(57)【要約】  ポリマーマトリクス中へのスニチニブの封入又は組み込みを増加させる方法が開発された。得られる製剤は、スニチニブ、又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩のより持続する制御放出を提供する。装荷の増加は、アルカリ性溶媒系を使用して達成される。医薬組成物は、角膜血管新生、及び急性黄斑変性等の血管化と関連する患者の眼の中又は眼の上の疾患又は障害を治療又は予防するために投与され得る。投与により、治療的利益をもたらすのに十分高いが、許容できないレベルの細胞毒性を回避するのに十分低い濃度で長時間に亘ってスニチニブ又はその類縁体若しくは塩が放出される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
有機溶媒と水性溶媒とのエマルジョンを使用して、下記式の化合物又はその塩のポリマーマトリクス中への封入効率を増加させる方法であって、
前記化合物が式（１）：
【化１】
2017537985.tif 000017
（式中、
Ｒ１は、水素、ハロ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、−（ＣＯ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、−（ＣＨ２）ｒＲ１６及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択され、
Ｒ２は、水素、ハロ、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、シアノ、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、アリール、ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３Ｒ１４及び−ＳＯ２Ｒ２０（ここで、Ｒ２０はアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、−（ＣＯ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、アリール、ヘテロアリール、−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）２Ｒ１４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、及び−ＳＯ２Ｒ２０（ここで、Ｒ２０はアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ４は、水素、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、及び−ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ５は、水素、アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択され、
Ｒ６は、水素、アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択され、
Ｒ７は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択されるか、又は、
Ｒ６とＲ７とが結合して−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、及び−（ＣＨ２）６−からなる群から選択される基を形成してもよく（但し、Ｒ５、Ｒ６、又はＲ７の少なくとも１つが−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０でなくてはならない）、
Ｒ８及びＲ９は、水素、アルキル、及びアリールからなる群から独立して選択され、
Ｒ１０は、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、−Ｎ（Ｒ１１）（ＣＨ２）ｎＲ１２、及び−ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ１１は、水素及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１２は、−ＮＲ１３Ｒ１４、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、アリール、ヘテロアリール、−Ｎ＋（Ｏ−）Ｒ１３Ｒ１４、−Ｎ（ＯＨ）Ｒ１３、及び−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒａ（ここで、Ｒａは非置換のアルキル、ハロアルキル、又はアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、水素、アルキル、シアノアルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールからなる群から独立して選択されるか、又は、
Ｒ１３とＲ１４とが結合して複素環基を形成してもよく、
Ｒ１５は、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、及びアリールオキシからなる群から選択され、
Ｒ１６は、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ１７は、アルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ２０は、アルキル、アリール、アラルキル、又はヘテロアリールであり、
ｎ及びｒは独立して１、２、３、又は４である）の化合物、又はその薬学的に許容可能な塩であり、
上記方法が塩形態のポリマーを使用して溶媒中での前記化合物のアルカリ度を増加すること、及び／又は前記ポリマーマトリクス中への前記化合物の封入若しくは組み込みの際にポリマーの濃度若しくは粘度を増加することを含む、方法。
【請求項２】
前記ポリマーが、ポリ（ヒドロキシ酸）、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）及びポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えばポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール、例えばポリ（エチレングリコール）、ポリアルキレンオキシド、例えばポリ（エチレンオキシド）、ポリアルキレンテレフタレート、例えばポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリハロゲン化ビニル、例えばポリ（塩化ビニル）、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（酢酸ビニル）、ポリスチレン、ポリウレタン及びそれらのコポリマー、セルロース、例えばアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシエチルセルロース、三酢酸セルロース及びセルロース硫酸ナトリウム塩（本明細書では総称して「セルロース」と呼ぶ）、エステル、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）及びポリ（オクタデシルアクリレート）（本明細書では総称して「ポリアクリル酸」と呼ぶ）を含むアクリル酸、メタクリル酸のポリマー又はそれらのコポリマー若しくは誘導体、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）及びポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、それらのコポリマー及びブレンドからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物がポリマーナノ粒子又はポリマーミクロ粒子に製剤化される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物がポリマーインプラント中に組み込まれる、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
前記化合物が５重量％超、１０重量％超、又は１５重量％超の装荷で前記ポリマー中に組み込まれる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記化合物がスニチニブ又はその塩である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記化合物がスニチニブリンゴ酸塩である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記製剤が、前記ポリマー及び前記化合物が溶解された有機溶媒を、水性溶媒と乳化することによって作製される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記溶媒のいずれか又は両方のアルカリ度が、前記ポリマーマトリクス内に封入された化合物の量を増加するのに有効な量のアルカリを添加することによって上昇される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
水性ｐＨが６より高く、かつ１０より低く、より好ましくはｐＨ６〜ｐＨ８である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ポリマーのジクロロメタン溶液の最小粘度が約３５０ｃＰｓである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ポリマーがポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はそれらのコポリマーである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法によって製造される持続放出を提供する製剤。
【請求項１４】
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法によって作製される製剤を投与することを含む、血管化と関連する障害を治療する方法。
【請求項１５】
前記製剤が、角膜血管化を予防又は減少するために投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記製剤が、加齢黄斑変性と関連する脈絡膜血管化を予防又は減少するため投与される、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、それらの開示の全体が引用することにより本明細書の一部をなす、２０１４年１２月１５日付出願の米国仮特許出願第６２／０９２，１１８号「徐放性スニチニブ製剤（Controlled Release Sunitinib Formulations）」、及び２０１５年３月２７日付出願の米国仮特許出願第６２／１３９，３０６号「角膜血管新生の予防方法（Method Of Prevention Of Corneal Neovascularization）」の優先権及び利益を主張する。
【０００２】
本発明は、スニチニブ、並びにその類縁体及び薬学的に許容可能な塩の製剤、またその使用、特に眼の疾患及び障害の治療における使用の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
スニチニブ（PfizerによってＳＵＴＥＮＴ（商標）として（−）−リンゴ酸塩の形態で市販され、以前はＳＵ１１２４８として知られる）は、２００６年１月２６日付で腎細胞癌（ＲＣＣ）及びイマチニブ耐性消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）の治療に対してＦＤＡにより承認された、経口低分子マルチターゲット型受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤である。スニチニブは、２つの異なる適応症に対して同時に承認された最初の制癌薬であった。
【０００４】
スニチニブは、複数の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）を標的とすることによって細胞シグナル伝達を阻害する。受容体チロシンキナーゼは、腫瘍血管形成及び腫瘍細胞増殖の両方において役割を果たす、全ての血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦ−Ｒ）、及び血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）を含む。これらの標的の同時の阻害は、腫瘍血管形成の減少及び癌細胞死の両方をもたらし、最終的に腫瘍の縮小をもたらす。
【０００５】
制御された様式で長時間に亘ってスニチニブ、又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩を送達し得る製剤を提供することは有利であろう。しかしながら、薬学的賦形剤中での上記薬物の乏しい溶解性のため薬物装荷（drug loading：薬物担持）が制限されて不安定性を招くことから、これは困難であるとされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、本発明の目的は、改良された持続時間、安定性、安全性、及び効能を有するスニチニブ、又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩の製剤を提供することである。
【０００７】
本発明の更なる目的は、増加された装荷で、ナノ粒子及びミクロ粒子を含むポリマーマトリクス中に封入又は組み込む方法を提供することである。
【０００８】
本発明の更に別の目的は、改善された投薬製剤、延長された薬物動態、及びその使用方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
スニチニブ、又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩のポリマーマトリクスへの封入又は組み込みを増加させる方法を開発した。得られる製剤は、癌の治療、血管形成の阻害、眼疾患、及び他の用途に対して、スニチニブ、又はその類縁体若しくは塩の更なる持続制御放出を提供する。装荷の増加は、以下により詳細に説明される、アルカリ性溶媒系を使用すること、及び／又はポリマー溶液の粘度若しくは濃度を増加することによって達成される。
【００１０】
一つの実施の形態では、ポリマースニチニブ薬物製剤は、（ｉ）任意にアルキル剤を含む有機溶媒中にスニチニブ又はその塩を溶解又は分散させること、（ｉｉ）工程（ｉ）の溶液／分散液を、少なくとも約３００ｃＰｓ（又は、場合によっては少なくとも約３５０ｃＰｓ、４００ｃＰｓ、５００ｃＰｓ、６００ｃＰｓ、７００ｃＰｓ、又は８００ｃＰｓ以上）の粘度を有するポリマー溶液と混合すること、（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）の薬物ポリマー溶液／分散液を、非酸性又はアルカリ性の水溶液（例えば、少なくともおよそ７、８、又は９のｐＨ、典型的には約１０以下）と、任意に界面活性剤又は乳化剤と共に混合して、溶媒を含むスニチニブ封入ミクロ粒子を形成すること、（ｉｖ）上記ミクロ粒子を単離することによって作製される。スニチニブリンゴ酸塩又はスニチニブの別の薬学的に許容可能な塩を使用する場合、有機溶媒にアルカリ剤を含むことが有用な場合があるとわかった。しかしながら、スニチニブ遊離塩基を使用する場合であれば、有機溶媒への酸の添加がミクロ粒子の薬物装荷を改善し得ることがわかった。実施例は、ＰＬＧＡ、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ（ＰＬＡ）、及びＰＥＧ−ＰＬＧＡ／ＰＬＧＡブレンドミクロ粒子等のポリエステルがスニチニブ、又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩の持続放出を示すことを実証する。スニチニブリンゴ酸塩で装荷され、ＰＬＧＡとＰＬＧＡ（分子量４５ｋＤａ）に共有結合的にコンジュゲートされるＰＥＧ（ＰＬＧＡ４５ｋ−ＰＥＧ５ｋ）とで構成されるポリマーミクロ粒子を、シングルエマルジョン溶媒蒸発法を使用して作製した。溶液中のスニチニブリンゴ酸塩のアルカリ度を、アルカリの添加がない場合はわずか１％であるのに比べて、ＰＥＧ−ＰＬＧＡにより最大１６．１％まで増加させる（ＤＭＦの添加によって更に増加され得る）ことによって、装荷の改善を達成した。スニチニブリンゴ酸塩の装荷を、ポリマー溶液と同様に水溶液のｐＨを増加させることによって更に増加させた。ミクロ粒子中のスニチニブリンゴ酸塩の装荷のより一層顕著な増加は、ポリマーの濃度又は粘度を増加させることによって達成された。
【００１１】
本明細書において提供されるポリマー薬組成物は、薬物の制御された送達に対して改善された特性を有するインプラント（例えば、ロッド、ディスク、ウェファー等）、ナノ粒子、又はミクロ粒子を形成するために使用され得る。スニチニブ、又はその類縁体若しくはその薬学的に許容可能な塩の制御放出のためインプラント（例えば、ロッド、ディスク、ウェファー等）、ナノ粒子、ミクロ粒子、又はそれらの組合せを含有する医薬組成物は、マトリクス中の薬物と、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤とを合わせることにより作製され得る。ナノ粒子、ミクロ粒子、又はそれらの組合せは、１つ以上の薬物、又は薬物と１つ以上のポリマーとのブレンドから形成され得る。
【００１２】
医薬組成物は、角膜血管新生、及び滲出型若しくは萎縮型の加齢黄斑変性（ＡＭＤ）等の血管新生と関連する患者の眼の中又は眼の上の疾患又は障害を治療又は予防するために投与され得る。
【００１３】
実施例にて、動物モデルにおいて、スニチニブ又はその薬学的に許容可能な塩の製剤が、角膜血管新生の治療、ＡＭＤの特徴である脈絡膜血管化、及び眼内圧の上昇に起因する視神経傷害の予防に有効であることを確認する。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】ポリマー濃度（ｍｇ／ｍｌ）の関数としてのパーセント封入効率のグラフである。
【図２Ａ】様々なポリマーミクロ粒子からの３７℃での経時的な（日数）スニチニブリンゴ酸塩のパーセント累積放出のグラフである。
【図２Ｂ】ポリマー濃度（ｍｇ／ｍＬ）に対して封入効率をプロットすることにより、ポリマー濃度の増加がスニチニブリンゴ酸塩の封入効率を改善することを示すグラフである。
【図３】スニチニブリンゴ酸塩ＭＳ（マイクロスフェア）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物放出プロファイルのグラフである。
【図４】スニチニブリンゴ酸塩遊離薬物及びスニチニブ−リンゴ酸塩ＭＳの残留曲線のグラフである。
【図５】スニチニブリンゴ酸塩ＭＳ、スニチニブリンゴ酸塩遊離薬物、及びプラセボＭＳのＳＣ注射による治療を伴うＰＯＤ５、ＰＯＤ７、及びＰＯＤ１４における角膜の角膜血管新生（血管長、図５Ａ、及びＮＶ面積、図５Ｂ）の定量分析のグラフである。
【図６】ＰＯＤ７におけるスニチニブリンゴ酸塩及びプラセボＭＳと比較した、スニチニブリンゴ酸塩ＭＳによる薬物標的遺伝子の発現レベルの強力な抑制を明らかにするＲＴ−ＰＣＲ分析の棒グラフである。
【図７】スニチニブリンゴ酸塩ミクロ粒子が、正常なＣ５７Ｂｌ／６マウスへの硝子体内注射後、少なくとも９週間に亘ってマウスＣＮＶモデルにおいてＮＶを抑制することを示すグラフである。直後、又は２週間、４週間、若しくは８週間後、マウス（ｎ＝５）をブルッフ膜のレーザー傷害（laser disruption）に供し、１週間後にＣＮＶ病変の大きさを定量した。図７Ａ、１週間；図７Ｂ、３週間；図７Ｃ、５週間；図７Ｄ、９週間。対照と比較した全ての治療群についてＰ＜０．０５。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
Ｉ．定義
本明細書で使用される「活性剤」は、身体で局所的に及び／又は全身に作用する生理学的又は薬理学的な有効成分を指す。活性剤は、疾患又は障害の治療（例えば治療剤）、予防（例えば予防剤）、又は診断（例えば診断剤）のため患者に投与される物質である。本明細書で使用される「眼科薬物」又は「眼科活性剤」は、眼の疾患若しくは障害の１つ以上の症状を緩和するため、発症を遅延するため、若しくは予防するため患者に投与される薬剤、又は画像化若しくはそれ以外の方法で眼を評価するのに有用な診断剤を指す。
【００１６】
本明細書で使用される「有効量」又は「治療的有効量」は、特に癌、又は目の疾患若しくは障害の１つ以上の症状の緩和、発症の遅延、又は予防に有効な薬物の量を指す。加齢黄斑変性の場合には、有効量の薬物は、患者の視力喪失を遅らせるか、減少させるか、又は予防する。
【００１７】
本明細書で使用される、「アルカリ」の用語は、酸性の陽子を受理することができるか、又はそれ以外の方法で組成物のｐＨを引き上げる化合物を指す。
【００１８】
本明細書で使用される「生体適合性の」、「生物学的に適合性の」は、一般に、任意の代謝産物又はその分解産物と共に、一般にレシピエントに無毒であり、レシピエントにいかなる著しい有害作用ももたらさない材料を指す。概して言えば、生体適合性材料は、患者に投与された場合に、著しい炎症又は免疫応答を誘発しない材料である。
【００１９】
本明細書で使用される「生分解性高分子」は、生理的条件下での酵素作用、及び／又は加水分解によって、被験体によって代謝されるか、排除されるか、又は排泄され得るより小さな単位又は化学種へと分解するか、又は崩壊するポリマーを一般に指す。分解時間は、ポリマー組成、多孔性、粒子寸法等の形態、及び環境に左右される。
【００２０】
本明細書で使用される「親水性」は、水に対して親和性を有する特性を指す。例えば、親水性ポリマー（又は親水性ポリマー）は水溶液において主として可溶性である、及び／又は、水を吸収する傾向を有する、ポリマー（又はポリマー）である。一般に、ポリマーがより親水性であれば、そのポリマーは、水に溶解する、水と混じる、又は水に濡れる傾向が強くなる。
【００２１】
本明細書で使用される「疎水性」は、水に対して親和性を欠くか、又は更には水をはじく特性を指す。例えば、ポリマー（又はポリマー）がより疎水性であれば、そのポリマー（又はポリマー）は、水に溶解しない、水と混じらない、又は水に濡れない傾向が強くなる。
【００２２】
親水性及び疎水性を、限定されないが、一群のポリマー又はポリマー内の親水性／疎水性のスペクトルのように相対的に述べることができる。２以上のポリマーが検討されているいくつかの実施形態では、「疎水性ポリマー」の用語は、もう一方のより親水性のポリマーと比較した場合のポリマーの相対的な疎水性に基づいて定義され得る。
