(57)【要約】エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体ならびに関連の抗体ベースの組成物および分子が開示される。抗体を使用する治療および診断方法も開示される。本発明によって提供される単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９；（ｂ）配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６；ならびに（ｃ）配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１からなる群より選択される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
エボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分の組合せ、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、前記モノクローナル抗体の組合せが、
（ａ）配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９、ならびに配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６、ならびに任意選択で配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１；
（ｂ）配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９、ならびに配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１、ならびに任意選択で配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６；ならびに
（ｂ）配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１、ならびに任意選択で配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６、ならびに任意選択で配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９
からなる群より選択される、医薬組成物。
【請求項２】
モノクローナル抗体４Ｇ７．９、２Ｇ４．６および１３Ｃ６．１を含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、前記モノクローナル抗体が、
（ａ）配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９；
（ｂ）配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６；ならびに
（ｃ）配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１
からなる群より選択される、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項４】
４Ｇ７．９を含む、請求項３に記載のモノクローナル抗体。
【請求項５】
２Ｇ４．６を含む、請求項３に記載のモノクローナル抗体。
【請求項６】
１３Ｃ６．１を含む、請求項３に記載のモノクローナル抗体。
【請求項７】
（ａ）それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、前記重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
（ｂ）それぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖であって、前記軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項８】
（ａ）それぞれ配列番号７４、７５、および７６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９４に記載の重鎖可変領域由来の４９Ｈ、５０Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、前記重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
（ｂ）それぞれ配列番号８０、８１、および８２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９５に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、前記軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項９】
（ａ）それぞれ配列番号４５、４６、および４７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、前記重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
（ｂ）それぞれ配列番号４８、５０、および５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖であって、前記軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１０】
エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、
（ａ）それぞれ配列番号１５および１７；
（ｂ）それぞれ配列番号３２および３７；ならびに
（ｃ）それぞれ配列番号３９および１４
からなる群より選択されるアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
前記モノクローナル抗体が、中和抗体であり、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合する、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１１】
エボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合し、エボラウイルス糖タンパク質への結合に関して、１３Ｃ６．１、２Ｇ４．６、および４Ｇ７．９からなる群より選択されるモノクローナル抗体と競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、前記モノクローナル抗体が、以下の特性：
（ａ）ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合すること；
（ｂ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上のコンフォメーショナルエピトープに結合すること；
（ｃ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１内に結合すること；
（ｄ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｎ５５０〜Ｅ５６４内に結合すること；
（ｅ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｔ２７０〜Ｐ２７９内に結合すること；
（ｆ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｙ３９４〜Ｒ４０４内に結合すること；および
（ｇ）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連すること
の少なくとも１つを表す、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１２】
Ｖ５０５〜Ｃ５１１およびＮ５５０〜Ｅ５６４にわたるエボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上のコンフォメーショナルエピトープに結合する、請求項１１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１３】
Ｔ２７０〜Ｐ２７９およびＹ３９４〜Ｒ４０９にわたるエボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上のコンフォメーショナルエピトープに結合する、請求項１１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１４】
（ａ）配列番号１５および１７；
（ｂ）配列番号３２および３７；
（ｃ）配列番号３９および１４；
（ｄ）配列番号１１および３７；
（ｅ）配列番号１３および１４；
（ｆ）配列番号１３および４２；
（ｇ）配列番号１３および４３；
（ｈ）配列番号３９および４２；
（ｉ）配列番号３９および４３；ならびに
（ｊ）配列番号３９および４４
からなる群より選択される可変重鎖および可変軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１５】
ザイールエボラウイルスに対する中和活性を有する、前記請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１６】
ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合する、前記請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１７】
前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体からなる群より選択される、前記請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体。
【請求項１８】
前記抗体が、ＩｇＧ１抗体である、請求項１６に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分。
【請求項１９】
請求項３から１８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２０】
請求項３から１８のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のうちの１つまたは複数、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項２１】
エボラウイルス感染を処置するための方法であって、それを必要とする被験体に、有効量の請求項１、２、１９、または２０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２２】
治療剤を投与することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記治療剤が、インターフェロンアルファである、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
この出願は、２０１４年１０月３日に出願された米国仮出願第６２／０５９，７４６号の優先権の利益を主張する。この仮出願の内容は、その全体が参考として本明細書に援用される。
【０００２】
政府による資金供与
この出願は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって付与された助成金第６９２２２６７号およびＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓによって付与された助成金第６９３０３７０号の下、政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
エボラウイルス（ＥＢＯＶ）は、ヒトにおいて死亡率５０〜９０％の重度の出血熱を引き起こす毒性の病原体である。疾患の急性型（罹患から死亡までおよそ３〜５週間）は、適応免疫が生じる機会がほとんどないことを意味する。ＥＢＯＶに対する承認されたワクチンも療法もないことから、有効な対抗手段への緊急的な必要性がある。
【０００４】
ＥＢＯＶ糖タンパク質（ＧＰ）は、ウイルスによって発現される優勢な表面タンパク質である。ＧＰタンパク質は、２つの主要な機能：（１）宿主細胞へのウイルス侵入および（２）膜融合の触媒作用に関与する。マウスの実験により、ＥＢＯＶ  ＧＰが中和抗体の主要な標的であることが実証されている。加えて、動物研究によれば、このような抗体は、ヒトにおけるＥＢＯＶ感染の重要な局面を模倣する非ヒト霊長類において防止および治療可能性を有することが示されている。しかしながら、エボラウイルス糖タンパク質における変異が、現行のワクチンまたは抗体処置の効能に影響を与える可能性がある。それゆえに、ＥＢＯＶ  ＧＰに対する新しい抗体ベースの薬剤およびワクチンが、ヒトにおけるＥＢＯＶの大流行と戦うための有望な選択肢となる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本明細書に記載の発明は、所望の機能特性を有する、エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）に対するモノクローナル抗体およびその抗原結合性部分に関する。これらの特性としては、エボラウイルスＧＰに対する高親和性結合、およびＭａｋｏｎａ２０１４株などのザイールエボラウイルスに対する中和活性が挙げられる。本明細書で説明されるように、本発明は、本発明のモノクローナル抗体のための特異的な中和エピトープとして役立つエボラウイルスＧＰ内の領域を同定する。これらのエピトープはまた、例えばＧＰ検出のためにｉｎ  ｖｉｔｒｏ、およびそれを必要とする被験体において防御免疫応答を誘導するためのｉｎ  ｖｉｖｏの両方において、エボラウイルスＧＰに対する能動的で特異的な免疫応答を惹起するのに有用なエボラウイルスＧＰの断片を提供するのにも役立つ。エピトープは、被験体において抗エボラウイルスＧＰ免疫応答を惹起するための免疫原としてのワクチン組成物において有用である。また、それを必要とする患者におけるエボラウイルス感染を処置するための方法、加えて試料中のエボラウイルスを検出する方法も本明細書で提供される。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様では、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、モノクローナル抗体が、
（ａ）配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９；
（ｂ）配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６；ならびに
（ｃ）配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１
からなる群より選択される、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分が、本明細書で提供される。
【０００７】
一部の態様では、本発明は、モノクローナル抗体４Ｇ７．９、またはその抗原結合性部分に関する。他の態様では、本発明は、モノクローナル抗体２Ｇ４．６、またはその抗原結合性部分に関する。本発明のさらに他の態様は、モノクローナル抗体１３Ｃ６．１、またはその抗原結合性部分に関する。
【０００８】
一態様では、エボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分の組合せ、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、モノクローナル抗体の組合せが、
（ａ）配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９、ならびに配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６、ならびに任意選択で配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１；
（ｂ）配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９、ならびに配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１、ならびに任意選択で配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６；ならびに
（ｃ）配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１、ならびに任意選択で配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６、ならびに任意選択で配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９
からなる群より選択される、医薬組成物が、本明細書で提供される。
【０００９】
一部の態様では、本発明は、モノクローナル抗体４Ｇ７．９、２Ｇ４．６および１３Ｃ６．１、ならびに薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００１０】
本発明の別の態様は、
ａ）それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００１１】
本発明の別の態様は、
ａ）それぞれ配列番号７４、７５、および７６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９４に記載の重鎖可変領域由来の４９Ｈ、５０Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号８０、８１、および８２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９５に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号４５、４６、および４７に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号４８、５０、および５１に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖であって、軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００１３】
本発明の別の態様は、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、
（ａ）それぞれ配列番号１５および１７；
（ｂ）それぞれ配列番号３２および３７；ならびに
（ｃ）それぞれ配列番号３９および１４
からなる群より選択されるアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、
モノクローナル抗体が、中和抗体であり、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合する、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００１４】
本発明の別の態様は、
ａ）それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖であって、軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の４３Ｌ、８７Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００１７】
本発明の別の態様は、
ａ）それぞれ配列番号７４、７５、および７６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号８０、８１、および８２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９５に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００１８】
本発明のさらに別の態様は、
ａ）それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の４３Ｌ、８７Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００１９】
本発明の別の態様は、
ａ）それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００２０】
本発明の別の態様は、
ａ）それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびに
ｂ）それぞれ配列番号８７、９０、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、５２Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部がヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００２１】
本発明の別の態様は、エボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合し、エボラウイルス糖タンパク質への結合に関して、１３Ｃ６．１、２Ｇ４．６、および４Ｇ７．９からなる群より選択されるモノクローナル抗体と競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、モノクローナル抗体が、以下の特性：
（ａ）ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合すること；
（ｂ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上のコンフォメーショナルエピトープ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｅｐｉｔｏｐｅ）に結合すること；
（ｃ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１内に結合すること；
（ｄ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｎ５５０〜Ｅ５６４内に結合すること；
（ｅ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｔ２７０〜Ｐ２７９内に結合すること；
（ｆ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｙ３９４〜Ｒ４０４内に結合すること；および
（ｇ）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連（ｅｎｇａｇｅ）すること
の少なくとも１つ（またはそれより多く）を表す、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００２２】
本発明の一部の態様は、Ｖ５０５〜Ｃ５１１およびＮ５５０〜Ｅ５６４にわたるエボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上のコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。
【００２３】
本発明の一部の態様は、Ｔ２７０〜Ｐ２７９およびＹ３９４〜Ｒ４０９にわたるエボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上のコンフォメーショナルエピトープに特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。
【００２４】
他の態様では、本発明は、
（ａ）配列番号１５および１７；
（ｂ）配列番号３２および３７；
（ｃ）配列番号３９および１４；
（ｄ）配列番号１１および３７；
（ｅ）配列番号１３および１４；
（ｆ）配列番号１３および４２；
（ｇ）配列番号１３および４３；
（ｈ）配列番号３９および４２；
（ｉ）配列番号３９および４３；ならびに
（ｊ）配列番号３９および４４
からなる群より選択される可変重鎖および可変軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００２５】
本発明の一部の態様は、ザイールエボラウイルスに対する中和活性を有する、前記抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。
【００２６】
本発明の一部の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満、１５０ｐＭまたはそれ未満、または１００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。本発明の一部の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１５０ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。本発明の一部の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合する、前記抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。
【００２７】
本発明の一態様は、エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）のＶ５０５〜Ｃ５１１およびＮ５５０〜Ｅ５６４に結合する、配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９に関する。本発明の他の態様は、領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１内もしくは領域Ｎ５５０〜Ｅ５６４内、またはその両方に結合する、モノクローナル抗体４Ｇ７．１、４Ｇ７．２、４Ｇ７．３、４Ｇ７．１０、４Ｇ７．１１、および４Ｇ７．１２に関する。
【００２８】
本発明のさらに他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．９に関する。本発明の別の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．９に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、９９．７ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．９に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．１に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１８２ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．１に関する。他の態様では、本発明は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．２に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、９５．２ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．２に関する。他の態様では、本発明は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．３に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１７６ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．３に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．１０に関する。本発明の別の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１２０ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．１０に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．１１に関する。本発明の別の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１４５ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．１１に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．１２に関する。本発明の別の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、８８．８ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体４Ｇ７．１２に関する。
【００２９】
本発明のさらに他の態様は、ザイールエボラウイルスに対する中和活性を有するモノクローナル抗体４Ｇ７．９に関する。一態様では、本発明は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、１μｇ／ｍＬでエボラウイルスＭａｙｉｎｇａ１９７６株を中和するモノクローナル抗体４Ｇ７．９に関する。別の態様では、本発明は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、１μｇ／ｍＬでエボラウイルスＫｉｋｗｉｔ１９９５株を中和するモノクローナル抗体４Ｇ７．９に関する。本発明の別の態様は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、１μｇ／ｍＬでエボラウイルスＭａｋｏｎ２０１４株を中和するモノクローナル抗体４Ｇ７．９に関する。
【００３０】
本発明の他の態様は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連する、配列番号３９および１４に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体４Ｇ７．９に関する。本発明のさらに他の態様は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連する、モノクローナル抗体４Ｇ７．１、４Ｇ７．２、４Ｇ７．３、４Ｇ７．１０、４Ｇ７．１１、および４Ｇ７．１２に関する。
【００３１】
別の態様では、本発明は、エボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合し、エボラウイルス糖タンパク質への結合に関して、モノクローナル抗体４Ｇ７．９と競合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、モノクローナル抗体が、以下の特性：
（ａ）ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合すること；
（ｂ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上のコンフォメーショナルエピトープに結合すること；
（ｃ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１内に結合すること；
（ｄ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｎ５５０〜Ｅ５６４内に結合すること；および
（ｅ）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連すること
の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは全てを表す、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００３２】
本発明の一態様は、エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）のＴ２７０〜Ｐ２７９およびＹ３９４〜Ｒ４０９に結合する、配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１に関する。
【００３３】
本発明のさらに他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体１３Ｃ６．１に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１３６ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体１３Ｃ６．１に関する。
【００３４】
本発明のさらに他の態様は、ザイールエボラウイルスに対する中和活性を有するモノクローナル抗体１３Ｃ６．１に関する。一態様では、本発明は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、＞５０μｇ／ｍＬでエボラウイルスＭａｙｉｎｇａ１９７６株を中和するモノクローナル抗体１３Ｃ６．１に関する。別の態様では、本発明は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、＞５０μｇ／ｍＬでエボラウイルスＫｉｋｗｉｔ１９９５株を中和するモノクローナル抗体１３Ｃ６．１に関する。本発明の別の態様は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、＞５０μｇ／ｍＬでエボラウイルスＭａｋｏｎ２０１４株を中和するモノクローナル抗体１３Ｃ６．１に関する。
【００３５】
本発明の他の態様は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連する、配列番号１５および１７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体１３Ｃ６．１に関する。
【００３６】
別の態様では、本発明は、エボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合し、エボラウイルス糖タンパク質への結合に関して、モノクローナル抗体１３Ｃ６．１と競合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、モノクローナル抗体が、以下の特性：
（ａ）ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合すること；
（ｂ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上のコンフォメーショナルエピトープに結合すること；
（ｃ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｔ２７０〜Ｐ２７９内に結合すること；
（ｄ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｙ３９４〜Ｒ４０９内に結合すること；および
（ｅ）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連すること
の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは全てを表す、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００３７】
本発明の一態様は、エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）のＶ５０５〜Ｃ５１１およびＮ５５０〜Ｅ５６４に結合する、配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６に関する。本発明の他の態様は、領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１内もしくは領域Ｎ５５０〜Ｅ５６２内、またはその両方に結合するモノクローナル抗体２Ｇ４．３に関する。
【００３８】
本発明のさらに他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体２Ｇ４．６に関する。本発明の別の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１０９ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体２Ｇ４．６に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体２Ｇ４．３に関する。本発明の他の態様は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１２９ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体２Ｇ４．３に関する。
