(57)【要約】  サンプルバッグ、バッグにおける乾燥した無菌増殖培地、および約２５〜５０℃の温度まで加熱した（タイプＩＩの）純水源においてサンプルを提供すること、サンプルを均質化すること、乾燥した培地を加熱したタイプＩＩの水で再構成すること、培地とサンプルとを均質な稠度まで混合すること、および、微生物が増殖できるのに十分な期間をインキュベートすることによって、微生物学的テストを行うためのサンプルを調製する方法およびシステム。タンクレス水ヒーターまたは熱交換器を水を所望の温度まで加熱するために用いることができる。タイプＩＩの水は、それが作られる前または後のいずれかで加熱され得る。ブレンダーは、サンプルの均質化ならびにインキュベーションの前の最終的な混合のために用いることができ、パドル式または据置型ブレンダーであり得る。微生物は、当該分野においてよく知られた種々の方法で検出される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップ：
ａ．テストされるべきサンプルを提供すること、
ｂ．脱水された増殖培地を提供すること、
ｃ．約２５〜５０℃の温度まで加熱された（タイプＩＩの）純水源を提供すること、
ｄ．サンプルを均質化すること、
ｅ．ｉ．加熱されたタイプＩＩの水を培地に添加してそれを再構成し、次いで、容器の中で、再構成された液体培地を均質化されたサンプルに添加すること、または、
ｉｉ．容器の中で、加熱されたタイプＩＩの水、脱水された培地および均質化されたサンプルを一緒に添加すること、
からなる群から選択される方法によって、加熱されたタイプＩＩの水で培地を液体形状に再構成すること、
ｆ．加熱されたタイプＩＩの水、培地および均質化されたサンプルを均質な稠度まで混合すること、ならびに、
ｇ．水、培地および均質化されたサンプルを含有する容器を、サンプルにおいていずれの微生物も増殖できるのに十分な期間インキュベートすること
を含む、半固体および／または固体サンプルに対して微生物学的テストを実行する方法。
【請求項２】
純水が、約３０〜４５℃の間、より好ましくは３７と４２℃との間の温度まで加熱される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
水が、水源の上流側に取り付けられたヒーターで加熱される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
水が、水源の下流側に取り付けられたヒーターで加熱される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
ステップ（ｉ）：微生物の存否を決定するために、インキュベートされたサンプルを試験すること
をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ステップ（ｉ）：微生物の存否を決定するために、インキュベートされたサンプルを試験すること、および、発見された場合に微生物を計数すること
をさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ステップ（ｊ）：存在するいずれの微生物も同定すること
をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
検出されるべき微生物が、酵母、カビおよび細菌からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
検出すべき微生物が、それらを取り込むとヒトまたは動物に問題を引き起こす食品飲料の腐敗微生物および食品の病原性微生物として知られる微生物である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
検出されるべき微生物が、大腸菌群、Escherichia coli（志賀毒素産生E. coli（ＳＴＥＣ）などの病原性E. coliを包含する）、サルモネラ菌属、リステリア菌属、ブドウ球菌、赤痢菌属、ビブリオ菌属等からなる群から選択される細菌である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
サンプルが、検出可能なコロニー形成ユニットを生育させるための期間インキュベートされる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
