(57)【要約】  本発明は、Ａ）ハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれたビタミンK化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグから選択される少なくとも1種の脂溶性活性物質を含有するマイクロカプセル、及びＢ）少なくとも1種の栄養素ミネラル、を含む組成物、並びにそのような組成物の使用及びそのような組成物を含む製品に関する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
Ａ）  ハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれたビタミンK化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグから選択される少なくとも1種の脂溶性活性物質を含有するマイクロカプセル、及び
Ｂ）  少なくとも1種の栄養素ミネラル
を含む組成物。
【請求項２】
上記少なくとも1種の脂溶性活性物質が、ビタミンK1、ビタミンK2、及びビタミンK1若しくはビタミンK2のプロビタミン及びプロドラッグ、例えばMK-6、MK-7若しくはMK-8又はこれらの混合物から選択される、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
上記活性物質の含有量が、マイクロカプセルの総重量の0.01〜15％、例えば0.1〜10％、0.2〜5％又は1〜3％である、請求項１又は２記載の組成物。
【請求項４】
上記少なくとも1種の栄養素ミネラルがLi、Na、Mg、K、Ca、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Mo又はSeの塩から選択される、請求項１〜３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項５】
上記少なくとも1種の栄養素ミネラルの塩が、例えばハロゲン化物、酸化物、硝酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、炭酸塩、グリセロリン酸塩、炭酸水素塩、ジヒドロリン酸塩若しくは無水リン酸塩等の任意の製薬上許容される塩、例えば炭酸カルシウム等のカルシウム塩、又は酸化マグネシウム等のマグネシウム塩である、請求項１〜４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項６】
上記マイクロカプセルの含有量が、組成物の総重量の0.001〜15％、例えば0.01〜10％、例えば0.1〜6％である、請求項１〜５のいずれか１項記載の組成物。
【請求項７】
上記少なくとも1種の栄養素ミネラルの含有量が、組成物の総重量の少なくとも10％、例えば少なくとも20％、例えば少なくとも30％である、請求項１〜６のいずれか１項記載の組成物。
【請求項８】
ビタミンD2若しくはD3、ビタミンE若しくはE-酢酸塩、ビタミンA、一価不飽和若しくは多価不飽和脂肪酸、又はPUFA油、β-カロテン、ゼアキサンチン、リコペン、ルテイン又はQ10から選択される1種以上の更なる活性物質、特にビタミンD2若しくはD3を更に含む、請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物。
【請求項９】
以下：
・上記少なくとも1種の脂溶性活性物質としてMK-7形態のビタミンK2を含有するマイクロカプセル、及び
・上記少なくとも1種の栄養素ミネラルの1種として炭酸カルシウム又は酸化マグネシウム
を含む、請求項１〜８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１０】
以下：
・上記少なくとも1種の脂溶性活性物質としてビタミンK1を含有するマイクロカプセル、及び
・上記少なくとも1種の栄養素ミネラルの1種として炭酸カルシウム又は酸化マグネシウム
を含む、請求項１〜８のいずれか１項記載の組成物。
【請求項１１】
以下のステップ：
・上記ハイドロコロイド及び上記任意の他のマトリクス成分の溶液又は分散液を提供し、
・上記溶液又は分散液に上記少なくとも1種の脂溶性活性物質を添加し、
・得られた混合液を処理して上記マトリクス中の上記少なくとも1種の活性物質の溶液又は分散液を調製し、
・得られた混合液を最終的に分配及び乾燥して、上記マトリクス中に埋め込まれた上記少なくとも1種の活性物質をそれぞれ含有する多数の粒子を調製する
を含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の組成物において使用するためのマイクロカプセルの調製方法。
【請求項１２】
上記活性物質の含有量が10〜500μg、例えば25〜250μg、例えば50〜200μgであり、上記少なくとも1種の栄養素ミネラルの含有量が投与形態の総重量の少なくとも10％、例えば少なくとも20％、例えば少なくとも30％である、請求項１〜１０のいずれか１項記載の組成物を含む単位投与形態。
【請求項１３】
一日単位投与形態（daily unit dosage form）である、請求項１２記載の単位投与形態。
【請求項１４】
以下のステップ：
・ハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれたビタミンK化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグから選択される少なくとも1種の脂溶性活性物質を10〜500μgの量で含有するマイクロカプセルを、投与形態の総重量の少なくとも10重量％の少なくとも1種の栄養素ミネラルと配合し、
・得られた配合物を圧縮して錠剤を形成する
を含む、錠剤の形態の請求項１２又は１３記載の単位投与形態の調製方法。
【請求項１５】
場合によって活性物質の溶解のための更なる油に分散し、ハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれたビタミンK化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグから選択される少なくとも1種の脂溶性活性物質を含有するマイクロカプセルであって、脂溶性活性物質の含有量がマイクロカプセルの総重量の0.01〜15％であり、活性物質と更なる油との合計含有量がマイクロカプセルの総重量の0.01〜15％である、上記マイクロカプセル。
