(57)【要約】  本明細書に記載の発明は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ−１）抗体と組み合わせた抗ＣＳ１抗体の治療効力を促進するための、治療的投与レジメンおよびその組み合わせに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらす方法。
【請求項２】
がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、および、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抗ＰＤ１抗体がニボルマブである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
抗ＣＳ１抗体がエロツズマブである、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項５】
抗ＰＤ１抗体が約０.１−３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され、抗ＣＳ１抗体が約０.１−１ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
抗ＰＤ１抗体が約１ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され、抗ＣＳ１抗体が約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
抗ＰＤ１抗体が約３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され、抗ＣＳ１抗体が約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
抗ＰＤ１抗体が約０.１−３ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され、抗ＣＳ１抗体が約１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
がんが、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、および、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１１９（ｅ）のもと２０１４年１２月４日に出願された米国仮出願番号６２／０８７,４８９に優先権を主張する。この参照出願の全ての教示を、引用により本明細書の一部とする。
【０００２】
発明の分野
本願で記載される発明は、抗プログラム細胞死１（ＰＤ−１）抗体と併用される抗ＣＳ１抗体の治療効果の増強において使用するための治療的投与レジメンおよびその組み合わせに関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
国立がん研究所は、米国単独で、３人に１人が生涯においてがんに襲われると見積もった。さらに、がんに罹患している人々の約５０％ないし６０％が、最終的に病に屈服する。この広汎な疾患の発生は、悪性腫瘍を処置するための抗癌レジメンの改良の必要性を強調している。
【０００４】
がんは、身体のいかなる組織または器官でも発生し得る。骨の「孤立性」骨髄腫である多発性骨髄腫、髄外性形質細胞腫、形質細胞白血病、マクログロブリン血症（ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症を含む）、重鎖病、原発性アミロイドーシス、良性単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）を含む形質細胞腫瘍は、免疫グロブリンの発現の増加を伴う。非形質細胞腫瘍である慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）も、高レベルの免疫グロブリン発現を伴う。
【０００５】
免疫グロブリン発現の上昇は、悪性疾患においても見られる。自己免疫疾患のように、がんの病因は、同様に多くの要因を起源とする。がんは、米国において死亡原因の第２位であり、細胞の無制限の増殖を引き起こすＤＮＡの変異と関連づけられてきた。遺伝的素因は、喫煙や化学的変異誘発などの環境要因と合わさって、多くのがんの発症に多大な役割を果たす。
【０００６】
骨髄腫は、単一のクローンに由来する形質細胞の腫瘍であり、典型的には二次リンパ組織で発生し、骨髄組織に転移し、居着く。骨髄腫は、通常、骨髄および隣接する骨構造を冒し、一次的症状として、骨痛および病的骨折または病変（溶骨性骨病変）、異常出血、貧血および易感染性の上昇を伴う。この疾患の進行した段階には、腎不全、骨格変形、脊髄の圧縮および高カルシウム血症が含まれる。骨髄腫は、骨の破骨細胞の再吸収を誘導することにより骨細胞を冒し、故に、骨構造を破壊し、血漿のカルシウム濃度を高める。骨髄腫の病因は、現在のところ、不明である。放射線障害、癌遺伝子の変異、家系的原因および異常なＩＬ６発現との関連が推定されている。
【０００７】
多発性骨髄腫は、多数の起源を持つ形質細胞腫瘍である。多発性骨髄腫は、全形質細胞悪性腫瘍の１０％近くを占め、成人では最も一般的な骨腫瘍であり、１年に１００,０００人当たり３〜４症例の発生率であり、診断時の年齢中位数は６３ないし７０歳である。米国では、多発性骨髄腫は、非ホジキンリンパ腫に次いで最も多い血液系腫瘍であり、米国単独で約５０,０００症例があり、約１３,５００例が毎年新しく報告される。欧州では、多発性骨髄腫の発生率は、１年に１００,０００人当たり６例である。多発性骨髄腫と診断された患者の予後の見通しは厳しく、進行した疾患形態の患者では、わずか数ヶ月から１年である。
【０００８】
骨髄腫および多発性骨髄腫（以後「骨髄腫」と称する）の伝統的な処置領域は、化学療法、放射線療法および外科手術からなる。加えて、他の点では健康である患者には、骨髄移植が推奨される。患者の治癒率は３０％に上り、骨髄腫を治癒できる唯一の既知の方法である。しかしながら、高齢であるか、骨髄移植処置に耐えられない人々には、化学療法が最適である。
【０００９】
近年、自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）の導入、サリドマイド、レナリドミド（免疫調節薬またはＩＭｉＤｓ）およびボルテゾミブの利用などの多発性骨髄腫治療における重要な進歩が、これらの患者の管理を変え、全生存期間（ＯＳ）の増加を可能にした（Kristinsson et al., J. Clin. Oncol., 25:1993-1999 (2007); Brenner et al., Blood, 111:2521-2526 (2008); and Kumar et al., Blood, 111:2516-2520 (2008)）。６０歳未満の患者の１０年生存確率は、約３０％である（Raab et al., Lancet, 374:324-339 (2009)）。サリドマイド（Rajkumar et al., J. Clin. Oncol., 26:2171-2177 (2008)）、レナリドミド（Rajkumar et al., Lancet Oncol., 11:29-37 (2010)）；またはボルテゾミブ（Harousseau et al., J. Clin. Oncol., 28:4621-4629 (2010)）は、ＡＳＣＴ前の誘導治療レジメンの一部としてのデキサメタゾンとの併用で、各々、８、１５および１６％近くのＣＲ率を導いた；一方、ボルテゾミブ−デキサメタゾンと、ドキソルビシン（Sonneveld et al., Blood (ASH Annual Meeting Abstracts), 116:23 (2010)）、シクロホスファミド（Reeder et al., Leukemia, 23:1337-1341 (2009)）、サリドマイド（Cavo et al., Lancet, 376:2075-2085 (2010)）；またはレナリドミド（Richardson et al., Blood, 116:679-686 (2010)）の３剤導入スケジュールは、各々７、３９、３２および５７％近くのＣＲ率の達成を可能にした。しかしながら、これらの進歩にも拘わらず、ほぼ全ての多発性骨髄腫患者は再発する。
【００１０】
Ｍタンパク質として知られる異常な抗体の出現が、多発性骨髄腫の診断指標である。Ｍタンパク質の産生の増加は、多発性骨髄腫における過粘稠度症候群と関連付けられてきた。これは、疲労、頭痛、息切れ、精神錯乱、胸痛、腎臓損傷および不全、視力の問題およびレイノー現象（血行不良、特に指、つま先、鼻および耳）を含む衰弱性の副作用を引き起こす。血中のＭタンパク質が寒冷条件下で粒子を形成すると、クリオグロブリン血症が生じる。これらの粒子は、寒冷な気候の中で、つま先、指および他の末端部において、小血管を塞ぎ、疼痛としびれをもたらし得る。染色体欠失、ベータ−２ミクログロブリンレベルの上昇、血清クレアチニンレベルおよびＩｇＡアイソタイピングなどの予後指標も研究されてきた。Tricot, G. et al., "Poor Prognosis in Multiple Myeloma", Blood, 86:4250-4252 (1995)。
【００１１】
免疫賦活性モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、悪性腫瘍に対する宿主の免疫反応を強化するための、がん免疫療法における新しく刺激的な戦略である（Melero et al., Nat. Rev. Cancer, 7:95-106 (2007)）。そのような作動性または拮抗性のｍＡｂは、免疫系の細胞における重要な受容体に結合して、抗原提示を増強し（例えば、抗ＣＤ４０）、共刺激を与え（例えば、抗ＰＤ１）、あるいは、免疫調節を打ち消す（例えば、抗ＣＴＬＡ−４）。
【００１２】
ＣＳ１（ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＡＣＣ、１９Ａ、ＡＰＥＸ−１、ＦＯＡＰ１２および１９Ａとしても知られる；GENBANK（登録商標）受託番号NM_021181.3、引用文献 Boles et al., Immunogenetics, 52:302-307 (2001); Bouchon et al., J. Immunol., 167:5517-5521 (2001); Murphy et al., Biochem. J., 361:431-436 (2002)）は、免疫グロブリンスーパーファミリーのＣＤ２サブセットの一員である。ＣＤ２ファミリーの分子は、リンパ球の同時活性化、増殖分化および接着、並びに、免疫グロブリン分泌、サイトカイン産生、およびＮＫ細胞の細胞傷害性などの幅広い免疫調節機能に関与する。ＣＤ２、ＣＤ５８およびＣＤ１５０などのＣＤ２ファミリーのいくつかのメンバーは、乾癬、関節リウマチおよび多発性硬化症などの数々の自己免疫性および炎症性疾患において役割を果たすか、または、役割を果たすと提唱されている。ＮＫ細胞に媒介される細胞傷害性およびリンパ球の接着においてＣＳ１が役割を果たすことが報告されている（Bouchon, A. et al., J. Immunol., 5517-5521 (2001); Murphy, J. et al., Biochem. J., 361:431-436 (2002))。
【００１３】
エロツズマブは、多発性骨髄腫において高度かつ均一に発現される細胞表面糖タンパク質であるＣＳ−１を対象とするヒト化モノクローナルＩｇＧ１抗体である。エロツズマブは、末梢リンパ球の存在下で、原発性多発性骨髄腫細胞に対して有意な抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導する（Tai et al., Blood, 112:1329-1337 (2008)）。再発性または難治性の多発性骨髄腫患者の処置のために、単独（Zonder et al., Blood, 120(3):552-559 (2012)）、ボルテゾミブとの併用（Jakubowiak et al., J. Clin. Oncol., 30(16):1960-1965 (Jun. 1, 2012)）またはレナリドミドおよび低用量デキサメタゾンとの併用（Lonial et al., J. Clin. Oncol., 30:1953-1959 (2012); and Richardson et al., Blood (ASH Annual Meeting Abstracts), 116:986 (2010) で、この薬物の安全性および効力を評価した３つの研究の結果が報告されている。３つすべての併用から、管理しやすい安全性プロフィールと有望な活性が示された。例えば、再発性または難治性多発性骨髄腫の処置用のレナリドミドおよび低用量デキサメタゾンと併用したエロツズマブの安全性および効力を評価するフェーズＩ／ＩＩ試験は、１０ｍｇ／ｋｇの用量を受容する患者について、３３ヵ月のＰＦＳおよび９２％の奏効率を示した（Lonial et al., J. Clin. Oncol., 31 (2013) (Suppl., Abstr. 8542)）。過去に処置を受けていない多発性骨髄腫患者における、エロツズマブを伴うか、または伴わないレナリドミド／デキサメタゾンのフェーズＩＩＩ治験が進行中であり、この同じ組み合わせを一次治療で評価するように設定された別のフェーズＩＩＩ治験も進行中である。
【００１４】
プログラム細胞死１受容体（ＰＤ−１）は、活性化ＴおよびＢ細胞により発現され、免疫抑制を媒介する重要なチェックポイント受容体である。ＰＤ−１は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＰＤ−１およびＢＴＬＡを含むＣＤ２８受容体ファミリーの一員である。抗原提示細胞および多くのヒトのがんで発現される２つのＰＤ−１の細胞表面糖タンパク質リガンド、即ち、プログラム細胞死リガンド−１（ＰＤ−Ｌ１）およびプログラム細胞死リガンド−２（ＰＤ−Ｌ２）が同定されており、ＰＤ−１に結合すると、Ｔ細胞活性化およびサイトカイン分泌を下方調節することが示された。ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の阻害は、前臨床モデルで、強力な抗腫瘍活性を媒介し（米国特許第８,００８,４４９号および第７,９４３,７４３号）、がんを処置するためのＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用の抗体阻害剤の使用は、治験に入っている（Brahmer et al., J. Clin. Oncol., 28:3167-3175 (2010); Topalian et al., N. Engl. J. Med., 366:2443-2454 (2012); Topalian et al., J. Clin. Oncol., 32(10):1020-1030 (2014); Hamid et al., N. Engl. J. Med., 369:134-144 (2013); Brahmer et al., N. Engl. J. Med., 366:2455-2465 (2012); Flies et al., Yale J. Biol. Med., 84:409-421 (2011); Pardoll, Nat. Rev. Cancer, 12:252-264 (2012); Hamid et al., Expert Opin. Biol. Ther., 13(6):847-861 (2013))。
【００１５】
いくつかのモノクローナル抗体の有望な抗腫瘍効力にも拘わらず、多くの腫瘍が単一の抗体による処置には難治性であり（Wilcox et al., J. Clin. Invest., 109:651-659 (2002); Verbrugge et al., Cancer Res., 72:3163-3174 (2012)）、２種またはそれ以上の抗体の併用が必要とされ得る。従って、本発明の目的は、異なるモノクローナル抗体の併用によりがん患者を処置するための改良された方法を提供することである。
【００１６】
本願発明者らは、治療的有効量の抗ＰＤ１抗体と治療的有効量の抗ＣＳ１抗体との投与が、多発性骨髄腫細胞および腫瘍の相乗的退縮をもたらすことを初めて見出し、かくして、この併用を、多発性骨髄腫患者のための可能性のある処置選択肢として確立した。
【発明の概要】
【００１７】
発明の概要
本発明は、多発性骨髄腫患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらす方法を提供する。
【００１８】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、特に、骨髄腫、多発性骨髄腫、および、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択される方法を提供する。
【００１９】
本発明は、多発性骨髄腫患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブである方法を提供する。
【００２０】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、黒色腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブである方法を提供する。
【００２１】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、および、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫からなる群から選択されるＢ細胞悪性腫瘍であり、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブである方法を提供する。
【００２２】
本発明は、多発性骨髄腫患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブである方法を提供する。
【００２３】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブである方法を提供する。
【００２４】
本発明は、多発性骨髄腫患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブであり、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブである方法を提供する。
【００２５】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブであり、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブである方法を提供する。
【００２６】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブであり、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブであり、該抗ＰＤ１抗体が約０.０３−３ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される方法を提供する。
【００２７】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブであり、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブであり、抗ＣＳ１抗体が約１ないし１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇの投与量で、１週間に１回投与される方法を提供する。
【００２８】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブであり、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブであり、該抗ＣＳ１抗体が約１ないし１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇの投与量で、３週間に１回投与される方法を提供する。
【００２９】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブであり、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブであり、該抗ＰＤ１抗体が、約０.０３−３ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され、該抗ＣＳ１抗体が、約１ないし１０ｍｇ／ｋｇ、または約２０ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で、１週間に１回、２週間に１回、または３週間に１回投与される方法を提供する。
【００３０】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブであり、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブであり、該抗ＰＤ１抗体が、約０.０３−３ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され、該抗ＣＳ１抗体が約１ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間に１回投与される方法を提供する。
【００３１】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体；および（ｉｉ）治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を含む併用療法レジメンの同時投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブであり、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブまたはペムブロリズマブであり、該抗ＰＤ１抗体が、約０.０３−３ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され、該抗ＣＳ１抗体が約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で３週間に１回投与される方法を提供する。
【００３２】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）まず、治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を投与し；続いて（ｉｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体を投与することを含む併用療法レジメンの連続投与を含み、該併用が、該がんの腫瘍負荷、腫瘍退縮および／または腫瘍成長の相乗的減少をもたらし、該がんが、骨髄腫、多発性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫からなる群から選択され、該抗ＰＤ１抗体がニボルマブであり、該抗ＣＳ１抗体がエロツズマブであり、該抗ＰＤ１抗体が、約０.０３−３ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇ、または約５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で投与され、該抗ＣＳ１抗体が、約１０ｍｇ／ｋｇの投与量で、１週間、２週間または３週間に１回投与される方法を提供する。
【００３３】
本発明は、がん患者の処置方法であって、（ｉ）まず、治療的有効量の抗ＣＳ１抗体を投与し；続いて（ｉｉ）治療的有効量の抗ＰＤ１抗体を投与することを含む併用療法レジメンの連続投与を含み、該方法は場合により（ｉ）と（ｉｉ）の間に介在期間（Intervening Period）を含み、該介在期間は、０日間ないし２４週間の時間である。本発明のある実施態様では、介在期間は２ないし８週間である。本発明のある実施態様では、介在期間は３ないし６週間である。本発明のある実施態様では、介在期間は１ないし２週間である。本発明のある実施態様では、介在期間は３ないし７日間である。本発明のある実施態様では、介在期間は約１ないし３日間である。本発明のある実施態様では、介在期間は約２日間である。本発明のある実施態様では、介在期間は約１日間である。
【００３４】
別の態様では、ヒト患者における多発性骨髄腫の処置方法が提供され、その方法は、有効量の
（ａ）配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＰＤ１抗体、および、
（ｂ）配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＣＳ１抗体、
の各々を患者に投与することを含み、
