(57)【要約】  冬虫夏草の子実体の人工培養方法であって、中国のトウチュウカソウ（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）菌を滅菌の培地に接種し、９−１３℃において、４０−６０日培養し、菌糸体が培地全体に成長したら、１−８℃で６０−８０日低温誘導を行って子実体の原基を得、続いて１１−１６℃に置いて培養し、子実体を収穫する。該冬虫夏草の子実体の人工培養方法は、低酸素環境が必要なく、培養コストを下げることができ、誘導から子実体の収穫までわずか３−４ヵ月であり、使用する米の培地も低価であり、冬虫夏草子実体の商業化培養に適用できる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
中国のトウチュウカソウ（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）菌を滅菌の培地に接種し、９−１３℃において、４０−６０日培養し、菌糸体が培地全体に成長したら、１−８℃で６０−８０日低温誘導を行って子実体の原基を得、続いて１１−１６℃に置いて子実体を収穫まで培養し、
前記培地は、米と栄養液を、重量比１：１〜１．５で混合してなるものであり、前記栄養液は、全体質量１００％とする場合、グルコース２％、ＫＨ２ＰＯ４  ０．２％、ＭｇＳＯ４  ０．１％、クエン酸アンモニウム０．１％、ペプトン０．５％、蚕蛹粉０．２％、および残量分の水を含み、ｐＨ６．０−６．５である、
ことを特徴とする冬虫夏草の子実体の人工培養方法。
【請求項２】
前記中国のトウチュウカソウ菌を滅菌の培地に接種する過程において、前記中国のトウチュウカソウ菌は、  
（１）親種の調製：中国のトウチュウカソウ菌を固体ＰＰＤＡ培地に接種し、９−１６℃において、４５−６０日間暗培養後に、冬虫夏草の典型的な菌群を親種として選択することと、
（２）液体菌種の調製：親種菌群を液体ＰＰＤＡ培地に接種し、９−１６℃において、４０−６０日間振とう培養後に、サイズの均一、かつ直径２−３ｍｍの菌糸体ボールを選択し液体菌種とすること、
そして、無菌の環境において、滅菌水によって液体菌種を５−１０倍に希釈してから、無菌の培地に接種することと、
を含む方法により調製され、
前記固体ＰＰＤＡ培地は、リットルごとに、グルコース２０ｇ、ポテト２００ｇ、ペプトン１０ｇ、ＫＨ２ＰＯ４の３ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏの１．５ｇ、ＶＢ１の０．０２ｇ、寒天１５ｇ、および残量分の水を含み、ｐＨは自然のままであり、
前記液体ＰＰＤＡ培地は、リットルごとに、グルコース２０ｇ、ポテト２００ｇ、ペプトン１０ｇ、ＫＨ２ＰＯ４  ３ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  １．５ｇ、ＶＢ１  ０．０２ｇ、および残量分の水を含み、ｐＨは自然のままであること、
を特徴とする請求項１に記載の冬虫夏草の子実体の人工培養方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、昆虫の飼育分野に関し、特に、冬虫夏草の宿主昆虫のコウモリガ科蛾の人工低海抜培養方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
冬虫夏草（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ、別称：Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）は、我が国のもっとも特別な生物資源であり、子嚢菌門（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）、フンタマカビ綱（Ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）、ニクザキン目（Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓ）、オフィオコルディセプス科（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｉｐｉｔａｃｅａｅ）、オフィオコルディセプス属（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ）に属し、中国では、主にチベット、青海、雲南、四川、甘肅など海抜３０００メートル以上の雪山である高寒山区に生息している。本物の薬用冬虫夏草は、中国のトウチュウカソウ（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）によってホスト昆虫であるコウモリガ科を真菌感染し菌核化させ、適切な条件下において、真菌感染した菌核化した幼虫を成長させ、虫（菌核化した宿主昆虫）草（真菌の子実体）を複合形態に形成したものである。
