(57)【要約】本発明は、ＡＴＰの合成を増大させるため、シトクロムｃオキシダーゼの活性を刺激するため、リボース五リン酸の合成を誘起するため、それ故、皮膚に関連する代謝プロセス及びエネルギープロセスを調節するための、ホウライアオカズラの抽出物の化粧品としての使用及び該抽出物を含む化粧品組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚細胞のエネルギー産生代謝経路を活性化させるための、ホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項２】
前記ホウライアオカズラ抽出物が葉抽出物である、請求項１に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項３】
前記ホウライアオカズラ抽出物が水アルコール抽出物である、請求項１又は２に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項４】
前記ホウライアオカズラ抽出物がグリセリンで安定化される、請求項３に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項５】
前記化粧品組成物が、前記組成物の総重量に対して、乾物重量で０．０１％〜１０％のホウライアオカズラ抽出物を含むことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項６】
前記組成物が、軟化剤、着色剤、被膜形成剤、界面活性剤、香料、防腐剤、乳化剤、油、グリコール、ＵＶ遮断剤及びビタミン剤等の配合剤又は添加剤の１つ又は複数を更に含む、請求項５に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項７】
ＡＴＰ合成を増大させるための、請求項１〜６のいずれか一項に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項８】
シトクロムＣオキシダーゼ活性を刺激するための、請求項１〜６のいずれか一項に記載のホウライアオカズラ抽出物、又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項９】
リボース五リン酸の合成を誘起させるための、請求項１〜６のいずれか一項に記載のホウライアオカズラ抽出物、又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項１０】
皮膚細胞に張りを与え、及び／又は皮膚細胞代謝を刺激するための、請求項１〜９のいずれか一項に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項１１】
最適な皮膚細胞機能を可能なものとし、その恒常性、再生及び修復を確実なものとするための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項１２】
皮膚、特にストレスを受けた疲れた皮膚に活力を与える、張りを与える、再活性化する又は解毒する；該皮膚の顔色の色調及び／又は輝きを改善させる；くすんだ及び／又は艶のない皮膚の外観を予防する；くすんだ及び／又は灰色の顔色といった顔にでる疲労の兆候を予防及び／又は修復する；冷気、風、汚染等の攻撃的な環境因子から皮膚細胞及び該皮膚を保護するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物。
【請求項１３】
眼の輪郭に張りを与える、疲れ目に活力を与える、眼の下の弛み及び影を低減させる、並びに包括的に、弛緩した及びたるんだ表情を元に戻すための、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧
品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧品スキントリートメントの分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は人体の特殊な器官である。皮膚は、厚さが薄く、かつ体の表面全体を覆っているため非常に広範なものであり、成人においては、皮膚の総表面積がおよそ１．６ｍ2とな
る。皮膚の機能は、異物の物理的侵入の点では外部環境から深部組織を保護することであり、免疫の点では、体温調節、体液喪失（fluid loss）等がある。最後に、皮膚が常に機械的ストレスに曝されていることは、大きな柔軟性と関連して皮膚が強固で凝集性の構造を有する必要があることを意味する。皮膚が受ける環境による攻撃のために、皮膚の構成細胞の代謝を刺激することによって、皮膚の再生及び修復を維持することが重要となる。
【０００３】
皮膚細胞における代謝プロセス及びエネルギープロセスの調節に関するその研究の範囲内で、本出願人は、皮膚細胞の代謝に対するホウライアオカズラ（Gymnema sylvestre）