【００３９】
本発明のさらに他の態様は、ザイールエボラウイルスに対する中和活性を有するモノクローナル抗体２Ｇ４．６に関する。一態様では、本発明は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、２μｇ／ｍＬでエボラウイルスＭａｙｉｎｇａ１９７６株を中和するモノクローナル抗体２Ｇ４．６に関する。別の態様では、本発明は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、４μｇ／ｍＬでエボラウイルスＫｉｋｗｉｔ１９９５株を中和するモノクローナル抗体２Ｇ４．６に関する。本発明の別の態様は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、２μｇ／ｍＬでエボラウイルスＭａｋｏｎ２０１４株を中和するモノクローナル抗体２Ｇ４．６に関する。
【００４０】
本発明の他の態様は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連する、配列番号３２および３７に記載の可変重鎖および可変軽鎖を含むモノクローナル抗体２Ｇ４．６に関する。本発明のさらに他の態様は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連する、モノクローナル抗体２Ｇ４．３に関する。
【００４１】
別の態様では、本発明は、エボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合し、エボラウイルス糖タンパク質への結合に関して、モノクローナル抗体２Ｇ４．６と競合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、モノクローナル抗体が、以下の特性：
（ａ）ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合すること；
（ｂ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上のコンフォメーショナルエピトープに結合すること；
（ｃ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１内に結合すること；
（ｄ）エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の領域Ｎ５５０〜Ｅ５６４内に結合すること；および
（ｅ）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの免疫要素と関連すること
の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは全てを表す、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【００４２】
本発明のさらに他の態様は、エボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分の組合せ、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、モノクローナル抗体の組合せが、前述のモノクローナル抗体から選択される、医薬組成物に関する。
【００４３】
本発明の一部の態様は、モノクローナル抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、またはＩｇＥ抗体である、前記抗体またはその抗原結合性部分のいずれかに関する。本発明の一部の態様では、前記抗体またはその抗原結合性部分のいずれかは、モノクローナルＩｇＧ１抗体である。
【００４４】
本発明の他の態様は、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれか、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００４５】
本発明の他の態様は、前記モノクローナル抗体の１つまたは複数（例えば、２または３つの異なるモノクローナル抗体）またはその抗原結合性部分、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００４６】
本発明の別の態様は、それを必要とする被験体においてエボラウイルス感染を処置するための方法であって、有効量の、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれか、またはモノクローナル抗体（例えば、２または３つの異なるモノクローナル抗体）またはその抗原結合性部分の組合せ；および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。
【００４７】
本発明の他の態様は、それを必要とする被験体においてエボラウイルス感染を処置するための方法であって、有効量の、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれかの第１のモノクローナル抗体、および薬学的に許容される担体を含む第１の医薬組成物；ならびに有効量の、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれか由来の第２のモノクローナル抗体（第１とは異なる）、および薬学的に許容される担体を含む第２の医薬組成物を投与することを含む、方法に関する。他の態様では、有効量の、前記モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のいずれか由来の第３のモノクローナル抗体（第１および第２とは異なる）、および薬学的に許容される担体を含む第３の医薬組成物が、それを必要とする被験体に投与される。
【００４８】
別の態様では、本発明の方法は、それを必要とする被験体に治療剤を投与することをさらに含む。一態様では、治療剤は、インターフェロンアルファである。
【００４９】
本発明の他の態様は、エボラウイルス感染を処置することにおいて使用するための、モノクローナル抗体もしくは前記抗体の抗原結合性部分、または１つもしくは複数のモノクローナル抗体もしくは前記抗体の抗原結合性部分に関する。一部の態様では、使用は、治療剤を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、治療剤は、インターフェロンアルファである。
【００５０】
本発明のさらに他の態様は、被験体においてエボラウイルス感染を検出するための方法であって、被験体から試料を得て、試料を、前記モノクローナル抗体もしくはその抗原結合性部分のいずれか、またはモノクローナル抗体（例えば、２もしくは３つの異なるモノクローナル抗体）もしくはその抗原結合性部分の組合せと接触させること；および被験体におけるエボラウイルス糖タンパク質の存在を検出することを含む、方法に関する。
【００５１】
本発明の一部の態様は、エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）のエボラウイルス糖タンパク質の領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１、領域Ｎ５５０〜Ｅ５６４、領域Ｔ２７０〜Ｐ２７９、または領域Ｙ３９４〜Ｒ４０４内の１つまたは複数のエピトープに基づくペプチドまたはペプチド模倣体（ｐｅｐｔｉｄｅ  ｍｉｍｅｔｉｃ）に関する。本発明の一部の態様は、Ｖ５０５〜Ｃ５１１およびＮ５５０〜Ｅ５６４にわたるエボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）内の１つまたは複数のエピトープに基づくペプチドまたはペプチド模倣体に関する。本発明の一部の態様は、Ｔ２７０〜Ｐ２７９およびＹ３９４〜Ｒ４０９にわたるエボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上の１つまたは複数のコンフォメーショナルエピトープに基づくペプチドまたはペプチド模倣体に関する。
【００５２】
本発明の一部の態様は、エボラウイルス糖タンパク質の１つまたは複数のエピトープであるＴＧＫＬＩＷＫＶＮＰ（配列番号９８）、ＹＫＬＤＩＳＥＡＴＱＶＧＱＨＨＲ（配列番号９９）、ＶＮＡＱＰＫＣ（配列番号１００）、およびＮＱＤＧＬＩＣＧＬＲＱＬＡＮＥ（配列番号１０１）に基づくペプチドまたはペプチド模倣体に関する。
【００５３】
本発明の他の態様は、前述のペプチド、ペプチド模倣体（またはその融合タンパク質）を含むワクチン組成物に関する。このようなワクチン組成物は、１つまたは複数のアジュバントを含んでいてもよい。また、動物に有効量のワクチン組成物を投与することを含む、被験体において抗エボラウイルスＧＰの免疫応答を惹起する方法も提供される。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】図１は、抗体４Ｇ７、１３Ｃ６、ＫＺ５２、および２Ｇ４の結合に対する、エボラウイルス糖タンパク質における様々な点変異の影響を示すヒートマップである。より高い結合親和性をもたらす変異は、明るい色で示され、より低い結合親和性をもたらす変異は、より暗い色で示される。ＷＴ＝野生型エボラウイルス糖タンパク質。
【図２】図２は、エボラウイルス糖タンパク質の配列であり、アミノ酸が図１で決定されたように結合への影響を有していた場合、そのアミノ酸は黒字で表示されるか、または下線と共に黒字で表示される。ＧＰ＝糖タンパク質。
【図３Ａ】図３Ａ〜３Ｃは、ＥＬＩＳＡによって決定されたエボラウイルス糖タンパク質の抗体２Ｇ４（図３Ａ）、４Ｇ７（図３Ｂ）、および１３Ｃ６（図３Ｃ）の結合親和性を示すグラフである。野生型抗体および関連構築物の両方が示される。
【図３Ｂ】図３Ａ〜３Ｃは、ＥＬＩＳＡによって決定されたエボラウイルス糖タンパク質の抗体２Ｇ４（図３Ａ）、４Ｇ７（図３Ｂ）、および１３Ｃ６（図３Ｃ）の結合親和性を示すグラフである。野生型抗体および関連構築物の両方が示される。
【図３Ｃ】図３Ａ〜３Ｃは、ＥＬＩＳＡによって決定されたエボラウイルス糖タンパク質の抗体２Ｇ４（図３Ａ）、４Ｇ７（図３Ｂ）、および１３Ｃ６（図３Ｃ）の結合親和性を示すグラフである。野生型抗体および関連構築物の両方が示される。
【図４】図４は、抗体２Ｇ４、４Ｇ７、および１３Ｃ６の可変領域重鎖（ＶＨ）および可変領域軽鎖（ＶＬ）の系統樹である。リード候補は、点線の長円で囲まれる。
【図５】図５は、３つの異なるエボラウイルス株に対する抗体１３Ｃ６．１、２Ｇ４．６、および４Ｇ７．９の中和力価を示す表である。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
本明細書に記載の発明は、所望の機能特性を有する、エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）に対するモノクローナル抗体およびその抗原結合性部分に関する。これらの特性としては、エボラウイルスＧＰへの高親和性結合、およびＭａｋｏｎａ２０１４株などのザイールエボラウイルスに対する中和活性が挙げられる。本明細書で説明されるように、本発明は、本発明のモノクローナル抗体のための特異的な中和エピトープとして役立つエボラウイルスＧＰ内の領域を同定する。これらのエピトープはまた、例えばＧＰ検出のためにｉｎ  ｖｉｔｒｏ、およびそれを必要とする被験体において防御免疫応答を誘導するためのｉｎ  ｖｉｖｏの両方において、エボラウイルスＧＰに対する活性で特異的な免疫応答を惹起するのに有用なエボラウイルスＧＰの断片を提供するのにも役立つ。
【００５６】
定義
特許請求の範囲および明細書で使用される用語は、特に他の規定がない限り、以下に記載された通りに定義される。
【００５７】
用語「エボラウイルス」は、ヒトおよび非ヒト霊長類における高い致死性の出血熱の大流行と関連するフィロウイルス科のメンバーを指す。ヒト病原体としては、Ｅｂｏｌａ  Ｚａｉｒｅ、Ｅｂｏｌａ  Ｓｕｄａｎ、およびＥｂｏｌａ  Ｉｖｏｒｙ  Ｃｏａｓｔが挙げられる。Ｅｂｏｌａ  Ｒｅｓｔｏｎは、サル病原体であり、ヒト病原体とはみなされない。ウイルスの天然のレザバは不明であり、現在のところフィロウイルス感染に利用可能なワクチンも有効な治療的処置もない。エボラウイルスのゲノムは、長さがおよそ１９ｋｂのマイナス鎖センス（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｓｅｎｓｅ）ＲＮＡの一本鎖からなる。このＲＮＡは、感染時に８つのｍＲＮＡを産生する７つの連続して配列された遺伝子を含有する。エボラビリオンは、他のフィロウイルスのビリオンのように、７つのタンパク質：表面糖タンパク質（ＧＰ）、核タンパク質（ＮＰ）、４つのビリオン構造タンパク質（ＶＰ４０、ＶＰ３５、ＶＰ３０、およびＶＰ２４）、およびＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（Ｌ）を含有する（Ｆｅｌｄｍａｎｎら（１９９２年）  Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．  ２４巻、１〜１９頁；  Ｓａｎｃｈｅｚら、（１９９３年）  Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓ．  ２９巻、２１５〜２４０頁；  Ｐｅｔｅｒｓら（１９９６年）  Ｉｎ  Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｏｙ、第３版  １１６１〜１１７６頁  Ｆｉｅｌｄｓ，  Ｂ．  Ｎ．、Ｋｎｉｐｅ，  Ｄ．  Ｍ．、Ｈｏｗｌｅｙ，  Ｐ．  Ｍ．ら編  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａで概説されている）。
【００５８】
用語「エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）」は、ウイルスによって発現される優勢な表面タンパク質を指す。エボラウイルスＧＰ（ザイールエボラウイルス糖タンパク質前駆体、Ｇｅｎｅｂａｎｋ受託番号：ＡＩＧ９６６３４．１）の配列は、配列番号９１として記載される。
【００５９】
エボラウイルスの糖タンパク質は、主要な表面抗原であり、ウイルスの侵入および融合に関与し、ウイルス表面上で三量体として発現される。異例な点は、エボラウイルスの糖タンパク質が２つのオープンリーディングフレーム中にコードされていることである。ビリオンに取り込まれる膜貫通型を発現するには、転写編集が必要である（Ｓａｎｃｈｅｚら（１９９６年）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９３巻、３６０２〜３６０７頁；  Ｖｏｌｃｈｋｏｖら、（１９９５年）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２１４巻、４２１〜４３０頁）。未編集型は、感染経過の早期に大量に合成される非構造的な分泌糖タンパク質（ｓＧＰ）を産生する。ウイルスの組み立て中、糖タンパク質はフューリンによる酵素的切断を受け、ＧＰ１およびＧＰ２ドメインを生成する。これらのタンパク質の生物学的機能についてはほとんどわかっておらず、どの抗原が有意に保護に寄与するのか、したがって免疫応答を誘導するのに使用されるべきなのかはわかっていない。
【００６０】
用語「抗体」は、本明細書で言及される場合、抗体全体およびあらゆる抗原結合性断片（すなわち、「抗原結合性部分」）またはそれらの単鎖を含む。「抗体」は、ある特定の実施形態では、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合性部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶＨと略記される）および重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶＬと略記される）および軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより高度に保存された領域中に散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細かく分類できる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列される３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第１の要素（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
【００６１】
抗体の「抗原結合性部分」（または単に「抗体部分」）という用語は、本明細書で使用される場合、抗原（例えば、エボラウイルスＧＰ）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。このような「断片」は、例えば約８から約１５００アミノ酸長、好適には約８から約７４５アミノ酸長、好適には約８から約３００、例えば約８から約２００アミノ酸、または約１０から約５０または１００アミノ酸長である。抗体の抗原結合機能は、全長抗体の断片により実行が可能であることが示されている。抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む２価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１巻：５４４〜５４６頁）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、または（ｖｉｉ）任意選択で合成リンカーで連結されていてもよい、２つまたはそれより多くの単離されたＣＤＲの組合せが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨが別々の遺伝子にコードされているにもかかわらず、これらは、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して１価分子を形成する単一のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２巻：４２３〜４２６頁；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５巻：５８７９〜５８８３頁を参照）として作製することを可能とする合成リンカーによる組換え方法を使用して、連結させることができる。またこのような単鎖抗体は、抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含されることも意図される。これらの抗体断片は、当業者に公知の従来技術を使用して得られ、断片は、それが無傷抗体である場合と同じ方式で、有用性に関してスクリーニングされる。抗原結合性部分は、組換えＤＮＡ技術によって、または無傷の免疫グロブリンの酵素的もしくは化学的切断によって産生することができる。
【００６２】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を提示する抗体を指す。したがって、用語「ヒトモノクローナル抗体」は、単一の結合特異性を提示し、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来の可変および任意選択の定常領域を有する抗体を指す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。
【００６３】
用語「組換えヒト抗体」は、本明細書で使用される場合、組換え手段によって調製される、発現される、作製される、または単離される全てのヒト抗体を含み、例えば、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックであるかまたは染色体導入されている（ｔｒａｎｓｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ）動物（例えば、マウス）またはそれから調製されたハイブリドーマから単離された抗体、（ｂ）抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えばトランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他のあらゆる手段によって調製された、発現された、作製された、または単離された抗体である。このような組換えヒト抗体は、生殖細胞系遺伝子によってコードされる特定のヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列を利用する可変および定常領域を含むが、それに続いて、例えば抗体成熟中に生じる再配列および変異を含む。当該分野で公知のように（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ（２００５年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ２３巻（９号）：１１１７〜１１２５頁を参照）、可変領域は抗原結合性ドメインを含有し、これは、再配列されて外来抗原に特異的な抗体を形成する様々な遺伝子によってコードされる。再配列に加えて、可変領域は、外来抗原への抗体の親和性を増加させるための複数の単一のアミノ酸変化（体細胞変異または超変異と称される）によってさらに改変される可能性がある。定常領域は、抗原へのさらなる応答（すなわち、アイソタイプスイッチ）において変化する。それゆえに、抗原に応答して、再配列され体細胞変異した、軽鎖および重鎖免疫グロブリンポリペプチドをコードする核酸分子は、元の核酸分子と配列同一性を有さない可能性があるが、その代わりに実質的に同一または類似である（すなわち、少なくとも８０％の同一性を有する）。
【００６４】
用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列の可変および定常領域（存在する場合）を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部位特異的変異誘発またはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入された変異）を含んでいてもよい（Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．ら（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁）；Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．（１９９４年）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３巻：４９〜１０１頁；Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．およびＨｕｓｚａｒ，  Ｄ．（１９９５年）Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３巻：６５〜９３頁、およびＨａｒｄｉｎｇ，  Ｆ．およびＬｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．（１９９５年）Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ７６４巻：５３６〜５４６頁を参照）。しかしながら、用語「ヒト抗体」は、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖細胞系由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフト化されている抗体（すなわち、ヒト化抗体）を含まない。
【００６５】
「異種抗体」は、本明細書で使用される場合、このような抗体を産生するトランスジェニック非ヒト生物に関して定義される。この用語は、トランスジェニック非ヒト動物で構成されていない生物に見出されるものに相当し、全体的にトランスジェニック非ヒト動物のもの以外の種に由来するアミノ酸配列またはコード核酸配列を有する抗体を指す。
【００６６】
「中和抗体」は、本明細書で使用される場合、形成されたウイルス粒子を崩壊させること、またはウイルス粒子のフォーマット化を阻害すること、またはウイルス粒子による哺乳動物細胞への結合もしくは感染を予防することが可能な抗体、例えばモノクローナル抗体を指す。
【００６７】
本明細書で使用される場合、「診断用抗体」または「検出抗体（ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」または「検出抗体（ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、試料中の抗原性標的の存在を検出することが可能な抗体、例えばモノクローナル抗体を指す。当業者には認識されるように、このような診断用抗体は、好ましくはそれらの抗原性標的に高い特異性を有する。
【００６８】
用語「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのヒト化免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわち、少なくとも１つのヒト化軽鎖または重鎖）を含む免疫グロブリンまたは抗体を指す。用語「ヒト化免疫グロブリン鎖」または「ヒト化抗体鎖」（すなわち、「ヒト化免疫グロブリン軽鎖」または「ヒト化免疫グロブリン重鎖」）は、実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の可変フレームワーク領域、および実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）（例えば、少なくとも１つのＣＤＲ、好ましくは２つのＣＤＲ、より好ましくは３つのＣＤＲ）を含み、定常領域（例えば、軽鎖の場合、少なくとも１つの定常領域またはその部分、重鎖の場合、好ましくは３つの定常領域）をさらに含む可変領域を有する、免疫グロブリンまたは抗体鎖（すなわち、それぞれ軽鎖または重鎖）を指す。用語「ヒト化可変領域」（例えば、「ヒト化軽鎖可変領域」または「ヒト化重鎖可変領域」）は、実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の可変フレームワーク領域、および実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む可変領域を指す。
【００６９】
句「実質的にヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の」または「実質的にヒト」は、比較目的でヒト免疫グロブリンまたは抗体アミノ酸配列にアラインされる場合、領域が、ヒトフレームワークまたは定常領域配列と、少なくとも８０〜９０％、好ましくは少なくとも９０〜９５％、より好ましくは少なくとも９５〜９９％の同一性（すなわち、局所的な配列同一性）を有しており、例えば、保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰変異などが許容されることを意味する。保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖細胞系置換、復帰変異などの導入はしばしばヒト化抗体または鎖の「最適化」と称される。句「実質的に非ヒト免疫グロブリンまたは抗体由来の」または「実質的に非ヒト」は、非ヒト生物、例えば、非ヒト哺乳動物の配列と、少なくとも８０〜９５％、好ましくは少なくとも９０〜９５％、より好ましくは、９６％、９７％、９８％、または９９％同一な、免疫グロブリンまたは抗体配列を有することを意味する。
【００７０】
好ましくは、同一ではない残基の位置は、保存的アミノ酸置換のために異なっている。アミノ酸置換を保存的または非保存的として分類する目的で、アミノ酸は、以下：Ｉ群（疎水性側鎖）：ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；ＩＩ群（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；ＩＩＩ群（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；ＩＶ群（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；Ｖ群（鎖の配向に影響を与える残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；およびＶＩ群（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅのように群分けされる。保存的置換は、同じクラス内でのアミノ酸間の置換を含む。非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを構成する。
【００７１】
変異（例えば、復帰変異）が、鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の結合親和性に、前記変異が欠失した等価な鎖を含む抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の能力と比較して少なくとも一桁の規模で影響を与える（例えば、減少させる）場合、その変異は抗原結合を導く重鎖または軽鎖の能力に実質的に影響を与えると言われる。変異が、鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の結合親和性に、前記変異が欠失した等価な鎖を含む抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の能力の２、３、または４倍しか影響を与えない（例えば、減少させない）場合、その変異は「抗原結合を導く鎖の能力に実質的に影響を与えない（例えば、減少させない）」。
【００７２】
好ましくは、ヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、対応する非ヒト化抗体の親和性の３、４、または５倍以内の親和性で抗原と結合する。例えば、非ヒト化抗体が１０９Ｍ−１の結合親和性を有する場合、ヒト化抗体は、少なくとも３×１０９Ｍ−１、４×１０９Ｍ−１または１０９Ｍ−１の結合親和性を有する。免疫グロブリンまたは抗体鎖の結合特性を説明する場合、鎖は、「抗原（例えば、エボラＧＰ）結合を導く」その能力に基づいて説明され得る。鎖が、無傷の免疫グロブリンまたは抗体（またはその抗原結合性断片）に特異的な結合特性または結合親和性を付与する場合、その鎖は「抗原結合を導く」と言われる。変異（例えば、復帰変異）が、鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の結合親和性に、前記変異が欠失した等価な鎖を含む抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の能力と比較して少なくとも一桁の規模で影響を与える（例えば、減少させる）場合、その変異は抗原結合を導く重鎖または軽鎖の能力に実質的に影響を与えると言われる。変異が、鎖を含む無傷の免疫グロブリンまたは抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の結合親和性に、前記変異が欠失した等価な鎖を含む抗体（またはそれらの抗原結合性断片）の能力の２、３、または４倍しか影響を与えない（例えば、減少させない）場合、その変異は「抗原結合を導く鎖の能力に実質的に影響を与えない（例えば、減少させない）」。
【００７３】
用語「キメラ免疫グロブリン」または抗体は、その可変領域が第１の種に由来し、その定常領域が第２の種に由来する免疫グロブリンまたは抗体を指す。キメラ免疫グロブリンまたは抗体は、例えば異なる種に属する免疫グロブリンの遺伝子セグメントから遺伝子工学によって構築されてもよい。用語「ヒト化免疫グロブリン」または「ヒト化抗体」は、以下で定義されるようなキメラ免疫グロブリンまたは抗体を包含することは意図されない。ヒト化免疫グロブリンまたは抗体は、それらの構築においてキメラであるが（すなわち、タンパク質の１つより多くの種由来の領域を含む）、それらは、本明細書で定義されるようなキメラ免疫グロブリンまたは抗体に存在しない追加の特徴（すなわち、ドナーのＣＤＲ残基およびアクセプターのフレームワーク残基を含む可変領域）を含む。
【００７４】
「単離された抗体」は、本明細書で用いられる場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、エボラウイルスＧＰに特異的に結合する単離された抗体は、エボラウイルスＧＰ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。単離された抗体は、典型的には、他の細胞性物質および／または化学物質を実質的に含まない。本発明のある特定の実施形態では、異なるエボラウイルスＧＰ特異性を有する「単離された」抗体の組合せは、明確な組成で組み合わされる。
【００７５】
用語「エピトープ」または「抗原決定基」は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上の部位を指す。エピトープは、隣接するアミノ酸またはタンパク質の３次フォールディングによって並置される隣接していないアミノ酸の両方から形成される可能性がある。隣接するアミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒への曝露の際に保持され、それに対して３次フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒での処理の際に失われる。エピトープは、典型的には、固有の空間的なコンフォメーションで、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体と結合するかを決定するための方法（すなわち、エピトープマッピング）は当該分野において周知であり、そのようなものとしては、例えば、免疫ブロッティングおよび免疫沈降アッセイが挙げられ、それらにおいて、エボラウイルスＧＰ由来の重複または隣接するペプチドが、所与の抗ＧＰ抗体との反応性に関して試験される。エピトープの空間的なコンフォメーションを決定する方法としては、当該分野における技術および本明細書に記載の技術、例えば、Ｘ線結晶学および２次元核磁気共鳴が挙げられる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、６６巻、Ｇ．  Ｅ．  Ｍｏｒｒｉｓ編（１９９６年）を参照）。
【００７６】
同じエピトープを認識する抗体は、ある抗体の別の抗体の標的抗原への結合をブロックする能力を示す簡単なイムノアッセイ、すなわち、競合結合アッセイで同定することができる。競合結合は、試験を受ける免疫グロブリンが参照抗体の共通の抗原への特異的な結合を阻害するアッセイで決定される。多数のタイプの競合結合アッセイが公知であり、例えば、固相の直接的または間接的なラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相の直接的または間接的な酵素免疫検査法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ９巻：２４２頁（１９８３年）を参照）；固相の直接的なビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３７巻：３６１４頁（１９８６年）を参照）；固相の直接的な標識アッセイ、固相の直接的な標識サンドイッチアッセイ（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８８年）を参照）；１−１２５標識を使用する固相の直接的な標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌら、Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２５巻（１号）：７頁（１９８８年）を参照）；固相の直接的なビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６巻：５４６頁（１９９０年））；および直接的な標識ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒら、Ｓｃａｎｄ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３２巻：７７頁（１９９０年））である。典型的には、このようなアッセイは、固体表面に結合した精製された抗原またはこれらのいずれかを有する細胞、非標識の試験免疫グロブリンおよび標識された参照免疫グロブリンの使用を含む。競合阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で固体表面または細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在する。通常、競合抗体が過剰に存在する場合、競合抗体は、参照抗体の共通の抗原への特異的な結合を、少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％  ７０〜７５％またはそれより多く阻害する。
