(57)【要約】免疫原性グリコペプチドにより規定される少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する抗体が、本明細書で開示される。本開示の他の態様は、抗体を含む医薬組成物、ならびにグロボＨ陽性癌を予防及び／または治療するための方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分であって、ヒト化抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を含み、ＧＦＳＬＳＴＦＤＭＧＶＧ（配列番号１）、ＧＳＳＬＳＴＦＤＶＧＶＧ（配列番号２）、ＧＦＳＬＧＴＦＤＬＧＩＧ（配列番号３）、ＧＦＳＬＳＴＦＤＬＧＩＧ（配列番号４）のアミノ酸残基、または配列番号１〜４のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域１（Ｈ−ＣＤＲ１）；ＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡ（配列番号５）、ＨＩＷＧＤＤＤＫＹＹＮＰＡ（配列番号６）のアミノ酸残基、または配列番号５及び６のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖ＣＤＲ２（Ｈ−ＣＤＲ２）；及びＬＹＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹ（配列番号７）、若しくはＬＳＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹ（配列番号８）、ＬＹＧＮＹＬＲＳＹＹＣＤＹ（配列番号９）のアミノ酸残基、または配列番号７〜９のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖ＣＤＲ３（Ｈ−ＣＤＲ３）；のうち少なくとも１つ、ならびに
ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１０）、ＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨ（配列番号１１）、ＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１２）、ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１３）のアミノ酸残基、または配列番号１０〜１３のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ−ＣＤＲ１）；ＡＴＳＮＬＡＳ（配列番号１４）、ＷＴＳＤＲＹＳ（配列番号１５）、ＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号１６）のアミノ酸残基、または配列番号１４〜１６のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖ＣＤＲ２（Ｌ−ＣＤＲ２）；及びＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１７）、ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ（配列番号１８）、ＱＱＨＬＨＩＰＹＴ（配列番号１９）のアミノ酸残基、または配列番号１７〜１９のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ−ＣＤＲ３）；のうち少なくとも１つ、を含み、前記単離された組み換え抗体またはその抗原結合部分がグロボＨに結合するような、前記単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２】
前記配列同一性が、少なくとも９０％である、請求項１に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項３】
モノクローナル抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体である、請求項１に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
（ｉ）配列番号１〜４からなる群から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号５及び６からなる群から選択されるＨ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号７〜９からなる群から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ａ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ａ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）、ならびに（ii）配列番号１０〜１３からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ１、配列番号１４〜１６からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１７〜１９からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域、を含む、請求項１に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
Ｈ−ＣＤＲ１は配列番号３であり；Ｈ−ＣＲＤ２は配列番号５であり；Ｈ−ＣＤＲ３は配列番号８であり；Ｌ−ＣＤＲ１は配列番号１０であり；Ｌ−ＣＤＲ２は配列番号１６であり；Ｌ−ＣＤＲ３は配列番号１８である、請求項１に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６】
（ｉ）配列番号１４０〜１６３のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１６４〜１９９のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７】
上記のような前記配列同一性が、少なくとも９０％である、請求項６に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８】
（ｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１９５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９】
（ｉ）配列番号１４７からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１９５からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０】
（ｉ）配列番号２０〜４３のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに（ii）配列番号４４〜７９及び２００〜２３５のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１】
上記のような前記配列同一性が、少なくとも９０％である、請求項９に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１２】
（ｉ）配列番号２０〜４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに（ii）配列番号４４〜７９及び２００〜２３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項９に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１３】
（ｉ）配列番号２７からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号７５からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；または（ii）配列番号２７からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２３１からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項９に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１４】
（ｉ）配列番号８０〜１０３のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１０４〜１３９のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１５】
（ｉ）配列番号８０〜１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１０４〜１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項９に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１６】
配列番号９０からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３５からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１４に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１７】
（ｉ）アミノ酸配列の最後から３番目の配列「Ｖ」が「Ｉ」に変更される、配列番号１４０〜１６３のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８５％の同一性をもつ前記アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１６４〜１９９のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１８】
（ｉ）アミノ酸配列の最後から３番目の配列「Ｖ」が「Ｉ」に変更される、配列番号１４７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性をもつ前記アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１９５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１７に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１９】
（ｉ）アミノ酸配列の最後から３番目の配列「Ｖ」が「Ｉ」に変更される、配列番号１４７からなる前記アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１９５からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１７に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分。
【請求項２０】
医薬組成物であって、請求項１〜１９に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分のいずれか、及び薬学的に許容される担体を含む、前記医薬組成物。
【請求項２１】
抗腫瘍薬をさらに含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
癌の治療及び／または予防方法であって、請求項１〜２０に記載の単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分のいずれかの治療的有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項２３】
前記癌が、腫瘍関連糖鎖発現癌である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記癌が、乳癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、結腸直腸癌、または肺癌である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記癌が、遊走癌である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
血管新生阻害剤、化学療法、放射線、または手術などから選択される１つ以上の追加の治療を実施することをさらに含む、請求項２２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌の免疫療法の分野に関する。より詳細には、開示される本発明は、免疫原性グリコペプチドに対する抗体、抗体を含む医薬組成物（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｃｏｍｐ）、及び癌治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
グロボＨは、六糖であり、乳癌、結腸癌、卵巣癌、膵癌、肺癌、及び前立腺癌細胞を含む種々の上皮癌細胞の表面に過剰発現する多数の腫瘍関連糖鎖抗原に属する。グロボＨの異常発現により、グロボＨはグロボＨ陽性癌に対する免疫療法及び癌ワクチンの開発のための魅力的な候補になる。
【０００３】
しかし、ほとんどの糖鎖抗原のように、グロボＨは多くの場合、免疫系により許容され、従ってグロボＨより引き起こされる免疫原性は乏しい。さらに、特定の免疫原に対する抗体の産生は通常、２つのタイプのリンパ球、Ｂ細胞及びヘルパーＴ細胞の共同的相互作用を必要とする。さらに、グロボＨは単独で、ヘルパーＴ細胞を活性化することができない。これは、グロボＨの免疫原性が不十分であることにも起因する。従って、グロボＨを用いた免疫化は多くの場合、免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）の力価が低いこと、及び免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）へのクラススイッチを行わないこと、ならびに抗体の親和性成熟に効果がないことにより代表される。
【０００４】
