(57)【要約】本発明は、本明細書において定義されるような式(I)〜(XIV)の化合物、および、これらを含む薬学的組成物、および、該化合物または組成物（例えば、化合物10）を使用して対象における伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法を提供する。2017531631.tif 000075
2017531631.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(IX)の化合物またはその薬学的に許容される塩：
2017531631.tif 000051
式中、
A、Z、およびYはアリールまたはヘテロアリールであり、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルで各々置換されていてもよく；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；かつ
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【請求項２】
式(X)の化合物であり、
2017531631.tif 000052
式中、
Yは、ヘテロアリールであり；かつ
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項2記載の化合物。
【請求項４】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9が、各々独立して、Hまたはハロである、請求項2記載の化合物。
【請求項５】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9がHである、請求項2記載の化合物。
【請求項６】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つがハロである、請求項2記載の化合物。
【請求項７】
R1、R2、R3、R4、およびR5のうちの1つがハロであり、かつ、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つがハロである、請求項2記載の化合物。
【請求項８】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である、請求項2記載の化合物。
【請求項９】
Yが、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジン、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである、請求項2記載の化合物。
【請求項１０】
式(XI)の化合物
2017531631.tif 000053
である、請求項2記載の化合物。
【請求項１１】
式(XII)の化合物であり、
2017531631.tif 000054
式中、
Yは、ヘテロアリールであり；かつ
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項1記載の化合物。
【請求項１２】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項11記載の化合物。
【請求項１３】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9が、各々独立して、Hまたはハロである、請求項11記載の化合物。
【請求項１４】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9がHである、請求項11記載の化合物。
【請求項１５】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9のうちの1つがハロである、請求項11記載の化合物。
【請求項１６】
R1、R2、R3、R4、およびR5のうちの1つがハロであり、かつ、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つがハロである、請求項11記載の化合物。
【請求項１７】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である、請求項11記載の化合物。
【請求項１８】
Yが、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジン、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである、請求項11記載の化合物。
【請求項１９】
式(XIII)の化合物であり、
2017531631.tif 000055
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；かつ、式中、R16がORaである場合、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの1つはHではない、請求項1記載の化合物。
【請求項２０】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項19記載の化合物。
【請求項２１】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16のうちの1つがハロである、請求項19記載の化合物。
【請求項２２】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、OH、CF3、またはSO2NH2である、請求項19記載の化合物。
【請求項２３】
R16がORaである場合、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの2つはHではない、請求項19記載の化合物。
【請求項２４】
式(I)の化合物であり、
2017531631.tif 000056
式中、
R15は、H、C1-C5アルキル、C(O)Ra、C(O)NRmRnであり；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；かつ、式中、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも1つは、Hではない、請求項1記載の化合物。
【請求項２５】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも2つは、Hではない、請求項24記載の化合物。
【請求項２６】
R15がH、C1-C5アルキルである、請求項24記載の化合物。
【請求項２７】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項24記載の化合物。
【請求項２８】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である、請求項24記載の化合物。
【請求項２９】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの1つがハロである、請求項24記載の化合物。
【請求項３０】
式(II)の化合物
2017531631.tif 000057
である、請求項24記載の化合物。
【請求項３１】
式(XIV)の化合物であり、
2017531631.tif 000058
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキルであり；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項1記載の化合物。
【請求項３２】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項31記載の化合物。
【請求項３３】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、Hまたはハロである、請求項31記載の化合物。
【請求項３４】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16がHである、請求項31記載の化合物。
【請求項３５】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16のうちの1つがハロである、請求項31記載の化合物。
【請求項３６】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、SO2NH2、アリール、またはヘテロアリールである、請求項31記載の化合物。
【請求項３７】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である、請求項31記載の化合物。
【請求項３８】
R14がHまたはC1-C3アルキルである、請求項1記載の化合物。
【請求項３９】
R14がHである、請求項1記載の化合物。
【請求項４０】
5-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(4-クロロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(2-クロロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(4-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[(2-ベンジルオキシ-5-ブロモ-フェニル)メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[5-クロロ-2-[(2-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
N-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-アミン、
4-[[5-ブロモ-2-[(4-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシ-5-クロロ-フェニル)メチルアミノ]ベンゼンスルホンアミド、
4-[[2-[(3-ニトロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
2-[[2-[(3-ニトロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]-3-フルオロ-フェノール、または
N-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチル]-4-オキサゾール-5-イル-アニリンである、請求項1記載の化合物。
【請求項４１】
前記請求項のいずれか一項記載の式(IX)の化合物またはその薬学的に許容される塩と、少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む、組成物。
【請求項４２】
その必要がある対象において伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法であって、治療有効量の式(IX)の化合物またはその薬学的に許容される塩を該対象へ投与する工程を含み、
2017531631.tif 000059
式中、
A、Z、およびYはアリールまたはヘテロアリールであり、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルで各々置換されていてもよく；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；かつ
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、方法。
【請求項４３】
前記化合物が、式(X)の化合物であり、
2017531631.tif 000060
式中、
Yは、ヘテロアリールであり；かつ
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項42記載の方法。
【請求項４４】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項43記載の方法。
【請求項４５】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9が、各々独立して、Hまたはハロである、請求項43記載の方法。
【請求項４６】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9がHである、請求項43記載の方法。
【請求項４７】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つがハロである、請求項43記載の方法。
【請求項４８】
R1、R2、R3、R4、およびR5のうちの1つがハロであり、かつ、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つがハロである、請求項43記載の方法。
【請求項４９】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である、請求項43記載の方法。
【請求項５０】
Yが、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジン、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである、請求項43記載の方法。
【請求項５１】
前記化合物が、式(XI)の化合物
2017531631.tif 000061
である、請求項43記載の方法。
【請求項５２】
前記化合物が、式(XII)の化合物であり、
2017531631.tif 000062
式中、
Yは、ヘテロアリールであり；かつ
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項42記載の方法。
【請求項５３】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項52記載の方法。
【請求項５４】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9が、各々独立して、Hまたはハロである、請求項52記載の方法。
【請求項５５】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9がHである、請求項52記載の方法。
【請求項５６】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9のうちの1つがハロである、請求項52記載の方法。
【請求項５７】
R1、R2、R3、R4、およびR5のうちの1つがハロであり、かつ、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つがハロである、請求項52記載の方法。
【請求項５８】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である、請求項52記載の方法。
【請求項５９】
Yが、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジン、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである、請求項52記載の方法。
【請求項６０】
前記化合物が、式(XIII)の化合物であり、
2017531631.tif 000063
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項42記載の方法。
【請求項６１】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項60記載の方法。
【請求項６２】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16のうちの1つがハロである、請求項60記載の方法。
【請求項６３】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、OH、CF3、またはSO2NH2である、請求項60記載の方法。
【請求項６４】
R16がORaである場合、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの2つはHではない、請求項60記載の方法。
【請求項６５】
前記化合物が、式(I)の化合物であり、
2017531631.tif 000064
式中、
R15は、H、C1-C5アルキル、C(O)Ra、C(O)NRmRnであり；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項42記載の方法。
【請求項６６】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも2つは、Hではない、請求項65記載の方法。
【請求項６７】
R15がH、C1-C5アルキルである、請求項65記載の方法。
【請求項６８】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項65記載の方法。
【請求項６９】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である、請求項65記載の方法。
【請求項７０】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの1つがハロである、請求項65記載の方法。
【請求項７１】
前記化合物が、式(II)の化合物
2017531631.tif 000065
である、請求項65記載の方法。
【請求項７２】
前記化合物が、式(XIV)の化合物であり、
2017531631.tif 000066
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキルであり；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、請求項42記載の方法。
【請求項７３】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである、請求項72記載の方法。
【請求項７４】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、Hまたはハロである、請求項72記載の方法。
【請求項７５】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16がHである、請求項72記載の方法。
【請求項７６】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16のうちの1つがハロである、請求項72記載の方法。
【請求項７７】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、SO2NH2、アリール、またはヘテロアリールである、請求項72記載の方法。
【請求項７８】
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16が、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である、請求項72記載の方法。
【請求項７９】
R14がHまたはC1-C3アルキルである、請求項42記載の方法。
【請求項８０】
R14がHである、請求項42記載の方法。
【請求項８１】
前記化合物が、
5-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(4-クロロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(2-クロロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(4-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[(2-ベンジルオキシ-5-ブロモ-フェニル)メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[5-クロロ-2-[(2-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
N-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-アミン、
4-[[5-ブロモ-2-[(4-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシ-5-クロロ-フェニル)メチルアミノ]ベンゼンスルホンアミド、
4-[[2-[(3-ニトロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
2-[[2-[(3-ニトロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]-3-フルオロ-フェノール、または
N-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチル]-4-オキサゾール-5-イル-アニリンである、請求項42記載の方法。
【請求項８２】
前記化合物が、DNAポリメラーゼとプロセッシビティー因子（processivity factor）との相互作用を低減、阻害、または抑止する、請求項42〜81のいずれか一項記載の方法。