【０００３】
冬虫夏草は、我が国において、薬膳同源の珍重的な食材であり、健肺、健腎、強精強壮効果、各種脱力感を回復する効果などたくさんの効果がある。現代医学では、冬虫夏草は天然免疫調節剤と視され、人体健康を守る“天然の調合物”である。冬虫夏草によって、多種の抗菌、抗ウイルス、抗腫瘍、抗放射線、免疫調節機能を有する生理活性物質を生み出すことができ、医薬、食品、および現代生物技術などの面で広く応用され、特に、我が国の伝統的な栄養剤市場において重要な地位をしめていって、国民に推薦と信頼されつつ、そして、日本、韓国、東南アジア、および米国など国際市場においてくよく販売されている。
【０００４】
資源の枯渇、需要ののび、および政策保護の原因で、市場価格が高騰してきている。野生の冬虫夏草は、すでに国家二級保護物種と指定された。チベット高原の生態環境や、虫草資源を保護するとともに、冬虫夏草を人類の健康によりよく貢献するための、唯一の選択として、人工培養がある。但し、冬虫夏草の成長条件は厳しく、現在までに、冬虫夏草の人工規模化培養技術がまだ達成されていない。冬虫夏草の無性型―中国のトウチュウカソウまたは関連の真菌の発酵培養およびその製品がすでに市場に出ている（非特許文献１、非特許文献２）。
【０００５】
現在、世界中に、成功的に人工培養できる虫草子実体の種類は、多くない。米を含有する培地を利用して蛹虫草子実体を培養する以外に、昆虫を寄主とし蛹虫草を培養することもある。潘中華ら（非特許文献３）と汪西強ら（非特許文献４）は、それぞれカイコ（Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ  Ｌ．）と黒サク（Ｃｒｙｐｔｏｔｙｍｐａｎａ  ｐｕｓｔｕｌａｔａ  Ｆ．）を利用して蛹虫草を培養した。李如春ら（非特許文献５）は、コメノゴミムシダマシ（Ｔｅｎｅｂｒｉｏ  ｍｏｌｉｔｏｒ  Ｌ．）が台湾虫草（Ｃ．ｆｏｒｍｏｓａｎａ）菌による感染させ菌糸束を形成した。李泰輝ら（特許文献１）は、人工培養のコメノゴミムシダマシの蛹を利用して、成功的に蛹虫草の子座を培養した。ほかいくつかの特許にも、蚕蛹を利用して蛹虫草を培養する方法（徐道田等、特許文献２；李健、特許文献３；陳瑞英等、特許文献４）が記載された。韓日畴ら（特許文献５）は、ハチノスツヅリガ（Ｇａｌｌｅｒｉａ  ｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ）幼虫を利用して、成功的に蛹虫草子実体を培養できた。
【０００６】
中国特許出願第２０１３１０４３２７２３．４号明細書（発明名称：冬虫夏草子実体およびその培養方法）によれば、冬虫夏草子実体を培養することができるが、下記の３つの問題点がある：１、子実体の誘導から、子実体を出てくるまでに、低酸素濃度（１０〜１５％の酸素濃度）環境下になければならないが、低海抜地域において、低酸素濃度を５−６ヵ月を維持するために、コストが非常に高くなる。２、子実体の誘導から、子実体が出てくるまでに、５−６ヵ月の時間がかかり、時間が比較的に長い。３、培地のコストも比較的高く、商業化大規模の培養に適用できない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】中国特許第２００５１０１０１３４８．０号明細書
【特許文献２】中国特許第００１３０３８１．３号明細書
【特許文献３】中国特許第０１１４１３８６．７号明細書
【特許文献４】中国特許第９７１１３１９０．２号明細書
【特許文献５】中国特許第２００６１０１２３３５５．５号明細書
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｉｎｆｏｒｍａ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，ＤＯＩ：１０．３１０９／０７３８８５５１．７９１２４５
【非特許文献２】Ｙｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｍｕｓｈｒｏｏｍｓ，１５：４２５−４３４．
【非特許文献３】潘中華ら、江蘇蚕業、２４：２１−２４（２００２）
【非特許文献４】汪西強ら、安徽農業科学、３０：９６５−９６８（２００２）
【非特許文献５】李如春ら、菌物学報、２４：３４９−３５５（２００５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、低酸素環境が必要なく、低海抜地域の通常酸素濃度下での、商業的な人工培養冬虫夏草子実体の方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の冬虫夏草子実体の人工培養方法は、下記のステップを含む：
【００１１】
