュル，Ｓ．Ｆ．（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．）ら著、（分子生物学会誌（Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．）、第２１５巻、ｐ．４０３、１９９０年）が挙げられる。
【０８１４】
遺伝子の発現を阻害する：本明細書で用いる用語「遺伝子の発現を阻害する」は、遺伝子の発現産物の量の低減を引き起こすことを意味する。発現産物は、遺伝子から転写されたＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）又は遺伝子から転写されたｍＲＮＡから翻訳されたポリペプチドである。典型的には、ｍＲＮＡのレベルの低下は、それから翻訳されるポリペプチドのレベル低下をもたらす。発現のレベルは、ｍＲＮＡ又はタンパク質を測定する標準的技術を用いて決定することができる。
【０８１５】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ：本明細書で用いる用語「ｉｎ  ｖｉｔｒｏ」は、生物（例えば、動物、植物、又は微生物）内ではなく、人工環境、例えば、試験管若しくは反応容器、細胞培養物、ペトリ（Ｐｅｔｒｉ）皿などで起こるイベントを指す。
【０８１６】
ｉｎ  ｖｉｖｏ：本明細書で用いる用語「ｉｎ  ｖｉｖｏ」は、生物（例えば、動物、植物、又は微生物）内で起こるイベントを指す。
単離（された）：本明細書で用いる用語「単離（された）」は、物質又は実体が結合された（天然又は実験環境のいずれにかかわらず）複数の成分の少なくともいくつかから分離された物質又は実体を指す。単離された物質は、それらが結合していた物質に対して様々なレベルの純度を有し得る。単離された物質及び／又は実体は、それらが初めに結合していた他の成分の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、又はそれ以上から分離され得る。一部の実施形態では、単離された物質は、約８０％超、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超純粋である。本明細書で用いる場合、物質は、それが、他の成分を実質的に含まなければ「純粋」である。実質的に単離された：「実質的に単離された」は、化合物が、それが形成又は検出された環境から実質的に分離されることを意味する。部分的分離は、例えば、本開示の化合物が富化された組成物を含み得る。実質的分離は、本開示の化合物又はそれらの塩の少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、又は少なくとも約９９重量％を含有する組成物を包含し得る。化合物及びそれらの塩を単離する方法は、当分野では常用的である。
【０８１７】
リンカー：本明細書で用いる場合、リンカーは、例えば、１０〜１，０００原子の原子団を指し、限定はしないが、炭素、アミノ、アルキルアミノ、酸素、硫黄、スルホキシド、スルホニル、カルボニル、及びイミンなどの原子又は原子団から構成され得る。リンカーは、第１末端で核酸塩基又は糖部分の修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドに結合させ、第２末端でペイロード、例えば、検出可能薬剤若しくは治療薬に結合させることができる。リンカーは、核酸配列への組み込みを妨害しないように、十分な長さであってよい。リンカーは、多量体（例えば、２つ以上のポリヌクレオチドの連結を介して）又はコンジュゲートの形成、並びに本明細書に記載するようなペイロードの投与など、任意の有用な目的のために使用することができる。リンカーに組み込むことができる化学基の例として、限定はしないが、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、エーテル、チオ
エーテル、エステル、アルキレン、ヘテロアルキレン、アリール、又はヘテロシクリルが挙げられ、これらの各々は、本明細書に記載するように、任意選択で置換することができる。リンカーの例として、限定はしないが、不飽和アルカン、ポリエチレングリコール（例えば、エチレン若しくはプロピレングリコールモノマー単位、例えば、ジエチレングリコール、ジプロピレングリコール、トリエチレングリコール、トリプロピレングリコール、テトラエチレングリコール、又はテトラエチレングリコール）、及びデキストランポリマーが挙げられる。その他の例として、限定はしないが、リンカー内で切断可能な部分、例えば、ジスルフィド結合（−Ｓ−Ｓ−）又はアゾ結合（−Ｎ＝Ｎ−）が挙げられ、これらは、還元剤又は光分解を用いて切断することができる。選択的に切断可能な結合の非限定的例として、例えば、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）、又は他の還元剤、及び／又は光分解の使用により切断することができるアミド結合、並びに例えば、酸性又は塩基性加水分解により切断することができるエステル結合が挙げられる。
【０８１８】
修飾（された）：本明細書で用いる「修飾（された）」は、本発明の分子の変化した状態又は構造を指す。分子は、化学的、構造的、及び機能的など、多くの方法で修飾することができる。一実施形態では、本発明のｍＲＮＡ分子は、例えば、それが、天然のリボヌクレオチドＡ、Ｕ、Ｇ、及びＣに関する場合、非天然ヌクレオシド及び／又はヌクレオチドの導入により修飾される。キャップ構造のような非標準ヌクレオチドは、Ａ、Ｃ、Ｇ、Ｕリボヌクレオチドの化学構造とは異なるが、「修飾された」とはみなされない。
【０８１９】
天然に存在する：本明細書で用いる場合、「天然に存在する」は、人工的な補助なしに自然界に存在することを意味する。
非ヒト脊椎動物：本明細書で用いる場合、「非ヒト脊椎動物」は、ヒトを除くあらゆる脊椎動物（野生及び家畜種を含む）を包含する。非ヒト脊椎動物の例として、限定はしないが、哺乳動物、例えば、アルパカ、バンテン、バイソン、ラクダ、ネコ、畜牛、シカ、イヌ、ロバ、ガヤル、ヤギ、モルモット、ウマ、ラマ、ラバ、ブタ、ウサギ、トナカイ、ヒツジ、スイギュウ、及びヤクが挙げられる。
【０８２０】
オフターゲット：本明細書で用いる場合、「オフターゲット」とは、いずれか１つ又は複数の標的、遺伝子、又は細胞転写物に対して意図されないあらゆる作用を指す。
オープンリーディングフレーム：本明細書で用いる場合、「オープンリーディングフレーム」とは、所与のリーディングフレーム内にストップコドンを含まない配列を指す。
【０８２１】
作動可能に連結された：本明細書で用いる場合、「作動可能に連結された」という用語は、２つ以上の分子、構築物、転写物、実体、部分などの間の機能性連結を指す。
パラトープ：本明細書で用いる場合、「パラトープ」とは、抗体の抗原結合部位を指す。
【０８２２】
患者：本明細書で用いる場合、「患者」とは、治療を求める若しくは治療が必要となり得る、治療を必要とする、治療を受けている、治療を受ける予定の対象、又は特定の疾患若しくは状態について専門家による医療を受けている対象を指す。
【０８２３】
任意選択で置換された：本明細書において、「任意選択で置換されたＸ」（例えば、任意選択で置換されたアルキル）という形態の用語は、「Ｘ（Ｘは、任意選択で置換される）」（例えば、「アルキル（アルキルは、任意選択で置換される）」と同等であることを意図する。特徴「Ｘ」（例えば、アルキル）自体が任意選択であることを意味するわけではない。
【０８２４】
ペプチド：本明細書で用いる場合、「ペプチド」は、長さが５０アミノ酸以下、例えば、長さが約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０アミノ酸で
ある。
【０８２５】
薬学的に許容される：用語「薬学的に許容される」は、本明細書において、正しい医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、若しくはその他の問題又は併発を伴わずに、ヒト及び動物の組織と接触して用いるのに好適であり、妥当な利益／リスク比に相応する化合物、材料、組成物、及び／又は剤形を指すために用いられる。
【０８２６】
薬学的に許容される賦形剤：本明細書で用いる用語「薬学的に許容される賦形剤」は、本明細書に記載する化合物以外の任意の成分（例えば、活性化合物を懸濁又は溶解させることができるビヒクル）であって、患者において実質的に非毒性かつ非炎症性である特性を有する成分を指す。賦形剤として、例えば、以下のものが挙げられる：固結防止剤、抗酸化剤、結合剤、コーティング、圧縮補助剤、崩壊剤、染料（色素）、柔軟剤、乳化剤、充填（希釈）剤、膜形成剤若しくはコーティング剤、香味料、香料、滑剤（流動促進剤）、潤滑剤、防腐剤、印刷インク、吸着剤、懸濁若しくは分散剤、甘味料、及び水和水。例示的な賦形剤として、限定はしないが、以下のものが挙げられる：ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶性セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、及びキシリトール。
【０８２７】
薬学的に許容される塩：本開示は、本明細書に記載する化合物の薬学的に許容される塩も含む。本明細書で用いる場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物が、既存の酸又は塩基部分をその塩形態に変換することにより（例えば、遊離塩基基を好適な有機酸と反応させることにより）、親化合物が修飾されている、開示する化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例として、限定はしないが、アミンのような塩基性残基の無機又は有機酸塩；カルボン酸のような酸性残基のアルカリ又は有機塩などが挙げられる。代表的な酸付加塩として、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、カンホラート、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプトン酸塩、ヘキサン酸塩、ヒドロ臭化物、ヒドロ塩化物、ヒドロヨウ化物、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリル酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチネート、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。アルカリ塩又はアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、並びに非毒性アンモニウム、第四アンモニウムが挙げられ、アミンカチオンとして、限定はしないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが挙げられる。本開示の薬学的に許容される塩としては、例えば、非毒性無機又は有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩を含む。本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法により、塩基性又は酸性
部分を含む親化合物から合成することができる。一般に、このような塩は、これらの化合物の遊離酸又は塩基形態を水若しくは有機溶媒、又は両者の混合物中の化学量の適切な塩基又は酸と反応させることによって調製することができ；一般に、エーテル、酢酸エチル、イソプロパノール、又はアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。好適な塩のリストは、以下の文献にみいだされる：「レミントンの薬学の科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、第１７版、マック出版社（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、ペンシルベニア州イーストン（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）、１９８５年、ｐ．１４１８、「製剤用塩：特性、選択、及び使用（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｕｓｅ）」、Ｐ．Ｈ．スタール（Ｐ．Ｈ．Ｓｔａｈｌ）及びＣ．Ｇ．ワームス（Ｃ．Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ）（編）、ワイリー−ＶＣＨ（Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ）、２００８年、並びにバージ（Ｂｅｒｇｅ）ら著、製剤科学会誌（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、第６６巻、ｐ．１〜１９、１９７７年。
【０８２８】
薬物動態学的：本明細書で用いる「薬物動態学的」とは、それが、生きた生物に投与される物質の運命の決定に関する場合、分子又は化合物のいずれか１つ又は複数の特性を指す。薬物動態学は、吸収、分布、代謝及び排泄の範囲及び速度など、いくつかの分野に分けられる。これは、一般に、ＡＤＭＥと呼ばれ、ここで、（Ａ）吸収は、物質が血液循環に進入するプロセスであり；（Ｄ）分布は、身体の体液及び組織全体に及ぶ物質の分散又は播種であり；（Ｍ）代謝（又は生体内変化）は、親化合物から娘の代謝産物への不可逆的変化であり；（Ｅ）排泄（又は排除）は、身体からの物質の排除を指す。稀なケースにおいて、一部の薬剤は、身体組織中に不可逆的に蓄積する。
【０８２９】
薬学的に許容される溶媒和物：本明細書で用いる「薬学的に許容される溶媒和物」は、好適な溶剤の分子が、結晶格子に組み込まれている本発明の化合物を意味する。好適な溶媒は、投与する用量で生理学的に耐容可能なものである。例えば、溶媒和物は、有機溶媒、水、又はこれらの混合物を含む溶液からの結晶化、再結晶化、又は沈殿により調製することができる。好適な溶媒の例として、エタノール、水（例えば、モノ−、ジ−、及びトリ−水和物）、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＣ）、１，３−ジメチル−２−イミダゾリジノン（ＤＭＥＵ）、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２−（１Ｈ）−ピリミジノン（ＤＭＰＵ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、プロピレングリコール、酢酸エチル、ベンジルアルコール、２−ピロリドン、安息香酸ベンジルなどが挙げられる。水が溶媒であるとき、溶媒和物は、「水和物」と呼ばれる。
【０８３０】
物理化学的：本明細書で用いる「物理化学的」とは、物理的及び／又は化学的特性、あるいは、それに関するものを意味する。
予防する：本明細書で用いる「予防する」は、感染症、疾患、障害及び／又は状態の開始を一部又は完全に遅延させる；特定の感染症、疾患、障害及び／又は状態の１つ又は複数の症状、特徴、若しくは臨床的発現の開始を一部又は完全に遅延させる；感染症、特定の疾患、障害及び／又は状態の１つ又は複数の症状、特徴、若しくは発現の開始を一部又は完全に遅延させる；特定の感染症、疾患、障害及び／又は状態からの進行を一部又は完全に遅延させる；感染症、疾患、障害及び／又は状態に関連する疾病を発生するリスクを低減することを指す。
【０８３１】
プロドラッグ：本開示は、本明細書に記載する化合物のプロドラッグも包含する。本明細書で用いる「プロドラッグ」は、任意の物質、分子又は実体が化学的若しくは物理的改変時に治療薬として作用することを断定する（ｐｒｅｄｉｃａｔｅ  ｆｏｒ）形態をした
これらの物質、分子又は実体を指す。プロドラッグは、任意の方法で共有結合又は隔離してよく、これらは、哺乳動物対象への投与前、投与時、又は投与後に活性薬部分を放出するか、又は活性薬部分に変換される。プロドラッグは、常用的操作又はｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかで、修飾物が親化合物へと切断されるように、化合物中に存在する機能性基を修飾することによって調製することができる。プロドラッグは、ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、又はカルボキシ基が任意の基に結合され、これが、哺乳動物対象に投与されたとき、切断されて、それぞれ遊離ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル、又はカルボキシ基を形成する化合物を含む。プロドラッグの調製及び使用は、以下の文献に論じられている：Ｔ．ヒグチ（Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ）及びＶ．ステラ（Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ）、「新規送達系としてのプロドラッグ（Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、Ａ．Ｃ．Ｓ．シンポジウムシリーズ（Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ）の第１４巻、並びに「薬剤設計における生体可逆的担体（Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ）、エドワード  Ｂ．ロシェ（Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ）編、アメリカン・ファーマスーティカル・アソシエーション・アンド・パーガモン・プレス（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  ｐｒｅｓｓ）、１９８７年。
【０８３２】
増殖する：本明細書で用いる用語「増殖する」は、成長、拡大、若しくは増加する、又は急速な成長、拡大、若しくは増加を引き起こすことを意味する。「増殖性」とは、増殖する能力を有することを意味する。「抗増殖性」とは、増殖性に対抗するか、又は増殖には不適切な特性を有することを意味する。
【０８３３】
タンパク質切断部位：本明細書で用いる「タンパク質切断部位」は、アミノ酸鎖の制御された切断が、化学、酵素、又は光化学的手段により達成することができる、部位を指す。
【０８３４】
タンパク質切断シグナル：本明細書で用いる「タンパク質切断シグナル」は、切断部位対象のポリペプチドをフラグ標識又はマークする少なくとも１つのアミノ酸を指す。
目的のタンパク質：本明細書で用いる用語「目的のタンパク質」又は「所望のタンパク質」は、本明細書に記載するもの、並びにそれらの断片、突然変異体、変異体、及び改変物を包含する。
【０８３５】
近位：本明細書で用いる用語「近位」は、中心、又は目的の地点若しくは領域により接近して位置することを意味する。
精製（された）：本明細書で用いる場合、「精製する」、「精製された」、「精製」は、実質的に純粋にするか、又は不要な成分、材料汚染、混合物若しくは不純物を取り除くことを意味する。
【０８３６】
サンプル：本明細書で用いる用語「サンプル」又は「生物学的サンプル」は、その組織、細胞又は構成部分（例えば、限定はしないが、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、羊水、臍帯血、尿、膣液及び精液などの体液）のサブセットを指す。サンプルはさらに、全生物から調製されたホモジネート、溶解物若しくは抽出液、又はその組織、細胞若しくは構成部分のサブセット、又はそれらの画分若しくは部分も包含し得るが、このようなものとして、限定はしないが、例えば、血漿、血清、脳脊髄液、リンパ液、皮膚の外側切片、呼吸、腸、及び尿生殖器管、涙、唾液、乳汁、血液細胞、腫瘍、臓器が挙げられる。サンプルはさらに、タンパク質又は核酸分子などの細胞成分を含有し得る、媒体、例えば、栄養ブロス若しくはゲルも指す。