【００７７】
用語「エピトープマッピング」は、抗体−抗原認識のための分子決定基を同定するプロセスを指す。エピトープマッピングに関する多数の方法が当該分野において公知であり、例えば、Ｘ線分析、プロテアーゼマッピング、水素／重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）、２Ｄ核磁気共鳴、アラニンスキャニング、およびディープ変異スキャニング（ｄｅｅｐ  ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｓｃａｎｎｉｎｇ）である。
【００７８】
エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）を標的化する抗体の操作を容易にするために、エピトープのホットスポットを、本明細書で説明されるようにアラニンスキャニングを使用して決定した。結合分析に基づいて、抗体４Ｇ７、Ｋ２５２、および２Ｇ４は、配列番号９１の領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１およびＮ５５０〜Ｅ５６４を含むコンフォメーショナルエピトープに結合することが見出され、それに対して抗体１３Ｃ６は、配列番号９１の領域Ｔ２７０〜Ｐ２７９およびＹ３９４〜Ｒ４０９内に結合することが見出された（図１）。図２は、この変異分析によって同定されたエボラウイルス糖タンパク質におけるホットスポットを要約する。本発明の一部の態様は、エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）のエボラウイルス糖タンパク質の領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１、領域Ｎ５５０〜Ｅ５６４、領域Ｔ２７０〜Ｐ２７９、または領域Ｙ３９４〜Ｒ４０４内の１つまたは複数のエピトープに基づくペプチドまたはペプチド模倣体に関する。本発明の一部の態様は、Ｖ５０５〜Ｃ５１１およびＮ５５０〜Ｅ５６４にわたるエボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）内の１つまたは複数のエピトープに基づくペプチドまたはペプチド模倣体に関する。本発明の一部の態様は、Ｔ２７０〜Ｐ２７９およびＹ３９４〜Ｒ４０９にわたるエボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）上の１つまたは複数のコンフォメーショナルエピトープに基づくペプチドまたはペプチド模倣体に関する。本発明の一部の態様は、エボラウイルス糖タンパク質の１つまたは複数のエピトープであるＴＧＫＬＩＷＫＶＮＰ（配列番号９８）、ＹＫＬＤＩＳＥＡＴＱＶＧＱＨＨＲ（配列番号９９）、ＶＮＡＱＰＫＣ（配列番号１００）、およびＮＱＤＧＬＩＣＧＬＲＱＬＡＮＥ（配列番号１０１）に基づくペプチドまたはペプチド模倣体に関する。
【００７９】
用語「特異的な結合」、「選択的な結合」、「選択的に結合する」、および「特異的に結合する」は、本明細書で使用される場合、予め決定された抗原上のエピトープへの抗体結合を指す。典型的には、抗体は、分析物として組換えエボラウイルスＧＰおよびリガンドとして抗体を使用するＢＩＡＣＯＲＥ２０００機器での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術によって決定した場合、およそ１０−７Ｍ未満、例えばおよそ１０−８Ｍ、１０−９Ｍもしくは１０−１０Ｍ未満の、またはそれよりさらに低い平衡解離定数（ＫＤ）で結合し、予め決定された抗原または近縁の抗原以外の非特異的な抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に関するその親和性の少なくとも２倍の親和性で、予め決定された抗原に結合する。句「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」は、本明細書において、用語「抗原に特異的に結合する抗体」と交換可能に使用される。
【００８０】
用語「ＫＤ」は、本明細書で用いられる場合、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を指すことが意図される。
【００８１】
用語「ｋｄ」は、本明細書で用いられる場合、抗体／抗原複合体からの抗体の解離に関するオフレート定数を指すことが意図される。
【００８２】
用語「ｋａ」は、本明細書で用いられる場合、抗体と抗原との会合に関するオンレート定数を指すことが意図される。
【００８３】
用語「ＥＣ５０」は、本明細書で使用される場合、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのいずれかのアッセイにおいて応答を誘導する、抗体またはその抗原結合性部分の濃度を指し、その濃度は、最大反応の５０％、すなわち最大反応とベースラインとの中間である。本発明の一部の態様では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、３００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合する。本発明の一部の態様では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合する。本発明の一部の態様では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１５０ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合する。本発明の一部の態様では、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分は、ＥＬＩＳＡで測定した場合、１００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラウイルス糖タンパク質に結合する。
【００８４】
本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域の遺伝子によってコードされる抗体のクラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧｌ）を指す。一実施形態では、本発明のヒトモノクローナル抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのものである。ある特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ１は、配列番号１に記載の重鎖定常ドメイン配列および配列番号２に記載の軽鎖定常ドメイン配列を有する。
【００８５】
用語「エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）に結合する」は、本発明のモノクローナル抗体の、例えば細胞表面上に発現された、または固体支持体に付着しているエボラウイルスＧＰに特異的に結合する能力を指す。
【００８６】
用語「中和活性を有する」は、本明細書で使用される場合、本発明のモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分のエボラウイルスＧＰへの結合によってウイルスの感染性が減少することを指す。中和は、補体の存在または非存在下で測定される。
【００８７】
プラーク減少中和アッセイは、本明細書で使用される場合、ウイルスの中和抗体の力価を定量するのに使用される。試験される血清試料または抗体の溶液を希釈して、ウイルス懸濁物と混合する。これをインキュベートして、抗体をウイルスと反応させ、宿主細胞のコンフルエントな単層の上に注ぐ。プラーク形成単位の濃度は、数日後に形成されたプラーク（感染細胞の領域）の数によって見積もることができる。血清非含有のウイルスと比較してプラークの数を５０％減少させる血清の濃度が、どの程度多くの抗体が存在するか、またはそれがどの程度有効であるかの尺度を与える。この測定値は、プラーク減少中和（ＰＲＮＴ）５０値として表される。
【００８８】
用語「核酸分子」は、本明細書で用いられる場合、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子を含むことが意図される。核酸分子は、一本鎖または二本鎖であってもよいが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
【００８９】
本発明はまた、配列表に記載の配列の「保存的配列改変」、すなわち、ヌクレオチドおよびアミノ酸配列の改変であって、そのヌクレオチド配列によってコードされるかまたはそのアミノ酸配列を含有する抗体の抗原への結合をなくさない改変も包含する。このような保存的配列改変は、保存的ヌクレオチドおよびアミノ酸の置換、加えてヌクレオチドおよびアミノ酸の付加および欠失を含む。例えば、改変は、当該分野において公知の標準的な技術、例えば部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発によって、配列表に記載の配列に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換を含む。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。したがって、ヒト抗ＧＰ抗体において予測される非必須アミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えられる。抗原結合をなくさないヌクレオチドおよびアミノ酸の保存的置換を同定する方法は、当該分野において周知である（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３２巻：１１８０〜１１８７頁（１９９３年）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．  １２巻（１０号）：８７９〜８８４頁（１９９９年）；およびＢｕｒｋｓら  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９４巻：４１２〜４１７頁（１９９７年）を参照）。
【００９０】
代替として、ある特定の実施形態では、変異は、抗エボラウイルスＧＰ抗体のコード配列の全部または一部に沿って、例えば飽和変異誘発によってランダムに導入することができ、結果得られた改変された抗エボラウイルスＧＰ抗体は、結合活性に関してスクリーニングすることができる。
【００９１】
核酸の場合、用語「実質的な相同性」は、２つの核酸またはそれらの指定された配列が、最適にアラインされ比較される場合、適切なヌクレオチド挿入または欠失を含んで、ヌクレオチドの少なくとも約８０％、通常ヌクレオチドの少なくとも約９０％から９５％、より好ましくは少なくとも約９８％から９９．５％同一であることを示す。あるいは、セグメントが、選択的なハイブリダイゼーション条件下で鎖の相補体とハイブリダイズする場合、実質的な相同性が存在する。
【００９２】
２つの配列間のパーセント同一性は、２つの配列の最適なアライメントのために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れた、配列が共有する同一な位置の数の関数である（すなわち、％相同性＝同一な位置の数／位置の総数×１００）。２つの配列間の配列の比較およびパーセント同一性の決定は、以下の非限定的な例で説明されるような数学的なアルゴリズムを使用して達成することができる。
【００９３】
２つのヌクレオチド配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）を使用して、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスおよび４０、５０、６０、７０、または８０のギャップ重み（ｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ）および１、２、３、４、５、または６の長さ重み（ｌｅｎｇｔｈ  ｗｅｉｇｈｔ）を使用して、決定することができる。２つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列間のパーセント同一性はまた、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．  ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．  Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ、４巻：１１〜１７頁（１９８９年））を使用して、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長さペナルティーおよび４のギャップペナルティーを使用して、決定することもできる。加えて、２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ中のＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで利用可能）に組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．（４８巻）：４４４〜４５３頁（１９７０年））のアルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重みおよび１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して、決定することができる。
【００９４】
本発明の核酸およびタンパク質の配列はさらに、公開データベースに対しての検索を実行して、例えば関連の配列を同定するための「クエリー配列」としてとして使用することができる。このような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５巻：４０３〜１０頁のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて実行することができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実行することができる。比較目的でギャップ有りアライメントを得るために、ギャップ有りＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．  ２５巻（１７号）：３３８９〜３４０２頁で説明されるようにして利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびギャップ有りＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメーターを使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
【００９５】
核酸は、全細胞中、細胞溶解産物中、または一部精製したまたは実質的に純粋な形態中に存在し得る。核酸は、アルカリ／ＳＤＳ処理、ＣｓＣｌバンディング、カラムクロマトグラフィー、アガロースゲル電気泳動および当該分野において周知の他のものなどの標準的な技術によって、他の細胞成分または他の夾雑物、例えば、他の細胞核酸またはタンパク質から精製される場合、「単離される」かまたは「実質的に純粋にされる」。Ｆ．  Ａｕｓｕｂｅｌら編  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８７年）を参照されたい。
【００９６】
アミノ酸配列が与えられたら、当業者は、遺伝子コードにおける冗長性を考慮して、アミノ酸配列を変更することなくそれをコードするヌクレオチド配列に保存的置換をなすことができる。核酸の組成は、ｃＤＮＡ、ゲノムまたはそれらの混合物のいずれか由来の自然の配列（ただし改変された制限部位などを除く）における場合が多いが、遺伝子配列を提供するための標準的な技術に従って変異させることができる。コード配列の場合、これらの変異は、所望されるアミノ酸配列に影響を与えることができる。特に、自然のＶ、Ｄ、Ｊ、定常、スイッチおよび本明細書に記載の他のこのような配列に実質的に相同であるかまたはそれら由来のＤＮＡ配列が予期される（この場合、「誘導された」は、配列が、別の配列と同一であるかまたはそれから改変されていることを示す）。
【００９７】
用語「ペプチド」は、本明細書で使用される場合、通常明確な配列を有するアミノ酸残基の鎖と定義される。ペプチドという用語は、本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド」および「タンパク質」と置き換え可能である。本発明の内容において、用語「ペプチド」は、改変または未改変のペプチド結合によって連結された少なくとも２つのアミノ酸を含むあらゆるペプチドまたはタンパク質であることと定義される。用語「ペプチド」は、オリゴペプチドもしくはオリゴマーなどの短鎖分子、またはタンパク質などの長鎖分子を指す。本発明に係るペプチドは、改変されたアミノ酸を含んでいてもよい。したがって、本発明のペプチドはまた、転写後改変などの天然のプロセスによって、または化学的プロセスによって改変することもできる。これらの改変のいくつかの例は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンとの共有結合、ヘムとの共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体との共有結合、改変または未改変の炭水化物成分への共有結合、脂質または脂質誘導体との結合、ホスファチジルイノシトール（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ）との共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル、システイン分子形成、ピログルタメート形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、水酸化、ヨウ素化、メチル化、酸化、リン酸化、ラセミ化、水酸化などである。したがって、ペプチドの免疫原性をなくす影響を有さないあらゆるペプチド改変が、本発明の範囲内に包含される。
【００９８】
本発明のタンパク質のペプチドの個々の残基は、ペプチド結合またはペプチド結合の模倣によってペプチド中に取り込むことができる。本発明のペプチド結合の模倣は、当業者周知のペプチド骨格の改変を含む。このような改変は、アミド窒素、ａ−炭素、アミドカルボニルの改変、アミド結合の完全な置き換え、伸長、欠失または骨格架橋を含む。一般的に、Ｓｐａｔｏｌａ、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ，  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、ＶＩＩ巻（Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ編、１９８３年）を参照されたい。数種のペプチド骨格改変が公知であり、これらとしては、ψ［ＣＨ２Ｓ］、ψ［ＣＨ２ＮＨ］、ψ［ＣＳＮＨ２］、ψ［ＮＨＣＯ］、ψ［ＣＯＣＨ２］およびψ［（Ｅ）または（Ｚ）ＣＨ＝ＣＨ］が挙げられる。上記で使用された学術名は、上記のＳｐａｔｏｌａが提唱するものに従っている。この文脈において、ψは、アミド結合の非存在を示す。アミド基を置き換える構造は、括弧内に特定される。
【００９９】
アミノ酸の模倣体も、ペプチド中に取り込まれていてもよい。本明細書で使用されるような「アミノ酸の模倣体」は、本発明のペプチド中のアミノ酸の代替物としてコンフォメーション的および機能的に役立つ、天然に存在するアミノ酸以外の成分である。このような成分は、エボラウイルス抗体に結合するペプチドの能力に干渉しないのであれば、アミノ酸残基の代替物として役立つ。アミノ酸の模倣体としては、非タンパク質アミノ酸、例えばβ−、γ−、δ−アミノ酸、β−、γ−、δ−イミノ酸（例えばピペリジン−４−カルボン酸）、加えてＬ−ａ−アミノ酸の多くの誘導体を挙げることができる。多くの好適なアミノ酸の模倣体は当業者に公知であり、そのようなものとしては、シクロヘキシルアラニン、３−シクロヘキシルプロピオン酸、Ｌ−アダマンチルアラニン、アダマンチル酢酸などが挙げられる。加えて、Ｄ−アミノ酸は、模倣体とみなすことができる。本発明のペプチドに好適なペプチド模倣体は、ＭｏｒｇａｎおよびＧａｉｎｏｒ、（１９８９年）Ａｎｎ．  Ｒｅｐｔｓ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．  ２４巻：２４３〜２５２頁によって論じられている。
【０１００】
用語「ベクター」は、本明細書で用いられる場合、連結させた別の核酸を輸送することが可能な核酸分子を指すことが意図される。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントをライゲートさせることができる環状の二本鎖ＤＮＡループを指す。ベクターの別のタイプはウイルスベクターであり、この場合、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲートさせることができる。ある特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞中で自律複製が可能である（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソームの哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されたときに宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって宿主ゲノムと共に複製される。さらに、ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結している遺伝子の発現を導くことが可能である。このようなベクターは、本明細書では、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般的に、組換えＤＮＡ技術において有用性を有する発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。本明細書において、プラスミドはベクターの最も一般的に使用される形態であるため、「プラスミド」および「ベクター」は、交換可能に使用することができる。しかしながら、本発明は、例えば等価な機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損型レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）などの発現ベクターの他の形態も含むことが意図される。
【０１０１】
用語「組換え宿主細胞」（または単に「宿主細胞」）は、本明細書で用いられる場合、組換え発現ベクターが導入された細胞を指すことが意図される。このような用語は、特定の対象細胞だけではなくこのような細胞の子孫も指すことが意図されることが理解されるものとする。後の世代で変異または環境の影響のいずれかに起因するある種の改変が起こる可能性があるため、このような子孫は、実際には親細胞と同一ではない可能性があるが、それでもなお本明細書で使用される用語「宿主細胞」の範囲内に含まれる。
【０１０２】
用語「処置する」、「処置すること」、および「処置」は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載の治療的または予防的措置を指す。「処置」方法は、障害もしくは再発する障害の１つまたは複数の症状を、予防する、治癒させる、遅延させる、その重症度を低減させる、もしくは好転させる（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）ために、またはこのような処置の非存在下で予測される生存より長く被験体の生存を延長するために、このような処置が必要な被験体、例えば、特定の抗原に対する強化された免疫応答が必要な被験体、または最終的にこのような障害を受ける可能性がある被験体に、本発明のヒト抗体を投与することを採用する。
【０１０３】
用語「有効量」または「有効投薬量」は、所望の効果を達成するかまたは少なくとも部分的に達成するのに十分な量と定義される。用語「治療有効用量」は、すでに疾患に罹った患者における疾患およびその合併症を治癒させるかまたは少なくとも部分的に抑えるのに十分な量と定義される。この使用のために有効な量は、処置されている障害の重症度および患者自身の免疫系の全身状態に依存する。
【０１０４】
用語「患者」は、防止的または治療的処置のいずれかを受けるヒトおよび他の哺乳動物被験体を含む。
【０１０５】
本明細書で使用される場合、用語「被験体」は、あらゆるヒトまたは非ヒト動物を含む。例えば、本発明の方法および組成物は、免疫障害を有する被験体を処置するのに使用することができる。用語「非ヒト動物」は、全ての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などを含む。
【０１０６】
本発明の様々な態様は、以下のサブセクションでさらに詳細に説明される。
【０１０７】
エボラウイルス糖タンパク質に対する抗体の産生
本発明は、エボラウイルスＧＰと結合する抗体、例えばモノクローナル抗体を包含する。例示的なエボラウイルスＧＰと結合するモノクローナル抗体は、マウスモノクローナル抗体１３Ｃ６、６Ｄ８、および１３Ｆ６（例えばＵＳ６，６３０，１４４およびＵＳ７，３３５，３５６で開示されている）、およびマウスモノクローナル抗体１Ｈ３、２Ｇ４、および４Ｇ７（例えばＵＳ８，５１３，３９１で開示されている）をベースとしたＣＤＲまたは最適化されたＣＤＲを含む、最適化されたモノクローナル抗体である。本明細書において、
（ａ）それぞれ配列番号１５および１７；
（ｂ）それぞれ配列番号１５および１８；
（ｃ）それぞれ配列番号１６および１７；
（ｄ）それぞれ配列番号１６および１８；
（ｅ）それぞれ配列番号１９および２０；
（ｆ）それぞれ配列番号１９および２１；
（ｇ）それぞれ配列番号２２および２３；
（ｈ）それぞれ配列番号２２および２４；
（ｉ）それぞれ配列番号９および１０；
（ｊ）それぞれ配列番号９および２７；
（ｋ）それぞれ配列番号９および２８；
（ｌ）それぞれ配列番号９および２９；
（ｍ）それぞれ配列番号９および３０；
（ｎ）それぞれ配列番号９および３１；
（ｏ）それぞれ配列番号２５および１０；
（ｐ）それぞれ配列番号２５および２７；
（ｑ）それぞれ配列番号２５および２８；
（ｒ）それぞれ配列番号２５および２９；
（ｓ）それぞれ配列番号２５および３０；
（ｔ）それぞれ配列番号２５および３１；
（ｕ）それぞれ配列番号２６および１０；
（ｖ）それぞれ配列番号２６および２７；
（ｗ）それぞれ配列番号２６および２８；
（ｘ）それぞれ配列番号２６および２９；
（ｙ）それぞれ配列番号２６および３０；
（ｚ）それぞれ配列番号２６および３１；
（ａａ）それぞれ配列番号１１および１２；
（ｂｂ）それぞれ配列番号１１および３６；
（ｃｃ）それぞれ配列番号１１および３７；
（ｄｄ）それぞれ配列番号３２および１２；
（ｅｅ）それぞれ配列番号３２および３６；
（ｆｆ）それぞれ配列番号３２および３７；
（ｇｇ）それぞれ配列番号３３および１２；
（ｈｈ）それぞれ配列番号３３および３６；
（ｉｉ）それぞれ配列番号３３および３７；
（ｊｊ）それぞれ配列番号３４および１２；
（ｋｋ）それぞれ配列番号３４および３６；
（ｌｌ）それぞれ配列番号３４および３７；
（ｍｍ）それぞれ配列番号３５および１２；
（ｎｎ）それぞれ配列番号３５および３６；
（ｏｏ）それぞれ配列番号３５および３７；
（ｐｐ）それぞれ配列番号１３および１４；
（ｑｑ）それぞれ配列番号１３および４２；
（ｒｒ）それぞれ配列番号１３および４３；
（ｓｓ）それぞれ配列番号１３および４４；
（ｔｔ）それぞれ配列番号３８および１４；
（ｕｕ）それぞれ配列番号３８および４２；
（ｖｖ）それぞれ配列番号３８および４３；
（ｗｗ）それぞれ配列番号３８および４４；
（ｘｘ）それぞれ配列番号３９および１４；
（ｙｙ）それぞれ配列番号３９および４２；
（ｚｚ）それぞれ配列番号３９および４３；
（ａａａ）それぞれ配列番号３９および４４；
（ｂｂｂ）それぞれ配列番号４０および１４；
（ｃｃｃ）それぞれ配列番号４０および４２；
（ｄｄｄ）それぞれ配列番号４０および４３；
（ｅｅｅ）それぞれ配列番号４０および４４；
（ｆｆｆ）それぞれ配列番号４１および１４；
（ｇｇｇ）それぞれ配列番号４１および４２；
（ｈｈｈ）それぞれ配列番号４１および４３；ならびに
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号４１および４４
を含む重鎖および軽鎖可変配列を含む（表１および２でさらに記載される）、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分が提供される。
【０１０８】
本発明のモノクローナル抗体は、様々な公知の技術、例えばＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ２５６巻：４９５頁（１９７５年）によって説明されている標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を使用して産生することができる。体細胞ハイブリダイゼーション手順が好ましいが、原則的に、モノクローナル抗体を産生するための他の技術、例えば、Ｂリンパ球のウイルスまたは腫瘍形成性形質転換、ヒト抗体遺伝子のライブラリーを使用するファージディスプレイ技術も採用することができる。
【０１０９】
したがって、ある特定の実施形態では、エボラウイルスＧＰと結合する抗体を産生するために、ハイブリドーマ方法が使用される。この方法において、マウスまたは他の適切な宿主動物は、免疫化に使用される抗原に特異的に結合する抗体を産生するかまたは産生することが可能なリンパ球を誘発させるのに好適な抗原で免疫化することができる。代替として、リンパ球は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化されてもよい。次いでリンパ球をポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を形成することができる（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、５９〜１０３頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６年））。ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地は、抗原に対するモノクローナル抗体の産生に関してアッセイされる。所望の特異性、親和性、および／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを限界希釈法によってサブクローニングして、標準的な方法によって成長させてもよい（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、５９〜１０３頁（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６年））。この目的に好適な培養培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。加えて、ハイブリドーマ細胞は、動物における腹水腫瘍としてｉｎ  ｖｉｖｏで成長させてもよい。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地、腹水、または血清から分離することができる。
【０１１０】
ある特定の実施形態では、エボラウイルスＧＰと結合する抗体および抗体部分は、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８巻：５５２〜５５４頁（１９９０年）Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３５２巻：６２４〜６２８頁（１９９１年）、Ｍａｒｋｓら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２２巻：５８１〜５９７頁（１９９１年）およびＨｏｅｔら（２００５年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３巻、３４４〜３４８頁；Ｌａｄｎｅｒらの米国特許第５，２２３，４０９号；同第５，４０３，４８４号；および同第５，５７１，６９８号；Ｄｏｗｅｒらの米国特許第５，４２７，９０８号および同第５，５８０，７１７号；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙらの米国特許第５，９６９，１０８号および同第６，１７２，１９７号；およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓらの米国特許第５，８８５，７９３号；同第６，５２１，４０４号；同第６，５４４，７３１号；同第６，５５５，３１３号；同第６，５８２，９１５号および同第６，５９３，０８１号で説明されている技術を使用して生成した抗体ファージライブラリーから単離することができる。加えて、鎖シャッフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）による高親和性（ｎＭ範囲の）ヒト抗体の産生（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：７７９〜７８３頁（１９９２年））だけでなく、非常に多くのファージライブラリーを構築するための戦略として組合せ感染（ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）およびｉｎ  ｖｉｖｏでの組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃ．  Ａｃｉｄｓ．  Ｒｅｓ．、２１巻：２２６５〜２２６６頁（１９９３年））も、使用することができる。
【０１１１】
ある特定の実施形態では、エボラウイルスＧＰと結合する抗体は、上記のＨｏｅｔらによって説明されているファージディスプレイ技術を使用して産生される。この技術は、ヒトドナーから単離された免疫グロブリン配列の固有な組合せを有し、重鎖ＣＤＲにおいて合成の多様性を有するヒトＦａｂライブラリーの生成を含む。次いでライブラリーを、エボラウイルスＧＰに結合するＦａｂに関してスクリーニングする。
【０１１２】
本発明の抗体を産生するハイブリドーマを生成するための好ましい動物系は、マウス系である。マウスにおけるハイブリドーマ産生は当該分野において周知であり、免疫化された脾細胞を単離して融合させるための免疫化プロトコールおよび技術などが挙げられる。
【０１１３】