【請求項８３】
その必要がある対象において伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法であって、治療有効量の式(I)の化合物またはその薬学的に許容される塩を該対象へ投与する工程を含み、
2017531631.tif 000067
式中、
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
R15は、H、C1-C5アルキル、C(O)Ra、C(O)NRmRnであり；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する、方法。
【請求項８４】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13が、各々独立して、HまたはCH3である、請求項83記載の方法。
【請求項８５】
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13が、各々独立して、Hまたはハロである、請求項83記載の方法。
【請求項８６】
R14がHまたはC1-C3アルキルである、請求項83記載の方法。
【請求項８７】
R15がH、C1-C5アルキルである、請求項83記載の方法。
【請求項８８】
前記化合物が、式(II)の化合物
2017531631.tif 000068
である、請求項83記載の方法。
【請求項８９】
前記化合物が、式(III)の化合物
2017531631.tif 000069
である、請求項83記載の方法。
【請求項９０】
前記化合物が、式(IV)の化合物
2017531631.tif 000070
である、請求項83記載の方法。
【請求項９１】
前記化合物が、式(V)の化合物
2017531631.tif 000071
である、請求項83記載の方法。
【請求項９２】
前記化合物が、式(VI)の化合物
2017531631.tif 000072
である、請求項83記載の方法。
【請求項９３】
前記化合物が、式(VII)の化合物
2017531631.tif 000073
である、請求項83記載の方法。
【請求項９４】
前記化合物が、式(VIII)の化合物
2017531631.tif 000074
である、請求項83記載の方法。
【請求項９５】
前記化合物が、DNAポリメラーゼとプロセッシビティー因子との相互作用を低減、阻害、または抑止する、請求項83〜94のいずれか一項記載の方法。
【請求項９６】
前記化合物を局所投与する、請求項42〜94のいずれか一項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府権利声明
本発明は、国立衛生研究所によって与えられた助成金番号5U01-A1082211およびP30-AR057217の下に政府支援により成された。政府は本発明において一定の権利を有する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止するための、化合物または組成物、および伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
伝染性軟属腫(MC)は、ポックスウイルス伝染性軟属腫ウイルス(MCV)によって引き起こされる皮膚疾患である。MCは、消散する前に数ヶ月間から数年間持続し得る皮膚病変を示す。MC病変は、小児、成人および免疫抑制された人において生じ、皮膚に厳密に制限される。MCVは、皮膚と皮膚との直接接触、性的接触、病変を掻くことによる自己接種によって、および汚染媒介物からの間接的な接種によって伝染する。病変は、拡散を減らすように意図される治療後に痛みを伴い得る。病変はまた、心理的に悲惨であり、瘢痕を生じさせる場合は一層より悲惨である。MCは、世界人口の2〜10%において生じ、米国においては、それは全ての診断された皮膚病の約1%を構成し、小児においては5%に近い。顕著なことに、免疫不全の人において、この感染症は重篤となり得、かつ長期化し得る。HIV患者の5%〜18%がMCを有する。しばしば、AIDS患者における重篤なMC疾患は、高活性抗レトロウイルス療法(HAART)の間に、消散し始める。しかしながら、HAART開始直後にMC病変が発生する症例が文書化されており、このことは、免疫再構築症候群(IRIS)がMCVの出現において役割を果たしているかもしれないことを示唆している。
【０００４】
MCに対する現在の治療は、通常、物理療法または化学物質を用い、これらは、一様に有効または安全ではなく、病変を完全に排除しないことが多く、瘢痕を生じさせ得る。加えて、dCMPアナログである広域抗ウイルス薬シドホビルは、免疫不全患者におけるMCに対する局所または静脈内薬剤として有効に使用されているが、局所治療の際の炎症、びらんおよび疼痛、ならびに全身適用の際の腎毒性の可能性を含む、副作用を伴う。現在まで、MCの特定の治療について認可されている抗ウイルス治療薬は一つも存在しない。そのような有効かつ安全な治療の開発は、MCVが培養で増殖しないことによって主に妨げられてきた。
【０００５】
プロセッシビティー因子（processivity factor）(PF)は、魅力的な抗ウイルス治療標的である。PFの機能は、DNAポリメラーゼ(Pol)をテンプレートへつなぎ、伸長鎖の合成を可能にすることである。PFは、それらの同族DNA Polに特異的であり、DNA合成に絶対に必要である。適例として、カポジ肉腫ヘルペスウイルスPol(Pol-8)は単独ではたった3つのヌクレオチドを組み込むが、そのPFであるPF-8の存在下では、何千個ものヌクレオチドを組み込むことができる。ファージからヒトまで全てのDNA Polは単一の同族PFで機能する。しかしながら、原型のポックスウイルスであるワクシニアウイルス(VV)は、A20およびD4ウイルスタンパク質を含むヘテロ二量体が機能的PFを構成するという点でいくぶん独特である。ウラシル-DNAグリコシラーゼ修復酵素としても機能し得るD4は、そのPFパートナーであるA20へ結合するが、E9 Polへは結合しない。他方で、A20はE9およびD4の両方へ結合し、このことは、これがD4をE9へ間接的に接続する橋として部分的にはたらくことを示唆している。従って、有効な治療薬が、伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止するために必要である。
【発明の概要】
【０００６】
一局面において、本発明は、式(IX)の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する：
2017531631.tif 000003
式中、
A、Z、およびYはアリールまたはヘテロアリールであり、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルで各々置換されていてもよく；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；かつ
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【０００７】
別の局面において、本発明は、本明細書に記載される本発明の化合物、例えば、式(I)〜(XIV)の化合物またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０００８】
さらに別の局面において、本発明は、その必要がある対象において伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法を提供し、方法は、治療有効量の式(IX)の化合物またはその薬学的に許容される塩を該対象へ投与する工程を含み、
2017531631.tif 000004
式中、
A、Z、およびYはアリールまたはヘテロアリールであり、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルで各々置換されていてもよく；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；かつ
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【０００９】
一局面において、本発明は、式(I)の化合物またはその薬学的に許容される塩を提供する：
2017531631.tif 000005
式中、
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
R15は、H、C1-C5アルキル、C(O)Ra、C(O)NRmRnであり；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
式中、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも1つは、水素ではない。
【００１０】
別の局面において、本発明は、式(I)の化合物（式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【００１１】
さらに別の局面において、本発明は、対象において伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法を提供し、方法は、治療有効量の式(I)の化合物またはその薬学的に許容される塩を該対象へ投与する工程を含み、
2017531631.tif 000006
式中、
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
R15は、H、C1-C5アルキル、C(O)Ra、C(O)NRmRnであり；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００１２】
本発明の1つまたは複数の態様の詳細を下記の添付の説明に記載する。本発明の他の特徴、目的および利点は、明細書、ならびに添付の図面および添付の特許請求の範囲から明らかとなるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
本発明は、添付の図面と併せて以下の詳細な説明を読むことによってよりよく理解され、図面において、同様の参照記号は、同様の要素を指定するために使用される。
【００１４】
（図１）MCVおよびVVポリメラーゼならびにプロセッシビティー因子のインビトロ翻訳。伝染性軟属腫ウイルスおよびワクシニアウイルス由来のE9ポリメラーゼならびにプロセッシビティー因子D4およびA20を、クローニングされたプラスミドからインビトロ翻訳し、[35S]Cys/Metで標識した。タンパク質をSDSゲル上で分画し、オートラジオグラフィによって視覚化した。矢印は全長タンパク質を示す。元のオートラジオグラムからのレーンを好都合な比較のために再配置したことに注意されたい。
（図２）mD4はプロセッシブ（processive）DNA合成においてvD4の代わりをすることができる。ラピッドプレートアッセイを使用して、VVおよびMCV由来のE9ポリメラーゼとA20およびD4プロセッシビティー因子との同種および異種の組み合わせを用いて、DNA合成を行った。DNA合成をdig-dUTPの組み込みによって定量し、これをペルオキシダーゼコンジュゲートDIG抗体(OD405 nm)によって検出した。バックグラウンドOD値を恣意的に1へ設定する。データはトリプリケートでの少なくとも2つの独立した実験からの平均値+SDを示す。
（図３）精製mD4はMCVおよびVVの両方からのA20と物理的に相互作用する。(A)細菌からのHisタグ付きmD4の発現および精製。N末端の6xHisタグ付きmD4(6His-mD4)を、大腸菌中において誘導し、コバルト金属親和性樹脂を使用して精製し(レーン1)、続いてSuperdex 200上でゲル濾過クロマトグラフィーを行った(レーン2)。Mはサイズマーカーを示す。(B)プルダウンアッセイ。精製6His-mD4をインビトロ翻訳された[35S]標識mA20またはvA20と共にインキュベートし、コバルト樹脂によってプルダウンした。プルダウンされたタンパク質をSDSゲル上で分離し、オートラジオグラフィによって視覚化した。インプットは、プルダウンアッセイのために使用した5%の放射標識タンパク質を示す。
（図４）精製mD4はプロセッシブDNA合成において機能する。全長M13 DNA(7,249ヌクレオチド)を、プライマーへアニーリングし(左)、インビトロ翻訳されたvE9、vA20、および精製6His-mD4またはインビトロ翻訳されたvD4のいずれかを用いてのDNA合成のためのテンプレートとして使用した。新しく合成されたDNA産物を、1.3%アルカリ性アガロースゲル上で分画し、オートラジオグラフィによって視覚化した(右)。6His-mD4依存的混合三つ組(レーン2)は、陽性対照としてのVV三つ組(レーン3)と同じく、7,249ヌクレオチドの全長M13 DNAを合成することができた。
（図５）化合物10はmD4に結合し、mD4依存的プロセッシブDNA合成を阻害する。(A)化合物10の分子式(上部)。化合物10の存在下での6His-mD4のサーマルシフト(下部)。サーマルシフト(ΔTm)とは、DMSOモック処理と化合物10との差である。化合物10の濃度が10μM(ΔTm: 2.2±SD 0.2℃)から40μM(ΔTm: 3.3±SD 0.3℃)へ上昇するにつれて、6His-mD4のサーマルシフトが増加していることに注意されたい。データは2つの独立した実験から得られた。(B)化合物10によるmD4依存的プロセッシブDNA合成の阻害。ラピッドプレートアッセイを使用し、漸増濃度の化合物10の存在下で精製6His-mD4ならびにインビトロ翻訳されたvA20およびvE9によって行われたDNA合成を定量した。2つの独立したアッセイから、化合物10のIC50＝28μMであった。
（図６）MCVのmD4を含有するワクシニアハイブリッドウイルスの構築。(A)mD4-VVハイブリッドウイルスの構築物の図。出発VVは、vD4が欠失している(VVDD4R)。vD4隣接配列を有するクローニングされたmD4を、天然vD4遺伝子が欠失しているVVΔD4Rに感染したRK-D4Rヘルパー細胞中へトランスフェクトした。mD4-VVハイブリッドウイルスを相同組換えによって得、プラーク精製し、mD4挿入物をDNA配列決定によって確認した。対照として、vD4プラスミドを使用することによって、vD4-VVレスキューウイルスを同様に作製した。Fと表示されたボックスは、vD4隣接配列である。(B)mD4-VVおよびvD4-VVの増殖曲線。BSC-1細胞をmD4-VVおよびvD4-VVウイルスに感染させた(MOI約0.05 pfu/細胞)。記載の時点で、培地および細胞を採取し、ウイルス力価を決定した。
（図７）化合物10はmD4-VVハイブリッドウイルス複製を阻害する。(A)プラーク減少アッセイ。コンフルエントなBSC-1細胞を、漸増濃度の化合物10の存在下でmD4-VVハイブリッドウイルスまたはvD4-VVレスキューウイルスに感染させた(80 pfu/ウェル)。16時間後、細胞をクリスタルバイオレットで染色し、プラークをカウントした。2つの独立した実験から得られた化合物10の平均EC50は、mD4-VVおよびvD4-VVについて、それぞれ14±SD 1 μMおよび11±SD 1μMである。(B)ドットブロットハイブリダイゼーション。コンフルエントなBSC-1細胞を、65μM 化合物10の非存在または存在下で、mD4-VVまたはvD4-VVに感染させた(約1 MOI)。細胞を記載の時点で採取し、ウイルスゲノムDNAを抽出した。次いで、32P標識vA20 DNAをプローブとして使用して、ドットブロットハイブリダイゼーションを行った。相対的なウイルスDNAレベルを各パネル下に示す。無しは感染無しを表す。
（図８）MCVゲノム上のD4、A20およびE9遺伝子の場所。MCVゲノム上のmD4およびmA20プロセッシビティー因子ならびにmE9 DNAポリメラーゼについての方向(矢印)およびヌクレオチドコード領域の場所(数字)を示す。
（図９）(A)mD4およびvD4のアラインメント。同一のアミノ酸には影が付けられている。欠落したアミノ酸はダッシュによって示されている。vD4のC末端残基167〜180および191〜206(下線付き)がvA20との相互作用のために重要である。(B)vD4結晶構造上へのmD4予想構造の重ね合わせ。SWISS-MODELを使用してホモロジーモデリングによって、mD4構造を作製した。
（図１０）SPRによって決定された、mD4への下記化合物2
2017531631.tif 000007
の結合。mD4を約3500 RUでバイオセンサーチップ上に固定し、1% DMSOを含む緩衝液中0〜250μMで化合物2を注入した。化合物2濃度に対する定常状態応答(Req)のプロットおよび1:1結合モデルへのフィッティングから、結合親和性KDを決定した。
（図１１）3-Dヒト皮膚器官培養物。
（図１２）染色された3-Dヒト皮膚器官培養物。
（図１３）化合物2は3-Dヒト皮膚器官培養物中のmD4-VVウイルス感染症をブロックする。
（図１４）図14A〜C。組織学的分析は化合物2による3-Dヒト皮膚器官培養物の保護を示す。図14A：非感染でありかつDMSO(薬物無し)で処理された3-D培養物；図14B：mD4-VVに感染したが薬物で処理されなかった3-D培養物；および図14C：mD4-VVに感染しかつ化合物2で処理された3-D培養物。
（図１５）化合物1〜14についてのmD4-VVプラークアッセイ結果。
【００１５】
説明の容易さおよび明瞭さのために、図中に示される要素は必ずしも一定の縮尺で描かれていないことが認識されるだろう。例えば、要素の一部の寸法は明瞭さのために他の要素と比べて誇張されている場合がある。さらに、適切であると考えられる場合、対応するまたは類似の要素を示すために図の間で参照番号は繰り返されてもよい。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
発明の詳細な説明
以下の詳細な説明において、本発明の完全な理解を提供するために、多数の具体的な詳細を記載する。しかしながら、本発明はこれらの具体的な詳細を用いないで実施され得ることが、当業者によって理解されるだろう。他の場合において、本発明を不明瞭にしないように、周知の方法、手順、および構成要素は詳細に記載されていない。
【００１７】
本発明は、いくつかの態様において、式(IX)の化合物またはその薬学的に許容される塩に関し、
2017531631.tif 000008
式中、
A、Z、およびYはアリールまたはヘテロアリールであり、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルで各々置換されていてもよく；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；かつ
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００１８】
いくつかの態様において、化合物は、式(X)の化合物であり、
2017531631.tif 000009
式中、
Yは、ヘテロアリールであり；かつ
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００１９】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、各々独立して、Hまたはハロである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、Hである。
【００２０】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つは、ハロである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、およびR5のうちの1つはハロであり、かつ、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つはハロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である。
【００２１】
いくつかの態様において、Yは、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジン、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである。他の態様において、Yは、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジンである。ある態様において、Yは、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである。
【００２２】
いくつかの態様において、化合物は、式(XI)の化合物
2017531631.tif 000010
である。
【００２３】
いくつかの態様において、化合物は、式(XII)の化合物であり、
2017531631.tif 000011
式中、
Yは、ヘテロアリールであり；かつ
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００２４】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、各々独立して、Hまたはハロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、Hである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9のうちの1つは、ハロである。