【００２３】
本明細書で使用される「ナノ粒子」は、約１０ｎｍから最大約１ミクロンであるがそれを含まない、例えば１００ｎｍ〜約１ミクロンの直径、例えば平均径を有する粒子を一般に指す。粒子は任意の形状を有し得る。球形のナノ粒子は、一般に「ナノスフェア」と呼ばれる。
【００２４】
本明細書で使用される「ミクロ粒子」は、約１ミクロン〜約１００ミクロン、例えば約１ミクロン〜約５０ミクロン、より例示的には約１ミクロン〜約３０ミクロンの直径、例えば平均径を有する粒子を一般に指す。ミクロ粒子は任意の形状を有し得る。球形のミクロ粒子は、一般に「ミクロスフェア」（「ＭＳ」）と呼ばれる。
【００２５】
本明細書で使用される「分子量」は、一般に、別段の明示がない限り、塊状ポリマーの相対平均鎖長を指す。実際、分子量は、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）又は毛細管粘度測定を含む様々な方法を使用して、推定されるか、又は特性評価され得る。ＧＰＣ分子量は、数平均分子量（Ｍｎ）とは対照的に重量平均分子量（Ｍｗ）として報告される。毛細管粘度測定は、特定のセットの濃度、温度及び溶媒の条件を使用して希薄ポリマー溶液から特定された、固有粘度として分子量の推定値を提供する。
【００２６】
本明細書で使用される「平均粒子径」は、一般に、粒子の集団における粒子の統計学的平均粒子径（直径）を指す。本質的に球形の粒子の直径は、物理学的又は流体力学的な直径を指し得る。非球形粒子の直径は、流体力学的な直径を優先的に指し得る。本明細書で使用されるように、非球形粒子の直径は、粒子の表面の２点間の最大の直線距離を指す場合がある。平均粒子径は、動的光散乱等の当該技術分野で既知の方法を使用して測定され得る。
【００２７】
「単分散」及び「均質な粒度分布」は、本明細書において同じ意味で使用され、全ての粒子が同じ又はほぼ同じサイズであるナノ粒子又はミクロ粒子の集団を説明する。本明細書に使用されるように、単分散の分布は、９０％以上の分布がメジアン粒子径の１５％以内、より例示的にはメジアン粒子径の１０％以内、最も例示的にはメジアン粒子径の５％以内に含まれる粒子分布を指す。
【００２８】
本明細書で使用される「薬学的に許容可能」は、健全な医学の判断の範囲に含まれ、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、又は他の問題若しくは合併症のない人間及び動物の組織と接触する使用に適している、合理的なベネフィット／リスク比と釣り合った化合物、担体、賦形剤、組成物、及び／又は剤形を指す。
【００２９】
本明細書において一般的に使用される「インプラント」は、移植部位で長期間に亘って１つ以上の活性剤を放出することにより治療の利益を提供するように、例えば注射又は外科的移植によって身体の特定の領域に移植されるように組み立てられるか、大きさを合わせられるか、又は別様に構成される、ポリマーデバイス又は要素を指す。例えば、眼内インプラントは、例えば注射又は外科的移植によって眼に入れられるように、また長期間に亘って１つ以上の薬物を放出することにより１つ以上の眼の疾患又は障害を治療するように組み立てられ、大きさを合わせられ、又は別様に構成される、ポリマーデバイス又は要素である。眼内インプラントは、眼の生理学的条件と一般に生体適合性であり、有害な副作用を引き起こさない。一般に、眼内インプラントは眼の視野を妨げることなく、眼に入れることができる。
【００３０】
ＩＩ．化合物
Ａ．スニチニブ
スニチニブは式（１）の化合物である。
【化１】
2017537985.tif 000002
【００３１】
スニチニブリンゴ酸塩は、Ｓｕｔｅｎｔとして販売されているスニチニブの（−）−リンゴ酸塩である。
【化２】
2017537985.tif 000003
【００３２】
本明細書において言及されるとき、スニチニブ類縁体は以下の式：
【化３】
2017537985.tif 000004
（式中、
Ｒ１は、水素、ハロ、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、−（ＣＯ）Ｒ１５、−Ｎ−ＮＲ１３Ｒ１４、−（ＣＨ２）ｒＲ１６及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８Ｒ９からなる群から選択され、
Ｒ２は、水素、ハロ、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、シアノ、−ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、アリール、ヘテロアリール、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３Ｒ１４及び−ＳＯ２Ｒ２０（ここで、Ｒ２０はアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ３は、水素、ハロゲン、アルキル、トリハロメチル、ヒドロキシ、アルコキシ、−（ＣＯ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、アリール、ヘテロアリール、−ＮＲ１３Ｓ（Ｏ）２Ｒ１４、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１３Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）Ｒ１４、−ＮＲ１３Ｃ（Ｏ）ＯＲ１４、及び−ＳＯ２Ｒ２０（ここで、Ｒ２０はアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、及びヘテロアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ４は、水素、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、及び−ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ５は、水素、アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択され、
Ｒ６は、水素、アルキル、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択され、
Ｒ７は、水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１７、及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０からなる群から選択されるか、又は、
Ｒ６とＲ７とが結合して−（ＣＨ２）４−、−（ＣＨ２）５−、及び−（ＣＨ２）６−からなる群から選択される基を形成してもよく（但し、Ｒ５、Ｒ６、又はＲ７の少なくとも１つが−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０でなくてはならない）、
Ｒ８及びＲ９は、水素、アルキル、及びアリールからなる群から独立して選択され、
Ｒ１０は、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、−Ｎ（Ｒ１１）（ＣＨ２）ｎＲ１２、及び−ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ１１は、水素及びアルキルからなる群から選択され、
Ｒ１２は、−ＮＲ１３Ｒ１４、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、アリール、ヘテロアリール、−Ｎ＋（Ｏ−）Ｒ１３Ｒ１４、−Ｎ（ＯＨ）Ｒ１３、及び−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒａ（ここで、Ｒａは非置換のアルキル、ハロアルキル、又はアラルキルである）からなる群から選択され、
Ｒ１３及びＲ１４は、水素、アルキル、シアノアルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールからなる群から独立して選択されるか、又は、
Ｒ１３とＲ１４とが結合して複素環基を形成してもよく、
Ｒ１５は、水素、ヒドロキシ、アルコキシ、及びアリールオキシからなる群から選択され、
Ｒ１６は、ヒドロキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１５、−ＮＲ１３Ｒ１４、及び−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１３Ｒ１４からなる群から選択され、
Ｒ１７は、アルキル、シクロアルキル、アリール、及びヘテロアリールからなる群から選択され、
Ｒ２０は、アルキル、アリール、アラルキル、又はヘテロアリールであり、
ｎ及びｒは独立して１、２、３、又は４である）を有するか、又はその薬学的に許容可能な塩である。
【００３３】
以下の定義が本明細書において使用される。
【００３４】
「アルキル」は、１個〜２０個の炭素原子（数値範囲が、例えば「１〜２０」と本明細書で述べられる場合、その基、この場合アルキル基は１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等から最大２０個以下の炭素原子を含んでもよいことを意味する）の直鎖及び分岐鎖の基を含む飽和脂肪族炭化水素ラジカルを指す。１個〜４個の炭素原子を含むアルキル基は、低級アルキル基と呼ばれる。低級アルキル基が置換基を欠く場合、非置換低級アルキル基と呼ばれる。より例示的には、アルキル基は１個〜１０個の炭素原子を有する中型アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、及びペンチルである。最も例示的には、１個〜４個の炭素原子を有する低級アルキルは、例えばメチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、又はｔｅｒｔ−ブチルである。アルキル基は、置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、例えば１、２、又は３の基で置換されてもよいアリール、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、例えば１、２、又は３の基で置換されてもよいアリールオキシ、環中に１個〜３個の窒素原子を有し、環中の炭素が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、例えば１、２、又は３の基で置換されてもよい６員ヘテロアリール、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、例えば１、２、又は３の基で置換されてもよい５員ヘテロアリール、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子（存在する場合）が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、例えば１、２、又は３の基で置換されてもよい５員又は６員のヘテロ脂環式基、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である、１つ以上の基、例えば１、２、又は３の基で置換されてもよいアリールチオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及び−ＮＲ１８Ｒ１９（ここで、Ｒ１８及びＲ１９は、水素、非置換低級アルキル、トリハロメチル、非置換（Ｃ３〜Ｃ６）シクロアルキル、非置換低級アルケニル、非置換低級アルキニルからなる群から独立して選択される）、並びに互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基である、１つ以上の基、例えば１、２、又は３の基で置換されてもよいアリールからなる群から独立して選択される、１つ以上、より例示的には１〜３、更に例示的には１又は２の置換基である。
【００３５】
一つの実施形態では、アルキル基は、ヒドロキシ、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子（存在する場合）が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基若しくは非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、例えば１、２、若しくは３の基で置換されてもよい５員若しくは６員のヘテロ脂環式基、窒素、酸素及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子が互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基若しくは非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、例えば１、２、若しくは３の基で置換されてもよい５員ヘテロアリール、環中に１個〜３個の窒素原子を有し、環中の炭素が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基若しくは非置換低級アルコキシ基である１つ以上の基、例えば１、２若しくは３の基で置換されてもよい６員ヘテロアリール、又は−ＮＲ１８Ｒ１９（ここで、Ｒ１８及びＲ１９は、水素、非置換低級アルキルからなる群から独立して選択される）からなる群から独立して選択される１又は２の置換基で置換される。いくつかの実施形態では、例えば、アルキル基は、互いに独立してヒドロキシ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノ、ピペラジノ、４−低級アルキルピペラジノ、フェニル、イミダゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、オキサゾリル、及びトリアジニルである１又は２の置換基で置換される。
【００３６】
「シクロアルキル」は、３員〜８員の全てが炭素の単環式環、全てが炭素の５員環／６員環若しくは６員／６員の縮合二環式環、又は多環縮合環（「縮合」環系は該系の各環が、該系の互いの環と隣接する炭素原子対を共有することを意味する）の基であって、該環の１つ以上が１つ以上の二重結合を含むが、いずれの環も完全共役パイ電子系を有しない基を指す。シクロアルキル基の例は、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロヘキサン、シクロヘキサジエン、アダマンタン、シクロヘプタン、及びシクロヘプタトリエンである。シクロアルキル基は置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、例えば１又は２の基で置換されてもよいアリール、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、例えば１又は２の基で置換されてもよいアリールオキシ、環中に１個〜３個の窒素原子を有し、環中の炭素が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、例えば１又は２の基によって置換されてもよい６員ヘテロアリール、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子が、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、例えば１又は２の基によって置換されてもよい５員ヘテロアリール、窒素、酸素、及び硫黄からなる群から選択される１個〜３個のヘテロ原子を有し、基中の炭素原子及び窒素原子（存在する場合）が互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、例えば１又は２の基によって置換されてもよい５員又は６員のヘテロ脂環式基、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、互いに独立してハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルキル基又は非置換低級アルコキシ基の１つ以上、例えば１又は２の基によって置換されてもよいアリールチオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、上に定義される、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、並びに−ＮＲ１８Ｒ１９からなる群から独立して選択される、例えば１つ以上、例えば１又は２の置換基である。
【００３７】
本明細書に定義されるように、「アルケニル」は、少なくとも２個の炭素原子、及び少なくとも１つの炭素−炭素二重結合からなる低級アルキル基を指す。代表的な例として、限定されないが、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル、及び１−、２−又は３−ブテニルが挙げられる。
【００３８】
本明細書に定義されるように、「アルキニル」は、少なくとも２個の炭素原子、及び少なくとも１つの炭素−炭素三重結合からなる低級アルキル基を指す。代表的な例として、限定されないが、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、及び１−、２−又は３−ブチニルが挙げられる。
【００３９】
「アリール」は、完全共役パイ電子系を有する１〜１２の炭素原子の全てが炭素の単環式基又は多環縮環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）基を指す。アリール基の例は、限定されないが、フェニル、ナフタレニル、及びアントラセニルである。アリール基は、置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、例えば、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及び−ＮＲ１８Ｒ１９（Ｒ１８及びＲ１９は上に定義される）からなる群から独立して選択される１つ以上、例えば１個、２個、又は３個である。例えば、アリール基は、ハロ、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、Ｎ−アミド、モノ若しくはジアルキルアミノ、カルボキシ、又はＮ−スルホンアミドから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４０】
「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、又はＳから選択される１、２、又は３の環ヘテロ原子を含み、残りの環原子がＣであり、さらに完全な共役パイ電子系を有する、５〜１２の環原子の単環基又は縮合環（すなわち、隣接する原子対を共有する環）基を指す。非置換ヘテロアリール基の例は、限定されないが、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、プリン、及びカルバゾールである。ヘテロアリール基は、置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、例えば、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及び−ＮＲ１８Ｒ１９（Ｒ１８及びＲ１９は上に定義される）からなる群から独立して選択される１個、２個、又は３個である。例えば、ヘテロアリール基は、ハロ、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、Ｎ−アミド、モノ若しくはジアルキルアミノ、カルボキシ、又はＮ−スルホンアミドから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４１】
「ヘテロ脂環式」は、５〜９の環原子の環（複数の場合がある）中に、１又は２の環原子がＮ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）ｎ（ここで、ｎは０〜２の整数である）から選択されるヘテロ原子を有し、残りの環原子がＣである、単環基又は縮合環基を指す。また、環は１つ以上の二重結合を有してもよい。しかしながら、環は完全な共役パイ電子系を有しない。非置換ヘテロ脂環式基の例は、限定されないが、ピロリジノ、ピペリジノ、ピペラジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、及びホモピペラジノである。ヘテロ脂環式環は、置換されてもよく、非置換であってもよい。置換される場合、置換基（複数の場合がある）は、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ハロ、ヒドロキシ、非置換低級アルコキシ、メルカプト、（非置換低級アルキル）チオ、シアノ、アシル、チオアシル、Ｏ−カルバミル、Ｎ−カルバミル、Ｏ−チオカルバミル、Ｎ−チオカルバミル、Ｃ−アミド、Ｎ−アミド、ニトロ、Ｎ−スルホンアミド、Ｓ−スルホンアミド、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）−、Ｒ１８Ｓ（Ｏ）２−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１８、Ｒ１８Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及び−ＮＲ１８Ｒ１９（Ｒ１８及びＲ１９は上に定義される）からなる群から独立して選択される１つ以上、例えば１個、２個、又は３個である。例えば、ヘテロ脂環式基は、ハロ、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、Ｎ−アミド、モノ若しくはジアルキルアミノ、カルボキシ、又はＮ−スルホンアミドから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４２】
例えば、ヘテロ脂環式基は、ハロ、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、ヒドロキシ、メルカプト、シアノ、Ｎ−アミド、モノ若しくはジアルキルアミノ、カルボニル、又はＮ−スルホンアミドから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４３】
