(57)【要約】  体重過多のヒトの体重増加の治癒的処置、及び／又は体重過多のヒト若しくは体重過多であったヒトの体重増加の予防的処置において使用するための、少なくとも１つのプロバイオティクスから生成された組成物であって、前記プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９である、組成物。
2017506637.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
体重過多のヒトの体重増加の根治的処置及び／又は体重過多のヒト若しくは体重過多であったヒトの体重増加の予防的処置において使用するための、少なくとも１つのプロバイオティクスに基づく組成物であって、該プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９であることを特徴とする、組成物。
【請求項２】
古細菌（Ａｒｃｈａｅａ）、ファーミキューテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、プロテオバクテリア（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、アクチノバクテリア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ベルコミクロビア（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）、フソバクテリア（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ）、メタノバクテリア（Ｍｅｔａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、スピロヘータ（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ）、フィブロバクター（Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒｓ）、デフェリバクター（Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ）、ディノコッカス（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、サーマス（Ｔｈｅｒｍｕｓ）、シアノバクテリア（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、メタノブレビバクテリウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、乳酸桿菌属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペプトストレプトコッカス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ルミノコッカス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、コプロコッカス（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ）、スブドリングラヌラム（Ｓｕｂｄｏｌｉｎｇｒａｎｕｌｕｍ）、ドレア（Ｄｏｒｅａ）、ブレイジア（Ｂｕｌｌｅｉｄｉａ）、アナエロフスティス（Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ）、ゲメラ（Ｇｅｍｅｌｌａ）、ロゼブリア（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）、カテニバクテリウム（Ｃａｔｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ジアリスター（Ｄｉａｌｉｓｔｅｒ）、アナエロトランカス（Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）（非病原性）、ファエカリバクテリウム（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、パラバクテロイデス（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、ユーバクテリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アッケルマンシア（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ブチリビブリオ（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ）、及びクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）のプロバイオティクス、又はそれらの組合せからなる群から選択される、少なくとも１つの追加のプロバイオティクスを含む、請求項１に係る使用のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）、デバリオマイセス（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）、トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、及びペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）からなる群から選択される真菌及び／又は酵母菌株を含む、請求項１に係る使用のための、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９及び任意選択で前記少なくとも１つの追加のプロバイオティクスが、カプセル化担体にカプセル化される、請求項１に係る使用のための、請求項１から３までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記カプセル化担体が、アルギネート、キトサン、ペクチン、プルラン、ゼラチン、カラギーナン、寒天ゲル又はそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの物質を含む、請求項１に係る使用のための、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
単糖、多糖体、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ビタミン、酵母エキス、アルカリ金属若しくはアルカリ土類金属のハロゲン塩、抗酸化剤、グリセロール、酢酸亜鉛、塩化亜鉛、乳酸亜鉛、アスコルビン酸、クエン酸、植物油、乳脂肪又はそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの食品源を含む、請求項１に係る使用のための、請求項１から５までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
少なくとも１つのプレバイオティクスを更に含み、それによって相利共生組成物（ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）が形成される、請求項１に係る使用のための、請求項１から６までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
前記ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９及び任意選択で前記少なくとも１つの追加のプロバイオティクスを被覆する第１の腸溶コーティングを含む、請求項１に係る使用のための、請求項１から８までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記第１の腸溶コーティングが、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）、又はそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に係る使用のための、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
アルギネート、キトサン、ペクチン、プルラン、ゼラチン、カラギーナン、寒天ゲル、セルロース、ヘミセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又はそれらの組合せからなる群から選択される第２の外部コーティングを含む、請求項１に係る使用のための、請求項１から９までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
１つ又はいくつかの生体適合性のある賦形剤を更に含む、請求項１に係る使用のための、請求項１から１０までのいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
体重過多のヒト又は体重過多であったヒトにおける、少なくとも１つのプロバイオティクスを含む組成物の非治療的な美容上の使用であって、該プロバイオティクスが、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９である、使用。
【請求項１３】