【請求項１６】
上記少なくとも1種の脂溶性活性物質が、ビタミンK1、ビタミンK2、及びビタミンK1若しくはビタミンK2のプロビタミン及びプロドラッグから選択される、請求項１５記載のマイクロカプセル。
【請求項１７】
上記活性物質の含有量が、マイクロカプセルの総重量の0.01〜15％、例えば0.1〜10％、0.2〜5％、0.5〜3％又は1〜2％である、請求項１５又は１６記載のマイクロカプセル。
【請求項１８】
請求項１〜１０のいずれか１項記載の組成物において使用するための、請求項１５〜１７のいずれか１項記載のマイクロカプセル。
【請求項１９】
以下のステップ：
・上記ハイドロコロイド及び上記任意の他のマトリクス成分の溶液又は分散液を提供し、
・上記溶液又は分散液に上記少なくとも1種の脂溶性活性物質を添加し、
・得られた混合液を処理して上記マトリクス中の上記少なくとも1種の活性物質の溶液又は分散液を調製し、
・得られた混合液を最終的に分配及び乾燥して、上記マトリクス中に埋め込まれた上記少なくとも1種の活性物質をそれぞれ含有する多数の粒子を調製する
を含む、請求項１５〜１８のいずれか１項記載のマイクロカプセルの調製方法。
【請求項２０】
上記ハイドロコロイドがアカシアガム、タンパク質又はデンプンである、請求項１〜１０のいずれか１項記載の組成物又は請求項１５〜１８のいずれか１項記載のマイクロカプセル。
【請求項２１】
上記マトリクスが抗酸化剤及び／又は炭水化物を更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項記載の組成物又は請求項１５〜１８のいずれか１項記載のマイクロカプセル。
【請求項２２】
例えば高圧ホモジナイザー中での溶液又は分散液の処理の更なるステップを含む、請求項１１又は１９記載の方法。
【請求項２３】
ハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれた、ビタミンK化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグから選択される少なくとも1種の脂溶性活性物質を含有する上記マイクロカプセルが、請求項１１又は１９記載の方法によって得られる、請求項１〜１０又は２０〜２２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２４】
請求項１〜１０、２０、２１及び２３のいずれか１項記載の組成物、又は請求項１５〜１８のいずれか１項記載のマイクロカプセルを含む製品。
【請求項２５】
食品、食品添加物（food supplement）、飲料、医薬品又は動物薬、飼料若しくは飼料添加物、パーソナルケア製品又は家庭用品であることを特徴とする、請求項２４記載の製品。
【請求項２６】
経口投与のための栄養補助食品又は医薬品である、請求項２４又は２５記載の製品。
【請求項２７】
ビタミンK欠乏と関連する症状の治療、例えば骨粗しょう症及び動脈硬化症等の心臓血管系の症状の治療において、あるいは血液凝固の補助において使用するための、請求項２４又は２５記載の製品。
【請求項２８】
上記活性物質を含有する錠剤の製造のための、請求項１〜１０及び２０、２１及び２３のいずれか１項記載の組成物、又は請求項１０若しくは１９記載の方法に従って製造される組成物の使用。
【請求項２９】
請求項１〜１０、２０、２１及び２３のいずれか１項記載の組成物、又は請求項１１若しくは１９記載の方法に従って製造される組成物の有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、ビタミンK1又はK2と関連する症状の治療方法。
【請求項３０】
以下：
Ａ）  ハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれた、保存中に分解する少なくとも1種の脂溶性活性物質、例えばビタミン又はビタミンのプロビタミン若しくはプロドラッグ又は多価不飽和脂肪酸若しくはその誘導体を含有するマイクロカプセル、及び
Ｂ）  少なくとも1種の栄養素ミネラル
を含む組成物。
【請求項３１】
請求項３０のＡ）に規定されるマイクロカプセル。
【請求項３２】
以下のステップ：
・ハイドロコロイド及び任意に他のマトリクス成分の溶液又は分散液を提供し、
・上記溶液又は分散液に保存中に分解する少なくとも1種の脂溶性活性物質、例えばビタミン又はビタミンのプロビタミン若しくはプロドラッグ又は多価不飽和脂肪酸若しくはその誘導体を添加し、
・得られた混合液を処理して上記マトリクス中の上記少なくとも1種の活性物質の溶液又は分散液を調製し、
・得られた混合液を最終的に分配及び乾燥して、上記マトリクス中に埋め込まれた上記少なくとも1種の活性物質をそれぞれ含有する多数の粒子を調製する
を含む、マイクロカプセルの調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ビタミンK化合物及びそのプロビタミン及びプロドラッグ類似体の新規組成物に関する。これらの組成物は、例えば食品の栄養価を高めるための栄養補助食品等のマルチミネラル製品に、又は単にサプリメントに、使用することができ、あるいは、ビタミンKの投与が有効であることが知られている様々な症状の治療のために医薬品に使用することができる。本発明は特に、ビタミンの分解を引き起こす金属塩と組み合わせてこれらを使用することを可能とするためのビタミン又はプロビタミンのマイクロカプセル化、及び場合によっては更なるコーティングに関する。
【背景技術】
【０００２】
ビタミンKは、雛鳥（chick）におけるコレステロール代謝に関する研究の後、1935年頃に発見された。ビタミンKは、大部分は血液凝固のために必要とされる特定のタンパク質の翻訳後修飾に必要な親油性かつ疎水性のビタミン群を示す。タンパク質の修飾は、血液凝固機能のために必要なカルシウムイオン結合能のために重要である。化学的には、これらは2-メチル-1,4-ナフトキノン誘導体である。ビタミンKは単独の化合物ではなく、一連の関連する同族体である。2種の主たる分子種、ビタミンK1及びビタミンK2が存在する。
【０００３】