「複素環」は、１又は２の環原子がＮ、Ｏ、又はＳ（Ｏ）ｎ（ここで、ｎは０〜２の整数である）から選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子がＣであり、ここで１又は２のＣ原子がカルボニル基によって置換されてもよい、３〜８の環原子の飽和環状ラジカルを意味する。ヘテロシクリル環は、置換されてもよい低級アルキル（カルボキシ又はエステルから独立して選択される１又は２の置換基で置換される）、ハロアルキル、シアノアルキル、ハロ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アラルキル、ヘテロアラルキル、−ＣＯＲ（ここで、Ｒはアルキルである）、又は−ＣＯＯＲ（ここで、Ｒは（水素又はアルキル）である）から選択される１、２、又は３の置換基によって独立して置換されてもよい。より具体的にはヘテロシクリルの用語には、テトラヒドロピラニル、２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン、ピペリジノ、Ｎ−メチルピペリジン−３−イル、ピペラジノ、Ｎ−メチルピロリジン−３−イル、３−ピロリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオモルホリノ−１−オキシド、チオモルホリノ−１，１−ジオキシド、４−エチルオキシカルボニルピペラジノ、３−オキソピペラジノ、２−イミダゾリドン、２−ピロリジノン、２−オキソホモピペラジノ、テトラヒドロピリミジン−２−オン、及びそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。例えば複素環基は、ハロ、非置換低級アルキル、カルボキシ、エステル、ヒドロキシ、モノ又はジアルキルアミノで置換された低級アルキルから独立して選択される１又は２の置換基で置換されてもよい。
【００４４】
「ヒドロキシ」は−ＯＨ基を指す。
【００４５】
「アルコキシ」は、−Ｏ−（非置換アルキル）基と−Ｏ−（非置換シクロアルキル）基の両方を指す。代表例として、限定されないが、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、シクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、及びシクロへキシルオキシが挙げられる。
【００４６】
「アリールオキシ」は、本明細書に定義される、−Ｏ−アリール基及び−Ｏ−ヘテロアリール基の両方を指す。代表例として、限定されないが、フェノキシ、ピリジニルオキシ、フラニルオキシ、チエニルオキシ、ピリミジニルオキシ、ピラジニルオキシ、及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００４７】
「メルカプト」は−ＳＨ基を指す。
【００４８】
「アルキルチオ」は、−Ｓ−（非置換アルキル）基及び−Ｓ−（非置換シクロアルキル）基の両方を指す。代表例として、限定されないが、例えば、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、ブチルチオ、シクロプロピルチオ、シクロブチルチオ、シクロペンチルチオ、及びシクロへキシルチオが挙げられる。
【００４９】
「アリールチオ」は、本明細書に定義される−Ｓ−アリール基及び−Ｓ−ヘテロアリール基の両方を指す。代表例として、限定されないが、フェニルチオ、ピリジニルチオ、フラニルチオ、チエニルチオ、ピリミジニルチオ、及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００５０】
「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）−Ｒ’’基であって、式中、Ｒ’’は水素、非置換低級アルキル、トリハロメチル、非置換シクロアルキル、非置換低級アルキル、トリハロメチル、非置換低級アルコキシ、ハロ、及び−ＮＲ１８Ｒ１９基からなる群から選択される１つ以上の、例えば１、２、又は３の置換基によって置換されてもよいアリール、非置換低級アルキル、トリハロアルキル、非置換低級アルコキシ、ハロ、及び−ＮＲ１８Ｒ１９基から選択される１つ以上の、例えば１、２、又は３の置換基によって置換されてもよいヘテロアリール（環炭素により結合される）、並びに非置換低級アルキル、トリハロアルキル、非置換低級アルコキシ、ハロ、及び−ＮＲ１８Ｒ１９基からなる群から選択される１つ以上の、例えば１、２、又は３の置換基によって置換されてもよいヘテロ脂環式（環炭素によって結合される）からなる群から選択される。代表的なアシル基として、限定されないが、アセチル、トリフルオロアセチル、及びベンゾイルが挙げられる。
【００５１】
「アルデヒド」はＲ’’が水素であるアシル基を指す。
【００５２】
「チオアシル」は−Ｃ（Ｓ）−Ｒ’’基（ここでＲ’’は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００５３】
「エステル」は−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｒ’’基（ここでＲ’’は本明細書で規定されるとおりであるが、Ｒ’’は水素ではない）を指す。
【００５４】
「アセチル」基は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３基を指す。
【００５５】
「ハロ」基はフッ素、塩素、臭素又はヨウ素、例えばフッ素又は塩素を指す。
【００５６】
「トリハロメチル」基は−ＣＸ３基（ここでＸは本明細書で規定のハロ基である）を指す。
【００５７】
「トリハロメタンスルホニル」基はＸ３ＣＳ（＝Ｏ）２−基（ここでＸは上に規定されるとおりである）を指す。
【００５８】
「シアノ」は−Ｃ≡Ｎ基を指す。
【００５９】
「メチレンジオキシ」は−ＯＣＨ２Ｏ−基（ここで２つの酸素原子は隣接する炭素原子に結合している）を指す。
【００６０】
「エチレンジオキシ」基は−ＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ−（ここで２つの酸素原子は隣接する炭素原子に結合している）を指す。
【００６１】
「Ｓ−スルホンアミド」は−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。「Ｎ−スルホンアミド」は−ＮＲ１８Ｓ（Ｏ）２Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００６２】
「Ｏ−カルバミル」基は−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。「Ｎ−カルバミル」はＲ１８ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１９−基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００６３】
「Ｏ−チオカルバミル」は−ＯＣ（Ｓ）ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。「Ｎ−チオカルバミル」はＲ１８ＯＣ（Ｓ）ＮＲ１９−基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００６４】
「アミノ」は−ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は両方とも水素である）を指す。
【００６５】
「Ｃ−アミド」は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１８Ｒ１９基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。「Ｎ−アミド」はＲ１８Ｃ（Ｏ）ＮＲ１９−基（ここでＲ１８及びＲ１９は本明細書で規定されるとおりである）を指す。
【００６６】
「ニトロ」は−ＮＯ２基を指す。
【００６７】
「ハロアルキル」は、非置換アルキル、例えば、１つ以上の同一又は異なったハロ原子で置換される上に定義される非置換低級アルキル、例えば、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＦ３、及び−ＣＨ２ＣＣｌ３を意味する。
【００６８】
「アラルキル」は、非置換アルキル、例えば、上に定義されるアリール基で置換される、上に定義される非置換低級アルキル、例えば、−ＣＨ２フェニル、−（ＣＨ２）２フェニル、−（ＣＨ２）３フェニル、ＣＨ３ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２フェニル、及びそれらの誘導体を意味する。
【００６９】
「ヘテロアラルキル」基は、非置換アルキル、例えば、上に定義されるヘテロアリール基で置換される、上に定義される非置換低級アルキルを意味する。
【００７０】
「ジアルキルアミノ」は、ラジカル−ＮＲＲであって、式中、Ｒがそれぞれ独立して上に定義される非置換アルキル又は非置換シクロアルキル基であり、例えばジメチルアミノ、ジエチルアミノ、（１−メチルエチル）−エチルアミノ、シクロへキシルメチルアミノ、及びシクロペンチルメチルアミノを意味する。
【００７１】
「シアノアルキル」は、非置換アルキル、例えば、１又は２のシアノ基で置換される、上に定義される非置換低級アルキルを意味する。
【００７２】
「任意の」又は「任意に（してもよい）」は、その後に記載される事象又は状況が必ずしも起こらなくてもよく、その記載が当該事象又は状況が起こる例及びそれが起こらない例を含むことを意味する。例えば、「アルキル基によって置換されてもよい複素環基」は、アルキル基が必ずしも存在しなくてもよく、その記載は複素環基がアルキル基によって置換される状況と、複素環基がアルキル基によって置換されない状況とを含む。
【００７３】
Ｂ．封入ポリマー
ポリマービヒクル中１つ以上の薬物の送達に対する制御放出投薬製剤が、本明細書に記載される。ポリマーマトリクスは、非生分解性又は生分解性のポリマーから形成され得るが、該ポリマーマトリクスは生分解性であることが好ましい。上記ポリマーマトリクスは、送達のため、インプラント（例えば、ロッド、ディスク、ウェファー等）、ミクロ粒子、ナノ粒子、又はそれらの組合せに形成され得る。投与により、スニチニブ、又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩は、ポリマーマトリクスの分解、ポリマーマトリクスからの１つ以上の阻害剤の拡散、又はそれらの組合せのいずれかにより、長期間に亘って放出される。上記薬物は、ポリマー中に分散されるか若しくは封入され、又はマトリクスを形成するのに使用されるポリマーに共有結合され得る。１つ以上のポリマーの分解プロファイルは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの活性剤の放出速度に影響を及ぼすように選択されてもよい。
【００７４】
上記ポリマーは、疎水性ポリマー、親水性ポリマー、親水性ポリマーと疎水性ポリマーとのコンジュゲート（すなわち、両親媒性ポリマー）、ブロックコポリマー、及びそれらのブレンドであってもよい。
【００７５】
好適な疎水性ポリマーの例として、限定されないが、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、又はそれらのコポリマー、ポリカプロラクトン等のポリヒドロキシエステル、ポリセバシン酸無水物等のポリ無水物、ポリジオキシドン（polydioxidone）、上のいずれかのブレンド及びコポリマーが挙げられる。一つの実施形態では、ＰＬＧＡとポリ乳酸（ＰＬＡ）とのブレンドを使用する。グリコール酸（ＧＡ）（数日から一週間の短い分解時間を有する）に対して種々の比率の乳酸（ＬＡ）（最長１年又は２年のより長い分解時間を有する）を有する、より高分子量のポリマーを使用して、長期間に亘る放出を提供する。ＰＬＧＡの親水性をＬＡとＧＡ（より親水性）とのモノマー比を選択することによって制御することができ、ＰＬＧＡ末端基（エステル又は酸）もまた分解に影響を及ぼす。ＰＬＧＡの酸末端もまたより速く分解する。ＰＬＧＡの酸末端基は薬物装荷の増加を補助するが、酸性度もまた変化する。しかしながら、酸性度の制御により、ポリマーが低酸であっても、より高い薬物装荷を達成するため使用することができる。ＰＬＧＡは、ポリマーをカルボキシルで処理することによってより親水性にすることができる。
【００７６】
１つ以上の親水性ポリマーは、任意の親水性、生体適合性、非毒性のポリマー又はコポリマーであってもよい。或る特定の実施形態では、１つ以上の親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等のポリ（アルキレングリコール）を含有する。特定の実施形態では、１つ以上の親水性ポリマーは、直鎖のＰＥＧ鎖である。
【００７７】
代表的な合成ポリマーとして、ポリ（ヒドロキシ酸）、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）及びポリ（乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、例えばポリエチレン及びポリプロピレン、ポリアルキレングリコール、例えばポリ（エチレングリコール）、ポリアルキレンオキシド、例えばポリ（エチレンオキシド）、ポリアルキレンテレフタレート、例えばポリ（エチレンテレフタレート）、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリハロゲン化ビニル、例えばポリ（塩化ビニル）、ポリビニルピロリドン、ポリシロキサン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（酢酸ビニル）、ポリスチレン、ポリウレタン及びそれらのコポリマー、セルロース、例えばアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシ−プロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシエチルセルロース、三酢酸セルロース及びセルロース硫酸ナトリウム塩（本明細書では総称して「セルロース」と呼ぶ）、エステル、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）及びポリ（オクタデシルアクリレート）（本明細書では総称して「ポリアクリル酸」と呼ぶ）を含むアクリル酸、メタクリル酸のポリマー又はそれらのコポリマー若しくは誘導体、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）及びポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、それらのコポリマー及びブレンドが挙げられる。本明細書で使用される「誘導体」は、置換、化学基、例えばアルキル、アルキレン等の付加、ヒドロキシル化、酸化、及び当業者によって日常的に行われる他の修飾を有するポリマーを含む。
【００７８】
典型的な天然ポリマーの例としては、アルブミン及びプロラミン、例えばゼイン等のタンパク質、並びにアルギネート、セルロース及びポリヒドロキシアルカノエート、例えばポリヒドロキシブチレート等の多糖が挙げられる。
【００７９】
典型的な非生分解性ポリマーの例としてはエチレン酢酸ビニル、ポリ（メタ）アクリル酸、ポリアミド、コポリマー及びそれらの混合物が挙げられる。
【００８０】
Ｃ．溶媒及びアルカリ化剤
スニチニブ若しくは薬学的に許容可能な塩（（−）−リンゴ酸塩を含む）、又はスニチニブ類縁体若しくはその薬学的に許容可能な塩を使用して、本明細書に記載される粒子を作製することができる。遊離塩基はより疎水性であり、リンゴ酸塩等の塩形態はより親水性である。スニチニブの形態の変化により薬物装荷を増加させることができる。例えば、アルカリを添加すること（有機相及び水相の両方）は、スニチニブリンゴ酸塩の装荷を増加する。スニチニブ遊離塩基は非常に疎水性であり、容易に結晶化される。酸を添加すること、又は水相のｐＨを制御することにより、結晶化を回避し、より良好な粒子を形成することができる。
【００８１】
粒子の形成に対する典型的な溶媒は、塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭素、ジクロロエタン、酢酸エチル、及びシクロヘキサン等の有機溶媒である。追加の溶媒として、限定されないが、アセトン、アルコール、アセトニトリル、ＤＭＳＯ、及びＤＭＦが挙げられる。水溶性溶媒及びアルカリ性溶媒は、スニチニブリンゴ酸塩装荷の増加を補助する。
【００８２】
スニチニブの装荷は、封入の間、溶液中のスニチニブのアルカリ度を増加することによって増加され得ることが見出された。これは、溶媒の選択、溶媒へのアルカリ化剤の添加、又はスニチニブと共にアルカリ性薬物を包含することによって達成され得る。この目的で添加することができる化合物の例としてはジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ＤＭＴＡ、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、アニリン、アンモニウム及び水酸化ナトリウム等の溶媒又は溶媒添加物、ビタミンＢ４、カフェイン、アルカロイド、ニコチン、鎮痛薬であるモルヒネ、抗菌剤であるベルベリン、抗癌化合物であるビンクリスチン、降圧剤であるレセルピン、コリン作動薬であるガランタミン、抗コリン作動薬であるアトロピン、血管拡張薬であるビンカミン、抗不整脈化合物であるキニジン、抗喘息治療薬であるエフェドリン、及び抗マラリア薬であるキニーネ等の薬物が挙げられる。
【００８３】
界面活性剤として、限定されないが、ポリビニルアルコール、Ｆ−１２７、レクチン、脂肪酸、リン脂質、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸誘導体、及びヒマシ油等のアニオン性、カチオン性及び非イオン性の界面活性剤が挙げられる。
【００８４】
ＩＩＩ．ミクロ粒子、ナノ粒子、及びインプラントを形成する方法
Ａ．ミクロ粒子及びナノ粒子の形成
ミクロ粒子及びナノ粒子は、当該技術分野で知られているポリマーミクロ粒子、又はナノ粒子の形成に適した任意の方法を使用して形成され得る。粒子形成に使用される方法は、所望の粒子径及び粒度分布と共に、薬物又はポリマーマトリクス中に存在するポリマーの特性を含む様々な要因に依存する。いくつかの薬物が或る特定の溶媒の存在下、或る特定の温度範囲、及び／又は或る特定のｐＨ範囲で不安定であることから、粒子中に組み込まれる薬物の種類（複数の場合がある）もまた要因となる可能性がある。
【００８５】
１０ｎｍ〜１０００ミクロンの平均粒子径を有する粒子は、本明細書に記載される組成物において有用である。或る特定の実施形態では、粒子は、１０ｎｍ〜１００ミクロン、例えば、約１００ｎｍ〜約５０ミクロン、又は約２００ｎｍ〜約５０ミクロンの平均粒子径を有する。粒子は任意の形状を有することができるが、一般的には球形である。
【００８６】
粒子中の薬物装荷は、酸性度によって著しく影響を受ける。例えば、アルカリの添加によるｐＨの上昇は、組み込まれるスニチニブリンゴ酸塩の量を著しく増加する。また、装荷は、水相ｐＨを変化させることによって、例えば、水相（ＰＢＳ等）ｐＨが６．８から７．４に上昇される場合に増加され得る。また、薬物装荷も、ポリマー及び薬物の濃度、ポリマー分子量の両方を増加させることによって増加され得る。
【００８７】
好ましい水性ｐＨは６より高く、かつ１０より低く、より例示的にはｐＨ６〜ｐＨ８である。
【００８８】
例えば、表２中の一つの例は、同じ粒子組成物について、水性ｐＨがおよそ６からおよそ７．４に増加された場合に３６％から８４％への封入効率の実質的な増加があることを示す。表２中の別の例は、ｐＨ１０では、多くの粒子の形態が球形から不規則な形状に変化し、一部の粒子は凝集塊を形成したことを示し、ｐＨの高い水溶液もまた、スニチニブの装荷の高い、高品質の粒子を生産するのに不利であることを示唆する。
【００８９】
また、ポリマーの濃度及び粘度も封入効率に影響を及ぼす。例えば、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中、異なるポリマー濃度の同じ製剤組成（９９％ＰＬＧＡ７５：２５  ４Ａ及び１％ＰＬＧＡ−ＰＥＧ（ＰＥＧ分子量５Ｋｄ、ＰＬＧＡ分子量約４５Ｋｄ））について、封入効率は１００ｍｇ／ｍＬポリマー濃度で５０％超まで増加する。ＤＭＳＯ中のスニチニブリンゴ酸塩溶液と混合する前のＤＣＭ中のこのポリマー溶液の動粘度は、およそ３５０ｃＰｓと推定される。ＤＣＭ中のポリマー溶液の好ましい最小粘度は約３５０ｃＰｓである。好ましい実施形態では、ＤＣＭ中のポリマー濃度は１４０ｍｇ／ｍＬであり、これは計算上およそ７２０ｃＰｓである。９９％ＰＬＧＡ  ７５２５  ６Ｅ及び１％ＰＬＧＡ−ＰＥＧ（ＰＥＧ分子量５Ｋｄ、ＰＬＧＡ分子量約４５Ｋｄ）で作製される粒子は、ＤＣＭ中１００ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度を有する。ＰＬＧＡ  ７５２５  ６ＥがＰＬＧＡ  ７５２５  ４Ａよりも分子量が高いポリマーであることから、ＤＣＭ中のポリマー溶液はより粘性であり、約８３０ｃＰｓの動粘度を有する。
【００９０】
また、薬物装荷は使用される作製方法及び溶媒によっても著しく影響を受ける。例えば、Ｓ／Ｏ／Ｗシングルエマルジョン法は、酸性度を制御せずとも、Ｏ／Ｗシングルエマルジョン法よりも高い装荷をもたらす。
【００９１】
薬物の放出
薬物の放出は、ポリマーの分子量、ポリマーの親水性又は疎水性、薬物の割合、粒子の作製方法を含む様々な要因によって影響を受ける。スニチニブ及びその薬学的に許容可能な塩、又はスニチニブ類縁体若しくはその薬学的に許容可能な塩の両方を使用して粒子を作製することができる。遊離塩基はより疎水性であり、スニチニブ遊離塩基放出はスニチニブリンゴ酸塩よりも更に遅い。また、放出媒質も薬物放出に影響する。放出は、媒質ｐＨの増加に伴って増加する。
【００９２】
作製方法
ミクロ粒子及びナノ粒子を作製する一般的な技法として、限定されないが、溶媒蒸発、溶媒除去、噴霧乾燥、転相、コアセルベーション、及び低温焼結（low temperature casting）が挙げられる。粒子製剤化の好適な方法を以下に簡潔に記載する。ｐＨ調節剤、崩壊剤、防腐剤、及び抗酸化剤を含む薬学的に許容可能な賦形剤を粒子形成の間に粒子に組み込んでもよい。
【００９３】
好ましい実施形態では、上記製剤はエマルジョンによって作製される。
【００９４】
１．溶媒蒸発
この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス及び１つ以上の薬物）を、塩化メチレン等の揮発性有機溶媒に溶解する。その後、薬物を含有する有機溶液を、ポリ（ビニルアルコール）等の界面活性剤を含む水溶液中に懸濁する。得られるエマルジョンを大半の有機溶媒が蒸発して固体ナノ粒子を残すまで撹拌する。得られたナノ粒子を水で洗浄し、凍結乾燥器で一晩乾燥させる。種々のサイズ及び形態のナノ粒子をこの方法によって得ることができる。
【００９５】
或る特定のポリ無水物等の不安定なポリマーを含有する薬物は、水の存在により製造過程で分解する可能性がある。これらのポリマーに対しては、完全に無水の有機溶媒中で行われる以下の２つの方法を使用することができる。
