(57)【要約】本発明は、創傷、特に慢性創傷、又はコルチゾール産生の阻害から利益を受けるその他の状態、特にクッシング症候群の治療における、サルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、前記一種類又は複数種類のタンシノン化合物の使用に関する。好適なタンシノン化合物は、ジヒドロタンシノン（特に１５，１６−ジヒドロタンシノン（ＣＡＳ番号８７２０５−９９−０））及びタンシノンＩなどであるが、これらに限定されない。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
創傷又はクッシング症候群の治療に使用するための、サルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、ＣＹＰ１１Ｂ１阻害量のタンシノンＩ及び／又はジヒドロタンシノンを含む一種類又は複数種類のタンシノン化合物。
【請求項２】
創傷が慢性創傷である、請求項１に記載のサルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、一種類又は複数種類のタンシノン化合物。
【請求項３】
慢性創傷が糖尿病に随伴する、請求項２に記載のサルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、一種類又は複数種類のタンシノン化合物。
【請求項４】
慢性創傷が静脈性又は動脈性潰瘍である、請求項２に記載のサルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、一種類又は複数種類のタンシノン化合物。
【請求項５】
慢性創傷が長期間の圧迫に随伴する、請求項２に記載のサルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、一種類又は複数種類のタンシノン化合物。
【請求項６】
慢性創傷が放射線による熱傷に随伴する、請求項２に記載のサルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、一種類又は複数種類のタンシノン化合物。
【請求項７】
クッシング症候群の治療に使用するための、請求項１に記載のサルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、一種類又は複数種類のタンシノン化合物。
【請求項８】
○クリプトタンシノン、
○ジヒドロタンシノン、
○タンシノンＩ、及び
○タンシノンIIA
を含み、上記タンシノン化合物が植物抽出物の少なくとも１５重量％を構成し、クリプトタンシノンが植物抽出物の少なくとも４重量％を構成することを特徴とする、前記請求項のいずれかに記載のサルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物。
【請求項９】
ＣＹＰ１１Ｂ１を少なくとも６４％、さらに好ましくは少なくとも８１％、なおさらに好ましくは少なくとも９４％阻害する量のタンシノンＩ及び／又はジヒドロタンシノン又はそれらと同じものを含有するサルビア属の抽出物を含む又は本質的にそれらからなる医薬品又は化粧品。
【請求項１０】
一種類又は複数種類の賦形剤をさらに含む、請求項９に記載の医薬品又は化粧品。
【請求項１１】
ドレッシング、バンテージ、ガーゼ又はその他の担体材料を含む、請求項９に記載の医薬品又は化粧品。
【請求項１２】
洗口液又は練り歯磨きなどの歯周用である、請求項９又は１０に記載の医薬品又は化粧品。
【請求項１３】
創傷又はクッシング症候群の治療法であって、患者に、治療上有効量のサルビア属の植物抽出物、又はＣＹＰ１１Ｂ１阻害量のタンシノンＩ及び／又はジヒドロタンシノンを含む一種類又は複数種類のタンシノン化合物を提供することを含む方法。
【請求項１４】
創傷が慢性創傷である、請求項１３に記載の創傷治療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001]本発明は、創傷、特に慢性創傷、又はコルチゾール産生の阻害から利益を受けるその他の状態、特にクッシング症候群の治療に使用するための、サルビア属(Salvia spp)から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、前記一種類又は複数種類のタンシノン化合物に関する。
【０００２】
[0002]好適なタンシノン化合物は、ジヒドロタンシノン（特に１５，１６−ジヒドロタンシノン（ＣＡＳ番号８７２０５−９９−０））及びタンシノンＩなどであるが、これらに限定されない。
【０００３】
[0003]好適な治療は、慢性創傷（一般的に治癒に６週間以上かかる創傷と定義される）の治療を含む。そのような創傷は、特に、肥満患者及び糖尿病患者のほか、寝たきりの患者（褥瘡又は床擦れ）及び外照射療法を受けた患者によく見られる。
【０００４】
[0004]慢性創傷は、ほとんどの創傷のように秩序立った一連の過程や予測できる時間では治癒しない。慢性創傷は、創傷治癒の一つ又は複数の段階で足止めされているように見える。これに対し、急性創傷では、コラーゲンなどの分子の産生と分解との間に正確なバランスが取れている。慢性創傷では、このバランスが失われ、分解が大きすぎる役割を演じている。
【０００５】
[0005]慢性創傷は決して治癒し得ないか、又は治癒するのに何年もかかりうる。こうした創傷は、患者に深刻な情緒的及び肉体的ストレスを引き起こすばかりでなく、患者及び医療制度全体にかなりの経済的負担ももたらす。
【０００６】
[0006]急性創傷と慢性創傷は、創傷治癒タイプのスペクトルにおいて対極的な立場にあり、異なる速度で治癒に向かって進行する。
[0007]大部分の慢性創傷は、三つのカテゴリーに分類できる。すなわち、静脈性潰瘍、糖尿病性潰瘍、及び圧迫性潰瘍である。これらのカテゴリーに入らない少数の創傷は、放射線又は虚血などの原因によるものであろう。
【０００７】
[0008]静脈性潰瘍は、通常は脚部に発生するが、慢性創傷の約７０％〜９０％を占め、ほとんどは高齢者に発症する。これは、血液の逆流を防止するために静脈内に存在する弁の機能不全によって引き起こされる静脈性高血圧が原因と考えられている。虚血は、機能障害の結果であるが、再潅流傷害とも相まって、創傷につながる組織損傷を引き起こす。
【０００８】