抽出物の有益な効果を明らかにし、より特には、この抽出物が、ミトコンドリアを刺激し、かつ細胞エネルギー準位を増大させ得ることから、皮膚の老化の兆候、また、冷気、風、ＵＶ線、放射線等の外的な攻撃、又は毒素若しくは汚染物質への曝露によって引き起こされる損傷を予防又は抑制することが可能となることを証明した。
【０００４】
これらの研究から、以下に対する、ホウライアオカズラ抽出物の効果が特に証明された。
【０００５】
培養ヒトケラチノサイトにおけるＡＴＰ合成：
細胞内のエネルギーは、食事から事実上得られる基本分子（炭水化物、タンパク質、脂肪）から産生される。ミトコンドリアにおけるこれらの化合物の酸化は、高エネルギー化合物、すなわちアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の形態で、エネルギーの放出を起こす。
【０００６】
細胞がエネルギーを必要とするときには、ＡＴＰの終端リン酸基を加水分解して、その結合からのエネルギーとアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）とを放出させる。細胞の要求に応じて、ＡＴＰは絶えず加水分解した後、再生する。しかしながら、年齢、及び皮膚細胞が受ける様々な酸化ストレスにより、ミトコンドリアの整合性及び機能が損なわれるため、ＡＴＰ新合成（neosynthesis）は低減する。
【０００７】
このため、細胞内のＡＴＰ含有率を増大させることができる作用物質を特定すること、及び、ＡＴＰ新合成を刺激することによって皮膚細胞の代謝を増強させることが重要であると考えられる。
【０００８】
以下の実験パートに提示した結果から、ホウライアオカズラ抽出物が、ＡＴＰ合成の大幅な増大を誘起することが証明される。
【０００９】
酸化ストレスを受けるか又は受けない培養ヒトケラチノサイトにおける、シトクロムＣオキシダーゼである、呼吸鎖の複合体ＩＶの活性：
シトクロムＣオキシダーゼは、様々な皮膚細胞型及び毛髪細胞型で存在するものであり、細胞のエネルギー準位、代謝及び恒常性を制御する、ミトコンドリアの呼吸鎖又は酸化還元鎖におけるエネルギー代謝に関与することが知られている。この酵素は、赤色光によって活性化される光受容体であり、光子が酸化還元鎖によって吸収されると、光子がそれらのエネルギーを呼吸系に伝達する結果、光活性化された細胞の電気化学ポテンシャルの
変化、並びにＣａ2+及びｃＡＭＰが介在する細胞内シグナルの伝達を介して、細胞内の事象（ＤＮＡ及びＲＮＡの合成、増殖性細胞活性）のカスケード、及びＡＴＰの形態のエネルギー産生が誘起される。
【００１０】
この酵素は、酸素分子への電子の移行を触媒することができ、下図に従って、細胞に有害なフリーラジカル中間体を形成することなく、酸素分子を水分子へと変換させる。
【００１１】
【化１】
2017500360.tif 000002
ＣｙｔｏＣオキシダーゼによって酸素からのＡＴＰ及び水分子の生成を誘起する反応図
【００１２】
それらの基質のうちの１つであるシトクロムＣは、呼吸鎖の必須成分である。シトクロムＣは、ミトコンドリアの機能及び細胞の生存において不可欠な役割を担っている。シトクロムＣの主な役割は、鉄原子の原子価を変えることによって電子の移行を確実なものとすることである。このため、可溶性のシトクロムＣが、複合体ＩＩＩから複合体ＩＶ（シトクロムオキシダーゼ）へと電子を運搬する。シトクロムオキシダーゼの基質である電子はその後、酵素によって酸素へと移行する。
【００１３】
数多くのデータから、現時点では、脂質過酸化反応を誘起させることによって、フリーラジカルが、老化した組織のミトコンドリアにおける、膜流動性の低下の大部分、及びシトクロムオキシダーゼ等の幾つかの輸送体の活性の降下の原因となると主張することができる。そのため、シトクロムＣオキシダーゼ活性を増大させることができる化合物の特定が有用であることがわかるであろう。
【００１４】
ホウライアオカズラ抽出物が、ヒトケラチノサイトのシトクロムＣオキシダーゼ活性を刺激することが証明されたのに加えて、ホウライアオカズラ抽出物の効果を、シトクロムＣオキシダーゼ活性の大幅な低下を誘起する効果を有する過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）で事前処理したヒトケラチノサイトについて試験すると、ホウライアオカズラ抽出物がシトクロムＣオキシダーゼ活性を大幅に回復させることが証明された。
【００１５】
結論として、ホウライアオカズラ抽出物が、培養ヒトケラチノサイトにおける代謝プロセス及びエネルギープロセスの調節にかなりの効果を有する。
【００１６】
リボース五リン酸アッセイによる培養ヒト線維芽細胞におけるペントース経路：
また、本出願人の試験から、ホウライアオカズラ抽出物が、リボース五リン酸合成の大幅な増大を誘起させることによって、培養ヒトケラチノサイト及び培養線維芽細胞における代謝プロセス及びエネルギープロセスの調節に効果を有することが証明された。
【００１７】