サンプルが、化学的検出剤または分子検出剤の添加の有無にかかわらない、視覚的検出、化学的検出（染料、蛍光）、分子的検出（ＰＣＲ、ｒＰＲＣ、ＴＭＡ）および、電子的検出（レーザートポグラフィー、ＣＣＤカメラ、カメラ／顕微鏡）からなる群から選択される検出方法によって検出可能なコロニー形成ユニットを生育させるための期間インキュベートされる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
サンプルが、据置型ブレンダーおよびパドル式ブレンダーからなる群から選択されるブレンダーによって均質化される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
脱水された培地が、粉および顆粒からなる群から選択される形状である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
無菌の顆粒状増殖培地のバッグ、（タイプＩＩの）純水を産生するためのシステム、水を加熱するためのシステム、食品サンプルならびにサンプル、培地および水を合わせたものを均質化するためのブレンダー、ならびに、サンプル内に含有されるいずれの微生物も増殖させるためのインキュベーターを含む、サンプル中の微生物を検出するためのシステム。
【請求項１６】
水が、ヒーターによって約２５〜５０℃の間の温度まで加熱され、ならびに、ヒーターが、タンクレス水ヒーターおよび熱交換器からなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
サンプルが、食品、環境サンプル、化粧料および医薬品からなる群から選択される、請求項１〜１４および１６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食品（野菜、肉、乳製品など）、環境サンプル（スポンジ、綿棒、土など）または化粧品もしくは医薬品（クリーム、軟膏など）などの非液体（固体または半固体）のサンプルの微生物を検出する方法、ならびに、そうするための種々のシステムに関する。さらにとりわけ、加熱された純粋な、無菌の水で再構成された、照射されて脱水された増殖培地を用いて、食品サンプルの微生物を検出、計数および任意に同定する方法、ならびに、そうするためのシステムに関する。
【背景技術】
【０００２】
製品の安全性は関心事であり、実体（ヒト、動物）の健康に影響を及ぼし得る、または、食品の貯蔵寿命に悪影響を及ぼす、細菌、カビおよび酵母などの微生物の存否を決定するために、食品および化粧製品において日常的にテストが行われている。食品などの製品は、生、缶詰、瓶詰、凍結、乾燥および食品が一般的に提供される他の典型的な形態であり得る。本出願における議論が食品に言及すべきではあるが、本発明がまた、化粧料および医薬品および土壌および他の環境サンプルなどの他の非液体サンプルにも適用可能であることは明らかにすべきことである。
【０００３】
食料品が安全であるかを決定するための典型的なプロセスは、食品のサンプルを得て、可能な限り多くの微生物が懸濁液中へ追い込まれ、それによって好適な増殖培地の存在下で増殖することができるように、前記サンプルを液体培養培地において、Waring（登録商標）ブレンダーなどの据置型(stationary)ブレンダーまたはより好ましくはStomacher（登録商標）ブレンダー（Seward Limitedより入手可能）などのパドル式(paddle)ブレンダーを用いて均質化する。
【０００４】
培地は、一般的に、バルクの液体または脱水された形態で提供される。脱水された培地は、使用前に水で再構成されるる必要がある。次いで、両方の形態は、食品サンプルでのテストにおいて偽陽性の潜在性を最小化するように、使用前に培地が無菌であることを確かにするためにオートクレーブされる。
【０００５】
オートクレーブされた培地は、食品のサンプルをそれと混合する前に、過熱状態の培地がサンプル中の微生物に対して起こし得るいずれのダメージをも最小化するために冷却してもよい。次いで、食品サンプルおよび培地は、均質になるまで混合され、次いで、微生物の増殖にとって好適な温度に達しており、かつ、サンプルに存在するいずれの微生物も検出され得るように、増殖を生じさせるのに十分な時間、インキュベーターの中におかれる。
【０００６】
サンプル中の微生物の存否、およびその同定さえも、検出するための種々の方法は、周知である。
現在の方法およびシステムには、いくつかの欠点がある。バルクの培地は、使用のために所望の量を引き抜く必要がある。脱水された培地の場合、その所望の量は、水で再構成される必要がある。液体培地または再構成された脱水培地のいずれかのバルク培地は、次いで、オートクレーブを用いて無菌化される必要がある。
【０００７】