【００２５】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、およびR5のうちの1つはハロであり、かつ、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つはハロである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である。
【００２６】
いくつかの態様において、Yは、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジン、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである。他の態様において、Yは、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジンである。ある態様において、Yは、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである。
【００２７】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(XIII)の化合物であり、
2017531631.tif 000012
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され、または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；かつ、式中、R16がORaである場合、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの1つはHではない。
【００２８】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。
【００２９】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16のうちの1つは、ハロである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、OH、CF3、またはSO2NH2でる。ある態様において、R16がORaである場合、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの2つはHではない。
【００３０】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(I)の化合物であり、
2017531631.tif 000013
式中、
R15は、H、C1-C5アルキル、C(O)Ra、C(O)NRmRnであり；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；かつ、式中、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも1つは、Hではない。
【００３１】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも2つは、Hではない。
【００３２】
いくつかの態様において、R15はH、C1-C5アルキルである。
【００３３】
いくつかの態様において、R15はHである。
【００３４】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの1つは、ハロである。
【００３５】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(II)の化合物
2017531631.tif 000014
である。
【００３６】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(XIV)の化合物であり、
2017531631.tif 000015
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキルであり；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００３７】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、Hまたはハロである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、Hである。
【００３８】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16のうちの1つは、ハロである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、SO2NH2、アリール、またはヘテロアリールである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である。
【００３９】
いくつかの態様において、R14はHまたはC1-C3アルキルである。他の態様において、R14はHである。
【００４０】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、以下である：
5-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(4-クロロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(2-クロロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(4-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[(2-ベンジルオキシ-5-ブロモ-フェニル)メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[5-クロロ-2-[(2-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
N-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-アミン、
4-[[5-ブロモ-2-[(4-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシ-5-クロロ-フェニル)メチルアミノ]ベンゼンスルホンアミド、
4-[[2-[(3-ニトロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
2-[[2-[(3-ニトロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]-3-フルオロ-フェノール、または
N-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチル]-4-オキサゾール-5-イル-アニリン。
【００４１】
本発明は、いくつかの態様において、式(I)の化合物に関し、
2017531631.tif 000016
式中、
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
R15は、H、C1-C5アルキル、C(O)Ra、C(O)NRmRnであり；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
式中、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも1つは、水素ではない。
【００４２】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも2つは、水素ではない。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも3つは、水素ではない。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの3つ超は、水素ではない。
【００４３】
いくつかの態様において、R14はHまたはC1-C3アルキルである。
【００４４】
いくつかの態様において、R15はH、C1-C5アルキルである。
【００４５】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、HまたはC1-C6アルキルである。いくつかの態様において、アルキルはCH3である。
【００４６】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、H、C1-C6アルキル(例えば、CH3)、ハロ、およびC1-C6アルコキシ(例えば、OCH3)からなる群より選択される。
【００４７】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、H、CH3、およびクロロからなる群より選択される。
【００４８】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、Hまたはハロである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの1つは、ハロ、例えば、フルオロ、クロロ、またはブロモである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの2つは、ハロ、例えばフルオロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの2つは、クロロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの3つは、ハロである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの3つは、クロロである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの3つ超は、ハロである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの3つ超は、クロロである。
【００４９】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(II) またはその薬学的に許容される塩を有し得、
2017531631.tif 000017
式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【００５０】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(III) またはその薬学的に許容される塩を有し得、
2017531631.tif 000018
式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【００５１】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(IV) またはその薬学的に許容される塩を有し得、
2017531631.tif 000019
式中、変数R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【００５２】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(V) またはその薬学的に許容される塩を有し得、
2017531631.tif 000020
式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【００５３】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(VI) またはその薬学的に許容される塩を有し得、
2017531631.tif 000021
式中、変数R6、R7、R8、およびR9は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【００５４】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(VII) またはその薬学的に許容される塩を有し得、
2017531631.tif 000022
式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【００５５】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、式(VIII) またはその薬学的に許容される塩を有し得、
2017531631.tif 000023
式中、変数R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【００５６】
本明細書中の様々な箇所で、本発明の化合物の置換基は群または範囲で開示される。本発明は、そのような群および範囲のメンバーの各々および全ての個々の部分組み合わせを含むことが、具体的に意図される。例えば、用語「C1-C6アルキル」は、メチル、エチル、C3アルキル、C4アルキル、C5アルキル、およびC6アルキルを個々に開示するように具体的に意図される。
【００５７】
本明細書において使用される場合、用語「アルキル」は、直鎖または分岐鎖である飽和炭化水素基を指す。アルキル基の例としては、メチル(Me)、エチル(Et)、プロピル(例えば、n-プロピルおよびイソプロピル)、ブチル(例えば、n-ブチル、イソブチル、t-ブチル)、ペンチル(例えば、n-ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル)などが挙げられる。
【００５８】
本明細書において使用される場合、「アルケニル」は、1つまたは複数の炭素-炭素二重結合を有するアルキル基を指す。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペニルなどが挙げられる。
【００５９】
本明細書において使用される場合、「アルキニル」は、1つまたは複数の炭素-炭素三重結合を有するアルキル基を指す。アルキニル基の例としては、エチニル、プロピニルなどが挙げられる。
【００６０】
本明細書において使用される場合、「シクロアルキル」は、環化されたアルキル、アルケニル、およびアルキニル基を含む非芳香族炭素環を指す。シクロアルキル基は、スピロ環を含む、単環式または多環式(例えば、2、3または4個の縮合環を有する)環系を含み得る。いくつかの態様において、シクロアルキル基は、3〜約20個の炭素原子、3〜約14個の炭素原子、3〜約10個の炭素原子、または3〜7個の炭素原子を有し得る。シクロアルキル基は、0、1、2、もしくは3個の二重結合および／または0、1、もしくは2個の三重結合をさらに有し得る。シクロアルキルの定義中にさらに含まれるのは、シクロアルキル環へ縮合された(即ちシクロアルキル環と共通の結合を有する)1つまたは複数の芳香環を有する部分、例えば、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサンなどのベンゾ誘導体である。1つまたは複数の縮合芳香環を有するシクロアルキル基は、芳香族部分または非芳香族部分のいずれかを介して結合される。シクロアルキル基の1つまたは複数の環形成炭素原子は、酸化され得、例えば、オキソまたはスルフィド置換基を有する。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプタトリエニル、ノルボルニル、ノルピニル、ノルカルニル、アダマンチルなどが挙げられる。
【００６１】
本明細書において使用される場合、「シクロアルキルアルキル」は、シクロアルキル基によって置換されたアルキル基を指す。シクロアルキルアルキル基の例としては、シクロプロピルアルキル、シクロヘキシルアルキルなどが挙げられる。
【００６２】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクロアルキル」は、環形成原子の1つまたは複数がO、N、またはS原子などのヘテロ原子であり得る、非芳香族ヘテロ環を指す。ヘテロシクロアルキル基は、単環式または多環式(例えば、2、3または4個の縮合環を有する)環系ならびにスピロ環を含み得る。ヘテロシクロアルキル基の例としては、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、2,3-ジヒドロベンゾフリル、1,3-ベンゾジオキソール、ベンゾ-1,4-ジオキサン、ピペリジニル、ピロリジニル、イソオキサゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニルなどが挙げられる。ヘテロシクロアルキルの定義中にさらに含まれるのは、非芳香族複素環へ縮合された(即ち、非芳香族複素環とく共通の結合を有する)1つまたは複数の芳香環を有する部分、例えば、フタルイミジル、ナフタルイミジル、およびヘテロ環のベンゾ誘導体であり得る。1つまたは複数の縮合芳香環を有するヘテロシクロアルキル基は、芳香族部分または非芳香族部分のいずれかを介して結合される。ヘテロシクロアルキルの定義中にさらに含まれるのは、1つまたは複数の環形成原子が1または2個のオキソまたはスルフィド基によって置換され得る部分であり得る。いくつかの態様において、ヘテロシクロアルキル基は、1〜約20個の炭素原子、さらなる態様において約3〜約20個の炭素原子を有する。いくつかの態様において、ヘテロシクロアルキル基は、3〜約20個、3〜約14個、3〜約7個、または5〜6個の環形成原子を含有する。いくつかの態様において、ヘテロシクロアルキル基は、1〜約4個、1〜約3個、または1〜2個のヘテロ原子を有する。いくつかの態様において、ヘテロシクロアルキル基は0〜3個の二重結合を含有する。いくつかの態様において、ヘテロシクロアルキル基は0〜2個の三重結合を含有する。
【００６３】
本明細書において使用される場合、「ヘテロシクロアルキルアルキル」は、ヘテロシクロアルキル基によって置換されたアルキル基を指す。ヘテロシクロアルキルアルキル基の例としては、モルホリノアルキルおよびピペラジニルアルキルなどが挙げられる。
【００６４】
本明細書において使用される場合、「アリール」は、単環式または多環式(例えば、2、3または4個の縮合環を有する)芳香族炭化水素、例えば、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニルなどを指す。いくつかの態様において、アリール基は6〜約20個の炭素原子を有する。
【００６５】
本明細書において使用される場合、「アリールアルキル」は、アリール基によって置換されたアルキル基を指す。アリールアルキル基の例としては、ベンジルおよびフェニルエチルが挙げられる。
【００６６】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリール」基は、硫黄、酸素、または窒素などの少なくとも1つのヘテロ原子環員を有する芳香族ヘテロ環を指す。ヘテロアリール基は、単環式および多環式(例えば、2、3または4個の縮合環を有する)系を含む。ヘテロアリール基中の任意の環形成N原子はまた、酸化され、N-オキソ部分を形成し得る。ヘテロアリール基の例としては、非限定的に、ピリジル、N-オキソピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、フリル、キノリル、イソキノリル、チエニル、イミダゾリル、チアゾリル、インドリル、ピリル、オキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、インダゾリル、1,2,4-チアジアゾリル、イソチアゾリル、ベンゾチエニル、プリニル、カルバゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリニルなどが挙げられる。いくつかの態様において、ヘテロアリール基は、1〜約20個の炭素原子、さらなる態様において約3〜約20個の炭素原子を有する。いくつかの態様において、ヘテロアリール基は、3〜約14個、3〜約7個、または5〜6個の環形成原子を含有する。いくつかの態様において、ヘテロアリール基は、1〜約4個、1〜約3個、または1〜2個のヘテロ原子を有する。
【００６７】
本明細書において使用される場合、「ヘテロアリールアルキル」基は、ヘテロアリール基によって置換されたアルキル基を指す。ヘテロアリールアルキル基の例はピリジルメチルである。
【００６８】
本明細書において使用される場合、「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを含む。
【００６９】
本明細書において使用される場合、「ハロアルキル」は、1つまたは複数のハロゲン原子によって置換されたアルキル基を指す。ハロアルキル基の例としては、CF3、C2F5、CHF2、CCl3、CHCl2、C2Cl5などが挙げられる。
【００７０】
本発明の化合物は、好適なハロゲン化アルキルでのフェノール基のアルキル化、続いての5-アミノベンゾイミダゾロンでの還元的アミノ化によって、サリチルアルデヒドから簡単に作製することができる(スキーム1)。
【００７１】
スキーム1は、本発明の化合物の作製において使用された合成法を示す。
2017531631.tif 000024
【００７２】