誘導期において、該抗ＣＳ１抗体は、毎週、全部で８回、８週間にわたって投与され、抗ＰＤ１抗体は、３週間毎に、全部で３回、８週間にわたって投与され、
誘導期および維持期の両方において、抗ＰＤ１抗体は、約０.０３−３ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、抗ＣＳ１抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【００３５】
別の態様では、ヒト患者における多発性骨髄腫の処置方法が提供され、その方法は、有効量の
（ａ）配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＰＤ１抗体、および、
（ｂ）配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＣＳ１抗体、
の各々を患者に投与することを含み、
誘導期において、該抗ＣＳ１抗体は、毎週、全部で８回、８週間にわたって投与され、抗ＰＤ１抗体は、３週間毎に、全部で３回、８週間にわたって投与され、
誘導期および維持期の両方において、抗ＰＤ１抗体は、１ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、抗ＣＳ１抗体は、１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。
【００３６】
別の態様では、ヒト患者における多発性骨髄腫の処置方法が提供され、その方法は、有効量の
（ａ）配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＰＤ１抗体、および、
（ｂ）配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＣＳ１抗体、
の各々を患者に投与することを含み、
誘導期において、該抗ＣＳ１抗体は、毎週、全部で８回、８週間にわたって投与され、抗ＰＤ１抗体は、３週間毎に、全部で３回、８週間にわたって投与され、
誘導期および維持期の両方において、抗ＰＤ１抗体は、３ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、抗ＣＳ１抗体は、１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。
【００３７】
ある種の実施態様では、抗ＰＤ１抗体の各回の用量は、約０.３、０.１、０.３、１、３、６、１０または２０ｍｇ／ｋｇである。好ましい実施態様では、抗ＰＤ１抗体の各回の用量は、０.０３ｍｇ／ｋｇ、０.１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇもしくは３ｍｇ／ｋｇ；または、３ｍｇもしくは８ｍｇである。他の実施態様では、抗ＣＳ１抗体の各回の用量は、０.１、０.３、１、３、６、１０または２０ｍｇ／ｋｇ体重である。好ましい実施態様では、抗ＣＳ１抗体の各回の用量は、１０ｍｇ／ｋｇで投与される。
【００３８】
ある実施態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＣＳ１抗体は、誘導期または維持期のいずれかにおいて、以下の用量で投与される：
（ａ）０.０３ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１０ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体；
（ｂ）０.１ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１０ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体；
（ｃ）０.３ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１０ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体；
（ｄ）１ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１０ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体；または
（ｅ）３ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１０ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体。
【００３９】
ある実施態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＣＳ１抗体は、誘導期または維持期のいずれかにおいて、以下の用量で投与される：
（ａ）０.０３ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体；
（ｂ）０.１ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体；
（ｃ）０.３ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体；
（ｄ）１ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体；または
（ｅ）３ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ１抗体および１ｍｇ／ｋｇ抗ＣＳ１抗体。
【００４０】
ある種の実施態様では、抗ＰＤ１抗体の各回の用量は、約３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、または２０ｍｇである。好ましい実施態様では、抗ＰＤ１抗体の各回の用量は、約３ｍｇまたは８ｍｇである。他の実施態様では、抗ＣＳ１抗体の各回の用量は、０.１、０.３、１、３、６、１０または２０ｍｇ／ｋｇ体重である。好ましい実施態様では、抗ＣＳ１抗体の各回の用量は、１０ｍｇ／ｋｇである。
【００４１】
ある実施態様では、抗ＣＳ１抗体は、誘導期の（１）１週１日目、（２）２週１日目、（３）３週１日目、（４）４週１日目、（５）５週１日目、（６）６週１日目、（７）７週１日目、および（８）８週１日目に投与される。別の実施態様では、抗ＰＤ１抗体は、誘導期の（１）１週１日目、（２）４週１日目、および（３）７週１日目に投与される。別の実施態様では、抗ＣＳ１抗体は、維持期の（１）１０週１日目および（２）１５週１日目に投与される。別の実施態様では、抗ＰＤ１抗体は、維持期の（１）１０週１日目に投与される。別の実施態様では、維持期は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９もしくは２０またはそれ以上のサイクルで反復される。
【００４２】
ある実施態様では、抗ＣＳ１抗体および抗ＰＤ１抗体は、第一線（「前線」）の処置として投与される（例えば、初期または一次処置）。別の実施態様では、抗ＣＳ１抗体および抗ＰＤ１抗体は、第二線の処置として投与される（例えば、再発後および／または一次処置が失敗した場合を含む、同一または異なる治療による初期の処置の後）。
【００４３】
抗ＰＤ１抗体および抗ＣＳ１抗体は、任意の適する手段で対象に投与され得る。ある実施態様では、抗体は静脈内投与用に処方される。別の実施態様では、抗体は同時に投与される（例えば、単一の製剤で、または、別々の製剤として同時に）。あるいは、別の実施態様では、抗体は連続的に投与される（例えば、別々の製剤として）。
【００４４】
本明細書で提供される処置方法の効力は、任意の適する手段で評価し得る。ある実施態様では、当該処置は、完全奏効、非常に良好な部分奏効、部分奏効および安定からなる群から選択される少なくとも１つの治療効果を奏する。別の実施態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＣＳ１抗体の投与は、いずれかの抗体単独の投与と比較して、処置に対して相乗効果を有する。
【００４５】
（ａ）配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＰＤ１抗体、および、
（ｂ）配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＣＳ１抗体、
を含む組成物も提供される。
【００４６】
本発明は、さらに、ニボルマブまたはペムブロリズマブなどの抗ＰＤ１抗体およびエロツズマブなどの抗ＣＳ１抗体、並びに、医薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物を、本明細書に記載の方法における使用に適合された治療的有効量で含むキットを提供する。ある実施態様では、キットは、
（ａ）配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＰＤ１抗体、および、
（ｂ）配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＣＳ１抗体、および、
（ｃ）抗ＰＤ１抗体および抗ＣＳ１抗体を本発明の方法において使用するための指示、
を含む。
【００４７】
別の態様では、配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＣＳ１抗体と同時投与するための、抗ＰＤ１抗体が提供され、抗ＰＤ１抗体は、配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。
【００４８】
さらなる態様では、配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＣＳ１抗体と同時投与するための、抗ＰＤ１抗体が提供され、抗ＰＤ１抗体は、配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含み、
（Ａ）誘導期において、抗ＣＳ１抗体は、毎週、全部で８回、８週間にわたって投与され、抗ＰＤ１抗体は、３週間毎に、全部で３回、８週間にわたって投与され、続いて、（Ｂ）維持期において、抗ＣＳ１抗体は２週間毎に、抗ＰＤ１抗体は４週間毎に投与され、
ここで、誘導期および維持期の両方において、抗ＰＤ１抗体は、０.１−２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与され、抗ＣＳ１抗体は、０.１−２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。
【００４９】
さらなる態様では、配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＣＳ１抗体と同時投与するための、抗ＰＤ１抗体が提供され、抗ＰＤ１抗体は、配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含み、
（Ａ）誘導期において、抗ＣＳ１抗体は、毎週、全部で８回、８週間にわたって投与され、抗ＰＤ１抗体は、３週間毎に、全部で３回、８週間にわたって投与され、続いて、（Ｂ）維持期において、抗ＣＳ１抗体は２週間毎に、抗ＰＤ１抗体は４週間毎に投与され、
ここで、誘導期および維持期の両方において、抗ＰＤ１抗体は、０.０３−０.１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与され、抗ＣＳ１抗体は、０.１−２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。
【００５０】
さらなる態様では、配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＣＳ１抗体と同時投与するための、抗ＰＤ１抗体が提供され、抗ＰＤ１抗体は、配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含み、
（Ａ）誘導期において、抗ＣＳ１抗体は、毎週、全部で８回、８週間にわたって投与され、抗ＰＤ１抗体は、３週間毎に、全部で３回、８週間にわたって投与され、続いて、（Ｂ）維持期において、抗ＣＳ１抗体は２週間毎に、抗ＰＤ１抗体は４週間毎に投与され、
ここで、誘導期および維持期の両方において、抗ＰＤ１抗体は、３ｍｇないし８ｍｇの用量で投与され、抗ＣＳ１抗体は、０.１−２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。
【００５１】
本発明は、さらに、ニボルマブまたはペムブロリズマブなどの抗ＰＤ１抗体およびエロツズマブなどの抗ＣＳ１抗体、並びに、医薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物を、本明細書に記載の方法における使用に適合された治療的有効量で含むキットを提供する。ある実施態様では、キットは、
（ａ）ある用量の、配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＰＤ１抗体、および、
（ｂ）ある用量の、配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、抗ＣＳ１抗体、および、
（ｃ）まず抗ＣＳ１抗体を投与し、続いてその後に抗ＰＤ１抗体を投与するための指示
を含む。
【００５２】
別の態様では、配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む抗ＣＳ１抗体と連続投与するための、抗ＰＤ１抗体が提供され、抗ＰＤ１抗体は、配列番号４に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含み、抗ＣＳ１抗体がまず投与され、続いて抗ＰＤ１抗体が投与される。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
図面の簡単な説明
【図１】ヒトＳＬＡＭＦ７（ＣＳ１−Ｌ）のアミノ酸配列。
【００５４】
【図２Ａ−Ｂ】安定的にＧＦＰおよびｈＳＬＡＭＦ７を発現するマウスＢ細胞リンパ腫細胞（Ａ２０）。細胞をＰＥ結合抗ヒトＳＬＡＭＦ７（クローン１６２.１、BioLegend）で染色し、ＧＦＰおよびｈＳＬＡＭＦ７に陽性染色する細胞の頻度を、０日目（Ａ）および５８日目（Ｂ）において示している。
【００５５】
【図３】Ａ２０細胞で発現されたｈＳＬＡＭＦ７へのエロツズマブ結合をフローサイトメトリーで確認した。Ａ２０−ＧＦＰまたはＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞を６.２５ｕｇ／ｍｌエロツズマブ（BMS）とインキュベートし、２回洗浄し、抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ二次抗体とインキュベートした。ＧＦＰおよびｈＳＬＡＭＦ７に陽性染色する細胞の頻度を、０日目において示している。
【００５６】
【図４Ａ−Ｂ】Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞はＢａｌｂ／ｃマウスにおいて増殖し、ｈＳＬＡＭＦ７の表面発現を保持する。Ｂａｌｂ／ｃマウスの後側腹部（hind flank）に、１０７個のＡ２０−ＧＦＰまたは１０７個のＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞のいずれかを皮下注射することにより、腫瘍を定着させた。（Ａ）腫瘍の増殖を２週間に１回、デジタルノギスで測定した。腫瘍が２,０００ｍｍ３に達した時点で、マウスを安楽死させた。本実験を終えるまでに腫瘍のない動物の数を、無腫瘍（ＴＦ）とした。（Ｂ）Ａ２０−ＧＦＰまたはＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍から単離した細胞を、抗ｈＳＬＡＭＦ７（クローン１６２.１、BioLegend）または、ｍＩｇＧ２ｂアイソタイプコントロール抗体（ＭＰＣ−１１、BioLegend）で染色した。培養で維持されたＡ２０親細胞を、対照として染色した。サンプルを FACSCanto フローサイトメトリー（BD）で解析し、ＧＦＰおよびｈＳＬＡＭＦ７に陽性である細胞の割合を示す。
【００５７】
【図５Ａ−Ｅ】Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰモデルにおける、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａのインビボでの抗腫瘍活性。Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスを、腫瘍が平均サイズ１８０.１±８７.３ｍｍ３に達した時点で、複数の処置群に無作為に割り付けた。Ａ２０−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスは、平均サイズ１９３.３±１３３.２ｍｍ３の腫瘍を有した。これらの処置群は、用量１、５および１０ｍｇ／ｋｇでのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａによる処置とした。対照群は、ｍＩｇＧ２ａコントロール抗体（Bioxcell）を１０ｍｇ／ｋｇで受容した。投与は、１４、１７、２１、２４および２８日目に行った。実験は５９日目に終了した。各マウスの腫瘍体積を以下の条件で示す：（Ａ）Ａ２０−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスに対する１０ｍｇ／ｋｇエロツズマブ−ｍＩｇＧ２ａ；（Ｂ）Ａ２０−ＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスに対する１０ｍｇ／ｋｇｍＩｇＧ２ｂアイソタイプコントロール抗体；（Ｃ）Ａ２０−ＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスに対する１ｍｇ／ｋｇエロツズマブ−ｍＩｇＧ２ａ；（Ｄ）Ａ２０−ＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスに対する５ｍｇ／ｋｇエロツズマブ−ｍＩｇＧ２ａ；および（Ｅ）Ａ２０−ＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスに対する１０ｍｇ／ｋｇエロツズマブ−ｍＩｇＧ２ａ。
【００５８】
【図６Ａ−Ｂ】Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスに対する、５つの処置群についての腫瘍体積の（Ａ）平均値および（Ｂ）中央値を示す。
【００５９】
【図７】３つの異なる用量でＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ（「Ｅｌｏ−ｇ２ａ」）を用いて、予め設定した４つの腫瘍体積にて計算した、アイソタイプコントロール抗体（Ｉｓｏ １０ｍｇ／ｋｇ）に対する様々な処置群の腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）。ＴＧＤは、１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）、５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）および１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａで処置したマウスを用いて計算した。これらの結果を考慮して、抗ＰＤ１との併用実験には、１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａを選択した。
【００６０】
【図８】様々な用量のＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ（「Ｅｌｏ」）で処置された、腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスにおけるＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ濃度。図５に記載の腫瘍を有するマウスから、いくつかの時点で血液サンプルを回収した。処置前（pre-bleed、１４日目）、１回目の投与の８時間後（１５日目）、２回目の投与の直前（１７日目）、最後の投与の直前（２８日目）、および最後の投与の８時間後（２９日目）に血液を回収した。Ｎ＝３−９匹／群。その後、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）で血清を解析した。血清サンプルは６４,０００倍に希釈した。エロツズマブ（BMS）に対する抗イディオタイプモノクローナル抗体を用いて、マウス血清サンプル中のＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａを捕捉した。捕捉したＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａを、抗マウスＩｇＧ２ａ−ＨＲＰを用いて検出し、ＴＭＢ基質を用いて測定した。結果は、最大抗腫瘍活性が、用量１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａについて、１１０±４９（２回目の投与前）−３５７±１１１μｇ／ｍＬ（最後の投与後）と相関し、一方、より低い生物学的活性が、用量１ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａについて、５±２−２７±７μｇ／ｍＬのレベルと相関することを示した。Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａの用量１０ｍｇ／ｋｇについて、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａの血清レベルはＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰおよびＡ２０−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスで同様であった（１１０±４９−３５７±１１１μｇ／ｍＬ対１０２±３０−３８１±４３μｇ／ｍＬ）。
【００６１】
【図９】ＰＤ−Ｌ１を親のＡ２０、Ａ２０−ＧＦＰおよびＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞株で発現させた。ＰＤＬ１発現のフローサイトメトリー分析を示す。細胞は染色しないか（ヒストグラムの最初のピーク内の薄い灰色の線）、あるいは、ラットＩｇＧ２ｂ（ＲＴＫ４５３０、BioLegend) (濃い灰色、ヒストグラムの外側の最初のピーク）もしくはラット抗マウスＰＤ−Ｌ１（１０Ｆ.９Ｇ２、BioLegend）（ヒストグラムの２番目のピーク）のいずれかで染色した。
【００６２】
【図１０Ａ−Ｆ】抗ＰＤ−１は、単剤としてのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａまたは抗ＰＤ−１と比べて、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰマウスにおけるＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａに媒介される抗腫瘍活性をインビボで有意に増強した。処置群は、（Ａ）アイソタイプコントロールの１０ｍｇ／ｋｇ ｍＩｇＧ２ａおよび１０ｍｇ／ｋｇ ｍＩｇＧ１；（Ｂ）３ｍｇ／ｋｇ抗ＰＤ−１と組み合わせた、アイソタイプコントロールｍＩｇＧ２ａ；（Ｃ）１ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１と組み合わせた、アイソタイプコントロールｍＩｇＧ２ａ；（Ｄ）１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２と組み合わせた、アイソタイプコントロールｍＩｇＧ１；（Ｅ）３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１と組み合わせた１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２；および（Ｆ）１ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１と組み合わせた１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２、による処置からなった。Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ／ｍＩｇＧ２ａは、１０、１４、１７、２１および２４日目に投与した（５回）。抗ＰＤ−１またはｍＩｇＧ１は、１０、１４および１７日目に投与した（３回）。（ｉ）は、抗ＰＤ１処置が終わったときを示し、一方、（ｉｉ）は、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２処置が終わったときを示す。実験は４４日目に終了した。腫瘍の体積を隔週で測定した。各群について、無腫瘍（ＴＦ）マウスの数／群を示す。示される通り、３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１と組み合わせた１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２により処置されたＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰマウスは、いずれか単独の剤では９匹中２匹に対し、９匹中８匹のマウスが無腫瘍と示されることに裏付けられる通り、腫瘍負荷の相乗的減少をもたらした。