ある特定の実施形態では、エボラウイルスＧＰに対する抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を有するトランスジェニックまたは染色体導入されたマウスを使用して生成される。一実施形態では、本発明は、本明細書では「ＨｕＭＡｂマウス」と称されるトランスジェニックマウスを採用しており、これは、再配列されていないヒト重鎖（μおよびγ）およびκ軽鎖免疫グロブリン配列を、内因性μおよびκ鎖遺伝子座を不活性化する標的化された変異と共にコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｉ）を含有する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．ら（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁）。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはκの発現の低減を表し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子はクラススイッチおよび体細胞変異を受けて、高親和性ヒトＩｇＧκモノクローナル抗体を生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．ら（１９９４年）、上記；Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．（１９９４年）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３巻：４９〜１０１頁；Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．およびＨｕｓｚａｒ，  Ｄ．（１９９５年）Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３巻：６５〜９３頁、ならびにＨａｒｄｉｎｇ，  Ｆ．およびＬｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．（１９９５年）Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ７６４巻：５３６〜５４６頁に概説されている）。ＨｕＭＡｂマウスの調製は、以下で、さらに、Ｔａｙｌｏｒ，  Ｌ．ら（１９９２年）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２０巻：６２８７〜６２９５頁；Ｃｈｅｎ，  Ｊ．ら（１９９３年）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５巻：６４７〜６５６頁；Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９３年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９０巻：３７２０〜３７２４頁；Ｃｈｏｉら（１９９３年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４巻：１１７〜１２３頁；Ｃｈｅｎ，  Ｊ．ら（１９９３年）ＥＭＢＯ  Ｊ．  １２巻：８２１〜８３０頁；  Ｔｕａｉｌｌｏｎら（１９９４年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５２巻：２９１２〜２９２０頁；Ｌｏｎｂｅｒｇら、（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁；Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．（１９９４年）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １１３巻：４９〜１０１頁；Ｔａｙｌｏｒ，  Ｌ．ら（１９９４年）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ６巻：５７９〜５９１頁；Ｌｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．およびＨｕｓｚａｒ，  Ｄ．（１９９５年）Ｉｎｔｅｒｎ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １３巻：６５〜９３頁；Ｈａｒｄｉｎｇ，  Ｆ．およびＬｏｎｂｅｒｇ，  Ｎ．（１９９５年）Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ７６４巻：５３６〜５４６頁；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，  Ｄ．ら（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４巻：８４５〜８５１頁で詳細に説明されている。さらに、全てＬｏｎｂｅｒｇおよびＫａｙならびにＧｅｎＰｈａｒｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの、米国特許第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５���６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，７８９，６５０号；同第５，８７７，３９７号；同第５，６６１，０１６号；同第５，８１４，３１８号；同第５，８７４，２９９号；および同第５，７７０，４２９号；Ｓｕｒａｎｉらの米国特許第５，５４５，８０７号；１９９８年６月１１日に公開された国際公開ＷＯ９８／２４８８４号；１９９４年１１月１０日に公開されたＷＯ９４／２５５８５号；１９９３年６月２４日に公開されたＷＯ９３／１２２７号；１９９２年１２月２３日に公開されたＷＯ９２／２２６４５号；１９９２年３月１９日に公開されたＷＯ９２／０３９１８号を参照されたい。
【０１１４】
ある特定の実施形態では、本発明のヒト抗体は、導入遺伝子および導入染色体（ｔｒａｎｓｃｈｏｍｏｓｏｍｅ）にヒト免疫グロブリン配列を有するマウス、例えばヒト重鎖導入遺伝子およびヒト軽鎖導入染色体を有するマウスを使用して発生させることができる。このようなマウスは、当該分野では「ＫＭマウス」と称され、ＩｓｈｉｄａらのＰＣＴ公報ＷＯ０２／４３４７８号で詳細に説明されている。
【０１１５】
さらにその上、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替のトランスジェニック動物系が当該分野において利用可能であり、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体を発生させるのに使用することができる。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と称される代替のトランスジェニック系を使用することができ、このようなマウスは、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉらの米国特許第５，９３９，５９８号；同第６，０７５，１８１号；同第６，１１４，５９８号；同第６，１５０，５８４号および同第６，１６２，９６３号で説明されている。
【０１１６】
さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替の導入染色体動物系が当該分野において利用可能であり、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体を発生させるのに使用することができる。例えば、ヒト重鎖導入染色体とヒト軽鎖導入染色体（ｔｒａｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）の両方を有するマウスは、当該分野では「ＴＣマウス」と称されて使用され得、このようなマウスは、Ｔｏｍｉｚｕｋａら（２０００年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９７巻：７２２〜７２７頁で説明されている。さらに、ヒト重鎖および軽鎖導入染色体を有するウシが当該分野において説明されており（Ｋｕｒｏｉｗａら（２００２年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２０巻：８８９〜８９４頁）、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体を発生させるのに使用することができる。
【０１１７】
当該分野で説明されるヒト抗体を発生させるための追加のマウス系、これらに限定されないが、（ｉ）マウスにおいてキメラ抗体（ヒトＶ／マウスＣ）を発生させ、それに続き標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して完全ヒト抗体に変換されるように、内因性マウス重鎖および軽鎖可変領域が、内因性マウス定常領域に作動可能に連結されたヒト重鎖および軽鎖可変領域と相同組換えにより置き換えられている、ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウス（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）；および（ｉｉ）単一の再配列されたヒトの共通の軽鎖可変領域のほかには再配列されていないヒト重鎖可変領域を含有するマウスである、ＭｅＭｏ（登録商標）マウス（Ｍｅｒｕｓ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）なども、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体を発生させるのに適用することができる。このようなマウス、および抗体を発生させるためのその使用は、例えば、ＷＯ２００９／１５７７７、ＵＳ２０１０／００６９６１４、ＷＯ２０１１／０７２２０４、ＷＯ２０１１／０９７６０３、ＷＯ２０１１／１６３３１１、ＷＯ２０１１／１６３３１４、ＷＯ２０１２／１４８８７３、ＵＳ２０１２／００７０８６１およびＵＳ２０１２／００７３００４で説明されている。
【０１１８】
本発明のヒトモノクローナル抗体は、免疫化されたときにヒト抗体反応が生成できるようにヒト免疫細胞が再構築されたＳＣＩＤマウスを使用して調製することもできる。このようなマウスは、例えば、Ｗｉｌｓｏｎらの米国特許第５，４７６，９９６号および同第５，６９８，７６７号で説明されている。
【０１１９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のｍＡｂは、参照により本明細書に組み入れられるＯｌｉｎｇｅｒら、ＰＮＡＳ  ２０１２年；１０９巻、１８０３０〜１８０３５頁で説明されるような分解されたウイルスベクターを使用して植物で産生することができる。ある特定の実施形態では、ｍＡｂは、タバコ植物で産生される。
【０１２０】
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、本明細書に記載のマウスモノクローナル抗体の配列をベースとして調製することができる。キメラ抗体は、その軽鎖および重鎖遺伝子が典型的には異なる種に属する免疫グロブリンの遺伝子セグメントから遺伝子工学によって構築されている抗体を指す。例えば、マウスモノクローナル抗体由来の遺伝子の可変（Ｖ）セグメントは、ヒト定常（Ｃ）セグメント、例えばＩｇＧ１およびＩｇＧ４に連結させてもよい。ヒトアイソタイプＩｇＧ１が好ましい。したがって典型的なキメラ抗体は、マウス抗体由来のＶまたは抗原−結合ドメインおよびヒト抗体由来のＣまたはエフェクタードメインからなるハイブリッドタンパク質である。
【０１２１】
ヒト化抗体の産生
用語「ヒト化抗体」は、実質的にヒト抗体鎖（アクセプター免疫グロブリンまたは抗体と称される）由来の可変領域のフレームワーク残基を含む少なくとも１つの鎖および実質的にマウス抗体（ドナー免疫グロブリンまたは抗体と称される）由来の少なくとも１つの相補性決定領域を含む抗体を指す。Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６巻：１００２９〜１００３３頁（１９８９年）、米国特許第５，５３０，１０１号、米国特許第５，５８５，０８９号、米国特許第５，６９３，７６１号、米国特許第５，６９３，７６２号、Ｓｅｌｉｃｋら、ＷＯ９０／０７８６１、およびＷｉｎｔｅｒ、米国特許第５，２２５，５３９号（あらゆる目的のために参照によりそれら全体が開示に組み入れられる）を参照されたい。定常領域も、存在する場合、実質的にまたは全体的にヒト免疫グロブリン由来である。
【０１２２】
マウスＣＤＲのヒト可変ドメインフレームワークへの置換は、ヒト可変ドメインフレームワークがＣＤＲの起源となるマウス可変フレームワークと同じまたは類似のコンフォメーションをとる場合、その正しい空間的な配向の保持をもたらす可能性が最も高い。これは、そのフレームワーク配列が、ＣＤＲが誘導されたマウス可変フレームワークドメインと高度な配列同一性を表すヒト抗体由来のヒト可変ドメインを得ることによって達成される。重鎖および軽鎖可変フレームワーク領域は、同一または異なるヒト抗体配列から誘導することができる。ヒト抗体配列は、天然に存在するヒト抗体の配列であってもよいし、または数種のヒト抗体のコンセンサス配列であってもよい。Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４巻：７７３頁（１９９１年）；Ｋｏｌｂｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ６巻：９７１頁（１９９３年）およびＣａｒｔｅｒら、ＷＯ９２／２２６５３を参照されたい。
【０１２３】
マウスドナー免疫グロブリンおよび適切なヒトアクセプター免疫グロブリンの相補性決定領域が同定されたら、次のステップは、結果得られるヒト化抗体の特性を最適化するために、もしあるとすればこれらの要素由来のどの残基が置換されるべきかを決定することである。一般的に、マウス残基の導入は、ヒトにおいてヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を惹起する抗体のリスクを増加させるため、ヒトアミノ酸残基のマウスのものでの置換は最小化されるべきである。特定の患者における、または治験中のＨＡＭＡ応答をモニターするために、当該分野で認識されている免疫応答の決定方法を実行することができる。ヒト化抗体が投与された患者は、前記療法の投与開始時とその間中、免疫原性評価を受けることができる。ＨＡＭＡ応答は、例えば、表面プラズモン共鳴技術（ＢＩＡＣＯＲＥ）および／または固相ＥＬＩＳＡ分析などの当業者に公知の方法を使用して、患者からの血清試料中でヒト化された治療試薬に対する抗体を検出することによって測定される。
【０１２４】
ヒト可変領域のフレームワーク残基由来のある特定のアミノ酸は、ＣＤＲコンフォメーションおよび／または抗原への結合へのその起こり得る影響に基づいて置換のために選択される。マウスＣＤＲ領域とヒト可変フレームワーク領域との天然にはない並置が、天然にはないコンフォメーションの制約を引き起こす可能性があり、このような制約は、ある特定のアミノ酸残基の置換によって修正されない限り、結合親和性の喪失をもたらす。
【０１２５】
置換のためのアミノ酸残基の選択は、コンピューターモデリングによって部分的に決定される。免疫グロブリン分子の３次元画像を作成するためのコンピューターのハードウェアおよびソフトウェアが、本明細書に記載される。一般的に、分子モデルは、免疫グロブリン鎖またはそのドメインの解像済みの構造から開始して作成される。モデル化しようとする鎖は、アミノ酸配列の類似性に関して、解像済みの３次元構造の鎖またはドメインと比較され、最大の配列類似性を示す鎖またはドメインが、分子モデル構築の開始点として選択される。少なくとも５０％の配列同一性を共有する鎖またはドメインが、モデリングのために選択され、好ましくは、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％またはそれより高い配列同一性を共有するものがモデリングのために選択される。解像済みの開始構造は、モデル化される免疫グロブリン鎖またはドメイン中の実際のアミノ酸と開始構造中のアミノ酸との差異を許容するように改変される。次いで改変された構造は、複合免疫グロブリンに組み立てられる。最終的に、エネルギーの最小化によって、さらに、全ての原子が互いに適切な距離内であること、および結合の長さと角度が化学的に許容できる限界内であることを検証することによって、モデルを精緻化させる。
【０１２６】
置換のためのアミノ酸残基の選択はまた、特定の場所におけるアミノ酸の特徴の調査、または特定のアミノ酸の置換もしくは変異誘発の影響の経験的な観察によって部分的に決定することもできる。例えば、マウス可変領域のフレームワーク残基と選択されたヒト可変領域のフレームワーク残基とでアミノ酸が異なる場合、ヒトフレームワークのアミノ酸は通常、マウス抗体由来の等価なフレームワークのアミノ酸が：
（１）抗原と直接非共有結合するか、
（２）ＣＤＲ領域と隣接するか、
（３）別の方法でＣＤＲ領域と相互作用するか（例えば、コンピューターモデリングによって決定した場合、ＣＤＲ領域の約３〜６オングストローム以内である）、または
（４）ＶＬ−ＶＨの界面に関与している
と合理的に予測される場合、そのアミノ酸で置換すべきである。
【０１２７】
「抗原と直接非共有結合する」残基としては、確立された化学的な力に従って、例えば水素結合、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などによって抗原上のアミノ酸と直接相互作用するとの良好な見込みを有する、フレームワーク領域中の位置にあるアミノ酸が挙げられる。
【０１２８】
ＣＤＲおよびフレームワーク領域は、上記のＫａｂａｔらまたはＣｈｏｔｈｉａらで定義された通りである。上記のＫａｂａｔらで定義されるフレームワーク残基が、上記のＣｈｏｔｈｉａらで定義される構造的なループ残基を構成する場合、マウス抗体に存在するアミノ酸は、ヒト化抗体への置換のために選択することが可能である。「ＣＤＲ領域に隣接する」残基としては、ヒト化免疫グロブリン鎖の一次配列中のＣＤＲの１つまたは複数に直接隣接する位置にあるアミノ酸残基、例えば、Ｋａｂａｔで定義されるＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａで定義されるＣＤＲに直接隣接する位置にあるアミノ酸残基が挙げられる（例えば、ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ  Ｊ  Ｍ  Ｂ  １９６巻：９０１頁（１９８７年）を参照）。これらのアミノ酸は特に、ＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用する可能性が高く、アクセプターから選択される場合、ドナーＣＤＲを歪ませて親和性を低下させる可能性が高い。さらに、隣接するアミノ酸は、抗原と直接相互作用する可能性があり（Ａｍｉｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３３巻：７４７頁（１９８６年）、参照により本明細書に組み入れられる）、ドナーからこれらのアミノ酸を選択することが、元の抗体において親和性を提供する抗原の接触を全て維持するために望ましい場合がある。
【０１２９】
「別の方法でＣＤＲ領域と相互作用する」残基としては、二次構造分析によってＣＤＲ領域に影響を与えるのに十分な空間的な配向にあることが決定されるものが挙げられる。ある特定の実施形態では、「別の方法でＣＤＲ領域と相互作用する」残基は、ドナー免疫グロブリンの３次元モデル（例えば、コンピューター生成モデル）を分析することによって同定される。典型的には元のドナー抗体の３次元モデルは、ＣＤＲの外側におけるある特定のアミノ酸がＣＤＲに近接しており、水素結合、ファンデルワールス力、疎水性相互作用などによってＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用する良好な見込みを有することを示す。そのアミノ酸位置において、アクセプター免疫グロブリンのアミノ酸ではなくドナー免疫グロブリンのアミノ酸が選択され得る。この基準によるアミノ酸は、一般的に、ＣＤＲ中のいくつかの原子の約３オングストローム単位（Ａ）以内に側鎖原子を有し、例えば上記で列挙したものなどの確立された化学的な力によってＣＤＲ原子と相互作用できる原子を含有するはずである。
【０１３０】
水素結合を形成する可能性がある原子の場合では、それらの核の間で３オングストロームが測定されるが、結合を形成しない原子の場合は、それらのファンデルワールス表面間で３オングストロームが測定される。したがって、後者の場合では、核は、相互作用が可能であるとみなされる原子に対して約６オングストローム（３オングストローム＋ファンデルワールス半径の合計）以内でなければならない。多くの場合において、核は、４または５から６オングストローム離れている。アミノ酸がＣＤＲと相互作用できるかどうかの決定において、重鎖ＣＤＲ２の最後の８アミノ酸をＣＤＲの一部とみなさないことが好ましく、これはなぜなら、構造の観点から、これらの８アミノ酸はよりフレームワークの一部としての挙動を示すためである。
【０１３１】
ＣＤＲ中のアミノ酸と相互作用することが可能なアミノ酸は、さらに別の方法でも同定することができる。各フレームワークのアミノ酸の溶媒が接近可能な表面積は、２つの方法で、すなわち（１）無傷抗体において、および（２）そのＣＤＲが除去された抗体からなる仮定の分子において計算される。これらの数値間の有意差が約１０平方オングストロームまたはそれより高いことは、フレームワークのアミノ酸の溶媒へのアクセスが、ＣＤＲによって少なくとも部分的にブロックされており、それゆえにアミノ酸がＣＤＲと接触していることを示す。アミノ酸の溶媒が接近可能な表面積は、当該分野において公知のアルゴリズムを使用して抗体の３次元モデルに基づいて計算することができる（例えば、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ，  Ｊ．  Ａｐｐｌ．  Ｃｒｙｓｔ．  １６巻：５４８頁（１９８３年）ならびにＬｅｅおよびＲｉｃｈａｒｄｓ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ５５巻：３７９頁（１９７１年）、これらの両方は、参照により本明細書に組み入れられる）。フレームワークのアミノ酸もまた、場合により、次にＣＤＲと接触する別のフレームワークのアミノ酸のコンフォメーションに影響を及ぼすことによって、ＣＤＲと間接的に相互作用する場合がある。
【０１３２】
フレームワーク中のいくつかの位置におけるアミノ酸が、多くの抗体においてＣＤＲと相互作用が可能なことが公知である（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、上記、Ｃｈｏｔｈｉａら、上記ならびにＴｒａｍｏｎｔａｎｏら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２１５巻：１７５頁（１９９０年）、これらの全ては、参照により本明細書に組み入れられる）。とりわけ、軽鎖の２、４８、６４および７１位ならびに重鎖の２６〜３０、７１および９４位におけるアミノ酸（Ｋａｂａｔによる番号付け）は、多くの抗体においてＣＤＲと相互作用することが可能なことが公知である。軽鎖の３５位ならびに重鎖の９３および１０３位におけるアミノ酸も、ＣＤＲと相互作用する可能性が高い。全てのこれらの番号付けされた位置において、ヒト化免疫グロブリン中にあるべきものとしてアクセプターアミノ酸ではなくドナーアミノ酸を選択すること（それらが異なる場合）が好ましい。一方で、ＣＤＲ領域と相互作用することが可能なある特定の残基、例えば軽鎖の最初の５アミノ酸は、時には、ヒト化免疫グロブリンにおける親和性を損なわずにアクセプター免疫グロブリンから選択されてもよい。
【０１３３】
「ＶＬ−ＶＨの界面に関与する」残基または「充填残基」としては、例えば、ＮｏｖｏｔｎｙおよびＨａｂｅｒ、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８２巻：４５９２〜６６頁（１９８５年）または上記のＣｈｏｔｈｉａらによって定義されるような、ＶＬとＶＨとの界面における残基が挙げられる。一般的に、異例な充填残基は、それらがヒトフレームワーク中のものとは異なる場合、ヒト化抗体中に保持されべきである。
【０１３４】
一般的に、上記の基準を満たすアミノ酸の１つまたは複数が置換される。一部の実施形態では、上記の基準を満たす全てまたはほとんどのアミノ酸が置換されている。場合によっては、特定のアミノ酸が上記の基準を満たすかどうかについて多少の曖昧さがあることから、代替のバリアント免疫グロブリンが産生され、そのうちの１つはその特定の置換を有するが、その他のものは有さない。このようにして産生された代替のバリアント免疫グロブリンを、所望の活性に関して本明細書に記載のアッセイのいずれかで試験して、好ましい免疫グロブリンを選択することができる。
【０１３５】
通常、ヒト化抗体におけるＣＤＲ領域は、実質的に同一であり、より一般的には、ドナー抗体の対応するＣＤＲ領域に同一である。通常望ましくないが、結果得られたヒト化免疫グロブリンの結合親和性に認識できる程度の影響を与えずに、ＣＤＲ残基の１つまたは複数の保存的アミノ酸置換をなすことも時には考えられる。保存的置換としては、ｇｌｙ、ａｌａ；ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ；ａｓｐ、ｇｌｕ；ａｓｎ、ｇｌｎ；ｓｅｒ、ｔｈｒ；ｌｙｓ、ａｒｇ；およびｐｈｅ、ｔｙｒなどの組合せが意図される。
【０１３６】
置換のための追加の候補は、その位置においてヒト免疫グロブリンにとって異例であるかまたは「まれな」アクセプターヒトフレームワークのアミノ酸である。これらのアミノ酸は、マウスドナー抗体の等価な位置からの、またはより典型的なヒト免疫グロブリンの等価な位置からのアミノ酸で置換することができる。例えば、アクセプター免疫グロブリンのヒトフレームワーク領域中のアミノ酸が、その位置にとってまれであり、ドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸が、ヒト免疫グロブリン配列におけるその位置において共通している場合；またはアクセプター免疫グロブリン中のアミノ酸が、その位置にとってまれであり、ドナー免疫グロブリン中の対応するアミノ酸も、他のヒト配列に対してまれである場合、置換が望ましい可能性がある。これらの基準は、ヒトフレームワーク中の非定型的なアミノ酸が抗体構造を崩壊させないことを確実にする上で助けになる。さらに、異例なヒトアクセプターのアミノ酸を、ヒト抗体にとって偶然にも典型的なドナー抗体由来のアミノ酸で置き換えることによって、ヒト化抗体の免疫原性をより低くすることができる。
【０１３７】
用語「まれな」は、本明細書で使用される場合、その位置において、代表的な配列サンプル中の配列の約２０％未満、ただし通常は約１０％未満で存在するアミノ酸を示し、用語「共通の」は、本明細書で使用される場合、代表的なサンプル中の配列の約２５％超、ただし通常は約５０％超で存在するアミノ酸を示す。例えば、全てのヒト軽鎖および重鎖可変領域配列は、互いに特に同種であり、ある特定の重要な位置に同じアミノ酸を有する配列の「下位群（ｓｕｂｇｒｏｕｐ）」にそれぞれ群分けされる（Ｋａｂａｔら、上記）。ヒトアクセプター配列中のアミノ酸が、ヒト配列のなかで「まれ」かまたは「共通」かを決定する場合、アクセプター配列と同じ下位群中のヒト配列のみを考察することがしばしば好ましい。
【０１３８】
置換のための追加の候補は、上記のＣｈｏｔｈｉａらによって提唱されている代替の定義の下でＣＤＲ領域の一部として同定されるアクセプターのヒトフレームワークのアミノ酸である。置換のための追加の候補は、ＡｂＭおよび／または接触の定義の下でＣＤＲ領域の一部として同定されるアクセプターのヒトフレームワークのアミノ酸である。
【０１３９】
置換のための追加の候補は、まれなまたは異例なドナーのフレームワーク残基に相当するアクセプターのフレームワーク残基である。まれなまたは異例なドナーのフレームワーク残基は、その位置でマウス抗体にとってまれかまたは異例なもの（本明細書で定義される通り）である。マウス抗体の場合、下位群をＫａｂａｔに従って決定して、コンセンサスとは異なる残基の位置を同定することができる。これらのドナーの特異的な差は、活性を強化するマウス配列における体細胞変異を指摘している可能性がある。結合に影響を与えることが予測される異例な残基は保持され、それに対して結合にとって重要ではないと予測される残基は置換され得る。
【０１４０】
置換のための追加の候補は、アクセプターのフレームワーク領域中に存在する非生殖細胞系の残基である。例えば、アクセプター抗体鎖（すなわち、ドナー抗体鎖と有意な配列同一性を共有するヒト抗体鎖）が、生殖細胞系の抗体鎖（同様にドナー鎖と有意な配列同一性を共有する）にアラインされる場合、アクセプター鎖のフレームワークと生殖細胞系の鎖のフレームワークとで一致しない残基は、生殖細胞系の配列由来の対応する残基で置換することができる。
【０１４１】
上記で論じられた特異的なアミノ酸置換以外に、ヒト化免疫グロブリンのフレームワーク領域は、通常、実質的に同一であり、より一般的には、それらが誘導されたヒト抗体のフレームワーク領域に同一である。当然ながら、フレームワーク領域中のアミノ酸の多くは、抗体の特異性または親和性にほとんど寄与しないか直接的には寄与しない。したがって、フレームワーク残基の多くの個々の保存的置換が、結果得られたヒト化免疫グロブリンの特異性または親和性を明らかに変化させることなく許容され得る。したがって、一実施形態では、ヒト化免疫グロブリンの可変フレームワーク領域は、ヒト可変フレームワーク領域配列またはこのような配列のコンセンサスに少なくとも８５％の配列同一性を共有する。別の実施形態では、ヒト化免疫グロブリンの可変フレームワーク領域は、ヒト可変フレームワーク領域配列またはこのような配列のコンセンサスに、少なくとも９０％、好ましくは９５％、より好ましくは９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を共有する。しかしながら、一般的に、このような置換は望ましくない。
【０１４２】
ヒト化抗体は、好ましくは、少なくとも１０７、１０８、１０９または１０１０Ｍ−１の抗原への特異的な結合親和性を表す。通常、抗原へのヒト化抗体の結合親和性の上限は、ドナー免疫グロブリンの結合親和性の３倍、４倍または５倍以内である。多くの場合、結合親和性の下限も、ドナー免疫グロブリンの結合親和性の３倍、４倍または５倍以内である。代替として、結合親和性は、置換がないヒト化抗体（例えば、ドナーＣＤＲおよびアクセプターＦＲを有するがＦＲ置換がない抗体）の結合親和性と比較することができる。このような例において、最適化された抗体（置換を有する）の結合は、非置換の抗体の結合より、好ましくは少なくとも２倍から３倍大きいか、または３倍から４倍大きい。比較するために、様々な抗体の活性は、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（すなわち、非標識の試薬を使用する表面プラズモン共鳴）または競合結合アッセイによって決定することができる。
【０１４３】
免疫化
エボラウイルスＧＰに対する完全ヒト抗体を生成するために、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含有するトランスジェニックまたは染色体導入されたマウス（例えば、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ７またはＫＭマウス）は、例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８巻（６４７４号）：８５６〜８５９頁；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４巻：８４５〜８５１頁およびＷＯ９８／２４８８４で説明されるようにして、エボラウイルスＧＰ抗原および／またはエボラウイルスＧＰを発現する細胞の精製または富化した調製物で免疫化することができる。本明細書で説明されるように、ＨｕＭＡｂマウスは、免疫原として組換えエボラウイルスＧＰタンパク質またはエボラウイルスＧＰを発現する細胞株のいずれかで免疫化される。代替として、マウスは、エボラウイルスＧＰをコードするＤＮＡで免疫化することができる。好ましくは、マウスは、最初の注入のとき６〜１６週齢である。例えば、組換えエボラウイルスＧＰ抗原の精製または富化した調製物（５〜５０μｇ）は、腹腔内によりＨｕＭＡｂマウスを免疫化するのに使用することができる。
【０１４４】
様々な抗原での累積的な経験から、最初に完全フロイントアジュバント中の抗原で腹腔内（ＩＰ）または皮下（ＳＣ）により免疫化し、それに続いて隔週で不完全フロイントアジュバント中の抗原でＩＰ／ＳＣにより免疫化する（合計１０回まで）場合に、トランスジェニックマウスは、最もよく応答することが示されている。免疫応答は、眼窩後方の採血により得られる血漿試料での免疫化プロトコールの経過にわたりモニターすることができる。血漿は、ＥＬＩＳＡ（後述する通り）によってスクリーニングすることができ、抗エボラウイルスＧＰヒト免疫グロブリンの十分な力価を有するマウスが、融合に使用される可能性がある。マウスは、屠殺しておよび脾臓を取り出す３日前に静脈内に抗原で追加免疫されてもよい。
【０１４５】
エボラウイルスＧＰに対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの生成
エボラウイルスＧＰに対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを生成するために、免疫化されたマウス由来の脾細胞およびリンパ節細胞を単離して、マウス骨髄腫細胞株などの適切な不死化細胞株に融合させることができる。次いで結果得られたハイブリドーマは、抗原特異的な抗体の産生に関してスクリーニングすることができる。例えば、免疫化されたマウス由来の脾臓リンパ球の単一細胞の懸濁物は、５０％ＰＥＧ（ｗ／ｖ）と共にＳＰ２／０−Ａｇ８．６５３非分泌性マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ１５８０）に融合させることができる。細胞を平底のマイクロタイタープレートでおよそ１×１０５個で蒔き、それに続いて通常の試薬の他にも１０％胎仔クローン血清、５〜１０％のオリゲン（ｏｒｉｇｅｎ）ハイブリドーマクローニングファクター（ＩＧＥＮ）および１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ）を含有する選択培地中で２週間インキュベートすることができる。およそ２週間後、細胞は、ＨＡＴがＨＴで置き換えられた培地中で培養することができる。次いで個々のウェルは、ＥＬＩＳＡによってヒト抗エボラウイルスＧＰモノクローナルＩｇＭおよびＩｇＧ抗体に関してスクリーニングすることができる。大規模なハイブリドーマ成長が一旦起これば、培地は、通常１０〜１４日後に観察してもよい。抗体を分泌するハイブリドーマは、再度平板培養して再度スクリーニングすることができ、それでもなおＩｇＧ陽性の場合、抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体を限界希釈によって少なくとも２回サブクローニングすることができる。次いで安定なサブクローンをｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養して、特徴付けのために組織培養培地中で抗体を生成させることができる。
【０１４６】
エボラウイルスＧＰに対するモノクローナル抗体を産生するトランスフェクトーマの生成
本発明の抗体はまた、例えば、当該分野において周知のようにして組換えＤＮＡ技術と遺伝子トランスフェクション方法との組合せを使用して、宿主細胞のトランスフェクトーマで産生することもできる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｓ．（１９８５年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９巻：１２０２頁）。
【０１４７】
例えば、ある特定の実施形態では、目的の遺伝子、例えばヒト抗体遺伝子は、発現ベクター、例えば、ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６およびＥＰ３３８８４１で開示されたＧＳ遺伝子発現系または当該分野において周知の他の発現系によって使用されるような真核生物発現プラスミドにライゲートすることができる。クローニングされた抗体遺伝子を有する精製されたプラスミドは、ＣＨＯ細胞もしくはＮＳＯ細胞などの真核宿主細胞、または代替として植物由来の細胞、真菌もしくは酵母細胞のような他の真核細胞に導入することができる。これらの遺伝子を導入するのに使用される方法は、エレクトロポレーション、リポフェクチン、リポフェクトアミンまたはその他のものなどの当該分野で説明されている方法であり得る。宿主細胞にこれらの抗体遺伝子を導入した後、抗体を発現する細胞を同定し、選択することができる。これらの細胞は、代表的なトランスフェクトーマであり、これらを次いでその発現レベルに応じて増幅して、抗体を産生するためにアップスケールすることができる。これらの培養上清および／または細胞から、組換え抗体を単離および精製することができる。
【０１４８】
代替として、これらのクローニングされた抗体遺伝子は、Ｅ．ｃｏｌｉなどの他の発現系または完全な生物において発現させることもでき、または合成的に発現させることもできる。
【０１４９】
無傷抗体を発現させるための部分的な抗体配列の使用