【０８３７】
シグナル配列：本明細書で用いる用語「シグナル配列」は、タンパク質の輸送又は局在
化を指令することができる配列を指す。
有意又は有意に：本明細書で用いる用語「有意」又は「有意に」は、用語「実質的に」と同義で用いられる。
【０８３８】
一単位用量：本明細書で用いる場合、「一単位用量」は、１用量／１回／１経路／１接触点、すなわち、１回の投与イベントで投与される任意の治療薬の用量である。
類似性：本明細書で用いる用語「類似性」は、ポリマー分子同士、例えば、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子及び／若しくはＲＮＡ分子）同士並びに／又はポリペプチド分子同士の全体的関連度を指す。ポリマー分子同士の類似性（％）の計算は、類似性（％）の計算が、当分野では理解されるように、保存的置換を考慮に入れること以外は、同一性（％）の計算と同様に実施することができる。
【０８３９】
分割用量：本明細書で用いる「分割用量」は、一単位用量又は１日総用量を２つ以上の用量に分割することである。
安定な：本明細書で用いる「安定な」は、反応混合物からの有用な純度までの単離に耐えるのに十分に頑健であり、好ましくは、有効な治療薬への製剤化が可能な化合物を指す。
【０８４０】
安定化（した）：本明細書で用いる用語「安定化する」、「安定化（した）」、「安定化領域」は、安定にする、又は安定することを意味する。
対象：本明細書で用いる用語「対象」又は「患者」は、例えば、実験、診断、予防、及び／又は治療の目的で、本発明の化合物が投与され得るいずれかの生物を指す。典型的な対象としては、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、及びヒト）及び／又は植物が挙げられる。
【０８４１】
実質的に：本明細書で用いる用語「実質的に」は、目的の特徴又は特性の全範囲又は程度若しくはほぼ全範囲又は程度を示す定性的状態を指す。生物学分野の通常の技術者であれば、生物学及び化学的現象が、完了に到達する、及び／又は完全性まで進行する、あるいは、絶対的な結果を達成又は回避することは、あったとしても、稀であることを理解されよう。従って、「実質的に」という用語は、本明細書において、多種多様な生物学及び化学的現象に固有の完全性の起こり得る欠如を表すために用いられる。
【０８４２】
実質的に等しい：本明細書で用いる場合、これが、用量間の時間差に関するとき、この用語は、プラス／マイナス２％を意味する。
実質的に同時に：本明細書で用いる場合で、かつ、これが、複数の用量に関するとき、この用語は、２秒以内を意味する。
【０８４３】
〜に罹患している：疾患、障害及び／又は状態「に罹患している」個体は、疾患、障害及び／又は状態を有すると診断されているか、又はその１つ又は複数の症状を呈示する。
〜に罹患しやすい：疾患、障害、及び／又は状態「に罹患しやすい」個体は、疾患、障害、及び／若しくは状態を有すると診断されていないか、並びに／又はその症状を呈示していないと考えられるが、疾患又はその症状を発症する傾向を有する。一部の実施形態では、疾患、障害、及び／又は状態（例えば、癌）に罹患しやすい個体は、以下に挙げるものの１つ又は複数の症状を特徴としうる：（１）疾患、障害、及び／又は状態の発症に関連する遺伝子突然変異；（２）疾患、障害、及び／又は状態の発症に関連する遺伝子多型；（３）疾患、障害、及び／若しくは状態に関連するタンパク質並びに／又は核酸の発現及び／若しくは活性の増大及び／若しくは低減；（４）疾患、障害、及び／若しくは状態の発症に関連する習慣並びに／又は生活様式；（５）疾患、障害、及び／又は状態に関連する家族の病歴；並びに（６）疾患、障害、及び／若しくは状態の発症に関連する微生物への暴露並びに／又は感染。一部の実施形態では、疾患、障害、及び／又は状態に罹患し
やすい個体は、将来、疾患、障害、及び／又は状態を発症する。一部の実施形態では、疾患、障害、及び／又は状態に罹患しやすい個体は、将来、疾患、障害及び／又は状態を発症しない。
【０８４４】
合成：本明細書で用いる用語「合成」は、人の手で生産、調製、及び／又は製造されることを意味する。本発明のポリヌクレオチド若しくはポリペプチド又はその他の分子の合成は、化学的又は酵素的のいずれであってもよい。
【０８４５】
標的細胞：本明細書で用いる「標的細胞」は、１つ又は複数の目的の細胞を指す。これらの細胞は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｓｉｔｕで、又は生物の組織若しくは器官においてみいだされ得る。生物は、動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト、最も好ましくは患者であってよい。
【０８４６】
治療薬：用語「治療薬」は、対象に投与されると、治療、診断、及び／若しくは予防効果を有する、並びに／又は生物学的及び／若しくは薬理学的作用を誘発する任意の薬剤を指す。
【０８４７】
治療有効量：本明細書で用いる用語「治療有効量」は、感染症、疾患、障害、及び／若しくは状態に罹患しているか、又は罹患しやすい対象に投与されたとき、感染症、疾患、障害、及び／若しくは状態の症状を治療、改善する、その開始を診断、予防する、並びに／又は遅延させる上で十分な、送達すべき薬剤（例えば、核酸、薬物、治療薬、診断薬、予防薬など）の量を意味する。
【０８４８】
治療有効結果：本明細書で用いる用語「治療有効結果」は、感染症、疾患、障害、及び／若しくは状態に罹患しているか、又は罹患しやすい対象において、感染症、疾患、障害、及び／若しくは状態の症状を治療、改善する、その発症を診断、予防する、並びに／又は遅延させる上で十分な結果を意味する。
【０８４９】
１日総用量：本明細書で用いる用語「１日総用量」は、２４時間毎に投与又は処方される量である。これは、１単位用量として投与してもよい。
転写因子：本明細書で用いる用語「転写因子」は、例えば、転写の活性化又は抑制により、ＲＮＡへのＤＮＡの転写を調節するＤＮＡ結合タンパク質を指す。転写の調節だけを実施する転写因子もあれば、他のタンパク質と共同で作用するものもある。一部の転写因子は、特定の条件下で、転写の活性化及び抑制の両方を実施することができる。概して、転写因子は、特定の標的配列、又は標的遺伝子の調節領域内の特定の共通配列と高度に類似する配列に結合する。転写因子は、標的遺伝子だけの転写、又は他の分子との複合体における転写を調節し得る。
【０８５０】
治療（すること）：本明細書で用いる用語「治療（すること）」は、特定の感染症、疾患、障害、及び／若しくは状態の１つ又は複数の症状若しくは特徴の部分的若しくは完全な緩和、回復、改善、軽減、その開始の遅延、その進行の阻害、その重症度の軽減、並びに／又はその発生率の低下を指す。例えば、癌を「治療すること」は、腫瘍の生存、成長、及び／又は広がりの阻害を指し得る。治療は、疾患、障害、及び／若しくは状態に関連する疾病を発症するリスクを低減する目的で、疾患、障害、及び／若しくは状態の兆候を呈示していない対象及び／又は疾患、障害及び／若しくは状態の早期兆候しか呈示していない対象に投与してもよい。
【０８５１】
非修飾：本明細書で用いる「非修飾」は、任意の方法で変化させる前の任意の物質、化合物又は分子を指す。非修飾は、常にではないが、野生型又はネイティブ形態の生体分子を指す。分子は、連続した修飾を受けてもよく、これによって、各々の修飾分子が、後の
修飾のための「非修飾」出発分子として役立ち得る。
【０８５２】
同等物及び範囲
当業者であれば、本明細書に記載する特定の実施形態の様々な同等物を認識するか、又は常用的実験を用いるだけで、これらを確認することができよう。本発明の範囲は、以上の説明に限定されるものではなく、添付の特許請求の範囲に記載される。
【０８５３】
添付の特許請求の範囲において、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」などの冠詞は、文脈から明白に反対又は他の意味に解釈すべき場合を除いて、１つ又は２つ以上を意味し得る。１グループの１つ又は複数のメンバー間で「又は（ｏｒ）」を含む請求項又は本明細書の記載は、文脈から明白に反対又は他の意味に解釈すべき場合を除いて、グループメンバーの１つ、２つ以上、又は全部が、所与の物質若しくはプロセスに存在する、そこで使用される、あるいは関連していれば、満たされると考えられる。本発明は、グループの厳密に１メンバーが、所与の物質若しくはプロセスに存在する、そこで使用される、あるいは関連している実施形態を包含する。本発明は、グループメンバーの２つ以上、又は全部が、所与の物質若しくはプロセスに存在する、使用される、あるいは関連している実施形態を包含する。
【０８５４】
また、用語「含む（こと）」は、非限定的であることを意図し、追加的要素又はステップの包含を可能にするが、それを要求するわけではない。従って、用語「含む（こと）」が本明細書で用いられるとき、用語「〜から構成される（こと）」も包含され、開示される。
【０８５５】
範囲が付与される場合、両端の値も含まれる。さらに、別に指示されているか、又は文脈及び当業者の理解から明白に他の意味に解釈すべき場合を除いて、範囲として表わされている値は、文脈から明らかに他の意味に解釈すべき場合を除いて、当該範囲の下限の単位の１０分の１まで、本発明の様々な実施形態における表示範囲内のあらゆる具体的値若しくは部分範囲を想定し得ることは理解すべきである。
【０８５６】
さらに、先行技術に含まれる本発明のいずれかの具体的な実施形態が、請求項のいずれか１つ又は複数から明示的に排除され得ることは理解すべきである。このような実施形態は、当業者には周知であるとみなされることから、排除が明示的に記載されていない場合であっても、排除され得る。本発明の組成物のいずれかの具体的な実施形態（例えば、いずれかの核酸又はそれによりコードされたタンパク質；いずれかの生成方法；いずれかの使用方法など）は、先行技術の存在との関連の有無にかかわらず、あらゆる理由で、いずれか１つ又は複数の請求項から排除することができる。
【０８５７】
全ての引用資料、例えば、本明細書で引用する参照文献、刊行物、データベース、データベースエントリ、及び技術は、引用に際して明示的に記載していない場合であっても、参照により本願に組み込むものとする。引用資料と本願の記載内容に矛盾が生じる場合には、本願の記載内容が優先されるものとする。
【０８５８】
（実施例）
本開示を以下の実施例でさらに説明するが、これらの実施例は、特許請求の範囲に記載される本開示の範囲を限定するものではない。
【０８５９】
実施例１：ｃＤＮＡ生成のためのＰＣＲ
ｃＤＮＡの調製のためのＰＣＲ手順は、カパ・バイオシステムズ（Ｋａｐａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）（マサチューセッツ州ウーバン（Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ））による２×カパ・ハイファイ（ＫＡＰＡ  ＨＩＦＩ）（商標）ホットスタート・レディミックス（Ｈｏｔ
Ｓｔａｒｔ  ＲｅａｄｙＭｉｘ）を用いて実施する。このシステムは、２×カパ・レディミックス（ＫＡＰＡ  ＲｅａｄｙＭｉｘ）１２．５μｌ；フォワードプライマー（１０ｕＭ）０．７５μｌ；リバースプライマー（１０ｕＭ）０．７５μｌ；鋳型ｃＤＮＡ１００ｎｇ；２５．０μｌまで希釈するｄＨ２Ｏを含む。反応条件は、９５℃で５分、９８℃で２０秒を２５サイクル、５８℃で１５秒、７２℃で４５秒、７２℃で５分に続いて終了まで４℃である。
【０８６０】
本発明のリバースプライマーは、ポリＡ１２０のためのポリＴ１２０をｍＲＮＡに組み込む。より長い、又は短いポリＴ配列を有する他のリバースプライマーを用いて、ｍＲＮＡ中のポリＡ尾部の長さを調節することができる。
【０８６１】
反応物は、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のピュアリンク（ＰＵＲＥＬＩＮＫ）（商標）ＰＣＲマイクロキット（ＰＣＲ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ）（カリフォルニア州カールスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））（最大５μｇ）を用いて、製造者の指示に従い浄化する。反応物が大量であるほど、高容量の製品を使用して浄化する必要がある。浄化の後、ナノドロップ（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて、ｃＤＮＡを定量してから、ｃＤＮＡが予想サイズであることを確認するために、アガロースゲル電気泳動により分析する。次に、ｃＤＮＡを配列決定分析に付した後、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応を開始する。
【０８６２】
実施例２：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）
Ａ．材料及び方法
本発明の修飾ｍＲＮＡは、ヌクレオチドミックスが修飾ヌクレオチドを含有する以外は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写のための標準的実験方法及び材料を用いて実施する。目的の遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は、強力なコザック（Ｋｏｚａｋ）翻訳開始シグナルを含有する５’非翻訳領域（ＵＴＲ）と、アデノシン類似体を含まないｍＲＮＡのポリＡ尾部の鋳型化付加（ｔｅｍｐｌａｔｅｄ  ａｄｄｉｔｉｏｎ）のためのオリゴ（ｄＴ）配列で終結するα−グロビン３’ＵＴＲによってフランキングされ得る。アデノシン含有ｍＲＮＡは、翻訳後ポリ（Ａ）ポリメラーゼポリ（Ａ）尾部付加を可能にするために、オリゴ（ｄＴ）配列なしで合成する。
【０８６３】
ＯＲＦはまた、様々な上流又は下流付加（限定はしないが、βグロビン、タグなど）を含んでもよく、これらは、限定はしないが、ＤＮＡ２．０（カリフォルニア州メンローパーク（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ））などの最適化サービスから注文することができ、ＸｂａＩ認識を有し得る複数のクローニング部位を含んでいてもよい。構築物の受け取り直後に、それを再構成し、ケミカルコンピテント大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に形質転換してもよい。
【０８６４】
本発明のために、ＮＥＢ  ＤＨ５−αコンピテント大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を用いてもよい。形質転換は、１００ｎｇのプラスミドを用いて、ＮＥＢの指示に従って実施する。プロトコルは以下の通りである：
ＮＥＢ  ５−αコンピテント大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞のチューブを氷上で１０分解凍する。
【０８６５】
１ｐｇ〜１００ｎｇのプラスミドＤＮＡを含有する１〜５μｌを細胞混合物に添加する。注意深くチューブを４〜５回振って、細胞とＤＮＡを混合する。泡を形成しないこと。
混合物を氷上に３０分間配置する。混合しないこと。
【０８６６】
４２℃で厳密に３０秒間のヒートショック。混合しないこと。
氷上に５分間配置する。混合しないこと。
９５０μｌの室温ＳＯＣをピペットで混合物に導入する。
【０８６７】
３７℃に６０分間配置する。激しく（２５０ｒｐｍ）振盪又は回転させる。
選択プレートを３７℃に温める。
チューブを振ったり反転させたりすることにより、細胞を入念に混合する。
【０８６８】
各希釈物の５０〜１００μｌを選択プレートに塗布し、３７℃で一晩インキュベートする。あるいは、３０℃で２４〜３６時間、又は２５℃で４８時間インキュベートする。
次に、単一コロニーを使用して、適切な抗生物質を用いた５ｍｌのＬＢ増殖培地に接種した後、５時間増殖させる（２５０ＲＰＭ、３７℃）。続いて、これを用いて、２００ｍｌ培養物を接種し、同じ条件下で一晩増殖させる。
【０８６９】
プラスミド（最大８５０μｇ）を単離するために、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ピュアリンク（ＰＵＲＥＬＩＮＫ）（商標）ハイピュア・マキシプレップ・キット（ＨｉＰｕｒｅ  Ｍａｘｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ）（カリフォルニア州カールスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を用いて、製造者の指示に従いマキシプレップを実施する。
【０８７０】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写（ＩＶＴ）のためのｃＤＮＡを作製するために、最初に、ＸｂａＩのような制限酵素を用いて、プラスミドを線状化する。ＸｂａＩを用いた典型的な制限消化は、以下を含む：プラスミド１．０μｇ；１０×バッファー１．０μｌ；ＸｂａＩ１．５μｌ；ｄＨ２Ｏ、最大１０μｌ；３７℃で１時間のインキュベート。実験室規模（＜５μｇ）で実施する場合、反応物は、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のピュアリンク（ＰＵＲＥＬＩＮＫ）（商標）ＰＣＲマイクロキット（ＰＣＲ  Ｍｉｃｒｏ  Ｋｉｔ）（カリフォルニア州カールスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を用いて、製造者の指示に従い浄化する。精製の規模が大きくなるほど、高い負荷容量の製品、例えば、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の標準ピュアリンク（ＰＵＲＥＬＩＮＫ）（商標）ＰＣＲキット（ＰＣＲ  Ｋｉｔ）（カリフォルニア州カールスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））が必要となり得る。浄化の後、ナノドロップ（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて、線状化ベクターを定量してから、線状化を確認するために、アガロースゲル電気泳動を用いて分析する。
【０８７１】
ＩＶＴ反応
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応によって、修飾ヌクレオチド又は修飾核酸を含有するｍＲＮＡが生成される。投入ヌクレオチド三リン酸（ＮＴＰ）ミックスは、天然及び非天然ＮＴＰを用いて、実験室内で作製する。
【０８７２】
典型的なｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応は、以下を含む。
鋳型ｃＤＮＡ          １．０オｇ
１０ｘ転写バッファー（４００ｍＭ  トリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．０，１９０ｍＭ  ＭｇＣｌ２，５０ｍＭ  ＤＴＴ，１０ｍＭ  スペルミジン）          ２．０オｌ
カスタムＮＴＰ（各々２５ｍＭ          ７．２オｌ
ＲＮａｓｅ阻害剤          ２０Ｕ
Ｔ７  ＲＮＡポリメラーゼ          ３０００Ｕ
ｄＨ２０          最大２０．０オｌ
３７℃で３時間〜５時間のインキュベーション。
【０８７３】
粗ＩＶＴミックスは、翌日の浄化のために、４℃で一晩貯蔵してもよい。続いて、１ＵのＲＮａｓｅ非含有ＤＮａｓｅを用いて、オリジナル鋳型を消化する。３７℃で１５分のインキュベーション後、アンビオン（Ａｍｂｉｏｎ）のメガクリア（ＭＥＧＡＣＬＥＡＲ）（商標）キット（Ｋｉｔ）（テキサス州オースチン（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ））を用いて、製造者の指示に従い、ｍＲＮＡを精製する。このキットは、最大５００μｇのＲＮＡを