種々のアプローチが、上述の欠陥に対処するために開発されている。特定の研究では、Ｔエピトープ（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）または無毒化された破傷風トキソイド（ＴＴ））を有する外来キャリアタンパク質またはペプチドは、糖鎖抗原の免疫原性を高めることを期待して、糖鎖抗原にコンジュゲートされている。ＵＳ２００１００４８９２９は、少なくとも１つの機能的Ｔ細胞エピトープを含有するキャリア分子、及びキャリア分子にそれぞれ結合され、少なくとも１つの機能的Ｂ細胞エピトープをそれぞれ含有する複数の異なる糖鎖フラグメントを含む多価免疫原性分子を提供し、該キャリア分子は、該複数の糖鎖フラグメントに増強された免疫原性を付与し、糖鎖フラグメントはグロボＨ、ＬｅＹ、またはＳＴｎである。ＵＳ２０１２０３２８６４６は、ｐ−ニトロフェニルリンカーを介して免疫原性キャリアのジフテリア毒素交差反応物質１９７（ＤＴ−ＣＲＭ１９７）（Ｔｈエピトープ）に化学的にコンジュゲートされたグロボＨ（Ｂ細胞エピトープ）を含有する糖鎖系ワクチンを提供し、これは、乳癌モデルにおける免疫原性を提供して、異種移植研究において腫瘍形成が遅延することを示す。ＵＳ２０１２０２６３７４９は、グロボＨ、ルイス抗原及びガングリオシド、多糖抗原、ムチン抗原、グリコシル化ムチン抗原などの糖脂質抗原ならびに適切なアジュバントを含有する群から選択される少なくとも２つのコンジュゲートされた抗原を含む、癌を治療するための多価ワクチンに関する。
【０００５】
それにもかかわらず、糖鎖のキャリアタンパク質へのコンジュゲートは、いくつかの新しい問題を提起する。Ｉｎｇａｌｅらによると、外来キャリアタンパク質、及びキャリアタンパク質及び糖鎖を付着させるためのリンカーは、強力なＢ細胞応答を誘発することがあり、それにより、糖鎖エピトープに対する抗体応答の抑制をもたらす（Ｉｎｇａｌｅ  Ｓ．ら  Ｒｏｂｕｓｔ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｅｌｉｃｉｔｅｄ  ｂｙ  ａ  ｆｕｌｌｙ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｔｈｒｅｅ−ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｖａｃｃｉｎｅ．Ｎａｔ  Ｃｈｅｍ  Ｂｉｏｌ．２００７  Ｏｃｔ；３（１０）：６６３−７．Ｅｐｕｂ  ２００７  Ｓｅｐ  ２）。さらに、Ｉｎｇａｌｅらはまた、コンジュゲート化学は制御が難しく、免疫応答の再現性に影響を及ぼし得る組成物及び構造における曖昧さを有するコンジュゲートをもたらすことを示した。上述の因子を考慮して、Ｉｎｇａｌｅらは、糖鎖−タンパク質コンジュゲートを使用した臨床前及び臨床研究により、混合された結果がもたらされていることは、驚くべき事ではないことを結論づけた。例えば、Ｋｕｄｕｋらは、アジュバントＱＳ−２１の存在下でＫＬＨにコンジュゲートされたＴｎ抗原の三量体クラスタでの免疫化は、マウスにおいて適度な力価のＩｇＧ抗体を誘発したことを教示した（Ｋｕｄｕｋ  ＳＤ，ら  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ  ｍｏｄｅｓ  ｏｆ  ｍｕｃｉｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｔｎ  ａｎｄ  ＴＦ  Ｏ−ｌｉｎｋｅｄ  ａｎｔｉｇｅｎｓ：ｔｈｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ−ｂａｓｅｄ  ｖａｃｃｉｎｅ  ｆｏｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ．１９９８；１２０：１２４７４−１２４８５）。一方、Ｓｌｏｖｉｎらは、同一のワクチンが、再発性前立腺癌患者の臨床試験において、中低のＩｇＧ及びＩｇＭ抗体力価を与えたことを教示した（Ｓｌｏｖｉｎ  ＳＦ，ら  Ｆｕｌｌｙ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−ｂａｓｅｄ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｉｎ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ：ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｌｐｈａ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ−Ｏ−ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｖａｃｃｉｎｅ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２００３；２１：４２９２−４２９８）。
【０００６】
さらに、低免疫状態の癌患者、特に、化学療法または放射線療法を受けた患者、及び後期癌患者にとって、能動的な免疫介入の有効性は多くの場合限られる。というのは、これらの患者は、抗腫瘍効果を誘発する十分な抗体を産生できないことがあるためである。
【０００７】
上述したことを考慮すると、当該技術分野には、糖鎖系ワクチンの免疫及び／または治療効果を改善するための代替戦略を開発することに対するニーズがある。
【発明の概要】
【０００８】
次のものは、読者に基本的な理解を提供するために、本開示の簡単な要旨を提示する。本要旨は、本開示の広範な概要ではなく、本発明の主要な／重要な要素を特定する、または本発明の範囲を正確に概説するものでない。その唯一の目的は、後で提示されるより詳述される記載の前置きとして、簡略化された形で、本明細書で開示されるいくつかの概念を提示することである。
【０００９】
本開示は、本開示の上述の態様／実施形態のいずれかによるグロボＨに特異的に結合する抗体に関する。
【００１０】
特定の実施形態によると、該抗体は、モノクローナル抗体である。
【００１１】
任意の実施形態によると、該抗体は、キメラまたはヒト化抗体である。
【００１２】
さらに別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の癌を治療するための医薬組成物に関する。
【００１３】
本開示の一実施形態によると、医薬組成物は、（１）本開示の上述の態様／実施形態のいずれかによる治療的有効量の抗体、及び必要に応じて（２）薬学的に許容される担体を含む。
【００１４】
さらに別の態様では、本開示は、それを必要とする対象の癌を治療する方法に関する。
【００１５】
本開示の実施形態によると、方法は、上述の本開示の態様／実施形態のいずれかによる抗体または医薬組成物（ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を、対象に投与することを含む。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１Ａ〜Ｅは、細胞結合アッセイの結果を示す（Ａ：アイソタイプ；Ｂ：ＶＫ９；Ｃ：ＭＺ−２；Ｄ：対照血清；Ｅ：α−グロボＨ血清）。
【図２】本開示のいくつかの実施例による、原発性卵巣癌細胞への抗グロボＨ・ＩｇＧ抗体の結合親和性を示す。
【図３】本開示の一実施例による、一連のグリカン−ビーズ結合分析の結果を示すＦＡＣＳグラフである。
【図４】図４Ａ及びＢは、本開示の一実施例による、抗グロボＨ・ＩｇＧ抗体のタンパク質フォールディングのシミュレーションを示す（Ａ：マウスＭＺ−２モノクローナル抗体；Ｂ：ヒト化ＭＺ−２モノクローナル抗体）。
【図５】図５Ａ〜Ｅは、本開示の一実施例による、結合及び解離カーブフィッティングならびに解離定数を表す、抗グロボＨ・ＩｇＧ抗体の結合親和性を示す（Ａ：ｍＭＺ−２；Ｂ：ｃＭＺ−２；Ｃ：ｈＭＺ−２Ｌ；Ｄ：ＭＫ−１；Ｅ：ｈＭＺ−２Ｌｗ）。
【図６】１．６μｇ／ｍｌを超えるｈＭＺ−２Ｌｗ抗体を含有するヒト血清が、乳癌ＭＣＦ−７細胞の補体依存性細胞傷害を誘発したことを示す。
【図７】約１０及び２０μｇ／ｍｌより高い濃度のｈＭＺ−２Ｌｗ抗体により、ヒト卵巣癌細胞株ＴＯＶ２１Ｇに用量依存性細胞傷害がもたらされたことを示す。
【図８】約１０及び２０μｇ／ｍｌより高い濃度のｈＭＺ−２Ｌｗ抗体により、ヒト膵癌細胞株ＨＰＡＣに用量依存性細胞傷害がもたらされたことを示す。
【図９】図９Ａ及びＢは、ＭＣＦ−７細胞（乳癌細胞株）における本ｈＭＺ−２Ｌｗ及びＭＫ−１（ＭＫ１）抗体の抗原依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。
【図１０】図１０Ａ及びＢは、ＴＯＶ２１Ｇ細胞（卵巣癌細胞株）における本ｈＭＺ−２Ｌｗ及びＭＫ−１（ＭＫ１）抗体の抗原依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を示す。
【図１１】ｈＭＺ−２Ｌｗ及びＭＫ−１（ＭＫ１）抗体の両方の投与は、腫瘍増殖を著しく抑制し、一方、対照ＩｇＧ抗体の投与は、腫瘍増殖に実質的に影響を及ぼさなかったことを示す。
【図１２】乳癌の皮下モデルＭＣＦ−７細胞のｈＭＺ−２抗体の結果を示す。
【図１３】図１３Ａ及びＢは、膵癌皮下モデルＨＰＡＣ細胞のｈＭＺ−２抗体の結果を示す（Ａ：腫瘍の写真；Ｂ：腫瘍サイズの減少）。
【図１４】ＭＺ−２抗体が、グロボＨ発現ＴＯＶ２１Ｇ細胞の遊走を抑制することを示す。
【図１５】ＭＺ−２抗体が、グロボＨ発現ＴＯＶ２１Ｇ細胞の遊走を抑制することを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、組換え抗体が、癌発現腫瘍関連糖鎖抗原を治療するためにグロボＨに特異的に結合するという知見に少なくとも基づく。
【００１８】
定義
本明細書で別途定義されない限り、本開示で用いられる科学及び技術用語は、当業者に一般に理解及び使用される意味を有するものとする。文脈により別途要求されない限り、単数の用語はそれの複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとすると理解されるであろう。特に、本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、文脈が別途明示しない限り、単数形「ａ」及び「ａｎ」は、複数形の対象物を含む。さらに、本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、用語「少なくとも１つの」及び「１つ以上の」は、同じ意味を有し、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上を含む。
【００１９】
本発明の広い範囲を記載する数の範囲及びパラメータが近似値であるにも関わらず、特定の実施例に記載される数値は、可能な限り正確に報告される。しかし、任意の数値は、それぞれの試験測定値に見出される標準偏差から必然的に生じる特定の誤差を本質的に含有する。さらに、本明細書で使用される場合、用語「約」は一般に、所与の値または範囲の１０％、５％、１％、または０．５％以内を意味する。あるいは、用語「約」は、当業者により考慮される時に、許容可能な標準誤差内を意味する。操作／実施例における以外で、または別途明記のない限り、本明細書で開示される、材料の量、時間の継続期間、温度、操作条件、量の比率、及びそれらの同類のもののような、数の範囲、量、値、及び、パーセンテージの全ては、用語「約」により、全ての場合において修飾されると理解されるべきである。従って、反対の指示がない限り、本開示及び添付の特許請求の範囲に記載される数値パラメータは、要望通りに変化できる近似値である。控えめに言っても、各数値パラメータは少なくとも、記録された有効桁数に照らして、通常のまるめ手法を適用することにより、解釈されるべきである。
【００２０】
本明細書で使用される用語「抗原」は、免疫応答を誘発できる物質と定義される。該免疫応答は、抗体産生若しくは特定の免疫担当細胞の活性化のいずれか、または両方を含むことがある。本明細書で使用される場合、用語「免疫原」は、抗体の産生を誘導できる抗原を指す。さらに、用語「免疫原性」は一般に、免疫原または免疫応答を刺激する抗原の能力を指す。
【００２１】
用語「エピトープ」は、免疫グロブリンＶＨ／ＶＬ対により通常結合される構造単位を指す。エピトープは、抗体に対する最小結合部位を規定し、結果として、抗体の特異性の標的を表す。
【００２２】
本明細書で使用される用語「抗体」は、抗原を認識またはそれに結合できる、抗体分子全体、またはそのフラグメント、変異体、若しくは誘導体を指す。ほとんどの天然の抗体は、ジスルフィド結合で互いに連結される２つの重鎖及び２つの軽鎖を有する。軽鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＬ）及び１つの定常ドメイン（ＣＬ）を含み、一方重鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＨ）及び３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３、総称的にＣＨと称される）を含む。軽鎖（ＶＬ）及び重鎖（ＶＨ）の両方の可変領域は、抗原への結合認識及び特異性を決定する。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域にさらに細分化でき、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存される領域が散在する。各ＶＨ及びＶＬは、次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端まで配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される。軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ）の定常領域ドメインは、抗体鎖結合、分泌、経胎盤移行性、補体結合、及びＦｃ受容体（ＦｃＲ）への結合などの重要な生物学的特性を付与する。
【００２３】
本明細書で使用される場合、「抗体可変ドメイン」は、相補性決定領域（ＣＤＲ；すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）及びフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含む抗体分子の軽鎖及び重鎖の部分を指す。本明細書で使用される方法によると、ＣＤＲ及びＦＲに与えられたアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７  ａｎｄ  １９９１））に従って決定できる。抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸のナンバリングはまた、Ｋａｂａｔのものに従う。
【００２４】
本明細書で使用される場合、用語「相補性決定領域」（（ＣＤＲ）、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、抗体可変ドメインのアミノ酸残基を指し、これらの存在は、抗原結合に必要である。各可変ドメインは通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として特定される３つのＣＤＲ領域を有する。Ｈ−ＣＤＲは重鎖のＣＤＲを指し、Ｌ−ＣＤＲは軽鎖のＣＤＲを指す。
【００２５】
本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」は、単一タイプの抗体産生細胞から得られた抗体分子を指す。
【００２６】