ＡＴＰ生成に関与する解糖と並行して、ペントースリン酸経路が、特に細胞呼吸（クレブス回路、呼吸鎖）を促す電子供与体であるＮＡＰＤＨ、及びリボース五リン酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ生合成）を生成する代謝経路となる。
【００１８】
それらの特性に起因して、このためホウライアオカズラ抽出物は、皮膚細胞のエネルギー代謝を増大させるのに有用な作用物質となると思われる。
【００１９】
ホウライアオカズラは、中央及び南部のインド及びスリランカの熱帯林の在来植物であ
り、この植物は、様々な治療用途の、特に糖尿病を処置する医薬製剤に従来から使用されている。
【００２０】
特にこの化合物の着色性に起因して、又はその発毛抑制特性のために（国際公開第２００５／０６７９５３号）、皮膚に塗布することが意図される組成物中にホウライアオカズラの抽出物を使用することが知られている。
【００２１】
しかしながら、本出願人の知る限りでは、これまで、ホウライアオカズラ抽出物が、上記の特性を有し、かつエネルギーを皮膚細胞に供給する代謝経路の活性化因子として有用であることを実証し得ることを示唆したものはなかった。
【発明の概要】
【００２２】
このため、本発明は、エネルギーを産生する皮膚細胞の代謝経路を活性化させるため、ＡＴＰ合成を増大させるため、シトクロムＣオキシダーゼ活性を刺激するため、リボース五リン酸合成を誘起させるため、並びにこれにより、皮膚における代謝プロセス及びエネルギープロセスを調節するための、ホウライアオカズラ抽出物の化粧品としての使用又は該抽出物を含む化粧品組成物に関する。
【００２３】
ホウライアオカズラ抽出物は好ましくは、植物の地上部、より特には葉から得られ、当業者に既知の任意の抽出方法を用いて調製することができる。
【００２４】
特定の一実施の形態によれば、ホウライアオカズラの地上部の断片を用いて下記処理：
乾燥後、粉砕と、
水アルコール相中、例えば水とエタノール等のＣ1〜Ｃ4の低級アルコールとの混合物中における固体／液体抽出と、
粗濾過（coarse filtration）と、
活性炭素上における脱色と、
１μｍのカットオフ閾値を有するプレート濾過（plate filtration）と、
濃縮と、
によって、抽出を行う。
【００２５】
それらのその後の使用を容易にするために、抽出物を、グリセリン等の化粧品的に許容可能な基材に溶解させてもよい。
【００２６】
このようにして、透明な琥珀色の液体抽出物が得られる。
【００２７】
有利には、ホウライアオカズラ抽出物が、水アルコール抽出物であり、及び／又はグリセリンで安定化される。
【００２８】
その化粧品としての使用では、ホウライアオカズラ抽出物を、組成物の総重量に対して、乾物重量で０．０１％〜１０％、好ましくは０．０１％〜５％で化粧品組成物中に配合させる。
【００２９】
この組成物は、化粧品分野及び皮膚科学的分野において通常使用される剤形のいずれでも提供することができ、特に、任意にゲル化した水溶液、任意に二相ローションタイプの分散液、水性相中に油相を分散させることによって得られるエマルション（Ｏ／Ｗ）若しくは逆に（Ｗ／Ｏ）、若しくは三重エマルション（Ｗ／Ｏ／Ｗ又はＯ／Ｗ／Ｏ）、又はイオン性及び／又は非イオン性タイプのベシクル分散液の形態をとるものであってもよい。これらの組成物は一般的な方法を用いて調製される。
【００３０】
この組成物は、程度の差こそあれ流体であり、白色又は有色のクリーム、軟膏、乳液、ローション、セラム、ペースト又はフォームの外観を有し得る。この組成物は任意にエーロゾル形態で皮膚に塗布することができる。この組成物はまた、固体形態、特に粘着形態で提供することもできる。この組成物は、スキンケア製品及び／又はメイクアップ製品として使用することができる。
【００３１】
本発明による組成物はまた、化粧品分野における通常の補助剤、例えば、親水性ゲル化剤又は親油性ゲル化剤、親水性作用物質又は親油性作用物質、防腐剤、抗酸化剤、溶剤、フレグランス、増量剤、遮断剤（filters）、顔料、臭気吸収剤及び染料を含有するもの
であってもよい。これらの異なる補助剤の量は、当該分野で従来使用されてきたもの、例えば、組成物の総重量の０．０１％〜２０％とする。これらの補助剤は、その性質に従って、油性相中に、水性相中に、脂質ベシクル中に及び／又はナノ粒子中に導入されるものであってもよい。いずれの場合も、これらの補助剤は、その割合に合わせて、本発明によるホウライアオカズラ抽出物の求められる特性を妨害しないように選ばれると考えられる。
【００３２】
本発明による組成物の使用目的によれば、ホウライアオカズラ抽出物は、更なるアンチエイジング剤、特に、しわとり剤（anti-wrinkle）、脱色剤、ファーミング剤（firming
：固化剤）、ドレイニング剤（draining：排膿剤）、引き締め剤（tightening）、抗ラジカル剤及び／又は免疫防護剤、及び／又は細胞代謝（特にタンパク質合成）及び／又は細胞増殖を刺激する作用物質と結び付けることができる。
【００３３】