精製することができる。浄化の後、ナノドロップ（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて、ＲＮＡを定量してから、ＲＮＡが適正なサイズであること、及びＲＮＡの分解が一切起こっていないことを確認するために、アガロースゲル電気泳動により分析する。
【０８７４】
Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼは、以下：Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ、Ｔ３ＲＮＡポリメラーゼ及び突然変異ポリメラーゼ、例えば、限定はしないが、修飾ＮＴＰを組み込むことができる新規のポリメラーゼ、並びに別のプロモータを認識するリュウ（Ｌｉｕ）により記載されているポリメラーゼ（エスベルト（Ｅｓｖｅｌｔ）ら著、（ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２０１１年、第４７２巻（７３４４）、ｐ．４９９〜５０３及び米国特許出願公開第２０１１０１７７４９５号明細書）から選択することができ、エリントン（Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ）（チェリセリーカッティル（Ｃｈｅｌｌｉｓｅｒｒｙｋａｔｔｉｌ）及びエリントン（Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ）著、ネイチャー・バイオテクノロジー（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、２００４年、第２２巻（９）、ｐ．１１５５〜１１６０）は、２’−Ｏ−メチルＲＮＡを転写するＴ７ＲＮＡポリメラーゼ変異体を記載し、また、ソーサ（Ｓｏｕｓａ）（パディラ（Ｐａｄｉｌｌａ）及びソーサ（Ｓｏｕｓａ）、核酸研究（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、２００２年、第３０巻（２４）、ｐ．ｅ１２８）は、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ二重突然変異体を記載している；尚、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【０８７５】
Ｂ．修飾ｍＲＮＡのアガロースゲル電気泳動
ウェル中の非変性１．２％アガロースＥ−ゲル（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、カリフォルニア州カールスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））上に、個別の修飾ｍＲＮＡ（２０μｌ容量中２００〜４００ｎｇ）をロードした後、製造者のプロトコルに従って１２〜１５分間泳動させる。
【０８７６】
Ｃ．ＲＴ−ＰＣＲ産物のアガロースゲル電気泳動
非変性１．２％アガロースＥ−ゲル（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、カリフォルニア州カールスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））のウェル中に、個別の逆転写ＰＣＲ産物（２００〜４００ｎｇ）をロードした後、製造者のプロトコルに従って１２〜１５分間泳動させる。
【０８７７】
Ｄ．ナノドロップ（ＮａｎｏＤｒｏｐ）修飾ｍＲＮＡ定量及びＵＶスペクトルデータ
ナノドロップ（ＮａｎｏＤｒｏｐ）ＵＶ吸光リーディングのためにＴＥバッファー（１μｌ）中の修飾ｍＲＮＡを用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応からの各修飾ｍＲＮＡの収率を定量する（ＵＶ吸光トレースは示していない）。
【０８７８】
実施例３：ｍＲＮＡの酵素的キャッピング
ｍＲＮＡのキャッピングを以下のように実施する（その際、混合物は、ＩＶＴ  ＲＮＡ６０μｇ〜１８０μｇと、最大７２μｌのｄＨ２Ｏを含む）。混合物を６５℃で５分間インキュベートして、ＲＮＡを変性させた後、直ちに氷上に移す。
【０８７９】
次に、プロトコルは、１０×キャッピングバッファー（０．５Ｍトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、６０ｍＭ  ＫＣｌ、１２．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２）（１０．０μｌ）；２０ｍＭ
ＧＴＰ（５．０μｌ）；２０ｍＭ  Ｓ−アデノシルメチオニン（２．５μｌ）；ＲＮａｓｅ阻害剤（１００Ｕ）；２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（４００Ｕ）；ワクシニアキャッピング酵素（グアニリルトランスフェラーゼ）（４０Ｕ）；ｄＨ２Ｏ（最大２８μｌ）の混合；並びに、６０μｇのＲＮＡの場合、３７℃で３０分間、又は１８０μｇのＲＮＡの場合、最大２時間のインキュベーションを含む。
【０８８０】
続いて、アンビオン（Ａｍｂｉｏｎ）のメガクリア（ＭＥＧＡＣＬＥＡＲ）（商標）キ
ット（Ｋｉｔ）（テキサス州オースチン（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ））を用いて、製造者の指示に従い、ｍＲＮＡを精製する。浄化の後、ナノドロップ（ＮＡＮＯＤＲＯＰ）（商標）（サーモフィッシャー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、マサチューセッツ州ウォルサム（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ））を用いて、ＲＮＡを定量してから、ＲＮＡが適正なサイズであること、及びＲＮＡの分解が一切起こっていないことを確認するために、アガロースゲル電気泳動により分析する。配列決定用のｃＤＮＡを作製するために、逆転写ＰＣＲを実施することによってＲＮＡ産物を配列決定してもよい。
【０８８１】
実施例４：５’−グアノシンキャッピング
Ａ．材料及び方法
クローニング、遺伝子合成及びベクター配列決定は、ＤＮＡ２．０社（ＤＮＡ２．０  Ｉｎｃ．）（カリフォルニア州メンローパーク（Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ））により実施させてもよい。ＸｂａＩを用いて、ＯＲＦを制限消化した後、テイルドＰＣＲ又はテイルなしＰＣＲを用いたｃＤＮＡ合成のために使用する。テイルドＰＣＲｃＤＮＡ産物は、修飾ｍＲＮＡ合成反応のための鋳型として使用し、この反応には、各々２５ｍＭの修飾ヌクレオチドミックスを使用し（修飾ヌクレオチドは全て、カスタム合成するか、又はトリリンク・バイオテック（ＴｒｉＬｉｎｋ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、カリフォルニア州サンディエゴ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入してよいが、ピロロ−Ｃ三リン酸は、グレン・リサーチ（Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、バージニア州スターリング（Ｓｔｅｒｌｉｎｇ，ＶＡ）から購入することができ；非修飾ヌクレオチドは、エピセンター・バイオテクノロジー（Ｅｐｉｃｅｎｔｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））から購入する）、また、セルスクリプト・メガスクリプト（ＣｅｌｌＳｃｒｉｐｔ  ＭＥＧＡＳＣＲＩＰＴ）（商標）（エピセンター・バイオテクノロジー（Ｅｐｉｃｅｎｔｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））によってｍＲＮＡ合成キットを補完する。
【０８８２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応を３７℃で４時間実施する。酵母ポリ（Ａ）ポリメラーゼ（アフィメトリックス（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）、カリフォルニア州サンタ・クララ（Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ））を用いて、アデノシン類似体を含有する修飾ｍＲＮＡをポリ（Ａ）尾部付加する。ＰＣＲ反応には、ハイファイ（ＨｉＦｉ）ＰＣＲ２×マスターミックス（ＭＡＳＴＥＲ  ＭＩＸ）（商標）（カパ・バイオシステムズ（Ｋａｐａ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、マサチューセッツ州ウーバン（Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ））を使用する。組換えワクシニアウイルスキャッピング酵素（Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃａｐｐｉｎｇ  Ｅｎｚｙｍｅ）（ニューイングランド・バイオラブズ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ
ＢｉｏＬａｂｓ）、マサチューセッツ州イプスウィッチ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ））及び組換え２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ（エピセンター・バイオテクノロジー（Ｅｐｉｃｅｎｔｅｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））を用いて、修飾ｍＲＮＡを転写後キャッピングすることにより、５’−グアノシンキャップ１構造を作製する。キャップ２構造及び複数のキャップ２構造は、追加の２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼを用いて作製してもよい。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写ｍＲＮＡ産物をアガロースゲル上で泳動させて、視覚化する。修飾ｍＲＮＡは、アンビオン／アプライド・バイオシステムズ（Ａｍｂｉｏｎ／Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）（テキサス州オースチン（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ））のメガクリアＲＮＡ（ＭＥＧＡＣｌｅａｒ  ＲＮＡ）（商標）精製キットを用いて精製してよい。ＰＣＲには、ピュアリンク（ＰＵＲＥＬＩＮＫ）（商標）ＰＣＲ精製キット（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、カリフォルニア州カールスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を使用する。産物は、ナノドロップ（ＮＡＮＯＤＲＯＰ）（商標）ＵＶアブソーバンス（ＵＶ  Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ）（サーモフィッシャー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、マサチューセッツ州ウォルサム（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ））で定量する。産物の特性、ＵＶ
吸光特性及び視覚化は、１．２％アガロースゲル上で実施した。ＴＥバッファー中で産物を再懸濁させる。
【０８８３】
Ｂ．修飾核酸（ｍＲＮＡ）構造の５’キャッピング
修飾ｍＲＮＡの５’キャッピングは、５’−グアノシンキャップ構造を作製する下記の化学ＲＮＡキャップ類似体を用いて、製造者のプロトコルに従い、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ転写反応中に同時に完了することができる：３’−０−Ｍｅ−ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（ＡＲＣＡキャップ）；Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ；Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ；ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ａ；ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ（ニューイングランド・バイオラブズ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）、マサチューセッツ州イプスウィッチ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ））。修飾ｍＲＮＡの５’キャッピングは、「キャップ０」構造：ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇを作製するワクシニアウイルスキャッピング酵素（Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｃａｐｐｉｎｇ  Ｅｎｚｙｍｅ）（ニューイングランド・バイオラブズ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ）、マサチューセッツ州イプスウィッチ（Ｉｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ））を用いて、転写後に完了することができる。キャップ１構造は、ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇ−２’−Ｏ−メチルを生成するワクシニアウイルスキャッピング酵素及び２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼの両方を用いて、作製することができる。キャップ２構造は、２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼを用いた５’側最後から３番目のヌクレオチドの２’−ｏ−メチル化後に、キャップ１構造から作製することができる。キャップ３構造は、２’−Ｏ−メチルトランスフェラーゼを用いた５’側最後から４番目のヌクレオチドの２’−ｏ−メチル化後に、キャップ２構造から作製することができる。酵素は、好ましくは、組換え体起原に由来する。
【０８８４】
哺乳動物細胞にトランスフェクトすると、修飾ｍＲＮＡは、１２〜１８時間又は１８時間超、例えば、２４、３６、４８、６０、７２若しくは７２時間超の安定性を有する。
実施例５．ポリＡ尾部付加反応
ｃＤＮＡ中にポリＴがない場合、ポリＡ尾部付加反応は、最終産物を浄化する前に実施しなければならない。これは、キャップ付ＩＶＴＲＮＡ（１００μｌ）；ＲＮａｓｅ阻害剤（２０Ｕ）；１０×テイリングバッファー（０．５Ｍトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２．５Ｍ  ＮａＣｌ、１００ｍＭ  ＭｇＣｌ２）（１２．０μｌ）；２０ｍＭ  ＡＴＰ（６．０μｌ）；ポリＡポリメラーゼ（２０Ｕ）；最大１２３．５μｌのｄＨ２Ｏを混合した後、３７℃で３０分間のインキュベーションによって実施される。ポリＡ尾部が転写物中に既に存在する場合には、尾部付加反応を省いて、アンビオン（Ａｍｂｉｏｎ）のメガクリア（ＭＥＧＡＣＬＥＡＲ）（商標）キット（テキサス州オースチン（Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ））（最大５００μｇ）を用いた浄化を直接開始してもよい。ポリＡポリメラーゼは、好ましくは酵母に発現させた組換え酵素である。
【０８８５】
本明細書で実施及び記載する研究のために、ポリＡ尾部は、長さ１６０ヌクレオチドを含むようにＩＶＴ鋳型にコードされる。しかし、ポリＡ尾部付加反応の処理能力及び完全性が、必ずしも厳密に１６０ヌクレオチドをもたらすとは限らないことは理解すべきである。従って、約１６０ヌクレオチド、酸約１５０〜１６５、１５５、１５６、１５７、１５８、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４若しくは１６５のポリＡ尾部は、本発明の範囲に含まれる。
【０８８６】
実施例６．タンパク質発現のためのスクリーニング方法
Ａ．エレクトロスプレーイオン化
対象に投与する修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し得る生物学的サンプルを調製した後、１、２、３又は４つの質量分析器を用いて、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）についての製造者のプロトコルに従い分析する。生物学的サンプルはまた、タンデムＥＳＩ質量分析システムを用いて分析してもよい。
【０８８７】
タンパク質断片、又は全タンパク質のパターンを所与のタンパク質の既知対照と比較して、比較により同一性を決定する。
Ｂ．マトリックス支援レーザー脱離イオン化
対象に投与される修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し得る生物学的サンプルを調製した後、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ｍａｔｒｉｘ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｌａｓｅｒ  ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ／ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ）（ＭＡＬＤＩ）についての製造者のプロトコルに従い分析する。
【０８８８】
タンパク質断片、又は全タンパク質のパターンを所与のタンパク質の既知対照と比較して、比較により同一性を決定する。
Ｃ．液体クロマトグラフィー−質量分析−質量分析
修飾ｍＲＮＡによってコードされるタンパク質を含有し得る生物学的サンプルは、そこに含まれるタンパク質を消化するために、トリプシン酵素で処理してもよい。こうして得られるペプチドは、液体クロマトグラフィー−質量分析−質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）により分析する。質量分析器でペプチドを断片化して、診断パターンを取得し、これらをコンピュータアルゴリズムにより、タンパク質配列データベースとマッチさせることができる。消化されたサンプルを希釈して、所与のタンパク質についての１ｎｇ以下の出発材料を取得することもできる。単純なバッファーバックグラウンド（例えば、水又は揮発性塩）を含有する生物学的サンプルは、直接溶液中消化を受けやすく；より複雑なバックグラウンド（例えば、デタージェント、非揮発性塩、グリコール）は、サンプルの分析を容易にするために、追加の浄化ステップを必要とする。
【０８８９】
タンパク質断片、又は全タンパク質のパターンを所与のタンパク質の既知対照と比較して、比較により同一性を決定する。
実施例７．トランスフェクション
Ａ．リバーストランスフェクション
２４ウェルのコラーゲンコーティングした組織培養プレートで実施する実験の場合、角化細胞（ケラチノサイト）又は他の細胞を１×１０５の細胞密度で接種する。９６ウェルのコラーゲンコーティングした組織培養プレートで実施する実験の場合には、角化細胞を０．５×１０５の細胞密度で接種する。トランスフェクトしようとする修飾ｍＲＮＡの各々について、修飾ｍＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）を記載の通りに調製し、細胞が組織培養プレートに付着してしまう前に、細胞接種から６時間以内にマルチウェルプレート内の細胞と混合する。
