(57)【要約】  本発明は、診断方法の分野に関する。具体的には、本発明は、少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定することに基づいて、被験体において心不全を診断する方法を予期する。本発明はまた、診断用デバイスなどの、上述の方法を実施するためのツールに関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
1. 心不全の診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するステップであって、前記少なくとも3つのバイオマーカーは、以下：
i. 少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのコレステリルエステル、及び少なくとも1つのホスファチジルコリン;
ii. 少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのホスファチジルコリン、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン;
iii. 少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのコレステリルエステル、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン;
iv. 少なくとも1つのホスファチジルコリン、少なくとも1つのコレステリルエステル、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン;
v. コレステリルエステルC18:2、SSS及びCer(d17:1/24:0);
vi. SM2、SM3、SM5、SM18、SM23、SM24、及びSM28からなる群から選択される少なくとも2つのスフィンゴミエリン、並びにSOP2、SPP1若しくはPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリド;
vii. OSS2、SOP2、SPP1及びSSP2からなる群から選択される少なくとも2つのトリアシルグリセリド、並びにSM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン;
viii. SM18、SM24及びSM28;
ix. 表2のパネル1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、若しくは199のバイオマーカー、又は
x. 表2aのパネル200、201、202、203、204、205、若しくは206のバイオマーカー
である、ステップ、並びに
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含み、
i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2、OSS2、SPP1、SSP2、PPO1及びPPPからなる群から選択され、i.、iii.、及びiv.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2及びコレステリルエステルC18:0からなる群から選択され、i.、ii.及びiv.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4及びPC8からなる群から選択され、並びにii.、iii.、及びiv.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM18、SM24、SM23、SM21、SM28、SM5、SM3、SM29及びSM8からなる群から選択される、方法。
【請求項２】
心不全が、左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
少なくとも、請求項１のi.、ii.、及びiii.のバイオマーカーの量が決定され、かつ、i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーが、SOP2、OSS2、SSP2、PPO1及びPPPからなる群から選択され、特に、SOP2、OSS2、SSP2、及びPPO1からなる群から選択され、i.、及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーがコレステリルエステルC18:2であり、i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーがPC4であり、ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーが、SM18、SM24、SM23、SM28、SM5、及びSM3からなる群から選択される、請求項１及び２に記載の方法。
【請求項４】
少なくとも、i.、ii.、及びiii.のバイオマーカーの量が決定され、かつ、i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSOP2及び/又はOSS2であり、i.、及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーがコレステリルエステルC18:2であり、i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーがPC4であり、ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーが、SM18、SM24、SM23、及びSM3からなる群から選択され、特に、
少なくとも、i.、ii.、又はiiiのバイオマーカーの量が決定され、かつ、i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドがSOP2及び/又はOSS2であり、i.、及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルがコレステリルエステルC18:2であり、i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンがPC4であり、ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンがSM23である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
少なくとも、OSS2、PC4及びSM23の量が決定され(パネル1)、又は少なくとも、OSS2、コレステリルエステルC18:2及びSM23の量が決定される(パネル2、又はパネル4)、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
少なくとも、iii.のバイオマーカーの量が決定され、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSOP2及び/又はOSS2であり、少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーがコレステリルエステルC18:2であり、少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM23である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
少なくとも、SOP2、OSS2、PC4、コレステリルエステルC18:2、SM18、SM28、SM24、SSP2、及びSM23の量が決定される(パネル3)、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
被験体が心不全の症状を示さない、請求項２〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも、表2におけるパネル7、8、9、11、又は12のバイオマーカーの量が決定される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
HFrEFがDCMP又はICMPである、請求項２〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
被験体がヒト被験体であり、及び/又はサンプルが血液、血清又は血漿である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも3つのバイオマーカーの量が、質量分析(MS)によって決定される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
HFrEFが、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
被験体が太り過ぎである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
被験体が54歳より上の年齢である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
被験体が女性被験体であり、54歳より上の年齢であり、かつ25.0kg/m2未満のボディマスインデックスを有する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
被験体が61歳より下の年齢であり、かつ26.8kg/m2を超えるボディマスインデックスを有する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
OSS2、PC4及びSM23(パネル1)の量が決定される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ステップ(a)においてNT-proBNP、BNP、ANP、又はNT-proANPの量の決定をさらに含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法を実施するための診断用デバイスであって、以下:
(a)請求項１〜９及び１８のいずれか一項に記載される少なくとも3つのバイオマーカーについての少なくとも1つの検出器を含む分析ユニットであって、前記分析ユニットは、少なくとも1つの検出器によって検出される前記バイオマーカーの量を決定するために適合されている、分析ユニット、及びそれと作動可能に結合された、
(b)少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量と参照量との比較を実施するための実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含むコンピューターと、前記バイオマーカーについての前記参照量を含むデータベースとを含む評価ユニットであって、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される、評価ユニット
を含む、診断用デバイス。
【請求項２１】
心不全を診断するための、又は心不全を診断するための医薬及び/若しくは診断用組成物の調製のための、被験体のサンプルにおける請求項１〜９及び１８のいずれか一項に記載される少なくとも3つのバイオマーカーの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、診断方法の分野に関する。具体的には、本発明は、少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定することに基づいて、被験体において心不全を診断する方法を予期する。本発明はまた、診断用デバイスなどの、上述の方法を実施するためのツールに関する。
【背景技術】
【０００２】
心不全は近代医学において重篤な問題である。心臓の機能障害は、生命に関わる状態を生じ、心不全を患う患者にとって不快をもたらす。心不全は、右心室又は左心室のそれぞれに影響を及ぼす可能性があり、強度も異なり得る。ニューヨーク心臓協会(New York Heart association、NYHA)によって最初に分類システムが開発された。この分類システムによると、軽症の心不全はクラスIの症例として分類される。これらの患者は、過度の運動時にのみ症候を示す。中程度の症例は、より少ない運動時にすでにより顕著な症候を示す(クラスII及びIII)が、クラスIVは、安静時にすでに症候を示す(New York Heart Association. Diseases of the heart and blood vessels. Nomenclature and criteria for diagnosis, 6th ed. Boston: Little、Brown and co, 1964;114)。
【０００３】
心不全の有病率は、過去数年にわたって、欧米先進国の集団において着実に増加している。この増加の理由の1つは、近代医学による平均余命の上昇及び心筋梗塞後の生存の改善にあるとみられている。しかしながら、心不全による死亡率は、診断及び治療方法の改善によってさらに低下し得る。いわゆる「フラミンガム(Framingham)」研究は、1950〜1969年と1990〜1999年の時間枠で比較した場合に、5年死亡率が男性では70％から59％に、女性では57％から45％に低下したことを報告した(Fox C.S. et al., Circulation 110, 522-527, 2004)。「メイヨー(Mayo)」研究は、1979〜1984年と比較して1996〜2000年の時間枠では、男性では65％から50％に、女性では51％から46％に低下したことを示している(Roger VL, Weston SA, Redfield MM, et al., JAMA-J. Am. Med. Assoc.  292, 344-350, 2004)。このような死亡率の低下にもかかわらず、心不全による全体的な死亡率は依然として主要な社会的負担である。ACE阻害剤治療を受けたNYHAクラスII〜III患者の1年死亡率は依然として9〜12％(SOLVD研究；The SOLVD Investigators、NEJM 325, 293-302, 1991; The SOLVD Investigators, New Engl. J. Med. 327, 685-691, 1992)であり、ACE阻害剤治療を受けていないNYHAクラスIVの場合には52％(Consensus研究；The Consensus Trial Study Group, New Engl. J. Med. 316, 1429-1435, 1987)である。
【０００４】
心不全の診断は、今日、臨床症状、イメージングモダリティ、並びにバイオマーカー、脳性ナトリウム利尿ペプチド(BNP)及びアミノ末端プロ脳性ナトリウム利尿ペプチド(NT-proBNP)に主に頼っている。しかし、医学界にバイオマーカーが広く受け入れられているにもかかわらず、ゴールドスタンダードであるBNP及びNT-proBNPの臨床利用は、心不全の初期における感度の欠如により限定的である(Rodeheffer、R.J., J. Am. Coll. Cardiol.  44, 740-749, 2004を参照)。さらに、BNP及び/又はNT-proBNP濃度は、性別、年齢、BMI、又は腎機能などの交絡因子によって影響を受ける[Balion C. et al. 2013. AHRQ Comparative Effectiveness Reviews. Agency for Healthcare Research and Quality (US), Rockville (MD)]。多くの患者が、顕性症候性疾患の発症前に無症候性期の左心室の収縮機能障害(ALVSD)を通って進行するため、これは、多大な医学的問題を表す。無症候性患者における薬物療法は、臨床帰結に前向きに影響することが示されているため、治療可能な初期の信頼できる診断及びその結果、ガイドラインによって決定された治療は、罹患率及び死亡率を低減し、大きな健康経済影響を有することが期待される。ALSVD(症候性心不全を発症するリスクがある患者)の費用効率的なスクリーニングに対するニーズについて、医学界にはほとんど疑いの余地がないが、利用可能な診断試験の非常に高い費用及び/又は準最適な臨床実施は、これまで、スクリーニングプログラムが、医学ガイドラインによって推奨されることを阻害している。
【０００５】
最近、心不全を診断するため及び/又は心不全の進行若しくは退行をモニタリングするための代謝バイオマーカーが報告されている(それぞれWO2011/092285及びWO2013/014286を参照)。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】WO2011/092285
【特許文献２】WO2013/014286
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】New York Heart Association. Diseases of the heart and blood vessels. Nomenclature and criteria for diagnosis, 6th ed. Boston: Little, Brown and co, 1964;114
【非特許文献２】Fox C.S. et al., Circulation 110, 522-527, 2004
【非特許文献３】Roger VL, Weston SA, Redfield MM, et al., JAMA-J. Am. Med. Assoc.  292, 344-350, 2004
【非特許文献４】The SOLVD Investigators, NEJM 325, 293-302、1991
【非特許文献５】The SOLVD Investigators, New Engl. J. Med. 327, 685-691, 1992
【非特許文献６】The Consensus Trial Study Group, New Engl. J. Med. 316, 1429-1435, 1987
【非特許文献７】Rodeheffer, R.J., J. Am. Coll. Cardiol.  44, 740-749, 2004
【非特許文献８】Balion C. et al. 2013. AHRQ Comparative Effectiveness Reviews. Agency for Healthcare Research and Quality (US), Rockville (MD)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
近代医学の目的は、心不全、特に初期の心不全を有する患者を信頼性をもって特定及び治療することである。したがって、心不全を信頼性をもって診断するための手段及び方法が依然として強く望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
したがって、本発明は、被験体において心不全を診断する方法であって、以下のステップ:
(a)被験体のサンプルにおいて、特に、少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するステップ、及び
(b)ステップ(a)で決定された前記バイオマーカーの量を、参照(単数又は複数、特に前記少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての参照)と比較するステップであって、それにより心不全が診断される、ステップ
を含む、方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明の基礎となる研究に適用されたLCMS法のフローダイアグラム。
【図２】NT-proBNPを含むパネル1を用いて計算されたHF患者の予測確率に対する(A)、又はNT-proBNPのレベルに対する(B)、利尿薬及び/又はスタチンでの投薬の効果。縦軸の値を、ロジット関数を用いて変換するか(A)、又は対数変換し(B)、正規分布を達成した。症例数は、ボックスの下に示される。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明に従って参照される方法は、上述のステップから本質的になる方法又はさらなるステップを含む方法を含む。しかし、本方法は、好ましい実施形態では、ex vivoで行われる方法、すなわち、人体又は動物体に対して実施されない方法であることを理解されたい。本方法は、好ましくは自動化により補助され得る。
【００１２】
用語「診断すること」は、本明細書中で使用される場合、被験体が心不全に罹患しているか否かを評価することを指す。したがって、被験体における心不全の存在又は非存在が、診断され得る。好ましくは、この用語は、心不全を含める(rule in)又は除外する(rule out)ことを指す。当業者であればわかるであろうが、そのような評価は、試験される被験体の100％に対して正しいことが好ましいが、通常はそうでない可能性がある。しかし、この用語は、統計学的に有意な一部の被験体を正確に評価でき、したがって診断できることを必要とする。一部が統計学的に有意であるかどうかは、種々の周知の統計学的評価ツール、例えば、信頼区間の決定、p値の決定、スチューデントのt検定、マン・ホイットニー検定などを用いて、当業者によって労苦もなく決定され得る。詳細は、Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983に見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、又は少なくとも95％である。p値は、好ましくは、0.2以下、0.1以下、又は0.05以下である。好ましくは、診断は、本発明の方法において決定されるバイオマーカー、すなわち、本発明の方法のステップ(a)において具体的に言及される少なくとも3つのバイオマーカー、及び決定される場合は、NT-proBNP若しくはBNPに基づく。
【００１３】
用語「診断すること」は、心不全又はその症状の個々の診断、並びに患者の継続的なモニタリングを含む。モニタリング、すなわち種々の時点における心不全又はそれに付随する症状の存在又は非存在の診断は、心不全に罹患していることがわかっている患者のモニタリング、並びに心不全、特に症候性心不全を発症するリスクがあることがわかっている被験体のモニタリングが含まれる。さらに、モニタリングは、患者の治療が成功するかどうか、又は少なくとも心不全の症状が特定の治療によって時間とともに改善し得るかどうかを判定するためにも使用され得る。さらに、モニタリングは、積極的な患者管理、例えば入院の決定、集中的ケア方策、並びに/又はさらなる質的モニタリング及び量的モニタリング方策、すなわち、モニタリング頻度のために使用され得る。
【００１４】
一実施形態では、試験被験体における疾患の存在が診断され得る。別の実施形態では、試験被験体における疾患の非存在が診断され得る。
【００１５】
用語「心不全」は、当技術分野で周知である。本明細書中で使用される場合、心臓の機能障害に関する。これは、心臓が、組織の代謝要求を満たすのに十分な速度で酸素化血液を供給しない、進行性障害である。好ましくは、用語心不全は、本明細書中で使用される場合、鬱血性心不全(CHF)に関する。
【００１６】
心不全は、多くの心血管疾患の最終的な共通の段階であり、最終段階の患者が、心臓の構造又は機能の異常から生じる努力不耐性(effort intolerance)及び/又は体液貯留(fluid retention)の典型的な兆候及び症状を示す、臨床的症候群として定義される。本明細書中以下にさらに記載されるように、用語「心不全」は、本発明の方法において、心不全の症候性形態及び無症候性形態の両方を包含する。例えば、無症候性の左心室収縮機能障害又は無症候性の拡張機能障害が診断され得る。
【００１７】
心臓の機能障害は、心臓からの血液の駆出率の顕著な低下、及びしたがって血流の減少をもたらす収縮機能障害であり得る。具体的には、収縮期心不全は、顕著に低下した左心室駆出率(LVEF)、好ましくは50％未満の駆出率(駆出率の低下を有する心不全、HFrEF)を特徴とする。あるいは、この障害は、拡張機能障害、すなわち心室が適切に弛緩できないことであり得る。後者は通常、より硬い心室壁を伴う。拡張機能障害は、心室の不充分な充填を引き起こし、したがって、一般的に血流に対する影響をもたらす。したがって、拡張機能障害はまた、拡張末期圧の上昇をもたらし、最終結果は収縮機能障害の場合と同等である(左心不全の肺浮腫、右心不全の末梢浮腫)。したがって、心不全は、右心(肺循環)、左心(体循環)又はその両方に影響し得る。心機能障害及びしたがって心不全を測定する技術は、当該技術分野において周知であり、心エコー検査、電気生理学、血管造影を含む。心臓の機能障害は、永久に、又は特定のストレス若しくは運動条件下でのみ生じ得ることが理解される。症状の強さに依存して、心不全は、本明細書の他の箇所に記載されているように分類され得る。心不全の典型的な症状は、呼吸困難、胸痛、めまい、混乱、肺及び/又は末梢浮腫を含む。症状の発生及びその重症度は、心不全の重症度並びに心不全の特徴及び原因、収縮期又は拡張期又は限定的、すなわち右心若しくは左心に位置する心不全に依存し得ることが理解される。心不全のさらなる症状は、当該技術分野において周知であり、Stedman又はBrunnwaldなどの医学の標準テキストブックに記載されている。
【００１８】
異なる病態生理学を有する心不全の2つのサブセットは、各心拍で押し出される左心室における血液の総量のパーセンテージである左心室駆出率(LVEF)の測定に基づいて記載される: 左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)及び左心室駆出率の維持を有する心不全(HFpEF)。好ましくは、本発明において診断される心不全はHFpEFであり、より好ましくは心不全はHFrEFである。
【００１９】
収縮性心不全としても知られるHFrEFは、心筋収縮の低下及び左心室の排出(emptying)を特徴とする。表現「左心室駆出率の低下」は、好ましくは、50％より低い左心室駆出率(LVEF)に関する。さらに、LVEFは40％より低い、特に35％より低いことが想定される。また、左心室駆出率は、50％より低いが、35％より大きくてよい。
【００２０】
HFrEFの多くの原因があるが、最も一般的なものは、冠動脈疾患から生じ、心筋梗塞より前の虚血性心筋症に関連する。虚血性心筋症(ICMP)は、冠動脈の狭窄又は閉塞が、心臓組織への血流及び酸素供給を制限し、心筋を損傷又は弱める(機能的心筋の喪失)場合に生じる。さらに、HfrEFは、非虚血性原因を有し得る。HFrEFの最も一般的な非虚血性原因の1つは、拡張型心筋症(dilatative cardiomyopathy)(DCMP、拡張型心筋症(dilated cardiomyopathy)とも称される)である。DCMPは、心臓の主要なポンピングチャンバーである左心室が拡大し、拡張し、弱いため、血液を送る心臓の能力が低下している状態である。DCMPの原因は、心筋感染(心筋炎)、高血圧、心臓弁膜症、及びアルコール乱用から家族性(遺伝性)形態まで及び得る。好ましくは、用語NICMP(非虚血性心筋症)及びDCMPは、本明細書中で交換可能に使用される。
【００２１】
したがって、HFrEFに罹患している被験体は、拡張型心筋症(dilatative cardiomyopathy)(DCMP、拡張型心筋症(dilated cardiomyopathy)と称されることも多い)又は虚血性心筋症(ICMP)に罹患し得る。
【００２２】
したがって、用語HFrEFは、好ましくは、ICMP及びDCMPを包含する。したがって、診断されるHFrEFは、ICMP又はDCMPであり得る。HFrEF、ICMP及びDCMPに対する好ましいマーカーの組み合わせは、本明細書中他の箇所に開示される。
【００２３】
ICMPに罹患している被験体は、好ましくは、LVEFの低下及び50％を超える冠動脈狭窄を有する。
【００２４】
DCMPに罹患している被験体は、好ましくは、LVEFの低下及び50％未満の冠動脈狭窄を有する。特に、DCMPに罹患している被験体は、好ましくは、LVEFの低下、50％未満の冠動脈狭窄及び左心室壁厚>55mmを有する。さらに、DCMPに罹患している被験体は、LVEFの低下、50％未満の冠動脈狭窄及び55mmより大きい左心室拡張末期径を有し得る。
【００２５】
HFrEF、又はHFrEFのサブフォーム(DCMP又はICMP)を診断するための少なくとも3つのバイオマーカーの好ましい組み合わせは、本明細書中他の箇所に開示される。
【００２６】
本発明の方法におけるHFrEFは、症候性又は無症候性であり得る。したがって、本発明は、好ましくは、症候性又は無症候性収縮機能障害の診断を可能にする。
【００２７】
上記のように、診断される心不全は、拡張性心不全としても知られている、左心室駆出率の維持を有する心不全(HFpEF)であってよい。用語「左心室駆出率の維持」は、好ましくは、50％より大きいLVEFを指す。60％より大きいLVEFも想定される。あるいは、用語「左心室駆出率の維持」は、好ましくは、55％より大きいLVEFを指す。HFpEFは、左心室の弛緩及び拡張の障害を特徴とする。拡張左心室機能障害は、心筋の硬さの増加をもたらすLV肥大及び心筋線維化から生じる。筋肉は硬くなり、特に拡張期の間に、弛緩するその能力の一部を失う。その結果、影響を受けた心室は、拡張期に血液充満に問題があり、左心室充満圧の上昇をもたらす。本発明の方法におけるHFpEFは、症候性又は無症候性であり得る。したがって、本発明は、好ましくは、症候性又は無症候性の拡張機能障害の診断を可能にする。
【００２８】
HFpEFに罹患している被験体は、好ましくは、12mmより大きな心中隔(cardium septum)厚を有する。あるいは、被験体は、11mmより大きな心中隔厚を有し得る。
【００２９】
HFpEFを診断するための少なくとも3つのバイオマーカーの好ましい組み合わせは、本明細書中他の箇所に開示される。
【００３０】
さらに、心不全は、本明細書中で使用される場合、症候性又は無症候性心不全に関する。したがって、本発明の方法は、症候性心不全及び特に、無症候性心不全の診断を可能にする。したがって、本発明は、特に、症候性若しくは無症候性のCHF、HFrEF、DCMP、ICMP及び/又はHFpEFの診断を可能にする。
【００３１】
心不全の症状は、当該技術分野において周知であり、上に記載されている。無症候性心不全は、好ましくは、NYHAクラスIによる心不全である。NYHAクラスIによる心不全を有する被験体は、身体活動の制限がなく、通常の身体活動は、過度の息切れ、疲労、又は動悸を引き起こさない。症候性心不全は、好ましくは、NYHAクラスII、III及び/又はVIによる、特にNYHAクラスII及び/又はIIIによる心不全である。NYHAクラスII又はIIIによる心不全を有する被験体は、身体活動のわずかな(NYHAクラスII)又は著しい(NYHAクラスIII)制限があり、安静時には苦痛が無いが、通常の(NYHAクラスII)又は通常を下回る(NYHAクラスIII)身体活動は、過度の息切れ、疲労、又は動悸をもたらす。
【００３２】
本明細書中以下により詳細に記載されるように、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示す。この場合、被験体が症候性心不全(又は症候性HFrEF、DCMP、ICMP若しくはHFpEF)に罹患しているかどうかが特に診断される。より好ましくは、被験体は、心不全の症状を示さない。この場合、無症候性心不全が診断される。この場合、被験体が無症候性心不全(又は無症候性HFrEF、DCMP、ICMP若しくはHFpEF)に罹患しているかどうかが特に診断される。
【００３３】
本発明の方法は、少なくとも3つのバイオマーカーの、すなわち、少なくとも3つのバイオマーカーの組み合わせの量の決定を想定する。好ましい組み合わせは、本明細書中他の箇所に記載される。用語「バイオマーカー」は、本明細書中で使用される場合、本明細書において言及される疾患又は効果の指標として機能する分子種を指す。前記分子種は、被験体のサンプル中に見出される代謝産物自体であってもよい。さらに、特定の場合には、バイオマーカーはまた、前記代謝産物に由来する分子種であってもよい。そのような場合、実際の代謝産物は、サンプル中で又は決定過程の間に化学的に修飾され、前記修飾の結果として、化学的に異なる分子種、すなわちアナライトが決定される分子種となる。そのような場合、アナライトは実際の代謝産物を表し、各医学的状態、すなわち心不全の指標として同じ可能性を有することが理解される。本発明の一実施形態では、トリアシルグリセリドが、それ自体、本明細書中他の箇所に記載されるように、決定される。本発明の一実施形態では、ホスファチジルコリンが、それ自体、本明細書中他の箇所に記載されるように、決定される。本発明の一実施形態では、セラミドが、それ自体、本明細書中他の箇所に記載されるように、決定される。本発明の一実施形態では、スフィンゴミエリンが、それ自体、本明細書中他の箇所に記載されるように、決定される。本発明の一実施形態では、コレステリルエステルが、それ自体、本明細書中他の箇所に記載されるように、決定される。好ましくは、本発明において決定される少なくとも3つのバイオマーカーは、代謝産物バイオマーカーである(ペプチド/タンパク質マーカーであるさらなるマーカーBNP及びNT-proBNPを除いて。以下参照)。用語「代謝産物」は、当技術分野において周知である。好ましくは、本発明における代謝産物は、小分子化合物である。
【００３４】
本発明の方法では、少なくとも、少なくとも3つのバイオマーカーの(すなわち、少なくとも3つの代謝産物バイオマーカーの)量が決定される。用語「少なくとも3つのバイオマーカー」は、本明細書で使用される場合、3つ又は4つ以上を意味する。したがって、3、4、5、6、7、8、9、10又はさらにそれ以上のバイオマーカーの量が、決定され(かつ参照と比較され)得る。好ましくは、3〜10個のバイオマーカー、特に代謝産物バイオマーカーの量が、決定され(かつ参照と比較され)る。
【００３５】
好ましくは、決定される少なくとも3つのバイオマーカーは、脂質代謝産物バイオマーカーである。したがって、バイオマーカーは、好ましくは、代謝産物バイオマーカー(すなわち、脂質バイオマーカー)である。より好ましくは、決定される少なくとも3つのバイオマーカーは、少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカー、少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカー、及び少なくとも1つのセラミドバイオマーカーからなる群から選択される。したがって、本発明の方法は、1つ以上のスフィンゴミエリンバイオマーカー、1つ以上のトリアシルグリセリドバイオマーカー、1つ以上のコレステリルエステルバイオマーカー、1つ以上のホスファチジルコリンバイオマーカー、及び/又は1つ以上のセラミドバイオマーカーの決定を想定する。さらに、グルタミン酸の量が決定され得る。一実施形態では、(i)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、(ii)少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、及び(iii)少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカー若しくは少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーの量が決定される。
【００３６】
決定される少なくとも3つのバイオマーカーは、好ましくは、上記の異なる化合物クラスの少なくとも3つに属する。例えば、少なくとも3つのバイオマーカーの1つはトリアシルグリセリドバイオマーカーであり、1つはスフィンゴミエリンバイオマーカーであり、1つはコレステリルエステルバイオマーカーである。しかし、少なくとも3つのバイオマーカーが、単一の化合物クラス、又は2つの化合物クラスに属することも想定される。
【００３７】
本発明において決定される好ましいバイオマーカーは、実施例のセクションの表1の第1列に開示される。
【００３８】
したがって、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、好ましくは、OSS2、SOP2、SPP1、SSP2、SSS、PPO1、及びPPPからなる群から選択され、より好ましくは、OSS2、SOP2、SPP1、SSP2、PPO1及びPPPからなる群から選択され、さらにより好ましくは、OSS2、SOP2、SPP1、SSP2及びPPO1、特にOSS2及びSOP2から選択され、最も好ましくはOSS2である。好ましくは、1、2、若しくは3個、又はそれ以上のトリアシルグリセリドバイオマーカーが決定される。
【００３９】
少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、好ましくは、SM10、SM18、SM2、SM21、SM23、SM24、SM28、SM29、SM3、SM5、SM8、及びSM9からなる群から(特に、SM10、SM18、SM21、SM23、SM24及びSM28から)選択される。より好ましくは、少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM23、SM24、及びSM18からなる群から選択される。さらにより好ましくは、少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーはSM18又はSM24であり、最も好ましくはSM23である。好ましくは、1、2、3、4個又はそれ以上のスフィンゴミエリンバイオマーカーが決定される。
【００４０】
少なくとも1つのセラミドバイオマーカーは、好ましくは、Cer(d16:1/24:0)、Cer(d17:1/24:0)、Cer(d18:1/23:0)、Cer(d18:1/24:1)、及びCer(d18:2/24:0)からなる群から選択される。好ましくは、1若しくは2個、又はそれ以上のセラミドバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも1つのセラミドバイオマーカーは、Cer(d16:1/24:0)、及びCer(d18:1/24:1)からなる群から選択される。さらにより好ましくは、少なくとも1つのセラミドバイオマーカーはCer(d16:1/24:0)である。
【００４１】
少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、好ましくは、PC4又はPC8である。好ましくは、1つのホスファチジルコリンバイオマーカー、特にPC4の量が決定される。しかし、バイオマーカーPC4及びPC8の両方を決定することも想定される。
【００４２】
少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、好ましくは、コレステリルエステルC18:0又はコレステリルエステルC18:2である。好ましくは、1つのコレステリルエステルバイオマーカー、特に、コレステリルエステルC18:2の量が決定される。しかし、コレステリルエステルC18:0及びコレステリルエステルC18:2の両方を決定することも想定される。好ましくは、コレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:1ではない。
【００４３】
したがって、本発明の方法のステップ(a)で参照される少なくとも3つのバイオマーカーは、好ましくは、OSS2、SOP2、SPP1、SSP2、SSS、PPO1、PPP、SM10、SM18、SM2、SM21、SM23、SM24、SM28、SM29、SM3、SM5、SM8、SM9、Cer(d16:1/24:0)、Cer(d17:1/24:0)、Cer(d18:1/23:0)、Cer(d18:1/24:1)、Cer(d18:2/24:0)、PC4、PC8、コレステリルエステルC18:0、コレステリルエステルC18:2、及びグルタミン酸からなるバイオマーカーの群から選択される。上述のバイオマーカーは、代謝産物バイオマーカーである。
【００４４】
バイオマーカーの定義
本発明において、OSS2、SOP2、SPP1、SSP2、SSS、PPO1、PPP、SM10、SM18、SM2、SM21、SM23、SM24、SM28、SM29、SM3、SM5、SM8、SM9、Cer(d16:1/24:0)、Cer(d17:1/24:0)、Cer(d18:1/23:0)、Cer(d18:1/24:1)、Cer(d18:2/24:0)、PC4、PC8、コレステリルエステルC18:0、コレステリルエステルC18:2及びグルタミン酸からなる群から選択される少なくとも3つの代謝産物バイオマーカーの量を決定できる。
【００４５】
これらのバイオマーカーの好ましい定義は、実施例のセクションの表1に提供される。したがって、バイオマーカーは、好ましくは、以下のように定義される。
【００４６】
トリアシルグリセリド(TAG)バイオマーカー
バイオマーカーOSS2、SOP2、SPP1、SSP2、SSS、PPO1、及びPPPは、トリアシルグリセリド(TAG：トリアシルグリセリド)である。
・OSS2は、TAG(C18:1, C18:0, C18:0)である
・PPO1は、TAG(C16:0, C16:0, C18:1)である
・PPPは、TAG(C16:0, C16:0, C16:0)である
・SOP2は、TAG(C18:0, C18:1, C16:0)である
・SPP1は、TAG(C18:0, C16:0, C16:0)である
・SSP2は、TAG(C18:0, C18:0, C16:0)である
・SSSは、TAG(C18:0, C18:0, C18:0)である
【００４７】
トリアシルグリセリドTAG(Cx1:y1, Cx2:y2, Cx3:y3)は、好ましくは、トリアシルグリセリドが3つの脂肪酸エステル残基を含み、ここで、1つの脂肪酸エステル残基がCx1:y1であり、これは、この残基がx1個の炭素原子及びy1個の二重結合を含むことを意味し、1つの脂肪酸エステル残基がCx2:y2であり、これは、この残基がx2個の炭素原子及びy2個の二重結合を含むことを意味し、1つの脂肪酸エステル残基がCx3:y3であり、これは、この残基がx3個の炭素原子及びy3個の二重結合を含むことを意味することを意味することが示される。好ましくは、これらの脂肪酸エステル残基のいずれかが、グリセロールの任意の元のヒドロキシル基に結合されてよい。
【００４８】
例えば、SOP2は3つの脂肪酸エステル残基を含み、ここで、1つの脂肪酸エステルがC18:0であり、これは、この残基が18個の炭素原子及び0個の二重結合を含むことを意味し、1つの脂肪酸エステル残基がC18:1であり、これは、この残基が18個の炭素原子及び1個の二重結合を含むことを意味し、1つの脂肪酸エステル残基がC16:0であり、これは、この残基が16個の炭素原子及び0個の二重結合を含むことを意味する。好ましくは、これらの脂肪酸エステル残基のいずれかが、グリセロールの任意の元のヒドロキシル基に結合されてよい。
【００４９】
セラミド(CER)バイオマーカー
バイオマーカーCer(d16:1/24:0)、Cer(d17:1/24:0)、Cer(d18:1/23:0)、Cer(d18:1/24:1)、及びCer(d18:2/24:0)はセラミドである。
【００５０】
セラミドCER(dx1:y1/x2:y2)は、好ましくは、セラミドが「スフィンゴシン骨格」dx1:y1(式中、x1は炭素原子の数を表し、y1は二重結合の数を表す)及び「脂肪酸アミド」残基x2:y2(式中、x2は炭素原子の数を表し、y2はその二重結合の数を表す)を含むことを意味することが示される。好ましくは、「d」は、骨格が2つのヒドロキシル基を含むことを示す。
・Cer(d16:1/24:0)は、セラミド(d16:1/24:0)である
・Cer(d17:1/24:0)は、セラミド(d17:1/24:0)である
・Cer(d18:1/23:0)は、セラミド(d18:1/23:0)である
・Cer(d18:1/24:1)は、セラミド(d18:1/24:1)である
・Cer(d18:2/24:0)は、セラミド(d18:2/24:0)である
【００５１】
例えば、セラミドCer(d16:1/24:0)は、好ましくは、セラミドが、16個の炭素原子及び1個の二重結合を含む「スフィンゴシン骨格」d16:1、並びに24個の炭素原子及び0個の二重結合を含む「脂肪酸アミド」残基24:0を含むことを意味することが示される。
【００５２】
スフィンゴミエリン(SM)バイオマーカー
SMは、スフィンゴミエリンの略称である。本明細書中以下に記載されるように、スフィンゴミエリンバイオマーカーSM10、SM18、SM2、SM21、SM23、SM24、SM5及びSM9の量は、サンプル中の単一のスフィンゴミエリン種の量を決定することによって、又は同一若しくは実質的に同一の分子量を有する2つ(若しくはさらには3つ)のスフィンゴミエリン種の総量を決定することによって、決定され得る(実施例のセクションの表1を参照)。例えば、SM10については、スフィンゴミエリン(d18:1/18:0)の量、又はスフィンゴミエリン(d18:1/18:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/20:0)の総量が決定され得る。単一種又は2種(若しくは3種)の量が決定されるかどうかは、決定に使用されるアッセイに依存し得る。例えば、決定ステップ(ステップa)の基礎となるアッセイが単一種の決定を可能にする場合、単一の種の量が決定される。決定ステップの基礎となるアッセイが2種(又は3種)の総量のみの決定(単一種の決定ではなく)を可能にする場合、言い換えれば、アッセイが2種(又は3種)のそれぞれの量を別々に決定することができない場合、2種(又は3種)の総量が決定され得る。例えば、バイオマーカーの量の決定が質量分析を含む場合、種のピークが重複するので、バイオマーカーの量の決定は、好ましくは、2種(又は3種)の質量スペクトルにおける単一ピークに基づく。これは、当業者によって考慮される。本発明の基礎となる研究の文脈において、単一種の決定、及び本明細書中以下に(若しくは表1に)記載される2種(若しくは3種)の決定の両方が、信頼できる診断を可能にすることが示されている。有利なことに、2種(又は3種)の決定が、特定の場合に単一種に基づく診断よりも信頼できる診断を可能にし得ることが示されている。さらに、同じ分子量を有する2種(又は3種)の総量の決定は、あまり複雑ではない(単一種の決定と比較して)。同じことがPC8の決定にも当てはまりる(下記参照)。
【００５３】
実施例のセクションの表1において、SM10、SM18、SM2、SM21、SM23、SM24、SM5及びSM9についての好ましいスフィンゴミエリン種が列挙されている(この種はこの表において「アナライト」と称される)。
【００５４】
SM10、SM2、SM24、SM5、及びSM9の場合、2つのアナライト(アナライト1及びアナライト2)が列挙される。前記バイオマーカーは、好ましくは、アナライト2(例えば、SM2について：SM(d16:1/16:0))、より好ましくはアナライト1(例えば、SM2について：SM(d18:1/14:0))、最も好ましくはアナライト1及び2(SM2について：スフィンゴミエリン(d18:1/14:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/16:0))を指す。したがって、表1に2種が列挙されているバイオマーカーは、アナライト1、アナライト2又はアナライト1とアナライト2との組み合わせである。 
【００５５】
したがって、前記バイオマーカーの量は、好ましくは、アナライト2の、又はより好ましくはアナライト1の量を決定することによって、最も好ましくはアナライト1及びアナライト2の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、前記バイオマーカーの量は、アナライト1若しくは2の量、又はアナライト1及び2の量の合計である。同じことがPC8に当てはまる。
【００５６】
バイオマーカーSM18、SM21及びSM23の場合、3つのアナライト(アナライト1、2及び3)が列挙される。前記バイオマーカーは、好ましくは、アナライト3、より好ましくはアナライト2、さらにより好ましくはアナライト1、最も好ましくはアナライト1、2及び3を指す。したがって、表1に3種が列挙されているバイオマーカーは、アナライト1、アナライト2、若しくはアナライト3、又はアナライト1、アナライト2及びアナライト3の組み合わせである。
【００５７】
2つのアナライトがバイオマーカーについて列挙されている場合(アナライト1及びアナライト2)、バイオマーカーはアナライト1であることが想定される。あるいは、バイオマーカーはアナライト2であってもよい。3つのアナライトがバイオマーカーについて列挙されている場合(アナライト1、アナライト2及びアナライト3)、バイオマーカーはアナライト1であることが想定される。あるいは、バイオマーカーはアナライト2であってもよい。また、バイオマーカーはアナライト3であってもよい。あるいは、バイオマーカーは、アナライト1とアナライト2の組み合わせであってもよい。あるいは、バイオマーカーは、アナライト1とアナライト3の組み合わせであってもよい。あるいは、バイオマーカーは、アナライト2とアナライト3の組み合わせであってもよい。あるいは、バイオマーカーは、アナライト1、アナライト2及びアナライト3の組み合わせであってもよい。
【００５８】
したがって、前記バイオマーカーの量は、好ましくは、アナライト3の、又はより好ましくはアナライト2の、さらにより好ましくはアナライト1の量を決定することによって、最も好ましくはアナライト1、アナライト2、及びアナライト3の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、前記バイオマーカーの量は、アナライト1、2、若しくは3の量、又はアナライト1、2及び3の量の合計である。
【００５９】
以下が特に適用される:
バイオマーカーSM10は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/18:0)を、又はより好ましくはスフィンゴミエリン(d18:1/18:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/20:0)を指す。したがって、バイオマーカーSM10は、スフィンゴミエリン(d18:1/18:0)、又はスフィンゴミエリン(d18:1/18:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/20:0)の組み合わせである。