本出願人は、皮膚細胞の代謝経路、特に細胞エネルギーを供給するものを活性化させるのに、ホウライアオカズラ抽出物、及びそのようなものとして、ホウライアオカズラ抽出物を含有する本発明による化粧品組成物を使用することができることを証明した。皮膚細胞という用語は、ケラチノサイト、線維芽細胞及びメラノサイトを示すものであり、好ましくは、ケラチノサイトと線維芽細胞とからなるものとする。
【００３４】
結果的に、ホウライアオカズラ抽出物は、皮膚細胞に張りを与える（toning）及び／又は皮膚細胞代謝を刺激する作用物質として使用され、この抽出物及び／又は本発明による化粧品組成物はこのため、皮膚細胞に張りを与える及び／又は皮膚細胞代謝を刺激する作用物質として使用することができる。
【００３５】
本発明によるホウライアオカズラ抽出物及び／又は化粧品組成物は、皮膚細胞の最適な機能を可能なものとし、その恒常性、再生及び修復を確実なものとするのに更に使用することができる。
【００３６】
このように、本発明によるホウライアオカズラ抽出物及び／又は組成物は、その顔色の輝き及びその表面外観を改善させることによって、皮膚、特にストレスを受けた疲れた皮膚に活力を与える、張りを与える、再活性化する、又は解毒するのに有利に使用される。それらはまた、くすんだ（dull）及び／又は灰色の顔色といった顔にでる疲労の兆候を予防及び／又は修復するのにも使用される。それらはまた、冷気若しくは風のような天候に関する因子又は汚染といった攻撃的な環境因子から、皮膚細胞及び皮膚を保護するのに使用される。
【００３７】
本発明によるホウライアオカズラ抽出物及び／又は組成物は、皮膚の顔色の色調及び／又は輝きを改善させるのにも使用される。このように、それらは、くすんだ及び／又は艶のない皮膚の外観を予防するものである。
【００３８】
本発明によるホウライアオカズラ抽出物及び／又は組成物は、眼の輪郭に張りを与える
、疲れ目に活力を与える、眼の下の弛み及び影を低減させる、並びに包括的に、弛緩した及びたるんだ（rested）表情を元に戻すのに更に有用である。
【００３９】
本発明によるホウライアオカズラ抽出物及び／又は組成物は、活力剤又は疲れ防止トリートメント剤に使用することができる。
【００４０】
上記の適用は特に、顔面の皮膚、すなわち、顔、首、デコルテ及び／又は眼の輪郭上の皮膚に関するものであるが、体上の皮膚に特異的な化粧品トリートメント剤にも好適である。
【００４１】
本発明はまた、上記のようにホウライアオカズラ抽出物、又はホウライアオカズラ抽出物を含む化粧品組成物を皮膚に塗布することを含む、皮膚細胞にエネルギーを供給する代謝経路を活性化させる、皮膚に活力を与える、張りを与える、再活性化する又は解毒する、及び眼の輪郭に張りを与える、疲れ目に活力を与える、眼の下の弛み及び影を低減させる、並びに包括的に、弛緩した及びたるんだ表情を元に戻すための美容処置方法に関する。
【００４２】
このため、皮膚への塗布は、使用される剤形に応じて行うことができる。皮膚への塗布は、例えば、皮膚への単なる塗布、又は本発明による組成物による皮膚のマッサージを伴う塗布からなるものであってもよい。
【００４３】
塗布は十分な量の組成物を用いて行うことで、処置すべき皮膚の全表面が処置されるのが好ましい。塗布は、例えば、クリーム等の皮膚への従来型の塗布からなるものであってもよい。また塗布は、例えば、処置用マスクとして機能する外用薬（application）から
なるものであってもよい。
【００４４】
以下の実施例は、一方では、ホウライアオカズラ抽出物の生物学的効果の評価に関し、他方では、本発明による組成物の生物学的効果の評価に関するものである。
【００４５】
これらの実施例は、添付の図面について言及するものである。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】未処理の対照細胞培養物又は０．１２５％若しくは０．２５％のホウライアオカズラ葉抽出物(Gymnema)で処理した細胞培養物における、ＡＴＰ含有率を表す柱状グラフである。
【図２Ａ】未処理の対照細胞培養物又は０．１２５％若しくは０．２５％のホウライアオカズラ葉抽出物(Gymnema)で処理した細胞培養物における、Ｈ2Ｏ2を伴わないシトクロムＣオキシダーゼ活性を表す柱状グラフである。
【図２Ｂ】未処理の対照細胞培養物又は０．１２５％若しくは０．２５％のホウライアオカズラ葉抽出物(Gymnema)で処理した細胞培養物における、Ｈ2Ｏ2を伴うシトクロムＣオキシダーゼ活性を表す柱状グラフである。
【図３】未処理の対照細胞培養物又は０．１２５％若しくは０．２５％のホウライアオカズラ葉抽出物(Gymnema)で処理した細胞培養物における、リボース五リン酸含有率を表す柱状グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
以下の実施例のセットでは、被験品を、上記の水アルコール抽出法を用いて得られるホウライアオカズラ葉抽出物とし、その後、グリセリンにおいて安定化させる（７０％／３０％  グリセリン／水混合物中１．５％乾燥抽出物）。
【実施例】
【００４８】