前記組成物が、古細菌（Ａｒｃｈａｅａ）、ファーミキューテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、プロテオバクテリア（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、アクチノバクテリア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ベルコミクロビア（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）、フソバクテリア（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ）、メタノバクテリア（Ｍｅｔａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、スピロヘータ（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ）、フィブロバクター（Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒｓ）、デフェリバクター（Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ）、ディノコッカス（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、サーマス（Ｔｈｅｒｍｕｓ）、シアノバクテリア（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、メタノブレビバクテリウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、乳酸桿菌属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペプトストレプトコッカス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ルミノコッカス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、コプロコッカス（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ）、スブドリングラヌラム（Ｓｕｂｄｏｌｉｎｇｒａｎｕｌｕｍ）、ドレア（Ｄｏｒｅａ）、ブレイジア（Ｂｕｌｌｅｉｄｉａ）、アナエロフスティス（Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ）、ゲメラ（Ｇｅｍｅｌｌａ）、ロゼブリア（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）、カテニバクテリウム（Ｃａｔｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ジアリスター（Ｄｉａｌｉｓｔｅｒ）、アナエロトランカス（Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）（非病原性）、ファエカリバクテリウム（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、パラバクテロイデス（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、ユーバクテリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アッケルマンシア（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ブチリビブリオ（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ）、及びクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）のプロバイオティクス、又はそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの追加のプロバイオティクスを含む、請求項１２に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項１４】
前記組成物が、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）、デバリオマイセス（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）、トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、及びペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）からなる群から選択される真菌及び／又は酵母菌株を含む、請求項１２又は１３に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項１５】
前記ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９及び任意選択で前記少なくとも１つの追加のプロバイオティクスが、カプセル化担体にカプセル化されている、請求項１２から１４までのいずれか一項に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項１６】
前記カプセル化担体が、アルギネート、キトサン、ペクチン、プルラン、ゼラチン、カラギーナン、寒天ゲル又はそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの物質を含む、請求項１５に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項１７】
前記組成物が、単糖、多糖体、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ビタミン、酵母エキス、アルカリ金属若しくはアルカリ土類金属のハロゲン塩、抗酸化剤、グリセロール、酢酸亜鉛、塩化亜鉛、乳酸亜鉛、アスコルビン酸、クエン酸、植物油、乳脂肪、又はそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの食品源を含む、請求項１２から１６までのいずれか一項に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項１８】
前記組成物が、少なくとも１つのプレバイオティクスを更に含み、それによって相利共生組成物が形成される、請求項１２から１７までのいずれか一項に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項１９】
前記組成物が、前記ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９及び任意選択で前記少なくとも１つの追加のプロバイオティクスを被覆する第１の腸溶コーティングを含む、請求項１２から１８までのいずれか一項に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項２０】
前記第１の腸溶コーティングが、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）、又はそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項２１】
前記組成物が、アルギネート、キトサン、ペクチン、プルラン、ゼラチン、カラギーナン、寒天ゲル、セルロース、ヘミセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又はそれらの組合せからなる群から選択される第２の外部コーティングを含む、請求項１２から２０までのいずれか一項に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項２２】
前記組成物が、１つ又はいくつかの生体適合性のある賦形剤を更に含む、請求項１２から２１までのいずれか一項に記載の組成物の非治療的な美容上の使用。
【請求項２３】
少なくとも１つのタンパク質源及び少なくとも１つの炭水化物源を含む、プロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９のための培地であって、グルタチオンを更に含むことを特徴とする、培地。
【請求項２４】
グルタチオンが、培地１ｌ当たり２０〜３０ｇを含む濃度で存在することを特徴とする、請求項２３に記載の培地。
【請求項２５】
前記炭水化物源が、ラクトース、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マルトデキストリン、デンプン、トレハロース、マルトトリオース、及びそれらの組合せからなる群から選択される、少なくとも１つの糖又は糖の混合物を含むことを特徴とする、請求項２３又は２４に記載の培地。
【請求項２６】
少なくとも１つのアミノ酸、例えばグルコサミン又はガラクトサミンを更に含むことを特徴とする、請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の培地。
【請求項２７】
少なくとも１つの酵母エキスを更に含むことを特徴とする、請求項２３から２６までのいずれか一項に記載の培地。
【請求項２８】
プロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９を発酵によって生成する方法であって、請求項２３から２７までのいずれか一項に記載の培地で、該プロバイオティクスを培養する少なくとも１つのステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、体重過多のヒトの体重増加の根治的処置及び／又は体重過多のヒト若しくは体重過多であったヒトの体重増加の予防的処置において使用するための、少なくとも１つのプロバイオティクスに基づく組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
「体重過多」という用語は、本発明の意味では、ヒトが体脂肪、主に腹部脂肪の異常な又は過度の蓄積を有することを意味し、これは健康にとってのリスクである。本発明の範囲において、「体重過多」という用語はまた、ヒトにおける肥満状態の特定の及び極端な例も含む。
【０００３】
「体重過多であった」という用語は、本発明の意味では、ヒトが体重減少し、３〜５年を含む期間以上で正常とみなされる体重（ＢＭＩ又はウエスト／ヒップ比に基づく）を有することと理解されるべきである。
【０００４】
所与の個体群のレベルで体重過多及び肥満の測定を可能にする簡易な指標を作ることは、困難である。例えば、子供及び１０代の体重過多及び肥満指数を測定するために使用される尺度は、彼らの身体が成長に伴い一定の生理的変化を受けるために、成人に使用されるものとは異なる。結果的に、ＷＨＯ（世界保健機関）は、年齢に応じ、個体の年齢又は個体群の平均年齢に応じて体重を測定するための異なる方法を一般公衆に利用可能にしている。
【０００５】
一例として、体重過多は、成人では肥満度指数（ＢＭＩ）に基づき評価が可能であり、このＢＭＩは、サイズと相対的に比較した体重の簡単な測定の一つであり、成人の体重過多及び肥満を推定するために現在使用されている。これは、体重をサイズの２乗で割った値に相当し、ｋｇ／ｍ２で表される。
【０００６】
ＢＭＩは、両方の性別及びすべての成人年齢層に適用できるという利点がある。したがって、個人によっては、必ずしも同じ脂肪質量パーセントと一致しないので、近似指標とみなされるべきである。
【０００７】
この状況において、ＷＨＯは、ＢＭＩに基づき、成人が体重過多であるか又は肥満であるかを決定するための以下の閾値を定義付けている。
−  正常な体重状態は、２０〜２５を含むＢＭＩに相当し、
−  体重過多状態は、２５〜３０を含むＢＭＩに相当し、
−  肥満状態は、３０又はそれ超のＢＭＩに相当する。
【０００８】
しかし、ＢＭＩは、皮下脂肪に対する腹部脂肪の分布に関して何ら指標を示さないことに留意されたい。
【０００９】
