(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0004344089.tif 000003
の化合物のラセメートの動力学的分割方法において、
式（Ｉ）〔式中、Ｒは、ＣＯＲ1｛Ｒ1は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ16)−アルキル、(Ｃ2〜Ｃ16)−アルケニルまたは（Ｃ3〜Ｃ16）−アルキニル、ＣnＨ2n−シクロアルキル（ｎは１〜１６である）であって、Ｆ、Ｃl、Ｂr、Ｉ、ＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシおよびＣＯＯＲ2（Ｒ2は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ4)−アルキルおよび（Ｃ2〜Ｃ4)−アルケニルであって、Ｆ、Ｃl、Ｂr、ＣＦ3からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい）からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい｝である〕の化合物のエナンチオマー混合物またはラセミ混合物を、均一または非均一な水性、水／有機または有機メジウム中、リパーゼ、エステラーゼまたはパンクレアチンの存在下、２０〜４０℃の温度で立体選択的加水分解または加アルコール分解に付し、反応後、未反応エステル〔式(Ｉ)においてＲはＣＯＲ1である化合物〕および生成したアルコール〔式(Ｉ)においてＲはＨである化合物〕、すなわち２つのエナンチオマーを分離することからなる、上記方法。
【請求項２】
前記式（Ｉ）の化合物のエナンチオマー混合物またはラセミ混合物と、前記水性、水／有機または有機メジウムと、前記リパーゼ、エステラーゼまたはパンクレアチンとを含む、立体選択的加水分解または加アルコール分解に付される反応混合物において、該式（Ｉ）の化合物のエナンチオマー混合物またはラセミ混合物が、２〜５０重量％の割合で存在する、請求項１に記載の動力学的分割方法。
【請求項３】
前記式（Ｉ）の化合物のエナンチオマー混合物またはラセミ混合物と、前記水性、水／有機または有機メジウムと、前記リパーゼ、エステラーゼまたはパンクレアチンとを含む、立体選択的加水分解または加アルコール分解に付される反応混合物が、共溶媒及び緩衝液をさらに含む、請求項１または２に記載の動力学的分割方法。
【請求項４】
式（Ｉ）〔式中、Ｒは、ＣＯＲ1｛Ｒ1は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル、（Ｃ2〜Ｃ12）−アルケニルまたは（Ｃ3〜Ｃ12）−アルキニル、ＣnＨ2n−シクロアルキル（ｎは１〜１２である）であって、Ｆ、Ｃl、Ｂr、ＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシおよびＣＯＯＲ2（Ｒ2は、メチル、エチルおよびビニルであって、Ｆ、Ｃl、ＣＦ3からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい）からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい｝である〕の化合物のラセメートの請求項１〜３のいずれか１項に記載の動力学的分割方法。
【請求項５】
式（Ｉ）〔式中、Ｒは、ＣＯＲ1｛Ｒ1は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ2〜Ｃ10）−アルケニルまたは（Ｃ3〜Ｃ10)−アルキニル、ＣnＨ2n−シクロアルキル（ｎは１〜１０である）であって、Ｆ、Ｃl、Ｂr、ＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、メトキシおよびＣＯＯＲ2（Ｒ2はメチル、エチルおよびビニルであって、Ｆ、Ｃl、ＣＦ3からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい）からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい｝である〕の化合物のラセメートの請求項１〜４のいずれか１項に記載の動力学的分割方法。
【請求項６】
式（Ｉ）〔式中、Ｒは、ＣＯＲ1（Ｒ1は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ10)−アルキル、（Ｃ2〜Ｃ10）−アルケニルまたは（Ｃ3〜Ｃ10）−アルキニルであり、Ｆ、Ｃl、Ｂr、ＣＦ3およびメトキシからなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい）である〕で表される化合物のラセメートの請求項１〜５のいずれか１項に記載の動力学的分割方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は、エナンチオマー混合物の、酵素の補助による立体的識別反応によって式（Ｉ）の光学的に純粋な化合物を製造する方法に関する。