ビタミンK1はフィロキノンとも呼ばれ、アロ-E-2-メチル-3-(3,7,11,15-テトラメチルヘキサデカ-2-エニル)ナフタレン-1,4-ジオンの系統名を有する。これは、以下の構造を有する。
【化１】
2017521359.tif 000002
【０００４】
ビタミンK2はナフトキノン構造に基づきイソプレノイド鎖長が異なる同族体分子の混合物である。これらの化合物はメナキノンと呼ばれる。化合物MK-7は7個のイソプレニル基を含み、下記に示すものであるが、ビタミンの他の成分はイソプレニル基の数が異なる。メナキノンはアロ（all）-Eポリプレニル残基から構成される側鎖を有し、一般的にMK-n（nはイソプレニル反復単位の数を特定する）と呼ばれる。nの最小値は2である（nは典型的には2-11の値を有する）。
【化２】
2017521359.tif 000003
【０００５】
ビタミンK2は、天然ではチーズ等の様々な発酵食品中に低濃度で存在し、腸内細菌によって少量産生され得る一方、栄養補助食品としてのその使用は多くの集団にとって有益であり得る。ビタミンK2はダイズの発酵によって製造することができるが、天然資源からのビタミンの単離は複雑であり、ビタミン濃度は低いため、未だに興味深い合成標的である。更に、合成によって、異なるメナキノンの混合物の単離でなく、特定のメナキノンの調製が可能となる。
【０００６】
多くの研究者がビタミンK2又はその成分の一部を形成するメナキノン化合物を合成した。Isler et al., Helv Chim Acta (1958) 41, 786-807に報告されたメナキノンの最初の合成は、非立体特異的なアプローチを用いていた。Tso及びChen, J Chem Res (1995), 104-105には、ビタミンKのワンポット（one pot）合成が記載されているが、彼等は分子の側鎖ではなく、ナフトキノン環の形成に注意を向けている。その化学は3-置換イソベンゾフラノンのビニルスルホンとの反応によってナフトキノン環構造を形成することを含む。Suhara et al., Bioorg Med Chem Lett  17, (2007) 1622-1625には、末端メチル基がヒドロキシル、アルデヒド又は酸基に変換されたメナキノン類似体の様々な合成が記載されている。Naruta, J Org Chem (1980) 45, 4097-4104には、トリアルキルアリルスタンナン化学を使用して予め形成されている側鎖をナフトキノン基に結合するいくつかのビタミンK2類似体の合成が記載されている。
【０００７】
製造工程中の重要な中間体の合成に関連するMK-7及び他のメナキノンの形成のための合成戦略は、WO2010/035000に開示されている。この方法は、先行技術では以前は可能ではなかったビタミンK2の大量の合成を可能とする。ビタミンK2のプロドラッグはWO2013/128037に開示されている。
【０００８】
ビタミンK1及び特にK2は、酸素及び光に対して安定ではなく、ビタミンK1及びK2を含む従来の調製物は、加工及び保存中に分解し得る。イソプレノイド鎖中の二重結合のラセミ化法は、例えば不活性なビタミンK2類似体をもたらし、これらの二重結合は明らかに酸化に対して感受性を有する。また、ビタミンのジケトン自体が酸化に感受性を有している。
【０００９】
ビタミン、栄養素ミネラル及び他の栄養素による栄養補助を意図する調製物であるマルチミネラル製剤中にビタミンKを含めることが特に望ましい場合がある。そのような調製物は、錠剤、カプセル、トローチ、粉末剤、液剤、及び注射可能な製剤の形態で利用することができ、例えば7種の栄養素として主要な元素、カルシウム、リン、カリウム、硫黄、ナトリウム、塩素及びマグネシウム、及びいくつかの栄養素としては副次的だが重要な元素、例えば鉄、コバルト、銅、亜鉛、モリブデン、ヨウ素及びセレンを含み得る。
【００１０】
しかしながら、ビタミンK1及びK2は、錠剤等の伝統的な投与形態に製剤化した場合、無機塩、特にカルシウム又はマグネシウム塩の存在下で分解する。更に、投与形態の製剤化の間、分解の更なる機会がまだある。カルシウム又はマグネシウム等の錠剤中の一部の賦形剤と共に直接圧縮すると、錠剤化後に存在するMK-7の量に、例えばMK-7の30％までの減少等、重大な減少が観察され得る。MK-7は高価であるため、これは製剤化において許容される損失ではない。MK-7の分解は、カルシウム又はマグネシウムの存在下で加速されるように思われる。カルシウム及びマグネシウムは貴重なミネラルであるため、ビタミン全般、そして特にMK-7をカルシウム及びマグネシウムと共に製剤化できることが望ましい。
【００１１】
本発明の目的は、製剤化中のビタミンの深刻な分解なしに錠剤等の伝統的な投与形態に製剤化することができる、ビタミンK製品を1種以上の無機塩と組み合わせて含有する新規組成物、並びにその調製方法を提供することである。
【００１２】
本発明の更なる目的は、望ましい高い総体的安定性及び良好な保存特性を有する組成物を提供することである。
【００１３】
錠剤等の伝統的な投与形態で製剤化した場合に良好な保存特性を有する、ビタミンK製品を含有する新規マイクロカプセルを提供することが、本発明の更なる目的である。
【００１４】
本発明者等は、これらのビタミンのより安定な製剤が、特定のマイクロカプセル化方法を使用して調製できることを認識した。製剤化前にビタミンをマイクロカプセル化することによって、ビタミンの総体的安定性が顕著に改善され得る。更に、得られた粉末は操作が容易で加工中安定であり、良好な経時的保存特性を有する。完成品の製造の間、損失を最小限にするために、製品は良好な「流動」特性を有することが重要である。製品は、均一な配合製品であるべきであり、錠剤化工程中、圧力及び温度に対して耐性であるべきである。多数の潜在的担体及び被覆の試験及び分析の後、本発明者等は、マイクロカプセル化のみが所定の条件下で安定な製品をもたらし得ることを結論づけた。
【００１５】
本発明者等はまた、マイクロカプセル化したビタミンK1及びK2を、カルシウム塩、マグネシウム塩、及び他の金属塩と、例えばCa又はMgと直接組み合わせたMK-7に関連する分解の問題を生じることなく組み合わせることができることも見出した。加工及び錠剤化（例えば直接的圧縮）の間、ビタミンはビタミンK1又はK2程急速には分解せず、またビタミンは光及び空気に対してより安定である。このことは、光及び空気への曝露が一般的であるような適用において使用することができ、また錠剤中等でより良好な保存安定性を有することを意味する。
