(57)【要約】  ピリドキサミンを使用して急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を制限しＡＫＩを処置する方法ならびにピリドキサミン療法の有効性をモニタリングするための方法が説明される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を制限する方法であって、
誘発事象を被る対象に、ＡＫＩの発症を制限するために有効量のピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を投与すること、
を含み、
前記投与が、前記対象にピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を前記誘発事象より前に、前記誘発事象の時点で、または前記誘発事象から２４時間以内に、投与することを含む、
方法。
【請求項２】
前記誘発事象が、心臓血管手術、造影剤の注射、化学療法剤の投与、感染症により誘発される炎症（敗血症）の発症、および病院の集中治療室への入院からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を制限する方法であって、
ＡＫＩの恐れがある対象に、ＡＫＩの発症を制限するために有効量のピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を投与すること、
を含む方法。
【請求項４】
前記対象が、低血液量、肝硬変症、感染症により誘発される炎症（敗血症）、腎動脈狭窄症、腎静脈血栓症、糸球体腎炎、急性尿細管壊死（ＡＴＮ）、急性間質性腎炎（ＡＩＮ）、良性前立腺肥大症、閉塞した尿路カテーテルへの曝露、膀胱結石、および、膀胱、尿管または腎臓の悪性腫瘍、からなる群より選択されるＡＫＩについての危険因子を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＡＫＩの発症を制限することが、以下の：
・ＡＫＩに特徴的な血清クレアチニンレベルの上昇を制限すること；
・ＡＫＩに特徴的な糸球体濾過量の減少を制限すること；
・ＡＫＩに特徴的な尿量の減少を低減すること；
・ＡＫＩに特徴的な腎線維症を制限すること；
・限定されるものではないが代謝性アシドーシス、高カリウムレベル（および潜在的に生じ得る不整脈）、尿毒症、体液バランスの変化、および他の臓器系への影響を含め、１つ以上の他のＡＫＩの症状の発症を制限すること；
・慢性腎疾患への進行を制限すること；
・腎透析の必要性を制限すること；および
・腎臓移植の必要性を制限すること、
のうちの１つ以上を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を処置する方法であって、
ＡＫＩを有する対象に、ＡＫＩを処置するために有効量のピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を投与すること、
を含む方法。
【請求項７】
ＡＫＩを処置することが、以下の：
・ＡＫＩに特徴的な血清クレアチニンレベルの上昇を低減または制限すること；
・ＡＫＩに特徴的な糸球体濾過量の減少を増大または制限すること；
・ＡＫＩに特徴的な尿量の減少を低減すること；
・ＡＫＩに特徴的な腎線維症を制限すること；
・限定されるものではないが代謝性アシドーシス、高カリウムレベル（および潜在的に生じ得る不整脈）、尿毒症、体液バランスの変化、および他の臓器系への影響を含め、１つ以上の他のＡＫＩの症状の発症を制限すること；
・慢性腎疾患への進行を制限すること；
・腎透析の必要性を制限すること；および
・腎臓移植の必要性を制限すること、
のうちの１つ以上を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩が、１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇの投与単位で１日あたり少なくとも１回、前記対象に投与される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ピリドキサミン療法の有効性をモニタリングするための方法であって、
（ａ）ピリドキサミン療法を受ける対象から得られた生体試料において、以下の：
（ａ）Ｃｏｌ３α１の発現レベル、（ｂ）αＳＭＡの発現レベル、（ｃ）Ｋｉｍ１の発現レベル、（ｄ）ＮＧＡＬの発現レベル、（ｅ）Ｃｏｌ１α１の発現レベル、および／または（ｅ）イソフラン対イソプロスタン比（ＩｓｏＦ／ＩｓｏＰ）、
のうちの１つ以上を決定することと、
（ｂ）ステップ（ａ）で決定したマーカーのレベルを対照と比較することと、
を含み、
前記マーカーのうちの１つ以上のレベルが対照に比べて低い対象は、ピリドキサミン療法に反応している、
方法。
【請求項１０】
前記対象がＡＫＩを有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
１つ以上のマーカーのレベルが前記生体試料中で増加していない場合、前記対象に対するピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩のその後の投与量が増加される、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記生体試料が腎生検を含む、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記対象が哺乳動物である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記対象がヒトである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、２０１４年１１月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／０７８２９９号；２０１５年３月９日に出願された同第６２／１３０４３５号；および２０１５年６月２日に出願された同第６２／１６９９９６号に対する優先権を主張し、これらはそれぞれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