【０８９０】
Ｂ．フォワードトランスフェクション
２４ウェルのコラーゲンコーティング済み組織培養プレートには、細胞を０．７×１０５の細胞密度で接種する。９６ウェルのコラーゲンコーティング済み組織培養プレートで実施する実験の場合には、角化細胞（もし用いられれば）を０．３×１０５の細胞密度で接種する。続いて、２４時間にわたり、細胞を＞７０％の密集まで増殖させる。トランスフェクトしようとする修飾ｍＲＮＡの各々について、修飾ｍＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）を記載の通りに調製し、細胞接種及び組織培養プレートへの細胞の付着後、２４時間かけてマルチウェルプレート内の細胞にトランスフェクトする。
【０８９１】
Ｃ．翻訳スクリーン：ＥＬＩＳＡ
インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのサプリメント（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）Ｓ７を含むエピライフ（ＥｐｉＬｉｆｅ）培地中で、細胞を＞７０％の密集まで増殖させる。インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と複合体化した３００ｎｇの表示化学修飾ｍＲＮＡで、細胞をリバーストランスフェクトする。あるいは、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＲＮＡＩＭＡＸ（商標）
と複合体化した３００ｎｇの修飾ｍＲＮＡで、細胞をフォワードトランスフェクトする。ＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）複合体は、最初に、５×体積の希釈物中のサプリメント非含有エピライフ（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ−ｆｒｅｅ  ＥｐｉＬｉｆｅ）（登録商標）培地と一緒にＲＮＡを室温で１０分間インキュベートすることにより形成される。
【０８９２】
第２バイアル中で、１０×体積の希釈物中のサプリメント非含有エピライフ（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ−ｆｒｅｅ  ＥｐｉＬｉｆｅ）（登録商標）培地と一緒にＲＮＡＩＭＡＸ（商標）試薬を室温で１０分間インキュベートする。次に、ＲＮＡバイアルをＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と混合し、室温で２０〜３０間インキュベートした後、細胞に滴下しながら添加する。各化学修飾ｍＲＮＡの各々について、トランスフェクションから１８時間後に、細胞培地中に分泌されたポリペプチド濃度を３回反復して測定する。トランスフェクトしたヒト細胞からの目的のポリペプチドの分泌は、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）又はＲ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）（ミネソタ州ミネアポリス（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ））からのＥＬＩＳＡキットを用いて、製造者の推奨する指示に従い定量する。
【０８９３】
Ｄ．用量及び継続時間：ＥＬＩＳＡ
インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのサプリメント（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）Ｓ７を含むエピライフ（ＥＰＩＬＩＦＥ）（登録商標）培地中で、細胞を＞７０％の密集まで増殖させる。インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と複合体化した０ｎｇ、４６．８７５ｎｇ、９３．７５ｎｇ、１８７．５ｎｇ、３７５ｎｇ、７５０ｎｇ、又は１５００ｎｇの修飾ｍＲＮＡで、細胞をリバーストランスフェクトする。修飾ｍＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）複合体は、記載の通りに形成する。修飾ｍＲＮＡの各々の濃度について、トランスフェクションから０、６、１２、２４、及び４８時間後に、培地中に分泌されたポリペプチド濃度を３回反復して測定する。トランスフェクトしたヒト細胞からの目的のポリペプチドの分泌は、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）又はＲ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）からのＥＬＩＳＡキットを用い、製造者の推奨する指示に従って定量する。
【０８９４】
実施例８．細胞の自然免疫応答：ＩＮＦ−βＥＬＩＳＡ及びＴＮＦαＥＬＩＳＡ
ｉｎ  ｖｉｔｒｏトランスフェクトしたヒト角化細胞から分泌されたヒト腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、ヒトインターフェロンβ（ＩＦＮ−β）及びヒト顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）について酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を細胞の自然免疫応答の検出のために試験する。
【０８９５】
インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのヒドロコルチゾン非存在ヒト増殖サプリメント（Ｈｕｍａｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を含むエピライフ（ＥＰＩＬＩＦＥ）（登録商標）培地中で、細胞を＞７０％の密集まで増殖させる。記載のようにインビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と複合体化した０ｎｇ、９３．７５ｎｇ、１８７．５ｎｇ、３７５ｎｇ、７５０ｎｇ、１５００ｎｇ又は３０００ｎｇの表示化学修飾ｍＲＮＡで、３回細胞をリバーストランスフェクトする。インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＥＬＩＳＡキットを用いて、製造者のプロトコルに従い、化学修飾ｍＲＮＡの各々について、トランスフェクションから２４時間後に、培地中に分泌されたＴＮＦ−αを測定する。
【０８９６】
分泌されたＩＦＮ−βは、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＥＬＩＳＡキットを用いて、製造者のプロトコルに従い、化学修飾ｍＲＮＡの各々について、トランスフェクションから２４時間後に測定する。分泌されたｈｕ−Ｇ−ＣＳＦ濃度は、化学修飾ｍＲＮＡの各々について、トランスフェクションから２４時間後に測定する。トランスフェクトしたヒト細胞からの目的のポリペプチドの分泌は、インビトロジェン（Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ）又はＲ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）（ミネソタ州ミネアポリス（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ））からのＥＬＩＳＡキットを用い、製造者の推奨される指示に従って定量する。これらのデータは、ＴＮＦ−α及びＩＦＮ−βなどの例示的１型サイトカインを測定することにより、天然及び他の化学修飾ポリヌクレオチド又は参照化合物と比較して、どの修飾ｍＲＮＡが、低減した細胞の自然免疫応答を誘導することができるかを示すものである。
【０８９７】
実施例９．細胞傷害性及びアポトーシス
この実験では、異なる修飾ｍＲＮＡをｉｎ  ｖｉｔｒｏトランスフェクトしたヒト角化細胞について、細胞の生存性、細胞傷害性及びアポトーシスを明らかにする。インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのヒドロコルチゾン非存在ヒト角化細胞増殖サプリメント（Ｈｕｍａｎ  Ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）を含むエピライフ（ＥＰＩＬＩＦＥ）（登録商標）培地中で、角化細胞を＞７０％の密集まで増殖させる。インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からのＲＮＡＩＭＡＸ（商標）と複合体化した０ｎｇ、４６．８７５ｎｇ、９３．７５ｎｇ、１８７．５ｎｇ、３７５ｎｇ、７５０ｎｇ、１５００ｎｇ、３０００ｎｇ、又は６０００ｎｇの修飾ｍＲＮＡで、角化細胞をリバーストランスフェクトする。修飾ｍＲＮＡ：ＲＮＡＩＭＡＸ（商標）複合体を形成する。各修飾ｍＲＮＡの各々の濃度について、トランスフェクションから０、６、１２、２４及び４８時間後に、培地中に分泌されたｈｕ−Ｇ−ＣＳＦ濃度を３回反復して測定する。トランスフェクトしたヒト角化細胞からの目的のポリペプチドの分泌は、インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）又はＲ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）からのＥＬＩＳＡキットを用い、製造者の推奨する指示に従って定量する。細胞の生存性、細胞傷害性及びアポトーシスは、トランスフェクションから０、１２、４８、９６、及び１９２時間後に、プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）（ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ））からのアポトックス−グロ（ＡＰＯＴＯＸ−ＧＬＯ）（商標）キットを用いて、製造者の指示に従って測定する。
【０８９８】
実施例１０．天然及び非天然ヌクレオシドの組み込み
目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡに、天然及び非天然ヌクレオシドを組み込む。これらの例を表４及び５に示す。本発明のポリヌクレオチドにおいて、いくつかの市販のヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）を調べる。これらの選択を表１０に掲載する。次に、得られたｍＲＮＡがタンパク質を産生し、サイトカインを誘導し、及び／又は治療結果をもたらす能力についてこれらを調べる。
【０８９９】
【表１０−１】
2017500034.tif 000180
【０９００】
【表１０−２】
2017500034.tif 000181
本発明の非天然ヌクレオチドは、以下の表１１に挙げるものも含み得る。
【０９０１】
【表１１−１】
2017500034.tif 000182
【０９０２】
【表１１−２】
2017500034.tif 000183
【０９０３】
【表１１−３】
2017500034.tif 000184
【０９０４】
【表１１−４】
2017500034.tif 000185
【０９０５】
【表１１−５】
2017500034.tif 000186
実施例１１．プソイドウリジン及びＮ１−メチルプソイドウリジンの指定ＳＡＲ
ピリミジンヌクレオシド  プソイドウリジンに近年関心が集まっていることから、プソイドウリジン又はＮ１−メチルプソイドウリジンに対する修飾を含むｍＲＮＡを調べる一連の構造−活性研究が設計された。
【０９０６】
この研究は、修飾が、Ｎ１位、Ｃ６位、２位、４位で、並びにリン酸主鎖上で実施されたとき、鎖長、親油性増加、環構造の存在、及び疎水性若しくは親水性相互作用の作用を調べるために設計された。安定性も調べる。
【０９０７】
そのために、アルキル化、シクロアルキル化、アルキル−シクロアルキル化、アリール化、アルキル−アリール化、アミノ基を含むアルキル化部分、カルボン酸基を含むアルキル化部分、並びにアミノ酸荷電部分を含むアルキル化部分を含む修飾はを調べる。アルキル化度は、概してＣ１〜Ｃ６である。化学修飾の例は、表１２、１３及び１４に挙げるものを含む。
【０９０８】
【表１２−１】
2017500034.tif 000187
【０９０９】
【表１２−２】
2017500034.tif 000188
【０９１０】
【表１３−１】
2017500034.tif 000189
【０９１１】
【表１３−２】
2017500034.tif 000190
【０９１２】
【表１３−３】
2017500034.tif 000191
【０９１３】
【表１３−４】
2017500034.tif 000192
【０９１４】
【表１３−５】
2017500034.tif 000193
１−メチルプソイドウリジン周辺の構造活性相関のために、さらに別の非天然化合物を設計した。これらの化合物は、表１４に挙げるものを含む。
【０９１５】
【表１４−１】
2017500034.tif 000194
【０９１６】
【表１４−２】
2017500034.tif 000195
【０９１７】
【表１４−３】
2017500034.tif 000196
実施例１２．天然及び非天然ヌクレオシドの組み込み
目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡに、天然及び非天然ヌクレオシドを組み込む。これらの例を表１５及び１６に示す。本発明のポリヌクレオチドにおいて、いくつかの市販のヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）を調べる。これらの選択を表１５に示す。次に、得られたｍＲＮＡがタンパク質を産生し、サイトカインを誘導し、及び／又は治療結果をもたらす能力についてこれらを調べる。
【０９１８】
【表１５】
2017500034.tif 000197
【０９１９】
【表１６】
2017500034.tif 000198
実施例１３．核酸塩基及び炭水化物（糖）への修飾の組み込み
目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡに、天然及び非天然ヌクレオシドを組み込む。核酸塩基及び炭水化物（糖）の両方に対する修飾を有する市販のヌクレオシド及びＮＴＰが、ｍＲＮＡに組み込まれる能力、並びにタンパク質を産生し、サイトカインを誘導し、及び／又は治療結果をもたらす能力についてこれらを調べる。これらのヌクレオシドの例を表１７及び１８に示す。
【０９２０】
【表１７】
2017500034.tif 000199
【０９２１】
【表１８】
2017500034.tif 000200
これらの表において、「ＵＴＰ」は、ウリジン三リン酸を表し、「ＧＴＰ」は、グアノシン三リン酸を表し、「ＡＴＰ」は、アデノシン三リン酸を表し、「ＣＴＰ」は、シトシン三リン酸を表し、「ＴＰ」は、三リン酸を表し、「Ｂｚ」は、ベンゾイルを表す。
【０９２２】
例えば、表５〜１０に示すように、本発明の非天然核酸塩基は、５’−一、二若しくは三リン酸塩及び／又は３’−ホスホロアミダイト（例えば、２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−
ジイソプロピルホスホロアミダイト）として提供することができる。
【０９２３】
実施例１４．プソイド−Ｕ−α−チオ−ＴＰ（００９０２０１５００１（１９４））の合成
【０９２４】
【化１３６】
2017500034.tif 000201
リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中のプソイドウリジン１（１３０．０ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１７０．４ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液に塩化チオホスホリル（１０７．５μＬ、１．０６ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（５１４．８４μＬ、２．１３ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（８７２．４ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、２４．５ｍＬの水で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で約１時間激しく攪拌した。約３．０時間激しく攪拌しながら、４．５ｍＬの１．０Ｍ  ＴＥＡＢバッファーを添加することにより、溶液のｐＨを６．７５に調節した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分間、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１６．５７〜１８．１５分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）としてプソイド−Ｕ−α−チオ−ＴＰを得た（α２６５＝７，５４６基準で、６２．７３ｍｇ、２４．５％）。ＵＶｍａｘ＝２６５ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ４９８．７０（Ｍ−Ｈ）。
【０９２５】
実施例１５．１−メチル−プソイド−Ｕ−α−チオ−ＴＰ（００９０２０１５００２（１９５））の合成
【０９２６】
【化１３７】
2017500034.tif 000202
リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の１−メチル−プソイドウリジン（１３０．０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１６０．７ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液に、塩化チオホスホリル（１０１．４３μＬ、１．００ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続ける。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（４８５．７μＬ、２．００ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（８２３．０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、２４．０ｍＬの水で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で約１時間激しく攪拌した。約３．０時間激しく攪拌しながら、３．５ｍＬの１．０Ｍ  ＴＥＡＢバッファーを添加することにより、溶液のｐＨを６．８５に調節した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１７．３４〜１８．７２分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として１−メチル−プソイド−Ｕ−α−チオ−ＴＰを得た（α２７１＝８，５００基準で、７２．３７ｍｇ、２８．０％）。ＵＶｍａｘ＝２７１ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５１２．６６（Ｍ−Ｈ）。
【０９２７】
実施例１６．１−エチル−プソイド−ＵＴＰ（０３６０１０１５００３（１７２））の合成
【０９２８】
【化１３８】
2017500034.tif 000203