【００９６】
２．溶媒除去
また、溶媒除去を使用して加水分解に不安定な薬物から粒子を作製することができる。この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス、及び１つ以上の薬物）を塩化メチレン等の揮発性有機溶媒中に分散させるか、又は溶解させる。その後、この混合物を有機性油（シリコンオイル等）中に撹拌することによって懸濁させ、エマルジョンを形成する。エマルジョンから形成される固体粒子は、その後上清から単離され得る。この技法により製造された球体の外部の形態は、薬物のアイデンティティに大きく依存する。
【００９７】
３．噴霧乾燥
この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス及び１つ以上の薬物）を、塩化メチレン等の有機溶媒に溶解する。圧縮ガスの流れによって制御される微細化ノズルにより溶液を噴出させ、得られたエアロゾルを加熱された気体のサイクロンに漂わせて、微小滴から溶媒を蒸発させて粒子を形成させる。この方法を使用して、０．１ミクロン〜１０ミクロンの範囲の粒子を得ることができる。
【００９８】
４．転相
粒子を転相法（phase inversion method）を使用して、薬物から形成することができる。この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス及び１つ以上の薬物）を「良好な」溶媒に溶解し、好ましい条件下で、薬物が自発的にミクロ粒子又はナノ粒子を生じるように、該溶液を強い非溶媒（non solvent）へと注ぐ。上記方法を使用して、例えば、典型的には狭い粒度分布で、約１００ナノメートル〜約１０ミクロンを含む広範囲のサイズのナノ粒子をもたらすことができる。
【００９９】
５．コアセルベーション
コアセルベーションを使用する粒子形成技法は、当該技術分野で、例えば英国特許第９２９４０６号、英国特許第９２９４０１号、並びに米国特許第３，２６６，９８７号、同第４，７９４，０００号、及び同第４，４６０，５６３号において知られている。コアセルベーションは、２つの非混和液相への薬物（又はポリマーマトリクス、及び１つ以上の薬物）溶液の分離を含む。１つの相は、高濃度の薬物を含有する濃厚なコアセルベート相であるのに対し、第２相は低濃度の薬物を含む。濃厚なコアセルベート相内では、薬物はナノスケール又はマイクロスケールの小滴を形成し、それらは硬化して粒子となる。コアセルベーションは、温度変化、非溶媒の添加若しくはミクロ塩（micro-salt）の添加（単純コアセルベーション）により、又は別のポリマーの添加により誘導されて高分子間錯体を形成することができる（複合コアセルベーション）。
【０１００】
６．低温焼結
制御放出ミクロスフェアの極低温焼結に関する方法は、Gombotz et al.に対する米国特許第５，０１９，４００号に記載される。この方法では、薬物（又はポリマーマトリクス及びスニチニブ）は溶媒中に溶解される。その後、混合物を、薬物小滴を凍結する薬液の氷点を下回る温度で液状の非溶媒の入った容器に微粒化する。薬物に対する小滴及び非溶媒が温められるにつれて、小滴中の溶媒は溶けて、非溶媒中に抽出されてミクロスフェアを硬化する。
【０１０１】
Ｄ．インプラント
薬物を封入する、及び／又は分散させるインプラントが形成され得る。好ましい実施形態では、インプラントは眼内インプラントである。好適なインプラントとして、限定されないが、ロッド、ディスク、及びウェファーが挙げられる。マトリクスは、上に記載されるいずれかの非生分解性又は生分解性の高分子で形成され得るが、生分解性高分子が好ましい。ポリマーマトリクスの組成は、ｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性に必要な時間、すなわち、送達が望まれる部位への分布に必要なその時間、及び送達に望ましい時間に基づいて選択される。
【０１０２】
インプラントは、ファイバー、シート、フィルム、マイクロスフェア、球体、円盤、ロッド、又はプラーク（plaques）等の任意の幾何学形状であってもよい。インプラントのサイズは、インプラントに対する忍容性、インプラントの位置、インプラント挿入の推奨される方法を考慮したサイズ制限、扱いやすさ等の因子によって決定される。
【０１０３】
シート又はフィルムを採用する場合、シート又はフィルムは、扱いやすいように、約０．１ｍｍ〜１．０ｍｍの厚さで少なくとも約０．５ｍｍ×０．５ｍｍ、通常約３ｍｍ〜１０ｍｍ×５ｍｍ〜１０ｍｍの範囲である。ファイバーを採用する場合、繊維径は、一般に約０．０５ｍｍ〜３ｍｍの範囲であり、繊維長は、一般に約０．５ｍｍ〜１０ｍｍの範囲である。
【０１０４】
また、移植部位で放出の速度、治療期間、及び薬物濃度を制御するためインプラントのサイズ及び形状を使用することができる。より大きなインプラントは、比例してより多量の用量を伝送達するが、表面対質量比に依存して、より遅い放出速度を有する場合がある。インプラントの特定のサイズ及び幾何形状は、移植の部位に適するように選択される。
【０１０５】
眼内インプラントは、球形であってもよく、又は非球形であってもよい。球形インプラントに対して、インプラントは、約５μｍ〜約２ｍｍの最大寸法（例えば直径）、又は針による投与に対して約１０μｍ〜約１ｍｍ、外科的移植による投与に対して１ｍｍ超、若しくは２ｍｍ超、例えば３ｍｍ若しくは最大１０ｍｍを有する場合がある。インプラントが非球形である場合、インプラントは、約５μｍ及び約２ｍｍの最大寸法若しくは最小寸法、又は針による投与に対して約１０μｍ〜約１ｍｍ、外科的移植による投与に対して１ｍｍ超、若しくは２ｍｍ超、例えば３ｍｍ若しくは最大１０ｍｍを有する場合がある。
【０１０６】
ヒトの硝子体腔は、例えば１ｍｍ〜１０ｍｍの長さを有する、変化する幾何形状の比較的大きなインプラントを適応することができる。インプラントは、約２ｍｍ×０．７５ｍｍの直径の寸法を有する円筒状ペレット（例えばロッド）であってもよい。インプラントは、長さ約７ｍｍ〜約１０ｍｍ、直径約０．７５ｍｍ〜約１．５ｍｍの円筒状のペレットであってもよい。或る特定の実施形態では、インプラントは、直径約０．５ｍｍ、長さ約６ｍｍ、及び重量およそ１ｍｇを有する押出しフィラメントの形態である。いくつかの実施形態では、寸法は、針による眼内注射に対して既に承認されたインプラントであるか、又はそれに類似する、すなわち直径４６０ミクロン及び長さ６ｍｍ、並びに直径３７０ミクロン及び長さ３．５ｍｍである。
【０１０７】
また、眼内インプラントは、硝子体液等の眼の中へのインプラントの挿入、及びその後のインプラントの適応の両方を容易にするように、少なくとも或る程度柔軟であるように設計され得る。インプラントの全重量は、通常約２５０μｇ〜５０００μｇ、例えば約５００μｇ〜１０００μｇである。或る特定の実施形態では、眼内インプラントは、約５００μｇ、７５０μｇ又は１０００μｇの質量を有する。
【０１０８】
２．製造方法
インプラントは、当該技術で知られている任意の好適な技法を使用して製造され得る。インプラントの作製に適した技法の例として、溶媒蒸発法、相分離法、界面法、成型法、射出成型法、押出法、共押出方法、カーバープレス法、打抜き法、熱圧縮、及びそれらの組合せが挙げられる。インプラントの製造に適した方法は、インプラント中に存在するポリマー（単数／複数）の特性、インプラント中に存在する１つ以上の薬物の特性、及びインプラントの所望の形状及びサイズを含む多くの因子を考慮して選択され得る。インプラントの作製に適した方法が、例えば、米国特許第４，９９７，６５２号、及び米国特許出願公開第２０１０／０１２４５６５号に記載されている。
【０１０９】
或る特定の場合、インプラント製造中の溶媒の必要を回避するため、押出法を使用してもよい。押出法を使用する場合、ポリマー（単数／複数）及び薬物は、製造に必要な温度、通常、少なくとも約８５℃で安定しているように選択される。しかしながら、ポリマー成分、及び１つ以上の薬物の性質に応じて、押出法は、約２５℃〜約１５０℃、例えば、約６５℃〜約１３０℃の温度を採用することができる。インプラントは、該インプラントの表面の全て又は一部を覆うコーティングを提供するために共押出しされてもよい。かかるコーティングは、浸食性又は非浸食性であってもよく、薬物、水、又はそれらの組合せに対して不浸透性、半浸透性、又は浸透性であってもよい。かかるコーティングは、インプラントからの薬物の放出を更に制御するために使用され得る。
【０１１０】
圧縮法を使用してインプラントを作製してもよい。圧縮法は、頻繁に、押出法より速い放出速度を有するインプラントを生じる。圧縮法は、約５０ｐｓｉ〜１５０ｐｓｉ、例えば約７０ｐｓｉ〜８０ｐｓｉ、より一層例示的には約７６ｐｓｉの圧力を採用してもよく、約０℃〜約１１５℃、例えば約２５℃の温度を使用してもよい。
【０１１１】
ＩＶ．医薬製剤
Ａ．薬学的賦形剤
医薬製剤は、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤と組み合わせてスニチニブを含む。代表的な賦形剤として、溶媒、希釈剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤、懸濁化剤、湿潤剤、粘度調整剤、等張化剤、安定剤及びそれらの組合せが挙げられる。好適な薬学的に許容可能な賦形剤は、例えば、一般に安全であると認定され（ＧＲＡＳ）、望ましくない生物学的副作用又は不要な相互作用を生じることなく個体に投与され得る材料から選択される。
【０１１２】
無菌、保存を補助するため、及びｐＨ若しくは等張性を調整及び／又は維持するため、賦形剤を上記製剤に添加してもよい。ミクロ粒子は、無菌の生理食塩水、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、平衡塩類溶液（ＢＳＳ）、粘性ゲル、又は眼において承認された粘弾性薬剤等の眼への投与のための他の薬学的に許容可能な担体に懸濁され得る。
【０１１３】
上に示されるように、薬物放出は、媒質、特に溶液のｐＨによって影響を受ける。例えば、スニチニブ遊離塩基粒子の放出は、遊離塩基が遊離塩基よりも親水性である塩を形成することから、生理食塩水中よりもｐＨ  ７のＰＢＳにおいてより速い。したがって、投与部位のｐＨは、薬物放出に影響を及ぼすであろう。
【０１１４】
いくつかの場合、上記医薬製剤は、薬物の制御放出に対する１種類のみのコンジュゲート又はポリマー粒子を含む（例えば、医薬製剤に組み込まれた薬物粒子が同じ組成を有する、薬物粒子を含む製剤）。他の実施形態では、医薬製剤は、薬物の制御放出に対する、２以上の異なる種類のコンジュゲート、又はポリマー粒子を含む（例えば、医薬製剤が、異なる化学組成、異なる平均粒子径、及び／又は異なる粒度分布を有する、２以上の薬物粒子の集団を含む）。
【０１１５】
薬物から形成された粒子は、例えば、眼又は腫瘍等の組織への注射用の溶液又は懸濁液として製剤化される。
【０１１６】
眼投与用医薬製剤は、例えば、スニチニブ、又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩から形成された粒子の無菌水溶液又は懸濁液の形態である。許容可能な溶媒としては、例えば、水、リンゲル液、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、及び等張食塩水が挙げられる。また、上記製剤は、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤又は溶媒、例えば１，３−ブタンジオール中の無菌液、懸濁液、又はエマルジョンであってもよい。
【０１１７】
いくつかの例では、上記製剤は、液状形態で分配されるか、又は包装される。代替的には、眼投与用製剤を、例えば好適な液状製剤の凍結乾燥によって得られる固体として包装することができる。固体は、投与に先立って適切な担体又は希釈剤により再構成され得る。
【０１１８】
眼の投与に対する溶液、懸濁液又はエマルジョンは、眼の投与に適したｐＨを維持するのに必要な有効量のバッファーで緩衝されてもよい。好適なバッファーは、当業者によく知られており、有用なバッファーのいくつかの例は酢酸塩、ホウ酸塩、炭酸塩、クエン酸塩、及びリン酸塩のバッファーである。
【０１１９】
また、眼の投与に対する溶液、懸濁液又はエマルジョンは、製剤の等張の範囲を調整するために１つ以上の等張化剤を含んでもよい。好適な等張化剤は当該技術分野でよく知られており、いくつかの例としてグリセリン、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム及び他の電解質が挙げられる。
【０１２０】
また、眼の投与に対する溶液、懸濁液又はエマルジョンは、眼科用調合薬の細菌汚染を予防するための１つ以上の防腐剤を含んでもよい。好適な防腐剤は当該技術分野において知られており、ポリヘキサメチレンビグアニジン（ＰＨＭＢ）、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）、安定化オキシクロロ錯体（別名Ｐｕｒｉｔｅ（商標）として知られる）、酢酸フェニル水銀、クロロブタノール、ソルビン酸、クロルヘキシジン、ベンジルアルコール、パラベン、チメロサール及びそれらの混合が挙げられる。
【０１２１】
また、眼の投与に対する、溶液、懸濁液又はエマルジョンは、分散剤、湿潤剤、及び懸濁化剤等の当該技術分野で知られている１つ以上の賦形剤を含んでもよい。
【０１２２】
Ｂ．追加の活性剤
上記ポリマー粒子中に存在するスニチニブ、又はその類縁体若しくは薬学的に許容可能な塩に加えて、上記製剤は、１つ以上の追加の治療剤、診断剤、及び／又は予防剤を含んでもよい。活性剤は、酵素若しくはタンパク質、ポリペプチド又は核酸等の低分子活性剤又は生体分子であってもよい。好適な低分子活性剤として、有機化合物、及び有機金属化合物が挙げられる。いくつかの例では、低分子活性剤は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満、例えば約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、例えば約１２００ｇ／ｍｏｌ未満の分子量を有する。低分子の活性剤は、親水性、疎水性、又は両親媒性の化合物であってもよい。
【０１２３】
いくつかの場合、１つ以上の追加の活性剤は、粒子中に封入されてもよく、分散されてもよく、又は他の場合には粒子と混ざってもよい。また、或る特定の実施形態では、１つ以上の追加の活性剤は、薬学的に許容可能な担体に溶解されてもよく、又は懸濁されてもよい。
【０１２４】
眼疾患の治療に対する医薬組成物の場合、上記製剤は１つ以上の眼科薬物を含んでもよい。特定の実施形態では、眼科薬物は、後眼部の疾患又は障害を治療、予防、又は診断するために使用される薬物である。眼科薬物の非限定的な例として、緑内障治療剤、血管形成抑制剤、感染症治療剤、抗炎症剤、増殖因子、免疫抑制剤、抗アレルギー剤、及びそれらの組合せが挙げられる。
【０１２５】
代表的な緑内障治療剤として、プロスタグランジン類縁体（トラボプロスト、ビマトプロスト及びラタノプロスト等）、ベータアドレナリン受容体アンタゴニスト（チモロール、ベタキソロール、レボベタキソロール及びカルテオロール）、アルファ−２アドレナリン受容体アゴニスト（ブリモニジン及びアプラクロニジン等）、炭酸脱水酵素阻害剤（ブリンゾラミド、アセタゾラミド及びドルゾラミド等）、縮瞳薬（すなわち、ピロカルピン及びエコチオパート等の副交感神経刺激薬）、セロトニン作動薬、ムスカリン作動薬、ドパミン作動薬、及びアドレナリン作動薬（アプラクロニジン、及びブリモニジン等）が挙げられる。
【０１２６】
代表的な血管形成抑制剤として、限定されないが、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））及びｒｈｕＦＡｂ  Ｖ２（ラニビズマブ、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（商標））等の血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）に対する抗体、及びアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（商標））を含む他の抗ＶＥＧＦ化合物；ＭＡＣＵＧＥＮ（商標）（ペガプタニブナトリウム、抗ＶＥＧＦアプタマー又はＥＹＥ００１）（Eyetech Pharmaceuticals）；色素上皮由来因子（複数の場合がある）（ＰＥＤＦ）；セレコキシブ（ＣＥＬＥＢＲＥＸ（商標））及びロフェコキシブ（ＶＩＯＸＸ（商標））等のＣＯＸ−２阻害剤；インターフェロンアルファ；インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）；レナリドマイド（ＲＥＶＬＩＭＩＤ（商標））等のサリドマイド（ＴＨＡＬＯＭＩＤ（商標））及びその誘導体；スクアラミン；エンドスタチン；アンジオスタチン；ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（商標）（Sirna Therapeutics）等のリボザイム阻害剤；ＮＥＯＶＡＳＴＡＴ（商標）（AE-941）（カナダ国ケベックシティのAeterna Laboratories）等の多機能の抗血管形成剤；スニチニブリンゴ酸塩（ＳＵＴＥＮＴ（商標））等の受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）阻害剤；ソラフェニブ（Ｎｅｘａｖａｒ（商標））及びエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））等のチロシンキナーゼ阻害剤；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（商標））及びセツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（商標））等の上皮増殖因子受容体に対する抗体、また同様に当該技術分野で知られている他の血管形成抑制剤が挙げられる。
【０１２７】
感染症治療薬として、抗ウィルス剤、抗菌剤、抗寄生虫薬及び抗真菌剤が挙げられる。代表的な抗ウィルス剤として、ガンシクロビル及びアシクロビルが挙げられる。代表的な抗生物質として、ストレプトマイシン、アミカシン、ゲンタミシン、及びトブラマイシン等のアミノグリコシド、ゲルダナマイシン及びハービマイシン等のアンサマイシン、カルバセフェム、カルバペネム、セファロスポリン、バンコマイシン、テイコプラニン及びテラバンシン等の糖ペプチド、リンコサミド、ダプトマイシン等のリポペプチド、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン及びエリスロマイシン等のマクロライド、モノバクタム、ニトロフラン、ペニシリン、バシトラシン、コリスチン及びポリミキシンＢ等のポリペプチド、キノロン、スルホンアミド及びテトラサイクリンが挙げられる。
【０１２８】
いくつかの場合、活性剤は、オロパタジン及びエピナスチン等の抗アレルギー剤である。  
【０１２９】
抗炎症剤は、非ステロイド系及びステロイド系の双方の抗炎症剤を含む。好適なステロイドの活性剤として、グルココルチコイド、プロゲスチン、鉱質コルチコイド及びコルチコステロイドが挙げられる。
【０１３０】
眼科薬物は、その中性の形態で、又は薬学的に許容可能な塩の形態で存在し得る。いくつかの場合、増強された安定性、又は望ましい溶解度、又は溶解プロファイル等の塩の１つ以上の有利な物理的特性により、活性剤の塩を含む製剤を作製することが望ましい場合がある。
【０１３１】
一般に、薬学的に許容可能な塩は、水中若しくは有機溶媒中、又は２者の混合物中（一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール又はアセトニトリルのような非水性媒質が好まれる）における、遊離酸又は塩基の形態の活性剤と化学量の適切な塩基又は酸との反応によって作製され得る。薬学的に許容可能な塩として、薬物と好適な有機リガンド（例えば、第四級アンモニウム塩）との反応によって形成された塩と同様に、無機酸、有機酸、アルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩に由来する活性剤の塩が挙げられる。好適な塩の一覧は、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 20th ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2000, p. 704に見られる。薬学的に許容可能な塩の形態で投与される場合もある眼科薬物の例として、マレイン酸チモロール、酒石酸ブリモニジン及びジクロフェナクナトリウムが挙げられる。スニチニブ又はスニチニブ類縁体の対イオンとして使用することができる薬学的に許容可能な酸の非限定的な例として、限定されないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸及び硝酸等の無機酸から誘導されるもの；並びに酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、メシル酸、エシル酸（esylic）、ベシル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸及びＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨ（ここでｎは０〜４である）等の有機酸から調製される塩が挙げられる。いくつかの場合、活性剤は、眼の画像化又は他の場合には眼を評価する診断剤である。例示的な診断剤として、常磁性分子、蛍光性化合物、磁気分子及び放射性核種、ｘ線造影剤及び造影剤が挙げられる。
【０１３２】
或る特定の実施形態では、上記医薬組成物は、１つ以上の局所麻酔薬を含む。代表的な局所麻酔薬として、テトラカイン、リドカイン、アメソカイン、プロパラカイン、リグノカイン及びブピバカインが挙げられる。また、いくつかの場合、局所麻酔薬の分散を加速及び改善するため、ヒアルロニダーゼ酵素等の１つ以上の追加の薬剤が上記製剤に添加される。
【０１３３】
Ｖ．使用方法
スニチニブ、又はその類縁体若しくはその薬学的に許容可能な塩の送達のための制御放出投薬製剤は、癌及び肥満を含む血管化と関連する患者の疾患又は障害を治療するために使用され得る。好ましい実施形態では、上記医薬組成物を、眼の血管新生に関連する患者の疾患又は障害を治療又は予防するために投与する。投与により、治療の利益をもたらすのに十分に高いが、細胞毒性を回避するため十分に低い濃度で、長期間に亘って、１つ以上の薬物が放出される。
【０１３４】
