(57)【要約】  本発明は、式（１−０１）〜（１−４７）の化合物および式（２−０１）〜（２−２６）の化合物、又はそれらの医薬的に若しくは獣医学上許容される塩、あるいは該化合物又は任意のそれらの医薬的に若しくは獣医学上許容される塩のいずれかの任意の立体異性体を含む製品に関する。本発明は、認知欠損若しくは認知障害に伴って進行する神経障害の又は神経変性疾患の処置及び／又は予防に使用するための前記製品にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
組合せである製品であって、前記組合せが、
ａ）次のものからなる群から選択されるホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤化合物：
（６Ｒ，１２ａＲ）−６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−２−メチル−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン（１−３０）、
５−［２−エトキシ−５−（４−メチルピペラジン−１−イル）スルホニル−フェニル］−１−メチル−３−プロピル−６Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（１−２８）、
２−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジン−１−イル）スルホニル−フェニル］−５−メチル−７−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（１−２９）、
３−（１−メチル−７−オキソ−３−プロピル−６Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−５−イル）−Ｎ−［２−（１−メチルピロリジン−２−イル）エチル］−４−プロポキシ−ベンゼンスルホンアミド（１−３１）、
４−［（３−クロロ−４−メトキシ−フェニル）メチルアミノ］−２−［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］−Ｎ−（ピリミジン−２−イルメチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（１−３２）、
５−エチル−２−［５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］スルホニル−２−プロポキシ−フェニル］−７−プロピル−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｄ］ピリミジン−４−オン（１−３３）、
５−［２−エトキシ−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］スルホニル−フェニル］−１−メチル−３−プロピル−６Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（１−３４）、
７−［（３−ブロモ−４−メトキシ−フェニル）メチル］−１−エチル−８−［［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロペンチル］アミノ］−３−（２−ヒドロキシエチル）プリン−２，６−ジオン（１−３５）、
１−（２−エトキシエチル）−５−［エチル（メチル）アミノ］−７−［（４−メチル−２−ピリジル）アミノ］−Ｎ−メチルスルホニル−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−３−カルボキサミド（１−３６）、
２−［（３，４−ジメトキシフェニル）メチル］−７−［（１Ｒ）−１−［（１Ｒ）−１−ヒドロキシエチル］−４−フェニル−ブチル］−５−メチル−１Ｈ−イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン−４−オン（１−０１）、
４−（アゼチジン−１−イル）−７−メチル−５−［１−メチル−５−［５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］ピラゾール−４−イル］イミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン（１−０２）、
３−（８−メトキシ−１−メチル−２−オキソ−７−フェニル−３Ｈ−１，４−ベンゾジアゼピン−５−イル）ベンズアミド（１−０３）、
６−［４−（１−シクロヘキシルテトラゾール−５−イル）ブトキシ］−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−キノリン−２−オン（１−０４）、
６−メチル−２−オキソ−５−（４−ピリジル）−１Ｈ−ピリジン−３−カルボニトリル（１−０５）、
４−メチル−５−（４−メチルスルファニルベンゾイル）−１，３−ジヒドロイミダゾール−２−オン（１−０６）、
３−アミノ−５−（４−ピリジル）−１Ｈ−ピリジン−２−オン（１−０７）、
５−イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン−６−イル−６−メチル−２−オキソ−１Ｈ−ピリジン−３−カルボニトリル（１−０８）、
１−シクロプロピル−１−［（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル］−３−［３−［（２−オキソ−１Ｈ−キノリン−６−イル）オキシ］プロピル］尿素（１−０９）、
４−［３−（シクロペントキシ）−４−メトキシ−フェニル］ピロリジン−２−オン（１−１０）、
２−［（Ｅ）−［３−（シクロペントキシ）−４−メトキシ−フェニル］メチレンアミノ］オキシ−１−（２，６−ジメチルモルホリン−４−イル）エタノン（１−１１）、
５−［５−［（２，４−ジメチルチアゾール−５−イル）メチル］−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル］−１−エチル−Ｎ−テトラヒドロピラン−４−イル−ピラゾロ［３，４−ｂ］ピリジン−４−アミン（１−１２）、
６−［３−（ジメチルカルバモイル）フェニル］スルホニル−４−（３−メトキシアニリノ）−８−メチル−キノリン−３−カルボキサミド（１−１３）、
Ｎ−［２−［（１Ｓ）−１−（３−エトキシ−４−メトキシ−フェニル）−２−メチルスルホニル−エチル］−１，３−ジオキソ−イソインドリン−４−イル］アセトアミド（１−１４）、
（１Ｒ，２Ｒ）−２−［４−［３−［３−（シクロプロピルカルバモイル）−４−オキソ−１，８−ナフチリジン−１−イル］フェニル］−２−フルオロ−フェニル］シクロプロパンカルボン酸（１−１５）、
３−（シクロプロピルメトキシ）−Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ピリジル）−４−（ジフルオロメトキシ）ベンズアミド（１−１６）、
４−［（１−ヒドロキシ−３Ｈ−２，１−ベンゾキサボロール−５−イル）オキシ］フタロニトリル（１−１７）、
４−［（１−ヒドロキシ−３Ｈ−２，１−ベンゾキサボロール−５−イル）オキシ］ベンゾニトリル（１−１８）、
４−シアノ−４−［３−（シクロペントキシ）−４−メトキシ−フェニル］シクロヘキサンカルボン酸（１−１９）、
（１Ｚ）−１−［（３，４−ジエトキシフェニル）メチレン］−６，７−ジエトキシ−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン（１−２０）、
Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ピリジル）−２−［１−［（４−フルオロフェニル）メチル］ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−２−オキソ−アセトアミド（１−２１）、
Ｎ−（３，５−ジクロロ−１−オキシド−ピリジン−１−イウム−４−イル）−６−（ジフルオロメトキシ）ベンゾフロ［３，２−ｃ］ピリジン−９−カルボキサミド（１−２２）、
６−［２−（３，４−ジエトキシフェニル）チアゾール−４−イル］ピリジン−２−カルボン酸（１−２３）、
４−［［３−［６，７−ジメトキシ−２−（メチルアミノ）キナゾリン−４−イル］フェニル］カルバモイル］安息香酸メチル（１−２４）、
２−［（２Ｅ）−９，１０−ジメトキシ−４−オキソ−２−（２，４，６−トリメチルフェニル）イミノ−６，７−ジヒドロピリミド［６，１−ａ］イソキノリン−３−イル］エチル尿素（１−２５）、
３−ベンジル−５−フェニル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｃ］［１，８］ナフチリジン−４−オン（１−２６）、
（３Ｓ，５Ｓ）−５−［３−（シクロペントキシ）−４−メトキシ−フェニル］−３−（ｍ−トリルメチル）ピペリジン−２−オン（１−２７）、
３−フェニル−２−チオキソ−１Ｈ−キナゾリン−４−オン（１−３７）、
３−［［（２Ｒ）−４−（チアゾール−２−イルメチル）モルホリン−２−イル］メチル］−５−（トリフルオロメチル）チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−７−アミン（１−３８）、
６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−１−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−１−テトラヒドロピラン−４−イル−５Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４−オン（１−３９）、
２−［［４−［１−メチル−４−（４−ピリジル）ピラゾール−３−イル］フェノキシ］メチル］キノリン（１−４０）、
ＲＧ７２０３（１−４１）、
ＴＡＫ−０６３（１−４２）、
ＯＭＳ８２４（１−４３）、
ＦＲＭ−６３０８（１−４４）、