【００６３】
【図１１Ａ−Ｂ】腫瘍移植後２１日目の様々なマウス処置群の比較。（Ａ）コントロール抗体（「ｍＩｇＧ２ａ」または「ｍＩｇＧ１」）、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２抗体（「Ｅｌｏ−ｇ２ａ」）または抗マウスＰＤ１抗体（「ＰＤ１」）、およびこれらの組み合わせのいずれかを使用する試験した各処置について、個々の腫瘍体積および中央値としてデータを表す。（Ｂ）統計解析：すべての群をクラスカル・ワリス（Kruskal-Wallis）ノンパラメトリック検定で、続いて、ダン（Dunn）の多重比較検定で比較した。Ｐ値を示す。
【００６４】
【図１２Ａ−Ｆ】Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍モデルにおける、異なる投与スケジュールによるＥｌｏ−ｇ２ａ抗体、抗ＰＤ１抗体またはこれらの組み合わせの抗腫瘍活性。抗ＰＤ−１抗体とＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ抗体の同時投与は、連続投与に対して、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰマウスにおいてインビボで有意に抗腫瘍活性を増強する。処置群は、（Ａ）アイソタイプコントロールの１０ｍｇ／ｋｇｍＩｇＧ２ａおよび１０ｍｇ／ｋｇのｍＩｇＧ１を、１１、１４および１８日目に投与した；（Ｂ）３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１を、１１、１４および１８日目に；（Ｃ）１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２を、１１、１４および１８日目に；（Ｄ）１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２および３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１を、１１、１４および１８日目に同時投与；（Ｅ）１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２を１１日目に、続いて３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１および１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｇ２ａの組み合わせを１４および１８日目に連続投与；および（Ｆ）１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２を１１日目に、続いて３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１を１４および１８日目に連続投与、による処置からなった。縦の破線は、処置の終了時である。実験を４０日目に終了した。腫瘍体積を隔週で測定した。各群について、無腫瘍（ＴＦ）マウスの数／群を示す。示される通り、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２および抗ＰＤ−１の同時投与は、連続処置と比較して、抗腫瘍効果に有意な改善をもたらした。
【００６５】
【図１３】コントロール抗体（「ｍＩｇＧ２ａ」または「ｍＩｇＧ１」）、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２（「Ｅｌｏ−ｇ２ａ」）または抗マウスＰＤ１抗体（「ＰＤ１」）、およびこれらの併用による処置の２１日後の４つの独立した試験における無腫瘍マウスの二項ロジスティック回帰分析。Ｎ＝５−１２マウス／群／試験。有意性を＊＊ｐ＜０.０１；＊＊＊ｐ＜０.０００１で示す。
【００６６】
【図１４Ａ−Ｄ】ＥＧ７−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍モデルにおけるＥｌｏ−ｇ２ａ抗体、抗ＰＤ１抗体またはこれらの併用の抗腫瘍活性。処置群は、（Ａ）アイソタイプコントロール；（Ｂ）１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１；（Ｃ）１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｇ２ａ；および（Ｄ）１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ−１＋１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｇ２ａ（同時処置）による処置からなった。投与は７、１０および１４日目に行った。実験を２８日目に終了した。腫瘍体積を隔週で測定した。各群について、無腫瘍（ＴＦ）マウスの数／群を示す。示される通り、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２および抗ＰＤ−１のＥＧ７マウス腫瘍モデルにおける同時投与は、連続処置と比較して、抗腫瘍効果に有意な改善をもたらした。
【発明を実施するための形態】
【００６７】
発明の詳細な説明
本発明は、Ｂａｌｂ／ｃマウス（８−１０週齢）で行われた前臨床研究のデータに基づき、それらは、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍をＳＣ移植（皮下移植）され、マウスＩｇＧ２を含有するように改変された形態のエロツズマブ（Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａと称する）のＩＰ（腹腔内投与）で処置されたか、または、抗マウスＰＤ１ ｍＡｂ（４Ｈ２）単独または相互の組み合わせで処置されたものである。これらの結果は、エロツズマブと抗ＰＤ１ ｍＡｂの組み合わせが、エロツズマブ単独または抗ＣＤ１ｍＡｂ単独と比較して、相乗的な数の完全な無腫瘍の応答を示すマウスをもたらすことを初めて立証した。特に、抗ＰＤ１単独またはエロツズマブ単独では９匹中２匹で完全退縮が観察されたのに対して、抗ＰＤ１ ｍＡｂおよびエロツズマブが投与されると、３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ１ ｍＡｂが投与された場合で、９匹中８匹のマウスで完全退縮が観察された。加えて、１ｍｇ／ｋｇの用量の抗ＰＤ１ ｍＡｂがエロツズマブと組み合わせて投与されると、無腫瘍の応答の増強が観察された。
【００６８】
マウスＢ細胞リンパ腫細胞株であるＡ２０細胞株を考慮すると、これらの結果は、抗ＰＤ１抗体と組み合わせたエロツズマブによるＢ細胞リンパ腫および他のＢ細胞悪性腫瘍の処置の有用性も立証する。
【００６９】
本発明の教示は、抗ＰＤ１剤と組み合わせた抗ＣＳ１剤の投与と、向上した、いくつかの場合では相乗的な、効力、安全性および耐容性に関する成果とを、初めて関連づけるものと確信される。
【００７０】
本発明の教示は、抗ＰＤ１剤と組み合わせた抗ＣＳ１剤の投与と、向上した、いくつかの場合では相乗的な成果とを、特に、抗ＣＳ１剤が約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され、抗ＰＤ１剤が約１ないし３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される場合に、初めて関連づけるものと確信される。
【００７１】
本発明の目的では、抗ＣＳ１剤は、抗ＰＤ１剤と同時または連続的に投与され得る。
【００７２】
同時投与は、抗ＣＳ１剤と抗ＰＤ１剤が、同時に、本質的に同時に、ほぼ同時に、または、相互に数分間、数時間、または、１または２日間まで離れた合理的な期間内に、投与されることを意味すると意図する。
【００７３】
語句「連続投与レジメン」は、一般的に、少なくとも２剤により特定の順序で患者を処置することを表し、第１の剤の１サイクルをまず投与し、その後他の剤のサイクルを投与する（例えば、抗ＣＳ１剤をまず投与し、続いて抗ＰＤ１剤を投与する、または、抗ＰＤ１剤をまず投与し、続いて抗ＣＳ１剤を投与する）。加えて、語句「連続投与レジメン」は、医薬分野で伝統的に言われている通りの語句「同調投与（phased dosing）レジメン」も包含する。ある文脈では、「連続投与レジメン」は、サイクルが投与される順序のみならず、患者のための処置レジメン全体も表す。例えば、「連続投与レジメン」は、１以上のサイクルの抗ＣＳ１剤、続いて、１以上のサイクルの抗ＰＤ１剤、または、抗ＰＤ１剤と１以上の抗ＣＳ１剤を含む組み合わせを含む、患者のための完全な投与レジメンを含み得る。ある実施態様では、抗ＣＳ１または抗ＰＤ１剤は、抗ＣＳ１または抗ＰＤ１剤が投与されてから、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、または約１４日間後に投与され得る。別の実施態様では、抗ＣＳ１または抗ＰＤ１剤は、抗ＣＳ１または抗ＰＤ１剤が投与されてから、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、または約１４週間後に投与され得る。この文脈では、用語「約」は、述べられた期間より±１、２、３、４、５、６または７日間、長いかまたは短いことを意味すると解釈される。
【００７４】
抗ＣＳ１剤と抗ＰＤ１剤の同時投与、または、抗ＣＳ１剤から抗ＰＤ１剤の連続投与は、患者の以前の治療後に十分な期間が経過した後に投与され得、その期間は、患者の以前の治療が終了し、かつ／または、医師が以前の治療が失敗したと判断した後、少なくとも約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間またはそれ以上であり得る。
【００７５】
本発明のある実施態様では、１以上のサイクルの抗ＣＳ１剤と、それに続く抗ＰＤ１剤を含む１以上のサイクルの連続投与は、場合により、最後の抗ＣＳ１剤サイクルの終わりから抗ＰＤ１剤サイクルの開始までの期間と定義される、「介在期間」を含み得る。本発明の別の態様では、１以上のサイクルの抗ＰＤ１剤と、それに続く抗ＣＳ１剤を含む１以上のサイクルの連続投与は、場合により、最後の抗ＣＳ１剤サイクルの終わりから抗ＰＤ１剤サイクルの開始までの期間と定義される、「介在期間」を含み得る。介在期間は、約２４週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約２０週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約１８週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約１５週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約１２週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約１１週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約１０週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約９週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約８週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約７週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約６週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約５週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約４週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約３週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約２週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は約１週間であり得る。本発明の別の実施態様では、介在期間は、約１、２、３、４、５、６または７日間であり得る。この文脈では、用語「約」は、述べられた介在期間より±１、２、３、４、５、６または７日間、長いかまたは短いことを意味すると解釈される。
【００７６】
本発明のある実施態様では、介在期間は２ないし８週間である。本発明の別の実施態様では、介在期間は３ないし６週間である。
【００７７】
本発明のある実施態様では、介在期間は１日である。
【００７８】
本発明の別の実施態様では、抗ＣＳ１剤が抗ＰＤ１剤と同時に投与されるように、介在期間は０日間未満でもよい。
【００７９】
語句「抗ＰＤ１サイクル」または「抗ＰＤ１剤のサイクル」は、抗ＰＤ１剤の１以上の投与サイクル、または、１以上の抗ＰＤ１剤を含む組み合わせの１以上の投与サイクルを包含することを意図する。
【００８０】
語句「抗ＣＳ１サイクル」または「抗ＣＳ１剤のサイクル」または「治療的有効量の抗ＣＳ１抗体のサイクル」は、抗ＣＳ１剤の１以上の投与サイクル、または、１以上の抗ＣＳ１剤を含む組み合わせの１以上の投与サイクルを包含することを意図する。
【００８１】
本発明のために、「１以上のサイクルの抗ＰＤ１剤サイクル」および／または「抗ＰＤ１剤の１以上のサイクル」は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０サイクルの、いずれかの剤による一次処置と、それに続く、いずれかの剤による１以上の任意の維持サイクルを意味する。維持サイクルは、患者の疾患および／または重篤度に応じて、一次治療について概説したのと同様のサイクル数に従ってよく、あるいは、サイクル数に関して有意に長くても短くてもよい。
【００８２】
本発明のために、「１以上のサイクルの抗ＣＳ１サイクル」および／または「抗ＣＳ１剤の１以上のサイクル」は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９または少なくとも１０サイクルの、いずれかの剤による一次処置と、それに続く、いずれかの剤による１以上の任意の維持サイクルを意味する。維持サイクルは、患者の疾患および／または重篤度に応じて、一次治療について概説したのと同様のサイクル数に従ってよく、あるいは、サイクル数に関して有意に長くても短くてもよい。
【００８３】
本発明の別の態様では、連続投与レジメンは、患者が１以上の抗ＣＳ１剤サイクルを、続いて１以上の抗ＰＤ１剤サイクルを、続いて１以上の抗ＣＳ１剤サイクルおよび／または１以上の抗ＰＤ１剤サイクルを投与される（逆も可）、「複合サイクル（hybrid cycle）」を含み得る。
【００８４】
語句「臨床的有用性」または「有用性」は、患者が完全奏効、部分奏効、安定、または本明細書において他に記載されているものを達成する状態を表す。
【００８５】
本発明の別の態様では、抗ＣＳ１剤と抗ＰＤ１剤の同時投与、または、抗ＣＳ１剤から抗ＰＤ１剤の連続投与は、１以上の免疫調節剤、共刺激経路調節剤とさらに組み合わせて投与され得る。
【００８６】
語句「抗ＣＳ１剤」は、一般的に、エロツズマブを含む、ＣＳ１に結合し、ＣＳ１活性を調節および／または阻害し得、ＮＫ細胞を活性化し得、抗ＣＳ１抗体であり得る剤を表す。
【００８７】
語句「抗ＰＤ１剤」は、一般的に、ニボルマブおよびペムブロリズマブを含む、ＰＤ１に結合し、ＰＤ１活性を調節および／または阻害し得、そのリガンド（ＰＤＬ１、ＰＤＬ２など）の１つがＰＤ１受容体に結合することを阻害し得、抗ＰＤ１抗体であり得る剤を表す。
【００８８】
語句「免疫調節剤」は、一般的に、免疫系の機能を向上または低下させ、かつ／または、本明細書の他の箇所で定義される通りの剤を表し、本明細書で開示される中でも、共刺激経路調節剤、イピリムマブ；オレンシア（登録商標）；ベラタセプト；ＣＤ２８アンタゴニスト、ＣＤ８０アンタゴニスト、ＣＤ８６アンタゴニスト、ＰＤ１アンタゴニスト、ＰＤＬ１アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニストおよびＫＩＲアンタゴニストを含む。
【００８９】
語句「共刺激経路調節剤」は、一般的に、共刺激経路の調節により免疫系の機能を向上または低下させることで機能する剤を表す。本発明のある態様では、共刺激経路調節剤は、免疫賦活薬またはＴ細胞活性化剤であり、ＣＤ２８抗原がその同族リガンドに結合する能力を妨害し、ＣＴＬＡ−４がその同族リガンドに結合する能力を阻害し、共刺激経路を介してＴ細胞応答を増強し、Ｂ７がＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ−４に結合する能力を妨害し、Ｂ７が共刺激経路を活性化する能力を妨害し、ＣＤ８０がＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ−４に結合する能力を妨害し、ＣＤ８０が共刺激経路を活性化する能力を妨害し、ＣＤ８６がＣＤ２８および／またはＣＴＬＡ−４に結合する能力を妨害し、ＣＤ８６が共刺激経路を活性化する能力を妨害し、そして、共刺激経路の活性化を一般的に妨害することができる、いかなる剤も包含し得る。これは、必然的に、共刺激経路のメンバーの中でも特に、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ−４の低分子阻害剤；共刺激経路のメンバーの中でも特に、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ−４に対する抗体；共刺激経路のメンバーの中でも特に、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ−４を対象とするアンチセンス分子；共刺激経路のメンバーの中でも特に、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ−４を対象とするアドネクチン、共刺激経路のメンバーの中でも特に、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ−４のＲＮＡｉ阻害剤（一本鎖と二本鎖の両方）、とりわけ抗ＣＴＬＡ−４アンタゴニストを含む。
【００９０】
本発明の方法で使用するための抗ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト剤は、抗ＣＴＬＡ−４抗体、ヒト抗ＣＴＬＡ−４抗体、マウス抗ＣＴＬＡ−４抗体、哺乳類抗ＣＴＬＡ−４抗体、ヒト化抗ＣＴＬＡ−４抗体、モノクローナル抗ＣＴＬＡ−４抗体、ポリクローナル抗ＣＴＬＡ−４抗体、キメラ抗ＣＴＬＡ−４抗体、ＭＤＸ−０１０（イピリムマブ）、トレメリムマブ、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＴＬＡ−４アドネクチン、抗ＣＴＬＡ−４ドメイン抗体、一本鎖抗ＣＴＬＡ−４フラグメント、重鎖抗ＣＴＬＡ−４フラグメント、軽鎖抗ＣＴＬＡ−４フラグメント、共刺激経路の調節剤、国際公開第２００１／０１４４２４号に開示される抗体、国際公開第２００４／０３５６０７号に開示される抗体、米国出願公開第２００５／０２０１９９４号に開示される抗体、欧州特許第ＥＰ１２１２４２２Ｂ１号に開示される抗体を、限定せずに含む。さらなるＣＴＬＡ−４抗体は、米国特許第５,８１１,０９７号、第５,８５５,８８７号、第６,０５１,２２７号および第６,９８４,７２０号；国際公開第０１／１４４２４号および第００／３７５０４号；および、米国出願公開第２００２／００３９５８１号および第２００２／０８６０１４号に記載されている。本発明の方法で使用できる他の抗ＣＴＬＡ−４抗体は、例えば、国際公開第９８／４２７５２号；米国特許第６,６８２,７３６号および第６,２０７,１５６号；Hurwitz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95(17):10067-10071 (1998); Camacho et al., J. Clin. Oncology, 22(145):Abstract No. 2505 (2004) (antibody CP-675206); Mokyr et al., Cancer Res., 58:5301-5304 (1998)、および米国特許第５,９７７,３１８号、第６,６８２,７３６号、第７,１０９,００３号および第７,１３２,２８１号に開示されているものを含む。これらの引例の各々は、ＣＴＬＡ−４抗体の説明のために、引用により具体的に本明細書の一部とする。好ましい臨床的ＣＴＬＡ−４抗体は、国際公開第０１／１４４２４号に開示のヒトモノクローナル抗体１０Ｄｌ（ＭＤＸ−０１０およびイピリムマブとも呼ばれ、Medarex, Inc., Bloomsbury, NJから入手できる）である。
【００９１】
当分野で公知の通り、エロツズマブは抗ＣＳ１抗体であり、ヒト化抗体の抗ＣＳ１モノクローナル抗体であり、ＣＳ１を発現している骨髄腫細胞に対するナチュラルキラー細胞に媒介される抗体依存的細胞傷害性を増強する。エロツズマブは、ＢＭＳ−９０１６０８またはそのＣＡＳ登録番号で９１５２９６−００−３とも呼ばれ、抗体ＨｕＬｕｃ６３として国際公開第２００４／１００８９８（その全体を全ての目的で引用により本明細書の一部とする）に開示されている。特に、エロツズマブは、ＣＳ−１に特異的に結合するヒト化モノクローナル抗体またはその抗原結合部であって、配列番号１の軽鎖可変領域および配列番号２の重鎖領域を有する軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含むもの、またはその抗原結合フラグメントおよび変異体を表す。エロツズマブはまた、配列番号２のアミノ酸３１−３５を有する重鎖ＣＤＲ１：配列番号２のアミノ酸５０−６６を有する重鎖ＣＤＲ２；配列番号２のアミノ酸９９−１０８を有する重鎖ＣＤＲ３；並びに、配列番号１のアミノ酸２４−３４を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１のアミノ酸５０−５６を有する軽鎖ＣＤＲ２；および、配列番号１のアミノ酸８９−９７を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む抗体と説明され得る。エロツズマブの医薬組成物には、エロツズマブおよび１以上の希釈剤、媒体および／または賦形剤を含む医薬的に許容し得る組成物が全て含まれる。エロツズマブは、Ｉ.Ｖ.により、約１ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇまたは約１０から約２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。
【００９２】
エロツズマブの軽鎖可変領域：
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVGIAVAWYQQKPGKVPKLLIYWASTRHTGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCQQYSSYPYTFGQGTKVEIK（配列番号１）
【００９３】
エロツズマブの重鎖可変領域：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYAPSLKDKFIISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPDGNYWYFDVWGQGTLVTVSS（配列番号２）
【００９４】
当分野で公知の通り、ニボルマブは、抗ＰＤ１抗体であり、機能的ヒトレパートリーを生成する重鎖および軽鎖をコードするヒトの遺伝子を有する遺伝子組換えマウスに由来する、完全にヒトのＩｇＧ４抗体である。ニボルマブは、ＢＭＳ−９３６５５８、ＭＤＸ−１１０６ＯＮＯ−４５３８またはそのＣＡＳ登録番号で９４６４１４−９４−４とも呼ばれ、抗体５Ｃ４として国際公開第２００６／１２１１６８号（その全体を全ての目的で引用により本明細書の一部とする）に開示されている。特に、ＢＭＳ−９３６５５８は、ＰＤ１に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体または抗原結合部であって、配列番号３の軽鎖可変領域および配列番号４の重鎖可変領域を有する軽鎖可変領域および重鎖可変領域を含むもの、またはその抗原結合フラグメントおよび変異体を表す。ニボルマブはまた、配列番号３のアミノ酸２４−３４を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸５０−５６を有する軽鎖ＣＤＲ２、および、配列番号３のアミノ酸８９−９７を有する軽鎖ＣＤＲ３を含み；かつ、配列番号４のアミノ酸３１−３５を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸５０−６６を有する重鎖ＣＤＲ２、および、配列番号４のアミノ酸９９−１０２を有する重鎖ＣＤＲ３を含む抗体と説明され得る。ＢＭＳ−９３６５５８の医薬組成物には、ＢＭＳ−９３６５５８および１以上の希釈剤、媒体および／または賦形剤を含む医薬的に許容し得る組成物が全て含まれる。ＢＭＳ−９３６５５８はＩ.Ｖ.により投与し得る。