この指数は、両方の性別及び成人個体のすべての年齢層にとって一貫した分類をもたらすことができるという利点を有するとしても、好ましくは、例えば個体のウエストラインの測定値といった別の指標を補完するものと解釈され得る。
【００１０】
かくして、ウエストラインが１００ｃｍを超える成人男性個体は、体重過多であるとみなされる。この閾値は、成人女性では８８ｃｍである。
【００１１】
このパラメータは、ウエストライン（Ａ）／ヒップ外周（Ｈ）比を測定することによって、すべての年齢層に一般化することができる。
【００１２】
体重過多は、男性個体では１を超える比で観測され、女性個体では０．８５を超える比で観測される。
【００１３】
「処置」という用語は、本発明の範囲において、ヒトの体重過多、特にヒトの肥満が、ＷＨＯによる疾患として認識された場合に適用される。
【００１４】
「根治的」という用語は、本発明の意味では、体重過多のヒトの体重を低減し、且つ／又は体重過多のヒトの体重増加を低減することを目的とする行為と理解されるものとする。したがって根治的処置は、好ましくは食事中及び／又は食後に、例えばＢＭＩに基づき、２０〜２５を含む、好ましくは２２と等しい、ある範囲の所定の値にあって、ヒトで正常とみなされる、すなわち健康にとってのリスクがより小さいとみなされる体重を達成することを目的とする行為を意味する。
【００１５】
「健康にとってのリスクがより小さい」という用語は、本発明の範囲において正常とみなされる体重にあり、メタボリック症候群を発症する危険性を無視できることと解釈されるべきである。
【００１６】
特に、根治的作用は、主に個体の腹部脂肪を低減し、少なくとも腹部脂肪の蓄積を低減することを目的とする。
【００１７】
「予防的」という用語は、本発明の意味では、体重過多のヒト又は体重過多であった（すなわち減量した）ヒトの体重を安定化し、したがって体重過多のヒト又は体重過多であったヒトの、好ましくは食事中及び／又は食後の体重増加を予防又は制限することを目的とする行為を意味するものとする。また予防的処置は、好ましくは食事中及び／又は食後に、ヒトで正常とみなされる、例えばＢＭＩに基づく一定の範囲の所定の値（注釈：２０〜２５）の安定な体重を維持することを目的とする行為を意味するが、正常な体重は、女性個体では０．８５未満、男性個体では１．００未満のＡ／Ｈ比に照らして解釈することもできる。
【００１８】
現在、世界的尺度に基づくと、体重過多及び肥満は、体重不足よりも高い死亡率の原因となっている（ＩＩ型糖尿病又は心血管疾患のような関連疾患が原因となる）。
【００１９】
特に、体重及び肥満は、世界的蔓延のレベルに達しており（毎年少なくとも３００万を超える人が体重過多又は肥満に関する病状で死亡することを考慮すると）、もはやいわゆる裕福な国々に限定されるものではなく、今や低所得国又は中所得国も影響を受けている。
【００２０】
更に一方では、高ＢＭＩは、時に高Ａ／Ｈ比と共にメタボリック症候群を促進する因子となることが証明されており、メタボリック症候群は、本発明の範囲内では、健康に対する危険因子：動脈高血圧、高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロールレベル、アンドロイド型肥満状態（例えば、腹部脂肪の蓄積）、及び糖血症の増大の組み合わせと定義される。これらの指標は、実際、現在の３つの主な公知の定義：ＷＨＯの定義（１９９８年に刊行され、次に１９９９年に修正された）、２００１年刊行のＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｇｒａｍの定義（ＮＣＥＰ−ＡＴＰＩＩＩ）、及び２００５年刊行のＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎの定義に共通する、定義の基本を形成する。
【００２１】
実際、メタボリック症候群は、これらに限定されないが、以下の指標：異常に高いインスリンレベル、ＩＩ型糖尿病、高コレステロール血症（低レベルの「善玉」コレステロールＨＤＬを伴う）、高血圧、経時的な著しい体重増加によって表され、特にこれが腹部肥満である場合、高トリグリセリド血症、脂肪肝、全身炎症状態の発生、及び脂肪細胞の肥大によって表される。
【００２２】
更に、慢性疾患の危険性は、これらに限定されないが、以下の指標：筋骨格系障害、特に関節症、又はある特定のタイプのがんによって表される。
【００２３】
したがって、ヒトの体重過多をもたらす制御の効かない体重増加の問題は、世界レベルで健康に無視できない影響を及ぼすことが証明されている社会問題となっている。
【００２４】
このような観点から、ＷＨＯは、過度の体重増加を予防するための世界的戦略において、食品及び身体運動に関する推奨を確立している。この戦略は、２００４年の世界保健総会（ＷＨＡ）によって採択されており、人に健康的な食事及び定期的な運動を行うことを推奨するのに必要なステップを定義する。
【００２５】
しかしこの戦略は、体重増加を予防する推奨に基づく場合、体重過多の個体若しくは体重過多であった個体、及び体重が再増加する危険性がある個体の体重増加の根治的及び予防的処置に関するいかなる指標も提案していない。実は、現在、制御の効かない体重増加の問題は、体重が増加するおそれがある正常な体重（すなわち、正常なＢＭＩ及び／又は正常なウエストラインを有する）個体にはもはや焦点を合わせておらず、特に、ＷＨＯが、２０歳を超えるほぼ１４億人が既に体重過多を呈していることを示した時から、既に体重過多であった個体に焦点を合わせている。後者の中でも、２億人を超える男性及びほぼ３億人の女性が肥満であり、世界的には、世界の１０人のうち１人を超える成人が、肥満である。
【００２６】
したがって実際に、体重過多のヒトの体重過多又は肥満の低減又は予防を可能にする処置を備えておく必要がある。体重過多及び肥満に関係する主な理由が、時に厳密になり得る処置を伴う特定の食事を行う努力の欠如であることに気付いた時からは、この処置は、好ましくは、それほど強制的であるべきではない。
【００２７】
特に、本発明は、腸管微生物叢の改変を肥満の発生と関連付ける、公知の因果関係の一部である（Ｌｅｙら、２００６．Ｎａｔｕｒｅ、４４４：１０２２〜１０２３；Ｎａｄａｌら、２００８．Ｉｎｔ  Ｊ．Ｏｂｅｓ．、３３（７）：７５８〜６７）。
【００２８】
これに関しては、多くの研究が実施されており、これらの研究によって、体重過多及び肥満の範囲に含まれるプロバイオティクスに基づく処置の使用に言及する膨大な数の文書を含む現況技術が提供されてきた。
【００２９】
特に、微生物叢は、宿主を良好な健康に維持することに寄与することが示されている。実際、均衡の取れた状態の微生物叢は、腸管の恒常性（homeostasia）の調節及び免疫均衡に寄与し、したがって微生物叢の任意の不均衡は、特にメタボリック症候群を発症する遺伝的素因を有する個体における、この症候群の発症に関与すると解釈される（Ｐａｒｋｓら、Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ、２０１２年）。
【００３０】
微生物叢と体重増加の関係を同定することは、広範な研究の原動力となっており、それらは様々な特許出願の対象となっており、最も関連するものを以下に記載する。
【００３１】
まず第１に、国際特許出願ＷＯ２００７０４３９３３に言及しなければならない。これは、食欲及びある特定の組織における脂肪堆積を低減し、これによってヒトの体重を制御するために、発酵乳の形態でのラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ）Ｆ１９及びＬ．アシドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＮＣＦＢ１７４８、並びにビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌａｃｔｉｓ）Ｂｂ１２の菌株の使用を提案する。しかし、その効果は、これらの細菌株の存在というよりは、主に、この特許出願において主張されている効果を生じさせる、カルシウム及び乳タンパク質の共同作用であると思われる。更に、この効果は、小腸の代謝に関する遺伝子発現だけを標的としており、したがって、体重増加に関与する他の器官及び組織には関しない。
【００３２】
次に、文書ＵＳ２０１０００６１９６７Ａ１はまた、飽食機序を調節するペプチドの発現を改変するための細菌組成物の使用について提案しており、この改変はもっぱら胃腸管でのみ行われる。
【００３３】
国際特許出願ＷＯ２００９１５３６６２は、体重過多又は肥満によって誘発されるメタボリック症候群と関連する指標の一覧に属する疾患である糖尿病の処置における、ビフィドバクテリウム及び乳酸桿菌に基づく組成物の使用を開示しており、この組成物は、中枢神経系には作用せず、したがって、例えば飽食機序の中枢制御に作用せずに、末梢組織の炎症を低減するこれらの微生物の能力に基づく。
【００３４】
更に、文書ＵＳ２０１００１５０８９０は、交感神経系機能を刺激し、その結果、代謝、したがってエネルギー消費を刺激するための組成物における、プロバイオティクス細菌（bacterial probiotics）の使用に関する情報を記載している。しかし、交感神経系の緊張は、ある特定の肥満個体でも活性であり、したがって、その活性化は、体重過多及び肥満の処置の範囲において信頼性のある代替手段ではないことが示されている。
【００３５】
特許出願ＵＳ２０１００１１１９１５は、子供の肥満を予防する範囲における代替手段として、プロバイオティクス細菌（bacterial probiotics）の組成物の一般的な使用を示している。ＵＳ２０１００１１１９１５によれば、この使用は、プロバイオティクスのビフィドジェニックな（bifidogenic）効果に基づくものであるが、この文書は、腸内のビフィドバクテリウムの数の増大が、子供の肥満の発生を予防するこの作用の原点とし得ることを確立する可能性をもたらす、具体的な根拠を示していない。
【００３６】
この文書ＵＳ２００５０１１２１１２は、胃腸管に存在する単糖から二糖からヒトが消化できない糖ポリマーを生成する、微生物の組成物を使用し、それによって体内の糖の吸収を事実上低減することを提案している。
【００３７】
最後に、文書ＪＰ１０３０６０２８は、更に、身体によるコレステロール吸収を阻害する作用に関する情報を記載しており、これは、ビフィドバクテリウムをキトサンと組み合わせて使用することによる。
【００３８】
残念ながら、現況技術の組成物の使用は、体重過多及び肥満の低減、並びにメタボリック症候群と関連する症状の低減（これは、例えば寛解と呼ばれる）を可能にするとしても、体重を所望の正常レベルで（すなわち、例えばＢＭＩ２０〜２５に相当する）、３〜５年を超えて長期間維持する（これは例えば治癒と呼ばれる）ことができない。
【００３９】