実施例１  培養ヒトケラチノサイトにおけるＡＴＰ合成に対する、本発明による抽出物の効果の検討
１．１．材料及び方法
ロット組成物：
ロット１：未処理の対照
ロット２：培地において０．１２５％に希釈したホウライアオカズラ抽出物で処理した
ロット３：培地において０．２５％に希釈したホウライアオカズラ抽出物で処理した
【００４９】
細胞培養：
環状切除部（circumcisions）から回収したヒト包皮由来の皮膚を用いてケラチノサイ
ト培養物を作り、インスリン、ＥＧＦ及び脳下垂体抽出物を添加したＫＧＭ２培地（ケラチノサイト増殖培地、ＫＧＮ２、ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）において増殖させた。試験は、３回継代させた（3rd passage）ケラチノサイトについて行った。細胞は、細胞数１×１０
５の割合でマルチウェルディッシュに接種した（inoculated）。３７℃（５％ＣＯ2）に
おける２４時間のインキュベーションの後、指数増殖段階にある細胞を、０．１２５％及び０．２５％の濃度のホウライアオカズラ抽出物で処理した。処理の２４時間後、細胞をサンプリングし、ＡＴＰアッセイを行った。
【００５０】
ＡＴＰアッセイ：
ＰＲＯＭＯＫＩＮＥアッセイキット（Promocell, France）を用いてＡＴＰアッセイを
行った。分光光度計を用いて５７０ｎｍにおいて比色分析法を実施した。
【００５１】
１．２  結果
【表１】
2017500360.tif 000003
【００５２】
得られる結果から、０．１２５％及び０．２５％の濃度のホウライアオカズラ抽出物が、それぞれ１９％及び２２％のＡＴＰ合成の大幅な増大を誘起させることが証明されている。
【００５３】
実施例２  酸化ストレスを受けるか又は受けない培養ヒトケラチノサイトにおける、シトクロムＣオキシダーゼである、呼吸鎖の複合体ＩＶの活性に対する、本発明による抽出物の効果の検討
２．１．材料及び方法
ロット組成物：
ロット１：未処理の対照
ロット２：培地において０．１２５％に希釈したホウライアオカズラ抽出物で処理した
ロット３：培地において０．２５％に希釈したホウライアオカズラ抽出物で処理した
ロット４：Ｈ2Ｏ2で処理した
ロット５：培地＋Ｈ2Ｏ2において０．１２５％に希釈したホウライアオカズラ抽出物で処理した
ロット６：培地＋Ｈ2Ｏ2において０．２５％に希釈したホウライアオカズラ抽出物で処理した
【００５４】
細胞培養：
環状切除部から回収したヒト包皮由来の皮膚を用いてケラチノサイト培養物を作り、インスリン、ＥＧＦ及び脳下垂体抽出物を添加したＫＧＭ２培地（ケラチノサイト増殖培地、ＫＧＮ２、ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）において増殖させた。試験は、３回継代させたケラチノサイトについて行った。細胞は、細胞数１×１０６の割合でマルチウェルディッシュに接種した。３７℃（５％ＣＯ2）における２４時間のインキュベーションの後、指数増殖
段階にある細胞を、単独で又はＨ2Ｏ2の存在下において、０．１２５％及び０．２５％の濃度のホウライアオカズラ抽出物で処理した。
【００５５】
シトクロムＣオキシダーゼ活性の評価
処理の２４時間後、細胞をサンプリングした後、洗浄して、冷ＰＢＳに再懸濁させた。その後、指定のプロトコルに従い分析キット（Ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｃ  Ｏｘｉｄａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ、Sigma）を用いてシトクロムＣオキシダーゼ活性の評価を行っ
た。
【００５６】
２．２．結果
【表２】
2017500360.tif 000004
【００５７】
得られる結果から、０．１２５％及び０．２５％の濃度のホウライアオカズラ抽出物が、培養ヒトケラチノサイトのシトクロムＣオキシダーゼ活性を、陰性対照と比較してそれぞれ１７％及び２３％刺激したことが明らかとなった。
【００５８】
過酸化水素単独（Ｈ2Ｏ2）による細胞の処理は、シトクロムＣオキシダーゼ活性のかなりの低下（−３４％）を誘起するものであった。Ｈ2Ｏ2の存在下における、０．１２５％及び０．２５％の濃度のホウライアオカズラ抽出物は、シトクロムＣオキシダーゼ活性を回復させた（＋１３％及び＋１６％）。
【００５９】
結論として、ホウライアオカズラ抽出物は、培養ヒトケラチノサイトにおける代謝プロセス及びエネルギープロセスの調節に対して重大な効果を有するといえる。
【００６０】
実施例３  リボース五リン酸アッセイを用いた、培養ヒトケラチノサイトにおけるペントース経路に対する、本発明による抽出物の効果の検討
３．１．材料及び方法
ロット組成物：
ロット１：未処理の対照
ロット２：培地において０．１２５％に希釈したホウライアオカズラ抽出物で処理した
ロット３：培地において０．２５％に希釈したホウライアオカズラ抽出物で処理した
【００６１】
細胞培養