【００１６】
本発明者等はまた、本明細書中でプロビタミン又はプロドラッグと呼ぶ、ビタミンK1及びK2の類似体にマイクロカプセル化方法を拡大することも想定する。従って、in vivoで実際のビタミンに変換されるプロビタミン／プロドラッグと、本明細書に記載された技術とを組み合わせることで、本発明の更なる態様が形成される。
【発明の概要】
【００１７】
本発明は、以下：
（Ａ）ハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれたビタミンK化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグから選択される少なくとも1種の脂溶性活性物質を含有するマイクロカプセル、及び
（Ｂ）少なくとも1種の栄養素ミネラル
を含む組成物に関する。
【００１８】
本発明は更に、本発明の組成物において使用するためのマイクロカプセルの調製方法に関し、該方法は以下のステップ：
・上記ハイドロコロイド及び上記任意の他のマトリクス成分の溶液又は分散液を提供し；
・上記溶液又は分散液に上記少なくとも1種の脂溶性活性物質を、場合によって溶媒に溶解して添加し；
・得られた混合液を処理して上記マトリクス中の上記少なくとも1種の活性物質の溶液又は分散液を調製し；
・得られた混合液を最後に分配及び乾燥して、上記マトリクス中に埋め込まれた上記少なくとも1種の活性物質をそれぞれ含有する多数の粒子を調製する
を含む。
【００１９】
特に、本発明は、本発明の組成物において使用するためのマイクロカプセルの調製方法であって、以下のステップ：
・ハイドロコロイド及び任意の他のマトリクス成分の溶液又は分散液を提供し；
・上記溶液又は分散液に上記少なくとも1種の脂溶性活性物質を、場合によって溶媒に溶解して添加し；
・得られた混合液を例えばローターステーター中でホモジナイズしてマトリクス中の上記少なくとも1種の活性物質の溶液又は分散液を調製し；
・得られた混合液を、場合によってデンプン等の被覆材料の存在下で、最後に分配及び乾燥、例えば噴霧乾燥して、上記マトリクス中に埋め込まれた上記少なくとも1種の活性物質をそれぞれ含有する多数の粒子を調製する
を含む方法を提供する。
【００２０】
本発明はまた、本発明の組成物を含む単位投与形態であって、上記活性物質の含量が10〜500μgであり、上記少なくとも1種の栄養素ミネラルの含量が投与形態の総重量の少なくとも10％である、単位投与形態に関する。
【００２１】
本発明はまた、錠剤の形態の単位投与形態の調製方法に関し、該方法は以下のステップ：
・ハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれたビタミンK化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグから選択される少なくとも1種の脂溶性活性物質を10〜500μgの量で含有するマイクロカプセルを、投与形態の総重量の少なくとも10重量％の少なくとも1種の栄養素ミネラルと配合し、そして
・得られた配合物を圧縮して錠剤を形成する
を含む。
【００２２】
本発明は更に、場合によって活性物質の溶解のための更なる油に分散され、かつハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれたビタミンK化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグから選択される少なくとも1種の脂溶性活性物質を含有するマイクロカプセルに関し、ここで脂溶性活性物質の含量は0.01〜15重量％であり、活性物質及び更なる油の総含量はマイクロカプセルの総重量の0.01〜15％である。
【００２３】
本発明の文脈において、ビタミンKは、ビタミンK1、ビタミンK2、又はビタミンKのプロビタミン若しくはプロドラッグ、又はこれらの組合せとして理解されるべきである。
【００２４】
本発明はまた、本発明のマイクロカプセルの調製方法に関し、該方法は以下のステップ：
・上記ハイドロコロイド及び上記任意の他のマトリクス成分の溶液又は分散液を提供し、
・上記溶液又は分散液に上記少なくとも1種の脂溶性活性物質を添加し、
・得られた混合液を処理して上記マトリクス中の上記少なくとも1種の活性物質の溶液又は分散液を調製し、
・得られた混合液を最後に分配及び乾燥して上記マトリクス中に埋め込まれた上記少なくとも1種の活性物質をそれぞれ含有する多数の粒子を調製する
を含む。
【００２５】
最後に、本発明は、本発明の組成物又はマイクロカプセルを含む製品、その使用、及びビタミンK欠乏と関連する症状の治療方法に関する。
【００２６】
驚くべきことに、ビタミンK（K1及び／又はK2）化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグを栄養素ミネラルと共に含むより安定な製剤を、本発明のマイクロカプセルに含まれたビタミンKの使用によって得ることができることが見出された。ビタミンを栄養素ミネラルと混合する前にマイクロカプセルとして製剤化し、その後に錠剤等の伝統的な投与形態中に混合物を製剤化すると、ビタミンKの総体的安定性は顕著に向上し得る。
【００２７】
また、ビタミンK化合物を含有するマイクロカプセル自体が水分に対して保護され、熱帯条件下でさえも保存中に自由な流れを保持する（remain free-flowing）。これらは、ビタミンK製剤としても、またマルチミネラル製剤中に製剤化された場合にも高い安定性を有する。
【００２８】
更に、得られた組成物は操作が容易で加工中安定であり、かつ錠剤等の最終適用／投与形態の良好な経時的保存特性を有する。完成品の製造中、損失を最小限にするために製品が良好な「流動（flow）」特性を有することは重要である。製品は均一な配合製品であるべきであり、錠剤化工程中に圧力及び温度に対して耐性を有するべきである。
【００２９】
多数の潜在的担体及び被覆の試験及び分析の後、本発明は、ビタミンK化合物を含有するマイクロカプセルのみが所定の条件下で安定な製品をもたらし得ることを見出した。
【００３０】