アリールアミン基のバリエーションを含む本発明の化合物は、アニリンを用いての、2-ベンジルオキシベンズアルデヒド（2-benzyloxybenzaldehye）、または他の適切に官能化されたベンズアルデヒドの還元的アミノ化反応によって得ることができる。アニリンの代わりに複素環式アミン(アミノピリジンなど)を使用すること、例えば、同じ合成プロセスを使用して、アニリンをベンジルアミン、フェネチルアミン、または他のアルキルアミンと交換することは、複素環式部分を有する本発明の化合物をもたらし得る。
【００７３】
ピリジンに基づく化合物などの、変数Zによって示される、異なる中心環を有する本発明の化合物は、2-クロロ-3-ホルミルピリジンから出発することによって作製することができ、化合物2のピリジンに基づくアナログ（ここで、X=OまたはNである）がアクセス可能である。アミン(X=Nの場合)またはアルコキシド(X=Oの場合)との反応に続く還元的アミノ化という順序は、ピリジン含有アナログのライブラリーへの容易なアクセスを提供し得る(スキーム2)。
2017531631.tif 000025
【００７４】
あるいは、可溶化基を導入する、水素結合受容体／供与体を付加する、親油性を調節するなどのために式(IX)の化合物の中心環を官能化する場合、サリチルアルデヒドの臭素化誘導体を、記載した合成経路において出発材料として使用し、臭素化中間体を提供することができる。次いで、臭素原子は、アリール化、アミノ化、およびアミノカルボニル化を含む、標準パラジウム触媒反応を介してのさらなる官能化のための手段として役立ち得、式(IX)の化合物、例えば、化合物2の芳香族、ヘテロ芳香族、アミノ、およびアミド誘導体を提供し、目標とされたより高い分子量を有する化合物へのアクセスを可能にする。
【００７５】
本発明はまた、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容される塩を含む。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容される塩」は、存在する酸または塩基部分をその塩形態へ変換させることによって親化合物が修飾されている、開示される化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例としては、アミンなどの塩基性基の鉱酸塩または有機酸塩；カルボン酸などの酸性基のアルカリ塩または有機塩などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の薬学的に許容される塩としては、例えば、非毒性無機酸または有機酸から形成される、親化合物の従来の非毒性塩が挙げられる。本発明の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成される。一般に、そのような塩は、水中もしくは有機溶媒中、またはこれら2つの混合物中において、これらの化合物の遊離酸または塩基形態と、化学量論量の適切な塩基または酸とを反応させることによって作製され得；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が、好ましい。好適な塩のリストは、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418およびJournal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977)において見られ得、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
【００７６】
好適な無機酸の例としては、塩化水素酸、硫酸、リン酸、または臭化水素酸が挙げられ、一方、好適な有機酸の例としては、カルボン酸、スルホ酸（sulpho acid）、またはスルホン酸、例えば、酢酸、酒石酸、乳酸、プロピオン酸、グリコール酸、マロン酸、マレイン酸、フマル酸、タンニン酸 、コハク酸、アルギン酸、安息香酸、2-フェノキシ安息香酸、2-アセトキシ安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、クエン酸、マレイン酸、サリチル酸、3-アミノサリチル酸、アスコルビン酸、エンボン酸、ニコチン酸、イソニコチン酸、シュウ酸、グルコン酸、アミノ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、2-ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン-1,2-ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、4-メチルベンゼンスルホン酸またはナフタレン-2-スルホン酸が挙げられ得る。好適な無機塩基の例としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムおよびアンモニアが挙げられ得、一方、好適な有機塩基の例は、アミン、例えば、第三級アミン、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、N,N-ジメチルアニリン、キノリン、イソキノリン、α-ピコリン、β-ピコリン、γ-ピコリン、キナルジン、またはピリミジンである。
【００７７】
本明細書において使用される場合、句「薬学的に許容される」は、正しい医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わずに、ヒトおよび動物の組織と接触しての使用に適し、妥当なベネフィット／リスク比に見合い得る、化合物、材料、組成物および／または投薬形態を指すために本明細書において用いられる。
【００７８】
いくつかの態様において、本発明の化合物、例えば、式(I)の化合物、式(II)の化合物、式(III)の化合物、式(IV)の化合物、式(V)の化合物、式(VI)の化合物、式(VII)の化合物、または式(VIII)の化合物は、脂質またはその誘導体もしくはアナログへ連結され得る。脂質またはその誘導体もしくはアナログの存在は、生体膜の破壊を促進し、本発明の化合物の細胞内送達を容易にし得る。脂質としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：(1)非荷電脂質成分、例えば、コレステロール、セラミド、ジアシルグリセロール、アシル(ポリエーテル)またはアルキルポリ(エーテル)；(2)中性リン脂質、例えば、ジアシルホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、およびジアシルホスファチジルエタノールアミン、(3)アニオン性脂質、例えば、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジルグリセロール、ジアシルホスファチダート、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルイノシトール、ジアシルグリセロールヘミスクシナート、ジアシルグリセロールヘミグルラタート（diaclyglycerolhemigluratate）、コレステリルヘミスクシナート、コレステリルヘミグルタラートなど；(4)ポリマーコンジュゲート脂質、例えば、N-[メトキシ-(ポリ(エチレングリコール)ジアシルホスファチジルエタノールアミン、ポリ(エチレングリコール)-ジアシルグリセロール、ポリ(エチレングリコール)-セラミド；および(5)カチオン性脂質、例えば、1,2,-ジアシル-3-トリメチルアンモニウム-プロパン(DOTAP)、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド(DDAB)、および1,2-ジアシル-sn-グリセロ-3-エチルホスホコリン。
【００７９】
本発明は、さらに、その必要がある対象において伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法を提供し、方法は、治療有効量の式(IX)の化合物またはその薬学的に許容される塩を該対象へ投与する工程を含み、
2017531631.tif 000026
式中、
A、Z、およびYはアリールまたはヘテロアリールであり、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、もしくはヘテロアリールアルキルで各々置換されていてもよく；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成し；
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；かつ
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００８０】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(X)の化合物であり、
2017531631.tif 000027
式中、
Yは、ヘテロアリールであり；かつ
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００８１】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、各々独立して、Hまたはハロである。
【００８２】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、Hである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つは、ハロである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、およびR5のうちの1つはハロであり、かつ、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つはハロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である。
【００８３】
いくつかの態様において、Yは、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジン、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである。他の態様において、Yは、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジンである。ある態様において、Yは、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである。
【００８４】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(XI)の化合物
2017531631.tif 000028
である。
【００８５】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(XII)の化合物であり、
2017531631.tif 000029
式中、
Yは、ヘテロアリールであり；かつ
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００８６】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、各々独立して、Hまたはハロである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、Hである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9のうちの1つは、ハロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、およびR5のうちの1つはハロであり、かつ、R6、R7、R8、およびR9のうちの1つはハロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、およびR9は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である。
【００８７】
いくつかの態様において、Yは、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジン、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである。他の態様において、Yは、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、インドール、インドリジンである。ある態様において、Yは、ベンゾイミダゾール、1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、またはインダゾールである。
【００８８】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(XIII)の化合物であり、
2017531631.tif 000030
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００８９】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16のうちの1つは、ハロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、OH、CF3、またはSO2NH2である。いくつかの態様において、R16がORaである場合、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの2つはHではない。
【００９０】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(I)の化合物であり、
2017531631.tif 000031
式中、
R15は、H、C1-C5アルキル、C(O)Ra、C(O)NRmRnであり；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００９１】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも2つは、Hではない。
【００９２】
いくつかの態様において、R15はH、C1-C5アルキルである。
【００９３】
いくつかの態様において、R15はHである。
【００９４】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの1つは、ハロである。
【００９５】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(II)の化合物
2017531631.tif 000032
である。
【００９６】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(XIV)の化合物であり、
2017531631.tif 000033
式中、
R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキルであり；または2つの隣接するORaもしくはNRmRn基は、それらが結合されている原子と一緒に、5〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【００９７】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、ORa、C1-C6ハロアルキル、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、またはヘテロアリールである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、Hまたはハロである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、Hである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16のうちの1つは、ハロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、SO2NH2、アリール、またはヘテロアリールである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、およびR16は、各々独立して、H、ハロ、シアノ、ニトロ、CF3、またはSO2NH2である。
【００９８】
いくつかの態様において、R14はHまたはC1-C3アルキルである。いくつかの態様において、R14はHである。
【００９９】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、以下である：
5-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(4-クロロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(2-クロロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[2-[(4-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[(2-ベンジルオキシ-5-ブロモ-フェニル)メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
5-[[5-クロロ-2-[(2-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]-1,3-ジヒドロベンゾイミダゾール-2-オン、
N-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチル]-1H-インダゾール-5-アミン、
4-[[5-ブロモ-2-[(4-フルオロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシ-5-クロロ-フェニル)メチルアミノ]ベンゼンスルホンアミド、
4-[[2-[(3-ニトロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
2-[[2-[(3-ニトロフェニル)メトキシ]フェニル]メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]フェノール、
4-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチルアミノ]-3-フルオロ-フェノール、または
N-[(2-ベンジルオキシフェニル)メチル]-4-オキサゾール-5-イル-アニリン。
【０１００】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、DNAポリメラーゼとプロセッシビティー因子との相互作用を低減、阻害、または抑止する。
【０１０１】
本発明は、その必要がある対象においてポックスウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法を提供し、方法は、治療有効量の式(I)の化合物を該対象へ投与する工程を含み、
2017531631.tif 000034
式中、
R14は、H、C1-C3アルキル、C(O)ORa、C(O)Rb、C(O)NRmRn、SORb、またはSO2Rbであり；
R15は、H、C1-C5アルキル、C(O)Ra、C(O)NRmRnであり；
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、独立して、H、C1-C6アルキル、ハロ、シアノ、ニトロ、C1-C6ハロアルキル、ORa、SRa、NRmRn、NRaCORb、SORb、SO2Rb、CORb、COORa、アリール、ヘテロアリール、C3-C7シクロアルキル、3〜7員のヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RaおよびRbは、各々独立して、H、C1-6アルキル、C1-6ハロアルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；
RmおよびRnは、独立して、H、C1-C6アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、およびヘテロアリールアルキルからなる群より選択され；またはRmおよびRnは、それらが結合されている窒素原子と一緒に、3〜7員のヘテロシクロアルキル基を形成する。
【０１０２】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(II) またはその薬学的に許容される塩を有し得
2017531631.tif 000035
式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【０１０３】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(III) またはその薬学的に許容される塩を有し得
2017531631.tif 000036
式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【０１０４】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(IV) またはその薬学的に許容される塩を有し得
2017531631.tif 000037