【００６０】
したがって、SM10の量は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/18:0)の量を決定することによって、又はスフィンゴミエリン(d18:1/18:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/20:0)の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、SM10の量は、スフィンゴミエリン(d18:1/18:0)の量、又はスフィンゴミエリン(d18:1/18:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/20:0)の量の合計である。
【００６１】
バイオマーカーSM18は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/21:0)を、又はより好ましくはスフィンゴミエリン(d18:1/21:0)、スフィンゴミエリン(d16:1/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/22:0)を指す。したがって、バイオマーカーSM18は、スフィンゴミエリン(d18:1/21:0)、又はスフィンゴミエリン(d18:1/21:0)、スフィンゴミエリン(d16:1/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/22:0)の組み合わせである。
【００６２】
したがって、SM18の量は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/21:0)の量を決定することによって、又はスフィンゴミエリン(d18:1/21:0)、スフィンゴミエリン(d16:1/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/22:0)の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、SM18の量は、スフィンゴミエリン(d18:1/21:0)の量、又はスフィンゴミエリン(d18:1/21:0)、スフィンゴミエリン(d16:1/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/22:0)の量の合計である。
【００６３】
バイオマーカーSM2は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/14:0)を、又はより好ましくはスフィンゴミエリン(d18:1/14:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/16:0)を指す。したがって、バイオマーカーSM2は、スフィンゴミエリン(d18:1/14:0)、又はスフィンゴミエリン(d18:1/14:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/16:0)の組み合わせである。
【００６４】
したがって、SM2の量は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/14:0)の量を決定することによって、又はスフィンゴミエリン(d18:1/14:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/16:0)の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、SM2の量は、スフィンゴミエリン(d18:1/14:0)の量、又はスフィンゴミエリン(d18:1/14:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/16:0)の量の合計である。
【００６５】
バイオマーカーSM21は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d17:1/23:0)を、又はより好ましくはスフィンゴミエリン(d17:1/23:0)、スフィンゴミエリン(d18:1/22:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/24:0)を指す。したがって、バイオマーカーSM21は、スフィンゴミエリン(d17:1/23:0)、又はスフィンゴミエリン(d17:1/23:0)、スフィンゴミエリン(d18:1/22:0)、及びスフィンゴミエリン(d16:1/24:0)の組み合わせである。
【００６６】
したがって、SM21の量は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d17:1/23:0)の量を決定することによって、又はスフィンゴミエリン(d17:1/23:0)、スフィンゴミエリン(d18:1/22:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/24:0)の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、SM21の量は、スフィンゴミエリン(d17:1/23:0)の量、又はスフィンゴミエリン(d17:1/23:0)、スフィンゴミエリン(d18:1/22:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/24:0)の量の合計である。
【００６７】
バイオマーカーSM23は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)を、又はより好ましくはスフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)を指す。したがって、バイオマーカーSM23は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、又はスフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせである。さらに、別の実施形態では、SM23がスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)であることが想定される。
【００６８】
したがって、SM23の量は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)の量を決定することによって、又はスフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、SM23の量は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)の量、又はスフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の量の合計である。さらに、別の実施形態では、SM23の量が、スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の量を決定することによって決定されることが想定される。
【００６９】
一実施形態では、バイオマーカーSM23は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)を指す。したがって、この実施形態では、バイオマーカーSM23は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:2/C23:0)の量を決定することによって決定される。
【００７０】
バイオマーカーSM24は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/23:0)を、又はより好ましくはスフィンゴミエリン(d18:1/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:0)を指す。したがって、バイオマーカーSM24は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:0)、又はスフィンゴミエリン(d18:1/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:0)の組み合わせである。
【００７１】
したがって、SM24の量は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/23:0)の量を決定することによって、又はスフィンゴミエリン(d18:1/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:0)の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、SM24の量は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:0)の量、又はスフィンゴミエリン(d18:1/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:0)の量の合計である。
【００７２】
バイオマーカーSM28は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/24:0)である。
【００７３】
バイオマーカーSM29は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:2/17:0)である。
【００７４】
バイオマーカーSM3は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d17:1/16:0)である。
【００７５】
バイオマーカーSM5は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/16:0)を、又はより好ましくはスフィンゴミエリン(d18:1/16:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/18:0)を指す。したがって、バイオマーカーSM5は、スフィンゴミエリン(d18:1/16:0)、又はスフィンゴミエリン(d18:1/16:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/18:0)の組み合わせである。
【００７６】
したがって、SM5の量は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/16:0)の量を決定することによって、又はスフィンゴミエリン(d18:1/16:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/18:0)の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、SM5の量は、スフィンゴミエリン(d18:1/16:0)の量、又はスフィンゴミエリン(d18:1/16:0)及びスフィンゴミエリン(d16:1/18:0)の量の合計である。
【００７７】
バイオマーカーSM8は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:2/18:1)である。
【００７８】
バイオマーカーSM9は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/18:1)を、又はより好ましくはスフィンゴミエリン(d18:1/18:1)及びスフィンゴミエリン(d18:2/18:0)を指す。したがって、バイオマーカーSM9は、スフィンゴミエリン(d18:1/18:1)、又はスフィンゴミエリン(d18:1/18:1)及びスフィンゴミエリン(d18:2/18:0)の組み合わせである。
【００７９】
したがって、SM9の量は、好ましくは、スフィンゴミエリン(d18:1/18:1)の量を決定することによって、又はスフィンゴミエリン(d18:1/18:1)及びスフィンゴミエリン(d18:2/18:0)の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、SM9の量は、スフィンゴミエリン(d18:1/18:1)の量、又はスフィンゴミエリン(d18:1/18:1)及びスフィンゴミエリン(d18:2/18:0)の量の合計である。
【００８０】
上記のように、本発明は、少なくとも3つのバイオマーカーの量に基づく。この文脈において、SM10、SM18、SM2、SM21、SM23、SM24、SM5、及びSM9、並びにPC8は、これらのバイオマーカーの決定が、単一種、2種(又は3種)の決定に基づくかどうかにかかわらず、単一のバイオマーカーとみなされることが留意される。したがって、少なくとも2つのさらなるバイオマーカーが決定される必要がある。
【００８１】
スフィンゴミエリンSM(dx1:y1/x2:y2)は、好ましくは、スフィンゴミエリンが、「スフィンゴシン骨格」dx1:y1(式中、x1は炭素原子の数を表し、y1は二重結合の数を表す)及び「脂肪酸アミド」残基x2:y2(式中、x2は炭素原子の数を表し、y2はその二重結合の数を表す)を含むことを意味することが示される。
【００８２】
スフィンゴミエリン(d18:2/18:0)は、好ましくは、スフィンゴミエリンが「スフィンゴシン骨格」d18:2(18個の炭素原子及び2個の二重結合を含む)及び「脂肪酸アミド」残基18:0(18個の炭素原子及び0個の二重結合を含む)を含むことを意味することが示される。
【００８３】
コレステリルエステル(CE)バイオマーカー
CEは、コレステリルエステルの略称である。
【００８４】
本発明において、2つの異なるコレステリルエステルの、すなわちコレステリルエステルC18:0及び/又はコレステリルエステルC18:2の決定が予期される。これらのバイオマーカーは、当技術分野で周知である。コレステリルエステル(Cx1:y1)は、好ましくは、コレステリルエステルが脂肪酸エステル残基を含むことを意味することが示され、ここで、前記脂肪酸エステル残基は、Cx1:y1(この残基がx1個の炭素原子及びy1個の二重結合を含むことを意味する)である。
【００８５】
例えば、コレステリルエステルC18:0は、コレステリルエステルC18:0が脂肪酸エステル残基を含むことを意味することが示され、ここで、前記脂肪酸エステル残基は、C18:0(この残基が18個の炭素原子及び0個の二重結合を含むことを意味する)である。
【００８６】
ホスファチジルコリン(PC)バイオマーカー
PCは、ホスファチジルコリンの略称である。ホスファチジルコリンPC(Cx1:y1 Cx2:y2)は、好ましくは、このホスファチジルコリンが、2つの脂肪酸エステル残基を含むことを意味することが示され、ここで、1つの脂肪酸エステル残基は、Cx1:y1(この残基がx1個の炭素原子及びy1個の二重結合を含むことを意味する)であり、1つの脂肪酸エステル残基は、Cx2:y2(この残基がx2個の炭素原子及びy2個の二重結合を含むことを意味する)である。 
【００８７】
例えば、ホスファチジルコリン(C16:0 C18:2)は、好ましくは、このホスファチジルコリンが、2つの脂肪酸エステル残基を含むことを意味することが示され、ここで、1つの脂肪酸エステル残基は、C16:0(この残基が16個の炭素原子及び0個の二重結合を含むことを意味する)であり、1つの脂肪酸エステル残基は、C18:2(この残基が18個の炭素原子及び2個の二重結合を含むことを意味する)である。
【００８８】
バイオマーカーPC4は、ホスファチジルコリン(C16:0 C18:2)である。バイオマーカーPC8は、好ましくは、ホスファチジルコリン(C18:0 C18:2)を、又はより好ましくはホスファチジルコリン(C18:0 C18:2)及びホスファチジルコリン(C18:1 C18:1)を指す。したがって、バイオマーカーPC8は、ホスファチジルコリン(C18:0 C18:2)、又はホスファチジルコリン(C18:0 C18:2)及びホスファチジルコリン(C18:1 C18:1)の組み合わせである。
【００８９】
したがって、PC8の量は、好ましくは、ホスファチジルコリン(C18:0 C18:2)の量を決定することによって、又はホスファチジルコリン(C18:0 C18:2)及びホスファチジルコリン(C18:1 C18:1)の組み合わせた量(したがって総量)を決定することによって、決定される。したがって、PC8の量は、ホスファチジルコリン(C18:0 C18:2)の量、又はホスファチジルコリン(C18:0 C18:2)及びホスファチジルコリン(C18:1 C18:1)の量の合計である。
【００９０】
好ましいバイオマーカーの組み合わせ
上記のように、心不全を診断するための本発明の方法は、被験体のサンプルにおける少なくとも3つのバイオマーカーの量の決定を含む。したがって、少なくとも3つのバイオマーカーの組み合わせの量の決定が予期される。本発明において決定される少なくとも3つのバイオマーカーの好ましい組み合わせは、本明細書中以下に記載される。さらに、少なくとも3つのマーカーの好ましい組み合わせは、「本発明の実施形態/項目」に記載される。「本発明の実施形態/項目」に記載される少なくとも3つのバイオマーカーは、心不全の診断について同様に使用され得る。
【００９１】
心不全の診断のための少なくとも3つのバイオマーカーは、好ましくは、以下である:
i. 少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのコレステリルエステル、及び少なくとも1つのホスファチジルコリン;
ii. 少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのホスファチジルコリン、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン;
iii. 少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのコレステリルエステル、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン;
iv. 少なくとも1つのホスファチジルコリン、少なくとも1つのコレステリルエステル、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン;
v. コレステリルエステルC18:2、SSS及びCer(d17:1/24:0);
vi. SM2、SM3、SM5、SM18、SM23、SM24、及びSM28からなる群から選択される少なくとも2つのスフィンゴミエリン、並びにSOP2、SPP1若しくはPPO1からなる群から選択される、又はSOP2、SPP1若しくはPPPからなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリド;
vii. OSS2、SOP2、SPP1及びSSP2からなる群から選択される少なくとも2つのトリアシルグリセリド、並びにSM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン;
viii. SM18、SM24及びSM28;
ix. 表2のパネル1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、若しくは199のバイオマーカー、又は
x. 表2aのパネル200、201、202、203、204、205、若しくは206のバイオマーカー。
【００９２】
決定される好ましいコレステリルエステル、トリアシルグリセリド、ホスファチジルコリン及びスフィンゴミエリンバイオマーカー、並びに少なくとも3つのバイオマーカーのさらなる好ましい組み合わせは、以下に記載される(特に、項目i.、ii.、iii.、及びiv.について)。
【００９３】
好ましくは、i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2、OSS2、SPP1、SSP2、PPO1及びPPPからなる群から選択され、i.、iii.及びiv.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2及びコレステリルエステルC18:0からなる群から選択され、i.、ii.、及びiv.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4及びPC8からなる群から選択され、ii.、iii.及びiv.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM18、SM24、SM23、SM21、SM28、SM5、SM3、SM29及びSM8からなる群から選択される。
【００９４】
あるいは、i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2、OSS2、SPP1、SSP2、PPO1及びSPP1からなる群から選択される。
【００９５】
好ましい実施形態では、少なくとも、上記の項目i.、ii.、iii.、vi、vii.、ix.又はx.の(特に、項目i.、ii.、iii.、vi、vii.又はix.の)バイオマーカーの量が決定される。特に、i.、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2、OSS2、SSP2、PPO1及びPPPからなる群から選択され、並びに/又は(特に並びに)i.及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM18、SM24、SM23、SM28、SM5、及びSM3からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、又は56のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、診断されるHF(心不全)が左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である場合に、決定される。被験体は、心不全の症状を示さなくてもよい。さらに、HfrEFがDCMP及びICMPから選択されることが想定される。
【００９６】
用語「少なくとも〜量(at least the amounts)」は、好ましくは、原則として、さらなるバイオマーカーが決定され得ることを意味する。一実施形態では、この用語は、「量」を意味する。好ましくは、本明細書中に開示される方法のステップ(a)で言及される少なくとも3つのバイオマーカーの量は、ステップ(b)における比較に使用される。
【００９７】
さらに好ましい実施形態では、少なくとも、i.、ii.、iii.、vi.、ix.又はx.の(特に、項目i.、ii.、iii.、vi. 又はix.の)バイオマーカーの量が決定され、ここで、i.、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2及び/若しくはOSS2であり、並びに/又は(特に並びに)i.及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに及び/又は(特に並びに)i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM18、SM24、SM23、及びSM3からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。特に、少なくとも、表2におけるパネル1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、又は18のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、診断されるHF(心不全)が左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である場合に、決定される。
【００９８】
さらに好ましい実施形態では、少なくとも、i.、ii.、iii.、vi.、ix.又はx.の(特に、i.、ii.、iii、vi、又はix.の)バイオマーカーの量が決定され、ここで、i.、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2及び/若しくはOSS2であり、並びに/又は(特に並びに)i.及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM23である。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。特に、少なくとも、表2におけるパネル1、2、3、又は4のバイオマーカーの量が決定される。好ましくは、少なくとも、OSS2、PC4及びSM23の量が、特にNT-proBNP又はBNPの量の決定と組み合わせて(本明細書中他の箇所を参照)、決定される(パネル1)。あるいは、パネル3、13及び60のバイオマーカーが決定され得る。また好ましくは、少なくとも、OSS2、コレステリルエステルC18:2及びSM23の量が決定される(パネル2)。あるいは、パネル20、21、22、23、32又は60のバイオマーカーが決定され得る。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、診断されるHF(心不全)が左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である場合に、決定される。
【００９９】
さらに好ましい実施形態では、少なくとも、iii.のバイオマーカーの量が決定され、ここで、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2及び/若しくはOSS2であり、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM23である。特に、少なくとも、SOP2、OSS2、PC4、コレステリルエステルC18:2、SM18、SM28、SM24、SSP2、及びSM23の量が決定される(パネル3)。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、診断されるHF(心不全)が左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である場合に、決定される。
【０１００】
前の段落に記載したように、パネル3に含まれるバイオマーカーの量、並びにしたがって、SOP2、OSS2、PC4、コレステリルエステルC18:2、SM18、SM28、SM24、SSP2、及びSM23の量を決定すること(又は少なくともそれらの量を決定すること)が、特に想定される。これらのバイオマーカーの量の決定は、NT-proBNP若しくはBNPの決定の非存在下並びに交絡因子についての補正の非存在下であっても、心不全、特にHFrEF(又はそのサブフォーム)の信頼可能な診断を可能にする。特に、初期の心不全が決定され得る。したがって、被験体は、心不全の症状を示さなくてもよい。LVEFは軽度に低下していてもよい。したがって、HFrEFは、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全であってよい。同じことが、例えばパネル1及び2にも適用される。したがって、初期の心不全は、パネル2の、及び特にパネル1のバイオマーカーを使用することによって、診断され得る。試験される被験体は、心不全の症状を示さなくてもよい。HFrEFは、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全であってよい。
【０１０１】
また好ましくは、パネル3のバイオマーカーの少なくとも3つのバイオマーカーの、少なくとも4つのバイオマーカーの、より好ましくは少なくとも5又は6個のバイオマーカーの、さらにより好ましくは少なくとも7個のバイオマーカーの、最も好ましくは少なくとも8個のバイオマーカーの量(又は少なくとも量)が、本発明の方法のステップ(a)において決定される。
【０１０２】
パネル3のバイオマーカーの(又は前の段落に記載のバイオマーカーの)量が決定される場合、本方法は、好ましくは、NT-proBNP及び/又はBNPの量のさらなる決定を含まない。特に、この方法は、BNP及び/若しくはNT-proBNPの量のさらなる決定、並びにBNP及び/若しくはNT-proBNPの量の参照との比較を含まなくてもよい。したがって、心不全の診断は、NT-proBNPの決定に基づくものではない。したがって、この方法は、非BNP及び非NT-proBNPベースの方法である。同じことが、例えば、パネル1及び2にも適用され得る。
【０１０３】
あるいは、この方法は、NT-proBNP及び/又はBNPの量のさらなる決定を含み得る。特に、この方法は、BNP若しくはNT-proBNPの量のさらなる決定、並びにBNP若しくはNT-proBNPの量の参照との比較を含み得る。
【０１０４】
パネル3のバイオマーカーの(パネル3のバイオマーカーの少なくとも3、4、5、6、7又は8個のバイオマーカーの)量が決定される場合、好ましくは、交絡因子についての補正は行われない。あるいは、交絡因子についての補正が行われてもよい。同じことが、例えば、パネル1及び2に適用され得る。
【０１０５】
好ましい実施形態では、少なくとも、i.、ii.、iii.又はvii.に示されるバイオマーカーの量が決定され、ここで、i.、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2、OSS2、及びSSP2からなる群から選択され、並びに/又は(特に並びに)i.及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM24、SM23、SM28、及びSM3からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、又は36のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、HFがHFrEF、及び特にDCMP(拡張型心筋症)である場合に、決定される。試験される被験体は、好ましくは、HFの症状を示さない。あるいは、被験体はHFの症状を示す。
【０１０６】
さらに好ましい実施形態では、少なくとも、ii.、又はiii.に示されるバイオマーカーの量が決定され、ここで、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2及び/若しくはOSS2であり、並びに/又は(特に並びに)iii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM23及び/若しくはSM24である。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル31、32、33、34、35、又は36のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、HFがHFrEF、及び特にDCMP(拡張型心筋症)である場合に、決定される。
【０１０７】
好ましい実施形態では、少なくとも、ii.、iii.又はvi.に示されるバイオマーカーの量が決定され、ここで、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2及び/若しくはOSS2であり、並びに/又は(特に並びに)iii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)ii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM18、SM24、及びSM23からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、又は56のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、HFがHFrEF、及び特にICMP(虚血性心筋症)である場合に、決定される。
【０１０８】
さらに好ましい実施形態では、少なくとも、iii.に示されるバイオマーカーの量が決定され、ここで、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2であり、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM18及び/若しくはSM23である。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル51、52、53、54、55、又は56のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、HFがHFrEF、及び特にICMP(虚血性心筋症)である場合に、決定される。
【０１０９】
好ましい実施形態では、少なくとも、ii.、iii.、vi.、vii.、ix.又はx.の(特に、ii.、iii.、vi.、vii.又はix.の)バイオマーカーの量が決定され、ここで、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択され、並びに/又は(特に並びに)iii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM24及びSM23からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル7、8、9、10、11、12、19、20、21、22、23、24、37、38、39、40、41、又は42のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、HFがHFrEF、特に無症候性HFrEFである場合に、決定される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。したがって、バイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、心不全の症状を示さない被験体におけるHFrEFの診断のために決定される。
【０１１０】
さらに好ましい実施形態では、ここで、少なくとも、iii.又はviのバイオマーカーの量が決定され、ここで、iii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2であり、並びに/又は(特に並びに)iii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)iii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM24及びSM23からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル7、8、9、10、11、又は12のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、HFがHFrEF、特に無症候性HFrEFである場合に、決定される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。したがって、バイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、心不全の症状を示さない被験体におけるHFrEFの診断のために決定される。
【０１１１】
好ましい実施形態では、少なくとも、iii.又はvii.のバイオマーカーの量が決定され、ここで、iii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2及びOSS2からなる群から選択され、並びに/又は(特に並びに)iii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)iii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM23である。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル19、20、21、22、23、又は24のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、HF又はHFrEFがDCMP、特に無症候性DCMPである場合に、決定される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。したがって、バイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、心不全の症状を示さない被験体におけるHFrEFの、特にDCMPの診断のために決定される。
【０１１２】
好ましい実施形態では、少なくとも、iii.又はvi.のバイオマーカーの量が決定され、ここで、iii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2であり、並びに/又は(特に並びに)iii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に並びに)iii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM24及びSM23からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル37、38、39、40、41、又は42のバイオマーカーの量が決定される。この段落で言及されるバイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、HF又はHFrEFがICMP、特に無症候性ICMPである場合に、決定される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。したがって、バイオマーカーの組み合わせは、好ましくは、心不全の症状を示さない被験体におけるHFrEFの、特にICMPの診断のために決定される。
【０１１３】
一実施形態では、診断される心不全は、駆出率の維持を有するHF(HFpEF)である。HFpEFの診断について、好ましくは、少なくとも、上記のii.、vi.又はvii.のバイオマーカーの量が決定され、ここで、ii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2、SSP2、SPP1及びPPO1からなる群から選択され、並びに/又は(特に並びに)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4及びPC8からなる群から選択され、並びに/又は(特に並びに)ii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM18、SM24、SM23、SM28、SM5、及びSM3からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、又は102のバイオマーカーの量が決定される。さらにより好ましくは、少なくとも、ii.のバイオマーカーの量が、決定され、ここで、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SSP2、SPP1及びPPO1からなる群から選択され、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM24、SM5、及びSM3からなる群から選択される。特に、ここで、少なくとも、表2におけるパネル79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、又は101のバイオマーカーの量が、HFpEFの診断のために決定される。最も好ましくは、少なくとも、ii.のバイオマーカーの量が決定され、ここで、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SSP2であり、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM24及びSM5からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、表2におけるパネル95、97、99、又は101のバイオマーカーの量が決定される。
【０１１４】
特に、診断されるHFpEFは、無症候性である。したがって、HFpEFは、心不全の症状を示さない被験体において診断される。好ましくは、少なくとも、ii.又はvii.の(特にii.の)バイオマーカーの量がこの場合決定され、ここで、ii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SPP1及びSSP2からなる群から選択され、並びに/又は(特に並びに)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)ii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM5及びSM3からなる群から選択される。好ましくは、少なくとも、これらのバイオマーカーを含む表2のいずれかのパネルのバイオマーカーの量が決定される。特に、少なくとも、表2におけるパネル79、80、81、82、83、84、85、又は86のバイオマーカーの量が決定される。より好ましくは、少なくとも、ii.のバイオマーカーの量が決定され、ここで、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SPP1であり、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4であり、並びに/又は(特に並びに)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM5である。特に、少なくとも、表2におけるパネル79、81、83、又は85のバイオマーカーの量が、好ましくは心不全の症状を示さない被験体におけるHFpEFの診断のために、決定される。
【０１１５】
好ましい実施形態では、少なくとも、viii.(パネル199)のバイオマーカーの量が決定され、ここで、CHFが診断され、NT-proBNPは含まれず、特に、少なくとも、表2におけるパネル3、5、9、11、17、35、39、47、53、55、62、70、77、99、又は199のバイオマーカーの量が決定される。
【０１１６】
一実施形態では、NT-proBNP又はBNPの量が、上記の少なくとも3つのバイオマーカーの得られた組み合わせの量に加えて決定される。別の実施形態では、NT-proBNP又はBNPの量は、上記の少なくとも3つのバイオマーカーの得られた組み合わせの量に加えて決定されない(本明細書中他の箇所を参照)。
【０１１７】
上記のように、パネル1〜206のいずれか1つのバイオマーカーの量を決定することが想定される。パネル1〜199のバイオマーカーは、表2に示される(第2列)。パネル200〜206のバイオマーカーは、表2aに示される(第2列)。好ましいパネルは、パネル1、パネル2、パネル3及びパネル4である。
【０１１８】
好ましい実施形態では、パネル1、2、3又は4のバイオマーカーの量は、本発明の方法のステップ(a)で決定される。別の好ましい実施形態では、パネル200のバイオマーカーが決定される。
【０１１９】
例えば、パネル1のバイオマーカーの量が決定される場合、SM23、OSS2及びPC4の量が決定される。本明細書中他の箇所に記載されているように、SM23は、(i)スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、(ii)スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、(iii)スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)、又は(iv)スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせであり得る。一実施形態では、SM23は、スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)である。別の実施形態では、SM23は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)である。
【０１２０】
パネル1のバイオマーカーが決定される場合、以下をを決定することが特に想定される：
・OSS2の量、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)の量及びPC4の量、
・OSS2の量、スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の量及びPC4の量、又は
・OSS2の量、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせた量、並びにPC4の量。
【０１２１】
例えば、パネル2又は4のバイオマーカーの量が決定される場合、SM23、OSS2及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。本明細書中他の箇所に記載されているように、SM23は、(i)スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、(ii)スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、(iii)スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)、又は(iv)スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせであり得る。特に、SM23は、スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)又はスフィンゴミエリン(d18:1/23:1)である。
【０１２２】
パネル2又は4のバイオマーカーが決定される場合、以下をを決定することが特に想定される：
・OSS2の量、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)の量及びコレステリルエステルC18:2の量、
・OSS2の量、スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の量及びコレステリルエステルC18:2の量、又は
・OSS2の量、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせた量、及びコレステリルエステルC18:2の量。
【０１２３】
例えば、パネル200のバイオマーカーの量が決定される場合、コレステリルエステルC18:2、SM23、OSS2及びPC4の量が決定される。本明細書中他の箇所に記載されているように、SM23は、(i)スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、(ii)スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、(iii)スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)、又は(iv)スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせであり得る。一実施形態では、SM23は、スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)である。別の実施形態では、SM23は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)である。
【０１２４】
パネル200のバイオマーカーが決定される場合、以下をを決定することが特に想定される：
・コレステリルエステルC18:2の量、OSS2の量、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)の量及びPC4の量、
・コレステリルエステルC18:2の量、OSS2の量、スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の量及びPC4の量、又は
・コレステリルエステルC18:2の量、OSS2の量、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせた量、並びにPC4の量。
【０１２５】
パネル1に加えて、パネル200は、コレステリルエステルC18:2をさらに含む。
【０１２６】
パネル2及び4に加えて、パネル200は、PC4をさらに含む。
【０１２７】
本明細書中他の箇所に記載されているように、上述のパネル(1〜206)のバイオマーカーの量に加えて、NT-proBNP又はBNPの量を決定することがさらに想定される。例えば、NT-proBNP又はBNPは、パネル1の少なくとも3つのバイオマーカーの量に加えて決定される。さらに、一実施形態では、交絡因子についての補正が実施されないことが想定される(例えば、パネル1について)。
【０１２８】
パネル1に関して、好ましい実施形態は、セクション「パネル1についての項目」(項目1〜43を参照)に与えられる。このセクションでは、例えば、診断される心不全の好ましいサブフォームが記載される。さらに、被験体は、さらに定義される(例えば、被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さないと)。本明細書中に与えられる定義は、好ましくは、このセクションに開示される項目に適用する。このセクションは、パネル1のバイオマーカーについての例示である。しかし、本発明の方法に関連して本明細書中に言及される少なくとも3つのバイオマーカーによって(例えば、パネル1〜206のいずれか1つのバイオマーカーによって)、このセクションにおけるパネル1のバイオマーカーを置き換えることが想定される。例えば、このセクション「パネル1についての項目」におけるパネル1のバイオマーカーの代わりに、パネル200のバイオマーカーの量が決定され得る。
【０１２９】
一実施形態では、パネル1、2又は200のバイオマーカー、特にパネル1のバイオマーカーは、NT-proBNPと組み合わせて使用される。好ましくは、決定は、HFrEFの診断のために、特に、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有するHFrEFの診断のために、実施される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する。好ましくは、被験体は無症候性であり、したがって、心不全の症状を示さない。したがって、無症候性心不全が診断される。