眼の慢性疾患を治療するため、眼にスニチニブ又はその薬学的に許容可能な塩を送達するため長時間作用する方法が必要とされている。スニチニブ又はその塩の延長された送達を提供する製剤は、スニチニブの投与と関連する毒性の可能性を最小化にする。また、スニチニブ又はその塩の延長された送達を提供する製剤は、ＶＥＧＦ及び血管形成の他の刺激因子の抑制を持続させ、効能を最大化し、血管新生の退化を促進し、網膜下出血を含む致命的な合併症の可能性を最小化する。さらに、頻繁な注射の必要を減少させることは、眼内炎のリスクを減少し、また医師、患者及び患者の家族にとって主な苦労である頻繁な受診の負担を軽減する。
【０１３５】
Ａ．眼の疾患及び障害
眼に投与された場合、上記粒子は、例えば、３日超、７日超、１０日超、１５日超、２１日超、２５日超、３０日超、４５日超、又は少なくとも最長約２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、若しくは６ヶ月以上の長期間に亘って低用量の１つ以上の活性剤を放出する。暗順応ＥＲＧ  ｂ波振幅の減少、及び／又は網膜変性等の副作用を最小化しながら、長期間に亘って眼に治療的有効量の１つ以上の活性剤を投与するため、薬物の構造又はポリマーマトリクスの構成、粒子の形態、及び投与する粒子の用量を適合させることができる。
【０１３６】
１つ以上の薬物の制御放出のための粒子を含む医薬組成物を、１つ以上の眼の疾患又は障害を治療又は予防するため、それを必要とする患者の眼に投与することができる。いくつかの場合には、眼の疾患又は障害は、後眼部を冒す。本明細書で使用される後眼部は、前部硝子体膜と、硝子体液、網膜、脈絡膜、及び視神経等のその後ろの全ての光学構造体を含む、眼の後ろ３分の２を指す。
【０１３７】
好ましい実施形態では、粒子を含む医薬組成物は、眼内の血管新生性疾患を治療又は予防するために投与される。眼疾患、特に眼の血管新生を特徴とするものは、かなりの公衆衛生上の関心事である。眼内の血管新生性疾患は、眼の１つ以上の領域における抑制されない（unchecked）血管の成長を特徴とする。抑制されなければ、血管化は、眼の１つ以上の構造を損傷及び／又は不明瞭にし、視力喪失をもたらす。眼内の血管新生性疾患として、増殖性網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病及び他の虚血関連の網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォンヒッペルリンダウ病、眼のヒストプラズマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜血管新生、及び網膜血管新生（ＲＮＶ）が挙げられる。眼内の血管新生性疾患は、多くの場合、重篤な視力喪失、並びに生活の質及び生産性の低下に結びつき、世界的に数百万人を悩ませる。
【０１３８】
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、高齢者の間で重篤で不可逆的な視力喪失の主な原因である。Bressler, et al. JAMA, 291:1900-1901(2004)。ＡＭＤは、ドルーゼンとして知られる淡黄色のスポット、網膜色素上皮（ＲＰＥ）の傷害、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、及び円板状黄斑変性等の幅広い臨床上の及び病的な所見を特徴とする。ＡＭＤは、萎縮型（すなわち、非滲出型）又は滲出型（wet：ウェット型）（すなわち、滲出型（exudative））のいずれかに分類される。萎縮型ＡＭＤは、ドルーゼンと呼ばれる病変の存在を特徴とする。滲出型ＡＭＤは、視野の中心の血管新生を特徴とする。それほど一般的でないが、滲出型ＡＭＤは、ＡＭＤに関連する重篤な視力喪失の８０％〜９０％を占める（Ferris, et al. Arch. Ophthamol. 102:1640-2 (1984)）。ＡＭＤの原因は不明である。しかしながら、ＡＭＤを発症するリスクは、加齢と共に増加することが明らかである。また、ＡＭＤは、家族歴、喫煙、酸化ストレス、糖尿病、アルコール摂取、及び直射日光曝露を含む危険因子と結び付けられている。
【０１３９】
滲出型ＡＭＤは、典型的には、黄斑領域のＣＮＶを特徴とする。脈絡膜の毛細血管が増殖し、ブルック膜を貫いて網膜色素上皮（ＲＰＥ）に達する。いくつかの場合には、毛細血管が網膜下腔へと伸びる場合がある。新しく形成された毛細血管の透過性の増加は、ＲＰＥ下の、及び／又は、網膜神経感覚上皮の下、若しくはその中の漿液又は血液の滞留をもたらす。網膜中心窩が腫脹するか、又は剥離すると、視力の低下が起こる。線様化生（fibrous metaplasia）及び組織化（organization）は続いて起こる場合があり、結果として末期のＡＭＤを構成し、永久的な視力喪失に関係する円盤形瘢痕と呼ばれる網膜下の腫瘤の増加をもたらす（D'Amico D J. N. Engl. J. Med. 331:95-106 (1994)）。
【０１４０】
また、ぶどう膜炎等の眼の他の疾患及び障害は、既存の治療を使用して治療することが難しい。ぶどう膜炎は、虹彩、毛様体又は脈絡膜等のブドウ膜の任意の構成要素の炎症を指す一般用語である。網膜炎と呼ばれる重なる網膜の炎症、又は視神経炎と呼ばれる視神経の炎症が、ぶどう膜炎に付随して、又は付随せずに起こる場合がある。
【０１４１】
特に、認識されないか、又は不適切に治療された場合、ぶどう膜炎の眼の合併症は深刻で不可逆的な視力損失をもたらす場合がある。ぶどう膜炎の最も頻繁な合併症は、網膜剥離、網膜、視神経又は虹彩の新血管新生、及び嚢胞様黄斑浮腫を含む。視覚に最も重大な網膜の中心５％である黄斑において浮腫、漏出、及び背景糖尿病網膜症（ＢＤＲ）が生じる場合、黄斑浮腫（ＭＥ）が起こる可能性がある。ＭＥは、重症の視力障害の一般的な原因である。
【０１４２】
眼の慢性炎症と関連する疾患と同様に、眼内の神経脈管の疾患を医薬品により治療する多くの試みがあった。臨床的に有用な治療法を開発する試みは、長期間に亘って眼組織中に治療的有効量の医薬品を投与し、維持することの困難性によって悩まされてきた。さらに、多くの医薬品は、眼組織に投与された場合に著しい副作用及び／又は毒性を示す。
【０１４３】
眼内血管新生性疾患は、眼の血管新生を特徴とする眼の疾患又は障害である。血管新生は、角膜、網膜、脈絡膜層、又は虹彩を含む眼の、１つ以上の領域に生じる場合がある。或る特定の実例では、眼の疾患又は障害は、眼の脈絡膜層における新たな血管の形成（すなわち脈絡膜血管新生、ＣＮＶ）を特徴とする。いくつかの例では、眼の疾患又は障害は、網膜静脈から始まり、網膜の内部の（硝子体）表面に沿って伸びる血管の形成（すなわち、網膜血管新生、ＲＮＶ）を特徴とする。
【０１４４】
眼の例示的な血管新生性疾患として、脈絡膜血管新生に関連する加齢性黄斑変性、増殖型糖尿病性網膜症（網膜、網膜前方、又は虹彩の血管新生に関連する糖尿病性網膜症）、増殖性硝子体網膜症、未熟児網膜症、病的近視、フォンヒッペルリンダウ病、推定眼ヒストプラズマ症候群（ＰＯＨＳ）、並びに網膜静脈分枝閉塞症、網膜中心静脈閉塞症、網膜動脈分枝閉塞症、及び網膜中心動脈閉塞症等の虚血と関連する病状が挙げられる。
【０１４５】
血管新生は、腫瘍によって引き起こされる場合がある。腫瘍は、良性又は悪性の腫瘍のいずれであってもよい。例示的な良性腫瘍として、過誤腫及び神経線維腫が挙げられる。例示的な悪性腫瘍として、脈絡膜黒色腫、虹彩のブドウ膜黒色腫、毛様体のブドウ膜黒色腫、網膜芽細胞腫又は転移性疾患（例えば脈絡膜転移）が挙げられる。
【０１４６】
血管新生は、眼の傷に関連する場合がある。例えば、傷は、角膜裂傷等の眼球に対する外傷性損傷の結果である場合がある。代替的には、傷は眼科手術の結果である場合がある。
【０１４７】
上記薬物を、硝子体網膜の手術後の増殖性硝子体網膜症を予防する、又はそのリスクを減らすため、角膜の手術（角膜移植及びエキシマレーザー手術等）後の角膜薄濁を予防するため、線維柱帯切除術（トラベクレクトミー）の閉鎖を予防するため、又は翼状片の再発を予防若しくは実質的に遅延するために投与することができる。
【０１４８】
上記薬物を、炎症に関連する眼疾患を治療するか、又は予防するために投与することができる。かかる場合、上記薬物は、例えば抗炎症剤を含む。例示的な炎症性眼疾患として、限定されないが、ぶどう膜炎、眼内炎、及び眼の外傷又は手術が挙げられる。
【０１４９】
また、眼疾患は、ＨＩＶ網膜症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、及び眼内炎等の感染性眼疾患であってもよい。
【０１５０】
また、１つ以上の薬物から形成される粒子を含有する医薬組成物を、ドライアイ、マイボーム腺炎、緑内障、結膜炎（例えば、アレルギー性結膜炎、春季カタル、巨大乳頭結膜炎、アトピー性角結膜炎）、虹彩血管新生を伴う新生血管緑内障、及び虹彩炎等の眼の他の部分を冒す１つ以上の疾患を治療又は予防するために使用することができる。
【０１５１】
１．投与方法
本明細書に記載される製剤は、硝子体内注射（例えば、前部、中部、又は後部の硝子体注射）、結膜下注射、前房内注射、側頭部角膜輪部を介する前眼房への注射、角膜実質内注射、脈絡膜下腔への注射、角膜間注射、網膜下注射、及び眼内注射によって眼に局所的に投与され得る。好ましい実施形態では、上記医薬組成物は硝子体内注射によって投与される。
【０１５２】
本明細書に記載されるインプラントは、当該技術において既知の移植に適した方法を使用して、眼に投与され得る。或る特定の実施形態では、インプラントは２２−ゲージ針等の針を使用して水晶体内に注入される。水晶体内のインプラントの配置は、インプラントのサイズ、インプラントの形状、及び治療される疾患若しくは障害を考慮して変化され得る。
【０１５３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物、及び／又はインプラントは、１つ以上の追加の活性剤と同時投与される。本明細書で使用される「同時投与」は、異なる剤形を同時に、又は本質的に同時に使用する投与と同様に、同じ剤形内の１つ以上の追加の活性剤との１つ以上の薬物の制御放出製剤の投与を指す。本明細書で使用される「本質的に同時に」は、一般的に、１０分以内、例えば５分以内、例えば２分以内、例えば１分以内を意味する。
【０１５４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物、及び／又はインプラントは、眼の血管新生の疾患又は障害に対する１つ以上の追加の治療と同時投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物、及び／又はインプラントは、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（商標））、ラニビズマブ、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（商標）又はアフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（商標））のような１つ以上の抗血管形成剤と同時投与される。
【０１５５】
ｂ．投薬
上記粒子は、長期間に亘って、有効量のスニチニブ、又はその類縁体若しくはその薬学的に許容可能な塩を放出することが好ましい。好ましい実施形態では、粒子は、少なくとも２週の期間に亘り、少なくとも４週の期間に亘り、少なくとも６週の期間に亘り、少なくとも８週の期間に亘り、３ヶ月の期間に亘り、４ヶ月の期間に亘り、５ヶ月の期間に亘り、又は６ヶ月の期間に亘り有効量のスニチニブを放出する。いくつか実施形態では、粒子は、３ヶ月以上の期間に亘って有効量のスニチニブを放出する。
【０１５６】
いくつかの場合、医薬製剤は、脈絡膜血管新生を減少させる治療的有効量で、それを必要とする患者に投与される。別の実施形態では、医薬製剤は、角膜血管新生を減少させる量で、及びそれを減少させる時間に亘って投与される。いくつかの場合、医薬製剤は、急性黄斑変性（ＡＭＤ）等における網膜血管新生を減少させる治療的有効量で、それを必要とする患者に投与される。
【０１５７】
ｃ．治療有効性
実施例は、様々な動物モデルにおける治療有効性を評価する方法を実証する。ヒト及びイヌ等の動物の場合、眼科分野の当業者によって十分に技法が確立されており、細隙灯評価、網膜の目視検査、視野、視力及び眼内圧の測定を含み得る。
【０１５８】
加齢黄斑変性の場合、患者における治療有効性は、ベースラインから希望時間までの最高矯正視力（ＢＣＶＡ）の平均変化を評価すること、ベースラインと比較して、希望時間の視力で１５個（３行）未満の文字を見失う患者の割合を評価すること、ベースラインと比較して、希望時間の視力で１５個（３行）以上の文字を得る患者の割合を評価すること、希望時間において２０／２０００と同等又はそれよりも劣る視力スネレンを有する患者の割合を評価すること、国立眼学研究所の視覚機能アンケートを評価すること、並びに希望時間で蛍光眼底血管撮影を使用して、ＣＮＶのサイズ、及びＣＮＶの漏出量を評価することの１つ以上によって測定され得る。
【０１５９】
或る特定の実施形態では、最近ＣＮＶを発症した、本明細書に記載される製剤により治療される患者の少なくとも２５％、例えば少なくとも３０％、例えば少なくとも３５％、例えば少なくとも４０％が３以上の視線により改善する（by three or more lines of vision）。
【０１６０】
本発明は、以下の非限定的な実施例の参照により更に理解される。
【実施例】
【０１６１】
実施例１．界面活性剤、スニチニブの形態、及び全体的なアルカリ度の薬物装荷に対する影響、並びにミクロ粒子（ＭＰ）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出プロファイル
材料及び方法
材料−２つの形態のスニチニブ
２つの形態のスニチニブ、すなわち、いずれもLC Lab（米国マサチューセッツ州ウーバン）から入手したスニチニブリンゴ酸塩及びスニチニブ遊離塩基を使用した。
【０１６２】
ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ、５０：５０）、２Ａを米国マサチューセッツ州ウォルサムのAlkermesから入手し、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ、５０：５０）、２Ａを米国アラバマ州バーミンガムのLakeshore Biomaterialsから入手し、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ、５０：５０）、４Ａを米国アラバマ州バーミンガムのLakeshore Biomaterialsから入手し、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ、７５：２５）、ＰＵＲＡＳＯＲＢ  ＰＤＬＧ  ７５０２Ａをオランダ国のPURACから入手し、ポリエチレングリコール−ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）、ＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）、ＰＥＧ１０％、ＰＬＧＡ  ５０：５０を中国上海済南のJinan Daigang Biomaterials Co, Ltd.から入手し、クロロホルム中に溶解してエーテル中に沈澱させることによって精製した。ＰＬＡ、ポリ（Ｄ、Ｌ−乳酸）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、分子量２５０００、加水分解８８％をPolyscienceから入手した。ＰＥＧ−ＰＬＡ（５Ｋ、４５Ｋ）、１０％ＰＥＧ、ＰＥＧ、５Ｋを合成した。Ｎ，Ｎジメチルトルイジン、Ｎ，Ｎジメチルアニリン、リンゴ酸、クエン酸、トリエチルアミン、及びその他は全てsigma（米国ミズーリ州セントルイス）から入手した。
【０１６３】
粒子の作製及び酸性度／アルカリ度の調整
２つの形態のスニチニブ（リンゴ酸塩又は遊離塩基のいずれか）で装荷したポリマーミクロ粒子をシングルｏ／ｗ又はｓ／ｏ／ｗのエマルジョン、溶媒蒸発法を使用して作製した。簡潔には、塩化メチレン（ジクロロメタン、ＤＣＭとしても知られる）中に溶解したＰＬＧＡと、ＤＭＳＯ中に溶解した薬物又は塩化メチレン中に懸濁した薬物を混合することによって溶液を作製した（Ｏ／Ｗ）。該混合物を、１％のポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を含有する水溶液中に１分間に亘ってホモジナイズした（英国バッキンガムシャー州チェサムのSilverson製ホモジナイザー、モデルＬ４ＲＴ）。その後、粒子を２時間に亘って撹拌して硬化させ、遠心分離によって収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１６４】
界面活性剤の選択において、カチオン性界面活性剤及びイオン性界面活性剤の両方、すなわちドデシル硫酸ナトリウム（「ＳＤＳ」）、及びヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド（「ＨＤＴＡ」）を最初に試し、上記溶媒に添加して粒子を作製した。代替的には、ＳＤＳ又はＨＤＴＡに代えて非イオン性溶媒であるポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を使用した。
【０１６５】
また、粒子をｗ／ｏ／ｗ又はｓ／ｗ／ｏ／ｗの二重動作法（double motion method）によって作製することができる。簡潔には、ＤＭＳＯ及び水の中で薬物を混合するか、又は水に薬物を懸濁した後塩化メチレン中のＰＬＧＡに添加し、超音波処理した後、該混合物を１分間に亘って１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を含有する水溶液中にホモジナイズ（英国バッキンガムシャー州チェサムのSilverson製ホモジナイザー、モデルＬ４ＲＴ）して溶液を作製した。その後、粒子を２時間撹拌して硬化させ、遠心分離によって収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１６６】
形成されるミクロ粒子の薬物装荷能力を増すため、有機相にアルカリを添加することによって、有機相の酸性度を調整することができる。
【０１６７】
製剤ＩＤ
識別を容易にするため、種々の処方に従って作製された粒子にそれぞれＩＤ、例えばＭＰ−ｎ（ｎは１〜２０の番号）を付与した。スニチニブリンゴ酸塩をＭＰ−１〜ＭＰ−１０、ＭＰ−１４、ＭＰ−１５、及びＭＰ−１８に使用し、一方、スニチニブ遊離塩基をＭＰ−１１〜ＭＰ−１３、ＭＰ−１６、ＭＰ−１７、ＭＰ−１９、及びＭＰ−２０に使用した。
【０１６８】
水中油（Ｏ／Ｗ）型シングルエマルジョン法
ＭＰ−１：１００ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を０．５ｍＬのＤＭＳＯ及びトリエチルアミンに溶解した。その後、それらを共に混合し、１％のポリビニルアルコール（ＰＶＡ）を含有する水溶液中に１分間、５０００ｒｐｍでホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄し、凍結乾燥した。
【０１６９】
ＭＰ−２：２００ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Alkermers）を３ｍＬの塩化メチレンに溶解し、４０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を０．５ｍＬのＤＭＡＯ及びトリエチルアミンに溶解した。その後、それらを共に混合し、１％ＰＶＡ中、５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄し、凍結乾燥した。
【０１７０】
ＭＰ−３：１８０ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Alkermers）、及び２０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を３ｍＬの塩化メチレンに溶解し、４０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を０．５ｍＬのＤＭＳＯ、トリエチルアミンに溶解した。その後、それらを共に混合し、１％ＰＶＡ中、５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄し、凍結乾燥した。
【０１７１】
ＭＰ−４：１４０ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Alkermers）、６０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を３ｍＬの塩化メチレンに溶解し、４０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を０．５ｍＬのＤＭＳＯ及びトリエチルアミンに溶解した。その後、それらを共に混合し、１％ＰＶＡ中、５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄し、凍結乾燥した。
【０１７２】
ＭＰ−５：１００ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Alkermers）、及び１００ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を３ｍＬの塩化メチレンに溶解し、４０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を０．５ｍＬのＤＭＳＯ及びトリエチルアミンに溶解した。その後、それらを共に混合し、１％ＰＶＡ中、５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄し、凍結乾燥した。
【０１７３】
ＭＰ−６：９０ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Alkermers）、及び１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を０．２５ｍＬのＤＭＳＯ及びＮ，Ｎ−ジメチルトルイジンに溶解した。その後、それらを共に混合し、１％ＰＶＡ中、５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄し、凍結乾燥した。
【０１７４】
ＭＰ−７：９０ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Alkermers）、及び１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を０．２５ｍＬのＤＭＳＯ及びＮ，Ｎ−ジメチルアニリンに溶解した。その後、それらを共に混合し、１％ＰＶＡ中、５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄し、凍結乾燥した。