[0009]糖尿病性潰瘍は、慢性創傷の別の主因である。糖尿病患者は、慢性潰瘍のために一般集団より１５％高い切断のリスクを有している。糖尿病は、神経障害を引き起こすので、侵害受容及び疼痛の知覚が阻害される。それ故に患者は初期の段階で脚足部の小さな傷に気付けず、感染又は反復傷害を予防しそこねてしまう。さらに、糖尿病は、免疫低下及び微小血管への損傷も引き起こすので、組織の適切な酸素化が妨げられ、これも慢性創傷の原因となりうる。圧迫も糖尿病性潰瘍の形成に役割を果たしている。
【０００９】
[0010]圧迫性潰瘍（褥瘡）は、踵、肩甲骨、及び仙骨など、一般に圧力を受ける身体の部分の動きが阻害される麻痺などの状態を有する人々に通常発生する。圧迫性潰瘍は、組織への圧力が毛細血管内の圧力より大きく、その領域への血流が制限されると発生する虚血によって起こる。皮膚よりも多くの酸素及び栄養素を必要とする筋肉組織は、長期間の圧迫により最悪の影響を受ける。他の慢性潰瘍と同様、再潅流傷害も組織を損傷する。
【００１０】
[0011]抽出物及び活性化合物の製剤は、周知の賦形剤を用いて、医薬品又は化粧品として使用するために製剤化できるが、スプレー製剤、クリーム、ヒドロゲル及び含浸担体材料、例えば、ドレッシング(dressing)、ガーゼ及びバンテージ(bandage)が好適である。
【００１１】
[0012]本発明の化合物は、コルチゾールの産生を阻害する作用があるので、コルチゾール合成の増加によって起こる疾患、例えばクッシング症候群の治療に用途を有する。
【背景技術】
【００１２】
[0013]サルビア属の抽出物、及びそれから単離されるいくつかのタンシノン化合物は、薬理作用を有することが知られ（例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｌａｎｔｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４，２８１３−２８２０，２９  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ，２０１０参照）、出願人自身の国際公開ＷＯ２００９０５０４５１号には、サルビア属から得られた特定の(defined)タンシノン含有抽出物の抗菌活性が教示されている。
【００１３】
[0014]西欧諸国の一般集団の約２％は慢性創傷に苦しんでおり、患者の生活の質に著しい悪影響を及ぼしている。また、相当な経済的負担ももたらし、保健予算のほぼ２％が慢性創傷の治療及び入院に充てられている（Ｓｃｈｒｅｍｌら（２０１０）Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ６３，８６６−８８１；Ｓｇｏｎｃ及びＧｒｕｂｅｒ（２０１２）Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ  ５９，１５９−１６４）。この高い発生率及び経済的負担にも関わらず、慢性創傷の管理の成果は満足には程遠く、患者の生活の質の向上及び医療費削減のために新規の療法が急務である。
【００１４】
[0015]慢性創傷の病因に対して特異性を備えた活性成分が非常に求められている。そのような活性化合物は、“誤活性化された(mis-activated)”調節経路を正常化できること、及び何らかの毒性及びアレルギー誘発性を欠いていることが必要である。
【００１５】
[0016]出願人は、今回、思いがけず、サルビア属のタンシノン含有抽出物、及びそれから単離されたいくつかのタンシノン化合物、特にタンシノンＩ及びジヒドロタンシノンが強力なＣＹＰ１１Ｂ１阻害薬であることを見出した。ＣＹＰ１１Ｂ１の阻害は創傷治癒の促進に有益なため、それ自体、コルチゾール合成の阻害から利益を受ける状態の治療、例えば創傷、特に慢性創傷の治療に有用であると期待できる。
【００１６】
[0017]この治療的応用の理論的根拠は、ＣＹＰ１１Ｂ１がヒトの副腎及び皮膚に発現しているコルチゾール産生酵素であり（図１）、ＣＹＰ１１Ｂ１の阻害がヒトの皮膚外植片及びブタのインビボにおいて創傷治癒を促進することが示されている（Ｖｕｋｅｌｉｃら（２０１１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８６，１０２６５−１０２７５）という事実に由来する。
【００１７】
[0018]重要なことに、齧歯類及びその他の下等哺乳動物種の皮膚は、コルチゾール生合成に関与する酵素の発現に関して、ヒトの皮膚とは異なる。例えば、マウスでは、１１ベータ−ＨＳＤ１が慢性創傷においてアップレギュレートされている。Ｃｙｐ１１Ｂ１は、マウス及びラットでは非創傷皮膚にも創傷後にも発現していない（Ｔｉｇａｎｅｓｃｕら，Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  ２２１，５１−６１；Ｄａｌｌａ  Ｖａｌｌｅら，Ｊ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４３，１０９５−１０９８）。
【００１８】
[0019]意義深いことに、出願人は、サルビアのエタノール抽出物中に存在するある種の化合物がＣｙｐ１１Ｂ１を阻害することを見出した。Ｃｙｐ１１Ｂ１はヒトでは重要な標的であるため、これをヒトの創傷、特に慢性創傷、及びその他の状態の治療に使用するために適用することができる。
【００１９】
[0020]例えば齧歯類又はその他の下等哺乳動物で報告されたデータは、ヒトの皮膚における創傷治癒効果を予測するための適切なモデルではないので、例えば慢性創傷又はコルチゾール産生に関連する状態、例えばクッシング症候群の治療に用途を有するとは結論付けられないであろう。
【００２０】
[0021]この点において、コルチゾールの合成において最も重要な酵素はＣＹＰ１１Ｂ１である。ＣＹＰ１１Ｂ１は、不活性なグルココルチコイド１１−デオキシコルチゾールを高活性コルチゾールに変換する酵素である。ヒトの皮膚におけるＣＹＰ１１Ｂ１の発現及び活性は、特に創傷治癒の間、厳密に調節されている。創傷後、ＣＹＰ１１Ｂ１の発現及び活性は、炎症反応を抑制するために、特に第２日目に著しくアップレギュレートされるが、創傷後第３及び４日目には、ケラチノサイトの増殖／移動及び創傷治癒に必須なその他の重要な過程をグルココルチコイドが阻害するのを防止するために、対照値に戻る（Ｖｕｋｅｌｉｃ  ら（２０１１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８６，１０２６５−１０２７５）。しかしながら、慢性創傷では、ＣＹＰ１１Ｂ１の発現は永続的に高められたままである（米国特許第８，８０２，６６０  Ｂ２号）。従って、コルチゾールの産生を阻害すると、慢性創傷における長期間のコルチゾール暴露の有害作用を逆転することができる。