【０１３０】
心不全及び/又はそのサブフォームの診断のための少なくとも3つのバイオマーカーのさらなる好ましい組み合わせが以下に開示される。
【０１３１】
さらに、少なくとも3つのバイオマーカーは、好ましくは以下のとおりである。特に、ステップa.において以下の量を決定することが想定される：
i. SM18、SM21、SM23、SM24、SM28、SM3、SM5、SM2、SM9及びSM10からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン(SM)バイオマーカー、特に、SM18、SM21、SM23、SM24、SM28、SM3及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン(SM)バイオマーカー、
ii. OSS2、PPO1、SOP2、SSP2及びSPP1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特に、OSS2、PPO1、SOP2、及びSSP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. Cer(d16:1/24:0)、Cer(d18:1/24:1)、コレステリルエステルC18:2、PC4、PC8、Cer(d18:2/24:0)、Cer(d17:1/24:0)及びグルタミン酸1からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特に、Cer(d16:1/24:0)、Cer(d18:1/24:1)、コレステリルエステルC18:2、及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１３２】
したがって、i.の少なくとも1つのバイオマーカー、ii.の少なくとも1つのバイオマーカー、及びiii.の少なくとも1つのバイオマーカーが決定される。同じことが以下の組み合わせに当てはまる。
【０１３３】
上述の組み合わせ(すなわち、上述の少なくとも3つのバイオマーカーの決定)は、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全である。したがって、試験される被験体は、好ましくは心不全の症状を示さない。しかし、被験体が心不全の症状を示し得ることも想定される。
【０１３４】
好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM28、SM23、SM21、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及び/若しくはOSS2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4。
【０１３５】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全である。しかし、被験体が心不全の症状を示し得ることも想定される。
【０１３６】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM28、SM21、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM28、又はSM18、SM21、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM18、並びに
ii. SOP2、並びに
iii. PC4。
【０１３７】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全である。
【０１３８】
さらなる好ましい実施形態では、ここで、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM18、SM2、SM23、SM24、SM28、SM3、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、PPO1、SOP2、SSP2及びSPP1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. Cer(d16:1/24:0)、コレステリルエステルC18:2、PC4及びグルタミン酸1からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１３９】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全である。したがって、被験体は、好ましくは心不全の症状を示さない。
【０１４０】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23、SM2、及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4、特にコレステリルエステルC18:2。
【０１４１】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全である。したがって、被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。
【０１４２】
特に、少なくとも、SM23及び/又はSM2の、特にSM23の、SOP2の、及びPC4の量が決定される。上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全である。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。
【０１４３】
本発明の好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM10、SM18、SM21、SM23、SM24、SM28、SM3及びSM9からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、PPO1、SOP2、SSP2及びSPP1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. Cer(d16:1/24:0)、Cer(d18:1/24:1)、Cer(d17:1/24:0)、Cer(d18:2/24:0)、コレステリルエステルC18:2、PC4及びPC8からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１４４】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、症候性心不全である。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示す。
【０１４５】
さらなる好ましい実施形態では、以下が決定される：
i. SM18、SM3、SM24、及びSM23からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM18、
ii. SOP2及び/若しくはOSS2、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4、特にPC4。
【０１４６】
特に、少なくとも、SM18及び/若しくはSM24、SOP2、並びにPC4の量が決定される。
【０１４７】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、症候性心不全である。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示す。
【０１４８】
好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23、SM18、SM24、SM28、SM2及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23、SM18、SM24、及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2及び/又はSOP2、特にOSS2、
iii. コレステリルエステルC18:2及び/又はPC4。
【０１４９】
特に、少なくとも、SM23、OSS2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１５０】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の、特にHFrEFの診断のために使用される。好ましくは、被験体は、心不全の症状を示さない。また好ましくは、被験体は、心不全の症状を示す。
【０１５１】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23 SM18、SM2、SM24及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、及び
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０１５２】
特に、少なくとも、バイオマーカーSM23、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１５３】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の、特にHFrEFの診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全、特に無症候性HFrEFである。したがって、試験される被験体は、好ましくは、 心不全の症状を示さない。
【０１５４】
好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM18、SM23、SM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、又はSM28、SM23及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、及び
iii. コレステリルエステルC18:2及び/又はPC4。
【０１５５】
特に、少なくとも、SM18及び/若しくはSM28の、OSS2の、並びにコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１５６】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の、特にHFrEFの診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、症候性心不全、特に症候性HFrEFである。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示す。
【０１５７】
本発明の好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23、SM24、SM28、及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23、SM24、及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及び/若しくはOSS2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4。
【０１５８】
特に、少なくとも、SM23の、SOP2の、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１５９】
上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはDCMPの診断のために使用される。好ましくは、被験体は、心不全の症状を示さない。また好ましくは、被験体は心不全の症状を示す。
【０１６０】
本発明のさらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23、
ii. OSS2及び/若しくはSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０１６１】
特に、少なくとも、SM23、OSS2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１６２】
上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはDCMPの、特に無症候性HFrEF及び/又はDCMPの診断のために使用される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、HFの症状を示さない。
【０１６３】
本発明の好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM28及び/若しくはSM3、
ii. SOP2及び/若しくはOSS2、並びに
iii. PC4。
【０１６４】
特に、少なくとも、SM28、SOP2の、及びPC4の量が決定される。
【０１６５】
上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはDCMPの、特に症候性HFrEF及び/又はDCMPの診断のために使用される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、HFの症状を示す。
【０１６６】
別の好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23、SM24、SM28及びSM18からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23、SM24、及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０１６７】
特に、少なくとも、SM23、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１６８】
上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはICMPの診断のために使用される。1つの(好ましい)実施形態では、被験体は、心不全の症状を示さない。別の実施形態では、被験体は、心不全の症状を示す。
【０１６９】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、SM18、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはICMPの、特に症候性HFrEF及び/若しくはICMPの診断のために使用される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、HFの症状を示す。
【０１７０】
無症候性心不全の診断のために、少なくとも3つのバイオマーカーは、以下であることがさらに想定される：
i. SM23、SM2、及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2、PC4、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１７１】
したがって、被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。
【０１７２】
無症候性ICMPの診断のために、少なくとも3つのバイオマーカーは、SM24、SM5、SM23、SOP2及びPPO1からなる群から選択されるマーカーであることがさらに想定される。好ましくは、SM24、SM5及びSOP2の、又はSM23、SM5及びPPO1の量が決定される。
【０１７３】
一実施形態では、上記の少なくとも3つのバイオマーカーの、得られた組み合わせの量に加えて、NT-proBNP又はBNPの量が決定される。別の実施形態では、上記の(本明細書中他の箇所を参照)少なくとも3つのバイオマーカーの、得られた組み合わせの量に加えて、NT-proBNP又はBNPの量が決定されない。
【０１７４】
心不全及び/又はそのサブフォームの診断のための少なくとも3つのバイオマーカーのさらなる好ましい組み合わせ
好ましい実施形態では、少なくとも3つのバイオマーカーは以下である：
i. SM18、SM23、SM24、SM3、SM5、SM2、及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン(SM)バイオマーカー、並びに特に、SM18、SM23、SM24、SM3、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン(SM)バイオマーカー、
ii. OSS2、SOP2、SSP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特に、OSS2及びSOP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１７５】
したがって、i.の少なくとも1つのバイオマーカー、ii.の少なくとも1つのバイオマーカー、及びiii.の少なくとも1つのバイオマーカーが決定される。同じことは、以下の組み合わせに適用する。
【０１７６】
好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM18、SM23、SM24、SM3、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2及びSOP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１７７】
特に、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM18、SM3、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM18、並びに
ii. OSS2及びSOP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にPC4。
【０１７８】
上述の組み合わせ(すなわち、上述の少なくとも3つのバイオマーカーの決定)は、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全である。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。しかし、被験体が心不全の症状を示し得ることも想定される。
【０１７９】
好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM18、SM2、SM23、SM24、SM28、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、PPO1、SOP2、及びSSP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１８０】
より好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23、SM24、SM18、及びSM2からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2。
【０１８１】
さらにより好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23、SM18、及びSM2からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4、特にコレステリルエステルC18:2。
【０１８２】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全である。したがって、被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。
【０１８３】
好ましい実施形態では、以下が決定される：
i. SM18、SM23、SM24、SM28、及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2及びSOP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１８４】
好ましくは、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM18、
ii. SOP2、及び
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０１８５】
特に、少なくとも、SM18及び/若しくはSM24、特にSM18の、SOP2の、並びにPC4の量が決定される。
【０１８６】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、症候性心不全である。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示す。
【０１８７】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23、SM18、SM3、SM24、SM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23及びSM18からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、SOP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にOSS2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１８８】
特に、少なくとも、SM23、OSS2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１８９】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の、特にHFrEFの診断のために使用される。好ましくは、被験体は、心不全の症状を示さない。また好ましくは、被験体は、心不全の症状を示す。
【０１９０】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2。
【０１９１】
特に、少なくとも、SM23、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１９２】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の、特にHFrEFの診断のために使用される。一実施形態では、心不全は、無症候性心不全、特に無症候性HFrEFである。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示さない。
【０１９３】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM18、SM23、SM3、SM28及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM18、SM23及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１９４】
特に、少なくとも、SM18の、OSS2の、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１９５】
上述の組み合わせは、好ましくは、心不全の、特にHFrEFの診断のために使用される。一実施形態では、心不全は症候性心不全、特に症候性HFrEFである。したがって、試験される被験体は、好ましくは、心不全の症状を示す。
【０１９６】
さらに好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23、SM24、SM3及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０１９７】
特に、少なくとも、SM23の、SOP2の、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０１９８】
上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはDCMPの診断のために使用される。好ましくは、被験体は、心不全の症状を示さない。また好ましくは、被験体は、心不全の症状を示す。
【０１９９】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０２００】
特に、少なくとも、SM23、OSS2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０２０１】
上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはDCMPの、特に無症候性HFrEF及び/又はDCMPの診断のために使用される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、HFの症状を示さない。
【０２０２】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM3、SM24及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０２０３】
特に、少なくとも、SM3、OSS2の、及びPC4の量が決定される。
【０２０４】
上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはDCMPの、特に症候性HFrEF及び/又はDCMPの診断のために使用される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、HFの症状を示す。
【０２０５】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM18、SM23、及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM18及びSM23からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2。
【０２０６】
特に、少なくとも、SM18、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０２０７】
上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはICMPの診断のために使用される。好ましくは、被験体は、心不全の症状を示さない。また好ましくは、被験体は、心不全の症状を示す。
【０２０８】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、以下の量が決定される：
i. SM24及びSM23からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2。
【０２０９】
特に、少なくとも、SM24、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。
【０２１０】
上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはICMPの、特に無症候性HFrEF及び/又はICMPの診断のために使用される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、HFの症状を示さない。
【０２１１】
さらなる好ましい実施形態では、少なくとも、SM18、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される。上述の組み合わせは、好ましくは心不全の、より好ましくはHFrEFの、最も好ましくはICMPの、特に症候性HFrEF及び/又はICMPの診断のために使用される。したがって、試験される被験体は、好ましくは、HFの症状を示す。
【０２１２】
さらに、無症候性心不全の診断のために、以下の量を決定することが想定される：
i. SM23、SM24、SM18、及びSM2からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2、PC4、SM5及びSSP2からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2。
【０２１３】
さらに、無症候性心不全の診断のために、以下の量を決定することが想定される：
i. SM23、SM18、及びSM2からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2、並びに
iii. SM5、コレステリルエステルC18:2、PC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にSM5。
【０２１４】
さらに、無症候性HFrEFの診断のために、以下の量を決定することが想定される：
i. SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2。
【０２１５】
さらに、無症候性DCMPの診断のために、以下の量を決定することが想定される：
i. SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にOSS2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びSSP2、特にコレステリルエステルC18:2。
【０２１６】
さらに、無症候性ICMPの診断のために、以下の量を決定することが想定される：
i. SM24及びSM23からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM24、
ii. SOP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. SM5、コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2、特にSM5、又は特にPC4。
【０２１７】
一実施形態では、上で説明された少なくとも3つのバイオマーカーの得られた組合せの量に加えて、NT-proBNP又はBNPの量が決定される。別の実施形態では、上で説明された少なくとも3つのバイオマーカーの得られた組合せの量に加えて、NT-proBNP又はBNPの量は決定されない(本明細書の他所を参照)。
【０２１８】
好ましくは、本発明の方法は、システインの量の決定を含まない。特に、本方法は、システインの量の決定、及びシステインの量の参照との比較を含まないものとする。したがって、好ましくは、バイオマーカーはシステインでないことが想定される。
【０２１９】
また好ましくは、本発明の方法は、コレステリルエステルC18:1の量の決定、又はコレステリルエステルC18:1の量の参照との比較を含まない。特に、本方法は、コレステリルエステルC18:1の量の決定、及びコレステリルエステルC18:1の量の参照との比較を含まないものとする。したがって、好ましくは、バイオマーカーはコレステリルエステルC18:1でないことが想定される。
【０２２０】
また好ましくは、本発明の方法は、システイン及びコレステリルエステルC18:1の量の決定、又はシステイン及びコレステリルエステルC18:1の量の参照との比較を含まない。特に、本方法は、システイン及びコレステリルエステルC18:1の量の決定、並びにシステイン及びコレステリルエステルC18:1の量の参照との比較を含まないものとする。したがって、好ましくは、バイオマーカーはコレステリルエステルC18:1及びシステインでないことが想定される。
【０２２１】
また好ましくは、本発明の方法は、コレステリルエステルC15:0の量の決定、又はコレステリルエステルC15:0の量の参照との比較を含まない。特に、本方法は、コレステリルエステルC15:0の量の決定、及びコレステリルエステルC15:0の量の参照との比較を含まないものとする。したがって、好ましくは、バイオマーカーはコレステリルエステルC15:0でないことが想定される。
【０２２２】
また好ましくは、本発明の方法は、SM(d17:1, C23:0)の量の決定、又はSM(d17:1, C23:0)の量の参照との比較を含まない。特に、本方法は、SM(d17:1, C23:0)の量の決定、及びSM(d17:1, C23:0)の量の参照との比較を含まないものとする。したがって、好ましくは、バイオマーカーはSM(d17:1, C23:0)でないことが想定される。
【０２２３】
また好ましくは、本発明の方法は、ノルアドレナリンの量の決定、又はノルアドレナリンの量の参照との比較を含まない。特に、本方法は、ノルアドレナリンの量の決定、及びノルアドレナリンの量の参照との比較を含まないものとする。したがって、好ましくは、バイオマーカーはノルアドレナリンでないことが想定される。
【０２２４】
バイオマーカーがトリアシルグリセリドであるなら、このバイオマーカーの量の決定が、このマーカーの誘導体化を包含しないことが好ましくは想定される。したがって、このバイオマーカーの決定は、前記トリアシルグリセリドに由来する1つ以上の脂肪酸残基の決定に基づかないことが想定される。したがって、全体のトリアシルグリセリドの量が測定される。
【０２２５】
さらに、方法は、トリコサノン酸及び/若しくはスレオスフィンゴシンの決定、又はトリコサノン酸及び/若しくはスレオスフィンゴシンの量の参照との比較を含まないことが想定される。
【０２２６】
用語「被験体」は、本明細書で使用される場合、動物に、及び好ましくは、哺乳動物に関する。より好ましくは、被験体は霊長類であり、最も好ましくは、ヒトである。被験体は、雌性、又は特に雄性被験体であってもよい。試験される被験体は、好ましくは、心不全に罹患していることが疑われる。試験される被験体は、心筋梗塞の既往歴を有してもよく、及び/又はII型糖尿病に罹患していてもよい。あるいは、又は加えて、被験体は、虚血性心疾患、心原性脳塞栓症、高血圧性心疾患、リウマチ性心疾患(RHD)、大動脈瘤、心筋症、心房細動、先天性心疾患、心内膜炎、及び末梢動脈障害(PAD)のような別の心疾患、並びにアテローム性動脈硬化症に罹患していてもよい。さらに、被験体は、高血圧に罹患していてもよい。好ましくは、被験体は大人である。より好ましくは、被験体は、年齢が40歳より上であり、及び最も好ましくは、年齢が50歳より上である。さらに、被験体は、年齢が54歳より上であるが、年齢が61歳より下であることが想定される。
【０２２７】
より好ましくは、被験体は、心不全の症状を既に示していてもよい。最も好ましくは、被験体は、心不全の症状を示さない。被験体として、リスク群に属すもの、又は疾患スクリーニングプロジェクト若しくは測定において含まれる被験体も包含される。
【０２２８】
高齢、及び太り過ぎの被験体において、NT-proBNP及びBNPは、心不全の、より信頼性の低いマーカーである。しかしながら、本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカーの決定は、高齢、又は太り過ぎの被験体における診断精度を改善し得る。それ故、被験体は、高齢、又は太り過ぎであってもよい。
【０２２９】
一実施形態では、被験体は、年齢が54歳より上であり、特に年齢が60歳より上であるか、又は年齢が70歳より上でさえある。NT-proBNP又はBNP単独の決定と比較すると、本発明の方法に関連して本明細書において説明される少なくとも3つのバイオマーカーの量の追加決定は、より信頼できる診断を可能にする。特に、前記被験体における診断の特異度が増す。
【０２３０】
別の実施形態では、被験体は、26.8kg/m2より上の、特に28.0kg/m2より上の、又はさらに30.0kg/m2より上のボディマスインデックス(BMI)を有する。NT-proBNP又はBNP単独の決定と比較すると、少なくとも3つのバイオマーカーの量の追加決定は、より信頼できる診断を可能にする。特に、前記被験体における診断の感度が増す。
【０２３１】
心不全の症状を示す被験体は、特に、NYHAクラスII及び/又はIIIによる症状を示す。したがって、心不全の症状を示す被験体は、好ましくは、身体活動の若干若しくは著しい制限を有し、安静時には快適に感じるが、通常の又は通常より低い身体活動は、過度の息切れ、疲労、又は動悸を(この被験体において)もたらす。心不全の症状を示さない被験体は、好ましくは、身体活動の制限を有さず、通常の身体活動は、過度の息切れ、疲労、又は動悸を(この被験体において)もたらす。
【０２３２】
好ましい実施形態では、本発明は、初期の心不全の診断を想定する。したがって、用語「心不全」は、一実施形態では、「初期の心不全」を意味する。例えば、初期の心不全の存在、又は特に非存在を、診断することができる。
【０２３３】
初期の心不全は、一実施形態では、NYHAクラスIによる心不全であってもよい。別の実施形態では、初期の心不全は、NYHAクラスIIによる心不全であってもよい。したがって、NYHAクラスI又はNYHAクラスIIによる心不全は、本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカー(例えば、パネル1のバイオマーカー)を使用することにより、診断することができる。
【０２３４】
HFrEFに関して、初期の心不全は、左心室駆出率が、50％より低いが35％より大きいことをさらに意味し得る。したがって、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全は、本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカー(例えば、パネル1のバイオマーカー)を使用することにより、診断することができる。一実施形態では、被験体は、心不全の症状を好ましくは示さない。
【０２３５】
本発明の基礎となる研究の関連において、患者が、少なくとも1つの3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-CoA還元酵素(HMGCR)阻害剤で、及び/又は少なくとも1つの利尿薬で処置されるなら、予測確率は、有意には影響されないことが示された。したがって、本発明の方法に従い試験される被験体は、3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-CoA還元酵素(HMGCR)阻害剤で好ましくは処置される。また好ましくは、被験体は、利尿薬で処置される。さらに、被験体は、3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-CoA還元酵素(HMGCR)阻害剤、及び利尿薬で処置され得ることが想定される。
【０２３６】
好ましい3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-CoA還元酵素(HMGCR)阻害剤は、スタチンである。好ましくは、スタチンは、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、メバスタチン、ロスバスタチン、及びシンバスタチンからなる群から選択される。
【０２３７】
好ましくは、利尿薬は、フロセミド、ブメタニド、エタクリン酸、トラセミド、クロルタリドン、ヒドロクロロチアジド、及びメタゾロンからなる群から選択される。
【０２３８】
さらに、被験体は、スタチン、及び/又は利尿薬で処置されなくてもよい。
【０２３９】
本発明の方法の一実施形態では、被験体は、好ましくは、女性であり、年齢が54歳より上(特に60歳より上)であり、及び25.0kg/m2未満の、特に、24.0kg/m2未満のボディマスインデックス(BMI)を有する。これらの被験体について、少なくとも3つのバイオマーカーの、及びNT-proBNPの決定は、健康な被験体(すなわち、心不全に罹患していない被験体)を心不全に罹患していないとして、より確実に分類することを可能にすることが示された。対照的に、NT-proBNP単独の決定は、高い百分率の偽陽性結果をもたらし得る(実施例8、NT-proBNPと組み合わされたパネル1についての結果を参照)。年齢が54歳より上の女性であり、25.0kg/m2未満のボディマスインデックスを有する被験体について、心不全の診断の特異度は、(NT-proBNP又はBNP単独と比較して)増す。
【０２４０】
心不全を診断するため使用される少なくとも3つのバイオマーカーの好ましい組合せは、被験体が心不全の症状を示す場合、症候性心不全の診断に関連して記載される。心不全の症状を示す被験体において心不全を診断するための少なくとも3つのバイオマーカーのさらなる好ましい組合せは、症候性のサブグループについての表2におけるそれらのバイオマーカーパネルである(「サブグループ」の列を参照)。
【０２４１】
心不全を診断するため使用される少なくとも3つのバイオマーカーの好ましい組合せは、被験体が心不全の症状を示さない場合、無症候性心不全の診断に関連して記載される。心不全の症状を示さない被験体において心不全を診断するための少なくとも3つのバイオマーカーのさらなる好ましい組合せは、無症候性のサブグループについての表2におけるそれらのバイオマーカーパネルである(「サブグループ」の列を参照)。
【０２４２】
好ましくは、被験体はしかしながら、前述の疾患及び障害を除いて、表面上は健康である。また好ましくは、被験体は、サンプルが採取される前の最近の4カ月以内に卒中(脳卒中)、心筋梗塞に罹患しておらず、又は急性若しくは慢性炎症性疾患、及び悪性腫瘍に罹患していないものとする。さらに、被験体は、サンプルが採取される前の最近の4週間以内、好ましくは、安定な投薬下にある。
【０２４３】
好ましい実施形態では、試験される被験体は、腎機能障害に罹患していない。しかしながら、被験体は、腎機能障害に罹患していることも、予期される。腎機能は、例えば、糸球体濾過率(GFR)を決定することにより、評価することができる。好ましくは、GFRが、60mL/分/1.73m2未満、又は特に50mL/分/1.73m2未満であるなら、被験体は腎機能障害に罹患している。好ましくは、GFRが、60mL/分/1.73m2より上、又は特に70mL/分/1.73m2より上であるなら、被験体は腎機能障害に罹患していない。
【０２４４】
より好ましくは、障害された腎疾患に罹患していない被験体は、慢性腎疾患ステージ3〜5に罹患していない(分類について、例えば、全体として参照により本明細書に組み込まれる、National Kidney Foundation, 2002. K/DOQI clinical practice guidelines for chronic kidney disease: evaluation, classification, and stratification. Am. J. Kidney Dis. 39, S1-266を参照)。
【０２４５】
GFRは、血液及び尿における物質の比較測定により正確に計算されるか、又は単に血液試験結果を使用する式により推定されてもよい(eGFR)。通常、これらの推定は、診療において、特に信頼できる尿採取が困難である、高齢及び病気の患者において使用される。これらの検査は、腎臓の排出機能の評価において、例えば、慢性腎不全の段階分けにおいて重要である。
【０２４６】
eGFRは、大規模な臨床研究(National Kidney Foundation(2002年2月) "K/DOQI clinical practice guidelines for chronic kidney disease: evaluation, classification, and stratification". American Journal of Kidney Diseases 39 (2 Suppl 1): S1-266. doi:10.1016/S0272-6386(02)70081-4. PMID 11904577)を介してGFRと関連付けられる。臨床評価のため、eGFR及びGFRのスケールは、互換的に使用することができる。
【０２４７】
用語「サンプル」は、本明細書で使用される場合、体液、好ましくは、血液、血漿、血清、唾液若しくは尿からのサンプル、又は例えば、生検により、細胞、組織若しくは器官から、特に心臓から得たサンプルを指す。より好ましくは、サンプルは、血液、血漿、又は血清サンプルであり、最も好ましくは、血漿サンプルである。生物学的サンプルは、本明細書の他所で特定される被験体から得ることができる。前述の異なる種類の生物学的サンプルを得るための技術は、当該技術分野において周知である。例えば、血液サンプルは、血液採取により得てもよく、一方、組織又は器官サンプルは、例えば、生検により得ることができる。
【０２４８】
本発明の好ましい実施形態では、サンプルは、空腹時サンプル、特に空腹時血液、血清、又は血漿サンプルである。したがって、サンプルは、空腹時被験体から得られるべきである。空腹時被験体は、特に、試験されるサンプルを得る前に、水を除き、食物及び飲料を控えた被験体である。好ましくは、空腹時被験体は、試験されるサンプルを得る前に少なくとも8時間、水を除き、食物及び飲料を控えた。より好ましくは、サンプルは、一晩の絶食後、被験体から得られる。
【０２４９】
前述のサンプルは、本発明の方法のため使用される前に、好ましくは、前処理される。以下でより詳細に記載される通り、前記前処理は、化合物を放出するか、若しくは分離するため、又は過剰の材料若しくは老廃物を取り除くために必要な処置を含んでもよい。適切な技術は、化合物の遠心分離、抽出、分画、限外濾過、タンパク質沈殿、その後の、濾過、並びに精製及び/又は濃縮を含む。さらに、他の前処理は、化合物分析に適切な形態又は濃度での化合物を提供するために行われる。例えば、ガス-クロマトグラフィー結合質量分析が、本発明の方法で使用される場合、前記ガスクロマトグラフィーの前に、化合物を誘導体化することが必要である。適切かつ必須の前処理は、本発明の方法を行うために使用される手段に依存し、当業者に周知である。上記の前処理されたサンプルも、本発明に従い使用される用語「サンプル」に含まれる。
【０２５０】
本明細書において以下でより詳細に記載される通り、本明細書で言及されるバイオマーカーの量の決定は、好ましくは、分離ステップ、すなわち、サンプルに含まれる化合物が分離されるステップを含む。好ましくは、化合物の分離が、クロマトグラフィーにより、特に液体クロマトグラフィー(LC)、又は高速液体クロマトグラフィー(HPLC)により行われる。好ましくは、サンプルの前処理は、サンプルにより含まれる、化合物、特に上で言及された代謝産物バイオマーカーの後の分離を可能にすることができる。目的の分子、特に上で言及されたバイオマーカーは、サンプルの適切な抽出溶媒との混合を含む、抽出ステップにおいて抽出されてもよい。抽出溶媒は、サンプル中のタンパク質を沈殿させ、それにより、除去しないと、上で言及されたバイオマーカーの後の分析を妨害し得る汚染タンパク質の、好ましくは遠心分離ベースの除去を促進することができる。好ましくは、本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカー、特に上で言及された全ての脂質バイオマーカーは、抽出溶媒に溶解可能である。より好ましくは、抽出溶媒は、1つの相の溶媒である。なおより好ましくは、抽出溶媒は、ジクロロメタン(DCM)、クロロホルム、第3級ブチルメチルエーテル(tBME又はMTBE、2-メトキシ-2-メチルプロパンとしても公知)、エタン酸エチル、及びイソオクタンからなる群から選択される第1の溶媒、並びにメタノール、エタノール、イソプロパノール、及びジメチルスルホキシド(DMSO)からなる群から選択される第2の溶媒を含む混合物である。一実施形態では、抽出溶媒は、メタノール及びDCMを、特に約2:1〜約3:2の比、好ましくは約2:1又は約3:2の比(好ましくは、v/v)で含む。用語「約」は、本明細書で使用される場合、後で示される正確な値、又は前記正確な値から+/-20％、+/-10％、+/-5％、+/-2％、又は+/-1％異なる値のいずれかを指す。
【０２５１】
好ましくは、サンプルの前処理は、適切な抽出溶媒での抽出ステップを含む。この抽出ステップは加えて、サンプルにより含まれるタンパク質の沈殿をもたらす。続いて、サンプルにより含まれるタンパク質は、遠心分離により取り除かれる。
【０２５２】
本明細書において以下で記載される通り、本発明の方法は、心不全の診断において有用なタンパク質マーカー、好ましくは、タンパク質マーカーNT-proBNP又はBNPの量の決定をさらに含んでもよい。これらのマーカーは、BNP又はNT-proBNPに特異的に結合する抗体を使用することにより(又は当該技術分野において公知の他の方法により)、好ましくは決定される。上の2つの段落において記載された前処理は、したがって、タンパク質マーカー、特にBNP及びNT-proBNPの決定に適用しない。好ましくは、前処理は、代謝産物バイオマーカーのみの、すなわち、スフィンゴミエリン、トリアシルグリセリド、コレステリルエステル、ホスファチジルコリン、セラミド、及び/又はグルタミン酸の量の決定に適用する。
【０２５３】
本明細書で言及される特に代謝産物バイオマーカーに関する用語「量を決定すること」は、サンプル中の本発明の方法により決定されるバイオマーカーの少なくとも1つの特徴的な特性を決定することを指す。本発明に従った特徴的な特性は、バイオマーカーの生化学的特性を含む物理的及び/又は化学的特性を特徴付ける、特性である。そのような性質は、例えば、分子量、粘度、密度、電荷、スピン、光学活性、色、蛍光、化学発光、元素組成、化学構造、他の化合物と反応する能力、生物学的読出システムにおいて応答を引き出す(例えば、レポーター遺伝子の誘導)能力等を含む。前記性質の値は、特徴的な特性として働いてもよく、当該技術分野において周知の技術により決定することができる。さらに、特徴的な特性は、標準的操作、例えば、掛け算、割り算、又は対数微分積分のような数学的計算により、バイオマーカーの物理的及び/又は化学的性質の値からもたらされる、任意の特性であってもよい。最も好ましくは少なくとも1つの特徴的な特性は、前記少なくとも1つのバイオマーカー及びその量の決定、並びに/又は化学的同定を可能にする。したがって、特徴的な値はまた、特徴的な値が導き出される、バイオマーカーの存在量に関する情報も好ましくは含む。例えば、バイオマーカーの特徴的な値は、質量スペクトルにおけるピークであってもよい。そのようなピークは、バイオマーカーの特徴的な情報、すなわち、m/z情報、並びにサンプル中の前記バイオマーカーの存在量に関する強度値(すなわち、その量)を含有する。