ＢＩ４０９３０６（１−４５）、
Ｎ−シクロプロピル−４−オキソ−１−［３−［２−（１−オキソ−３−ピリジル）エチニル］フェニル］−１，８−ナフチリジン−３−カルボキサミド（１−４６）、および
１−［４−［３−［４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−カルボニル）フェノキシ］ピラジン−２−イル］−１−ピペリジル］エタノン（１−４７）、
またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、前記式（１−０１）〜（１−４７）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、と、
ｂ）次のものからなる群から選択されるヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤化合物：
８−（ヒドロキシアミノ）−８−オキソ−Ｎ−フェニル−オクタンアミド（２−０１）、
（１Ｓ，４Ｓ，７Ｚ，１０Ｓ，１６Ｅ，２１Ｒ）−７−エチリデン−４，２１−ジイソプロピル−２−オキサ−１２，１３−ジチア−（Ｅ）−３−［４−［［２−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）エチルアミノ］メチル］フェニル］プロパ−２−エンヒドロキサム酸（２−０３）、
（Ｅ）−３−［３−（フェニルスルファモイル）フェニル］プロパ−２−エンヒドロキサム酸（２−０７）、
２−プロピルペンタン酸（２−１７）、
５，８，２０，２３−テトラアザビシクロ［８．７．６］トリコス−１６−エン−３，６，９，１９，２２−ペントン（２−０２）、
Ｎ−［［４−［（２−アミノフェニル）カルバモイル］フェニル］メチル］カルバミン酸３−ピリジルメチル（２−０４）、
Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［［［４−（３−ピリジル）ピリミジン−２−イル］アミノ］メチル］ベンズアミド（２−０５）、
Ｎ−［７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソ−ヘプチル］−２−（Ｎ−フェニルアニリノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（２−０６）、
（Ｅ）−３−［１−［４−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル］スルホニルピロール−３−イル］プロパ−２−エンヒドロキサム酸（２−０８）、
Ｎ−［４−（ヒドロキシカルバモイル）フェニル］カルバミン酸［６−（ジエチルアミノメチル）−２−ナフチル］メチル（２−０９）、
（Ｅ）−３−［２−ブチル−１−［２−（ジエチルアミノ）エチル］ベンゾイミダゾール−５−イル］プロパ−２−エンヒドロキサム酸（２−１０）、
３−［（ジメチルアミノ）メチル］−Ｎ−［２−［４−（ヒドロキシカルバモイル）フェノキシ］エチル］ベンゾフラン−２−カルボキサミド（２−１１）、
（Ｅ）−Ｎ−（２−アミノフェニル−３−［１−［４−（１−メチルピラゾール−４−イル）フェニル］スルホニルピロール−３−イル］プロパ−２−エナミド（２−１２）、
（２Ｓ）−Ｎ−［４−（ヒドロキシカルバモイル）フェニル］−３−メチル−２−フェニル−ブタンアミド（２−１３）、
（Ｅ）−Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−８−（ヒドロキシアミノ）−２−（１−ナフチルオキシメチル）−８−オキソ−オクタ−２−エナミド）（２−１４）、
４−［［２−メチル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］インドール−５−イル）メチル］ベンゼンカルボヒドロキサム酸（２−１５）、
４−フェニルブタン酸ナトリウム（２−１６）、
Ｎ−（２−アミノ−５−フルオロ−フェニル）−４−［［［（Ｅ）−３−（３−ピリジル）プロパ−２−エノイル］アミノ］メチル］ベンズアミド（２−１８）、
２−［４−［［（１−メチルインドール−３−イル）メチルアミノ］メチル］−１−ピペリジル］ピリミジン−５−カルボヒドロキサム酸（２−１９）、
（２Ｓ）−２−［［４−［［８−（ヒドロキシアミノ）−８−オキソ−オクタノイル］アミノ］フェニル］−メチルアミノ］−２−フェニル−酢酸シクロペンチル（２−２０）、
２−［（１Ｒ，５Ｓ）−６−［（６−フルオロ−２−キノリル）メチルアミノ］−３−ビシクロ［３．１．０］ヘキサニル］ピリミジン−５−カルボヒドロキサム酸（２−２１）、
Ｎ−［６−（２−アミノアニリノ）−６−オキソ−ヘキシル］−４−メチル−ベンズアミド（２−２２）、
４−アセトアミド−Ｎ−（２−アミノフェニル）ベンズアミド（２−２３）、
ＡＣＹ−２４１（２−２４）、
ＯＣＩＤ−４６８１（２−２５）および
ＦＲＭ−０３３４（２−２６）、
またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、前記式（２−０１）〜（２−２６）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、と
を含む、製品。
【請求項２】
前記ＰＤＥ阻害剤化合物が、選択的ＰＤＥ５阻害剤である、請求項１に記載の製品。
【請求項３】
前記選択的ＰＤＥ５阻害剤化合物が、式（１−３０）、（１−２８）及び（１−２９）の化合物からなる群から選択される、請求項２に記載の製品。
【請求項４】
前記ＨＤＡＣ阻害剤化合物が、式（２−０１）、（２−０３）、（２−０７）及び（２−１７）の化合物からなる群から選択される汎ＨＤＡＣ阻害剤、又は式（２−０２）のクラス−Ｉ阻害剤化合物である、請求項１〜３のいずれかに記載の製品。
【請求項５】
前記汎ＨＤＡＣ阻害剤が、式（２−０１）の化合物である、請求項４に記載の製品。
【請求項６】
前記ＰＤＥ阻害剤化合物が、式（１−３０）、（１−２８）及び（１−２９）の化合物からなる群から選択される選択的ＰＤＥ５阻害剤化合物であり、前記汎ＨＤＡＣ阻害剤が、式（２−０１）の化合物である、請求項５に記載の製品。
【請求項７】
前記選択的ＰＤＥ５阻害剤が式（１−３０）の化合物であり、前記汎ＨＤＡＣ阻害剤が式（２−０１）の化合物である、請求項６に記載の製品。
【請求項８】
単一の医薬組成物または獣医学組成物である製品であって、前記組成物が、治療有効量の：
ａ）請求項１に記載のいずれかで定義の式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいは前記化合物または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩のいずれかの任意の立体異性体、および
ｂ）請求項１で定義の式（２−０１）〜（２−２６）のＨＤＡＣ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいは前記化合物または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩のいずれかの任意の立体異性体
を、１つ以上の医薬的または獣医学的に許容される賦形剤または担体と共に含む、製品。
【請求項９】
パッケージまたはキット・オブ・パーツである製品であって、前記パッケージまたはキット・オブ・パーツが、
ａ）ｉ）治療有効量の、請求項１で定義の式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、前記式（１−０１）〜（１−４７）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、を１つ以上の医薬的にまたは獣医学上許容される賦形剤または担体とともに含む医薬組成物または獣医学組成物、および
ｉｉ）治療有効量の、請求項１で定義の式（２−０１）〜（２−２６）のＨＤＡＣ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、前記式（２−０１）〜（２−２６）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、を１つ以上の医薬的にまたは獣医学上許容される賦形剤または担体とともに含む医薬組成物または獣医学組成物と前記組成物ｉ）の同時的、並行した、別個のまたは逐次的併用についての説明書
を含むか、あるいは
ｂ）ｉ’）治療有効量の、請求項１で定義の式（２−０１）〜（２−２６）のＨＤＡＣ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、前記式（２−０１）〜（２−２６）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、を１つ以上の医薬的にまたは獣医学上許容される賦形剤または担体とともに含む医薬組成物または獣医学組成物、および
ｉｉ’）治療有効量の、請求項１で定義の式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、前記式（１−０１）〜（１−４７）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、を１つ以上の医薬的にまたは獣医学上許容される賦形剤または担体とともに含む医薬組成物または獣医学組成物と前記組成物ｉ’）の同時的、並行した、別個のまたは逐次的併用についての説明書
を含む、製品。
【請求項１０】
パッケージまたはキット・オブ・パーツである製品であって、前記パッケージまたはキット・オブ・パーツが、
ａ）治療有効量の、請求項１で定義の式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、前記式（１−０１）〜（１−４７）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、を１つ以上の医薬的にまたは獣医学上許容される賦形剤または担体とともに含む、第一の医薬組成物または獣医学組成物、および