式中、変数R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【０１０５】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(V) またはその薬学的に許容される塩を有し得
2017531631.tif 000038
式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【０１０６】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(VI) またはその薬学的に許容される塩を有し得
2017531631.tif 000039
式中、変数R6、R7、R8、およびR9は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【０１０７】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(VII) またはその薬学的に許容される塩を有し得
2017531631.tif 000040
式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【０１０８】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、式(VIII) またはその薬学的に許容される塩を有し得
2017531631.tif 000041
式中、変数R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである。
【０１０９】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも1つは、水素ではない。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも2つは、水素ではない。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの少なくとも3つは、水素ではない。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15のうちの3つ超は、水素ではない。
【０１１０】
いくつかの態様において、R14はHまたはC1-C3アルキルである。
【０１１１】
いくつかの態様において、R15はH、C1-C5アルキルである。
【０１１２】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、HまたはC1-C6アルキルである。いくつかの態様において、アルキルはCH3である。
【０１１３】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、H、C1-C6アルキル(例えば、CH3)、ハロ、およびC1-C6アルコキシ(例えば、OCH3)からなる群より選択される。
【０１１４】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、H、CH3、およびクロロからなる群より選択される。
【０１１５】
いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は、各々独立して、Hまたはハロである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの1つは、ハロ、例えば、フルオロ、クロロ、またはブロモである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの2つは、ハロ、例えばフルオロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの2つは、クロロである。いくつかの態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの3つは、ハロである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの3つは、クロロである。他の態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの3つ超は、ハロである。ある態様において、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13のうちの3つ超は、クロロである。
【０１１６】
いくつかの態様において、本発明の方法のための化合物は、以下に示される(4-({[2-(ベンジルオキシ)フェニル]メチル}アミノ)フェノール)(化合物10)である。
2017531631.tif 000042
【０１１７】
いくつかの態様において、対象においてポックスウイルス感染症を阻害するステップは、前記伝染性軟属腫ウイルスのDNA合成を阻害するステップを含み得る。
【０１１８】
いくつかの態様において、DNAポリメラーゼはE9 DNAポリメラーゼである。
【０１１９】
いくつかの態様において、化合物は、前記DNAポリメラーゼとプロセッシビティー因子との相互作用を低減、阻害、または抑止し得る。いくつかの態様において、プロセッシビティー因子はA20またはD4Rプロセッシビティー因子である。
【０１２０】
いくつかの態様において、対象はヒトである。
【０１２１】
対象においてポックスウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法は、有効量の本発明の化合物を前記対象へ投与するステップを含む。用語「有効量」または「治療有効量」は、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって組織、系、動物、個体またはヒトにおいて求められている生物学的または薬効的応答を誘発する活性化合物または薬学的薬剤の量を指す。
【０１２２】
ある態様において、伝染性軟属腫ウイルスの複製を阻害する方法は、そのDNAを阻害する方法を含む。ある態様において、DNA複製の阻害は、DNAポリメラーゼタンパク質の活性を阻害することによって達成される。ある態様において、DNAポリメラーゼタンパク質活性の阻害は、DNAポリメラーゼのプロセッシビティーを低減することを含む。
【０１２３】
ある態様において、本明細書に記載されるような化合物を、細胞または組織培養物を含む培地と適合性の緩衝液中に可溶化させる。別の態様において、本明細書に記載されるような化合物を、細胞または組織培養物を含む培地中に可溶化させる。ある態様において、本明細書に記載されるような化合物を、当業者に公知の方法によって懸濁させるかまたはそうでなければ乳化させる。
【０１２４】
ある態様において、本発明は、本発明の化合物を動物および／または対象へ投与する工程を含む、動物および／または対象において伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害する方法を提供する。
【０１２５】
いくつかの態様において、本明細書に記載されるような方法において用いられる本発明の化合物は、伝染性軟属腫ウイルスに対して約30 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、IC50は約100 nMである。他の態様において、IC50は約200 nMである。
【０１２６】
いくつかの態様において、本明細書に記載されるような方法において用いられる本発明の化合物は、伝染性軟属腫ウイルスに対して約10,000 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は約5,000 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は約1,000 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は約750 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は約500 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は約250 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は約200 nM以下のIC50を有し得る。他の態様において、本発明の化合物は約175 nM以下のIC50を有し得る。他の態様において、本発明の化合物は150 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は約125 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は約100 nM以下のIC50を有し得る。ある態様において、本発明の化合物は約75 nM以下のIC50を有し得る。他の態様において、本発明の化合物は約50 nM以下のIC50を有し得る。ある態様において、本発明の化合物は約30 nM以下のIC50を有し得る。他の態様において、本発明の化合物は約20 nM以下のIC50を有し得る。
【０１２７】
いくつかの態様において、本明細書に記載されるような方法において用いられる本発明の化合物は、伝染性軟属腫ウイルスに対して約40 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本明細書に記載されるような方法において用いられる本発明の化合物は、ポックスウイルスに対して約50 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本明細書に記載されるような方法において用いられる本発明の化合物は、ポックスウイルスに対して約200 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本明細書に記載されるような方法において用いられる本発明の化合物は、ポックスウイルスに対して約250 nMのIC50を有し得る。
【０１２８】
いくつかの態様において、本明細書に記載されるような方法において用いられる本発明の化合物は、伝染性軟属腫ウイルスに対して約100,000 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約75,000 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約50,000 nM以下の抗ウイルスIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約25,000 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約10,000 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約7,500 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約5,000 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約2,500 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約1,000 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約750 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約500 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約250 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約225 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約200 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約150 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約125 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約100 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約75 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約50 nM以下のIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約40 nM以下のIC50を有し得る。
【０１２９】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、伝染性軟属腫ウイルスに対して約20 nM〜約1,000 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約750 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約500 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約250 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約225 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約200 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約150 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約125 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約100 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約75 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20 nM〜約50 nMのIC50を有し得る。
【０１３０】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、伝染性軟属腫ウイルスに対して約30 nM〜約1,000 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約750 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約500 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約250 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約225 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約200 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約150 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約125 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約100 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約75 nMのIC50を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約30 nM〜約50 nMのIC50を有し得る。
【０１３１】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、約120の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約150の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約370の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約570の選択指数(SI)を有し得る。
【０１３２】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、約10以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約50以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約100以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約150以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約200以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約250以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約300以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約350以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約400以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約450以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約500以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約600以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約700以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約800以上の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約900以上の選択指数(SI)を有し得る。
【０１３３】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、約50〜約600の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約100〜約600の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約150〜約600の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約200〜約600の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約250〜約600の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約300〜約600の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約350〜約600の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約400〜約600の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約450〜約600の選択指数(SI)を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約500〜約600の選択指数(SI)を有し得る。
【０１３４】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、約15の結合効率指数(BEI)を有し得る。他の態様において、本発明の化合物は、約17の結合効率指数を有し得る。他の態様において、本発明の化合物は、約18の結合効率指数を有し得る。他の態様において、本発明の化合物は、約19の結合効率指数を有し得る。他の態様において、本発明の化合物は、約20の結合効率指数を有し得る。
【０１３５】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、約10以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約12以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約14以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約15以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約16以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約17以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約18以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約19以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約20以上の結合効率指数を有し得る。他の態様において、本発明の化合物は、約21以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約22以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約23以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約24以上の結合効率指数を有し得る。いくつかの態様において、本発明の化合物は、約25以上の結合効率指数を有し得る。