抗体は、６つの重鎖および軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）中に配置されたアミノ酸残基を介して優勢に標的抗原と相互作用する。この理由のために、ＣＤＲ内のアミノ酸配列は、個々の抗体間で、ＣＤＲの外側の配列より多様である。ＣＤＲ配列はほとんどの抗体−抗原相互作用に関与するため、異なる特性を有する異なる抗体由来のフレームワーク配列上にグラフト化された、特異的な天然に存在する抗体由来のＣＤＲ配列を含む発現ベクターを構築することによって、特異的な天然に存在する抗体の特性を模倣する組換え抗体を発現させることが可能である（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，  Ｌ．ら、１９９８年、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２７頁；Ｊｏｎｅｓ，  Ｐ．ら、１９８６年、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁；およびＱｕｅｅｎ，  Ｃ．ら、１９８９年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．を参照、Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８６巻：１００２９〜１００３３頁を参照）。このようなフレームワーク配列は、生殖細胞系の抗体の遺伝子配列を含む公共のＤＮＡデータベースから得ることができる。これらの生殖細胞系の配列は、Ｂ細胞の成熟中のＶ（Ｄ）Ｊの連結によって形成される完全に組み立てられた可変遺伝子を含まないので、成熟抗体の遺伝子配列とは異なる。生殖細胞系の遺伝子配列はまた、個体における高親和性二次レパートリー抗体の配列とも、可変領域全体にわたり均一に異なっている。例えば、体細胞変異は、フレームワーク領域のアミノ末端部分において比較的低頻度である。例えば、体細胞変異は、フレームワーク領域１のアミノ末端部分およびフレームワーク領域４のカルボキシ末端部分において比較的低頻度である。さらに、多くの体細胞変異は、抗体の結合特性を有意に変更しない。この理由のために、元の抗体の結合特性に類似した結合特性を有する無傷の組換え抗体を再度作製するために特定の抗体のＤＮＡ配列全体を得ることは、必ずしも必要ではない（１９９９年３月１２日付けで出願されたＰＣＴ／ＵＳ９９／０５５３５を参照）。この目的のためには、典型的にはＣＤＲ領域にわたる部分的な重鎖および軽鎖配列で十分である。部分的な配列は、どの生殖細胞系の可変および連結遺伝子セグメントが組み換えられた抗体可変遺伝子に寄与するのかを決定するのに使用される。次いで生殖細胞系の配列は、可変領域の失われた部分を満たすのに使用される。重鎖および軽鎖リーダー配列は、タンパク質成熟中に切断され、最終的な抗体の特性に寄与しない。失われた配列を付加するために、クローニングされたｃＤＮＡ配列は、ライゲーションまたはＰＣＲ増幅によって合成オリゴヌクレオチドと組み合わせることができる。代替として、短い重複するオリゴヌクレオチドのセットとして可変領域全体を合成して、ＰＣＲ増幅によって組み合わせることにより、全体的に合成の可変領域クローンを作製することもできる。このプロセスは、特定の制限部位の除去もしくは包含、または特定のコドンの最適化などの一定の利点を有する。
【０１５０】
ハイブリドーマからの重鎖および軽鎖転写物のヌクレオチド配列は、天然配列と同一なアミノ酸をコードする能力を有する合成Ｖ配列を作製するために、合成オリゴヌクレオチドの重複するセットを設計するのに使用される。合成重鎖およびカッパ鎖配列は、以下の３つの仕方：オリゴヌクレオチド合成およびＰＣＲ増幅を促進するために、一続きの繰り返されたヌクレオチド塩基が中断されること；コザックのルール（Ｋｏｚａｋ、１９９１年、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６６巻：１９８６７〜１９８７０頁）に従って最適な翻訳開始部位が取り込まれること；および翻訳開始部位の上流でＨｉｎｄＩＩＩ部位を作出すること、天然配列と異なり得る。
【０１５１】
重鎖および軽鎖可変領域の両方に関して、最適化されたコードおよび対応する非コード鎖配列は、対応する非コードオリゴヌクレオチドのおよそ中間点である３０〜５０ヌクレオチドに分解される。したがって、各鎖につき、オリゴヌクレオチドは、１５０〜４００ヌクレオチドのセグメントにわたる重複する二本鎖のセットに組み立てることができる。次いでそのプールは、１５０〜４００ヌクレオチドのＰＣＲ増幅産物を産生するための鋳型として使用される。典型的には、単一の可変領域オリゴヌクレオチドのセットは、２つのプールに分解され、これらは別々に増幅されて、２種の重複するＰＣＲ産物を生成する。次いでこれらの重複する産物はＰＣＲ増幅によって組み合わされて、完全な可変領域を形成する。発現ベクター構築物に容易にクローニングすることができる断片を生成するために、ＰＣＲ増幅において重鎖または軽鎖定常領域の重複する断片（カッパ軽鎖のＢｂｓＩ部位、またはガンマ重鎖の場合はＡｇｅＩ部位を含む）を含むことも望ましい場合がある。
【０１５２】
次いで再構築された重鎖および軽鎖可変領域は、発現ベクター構築物を形成するために、クローニングされたプロモーター、リーダー配列、翻訳開始、リーダー配列、定常領域、３’非翻訳、ポリアデニル化、および転写終結配列と組み合わされる。重鎖および軽鎖発現構築物は、単一のベクターに組み合わされて、宿主細胞に共にトランスフェクトされるか、連続的にトランスフェクトされるか、または別々にトランスフェクトされてもよく、次いでこれを融合して、両方の鎖を発現する宿主細胞を形成する。
【０１５３】
発現ベクターの構築で使用するためのプラスミドを、ＰＣＲで増幅したＶ重鎖およびＶカッパ軽鎖のｃＤＮＡ配列が、完全な重鎖および軽鎖のミニ遺伝子を再構築するのに使用できるように構築した。これらのプラスミドは、完全ヒトＩｇＧ１κまたはＩｇＧ４κ抗体を発現させるのに使用することができる。
【０１５４】
本発明の完全ヒト、ヒト化、およびキメラ抗体はまた、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＤ抗体も含む。他の重鎖アイソタイプの発現のために、またはラムダ軽鎖を含む抗体の発現のために、類似のプラスミドを構築することができる。
【０１５５】
ある特定の実施形態では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号４５〜４７に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号４８、５０、および５１に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、エボラウイルスＧＰに結合する能力を保持する、方法を提供する。エボラウイルスＧＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１５６】
ある特定の実施態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号５２〜５４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号５５、５６、および５８に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、エボラウイルスＧＰに結合する能力を保持する、方法を提供する。エボラウイルスＧＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１５７】
ある特定の実施態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号５２〜５４に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ、ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号５５、５６、および５９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、エボラウイルスＧＰに結合する能力を保持する、方法を提供する。エボラウイルスＧＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１５８】
ある特定の実施態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号６０、６１、および６３に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号６４、６５、および６７に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、エボラウイルスＧＰに結合する能力を保持する、方法を提供する。エボラウイルスＧＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１５９】
ある特定の実施態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号７４、７７、および７８に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号８０〜８２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、エボラウイルスＧＰに結合する能力を保持する、方法を提供する。エボラウイルスＧＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６０】
ある特定の実施態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号７４、７７、および７９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ、ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号８０〜８２に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、エボラウイルスＧＰに結合する能力を保持する、方法を提供する。エボラウイルスＧＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６１】
ある特定の実施態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号８３〜８５に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ、ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号８７、９０、および８９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、エボラウイルスＧＰに結合する能力を保持する、方法を提供する。エボラウイルスＧＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６２】
ある特定の実施態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号８６、８４、および８５に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号８７〜８９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、エボラウイルスＧＰに結合する能力を保持する、方法を提供する。エボラウイルスＧＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６３】
ある特定の実施態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体を調製するための方法であって、（１）重鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号８６、８４、および８５に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖フレームワーク領域および重鎖ＣＤＲ；ならびに（２）軽鎖ＣＤＲの少なくとも１つが、配列番号８７、９０、および８９に示されるＣＤＲのアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖フレームワーク領域および軽鎖ＣＤＲを含む抗体を調製することを含み、抗体は、エボラウイルスＧＰに結合する能力を保持する、方法を提供する。エボラウイルスＧＰと結合する抗体の能力は、標準的な結合アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＬＩＳＡ）を使用して決定することができる。
【０１６４】
したがって、ある特定の実施態様では、本発明はさらに、（１）重鎖フレームワーク領域、重鎖ＣＤＲ１領域、重鎖ＣＤＲ２領域、および本明細書で開示された抗体のＣＤＲ３から選択される重鎖ＣＤＲ３領域、ならびに（２）軽鎖フレームワーク領域、軽鎖ＣＤＲ１領域、軽鎖ＣＤＲ２領域、および本明細書で開示された抗体のＣＤＲ３から選択される軽鎖ＣＤＲ３領域を含む抗エボラウイルスＧＰ抗体であって、抗体は、エボラウイルスＧＰと結合する、抗エボラウイルスＧＰ抗体を提供する。抗体は、本明細書で開示された抗体の重鎖ＣＤＲ２および／または軽鎖ＣＤＲ２をさらに含んでいてもよい。抗体は、本明細書で開示された抗体の重鎖ＣＤＲ１および／または軽鎖ＣＤＲ１をさらに含んでいてもよい。
【０１６５】
改変された配列を有する抗体の生成
別の実施態様では、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体の可変領域配列またはその部分は、結合（すなわち、改変されていない抗体と同じエピトープへの）を保持する構造的に関連する抗エボラウイルスＧＰ抗体が作製されるように改変される。
【０１６６】
したがって、本発明の一態様において、上述した操作された抗体のＣＤＲ１、２、および／または３の領域は、本明細書で開示された抗体のアミノ酸配列のような正確なアミノ酸配列を含んでいてもよい。しかしながら、本発明の他の態様において、抗体は、本明細書で開示された抗体の正確なＣＤＲ配列由来の誘導体を含み、それでもなおエボラウイルスＧＰと有効に結合する能力を保持する。このような配列改変は、１つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、または置換、例えば、上述したような保存的配列改変を含んでいてもよい。また配列改変は、本明細書で開示された抗体の特定のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列について上述したコンセンサス配列に基づいていてもよい。
【０１６７】
したがって、別の実施態様では、操作された抗体は、例えば、本明細書で開示された抗体の１つまたは複数のＣＤＲに９０％、９５％、９８％または９９．５％同一な１つまたは複数のＣＤＲで構成されていてもよい。上記で列挙された値の間の範囲、例えば、上記の配列の１つまたは複数に９０〜９５％、９５〜９８％、または９８〜１００％同一なＣＤＲも、本発明に包含されることが意図される。
【０１６８】
別の実施態様では、理想的な結合定数が達成されるように、より好ましい結合のオンレート、より好ましい結合のオフレート、またはその両方を達成するために、ＣＤＲの１つまたは複数の残基を変更して、結合を改変してもよい。この戦略を使用して、例えば１０１０Ｍ−１またはそれ超の極めて高い結合親和性を有する抗体を達成することができる。ＣＤＲ領域を変更し、それに続いて結果生じる結合分子を所望の結合の変化に関してスクリーニングするのに、当該分野において周知の親和性成熟技術および本明細書に記載の技術を使用することができる。したがって、ＣＤＲが変更される場合、最もよい組合せの結合および低い免疫原性に関して最適化された抗体が達成されるように、結合親和性の変化に加えて免疫原性をモニターしてスコア付けすることができる。
【０１６９】
したがって、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３領域内の可変領域の改変のために、部位特異的変異誘発またはＰＣＲ媒介変異誘発を実行して変異を導入することができ、抗体結合に対する影響または目的とする他の機能特性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏのアッセイで評価することができる。好ましくは、保存的改変（本明細書で論じられるように）が導入される。変異は、アミノ酸の置換、付加または欠失であり得るが、好ましくは置換である。さらに、典型的には、ＣＤＲ領域内の１、２、３、４または５以下の残基が変更される。
【０１７０】
したがって、別の実施態様では、本発明は、（ａ）配列番号４５、５２、６０、６８、７４、および８３からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列番号４５、５２、６０、６８、７４、および８３と比較して１、２、３、４もしくは５つのアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ１領域；（ｂ）配列番号４６、５３、６１、６９、７５、および８４からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列番号４６、５３、６１、６９、７５、および８４と比較して１、２、３、４もしくは５つのアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ２領域；（ｃ）配列番号４７、５４、６２、７０、７６、および８５からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列番号４７、５４、６２、７０、７６、および８５と比較して１、２、３、４もしくは５つのアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＨ  ＣＤＲ３領域；（ｄ）配列番号４８、５５、６４、７１、８０、および８７からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列番号４８、５５、６４、７１、８０、および８７と比較して１、２、３、４もしくは５つのアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ１領域；（ｅ）配列番号４９、５６、６５、７２、８１、および８８からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列番号４９、５６、６５、７２、８１、および８８と比較して１、２、３、４もしくは５つのアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ２領域；ならびに（ｆ）配列番号５１、５７、６６、７３、８２、および８９からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列番号５１、５７、６６、７３、８２、および８９と比較して１、２、３、４もしくは５つのアミノ酸の置換、欠失もしくは付加を有するアミノ酸配列を含むＶＬ  ＣＤＲ３領域を含む、単離された抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分を提供する。
【０１７１】
ＣＤＲ内の改変に加えて、またはその代わりに、改変によって抗体の結合親和性がなくならないかぎり、改変は、抗体の重鎖および／または軽鎖可変領域のフレームワーク領域、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４の１つまたは複数内でなされてもよい。ある特定の実施態様では、単離されたモノクローナル抗体は、それぞれ配列番号６８、６９、および７０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９２に記載の重鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異４９Ｈ、７１Ｈのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号７１、７２、および７３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９３に記載の軽鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異４２Ｌ、５９Ｌ、７０Ｌ、９９Ｌのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む。
【０１７２】
ある特定の実施態様では、本明細書において使用されるモノクローナル抗体は、それぞれ配列番号７４、７５、および７６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９４に記載の重鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異４９Ｈ、５０Ｈのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８０、８１、および８２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９５に記載の軽鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異３Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む。
【０１７３】
ある特定の実施態様では、本明細書において使用されるモノクローナル抗体は、それぞれ配列番号７４、７７、および７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８０、８１、および８２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９５に記載の軽鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異３Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、１００Ｌのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む。
【０１７４】
ある特定の実施態様では、本明細書において使用されるモノクローナル抗体は、それぞれ配列番号７４、７７、および７９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８０、８１、および８２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９５に記載の軽鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異３Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、１００Ｌのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む。
【０１７５】
ある特定の実施態様では、本明細書において使用されるモノクローナル抗体は、それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む。
【０１７６】
ある特定の実施態様では、本明細書において使用されるモノクローナル抗体は、それぞれ配列番号８６、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む。
【０１７７】
ある特定の実施態様では、本明細書において使用されるモノクローナル抗体は、それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８７、９０、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む。
【０１７８】
ある特定の実施態様では、本明細書において使用されるモノクローナル抗体は、それぞれ配列番号８６、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８７、９０、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の可変領域のフレームワーク残基の変異３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌのいずれか１つ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む。
【０１７９】
一般的に、抗体のフレームワーク領域は、それらが誘導されたヒト生殖細胞系の配列のフレームワーク領域に、通常実質的に同一であり、より一般的には同一である。当然ながら、フレームワーク領域中のアミノ酸の多くは、抗体の特異性または親和性にほとんど寄与しないか直接的には寄与しない。したがって、フレームワーク残基の多くの個々の保存的置換は、結果得られた免疫グロブリンの特異性または親和性の明らかな変化がなければ、許容することができる。したがって、一実施態様では、抗体の可変フレームワーク領域は、ヒト生殖細胞系の可変フレームワーク領域配列またはこのような配列のコンセンサスに、少なくとも８５％の配列同一性を共有する。別の実施態様では、抗体の可変フレームワーク領域は、ヒト生殖細胞系の可変フレームワーク領域配列またはこのような配列のコンセンサスに、少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を共有する。
【０１８０】
ある特定の実施態様では、フレームワーク領域は、変異されている。ある特定の実施態様では、配列番号９の重鎖可変領域中、残基４９のグリシンにおいてアラニンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号９の重鎖可変領域中、残基７１のスレオニンにおいてセリンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１０の軽鎖可変領域中、残基４２のセリンにおいてアラニンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１０の軽鎖可変領域中、残基５９のバリンにおいてアラニンに置換されており、残基７０のチロシンにおいてフェニルアラニンに置換されており、残基９９のグリシンにおいてグルタミンに置換されている。
【０１８１】
ある特定の実施態様では、配列番号１１の重鎖可変領域中、残基４９のアラニンにおいてグリシンに置換されており、残基５０のグルタミン酸においてフェニルアラニンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１１の重鎖可変領域中、残基１０２のバリンにおいてアラニンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１２の軽鎖可変領域中、残基４３のセリンにおいてアラニンに置換されており、残基４５のグルタミンにおいてリジンに置換されており、残基１００のグリシンにおいてグルタミンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１２の軽鎖可変領域中、残基３のバリンにおいてグルタミンに置換されており、残基７０のグルタミンにおいてアスパラギン酸に置換されており、残基７１のチロシンにおいてフェニルアラニンに置換されている。
【０１８２】
ある特定の実施態様では、配列番号１３の重鎖可変領域中、残基４４のセリンにおいてグリシンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１３の重鎖可変領域中、残基４８のイソロイシンにおいてメチオニンに置換されており、残基７０のロイシンにおいてイソロイシンに置換されており、残基７２のバリンにおいてアラニンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１３の重鎖可変領域中、残基５０のバリンにおいてアスパラギンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１３の重鎖可変領域中、残基３２のバリンにおいてフェニルアラニンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１４の軽鎖可変領域中、残基４３のセリンにおいてアラニンに置換されており、残基８７のフェニルアラニンにおいてチロシンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１４の軽鎖可変領域中、残基３のバリンにおいてグルタミンに置換されており、残基７０のグルタミンにおいてアスパラギン酸に置換されており、残基７２のセリンにおいてスレオニンに置換されており、残基７３のロイシンにおいてフェニルアラニンに置換されており、残基１００のセリンにおいてグルタミンに置換されている。ある特定の実施態様では、配列番号１４の軽鎖可変領域中、残基５２のバリンにおいてリジンに置換されている。
【０１８３】
フレームワーク改変はまた、例えばＵＳ２００３／０１５３０４３でＣａｒｒらによって説明されるようにして、抗体の免疫原性を低減するか、またはその中に存在するＴ細胞エピトープを低減もしくは除去するようになすこともできる。
【０１８４】
本発明の操作された抗体としては、例えば抗体の特性を改善するためにＶＨおよび／またはＶＬ内のフレームワーク残基に改変がなされたものが挙げられる。典型的には、このようなフレームワーク改変は、抗体の免疫原性を減少させるためになされる。例えば、１つのアプローチは、１つまたは複数のフレームワーク残基を対応する生殖細胞系の配列に「復帰変異」させることである。より具体的には、体細胞変異を受けた抗体は、抗体が誘導される生殖細胞系の配列とは異なるフレームワーク残基を含有する可能性がある。このような残基は、抗体のフレームワーク配列を抗体が誘導される生殖細胞系の配列と比較することによって同定することができる。
【０１８５】
別のタイプのフレームワーク改変は、Ｔ細胞エピトープを除去することによって抗体の起こり得る免疫原性を低下させるために、フレームワーク領域内の１つもしくは複数の残基を変異させること、または１つもしくは複数のＣＤＲ領域内の１つもしくは複数の残基でさえも変異させることを含む。このアプローチは「脱免疫化（ｄｅｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」とも称され、米国特許公開第２００３０１５３０４３号でさらに詳細に説明されている。
【０１８６】
追加の抗体の改変
本発明の開示の抗体は、軽鎖または重鎖可変領域のいずれかにおいて１つまたは複数のグリコシル化部位を含有していてもよい。このようなグリコシル化部位は、抗体の免疫原性の増加または変更された抗原結合に起因する抗体のｐＫの変更を引き起こす可能性がある（Ｍａｒｓｈａｌｌら（１９７２年）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ４１巻：６７３〜７０２頁；ＧａｌａおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ（２００４年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７２巻：５４８９〜９４頁；Ｗａｌｌｉｃｋら（１９８８年）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １６８巻：１０９９〜１０９頁；Ｓｐｉｒｏ（２００２年）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １２巻：４３Ｒ〜５６Ｒ；Ｐａｒｅｋｈら（１９８５年）Ｎａｔｕｒｅ  ３１６巻：４５２〜７頁；Ｍｉｍｕｒａら（２０００年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３７巻：６９７〜７０６頁）。グリコシル化は、Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔ配列を含有するモチーフで起こることがすでに公知である。一部の場合において、可変領域のグリコシル化を含有しない抗エボラウイルス抗体を有することが好ましい。これは、可変領域にグリコシル化モチーフを含有しない抗体を選択すること、またはグリコシル化領域内の残基を変異させることのいずれかによって達成することができる。
【０１８７】
例えば、ある特定の実施態様では、抗体のグリコシル化が改変され、例えば、可変領域が、可変領域に存在する１つまたは複数のグリコシル化部位がなくなるように変更される。より特に、本発明の抗体の配列においてグリコシル化を受けやすい部位をなくすことが望ましい。これは、親の可変領域に生じる１つまたは複数のＮ−Ｘ−（Ｓ／Ｔ）配列（式中、Ｘはあらゆるアミノ酸残基である）の出現を、特にＮ残基および／またはＳもしくはＴ残基を置換することによって変更することにより達成される。一実施態様では、Ｔ９５は、Ｋ９５に変異されている。別の実施態様では、Ｎ４７は、Ｒ４７に変異されている。
【０１８８】
例えば、非グリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｌａｔｅｄ）（すなわち、グリコシル化を欠く）抗体を作製することができる。グリコシル化は、例えば、抗原への抗体の親和性を増加させるように変更することができる。このような炭水化物の改変は、例えば、抗体配列内の１つまたは複数のグリコシル化部位を変更することによって達成することができる。例えば、１つまたは複数の可変領域のフレームワークのグリコシル化部位を排除することをもたらす１つまたは複数のアミノ酸置換をなすことができ、それによってその部位におけるグリコシル化をなくす。このような非グリコシル化は、抗原への抗体の親和性を増加させる可能性がある。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号および同号６，３５０，８６１号を参照されたい。
【０１８９】
加えて、または代替として、抗体は、フコシル残基の量が低減された低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体またはバイセクト型ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体などの、グリコシル化が変更されたタイプを有し得る。このような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証されてきた。このような炭水化物の改変は、例えば、グリコシル化機構が変更された宿主細胞で抗体を発現することによって達成することができる。グリコシル化機構が変更された細胞は当該分野で説明されており、これらは、本発明の組換え抗体を発現させることによってグリコシル化が変更された抗体を産生するための宿主細胞として使用することができる。例えば、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９細胞株で発現される抗体がそれらの炭水化物上におけるフコースを欠くように、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８（α（１，６）−フコシルトランスフェラーゼ）を欠いている。２つの置換ベクターを使用したＣＨＯ／ＤＧ４４細胞におけるＦＵＴ８遺伝子の標的化破壊によって、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、およびＭｓ７０９ＦＵＴ８−／−細胞株が作製された（米国特許公開第２００４０１１０７０４号およびＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら（２００４年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ８７巻：６１４〜２２頁を参照）。別の例として、ＥＰ１，１７６，１９５は、機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株であって、このような細胞株で発現される抗体が、α−１，６結合に関連する酵素を低減するかまたは排除することによって低フコシル化を示すようにフコシルトランスフェラーゼをコードしている、細胞株を説明している。またＥＰ１，１７６，１９５は、抗体のＦｃ領域に結合するＮ−アセチルグルコサミンへのフコースの付加に関して低い酵素活性を有するかまたは酵素活性を有さない細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６６２）も説明している。ＰＣＴ公開公報ＷＯ０３／０３５８３５は、Ａｓｎ（２９７）が連結した炭水化物にフコースを付着させる能力が低減され、その結果としてその宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化ももたらされる、バリアントＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃ１３細胞を説明している（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００２年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７７巻：２６７３３〜２６７４０頁も参照）。改変されたグリコシル化プロファイルを有する抗体はまた、ＰＣＴ公開公報ＷＯ０６／０８９２３１で説明されるようにニワトリの卵で産生させることもできる。代替として、改変されたグリコシル化プロファイルを有する抗体は、植物細胞、例えばＬｅｍｎａで産生させることもできる。植物系で抗体を産生するための方法は、２００６年８月１１日に出願されたＡｌｓｔｏｎ＆Ｂｉｒｄ  ＬＬＰ代理人の整理番号０４０９８９／３１４９１１に対応する米国特許出願で開示されている。ＰＣＴ公開公報ＷＯ９９／５４３４２は、操作された細胞株で発現される抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらすバイセクト型ＧｌｃＮａｃ構造の増加を表すように、糖タンパク質を改変するグリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β��１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株を説明している（Ｕｍａｎａら（１９９９年）Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  １７巻：１７６〜１８０頁も参照）。代替として、抗体のフコース残基を、フコシダーゼ酵素を使用して切断して除去することができ、例えば、α−Ｌ−フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏら（１９７５年）Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １４巻：５５１６〜２３頁）。