用語「キメラ抗体」は、１つの供給源または種からの可変領域、及び異なる供給源または種から誘導される定常領域の少なくとも一部分を含む抗体を指し、通常は組み換えＤＮＡ技術により調製される。キメラ抗体のＣＤＲは１つの起源を有し、一方、抗体の残りの部分は異なる起源を有することが好ましい。特に、本発明では、キメラ抗体は、非ヒト抗体の抗原結合配列／可変ドメインがヒト抗体のフレームワーク領域に移植（ｇｒａｆｔｅｄ）されているヒト化抗体であっても良い。
【００２７】
本明細書で使用される場合、用語「ヒト化抗体」は、ヒト抗体に加え、非ヒト（例えば、マウス）抗体由来の配列を含有する抗体の形態を指す。このような抗体は、非ヒト免疫グロブリンから誘導される最小配列を含有する。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループの全てまたはほぼ全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたはほぼ全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つの、及び通常２つの可変領域のほぼ全てを含むことになる。ヒト化抗体はまた、必要に応じて免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、通常はヒト免疫グロブリンのものをさらに含むことになる。親和性を増大させるために、ヒト化抗体の安定性を増大させるために、または他の理由のために、特定のアミノ酸置換が含まれても良いが、ヒト化型の齧歯類抗体は、親の齧歯類抗体の同じＣＤＲ配列を実質的に含むことになる。しかし、ＣＤＲループ交換により、起源の抗体と同じ結合特性を有する抗体が一様にもたらされないので、ＣＤＲループサポートに関与する残基であるフレームワーク残基（ＦＲ）の変更はまた、抗原結合親和性を維持するために、ヒト化抗体にさらに導入されても良い。
【００２８】
別途明記のない限り、本明細書で使用されるペプチド表記法では、標準的な使用法及び習慣に従って、左手方向はアミノ末端（Ｎ末端）方向であり、右手方向はカルボキシ末端（Ｃ末端）方向である。
【００２９】
本明細書で同定されるアミノ酸配列に関する「パーセンテージ（％）アミノ酸配列同一性」は、最大のパーセントの配列同一性を達成するために、配列をアライメントし、必要に応じて、ギャップを導入した後、特定のポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージと定義され、配列同一性の一部としての任意の保守的置換を考慮しない。パーセンテージ配列同一性を決定するためのアライメントは、当該技術分野の技能の範囲内の、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアなどの公的に入手可能であるコンピュータソフトウエアを使用した種々の手段で達成できる。当業者らは、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定できる。本明細書における目的のために、２つのアミノ酸配列の間の配列比較は、Ｎａｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）からオンラインで提供されたコンピュータプログラムＢｌａｓｔｐ（タンパク質−タンパク質ＢＬＡＳＴ）により実施された。特に、所与のアミノ酸配列Ａ対所与のアミノ酸配列Ｂのパーセンテージアミノ酸配列同一性（所与のアミノ酸配列Ｂに対する特定の％アミノ酸配列同一性をもつ所与のアミノ酸配列Ａと代わりに呼ぶことができる）は、次のとおりの式により計算される。
2017518958.tif 000002
式中、Ｘは、Ａ及びＢのプログラムのアライメントという点で、配列アライメントプログラムＢＬＡＳＴにより完全一致として記録されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、ＡまたはＢのいずれか短いものにおけるアミノ酸残基の総数である。
【００３０】
本明細書で検討される場合、タンパク質／ポリペプチドのアミノ酸配列における小さな変更は、本明細書に開示及び特許請求される発明の概念（複数可）に包含されると考えられる。但し、アミノ酸配列の変更は、少なくとも８０％、例えば、少なくとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、及び９９％を維持する。特に、保存的なアミノ酸交換が考えられる。保存的な交換は、側鎖に関連するアミノ酸のファミリー内で起こるものである。遺伝的にコードされるアミノ酸は一般に、ファミリー：（１）酸性アスパルテート、グルタメート；（２）塩基性リシン、アルギニン、ヒスチジン；（３）無極性アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン；及び（４）非荷電極性グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、スレオニン、チロシン；に分けられる。より好ましいファミリーは、セリン及びスレオニンは脂肪族ヒドロキシファミリーであり；アスパラギン及びグルタミンはアミド含有ファミリーであり；アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシンは脂肪族ファミリーであり；ならびにフェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシンは芳香族ファミリーである。例えば、ロイシンのイソロイシン若しくはバリンとの単独交換、アスパルテートのグルタメートとの単独交換、スレオニンのセリンとの単独交換、またはアミノ酸の構造的に関連するアミノ酸との同様の交換は、特に交換が、フレームワーク内のアミノ酸を伴わない場合、得られる分子の結合または特性に重大な影響を及ぼさないであろうことを予想するのは妥当である。アミノ酸の変化により機能性ペプチドがもたらされるかどうかは、ポリペプチド誘導体の特異的活性を測定することにより容易に判断できる。タンパク質／ポリペプチドのフラグメントまたは類似体は、当業者らが容易に調製できる。フラグメントまたは類似体の、好ましいアミノ末端及びカルボキシ末端は、機能ドメインの境界の近くに存在する。
【００３１】
本明細書で使用される場合、「抗体突然変異体」または「抗体変異体」は、種依存性抗体のアミノ酸残基のうち１つ以上が修飾されている、種依存性抗体のアミノ酸配列変異体を指す。このような突然変異体は、必然的に種依存性抗体との１００％未満の配列同一性または類似性を有する。一実施形態では、抗体突然変異体は、少なくとも７５％の、より好ましくは少なくとも８０％の、より好ましくは少なくとも８５％の、より好ましくは少なくとも９０％の、最も好ましくは少なくとも９５％の、種依存性抗体の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインのいずれかのアミノ酸配列とのアミノ酸配列同一性または類似性をもつアミノ酸配列を有することになる。この配列に関する同一性または類似性は、最大のパーセント配列同一性を達成するために、配列をアライメントし、必要に応じて、ギャップを導入した後、種依存性抗体残基と同一（すなわち、同じ残基）または類似（すなわち、共通の側鎖特性に基づく同じ群由来のアミノ酸残基、下記参照）である候補配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして、本明細書で定義される。可変ドメインの外側の抗体配列におけるＮ末端、Ｃ末端、または内部の伸長、欠失または挿入のいずれも、配列同一性または類似性に影響を及ぼさないと解釈すべきである。
【００３２】
本明細書で使用される場合、抗体の、用語「抗原結合部分」（または単に「抗原部分」）は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の、完全長または１つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントにより実施できることが示されている。抗体の、用語「抗原結合部分」に包含される結合フラグメントの例としては、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント；ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントであるＦ（ａｂ）２フラグメント；ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら，１９８９  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、またはこのような抗原結合部分を含む任意の融合タンパク質が挙げられる。
【００３３】
文脈に反しない限り、用語「治療」は、所望の医薬品及び／または生理学的効果をもたらす予防的（例えば、防止的）、治癒的、または症状緩和的処置を含むように本明細書で広く使用される。好ましくは、効果は、癌を部分的にまたは完全に治癒または予防する観点から治療上のものである。さらに、本明細書で使用される用語「治療」及び「治療すること」は、癌の１つ以上の症状または特徴を部分的にまたは完全に、緩和、改善、軽減する、その発症を遅延する、その進行を抑制する、その重症度を減少させる、及び／またはその発生率を減少させる目的を有する、癌、癌の症状、癌に起因する疾患若しくは障害、または癌の素因を有する対象への本免疫原性グリコペプチド、抗体、または上記のいずれかを含む医薬組成物の適用または投与を指す。一般に、「治療」は、治療の非存在下で予想されるであろう症状の改善または疾患のマーカーの低減だけでなく、進行の停止若しくは遅延または症状の悪化も含む。用語「治療すること」はまた、患者または対象のすでに存在する疾患の状況または状態を改善及び／または治癒するように意図される、単に治癒的処置または緩和処置を指す狭い意味で、本明細書において使用できる。
【００３４】
本明細書で使用される用語「予防する」は、疾患の状況または状態が患者または対象に発生することを停止させる、予防的処置または防止的処置を指す。予防は、疾患の状況または状態が患者または対象に発生する可能性を減少させること、及び該疾患の状況または状態の発症を妨害または阻止することをさらに含むことができる。
【００３５】
本明細書で使用される用語「有効量」は、所望の応答を生じるのに十分である構成成分の量を指す。有効量は、例えば、グラム、ミリグラム、若しくはマイクログラムで、または体重１キログラム当たりのミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）として表現されても良い。用語はまた、活性構成成分または構成成分の組み合わせを含有する医薬組成物の量を指す。特定の有効または十分な量は、治療されている特定の状態、患者の物理的状態（例えば、患者の体重、年齢、または性別）、治療されている哺乳動物または動物の種類、治療期間、（もしあれば）併用療法の性質、ならびに用いられた特定の製剤及び化合物またはその誘導体の構造のような因子と共に変化するであろう。
【００３６】
本明細書で使用される場合、用語「治療的有効量」は、所望の治療応答を生じるのに十分な、活性構成成分の量を指す。治療的有効量はまた、化合物または組成物の任意の毒性のまたは有害な影響を、治療的に有益な効果が上回る量である。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、合理的な利益／リスク比に見合う、過度の有害な副作用（例えば、毒性、刺激、及びアレルギー反応）なしに、対象での使用に適した担体である。さらに、各担体は、医薬組成物の他の成分と適合するという意味で「許容可能」でなければならない。担体は、固体、半固体、若しくは液体の、希釈剤、クリーム、またはカプセルの形態をとることができる。担体は、製剤の他の成分と適合するという意味で「許容可能」でなければならず、活性薬剤のあらゆる分解を最小限に抑え、かつ対象におけるあらゆる有害な副作用を最小限に抑えるように選択される。
【００３８】
用語「対象」は、抗体で治療可能な、ヒトを含む哺乳動物を指す。用語「対象」は、一方の性別が具体的に示されない限り、男性及び女性の両方を指すように意図される。
【００３９】
特定される特許及び他の刊行物の全ては、例えば、本発明に関連して使用され得るような刊行物に記載される方法論を記載及び開示するために、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。本出願の出願日に先立つ、これらの刊行物は、専ら開示のために提供される。この点に関しては、本発明者らが、先行発明により、または他の任意の理由のために、このような開示に先行する権利を与えられないことを認めるものと解釈されるべきでない。これらの文書の日付に関する記述または内容に関する表記の全ては、出願人らが入手可能な情報に基づいており、これらの文書の日付または内容の正確さに関するいかなる承認となるものではない。
【００４０】
別途定義しない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語の全ては、本発明に関する当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。任意の既知の方法、デバイス、及び材料が、本発明の実施または試験に使用されても良いが、この点に関する方法、デバイス、及び材料は、本明細書で記載される。
【００４１】
癌の予防及び／または治療（Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ／ｏｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ）のための抗体
グロボＨまたはその誘導体に特異的に結合する新規組換え抗グロボＨ抗体及び抗グロボＨ結合ペプチド、ならびに癌の治療などの抗腫瘍免疫療法におけるそれらの使用方法が本明細書で提供される。一旦癌抗原に結合すると、抗体は抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を引き起こし、補体系を活性化し、受容体がそのリガンド（例えば、グロボＨ）と相互作用することを妨げることができる。一実施形態では、本明細書に記載される抗グロボＨ結合ペプチドまたは抗グロボＨ抗体を含む組成物は、抗癌治療に使用される。さらに、抗グロボＨ結合ペプチドまたは抗グロボＨ抗体を含む組成物は、追加の抗腫瘍剤と組み合わせることができる。特に、本実施形態は、種々の抗グロボＨ結合ペプチドに使用できる特定の抗グロボＨ抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を提供する。特に、本発明は、グロボＨまたはその誘導体に結合できる、ヒト化若しくはキメラ抗体またはそれらの抗原結合フラグメントを提供する。
【００４２】