【００２１】
[0022]出願人は、１１β−ＨＳＤ１阻害活性を欠く非常に強力なＣＹＰ１１Ｂ１阻害薬をＶｕｋｅｌｉｃら（（２０１１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８６，１０２６５−１０２７５）が使用したのと同じエクスビボ（生体外）ヒト皮膚創傷モデルで用い、ＣＹＰ１１Ｂ１を創傷治癒の標的として確認した。このＣＹＰ１１Ｂ１阻害薬を化学プローブとして用い、ビヒクル対照と比べて著しく早い治癒過程、及び再上皮化による完全創傷閉鎖を観察した。
【００２２】
[0023]このように、ＣＹＰ１１Ｂ１の阻害は、特に慢性創傷の治療のための新規で非常に有望な療法と見なすことができる。さらに、環境乾燥（皮膚のバリア機能不全も誘発する）も、皮膚等価モデルにおいてＣＹＰ１１Ｂ１の発現及び活性を著しく増大する（Ｔａｋｅｉら（２０１３）Ｅｘｐ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２２，６６２−６６４）。
【００２３】
[0024]短波長のＵＶ光（ＵＶＢ及びＵＶＣ）も、哺乳動物皮膚においてコルチゾール及びコルチコステロン合成を刺激する別の重要な環境ストレス要因である。合成速度の増大は、ヒトの皮膚におけるＣＹＰ１１Ｂ１及び１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（ＨＳＤ）１を含むいくつかのステロイド産生酵素のアップレギュレーションによって媒介されていることが示されている（Ｓｋｏｂｏｗｉａｔら（２０１１）Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １６８，５９５−６０１；Ｓｋｏｂｏｗｉａｔら（２０１１）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ３０１，Ｅ４８４−Ｅ４９３）。この生化学反応は若年の皮膚では保護的であると思われるが、コルチゾール産生のアップレギュレーションは高齢の皮膚では持続し、暦老化及び光老化に伴う皮膚の形態及び機能における有害な変化に寄与すると考えられている（Ｔｉｇａｎｅｓｃｕら（２０１１）Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １３１，３０−３６）。従って、特に高齢皮膚におけるコルチゾール合成の阻害は、有害な年齢依存性の影響、例えば、張り及び弾性の喪失、脆弱性の増加、乾燥の増大、厚みの減少、及び細胞外基質成分、例えばヒアルロン酸及びコラーゲンの合成低下を軽減することが期待される（Ｔｉｇａｎｅｓｃｕら（２０１１）Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １３１，３０−３６）。
【００２４】
[0025]ＣＹＰ１１Ｂ１は、腸管（Ｔａｖｅｓら（２０１１）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂｏｌ  ３０１，Ｅ１１−Ｅ２４；Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｍａｒｃｏｓら（２０１１）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１８１２，  ９４７−９５５）及び口腔（Ｐｅｎｇら（２０１１）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６：ｅ２３４５２，データはＯｎｃｏｍｉｎｅウェブポータル(www.oncomine.org)を用いて解析）内にも発現している。従って、皮膚以外の上皮組織及び腔内の病変の治癒も、それぞれの上皮細胞におけるＣＹＰ１１Ｂ１の阻害によって促進できるであろう。
【００２５】
[0026]さらに、ストレス関連の鬱及び消耗を有する女性においては、著しく増大したレベルのコルチゾールが歯肉溝滲出液中に存在することが報告されているが、これは高量の歯垢及び局所炎症と相関する（Ｊｏｈａｎｎｓｅｎら（２００６）Ｊ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ  ７７，１４０３−１４０９）。コルチゾールの何パーセントが全身由来のものであるかは不明であるが、局所産生はＣＹＰ１１Ｂ１阻害薬を用いて効果的に遮断でき、歯周衛生の改良につながる。
【００２６】
[0027]確認された先行技術は下記のものを含む。
[0028]Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ  ９，Ｎｏ  ６，２００５，１５６−７ページ。この文献は、ラット皮膚の創傷治癒へのラディックス・サルビアエ・ミリチオリザエ(radix Salviae militiorrhizae)の使用を開示している。しかしながら、ラットの皮膚は、コルチゾール産生においてヒトとは異なる酵素を発現しているので、それがヒトの創傷の治療に使用できるわけではない。
【００２７】
[0029]中国特許第１０２９８８３７０号は、乾癬の治療にタンシノンＩの使用を開示している。
[0030]中国特許第１０２８２３４０号は、乾癬の治療にタンシノンIIAの使用を開示している。
【００２８】
[0031]中国特許第１２９７３５７５号は、乾癬の治療にクリプトタンシノンの使用を開示している。
[0032]Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ  ｖｏｌ  １３１  ｎｏ  ４  ２０１１  ５８１−５８６ページには、マウスモデルのアトピー性皮膚炎の治療に薬用サルビア(Salvia officinalis L)の使用が開示されている。
【００２９】
[0033]Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｖｏｌ  １２，ｎｏ  ４，１９９８，２０５−２０８ページには、ウサギの熱傷皮膚への丹参(Danshen)の使用が開示されている。ウサギは下等哺乳動物なので、それがヒトの創傷の治療に使用できるわけではない。
【００３０】
[0034]ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ  １４，ｎｏ  １，２０１４，７４ページ：１−１０には、創傷治癒に、ヒト線維芽細胞増殖因子Ｉを発現している遺伝子導入サルビア・ミルチオリザ(Salvia miltiorrhiza)の使用が開示されている。データ（３から４ページにかかる段落）によれば、野生型の植物抽出物は、ラットの皮膚の創傷治癒を促進しなかったことが示されている。
