(57)【要約】  本発明は、インフルエンザの治療、改善又は予防に有用な、下記一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、コドラッグ、共結晶、プロドラッグ、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい化合物に関する。さらに、具体的な併用療法を開示する。    【化１】2017521423.tif 000053【選択図】なし
2017521423.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー若しくはジアステレオマー又はそれらの混合物の形態であってもよい化合物：
【化１】
2017521423.tif 000052
（式中、
Ｒ５１は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）及び−Ｃ（Ｏ）−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）から選択され、
Ｒ５２は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（ＣＨ２）ｑ−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）、−（ＣＨ２）ｑ−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（ＣＨ２）ｐ−ＯＲ５５及び−（ＣＨ２）ｐ−ＮＲ５６Ｒ５７から選択され、
Ｒ５３は−Ｌ１−（ＣＲ＊Ｒ＊＊）ｔ−Ｒ５４であり、
Ｒ５４は−Ｈ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＯＣＦ３、−（任意に置換されたＣ３〜２０カルボシクリル）及び−（３個〜２０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
Ｒ５５は−Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル及び−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨから選択され、
Ｒ５６は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
Ｒ５７は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
Ｒ５８は−Ｈ及び−Ｃ１〜６アルキルから選択され、
Ｒ５９は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
Ｌ１はＮ（Ｒ５９）ＳＯ２、ＮＲ５９、Ｎ（Ｒ５９）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５９、ＳＯ２Ｎ（Ｒ５９）及びＮ（Ｒ５９）ＳＯ２Ｎ（Ｒ５９）から選択され、
Ｘ５１はＮＲ５６、Ｎ（Ｒ５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５６、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ５６）ＳＯ２、ＳＯ２Ｎ（Ｒ５６）、Ｎ（Ｒ５６）ＳＯ２Ｎ（Ｒ５６）、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２及び（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ５６から選択され、
Ｒ＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
Ｒ＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、
又はＲ＊及びＲ＊＊は場合により、任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル基若しくは３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル基を形成することができ、
Ｒ＊＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル基又は１つ若しくは複数のハロゲン原子により置換される−Ｃ１〜６アルキル基であり、
ｐは１〜４であり、
ｑは０〜４であり、
ｒは１〜３であり、
ｓは０〜４であり、
ｔは０〜６であり、
前記アルキル基はハロゲン、−ＣＮ、−ＮＲ５６Ｒ５７、−ＯＨ及び−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−（Ｃ３〜２０カルボシクリル）及び−（３個〜２０個の環原子を有するヘテロシクリル）から独立して選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができ、
前記ヘテロシクリル基及び／又はカルボシクリル基は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｓ−Ｘ５１−Ｒ５８、−Ｃ１〜６アルキル、ハロゲンにより任意に置換することができる−Ｃ３〜１０カルボシクリル、ハロゲンにより任意に置換することができる−Ｃ１〜４アルキル−Ｃ３〜１０カルボシクリル、−（ハロゲンにより任意に置換することができる３個〜１０個の環原子を有するヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（ハロゲンにより任意に置換することができる３個〜１０個の環原子を有するヘテロシクリル）から独立して選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができる）。
【請求項２】
Ｒ５１が−Ｈ及び−Ｃ１〜６アルキルから選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ５２が−Ｈ、−（ＣＨ２）ｑ−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜６アルキルから選択される、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｌ１がＮ（Ｒ５９）ＳＯ２である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ＊がそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）及び−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）から選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ＊＊がＨである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
ｔが０〜４である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ５４が−Ｈ、−ＣＦ３、−（任意に置換されたＣ３〜６カルボシクリル）及び−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物と、任意に、１種又は複数種の薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は担体と、
を含む、医薬組成物。
【請求項１０】
一般式（Ｖ）で表わされる化合物とは異なるポリメラーゼ阻害剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、Ｍ２チャネル阻害剤、アルファグルコシダーゼ阻害剤、別のインフルエンザ標的のリガンド、抗生物質、抗炎症剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、ＥＰリガンド、ブラジキニンリガンド、及びカンナビノイドリガンドからなる群から選択される少なくとも１種の更なる薬剤を更に含む、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
インフルエンザの治療、改善又は予防に使用される、一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
インフルエンザを治療、改善又は予防する方法であって、それを必要とする患者に、一般式（Ｖ）で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物を有効量投与することを含む、方法。
【請求項１３】
前記一般式（Ｖ）で表わされる化合物とは異なるポリメラーゼ阻害剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、Ｍ２チャネル阻害剤、アルファグルコシダーゼ阻害剤、別のインフルエンザ標的のリガンド、抗生物質、抗炎症剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、ＥＰリガンド、ブラジキニンリガンド、及びカンナビノイドリガンドからなる群から選択される少なくとも１種の更なる薬剤を、一般式（Ｖ）で表わされる化合物と同時に、それと順次に又はそれとは別々に投与する、請求項１１に記載の化合物又は請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記一般式（Ｖ）で表わされる化合物が、本明細書に開示のＦＲＥＴエンドヌクレアーゼ活性アッセイ及び／又は転写アッセイにおいて約５０μＭ未満のＩＣ５０を示す、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の化合物、医薬組成物又は方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インフルエンザの治療、改善又は予防に有用な、一般式（Ｖ）：
【化１】
2017521423.tif 000003
で表わされ、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、コドラッグ（codrug）、共結晶、プロドラッグ、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい化合物に関する。さらに、具体的な併用療法を開示する。
【背景技術】
【０００２】
近年、世界的な公衆衛生へのインフルエンザウイルス感染による深刻な脅威が、第一に高病原性Ａ型鳥インフルエンザウイルスＨ５Ｎ１株の進行中のヒトへの伝播（感染したヒトにおける６３％の死亡率、http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/en/）、第二に２００９年の全世界に急速に蔓延した新規の流行性インフルエンザウイルス株Ａ／Ｈ１Ｎ１の予期せぬ出現（http://www.who.int/csr/disease/swineflu/en/）によって浮き彫りになっている。この新たなウイルス株は感染力が強いが、現在では概して比較的軽度の病気しか生じていないが、このウイルスの将来の進化は予測不可能である。はるかに深刻であるが、極めて説得力のあるシナリオでは、Ｈ５Ｎ１及び関連の高病原性鳥インフルエンザウイルスがヒト間でより容易に伝播し得るような突然変異を獲得するか、又は新たなＡ／Ｈ１Ｎ１が近年の多くの季節性Ｈ１Ｎ１株のように（非特許文献１、非特許文献２）、より病原性が強くなる場合があり、またオセルタミビル耐性を与えるには単一点突然変異のみで十分である（非特許文献３）。この場合、ワクチンの生成及び展開の遅延（Ａ／Ｈ１Ｎ１の比較的有利な場合で約６ヶ月であり、Ｈ５Ｎ１については依然として解決されていない問題である）が人々の生命に破滅的な影響をもたらし、社会的混乱を生じ得る。
【０００３】
新たなワクチンが利用可能となるまでの期間を埋めるため及び重症例を治療するため、並びにウイルス耐性の問題に対応するためには、より幅広い抗インフルエンザ薬の選択肢が必要とされることが広く認められている。したがってこの点からも、ノイラミニダーゼ阻害剤が利用可能となってから大手製薬会社の殆どが断念している新たな抗インフルエンザ薬の開発が最優先となっている。
【０００４】
抗ウイルス薬開発の格好の出発点は、必須ウイルスタンパク質の構造データである。このため、例えばインフルエンザウイルス表面抗原ノイラミニダーゼの結晶構造の決定（非特許文献４）は、ウイルス産生自体ではなく、細胞からのウイルスの放出を妨げる抗ウイルス活性を有するノイラミニダーゼ阻害剤の開発に直結した。これら及びそれらの誘導体は、その後抗インフルエンザ薬であるザナミビル（Glaxo）及びオセルタミビル（Roche）へと開発され、現在では起こり得る大流行に対する防御の第一線として多くの国々が備蓄している。しかしながら、これらの薬剤は臨床疾患の期間の短縮しかもたらさない。代替的には、他の認可された抗インフルエンザ薬群（例えばアマンタジン及びリマンタジン）が、細胞内のウイルス粒子の脱殻を妨げる、ウイルス膜中に位置するウイルスＭ２イオンチャネルタンパク質を標的としている。しかしながら、これらはその副作用及び耐性ウイルス突然変異体の急速な発生のために広くは使用されていない（非特許文献５）。加えて、リバビリン等のより非特異的な抗ウイルス薬が、インフルエンザ及び他のウイルス感染の治療に有効であることが示されている（非特許文献６）。しかしながらリバビリンは、おそらくは重い副作用のために少数の国でしか認可されていない（非特許文献７）。明らかに、好ましくは異なる標的に指向性を有する新たな抗ウイルス化合物が必要とされている。
【０００５】
インフルエンザウイルス及びトゴトウイルス及びイサウイルスはオルトミクソウイルス科に属し、とりわけハンタウイルス、ナイロウイルス、オルトブニヤウイルス及びフレボウイルスを含むブニヤウイルス科と同様にマイナス鎖ＲＮＡウイルスである。それらのゲノムは分節され、（ｉ）一本鎖マイナス鎖ウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）のウイルスｍＲＮＡへの初期コピー（すなわち転写）及び（ｉｉ）ｖＲＮＡ複製を行う、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼを含むリボヌクレオタンパク質粒子となる。サブユニットＰＡ、ＰＢ１及びＰＢ２から構成される三量体複合体であるこの酵素は、ウイルスＲＮＡの複製及び転写に関与することから、ウイルスのライフサイクルの中心である。以前の研究では、ポリメラーゼの２つの主要ドメインである、ＰＢ２サブユニット中のｍＲＮＡキャップ結合ドメイン（非特許文献８）及びＰＡサブユニット中にあるエンドヌクレアーゼ活性部位（非特許文献９）の原子構造が同定され、これらの分子構造が特徴付けられた。これら２つの部位は、インフルエンザウイルス及びこの属の或る特定の他のウイルスファミリーによってウイルスｍＲＮＡを生成するために使用されるｍＲＮＡ転写を開始するのに使用される独特の「キャップスナッチング」様式に重要である。５’キャップは、メッセンジャーＲＮＡの５’末端に付加された修飾グアニンヌクレオチドである。５’キャップ（ＲＮＡキャップ又はＲＮＡ  ｍ７Ｇキャップとも呼ばれる）は、５’−５’−三リン酸結合により第１の転写ヌクレオチドに連結された末端の７−メチルグアノシン残基からなる。ウイルスポリメラーゼは、細胞ｍＲＮＡ分子の５’ＲＮＡキャップに結合し、１０〜１５ヌクレオチドストレッチと共にそのＲＮＡキャップを切断する。その後、キャップを有するＲＮＡ断片は、ウイルスｍＲＮＡの合成に対するプライマーとして働く（非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２、非特許文献１３）。
【０００６】
ポリメラーゼ複合体は、それがウイルスｍＲＮＡの合成及びウイルス複製に必須であり、宿主細胞タンパク質に見られるものとは顕著に異なる可能性がある幾つかの機能的活性部位を含有することから、適切な抗ウイルス薬の標的であるようである（非特許文献５）。このため、例えば、ＰＢ１中のＰＡ結合ドメインに類似した２５アミノ酸ペプチドによるポリメラーゼサブユニットの集合を妨げることが試みられている（非特許文献１４）。さらに、ポリメラーゼのエンドヌクレアーゼ活性が標的とされ、一連の４−置換２，４−ジオキソブタン酸化合物がインフルエンザウイルスにおけるこの活性の選択的阻害剤として同定された（非特許文献１５）。加えて、真菌種のデリツチア・コンファータスポラ（Delitschia confertaspora）の抽出物において同定された、置換２，６−ジケトピペラジンであるフルチミドは、インフルエンザウイルスのエンドヌクレアーゼを阻害することが示されている（非特許文献１６）。さらに、２’−デオキシ−２’−フルオログアノシン等のヌクレオシド類似体によってウイルス転写を妨げることが試みられている（非特許文献１７）。
【０００７】
特許文献１は、ＨＩＶインテグラーゼを阻害するのに好適であると言われる或る特定のヒドロキシジヒドロピリドピラジン−１，８−ジオンに関する。
【０００８】
特許文献２は、ＨＩＶインテグラーゼ阻害剤として記載されている特定の含窒素縮合環化合物を開示している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際公開第２００６／０６６４１４号