特に、マイクロカプセルとして製剤化されたビタミンK1及びK2は、例えばCa又はMgと直接組み合わせたMK-7に関連する分解の問題なしに、カルシウム塩、マグネシウム塩、及び他の重要な金属塩と組み合わせることができることも見出された。この組合せは、加工及び錠剤化（例えば直接圧縮）の間、伝統的なビタミンK1又はK2製品との組合せ程急速に分解せず、Kビタミンは光及び空気に対してより安定であり、これは光及び空気への曝露が一般的な適用において使用することができ、錠剤中等でより良好な保存安定性を有することを意味する。
【００３１】
本発明者等はまた、本明細書においてプロビタミン又はプロドラッグと呼ぶビタミンK1及びK2の類似体にマイクロカプセル化方法を拡大することも想定する。従って、in vivoで実際のビタミンに変換されるプロビタミン又はプロドラッグと、本明細書に記載される技術との組合せは、本発明の更なる態様を形成する。
【００３２】
本明細書において使用する用語「マイクロカプセル」（又は「ビーズレット」）は、複数の固体若しくは液体のマイクロ粒子又は溶質分子が埋め込まれたマトリクス材料をそれぞれ含有する粒子を意味する。マイクロカプセルは、通常約5mm以下、例えば1mm〜0.05mm、例えば0.6〜0.1mmの平均径を有する。これらはまた、例えば2mm〜0.01mm、例えば1.5mm〜0.05mm、より具体的には1.0〜0.2mm、例えば0.1〜0.2mmの直径を有することができる。
【００３３】
本明細書において使用する用語「分散液」は、液体媒体中、例えば水／水溶液中に分散した液体粒子（例えば油滴）を含む混合液を意味するエマルジョン、又は液体媒体中、例えば油、水／水溶液中に分散した固体粒子を意味する懸濁液の双方を包含する。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明の組成物の一実施形態において、少なくとも1種の脂溶性活性物質は、ビタミンK1、ビタミンK2、及びビタミンK1若しくはビタミンK2のプロビタミン及びプロドラッグ、例えばMK-6、MK-7又はMK-8、特にK1及びMK-7、又はこれらの混合物から選択される。
【００３５】
別の実施形態において、上記活性物質の含有量は、マイクロカプセルの全重量の0.01〜15％、例えば0.1〜10％、例えば0.2〜5％、又は0.5〜3％、又は1〜2％である。
【００３６】
本発明の組成物の一実施形態において、少なくとも1種の栄養素ミネラルは、Li、Na、Mg、K、Ca、V、Cr、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、Zn、Mo又はSe、好ましくはCa及び／又はMgの塩から選択される。
【００３７】
別の実施形態において、少なくとも1種の栄養素ミネラルの塩は、ハロゲン化物、酸化物、硝酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、炭酸塩、グリセロリン酸塩、炭酸水素塩、ジヒドロリン酸塩若しくは無水リン酸塩等の任意の製薬上許容される塩、例えば炭酸カルシウム等のカルシウム塩、又は酸化マグネシウム等のマグネシウム塩である。
【００３８】
このような実施形態の一つでは、組成物は、少なくとも1種の活性物質としてMK-7形態のビタミンK2、及び少なくとも1種の栄養素ミネラルの一つとして炭酸カルシウム又は酸化マグネシウムを含有するマイクロカプセルを含む。
【００３９】
このような実施形態のもう一つでは、組成物は、少なくとも1種の活性物質としてビタミンK1、及び少なくとも1種の栄養素ミネラルの一つとして炭酸カルシウム又は酸化マグネシウムを含有するマイクロカプセルを含む。
【００４０】
更に別の実施形態において、上記マイクロカプセルの含有量は、組成物の全重量の0.001〜15％、例えば0.01〜10％、例えば0.1〜6％である。
【００４１】
上記少なくとも1種の栄養素ミネラルの含有量は、例えば組成物の全重量の少なくとも10％、例えば少なくとも20％又は少なくとも30％であっても良い。
【００４２】
本発明の組成物は更に、ビタミンE若しくはE-酢酸塩、ビタミンA、D2若しくはD3、一価不飽和若しくは多価不飽和脂肪酸、又はリノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸及び／若しくはドコサヘキサエン酸を他の脂肪酸と組み合わせて含むモノ、ジ、及び／又はトリグリセリド又は遊離脂肪酸自体を含むPUFA油、β-カロテン、ゼアキサンチン、リコペン、ルテイン若しくはQ10から選択される1種以上の更なる活性物質、例えばビタミンE若しくはE-酢酸塩、ビタミンA、D2若しくはD3、一価不飽和若しくはPUFA油、β-カロテン、リコペン、ルテイン又はQ10を含有し得る。
【００４３】
一実施形態において、本発明の単位投与形態は一日単位投与形態（daily unit dosage form）である。
【００４４】
本発明のマイクロカプセルの一実施形態において、少なくとも1種の脂溶性活性物質は、ビタミンK1、ビタミンK2、及びビタミンK1若しくはビタミンK2のプロビタミン及びプロドラッグから選択される。
【００４５】
別の実施形態において、活性物質の含有量は、マイクロカプセルの全重量の0.1〜10％、例えば0.2〜5％、又は0.5〜3％、又は1〜2％である。
【００４６】
別の実施形態において、ビタミンK化合物又はビタミンK化合物のプロビタミン若しくはプロドラッグから選択される少なくとも1種の脂溶性活性物質を含有し、本発明の組成物に含まれるマイクロカプセルは、本発明の方法によって得られる。
【００４７】
第三の実施形態において、本発明のマイクロカプセルは、本発明の組成物において使用するためのものである。
【００４８】
活性物質の溶液のための更なる油は、中鎖トリグリセリド、任意の植物性食用油、ダイズ油、オリーブ油、パーム油、サンフラワー油等の従来の油である。
【００４９】