【０１７５】
ＭＰ−８：１６０ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Alkermers）及び４０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を２ｍＬのＤＭＦに溶解し、２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を添加してボルテックスを行った後、１％ＰＶＡ中で１分間、５０００ｒｐｍでホモジナイズして２時間撹拌し、粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１７６】
ＭＰ−９：９０ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）及び１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、０．２５ｍＬのＤＭＳＯに（溶解した２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩、エタノール中０．１Ｍの水酸化カリウムを添加し、１％ＰＶＡ中、５２００ｒｐｍで１分間ホモジナイズして２時間撹拌し、粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１７７】
ＭＰ−１０：１６０ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Alkermers）及び４０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を２ｍＬの塩化メチレンに溶解し、１ｍＬのＤＭＳＯに溶解した４０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩、トリエチルアミンを添加し、１％ＰＶＡ中、５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズして２時間撹拌し、粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１７８】
ＭＰ−１１：１ｍＬの塩化メチレンに溶解した１００ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）、０．２５ｍＬのＤＭＳＯに溶解した２０ｍｇのスニチニブ遊離塩基、少量のエタノール中１％酢酸を添加し、１％ＰＶＡ中、５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズして２時間撹拌し、粒子を添加し、再蒸留水で洗浄して凍結した。
【０１７９】
ＭＰ−１２：１００ｍｇのＰＬＧＡ（７５０２Ａ、オランダ国のPURAC）を２ｍＬの塩化メチレンに溶解し、０．２５ｍＬのＤＭＳＯに溶解した２０ｍｇのスニチニブ遊離塩基、エタノール中０．１Ｍクエン酸を添加し、１％ＰＶＡ中、３０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１８０】
ＭＰ−１３：１００ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）を２ｍＬの塩化メチレンに溶解し、０．２５ｍＬのＤＭＳＯに溶解した２０ｍｇのスニチニブ遊離塩基、エタノール中０．１Ｍリンゴ酸を添加し、１％ＰＶＡ中、３０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１８１】
Ｓ／Ｏ／Ｗ（水中油中固体）シングルエマルジョン法
ＭＰ−１４：９０ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）及び１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ））を２ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を添加して超音波処理した後、１％ＰＶＡに注いで４３００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１８２】
ＭＰ−１５（水相ｐＨを制御）：９０ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）、１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ））を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を上の溶液に添加し、超音波処理した後１％ＰＶＡ  ＰＢＳ（リン酸緩衝溶液  ｐＨ＝７．４）に注ぎ、４８００ｒｐｍで１分間ホモジナイズして２時間撹拌し、粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１８３】
ＭＰ−１６：９０ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）及び１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブ遊離塩基を上の溶液に添加し、エタノール中０．１Ｍのリンゴ酸を上の溶液に添加して、該溶液を超音波処理した後、１％ＰＶＡに注いで４８００ｒｐｍで１分間ホモジナイズして２時間撹拌し、粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１８４】
ＭＰ−１７：９０ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）及び１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ））を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブ遊離塩基を上の溶液に添加した後、ＰＢＳ中１％のＰＶＡに注いで、４８００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１８５】
ダブルエマルジョン（ｗ／ｏ／ｗ）法
ＭＰ−１８：９０ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）及び１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ））を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を１００μｌのＤＭＳＯ及び２００μｌの水に添加し、超音波処理した後、ＰＢＳ中１％ＰＶＡに注ぎ、３０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１８６】
ＭＰ−１９：９０ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）及び１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ））を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブ遊離塩基を１００μｌのＤＭＳＯ及び２００μｌの水に添加し、超音波処理した後、ＰＢＳ中１％ＰＶＡに注ぎ、４０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１８７】
ＭＰ−２０：９０ｍｇのＰＬＧＡ（４Ａ、Lakeshore biomaterials）及び１０ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ））を１ｍＬの塩化メチレンに溶解し、２０ｍｇのスニチニブ遊離塩基を１００μｌのＤＭＳＯ及び２００μｌの水に添加し、０．１Ｍリンゴ酸を添加し、超音波処理した後、１％ＰＶＡに注ぎ、４０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズし、２時間に亘って撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０１８８】
ミクロ粒子（ＭＰ）の特性評価
ＭＰのサイズをＣｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＶＩ（カリフォルニア州フラートンのBeckman-Coulter Inc.）を使用して特定した。およそ２ｍＬのｉｓｏｔｏｎ  ＩＩ溶液を５ｍｇ〜１０ｍｇのミクロ粒子に添加した。溶液に短時間ボルテックスを行ってミクロ粒子を懸濁させた後、粒子の同時発生が８％〜１０％になるまで１００ｍＬのｉｓｏｔｏｎ  ＩＩ溶液に滴加した。ミクロ粒子の各バッチについて１０００００超の粒子をサイズで分類し、平均粒子径を特定した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの薬物放出速度を特定するため、５ｍｇの薬物装荷粒子を１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）に懸濁し、ロテーター上３７℃でインキュベートした。選択された時間点において、ミクロ粒子を遠心分離によって沈澱させ、上清を除去し、新たなリン酸バッファーで交換した。
【０１８９】
薬物装荷をＵＶ−Ｖｉｓ分光光度法によって特定した。スニチニブを含むミクロ粒子（総重量１０ｍｇ）を無水ＤＭＳＯ（１ｍＬ）に溶解し、薬物の濃度が薬物のＵＶ吸光度の標準曲線の比例領域に含まれるまで更に希釈した。標準曲線に対してＵＶ吸光度を比較することにより、薬物の濃度を特定した。薬物装荷は、ミクロ粒子に対する薬物の重量比として定義される。
【０１９０】
６ｍＬガラスバイアル中、１％のＴｗｅｅｎ  ２０を含有する４ｍＬのＰＢＳにスニチニブを含むＭＰ（総重量１０ｍｇ）を懸濁し、１５０ｒｐｍで振蕩しながら３７℃でインキュベートすることにより、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物放出を特定した。所定の時間点において、バイアルの底に粒子が沈澱した後３ｍＬの上清を取り出し、３ｍＬの新たな放出媒質と交換した。上清中の薬物含有量をＵＶ−Ｖｉｓ分光光度法又はＨＰＬＣによって特定した。
【０１９１】
結果
放出結果の要約
およそ３０日間に亘り、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中において、Ｆ１２７によって作製されたＰＬＧＡスニチニブ粒子から全てのスニチニブ（Ｆ１２７）が直線的に放出された。
【０１９２】
およそ４０日間に亘り、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中において、ＰＶＡによって作製された後、Ｆ１２７によって洗浄されたＰＬＧＡ粒子から全てのスニチニブ（Ｆ１２７／ＰＶＡ）が直線的に放出された。
【０１９３】
およそ６０日間〜７０日間に亘り、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中において、ＰＶＡによって作製されたＰＬＧＡ粒子から全てのスニチニブが直線的に放出された。
【０１９４】
およそ１００日間〜１２０日間に亘り、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中でＰＥＧ−ＰＬＧＡ粒子から全てのスニチニブが直線的に放出された。
【０１９５】
およそ１２０日間に亘り、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中でＰＥＧ−ＰＬＡ粒子から全てのスニチニブが直線的に放出された。
【０１９６】
装荷に対する界面活性剤及びｐＨの影響の要約
カチオン性及びイオン性の両方の界面活性剤は、極端に低い装荷、例えばＳＤＳで０．２０％、及びＨＤＴＡブロミドで０．２７％をもたらした。ＰＶＡを代用することにより最大１．１％まで装荷を増加した。スニチニブ遊離塩基は結晶化し、より高い装荷を得るために利用することはできなかった。溶媒へのＤＭＳＯの添加は、より一層、最大およそ５％まで装荷を増加した。しかしながら、アルカリを添加しないわずか１％の装荷能力と比較して、スニチニブ溶液のアルカリ度を増加することによってＰＥＧ−ＰＬＧＡによる最大１６．１％の装荷能力までの装荷の増加が達成され、これはＤＭＦを添加することによって更に増加可能であった。
【０１９７】
表１は、上に記載されるように、ＰＶＡ、２形態のスニチニブ、及び種々の溶液全体のアルカリ度を使用して作製されたＭＰ製剤のサイズ、薬物装荷能力、及び１日目の放出パーセンテージを示す。
【０１９８】
【表１−１】
2017537985.tif 000005
【表１−２】
2017537985.tif 000006
【０１９９】
実施例２：スニチニブを封入するナノ粒子（ＮＰ）の作製及びｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出プロファイル
材料及び方法
製剤ＩＤ
識別しやすいように、種々の処方に従ってＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１％のＰＶＡを含む水相に作製されたナノ粒子に、それぞれＩＤ、例えばＮＰ−ｎ（ｎは２１〜２７の番号）を付与した。
【０２００】
ＮＰ−２１：１００ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Lakeshore biomaterials）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解した。２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を２５０μｌのＤＭＳＯに添加した後、１％ＰＶＡに注いだ。５ｍＬを３分間超音波処理し、８０ｍＬの０．１％ＰＶＡに注ぎ、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０２０１】
ＮＰ−２２：１００ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Lakeshore biomaterials）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解した。２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を２５０μｌのＤＭＳＯに添加した後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１％ＰＶＡに注いだ。５ｍＬを３分間超音波処理し、８０ｍＬの０．１％ＰＶＡに注ぎ、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０２０２】
ＮＰ−２３：１００ｍｇのＰＬＧＡ（１Ａ、Lakeshore biomaterials）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解した。２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を２５０μｌのＤＭＳＯに添加した後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１％ＰＶＡに注いだ。５ｍＬを３分間超音波処理し、８０ｍＬのＰＢＳ中０．１％ＰＶＡに注ぎ、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０２０３】
ＮＰ−２４：１００ｍｇのＰＬＧＡ（７５：２５、４Ａ、Lakeshore biomaterials）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解した。２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を２５０ｕｌのＤＭＳＯに添加した後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１％ＰＶＡに注いだ。５ｍＬを３分間超音波処理し、ＰＢＳ中８０ｍＬの０．１％ＰＶＡに注ぎ、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０２０４】
ＮＰ−２５：１００ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Resomer biomaterials）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解した。２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を２５０μｌのＤＭＳＯに添加し、２０μｌのＴＥＡを添加した後、１％ＰＶＡに注いだ。５ｍＬを３分間超音波処理し、８０ｍＬの０．１％ＰＶＡに注ぎ、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０２０５】
ＮＰ−２６：１００ｍｇのＰＬＧＡ（２Ａ、Resomer biomaterials）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解した。２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を２５０μｌのＤＭＳＯに添加した後、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中１％ＰＶＡに注いだ。５ｍＬを３分間超音波処理し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中８０ｍＬの０．１％ＰＶＡに注ぎ、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０２０６】
ＮＰ−２７：１００ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＧＡ（５Ｋ、４５Ｋ  Shangdong、１０％ＰＥＧ）を１ｍＬの塩化メチレンに溶解した。２０ｍｇのスニチニブリンゴ酸塩を２５０μＬのＤＭＳＯに添加した後、１％ＰＶＡに注ぎ、３分間超音波処理を行い、８０ｍＬの０．１％ＰＶＡに注ぎ、２時間撹拌して粒子を収集し、再蒸留水で洗浄して凍結乾燥した。
【０２０７】
結果
【表２】
2017537985.tif 000007
【０２０８】
実施例３．スニチニブの封入効率に対する水性ｐＨの影響
材料及び方法
スニチニブリンゴ酸塩を含む又は含まない、ＰＬＧＡ及び／又はＰＬＧＡと、ＰＬＧＡ（分子量４５ｋＤａ）に共有結合的にコンジュゲートしたＰＥＧ（ＰＬＧＡ４５ｋ−ＰＥＧ５ｋ）とのジブロックコポリマーのポリマーミクロ粒子を、シングルエマルジョン溶媒蒸発法を使用して作製した。簡潔には、ＰＬＧＡ及び／又はＰＬＧＡ−ＰＥＧを最初にジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶解し、所定の濃度でスニチニブリンゴ酸塩をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。ポリマー溶液及び薬液を混合して均質な溶液（有機相）を形成した。有機相を１％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）（Polysciences、分子量２５ｋＤａ、８８％加水分解）の水溶液に添加し、Ｌ５Ｍ−Ａ実験室用ミキサー（マサチューセッツ州イーストロングメドーのSilverson Machines Inc.）を使用して５０００ｒｐｍで１分間ホモジナイズしてエマルジョンを得た。
【０２０９】
その後、エマルジョン中の溶媒を含むミクロ粒子を室温で２時間超に亘って撹拌することによりＤＣＭを蒸発させ、硬化させた。ミクロ粒子を沈降及び遠心分離によって収集し、水中で３回洗浄し、凍結乾燥によって乾燥させた。
【０２１０】
水溶液中のスニチニブ溶解度がｐＨ依存性であることが示されたため、スニチニブを封入するミクロ粒子（ＭＰ）製剤を様々なｐＨ値（表３に示される）の水相に作製して薬物封入に対する水性ｐＨの影響を調べた。
【０２１１】
【表３】
2017537985.tif 000008
【０２１２】
薬物装荷の特定
ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度法を使用して薬物装荷を特定した。スニチニブを含むミクロ粒子（総重量１０ｍｇ）を無水ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中に溶解し、薬物の濃度が薬物のＵＶ吸光度の標準曲線の比例領域に含まれるまで更に希釈した。ＵＶ吸光度を標準曲線と比較することにより、薬物の濃度を特定した。薬物装荷は、ミクロ粒子に対する薬物の重量比として定義される。
【０２１３】
ミクロ粒子の平均サイズ及び粒度分布の測定
数ミリグラムのミクロ粒子を最初に水に懸濁し、ＩＳＯＴＯＮ（商標）希釈剤中に分散させた。ＣＯＵＬＴＥＲ  ＭＵＬＴＩＳＩＺＥＲ  ＩＶ（カリフォルニア州ブレアのBeckman Coulter, Inc.）を使用して平均粒子径及び分布を特定した。
【０２１４】
結果
表４は、表３の処方に従って作製されたＭＰの装荷及び封入効率を示す。薬物装荷及び封入の効率は、水性ｐＨが４から７．４、より実質的には６から７．４に増加した場合に著しく増加した。しかしながら、ｐＨを１０に調整して水溶液がより塩基性になると、多くの粒子の形態は球形から不規則な形状へと変化し、一部の粒子は凝集塊を形成し、高ｐＨの水溶液もまたスニチニブの高装荷及び高品質の粒子を生産するのに不利であることを示唆した。したがって、水性ｐＨの好ましい範囲は６〜１０であり、より好ましくは６〜８である。
【０２１５】
【表４】
2017537985.tif 000009
【０２１６】
実施例４．水性ｐＨ７．４におけるスニチニブの封入効率に対するポリマー濃度及びポリマー粘度の影響
材料及び方法
表５に示されるように、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）中にスニチニブを封入するミクロ粒子（ＭＰ）製剤を作製した。
【０２１７】
【表５】
2017537985.tif 000010
【０２１８】
結果
