(57)【要約】  本発明は、Ｂ型肝炎ウイルスを含む様々の疾病や感染症の処置に有効な濃度でタンパク質を含有するフラクションＩＩ＋ＩＩＩ由来の精製血漿生成物を提供する。製造及び処置方法も提供する。精製血漿生成物は処置対象の臓器や末梢血の免疫細胞やタンパク質の濃度を調整する。精製血漿生成物によって調整された免疫細胞や関連するタンパク質の実施例は、顆粒白血球及びマクロファージと同様、Ｔ細胞、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ２８＋及びＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞、Ｂ細胞上にＣＤ６２Ｌを含有する。
2017525752.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列番号３３から３７で定義されるタンパク質を含有する単離精製されたタンパク質複合体を含む単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）。
【請求項２】
更に、アミノ酸配列番号２２から３１で定義されるタンパク質を含む請求項１に記載の単離精製されたタンパク質複合体。
【請求項３】
更に、アミノ酸配列番号５１で定義されるタンパク質を含む請求項１に記載の単離精製されたタンパク質複合体。  
【請求項４】
アミノ酸配列番号２２に対して少なくとも９０％の相同性を有する第１の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号２３に対して少なくとも９０％の相同性を有する第２の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号２４に対して少なくとも９０％の相同性を有する第３の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号２５に対して少なくとも９０％の相同性を有する第４の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号２６に対して少なくとも９０％の相同性を有する第５の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号２７に対して少なくとも９０％の相同性を有する第６の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号２８に対して少なくとも９０％の相同性を有する第７の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号２９に対して少なくとも９０％の相同性を有する第８の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３０に対して少なくとも９０％の相同性を有する第９の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３１に対して少なくとも９０％の相同性を有する第１０の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３２に対して少なくとも９０％の相同性を有する第１１の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３３に対して少なくとも９０％の相同性を有する第１２の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３４に対して少なくとも９０％の相同性を有する第１３の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３５に対して少なくとも９０％の相同性を有する第１４の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３６に対して少なくとも９０％の相同性を有する第１５の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３７に対して少なくとも９０％の相同性を有する第１６の実質的に純粋なタンパク質と、を含有する単離精製されたタンパク質複合体を含む単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）。
【請求項５】
アミノ酸配列番号３３に対して少なくとも９０％の相同性を有する第１の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３４に対して少なくとも９０％の相同性を有する第２の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３５に対して少なくとも９０％の相同性を有する第３の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３６に対して少なくとも９０％の相同性を有する第４の実質的に純粋なタンパク質と、
アミノ酸配列番号３７に対して少なくとも９０％の相同性を有する第５の実質的に純粋なタンパク質と、を含有する単離精製されたタンパク質複合体を含む単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）。
【請求項６】
アミノ酸配列番号２２に対して少なくとも８０％の相同性を有する第１の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号２２で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号２３に対して少なくとも８０％の相同性を有する第２の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号２３で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号２４に対して少なくとも８０％の相同性を有する第３の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号２４で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号２５に対して少なくとも８０％の相同性を有する第４の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号２５で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号２６に対して少なくとも８０％の相同性を有する第５の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号２６で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号２７に対して少なくとも８０％の相同性を有する第６の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号２７で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号２８に対して少なくとも８０％の相同性を有する第７の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号２８で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号２９に対して少なくとも８０％の相同性を有する第８の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号２９で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３０に対して少なくとも８０％の相同性を有する第９の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３０で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３１に対して少なくとも８０％の相同性を有する第１０の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３１で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３２に対して少なくとも８０％の相同性を有する第１１の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３２で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３３に対して少なくとも８０％の相同性を有する第１２の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３３で