(57)【要約】  本発明は、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）を使用して、組織における代謝型グルタミン酸受容体ｍＧｌｕＲ２を画像化および定量化するのに有用である、新規の、選択的な、放射標識されたｍＧｌｕＲ２リガンドに関する。本発明はまた、こうした化合物を含む組成物、こうした化合物および組成物を調製するためのプロセス、組織、細胞、または哺乳類をインビトロまたはインビボで画像化するためのこうした化合物および組成物の使用、および前記化合物の前駆体を対象とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｍＧｌｕ２受容体を画像化または定量化するのに使用するための、式（Ｉ）
【化１】
2017537917.tif 000089
（式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮであり、
Ｒ１は、ＣＦ３、ＳＦ５、およびＣｌの群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃｌ、および−ＯＣＨ３の群から選択され；
Ｒ３は、−ＮＨＣＨ３、ＣＨ３、およびＦから選択され；
式中、少なくとも１つの原子は、放射標識されている）
に記載の化合物、または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
請求項１に記載の使用のための化合物であって、
式中、
【化２】
2017537917.tif 000090
は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）：
【化３】
2017537917.tif 000091
から選択され、Ｒ３は、請求項１で定義した通りである、化合物。
【請求項３】
Ｒ３が、−ＮＨ［１１Ｃ］ＣＨ３、［１１Ｃ］ＣＨ３、および１８Ｆから選択される、請求項１または２に記載の使用のための化合物。
【請求項４】
式［１１Ｃ］−（Ｉ−ａ）の化合物
【化４】
2017537917.tif 000092
（式中、
【化５】
2017537917.tif 000093
は、（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）：
【化６】
2017537917.tif 000094
から選択される）
から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項５】
化合物が、
【化７】
2017537917.tif 000095
である、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項６】
次式
【化８】
2017537917.tif 000096
からなる群から選択される、放射標識された化合物、または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物。
【請求項７】
請求項６で定義した通りの式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容し得る担体または希釈剤とを含む医薬組成物。
【請求項８】
請求項７で定義した通りの滅菌溶液である、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
ｍＧｌｕ２受容体を画像化または定量化するのに使用するための、請求項７または８で定義した通りの医薬組成物。
【請求項１０】
前記画像化が、他の非放射標識化合物によるｍＧｌｕ２受容体部位占有を決定することを含む、請求項９で定義した通りの使用のための医薬組成物。
【請求項１１】
組織、細胞、または哺乳類を画像化する方法であって、組織、細胞、または哺乳類に、請求項１〜５のいずれか一項に定義した通りの検出可能な量の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物と接触させることまたは前記式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物を提供することと、ｍＧｌｕ２受容体と結合した標識された前記化合物を検出することとを含む方法。
【請求項１２】
前記画像化技術が、陽電子放射断層撮影である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
式（Ｐ−Ｉ）、（Ｐ−ＩＩ）、または（Ｐ−ＩＩＩ）
【化９】
2017537917.tif 000097
（式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮであり、
Ｒ１は、ＣＦ３、ＳＦ５、およびＣｌの群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃｌ、および−ＯＣＨ３の群から選択され；かつ
Ｂｏｃは、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである）
を有する化合物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の式（Ｐ−ＩＩＩ）の化合物であって、
式中、
【化１０】
2017537917.tif 000098
は、（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）：
【化１１】
2017537917.tif 000099
から選択される、化合物。
【請求項１５】
請求項１で定義した通りの式（Ｉ）に記載の化合物の調製のための方法であって、
（ａ）請求項１３で定義した通りの式（Ｐ−ＩＩＩ）に記載の化合物を、適切な条件下で［１１Ｃ］ＣＨ３Ｉと反応させ、適切な条件下でのＢｏｃ切断がそれに続くステップ
【化１２】
2017537917.tif 000100
または
（ｂ）請求項１３で定義した通りの式（Ｐ−Ｉ）の化合物を、Ｋ２Ｃ２Ｏ４またはＫＨＣＯ３の存在下で１８Ｆ−／４，７，１３，１６，２１，２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザビシクロ［８．８．８］ヘキサコサンと反応させるステップ
【化１３】
2017537917.tif 000101
または
（ｃ）請求項９で定義した通りの式（Ｐ−ＩＩ）の化合物を、［１１Ｃ］ＣＨ３Ｉと反応させるステップ
【化１４】
2017537917.tif 000102
を含む方法。
【請求項１６】
次式
【化１５】
2017537917.tif 000103
を有する化合物、または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の治療有効量の化合物と、薬学的に許容し得る担体または賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１８】
医薬品としての使用のための、請求項１６に記載の化合物または請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
気分障害またはうつ病性障害；せん妄、認知症、健忘症および他の認知障害、または神経認知障害；通常、幼児期、小児期、または青年期に最初に診断される障害、または神経発達障害；物質関連障害、または物質関連および嗜癖障害；統合失調症および他の精神障害、または統合失調症スペクトラムおよび他の精神障害；身体表現性障害、または身体症状および関連障害；ならびに過眠性睡眠障害または過眠障害から選択される中枢神経系の状態または疾患の治療におけるまたは予防における使用のための、請求項１６に記載の化合物または請求項１７に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）を使用して、組織における代謝型グルタミン酸受容体ｍＧｌｕＲ２を画像化および定量化するのに有用である、新規の、選択的な、放射標識されたｍＧｌｕＲ２リガンドに関する。本発明はまた、こうした化合物を含む組成物、こうした化合物および組成物を調製するためのプロセス、組織、細胞、または哺乳類をインビトロまたはインビボで画像化するためのこうした化合物および組成物の使用、および前記化合物の前駆体を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
ＣＮＳ中のグルタミン酸作動系は、いくつかの脳機能において重要な役割を果たす神経伝達物質系の１つである。代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）は、Ｇタンパク質共役ファミリーに属しており、様々な脳領域に分布している８つの異なるサブタイプがこれまでに同定されている（Ｆｅｒｒａｇｕｔｉ＆Ｓｈｉｇｅｍｏｔｏ，Ｃｅｌｌ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，３２６：４８３−５０４，２００６）。ｍＧｌｕＲは、グルタミン酸の結合によりＣＮＳ中でのシナプス伝達および神経興奮性の調節に関与する。これにより受容体が活性化して細胞内シグナル伝達相手に結合し、細胞事象を引き起こす（Ｎｉｓｗｅｎｄｅｒ＆Ｃｏｎｎ，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ５０：２９５−３２２，２０１０）。
【０００３】
ｍＧｌｕＲは、それらの薬理学的特性および構造的特性に基づいて３つのサブグループ：Ｉ群（ｍＧｌｕＲ１およびｍＧｌｕＲ５）、ＩＩ群（ｍＧｌｕＲ２およびｍＧｌｕＲ３）、およびＩＩＩ群（ｍＧｌｕＲ４、ｍＧｌｕＲ６、ｍＧｌｕＲ７およびｍＧｌｕＲ８）に細分される。オルソステリック調節とアロステリック調節の両方を行うＩＩ群リガンドは、精神病、気分障害、アルツハイマー病、および認知障害または記憶障害を含む、様々な神経障害の治療に有用な可能性があると考えられる。これは、それらが主に皮質、海馬および線条体などの脳領域中に局在していることと一致する（Ｆｅｒｒａｇｕｔｉ＆Ｓｈｉｇｅｍｏｔｏ，Ｃｅｌｌ＆Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３２６：４８３−５０４，２００６）。特に、アンタゴニストおよび負のアロステリック調節因子は、気分障害および認知機能障害または記憶機能障害を治療する可能性を有すると報告されている。これは、これらの臨床症候群に関連すると思われる様々な実験条件下での実験動物で試験したＩＩ群受容体アンタゴニストおよび負のアロステリック調節因子に関する知見に基づく（Ｇｏｅｌｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ６４：３３７−３４６，２０１３）。例えば、ｍＧｌｕＲ２／３アンタゴニスト、ＲＯ４９９５８１９（Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  Ｌｔｄ．）を用いた臨床試験が、現行の抗うつ剤治療に十分応答しない大抗うつ病性障害患者の補助療法において進行中である（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ  ＮＣＴ０１４５７６７７，ｒｅｔｒｉｅｖｅｄ  １９  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２０１４）。国際公開第２０１３０６６７３６号パンフレット（Ｍｅｒｃｋ  Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ  Ｃｏｒｐ．）は、ｍＧｌｕＲ２  ＮＡＭとしてのキノリンカルボキサミドおよびキノリンカルボニトリル化合物を記載している。国際公開第２０１３１７４８２２パンフレット（Ｄｏｍａｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）は、４Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］キナゾリン−５−オンおよび４Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キナゾリン−５−オンと、それらのインビトロでのｍＧｌｕＲ２  ＮＡＭ活性とを記載している。国際公開第２０１４０６４０２８号パンフレット（Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ  ＡＧ）は、様々なｍＧｌｕ２／３の負のアロステリック調節因子および自閉症スペクトラム障害（ＡＳＤ）の治療におけるそれらの使用可能性を開示している。
【０００４】
ＩＩ群受容体は主に、それらがシナプスへのグルタミン酸の放出に負のフィードバックループをかけるシナプス前神経終末に位置する（Ｋｅｌｍｅｎｄｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １３：８０−８６，２００６）。したがって、アンタゴニストまたは負のアロステリック調節因子でこれらの受容体の機能を阻害すると、グルタミン酸放出に対するブレーキが外れ、グルタミン酸作動性シグナル伝達が亢進される。この作用は、ＩＩ群受容体の阻害剤を有する前臨床種（ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｐｅｃｉｅｓ）おいて観察される、抗うつ剤様作用および認知促進（ｐｒｏｃｏｇｎｉｔｉｖｅ）作用の基礎をなすと考えられる。さらに、ＩＩ群のオルソステリックアンタゴニストを用いたマウスの治療は、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）などの成長因子によるシグナル伝達を亢進させることが分かった（Ｋｏｉｋｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２３８：４８−５２，２０１３）。ＢＤＮＦおよび他の成長因子は、シナプス可塑性の媒介に決定的な関与をすることが分かったため、この機構はこれらの化合物の抗うつ性と認知促進性の両方に寄与する可能性がある。したがって、ＩＩ群受容体ファミリーのｍＧｌｕＲの阻害は、うつ、および認知機能障害または記憶機能障害を含む、神経障害の治療機構となり得ると考えられる。
【０００５】
陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）は、すべての核画像化技術のうち最も高い空間分解能および時間分解能を提供し、かつ組織中の痕跡濃度の真の定量化を可能にする追加的利点を有する、非侵襲性の画像化技術である。この技術は、検出のために、例えば、１５Ｏ、１３Ｎ、１１Ｃ、および１８Ｆなどの陽電子放射性核種を使用する。ｍＧｌｕＲのインビボ画像化のための、いくつかの陽電子放射断層撮影放射性トレーサーが、今までのところ報告されている。ｍＧｌｕＲ２を画像化するための、改良された陽電子放射断層撮影放射性トレーサーを提供する必要性が、依然として存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、式（Ｉ）を有する化合物
【化１】
2017537917.tif 000002
（式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮであり、
Ｒ１は、ＣＦ３、ＳＦ５、およびＣｌの群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃｌ、および−ＯＣＨ３の群から選択され；
Ｒ３は、−ＮＨＣＨ３、ＣＨ３、およびＦから選択され；
式中、少なくとも１つの原子は、放射標識されている）
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物に関する。
【０００７】
本発明はまた、前に定義した通りの式（Ｉ）の化合物の合成のための前駆体化合物に関する。したがって、本発明はまた、式（Ｐ−Ｉ）、（Ｐ−ＩＩ）、または（Ｐ−ＩＩＩ）の化合物に関する。
【化２】
2017537917.tif 000003
式中、
Ｘは、ＣＨまたはＮであり、
Ｒ１は、ＣＦ３、ＳＦ５、およびＣｌの群から選択され；
Ｒ２は、Ｈ、Ｃｌ、および−ＯＣＨ３の群から選択され；かつＢｏｃは、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。
【０００８】
本発明はまた、式（Ｉ）の対応する［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物に例えば対応する基準物質に関する。追加の態様では、本発明は、化合物
【化３】
2017537917.tif 000004
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物に関する。
【０００９】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容し得るその塩と、薬学的に許容し得る担体または希釈剤とを含む医薬組成物に関する。特定の実施態様では、前記医薬組成物は、診断に特に適しており、それゆえに、診断用医薬組成物と称することができる。具体的には、前記医薬組成物は、滅菌溶液である。したがって、本発明の実例となるものは、本明細書に記載する式（Ｉ）の化合物を含む滅菌溶液である。
【００１０】
本発明はさらに、造影剤としての式（Ｉ）の化合物の使用に関する。したがって、本発明の例示は、組織、細胞、または哺乳類をインビトロまたはインビボで画像化するための、または画像化する方法のための、本明細書に記載する通りの式（Ｉ）の化合物の使用である。
【００１１】
本発明はまた、組織、細胞、または哺乳類を画像化するための方法であって、組織、細胞、または哺乳類に、本明細書に記載する通りの検出可能な量の標識された式（Ｉ）の化合物と接触させること、またはこの化合物を提供すること、またはこの化合物を投与すること、および、式（Ｉ）の化合物を検出することを含む方法に関する。
【００１２】
本発明のさらなる例示は、組織、細胞、または哺乳類を画像化する方法であって、組織、細胞、または哺乳類に、本明細書に記載する通りの式（Ｉ）の化合物と接触させること、またはこの化合物を提供すること、またはこの化合物を投与すること、および、陽電子放射断層撮影画像化するシステムを用いて組織、細胞、または哺乳類を画像化することを含む方法である。さらに、本発明は、以下を含む、本明細書に記載する通りの式（Ｉ）に記載の化合物の調製のためのプロセスに関する：
（ａ）本明細書で定義した通りの式（Ｐ−ＩＩＩ）に記載の化合物を、適切な条件下で［１１Ｃ］ＣＨ３Ｉと反応させ、適切な条件下でのＢｏｃ切断がそれに続くステップ
【化４】
2017537917.tif 000005
または
（ｂ）本明細書で定義した通りの式（Ｐ−Ｉ）の化合物を、Ｋ２Ｃ２Ｏ４またはＫＨＣＯ３の存在下で１８Ｆ−／４，７，１３，１６，２１，２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザビシクロ［８．８．８］ヘキサコサンと反応させるステップ
【化５】
2017537917.tif 000006
または
（ｃ）本明細書で定義した通りの式（Ｐ−ＩＩ）の化合物を、［１１Ｃ］ＣＨ３Ｉと反応させるステップ。
【化６】
2017537917.tif 000007
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、ｍＧｌｕＲ２ノックアウト（ＫＯ）および野生型（ＷＴ）マウス脳切片に対する［１１Ｃ］−２の結合を示す。ＴＢ＝全トレーサー結合（上列に示される）；ＡＳ＝１０μＭのＣｏ．Ｎｏ．１の存在下での限定された結合（下列に示される）。
【図２】図２は、ｍＧｌｕＲ２  ＫＯおよびＷＴマウス脳切片に対する［１１Ｃ］−１の結合を示す。ＴＢ＝全トレーサー結合（上列に示される）；ＡＳ＝１０μＭのＣｏ．Ｎｏ．１の存在下での限定された結合（下列に示される）。
【図３】図３は、ｍＧｌｕＲ２  ＫＯおよびＷＴマウス脳切片に対する［１８Ｆ］−３の結合を示す。ＴＢ＝全トレーサー結合（上列に示される）；ＡＳ＝１０μＭのＣｏ．Ｎｏ．１の存在下での限定された結合（下列に示される）。