【００３１】
[0035]Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ，ｖｏｌ  ２３，２００２，４４５９−４４６２ページには、キトサンを用いた薬草抽出物の徐放性インプラントが開示されている。インビボにおける生分解はここでもラットで試験された。
【００３２】
[0036]Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｂａｓｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ａｎｄ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ  ２０１２，ａｒｔｉｃｌｅ  ｉｄ  ９２７６５８には、タンシノン１１Ａがケラチノサイトの増殖を阻害することが開示されている。これがおそらくは乾癬の治療にそれを使用することの機序であろう。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００３３】
【特許文献１】国際公開第２００９０５０４５１号
【特許文献２】米国特許第８，８０２，６６０  Ｂ２号
【特許文献３】中国特許第１０２９８８３７０号
【特許文献４】中国特許第１０２８２３４０号
【特許文献５】中国特許第１２９７３５７５号
【非特許文献】
【００３４】
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｐｌａｎｔｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４，２８１３−２８２０，２９  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ，２０１０
【非特許文献２】Ｓｃｈｒｅｍｌら（２０１０）Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ６３，８６６−８８１
【非特許文献３】Ｓｇｏｎｃ及びＧｒｕｂｅｒ（２０１２）Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ  ５９，１５９−１６４
【非特許文献４】Ｖｕｋｅｌｉｃら（２０１１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８６，１０２６５−１０２７５
【非特許文献５】Ｔｉｇａｎｅｓｃｕら，Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  ２２１，５１−６１
【非特許文献６】Ｄａｌｌａ  Ｖａｌｌｅら，Ｊ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４３，１０９５−１０９８
【非特許文献７】Ｔａｋｅｉら（２０１３）Ｅｘｐ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  ２２，６６２−６６４
【非特許文献８】Ｓｋｏｂｏｗｉａｔら（２０１１）Ｂｒ  Ｊ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １６８，５９５−６０１
【非特許文献９】Ｓｋｏｂｏｗｉａｔら（２０１１）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ３０１，Ｅ４８４−Ｅ４９３
【非特許文献１０】Ｔｉｇａｎｅｓｃｕら（２０１１）Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  １３１，３０−３６
【非特許文献１１】Ｔａｖｅｓら（２０１１）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂｏｌ  ３０１，Ｅ１１−Ｅ２４
【非特許文献１２】Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｍａｒｃｏｓら（２０１１）Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ，１８１２，９４７−９５５
【非特許文献１３】Ｐｅｎｇら（２０１１）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６：ｅ２３４５２
【非特許文献１４】Ｊｏｈａｎｎｓｅｎら（２００６）Ｊ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ  ７７，１４０３−１４０９
【非特許文献１５】Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ，Ｖｏｌ  ９，Ｎｏ  ６，２００５，１５６−７ページ
【非特許文献１６】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ  ｖｏｌ  １３１  ｎｏ  ４  ２０１１  ５８１−５８６ページ
【非特許文献１７】Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｒｅｐａｒａｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｖｏｌ  １２，ｎｏ  ４，１９９８，２０５−２０８ページ
【非特許文献１８】ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ  １４，ｎｏ  １，２０１４，７４ページ：１−１０
【非特許文献１９】Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ，ｖｏｌ  ２３，２００２，４４５９−４４６２ページ
【非特許文献２０】Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｂａｓｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ａｎｄ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ  ２０１２，ａｒｔｉｃｌｅ  ｉｄ  ９２７６５８
【発明の概要】
【００３５】