表６は、表５の処方に従って作製されたＭＰの装荷及び封入効率を示す。薬物装荷及び封入効率は、ポリマーＰＬＧＡ  ７５２５  ４Ａの濃度が５０．５ｍｇ／ｍＬから２０２ｍｇ／ｍＬに増加するにつれて増加した（図１、図２Ｂ、及び表５）。これはおそらく、より高い濃度では、ポリマー溶液はより粘性であり、薬物分子が水相へと拡散するのを防ぐバリアとして有効に機能するという事実に起因する。特に、封入効率は１００ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度で５０％超まで増加した。ＤＭＳＯ中スニチニブリンゴ酸塩溶液と混合する前のこのＤＣＭ（塩化メチレン）中のポリマー溶液の動粘度は、およそ３５０ｃＰｓと推定された。ＤＣＭ中のポリマー溶液の好ましい最小粘度は約３５０ｃＰｓと考えられ、ポリマー粘度は計算上およそ７２０ｃＰｓであることが好ましい（ＤＣＭ中１４０ｍｇ／ｍＬのポリマー濃度と相関する）。また、ミクロ粒子の平均径は、ポリマー濃度の関数として増加した。ポリマー濃度２００ｍｇ／ｍＬ、及び水性ｐＨ７．４において、封入効率は９２％と高かった。
【０２１９】
また、薬物装荷及び封入効率は、所与のポリマー濃度及び７．４の所与の水性ｐＨでポリマー溶液の粘度が増加するにつれて増加した。ポリマーＰＬＧＡ  ７５：２５  ６Ｅ、ポリマーＰＬＧＡ  ８５：１５  ６Ｅ、及びポリマーＰＬＧＡ  ８５：１５  ６ＥのそれぞれがポリマーＰＬＧＡ  ７５：２５  ４Ａよりも高い分子量を有することから、１００ｍｇ／ｍＬの同じ濃度で、ＰＬＧＡ  ７５：２５  ６Ｅ溶液、ＰＬＧＡ  ８５：１５  ６Ｅ溶液、及びＰＬＧＡ  ８５：１５  ６Ａ溶液の粘度は、ＰＬＧＡ  ７５：２５  ４Ａ溶液の粘度よりも高かった。具体的には、ＤＣＭ中１００ｍｇ／ｍＬのＰＬＧＡ  ７５：２５  ６Ｅの粘度は約８３０ｃＰｓと計算された。その結果、ＰＬＧＡ  ７５：２５  ６Ｅ、ＰＬＧＡ  ８５：１５  ６Ｅ、又はＰＬＧＡ  ８５：１５  ６Ａの製剤の封入効率は約８０％であり、５３％の同じ濃度のＰＬＧＡ  ７５２５  ４Ａを含む製剤の封入効率よりも高かった（表６）。
【０２２０】
【表６】
2017537985.tif 000011
【０２２１】
結果は、スニチニブ製剤の薬物装荷及び封入効率を、最適化された水性ｐＨでのポリマー濃度／粘度の修正によって著しく改善することができることを示す。上に記載されるものよりも更に粘性の高いポリマー溶液を使用することができると考えられる。しかしながら、或る特定の段階では溶液の粘度が高すぎて水相と完全に混合して比較的均一な粒度分布を有するミクロ粒子を形成することができない。
【０２２２】
実施例５：水性ｐＨ７．４で形成されたスニチニブ封入ポリマーミクロ粒子製剤の放出持続期間
材料及び方法
製剤
以下のミクロ粒子（ＭＰ）製剤、すなわち、表５に従って製剤ＩＤ：ＤＣ−１−５３−１、ＤＣ−１−５３−２、及びＤＣ−１−５３−３を作製し、また表７に従って製剤を作製した。表７の製剤の薬物装荷及び封入効率を先の実施例３に記載される通りアッセイした。
【０２２３】
【表７】
2017537985.tif 000012
【０２２４】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物放出
６ｍＬのガラスバイアル中でスニチニブを含有するＭＰ（全重量１０ｍｇ）を１％ＴＷＥＥＮ（商標）２０を含有するＰＢＳ  ４ｍＬに懸濁し、１５０ｒｐｍで振蕩しながら３７℃でインキュベートした。所定の時間点において、バイアルの底に粒子が沈殿した後、３ｍＬの上清を取り出し、３ｍＬの新たな放出媒質と交換した。上清中の薬物含有量をＵＶ−Ｖｉｓ分光光度法又はＨＰＬＣによって特定した。
【０２２５】
結果
表８は、表７の処方に従って作製されたＭＰの装荷及び封入効率を示す。
【０２２６】
【表８】
2017537985.tif 000013
【０２２７】
図２Ａは、表５に列挙される選択されたＭＰ製剤、及び表７に列挙されるものの約１ヶ月から約６ヶ月の範囲のｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出プロファイルを示す。ＰＥＧ−ＰＬＧＡ（ＰＬＡ）及びＰＥＧ−ＰＬＧＡ／ブレンドミクロ粒子は、スニチニブの持続放出を示す。治療プロファイルを改善するため、必要に応じて、ＰＬＧＡコポリマー中のラクチド：グリコリドの比率、ポリマー濃度、ポリマーに対する薬物の比、及び粒子径を調整することによって粒子の持続放出を変化させることができる。
【０２２８】
実施例６：スニチニブ装荷生分解性ミクロスフェアは実験的角膜血管新生を阻害する
序論
無血管及び透明性を特徴とする角膜は、眼の機械的バリア及び前部の屈折面としてはたらく。角膜血管新生（ＮＶ）は、感染症、化学的又は外傷による損傷、自己免疫疾患及び角膜移植を含む様々な病的状況において起こり、治療せずに放置すれば視力を損なうことになる場合がある。したがって、角膜ＮＶの効果的な阻害は、視覚を守るために重要である。角膜ＮＶの治療として、局所のコルチコステロイド、非ステロイド、抗炎症の医薬、及び光凝固が挙げられるが、いずれの治療法も根治はせず、いくつかの望ましくない副作用を伴う。
【０２２９】
病的角膜ＮＶは、血管形成因子と抗血管形成因子との間のホメオスタシスの崩壊によってもたらされる。血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）及び血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）は、角膜ＮＶの発症における主要なメディエーターである。ＶＥＧＨ及びその受容体（ＶＥＧＦＲ）は、正常な角膜と比較して、血管新生化角膜において高濃度で存在する。ＶＥＧＦは、チロキシンキナーゼ受容体（ＶＥＧＦＲ１、２、３）によりそれらの効果をもたらし、血管内皮細胞の増殖、遊走、及び生存に対するシグナル伝達を導く。ＶＥＧＦの妨害は角膜ＮＶを阻害する。増殖している（Sprouting）内皮細胞はＰＤＧＦを分泌し、ＰＤＧＦはチロシンキナーゼＰＤＧＦ受容体を介してＶＥＧＦ転写を賦活する。周皮細胞はＰＤＧＦＲ−βを発現し、周皮細胞のサポート及びＶＥＧＦシグナル伝達がない場合、内皮細胞はアポトーシスを経る。ＰＤＧＦシグナル伝達経路の阻害は、周皮細胞動員を妨げ、そして血管形成を阻害する。
【０２３０】
モノクローナル抗体、リボ核酸アプタマー、及びＶＥＧＦトラップを含む抗ＶＥＦＧ剤は、動物試験及び臨床試験において角膜ＮＶを予防し、治療するために適用されており、病的角膜ＮＶにおける制限された又は部分的な減少を示した。ＶＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲの両者の組合せは、抗血管形成における効能を著しく増強することができる。スニチニブによるＶＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲの複合阻害は、消化管間質腫瘍、膵臓癌、及び腎細胞癌の治療に対して承認された。ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦの受容体を標的とするスニチニブ、パゾパニブ、及びソラフェニブ等の低分子チロシン受容体キナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）は、角膜ＮＶの治療において強力で有効な特徴を示す。
【０２３１】
ＴＫＩの局所適用は、動物モデル及び臨床試験の両方において角膜ＮＶの治療における効能を実証する（Amparo, F., et al., Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2013. 54(1): p. 537-544; Cakmak, H., et al., Cutan Ocul Toxicol, 2015: p. 1-7; Perez-Santonja, J.J., et al., Arch Soc Esp Oftalmol, 2013. 88(12): p. 473-81; Ko, B.Y., et al., Cornea, 2013. 32(5): p. 689-95）。しかしながら、局所点眼は、乏しい薬物浸透、急速な涙膜のターンオーバー、及びクリアランスのため、制限されたバイオアベイラビリティーを示した（Govindarajan, B. and I.K. Gipson, Exp Eye Res, 2010. 90(6): p. 655-63; Gaudana, R., et al., Pharm Res, 2009. 26(5): p. 1197-216）。治療効果を達成するため、ＴＫＩ点眼は頻繁に適用されなければならず、患者において角膜ＮＶを治療するためのＴＫＩパゾパニブを使用する臨床試験では、点眼を１日当たり４回適用した（Amparo 2013）。頻繁な投与は患者の乏しいコンプライアンスと結びつく。
【０２３２】
生分解性ポリマーのナノ粒子及びミクロ粒子は、制御された薬物送達、増強された眼浸透、改善されたバイオアベイラビリティー、及び減少された薬物の副作用等の眼科用途に対する利点を示す（Makadia, H.K. and S.J. Siegel, Polymers (Basel), 2011. 3(3): p. 1377-1397; Shive, M.S. and J.M. Anderson, Adv Drug Deliv Rev, 1997. 28(1): p. 5-24）。
【０２３３】
したがって、角膜ＮＶを効果的に阻害するためＳｕｎｂ−リンゴ酸塩の持続放出を提供することができるＳＣ投与に対する生分解性高分子ミクロスフェア系を開発し、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてラットモデルで試験した。
【０２３４】
角膜血管新生（ＮＶ）は、患者の角膜の透明性及び視力を損なわせ易くする。複数の受容体チロシンキナーゼを標的とするスニチニブリンゴ酸塩（Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩）は、強力な抗血管形成を与える。しかしながら、局所点眼によって投与されたＳｕｎｂ−リンゴ酸塩薬物の急速なクリアランスは、治療的な効能を制限し、潜在的な患者のコンプライアンスに対する課題を提示する。
【０２３５】
下に示されるように、粒子径およそ１８μｍ及び薬物装荷６重量％を有するＳｕｎｂ−リンゴ酸塩−装荷ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸）（ＰＬＧＡ）ミクロスフェア（Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳ）。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの無限の沈下条件のもと最長２５日間に亘って薬物放出の持続を提供した。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳの結膜下（ＳＣ）注射は、眼の薬物保持の延長をもたらし、１５０μｇの活性剤の用量において眼毒性を生じなかった。ＳＣ注射後のＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳは、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬物又はプラセボＭＳのいずれかよりも縫合誘発性角膜ＮＶを効果的に抑制した。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射によるＳｕｎｂ−リンゴ酸塩の局所持続放出は、血管内皮細胞の増殖及び壁細胞の角膜への動員を失速させた。さらに、病態形成過程によって誘導された血管形成促進因子の遺伝子発現増加は、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射によって大幅に失効された。
【０２３６】
材料及び方法
材料
ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸−ｃｏ−グリコール酸  ＬＡ：ＧＡ  ５０：５０、分子量約５．６ｋＤａ、酸末端）（ＰＬＧＡ）をLakeshore Biomaterials（アラバマ州バーミンガムのEvonik）から購入し、スニチニブリンゴ酸塩をLC laboratories（マサチューセッツ州ウーバン）から購入した。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬液をリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に０．５％の濃度でＳｕｎｂ−リンゴ酸塩を溶解することによって作製した。分子量約２５ｋＤａのポリビニルアルコール（ＰＶＡ）をPolysciences, Inc.（ペンシルベニア州ワーリントン）から購入した。他の有機溶媒はSigma-Aldrich（ミズーリ州セントルイス）によって提供された。
【０２３７】
動物
全ての実験プロトコルはジョンズホプキンズ実験動物委員会によって承認された。６週齢〜８週齢の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  ＤａｗｌｅｙラットをHarlan社（インディアナ州インディアナポリス）から購入した。眼科研究における動物の使用に関する視覚と眼科学研究協会会議（ＡＲＶＯ）に従って全てのラットを飼育し、処理した。実験手順の間、ケタミン（５０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の混合物の筋肉内注射によって動物を麻酔した。局所麻酔及び散瞳のため、それぞれ０．５％プロパラカイン及び０．５％トピカミドの局所点眼を使用した。
【０２３８】
Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩装荷ＰＬＧＡミクロスフェアの作製
エマルジョン法を使用して、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩装荷ＰＬＧＡミクロスフェア（Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳ）を作製した。簡潔には、２５０ｍｇのＰＬＧＡを含む２．５ｍＬのジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液と混合する前に、５０ｍｇのＳｕｎｂ−リンゴ酸塩を０．６２５ｍＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した。Ｌ４ＲＴ高剪断ミキサー（マサチューセッツ州イーストロングメドーのSilverson）を使用して５０００ｒｐｍでホモジナイズしながら、上記混合物を６０ｍＬの１％ＰＶＡ溶液に注いだ。１時間に亘って７００ｒｐｍで磁気撹拌しながら、形成されたエマルジョンを追加の０．３％ＰＶＡ溶液１００ｍＬに添加した。撹拌しながら上記懸濁液を真空チャンバーに更に３時間入れてＤＣＭを更に除去した。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳを４０μｍのストレーナーで濾過し、脱イオン水で洗浄し、５００×ｇで１０分間遠心分離によって収集した。薬物の添加を行わずに同じ手順でプラセボミクロ粒子（プラセボＭＳ）を作製した。
【０２３９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物装荷及び薬物放出
特定の量の凍結乾燥Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳをＤＭＳＯに可溶化して溶解し（dissolved in solubilized in DMSO）、該溶液をＢｉｏＴｅｋ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（バーモント州ウィヌーキー）上、４４１ｎｍでＵＶ−Ｖｉｓにより測定した。ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩濃度をｓｕｎｂ−リンゴ酸塩の確立された標準曲線を使用して計算した。薬物装荷（ＤＬ）及び封入効率（ＥＥ）を以下の通り計算した。
【数１】
2017537985.tif 000014
【０２４０】
Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのｉｎ  ｖｉｔｒｏ薬物放出プロファイルを研究するため、１．５ｍＬのシリコン処理したエッペンドルフチューブにおいてＰＢＳ（ｐＨ７．４）中の１ｍＬのＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳ懸濁液を３７℃未満にて１２０ＲＰＭで振った。所定の時間点において、２０００×ｇで５分間に亘り懸濁液を遠心分離し、上清を１ｍＬの新たなＰＢＳで交換した。収集した上清中のＳｕｎｂ−リンゴ酸塩の濃度をＵＶ−Ｖｉｓにより測定した。
【０２４１】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの眼の薬物保持
ＰＢＳ中５ｍｇのｓｕｎｂ−リンゴ酸塩／ｍＬの濃度の３０マイクロリットルのＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳ又はｓｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬液を、２７ゲージ針を使用してＳＣ注射によってラットに投与した。注射の後（ＰＩ）０日目、１日目、３日目、７日目、１４日目、及び２８日目において、動物を死亡させた後、全眼球（ｎ＝４）を採取した。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩は自己蛍光を示すため、摘出された眼球をＸｅｎｏｇｅｎ  ＩＶＩＳ  Ｓｐｅｃｔｒｕｍ光学結像システム（マサチューセッツ州ホプキントンのCaliper Life Sciences Inc.）を使用し、励起及び発光の波長それぞれ４２０ｎｍ及び５１０ｎｍで画像化した。Ｌｉｖｉｎｇ  Ｉｍａｇｅ  ３．０ソフトウェア（Caliper Lifesciences, Inc.）を使用して蛍光画像を分析し、ＳＣ注射を経た直後の眼の蛍光カウントと比較することによりスニチニブの保持を定量した。ＳＣ注射を伴わないラットの眼をベースラインとして使用した。
【０２４２】
ｉｎ  ｖｉｖｏ安全性研究
ＳＣ注射後のＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳの眼毒性を特定するため、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットの両眼に５ｍｇ及び０．５ｍｇのＳｕｎｂ−リンゴ酸塩／ｍＬの濃度の３０μＬのＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳを投与した。生理食塩水及びプラセボＭＳ（１つの眼当たり２．５ｍｇの粒子）のＳＣ注射を対照として使用した。ＰＩ  ７日目及び１４日目の両方において２匹の動物を死亡させ、組織学的検査のため結膜組織と共に全眼球を採取した。６−０ナイロン縫合糸によって注射部位に印をした。眼球をホルマリン中で固定し、パラフィンに包埋し、ＳＣ注射部位を切断するため背腹軸に沿って（角膜から視神経へ）切片作製を行い、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。スライドを観察し、病理学者が採点した。
【０２４３】
角膜ＮＶの治療
基質内縫合によって角膜ＮＶを誘発した。簡潔には、ラットに麻酔して散瞳させた後、手術用顕微鏡のもと、１０−０ナイロン（テキサス州フォートワースのAlcon Laboratories）を用いて角膜上部に２つの基質内の縫合の縫い目を作った。縫い目と角膜輪部との間の距離はおよそ２ｍｍであり、２つの縫い目の間は１ｍｍの距離があった。縫合の後、すぐに動物を３０μＬの（１）ＰＢＳ、（２）プラセボＭＰ、（３）Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳ（５ｍｇ  ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩／ｍＬ）、及び（４）Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬液（５ｍｇ  ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩／ｍＬ）の１回のＳＣ注射で処理した。エリスロマイシン抗生物質軟膏を塗布して可能性のある感染及び角膜の乾燥を予防した。ラットを２週間経過観察した。
【０２４４】
角膜ＮＶの定量分析
全てのラットの角膜を、細隙灯顕微鏡（ＳＬ１２０；ドイツ国オーバーコッヘンのCarl Zeiss AG）により検査し、デジタルカメラで角膜の写真を撮影した。Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ  ＣＳ３．０により血管化角膜の面積及び長さを定量した。角膜輪部に沿って弧を描き、血管化面積のピクセルを測定し、角膜ＮＶ面積を以下の等式を使用して計算した。
【数２】
2017537985.tif 000015
【０２４５】
血管化領域を６つのセクションに均等に分割した。弧の５つの交点における血管の先端と角膜輪部との間の距離を測定した。５つの測定された長さの平均を角膜ＮＶ長とした。
【０２４６】
リアルタイム定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）
手術後（ＰＯ）７日目及び１４日目において、ラットを死亡させ、角膜を収集した。ｍＲＮＡ単離用に同じ条件の３つの角膜を合わせてプールした。トータルｍＲＮＡをＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬（米国、Invitrogen）を用い、製造業者の指示書に従って単離し、Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  ｃＤＮＡ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（米国、Applied Biosystems）を使用して逆転写を行った。ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦａ、ＰＤＧＦｂ、ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ、ＶＥ−カドヘリン、Ａｎｇ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ９、ｂＦＧＦ、及びＰＥＣＡＭ１を含む血管形成因子及び抗血管形成因子のｍＲＮＡ発現レベルを定量するため、７１００  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（カリフォルニア州のApplied Biosystems）を使用して、Ｆａｓｔ  ＳＹＢＲ（商標）Ｇｒｅｅｎ  Ｍａｓｔｅｒ  ＭｉｘによりＲＴ−ＰＣＲを行った。更なる複数の群比較のため、ｍＲＮＡ発現レベルをＧＡＰＤＨに対して正規化した。
【０２４７】
免疫染色及び共焦点画像解析