【図４】図４は、ｍＧｌｕＲ２  ＫＯおよびＷＴマウス脳切片に対する［１１Ｃ］−５の結合を示す。ＴＢ＝全トレーサー結合（上列に示される）；ＡＳ＝１０μＭのＣｏ．Ｎｏ．１の存在下での限定された結合（下列に示される）。
【図５】図５は、ｍＧｌｕＲ２  ＫＯおよびＷＴマウス脳切片に対する［１１Ｃ］−４の結合を示す。ＴＢ＝全トレーサー結合（上列に示される）；ＡＳ＝１０μＭのＣｏ．Ｎｏ．１の存在下での限定された結合（下列に示される）。
【図６】図６は、正常な雌のラット脳切片に対する［１１Ｃ］−２の結合を示す。全トレーサー結合を、上列に示す；１０μＭのＣｏ．Ｎｏ．１の存在下での、および１０μＭ  Ｃｏ．Ｎｏ．２（自己ブロック）の存在下での限定された結合を、下列に示す。
【図７】図７は、正常な雌のラット脳切片に対する［１１Ｃ］−１の結合を示す。全トレーサー結合を、上列に示す；１０μＭのＣｏ．Ｎｏ．１（自己ブロック）の存在下での、および１０μＭ  Ｃｏ．Ｎｏ．２の存在下での限定された結合を、下列に示す。
【図８】図８は、正常な雌のラット脳切片に対する［１８Ｆ］−３の結合を示す。全トレーサー結合を、上列に示す；１０μＭのＣｏ．Ｎｏ．１の存在下での、および１０μＭ  Ｃｏ．Ｎｏ．３（自己ブロック）の存在下での限定された結合を、下列に示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、先に定義した通りの式（Ｉ）の化合物、ならびに薬学的に許容し得るその塩および溶媒和物を対象とする。
【００１５】
一実施態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物
（式中、
【化７】
2017537917.tif 000008
は、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、または（ｄ）から選択され：
【化８】
2017537917.tif 000009
Ｒ３は、本明細書で定義した通りである）
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物に関する。
【００１６】
本発明の別の実施態様では、Ｒ３は、−ＮＨ［１１Ｃ］ＣＨ３、［１１Ｃ］ＣＨ３、および１８Ｆから選択される。
【００１７】
本発明のさらなる実施態様では、式（Ｉ）の化合物は、式［１１Ｃ］−（Ｉ−ａ）の化合物
【化９】
2017537917.tif 000010
（式中、
Ｘ、Ｒ１、およびＲ２は、本明細書で定義した通りである）
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物から選択される。
【００１８】
本発明のさらなる実施態様では、式（Ｉ）の化合物は、式［１１Ｃ］−（Ｉ−ａ）の化合物
【化１０】
2017537917.tif 000011
（式中、
【化１１】
2017537917.tif 000012
は、（ａ）、（ｂ）、または（ｃ）：
【化１２】
2017537917.tif 000013
から選択される）
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物から選択される。
【００１９】
式［１１Ｃ］−（Ｉ−ａ）の特定の化合物は、［１１Ｃ］−２、［１１Ｃ］−５、または［１１Ｃ］−４：
【化１３】
2017537917.tif 000014
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物から選択することができる。
【００２０】
本発明のさらなる実施態様では、式（Ｉ）の化合物は、式［１１Ｃ］−（Ｉ−ｂ）の化合物
【化１４】
2017537917.tif 000015
（式中、
Ｘ、Ｒ１、およびＲ２は、本明細書で定義した通りである）
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物から選択される。
【００２１】
本発明のさらなる実施態様では、式［１１Ｃ］−（Ｉ−ｂ）の化合物は、［１１Ｃ］−１
【化１５】
2017537917.tif 000016
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物である。
【００２２】
本発明のさらなる実施態様では、式（Ｉ）の化合物は、式［１８Ｆ］−（Ｉ）の化合物
【化１６】
2017537917.tif 000017
（式中、
Ｘ、Ｒ１、およびＲ２は、本明細書で定義した通りである）
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物から選択される。
【００２３】
本発明のさらなる実施態様では、式［１８Ｆ］−（Ｉ）の化合物は、［１８Ｆ］−３
【化１７】
2017537917.tif 000018
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物である。
【００２４】
さらなる実施態様では、前に記載した通りの式（Ｉ）の化合物は、
【化１８】
2017537917.tif 000019
または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物である。
【００２５】
すでに言及した通り、式（Ｉ）の化合物、および式（Ｉ）の化合物を含む組成物は、組織、細胞、または哺乳類をインビトロまたはインビボで画像化するために使用することができる。特に、本発明は、組織、細胞、または哺乳類におけるｍＧｌｕＲ２受容体をインビトロまたはインビボで画像化または定量化する方法に関する。
【００２６】
これらの細胞および組織は、好ましくは、ｍＧｌｕＲ２受容体が豊富である中枢神経系の細胞および組織である。すでに言及した通り、ｍＧｌｕＲ２受容体は、中枢神経系組織に、より具体的には脳を形成する；より具体的には大脳皮質、視床領域、副嗅球、海馬、扁桃体、新線条体、および側坐核を形成する中枢神経系組織に豊富である。
【００２７】
本方法がインビボで実施される場合、式（Ｉ）の化合物を、例えばシリンジを用いる注射によって、または短カテーテルなどの末梢静脈ラインの手段によって、静脈内に投与することができる。
【００２８】
哺乳類がヒトである場合、式（Ｉ）の化合物、または式（Ｉ）の化合物を含む滅菌溶液は、具体的には静脈内投与によって、腕に、いずれかの確認可能な静脈に、特に手の甲に、または肘の肘正中皮静脈に投与することができる。
【００２９】
したがって、特定の実施態様では、本発明は、本明細書で定義した通りの式（Ｉ）の化合物、または式（Ｉ）の化合物を含む組成物の哺乳類への静脈内投与を含む、哺乳類における組織または細胞を画像化する方法、および、陽電子放射断層撮影画像化システムを用いて、組織または細胞を画像化する方法に関する。
【００３０】
したがって、さらなる特定の実施態様では、本発明は、本明細書で定義した通りの式（Ｉ）の化合物、または式（Ｉ）の化合物を含む滅菌製剤のヒトへの静脈内投与を含む、ヒトにおける組織または細胞を画像化する方法、および、陽電子放射断層撮影画像化システムを用いて、組織または細胞を画像化する方法に関する。
【００３１】
さらなる実施態様では、本発明は、式（Ｉ）の化合物、または式（Ｉ）の化合物を含む組成物の哺乳類への静脈内投与を含む、哺乳類におけるｍＧｌｕＲ２受容体を画像化または定量化する方法、および、陽電子放射断層撮影画像化システムを用いて画像化する方法に関する。
【００３２】
別の実施態様では、本発明は、組織、細胞、または哺乳類をインビトロまたはインビボで画像化するための式（Ｉ）の化合物の使用に関する。あるいは、本発明は、陽電子放射断層撮影を使用して、組織、細胞、または哺乳類をインビトロまたはインビボで画像化するのに使用するための式（Ｉ）の化合物に関する。
【００３３】
本発明はまた、哺乳類におけるｍＧｌｕ２受容体を画像化または定量化する方法であって、検出可能な量の式（Ｉ）の化合物を哺乳類に提供すること、および、ｍＧｌｕ２受容体と結合した式（Ｉ）の化合物を検出することを含む方法に関する。本方法はまた、他の非放射標識化合物によるｍＧｌｕ２受容体占有を決定することを可能にし、したがって、本発明は、他の非放射標識化合物によるｍＧｌｕ２受容体の部位占有を決定するのに使用するための、本明細書で定義した通りの式（Ｉ）の化合物、または本発明による医薬組成物に関する。
【００３４】
さらに、本発明は、対象における、ｍＧｌｕ２受容体に関連する障害またはその素因を評価する方法であって、検出可能な量の式（Ｉ）の化合物、または本発明による医薬組成物を提供すること（ここでは、式（Ｉ）の化合物は、血液脳関門を通過し、脳組織内のｍＧｌｕ２受容体に優先的に結合する）と、化合物を脳組織に分散させることと、脳組織を画像化することを含む方法に関する。
【００３５】
本化合物は、検出可能な量で、かつ、化合物がｍＧｌｕ２受容体と結合するようになりかつ標識された化合物が非侵襲的に検出されるのに十分な時間が経過した後に、対象に提供される。
【００３６】
上ですでに言及した通り、本発明はまた、式（Ｉ）の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物に相当する新規の化合物ならびに薬学的に許容し得るその塩および溶媒和物を包含する。前記化合物は、ｍＧｌｕＲ２  ＮＡＭ活性を示すことが判明している。したがって、本発明はさらに、治療有効量の新規の式（Ｉ）の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容し得る担体または賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【００３７】
したがって、本発明はまた、医薬品としての使用のための、一般式（Ｉ）による新規の式（Ｉ）化合物の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物、または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物に関する。
【００３８】
本発明はまた、医薬品の製造のための、新規の式（Ｉ）の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物、または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物の使用に関する。
【００３９】
さらに、本発明はまた、医薬品としての使用のための、前記の新規の式（Ｉ）の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物、および薬学的に許容し得るその塩および溶媒和物に、また、気分障害；せん妄、認知症、健忘症および他の認知障害；通常、幼児期、小児期、または青年期に最初に診断される障害；物質関連障害；統合失調症および他の精神障害；身体表現性障害；ならびに過眠性睡眠障害から選択される中枢神経系の状態または疾患の治療におけるまたは予防における使用のための、前記の新規の式（Ｉ）の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物、および薬学的に許容し得るその塩および溶媒和物に関する。
【００４０】
本発明はまた、気分障害；せん妄、認知症、健忘症および他の認知障害；通常、幼児期、小児期、または青年期に最初に診断される障害；物質関連障害；統合失調症および他の精神障害；身体表現性障害；ならびに過眠性睡眠障害から選択される中枢神経系の状態または疾患の治療または予防における使用のための追加の医薬品と組み合わせた、前記の新規の式（Ｉ）の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物、および薬学的に許容し得るその塩および溶媒和物の使用に関する。
【００４１】
さらに、本発明は、薬学的に許容し得る担体が、治療有効量の前記の新規の式（Ｉ）の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物、または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物と、緊密に混合されることを特徴とする、本発明による医薬組成物を調製するためのプロセスに関する。
【００４２】
本発明はまた、気分障害；せん妄、認知症、健忘症および他の認知障害；通常、幼児期、小児期、または青年期に最初に診断される障害；物質関連障害；統合失調症および他の精神障害；身体表現性障害；ならびに過眠性睡眠障害から選択される中枢神経系の障害を治療または予防する方法であって、治療有効量の前記の新規の式（Ｉ）の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物、または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物、あるいは本発明による治療有効量の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。
【００４３】
本発明はまた、気分障害；せん妄、認知症、健忘症および他の認知障害；通常、幼児期、小児期、または青年期に最初に診断される障害；物質関連障害；統合失調症および他の精神障害；身体表現性障害；ならびに過眠性睡眠障害から選択される中枢神経系の状態または疾患の治療または予防における、同時の、別々の、または連続的な使用のための併用製剤として、新規の式（Ｉ）の［１２Ｃ］−化合物または［１９Ｆ］−化合物、または薬学的に許容し得るその塩もしくは溶媒和物と、追加の医薬品とを含む製品に関する。
【００４４】
定義
本明細書で使用される場合、「組成物」という用語は、所定量の特定成分を含む生成物、および所定量の特定成分の組合せから直接的または間接的に得られる任意の生成物を包含することを意図する。
【００４５】
用語「検出可能な量」は、画像化機器の、特にＰＥＴ走査機器の検出の下限よりも高い化合物の濃度を指す。
【００４６】
絶対配置は、カーン・インゴルド・プレローグ（Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ）体系に従って指定される。
【００４７】
本発明による化合物の付加塩も、本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００４８】
本発明の化合物の許容し得る塩は、対イオンが、薬学的に許容し得るものである。しかし、医薬として許容されない酸および塩基の塩も、例えば、薬学的に許容し得る化合物の調製または精製において用途を見出すことができる。薬学的に許容し得るか否かにかかわらず、すべての塩が、本明細書の範囲内に含まれる。薬学的に許容し得る塩は、本発明による化合物が形成することが可能である治療活性のある非毒性の酸付加塩形態を含むものと定義される。前記の塩は、本発明による化合物の塩基形を、適切な酸、例えば無機酸、例えばハロゲン化水素酸、具体的には塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、およびリン酸；有機酸、例えば酢酸、ヒドロキシ酢酸、プロパン酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、およびパモ酸で処理することによって得ることができる。
【００４９】
逆に、前記塩形態を、適切な塩基での処理によって、遊離の塩基形態に変換することができる。
【００５０】
さらに、本発明の化合物のいくつかは、水（すなわち水和物）または通常の有機溶媒と共に、溶媒和物を形成することができ、こうした溶媒和物も、本発明の範囲内に包含されることが意図される。
【００５１】
用語「対象」は、本明細書で使用する場合、治療、観察、または実験の対象であるまたは対象であった動物、好ましくは哺乳類、最も好ましくはヒトを指す。他に記述のない限り、「対象」には、健康な動物と、様々な疾患または障害に悩む動物との両方が含まれる。
【００５２】
用語「哺乳類」は、特に、ヒト、マウス、イヌ、およびラットを指す。
【００５３】
用語「細胞」は、ｍＧｌｕ２受容体を発現するまたは組み込む細胞を指す。
【００５４】
本発明の化合物の名前は、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｉｎｃ．のソフトウェア（ＡＣＤ／Ｎａｍｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １０．０１；Ｂｕｉｌｄ  １５４９４，１  Ｄｅｃ  ２００６）を使用して、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）によって承諾された命名規則に従って付けられた。
【００５５】
調製
本発明の化合物は、一般に、それぞれが当業者に知られている一連の工程により調製することができる。特に、化合物は、以下の合成方法にしたがって製造することができる。
【００５６】
Ａ．最終化合物の調製
本明細書では［１２Ｃ］−（Ｉ）または［１９Ｆ］−（Ｉ）と称される、放射標識されていない型の式（Ｉ）の化合物は、例えば、当業者に周知の合成方法によって調製することができる。
【００５７】
実験手順１
式［１２Ｃ］／［１９Ｆ］−（Ｉ）に記載の最終化合物は、当業者に公知の条件に従う、式（ＩＩ）の化合物と、式（ＩＩＩ）の適切なハロゲン化（ヘテロ）アリール（ここでは、ハロ１は、特にブロモまたはヨードである）とのゴールドバーグカップリング反応によって調製することができる。こうした条件としては、例えば、反応が確実に完了するまでの時間、好都合な温度、一般的に１００℃から１４０℃の範囲、特に１１０℃などの好適な反応条件下で、トルエンまたはトルエンとＤＭＦとの混合物などの好適な溶媒中で、無機炭酸塩、例えば炭酸ナトリウム塩（Ｎａ２ＣＯ３）または炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）などの塩基の存在下で、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンなどの配位子の存在下で、ヨウ化銅（Ｉ）などの好適な銅（Ｉ）触媒を使用することが挙げられる。式（ＩＩＩ）の化合物は、市販品として得ることもできるし、当技術分野で公知の手順に従って作ることもできる。反応スキーム１では、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、上で定義した通りである。
【化１９】
2017537917.tif 000020
【００５８】
実験手順２
あるいは、式［１２Ｃ］／［１９Ｆ］−（Ｉ）に記載の最終化合物は、当業者に公知の反応条件に従って、パラジウム触媒の存在下で、好適なハロゲン化４−ピリジニル誘導体と共に、式（ＩＶａ）の化合物と、好適なホウ素種または式（ＩＶｂ）の化合物（式中、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキルからそれぞれ独立に選択することもできるし、Ｒ４およびＲ５は共に、例えば式−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−の二価のラジカルを形成することもできる）との鈴木型カップリング反応によって調製することができる。こうした反応条件としては、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）などのパラジウム触媒、またはＰｄ（ＯＡｃ）２およびＰＰｈ３からｉｎ  ｓｉｔｕ調製された他の触媒系、好適な塩基、例えばＮａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＮａＯＡｃ、ＮａＨＣＯ３、またはＫ３ＰＯ４など、および好適な溶媒、例えば１，４−ジオキサン、またはＤＭＥと水との混合物などの使用が挙げられる。反応混合物を、Ｎ２またはアルゴンなどの不活性ガスで脱気すること、および反応混合物を古典的加熱またはマイクロ波照射下で還流温度などの高温、特に８０℃に加熱することによって、反応結果を高めることができる。反応スキーム２ａおよび２ｂでは、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、上で定義した通りである。
【化２０】
2017537917.tif 000021
【００５９】
好適なホウ素種は、例えば、ボロン酸またはボロン酸エステルから選択することができ、これは、