本発明の範囲において、寛解は、治癒とは区別されるものとする。個体は、医学的試験の間（体重、ウエストラインの測定等）、体重過多がもはや検出されなくなったときに寛解したとされる。しかし、ある特定の追加の時間間隔後に（体重過多のタイプに応じて変わり、一般に、寛解が３年又は５年継続するときである）、治癒が言及される場合にのみ、治癒が起こったとみなされる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００４０】
本発明の目的は、冒頭に記載した、前記プロバイオティクスがビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｓｐ．  ｌａｃｔｉｓ）Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９であることを特徴とする組成物を提供することによって、現況技術の障害を克服することである。
【００４１】
本発明による菌株は、ＢＣＣＭ（Ｂｅｌｇｉａｎ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｓ）及びＬＭＧ（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｕｍ  ｖｏｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ−Ｂａｃｔｅｒｉｅｎｖｅｒｚａｍｅｌｉｎｇ）によって、ブダペスト条約に従って２０１４年１月２７日に、ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９の番号の下で寄託された。
【００４２】
本発明の範囲において、組成物は、好ましくは生きた状態のプロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９を含む。「生きた状態の」という用語は、組成物１グラム当たり１０８〜１０１３ＣＦＵを含む、組成物中の生きた細菌の濃度を意味する。
【００４３】
本発明の範囲において、この特定のプロバイオティクスの菌株は、飽食に対して、また体重増加の制限と関連する腸管微生物叢の回復に対して、著しいプラス作用があることが観測された。
【００４４】
ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９の存在の役割は、特に、ヒトの肥満を予防する役割でよく知られている細菌であるアッケルマンシア・ムシニフィラ（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ  ｍｕｃｉｎｉｐｈｉｌａ）による腸管の再コロニー形成において顕著に観測され、肥満のレベルは、体重過多又は肥満の個体において強力に低減される。
【００４５】
更に驚くべきことに、白色脂肪組織を調節するＴリンパ球の機能に関与する転写因子ＰＰＡＲγの発現の回復に関連する、本発明による菌株の抗炎症作用及び免疫調節作用が、更に観測された。
【課題を解決するための手段】
【００４６】
したがって、本発明による組成物は、特に、体重過多のヒトにおける腸管微生物叢の障害、及びこの障害に関連する炎症性疾患の根治的又は予防的処置を可能にする。
【００４７】
したがって、本発明の組成物は、有利なことに、ヒトの体重過多と関連するメタボリック症候群の根治的又は予防的処置を目的とする。
【００４８】
したがって、本発明によれば、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９に基づく組成物は、好ましくは食事中及び／若しくは食後の、高脂肪食による体重増加を低減すること、又は体重を安定化することを伴って、身体に対する以下の効果を有することが実証された：インスリン感受性の改善、腹部及び皮下脂肪塊の発生の低減、脂肪細胞のサイズの低減、特に炎症促進性マクロファージによる白色脂肪組織の細胞浸潤の低減、炎症性マーカーの低減、肝脂肪の制限、及び「悪玉」コレステロールの制限又は低減。
【００４９】
このことが示し得る通り、少なくともプロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９を含む本発明による組成物は、体重過多に関係する様々な因子に対して作用する。
【００５０】
また、本発明の範囲内では、生きている状態又はそうでない状態のいずれかの特定の菌株ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９だけでなく、この菌株に由来する化合物の、体重増加に対する予防的及び根治的作用、並びに体重過多のヒトのメタボリック症候群に対する作用が実証された。
【００５１】
この文脈では、本発明による組成物は、少なくとも１つのプロバイオティクス要素又は少なくとも２つのプロバイオティクス要素の組合せを更に含むことができ、各要素は、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９に由来する、細胞壁の構成成分、細胞小器官の構成成分、核酸、細胞膜の構成成分、及び細胞代謝産物からなる群から選択される。
【００５２】
細胞壁の構成成分は、限定的ではなく例示的なものとして、ペプチドグリカン、タンパク質、ポリサッカライド、タイコ酸、又はそれらの組合せからなる群から選択される。
【００５３】
代謝産物は、限定的ではなく例示的なものとして、有機酸、無機酸、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、酵素、脂質、炭水化物、糖脂質、糖タンパク質、ビタミン、塩、金属又はそれらの組合せからなる群から選択される。
【００５４】
特定の一実施形態では、本発明による組成物は、酪酸塩若しくはその誘導体の少なくとも１つ、及び／又はプロピオン酸塩若しくはその誘導体の少なくとも１つを含み、前記酪酸塩及び／又は前記プロピオン酸塩の誘発は、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９によって促進される。
【００５５】
任意選択により、本発明による組成物は、少なくとも１つの追加のプロバイオティクスを含み、この追加のプロバイオティクスは、以下のプロバイオティクス、又はそれらの組合せからなる群から選択される：古細菌（Ａｒｃｈａｅａ）、ファーミキューテス（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、プロテオバクテリア（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、アクチノバクテリア（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ベルコミクロビア（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）、フソバクテリア（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ）、メタノバクテリア（Ｍｅｔａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、スピロヘータ（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ）、フィブロバクター（Ｆｉｂｒｏｂａｃｔｅｒｓ）、デフェリバクター（Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ）、ディノコッカス（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、サーマス（Ｔｈｅｒｍｕｓ）、シアノバクテリア（Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ）、メタノブレビバクテリウム（Ｍｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ペプトストレプトコッカス（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ルミノコッカス（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、コプロコッカス（Ｃｏｐｒｏｃｏｃｃｕｓ）、スブドリングラヌラム（Ｓｕｂｄｏｌｉｎｇｒａｎｕｌｕｍ）、ドレア（Ｄｏｒｅａ）、ブレイジア（Ｂｕｌｌｅｉｄｉａ）、アナエロフスティス（Ａｎａｅｒｏｆｕｓｔｉｓ）、ゲメラ（Ｇｅｍｅｌｌａ）、ロゼブリア（Ｒｏｓｅｂｕｒｉａ）、カテニバクテリウム（Ｃａｔｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ジアリスター（Ｄｉａｌｉｓｔｅｒ）、アナエロトランカス（Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ミクロコッカス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ）、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）（非病原性）、ファエカリバクテリウム（Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、バクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、パラバクテロイデス（Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）、ユーバクテリウム（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、アッケルマンシア（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、ブチリビブリオ（Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ）、及びクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）。
【００５６】
好ましくは、本発明による組成物は、少なくとも１つの真菌株及び／又は酵母菌株を更に含むことができ、この菌株は、以下の群から選択される：サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）、デバリオマイセス（Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ）、トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）、及びペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）。
【００５７】
好ましくは、本発明による組成物は、プロバイオティクスをカプセル化するための担体を含み、前記ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９及び任意選択で前記少なくとも１つの追加のプロバイオティクスは、カプセル化される。