[0037]本発明の第一の側面に従って、創傷又はクッシング症候群の治療に使用するための、サルビア属(Salvia spp)から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、ＣＹＰ１１Ｂ１阻害量のタンシノンＩ及び／又はジヒドロタンシノンを含む一種類又は複数種類のタンシノン化合物を提供する。
【００３６】
[0038]最も好ましくは、治療される創傷は慢性創傷である。
[0039]好ましくは、必須ではないが、サルビア属の植物抽出物は、国際公開第２００９０５０４５１号に記載及び特徴付けされているものである。前記文献は引用によって本明細書に援用する。
【００３７】
[0040]これらの有益性質を示す抽出物は、シソ科(Labiatae family)の多年生草本であるサルビア・ミルチオリザ・ブンゲ(Salvia miltiorrhiza Bunge)の根及び根茎から誘導できる。伝統中国医学（漢方）（ＴＣＭ）では丹参（タンジン）(Danshen)とも呼ばれる。
【００３８】
[0041]丹参の化学成分は、化学物質の二つの主要カテゴリーに分けることができる。すなわち、
・脂溶性物質、及び
・水溶性物質
である。
【００３９】
[0042]丹参の“活性”化合物に関する初期の研究は、主に脂溶性化合物に焦点が当てられてきた。これまでに約４０の化合物が発見されている。
[0043]これらはさらに二つのグループに分けられる。すなわち、
・タンシノン（ｏ−キノン構造）、及び
・ロシグリタゾン（ｏ−ヒドロキシロシグリタゾン、パラキノイド構造）
である。
【００４０】
[0044]タンシノン化合物の大部分はジテルペンであり、そのうち主にジテルペンキノンである。
[0045]４０を超える異なる化合物が確認されている。例えば、タンシノン、クリプトタンシノン、タンシノンIIA、タンシノンIIB、メチルタンシノン、ヒドロキシタンシノンIIA、イソタンシノンＩ、イソタンシノンII、イソクリプトタンシノン、ミルチロン、Ｌ−ジヒドロタンシノンＩ、ネオタンシノンＡ、Ｂ、Ｃ、及びサルビオールである。
【００４１】
[0046]これらの化合物の４つの構造を以下に示す。これらは、国際公開第２００９０５０４５１号に開示されている抽出物中に相当量（ＨＰＬＣクロマトグラフィーによる）具体的に確認されている。
【００４２】
【化１】
2017537163.tif 000003
【００４３】
[0047]好ましくは、抽出物は、ＣＹＰ１１Ｂ１阻害量のタンシノンＩ及び／又はジヒドロタンシノン（さらに具体的には１５，１６−ジヒドロタンシノンＩ）を含む。
[0048]好適な態様において、サルビア属の植物抽出物又は一つもしくは複数のタンシノン化合物は、慢性創傷の治療に使用するためのものである。そのような創傷は、糖尿病患者又は肥満患者の集団に蔓延している。
【００４４】
[0049]治療から利益を受けるその他の創傷は、褥瘡（床擦れ）、擦過傷、放射線、熱傷、潰瘍又は外科的介入に由来する創傷のほか、免疫系が障害されている患者群における創傷でありうる。
【００４５】
[0050]コルチゾールの阻害から利益を受ける別の状態はクッシング症候群である。
[0051]例示的抽出物は、国際公開第２００９０５０４５１号に開示されているもので、
○クリプトタンシノン、
○ジヒドロタンシノン、
○タンシノンＩ、及び
○タンシノンIIA
を含み、上記タンシノン化合物は選択的精製抽出物の少なくとも１５重量％を構成し、クリプトタンシノンは選択的精製抽出物の少なくとも４重量％を構成することを特徴とする。
【００４６】
[0052]明白なことであるが、代替のタンシノン含有抽出物も使用できる。又はＣＹＰ１１Ｂ１を阻害する一種類又は複数種類のｏ−キノンもしくはタンシノンを含む又はそれらからなる製剤も使用できる。
【００４７】
[0053]本発明の第二の側面に従って、ＣＹＰ１１Ｂ１を少なくとも６４％、さらに好ましくは少なくとも８１％、なおさらに好ましくは少なくとも９４％阻害する量のタンシノンＩ及び／又はジヒドロタンシノン又はそれらと同じものを含有するサルビア属の抽出物を含む又は本質的にそれらからなる医薬品又は化粧品を提供する。
【００４８】
[0054]当業者であれば、阻害効果を最大化すること、典型的には７５％から８０％、８５％、９０％を通って９５％に至り、９６％、９７％、９８％及び９９％を通って１００％に至る阻害が好ましいことは認識できるであろう。
【００４９】
[0055]治療的利益のある阻害量は、ＣＹＰ１１Ｂ１の活性を少なくとも６０％、さらに好ましくは少なくとも７５％以上阻害することができる量である。
[0056]医薬品又は化粧品はさらに一種類又は複数種類の賦形剤を含む。
【００５０】
[0057]特に好適な態様において、活性成分は、ドレッシング、バンテージ、ガーゼ又はその他の担体材料上に担持される。
[0058]別の態様において、活性成分は、洗口液及び練り歯磨き(toothpaste)などの歯周用製品に配合される。
【００５１】
[0059]本発明の第三の側面に従って、創傷又はクッシング症候群の治療法を提供する。該方法は、患者に、治療上有効量のサルビア属の植物抽出物、又はタンシノンＩ及びジヒドロタンシノンを含む一種類又は複数種類のタンシノン化合物を提供することを含む。
【００５２】
[0060]好ましくは、治療される創傷は慢性創傷である。
[0061]最も好ましくは、タンシノン化合物は、タンシノンＩ及び／又は１５，１６−ジヒドロタンシノンＩである。
【００５３】
[0062]本発明を、以下の図面及び詳細な説明を参照しながら、単なる例としてさらに説明する。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】[0063]図１は、ヒトにおけるステロイドホルモンの生合成経路を示すダイアグラムである。
【図２】[0064]図２は、本発明による抽出物のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
[0065]出願人は、サルビア・ミルチオリザ・ブンゲ(Salvia miltiorrhiza Bunge)抽出物（国際公開第２００９０５０４５１号に開示の通り）が、無傷細胞のＣＹＰ１１Ｂ１活性を用量依存的に阻害することを見出した。
【００５６】
[0066]国際公開第２００９０５０４５１号に開示されている抽出物は、
○クリプトタンシノン、
○ジヒドロタンシノン、
○タンシノンＩ、及び
○タンシノンIIA