オートクレーブステップの使用は、無菌性を保証するためのその期間ならびにその冷却時間の両方において時間が掛かるが、それは、オートクレーブされた培地が、サンプル中に存在し得る微生物に悪影響を及ぼすことなく用いられ得るようにするためである。      
【０００８】
付言すると、オートクレーブステップは、熱不安定性である培地のある成分に悪影響を及ぼす可能性があり、それによって、培地の効率が下がり、潜在的に、付加的なインキュベーション時間が必要となるか、または、偽陰性のテスト結果を許容されることになる。
【０００９】
インキュベーションの時間もまた時間が掛かり、なぜならそれが、最初にサンプルおよび培地を適当なインキュベーション温度（典型的には２５℃から５０℃）まで上昇させること、および次いで、微生物をそれらの選択された最適温度で増殖させることを含むからである。加熱ステップは、サンプルのサイズおよびそのサンプルに熱を提供するインキュベーターの能力などの多くの因子に依存して、プロセスに対し数時間を追加する可能性がある。
【００１０】
さらに、サンプルに取り込まれた食品または他の材料は一般に、テストが完了し、それが安全であるとみなされるまで、隔離され続けられる。これによって、食品、化粧料または医薬品が市場から離隔されるが、結果を待つ間、その食品を貯蔵するコストがかさむ。
必要なものは、テストするためのかかる食品サンプルを調製するためのより良い方法およびシステムである。
【発明の概要】
【００１１】
本発明は、微生物のテストをするためのサンプルを調製する方法のための方法およびシステムに関する。方法は、密封された無菌パウチ中、１ｇから５００ｇまでの種々のサンプルサイズに対し照射前線量(predosed amount)で、放射線照射された脱水培地、とくにガンマ線照射された脱水培地（含まれる選択サプリメントの有無にかかわらず、粉末顆粒の形態）などの無菌培地を用いる。２５℃〜５０℃、好ましくは、３０℃〜４５℃、より好ましくは、３７℃〜４２℃の範囲で加熱された無菌の純水（タイプＩＩの水）が提供され、脱水培地に添加されてそれを再構成し、再構成された培地および食品サンプルは、培地の再構成の間または培地の再構成の後に均質化され、関心のあるいずれの微生物が検出に好適なサイズまで増殖することが可能な選択された時間、インキュベーターの中に置かれる。
【００１２】
一態様において、微生物のテストをするためのサンプルを調製する方法は、サンプル容器中に、一般にプラスチックバッグまたは大きなペトリ皿様のカバーされたプレートの形態で、テストされるべき食品サンプルを提供すること、放射線照射された、無菌の、脱水された増殖培地を提供すること、約２５℃〜５０℃の温度まで加熱された（タイプＩＩの）純水源を提供すること、サンプルを均質化すること、加熱された水を培地へ添加することで液体形状の培地を再構成すること（加熱されたタイプＩＩの水を培地単独と混合した後、再構成された液体培地を、サンプル容器中の食品サンプルへ添加すること、または好ましくは、乾燥培地、加熱されたタイプＩＩの水およびサンプルを一緒に添加し、培地をサンプルおよび水と再構成した後、再構成された液体培地およびサンプルを均質な稠度まで混合することのいずれかによって）、ならびに、再構成された培地およびサンプルを、サンプル中のいずれの微生物も増殖できるのに十分な時間インキュベートすること、によって教示される。Elix（登録商標）水システムまたは二重蒸留カラムなどの水システムは、無菌の（タイプＩＩの）純水を提供するために用いられ得る。タンクレス水ヒーターまたは熱交換器は、好ましくは約２５°と５０℃との間の所望の温度まで水を加熱するために用いられ得る。タイプＩＩの水は、それが作られた後、または、タイプＩＩの水を創出するデバイスへ加熱された水を提供することによってそれがタイプＩＩの水に作られる前に、加熱され得る。ブレンダーは、サンプルの均質化ならびにインキュベーション前の最終的な均質化のために用いることができ、パドル式または据置型ブレンダーであってよい。手捏ねは、必要に応じて、いずれかまたは両方のブレンダーステップに置き換えることができる。
【００１３】