化合物９：−３０℃で、無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中のプソイドウリジン（１、２．４ｇ、９．８ｍｍｏｌ）の溶液に、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１．１ｇ、９．８ｍｍｏｌ）、続いて、無水酢酸（１０ｍＬ）を１５分かけて少量ずつ添加した。反応混合物を−３０℃で３時間攪拌した後、温度を室温まで上昇させた。ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）で反応混合物をクエンチングしてから、減圧下で乾燥まで濃縮させた。残留物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解させて、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させて、濃縮させた。Ｐ２Ｏ５と一緒に真空オーブン内で粗化合物９を一晩乾燥させた後、それ以上精製せずに使用した。
【０９２９】
化合物１０：乾燥ＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）中の２’，３’，５’−トリ−Ｏ−アセチル−プソイドウリジン（９）（０．８ｇ、２．２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル１）アセトアミド（ＢＳＡ）（３．０ｍＬ）を添加した後、反応混合物を２時間還流させた。続いて、反応混合物を室温まで冷却させた。ＣＨ３ＣＨ２ｌ（０．５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を添加してから、反応混合物を６２℃で一晩攪拌した。次に、ＣＨ３ＣＨ２ｌ（０．５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を添加してから、反応混合物を６２℃で４日間攪拌した。反応混合物を減圧下で蒸発させた。残留物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解させて、１％ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、乾燥まで蒸発させた。溶離液としてＰＥ：ＥＡ（５：１〜１：１）を用いたシリカゲルカラムにより残留物を精製することによって、０．５６ｇの所望の生成物１０を得た。
【０９３０】
１−エチル−プソイドウリジン１１：アンモニア飽和メタノール（５０ｍＬ）中の化合物１０（０．５６ｇ）の溶液を室温で一晩攪拌した。減圧下で揮発物を除去した。次に、ジクロロメタン中の５〜１０％メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、９５．９５％ＨＰＬＣ純度で、淡い黄色の固体として２３０ｍｇの化合物１１を取得した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３００ＭＨｚ，ｐｐｍ）δ１１．３２（ｂｒ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），５．０１（ｄ，Ｊ＝３．００Ｈｚ，１Ｈ），４．９８（ｔ，Ｊ＝３．００Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．５，２．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｄ，Ｊ＝３．００Ｈｚ，１Ｈ），３．８８−３．９５（ｍ，２Ｈ），３．６９−３．７０（ｍ，４Ｈ），３．４５−３．４８（ｍ，１Ｈ），１．１７（ｔ，Ｊ＝５．１０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０９３１】
【化１３９】
2017500034.tif 000204
１−エチル−プソイド−ＵＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の１−エチル−プソイドウリジン１１（１２４．０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１４７．８７ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（８５．９μＬ、０．９２ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（４４６．５μＬ、１．８ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（７５７．２ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、２５．０ｍＬの水で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で約１時間激しく攪拌した。約３．０時間激しく攪拌しながら、３．５ｍＬの１．０Ｍ  ＴＥＡＢバッファーを添加することにより、溶液のｐＨを６．５０に調節した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１７．８７〜１８．６８分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として１−エチル−プソイド−ＵＴＰを得た（α２７１＝８，５００基準で、４７．７ｍｇ、２０．２％）。ＵＶｍａｘ＝２７１ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５１０．７０（Ｍ−Ｈ）。
【０９３２】
実施例１７．１−プロピル−プソイド−ＵＴＰ（０３６０１０１５００４（１７３））の合成
【０９３３】
【化１４０】
2017500034.tif 000205
化合物１５：乾燥ピリジン（２０ｍＬ）中の２’，３’，５’−トリ−Ｏ−アセチル−プソイドウリジン９（１．０ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＢＵ（０．６ｇ、４．１ｍｍｏｌ）を添加した後、反応混合物を室温で０．５時間攪拌した。この混合物に、ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ｌ（０．６９ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を添加してから、室温で２〜３時間攪拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解させて、塩水（３×５０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、乾燥まで蒸発させた。溶離液としてＰＥ：ＥＡ（１０：１〜３：１）を用いたシリカゲルカラムにより残留物を精製することによって、０．５ｇの所望の化合物１５を得た。
【０９３４】
１−プロピル−プソイド−Ｕ（１６）：アンモニア飽和メタノール（５０ｍＬ）中の化合物１５（０．５ｇ）の溶液を室温で一晩攪拌した。減圧下で揮発物を除去した。ジクロロメタン中の５〜１０％メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、９６．５９％ＨＰＬＣ純度で、オフホワイトの固体として２６０ｍｇの化合物１６を取得した。１−プロピル−プソイド−Ｕ（１６）の解析データ：１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３００ＭＨｚ，ｐｐｍ）δ１１．２９（ｂｒ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），４．９６（ｄ，Ｊ＝１．８０Ｈｚ，１Ｈ），４．８３（ｔ，Ｊ＝３．９０Ｈｚ，１Ｈ），４．７３（ｄ，Ｊ＝３．９０Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝３．００Ｈｚ，１Ｈ），３．８５−３．９２（ｍ，２Ｈ），３．４３−３．６９（ｍ，５Ｈ），１．５６（ｑ，Ｊ＝５．４０Ｈｚ，２Ｈ），８．３８（ｔ，Ｊ＝５．４０Ｈｚ，３Ｈ）。
【０９３５】
【化１４１】
2017500034.tif 000206
１−プロピル−プソイド−ＵＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の１−プロピル−プソイドウリジン１６（１３０．０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１４４．６６ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（８４．０μＬ、０．９０ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（４３６．７５μＬ、１．８ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（７４０．７ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、２５．０ｍＬの水で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で約１時間激しく攪拌した。約３．０時間激しく攪拌しながら、３．５ｍＬの１．０Ｍ  ＴＥＡＢバッファーを添加することにより、溶液のｐＨを６．５０に調節した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１８．６６〜１９．４５分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として１−プロピル−プソイド−ＵＴＰを得た（ε２７１＝８，５００基準で、６３．３３ｍｇ、２６．６６％）。ＵＶｍａｘ＝２７１ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５２４．７０（Ｍ−Ｈ）。
【０９３６】
実施例１８．１−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ＵＴＰ（０３６０１０１５００５（１７５））の合成
【０９３７】
【化１４２】
2017500034.tif 000207
化合物２０の合成：乾燥ＣＨ３ＣＮ（２０ｍＬ）中の２’，３’，５’−トリ−Ｏ−アセチル−プソイドウリジン（０．８ｇ、２．２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル１）アセトアミド（ＢＳＡ）（３．０ｍＬ）を添加した後、反応混合物を２時間還流させた。続いて、反応混合物を室温まで冷却させた。この混合物に、ＣＦ３ＣＨ２ＯＴｆ（０．７５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を添加してから、反応混合物を６０℃で一晩攪拌した。さらにＣＦ３ＣＨ２ＯＴｆ（０．７５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を添加してから、反応混合物を６０℃で一晩攪拌した。反応混合物を減圧下で濃縮させた。残留物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に溶解させて、１％ＮａＨＣＯ３溶液（３×５０ｍＬ）で洗浄してから、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、乾燥まで蒸発させた。溶離液としてＰＥ：ＥＡ（５：１〜１：１）を用いたシリカゲルカラムにより残留物を精製することによって、０．７ｇ（７２％）の生成物２０を得た。
【０９３８】
１−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−Ｕ（２１）：アンモニア飽和メタノール（５０ｍＬ）中の化合物２０（０．７ｇ）の溶液を室温で一晩攪拌した。減圧下で揮発物を除去した。次に、ジクロロメタン中の５〜１０％メタノールで溶離するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、９８．６６％ＨＰＬＣ純度を有する薄い黄色のフォームとして２６０ｍｇの化合物２１を取得した。１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３００ＭＨｚ，ｐｐｍ）δ１１．６２（ｂｒ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），５．０１（ｄ，Ｊ＝３．６０Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝４．２０Ｈｚ，１Ｈ），４．７５（ｔ，Ｊ＝３．７０Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｑ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝２．７０Ｈｚ，１Ｈ），３．８３−３．９３（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｄ，Ｊ＝２．４０Ｈｚ，１Ｈ），３．６１−３．６５（ｍ，１Ｈ），３．４３−３．４９（ｍ，１Ｈ）。構造は、ＨＭＢＣ  ＮＢＲによっても確認した。
【０９３９】
【化１４３】
2017500034.tif 000208
１−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ＵＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の１−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイドウリジン２１（１３５．６ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１３５．０１ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（７８．４．０μＬ、０．８４ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（４０７．６３μＬ、１．６８ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（６９１．３２ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、２５．０ｍＬの水で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で約１時間激しく攪拌した。約３．０時間激しく攪拌しながら、３．６ｍＬの１．０Ｍ  ＴＥＡＢバッファーを添加することにより、溶液のｐＨを６．５３に調節した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１９．３３〜２０．７４分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として１−（２，２，２−トリフルオロエチル）プソイド−ＵＴＰを得た（ε２７１＝９，０００基準で、９３．８８ｍｇ、３９．５２％）。ＵＶｍａｘ＝２６２ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５６４．６５（Ｍ−Ｈ）。
【０９４０】
実施例１９．２−チオ−プソイド−ＵＴＰ（００９０１０１５００６（１９３））の合成
【０９４１】
【化１４４】
2017500034.tif 000209
Ｎ１，Ｎ３−ジメチルプソイドウリジン（２５）の合成：透明な溶液が得られるまで、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（１０ｍＬ）中のプソイドウリジン（１）（１．０ｇ、４．１ｍｍｏｌ）の懸濁液を１１０℃で１時間還流させた。ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝９：１）により、反応がほぼ完了したことが示された。溶液を真空下で濃縮させて、シロップを取得し、これを少量のメタノールと一緒に粉砕することにより、６４０ｍｇの固体生成物を得た。濾過物を濃縮させた後、ＤＣＭ−ＭｅＯＨ  ３０：１〜１０：１勾配溶離液を用いたシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによりさらに精製することによって、さらに２００ｍｇの生成物を取得し、これにより、総収率は７５．４％となった。
【０９４２】
２−チオ−プソイドーＵ（２６）：１Ｍエタノールナトリウムエトキシド（２５ｍＬ）中の化合物２５（６８０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）及びチオ尿素（９５０ｍｇ、１２．５ｍｍｏｌ）の混合物を２時間攪拌しながら還流させた。ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝９：１）により、反応の完了が示された。冷却後、３Ｍ塩酸を添加することによって、ｐＨを中性に調節したところ、メルカプト化合物の臭いを知覚した。次に、水酸化アンモニウムでこれを弱塩基性に調節した。ＤＣＭ−ＭｅＯＨ  ２０：１〜１０：１〜５：１勾配溶離液を用いたシリカゲルカラム上でのフラッシュクロマトグラフィーでこれを精製することによって、４７．７％の収率で、３１０ｍｇの生成物を取得した。この材料は、６９％のβアノマーと２８％のαアノマーを含んでいた。次に、分取ＴＬＣによりさらに精製することによって、２３０ｍｇの純粋なβアノマー生成物２６を得た。第２分取ＴＬＣ精製により、９４．２３％ＨＰＬＣ純度で１８３ｍｇの最終生成物が得られた。ＮＭＲ及びＭＳスペクトル分析によりこれを特性決定した。
【０９４３】
【化１４５】
2017500034.tif 000210
２−チオ−プソイド−ＵＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の２−チオプソイドウリジン２６（１００．５ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１２５．３７ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（７２．８μＬ、０．７８ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（３７８．５２μＬ、１．５６ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（６４１．９４ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、２５．０ｍＬの水で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で約１時間激しく攪拌した。約３．０時間激しく攪拌しながら、３．５ｍＬの１．０Ｍ  ＴＥＡＢバッファーを添加することにより、溶液のｐＨを６．７５に調節した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１７．０６〜１８．１８分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として２−チオ−プソイド−ＵＴＰを得た（α２６９＝１０，０００基準で、６７．１３ｍｇ、３４．３６％）。ＵＶｍａｘ＝２６９ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ４９８．７５（Ｍ−Ｈ）。
【０９４４】
実施例２０．５−トリフルオロメチル−ＵＴＰ（００９０１０１３００２（３５２））の合成
【０９４５】
【化１４６】
2017500034.tif 000211