【０２５４】
上で考察された通り、サンプルにより含まれるそれぞれのバイオマーカーは、本発明に従い、定量的に、又は半定量的に好ましくは決定され得る。定量的決定のため、バイオマーカーの絶対又は正確な量のいずれかが決定されるか、又はバイオマーカーの相対量が、本明細書において上で言及された特徴的な特性について決定された値に基づき、決定される。相対量は、バイオマーカーの正確な量を決定することができないか、又は決定されないとする場合、決定されてもよい。前記場合に、バイオマーカーが存在する量が、前記バイオマーカーを第2の量で含む第2のサンプルに関して、拡大又は減少されるかどうかを決定することができる。好ましい実施形態では、前記バイオマーカーを含む前記第2のサンプルは、本明細書の他所で特定される、計算された参照であるものとする。バイオマーカーを定量的に分析することはしたがって、また、バイオマーカーの半定量的分析として時に言及されるものも含む。
【０２５５】
したがって、本明細書で言及されるバイオマーカーの量の決定は、化合物分離ステップ、及びその後の質量分析ステップにより、好ましくは行われる。したがって、本発明の方法で使用される決定は、分析ステップの前に、化合物分離ステップを使用することを好ましくは含む。好ましくは、前記化合物分離ステップは、サンプルにより含まれる、代謝産物の、特に、少なくとも3つのバイオマーカーの時間分解分離をもたらす。本発明に従い好ましくは使用される分離の適切な技術は、それ故に、液体クロマトグラフィー(LC)、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、ガスクロマトグラフィー(GC)、薄層クロマトグラフィー、サイズ排除又はアフィニティークロマトグラフィーのような全てのクロマトグラフィーの分離技術を含む。これらの技術は、当該技術分野において周知であり、さらなる困難を伴わずに当業者が適用することができる。最も好ましくは、LC及び/又はHPLCは、本発明の方法により想定されるクロマトグラフィーの技術である。バイオマーカーのそのような決定の適切なデバイスは、当該技術分野において周知である。好ましくは、質量分析は、特に、ガスクロマトグラフィー質量分析(GC-MS)、液体クロマトグラフィー質量分析(LC-MS)、ダイレクトインフュージョン質量分析若しくはフーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴質量分析(FT-ICR-MS)、キャピラリー電気泳動質量分析(CE-MS)、高速液体クロマトグラフィー結合質量分析(HPLC-MS)、四重極質量分析、MS-MS若しくはMS-MS-MSのような、任意の順次結合質量分析、誘導結合プラズマ質量分析(ICP-MS)、熱分解質量分析(Py-MS)、イオン移動度質量分析、又は飛行時間型質量分析(TOF)が使用される。より好ましくは、LC-MS、特に、LC-MS/MS、最も好ましくは、HPLC-MS、特に、HPLC-MS/MSが、以下で詳細に記載される通り、使用される。したがって、少なくとも3つのバイオマーカーの量の決定は、HPLC-MS、特に、HPLC-MS/MS(高速液体クロマトグラフィータンデム質量分析)により、好ましくは行われる。上記の技術は、例えば、Nissen 1995, Journal of Chromatography A, 703: 37-57、米国特許第4,540,884号、又は米国特許第5,397,894号において開示され、その開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２５６】
代替の質量分析技術として、又は質量分析技術に加えて、以下の技術が、化合物決定のため使用されてもよい:核磁気共鳴(NMR)、核磁気共鳴画像法(MRI)、フーリエ変換赤外分析(FT-IR)、紫外(UV)分光法、屈折率(RI)、蛍光検出、放射化学的検出、電気化学的検出、光散乱(LS)、分散ラマン分光法、又はフレームイオン化検出(FID)。これらの技術は当業者に周知であり、さらなる困難を伴わずに適用することができる。
【０２５７】
本発明の方法は、自動化により、好ましくは補助される。例えば、サンプル処理、又は前処理は、ロボット工学により自動化することができる。データ処理、並びに比較は、適切なコンピュータープログラム及びデータベースにより好ましくは補助される。本明細書において上で記載された自動化は、本発明の方法をハイスループットアプローチで使用することを可能にする。
【０２５８】
上で記載される通り、少なくとも3つのバイオマーカーの前記決定は、好ましくは質量分析(MS)を含むことができる。したがって、質量分析ステップは、分離ステップ(例えば、LC又はHPLCによる)後に行われる。本明細書で使用される質量分析は、本発明に従い決定される化合物、すなわち、バイオマーカーに対応する分子量(すなわち、質量)、又は可変の質量の決定を可能にする、全ての技術を包含する。好ましくは、本明細書で使用される質量分析は、GC-MS、LC-MS、ダイレクトインフュージョン質量分析、FT-ICR-MS、CE-MS、HPLC-MS、四重極質量分析、MS-MS若しくはMS-MS-MSのような、任意の順次結合質量分析、ICP-MS、Py-MS、TOF、又は前述の技術を使用した任意の組合せたアプローチに関する。これらの技術を適用する方法は、当業者に周知である。さらに、適切なデバイスは市販されている。より好ましくは、本明細書で使用される質量分析は、LC-MS、及び/又はHPLC-MSに、すなわち、前の液体クロマトグラフィー分離ステップに作動可能に結合された質量分析に関する。好ましくは、質量分析は、タンデム質量分析(MS/MSとしても公知)である。MS/MSとしても公知の、タンデム質量分析は、2つ以上の質量分析ステップを、段階の間で生じる断片化と共に含む。タンデム質量分析において、一連の2つの質量分析計は、衝突セルにより接続している。質量分析計は、クロマトグラフィーのデバイスに結合される。クロマトグラフィーにより分離されたサンプルは、ソートされ、第1の質量分析計において質量が測定され、次に、衝突セルにおいて不活性ガスによって断片化され、小片又は複数の小片が第2の質量分析計においてソートされ、質量が測定される。断片は、ソートされ、第2の質量分析計において質量が測定される。MS/MSによる同定が、より正確である。
【０２５９】
一実施形態では、質量分析は、本明細書で使用される場合、四重極MSを包含する。最も好ましくは、前記四重極MSは、以下の通り行われる:(a)質量分析計の第1の分析四重極においてイオン化により作り出されたイオンの質量/電荷比(m/z)の選択、(b)衝突ガスで充填され、衝突室として機能する、追加の続く四重極において加速電圧を適用することによる、ステップ(a)において選択されたイオンの断片化、(c)追加のその後の四重極においてステップ(b)における断片化プロセスにより作り出されたイオンの質量/電荷比の選択、方法のステップ(a)〜(c)は、少なくとも1回行われる。
【０２６０】
より好ましくは、前記質量分析は、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)MS、特にHPLC-MS/MSのような液体クロマトグラフィー(LC)MSである。本明細書で使用される液体クロマトグラフィーは、液又は超臨界相における化合物(すなわち、代謝産物)の分離を可能にする、全ての技術を指す。液体クロマトグラフィーは、移動相中の化合物が、固定相を通過することを特徴とする。化合物が、固定相を異なる速度で通過するとき、それぞれの個々の化合物はその特定の保持時間(すなわち、化合物がシステムを通過するのに必要とする時間)を有するので、それらは、時間で分けられる。本明細書で使用される液体クロマトグラフィーはまた、HPLCも含む。液体クロマトグラフィーのためのデバイスは、例えば、Agilent Technologies，USAから市販されている。例えば、HPLCは、例えば、C8、C18、又はC30固定相を有する市販の逆相分離カラムで行うことができる。当業者は、HPLC、又は本明細書に記載される任意の他のクロマトグラフィー方法に適切な溶媒を選択する能力がある。クロマトグラフィーデバイスから現れる溶出液は、上で言及されたバイオマーカーを含むべきである。
【０２６１】
脂質クロマトグラフィーのための溶出に適切な溶媒を、当業者は決定することができる。一実施形態では、HPLC分離における勾配溶出のための溶媒は、極性溶媒、及び脂質溶媒からなる。好ましくは、極性溶媒は、水と、酸変性剤を含む水混和性溶媒の混合物である。水と完全に混和性である適切な有機溶媒の例は、C1-C3-アルカノール、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトンのようなC3-C4-ケトン、及びアセトニトリル、並びにその混合物を含み、メタノールが特に好ましい。加えて、脂質溶媒は、前述の溶媒の、ジクロロメタン(DCM)、クロロホルム、第3級ブチルメチルエーテル(tBME、又はMTBE)、エタン酸エチル、及びイソオクタンからなる群からの疎水性溶媒と一緒の混合物である。酸変性剤の例は、ギ酸、又は酸性酸である。勾配溶出のための好ましい溶媒は、実施例の章において開示される。
【０２６２】
本発明に従い適用されてもよいガス-クロマトグラフィーは、原則として、液体クロマトグラフィーと同等に作動する。しかしながら、固定相を通過する液体移動相中に化合物(すなわち、代謝産物)を有するのではなく、化合物は、気体体積中に存在する。化合物は、固体支持材料を固定相として含有し得る、又は固定相として機能し得るか、若しくは固定相でコーティングされた壁を含有し得るカラムを通過する。ここでもまた、それぞれの化合物は、カラムを通過するのに必要とする、特定の時間を有する。さらに、ガスクロマトグラフィーの場合、化合物は、好ましくはガスクロマトグラフィーの前に誘導体化されることが想定される。誘導体化の適切な技術は、当該技術分野において周知である。好ましくは、本発明に従った誘導体化は、好ましくは極性化合物の、メトキシメーション及びトリメチルシリル化、並びに好ましくは無極性(すなわち、親油性)化合物の、トランスメチレーション、メトキシメーション、及びトリメチルシリル化に関する。
【０２６３】
質量分析のため、サンプル中のアナライトは、荷電分子、又は分子断片を生じるようにイオン化される。その後、イオン化されたアナライトの、特にイオン化されたバイオマーカー、又はその断片の、電荷に対する質量が、測定される。
【０２６４】
したがって、質量分析ステップは、決定されるバイオマーカーがイオン化される、イオン化ステップを好ましくは含む。当然、サンプル/溶出液に存在する他の化合物が、同様にイオン化される。バイオマーカーのイオン化は、適切とみなされる任意の方法により、特に、電子衝撃イオン化、高速原子衝撃、エレクトロスプレーイオン化(ESI)、大気圧化学イオン化(APCI)、マトリックス支援レーザー脱離イオン化(MALDI)により行うことがきる。
【０２６５】
好ましくは、イオン化ステップは、大気圧化学イオン化(APCI)により行われる。より好ましくは、イオン化ステップ(質量分析のため)は、エレクトロスプレーイオン化(ESI)により行われる。したがって、質量分析は、好ましくは、ESI-MS(又は、タンデムMSが行われるなら、ESI-MS/MS)である。エレクトロスプレーは、いずれの化学結合を壊すことなく、イオンの形成をもたらす、ソフトイオン化方法である。
【０２６６】
エレクトロスプレーイオン化(ESI)は、高い電位をサンプルに適用して、エアロゾルを作り出す、エレクトロスプレーを用いてイオンを産生するために質量分析で使用される技術である。それは、イオン化の際、これらの分子のフラグメント化の傾向を克服するので、イオンを高分子から産生する際に特に有用である。
【０２６７】
好ましくは、エレクトロスプレーイオン化は、陽イオンモードエレクトロスプレーイオン化である。したがって、イオン化は、好ましくは、プロトン化(又はNH4+、Na+、又はK+、特にNH4+のような正に荷電したイオンとの付加物形成)である。したがって適切なカチオン、好ましくは、プロトン(H+)が、決定されるバイオマーカーに(及び当然、サンプル中、すなわち、クロマトグラフィーカラムからの溶出液中の任意の化合物に)加えられる。それ故、少なくとも3つのバイオマーカーの量の決定は、プロトン化されたバイオマーカーの量の決定であってもよい。
【０２６８】
当業者は、イオン化ステップが、質量分析ステップの始めに行われることを知っている。タンデムMSが行われるなら、イオン化、特にエレクトロスプレーイオン化は、第1の質量分析ステップにおいて行われる。
【０２６９】
バイオマーカーのイオン化は、クロマトグラフィーカラムから(特にLC又はHPLCカラムから)溶出する液体を、エレクトロスプレーに直接供給することにより、好ましくは行うことができる。あるいは、画分を集め、古典的なナノエレクトロスプレー-質量分析設定において後に分析することができる。
【０２７０】
上で説明された通り、質量分析ステップは、分離ステップ、特にクロマトグラフィーステップの後に行われる。一実施形態では、クロマトグラフィーカラム(例えば、LC又はHPLCカラム)から現れる溶出液は、それを質量分析ステップに供する前に、前処理されてもよい。好ましくは、アンモニウムバッファー(最も好ましくは、ギ酸アンモニウム、又は酢酸アンモニウム)が、セラミド及びTAGのようないくつかの脂質のためのエレクトロスプレープロセスにおいてイオン化効率を増強するために溶出液に加えられる。好ましくは、ギ酸アンモニウムバッファーは、勾配HPLC溶媒(最も好ましくは、メタノール)と混和性の溶媒において溶解される。
【０２７１】
本発明の好ましい実施形態では、少なくとも3つのバイオマーカーは、1回の測定で一緒に決定される。特に1回のLC-MS(又はLC-MS/MS)、HPLC-MS(HPLC-MS/MS)測定(すなわち、実行)において一緒に量を決定することが想定される。
【０２７２】
一実施形態では、少なくとも3つのバイオマーカーの量の決定は、実施例の章において記載されるステップを含む。例えば、少なくとも3つのバイオマーカーを、実施例5において、又は実施例11〜15において記載される通り、決定することができる。特にパネル1、2、又は200のバイオマーカーを、実施例の章(好ましくは、実施例11〜15)において記載される通り、決定することができる。
【０２７３】
例えば、血液、血清、又は血漿サンプル(特に血漿サンプル)を分析することができる。サンプルは、新鮮サンプル、又は凍結サンプルであってもよい。凍結されるなら、サンプルは、適切な温度において適切な時間解凍されてもよい。次に、サンプルのアリコート(例えば、前記サンプルのアリコートは、10μlの体積を有してもよい)が、微量遠心チューブに移され、適切な抽出溶媒(例えば、メタノール/ジクロロメタン(2:1v/v)中の約1:150v/v)と混合される。内部標準が加えられてもよい。例えば、パネル1の少なくとも3つのバイオマーカーの量が決定される場合、メタノール/ジクロロメタン(2:1v/v)に溶解されたホスファチジルコリン(C19:0 C19:0)が、内部標準として使用されてもよく、例えば、メタノール/ジクロロメタン(2:1v/v)中のそれぞれ0.05ミリモルの溶液10μl。その後、(例えば、ボルテクサーを用いて5分間)抽出が行われる。抽出後、サンプルは、(例えば、約20.000gにおいて)遠心分離されてもよい。上清のアリコート(例えば、200μl)は、マーカーの定量のため使用することができる。上清は、-20℃において、(好ましくは、最大3カ月)保存されてもよい。
【０２７４】
加えて、少なくとも1つの内部標準化合物を、サンプルに加えることができる。本明細書で使用される用語「内部標準化合物」は、サンプルに加えられ、決定される化合物を指す(すなわち、内部標準化合物の量が決定される)。少なくとも1つの内部標準化合物は、試験されるサンプルの抽出の前、間、又は後に加えることができる。一実施形態では、少なくとも1つの内部標準化合物が、サンプルのアリコートを抽出溶媒と混合した後、加えられる。好ましくは、内部標準化合物はしたがって、抽出溶媒に溶解される。一実施形態では、抽出溶媒は、本明細書の他所で記載される抽出溶媒(例えば、メタノール/ジクロロメタン(2:1v/v))である。好ましくは少なくとも1つの内部標準化合物は、脂質代謝産物バイオマーカーである。より好ましくは、内部標準化合物は、本質的に存在しないか、又は試験されるサンプルに存在しない、化合物、特に脂質である。したがって、化合物は、好ましくは、試験されるサンプルに天然に存在しない。好ましくは、内部標準は、本発明による、それぞれの脂質バイオマーカーと非常に類似する。一実施形態では、少なくとも1つの標準化合物は、リゾホスファチジルコリンC17:0、セラミドd18:1/17:0、ホスファチジルコリンC19:0 C19:0、コレステリルヘプタデカノエート(CE C17:0)、及びグリセリルトリヘプタデカノエート(MMM)からなる群から選択される。特に、内部標準化合物は、ホスファチジルコリンC19:0 C19:0である。
【０２７５】
内部標準化合物は、適切な溶媒に溶解することができる(内部標準化合物、及び適切な溶媒を含む溶液は、本明細書において、「内部標準溶液」としても言及される)。好ましくは、溶媒は、塩化メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタンの様な、無極性液体溶媒を含むか、又は塩化メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタンの様な、無極性液体溶媒である。好ましくは、本明細書の他所で記載される抽出溶媒が使用される。なおより好ましくは、溶媒は、ジクロロメタン(DCM)及びメタノールを含む混合物である。一実施形態では、抽出溶媒は、メタノール及びDCMを、特に約2:1の比(好ましくは、体積対体積)で含む。
【０２７６】
好ましくは、内部標準溶液は、サンプルを、本明細書の他所で記載される抽出溶媒で抽出し、タンパク質をサンプルから遠心分離により取り除いた後、試験されるサンプルに加えられる。これにより、内部標準溶液は、前処理されたサンプルに加えられる。
【０２７７】
ホスファチジルコリンC19:0 C19:0が内部標準化合物として使用されるなら、サンプル(前処理された)に加えられる内部標準溶液中の内部標準化合物の濃度は、好ましくは、1〜200μg/ml、より好ましくは、35〜50μg/ml、最も好ましくは、40〜45μg/mlの範囲内である。調製後の(すなわち、実際の測定のため使用される) サンプルに関して、内部標準化合物の濃度は、サンプル調製後、好ましくは、0.01〜1.3μg/ml、より好ましくは、0.23〜0.33μg/ml、最も好ましくは、0.26〜0.30μg/mlの範囲内である。
【０２７８】
一実施形態では、使用される内部標準溶液の体積は、前処理前のサンプルと同じ体積である。例えば、10μlの血漿及び内部標準溶液が使用される。
【０２７９】
内部標準の量の決定は、本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカーの量の標準化を好ましくは可能にするものとする。好ましくは少なくとも3つのバイオマーカーについて決定されたピーク面積を、少なくとも1つの内部標準化合物のピーク面積により除算する。
【０２８０】
特に、試験サンプル(試験される被験体由来のサンプルに加えてキャリブレーションサンプル)についての補正因子を計算することが可能である。この補正因子は、装置の変動、固有のシステムエラー等について、少なくとも3つのバイオマーカーのピーク面積を補正するために使用することができる。ピーク面積として決定されるそれぞれのバイオマーカーについて、バイオマーカーピーク面積の内部標準ピーク面積に対する面積比を決定することができる。
【０２８１】
好ましくは少なくとも1つの標準化合物の決定は、少なくとも3つのバイオマーカーの量の決定を妨害しない。
【０２８２】
用語「量」は、本明細書で使用される場合、本明細書で言及されるバイオマーカーの絶対量、前記バイオマーカーの相対量若しくは濃度、並びにそれと関連するか、若しくはそれからもたらされ得る任意の値又はパラメーターを好ましくは包含する。そのような値又はパラメーターは、前記バイオマーカーから得られた特異的な物理的若しくは化学的性質由来の強度シグナル値を含む。特に、包含されるのは、この記載の他所で特定される間接的測定により得られる、値又はパラメーターである。前述の量又はパラメーターに関連する値はまた、標準的な数学操作によっても得ることがきることは、理解されよう。
【０２８３】
一実施形態では、用語「量」は、絶対量を指す。絶対量の決定の方法は、例えば、実施例11〜15において、OSS2、SM23、CE C18:2、及びPC4について記載される。
【０２８４】
加えて、本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカーの量のみを決定することが予期され、すなわち、さらなるバイオマーカー(NT-proBNPのようなナトリウム利尿ペプチドを除く)は決定されない。例えば、パネル1のバイオマーカーが決定されるなら、量OSS2、PC4、及びSM23のみが、決定される(及び診断のため、場合によりナトリウム利尿ペプチドが考慮される)。したがって、決定される脂質バイオマーカーの群は、OSS2、PC4、及びSM23からなる。パネル2のバイオマーカーが決定されるなら、決定される脂質バイオマーカーの群は、OSS2、SM23、CE C18:2からなる。パネル200のバイオマーカーが決定されるなら、決定される脂質バイオマーカーの群は、OSS2、SM23、CE C18:2、PC4からなる。
【０２８５】
本発明の好ましい実施形態では、本発明による方法は、被験体由来のサンプル中のBNP(B型ナトリウム利尿ペプチドとしても公知の、脳性ナトリウム利尿ペプチド)、又は、特にNT-proBNP(プロホルモン脳性ナトリウム利尿ペプチドのN-末端)の量の決定をさらに含み、次に、BNP又はNT-proBNPのこれにより決定された量が、参照と比較される。好ましい実施形態では、本発明による方法は、特にステップ(a)において、被験体由来のサンプル中のBNP(脳性ナトリウム利尿ペプチド、B型ナトリウム利尿ペプチドとしても公知)、又は、特にNT-proBNP(プロホルモン脳性ナトリウム利尿ペプチドのN-末端)の量の決定をさらに含む。次に、BNP又はNT-proBNPのこれにより決定された量が、BNP又はNT-proBNPについての参照と(ステップbにおいて)比較される。したがって、少なくとも3つのバイオマーカー、及びBNP若しくはNTproBNPは、同時に(しかしながら、好ましくは異なるアッセイにより)決定されてもよい。本発明の別の好ましい実施形態では、NT-proBNP又はBNPの量は、さらなるステップ(c)においてサンプルにおいて決定され、さらなるステップ(d)においてNT-proBNP又はBNPについての参照と比較される。ステップ(b)及び(d)に基づき、心不全が診断される。したがって、少なくとも3つのバイオマーカーの量の決定と、BNP又はNT-proBNPの量の決定の間の時間ギャップ(例えば、1日、又は1週)があってもよい。
【０２８６】
あるいは、NT-proBNP又はBNPの量を、試験される被験体の医療記録から得ることができる。したがって、本発明の方法は、NT-proBNP又はBNPの量(すなわち、このマーカーの値)についての情報をもたたらす、及び/又は回収するステップを含んでもよい。
【０２８７】
NT-proBNP及びBNPは、タンパク質マーカーである。マーカーNT-proBNP及びBNPは、当該技術分野において周知である。BNPは、心臓の筋肉細胞(心筋細胞)の過剰の伸展に応答して心臓の心室により分泌される32個のアミノ酸のポリペプチドである。NT-proBNPは、脳性ナトリウム利尿ペプチドを放出するようproBNPから切断される、76個のアミノ酸のN末端の不活性なタンパク質である。BNPは、活性ホルモンであり、それぞれの不活性な相対物NT-proBNPより短い半減期を有する。ヒトBNP及びNT-proBNPの構造は、既に詳細に記載されており、例えば、国際公開第02/089657号、国際公開第02/083913号を参照のこと。
【０２８８】
タンパク質マーカーBNP又はNTproBNPが決定されるなら、タンパク質マーカーが、本明細書で言及される少なくとも3つの(代謝産物)バイオマーカーに加えて、本発明の方法に従い決定されることが理解される。
【０２８９】
BNP/NT-proBNPの量の決定は、本発明の方法との関連で言及される少なくとも3つのバイオマーカーの量の決定と異なってもよい(少なくとも3つのバイオマーカーの量は、クロマトグラフィー及び質量分析を含む方法により、好ましくは決定されるため、本明細書の他所を参照のこと)。好ましくは、NT-proBNP又はBNPの量は、血液、血清、又は血漿サンプルにおいて決定される。好ましくは、量は、NT-proBNP又はBNPに特異的に結合する、少なくとも1つの抗体を使用することにより、決定される。少なくとも1つの抗体は、決定されるマーカー(NT-proBNP、又はBNP)と複合体を形成する。その後、形成された複合体の量が測定される。複合体は、マーカー及び抗体(複合体の検出を可能にするために標識されていてもよい)を含む。
【０２９０】
NT-proBNP又はBNPが決定されるサンプルは、本明細書で言及される他のバイオマーカーが決定されるサンプルの前処理と異なる前処理を必要とするか、又は必要とし得ることが理解されるものとする。例えば、このマーカーが決定されるサンプルにより含まれるタンパク質は、沈殿されない。これは、当業者により考慮される。しかしながら、好ましくは少なくとも3つのバイオマーカーの、及びBNP若しくはNT-proBNPの量は、同じサンプルから得たアリコートにおいて測定される。あるいは、少なくとも3つのバイオマーカーの、及びBNP若しくはNT-proBNPの量は、被験体由来の別々のサンプルから得たアリコートにおいて測定されてもよい。
【０２９１】
タンパク質マーカーNT-proBNP又はBNPのさらなる決定は、より信頼できる診断を可能にする。特に本発明の研究において、制限された数の代謝産物の、すなわち、上で言及された少なくとも3つのバイオマーカーの、NT-proBNPとの組合せが、心不全のような複合病における単一の特性マーカーの制限を克服することを可能にすることが示された。
【０２９２】
本発明の一実施形態では、タンパク質マーカーNT-proBNP又はBNPの量は、NT-proBNPが本発明の基礎となる研究において決定されている(「NT-proBNP有り」の列において「はい」で示される)、表2におけるマーカーパネルについて決定される。
【０２９３】
加えて、本発明の基礎となる研究において試験された、いくつかのマーカーの組合せは、NT-proBNPの決定の非存在下においてでさえ非常に正確な結果をもたらした(実施例の章、例えば、表2における結果を参照)。例えば、実施例の章における表2の飽和パネルのバイオマーカー(「飽和パネル」の列において「はい」と示される)の決定は、たとえ、ゴールドスタンダードのNT-proBNPが考慮されないとしても、比較的高いAUC値をもたらした(例えば、表6、並びに/又は表4A、4B、4C、及び4Dを参照のこと)。故に、本発明の別の実施形態では、本発明による方法は、BNP又はNT-proBNPの量のさらなる決定を含まない。特に本方法は、BNP若しくはNT-proBNPの量のさらなる決定、並びにBNP若しくはNT-proBNPの量の参照との比較を含まなくてもよい。したがって、心不全の診断は、BNP及び/又はNT-proBNPの決定に基づかない。したがって、本方法は、非BNP及び/又は非NT-proBNPベースの方法である。
【０２９４】
NT-proBNP若しくはBNPの代わりに、又はNT-proBNP若しくはBNPに加えて、本発明は、ANP(心房性ナトリウム利尿ペプチド)、あるいはNT-proANP(プロホルモン脳性ナトリウム利尿ペプチドのN-末端)の量の決定をさらに想定する。あるいは、C型ナトリウム利尿ペプチド、又はナトリウム利尿ペプチド前駆体Cの量を決定することができる。
【０２９５】
一実施形態では、本発明の方法は、交絡因子についての補正を行うことをさらに含んでもよい。好ましくは、本発明により被験体のサンプルにおいて決定された値あるいは比は、参照と比較する前に、年齢、BMI、性別、又は他の存在する疾患、例えば、糖尿病の存在又は非存在について調整される。あるいは、参照は、年齢、BMI、性別について同様に調整された、値又は比から得ることができる(実施例を参照)。そのような調整は、個々の被験体が調査対象の被験体とこれらのパラメーターに関して本質的に同一である、被験体の群由来の参照並びに基礎となる値若しくは比を導出することにより、成すことができる。あるいは、調整は、統計的計算により成されてもよい。したがって、交絡因子についての補正が行われてもよい。一実施形態では、交絡因子についての補正は、ANOVA補正が本発明の基礎となる研究において行われた(「ANOVA有り」の列において「はい」で示される)、表2(及び表2a)においてそれらのマーカーパネルについて行われる。好ましい交絡因子は、年齢、BMI(ボディマスインデックス)、及び性別である。
【０２９６】
別の実施形態では、交絡因子についての補正は、行われない。一実施形態では、本発明の基礎となる研究においてANOVA補正が行われなかった(「ANOVA有り」の列において「いいえ」で示される)、表2(及び表2a)においてそれらのマーカーパネルについて、交絡因子についての補正は、行われない。好ましい実施形態では、交絡因子である年齢、BMI、及び性別についての補正は行われない。実施例の章から得ることができるように、信頼できる診断が、交絡因子についての補正なしでさえ可能である(実施例の章におけるそれぞれの表も参照)。
【０２９７】
少なくとも3つのバイオマーカーの量の決定は、特により若い年齢(例えば、<61歳)の、増大したボディマスインデックス(BMI>26.8kg/m2)を有する患者においてでさえ、特にHFrEF(又はそのサブフォーム)の信頼性の高い包含判定(rule-in)(心不全の存在の診断である)を可能にする。これは、交絡因子(特に年齢、ボディマスインデックス、及び性別)についての補正の非存在下で特に当てはまる。これは、初期の心不全の診断のため、特に当てはまる。
【０２９８】
心不全に罹患していない被験体を、特に低減したボディマスインデックス(BMI<25.0kg/m2)を有する、上昇した年齢(例えば、>54歳)の患者においてでさえ、より正確に同定することができる。これらの被験体において、より信頼性の高い除外判定(rule-out)(心不全の非存在の診断である)が可能である。これは、交絡因子(特に年齢、ボディマスインデックス、及び性別)についての補正の非存在下で特に当てはまる。
【０２９９】
上で説明された通り、交絡因子についての補正は、行われなくてもよく、すなわち、信頼性の高い診断のため必要とされなくてもよい。診断を、年齢、ボディマスインデックス、及び性別のようなある種の患者の特徴の知識がなくてさえも行うことができるので、これは有利である。したがって、一実施形態では、年齢、ボディマスインデックス、及び/又は性別、特に年齢、及び/又はボディマスインデックスは知られていない(したがって、診断に考慮されない)。
【０３００】
診断方法に関連して用語「参照」は、当該技術分野において周知である。本発明に従った参照は、心不全の診断を可能にする。適切な参照は、さらなる困難を伴わずに当業者により確立され得る。適用される参照は、本発明の方法において決定される少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての(及び決定されるなら、BNP又はNT-proBNPについての)個々の参照であってもよい。したがって、本発明の方法のステップ(a)において言及される少なくとも3つのバイオマーカー(及び決定されるなら、BNP又はNT-proBNP)のそれぞれの量が、少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての(及び決定されるなら、BNP又はNT-proBNPについての)参照と比較される。例えば、3つのバイオマーカーが、ステップ(a)において決定されるなら、3つの参照(第1のマーカーについての参照、第2のマーカーについての参照、及び第3のマーカーについての参照)が、ステップ(b)において適用される。BNP又はNT-proBNPの量が、ステップ(a)において決定されるなら、BNP又はNT-proBNPについてのさらなる参照が使用されてもよい。少なくとも3つのバイオマーカーの量(及びBNP又はNT-proBNPが決定されるなら、BNP又はNT-proBNPの量)の、参照との比較に基づき、心不全の診断、すなわち、本明細書で言及される被験体が、心不全に罹患しているか否かを確立することができる。
【０３０１】
用語「参照」は、医学的状態、すなわち本明細書で言及される疾患の存在若しくは非存在、疾患状態、又は効果と相関する可能性がある特徴的な特性の値を指す。好ましくは、参照は、本発明に関連して言及される少なくとも3つのバイオマーカーのバイオマーカーについての閾値であり、それにより、閾値より高い(又は閾値より低いマーカーに依存している)調査対象サンプルにおいて見出された値が、心不全の存在を示し、一方、より低いもの(より高いマーカーに依存している)が、心不全の非存在を示す。
【０３０２】
診断用アルゴリズムは、参照に依存してもよい。参照量が、例えば、心不全に罹患していることが知られている被験体、又は被験体の群に由来する場合、心不全の存在は、参照と本質的に同一である、試験サンプル中の量により好ましくは示される。参照量が、例えば、表面上健康な被験体、又はその群に由来する場合、心不全の存在は、参照と異なる(例えば、参照と比較して、増大される(「上昇」)か、又は低減される(「下降」)、試験サンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーの量により好ましくは示される。
【０３０３】
前述の本発明の方法に従い、参照(又は複数の参照)は、好ましくは、心不全に罹患していることが知られている被験体又は被験体の群由来のサンプルから得られた参照(又は複数の参照)である。そのような場合、本質的に同一である試験サンプルにおいて見られる少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値は、疾患の、すなわち、心不全(特にHFrEF、DCMP、ICMP、及び/又はHFpEFのようなそのサブフォーム)の存在を示す。さらに、参照はまた、好ましくは、心不全に罹患していないことが知られている被験体又は被験体の群、好ましくは、表面上健康な被験体又は被験体の群に由来し得る。そのような場合、参照に関して変化した、試験サンプルにおいて見られる少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれの値は、疾患の存在を示す。あるいは、参照に関して本質的に同一である、試験サンプルにおいて見られる少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値は、疾患の非存在を示す。同じことは、計算された参照について、最も好ましくは、調査被験体を含む個体の集団のバイオマーカーの相対又は絶対値についての平均値又は中央値に準用する。集団の前記個体のバイオマーカーの絶対又は相対値は、本明細書の他所で特定される通り、決定することができる。適切な参照値、好ましくは、平均値又は中央値の計算の方法は、当該技術分野において周知である。前に言及された被験体集団は、多数の被験体、好ましくは少なくとも5、10、50、100、1,000、又は10,000個の被験体を含むべきである。本発明の方法により診断される被験体、及び前記多数の被験体の被験体は、同じ種のものであることが理解される。
【０３０４】
特徴的な特性についての値、及び定量的決定の場合、強度値が本質的に同一であるなら、試験サンプルのバイオマーカーに関する値、及び参照値は、本質的に同一である。本質的に同一は、2つの値の間の差が、好ましくは、有意でなく、強度についての値が、少なくとも、参照値の1〜99パーセンタイル、5〜95パーセンタイル、10〜90パーセンタイル、20〜80パーセンタイル、30〜70パーセンタイル、40〜60パーセンタイル、好ましくは、参照値の50、60、70、80、90、又は95パーセンタイルの間隔内であることを特徴とすることを意味する。2つの量又は値が、本質的に同一であるかどうかを決定するための統計的試験は、当該技術分野において周知であり、本明細書の他所でまた記載される。
【０３０５】
2つの値について観察される差は、他方で、統計的に有意であろう。相対又は絶対値における差は、好ましくは、参照値の45〜55パーセンタイル、40〜60パーセンタイル、30〜70パーセンタイル、20〜80パーセンタイル、10〜90パーセンタイル、5〜95パーセンタイル、1〜99パーセンタイルの外側で有意である。中央値の好ましい変化及び比が、実施例において記載される(特に表1A及び1Bを参照)。
【０３０６】
好ましい実施形態では、特徴的な特性についての値はまた、本明細書の他所で説明される「エラスティックネット」の様な分類アルゴリズムのスコアのような計算されたアウトプットでもあり得る。
【０３０７】
好ましくは、参照、すなわち、バイオマーカーの少なくとも1つの特徴的な特性についての値若しくは複数の値(例えば、量)、又はその比は、データベースのような適切なデータ記憶媒体において保存され、したがって、さらなる評価のため入手可能である。
【０３０８】
用語「比較すること」は、バイオマーカーの決定された値、又はスコア(以下を参照)が、参照と本質的に同一であるか、又はそれと異なるかどうかを決定することを好ましくは指す。好ましくは、この記載の他所で言及される統計的技術により決定することができる観察された差が、統計的に有意であるなら、バイオマーカーに関する値(又はスコア)は、参照と異なるとみなされる。差が統計的に有意でないなら、バイオマーカー値及び参照は、本質的に同一である。上で言及された比較に基づき、被験体を、心不全に(特にそのサブフォームに)罹患しているか、又はしていないか、評価することができる。
【０３０９】
本明細書で言及される特定のバイオマーカーについて、相対量あるいは比における変化(すなわち、平均の比として表される変化)についての好ましい値、あるいは変化の方向の種類(すなわち、より大きな若しくはより小さな相対及び/又は絶対量、あるいは比をもたらす、「上昇」又は「下降」、あるいは増大又は低減)が、実施例の章における表1A及び1Bにおいて示される。平均値の比は、増大又は低減の程度を示し、例えば、2の値は、量が、参照と比較して、バイオマーカーの量が2倍であることを意味する。さらに、「上方制御」、又は「下方制御」が存在するかどうかは、明白である。「上方制御」の場合、平均値の比は1.0を超えるが、一方、「下方」制御の場合、それは1.0未満である。したがって、調節の方向は、同様に表から得ることができる。平均値の代わりに、中央値を同様に使用することができることは理解される。
【０３１０】
例えば、パネル1のバイオマーカーに関して、心不全の存在は、サンプル中のOSS2の量が参照より多く、サンプル中のSM23の量が参照より少なく、サンプル中のPC4の量が参照より少ないとき、被験体において好ましくは診断される。心不全の非存在は、サンプル中のOSS2の量が参照より少なく、サンプル中のSM23のそれらの量が参照より多く、サンプル中のPC4の量が参照より少ないとき、被験体において好ましくは診断される。参照がそれぞれのバイオマーカーについて使用されるなら、これが、例えば、当てはまる。参照スコアについて、本明細書の他所を参照のこと。
【０３１１】
実施例の章において、参照は、健康な対照被験体、すなわち、心不全に罹患していないことが知られている被験体から得た。しかしながら、原則として、他の参照を同様に確立することができる。
【０３１２】
表1A及び1Bから得ることができる通り、参照と比較して、トリアシルグリセリドバイオマーカーの量の増大は、心不全の存在を(及びこれにより、心不全の診断を)を示し、一方、参照と比較して、低減した又は本質的に同一の量は、心不全の非存在を示す。好ましくは、前記参照は、複数の健康な対照被験体(すなわち、心不全に罹患していないことが知られている被験体)、又は健康な対照被験体に由来する参照である。
【０３１３】
本明細書において開示される他のさらなるバイオマーカー(すなわち、スフィンゴミエリンバイオマーカー、コレステリルエステルバイオマーカー、ホスファチジルコリンバイオマーカー、セラミドバイオマーカー、及びグルタミン酸の)関して、参照と比較して、バイオマーカーの低減した量は、心不全の存在を(及びこれにより、患者が心不全に罹患していないという診断を)を示し、一方、参照と比較して、増大した又は本質的に同一の量は、心不全の非存在を示す。好ましくは、前記参照は、複数の健康な対照被験体(すなわち、心不全に罹患していないことが知られている被験体)、又は健康な対照被験体に由来する参照である。
【０３１４】
NT-proBNP又はBNPの量が決定されるなら、このマーカーの増大した量は、心不全の存在を(及びこれにより、心不全の診断を)を示し、一方、低減した又は本質的に同一の量は、心不全の非存在を示す。一実施形態では、NT-proBNPについての参照量は、好ましくは、血清又は血漿サンプル中で、特にヒト被験体について、約125pg/mLである。しかしながら、(例えば、レベルは年齢に依存し得るので)さらなる参照が使用されてもよい。
【０３１５】
診断用アルゴリズムは、適用される参照又は複数の参照に依存してもよいことが理解される。しかしながら、これは、本明細書において提供される診断に基づき、適切な参照値及び/又は診断用アルゴリズムを確立することができる当業者により考慮される。例えば、参照は、心不全に罹患していることが知られている被験体又は被験体の群に由来し得る。この場合、以下が当てはまる:トリアシルグリセリドバイオマーカーに関して、参照と比較して、本質的に同一であるか、又は増大した、被験体由来のサンプル中のトリアシルグリセリド(複数可)の量は、心不全の存在を示す。決定することができる、残りのバイオマーカーに関して、参照と比較して、減少したか、又は本質的に同一である、被験体由来のサンプル中の残りのバイオマーカー(複数可)の量は、心不全の存在を示す。
【０３１６】
比較は、自動化により好ましくは補助される。例えば、2つの異なるデータセット(例えば、特徴的な特性の値を含むデータセット)の比較のためのアルゴリズムを含む適切なコンピュータープログラムが、使用されてもよい。そのようなコンピュータープログラム、及びアルゴリズムは、当該技術分野において周知である。上記に関わらず、比較をまた、手動で行うこともできる。
【０３１７】
本発明のステップ(b)との関連における、本発明の方法のステップ(a)において言及されるバイオマーカーの群の量は、参照又は複数の参照と比較される。それにより、本明細書で言及される疾患の存在又は非存在が、診断される。一実施形態では、個々の決定されたバイオマーカーに関する参照、すなわち、ステップ(a)において言及されるバイオマーカーのそれぞれについての参照が、適用される。しかしながら、本発明の方法のステップ(a)において言及される少なくとも3つのバイオマーカーの量に基づき、スコア(特に単一のスコア)、すなわち、単一のスコアを計算すること、及びこのスコアを参照スコアと比較することも想定される。好ましくは、スコアは、試験被験体由来のサンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーの量に基づき、NT-proBNP又はBNPが決定されるなら、試験被験体由来のサンプル中の少なくとも3つのバイオマーカー量、及びNT-proBNP若しくはBNPの量に基づく。例えば、パネル1のバイオマーカーの量が決定されるなら、計算されたスコアは、試験被験体由来のサンプル中のSM23、OSS2、及びPC4の量に基づく。加えて、NT-proBNPが決定されるなら、スコアは、試験被験体のSM23、OSS2、PC4、及びNT-proBNPの量に基づく。
【０３１８】
計算されたスコアは、少なくとも3つのバイオマーカーの量についての情報を組合せる。さらに、スコアにおいて、バイオマーカーは、診断の確立へのそれらの関与に従い、好ましくは、重み付けされる。本発明の方法において適用されるバイオマーカーの組合せに基づき、個々のバイオマーカーの重みは異なってよい。
【０３１９】
スコアは、心不全を診断するための分類子パラメーターと考えることができる。特にそれは、人が、参照スコアとの比較に基づき、単一のスコアに基づく診断を提供することを可能にする。参照スコアは、試験される被験体において、心不全の存在と心不全の非存在を区別することを可能にする、好ましくは値、特にカットオフ値である。好ましくは、参照は単一の値である。したがって、人は、個々のバイオマーカーの量についての全体の情報を解釈する必要はない。
【０３２０】
値は数学的にスコアに変換されるので、本明細書に記載されるスコアリングシステムを使用して、有利には、異なる次元の値、又はバイオマーカーに関する単位が使用されてもよい。したがって、実施例5において後述される通り、例えば、絶対濃度についての値が、ピーク面積比を有するスコアにおいて組み合わされてもよい。
【０３２１】
したがって、本発明の好ましい実施形態では、本発明の方法のステップ(b)において説明されるバイオマーカーの量の参照との比較は、ステップ(a)において言及されるバイオマーカーの決定された量に基づき、スコアを計算するステップ(b1)、及びこれにより、計算されたスコアを参照スコアと比較するステップ(b2)を包含する。より好ましくは、ロジスティック回帰法が、スコアを計算するため使用され、最も好ましくは、前記ロジスティック回帰法は、エラスティックネット正則化を含む。
【０３２２】
あるいは、少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれの量が、参照と比較され、この比較の結果が、スコア(特に単一のスコア)の計算のため使用され、前記スコアが、参照スコアと比較される。
【０３２３】
したがって、本発明、特に被験体において心不全を診断する方法は、
(a)本明細書で言及される被験体のサンプルにおいて、上で言及された少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するステップ、及び
(b1)ステップ(a)において言及された少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量に基づき、スコアを計算するステップ、及び
(b2)こうして計算されたスコアを参照スコアと比較するステップであって、それにより、心不全が診断される、ステップ、
を含む。
【０３２４】
本明細書の他所で説明される通り、前述の方法は、ステップ(a)において、BNP又はNT-proBNPの量の決定をさらに含んでもよい。BNP又はNT-proBNPの量は、ステップ(b)において計算されるスコアに寄与してもよい。したがって、本方法は、以下のステップ:
(a)本明細書で言及される被験体のサンプルにおいて、上で言及された少なくとも3つのバイオマーカーの量、及びBNP若しくはNT-proBNPの量を決定するステップ、並びに
(b1)ステップ(a)において言及された少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量に、及びBNP若しくはNT-proBNPの量に基づき、スコアを計算するステップ、並びに
(b2)こうして計算されたスコアを参照スコアと比較するステップであって、それにより、心不全が診断される、ステップ
を含む。
【０３２５】
本明細書の他所で説明される通り、NT-proBNP又はBNPの量をまた、試験される被験体の医療記録から得ることもできる。この場合、ステップ(a)において、このマーカーの量を決定することは必要とされない。
【０３２６】
あるいは、BNP又はNT-proBNPの量は、ステップ(b1)において計算されるスコアに寄与しなくてもよい。したがって、本方法は、以下のステップ:
(a)本明細書で言及される被験体のサンプルにおいて、上で言及された少なくとも3つのバイオマーカーの量、及びBNP若しくはNT-proBNPの量を決定するステップ、並びに
(b1)少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量に基づき、スコアを計算するステップ、並びに
(b2)こうして計算されたスコアを参照スコアと比較し、BNP若しくはNT-proBNPの量を参照と比較するステップであって、それにより、心不全が診断される、ステップ
を含む。
【０３２７】
本明細書の他所で説明される通り、NT-proBNP又はBNPの量はまた、試験される被験体の医療記録から得ることもできる。この場合、ステップ(a)において、このマーカーの量を決定することは必要とされない。
【０３２８】
好ましくは、参照スコアは、被験体が、本明細書で言及される心不全に罹患しているか否かを識別することを可能とする。好ましくは、診断は、試験被験体のスコアが、参照スコアより上であるか、又は下であるかを評価することにより、成される。したがって、一実施形態では、正確な参照スコアをもたらすことは必須ではない。関連する参照スコアは、好ましくは、ROC曲線分析を使用して、感度及び特異度、並びに任意のスコアについての感度/特異度を関連付けることにより得ることができる。高い感度をもたらす参照スコアは、より低い特異度をもたらし、逆も真なりである。したがって、参照スコアは、所望の感度、及び/又は特異度に依存してもよい。好ましくは、参照スコアは、スコアと同じマーカー(例えば、少なくとも3つのバイオマーカー、及びNT-proBNP)に基づく。
【０３２９】
参照スコアは、被験体において心不全の存在と非存在とを識別することを可能にする、「カットオフ」値であってもよい。
【０３３０】
本発明に従い、参照スコアは、好ましくは、心不全に罹患していることが知られている被験体、又は被験体の群由来のサンプルから得られた参照スコアである。そのような場合、本質的に同一である試験サンプルにおけるスコアは、疾患の、すなわち、心不全の存在を(特にHFrEF、DCMP、ICMP、及び/又はHFpEFのようなそのサブフォームを)示す。さらに、参照スコアはまた、好ましくは、心不全に罹患していないことが知られている被験体又は被験体の群、好ましくは、表面上健康な被験体又は表面上健康な被験体の群由来であり得る。そのような場合、参照スコアに関して、変化している、特に増大している試験サンプルにおけるスコアは、疾患の存在を示す。あるいは、前記参照スコアと本質的に同一である試験サンプルにおけるスコアは、疾患の非存在を示す。
【０３３１】