【特許文献２】欧州特許出願公開第１５４４１９９号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Dharan et al., The Journal of the American Medical Association, 2009 Mar 11; 301 (10), 1034-1041
【非特許文献２】Moscona et al., The New England Journal of Medicine, 2009 (Mar 5;360(10) pp. 953-956)
【非特許文献３】Neumann et al., Nature, 2009 (18; 459(7249) 931-939)
【非特許文献４】Von Itzstein, M. et al., (1993), Nature, 363, pp. 418-423
【非特許文献５】Magden, J. et al., (2005), Appl. Microbiol. Biotechnol., 66, pp. 612-621
【非特許文献６】Eriksson, B. et al., (1977), Antimicrob. Agents Chemother., 11, pp. 946-951
【非特許文献７】Furuta et al., ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, 2005, p. 981-986
【非特許文献８】Guilligay et al., Nature Structural & Molecular Biology 2008; May;15(5): 500-506
【非特許文献９】Dias et al., Nature 2009, 458, 914-918
【非特許文献１０】Plotch, S. J. et al., (1981), Cell, 23, pp. 847-858
【非特許文献１１】Kukkonen, S. K. et al (2005), Arch. Virol., 150, pp. 533-556
【非特許文献１２】Leahy, M. B. et al., (2005), J. Virol., 71, pp. 8347-8351
【非特許文献１３】Noah, D. L. et al., (2005), Adv. Virus Res., 65, pp. 121-145
【非特許文献１４】Ghanem, A. et al., (2007), J. Virol., 81, pp. 7801-7804
【非特許文献１５】Tomassini, J. et al., (1994), Antimicrob. Agents Chemother., 38, pp. 2827-2837
【非特許文献１６】Tomassini, J. et al., (1996), Antimicrob. Agents Chemother., 40, pp. 1189-1193
【非特許文献１７】Tisdale, M. et al., (1995), Antimicrob. Agents Chemother., 39, pp. 2454-2458
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、インフルエンザに対して効果的であり、薬理学的特性が改善された更なる化合物を同定することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
したがって、第１の実施の形態では、本発明は一般式（Ｖ）で表わされる化合物を提供する。
【化２】
2017521423.tif 000004
【００１３】
本明細書全体を通して、「一般式（Ｖ）で表わされる化合物」という用語は、他に言及のない限り、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、プロドラッグ、コドラッグ、共結晶、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物を包含することが理解される。
【００１４】
本発明の更なる実施の形態は、一般式（Ｖ）で表わされる化合物と、任意に１種又は複数種の薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は担体とを含む医薬組成物に関する。
【００１５】
一般式（Ｖ）で表わされる化合物は、インフルエンザの治療、改善又は予防に有用である。
【００１６】
驚いたことに、特異的なリンカーである−（ＣＲ＊＊＊Ｒ＊＊＊）−Ｒ５３を有する本発明の化合物は、特性が向上していることがわかっている。特に、タンパク質との相互作用を最適化し、より良好な結合特性を得ることができた。タンパク質の疎水性結合ポケットに関連するアミノ酸との更なる相互作用が確立され、水分子の置換によってエントロピー因子が追加されることにより、結合の相互作用のエンタルピーを増大させることができた。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ  ＴＡアッセイプローブセット設計に使用された、デノボ合成されたウイルスｍＲＮＡの配列を示す図である：標識伸長剤（ＬＥ）は提供された合成ＲＮＡ基質から得られたキャップされたプライマー配列及びデノボ合成されたウイルスｍＲＮＡの５’末端側の第１の塩基にハイブリダイズし（ＬＥ１）、また３’末端側のポリａ尾部にハイブリダイズする（ＬＥ２）。キャプチャー伸長剤（ＣＥ１〜９）は遺伝子特異的領域に特異的にハイブリダイズし、同時にキャプチャーしたＲＮＡをプレートに固定化する。ブロッキングプローブ（ＢＰ）は、デノボ合成されたウイルスｍＲＮＡの様々な伸長領域（stretches：ストレッチ）にハイブリダイズする。３’末端の斜字で示した配列は３’−ＲＬＭ  ＲＡＣＥ法により確かめられた（完全な配列は図示せず）。プローブセットはPanomicsより３つ全てのミックスとして供給されている。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明を下記に詳細に説明する前に、本明細書に記載の特定の方法論、プロトコル及び試薬は変更することができるため、本発明がこれらに限定されないことを理解されたい。本明細書で使用される専門用語は特定の実施形態を説明することを目的とするものに過ぎず、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されたい。他に定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。
【００１９】
好ましくは、本明細書で使用される用語は、"A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Koelbl, H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerlandに記載のように定義される。
【００２０】
本明細書及び添付の特許請求の範囲の全体を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む」という語は（the word "comprise", and variations such as "comprises" and "comprising"）、提示の物（integer）若しくは工程又は物（integer）若しくは工程の群を含むが、任意の他の物（integer）若しくは工程又は物（integer）若しくは工程の群を除外しないことを意味するものと理解される。以下の節で本発明の種々の態様をより詳細に規定する。そのように規定される各々の態様は、そうではないという明白な指定のない限り、任意の他の態様（単数又は複数）と組み合わせることができる。特に、好ましい又は有利であることが示される任意の特徴を、好ましい又は有利であることが示される任意の他の特徴（単数又は複数）と組み合わせることができる。
【００２１】
幾つかの文献が本明細書の文章全体を通して引用される。本明細書に引用される各々の文献（特許、特許出願、科学出版物、製造者の仕様書、使用説明書等の全てを含む）は、上記又は下記を問わず、その全体が引用することにより本明細書の一部をなす。本明細書中のいずれの記載も、本発明が従来発明のためにかかる開示に先行する権利がないことを認めるものと解釈されるものではない。
【００２２】
定義
「アルキル」という用語は、飽和した直鎖又は分岐炭素鎖を指す。
【００２３】
「シクロアルキル」という用語は環状の「アルキル」を表す。「シクロアルキル」という用語はその二環式、三環式及び多環式のものを含むことも意味する。特に規定のない限り、シクロアルキル基は３個〜１０個の炭素原子、好ましくは３個〜８個の炭素原子、より好ましくは３個〜１０個の炭素原子を有し得る。
【００２４】
「Ｈａｌ」又は「ハロゲン」はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩを表す。
【００２５】
「カルボシクリル」という用語は、環系にヘテロ原子を含まない任意の炭化水素環系を包含する。「カルボシクリル」という用語は、飽和型（シクロアルキル環を含む）、不飽和型の環及び芳香族環（アリール環を含む）を包含する。「カルボシクリル」という用語はその二環式、三環式及び多環式のものを含むことも意味する。多環式の例として、例えばアダマンチル、
【化３】
2017521423.tif 000005
が挙げられる。
【００２６】
「ヘテロシクリル」は、環中の炭素原子の１つ又は複数が、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される同じ又は異なるヘテロ原子の１つ若しくは２つ（三員環の場合）、１つ、２つ若しくは３つ（四員環の場合）、１つ、２つ、３つ若しくは４つ（五員環の場合）又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つ（六員環の場合）及び１つ、２つ、３つ、４つ、５つ若しくは６つ（七員環の場合）等によって置き換えられた、又は置き換えられてない環を指す。好ましくは、ヘテロシクリル基は１つ、２つ又は３つのヘテロ原子、より好ましくは１つ又は２つのヘテロ原子を含有する。「ヘテロシクリル環」という用語は、飽和型、不飽和型の環及び芳香族環（ヘテロアリール環を含む）を包含する。「ヘテロシクリル」という用語はその二環式、三環式及び多環式のものを含むことも意味する。例として、ピロール、ピロリジン、オキソラン、フラン、イミダゾリジン、イミダゾール、ピラゾール、オキサゾリジン、オキサゾール、チアゾール、ピペリジン、ピリジン、モルホリン、ピペラジン、ジアゾン（diazone）及びジオキソランが挙げられる。
【００２７】
「アリール」という用語は、好ましくは６個の炭素原子を含有する芳香族単環、１０個の炭素原子を含有する芳香族二環系又は１４個の炭素原子を含有する芳香族三環系を指す。例はフェニル、ナフチル又はアントラセニル、好ましくはフェニルである。
【００２８】
「ヘテロアリール」という用語は、好ましくは環中の炭素原子の１つ又は複数が、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される同じ又は異なるヘテロ原子の１つ、２つ、３つ若しくは４つ（五員環の場合）又は１つ、２つ、３つ、４つ若しくは５つ（六員環の場合）によって置き換えられた五員又は六員の芳香環を指す。好ましくは、ヘテロアリール基は１つ、２つ又は３つのヘテロ原子、より好ましくは１つ又は２つのヘテロ原子を含有する。
【００２９】
化合物又は部分が「任意に置換された」と称される場合、それぞれ、同じであっても又は異なっていてもよい１つ又は複数の指定の置換基を含み得る。
【００３０】
「薬学的に許容可能な塩」という用語は本発明の化合物の塩を指す。好適な薬学的に許容可能な塩としては、例えば本発明の化合物の溶液と、塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸又はリン酸等の薬学的に許容可能な酸の溶液とを混合することによって形成され得る酸付加塩が挙げられる。さらに、化合物が酸性部分を有する場合、その好適な薬学的に許容可能な塩としては、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩又はカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩又はマグネシウム塩）、及び好適な有機リガンドと形成される塩（例えば、ハロゲン化物アニオン、水酸化物アニオン、カルボン酸アニオン、硫酸アニオン、リン酸アニオン、硝酸アニオン、アルキルスルホン酸アニオン及びアリールスルホン酸アニオン等の対アニオンを用いて形成されるアンモニウムカチオン、第四級アンモニウムカチオン及びアミンカチオンの塩）を挙げることができる。薬学的に許容可能な塩の実例としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重硫酸塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、臭化物塩、酪酸塩、エデト酸カルシウム塩、樟脳酸塩（camphorate）、カンファースルホン酸塩、カンシル酸塩、炭酸塩、塩化物塩、クエン酸塩、クラブラン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、二塩酸塩、ドデシル硫酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩（estolate）、エシル酸塩（esylate）、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリセロリン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩（glycolylarsanilate）、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩（hexylresorcinate）、ヒドラバミン塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、メチル硫酸塩、ムチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ナプシル酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、ペクチン酸塩（pectinate）、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、ポリガラクツロン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクル酸塩、トシル酸塩、トリエチオジド（triethiodide）、ウンデカン酸塩、吉草酸塩等が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、S. M. Berge et al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 66, pp. 1-19 (1977)を参照されたい）。
【００３１】
本発明の化合物を結晶形態で提供する場合、その構造は溶媒分子を含有し得る。溶媒は通常は薬学的に許容可能な溶媒であり、とりわけ水（水和物）又は有機溶媒が含まれる。可能な溶媒和物の例としては、エタノール付加物及びイソプロパノール付加物（iso-propanolates）が挙げられる。
【００３２】
「コドラッグ」という用語は、共有化学結合を介して結合した２つ以上の治療化合物を指す。詳細な定義は、例えばN. Das et al., European Journal of Pharmaceutical Sciences, 41, 2010, 571-588に見ることができる。
【００３３】
「共結晶」という用語は、純粋形態の場合に全成分が周囲条件下で固体である複合成分結晶を指す。これらの成分は、標的分子又はイオン（すなわち本発明の化合物）及び１種又は複数種の中性分子共結晶形成剤（formers）の化学量論比又は非化学量論比で共存する。詳述は例えば、Ning Shan et al., Drug Discovery Today, 13(9/10), 2008, 440-446及びD. J. Good et al., Cryst. Growth Des., 9(5), 2009, 2252-2264に見ることができる。
【００３４】
本発明の化合物はプロドラッグ、すなわちｉｎ  ｖｉｖｏで活性代謝産物へと代謝される化合物の形態でも提供され得る。好適なプロドラッグは、例えばエステル、エーテル、ホスホン酸塩及び炭酸塩である。考えられるプロドラッグの詳述は、J. Rautio (Ed.), Prodrugs and Targeted Delivery, Wiley-VCH, 2011, ISBN: 978-3-527-32603-7に見つけることができる。好適な基のより詳細な例として特に、米国特許出願公開第２００７／００７２８３１号の段落番号［００８２］〜［０１１８］のプロドラッグ及び保護基の見出しに挙げられる。プロドラッグの好ましい例として、Ｒ５１が−Ｃ（Ｏ）−Ｒ、−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ、−ＰＯ（ＯＲＡ）（ＯＲＢ）又は−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ（Ｒ、ＲＡ及びＲＢは独立してＣ１〜６アルキル、アリール又はヘテロアリールから選択され、アルキル、アリール又はヘテロアリールは任意に例えば、−ＯＨ又はＯ−Ｃ１〜６アルキルによって置換することができる）から選択される化合物が挙げられる。Ｒの例として、Ｃ１〜６アルキル（ＣＨ３、ｔ−ブチル）、フェニル、フェニル−ＯＨ又はフェニル−ＯＣＨ３が挙げられる。