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３４に対して少なくとも８０％の相同性を有する第１３の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３４で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３５に対して少なくとも８０％の相同性を有する第１４の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３５で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３６に対して少なくとも８０％の相同性を有する第１５の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３６で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３７に対して少なくとも８０％の相同性を有する第１６の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３７で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、を含有する単離精製されたタンパク質複合体を含む単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）。
【請求項７】
アミノ酸配列番号３３に対して少なくとも８０％の相同性を有する第１の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３３で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３４に対して少なくとも８０％の相同性を有する第２の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３４で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３５に対して少なくとも８０％の相同性を有する第３の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３５で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３６に対して少なくとも８０％の相同性を有する第４の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３６で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、
アミノ酸配列番号３７に対して少なくとも８０％の相同性を有する第５の実質的に純粋なタンパク質であって、前記実質的に純粋なタンパク質がアミノ酸配列番号３７で定義されるタンパク質と同じ活性であるものと、を含有する単離精製されたタンパク質複合体を含む単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）。
【請求項８】
前記アミノ酸配列番号３３から３７によって定義されるタンパク質が少なくとも３０％濃度であることを特徴とする請求項１に記載の単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）。
【請求項９】
前記アミノ酸配列番号２２から３７によって定義されるタンパク質が少なくとも３０％濃度であることを特徴とする請求項２に記載の単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）。
【請求項１０】
前記アミノ酸配列番号２２−３７及び５１によって定義されるタンパク質が少なくとも３０％濃度であることを特徴とする請求項３に記載の単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）。
【請求項１１】
患者に単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）の有効量を投与するものであって、前記単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物が、
アミノ酸配列番号３３によって定義される第１のタンパク質と、
アミノ酸配列番号３４によって定義される第２のタンパク質と、
アミノ酸配列番号３５によって定義される第３のタンパク質と、
アミノ酸配列番号３６によって定義される第４のタンパク質と、
アミノ酸配列番号３７によって定義される第５のタンパク質と、を含むものであることを特徴とする患者におけるＢ型肝炎を処置する方法。
【請求項１２】
前記単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物がさらに、
アミノ酸配列番号２２によって定義される第６のタンパク質と、
アミノ酸配列番号２３によって定義される第７のタンパク質と、
アミノ酸配列番号２４によって定義される第８のタンパク質と、
アミノ酸配列番号２５によって定義される第９のタンパク質と、
アミノ酸配列番号２６によって定義される第１０のタンパク質と、
アミノ酸配列番号２７によって定義される第１１のタンパク質と、
アミノ酸配列番号２８によって定義される第１２のタンパク質と、
アミノ酸配列番号２９によって定義される第１３のタンパク質と、
アミノ酸配列番号３０によって定義される第１４のタンパク質と、
アミノ酸配列番号３１によって定義される第１５のタンパク質と、
アミノ酸配列番号３２によって定義される第１６のタンパク質と、を含むものであることを特徴とする請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物がさらに、アミノ酸配列番号５１によって定義される第１６のタンパク質を含むことを特徴とする請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の末梢血のＣＤ４＋Ｔ細胞上においてＣＤ６２Ｌを有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の脾臓のＣＤ４＋Ｔ細胞上においてＣＤ６２Ｌを有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の末梢血のＣＤ８＋Ｔ細胞上においてＣＤ６２Ｌを有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の脾臓のＣＤ８＋Ｔ細胞上においてＣＤ６２Ｌを有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の末梢血においてＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の脾臓においてＣＤ４＋Ｔ細胞の濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の末梢血においてＣＤ２８＋Ｔ細胞の濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２１】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の脾臓においてＣＤ２８＋Ｔ細胞の濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の脾臓においてＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞の濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２３】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の末梢血のＴ細胞上においてＦｏｘｐ３＋Ｔ細胞の濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２４】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の脾臓においてＣＤ２８＋Ｔ細胞の濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２５】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の末梢血にＢ細胞濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２６】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の脾臓においてＢ細胞濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２７】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の末梢血において顆粒白血球濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２８】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の脾臓において顆粒白血球濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項２９】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の末梢血においてマクロファージ濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項３０】