ｂ）治療有効量の、請求項１で定義の式（２−０１）〜（２−２６）のＨＤＡＣ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、前記式（２−０１）〜（２−２６）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、を１つ以上の医薬的にまたは獣医学上許容される賦形剤または担体とともに含む、第二の医薬組成物または獣医学組成物
を含み、
前記組成物ａ）およびｂ）が別個の組成物である、製品。
【請求項１１】
認知欠損若しくは認知障害に伴って進行する神経障害の又は神経変性疾患の処置及び／又は予防に使用するための、請求項１〜１０のいずれかに記載の製品。
【請求項１２】
前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、血管性認知症（無併発症のもの、せん妄を伴うもの、妄想を伴うもの、又は抑うつ気分を伴うもの）、軽度認知障害、及び加齢性認知障害から選択される、認知欠損又は認知障害に伴って進行する神経変性疾患である、請求項１１に記載の使用のための製品。
【請求項１３】
前記疾患がアルツハイマー病である、請求項１２に記載の使用のための製品。
【請求項１４】
認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防における同時、並行、別個のまたは逐次的使用のために、請求項１で定義の式（２−０１）〜（２−２６）の化合物からなる群から選択されるＨＤＡＣ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいは前記化合物または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩のいずれかの任意の立体異性体と併用で投与するための、請求項１で定義の式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいは前記化合物または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩のいずれかの任意の立体異性体。
【請求項１５】
認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防における同時、並行、別個のまたは逐次的使用のために、請求項１で定義の式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいは前記化合物または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩のいずれかの任意の立体異性体と併用で投与するための、請求項１で定義の式（２−０１）〜（２−２６）の化合物からなる群から選択されるＨＤＡＣ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいは前記化合物または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩のいずれかの任意の立体異性体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、製薬部門に包含され、公知ＰＤＥ阻害剤化合物および公知ＨＤＡＣ阻害剤化合物を含む製品に関し、認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防に使用するための前記製品にも関する。
【背景技術】
【０００２】
軽度認知障害は、個体の日常生活を妨げない記憶、言語および／または他の必須認知機能の欠損を特徴とする。この状態は、日常生活を妨げる程の全般的な認知能力低下を特徴とする認知症に進行することが多い。アルツハイマー病（ＡＤ）は、高齢者の認知症の最も一般的な形態であり、脳卒中、頭部外傷またはアルコールなどの先行する原因がない認知症を指し、神経機能障害および細胞死を誘発する細胞外アミロイド斑および細胞内神経原線維変化の脳内の存在を特徴とする。人口の高齢化に伴うＡＤ患者数増加のため、新たな疾患管理／処置戦略の開発が急務になっている。
【０００３】
有効なＡＤ管理の研究は、老人斑の数の低減に主に重点を置くアミロイド（Ａβ）仮説に主として基づいてきたが、これまでほとんど成功していない。神経原線維変化の主成分である細胞骨格タンパク質タウの過剰リン酸化などのこの疾患の他の特徴に、今は重点が置かれている。
【０００４】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤を使用するヒストン（Ｈ３および／またはＨ４）アセチル化の増加は、遺伝子転写活性化に関連するクロマチン再構造化を誘導する。ＨＤＡＣタンパク質は、次の４つのファミリーに分類される：クラスＩ（ＨＤＡＣ１〜３、ＨＤＡＣ８）、クラスＩＩａ（ＨＤＡＣ４、５、７および９）、クラスＩＩｂ（ＨＤＡＣ６および１０）、およびクラスＩＶ（ＨＤＡＣ１１）。中枢神経系（ＣＮＳ）における各ＨＤＡＣの発現パターン、および記憶機能へのその寄与は、各サブタイプによって異なる。
【０００５】
ＨＤＡＣ阻害剤である４−フェニル酪酸（ＰＢＡ）は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の変異型を過剰発現するＡＤのＴｇ２５７６トランスジェニックマウスモデルにおける有効な向知性薬である。加えて、ＰＢＡは、この疾患の病理学的特徴を反転させ、この動物モデルの樹状突起棘の損失を回復させた。ＰＢＡがクラスＩおよびクラスＩＩｂ  ＨＤＡＣを阻害することを踏まえて、これらのデータすべてが、ＡＤにＨＤＡＣ阻害剤が治療上有用である可能性、特に、クラスＩ  ＨＤＡＣおよびＨＤＡＣ６の可能性を強く示唆している。クラスＩ  ＨＤＡＣ阻害剤は、脳内の遺伝子転写を助長するヒストンアセチル化のレベルを増加させることによって記憶機能を向上させる。さらに、ＨＤＡＣ６阻害剤は、細胞骨格安定性およびタンパク質輸送を助長しうるチューブリンアセチル化（ＡｃＴｕｂ）を誘導する。アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）プロセッシングを、そのアミロイド前駆体（Ｃ９９）生産を低減させることによって、低減させることが証明されているこのＨＤＡＣ６阻害剤は、ミスフォールディングタンパク質障害、例えばＡＤ、において重要な役割を果たしうる。
【０００６】
さらに、加齢は、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）発現および活性の増加を伴う。したがって、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、一般に認知欠損における、特にＡＤにおける非アミロイド標的の良好な候補である。特異的ＰＤＥ４阻害剤であるロリプラムは、ＡＤの動物モデルにおいて認知欠損を回復させるのに有用であると証明された最初のものであった。特定のホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤（例えば、ＰＤＥ阻害剤：シルデナフィルまたはタダラフィル；およびＰＤＥ９阻害剤：ＰＦ−４４４７９４３（６−［（３Ｓ，４Ｓ）−４−メチル−１−（ピリミジン−２−イルメチル）ピロリジン−３−イル］−１−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−４（５Ｈ）−オン））は、ＡＤの別の動物モデルにおいて、記憶能力を向上させること、または／ならびにシナプス可塑性および認知機能を向上させることが証明されている。ＰＤＥ阻害剤は、ｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰレベルを上昇させることによってシグナル伝達経路を調節し、最終的には、ｃＡＭＰ応答配列結合（ＣＲＥＢ）を直接および／または間接的に活性化することによって遺伝子転写を促進しうる。シナプス可塑性および強度の指標となる、長期記憶形成および持続性長期増強（ＬＴＰ）の根底には、ＣＲＥＢ依存性遺伝子発現がある。海馬でのこの発現は、失認を回復させるために必要とされる新たなシナプス結合の形成によって起こる可能性が高い。したがって、ＣＲＥＢシグナル伝達経路を活性化することによって、ＰＤＥ阻害剤はＡＤの症状を改善することができるであろう。さらに、他のＣＲＥＢ依存性機序は、ｃＡＭＰおよび／またはｃＧＭＰレベルの増加によって、ＡＤの認知障害を回復させるように相乗的に作用するようである。脳の血流のおよび／または脳のグルコース消費のＰＤＥ阻害剤媒介増加によって間接的に認知能力が向上されることもある。
【０００７】
アミロイド負荷に加えて、タウのリン酸化は、ＡＤ進行のもう１つの病理組織学的マーカーである。重要なこととして、ＰＤＥ５阻害剤シルデナフィルおよびタダラフィルはＡＤの様々な動物モデルにおいてタウのリン酸化（ｐタウレベル）を低減させることが証明されている。
【０００８】
Ｓａｂａｙａｎら（非特許文献１）は、ＰＤＥ−５阻害剤化合物をＡＤに対する新規疾患修飾剤として再考した。特許文献１（２０１２年１２月２０日）には、認知症、特にＡＤの予防または処置におけるＰＤＥ５阻害剤化合物、タダラフィル、の使用が開示されている。Ｍ．Ｃｕａｄｒａｄｏ−Ｔｅｊｅｄｏｒら（非特許文献２）は、ＰＤＥ５阻害剤化合物、シルデナフィル、がＡＤのＴｇ２５７６マウスモデルにおいて認知障害を改善することを開示した。Ｋｏｎｓｏｕｌａらは、総説（非特許文献３）の中で、ＨＤＡＣ阻害剤化合物での処置が神経変性性の欠損症を改善し、神経変性から保護することを示唆している。Ｃｈｅｎら（非特許文献４）は、汎ＨＤＡＣ阻害剤化合物、ボリノスタット、の神経栄養効果および神経保護効果が、神経変性疾患の処置への新たな治療アプローチをもたらすことができることを論証した。
【０００９】