【００３５】
一般式（Ｖ）で表わされる化合物
本発明は、一般式（Ｖ）で表わされる化合物を提供する。
【化４】
2017521423.tif 000006
【００３６】
本発明は、一般式（Ｖ）で表わされる化合物を提供し、式中、以下の定義が適用される。
【００３７】
Ｒ５１は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）及び−Ｃ（Ｏ）−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）から選択され、好ましくはＲ５１は−Ｈ及び−Ｃ１〜６アルキルから選択され、より好ましくはＲ５１は−Ｈである。
【００３８】
Ｒ５２は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（ＣＨ２）ｑ−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）、−（ＣＨ２）ｑ−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（ＣＨ２）ｐ−ＯＲ５５及び−（ＣＨ２）ｐ−ＮＲ５６Ｒ５７から選択され、好ましくはＲ５２は−Ｈ、−（ＣＨ２）ｑ−（３個〜６個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜６アルキル、より好ましくは−Ｈ及び−Ｃ１〜６アルキルから選択される。
【００３９】
Ｒ５３は−Ｌ１−（ＣＲ＊Ｒ＊＊）ｔ−Ｒ５４である。
【００４０】
Ｒ５４は−Ｈ、−ＣＦ３、−ＣＨＦ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＯＣＦ３、−（任意に置換されたＣ３〜２０カルボシクリル）及び−（３個〜２０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、好ましくはＲ５４は−Ｈ、−ＣＦ３、−（任意に置換されたＣ３〜６カルボシクリル）及び−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択される。
【００４１】
Ｒ５５は−Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル及び−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒＨから選択される。
【００４２】
Ｒ５６は、−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、Ｒ５６は好ましくは−Ｈ又は−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、より好ましくは−Ｈ又は−Ｃ１〜６アルキルである。
【００４３】
Ｒ５７は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、好ましくはＲ５７は−Ｈ又は−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）であり、より好ましくは−Ｈ又は−Ｃ１〜６アルキルである。
【００４４】
Ｒ５８は−Ｈ及び−Ｃ１〜６アルキルから選択される。
【００４５】
Ｒ５９は−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、好ましくはＲ５９は、−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）から選択される。より好ましくはＲ５９は、−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜４アルキル）及び−（任意に置換されたＣ３〜６カルボシクリル）から選択される。
【００４６】
Ｌ１はＮＲ５９、Ｎ（Ｒ５９）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５９、Ｎ（Ｒ５９）ＳＯ２、ＳＯ２Ｎ（Ｒ５９）及びＮ（Ｒ５９）ＳＯ２Ｎ（Ｒ５９）から選択され、好ましくはＬ１はＮ（Ｒ５９）ＳＯ２である。
【００４７】
Ｘ５１は、ＮＲ５６、Ｎ（Ｒ５６）Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲ５６、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）、Ｎ（Ｒ５６）ＳＯ２、ＳＯ２Ｎ（Ｒ５６）、Ｎ（Ｒ５６）ＳＯ２Ｎ（Ｒ５６）、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２及び（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）−ＮＲ５６から選択される。
【００４８】
Ｒ＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、好ましくはＲ＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜４アルキル）及び−（任意に置換されたＣ３〜６カルボシクリル）から選択される。
【００４９】
Ｒ＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−（任意に置換されたＣ１〜６アルキル）、−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−Ｃ１〜４アルキル−（任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル）、−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル）から選択され、好ましくはＲ＊＊はＨである。
【００５０】
別の実施形態において、Ｒ＊及びＲ＊＊は任意に置換されたＣ３〜１０カルボシクリル基又は３個〜１０個の環原子を有する任意に置換されたヘテロシクリル基を任意に形成することができる。
【００５１】
Ｒ＊＊＊はそれぞれ独立して−Ｈ、−Ｃ１〜６アルキル基又は１つ又は複数のハロゲン原子により置換される−Ｃ１〜６アルキル基である。
【００５２】
ｐは１〜４である。
【００５３】
ｑは０〜４である。
【００５４】
ｒは１〜３である。
【００５５】
ｓは０〜４である。
【００５６】
ｔは０〜６であり、好ましくはｔは０〜４である。
【００５７】
アルキル基は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＲ５６Ｒ５７、−ＯＨ、−Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、−（Ｃ３〜２０カルボシクリル）及び−（３個〜２０個の環原子を有するヘテロシクリル）から独立して選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができ、好ましい任意の置換基にはハロゲン、−ＣＮ、−ＮＲ５６Ｒ５７、−ＯＨ及び−Ｏ−Ｃ１〜６アルキルがある。
【００５８】
ヘテロシクリル基及び／又はカルボシクリル基は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｓ−Ｘ５１−Ｒ５８、−Ｃ１〜６アルキル、ハロゲンにより任意に置換することができる−Ｃ３〜１０カルボシクリル、ハロゲンにより任意に置換することができる−Ｃ１〜４アルキル−Ｃ３〜１０カルボシクリル、−（ハロゲンにより任意に置換することができる３個〜１０個の環原子を有するヘテロシクリル）及び−Ｃ１〜４アルキル−（ハロゲンにより任意に置換することができる３個〜１０個の環原子を有するヘテロシクリル）から独立して選択される１つ又は複数の置換基で任意に置換することができる。好ましい任意の置換基にはハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ３、−ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ１〜６アルキル及びハロゲンにより任意に置換することができる−Ｃ３〜１０カルボシクリルがある。
【００５９】
上記の定義及び好ましい定義の全ての組合せもまた、本発明者らにより想定されるものである。
【００６０】
本発明者らは、驚いたことに、特異的なリンカーである−（ＣＲ＊＊＊Ｒ＊＊＊）−Ｒ５３を有する本発明の化合物がこのようなリンカーを含まない当該化合物に比べ薬理学的特性が改善されていることがわかった。理論に束縛されることを望まないが、本発明の化合物は、二元金属結合だけでなく、リガンドの固有の結合特性に寄与する疎水性の相互作用も有することが仮定される。二元金属の頭部基と嵩高い疎水性の置換基とを組み合わせているより柔軟なリンカーにより、より高い配座柔軟性が得られ、特定の相互作用に適用し、またより高い配座柔軟性によってエントロピーの寄与（１分子）を失うことなく、より最適な方法において結合ポケットの幾つかのアミノ酸に相互作用するベクターが得られる。
【００６１】
本発明の化合物は、任意に１種又は複数種の薬学的に許容可能な賦形剤及び／又は担体を含み得る医薬組成物の形態で患者に投与することができる。
【００６２】
本発明の化合物は、経口投与、直腸投与、胃内投与、頭蓋内投与及び非経口投与、例えば静脈内投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、皮内投与、皮下投与、並びに類似の投与経路を含む様々な既知の経路で投与することができる。経口投与、鼻腔内投与及び非経口投与が特に好ましい。投与経路に応じて異なる医薬配合物が必要とされ、その一部で本発明の化合物の例えば消化管における分解を防ぐ保護コーティングを薬物配合物に施す必要がある場合がある。
【００６３】
このため、本発明の化合物はシロップ、輸液若しくは注射液、噴霧剤、錠剤、カプセル、カプレット、トローチ剤、リポソーム、坐剤、硬膏、絆創膏、徐放性カプセル（retard capsule）、粉末又は持続放出配合物として配合するのが好ましい。希釈剤は好ましくは水、緩衝液、緩衝塩溶液又は塩溶液であり、担体は好ましくはココアバター及びビテベソール（vitebesole）からなる群から選択される。
【００６４】
本発明の化合物の投与に特に好ましい医薬品形態は注射用途に好適な形態であり、滅菌水溶液又は分散液、及び滅菌注射用溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末が挙げられる。いかなる場合も、最終の溶液又は分散液形態は滅菌され、流体でなくてはならない。通常は、かかる溶液又は分散液としては、例えば水緩衝水溶液、例えば生体適合性緩衝液、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等のポリオール、それらの好適な混合物、界面活性剤又は植物油を含有する溶媒又は分散媒が挙げられる。本発明の化合物は、特に非経口投与用のリポソームへと配合することもできる。リポソームは、遊離薬物と比較して増大した循環血液中での半減期、及び封入された薬物の持続した、より均一な放出という利点をもたらす。
【００６５】
輸液又は注射液の滅菌は、抗菌剤又は抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸又はチメロサールのような防腐剤の添加を含むが、これに限定されない任意の回数の当該技術分野で認められている技法によって行うことができる。さらに、糖又は塩等の等張剤、特に塩化ナトリウムを輸液又は注射液に加えてもよい。
【００６６】
１種又は幾つかの種の本発明の化合物を含有する滅菌注射液の作製は、適切な溶媒中の所要量のそれぞれの化合物と、必要に応じて上に列挙した様々な成分とを組み合わせた後、滅菌することによって行われる。滅菌粉末を得るために、上記の溶液を必要に応じて真空乾燥又は凍結乾燥させる。好ましい本発明の希釈剤は水、生理学的に許容可能な緩衝液、生理学的に許容可能な緩衝塩溶液又は塩溶液である。好ましい担体はココアバター及びビテベソールである。本発明の化合物の様々な医薬形態で使用することができる賦形剤は、以下の非限定的なリストから選ぶことができる：
ａ）ラクトース、マンニトール、結晶ソルビトール、第二リン酸塩、リン酸カルシウム、糖、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、
ｂ）ステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、硬化植物油、ロイシン、グリセリド及びフマル酸ステアリルナトリウム等の潤滑剤、
ｃ）デンプン、クロスカルメロース、メチルセルロースナトリウム、寒天、ベントナイト、アルギン酸、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の崩壊剤。
【００６７】
一実施形態では、配合物は経口投与用であり、以下の成分の１種若しくは複数種又は全種を含む：α化デンプン、タルク、ポビドンＫ３０、クロスカルメロースナトリウム、フマル酸ステアリルナトリウム、ゼラチン、二酸化チタン、ソルビトール、クエン酸一ナトリウム、キサンタンガム、二酸化チタン、香料、安息香酸ナトリウム及びサッカリンナトリウム。
【００６８】
本発明の化合物を鼻腔内投与する場合、好ましい実施形態では、化合物は乾燥粉末吸入剤又はエアゾール噴霧剤の形態で加圧容器、ポンプ、スプレー又はネブライザーから好適な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、１，１，１，２−テトラフルオロエタン（ＨＦＡ  １３４Ａ（商標））若しくは１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパン（ＨＦＡ  ２２７ＥＡ（商標））等のハイドロフルオロアルカン、二酸化炭素又は別の好適なガスを用いて投与することができる。加圧容器、ポンプ、スプレー又はネブライザーは、潤滑剤、例えばトリオレイン酸ソルビタンを更に含有し得る溶媒として例えばエタノールと噴射剤との混合物を用いて本発明の化合物の溶液又は懸濁液を含有することができる。
【００６９】
他の好適な賦形剤は、American Pharmaceutical Association から出版されているHandbook of Pharmaceutical Excipients（引用することにより本明細書の一部をなす）に見ることができる。
【００７０】
障害の重症度及び本発明の化合物の１種を用いて治療可能な特定のタイプ、並びに治療対象のそれぞれの患者、例えば患者の全身健康状態等に応じて、治療効果又は予防効果を発揮するのに異なる用量のそれぞれの化合物が必要とされることを理解されたい。適切な用量の決定は主治医の裁量による。本発明の治療用途又は予防用途における本発明の化合物の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１ｇの活性成分（すなわち本発明の化合物）という範囲内にあると考えられる。しかしながら、本発明の好ましい用途では、本発明の化合物は、それを必要とする被験体に１．０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜２００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与される。本発明の化合物による治療期間は、治療対象の疾患の重症度並びに個々の患者の状態及び特異的な応答に応じて異なる。予防用途又は治療用途の好ましい一実施形態では、疾患の重症度及び／又は保菌者との接触の程度に応じて、１日当たり１０ｍｇ〜２００ｍｇの化合物を成人に経口投与する。
【００７１】
当該技術分野で既知のように、所与の組成物の薬学的有効量も投与経路によって異なる。概して、投与が胃腸管を介する、例えば坐剤、直腸プローブ又は胃内プローブによるものである場合に所要量はより多く、投与経路が非経口経路、例えば静脈内経路である場合に所要量はより少ない。通常、本発明の化合物は、直腸投与又は胃内投与が用いられる場合に５０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜１ｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜５００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲で投与され、非経口投与が用いられる場合に１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲で投与される。鼻腔内投与については、１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜１００ｍｇ／ｋｇ（体重）が想定される。
【００７２】