さらなる態様において、微生物のテストのためのサンプルを調製する方法は、サンプル容器中にテストされるべきサンプルを提供すること、放射線放射された、無菌の、脱水された増殖培地を提供すること、約２５℃〜約５０℃の温度まで加熱された無菌の（タイプＩＩの）純水源を提供すること、サンプルを均質化すること、それをその容器に添加すること、サンプルバッグ中の食品サンプルへ、加熱された水および脱水された培地を添加すること、および、加熱された水、培地および食品を均質な稠度まで混合すること、ならびに、食品サンプル中のいずれの微生物も増殖できるのに十分な期間、培地および食品を含有するバッグをインキュベートすること、によって教示される。Elix（登録商標）水システムまたは二重蒸留カラムなどの水システムは、無菌の（タイプＩＩの）純水を提供するために用いられ得る。タンクレス水ヒーターまたは熱交換器は、好ましくは約２５°と５０℃との間の所望の温度まで水を加熱するために用いられ得る。ブレンダーは、サンプルの均質化ならびにインキュベーション前の最終的な均質化のために用いることができ、パドル式または据置型ブレンダーであってよい。
【００１４】
別の態様において、微生物のテストのためのサンプルを調製するためのシステムは、ある線量で照射された、無菌の、脱水された増殖培地、（タイプＩＩの）純水を生産するためのシステム、水を加熱するためのシステム、サンプルを均質化するためのブレンダー、および、サンプル内に含有されるいずれの微生物をも増殖させるためのインキュベーターを提供することによって教示される。Elix（登録商標）水システムまたは二重蒸留カラムなどのシステムは、（タイプＩＩの）純水を提供するために用いられ得る。タンクレス水ヒーターまたは熱交換器は、好ましくは約２５°と５０℃との間の所望の温度まで水を加熱するために用いられ得る。タンクレス水ヒーターまたは熱交換器は、タイプＩＩの水を作るデバイスの上流側または下流側にあり得る。ブレンダーは、サンプルの均質化ならびにインキュベーション前の最終的な均質化のために用いることができ、パドル式または据置型ブレンダーであってよい。
【００１５】
一態様において、培地は、均質化されたサンプルへ、液体の形態で添加される前に、再構成される。要求される培地のアリコートは、次いで、例えばディスペンサー当を用いることによって、食品サンプルに添加され得る。その結果、２つの成分は、次いで、インキュベーション前に均質なサンプルを提供するために再混合される。
【００１６】
別の態様において、均質化されたサンプル、加熱された純水および脱水された培地は、培地を液体に再構成し、インキュベーションのために成分を混合できるように、一緒に混合される。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、本発明の第一の態様に従うシステムおよび方法を示す。
【図２】図２は、本発明の第二の態様に従うシステムおよび方法を示す。
【図３】図３は、本発明の第三の態様に従うシステムおよび方法を示す。
【図４】図４は、本発明の第四の態様に従うシステムおよび方法を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
詳細な説明
図１は、本発明のシステムおよび方法の第一の態様を示す。サンプル２は、サンプルの均質な塊を創出するために均質化４される。多くの場合、塊は、サンプル自体の中に含有される液体によって、少なくとも部分的に十分に液化される。
別途、無菌の放射線照射脱水培地などの無菌乾燥培地８が得られる。これは、バルク供給からのもので、閉じられた容器中へ入れられても、またはより好ましくは、Merck KGaAから入手可能なReadyBag（商標）培地などの閉じられ前処理されたバッグ中に供給されてもよい。加えて、加熱されたタイプＩＩの水１８は、培地８を再構成することに用いるため調製される。
【００１９】
この態様において、未処理水１０は、源２０から、タンクレス水ヒーターまたは熱交換器などの加熱デバイス１２へ供給されるが、前記デバイスは、未処理水１０を、所望の温度、典型的には、約２５℃と５０℃との間、好ましくは３０℃〜４０℃の間、および、より好ましくは３２°と３７℃との間までもっていく。
加熱された水１０は、次いで、加熱されたタイプＩＩの水１８を形成するためにタイプＩＩの水を作るためのデバイス１４で処理される。
この加熱されたタイプＩＩの水１８は、次いで、培地８に添加され、培地が再構成される。
【００２０】
いくつかの例では、混合ステップは、任意に、培地８が完全に溶解されるのを保証することが要求され得る。
加熱されたタイプＩＩの水１８の量は、供給された培地、その量、および、培地８を溶解するのに必要な培地８のその量に対する要求される水の容量、に依存する。これは一般に、培地のサプライヤーによって提供される情報である。それが提供されない場合は、簡単なテストによって、乾燥培地８のグラムあたりの必要な水の量を決定でき、次いで、これにより、テストに必要な量を推定することができる。
培地８を再構成するために必要なタイプＩＩの水の量のみが加熱され、すぐに用いられることが好ましい。