【００５８】
有利には、前記真菌及び／又は前記酵母も、前記担体にカプセル化されている。
【００５９】
或いは、カプセル化担体は、アルギネート、キトサン、ペクチン、プルラン、ゼラチン、カラギーナン、寒天ゲル又はそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの物質を含む。
【００６０】
優先的に、前記少なくとも１つの物質は、親水コロイドである。
【００６１】
有利には、本発明による組成物は、単糖、多糖体、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ビタミン、酵母エキス、アルカリ金属若しくはアルカリ土類金属のハロゲン塩、抗酸化剤、グリセロール、酢酸亜鉛、塩化亜鉛、乳酸亜鉛、アスコルビン酸、クエン酸、植物油、乳脂肪、又はそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの食品源を含む。
【００６２】
特定の一実施形態では、本発明による組成物は、少なくとも１つのプレバイオティクスを含む相利共生組成物である。
【００６３】
好ましくは、前記少なくとも１つのプレバイオティクスは、オリゴ糖、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、イヌリン若しくはその誘導体、ラクツロース若しくはその誘導体、マンナンオリゴ糖、又はそれらの組合せからなる群から非限定的に選択される。
【００６４】
優先的に、本発明による組成物は、前記ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９及び任意選択で前記少なくとも１つの追加のプロバイオティクスを被覆する第１の腸溶コーティングを含む。特に、第１の腸溶コーティングは、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリマー（例えばＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）など）、又はそれらの組合せからなる群から選択される。
【００６５】
或いは、当該組成物は、アルギネート、キトサン、ペクチン、プルラン、ゼラチン、カラギーナン、寒天ゲル、セルロース、ヘミセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又はそれらの組合せからなる群から選択される第２の外部コーティングを更に含む。
【００６６】
別の任意選択の実施形態では、本発明による組成物は、１つ又はいくつかの生体適合性のある賦形剤を含む。
【００６７】
本発明による組成物は、妊娠中の女性若しくは出産した女性、又は「擬娩」儀式中の男性若しくは「擬娩」儀式を行った男性の、過度の体重増加（すなわち妊娠に伴う体重増加を大きく上回る）の根治的又は予防的処置を企図することができる。
【００６８】
本発明によれば、当該組成物は、好ましくは生きた状態のビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９を含む、当該組成物に基づく食品、又は更には栄養補助食品の食品組成物として提示することができる。
【００６９】
「食品組成物」という用語は、本発明における意味では、食品市場で一般に見られる組成物（例えばスナック、調理済み料理、飲料等）を意味するものとする。
【００７０】
「栄養補助食品」という用語は、本発明における意味では、栄養学的及び／又は生理的効果を有する栄養分又は物質を補足することを目的とする食料品と理解されるべきである。
【００７１】
本発明によれば、組成物は、経口又は舌下経路を介して使用し、摂取するために提供され得るが、呼吸器、好ましくは経鼻若しくは気管支、又は更には直腸を介して使用し、摂取するためにも提供され得る。
【００７２】
また、組成物は、プロバイオティクスに由来する要素に少なくとも基づき、皮下注射を企図される注射可能な液体組成物であってもよい。
【００７３】
優先的に、本発明による組成物は、錠剤、丸剤、ゼラチンカプセル、顆粒、粉末、流体、液体、クリーム又はスプレーとして調製することができる。
【００７４】
本発明によれば、組成物は、妊娠中の女性若しくは出産した女性、又は「擬娩」儀式中の男性若しくは「擬娩」儀式を行った男性の、過度の体重増加（すなわち妊娠を伴う体重増加を大きく上回る）の根治的又は予防的処置のために使用することができる。
【００７５】
本発明による治療組成物の他の実施形態及び使用は、添付の特許請求の範囲に示される。
【００７６】
本発明はまた、体重過多のヒト又は体重過多であったヒトにおける、少なくとも１つのプロバイオティクスを含む組成物の非治療的な美容上の使用に関し、前記プロバイオティクスは、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９である。
【００７７】
好ましくは、非治療的な美容上の使用のための前記組成物は、以下のプロバイオティクス、又はそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの追加のプロバイオティクスを含む：古細菌、ファーミキューテス、バクテロイデス、プロテオバクテリア、アクチノバクテリア、ベルコミクロビア、フソバクテリア、メタノバクテリア、スピロヘータ、フィブロバクター、デフェリバクター、ディノコッカス、サーマス、シアノバクテリア、メタノブレビバクテリウム、ラクトバチルス、ペプトストレプトコッカス、ルミノコッカス、コプロコッカス、スブドリングラヌラム、ドレア、ブレイジア、アナエロフスティス、ゲメラ、ロゼブリア、カテニバクテリウム、ジアリスター、アナエロトランカス、スタフィロコッカス、ミクロコッカス、プロピオニバクテリウム、腸内細菌科（非病原性）、ファエカリバクテリウム、バクテロイデス、パラバクテロイデス、プレボテラ、ユーバクテリウム、アッケルマンシア、バチルス、ブチリビブリオ、及びクロストリジウム。
【００７８】
有利には、前記非治療的な美容上の使用のための組成物は、サッカロマイセス、カンジダ、ピキア、デバリオマイセス、トルロプシス、アスペルギルス、リゾプス、ムコール、及びペニシリウムからなる群から選択される真菌株及び／又は酵母菌株を含む。
【００７９】
優先的に、前記非治療的な美容上の使用のための組成物において、前記ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスＮｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９及び任意選択で前記少なくとも１つの追加のプロバイオティクスは、カプセル化担体にカプセル化される。
【００８０】
有利には、前記非治療的な美容上の使用のための組成物において、前記カプセル化担体は、アルギネート、キトサン、ペクチン、プルラン、ゼラチン、カラギーナン、寒天ゲル及びそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの物質を含む。
【００８１】
有利には、前記非治療的な美容上の使用のための組成物は、単糖、多糖体、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ビタミン、酵母エキス、アルカリ金属若しくはアルカリ土類金属のハロゲン塩、抗酸化剤、グリセロール、酢酸亜鉛、塩化亜鉛、乳酸亜鉛、アスコルビン酸、クエン酸、植物油、乳脂肪、又はそれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つの食品源を含む。
【００８２】
好ましくは、前記非治療的な美容上の使用のための組成物は、少なくとも１つのプレバイオティクスを更に含み、それによって相利共生組成物が形成される。
【００８３】
好ましくは、前記非治療的な美容上の使用のための組成物は、前記ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９及び任意選択で前記少なくとも１つの追加のプロバイオティクスを被覆する第１の腸溶コーティングを含む。
【００８４】
有利には、前記非治療的な美容上の使用のための組成物において、前記第１の腸溶コーティングは、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）、又はそれらの組合せからなる群から選択される。
【００８５】
好ましくは、前記非治療的な美容上の使用のための組成物は、アルギネート、キトサン、ペクチン、プルラン、ゼラチン、カラギーナン、寒天ゲル、セルロース、ヘミセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又はそれらの組合せからなる群から選択される第２の外部コーティングを含む。
【００８６】
有利には、前記非治療的な美容上の使用のための組成物は、１つ又はいくつかの生体適合性のある賦形剤を更に含む。
【００８７】
本発明による組成物の非治療的な美容上の使用のための他の形態は、添付の特許請求の範囲において示されている。
【００８８】
本発明はまた、少なくとも１つのタンパク質源及び少なくとも１つの炭水化物源を含む、プロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９の培地であって、グルタチオンを更に含むことを特徴とする培地に関する。
【００８９】
グルタチオンは、細胞の細胞質の酸化還元電位を維持し、ある一定数の解毒作用及び酸素反応種の除去反応に関与するトリペプチドである。
【００９０】
驚くべきことに、本発明の範囲内では、このようなグルタチオンを含む培地は、体重過多のヒト又は体重過多であったヒトの体重増加に対して根治的又は予防的作用があることが観測された、プロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスの菌株Ｎｏ．ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９の能力を最適化することが示された。
【００９１】
好ましくは、本発明による培地は、培地１ｌ当たり２０〜３０ｇを含む濃度のグルタチオンを含む。
【００９２】
有利には、本発明によれば、前記培地の前記タンパク質源は、乳清ペプトン、カゼインペプトン、植物又は細菌のペプトン、及びそれらの組合せからなる群から選択される。
【００９３】
好ましくは、本発明によれば、前記培地の前記炭水化物源は、ラクトース、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マルトデキストリン、デンプン、トレハロース、マルトトリオース、及びそれらの組合せによって形成される群から選択される、少なくとも１つの糖又は糖の混合物を含む。
【００９４】
好ましくは、本発明によれば、前記培地は、少なくとも１つのアミノ糖、例えばグルコサミン又はガラクトサミンを更に含む。