式（ＩＩＩａ）の化合物
【化２１】
2017537917.tif 000022
（式中、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、Ｃ１〜４アルキルからそれぞれ独立に選択することもできるし、Ｒ４およびＲ５は共に、例えば式−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−の二価のラジカルを形成することもでき、かつ、Ｘ、Ｒ１、およびＲ２は、上で定義した通りである）として好都合に表すことができる。当業者は、反応スキーム２ａでの反応を、式（ＩＶａ）の化合物が、ヨード基の代わりにブロモ基を有する場合に類似の条件下で実施できることを認識することもできる。こうした反応は、反応スキーム２ｃのように表すことができ、ここでは、式（ＩＶ）の化合物（式中、ハロは、特にブロモまたはヨードであり、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、上で定義した通りである）は、上に記載した通りの鈴木型カップリングを受ける。
【化２２】
2017537917.tif 000023
【００６０】
実験手順３
あるいは、式［１２Ｃ］／［１９Ｆ］−（Ｉ）に記載の最終化合物は、式（ＩＩ）の化合物から出発して、ワンポットで調製することができる。最初は、例えばＤＭＦなどの好適な溶媒中での、例えば水素化ナトリウムなどの塩基の存在下での、式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の適切なハロゲン化（ヘテロ）アリール（上で定義した通り）との求核置換の反応であり、典型的なペプチド型カップリングの条件を適用する式（Ｖ）の化合物の分子内ペプチド型カップリングがそれに続く。一般的に、ＨＡＴＵなどのペプチドカップリング剤の存在下、かつＴＥＡなどの塩基の存在下で、ＤＭＦなどの好適な溶媒に溶解した出発材料を攪拌することなどの、ペプチドカップリング条件を適用することができる。反応スキーム３では、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、上で定義した通りである。
【化２３】
2017537917.tif 000024
【００６１】
あるいは、式［１２Ｃ］／［１９Ｆ］−（Ｉ）に記載の最終化合物は、式（ＩＩ）の化合物から出発して、ワンポットで調製することができる。最初は、反応が確実に完了するまでの時間、好都合な温度、一般的に１００℃から１４０℃の範囲などの好適な反応条件下での、Ｃｓ２ＣＯ３などの塩基の存在下での、また、１，４−ジオキサンなどの好適な溶媒中での、４，５−ビス（ジフェニルホスフィノ）−９，９−ジメチルキサンテンなどの配位子の存在下での、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）などのパラジウム触媒の存在下での、式（ＩＩ）の化合物と式（ＩＩＩ）の適切なハロゲン化（ヘテロ）アリールとのカップリング反応によるものであり、典型的なペプチド型カップリングの条件を適用する式（Ｖ）の化合物の分子内ペプチド型カップリングがそれに続く。一般的に、ＨＡＴＵなどのペプチドカップリング剤の存在下、かつＴＥＡなどの塩基の存在下で、ＤＭＦなどの好適な溶媒に溶解した出発材料を攪拌することなどの、ペプチドカップリング条件を適用することができる。反応スキーム３では、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は、上で定義した通りである。
【００６２】
Ｂ．中間化合物の調製
実験手順４
式（ＩＩ）（反応スキーム４ａ）に記載の中間化合物は、当技術分野で公知の手順に従って、例えば、式（ＶＩａ）の中間化合物を、当業者に公知の条件下で鈴木型カップリング反応にかけることによって、調製することができる。こうした条件としては、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）などのパラジウム触媒、またはＰｄ（ＯＡｃ）２およびＰＰｈ３からｉｎ  ｓｉｔｕ調製された他の触媒系、好適な塩基、例えばＮａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３、ＮａＨＣＯ３、およびＫ３ＰＯ４など、および好適な溶媒、例えば１，４−ジオキサン、またはＤＭＥと水との混合物などの存在下で、例えば、先に実験手順２に記載した通りに、例えば、式（ＶＩａ）の中間化合物を好適なホウ素種（例えばボロン酸またはボロン酸エステルなど）と反応させることが挙げられる。反応混合物を、Ｎ２またはアルゴンなどの不活性ガスで脱気すること、および反応混合物を還流温度などの高温、特に８０℃に加熱することによって、反応結果を高めることができる。反応スキーム４ａでは、Ｒ３は、上で定義した通りである。
【化２４】
2017537917.tif 000025
【００６３】
当業者はまた、反応スキーム４ａでの反応を、式（ＩＶａ）の化合物が、ヨード基の代わりにブロモ基を有する場合に類似の条件下で実施できることを認識することができる。こうした反応は、反応スキーム４ｂのように表すことができ、ここでは、式（ＶＩ）の化合物（式中、ハロ２は、特にブロモまたはヨードであり、他のすべての可変因子は、式（Ｉ）で定義された通りである）は、上に記載した通りの鈴木型カップリングを受ける。
【化２５】
2017537917.tif 000026
【００６４】
実験手順５
式（ＶＩａ）のまたは式（ＶＩ）の中間化合物は、反応が確実に完了するまでの時間の、好都合な温度、例えば１５から８０℃、一般的に８０℃、または溶媒系に応じて１５〜３０℃などの好適な反応条件下での、１，４−ジオキサンまたはアセトニトリルまたはＥｔＯＡｃなどの不活性溶媒中での、塩酸などの酸性媒体の存在下での、それぞれ式（ＶＩＩａ）のまたは式（ＶＩＩ）の中間体における保護基、例えばＢｏｃ基の除去、それに続く、反応が確実に完了するまでの時間の、好都合な温度、一般的に０℃から４０℃の範囲、特に１５から３０℃などの好適な反応条件下でのＮａ２ＣＯ３、Ｋ２ＣＯ３またはＮａＨＣＯ３などの塩基での処理によって調製することができる。反応スキーム５ａおよび５ｂでは、ハロ２は、特にブロモまたはヨードであり、Ｒ６は、Ｃ１〜４アルキルであり、ＰＧは、保護基、例えばＢｏｃである。
【化２６】
2017537917.tif 000027
【００６５】
実験手順６
Ｒ６がＣ１〜４アルキルであり、かつＰＧが保護基、例えばＢｏｃである、式（ＶＩＩａ）または（ＶＩＩ）の中間化合物は、反応が確実に完了するまでの時間、好都合な温度、一般的に０℃からｒｔの範囲、例えば２０℃などの好適な反応条件下で、ＴＨＦなどの好適な不活性溶媒中で、好適なトリアリールホスフィン、例えばトリフェニルホスフィン（一般的に１．５当量）、または好適なトリアルキルホスフィン、および好適なアゾジカルボン酸ジアルキル試薬、例えばアゾジカルボン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルまたはアゾジカルボン酸ジエチル（一般的に１．５当量）の存在下で、それぞれ式（ＶＩＩＩａ）または（ＶＩＩＩ）の中間化合物と式（ＩＸ）の適切なアルコールとの光延型反応によって調製することができる。式（ＩＸ）の中間化合物は、市販品として得ることも、文献の手順に従って合成することもできる。
【００６６】
Ｒ６がＣ１〜４アルキルである式（ＶＩＩＩａ）の中間化合物は、反応が確実に完了するまでの時間の、好適な反応条件下での、例えば、好都合な温度、一般的にｒｔでの、ジクロロメタンなどの不活性溶媒中での、式（Ｘ）の中間体と、Ｎ−ヨードスクシンイミドなどのハロゲン化試薬とのハロゲン化の反応を介して調製することができる。Ｒ６がメチルであり、かつハロがブロモである式（ＶＩＩＩ）の中間化合物は、市販品として得ることができ、本明細書に記載する一般手順に従う、式［１２Ｃ］／［１９Ｆ］−（Ｉ）の様々な最終化合物の、大規模合成を含めた合成における使用にとって特に好ましい材料である。式（Ｘ）の中間化合物は、市販品として得ることも、文献の手順に従って合成することもできる。
【００６７】
反応スキーム６ａおよび６ｂでは、ハロ２は、特にブロモまたはヨードであり、Ｒ６は、Ｃ１〜４アルキルであり、ＰＧは、例えばＢｏｃなどの保護基である。
【化２７】
2017537917.tif 000028
【００６８】
実験手順７
式（ＩＶｂ）の中間化合物を、反応が確実に完了するまでの時間の、好都合な温度、一般的に−２５℃などの好適な反応条件下での、無水ＴＨＦなどの不活性溶媒中での、例えばｎＢｕＬｉまたはグリニャール試薬などのトランスメタル化剤（ある特定の試薬の例としては、塩化イソプロピルマグネシウム・塩化リチウム錯体溶液、および２−イソプロポキシ−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロランなどのホウ素種が挙げられる）を用いる、式（ＩＶａ）の中間体から出発するボロン酸エステルまたはボロン酸形成の反応を介して調製することができる。反応条件に応じて、ボロン酸エステルまたはボロン酸が得られる。反応スキーム７では、Ｒ４およびＲ５は、ＨもしくはＣ１〜４アルキルである、または、Ｒ４およびＲ５は共に、例えば式−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、または−Ｃ（ＣＨ３）２Ｃ（ＣＨ３）２−の二価のラジカルを形成し、Ｘ、Ｒ１、およびＲ２は、上で定義した通りである。
【化２８】
2017537917.tif 000029
【００６９】
実験手順８
式（ＩＶａ）の中間化合物は、反応が確実に完了するまでの時間の、好都合な温度、一般的に７０℃などの好適な反応条件下での、硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）の存在下かつアセトニトリルなどの不活性溶媒中での、ヨウ素などのハロゲン化試薬を用いる式（ＸＩ）の中間体のハロゲン化の反応を介して調製することができる。類似の方式で、式（ＶＩａ）の中間化合物を、式（ＸＩＩ）の中間体から調製することができる。反応スキーム８ａおよび８ｂでは、Ｘ、Ｒ１、およびＲ２は、上で定義した通りである。
【化２９】
2017537917.tif 000030
【００７０】
実験手順９
式（ＸＩ）の中間化合物は、反応が確実に完了するまでの時間、好都合な温度、一般的に１００℃から１４０℃の範囲などの好適な反応条件下で、トルエンなどの好適な溶媒中で、Ｎａ２ＣＯ３などの塩基の存在下で、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンなどの配位子の存在下で、ヨウ化銅（Ｉ）などの好適な銅（Ｉ）触媒を用いて、式（ＸＩＩ）の中間化合物と、先に定義した通りの式（ＩＩＩ）の適切なハロゲン化（ヘテロ）アリールとのカップリング反応によって調製することができる。類似の方式で、式（ＩＶ）の中間化合物を、式（ＶＩ）の中間体から調製することができる。式（ＩＩＩ）の中間化合物は、市販品として得ることができる。反応スキーム９ａおよび９ｂでは、Ｘ、Ｒ１、およびＲ２は、上で定義した通りであり、ハロ２は、特にブロモまたはヨードである。
【化３０】
2017537917.tif 000031
【００７１】
実験手順１０
式（ＸＩＩ）の中間化合物は、反応が確実に完了するまでの時間の、好都合な温度、一般的に８０℃などの好適な反応条件下での、１，４−ジオキサンなどの不活性溶媒中での、例えば塩酸などの酸性媒体の存在下での、式（ＸＩＩＩ）の中間体における保護基の除去、それに続く、反応が確実に完了するまでの時間の、好都合な温度、一般的に０℃から４０℃の範囲などの好適な反応条件下でのＮａ２ＣＯ３またはＮａＨＣＯ３などの塩基での処理によって調製することができる。反応スキーム１０では、Ｒ６は、Ｃ１〜４アルキルであり、ＰＧは、保護基である。
【化３１】
2017537917.tif 000032
【００７２】
実験手順１１
Ｒ６がＣ１〜４アルキルであり、かつＰＧが保護基である、式（ＸＩＩＩ）の中間化合物は、反応が確実に完了するまでの時間、好都合な温度、一般的にｒｔなどの好適な反応条件下で、ＴＨＦなどの好適な不活性溶媒中で、好適なトリアリールホスフィン、例えばトリフェニルホスフィン、または好適なトリアルキルホスフィン、および好適なアゾジカルボン酸ジアルキル試薬、例えばアゾジカルボン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルの存在下で、式（ＸＩＶ）の化合物と式（ＩＸ）の適切なアルコールとの光延型反応によって調製することができる。式（ＸＩＶ）のおよび式（ＩＸ）の中間化合物は、市販品として得ることも、文献の手順に従って合成することもできる。反応スキーム１１では、Ｒ６は、Ｃ１〜４アルキルであり、ＰＧは、保護基である。
【化３２】
2017537917.tif 000033
【００７３】
実験手順１２
Ｒ６がＣ１〜４アルキルである式（ＸＩＶ）の中間化合物は、当業者に公知の方法による、市販品として入手できる式（ＸＶ）の中間化合物のエステル化によって得ることもできるし、市販品として入手することもできる。この反応は、例えば、反応が確実に完了するまでの時間、好都合な温度、一般的に８０℃から１００℃などの好適な反応条件下で、ＥｔＯＨなどの好適な溶媒中で、硫酸などの酸性の薬剤およびＥｔＯＨなどのアルコールの存在下で実施することができる。反応スキーム１２では、Ｒ６は、Ｃ１〜４アルキルである。
【化３３】
2017537917.tif 000034
【００７４】
Ｃ．放射性リガンド前駆体の調製
実験手順１３
式（Ｐ−Ｉ）の前駆体化合物は、好適な反応条件（例えば、ｒｔで数日間攪拌することなど）下での、好適な塩基、例えばＫ２ＣＯ３の存在下での、かつＭｅＯＨなどの極性溶媒中での、ＣＨ３Ｉなどの好適なアルキル化試薬との反応による、式（ＸＶＩ）の化合物のメチル化によって得ることができる。式（ＸＶＩ）の化合物は、ＴＨＦなどの好適な反応不活性溶媒中での、好適な反応条件（塩基、例えばＫＯＨの存在下での反応など）下での、４−ハロ−２−（ジメチルアミノ）ピリジン、例えば（４−ブロモ−２−ジメチルアミノ）ピリジンなどとの反応によって、式（ＩＶｂ）の化合物から得ることができる。フロー反応器条件によって、反応結果を高めることができる。反応スキーム１３では、すべての可変因子は、上で定義した通りである。
【化３４】
2017537917.tif 000035
【００７５】
実験手順１４
式（Ｐ−ＩＩ）の前駆体化合物は、適温で数分間攪拌することなどの好適な反応条件下での、ジオキサンなどの好適な溶媒中での、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２の存在下での、式（ＸＶＩＩ）の化合物とヘキサブチル二スズなどの好適な試薬との反応による有機スズ試薬の形成によって得ることができる。式（ＸＶＩＩ）の化合物は、塩化アセチルの存在下で、ヨウ化ナトリウムを用いるハロゲン交換反応によって、対応する式（ＸＶＩＩＩ）の塩素化合物から得ることができる。式（ＸＶＩＩＩ）の化合物は、実験手順２に記載した条件などの反応条件に従って、式（ＩＶａ）の化合物の反応によって得ることができる。反応スキーム１４では、すべての可変因子は、上で定義した通りである。
【化３５】
2017537917.tif 000036
【００７６】
実験手順１５
式（Ｐ−ＩＩＩ）の前駆体化合物は、一般的に、ｔＢｕＯＨなどの極性溶媒中での、室温での、反応が完了するのに必要な時間の、（ＩＸＸ）と二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルとの反応による、当業者に公知の反応条件下での式（ＩＸＸ）の化合物内のアミン官能性の保護によって得ることができる。式（ＩＸＸ）の化合物は、実験手順２に記載した条件などの反応条件に従って、式（ＩＶａ）の化合物から合成することができる。反応スキーム１５では、すべての可変因子は、上で定義した通りである。
【化３６】
2017537917.tif 000037
【００７７】
放射性リガンドの調製
実験手順１６
本明細書では式［１１Ｃ］−（Ｉ−ａ）の化合物と称される、［１１Ｃ］で放射標識された式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ３は、−ＮＨ［１１Ｃ］ＣＨ３であり、残りの可変因子は、式（Ｉ）に定義した通りである）は、適切な条件下、一般的に、ＮａＨなどの塩基の存在下で無水ＤＭＦなどの溶媒中、反応の完了を可能にする時間、例えば４分間、適切な温度、一般的に８０℃で、［１１Ｃ］ＭｅＩなどの好適な試薬と共に、その対応するＮ−Ｂｏｃ保護前駆体（Ｐ−ＩＩＩ）を加熱して、（ＸＸ）をもたらすことによって、２ステップで合成することができる。（ＸＸ）からのＢｏｃ切断は、当業者に公知の条件、例えば、ＨＣｌのジオキサン溶液と共に例えば１００℃などでの加熱下で酸性媒体中で攪拌することなどを使用して実現することができる。反応スキーム１６では、すべての可変因子は、式（Ｉ）に記載された通りである。
【化３７】
2017537917.tif 000038
【００７８】
実験手順１７
本明細書では式［１１Ｃ］−（Ｉ−ｂ）の化合物と称される、Ｒ３が［１１Ｃ］ＣＨ３である式（Ｉ）の化合物は、スティルカップリング反応を使用して合成することができる。一般的に、この反応は、適切な条件下、一般的に無水ＤＭＦ中で１００℃で、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４などのパラジウム−触媒の存在下で、適切なトリブチルスタンニル前駆体（Ｐ−ＩＩ）（ここでは、すべての可変因子は、先に定義した通りである）および［１１Ｃ］ＣＨ３Ｉと共に実施される。
【化３８】
2017537917.tif 000039
【００７９】
実験手順１８
本明細書では式［１８Ｆ］−（Ｉ）の化合物と称される、Ｒ３が［１８Ｆ］である式（Ｉ）の化合物は、対応するトリメチルアンモニウム前駆体（Ｐ−Ｉ）（ここでは、すべての可変因子は、上に記載した通りである）を、塩基としてのＫ２Ｃ２Ｏ４の存在下で、１８Ｆ−／４，７，１３，１６，２１，２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザビシクロ［８．８．８］ヘキサコサン（商品名ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）２．２．２で市販されている）と共に、無水ＣＨ３ＣＮ中で８２℃で加熱することによって合成することができる。当業者はまた、Ｋ２Ｃ２Ｏ４をＫＨＣＯ３で置き換えできること、および、前駆体中の異なる脱離基を使用できることを認識するであろう。トリメチルアンモニウム前駆体の脱メチル化は、一般的に、副反応として観察された。
【化３９】
2017537917.tif 000040
次いで、未精製の反応混合物を、セミ分取ＨＰＬＣを使用して精製した。
【００８０】
適用
本発明による化合物には、インビトロとインビボの両方で組織、細胞、または哺乳類を画像化することに関する様々な用途が見出される。したがって、例えば、本発明による化合物を使用して、様々な年齢および性別の対象におけるｍＧｌｕＲ２の特異的分布をマッピングすることができる。さらに、本発明による化合物は、様々な疾患または障害に悩む対象におけるｍＧｌｕＲ２の特異的分布の探索を可能にする。したがって、正常でない分布を、診断、症例探索、対象集団の層別化に、また、個々の対象における疾患進行をモニタリングするのに役立てることができる。これらの放射性リガンドは、さらに、他のリガンドによるｍＧｌｕＲ２部位占有の決定における有用性を見出すことができる。これらの放射性リガンドは、痕跡量で、すなわち、例えばＰＥＴ画像化のために検出可能な量で投与されるので、治療効果が、本発明による放射性リガンドの投与に起因する可能性はない。
【実施例】
【００８１】
実験編
Ｉ．化学