【００２１】
代替的に、加熱されたタイプＩＩの水１８は、熱フラスコ(thermal flask)などの断熱貯蔵容器または後に使用するためのジャケット付きリザーバーの中に入れられてもよい。
ジャケットは、少なくとも断熱性の性質があり、いくつかの場合、貯蔵中のいかなる熱損失をも低減するのに役立つように、加熱されてもよい。
再構成され加熱された培地８／１８は、次いで、ブレンドされたサンプル／培地材料６を創出するために、均質化されたサンプル４と混合される。この材料６は、サンプルバッグまたは容器の中へ入れられることができ、次いで、いかなる微生物が存在し得るかを決定するための期間、インキュベーター１６でインキュベートされる。インキュベーター１６は一般に、サンプル６中に存在するいかなる微生物の増殖をも促進するのに役立つ、約２５℃と５０℃との間に上げられた温度に維持される。好適な期間インキュベートした後のサンプル／培地ブレンド６は、次いで、以下に記載のとおり、微生物の存否を決定するためにテストされ得る。
【００２２】
図２は、本発明の第二の態様を示す。この図における特徴は、図１のものと同じである限り、それらを描写するために同じ参照番号が用いられている。
この態様において、タイプＩＩ水１８は、その形成の後に加熱される。また一方、かかるステップは、タイプＩＩの水２２を約２５℃と５０℃との間の温度にもっていくタンクレス水ヒーターまたは熱交換器などの加熱デバイス１２において成し遂げられ得、次いで、タイプＩＩの加熱された水１８は、乾燥培地８の再構成のため培地バッグ８へ供給される。
【００２３】
培地８を再構成するのに必要な水の量だけが加熱され、すぐに用いられることが好ましい。代替的に、加熱されたタイプＩＩの水１８は、熱フラスコなどの断熱貯蔵容器または後に使用するためのジャケット付きリザーバーの中に入れられてもよい。ジャケットは、少なくとも断熱性の性質があり、いくつかの場合、貯蔵中のいかなる熱損失をも低減するのに役立つように加熱され得る。
【００２４】
再構成され加熱された培地８／１８は、次いで、ブレンドされたサンプル／培地材料６を創出するために、均質化されたサンプル４と混合される。この材料６は、サンプルバッグまたは容器の中へ入れられることができ、次いで、いかなる微生物が存在し得るかを決定するための期間、インキュベーター１６中でインキュベートされる。インキュベーター１６は一般に、サンプル中に存在するいかなる微生物の増殖をも促進するのに役立つ、約２５℃と５０℃との間に上げられた温度に維持される。サンプル／培地ブレンド６は、次いで、以下に記載のとおり、微生物の存否を決定するためにテストされ得る。
【００２５】
図３は、本発明の別の態様を示す。この図における特徴は、図１のものと同じである限り、それらを描写するために同じ参照番号が用いられている。
この態様において、培地８は、それがタイプＩＩの水１８および均質化されたサンプル４と、バッグまたはプレート６などの容器において混合されるとき、加熱されたタイプＩＩの水１８で再構成される。培地、水１８および均質化されたサンプル４の混合後の全てのステップは、図１および２のものと同じである。
示されたとおり、水１０は、図１のようにタイプＩＩの水１８になるように処理される前に、加熱デバイス１２で加熱される。
【００２６】
図４は、本発明の別の態様を示す。この図における特徴は、図１のものと同じである限り、それらを描写するために同じ参照番号が用いられている。
この態様において、培地８は、それがタイプＩＩの水１８および均質化されたサンプル４と、１つの容器６において混合されるとき、加熱されたタイプＩＩの水１８で再構成される。
示されたとおり、水１０は、図１のようにタイプＩＩの水１８になるように処理される前に、加熱デバイス１２で加熱される。
【００２７】
本システムおよび方法によって検出されるべき微生物は、酵母、カビおよび細菌からなる群から選択される。とくに、これらの微生物は、それらを取り込むとヒトまたは動物に問題を引き起こす食品飲料の腐敗微生物および食品の病原性微生物として知られる微生物である。これらには、限定されないが、大腸菌群(coliform bacteria)、志賀毒素産生Escherichia coli（ＳＴＥＣ）などの病原性E. coliを包含するE. coli、サルモネラ菌属(Salmonella)、リステリア菌属(Listeria)、ブドウ球菌(Staphylococci)、赤痢菌属(Shigella)、ビブリオ菌属(Vibrio)等が含まれる。加えて、本発明は、医薬品およびパーソナルケア製品(Pharmaceutical and Personal Care product)に関連する品質およびリリーステストのための培養培地アプリケーションをカバーする。