急性腎傷害（ＡＫＩ）（急性腎不全とも呼称される）は、数時間または数日間にわたって急速に発症する。ＡＫＩは、慢性腎疾患（ＣＫＤ）を引き起こし得るか、または、透析を必要とする腎不全（末期の腎疾患）さえも引き起こし得る。また、ＡＫＩは、心臓疾患または死亡を導くこともある。
【発明の概要】
【０００３】
第一の態様では、本発明は、急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を制限する方法であって、
誘発事象を被る対象に、ＡＫＩの発症を制限するために有効量のピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を投与すること、
を含み、
投与が、対象にピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を誘発事象より前に、誘発事象の時点で、または誘発事象から２４時間以内に、投与することを含む、
方法を提供する。
【０００４】
別の態様では、本発明は、急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を制限する方法であって、
ＡＫＩの恐れがある対象に、ＡＫＩの発症を制限するために有効量のピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を投与すること、
を含む方法を提供する。
【０００５】
さらなる態様では、本発明は、急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を処置する方法であって、
ＡＫＩを有する対象に、ＡＫＩを処置するために有効量のピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を投与すること、
を含む方法を提供する。
【０００６】
さらに別の態様では、本発明は、ピリドキサミン療法の有効性をモニタリングするための方法であって、
（ａ）ピリドキサミン療法を受ける対象から得られた生体試料において、
（ａ）Ｃｏｌ３α１の発現レベル、（ｂ）αＳＭＡの発現レベル、（ｃ）Ｋｉｍ１の発現レベル、（ｄ）ＮＧＡＬの発現レベル、（ｅ）Ｃｏｌ１α１の発現レベル、および／または（ｅ）イソフラン対イソプロスタン比（ＩｓｏＦ／ＩｓｏＰ）、
のうちの１つ以上を決定することと、
（ｂ）ステップ（ａ）で決定したマーカーのレベルを対照と比較することと、
を含み、
マーカーのうちの１つ以上のレベルが対照に比べて低い対象は、ピリドキサミン療法に反応している、
方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】Ｉ／Ｒ−ＡＫＩから２８日後の腎線維症に対する５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミン（ＰＹＲ）での前処置の用量依存的効果。（Ａ）実験モデル。マウスに片側腎茎クランプ（Ｕ−ＩＲ）を施した後、最初の手術から８日後に反対側の腎摘出を行った。飲料水中のビヒクル対照または５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲで３日間、全てのマウスを前処置し、各外科処置の後の３日間については経口胃管栄養によって１日に２回、２００ｍｇのＰＹＲ（またはビヒクル）を与えた。処置を２８日間続け、その時点でマウスを屠殺して、分析のために腎臓を回収した。（Ｂ〜Ｄ）対照であるＧａｐｄｈのｍＲＮＡに対する、腎線維症マーカーであるＣｏｌ１α１、αＳＭＡおよびＣｏｌ３α１のｍＲＮＡの相対発現。（Ｅ）シリウスレッド染色の定量（％総面積）。（Ｆ）シリウスレッドで染色された組織の代表的画像（髄質外部；スケールバー、５０μｍ）。結果は、平均±ＳＥＭとして表した。ｎ＝９〜１０匹／群。ＡＮＯＶＡでｐ＜０．０５の場合にのみ結果を示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃ｐ＜０．０００１。無傷害の対照（ブラケットなし）またはビヒクルで処置したマウス（ブラケット）との比較。
【図２】Ｉ／Ｒ−ＡＫＩから２８日後の腎傷害のマーカーに対する５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲでの前処置の用量依存的効果。傷害後２８日目におけるＫｉｍ１（Ａ）およびＮＧＡＬ（Ｂ）のｍＲＮＡに対するＰＹＲの効果。結果は、平均±ＳＥＭとして表した。ｎ＝９〜１０匹／群。ＡＮＯＶＡでｐ＜０．０５の場合にのみ結果を示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃ｐ＜０．０００１。無傷害の対照（ブラケットなし）またはビヒクルで処置したマウス（ブラケット）との比較。
【図３】Ｉ／Ｒ−ＡＫＩから２８日後の腎線維症に対する傷害から２４時間後に開始された１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲでの処置の有益な効果。（Ａ）実験モデル。マウスにＵ−ＩＲを施した後、最初の手術から８日後に反対側の腎摘出を行った。１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲでマウスを処置した。これは最初の傷害から２４時間後に開始し、各外科処置の後の３日間については経口胃管栄養によって１日に２回、２００ｍｇのＰＹＲ（またはビヒクル）を与えた。処置を２８日間続け、その時点でマウスを屠殺して、分析のために腎臓を回収した。（Ｂ〜Ｄ）対照であるＧａｐｄｈのｍＲＮＡに対する、腎線維症マーカーであるＣｏｌ１α１、αＳＭＡおよびＣｏｌ３α１のｍＲＮＡの相対発現。（Ｅ）シリウスレッド染色の定量（％総面積）。（Ｆ）シリウスレッドで染色された組織の代表的画像（髄質外部；スケールバー、５０μｍ）。結果は、平均±ＳＥＭとして表した。ｎ＝８〜１０／群。ＡＮＯＶＡでｐ＜０．０５の場合に結果を示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃ｐ＜０．０００１。無傷害（ブラケットなし）またはビヒクルもしくは遅延ＰＹＲ処置（ブラケット）との比較。