本明細書で使用する場合、用語「ａｑ．」は「水溶液」を意味し、「ＢＥＨ」架橋エチルシロキサン／シリカハイブリッド、「Ｂｏｃ」／「ＢＯＣ」はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルを意味し、「ｔＢｕＯＨ」はｔｅｒｔ−ブタノールを意味し、「ＤＡＤ」ダイオードアレイ検出器、「ＤＣＥ」は１，２−ジクロロエタンを意味し、「ＤＣＭ」はジクロロメタンを意味し、「ＤＩＰＥ」はジイソプロピルエーテルを意味し、「ＤＭＥ」はジメチルオキシエタンを意味し、「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを意味し、「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを意味し、「ＤＳＣ」は示差走査熱量測定を意味し、「Ｅｔ３Ｎ／ＴＥＡ」はトリエチルアミンを意味し、「ＥｔＯＨ」はエタノールを意味し、「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを意味し、「ｈ」は時間を意味し、「ＨＡＴＵ」は３−オキシドヘキサフルオロリン酸１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウムを意味し、「ＨＰＬＣ」は高速液体クロマトグラフィーを意味し、「ＬＣＭＳ」は液体クロマトグラフィー／質量分析を意味し、「ＩＰＡ」はイソプロピルアルコールを意味し、「ＬＣＴ」はＬＣ−飛行時間型を意味し、「ＭｅＯＨ」はメタノールを意味し、「［Ｍ＋Ｈ］＋」は化合物の遊離塩基のプロトン化された質量を意味し、「［Ｍ−Ｈ］−」は化合物の遊離塩基の脱プロトン化された質量を意味し、「ｍｉｎ」は分を意味し、「ｍ．ｐ．」は融点を意味し、「ＭＳＤ」質量選択検出器、「ＭＴＢＥ」はメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを意味し、「ｍｗ／ＭＷ」はマイクロ波を意味し、「ＱＴＯＦ」は四重極−飛行時間型を意味し、「ｑｕａｎｔ．」は定量的を意味し、「ｒ．ｍ．」は反応混合物を意味し、「ＲＰ」は逆相を意味し、「ｒ．ｔ．／ＲＴ」は室温を意味し、「Ｒｔ」は保持時間（分）を意味し、「ｓａｔ．」は飽和を意味し、「ｓｏｌ．」は溶液を意味し、「ＳＱＤ」はシングル四重極検出器を意味し、「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを意味し、「ＵＶ」は紫外線を意味する。
【００８２】
マイクロ波補助反応は、単一モード反応器：Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ（商標）Ｓｉｘｔｙマイクロ波反応器（Ｂｉｏｔａｇｅ）で、またはマルチモード型反応器：ＭｉｃｒｏＳＹＮＴＨ  Ｌａｂｓｔａｔｉｏｎ（Ｍｉｌｅｓｔｏｎｅ，Ｉｎｃ．）で実施した。
【００８３】
圧力下での反応は、Ｑ−Ｌａｂｔｅｃｈ  ＬＬＣの圧力管（Ｑ−Ｔｕｂｅ（商標））で実施した。
【００８４】
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、試薬等級溶媒を使用して、シリカゲル６０  Ｆ２５４プレート（Ｍｅｒｃｋ）で実施した。オープンカラムクロマトグラフィーは、標準の技術下で、シリカゲル、メッシュ２３０〜４００粒度、および６０Å孔径（Ｍｅｒｃｋ）上で実施した。自動フラッシュカラムクロマトグラフィーは、Ａｒｍｅｎ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔのＳＰＯＴまたはＬＡＦＬＡＳＨシステム上で、不定形シリカゲル（粒径１５〜４０μｍ）（順相使い捨てフラッシュカラム）で、Ｍｅｒｃｋの直ぐに接続できるカートリッジを使用して実施した。
【００８５】
核磁気共鳴（ＮＭＲ）：いくつかの化合物では、それぞれ４００ＭＨｚおよび５００ＭＨｚで動作する、標準パルス系列を用いるＢｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ＩＩＩ、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ−４００、またはＢｒｕｋｅｒ  ＡＶ−５００分光計で、１Ｈ  ＮＭＲスペクトルを記録した。化学シフト（δ）を、内部標準として使用したテトラメチルシラン（ＴＭＳ）より低磁場側の百万分率（ｐｐｍ）で報告する。
【００８６】
本発明の化合物を調製するためのいくつかの方法を、本発明の範囲の限定ではなく例示が目的である以下の実施例に例示する。他に注記のない限り、すべての出発材料は、供給業者から得られ、さらなる精製を行わずに使用される。
【００８７】
Ａ．中間体の合成
中間体１（Ｉ−１）
【化４０】
2017537917.tif 000041
１−Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（１．９３ｇ、１７．２２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）溶液に、硫酸（１０ｍＬ、１８７．６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を９０℃で１５時間攪拌した。次いで、これを、ｒｔまで冷却させ、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣を水に注ぎ、溶液をＫ２ＣＯ３で塩基性化し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させて、白色固体として中間化合物Ｉ−１をもたらし（２．２８ｇ、９３％純度、９４％）、これを、さらなる精製を行わずに次のステップで使用した。
【００８８】
中間体２（Ｉ−２）
【化４１】
2017537917.tif 000042
中間体Ｉ−１（１００ｇ、０．６８ｍｏｌ）、Ｎ−ヨードスクシンイミド（２１３．５ｇ、０．９５ｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２Ｌ）に溶解した。混合物をｒｔで２４時間攪拌した。混合物を、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３の飽和溶液およびＮａ２ＣＯ３の飽和溶液で処理し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させて、白色固体として中間化合物Ｉ−２をもたらした（１６０ｇ、８５％）。
【００８９】
中間体３（Ｉ−３）
【化４２】
2017537917.tif 000043
二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（５８．１ｇ、２６６．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）溶液を、窒素下で０℃で、（Ｒ）−（−）−１−アミノ−２−プロパノールをＤＣＭ（５０ｍＬ）に入れた攪拌溶液に添加した。混合物をｒｔで２時間攪拌した。混合物を冷却水で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させて、無色のオイルとして中間体Ｉ−３をもたらした（４７ｇ、定量的）。この生成物を、さらなる精製を行わずに次のステップで使用した。
【００９０】
中間体４（Ｉ−４）
【化４３】
2017537917.tif 000044
アゾジカルボン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（４．６７ｇ、２０．３ｍｍｏｌ）を、窒素下で、中間体Ｉ−２（３ｇ、１１．２８ｍｍｏｌ）、中間体Ｉ−３（４．４４ｇ、２２．５５ｍｍｏｌ）、およびトリフェニルホスフィン（５．３２ｇ、２０．３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５６ｍＬ）に入れた攪拌溶液に添加した。混合物を、ｒｔで５時間攪拌した。溶媒を、真空中で蒸発させ、未精製生成物をＤＩＰＥで粉末化した。固体を濾過し、濾液を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００から３０／７０）によって精製した。所望の分画を収集し、溶媒を真空中で蒸発させて、無色のオイルとして中間化合物Ｉ−４を与えた（４．９ｇ、９１％純度、９３％）。
【００９１】
中間体５（Ｉ−５）
【化４４】
2017537917.tif 000045
中間化合物Ｉ−５を、中間体Ｉ−４について記載したのと同様の手法に従って合成した。中間体Ｉ−１（２５．８２ｇ、１８４．２５ｍｍｏｌ）および中間体Ｉ−３（４７．１６ｇ、２３９．５ｍｍｏｌ）から出発して、中間化合物Ｉ−５が、黄色のオイルとして得られ（１２３ｇ、定量的）、これを、さらなる精製を行わずに次のステップで使用した。
【００９２】
中間体６（Ｉ−６）
【化４５】
2017537917.tif 000046
ＨＣｌの４Ｍ溶液（１，４−ジオキサン（１０ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）中）を、中間体Ｉ−４（４．２ｇ、９．６３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）に入れた溶液に添加した。混合物を８０℃で２時間攪拌した。溶媒を真空中で蒸発させて中間化合物Ｉ−６をもたらした（３．５ｇ、９７％）。
【００９３】
中間体７（Ｉ−７）
【化４６】
2017537917.tif 000047
中間化合物Ｉ−７を、中間体Ｉ−６について記載したのと同様の手法に従って合成した。中間体Ｉ−５（５４．７９ｇ、１８４．２５ｍｍｏｌ）、およびＨＣｌの４Ｍ溶液（１，４−ジオキサン（４１５ｍＬ、１．６６ｍｏｌ）中）から出発して、中間化合物Ｉ−７が、白色固体として得られ（３２．５ｇ、８２％純度、７５％）、これを、さらなる精製を行わずに次のステップで使用した。
【００９４】
中間体８（Ｉ−８）
【化４７】
2017537917.tif 000048
ＨＣｌ塩としての中間体Ｉ−６（１８０ｇ、３５０．４ｍｍｏｌ）を、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液（２Ｌ）に溶解した。混合物を、ｒｔで１２時間攪拌した。混合物を、水で希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。次いで、残渣をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで洗浄して、中間化合物Ｉ−８をもたらした（９２ｇ、９０％）、ｍｐ  １８２．６〜１８６．１℃。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．４２（ｄ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，３Ｈ）３．２６−３．３５（ｍ，１Ｈ）３．５７−３．７１（ｍ，１Ｈ）４．４４−４．６０（ｍ，１Ｈ）７．６８（ｓ，１Ｈ）８．２６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）．Ｃ７Ｈ８ＩＮ３Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＬＣ−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）計算値：２７７．９７９０，実測値：ｍ／ｚ２７７．９７９６（＋０．６ｍＤａ），Ｒｔ＝０．７６ｍｉｎ（方法１３，表２参照）．［α］＝＋１１．７°（５８９ｎｍ，ｃ  １．００ｗ／ｖ％，ＣＨ３ＯＨ，２５℃）．
【００９５】
中間体８ａ（Ｉ−８ａ）
【化４８】
2017537917.tif 000049
中間体８ａは、大規模で実施される、合成の次の一般的説明に従って、７１％の収率で調製した：４−ブロモ−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボン酸メチル（本明細書では「ピラゾールＳＭ」と称される）（１当量）、トリフェニルホスフィン（１．２当量）、Ｉ−３（１．２当量）、および無水ＴＨＦ（１５ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ））の混合物を、窒素下で、５〜１０℃に冷却した。アゾジカルボン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１．２当量）を、窒素下で５〜１５℃で何度かに分けて添加した。溶液を２０〜３０℃に加熱し、２０〜３０℃で２〜３時間攪拌した。得られた溶液を濃縮し、酢酸イソプロピルと共に同時蒸発させて、ＴＨＦを除去し、未精製の４−ブロモ−１−［（１Ｓ）−１−［［（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル］アミノ］エチル］−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボン酸メチルエステルＩ−４ａの酢酸イソプロピル（２０ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ））溶液をもたらした。Ｉ−４ａの溶液に、Ｂｏｃ保護基の切断が完了するまで１５〜３０℃でＨＣｌガスを通気した。この懸濁液に窒素ガスを通気して、ＨＣｌガスの大部分を除去した。懸濁液を、５０℃未満で、約５ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ）の体積に濃縮し、次いで、残渣に酢酸イソプロピル（１５ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ））を添加した。水（１０ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ））を１０〜２０℃で添加した。混合物を１０〜２０℃で２０〜３０分間攪拌した。混合物を濾過し、水性層を分離した。有機層を水（２ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ））で抽出した。合わせた水性層を酢酸イソプロピル（２×１０ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ））で洗浄して、残留したトリフェニルホスフィンオキシドを除去した。Ｉ−６ａが、水溶液（６．２５ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ））として得られた。Ｉ−６ａの水溶液に、炭酸カリウム（約１ｇ／ｇ（ピラゾールＳＭ））を添加して、１０〜２５℃でｐＨ＝８〜９に調整した。混合物を１０〜２５℃で５〜６時間攪拌し、固体Ｉ−８ａが沈殿した。懸濁液を５〜１０℃に冷却し、５〜１０℃で２〜３時間攪拌し、次いで、これを濾過し、水（１ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ））、およびヘプタン（１ｍＬ／ｇ（ピラゾールＳＭ））で洗浄し、次いで、４０〜４５℃で真空中で乾燥させて、白色固体としてＩ−８ａをもたらした、ｍｐ．１９６．１２℃。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．６１（ｄ，Ｊ＝６．３６Ｈｚ，３Ｈ）３．４８（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７２，７．２２，２．６０Ｈｚ，１Ｈ）３．７５−３．８４（ｍ，１Ｈ）４．４９−４．５９（ｍ，１Ｈ）６．５４（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．５６（ｓ，１Ｈ）．Ｃ７Ｈ８ＢｒＮ３Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＬＣ−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）計算値：２２９．９９２９，実測値：ｍ／ｚ２２９．９９３１（＋０．２ｍＤａ），Ｒｔ＝０．６２ｍｉｎ（方法１３，表２参照）．［α］＝＋２５．２°（５８９ｎｍ，ｃ  ０．５３ｗ／ｖ％，ＤＭＦ，２０℃）．
【００９６】
中間体９（Ｉ−９）
【化４９】
2017537917.tif 000050
中間化合物Ｉ−９を、中間体Ｉ−８について記載したのと同様の手法に従って合成した。中間体Ｉ−７（３２．５ｇ、１３９．１ｍｍｏｌ）から出発して、中間化合物Ｉ−９が、固体として得られた（１４．８ｇ、７０％）。
【００９７】
中間体１０（Ｉ−１０）
【化５０】
2017537917.tif 000051
Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．３３ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を、窒素下で、封管内で、中間体Ｉ−８（１．６ｇ、５．７７ｍｍｏｌ）および２−ピコリン−４−ボロン酸（０．９５ｇ、６．９３ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（８ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３の飽和溶液（４ｍＬ）に入れた攪拌懸濁液に添加した。混合物を１００℃で１６時間攪拌した。次いで、混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００から６／９４）によって精製した。所望の分画を収集し、溶媒を真空中で蒸発させて、白色固体として中間化合物Ｉ−１０をもたらした（１ｇ、７１％）、ｍｐ  １７３．２０℃。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．６７（ｄ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，３Ｈ）２．６０（ｓ，３Ｈ）３．５２（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．７９，７．１５，２．８９Ｈｚ，１Ｈ）３．８４（ｄｔ，Ｊ＝１２．７２，４．００Ｈｚ，１Ｈ）４．５７−４．６６（ｍ，１Ｈ）６．１０（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）７．５１（ｄｄ，Ｊ＝５．２０，１．４４Ｈｚ，１Ｈ）７．５５（ｓ，１Ｈ）７．７８（ｓ，１Ｈ）８．５０（ｄ，Ｊ＝５．２０Ｈｚ，１Ｈ）．Ｃ１３Ｈ１４ＩＮ４Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋に対するＬＣ−ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）計算値：２４３．１２４６，実測値：ｍ／ｚ２４３．１２５０（＋０．４ｍＤａ），Ｒｔ＝０．８２ｍｉｎ（方法１３，表２参照）．［α］＝＋３２．８°（５８９ｎｍ，ｃ  ０．５２ｗ／ｖ％，ＤＭＦ，２０℃）．
【００９８】
あるいは、中間体Ｉ−１０は、大規模で実施される、合成の次の一般的説明に従って、７０％の収率で調製した：
Ｉ−８ａ（１当量）、２−メチル−４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）−ピリジン（１．１当量）、無水リン酸カリウム（２当量）、ＤＭＥ（７．５ｍＬ／ｇ（Ｉ−１３ａ））、および精製水（２．５ｍＬ／ｇ（Ｉ−１３ａ））の混合物を、排気し、窒素を３回再充填した。トリフェニルホスフィン（０．２６１当量）および酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．１３１当量）を、窒素下で一度に添加した。混合物を排気し、窒素を再び３回再充填し、これを７５〜８０℃に加熱し、窒素下で７５〜８０℃で１２〜１５時間攪拌した。水性層を６０〜７０℃で分離して捨て、次いで、有機層に水（８ｍＬ／ｇ（Ｉ−１３ａ））を添加した。４０℃未満での濃縮によってＤＭＥを除去した。酢酸イソプロピル（１５ｍＬ／ｇ（Ｉ−１３ａ））を添加し、混合物のｐＨを、濃ＨＣｌで１〜２に調整した。混合物を濾過し、濾過ケークを水（１ｍＬ／ｇ（Ｉ−１３ａ））で洗浄し、水性層を分離し、有機層を水（２ｍＬ／ｇ（Ｉ−１３ａ））で抽出した。合わせた水性層を酢酸イソプロピル（２×１５ｍＬ／ｇ（Ｉ−１３ａ））で洗浄した。水性層を濃縮して、残留したＤＭＥおよび酢酸イソプロピルを除去した。ＭＴＢＥ（２ｍＬ／ｇ（Ｉ−１３ａ））を添加し、混合物を０〜５℃に冷却し、０〜５℃で２〜３時間攪拌した。Ｉ−１０を濾過し、冷却水（１ｍＬ／ｇ（Ｉ−１３ａ））で洗浄し、４５〜５０℃で真空中で乾燥させて、オフホワイトの固体としてＩ−１０をもたらした。