【０００２】
【背景技術】
３(Ｓ)−および３(Ｒ)−ヒドロキシ−１−メチル−４−（２,４,６−トリメトキシフェニル）−１,２,３,６−テトラヒドロピリジン〔式(Ｉ)の化合物においてＲはＨの化合物〕またはそれらのエステル誘導体〔式(Ｉ)の化合物においてＲはＣＯＲ1の化合物〕は、特許出願 HMR 98／L 001（“Process for the preparation of (-)-cis-3-hydroxy-1-methyl-4(R)-(2,4,6-trimethoxyphenyl)piperidine"）に記載されたフラボピリドール（HMR 1275 または L 86 8275)、すなわちサイクリン依存性タンパク質キナーゼの最初の強力な阻害剤（たとえば、Sedlacek,HansHarald; Czech,Joerg; Naik,Ramachandra; Kaur, Gurmeet; Worland, Peter; Losiewicz, Michael; Parker, Bernard; Carlson, Bradley; Smith, Adalineら: Flavopiridol (L 868275; NSC 649890）,a new kinase inhibitor for tumor therapy. Int.J.Oncol. (1996), 9 (6), 1143-1168 または Czech, Joerg; Hoffmann, Dieter; Naik, Ramachandra; Sedlacek,Hans-Harald: Antitumoral activity of flavone L 86 8275. Int. J. Oncol. (1995), 6 (1), 31-36参照）の合成の中心単位または前駆体である。
式（Ｉ）の化合物のラセメートの分割もしくはエナンチオマーの分離は知られていない。
【０００３】
【発明の開示】
式（Ｉ）の化合物は今回、エナンチオマーの混合物から、酵素的なエステルの分解（加水分解または加アルコール分解）によって光学的に純粋な型で得られることが見いだされたのである。したがって、本発明は、式（Ｉ）
【化２】
0004344089.tif 000002
の化合物のラセメートの動力学的分割方法において、
式（Ｉ）〔式中、Ｒは、ＣＯＲ1｛Ｒ1は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ16)−アルキル、（Ｃ2〜Ｃ16）−アルケニルまたは（Ｃ3〜Ｃ16）−アルキニル、ＣnＨ2n−シクロアルキル（ｎは１〜１６である）であって、Ｆ、Ｃl、Ｂr、Ｉ、ＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシおよびＣＯＯＲ2（Ｒ2は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルおよび（Ｃ2〜Ｃ4）−アルケニルであって、Ｆ、Ｃl、Ｂr、ＣＦ3からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい）からなる群から選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい｝である〕で表される化合物のエナンチオマー混合物またはラセミ混合物を、均一または非均一な水性、水／有機または有機メジウム中、酵素、たとえば哺乳動物の肝臓もしくは膵臓または微生物起源、たとえばカンジダ（Candida）、シュードモナス（Pseudomonas）またはアスペルギルス（Aspergillus）からのリパーゼもしくはエステラーゼ、またはたとえばバチルスからのプロテアーゼの存在下、必要に応じて共溶媒および緩衝液を加え、好ましくは２〜５０重量％のエステルを含有する反応混合物として１０〜８０℃の温度で立体選択的加水分解または加アルコール分解に付し、
反応後、未反応エステル〔式(Ｉ)においてＲはＣＯＲ1である化合物〕および生成したアルコール〔式(Ｉ)においてＲはＨである化合物）、すなわち２つのエナンチオマーを分離することからなる方法に関する。
【０００４】
本発明の方法は、経済的で単純で、かつ迅速である。この反応は、等モル量の光学的に純粋な補助剤、高価な試薬および法外に大量の溶媒、ならびに経費集約的な作業工程を必要としない。反応完了後、生成物またはエナンチオマーの分離は単純な方法たとえば抽出によって実施することができる。