【図４】Ｉ／Ｒ−ＡＫＩから２８日後の腎傷害のマーカーに対する傷害から２４時間後に開始された１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲでの処置の効果の無さ。（Ａ，Ｂ）傷害後２８日目の、対照であるＧａｐｄｈのｍＲＮＡに対する、腎傷害マーカーであるＫｉｍ１およびＮＧＡＬのｍＲＮＡの相対発現。結果は、平均±ＳＥＭとして表した。ｎ＝８〜１０／群。ＡＮＯＶＡでｐ＜０．０５の場合に結果を示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃ｐ＜０．０００１。無傷害（ブラケットなし）またはビヒクルもしくは遅延ＰＹＲ処置（ブラケット）との比較。
【図５】Ｉ／Ｒ−ＡＫＩから３日後の腎傷害に対する５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲでの前処置の用量依存的効果。（Ａ）実験モデル。マウスにＵ−ＩＲを施し、飲料水中のビヒクル対照、５００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲまたは１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲのいずれかで３日間、前処置し、外科処置の後の３日間については経口胃管栄養によって１日に２回、２００ｍｇのＰＹＲ（またはビヒクル）を与えた。最初の傷害から３日後にマウスを屠殺して、分析のために腎臓を回収した。（Ｂ，Ｃ）対照であるＧａｐｄｈのｍＲＮＡに対する比として表した、傷害から３日後の腎臓のＫｉｍ１およびＮＧＡＬのｍＲＮＡの発現。（Ｄ）ＯＭにおける傷害から３日後の尿細管傷害スコア（０〜４、任意単位）。（Ｅ）ＰＡＳで染色した組織の代表的画像（髄質外部；スケールバー、５０μｍ）。（Ｆ）Ｕ−ＩＲから３日後の、５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日でのＰＹＲ処置後の式：腎臓イソフラン／イソプロスタン比。結果は、平均±ＳＥＭとして表した。ｎ＝９〜１０匹／群。ＡＮＯＶＡでｐ＜０．０５の場合にのみ結果を示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃ｐ＜０．０００１。無傷害（ブラケットなし）またはビヒクルもしくは５００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲで処置したマウス（ブラケット）との比較。
【図６】Ｉ／Ｒ−ＡＫＩ後の血漿ＰＹＲレベル。（Ａ）マウスにＵ−ＩＲを施したが、飲料水中のビヒクル対照、５００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲまたは１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲで３日間、前処置した。外科処置の後の３日間については経口胃管栄養によって１日に２回、２００ｍｇのＰＹＲ（またはビヒクル）を与えた。傷害後３日目のＰＹＲの血漿レベルの評価。（Ｂ）マウスにＵ−ＩＲを施した後、最初の手術から８日後に反対側の腎摘出を行った。飲料水中のビヒクル対照、５００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲまたは１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲで全てのマウスを前処置し、各外科処置の後の３日間については経口胃管栄養によって１日に２回、２００ｍｇのＰＹＲ（またはビヒクル）を与えた。処置を２８日間続け、その時点で、血漿ＰＹＲレベルの分析のためにマウスに静脈切開を施した。傷害後２８日目のＰＹＲの血漿レベルの評価。結果は、平均±ＳＥＭとして表した。ｎ＝９〜１０匹／群。ＡＮＯＶＡでｐ＜０．０５の場合にのみ結果を示した：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＃ｐ＜０．０００１。無傷害対照（ブラケットなし）またはビヒクルもしくは５００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲで処置したマウス（ブラケット）との比較。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
引用した参考文献は全て、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本出願においては、特に明記しない限り、利用される技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１８５，ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｄ．Ｇｏｅｄｄｅｌ，１９９１．Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、「Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）（Ｍ．Ｐ．Ｄｅｕｔｓｈｃｅｒ，ｅｄ．，（１９９０）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｉｎｎｉｓ，ｅｔ  ａｌ．１９９０．Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ：  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，２ｎｄ  Ｅｄ．（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ．１９８７．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ｐｐ．１０９−１２８，ｅｄ．Ｅ．Ｊ．Ｍｕｒｒａｙ，Ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｃｌｉｆｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、およびｔｈｅ  Ａｍｂｉｏｎ  １９９８  Ｃａｔａｌｏｇ（Ａｍｂｉｏｎ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）など、いくつかの周知の参考文献のいずれかに見出すことができる。