個体が本発明の化合物を用いて治療可能な疾患を発症するリスクがあることが知られる場合、生物学的に活性な血清又は本発明による医薬組成物の予防的投与が可能であり得る。これらの場合、それぞれの本発明の化合物を上に概説した好ましい用量及び特定の好ましい用量で毎日投与するのが好ましい。１日１回０．１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜１ｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ（体重）〜２００ｍｇ／ｋｇ（体重）が好ましい。この投与は、それぞれのウイルス障害を発症するリスクが減少するまで継続することができる。しかしながら、殆どの場合、本発明の化合物は疾患／障害が診断されてから投与される。これらの場合、初回用量の本発明の化合物を１日１回、２回、３回又は４回投与することが好ましい。
【００７３】
本発明の化合物はインフルエンザ、特にＡ型、Ｂ型、及びＣ型のインフルエンザウイルスによるインフルエンザの治療、改善又は予防に特に有用である。本発明において、「インフルエンザ」という用語は、それらの様々な系統及び分離株を含むＡ型、Ｂ型及びＣ型のインフルエンザウイルス等の任意のインフルエンザウイルスによって引き起こされるインフルエンザを包含し、また、鳥インフルエンザ及び豚インフルエンザと一般的に呼ばれるＡ型インフルエンザウイルス株を含む。治療される被験体は、特に限定されず、鳥類及び哺乳動物（ヒトを含む）等の任意の脊椎動物であってもよい。
【００７４】
理論に拘束されることを望むものではないが、本発明の化合物は、エンドヌクレアーゼ活性、とりわけインフルエンザウイルスのエンドヌクレアーゼ活性を阻害することができると推測される。より具体的には、本発明の化合物は、エンドヌクレアーゼ活性を持ち、インフルエンザウイルスの複製に必須のインフルエンザウイルスＰＡタンパク質のＮ末端部分に直接干渉すると推測される。インフルエンザウイルスの複製は、細胞内の核内で起こる。そのため、ＰＡエンドヌクレアーゼ活性を阻害するように設計された化合物は、細胞膜及び核膜の両方を越えなければならず、その特性は、上記化合物のデザインされた物理化学的特性に強く依存する。
【００７５】
上記式（Ｖ）で表わされる化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのエンドヌクレアーゼ阻害活性の可能性のある測定は、本明細書で開示されるＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）に基づくエンドヌクレアーゼ活性アッセイである。上記化合物は、ＦＲＥＴアッセイにおいて２５μＭで少なくとも約５０％の％減少を呈するのが好ましい。これに関連して、％減少は、非処理のサンプルと比較した、化合物処理によるインフルエンザウイルスエンドヌクレアーゼサブユニット（ＰＡ−Ｎｔｅｒ）によって切断された二重標識化ＲＮＡ基質の蛍光発光の増加として計測される初期反応速度（ｖ０）の％減少である。上記化合物は、このアッセイにおいて好ましくは約５０μＭ未満、より好ましくは約２０μＭ未満のＩＣ５０を呈する。半数阻害濃度（ＩＣ５０）は、生物学的又は生化学的な機能の阻害における化合物の有効性の尺度であり、最大１００μＭ〜少なくとも２ｎＭの範囲の所与の濃度系列での初期反応速度（ｖ０）から算出された。
【００７６】
一般式（Ｖ）で表わされる化合物を、１種又は複数種の他の薬剤と組合せて使用することができる。他の薬剤の種類は特に限定されないが、治療される障害に依存する。他の薬剤は、インフルエンザウイルス感染によって引き起こされたインフルエンザ、及びウイルス性肺炎又は二次細菌性肺炎等のこのウイルス感染と関連する状態の治療、改善又は予防に有用な更なる薬剤、並びに悪寒、発熱、のどの痛み、筋肉痛、激しい頭痛、咳、脱力感及び疲労等の症状を治療する薬剤であることがより好ましい。さらに、一般式（Ｖ）で表わされる化合物を抗炎症剤と組合せて使用することができる。
【００７７】
以下の組合せの薬剤がとりわけ好適であると予想される。
（ｉ）エンドヌクレアーゼ阻害剤とキャップ結合阻害剤（とりわけインフルエンザを標的とする）との組合せ。エンドヌクレアーゼ阻害剤は特に限定されず、任意のエンドヌクレアーゼ阻害剤、とりわけ、任意のウイルスエンドヌクレアーゼ阻害剤であってもよい。好ましいエンドヌクレアーゼ阻害剤は、米国特許出願公開第２０１３／０１０２６００号、同第２０１３／０３１７０２２号、同第２０１３／０３１７０２１号及び同第２０１４／００３８９９０号に規定のものである。これらの出願の完全な開示は、引用することにより本明細書の一部をなす。とりわけ、これらの米国出願による化合物の一般式、様々な置換基の好ましい実施形態、並びに上記化合物の医学的有用性及び利点に関する全ての記載が引用することにより本明細書の一部をなす。
【００７８】
より好ましいエンドヌクレアーゼ阻害剤は、それらの完全な開示が引用することにより本明細書の一部をなす、米国特許出願第６１／７５０，０２３号（２０１３年１月８日に出願）に規定の一般式（ＩＩ）で表わされる化合物、及び米国特許出願第６１／７５０，０３２号（２０１３年１月８日に出願）に規定の一般式（Ｖ）で表わされる化合物である。特に、これらの化合物の一般式、様々な置換基の好ましい実施形態、また上記化合物の医学的有用性及び利点に関する全ての記載が引用することにより本明細書の一部をなす。これらの化合物は、任意に、薬学的に許容可能な塩、溶媒和物、多形、コドラッグ、共結晶、プロドラッグ、互変異性体、ラセミ体、エナンチオマー、若しくはジアステレオマー、又はそれらの混合物の形態であってもよい。
【００７９】
キャップ結合阻害剤は特に限定されず、任意のキャップ結合阻害剤、特に任意のウイルスキャップ結合阻害剤であり得る。好ましいキャップ結合阻害剤は、米国特許出願公開第２０１３／０１０２６０１号に規定の一般式（ＩＩ）で表わされるもの及び／又は国際公開第２０１１／０００５６６号（その完全な開示が引用することにより本明細書の一部をなす）に開示される化合物である。特に、米国特許出願公開第２０１３／０１０２６０１号又は国際公開第２０１１／０００５６６号による化合物の一般式、様々な置換基の好ましい実施形態、並びに化合物の医学的有用性及び利点に関する全ての記載が引用することにより本明細書の一部をなす。
【００８０】
認可されたインフルエンザ抗ウイルス剤（Ｍ２イオンチャネル阻害剤（アダマンタン）及びノイラミニダーゼ阻害剤（例えばオセルタミビル））の両方のクラスに対する幅広い耐性が、流行性インフルエンザ株及び新たに出現する季節性インフルエンザ株の両方で生じており、これらの薬物の治療法における効用が限定されている。Ｍ２イオンチャネル阻害剤については、ウイルスの耐性頻度は２００３年から増え続けており、季節性インフルエンザＡ／Ｈ３Ｎ２については、アダマンタンは現在無効であるとみなされている。ほぼ全ての２００９  Ｈ１Ｎ１株及び季節性Ｈ３Ｎ２株がアダマンタン（リマンタジン及びアマンタジン）に対して耐性を有し、最も広く処方されているノイラミニダーゼ阻害剤（ＮＡＩ）であるオセルタミビルについては、ＷＨＯは、２００７年／２００８年のインフルエンザ流行期並びに南半球においては２００８年の第２四半期及び第３四半期に端を発するインフルエンザＡ／Ｈ１Ｎ１の耐性の重大な出現について報告している。更により深刻な数が２００８年の第４四半期（北半球）に公表されており、試験した全分離株の９５％がオセルタミビル感受性を示さなかった。現在、大半の国の政府がインフルエンザ大流行に対する対策計画の一環としてＮＡＩを備蓄していることを考えると、新たな有効な薬物に対する需要が著しく増大していることが明らかである。より有効な療法の必要性に取り組むために、作用機構の異なる抗ウイルス薬の二剤併用又は更には三剤併用を用いた予備研究が行われている。アダマンタン及びノイラミニダーゼ阻害剤の組合せがｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏで分析され、極めて相乗的に作用することが見出されている。しかしながら、どちらのタイプの抗ウイルス剤についても耐性ウイルスが相当急速に出現し、この問題がこれらの確立された抗ウイルス薬を組み合わせることによっては対処できないことが知られている。
【００８１】
インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写活性を標的とする新規の薬物である。ウイルスポリメラーゼのキャップ結合部位及びエンドヌクレアーゼ活性部位に対する選択的阻害剤は、ウイルス複製サイクルを停止させることによってウイルス感染を大幅に軽減する。これら２つの標的はポリメラーゼ複合体の異なるサブユニット内に位置するため、独自の薬物標的である。どちらの機能もウイルス転写に必須のいわゆる「キャップスナッチング」機構に必要とされることから、両方の機能の同時阻害が極めて相乗的に作用することが期待される。この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。
【００８２】
いずれの活性部位も全てのＡ型インフルエンザ株（例えば、鳥類及びヒト）の間で、またＢ型インフルエンザウイルスの間でも高度に保存され、したがって、この高度な配列保存が、これらの標的が急速な耐性ウイルスの発生を引き起こす可能性が低いという知見を支持する。さらに、宿主タンパク質との密接な相互作用は、これらのウイルスタンパク質に突然変異を起こしにくくする。このため、エンドヌクレアーゼ阻害剤及びキャップ結合阻害剤は単独及び組合せで、ウイルス株に関わらず、季節性インフルエンザ及び流行性インフルエンザの両方に対抗するのに理想的な薬物候補である。
【００８３】
エンドヌクレアーゼ阻害剤とキャップ結合阻害剤との組合せ、又はエンドヌクレアーゼ活性部位及びキャップ結合ドメインの両方を標的とする二重特異性ポリメラーゼ阻害剤は、アダマンタン及びノイラミニダーゼ阻害剤に対して耐性を有するウイルス株に有効であり、さらに耐性株が出現しにくい点と、広範なウイルス株に対する活性という利点を組み合わせたものであり得る。
【００８４】
（ｉｉ）二剤併用療法又は多剤併用療法としての（好ましくはインフルエンザウイルス）ポリメラーゼ阻害剤との組合せに焦点を合わせた種々の抗ウイルス標的の阻害剤（特にインフルエンザウイルスを標的とする）の組合せ。インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルスポリメラーゼに対する選択的阻害剤は、ウイルス複製サイクルを停止させることによってウイルス感染を大幅に軽減する。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の抗ウイルス標的の阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。
【００８５】
この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。
【００８６】
通常は、ポリメラーゼ阻害剤の第１の群（例えばキャップ結合阻害剤及びエンドヌクレアーゼ阻害剤）から選択される少なくとも１種の化合物と、ポリメラーゼ阻害剤の第２の群から選択される少なくとも１種の化合物とを組み合わせる。
【００８７】
このタイプの併用療法に使用することができるポリメラーゼ阻害剤の第１の群としては、一般式（Ｖ）で表わされる化合物が挙げられるが、これに限定されない。
【００８８】
このタイプの併用療法に使用することができるポリメラーゼ阻害剤の第２の群としては、米国特許出願公開第２０１３／０１０２６００号に規定の一般式（Ｉ）で表わされる化合物、米国特許出願公開第２０１３／０１０２６０１号に規定の一般式（ＩＩ）で表わされる化合物、国際公開第２０１１／０００５６６号、国際公開第２０１０／１１０２３１号、国際公開第２０１０／１１０４０９号、国際公開第２００６／０３０８０７号又は米国特許第５，４７５，１０９号に開示の化合物、並びにフルチミド及び類似体、ファビピラビル及び類似体、没食子酸エピガロカテキン及び類似体、並びにリバビリン等のヌクレオシド類似体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８９】
（ｉｉｉ）ポリメラーゼ阻害剤とノイラミニダーゼ阻害剤との組合せ
インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の細胞外抗ウイルス標的、とりわけ（例えばウイルス）ノイラミニダーゼの阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。
【００９０】
この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。
【００９１】
通常は、上述のポリメラーゼ阻害剤の第１の群から選択される少なくとも１種の化合物と、少なくとも１種のノイラミニダーゼ阻害剤とを組み合わせる。
【００９２】
ノイラミニダーゼ阻害剤（特にインフルエンザノイラミニダーゼ阻害剤）は特に限定されない。例としては、ザナミビル、オセルタミビル、ペラミビル、ＫＤＮ、ＤＡＮＡ、ＦＡＮＡ及びシクロペンタン誘導体が挙げられる。
【００９３】
（ｉｖ）ポリメラーゼ阻害剤とＭ２チャネル阻害剤との組合せ
インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の細胞外抗ウイルス標的及び細胞質抗ウイルス標的、とりわけウイルスＭ２イオンチャネルの阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。
【００９４】
この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。
【００９５】
通常は、上述のポリメラーゼ阻害剤の第１の群から選択される少なくとも１種の化合物と、少なくとも１種のＭ２チャネル阻害剤とを組み合わせる。
【００９６】
Ｍ２チャネル阻害剤（特にインフルエンザＭ２チャネル阻害剤）は特に限定されない。例としては、アマンタジン及びリマンタジンが挙げられる。
【００９７】
（ｖ）ポリメラーゼ阻害剤とαグルコシダーゼ阻害剤との組合せ
インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の宿主細胞標的、とりわけαグルコシダーゼの阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。
【００９８】
この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、ウイルスの複製と相互作用する細胞標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。
【００９９】
通常は、上述のポリメラーゼ阻害剤の第１の群から選択される少なくとも１種の化合物と、少なくとも１種のαグルコシダーゼ阻害剤とを組み合わせる。
【０１００】
αグルコシダーゼ阻害剤は特に限定されない。例としては、Chang et al., Antiviral Research 2011, 89, 26-34に記載の化合物が挙げられる。
【０１０１】
（ｖｉ）ポリメラーゼ阻害剤と他のインフルエンザ標的のリガンドとの組合せ
インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と種々の細胞外、細胞質又は核の抗ウイルス標的の阻害剤との組合せは、極めて相乗的に作用することが期待される。これは、これらの異なるタイプの抗ウイルス薬が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すということに基づく。
【０１０２】
この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。
【０１０３】
通常は、上述のポリメラーゼ阻害剤の第１の群から選択される少なくとも１種の化合物と、少なくとも１種の別のインフルエンザ標的のリガンドとを組み合わせる。
【０１０４】
別のインフルエンザ標的のリガンドは特に限定されない。例としては、シアリダーゼ融合タンパク質に作用する化合物（例えばＦｌｕｄａｓｅ（ＤＡＳ１８１）、ｓｉＲＮＡ及びホスホロチオエートオリゴヌクレオチド）、シグナル伝達阻害剤（例えば、ＥｒｂＢチロシンキナーゼ、Ａｂｌキナーゼファミリー、ＭＡＰキナーゼ、ＥＲＫシグナリングのＰＫＣａ媒介活性化）、及びインターフェロン（誘導因子）が挙げられる。
【０１０５】
（ｖｉｉ）（好ましくはインフルエンザ）ポリメラーゼ阻害剤と、疾患の症状を最小限に抑えるアジュバントとして使用される化合物（抗生物質、ＣＯＸ阻害剤（例えば、ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２阻害剤、選択的ＣＯＸ−２阻害剤）のような抗炎症剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、ＥＰリガンド（特にＥＰ４リガンド）、ブラジキニンリガンド及び／又はカンナビノイドリガンド（例えばＣＢ２アゴニスト））との組合せ。インフルエンザウイルスポリメラーゼ阻害剤は、ポリメラーゼの転写及び複製活性を標的とする新規の薬物である。ウイルス細胞内標的に特異的に対処するポリメラーゼ阻害剤と、疾患の症状を最小限に抑えるアジュバントとして使用される化合物との組合せは、原因及び兆候となるウイルス感染の病理学的帰結に対処する。これらの異なるタイプの薬物が、組合せの抗ウイルス効果に有利かつ相乗的に作用する異なる薬物動態特性を要求する完全に異なる作用機構を示すため、この組合せは相乗的に作用することが期待される。