眼球を摘出し、４℃にて１時間、４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で固定した。その後、角膜を切り取り、ＰＢＳで洗浄し、１５％スクロースＰＢＳ溶液中で凍害を防止し、ＯＣＴコンパウンドに包埋した。角膜の連続切片（厚さ３０μｍ）をクライオスタットによる切片作製で収集した後、以下の抗体、マウス血小板内皮細胞接着分子−１（ＰＥＣＡＭ−１、１：５００；Abcam）、ウサギ神経／グリア抗原−２（ＮＧ２、１：５００；Millipore）、１０％ロバ血清及び０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含むＰＢＳ中に希釈したロバ抗マウスＣｙ２及びロバ抗ウサギＣｙ３を使用して免疫染色を行った。４℃での一晩のインキュベーションの後、角膜切片をＰＢＳで３回洗浄し、室温で２時間、二次抗体とインキュベートした。マウントした角膜切片をＺｅｉｓｓ  ＬＳＭ  ７１０共焦点顕微鏡（ドイツ国、Carl Zeiss）を使用して画像化した。角膜のパノラマ画像を保証するため、本発明者らは、Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔ  １．１．０（ＮＩＨのJ.C. Fiala）を使用して背腹軸に沿って角膜切片を順に並べ、最大値投影法を行った。
【０２４８】
統計学的分析
定量結果を、複数の繰り返しの平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として提示する。収集した全てのデータをｔ検定及び複数の比較検定（one-way ANOVA、ボンフェローニ検定）を使用して群間で比較した。Ｐ＜０．０５のレベルで差を統計学的に有意とした。複数の比較に対する有意性：＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１；＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【０２４９】
結果
Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳの作製及び特性評価
Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳは、ＳＥＭにより多孔性であり、１５±９μｍの粒子径、及び−０．７ｍＶの表面電荷を有する（表４）。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳは６重量％の薬物装荷を示し、ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩は、明確な初期の急速な薬物放出フェーズを伴わずにｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて３７℃で無限の沈下条件下で最長２５日まで一様に放出された（図３）。
【０２５０】
【表９】
2017537985.tif 000016
【０２５１】
眼の薬物保持
Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬物は、ＳＣ注射後１日以内に急速に除去される。図４に示されるように、ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩のＰＬＧＡ  ＭＳへの封入は、眼の薬物保持を著しく延長し、本来の薬物のおよそ５０％がＰＩ  １４日目までに保持され、ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩はＰＩ  ２８日目までに徐々に消滅した。
【０２５２】
Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳの眼安全性
プラセボＭＳ及びＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射後の眼安全性を特定するため、本発明者らは眼の組織学的検査を行った。プラセボＭＳのＳＣ注射は生理食塩水のＳＣ注射のように安全である。ＳＣ注射後、低用量及び高用量のＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳ（０．５ｍｇ及び５ｍｇのｓｕｎｂ−リンゴ酸塩／ｍｌ）はいずれも注射部位の結膜組織及び角膜における炎症を誘導しなかった。
【０２５３】
角膜ＮＶに対するＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳの効果
Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳ、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬物、及びプラセボＭＰの治療の下、角膜ＮＶを評価するため、手術後（ＰＯＤ）５日目、７日目、及び１４日目に細隙灯顕微鏡検査によって全ての動物を検査した。放射状に方向づけられた新生血管は、プラセボＭＳ処理ラットについて、ＰＯＤ５までに角膜輪部から縫合の縫い目に向かって角膜へと侵入し、ＰＯＤ１４までにさらに成長して縫い目に達した。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬物のＳＣ注射は、角膜ＮＶの阻害に対して無視できるほどの効果を示し、ＰＯＤ５においてプラセボＭＳと比較すると角膜ＮＶ領域のわずかな阻害があったものの、統計学的に有意ではなかった。対照的に、角膜ＮＶの長さ（図５Ａ）及び面積（図５Ｂ）の定量は、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳがＰＯＤ５において新生血管の出芽を有意に抑制し、経時的に更なる成長を失速させたことを明らかにした。組織病理学的分析は、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩及びプラセボＭＳで処理された角膜で観察された新生血管の内殖が、ＰＯＤ７及びＰＯＤ１４の両方においてＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射によって著しく失速されたことを更に確認した。角膜炎症及び角膜浮腫は、５ｍｇ／ｍｌのＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射の処理の下では観察されなかった。したがって、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳは、角膜血管形成に対して安全で効率的な阻害を提供した。
【０２５４】
Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳは血管形成エフェクタのｍＲＮＡ発現レベルを減少させる
血管形成因子、内皮細胞マーカー、及びマトリクスメタロプロテアーゼのｍＲＮＡ発現を、ＰＯＤ７及びＰＯＤ１４においてＲＴ−ＰＣＲにより特定した。ＰＯＤ７における定量分析は、角膜におけるＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ１、ＰＤＧＦｂ、ＰＤＧＦＲｓ、ＶＥ−カドヘリン、ｂＦＧＦ、ＭＭＰ、及びＡｎｇ１の発現が、プラセボＭＰ及びＳｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬物と比較して、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射によって有意に減少されたが、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳとＳｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬物の治療群との間でＶＥＧＦＲ２及びＰＤＧＦａのｍＲＮＡレベルに統計学的有意差はなかったことを示した（図６Ａ〜図６Ｍ）。ＰＯＤ１４において類似の結果は、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射による血管形成関連遺伝子発現の持続可能な抑制を示した。
【０２５５】
Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳは壁細胞の動員を抑制する
血管内皮細胞の内殖、及び毛細血管の周りの周皮細胞、及び大きな血管の周りの平滑筋細胞を含む血管壁細胞のその後の動員に対するＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射の影響を調べるため、免疫組織化学分析のためＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射の後、角膜を収集した。角膜のパノラマ画像は、角膜脈管構造の成長が、プラセボＭＳのＳＣ注射と比較した場合、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射によって著しく抑制されたことを示した。ＮＧ２−陽性壁細胞の動員は、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射によるＰＥＣＡＭ陽性内皮細胞よりも更に軽減された。
【０２５６】
要約すると、生分解性ＰＬＧＡ  ＭＳに封入されたｓｕｎｂ−リンゴ酸塩は、縫合誘発性角膜ＮＶモデルにおいて角膜ＮＶの効率的な阻害を提供した。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩は、少なくとも２５ｍｇ／ｍＬの濃度でＰＢＳに溶解され得る。ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩遊離薬液のラットへのＳＣ注射後２４時間以内は、眼においてほとんど何らの薬物保持も観察されなかった。水溶性ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩の生分解性ＰＬＧＡ  ＭＳへの封入により、ＰＩ  １４日目において５０％で、最長２８日目の著しく長いｓｕｎｂ−リンゴ酸塩の保持が観察された。粒子を、最初の注射及び粒子の漏出の後、注射部位に常に保持することができた。ＳＣ注射後の粒子の保持の増強、及び薬物放出の持続は、注射部位における薬物の保持の延長に寄与した。角膜ＮＶの阻害におけるＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射の効能は、２つの重要な因子、すなわち（１）水溶性ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩の生分解性ポリマーＭＳへの封入の成功、及び（２）ＳＣ注射後のＳｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳから放出された水溶性ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩の効率的な眼内浸透に起因する。
【０２５７】
上記結果は、内皮細胞マーカー（ＶＥ−カドヘリン及びＰＥＣＡＭ１）、メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ２及びＭＭＰ９）、血管新生促進因子及びそれらの受容体（ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ｂＦＧＦ、Ａｎｇ１、ＶＥＧＦＲ、及びＰＤＧＦＲ）の発現増加が、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳの投与によって大幅に消失されることを実証した。ＭＭＰは、血管形成に必要とされる細胞外マトリクスの分解、及び血管基底膜のリモデリングに関わる。ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦｓ、ｂＦＧＦ、及びＡｎｇ１は、細胞表面の対応する受容体チロシンキナーゼを結合及び活性化することによって血管形成の調節に関与する。本研究では、縫合誘発性動物モデルにおいて多くの血管形成促進因子及び血管形成関連プロテアーゼの遺伝子発現が、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸ＭＳによって発現減少され、分子レベルでのその抗血管形成活性を実証する。
【０２５８】
生体適合性及び生分解性のＰＬＧＡミクロスフェアは、ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩の持続放出、及び眼球表面での薬物保持の延長を可能とした。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳの安全な用量は、動物モデルにおける濃度勾配分析によって決定された。Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射は、縫合誘発性モデルにおける角膜ＮＶを著しく阻害した。あわせて、Ｓｕｎｂ−リンゴ酸塩ＭＳのＳＣ注射によるｓｕｎｂ−リンゴ酸塩の持続放出は、効能を改善し、毒性を減少し、患者のノンコンプライアンスを克服することができた。上記研究は、角膜ＮＶを標的とする治療戦略を提供する。
【０２５９】
実施例７：スニチニブ粒子の持続及び生体適合性
材料及び方法
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５）のコホートは、スニチニブミクロ粒子（全薬物量１０μｇ）のＩＶＴ注射を受け、注射から０週間、２週間、４週間、又は８週間の後、ブルッフ膜のレーザー誘発性傷害を受けた。レーザー処理の１週間後（すなわち、１週目、３週目、５週目、及び９週目）にＣＮＶの面積を測定した。直後、又は２週間後、４週間後、若しくは８週間後に、マウス（ｎ＝５）をブルッフ膜のレーザー傷害に供し、１週間後、ＣＮＶ病変のサイズを定量した。
【０２６０】
また、正常Ｃ５７ＢＬ／６マウスを使用して薬物動態試験を行い、ミクロ粒子のＩＶＴ注射に続いて様々な時間点でＨＰＬＣ−ＭＳによって種々の眼組織における薬物レベルを特定した。スニチニブ放出ミクロ粒子の単回注射の１ヶ月後、２ヶ月後、及び３ヶ月後に眼底画像を撮影した。
【０２６１】
リン酸緩衝生理食塩水又はスニチニブ放出ミクロ粒子のいずれかの注射から３ヶ月後のウサギの眼における網膜の組織学的画像を使用し、炎症応答を測定した。
【０２６２】
結果
ミクロ粒子は、３．４（重量）％の薬物装荷、及び約１３μｍの平均径を有した。対照と比較してスニチニブミクロ粒子で治療された全ての動物において、ＣＮＶ面積の著しい減少が観察された。重要なことには、保護効果は、ミクロ粒子のＩＶＴ注射に続いて少なくとも９週間に亘って持続した。
【０２６３】
スニチニブ放出ミクロ粒子は保持され、ｉｎ  ｖｉｖｏでウサギの眼において少なくとも３ヶ月間に亘って持続したスニチニブレベルを提供した。
【０２６４】
スニチニブは、少なくとも３ヶ月に亘って注入部位ではっきりとした特徴的な黄色を有する。３ヶ月目におけるこれらのウサギの硝子体中の平均スニチニブ濃度は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養に基づく最大ＲＧＣ生存に対する標的範囲に含まれる１．６μＭであった。ミクロ粒子中のスニチニブの全体的な濃度は、薬物が経時的に硝子体中に放出されるにつれて明らかに減少し、黄色の強さの減少によって示された。３ヶ月目の硝子体中のスニチニブの平均濃度は、ＨＰＬＣ−ＭＳによって１．６μＭであることがわかり、これはｉｎ  ｖｉｔｒｏ初代ＲＧＣ培養法に基づく最大ＲＧＣ生存に対する標的範囲に含まれる。
【０２６５】
スニチニブ放出ミクロ粒子の注射から３ヶ月後に得られたウサギの眼の組織学的画像は、眼科病理学部長のCharles Eberhart博士によって分析された。眼の半分に炎症応答は観察されず、眼の半分においてミクロ粒子凝集物の周囲に軽度の炎症が観察された。
【０２６６】
スニチニブ放出ミクロ粒子のＰＥＧ含有量を増加することは、一回の注射で少なくとも６ヶ月に亘って眼において治療的なスニチニブレベルを維持しながら、炎症応答の可能性を更に最小化するはずである。
【０２６７】
実施例８：加齢黄斑変性の治療
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、高齢者の間で重篤で不可逆的な視力喪失の主な原因である。Bressler, et al. JAMA, 291:1900-1901(2004)。ＡＭＤは、ドルーゼンとして知られる淡黄色のスポット、網膜色素上皮（ＲＰＥ）の傷害、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、及び円板状黄斑変性等の幅広い臨床上の及び病的な所見を特徴とする。ＡＭＤは、萎縮型（すなわち、非滲出型）又は滲出型（すなわち、滲出型）のいずれかに分類される。萎縮型ＡＭＤは、ドルーゼンと呼ばれる病変の存在を特徴とする。滲出型ＡＭＤは、視野の中心の血管新生を特徴とする。
【０２６８】
それほど一般的でないが、滲出型ＡＭＤは、ＡＭＤに関連する重篤な視力喪失の８０％〜９０％を占める（Ferris, et al. Arch. Ophthamol. 102:1640-2 (1984)）。ＡＭＤの原因は不明である。しかしながら、ＡＭＤを発症するリスクは、加齢と共に増加することが明らかである。また、ＡＭＤは、家族歴、喫煙、酸化ストレス、糖尿病、アルコール摂取、及び直射日光曝露を含む危険因子と結び付けられている。
【０２６９】
滲出型ＡＭＤは、典型的には、黄斑領域のＣＮＶを特徴とする。脈絡膜の毛細血管が増殖し、ブルック膜を貫いて網膜色素上皮（ＲＰＥ）に達する。いくつかの場合には、毛細血管が網膜下腔へと伸びる場合がある。新しく形成された毛細血管の透過性の増加は、ＲＰＥ下の、及び／又は、網膜神経感覚上皮の下、若しくはその中の漿液又は血液の滞留をもたらす。網膜中心窩が腫脹するか、又は剥離すると、視力の低下が起こる。線様化生及び組織化は続いて起こる場合があり、結果として末期のＡＭＤを構成し、永久的な視力喪失に関係する円盤形瘢痕と呼ばれる網膜下の腫瘤の増加をもたらす（D'Amico D J. N. Engl. J. Med. 331:95-106 (1994)）。
【０２７０】
スニチニブ封入ポリマーミクロ粒子の硝子体内注射によるネズミ科脈絡膜血管新生の持続抑制が、ここで実証された。レーザー誘導性脈絡膜血管新生のマウスモデルにおける硝子体内（ＩＶＴ）注射後の生分解性ポリマーミクロ粒子から放出されたスニチニブの長期間の効能を以下の通り実証した。
【０２７１】
材料及び方法
先の実施例に記載されるようにスニチニブの持続送達のため、生分解性ポリマーミクロ粒子を作製した。平均サイズ、粒度分布、薬物装荷、及び薬物放出プロファイルを含む特性評価をｉｎ  ｖｉｔｒｏでミクロ粒子に行った。
【０２７２】
材料及び方法
病原体感染のないＣ５７ＢＬ／６マウス（マサチューセッツ州ウィルミントンのCharles River）を、米国視覚眼科研究学会の眼科視覚研究における動物実験指針、及びジョンズホプキンズ大学実験動物委員会のガイドラインに従って処理した。
【０２７３】
先に記載されるように（Tobe, T. et al., Am. J. Pathol. 135(5): 1641-1646(1998)）ブルッフ膜をレーザー光凝固誘導性破損によって脈絡膜ＮＶを誘導した。簡潔には、５週齢〜６週齢の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスを塩酸ケタミン（１００ｍｇ／体重ｋｇ）で麻酔し、瞳孔を散大させた。ＯｃｕＬｉｇｈｔ  ＧＬダイオードレーザー（カリフォルニア州マウンテンビューのIridex）の細隙灯送達システム、及び網膜を見るためのコンタクトレンズとして手持ちのカバーガラスを用いて各眼の後極の９時、１２時及び３時の位置でレーザー光凝固（７５μｍのスポットサイズ、０．１秒間、１２０ｍＷ）を行った。ブルッフ膜の破損を示すレーザーの際の気泡の生成は、脈絡膜ＮＶを得るために重要な因子であることから、気泡が生成された熱傷のみを研究に含めた。
【０２７４】
ブルッフ膜のレーザー誘導性破損の直後、マウスを眼内注射に関して様々な治療群に無作為化した。Ｈａｒｖａｒｄ  Ｐｕｍｐ  Ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ及びガラスを引っ張って作製したマイクロピペット（pulled glass micropipette）を備えた手術用顕微鏡下で硝子体内注射を行った。
【０２７５】
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝５）のコホートは、スニチニブミクロ粒子（全薬物量１０μｇ）の硝子体内（ＩＶＴ）注射を受け、注射から０週間、２週間、４週間、又は８週間の後、ブルッフ膜のレーザー誘発性傷害を受けた。レーザー処理の１週間後（すなわち、１週目、３週目、５週目、及び９週目）にＣＮＶの面積を測定した。
【０２７６】
また、正常Ｃ５７ＢＬ／６マウスを使用して薬物動態試験を行い、ミクロ粒子のＩＶＴ注射に続いて様々な時間点でＨＰＬＣ−ＭＳによって種々の眼組織における薬物レベルを特定した。
【０２７７】
結果
ミクロ粒子は、３．４（重量）％の薬物装荷、及び約１３μｍの平均径を有した。
【０２７８】
図７Ａ〜図７Ｄに示されるように、対照と比較してスニチニブミクロ粒子で治療された全ての動物において、ＣＮＶ面積の著しい減少が観察された。重要なことには、保護効果は、ミクロ粒子のＩＶＴ注射に続いて少なくとも９週間に亘って持続した。
【０２７９】
スニチニブ製剤及びその使用方法の修正及び変更は、当業者に明らかであり、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図６Ｆ】
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【図６Ｇ】
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【図６Ｈ】
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【図６Ｉ】
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【図６Ｊ】
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【図６Ｋ】
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【図６Ｌ】
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【図６Ｍ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【国際調査報告】
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