【０１３６】
本発明は、伝染性軟属腫ウイルスを本発明の化合物と接触させる工程を含む、その必要がある対象において伝染性軟属腫ウイルス感染症を阻害、治療、または抑止する方法；伝染性軟属腫ウイルスの複製を阻害する方法；伝染性軟属腫ウイルスDNAポリメラーゼの活性を阻害する方法；および伝染性軟属腫ウイルスDNAポリメラーゼのプロセッシビティーを低下させる方法を提供する。
【０１３７】
ある態様において、本発明は、本発明の化合物を動物および／または対象へ投与する工程を含む、動物および／または対象において伝染性軟属腫ウイルス感染症を治療する方法を提供する。
【０１３８】
ある態様において、本発明は、本発明の化合物を動物および／または対象へ投与する工程を含む、動物および／または対象において伝染性軟属腫ウイルス感染症を抑止する方法を提供する。いくつかの態様において、本発明の化合物を対象へ投与する工程は、化合物を対象へ局所投与することによって行われる。
【０１３９】
本発明はさらに、本明細書に記載される本発明の化合物、例えば、式(I)〜(XIV)の化合物またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４０】
本発明は、いくつかの態様において、式(I)の化合物（式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR15は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４１】
いくつかの態様において、本発明は、式(II)の化合物（式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４２】
いくつかの態様において、本発明は、式(III)の化合物（式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４３】
いくつかの態様において、本発明は、式(IV)の化合物（式中、変数R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４４】
本発明は、いくつかの態様において、式(V)の化合物（式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４５】
いくつかの態様において、本発明は、式(VI)の化合物（式中、変数R6、R7、R8、およびR9は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４６】
いくつかの態様において、本発明は、式(VII)の化合物（式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、およびR6は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４７】
いくつかの態様において、本発明は、式(VIII)の化合物（式中、変数R10、R11、R12、およびR13は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４８】
いくつかの態様において、本発明は、式(IX)の化合物（式中、変数A、Z、Y、およびR14は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１４９】
いくつかの態様において、本発明は、式(X)の化合物（式中、変数Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、およびR14は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１５０】
いくつかの態様において、本発明は、式(XI)の化合物（式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、およびR9は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１５１】
いくつかの態様において、本発明は、式(XII)の化合物（式中、変数Y、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、およびR14は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１５２】
いくつかの態様において、本発明は、式(XIII)の化合物（式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR16は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１５３】
いくつかの態様において、本発明は、式(XIV)の化合物（式中、変数R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13、R14、およびR16は本明細書中の任意の箇所で定義される通りである）またはその薬学的に許容される塩と少なくとも1つの薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。
【０１５４】
いくつかの態様において、本発明の化合物を薬学的投薬形態へ製剤化する。ある態様において、薬学的投薬形態は、製薬産業において公知であるように、薬学的に許容される担体、賦形剤、皮膚軟化剤、安定剤などをさらに含む。ある態様において、薬学的投薬形態を局所投与用に製剤化する。いくつかの態様において、薬学的投薬形態は、免疫系調節剤のような他の活性薬剤を含む。別の態様において、示される有効成分の治療効果に直接関与しないが、安定化、保存、製剤化などのための他の化合物が含まれる。
【０１５５】
ある態様において、本明細書に記載されるような化合物を含有する薬学的組成物を、対象へ局所投与する。ある態様において、本明細書に記載されるような化合物を含有する薬学的組成物を、局所投与用に製剤化する。ある態様において、本明細書に記載されるような化合物を含有する薬学的組成物を、当業者に公知の任意の方法によって、例えば、非経口的に、癌近傍に（paracancerally）、経粘膜的に、経皮的に、筋肉内に、静脈内に、皮内に、皮下に、腹腔内に、脳室内に、頭蓋内に、膣内にまたは腫瘍内に、対象へ投与する。
【０１５６】
投薬量範囲の様々な態様が本発明によって意図される。一態様において、本明細書に記載されるような化合物の投薬量は0.1〜100 mg/日の範囲である。別の態様において、投薬量は0.1〜50 mg/日の範囲である。別の態様において、投薬量は0.1〜20 mg/日の範囲である。別の態様において、投薬量は0.1〜10 mg/日の範囲である。別の態様において、投薬量は0.1〜5 mg/日の範囲である。別の態様において、投薬量は0.5〜5 mg/日の範囲である。
【０１５７】
局所投与について、本発明の態様は、ローション、クリーム、シーラム、スプレー、エアロゾル、ケーキ、軟膏、エッセンス、ゲル、パスタ、パッチ、ペンシル、タオレット、マスク、スティック、フォーム、エリキシル、コンセントレートなどの形態で製剤化され得る。
【０１５８】
別の態様において、好ましいモードを経口投与する場合、単位投薬形態は、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、チュアブル錠、懸濁剤、乳剤などを含む。ある態様において、そのような単位投薬形態は、安全かつ有効な量の所望の化合物を含み、これらの各々は、別の態様において、約0.5もしくは10 mg〜約300 mg/70 kg、または別の態様において、約0.5もしくは10 mg〜約210 mg/70 kgである。ある態様において、経口投与用の単位投薬形態の調製に適した薬学的に許容される担体は、当技術分野において周知である。ある態様において、錠剤は、典型的に、不活性希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、マンニトール、ラクトースおよびセルロース；結合剤、例えば、デンプン、ゼラチンおよびスクロース；崩壊剤、例えば、デンプン、アルギン酸およびクロスカルメロース；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸およびタルクとして、従来の薬学的に適合性の補助剤を含む。ある態様において、滑剤、例えば、二酸化ケイ素は、粉末混合物の流動特徴を改善するために使用される。ある態様において、着色剤、例えば、FD&C色素は、外観のために添加される。ある態様において、甘味剤および矯味矯臭剤、例えば、アスパルテーム、サッカリン、メントール、ペパーミント、および果実フレーバーは、チュアブル錠についての有用な補助剤である。ある態様において、カプセル剤は、典型的に、上記に開示される1つまたは複数の固体希釈剤を含む。ある態様において、担体成分の選択は、味、費用および貯蔵安定性のような副次的考察事項に依存し、これらは本発明の目的について重要ではなく、当業者によって容易に行われる。
【０１５９】
ある態様において、経口組成物は、液体液剤、乳剤、懸濁剤などを含む。ある態様において、そのような組成物の調製に適した薬学的に許容される担体は、当技術分野において周知である。ある態様において、液体経口組成物は、ある態様において、所望の化合物を約0.012%〜約0.933%、または別の態様において、約0.033%〜約0.7%含む。
【０１６０】
別の態様において、投薬量は10〜20μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は20〜30μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は20〜40μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は30〜60μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は40〜80μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は50〜100μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は50〜150μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は100〜200μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は200〜300μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は300〜400μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は400〜600μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は500〜800μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は800〜1000μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は1000〜1500μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は1500〜2000μg/錠剤である。別の態様において、投薬量は2〜3 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は2〜5 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は2〜10 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は2〜20 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は2〜30 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は2〜50 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は2〜80 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は2〜100 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は3〜10 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は3〜20 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は3〜30 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は3〜50 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は3〜80 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は3〜100 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は5〜10 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は5〜20 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は5〜30 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は5〜50 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は5〜80 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は5〜100 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は10〜20 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は10〜30 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は10〜50 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は10〜80 mg/錠剤である。別の態様において、投薬量は10〜100 mg/錠剤である。
【０１６１】
いくつかの態様において、本発明の方法における使用のための組成物は、液剤または乳剤を含み、これは、別の態様において、安全かつ有効な量の本明細書に記載されるような化合物を、および、さらに別の態様において、他の化合物を含む、水性液剤または乳剤である。一態様において、そのような組成物は、本化合物を約0.01%〜約10.0% w/v、より好ましくは約0.1%〜約5.0含み、これは、別の態様において、当業者に公知の経路による化合物の全身送達のために使用される。
【０１６２】
ある態様において、組成物は乾燥粉末を含む。ある態様において、組成物は噴霧および／または吸入投与用に製剤化される。ある態様において、そのような組成物は、付属の噴霧手段と共に容器中に含有される。
【０１６３】
さらに、別の態様において、薬学的組成物は、液体調製物の静脈内、動脈内、または筋肉内注射によって投与される。ある態様において、好適な液体製剤は、液剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、オイルなどを含む。別の態様において、薬学的組成物は静脈内投与され、従って、静脈内投与に適した形態に製剤化される。別の態様において、薬学的組成物は動脈内投与され、従って、動脈内投与に適した形態に製剤化される。別の態様において、薬学的組成物は筋肉内投与され、従って、筋肉内投与に適した形態に製剤化される。
【０１６４】
別の態様において、活性化合物は、小胞、特にリポソーム内に送達される(Langer, Science 249:1527-1533 (1990); Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez- Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327を参照のこと)。
【０１６５】
別の態様において、放出制御システムで送達される薬学的組成物は、静脈内注入、埋め込み型浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、または他の投与様式のために製剤化される。別の態様において、ポンプが使用され得る(Langer, 上記; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980); Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574 (1989)を参照のこと)。別の態様において、高分子材料が使用される。さらにある態様において、放出制御システムは、治療標的、即ち、脳に近接して配置されるので、全身用量の一部しか必要とされない(例えば、Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, 上記, vol. 2, pp. 115-138 (1984)を参照のこと)。他の放出制御システムはLangerによってレビューにおいて議論されている(Science 249:1527-1533 (1990))。
【０１６６】
例えば、混合、造粒、または錠剤形成プロセスによる、活性成分を含有する薬学的組成物の調製は、当技術分野においてよく理解されている。ある態様において、治療有効成分は、薬学的に許容されかつ有効成分と適合性である賦形剤と混合される。ある態様において、経口投与のために、本明細書に記載されるような化合物またはそれらの生理学的に許容される誘導体、例えば塩、エステル、N-オキシドなど、および追加の治療剤は、この目的に関して一般的である添加剤、例えば、ビヒクル、安定剤、または不活性希釈剤と混合され、投与に適した形態、例えば、錠剤、コーティング錠剤、硬または軟ゼラチンカプセル剤、水性、アルコール性または油性液剤へ通常の方法によって変換される。
【０１６７】
ある態様において、本明細書に記載されるような活性成分を、中和された薬学的に許容される塩形態として、組成物へ製剤化する。ある態様において、薬学的に許容される塩は、酸付加塩(ポリペプチドまたは抗体分子の遊離アミノ基を用いて形成される)を含み、これは、例えば、塩化水素酸もしくはリン酸のような無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸のような有機酸などを用いて形成される。ある態様において、遊離カルボキシル基から形成される塩はまた、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化第二鉄のような無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、2-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインのような有機塩基などから誘導することができる。
【０１６８】
ある態様において、医薬における使用について、本明細書に記載されるような化合物の塩は、薬学的に許容される塩であろう。しかしながらある態様においては、他の塩が、本明細書に記載される方法において使用される化合物またはそれらの薬学的に許容される塩の調製において有用であり得る。ある態様において、本発明の化合物の好適な薬学的に許容される塩は酸付加塩を含み、これは、例えば、本発明に従う化合物の溶液と、塩化水素酸、硫酸、メタンスルホン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、シュウ酸、クエン酸、酒石酸、炭酸またはリン酸などの薬学的に許容される酸の溶液とを混合することによって、形成され得る。
【０１６９】
ある態様において、組成物はまた、必要に応じて、保存剤、例えば、塩化ベンザルコニウムおよびチメロサールなど；キレート剤、例えば、エデト酸ナトリウムなど；緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩および酢酸塩；等張化剤、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、グリセリン、マンニトールなど；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、アセチルシスチン、メタ重亜硫酸ナトリウムなど；芳香剤；粘度調整剤、例えば、ポリマー、例えば、セルロースおよびその誘導体；ならびにポリビニルアルコール、ならびにこれらの水性組成物のpHを調節するための酸および塩基を含む。ある態様において、組成物はまた局所麻酔薬または他の活性物質を含み得る。ある態様において、組成物はスプレー剤、ミスト剤、点滴剤などとして使用される。