一態様では、本発明は、ＧＦＳＬＳＴＦＤＭＧＶＧ（配列番号１）、ＧＳＳＬＳＴＦＤＶＧＶＧ（配列番号２）、ＧＦＳＬＧＴＦＤＬＧＩＧ（配列番号３）、ＧＦＳＬＳＴＦＤＬＧＩＧ（配列番号４）のアミノ酸残基、または配列番号１〜４のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖相補性決定領域１（Ｈ−ＣＤＲ１）；ＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡ（配列番号５）、ＨＩＷＧＤＤＤＫＹＹＮＰＡ（配列番号６）のアミノ酸残基、または配列番号５及び６のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖ＣＤＲ２（Ｈ−ＣＤＲ２）；及びＬＹＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹ（配列番号７）、若しくはＬＳＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹ（配列番号８）、ＬＹＧＮＹＬＲＳＹＹＣＤＹ（配列番号９）のアミノ酸残基、または配列番号７〜９のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる重鎖ＣＤＲ３（Ｈ−ＣＤＲ３）；のうち少なくとも１つ、ならびに、ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１０）、ＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨ（配列番号１１）、ＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１２）、ＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨ（配列番号１３）のアミノ酸残基、または配列番号１０〜１３のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖ＣＤＲ１（Ｌ−ＣＤＲ１）；ＡＴＳＮＬＡＳ（配列番号１４）、ＷＴＳＤＲＹＳ（配列番号１５）、ＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号１６）のアミノ酸残基、または配列番号１４〜１６のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖ＣＤＲ２（Ｌ−ＣＤＲ２）；及びアミノ酸残基ＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１７）、ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ（配列番号１８）、ＱＱＨＬＨＩＰＹＴ（配列番号１９）、または配列番号１７〜１９のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を有する変異体からなる軽鎖ＣＤＲ３（Ｌ−ＣＤＲ３）；のうち少なくとも１つを含む、単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を提供し、その結果、該単離された抗体またはその抗原結合部分がグロボＨに結合する。好ましくは、上記のような配列同一性は、少なくとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％である。
【００４３】
さらなる実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１〜４からなる群から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号５及び６からなる群から選択されるＨ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号７〜９からなる群から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ａ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ａ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）、ならびに（ii）配列番号１０〜１３からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ１、配列番号１４〜１６からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１７〜１９からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましくは、Ｈ−ＣＤＲ１は配列番号３であり；Ｈ−ＣＲＤ２は配列番号５であり；Ｈ−ＣＤＲ３は配列番号８であり；Ｌ−ＣＤＲ１は配列番号１０であり；Ｌ−ＣＤＲ２は配列番号１６であり；Ｌ−ＣＤＲ３は配列番号１８である。
【００４４】
さらなる実施形態では、Ｈ−ＣＤＲ１は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列を有し、Ｈ−ＣＤＲ２は、配列番号５のアミノ酸配列を有し、Ｈ−ＣＤＲ３は、配列番号８のアミノ酸配列を有し、Ｌ−ＣＤＲ１は、配列番号１２のアミノ酸配列を有し、Ｌ−ＣＤＲ２は、配列番号１６のアミノ酸配列を有し、Ｌ−ＣＤＲ３は、配列番号１８のアミノ酸配列を有する。
【００４５】
一態様では、本発明は、配列番号１〜４からなる群から選択されるＨ−ＣＤＲ１、配列番号５及び６からなる群から選択されるＨ−ＣＤＲ２、ならびに配列番号７〜９からなる群から選択されるＨ−ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ａ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ  ａ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ  ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、Ｈ−ＣＤＲ１として配列番号３，Ｈ−ＣＤＲ２として配列番号５（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：  ５  Ｈ−ＣＤＲ２）、及びＨ−ＣＤＲ３として配列番号８を含む重鎖可変領域を提供する。
【００４６】
一態様では、本発明は、配列番号１０〜１３からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ１、配列番号１４〜１６からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ２、及び配列番号１７〜１９からなる群から選択されるＬ−ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、Ｌ−ＣＤＲ１として配列番号１２、Ｌ−ＣＤＲ２として配列番号１６、及びＬ−ＣＤＲ３として配列番号１８を含む軽鎖可変領域を提供する。
【００４７】
一実施形態では、単離された抗グロボＨ抗体は、モノクローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎｃａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）である。グロボＨに対するモノクローナル抗体は、当該技術分野の知識及び技能に従って作製できる。例えば、それは、本発明のグロボＨコンジュゲートを試験対象に注射し、次に所望の配列または機能的特性を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離することにより作製できる。
【００４８】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、容易に分離され、従来の手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより、）配列決定された。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター内に配置されても良く、次に、これらは、免疫グロブリンタンパク質を別途産生しない、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクションされて、組み換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を得る。抗体の組み換え産生は、以下により詳細に記載されるであろう。
【００４９】
さらなる実施形態では、抗体または抗体フラグメントは、当該技術分野で既知の従来技術、例えば、ファージライブラリを使用して、マウス及びヒト抗体をそれぞれに単離することを使用して生成される抗体ファージライブラリから単離できる。後続の刊行物は、非常に大きなファージライブラリを構築するための戦略としての、鎖シャッフリングならびに組み合わせの感染及びインビボの組み換えによる高親和性の（ｎＭの範囲の）ヒト抗体の作製について記載する。従って、これらの手法は、モノクローナル抗体の分離のための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ手法の実行可能な代替法である。
【００５０】
一実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１４０〜１６３のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１６４〜１９９のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗グロボＨ抗体を提供する。好ましくは、上記のような配列同一性は、少なくとも９０％、９１％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％である。
【００５１】
一実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１４７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１９５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗グロボＨ抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号１４７からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１９５からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗グロボＨ抗体を提供する（ＭＺ−２抗体）。配列番号１４７のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ｈｅａｖｙ  ｃｈｉａｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ）をコードするヌクレオチドは、次の通りである。
ＣＡＧＧＴＴＡＣＴＣＴＧＡＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＧＡＴＡＴＴＧＣＡＧＡＣＣＴＣＣＣＡＧＡＣＣＣＴＣＡＧＴＣＴＧＡＣＴＴＧＴＴＣＴＴＴＣＴＣＴＧＧＧＴＴＴＴＣＡＣＴＧＧＧＣＡＣＴＴＴＴＧＡＴＴＴＧＧＧＴＡＴＡＧＧＣＴＧＧＡＴＴＣＧＴＣＡＧＣＣＴＴＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＴＧＧＣＧＣＡＣＡＴＣＴＧＧＴＧＧＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＡＧＴＡＣＴＡＴＡＡＴＣＣＡＧＣＣＣＴＧＡＡＧＡＧＴＣＧＧＣＴＣＡＣＡＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＣＣＴＣＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＴＡＴＴＣＣＴＣＡＡＧＡＴＣＧＣＣＡＡＴＧＴＧＧＡＣＡＣＴＧＣＡＧＡＣＴＣＴＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＴＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＧＡＡＡＣＴＡＣＣＴＣＡＣＧＴＣＧＴＴＣＴＡＣＴＧＴＧＡＣＴＡＣＴＧＧＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＣＴＣＡ（配列番号２３６）。
配列番号１９５のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ｌｉｇｈｔ  ｃｈｉａｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ）をコードするヌクレオチドは、次の通りである。
ＣＡＡＡＴＴＧＴＴＣＴＣＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＡＴＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＧＧＧＧＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＣＡＧＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＡＧＴＴＡＴＡＴＧＣＡＣＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＧＴＣＡＧＧＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＡＡＡＡＧＡＴＧＧＡＴＴＴＡＴＧＡＣＡＣＡＴＣＣＡＡＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＣＴＧＣＴＣＧＣＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＣＣＴＣＴＴＡＴＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＣＡＧＣＡＧＣＡＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＡＧＴＡＡＴＣＣＡＣＴＣＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＡＡＡＣＧＧ（配列番号２３７）。
ＭＺ−２シリーズの重鎖可変領域
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＴＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＦＳＬＳＴＦＤＭＧＶＧＷＩＲＱＰＳＧＫＧＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＦＬＫＩＡＮＶＤＴＡＤＳＡＴＹＹＣＡＲＬＹＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１４０）