【０１０６】
この高効率の複合薬はより低い物質濃度、したがって向上した用量応答関係及びより良好な副作用プロファイルをもたらし得る。さらに、ポリメラーゼ阻害剤について上記された利点は、種々の抗ウイルス標的の阻害剤とポリメラーゼ阻害剤との組合せにも当てはまる。
【０１０７】
本発明の様々な変更形態及び変形形態が、本発明の範囲を逸脱することなく当業者に明らかである。本発明は具体的な好ましい実施形態に関連して記載されるが、特許請求される本発明は、かかる具体的な実施形態に過度に限定されるものではないことを理解されたい。実際に、関連分野の当業者に明らかな記載の発明を実施する上での形態の様々な変更形態が、本発明に包含されることが意図される。
【０１０８】
以下の実施例は本発明の単なる例示であり、添付の特許請求の範囲によって示される本発明の範囲を限定すると何ら解釈されるものではない。
【実施例】
【０１０９】
ＦＲＥＴエンドヌクレアーゼ活性アッセイ
インフルエンザエンドヌクレアーゼ活性を有するＡ型インフルエンザウイルス（ＩＡＶ）ＰＡ−Ｎｔｅｒ断片（アミノ酸１〜２０９）を、非特許文献９に記載のように生成及び精製した。タンパク質を、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ及び１０ｍＭ  β−メルカプトエタノールを含有する緩衝液に溶解し、アリコートを−２０℃で保管した。
【０１１０】
５’−ＦＡＭフルオロフォア及び３’−ＢＨＱ１クエンチャーを有する２０塩基の二重標識ＲＮＡオリゴを、ＰＡ−Ｎｔｅｒのエンドヌクレアーゼ活性によって切断される基質として使用した。ＲＮＡ基質の切断はフルオロフォアをクエンチャーから遊離させ、蛍光シグナルの増大をもたらす。
【０１１１】
全てのアッセイ成分を、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び１０ｍＭ  β−メルカプトエタノールを含有するアッセイ緩衝液で希釈した。ＰＡ−Ｎｔｅｒの最終濃度は０．５μＭであり、ＲＮＡ基質は１．６μＭであった。試験化合物をＤＭＳＯに溶解し、概して２つの濃度又は０．５％のプレートウェルの最終ＤＭＳＯ濃度をもたらす濃度系列で試験した。化合物がこれらの濃度で溶解しなかった場合、それらを最も溶解度が高い濃度にて試験した。
【０１１２】
５μｌの各化合物の希釈物を、白色の３８４ウェルマイクロタイタープレート（PerkinElmer）のウェルに８連で準備した。ＰＡ−Ｎｔｅｒ希釈物を添加した後、プレートを密閉し、室温で３０分間インキュベートし、続いてアッセイ緩衝液で希釈した１．６μＭ  ＲＮＡ基質を添加した。続いて、切断されたＲＮＡの蛍光シグナルの増大を、マイクロプレートリーダー（Ｓｙｎｅｒｇｙ  ＨＴ、Biotek）において励起波長４８５ｎｍ及び発光波長５３５ｎｍで測定した。反応速度読み取り間隔は感度３５で３５秒であった。２０分間にわたる蛍光シグナルデータを用いて、基質切断の初期速度（ｖ０）を算出した。最終の読み取りは非処理サンプルと比較した化合物で処理したサンプルのｖ０の減少％であった。半数阻害濃度（ＩＣ５０）は、生物学的機能又は生化学的機能の阻害における化合物の有効性の尺度であり、最大１００μＭ〜少なくとも２ｎＭの範囲の所与の濃度系列での初期反応速度（ｖ０）から算出された。
【０１１３】
細胞変性効果（ＣＰＥ）アッセイ
Ａ型のインフルエンザウイルス（ＩＡＶ）を米国培養細胞系統保存機関（American Tissue Culture Collection）から得た（Ａ／Ａｉｃｈｉ／２／６８（Ｈ３Ｎ２）；ＶＲ−５４７）。ウイルスストックはメイディン−ダービーイヌ腎臓（ＭＤＣＫ；ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−３４）細胞上でウイルスを増殖させることによって作製され、ウイルスストックの感染力価は、Reed, L. J., and H. Muench. 1938, Am. J. Hyg. 27:493-497に記載のように５０％組織培養感染量（ＴＣＩＤ５０）分析により求められた。
【０１１４】
ＭＤＣＫ細胞を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭのＬ−グルタミン及び１％抗生物質（全てPAA製）を含有するＤＭＥＭ／ハムＦ−１２（１：１）培地を用いた９６ウェルプレートに２×１０４細胞／ウェルにて播種した。感染まで細胞を３７℃、５．０％ＣＯ２にて５時間インキュベーションすると、ウェルの底部に約８０％コンフルエントな単層が形成された。各試験化合物をＤＭＳＯに溶解させ、概ね２５μＭ及び２５０μＭにて試験した。化合物がこれらの濃度で溶解しなかった場合、それらを最も溶解度が高い濃度にて試験した。化合物を感染培地（５μｇ／ｍｌのトリプシン及び１％の抗生物質を含有するＤＭＥＭ／ハムＦ−１２（１：１））に入れて希釈し、プレートウェルの最終ＤＭＳＯ濃度を１％にした。ウイルスストックを感染培地（５μｇ／ｍｌのトリプシン、１％のＤＭＳＯ及び１％の抗生物質を含有するＤＭＥＭ／ハムＦ−１２（１：１））に入れて希釈し、理論的感染多重度（ＭＯＩ）を０．０５にした。
【０１１５】
培養培地を除去し、ＰＢＳを用いて洗浄工程を１回行った後、ウイルス及び化合物を合わせて細胞に添加した。細胞毒性を求めるために使用されるウェル（すなわち、ウイルス感染の非存在下）には、ウイルス懸濁液を添加しなかった。代わりに、感染培地を添加した。各処理を２回繰返し行った。３７℃、５％ＣＯ２にて４８時間インキュベーションを行った後、各ウェルの明らかな細胞毒性、沈殿物の形成又は他の顕著な異常を顕微鏡により観察した。次いで、細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光細胞生存率アッセイ（Promega）を用いて求めた。上清を注意深く除去し、６５μｌの再構築した試薬を各ウェルに添加し、室温にて１５分間静かにインキュベーションした。その後、６０μｌの溶液を不透明なプレートに移し、発光（ＲＬＵ）をＳｙｎｅｒｇｙ  ＨＴプレートリーダー（Biotek）を用いて測定した。
【０１１６】
非感染処理細胞と非感染非処理細胞の相対的な細胞生存率の値を用いて、化合物の細胞毒性を評価した。試験濃度での相対的生存率が８０％より低い物質を細胞毒性があると見なし、より低い濃度で再試験を行った。
【０１１７】
化合物を用いて処理したウイルス介在性細胞変性効果（ＣＰＥ）の減少を以下のように算出した：感染非処理サンプルの反応（ＲＬＵ）を感染処理サンプルの反応（ＲＬＵ）から減算した後、対応する非感染サンプルの生存率に正規化し、％ＣＰＥ減少を得た。半数阻害濃度（ＩＣ５０）は、生物学的又は生化学的な機能の阻害における化合物の有効性の尺度であり、最大１００μＭ〜少なくとも１００ｎＭの範囲の一連の所与の濃度系列でのＲＬＵ反応から算出された。
【０１１８】
ＩＣ５０値の決定−転写アッセイ（ＴＡアッセイ）
ＴＡアッセイの原理
阻害剤の活性を分析するために、放射活性のある標識ヌクレオチドを使用せず、無細胞環境で全ＲＮＰ複合体（whole RNP complex）を用いた転写アッセイ（ＴＡ）を使用した。
【０１１９】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏで合成されたキャップされたｍＲＮＡオリゴは、ウイルスＲＮＰのキャップスナッチングの基質と同じく、ウイルスｍＲＮＡ合成のプライマーとして作用し、新たに合成されたウイルスｍＲＮＡはＱｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）２．０技術を用いて検出される。Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）（ＱＧ）法は、コーティングした９６ウェルプレートに結合させたＲＮＡハイブリダイゼーションの後に、分岐ＤＮＡ（ｂＤＮＡ）のシグナル増幅を行うことをベースとする。目的の遺伝子に特異的なハイブリダイゼーションには異なる３種のプローブが関与する。キャプチャー伸長剤（ＣＥ）は特定の遺伝子領域にハイブリダイズし、同時にそのＲＮＡをＱＧキャプチャープレートに固定化する。標識伸長剤（ＬＥ）も目的の遺伝子に特異的にハイブリダイズし、プレ増幅剤（preAmplifier）（ＰｒｅＡｍｐ）、増幅剤（Ａｍｐ）及びアルカリホスファターゼ標識プローブの連続ハイブリダイゼーションを介して構築されるシグナル増幅のツリー構造（tree）のための配列を得られる。次いでシグナルを、化学発光基質を添加し、マイクロプレートルミノメーターを用いて読み取ることにより検出する。３つ目のプローブは、非特異的な相互作用をブロックする（ブロッキングプローブ；ＢＰ）。一般に、ＩＡＶ検出用のプローブセットは、翻訳に対して、ｃＲＮＡ又はｍＲＮＡを区別することなくマイナス鎖ゲノムｖＲＮＡ又は合成されたプラス鎖ＲＮＡ（＋ＲＮＡ）のいずれかを検出するように設計される。ＴＡアッセイにおいて、プローブセット及びＱＧ２．０プロトコルを適合させ、無細胞環境における抗ウイルス化合物の試験に適した生化学アッセイ用に改変した。
【０１２０】
材料及び方法
化合物
全ての化合物をＤＭＳＯに溶解させ、４℃で保存した。他に明記しない限り、他の試薬は全てSigma-Aldrichから得られた。
【０１２１】
ＲＮＡ基質の作製
使用した基質のＲＮＡは、Ｔ７高収率ＲＮＡ合成キット（New England BioLabs Inc.）によって合成され、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで転写したＲＮＡから得られたものであるが、製造業者のプロトコルにインキュベーション時間を１６時間延長させたものに従って作製した。ＲＮＡ産物を、ｍｉＲＮｅａｓｙミニキット（Qiagen）を用いてゲル精製した。ＲＮＡをＳｃｒｉｐｔＣａｐ  ｍ７Ｇキャップ化システム（CellScript、ウィスコンシン州マディソン）を用いて酵素によりキャップした。得られたキャップされたＲＮＡオリゴヌクレオチド（５’−ｍ７ＧｐｐｐＧ−ＧＧＧ  ＡＡＵ  ＡＣＵ  ＣＡＡ  ＧＣＵ  ＡＵＧ  ＣＡＵ  ＣＧＣ  ＡＵＵ  ＡＧＧ  ＣＡＣ  ＧＵＣ  ＧＡＡ  ＧＵＡ−３‘；配列番号１）は、インフルエンザウイルスポリメラーゼ用のプライマーとして作用した。
【０１２２】
ＲＮＰの作製
全ての実験は、孵化鶏卵において増殖させたか、Charles River Laboratoriesから入手し、精製濃縮させたかのいずれかによるＩＡＶ株Ａ／ＰＲ／８／３４に対して行われた。卵内で増殖させたウイルスを１００ｍＭのＮａＣｌを含有する２ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）緩衝液において４％ｗ／ｖのＰＥＧ８０００を用いてＰＥＧ沈殿させ（４℃、４５分）、４℃、３６００ｇにて４５分間遠心分離させた。ペレットを１００ｍＭのＮａＣｌ及び６％ｗ／ｖのスクロースを含有する１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）緩衝液に懸濁させた後、３０％ｗ／ｖのスクロースクッション法により精製した（１０９０００ｇ、１２０分、４℃）。
【０１２３】
ＲＮＰ精製は、これまでに公開されたものに一部変更を加えて行われた（Klumpp et al. 2001. Influenza virus endoribonuclease, p. 451-466, 342 ed.）。ウイルス凍結乾燥物を１×溶解緩衝液（１％ｗ／ｖのトリトンＸ−１００、１ｍｇ／ｍＬのリゾレシチン、２．５ｍＭのＭｇＣｌ２、１００ｍＭのＫＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、２．５％ｖ／ｖのグリセロール、２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２０Ｕ／ｍＬのＲＮａｓｅ阻害剤）に溶解させ、最終ウイルスタンパク質濃度を２ｍｇ／ｍＬにした後、３０℃にて６０分間インキュベーションした。得られた３．３ｍＬの溶解物をグリセロール勾配（２ｍＬ  ７０％ｖ／ｖ、１．５ｍＬ  ５０％ｖ／ｖ、０．７５ｍＬ  ４０％ｖ／ｖ及び３．６ｍＬ  ３３％ｖ／ｖ−２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＤＴＴ、５ｍＭの２−メルカプトエタノールで緩衝）に充填した。勾配物をＳｏｒｖａｌｌ  Ｕｌｔｒａ遠心分離機のＡＨ６４１ローターにおいて４℃、２４００００ｇにて６時間回転させた。画分（０．５ｍＬ）を勾配物の上部から回収した。ＲＮＰ粒子を含有する画分をプールし、１０ｋＤのＶｉｖａＳｐｉｎ２カラムを用いて更に濃縮し、−２０℃で保存した。ＲＮＰ濃度はＯＤ２６０ｎｍの１．０＝６０ｍｇ／ｍＬのＲＮＰを変換因子として用いたＵＶ分光法（Klumpp et al. 2001. Influenza virus endoribonuclease, p. 451-466, 342 ed.）により求められた。
【０１２４】
ＲＮＡ分析及び転写アッセイ（ＴＡアッセイ）
全ての種類のウイルスＲＮＡを、マイナス鎖ゲノムｖＲＮＡ（−ＲＮＡ；品番ＳＦ−１０３１８）、新たに合成したプラス鎖ＲＮＡ（＋ＲＮＡ；品番ＳＦ−１００４９）又は新たに合成したウイルスｍＲＮＡ（ＴＡアッセイ；ＳＦ−１０５４２）のいずれかを検出するよう設計した特異的プローブセットを用いて、Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）法の間の全てのインキュベーション工程を４９℃で行った以外、製造業者の説明書に従いＱｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）によって分析した。
【０１２５】
標準的な反応として、阻害剤を連続希釈しながら、８０ｐＭのＲＮＰを３０℃にて２時間インキュベーションし、反応緩衝液（５５ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、２０ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２％ｖ／ｖのトリトンＸ−１００、０．２５Ｕ／μＬのＲＮａｓｅＯｕｔ、１２．５ｍＭのＮａＣｌ、１．２５ｍＭのＤＴＴ、１．２５ｍＭの２−メルカプトエタノール、１２．５％ｖ／ｖのグリセロール）の最終ＤＭＳＯ濃度を１％ｖ／ｖにした。次いで、２ｎＭのキャップされたＲＮＡ基質を添加後、３０℃にて２時間インキュベーションした。９５℃にて５分間インキュベーションすることで反応を停止させた。
【０１２６】
合成したｍＲＮＡの検出に、Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）２．０（Panomics. 2007.  Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ２．０試薬システム。使用者マニュアル）を特定のプローブセットとともに用いた。プローブセットはキャプチャー伸長剤（ＣＥ）、標識伸長剤（ＬＥ）及びブロッキングプローブ（ＢＰ）からなり、Affymetrix/Panomicsにより作製され、３つ全てのミックスとして供給された。プローブ配列を配列番号５〜配列番号２０で表し、図１にも示した。
【０１２７】
反応値（相対的発光単位）を、ＧｒａｐｈＰａｄプリズムを用いて分析し、４パラメーターロジスティック方程式を用いてＩＣ５０値及び９５％の信頼区間を求めた。曲線を当てはめるため、陽性及び陰性対照を含めて最大値及び最小値を規定した。
【０１２８】
デノボ合成されたウイルスｍＲＮＡは、精製されたＲＮＰと既知の配列のキャップされたＲＮＡ基質とをインキュベーションすることによって作製された。
【０１２９】
Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ（商標）プローブセットの「ＴＡアッセイ」は核タンパク質（ＮＰ）をコードする新たに合成されたウイルスｍＲＮＡを検出し、標識伸長剤（ＬＥ１及びＬＥ２）は４４−ｍｅｒ  ＲＮＡ基質から切断された、スナッチングされたキャップ配列５’−ｃａｐ−ＧＧＧＧＧＡＡＵＡＣＵＣＡＡＧ−３’（配列番号２）及びポリＡ配列にそれぞれ特異的にハイブリダイズする。キャプチャー伸長剤（ＣＥ１〜９）はＩＡＶ  ＮＰ遺伝子のコード領域内の領域に特異的にハイブリダイズする。プローブセットの「＋ＲＮＡ」は遺伝子内の１０を超える様々な領域に特異的に結合することによってＮＰをコードするプラス鎖ウイルスＲＮＡを検出する。このプローブセットのＬＥ及びＣＥはヌクレオチド１〜１５４０の領域（ＧｅｎＢａｎｋ  ＣＹ１４７５０５）にハイブリダイズし、ウイルスｍＲＮＡとウイルスｃＲＮＡとを識別しない。３つ目のプローブセット「−ＲＮＡ」は非構造的タンパク質（ＮＳ）をコードするマイナス鎖ＲＮＡ（ｎｓＲＮＡ）に特異的にハイブリダイズする。
【０１３０】
本発明の化合物のＴＡアッセイの結果
上記のＴＡアッセイを使用し、本発明の化合物のＩＣ５０値を求めた。
【０１３１】
【表１】
2017521423.tif 000007
2017521423.tif 000008
2017521423.tif 000009