認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防に関して向上した活性を示す製品の開発が今もなお必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第２０１２／１７１９７４号Ａ１パンフレット
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Ｓａｂａｙａｎら、Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、２０１０年、１２０巻（１２号）、７４６〜５１頁
【非特許文献２】Ｍ．  Ｃｕａｄｒａｄｏ−Ｔｅｊｅｄｏｒら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２０１１年、１６４巻（８号）、２０２９〜２０４１頁
【非特許文献３】Ｋｏｎｓｏｕｌａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０１２年、６６巻、２１５〜２２０頁
【非特許文献４】Ｃｈｅｎら、  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２０１２年、１６５巻（２号）、４９４〜５９５頁
【発明の概要】
【００１２】
本発明者らは、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）およびヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤化合物を併用するインビトロアッセイを使用してエピジェネティックマーク（ＡｃＨ３）に対する相乗効果を観察し、両方の経路が相互作用し（図１）、ヒストンアセチル化レベルで収束して、遺伝子転写を増進させることになりうることを示した。この仮説を、式（２−０１）のＨＤＡＣ阻害剤化合物（ボリノスタット）と式（１−３０）のＰＤＥ５阻害剤化合物（タダラフィル）を併用して慢性加齢Ｔｇ２５７６マウス（ＡＤマウスモデル）を処置することによるインビボ概念実証で確認した。この併用治療は、加齢Ｔｇ２５７６においてその認知に深刻な影響を及ぼしていた記憶障害を改善した。さらに、アミロイドおよびタウ病態の有意な低減も処置動物の脳内で観察された。興味深いこととして、これらの効果は、４週間の休薬期間後も維持された。本発明者らが知る限り、認知向上に有用な、ＰＤＥおよびＨＤＡＣの阻害による相乗効果は、先行技術では確証されていない。
【００１３】
したがって、第一の態様では、本発明は、
ａ）式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、式（１−０１）〜（１−４７）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、と、
ｂ）式（２−０１）〜（２−２６）の化合物からなる群から選択されるＨＤＡＣ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、式（２−０１）〜（２−２６）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、と
を含む製品（本文書では以降「本発明の製品」と呼ぶ）に関する。
【００１４】
本発明の製品は、合剤、併用製剤、医薬組成物もしくは獣医学組成物、および／またはパッケージもしくはキット・オブ・パーツであることができる。本発明の製品は、上で定義した阻害剤化合物ａ）とｂ）両方の同時、並行、別個のまたは逐次的使用に好適である。
【００１５】
前に記載したように、ＰＤＥおよびＨＤＡＣの阻害剤を併用する本発明の製品は、認知の向上に有用でありうる。したがって、本発明の別の態様は、医薬品として使用するための、上で定義の本発明の製品に関する。
【００１６】
別の態様では、本発明は、認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防に使用するための、上で定義の本発明の製品に関する。
【００１７】
別の態様では、本発明は、認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防用の医薬品を調製するための、式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物および式（２−０１）〜（２−２６）の化合物からなる群から選択されるＨＤＡＣ阻害剤化合物の使用、または上で定義の本発明の製品の使用に関する。この態様は、認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害または神経変性疾患を処置および／または予防する方法であって、ヒト対象を含む、それを必要とする哺乳動物対象に、治療有効量の
ａ）式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、式（１−０１）〜（１−４７）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、および
ｂ）式（２−０１）〜（２−２６）の化合物からなる群から選択されるＨＤＡＣ阻害剤化合物、またはその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩、あるいはその任意の立体異性体、式（２−０１）〜（２−２６）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれか、と
１つ以上の医薬的に許容される賦形剤または担体と
を投与することを含む方法として策定されうる。一実施形態では、該処置は、上で定義のＰＤＥ阻害剤化合物ａ）およびＨＤＡＣ阻害剤化合物ｂ）の同時、並行、別個のまたは逐次投与を含む。さらなる態様では、本発明は、認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防において、式（２−０１）〜（２−２６）の化合物からなる群から選択されるＨＤＡＣ阻害剤化合物、その医薬的にまたは獣医学上許容される塩、およびその任意の立体異性体、式（２−０１）〜（２−２６）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれかｂ）と同時に、並行して、別個にまたは逐次的に併用するための、式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、その医薬的にまたは獣医学上許容される塩、およびその任意の立体異性体、式（１−０１）〜（１−４７）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれかａ）に関し、本発明は、認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防において、上で定義のＰＤＥ阻害剤化合物ａ）と同時に、並行して、別個にまたは逐次的に併用するための、上で定義のＨＤＡＣ阻害剤化合物ｂ）にも関する。
【００１８】
さらなる態様では、本発明は、認知欠損または認知障害に伴って進行する神経障害の処置および／または予防において、上で定義のＨＤＡＣ阻害剤化合物ｂ）との併用治療で同時に、並行して、別個にまたは逐次的に使用するための医薬品の調製のための、上で定義のＰＤＥ阻害剤化合物ａ）に関する。
【００１９】
さらなる態様では、本発明は、認知欠損または認知障害に伴って進行する神経障害の処置および／または予防において、ＰＤＥ阻害剤化合物ａ）との併用治療で同時に、並行して、別個にまたは逐次的に使用するための医薬品の調製のための、ＨＤＡＣ阻害剤化合物ｂ）に関する。
【００２０】
さらにさらなる態様では、本発明は、認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防に使用するためのパッケージまたはキット・オブ・パーツであって、
ｉ）式（２−０１）〜（２−２６）の化合物からなる群から選択されるＨＤＡＣ阻害剤化合物、その医薬的にまたは獣医学上許容される塩、およびその任意の立体異性体、式（２−０１）〜（２−２６）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれかｂ）との同時的、並行した、別個のまたは逐次的併用についての説明書とともに、式（１−０１）〜（１−４７）の化合物からなる群から選択されるＰＤＥ阻害剤化合物、その医薬的にまたは獣医学上許容される塩、およびその任意の立体異性体、式（１−０１）〜（１−４７）の化合物の立体異性体または任意のその医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体のいずれかａ）を含む、または
ｉｉ）ＰＤＥ阻害剤化合物ａ）との同時的、並行した、別個のまたは逐次的併用についての説明書とともに、ＨＤＡＣ阻害剤化合物ｂ）を含む、
パッケージまたはキット・オブ・パーツに関する。
【００２１】
ＰＤＥ阻害剤化合物ａ）とＨＤＡＣ阻害剤化合物ｂ）両方の同時、並行、別個のおよび逐次的使用はすべて、上記および下記の本発明によるすべての使用および方法の特定の実施形態と考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】ヒストンアセチル化が、ＨＤＡＣを阻害すると、またはヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）を活性化することによって、増加されることを示す図である。ＰＤＥ阻害は、ＣＲＥＢリン酸化を誘導する。ｐＣＥＲＢは、ＨＡＴを活性化するＣＢＰを漸増させることによってヒストンアセチル化の増加に寄与する。×、阻害；Δ、活性化；Ａｃ、アセチル化；Ｐ、リン酸化；ＰＤＥ、ホスホジエステラーゼ；ＨＤＡＣ、ヒストンデアセチラーゼ；ＣＢＰ、ＣＲＥＢ結合タンパク質；ＨＡＴ、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ。