好ましくは、スコアは、適切なスコアリングアルゴリズムに基づき計算される。前記スコアリングアルゴリズムは、決定されるバイオマーカーの量に基づき、被験体が、本明細書で言及される疾患に罹患しているか否かを識別することを好ましくは可能にする。
【０３３２】
好ましくは、前記スコアリングアルゴリズムは、本明細書で言及される心不全に罹患している患者由来、及び心不全に罹患していない患者由来のサンプル中の、ステップ(a)において言及される個々のバイオマーカーの量に関する情報を比較することにより、事前に決定される。したがって、ステップ(b)はまた、スコアリングアルゴリズムを決定又は実行することのステップ(b0)も含んでもよい。好ましくは、このステップは、ステップ(b1)及び(b2)の前に行われる。
【０３３３】
一実施形態では、参照スコアは、参照スコアと比較して試験被験体のスコアの増大した量が、心不全の存在を示し、及び/又は参照スコアと比較して試験被験体のスコアの低減した量が、心不全の非存在を示すように、計算される。特にスコアはカットオフ値であってもよい。
【０３３４】
本発明の(例えば、方法、デバイス、使用等の)好ましい実施形態では、参照スコアは、単一のカットオフ値である。好ましくは、前記値は、試験被験体を、心不全に罹患している被験体の群、又は心不全に罹患していない被験体の群のいずれかに割り当てることを可能にする。好ましくは、参照スコアより低い被験体についてのスコアは、前記被験体における心不全の非存在を示す(及びこれにより、心不全を除外判定するために使用することができる)一方、参照スコアより高い被験体についてのスコアは、前記被験体における心不全の存在を示す(及びこれにより、心不全を包含判定するために使用することができる)。
【０３３５】
本発明の(例えば、方法、デバイス、使用等の)別の好ましい実施形態では、参照スコアは、参照スコア範囲である。これに関連して、心不全の存在を示す参照スコア範囲、心不全の非存在を示す参照スコア範囲、又は2つの参照スコア範囲(すなわち、心不全の存在を示す参照スコア範囲及び心不全の非存在を示す参照スコア範囲)を適用することができる。
【０３３６】
好ましくは、被験体のスコアは、参照スコア範囲(又は複数の範囲)と比較される。好ましくは、スコアが、心不全の非存在を示す参照スコア範囲内であるなら、心不全の非存在が診断される。心不全の非存在を示す参照スコア範囲内でないスコアは、好ましくは、心不全の存在を示す。この場合、心不全の存在が診断される。
【０３３７】
あるいは、スコアが、心不全の存在を示す参照スコア範囲内であるなら、心不全の存在が診断される。心不全の存在を示す参照スコア範囲内でないスコアは、好ましくは、心不全の非存在を示す。この場合、心不全の非存在が診断される。
【０３３８】
適切なスコアリングアルゴリズムは、さらなる困難を伴わずに、当業者によりステップ(a)において言及される少なくとも3つの(及び場合によりBNP又はNT-proBNPの)バイオマーカーを用いて決定することができる。例えば、スコアリングアルゴリズムは、心不全に罹患している被験体、及び心不全に罹患していない被験体のコホートにおける少なくとも3つのバイオマーカー(及び場合によりBNP若しくはNT-proBNP)の量に関する情報を使用する、数学関数であってもよい。スコアリングアルゴリズムを決定する方法は、当該技術分野において周知であり、マイクロアレイの有意性分析、ツリーハーベスティング、CART、MARS、自己組織マップ、頻出アイテムセット、ベイジアンネットワーク、マイクロアレイの予測分析(PAM)、SMO、単純ロジスティック回帰、ロジスティック回帰、多層パーセプトロン、ベイズネット、ナイーブベイズ、単純ナイーブベイズ、ナイーブベイズアップ、IB1、Ibk、Kstar、LWL、AdaBoost、ClassViaRegression、Decorate、マルチクラスクラシファイア、ランダムコミッティー、j48、LMT、NBTree、Part、ランダムフォレスト、順序クラシファイア、スパース線形プログラミング(SPLP)、スパースロジスティック回帰(SPLR)、エラスティックネット、サポートベクターマシン、残差平方和の予測(PRESS)、罰金付ロジスティック回帰、相互情報量を含む。好ましくは、スコアリングアルゴリズムは、本明細書の他所で説明される交絡因子についての補正有り、又は無しで決定される。
【０３３９】
一実施形態では、スコアリングアルゴリズムは、少なくとも3つのバイオマーカー、及び場合によりBNP若しくはNT-proBNPを用いるエラスティックネットで決定される(実施例の章も参照)。
【０３４０】
典型的には、エラスティックネット法を実行するアルゴリズムなどの分類アルゴリズムが、スコアリングのため使用されてもよい(Zou 2005, Journal of the Royal Statistical Society, Series B: 301-320, Friedman 2010, J. Stat. Sotw. 33)。したがって、被験体についてのスコアは、好ましくは、例えばRパッケージglmnetで実行されるようなエラスティックネットアルゴリズムを使用することによりフィッティングされた、ロジスティック回帰モデルで計算することができる。より具体的には、スコアは、以下の式
【数１】
2017525970.tif 000002
又は数学的に均等な式により、計算されてもよく、
但し、特性
2017525970.tif 000003
が、
【数２】
2017525970.tif 000004
(式中、xiは、対数変換された測定値、例えば、ピーク面積比及び/又は濃度値であり、mi、siは、特性に特異的なスケーリング因子であり、wiは、モデルの係数である[w0、切片；w1、第1の特性(例えば、NT-proBNP、又は本明細書において言及される脂質バイオマーカーのいずれか1つ)についての係数；w2・・・wn、さらなる特性についての係数；n、パネルにおける特性の数])である。
【０３４１】
参照スコアより大きいスコアは、心不全に罹患している被験体を示し、一方、参照スコアより小さい(又は同等の)スコアは、心不全に罹患していない被験体を示す。
【０３４２】
参照スコアは、例えば、心不全の検出のため、ヨーデン指数(Youden index)を最大にするよう決定することができる。
【０３４３】
スコア及び参照スコアを計算するための、さらなる好ましい方法は、実施例の章の実施例5において記載される。さらに、実施例5は、パネル1、3、及び4についての好ましい参照スコアを開示する。例えば、NT-proBNPとの組合せにおけるパネル1についての参照スコアは、0.738であってもよい。
【０３４４】
有利には、本発明の基礎となる研究において、上で言及された少なくとも3つのバイオマーカーの量が、心不全の指標であることが、見出された。したがって、サンプル中の上で特定される少なくとも3つのバイオマーカーを、原則として、被験体が心不全に罹患しているかどうかを評価するために使用することができる。これは、疾患の効率的な診断、並びに心不全の前臨床的及び臨床的管理の改善、並びに患者の効率的なモニタリングに特に役立つ。さらに、本発明の基礎となる知見はまた、効率的な薬物ベースの治療、又は以下で詳細に説明される、心不全に対する栄養食を含む他の介入の開発も促進する。
【０３４５】
上でなされた用語の定義及び説明は、本明細書中以下に別段指定する場合を除き、変更すべきところは変更して、本発明の以下の実施形態(例えば、キット、デバイス、使用、さらなる方法等)について準用する。
【０３４６】
本発明の方法を行うことにより、心不全の治療を必要とする被験体を同定することができる。したがって、本発明は、被験体が、本発明の方法のステップ、及び心不全が診断されるなら、必要がある被験体を同定するさらなるステップを含む、心不全の治療又は治療の変更を必要とするかどうかを同定する方法に関する。
【０３４７】
本明細書で使用される語句「心不全の治療を必要とする」は、被験体における疾患が、心不全又はそれに付随する症状を改善するか、又は処置するために、治療的介入が必要であるか、あるいは有益である、状態にあることを意味する。したがって、本発明の基礎となる研究の知見は、被験体において心不全を診断することを可能にするばかりでなく、心不全治療により処置される被験体、又はその心不全治療が調整を必要とする被験体を同定することも可能にする。一旦、被験体が同定されると、本方法は、心不全の治療についての推奨を行うステップをさらに含んでもよい。
【０３４８】
本発明に従い使用される心不全の治療は、ACE阻害剤(ACEI)、ベータ遮断薬、AT1-阻害剤、アルドステロン拮抗薬、レニン拮抗薬、利尿薬、Ca-増感剤、ジギタリスグリコシド、抗血小板薬、ビタミンK拮抗薬、タンパク質S100ファミリーのポリペプチド(参照により本明細書に組み込まれる、DE000003922873A1、DE000019815128A1、又はDE000019915485A1)、BNP(ネシリチド(ヒト組み換え脳性ナトリウム利尿ペプチド-BNP))又はANPのようなナトリウム利尿ペプチドからなる群から選択される少なくとも1つの薬物の投与を含むか又はからなる治療に好ましくは関する。
【０３４９】
一般に、患者は、European Society of Cardiologyのガイドライン(参考文献：European Heart Journal (2012), 33:1787-1847)により推奨される薬剤で好ましくは処置される。
【０３５０】
別の実施形態では、患者は、2013年ACCF/AHAガイドライン(Circulation. 2013; 128: e240-e327)により推奨される通り、処置される。
【０３５１】
好ましくは、被験体がHFrEFに罹患していると診断されるなら、治療は、鉱質コルチコイド/アルドステロン拮抗薬、及び/又はACE阻害剤の投与を含む。ベータ遮断薬での処置がさらに想定される。
【０３５２】
さらに、被験体は、アンジオテンシン受容体遮断薬(ARB)、イバブラジン、ジゴキシン及び他のジギタリスグリコシド、ヒドララジン及び二硝酸イソソルビド(血管拡張剤)、並びにオメガ-3多価不飽和脂肪酸で処置されてもよい。
【０３５３】
好ましくは、被験体がDCMPに罹患していると診断されるなら、治療は、利尿薬、アルドステロン拮抗薬、及び/又はACE阻害剤の投与を含む。
【０３５４】
好ましくは、被験体がICMPに罹患していると診断されるなら、治療は、利尿薬、アルドステロン拮抗薬、及び/又はACE阻害剤の投与を含む。ビタミンK拮抗薬、及び抗血小板薬も好ましい。
【０３５５】
被験体がHFpEFに罹患しているなら、治療は、利尿薬、ACE阻害剤、受容体遮断薬(ARB)、及び/又はベータ遮断薬の投与を好ましくは含む。
【０３５６】
本発明は、本発明の方法のステップ、及び心不全が診断されないなら、治療が成功しているかどうかを決定するさらなるステップを含む、心不全に対する治療が、被験体において成功しているかどうかを決定する方法にさらに関する。
【０３５７】
心不全、又は少なくともそのいくつかの症状が処置され、無処置の被験体と比較して改善され得るなら、心不全が成功することが理解される。さらに、疾患の進行が、無処置の被験体と比較して阻止されるか、又は少なくとも遅延されるなら、治療はまた、本明細書において意味する成功である。
【０３５８】
本発明の方法の好ましい実施形態では、少なくとも1つのバイオマーカーの決定は、質量分析技術(好ましくは、GC-MS、及び/又はLC-MS)、NMR、又は本明細書において上で言及された他のものにより達成される。そのような場合、好ましくは、分析されるサンプルは、前処理される。前記前処理は、サンプル材料由来の少なくとも1つ、好ましくは少なくとも3つのバイオマーカーを好ましくは含み、例えば、血漿又は血清は、全血から得られてもよく、又は少なくとも1つ、好ましくは少なくとも3つのバイオマーカーは、サンプル材料から特異的に抽出されてすらよい。さらに、GC-MSのため、少なくとも1つのバイオマーカーの誘導体化のようなさらなるサンプル前処理が、好ましくは必要とされる。さらに、前処理はまた、サンプル材料を希釈すること、及びそこに含まれる成分の濃度を調整するか、又は標準化することも好ましくは含む。この目的で、好ましくは、標準化標準が、少なくとも1つのバイオマーカーと参照の量の比較、及び/又は分析される異なるサンプル間の比較を行うことを可能にする、予め定義された量でサンプルに加えられてもよい。好ましくは、標準化標準は、本明細書の他所で定義される、内部標準化合物である。例えば、バイオマーカーのそれぞれのクラスについての1つの標準、例えば、トリアシルグリセリドについての1つの標準、スフィンゴミエリンについての1つの標準等が、標準化を可能にするために加えられてもよい。別の好ましい実施形態では、SMバイオマーカーの定量は、検出器応答が同じであるという観察に基づき、標的代謝産物と異なる鎖長を有する市販のスフィンゴミエリン標準を加えることにより、達成される。さらなる好ましい実施形態では、キャリブレーション溶液を、脱脂血漿(市販)において調製して、実際の血漿とできるだけ近く、マトリックスを模倣する。
【０３５９】
したがって、本発明は、本発明の方法に関連して説明される少なくとも3つのバイオマーカーを含む、組成物、又はキットにさらに関する。
【０３６０】
加えて、本発明は、前記少なくとも3つのバイオマーカーを含む前記組成物を含むキャリブレーション溶液に関する。キャリブレーション溶液は、少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するために使用されるデバイスのキャリブレーションを可能にする。好ましくは、キャリブレーション溶液は、本明細書において以下で定義される、キャリブレーションサンプル/複数のキャリブレーションサンプルの調製のためのストック溶液として機能する。好ましくは少なくとも3つのバイオマーカーを、適切な溶媒に溶解して、キャリブレーション溶液を一緒に形成する。したがって、キャリブレーション溶液は、適切な溶媒、及び前記少なくとも3つのバイオマーカーを含む前記組成物を好ましくは含む。好ましくは、溶媒は、塩化メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタンの様な、無極性液体溶媒を含むか、又は塩化メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタンの様な、無極性液体溶媒である。好ましくは、本明細書の他所で記載される抽出溶媒が使用される。なおより好ましくは、溶媒は、ジクロロメタン(DCM)及びメタノールを含む混合物である。一実施形態では、抽出溶媒は、メタノール及びDCMを、特に約2:1の比(好ましくは、体積対体積)で含む。
【０３６１】
さらに、本発明は、本発明の組成物(すなわち、本発明の方法に関連して説明される、少なくとも3つのバイオマーカーを含む)、及び脱脂血清若しくは血漿を含むキャリブレーションサンプルに関する。好ましくは、キャリブレーションサンプルは、適切な溶媒、特に本明細書の他所で定義される抽出溶媒をさらに含む。
【０３６２】
前記組成物、キャリブレーション溶液、又は前記キャリブレーションサンプルは、特に少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するためデバイスを制御するか、及び/又はキャリブレーションするため、本発明を行うとき、対照として使用することができる。
【０３６３】
好ましい実施形態では、脱脂血清又は血漿は、脱繊維化されている。
【０３６４】
一実施形態では、前記脱脂サンプルは、脱脂血清である。別の実施形態では、前記脱脂サンプルは、脱脂血漿である。
【０３６５】
好ましくは、前記組成物、キャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプルは、少なくとも3つのバイオマーカーを予め定義された量又は比で含む。
【０３６６】
用語「脱脂(delipidized)」(「脱脂化された(delipidated)」と言及されることも多い)」は、当該技術分野において周知である。好ましくは、この用語は、前記サンプル(例えば、血清、血漿)に天然で存在する脂質(例えば、トリグリセリド、コレステロール、リン脂質、及び非エステル化脂肪酸)が、前記サンプルから取り除かれたことを意味する(例えば、Cham et al. J Lipid Res. 1976 Mar;17(2):176-81. A solvent system for delipidation of plasma or serum without protein precipitationを参照)。前記サンプルを脱脂後、少なくとも3つのバイオマーカーが、本明細書において言及され、前記脱脂血清又は血漿に加えられ、特に人工的に加えられる。したがって、少なくとも3つのバイオマーカーは、前記脱脂サンプル中に好ましくは添加される。好ましくは少なくとも3つのバイオマーカーは、脱脂血清又は血漿に予め定義された量で加えられる。好ましくは、前記予め定義された量は、キャリブレーション及び/又はコントロールを可能にする。あるいは、前記予め定義された量は、参照を表す。
【０３６７】
少なくとも3つのバイオマーカーを脱脂血清又は血漿に加えるために、少なくとも3つのバイオマーカーが、適切な溶媒(特に本明細書の他所で定義される抽出溶媒である)に溶解される。次に、得られた溶液が、加えられる、すなわち、脱脂血清又は血漿と組み合わされる。好ましくは、脱脂血清又は血漿の溶媒に対する比は、約1:10〜1:1000、より好ましくは、約1:100〜1:500、又はなおより好ましくは、約1:100〜1:200、最も好ましくは、約1:150である。
【０３６８】
キャリブレーションのため、キャリブレーション溶液のアリコートは、脱脂血清又は血漿と混合され、それにより、キャリブレーションサンプル又は一連のキャリブレーションサンプルを生成することができる。好ましくは、さらなるキャリブレーションサンプルが、最高濃度のバイオマーカーを含むキャリブレーション溶液であるストック溶液から調製されてもよい。内部標準が加えられる場合、好ましくは、同じ量の内部標準が、一連のキャリブレーションサンプルのそれぞれのメンバーに与えられる(以下を参照)。
【０３６９】
本発明の好ましい実施形態では、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットは、診断のため使用される、脂質バイオマーカー(すなわち、同じ組合せの脂質バイオマーカー、例えば、パネル1、2、又は200のバイオマーカー)を含む。
【０３７０】
しかしながら、脂質バイオマーカーは、他のバイオマーカーで置き換えられ、前記他のバイオマーカーは、同じ化合物クラスに好ましくは属することが想定される。したがって、トリアシルグリセリドバイオマーカーは、異なるトリアシルグリセリドで置き換えられてもよく、コレステリルエステルバイオマーカーは、異なるコレステリルエステルで置き換えられてもよく、ホスファチジルコリンバイオマーカーは、異なるホスファチジルコリンで置き換えられてもよく、スフィンゴミエリンバイオマーカーは、異なるスフィンゴミエリンで置き換えられてもよく、セラミドバイオマーカーは、異なるセラミドで置き換えられてもよい。例えば、本発明の方法が、SM23の決定を含むなら、脱脂サンプルは、SM27を代わりに含んでもよい。SM27は、スフィンゴミエリン(d18:1/24:1)若しくはスフィンゴミエリン(d18:2/24:0)、又はその組合せを好ましくは指す。好ましい実施形態では、SM27は、スフィンゴミエリン(d18:1/24:1)である。好ましいトリアシルグリセリド、コレステリルエステル、ホスファチジルコリン、セラミド、及びスフィンゴミエリンは、本明細書の他所で記載される。
【０３７１】
組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットはしたがって、
i.少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのコレステリルエステル、及び少なくとも1つのホスファチジルコリン;
ii.少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのホスファチジルコリン、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン;
iii.少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのコレステリルエステル、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン;又は
iv.少なくとも1つのホスファチジルコリン、少なくとも1つのコレステリルエステル、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン
を好ましくは含む。
【０３７２】
別の好ましい実施形態では、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットは、少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのコレステリルエステル、少なくとも1つのスフィンゴミエリン、及び少なくとも1つのホスファチジルコリンを含んでもよい。
【０３７３】
特に好ましい実施形態では、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットは、OSS2、PC4、及びSM23を含む。別の特に好ましい実施形態では、組成物、キャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプルは、OSS2、PC4、及びSM27を含む。
【０３７４】
好ましい実施形態では、特にパネル1について、PC4:SM27の比(モル濃度に基づく)は、50:1〜2.5:1の範囲内であり、より好ましい実施形態では、比は、25:1〜5:1の範囲内である。別の好ましい実施形態では、特にパネル1について、SM27:OSS2の比(モル濃度に基づく)は、30:1〜1.5:1の範囲内であり、より好ましい実施形態では、比は、15:1〜2:1の範囲内である。特にPC4:SM27:OSS2の比(モル濃度に基づく)は、約100:7.9:1.1である。SM23が、SM27の代わりに、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットの一部である場合、上で述べられた同じ比が当てはまる。
【０３７５】
別の特に好ましい実施形態では、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットは、OSS2、CE18:2、及びSM23を含む。別の特に好ましい実施形態では、組成物、キャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプルは、OSS2、CE18:2、及びSM27を含む。好ましい実施形態では、特にパネル2について、CE18:2:SM27の比(モル濃度に基づく)は、500:1〜2:1の範囲内であり、より好ましい実施形態では、比は、100:1〜10:1の範囲内である。別の好ましい実施形態では、特にパネル2について、SM27:OSS2の比(モル濃度に基づく)は、30:1〜1.5:1の範囲内であり、より好ましい実施形態では、比は、15:1〜2:1の範囲内である。特にCE8:2:SM27:OSS2の比(モル濃度に基づく)は、約100:2.7:0.39である。SM23が、SM27の代わりに、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットの一部である場合、上で述べられた同じ比が当てはまる。
【０３７６】
別の特に好ましい実施形態では、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットは、OSS2、PC4、SM23、及びCE18:2を含む。別の特に好ましい実施形態では、組成物、キャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプルは、OSS2、PC4、CE18:2、及びSM27を含む。好ましい実施形態では、特にパネル200について、PC4:SM27の比(モル濃度に基づく)は、50:1〜2.5:1の範囲内であり、より好ましい実施形態では、比は、25:1〜5:1の範囲内である。別の好ましい実施形態では、特にパネル200について、SM27:OSS2の比(モル濃度に基づく)は、30:1〜1.5:1の範囲内であり、より好ましい実施形態では、比は、15:1〜2:1の範囲内である。別の好ましい実施形態では、CE18:2:SM27の比(モル濃度に基づく)は、500:1〜2:1の範囲内であり、より好ましい実施形態では、比は、100:1〜10:1の範囲内である。特にCE18:2:PC4:SM27:OSS2の比(モル濃度に基づく)は、約100:34.2:2.7:0.4である。SM23が、SM27の代わりに、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットの一部である場合、上で述べられた同じ比が当てはまる。
【０３７７】
加えて、本発明は、一連の本発明のキャリブレーション溶液、及び/又はキャリブレーションサンプル、及び/又は組成物に関する。好ましくは、前記一連のキャリブレーション溶液/キャリブレーションサンプルは、少なくとも3つ、より好ましくは少なくとも4つ、最も好ましくは少なくとも5つの異なるキャリブレーション溶液、及び/又はキャリブレーションサンプル、及び/又は組成物を含む。前記キャリブレーション溶液、及び/又はキャリブレーション溶液、及び/又は組成物は、前記溶液/サンプル/組成物により含まれる脂質バイオマーカーの事前に定義された量で異なるべきである。したがって、本発明は、本発明のキャリブレーション溶液及び/又はキャリブレーションサンプルの希釈系列を想定する。一実施形態では、一連のキャリブレーション溶液及び/又はキャリブレーションサンプルにより含まれるバイオマーカーの量は、最高濃度のものが、ストック溶液として使用することができるように、直線関係にある。
【０３７８】
キャリブレーション溶液に存在するバイオマーカーPC4、CE18:2、SM27、及びOSS2の好ましい量は、実施例の章の表13において示される。表13は、キャリブレーションのため使用されるストック溶液を列挙する。バイオマーカーの好ましい比は、パネル200について表13a、パネル2について表13b、及びパネル1について表13c(特にSTD1の列を参照)において示される。
【０３７９】
好ましくは、キャリブレーション溶液は、OSS2、PC4、及び/又はSM27を含む。好ましくは、濃度は以下の通りである:
PC4：約6〜約193nmol/ml
OSS2：約0.07〜約2.2nmol/ml、及び/又は
SM27：約0.5〜約15.2nmol/ml。
【０３８０】
キャリブレーション溶液がCE18:2を含むなら、濃度は、好ましくは、約18〜約570nmol/mlである。
【０３８１】
一実施形態では、パネル1のバイオマーカーが決定されるなら、PC4、OSS2、及びSM27を含むキャリブレーション溶液又はキャリブレーションサンプルが使用される。別の実施形態では、パネル1のバイオマーカーが決定されるなら、PC4、OSS2、及びSM23を含むキャリブレーション溶液又はキャリブレーションサンプルが使用される。
【０３８２】
一実施形態では、パネル2のバイオマーカーが決定されるなら、OSS2、CE18:2、及びSM27を含むキャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプル、又はキットが使用される。別の実施形態では、パネル2のバイオマーカーが決定されるなら、OSS2、CE18:2、及びSM23を含むキャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプル、又はキットが使用される。
【０３８３】
一実施形態では、パネル200のバイオマーカーが決定されるなら、PC4、OSS2、CE18:2、及びSM27を含むキャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプル、又はキットが使用される。別の実施形態では、パネル200のバイオマーカーが決定されるなら、PC4、OSS2、CE18:2、及びSM23を含むキャリブレーション溶液若しくはキャリブレーションサンプル、又はキットが使用される。しかしながら、パネル1又はパネル2のバイオマーカーが決定されるなら、このキャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプル、又はキットを使用することができることも、想定することができる。
【０３８４】
さらなる好ましいキャリブレーション溶液は、実施例の章において記載され、例えば、実施例12を参照のこと。
【０３８５】
上で説明された通り、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットは、少なくとも3つのバイオマーカーを含むべきである。少なくとも3つのバイオマーカーが、同じキャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプルにより含まれる必要がないことは、理解される。故に、多数のキャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプルを調製することができる。むしろ、それらを、個々のキャリブレーション溶液、又はキャリブレーションサンプルにおいて含むことができる。したがって、3つのバイオマーカー(マーカーA、マーカーB、及びマーカーC)が決定される場合、個々のバイオマーカーを、マーカーA、B、及びCを有する1つのキャリブレーション溶液/サンプル、2つのキャリブレーション溶液/サンプル(1つはA及びBを有し、1つはCを有するか;又は1つはA及びCを有し、1つはBを有するか;1つはA及びCを有し、1つはBを有する)、又は3つのキャリブレーション溶液/サンプルにおいて含むことができる。
【０３８６】
したがって、本発明は、(i)本発明の方法に関連して説明される少なくとも3つのバイオマーカーを含む単一のキャリブレーション溶液、又は(ii)本発明の方法に関連して説明される少なくとも3つのバイオマーカーを含む多数のキャリブレーション溶液を含むキットに関し、好ましくは、多数のキャリブレーション溶液において、それぞれのキャリブレーション溶液が、前記少なくとも3つのバイオマーカーの少なくとも1つを含む。より好ましくは、多数のキャリブレーション溶液におけるキャリブレーション溶液は、同一のバイオマーカーを含まない。好ましい実施形態では、少なくとも3つのバイオマーカーは、パネル1、2、又は200のバイオマーカーであり、SM23は、SM27により置き換えられている。例えば、パネル1に関して、キットは、バイオマーカーOSS2、PC4、及びSM23、又はOSS2、PC4、及びSM27を含む。いくつかのパネルのバイオマーカーに関する好ましい濃度又は比は、上に記載した通りである。加えて、キットは、本発明の内部標準溶液を含んでもよい。好ましくは、内部標準溶液は、ホスファチジルコリンC19:0 C19:0を含む。
【０３８７】
本発明の組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットの好ましい実施形態では、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットは、1つ以上の内部標準化合物をさらに含む。好ましくは、組成物、キャリブレーション溶液、キャリブレーションサンプル、又はキットは、ホスファチジルコリンC19:0 C19:0をさらに含む。本発明の実施形態では、パネル1、2、及び/又は200について、最高濃度のそれぞれのバイオマーカーを有するキャリブレーションサンプルは、OSS2、及びホスファチジルコリンC19:0 C19:0(モル濃度に基づく)を、0.05:1〜2:1の比で含み、好ましい実施形態では、比は、0.1:1〜0.5:1の範囲内である。特にパネル1について、PC4:SM27:OSS2:ホスファチジルコリンC19:0 C19:0の比(モル濃度に基づく)は、約100:7.9:1.1:5.2である。SM27の代わりに、SM23が使用されるなら、同じ比が当てはまる。
【０３８８】
本発明はまた、本明細書において上記された内部標準溶液に関する。好ましくは、内部標準溶液は、少なくとも1つの内部標準化合物を含む。一実施形態では、内部標準化合物は、ホスファチジルコリンC19:0 C19:0である。好ましくは少なくとも1つの内部標準化合物を、適切な溶媒に溶解して、内部標準溶液を一緒に形成する。したがって、内部標準溶液は、適切な溶媒、及び前記少なくとも3つのバイオマーカーを含む前記組成物を好ましくは含む。好ましくは、溶媒は、塩化メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタンの様な、無極性液体溶媒を含むか、又は塩化メチル、ジクロロメタン、クロロホルム、1,2-ジクロロエタンの様な、無極性液体溶媒である。好ましくは、本明細書の他所で記載される抽出溶媒が使用される。なおより好ましくは、溶媒は、ジクロロメタン(DCM)及びメタノールを含む混合物である。一実施形態では、抽出溶媒は、メタノール及びDCMを、特に約2:1の比(好ましくは、体積対体積)で含む。
【０３８９】
内部標準溶液中のホスファチジルコリンC19:0 C19:0の好ましい濃度は、本発明の方法に関連して与えられる。
【０３９０】
さらに、本発明は、本発明の関連で言及される、少なくとも3つのバイオマーカーを含むキットに関する。好ましい実施形態では、少なくとも3つのバイオマーカーは、パネル1、2、又は200(特にパネル1)のバイオマーカーである。別の好ましい実施形態では、少なくとも3つのバイオマーカーは、パネル1、2、又は200のバイオマーカーであり、SM23は、SM27により置き換えられている。例えば、パネル1に関して、キットは、バイオマーカーOSS2、PC4、及びSM23、又はOSS2、PC4、及びSM27を含む。
【０３９１】
加えて、本発明は、本発明の方法に関連して説明される少なくとも3つのバイオマーカー、及び本明細書で言及される1つ以上の内部標準化合物を含むキットに関する。好ましい実施形態では、内部標準化合物は、ホスファチジルコリンC19:0 C19:0であり、少なくとも3つのバイオマーカーは、パネル1、2、又は200(特にパネル1)のバイオマーカーである。別の好ましい実施形態では、内部標準化合物は、ホスファチジルコリンC19:0 C19:0であり、少なくとも3つのバイオマーカーは、パネル1、2、又は200のバイオマーカーであり、SM23は、SM27により置き換えられている。例えば、パネル1に関して、キットは、バイオマーカーOSS2、PC4、及びSM23、又はOSS2、PC4、及びSM27を含む。
【０３９２】
加えて、本発明は、(i)本発明のキャリブレーション溶液若しくは多数のキャリブレーション溶液、並びに(ii)本発明の内部標準溶液を含むキットに関する。好ましくは、内部標準溶液は、ホスファチジルコリンC19:0 C19:0を含む。
【０３９３】
加えて、本発明は、(i)本発明のキャリブレーションサンプル、若しくは多数のキャリブレーションサンプル、並びに(ii)本発明の内部標準溶液を含むキットに関する。好ましくは、内部標準溶液は、ホスファチジルコリンC19:0 C19:0を含む。
【０３９４】
前述のキットは、好ましくは、少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するためのデバイスのキャリブレーションのために使用することができる。
【０３９５】
本発明の方法は、好ましい実施形態では、その上、ステップ(b)において確立された診断の結果にしたがって被験体に推奨するか、及び/又は被験体を管理するステップをさらに含む。そのような推奨は、一態様において、生活環境を改善することを目的にしたライフスタイル、栄養摂取等の適応、本明細書の他所で説明される治療的処置の適用、及び/又は定期的な疾患のモニタリングであってもよい。
【０３９６】
前述の方法の別の好ましい実施形態では、ステップ(b)は、本明細書の他所で説明される評価ユニットにより行われる。
【０３９７】
さらに、本発明はまた、一態様において、心不全を診断する方法のステップ(a)及び(b)、並びに被験体が心不全に罹患していると診断される場合、被験体を処置するさらなるステップ(c)を含む、心不全を処置する方法に関する。方法はまた、心不全に罹患している被験体を選択するステップ(b1)を含んでもよい。一実施形態では、ステップ(b1)は、ステップ(b)の後であるが、ステップ(c)の前に行われる。例えば、被験体は、被験体が症候性又は無症候性心不全に罹患しているなら、処置されてよい。
【０３９８】
さらに、本発明はまた、一態様において、本発明の方法のステップ、心不全が診断されるなら、必要がある被験体を同定するさらなるステップ、及び状況に応じて被験体を処置するさらなるステップを含む、被験体が心不全の治療又は治療の変更を必要とするかどうかを同定する方法のステップを含む、心不全を処置する方法にも関する。
【０３９９】
上でなされた定義及び説明は、以下で別段の指定がされている場合を除き、適宜変更を加えて本発明の以下の実施形態にも適用される。
【０４００】
前述の少なくとも3つのバイオマーカーの決定方法は、デバイスに実装することができる。本明細書で使用されるデバイスは、少なくとも前述の手段を含むべきである。さらに、デバイスは、好ましくは少なくとも3つのバイオマーカーの検出された特徴的な特性、及びまた好ましくは決定されたシグナル強度の比較並びに評価の手段を含む。デバイスの手段は、好ましくは、互いに作動可能に結合される。手段を動作するように結合させる方法は、デバイスに含まれる手段のタイプに依存する。例えば、バイオマーカーを自動で定性的又は定量的に決定する手段が適用される場合、そのような自動で動作する手段により得られたデータは、評価を促進するために、例えばコンピュータープログラムにより処理することができる。そのような場合において、手段は、好ましくは単一のデバイスに含まれる。したがって、前記デバイスは、バイオマーカーのための分析ユニット、及び評価のために得られたデータを処理するためのコンピューターユニットを含んでもよい。好ましいデバイスは、専門臨床医の特定の知識なく適用することができるものであり、例えば、サンプルのローディングを単に要求する電子デバイスである。
【０４０１】
あるいは、少なくとも1つのバイオマーカーの決定方法は、好ましくは、互いに作動可能に結合されたいくつかのデバイスを含む、システムに実装することができる。具体的には、手段は、上で詳細に記載された本発明の方法を行うことを可能にするような手法で結合されなければならない。それ故、好ましくは、本明細書で使用される、作動可能に結合されることは、機能的に結合されることを意味する。本発明のシステムのため使用される手段に依存して、前記手段は、それぞれの手段を他と、前記手段間においてデータ輸送を可能にする手段により、結びつけることにより、機能的に結合されてもよい。好ましいシステムは、バイオマーカーを決定するための手段を含む。本明細書で使用されるバイオマーカーを決定する手段は、クロマトグラフィーのデバイスのような、バイオマーカーを分離するための手段、及び質量分析デバイスのような、代謝産物決定のための手段を包含する。適切なデバイスは、上で詳細に記載されている。本発明のシステムで使用される化合物分離のための好ましい手段は、クロマトグラフィーのデバイス、より好ましくは、液体クロマトグラフィー、HPLC、及び/又はガスクロマトグラフィーのためのデバイスを含む。化合物決定のための好ましいデバイスは、質量分析デバイス、より好ましくは、GC-MS、LC-MS、ダイレクトインフュージョン質量分析、FT-ICR-MS、CE-MS、HPLC-MS、四重極質量分析、順次結合質量分析(MS-MS、又はMS-MS-MSを含む)、ICP-MS、Py-MS、又はTOFを含む。分離及び決定手段は、好ましくは、互いに結合される。最も好ましくは、LC-MS、特にHPLC-MS、及び/又はGC-MSは、明細書の他所で詳細に記載される本発明のシステムで使用される。少なくとも3つのバイオマーカー(及び場合によりNT-proBNP又はBNP)の決定のための手段から得られた結果を比較する、及び/又は分析するための手段が、さらに含まれる。結果を比較し、及び/又は分析するための手段は、少なくとも1つのデータベース、並びに結果の比較のため実行されるコンピュータープログラムを含んでもよい。前述のシステム及びデバイスの好ましい実施形態はまた、以下で詳細に記載される。
【０４０２】
それ故、本発明は、診断用デバイスであって、以下：
(a)少なくとも1つの検出器により検出される、本発明に関連して本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカーのための少なくとも1つの検出器を含む分析ユニット、及びそれと作動可能に結合された、
(b)少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量と参照量との比較を実施するための実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含むコンピューターと、前記バイオマーカーについての前記参照量を含むデータベースとを含む評価ユニットであって、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される、評価ユニット
を含む、診断用デバイスに関する。
【０４０３】
あるいは、(b)の下の評価ユニットは、少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量に基づきスコアを計算するため、及び計算されたスコアと参照スコアの比較を行うための、実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含み、ここで前記評価ユニットは、前記参照スコアを含むデータベースをさらに含み、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される。
【０４０４】
用語「スコア」、及び「参照スコア」は、本明細書の他所で決定される。
【０４０５】
一実施形態では、デバイスは、NT-proBNP及び/又はBNPのための少なくとも1つの検出器を含む、少なくとも1つのさらなる分析ユニットをさらに含み、前記さらなる分析ユニットは、少なくとも1つの検出器により検出されるBNP及び/又はNT-proBNPの量を決定するための適合されている。
【０４０６】
したがって、本発明は、診断用デバイスであって、以下：
(a)本発明に関連して本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカーのための少なくとも1つの検出器を含む分析ユニットであって、少なくとも1つの検出器により検出される前記バイオマーカーの量を決定するために適合されている、分析ユニット、及び場合によりNT-proBNP及び/又はBNPのための少なくとも1つの検出器を含む少なくとも1つのさらなる分析ユニットであって、NT-proBNP及び/又はBNPのための少なくとも1つの検出器により検出されるBNP及び/又はNT-proBNPの量を決定するために適合されている分析ユニット、及びそれと作動可能に結合されてた、
(b)少なくとも3つのバイオマーカー、及び場合によりBNP若しくはNT-proBNPの決定された量と参照量との比較を行うための実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含むコンピューターと、前記バイオマーカーについての前記参照量を含むデータベースとを含む評価ユニットであって、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される、評価ユニット
を含む、診断用デバイスに関する。
【０４０７】
あるいは、(b)の下の評価ユニットは、少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量、並びにBNP及び/若しくはNT-proBNPの決定された量に基づきスコアを計算するため、並びに計算されたスコアと参照スコアの比較を行うための、実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含むコンピューターを含み、ここで、前記評価ユニットは、前記参照スコアを含むデータベースをさらに含み、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される。
【０４０８】
好ましくは、デバイスは、本発明の方法を行うために適合されている。
【０４０９】
好ましくは、コンピュータープログラムコードは、本明細書の他所で詳細に特定される本発明の方法のステップを実行することができる。したがって、デバイスを、被験体のサンプルに基づき、本明細書において特定される心不全を診断するために使用することができる。
【０４１０】
好ましい実施形態では、デバイスは、表1A及び/又は1Bのいずれか1つにおいてそれぞれのバイオマーカーについて示される、制御の種類及び/又は制御値の倍数を含む、さらなるデータベース、並びに決定された、制御の種類及び/又は制御値の倍数と、データベースにより含まれるものとの間での比較を行うための、さらなる実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含む。別の好ましい実施形態では、デバイスは、少なくとも3つのバイオマーカーの量に基づき計算されたスコアについて示された、制御の種類及び/又は制御値の倍数を含む、さらなるデータベース、並びに決定された、スコアについての制御の種類及び/又は制御値の倍数と、データベースにより含まれるものとの間での比較を行うための、さらなる実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含む。
【０４１１】
その上、本発明は、上で説明された医学的状態又は効果を示す(すなわち、被験体において心不全を診断する)、少なくとも3つのバイオマーカーの特徴的な値を含むデータ収集物に関する。その上、本発明は、上で説明された医学的状態又は効果を示す(すなわち、被験体において心不全を診断する)、本明細書において説明される少なくとも3つのバイオマーカーの量に基づき計算されたスコアの特徴的な値を含むデータ収集物に関する。
【０４１２】
用語「データ収集物」は、一緒に物理的及び/又は理論的にグループ化されてもよい、データの収集物に関する。一実施形態では、物理的又は理論的グループ化は、エラスティックネット、ランダムフォレスト、罰金付ロジスティック回帰、又は当業者により公知の他のものの様な分類アプローチにより実現される。したがって、データ収集物は、単一のデータ記憶媒体に、又は互いに作動可能に結合された物理的に分かれたデータ記憶媒体で実行されてもよい。好ましくは、データ収集物は、データベースにより実行される。したがって、本明細書で使用されるデータベースは、適切な記憶媒体上のデータ収集物を含む。さらに、データベースは、好ましくは、データベース管理システムをさらに含む。データベース管理システムは、好ましくは、ネットワークベースの階層又はオブジェクト指向のデータベース管理システムである。その上、データベースは、連邦又は統合データベースであってもよい。より好ましくは、データベースは、分散(連邦)システムとして、例えば、クライアント-サーバー-システムとして実行される。より好ましくは、データベースは、検索アルゴリズムが、試験データセットをデータ収集物により含まれるデータセットと比較することを可能にするよう構造化される。具体的には、そのようなアルゴリズムを使用することにより、データベースを、上で説明された医学的状態又は効果を示す、類似又は同一のデータセットについて検索することができる(例えば、クエリー検索により)。したがって、同一又は類似のデータセットを、データ収集物において同定するこができるなら、試験データセットは、前記医学的状態又は効果と関連する。結論として、データ収集物から得られた情報は、例えば、上記の本発明の方法についての参照として使用することができる。より好ましくは、データ収集物は、上で挙げられた全ての少なくとも3つのバイオマーカーの特徴的な値を含む。また好ましくは、データ収集物は、上で説明された少なくとも3つのバイオマーカーに関するスコアを含む。
【０４１３】
前述のものに照らして、本発明は、前述のデータ収集物を含むデータ記憶媒体を包含する。
【０４１４】
用語「データ記憶媒体」は、本明細書で使用される場合、CD、CD-ROM、ハードディスク、フラッシュ記憶媒体、光学記憶媒体、又はディスケットのような単一の物理的実体に基づく、データ記憶媒体を包含する。さらに、用語は、好ましくは、クエリー検索に適切な方法で、前述のデータ収集物をもたらすような手法で互いに作動可能に結合された物理的に分かれた実体からなるデータ記憶媒体をさらに含む。
【０４１５】
本発明はまた、
(a)(b)と作動可能に結合された、サンプルの少なくとも3つのバイオマーカーのバイオマーカーの特徴的な値、又はスコア(少なくとも3つのマーカーの量に基づく)を比較するための手段
(b)上記のデータ記憶媒体
を含むシステムに関する。
【０４１６】
システムは、BNP又はNT-proBNPの特徴的な値(又はそれに基づくスコア)を比較するための手段をさらに含んでもよい。
【０４１７】
別の実施形態では、本発明はまた、
(a)(b)と作動可能に結合された、サンプルの少なくとも3つのバイオマーカーの量、及びBNP又はNT-proBNPの量に基づくスコアを比較するための手段
(b)上記のデータ記憶媒体
を含むシステムに関する。
【０４１８】
本明細書で使用される用語「システム」は、互いに作動可能に結合された様々な手段に関する。前記手段は、単一のデバイスで実行されてもよいし、又は互いに作動可能に結合された物理的に分かれたデバイスであってもよい。バイオマーカーの特徴的な値を比較するための手段は、上で述べられた比較のためのアルゴリズムに好ましくは基づいている。データ記憶媒体は、前述のデータ収集物又はデータベースを好ましくは含み、ここで、記録されたデータセットのそれぞれが、上で言及された医学的状態又は効果を示す。したがって、本発明のシステムは、試験データセットが、データ記憶媒体に記録されたデータ収集物により含まれるかどうかを同定することを可能にする。結論として、本発明の方法は、本発明のシステムにより実行することができる。
【０４１９】
システムの好ましい実施形態では、サンプルのバイオマーカーの特徴的な値を決定するための手段が含まれる。用語「バイオマーカーの特徴的な値を決定するための手段」は、質量分析デバイス、NMRデバイス、又はバイオマーカーについて化学的又は生物学的アッセイを行うためのデバイスのような、前述の、代謝物の決定のためのデバイスに好ましくは関する。