５−トリフルオロメチル−ＵＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の５−トリフルオロメチルウリジン３０（１０１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１０２．８６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（５９．７３μＬ、０．６４ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（３１０．８５μＬ、１．５６ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（５２６．７２ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１３．７ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：２６．６９〜２７．８７分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として５−トリフルオロメチル−ＵＴＰを得た（α２６０＝１０，０００基準で、３４．１１ｍｇ、１９．３０％）。ＵＶｍａｘ＝２５８ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５５０．６５（Ｍ−Ｈ）。
【０９４６】
実施例２１．５−トリフルオロメチル−ＣＴＰ（００９０１０１４００３（３５１））の合成
【０９４７】
【化１４７】
2017500034.tif 000212
５−トリフルオロメチル−ＣＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の５−トリフルオロメチルシチジン３４（１０９ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１１２．５ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（６５．３４μＬ、０．７０ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（３４０．００μＬ、１．４０ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（５７６．１０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１６．５ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１７．７７〜１８．６３分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として５−トリフルオロメチル−ＣＴＰを得た（α２６９＝９，０００基準で、５０．７５ｍｇ、２６．２８％）。ＵＶｍａｘ＝２６９ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５４９．６５（Ｍ−Ｈ）。
【０９４８】
実施例２２．３−メチル−プソイド−ＵＴＰ（００９０１０１５１８７（２３６））の合成
【０９４９】
【化１４８】
2017500034.tif 000213
３−メチル−プソイド−ＵＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の３−メチルプソイドウリジン３８（１０４ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１２８．５８ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（７４．７０μＬ、０．８０ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（３８８．５６μＬ、１．６０ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（６５８．４０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１７．０ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１５．６１〜１７．２１分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス−（トリエチルアンモニウム塩）として３−メチル−プソイド−ＵＴＰを得た（α２６４＝８，０００基準で、５２．３８ｍｇ、２６．２５％）。ＵＶｍａｘ＝２６４ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ４９６．７５（Ｍ−Ｈ）。
【０９５０】
実施例２３．５−メチル−２−チオ−ＵＴＰ（００９０１０１３００３（４））の合成
【０９５１】
【化１４９】
2017500034.tif 000214
５−メチル−２−チオ−ＵＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の５−メチル−２−チオウリジン４２（５５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（６４．３０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（３７．３５μＬ、０．４０ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（１９４．２８μＬ、０．８ｍｍｏｌ、４．０当量）、及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（３２９．２０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（８．５ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１８．２１〜１８．９２分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として５−メチル−２−チオ−ＵＴＰを得た（α２７６＝１３，１２０基準で、６２．４４ｍｇ、６０．００％）。ＵＶｍａｘ＝２７６ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５１２．７０（Ｍ−Ｈ）。
【０９５２】
実施例２４．Ｎ４−メチル−ＣＴＰ（００９０１０１４００４（３４６））の合成
【０９５３】
【化１５０】
2017500034.tif 000215
Ｎ４−メチル−ＣＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中のＮ４−メチル−シチジン４６（１００．７ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１２６．４４ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（７２．８μＬ、０．７８ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（３７８．８５μＬ、１．５６ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（６４２．０ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１７．０ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１７．０５〜１７．８０分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）としてＮ４−メチル−ＣＴＰを得た（α２７０＝１１，０００基準で、３５．０５ｍｇ、１７．９４％）。ＵＶｍａｘ＝２７０ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ４９５．７０（Ｍ−Ｈ）。
【０９５４】
実施例２５．５−ヒドロキシメチル−ＣＴＰ（００９０１０１４００５（３５０））の合成
【０９５５】
【化１５１】
2017500034.tif 000216
５−ヒドロキシメチル−ＣＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の５−ＯＴＢＳ−ＣＨ２−シチジン５０（１２６．０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１０７．２ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（６１．６μＬ、０．６６ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。ＰＯＣｌ３反応中にＴＢＳ基を除去しておき、対応する一リン酸塩（ＴＢＳを含まない）をＬＣＭＳにより検出した。アセトニトリル（２．３ｍＬ）中のトリブチルアミン（３２０．２８μＬ、１．３２ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（５４３．２ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１３．０ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩（ＴＢＳを含まない）の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１６．４８〜１７．３６分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として５−ヒドロキシメチル−ＣＴＰを得た（α２７６＝９，０００基準で、２ステップで１６．７２ｍｇ、９．７５％）。ＵＶｍａｘ＝２７６ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ
５１１．７０（Ｍ−Ｈ）。
【０９５６】
実施例２６．３−メチル−ＣＴＰ（００９０１０１４００６）の合成
【０９５７】
【化１５２】
2017500034.tif 000217
３−メチル−ＣＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の３−メチル−シチジン５４（９３．０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１１５．７ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（６７．２μＬ、０．７２ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（３４９．４μＬ、１．４４ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（５９２．６ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１７．０ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１６．１５〜１６．６７分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として３−メチル−ＣＴＰを得た（α２７７＝９，０００基準で、２０．４ｍｇ、１１．４％）。ＵＶｍａｘ＝２７７ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ４９５．７５（Ｍ−Ｈ）。
【０９５８】
実施例２７．ＵＴＰ−オキシ酢酸Ｍｅエステル（００９０１０１３００４（３４８））の合成
【０９５９】
【化１５３】
2017500034.tif 000218
ＵＴＰ−５−オキシ酢酸Ｍｅエステル：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中のウリジン−５−オキシ酢酸Ｍｅエステル５８（１００．３ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（９６．４４ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（５６．０μＬ、０．６ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（２９１．２μＬ、１．２ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（４９３．８ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１４．２ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１８．５２〜１９．０６分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）としてＵＴＰ−５−オキシ酢酸Ｍｅエステルを得た（α２７５＝１０，０００基準で、２０．０４ｍｇ、１１．６７％）。ＵＶｍａｘ＝２７５ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５７０．６５（Ｍ−Ｈ）。
【０９６０】
実施例２８．５−メトキシカルボニルメチル−ＵＴＰ（００９０１０１３００５（３５８））の合成
【０９６１】
【化１５４】
2017500034.tif 000219
５−メトキシカルボニルメチル−ＵＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の５−メトキシカルボニルメチル−ウリジン６２（１０１．０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１０２．８６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（５９．７３μＬ、０．６４ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（３１０．５８μＬ、１．２８ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（５２６．７２ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１５．１ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１７．１５〜１８．３８分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として５−メトキシカルボニルメチル−ＵＴＰを得た（α２６５＝１１，０００基準で、４９．８８ｍｇ、２８．１２％）。ＵＶｍａｘ＝２６５ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５５４．７０（Ｍ−Ｈ）。
【０９６２】
実施例２９．５−メチルアミノメチル−ＵＴＰ（００９０１０１３００６（３５３））の合成
【０９６３】
【化１５５】
2017500034.tif 000220
【０９６４】
【化１５６】
2017500034.tif 000221
５−メチルアミノメチル−ＵＴＰ：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の５−Ｎ−ＴＦＡ−Ｎ−メチルアミノメチル−ウリジン６６（１１０．０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（９４．３０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（５４．１３μＬ、０．５８ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（２８１．４６μＬ、１．１６ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（４７７．３４ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１３．７ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。この粗反応混合物に、約２２．０ｍＬの濃縮ＮＨ４ＯＨを添加し、反応
混合物を室温で一晩攪拌した。次に、これを一晩凍結乾燥させてから、粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１４．８９〜１６．１１分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として５−メチルアミノメチル−ＵＴＰを得た（α２６６＝１０，０００基準で、２ステップで３５．２７ｍｇ、１９．３１％）。ＵＶｍａｘ＝２６６ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５２５．７０（Ｍ−Ｈ）。
【０９６５】
実施例３０．Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−ＣＴＰ（０３６０１０７４０２９）の合成
【０９６６】
【化１５７】
2017500034.tif 000222
Ｎ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−ＣＴＰ（７４）：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中のＮ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−シチジン７１（１０１．５ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１１５．７ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（６７．２０μＬ、０．７２ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（３４９．４０μＬ、１．４４ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（５９２．６０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１７．０ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１８．６７〜１９．３８分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム
塩）としてＮ４，Ｎ４，２’−Ｏ−トリメチル−ＣＴＰ（７４）を得た（α２７８＝９，０００基準で、３０．２２ｍｇ、１６．１１％）。ＵＶｍａｘ＝２７８ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５２３．７５（Ｍ−Ｈ）。
【０９６７】
実施例３１．５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ＵＴＰ（００９０１０７３００５（７８））の合成
【０９６８】
【化１５８】
2017500034.tif 000223
５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ＵＴＰ（７８）：リン酸トリメチル（０．８ｍＬ）中の５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ウリジン７５（１０２．０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）及びプロトンスポンジ（１００．７２ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液を０℃で１０．０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（５７．８７μＬ、０．６２ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２．０時間攪拌し続けた。アセトニトリル（２．５ｍＬ）中のトリブチルアミン（３００．８７μＬ、１．２４ｍｍｏｌ、４．０当量）及びピロリン酸ビス（トリブチルアンモニウム）（５１０．２６ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ、３．０当量）の混合物を一度に添加した。約２５分後、０．２Ｍ  ＴＥＡＢバッファー（１４．６４ｍＬ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。ＬＣＭＳ分析により、対応する三リン酸塩の形成が示された。次に、反応混合物を一晩凍結乾燥させた。粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×３０．０ｍｍ、５．０ミクロン；勾配（１％）：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：２０．０ｍＬ／分；保持時間：１８．５７〜１９．３５分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、テトラキス（トリエチルアンモニウム塩）として５−メトキシカルボニルメチル−２’−Ｏ−メチル−ＵＴＰ（７８）を得た（α２６５＝１１，０００基準で、５４．６０ｍｇ、３０．９７％）。ＵＶｍａｘ＝２６５ｎｍ；ＭＳ：ｍ／ｅ  ５６８．６５（Ｍ−Ｈ）。