【０１９０】
上記で説明したように産生された抗体の可変セグメント（例えば、キメラまたはヒト化抗体の重鎖および軽鎖可変領域）は、典型的には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ領域）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものに連結される。ヒト定常領域のＤＮＡ配列は、様々なヒト細胞から、ただし好ましくは不死化Ｂ細胞から、周知の手順に従って単離することができる（Ｋａｂａｔら、上記、およびＬｉｕら、ＷＯ８７／０２６７１を参照）（これらのそれぞれは、あらゆる目的のために参照によりその全体が開示に組み入れられる）。通常は、抗体は、軽鎖および重鎖定常領域の両方を含有する。重鎖定常領域は通常、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域を含む。本明細書に記載の抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥなどの全てのタイプの定常領域、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４などのあらゆるアイソタイプを有する抗体を含む。抗体（例えば、ヒト化抗体）が、細胞傷害活性を表すことが望ましい場合、定常ドメインは通常、補体を固定する定常ドメインであり、クラスは、典型的にはＩｇＧ１である。ヒトアイソタイプＩｇＧ１が好ましい。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであってもよい。ヒト化抗体は、１つより多くのクラスまたはアイソタイプからの配列を含んでいてもよい。抗体は、２つの軽鎖と２つの重鎖とを含有する四量体として、別々の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖとして、または重鎖および軽鎖可変ドメインがスペーサーを介して連結されている単鎖抗体として発現させてもよい。
【０１９１】
ある特定の実施態様では、抗体は、抗体の物理的安定性が改善されるように変異されている可変領域を含む。一実施態様では、抗体は、重鎖定常領域のヒンジ領域における２２８位に対応する位置にセリンからプロリンへの変異（Ｓ２２８Ｐ；ＥＵインデックス）を含むＩｇＧ４アイソタイプ抗体である。この変異は、ヒンジ領域において重鎖間のジスルフィド架橋の不均一性をなくすことが報告されている（Ａｎｇａｌら  上記；２４１位は、Ｋａｂａｔの番号付けシステムに基づく）。例えば、ある特定の実施態様では、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体は、上記のＡｎｇａｌらで説明されるように、２４１位に対応する位置におけるセリンがプロリンに変異したヒトＩｇＧ４の定常領域に連結した、本明細書に記載の抗体のいずれかの重鎖可変領域を含んでいてもよい。したがって、ヒトＩｇＧ４の定常領域に連結した重鎖可変領域の場合、この変異は、ＥＵインデックスによればＳ２２８Ｐ変異に相当する。
【０１９２】
ある特定の実施態様では、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域中のシステイン残基の数が変更される、例えば増加するかまたは減少するように改変される。このアプローチは、米国特許第５，６７７，４２５号でさらに説明されている。ＣＨ１のヒンジ領域中のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の組み立てを容易にするために、または抗体の安定性を増加もしくは減少させるために変更される。
【０１９３】
加えて、抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるために、ペグ化することができる。抗体をペグ化するために、典型的には、１つまたは複数のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着するようになる条件下で、抗体またはその断片を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、例えばＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体と反応させる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して行われる。用語「ポリエチレングリコール」は、本明細書で使用される場合、他のタンパク質を誘導体化するのに使用されてきたＰＥＧの形態のいずれか、例えば、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ−もしくはアリールオキシ−ポリエチレングリコール、またはポリエチレングリコール−マレイミドを包含することが意図される。ある特定の実施態様では、ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は当該分野において公知であり、本発明の抗体に適用することができる。例えば、ＥＰ０１５４３１６およびＥＰ０４０１３８４を参照されたい。
【０１９４】
組換え抗体の発現
キメラおよびヒト化抗体は、典型的には、組換え発現によって産生される。任意選択で定常領域に連結された、軽鎖および重鎖可変領域をコードする核酸を発現ベクターに挿入する。軽鎖および重鎖は、同一または異なる発現ベクターにおいてクローニングすることができる。免疫グロブリン鎖をコードするＤＮＡセグメントは、免疫グロブリンポリペプチドの発現を確実にする発現ベクター中の制御配列に作動可能に連結している。発現制御配列としては、これらに限定されないが、プロモーター（例えば、天然において関連するまたは異種プロモーター）、シグナル配列、エンハンサーエレメント、および転写終結配列が挙げられる。真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクターにおいて、発現制御配列は、好ましくは真核生物プロモーター系である。ベクターが適切な宿主に一旦取り込まれたなら、宿主は、高レベルのヌクレオチド配列発現、ならびに交差反応抗体の収集および精製に好適な条件下で維持される。
【０１９５】
これらの発現ベクターは、典型的には、宿主生物においてエピソームまたは宿主染色体のＤＮＡの統合部分のいずれかとして複製可能である。一般的に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換した細胞の検出が可能になるように、選択マーカー（例えば、アンピシリン耐性、ハイグロマイシン耐性、テトラサイクリン耐性、カナマイシン耐性またはネオマイシン耐性）を含有する（例えば、Ｉｔａｋｕｒａら、米国特許第４，７０４，３６２号を参照）。
【０１９６】
Ｅ．ｃｏｌｉは、本発明のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ配列）をクローニングするのに特に有用な原核生物宿主の１つである。使用に好適な他の微生物宿主としては、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓなどの杆菌、ならびにＳａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、および様々なＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種などの他の腸内細菌科が挙げられる。これらの原核生物宿主において、典型的には、宿主細胞に適合する発現制御配列（例えば、複製起点）を含有する発現ベクターを作製することもできる。加えて、ラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ベータ−ラクタマーゼプロモーター系、またはファージラムダ由来のプロモーター系などの多数の様々な周知のプロモーターも存在する。プロモーターは、典型的には、任意選択でオペレーター配列と共に発現を制御し、転写および翻訳を開始および完了させるためのリボソーム結合部位配列などを有する。酵母などの他の微生物も、発現に有用である。
【０１９７】
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓは、所望される発現制御配列（例えば、プロモーター）、複製起点、終結配列などを有する好適なベクターが用いられる好ましい酵母宿主である。典型的なプロモーターとしては、３−ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の糖分解酵素が挙げられる。誘導性酵母プロモーターとしては、なかでも、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソチトクロムＣ、ならびにマルトースおよびガラクトース利用に関与する酵素由来のプロモーターが挙げられる。
【０１９８】
微生物に加えて、哺乳動物組織の細胞培養物も、本発明のポリペプチド（例えば、免疫グロブリンまたはその断片をコードするポリヌクレオチド）を発現および産生するのに使用することができる。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ、Ｆｒｏｍ  Ｇｅｎｅｓ  ｔｏ  Ｃｌｏｎｅｓ、ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎ．Ｙ．、Ｎ．Ｙ．（１９８７年）を参照されたい。異種タンパク質（例えば、無傷の免疫グロブリン）を分泌することが可能な多数の好適な宿主細胞株が当該分野において開発されていることから、実際には真核細胞が好ましく、そのようなものとしては、ＣＨＯ細胞株、様々なＣｏｓ細胞株、ＨｅＬａ細胞、好ましくは、骨髄腫細胞株、または形質転換したＢ細胞もしくはハイブリドーマが挙げられる。好ましくは、細胞は、非ヒトである。これらの細胞のための発現ベクターは、発現制御配列、例えば複製起点、プロモーター、およびエンハンサー（Ｑｕｅｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｒｅｖ．  ８９巻：４９頁（１９８６年））、ならびに必要なプロセシング情報の部位、例えばリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写ターミネーター配列を含んでいてもよい。好ましい発現制御配列は、免疫グロブリン遺伝子、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、サイトメガロウイルス由来のプロモーターなどである。Ｃｏら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８巻：１１４９頁（１９９２年）を参照されたい。
【０１９９】
代替として、トランスジェニック動物のゲノムへの導入とそれに続くトランスジェニック動物の乳汁での発現のために、抗体−コード配列を導入遺伝子に取り込むことができる（例えば、Ｄｅｂｏｅｒら、米国特許第５，７４１，９５７号、Ｒｏｓｅｎ、米国特許第５，３０４，４８９号、およびＭｅａｄｅら、米国特許第５，８４９，９９２号を参照）。好適な導入遺伝子は、カゼインまたはベータラクトグロブリンなどの乳腺特異的遺伝子由来のプロモーターおよびエンハンサーと作動可能に連結されている軽鎖および／または重鎖のコード配列を含む。
【０２００】
目的のポリヌクレオチド配列（例えば、重鎖および軽鎖をコードする配列および発現制御配列）を含有するベクターは、細胞宿主のタイプに応じて様々な周知の方法によって宿主細胞に移入させることができる。例えば、原核細胞には、塩化カルシウムトランスフェクションが広く利用されており、それに対して他の細胞宿主には、リン酸カルシウム処理、エレクトロポレーション、リポフェクション、遺伝子銃またはウイルスベースのトランスフェクションが使用され得る。（一般的に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、第２版、１９８９年）を参照（あらゆる目的のためにその全体が参照により組み入れられる）。哺乳動物細胞を形質転換するのに使用される他の方法としては、ポリブレン、プロトプラスト融合、リポソーム、エレクトロポレーション、およびマイクロインジェクションの使用が挙げられる（一般的に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、上記を参照）。トランスジェニック動物の産生のために、導入遺伝子を受精した卵母細胞にマイクロインジェクションしてもよいし、または胚性幹細胞のゲノムに取り込ませてもよく、このような細胞の核を除核した卵母細胞に移入させてもよい。
【０２０１】
重鎖および軽鎖が別々の発現ベクターでクローニングされる場合、ベクターは、無傷の免疫グロブリンの発現および組み立てを達成するために共にトランスフェクトされる。本発明の抗体全体、その二量体、個々の軽鎖および重鎖、または他の免疫グロブリンの形態は、一旦発現されたら、硫酸アンモニウム沈殿、アフィニティーカラム、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ精製、ゲル電気泳動などの当該分野の標準的手順に従って精製することができる（一般的にＳｃｏｐｅｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．、（１９８２年）を参照）。少なくとも約９０から９５％の均一性を有する実質的に純粋な免疫グロブリンが好ましく、医薬品用途の場合は９８から９９％またはそれより高い均一性が最も好ましい。
【０２０２】
抗体断片
また抗体断片も、本発明の範囲内であると予期される。一実施態様では、非ヒトおよび／またはキメラ抗体の断片が提供される。別の実施態様では、ヒト化抗体の断片が提供される。典型的には、これらの断片は、少なくとも１０７、より典型的には１０８または１０９Ｍ−１の親和性での抗原への特異的な結合を示す。ヒト化抗体断片は、別々の重鎖、軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、およびＦｖを含む。断片は、組換えＤＮＡ技術によって、または無傷の免疫グロブリンの酵素または化学的分離によって産生される。
【０２０３】
抗体を特徴付けるためのアッセイ
本明細書に記載の抗体は、エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）への結合に関して、例えば標準的なＥＬＩＳＡによって試験することができる。簡単に言えば、マイクロタイタープレートを、ＰＢＳ中の１０〜２０μｇ／ｍｌの精製されたエボラウイルス（すなわち、Ｅｂｏｌａ  Ｚａｉｒｅ１９９５のビリオン）でコーティングし、次いでＰＢＳ中の５％乾燥脱脂乳でブロックする。洗浄後、０．０５ｍＬの精製されたｍＡｂを、抗原を含有するウェルに添加し、室温で２時間インキュベートした。ホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＡ＋ＩｇＧ＋ＩｇＭ二次抗体およびＡＢＴＳ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ａｎｄ  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、結合したｍＡｂを検出した。
【０２０４】
上述したようなＥＬＩＳＡアッセイは、抗体、したがってエボラウイルスＧＰとの陽性の反応性を示す抗体を産生するハイブリドーマに関してスクリーニングするのに使用することができる。次いで、エボラウイルスＧＰに好ましくは高親和性で結合する抗体を産生するハイブリドーマをサブクローニングして、さらに特徴付けることができる。次いで、親細胞の反応性を保持する（ＥＬＩＳＡにより）各ハイブリドーマからの１つのクローンを、細胞バンクを作製するため、および抗体精製のために、選択することができる。
【０２０５】
フレームワークの変異が本明細書で開示された抗ＧＰ抗体のＧＰに結合する能力に影響を与えないことを確認するために、上述したＥＬＩＳＡアッセイも使用することができる。
【０２０６】
抗エボラウイルスＧＰ抗体を精製するために、選択されたハイブリドーマは、モノクローナル抗体精製のための２リットルのスピナーフラスコで成長させることができる。プロテインＡ−セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いたアフィニティークロマトグラフィーの前に、上清を濾過して濃縮してもよい。溶出したＩｇＧをゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィーでチェックして、純度を確実にすることができる。緩衝溶液をＰＢＳに交換してもよく、濃度は、１．４３の吸光率を使用してＯＤ２８０により決定してもよい。モノクローナル抗体をアリコートにして、−８０℃で貯蔵することができる。
【０２０７】
選択された抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体が固有のエピトープに結合するかどうかを決定するために、市販の試薬（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使用して各抗体をビオチン化することができる。ビオチン化ＭＡｂの結合は、ストレプトアビジン標識プローブで検出することができる。非標識モノクローナル抗体およびビオチン化モノクローナル抗体を使用した競合研究は、上述したようにしてエボラウイルスＧＰがコーティングされたＥＬＩＳＡプレートを使用して実行することができる。
【０２０８】
精製された抗体のアイソタイプを決定するために、アイソタイプＥＬＩＳＡは、特定のアイソタイプの抗体に特異的な試薬を使用して実行することができる。例えば、プレートを抗ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ重鎖に特異的な抗体（１００ｎｇ／ウェル）でコーティングして、ハイブリドーマ培養上清と共にインキュベートする。ｍＡｂのサブタイプは、アルカリホスファターゼにコンジュゲートした、抗ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＭ、またはＩｇＡ重鎖に特異的な抗体を使用することによって検出される。
【０２０９】
抗エボラウイルスＧＰ抗体は、エボラウイルスＧＰ抗原との反応性についてウェスタンブロッティングによってさらに試験することができる。簡単に言えば、非標識のＥｂｏｌａ  Ｚａｉｒｅ１９９５のビリオンタンパク質を１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミド（ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｎｄｅ）ゲル上で分解し、ＰＶＤＦ膜に移す。０．０２％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳ中の乾燥脱脂乳を使用して非特異的な結合部位をブロックした後、精製されたｍＡｂ（１０ｕｇ／ｍｌ）を室温で１時間にわたり膜に添加する。次いで膜をホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＡ＋ＩｇＧ＋ＩｇＭ二次抗体と共に１時間インキュベートして、ＥＣＬ化学発光キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用して展開する。
【０２１０】
様々な抗エボラウイルスＧＰ抗体の結合親和性、交差反応性、および結合動態を分析するための方法としては、当該分野において公知の標準的なアッセイ、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）２０００ＳＰＲ機器（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を使用するＢｉａｃｏｒｅ（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析が挙げられる。
【０２１１】
本明細書に記載のｍＡｂの中和を決定するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのプラーク減少中和アッセイを実行することができる。簡単に言えば、プラークアッセイは、コンフルエントなＶｅｒｏ−Ｅ６細胞を使用してなされる。ｍＡｂの４倍連続希釈液を、１００ｐｆｕのマウス適合化エボラウイルスと３７℃で１時間混合する。ある特定の実施態様では、エボラウイルスは、Ｍａｙｉｎｇａ１９７６株である。ある特定の実施態様では、エボラウイルスは、Ｋｉｋｗｉｔ１９９５株である。ある特定の実施態様では、エボラウイルスは、Ｍａｋｏｎａ２０１４株である。細胞をアガロースのオーバーレイで覆い、６日後にＰＢＳまたはアガロース中の５％ニュートラルレッド溶液を含有する第２のオーバーレイを追加する。翌日プラークを計数し、終点の力価は、プラークの数がｍＡｂとインキュベートされなかった細胞の８０％だけ低減したｍＡｂの最後の希釈率であると決定される。
【０２１２】
本発明の一部の態様は、ザイールエボラウイルスに対する中和活性を有するモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。一態様では、本発明は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、５０ｕｇ／ｍＬでエボラウイルスを中和するモノクローナル抗体に関する。別の態様では、本発明は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、５０μｇ／ｍＬ未満でエボラウイルスを中和するモノクローナル抗体に関する。本発明の別の態様は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、２０μｇ／ｍＬ未満でエボラウイルスを中和するモノクローナル抗体に関する。本発明の別の態様は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、１０μｇ／ｍＬ未満でエボラウイルスを中和するモノクローナル抗体に関する。本発明の別の態様は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、５μｇ／ｍＬ未満でエボラウイルスを中和するモノクローナル抗体に関する。本発明の別の態様は、プラーク減少中和アッセイによって測定した場合、１〜５または２〜４μｇ／ｍＬでエボラウイルスを中和するモノクローナル抗体に関する。
【０２１３】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける本明細書に記載のｍＡｂの能力を決定するために、ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７ＢＬ／６マウスが使用される。防止的な利益を決定するために、精製されたｍＡｂまたはｍＡｂの組合せの注射から２４時間後に、マウスをマウス適合化Ｅｂｏｌａ  Ｚａｉｒｅウイルスで攻撃する。本明細書に記載のｍＡｂの治療的な利益を決定するために、Ｅｂｏｌａ  Ｚａｉｒｅウイルスでの攻撃の１、２または３日後にｍＡｂを注射する。感染後２８日間、動物を罹患率および死亡率に関してモニターする。
【０２１４】
競合結合抗体
ある特定の実施態様では、本発明の抗体は、エボラウイルスＧＰへの結合に関して、本明細書に記載の特定の抗ＧＰ抗体と競合する（例えば、交差競合する）。このような競合する抗体は、標準的なエボラウイルスＧＰ結合アッセイにおいて本明細書に記載のｍＡｂの１つまたは複数のエボラウイルスＧＰへの結合を競合的に阻害するその能力に基づいて同定することができる。例えば、標準的なＥＬＩＳＡアッセイを使用することができ、このようなアッセイにおいて、組換えエボラウイルスＧＰがプレート上に固定され、抗体の１つが蛍光標識され、標識された抗体の結合を競合的に分離する（ｃｏｍｐｅｔｅ  ｏｆｆ）非標識抗体の能力が評価される。加えて、または代替として、交差競合する抗体の能力を評価するために、ＢＩＡｃｏｒｅ分析を使用することができる。本発明の抗ＧＰ抗体のエボラウイルスＧＰへの結合を阻害する試験抗体の能力は、試験抗体がエボラウイルスＧＰへの結合に関して抗体と競合できることを実証する。
【０２１５】
ある特定の実施態様では、競合する抗体は、本明細書に記載の特定の抗ＧＰモノクローナル抗体と同じエボラウイルスＧＰ上のエピトープに結合する抗体である。抗体が参照抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、標準的なエピトープマッピング技術、例えばＸ線結晶学および２次元核磁気共鳴を使用することができる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、６６巻、Ｇ．  Ｅ．  Ｍｏｒｒｉｓ編（１９９６年）を参照）。
【０２１６】
ある特定の実施態様では、エボラウイルスＧＰへの結合に関して競合する、および／またはエボラウイルスＧＰ上の同じエピトープに結合する抗体は、ヒト化抗体である。
【０２１７】
本明細書に記載の所望の特性を有する単一の原型（ａｒｃｈｔｙｐａｌ）の抗ＧＰ  ｍＡｂが単離されたら、当該分野で公知の方法を使用することによって、類似の特性を有する、例えば同じエピトープを有する他のｍＡｂを生成することは簡単である。例えば、本明細書に記載されるエボラウイルスでマウスを免疫化し、ハイブリドーマを産生し、結果得られたｍＡｂを、エボラウイルスＧＰへの結合に関して原型のｍＡｂと競合する能力についてスクリーニングしてもよい。またマウスは、原型のｍＡｂが結合するエピトープを含有するより小さいエボラウイルスＧＰの断片で免疫化してもよい。例えば、エボラウイルスＧＰにわたる一連の重複するペプチドへの結合に関してスクリーニングすることによって、エピトープの場所を突き止めることができる。代替として、原型のｍＡｂと同じエピトープ、それゆえにそれと類似の特性を有するｍＡｂの選択をガイドするために、Ｊｅｓｐｅｒｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２巻：８９９号、１９９４年の方法を使用してもよい。ファージディスプレイを使用して、まず原型の抗体の重鎖を（好ましくはヒト）軽鎖のレパートリーと対合させ、エボラウイルスＧＰと結合するｍＡｂを選択し、次いで新しい軽鎖を（好ましくはヒト）重鎖のレパートリーと対合させ、原型のｍＡｂと同じエピトープを有する（好ましくはヒト）エボラウイルスＧＰと結合するｍＡｂを選択する。代替として、原型のｍＡｂのバリアントは、抗体の重鎖および軽鎖をコードするｃＤＮＡの変異誘発により得ることができる。
【０２１８】
エピトープマッピングは、例えば、Ｃｈａｍｐｅら（１９９５年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０巻：１３８８〜１３９４頁で説明されるように、抗体が目的のエピトープと結合するかどうかを決定するために実行することができる。ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４巻：１０８１〜１０８５頁によって説明されるような「アラニンスキャニング変異誘発」、またはヒトエボラウイルスＧＰにおけるアミノ酸残基の点変異誘発の一部の他の形態も、本発明の抗ＧＰ抗体の機能的なエピトープを決定するために使用することができる。しかしながら、変異誘発研究はまた、エボラウイルスＧＰの全体的な３次元構造にとって重要であるが抗体−抗原の接触に直接関与しないアミノ酸残基を解明する可能性もあるため、この方法を使用して決定された機能的なエピトープを確認するために、他の方法が必要になり得る。
【０２１９】
また特異的な抗体と結合するエピトープは、エボラウイルスＧＰの断片を含むペプチドへの抗体の結合を評価することによって決定してもよい。エボラウイルスＧＰの配列を包含する一連の重複するペプチドを合成し、例えば直接ＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ（この場合、マイクロタイタープレートのウェルに結合したエボラウイルスＧＰへの抗体の結合を予防するその能力に関して、ペプチドが評価される）で、またはチップ上で、結合に関してスクリーニングすることができる。このようなペプチドスクリーニング方法は、一部の不連続の機能的なエピトープ、すなわちエボラウイルスＧＰポリペプチド鎖の一次配列に沿って隣接していないアミノ酸残基を含む機能的なエピトープを検出することができない場合がある。
【０２２０】
また本発明の抗体と結合するエピトープは、構造的な方法、例えばＸ線結晶構造決定（例えば、ＷＯ２００５／０４４８５３）、分子モデリングおよび核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、例えば遊離の場合、および目的の抗体との複合体において結合している場合のエボラウイルスＧＰ中の不安定なアミド水素のＨ−Ｄ交換速度のＮＭＲ決定などによって決定してもよい（Ｚｉｎｎ−Ｊｕｓｔｉｎら（１９９２年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３１巻、１１３３５〜１１３４７頁；Ｚｉｎｎ−Ｊｕｓｔｉｎら（１９９３年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３２巻、６８８４〜６８９１頁）。
【０２２１】
Ｘ線結晶学に関して、結晶化は、当該分野において公知の方法（例えばＧｉｅｇｅら（１９９４年）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．  Ｄ５０巻：３３９〜３５０頁；ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ（１９９０年）Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １８９巻：１〜２３頁）のいずれか、例えば、マイクロバッチ（例えばＣｈａｙｅｎ（１９９７年）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５巻：１２６９〜１２７４頁）、ハンギングドロップ蒸気拡散（例えばＭｃＰｈｅｒｓｏｎ（１９７６年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２５１巻：６３００〜６３０３頁）、シーディングおよび透析などを使用して達成することができる。少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、好ましくは約１０ｍｇ／ｍＬから約２０ｍｇ／ｍＬの濃度を有するタンパク質調製物を使用することが望ましい。結晶化は、ポリエチレングリコール１０００〜２０，０００（ＰＥＧ；平均分子量は約１０００から約２０，０００Ｄａの範囲）、好ましくは約５０００から約７０００Ｄａ、より好ましくは約６０００Ｄａを約１０％から約３０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で含有する沈殿剤溶液中で最もよく達成することができる。また、タンパク質安定化剤、例えばグリセロールを約０．５％から約２０％の範囲の濃度で含むことも望ましい場合がある。塩化ナトリウム、塩化リチウムまたはクエン酸ナトリウムなどの好適な塩も、沈殿剤溶液中において、好ましくは約１ｍＭから約１０００ｍＭの範囲の濃度で、望ましい場合がある。沈殿剤は、好ましくは約３．０から約５．０、好ましくは約４．０のｐＨに緩衝化される。沈殿剤溶液中で有用な特定の緩衝液は様々で有り得、当該分野において周知である（Ｓｃｏｐｅｓ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、第３版、（１９９４年）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）。有用な緩衝液の例としては、これらに限定されないが、ＨＥＰＥＳ、トリス、ＭＥＳおよび酢酸塩が挙げられる。結晶は、２℃、４℃、８℃および２６℃などの様々な温度で成長させることができる。
【０２２２】
抗体：抗原の結晶は、周知のＸ線回折技術を使用して研究することができ、これらの開示が参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、１９９２年、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．により配信；例えばＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９８５年）Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  １１４巻および１１５巻、Ｈ．  Ｗ．  Ｗｙｃｋｏｆｆら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）；米国特許出願公開第２００４／００１４１９４号を参照）、およびＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ（１９９３年）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．  Ｄ４９巻：３７〜６０頁；Ｂｒｉｃｏｇｎｅ（１９９７年）Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  ２７６Ａ巻：３６１〜４２３頁、ＣａｒｔｅｒおよびＳｗｅｅｔ編；Ｒｏｖｅｒｓｉら（２０００年）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔ．  Ｄ５６巻：１３１３〜１３２３頁）などのコンピューターソフトウェアを使用して精緻化することができる。
【０２２３】
抗体競合アッセイは、本明細書に記載される場合、抗体が別の抗体と「同じエピトープに結合する」かどうかを決定するために使用することができる。典型的には、エピトープと相互作用することが公知の抗体が、第２の抗体と、第２の抗体が過剰であり第１の抗体が全ての部位を飽和させる条件下で、５０％またはそれより多く、６０％またはそれより多く、７０％またはそれより多く、例えば７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多く競合することが、抗体が「同じエピトープに結合する」ことを示す。２つの抗体間の競合のレベルを評価するために、例えば、ラジオイムノアッセイまたは抗体のための他の標識を使用するアッセイを使用することができる。例えば、エボラウイルスＧＰ抗原は、標識された化合物（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、ビオチン、またはルビジウム）にコンジュゲートした飽和量の第１の抗ＧＰ抗体またはその抗原結合性断片と、同じ量の第２の非標識抗ＧＰ抗体の存在下でインキュベートすることができる。次いで非標識ブロッキング抗体の存在下で抗原に結合する標識された抗体の量を評価し、非標識ブロッキング抗体の非存在下における結合と比較する。競合は、ブロッキング抗体の非存在と比較した、非標識ブロッキング抗体の存在下における結合シグナルのパーセンテージの変化によって決定される。したがって、ブロッキング抗体の非存在下における結合と比較してブロッキング抗体の存在下において標識された抗体の結合の５０％の阻害がある場合、２つの抗体間の５０％の競合がある。したがって、５０％またはそれより多く、６０％またはそれより多く、７０％またはそれより多く、例えば７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多くの第１および第２の抗体間の競合への言及は、第１の抗体が抗原への第２の抗体の結合を、５０％、６０％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多く（第１の抗体の非存在下における第２の抗体による抗原の結合と比較して）阻害する（または逆もまた同様）ことを意味する。したがって、５０％、６０％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれより多くの、第２の抗体による抗原への第１の抗体の結合の阻害は、２つの抗体が同じエピトープに結合することを示す。
【０２２４】
動物モデルでの治療効能に関する抗体の試験
動物モデルは、エボラウイルスＧＰに対する抗体の治療効能を試験するのに有効である。ある特定の実施態様では、エボラ感染にげっ歯類（すなわち、マウス）を使用することができる。簡単に言えば、成体マウスの５０％に致死的な用量のおよそ３００倍を腹腔内に接種することにより、マウス適合化エボラウイルス株（例えば、Ｅｂｏｌａ  Ｚａｉｒｅ１９７６）でマウスを攻撃する。ある特定の実施態様では、エボラ感染にモルモットを使用することができる。モルモットは、モルモット適合化ウイルスで攻撃される。加えて、ある特定の実施態様では、非ヒト霊長類を、以下の実施例で説明されるように感染の動物モデルとして使用する。全ての動物モデルにおいて、治療効能に関して試験するために、抗体は、感染の２４または４８時間後に投与することができる。