本発明のマイクロカプセル、又は本発明の組成物中に含まれるマイクロカプセル中に含まれる脂溶性活性物質は、ビタミンK1、ビタミンK2、及びビタミンK1若しくはビタミンK2のプロビタミン又はプロドラッグ、すなわちビタミンK型の任意の物質から選択され、保存、輸送、操作及び使用中に、その物質の物理的及び化学的分解を回避するために、例えば酸素、水分、光照射、及び物理的な影響からの保護を必要とする任意の物質であり得る。これらの活性物質は更に、化学的又は生物学的システムのいずれかにおいて活性であると定義される。ビタミンKのプロビタミン又はプロドラッグは、in vivoで活性なビタミンに変換され、WO2010/035000又はWO2013/128037に開示される物質の任意のものから選択され得る。全体として参照されるこれらの文献は、ビタミンK化合物の製造方法も開示している。
【００５０】
一実施形態において、マイクロカプセルは、実際のビタミンK2化合物の結晶形態から製造される。別の実施形態において、マイクロカプセルは、実際のビタミンK1化合物の油から製造される。更なる別の実施形態において、マイクロカプセルは、実際のビタミンK1及びK2のみの結晶形態、又はこれらと他のビタミン、カロテノイド、又は一価不飽和若しくは多価不飽和脂肪酸との組合せから製造される。
【００５１】
本発明に従って使用するマトリクスハイドロコロイドは、乳化特性を有する任意のハイドロコロイド、例えばアカシアガム、タンパク質、例えばカゼイン塩、ホエイタンパク質、乳タンパク質若しくは加水分解物、天然及び改変多糖及び天然のハイドロコロイド、例えばアルギン酸塩、カラギーナン、ゼラチン、ガッティガム（gum ghatti）、キサンタンガム、ゲランガム、改変アカシアガム、カルボキシメチルセルロース、ペクチン、改変ペクチン又は混合物であり得る。天然起源、例えばジャガイモ、コムギ、トウモロコシ、タピオカ、オオムギ及びコメ由来のデンプン、及び加工デンプンは好適なマトリクスハイドロコロイドの他の例であり、例えばオクテニルコハク酸ナトリウム加工デンプンである。量は、マイクロカプセルの重量の15〜80％、例えば20〜70％又は25〜60％を構成し得る。
【００５２】
マトリクスは、場合によって更なる成分、例えば溶解した炭水化物、例えばフルクトース、グルコース、グルコースシロップ、フルクトース高含量コーンシロップ、ソルビトール及びスクロース又はこれらの組合せ、及び／又は抗酸化剤を含有し得る。従って、ソルビトール及びスクロース及び／又は抗酸化剤の使用は任意選択である。ハイドロコロイド及び炭水化物の組合せの使用が特に好ましい。
【００５３】
マイクロカプセルは、抗酸化剤、例えばt-ブチルヒドロキシトルエン（BHT）、t-ブチルヒドロキシアニソール（BHA）、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、アスコルビン酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸ナトリウム、EDTA若しくはその塩、トコフェロール、TBHQ、エトキシキン（ethoxyquine）、没食子酸プロピル、及びハーブからの抽出物、すなわちローズマリー若しくはオレガノ抽出物；抗ケーキング剤、例えばリン酸三カルシウム及びケイ酸塩、すなわち二酸化ケイ素及びケイ酸アルミニウムナトリウム；可塑剤、例えば炭水化物及び炭水化物アルコール（carbohydrate alcohol）、その例はサッカロース、グルコース、フルクトース、ラクトース、転化糖、ソルビトール、マンニトール、トレハロース、タガトース、プルラン、ラフチロース（オリゴフルクトース）、デキストリン、マルトデキストリン、グリセリン、及びこれらの混合物、例えばサッカロース、トレハロース、プルラン、デキストリン及びラフチロース及びこれらの混合物；乳化剤及び界面活性剤、例えばパルミチン酸アスコルビル、スクロースエステル、脂肪酸のモノグリセリド及びジグリセリド、及びこれらの誘導体、及びレシチン等の伝統的な添加剤を更に含有し得る。
【００５４】
マイクロカプセル化工程は、典型的には油、例えばMCT油中への脂溶性活性成分の溶解を含む。次いで、ハイドロコロイドを、水等の溶媒中に、任意に糖等の他の賦形剤と共に溶解する。次いで2つの相を混合し、ローターステーター等のホモジナイザー中でホモジナイズする。ホモジナイズした組成物を、次いで噴霧しても良い。噴霧を容易にするために、ホモジナイズした混合物を希釈することが必要な場合がある。
【００５５】
次いで、ホモジナイズした混合物を、好ましくは噴霧乾燥するが、他の乾燥方法も使用することができる。多量の粒子を製造するための溶液又は分散液の分配及び乾燥は、伝統的な任意の方法、例えば噴霧冷却、噴霧乾燥またはシート乾燥及び破砕によって行うことができる。例えばWO 91/06292を参照されたい。
【００５６】
本発明の方法の一実施形態において、粉末化剤（powdering agent）、例えば天然のコーンスターチを、最終の分配及び乾燥ステップ中にマイクロカプセルに供給する。
【００５７】
本方法の別の実施形態において、高圧ホモジナイザー中での溶液又は分散液の処理、例えばNiro Soavi High Pressure Homogenisator又はRannie中での処理の更なるステップが含まれる。
【００５８】
一実施形態において、本発明の製品は、食品、食品添加物（food supplement）、飲料、医薬品若しくは動物薬、飼料若しくは飼料添加物、パーソナルケア製品若しくは家庭用品、例えば経口投与のための栄養補助食品又は医薬品である。
【００５９】
例えば、スクロース製品を本発明の組成物で強化することができる。
【００６０】
製品は、例えばビタミンK欠乏と関連する症状の治療、例えば骨粗しょう症及び動脈硬化症等の心臓血管系の症状の治療において、あるいは血液凝固の補助において使用するためのものであり得る。
【００６１】
一実施形態において、本発明は、ビタミンK製品から選択される活性物質を含有する錠剤の製造のための本発明の組成物の使用に関する。
【００６２】
本発明の組成物はまた、有効量の本発明の組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、ビタミンK欠乏と関連する症状の治療方法において使用することもできる。
【００６３】
本発明の方法は、以下の一般的な手順に従って、又は実施例に示したように実施することができる。
【００６４】
マトリクス成分の一部を含む水溶性成分は、場合によって高温で水に添加し、撹拌下で溶解させる。脂溶性成分を混合し、次いで水相に添加して混合液をローター／ステーター溶解機中でホモジナイズして溶液又は分散液を調製する。必要に応じ、溶液又は分散液を伝統的な方法で最終的に分配（divide）及び乾燥する前に、溶液又は分散液を適切な粘度まで希釈する。適用可能であれば、分配及び乾燥中に粉末化剤（powdering agent）を添加する。