【０００９】
本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別段の明示がない限り、複数の指示対象を包含する。本明細書で使用される場合、「および」は、明示的に別段の定めをした場合を除き、「または」と互換的に使用される。
【００１０】
本発明の任意の態様の実施形態は全て、文脈上別段の明示がない限り、組み合わせて用いることができる。
【００１１】
第一の態様では、本発明は、急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を制限する方法であって、
誘発事象を被る対象に、ＡＫＩの発症を制限するために有効量のピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を投与すること、
を含み、
投与が、対象にピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を誘発事象より前に、誘発事象の時点で、または誘発事象から１２時間以内に、投与することを含む、
方法を提供する。
【００１２】
「急性腎傷害」（ＡＫＩ）は、誘発事象の直後に発症する腎機能の急激な低下（例えば、誘発事象から７日以内に生じる腎機能の低下）を指す。例えば、対象が、
・血清クレアチニンの２倍の増加、
・糸球体濾過量（ＧＦＲ）の５０％の減少、
・１２時間にわたって１時間あたり０．５ｍＬ／ｋｇ未満である尿排出量、
のうちの１つ以上を経験するとＡＫＩと診断される可能性がある。
【００１３】
「誘発事象」は、ＡＫＩにつながる任意の出来事または危険因子である。様々な非限定的実施形態において、誘発事象は、疾患または医療処置であり得る。一実施形態において、誘発事象は、限定されるものではないが心臓血管手術を含む、腎臓への有効血流の減少を生じさせ得る医療処置であり得る。別の実施形態において、誘発事象は、医療用イメージングまたは他の目的のための造影剤の注射であり得る。さらなる実施形態において、誘発事象は、化学療法剤の投与であり得る。さらなる実施形態において、誘発事象は、病院の集中治療室への対象の入院であり得る。別の実施形態において、誘発事象は、対象が、感染症により誘発される炎症（敗血症）を発症することであり得る。
【００１４】
一実施形態において、ピリドキサミンまたはその塩の有効量は、誘発事象の前（例えば、７日前、６日前、５日前、４日前、３日前、２日前、および／または１日前）に、または誘発事象の時点で、または誘発事象の後の２４時間以内（すなわち、２４時間以内、２３時間以内、２２時間以内、２１時間以内、２０時間以内、１９時間以内、１８時間以内、１７時間以内、１６時間以内、１５時間以内、１４時間以内、１３時間以内、１２時間以内、１１時間以内、１０時間以内、９時間以内、８時間以内、７時間以内、６時間以内、５時間以内、４時間以内、３時間以内、２時間以内、または１時間以内）に、投与されてよく、誘発事象の後に投与され続けてよい。
【００１５】
別の態様では、本発明は、急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を制限する方法であって、
ＡＫＩの恐れがある対象に、ＡＫＩの発症を制限するために有効量のピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を投与すること、
を含む方法を提供する。
【００１６】
様々な実施形態において、ＡＫＩについての危険因子には、限定されるものではないが、低血液量、感染症により誘発される炎症（敗血症）、肝硬変症、腎動脈狭窄症、腎静脈血栓症、糸球体腎炎、急性尿細管壊死（ＡＴＮ）、急性間質性腎炎（ＡＩＮ）、良性前立腺肥大症、閉塞した尿路カテーテルへの曝露、膀胱結石、および、膀胱、尿管または腎臓の悪性腫瘍、が包含される。ピリドキサミンまたはその塩の有効量は、ＡＫＩについての危険因子を有する対象に投与されてよく、対象がＡＫＩに進行すれば投与され続けてよい。
【００１７】
これらの態様、実施形態、およびそれらの組み合わせのそれぞれにおいて、「ＡＫＩの発症を制限する」は、本発明の方法で処置されない対象（「対照」）と比較した、対象に対する任意の臨床的利点を意味する。様々な実施形態において、ＡＫＩの発症を制限することは、対照と比較して、以下のうちの１つ以上をもたらして得る：
・ＡＫＩに特徴的な血清クレアチニンレベルの上昇を制限すること；
・ＡＫＩに特徴的な糸球体濾過量の減少を制限すること；
・ＡＫＩに特徴的な尿量の減少を低減すること；
・ＡＫＩに特徴的な腎線維症を制限すること；
・限定されるものではないが代謝性アシドーシス、高カリウムレベル（および潜在的に生じ得る不整脈）、尿毒症、体液バランスの変化、および他の臓器系への影響を含め、１つ以上の他のＡＫＩの症状の発症を制限すること；
・慢性腎疾患への進行を制限すること；
・腎透析の必要性を制限すること；および
・腎臓移植の必要性を制限すること。
【００１８】
これらの態様、実施形態、およびそれらの組み合わせのそれぞれにおいて、ピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩は、ＡＫＩの発症より前に対象に投与される。当業者であれば理解するように、ピリドキサミンまたはその塩は、主治医が適切とみなすのであれば、ＡＫＩの発症の後に投与され続けてよい。