【０２２５】
免疫毒素、イムノコンジュゲートおよび抗体誘導体
別の実施態様では、本発明の抗体は、細胞毒素、薬物または放射性同位体などの治療成分に連結される。細胞毒素にコンジュゲートされる場合、これらの抗体コンジュゲートは「免疫毒素」と称される。細胞毒素または細胞傷害性作用物質としては、細胞に有害な（例えば、細胞を殺す）あらゆる薬剤が挙げられる。
【０２２６】
このような治療成分を抗体にコンジュゲートするための技術は当該分野において周知である。
【０２２７】
免疫毒素の毒素要素は、例えば、化学療法剤、細菌、真菌、植物または動物起源の酵素的に活性な毒素などの毒素、またはそれらの断片、または小分子毒素であり得る。
【０２２８】
使用することができる追加の毒素およびその断片としては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性の活性断片、コレラ毒素、ボツリヌス毒素、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、アルファ−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ダイアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヤマゴボウ（ｐｈｙｔｏｌａｃａ）Ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害物質、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、Ｓａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害物質、ゲロニン、サポリン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテシン（ｔｒｉｃｏｔｈｃｅｎｅ）が挙げられる。小分子毒素としては、例えば、カリケアマイシン、メイタンシノイド、パリトキシンおよびＣＣ１０６５が挙げられる。
【０２２９】
また本発明の抗体は、試料の試験およびｉｎ  ｖｉｖｏでのイメージングなどの診断目的で使用することもでき、この目的のために、抗体（またはその結合断片）を適切な検出可能な薬剤にコンジュゲートさせて、イムノコンジュゲートを形成することができる。診断目的で、適切な薬剤は、全身イメージングのためには放射性同位体を含む検出可能な標識であり、試料の試験のためには放射性同位体、酵素、蛍光標識および他の好適な抗体タグである。
【０２３０】
エボラウイルスＧＰ検出のために、検出可能な標識は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの診断法の分野において現在使用される様々なタイプのいずれであってもよく、このようなものとしては、コロイド金などの金属ゾルなどの微粒子標識、Ｎ２Ｓ２、Ｎ３ＳまたはＮ４タイプのペプチドキレート剤での場合に提示されるＩ１２５またはＴｃ９９などの同位体、蛍光マーカー、発光マーカー、リン光性マーカーなどの発色団、加えて、所与の基質を検出可能なマーカーに変換する酵素標識、および例えばポリメラーゼ連鎖反応による増幅後に顕示化されるポリヌクレオチドタグが挙げられる。好適な酵素標識としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼなどが挙げられる。例えば、標識は、酵素アルカリホスファターゼであってもよく、これは、１，２ジオキセタン基質、例えばアダマンチルメトキシホスホリルオキシフェニルジオキセタン（ＡＭＰＰＤ）、３−（４−（メトキシスピロ｛１，２−ジオキセタン−３，２’−（５’−クロロ）トリシクロ｛３．３．１．１  ３，７｝デカン｝−４−イル）フェニルリン酸二ナトリウム（ＣＳＰＤ）、加えてＣＤＰおよびＣＤＰ−ｓｔａｒ（登録商標）、または当業者に周知の他の発光基質、例えばテルビウム（ＩＩＩ）およびユーロピウム（ＩＩＩ）などの好適なランタニドのキレートの変換後に化学発光の存在または形成を測定することによって検出される。検出手段は、選択された標識によって決定される。標識またはその反応生成物の出現は、標識が微粒子であり適切なレベルに累積するような場合では肉眼を使用して達成してもよいし、または分光光度計、ルミノメーター、蛍光分光計など機器を全て標準的な実施に従って使用して達成してもよい。
【０２３１】
ある特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、当該分野において公知であり容易に入手可能な追加の非タンパク質様成分を含有するようにさらに改変されていてもよい。抗体の誘導体化に好適な成分としては、これらに限定されないが、水溶性ポリマーが挙げられる。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、これらに限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性のために製造において利点を有し得る。ポリマーは、あらゆる分子量を有していてもよく、分岐状または非分岐状であり得る。抗体に付着したポリマーの数は様々であってもよく、１つより多くのポリマーが付着している場合、それらは同一または異なる分子であり得る。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／またはタイプは、これらに限定されないが、改善しようとする抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下での療法に使用されるのかどうかなどの検討事項に基づいて決定することができる。
【０２３２】
組成物
ある特定の実施態様では、本発明は、組成物、例えば、担体（例えば、薬学的に許容される担体）と共に製剤化された１つまたは複数の本明細書に記載のモノクローナル抗体を含有する組成物を提供する。一実施態様では、組成物は、複数の（例えば、２またはそれより多くの）本発明の単離された抗体の組合せを含む。好ましくは、組成物の抗体のそれぞれは、エボラウイルスＧＰの別個の予め選択されたエピトープに結合する。
【０２３３】
また本発明の医薬組成物は、併用療法で、すなわち他の薬剤と組み合わせて投与することもできる。例えば、併用療法は、少なくとも１つまたは複数の追加の治療剤と共に本発明の組成物を含んでいてもよい。また他の抗体との共投与も、本発明に包含される。
【０２３４】
本明細書で使用される場合、用語「担体」および「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含む。好ましくは、担体は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄または表皮投与（例えば、注射または注入による）に好適である。投与経路に応じて、活性化合物、例えば抗体は、化合物を不活性化する可能性がある酸および他の天然条件の作用から化合物を保護するための材料でコーティングされていてもよい。
【０２３５】
「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物活性を保持し、いかなる望ましくない毒物学的影響も付与しない塩を指す（例えば、Ｂｅｒｇｅ，  Ｓ．Ｍ．ら（１９７７年）Ｊ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．  ６６巻：１〜１９頁を参照）。このような塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸（ｈｙｄｒｏｉｏｄｉｃ  ａｃｉｄ）、亜リン酸などの非毒性の無機酸由来のもの、加えて脂肪族モノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性の有機酸由来のものが挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属由来のもの、加えてＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性の有機アミン由来のものが挙げられる。
【０２３６】
本発明の組成物は、当該分野において公知の様々な方法によって投与することができる。当業者であれば認識しているように、投与の経路および／または様式は、所望の結果に応じて変更される。活性化合物は、急速な放出から化合物を保護する担体、例えばインプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化された送達系などの制御放出製剤を用いて調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性の生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤を調製するための多くの方法が特許化されているかまたは一般的に当業者に公知である。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．Ｒ．  Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９７８年を参照されたい。
【０２３７】
ある特定の投与経路によって本発明の化合物を投与するために、その不活性化を予防する材料で化合物をコーティングするか、または化合物をそのような材料と共投与（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）することが必要になる場合がある。例えば、化合物は、適切な担体、例えばリポソームまたは希釈剤中で被験体に投与されてもよい。許容できる希釈剤としては、食塩水および水性緩衝溶液が挙げられる。リポソームとしては、水中油中水型ＣＧＦエマルジョンに加えて従来のリポソームが挙げられる（Ｓｔｒｅｊａｎら（１９８４年）Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．  ７巻：２７号）。
【０２３８】
担体としては、滅菌注射用溶液または分散物を即時調製するための、滅菌水溶液または分散物および滅菌粉末が挙げられる。医薬活性物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野において公知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と適合しない場合を除き、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が予期される。補助的な活性化合物も、組成物に取り込むことができる。
【０２３９】
治療用組成物は、典型的には、製造および貯蔵条件下で滅菌されており、安定でなければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、リポソーム、または高い薬物濃度に好適な他の規則正しい構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物を含有する溶媒または分散媒であり得る。適した流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散物の場合では必要な粒度の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合において、組成物中に、等張剤、例えば糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の持効性吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含ませることによってもたらすことができる。
【０２４０】
滅菌注射用溶液は、適切な溶媒中に、必要に応じて上記で列挙された成分の１つまたは組合せと共に活性化合物を必要な量で取り込ませ、それに続いて滅菌精密濾過することによって調製することができる。一般的に、分散物は、ベースの分散媒および上記で列挙されたものからの必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに活性化合物を取り込むことによって調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉末の場合では、好ましい調製方法は、活性成分に加えてあらゆる追加の所望の成分の粉末を前もって滅菌濾過したそれらの溶液から生じる真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
【０２４１】
投薬レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）が提供されるように調整される。例えば、単回のボーラスが投与されてもよいし、数回分の分割用量が時間をわたり投与されてもよいし、または治療状況の緊急性により示されるように必要に応じて用量を比例的に低減または増加させてもよい。例えば、本発明の抗体は、皮下もしくは筋肉内注射によって毎週１回もしくは２回、または皮下もしくは筋肉内注射によって毎月１回もしくは２回投与されてもよい。
【０２４２】
投与のしやすさおよび投薬量の均一性のために、非経口用組成物を投薬単位形態で製剤化することが特に有利である。投薬単位形態は、本明細書で使用される場合、処置される被験体への一体的な投薬量として適した物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果が生じるように計算された、予め決定された量の活性化合物を含有する。本発明の投薬単位形態に関する仕様は、（ａ）活性化合物の固有の特徴および達成しようとする特定の治療効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の処置に関してこのような活性化合物を調合する分野における固有の制限によって決定され、これらに直接依存する。
【０２４３】
薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えばパルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファ−トコフェロールなど；および（３）金属キレート剤、例えばクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸などが挙げられる。
【０２４４】
治療用組成物の場合、本発明の製剤としては、経口、鼻、局所（頬側および舌下など）、直腸、膣および／または非経口投与に好適なものが挙げられる。製剤は、都合よく単位剤形で提示されてもよく、薬学分野において公知のあらゆる方法によって調製されてもよい。単一の剤形を生産するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、処置される被験体および特定の投与様式に応じて変更される。単一の剤形を生産するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、一般的に、治療効果をもたらす組成物の量である。一般的に、この量は、１００パーセントのうち、約０．００１パーセントから約９０パーセントの活性成分、好ましくは約０．００５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約０．０１パーセントから約３０パーセントの範囲である。
【０２４５】
膣投与に好適な本発明の製剤としては、適切であることが当該分野において公知の担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡沫またはスプレー製剤も挙げられる。本発明の組成物の局所または経皮投与のための剤形としては、散剤、スプレー剤、軟膏、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、液剤、パッチおよび吸入剤が挙げられる。活性化合物は、滅菌条件下で、薬学的に許容される担体と共に、さらに必要な可能性があるあらゆる保存剤、緩衝液、または噴霧体と共に混合されてもよい。
【０２４６】
句「非経口投与」および「非経口投与される」は、本明細書で使用される場合、通常注射による、経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、このようなものとしては、これらに限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入が挙げられる。
【０２４７】
本発明の医薬組成物で採用される可能性がある好適な水性および非水性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混合物、植物油、例えばオリーブ油、ならびに注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルが挙げられる。適した流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用、分散物の場合では必要な粒度の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。
【０２４８】
これらの組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などのアジュバントを含有していてもよい。微生物の存在の予防は、上記の滅菌手順と、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などの包含との両方によって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含ませることも望ましい場合がある。加えて、注射可能な医薬形態の持効性吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含ませることによってもたらされ得る。
【０２４９】
本発明の化合物がヒトおよび動物に医薬品として投与される場合、これらは、単独で、または薬学的に許容される担体と組み合わせて、例えば０．００１から９０％（より好ましくは、０．００５から７０％、例えば０．０１から３０％）の活性成分を含有する医薬組成物として与えることができる。
【０２５０】
選択された投与経路に関係なく、好適な水和物の形態で使用することができる本発明の化合物、および／または本発明の医薬組成物は、当業者に公知の従来の方法によって薬学的に許容される剤形に製剤化される。
【０２５１】
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬レベルは、患者にとって毒性にならずに、特定の患者、組成物、および投与様式について所望の治療応答を達成するのに有効な活性成分の量が達成されるように変更することができる。選択された投薬レベルは、様々な薬物動態学的な要因、例えば、採用される本発明の特定の組成物またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、投与経路、投与時間、採用される特定の化合物の排出速度、処置の持続時間、採用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または材料、処置される患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康状態および以前の病歴、ならびに医療分野において周知の類似の要因に依存する。当該分野における通常の技術を有する医師または獣医師は、必要な有効量の医薬組成物を容易に決定して、処方することができる。例えば、医師または獣医師は、所望の治療効果を達成するために必要なレベルより低いレベルで医薬組成物で用いられる本発明の化合物の用量を開始して、所望の効果が達成されるまで投薬量を徐々に増加させることができる。一般的に、本発明の組成物の好適な１日用量は、治療効果をもたらすのに有効な最も低い用量である化合物の量である。このような有効用量は、一般的に、上述した要因によって決まると予想される。投与は、好ましくは静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下であり、好ましくは標的部位の近位に投与される。必要に応じて、治療用組成物の有効な１日用量は、一日にわたり適切な間隔で、任意選択で単位剤形により別々に投与される２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれより多くの部分用量（ｓｕｂ−ｄｏｓｅ）として投与されてもよい。本発明の化合物は単独で投与することが可能であるが、化合物を医薬製剤（組成物）として投与することが好ましい。
【０２５２】
治療用組成物は、当該分野において公知の医療用デバイスを用いて投与することができる。例えば、ある特定の実施態様では、本発明の治療用組成物は、無針の皮下注射デバイス、例えば米国特許第５，３９９，１６３号、同第５，３８３，８５１号、同第５，３１２，３３５号、同第５，０６４，４１３号、同第４，９４１，８８０号、同第４，７９０，８２４号、または同第４，５９６，５５６号で開示されたデバイスを用いて投与することができる。本発明において有用な周知のインプラントおよびモジュールの例としては、制御された速度で薬物を投薬するための埋め込み型マイクロ注入ポンプを開示する米国特許第４，４８７，６０３号；皮膚を介して医薬を投与するための治療デバイスを開示する米国特許第４，４８６，１９４号；正確な注入速度で薬物を送達するための薬物適用注入ポンプを開示する米国特許第４，４４７，２３３号；連続的な薬物送達のための可変流量埋め込み型注入装置を開示する米国特許第４，４４７，２２４号；マルチチャンバー区画を有する浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４，４３９，１９６号；および浸透圧薬物送達システムを開示する米国特許第４，４７５，１９６号が挙げられる。他の多くのこのようなインプラント、送達システム、およびモジュールは、当業者に公知である。
【０２５３】
ある特定の実施態様では、本発明の抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏで適した分配を確実にするように製剤化することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高度に親水性の化合物を排除する。本発明の治療化合物がＢＢＢを横切ることを確実にするために（必要に応じて）、それらを例えばリポソーム中に製剤化することができる。リポソームを製造する方法に関して、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号；同第５，３７４，５４８号；および同第５，３９９，３３１号を参照されたい。リポソームは、特定の細胞または臓器に選択的に輸送される１つまたは複数の成分を含み、したがって標的化された薬物送達を強化することができる（例えば、Ｖ．Ｖ．  Ｒａｎａｄｅ（１９８９年）Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２９巻：６８５頁を参照）。例示的な標的化成分としては、葉酸塩またはビオチン（例えば、Ｌｏｗらの米国特許第５，４１６，０１６号を参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａら、（１９８８年）Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １５３巻：１０３８頁）；抗体（Ｐ．Ｇ．  Ｂｌｏｅｍａｎら（１９９５年）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３５７巻：１４０頁；Ｍ．  Ｏｗａｉｓら（１９９５年）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  ３９巻：１８０頁）；サーファクタントタンパク質Ａ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅら（１９９５年）Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １２３３巻：１３４頁）であって、その様々な種が、本発明の製剤に加えて発明された分子の成分を含み得る、受容体；ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒら（１９９４年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６９巻：９０９０頁）が挙げられ、さらに、Ｋ．  Ｋｅｉｎａｎｅｎ；Ｍ．Ｌ．  Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４年）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３４６巻：１２３頁；Ｊ．Ｊ．  Ｋｉｌｌｉｏｎ；Ｉ．Ｊ．  Ｆｉｄｌｅｒ  （１９９４年）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４巻：２７３頁も参照されたい。本発明の一実施態様では、本発明の治療化合物は、リポソーム中に製剤化され、ある特定の実施態様では、リポソームは、標的化成分を含む。ある特定の実施態様では、リポソーム中の治療化合物は、腫瘍または感染の近位の部位にボーラス注射によって送達される。組成物は、容易な注入性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流体でなければならない。これは、製造および貯蔵条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。
【０２５４】
組成物は、滅菌されており、シリンジによって組成物を送達できる程度に流体でなければならない。水に加えて、担体は、等張緩衝食塩溶液、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｙｌｅｎｅ）グリコールなど）、およびそれらの好適な混合物であり得る。適した流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散物の場合では必要な粒度の維持、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合において、組成物中に、等張剤、例えば糖、マンニトールまたはソルビトールなどの多価アルコール、および塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の長期吸収は、組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムまたはゼラチンを含ませることによってもたらされ得る。
【０２５５】
活性化合物が好適に保護される場合、上述したように、化合物は、例えば、不活性希釈剤または同化可能な食用担体と共に経口投与されてもよい。
【０２５６】
本発明の使用および方法
ある特定の実施態様では、本発明の抗体、二重特異性分子、および組成物は、被験体においてエボラウイルス感染を処置および／または予防する（例えば、それに対して免疫化する）のに使用することができる。他の態様では、本発明の抗体および組成物は、試料中でエボラウイルス感染を検出するのに使用することができる。
【０２５７】
療法で使用するために、本発明の抗体は、単独かまたは免疫賦活剤（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔ）などの他の療法と共にのいずれかで、直接（すなわち、ｉｎ  ｖｉｖｏで）被験体に投与できる。全ての場合において、抗体、組成物、ならびに免疫賦活剤および他の療法は、それらの所望の治療効果を発揮する有効量で投与される。用語「有効量」は、所望の生物学的な効果を実現するのに必要または十分な量を指す。当業者は、過度の実験を要せずに、経験的に特定の分子の有効量を決定することができる。
【０２５８】
加えて、ある特定の実施態様では、これらの最適化された抗体は、ＵＳ６，６３０，１４４、Ｏｌｉｎｇｅｒら、ＰＮＡＳ  ２０１２年；１０９巻、１８０３０〜１８０３５頁、およびＰｅｔｔｉｔｔら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１３年；５巻、１９９ｒａ１１３で特徴付けられたエボラウイルス糖タンパク質に対するモノクローナル抗体と組み合わせることができる。
【０２５９】
ワクチンの好ましい投与経路としては、例えば、注射（例えば、皮下、静脈内、非経口、腹腔内、髄腔内）が挙げられる。注射は、ボーラスまたは連続的な注入であってもよい。他の投与経路としては、経口投与が挙げられる。
【０２６０】
本発明の抗体はまた、アジュバントおよび他の治療剤と共投与することもできる。用語「共投与される」は、本明細書で使用される場合、投与レジメンの一部としての投与を含む、本発明の抗体およびコンジュゲートとアジュバントおよび他の薬剤との同時の、別々の、または逐次的な投与のいずれかまたは全部を含むことが理解されよう。抗体は、典型的には、単独で、またはこのような薬剤と組み合わせて担体中に製剤化される。このような担体の例としては、溶液、溶媒、分散媒、遅延剤（ｄｅｌａｙ  ａｇｅｎｔ）、エマルジョンなどが挙げられる。このような医薬活性物質のための媒体の使用は当該分野において周知である。分子との使用に好適な他のあらゆる従来の担体が本発明の範囲内に含まれる。
【０２６１】
本発明は、以下の実施例によってさらに例示されるが、これらは、さらなる限定として解釈されないものとする。配列表、図面、ならびに本出願にわたり引用された全ての参考文献、特許および公開された特許出願の内容は、明示的に参照により本明細書に組み入れられる。
【０２６２】
抗体の組合せ
ある特定の実施態様では、１つまたは複数の本発明の抗体または抗原結合性断片を薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物が被験体に投与される。一部の実施態様では、抗体の組合せは、単一の医薬組成物において、薬学的に許容される担体と共に製剤化される。他の実施態様では、各抗体は、薬学的に許容される担体と共に製剤化され、組合せまたは２つまたはそれより多くの医薬組成物が被験体に投与される。
【０２６３】
本発明のある特定の実施態様では、２つ、３つ、またはそれより多くの抗体の組合せは、表１および表２に記載の抗体からなる群より選択される。ある特定の実施態様では、表１または表２からの３つの抗体は、単一の医薬組成物において、薬学的に許容される担体と共に製剤化される。ある特定の実施態様では、組合せは、エボラウイルス感染を処置するために被験体に投与される。他の実施態様では、表１または表２からの各抗体は、薬学的に許容される担体と共に製剤化され、組合せまたは２つもしくはそれより多くの医薬組成物が被験体に投与される。本明細書で開示された抗体を含む組成物は、単独で、または治療剤とともに組み合わせて被験体に投与することができる。ある特定の実施態様では、治療剤は、インターフェロン−アルファである。本明細書に記載の組合せは、エボラウイルスの中和においてより有効であり得る。
【０２６４】
エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）エピトープに基づくペプチドおよび組成物
エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）を標的化する抗体の操作を容易にするために、エピトープのホットスポットを、本明細書で説明されるようにアラニンスキャニングを使用して決定した。結合分析に基づいて、抗体４Ｇ７、Ｋ２５２、および２Ｇ４は、配列番号９１の領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１およびＮ５５０〜Ｅ５６４を含むコンフォメーショナルエピトープに結合することが見出され、それに対して抗体１３Ｃ６は、配列番号９１の領域Ｔ２７０〜Ｐ２７９およびＹ３９４〜Ｒ４０９内に結合することが見出された（図１）。図２は、この変異分析によって同定されたエボラウイルス糖タンパク質におけるホットスポットを要約する。
【０２６５】
エボラウイルス糖タンパク質内の１つまたは複数のエピトープに基づくペプチドまたはペプチド模倣体は、エボラウイルス糖タンパク質（配列番号９１）の、領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１、領域Ｎ５５０〜Ｅ５６４、領域Ｔ２７０〜Ｐ２７９、または領域Ｙ３９４〜Ｒ４０４を含む。エボラウイルス糖タンパク質の１つまたは複数のエピトープに基づく他のペプチドまたはペプチド模倣体は、ＴＧＫＬＩＷＫＶＮＰ（配列番号９８）、ＹＫＬＤＩＳＥＡＴＱＶＧＱＨＨＲ（配列番号９９）、ＶＮＡＱＰＫＣ（配列番号１００）、およびＮＱＤＧＬＩＣＧＬＲＱＬＡＮＥ（配列番号１０１）を含む。
【０２６６】
一般的に、免疫原として使用するためのペプチドは、長さが、約１０から約５０アミノ酸残基、より好ましくは約１５から約３０アミノ酸残基のサイズの範囲を有し、特に、長さが約２０アミノ酸残基である。
【０２６７】
本発明のペプチドは、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を任意の位置で含むように容易に改変することができる。好ましくは、そのペプチドは、本明細書に記載される抗エボラモノクローナル抗体に特異的に結合する。本発明のペプチドは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで公知の技術を使用して化学合成される。
【０２６８】
上述したペプチドは、ワクチン組成物に製剤化される。これらのワクチン組成物は、高度な抗エボラ抗体免疫応答を惹起するために、動物を免疫化するのに採用することができる。ワクチン組成物はまた、それを必要とする被験体に投与して、防御免疫応答を誘導するのにも有用である。このようなワクチン組成物は当該分野において周知であり、例えば、生理学的に適合する緩衝液、保存剤、および食塩水など、加えてアジュバントを含む。
【０２６９】
「アジュバント」は、特定の抗原に対する免疫応答を非特異的に増加させる薬剤であり、したがって、あらゆる所与のワクチンにおいて必要な抗原の量、および／または目的の抗原に対する十分な免疫応答を生じるのに必要な注射頻度を低減する。動物のワクチン接種に好適なアジュバントとしては、これらに限定されないが、アジュバント６５（落花生油、モノオレイン酸マンニトール（ｍａｎｎｉｄｅ  ｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）およびモノステアリン酸アルミニウムを含有する）；フロイント完全または不完全アジュバント；ミネラルゲル、例えば水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムおよびミョウバン；界面活性剤、例えばヘキサデシルアミン、オクタデシルアミン、リゾレシチン、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ’，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシメチル）プロパンジアミン、メトキシヘキサデシルグリセロールおよびプルロニックポリオール；ポリアニオン、例えばピラン、硫酸デキストラン、ポリＩＣ、ポリアクリル酸およびカーボポール；ペプチド、例えばムラミルジペプチド、ジメチルグリシンおよびタフトシン；ならびに油エマルジョンが挙げられる。タンパク質またはペプチドはまた、リポソームまたは他のマイクロキャリアーに取り込ませた後に投与してもよい。アジュバントおよびイムノアッセイの様々な態様に関する情報は、例えば、参照により本明細書に組み入れられるＰ．  Ｔｉｊｓｓｅｎ、Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ａｎｄ  Ｔｈｅｏｒｙ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ、第３版、１９８７年、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．によるシリーズで開示されている。
【０２７０】
ワクチン組成物は、免疫応答を惹起するのに十分な量の所望の免疫原、例えば本発明のペプチドを含む。投与される量は、動物の質量に対して約０．０００１ｇ／ｋｇから約１．０ｇ／ｋｇの範囲であってもよい。ポリクローナル抗血清を得るために、あらゆる好適な脊椎動物が容易に採用できる。動物は、好ましくは哺乳動物であり、これらに限定されないが、げっ歯類、例えばマウス、ラット、ウサギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ（ｏｖｉｎｅ）、例えばヤギおよびヒツジ（ｓｈｅｅｐ）、霊長類、例えばサル、大型類人猿およびヒトなどが挙げられる。
【０２７１】
ワクチン組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、および／または経口などのあらゆる標準的な経路によって容易に投与される。ワクチン組成物は、好ましくは、各タイプのレシピエント動物および投与経路に適切なように製剤化されることを、技術者は理解している。