【００９５】
ニボルマブの軽鎖可変領域：
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK（配列番号３）
【００９６】
ニボルマブの重鎖可変領域：
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSS（配列番号４）
【００９７】
本明細書の他の箇所でも記載される通り、抗ＣＳ１剤および／または抗ＰＤ１剤は、単独で、または、ペプチド抗原（例えば、ｇｐ１００）と組み合わせて投与され得る。ペプチド抗原の非限定的な例は、ＩＭＤＱＶＰＦＳＶ（配列番号５）およびＹＬＥＰＧＰＶＴＶ（配列番号６）からなる群から選択される配列を含むか、またはそれからなる、ｇｐ１００ペプチドであろう。そのようなペプチドは、経口で、または、好ましくは、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）中で乳化されて１ｍｇで体肢の一つにｓ.ｃ.注射され得、ＩＦＡ中で乳化された同一かまたは異なるペプチド１ｍｇが、他の体肢に注射され得る。
【００９８】
本発明の同時および／または連続投与レジメンが処置において有用であり得る疾患には、多発性骨髄腫、黒色腫、原発性黒色腫、切除不能なステージＩＩＩまたはＩＶの悪性黒色腫、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、前立腺癌；固形腫瘍、膵臓癌、前立腺新生物、乳癌、神経芽細胞腫、腎臓癌、卵巣癌、肉腫、骨癌、精巣癌、造血器癌、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫および骨髄異形成症候群が含まれるが、これらに限定されない。
【００９９】
本発明の同時および／または連続投与が処置において有用であり得るさらなる疾患には、以下のものが含まれるが、これらに限定されない：神経膠腫、消化器癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、甲状腺癌、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形性グリア芽細胞腫、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、および頭頚部癌、胃癌、胚細胞性腫瘍、骨癌、骨腫瘍、成人の骨の悪性線維性組織球腫；小児の骨の悪性線維性組織球腫、肉腫、小児の肉腫、鼻性ナチュラルキラー新生物、形質細胞新生物；骨髄異形成症候群；神経芽細胞腫；精巣胚細胞腫瘍、眼球内黒色腫、骨髄異形成症候群；骨髄異形成性／骨髄増殖性疾患、滑膜肉腫、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病（Ｐｈ＋ＡＬＬ）、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、肥満細胞症および肥満細胞症に伴う症状、および、これらの転移。加えて、疾患は、色素性蕁麻疹、肥満細胞症、例えば、びまん性皮膚肥満細胞症、ヒトの孤立性肥満細胞症、並びに、イヌの肥満細胞腫、および、いくつかの稀なサブタイプ、例えば、水疱性、紅皮症性および末梢血管拡張性の肥満細胞症、血液疾患を伴う肥満細胞症、例えば、骨髄増殖性または骨髄異形成性症候群、または、急性白血病、肥満細胞症を伴う骨髄増殖性疾患、マスト細胞白血病、並びに他のがんが含まれる。疾患の範囲に含まれる他のがんは、以下を含むがこれらに限定されない：膀胱、尿路上皮癌、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮頸部、甲状腺、精巣、特に精巣の精上皮腫、および皮膚のものを含む癌腫；扁平上皮癌を含み；消化管間質腫瘍（「ＧＩＳＴ」）；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫を含むリンパ球系の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病および前骨髄球性白血病を含む、骨髄系の造血器腫瘍；線維肉腫および横紋筋肉腫を含む、間葉系起源の腫瘍；黒色腫、精上皮腫、奇形癌腫、神経芽細胞腫および神経膠腫を含む他の腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫を含む、中枢および末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫および骨肉腫を含む、間葉系起源の腫瘍；および、黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞性癌、奇形癌腫、化学療法抵抗性非セミノーマ胚細胞腫瘍およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍、並びにこれらの転移。
【０１００】
本明細書で使用する用語「処置する」「処置」および「治療」は、根治療法、予防的療法、予防療法および疾患緩和療法を表す。
【０１０１】
本明細書で使用する語句「より積極的な投与レジメン」または「投与頻度増加レジメン」は、投与頻度の増加（約週１回、約週２回、約１日１回、約１日２回、など）、用量の増加または上昇（抗ＣＳ１抗体の場合：約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、約２３、約２４、約２５、約２６、約２７、約２８、約２９、約３０、約３５、約４０ｍｇ／ｋｇ；あるいは、抗ＰＤ１抗体の場合：約０.０１ｍｇ／ｋｇ、約０.０２ｍｇ／ｋｇ、約０.０３ｍｇ／ｋｇ、約０.０５ｍｇ／ｋｇ、約０.０７５ｍｇ／ｋｇ、約０.１ｍｇ／ｋｇ、約０.２ｍｇ／ｋｇ、約０.３ｍｇ／ｋｇ、約０.４ｍｇ／ｋｇ、約０.５ｍｇ／ｋｇ、約０.６ｍｇ／ｋｇ、約０.７ｍｇ／ｋｇ、約０.８ｍｇ／ｋｇ、約０.９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１.２ｍｇ／ｋｇ、約１.４ｍｇ／ｋｇ、約１.６ｍｇ／ｋｇ、約１.８ｍｇ／ｋｇ、または約２.０ｍｇ／ｋｇ；または約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、または約１６ｍｇ）により、または、該抗ＣＳ１剤および／または該抗ＰＤ１剤のバイオアベイラビリティの増加をもたらし得る投与経路の変更により、投与レジメンの抗ＣＳ１剤部分および／または投与レジメンの抗ＰＤ１部分の、基底かつ／または指定の投与レジメンを必然的に超越する投与レジメンを表す。
【０１０２】
ある種の実施態様では、抗ＰＤ−１抗体は、１、２、３または４週間に１回、約０.１ないし１０.０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の用量で投与される。例えば、抗ＰＤ−１抗体は、１または３ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、２週間に１回投与される。
【０１０３】
本発明が特定の方法、薬剤、化合物、組成物または生物学的システムに限定されず、これらは当然変動し得ることを理解すべきである。本明細書で使用される用語は、特定の態様を説明するためだけのものであり、限定を意図していないことも理解すべきである。
【０１０４】
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるとき、単数形の「a」「an」および「the」は、文脈が明らかに否定しない限り、複数への参照も含む。従って、例えば、「ペプチド」への言及は、２またはそれ以上のペプチドの組み合わせを含むといったことがある。
【０１０５】
本明細書で使用する「約」は、量や期間などの測定可能な値に関する場合、断りの無い限り、特定された値からの±２０％または±１０％、好ましくは±５％または±１％、またはわずか±０.１％の変動を、そのような変動は開示された方法を実施するのに適当であるので、包含する。
【０１０６】
本明細書で使用するとき、用語CS1、SLAMF7、SLAM Family Member 7、CD2 Subset、CRACC、CD2-Like Receptor-Activating Cytotoxic Cells、19A24 Protein、19A、CD2-Like Receptor Activating Cytotoxic Cells、CD319、Novel LY9 (Lymphocyte Antigen 9) Like Protein、Membrane Protein FOAP-12、CD319 Antigen、Protein 19A、APEX-1、FOAP12および Novel Ly93 は、互換的に使用され、変異体、アイソフォーム、ヒトＣＳ１の種のホモログ、および、ＣＳ１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。
【０１０７】
ＣＳ１は、多発性骨髄腫細胞で高度に発現される細胞表面糖タンパク質である。ＣＳ１は、２つの細胞外免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインと、免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフを有する細胞内シグナル伝達ドメインを特徴とする（Tai, Y.-T. et al., Blood, 113(18):4309-4318 (Apr. 30, 2009); Bhat, R. et al., J. Leukoc. Biol., 79:417-424 (2006); Fischer, A. et al., Curr. Opin. Immunol., 19:348-353 (2007); Boles, K.S. et al., Immunogenetics, 52:302-307 (2001); Lee, J.K. et al., J. Immunol., 179:4672-4678 (2007); および Veillette, A., Immunol. Rev., 214:22-34 (2006)）。ＣＳ１は、正常および悪性の形質細胞において高レベルで発現されるが、正常な器官、固形腫瘍またはＣＤ３４＋幹細胞では発現されない。ＮＫ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞のサブセットを含む休止リンパ球の小さいサブセットのみが、検出可能であるが低レベルのＣＳ１を発現する（His, E.D. et al., Clin. Cancer Res., 14:2775-2784 (2008) および Murphy, J.J. et al., Biochem. J., 361:431-436 (2002)）。
【０１０８】
ＣＳ１（ＳＬＡＭＦ７）は、Boles らにより単離およびクローン化された（Immunogenetics, 52(3-4):302-307 (2001)）。完全なＣＳ１配列をGENBANK（登録商標） 受託番号 NM_021181.3 に見出すことができ、以下の通りである：
MAGSPTCLTLIYILWQLTGSAASGPVKELVGSVGGAVTFPLKSKVKQVDSIVWTFNTTPLVTIQPEGGTIIVTQNRNRERVDFPDGGYSLKLSKLKKNDSGIYYVGIYSSSLQQPSTQEYVLHVYEHLSKPKVTMGLQSNKNGTCVTNLTCCMEHGEEDVIYTWKALGQAANESHNGSILPISWRWGESDMTFICVARNPVSRNFSSPILARKLCEGAADDPDSSMVLLCLLLVPLLLSLFVLGLFLWFLKRERQEEYIEEKKRVDICRETPNICPHSGENTEYDTIPHTNRTILKEDPANTVYSTVEIPKKMENPHSLLTMPDTPRLFAYENVI（配列番号７）
【０１０９】
本明細書で使用するとき、用語PD1、PD-1、hPD-1、CD279、SLEB2; hSLE1およびPDCD1 およびProgrammed Death-1は、互換的に使用され、変異体、アイソフォーム、ヒトＰＤ１の種のホモログ、および、ＰＤ１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。
【０１１０】
「プログラム細胞死−１（Programmed Death-1）（PD-1）」は、ＣＤ２８ファミリーに属する免疫抑制性受容体である。ＰＤ−１は、インビボで以前に活性化されたＴ細胞において優勢に発現され、２つのリガンド、即ちＰＤ−Ｌ１およびＰＤ−Ｌ２に結合する。本明細書で使用される用語「ＰＤ−１」は、ヒトＰＤ−１（ｈＰＤ−１）、変異体、アイソフォーム、およびｈＰＤ−１の種のホモログおよびｈＰＤ１と少なくとも１つの共通エピトープを有する類似体を含む。完全なｈＰＤ−１配列をGENBANK（登録商標） 受託番号 U64863に見出すことができる。
【０１１１】
完全なヒトＰＤ１配列をGENBANK（登録商標） 受託番号 U64863に見出すことができ、以下の通りである：
MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFFPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL（配列番号８）
【０１１２】
所与の患者のための特定の同時および／または連続的投与レジメンは、患者が診断された特定の疾患に基づいて、または、患者の疾患のステージに関連して、確立され得る。例えば、患者が攻撃性の低いがん、または、初期段階にあるがんと診断されたら、患者は、抗ＣＳ１剤と抗ＰＤ１剤の同時投与および／または抗ＣＳ１剤から抗ＰＤ１剤の連続投与に対して、臨床的効力および／または免疫に関連する応答を達成する見込みが高い。あるいは、患者が攻撃性の高いがん、または、後期段階にあるがんと診断されたら、患者は、該同時投与および／または連続投与に対して、臨床的効力および／または免疫に関連する応答を達成する見込みが低く、従って、高用量の該抗ＣＳ１剤および／または該抗ＰＤ１剤治療を投与すべきであるか、または、より積極的な投与レジメンまたは剤または治療の組み合わせが是認され得る。ある態様では、高い投与レベルの抗ＣＳ１、例えばイピリムマブは、特定の適応症または個体のための典型的な抗ＣＳ１剤の用量より、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９５％多いか（例えば、約０.３ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ）、または特定の適応症または個体のための典型的な用量より、約１.５倍、２倍、２.５倍、３倍、３.５倍、４倍、４.５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍多い抗ＣＳ１剤であろう。別の態様では、抗ＰＤ１剤の高い投与レベルは、特定の適応症または個体のための典型的な抗ＰＤ１剤の用量より、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９５％多いか（例えば、約０.０３ｍｇ／ｋｇ、０.１ｍｇ／ｋｇ、０.３ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ；または、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇまたは約１６ｍｇ）、または、特定の適応症または個体のための典型的な用量より１.５倍、２倍、２.５倍、３倍、３.５倍、４倍、４.５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍または１０倍より多い抗ＰＤ１剤であろう。
【０１１３】
抗ＣＳ１剤および／または抗ＰＤ１剤の治療的有効量は、低分子のモジュレーターであれば、経口投与でき、例えば、または好ましくは、例えばそれば生物学的な剤であれば、患者に注射できる。実際に用いる投与量は、患者の必要および処置される症状の重篤度によって変動し得る。特定の状況に適当な開始投与量の決定は、当業者の能力の範囲内であるが、処置レジメンの決定は、適応症および疾患の段階を考慮に入れることで有利になろう。にもかかわらず、任意の特定の患者のための具体的な用量レベルおよび投与頻度は、変動し得、用いる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、患者の種、齢、体重、一般的健康、性別および食事、投与の様式および時間、排出速度、薬物の組み合わせ、特定の症状の重篤度を含む様々な要因に依存する。処置に好ましい患者は、動物、最も好ましくは哺乳類の種、例えばヒト、および、飼育動物、例えば、イヌ、ネコなどの、がん患者を含む。
【０１１４】
本明細書で使用するとき、用語「誘導」および「誘導期」は、互換的に使用され、臨床的試行における処置の第１の期間を表す。例えば、誘導の間に、対象は抗ＣＳ１抗体と組み合わせた抗ＰＤ１抗体の静脈投与を受け得る。
【０１１５】
本明細書で使用するとき、用語「維持」および「維持期」は、互換的に使用され、臨床的試行における処置の第２の期間を表す。例えば、維持の間に、対象は抗ＣＳ１抗体と組み合わせた抗ＰＤ１抗体を受容し得る。ある種の実施態様では、処置は臨床的効果が観察される限り、または、御しがたい毒性または疾患の進行が生じるまで継続される。
【０１１６】
本明細書で使用するとき、用語「固定用量」「均一用量」および「固定均一用量」は、互換的に使用され、患者の体重または体表面積（ＢＳＡ）に拘わらず患者に投与される用量を表す。従って、固定または均一用量は、ｍｇ／ｋｇ用量ではなく、剤（例えば、抗ＰＤ１抗体および／または抗ＣＳ１抗体）の絶対量として与えられる。
【０１１７】
本明細書で使用するとき、「体表面積（ＢＳＡ）に基づく用量」は、個々の患者の体表面積（ＢＳＡ）に合わせて調節された用量（例えば、抗ＰＤ１抗体および／または抗ＣＳ１抗体の）を表す。ＢＳＡに基づく用量は、ｍｇ／ｋｇ体重で与えられ得る。直接測定せずにＢＳＡに到達するための様々な計算が公開されてきた。最も広く使用されているのは、Du Bois の式（Du Bois, D. et al., Archives of Internal Medicine, 17(6):863-871 (Jun. 1916); および Verbraecken, J. et al., Metabolism - Clinical and Experimental, 55(4):515-514 (Apr. 2006)参照）である。他の例示的なＢＳＡの計算式には、Mosteller の式（Mosteller, R.D., N. Engl. J. Med., 317:1098 (1987)）、Haycock の式（Haycock, G.B. et al., J. Pediatr., 93:62-66 (1978)）、Gehan および George の式（Gehan, E.A. et al., Cancer Chemother. Rep., 54:225-235 (1970)）、Boyd の式（Current, J.D., The Internet Journal of Anesthesiology, 2(2) (1998); および Boyd, E., University of Minnesota, The Institute of Child Welfare, Monograph Series, No. 10., Oxford University Press, London (1935)）、Fujimoto の式（Fujimoto, S. et al., Nippon Eiseigaku Zasshi, 5:443-450 (1968)）、Takahira の式（Fujimoto, S. et al., Nippon Eiseigaku Zasshi, 5:443-450 (1968)）、および、Schlich の式（Schlich, E. et al., Ernaehrungs Umschau, 57:178-183 (2010)）が含まれる。
【０１１８】
本明細書で使用するとき、用語「組み合わせ」および「併用」は、抗ＣＳ１剤と抗ＰＤ１剤の同時投与；または、抗ＣＳ１剤と抗ＰＤ１剤の連続投与；または、抗ＰＤ１と抗ＣＳ１剤の連続投与；または、より複雑な組み合わせを表し、これは、例えば、抗ＣＳ１剤および／または抗ＰＤ１剤と、他の薬剤、例えば、免疫療法剤または共刺激経路調節剤、好ましくは、アゴニスト（即ち、免疫賦活薬)、PROVENGE（登録商標）、チューブリン安定化剤（例えば、パクリタキセル、エポチロン、タキサンなど）、ベバシズマブ、IXEMPRA（登録商標）、ダカルバジン、PARAPLATIN（登録商標）、ドセタキセル、１以上のペプチドワクチン、MDX-1379 黒色腫ペプチドワクチン、１以上のｇｐ１００ペプチドワクチン、鶏痘-PSA-TRICOM（商標）ワクチン、ワクシニア-PSA-TRICOM（商標） ワクチン、ＭＡＲＴ−１抗原、サルグラモスチム、チシリムマブ（ticilimumab）、複合アンドロゲン除去療法との併用；共刺激経路調節剤との併用；チューブリン安定化剤（例えば、パクリタキセル、エポチロン、タキサンなど）との併用；IXEMPRA（登録商標）との併用、ダカルバジンとの併用、PARAPLATIN（登録商標）との併用、ドセタキセルとの併用、１以上のペプチドワクチンとの併用、MDX-1379 黒色腫ペプチドワクチンとの併用、１以上のｇｐ１００ペプチドワクチンとの併用、鶏痘-PSA-TRICOM（商標） ワクチンとの併用、ワクシニア-PSA-TRICOM（商標） ワクチンとの併用、ＭＡＲＴ−１抗原との併用、サルグラモスチムとの併用、チシリムマブとの併用、および／または、複合アンドロゲン除去療法との併用を含み得る。本発明の組み合わせは、また、処置される症状に対する特定の有用性のために選択される他の周知の療法と共に使用され得る。そのような組み合わせは、より攻撃的な適応症を呈する患者に治療選択肢を提供し得る。
【０１１９】
本発明の別の実施態様では、抗ＰＤ１剤と抗ＣＳ１剤の組み合わせは、少なくとも１つの他の薬剤を含み得、その薬剤は、以下のものから選択される：プロテアソーム阻害剤（VELCADE（登録商標）、KYPROLIS（登録商標）、イキサゾミブなど）、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、ISTODAX（登録商標）、ZOLINZA（登録商標）、パノビノスタットなど）、ＣＤ抗３８剤（例えば、ダラツムマブ）、抗ＣＤ１３８剤（例えば、インダツキシマブ（Indatuximab））、アガトリモド（agatolimod）、ベラタセプト、ブリナツモマブ、ＣＤ４０リガンド、抗Ｂ７−１抗体、抗Ｂ７−２抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、ＡＧ４２６３、エリトラン、抗ＰＤ１モノクローナル抗体、抗ＯＸ４０抗体、ＩＳＦ−１５４およびＳＧＮ−７０。
【０１２０】
本発明の別の実施態様では、抗ＰＤ１剤と抗ＣＳ１剤の組み合わせは、少なくとも１つの他の薬剤を含み得、その薬剤は、THALOMID（登録商標）（サリドマイド）、REVLIMID（登録商標）（レナリドミド）、POMALYST（登録商標）（ポマリドミド）、ＣＣ−１２０、ＣＣ−２２０およびＣＣ−４８６（アザシチジン）を含むがこれらに限定されないＩＭｉＤである。特定の実施態様では、本発明は以下の組み合わせを包含する：抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋サリドマイド；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋サリドマイド＋低用量デキサメタゾン；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋サリドマイド＋高用量デキサメタゾン；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋サリドマイド＋デキサメタゾン錠剤；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋サリドマイド＋デキサメタゾンＩＶ；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋レナリドミド；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋レナリドミド＋低用量デキサメタゾン；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋レナリドミド＋高用量デキサメタゾン；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋レナリドミド＋デキサメタゾン錠剤；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋レナリドミド＋デキサメタゾンＩＶ；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋ポマリドミド；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋ポマリドミド＋低用量デキサメタゾン；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋ポマリドミド＋高用量デキサメタゾン；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋ポマリドミド＋デキサメタゾン錠剤；抗ＰＤ１剤＋抗ＣＳ１剤＋ポマリドミド＋デキサメタゾンＩＶ；ここで、該抗ＰＤ１剤は、ニボルマブまたはペムブロリズマブを含む本明細書に記載の抗ＰＤ１剤である。