【０９６９】
実施例３２．５−メトキシウリジン（化合物１５）及び５−メトキシ−ＵＴＰ（前記化合物のＮＴＰ）の合成
【０９７０】
【化１５９】
2017500034.tif 000224
５−メトキシウリジン（化合物１５）（６９．０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ；可溶性にするために加熱）の溶液を０．７ｍＬのリン酸トリメチル（ＴＭＰ）中のプロトンスポンジ（８０．３６ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ、１．５０当量）に添加し、０℃で１０分間攪拌した。この溶液にオキシ塩化リン（ＰＯＣｌ３）（４６．７ｕＬ、０．５０ｍｍｏｌ、２．０当量）を滴下しながら添加した後、Ｎ２雰囲気下で２時間攪拌し続けた。２時間後、２．０ｍＬのジメチルホルムアミドア中のピロリン酸ビストリブチルアンモニウム（ＴＢＡＰＰすなわち（ｎ−Ｂｕ３ＮＨ）２Ｈ２Ｐ２Ｏ７）（８９４．６０ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ、６．５０当量）及びトリブチルアミン（２４３．０ｕＬ、１．００ｍｍｏｌ、４．０当量）の混合物と溶液を反応させた。約１５分後、１７．０ｍｌの０．２Ｍ  重炭酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＢ）で反応物をクエンチングしてから、透明な溶液を室温で１時間攪拌した。反応混合物を一晩凍結乾燥させた後、粗反応混合物をＨＰＬＣ精製した（島津製作所（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）、京都（日本）、フェノメネクス（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ｃ１８分取カラム、２５０×２１．２０ｍｍ、１０．０ミクロン；勾配：１００％Ａを３．０分、続いて１％Ｂ／分、Ａ＝１００ｍＭ  ＴＥＡＢバッファー、Ｂ＝ＡＣＮ；流速：１０．０ｍＬ／分；保持時間：１６．５７〜１７．５１分）。所望の化合物を含む画分をプールし、凍結乾燥することにより、化合物１５のＮＴＰが生成された。Ｎ２雰囲気下でフレームドライした２口フラスコ中で三リン酸化反応を実施した。使用前に一晩、真空下、Ｐ２Ｏ５でヌクレオシド及びタンパク質スポンジを乾燥させた。ＬＣＭＳによって、一リン酸塩の形成をモニターした。
【０９７１】
実施例３３．６−メチルプソイドウリジン（０３６０１０１５０３７）の合成：スキーム２６
【０９７２】
【化１６０】
2017500034.tif 000225
エチルチオメタノール：エタンチオール（７．４ｍｌ、６．２ｇ、０．１ｍｏｌ）及びパラホルムアルデヒド（３．０ｇ、０．１ｍｏｌ）の攪拌した混合物に、触媒として０．０３ｍＬの飽和ナトリウムメトキシドのメタノール溶液を添加した。４０℃で３０分攪拌してから、冷却することにより、液体生成物９．２ｇを得た。それ以上精製せずに、これを次のステップで使用した。
【０９７３】
（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチルエチルスルフィド：５０ｍＬの無水ジクロロメタン中のエチルチオメタノール（４．６ｇ、５０ｍｍｏｌ）の溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（８．３１ｇ、５５ｍｍｏｌ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジン（２４４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（８．３５ｍｌ、６０ｍｍｏｌ）を添加した。窒素雰囲気下、周囲温度で４時間にわたり混合物を攪拌した後、ジクロロメタンで希釈した。水（×２）、次に飽和水性塩化アンモニウム（×２）で混合物を順次洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下で濾過物溶液を濃縮することにより、８４％の収率で、薄黄色の油として８．７２ｇの生成物を得た。それ以上精製せずに、これを次のステップで使用した。
【０９７４】
（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチルクロリド：無水ジクロロメタン中の（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチルエチルスルフィド（５．１ｇ、２５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。２０ｍＬの無水塩化メチレン中の塩化スルフリル（１．６ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を３０分かけて攪拌しながら添加した。反応混合物を室温でさらに１０分間攪拌した後、減圧下で濃縮することにより、薄黄色の油として４．２ｇの生成物を取得し、それ以上精製せずに、これを次のステップで直接使用した。
【０９７５】
化合物７９：無水ＤＭＦ中のプソイドウリジン（１）（３．０ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）、イミダゾール（４．２ｇ、６１．５ｍｍｏｌ、５．０当量）、及びｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（７．４ｇ、４９．２ｍｍｏｌ、４．０当量）の混合物を３０℃で一晩攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ−ＥＡ＝２：１）により、反応の完了が示された。反応混合物をジクロロメタン及び飽和炭酸ナトリウム溶液で処理した。有機相を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。減圧下で濾過物を濃縮させた。溶離液としてＰＥ−ＥＡ＝（３：１）を用いたシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより粗生成物を精製することによって、白色のフォーム状の生成物７９を取得し、それ以上精製及びキャラクタリゼーションせずに、これを次のステップで使用した。
【０９７６】
化合物８０：２０ｍＬの無水アセトニトリル及び８ｍＬのＢＳＡ中のトリシリル化化合物７９（１．５ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）の攪拌混合物を窒素雰囲気下６５℃で６時間加熱した。ｔ−（ブチルジメチルシリルオキシ）メチルクロリド（１．８ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を６５℃で一晩攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ−ＥＡ＝３：１）により、反応の完了が示された。反応混合物を室温まで冷却させてから、ジクロロメタン及び飽和炭酸ナトリウム水溶液で処理した。各層を分離し、水層をジクロロメタン（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させてから、濾過した。減圧下で溶媒を蒸発させた。シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、６４％の収率で、１．２ｇの所望の生成物８０を取得した。
【０９７７】
化合物８１：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（１．４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させた。この溶液を窒素雰囲気下で−７８℃に冷却した。１時間攪拌しながら、ｎ−ブチルリチウム（４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ；ヘキサン中２．５Ｍ）を滴下して添加した。上で調製したＬＤＡ溶液に、５ｍＬの無水ＴＨＦ中の化合物８０（２．２ｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。得られた反応混合物を−７８℃でさらに２時間攪拌した。その間、１０ｍＬの無水ＴＨＦ中のヨードメタン（１．２５ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下で−７８℃に冷却した。冷却したヨードメタン溶液に、低温の化合物ＤのＬＤＡ溶液を直接移した。得られた反応混合物を−７８℃で３０分間攪拌した。塩化アンモニウム水溶液で反応混合物を処理してから、これを室温まで昇温させた後、酢酸エチル及び重炭酸ナトリウム水溶液で処理した。各層を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させてから、濾過した。減圧下で溶液を濃縮させた。シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、４９％の収率で、１．１ｇの所望の６−メチル化生成物８２を取得した。
【０９７８】
６−メチルプソイドウリジン（８２）：化合物８１（１．１ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ中の０．５Ｍ  ＴＢＡＦ溶液で処理した後、３０℃で一晩攪拌した。ＴＬＣによって、反応の完了が示された。混合物を濃縮した後、シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製することによって、６７％の収率で、２５７ｍｇの所望の生成物を取得し、これは、９９．４２％ＨＰＬＣ純度を有した。ＮＭＲ及びＭＳスペクトル分析によりこれを特性決定した。
【０９７９】
実施例３４．６，Ｎ１−ジメチルプソイドウリジン（０３６０１０１５１０７）の合成：
【０９８０】
【化１６１】
2017500034.tif 000226
化合物８３：化合物７９（５．８７ｍｇ、１０ｍｍｏｌ）を１００ｍＬの無水ジクロロメタンに溶解させてから、２０ｍＬのＢＳＡを添加した。この混合物を窒素雰囲気下で４時間還流させた。ヨードメタン（２．５６ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ、１．８当量）を添加した後、還流温度で５日間反応混合物を加熱し続けた。ＴＬＣ（ＰＥ−ＥＡ＝３：１）により、微量の出発材料の残留が示された。反応混合物を室温まで冷却させてから、ジクロロメタン及び重炭酸ナトリウム水溶液で処理した。各層を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、濾過物を減圧下で濃縮させた。シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、６５％の収率で、白色のフォームとして３．９ｇの化合物８３を取得した。幾分かの出発材料を回収した。
【０９８１】
化合物８４：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（１．４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させた。この溶液を窒素雰囲気下で−７８℃に冷却した。１時間攪拌しながら、ｎ−ブチルリチウム（４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ；ヘキサン中２．５Ｍ）を滴下して添加した。上で調製したＬＤＡ溶液に、５ｍＬの無水ＴＨＦ中の化合物８３（１．８ｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。得られた反応混合物を−７８℃でさらに２時間攪拌した。その間、１０ｍＬの無水ＴＨＦ中のヨードメタン（１．２５ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下で−７８℃に冷却した。この冷却したヨードメタン溶液に、低温の化合物８３のＬＤＡ溶液を直接移した。得られた反応混合物を−７８℃で３０分間攪拌した。塩化アンモニウム水溶液で反応混合物を処理してから、これを室温まで昇温させた後、酢酸エチル及び重炭酸ナトリウム水溶液で処理した。各層を分離し、水相を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させてから、濾過した。減圧下で溶液を濃縮させた。シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、６５％の収率で、１．２ｇの所望の生成物８４を取得した。
【０９８２】
１，６−ジメチルプソイドウリジン（８５）：化合物８４（１．２ｇ、１．９５ｍｍｏ
ｌ）をＴＨＦ中の１０ｍＬの１Ｍ  ＴＢＡＦ溶液で処理した後、室温で２４時間攪拌した。ＴＬＣによって、反応の完了が示された。混合物を濃縮した後、塩化メチレン−メタノール（２０：１）を用いたシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製することによって、９９．６１％ＨＰＬＣ純度を有する２４０ｍｇの所望の生成物８５を取得した。ＮＭＲ及びＭＳスペクトル分析によりこれを特性決定した（スペクトルについては、別の資料を参照されたい）。
【０９８３】
実施例３５．Ｎ１−アリルプソイドウリジン（０３６０１０１５１５１）の合成：
【０９８４】
【化１６２】
2017500034.tif 000227
化合物８６：２０ｍＬの無水アセトニトリル及び１０ｍＬのＢＳＡ中の化合物７９（１．１７ｇ、２．０ｍｍｏｌ）の攪拌混合物を窒素雰囲気下６５℃で４時間加熱した。臭化アリル（０．５ｍＬ、０．７ｇ、５．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を６５℃でさらに２４時間攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ−ＥＡ＝３：１）により、反応の完了が示された。冷却した反応混合物を酢酸エチル及び飽和炭酸ナトリウム溶液で処理した。各層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。濾過物を減圧下で濃縮させた。溶離液としてＰＥ−ＥＡを用いたシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、５２％の収率で、６５０ｍｇの生成物８６を取得した（幾分かの出発材料を回収した）。
【０９８５】
１−アリル−プソイドウリジン（８７）：化合物Ｃ（１．１ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＴＨＦに溶解させた後、ＴＨＦ中の１０ｍＬの１Ｍ  ＴＢＡＦを添加した。反応混合物を室温で２４時間攪拌した。溶媒を濃縮した後、シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、５７％の収率で、２８４ｍｇの所望の生成物８７を取得し、これは、９５．４７％収率を有した。ＮＭＲ及びＭＳスペクトル分析によりこれを特性決定した（スペクトルについては、別の資料を参照されたい）。
【０９８６】
実施例３６．１−プロパルギル−プソイドウリジン（０３６０１０１５１５３）の合成：
【０９８７】
【化１６３】
2017500034.tif 000228
化合物８８の合成：ビス−トリメチルシリルアセトアミド（ＢＳＡ、１０ｍｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）中の化合物７９（１．５ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。４０℃で４時間攪拌した後、この溶液に、臭化プロパルギル（０．３６ｍＬ）を添加し、次にこの溶液を還流温度で２４時間加熱した。減圧下で、反応混合物を乾燥まで濃縮させた。石油エーテル（ＰＥ）：酢酸エチル（ＥＡ）＝２０：１〜８：１を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、８１％の収率で、淡い黄色のフォームとして１．１ｇの化合物８８を取得した。
【０９８８】
１−プロパルギル−プソイドウリジン（８９）：ＴＨＦ中の化合物８８（２．２ｇ、１当量）の溶液に、ＴＨＦ（１Ｍ、２ｍＬ）中のＴＢＡＦを添加した後、混合物を３０℃で一晩攪拌した。減圧下で、混合物を乾燥まで濃縮させた。ＭｅＯＨ−ＤＣＭ＝１：５０〜１：２５を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、得られた粗生成物を精製することによって、３２．７％の収率で、薄桃色の固体として０．３２５ｇの化合物８９を取得した。ＨＰＬＣ純度：９８．２％；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．４（ｓ，１Ｈ），７．８１（ｓ，１Ｈ），４．９７−４．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），４．７７−４．７８（ｍ，２Ｈ），４．４６−４．５０（ｍ，３Ｈ），３．８３−３．９３（ｍ，２Ｈ），３．５９−３．７１（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．５０（ｍ，２Ｈ）。
【０９８９】
実施例３７．１−シクロプロピルメチルプソイドウリジン（０３６０１０１５０３０）の合成：
【０９９０】
【化１６４】
2017500034.tif 000229
化合物９０の合成：ビス−トリメチルシリルアセトアミド（ＢＳＡ、５ｍｌ）をＤＣＭ（１５ｍＬ）中の化合物７９（１．５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。４０℃で４時間攪拌した後、この溶液に、臭化シクロプロピルメチル（０．４５ｍＬ）を添加してから、溶液を還流温度で５日間加熱した。減圧下で、反応混合物を乾燥まで濃縮させた。ＰＥ：ＥＡ＝２０：１〜８：１を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、６７％の収率で、淡い黄色のフォームとして１．１ｇの化合物９０を取得した。
【０９９１】
１−シクロプロピルメチルプソイドウリジン（９１）：ＴＨＦ中の化合物９０（１．２ｇ、１当量）の溶液に、ＴＨＦ（１Ｍ、２ｍＬ）中のＴＢＡＦを添加した後、混合物を一晩攪拌した。減圧下で、混合物を乾燥まで濃縮させた。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：５０〜１：２５を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、得られた粗生成物を精製することによって、４６．６％の収率で、白色の固体として０．２６ｇの生成物９１を取得した。ＨＰＬＣ純度：９７．６％；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．２８（ｓ，１Ｈ），７．８４（ｓ，１Ｈ），４．９７−４．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），４．８２−４．８５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），４．７５−４．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．５Ｈｚ），４．４６−４．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３Ｈｚ），３．８８−３．９５（ｍ，２Ｈ），３．５８−３．７１（ｍ，３Ｈ），３．３４−３．４５（ｍ，２Ｈ），１．１１（１Ｈ），０．４５−０．４８（ｍ，２Ｈ），０．３２−０．３５（ｍ，２Ｈ）。