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＴＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＦＳＬＳＴＦＤＭＧＶＧＷＩＲＱＰＳＧＫＧＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＦＬＫＩＡＮＶＤＴＡＤＳＡＴＹＹＣＡＲＬＳＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１４１）
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＴＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＦＳＬＳＴＦＤＭＧＶＧＷＩＲＱＰＳＧＫＧＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＦＬＫＩＡＮＶＤＴＡＤＳＡＴＹＹＣＡＲＬＹＧＮＹＬＲＳＹＹＣＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１４２）
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＴＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＳＳＬＳＴＦＤＶＧＶＧＷＩＲＱＰＳＧＫＧＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＦＬＫＩＡＮＶＤＴＡＤＳＡＴＹＹＣＡＲＬＹＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１４３）
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＴＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＳＳＬＳＴＦＤＶＧＶＧＷＩＲＱＰＳＧＫＧＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＦＬＫＩＡＮＶＤＴＡＤＳＡＴＹＹＣＡＲＬＳＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１４４）
ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＴＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＳＳＬＳＴＦＤＶＧＶＧＷＩＲＱＰＳＧＫＧＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＦＬＫＩＡＮＶＤＴＡＤＳＡＴＹＹＣＡＲＬＹＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１４５）
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ＱＶＴＬＫＥＳＧＰＧＩＬＱＴＳＱＴＬＳＬＴＣＳＦＳＧＦＳＬＳＴＦＤＬＧＩＧＷＩＲＱＰＳＧＫＧＬＥＷＬＡＨＩＷＧＤＤＤＫＹＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＶＦＬＫＩＡＮＶＤＴＡＤＳＡＴＹＹＣＡＲＬＹＧＮＹＬＲＳＹＹＣＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号１６３）
ＭＺ−２シリーズの軽鎖可変領域
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ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＶＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１６７）
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ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＶＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１９５）
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＶＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１９６）
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＶＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１９７）
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＶＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１９８）
ＱＩＶＬＴＱＳＰＡＩＶＳＡＳＰＧＥＫＶＴＭＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＳＧＴＳＰＫＲＷＩＹＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＳＹＳＬＴＩＳＳＭＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号１９９）
【００５２】
別の実施形態（ｅｍｂｏｄｉｍｅｔｎ）では、本発明（ｐｒｅｓｅｔｎ  ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）の単離された抗グロボＨ抗体は、グロボＨに特異的に結合できるヒト化若しくはキメラ抗体またはそれらのフラグメントである。
【００５３】
さらなる実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号２０〜４３のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに（ii）配列番号４４〜７９及び２００〜２３５のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましくは、上記のような配列同一性は、少なくとも９０％、９１％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％である。
【００５４】
別のさらなる実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号２０〜４３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに（ii）配列番号４４〜７９及び２００〜２３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を提供する。別の実施形態では、ヒト化抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２７からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号７５からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む（ｈＭＺ−２Ｌｗ抗体）。別の実施形態では、ヒト化抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２７からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２３１からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
ｈＭＺ−２シリーズの重鎖可変領域
（ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳ＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊ＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡ＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊ＬＫＳＲＬＴＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲ＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ）
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＦＳＬＳＴＦＤＭＧＶＧＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡ  ＬＫＳＲＬＴＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＬＹＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２０）
ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＦＳＬＳＴＦＤＭＧＶＧＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡ  ＬＫＳＲＬＴＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＬＳＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２１）
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ＱＩＴＬＫＥＳＧＰＴＬＶＫＰＴＱＴＬＴＬＴＣＴＦＳＧＳＳＬＳＴＦＤＶＧＶＧＷＩＲＱＰＰＧＫＡＬＥＷＬＡＨＩＷＷＤＤＤＫＹＹＮＰＡＬＫＳＲＬＴＩＴＫＤＴＳＫＮＱＶＶＬＴＭＴＮＭＤＰＶＤＴＡＴＹＹＣＡＲＬＹＧＮＹＬＴＳＦＹＣＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３）
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ｈＭＺ−２シリーズの軽鎖可変領域
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ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＮＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＬＴ  ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２０７）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＮＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２０８）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＮＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２０９）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＮＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２１０）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＮＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２１１）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＤＲＹＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２１２）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＤＲＹＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２１３）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＤＲＹＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２１４）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＤＲＹＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＦＴ  ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２１５）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＤＲＹＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２１６）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＤＲＹＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２１７）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＴＳＤＲＹＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２１８）
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ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＴＳＫＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２２５）  
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ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＴＳＫＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２２８）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＴＳＫＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２２９）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＴＳＫＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２３０）  