【０００５】
好ましくは、式（Ｉ）の化合物において、Ｒは、ＣＯＲ1〔Ｒ1は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ12）−アルキル、（Ｃ2〜Ｃ12）−アルケニルまたは（Ｃ3〜Ｃ12）−アルキニル、ＣnＨ2n−シクロアルキル（ｎは１〜１２である）であって、Ｆ、Ｃl、Ｂr、ＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、ヒドロキシル、メトキシ、エトキシおよびＣＯＯＲ2（Ｒ2はメチル、エチルおよびビニルであって、Ｆ、Ｃl、ＣＦ3からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい）からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい〕である。
【０００６】
特に好ましくは、式（Ｉ）の化合物において、Ｒは、ＣＯＲ1〔Ｒ1は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ2〜Ｃ10）−アルケニルまたは（Ｃ3〜Ｃ10）−アルキニル、ＣnＨ2n−シクロアルキル（ｎは１〜１０である）であって、Ｆ、Ｃl、Ｂr、ＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2、メトキシおよびＣＯＯＲ2（Ｒ2はメチル、エチルおよびビニルであって、Ｆ、Ｃl、ＣＦ3からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい）からなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい〕である。
【０００７】
特に、きわめて好ましくは、式（Ｉ）の化合物において、Ｒは、ＣＯＲ1（Ｒ1は分枝状または直鎖状の（Ｃ1〜Ｃ10）−アルキル、（Ｃ2〜Ｃ10）−アルケニルまたは（Ｃ3〜Ｃ10）−アルキニルであって、Ｆ、Ｃl、Ｂr、ＣＦ3およびメトキシからなる群より選択された１〜３個の置換基で置換されていてもよい）である。
【０００８】
本発明の方法においては、たとえばＲはＣＯＲ1（Ｒ1はＣ3Ｈ7またはＣ8Ｈ17である）である式（Ｉ）のエステルを、水またはアルコール含有溶液中リパーゼ、エステラーゼもしくはプロテアーゼで処理し、撹拌する操作を使用することが好ましい。上述の溶液は、たとえばリン酸塩またはトリス〔＝トリス（ヒドロキシメチル)メチルアミン〕緩衝剤によって緩衝化することが有利である。添加は、たとえば０.０１〜１.０モル濃度とすることができる。適当な緩衝範囲はｐＨ５〜９である。
【０００９】
さらにまた共溶媒を加えることも有利である。適当な共溶媒は、たとえばジメトキシエタン、アセトン、ＴＨＦ、ジオキサン、ヘキサン、tert−ブチルメチルエーテルおよび tert−ブタノールである。溶液中の共溶媒の割合は、好ましくは１０〜８０％である。
【００１０】
用いられる酵素は、好ましくはリパーゼおよびエステラーゼたとえばウシ膵臓からのコレステロールエステラーゼ（EC 3.1.1.13）(Sigma Chemical Co.)、ブタ肝臓エステラーゼ（PLE，Sigma Chemical Co.)、パンクレアチン（Fluka および Sigma Chemical Co.)、ウシからの膵臓アセトン粉末（Sigma Chemical Co.)、ウマからの肝臓アセトン粉末（Sigma Chemical Co.）ならびにブタ膵臓からのリパーゼ（PPL，Sigma Chemical Co.)、Candida rugosa からのリパーゼＯＦおよび Aspergillus niger からのリパーゼ ＡＰ−６（Amano Pharmaceuticals）である。
【００１１】
上述の酵素のそれぞれは遊離型または固定化型（Immobilized Biocatalysts, W. Hartmeier, Springer Verlag Berlin, 1988）で使用することができる。酵素の量は所望の反応速度または反応時間および酵素の性質（たとえば遊離型または固定化型）に依存して自由に選択することが可能であり、簡単な予備的実験により容易に決定される。
【００１２】
反応混合物は、好ましくはエステル２〜５０重量％、特に好ましくは５〜２０％を含有する。反応温度は１０〜８０℃、好ましくは１０〜６０℃、特に好ましくは２０〜４０℃である。
【００１３】