【０１７０】
ある態様において、薬学的に許容される担体またはその成分として役立ち得る物質は、糖類、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、およびメチルセルロース；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；固体滑沢剤、例えば、ステアリン酸およびステアリン酸マグネシウム；硫酸カルシウム；植物油、例えば、落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびカカオ脂；ポリオール、例えば、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール；アルギン酸；乳化剤、例えば、Tween（商標）ブランド乳化剤；湿潤剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム；着色剤；矯味矯臭剤；錠剤化剤、安定剤；抗酸化剤；保存剤；パイロジェンフリー水；等張食塩水；ならびにリン酸緩衝液である。ある態様において、化合物と共に使用される薬学的に許容される担体の選択は、化合物が投与される方法によって基本的に決定される。本化合物が注射される態様において、好ましい薬学的に許容される担体は、そのpHが約7.4に調節されている、血液適合性懸濁化剤を含む滅菌生理食塩水である。
【０１７１】
ある態様において、組成物はさらに、結合剤(例えば、アカシア、トウモロコシデンプン、ゼラチン、カルボマー、エチルセルロース、グアーガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポビドン)、崩壊剤(例えば、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸、二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、グアーガム、デンプングリコール酸ナトリウム)、様々なpHおよびイオン強度の緩衝剤(例えば、Tris-HCI.、酢酸塩、リン酸塩)、添加剤、例えば、表面への吸収を妨げるためのアルブミンまたはゼラチン、界面活性剤(例えば、Tween 20、Tween 80、Pluronic F68、胆汁酸塩)、プロテアーゼ阻害剤、表面活性剤(例えば、ラウリル硫酸ナトリウム)、透過促進剤、可溶化剤(例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール)、抗酸化剤(例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム、ブチル化ヒドロキシアニソール)、安定剤(例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、増粘剤(例えば、カルボマー、コロイド状二酸化ケイ素、エチルセルロース、グアーガム)、甘味剤(例えば、アスパルテーム、クエン酸)、保存剤(例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン)、滑沢剤(例えば、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム)、流動助剤(例えば、コロイド状二酸化ケイ素)、可塑剤(例えば、フタル酸ジエチル、クエン酸トリエチル)、乳化剤(例えば、カルボマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ラウリル硫酸ナトリウム)、ポリマーコーティング(例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン)、コーティングおよびフィルム形成剤(例えば、エチルセルロース、アクリラート、ポリメタクリラート)および／または補助剤を含む。
【０１７２】
ある態様において、シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および懸濁剤のための担体の典型的な成分は、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、液体スクロース、ソルビトールおよび水を含む。懸濁剤について、典型的な懸濁化剤としては、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、セルロース(例えば、AVICEL（商標）、RC-591)、トラガカントおよびアルギン酸ナトリウムが挙げられ；典型的な湿潤剤としては、レシチンおよびポリエチレンオキシドソルビタン(例えば、ポリソルベート80)が挙げられる。ある態様において、典型的な保存剤としては、メチルパラベンおよび安息香酸ナトリウムが挙げられる。ある態様において、経口液体組成物はまた、上記に開示される甘味剤、矯味矯臭剤および着色剤などの1つまたは複数の成分を含有する。
【０１７３】
ある態様において、乾燥粉末組成物は、噴射剤、例えば、クロロフルオロカーボン12/11および12/114、または別の態様において、他のフルオロカーボン、非毒性揮発性物質；溶媒、例えば、水、グリセロールおよびエタノールを含み得、これらは、必要に応じて、活性物質を溶媒和するまたは懸濁させるための共溶媒；安定剤、例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム；保存剤、例えば、塩化セチルピリジニウムおよび塩化ベンザルコニウム；張度調整剤、例えば、塩化ナトリウム；緩衝剤；および矯味矯臭剤、例えば、サッカリンナトリウムを含む。
【０１７４】
ある態様において、組成物はまた、ポリ乳酸、ポリグリコール酸（polglycolic acid）、ヒドロゲルなどの高分子化合物の微粒子状調製物の内部もしくは表面上への、または、リポソーム、マイクロエマルジョン、ミセル、単層もしくは多層小胞、赤血球ゴーストまたはスフェロプラストの表面上への、活性材料の組み込みを含む。そのような組成物は、物理的状態、可溶性、安定性、インビボ放出速度、およびインビボクリアランス速度に影響を与えるだろう。
【０１７５】
ある態様において、ポリマー(例えば、ポロキサマーまたはポロキサミン)でコーティングされた微粒子状組成物、および、組織特異的受容体、リガンドもしくは抗原に対する抗体へカップリングされたかまたは組織特異的受容体のリガンドへカップリングされた化合物も、本発明によって包含される。
【０１７６】
ある態様において、化合物は、ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、またはポリプロリンなどの水溶性ポリマーの共有結合によって修飾される。修飾された化合物は、対応する未修飾化合物と比べて、静脈内注射後の血液中において実質的により長い半減期を示すことが公知である(Abuchowski et al., 1981; Newmark et al., 1982; and Katre et al., 1987)。ある態様において、そのような修飾はまた水溶液中における化合物の可溶性を増加させ、凝集を排除し、化合物の物理的および化学的安定性を高め、かつ化合物の免疫原性および反応性を大幅に低下させ得る。ある態様において、所望のインビボ生物学的活性は、そのようなポリマー-化合物付加物（abduct）の投与によって、未修飾化合物を用いるのと比べてより低頻度でまたはより低用量で達成され得る。
【０１７７】
ある態様において、本発明の化合物は唯一の薬学的活性薬剤として投与され、それらはまた、当業者によって理解されるように、本明細書に記載されるような1つまたは複数の他の化合物と組み合わせてならびに／またはポックスウイルス感染症と関連する疾患、障害および／または状態の治療および／または予防において使用される他の薬剤と組み合わせて、使用することができる。別の態様において、本明細書に記載されるような化合物は、持続した治療および予防効果を提供するために1つまたは複数のそのような薬剤と連続して投与される。別の態様において、化合物は、異なる経路を介して、異なる時間で、またはそれらの組み合わせで、投与され得る。本発明の化合物を含む併用療法を与える任意の手段が、本発明の部分と見なされることが理解される。
【０１７８】
別の態様において、追加の活性薬剤が、参照により本明細書に組み入れられるPHYSICIANS' DESK REFERENCE (PDR) 53rd Edition (1999)に示されるような治療量で、または当業者に公知であるような治療的に有用な量で、一般に用いられる。別の態様において、本発明の化合物および他の治療活性薬剤は、推奨される最大臨床投与量でまたはより低い用量で投与される。ある態様において、本発明の組成物中の活性化合物の投薬レベルは、投与経路、疾患の重篤度および患者の反応に依存して、所望の治療反応を得るように変えられ得る。別の態様において、組み合わせは、別個の組成物として、または他の態様においては両方の薬剤を含有する単一の投薬形態として、投与される。ある態様において、組み合わせとして投与される場合、治療剤は、別の態様において、同じ時間もしくは異なる時間で与えられる別個の組成物として製剤化され、または他の態様においては、治療剤は単一の組成物として与えられる。
【０１７９】
ある態様において、本明細書に記載される組成物および方法は、ヒトの治療において用いられる。ある態様において、本明細書に記載される組成物および方法は、ペットとして養われるか(例えば、イヌ、ネコ、ウマ)、著しい商業的価値を有するか(例えば、酪牛、肉牛、競技用動物)、著しい科学的価値を有するか(例えば、絶滅危惧種の捕らわれたまたは自由な標本)、または他の点で価値を有する、飼育される哺乳動物の治療において用いられる。
【０１８０】
本発明の好ましい態様をより完全に説明するために以下の実施例を提示する。しかしながら、それらは、本発明の広い範囲を限定するようには決して解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１８１】
材料および方法
細胞培養
ウサギ腎臓(RK)細胞を、10%ウシ胎仔血清および抗生物質/抗真菌剤ミックス(Invitrogen)が補われたMEM中に維持した。RK-D4R細胞を増殖させるための培地に、400 ug/mlのハイグロマイシンBをさらに補った。アフリカミドリザル上皮細胞(BSC-1)を、10%ウシ胎仔血清および10μg/mLゲンタマイシンが補われたDMEM中に維持した。
【０１８２】
MCV E9L、A20R、およびD4Rのクローニング
MCV E9L (mE9)、A20R (mA20)、およびD4R (mD4)遺伝子を、組織サンプル(R.M. Buller, Saint Louis University School of Medicineによって善意に提供された)より得られたゲノムDNAから、以下のプライマーセットを使用してPCR増幅させた：
2017531631.tif 000043
。Herculase Enhanced DNA Polを使用して製造元の推奨に従って(Agilent Technologies, Inc.)、各反応について1 Mベタインおよび5 % DMSOを添加して、PCRを行った。HindIII部位(フォワードプライマー、下線付き)およびXbaI部位(リバースプライマー、下線付き)を使用して、pcDNA3.1(+)プラスミド(Invitrogen)中へのクローニングを達成した。Kozak配列(GCCATGG)がフォワードプライマー内に含まれ、適切な翻訳開始を可能にした。全ての挿入物をDNA配列決定によって確認した。VV E9L (vE9)、A20R (vA20)、およびD4R (vD4) 遺伝子を、前に記載したようにクローニングした。
【０１８３】
タンパク質発現および精製
MCVおよびVV E9、A20、およびD4 [35S]Cys/Met標識タンパク質を、TNT T7結合網状赤血球溶解物システム(Promega)を使用して、組換えpcDNA3.1からそれぞれ作製した。標識タンパク質をSDSゲル上で分離し、オートラジオグラフィによって視覚化した。N末端で6Hisタグ付きmD4を発現させるために、mD4R遺伝子を、プライマー
2017531631.tif 000044
を使用してPCRによって増幅し、大腸菌（E. coli）発現ベクターpET-15b(Novagen)のNdeI部位およびBamHI部位中へクローニングした。6His-mD4タンパク質を、17℃で一晩0.6 mM IPTGで誘導することによって大腸菌Rosetta(DE3)株(EMD Millipore)中において発現させた。全タンパク質を、0.1% Triton X-100、0.1% Tween 20、および0.5 mM PMSFを含有するリン酸緩衝液(50 mMリン酸緩衝液, pH 7.1, 400 mM NaCl, 5%グリセロール)中において4℃で1時間0.25 mg/mlリゾチームで処理することによって細胞から抽出し、続いて3X凍結/解凍および超音波処理を行った。遠心分離後、上清をTalonコバルト樹脂カラム(Clontech)上へロードし、続いて、20 mMイミダゾールを含有する上記リン酸緩衝液で徹底的に洗浄した。6His-mD4タンパク質を、200 mMイミダゾールで溶出し、次いで、200 mM NaClおよび5%グリセロールを含有する25 mMリン酸緩衝液(pH 6.8)でのSuperdex 200ゲル濾過によってさらに精製した。インビトロ翻訳されそして大腸菌発現されたタンパク質を、下記に記載されるように、プロセッシブDNA合成アッセイのために使用した。
【０１８４】
プロセッシブDNA合成アッセイ
プロセッシブDNA合成を2タイプのアッセイによって評価した：ラピッドプレートアッセイおよびM13アッセイ。ラピッドプレートアッセイを以前に記載したように行った。簡潔には、その5’遠位末端にアデニンのみを含有する5’-ビオチン化100-ヌクレオチドテンプレートを、その3’末端への15-ヌクレオチドプライマーと共にアニーリングし、ストレプトアビジンコーティングされた96プレートウェル(Roche Applied Science)へ付着させた。DNA合成を、100 mM (NH)2S04、20 mM Tris-HCl (pH 7.5)、3 mM MgCl2、0.1 mM EDTA、0.5 mM DTT、2%グリセロール、40μg/ml BSA、5μM dATP、5μM dCTP、5μM dGTP、1μMジゴキシゲニン-11-dUTP、およびE9/A20/D4タンパク質を含有する50μL反応混合物中において行った。TNT網状赤血球溶解物またはインビトロ翻訳されたルシフェラーゼを陰性対照として使用した。37℃で30分間のインキュベーション後、プレートをリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で広範囲に洗浄した。次いで、ウェルを抗ジゴキシゲニン-ペルオキシダーゼ抗体(Roche)と共に37℃で1時間インキュベートし、続いてPBSで洗浄した。基質である2,2’-アジノ-ビス(3-エチルベンゾチアゾリン)-スルホネート(Roche)を添加し、プレートを穏やかに揺り動かし、発色させた。マイクロプレートリーダー(Tecan)を用いて405 nmでの各反応の吸光度を測定することによって、DNA合成を定量化した。実験をトリプリケートで行い、独立して少なくとも2回繰り返した。
【０１８５】
M13アッセイを記載したように行った。簡潔には、反応混合物(50μL)は、45 fmolのプライミングM13mp18単鎖DNA、100mM (NH4)2SO4、10 mM Tris-HCl pH 7.5、8 mM MgCl2、0.1 mM EDTA、5 mM DTT、40μg/ml BSA、4 %グリセロール、各々60μMのdATP、dGTPおよびdTTPならびに20μM [α -32P] dCTPを含有した。37℃で1時間のインキュベーション後、200 mM NaOHを含有する6xローディング色素を添加することによって、反応を停止させた。産物を1.3%アルカリ性アガロースゲル上で分画し、オートラジオグラフィによって視覚化した。
【０１８６】
タンパク質プルダウンアッセイ
1.5μg精製6His-mD4を、4℃で2時間、10μLのインビトロ翻訳された[35S]標識A20、15μL Talonコバルトビーズ(5% BSAで前処理)および300μL PBS-NP緩衝液(0.2 % NP40を含むPBS)と共にインキュベートした。ビーズをPBS-NP緩衝液中において4回洗浄した(各々15分間)。プルダウンされたタンパク質をSDSゲル上で分離し、オートラジオグラフィによって視覚化した。
【０１８７】
サーマルシフトアッセイ
サーマルシフト(示差走査蛍光定量法)アッセイを以前に記載したように行った。簡潔には、5μM精製6His-mD4を、25 mMリン酸緩衝液(pH 6.8)、0.2 M NaCl、2.5%グリセロール、2% DMSO、0.005% (w/v) Triton-X100、および1x Sypro Orangeを含有する20μL総体積で、薄壁PCR 96プレートウェル中において化合物と混合した。1℃/分の速度で25〜80℃において、582 nmでApplied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCRシステム(Carlsbad, CA)を使用して、蛍光強度をモニタリングした。融解温度(Tm)を得るために、タンパク質融解曲線をGraphPad Prism上にプロットし、Boltzmannシグモイドモデルへフィットさせた。サーマルシフト(ΔTm)は、2% DMSOモック処理とインヒビター処理との差である。全ての実験を二重に行い、独立して繰り返した。
【０１８８】
mD4-VVハイブリッドウイルスおよびvD4-VVレスキューウイルスの構築、単離、および特徴付け
機能的D4R遺伝子を欠いているワクシニアウイルスvD4-ZG(VVΔD4R)、ワクシニアD4タンパク質を安定発現するウサギ腎臓細胞株(RK-D4R)、およびプラスミドpER（これは、D3RおよびD5R配列に隣接したD4R配列を含有する）は、F.G. Falknerからの寄贈であり、B. Mossによって本発明者らに提供された。
【０１８９】
mD4-VVハイブリッドウイルスを生じるプラスミドを構築するために、mD4R遺伝子を、プライマー
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を使用して増幅し、pERプラスミドのEcoRIおよびHindIII部位中へサブクローニングした。これは、vD4RをmD4R遺伝子で置き換えるが、誘導されるクローンは2つのATG開始コドン(太字の、
2017531631.tif 000046
)を含有し、このうちの最初のものはvD4R遺伝子に由来する。vD4R開始コドンを除去するために、部位特異的突然変異誘発を、一対の相補プライマー
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（突然変異ヌクレオチドは小文字であり、下線付きヌクレオチドはmD4配列である）を使用して行い、プラスミドpER-mD4(ATG)を作製し、これは、mD4R開始コドンのみを含有し、従って野生型mD4をコードする。
【０１９０】
mD4-VVハイブリッドウイルスおよびvD4-VVレスキューウイルスを、以前に記載したような、親ウイルスVVΔD4Rに感染したRK-D4R細胞中へのプラスミドのトランスフェクションによる、それぞれpER-mD4(ATG)およびpERの相同組換えによって作製した。48時間後、細胞を採取し、ウイルスを凍結-解凍および超音波処理によって放出させた。次いで、RK-D4R細胞由来のウイルス溶解物によるBSC-1細胞の感染および大きなプラークの連続的なプラーク精製によって、組換えウイルスを単離した。組換えウイルスをPCRおよび配列決定によって確認した。poxvirus.orgのmD4R配列(VP0038088)と比較した場合、組換えmD4R-VVハイブリッドウイルス(プラーク#224a1-1)中のmD4R配列と完全に一致した。poxvirus.orgのD4R WR配列(VP0042547)と比較した場合、組換えvD4-VVレスキューウイルス(プラーク#225a1)中のvD4R配列は、残基150でLysの代わりにアミノ酸Asnを含有した。この塩基変化は出発プラスミドpER中にも存在した。
【０１９１】
mD4-VVハイブリッドウイルスおよびvD4-VVレスキューウイルスに感染多重度(MOI)0.05 pfu/細胞で感染させた24ウェルプレートのウェル中のコンフルエントなBSC-1細胞上において、ウイルス増殖動態をクアドルプリケートで測定した。様々な時点で、培地および細胞を採取し、ウイルス力価を決定した。
【０１９２】
ウイルスプラーク減少および細胞毒性アッセイ
以前に記載したようにウイルスプラーク減少アッセイをトリプリケートでBSC-1細胞を使用して行い、化合物10については独立して繰り返した。簡潔には、48ウェルプレート中で1時間、100μLの増殖培地中において80 PFU/ウェルでウイルスを吸着させることによって、細胞を感染させ、続いて化合物で16時間処理した。細胞を染色し、プラークを解剖顕微鏡下でカウントし、データをGraphPad Prism上にプロットした。BSC-1細胞に対する細胞毒性を、以前に報告されたように、乳酸デヒドロゲナーゼアッセイ(LDH)によって評価した。
【０１９３】
ドットブロットハイブリダイゼーション