中国のトウチュウカソウ（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）菌を滅菌の培地に接種し、９−１３℃において、４０−６０日培養し、菌糸体が培地全体に成長したら、１−８℃で６０−８０日低温誘導を行って子実体の原基を得、続いて１１−１６℃に置いて３０−４０日に培養し、長さ４−１２ｃｍの子実体を収穫でき、収穫した子実体は、棒状であり、分岐がなく、暗灰色であり、野生の冬虫夏草的子実体の形態と似ている。
【００１２】
前記培地は、米と栄養液を、重量比１：１〜１．５の比で混合してなるものであり、前記栄養液は、全体質量を１００％とする場合、グルコース２％、ＫＨ２ＰＯ４の０．２％、クエン酸アンモニウム０．１％、ペプトン０．５％、蚕蛹粉０．２％、および残量分の水を含み、ｐＨ６．０−６．５である。
【００１３】
好ましいのは、前記中国のトウチュウカソウ菌を滅菌の培地に接種する過程において、前記中国トウチュウカソウは、下記の方法により調製する。
【００１４】
（１）親種の調製：中国のトウチュウカソウ菌を固体ＰＰＤＡ培地に接種し、９−１６℃において、４５−６０日培養後に、冬虫夏草の典型的な菌群を親種として選択する。
【００１５】
（２）液体菌種の調製：親種菌群を液体ＰＰＤＡ培地に接種し、９−１６℃において、４０−６０日間振とう培養後に、サイズの均一、かつ直径２−３ｍｍの菌糸体ボールを選択し液体菌種とする。
【００１６】
そして、無菌の環境において、滅菌水によって液体菌種を５−１０倍に希釈してから、無菌の培地に接種する。
【００１７】
本発明の固体のＰＰＤＡ培地は、従来用いられている培地であり、その配合は、下記の通りである：グルコース２０ｇ、ポテト２００ｇ、ペプトン１０ｇ、ＫＨ２ＰＯ４  ３ｇ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ  １．５ｇ、ＶＢ１  ０．０２ｇ、寒天１５ｇ、およびＨ２Ｏ  １０００ｍＬ、ｐＨは自然のままである。その配合方法は、下記の通りである：ポテトを洗って皮を剥いて、水を添加してよくゆで、そしてガーゼを用いて濾過して、濾液にグルコース、ペプトン、ＫＨ２ＰＯ４、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、ＶＢ１、および寒天を添加し、水で１Ｌに容量をフィクスし、１２１℃で６０分間滅菌を行って、用意する。前記液体のＰＰＤＡ培地は、上記の固体のＰＰＤＡ培地から寒天を除いて得られた培地であり、その配合方法は、寒天を添加していないこと以外、上記と同様である。
【００１８】
本発明は、多数回繰り返しても、何れも本発明の目的を達成することができ、すなわち、成功的に冬虫夏草子実体を規模化培養することができる。子実体の培養条件の設立は、本発明を実現する重要点である。
【００１９】
本発明の培養方法によって培養し得た冬虫夏草子実体は、形態上に野生の冬虫夏草子実体と似ており、主成分も野生の冬虫夏草子実体より低くなく、食品として応用できる。野生の冬虫夏草と本発明の人工培養方法によって得られた冬虫夏草子実体の主成分の分析結果を、表１に示す。
【００２０】
表１：本発明による人工培養の冬虫夏草子実体と野生冬虫夏草子実体の主成分の分析結果
【００２１】
【表１】
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【００２２】
本発明の冬虫夏草子実体の人工培養方法は、低海抜の正常酸素濃度下で培養する方法であり、１０〜１５％のような低酸素濃度が必要なく、培養コストを大幅に削減することができ、また、子実体の誘導から収穫できる子実体になるまでわずか９０−１２０日（すなわち、３−４ヵ月）がかかり、培養期間も短縮でき、また、本発明に使われている米培地は、低価であり、冬虫夏草の商業化大規模培養に適用できる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１は、本発明によって培養した冬虫夏草子実体の図である。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
下記実施例は、本発明に対するさらなる説明であり、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００２５】
実施例１：
実験場所：中国広州市の広東省昆虫研究所。下記の培養は、すべて空気中の通常酸素濃度下におこなった。
【００２６】
中国のトウチュウカソウ（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）菌の菌種を無菌固体ＰＰＤＡ培地に接種し、９℃において、６０日暗培養後に、冬虫夏草の典型的な菌群を選択し、親種とする。
【００２７】
親種菌群を液体ＰＰＤＡ培地に接種し、９℃、１００ｒｐｍの条件下にて６０日振とう培養し、その後、サイズの均一、かつ直径２−３ｍｍの菌糸体ボールを選択し液体菌種とし、冬虫夏草の培養生産に用いる。
【００２８】