【０４２０】
さらに、本発明は、本発明の方法に関連して言及される少なくとも3つのバイオマーカーの決定のための手段を含む、診断の手段に関する。
【０４２１】
診断の手段は、BNP又はNT-proBNPの決定のための手段をさらに含んでもよく、特に前記決定は、それぞれの抗体を用いた決定に基づいており、したがって、前記手段は、BNP又はNT-proBNPに特異的に結合する、少なくとも1つの抗体、又はその断片を含む。したがって、前記手段は、NT-proBNP又はBNPの決定を可能にする。好ましくは、前記手段は、マーカーの量を決定するためのイムノアッセイを行うために適合されている。
【０４２２】
用語「診断の手段」は、他所での詳細な記載において特定される、診断用デバイス、システム、又は生物学的若しくは化学的アッセイに好ましくは関する。
【０４２３】
表現「少なくとも3つのバイオマーカーの決定のための手段」は、少なくとも3つのバイオマーカーを特異的に認識することができる、デバイス又は物質を指す。適切なデバイスは、質量分析、NMRデバイス、又はバイオマーカーについて化学的若しくは生物学的アッセイを行うためのデバイスのような分光デバイスであってもよい。適切な物質は、バイオマーカーを特異的に検出する、化合物であってもよい。本明細書で使用される検出は、2つのステップのプロセスであってもよく、すなわち化合物は、まず検出されるバイオマーカーに特異的に結合し、続いて検出可能なシグナル、例えば蛍光シグナル、化学発光シグナル、放射活性シグナル等を作り出してもよい。検出可能なシグナルの生成のため、さらなる化合物が必要な場合もあり、これらも全て用語「少なくとも1つのバイオマーカーの決定のための手段」に含まれる。
【０４２４】
さらに、本発明は、上で言及された少なくとも3つのバイオマーカーを含む診断用組成物に関する。
【０４２５】
前記少なくとも3つのバイオマーカーは、本明細書の他所で説明される被験体における医学的状態又は効果の指標として機能する。したがって、バイオマーカー分子自体は、好ましくは、本明細書で言及される手段による視覚化又は検出の際、診断用組成物として機能し得る。したがって、本発明によるバイオマーカーの存在を示す診断用組成物はまた、前記バイオマーカーを物理的に含んでもよく、例えば、抗体と検出されるバイオマーカーとの複合体が、診断用組成物として機能し得る。したがって、診断用組成物は、本記載の他所で特定される代謝産物の検出のための手段をさらに含んでもよい。あるいは、MS又はNMRベースの技術のような検出手段が使用されるなら、リスク条件の指標として機能する分子種は、調べられる試験サンプルにより含まれる少なくとも1つのバイオマーカーである。したがって、本発明に従い言及される少なくとも3つのバイオマーカーは、疾患の指標としてのその同定に起因して、それ自体、診断用組成物として機能するべきである。
【０４２６】
一般に、本発明は、心不全を診断するための、又は心不全を診断するための医薬及び/若しくは診断用組成物の調製のための、被験体のサンプルにおける、心不全を診断する方法に関連して本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカー及び場合によりBNP若しくはNT-proBNPの使用を予期する。診断される心不全のバイオマーカー及びサブフォームの好ましい組合せは、本明細書の他所で開示される。
【０４２７】
本発明はまた、本発明の方法を行うためのキットに関し、前記キットは、心不全を診断する方法に関連して説明される少なくとも3つのバイオマーカーのバイオマーカーのそれぞれについての検出物質を含む。一実施形態では、キットは、NT-proBNP又はBNPのための検出物質をさらに含んでもよい。
【０４２８】
用語「キット」は、本明細書で使用される場合、好ましくは、別々に、又は単一の容器内で提供される、前述の化合物の集合物を指す。検出物質は、「すぐに使える」液体形態で、又は乾燥形態で、本発明のキットにおいて提供されてもよい。キットは、対照、バッファー、及び/又は試薬をさらに含んでもよい。キットはまた、本発明の方法を行うための指示書、並びに参照値についての情報をさらに含む。これらの指示書は、マニュアルの形態であってもよいか、又は電気的にアクセス可能な情報であってもよい。後者の情報は、光学記憶媒体(例えば、コンパクトディスク)のようなデータ記憶媒体若しくはデバイス上で、又はコンピューター若しくはデータ処理デバイス上で直接的に提供されてもよい。
【０４２９】
バイオマーカーの適切な検出物質は、本明細書の他所で詳細に特定されている。例えば、検出物質は、抗体若しくはアプタマー、又はバイオマーカーに特異的に結合する能力がある他の分子であってもよい。
【０４３０】
本発明のキットは、好ましくは、本発明の方法を行うため、すなわち、本明細書の他所で詳細に特定される心不全を診断するため、使用することができる。
【０４３１】
本明細書において上で与えられた定義並びに説明はまた、以下の方法、及び使用に当てはまる。
【０４３２】
さらに、本発明は、被験体において心不全を診断する方法であって、
(a)被験体のサンプルにおいて、ホスファチジルコリン(C18:1 C18.1)、SM(d18:1/18:1)、SM(d18:2/17:0)、OSS2、PPO1、PPP、SOP2、SPP1、SSP2、及びSSSからなる群から選択される少なくとも1つのバイオマーカーの量を決定するステップ、及び
(b)ステップ(a)において決定された前記バイオマーカーの量を参照と比較するステップであって、それにより心不全が診断される、ステップ
を含む、方法に関する。
【０４３３】
さらに、本発明は、心不全の診断のための、被験体のサンプルにおける、ホスファチジルコリン(C18:1 C18.1)、SM(d18:1/18:1)、SM(d18:2/17:0)、OSS2、PPO1、PPP、SOP2、SPP1、SSP2、及びSSSからなる群から選択される少なくとも1つのバイオマーカーの使用に関する。
【０４３４】
本発明の方法、キット、デバイス、使用の一実施形態では、パネル300のバイオマーカーの量(実施例10を参照)が決定される。好ましくは、前記バイオマーカーは、実施例10において記載される通り、決定される。
【０４３５】
心不全治療をモニタリングする方法
心臓を診断する方法との関連における、上で言及された少なくとも3つのバイオマーカーの量の決定に基づき、処置が有効であるか否かを個人別に評価することもできる。
【０４３６】
本発明はしたがって、被験体において心不全治療をモニタリングする方法であって、以下：
(a)前記被験体の第1のサンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定し、決定された量に基づき第1のスコアを計算すること、
(b)前記被験体の第2のサンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定し、決定された量に基づき第2のスコアを計算すること、及び
(c)第1のスコアを第2のスコアと比較し、それによって、前記被験体における心不全治療がモニタリングされること
を含む、方法に関する。
【０４３７】
前述の方法の一実施形態では、本方法は、第1及び第2のサンプル中のBNP(脳性ナトリウム利尿ペプチド、B型ナトリウム利尿ペプチドとしても公知)、又は特にNT-proBNP(プロホルモン脳性ナトリウム利尿ペプチドのN-末端)の量の決定をさらに含む。
【０４３８】
したがって、ステップ(a)〜(c)は、以下の通り:
(a)前記被験体の第1のサンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーの量、並びにBNP若しくはNT-proBNPの量を決定し、決定された量に基づき第1のスコアを計算すること、
(b)前記被験体の第2のサンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーの量、並びにBNP若しくはNT-proBNPの量を決定し、決定された量に基づき第2のスコアを計算すること、及び
(c)第1のスコアを第2のスコアと比較し、それによって、前記被験体における心不全治療がモニタリングされること
であってもよい。
【０４３９】
本明細書において心不全を診断する方法と関連して上で与えられた定義は、同様に、心不全治療をモニタリングする方法に好ましくは当てはまる。
【０４４０】
前述の方法、好ましくは、インビトロの方法である。さらに、それは、上で明示的に述べられたものに加えて、ステップを含んでもよい。例えば、さらなるステップは、前処理、又は方法により得られた結果の評価に関してもよい。好ましくは、ステップ(a)、(b)、及び/又は(c)は、全体的又は部分的な自動化により、例えば、ステップ(a)及び(b)における決定のための適切なロボット並びに知覚性設備、又はステップ(c)におけるコンピューターにより実行される比較により補助されてもよい。
【０４４１】
用語「被験体」は、心不全を診断する方法に関連して上で定義されている。好ましくは、心不全治療をモニタリングする方法に従い処置される被験体は、心不全に罹患している。さらに、前述の方法に関連して説明される被験体は、心不全について処置され、これにより、心不全治療を受ける。好ましくは、前記被験体は、急性代償不全に罹患していない。
【０４４２】
前述の方法に関連して本明細書で使用される用語「心不全治療をモニタリングすること」は、被験体が前記治療に応答するか否かを評価することに、好ましくは関する。したがって、被験体が前記治療から恩恵を受けるか否かが評価される。好ましくは、第1のスコアと比較した第2のスコアの低減は、心不全治療に応答する被験体を示す。対照的に、第1のスコアと比較した第2のスコアの増大は、心不全治療に応答しない被験体を示す。好ましくは、前述の方法を行うことにより、前記被験体における心不全治療が、継続されるか、止められるか、又は修正されるかの決定を行うことができる。
【０４４３】
好ましくは、前記治療が、心不全に関する被験体の状態を改善するなら、被験体は心不全治療に応答する。好ましくは、前記治療が、心不全に関する被験体の状態を改善しないなら、被験体は前記治療に応答しない。この場合、治療は、被験体への顕著な恩恵なく、被験体を副作用のリスクにさらし得る(それにより、無駄な医療費負担を生じる)。
【０４４４】
用語「心不全治療」は、本明細書で使用される場合、心不全の処置のための任意の治療を好ましくは含む。好ましい治療は、薬物ベースの治療である。好ましくは、心不全の治療は、ACE阻害剤(ACEI)、ベータ遮断薬、AT1-阻害剤、アルドステロン拮抗薬、レニン拮抗薬、利尿薬、Ca-増感剤、ジギタリスグリコシド、抗血小板薬、及びビタミンK拮抗薬からなる群から選択される、少なくとも1つの薬物の投与を含むか又はからなる治療である。
【０４４５】
あるいは、治療は、心室補助デバイスのような補助デバイスでの治療であってもよい。
【０４４６】
用語「スコア」は、心不全を診断する方法に関連して説明されている。説明は状況に応じて適用する。
【０４４７】
用語「サンプル」は、本明細書の他所で記載されている。定義は状況に応じて適用する。前述の方法との関連で、本明細書で言及される少なくとも3つのバイオマーカーの量は、第1及び第2のサンプルにおいて決定される。好ましくは、第1のサンプルは、心不全治療の開始前、又はより好ましくは、心不全治療の開始後に得られたか/得られる。
【０４４８】
第1のサンプルが、心不全治療の開始前に得られたなら、それは前記開始の直前に得られることが、好ましい。好ましくは、心不全治療を開始する前、1週未満内、又はより好ましくは、3日未満内、又は最も好ましくは1日未満内に得られているなら、サンプルが心不全治療の開始の直前に得られたと見なされる。
【０４４９】
「第2のサンプル」は、第2のスコア(すなわち、第2のサンプルにおけるスコア)の第1のスコア(すなわち、第1のサンプルにおけるスコア)に対する変化を反映するために得られるサンプルとして特に理解される。したがって、第2のサンプルは、第1のサンプルの後、好ましくは得られている。当然、第2のサンプルは、心不全治療の開始後に得られている。第2のサンプルは、心不全治療をモニタリングすることを可能にするよう、スコアの十分に有意な変化を観察するために第1のサンプルの後あまりに早く得られていないことが理解される。それ故、第2のサンプルは、第1のサンプルが得られた後、少なくとも1週で、又はより好ましくは少なくとも2週で、又はなおより好ましくは少なくとも1カ月若しくは2カ月で、又は最も好ましくは少なくとも3カ月で好ましくは得られている。また好ましくは、第2のサンプルは、第1のサンプルの後、1週〜3カ月の期間内に得られることが予期される。
【０４５０】
第1のサンプルが、心不全治療の開始前に得られているなら、第2のサンプルは、心不全治療の開始後、好ましくは少なくとも1週で、又はより好ましくは少なくとも2週で、又はなおより好ましくは少なくとも1カ月若しくは2カ月で、又は最も好ましくは少なくとも3カ月で得られる。
【０４５１】
ステップ(a)において言及される前記第1のサンプル中の少なくとも3つのバイオマーカー(及び場合によりBNP又はNT-proBNP)の量の決定は、ステップ(b)において言及される前記第2のサンプル中の量の決定の数日前又は数週間前に行われてもよいことは、上記から明らかであろう。それ故、心不全をモニタリングする方法のステップ(a)、(b)、及び(c)は、次々に、制限された時間枠で行うことを必要としないが、数日、数週、又はたとえ数カ月というより長い期間に十分広げられていてよい。したがって、前述の方法は、2つのサンプルを得る間の間隔に依存して、短期、中期、及びまた長期モニタリングを可能にすることが理解される。したがって、第2のサンプルは、第1のサンプルの後、1日〜2年又はそれ以上の期間内に得られてもよい。1つの好ましい実施形態では、第2のサンプルは、第1のサンプルの後、1日、又は2日、特に1〜2日の期間内に得られている(それは、短期モニタリングを可能にする)。1つの別の好ましい実施形態では、第2のサンプルは、第1のサンプルの後、1カ月、又は2カ月、特に1〜2カ月の期間内に得られている(それは、中期モニタリングを可能にする)。さらに好ましい実施形態では、第2のサンプルは、第1のサンプルの後、6カ月、又は12カ月、特に6〜12カ月又はそれ以上の期間内に得られている(それは、長期モニタリングを可能にする)。
【０４５２】
モニタリングされる被験体由来のサンプル中のスコアの経時的変化を評価することも想定される。したがって、前述の方法は、前記被験体由来の少なくとも1つのさらなるサンプル中(したがって、第3のサンプル中、第4のサンプル中、第5のサンプル中等)の少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定すること、少なくとも1つのさらなるスコアを計算すること、並びにこうして計算されたスコアを、前記少なくとも1つのさらなるサンプルが得られる前に計算された、第1及び/若しくは第2のスコア、並びに/又は任意のスコアと比較することの、追加のステップを含んでもよい。サンプルを得るための好ましい時間間隔について、上記を参照されたい。
【０４５３】
好ましくは、被験体が心不全治療に応答するか否かの評価は、被験体由来の第2のスコアの第1のスコアとの比較に基づく。
【０４５４】
第1のスコアと比較した第2のスコアの、好ましくは低減、より好ましくは有意な低減、及び最も好ましくは統計的に有意な低減は、心不全治療に応答する被験体を示す。
【０４５５】
有意な低減は、好ましくは、心不全をモニタリングするため有意であると見なされる、サイズの低減である。具体的には、前記低減は、統計的に有意と見なされる。用語「有意な」及び「統計的に有意な」は、当業者に公知である。したがって、低減が有意、又は統計的に有意であるかどうかを、様々な周知の統計的評価ツールを使用した当業者によりさらなる困難を伴わずに決定することができる。心不全治療に応答する被験体を示す、スコアの好ましい有意な低減は、本明細書の以下に示される。
【０４５６】
好ましくは少なくとも5％の、少なくとも10％の、より好ましくは少なくとも20％の、なおより好ましくは少なくとも30％の、及び最も好ましくは少なくとも40％の第1のスコアと比較した第2のスコアの低減が、有意であり、したがって、心不全治療に応答する被験体を示すと見なされる。また好ましくは少なくとも0.05の、少なくとも0.10の、より好ましくは少なくとも0.15の、及び最も好ましくは少なくとも0.2の、第1のスコアと比較した第2のスコアの低減が、有意であり、したがって、心不全治療に応答する被験体を示すと見なされる。
【０４５７】
上で説明された通り、第1のスコアと比較した第2のスコアの増大(又は特に第1のスコアと比較して本質的に変化していない第2のスコア)は、心不全治療に応答しない被験体を示す。
【０４５８】
本発明の実施形態/項目
明細書及び/又は請求項に与えられた定義及び説明は、好ましくは、以下の好ましい本発明の実施形態/項目に準用する。
【０４５９】
1. 心不全の診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて、少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するステップであって、前記少なくとも3つのバイオマーカーは、以下：
i. 少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカー、及び少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカー;
ii. 少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカー、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー;
iii. 少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカー、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー;
iv. 少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカー、少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカー、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー;
v. コレステリルエステルC18:2、SSS及びCer(d17:1/24:0);
vi. SM2、SM3、SM5、SM18、SM23、SM24、及びSM28からなる群から選択される少なくとも2つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、並びにSOP2、SPP1及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー(又は代替的に、SOP2、SPP1及びPPPからなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー);
vii. OSS2、SOP2、SPP1及びSSP2からなる群から選択される少なくとも2つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びにSM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー;
viii. SM18、SM24及びSM28; 又は
ix. 表2のパネル1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、又は199のバイオマーカー、
x. 表2aのパネル200、201、202、203、204、205、又は206のバイオマーカー
である、ステップ、並びに
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含み、
i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーは、SOP2、OSS2、SPP1、SSP2、PPO1及びPPPからなる群から選択され、i.、iii.、及びiv.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーは、コレステリルエステルC18:2及びコレステリルエステルC18:0からなる群から選択され、i.、ii.及びiv.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーは、PC4及びPC8からなる群から選択され、並びにii.、iii.、及びiv.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーは、SM18、SM24、SM23、SM21、SM28、SM5、SM3、SM29及びSM8からなる群から選択される、方法。
【０４６０】
2. 心不全が、左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である、実施形態1に記載の方法。
【０４６１】
3. 少なくとも、実施形態1のi.、ii.、iii.、vi、vii. ix又はx.の(特に、i.、ii.、iii.、vi.、vii.又はixの)バイオマーカーの量が決定され、かつ、i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーが、SOP2、OSS2、SSP2、PPO1及びPPPからなる群から選択され、並びに/又は(特に「並びに」)i.、及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーが、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーが、PC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーが、SM18、SM24、SM23、SM28、SM5、及びSM3からなる群から選択される、実施形態1及び2に記載の方法。
【０４６２】
4. 少なくとも、表2におけるパネル1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、又は56のバイオマーカーの量が決定される、実施形態1〜3のいずれか1つに記載の方法。
【０４６３】
5. 少なくとも、i.、ii.、iii、vi、ix又はx.のバイオマーカーの量が決定され、かつ、i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーが、SOP2及び/若しくはOSS2であり、並びに/又は(特に「並びに」)i.、及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーが、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーが、PC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーが、SM18、SM24、SM23、及びSM3からなる群から選択される、実施形態1〜4のいずれか1つに記載の方法。
【０４６４】
6. 少なくとも、表2におけるパネル1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17又は18のバイオマーカーの量が決定される、実施形態1〜5のいずれか1つに記載の方法。
【０４６５】
7. 少なくとも、i.、ii.、iii、vi、ix又はx.の(特に、i.、ii、iii、又はvi.の)バイオマーカーの量が決定され、かつ、i.、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーが、SOP2及び/若しくはOSS2であり、並びに/又は(特に「並びに」)i.、及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーが、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーが、PC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーが、SM23である、実施形態1〜6のいずれか1つに記載の方法。
【０４６６】
8. 少なくとも、表2におけるパネル1、2、3又は4のバイオマーカーの量が決定される、実施形態1〜7のいずれか1つに記載の方法。
【０４６７】
9. 少なくとも、OSS2、PC4及びSM23の量が決定され、特に、少なくとも、OSS2、PC4及びSM23の量、並びにNT-proBNP若しくはBNPの量が決定される、実施形態1〜7のいずれか1つに記載の方法。
【０４６８】
10. 少なくとも、OSS2、コレステリルエステルC18:2及びSM23の量が決定される、実施形態1〜7のいずれか1つに記載の方法。
【０４６９】
11. 少なくとも、iii.のバイオマーカーの量が決定され、かつ、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーが、SOP2及び/若しくはOSS2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーが、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーが、SM23である、実施形態1〜7のいずれか1つに記載の方法。
【０４７０】
12. 少なくとも、SOP2、OSS2、PC4、コレステリルエステルC18:2、SM18、SM28、SM24、SSP2、及びSM23の量が決定される、実施形態1〜11のいずれか1つに記載の方法。
【０４７１】
13. 左心室駆出率の低下を有する心不全が、DCMP(拡張型心筋症)である、実施形態2〜12の、特に実施形態2〜4のいずれか1つに記載の方法。
【０４７２】
14. 少なくとも、i.、ii.、iii.又はviiに、特に、i.、ii.、又はiii.に示されるバイオマーカーの量が決定され、かつ、i.、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーが、SOP2、OSS2、及びSSP2からなる群から選択され、並びに/又は(特に「並びに」)i.及びiii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーが、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)i.及びii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーが、PC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーが、SM24、SM23、SM28、及びSM3からなる群から選択される、実施形態13に記載の方法。
【０４７３】
15. 少なくとも、表2におけるパネル19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35又は36のバイオマーカーの量が決定される、実施形態13及び14に記載の方法。
【０４７４】
16. 少なくとも、ii.又はiii.に示されるバイオマーカーの量が決定され、かつ、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーが、SOP2及び/若しくはOSS2であり、並びに/又は(特に「並びに」)iii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーが、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーが、PC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーが、SM23及び/若しくはSM24である、実施形態13〜15のいずれか1つに記載の方法。
【０４７５】
17. 少なくとも、表2におけるパネル31、32、33、34、35及び36のバイオマーカーの量が決定される、実施形態13〜16のいずれか1つに記載の方法。
【０４７６】
18. 左心室駆出率の低下を有する心不全が、ICMP(虚血性心筋症)である、実施形態2〜12の、特に実施形態2〜4のいずれか1つに記載の方法。
【０４７７】
19. 少なくとも、ii.、iii.又はviに、特にii.、又はiii.に示されるバイオマーカーの量が決定され、かつ、ii.及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーが、SOP2及び/若しくはOSS2であり、(特に「並びに」)iii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーが、コレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーが、PC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーが、SM18、SM24、及びSM23からなる群から選択される、実施形態18に記載の方法。
【０４７８】
20. 少なくとも、表2におけるパネル37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55又は56のバイオマーカーの量が決定される、実施形態18及び19に記載の方法。
【０４７９】
21. 少なくとも、iii.に示されるバイオマーカーの量が決定され、かつ、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSOP2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーがコレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM18及び/若しくはSM23である、実施形態18〜20のいずれか1つの記載の方法。
【０４８０】
22. 少なくとも、表2におけるパネル51、52、53、54、55又は56のバイオマーカーの量が決定される、実施形態18〜21のいずれか1つに記載の方法。
【０４８１】
23. HFrEFが無症候性である(又は被験体が心不全の症状を示さない)、実施形態2〜23の、特に実施形態2〜4のいずれか1つに記載の方法。
【０４８２】
24. 少なくとも、ii.、iii. vi、vii.、ix又はx.の(特にii、iii、vi、vii、又はix.の)バイオマーカーの量が決定され、かつ、ii.、及びiii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択され、並びに/又は(特に「並びに」)iii.における少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーがコレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーがPC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.及びiii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM24及びSM23からなる群から選択される、実施形態23に記載の方法。
【０４８３】
25. 少なくとも、表2におけるパネル7、8、9、10、11、12、19、20、21、22、23、24、37、38、39、40、41又は42のバイオマーカーの量が決定される、実施形態23及び24に記載の方法。
【０４８４】
26. 少なくとも、実施形態1のiii.又はvi.の(特にiii.の)バイオマーカーの量が決定され、かつ、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSOP2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーがコレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM24及びSM23からなる群から選択される、実施形態23〜25の、特に実施形態23及び24のいずれか1つに記載の方法。
【０４８５】
27. 少なくとも、表2におけるパネル7、8、9、10、11、又は12のバイオマーカーの量が決定される、実施形態26に記載の方法。
【０４８６】
28. DCMPが無症候性である(又は被験体が心不全の症状を示さない)、実施形態13〜17のいずれか1つに記載の、特に実施形態13、14及び16のいずれか1つに記載の方法。
【０４８７】
29. 少なくとも、実施形態1におけるiii.のバイオマーカーの量が決定され、かつ、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSOP2及びOSS2からなる群から選択され、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーがコレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM23である、実施形態28に記載の方法。
【０４８８】
30. 少なくとも、表2におけるパネル19、20、21、22、23又は24のバイオマーカーの量が決定される、実施形態28又は29に記載の方法。
【０４８９】
31. ICMPが無症候性である(又は被験体が心不全の症状を示さない)、実施形態18又は22に記載の方法。
【０４９０】
32. 少なくとも、iii.又はviの(特にiii.の)バイオマーカーの量が決定され、かつ、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSOP2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのコレステリルエステルバイオマーカーがコレステリルエステルC18:2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM24及びSM23からなる群から選択される、実施形態31に記載の方法。
【０４９１】
33. 少なくとも、表2におけるパネル37、38、39、40、41又は42のバイオマーカーの量が決定される、実施形態31又は32に記載の方法。
【０４９２】
34. 心不全が、駆出率の維持を有する心不全(HFpEF)である、実施形態1に記載の方法。
【０４９３】
35. 少なくとも、実施形態1のii.、vi、又はvii.のバイオマーカーの量が決定され、かつ、ii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSOP2、SSP2、SPP1及びPPO1からなる群から選択され、並びに/又は(特に「並びに」)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーがPC4及びPC8からなる群から選択され、並びに/又は(特に「並びに」)ii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM18、SM24、SM23、SM28、SM5、及びSM3からなる群から選択される、実施形態34に記載の方法。
【０４９４】
36. 少なくとも、表2におけるパネル79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101又は102のバイオマーカーの量が決定される、実施形態35に記載の方法。
【０４９５】
37. 少なくとも、実施形態1のii.のバイオマーカーの量が決定され、かつ、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSSP2、SPP1及びPPO1からなる群から選択され、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーがPC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM24、SM5、及びSM3からなる群から選択される、実施形態35又は36に記載の方法。
【０４９６】
38. 少なくとも、表2におけるパネル79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99又は101のバイオマーカーの量が決定される、実施形態37に記載の方法。
【０４９７】
39. 少なくとも、実施形態1のii.のバイオマーカーの量が決定され、かつ、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSSP2であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーがPC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM24及びSM5からなる群から選択される、実施形態35〜38のいずれか1つに記載の、特に実施形態34〜37のいずれか1つに記載の方法。
【０４９８】
40. 少なくとも、表2におけるパネル95、97、99又は101のバイオマーカーの量が決定される、実施形態39に記載の方法。
【０４９９】
41. HFpEFが無症候性である、実施形態34〜37のいずれか1つに記載の、特に実施形態34〜36のいずれか1つに記載の方法。
【０５００】
42. 少なくとも、実施形態1のii.又はvii.の(特にii.の)バイオマーカーの量が決定され、かつ、少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSPP1及びSSP2からなる群から選択され、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーがPC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM5及びSM3からなる群から選択される、実施形態41に記載の方法。
【０５０１】
43. 少なくとも、表2におけるパネル79、80、81、82、83、84、85又は86のバイオマーカーの量が決定される、実施形態41又は42に記載の方法。
【０５０２】
44. ii.における少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカーがSPP1であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.における少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーがPC4であり、並びに/又は(特に「並びに」)ii.における少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカーがSM5である、実施形態41〜43のいずれか1つに記載の方法。
【０５０３】
45. 少なくとも、表2におけるパネル79、81、83、又は85のバイオマーカーの量が決定される、実施形態41〜44のいずれか1つに記載の方法。
【０５０４】
46. 被験体がヒト被験体である、実施形態1〜45のいずれか1つに記載の方法。
【０５０５】
47. サンプルが血液、血清又は血漿である、実施形態1〜46のいずれか1つに記載の方法。
【０５０６】
48. NT-proBNP又はBNPの決定を含まない、実施形態1〜47のいずれか1つに記載の方法。
【０５０７】
49. 被験体に由来するサンプル/前記サンプルにおけるNT-proBNP若しくはBNPの量を決定するステップ、及びNT-proBNP若しくはBNPの量を参照と比較するステップをさらに含む、実施形態1〜47のいずれか1つに記載の方法。
【０５０８】
50. 交絡因子について補正を実施するステップをさらに含む、実施形態1〜49のいずれか1つに記載の方法。
【０５０９】
51. 交絡因子が年齢、BMI及び/又は性別、特に年齢、BMI及び性別である、実施形態50に記載の方法。
【０５１０】
52. ステップ(b)において、スコアが少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量に基づいて計算され、参照が参照スコアである、実施形態1〜51のいずれか1つに記載の方法。
【０５１１】
53. 参照又は参照スコアが、心不全に罹患していないことが知られている被験体又は被験体の群に由来する、実施形態1〜52のいずれか1つに記載の方法。
【０５１２】
54. 試験サンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値、又はスコアが、参照又は参照スコアと比較して本質的に同一であることは、心不全の非存在を示す、実施形態53に記載の方法。
【０５１３】
55. 参照又は参照スコアが、心不全に罹患していることが知られている被験体又は被験体の群に由来する、実施形態1〜52のいずれか1つに記載の方法。
【０５１４】
56. 試験サンプル中の見い出された少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値、又はスコアが、参照又は参照スコアと比較して本質的に同一であることは、心不全の存在を示す、実施形態55のいずれか1つに記載の方法。
【０５１５】
57. 少なくとも3つのバイオマーカーの量が、質量分析(MS)によって決定される、実施形態1〜56のいずれか1つに記載の方法。
【０５１６】
58. 質量分析がLC-MS、特にLC-MS/MS、又はHPLC-MS、特にHPLC-MS/MSである、実施形態57に記載の方法。
【０５１７】
59. 質量分析が、少なくとも3つのバイオマーカーがイオン化されるイオン化ステップを含む、実施形態57及び58に記載の方法。
【０５１８】
60. イオン化ステップが、エレクトロスプレーイオン化によって、特に陽イオンモードエレクトロスプレーイオン化によって実施される、実施形態59に記載の方法。
【０５１９】
61. 実施形態1〜60のいずれか1つに記載の方法を実施するための診断用デバイスであって、以下:
(a)実施形態1〜45のいずれか1つに記載の少なくとも3つのバイオマーカーについての少なくとも1つの検出器を含む分析ユニットであって、前記分析ユニットは、少なくとも1つの検出器によって検出される前記バイオマーカーの量を決定するために適合されている、分析ユニット、及びそれと作動可能に結合された、
(b)少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量と参照量(又は参照スコア)との比較を実施するための実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含むコンピューターと、前記バイオマーカーについての前記参照量を含むデータベースとを含む評価ユニットであって、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される、評価ユニット
を含む、診断用デバイス。
【０５２０】
62. 心不全を診断するための、又は心不全を診断するための医薬及び/若しくは診断用組成物の調製のための、被験体のサンプルにおける実施形態1〜45のいずれか1つに記載の少なくとも3つのバイオマーカーの使用。
【０５２１】
63. HFrEFが、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全である、実施形態2〜33のいずれか1つに記載の方法、実施形態61に記載のデバイス、又は実施形態62に記載の使用。
【０５２２】
64. 被験体が太り過ぎである、実施形態1〜33若しくは63のいずれか1つに記載の方法、実施形態61若しくは63に記載のデバイス、又は実施形態62若しくは63に記載の使用。
【０５２３】
65. 被験体が54歳より上の年齢である、実施形態1〜33若しくは63のいずれか1つに記載の方法、実施形態61若しくは63に記載のデバイス、又は実施形態62若しくは63に記載の使用。
【０５２４】
66. 被験体が女性被験体であり、54歳より上の年齢であり、かつ25.0kg/m2未満のボディマスインデックスを有する、実施形態1〜33若しくは63のいずれか1つに記載の方法、実施形態61若しくは63に記載のデバイス、又は実施形態62若しくは63に記載の使用。
【０５２５】
67. 被験体が61歳より下の年齢であり、かつ、26.8kg/m2を超えるボディマスインデックスを有する、実施形態1〜33若しくは63のいずれか1つに記載の方法、実施形態61若しくは63に記載のデバイス、又は実施形態62若しくは63に記載の使用。
【０５２６】
本発明のさらなる好ましい項目
1. 心不全の診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するステップであって、前記少なくとも3つのバイオマーカーが、以下：
i. SM18、SM21、SM23、SM24、SM28、SM3、SM5、SM2、SM9及びSM10からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー(SM)、特に、SM18、SM21、SM23、SM24、SM28、SM3及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン(SM)バイオマーカー、
ii. OSS2、PPO1、SOP2、SSP2及びSPP1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特に、OSS2、PPO1、SOP2、及びSSP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、及び
iii. Cer(d16:1/24:0)、Cer(d18:1/24:1)、コレステリルエステルC18:2、PC4、PC8、Cer(d18:2/24:0)、Cer(d17:1/24:0)及びグルタミン酸1からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特に、Cer(d16:1/24:0)、Cer(d18:1/24:1)、コレステリルエステルC18:2、及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー
である、ステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０５２７】
2. 少なくとも、以下の量が決定される、項目1に記載の方法：
i. SM28、SM23、SM21、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及び/若しくはOSS2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4。
【０５２８】
3. 少なくとも、以下の量が決定される、項目1又は2に記載の方法：
i. SM28、SM21、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM28、又はSM18、SM21、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM18、並びに
ii. SOP2、並びに
iii. PC4。
【０５２９】
4. 心不全が無症候性心不全であり、及び/又は被験体が心不全の症状を示さない、項目1〜3のいずれか1つに記載の方法。
【０５３０】
5. 少なくとも、以下の量が決定される、項目4に記載の方法：
i. SM18、SM2、SM23、SM24、SM28、SM3、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、PPO1、SOP2、SSP2及びSPP1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. Cer(d16:1/24:0)、コレステリルエステルC18:2、PC4及びグルタミン酸1からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０５３１】
6. 少なくとも、以下の量が決定される、項目4及び5に記載の方法：
i. SM23、SM2、及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4、特にコレステリルエステルC18:2。
【０５３２】
7. 少なくとも、SM23及び/若しくはSM2の、特にSM23の、SOP2の、並びにPC4の量が決定される、項目4〜6のいずれか1つに記載の方法。
【０５３３】
8. 心不全が症候性心不全であり、及び/又は被験体が心不全の症状を示す、項目1〜3のいずれか1つに記載の方法。
【０５３４】
9. 少なくとも、以下の量が決定される、項目8に記載の方法：
i. SM10、SM18、SM21、SM23、SM24、SM28、SM3及びSM9からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、PPO1、SOP2、SSP2及びSPP1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. Cer(d16:1/24:0)、Cer(d18:1/24:1)、Cer(d17:1/24:0)、Cer(d18:2/24:0)、コレステリルエステルC18:2、PC4及びPC8からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０５３５】
10. 少なくとも、以下の量が決定される、項目8及び9に記載の方法：
i. SM18、SM3、SM24、及びSM23からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM18、
ii. SOP2及び/若しくはOSS2、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4、特にPC4。
【０５３６】
11. 少なくとも、SM18及び/若しくはSM24、SOP2、並びにPC4の量が決定される、項目8〜10のいずれか1つに記載の方法。
【０５３７】
12. 心不全が、左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である、項目1〜11のいずれか1つに記載の方法。
【０５３８】
13. 少なくとも、以下の量が決定される、項目12に記載の方法：