使用する方法は、ヒト皮膚生検材料から初代線維芽細胞培養物を得るのに好適な酵素消化法とした。得られる細胞を、ウシ胎児血清（calf serum）、Ｌ−グルタミン及び抗生剤を添加したＲＰＭＩ  １６４０培地において増殖させた。試験は、３回継代させたケラチノサイトについて行った。細胞は、細胞数１×１０５の割合でマルチウェルディッシュに接種した。３７℃（５％ＣＯ2）における２４時間のインキュベーションの後、指数増殖
段階にある細胞を、０．１２５％及び０．２５％の濃度のホウライアオカズラ抽出物で処理した。
【００６２】
リボース五リン酸アッセイ
処理の２４時間後、細胞をサンプリングし、細胞沈殿物を氷浴内で３０秒間超音波処理し、１０℃において１１０００ｇで５分間遠心分離させた。その後、上澄みを新たな管に移した。残りの酵素の活性は、３μｍｏｌ／ｌのＩＳを含有する５０μｌの過塩素酸（２．５％）をサンプルに添加することによって止め、その後サンプルを除タンパクのために−２０℃で少なくとも３０分間貯蔵した。続いて、１５μｌのリン酸緩衝液（ｐＨ  １１．５、１ｍｏｌ／ｌ）を添加して、溶液を中和し、サンプルを４℃において２１０００ｇで５分間遠心分離させた。上澄みをガラスバイアルに移し、これを投入するまで−２０℃で貯蔵した。一連の標準溶液を調製した。これらはそれぞれ、０．６２５μｍｏｌ／ｌ、１．２５μｍｏｌ／ｌ、２．５μｍｏｌ／ｌ、３．７５μｍｏｌ／ｌ及び６．２５μｍｏｌ／ｌのリボース五リン酸からなるものである。一連の標準溶液をサンプルと同じ方法で処理した。リボース五リン酸含有率アッセイはＬＣ−ＭＳ／ＭＳによって実施した。
【００６３】
３．２．結果
【表３】
2017500360.tif 000005
【００６４】
得られる結果から、０．１２５％及び０．２５％の濃度のホウライアオカズラ抽出物が、それぞれ２６％及び３３％のリボース五リン酸合成の大幅な増大を誘起させることが証明されている。
【００６５】
結論として、ホウライアオカズラ抽出物は、培養ヒトケラチノサイト及び培養線維芽細胞における代謝プロセス及びエネルギープロセスの調節に対して重大な効果を有するとい
える。
【００６６】
実施例４  組成物
セラム                                                                        ％カルボマー．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．６０セルロースガム．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．２０ペンチレングリコール．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．  ２．００トロメタミン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．５２グリセリン＆ＡＱＵＡ＆ＰＥＧ−８＆カプリリルグリコール＆
ナトリウムポリアクリレート．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５．００ＡＱＵＡ＆グリセリン＆グリセリルアクリレート／アクリル酸＆コポリ                マー．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１０．００ホウライアオカズラ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．３．００防腐剤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．適量キレート剤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．適量フレグランス．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．適量脱イオン水．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１００まで適量
【００６７】
保湿クリーム                                                                  ％セテアリルアルコール＆ラウリル硫酸ナトリウム＆