【０１２１】
本発明の別の実施態様では、抗ＰＤ１剤と抗ＣＳ１剤の組み合わせは、少なくとも１つの他の薬剤を含み得、その少なくとも１つの他の薬剤はデキサメタゾンである。
【０１２２】
本発明の別の実施態様では、抗ＰＤ１剤と抗ＣＳ１剤の組み合わせは、少なくとも１つの他の薬剤を含み得、その少なくとも１つの他の薬剤は、イピリムマブまたはトレメリムマブである。
【０１２３】
本発明の別の実施態様では、抗ＰＤ１剤と抗ＣＳ１剤の組み合わせは、少なくとも１つの他の薬剤を含み得、その少なくとも１つの他の薬剤は、イピリムマブまたはトレメリムマブ、およびデキサメタゾンである。
【０１２４】
本発明の別の実施態様では、抗ＰＤ１剤と抗ＣＳ１剤の組み合わせは、少なくとも１つの他の薬剤を含み得、その少なくとも１つの他の薬剤は、化学療法剤である。
【０１２５】
様々な化学療法剤が当分野で知られており、それらのいくつかは本明細書に記載されている。あるタイプの化学療法剤は、金属配位錯体と呼ばれる。このタイプの化学療法剤は、細胞の核内で鎖間のＤＮＡクロスリンクを優勢に形成し、それにより細胞の複製を防止すると考えられている。その結果、腫瘍の増殖がまず抑圧され、次いで逆転される。別のタイプの化学療法剤は、アルキル化剤と呼ばれる。これらの化合物は、分裂しているがん細胞のＤＮＡに外来組成物または分子を挿入することにより機能する。これらの外来部分の結果、がん細胞の正常な機能が乱され、増殖が防止される。別のタイプの化学療法剤は、抗悪性腫瘍薬である。このタイプの薬剤は、がん細胞を阻害し、殺し、その増殖および拡散を阻害する。また他のタイプの抗癌剤には、非ステロイド性アロマターゼ阻害剤、二官能性アルキル化剤などが含まれる。
【０１２６】
本発明の別の実施態様では、化学療法剤は、イクサベピロン（IXEMPRA（登録商標））およびパクリタキセル（TAXOL（登録商標））などの微小管安定化剤を含み得、それは、多くのタイプのがんの処置に一般的に使用され、ＣＴＬＡ−４阻害と組み合わせるための魅力的な薬剤のクラスである。
【０１２７】
語句「マイクロチューブリン（microtubulin）調節剤」は、マイクロチューブリンを安定化するか、またはマイクロチューブリン合成および／または重合を不安定化する薬剤を表すことを意図する。
【０１２８】
マイクロチューブリン調節剤の１つはパクリタキセルであり（TAXOL（登録商標）として販売されている）、これは、有糸分裂の異常および停止を引き起こし、微小管のカルシウム安定凝集構造への集合を促進し、細胞複製の阻害をもたらすと知られている。
【０１２９】
エポチロンは、TAXOL（登録商標）の生物学的作用を模倣し（Bollag et al., Cancer Res., 55:2325-2333 (1995)）、競合研究では、微小管へのTAXOL（登録商標）結合の競合的阻害剤として作用する。しかしながら、エポチロンは、エポチロンがTAXOL（登録商標）と比較して大幅に少ない多剤耐性細胞株に対する効能の低下を示す点で（Bollag et al. (1995)）、TAXOL（登録商標）に対して有意な利点を有する。さらに、エポチロンは、TAXOL（登録商標）よりも相当に低い効率でＰ−糖タンパク質により細胞から排出される（Gerth (1996)）。さらなるエポチロンの例は、２００９年１月７日に出願された共願のＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０３０２９１において提供され、その全体を全ての目的で引用により本明細書の一部とする。
【０１３０】
イクサベピロンは、チューブリンに結合し、チューブリン重合および微小管安定化を促進し、それにより細胞周期のＧ２／Ｍ期で細胞を停止させ、腫瘍細胞のアポトーシスを誘導する、パツピロン（patupilone）の半合成ラクタム類似体である。
【０１３１】
免疫療法との併用において有用な微小管調節剤のさらなる例には、アロコルヒチン（allocolchicine）（NSC 406042）、ハリコンドリンＢ（NSC 609395）、コルヒチン（NSC 757）、コルヒチン誘導体（例えば、NSC 33410）、ドラスタチン１０（NSC 376128)、マイタンシン（NSC 153858）、リゾキシン（NSC 332598）、パクリタキセル（TAXOL（登録商標）、NSC 125973）、TAXOL（登録商標）誘導体（例えば、誘導体（例えば、NSC 608832）、チオコルヒチン（thiocolchicine）NSC 361792）、トリチルシステイン（NSC 83265）、硫酸ビンブラスチン（NSC 49842）、硫酸ビンクリスチン（NSC 67574）、天然および合成エポチロン、これには、エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ、エポチロンＤ、デスオキシエポチロンＡ、デスオキシエポチロンＢ、［１Ｓ−［１Ｒ＊,３Ｒ＊（Ｅ）,７Ｒ＊,１０Ｓ＊,１１Ｒ＊,１２Ｒ＊,１６Ｓ＊］］−７−１１−ジヒドロキシ−８,８,１０,１２,１６−ペンタメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４−アザ−１７オキサビシクロ［１４.１.０］ヘプタデカン−５,９−ジオン（２００１年７月１７日発行の米国特許第６,２６２,０９４号に開示）、［１Ｓ−［１Ｒ＊,３Ｒ＊（Ｅ）,７Ｒ＊,１０Ｓ＊,１１Ｒ＊,１２Ｒ＊,１６Ｓ＊］］−３−［２−［２−（アミノメチル）−４−チアゾリル］−１−メチルエテニル］−７,１１−ジヒドロキシ−８,８,１０,１２,１６−ペンタメチル−４−１７−ジオキサビシクロ［１４.１.０］−ヘプタデカン−５,９−ジオン（２０００年２月１７日出願の米国特許出願番号第０９／５０６,４８１、および、本明細書の実施例７および８に開示）、およびそれらの誘導体が含まれるがこれらに限定されない；および、他の微小管崩壊剤が含まれるが、これらに限定されない。さらなる抗悪性腫瘍剤には、ディスコデルモリド（Service, Science, 274:2009 (1996)参照）、エストラムスチン、ノコダゾール、ＭＡＰ４などが含まれる。そのような薬剤の例は、また、科学文献および特許文献にも記載されており、例えば、Bulinski, J. Cell Sci., 110:3055-3064 (1997); Panda, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:10560-10564 (1997); Muhlradt, Cancer Res., 57:3344-3346 (1997); Nicolaou, Nature, 387:268-272 (1997); Vasquez, Mol. Biol. Cell., 8:973-985 (1997); and Panda, J. Biol. Chem., 271:29807-29812 (1996)を参照されたい。
【０１３２】
本発明の方法で使用するための好ましい治療剤の組み合わせおよび例示的な投与量を以下に記載する。
【表１】
2017537927.tif 000002
【０１３３】
この表は抗ＣＳ１および抗ＰＤ１抗体の例示的な投与量の範囲を提供するが、本発明の医薬組成物を製剤化するときには、臨床医は、処置される患者の症状により是認される好ましい投与量を利用し得る。例えば、エロツズマブを、好ましくは、約１０ｍｇ／ｋｇで３週間毎に投与し得る。ニボルマブは、好ましくは、約０.０３、０.１、１、３、０.１−１０ｍｇ／ｋｇまたは３もしくは８ｋｇで、３週間毎に投与し得る。
【０１３４】
抗ＣＳ１抗体は、好ましくは、約０.１−２０ｍｇ／ｋｇで、または、最大耐容量で投与され得る。本発明のある実施態様では、ある投与量の抗ＣＳ１抗体が、約３週間毎に投与される。あるいは、抗ＣＳ１抗体は、投与量が上昇するレジメンにより投与され得、これは、第１の投与量の抗ＣＳ１抗体を約１ｍｇ／ｋｇで、第２の投与量の抗ＣＳ１抗体を約３ｍｇ／ｋｇで、そして、第３の投与量の抗ＣＳ１抗体を約１０ｍｇ／ｋｇで投与することを含む。
【０１３５】
他の具体的な実施態様では、投与量が上昇するレジメンは、第１の投与量の抗ＣＳ１抗体を約３ｍｇ／ｋｇで、そして、第２の投与量の抗ＣＳ１抗体を約１０ｍｇ／ｋｇで投与することを含む。
【０１３６】
抗ＰＤ１抗体は、好ましくは、約０.０３、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇまで、または、最大耐容量で投与され得る。本発明のある実施態様では、ある投与量の抗ＰＤ１抗体が、約３週間毎に投与される。あるいは、抗ＰＤ１抗体は、投与量が上昇するレジメンにより投与され得、これは、第１の投与量の抗ＰＤ１抗体を約０.１ｍｇ／ｋｇで、第２の投与量の抗ＰＤ１抗体を約０.３ｍｇ／ｋｇで、そして、第３の投与量の抗ＰＤ１抗体を約１ｍｇ／ｋｇで投与することを含む。あるいは、抗ＰＤ１抗体は、投与量が上昇するレジメンにより投与され得、これは、第１の投与量の抗ＰＤ１抗体を約０.３ｍｇ／ｋｇで、第２の投与量の抗ＰＤ１抗体を約１ｍｇ／ｋｇで、そして、第３の投与量の抗ＰＤ１抗体を約３ｍｇ／ｋｇで投与することを含む。
【０１３７】
他の具体的な実施態様では、投与量が上昇するレジメンは、第１の投与量の抗ＰＤ１抗体を約１ｍｇ／ｋｇで、そして、第２の投与量の抗ＰＤ１抗体を約３ｍｇ／ｋｇで投与することを含む。
【０１３８】
他の具体的な実施態様では、投与量が上昇するレジメンは、第１の投与量の抗ＰＤ１抗体を約３ｍｇで、そして、第２の投与量の抗ＰＤ１抗体を約８ｍｇで投与することを含む。
【０１３９】
さらに、本発明は、投与量が上昇するレジメンを提供し、それは、増加する投与量の抗ＣＳ１抗体を約６週間毎に投与することを含む。
【０１４０】
ある実施態様では、抗ＣＳ１抗体は、誘導期の（１）１週１日目、（２）２週１日目、（３）３週１日目、（４）４週１日目、（５）５週１日目、（６）６週１日目、（７）７週１日目、および（８）８週１日目に投与される。別の実施態様では、抗ＰＤ１抗体は、誘導期の（１）１週１日目、（２）４週１日目、および（３）７週１日目に投与される。別の実施態様では、抗ＣＳ１抗体は、維持期の（１）１０週１日目および（２）１５週１日目に投与される。別の実施態様では、抗ＰＤ１抗体は、維持期の（１）１０週１日目に投与される。別の実施態様では、維持期は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０またはそれ以上のサイクルで反復される。
【０１４１】
実際に用いる投与量は、患者の必要および処置される症状の重篤度によって変動し得る。一般的に、処置は化合物の最適用量よりも少ない投与量で開始する。その後、その状況での最適な効果に達するまで、投与量を少量ずつ増やす。便宜上、総１日投与量を、所望により分割して一日の間に数回で投与してもよい。間欠的な治療（例えば、３週間のうち１週間、４週間のうち３週間）も使用し得る。
【０１４２】
ある特定の実施態様では、抗ＣＳ１抗体および抗ＰＤ−１抗体は、以下の投与レジメンのいずれかに従って投与される：
（ａ）４週間にわたり、毎週、抗ＣＳ１抗体１０ｍｇ、および、２週間毎に抗ＰＤ−１抗体３ｍｇ／ｋｇ；
（ｂ）４週間にわたり、毎週、抗ＣＳ１抗体１０ｍｇ、および、２週間毎に、抗ＰＤ−１抗体１ｍｇ／ｋｇ；
（ｃ）２週間毎に抗ＣＳ１抗体１０ｍｇ、および、３週間毎に抗ＰＤ−１抗体３ｍｇ／ｋｇ；および、
（ｄ）３週間毎に抗ＣＳ１抗体１０ｍｇ、および、２週間毎に抗ＰＤ−１抗体３ｍｇ／ｋｇ。
抗ＰＤ１抗体は、最初の処置サイクルの後、疾患の進行または許容し得ない毒性まで、２週間に１回投与され得る。
【０１４３】
他の実施態様では、抗ＣＳ１抗体および抗ＰＤ−１抗体は、抗ＣＴＬＡ４抗体（例えば、イピリムマブまたはトレメリムマブ）と組み合わせて、以下の投与レジメンのいずれかに従って投与し得る：
（ａ）４週間にわたり、毎週、抗ＣＳ１抗体１０ｍｇ、および、３週間毎に抗ＣＴＬＡ４抗体１ｍｇ／ｋｇおよび抗ＰＤ−１抗体３ｍｇ／ｋｇ；
（ｂ）４週間にわたり、２週間毎に抗ＣＳ１抗体１０ｍｇ、および、３週間毎に抗ＣＴＬＡ４抗体１ｍｇ／ｋｇおよび抗ＰＤ−１抗体３ｍｇ／ｋｇ；
（ｃ）４週間にわたり、毎週、抗ＣＳ１抗体１０ｍｇ、および、２週間毎に抗ＣＴＬＡ４抗体１ｍｇ／ｋｇおよび抗ＰＤ−１抗体３ｍｇ／ｋｇ；および
（ｄ）３週間にわたり、毎週ＣＳ１抗体１０ｍｇ、および、２週間毎に抗ＣＴＬＡ４抗体１ｍｇ／ｋｇおよび抗ＰＤ−１抗体３ｍｇ／ｋｇ。
抗ＰＤ１抗体は、最初の処置サイクルの後、疾患の進行または許容し得ない毒性まで、２週間に１回投与され得る。
【０１４４】
ＩＭｉＤの添加を含む組み合わせのために、処置に推奨される用量を提供することは、処方する医師の技能の範囲内であろう。サリドマイドに示唆される用量には、５０ｍｇ、１００ｍｇまたは２００ｍｇが含まれ、１ヵ月のサイクルの一部として投与される場合、サリドマイドを１日目から１４日目に投与する。レナリドミドに示唆される用量には、１日１回２５ｍｇが含まれ、１ヵ月のサイクルの一部として投与される場合、レナリドミドを１日目から２１日目に投与する。ポマリドミドに示唆される用量には、１日１回、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇまたは４ｍｇが含まれ、１ヵ月のサイクルの一部として投与される場合、ポマリドミドを１日目から２１日目に投与する。
【０１４５】
デキサメタゾンの添加を含む組み合わせのために、処置に推奨される用量を提供することは、処方する医師の技能の範囲内であろう。低用量デキサメタゾンに示唆される用量には、１日１回２８ｍｇが含まれ、１ヵ月のサイクルの一部として投与される場合、低用量デキサメタゾンを、１、８、１５および２２日目（サイクル１および２に）；１および１５日目（サイクル３ないし１８）；および、１日目（サイクル１９以降）に投与する。高用量デキサメタゾンに示唆される用量には、１日１回４０ｍｇが含まれ、１ヵ月のサイクルの一部として投与される場合、低用量デキサメタゾンを８ないし２２日目（サイクル３ないし１８に）；および、８、１５および２２日目（サイクル１９以降）に投与する。ＩＶデキサメタゾンに示唆される用量には、１日１回８ｍｇＩＶが含まれ、１ヵ月のサイクルの一部として投与される場合、ＩＶデキサメタゾンを、１、８、１５および２２日目（サイクル１および２に）；１および１５日目（サイクル３ないし１８）および１日目（サイクル１９以降）に投与する。
【０１４６】
本明細書における本発明の多くの態様を実施するにあたり、生物学的サンプルは、好ましくは、血液、血液細胞（赤血球または白血球）から選択され得る。サンプル由来の細胞を使用でき、または、細胞サンプルの可溶化液を使用できる。ある種の実施態様では、生物学的サンプルは血液細胞を含む。
【０１４７】
本発明において使用するための医薬組成物は、１つまたは複数の共刺激経路調節剤を目的の達成に有効な量で含む組成物を含み得る。治療的有効用量は、症状または状態を改善する有効成分の量を表す。ヒトにおける治療効力および毒性は、例えば、ＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効である用量）およびＬＤ５０（集団の５０％に致死的である用量）として、細胞培養または実験動物において標準的な医薬的手順で予測できる。
【０１４８】
抗ＰＤ１剤または抗ＣＳ１剤の「治療的有効量」は、患者の適応症および疾患の重篤度に応じて、典型的な用量より１ないし１４倍またはそれ以上に高い範囲にあってよい。従って、本明細書に記載の任意の疾患に対する抗ＰＤ１剤または抗ＣＳ１剤の治療的に意味のある用量は、例えば、指定の用量または標準的な用量より、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０または３００倍高くてもよい。あるいは、抗ＰＤ１剤または抗ＣＳ１剤の治療的に意味のある用量は、例えば、約１.０倍、約０.９倍、０.８倍、０.７倍、０.６倍、０.５倍、０.４倍、０.３倍、０.２倍、０.１倍、０.０９倍、０.０８倍、０.０７倍、０.０６倍、０.０５倍、０.０４倍、０.０３倍、０.０２倍、０.０１倍であってもよい。
【０１４９】
処置において連続投与レジメンが有用であり得る疾患には、以下の疾患の１つまたはそれ以上が含まれる：黒色腫、前立腺癌、肺癌、例えば、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病、および、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病（Ｐｈ＋ＡＬＬ）を含む）、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、消化器癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形性グリア芽細胞腫、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、および頭頚部癌、胃癌、胚細胞性腫瘍、小児の肉腫、鼻性ナチュラルキラー、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、肥満細胞症および肥満細胞症に伴う症状も含まれる。加えて、疾患には、色素性蕁麻疹、肥満細胞症、例えば、びまん性皮膚肥満細胞症、ヒトの孤立性肥満細胞症、並びに、イヌの肥満細胞腫、および、いくつかの稀なサブタイプ、例えば、水疱性、紅皮症性および末梢血管拡張性の肥満細胞症、血液疾患を伴う肥満細胞症、例えば、骨髄増殖性または骨髄異形成性症候群、または、急性白血病、肥満細胞症を伴う骨髄増殖性疾患およびマスト細胞白血病が含まれる。様々なさらなるがんも、タンパク質チロシンキナーゼに関連する疾患の範囲に含まれ、例えば、以下のものを含む：膀胱、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、子宮頸部、甲状腺、精巣、特に精巣の精上皮腫、および皮膚のものを含む癌腫；扁平上皮癌を含み；消化管間質腫瘍（「ＧＩＳＴ」）；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリー細胞リンパ腫およびバーキットリンパ腫を含むリンパ球系の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病および前骨髄球性白血病を含む、骨髄系の造血器腫瘍；線維肉腫および横紋筋肉腫を含む、間葉系起源の腫瘍；黒色腫、精上皮腫、奇形癌腫、神経芽細胞腫および神経膠腫を含む他の腫瘍；星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫を含む、中枢および末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫および骨肉腫を含む、間葉系起源の腫瘍；および、黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞性癌、奇形癌腫、化学療法抵抗性非セミノーマ胚細胞腫瘍およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍。ある好ましい実施態様では、疾患は、白血病、乳癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌、黒色腫または固形腫瘍である。ある好ましい実施態様では、白血病は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｐｈ＋ＡＬＬ、ＡＭＬ、イマチニブ抵抗性ＣＭＬ、イマチニブ不耐容ＣＭＬ、進行性ＣＭＬ、リンパ系急性転化期ＣＭＬである。
【０１５０】
用語「がん」「癌腫」または「悪性」は、制御されない細胞増殖を典型的な特徴とする、哺乳動物または他の生物の生理的状態を表すか、または説明する。がんの例には、例えば、固形腫瘍、黒色腫、白血病、リンパ腫、芽細胞腫、癌腫および肉腫が含まれる。そのようながんのより具体的な例には、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病（Ｐｈ＋ＡＬＬ）、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神経膠腫、消化器癌、腎臓癌、卵巣癌、肝臓癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、腎臓癌、前立腺癌、甲状腺癌、神経芽細胞腫、膵臓癌、多形性グリア芽細胞腫、子宮頸癌、胃癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、および頭頚部癌、胃癌、胚細胞性腫瘍、小児の肉腫、鼻性ナチュラルキラー、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、および慢性リンパ性白血病（ＣＭＬ）が含まれる。
【０１５１】
「固形腫瘍」には、例えば、肉腫、黒色腫、結腸癌、乳癌、前立腺癌または他の固形腫瘍のがんが含まれる。
【０１５２】
「白血病」は、造血器官の進行性の悪性疾患を表し、一般的に、血液および骨髄における白血球およびそれらの前駆細胞の異常な増殖および発達を特徴とする。白血病は、一般的に、（１）疾患の期間および特徴−急性または慢性；（２）関与する細胞のタイプ；骨髄性、リンパ性または単球性；および（３）血液中の異常細胞数の増加の有無−白血病性または無白血病性（亜白血性）、に基づいて臨床的に分類される。白血病には、例えば、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性顆粒球白血病、慢性顆粒球白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、無白血病性白血病、白血性（leukocythemic）白血病、好塩基球性白血病、芽細胞白血病、ウシ白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚白血病、胚性白血病、好酸球性白血病、グロス（Gross'）白血病、ヘアリー細胞白血病、血芽球性（hemoblastic）白血病、血球芽細胞性（hemocytoblastic）白血病、組織球性白血病、幹細胞白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ行性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、リンパ向性白血病、リンパ様白血病、リンパ肉腫細胞白血病、マスト細胞白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性（micromyeloblastic）白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄球性白血病、骨髄性顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ型（Naegeli）白血病、形質細胞白血病、形質細胞性白血病、前骨髄球性白血病、リーダー（Rieder）細胞白血病、シリング型（Schilling's）白血病、幹細胞白血病、亜白血性白血病および未分化細胞白血病が含まれる。ある種の態様では、本発明は、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、および／または、フィラデルフィア染色体陽性急性リンパ性白血病（Ｐｈ＋ＡＬＬ）の処置を提供する。
【０１５３】
本明細書において、患者に抗ＣＳ１抗体および抗ＰＤ１抗体を投与することを含む、患者におけるがん（例えば、多発性骨髄腫を含む血液のがん）の処置方法が提供される。好ましくは、この併用療法は、治療的相乗効果を示す。
【０１５４】