【００６５】
適用可能であれば、溶液又は分散液は、高圧ホモジナイザー中での更なる処理に付される。
【００６６】
本発明の組成物は、ビタミンK1又はK2と関連する症状の治療における使用、例えば骨粗しょう症及び心臓血管系の症状、例えば動脈硬化症の治療のために、あるいは血液凝固の補助における使用のために、好適である。
【００６７】
本発明の組成物はまた、有効量の本発明の組成物をそれを必要とする患者に投与することを含む、ビタミンK1又はK2と関連する症状の治療方法において使用するために好適である。
【００６８】
本発明はビタミンKに関連して記載されているが、本明細書に記載したマイクロカプセル化の技術は、その保存中に容易に分解する他のビタミン及び他の化合物、例えば多価不飽和脂肪酸及びその誘導体、例えばオメガ-3sに応用することができる。マイクロカプセル化することができるビタミンとしては、ビタミンA、ビタミンBファミリーのビタミン、及びビタミンDファミリーのビタミンが挙げられる。マイクロカプセル化化合物は、栄養素ミネラルと共に使用し得るが、それ自体で同様に使用することができる。
【００６９】
従って、更なる態様から見て、本発明は、以下：
Ａ）  ハイドロコロイド及び任意に1種以上の他のマトリクス成分を含むマトリクス中に埋め込まれた、保存中に分解する少なくとも1種の脂溶性活性物質、例えばビタミン又はビタミンのプロビタミン若しくはプロドラッグ又は多価不飽和脂肪酸若しくはその誘導体、を含有するマイクロカプセル、及び
Ｂ）  少なくとも1種の栄養素ミネラル
を含む組成物を提供する。
【００７０】
上記Ａ）のマイクロカプセルはまた、本発明の更なる態様を形成する。
【００７１】
別の態様から見て、本発明は、マイクロカプセルの調製方法であって、以下のステップ：
・ハイドロコロイド及び任意に他のマトリクス成分の溶液又は分散液を提供し、
・上記溶液又は分散液に、保存中に分解する上記少なくとも1種の脂溶性活性物質、例えばビタミン又はビタミンのプロビタミン若しくはプロドラッグ又は多価不飽和脂肪酸若しくはその誘導体を添加し、
・得られた混合液を処理して上記マトリクス中の上記少なくとも1種の活性物質の溶液又は分散液を調製し、
・得られた混合液を最後に分配及び乾燥して、上記マトリクス中に埋め込まれた上記少なくとも1種の活性物質をそれぞれ含有する多数の粒子を調製する
を含む方法を提供する。
【００７２】
本発明は、以下の実施例を参照しながら更に詳細に記載される。
【実施例】
【００７３】
錠剤の安定性試験：
ビタミンK及び栄養素ミネラルを含有する組成物を、長期安定性（25℃／60％RH）及び加速条件下での安定性（40℃／75 30％RH）について試験する。ビタミンK2、MK-7化合物はKappa Bioscienceから提供された。
【００７４】
［実施例１］ビタミンKを含有するマイクロカプセルの調製
0.2重量％の結晶性MK-7の量でビタミンK2を含有するマイクロカプセル
8.9gのビタミンK2／MK-7を60gのMCT（中鎖トリグリセリド）油に62℃の温度で溶解した。
1250gのアカシアゴム及び1800gの糖を2200gの水に62℃で撹拌しながら溶解した。MK-7を含む油相を水溶液に添加し、溶液を65℃以下で撹拌した。
【００７５】
分散液をローター／ステーター中で良くホモジナイズした。あるいはまた、高圧ホモジナイザーを適用することもできる。そして噴霧可能な粘度まで希釈した。
続いて、分散液を最終的に噴霧乾燥塔（spray drying tower）に分配し、そこで分散液粒子をデンプンの薄層で被覆し、乾燥した。
【００７６】
最終マイクロカプセル中の小滴の平均サイズ（d0.5、Master sizer、Malvern instrumentsで測定）は100-800nmであり、MK-7の含有量は0.2重量％、残留水の含量は3-5重量％、かさ密度、ルース／タップは0.71／0.86 g/mlであった。
【００７７】
［比較例１］
MCC（微結晶セルロース）粉末中のビタミンK2 MK-7を使用した。
【００７８】
［実施例２］
栄養素ミネラルとしてMgO及び結晶性MK-7を含有するマイクロカプセルを含む本発明の組成物
16gのマイクロカプセル化ビタミンK2（0.2重量％MK7、実施例１）を、274gのMgO（Magnesia 82600）、274gの微結晶セルロースパウダー（MCC）及び5gのステアリン酸マグネシウムと混合して均一な混合物とした。この混合物を使用して錠剤を製造した。
【００７９】
［比較例２］
栄養素ミネラルとしてMgO及びMCCパウダー中のMK-7を含む組成物
MCCパウダー中の45gのビタミンK2、MK7（0.2％、Kappa Bioscience、比較例１）を、373.5gのMgO（Magnesia 82600）、373.5gのMCCパウダー及び8gのステアリン酸マグネシウムと共に混合して均一な混合物とした。この混合物を使用して錠剤を製造した。
【００８０】
錠剤パラメーター：
錠剤機：Killian T 300
錠剤サイズ：11mm
錠剤圧：39kN
【００８１】
錠剤の安定性試験：
MK7を含有するマイクロカプセル及びMgOを含む錠剤（実施例２）について、長期（25℃/60％RH）及び加速条件下（40℃/75％RH）の安定性試験を、MCC中のMK7（被覆されていない）及びMgOを含む錠剤（比較例２）と比較して実施した。下記の表１は安定性の結果（％ w/w）を示す。
【表１】
2017521359.tif 000004
【００８２】
［実施例３］
栄養素ミネラルとしてCaCO3及び結晶性MK-7を含有するマイクロカプセルを含む本発明の組成物
16gのマイクロカプセル化ビタミンK2（0.2％MK7、実施例１）を、459gのCaCO3（Presscal 90％）、90gの微結晶セルロースパウダー（MCC）及び5gのステアリン酸マグネシウムと混合して均一な混合物とした。この混合物を使用して錠剤を製造した。
【００８３】
［比較例３］
栄養素ミネラルとしてCaCO3及びMCCパウダー中のMK-7を含む組成物