【００９５】
好ましくは、本発明によれば、前記培地は、少なくとも１つの酵母エキスを更に含む。
【００９６】
好ましくは、本発明によれば、前記培地は、少なくとも１つの卵エキスを更に含む。
【００９７】
本発明による培地の他の実施形態は、添付の特許請求の範囲に示されている。
【００９８】
本発明はまた、プロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９を発酵によって製造する方法に関し、前記方法は、本発明による培地で、前記プロバイオティクスを培養する少なくとも１つのステップを含む。
【００９９】
本発明による方法の他の実施形態は、添付の特許請求の範囲に示されている。
【０１００】
本発明の他の特徴及び利点は、非限定的な下記の説明から、下記の実施例を参照することによって明らかになろう。
【０１０１】
これらの実施例は、マウスにおいて得られる結果を反復するものであり、それらを、ヒト血液から単離された免疫細胞からインビトロで得られた結果を用いて完遂した。
【０１０２】
以下の例１〜４で反復された試験結果は、マウスにおいて得られたものであるが、類似の結果が、ヒトにおいて予測されると理解される。
【０１０３】
特に哺乳動物、特にげっ歯類の体重増加に対する、菌株に特異的な効果が、本発明の範囲内で実証された。
【０１０４】
実際、プロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスの菌株ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９を、単独で、又は少なくとも１つの他のプロバイオティクスと組み合わせて投与することによって、体重過多の哺乳動物、特にげっ歯類における体重増加の低減を、インスリン抵抗性を含めた炎症及び代謝パラメータの改善と一緒に誘発する。
【０１０５】
特に、本発明によるプロバイオティクス菌株に基づく組成物の代謝保護効果は、本発明の範囲内で実証されており、その保護効果は、脂肪組織内のＰＰＡＲγの発現の回復及び細胞再構築、並びに肝脂肪に対する保護効果と更に関連する。
【０１０６】
また、本発明による菌株に基づく組成物は、脂肪酸の輸送に関する受容体の発現のモジュレーション、特に栄養分の吸収によって誘発される飽食機序において重要な役割を果たす短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）の輸送に関与するＧタンパク質（ＧＰＲ４１及びＧＰＲ４３）と連結する受容体の回復を可能にする。
【０１０７】
実際、脂肪細胞のサイズ、並びに炎症促進性サイトカイン及びケモカイン（ＭＣＰ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−アルファ等）の産生に対する、本発明による菌株のプラス作用が、実証され、そのいくつかはインスリン抵抗性の直接的な起源である。
【０１０８】
本発明による菌株は、更に、哺乳動物における脂質プロファイル及びグルコース代謝を再確立し、脂質異常症（したがってＩＩ型糖尿病）及び高血糖症のようなメタボリック症候群に直接関係する疾患を発症する危険性の予防を可能にすることが観測された。
【０１０９】
最後に、本発明によるプロバイオティクス菌株の摂取と、ヒトの肥満の予防、及び体重過多又は肥満の個体を強力に低減する役割でよく知られている細菌であるアッケルマンシアによる腸管コロニー再形成との間の関連が、実証された。
【図面の簡単な説明】
【０１１０】
【図１】体重過多及び次いで肥満が生じているマウスにおける、（Ａ）体重増加の時間依存性変化（％）、（Ｂ）グルコース耐性（ＧＴ）、（Ｃ）精巣上体脂肪組織（ＥＷＡＴ）の重量（質量）、及び（Ｄ）皮下脂肪組織（ＳＣＷＡＴ）の重量（質量）に対するＬｓ３３の作用を示す。データを、平均（１群当たりマウス１０〜１５匹）±平均からの標準偏差（ＳＥＭ）として表す。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。＊は、同一の介入処置の下、脂肪が豊富な食餌（ＨＦＤ）と対照食（ＬＦＤ）の比較に相当する（食餌効果の測定）。
【図２】体重過多及び次いで肥満が生じているマウスにおける、（Ａ）体重増加の時間依存性変化（％）、（Ｂ）食物の蓄積摂取量（グラム／日／マウス）、（Ｃ）インスリン耐性（ＩＴ）、及び（Ｄ）ＧＴに対するミックスの作用を示す。データを、平均（１群当たりマウス５〜１４匹）±平均からの標準偏差（ＳＥＭ）として表す。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＞０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１。＊は、同一の介入処置の下、ＨＦＤ食とＬＦＤ食の比較に相当する（食餌効果の測定）。＃は、同一食による、ミックスとリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）の比較に相当する（本発明によるプロバイオティクス又はプロバイオティクス混合物の効果の測定）。
【図３】体重過多及び次いで肥満が生じているマウスにおける、（Ａ）ＥＷＡＴの重量（質量）、（Ｂ）ＳＣＷＡＴの重量（質量）、（Ｃ）血中のレプチンの量（ｎｇ／ｍｌ）、（Ｄ）血中のアディポネクチンの量（μｇ／ｍｌ）、（Ｅ）ＥＷＡＴの組織学的検査（実験群のそれぞれの代表的切片）、及び（Ｆ）ＥＷＡＴにおける脂肪細胞のサイズ分布に対するミックスの作用を示す。データは、平均（１群当たりマウス１０〜１５匹）±平均からの標準偏差（ＳＥＭ）として表す。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１。＊は、同一の介入処置による、ＨＦＤ食とＬＦＤ食の比較に相当する（食餌効果の測定）。＃は、同一食による、ミックスとＰＢＳの比較に相当する（本発明によるプロバイオティクス又はプロバイオティクス混合物の効果の測定）。
【図４】体重過多及び次いで肥満が生じているマウスにおける、（Ａ）ＥＷＡＴの細胞組成（単球／マクロファージ（Ｆ４／８０、ＣＤ６８、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ）、制御性Ｔリンパ球（ＦｏｘＰ３）、及びケモカインＭＣＰ−１の特異的遺伝子の発現の分析）、（Ｂ）ＥＷＡＴにおけるマクロファージの存在（Ｆ４／８０に特異的な免疫蛍光マーキング及び総密度［ＩｎｔＤｅｎ］に関する定量化）、（Ｃ）ＥＷＡＴの炎症（炎症促進性サイトカインＴｎｆα、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−６及びＩＬ−１７の遺伝子発現の分析）、並びに（Ｄ）メッセンジャーＲＮＡにおけるＰＰＡＲガンマ（ＰＰＡＲγ）の発現（左、遺伝子発現）及びタンパク質の発現（中心左、ウエスタンブロット及び定量化［任意単位：Ａ．Ｕ．］）に対するミックスの作用を示す。データは、平均（１群当たりマウス５〜１４匹）±平均からの標準偏差（ＳＥＭ）として表す。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１。＊は、同一の介入処置による、ＨＦＤ食とＬＦＤ食の比較に相当する（食餌効果の測定）。＃は、同一食による、ミックスとＰＢＳの比較に相当する（プロバイオティクス又はプロバイオティクス混合物の効果の測定）。
【図５】体重過多及び次に肥満が生じているマウスにおける、（Ａ）脂質代謝に関与する因子（遺伝子ＦＡＢＰ１、ＡＰＯ  ＣＩＩ、及びＣＤ３６の発現の分析）、（Ｂ）短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）に対する受容体、遺伝子ＧＰＲ４１及びＧＰＲ４３の発現の分析によるに対するミックスの作用を示す。データは、平均（１群当たりマウス５〜１４匹）±平均からの標準偏差（ＳＥＭ）として表す。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１。＊は、同一の介入処置による、ＨＦＤ（高脂肪食）とＬＦＤ（低脂肪食）の比較に相当する（食餌効果の測定）。＃は、同一食による、ミックスとＰＢＳの比較に相当する（プロバイオティクス又はプロバイオティクス混合物の効果の測定）。
【図５Ｃ】腸管生態系をインビトロで刺激する（ＳＨＩＭＥ）モデルにおける、プロバイオティクス混合物ミックスと共に２４時間及び４８時間インキュベートした後の、総ＳＣＦＡの産生レベル（左）、並びに酢酸塩、酪酸塩及びプロピオン酸塩の割合（右）を示す。＊＊＊は、時間０と比較したものである。
【図６】体重過多及び肥満が生じているマウスにおける、（Ａ）腸管微生物叢の組成、特にビフィドバクテリウム属及びアッケルマンシア・ムシニフィラの集団に対するミックスの効果を示す。（Ｂ）ミックスで処置し、又はミックスで処置していないＨＦＤマウスにおいて検出されるビフィドバクテリウム種を、ＨＦＤ−ＰＢＳ及びＨＦＤ−ミックス群の代表であるマウス５匹のＴＧＧＥ分析によって決定した。マーカーＭ１又はＭ２は、示された菌株の混合物に相当する。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１。＊は、同一の介入処置による、ＨＦＤ食とＬＦＤ食の比較に相当する（食餌効果の測定）。＃は、同一食による、ミックスとＰＢＳの比較に相当する（本発明によるプロバイオティクス又はプロバイオティクス混合物の効果の測定）。
【図７】体重過多及び次に肥満が生じているマウスにおける、（Ａ）膵臓、肝臓及び脾臓の重量（質量）、（Ｂ）脂肪滴の蓄積（脂肪症、実験群のそれぞれに代表的な組織学的切片を見る）、及び（Ｃ）炎症若しくは脂質代謝に関与する異なるマーカー、又はインスリンに対する応答（遺伝子ｍｃｐ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＩＬ−１０、ＩＬ−１７、ｓｒｅｂｐ−１ｃ、ＡＰＯＣＩＩ  Ｆａｂｐ１及びＩＲＳ２の発現の分析）に対するミックスの作用を示す。データは、平均（１群当たりマウス５〜１４匹）±平均からの標準偏差（ＳＥＭ）として表す。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１、＃＃＃＃ｐ＞０．０００１。＊は、同一の介入処置による、ＨＦＤ食とＬＦＤ食の比較に相当する（食餌効果の測定）。＃は、同一食による、ミックスとＰＢＳの比較に相当する（本発明によるプロバイオティクス又はプロバイオティクス混合物の効果の測定）。
【図８ａ−８ｂ】本発明によるプロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９が、本発明による培地で培養されたか（図８ａ）又は培養されていないか（図８ｂ）に応じて、体重増加に対して及ぼす継時的な影響を示す。ＬＦＤ＝低脂肪食、ＨＦＤ＝高脂肪食、ＨＦＤ  Ｂ．ラクティス＝プロバイオティクスが、グルタチオンが存在する状態（図８ａ）又はグルタチオンが存在しない状態（図８ｂ）で培養された場合の、本発明による組成物と一緒に摂取される高脂肪食。