【００２８】
純水は、典型的に、２５℃の測定温度でセンチメートルあたり５ミリオームよりも大きな抵抗率（２５℃で＞５ＭΩｃｍ）を有するタイプＩＩの水を意味する。かかる水は、培地を調製するため、および、他のかかる任務(duties)を遂行するために、実験室において用いられる標準的なものである。それは典型的には、無菌(aseptic and sterile)の適用のためにそれを望ましいものとする、それを作るために用いられるプロセスにより、低レベルの有機物、微生物および粒子を有する。所望により、付加的な無菌グレードのフィルター（Durapore（登録商標）フィルターまたはMillipore Express（登録商標）フィルター（EMD Millipore Corporation（マサチューセッツ州ビレリカ）からの）などの、０．２ミクロンまたはさらには０．１ミクロンの通常のポアサイズののフィルター）は、タイプＩＩの水を作るデバイスまたはヒーターのいずれかが後であっても、いずれの下流側で用いられ得る。
それは、逆浸透（ＲＯ）水を創出するための逆浸透膜（単数または複数）を介して、逆浸透プロセスによって最初に水をフィルターに通し、次いで、さらにＲＯ水を脱イオンステップおよび好ましくはＵＶステップでも処理するシステムによって作られ得る。１つのかかるシステムは、マサチューセッツ州ビレリカのEMD Millipore Corporationから入手可能なElix（登録商標）システムとして知られている。
代替的に、それは、タイプＩＩの水を創出するために、２つ以上の蒸留カラムが直列で用いられる二重蒸留プロセスによって作られ得る。
【００２９】
サンプルならびに、サンプル、培地および水の得られた混合物は、様々な装置による様々なやり方において均質化され得る。その最も簡単な形態において、食品は、密封されたバッグの中に入れられ、サンプルを均質化するために手、ローラー等によって捏ねられ、食品サンプルの範囲からできるだけ多くの微生物が除かれており、均質化によって創出された懸濁液になる。同様に、それは、乳鉢と乳棒を手配して粉砕され得る。
好ましくは、かかる均質化は、ブレンダーボウルが一連のブレードを含有する据置型ブレンダーなどのブレンダーによってなされるが、前記ブレードは、軸を中心に回転し、サンプルをペースト状に粉々にする。１つのかかるブレンダーは、Waring Corporationから入手可能なWaringスタイルの据置型ブレンダーである。
代替的に、パドル式ブレンダーが用いられ得る。パドル式ブレンダーは２つ以上のパドルを用いるが、それらの間にあるサンプルを含有するバッグとともに、互いに対して前後に揺らす。パドルは、サンプルを粉砕し、均質化されたサンプルによって形成された懸濁液中へ、存在する微生物を追い込む。１つのかかるデバイスは、英国のSeward Limitedから入手可能なStomacher（登録商標）パドル式ブレンダーと呼ばれる。
【００３０】
純水は、脱水培地に添加される前に加熱されて、微生物の検出における使用のためのそれを再構成する必要がある。
純水のための加熱システムは、加熱された水が純水製造プロセスにおいて用いられるように、純水製造の上流側にあることができる。
代替的に、加熱は、既に製造されたタイプＩＩの水に、または、純水製造の下流側で、行い得る。
この加熱は、純水製造の上流側または下流側のいずれかで、所望の温度範囲、典型的には２５〜５０℃まで水を加熱するタンクレス水ヒーターまたは熱交換器の使用を介して遂行され得る。かかるシステムは、Keltech Incorporatedから入手可能なタンクレス水ヒーターまたは熱交換器またはオハイオ州メンターのProcess technology Incから入手可能なTYTAN（商標）タンクレス水ヒーターなどがよく知られている。
【００３１】
微生物は、存在する場合、存在／不存が検出され、しばしば
計数され、同定すらされる。
最も基本的なテストは、インキュベートされたサンプルを、コロニー形成単位（ＣＦＵ）の形成について単純に視覚的に観察することであるが、前記ＣＦＵは、ヒトの目単独で、または顕微鏡を介して検出され得るを。いくつかの場合、混合された培地サンプルは、視覚的検出のその様式で、リーダープレート上に置かれ、インキュベートされる。