を含むサルビア属の根由来の選択的精製タンシノン化合物含有抽出物で、上記タンシノン化合物が選択的精製抽出物の少なくとも１５重量％を構成し、クリプトタンシノンが選択的精製抽出物の少なくとも４重量％を構成することを特徴とする。
【００５７】
[0067]しかしながら、国際公開第２００９０５０４５１号のサルビア属は、サルビア・ミルチオリザ・ブンゲ(Salvia miltiorrhiza Bunge)であるが、他のサルビア属、例えば、サルビア・アピアナ(Salvia apiana)、サルビア・アルゲンテア(Salvia argentea)、サルビア・アリゾニカ(Salvia arizonica)、サルビア・アズレア(Salvia azurea)、サルビア・カルノサ(Salvia carnosa)、サルビア・クレベランディイ(Salvia clevelandii)、サルビア・コクシネア(Salvia coccinea)、サルビア・ディビノルム(Salvia divinorum)、サルビア・ドルリイ(Salvia dorrii)、サルビア・ファリナセア(Salvia farinacea)、サルビア・フォルレリ(Salvia forreri)、サルビア・フルゲンス(Salvia fulgens)、サルビア・フネレア(Salvia funerea)、サルビア・グルチノサ(Salvia glutinosa)、サルビア・グレグギイ(Salvia greggii)、サルビア・グアラニチカ(Salvia guaranitica)、サルビア・ヒスパニカ(Salvia hispanica)、サルビア・レウカンサ(Salvia leucantha)、サルビア・レウコフィラ(Salvia leucophylla)、サルビア・リバノチカ(Salvia libanotica)、サルビア・ロンギスチラ(Salvia longistyla)、サルビア・リラタ(Salvia lyrata)、サルビア・メキシカナ(Salvia mexicana)、サルビア・オフィシナリス(Salvia officinalis)、サルビア・パテンス(Salvia patens)、サルビア・ポリスタキア(Salvia polystachya)、サルビア・ポツス(Salvia potus)、サルビア・プラテンシス(Salvia pratensis)、サルビア・ロエメリアナ(Salvia roemeriana)、サルビア・スクラレア(Salvia sclarea)、サルビア・スパサセア(Salvia spathacea)、サルビア・スプレンデンス(Salvia splendens)、サルビア・ベルチシラタ(Salvia verticillata)、サルビア・ビリディス(Salvia viridis)も、タンシノン含有抽出物を得るために使用できる。
【００５８】
[0068]従って、国際公開第２００９０５０４５１号に開示されている抽出物は、選択的精製抽出物の少なくとも３５重量％の特定タンシノン化合物を含み、クリプトタンシノンは少なくとも１５重量％を構成する。
【００５９】
[0069]実際、好ましくは、特定タンシノン化合物は選択的精製抽出物の少なくとも４５重量％を構成し、クリプトタンシノンは選択的精製抽出物の少なくとも２５重量％を構成する。
【００６０】
[0070]一態様において、クリプトタンシノンは、４種類の特定タンシノン化合物の少なくとも２０％、さらに好ましくは少なくとも２５％、なおさらに好ましくは少なくとも４０％、そしておそらくは６０％もの割合を構成する。
【００６１】
[0071]同様に、タンシノンIIAは、４種類の特定タンシノン化合物の５５％未満、さらに好ましくは５０％未満、なおさらに好ましくは４０％未満を構成し、そして４種類の特定タンシノン化合物のわずか２０％以下しか構成しないであろう。
【００６２】
[0072]最も好ましくは、抽出物は、少なくとも１％、さらに好ましくは少なくとも２％、なおさらに好ましくは少なくとも３％のタンシノンＩ及び／又はジヒドロタンシノンを含有する。実際、抽出物は、少なくとも５％、さらに好ましくは少なくとも１０％から２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、及び９０％の一種類又は複数種類の好適な化合物タンシノンＩ及び／又はジヒドロタンシノンを含有する高選択抽出物でありうる。
【００６３】
[0073]実施例１に例示されている態様において、選択的精製タンシノン化合物含有抽出物は、４種類の特定タンシノン化合物を４２．８９％（プラス又はマイナス４０％から３０％を通って２０％まで）の量で含むことを特徴としていた。すなわち、
・クリプトタンシノン含有量１８．９５％（プラス又はマイナス４０％から３０％を通って２０％まで）、
・ジヒドロタンシノン含有量３．６５％（プラス又はマイナス４０％から３０％を通って２０％まで）、
・タンシノンＩ含有量３．８２％（プラス又はマイナス４０％から３０％を通って２０％まで）、及び
・タンシノンIIA含有量１６．４７％（プラス又はマイナス４０％から３０％を通って２０％まで）。
【００６４】
[0074]この選択的精製タンシノン化合物含有抽出物は、実質的に図２に示されているような、特徴的ピークを有するＨＰＬＣフィンガープリントを有することを特徴とする。
[0075]しかしながら、実施例３（本明細書中）から明らかなように、抽出物は強力なＣＹＰ１１Ｂ１阻害薬であるが、存在量の少ない２種類のタンシノンの１５，１６−ジヒドロタンシノン及びタンシノンＩの方が、存在する主要タンシノンのクリプトタンシノン及びタンシノンIIAよりも著しく活性が高いので、結果的に、１５，１６−ジヒドロタンシノン又はタンシノンＩの一つ又は複数の高含有量の代替抽出物を使用するか、又は、実際、単離された化合物（又は合成された化合物もしくは誘導体）を単独で又は互いと共に使用するのが好適でありうる。
【００６５】
[0076]同様に、上記抽出物は、サルビア属の根から、
・原料を、強エタノール中に、タンシノン化合物を可溶化するのに足る時間浸漬し、
・タンシノン化合物含有フラクションをパーコレーション法を用いて抽出し、そして
・所望フラクションを真空下で濃縮し、エタノールを回収する
工程を含む方法によって製造されたが、１５，１６−ジヒドロタンシノン又はタンシノンＩを濃縮又は優先的に選択するように方法を変更するのが好適であろう。
【００６６】
[0077]そこで、国際公開第２００９０５０４５１号に開示されている方法の代替法、すなわち、
ａ．十分な水に抽出物を溶解し、
ｂ．所望フラクションを沈殿させ、
ｃ．水溶液を廃棄し、そして
ｄ．沈殿物を回収する
ことを含む第一の精製工程を利用する方法が使用されうる。
【００６７】