【００９９】
中間体１１（Ｉ−１１）
【化５１】
2017537917.tif 000052
中間体Ｉ−９（５ｇ、３３．０１ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（３．７８ｇ、１９．８５ｍｍｏｌ）、およびＫ２ＣＯ３（９．１４ｇ、６６．１５ｍｍｏｌ）をトルエン（１５０ｍＬ）に入れた混合物を、数分間窒素フラッシュした。次いで、４−ブロモベンゾトリフルオリド（９．３ｍＬ、６６．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジメチルエチレン−ジアミン（２．１ｍＬ、１９．８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、ｒｔで１０分間、窒素下で攪拌し、次いで、１００℃で１６時間攪拌した。次いで、ＤＭＦ（２０ｍＬ）を添加し、混合物を１００℃で８時間攪拌した。次いで、水、濃アンモニア水、およびＤＣＭを添加した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  ０／１００から５０／５０）によって精製した。所望の分画を収集し、溶媒を真空中で蒸発させて、淡黄色のオイルとして中間化合物Ｉ−１１をもたらした（９．６ｇ、９８％）。
【０１００】
中間体Ｉ−１１について記載した手順と類似の手順で、次の中間体を合成した。
【０１０１】
【表１】
2017537917.tif 000053
【０１０２】
中間体１５（Ｉ−１５）
【化５２】
2017537917.tif 000054
中間体Ｉ−１１（１９．２ｇ、６５．０ｍｍｏｌ）および硝酸アンモニウムセリウム（ＩＶ）（２４．９５ｇ、４５．５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３５０ｍＬ）に入れた溶液に、ヨウ素（１１．５５ｇ、４５．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を７０℃で１時間攪拌した。次いで、混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３の飽和溶液およびブラインで洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣をＤＩＰＥで沈殿させ、次いで、ショートカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＤＣＭ）によって、次いでフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＤＣＭ／ヘプタン  ５０／５０から１００／０）によって精製した。所望の分画を収集し、溶媒を真空中で蒸発させて、固体として中間化合物Ｉ−１５をもたらした（２４．８ｇ、９０％）。
【０１０３】
中間体Ｉ−１５について記載した手順と類似の手順で、次の中間体を合成した。
【０１０４】
【表２】
2017537917.tif 000055
【０１０５】
中間体１９（Ｉ−１９）
【化５３】
2017537917.tif 000056
中間体Ｉ−１５（１０ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）および２−イソプロポキシ−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（９．７ｍＬ、４７．５ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）に入れた攪拌溶液に、窒素雰囲気中で−２５℃で、塩化イソプロピルマグネシウム・塩化リチウム錯体（１．３Ｍ溶液、３２．９ｍＬ、４２．７ｍｍｏｌ）を、滴下した。混合物を、−２５℃で３０分間攪拌した。次いで、反応を、１０％  ＮＨ４Ｃｌ水溶液で停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００から３／９７）によって精製した。所望の分画を収集し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、ＤＩＰＥで粉末化し、濾過し、乾燥させて、白色固体として中間化合物Ｉ−１９をもたらした（６．４ｇ、６４％）。カラム精製による溶液と不純な分画とを合わせ、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ３０／７０から７０／３０）によって再精製した。所望の分画を収集し、溶媒を真空中で蒸発させた。生成物を、ＤＩＰＥ／ヘプタンで粉末化し、濾過し、乾燥させて、白色固体として中間化合物Ｉ−１９をもたらした（１ｇ、１０％）。
【０１０６】
次の中間体を、中間体１９について報告したのと類似の合成手順に従うことによって合成した。
【０１０７】
【表３】
2017537917.tif 000057
【０１０８】
中間体２０（Ｉ−２０）の代替合成
【化５４】
2017537917.tif 000058
Ｉ−１６（２５０ｍｇ、０．５９２ｍｍｏｌ）および２−イソプロポキシ−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン（０．２４２ｍＬ、１．１８５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１．５ｍＬ）に入れた溶液と、塩化イソプロピルマグネシウム・ＬｉＣｌ錯体（１．３Ｍ（ＴＨＦ中）、８２０．１７μＬ、１．０６６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍＬ）に入れた溶液の２種の溶液を、０℃、Ｒｔ＝１ｍｉｎで、ＬＴＦミキサーに送り込んだ（０．５ｍＬ／ｍｉｎ）。混合物を、４ｍＬの１０％  ＮＨ４Ｃｌによって収集し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させて、透明なオイルとしてＩ−２０をもたらした（２５０ｍｇ、定量的）。
【０１０９】
中間体２２（Ｉ−２２）
【化５５】
2017537917.tif 000059
Ｉ−１８（１．５７ｇ、３．２７６ｍｍｏｌ）および２−イソプロポキシ−４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキソボロラン（ｄｉｏｘｏｂｏｒｏｌａｎｅ）（１．３４ｍＬ、６．５５２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１７．１１ｍＬ）に入れた溶液と、塩化イソプロピル−マグネシウム−ＬｉＣｌ錯体（１．３Ｍ（ＴＨＦ中）、３．７８ｍＬ、４．９１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１４．８８ｍＬ）溶液の２種の溶液を、０℃、Ｒｔ＝１ｍｉｎで、ＬＴＦミキサーに送り込んだ（０．５ｍＬ／ｍｉｎ）。排出口溶液を、ＮＨ４Ｃｌの溶液で希釈し、ＥｔＯＡｃで処理した。混合物を、珪藻土を通して濾過し、濾液をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣を、ＤＩＰＥ／ヘプタンで粉末化し、濾過し、乾燥させて、白色固体としてＩ−２２をもたらした（１．２３ｇ、７８．５％）。
【０１１０】
中間体２３（Ｉ−２３）
【化５６】
2017537917.tif 000060
４−ブロモ−２−（ジメチルアミノ）ピリジン（１５４．８０６ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４．５ｍＬ）溶液と、Ｉ−２０（２５０ｍｇ、０．５９２ｍｍｏｌ）のＫＯＨ（４．７３８ｍＬ、１．１８５ｍｍｏｌ）溶液を、Ｖａｐｏｕｒｔｅｃ  Ｒ２＋Ｒ４反応器を使用する、０．５ｇのＳｉｌｉａｃａｔ（登録商標）ＤＰＰ  Ｐｄ（５００ｍｇ）で満たしたＸ−Ｔｅｒｒａ（登録商標）カラムに送り込んだ（０．５ｍＬ空隙容量、０．０５ｍＬ／毎分、６０℃、滞留時間５分）。結果を収集した。混合物を水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２  ０／１００から１００／０）によって精製した。所望の分画を収集し、溶媒を蒸発させて、透明なオイルとしてＩ−２３（１５０ｍｇ、６１％）をもたらした。
【０１１１】
中間体２４（Ｉ−２４）
【化５７】
2017537917.tif 000061
中間体Ｉ−１５（７００ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）および２−アミノピリジン−４−ボロン酸（４５８ｍｇ、３．３２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）の飽和溶液に入れた攪拌懸濁液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（９６ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、マイクロ波照射下で、１５０℃で１０分間攪拌した。次いで、混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００から１０／９０）によって精製した。所望の分画を収集し、溶媒を真空中で蒸発させ、残渣をＲＰ  ＨＰＬＣ（ＲＰ  Ｃ１８  ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）３０×１００ｍｍ  ５μｍ）、移動相（グラジエント  ６７％  ０．１％  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ／ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ９）水溶液、３３％  ＣＨ３ＣＮから、５０％  ０．１％  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ／ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ９）水溶液、５０％  ＣＨ３ＣＮまで）によって精製した。最初にＭｅＯＨで、次いでアンモニアの７Ｍ溶液（ＭｅＯＨ中）で溶出する、ＩＳＯＬＵＴＥ（登録商標）ＳＣＸ２カートリッジを使用するイオン交換クロマトグラフィーによって残渣を精製した。アンモニアの７Ｍ溶液（ＭｅＯＨ中）に含有されていた所望の分画を収集し、溶媒を真空中で蒸発させて、白色固体としてＩ−２４をもたらした（１６３ｍｇ、２５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．７４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）４．０１（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，７．１Ｈｚ，１Ｈ）４．２９（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，４．２Ｈｚ，１Ｈ）４．４３（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）４．７８（ｑｕｉｎｄ，Ｊ＝６．６，４．３Ｈｚ，１Ｈ）６．９４（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１．４Ｈｚ，１Ｈ）６．９８（ｓ，１Ｈ）７．５１（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）７．７１（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）７．７９（ｓ，１Ｈ）８．０６（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１１２】
中間体２５（Ｉ−２５）
【化５８】
2017537917.tif 000062
Ｉ−１７（４３７．０９３ｍｇ、０．９６７ｍｍｏｌ）、２−アミノピリジン−４−ボロン酸（［ＣＡＳ９０３５１３−６２−２］、２００ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）、および飽和Ｎａ２ＣＯ３（４．６ｍＬ）を１，４−ジオキサン（６．９ｍＬ）に入れた攪拌懸濁液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（５５．８５２ｍｇ、０．０４８３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、マイクロ波照射下で、１５０℃で１０分間攪拌した。次いで、混合物を、Ｈ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  ０／１００から５０／５０）によって精製した。所望の分画を収集し、真空中で蒸発させ、次いで、ＤＩＰＥで粉末化し、濾過して、Ｉ−２５をもたらした（１４３ｍｇ、３５％）。
【０１１３】
次の中間体を、中間体２５について報告したのと類似の合成手順に従うことによって合成した。
【０１１４】
【表４】
2017537917.tif 000063
【０１１５】
中間体２８（Ｉ−２８）
【化５９】
2017537917.tif 000064
中間体Ｉ−２６（３２０ｍｇ、０．７８６ｍｍｏｌ）およびＮａＩ（１．１８ｇ、７．８６６ｍｍｏｌ）をＣＨ３ＣＮ（１２．８ｍＬ）に入れた攪拌懸濁液に、ｒｔで塩化アセチル（８４μＬ、１．１８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、ＭＷ照射下で、１２０℃で３０分間攪拌した。次いで、混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３の飽和溶液およびブラインで洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００から６０／４０）によって精製した。所望の分画を収集し、真空中で蒸発させて、Ｉ−２８をもたらした（２８９ｍｇ、７４％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  δ  ｐｐｍ  １．７５（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）４．０２（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，７．３Ｈｚ，１Ｈ）４．３０（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，４．２Ｈｚ，１Ｈ）４．８０（ｑｕｉｎｄ，Ｊ＝６．７，４．２Ｈｚ，１Ｈ）７．５０（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）７．６７（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１．６Ｈｚ，１Ｈ）７．７２（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）７．８０（ｓ，１Ｈ）８．０３−８．０５（ｍ，１Ｈ）８．３２（ｄｄ，Ｊ＝５．２，０．６Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１１６】
Ｂ．最終化合物の調製
実施例１  （７Ｓ）−７−メチル−３−（２−メチルピリジン−４−イル）−５−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−６，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４（５Ｈ）−オン（Ｃｏ．Ｎｏ．１）
【化６０】
2017537917.tif 000065
手順Ａ：ヨウ化銅（Ｉ）（８７２ｍｇ、４．５８ｍｍｏｌ）を、封管内でかつ窒素下で、中間体Ｉ−１０（１．８５ｇ、７．６４ｍｍｏｌ）、４−ブロモベンゾトリフルオリド（２．１４ｍＬ、１５．２７ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．１１ｇ、１５．２７ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（０．４９２ｍＬ、４．５８ｍｍｏｌ）をトルエン（７０ｍＬ）に入れた攪拌懸濁液に添加した。混合物を、１００℃で１６時間攪拌した。次いで、ＤＭＦ（１０ｍＬ）を添加し、混合物を、１００℃でさらに８時間攪拌した。混合物を、珪藻土を通して濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。有機層を洗浄し、ＮＨ４ＯＨ溶液で希釈し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ２０／８０から５０／５０）によって精製した。所望の分画を収集し、溶媒を真空中で蒸発させた。生成物を、ヘプタンで沈殿させ、濾過し、真空中で乾燥させて、白色固体として最終産物の化合物１をもたらした（２．３２ｇ、７８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．７５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），２．５７（ｓ，３Ｈ），４．０２（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，４．２Ｈｚ，１Ｈ），４．７５−４．８４（ｍ，１Ｈ），７．４４（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，２Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８０（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１１７】
手順Ｂ：ヨウ化銅（Ｉ）（９４ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）を、封管内でかつ窒素下で、中間体Ｉ−１０（２００ｍｇ、０．８２５ｍｍｏｌ）、４−ブロモベンゾトリフルオリド（０．２３１ｍＬ、１．６５１ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２２８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（５３μＬ）をトルエン（７．５ｍＬ）に入れた攪拌懸濁液に添加した。混合物を、１００℃で一晩攪拌した。混合物を、珪藻土のパッドを通して濾過し、ＤＣＭで洗浄した。有機層を分離し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００から７０／３０）によって精製した。所望の分画を収集し、真空中で濃縮して、ピンクがかった固体として化合物１（２８３ｍｇ、８９％）をもたらした。
【０１１８】
手順Ｃ：Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（３８４ｍｇ、０．３３２ｍｍｏｌ）を、封管内でかつ窒素下で、中間体Ｉ−１５（２ｇ、４．７４ｍｍｏｌ）および２−メチルピリジン−４−ボロン酸ピナコールエステル（１．６６ｇ、７．６０ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）およびＮａ２ＣＯ３（５ｍＬ）の飽和溶液に入れた攪拌懸濁液に添加した。混合物を、１００℃で１６時間攪拌した。次いで、混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭ、および少量のＥｔＯＨを含むＤＣＭで抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；アンモニアの７Ｍ溶液（ＭｅＯＨ中）／ＤＣＭ  ０／１００から３／９７、次いでＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００から１００／０）によって精製した。所望の分画を収集し、および真空中で蒸発させて、白色固体として化合物１をもたらした（４８０ｍｇ、２６％）。（１．３１ｇの出発材料が回収された）。