「治療的相乗効果」は、治療剤の併用による患者の処置が、その最適用量で使用される個々の構成成分により達成される成果よりも、治療的に優れた成果を示す現象を表す（Corbett, T.H. et al., Cancer Treatment Reports, 66:1187 (1982)）。例えば、治療的に優れた成果は、患者が、ａ）併用の個々の構成成分が併用と同じ用量で単剤治療として各々投与される場合と同等以上の治療的効果を受容する一方で、有害事象の発生が少ない、または、ｂ）各構成成分が個々の成分として投与されるのと同じ用量で併用において投与される場合に、併用の個々の構成成分による処置よりも高い治療的効果を受容する一方で、用量を限定する毒性を示さない、ものである。従って、ある実施態様では、抗ＰＤ１抗体および抗ＣＳ１抗体の投与は、いずれか単独の抗体の投与と比較して、処置に対して相乗的効果を有する。
【０１５５】
あるいは、抗ＣＳ１抗体および抗ＰＤ１抗体の併用療法は、いずれかの抗体単独による単剤治療と比較して、がん（例えば、多発性骨髄腫）の抑制に対して、相加的または優加法的（superadditive）効果を有し得る。「相加的」は、それぞれ個々の成分による単剤療法により達成される最良の別個の結果よりも高い程度の結果を意味し、一方、「優加法的」は、そのような別個の結果の合計を超える程度の結果を示すために使用される。ある実施態様では、相加的効果は、例えば、パラプロテインの減少、形質細胞増加症の減少、経時的な骨病変の減少、奏効率の増加または生存期間中央値もしくは全生存期間の増加として測定される。
【０１５６】
多発性骨髄腫の応答または進行は、特に、典型的には、パラプロテインの減少（または上昇）の大きさに従って測定される。しかしながら、骨髄における形質細胞増加症（骨髄における形質細胞の割合の増加）の程度、骨病変の進行、および、軟組織形質細胞腫の存在（軟組織において増殖する悪性形質細胞腫瘍）も考慮される（Smith, D. et al., BMJ, 346:f3863 (Jun. 26, 2013)）。治療応答には、以下のものが含まれ得る：
【表２】
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【０１５７】
本明細書に開示の方法に従って処置される患者は、好ましくは、多発性骨髄腫の少なくとも１つの徴候の改善を経験する。ある実施態様では、処置される患者は、完全奏効（ＣＲ）、非常に良好な部分奏効（ＶＧＰＲ）、部分奏効（ＰＲ）、または安定（ＳＤ）を示す。
【０１５８】
ある実施態様では、改善は、パラプロテインの減少および／または軟組織形質細胞腫の縮小または消失により測定される。別の実施態様では、病変は、Ｘ線検査により測定できる。別の実施態様では、細胞診または組織診を使用して、治療への応答を評価できる。
【０１５９】
他の実施態様では、本明細書で提供される方法のいずれかに従う抗ＰＤ１抗体および抗ＣＳ１抗体の有効量の投与は、パラプロテインの減少、軟組織形質細胞腫の縮小または消失、ＣＲ、ＶＧＰＲ、ＰＲまたはＳＤからなる群から選択される少なくとも１つの治療効果を奏する。また他の実施態様では、これらの処置方法は、抗ＰＤ１抗体または抗ＣＳ１抗体単独により達成されるものよりも良好な臨床的有用率（ＣＢＲ＝ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ＞６ヵ月）を奏する。他の実施態様では、臨床的有用率の改善は、抗ＰＤ１抗体または抗ＣＳ１抗体単独と比較して、約２０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％またはそれ以上である。
【０１６０】
抗体
用語「抗体」は、少なくとも１つの抗体に由来する抗原結合部位（例えば、ＶＨ／ＶＬ領域またはＦｖ、またはＣＤＲ）を含むポリペプチドを表す。抗体には、抗体の既知の形態が含まれる。例えば、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体またはキメラ抗体であり得る。抗体は、また、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ＡＦＦＩＢＯＤＹ（登録商標）、ナノボディまたはドメイン抗体であり得る。抗体は、また、以下のアイソタイプのいずれかであり得る：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡｓｅｃ、ＩｇＤおよびＩｇＥ。抗体は、天然産生の抗体であってもよく、変更された抗体であってもよい（例えば、変異、欠失、置換、非抗体部分への結合により）。例えば、抗体は、抗体の特性（例えば、機能的特性）を変更する１以上の変異型アミノ酸を含み得る（天然産生の抗体と比較して）。例えば、当分野では、例えば、患者における半減期、エフェクター機能および／または抗体に対する免疫応答に影響する、多数のそのようは変更が知られている。抗体という用語は、少なくとも１つの抗体由来の抗原結合部位を含む人工ポリペプチドコンストラクトも含む。
【０１６１】
抗体は、既知形態の抗体も含む。例えば、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体またはキメラ抗体であり得る。抗体は、また、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ＳｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ＡＦＦＩＢＯＤＹ（登録商標）、ナノボディまたはドメイン抗体であり得る。抗体は、また、以下のアイソタイプのいずれかであり得る：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＡｓｅｃ、ＩｇＤおよびＩｇＥ。抗体は、天然産生の抗体であってもよく、変更された抗体であってもよい（例えば、変異、欠失、置換、非抗体部分への結合により）。例えば、抗体は、抗体の特性（例えば、機能的特性）を変更する１以上の変異型アミノ酸を含み得る（天然産生の抗体と比較して）。例えば、当分野では、例えば、患者における半減期、エフェクター機能および／または抗体に対する免疫応答に影響する、多数のそのようは変更が知られている。抗体という用語は、少なくとも１つの抗体由来の抗原結合部位を含む人工ポリペプチドコンストラクトも含む。
【０１６２】
本発明の同時投与レジメンは、併用の１つの成分としての抗体の使用を含み得る。例えば、ＣＳ−１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、好ましくは、エロツズマブ、および／またはＰＤ１に特異的に結合する抗体、好ましくはニボルマブ。
【０１６３】
あるいは、本発明の連続投与レジメンは、併用の１つの成分としての抗体の使用を含み得る。例えば、ＣＳ−１ポリペプチドに特異的に結合する抗体、好ましくは、エロツズマブ、および／またはＰＤ１に特異的に結合する抗体、好ましくはニボルマブ。
【０１６４】
用語「抗体」は、また、最も広い意味で使用され、具体的には、所望の生物学的活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、複数のエピトープ特異性を有する抗体組成物、二重特異性抗体、二特異性抗体、キメラ、一本鎖およびヒト化抗体、並びに、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ）に及ぶ。抗体は、生物学的アッセイにおいて使用するために、抗体の検出を補助するように標識（例えば、放射性同位体標識、蛍光標識）されていてもよい。
【０１６５】
抗体は、例えば、目的の小型ペプチドを含有する未加工のポリペプチドまたはフラグメントを使用して調製でき、それらは、免疫化する抗原として使用するために、組換え的に調製できる。動物を免疫するために使用されるポリペプチドまたはオリゴペプチドは、ＲＮＡの翻訳に由来してもよく、化学的に合成されてもよく、所望により、担体タンパク質に結合させてもよい。一般的に使用される、ペプチドに化学的に結合させる担体には、例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）およびサイログロブリンが含まれる。結合させたペプチドを、次いで、動物（例えば、マウス、ラットまたはウサギ）を免疫するのに使用する。
【０１６６】
用語「抗原決定基」は、特定の抗体との接触をなす分子の部分（即ち、エピトープ）を表す。タンパク質またはタンパク質のフラグメントを使用して宿主動物を免疫すると、タンパク質の多数の領域が、タンパク質のある領域または三次元構造に特異的に結合する抗体の産生を誘導できる；これらの領域または構造の各々が、抗原決定基と呼ばれる。抗原決定基は、未加工の抗原（即ち、免疫反応を誘起するために使用される免疫原）と、抗体への結合について競合できる。
【０１６７】
語句「特異的に結合する」は、他の生物学的物質の不均一な集団の存在下における、標的の存在に限定的である結合反応を表す。従って、設定されたアッセイ条件下で、特定の結合領域は、特定の標的に優先的に結合し、試験サンプル中に存在する他の成分には有意な量で結合しない。そのような条件下での標的への特異的結合は、特定の標的に対する特異性のために選択される結合部分を必要とし得る。特定の分析物と特定的に反応性である結合領域を選択するために、様々なアッセイ形式を使用できる。典型的には、特異的または選択的反応は、少なくともバックグラウンドのシグナルまたはノイズの２倍、より典型的にはバックグラウンドの１０倍である。
【０１６８】
抗ＣＳ１抗体
本発明における使用に適する抗ヒトＣＳ１抗体（または、それに由来するＶＨおよび／またはＶＬドメイン）は、当分野で周知の方法を使用して生成できる。あるいは、当分野で認められている抗ＣＳ１抗体を使用できる。例えば、Bouchon et al., J. Immunol., 167:5517-5521 (2001) に記載のモノクローナル抗体ｍＡｂ １６２を使用でき、その教示は、全体的に、そして、この抗体に直接関連する部分について特に、引用により本明細書の一部とする。別の既知のＣＳ１抗体には、Matthew et al. （米国特許第７,０４１,４９９号）に記載の抗ＣＳ１抗体が含まれ、その教示は、全体的に、そして、この抗体に直接関連する部分について特に、引用により本明細書の一部とする。他の既知のＣＳ１抗体には、抗ＣＳ１抗体Ｌｕｃ６３、および、同じエピトープを共有するＬｕｃ４、Ｌｕｃ１２、Ｌｕｃ２３、Ｌｕｃ２９、Ｌｕｃ３２およびＬｕｃ３７を含む他の抗体、抗ＣＳ１抗体Ｌｕｃ９０、および、Ｌｕｃ３４、Ｌｕｃ６９およびＬｕｃＸを含む同じエピトープを共有する他の抗体、および、抗ＣＳ１抗体Ｌｕｃ２、Ｌｕｃ３、Ｌｕｃ１５、Ｌｕｃ２２、Ｌｕｃ３５、Ｌｕｃ３８、Ｌｕｃ３９、Ｌｕｃ５６、Ｌｕｃ６０、ＬｕｃＸ.１、ＬｕｃＸ.２、およびＰＤＬ−２４１が含まれ、これらは Williams ら（米国特許第７,７０９,６１０号）に記載されており、その教示は、全体的に、そして、これらの抗体に直接関連する部分について特に、引用により本明細書の一部とする。これらの当分野で認められている抗体のいずれかとＣＳ１への結合を競合する抗体も使用できる。
【０１６９】
例示的な抗ＣＳ１抗体は、各々配列番号１７および１８に示す配列を有する重鎖および軽鎖を含むエロツズマブ（ＢＭＳ−９０１６０８およびＨｕＬｕｃ６３とも呼ばれる）、または、その抗原結合フラグメントおよび変異体である。エロツズマブは、国際公開第２００４／１００８９８号、第２００５／１０２３８号、第２００８／０１９３７６号、第２００８／０１９３７８号、第２００８／０１９３７９号、第２０１０／０５１３９１号、第２０１１／０５３３２１号および第２０１１／０５３３２２号に記載されているヒト化ＩｇＧ抗ＣＳ−１モノクローナル抗体であり、これらの教示を引用により本明細書の一部とする。エロツズマブは、ＮＫ細胞を介してＡＤＣＣを媒介すると知られている（van Rhee, F. et al., Mol. Cancer Ther., 8(9):2616-2624 (2009))。
【０１７０】
他の実施態様では、抗体は、エロツズマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を含む。従って、ある実施態様では、抗体は、配列番号２に記載の配列を有するエロツズマブのＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１に記載の配列を有するエロツズマブのＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号２のアミノ酸３１−３５を有する重鎖ＣＤＲ１：配列番号２のアミノ酸５０−６６を有する重鎖ＣＤＲ２；配列番号２のアミノ酸９９−１０８を有する重鎖ＣＤＲ３；並びに、配列番号１のアミノ酸２４−３４を有する軽鎖ＣＤＲ１；配列番号１のアミノ酸５０−５６を有する軽鎖ＣＤＲ２；および、配列番号１のアミノ酸８９−９７を有する軽鎖ＣＤＲ３を含む。別の実施態様では、抗体は、各々配列番号２および／または配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＶＨおよび／またはＶＬ領域を含む。別の実施態様では、抗体は、ＣＳ１上の同じエピトープとの結合を上記の抗体と競合し、かつ／または、それに結合する。別の実施態様では、抗体は、上記の抗体と、少なくとも約９０％の可変領域のアミノ酸配列の同一性を有する（例えば、配列番号２または配列番号１と、少なくとも約９０％、９５％または９９％の可変領域同一性）。
【０１７１】
抗ＰＤ１抗体
ＰＤ−１に高い親和性で特異的に結合するＨｕＭＡｂｓが、米国特許第８,００８,４４９号に開示されている。他の抗ＰＤ−１ｍＡｂが、例えば、米国特許第６,８０８,７１０号、第７,４８８,８０２号、第８,１６８,７５７号および第８,３５４,５０９号、および、国際公開第２０１２／１４５４９３号に記載されている。米国特許第８,００８,４４９号に開示されている抗ＰＤ−１ＨｕＭＡｂの各々は、以下の特徴の１つまたはそれ以上を示すと立証された：（ａ）BIACORE（登録商標）バイオセンサーシステムを使用する表面プラズモン共鳴法で測定して、１ｘ１０−７Ｍ以下のＫＤでヒトＰＤ−１に結合する；（ｂ）ヒトＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４またはＩＣＯＳに実質的に結合しない；（ｃ）混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて、Ｔ細胞増殖を高める；（ｄ）ＭＬＲアッセイにおいて、インターフェロンγ産生を高める；（ｅ）ＭＬＲアッセイにおいてＩＬ−２分泌を高める；（ｆ）ヒトＰＤ−１およびカニクイザルＰＤ−１に結合する；（ｇ）ＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２のＰＤ−１への結合を阻害する；（ｈ）抗原特異的記憶反応（memory response）を刺激する；（ｉ）Ａｂ応答を刺激する；および、（ｊ）インビボで腫瘍細胞の増殖を阻害する。本発明で使用できる抗ＰＤ１Ａｂには、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、上記の特徴の少なくとも１つ、好ましくは少なくとも５つを示すｍＡｂが含まれる。
【０１７２】
好ましい抗ＰＤ−１Ａｂはニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８とも呼ばれる）である。ニボルマブは、国際公開第２００６／１２１１６８号に５Ｃ４として開示されている完全ヒトＩｇＧ４抗ＰＤ−１モノクローナル抗体である。ニボルマブは、腫瘍に対する細胞免疫反応を高めると知られている（Brahmer, J.R. et al., J. Clin. Oncol., 28:3167-3175 (2010)）。本方法で使用できる他の抗ＰＤ−１Ａｂは、ペムブロリズマブ（Hamid et al., N. Engl. J. Med., 369(2):134-144 (2013)）である。
【０１７３】
開示される方法において使用できる抗−ＰＤ−１Ａｂは、ヒトＰＤ−１に特異的に結合し、ヒトＰＤ−１への結合をニボルマブと交差競合する、単離されたＡｂも含む（例えば、米国特許第８,００８,４４９号；国際公開第２０１３／１７３２２３号参照）。Ａｂがある抗原への結合を交差競合する能力は、これらのＡｂが抗原の同じエピトープ領域に結合し、他の交差競合するＡｂのその特定のエピトープ領域への結合を立体的に妨げることを示す。これらの交差競合Ａｂは、ＰＤ−１の同じエピトープ領域への結合のおかげで、ニボルマブと非常に類似する機能的特性を有すると期待される。交差競合するＡｂは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析、ＥＬＩＳＡアッセイまたはフローサイトメトリーなどの標準的なＰＤ−１結合アッセイにおいてニボルマブと交差競合する能力に基づいて、容易に同定できる（例えば、国際出願第２０１３／１７３２２３号参照）。
【０１７４】
ヒト対象への投与には、これらの抗ＰＤ−１Ａｂは、好ましくはキメラＡｂ、より好ましくはヒト化またはヒトＡｂである。そのようなキメラ、ヒト化またはヒトｍＡｂは、当分野で周知の方法により調製および単離できる。開示される発明の方法において使用できる抗ＰＤ−１Ａｂは、上記のＡｂの抗原結合部分も含む。Ａｂの抗原結合機能は、全長Ａｂのフラグメントにより発揮され得ることが十分に示されてきた。Ａｂの「抗原結合部分」の用語に包含される結合フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントである、Ｆａｂフラグメント；（ｉｉ）ジスルフィド架橋によりヒンジ領域で連結された２個のＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントである、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；および、（ｉｖ）Ａｂの単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメントを含む。本発明における使用に適する抗ＰＤ−１抗体（または、それに由来するＶＨおよび／またはＶＬドメイン）は、当分野で周知の方法を使用して生成できる。
【０１７５】
例示的な抗ＰＤ−１抗体は、配列番号４および３に示す配列を各々含む重鎖および軽鎖を含むニボルマブ、または、その抗原結合フラグメントおよび変異体である。
【０１７６】
他の実施態様では、抗体は、ニボルマブの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を有する。従って、ある実施態様では、抗体は、配列番号４に記載の配列を有するニボルマブのＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を有するニボルマブのＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号３のアミノ酸２４−３４を有する軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸５０−５６を有する軽鎖ＣＤＲ２、および、配列番号３のアミノ酸８９−９７を有する軽鎖ＣＤＲ３を含み；かつ、配列番号４のアミノ酸３１−３５を有する重鎖ＣＤＲ１、配列番号４のアミノ酸５０−６６を有する重鎖ＣＤＲ２、および、配列番号４のアミノ酸９９−１０２を有する重鎖ＣＤＲ３を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号４および／または配列番号３に記載のアミノ酸配列を各々含むＶＨおよび／またはＶＬ領域を含む。別の実施態様では、抗体は、ＰＤ−１上の同じエピトープとの結合を上記の抗体と競合するか、または、それに結合する。別の実施態様では、抗体は、上記の抗体と、少なくとも約９０％の可変領域のアミノ酸配列の同一性を有する（例えば、配列番号３または配列番号４と、少なくとも約９０％、９５％または９９％の可変領域同一性）。
【０１７７】
キット
上記で説明または示唆される診断および治療適用において使用するために、本発明によりキットも提供される。そのようなキットは、例えば、バイアル、チューブなどの１以上の容器手段を厳重な管理下で受け入れるように区画化されているキャリアー手段を含み、容器手段の各々は、本方法で使用される別々の構成要素の１つを含む。例えば、容器手段の１つは、医薬的に許容し得る量の抗ＣＳ１抗体および／または抗ＰＤ１抗体を含有する１以上のバイアルを含み得る。
【０１７８】
本発明のキットは、典型的には、上記の容器、並びに、商業および利用者の立場から望ましい物質、例えば、バッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および、使用のための指示を伴う添付文書を含む、１以上の他の容器を含む。組成物が特定の治療または非治療的適用に使用されることを示すラベルが容器に存在してもよく、それは、上記のようなインビボまたはインビトロ使用のための指導も示し得る。
【０１７９】
加えて、キットは、本発明の方法の実施のための指導を含む使用説明書（即ち、プロトコール）を含み得る。使用説明書は、典型的には、記述または印刷された資料を含むが、そのようなものに限定されない。そのような説明を保存でき、それらを末端の利用者に伝えることができるいかなる媒体も、本発明により企図されている。そのような媒体には、電子的記憶媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップなど）、光学媒体（例えば、ＣＤ−ＲＯＭ）などが含まれるが、それらに限定されない。そのような媒体は、そのような使用説明書を提供するインターネットサイトのアドレスを含み得る。
【０１８０】
キットは、また、例えば、個体から生物学的試料を得るための手段を含み得る。個体から生物学的試料を得るための手段は当分野で周知であり（例えば、カテーテル、シリンジなど）、本明細書では詳述しない。
【０１８１】
本明細書では、また、上記の方法での使用に合わせた治療的有効量で、ニボルマブなどの抗ＰＤ１抗体、エロツズマブなどの抗ＣＳ１抗体、および医薬的に許容し得る担体を含有する医薬組成物を含むキットも提供される。キットは、場合により、例えば、実施者（例えば、医師、看護師または患者）が、がん（例えば、多発性骨髄腫などの血液のがん）を有する患者に組成物を投与するために、それに含まれる組成物を投与することを可能にする、投与スケジュールを含む指示も含み得る。キットは、シリンジも含み得る。
【０１８２】
場合により、キットは、上記で提供される方法に従う単回投与に有効な量の抗ＰＤ１抗体または抗ＣＳ１抗体を各々含有する単回用量の医薬組成物の複数のパッケージを含む。医薬組成物の投与に必要な装置または器具もキットに含まれ得る。例えば、キットは、ある量の抗ＰＤ１抗体または抗ＣＳ１抗体を含有する事前に充填された１以上のシリンジを提供し得る。
【０１８３】
ある実施態様では、本発明は、ヒト患者におけるがん（例えば、多発性骨髄腫などの血液のがん）の処置用のキットを提供し、そのキットは、
（ａ）配列番号３に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号３に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、ある用量の抗ＰＤ１抗体；
（ｂ）配列番号２に記載の配列を含む重鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメイン、および、配列番号１１に記載の配列を含む軽鎖可変領域中のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ドメインを含む、ある用量の抗ＣＳ１抗体；および、
（ｃ）抗ＰＤ１抗体および抗ＣＳ１抗体を本明細書に記載の方法において使用するための指示、を含む。
【０１８４】
本発明は、本発明の個々の態様の個別の例示と意図される本明細書に開示の実施態様によりその範囲を限定されず、機能的に均等なものは本発明の範囲に含まれる。本発明のモデルおよび方法に対する様々な改変は、本明細書に記載のものに加えて、上記の説明および教示から当業者に明らかであり、同様に本発明の範囲内にあると意図されている。そのような改変または他の実施態様は、本発明の真の範囲および精神から逸脱せずに実施され得る。
【０１８５】
以下の代表的な実施例は、様々な実施態様およびそれらの均等物における本発明の実施に合わせられる、重要なさらなる情報、例示およびガイダンスを含む。これらの実施例は、本発明の例示を補助することを意図しており、その範囲を限定することを意図せず、また、その範囲を限定すると解釈されるべきではない。
参考文献
1) Li, B. et al., "Anti-programmed death-1 synergizes with granulocyte macrophage colony-stimulating factor-secreting tumor cell immunotherapy providing therapeutic benefit to mice with established tumors", Clin. Cancer Res., 15:1623-1634 (Mar. 1, 2009).