セテアリル硫酸ナトリウム．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１．７０水添ポリイソブテン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．７．００イソノナン酸イソノニル．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５．００ステアリン酸グリセリルＳＥ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５．６０Ｃ１２〜１５安息香酸アルキル．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．３．５０ＰＥＧ−２０メチルグルコース＆セスキステアレート．．．．．．．．．．．．０．５０グリセリン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．３．００カルボマー．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．２５シリカ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．１５マイカ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．１０タルク．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．５０グリセリン＆ＡＱＵＡ＆ＰＥＧ−８＆カプリリルグリコール＆
ナトリウムポリアクリレート．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５．００ジメチコン＆ジメチコノール．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．１５酢酸トコフェロール．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．２０ホウライアオカズラ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１．００防腐剤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．適量キレート剤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．適量フレグランス．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．適量脱イオン水．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１００まで適量
【００６８】
保湿ジェル                                                                    ％タピオカデンプン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１．００アンモニウム＆アクリロイルジメチルタウレート／ＶＰ＆
コポリマー．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１．００グリコール．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５．００エチルヘキシルグリセリン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．２０ＡＱＵＡ＆グリセリン＆グリセリルアクリレート／アクリル酸＆
コポリマー．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５．００カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド．．．．．．．．．．．．．．．．．．１．５０
シクロメチコン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５．００フェニルトリメチコン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１．００シクロペンタシロキサン＆ＰＥＧ／ＰＰＧ−１８／１８ジメチコン．．．．．．１．００酢酸トコフェロール．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．２０ホウライアオカズラ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１．００ＥＤＴＡ四ナトリウム．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．０５防腐剤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．適量フレグランス．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．適量脱イオン水．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１００まで適量
【図１】
2017500360.tif 000006
【図２Ａ】
2017500360.tif 000007
【図２Ｂ】
2017500360.tif 000008
【図３】
2017500360.tif 000009
【国際調査報告】
2017500360.tif 000010
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