そして、無菌室または非常に清潔な操作台において、滅菌水によって５倍に希釈した液体菌種を無菌の培地に接種した。接種後の培養瓶を９℃において６０日培養し、菌糸体が培地全体に成長したら、１℃で６０日低温誘導を行って子実体の原基を得、続いて１１℃でさらに４０日培養したら、長さ４−８ｃｍの子実体を収穫することができ、すなわち、子実体の体温誘導かから、収穫できる子実体を成長させるまでの期間は、１００日だった。人工培養の冬虫夏草子実体において、図１に示すように、該冬虫夏草子実体の形態は、野生の冬虫夏草子実体と似ており、主要成分の含有量も野生の冬虫夏草子実体より低くないため、食品として応用できる。
【００２９】
前記培地の配合方法：グルコース２０ｇ、ＫＨ２ＰＯ４  ２ｇ、ＭｇＳＯ４  １ｇ、クエン酸アンモニウム１ｇ、ペプトン５ｇ、および蚕蛹粉２ｇを少量の水に溶解し、ｐＨ値は６．０−６．５であり、その後に１Ｌにフィクスして、栄養液を得、米と当該栄養液を、重量比１：１の比で攪拌しながら混合して、培養瓶に入れて、１２１℃で６０分間滅菌を行って、用意する。
【００３０】
実施例２：
実験場所：中国広州市の広東省昆虫研究所。下記の培養は、すべて空気中の通常酸素濃度下におこなった。
【００３１】
中国のトウチュウカソウ（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）菌の菌種を無菌固体ＰＰＤＡ培地に接種し、１６℃において、４５日暗培養後に、冬虫夏草の典型的な菌群を選択し、親種とする。
【００３２】
親種菌群を液体ＰＰＤＡ培地に接種し、１６℃、１００ｒｐｍの条件下にて４０日振とう培養し、その後、サイズの均一、かつ直径２−３ｍｍの菌糸体ボールを選択し液体菌種とし、冬虫夏草の培養生産に用いる。
【００３３】
そして、無菌室または非常に清潔な操作台において、滅菌水によって１０倍に希釈した液体菌種を無菌の培地に接種した。接種後の培養瓶を１３℃において４０日培養し、菌糸体が培地全体に成長したら、８℃で８０日低温誘導を行って子実体の原基を得、続いて１６℃にさらに３０日培養したら、長さ４−６ｃｍの子実体を収穫することができ、すなわち、子実体の体温誘導から、収穫できる子実体を成長させるまでの期間は、１１０日だった。人工培養の冬虫夏草子実体において、図１に示すように、該冬虫夏草子実体の形態は、野生の冬虫夏草子実体と似ていて、主要成分の含有量も野生冬虫夏草子実体より低くないため、食品として応用できる。
【００３４】
前記培地の配合方法：グルコース２０ｇ、ＫＨ２ＰＯ４  ２ｇ、ＭｇＳＯ４  １ｇ、クエン酸アンモニウム１ｇ、ペプトン５ｇ、および蚕蛹粉２ｇを少量の水に溶解し、ｐＨ値は６．０−６．５であり、その後に容量を１Ｌにフィクスして、栄養液を得、米と当該栄養液を、重量比１：１．５の比で攪拌しながら混合して、培養瓶に入れて、１２１℃で６０分間滅菌を行って、用意する。
【００３５】
実施例３：
実験場所：中国広州市の広東省昆虫研究所。下記の培養は、すべて空気中の通常酸素濃度下におこなった。
【００３６】
中国のトウチュウカソウ（Ｏｐｈｉｏｃｏｒｄｙｃｅｐｓ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）菌の菌種を無菌固体ＰＰＤＡ培地に接種し、１１℃において、５３日暗培養後に、冬虫夏草の典型的な菌群を選択し、親種とする。
【００３７】
親種菌群を液体ＰＰＤＡ培地に接種し、１１℃、１００ｒｐｍの条件下にて５０日振とう培養し、その後、サイズの均一、かつ直径２−３ｍｍの菌糸体ボールを選択し液体菌種とし、冬虫夏草の培養生産に用いる。
【００３８】
そして、無菌室または非常に清潔な操作台において、滅菌水によって７倍に希釈した液体菌種を無菌の培地に接種した。接種後の培養瓶を１１℃において５０日培養し、菌糸体が培地全体に成長したら、５℃で６５日低温誘導を行って子実体の原基を得、続いて１３℃にさらに３５日培養したら、長さ４−１２ｃｍの子実体を収穫することができ、すなわち、子実体の体温誘導から、収穫できる子実体を成長させるまでの期間は、１００日だった。人工培養の冬虫夏草子実体において、図１に示すように、該冬虫夏草子実体の形態は、野生の冬虫夏草子実体と似ていて、主要成分の含有量も野生冬虫夏草子実体より低くないため、食品として応用できる。
【００３９】
前記培地の配合方法：グルコース２０ｇ、ＫＨ２ＰＯ４  ２ｇ、ＭｇＳＯ４  １ｇ、クエン酸アンモニウム１ｇ、ペプトン５ｇ、および蚕蛹粉２ｇを少量の水に溶解し、ｐＨ値は６．０−６．５であり、その後に容量を１Ｌにフィクスして、栄養液を得、当該米と栄養液を、重量比１：１．３の比で攪拌しながら混合して、培養瓶に入れて、滅菌を行って、用意する。
【図１】
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【国際調査報告】
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2017500059.tif 000007
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