【０９９２】
実施例３８．６−クロロ−１−メチルプソイドウリジン（０３６０１０１５１１７）の合成：
【０９９３】
【化１６５】
2017500034.tif 000230
化合物９２：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミン（１．４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解させた。この溶液を窒素雰囲気下で−７８℃に冷却した。１時間にわたって攪拌しながら、ｎ−ブチルリチウム（４ｍＬ、１０ｍｍｏｌ；ヘキサン中２．５Ｍ）を滴下して添加した。上で調製したＬＤＡ溶液に、５ｍＬの無水ＴＨＦ中の化合物８３（２．２ｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。得られた反応混合物を−７８℃でさらに２時間攪拌した。１０ｍＬの無水四塩化炭素に、臭素（５ｍＬ）を溶解させてから、分子篩で乾燥させた。−７８℃で攪拌しながら、薄黄色がオレンジ色になるまで、この臭素溶液を化合物８３のＬＤＡ溶液に添加した。反応混合物を−７８℃で３０分間攪拌した。ＴＬＣ（ＰＥ−ＥＡ＝３：１）により、微量の出発材料の残留が示された。まだ低温のうちに、反応混合物をチオ硫酸ナトリウム及び重炭酸ナトリウム水溶液の混合物に注ぎ込んだ。これを酢酸エチルで抽出し、有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、濾過した。減圧下で溶液を濃縮させた。シリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、１．６ｇの９２を取得した。
【０９９４】
６−クロロ−１−メチルプソイドウリジン（９３）：１．６ｇの上で得られた９２をＴＨＦ中の１０ｍＬの０．５Ｍ  ＴＢＡＦ溶液で処理した後、室温で２４時間攪拌して、濃縮させた。塩化メチレン−メタノールを用いたシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、９６．３％ＨＰＬＣ純度を有する１２０ｍｇの生成物を取得した。ＮＭＲ及びＭＳスペクトル分析によりこれを特性決定して、Ｎ１−メチル−６−クロロプソイドウリジン９３であることが判明した。
【０９９５】
実施例３９．１−ベンジル−プソイドウリジン（０３６０１０１５０３２）の合成：
【０９９６】
【化１６６】
2017500034.tif 000231
化合物９４：ビス−トリメチルシリルアセトアミド（ＢＳＡ、１０ｍＬ）を２０ｍＬのジクロロメタン中の化合物７９（２．０ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。４０℃で４時間攪拌した後、この溶液に、臭化ベンジル（０．５ｍＬ）を添加してから、溶液を還流温度で５日間加熱した。減圧下で、反応混合物を乾燥まで濃縮させた。ＰＥ：ＥＡ＝２０：１〜８：１を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、６０．８％の収率で、淡い黄色のフォームとして１．４ｇの化合物９４を取得した。
【０９９７】
１−ベンジル−プソイドウリジン（９５）：ＴＨＦ中の化合物９４（１．４ｇ、１当量）の溶液に、ＴＨＦ（１Ｍ、１０ｍＬ）中のＴＢＡＦを添加した後、混合物を室温で一晩攪拌した。減圧下で、混合物を乾燥まで濃縮させた。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：５０〜１：２５を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、粗生成物を精製することによって、５１．０％の収率で、白色の固体として０．３０９ｇの所望の生成物９５を取得した。純度：９７．９％；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．４１（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ），７．２７−７．３６（ｍ，５Ｈ），４．９４−４．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），４．８６（ｓ，２Ｈ），４．７７−４．８０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），４．７１−４．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），４．４６−４．４７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．３Ｈｚ），３．９３−３．９６（ｍ，１Ｈ），３．８３−３．８７（ｍ，１Ｈ），３．６８−３．７０（ｍ，１Ｈ），３．５９−３．６３（ｍ，１Ｈ），３．４２−３．４７（ｍ，１Ｈ）；質量スペクトル：３３５．１（Ｍ＋Ｈ）＋，３５８．１（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【０９９８】
実施例４０．１−メチル−３−（２−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノ−３−ｔ−ブチルオキシカルボニル）プロピル−プソイドウリジン（０３６０１０１５０３６−Ｂｏｃ）の合成：
【０９９９】
【化１６７】
2017500034.tif 000232
化合物９７の合成：５０ｍｌの乾燥ＴＨＦ中のＢｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（９６）（５．０ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）の溶液を−１０℃に冷却させた。Ｎ−メチルモルホリン（１．７５ｇ、１７．３ｍｍｏｌ）を添加した。１分後、ＣｌＣＯ２Ｅｔ（１．６５ｍｌ、１７．３ｍｍｏｌ）を滴下しながら添加した。反応混合物を−５℃でさらに１５分間攪拌した。沈殿したＮ−メチルモルホリン塩酸塩を濾過して除去した後、１０分以内に、２０ｍＬの水中のＮａＢＨ４（１．４７ｇ、３８．９ｍｍｏｌ）の溶液に、５〜１０℃で濾過物を添加した。反応混合物を室温で３．５時間攪拌した後、５℃に冷却した。３Ｍ塩酸を添加することにより、ｐＨを２にしてから、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機相を水で２回洗浄した後、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。生成物を真空下で乾燥させた後、溶離液としてＰＥ：ＥＡ（１：２）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより精製することによって、８５％の収率で、無色の油として４．０ｇの生成物９７を取得した。
【１０００】
化合物（９８）：Ｎ２下、室温で、無水ＴＨＦ（１６ｍＬ）中の化合物８３（１．６０ｇ、１．０当量）、化合物９７（０．８３ｇ、１．５当量）及びトリフェニルホスフィン（２．１ｇ、３当量）の攪拌溶液に、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（１．６ｇ、３当量）を添加した。反応混合物を１時間攪拌し、減圧下で溶媒を除去した。ＰＥ：ＥＡ（１０：１〜８：１）を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより残留物を精製することによって、５６．８％の収率で、薄黄色の油として１．６ｇの所望の生成物９８を取得した。
【１００１】
１−メチル−３−（２−Ｎ−ｔ−Ｂｏｃ−アミノ−３−ｔ−ブチルオキシカルボニル）プロピル−プソイドウリジン（９９）：ＴＨＦ中の化合物９８（１．３ｇ、１当量）の溶液に、ＴＨＦ（１Ｍ、２ｍＬ）中のＴＢＡＦを添加した後、混合物を室温で２時間攪拌し
た。減圧下で、混合物を乾燥まで濃縮させた。ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：２０〜１：５を用いたシリカゲルクロマトグラフィーにより、粗生成物を精製することによって、５７．６％の収率で、白色のフォームとして０．４６ｇの生成物９９を取得し、これは、９８％のＨＰＬＣ純度を有した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，３００ＭＨｚ）：δ７．７７（ｓ，１Ｈ），６．２５−６．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），４．９３−４．９５（１Ｈ），４．７８−４．８１（ｍ，２Ｈ），４．７３−４．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），４．５１−４．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），３．８６−３．９０（ｍ，１Ｈ），３．６８−３．７０（ｍ，３Ｈ），３．４８−３．５０（ｍ，３Ｈ），３．３４（ｓ，３Ｈ），２．３３−２．３７（ｍ，２Ｈ），１．２６−１．３７（１８Ｈ）；ＥＳ
ＭＳ，ｍ／ｚ  ５３７．７（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【１００２】
実施例４１．化合物プソイドウリジン１−（２−エタン酸−Ｆｍ）（０３６０１０１５０３４−Ｆｍ）の合成：
【１００３】
【化１６８】
2017500034.tif 000233
ブロモ酢酸Ｆｍエステル（１０２）の合成：９−フルオレニルメタノール（１０ｇ、１当量）を１００ｍＬのジクロロメタンに溶解させてから、トリエチルアミン（６．１４ｇ、１．１９当量）を添加した。反応混合物を氷浴中で冷却させ、１時間にわたって攪拌しながら、１０ｍＬの塩化メチレン中の臭化ブロモアセチル（１０．３ｇ、１当量）の뫦늶苣뮷諥鞁臣芀뿦ꎁ臣랷郥ꦉ苣꒮룦뺁臣螘룦閁臣ꚁ臣覂胣肸駦ꪔ详鞁臣芀럦袐觧銂냦袼볯邼볯趽볯쎬鎼볯誏臣ꦡ냦ꞁ듦蒵臣龁胣袐苣鮁臣覜ꧦ뢛苣뺹蟧閁臣ꚁ臣覂胣鮸鳥许臣莿룧閁臣龁胣랂菣ꮂ苣ꮃ苣궃菣袃苣ꦃ菣ꎂ菣袼볯ꖼ볯ꖼ볯鶼볯邼볯骼볯鲀볯邼볯醼볯ꮁ苣誂뻥覂苣龁닧龔裦ꦉ苣뺲ꏨ馁苣鎁臣ꮁ苣ꎁ臣膀볯馼볯颼볯꺁迥螎臣膀럦蒁믩늉臣몛뷤ꢁ臣ꚁ볯躼볯螽臣龔裦ꦉ볯邼볯銂迥鞾臣龁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯邼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†賥袐觧醼볯邼볯鎃苣銈菣ꪃ菣膃菣랂菣ꮃ苣뮂菣ꊂ菣覃볯ꊼ볯ꆼ胣銼볯趽뷯覼苣뢂苣궃菣ꆃ苣뎃볯銼볯趽볯覼룤꺁賥袐觧鞼볯袼볯躼볯螽胣鎼볯钼뷯趽뷯貽볯꺁铦貋뫦늶臣뮷諥鞁臣芀볯邼蓢ꞁ볯芙雩ꪔ详鞁臣貾胣뢂苣궃菣ꆃ苣뎃볯銼뷯겼볯궸臣隃菣ꊃ裢隌郥ꦉ볯邼볯袼볯躼볯鎼뷯膀볯躼볯鎽蟩覼苣뮷諥鞁臣讁苣膀뫦늶苣蒂뗦ꦸ뫥ꞁ볯ꖗ雩ꂊ蛧鞁臣芀룦Ꞝ룤ꞁ胣趏뿥랷郥ꦉ苣뺹蟧뺁臣莿룧閁臣龁胣낼볯骼볯ꆼ볯醼볯骼볯鲀볯骼볯銂铧蒁臣랂菣ꮂ苣ꮃ苣궃菣袃苣ꦃ菣ꎂ菣ꮁ苣誂껦馕觧銂닧붣臣讂臣ꢁ臣袂臣ꚁ胣붙觨꺁菣ꦂ菣ꂃ臣鞁臣邼볯颼뷯㲇牢ਾ臣肉鳦꺁賥袐觧醼볯邼苣随뻥鞁臣袼볯躼볯螽臣隌郥ꦉ볯馼苣麛迥鞁臣覼胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯邼볯閼胣㲑䐯噉ਾ†菣붂苣覃苣ꪃ苣뎃볯銈볯銼裢ꢂ苣뎃藩銈볯趽볯袼볯邼볯覼볯뒼볯ꚼ볯銼볯趽볯覼룤꺁賥袐觧醼볯邼볯邼볯颼뷯膀볯鎽蟩覼臣뚺뛦ꮁ胣醼볯₭ꢼ볯貽볯醼뷯겼볯銂럦ꂊ臣龁뻥膀럦袐觧銂껥ꦸ臣肸駦ꪔ详鞁臣芀룦Ꞝ룤ꞁ胣랷郥ꦉ苣뺹蟧뺁臣莿룧閁臣龁胣궼뷯꾼볯骼볯ꎼ볯鶼볯骼볯邼胣醼볯銼볯銂铧蒁臣랂菣ꮂ苣ꮃ苣궃菣袃苣ꦃ菣ꎂ菣ꮁ苣誂胣议闧ꦉ苣뺲ꏨ馁苣鎁臣ꮁ苣ꎁ臣膀볯钼볯銼볯꺁迥螎臣膀駧늉臣몛뷤ꢁ臣ꚁ볯躼볯邼뷯꺁鳦芵铧邈觧醼볯醼苣随뻥鞁臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 龮雦设볯銼볯閼裢ꢂ菣ꮃ裢랂菣뢂菣袼볯鎼볯邼볯邼볯钼볯鎼볯覼臣袐裦骼㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣隌볯隼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔷〰㌰⸴楴≦㈾㄰㔷〰㌰⸴楴쉦゠〰㌲㰴愯㰾䐯噉ਾ 隌郥ꦉ볯邼볯骼매ꖇ苣뮂菣讃菣ꪃ菣袼볯邼뷯겼볯궸臣隌郥ꦉ볯邼볯袼볯躼볯螽胣銼볯趽뷯辽뷯覼臣뚺뛦ꮁ胣ꊼ볯ꆼ볯銼볯螽胣醼볯邼뷯趽뷯貽胣閼뷥辇볯銂럦ꂊ臣龁胣趏뿥랷郥ꦉ苣隼볯莄臣钼駦鎖铦貋臣龁뻥膀껥ꦸ臣ꞁ蛥뒍臣鮁臣芀臣꺁迥鲿럦袐觧ꮁ胣隌郥ꦉ볯邼볯袼볯邼볯醼뷯膀볯邼뷯趽뷯貽볯膀볯궼볯꾼볯蚽볯醼볯躼볯趽볯膀볯邼뷯趽뷯貽胣鎼뷥辇볯銂럦ꂊ臣膀뻥覂苣龁迥鲿럦袐觧銂볯邼蓢ꞁ볯芙雩ꪔ详鞁臣芀볯겼볯ꮁ苣誂菣讃苣벃臣貂苣趏뿥꺁껥蚺駦ꮁ胣趏뿥랷郥ꦉ苣ꦡ賥ꆃ菣것菣誏臣붣鋥趇苧뢅菣袃菣Ꚃ菣ꞁ蟥蚐臣龁胣覜ꧦ뢛苣蚈鯩鞁胣뒰鯧銂苣꾂菣궃菣뾂菣ꞁ諦몇臣龁胣袐苣鮁臣覜ꧦ뢛苣ꆄ냦꺼뷯㲁畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲒猯扵뎼볯㲯畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲔猯扵ꞁ매ꖇ臣鮁臣芀매ꖇ觥銂뿦躁臣袂苣꒙軥鞁臣貾胣鮸鳥许臣뺿臩ꦉ苣莿룧閁臣龁胣랂菣ꮂ苣ꮃ苣ꦃ菣ꞁ臣閃菣莃苣ꖃ苣궃菣袃苣ꦃ菣ꎂ菣ꮁ苣誂닧龔裦ꦉ苣뺲ꏨ馁苣鎁臣ꮁ苣ꎁ臣膀볯閼볯꺁迥螎臣膀볯醼뷯꺁触鮜臣隌郥ꦉ볯邼볯銂迥鞾臣龁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯邼볯颼胣㲑䐯噉ਾ†賥袐觧醼볯隼볯뺹蟧ꦡ賥ꆃ菣것菣袼볯邼볯趽볯覼룤꺁볯貼볯貼볯銈볯ꢼ裢袃菣ꊂ苣벃菣袼볯馼볯鎼볯螽胣銼볯閼뷯趽뷯貽볯膀苣궂苣ꦡ賥ꪃ菣袼볯躼볯趽볯膀볯鎼뷯趽뷯貽볯꺁뫦늶臣膀菣ꪃ苣膃菣ꊂ菣뎃볯鎼볯躼볯趽볯膀볯鞼볯趽뷯辽뷯覼苣邼蓢ꞁ苣ꎁ臣誂臣뮷諥鞁臣芀迥鲿럦袐觧銂껥ꦸ臣ꞁ飦ꦸ臣鮁臣貾胣隌郥ꦉ볯邼볯袼볯隼볯鞼뷯膀볯邼뷯趽뷯貽볯銂럦ꂊ臣龁胣趏뿥랷郥ꦉ苣뮷諥鞁臣膀룦ꚺ臣銼駦鎖铦貋臣龁胣뒼볯ꎼ臣袂苣ꊃ菣뾂菣閁苣讂迥鲿臣貮뫤芙臣膀迥鲿럦袐觧銂ꇥ隌菣膃菣뎃迥뎁ꏩ貒蟩궂藩誃菣ꪃ苣ꂃ臣ꚇ郧鞁臣芀鳦龩鯧銂裥ꊛ臣膀냦뢛苣ꦡ賥ꆃ菣것菣ꞁ諦몇臣龁胣袐苣鮁臣覜ꧦ뢛苣ꆄ냦꺼뷯㲁畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲒猯扵뎼볯㲯畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲔猯扵ꞁ매ꖇ臣鮁臣芀매ꖇ觥銂뿦躁臣袂苣꒙軥鞁臣貾胣鮸鳥许臣뺿臩ꦉ苣莿룧閁臣讂臣ꢁ臣袂苣膀닧龔裦㲐牢ਾ賥袐觧醼볯隼苣随뻥鞁胣鎁苣銂臣貂믤誸닧붣臣骁臣ꆬ臣릂菣莃菣ꮁ胩ꎁ臣芀㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯邼볯醀⼼䥄㹖 隌郥ꦉ볯邼볯骼苣ꪂ苣떂菣袼볯鎼볯趽볯覼룤꺁賥袐觧醼볯隼볯誸臣随뻥鞁臣鞲铧邈觧覼臣ꪔ详뚺뛦ꮁ胣莿룧ꊂ菣ꊃ菣Ꚃ菣뚺뛦袼볯馼볯钼뷯겼볯銂럦ꂊ臣龁胣趏뿥랷郥ꦉ苣꒮룦ꞁ볯芙雩ꪔ详鞁臣芀볯겼볯ꮁ苣誂菣讃苣벃臣貂苣趏뿥꺁껥蚺駦ꮁ胣趏뿥랷郥ꦉ苣鮸鳥许臣莿룧閁臣讂臣ꢁ臣袂苣膀닧隌郥ꦉ볯邼볯銂迥鞾臣膀臣貂苣鶁苣ꖻ룤뺲ꏨ鮁臣ꮁ곦꺁苣蚃菣鞃臣膀臣龁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯邼볯邼胣㲑䐯噉ਾ†볯銈苣膃菣銈苣膃苣뎃볯醼볯颼볯骼ꏩ貒苣뎃菣讃苣ꆃ苣躃菣ꮃ뫦늶볯醼볯邼뷯겼볯궸臣隌郥ꦉ볯邼볯袼룤ꞁ迥鞾臣龁닧龔裦ꦉ볯꺁뫦늶苣蚯雩릮駥궸껥ꦸ臣銼볯芙雩ꪔ详鞁臣芀볯겼볯ꮁ苣誂菣讃苣벃臣貂苣趏뿥꺁껥蚺駦ꮁ胣趏뿥랷郥ꦉ苣鮸鳥许臣뺹蟧뺁臣莿룧閁臣龁胣랂菣ꮂ苣ꮃ苣ꦃ菣ꞁ臣閃菣莃苣ꖃ苣궃菣袃苣ꦃ菣ꎂ菣ꮁ苣誂胣鞲铧邈觧銂닧붣臣讂臣ꢁ臣袂臣ꚁ胣肉鳦꺁鳦芵铧邈觧醼볯颼苣随뻥鞁胣鎁苣銂볯궼볯膀볯뎼迥뎁볯뚼苣骃苣袃菣蚈黦ꮁ苣誂觧Ꞁ뇦骮臣龁胣㲂畳⁰浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲑猯灵ꢼ†볯궼볯袼볯궼볯꾼裢蒽猼扵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰隼⼼畳㹢볯캉鞼볯颼볯鎽볯醼볯覼볯鞼볯鎼볯芽뷯鎽볯銼볯覼볯閼볯鞼볯袼뷯貼볯ꢼ볯貼볯躼볯醼볯鎽볯醼볯覼볯閼볯醼볯袼뷯貼볯ꢼ볯貼볯躼볯醼볯鎽볯醼볯覼볯鎼볯馼볯袼뷯貼볯ꢼ볯貼볯躼볯鎼볯鎽볯醼볯覼볯鎼볯隼볯袼뷯貼볯ꢼ볯ꪼ볯醼볯躼볯ꢼ뷯覼볯鎼볯閼볯袼뷯貼볯ꢼ볯ꪼ볯醼볯躼볯ꢼ뷯覼볯銼볯銼볯袼뷯貼볯ꢼ볯ꪼ볯鞼볯銼볯骽볯貼볯躼볯閼볯钽볯鎼볯貼볯鶼볯躼볯ꢼ뷯覼胣ꪳ蟩릂菣꾂菣ꮃ볯趽볯骽†볯鞼볯躼볯袼볯讼볯覼猼灵砠汭獮樺㵰栢瑴㩰⼯睷⹷灪⹯潧樮≰讼⼼畳㹰胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯邼볯醼胣㲑䐯噉ਾ†껥붖뻤钼볯躼볯銈菣袃苣랂裢랂菣뢂菣袼볯鎼볯邼볯邼볯钼볯鎼볯覼臣袐裦骼㰊䐯噉ਾ䐼噉㰾䥄㹖胣醼볯醼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖胣隌볯鞼볯醀⼼䥄㹖㰊䥄㹖愼栠敲㵦㈢㄰㔷〰㌰⸴楴≦㈾㄰㔷〰㌰⸴楴쉦゠〰㌲㰵愯㰾䐯噉ਾ 隌郥ꦉ볯醼볯骼매ꖇ苣뮂菣讃菣ꪃ菣袼볯邼뷯겼볯궸臣隌郥ꦉ볯邼볯袼볯躼볯銼뷯膀볯邼뷯趽뷯貽볯꺁뫦늶臣膀볯뎼볯袼볯邼볯閼뷯膀볯邼뷯趽뷯貽볯銂럦ꂊ臣龁胣趏뿥랷郥ꦉ苣隼볯莄臣钼駦鎖铦貋臣龁뻥膀껥ꦸ臣ꞁ蛥뒍臣鮁臣芀臣꺁迥鲿럦袐觧ꮁ胣隌郥ꦉ볯邼볯袼볯躼볯钼뷯膀볯邼뷯趽뷯貽볯誏臣뒼볯뎼볯뒼뷯袼볯躼볯趽볯膀볯閼뷯趽뷯貽볯銂럦ꂊ臣龁胣鞾苣貂臣趏뿥랷郥ꦉ苣隼볯莄臣钼駦鎖铦貋臣龁胣뒼볯ꎼ臣袂苣ꊃ菣뾂菣閁苣讂迥鲿臣貮뫤芙臣膀迥鲿럦袐觧銂ꇥ隌菣膃菣뎃迥뎁ꏩ貒蟩궂藩誃菣ꪃ苣ꂃ臣ꚇ郧鞁臣芀鳦龩鯧銂裥ꊛ臣膀냦뢛苣ꦡ賥ꆃ菣것菣ꞁ諦몇臣龁胣袐苣鮁臣覜ꧦ뢛苣ꆄ냦꺼뷯㲁畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲒猯扵뎼볯㲯畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲔猯扵ꞁ매ꖇ臣鮁臣芀매ꖇ觥銂뿦躁臣袂苣꒙軥鞁臣貾胣鮸鳥许臣뺿臩ꦉ苣莿룧閁臣龁胣랂菣ꮂ苣ꮃ苣ꦃ菣ꞁ臣閃菣莃戼㹲랂菣꾂菣麃菣낂菣閃苣벃臣袂苣鞲铧邈觧銂닧붣臣讂臣ꢁ臣袂臣ꚁ胣隼볯薼臣躏軧ꞁ胣鎼볯颼뷯꺁触鮜臣隌郥ꦉ볯醼볯銂迥鞾臣龁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯邼볯鎼胣㲑䐯噉ਾ†賥袐觧醼볯醼볯뺹蟧ꦡ賥ꆃ菣것菣袼볯邼볯趽볯覼룤꺁볯貼볯貼볯銈볯ꢼ裢袃菣ꊂ苣벃菣袼볯躼볯鎼뷯膀볯銼볯趽뷯辽뷯覼迥뎁苣궂苣ꦡ賥ꪃ菣袼볯躼볯趽볯膀볯鞼볯馼뷯趽뷯貽볯꺁뫦늶臣膀菣ꪃ苣膃菣ꊂ菣뎃볯醼볯躼볯趽볯膀볯醼볯躼볯趽뷯辽뷯覼苣邼蓢ꞁ苣ꎁ臣誂臣뮷諥鞁臣芀迥鲿럦袐觧銂껥ꦸ臣ꞁ飦ꦸ臣鮁臣貾胣隌郥ꦉ볯醼볯袼볯躼볯螽胣醼볯躼볯趽뷯辽뷯覼苣뮷諥鞁臣芀迥鲿럦袐觧銂룦ꚺ臣銼駦鎖铦貋臣龁胣뒼볯ꎼ臣袂苣ꊃ菣뾂菣閁苣讂迥鲿臣貮뫤芙臣膀迥鲿럦袐觧銂ꇥ隌菣膃菣뎃迥뎁ꏩ貒蟩궂藩誃菣ꪃ苣ꂃ臣ꚇ郧鞁臣芀鳦龩鯧銂裥ꊛ臣膀냦뢛苣ꦡ賥ꆃ菣것菣ꞁ諦몇臣龁胣袐苣鮁臣覜ꧦ뢛苣ꆄ냦꺼뷯㲁畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲒猯扵뎼볯㲯畳⁢浸湬㩳灪∽瑨灴⼺眯睷樮潰朮⹯灪㸢볯㲔猯扵ꞁ매ꖇ臣鮁臣芀매ꖇ觥銂뿦躁臣袂苣꒙軥鞁臣貾胣鮸鳥许臣뺿臩ꦉ苣莿룧閁臣讂臣ꢁ臣袂苣膀닧龔裦隌郥ꦉ볯醼볯銂迥鞾臣膀臣貂苣鶁苣ꖻ룤뺲ꏨ鮁臣ꮁ곦꺁苣蚃菣鞃臣膀臣龁胣ં⼼䥄㹖㰊䥄㹖䐼噉邀볯邼볯钼胣㲑䐯噉ਾ†賥袐觧醼볯銼볯뢂苣궂苣뎃볯隼볯趽볯覼룤꺁賥袐觧醼볯醼볯誸臣随뻥鞁臣鞲铧邈觧覼臣ꪔ详뚺뛦ꮁ胣莿룧ꊂ菣ꊃ菣Ꚃ菣뚺뛦袼볯躼볯趽볯覼苣뮷諥鞁臣芀迥鲿럦袐觧銂껥ꦸ臣閼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