【図２】処置、行動試験および屠殺時点についての時点を示すスキームである。ＦＣ、恐怖条件づけ；ＭＷＭ、モーリス水迷路；Ｒ＿ＭＷＭ、リバーサルＭＷＭ。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本出願の本文書で用いるすべての用語は、別段の記述がない限り、当技術分野において公知のそれらの通常の意味で解釈されるものとする。本出願において用いる特定の用語について、他のより具体的な定義を下で示す。これらの定義は、別様に明確に記載する定義によってより広い定義が与えられない限り、本明細書および特許請求の範囲全体にわたって均一に適用されるものと考える。
【００２４】
用語「製品」は、本発明の製品を指すために用いるとき、単一の組成物もしくは製剤に含有されることもあり、別個の組成物もしくは製剤に含有されることもある、ＰＤＥ阻害剤化合物およびＨＤＡＣ阻害剤化合物を含む任意の製品と解されるものとする。ＰＤＥ阻害剤化合物およびＨＤＡＣ阻害剤化合物を含有する製品は、目的に指向した応用、本件では、認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防のための使用、によって機能的単一性または真の組合せを成す。本発明の製品は、同時、並行、別個のまたは逐次的使用のために合剤または併用製剤として概して使用されるものとする。したがって、一実施形態では、本製品は、合剤または併用製剤である。
【００２５】
場合によっては上記または下記の様々な実施形態の１つ以上の特徴との組合せでの、一実施形態において、本発明の製品は、同じ単一の組成物中にＰＤＥ阻害剤化合物とＨＤＡＣ阻害剤化合物両方を含有する、医薬組成物または獣医学組成物である。
【００２６】
場合によっては上記または下記の様々な実施形態の１つ以上の特徴との組合せでの、一実施形態において、本発明の製品は、単一のまたは別個の組成物中のＰＤＥ阻害剤化合物およびＨＤＡＣ阻害剤化合物を含有し、同時、並行、別個のまたは逐次的使用に好適である、パッケージまたはキット・オブ・パーツである。
【００２７】
明らかに、本発明に製品の一部を構成または成すいずれの組成物または製剤も、賦形剤、アジュバント、および任意の他の都合のよい医薬成分（他の薬物を含む）をさらに含むことがある。
【００２８】
式（１−０１）〜（１−４７）および式（２−０１）〜（２−２６）の任意の化合物に言及する本発明のすべての実施形態において、その医薬的にまたは獣医学上許容される塩、ならびに式（１−０１）〜（１−４７）および式（２−０１）〜（２−２６）の任意の化合物の立体異性体またはそれらの任意の医薬的にもしくは獣医学上許容される塩の立体異性体は、それらを具体的に述べていない場合であっても、常に企図される。
【００２９】
使用することができる塩のタイプに制限はないが、これらの塩は、治療目的で使用される場合、医薬的にまたは獣医学上許容されるものであることを条件とする。用語「医薬的にまたは獣医学上許容される塩」は、アルカリ金属塩を形成するためにまたは遊離酸もしくは遊離塩基の付加塩を形成するために一般に使用される塩を包含する。
【００３０】
式（１−０１）〜（１−４７）および式（２−０１）〜（２−２６）の化合物の医薬的にまたは獣医学上許容される塩の調製は、当技術分野において公知の方法によって行うことができる。例えば、該塩は、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から従来の化学的方法によって調製することができる。一般に、そのような塩は、例えば、遊離酸または塩基形態のこれらの化合物と、化学量論量の適切な医薬的にまたは獣医学上許容される塩基または酸とを水中でもしくは有機溶媒中でまたはそれらの混合物中で反応させることによって調製される。式（１−０１）〜（１−４７）および式（２−０１）〜（２−２６）の化合物およびそれらの塩は、多少の物理的特性が異なるが、本発明の目的に対しては等価である。
【００３１】
式（１−０１）〜（１−４７）および式（２−０１）〜（２−２６）の一部の化合物は、遊離溶媒和化合物としてまたは溶媒和物（例えば水和物）として、結晶形態で存在することもあり、両方の形態が本発明の範囲内であると考える。溶媒和方法は、当技術分野において周知である。一般に、水、エタノールなどのような医薬的にまたは獣医学上許容される溶媒を伴う溶媒和形態は、本発明の目的に対しては非溶媒和形態と等価である。
【００３２】
式（１−０１）〜（１−４７）および式（２−０１）〜（２−２６）の一部の化合物は、様々な立体異性体を生じさせることがきるキラル中心を有することができる。本文書において用いる場合、用語「立体異性体」は、個々の化合物の、それらの原子の空間における配向のみが異なる、すべての異性体を指す。用語立体異性体は、鏡像異性体（エナンチオマー）、鏡像異性体の混合物（ラセミ体、ラセミ混合物）、幾何（シス／トランスまたはシン／アンチまたはＥ／Ｚ）異性体、および互いの鏡像でない、１つより多くのキラル中心を有する化合物の異性体（ジアステレオ異性体）を含む。本発明は、これらの立体異性体の各々に関し、それらの混合物にも関する。
【００３３】
ジアステレオ異性体およびエナンチオマーは、クロマトグラフィーまたは分別結晶などの従来の技術によって分離することができる。光学異性体は、光学的に純粋な異性体を得るための従来の光学分割技術によって分割することができる。任意のキラル合成中間体に関してまたは式（１−０１）〜（１−４７）および式（２−０１）〜（２−２６）の化合物に関してこの分割を行うことができる。エナンチオ特異的合成を用いて光学的に純粋な異性体を個々に得ることもできる。
【００３４】
用語「阻害剤化合物」は、本文書において用いる場合、触媒活性を阻害することによって標的分子（本件ではＰＤＥまたはＨＤＡＣ）を部分的にまたは完全に、直接または間接的に阻害する化合物の能力を指す。活性の阻害は、阻害剤化合物濃度が１０μＭ以下であるときの活性測定値が、基底値と比較して１０％以下である場合、完全でありうる。測定される活性が１０％より高く、１００％より低い場合、さらに特に、１０％より高く、９０％以下である場合、その活性は、部分的に阻害されていると考えられる。
【００３５】
用語「選択的阻害剤化合物」は、本文書において用いる場合、酵素標的ファミリーの特定のアイソフォームを、同じ酵素標的ファミリーからの他のものより、少なくとも１ｌｏｇ単位の阻害効力（ＩＣ５０）差で阻害することができる化合物を指す。
【００３６】
用語「汎ＨＤＡＣ阻害剤化合物」は、本文書において用いる場合、少なくとも、１つのクラスＩ  ＨＤＡＣおよび１つのクラスＩＩ  ＨＤＡＣを完全にまたは部分的に阻害することができる化合物を指す。
【００３７】
用語「ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）」または「環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ」は、本文書において用いる場合、二次メッセンジャー分子ｃＡＭＰおよびｃＧＭＰ中のホスホジエステル結合を分解する酵素の１群（ＥＣ番号３．１．４．１７）を指し、そのような酵素群を含む。それらは、細胞内ドメイン内での環状ヌクレオチドシグナル伝達の局在、持続時間および増幅を調節する。したがって、ＰＤＥは、これらの二次メッセンジャー分子によって媒介されるシグナル伝達の重要な調節因子である。ＰＤＥ酵素のスーパーファミリーは、哺乳動物では１１のファミリー、すなわちＰＤＥ１〜ＰＤＥ１１に分類される。この分類は、アミノ酸配列、基質特異性、調節特性、薬理学的特性、組織分布に基づく。
【００３８】
表１は、本発明による一部のＰＤＥ阻害剤化合物についての一般名、別名、化学構造、化学名およびＣＡＳ登録番号を要約するものである。
【００３９】
表１．ＰＤＥ阻害剤化合物
【表１】
2017525721.tif 000002
2017525721.tif 000003
2017525721.tif 000004
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【００４０】
式（１−０１）、（１−０４）〜（１−０８）、（１−１０）〜（１−２３）、（１−２８）〜（１−３５）、（１−３７）〜（１−４０）の化合物は、市販されている。式（１−０２）、（１−０３）、（１−０９）、（１−２４）、（１−２５）、（１−２６）、（１−２７）、（１−３６）、（１−４６）および（１−４７）の化合物は、当技術分野において周知の方法によって合成することができる。例えば、式（１−０２）の化合物を、米国特許出願公開第２０１２／０２１４７９１号明細書に記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（１−０３）の化合物を、欧州特許第１５４８０１１号明細書に記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（１−０９）の化合物を、国際公開第９７／１２８６９号パンフレットに記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（１−２４）の化合物を、国際公開第２００７／０９７３１７号パンフレットに記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（１−２５）の化合物を、国際公開第２０００／０５８３０８号パンフレットに記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（１−２６）の化合物を、国際公開第２００４／０４１８１９号パンフレットに記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（１−２７）の化合物を、米国特許出願公開第２００３／０１８６９４３号明細書に記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（１−３６）の化合物を、国際公開第２００５／０４９６１６号パンフレットに記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（１−４６）の化合物を、国際公開第２００３／０１８５７９号パンフレットに記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（１−４７）の化合物を、国際公開第２０１０／０５７１２１号パンフレットに記載されているように合成することができるであろう。