MCCパウダー中の45gのビタミンK2、MK7（0.2％、Kappa Bioscience、比較例１）を、645gのCaCO3（Presscal 90％）、102gのMCCパウダー及び8gのステアリン酸マグネシウムと共に混合して均一な混合物とした。この混合物を使用して錠剤を製造した。
【００８４】
錠剤パラメーター：
錠剤機：Killian T 300
錠剤サイズ：11mm
錠剤圧：39kN
【００８５】
錠剤の安定性試験：
MK7を含有するマイクロカプセル及びCaCO3を含む錠剤（実施例３）について、長期（25℃/60％RH）及び加速条件下（40℃/75％RH）の安定性試験を、MCC中のMK7（被覆されていない）及びCaCO3を含む錠剤（比較例３）と比較して実施した。下記の表２は安定性の結果（％ w/w）を示す。
【表２】
2017521359.tif 000005
【００８６】
［実施例４］
1.0重量％の量でビタミンK1を含有するマイクロカプセル
7.5gのビタミンK1を65℃の温度で秤量する。
176gのアカシアガム及び476gの噴霧乾燥したグルコースシロップを490gの水に65℃で撹拌しながら溶解する。ビタミンK1を含む油相を水溶液に添加して70℃以下で撹拌する。
分散液をローター／ステーター中で良くホモジナイズする。あるいはまた、高圧ホモジナイザーを適用することができる。そして、噴霧可能な粘度まで希釈する。
続いて、分散液を最終的に噴霧乾燥塔に分配し、そこで分散液粒子をデンプンの薄層で被覆し、乾燥する。
MK-7の含有量は1.0重量％であり、残留水の含量は2-3％である。
【００８７】
［比較例４］
1.0％のK1を含有する伝統的な噴霧乾燥ビタミンK1製品を使用する。
【００８８】
［実施例５］
栄養素ミネラルとしてMgO及びビタミンK1を含有するマイクロカプセルを含む本発明の組成物
10gのマイクロカプセル化ビタミンK1（1.0％、実施例４）を、274gのMgO（Magnesia 82600）、274gの微結晶セルロースパウダー（MCC）及び5gのステアリン酸マグネシウムと混合して均一な混合物とする。この混合物を使用して錠剤を製造する。
【００８９】
［比較例５］
栄養素ミネラルとしてMgO及び伝統的な噴霧乾燥ビタミンK1製品を含む組成物
10gの噴霧乾燥ビタミンK1（1.0％、比較例４）を、20 274gのMgO、274gの微結晶セルロースパウダー（MCC）及び5gのステアリン酸マグネシウムと混合して均一な混合物とする。この混合物を使用して錠剤を製造する。
【００９０】
錠剤パラメーター：
錠剤機：Killian T 300
錠剤サイズ：11mm
錠剤圧：39kN
【００９１】
錠剤の安定性試験：
ビタミンK1を含有するマイクロカプセル及びMgOを含む錠剤（実施例５）、及び噴霧乾燥ビタミンK1及びMgO（比較例５）について、長期（25℃/60％RH）及び加速条件下（40℃/75％RH）の安定性試験が進行中である。
【００９２】
［実施例６］
栄養素ミネラルとしてCaCO3及びビタミンK1を含有するマイクロカプセルを含む本発明の組成物
10gのマイクロカプセル化ビタミンK1（1.0％ K1、実施例４）を、858gのCaCO3（Calci-Press 95MD）、30gのKollidon CL-F（BASF）及び8.4gのステアリン酸マグネシウムと混合して均一な混合物とする。この混合物を使用して錠剤を製造する。
【００９３】
［比較例６］
栄養素ミネラルとしてCaCO3及び伝統的な噴霧乾燥ビタミンK1製品を含む組成物
10gのビタミンK1（比較例５）を858gのCaCO3（Calci-15 Press 95MD）、30gのKollidon CL-F（BASF）及び8.4gのステアリン酸マグネシウムと混合して均一な混合物とする。この混合物を使用して錠剤を製造する。
【００９４】
錠剤パラメーター：
錠剤機：Korsch PH 106 20
錠剤サイズ：楕円形（Oblong）カルシウム
錠剤圧：20kN
【００９５】
錠剤の安定性試験
ビタミンK1及びCaCO3を含有するマイクロカプセルを含む錠剤（実施例６）及び噴霧乾燥したビタミンK1及びCaCO3（比較例６）についての長期（25℃／60％RH）及び加速条件（40℃／75％RH）での安定性試験が進行中である。
【００９６】
［実施例７］
実施例２及び３の組成物、及び比較例２及び３の組成物について、今度は12カ月間の更なる安定性試験を実施した。
2017521359.tif 000006
錠剤は、実施例２に記載したようにして製造した。これらをそのまま使用するか、あるいは乳鉢ですりつぶして粉末を得た。
【００９７】
HPLC条件：
・サンプルは逆相HPLCで分析した（method ID MK-7_short）。
・MK-7は外部標準較正及び270nmでのUV検出を使用して定量した。
・低濃度のサンプルのため、60mmフローセルを有する検出器を使用した。
【００９８】
結果
実施例２及び３の製品、及び比較例２及び３の結果を表３及び表４にそれぞれ示す。
【表３】
2017521359.tif 000007
【表４】
2017521359.tif 000008
【００９９】
要約
CaCO3及びMgOと組み合わせた粉末及び錠剤中のMK-7の安定性試験の結果から、本発明の製剤がMK-7含量に関して対応するMCC製剤よりも安定であることが示される。
【０１００】
MgO及びCaCO3を含む粉砕した粉末及び錠剤では、25℃で保存した材料について、12カ月の試験期間中にMK-7含量の結果にわずかな変化しか観察されない。40℃で保存した材料では、MK-7の含量はわずかに減少する。
【０１０１】
MgO及びCaCO3を含むMCC製品での結果から、特にMgOを含有する材料で、MK-7の量に顕著な減少が示される。1カ月の試験期間の時点で、MCCパウダー及びMgOを含む錠剤では、MK-7の量はT=0の結果の20％未満まで減少する。
【０１０２】
MCCパウダー及びCaCO3を含む錠剤では、１カ月の結果はMgOの場合よりも良好であるが、本発明の製品と比較すると、MK-7の減少は顕著である。
【０１０３】
MK-7に対するMgO及びCaCO3の効果の比較試験から、MK-7の安定性がマイクロカプセル製剤中で顕著に向上することが示される。
【国際調査報告】
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