【００１９】
別の態様では、本発明は、急性腎傷害（ＡＫＩ）の発症を処置する方法であって、
ＡＫＩを有する対象に、ＡＫＩを処置するために有効量のピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を投与すること、
を含む方法を提供する。
【００２０】
この態様では、「ＡＫＩを処置する」は、本発明の方法で処置されない対象（「対照」）と比較した、対象に対する任意の臨床的利点を意味する。様々な実施形態において、ＡＫＩを処置することは、対照と比較して、以下のうちの１つ以上をもたらし得る：
・ＡＫＩに特徴的な血清クレアチニンレベルの上昇を低減または制限すること；
・ＡＫＩに特徴的な糸球体濾過量の減少を増大または制限すること；
・ＡＫＩに特徴的な尿量の減少を低減すること；
・ＡＫＩに特徴的な腎線維症を制限すること；
・限定されるものではないが代謝性アシドーシス、高カリウムレベル（および潜在的に生じ得る不整脈）、尿毒症、体液バランスの変化、および他の臓器系への影響を含め、１つ以上の他のＡＫＩの症状の発症を制限すること；
・慢性腎疾患への進行を制限すること；
・腎透析の必要性を制限すること；および
・腎臓移植の必要性を制限すること。
【００２１】
本発明の全ての態様、実施形態および実施形態の組み合わせにおいて、ピリドキサミンまたはその塩は、主治医が適切とみなす任意の頻度（１日に１回、１日に２回、１日おき等）で投与されてよい。本発明における使用のための投与単位形態は、主治医が適切とみなすような、ピリドキサミンまたはその塩の任意の好適な用量を含んでよい。非限定的な実施形態において、投与単位は、１ｍｇ〜１０００ｍｇのピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を含む。このような投与単位形態は、例えば、１ｍｇ〜７５０ｍｇ、１ｍｇ〜５００ｍｇ、１ｍｇ〜２５０ｍｇ、１ｍｇ〜１００ｍｇ、５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、５０ｍｇ〜７５０ｍｇ、５０ｍｇ〜５００ｍｇ、５０ｍｇ〜２５０ｍｇ、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜１０００ｍｇ、１００ｍｇ〜７５０ｍｇ、１００ｍｇ〜５００ｍｇ、１００ｍｇ〜２５０ｍｇ、２５０ｍｇ〜１０００ｍｇ、２５０ｍｇ〜７５０ｍｇ、２５０ｍｇ〜５００ｍｇ、５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、５００ｍｇ〜７５０ｍｇ、または７５０ｍｇ〜１０００ｍｇのピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩を含み得る。投与単位形態は、それを必要とする対象に対するピリドキサミンまたはその医薬的に許容される塩の指定１日投与量を達成するために使用される所望の投与頻度に適合するように選択できる。
【００２２】
本発明の全ての実施形態および実施形態の組み合わせにおいて、対象は、ヒト対象などの哺乳動物対象を含む任意の好適な対象であってよい。
【００２３】
本発明に従う医薬的に許容される塩は、医薬技術分野の当業者に周知の生理学的に許容される塩基および／または酸との塩である。好適な生理学的に許容される塩基との塩には、例えば、アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩など）ならびにアンモニウム塩および好適な有機塩基（メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリンおよびトリエタノールアミンなど）との塩が包含される。好適な生理学的に許容される酸との塩には、例えば、ハイドロハライド（hydrohalide）（特に塩酸塩または臭化水素酸塩）、硫酸塩およびリン酸塩などの無機酸との塩、ならびに有機酸との塩が包含される。
【００２４】
ピリドキサミンまたはその塩は、経口投与（口腔内投与および舌下投与を含む）、直腸投与、経鼻投与、局所投与、経肺投与、腟内投与または非経口投与（筋肉内投与、動脈内投与、髄腔内投与、皮下投与および静脈内投与を含む）に好適なものを含む医薬製剤として、または吸入もしくは吹送による投与に好適な形態で、投与され得る。様々な実施形態において、投与の様式は、苦痛の程度に応じて調整できる便利な毎日の投与計画を用いる静脈内または経口（または、膣もしくは鼻の経路など、別の経粘膜送達）である。
【００２５】
固体組成物の場合、従来の非毒性固体担体には、例えば、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム等が包含される。医薬的に投与可能な液体組成物は、例えば、本明細書に記載されるような活性化合物、および任意選択で医薬アジュバント、を賦形剤（例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、エタノール等など）中に溶解、分散等させ、それにより溶液または懸濁液を作製することによって、調製できる。必要に応じて、投与される医薬組成物はまた、少量の非毒性補助物質（湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤等など；例えば、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンナトリウムアセテート（triethanolamine sodium acetate）、トリエタノールアミンオレエート等）を含み得る。このような剤形を調製する実際の方法は、当業者には公知であるか、明らかであろう。例えば、上記のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓを参照のこと。
【００２６】