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2017521423.tif 000012
2017521423.tif 000013
【０１３２】
【表２】
2017521423.tif 000014
2017521423.tif 000015
【０１３３】
合成例
特定の合成方法が示されない限り、以下の一般的なスキームに従い化合物を作製した。
【０１３４】
スキーム：
【化５】
2017521423.tif 000016
【０１３５】
一般的手法：
Ｅ−１−０１２の合成：
２−アミノエタノール（６．１ｇ、０．１ｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液にジ−ｔｅｒｔ−ブチル重炭酸塩（２１．８ｇ、０．１ｍｏｌ）をゆっくり添加した。得られた混合物を室温にて一晩撹拌した。有機溶媒を減圧下において除去し、所望の粗生成物Ｅ−１−０１２（１６．０ｇ、９９％）を無色油として得て、これを更に精製することなく次の工程に使用した。
【０１３６】
Ｅ−１−０１３の合成：
ジクロロメタン（１８０ｍＬ）中Ｅ−１−０１２（１６．０ｇ、０．１ｍｏｌ）とＥｔ３Ｎ（２０．２ｇ、０．２ｍｏｌ）との混合物にＭｓＣｌ（１２．０ｇ、０．１０５ｍｏｌ）を０℃にて添加した。溶液を室温に加温し、３時間撹拌した。得られた溶液を水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２を用いて抽出した。有機相をＨＣｌ水溶液（１ｍｏｌ／Ｌ）及びブラインを用いて洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥後、溶媒を真空下において除去し、Ｅ−１−０１３（２１．０ｇ、８８％）を無色油として得た。
【０１３７】
Ｅ−１−０１４の合成：
Ｅ−１−０１３（２０ｇ、８７．５ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（３５０ｍＬ）溶液にＫ２ＣＯ３（３６ｇ、２６２ｍｍｏｌ）及びプロパン−２−アミン（１５．５ｇ、２６２ｍｍｏｌ）を連続して添加した。得られた混合物を８０℃にて１２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮し、Ｅ−１−０１４（１５ｇ、８５％）を無色油として得た。
【０１３８】
Ｅ−１−００１の合成：
ＳＭ−１（１４２ｇ、１ｍｏｌ）のジクロロメタン（１０００ｍＬ）溶液に塩化チオニル（２３６ｇ、２ｍｏｌ）を滴加した。溶液を室温にて６時間撹拌した。混合物を濾過し、残渣を、石油エーテルを用いて洗浄し、Ｅ−１−００１（１４４ｇ、９０％）を白色固体として得た。
【０１３９】
Ｅ−１−００２の合成：
Ｅ−１−００１（１６．０ｇ、０．１０ｍｏｌ）のＤＭＦ溶液にＮａＮ３（７．２ｇ、０．１１ｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて６時間撹拌した後、Ｈ２Ｏを用いて希釈した。得られた溶液を濾過した。残渣をＨ２Ｏ及びＰＥを用いて洗浄し、Ｅ−１−００２（１３．３ｇ、８０％）を明黄色固体として得た。
【０１４０】
Ｅ−１−００４の合成：
Ｅ−１−００２（１６．０ｇ、０．０９５ｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）溶液にＮａＯＨ（４．２ｇ、０．１００ｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１２ｍＬ）溶液を０℃にて添加した。混合物を０℃にて１５分間撹拌し、３５％ホルムアルデヒド溶液（２０ｍＬ）を添加した。その後、混合物を室温に加温し、一晩撹拌した。得られた溶液を、３７％ＨＣｌ溶液を用いてｐＨ＝１に調整した。有機溶媒を減圧下において除去し、残渣を、ＥｔＯＡｃを用いて抽出した。有機相を濃縮し、Ｅ−１−００３の粗生成物を得て、更に精製しなかった。上記の粗製Ｅ−１−００３のメタノール（８０ｍＬ）溶液にＮａＯＨ（３．８ｇ、０．０９５ｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１２ｍＬ）溶液及びＢｎＢｒ（１０．４ｇ、０．０９５ｍｏｌ）を連続して添加した。得られた混合物を６０℃にて４時間撹拌した。有機溶媒を減圧下において除去し、残渣を、ＥｔＯＡｃを用いて抽出した。有機層を、ブラインを用いて洗浄し、無水ＮａＳＯ４上にて乾燥させ、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝６：１）により精製し、Ｅ−１−００４（８．２ｇ、３０％）を黄色固体として得た。
【０１４１】
Ｅ−１−００５の合成：
Ｅ−１−００４（５．７４ｇ、２０ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液にＩＢＸ（１０．００ｇ、３６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて一晩撹拌した後、Ｈ２Ｏを用いて希釈した。得られた溶液を濾過し、濾液を、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機相を、ブラインを用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上にて乾燥させ、濃縮し、Ｅ−１−００５（５．２４ｇ、９２％）を無色油として得た。
【０１４２】
Ｅ−１−００６の合成：
Ｅ−１−００５（３．００ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ−ブチルアルコール（２０ｍＬ）溶液に２−メチルブタ−２−エン（４ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）中ＮａＨ２ＰＯ４（２．５２ｇ、２１．５２ｍｍｏｌ）を連続して添加した。次いでＮａＣｌＯ２（１．４３ｇ、１５．７８ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（６ｍＬ）溶液をゆっくり添加した。出発材料を使い切った後に、有機溶媒を減圧下において除去した。残渣を、ＨＣｌ（３７％）を用いてｐＨ＝２に調整した。得られた溶液を濾過し、残渣を、Ｈ２Ｏを用いて洗浄し、Ｅ−１−００６（３．００ｇ、９４％）を白色固体として得た。
【０１４３】
Ｅ−１−００７の合成：
Ｅ−１−００６（３．００ｇ、１０ｍｍｏｌ）、Ｅ−１−０１４（２．４２ｇ、１２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１．５０ｇ、１５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液に、ＨＡＴＵ（４．５６ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて３時間撹拌した後、Ｈ２Ｏを用いて希釈した。得られた溶液を、ＥｔＯＡｃを用いて抽出した。有機相を、ブラインを用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上にて乾燥させ、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製し、Ｅ−１−００７（４．００ｇ、８２％）を淡黄色固体として得た。
【０１４４】
Ｅ−１−００９の合成：
Ｅ−１−００７（４．００ｇ、８．２４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）溶液にＣＦ３ＣＯＯＨ（６ｍＬ）を添加した。得られた混合物を室温にて一晩撹拌した。有機溶媒を減圧下において除去した。残渣をメタノールに溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を用いてｐＨ＝８に調整した。混合物を室温にて更に６時間撹拌した。有機溶媒を減圧下において除去し、残渣を、ジクロロメタンを用いて抽出した。有機相を、ブラインを用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上にて乾燥させ、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３０：１）により精製し、Ｅ−１−００９（１．８９ｇ、６３％）を淡黄色固体として得た。
【０１４５】
Ｅ−１−０１０の合成
Ｅ−１−００９（１．８９ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液にＨ２Ｏ（１．５ｍＬ）及びＰＰｈ３（１．６２ｇ、６．１７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を７０℃にて８時間撹拌した。溶媒を減圧下において除去した。残渣をクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製し、Ｅ−１−０１０（１．２３ｇ、７０％）を淡黄色固体として得た。
【０１４６】
６−（アミノメチル）−９−（ベンジルオキシ）−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン（Ｅ−１−０１０）
【化６】
2017521423.tif 000017
収率：７０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３４２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ７．５１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．２９〜７．３７（ｍ，３Ｈ）、６．４０（ｓ，１Ｈ）、５．０７（ｓ，２Ｈ）、４．６４〜４．６７（ｍ，１Ｈ）、４．０８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．７４（ｓ，２Ｈ）、３．４７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．１３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１４７】
Ｅ−１−０１０−Ａの合成：
Ｅ−１−０１０（１ｇ、２．９３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３０ｍＬ）の溶液にＰｔ／Ｃ（１５０ｍｇ）を添加した。混合物をＨ２雰囲気下において一晩撹拌した。その後、Ｐｔ／Ｃを濾去し、濾液を濃縮し、Ｅ−１−０１０−Ａ（６６３ｍｇ、９０％）を白色固体として得た。
【０１４８】
６−（アミノメチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン（Ｅ−１−０１０−Ａ）
【化７】
2017521423.tif 000018
収率：９０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：２５２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ６．２５（ｓ，１Ｈ）、４．７１〜４．７６（ｍ，１Ｈ）、４．１６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．７０（ｓ，２Ｈ）、３．５８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．１５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１４９】
一般的手法：Ｅ−１−０１５シリーズの合成
【化８】
2017521423.tif 000019
Ｅ−１−０１０−Ａ（８０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．５ｍＬ）溶液にＥｔ３Ｎ（４８ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）及びＲＳＯ２Ｃｌ（０．３５ｍｍｏｌ）を連続して添加した。反応混合物を室温にて５時間撹拌した。得られた混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣにより精製し、所望の化合物を得た。
【０１５０】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０１）
【化９】
2017521423.tif 000020
Ｅ−１−０１０−Ａを一般的手法に従いベンゼンスルホニルクロリドを用いて処理し、化合物Ｅ−１−０１５−０１を淡黄色固体として得た。
収率：２１％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３９２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ８．４８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．８３（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．６０〜７．７０（ｍ，３Ｈ）、６．６４（ｓ，１Ｈ）、４．６９〜４．７２（ｍ，１Ｈ）、４．１８〜４．２３（ｍ，４Ｈ）、３．５０（ｓ，２Ｈ）、１．１７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１５１】
Ｎ−（（９−（ベンジルオキシ）−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０１−１）
【化１０】
2017521423.tif 000021
Ｅ−１−０１０−Ａを一般的手法に従いベンゼンスルホニルクロリドを用いて処理し、化合物Ｅ−１−０１５−０１−１を淡白色固体として得た。
収率：６０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４８２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ−ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ  ８．３９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．０３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、７．６２〜７．６５（ｍ，３Ｈ）、７．５４〜７．６０（ｍ，２Ｈ）、７．２６〜７．３３（ｍ，３Ｈ）、６．１１（ｓ，１Ｈ）、５．１４（ｓ，２Ｈ）、４．６７〜４．７０（ｍ，１Ｈ）、４．０４（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）、３．８０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．１８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）、１．０５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１５２】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−４−メチルベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０２）
【化１１】
2017521423.tif 000022
Ｅ−１−０１０−Ａを一般的手法に従い４−メチルベンゼン−１−スルホニルクロリドを用いて処理し、化合物Ｅ−１−０１５−０２を淡黄色固体として得た。
収率：３０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４０６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ８．３８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．７０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、７．４０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、６．６６（ｓ，１Ｈ）、４．６７〜４．７４（ｍ，１Ｈ）、４．２３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．１６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．３９（ｓ，３Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１５３】
２−フルオロ−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０３）
【化１２】
2017521423.tif 000023