エステル〔式(Ｉ)においてＲはＣＯＲ1の化合物〕の製造は、アルコール〔式(Ｉ)においてＲはＨの化合物〕から、エステル化の既知の方法によって（Haslam, Tetrahedron 1980, 36,2409; Hoefle, Steglich, Vorbrueggen, Angew.Chem. 1978,90, 602）または特許出願 HMR 98／L 001 (“Process for the preparation of（-)-cis-3-hydroxy-1-methyl-4(R)-(2,4,6-trimethoxyphenyl) piperidine"）に記載されたようにして適宜実施される。
【００１４】
この方法で得られたまたは残留した生成物は単純な様式により、たとえば抽出またはクロマトグラフ法によって分離することができる。残留したエステルは、たとえば反応溶液を水とｎ−ヘキサンの間に分配し、有機相を濃縮することによって得られる。得られたアルコールは次いで水相から酢酸エチルによって抽出することができる。酵素は凍結乾燥によって回収することができる。酵素の分離は（そして、必要に応じて再使用は）固定化により単純化することができる。
【００１５】
反応の適当な操作により、少なくとも１種の光学的に純粋なエナンチオマーを常に得ることが可能である。光学的に純粋なエステルを所望の場合は、変換は５０％以上（または50％に等しい）でなければならず、光学的に純粋なアルコールを所望の場合には、変換は５０％以下（または50％に等しい）でなければならない。酵素的加水分解または加アルコール分解の変換はＨＰＬＣ（RP 18 LiChrosorb−登録商標）により測定され、光学的純度の測定はＨＰＬＣ（Chirapak AD）によって実施された。ラセメート分割過程から得られたまたはその過程で残留したエステルは、転化またはラセミ化を起こすことなく、既知のエステル分解方法により相当するアルコールに変換することができる（S.J.Salomon, E.G.Mata, O.A.Mascaretti, Tetrahedron 1993, 49,3691-3748)。逆に、得られたアルコールは転化またはラセミ化を起こすことなく、既知のエステル化法により相当するエステルに変換することができる（Haslam, Tetrahedron 1980, 36, 2409)。
【００１６】
この方法において得られたまたは残留した生成物は、既知の方法たとえば金属触媒転位によりラセミ化して再びラセメートの分割に使用することができる（L.E.Overman, Angew.Chem. 1984, 96, 565-573 および既に引用された文献）。これは収率を５０％以上に増大させる。たとえば、式（Ｉ）においてＲがＣＯＲ1の化合物は直接ラセミ化することが可能であり、式（Ｉ）においてＲがＨの化合物はL.E.Overman, Angew.Chem. 1994, 96, 565-573 に記載のようにたとえば適当な誘導体に変換したのちにラセミ化することができる。使用できる金属触媒は、たとえばＨg（II)、Ｐd（Ｏ）またはＰd（II）化合物または塩である。
以下の実施例は本発明をさらに詳細に例示することを意図するものである。
【００１７】
【実施例】
すべての単離生成物または粗生成物混合物は1Ｈ−ＮＭＲおよびマススペクトルまたはＨＰＬＣによって同定された。生成物の光学的純度はＨＰＬＣによって、たとえば Chiralpak AD 250×4.6（Daicel）により測定した。
【００１８】
実施例 １
酢酸エステル（式Ｉにおいて、ＲがＣＯＲ1であり、Ｒ1がＣＨ3である化合物）１０mgを１mlのリン酸カリウム緩衝液（0.1Ｍ、pH＝7.0）／ジメトキシエタン（５：１）に導入した。５mgのパンクレアチンを加えた。混合物を変換が約４０％（HPLC）に達するまで２０〜２５℃で撹拌した。次いでこれをろ過し、濃縮乾固し、得られた混合物をＨＰＬＣで検査した（Chiralpak AD 250×4.6、ｎ−ヘキサン＋ＥtＯＨ ５＋１、流速１ml／分、25℃、220／240nm)。残留(Ｒ)−酢酸エステルのｅｅ：６３％；(Ｓ)−アルコールのｅｅ：８５％。
【００１９】
実施例 ２
酪酸エステル（式Ｉにおいて、ＲがＣＯＲ1であり、Ｒ1が(ＣＨ2)2ＣＨ3である化合物）１０mgを１mlのリン酸カリウム緩衝液（0.1Ｍ、pH＝7.0）／ジメトキシエタン（５：１）に導入した。５mgのＰＰＬ（ブタ膵臓からのリパーゼ、Sigma Chemical Co.）を加えた。混合物を、変換が約４８％（HPLC）に達するまで３０℃において撹拌した。次いでこれをろ過し、濃縮乾固し、得られた混合物をＨＰＬＣにより検査した（Chiralpak AD 250×4.6、ｎ−ヘキサン＋ＥtＯＨ ６＋１、流速１ml／分、25℃、220／240nm)。(Ｒ)−酪酸エステルのｅｅ：９０％；(Ｓ)−アルコールのｅｅ：９７％。
【００２０】
実施例 ３