さらに別の実施形態において、ポリカチオン（キトサンおよびその四級アンモニウム誘導体、ポリ−Ｌ−アルギニン、アミノ化ゼラチン）、ポリアニオン（Ｎ−カルボキシメチルキトサン、ポリアクリル酸）およびチオール化ポリマー（カルボキシメチルセルロース−システインコンジュゲート、ポリカルボフィル−システインコンジュゲート、キトサン−チオブチルアミジンコンジュゲート、キトサン−チオグリコール酸コンジュゲート、キトサン−グルタチオンのコンジュゲート）などのポリマーを含む浸透促進賦形剤の使用である。
【００２７】
経口投与の場合、組成物は一般に、錠剤、カプセル、ソフトジェルカプセルの形態をとるであろうし、あるいは、水性または非水性の溶液、懸濁液またはシロップであってよい。錠剤およびカプセルが、好ましい経口投与形態である。経口での使用のための錠剤およびカプセルは、１種以上の一般的に使用される担体（ラクトースおよびトウモロコシデンプンなど）を含み得る。典型的には、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤も添加される。典型的には、本開示の化合物は、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトール等などの医薬的に許容される経口用非毒性不活性担体と組み合わせることができる。さらに、望ましいか必要な場合には、好適な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、および着色剤も、混合物中に組み込むことができる。好適な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然の糖（グルコースまたはβ−ラクトースなど）、コーン甘味料、天然ゴムおよび合成ゴム（アラビアゴム、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウムなど）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックス等が包含される。これらの剤形において使用される潤滑剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が包含される。崩壊剤には、限定されるものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等が包含される。
【００２８】
液体懸濁液が使用される場合、活性薬剤は、任意の医薬的に許容される経口用非毒性不活性担体（エタノール、グリセロール、水等など）と、ならびに乳化剤および懸濁化剤と、組み合わせることができる。必要に応じて、香味料、着色剤および／または甘味料も添加できる。本明細書に記載される経口製剤に組み込むための他の任意選択の成分には、限定されるものではないが、防腐剤、懸濁化剤、増粘剤等が包含される。
【００２９】
非経口製剤は、従来の形態で（溶液または懸濁液のいずれかとして）、注射前に液体に可溶化または懸濁するのに好適な固体形態で、またはエマルジョンとして、調製され得る。好ましくは、好適な担体、分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、当技術分野で公知の技術に従って無菌の注射用懸濁液が製剤化される。無菌の注射用製剤はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の、無菌の注射用の溶液または懸濁液であってもよい。許容されるビヒクルおよび溶媒の中で、利用可能なものは水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌の不揮発油、脂肪エステルまたはポリオールが、溶媒または懸濁媒体として従来通りに利用される。さらに、非経口投与は、一定レベルの投与量が維持されるように徐放系または持続放出系の使用を伴い得る。
【００３０】
非経口投与には、関節内経路、静脈内経路、筋肉内経路、皮内経路、腹腔内経路、および皮下経路が包含され、水性および非水性の等張性無菌注射溶液（抗酸化剤、緩衝液、静菌薬、および、製剤を対象レシピエントの血液と等張にする溶質、を含み得る）、ならびに水性および非水性の無菌懸濁液（懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および防腐剤を含み得る）が包含される。特定の非経口経路を介した投与は、無菌の注射器または何らかの他の機械装置（連続注入システムなど）によって推進される針またはカテーテルを通じて本開示の製剤を患者の体内に導入することを伴い得る。本開示により提供される製剤は、注射器、注入器、ポンプ、または当技術分野において非経口投与用と認識される任意の他の装置を使用して投与できる。
【００３１】
無菌の注射用懸濁液は、好適な担体、分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、当技術分野で公知の技術に従って製剤化できる。無菌の注射用製剤はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の、無菌の注射用の溶液または懸濁液であってもよい。許容されるビヒクルおよび溶媒の中で、利用可能なものは水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌の不揮発油、脂肪エステルまたはポリオールが、溶媒または懸濁媒体として従来通りに利用される。さらに、非経口投与は、一定レベルの投与量が維持されるように徐放系または持続放出系の使用を伴い得る。非経口投与のための本開示に従う調製物には、無菌の水性または非水性の溶液、懸濁液、またはエマルジョンが包含される。非水性の溶媒またはビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、サラダ油（オリーブ油およびトウモロコシ油など）、ゼラチン、および注射用有機エステル（オレイン酸エチルなど）である。このような剤形はまた、アジュバント（防腐剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤など）を含んでもよい。それらは、例えば、細菌を保持するフィルターによる濾過によって、組成物中に滅菌剤を組み込むことによって、組成物を照射することによって、または組成物を加熱することによって、滅菌できる。それらはまた、使用直前に滅菌水または何らかの他の無菌の注射用媒体を用いて製造することもできる。