【００４１】
式（１−０１）〜（１−４７）の化合物のＰＤＥ活性を阻害する能力は、例えば、下の表に要約する参考文献に開示されている。
【００４２】
表２．化合物の阻害活性についての参考文献
【表２】
2017525721.tif 000013
【００４３】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、一実施形態において、ＰＤＥ阻害剤化合物は、化合物（１−０１）〜（１−４４）からなる群から選択される。
【００４４】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、一実施形態において、ＰＤＥ阻害剤化合物は、化合物（１−０１）〜（１−４０）、（１−４６）および（１−４７）からなる群から選択される。
【００４５】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、一実施形態において、ＰＤＥ阻害剤化合物は、ＰＤＥ１、ＰＤＥ２、ＰＤＥ３、ＰＤＥ４、ＰＤＥ５、ＰＤＥ６、ＰＤＥ７、ＰＤＥ８、ＰＤＥ９、ＰＤＥ１０およびＰＤＥ１１からなる群から選択されるＰＤＥに対して選択的である。好ましい実施形態において、ＰＤＥ阻害剤化合物は、選択的ＰＤＥ５阻害剤化合物（式（１−２８）〜（１−３６））、より好ましくは、タダラフィル（式（１−３０））、シルデナフィル（式（１−２８））またはバルデナフィル（式（１−２９））である。
【００４６】
用語「ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）」は、本文書において用いる場合、ヒストン上のε−Ｎ−アセチルリシンからアセチル基（Ｏ＝Ｃ−ＣＨ３）を除去し、その結果、より緊密にヒストンにＤＮＡを巻きつかせる酵素の１群（ＥＣ番号３．５．１．９８）を指し、そのような酵素群を含む。この酵素群は、ＤＮＡをヒストンに巻きつけるので重要であり、ＤＮＡ発現は、アセチル化および脱アセチル化によって調節される。
【００４７】
ＨＤＡＣは、機能およびＤＮＡ配列類似性に基づいて４つのクラスＩ〜ＩＶに分類される。クラスＩは、アイソフォームＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３およびＨＤＡＣ８を含み、クラスＩＩは、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ９およびＨＤＡＣ１０を含み、クラスＩＶは、ＨＤＡＣ１１を含む。
【００４８】
表３は、本発明による一部のＨＤＡＣ阻害剤化合物についての一般名、別名、化学構造、化学名およびＣＡＳ登録番号を要約するものである。
【００４９】
表３．ＨＤＡＣ阻害剤化合物
【表３】
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2017525721.tif 000020
【００５０】
式（２−０１）〜（２−１１）、（２−１３）〜（２−１９）および（２−２１）〜（２−２３）の化合物は、市販されている。式（２−１２）および（２−２０）の化合物は、当技術分野において周知の方法によって合成することができる。例えば、式（２−１２）の化合物を、国際公開第２００６／０９７４７４号パンフレットに記載されているように合成することができるであろう。例えば、式（２−２０）の化合物を、国際公開第２００６／１１７５６７号パンフレットに記載されているように合成することができるであろう。
【００５１】
式（２−０１）〜（２−２６）の化合物のＨＤＡＣ活性を阻害する能力は、例えば、下の表に要約する参考文献に開示されている。
【００５２】
表４．化合物の阻害活性についての参考文献
【表４】
2017525721.tif 000021
【００５３】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤化合物は、化合物（２−０１）〜（２−２２）からなる群から選択される。
【００５４】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤化合物は、化合物（２−０１）〜（２−２３）からなる群から選択される。
【００５５】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤化合物は、汎ＨＤＡＣ阻害剤である。好ましい実施形態において、この汎ＨＤＡＣ阻害剤化合物はボリノスタット（式（２−０１））、パノビノスタット（式（２−０３））、ベリノスタット（式（２−０７））およびバルプロ酸（式（２−１７））からなる群から選択され、より好ましくはボリノスタットである。
【００５６】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、別の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤化合物は、クラスＩ阻害剤であり、特に化合物ロミデプシン（式（２−０２））である。
【００５７】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、１つの好ましい実施形態において、ボリノスタット（式（２−０１））は、選択的ＰＤＥ５阻害剤化合物と、より好ましくはタダラフィル（式（１−３０））、シルデナフィル（式（１−２８））またはバルデナフィル（式（１−２９））と併用される。
【００５８】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、別の好ましい実施形態において、パノビノスタット（式（２−０３））は、選択的ＰＤＥ５阻害剤化合物と、より好ましくはタダラフィル（式（１−３０））、シルデナフィル（式（１−２８））またはバルデナフィル（式（１−２９））と併用される。
【００５９】
本発明によると、上で定義のＰＤＥ阻害剤化合物およびＨＤＡＣ阻害剤化合物は、認知欠損もしくは認知障害に伴って進行する神経障害のまたは神経変性疾患の処置および／または予防に合剤または併用製剤として使用することができ、広範な治療的応用に使用することができる。
【００６０】
特定の実施形態において、神経変性疾患は、認知欠損または認知障害に伴って進行する神経変性疾患である。より詳細には、認知欠損または認知障害に伴って進行する神経変性疾患または神経障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、血管性認知症（無併発症のもの、せん妄を伴うもの、妄想を伴うもの、または抑うつ気分を伴うもの）、軽度認知障害、および加齢性認知障害から選択される。より好ましくは、疾患は、アルツハイマー病である。
【００６１】
場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、本発明の一実施形態において、上で定義のＰＤＥ阻害剤化合物および／またはＨＤＡＣ阻害剤化合物は、治療有効量のＰＤＥ阻害剤化合物および／または治療有効量のＨＤＡＣ阻害剤化合物を１つ以上の医薬的にまたは獣医学上許容される賦形剤または担体とともに含む医薬組成物または獣医学組成物の活性医薬成分または活性獣医学成分である。
【００６２】
「治療有効量」という表現は、本文書において用いる場合、合剤または併用製剤として投与したとき、取り組んでいる疾患の症状の１つ以上の発症を予防するまたは該症状をある程度軽減するのに十分である、ＰＤＥ阻害剤化合物および／またはＨＤＡＣ阻害剤化合物の量を指す。治療的有用性を得るための本発明のＰＤＥ阻害剤化合物のおよびＨＤＡＣ阻害剤化合物の具体的な用量は、個々の患者の特定の状況に依存して変わることがあり、そのような状況としては、数ある中でも、患者のサイズ、体重、年齢および性別、疾患の性質および病期、疾患の悪性度、ならびに投与経路が挙げられる。例えば、約０．０１〜約３００ｍｇ／ｋｇのＰＤＥ阻害剤化合物の用量および約０．０１〜約３００ｍｇ／ｋｇのＨＤＡＣ阻害剤化合物の用量を使用することができるであろう。
【００６３】
「医薬的にまたは獣医学上許容される賦形剤または担体」という表現は、医薬的にまたは獣医学上許容される材料、組成物またはビヒクルを指す。各成分は、医薬組成物または獣医学組成物の他の成分と適合性であるという意味で、医薬的にまたは獣医学上許容されなければならない。それはまた、ヒトおよび動物の組織もしくは器官と接触使用に好適であり、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性または他の問題もしくは合併症を伴わず、妥当なリスク便益比に見合ったものでなければならない。
【００６４】
医薬製剤または獣医学製剤の選択は、活性化合物の性質およびその投与経路に依存することになる。いずれの投与経路を使用してもよい。場合によっては上記または下記の実施形態のいずれかとの組合せでの、本発明の一実施形態において、医薬組成物または獣医学組成物は、経口、局所または非経口投与される。
【００６５】
例えば、医薬組成物または獣医学組成物は、経口投与用に製剤化されることがあり、１つ以上の生理的に適合性の担体または賦形剤を固体または液体形態で含有することがある。これらの製剤は、従来の成分、例えば、結合剤、充填剤、滑沢剤および許容される湿潤剤を含有することもある。
【００６６】
医薬組成物または獣医学組成物は、従来の注射用液体担体、例えば水または好適なアルコールとの組合せで非経口投与用に製剤化されることもある。注射用の従来の医薬品賦形剤または獣医学用賦形剤、例えば安定剤、可溶化剤および緩衝剤がそのような組成物に含まれることもある。これらの医薬組成物または獣医学組成物は、皮下、筋肉内、腹腔内または静脈内注射することができるであろう。
【００６７】