[0078]同様に、国際公開第２００９０５０４５１号には、
ｅ．マクロ孔樹脂カラム（ＡＢ８マクロ孔樹脂カラム、Ｌｉｏａｙｕａｎ  Ｎｅｗ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  Ｌｔｄ社製、又は別の適切なカラム）での分離
を含む第二の精製工程が開示されているが、好適な化合物に対して特異性を有する代替法が望ましいであろう。
【００６８】
[0079]クレームを裏付ける実験の詳細を以下に示す。
【実施例】
【００６９】
実施例１
１．１  抽出物溶液の製造
[0080]出願人は、〜１０ｍｇのサルビア・ｍ・ブンゲ(Salvia m. Bunge)抽出物（国際公開第２００９０５０４５１号に開示の通り）を所要体積の１００％エタノール又は１００％ＤＭＳＯ中に溶解し、１％（ｗ／ｖ）の抽出物溶液を得た。この溶液５μＬの５００μＬアッセイ培養体積中溶液を試験した（最終エタノール又はＤＭＳＯ濃度は１％）。この１％サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物溶液から、１００％エタノール又は１００％ＤＭＳＯ中に１：１０及び１：１００希釈溶液も製造した。これらの溶液から、５００μＬアッセイ培養体積中５μＬの溶液を試験した。
【００７０】
１．２  ＣＹＰ１１Ｂ１アッセイ
[0081]組換えヒトＣＹＰ１１Ｂ１を発現しているＶ７９ＭＺｈ１１Ｂ１細胞株を、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ；Ｓｉｇｍａ社）、ペニシリンＧ（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、グルタミン（２ｍＭ）及びピルビン酸ナトリウム（１ｍＭ）を補給したダルベッコ変法イーグル（ＤＭＥ、Ｓｉｇｍａ社）培地にて、３７℃、空気中５％ＣＯ２中で培養した。細胞を２４ウェル細胞培養プレートに入れ（８×１０５細胞／ウェル）、ウェルあたり１ｍｌのＤＭＥ中でコンフルエンス（集密状態）になるまで培養した。試験当日、ＤＭＥ培地を除去し、１００％エタノール又は１００％ＤＭＳＯ中に５μｌの抽出物溶液を含有する４５０μｌの新鮮ＤＭＥＭを各ウェルに加えた。溶媒としてのＤＭＳＯ又はエタノールの間にＣＹＰ１１Ｂ１阻害の顕著な差はなかった。対照ウェル（ビヒクル又は各実験を検証するための参照化合物としてケトコナゾール（最終濃度５０ｎＭ）入り）も、抽出物溶液なしで同様に処理した。３７℃のＣＯ２インキュベーター中で６０分後、１００ｎＭの１１−デオキシコルチコステロン（プラス０．１５μＣｉの［１，２−３Ｈ］１１−デオキシコルチコステロン）を基質として含有する５０μｌのＤＭＥＭの添加により、反応を開始した。すべての測定は２回ずつ行った。２５分後、上清を酢酸エチルで抽出することにより、酵素反応を停止させた。サンプルを遠心分離し（１０，０００×ｇ、１０分間）、上相をピペットで採取して新しいカップに入れた。酢酸エチル溶媒を蒸発させ、残渣を４０μｌのメタノール中に溶解し、ＨＰＬＣで分析した。下記式を用いて、変換率及び酵素阻害のパーセンテージを求めた。
【００７１】
[0082]ＣＹＰ１１Ｂ１
【００７２】
【数１】
2017537163.tif 000004
【００７３】
結果
[0083]結果を表１に示す。それによれば、Ｖ７９ＭＺｈ１１Ｂ１細胞におけるサルビア・ｍ・ブンゲ抽出物によるＣＹＰ１１Ｂ１活性の阻害が示されている。抽出物溶液は、乾燥抽出物から実験当日に新たに製造した。
【００７４】
[0084]表１．
【００７５】
【表１】
2017537163.tif 000005
【００７６】
示されているように、１００％エタノール及び１００％ＤＭＳＯ中に最終濃度０．０１％で製造されたサルビア・ｍ・ブンゲ抽出物は、ヒトＣＹＰ１１Ｂ１をそれぞれ９５．６％及び１００．０％阻害した。１％の抽出物溶液から、出願人は、１００％エタノール又は１００％ＤＭＳＯ中に１：１０の希釈溶液をそれぞれ製造した。これら後者の溶液から、５００μＬアッセイ体積中５μＬの溶液を試験した。これらの抽出物溶液（アッセイ体積中の最終抽出物濃度０．００１％）は、ヒトＣＹＰ１１Ｂ１をそれぞれ７９．１％及び８３．１％阻害した。１％の抽出物溶液から、出願人は、１００％エタノール又は１００％ＤＭＳＯ中に１：１００の希釈溶液もそれぞれ製造した。後者の溶液から、５００μＬアッセイ体積中５μＬの溶液を試験した。この抽出物溶液（アッセイ体積中の最終抽出物濃度０．０００１％）は、ヒトＣＹＰ１１Ｂ１をそれぞれ２２．６％及び１６．８％阻害した。
【００７７】
[0085]これらの実験から、サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物は、０．０００１％、０．００１％及び０．０１％の希釈度でＣＹＰ１１Ｂ１を阻害するという結論に達した。
[0086]阻害が毒性によるものではないことを確認するために、以下の実施例２に示されているように、ＭＴＴ［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−テトラゾリウムブロミド］細胞生存性アッセイを、ＣＹＰ１１Ｂ１スクリーニングアッセイで使用されたのと同じ細胞株及び培養条件下で実施した。
【００７８】
実施例２
ＭＴＴ細胞生存性アッセイ
[0087]Ｖ７９ＭＺｈ１１Ｂ１細胞を２４ウェル細胞培養プレート上（８×１０５細胞／ウェル）、１ｍｌのＤＭＥ培地中でコンフルエンスになるまで培養した。試験当日、ＤＭＥ培地を除去し、１００％エタノール中サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物溶液５μｌを含有する５％ＦＣＳ入り新鮮ＤＭＥ培地４５０μｌを各ウェルに加えた。エタノール（１％）及びＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００（０．０００６％）をそれぞれビヒクル及び陽性対照として用いた（すべて最終濃度）。すべての測定は４回ずつ行った。５％ＣＯ２中３７℃で６０分後、５０μｌの新鮮ＤＭＥ培地（＋５％ＦＣＳ）を各ウェルに加えた。２５分後、培地を５００μｌの新鮮ＤＭＥ培地（＋５％ＦＣＳ）で置き換え、これに２５μｌのＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍｌのＰＢＳ、ｐＨ７．２）を直ちに加えた。３０分後、すべての培地を除去し、細胞を、ＤＭＳＯ中０．５％酢酸（ｖ／ｖ）、１０％ＳＤＳ（ｗ／ｖ）２５０μｌ中に溶解した。ホルマザンの吸光度を５７０ｎｍの波長で分光光度法により測定した。