【００３２】
製剤は、任意選択で、等張化剤を含んでもよい。製剤は、好ましくは等張化剤を含み、グリセリンが最も好ましい等張化剤である。グリセリンが使用される場合、グリセリンの濃度は、当技術分野で公知の範囲内（例えば約１ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬなど）である。
【００３３】
非経口製剤のｐＨは、緩衝剤（リン酸塩、酢酸塩、ＴＲＩＳまたはＬ−アルギニンなど）によって調節できる。緩衝剤の濃度は、好ましくは、保管中のｐＨの緩衝化をもたらしてｐＨを標的ｐＨ±０．２ｐＨ単位に維持するのに適切な濃度である。好ましいｐＨは、室温で測定した場合に約７〜約８である。
【００３４】
Ｔｗｅｅｎ２０（登録商標）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、Ｔｗｅｅｎ４０（登録商標）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、Ｔｗｅｅｎ８０（登録商標）（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８（登録商標）（ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー）、およびＰＥＧ（ポリエチレングリコール）のような医薬的に許容される可溶化剤など、他の添加剤が製剤に添加されてもよく、それらは、製剤がプラスチック材料と接触する場合に有用である可能性がある。さらに、非経口製剤は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等）を含み得る。
【００３５】
無菌の注射用溶液は、上記で列挙した様々な他の成分を必要に応じて含む適切な溶媒に必要量のピリドキサミンまたはその塩を組み込んだ後にフィルター滅菌を行うことによって調製できる。一般に、分散系は、基礎となる分散媒体と他の必要な成分（上記で列挙したものから）とを含む無菌ビヒクルに様々な滅菌された活性成分を組み込むことによって調製される。無菌の注射用溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、有効成分と任意の追加の所望の成分の粉末を、予め滅菌濾過された、それらの溶液から生成する真空乾燥および凍結乾燥の技術である。従って、例えば、注射による投与に好適な非経口用組成物は、１．５重量％の活性成分を１０体積％のプロピレングリコールおよび水の中で撹拌することによって調製される。溶液は塩化ナトリウムで等張化され、滅菌される。
【００３６】
別の態様では、本発明は、ピリドキサミン療法の有効性をモニタリングするための方法であって、
（ａ）ピリドキサミン療法を受ける対象から得られた生体試料において、
（ａ）Ｃｏｌ３α１の発現レベル、（ｂ）αＳＭＡの発現レベル、（ｃ）Ｋｉｍ１の発現レベル、（ｄ）ＮＧＡＬの発現レベル、および／または（ｅ）イソフラン対イソプロスタン比（ＩｓｏＦ／ＩｓｏＰ）、
のうちの１つ以上を決定することと、
（ｂ）ステップ（ａ）で決定したマーカーのレベルを対照と比較することと、
を含み、
マーカーのうちの１つ以上のレベルが対照に比べて低い対象は、ピリドキサミン療法に反応している、
方法を提供する。
【００３７】
本明細書の実施例で示されるように、成功したピリドキサミン療法は、対照（例えば、ピリドキサミンで処置されない同様の対象；発現レベルまたはＩｓｏＦ／ＩｓｏＰ比についての既存の標準；等）と比較して、Ｃｏｌ３α１、Ｃｏｌ１α１、αＳＭＡ、Ｋｉｍ１、およびＮＧＡＬの発現（ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質）の低下ならびにイソフラン対イソプロスタン比の低下をもたらす。従って、この方法は、ピリドキサミン療法（ＡＫＩ、糖尿病性腎症、または他の適応症に対するピリドキサミン療法など）を受ける対象において有効性をモニタリングするために使用できる。限定されるものではないが腎生検、血液試料等を含め、任意の好適な生体試料を使用できる。
【００３８】
一実施形態において、ステップは、経時的に治療の進行をモニタリングするために２回以上（２回、３回、４回、５回、６回、または７回以上）実施され得る。さらなる実施形態では、対象が、マーカーのうちの１つ以上のレベルが対照と比較して低下していないと判定されれば、その後のピリドキサミンの投与量が増加されてよい。
【００３９】
一実施形態において、決定されるマーカーには、少なくともイソフラン対イソプロスタン比が含まれる。
【実施例】
【００４０】
後天的な心臓手術に関連する虚血性傷害（ＣＳＡ−ＡＫＩ）をモデル化するために広く使用されている腎虚血のモデル（Ｔｈｉｅｌｅ  ｅｔ  ａｌ，２０１５）である、マウスにおけるＡＫＩの外科的虚血再灌流モデル（ＩＲ−ＡＫＩ）（Ｃｉａｎｃｉｏｌｏ  Ｃｏｓｅｎｔｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ，２０１３；Ｓｋｒｙｐｎｙｋ  ｅｔ  ａｌ，２０１３）というＡＫＩの実験モデルに５００ｍｇ／ｋｇ／日および１０００ｍｇ／ｋｇ／日という２種類の用量のピリドキサミンを経口投与した。大部分の試験では、ＡＫＩ誘発前の３日間にわたってピリドキサミンを投与し、試験完了まで継続した。一部の実験では、ＡＫＩの誘発から２４時間後にピリドキサミンを投与した。
【００４１】