医薬組成物または獣医学組成物は、局所投与用に製剤化されることもある。製剤は、化合物が好適な賦形剤に分散または溶解されているクリーム、ローション、ゲル、パウダー、溶液およびパッチを含む。本発明の局所組成物は、固体支持体でありうる担体材料によって投与されることもある。したがって、固体支持体でありうる担体材料を含む局所組成物も本発明の一部を成す。固体支持体の実例となる非限定的な例としては、インテリジェントテキスタイル、包帯材、コーティング、スポンジ、バンドエイド、生理用ナプキン、圧定布、ギプスなどが挙げられる。そのような組成物の製造は、従来の方法によって、例えば、本発明の組合せと材料担体とを混合することによって達成することができる。
【００６８】
医薬組成物または獣医学組成物は、即時放出もしくは徐放のためのいかなる形態であってもよく、そのような形態としては、数ある中でも、錠剤、ペレット、カプセル、水溶液もしくは油性溶液、懸濁液、エマルジョン、または使用前の水もしくは他の好適な液体媒体での再構成に好適な乾燥粉末形態が挙げられる。
【００６９】
当業者は、調製する製剤のタイプに従って適切な賦形剤および／または担体ならびにそれらの量を容易に決定することができる。
【００７０】
本明細書および特許請求の範囲を通して、「含む」という語およびこの語の語尾変化形は、他の技術的特徴、添加物、成分またはステップを除外しないものと考える。さらに「含む」という語は、「からなる」の場合を包含する。本発明のさらなる目的、利点および特徴は、本明細書を検討することで当業者に明らかになり、本発明を実施することによって知ることができるであろう。以下の実施例は、実例として提供するものであり、本発明を限定しないものと考える。さらに、本発明は、本文書に記載する特定のおよび好ましい実施形態の可能なすべての組合せを包含する。
【実施例】
【００７１】
一次ニューロン培養物および細胞株ＳＨＳＹ−５Ｙを使用するインビトロアッセイ
野生型ニューロンにおけるＨＤＡＣ活性
【００７２】
ＨＤＡＣ活性を判定するための細胞アッセイを、Ｌｙｓ９のアセチル化されたヒストン３に対する特異的抗体（ＡｃＨ３Ｋ９、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ）を使用するウェスタンブロット分析によって評価した。
【００７３】
胎生１６日の野生型マウスの海馬および皮質から得た一次ニューロン培養物を使用した。ガラスピペットを使用してニューロンが解離するまで組織を粉砕した。Ｂ２７サプリメント（Ｉｎｖｔｒｏｇｅｎ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）と２ｍＭ  Ｌ−グルタミンとを含有する無血清ニューロベーサル培地を用いて、ニューロンをポリ−Ｌ−リシン処理（０．１ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）３５ｍｍ皿に播種した。
【００７４】
ボリノスタットおよびタダラフィルの濃度応答曲線効果を判定するために、１５日インビトロ細胞培養物を様々な濃度（１０、１００および５００ｎＭ）で２時間処理した（表５）。
【００７５】
基底レベルに対するＡｃＨ３レベル増加をもたらさないボリノスタットの濃度を特定したら、この最小濃度をタダラフィルとの併用に用いて、ヒストン３アセチル化における相乗効果を特定する。したがって、両方の化合物を併用したときにエピジェネティックマーク（ＡｃＨ３）に対する相乗効果が存在するかどうかを判定するために、５０ｎＭのボリノスタットを、様々な濃度（１２．５、２５、５０、１００および２００ｎＭ）のタダラフィルと２時間、併用した（表６）。
【００７６】
ＳＨＳＹ−５ＹにおけるＨＤＡＣ活性
【００７７】
ヒト神経芽細胞腫細胞株（ＳＨＳＹ−５Ｙ）も使用した。細胞株をＡＴＣＣ（ＣＲＬ−２２６６）（Ｂｉｅｄｌｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３８巻、３７５１〜３７５７頁、１９７８年）から得、３５ｍｍプレート（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＮＪ）で培養した。Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）、１００単位／ｍｌ  ペニシリン／ストレプトマイシン、１ｘ最小必須培地（ＭＥＭ）非必須アミノ酸および１０％ウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｔｒｏｇｅｎ、ＣＡ）を補足したダルベッコ変性イーグル培地において、３７℃で、５％ＣＯ２雰囲気で、細胞を集密度９０％に増殖させた。
【００７８】
冷溶解緩衝液とプロテアーゼ阻害剤を含有する緩衝液（０．２Ｍ  ＮａＣｌ、０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）、１０％グリセロール、２００ｍＭ  ＮａＦ、２ｍＭ  Ｎａ４Ｐ２Ｏ７、５ｍＭ  ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、１ｍＭ  ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、２ｍＭ  ＤＴＴ（ジチオトレイトール）、０．５ｍＭ  ＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフルオリド）、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４および完全プロテアーゼ阻害剤カクテル、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）に細胞を収集し、１４，０００ｘｇ、４℃で２０分間、遠心分離し、上清を等分し、−８０℃で保存した。ＢｉｏＲａｄ  Ｂｒａｄｆｏｒｄプロテインアッセイ（ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、全タンパク質濃度を決定した。
【００７９】
タンパク質試料をＬａｅｍｍｌｉサンプルバッファーと混合し、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで分離し、ニトロセルロース膜に転写した。膜を５％ミルク、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）またはＴＢＳ（Ｔｒｉｓ緩衝食塩水）中のもの）でブロックし、その後、対応する緩衝液中の次の一次抗体とともに一晩インキュベートした：ウサギポリクローナル抗アセチル化ヒストン３（アセチルＫ９、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  １：１０００）、マウスモノクローナル抗アクチン（Ｓｉｇｍａ、１：５００００）。ＴＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０で２回洗浄し、ＴＢＳ単独で１回洗浄した後、ＨＲＰ結合抗ウサギまたは抗マウス抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、希釈１：５０００）を使用することにより強化化学発光システム（ＥＣＬ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、ＵＫ）およびＨｙｐｅｒｆｉｌｍｔＥＣＬ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）へのオートラジオグラフィーでの露出に従って免疫標識タンパク質バンドを検出した。Ｑａｕｎｔｉｔｙ  Ｏｎｅ（商標）ソフトウェアｖ．４．６．３（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を定量に使用した。
【００８０】
基底レベルに対するＡｃＨ３レベル増加をもたらさないＨＤＡＣ阻害剤の濃度が１０ｎＭであると特定したら、この最小濃度をＰＤＥ阻害剤との併用に用いて、ヒストン３アセチル化における相乗効果を特定する。細胞株を、表７に示すような様々な濃度のＨＤＡＣ阻害剤とＰＤＥ阻害剤の組合せで２時間処理して、ヒストンアセチル化における相乗効果を明らかにした。
【００８１】
表５は、野生型ニューロンを使用したときの基底レベル（処理なし）に対するヒストン３アセチル化レベル（ＡｃＨ３）の増加を次のように示すものである：基底レベルｘ１は増加なし（＋）を意味し、基底レベルｘ２≦（＋＋）。
【００８２】
表５．野生型ニューロンを使用したときの単独でのＰＤＥおよびＨＤＡＣ阻害剤によるＡｃＨ３増加
【表５】
2017525721.tif 000022
【００８３】
表６は、野生型ニューロンを使用したときの基底レベル（処理なし）に対するヒストン３アセチル化レベル（ＡｃＨ３）の増加を次のように示すものである：基底レベルｘ１は増加なし（＋）を意味し、基底レベルｘ２≦（＋＋）＜基底レベル３、基底レベルｘ３≦（＋＋＋）＜基底レベルｘ４、および基底レベルｘ４≦（＋＋＋＋）。Ｎ．Ｅ．は、効果なしを意味する。
【００８４】
表６．野生型ニューロンを使用したときのＰＤＥとＨＤＡＣ併用によるＡｃＨ３増加
【表６】
2017525721.tif 000023
【００８５】
表７はまた、ＳＨＳＹ−５Ｙ細胞株を使用したときの基底レベル（処理なし）に対するヒストン３アセチル化レベル（ＡｃＨ３）の増加を次のように示すものである：基底レベルｘ１は増加なし（＋）を意味し、基底レベルｘ２≦（＋＋）＜基底レベル３、基底レベルｘ３≦（＋＋＋）＜基底レベルｘ４、および基底レベルｘ４≦（＋＋＋＋）。Ｎ．Ｅ．は、効果なしを意味する。
【００８６】
表７．ＳＨＳＹ−５Ｙ細胞株を使用したときのＰＤＥとＨＤＡＣ併用によるＡｃＨ３増加
【表７】
2017525721.tif 000024
【００８７】
表７に示したように、両方の化合物を併用したとき明らかな相乗効果がある。
【００８８】
Ｔｇ２５７６  ＡＤマウスモデルを使用するインビボ研究