酪酸エステル（式Ｉにおいて、ＲがＣＯＲ1、Ｒ1が(ＣＨ2)2ＣＨ3である化合物）１.０ｇ（2.86ミリモル）を８mlのジメトキシエタンおよび４０mlのリン酸カリウム緩衝液（0.1Ｍ、pH＝7.0）に導入した。９０mgのパンクレアチンを加えた。混合物を変換が５０％以上進むまで２２〜２５℃において撹拌した。次いでこれを真空中で濃縮し、水と混合し、約５０mlのｎ−ヘプタンで６回抽出した。乾燥（Na2SO4）後、これを真空中で濃縮した。４５０mg（45％）の(Ｒ)−酪酸エステルが得られた。ｅｅ（HPLC）≧９９％。残った水相を、酢酸エチルで抽出し、乾燥させ（Na2SO4)、真空中で濃縮すると、１９０mg（23.8％）の(Ｓ)−アルコールが得られた。ｅｅ（HPLC）：９７％。
【００２１】
実施例 ４
酪酸エステル（式Ｉにおいて、ＲがＣＯＲ1であり、Ｒ1が(ＣＨ2)2ＣＨ3である化合物）１０mgを１mlのリン酸カリウム緩衝液（0.1Ｍ、pH＝7.0)／ジメトキシエタン（５：１）に導入した。５mgのＰＰＬを加えた。混合物を、変換が約４８％（HPLC）に達するまで３０℃において撹拌した。次いでこれをろ過し、濃縮乾固し、得られた混合物をＨＰＬＣで検査した（Chiralpak AD 250×4.6、ｎ−ヘキサン＋ＥtＯＨ ６＋１、流速１ml／分、25℃，220／240nm)。(Ｒ)−酪酸エステルのｅｅ：９０％；(Ｓ)−アルコールのｅｅ：９７％。
【００２２】
実施例 ５
酪酸エステル（式Ｉにおいて、ＲがＣＯＲ1であり、Ｒ1が(ＣＨ2)2ＣＨ3である化合物）１０mgを１mlのリン酸カリウム緩衝液（0.1Ｍ、pH＝7.0)／ジメトキシエタン（５：１）に導入した。５mgのＰＬＥ（ブタ肝臓のエステラーゼ、Sigma Chemical Co.）を加えた。混合物を変換が約４７％（HPLC）に達するまで３０℃において撹拌した。次いでこれをろ過し、濃縮乾固し、得られた混合物をＨＰＬＣで検査した（Chiralpak AD 250×4.6、ｎ−ヘキサン＋ＥtＯＨ ６＋１、流速 1 ml／分、25℃、220／240nm)。(Ｒ)−酪酸エステルのｅｅ：８８％、(Ｓ)−アルコールのｅｅ：９７％。
【００２３】
実施例 ６
カプロン酸エステル（式ＩにおいてＲがＣＯＲ1であり、Ｒ1が(ＣＨ2)4ＣＨ3である化合物）１０mgを１mlのリン酸カリウム緩衝液（0.1Ｍ、pH＝7.0)／ジメトキシエタン（５：１）に導入した。５mgのＰＬＥを添加した。混合物を変換が約４０％（HPLC）に達するまで３０℃において撹拌した。次いでこれをろ過し、濃縮乾固し、得られた混合物をＨＰＬＣで検査した（Chiralpak AD 250×4.6、ｎ−ヘキサン＋ＥtＯＨ ６＋１、流速１ml／分、25℃、220／240nm)。(Ｒ)−カプロン酸エステルのｅｅ：６６％、(Ｓ)−アルコールのｅｅ：９６％。
【００２４】
実施例 ７
カプロン酸エステル（式ＩにおいてＲがＣＯＲ1であり、Ｒ1が(ＣＨ2)4ＣＨ3である化合物）１０mgを１mlのリン酸カリウム緩衝液（0.1Ｍ、pH＝7.0)／ジメトキシエタン（５：１）に導入した。ウシ膵臓からのコレステロールエステラーゼ５mgを加えた。混合物を変換が約５０％（HPLC）に達するまで３０℃で撹拌した。次いでこれをろ過し、濃縮乾固し、得られた混合物をＨＰＬＣで検査した（Chiralpak AD 250×4.6、ｎ−ヘキサン＋ＥtＯＨ ６＋１、流速１ml／分、25℃、220／240nm)。(Ｒ)−カプロン酸エステルのｅｅ：≧９９.８％、(Ｓ)−アルコールのｅｅ：≧９９.８％。
【００２５】
実施例 ８
カプリン酸エステル（式ＩにおいてＲがＣＯＲ1であり、Ｒ1が(ＣＨ2)8ＣＨ3である化合物）１０mgを１mlのリン酸カリウム緩衝液（0.1Ｍ、pH＝7.0）／ジメトキシエタン（５：１）に導入した。５mgのＰＰＬを加えた。混合物を変換が約１０％（HPLC）に達するまで３０℃で撹拌した。次いでこれをろ過し、濃縮乾固し、得られた混合物をＨＰＬＣで検査した（Chiralpak AD 250×4.6、ｎ−ヘキサン＋ＥtＯＨ ６＋１、流速１ml／分、25℃、220／240nm)。(Ｒ)−カプリン酸エステルのｅｅ：≧１１％、(Ｓ)−アルコールのｅｅ：９５％。
【００２６】
実施例 ９
酪酸エステル（式ＩにおいてＲがＣＯＲ1であり、Ｒ1が(ＣＨ2)2ＣＨ3である化合物）１０mgを１mlのリン酸カリウム緩衝液（0.1Ｍ、pH＝7.0）／ジメトキシエタン（５：１）に導入した。 ５mgのウマ肝臓アセトン粉末を加えた。混合物を変換が約４６％（HPLC）に達するまで３０℃で撹拌した。次いでこれをろ過し、濃縮乾固し、得られた混合物をＨＰＬＣで検査した（Chiralpak AD 250×4.6、ｎ−ヘキサン＋ＥtＯＨ ６＋１、流速１ml／分、25℃、220／240nm)。(Ｒ)−酪酸エステルのｅｅ：８２％、(Ｓ)−アルコールのｅｅ：９６％。