【０１１１】
以下の例１〜４で論じるインビボの結果を収集するために、以下の手順を観測した。
【０１１２】
インビボ手順
マウス、細菌株、及び食餌
試験を、実験方法の開始時に５週齢であった雄性マウスＣ５７ＢＬ／６Ｊで実施した。
【０１１３】
乳酸桿菌のＬ．サリバリウス（Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）の菌株Ｌｓ３３は、Ｄａｎｉｓｃｏ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡ）によって提供された。
【０１１４】
プロバイオティクス混合物（以下の実施例ではミックスと呼ばれる）は、１：１のＣＦＵ（コロニー形成単位）比（合計１０９ＣＦＵ）の、２つの異なる菌株：Ｌ．ラムノサス（Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＬＭＧ  Ｓ−２８１４８菌株、及びビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９菌株を含む。マウスに与える食餌を、低脂肪含量（ＬＦＤ：Ｄ１２４５０Ｂ；脂肪由来１０％ｋｃａｌ）を含む第１の食餌、及び高脂肪レベル（ＨＦＤ：Ｄ１２４９２、脂肪由来６０％ｋｃａｌ）を含む第２の食餌に分ける。食餌は、社製研究食によって提供する。
【０１１５】
動物の処置手順
１週間５日間連続で、各マウスに、滅菌水（Ｈ２Ｏ）中Ｌｓ３３−１０９ＣＦＵ（コロニー形成単位又は経口組成物に存在するコロニー形成単位の数）（Ｌｓ３３−Ｈ２Ｏ群）、滅菌水（Ｈ２Ｏ群）、又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中プロバイオティクス混合物（ミックス群；菌株毎に５  １０８ＣＦＵ）（ミックス−ＰＢＳ群又はＰＢＳ群）を３０μＬ経口投与した。
【０１１６】
処置の１週間後、Ｌｓ３３、水、ミックス、又はＰＢＳで処置したマウスを、ＬＦＤ食（１群当たりｎ＝５）又はＨＦＤ食（１群当たりｎ＝１５）に無作為に割り当てた。体重及び食物摂取量を、毎週記録した。
【０１１７】
動物を屠殺したら、血液、精巣上体の白色脂肪組織（ＥＷＡＴ）及び皮下の白色脂肪組織（ＳＣＷＡＴ）、肝臓、脾臓、小腸及び膵臓を収集した。
【０１１８】
インスリン及びグルコースに対する耐性試験
耐糖能（ＧＴＴ）及びインスリン耐性（ＩＴＴ）試験を、食餌のそれぞれ１２週間及び各１４週間後に実施した。動物を、６時間絶食させた後、グルコース（Ｄ−グルコース、１ｇ／体重１ｋｇ）（ＧＴＴ）又はインスリン（０．７５ＵＩ／体重１ｋｇ）（ＩＴＴ）を腹腔内投与（ＩＰ）した。血中グルコースレベルを、市販で利用可能な自動血糖測定器（glucometer）（例えば、ＡＣＣＵ−ＣＨＥＫ（登録商標）ｐｅｒｆｏｒｍａ）を用いて、グルコース（ＧＴＴ）又はインスリン（ＩＴＴ）を注射する前と、グルコース（ＧＴＴ）又はインスリン（ＩＴＴ）を注射した後の異なる時間に尾部で採血した血液試料で測定した。
【０１１９】
血液分析
レプチン、アディポネクチン、ＭＣＰ−１、及びインスリンの血漿レベルを、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して測定した。非エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）、トリグリセリド、グリセロール、ＨＤＬコレステロール、及びＬＤＬコレステロールのレベルを、市販で利用可能な分析キット（例えば、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＧＢによって開発されたＡｂｃａｍキット）を使用して決定した。
【０１２０】
組織学的分析及び免疫組織化学的分析
肝臓及び白色脂肪組織（ＥＷＡＴ）の試料を、４％のパラホルムアルデヒド溶液に入れ、次にパラフィンに包埋し、最後に切断し、スライド上に置き、次にヘマトキシリンエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。白色脂肪組織（ＥＷＡＴ）の形態学的分析を、切片１つ当たり少なくとも１０の視野（約１００個の脂肪細胞を表示する）で、画像化プログラムＩｍａｇｅ  Ｊ（ＮＩＨ  ｉｍａｇｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を使用することによって実施した。
【０１２１】
遺伝子発現の分析
肝臓及び腸の白色脂肪組織の総ＲＮＡを、抽出して（当業者に公知の方法に従って）、次に逆転写した（１μｇの量を、前述の組織分類毎に再転写した）。定量的リアルタイムＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）（ＲＴ−ｑＰＣＲ）を、当業者に公知の手順に従って実施した。
【０１２２】
統計的分析
データを、平均±平均に関する標準偏差（ＳＥＭ）として表す。統計的分析を、Ｋｒｕｓｋａｌ  Ｗａｌｌｉｓ試験を使用し、その後マン−ホイットニーＵ検定を使用して実施した。実験群間の差異は、値ｐが０．０５未満である場合に統計的に有意であるとみなされる。
【０１２３】
例５及び６に論じたインビトロ結果を収集するために、以下の手順を観測した。
【０１２４】
インビトロ手順
ヒトの微生物生態系のシミュレーター−ＳＨＩＭＥモデル
ヒト胃腸管をシミュレートするＳＨＩＭＥ反応器を、当業者に周知の手順に従って設定した。
【０１２５】
ミックスを反応器に添加し、短鎖脂肪酸の産生（ＳＣＦＡ）を、嫌気性雰囲気下、３７℃におけるインキュベーションのｔ＝０時間、ｔ＝２４時間、及びｔ＝４８時間目に測定した。
【０１２６】
ヒト血液細胞に対する菌株ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９の抗炎症効果の評価
４人の健康なドナーから得た新鮮なヒト血液を、ＰＢＳ−Ｃａ（ＧＩＢＣＯ）により１：１比で希釈し、Ｆｉｃｏｌｌ層（ＧＩＢＣＯ）上に置き、４００Ｇで３０分間、２０℃で遠心分離処理した。
【０１２７】
末梢血の単核細胞（ＰＢＭＣ）を、遠心分離後に血液から単離し、ＰＢＳ−Ｃａを使用して最終体積５０ｍｌに懸濁させ、７５０Ｇで１０分間、２０℃において３回洗浄した。次に、ＰＢＭＣを、１０％（ｖ／ｖ）の補体除去ウシ血清（血清を５６℃で３０分間置いた）、１％（ｗ／ｖ）のＬ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ）、及びゲンタマイシン（３０μｇ／ｍｌ）（ＧＩＢＣＯ）を補完したＲＰＭＩ培地（ＧＩＢＣＯ）に再懸濁させた。ＰＢＭＣを計数し、それらの数を１ｍｌ当たり細胞２×１０６個に調整した。調製物を、２４ウェルの培養プレートに分配する（１ｍｌ）。
【０１２８】
（例１）Ｌｓ３３対ミックス
この実施例は、マウスの体重過多及び肥満の発生に対するＬｓ３３の影響を示す。
【０１２９】
図１は、Ｌｓ３３又は水及び低脂肪レベル食（ＬＦＤ）又は高脂肪レベル食（ＨＦＤ）による１５週間の処置の間の、以下の指標を示す。
（Ａ）ｄ日目＝０に測定した体重に対するパーセンテージとして表される、体重増加の時間依存性変化、
（Ｂ）食餌を開始して１２週間後に実施した耐糖能試験（ＧＴＴ）。グルコースレベル（ｍｇ／ｄｌ）を、６時間絶食させた後のマウスにおいて、グルコースの腹腔内注射（ＩＰ）（時間ｔ＝０に相当する）後、グラフに示した時間ｔ（分）において直接測定した。
（Ｃ）食餌を開始して１５週間後の精巣上体脂肪組織（ＥＷＡＴ）の重量（質量）（ｇ）（屠殺の際に秤量した）、
（Ｄ）食餌を開始して１５週間後の皮下脂肪組織（ＳＣＷＡＴ）の重量（質量）（ｇ）（屠殺の際に秤量した）。
【０１３０】
この図に示されている結果からわかる通り、菌株Ｌｓ３３は、インビトロ及び他の病理学的モデル（すなわち腸管の炎症）でその抗炎症活性が実証されているにもかかわらず、Ａ〜Ｄの様々な指標に対していかなる（プラス又はマイナス）効果も示さない。
【０１３１】
逆に、混合物ミックスの投与は、著しい保護効果を示す。これらの結果を、図２に示す。
【０１３２】
この図は、プロバイオティクス混合物（ミックス）又はＰＢＳを用いた処置の１７週間後、及び低脂肪レベル食（ＬＦＤ）又は高脂肪レベル食（ＨＦＤ）に関して、対応する以下の結果を示す。
（Ａ）体重増加の時間依存性変化（ｄ日目＝０に測定した体重に対するパーセンテージとして表される）、
（Ｂ）マウス１匹及び１日当たりの食物の蓄積摂取量（ｇ／日／マウス）、
（Ｃ）食餌を開始して１４週間後に実施したインスリン耐性試験（ＩＴＴ）：血中グルコースレベルを、インスリンの腹腔内注射（ＩＰ）後に測定した。結果は、正規化レベル（注射前に測定したグルコースレベルに対する％）±ＳＥＭ、及びインスリン注射後に正規化された各グルコース曲線の曲線下面積値（ＡＵＣ）の平均±ＳＥＭを示す。
（Ｄ）食餌を開始して１２週間後に実施した耐糖能試験（ＧＴＴ）。グルコースレベル（ｍｇ／ｄｌ）を、グルコースのＩＰ注射後にマウスで測定し、ＡＵＣ値を算出した。
【０１３３】
ＨＦＤ−ミックス群のマウスでは、ＨＦＤ−ＰＢＳ群で得られた（１１３．５１％±４．８９％の増加）よりも、著しい体重増加が観測されなかった（８０．９７％±４．９６％の増加）（図２Ａ参照）。
【０１３４】
図２Ｂによって示されている通り、プロバイオティクスミックス混合物で処置したＨＦＤ群のマウスは、食物の蓄積摂取量（食物摂取量、ＦＩ）が少なかった。興味深いことに、体重増加及びＦＩ指数で観測された有益な効果は、処置開始後に急速に表れた（第４週目から）。
【０１３５】
ミックス混合物の投与により、以下の表１のより少ないグルコース及びインスリンレベルによって示される通り、ＨＦＤ群のグルコースの恒常性が改善される。
【表１】
2017506637.tif 000003
【０１３６】
この表のデータは、平均±平均に関する標準偏差（ＳＥＭ）（１群当たりマウス５〜１４匹）で表される。＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１。＊は、同一の介入処置による、ＨＦＤ食とＬＦＤ食の比較に相当する（食餌効果の測定）。＃は、同一食による、ミックスとＰＢＳの比較に相当する（プロバイオティクス又はプロバイオティクス混合物の効果の測定）。
【０１３７】
更に、表１に示されている通り、ミックスの効果を、引き続きＮＥＦＡ、グリセロール及びトリグリセリドレベルに限定する場合、総コレステロールレベル及びＨＤＬコレステロールの低下に関連して、低コレステロール血症作用が実証される。
【０１３８】
更に、ＨＯＭＡ−ＩＲ指数（（空腹時インスリン／空腹時グルコースレベル）／２２．５レベル）は、ＨＤＦ−ミックス群のマウスにおいて、対照群と比較して著しく低下しており（３２．０４±５．８６対８１．５７±１９．６３；ｐ＜０．０１）、このことは、インスリン耐性試験の結果によって確認される通り、インスリン感受性が改善されたことを示している（図２Ｃ参照）。