化学的検出方法は典型的には、インキュベーションの間に増殖する微生物と相互作用するダイおよび蛍光材料の使用を包含し、微生物の存在および同定を決定するための別の方法である。これらは、視覚的に検出され得るか、または、化学実体の存在およびしばしばそれらのレベルおよび配置をも同定する電子的検査システムの使用を介して検出され得る。かかる機器は、フルオロメーター、顕微鏡、ＣＣＤおよび他のタイプのビデオおよびカメラ等を包含し得る。
【００３２】
より最近の検出の方法は、存在するいずれの微生物の存在および同定をも決定するために、様々な分子的方法を用いることである。これらのシステムは典型的には、色彩(color)またはフルオロフォア基などのシグナル部分(signal moiety)により、選択されたＤＮＡ（ＰＣＲ法）またはＲＮＡ（ＴＭＡ法）配列を増幅し、次いで、視覚的にまたは補助的な電子検査装置で検出される。
【００３３】
例
例１
骨なしチキンの３２５グラムのサンプルを選択し、Waringブレンダーに入れる。ブレンダーをカバーし、サンプルを滑らかな稠度のブレンダーユニットによって処理する。サンプルは、再密閉可能なスタイルのバッグ（ZipLock １クオートバッグ）に静かに注ぐ(decanted)。
別途、４リットルのタイプＩＩの水を、Elix（登録商標）純水システム（EMD Millipore Corporation）の使用ディスペンサーの所から引き出し、３５℃の温度に達するまで、タンクレス水ヒーターで加熱する。
８６グラムの乾燥培地を含む脱水され放射線照射され緩衝されたペプトン培地を得て（ReadyBag（登録商標） Merck KGaA）、開封する。３３７５ｍｌの加熱したタイプＩＩの水をバッグに添加し、バッグを再密封し、培地を溶解するために手で軽く振る。溶解をチェックするため、時々、振るのを止める。培地が完全に溶解したとき、それをサンプルを含む再密封可能なバッグに添加する。再密封可能なバッグを、３７℃のインキュベーターに入れ、２４時間インキュベートさせる。
バッグをインキュベーターから取り除き、病原性細菌または腐敗性細菌のさらなる検出のために用いる。
【００３４】
例２
骨なしチキンの３７５グラムのサンプルを選択し、Waringブレンダーに入れる。ブレンダーをカバーし、サンプルを滑らかな稠度のブレンダーユニットによって処理する。サンプルは、再密閉可能なスタイルのバッグ（ZipLock １クオートバッグ）に静かに注ぐ。
別途、４リットルのタイプＩＩの水を、Elix（登録商標）純水システム（EMD Millipore Corporation）の使用ディスペンサーの所から引き出し、３５℃の温度に達するまで、タンクレス水ヒーターで加熱する。
８６グラムの乾燥培地を含む脱水され放射線照射され緩衝されたペプトン培地を得て（ReadyBag（登録商標） Merck KGaA）、開封する。３３７５ｍｌの加熱したタイプＩＩの水および培地をサンプルバッグに添加し、バッグを再密封する。
再密封可能なバッグを、３７℃のインキュベーターに入れ、２４時間インキュベートさせる。
バッグをインキュベーターから取り除き、病原性細菌または腐敗性細菌のさらなる検出のために用いる。
【００３５】
例３
骨なしチキンの３７５グラムのサンプルを選択し、Waringブレンダーに入れる。ブレンダーをカバーし、サンプルを滑らかな稠度のブレンダーユニットによって処理する。サンプルは、再密閉可能なスタイルのバッグ（ZipLock １クオートバッグ）に静かに注ぐ。
８６グラムの乾燥培地を含む脱水され放射線照射され緩衝されたペプトン培地を得て（ReadyBag（登録商標） Merck KGaA）、開封する。培地をサンプルバッグに添加する。
別途、４リットルのタイプＩＩの水を、Elix（登録商標）純水システム（EMD Millipore Corporation）の使用ディスペンサーの所から引き出し、３５℃の温度に達するまで、タンクレス水ヒーターで加熱する。
３３７５ｍｌの加熱したタイプＩＩの水を、サンプルおよび培地を含むサンプルバッグに添加し、バッグを再密封する。
再密封可能なバッグを、３７℃のインキュベーターに入れ、２４時間インキュベートさせる。
バッグをインキュベーターから取り除き、病原性細菌または腐敗性細菌のさらなる検出のために用いる。
【図１】
2017506900.tif 000002
【図２】
2017506900.tif 000003
【図３】
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【図４】
2017506900.tif 000005
【国際調査報告】
2017506900.tif 000006
2017506900.tif 000007
2017506900.tif 000008