2) Fransen, M.F. et al., "Controlled local delivery of CTLA-4 blocking antibody induces CD8 T cell dependent tumor eradication and decreases risk of toxic side effects", Clin. Cancer Res. (2013).
【０１８６】
材料と方法
細胞株
ｐＦＢ−ＧＦＰまたはｐＦＢ−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰプラスミドを、Lipo2000 (Invitrogen) を使用して、Phoenix 細胞に形質導入した。Ａ２０またはＥＧ７細胞に、ｐＦＢ−ＧＦＰまたはｐＦＢ−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰウイルスを、polybrene (Sigma) で、２５００ｒｐｍ、９０分間、室温での２周のスピン感染法により、形質導入した。個々のクローンを選択し、増殖させた。動物試験で使用するのに先立ち、Ａ２０−ＧＦＰ、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ、ＥＧ７−ＧＦＰおよびＥＧ７−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞株をマイコプラズマおよび病原体について分析した（ＲＡＤＩＬ試験）。
【０１８７】
マウス
すべてのインビボ試験に使用したマウスは、Charles River、Taconic または Jackson Labs から入手した８〜１０週齢のＢａｌｂ／ｃまたはＣ５７ＢＬ／６マウスであった。試験は、「実験動物の管理と使用に関する指針」の基準に従って、ＩＡＣＵＣにより承認されたプロトコールを使用して実施した。
【０１８８】
抗体
エロツズマブは、ヒト化抗ヒトＳＬＡＭＦ７抗体、ＩｇＧ１（以前のＨｕＬｕｃ６３）である。マウスＩｇＧ２ａアイソタイプでエロツズマブを作成するために、プラスミド＃３０３ ｐＭｕＬｕｃ６３（AbbVieから入手した）からＶＨを増幅し、マウスＩｇＧ２ａ定常領域を含む発現ベクターにクローニングし、ｐＩＣＯＦＳＣｐｕｒ.ｍｇ２ａ（ＣＳ１.１）を産生した。プラスミド＃３０３ ｐＭｕＬｕｃ６３からＶＫを増幅し、マウスカッパ定常領域を含む発現ベクターにクローニングし、ｐＩＣＯＦＳＣｎｅｏ.ｍＫ（ＣＳ１.１）を産生した。２つのベクターをＣＨＯ−Ｓ細胞に同時導入し、安定なクローンを選択した。ＣＨＯ−ＳクローンＣＳ１.１−ｍｇ２ａ＃９Ｇ４（Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａと称する）を抗体産生のためにスケールアップした。マウスＰＤ−１−免疫グロブリン融合タンパク質（Li, B. et al., Clin. Cancer Res., 15:1623-1634 (2009)）でラットを免疫することにより、抗マウスＰＤ−１抗体（４Ｈ２）を生成した。マウスＰＤ−１への抗体の結合は、ＰＤ−１−免疫グロブリン融合体に対するＥＬＩＳＡにより、そして、マウスＰＤ−１を発現する形質導入されたチャイニーズハムスター卵巣細胞のフローサイトメトリーにより、示した。抗体は、マウスＰＤ−１とそのリガンドであるＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２との相互作用を阻害する能力について選択した。この抗体の可変（Ｖ）領域の配列を決定し、ＶＨおよびＶＫの配列を、Ｆｃ受容体結合を除外するＤ２６５Ａ変異を含むマウスＩｇＧ１定常領域に移植した（ＰＤ−１−４Ｈ２−ｍｇ１−Ｄ２６５Ａ）。キメラ抗体を発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞株を選択し、抗体産生に使用した。コントロール抗体には、抗ｍＩｇＧ２ａ（クローンＣ１.１８.４、Bioxcell）および抗ｍＩｇＧ１、マウスＩｇＧ１アイソタイプの抗ジフテリア毒素抗体（ＢＭＳ）が含まれる。
【０１８９】
細胞培養の条件
Ａ２０細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、０.０５ｍＭ ２−メルカプトエタノールを添加したＲＰＭＩ培地（Gibco）で培養した；ＥＧ７細胞を、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１０％ＦＢＳ、１.５ｇ／Ｌ炭酸水素ナトリウム、４.５ｇ／Ｌグルコース、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、０.０５ｍＭ ２−メルカプトエタノール、０.４ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１８（ＥＧ７）を添加したＲＰＭＩ培地で培養した。細胞を週に３回植え継ぎ、細胞０.３ｘ１０６個／ｍｌの密度で維持した。
【０１９０】
腫瘍の試験
１ｘ１０７個のＡ２０−ＧＦＰまたはＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞をマウスの後側腹部に皮下注射することにより、Ａ２０腫瘍を定着させた。１０−１７日後に腫瘍の体積を測定し、平均腫瘍体積が１５０−１８０ｍｍ３に達したら、マウスを各処置群に無作為に割り付けた。０.５ｘ１０７ＥＧ７−ＧＦＰ−ｈＳＬＡＭＦ７細胞をマウスの後側腹部に皮下注射することにより、ＥＧ７腫瘍を定着させた。６−７日後に、平均腫瘍体積が９０−１２０ｍｍ３に達したら、マウスを各処置群に無作為に割り付けた。抗体溶液をＢＤ２８−ゲージのインシュリン注射器（VWR, Westchester, PA）に充填した。ＰＢＳに溶かした抗体２００−４００μｌを、腹腔内（ｉ.ｐ.）に、３または４日毎に、３ないし５回、１ないし１０ｍｇ／ｋｇで投与した。Fowler Electronic Digital Caliper を使用して腫瘍を隔週で測定することにより、腫瘍増殖を判定した。式：ＬｘＷｘＨ／２（式中、Ｌ（長さ）は動物の背面における腫瘍の最大の長さであり、Ｗ（幅）は動物の背面における長さに垂直な最大の測定値であり、Ｈ（高さ）は動物の背面に垂直な最も高い位置でとる）により腫瘍の体積を算出した。各群について、無腫瘍（ＴＦ）マウスの数を評価した：無腫瘍マウスは、３回の逐次的測定で腫瘍体積＝０のマウスと定義した。腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）は、処置群が対照と比較して選択された体積に達するまでの遅延である：ＴＧＤ＝Ｔ−Ｃ。Ｔ＝処置群の腫瘍が予め定めた大きさに達するのに必要な時間の中央値（日）。Ｃ＝対照群の腫瘍が同じ大きさに達するのに必要な時間の中央値（日）。
【０１９１】
Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ血清分析
Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ抗体の薬物動態を解析するために、Ｂａｌｂ／ｃマウスにＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ（１、５または１０ｍｇ／ｋｇ）またはｍＩｇＧ２ａ（１０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射した。血液サンプルを最初の投与の８時間後、２回目の投与の直前、最後の投与の直前、および、最後の投与の８時間後に採取し、血清をＥＬＩＳＡにより分析した。Nunc-Immuno MaxiSorp Microtiter プレートを、ＰＢＳ中のＨｕＬｕｃ６３抗イディオタイプモノクローナル抗体で、終夜４℃で被覆した。血清サンプルを６４，０００倍に希釈し、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａを標準として使用した。プレートを洗浄し、１／１０００のマウスＩｇＧ２ａ−ＨＲＰと５０分間室温でインキュベートし、ＴＭＢ基質を使用して測定した。Ｍ５プレートリーダー（Molecular Devices）により測定した発光強度から、マウス血清サンプル中のＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ抗体の濃度を、SOFTMAX（登録商標）Pro を使用して算出した。
【０１９２】
腫瘍細胞の単離と染色
注射器の背面を用いて２４ウェルプレート中で腫瘍を解離することにより、腫瘍の単細胞浮遊液を調製した。細胞浮遊液を７０μｍのフィルターに通し、ペレット化し、再懸濁し、計数した。次いで、染色のために、細胞を１ｘ１０ｅ６個／ウェルで９６ウェルプレートに移した。Ｆｃ結合を阻害する２.４Ｇ２で細胞を処理し、次いで抗ｈＳＬＡＭＦ７（クローン１６２.１、BioLegend）または抗ｍＩｇＧ２ｂで染色した。サンプルを FACSCanto フローサイトメーター（ＢＤ）で分析した。
【０１９３】
配列表の簡単な説明
配列番号１ないし８を含む「12430-PCT_ST25.txt」と題する配列表の全体を引用により本明細書の一部とし、それは、本明細書で開示する核酸および／またはアミノ酸配列を含む。配列表は、ＡＳＣＩＩテキストフォーマットで、ＥＦＳを介して提出した。配列表は、２０１５年１１月２１日に最初に作成され、１０ＫＢのサイズである。
【実施例】
【０１９４】
実施例１−ＳＬＡＭＦ７ｃＤＮＡをｐＦＢレトロウイルスベクターにクローニングする方法
ヒトＳＬＡＭファミリーメンバー７（ｈＳＬＡＭＦ７；別名：ＣＳ１−Ｌ）のｃＤＮＡ配列を、緑色蛍光蛋白質（ＧＦＰ）をコードするレトロウイルスベクター（ｐＦＢ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ、Stratagene）にクローニングした。
【０１９５】
該ベクターは、マウス白血病レトロウイルス（ＭＬＶ）パッケージング配列および、ＭＬＶ末端反復配列（ＬＴＲ）領域と隣接しているマルチクローニングサイト（ＭＣＳ）を含有する。
【０１９６】
５’ＬＴＲは、ＤＮＡの染色体導入における強力なプロモーターとして機能する。ｐＦＢプラスミドは、ＥＣＭＶ配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）とそれに続くＧＦＰをコードする遺伝子を含むカセットを含有する。
【０１９７】
コードされたＳＬＡＭＦ７タンパク質配列のクローニングされた配列を、図１に提供する（配列番号７）。
【０１９８】
実施例２−ヒトＳＬＡＭＦ７を発現するＡ２０マウス腫瘍細胞株を産生する方法
Ａ２０マウスＢリンパ腫細胞株を、ＧＦＰのみをコードするレトロウイルス、あるいは、ＧＦＰおよびｈＳＬＡＭＦ７の両方をコードするレトロウイルスのいずれかで形質導入した。Ａ２０−ＧＦＰおよびＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ株をサブクローニングし、それぞれのクローンを選んでインビロトで増やした。Ａ２０−ＧＦＰ（クローンＤ３）およびＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ（クローンＦ１１）を培養で維持し、ｈＳＬＡＭＦ７およびＧＦＰの発現を５８日目に評価して、ｈＳＬＡＭＦ７発現の安定性を確認した。
【０１９９】
細胞をＰＥ結合抗ヒトＳＬＡＭＦ７（クローン１６２.１、BioLegend）で染色し、ＧＦＰおよびｈＳＬＡＭＦ７に陽性染色する細胞の頻度を決定した。図２Ａ−Ｂに示す通り、安定的にＧＦＰおよびｈＳＬＡＭＦ７を発現するＡ２０細胞株を取得した。
【０２００】
実施例３−エロツズマブがＡ２０細胞で発現されたヒトＳＬＡＭＦ７に結合するか否かを決定する方法
Ａ２０で発現されたｈＳＬＡＭＦ７がエロツズマブにより認識されるか否かを決定するために、Ａ２０−ＧＦＰおよびＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞をエロツズマブで染色した。
【０２０１】
Ａ２０−ＧＦＰまたはＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞を６.２５ｕｇ／ｍｌエロツズマブ（ＢＭＳ）とインキュベートし、２回洗浄し、抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ二次抗体とインキュベートした。ＧＦＰおよびｈＳＬＡＭＦ７に陽性染色する細胞の頻度を、フローサイトメトリーを用いて決定した。
【０２０２】
図３に示す通り、エロツズマブ結合を示す表面染色は、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞においてのみ検出され、Ａ２０−ＧＦＰ細胞では検出されなかった。
【０２０３】
実施例４−Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍モデルを構築する方法
Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞が、皮下移植されインビボで増殖するかどうかを決定するために、本実験を計画した。
【０２０４】
１,０００万個のＡ２０−ＧＦＰまたはＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞を、免疫適格性のＢａｌｂ／ｃマウスに移植した。Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍の増殖が７０％のレシピエントマウス（７／１０）で見られ、一方、Ａ２０−ＧＦＰ腫瘍の増殖が１００％レシピエントマウス（１０／１０）で見られた（Ａ）。
【０２０５】
腫瘍の完全退縮が、３０％のレシピエントマウスで見られ、これは恐らくＢａｌｂ／ｃマウスにおけるヒトＳＬＡＭＦ７の免疫原性に起因する。
【０２０６】
Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍細胞がエロツズマブ処置に対して応答性であるためには、マウスに移植された場合にＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞においてｈＳＬＡＭＦ７の発現レベルが維持されることを確定することが重要であった。
【０２０７】
Ｂａｌｂ／ｃマウスの後側腹部に、１０７個のＡ２０−ＧＦＰまたは１０７個のＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞のいずれかを皮下注射することにより、腫瘍を定着させた。腫瘍の増殖は、２週間に１回、デジタルノギスで測定した（図４Ａ参照）。腫瘍が２,０００ｍｍ３に達した時点で、マウスを安楽死させた。本実験を終えるまでに腫瘍のない動物の数を、無腫瘍（ＴＦ）とした。
【０２０８】
Ａ２０−ＧＦＰまたはＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍から単離した細胞を、抗ｈＳＬＡＭＦ７（クローン１６２.１、BioLegend）または、ｍＩｇＧ２ｂ アイソタイプコントロール抗体（ＭＰＣ−１１、BioLegend）で染色した。培養で維持されたＡ２０親細胞を、コントロールとして染色した。サンプルを FACSCanto フローサイトメトリー（BD）で解析し、ＧＦＰおよびｈＳＬＡＭＦ７に陽性である細胞の割合を示す。
【０２０９】
Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰおよびＡ２０−ＧＦＰ腫瘍を、腫瘍細胞接種後の４５日目にマウスから回収し、細胞をｈＳＬＡＭＦ７について染色した（図４Ｂ参照）。示したように、ヒトＳＬＡＭＦ７は、マウスから単離されたＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞において発現されたが、Ａ２０−ＧＦＰまたはＡ２０親細胞においては発現されなかった。従って、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞はＢａｌｂ／ｃマウスにおいて増殖し、ｈＳＬＡＭＦ７の表面発現を保持する。
【０２１０】
実施例５−Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍モデルにおけるＥｌｏ−Ｇ２ａに対する用量反応を決定する方法
免疫適格マウスにおいてエロツズマブの力価を決定するために、エロツズマブの免疫グロブリン重鎖定常領域を、ヒトＩｇＧ１からマウスＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ）に変えた。ｍＩｇＧ２ａアイソタイプを有するエロツズマブ変異体をＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａと称する。
【０２１１】
ＳＬＡＭＦ７発現ＯＰＭ２腫瘍に対するエロツズマブの抗腫瘍活性を、投与量０.１、０.５、１および１０ｍｇ／ｋｇにて、ＳＣＩＤマウスにおいて解析した（Tai, Y. et al., Blood, 112:1329-1337 (2008)）。抗ＰＤ１と併用されるＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａの最適用量を決定するために、３つの用量、すなわち１、５、および１０ｍｇ／ｋｇを選択した。
【０２１２】
Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスを、腫瘍が平均サイズ１８０.１±８７.３ｍｍ３に達した時点で、複数の処置群に無作為に割り付けた。Ａ２０−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスは、平均サイズ１９３.３±１３３.２ｍｍ３の腫瘍を有した；処置群は、用量１、５および１０ｍｇ／ｋｇでのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａによる処置とした。対照群は、ｍＩｇＧ２ａコントロール抗体（Bioxcell）を１０ｍｇ／ｋｇで受容した。投与は、１４、１７、２１、２４および２８日目に行った。５９日目に実験を終了した。
【０２１３】
Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａの抗腫瘍活性を、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウス（Ｇ３、Ｇ４、およびＧ５）、または、ｈＳＬＡＭＦ７を発現しないためにＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ活性に応答性であるはずのないＡ２０−ＧＦＰ腫瘍を有するマウス（Ｇ１）において試験した。Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ抗体に対する対照として、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰを有するマウスを抗マウスＩｇＧ２ａ抗体で処置した（Ｇ２）。
【０２１４】
それぞれのマウスの腫瘍体積は、図５Ａ−Ｅに示す通りである。５つの処置群についての腫瘍体積の平均値および中央値を図６に示す。コントロール抗体（Ｉｓｏ １０ｍｇ／ｋｇ）に対する様々な処置群の腫瘍増殖遅延（ＴＧＤ）を、予め設定した４つの腫瘍体積にて計算し、図７に示す。ＴＧＤは、１ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝６）、５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）および１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝８）のマウスから計算した。
【０２１５】
Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ処置群（Ｇ３、Ｇ４およびＧ５）とコントロール（Ｇ２）との比較により、１０ｍｇ／ｋｇの投与は、１または５ｍｇ／ｋｇの投与と比較して、より強い抗腫瘍活性を有することが明らかになった（図５Ａ−Ｅおよび図６参照）。さらに、腫瘍増殖遅延は、解析した全ての腫瘍体積において、１ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａまたはアイソタイプ処置群と比較して、１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ群において大きかった（図７参照）。重要なことに、１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａは、Ａ２０−ＧＦＰ腫瘍を有するマウス（Ｇ１）において、抗腫瘍活性を示さなかった（図５Ａ−Ｅ参照）。これらの結果を考慮して、１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａを選択して、後に続く実験において抗ＰＤ１と併用した。