【０２７２】
本発明の他の態様は、それを必要とする被験体に本発明に係るワクチンの有効量を投与することによってエボラウイルス感染を処置または予防する方法に関する。
【０２７３】
他の実施態様
本明細書に記載の発明は、エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）に対する抗体に関する。一態様では、本発明は、
（ａ）配列番号１５および１７；
（ｂ）配列番号１５および１８；
（ｃ）配列番号１６および１７；
（ｄ）配列番号１６および１８；
（ｅ）配列番号１９および２０；
（ｆ）配列番号１９および２１；
（ｇ）配列番号２２および２３；
（ｈ）配列番号２２および２４；
（ｉ）配列番号９および１０；
（ｊ）配列番号９および２７；
（ｋ）配列番号９および２８；
（ｌ）配列番号９および２９；
（ｍ）配列番号９および３０；
（ｎ）配列番号９および３１；
（ｏ）配列番号２５および１０；
（ｐ）配列番号２５および２７；
（ｑ）配列番号２５および２８；
（ｒ）配列番号２５および２９；
（ｓ）配列番号２５および３０；
（ｔ）配列番号２５および３１；
（ｕ）配列番号２６および１０；
（ｖ）配列番号２６および２７；
（ｗ）配列番号２６および２８；
（ｘ）配列番号２６および２９；
（ｙ）配列番号２６および３０；
（ｚ）配列番号２６および３１；
（ａａ）配列番号１１および１２；
（ｂｂ）配列番号１１および３６；
（ｃｃ）配列番号１１および３７；
（ｄｄ）配列番号３２および１２；
（ｅｅ）配列番号３２および３６；
（ｆｆ）配列番号３２および３７；
（ｇｇ）配列番号３３および１２；
（ｈｈ）配列番号３３および３６；
（ｉｉ）配列番号３３および３７；
（ｊｊ）配列番号３４および１２；
（ｋｋ）配列番号３４および３６；
（ｌｌ）配列番号３４および３７；
（ｍｍ）配列番号３５および１２；
（ｎｎ）配列番号３５および３６；
（ｏｏ）配列番号３５および３７；
（ｐｐ）配列番号１３および１４；
（ｑｑ）配列番号１３および４２；
（ｒｒ）配列番号１３および４３；
（ｓｓ）配列番号１３および４４；
（ｔｔ）配列番号３８および１４；
（ｕｕ）配列番号３８および４２；
（ｖｖ）配列番号３８および４３；
（ｗｗ）配列番号３８および４４；
（ｘｘ）配列番号３９および１４；
（ｙｙ）配列番号３９および４２；
（ｚｚ）配列番号３９および４３；
（ａａａ）配列番号３９および４４；
（ｂｂｂ）配列番号４０および１４；
（ｃｃｃ）配列番号４０および４２；
（ｄｄｄ）配列番号４０および４３；
（ｅｅｅ）配列番号４０および４４；
（ｆｆｆ）配列番号４１および１４；
（ｇｇｇ）配列番号４１および４２；
（ｈｈｈ）配列番号４１および４３；ならびに
（ｉｉｉ）配列番号４１および４４；
からなる群より選択される可変重鎖および可変軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に特異的に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２７４】
本発明のある特定の態様は、エボラウイルス糖タンパク質に結合し、重鎖および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、重鎖可変領域が、配列番号９、１１、１３、１５、１６、１９、２２、２５、２６、３２、３３、３４、３５、３８、３９、４０、および４１からなる群より選択されるアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２７５】
別の態様では、本発明は、エボラウイルス糖タンパク質に結合し、重鎖および軽鎖可変領域を含む、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、軽鎖可変領域が、配列番号１０、１２、１４、１７、１８、２０、２１、２３、２４、２７、２８、２９、３０、３１、３６、３７、４２、４３、および４４からなる群より選択されるアミノ酸配列に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２７６】
さらなる態様では、本発明は、エボラウイルス糖タンパク質に結合し、重鎖および軽鎖配列を含む単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分であって、重鎖および軽鎖配列が、
（ａ）それぞれ配列番号１５および１７；
（ｂ）それぞれ配列番号１５および１８；
（ｃ）それぞれ配列番号１６および１７；
（ｄ）それぞれ配列番号１６および１８；
（ｅ）それぞれ配列番号１９および２０；
（ｆ）それぞれ配列番号１９および２１；
（ｇ）それぞれ配列番号２２および２３；
（ｈ）それぞれ配列番号２２および２４；
（ｉ）それぞれ配列番号９および１０；
（ｊ）それぞれ配列番号９および２７；
（ｋ）それぞれ配列番号９および２８；
（ｌ）それぞれ配列番号９および２９；
（ｍ）それぞれ配列番号９および３０；
（ｎ）それぞれ配列番号９および３１；
（ｏ）それぞれ配列番号２５および１０；
（ｐ）それぞれ配列番号２５および２７；
（ｑ）それぞれ配列番号２５および２８；
（ｒ）それぞれ配列番号２５および２９；
（ｓ）それぞれ配列番号２５および３０；
（ｔ）それぞれ配列番号２５および３１；
（ｕ）それぞれ配列番号２６および１０；
（ｖ）それぞれ配列番号２６および２７；
（ｗ）それぞれ配列番号２６および２８；
（ｘ）それぞれ配列番号２６および２９；
（ｙ）それぞれ配列番号２６および３０；
（ｚ）それぞれ配列番号２６および３１；
（ａａ）それぞれ配列番号１１および１２；
（ｂｂ）それぞれ配列番号１１および３６；
（ｃｃ）それぞれ配列番号１１および３７；
（ｄｄ）それぞれ配列番号３２および１２；
（ｅｅ）それぞれ配列番号３２および３６；
（ｆｆ）それぞれ配列番号３２および３７；
（ｇｇ）それぞれ配列番号３３および１２；
（ｈｈ）それぞれ配列番号３３および３６；
（ｉｉ）それぞれ配列番号３３および３７；
（ｊｊ）それぞれ配列番号３４および１２；
（ｋｋ）それぞれ配列番号３４および３６；
（ｌｌ）それぞれ配列番号３４および３７；
（ｍｍ）それぞれ配列番号３５および１２；
（ｎｎ）それぞれ配列番号３５および３６；
（ｏｏ）それぞれ配列番号３５および３７；
（ｐｐ）それぞれ配列番号１３および１４；
（ｑｑ）それぞれ配列番号１３および４２；
（ｒｒ）それぞれ配列番号１３および４３；
（ｓｓ）それぞれ配列番号１３および４４；
（ｔｔ）それぞれ配列番号３８および１４；
（ｕｕ）それぞれ配列番号３８および４２；
（ｖｖ）それぞれ配列番号３８および４３；
（ｗｗ）それぞれ配列番号３８および４４；
（ｘｘ）それぞれ配列番号３９および１４；
（ｙｙ）それぞれ配列番号３９および４２；
（ｚｚ）それぞれ配列番号３９および４３；
（ａａａ）それぞれ配列番号３９および４４；
（ｂｂｂ）それぞれ配列番号４０および１４；
（ｃｃｃ）それぞれ配列番号４０および４２；
（ｄｄｄ）それぞれ配列番号４０および４３；
（ｅｅｅ）それぞれ配列番号４０および４４；
（ｆｆｆ）それぞれ配列番号４１および１４；
（ｇｇｇ）それぞれ配列番号４１および４２；
（ｈｈｈ）それぞれ配列番号４１および４３；ならびに
（ｉｉｉ）それぞれ配列番号４１および４４
からなる群より選択されるアミノ酸配列に、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２７７】
ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）〜（ｉｉｉ）からなる群より選択される重鎖および軽鎖可変領域に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施態様では、抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）〜（ｉｉｉ）からなる群より選択される重鎖および軽鎖可変領域に少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む。別の実施態様では、抗体またはその抗原結合性部分は、（ａ）〜（ｉｉｉ）からなる群より選択される重鎖および軽鎖可変領域に少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含む、重鎖および軽鎖可変領域を含む。
【０２７８】
さらなる実施態様では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ抗体からなる群より選択される。よりさらなる実施態様では、抗体またはその抗原結合性部分は、ＩｇＧ１抗体である。
【０２７９】
本発明の別の態様は、エボラウイルスＧＰへの結合に関して本明細書に記載の抗体と競合する単離されたモノクローナル抗体に関する。
【０２８０】
さらなる態様では、本発明は、モノクローナル抗体またはその抗原結合性部分、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。ある特定の実施態様では、医薬組成物は、モノクローナル抗体（モノクローナル抗体の組合せ）またはその抗原結合性部分のうちの１つまたは複数、および薬学的に許容される担体を含む。一実施態様では、抗体の組合せは、単一の医薬組成物において、薬学的に許容される担体と共に製剤化される。別の実施態様では、各抗体は、薬学的に許容される担体と共に製剤化され、１つまたは複数の抗体を含む２つまたはそれより多くの医薬組成物が被験体に投与される。
【０２８１】
本発明の一態様は、上述した有効量の医薬組成物を投与することを含む、エボラウイルス感染を処置するための方法に関する。さらなる実施態様では、方法は、治療剤を投与することをさらに含む。ある特定の実施態様では、治療剤は、インターフェロンアルファである。
【０２８２】
別の態様では、本発明は、それぞれ配列番号６８、６９、および７０に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９２に記載の重鎖可変領域由来の４９Ｈ、７１Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号７１、７２、および７３に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９３に記載の軽鎖可変領域由来の４２Ｌ、５９Ｌ、７０Ｌ、９９Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２８３】
ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４９Ｇ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基７１Ｔ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４２Ｓ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基５９Ｖ、７０Ｙ、および９９Ｇ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。
【０２８４】
別の態様では、本発明は、それぞれ配列番号７４、７５、および７６に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９４に記載の重鎖可変領域由来の４９Ｈ、５０Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８０、８１、および８２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９５に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２８５】
ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４９Ａおよび５０Ｅ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４３Ｓ、４５Ｑ、および１００Ｇ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基３Ｖ、７０Ｑ、および７１Ｙ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。
【０２８６】
本発明の別の態様は、それぞれ配列番号７４、７７、および７８に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８０、８１、および８２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９５に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２８７】
ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４３Ｓ、４５Ｑ、および１００Ｇ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基３Ｖ、７０Ｑ、および７１Ｙ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。
【０２８８】
本発明の別の態様は、それぞれ配列番号７４、７７、および７９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８０、８１、および８２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９５に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、４５Ｌ、７０Ｌ、７１Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２８９】
ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４３Ｓ、４５Ｑ、および１００Ｇ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基３Ｖ、７０Ｑ、および７１Ｙ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。
【０２９０】
別の態様では、本発明は、それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２９１】
ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４４Ｓ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４８Ｉ、７０Ｌ、および７２Ｖ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基５０Ｖ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４３Ｓおよび８７Ｆ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基３Ｖ、７０Ｑ、７２Ｓ、７３Ｌ、および１００Ｓ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。
【０２９２】
別の態様では、本発明は、それぞれ配列番号８６、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８７、８８、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２９３】
ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４４Ｓ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４８Ｉ、７０Ｌ、および７２Ｖ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基５０Ｖ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４３Ｓおよび８７Ｆ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基３Ｖ、７０Ｑ、７２Ｓ、７３Ｌ、および１００Ｓ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。
【０２９４】
別の態様では、本発明は、それぞれ配列番号８３、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８７、９０、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２９５】
ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４４Ｓ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４８Ｉ、７０Ｌ、および７２Ｖ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基５０Ｖ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４３Ｓおよび８７Ｆ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基３Ｖ、７０Ｑ、７２Ｓ、７３Ｌ、および１００Ｓ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。
【０２９６】
別の態様では、本発明は、それぞれ配列番号８６、８４、および８５に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９６に記載の重鎖可変領域由来の４４Ｈ、４８Ｈ、７０Ｈ、７２Ｈ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む重鎖であって、重鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、重鎖；ならびにそれぞれ配列番号８７、９０、および８９に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列と、配列番号９７に記載の軽鎖可変領域由来の３Ｌ、４３Ｌ、７０Ｌ、７２Ｌ、７３Ｌ、８７Ｌ、１００Ｌ、またはそれらの組合せ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）からなる群より選択される可変領域のフレームワーク残基とを含む軽鎖であって、軽鎖の残部はヒト免疫グロブリン由来である、軽鎖を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２９７】
ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４４Ｓ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４８Ｉ、７０Ｌ、および７２Ｖ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基５０Ｖ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基４３Ｓおよび８７Ｆ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。ある特定の実施態様では、前記の抗体またはその抗原結合性部分は、可変領域のフレームワーク残基３Ｖ、７０Ｑ、７２Ｓ、７３Ｌ、および１００Ｓ（Ｋａｂａｔの番号付けの慣例）を含む。
【０２９８】
別の態様では、本発明は、
ａ）それぞれ配列番号４５、４６、および４７を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号４８、５０、および５１を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列；
ｂ）それぞれ配列番号５２、５３、および５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号５５、５６、および５８を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列；
ｃ）それぞれ配列番号５２、５３、および５４を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号５５、５６、および５９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列；
ｄ）それぞれ配列番号６０、６１、および６３を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号６４、６５、および６７を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列；
ｅ）それぞれ配列番号７４、７７、および７８を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８０、８１、および８２を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列；
ｆ）それぞれ配列番号７４、７７、および７９を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８０、８１、および８２を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列；
ｇ）それぞれ配列番号８３、８４、および８５を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８７、９０、および８９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列；
ｈ）それぞれ配列番号８６、８４、および８５を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８７、８８、および８９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列；または
ｉ）それぞれ配列番号８６、８４、および８５を含む重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号８７、９０、および８９を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列
を含む、エボラウイルス糖タンパク質に結合する単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合性部分に関する。
【０２９９】
本発明の一態様は、前記の抗体またはそれらの抗原結合性部分、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【０３００】
本発明のさらなる態様は、前記の抗体またはそれらの抗原結合位置の１つまたは複数、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物である。
【０３０１】
本発明の一態様は、有効量の本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む、エボラウイルス感染を処置するための方法である。ある特定の実施態様では、方法は、治療剤を投与することを含む。ある特定の実施態様では、治療剤は、インターフェロンアルファである。
【実施例】
【０３０２】
以下の実施例は、以前に特徴付けられたマウスモノクローナル抗体１Ｈ３、２Ｇ４、および４Ｇ７（参照により本明細書に組み入れられる、ＵＳ８，５１３，３９１、Ｑｉｕら、Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ２０１２年；４巻、１３８ｒａ８１、およびＱｉｕら、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０１１年；１４１巻、２１８〜２２７頁）、およびマウスモノクローナル抗体１３Ｃ６、６Ｄ８、および１３Ｆ６（参照により本明細書に組み入れられる、ＵＳ６，６３０，１４４および７，３３５，３５６）に基づき最適化された本発明のモノクローナル抗体を利用する。
【０３０３】
（実施例１）
エボラウイルス糖タンパク質のエピトープマッピング
エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）を標的化する抗体の操作を容易にするために、エピトープのホットスポットを、後述するようにアラニンスキャニングを使用して決定した。
【０３０４】
ＧＰ発現プラットフォーム
アラニン変異の生成およびその結合特性のアッセイを可能にするＧＰ発現プラットフォームをまず確立した。ＧＰΔＴＭΔｍｕｃ（膜貫通およびムチンドメインがない）をコードする配列を含有するｐｃＤＮＡ３．３発現ベクターをＨＥＫ２９３Ｆ細胞に一時的にトランスフェクトした。６日後、上清を回収し、ＡＫＴＡ  ＦＰＬＣ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で１ｍＬのＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰカラムを使用して精製した。画分を収集し、ネイティブＰＡＧＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して分析した。三量体のＧＰ種を含有する画分を合わせ、Ａｍｉｃｏｎ超遠心分離フィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して緩衝液をＰＢＳに交換した。ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用してタンパク質濃度を決定し、ネイティブＰＡＧＥを使用してＧＰを再度評価して、純度を確認した。
【０３０５】
アラニンスキャニング研究のための部位特異的変異誘発
部位特異的変異誘発を使用して、ＧＰΔＴＭΔｍｕｃ点変異体を作製した。変異体配列に対応する変異誘発プライマーを設計し、ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ変異誘発キット（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用してＰＣＲ増幅反応を行った。次いでＰＣＲ反応物をＤｐｎ１を３時間使用して消化し、Ｏｎｅ  Ｓｈｏｔ  ＴＯＰ１０  Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ  ｃｅｌｌ（Ｔｈｅｒｍｏ）に形質転換し、次いでアンピシリンを含有するＬＢ寒天プレート上で平板培養した。アンピシリンを含有するＬＢブロス中でコロニーを一晩成長させ、次いでプラスミドＤＮＡ調製キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して精製することによって、プラスミドＤＮＡを生成した。サンガー配列決定（Ｇｅｎｅｗｉｚ）を使用して陽性コロニーを確認した。様々なｍＡｂ（例えば１３Ｃ６、２Ｇ４、４Ｇ７）の変異体への結合をアッセイすることによってアラニン変異の機能的な結果を評価した。ＥＬＩＳＡを使用し、それにおいて変異体またはＷＴ  ＧＰのいずれかをプレート上にコーティングし、抗体を添加した。特異的な変異体とＷＴとの間の結合の変化を分析して、結合に対する変異の影響を決定した。
【０３０６】
結合分析に基づいて、抗体４Ｇ７、Ｋ２５２、および２Ｇ４は、配列番号９１の領域Ｖ５０５〜Ｃ５１１およびＮ５５０〜Ｅ５６４を含むコンフォメーショナルエピトープに結合することが見出され、それに対して抗体１３Ｃ６は、配列番号９１の領域Ｔ２７０〜Ｐ２７９およびＹ３９４〜Ｒ４０９内に結合することが見出された（図１）。図２は、この変異分析によって同定された糖タンパク質におけるホットスポットを要約する。
【０３０７】
（実施例２）
エボラ糖タンパク質に特異的な抗体の結合親和性
実施例１からのエピトープのホットスポットデータに基づき、ＥＬＩＳＡを使用して、表１からの抗体を、エボラウイルス糖タンパク質へのそれらの結合親和性に基づいてさらに選択した。
【０３０８】
ＥＬＩＳＡの場合、１００μＬのエボラＧＰｄＴＭ（ＩＢＴ  Ｂｉｏｓｅｒｖｉｃｅｓ）を１μｇ／ｍＬの濃度でＭａｘｉｓｏｒｐ  ９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）上に蒔き、４℃で一晩そのままにした。翌日、プレートをＰＢＳＴ（ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ）で３回洗浄し、１００μＬのＰＢＳＴ中の１％ＢＳＡを室温で１時間インキュベートした。次いでプレートを３回洗浄し、１００μＬの抗体希釈系列を添加した。各抗体希釈系列について、第１のウェルは、抗体を９μｇ／ｍＬの濃度で含み、次いで各ウェルは、１１点の系列にわたり３倍希釈であった（１２番目のウェルはＰＢＳＴであった）。抗体添加後、プレートを室温で２時間インキュベートした。次いでプレートを３回洗浄し、各ウェルに１００μＬの二次抗体（ＨＲＰを有するウサギ抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を（０．８ｍｇ／ｍＬストックから）１：５０００の希釈率で１時間にわたり添加した。次いでプレートを３回洗浄し、１００μＬのＴＭＢマイクロウェルペルオキシダーゼ（ＫＰＬ）を５分間にわたり添加し、その後、１００μＬの１ＮのＨ２ＳＯ４で中和した。次いでプレートを、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５ｅプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで読み取った。
【０３０９】
図３Ａ〜３Ｃは、ＥＬＩＳＡから生成したデータを示す。データは、スクリーニングプロセスからの様々な抗体（１３Ｃ６．Ｘ、２Ｇ４．Ｘ、４Ｇ７．Ｘ）の表示である。試験された２Ｇ４抗体は、野生型（ＷＴ）、２Ｇ４．３、および２Ｇ４．６であり、それぞれ１５４ｐＭ、１２９ｐＭ、および１０９ｐＭのＥＣ５０値を有していた（図３Ａ）。試験された４Ｇ７抗体は、Ｗｔ、４Ｇ７．２、４Ｇ７．３、４Ｇ７．１、４Ｇ７．１０、４Ｇ７．９、４Ｇ７．１１、および４Ｇ７．１２であり、それぞれ７２．５ｐＭ、９５．２ｐＭ、１７６ｐＭ、１８２ｐＭ、１２０ｐＭ、９９．７ｐＭ、１４５ｐＭ、および８８．８ｐＭのＥＣ５０値を有していた（図３Ｂ）。試験された１３Ｃ６抗体は、ＷＴおよび１３Ｃ６．１であり、それぞれ７４．７ｐＭおよび１３６ｐＭのＥＣ５０値を有していた（図３Ｃ）。これらのデータは、ＥＬＩＳＡで測定した場合、抗体が２００ｐＭまたはそれ未満のＥＣ５０でエボラ糖タンパク質に結合したことを示す。
【０３１０】
ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏの抗体設計を使用して候補を生成し、結合親和性の値に基づきリード候補を選択した。図４に示される系統樹は、様々な抗体間の配列類似性を例示する。それぞれの場合において、リード候補は、点線の長円で囲まれる。各々の候補について、親のモノクローナル抗体（ＷＴ）から大きな距離が存在した。加えて、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏで生成された候補は、密接にクラスター化しており、これは、これらの候補間に類似性があることを例示する。Ｇｅｎｅｉｏｕｓ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｉｏｕｓ．ｃｏｍ／）を使用した近隣結合法によって代表的な抗体のアミノ酸配列の系統樹を構築した。
【０３１１】
（実施例３）
最適化されたモノクローナル抗体によるエボラウイルス糖タンパク質の中和
抗エボラ糖タンパク質の抗体がｉｎ  ｖｉｔｒｏでエボラウイルスを中和するかどうかを決定するために、精製されたｍＡｂを、様々なエボラウイルス株によるプラーク形成を阻害するそれらの能力に関して、抗体の非存在下におけるプラーク形成（すなわち、対照）と比較して評価した。公知の量の抗体を２００ｐｆｕのエボラウイルスと混合し、３７℃で３０分インキュベートした。次いでウイルス／抗体の混合物をｖｅｒｏ  Ｅ６細胞の単層に添加し、３７℃で３０分間吸着させた。この後、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、次いで１％メチルセルロースを含有する培地を上に重ねた。細胞を３７℃で４日間インキュベートし、次いでＢＳＬ４の研究室から移動させるためにホルマリンで固定した。エボラウイルスに感染したプラークをＩＦＡ染色によって可視化し、各ウェル中のプラークの数を計数した。プラーク数減少のパーセントを血清非含有のウェルにより計算した。力価は、５０または８０％プラーク減少のいずれかとして表現される。
【０３１２】
図５は、中和アッセイの結果を示す。抗体１３Ｃ６．１は、３つのエボラ株のそれぞれを５０μｇ／ｍＬより高い濃度で中和した。抗体２Ｇ４．６は、３つのエボラ株を２から４μｇ／ｍＬの濃度で中和した。抗体４Ｇ７．９は、３つの株を１μｇ／ｍＬの濃度で中和した。
【０３１３】
（実施例４）
ｉｎ  ｖｉｖｏにおける非ヒト霊長類の研究
マカク属のカニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍａｃａｑｕｅ）を使用して、抗ＧＰ  ｍＡｂが、高用量のＥＢＯＶ感染後に投与された場合、生存を改善できるかどうか、およびそれがどの程度有効であるかを試験する。
【０３１４】
エボラウイルス（ＥＢＯＶ）株Ｋｉｋｗｉｔ９５は、完全最小必須培地（ｃＭＥＭ）、２％ＦＢＳ、および１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ｓｔｒｅｔｏｐｍｙｃｉｎ）中、Ｖｅｒｏ  Ｅ６細胞で産生される。
【０３１５】
マカクを、処置レジメンに基づく群、加えて感染の陽性対照としてＰＢＳのみを与えた群にランダム化する。各被験体を、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中の１０００ＰＦＵ（筋肉内の２つの部位に各１ｍＬ）のＥＢＯＶで感染させる。群の半分は、感染後２４時間で処置を開始し、群の他の半分は、感染後４８時間で処置を開始する。被験体を、伏在静脈中の５ｍＬの緩徐ボーラス（ｓｌｏｗ  ｂｏｌｕｓ）として、２５ｍｇ／ｋｇの本明細書で開示されたＥＢＯＶ−ＧＰに特異的な中和抗体の１つ、または本明細書で開示された抗体の混合物で静脈内処置する。被験体を毎日モニターして、内部フィロウイルススコア付けプロトコールで疾患進行に関してスコア付けする。被験体の姿勢／活動、態度、活動レベル、便／尿排出量、食物／水の摂取、体重、体温、呼吸、およびスコア付けされる疾患の症状発現（例えば目に見える発疹、出血、チアノーゼ、または潮紅した皮膚）の変化をスコア付けする。動物がｍＡｂまたはｍＡｂ混合物を受ける前に、２４時間の群では感染後１、４、７、１４、２１、および２８日目、または４８時間の群では感染後２、５、８、１４、２１、および２８日目に、体重、体温、血液、ならびに口腔咽頭、鼻、および直腸スワブの試験を行った。
【０３１６】
（実施例５）
ヒトの研究
エボラウイルスに感染したヒトに、本明細書で開示された単一の抗ＧＰ抗体、またはそれらの組合せを投与する。理想的には、抗体は、感染後２４または４８時間に与えられる。被験体を、目に見える発疹、出血、チアノーゼ、または潮紅した皮膚などの疾患の症状発現に関してモニターする。ウイルス力価もモニターされる。
【０３１７】
等価物
当業者は、慣例的な実験のみを使用することで、本明細書に記載の発明の具体的な実施態様の多くの等価物を認識するか、または確認できる。このような等価物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【表１−１】
2017531642.tif 000002
【表１−２】
2017531642.tif 000003
【表２−１】
2017531642.tif 000004
【表２−２】
2017531642.tif 000005
【表２−３】
2017531642.tif 000006
【表２−４】
2017531642.tif 000007
【表２−５】
2017531642.tif 000008
【表２−６】
2017531642.tif 000009
【図１】
2017531642.tif 000010
【図２】
2017531642.tif 000011
【図３Ａ】
2017531642.tif 000012
【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
2017531642.tif 000015
【図５】
2017531642.tif 000016
【配列表】
2017531642000001.app
【国際調査報告】
2017531642.tif 000017
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