【００７９】
結果
Ｖ７９ＭＺｈ１１Ｂ１細胞の細胞生存性に及ぼす０．０１％及び０．０００１％サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物溶液の影響の判定
[0088]ＣＹＰ１１Ｂ１スクリーニングアッセイで使用された（前）培養条件下でのＶ７９ＭＺｈ１１Ｂ１細胞の細胞生存性に及ぼすサルビア・ｍ・ブンゲ抽出物の影響を判定した。表２に示されているように、０．０１％及び０．０００１％サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物溶液は、ＭＴＴのホルマザンへの変換に何の影響も及ぼさなかった（一方、陽性対照のＴｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００は、ほぼ完全にホルマザン形成を遮断した）。従って、サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物のＣＹＰ１１Ｂ１に対する阻害効果は、細胞毒性作用によって生じているのではないと結論付けられた。
【００８０】
[0089]表２．
【００８１】
【表２】
2017537163.tif 000006
【００８２】
実施例３
[0090]抽出物の活性を考慮し、出願人は、実施例１に記載の方法を用いて、いくつかのタンシノンの活性について調べた。
Ｖ７９ＭＺｈ１１Ｂ１細胞で試験されたタンシノンは、
・タンシノンIIA、
・タンシノンＩ、
・ジヒドロタンシノンＩ、及び
・クリプトタンシノン
であった。
【００８３】
[0091]結果を以下の表３に示す。
【００８４】
【表３】
2017537163.tif 000007
【００８５】
[0092]結果から、各タンシノンは阻害活性を示し、２種類の最も効果的なタンシノンは、ジヒドロタンシノン（１０μＭで９４％の阻害）及びタンシノンＩ（１０μＭで６４％の阻害）であることが明らかである。
【００８６】
[0093]このこと自体は予期せぬことであった。なぜならば、これら２種類の化合物は、国際公開第２００９０５０４５１号に開示されている抽出物中には、クリプトタンシノン及びタンシノンIIA（それぞれ１８．９５％及び１６．４７％）よりも少量しか存在していない（それぞれ３．６５％及び３．８２％）からである。
【００８７】
[0094]構造に注目すると、ジヒドロタンシノン（１０μＭで９４％の阻害）及びタンシノンＩ（１０μＭで６４％の阻害）の増強された活性は、Ｃ４位のメチル（ジメチルとは対照的に）基の存在に起因する可能性がある。
【００８８】
[0095]これらの構造的に関連した化合物の活性を考えると、タンシノンファミリーの化合物のその他のメンバー（又はそれらの誘導体）も、同様の（又はより良好な）ＣＹＰ１１Ｂ１阻害活性を示すことが期待されそうである。
【００８９】
実施例４
サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物の７０℃、８０℃及び９０℃における熱安定性についての試験
[0096]一般に、傷プラスター(wound plaster)の成分は、潜在的残留細菌の数を減らすために、短時間、高温（７０℃〜９０℃）に保持されることが多い。そこで、プラスターが術後、創傷周囲に貼付されるような状況で使用される場合、抽出物／タンシノンのＣＹＰ１１Ｂ１阻害活性はこのような高温でも安定であるべきことが重要である。
【００９０】
[0097]サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物のＣＹＰ１１Ｂ１阻害効力を、７０℃、８０℃又は９０℃での処理の５分及び１５分後に測定した。サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物を１００％ＤＭＳＯ溶液中に溶解し（０．０５％及び０．０２５％のいずれかの濃度で）、７０℃、８０℃及び９０℃で５又は１５分間培養し、その後、ＣＹＰ１１Ｂ１アッセイにて最終濃度０．０００５％及び０．０００２５％で試験した。これらの濃度は、ＣＹＰ１１Ｂ１を阻害する抽出物のＩＣ５０近辺で選ばれた。
【００９１】
[0098]結果を以下の表４に示すが、サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物の熱安定性が示されている。データは、４回（対照）又は２回の測定の平均±ＳＤである。
[0099]表４．
【００９２】
【表４】
2017537163.tif 000008
【００９３】
[00100]対照値（０．０５％及び０．０２５％の濃度で２５℃にて１５分間前処理されたサルビア・ｍ・ブンゲ抽出物で測定された）と比べて、ＣＹＰ１１Ｂ１阻害活性への影響は、７０℃、８０℃及び９０℃のいずれの前処理でも見られなかった。従って、これらの抽出物／化合物は、創傷がプラスターで固定されるような状況でも使用することができる。
【００９４】
実施例５
サルビア・ｍ・ブンゲ抽出物のアレルギー誘発性についての試験
[00101]抽出物のアレルギー誘発性の可能性を、１００％ワセリン（登録商標）中０．５％（重量／体積）のサルビア・ｍ・ブンゲ濃度で、３人の自発的被験者の無傷ヒト皮膚（上腕内側）上で試験した。５日間の皮膚暴露中、アレルギー誘発性の徴候（すなわち皮膚の色又は質感(texture)の変化）はいずれの個人にも見られなかった。
【００９５】
[00102]上記実施例から、サルビア属から誘導された一種類又は複数種類のタンシノン化合物を含む植物抽出物、又は、前記一種類又は複数種類のタンシノン化合物は、創傷又はコルチゾール合成の阻害から利益を受けるその他の状態の治療に使用するための有望な候補であると結論付けることができる。
【００９６】
[00103]さらに、出願人は、２種類の特に活性な成分は、どちらかと言えば脂溶性であることを確認し（ＡＣＤ／ｌｏｇＰ  ＧＡＬＡＳを用いて計算した対数は、ジヒドロタンシノンＩの場合３．５７である）、表皮への良好な浸透を示唆している。このことは、表皮に発現している標的酵素の効率的な阻害に不可欠のことである。
【図１】
2017537163.tif 000009
【図２】
2017537163.tif 000010
【国際調査報告】
2017537163.tif 000011
2017537163.tif 000012
2017537163.tif 000013
2017537163.tif 000014