収率：４０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４１０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ８．８３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．７９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．７２〜７．７４（ｍ，１Ｈ）、７．４７（ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．３９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．６６（ｓ，１Ｈ）、４．６９〜４．７３（ｍ，１Ｈ）、４．３１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．２６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１５４】
６−（（２−フルオロフェニルスルホンアミド）メチル）−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−９−イル  ２−フルオロベンゼンスルホネート（Ｅ−１−０１５−０３−１）
【化１３】
2017521423.tif 000024
収率：２０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：５６６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ８．７０（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．６８〜７．８０（ｍ，４Ｈ）、７．３１〜７．４８（ｍ，４Ｈ）、６．３０（ｓ，１Ｈ）、４．３６〜４．４０（ｍ，１Ｈ）、４．１９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．０３（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．４９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．０９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１５５】
３−フルオロ−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０４）
【化１４】
2017521423.tif 000025
収率：３７％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４１０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ８．６４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．６７〜７．７０（ｍ，２Ｈ）、７．６３（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．５４〜７．５９（ｍ，１Ｈ）、６．７０（ｓ，１Ｈ）、４．６８〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．２６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，４Ｈ）、３．６１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１５６】
４−シアノ−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０５）
【化１５】
2017521423.tif 000026
収率：３７％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４１７（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ８．７２（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．１１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、７．９７（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、６．３９（ｓ，１Ｈ）、４．６６〜４．７６（ｍ，１Ｈ）、４．１９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．１５（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．６１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１５７】
２，６−ジクロロ−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０６）
【化１６】
2017521423.tif 000027
収率：４０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４６０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ８．９４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５２〜７．６３（ｍ，３Ｈ）、６．４４（ｓ，１Ｈ）、４．６９〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．３０（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．２０（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．６１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１５８】
２，４−ジクロロ−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０７）
【化１７】
2017521423.tif 000028
収率：４０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４６０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ８．８２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．９０〜７．９４（ｍ，２Ｈ）、７．６３（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．４５（ｓ，１Ｈ）、４．６８〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．２５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．１８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．６１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１５９】
４−クロロ−２−フルオロ−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０８）
【化１８】
2017521423.tif 000029
収率：４２％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４４４（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  １２．６（ｂｒ，１Ｈ）  ８．７９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．７４〜７．７８（ｍ，２Ｈ）、７．４８（ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．１７（ｓ，１Ｈ）、４．６８〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．１７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．０８（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．５７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１６０】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−１−フェニルメタンスルホンアミド（Ｅ−１−０１６）
【化１９】
2017521423.tif 000030
収率：４０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４０６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ７．９７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ）、７．３９（ｓ，５Ｈ）、６．７９（ｓ，１Ｈ）、４．６８〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．４７（ｓ，２Ｈ）、４．３３（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．２６（ｓ，２Ｈ）、３．６７（ｓ，２Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１６１】
１−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）メタンスルホンアミド（Ｅ−１−０１６−１）
【化２０】
2017521423.tif 000031
収率：４２％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４４０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ７．８８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．４０〜７．４８（ｍ，４Ｈ）、６．４７（ｓ，１Ｈ）、４．６８〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．４８（ｓ，２Ｈ）、４．２６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．１５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．６２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．１８（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）
【０１６２】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−４−スルホンアミド（Ｅ−１−０１７）
【化２１】
2017521423.tif 000032
収率：３６％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３９６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ８．３８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．８０（ｓ，１Ｈ）、７．７５（ｓ，１Ｈ）、６．８４（ｓ，１Ｈ）、４．６９〜４．７６（ｍ，１Ｈ）、４．３４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．２６（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６９（ｓ，３Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）
【０１６３】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−３，５−ジメチルイソキサゾール−４−スルホンアミド（Ｅ−１−０１８）
【化２２】
2017521423.tif 000033
収率：４０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４１１（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  １２．９３（ｂｒ，１Ｈ）、８．６７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．６４（ｓ，１Ｈ）、４．７１〜４．７４（ｍ，１Ｈ）、４．２６（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、４．２３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６６（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．６１（ｓ，３Ｈ）、２．３６（ｓ，３Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）
【０１６４】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−２−メチルプロパン−１−スルホンアミド（Ｅ−１−０１９）
【化２３】
2017521423.tif 000034
収率：４２％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３７２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  １２．６９（ｂｒ，１Ｈ）、７．８９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．８３（ｓ，１Ｈ）、４．６９〜４．７６（ｍ，１Ｈ）、４．３１〜４．３７（ｍ，４Ｈ）、３．６９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．０３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．１０〜２．１４（ｍ，１Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）、１．０３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）
【０１６５】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）シクロプロパンスルホンアミド（Ｅ−１−０２０）
【化２４】
2017521423.tif 000035
収率：４０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３５６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ７．９４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．８３（ｓ，１Ｈ）、４．６８〜４．７６（ｍ，１Ｈ）、４．４０（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、４．３３（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．６９（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．６６〜２．６９（ｍ，１Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）、０．９６〜０．９９（ｍ，４Ｈ）
【０１６６】
Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）スルホンアミド（Ｅ−１−０２１）
【化２５】
2017521423.tif 000036
収率：４０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３５９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ７．９７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）、６．８３（ｓ，１Ｈ）、４．６８〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．３２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，４Ｈ）、３．６９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、２．７１（ｓ，６Ｈ）、１．１９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）