【０２１６】
実施例６−腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスにおける、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａの薬物動態解析を実施する方法
Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ抗体の薬物動態解析を、腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスで評価した。
【０２１７】
実施例５に記載の腫瘍を有するマウスから、いくつかの時点で血液サンプルを回収した。処置前（pre-bleed、１４日目）、１回目の投与の８時間後（１５日目）、２回目の投与の直前（１７日目）、最後の投与の直前（２８日目）、および最後の投与の８時間後（２９日目）に血液を回収した。Ｎ＝３−９匹／群。
【０２１８】
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）で血清を分析した。血清サンプルを６４,０００倍に希釈した。エロツズマブに対する抗イディオタイプモノクローナル抗体（BMS）を用いて、マウス血清サンプル中のＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａを捕捉した。捕捉したＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａを、抗マウスＩｇＧ２ａ−ＨＲＰを用いて検出し、ＴＭＢ基質を用いて測定した。
【０２１９】
Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスから取得した血清サンプル中のＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ濃度の測定により、最大抗腫瘍活性が、用量１０ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａについて、１１０±４９（２回目の投与前）−３５７±１１１μｇ／ｍＬ（最後の投与後）と相関し、一方、より低い生物学的活性が、用量１ｍｇ／ｋｇのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａについて、５±２−２７±７μｇ／ｍＬのレベルと相関することが示された（図８参照）。
【０２２０】
Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａの用量１０ｍｇ／ｋｇについて、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａの血清レベルはＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰおよびＡ２０−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスにおいて同様であった（１１０±４９−３５７±１１１μｇ／ｍＬ対１０２±３０−３８１±４３μｇ／ｍＬ）。
【０２２１】
実施例７−Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍細胞がＰＤ−Ｌ１を発現するかどうかを決定する方法
抗ＰＤ１抗体がＡ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍の増殖に影響を与えるかどうかを決定するために、本発明者はまず、ＰＤ１リガンドであるＰＤ−Ｌ１がＡ２０腫瘍細胞において発現するか否かを調べた。
【０２２２】
ＰＤＬ１発現のフローサイトメトリー解析を行った。これを図９に示す。細胞は染色しないか（ヒストグラムの最初のピーク内の薄い灰色の線）、あるいは、ラットＩｇＧ２ｂ（ＲＴＫ４５３０、 BioLegend) (ヒストグラムの最初のピークの濃い外側の線）もしくはラット抗マウスＰＤ−Ｌ１（１０Ｆ.９Ｇ２、 BioLegend) (ヒストグラムの２番目のピークの濃い線)のいずれかで染色した。
【０２２３】
本結果は、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ並びにＡ２０−ＧＦＰ細胞の両方が、Ａ２０親細胞と同様の高レベルのＰＤ−Ｌ１を発現することを示した（図９参照）。
【０２２４】
これらのデータは、Ａ２０細胞により発現される腫瘍抗原であるＳＬＡＭＦ７を標的とするエロツズマブと、Ｔ細胞上のＰＤ１受容体とＡ２０腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１との相互作用を阻害することによりＴ細胞を活性化させる抗ＰＤ１抗体とによる併用療法のための、理論的根拠を提供する。
【０２２５】
実施例８−Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰマウス腫瘍モデルにおける、エロツズマブと抗ＰＤ１ ｍＡｂとの併用の治療効果を評価する方法
Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍モデルにおいて、遮断性の抗ＰＤ１抗体（ＰＤ−１−４Ｈ２−ｍｇ１−Ｄ２６５Ａ）と組み合わせたＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａの治療活性を試験した。
【０２２６】
Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａを１０ｍｇ／ｋｇで用いて、抗ＰＤ１抗体を３ｍｇ／ｋｇおよび１ｍｇ／ｋｇで試験して、併用レジメンの治療活性を評価した。Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスを、腫瘍が平均サイズ１５６.６±６３.１ｍｍ３に達した１０日目に、複数の処置群に無作為に割り付けた。Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ投与を、１０、１４、１７、２１および２４日目に行った（５回）。抗ＰＤ−１またはｍＩｇＧ１投与を、１０、１４および１７日目に行った（３回）。実験を４４日目に終了した。腫瘍体積を隔週で測定した。各群について、無腫瘍（ＴＦ）マウスの数／群を示す。
【０２２７】
図１０Ａ−Ｆに示す通り、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａと抗ＰＤ−１との併用療法は、単剤としてのＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａまたは抗ＰＤ−１よりも、抗腫瘍活性の驚くべき増大をもたらした。特に、曲線プロファイルの解析により、アイソタイプ処置対照群（Ｇ１）において０／９の無腫瘍マウスであるのと比較して、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ群（Ｇ４）において２／９の無腫瘍マウスが示された。３ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇでの抗ＰＤ１処置は、２／９の無腫瘍マウスの結果となった（Ｇ２、Ｇ３）。
【０２２８】
抗ＰＤ１抗体のＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａへの追加は、強力で相乗的な結果をもたらした。特に、抗ＰＤ１抗体の追加はＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａの治療活性を有意に改善し、抗ＰＤ１が３ｍｇ／ｋｇで用いられた場合（Ｇ５）は８／９の無腫瘍マウス、抗ＰＤ１が１ｍｇ／ｋｇで用いられた場合（Ｇ６）は４／９の無腫瘍マウスの結果となった。
【０２２９】
腫瘍移植後２１日目の様々な処置群の比較により、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａを抗ＰＤ−１と併用した処置において、特に抗ＰＤ１抗体が３ｍｇ／ｋｇの用量で投与された場合に、腫瘍体積中央値の顕著な減少を示した。
【０２３０】
図１１Ｂに示したように、２１日目に行った統計解析により、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ＋ＰＤ１ ３ｍｇ／ｋｇの併用が、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ単独（ｐ＝０.０２７０）または抗ＰＤ１ ３ｍｇ／ｋｇ単独（ｐ＝０.０３０５）と比較して、腫瘍体積の有意な低減をもたらすことが示された。
【０２３１】
結論
前述の結果を考慮すると、エロツズマブとＩｇＧ２ａアイソタイプとの組み合わせ（Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ）が、免疫適格性のＢａｌｂ／ｃマウスにおいてｈＳＬＡＭＦ７を発現するＡ２０腫瘍細胞に対する抗腫瘍活性を有することが示された。この活性は、マウス血清において観察されるＥｌｏ−ｍＩｇＧ２ａのレベルと関連していた。エロツズマブと抗ＰＤ１抗体の併用は、相乗的抗腫瘍活性を示した。
【０２３２】
本研究は、多発性骨髄腫細胞により発現される腫瘍抗原であるＳＬＡＭＦ７を標的とする細胞傷害性抗体、エロツズマブと、Ｔ細胞上のＰＤ１受容体と腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１受容体との相互作用を阻害することによりＴ細胞を活性化させる抗体とによる、併用療法の相乗的治療効果を強調するものである。エロツズマブと抗ＰＤ１抗体との併用は、投与された場合に、特にエロツズマブが１０ｍｇ／ｋｇで投与され、抗ＰＤ１ ｍＡｂが３ｍｇ／ｋｇで投与された場合に、相乗的結果を示した。
【０２３３】
非臨床試験において、エロツズマブとニボルマブとの併用は、安全で相乗的な治療効果をもたらし、相乗的な有害事象プロファイルはもたらさない。
【０２３４】
これらの結果は、治験における抗ＳＬＡＭＦ７と抗ＰＤ−１抗体との組み合わせの潜在的有効性を裏付ける前臨床データを提供する。
【０２３５】
実施例９−同時投与または連続投与のいずれかを用いた、Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰマウス腫瘍モデルにおける、エロツズマブと抗ＰＤ１ ｍＡｂとの併用の治療効果を評価する方法
Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍モデにおける、抗ＰＤ１抗体とＥｌｏ−ｇ２ａの同時投与の効果を調べた。
【０２３６】
Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍モデルにおいて、抗ＰＤ１およびＥｌｏ−ｇ２ａ抗体の様々な投与レジメンを検討した。Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスを、腫瘍が平均サイズ１７９.６±５９.５ｍｍ３に達した１１日目に、複数の処置群に無作為に割り付けた。
【０２３７】
図１２Ａ−Ｆに示すように、Ｅｌｏ−ｇ２ａおよび抗ＰＤ１が同日に投与された場合、それぞれ抗ＰＤ１処置群における６／１２（図１２Ｂ参照）およびＥｌｏ−ｇ２ａ処置群における５／１２（図１２Ｃ参照）と比較して、１０／１２のマウスにおける完全退縮が観察された（図１２Ｄ参照）。Ｅｌｏ−ｇ２ａおよび抗ＰＤ１の相乗的効果は、Ｅｌｏ−ｇ２ａおよび抗ＰＤ１を順次投与した併用療法群においては、より少ない完全退縮をもたらした（図１２Ｄ対、図１２Ｅおよび１２Ｆを参照）。Ｅｌｏ−ｇ２ａの独立した投与の後、Ｅｌｏ−ｇ２ａおよび抗ＰＤ１の組み合わせ（図１２Ｅ参照）または抗ＰＤ１単独（図１２Ｆ参照）のいずれかが続いた場合、それぞれ４／１２および８／１２の無腫瘍マウスが観察された。
【０２３８】
結論
前述の結果を考慮すると、併用療法は、抗体が連続処置と比較して同日に投与された場合に、抗腫瘍効果において有意な改善をもたらしており、このことは、この組み合わせがヒトの治験において投与される場合に、同時投与が好ましいであろうことを示唆している。これらの実験および実施例８で概説される実験の間で観察されるより高い応答レベルは、より高い相対濃度を有し、その結果より高い単剤療法応答レベルをもたらす、新しいロットのＥｌｏおよびＰＤ１抗体の使用に起因し得るかもしれない。この新しいロットのＥｌｏ−ｇ２ａおよび抗ＰＤ１抗体が実施例８の実験で使用したロットと機能的に同等であることを確認するために、これらの力価測定を行うことを計画した追加実験が進行中である。
【０２３９】
これらの結果は、ヒト治験において抗ＳＬＡＭＦ７および抗ＰＤ−１抗体を同時に併用することの潜在的有用性を裏付ける、前臨床データを提供する。
【０２４０】
実施例１０−Ａ２０−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍マウスモデルにおけるエロツズマブと抗ＰＤ１ ｍＡｂとの併用の治療効果を評価する統計解析
抗ＰＤ１抗体と併用したＥｌｏ−ｇ２ａの治療活性を、４つの独立した実験にわたって評価した。実験の終わりに無腫瘍だったマウスの比率における処置群間の違いを理解するために、二項ロジスティック回帰モデルを構築した。群全体の効果：ワルドカイ二乗（３）＝２９.６４、ｐ＜.０００１。アイソタイプをリファレンスにして、Ｅｌｏ−ｇ２ａおよび抗ＰＤ１の処置群は両方とも、遙かに高い癌なしの確率であった（それぞれ、ワルドカイ二乗（１）＝７.３０、ｐ＝.００７、ＯＲ＝１８.４８、９５％ＣＩ＝２.２３−１５３.３７；ワルドカイ二乗（１）＝１０.０６、ｐ＝.００２、ＯＲ＝３０.２６、９５％ＣＩ＝３.６８−２４８.８５）。Ｅｌｏ−ｇ２ａおよび抗ＰＤ１の組み合わせは、癌なしの確率に最大の増加をもたらした（ワルドカイ二乗（１）＝２２.５１、ｐ＜.０００１、ＯＲ＝２０６.８４、９５％ＣＩ＝２２.８６−１８７１.８８）。Ｅｌｏ−ｇ２ａと抗ＰＤ１の併用が単剤より優れるかどうかを試験するために、併用をリファレンス群として該モデルを繰り返した。実際に、併用と比較して、Ｅｌｏ−ｇ２ａまたは抗ＰＤ１群のいずれかの癌なしの確率は遙かに低かった（それぞれ、ワルドカイ二乗（１）＝１６.７２、ｐ＜.００１、ＯＲ＝.０９、９５％ＣＩ＝.０３−.２８；ワルドカイ二乗（１）＝１１.１２、ｐ＝.００１、ＯＲ＝.１５、９５％ＣＩ＝.０５−.４５）。本統計解析の結果は図１３に示されており、２１日目に、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ＋ＰＤ１ ３ｍｇ／ｋｇの併用は、Ｅｌｏ−ｍＩｇＧ２ａ単独または抗ＰＤ１ ３ｍｇ／ｋｇ単独と比較して、＜０.０１から＜０.０００１の範囲のｐ値で、腫瘍体積の有意な低減をもたらしたことを示す。
【０２４１】
実施例１１−ＥＧ７リンパ腫腫瘍モデルにおいて、エロツズマブと抗ＰＤ１ ｍＡｂの併用の治療効果を評価する方法
抗ＰＤ１抗体と組み合わせたＥｌｏ−ｇ２ａの治療活性を、第二の同系腫瘍モデル：ＥＧ７マウスリンパ腫モデルにおいて試験した。
【０２４２】
簡潔に述べると、安定なＥＧ７−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞株を、実施例１および本明細書の他の部分に記載した同じプロトコールを用いて樹立した。Ａ２０遺伝子導入細胞株と同様に、ＥＧ７−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ細胞株は、長い時間ＳＬＡＭＦ７の高発現を維持し、また高レベルのＰＤ−Ｌ１を発現した。ＥＧ７細胞の皮下投与は悪性の固形リンパ腫を引き起こすために（Fransen, M.F. et al., Clin. Cancer Res., 19:5381-5389 (2013)）、Ｅｌｏ−ｇ２ａおよび抗ＰＤ１抗体を１０ｍｇ／ｋｇで用いた。これは、Ａ２０細胞株で用いた用量と比較して高いレベルの抗ＰＤ１抗体である。
【０２４３】
ＥＧ７−ｈＳＬＡＭＦ７−ＧＦＰ腫瘍を有するマウスを、腫瘍が平均サイズ１２０.０±５０.５ｍｍ３に達した７日目に、複数の処置群に無作為に割り付けた。Ｅｌｏ−ｇ２ａおよび抗ＰＤ１の投与を、７、１０および１４日目に行った（３回）。
【０２４４】
図１４Ａ−Ｄに示す通り、曲線プロファイルの解析は、アイソタイプ処置対照群（Ｇ１）における１／９の無腫瘍マウスと比較して、Ｅｌｏ−ｇ２ａ群（Ｇ３）では２／９の無腫瘍マウスを示した。抗ＰＤ１処置は、２／９の無腫瘍マウスをもたらした。抗ＰＤ１抗体の追加は、Ｅｌｏ−ｇ２ａの治療活性を有意に改善し、全体的な腫瘍増殖の阻害をもたらし、９匹中５匹のマウスが無腫瘍であった（Ｇ４）。
【０２４５】
結論
総合的に、ＩｇＧ２ａアイソタイプを含むエロツズマブ（Ｅｌｏ−ｇ２ａ）が、免疫適格性のＢａｌｂ／ｃ（Ａ２０モデル）またはＣ５７ＢＬ／６（ＥＧ７モデル）マウスにおいて、ｈＳＬＡＭＦ７を発現するＡ２０およびＥＧ７腫瘍細胞の両方に対して抗腫瘍活性を有することが示された。本活性は、マウス血清で観察されたＥｌｏ−ｇ２ａのレベルに直接関連していた。エロツズマブと抗ＰＤ１抗体との組み合わせは、相乗的抗腫瘍活性を示した。併用療法は、抗体が連続処置と比較して同日に投与された場合に、抗腫瘍効果において有意な改善をもたらしており、このことは、ヒト治験において同時投与が選択され得ることを示唆している。総合的に、これらの研究は、ＳＬＡＭＦ７を標的とする細胞傷害性抗体、エロツズマブと、Ｔ細胞上のＰＤ１受容体と腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１受容体との間の相互作用を阻害することによりＴ細胞を活性化させる抗体とによる、併用療法の相乗的治療効果を強調する。
【０２４６】
これらの結果はさらに、ヒト治験において同時に抗ＳＬＡＭＦ７および抗ＰＤ−１抗体を併用することの潜在的有用性を裏付ける前臨床データを提供する。
【０２４７】
発明の背景、詳細な説明、図面の簡単な説明および実施例で引用される各文書の全開示（特許、特許出願、学術雑誌記事、抄録、実験室マニュアル、書籍、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセッション番号、ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ（登録商標）アクセッション番号、または他の開示を含む）は、その全体が引用により本明細書に組み込まれる。さらに、本明細書と共に提出された配列表のハードコピーは、対応するコンピュータ読み取り形式に加えて、その全体が引用により本明細書に組み込まれる。
【０２４８】
本発明は、本明細書に開示された実施形態により範囲が限定されるべきではなく、これらの実施形態は本発明の個々の態様を単に例示するものとして意図されたものであり、機能的に同等のものはいずれも本発明の範囲内である。本発明のモデルおよび方法に対する様々な改変は、本明細書に記載のモデルおよび方法に加えて、先の記述および教示から当業者に明らかであろうし、同様に本発明の範囲内に入ることが意図されている。これらの改変または他の改変は、本発明の真の範囲および精神から逸脱することなく行われ得る。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図５Ｅ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１０Ｅ】
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【図１０Ｆ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１２Ｅ】
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【図１２Ｆ】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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