【０１１９】
手順Ｄ；精製前の収率９０％でＣｏ．Ｎｏ．１が単離された、大規模で実施される合成の一般的説明：
Ｉ−１０（１当量）、炭酸カリウム（２当量）、ヨウ化銅（Ｉ）（０．３当量）、４−ブロモベンゾトリフルオリド（１．３当量）、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（０．３５当量）、ＤＭＦ（５ｍＬ／ｇ（Ｉ−１８））、およびトルエン（８ｍＬ／ｇ（Ｉ−１８））の混合物を、排気し、窒素を３回再充填した。これを１００〜１１０℃に加熱し、窒素下で１００〜１１０℃で７〜８時間攪拌した。反応溶液を濃縮して、５０℃未満でトルエンを除去した。酢酸イソプロピル（１５ｍＬ／ｇ（Ｉ−１８））を添加した。混合物を、１０〜２５℃で、５％  ＮＨ４ＯＨ水溶液（３×７ｍＬ／ｇ（Ｉ−１８））で、次いで５％  Ｎ−アセチル−Ｌ−システインおよび５％  Ｋ２ＣＯ３水溶液（２×７ｍＬ／ｇ（Ｉ−１８））で洗浄した。最後に、これを、５％  ＮａＣｌ水溶液（５ｍＬ／ｇ（Ｉ−１８））で洗浄した。得られた溶液を濃縮し、ＭＴＢＥと同時蒸発させて、酢酸イソプロピルを除去した。得られた固体を濾過し、４５〜５０℃で真空中で乾燥させた。オフホワイトの固体としてＣｏ．Ｎｏ．１が得られ、これを、次の通りにさらに精製した：
Ｃｏ．Ｎｏ．１を、４８〜５５℃で、ＩＰＡ（４ｍＬ／ｇ（Ｃｏ．Ｎｏ．１））と水（１ｍＬ／ｇ（Ｃｏ．Ｎｏ．１））の溶媒混合物に溶解した。溶液を濾過し、０〜５℃に冷却した。ＩＰＡ／水混合物（０．５ｍＬ／ｇ（Ｃｏ．Ｎｏ．１）、４／１  ｖ／ｖ）を使用してすすいだ。水（６５０μＬ／ｇ（Ｃｏ．Ｎｏ．１））を滴下し、Ｃｏ．Ｎｏ．１でのシーディングを実施した。混合物を０〜５℃で３〜４時間攪拌した。水（１４ｍＬ／ｇ（Ｃｏ．Ｎｏ．１））を、０〜５℃で３〜４時間滴下し、ついで、懸濁液を、０〜５℃で５〜６時間攪拌した。湿った生成物を濾過し、水（２ｍＬ／ｇ（Ｃｏ．Ｎｏ．１））ですすぎ、次いで、４５〜５０℃で１６時間、真空中で乾燥させて、白色固体としてＣｏ．Ｎｏ．１をもたらした。
【０１２０】
化合物１（ＤＳＣ  ｍｐ＝１５５．３５℃）については、塩酸塩（．ＨＣｌ）（ＤＳＣ  ｍｐ＝２００℃超で分解）；硫酸塩（．Ｈ２ＳＯ４）（ＤＳＣ  ｍｐ＝２００℃超で分解）；メタンスルホン酸塩（．ＣＨ３ＳＯ３Ｈ）（ＤＳＣ  ｍｐ＝２５２℃）；およびマレイン酸塩（．ＨＯ２ＣＣＨ＝ＣＨＣＯ２Ｈ−ｃｉｓ）（ＤＳＣ  ｍｐ＝１６３℃）；（ｍｐはＤＳＣ（Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｔｏｌｅｄｏ  Ｑ２０００  ＭＤＳＣ、１０℃／ｍｉｎで２５から３５０℃まで加熱）によって決定された）を、下に記載する手順に従って得た：
化合物１（１．５ｇ）を９ｍＬのＩＰＡまたはアセトン（塩酸塩および硫酸塩はアセトン中で産生し；メタンスルホン酸塩およびマレイン酸塩はＩＰＡ中で産生した）に入れた溶液を、すべての固体が溶解するまで５０℃で攪拌した。この溶液に酸（１．１モル当量）を添加し、反応混合物を、５０℃で２時間、さらに攪拌し、次いで、２０℃で１時間で冷却し、２０℃で３０時間、さらに攪拌した。懸濁液を濾過し、固体を真空オーブン内で一晩、５０℃で乾燥させた。
【０１２１】
実施例２  （７Ｓ）−７−メチル−３−［２−（メチルアミノ）−４−ピリジル］−５−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−６，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オン（Ｃｏ．Ｎｏ．２）
【化６１】
2017537917.tif 000066
Ｉ−１９（１．５ｇ、３．５６１ｍｍｏｌ）および４−ブロモ−Ｎ−メチル−ピリジン−２−アミン（７９９ｍｇ、４．２７３ｍｍｏｌ、１．０６ｍｍｏｌ）をＮａＨＣＯ３飽和溶液（８．２ｍＬ）および１，４−ジオキサン（８．１ｍＬ）に入れた攪拌懸濁液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０６ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、マイクロ波照射下で１２０℃で１０分間攪拌した。混合物を、珪藻土を通して濾過し、ＤＣＭで洗浄した。有機層を水で洗浄し、分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空中で濃縮した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ヘプタン  ０／１００から７０／３０）によって精製した。所望の分画を、収集し、真空中で濃縮して、Ｃｏ．Ｎｏ．２をもたらし、これを、ＲＰ  ＨＰＬＣ（固定相：Ｃ１８  ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）３０×１００ｍｍ  ５μｍ）、移動相（グラジエント  ６７％  ０．１％  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ／ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ９）水溶液、３３％  ＣＨ３ＣＮから、５０％  ０．１％  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ／ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ９）水溶液、５０％  ＣＨ３ＣＮまで）によって精製し、白色固体としてＣｏ．Ｎｏ．２（１．１４ｇ、８０％）をもたらした。Ｃｏ．Ｎｏ．２を、ヘプタン中で粉末化し、白色固体としてのＣｏ．Ｎｏ．２をもたらした（１８１ｍｇ、１３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．７４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）２．９３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，３Ｈ）４．００（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，７．１Ｈｚ，１Ｈ）４．２９（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，４．０Ｈｚ，１Ｈ）４．５４（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ）４．７３−４．８２（ｍ，１Ｈ）６．８４（ｓ，１Ｈ）６．８６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）７．５０（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）７．７０（ｂｒ．ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）７．７９（ｓ，１Ｈ）８．０９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２２】
実施例３  （７Ｓ）−５−（３，４−ジクロロフェニル）−３−（２−フルオロ−４−ピリジル）−７−メチル−６，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オン（Ｃｏ．Ｎｏ．３）
【化６２】
2017537917.tif 000067
Ｉ−１６（２００ｍｇ、０．４７４ｍｍｏｌ）および２−フルオロピリジン−４−ボロン酸（１３３３．５４７ｍｇ、０．９４８ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２．８ｍＬ、３２．８２９ｍｍｏｌ）および飽和Ｎａ２ＣＯ３（１．４ｍＬ）に入れた攪拌懸濁液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２７．３８ｍｇ、０．０２３７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、マイクロ波照射下で、１５０℃で１０分間攪拌した。次いで、混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  ０／１００から２０／８０）によって精製した。所望の分画を収集し、真空中で蒸発させて、黄色のオイルとして、Ｃｏ．Ｎｏ．３をもたらした（１３５ｍｇ、７３％）。Ｃｏ．Ｎｏ．３を、ＲＰ  ＨＰＬＣ（固定相：Ｃ１８  ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）３０×１００ｍｍ  ５μｍ）、移動相（グラジエント  ５４％  ０．１％  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ／ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ９）水溶液、４６％  ＣＨ３ＣＮから、６４％  ０．１％  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ／ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ９）水溶液、３６％  ＣＨ３ＣＮまで）によって精製し、固体としてのＣｏ．Ｎｏ．３（６５ｍｇ、３５％）をもたらした。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．７５（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ）３．９７（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，７．３Ｈｚ，１Ｈ）４．２５（ｄｄ，Ｊ＝１２．８，４．３Ｈｚ，１Ｈ）４．７９（ｑｕｉｎｄ，Ｊ＝６．７，４．２Ｈｚ，１Ｈ）７．２４（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．５Ｈｚ，１Ｈ）７．３２−７．３６（ｍ，１Ｈ）７．４９（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）７．５２（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）７．５２−７．５６（ｍ，１Ｈ）７．８３（ｓ，１Ｈ）８．１９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２３】
実施例４  （７Ｓ）−７−メチル−３−［２−（メチルアミノ）−４−ピリジル］−５−［４−（ペンタフルオロ−λ６−スルファニル）フェニル］−６，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オン（Ｃｏ．Ｎｏ．４）
【化６３】
2017537917.tif 000068
Ｉ−２２（１５０ｍｇ、０．３１３ｍｍｏｌ）および４−ブロモ−Ｎ−メチル−２−ピリジンアミン（７０．２４５ｍｇ、０．３７６ｍｍｏｌ）をＮａＨＣＯ３飽和溶液（１．５ｍＬ）および１，４−ジオキサン（脱酸素）（１．５ｍＬ）に入れた攪拌混合物に、窒素下で、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１８．０８４ｍｇ、０．０１５６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、マイクロ波照射下で１２０℃で１０分間攪拌した。混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空中で濃縮した。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  ０／１００から１００／０）によって精製した。所望の分画を収集し、真空中で濃縮した。次いで、生成物を、ヘプタン／ＤＩＰＥで粉末化し、濾過し、乾燥させて、白色固体としてＣｏ．Ｎｏ．４をもたらした（１１０．４ｍｇ、７７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．７４（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）２．９３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，３Ｈ）４．００（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，６．９Ｈｚ，１Ｈ）４．２９（ｄｄ，Ｊ＝１２．４，４．０Ｈｚ，１Ｈ）４．４７−４．５８（ｍ，１Ｈ）４．７２−４．８４（ｍ，１Ｈ）６．８２（ｓ，１Ｈ）６．８５（ｄｄ，Ｊ＝５．５，１．３Ｈｚ，１Ｈ）７．４９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ）７．７９（ｓ，１Ｈ）７．８２（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）８．０９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２４】
実施例５  （７Ｓ）−５−［６−メトキシ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］−７−メチル−３−［２−（メチルアミノ）−４−ピリジル］−６，７−ジヒドロピラゾロ［１，５−ａ］ピラジン−４−オン（Ｃｏ．Ｎｏ．５）
【化６４】
2017537917.tif 000069
Ｉ−１６（３００．６５７ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ）、ボロン酸２−（メチルアミノ）ピリジン−４−イル（［ＣＡＳ  １２１４８７９−８８−５］、１５１．５６１ｍｇ、０．９９７ｍｍｏｌ）、および飽和Ｎａ２ＣＯ３（３ｍＬ）を１，４−ジオキサン（４．７４７ｍＬ、５５．６５２ｍｍｏｌ）に入れた攪拌懸濁液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（３８．４１８ｍｇ、０．０３３２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、マイクロ波照射下で、１５０℃で１０分間攪拌した。次いで、混合物をＨ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空中で蒸発させた。この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ  ０／１００から５０／５０）によって精製した。所望の分画を収集し、真空中で蒸発させた。残渣をＤＩＰＥ／ヘプタンで沈殿させ、蒸発させて、白色固体としてＣｏ．Ｎｏ．５をもたらした。Ｃｏ．Ｎｏ．５を、ＲＰ  ＨＰＬＣ（固定相：Ｃ１８  ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）  ３０×１００ｍｍ  ５μｍ）、移動相：グラジエント  ６０％  ０．１％  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ／ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ９）水溶液、４０％  ＣＨ３ＣＮから、４３％  ０．１％  ＮＨ４ＣＯ３Ｈ／ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ９）水溶液、５７％  ＣＨ３ＣＮまで）によって精製し、白色固体としてのＣｏ．Ｎｏ．５をもたらした（１１２ｍｇ、３９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．７２（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）２．９６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，３Ｈ）４．０５（ｓ，３Ｈ）４．４２（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，６．９Ｈｚ，１Ｈ）４．５２−４．６０（ｍ，１Ｈ）４．６４（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ）４．６９−４．７８（ｍ，１Ｈ）６．７６（ｓ，１Ｈ）６．８４（ｄｄ，Ｊ＝５．２，０．６Ｈｚ，１Ｈ）７．７７（ｓ，１Ｈ）７．７８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）７．８８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）８．１３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２５】
Ｃ．放射性リガンド前駆体の調製
前駆体１（Ｐ−１）
【化６５】
2017537917.tif 000070
Ｉ−２３（１５０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）およびＫ２ＣＯ３（１．８６７ｇ、１３．５１２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）に入れた混合物に、ＣＨ３Ｉ（２．２４３ｍＬ、３６．０３１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、ｒｔで４日間攪拌した。次いで、水およびＣＨ２Ｃｌ２を添加した。有機層をＣＨ２Ｃｌ２で分離し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃで粉末化して、オフホワイトの固体としてＰ−１（１４０ｍｇ、７０％）をもたらした。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ｐｐｍ  １．６０（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）３．５９（ｓ，９Ｈ）４．０６（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，７．５Ｈｚ，１Ｈ）４．３６（ｄｄ，Ｊ＝１３．０，４．３Ｈｚ，１Ｈ）４．８３−４．９３（ｍ，１Ｈ）７．４９（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．６Ｈｚ，１Ｈ）７．７５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）７．８１（ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，１Ｈ）８．１０（ｄｄ，Ｊ＝４．９，０．９Ｈｚ，１Ｈ）８．２８（ｓ，１Ｈ）８．４３（ｓ，１Ｈ）８．６３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２６】
前駆体２（Ｐ−２）
【化６６】
2017537917.tif 000071