24ウェルプレート中に1.2 x 105細胞/ウェルで播種し、37oCで一晩インキュベートすることによって、BSC-1細胞をコンフルエントまで増殖させた。200μLの増殖培地中においてウイルス(約1 MOI)を1時間吸着させることによって、細胞を感染させ、続いて65μM化合物10で処理した。次いで、細胞を様々な時点で採取した。以前に記載したように、ウイルスDNAを、20 mM EDTA、0.5% (w/v) SDSおよび0.5 mg/mlプロテイナーゼKを含有する20 mM Tris緩衝液(pH 7.5)で抽出し、ドットブロットハイブリダイゼーションのために使用した。32P標識vA20 DNAをプローブとして使用した。
【０１９４】
実施例1
MCVのDNA PolおよびPFのクローニングおよび発現
ワクシニアウイルス(VV)に対する配列相同性に基づいて、MCV PF(mA20およびmD4)は、同族mE9 DNA PolがDNAをプロセッシブに合成することを可能にすると予測される。この仮定を立証するために、先ず、MCを有する個体より得られた臨床分離株からこれらの3つのMCV遺伝子をクローニングした(mE9、mA20およびmD4についてのコード領域の方向およびゲノム位置については、図8を参照のこと)。各MCV遺伝子の完全なコード領域を、翻訳Kozak配列ならびにpcDNA3.1(+)中への挿入のためのHindIIIおよびXbaI制限部位を含有するプライマーを用いて増幅した。全てのクローンをDNA配列決定によって確認した。インビトロで転写および翻訳された場合、クローニングされたテンプレートの各々は、予測されるサイズのタンパク質産物を生じさせることができた(図1)。これらのMCVタンパク質は、ワクシニアウイルスの対応する相当物とサイズが同様である(図1)。
【０１９５】
mE9、mD4およびmA20はラピッドプレートアッセイにおいてプロセッシブDNA合成を行う
MCVタンパク質のプロセッシブDNA合成について試験するために(図1)、ヌクレオチド組み込みを測定するラピッドプレートアッセイ(RPA)を用いた。RPAは、その5’末端上にビオチン部分を有する100ヌクレオチドテンプレート、およびその3’末端へアニーリングされる15ヌクレオチドプライマーからなる。アニーリングされたプライマーテンプレートを、96ウェルプレートのストレプトアビジンコーティングされたウェルへ付着させる。DNA PolおよびPFの添加は、dNTPと、比色定量化のためにHRPへカップリングされたジゴキシゲニン(DIG)抗体によって認識されるdig-dUTPとの組み込みを引き起こす。このRPAを首尾よく使用し、プロセッシブDNA合成におけるVVタンパク質三つ組(vE9、vA20、vD4)の3つ全てのメンバーの厳密な要件を決定した。実際に、このタンパク質三つ組のいずれかのメンバーを省略することによって、プロセッシブDNA合成は不可能となる(図2を参照し、バー1および2を比較のこと)。図2に示されるように、MCV mE9、mA20、およびmD4三つ組は、対応するVVタンパク質と同じ活性を示した(バー2および3を比較のこと)。
【０１９６】
mD4はラピッドプレートアッセイにおいてプロセッシブDNA合成を可能にするためにvD4の完全な代わりとなる
図2に示されるように、mE9およびmA20は、各々、プロセッシブDNA合成を可能にするためにそれらのVV相当物の代わりとなるには不十分であり得る(図2、バー4および5)。非常に対照的に、mD4は、vD4の完全な代わりとなることができる(図2、バー6とバー2、3とを比較のこと)。
【０１９７】
mD4はmA20またはvA20と物理的に会合する
VVプロセッシビティータンパク質vD4およびvA20は、ヘテロ二量体複合体を形成し、これらは両方とも、DNA Polが伸長DNA鎖合成を行うことを可能にするために必要である。プロセッシビティーにおいてvD4の代わりをするmD4の機能的能力(図2)がvA20に結合するその能力に関連していることを実証することが重要であった。この目的に向かって、大腸菌中において産生された6Hisタグ付きmD4(6His-mD4)を、プルダウンアッセイにおいて使用するために均質になるまで精製した(図3A)。図3Bに示されるように、6His-mD4は、インビトロ翻訳されたmA20およびvA20をそれぞれプルダウンすることができた。この結果は、機能的にvD4の代わりをするmD4の能力が、mD4/vA20ヘテロ複合体の形成を必要とするという前提を強く支持する。
【０１９８】
mD4はM13アッセイにおいて長鎖プロセッシブDNA合成を可能にする
RPA(図2)は、プロセッシビティーを評価するための信頼できるスクリーニング技術であるが、ヌクレオチドの最大組み込みに制限される。mD4が長鎖プロセッシブDNA合成においてvD4の完全な代わりとなることができることを確認するために、テンプレートとしてM13単鎖DNA(7,249ヌクレオチド)を使用して、より厳しいアッセイを用いた。このアッセイにおいて、M13テンプレートを、30ヌクレオチドプライマーへアニーリングし、vE9、vA20、およびvD4または6His-mD4のいずれかの存在下でdNTPと共にインキュベートした。図4に示されるように、6His-mD4単独(レーン1)またはvE9単独(レーン4)または陰性対照ルシフェラーゼ(レーン5)のいずれも、M13テンプレートから新しく合成されるDNAを生じさせることができなかった。対照的に、6His-mD4、vA20およびvE9三つ組は、7,249ヌクレオチド全長鎖を合成することができた(レーン2)。陽性対照として、VV-三つ組(vE9、vD4、vA20)も全長M13産物を産生することが示された(レーン3)。注意すべきことに、各D4タンパク質の合成源が異なっていたため（即ち、細菌性His-mD4およびインビトロ翻訳されたvD4）、このアッセイはシグナル強度について定量的ではない。これらのデータは、mD4がプロセッシブDNA合成においてvD4の代わりをすることができることを明確に実証している。
【０１９９】
化合物10はインビトロでmD4に結合しmD4依存的プロセッシブDNA合成をブロックする
vD4とvA20のN末端ドメインとの相互作用の破壊を調べた以前のハイスループットスクリーニングから、vD4に結合しそしてVV DNA合成および感染症を阻害することができる5つの小さな化学的化合物が発見された(Nuth M, et al. 2011. J. Med. Chem. 54:3260-3267)。mD4がそのVV相当物vD4の代わりをすることができるという事実(図3および5)により、本発明者らは、mD4がまたこれらの5つの化合物によって標的化され得るかどうかを調べるように促された。この可能性を調べるために、Thermofluorアッセイ(示差走査蛍光定量法)を最初に用いた。このアッセイは、熱安定性(Tm)の増加を観察することによって、タンパク質への小分子の結合を検出することができる。5つの小分子のうちの1つである化合物10 (4-({[2-(ベンジルオキシ)フェニル]メチル}アミノ)フェノール)が、明らかにmD4に結合することができたことが分かる。図5Aにおいて見られるように、精製6His-mD4は、10μM 化合物10の存在下でTmシフト(ΔTm: 2.2℃)、40μM 化合物10の存在下でさらにより大きなTmシフト(ΔTm: 3.3℃)を示した。この結果は、化合物10がvD4およびmD4の保存領域へ結合することを示唆している。
【０２００】
mD4への化合物10の結合がDNA合成におけるPFとしてのその必須の役割を阻害するかどうかを調べるために、プロセッシブDNA合成をブロックする能力に関する小さな化学的インヒビターの効力(IC50)を定量的に評価することができるRPAを用いた。M13アッセイ(図4)と一致させるために、翻訳されたvE9、vA20および細菌性6His-mD4を使用した。図5Bに示されるように、化合物10は、IC50=28μMでDNA合成をブロックすることができた。総合すれば、これらの結果は、化合物10がmD4に結合し、プロセッシブDNA合成においてそれが機能することを不能にすることを示している。
【０２０１】
mD4を標的化する化合物をアッセイするためにmD4-VVハイブリッドウイルスを構築する
化合物10がウイルス感染症に関連するmD4機能をブロックすることができるかどうかを評価するために、MCVの重要な機能を特異的に標的化する薬物を発見することにおける主な妨げは、これまで試みられた全ての細胞培養系においてこのウイルスを増殖させることができないことであった。この妨害は、vD4がmD4によって置き換えられているワクシニアハイブリッドウイルス(mD4-VV)を操作することによって回避された(図6)。このアプローチを選ぶことの論理的根拠は、mD4がプロセッシブDNA合成においてvD4の完全な代わりとなることができるという本発明者らの実証であった(図3、6、8)。mD4-VVウイルスをどのように操作したかについての説明を図6Aに示す。簡潔には、mD4-VVハイブリッドウイルスを、VV D4欠失変異ウイルスであるVVΔD4Rから操作した。VVΔD4Rウイルス(WR株)は、補完性vD4発現ウサギ腎臓(RK)細胞株においてのみ増殖させることができ、通常のRK(またはBSC-1)細胞においては増殖させることができない。図6Aに示されるように、相同組換えによってmD4をVVΔD4R中へ導入した。新しいmD4-VVハイブリッドウイルスを、BSC-1細胞中における数回のプラーク精製によって単離した。mD4-VVハイブリッドウイルスの増幅されたストックを配列決定し、それが完璧かつ完全にインタクトなmD4遺伝子をコードすることを確認した。陽性対照として、vD4バックをVVΔD4R中へ組換え、レスキューウイルスvD4-VVを作製した。図6Bは、mD4-VVハイブリッドウイルスおよび陽性対照vD4-VVレスキューウイルスについての多段階増殖曲線が、BSC-1細胞において増殖させた場合にほぼ同一であることを明らかにしている。また、BSC-1細胞において、mD4-VVハイブリッドウイルスは、陽性対照ウイルスvD4-VVのそれと同様のサイズのプラークを産生した(データを示さず)。
【０２０２】
mD4インヒビター化合物10はmD4-VVハイブリッドウイルスの感染をブロックする
図7Aに示されるプラーク減少アッセイにおいて見られるように、化合物10は、EC50 =14μMでBSC-1細胞のmD4-VV感染を有効にブロックし、これは、プロセッシブDNA合成を阻害することにおけるその28μMのIC50に匹敵し(図5B)、以前に決定されたようなBSC-1細胞に対するその細胞毒性CC50(175.4μM)を遥かに下回る。比較において、vD4-VVレスキューウイルスを阻害することについて、EC50 =11μMが化合物10について得られた(図7A)。対照的に、抗ヘルペスウイルス薬アシクロビルは、高濃度でさえ阻害効果を有さなかった(データを示さず)。
【０２０３】
化合物10がウイルスのプロセッシブDNA合成を阻害することによってmD4-VV複製をブロックすることを確認するために、ウイルスDNA蓄積に対するその効果を感染時間経過の全体にわたって評価した。図7B(上の列)に示されるように、65μM化合物10でのBSC-1感染細胞の処理は、感染の各時点でのmD4-VVゲノムDNA蓄積を完全に妨げた。対照的に、化合物10の非存在下で(DMSO単独)、予想通り、ウイルスDNAが経時的に蓄積するのが観察された。同様の結果が対照vD4-VVレスキューウイルスで観察された(図7B、下の列)。これらのデータは、化合物10がウイルスDNA複製を阻害することを明らかに実証している。
【０２０４】
議論
小児および成人において蔓延している一般的なウイルス性皮膚感染症である伝染性軟属腫(MC)を特異的に治療する利用可能な認可された抗ウイルス薬は存在しない。MCV感染症をブロックし得る化合物を同定するいかなる試みも、このポックスウイルスが細胞培養で増殖できないことによって妨げられてきた。本研究において、この障壁を回避するために二段階戦略を考案した。第1段階について、小さな化学的化合物によってインビトロで阻害される新規かつ必須のMCV標的遺伝子を同定した。具体的には、プロセッシブDNA合成に必須であるMCVのmD4遺伝子をクローニングした。ワクシニアポックスウイルスvD4をブロックするのに有効であると以前に実証された化合物10が、インビトロアッセイによって決定されたように、mD4に結合することおよびmD4依存的プロセッシブDNA合成をブロックすることのどちらもできることが示された。第2段階について、天然vD4遺伝子の代わりにmD4標的遺伝子を用いるワクシニアハイブリッドウイルス(mD4-VV)を構築した。mD4-VVは、vD4-レスキュー化ワクシニアウイルスと同じ増殖特徴を示した。顕著なことに、化合物10は、mD4-VVハイブリッドウイルスが細胞中において複製するのを実際にブロックすることが示された。感染性であるためにハイブリッドウイルスがmD4を必要とし、かつmD4が化合物10の物理的かつ機能的な標的であるという事実は、化合物10が天然MCV感染症を阻害するであろうことの強い予測となる。重要なことには、本研究は、MCV複製および感染を特異的に標的化する薬物を発見するための系統的な道を初めて提供する。
【０２０５】
MCVプロセッシビティー三つ組のうち、mD4だけがインビトロでのプロセッシブDNA合成アッセイにおいてそのvD4相当物の代わりとなり、一方、A20およびE9は代わりをするには不十分であった(図2)。これは、mD4が、そのプロセッシビティーパートナーA20(30%)と比べて、そのワクシニアウイルス相当物に対してより大きな化学的同一性(55%)を示すという事実に関連し得る。顕著なことに、精製mD4は、プルダウンアッセイによって見られたように、mA20およびvA20の両方と物理的に会合することができ、これにより、このポックスウイルスタンパク質の保存がさらに確認される(図3B)。最も重要なことには、化合物10は、本明細書で示されたように、vD4と同様に、結合してmD4機能を阻害する。これは、化合物10が、A20との相互作用に関与するD4の保存領域へ結合することができることを示唆している。最近になって、vD4とvA20 N末端ドメインとの共結晶構造によって、vD4のC末端残基167〜180および191〜206がvA20と直接接触していることが明らかになった。vD4のこの領域中のArg167およびPro173の点突発変異は、D4/A20複合体の形成を乱すことができた。mD4およびvD4の配列比較は、C末端領域(Arg167およびPro173を含む残基167〜206)がD4において保存されていることを示す(67.5 %同一性、図9Aを参照のこと)。mD4の予想構造は、vD4の公知の結晶構造とそのまま重なることに注目されたい(図9B)。これは、mD4およびvD4の両方が化合物10によって標的化される理由を大いに説明し得る。他のポックスウイルスのD4タンパク質はvD4と高い配列同一性を共有するため(約99%)、化合物10は広域抗ポックスウイルス活性を有することが予想される。特に、サーマルシフトによってvD4への結合を示した4つの他の化合物(Nuth M, et al. 2011. J. Med. Chem. 54:3260-3267)は、mD4へ結合せず(本研究、示さず)、このことは、それらのタンパク質組成および局所的なコンフォーメーションにおける差異によって説明され得る。mD4-VVウイルスハイブリッドシステムは、mD4の複数の領域に直接的に結合してこれらを阻害する追加の化合物の同定を可能にし、従って、MCの治療のためにMCVを特異的に標的化する新しい治療薬の開発を可能にする。
【０２０６】
本願の本発明において、新規の抗ウイルス標的であるPF mD4がクローニングされ、同定され、これは、小さな化学的化合物によって阻害されてウイルスPolがDNAの伸長鎖を合成するのを妨げる。本明細書に記載されるMCVハイブリッドシステムのタイプは、感染症をブロックする追加のウイルス標的および化合物を発見するために利用され得る。
【０２０７】
実施例2：mD4への化合物2の結合
mD4への化合物2の結合をSPRによって決定した。mD4を約3500 RUでバイオセンサーチップ上に固定し、1% DMSOを含む緩衝液中0〜250μMで化合物2を注入した。化合物2濃度に対する定常状態応答(Req)のプロットおよび1:1結合モデルへのフィッティングから、結合親和性KDを決定した(図10)。
【０２０８】
実施例3：3-Dヒト皮膚器官培養物中における抗ウイルス活性。
3-Dシステム：
MCV感染症はもっぱら皮膚に生じ、3-Dヒト皮膚器官培養物は、mD4-VVに対する抗ウイルス活性について本発明の化合物、例えば化合物2および他のリードを試験するために、ならびにその意図される使用の自然環境における安定性および組織病理についてアッセイするために、理想的である。支持フレームワークとして無細胞真皮を使用し、ここへ間質線維芽細胞および上皮細胞を添加して、3-D培養物を調製する(62)。郵便切手サイズの3-D培養物(図11)を、開口部を有するトレー上で増殖させ、ここで、それらは血液供給を除いてヒト皮膚等価物へ発達する(図12)。角質層、顆粒層、有棘層および基底層を含む表皮層の全てが、真皮層の上に形成される(図12)。
【０２０９】
3-D培養物のmD4-VV感染および化合物2処理：
予備実験において、3-D培養物(図11)を化合物2の存在または非存在下でmD4-VVハイブリッドウイルスに感染させた。感染の3日後、3-D培養物の半分をウイルス力価のために、他方の半分を組織学のために採取した。
【０２１０】
mD4-VVのウイルス力価は3-D培養物中において化合物2によって有意に減少した。具体的には、通常の培養培地80μL中mD4-VVハイブリッドウイルス106 pfuを、各3D-組織の上面上へ滴下した。化合物2または薬物ビヒクルとしての0.5% DMSOを含有する培養培地5 ml中において、組織をインキュベートした。感染後3日で、組織を採取し、各組織中のウイルス力価を決定した。図13において見られるように、化合物2は、DMSO薬物ビヒクル単独と比較して、mD4-VVのウイルス力価の有意な減少を引き起こした。これは標準2-D培養物において得られた結果と一致している。
【０２１１】
組織学的分析により化合物2による3-Dヒト皮膚器官培養物の保護が明らかになる。
3-D培養物の他方の半分を組織学的に調べ、化合物2有りまたは無しでのウイルス誘導組織損傷のレベルを評価した。3-D組織を断面で切断し、H&E染色した。
【０２１２】
図14Aにおいて見られるように、DMSOで処理された非感染3-D組織は通常見られる表皮を有し、これは、健康的な染色されたケラチノサイトの豊富な集団を含有した。対照的に、図14Bに示されるように、mD4-VVウイルスでの3-D培養物の感染は、表皮層中のケラチノサイトを根絶させた。しかしながら、3-D培養物をmD4-VVに感染させ、次いでこれを化合物2で直接処理した場合、染色されたケラチノサイトの豊富な集団が3日後に表皮層中において観察された。図14C。2-Dケラチノサイト培養物に対する別の実験において、ここで使用された濃度で化合物2の毒性はなかったことに注意することが重要である。いくぶん類似している3-Dヒト皮膚器官培養物が、シドホビルに関連する非環式ヌクレオシドホスホナート(ANP)を調べるために以前使用されたことは、注目すべきことである(Duraffour, et al. Antimicrob Agents Chemother. 51:4410-4419, 2007)。
【０２１３】
表1は本発明の化合物についてのEC50結果を提供する(図15)。
【０２１４】
【表１】
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【０２１５】
化合物2などの本発明の化合物は、インビトロでのプロセッシブDNA合成の特異的ブロッキング；ほぼnM単位の、mD4-VVウイルス感染症のブロッキング効力(EC50=3μM)、および3-Dヒト皮膚器官培養物中におけるその抗ウイルス活性を含む特性を示す。さらに、化合物2は、CC50>100の細胞毒性；マウス肝臓ミクロソーム中の化合物10の6.7分間の半減期の5倍を上回る増加である、36分間のマウス肝臓ミクロソーム中の半減期安定性；SPR（表面プラズモン共鳴）によってmD4タンパク質への化合物2結合から誘導された測定可能なKD=32.8μM(図10)を有する。
【０２１６】
添付の図面を参照して本発明の好ましい態様を記載したが、本発明は正確な態様に限定されないこと、ならびに、様々な変更および修飾が、添付の特許請求の範囲において定義されるような本発明の範囲または精神から逸脱することなく、当業者によってその中においてもたらされ得ることが、理解されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５−１】
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【図１５−２】
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【図１５−３】
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【図１５−４】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年5月31日(2017.5.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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