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＴＳＫＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２３１）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＴＳＫＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２３２）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＴＳＫＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２３３）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＴＳＫＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２３４）
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＴＳＫＬＡＳ  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ  ＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号２３５）
【００５５】
さらなる実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号８０〜１０３のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１０４〜１３９のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましくは、上記のような配列同一性は、少なくとも９０％、９１％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％である。
【００５６】
別のさらなる実施形態では、本発明は、（ｉ）配列番号８０〜１０３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１０４〜１３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むヒト化抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を提供する。
【００５７】
別の実施形態では、ヒト化抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分は、配列番号９０からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３５からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む（ＭＫ−１（ＭＫ１）抗体）。
ＭＫ−１シリーズの重鎖可変領域
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ＭＫ−１シリーズの軽鎖可変領域
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ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１０７）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１０８）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１０９）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１０）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１１）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１２）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１３）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１４）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＡＴＳＮＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１５）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１６）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１７）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１８）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１１９）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２０）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２１）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２２）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２３）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２４）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２５）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２６）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＷＴＳＤＲＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２７）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２８）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１２９）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３０）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３１）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３２）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＳＳＲＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３３）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３４）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３５）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＳＡＲＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３６）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＦＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３７）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＷＳＳＮＰＬＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号１３８）
ＤＶＶＭＴＱＳＰＡＦＬＳＶＴＰＧＥＫＶＴＩＴＣＲＡＳＳＳＶＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＤＱＡＰＫＬＬＩＫＤＴＳＫＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＨＬＨＩＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ  （配列番号１３９）
【００５８】
ヒト化抗体は、非ヒトである供給源由来の１つ以上のアミノ酸残基を有する。非ヒトアミノ酸残基は多くの場合、「移入」残基と称され、通常「移入」可変ドメインから取り込まれる。ヒト化は、齧歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列を、ヒト抗体の対応する配列と置換することにより、当該技術分野で既知の従来の方法に従って、一般に実施できる。従って、このような「ヒト化」抗体は、完全なヒト可変ドメインよりも実質的に少ないものが、非ヒト種由来の対応する配列で置換されている抗体である。実際には、ヒト化抗体は通常、一部のＣＤＲ残基及び可能な一部のＦＲ残基が、非ヒト、例えば齧歯類抗体の類似部位由来の残基で置換されるヒト抗体である。
【００５９】
ヒト化抗体を作製することに使用される、軽鎖及び重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減させることが非常に重要である。齧歯類抗体の可変ドメインの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングされる。次に、齧歯類の配列に最も近いヒト配列は、ヒト化抗体に対するヒトフレームワーク（ＦＲ）として受け入れられる。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列から誘導された特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークは、いくつかの異なるヒト化抗体のために使用されても良い。
【００６０】
抗原に対する高親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持しながら、抗体がヒト化されることはさらに重要である。この目標を達成するために、好ましい方法に従い、ヒト化抗体は、親配列及びヒト化配列の３次元モデルを使用して、親配列及び種々の概念的ヒト化産物の分析のプロセスにより調製される。３次元免疫グロブリンモデルは、一般に入手可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の予想される３次元立体構造を図示及び表示するコンピュータプログラムは、入手可能である。これらの表示を調査すると、候補免疫グロブリン配列の機能化における残基の可能な役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンがそれの抗原を結合する能力に影響を与える残基の分析が可能になる。このように、ＦＲ残基は、標的抗原（複数可）に対する親和性が増加することなどの所望の抗体特性が達成されるように、レシピエント及び移入配列から選択し、組み合わせることができる。一般に、ＣＤＲ残基は、直接的かつ最も実質的に抗原結合性に影響を及ぼしている。
【００６１】
一実施形態では、本発明は、（ｉ）アミノ酸配列の最後から３番目の配列ＶがＩのように変更される、配列番号１４０〜１６３のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１６４〜１９９のアミノ酸配列のいずれかと少なくとも８０％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むキメラ抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を提供する。好ましくは、上記のような配列同一性は、少なくとも９０％、９１％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％である。
【００６２】
一実施形態では、本発明は、（ｉ）アミノ酸配列の最後から３番目の配列ＶがＩのように変更される、配列番号１４７のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１９５のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性をもつアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むキメラ抗グロボＨ抗体を提供する。さらなる実施形態では、本発明は、（ｉ）アミノ酸配列の最後から３番目の配列ＶがＩのように変更される、配列番号１４７からなるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び（ii）配列番号１９５からなるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗グロボＨ抗体（ｃＭＺ−２）を提供する。
【００６３】
キメラ抗体の作製は、当該技術分野で既知の従来の方法に従って作製できる。キメラ抗体を作製するための方法は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４（１９８６）；Ｇｉｌｌｉｅｓら，（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２；米国特許第５，８０７，７１５号；同第４，８１６，５６７号；及び同第４，８１６，３９７号を参照のこと。加えて、適切な生物活性をもつヒト抗体分子由来の遺伝子と共に、適切な抗原特異性のマウス抗体分子由来の遺伝子をスプライシングすることによる、「キメラ抗体」の作製のために開発された手法（全体として参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）が使用できる。一部の実施形態では、例えば、マウスモノクローナル抗体の軽鎖及び重鎖の定常ドメインは、１）例えば、キメラ抗体を生成するヒト抗体のこれらの領域、または２）融合抗体を生成する非免疫グロブリンポリペプチドと置換できる。他の実施形態では、定常領域は、モノクローナル抗体の所望の抗体フラグメントを生成するために切り取られるか、または取り除かれる。さらに、可変領域の部位特異的または高密度な突然変異誘発は、モノクローナル抗体の特異性、親和性などを最適化するために使用できる。
【００６４】
本発明の抗体の組成物
別の態様では、本発明は、抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を含む医薬組成物を提供する。本抗体はまた、医薬組成物に製剤化できる。抗体またはその抗原結合部分に加えて、医薬組成物は、薬学的に許容される担体をさらに含む。