Ｉ−２８（７００ｍｇ、１．４０５ｍｍｏｌ）およびヘキサブチル二スズ（２１３７．２３３μＬ、４．２ｍｍｏｌ）の乾燥ジオキサン（１５ｍＬ）溶液に、窒素を５分間通気した。次いで、Ｐｄ（ＰＰｈ３）２Ｃｌ２（１４７．２１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、加温浴中で、１６３℃で１７分攪拌した。水およびＥｔＯＡｃを添加し、相を分離した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。この未精製物を、逆相カラムクロマトグラフィー（ＣＨ３ＣＮ、酢酸アンモニウム）によって精製し、Ｐ−２をもたらした（１９１ｍｇ、２０％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  ８．６５（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｓ，１Ｈ），７．６６−７．５３（ｍ，３Ｈ），７．５１−７．３５（ｍ，３Ｈ），４．８０−４．６５（ｍ，１Ｈ），４．２３（ｄｄ，Ｊ＝４．１，１２．６Ｈｚ，１Ｈ），３．９５（ｄｄ，Ｊ＝７．１，１２．８Ｈｚ，１Ｈ），１．６８（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），１．６４−１．３６（ｍ，６Ｈ），１．３５−１．１５（ｍ，６Ｈ），１．１５−０．９３（ｍ，６Ｈ），０．９２−０．７２（ｍ，９Ｈ）．
【０１２７】
前駆体３（Ｐ−３）
【化６７】
2017537917.tif 000072
二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（０．３１９ｇ、１．４６２ｍｍｏｌ）のｔＢｕＯＨ（６ｍＬ）溶液に、Ｉ−２４（５１５ｍｇ、１．３２９ｍｍｏｌ）のｔＢｕＯＨ（６ｍＬ）溶液を、ゆっくりと添加した。この混合物を、２５℃で２０時間攪拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、この未精製生成物を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  ０／１００から５／９５）によって精製した。所望の分画を収集し、真空中で蒸発させて、白色固体としてＰ−３をもたらした（４３０ｍｇ、６６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．５２（ｓ，９Ｈ）１．７４（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）４．０１（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，７．２Ｈｚ，１Ｈ）４．３１（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，４．２Ｈｚ，１Ｈ）４．７３−４．８３（ｍ，１Ｈ）７．３９（ｄｄ，Ｊ＝５．３，１．６Ｈｚ，１Ｈ）７．５０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）７．５８（ｓ，１Ｈ）７．６９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ）７．８５（ｓ，１Ｈ）８．１３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ）８．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．３，０．７Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１２８】
次の前駆体を、前駆体３について報告したのと類似の合成手順に従うことによって合成した。
【０１２９】
【表５】
2017537917.tif 000073
【０１３０】
ＮＭＲ  Ｐ−４：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．５２（ｓ，９Ｈ）１．７３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ）４．０１（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，７．２Ｈｚ，１Ｈ）４．３０（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，４．２Ｈｚ，１Ｈ）４．７２−４．８４（ｍ，１Ｈ）７．３７（ｄｄ，Ｊ＝５．１，１．４Ｈｚ，１Ｈ）７．４８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ）７．６４（ｓ，１Ｈ）７．８２（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２Ｈ）７．８４（ｓ，１Ｈ）８．１３（ｄ，Ｊ＝０．５Ｈｚ，１Ｈ）８．２２（ｄｄ，Ｊ＝５．３，０．７Ｈｚ，１Ｈ）．
ＮＭＲ  Ｐ−５：１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ  ｐｐｍ  １．５３（ｓ，９Ｈ）１．７１（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）４．０５（ｓ，３Ｈ）４．４３（ｄｄ，Ｊ＝１３．９，７．２Ｈｚ，１Ｈ）４．６４（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ）４．６９−４．７９（ｍ，１Ｈ）７．３２（ｄｄ，Ｊ＝５．２，１．４Ｈｚ，１Ｈ）７．５９（ｓ，１Ｈ）７．７７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）７．８２（ｓ，１Ｈ）７．８７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ）８．１５（ｓ，１Ｈ）８．２６（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）．
【０１３１】
Ａ．放射性リガンドの調製
材料および方法
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析を、ＵＶ分光計を接続したＬａＣｈｒｏｍ  Ｅｌｉｔｅ（登録商標）ＨＰＬＣシステム（Ｈｉｔａｃｈｉ，Ａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で実施した。放射標識された化合物の分析については、ＵＶ検出器を通過した後のＨＰＬＣ溶離液を、シングルチャネル分析器を接続した遮蔽された３インチＮａＩ（Ｔｌ）シンチレーション検出器（Ｇａｂｉ  ｂｏｘ，Ｒａｙｔｅｓｔ，Ｓｔｒａｕｂｅｎｈａｒｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に導入した。出力信号を記録し、ＧＩＮＡ  Ｓｔａｒデータ取得システム（Ｒａｙｔｅｓｔ，Ｓｔｒａｕｂｅｎｈａｒｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して分析した。生体内分布研究の試料における放射能を、マルチチャンネルアナライザ（Ｗａｌｌａｃ  ２４８０  Ｗｉｚａｒｄ，Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕｒｋｕ，Ｆｉｎｌａｎｄ）と接続した３インチＮａＩ（Ｔｌ）ウェル型結晶を備え付けた自動ガンマカウンターを使用して定量化した。結果を、バックグラウンドの放射線、物理的崩壊、および計数管不感時間に対して補正した。動物を、温度調節された（約２２℃）、湿度制御された施設内の、それぞれに換気されたケージに収容し、１２ｈ／１２ｈ明／暗周期で、食物と水に自由に利用させた。すべての動物実験は、地元の動物に関する大学倫理委員会（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｅｔｈｉｃｓ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌｓ）からの承認後、動物の管理と使用に関するベルギーの実施規定に従って実施した。
【０１３２】
ａ）炭素−１１標識されたトレーサー
［１１Ｃ］−２／［１１Ｃ］−４／［１１Ｃ］−５
【化６８】
2017537917.tif 000074
炭素−１１は、Ｃｙｃｌｏｎｅ  １８／９サイクロトロン（ＩＢＡ，Ｌｏｕｖａｉｎ−ｌａ−Ｎｅｕｖｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）内での［１４Ｎ（ｐ，α）１１Ｃ］核反応によって生じた。Ｎ２（９５％）とＨ２（５％）との混合物である標的ガスを、２５μＡのビーム電流で、１８−ＭｅＶプロトンを使用して照射した。照射を約３０分間行い、［１１Ｃ］メタン（［１１Ｃ］ＣＨ４）をもたらした。次いで、［１１Ｃ］ＣＨ４を自作の再循環合成モジュールに移し、液体窒素に入れたＰｏｒａｐａｋカラムに捕捉させた。ヘリウムでフラッシュした後、濃縮された［１１Ｃ］ＣＨ４を、Ｐｏｒａｐａｋループを室温に持って行くことによって気相に変換した。次いで、この［１１Ｃ］ＣＨ４を、６５０℃で蒸気状のＩ２と反応させて、［１１Ｃ］ヨウ化メチル（［１１Ｃ］ＭｅＩ）に変換した。
【０１３３】
得られた揮発性の［１１Ｃ］ＭｅＩを、ヘリウムの流れと共に、Ｎ−Ｂｏｃ保護された放射標識前駆体Ｐ−３（［１１Ｃ］−２に対する）、Ｐ−５（［１１Ｃ］−５に対する）、およびＰ−４（［１１Ｃ］−４に対する）（０．５ｍｇ）、およびＮａＨ（約０．２ｍｇの６０％分散（鉱油中））の無水ＤＭＦ（０．２ｍＬ）溶液に通気した。反応バイアル中の放射能の量が安定化した時に、反応混合物を８０℃で４分間加熱した。ＨＣｌの４Ｍ溶液（１，４−ジオキサン（０．２ｍＬ）中）を添加し、反応混合物を１００℃で１分間加熱することによって、脱保護を行った。中和後、未精製の反応混合物を、セミ分取ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）カラム（Ｃ１８、５μｍ；４．６ｍｍ×１５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ，Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ，ＵＳＡ）からなるＨＰＬＣシステムに注入し、［１１Ｃ］−２に対する１ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）とＥｔＯＨ（６０：４０  ｖ／ｖ）との混合物で、［１１Ｃ］−４に対する０．８ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）とＥｔＯＨ（５５：４５  ｖ／ｖ）との混合物で、および［１１Ｃ］−５に対する０．８ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．２）とＣＨ３ＣＮ（６０：４０  ｖ／ｖ）との混合物で溶出した。放射標識された生成物を、１５分から１７分（異なるトレーサーについての保持時間のわずかな違い）に収集した。次いで、収集されたピークに対応する所望の放射性リガンドを、生理食塩水（Ｍｉｎｉ  Ｐｌａｓｃｏ（登録商標），Ｂｒａｕｎ，Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で希釈して、１０％の最終エタノール濃度を得、溶液を０．２２μｍメンブレンフィルター（Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）−ＧＶ，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｉｒｅｌａｎｄ）を通して滅菌濾過した。分取用移動相中にＣＨ３ＣＮが存在する場合、滅菌濾過の前に、Ｃ１８  ＳｅｐＰａｋでの後精製を行った。１０％以下のエタノールを含有するこの最終調製物を、次いで、さらなるインビトロおよびインビボでの前臨床実験のために使用した。［１１Ｃ］−２に対する０．６ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）とＣＨ３ＣＮ（６５：３５  ｖ／ｖ）との混合物（および２７５ｎｍでのＵＶ検出）で、［１１Ｃ］−４に対する０．６ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）とＣＨ３ＣＮ（６０：４０  ｖ／ｖ）との混合物（および２５４ｎｍでのＵＶ検出）で、および［１１Ｃ］−５に対する０．６ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）とＣＨ３ＣＮ（５５：４５  ｖ／ｖ）との混合物（および２１７ｎｍでのＵＶ検出）で溶出する、ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）カラム（Ｃ１８、３．５μｍ；３ｍｍ×１００ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ）からなる分析用ＨＰＬＣシステムを使用して、品質管理を実施した（Ｒｔ＝６〜１０ｍｉｎ、異なるトレーサーについての保持時間のわずかな違い）。
【０１３４】
［１１Ｃ］−１
【化６９】
2017537917.tif 000075
［１１Ｃ］ＭｅＩを、ヘリウムの流れと共に、室温で２分間、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４触媒（２．６μｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（０．２ｍＬ、使用前にＮ２でパージした）懸濁液に通気した。Ｐ−２（２．６μｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（０．２ｍＬ、使用前にＮ２でパージした）溶液を添加し、反応混合物を、１００℃で３分間加熱した。０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）とＥｔＯＨ（９０：１０  ｖ／ｖ）との混合物での希釈後、触媒を約２分間、沈殿させておき、その後、この未精製の放射標識混合物を、セミ分取ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）カラム（Ｃ１８、５μｍ；４．６ｍｍ×１５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ）からなるＨＰＬＣシステムに注入し、０．８ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）とＥｔＯＨ（５５：４５  ｖ／ｖ）との混合物で溶出した。［１１Ｃ］−１を、およそ１４分収集し、上で定義した通りに調製した。０．６ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）とＣＨ３ＣＮ（６５：３５  ｖ／ｖ）との混合物で溶出する（および２７７ｎｍでのＵＶ検出）（Ｒｔ  １０分）、ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）カラム（Ｃ１８、３．５μｍ；３ｍｍ×１００ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ）からなる分析用ＨＰＬＣシステムを使用して、品質管理を実施した。
【０１３５】
ｂ）フッ素−１８標識されたトレーサー
［１８Ｆ］−３
【化７０】
2017537917.tif 000076
［１８Ｆ］フッ化物（［１８Ｆ］Ｆ−）を、１８−ＭｅＶプロトンを使用する、２ｍＬの９７％濃縮［１８Ｏ］Ｈ２Ｏ（Ｒｏｔｅｍ  ＨＹＯＸ１８，Ｒｏｔｅｍ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｂｅｅｒ  Ｓｈｅｖａ，Ｉｓｒａｅｌ）の照射による、Ｃｙｃｌｏｎｅ  １８／９  ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ（ＩＢＡ，Ｌｏｕｖａｉｎ−ｌａ−Ｎｅｕｖｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）における［１８Ｏ（ｐ，ｎ）１８Ｆ］核反応によって生成した。照射後、Ｃｈｒｏｍａｆｉｘ（登録商標）（ＰＳ−ＨＣＯ３）アニオン交換カートリッジ（Ｍａｃｈｅｒｙ−Ｎａｇｅｌ、Ｃ２Ｏ４２−形で調整済み）を使用して、生じた［１８Ｆ］Ｆ−を、［１８Ｏ］Ｈ２Ｏから分離した。［１８Ｆ］Ｆ−を、Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ（０．２ｍＬ；５：９５  ｖ／ｖ）に溶解したＫ２Ｃ２Ｏ４（１．８６ｍｇ）およびＫｒｙｐｔｏｆｉｘ  ２２２（７．４３ｍｇ）を含有する溶液を使用して、カートリッジから溶出した。
【０１３６】
溶液を、１１０℃でヘリウムの流動下で蒸発させ、同じ条件下で、無水ＣＨ３ＣＮ（１ｍＬ）を使用する共沸蒸留によって、完全に乾燥するまでさらに乾燥させた。Ｐ−１（０．５ｍｇ）溶液（無水ＣＨ３ＣＮ（０．２５ｍＬ）中）を、乾燥させた［１８Ｆ］Ｆ−／Ｋ２Ｃ２Ｏ４／ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ錯体に添加し、混合物を８２℃で２．５分加熱した。次に、この未精製の放射標識混合物を、０．０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）とＥｔＯＨ（９６：４  ｖ／ｖ）との混合物で希釈し、セミ分取ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）カラム（Ｃ１８、５μｍ；４．６ｍｍ×１５０ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ）からなるＨＰＬＣシステムに注入し、０．８ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）とＥｔＯＨ（６０：４０  ｖ／ｖ）との混合物で溶出した。放射標識された生成物［１８Ｆ］−３を、４９分後に収集した。上に記載した通りに調製を行った。０．６ｍＬ／ｍｉｎの流速の０．０５Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）とＣＨ３ＣＮ（５５：４５  ｖ／ｖ）との混合物で溶出する（および２２１ｎｍでのＵＶ検出）（Ｒｔ  ８．３分）、ＸＢｒｉｄｇｅ（登録商標）カラム（Ｃ１８、３．５μｍ；３ｍｍ×１００ｍｍ；Ｗａｔｅｒｓ）からなる分析用ＨＰＬＣシステムを使用して、品質管理を実施した。
［１１Ｃ］−２は、５５％の放射化学的収率（ｎ＝５）で合成され、
［１１Ｃ］−５は、２５％の放射化学的収率（ｎ＝１）で合成され、
［１１Ｃ］−４は、５５％の放射化学的収率（ｎ＝１）で合成され、
［１１Ｃ］−１は、４４％の放射化学的収率（ｎ＝４）で合成され、
［１８Ｆ］−３は、４８％の放射化学的収率（ｎ＝２）で合成される。
【０１３７】
収率はすべて、出発［１１Ｃ］ＭｅＩまたは［１８Ｆ］Ｆ−と比較して決定し、減衰補正しなかった。すべての放射性リガンドは、上に記載した分析用ＨＰＬＣシステムを使用して検査される通りの、＞９５％の放射化学的純度かつ５９から１９２ＧＢｑ／μｍｏｌの比放射能で得られた。
【０１３８】
放射性トレーサーの同一性は、その非放射性類似体との同時注入後、上に記載したのと同じ分析用ＨＰＬＣ方法を使用して確認した。
【０１３９】
ＩＩ．分析編
融点
値はピーク値であり、この分析方法に通常伴われる、実験による不確定性を伴って得られる。
Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ  ６２（Ａ）：いくつかの化合物については、融点は、Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ６２装置上で、オープンキャピラリーチューブで決定した。融点は、３または１０℃／分の温度勾配を用いて測定した。最大温度は、３００℃であった。融点は、デジタル表示装置から読み取った。
Ｍｅｔｔｌｅｒ  ＦＰ  ８１ＨＴ／ＦＰ９０（Ｂ）：いくつかの化合物については、融点は、ＦＰ  ８１ＨＴ／ＦＰ９０装置（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ）上で、オープンキャピラリーチューブで決定した。融点は、１、３、５、または１０℃／分の温度勾配を用いて測定した。最大温度は、３００℃であった。融点は、デジタル表示装置から読み取った。
ＤＳＣ８２３ｅ（Ｃ）：いくつかの化合物については、融点（ｍ．ｐ．）は、ＤＳＣ８２３ｅ（Ｍｅｔｔｌｅｒ−Ｔｏｌｅｄｏ）装置を用いて決定した。融点は、１０℃／分の温度勾配を用いて測定した。最大温度は、３００℃であった。ピーク値を記録した。