i. SM23、SM18、SM24、SM28、SM2及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23、SM18、SM24、及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2及び/又はSOP2、特にOSS2、
iii. コレステリルエステルC18:2及び/又はPC4。
【０５３９】
14. 少なくとも、SM23、OSS2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、項目12及び13に記載の方法。
【０５４０】
15.HFrEFが無症候性HFrEFであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示さない、項目12〜14のいずれか1つに記載の方法。
【０５４１】
16. 少なくとも、以下の量が決定される、項目15に記載の方法：
i. SM23、SM18、SM2、SM24及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、及び
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０５４２】
17. 少なくとも、SM23、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、項目15及び16に記載の方法。
【０５４３】
18.HFrEFが症候性HFrEFであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示す、項目12〜14のいずれか1つに記載の方法。
【０５４４】
19. 少なくとも、以下の量が決定される、項目18に記載の方法：
i.SM18、SM23、SM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー又はSM28、SM23及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、及び
iii. コレステリルエステルC18:2及び/又はPC4。
【０５４５】
20. 少なくとも、SM18及び/若しくはSM28の、OSS2の、並びにコレステリルエステルC18:2の量が決定される、項目18及び19に記載の方法。
【０５４６】
21. 左心室駆出率の低下を有する心不全がDCMP(拡張型心筋症)である、項目12〜14のいずれか1つに記載の方法。
【０５４７】
22. 少なくとも、以下の量が決定される、項目21に記載の方法：
i. SM23、SM24、SM28、及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23、SM24、及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及び/若しくはOSS2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4。
【０５４８】
23. 少なくとも、SM23の、SOP2の、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、項目21及び22に記載の方法。
【０５４９】
24.DCMPが無症候性DCMPであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示さない、項目21〜23に記載の方法。
【０５５０】
25. 少なくとも、以下の量が決定される、項目21に記載の方法：
i. SM23、
ii. OSS2及び/若しくはSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０５５１】
26. 少なくとも、SM23、OSS2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、項目24及び25に記載の方法。
【０５５２】
27.DCMPが症候性DCMPであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示す、項目21〜23に記載の方法。
【０５５３】
28. 少なくとも、以下の量が決定される、項目27に記載の方法：
i. SM28及び/若しくはSM3、
ii. SOP2及び/若しくはOSS2、並びに
iii. PC4。
【０５５４】
29. 少なくとも、SM28、SOP2の、及びPC4の量が決定される、項目27及び28に記載の方法。
【０５５５】
30. 左心室駆出率の低下を有する心不全が、ICMP(虚血性心筋症)である、項目12〜14のいずれか1つに記載の方法。
【０５５６】
31. 少なくとも、以下の量が決定される、項目30に記載の方法：
i. SM23、SM24、SM28及びSM18からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23、SM24、及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、及び
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０５５７】
32. 少なくとも、SM23、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、項目30及び31に記載の方法。
【０５５８】
33.ICMPが症候性ICMPであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示す、項目31及び32に記載の方法。
【０５５９】
34. 少なくとも、SM18、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、項目33に記載の方法。
【０５６０】
35. 無症候性心不全の診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて、以下の量：
i. SM23、SM2、及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2、PC4、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、
を決定するステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０５６１】
36. 無症候性ICMPの診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて、SM24、SM5、SM23、SOP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも3つのマーカーの量を決定するステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０５６２】
37. 少なくとも、以下の量が決定される、項目36に記載の方法：
i. SM24、SM5及びSOP2、又は
ii. SM23、SM5及びPPO1。
【０５６３】
38. 被験体がヒト被験体である、項目1〜37のいずれか1つに記載の方法。
【０５６４】
39. サンプルが血液、血清又は血漿である、項目1〜38のいずれか1つに記載の方法。
【０５６５】
40. NT-proBNP又はBNPの決定を含まない、項目1〜39のいずれか1つに記載の方法。
【０５６６】
41. 被験体に由来するサンプル/前記サンプルにおけるNT-proBNP若しくはBNPの量を決定するステップ、及びNT-proBNP若しくはBNPの量を参照と比較するステップをさらに含む、項目1〜39のいずれか1つに記載の方法。
【０５６７】
42. 交絡因子について補正を実施するステップをさらに含む、項目1〜41のいずれか1つに記載の方法。
【０５６８】
43. 交絡因子が年齢、BMI及び/又は性別、特に年齢、BMI及び性別である、項目42に記載の方法。
【０５６９】
44. ステップ(b)において、スコアが少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量に基づいて計算され、参照が参照スコアである、項目1〜43のいずれか1つに記載の方法。
【０５７０】
45. 参照又は参照スコアが、心不全に罹患していないことが知られている被験体又は被験体の群に由来する、項目1〜44のいずれか1つに記載の方法。
【０５７１】
46. 試験サンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値、又はスコアが、参照又は参照スコアと比較して本質的に同一であることは、心不全の非存在を示す、項目45に記載の方法。
【０５７２】
47. 参照又は参照スコアが、心不全に罹患していることが知られている被験体又は被験体の群に由来する、項目1〜44のいずれか1つに記載の方法。
【０５７３】
48. 試験サンプル中の見い出された少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値、又はスコアが、参照又は参照スコアと比較して本質的に同一であることは、心不全の存在を示す、項目47のいずれか1つに記載の方法。
【０５７４】
49. 少なくとも3つのバイオマーカーの量が、質量分析(MS)によって決定される、項目1〜48のいずれか1つに記載の方法。
【０５７５】
50. 質量分析がLC-MS、特にLC-MS/MS、又はHPLC-MS、特にHPLC-MS/MSである、項目49に記載の方法。
【０５７６】
51. 質量分析が、少なくとも3つのバイオマーカーがイオン化されるイオン化ステップを含む、項目49及び50に記載の方法。
【０５７７】
52. イオン化ステップが、エレクトロスプレーイオン化によって、特に陽イオンモードエレクトロスプレーイオン化によって実施される、項目51に記載の方法。
【０５７８】
53. 項目1〜52のいずれか1つに記載の方法を実施するための診断用デバイスであって、以下:
(a)項目1〜37のいずれか1つに記載の少なくとも3つのバイオマーカーについての少なくとも1つの検出器を含む分析ユニットであって、前記分析ユニットは、少なくとも1つの検出器によって検出される前記バイオマーカーの量を決定するために適合されている、分析ユニット、及びそれと作動可能に結合された、
(b)少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量と参照量(又は参照スコア)との比較を実施するための実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含むコンピューターと、前記バイオマーカーについての前記参照量を含むデータベースとを含む評価ユニットであって、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される、評価ユニット
を含む、診断用デバイス。
【０５７９】
54. 心不全を診断するための、又は心不全を診断するための医薬及び/若しくは診断用組成物の調製のための、被験体のサンプルにおける項目1〜37のいずれか1つに記載の少なくとも3つのバイオマーカーの使用。
【０５８０】
55. HFrEFが、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全である、項目2〜52のいずれか1つに記載の方法、実施形態53に記載のデバイス、又は実施形態54に記載の使用。
【０５８１】
56. 項目1〜27のいずれか1つに記載の少なくとも3つのバイオマーカーを含む組成物。
【０５８２】
57. 項目56に記載の組成物を含む、キャリブレーション溶液。
【０５８３】
58. 項目56に記載の組成物と、脱脂血清若しくは脱脂血漿とを含む、キャリブレーションサンプル。
【０５８４】
本発明のさらなる好ましい実施形態
1. 心不全の診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて、量、好ましくは、少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するステップであって、前記少なくとも3つのバイオマーカーは、以下：
i. SM18、SM23、SM24、SM3、SM5、SM2、及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン(SM)バイオマーカー、特に、SM18、SM23、SM24、SM3、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン(SM)バイオマーカー、
ii. OSS2、SOP2、SSP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特に、OSS2及びSOP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、及び
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー
である、ステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０５８５】
2. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態1に記載の方法：
i. SM18、SM23、SM24、SM3、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii.OSS2及びSOP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０５８６】
3. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態1又は2に記載の方法：
i. SM18、SM3、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM18、並びに
ii. OSS2及びSOP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にPC4。
【０５８７】
4. 心不全が無症候性心不全であり、及び/又は被験体が心不全の症状を示さない、実施形態1〜3のいずれか1つに記載の方法。
【０５８８】
5. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態4に記載の方法：
i. SM18、SM2、SM23、SM24、SM28、及びSM5からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、PPO1、SOP2、及びSSP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０５８９】
6. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態4及び5に記載の方法：
i. SM23、SM24、SM18、及びSM2からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2。
【０５９０】
7. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態4〜6のいずれか1つに記載の方法：
i. SM23、SM18、及びSM2からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及び/若しくはPC4、特にコレステリルエステルC18:2。
【０５９１】
8. 心不全が症候性心不全であり、及び/又は被験体が心不全の症状を示す、実施形態1〜3のいずれか1つに記載の方法。
【０５９２】
9. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態8に記載の方法：
i. SM18、SM23、SM24、SM28、及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2及びSOP2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０５９３】
10. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態8及び9に記載の方法：
i. SM18、
ii. SOP2、及び
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０５９４】
11. 少なくとも、SM18及び/若しくはSM24、特にSM18の、SOP2の、並びにPC4の量が決定される、実施形態8〜10のいずれか1つに記載の方法。
【０５９５】
12. 心不全が、左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である、実施形態1〜11のいずれか1つに記載の方法。
【０５９６】
13. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態12に記載の方法：
i. SM23、SM18、SM3、SM24、SM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23及びSM18からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. OSS2、SOP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にOSS2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０５９７】
14. 少なくとも、SM23、OSS2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、実施形態12及び13に記載の方法。
【０５９８】
15. HFrEFが無症候性HFrEFであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示さない、実施形態12〜14のいずれか1つに記載の方法。
【０５９９】
16. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態15に記載の方法：
i. SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2、及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2。
【０６００】
17. 少なくとも、SM23、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、実施形態15及び16に記載の方法。
【０６０１】
18. HFrEFが症候性HFrEFであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示す、実施形態12〜14のいずれか1つに記載の方法。
【０６０２】
19. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態18に記載の方法：
i. SM18、SM23、SM3、SM28及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM18、SM23及びSM3からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリン、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０６０３】
20. 少なくとも、SM18の、OSS2の、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、実施形態18及び19に記載の方法。
【０６０４】
21. 左心室駆出率の低下を有する心不全がDCMP(拡張型心筋症)である、実施形態12〜14のいずれか1つに記載の方法。
【０６０５】
22. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態21に記載の方法：
i. SM23、SM24、SM3及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０６０６】
23. 少なくとも、SM23の、SOP2の、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、実施形態21及び22に記載の方法。
【０６０７】
24. DCMPが無症候性DCMPであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示さない、実施形態21〜23に記載の方法。
【０６０８】
25. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態21に記載の方法：
i. SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2。
【０６０９】
26. 少なくとも、SM23、OSS2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、実施形態24及び25に記載の方法。
【０６１０】
27. DCMPが症候性DCMPであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示す、実施形態21〜23に記載の方法。
【０６１１】
28. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態27に記載の方法：
i. SM3、SM24及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー。
【０６１２】
29. 少なくとも、SM3、OSS2の、及びPC4の量が決定される、実施形態27及び28に記載の方法。
【０６１３】
30. 左心室駆出率の低下を有する心不全がICMP(虚血性心筋症)である、実施形態12〜14のいずれか1つに記載の方法。
【０６１４】
31. 少なくとも、以下の量が決定される、実施形態30に記載の方法：
i. SM18、SM23、及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特に、SM18及びSM23からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2。
【０６１５】
32. 少なくとも、SM18、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、実施形態30及び31に記載の方法。
【０６１６】
33. ICMPが無症候性ICMPであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示さない、実施形態31及び32に記載の方法。
【０６１７】
34. i. SM24及びSM23からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2
が決定される、実施形態33に記載の方法。
【０６１８】
35. 少なくとも、SM24、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、実施形態33に記載の方法。
【０６１９】
36. ICMPが症候性ICMPであり、及び/又は被験体が心不全の症状を示す、実施形態31及び32に記載の方法。
【０６２０】
37. 少なくとも、SM18、SOP2、及びコレステリルエステルC18:2の量が決定される、実施形態33に記載の方法。
【０６２１】
38. 無症候性心不全の診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて、以下：
i. SM23、SM24、SM18、及びSM2からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2、OSS2、及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2、PC4、SM5及びSSP2からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2
の量を決定するステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０６２２】
39. 無症候性心不全の診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて、以下：
i. SM23、SM18、及びSM2からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2、及び
iii. SM5、コレステリルエステルC18:2、PC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にSM5
の量を決定するステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０６２３】
40. 無症候性HFrEFの診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて、以下：
i. SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、
ii. SOP2、及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びSM28からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2
の量を決定するステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０６２４】
41. 無症候性DCMPの診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて、以下：
i. SM23及びSM24からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM23、
ii. SOP2及びOSS2からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にOSS2、並びに
iii. コレステリルエステルC18:2及びSSP2、特にコレステリルエステルC18:2
の量を決定するステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０６２５】
42. 無症候性ICMPの診断方法であって、以下のステップ： 
a. 被験体のサンプルにおいて、以下：
i. SM24及びSM23からなる群から選択される少なくとも1つのスフィンゴミエリンバイオマーカー、特にSM24、
ii. SOP2及びPPO1からなる群から選択される少なくとも1つのトリアシルグリセリドバイオマーカー、特にSOP2、並びに
iii. SM5、コレステリルエステルC18:2及びPC4からなる群から選択される少なくとも1つのさらなるバイオマーカー、特にコレステリルエステルC18:2、特にSM5、又は特にPC4
の量を決定するステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０６２６】
43. 被験体がヒト被験体である、実施形態1〜42のいずれか1つに記載の方法。
【０６２７】
44. サンプルが血液、血清又は血漿である、実施形態1〜43のいずれか1つに記載の方法。
【０６２８】
45. NT-proBNP又はBNPの決定を含まない、実施形態1〜44のいずれか1つに記載の方法。
【０６２９】
46. 被験体に由来するサンプル/前記サンプルにおけるNT-proBNP若しくはBNPの量を決定するステップ、及びNT-proBNP若しくはBNPの量を参照と比較するステップをさらに含む、実施形態1〜44のいずれか1つに記載の方法。
【０６３０】
47. 交絡因子について補正を実施するステップをさらに含む、実施形態1〜46のいずれか1つに記載の方法。
【０６３１】
48. 交絡因子が年齢、BMI及び性別である、実施形態47に記載の方法。
【０６３２】
49. ステップ(b)において、スコアが少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量に基づいて計算され、参照が参照スコアである、実施形態1〜48のいずれか1つに記載の方法。
【０６３３】
50. 参照又は参照スコアが、心不全に罹患していないことが知られている被験体又は被験体の群に由来する、実施形態1〜49のいずれか1つに記載の方法。
【０６３４】
51. 試験サンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値、又はスコアが、参照又は参照スコアと比較して本質的に同一であることは、心不全の非存在を示す、実施形態50に記載の方法。
【０６３５】
52. 参照又は参照スコアが、心不全に罹患していることが知られている被験体又は被験体の群に由来する、実施形態1〜49のいずれか1つに記載の方法。
【０６３６】
53. 試験サンプル中の見い出された少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値、又はスコアが、参照又は参照スコアと比較して本質的に同一であることは、心不全の存在を示す、実施形態52のいずれか1つに記載の方法。
【０６３７】
54. 少なくとも3つのバイオマーカーの量が、質量分析(MS)によって決定される、実施形態1〜53のいずれか1つに記載の方法。
【０６３８】
55. 質量分析がLC-MS、特にLC-MS/MS、又はHPLC-MS、特にHPLC-MS/MSである、実施形態54に記載の方法。
【０６３９】
56. 質量分析が、少なくとも3つのバイオマーカーがイオン化されるイオン化ステップを含む、実施形態54及び55に記載の方法。
【０６４０】
57. イオン化ステップが、エレクトロスプレーイオン化によって、特に陽イオンモードエレクトロスプレーイオン化によって実施される、実施形態56に記載の方法。
【０６４１】
58. 実施形態1〜57のいずれか1つに記載の方法を実施するための診断用デバイスであって、以下:
(a)実施形態1〜42のいずれか1つに記載の少なくとも3つのバイオマーカーについての少なくとも1つの検出器を含む分析ユニットであって、前記分析ユニットは、少なくとも1つの検出器によって検出される前記バイオマーカーの量を決定するために適合されている、分析ユニット、及びそれと作動可能に結合された、
(b)少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量と参照量(又は参照スコア)との比較を実施するための実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含むコンピューターと、前記バイオマーカーについての前記参照量を含むデータベースとを含む評価ユニットであって、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される、評価ユニット
を含む、診断用デバイス。
【０６４２】
59. 心不全を診断するための、又は心不全を診断するための医薬及び/若しくは診断用組成物の調製のための、被験体のサンプルにおける実施形態1〜42のいずれか1つに記載の少なくとも3つのバイオマーカーの使用。
【０６４３】
60. HFrEFが、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全である、実施形態2〜57のいずれか1つに記載の方法、実施形態58に記載のデバイス、又は実施形態59に記載の使用。
【０６４４】
61. 実施形態1〜42のいずれか1つに記載の少なくとも3つのバイオマーカーを含む組成物。
【０６４５】
62. 実施形態61に記載の組成物を含む、キャリブレーション溶液。
【０６４６】
63. 実施形態61に記載の組成物と、脱脂血清若しくは脱脂血漿とを含む、キャリブレーションサンプル。
【０６４７】
パネル1についての項目
好ましい実施形態では、パネル1におけるバイオマーカーの量が決定される。診断される心不全は、NYHAクラスI又はIIとして分類され得る。好ましくは、決定は、HFrEFの診断のために、特に、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有するHFrEFの診断のために行われる。さらに、被験体が、心不全の症状を示さないことが想定される。
【０６４８】
さらに、少なくとも3つのバイオマーカーに加えて、NT-proBNPの量を決定することが想定される。好ましくは、交絡因子(特に、年齢、BMI及び性別)についての補正が実施されない。
【０６４９】
パネル1に関して、以下の項目が好ましい。上記の明細書に与えられた定義及び説明は、好ましくは、本発明の以下の好ましい項目に準用する。
【０６５０】
1. 心不全の診断方法であって、以下のステップ：
a. 被験体のサンプルにおいて、SM23、OSS2及びPC4の量を決定するステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０６５１】
2. 被験体が心不全の症状を示さない、項目1に記載の方法。
【０６５２】
3. 被験体が心不全の症状を示す、項目1に記載の方法。
【０６５３】
4. 心不全が、左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)であり、特に、前記HFrEFが無症候性HFrEFである、項目1〜3のいずれか1つに記載の方法。
【０６５４】
5. 前記心不全が、拡張型心筋症(DCMP)である、左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)であり、特に、前記DCMPが無症候性DCMPである、項目4に記載の方法。
【０６５５】
6. 前記心不全が、虚血性心筋症(ICMP)である、左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)であり、特に、前記ICMPが無症候性ICMPである、項目4に記載の方法。
【０６５６】
7. HFrEFが、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全である、項目2〜6のいずれか1つに記載の方法。
【０６５７】
8. 被験体がヒト被験体である、項目1〜7のいずれか1つに記載の方法。
【０６５８】
9. サンプルが血液、血清又は血漿である、項目1〜8のいずれか1つに記載の方法。
【０６５９】
10. NT-proBNP又はBNPの決定を含まない、項目1〜9のいずれか1つに記載の方法。
【０６６０】
11. 被験体に由来するサンプル/前記サンプルにおけるNT-proBNP若しくはBNPの量を決定するステップ、及びNT-proBNP若しくはBNPの量を参照と比較するステップをさらに含む、項目1〜9のいずれか1つに記載の方法。
【０６６１】
12. 交絡因子について補正を実施するステップをさらに含む、項目1〜11のいずれか1つに記載の方法。
【０６６２】
13. 交絡因子が年齢、BMI及び/又は性別である、特に年齢、BMI及び性別である、項目12に記載の方法。
【０６６３】
14. 交絡因子についての補正が実施されない、項目1〜11に記載の方法。
【０６６４】
15. 交絡因子である年齢、BMI及び性別についての補正が実施されない、項目14に記載の方法。
【０６６５】
16. ステップ(b)において、スコアが少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量に基づいて計算され、参照が参照スコアであり、スコアが参照スコアと比較される、項目1〜15のいずれか1つに記載の方法。
【０６６６】
17. 参照又は参照スコアが、心不全に罹患していないことが知られている被験体又は被験体の群に由来する、項目1〜16のいずれか1つに記載の方法。
【０６６７】
18. 試験サンプル中の少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値、又はスコアが、参照又は参照スコアと比較して本質的に同一であることは、心不全の非存在を示す、項目17に記載の方法。
【０６６８】
19. 参照又は参照スコアが、心不全に罹患していることが知られている被験体又は被験体の群に由来する、項目1〜16のいずれか1つに記載の方法。
【０６６９】
20. 試験サンプル中の見い出された少なくとも3つのバイオマーカーのそれぞれについての値、又はスコアが、参照又は参照スコアと比較して本質的に同一であることは、心不全の存在を示す、項目19のいずれか1つに記載の方法。
【０６７０】
21. 少なくとも3つのバイオマーカーの量が、質量分析(MS)によって決定される、項目1〜20のいずれか1つに記載の方法。
【０６７１】
22. 質量分析がLC-MS、特にLC-MS/MS、又はHPLC-MS、特にHPLC-MS/MSである、項目21に記載の方法。
【０６７２】
23. 質量分析が、少なくとも3つのバイオマーカーがイオン化されるイオン化ステップを含む、項目22及び23に記載の方法。
【０６７３】
24. イオン化ステップが、エレクトロスプレーイオン化によって、特に陽イオンモードエレクトロスプレーイオン化によって実施される、項目24に記載の方法。
【０６７４】
25. 被験体が太り過ぎである、項目1〜24のいずれか1つに記載の方法。
【０６７５】
26. 被験体が61歳より下の年齢であり、かつ、26.8kg/m2を超えるボディマスインデックスを有する、項目2〜33若しくは63のいずれか1つに記載の方法。
【０６７６】
27. 被験体が54歳より上の年齢である、項目1〜24のいずれか1つに記載の方法。
【０６７７】
28. 被験体が女性被験体であり、54歳より上の年齢であり、かつ25.0kg/m2未満のボディマスインデックスを有する、項目1〜24のいずれか1つに記載の方法。
【０６７８】
29. OSS2がTAG(C18:1, C18:0, C18:0)である、項目1〜28に記載の方法。
【０６７９】
30. 項目1〜29に記載の方法(ホスファチジルコリン(C16:0 C18:2))。
【０６８０】
31. SM23がスフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、(ii)スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、(iii)スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)、又は(iv)スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせである、項目1〜30のいずれか1つに記載の方法。
【０６８１】
32. SM23の量が、(i)スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)の量、スフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の量、又は特に、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせた量、の量を決定することによって決定される、項目31のいずれか1つに記載の方法。
【０６８２】
33. SM23の量が、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の組み合わせた量を決定することによって決定される、項目1〜33のいずれか1つに記載の方法。
【０６８３】
34. HFrEFの診断方法であって、以下のステップ：
a. 心不全の症状を示さない被験体の血液、血清又は血漿サンプルにおいて、バイオマーカーSM23、OSS2及びPC4の量、並びに場合によりNT-proBNPの量を決定するステップ、及び
b. ステップa.において決定された量を参照と比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０６８４】
35. HFrEFの診断方法であって、以下のステップ：
(a)心不全の症状を示さない被験体の血液、血清又は血漿サンプルにおいて、バイオマーカーSM23、OSS2及びPC4の量、並びに場合によりBNP若しくはNT-proBNPの量を決定するステップ、及び
(b1)バイオマーカーの決定された量、及び決定された場合には、BNP若しくはNT-proBNPの量に基づき、スコアを計算するステップ、及び
(b2)こうして計算されたスコアを参照スコアと比較するステップであって、それによって心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０６８５】
36. 交絡因子についての補正、特に、交絡因子である年齢、BMI及び性別についての補正が実施されない、項目34又は35に記載の方法。
【０６８６】
37. 被験体が、項目25〜28に定義される被験体である、項目34〜36のいずれか1つに記載の方法。
【０６８７】
38. HFrEFが、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全である、項目34〜37のいずれか1つに記載の方法。
【０６８８】
39. 項目1〜38のいずれか1つに記載の方法を実施するための診断用デバイスであって、以下:
(a)バイオマーカーSM23、OSS2及びPC4についての少なくとも1つの検出器を含む分析ユニットであって、前記分析ユニットは、少なくとも1つの検出器によって検出される前記バイオマーカーの量を決定するために適合されている、分析ユニット、及びそれと作動可能に結合された、
(b)バイオマーカーの決定された量と参照量との比較を実施するための実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含むコンピューターと、前記バイオマーカーについての前記参照量を含むデータベースとを含む評価ユニットであって、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される、評価ユニット
を含む、診断用デバイス。
【０６８９】
40. 心不全を診断するための、又は心不全を診断するための医薬及び/若しくは診断用組成物の調製のための、被験体のサンプルにおけるSM23、OSS2及びPC4の使用。
【０６９０】
41. 心不全が、項目4〜7のいずれか1つに記載の心不全である、項目40に記載の使用。
【０６９１】
42. 被験体が、項目25〜28のいずれか1つに定義される被験体である、項目40又は41に記載の使用。
【０６９２】
43. 被験体が、心不全の症状を示さない、項目40〜42のいずれか1つに記載の使用。
【０６９３】
44. PC4、OSS2及びSM27を含むか、又はPC4、OSS2及びSM23を含む、組成物。
【０６９４】
45. 実施形態44に記載の組成物を含む、キャリブレーション溶液。
【０６９５】
46. 実施形態44に記載の組成物、及び脱脂血清若しくは脱脂血漿を含む、キャリブレーションサンプル。
【０６９６】
パネル1についてのさらなる好ましい実施形態：
1. 被験体において心不全を診断するための診断用試験であって、以下：
a. ヒト被験体から得られた1つ以上の調製された血液、血清又は血漿サンプルであって、調製されたサンプルは、脂質バイオマーカーの検出のために処理されている、サンプル、
b. 少なくとも1つのバイオマーカーパネルのバイオマーカーを検出するための1つ以上の分析ユニットであって、
バイオマーカーパネルは、少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのホスファチジルコリン、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリンの量を検出することを含み、
少なくとも1つのスフィンゴミエリンはSM23を含み、少なくとも1つのトリアシルグリセリドはOSS2を含み、少なくとも1つのホスファチジルコリンはPC4を含み、
さらに、SM23は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の総量を含む、分析ユニット、
c. 患者医療記録情報を含有する1つ以上のデータベースであって、医療記録情報は被験体のBNP試験結果を含み、さらに、BNP試験結果は、被験体由来の血液、血清、又は血漿サンプルにおける、以下の脳性ナトリウム利尿ペプチド(BNP)、アミノ末端プロ脳性ナトリウム利尿ペプチド(NT-proBNP)、ANP(心房性ナトリウム利尿ペプチド)若しくはNT-proANP(プロホルモン脳性ナトリウム利尿ペプチドのN末端)の少なくとも1つの量を含む、データベース、
d. 以下についてのプログラムを含むコンピューターを含む評価ユニット：
i. (b)及び(c)の量に基づいて被験体についてスコア値を計算すること、及び
ii. ステップ(i)のスコア値を参照値と比較し、それによって被験体における心不全が診断されること
を含む、診断用試験。
【０６９７】
2. 診断用試験が、被験体において左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)を診断するために使用される、実施形態1に記載の診断用試験。
【０６９８】
3. HFrEFがDCMP又はICMPである、実施形態2に記載の診断用試験。
【０６９９】
4. HFrEFが、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全である、実施形態2に記載の診断用試験。
【０７００】
5. 少なくとも1つのバイオマーカーパネルにおけるバイオマーカーの量が、質量分析(MS)によって決定される、実施形態1に記載の診断用試験。
【０７０１】
6. 試験が、心不全の症状を示さない被験体に対して使用される、実施形態1に記載の診断用試験。
【０７０２】
7. 試験が、太り過ぎの被験体に対して使用される、実施形態1に記載の診断用試験。
【０７０３】
8. 試験が、54歳より上の年齢である被験体に対して使用される、実施形態1に記載の診断用試験。
【０７０４】
9. 試験が、女性被験体であり、54歳より上の年齢であり、かつ25.0kg/m2未満のボディマスインデックスを有する被験体に対して使用される、実施形態1に記載の診断用試験。
【０７０５】
10. 試験が、61歳より下の年齢であり、かつ26.8kg/m2を超えるボディマスインデックスを有する被験体に対して使用される、実施形態1に記載の診断用試験。
【０７０６】
11. 心不全の診断方法であて、以下のステップ：
a. ヒト被験体から少なくとも1つの血液、血漿、又は血清サンプルを得るステップ、
b. HPLC-MS/MS分析のために少なくとも1つのサンプルを処理するステップであって、少なくとも1つのサンプルは、抽出溶媒と組み合わされて、組み合わされたサンプルを作出し、抽出溶媒は、組み合わされたサンプル中のタンパク質から組み合わされたサンプル中の脂質を分離し、さらに、組み合わされたサンプルは、遠心分離を受けて、サンプルからタンパク質を除去し、HPLC-MS/MS分析のために処理されたサンプルを作出する、ステップ、
c. HPLC-MS/MS分析を使用して、被験体の少なくとも1つの処理されたサンプルにおいて、少なくとも1つのバイオマーカーパネルにおけるバイオマーカーの量を決定するステップであって、少なくとも1つのバイオマーカーパネルは、少なくとも3つのバイオマーカーを含み、さらに、少なくとも3つのバイオマーカーは、以下：
i. 少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのホスファチジルコリン、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン
を含み、ここで、少なくとも1つのスフィンゴミエリンはSM23を含み、少なくとも1つのトリアシルグリセリドはOSS2を含み、少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーはPC4を含み、さらに、SM23は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の総量を含む、ステップ、
d. 以下の方法の1つ以上を使用することによって被験体のBNP試験結果を得るステップ：
i. サンプル中の以下のタンパク質：NT-proBNP、BNP、ANP、又はNT-proANPの1つ以上の量を決定すること、ここで、1つ以上のタンパク質の量は抗体試験を使用して決定される、及び/又は
ii. サンプル中の以下のタンパク質：NT-proBNP、BNP、ANP、又はNT-proANPの1つ以上の量を決定すること、ここで、1つ以上のタンパク質の量は被験体の医療記録に由来し、及び/又は電子データベース中に保存されている、
e. ステップ(c)及び(d)において決定された量に基づいて被験体についてスコア値を計算するステップ、及び
f. ステップ(e)のスコア値を参照値と比較するステップであって、それによって被験体における心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【０７０７】
12. 心不全が、左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である、実施形態11に記載の方法。
【０７０８】
13. HFrEFがDCMP又はICMPである、実施形態12のいずれか1つに記載の方法。
【０７０９】
14. HFrEFが、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全である、実施形態12に記載の方法。
【０７１０】
15. サンプルが、血漿サンプルである、実施形態11のいずれか1つに記載の方法。
【０７１１】
16. 少なくとも3つのバイオマーカーの量が、質量分析(MS)によって決定される、実施形態11に記載の方法。
【０７１２】
17. 被験体が心不全の症状を示さない、実施形態11に記載の方法。
【０７１３】
18. 被験体が太り過ぎである、実施形態11に記載の方法。
【０７１４】
19. 被験体が54歳より上の年齢である、実施形態11に記載の方法。
【０７１５】
20. 被験体が女性被験体であり、54歳より上の年齢であり、かつ25.0kg/m2未満のボディマスインデックスを有する、実施形態11に記載の方法。
【０７１６】
21. 被験体が61歳より下の年齢であり、かつ26.8kg/m2を超えるボディマスインデックスを有する、実施形態11に記載の方法。
【０７１７】
22. 参照が、市販の脂質標準参照である、実施形態11に記載の方法。
【０７１８】
23. ヒト被験体において無症候性及び/又は初期HFrEFを診断する方法であって、以下：