実施例１：Ｉ／Ｒ−ＡＫＩから２８日後の腎線維症に対する５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンでの前処置の用量依存的効果
傷害モデルおよび処置は、図１Ａに図示されるように施した。マウスに片側腎茎クランプ（Ｕ−ＩＲ）を施した後、最初の手術から８日後に反対側の腎摘出を行った。飲料水中のビヒクル対照または５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲで３日間、全てのマウスを前処置し、各外科処置の後の３日間については経口胃管栄養によって１日に２回、２００ｍｇのＰＹＲ（またはビヒクル）を与えた。処置を２８日間続け、その時点でマウスを屠殺して、分析のために腎臓を回収した。５００および１０００ｍｇ／ｋｇのピリドキサミンでの前処置は、用量依存的に、線維化促進遺伝子（pro-fibrotic genes）であるＣｏｌ３α１、αＳＭＡおよびＣｏｌ１α１のｍＲＮＡの発現を低下させ（図１Ｂ〜Ｄ）、線維症のレベルを低下させた（図１ＥおよびＦ）。
【００４２】
実施例２：Ｉ／Ｒ−ＡＫＩから２８日後の腎傷害のマーカーに対する５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンでの前処置の用量依存的効果。
図１Ａに示される投与レジメンに従って傷害の開始から２８日後に腎傷害のマーカーを評価した。５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンでの前処置は、傷害後２８日目において腎傷害マーカーであるＫｉｍ１（図２Ａ）の発現を低下させたがＮＧＡＬ（図２Ｂ）の発現は低下させなかった。
【００４３】
実施例３：Ｉ／Ｒ−ＡＫＩから２８日後の腎線維症に対する傷害から２４時間後に開始された１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンでの処置の有益な効果。
高用量のピリドキサミンでの遅延処置がＩＲ−ＡＫＩ後の傷害後線維症を低減するのに有効であるかどうかを決定するために、１０００ｍｇ／ｋｇ／日のＰＹＲでマウスを処置した。これは最初の傷害から２４時間後に開始し、各外科処置の後の３日間については経口胃管栄養によって１日に２回、２００ｍｇのＰＹＲ（またはビヒクル）を与えた。処置を２８日間続け、その時点でマウスを屠殺して、分析のために腎臓を回収した（図３Ａ）。傷害から２４時間後に開始された遅延ピリドキサミン処置は、線維化促進遺伝子であるＣｏｌ３α１およびαＳＭＡ（図３ＢおよびＣ）のｍＲＮＡの発現を低下させたがＣｏｌ１α１（図３Ｄ）のｍＲＮＡの発現は低下させず、傷害後線維症を低減した（図３ＥおよびＦ）。
【００４４】
傷害から２４時間後に開始された遅延ピリドキサミン処置は、傷害後２８日目において傷害マーカーであるＫｉｍ１およびＮＧＡＬの発現を低下させなかった（図４ＡおよびＢ）。
【００４５】
これらのデータは、（ａ）１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンでの遅延処置が、開始したＡＫＩ傷害から２８日後に腎線維症に対して有益な効果を有したということ、および（ｂ）ピリドキサミンでの前処置が、遅延処置と比較して、Ｉ／Ｒ−ＡＫＩ後の慢性腎傷害を低減するのに、より有効であるということ、を示す。
【００４６】
実施例４：Ｉ／Ｒ−ＡＫＩから３日後の腎傷害および酸化ストレスのマーカーに対する５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンでの前処置の用量依存的効果。
ＩＲ−ＡＫＩ後の初期の腎傷害に対しても５００および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンの用量依存的効果が存在するかどうかを決定するために、傷害後３日目（図５Ａ）にマウスを屠殺して、腎傷害および腎臓の酸化ストレスのレベルを評価した。ビヒクルで処置したマウスと比較して、５００ｍｇ／ｋｇ／日ではなく１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンで処置したマウスでは、腎臓のＫｉｍ１ではなくＮＧＡＬのｍＲＮＡの発現の有意な用量依存的低下（図５ＢおよびＣ）、組織学的尿細管傷害スコアの低下（図５ＤおよびＥ）、および酸化ストレスマーカーであるイソフラン対イソプロスタン比の腎臓におけるレベルの低下（図５Ｆ）が見られた。
【００４７】
これらのデータは、ピリドキサミンで処置されたマウスではＩＲ−ＡＫＩ後の初期の腎傷害が低減するということを示す。また、データは、ＩＲ−ＡＫＩ後の初期の腎傷害の低減においては１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンが５００ｍｇ／ｋｇ／日よりも有効であるということも示す。
【００４８】
実施例５：Ｉ／Ｒ−ＡＫＩ後の血漿ピリドキサミンレベル
マウスにおいてＩＲ−ＡＫＩ後の初期および長期の腎傷害を防止するのに１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドリンがより有効であるということが確立されたため、５００ｍｇ／ｋｇ／日および１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンで３日間および２８日間処置したＩＲ−ＡＫＩを伴うマウスにおいてピリドキサミンの血漿レベルを決定した（図６）。各時点において血漿ピリドキサミンレベルの用量依存的増加が見られた（図６）。１０００ｍｇ／ｋｇ／日のピリドキサミンで処置したマウスでは、３日目および２８日目における平均ピリドキサミン血漿レベルは約６μｇ／ｍＬであることから（図６ＡおよびＢ）、これらの血漿レベルでピリドキサミンはマウスのＩＲ−ＡＫＩにおいて治療的に有効であるということが示唆された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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