【００６５】
本明細書に記載される抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分の投与は、医薬組成物、または非経口投与、例えば静脈内；粘膜、例えば経鼻；眼内、若しくは他の投与様式のための医薬製剤への製剤化を含むことができる。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分は、対象において効果的な治療をもたらす、任意の薬学的に許容される担体化合物、物質、または組成物と共に投与できる。従って、本明細書に記載される方法で使用される医薬製剤／組成物は、１つ以上の薬学的に許容される担体と組み合わせて、本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分を含有できる。
【００６６】
語句「薬学的に許容される」は、適切な医学的判断の範囲内であり、合理的な利益／リスク比に見合う、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題若しくは合併症なしに、ヒト及び動物の組織と接触して使用することに適する、化合物、物質、組成物及び／または剤形を指す。本明細書で使用される語句「薬学的に許容される担体」は、本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分の安定性、溶解性、または活性を維持することに必要とする、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、媒体、カプセル化材料、製造補助物（例えば、滑沢剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、若しくはステアリン酸亜鉛（ｔａｌｃ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ，  ｃａｌｃｉｕｍ  ｏｒ  ｚｉｎｃ  ｓｔｅａｒａｔｅ）、またはステアリン酸（ｓｔｅｒｉｃ  ａｃｉｄ））、または溶媒カプセル化材料などの薬学的に許容される物質、組成物、またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合性があり、患者に有害でないという意味で、「許容可能」でなければならない。用語「賦形剤」、「担体」、「薬学的に許容される担体」、または同類のものは、本明細書で同じ意味で使用される。
【００６７】
本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分は、次の（１）例えば、滅菌溶液若しくは懸濁液、または持続性製剤としての、例えば、皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射による非経口投与；（２）例えば、肌に適用される、クリーム、軟膏、または徐放性パッチ若しくはスプレーとしての局所適用；（３）例えば、ペッサリー、クリームまたは泡としての膣内または直腸内；（４）眼内；（５）経皮；（６）経粘膜；または（７）（（７９））経鼻に適したものを含む固体、液体、またはゲル形態で、対象に化合物を投与するために特別に製剤化できる。さらに、本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分は、患者に移植できるか、または薬物送達システムを使用して注射できる。
【００６８】
以下に提示される種々の実施例によると、週に２回本抗体を投与される成体Ｃ５７ＢＬ／６マウス（体重２０〜２５グラム）は、接種の３〜２１日後の腫瘍サイズが低減することを達成した。従って、本開示の特定の実施形態では、マウスに対する抗体の治療的有効量は、体重１ｋｇ当たり０．８〜１００ｍｇと表すことができる。上述のマウスの有効量のヒト等価用量（ＨＥＤ：ｈｕｍａｎ−ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  ｄｏｓｅ）は、体重１ｋｇ当たり約０．６５〜８１．５ｍｇである。本開示の種々の実施形態によると、対象がヒトである場合、抗体の治療的有効量は、少なくとも１ｍｇ／ｋｇとすることができる。疾患の種類及び重症度に応じて、約１ｍｇ／ｋｇ〜１５０ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体またはその抗原結合部分は、例えば、１回以上の別個の投与によるか、または連続的な注入によるかどうかにかかわらず、対象に投与するための最初の候補投薬量である。代表的な一日の投薬量は、上述の因子に応じて、約１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であることがある。代表的な投薬量としては、例えば、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、及び３０ｍｇ／ｋｇが挙げられる。数日以上にわたる反復投与に対し、状態に応じて、上記または当該技術分野で既知の方法で測定される場合、治療は、例えば癌が治療されるまで維持される。
【００６９】
投与方法
別の態様では、本発明は、治療的有効量の本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分、または本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分を含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む癌を治療及び／または予防する方法を提供する。
【００７０】
対象への抗体またはそれを含む医薬組成物の投与は、対象に受動的な保護を与え、それにより腫瘍関連糖鎖発現癌、好ましくは、乳癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、結腸直腸癌、及び肺癌などの癌に目的の治療効果を提供する。
【００７１】
一部の実施形態では、本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分、または本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分を含む医薬組成物は、全身または所望の表面若しくは標的に薬剤を送達させ、注射、注入、点滴注入、及び吸入投与を含むことができるが限定されない、任意の投与様式により抑制されるように、癌を有する対象に投与される。本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分、または本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分を含む医薬組成物が、腸内での不活性化から保護できる程度まで、経口投与形態は、さらに考えられる。「注射」は、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、脳室内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内、脳脊髄内、及び胸骨内注射及び注入を制限なく含む。好ましい実施態様では、本明細書に記載される方法で使用するための、本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分、または本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分を含む医薬組成物は、静脈内注入または注射により投与される。
【００７２】
本明細書で使用される語句「非経口投与」及び「非経口で投与される」は、通常は注射による、経腸及び局所投与以外の投与様式を指す。本明細書で使用される語句「全身投与」、「全身に投与される」、「末梢投与」、及び「末梢に投与される」は、対象の循環系に入り、結果として代謝及び他の同様のプロセスを受けるように、腫瘍部位などの標的部位、組織、または器官に直接以外で、二重または多重特異性ポリペプチド剤を投与することを指す。
【００７３】
治療的（ｔｈｅｒａｐｕｅｔｉｃａｌｌｙ）有効量の本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分、または本明細書に記載されるような抗グロボＨ抗体若しくはその抗原結合部分を含む医薬組成物を、対象に投与することにより、癌を有するか、または癌のリスクがある対象の癌を抑制または治療するための本明細書で提供される方法は、一部の実施形態では、癌を予防及び／または治療するために、当業者に知られている、血管新生阻害剤、化学療法、放射線、外科手術、または他の治療などの１つ以上の追加の治療を実施することをさらに含むことができる。
【００７４】
以下の実施例は、本発明の特定の態様を明らかにするために、及び本発明を実行する際に当業者を助けるために提供される。これらの実施例は、いかなる方法でも本発明の範囲を制限すると考えられるものでは決してない。さらなる詳述をすることなく、当業者は、本明細書の記載に基づいて、本発明を最大限に利用できると考えられる。本明細書で引用された全ての刊行物は、全体として本明細書で参照により組み込まれる。
【実施例】
【００７５】
実施例１  グロボＨに対するモノクローナル抗体、キメラ抗体、及びヒト化抗体の作製
成体雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（各群ｎ＝３；５週齢；平均体重１６〜２０グラム；Ｂｉｏｌａｓｃｏ，Ｔａｉｗａｎから購入）を、６μｇのグロボＨ−ＰＡＤＲＥグリコペプチドの皮下注射により免疫化した。ＰＡＲＤＥは、ＡＫＸＶＡＡＷＴＬＫＡＡＡ（配列番号２３８）のポリペプチド、及び５０μｌの完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；Ｓｉｇｍａ製）を表す。２週間の間隔で、４回の免疫化を与えた。４回目の免疫化の３日後、免疫化された脾細胞を収穫し、無血清培地で洗浄した。続いて、１×１０８の単細胞懸濁液の膵細胞を、２×１０７のＦＯ細胞と混合し、３７℃で１ｍｌの５０％ＰＥＧ１５００溶液（Ｒｏｃｈｅ）中で、細胞融合を実施し、続いて１３ｍｌの温めたＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ）の滴加を実施した。融合細胞を遠心分離し、完全培地で２回洗浄した。次に、１ｘＢＭで馴化されたＨ１ハイブリドーマクローニングサプリメント（Ｒｏｃｈｅ）の完全培地中に細胞を再懸濁させ、９６ウェルプレートに播種した。標的特異的Ｂ細胞骨髄腫細胞融合の場合、免疫化された脾細胞を、４℃で３時間、無血清ＲＰＭＩ培地中でグロボＨ−ビオチン（１０μｇ／ｍｌ）とインキュベーションした。同じ培地で３回洗浄した後、１×１０８細胞／ｍｌの濃度でグロボＨ−ビオチン（ｂｉｎｏｔｉｎ）を有する細胞を再懸濁し、４℃で３０分間ストレプトアビジン（５０μｇ／ｍｌ）とインキュベートした。一方で、ＦＯ細胞を、４℃で１時間、５０μｇ／ｍｌのＮＨＳ−ビオチンとインキュベートした。次に、処理済み細胞の両方を、無血清ＲＰＭＩ培地で３回洗浄した。次に、１×１０８の脾細胞及び２×１０７ＦＯ細胞を共に混合し、上述のように化学的細胞融合を実施した。細胞融合後、さらなる選択のために、細胞を、１ｘＨＡＴ培地（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で培養した。
【００７６】
モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ細胞株（Ｍｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ）を、グロボＨ−ビオチン抗原でコーティングされたプレート上で、ＥＬＩＳＡアッセイにより、限定希釈でスクリーニングした。高力価の抗グロボＨ・ＩｇＧ抗体または抗グロボＨ・ＩｇＭ抗体を分泌できる５つのクローン（それぞれＭＺ−１〜ＭＺ−５と称される）を得た。
【００７７】
これらのハイブリドーマ株からの上清を、さらに細胞結合アッセイにかけた。要約すると、ハイブリドーマ培養物からの１００μｌの上清を、２×１０５（２ｘ１０５）のＭＣＦ−７細胞とインキュベーションし、次に、下記の適切な蛍光二次抗体でフローサイトメトリーにより分析した。細胞を、２ｍｌの１ｘＰＢＳで１回洗浄した。遠心分離後、洗浄緩衝液を廃棄し、細胞を、１００μｌの１：１００希釈ＰＥ抗マウスＩｇＧ−Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）または１００μｌの１：１００希釈ＰＥ抗マウスＩｇＭ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に再懸濁し、２０分間室温で再度インキュベーションした。細胞を、ＰＢＳで洗浄し、遠心分離後２００μｌの１ｘＰＢＳに再懸濁した。抗体の細胞との結合を、フローサイトメトリーにより検出した。図１Ａ〜Ｅに提供された結果は、ＭＺ−２ハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗体（図１Ｃ参照）（以下、ＭＺ−２抗体）がＭＣＦ−７細胞に対する良好な結合親和性を有したことを明らかにする。比較目的で、市販の抗グロボＨ・ＩｇＧ３抗体（図Ｅ参照）、ＶＫ９抗体（図Ｂ参照）（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）も分析した。
【００７８】
ＭＺ−２抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域を、最初に、マウス−ヒトキメラＭＺ−２（ｃＭＺ−２）を形成するために、ヒトＩｇＧ１及びκ鎖保存領域発現ベクターにクローニングした。ｃＭＺ−２抗体は、構造解析及び配列相同性に基づいたＣＤＲ−グラフト化によりヒト化を通じて消失している。ヒト化ＭＺ−２抗体（ｈＭＺ−２）は、哺乳類細胞中の組み換えＩｇＧとして容易に発現させることができ、親マウス抗体の抗原結合親和性及び特異性を保持する。発明者らは、ＣＤＲの選択的突然変異体及びＣＤＲに隣接するフレームワーク配列とのその結合親和性をさらに改善した。ヒト化構造体を、電気穿孔法によりＦＯ細胞にさらにトランスフェクションし、安定発現クローンを生成するために、関連抗体により選択した。ＦＯ細胞から産生される抗体を、フローサイトメトリー分析により確認した。インビボの抗腫瘍アッセイのための大規模ｈＭＺ−２抗体を得るために、１×１０６（１ｘ１０６）のｈＭＺ−２発現ＦＯ細胞を最初にＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに腹腔内注射した。これらのマウスからの腹水を、２週間後収穫し、生成された抗体を精製するために、プロテインＧアガロースカラムを通過させた。このように得られたｈＭＺ−２抗体を決定配列した。ｈＭＺ−２抗体、ｈＭＺ−２Ｌｗ（ｈＭｚ−２Ｌｗ）（重鎖の可変領域：配列番号２７；軽鎖の可変領域：配列番号７５）；及びＭＫ−１（ＭＫ１）（重鎖の可変領域：配列番号２９０；軽鎖の可変領域：配列番号１３５）を、次の実施例にて使用した。
【００７９】
実施例２  ＭＺ−２モノクローナル抗体の原発性卵巣癌細胞への結合親和性