【０１４０】
ＬＣＭＳ
一般手順
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定は、それぞれの方法で指定した通りの、ＬＣポンプ、ダイオード−アレイ（ＤＡＤ）またはＵＶ検出器、およびカラムを使用して実施した。必要な場合には、追加の検出器が含められた（下の方法の表を参照のこと）。
【０１４１】
カラムからの流れは、大気圧イオン源が配置される質量分析計（ＭＳ）に運ばれる。化合物の名目上のモノアイソトピック分子量（ＭＷ）の特定を可能にするイオンを得るために、調整パラメータ（例えば、走査範囲、ドウェル時間（ｄｗｅｌｌ  ｔｉｍｅ）…）を設定することは、当業者の知識の範囲内である。データ収集は、適切なソフトウェアを用いて実施した。
【０１４２】
化合物は、その実験による保持時間（Ｒｔ）およびイオンによって記載される。データの表において違うように明記されなければ、報告される分子イオンは、［Ｍ＋Ｈ］＋（プロトン化された分子）および／または［Ｍ−Ｈ］−（脱プロトン化された分子）に相当する。化合物が、直接的にイオン化可能ではない場合には、付加物の種類が明記される（すなわち、［Ｍ＋ＮＨ４］＋、［Ｍ＋ＨＣＯＯ］−、［Ｍ＋ＣＨ３ＣＯＯ］−など…）。複数の同位体パターンを有する分子（Ｂｒ、Ｃｌ．．）については、報告される値は、最も小さい同位体質量について得られるものである。すべての結果は、使用される方法に通常伴われる、実験による不確定性を伴って得られた。
【０１４３】
【表６】
2017537917.tif 000077
【０１４４】
【表７】
2017537917.tif 000078
【０１４５】
旋光度
旋光度は、ナトリウムランプを備えたＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ３４１旋光計で測定し、次の通りに報告した：［α］o（λ、ｃｇ／１００ｍｌ、溶媒、Ｔ℃）。
［α］λＴ＝（１００α）／（ｌ×ｃ）：式中、ｌは経路長（ｄｍ）であり、ｃは、ある温度Ｔ（℃）およびある波長λ（ｎｍ）における試料の濃度（ｇ／１００ｍｌ）である。使用する光の波長が５８９ｎｍ（ナトリウムＤ線）である場合、代わりに記号Ｄを使用することがある。旋光度の符号（＋または−）は常に記載するものとする。この等式を使用する場合、回転の後に、括弧内に濃度と溶媒を常に記載する。旋光度は度を使用して報告し、濃度の単位は記載しない（それはｇ／１００ｍｌであるものとする）。
【０１４６】
【表８】
2017537917.tif 000079
【０１４７】
ＩＩＩ．［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合アッセイ
［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合アッセイは、非加水分解型のＧＴＰである、［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ（ガンマ放出３５Ｓで標識されたグアノシン５’三リン酸）の取り込みを測定する、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）機能を調べるために使用される機能性膜によるアッセイである。Ｇ−タンパク質αサブユニットは、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）によるグアノシン５’−二リン酸（ＧＤＰ）の交換を触媒し、アゴニストである［３５Ｓ］ＧＴＰγＳによりＧＰＣＲが活性化されると、組み込まれるため、切断されて交換サイクルを継続することができない（Ｈａｒｐｅｒ（１９９８）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２．６．１−１０，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．）。放射性［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの取り込み量は、Ｇタンパク質の活性の直接的尺度であり、したがって、アンタゴニストの活性を求めることができる。ｍＧｌｕ２  受容体はＧαｉタンパク質と選択的に結合（この方法では、選択的結合）することがわかっており、したがって、組換え細胞株および組織の両方のｍＧｌｕ２  受容体の受容体活性を調べるために広く使用されている。ここでは我々は、本発明の化合物の負のアロステリック調節（ＮＡＭ）特性を検出するため、ヒトｍＧｌｕ２受容体を導入した細胞の膜を使用した［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合アッセイの使用について記載するが、それは、Ｓｃｈａｆｆｈａｕｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００３，４：７９８−８１０）からの引用である。
【０１４８】
膜の製造
ＣＨＯ細胞をプレコンフルエンスまで培養し、５ｍＭ酪酸塩で２４時間刺激した。その後、ＰＢＳ中でスクレープすることにより細胞を回収し、細胞懸濁液を遠心分離した（ベンチトップ遠心分離機において、４０００ＲＰＭで１０分）。上清を廃棄し、Ｕｌｔｒａ  Ｔｕｒｒａｘホモジナイザを用いて混合することによりペレットを５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４に静かに再懸濁させた。懸濁液を１２，４００ＲＰＭ（Ｓｏｒｖａｌｌ  Ｆ１４Ｓ−６ｘ２５０Ｙ）で１０分間遠心分離し、上清を廃棄した。再度、ｕｌｔｒａ−ｔｕｒｒａｘホモジナイザを用いてペレットを５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４でホモジナイズし、遠心分離した（１３，０００ＲＰＭ、２０分、４℃）。最終ペレットを５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４に再懸濁させ、使用する前に、−８０℃で適量ずつ保存した。標準物質としてウシ血清アルブミンを用いてブラッドフォード法（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、ＵＳＡ）でタンパク質濃度を求めた。
【０１４９】
［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ結合アッセイ
被検化合物のｍＧｌｕＲ２の負のアロステリック調節活性の測定を次のように行った。１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ酸、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ塩、ｐＨ７．４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２および１０μＭ  ＧＤＰを含有するアッセイバッファで被検化合物およびグルタミン酸を希釈した。ヒトｍＧｌｕ２受容体含有膜を氷上で解凍し、１８μｇ／ｍｌのサポニンを補ったアッセイバッファで希釈した。膜を、所定（約ＥＣ８０）濃度のグルタミン酸（６０μＭ）と共に化合物と３０℃で３０分、予めインキュベートした。［３５Ｓ］ＧＴＰＳ（ｆ．ｃ．０．１ｎＭ）を添加後、アッセイ混合物を僅かな時間振盪させ、［３５Ｓ］ＧＴＰγＳの導入を活性化させるため、さらにインキュベートした（３０分、３０℃）。最終アッセイ混合物は、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ酸、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ塩、ｐＨ７．４、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１０μＭ  ＧＤＰおよび１０μｇ／ｍｌサポニン中に膜タンパク質７μｇを含有した。全反応体積は２００μｌであった。９６ウェルのｆｉｌｔｅｒｍａｔｅユニバーサルハーベスタを用いてＵｎｉｆｉｌｔｅｒ−９６  ＧＦ／Ｂプレート（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ、ＵＳＡ）で急速濾過することにより反応を終了させた。フィルタを氷冷１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４／１０ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ７．４で６回洗滌した。次いで、フィルタを風乾し、液体シンチレーションカクテル（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−Ｏ）３０μｌを各ウェルに添加した。膜結合放射能はＴｏｐｃｏｕｎｔで計数した。
【０１５０】
データ解析
本発明の代表的な化合物の濃度反応曲線を、Ｌｅｘｉｓソフトウェアインターフェース（Ｊ＆Ｊで開発）を用いて作成した。データは、グルタミン酸のＥＣ８０相当濃度を添加すると発生する応答として定義される対照のグルタミン酸応答の％として算出した。非線形回帰分析を用いて、これらのパーセンテージ対被検化合物の対数濃度をプロットするシグモイド濃度反応曲線を解析した。半数阻害を生じさせる濃度を、ＩＣ５０として算出した。
【０１５１】
【表９】
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【０１５２】
【表１０】
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【０１５３】
ＩＶ．生体内分布研究
一般的方法
健康な雌のＷｉｓｔｅｒラット（体重１８５〜２２０ｇ）において、注射後（ｐ．ｉ．）２分、３０分、および６０分（ｎ＝３／時点）で、［１１Ｃ］−２および［１１Ｃ］−１の生体内分布研究を実施した。ラットの尾静脈に、麻酔（流速１Ｌ／ｍｉｎの２．５％イソフルラン（Ｏ２中））下で、約１８ＭＢｑのトレーサーを注射し、上で指定した時点で、断頭によって屠殺した。血液および主な器官を、風袋を量ったチューブに収集し、秤量した。血液、器官、および他の体の部分における放射能を、自動ガンマカウンターを使用して測定した。全血の放射能の算出のために、血液質量を、体重の７％であると仮定した。筋肉全体および骨全体の放射能の算出のために、筋肉および骨の質量を、それぞれ体重の４０％および１２％であると仮定した。
【０１５４】
生体内分布研究
［１１Ｃ］−２および［１１Ｃ］−１
正常な雌のＷｉｓｔａｒラットにおける［１１Ｃ］−２および［１１Ｃ］−１の生体内分布研究の結果を、表５〜１０に示す。表５および６は、それぞれ［１１Ｃ］−２および［１１Ｃ］−１の注射後（ｐ．ｉ．）２分、３０分、および６０分での、％注射量（％ＩＤ）値を示す。［１１Ｃ］−１については、６０分時点は研究を行わなかった。
【０１５５】
【表１１】
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【０１５６】
【表１２】
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【０１５７】
どちらのトレーサーも、主として肝臓を介して腸へと、また、一部は腎臓経路を介して排除された。高い取り込みはまた、屠体および筋肉において観察されたが、これらは、体重の大部分を占める。
【０１５８】
どちらのトレーサーの初期の総脳取り込みも、［１１Ｃ］−２および［１１Ｃ］−１について、２分ｐｉでそれぞれ１．４％ＩＤおよび２．０％ＩＤと、比較的に高かった（表７参照）。脳からの洗い出し（ｗａｓｈ  ｏｕｔ）を観察した。
【０１５９】
【表１３】
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【０１６０】
表８および９は、両方のトレーサーについての、様々な脳領域、血液、骨、および筋肉における放射能濃度を示す。これらの濃度は、標準化取り込み値（ＳＵＶ）として表され、動物の体重に対して補正されている。
【０１６１】
【表１４】
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【０１６２】
【表１５】
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【０１６３】
研究されたすべての脳領域からの有意な洗い出しを、両方のトレーサーについて注射後２分から３０分まで、さらに［１１Ｃ］−２について（［１１Ｃ］−１については分析していない）注射後３０分から６０分まで観察した。洗い出し率を、表１０に示す。血液および骨からの洗い出しは、よりゆっくりであった。筋肉では、いくらかの停滞が認められた。
【０１６４】
【表１６】
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【０１６５】
脳からの洗い出しは、［１１Ｃ］−２については、［１１Ｃ］−１と比較して、わずかにゆっくりであった。皮質については、最も高い洗い出し率が認められた。２から３０分の、骨および血液からの洗い出しは、［１１Ｃ］−１については、［１１Ｃ］−２と比較して、早かった。筋肉では、どちらのトレーサーについても、いくらかの停滞が認められた。
【０１６６】
これらの生体内分布研究の結果は、［１１Ｃ］−２および［１１Ｃ］−１が、トレーサー注射後２分での比較的に高い初期の脳取り込みを有するが、２から３０分まで、脳からの有意な洗い出しが認められることを示す。［１１Ｃ］−２の脳取り込みは、［１１Ｃ］−１の脳取り込みと比較して、ゆっくりであったが、２から３０分までの脳からの洗い出しは、［１１Ｃ］−２については、［１１Ｃ］−１と比較して、わずかにゆっくりであった。２分から３０分の洗い出し率は、研究されたすべての脳領域について、＞２．３であり、皮質について、最も高かった。
【０１６７】
Ｖ．インビトロオートラジオグラフィー結合研究
一般的方法
ｍＧｌｕＲ２  ＫＯおよびＷＴマウス脳の、また正常な雌のＷｉｓｔａｒラット脳の、水平切片（２０μｍ）に対して、インビトロオートラジオグラフィー研究を実施した。これらの切片を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ＭｇＣｌ２  ２ｍＭ、ＣａＣｌ２  ２ｍＭ；ｐＨ７．０）中で、室温で１０分間（２回）、予備インキュベートし、乾燥させた。次に、これらの脳切片を、０．１％  ＢＳＡをさらに含有する予備インキュベーションに使用したのと同じＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液で希釈したトレーサー［１１Ｃ］−２、［１１Ｃ］−５、［１１Ｃ］−４、［１１Ｃ］−１、もしくは［１８Ｆ］−３と共に、または１０μＭ  Ｃｏ．Ｎｏ．２もしくはＣｏ．Ｎｏ．１の存在下でのこのトレーサー溶液と共に、インキュベートした。これらのマウス脳切片を、１７ｋＢｑの炭素−１１標識されたトレーサーおよび１．７ｋＢｑのフッ素−１８標識されたトレーサーと共にインキュベートした。ラット脳切片については、これは、４４ｋＢｑの炭素−１１標識されたトレーサーおよび０．４４ｋＢｑのフッ素−１８標識されたトレーサーであった。３０分のインキュベーション後、脳切片を、氷冷Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ（ＭｇＣｌ２  ２ｍＭ、ＣａＣｌ２  ２ｍＭ；ｐＨ７．０＋０．１％  ＢＳＡ緩衝液）中で、５分間、３回洗浄した。氷冷精製水への素早い浸漬の後、スライドを乾燥させた。スライドを一晩、高性能蛍光体蓄積（ｐｈｏｓｐｈｏｒ  ｓｔｏｒａｇｅ）スクリーン（超解像度スクリーン；Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＵＳＡ）に感光させることによって、オートラジオグラムを得た。スクリーンは、Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｐｌｕｓシステム（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して読み取り、Ｏｐｔｉｑｕａｎｔソフトウェア（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用して分析した。オートラジオグラムにおける放射能濃度は、デジタル光（ｄｉｇｉｔａｌ  ｌｉｇｈｔ）単位（ＤＬＵ）／ｍｍ2で表した。
【０１６８】
インビトロオートラジオグラフィー結合研究
ｍＧｌｕＲ２へのトレーサー結合の特異性に関するさらなる情報を得るために、高濃度のｍＧｌｕＲ２  ＮＡＭ化合物（Ｃｏ．Ｎｏ．１またはＣｏ．Ｎｏ．２）の存在または非存在下での、ｍＧｌｕＲ２  ＫＯおよびＷＴマウス脳切片に対する、および正常なラット脳切片に対する、インビトロオートラジオグラフィー結合研究を実施した。図１〜５は、［１１Ｃ］−２、［１１Ｃ］−１、［１８Ｆ］−３、［１１Ｃ］−５、および［１１Ｃ］−４についての、ｍＧｌｕＲ２  ＫＯおよびＷＴマウス脳切片に対するこれらの結合研究の結果を示す。表１１は、研究した５種のトレーサーの、線条体および皮質についての「ＷＴ全結合−対−ＫＯ全結合」比および「ＷＴ全結合−対−ブロックされたＷＴ」比を示す。
【０１６９】
【表１７】
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【０１７０】
［１１Ｃ］−２および［１１Ｃ］−１については、ＷＴマウス脳切片およびｍＧｌｕＲ２  ＫＯマウス脳切片に対する、トレーサー結合の有意差が認められた。ＷＴマウス脳に対するこの結合は、不均一であり、線条体および皮質に対するより高い結合を伴い、これは、Ｃｏ．Ｎｏ．１（１０μＭ）で、約８５％よりも多くブロックされる可能性がある。［１１Ｃ］−５および［１１Ｃ］−４については、ＷＴマウス脳とＫＯマウス脳との間のこの結合の差は、あまりはっきりせず、［１８Ｆ］−３については、有意ではない一貫した差が認められた。ｍＧｌｕＲ２  ＫＯマウス脳に対する全結合は、［１１Ｃ］−１については、［１１Ｃ］−２と比較してわずかに高かった。
【０１７１】
［１１Ｃ］−２、［１１Ｃ］−１、および［１８Ｆ］−３については、正常なラット脳切片におけるトレーサー結合の特異性も研究した。これらの結合研究の結果を、図６〜８に示す。
【０１７２】
ＷＴマウス脳切片について観察された通り、［１１Ｃ］−２の、正常なラット脳の線条体および皮質に対するインビトロでの高い結合も認められた。自己ブロッキングまたはＣｏ．Ｎｏ．１（１０μＭ）でのブロッキングは、ラット線条体において約７８％、またラット皮質において約９１％の結合の低下をもたらした。これらの割合は、インビトロＷＴマウス脳結合研究において得られる割合に匹敵する。
【０１７３】
一般に、［１１Ｃ］−１についての、ラット脳に対する全結合は、［１１Ｃ］−２と比較して、それほど顕著ではなかった。［１１Ｃ］−１については、線条体および皮質とは別に、ＷＴマウス脳切片では当てはまらなかった視床および丘に対する結合も認められた。
【０１７４】
ラット脳に対する［１８Ｆ］−３の全結合を見ると、トレーサーの分布は、脳全体を通して、切片ごとに異なっていた。これは、ＷＴマウス脳切片においても観察された。また、ラット脳に対する限定された結合は、［１８Ｆ］−３については、［１１Ｃ］−２および［１１Ｃ］−１について観察されるものと比較して高かった。
【０１７５】
ｍＧｌｕＲ２  ＫＯ、およびＷＴマウス脳切片、および正常なラット脳切片でのインビトロオートラジオグラフィー結合実験において研究された５種すべてのトレーサーのうち、［１１Ｃ］−２が、ＷＴマウス脳における最も高い割合の限定された結合（Ｃｏ．Ｎｏ．１でブロックされる）、線条体および皮質についての最も高いＷＴ全結合−対−ＫＯ全結合比を有しており、正常なラット線条体および皮質に対する最も強い結合を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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