a. 患者から少なくとも1つの血漿サンプルを得るステップ、
b. HPLC-MS/MS分析のために少なくとも1つのサンプルを処理するステップであって、少なくとも1つのサンプルは、抽出溶媒と組み合わされて、組み合わされたサンプルを作出し、抽出溶媒は、組み合わされたサンプル中のタンパク質から組み合わされたサンプル中の脂質を分離し、さらに、組み合わされたサンプルは、遠心分離を受けて、サンプルからタンパク質を除去し、HPLC-MS/MS分析のために処理されたサンプルを作出する、ステップ、
c. バイオマーカーパネル及びLC-MS/MS試験を使用して、少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するステップであって、少なくとも3つのバイオマーカーは、以下：
i. 少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのホスファチジルコリン、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン
を含み、ここで、少なくとも1つのスフィンゴミエリンはSM23を含み、少なくとも1つのトリアシルグリセリドはOSS2を含み、少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーはPC4を含み、
さらに、SM23は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の総量を含む、ステップ、
d. 被験体に見出されるNT-proBNPタンパク質の量を得るステップであって、該タンパク質の量は以下の方法の1つ以上によって得られる、ステップ：
i. 被験体から得られたサンプルにおいてNT-proBNPの量を決定すること、ここで、1つ以上のタンパク質の量は抗体試験を使用して決定される、及び/又は
ii. NT-proBNPの量を決定すること、ここで、該タンパク質の量は被験体の医療記録に由来し、及び/又は電子データベース中に保存されている、
e. ステップ(c)及び(d)において決定された量に基づいて被験体についてスコア値を計算するステップ、及び
f. ステップ(e)のスコア値を参照値と比較するステップであって、それによって被験体における無症候性及び/又は初期 HFrEFが診断される、ステップ
を含む、方法。
【０７１９】
24. 参照値が、心不全に罹患していることが知られている1つ以上の被験体から及び心不全に罹患していないことが知られている1つ以上の被験体から決定されたカットオフ値である、実施形態23に記載の方法。
【０７２０】
25. 心不全に対する治療を現在受けている患者において、心不全を診断する方法であって、以下のステップ：
a. 心不全に対する治療を現在受けているヒト被験体から少なくとも1つの血液、血漿、又は血清サンプルを得るステップ、
b. HPLC-MS/MS分析のために少なくとも1つのサンプルを処理するステップであって、少なくとも1つのサンプルは、抽出溶媒と組み合わされて、組み合わされたサンプルを作出し、抽出溶媒は、組み合わされたサンプル中のタンパク質から組み合わされたサンプル中の脂質を分離し、さらに、組み合わされたサンプルは、遠心分離を受けて、サンプルからタンパク質を除去し、HPLC-MS/MS分析のために処理されたサンプルを作出する、ステップ、
c. 被験体の少なくとも1つの処理されたサンプルにおいて、少なくとも1つのバイオマーカーパネルにおけるバイオマーカーの量を決定するステップであって、少なくとも1つのバイオマーカーパネルは、少なくとも3つのバイオマーカーを含み、さらに、少なくとも3つのバイオマーカーは、以下：
i. 少なくとも1つのトリアシルグリセリド、少なくとも1つのホスファチジルコリン、及び少なくとも1つのスフィンゴミエリン
を含み、ここで、少なくとも1つのスフィンゴミエリンはSM23を含み、少なくとも1つのトリアシルグリセリドはOSS2を含み、少なくとも1つのホスファチジルコリンバイオマーカーはPC4を含み、さらに、SM23は、スフィンゴミエリン(d18:1/23:1)、スフィンゴミエリン(d18:2/23:0)、及びスフィンゴミエリン(d17:1/24:1)の総量を含む、ステップ、
d. 以下の方法の1つ以上を使用することによって被験体のBNP試験結果を得るステップ：
i. サンプル中の以下のタンパク質：NT-proBNP、BNP、ANP、又はNT-proANPの1つ以上の量を決定すること、ここで、1つ以上のタンパク質の量は抗体試験を使用して決定される、及び/又は
ii. サンプル中の以下のタンパク質：NT-proBNP、BNP、ANP、又はNT-proANPの1つ以上の量を決定すること、ここで、1つ以上のタンパク質の量は被験体の医療記録に由来し、及び/又は電子データベース中に保存されている、
e. ステップ(c)及び(d)において決定された量に基づいて被験体についてスコア値を計算するステップ、及び
f. ステップ(e)のスコア値を参照値と比較するステップであって、それによって被験体における心不全が診断される、ステップ、及び
g. ステップ(f)で得られた診断に基づいて、現在の心不全治療が被験体に有効かどうかを決定するステップ
を含む、方法。
【実施例】
【０７２１】
以下の実施例は、本発明を例示する。しかし、それらは、本発明の範囲を限定するものと解釈されない。
【０７２２】
[実施例1]
実施例1：DCMP(拡張型心筋症)及びICMP(虚血性心筋症)からなる駆出率の低下を有するCHFサブタイプ(HFrEF)並びに駆出率の維持を有する心不全(HFpEF)の診断のための研究設計
3つの臨床センターで及び合計843人の被験体における多中心的研究を行った。この研究は、35〜75歳の年齢層及び20〜35kg/m2のBMI範囲の、194人の男性及び女性のDCMP、183人の男性及び女性のICMP、並びに210人の男性及び女性のHFpEF患者、並びに256人の男性及び女性の健康な対照を含んでいた。患者のNYHA(ニューヨーク心臓協会)スコアは、IからIIIの範囲であった。患者及び対照は、年齢、性別及びBMIについて適合させた。全ての患者及び対照について、血液サンプルを採取した。遠心分離によって血漿を調製し、測定が行われるまでサンプルを-80℃で保存した。
【０７２３】
心エコー検査と血行力学的基準に基づいて、CHF(DCMP、ICMP及びHFpEF)の3つのサブグループを定義した。
【０７２４】
(a)サブグループDCMP：血行力学的には、>50％狭窄の存在を伴わない、心拡張(左心室拡張末期径>55mm及び<50％の制限された左心室駆出率(LVEF)の心エコー増強)を伴う収縮期ポンプ不全と定義される
(b)サブグループICMP：血行力学的には、冠動脈不全(>50％冠動脈狭窄及び<50％のLVEF)に起因する収縮期ポンプ不全と定義される
(c)駆出率の維持を有するサブグループ心不全(HFpEF)：同心心肥大(心エコー検査：心中隔>12mm及び後心筋壁>11mm)及び拡張期心不全(≧50％のLVEFを有するポンプ機能の非障害又は軽度障害)を伴い、心中隔厚>18mmを伴わない。
【０７２５】
NYHA IV患者は、卒中に罹患している患者、試験前の最近の4カ月以内に心筋梗塞を有した患者、試験前の最近の4週間以内に薬剤を変更した患者、並びに急性若しくは慢性の炎症性疾患及び悪性腫瘍に罹患した患者と同様に除外された。
【０７２６】
[実施例2]
代謝産物の決定
CHF対健康、それぞれ、HFrEF対健康患者において大きく変化した代謝産物が同定されている。代謝産物は、簡略化された分析前プロセス(下記の分析方法の説明を参照)を用いて、ワンショットLC-MS/MS測定を用いてそれらのアクセシビリティに従って選択されている。
【０７２７】
代謝産物の組み合わせのin-silico性能及びアッセイ最適化ステップが実行されている反復プロセスでは、CHFの分析のためのLC-MS/MS法が確立された。この方法は、表1に列挙したバイオマーカーの全てを分析することが可能であり、バイオマーカーは、保持時間及び多重反応モニタリング(MRM)移行、及びさらなる潜在的な脂質代謝産物の組み合わせによって特徴付けられる。
【０７２８】
各バイオマーカーは2つ以上のアナライトを含むことができ、それにより、同じバイオマーカーに含まれるアナライトは同じ総炭素原子数及び同じ総二重結合数を有する。
【０７２９】
[実施例3]
分析方法
ヒト血漿サンプルを調製し、以下に記載するようにHPLC-MS/MS分析に供した：
【０７３０】
10μlの血漿を、2mlのセーフロック微小遠心チューブ(Eppendorf、ドイツ)中で、メタノール/ジクロロメタン(2：1、v/vの比)を含有する抽出溶媒1500μl及び10μlの内部標準混合物と混合した。内部標準溶液は、抽出溶媒中の、25.65μg/mlのリゾホスファチジルコリン(LPC)C17:0、0.386μg/mlのセラミド(Cer)d18:1/17:0、41.28μg/mlのホスファチジルコリン(PC)C19:0 C19:0(表8にPC5として記載した)、22.51μg/mlのコレステリルヘプタデカノエート(CE C17:0)、及び5.26μg/mlのグリセリルトリヘプタデカノエート(MMM)からなった。脂質標準は、Avanti Polar Lipids(CA、米国)、Larodan Fine Chemicals(スウェーデン)、Sigma-Aldrich(MO、米国)又は東京化成工業(日本)から購入した。
【０７３１】
超純水(Milli-Q水系、Millipore)及び分析グレードの化学物質を抽出、希釈に又はLC溶媒として使用した。品質管理及び参照サンプルを市販のヒト血漿(RECIPE Chemicals + Instruments GmbH)から調製した。キャリブレータ及びブランクの調製には脱脂血漿(血漿、ヒト、脱繊維化、脱脂、2Xチャコール処理、高純度; USBio)を使用した。
【０７３２】
20℃で5分間完全に混合した後、沈殿したタンパク質を10分間の遠心分離により除去した。液体上清のアリコートを適切なガラスバイアルに移し、LC-MS/MSによる分析まで-20℃で保存した。このサンプル調製方法は、目的の全ての脂質(PC、SM、Cer、CE、TAG)を捕捉するために、唯一の精製工程としてタンパク質沈殿を使用し、そのため、脂質のより包括的かつ複雑な抽出(例えば、Folch、又はBligh及びDyerによって記載されている)は必要ではなかった。HPLC-MS/MS系は、ABSciex(商標)API4000トリプル四重極質量分析計(ABSCIEX、トロント、カナダ)に連結されたAgilent 1100 LCシステム(Agilent Technologies、Waldbronn、ドイツ)からなっていた。HPLC分析は、C18固定相を有する市販の逆相分離カラム(Ascentis(登録商標)Express C18カラム(5cm×2.1mm、2.7μm、Phenomenex、ドイツ))で55℃で行った。
【０７３３】
最大5μLの粗抽出物を注入し、メタノール、水、ギ酸、2-プロパノール及び2-メトキシ-2-メチルプロパンからなる溶媒の混合物を用いた勾配溶出によって分離した：
溶媒A：400gのメタノール、400gの水、1gのギ酸
溶媒B：400gのtert-ブチルメチルエーテル(tBME)、200gの2-プロパノール、100gのメタノール、1gのギ酸
【０７３４】
溶出勾配の詳細を表7に示す。
【０７３５】
質量分析を、多重反応モニタリング(MRM)を用いた陽イオンモードでのエレクトロスプレーイオン化によって行った。供給源パラメーターは、ネブライザーガス、50；ヒーターガス、60；カーテンガス、25；CADガス、4；イオンスプレー電圧、5500V；温度、400℃；質量範囲間の休止、5ms；解像度Q1及びQ3、単位であった。MRM設定を表8に与える。いくつかの脂質(CE、TAG)のエレクトロスプレープロセスにおけるイオン化効率を高めるために、メタノールに溶解したギ酸アンモニウム緩衝液(溶媒C：200gのメタノール、30gの0.1Mギ酸アンモニウム溶液(水中))を、CE及びTAGの溶出時間中にカラム後に添加した(図1参照)。この方法は、例えば、ABSciex(商標)3200MDベンチトップLC-MS/MSシステムと適合性があるように意図される。
【０７３６】
さらに、いくつかの非常に豊富な脂質がMS検出器のダイナミックレンジ外にあるので、衝突エネルギーのようなMSパラメーターを、フラグメンテーション効率が低いことに起因する低いシグナル強度を得るように、前記非常に豊富な脂質について変更した。
【０７３７】
これらのイソバリック(isobaric)種はクロマトグラフィーで分離されなかったため、エレクトロスプレーイオン化(ESI)を用いて、同数の炭素及び二重結合を有するPC8及びいくつかのSMを一緒に検出した(いわば前記種の分離なしで)。低濃度のセラミドを検出し、ホスファチジルコリンとスフィンゴミエリンを互いに分離するために、クロマトグラフィーが必要であった。なぜならSMに対するPC又はPCに対するSMのC13影響が代謝産物の性能を妨げるからである(測定可能性という意味で)。
【０７３８】
全ての化合物についての定量的結果を、市販の参照化合物が利用できなかったスフィンゴミエリンを除いて、対応する参照化合物を使用することによって達成した。スフィンゴミエリンを、検出器応答が同じであると仮定して、標的代謝産物とは異なる鎖長を有する市販のスフィンゴミエリン標準を添加することによって定量した。概念実証を、SM(d18:1/16:0)、SM(d18:1/24:1)、及びPC C18:0 C18:2に対して行った。エレクトロスプレーによるホスホコリン側の陽イオン形成は、脂肪酸組成に依存しないだけでなく、ホスホコリン種(スフィンゴシン又はグリセロール骨格)にも依存しないことを示すために、PC C18:0 C18:2を含めた。20の相対標準偏差(％RSD)は、標準を相互に較正することによって達成することができた。
【０７３９】
キャリブレーション溶液を、実際の血漿に可能な限り近くマトリックスを模倣するために脱脂血漿(市販)で調製した。
【０７４０】
陽性対照及び陰性対照を、市販されている様々な量の血漿を凍結乾燥することによって調製し、全ての下方制御された代謝産物の陽性及び陰性カットオフを満たした。トリアシルグリセリド(TAG)の場合、対応するTAGを、凍結乾燥プロセスの前に血漿に加えたが、タンパク質が沈殿するのを避けた。凍結乾燥したサンプルをサンプル調製まで冷凍庫に保存した。
【０７４１】
市販の血漿を抽出溶媒で抽出することにより、品質管理サンプルを調製した。これらの抽出物のいくつかのアリコートを冷凍庫に保存し、機器の性能及びサンプル調製の日常の品質管理に使用した。
【０７４２】
血漿サンプルを無作為化分析順序設計で分析した。包括的な分析検証ステップの後、得られたピーク面積を、分析変動を低減するために、類似の分析挙動を有する内部標準のピーク面積で除算した。得られた比をlog10変換して正規分布を達成した。
【０７４３】
【表１】
2017525970.tif 000005
2017525970.tif 000006
【０７４４】
[実施例4]
データ分析及び統計学的評価
表1に列挙された各バイオマーカーについて、健康な対照被験体に対するCHF患者における変化の方向をANOVAによって計算した(表1A及び1B参照)。方向「上昇」は、バイオマーカーのレベルが健康な対照被験体におけるよりもCHF患者において高いことを意味し、方向「下降」は、バイオマーカーのレベルが健康な対照被験体におけるよりもCHF患者において低いことを意味する。まとめた健康な対照被験体と比較した全てのCHF患者について[ANOVAモデル：CHF+中央(CENTER)+(性別+年齢+BMI)^2]、健康な対照被験体と比較したHFpEF患者について、及び健康な対照被験体と比較したHFrEF患者について[CHF_サブグループ+中央(CENTER)+(性別+年齢+BMI)^2]、変化の方向は同じであることが見出された。
【０７４５】
【表１Ａ】
2017525970.tif 000007
2017525970.tif 000008
【０７４６】
【表１Ｂ】
2017525970.tif 000009
【０７４７】
実施例1に記載の研究のデータを、ペプチドNT-proBNPと組み合わせて対照と比較したCHFサブグループの分類のための診断力の評価に利用した。代謝産物データを交絡因子について補正したか、又は未補正代謝産物データを使用した。交絡因子についての補正のためのANOVAモデルは、因子である年齢、BMI、性別及びCHFサブグループ(ANOVAモデル：CHF_サブグループ+(性別+年齢+BMI)^2；補正因子：性別、年齢及びBMI)を含んだ。CHF患者を、CHFサブタイプ[HFpEF、DCMP、ICMP、又はHFrEF(駆出率の低下を有する心不全)と命名された合わせたDCMP+ICMPグループ並びに疾患の重症度の尺度に基づいて細分した。この疾患の重症度には、NYHAクラス及びLVEFの2つの異なる尺度を用いた。この目的のために、CHF患者を、症状がない若しくは軽度のみの患者(NYHAクラスI、及びNYHAクラスIIの初期；時には「無症候性」と呼ばれる)並びにより重度の症状を有する患者(NYHAクラスII及びIII；時には「症候性」と呼ばれる)に細分した。あるいは、CHF患者を、LVEFが著しく低下した患者(LVEF<35％)並びにLVEFが軽度に低下した若しくは低下していない患者(LVEF≧35)に細分した。後者のサブグループは、35％≦LVEF<50％のHFrEF患者及び全てのHFpEF患者(LVEF≧50％)を含む。
【０７４８】
約850サンプルの全セットを、訓練若しくは識別セット(「IDデータ」セットとも呼ばれる；サンプルの約66％)並びに試験セット(「VDデータ」セットとも呼ばれる；サンプルの約33％)に分けた。分割はグループについて行い、グループは性別、心不全のタイプ及びNYHAレベルの組み合わせによって定義された。
【０７４９】
総サンプル数及び構成は以下の通りであった：
2017525970.tif 000010
【０７５０】
[実施例5]
表2には、本発明によるバイオマーカーパネルが列挙されている。第1列にはそれぞれのパネル番号が与えられ、第2列には各パネルの構成が与えられ、第3列には非タンパク質バイオマーカーの数が与えられ、第4列にはCHFサブグループが与えられ、第5列にはパネルがいわゆる「飽和パネル」であるか否かが示され、第6列にはNT-proBNPがさらに決定されたかどうかが示され、第7列には、交絡因子である年齢、BMI及び性別についてのANOVA補正が行われたかどうかが示され、第8列にはAUC値が与えられる。
【０７５１】
各患者についての予測確率は、Rパッケージglmnet(Zou, H. and Hastie, T., 2003: Regression shrinkage and selection via the elastic net, with applications to microarrays. Journal of the Royal Statistical Society: Series B, 67, 301-320; Friedman, J., Hastie, T., and Tibshirani, R, 2010: Regularization Paths for Generalized Linear Models via Coordinate Descent. J. Stat. Softw. 33)で実施されたエラスティックネットアルゴリズムを用いてフィッティングされたロジスティック回帰モデルを用いて計算した。フィッティングをIDコホートからのデータに対して行った。L1及びL2ペナルティーに等しいウェイトを与えた。対数変換されたピーク面積比を、分析前に中央化し(center)、単位分散(unit variance)にスケーリングした。予測確率を、以下の式を用いて計算した。
【数３】
2017525970.tif 000011
但し、特性
2017525970.tif 000012
が、
【数４】
2017525970.tif 000013
(式中、xiは、対数変換されたピーク面積比(又は考慮される場合には例えばNT-proBNPの濃度)であり、mi、siは、特性に特異的なスケーリング因子であり、wiは、モデルの係数である[w0、切片；w1、NT-proBNPについての係数(適用可能な場合)；w2・・・wn、特性についての係数；n、パネル内の脂質バイオマーカー+決定又は考慮される場合はBNP若しくはNT-proBNPの数])である。
【０７５２】
パネル1+NT-proBNPについての係数は以下のとおりである：w0=0.7602899(切片)、w1=1.5745605(NT-proBNP)、w2=-0.7158906(SM23)、w3=0.6762354(OSS2)、w4=-0.4594183(PC4)、n=4。それぞれのスケーリング因子は、m1=2.2023800、m2=-0.5379916、m3=-2.1316954、m4=0.8736775、及びs1=0.6364517、s2=0.1159420、s3=0.3863649、s4=0.0834807である。NT-proBNPを単位pg/mlで測定した。
【０７５３】
それぞれのパネルのカットオフより大きい予測確率を有するサンプルは試験陽性であると言われ、カットオフ以下の予測確率を有するサンプルは試験陰性であると言われる。感度は、試験陽性であるそれぞれのサブグループにおけるHF患者の割合であり、一方、特異度は、試験陰性である健康な対照被験体の割合である。
【０７５４】
カットオフ値は、HFrEFの検出のためにYouden指数を最大にするように最初に決定された。パネル1+NT-proBNPの得られたカットオフを0.587と定義し、パネル3について0.522と定義し、パネル4について0.574と定義し、表6に示されるようにパネル1、3及び4についての感度及び特異度が得られた。
【０７５５】
あるいは、NT-proBNPのみを使用する場合のように、バイオマーカーパネルを使用する場合、IDデータセットにおけるHFrEFの検出について同じ特異度を達成するようにカットオフ値を決定することができる。この要件によれば、パネル1+NT-proBNPのカットオフは代わりに0.738と定義された。パネル1+NT-proBNPについてのこの代替カットオフを使用すると、感度は、CHFの検出について61.0％、HFrEFの検出について80.2％、軽度にのみ低下したLVEF(35％≦LVEF<50％)を有するHFrEFの検出について67.6％である。代替カットオフを用いたパネル1+NT-proBNPの特異度は97.7％である。
【０７５６】
米国のメディケア適格人口におけるHFの有病率は、1994年から2003年の間に9〜12％であり、その約半分がHFrEFを患っている[Yancy, C.W., Jessup, M., Bozkurt, B., Butler, J., Casey, D.E., Drazner, M.H., Fonarow, G.C., Geraci, S.A., Horwich, T., Januzzi, J.L., Johnson, M.R., Kasper, E.K., Levy, W.C., Masoudi, F.A., McBride, P.E., McMurray, J.J.V., Mitchell, J.E., Peterson, P.N., Riegel, B., Sam, F., Stevenson, L.W., Tang, W.H.W., Tsai, E.J., Wilkoff, B.L., 2013. 2013 ACCF/AHA Guideline for the Management of Heart Fail-ure. A Report of the American College of Cardiology Foundation/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. Circulation 128, e240-e327; Curtis LH, Whellan DJ, Hammill BG, et al, 2008. Incidence and prevalence of heart failure in elderly persons, 1994-2003. Arch Intern Med 168, 418-424. doi:10.1001/archinternmed.2007.80]。
【０７５７】
先に引用した文献に基づいて、CHFについて10％、HFrEFについて5％の有病率を仮定すると、得られる陽性予測値(PPV)は、CHFについて74.7％、HFrEFについて64.7％である。表6Aに示すように、得られる陰性予測値(NPV)は、CHFについて95.8％、HFrEFについて98.9％である。主に、NT-proBNPの診断性能は著しく増加し得る；例えば、サブグループCHF及びHFrEFについては、それぞれ6.4％及び8.8％の正味再分類指数(NRI=感度[試験A]-感度[試験B]+特異度[試験A]-特異度[試験B])が観察された。無症候性ICMPのNRIは10.3％にも達した。したがって、本発明のパネルは、特に、HFrEF及び/又は心不全の無症候性形態の診断性能を改善した。
【０７５８】
用語「飽和パネル」は、好ましくは、表1からのさらなる適切な心臓マーカーのそれぞれのパネルへの付加が、AUC値の顕著な改善をもたらさないことを示す。
【０７５９】
[実施例6]
試験セットにおける性能の検証
検証データに適用されたときの訓練データで同定されたバイオマーカーの組み合わせの性能を、バイノーマル(binormal)モデルでモデル化された受信者動作曲線の曲線下面積(AUC)によって評価した。
【０７６０】
バイオマーカーの組合せ/パネル103〜199(表2)は、以下の表における異なるCHFサブグループにおけるそれらの計算された性能とともに示される。
【０７６１】
[実施例7]
試験セットにおける性能に対する薬剤の影響
NT-proBNPを含むパネル1を用いて計算されたHFrEF患者のHF予測確率に対する3-ヒドロキシ-3-メチル-グルタリル-CoAレダクターゼ(HMGCR)阻害剤及び利尿薬の効果を図2に示す。利尿薬を投与されている患者は、利尿薬を投与されていない患者よりも平均して低いLVEFを有するため(示さず)、予測確率を、軽度に(35％≦LVEF≦50％；上部パネル)又は強く低下したLVEF(LVEF<35％；下部パネル)を有する患者について別々にプロットした。利尿薬もスタチンも投与されていないHFrEF患者は、これらの薬剤のいずれか又は両方を投与されている患者よりもわずかに低い予測確率を有し(図2の右端の4列)、利尿薬もスタチンも投与されていない軽度に低下したLVEFを有する患者(35％≦LVEF≦50％；表9)における感度の低下をもたらす。この効果は、スタチン又は利尿薬を投与されている全ての患者を含む部分的に重複する群を比較すると、あまり明らかではない(表9；図2の左端3列)。
【０７６２】
[実施例8]
全患者コホートにおける性能に対する臨床パラメーターの影響
NT-proBNPを含むパネルl又はNT-proBNP単独のいずれかを用いて異なって分類される患者の特徴を調べることにより、NT-proBNPとの比較におけるパネル1の性能に対する臨床パラメーターの影響を評価した。全患者コホートにおいて、30人の健康な対照は、NT-proBNPを含むパネル1を用いて正しく陰性と分類されたが、NT-proBNP単独を用いて誤って陽性と分類された。これらの被験体は、コホート中の残りの216人の健康な対照より、有意に高齢であり(中央値62.5歳対53.5歳；FDR(偽発見率)補正前のp=0.0036及び後のp<0.05)、有意に低いBMIを有し(中央値23.0kg/m2対24.8kg/m2；FDR補正前のp=0.0197及び後のp<0.1)、有意に高い割合の女性を含んだ(30人中24人対216人中107人；FDR補正前のp=0.0033及び後のp<0.05)。
【０７６３】
全患者コホートにおいて、27人のHFrEF患者は、NT-proBNPを含むパネル1を用いて正しく陽性と分類されたが、NT-proBNP単独を用いて誤って陰性と分類された。これらの被験体は、コホート中の残りの347人のHFrEF患者より、有意に若く(中央値55.0歳対61.0歳；FDR補正前のp=0.0218及び後のp<0.1)、有意に高いBMIを有し(中央値29.9kg/m2対26.8kg/m2；FDR補正前のp=0.0037及び後のp<0.05)、有意に低い高感度心臓トロポニンTを有し(hs-cTnT値；中央値4.0ng/l対7.0ng/l；FDR補正前のp=0.0238及び後のp<0.1)、有意に大きいLVEFを有し(中央値45.0％対35.0％；FDR補正前のp=0.0003及び後のp<0.01)、有意に低い左心室拡張末期径を有し(LVEDD；中央値50.0mm対55.0mm；FDR補正前のp=0.0020及び後のp<0.05)、有意に高い隔壁厚を有し(13.0mm対11.0mm；FDR補正前のp=0.0017及び後のp<0.05)、有意に高い後壁厚を有し(12.0mm対11.0mm；FDR補正前のp=0.0008及び後のp<0.05)、糖尿病に罹患している患者の有意に高い割合を含んだ(27人中11人対347人中68人；FDR補正前のp=0.0189及び後のp<0.1)。
【０７６４】
[実施例9]
パネル1の決定のための実施例3の方法のさらなる改良
トリグリセリド、ホスファチジルコリン、及びスフィンゴミエリンの改善された定量化を、キャリブレーション標準1,3-ジステアロイル-2-オレオイルグリセロール(TAG C18:0 C18:1 C18:0；LGC Standards、英国から入手可能)、ホスファチジルコリンC16:0 C18:2(Avanti Polar Lipids、CA、米国から入手可能)、及びスフィンゴミエリンd18:1/24:1(Avanti Polar Lipids、CA、米国から入手可能)を用いて達成できる。キャリブレーション標準を、溶媒としてメタノール/ジクロロメタン(2:1、v/v)又はジクロロメタンを用いて1〜5mg/ml溶液の範囲で溶解する。
【０７６５】
この方法は、例えば、ABSciex(商標)3200MDベンチトップLC-MS/MSシステムと適合性があるように意図される。
【０７６６】
[実施例10]
組み合わされた/標的化された脂質分析アプローチで決定されたさらなるバイオマーカーパネル
本明細書に記載された方法と、例えば表1のバイオマーカー内に表される単一の代謝産物種(アナライトとも呼ばれる)の検出に適したWO2013079594の実施例1に開示されている標的化脂質分析のための方法、又は例えばWO2013079594のみに開示されている標的化脂質分析のための方法との組み合わせを用いて、HFrEFの診断のための良好な性能を有するさらなる代謝産物パネルを同定することができる。6つの代謝産物の1つのこのような組合せを表10(パネル番号300)に示す。
【０７６７】
NT-proBNPの値と組み合わせると、このパネル(パネル番号300)は、最大で0.988(サブグループ：LVEF<35％を有するHFrEF)、0.937(サブグループ：35％〜50％のLVEFを有するHFrEF)、0.942(サブグループ：HFrEF無症候性)、0.969(サブグループ：HFrEF症候性)、0.959(サブグループ：HFrEF全体)、0.979(ICMP全体)、又は0.936(DCMP全体)の推定AUC値を示す。
【０７６８】
[実施例11]
SM23、PC 4、CE C18:2、及びOSS2の絶対定量についての分析方法
ヒト血漿サンプルを調製し、以下に記載するようにHPLC-MS/MS分析に供した：
【０７６９】
10μlの血漿を、2mlのセーフロック微小遠心チューブ(Eppendorf、ドイツ)中で、メタノール/ジクロロメタン(2：1、v/vの比)を含有する抽出溶媒1500μl及び10μlの内部標準混合物と混合した。内部標準は、抽出溶媒中の、41.28μg/mlのホスファチジルコリン(PC)C19:0 C19:0(表8にPC5として記載した)を含有した。脂質標準は、Avanti Polar Lipids(CA、米国)から購入した。
【０７７０】
超純水(Milli-Q水系、Millipore)及び分析グレードの化学物質を抽出、希釈に又はLC溶媒として使用した。品質管理及び参照サンプルを市販のヒト血漿(RECIPE Chemicals + Instruments GmbH)から調製した。キャリブレータ及びブランクの調製には脱脂血漿(血漿、ヒト、脱繊維化、脱脂、2Xチャコール処理、高純度; USBio)を使用した。
【０７７１】
20℃で5分間完全に混合した後、沈殿したタンパク質を10分間の遠心分離により除去した。液体上清のアリコートを適切なガラスバイアルに移し、LC-MS/MSによる分析まで-20℃で保存した。このサンプル調製方法は、目的の全ての脂質(PC4、SM23、OSS2、CE C18:2)を捕捉するために、唯一の精製工程としてタンパク質沈殿を使用する。HPLC-MS/MS系は、ABSciex(商標)API4000トリプル四重極質量分析計(ABSCIEX、トロント、カナダ)に連結されたAgilent 1100 LCシステム(Agilent Technologies、Waldbronn、ドイツ)からなっていた。HPLC分析は、C18固定相を有する市販の逆相分離カラム(Ascentis(登録商標)Express C18カラム(5cm×2.1mm、2.7μm、Phenomenex、ドイツ))で55℃で行った。
【０７７２】
最大5μLの粗抽出物を注入し、メタノール、水、ギ酸、2-プロパノール及び2-メトキシ-2-メチルプロパンからなる溶媒の混合物を用いた勾配溶出によって分離した：
溶媒A：400gのメタノール、400gの水、1gのギ酸
溶媒B：400gのtert-ブチルメチルエーテル(tBME)、200gの2-プロパノール、100gのメタノール、1gのギ酸
【０７７３】
溶出勾配の詳細を表7に示す。
【０７７４】
質量分析を、多重反応モニタリング(MRM)を用いた陽イオンモードでのエレクトロスプレーイオン化によって行った。供給源パラメーターは、ネブライザーガス、50；ヒーターガス、60；カーテンガス、25；CADガス、4；イオンスプレー電圧、5500V；温度、400℃；質量範囲間の休止、5ms；解像度Q1及びQ3、単位であった。MRM設定を表12に与える。OSS2のエレクトロスプレープロセスにおけるイオン化効率を高めるために、メタノールに溶解したギ酸アンモニウム緩衝液(溶媒C：200gのメタノール、100gの0.1Mギ酸アンモニウム溶液(水中))を、OSS2の溶出時間中にカラム後に添加した(図1参照)。溶出条件などは、溶出時間3.30分から5.30分の間に本実施例11で300μl/分に増加した溶媒Cの流速以外は、表7に示す。
【０７７５】
この方法は、例えば、ABSciex(商標)3200MDベンチトップLC-MS/MSシステムと適合性があるように意図される。
【０７７６】
上記の内部標準PC5を、既知の濃度で全てのサンプルに添加した。結果として、MS測定におけるそれぞれのピーク面積の決定は、前記サンプル中の補正因子を計算することを可能にする；この補正因子は、装置の変動、固有のシステムエラーなどについて、決定されるバイオマーカーのピーク面積を補正するために使用され得る。
【０７７７】
ピーク面積として決定される各バイオマーカーについて、内部標準ピーク面積に対するバイオマーカーピーク面積の面積比を決定した。
【０７７８】
ピーク面積比計算のためのそれぞれの保持時間及び標準を表12aに示す。SM23、PC4、CE C18:2、及びOSS2の定量結果を、以下(実施例12)に記載されるキャリブレーション溶液を用いたキャリブレーション手順を使用することによって達成した。
【０７７９】
[実施例12]
キャリブレーションサンプルの調製
SM23、PC4、CE C18:2及びOSS2の絶対定量のための検量線を作成するために、MeOH/CH2Cl2(2/1、v/v)中で、既知の量のSM27(Avanti Lipidsから購入したSM23の定量のためのスフィンゴミエリン(d18:1/24:1)、PC4及びOSS2を含むキャリブレーションサンプルを調製した。
【０７８０】
キャリブレーションサンプルの続く作製のために、表13に示すようなMeOH/CH2Cl2(2/1)中のSM27、PC4、CE C18:2、及びOSS2のそれぞれの濃度を含有するキャリブレーション溶液(それぞれの比は表13aに示す)を調製した。
【０７８１】
これらのキャリブレーション溶液のそれぞれから、50μlを、10μlの脱脂血漿(市販)及び750μlのMeOH/CH2Cl2(2/1)の混合物に添加した。上記のように10μlの内部標準を添加し、さらなる700μlのMeOH/CH2Cl2(2/1)を添加し、1520μlの最終キャリブレーションサンプル体積を達成した。
【０７８２】
次いで、得られた7つのキャリブレーションサンプルを、バイオマーカー決定のための実際の血漿サンプルと同じ方法で処理した。
【０７８３】
[実施例13]
患者サンプル中のSM23、PC4、CE C18:2及びOSS2の絶対濃度の計算
所与のサンプル中のSM23、PC4、CE C18:2、及びOSS2の絶対濃度を、サンプル中のピーク面積比をキャリブレーションサンプル中のそれぞれのピーク面積比、又は既知の量のSM23、PC4、CE C18:2、及びOSS2を含有するキャリブレーションサンプルのそれぞれのセットのそれぞれのピーク面積比から得られる検量線と比較することによって決定することができる。
【０７８４】
上記のように、SM23の定量のためのキャリブレーションサンプル中にSM27を使用した。
【０７８５】
実施例11に記載された分析方法及び上記実施例12に記載されたキャリブレーションサンプルを使用して、SM23、PC4、CE C18:2、及びOSS2の絶対定量を、十分に混合され、十分な数のアリコートに分割された市販のヒト血漿からなるウルトラプール(ultrapool)サンプルを含んで追加のステップを用いて実施した。ウルトラサンプルのアリコートを、分析の各日に測定した患者サンプルとともに含めた。絶対濃度を計算するために、各患者サンプルにおけるSM23、PC4、CE C18:2及びOSS2のピーク面積比(上記のような)を、最初に、前記患者サンプルと同じ分析日に測定したウルトラプールサンプルのアリコートにおけるそれぞれのピーク面積比の中央値によって除算し、次いで、ウルトラプールサンプル中のSM23、PC4、CE C18:2、及びOSS2それぞれの既知濃度によって乗算した。
【０７８６】
実施例1〜10に示された結果の計算に含まれていた少数のサンプルを、技術的理由からここでは除外した。SM23、PC4、CE C18:2及びOSS2のウルトラプールサンプル中の濃度は、それらのピーク面積比を、上記実施例12に記載したキャリブレーションサンプルから得られた検量線と比較することによって、以前に決定された。
【０７８７】
50μlの各キャリブレーション標準を使用したが、各患者サンプルの10μlの血漿のみを使用したため、5の倍率を適用して、患者サンプルから実際の濃度範囲を受け取った。
【０７８８】
対照サンプル並びに選択されたCHFサブグループHFrEF及びHFpEFのサンプルについて決定されたSM23、PC4、CE C18:2及びOSS2の得られた濃度を表14に示す。
【０７８９】
[実施例14]
SM23、PC 4、及びOSS2(パネル1)の絶対定量-SM23、CE C18:2、及びOSS2(パネル2)の絶対定量
SM23、PC4及びOSS2(パネル1)の絶対定量のために実施例11〜13に記載したのと同じ手順を適用したが、CE C18:2を決定しなかった。また、SM23、CE C18:2、及びOSS2(パネル2)の絶対定量のために、PC4は決定せずに、実施例11〜13に記載したのと同じ手順を適用することができる。MS設定、定量のための標準等に関する各情報は、表12、12a、13及び13b(パネル2)若しくは13c(パネル1)に示されている。
【０７９０】
[実施例15]
SM23、PC4及びOSS2(パネル1+NT-proBNP)の絶対濃度を用いた異なるサブグループの性能計算
代謝産物バイオマーカーの絶対濃度を使用して、予測確率及び性能統計を、ANOVA補正を伴わずに実施例5に記載されるようにパネル1+NT-proBNPについて計算した。単位μg/dlで測定した代謝産物バイオマーカーについてのスケーリング因子は、m2=3.106761(SM23)、m3=2.12519(OSS2)、m4=4.583751(PC4)及びs2=0.123062、s3=0.3926955、s4=0.0892658であった。NT-proBNPについてのスケーリング因子m1及びs1並びにウェイトw0、w1、w2、w3及びw4は、実施例5と同じであった。カットオフを、上記実施例5に記載されているようにサブグループHFrEFにおいて「マッチした感度(matched sensitivity)」について0.743であると決定した。
【０７９１】
絶対濃度対ピーク面積比を用いて計算された性能統計間の直接的な比較を可能にするために、実施例1〜10において以前に実施され、記載されたピーク面積比に基づく性能計算をまた、絶対濃度の計算から除外された同じ少数のサンプルを除いて、繰り返した(実施例13参照)。
【０７９２】
試験(「VD」)データセットにおいて、CHFについてのAUCは、ピーク面積比を用いて0.917であったのに対し、絶対濃度を用いて0.915であった。前記カットオフ値でのCHFについての感度(62.3％)及び特異度(97.6％)は変わらなかった。HFrEFについてのAUC(0.969)及び特異度(97.6％)は変わらなかった。HFrEFについての感度は、ピーク面積比を用いて80.2％であったのに対し、絶対濃度を用いて80.9％であった。無症候性HFrEFについてのAUCは、ピーク面積比を用いて0.954であったのに対し、絶対濃度を用いて0.953であった。前記カットオフ値での無症候性HFrEFの感度(73.5％)及び特異度(97.6％)は変わらなかった。HFrEF LVEF35％〜50％についてのAUCは、ピーク面積比を用いて0.948であったのに対し、絶対濃度を用いて0.946であった。HFrEF LVEF35％〜50％についての感度は、ピーク面積比を用いて67.6％であったのに対し、絶対濃度を用いて69.0％であった。HFrEF LVEF35％〜50％についての特異度(97.6％)は変わらなかった。したがって、代謝産物バイオマーカーについての絶対濃度を用いて計算したパネル1+NT-proBNPについての性能統計は、ピーク面積比を用いて計算したものと本質的に同一であった。
【０７９３】
【表２】
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【０７９４】
【表２ａ】
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【０７９５】
【表３】
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【０７９６】
【表４Ａ】
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【０７９７】
【表４Ｂ】
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【０７９８】
【表４Ｃ】
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【０７９９】
【表４Ｄ】
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【０８００】
【表５】
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【０８０１】
【表５ａ】
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【０８０２】
【表５ｂ】
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【０８０３】
【表６】
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【０８０４】
【表６Ａ】
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【０８０５】
【表７】
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【０８０６】
【表８】
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【０８０７】
【表９】
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【０８０８】
【表１０】
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【０８０９】
【表１２】
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【０８１０】
【表１２ａ】
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【０８１１】
【表１３】
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【０８１２】
【表１３ａ】
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【０８１３】
【表１３ｂ】
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【０８１４】
【表１３ｃ】
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【０８１５】
【表１４】
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【図１】
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【図２】
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【手続補正書】
【提出日】平成28年11月21日(2016.11.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
心不全を診断する方法であって、以下のステップ：
(a)被験体のサンプルにおいて、少なくとも3つのバイオマーカーの量を決定するステップであって、前記少なくとも3つのバイオマーカーは表2のパネル1又は16のバイオマーカーである、ステップ、及び
(b)ステップa.で決定された量を参照と比較するステップであって、それにより心不全が診断される、ステップ
を含む、方法。
【請求項２】
心不全が、左心室駆出率の低下を有する心不全(HFrEF)である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
少なくとも、OSS2、PC4及びSM23の量が決定される(パネル1)、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
被験体が心不全の症状を示さない、請求項２又は３に記載の方法。
【請求項５】
HFrEFがDCMP又はICMPである、請求項２〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
被験体がヒト被験体である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
サンプルが血液、血清又は血漿である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも3つのバイオマーカーの量が、質量分析(MS)によって決定される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
HFrEFが、50％より低いが35％より大きい左心室駆出率を有する心不全である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
被験体が太り過ぎである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
被験体が54歳より上の年齢である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
被験体が女性被験体であり、54歳より上の年齢であり、かつ25.0kg/m2未満のボディマスインデックスを有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
被験体が61歳より下の年齢であり、かつ26.8kg/m2を超えるボディマスインデックスを有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ステップ(b)が、以下のステップ：
(b1)ステップ(a)において言及された少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量に基づき、スコアを計算するステップ、及び
(b2)こうして計算されたスコアを参照スコアと比較するステップであって、それにより、心不全が診断される、ステップ、
を含む、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ステップ(a)においてNT-proBNP、BNP、ANP、又はNT-proANPの量の決定をさらに含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法を実施するための診断用デバイスであって、以下:
(a)請求項１に記載される少なくとも3つのバイオマーカーについての少なくとも1つの検出器を含む分析ユニットであって、前記分析ユニットは、少なくとも1つの検出器によって検出される前記バイオマーカーの量を決定するために適合されている、分析ユニット、及びそれと作動可能に結合された、
(b)少なくとも3つのバイオマーカーの決定された量と参照量との比較を実施するための実体的に組み込まれたコンピュータープログラムコードを含むコンピューターと、前記バイオマーカーについての前記参照量を含むデータベースとを含む評価ユニットであって、それにより、被験体が心不全に罹患しているかどうかが診断される、評価ユニット
を含む、診断用デバイス。
【請求項１７】
心不全を診断するための、又は心不全を診断するための医薬及び/若しくは診断用組成物の調製のための、被験体のサンプルにおける請求項１に記載される少なくとも3つのバイオマーカーの使用。
【国際調査報告】
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