原発性ヒト卵巣癌組織を、ＩＲＢの承認及び患者の同意の下に得た。卵巣癌組織を、ＭＡＳＣ腫瘍解離キット（ＭＡＳＣ，１３０−０９５−９２９）により消化させた。単一の細胞懸濁液を、４℃で３０分間、ＭＺ−２モノクローナル抗体（１０μｇ／ｍｌ；１００μｌ）で染色し、二次抗体抗マウスＩｇＧ１  ＰＥ（１：５０；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、２−４０５−８２）で染色し、次に室温で１分間４％のパラホルムアルデヒドで固定した。次に、細胞を、４℃で３０分間、ＦＩＴＣコンジュゲートマウス抗ヒトＥｐＣＡＭ（１：５０；ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３２４２０４）、及びマウス抗ヒトＳＳＥＡ４（１：５０；ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３３０４０８）で染色した。フローサイトメトリー分析を、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳｃａｎ（ＢＤ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）で行った。図２は、本ＭＺ−２モノクローナル抗体が原発性卵巣癌細胞と良好な結合性を示したことを図示する。ほとんどの上皮原発性癌細胞を、ＭＺ−２またはＳＳＥＡ４抗体のいずれかで染色して、代表的なフローサイトメトリーで見えた。ここで、ＥｐＣＡＭ染色は、上皮細胞のマーカーを表す。
【００８０】
実施例３  ＭＺ−２抗体の特異性アッセイ
ビオチン化糖鎖を、機能性ビーズコンジュゲーションバッファーセット（ＢＤ）によりアビジンを経由して、ＢＤサイトメトリービーズでコンジュゲートした。最初に、７５μＬの機能性ビーズを超音波処理し、１時間室温で１．９μＬの１ＭのＤＴＴとインキュベーションした。同時に、２０ｕＬの各ビオチン糖鎖（０．２ｍｇ／ｍＬ）を、９０μｇのマレイミド活性化ニュートラアビジン（カップリング緩衝液中１ｍｇ／ｍＬ；Ｐｉｅｒｃｅ）と混合し、１時間室温でインキュベーションした。ビーズを、１ｍＬのカップリング緩衝液で３回洗浄し、２０μＬのカップリング緩衝液に再懸濁した。次に、糖鎖を、意図されるビーズと混合し、さらに１時間インキュベーションした。次に、２μＬのＮ−エチルマレイミド（ＤＭＳＯ中の２ｍｇ／ｍＬ、Ｐｉｅｒｃｅ）を、コンジュゲートされたビーズに加え、さらに１５分間インキュベーションした。３回の洗浄の後、ビーズを、５００μＬの保存用緩衝液に懸濁し、使用のための準備ができた。
【００８１】
抗グロボＨ抗体の特異性及び相対的な力価を検出するために、糖鎖コンジュゲートビーズの各セットを混合し、それぞれを１：５０に希釈した。次に、５０μＬのビーズ混合物を、Ｖ底９６ウェルプレートに移し、５０μＬの１：１０００希釈血清または１μｇ／ｍＬのＭＺ−２抗体と混合した。３０分間インキュベーションした後、ビーズを、１５０μＬの洗浄緩衝液で洗浄し、１００μＬのＰＥコンジュゲート２Ａｂ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）でさらに染色した。抗グロボＨ抗体の結合性を、ＦＡＣＳにより検出した。図３は、ＭＺ−２及びキメラＭＺ−２抗体が、ＳＳＥＡ３またはＳＳＥＡ４コンジュゲートビーズではなく、グロボＨコンジュゲートビーズにのみ結合するという事実により、ＭＺ−２抗体の特異性が示されることを示す。
【００８２】
実施例４  マウス及びヒト化ＭＺ−２モノクローナル抗体におけるタンパク質フォールディングのシミュレーション
オリジナル及びヒト化ＭＺ−２クローンにおける可変領域の３−Ｄ構造を、免疫グロブリン構造の予測オンラインプログラムによりシミュレーションした。図４及びＢは、マウスＭＺ−２モノクローナル抗体（図４Ａ）及びヒト化ＭＺ−２モノクローナル抗体（図４Ｂ）のタンパク質フォールディングのシミュレーションを示す。
【００８３】
実施例５  本発明の抗体の結合及び解離カーブフィッティングならびにＫＤ計算
抗グロボＨ抗体の結合親和性を、ＦｏｒｔｅＢｉｏ  Ｏｃｔｅｔ（ＦｏｒｔｒＢｉｏ  ＯｃＴｅｔ）システムを使用して、バイオレイヤー干渉法により検出した。要約すると、センサーを、それらの表面にグロボＨをコーティングするために、最初に２０μＭのビオチン化グロボＨに浸す。ＭＺ−２クローン（ｍＭＺ−２）、マウス−ヒトキメラＭＺ−２クローン（ｃＭＺ−２）、及びヒト化ＭＺ−２クローン（ｈＭＺ−２Ｌ、ＭＫ−１、またはｈＭＺ−２Ｌｗ）を、１３３３、４４４．４、１４８．１、４９．４、及び１６．５ｎＭに段階的に希釈し、グロボＨコーティングされたセンサーと別々にインキュベーションした。１０ｍＭのグリシン（ｐＨ１．５）を再生緩衝液として使用した。図５Ａ及びＢは、ＭＺ−２抗体のＢｉａｃｏｒｅ完全結合動態解析を実施したことを示す。詳述された結合カイネティクスパラメータ（結合速度定数、ｋａ、解離速度定数、ｋｄ、及び親和性定数、ＫＤ）を、完全カイネティクス解析により決定した。各抗体に対するセンサーグラム（Ｓｅｎｓｏｇｒａｍｓ）を示す。３つのヒト化ＭＺ−２抗体（ｈＭＺ−２Ｌ（図５Ｃ参照）、ＭＫ−１（図５Ｄ参照）、及びｈＭＺ−２Ｌｗ（図５Ｅ参照））、ならびにキメラＭＺ−２（ｃＭＺ−２）抗体（図５Ｂ参照）のＫＤ値は、同様である。
【００８４】
実施例６  乳癌ＭＣＦ−７細胞（Ｂｒｅａｓｔ  ＭＣＦ−７  ｃｅｌｌｓ）のキメラＭＺ−２（ＩｇＧ１κ）のＣＤＣアッセイ
ＭＣＦ−７、ＴＯＶ２１ＧグロボＨ（＋）、及びＨＰＡＣ細胞を、ＲＰＭＩ  １６４０培地中２×１０６（２ｘ１０６）細胞／ｍＬに調整し、５０μＬの希釈された細胞をフローチューブに等分した。キメラＭＺ−２抗体を、ＲＰＭＩ  １６４０培地中で、２倍の意図される濃度に希釈し、癌細胞の入った各フローチューブに５０μＬを等分した。ヒトＩｇＧ（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ、３１−ＡＩ０６）を、対照と同じ濃度に希釈した。１５分後、１００μＬの健常なヒトドナー由来の正常ヒト血清を、各チューブに加えて、２時間３７℃でインキュベーションした。細胞を、完全培地で１回洗浄し、０．５μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウムと、２００μＬの完全培地中に再懸濁した。ＦＡＣＳを使用して、死細胞のパーセンテージを分析した。
【００８５】
図６に報告されているように、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）アッセイの結果は、１．６μｇ／ｍｌを超えるｈＭＺ−２Ｌｗ抗体を含有するヒト血清が、乳癌、ＭＣＦ−７細胞における補体依存性細胞傷害を誘発したことを示す。ＣＤＣは、用量依存的に増加した。約１０及び２０μｇ／ｍｌより高い濃度でのｈＭＺ−２Ｌｗ抗体が、ヒト卵巣癌細胞株ＴＯＶ２１Ｇ（図７）または膵癌細胞株、ＨＰＡＣ（図８参照）において用量依存的な細胞傷害をもたらす同様の傾向はまた、卵巣及び膵癌細胞で観察された。
【００８６】
実施例７  ＭＣＦ−７細胞のｈＭＺ−２Ｌｗ及びＭＫ−１（ＭＫ１）抗体のＡＤＣＣアッセイ
要約すると、７．５×１０３（１００ｕＬ）の各細胞を、９６ウェルアッセイプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃３９１７）の意図されるウェルに予め播種（ｐｒｅ−ｓｅｅｄｅｄ）し、３７℃、ＣＯ２（ＣＯ２）インキュベータ内で一晩インキュベーションした。ヒト化抗グロボＨ抗体クローンｈＭＺ−２ＬｗまたはＭＫ−１（ＭＫ１）を、アッセイの最高濃度の３倍、及び８回の段階希釈で４倍に希釈した。同一の濃度の正常ヒトＩｇＧ（Ｎｏｒａｍｌ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ）を対照として使用した。１０：１のＥ／Ｔ比のＡＤＣＣ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ｂｉｏａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａカタログ＃Ｇ７０１０）により、ＡＤＣＣアッセイを実施し、化学発光リーダー（ＥｎＳｐｉｒｅ  ２３００、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）により検出した。引き起こされたＡＤＣＣ応答のフォールドを、以下の式として計算した。
引き起こされたフォールド＝ＲＬＵ（引き起こされた−バックグラウンド）／ＲＬＵ（抗体なしの対照−バックグラウンド）を計算
【００８７】
図９Ａ及びＢならびに図１０Ａ及びＢは、それぞれ、ＭＣＦ−７細胞（乳癌細胞株）及びＴＯＶ２１Ｇ細胞（卵巣癌細胞株）の本ｈＭＺ−２Ｌｗ及びＭＫ−１（ＭＫ１）抗体の抗原依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性をまとめたものである。一般に、これらの結果は、本ヒト化ＭＺ−２抗体が、ＭＣＦ−７及びＴＯＶ２１Ｇ細胞の効率的及び用量依存性ＡＤＣＣを誘発することがあることを実証する。
【００８８】
実施例８  ヒト化ＭＺ−２抗体、ｈＭＺ−２Ｌｗ、及びＭＫ−１（ＭＫ１）の抗腫瘍効果
腹腔内卵巣腫瘍モデルを確立するために、１×１０６のＴＯＶ２１Ｇ細胞を、５週齢の雌ＮＵ／ＮＵマウス（ＢｉｏＬＡＳＣＯ  Ｔａｉｗａｎ）に腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。２日後、マウスを４群に分け、尾静脈（ｉ．ｖ．）経路を介して週に２回、（５ｍｇ／ｋｇの治療用量で）１００μｇのヒトＩｇＧ、抗グロボＨ抗体ｈＭＺ−２Ｌｗ、またはＭＫ−１（ＭＫ１）のいずれかを投与した。未処理マウスを、対照として設定した。腫瘍の成長を監視するためには、腫瘍を有するマウスに、２００μＬのルシフェリン（３．９ｍｇ／ｍｌ）を腹腔内注射し、各マウスの化学発光強度を、実験のそれぞれ異なるバッチで固定された露光条件で非侵襲ＩＶＩＳシステム（Ｘｅｎｏｇｅｎ）により検出した。図１１の代表的な写真は、ｈＭＺ−２Ｌｗ及びＭＫ−１（ＭＫ１）抗体の両方を投与することは、腫瘍増殖を著しく抑制したが、一方対照ＩｇＧ抗体は、腫瘍増殖に実質的に影響を及ぼさなかったことを示す。しかし、本ｈＭＺ−２抗体は、腫瘍サイズを著しく低減させる。治療の２４日後までに、ｈＭＺ−２Ｌｗ抗体が与えられたマウスの腫瘍をほぼ排除した。
【００８９】
皮下乳房腫瘍モデルを確立するために、１７ｂエストラジオール（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ，ＳＥ−１２１）を、ＮＵ／ＮＵマウス（ＢｉｏＬＡＳＣＯ  Ｔａｉｗａｎ）に最初に皮下（ｓ．ｃ．）移植した。３日後、マトリゲルと混合された３×１０６のＭＣＦ−７細胞を、マウスに皮下移植（異種移植）した。腫瘍誘発試験の１８日後に、マウスを３群（ｎ＝７）に分け、週に２回、ｉ．ｖ．で（尾静脈を介して）治療用量（５ｍｇ／ｋｇ）のヒトＩｇＧ（１００μｇ／マウス）または１００μｇ／マウスのｈＭＺ−２Ｌｗ抗体で治療した。治療なしのマウスを、対照として設定した。腫瘍サイズを、ノギスで毎週測定した。乳癌皮下モデルＭＣＦ−７細胞のｈＭＺ−２抗体の結果を、図１２に示す。図１３Ａ及びＢは、膵癌皮下モデルＨＰＡＣ細胞のｈＭＺ−２抗体の結果を示す。
【００９０】
実施例９  ＭＺ−２抗体は、グロボＨ発現ＴＯＶ２１Ｇ細胞（Ｉ）の遊走を抑制する。
要約すると、２×１０５のグロボＨ陽性ＴＯＶ２１Ｇ細胞を、１ｍＬの培地中で（ｉｎ  １  ｍＬ  ｏｆ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｍｅｄｉｕｍ  ｉｎ）、５μｇのマウスＩｇＧ１アイソタイプまたはＭＺ−２抗体（ｈＭＺ−２Ｌｗ）と混合し、１５分間３７℃でインキュベーションした。次に、これらの細胞を、１ｘＰＢＳで３回洗浄し、培地中２×１０５細胞／ｍＬに再懸濁した。１００マイクロリットルの細胞を、トランズウェルのインサート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に移し、２４時間、ＣＯ２インキュベータ内でインキュベーションした。抗体治療なしの細胞またはグロボＨ陰性ＴＯＶ２１Ｇ細胞を、対照として使用した。トランズウェル膜の上面のこれらの細胞を、綿棒で除去した。膜（底面）を通って遊走した細胞を、４％のホルムアルデヒドで固定し、クリスタルバイオレットで染色した。遊走した細胞の数を、組織スキャナ（ＴｉｓｓｕｅＧｎｏｓｔｉｃｓ）で計数した。図１４は、ＭＺ−２抗体が、グロボＨ発現ＴＯＶ２１Ｇ細胞の遊走を抑制することを示す。
【００９１】
実施例１０  ＭＺ−２抗体は、グロボＨ発現ＴＯＶ２１Ｇ細胞（II）の遊走を抑制する
要約すると、２×１０５のグロボＨ発現ＴＯＶ２１Ｇ細胞を、０．５ｍＬの培地中で、５μｇのマウスＩｇＧ１アイソタイプ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）またはＭＺ−２抗体（ｈＭＺ−２Ｌｗ）と混合し、１５分間３７℃でインキュベーションした。次に、それらの細胞を、１ｘＰＢＳで３回洗浄し、培地中４×１０５細胞／ｍＬに再懸濁した。１００マイクロリットルの細胞を、２４ウェルプレートでの創傷治癒培養インサート（Ｉｂｉｄカタログ＃８０２４１）のウェルに移し、ＣＯ２インキュベータ内で８時間インキュベーションした。抗体治療なしの細胞またはグロボＨ陰性ＴＯＶ２１Ｇ細胞を、対照として使用した。次に、インサートを除去し、細胞をさらに１８時間培養したままにした。細胞イメージを、インサートを除去した０時間〜１８時間後に、ＣＣＤカメラで撮影した。ＭＺ−２抗体で治療される細胞のギャップは、ＩｇＧ１アイソタイプ対照で治療されるものよりも大きいことに注意を要する。図１５は、ＭＺ−２抗体が、グロボＨ発現ＴＯＶ２１Ｇ細胞の遊走を抑制することを示す。
【００９２】
実施例１１  本発明の他の抗体のアッセイ
本明細書に記載されるような重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する本発明の抗体を、実施例２の結合親和性アッセイ、実施例５の結合及び解離アッセイ、実施例６のＣＤＣアッセイ、実施例７のＡＤＣＣアッセイ、及び実施例８の抗腫瘍アッセイにかけた。これら抗体は、ｃＭＺ−２抗体、ｈＭＺ−２Ｌｗ抗体、及びＭＫ−１抗体と類似の結果を示す。例えば、配列番号２７の重鎖可変領域及び配列番号２３１の軽鎖可変領域を有する抗体のＫＤ値は、１×１０−７〜１×１０−１０ｎＭの範囲にある。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５ＡＢ】
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【図５ＣＤ】
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【図５Ｅ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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