加齢Ｔｇ２５７６マウスにおける記憶機能
【００８９】
２〜５週の慢性処置後のＴｇ２５７６マウス（月齢１４〜１６ヶ月）において、２つの異なる行動課題：恐怖条件づけ（ＦＣ）およびモーリス水迷路（ＭＷＭ）試験を使用することにより、ボリノスタット（１２．５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）、タダラフィル（１ｍｇ／ｋｇ、経口）および併用（ボリノスタット  １２．５ｍｇ／ｋｇ＋タダラフィル  １ｍｇ／ｋｇ）の記憶機能に対する効果を研究した。Ｔｇ２５７６マウスは、Ａβ生産に好適である、スウェーデン型二重変異を有するＡＰＰのヒト６９５−ａａアミノ酸アイソフォーム（ｈＡＰＰ）を発現する。図２を参照されたい。結果を表８および９に示す。
【００９０】
ＦＣ課題の行動実験手順は、３つの段階を含んだ：馴化、訓練および試験。馴化段階中、刺激を与えずに５分間、条件づけボックス（状況）にマウスを馴化させた。２４時間後（訓練段階）、マウスを訓練チャンバーに入れ、２分間探索させ、その後、フットショック（０．３ｍＡ）無条件刺激を施し（２秒）、３０秒後にマウスを自分たちのホームケージに戻した。
【００９１】
訓練の２４時間後にマウスを条件づけチャンバーに戻し、２分間状況を探索させ、この間のすくみ行動（状況長期記憶）を記録した。すくみスコアを百分率として表した。条件づけ実験手順は、ＳｔａｒｔＦｅａｒシステム（Ｐａｎｌａｂ  Ｓ．Ｌ．，Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）で行った。このシステムは、動物の移動によって発生する信号の記録および分析を高感度Ｗｅｉｇｈｔ  Ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒシステムによって可能にする。そのアナログ信号は、記録のために、また後の活動性／不動性に関する分析のために、ロードセルによって調節されるＦＲＥＥＺＩＮＧ  ａｎｄ  ＳＴＡＲＴＬＥソフトウェアに送られる。
【００９２】
以前に記載された（Ｒｉｃｏｂａｒａｚａら、２００９年、Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、３４巻、１７２１〜１７３２頁およびＲｉｃｏｂａｒａｚａら、２０１１年、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、３巻、１３７５〜８４頁）ようにＭＷＭおよびリバーサル＿ＭＷＭ試験を用いて空間記憶を評価した。３週間の処置後、動物群は、ＭＷＭで空間参照学習および記憶試験を受けた。水迷路は、２０℃で維持され非毒性白色塗料の添加によって不透明化された水で満たされている円形プール（直径１．２ｍ）であった。高くしたプラットフォーム（見えるプラットフォーム）に泳ぎ着く訓練を連続３日間（８試行／日）、マウスに行った。この段階の間、遠位に見える手がかりは存在しなかった。見えるプラットフォームでのセッションすべてにこの同じプラットフォーム位置を使用し、見えないプラットフォームでの訓練のために変更し（水面より１ｃｍ下に沈め）、その訓練を連続８日にわたって（４試行／日）行い、この段階ではすべて見える遠位の手がかりがあった。見えるプラットフォームバージョンと隠されたプラットフォームバージョン両方において、マウスをプールの壁に向けて選択位置に疑似ランダムに配置して、迷路外の空間手がかりの潜在的交絡寄与を取り除いた。マウスがプラットフォームに達したか、６０秒後か、先にきたほうで各試行を終了した。記憶保持を試験するために、３回のプローブ試行を、試験の第４日に開始し、第７日および最終日（第９日）に行った。プローブ試行では、プラットフォームをプールから除去し、プラットフォームが以前に設置されていた四分円内で費やす時間の百分率を記録した。
【００９３】
４週間の退薬期間後、リバーサルＭＷＭ段階を行った。この段階では、プラットフォームをタンクの反対側の四分円に配置し、隠されたプラットフォームの訓練を連続５日間（１日に４試行）行った。すべての手がかりは、それらの原位置のままであった。記憶保持を第６日のプローブで分析した。
【００９４】
プローブ試行中の逃避潜時、水泳速度、経路長、およびプールの各四分円内で費やした時間のパーセントのその後の分析のために、ＳＭＡＲＴ−ＬＤプログラム（Ｐａｎｌａｂ  Ｓ．Ｌ．，Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、Ｓｐａｉｎ）に接続されたプールの中心の上方のカメラによってすべての試行をモニターした。すべての実験手順を群には分からないように行った。
【００９５】
表８．ＦＣ試験におけるすくみのパーセント
【表８】
2017525721.tif 000025
【００９６】
表９．ＭＷＭおよびリバーサル＿ＭＷＭにおける右四分円での時間のパーセント
【表９】
2017525721.tif 000026
【００９７】
表９に示したように、Ｖ＋Ｔでのみ有意な効果（ｐ＜０．０５）があるので、両方の化合物を併用したときに相乗的インビボ効果がある。
【００９８】
Ｔｇ２５７６マウスにおけるアミロイドに基づくおよびｐタウに基づく病態
【００９９】
アミロイドおよびタウ病態を処置動物の海馬で分析した。海馬を計量し、冷溶解緩衝液とプロテアーゼ阻害剤を含有する８質量の氷冷緩衝液（０．２Ｍ  ＮａＣｌ、０．１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）、１０％グリセロール、２００ｍＭ  ＮａＦ、２ｍＭ  Ｎａ４Ｐ２Ｏ７、５ｍＭ  ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、１ｍＭ  ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、２ｍＭ  ＤＴＴ（ジチオトレイトール）、０．５ｍＭ  ＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフルオリド）、１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４および完全プロテアーゼ阻害剤カクテル、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）中で均質化し、１４，０００ｘｇ、４℃で２０分間、遠心分離し、上清を等分し、−８０℃で保存した。ＢｉｏＲａｄ  Ｂｒａｄｆｏｒｄプロテインアッセイ（ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、全タンパク質濃度を決定した。
【０１００】
Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ、Ｃａ、ＵＳＡ）からの高感度サンドイッチＥＬＩＳＡキットをその製造業者の説明書に従って使用して３Ｄ６抗体（Ａβのアミノ酸１〜５に対して特異的；Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ、ＵＳＡからのキット）で海馬抽出物中のＡβ４２レベルを測定した。
【０１０１】
処置動物の海馬におけるｐタウをウェスタンブロットによって分析した。タンパク質試料をＬａｅｍｍｌｉサンプルバッファーと混合し、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで分離し、ニトロセルロース膜に転写した。膜を５％ミルク、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）またはＴＢＳ（Ｔｒｉｓ緩衝食塩水）中のもの）でブロックし、その後、対応する緩衝液中の次の一次抗体とともに一晩インキュベートした：Ｓｅｒ２０２／Ｔｈｒ２０５の過剰リン酸化エピトープを認識するマウスモノクローナル抗ホスホタウＡＴ８（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、１：１０００）およびマウスモノクローナル抗タウ（クローンＴａｕ４６、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ  Ｌｕｉｓ、ＭＯ、１：１０００）。ＴＢＳ／Ｔｗｅｅｎ２０で２回洗浄し、ＴＢＳ単独で１回洗浄した後、ＨＲＰ結合抗ウサギまたは抗マウス抗体（１：５０００希釈されたもの、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）を使用して免疫標識タンパク質バンドを検出した。定量のためにＱａｕｎｔｉｔｙ  Ｏｎｅ（商標）ソフトウェアｖ４．６．３（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用して、強化化学発光（ＥＣＬ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、ＵＫ）およびＨｙｐｅｒｆｉｌｍ  ＥＣＬ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）へのオートラジオグラフィーでの露出によって結合を可視化した。
【０１０２】
表１０．処置動物の海馬におけるＡβ４２レベル
【表１０】
2017525721.tif 000027
【０１０３】
表１１．処置動物の海馬におけるｐタウレベル 
【表１１】
2017525721.tif 000028
【０１０４】
表１０および１１に示したように、両方の化合物を併用したとき、アミロイドおよびタウＡＤマーカーを低減させることへの相乗効果がある。
【図１】
2017525721.tif 000029
【図２】
2017525721.tif 000030
【国際調査報告】
2017525721.tif 000031
2017525721.tif 000032
2017525721.tif 000033
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