【０１６７】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ナフタレン−１−スルホンアミド（Ｅ−１−０２２）
【化２６】
2017521423.tif 000037
収率：４４％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４４２（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  １２．４２（ｂｒ，１Ｈ）、８．６７（ｂｒ，１Ｈ）、８．６１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．１９（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、８．０４〜８．０９（ｍ，２Ｈ）、７．７２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．６６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．５６（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．０７（ｓ，１Ｈ）、４．５８〜４．６５（ｍ，１Ｈ）、４．０９（ｓ，２Ｈ）、３．８０（ｓ，２Ｈ）、３．２１（ｓ，２Ｈ）、１．０６（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）
【０１６８】
Ｎ−（（２−イソプロピル−９−メトキシ−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０１−４）
【化２７】
2017521423.tif 000038
収率：３８％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４０６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：δ  ８．４８（ｂｒ，１Ｈ）、７．８０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．５５〜７．６２（ｍ，３Ｈ）、６．１７（ｓ，１Ｈ）、４．８２〜４．８５（ｍ，１Ｈ）、４．３０（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．９５（ｓ，３Ｈ）、３．８５（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．６７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．２２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）
【０１６９】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−Ｎ−メチルベンゼンスルホンアミド（Ｅ−１−０１５−０１−２）
【化２８】
2017521423.tif 000039
収率：３８％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４０６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ７．８８（ｄ，，Ｊ＝７．２Ｈｚ  ２Ｈ）、７．７９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．７２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、６．７３（ｂｒ，１Ｈ）、４．７０〜４．７７（ｍ，１Ｈ）、４．３６（ｂｒ，４Ｈ）、３．７３（ｓ，２Ｈ）、２．６０（ｓ，３Ｈ）、１．２０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）
【０１７０】
スキーム：
【化２９】
2017521423.tif 000040
【０１７１】
一般的手法：
化合物Ｅ−１−０１０（８０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）の溶液にＥｔ３Ｎ（３４ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）、ＲＣＯＯＨ（０．２４ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（９２ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて４時間撹拌した後、水を用いて希釈した。得られた溶液をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１０：１）を用いて抽出した。混和した有機相をＨＣｌ（１ｍｏｌ／Ｌ）及びブラインを用いて連続して洗浄した後、濃縮し、粗生成物を固体として得た。粗生成物ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ）を添加した。得られた混合物をＨ２雰囲気下において室温にて一晩撹拌した。Ｐｄ／Ｃを濾去し、濾液を濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、所望の化合物を得た。
【０１７２】
４−クロロ−Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンズアミド（Ｅ−１−０２３）
【化３０】
2017521423.tif 000041
収率：４２％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３９０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：δ  ８．０３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．６１（ｓ，１Ｈ）、７．５９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、４．７７（ｓ，２Ｈ）、４．７０〜４．７４（ｍ，３Ｈ）、３．８１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１７３】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）ベンズアミド（Ｅ−１−０２４）
【化３１】
2017521423.tif 000042
収率：４０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３５６（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：δ  ８．００（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ）、７．５０〜７．６０（ｍ，４Ｈ）、４．７８（ｓ，２Ｈ）、４．７１〜４．７４（ｍ，３Ｈ）、３．８２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．２２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１７４】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド（Ｅ−１−０２５）
【化３２】
2017521423.tif 000043
収率：４５％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３９０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：δ  ９．５７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ）、８．２６（ｓ，１Ｈ）、８．２４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．９８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ）、７．７９（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ）、７．１６（ｓ，１Ｈ）、４．７７（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．７１〜４．７６（ｍ，１Ｈ）、４．５７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．７７（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１７５】
Ｎ−（（９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−１，８−ジオキソ−２，３，４，８−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−６−イル）メチル）−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド（Ｅ−１−０２７）
【化３３】
2017521423.tif 000044
収率：４０％
ＭＳ（ＥＳＩ）：３５９（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００Ｈｚ）：δ  ８．５８（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．９７（ｔ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ）、６．８９（ｄｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ）、６．５０（ｓ，１Ｈ）、６．０６（ｄｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈｚ，１Ｈ）、４．７０〜４．７５（ｍ，１Ｈ）、４．４８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、４．３１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．８４（ｓ，３Ｈ）、３．６７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．２１（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１７６】
スキーム：
【化３４】
2017521423.tif 000045
【０１７７】
化合物Ｅ−１−０１０（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のＨＣＯＯＨ（２ｍＬ）溶液に（ＨＣＨＯ）ｎ（８７ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を９０℃にて３時間撹拌した。溶媒を減圧下において除去した。残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、化合物Ｅ−１−０２６（１５ｍｇ、１９％）を淡白色固体として得た。
【０１７８】
６−（（ジメチルアミノ）メチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン（Ｅ−１−０２６）
【化３５】
2017521423.tif 000046
ＭＳ（ＥＳＩ）：２８０（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ−ＣＤＣｌ３，４００Ｈｚ）：δ  ６．２９（ｓ，１Ｈ）、４．９４〜４．９８（ｍ，１Ｈ）、４．３７（ｓ，２Ｈ）、３．５３（ｓ，２Ｈ）、３．２７（ｓ，２Ｈ）、２．２２（ｓ，６Ｈ）、１．２４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１７９】
スキーム：
【化３６】
2017521423.tif 000047
【０１８０】
化合物Ｅ−１−０１０（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）溶液にシクロヘキサノン（３４ｍｇ、３４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて１０分間撹拌した後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１２３ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を一晩撹拌した。出発材料がＴＬＣにより完全に消失した後に、混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃを用いて抽出した。有機層を、ブラインを用いて洗浄し、濃縮した。残渣を分取ＴＬＣにより精製し、Ｅ−１−０１５−０１−３（８７ｍｇ、７０％）を白色固体として得た。
【０１８１】
９−（ベンジルオキシ）−６−（（シクロヘキシルアミノ）メチル）−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン（Ｅ−１−０１５−０１−３）
【化３７】
2017521423.tif 000048
ＭＳ（ＥＳＩ）：４２４（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ−ＣＤＣｌ３，４００Ｈｚ）：δ  ７．６４（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、７．２７〜７．３５（ｍ，３Ｈ）、６．４６（ｓ，１Ｈ）、５．２９（ｓ，２Ｈ）、４．８９〜４．９３（ｍ，１Ｈ）、４．２７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．６７（ｓ，２Ｈ）、３．７６（（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．４２〜２．４５（ｍ，１Ｈ）、１．８８（ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．７１〜１．８６（ｍ，２Ｈ）、１．６２〜１．６５（ｍ，１Ｈ）、１．０２〜１．３０（ｍ，１２Ｈ）。
【０１８２】
スキーム：
【化３８】
2017521423.tif 000049
【０１８３】
Ｅ−１−０３０−０２の合成
化合物Ｅ−１−０１０（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）と５−クロロジベンゾスベラン（６７ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）との混合物を、溶媒を含むことなく１２０℃にて１０時間撹拌した。得られた混合物を分取ＨＰＬＣにより直接精製し、Ｅ−１−０３０−０２（１１ｍｇ、９％）を淡黄色固体として得た。
【０１８４】
６−（（５−アミノジベンゾスベラン）メチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン（Ｅ−１−０３０−０２）
【化３９】
2017521423.tif 000050
ＭＳ（ＥＳＩ）：５６３（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）：δ  ７．２６〜７．３４（ｍ，９Ｈ）、７．０８（ｓ，１Ｈ）、４．８５〜４．８９（ｍ，１Ｈ）、４．４１（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、３．８２（ｓ，２Ｈ）、３．７２（ｓ，４Ｈ）、３．６３（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．２９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）。
【０１８５】
６−（（ベンズヒドリルアミノ）メチル）−９−ヒドロキシ−２−イソプロピル−３，４−ジヒドロ−１Ｈ−ピリド［１，２−ａ］ピラジン−１，８（２Ｈ）−ジオン（Ｅ−１−０３０−０３）：
【化４０】
2017521423.tif 000051
Ｅ−１−０３０−０３をＥ−１−０３０−０２と同様に合成した。
収率：８％
ＭＳ（ＥＳＩ）：４１８（Ｍ＋Ｈ）＋
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，４００Ｈｚ）：δ  ７．５４（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，４Ｈ）、７．３１〜７．４２（ｍ，６Ｈ）、６．９０（ｓ，１Ｈ）、５．２９（ｓ，１Ｈ）、４．８６〜４．８８（ｍ，１Ｈ）、４．４６（ｓ，２Ｈ）、４．１６（ｓ，２Ｈ）、３．７４（ｓ，２Ｈ）、１．２９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ）
【図１】
2017521423.tif 000054
【配列表】
2017521423000001.app
【国際調査報告】
2017521423.tif 000055
2017521423.tif 000056
2017521423.tif 000057