【０１３９】
また、ミックスで処置したマウスは、グルコース注射に対する不耐性がより低い（図２Ｄ参照）。
【０１４０】
（例２）白色脂肪組織の炎症に対するミックスの作用
図３は、以下に対するミックスの効果を示す。
（Ａ）ＥＷＡＴの重量（質量）（ｇ）、
（Ｂ）ＳＣＷＡＴの重量（質量）（ｇ）、
（Ｃ）事前に６時間絶食させておいたマウスの血清においてＥＬＩＳＡ法（免疫酵素的アッセイ法）によって測定される、血中レプチンの量（ｎｇ／ｍｌ）、
（Ｄ）事前に６時間絶食させておいたマウスの血清においてＥＬＩＳＡ法によって測定される、血中アディポネクチンの量（μｇ／ｍｌ）、
（Ｅ）精巣上体脂肪組織の組織学的検査（実験群のそれぞれに代表的な、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した切片を提示する）。尺度は１００μｍである。黒色矢印は、細胞浸潤の存在を示す、及び
（Ｆ）ＥＷＡＴの脂肪細胞のサイズ分布。結果を、サイズ１クラス（０〜２０μｍ、２０〜４０μｍ等）当たりの脂肪細胞％で示す。一方、図７は、以下に対するミックスの作用を示す。
（Ａ）膵臓、肝臓、及び脾臓の重量（質量）（ｇ）、
（Ｂ）肝臓の脂肪滴の蓄積（すなわち脂肪症）（実験群のそれぞれに代表的な、Ｈ＆Ｅで染色した切片を提示する）。尺度は、１００μｍである、及び、
（Ｃ）炎症促進性及び抗炎症性サイトカイン、並びに肝臓の脂質の輸送及び代謝に関与する受容体をコードする遺伝子の発現。
【０１４１】
対照群ＨＦＤと比較すると、ＨＦＤ−ミックス群は、ＥＷＡＴ及びＳＣＷＡＴの脂肪質量が顕著に低下する（図３Ａ及び３Ｂ参照）。
【０１４２】
また、膵臓、肝臓及び脾臓の重量（質量）の顕著な低下が、ＨＦＤ−ミックス群の個体で観測される（図７Ａ参照）。
【０１４３】
更に、制御されたＨＦＤ群のマウスは、脂肪肝を生じたが、プロバイオティクスミックス混合物を投与すると、組織の脂肪滴の存在が制限される可能性がある（図７Ｂ参照）。
【０１４４】
白色脂肪組織の質量低下に従って、ＨＦＤ−ミックス群では、血中レプチンレベルが著しく低下することが証明され（図３Ｃ参照）、一方アディポネクチンレベルは、より高くなる傾向がある（図３Ｄ参照）。
【０１４５】
精巣上体脂肪組織の組織学的検査によって、ＨＦＤ−ミックス群のマウスにおける小脂肪細胞の密度がより高かったことが示された（図３Ｅ及び３Ｆ参照）。
【０１４６】
対照群のマウスでは、脂肪組織が、脂肪細胞を取り囲む細胞によって顕著に浸潤されているとしても（図３Ｅの矢印で示す）、プロバイオティクスミックスを投与された群のマウスから得られた組織試料は、この浸潤がそれほど顕著ではないことに留意されたい。
【０１４７】
肥満が生じている間、マクロファージが白色脂肪組織において動員されると同時に、制御性Ｔ細胞ＦｏｘＰ３＋ＣＤ４＋がこれらの組織に残存する。
【０１４８】
図４は、体重過多マウスにおける、脂肪組織の炎症に対するミックスの作用を示す。
【０１４９】
図４Ａに示されている通り、ＬＦＤの対照組織と比較すると、単球／マクロファージのいくつかの特異的なマーカー（Ｆ４／８０、Ｃｄ６８、Ｃｄ１１ｂ、及びＣｄ１１ｃ）の発現レベルは、ＨＦＤ群のマウスで増大するが、マーカーＦｏｘｐ３に関するレベルは低下する。
【０１５０】
プロバイオティクスミックス混合物を投与すると、ＨＦＤ食によって誘発される単球／マクロファージのマーカーの発現が著しく低下し、マーカーＦｏｘｐ３の発現レベルが増大する。
【０１５１】
脂肪組織へのマクロファージの動員に対する、ミックス混合物、したがって本発明によるプロバイオティクス菌株の影響は、図４Ｂに示されている結果によって支持される。
【０１５２】
抗炎症性Ｔｒｅｇリンパ球の蓄積の増加を伴うマクロファージの動員の低下に従って、この実施例では、Ｉｌ６、Ｔｎｆα、Ｉｌ−１α、及びＩｌ−１７の特異的メッセンジャーＲＮＡの発現レベルの低下によって実証される通り（図４Ｃ参照）、ミックス混合物で処置したマウスの精巣上体脂肪組織が、対照組織未満の炎症レベルを有することが示される。
【０１５３】
更に、ミックス混合物に基づく処置は、ＨＦＤ食によって誘発されるＰＰＡＲγの低下を制限する（メッセンジャーＲＮＡレベル及びタンパク質レベルの両方において）ことが示される（図４Ｄ参照）。
【０１５４】
（例３）小腸の脂質代謝及び短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）の産生に対するミックスの作用
この実施例では、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡは短鎖脂肪酸の略語である）の輸送の原因となる遺伝子（ＧＰＲ４１及びＧＰＲ４３）の発現レベルが、ＨＦＤ食を受けたマウスの小腸では低下することを示すが、このことは、ＨＦＤ群においてそれらが検出される程度が少ないほど、ＳＣＦＡがプラスに作用できる程度が低くなり、一方、ＨＦＤ食の下でミックス混合物を用いて処置された動物では、著しく増加することを示している（図５Ｂ参照）。
【０１５５】
逆に、ミックスの投与は、脂肪食によって誘発される脂質代謝に関与する遺伝子の増加を制限する効果がある（図５Ａ参照）。
【０１５６】
（例４）アッケルマンシア・ムシニフィラの微生物叢及びコロニー形成レベルに対するミックスの作用
ある特定の細菌の微生物叢の分析を、マウスの盲腸内容物で定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）によって実施した。マウスに、ミックスと共に、又はミックスの投与を伴わずにＨＦＤ食を与え、他方ではマウスに、ミックスと共に、又はミックスの投与を伴わずにＬＦＤ食を与えた。
【０１５７】
図６に示されている結果は、ＨＦＤ−ミックスマウスの微生物叢の組成に変化があったことを示しており、特に、ＨＦＤ食を受け、本発明によるプロバイオティクス菌株又はプロバイオティクス混合物で処置したマウスでは、アッケルマンシア・ムシニフィラによるコロニー形成が回復した。
【０１５８】
（例５）ＳＦＣＡの産生に対するミックスの作用；ＳＨＩＭＥモデルの使用
この実施例では、ヒトの腸の微生物生態系を再生することを企図した、腸をシミュレーションするインビトロの動的モデルを使用した。
【０１５９】
このシミュレーションによる結果によって示される通り（図５Ｃ参照）、プロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスの菌株番号ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９を使用すると、接種後４８時間以内に総ＳＦＣＡの産生を増大し、ヒトによる栄養分の取込みによって誘発される飽食を促進する２つの代謝産物である酪酸塩及びプロピオン酸塩の腸内産生を促進することができる。本発明によるミックス混合物のインキュベーション前（Ｔ０）及びインキュベーション後（Ｔ２４ｈ及びＴ４８ｈ）、ＳＨＩＭＥ反応器と関連する上行結腸において産生された酪酸塩及びプロピオン酸塩のレベルを、再び表２に示す。これらのデータは、ｍｍｏｌ／Ｌ±ＳＥＤで表される。
【表２】
2017506637.tif 000004
【０１６０】
菌株ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９の培地におけるグルタチオンの重要性の実証
図８ａ及び８ｂは、本発明によるプロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９が、本発明による培地で培養されたか（図８ａ）又は培養されていないか（図８ｂ）に応じて、体重増加に対して及ぼす継時的な影響を示す。
【０１６１】
図８ａ及び８ｂ、より具体的にはＨＦＤ  Ｂ．ラクティス曲線を比較することによってわかる通り、グルタチオンを含む培地で培養することによってプロバイオティクスであるビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティスNo.ＬＭＧ  Ｐ−２８１４９を得た本発明による組成物と一緒に、脂肪が豊富な食餌が摂取されると、体重増加の著しい低減が継時的に観測されるが（図８ａ）、グルタチオンを含まない培地で培養することによって得られたプロバイオティクスを含む本発明による組成物を投与しても観測されない（図８ｂ）。
【０１６２】
本発明は、前述の実施形態に限定されず、添付の特許請求の範囲から逸脱することなく、多くの改変を加え得ることが、完全に理解される。
【０１６３】
頭字語の一覧
ＳＣＦＡ：短鎖脂肪酸
ＥＷＡＴ：精巣上体の白色脂肪組織
ＧＴ（Ｔ）：耐糖能（試験）
ＨＤＬ：高密度脂質
Ｈ＆Ｅ：ヘマトキシリン及びエオシン
ＨＦＤ：高脂肪食
ＢＭＩ：肥満度指数
（ＨＯＭＡ）−ＩＲ：インスリン抵抗性の（恒常性モデル）評価
ＩＴ（Ｔ）：インスリン耐性（試験）
（Ｖ）ＬＤＬ：（非常に）低密度脂質
ＬＦＤ：低脂肪食
ＮＥＦＡ：非エステル化脂肪酸
ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水
ＰＢＭＣ：末梢血の短核細胞
ＳＣＷＡＴ：皮下の白色脂肪組織
ＳＥＭ：平均に関する標準偏差
ＳＨＩＭＥ：ヒト腸管の微生物生態系のシミュレーター
ＷＡＴ：白色脂肪組織
【図１Ａ】
2017506637.tif 000005
【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
2017506637.tif 000007
【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
2017506637.tif 000011
【図２Ｄ】
2017506637.tif 000012
【図３Ａ】
2017506637.tif 000013
【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
2017506637.tif 000015
【図３Ｄ】
2017506637.tif 000016
【図３Ｅ】
2017506637.tif 000017
【図３Ｆ】
2017506637.tif 000018
【図４Ａ】
2017506637.tif 000019
【図４Ｂ】
2017506637.tif 000020
【図４Ｃ】
2017506637.tif 000021
【図４Ｄ】
2017506637.tif 000022
【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2017506637.tif 000024
【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【国際調査報告】
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