ＨＢＶを処置するためにＢ型肝炎患者の脾臓においてマクロファージ濃度を有効範囲に調整することを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項３１】
ａ）ヒト血漿からフラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストを採取し、
ｂ）１対１７の比率で前記フラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストを懸濁して希釈し、
ｃ）前記希釈したフラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストのｐＨをｐＨ５．２に調整して調整フラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストを生成し、
ｄ）前記調整フラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストにエタノールを加えて１７％エタノールフラクションＩＩ＋ＩＩＩ生成物を生成し、
ｅ）前記１７％エタノールフラクションＩＩ＋ＩＩＩ生成物をプレス濾過してフラクションＩＩＩからなる濾過液を集め、
ｆ）限外濾過による前記濾過液を濃縮して１００ｋの濾過液を形成し、
ｇ）前記１００ｋの濾過液のｐＨをｐＨ４．０に調整し、
ｈ）４５μｍフィルターを使って前記ｐＨ調整濾過液を濾過して濾過物を集め、そして
ｉ）５０ｎｍフィルターで前記濾過物をナノ濾過して最終生成物を得ることを特徴とするアミノ酸配列番号３３−３７によって定義されるタンパク質を含有する単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）の製造方法。
【請求項３２】
ａ）高濃度のＢ型肝炎表面抗原を含有するヒトＢ型肝炎免疫グロブリンからフラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストを採取し、
ｂ）１対１７の比率で前記フラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストを懸濁して希釈し、
ｃ）前記希釈したフラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストのｐＨをｐＨ５．２に調整して調整フラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストを生成し、
ｄ）前記調整フラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストにエタノールを加えて１７％エタノールフラクションＩＩ＋ＩＩＩ生成物を生成し、
ｅ）前記１７％エタノールフラクションＩＩ＋ＩＩＩ生成物をプレス濾過してフラクションＩＩＩからなる濾過液を集め、
ｆ）限外濾過による前記濾過液を濃縮して１００ｋの濾過液を形成し、
ｇ）前記１００ｋの濾過液のｐＨをｐＨ４．０に調整し、
ｈ）４５μｍフィルターを使って前記ｐＨ調整濾過液を濾過して濾過物を集め、そして
ｉ）５０ｎｍフィルターで前記濾過物をナノ濾過して最終生成物を得ることを特徴とするアミノ酸配列番号２２−３７によって定義されるタンパク質を含有する単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）の製造方法。
【請求項３３】
ａ）非滅菌の最終容量の正常免疫グロブリンを製造し、
ｂ）非滅菌の最終容量のＢ型肝炎免疫グロブリンを製造し、
ｃ）８０％の前記非滅菌の最終容量の正常免疫グロブリンと２０％の前記非滅菌の最終容量のＢ型肝炎免疫グロブリンとを含む免疫グロブリン混合物をつくり、
ｄ）前記免役グロブリンに除菌を行って最終生成物を集めることを特徴とするアミノ酸配列番号２２−３７及び５１によって定義されるタンパク質を含有する単離精製静注用免疫グロブリン血漿生成物（ＩＶＩＧ  ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｄｕｃｔ）の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願との相互参照）
本願は、２０１４年５月２８日に出願した仮出願Ｎｏ．６２／００３，６６４に対して３５ＵＳＣ１１９（ｅ）に基づく優先権を主張するもので、その全体が参照によって組み込まれる。本願は、また、２０１３年１月３１日に出願された非仮出願Ｎｏ．１３／７５６，０３４の一部を継続するもので、２０１２年１月３１日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／５９３，１８３、２０１２年１月３１日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／５９３，１９６、２０１２年５月１７日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／６４８，２８１、２０１２年８月２３日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／６９２，２７３及び２０１２年１０月８に出願された仮出願Ｎｏ．６１／７１０，９３０に対して優先権を主張する。本願は、また、２０１３年１月３１日に出願された非仮出願Ｎｏ．１３／７５６，４７８の一部を継続するもので、２０１２年１月３１日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／５９３，１６４、２０１２年１月３１日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／５９３，１８３、２０１２年１月３１日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／５９３，１９６、２０１２年５月１７日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／６４８，２８１、２０１２年８月２３日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／６９２，２７３、及び２０１２年１０月８日に出願された仮出願Ｎｏ．６１／７１０，９３０に対して優先権を主張する、よって全ては、その全体が参照によって組み込まれる。本願は、また、２０１１年３月４日に出願された非仮出願Ｎｏ．１３／０６４，０７０の一部に継続する、２０１１年５月６日に出願された非仮出願Ｎｏ．１３／１０８，９７０の一部に継続する、２０１４年１月９日に出願された非仮出願Ｎｏ．１４／１５１，１４７の一部に継続している。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、血漿の単離及び精製、血漿由来生成物、並びに治療を受けた個人の末梢血及び臓器における免疫細胞及び関連タンパク質の濃度調整方法に関する。  
【背景技術】
【０００３】
暴露或いは予防接種を受けた個人或いは動物から採取した抗体或いは抗毒素をその疾病にかかりやすい患者に投与することは、１８００年代後半から受動免疫療法に関与した基本的な医療行為である。１９４０年代からは、ヒトアルブミンや他の治療タンパク質が特定の臨床ニーズに対処すべくリンパ漿から抽出されている。
【０００４】
多くの抗体と比較して、ヒト抗体を利用する抗体系療法は低い毒性と高い特異性を備えている。高い特異性とは、抗体が宿主の内性有機体に影響を与えることなく疾病を引き起こす病原微生物のみをターゲットとし、これによって、有害反応や耐性有機体の発育を最小にすることを意味する。しかし、これはまた、複数の抗体の調合が高い抗原性変化を伴う微生物をターゲットとするよう要求される可能性があることを意味している。よって、様々な疾病や苦痛への特定の抗体を含有する配合リンパ漿生成物は、同じものを投与する治療法と同様、健康な細胞に対する弊害を最小限にしながら、疾病の範囲を処理することを要求される。
【０００５】
ヒト血漿の様々のフラクションやそれらに属するタンパク質及びこれらタンパク質の特有の性質の同定は、様々の慢性及び急性、遺伝性及び後天性疾病に対し、新しい延命治療という結果をもたらしている。生成物に安全性と効き目を保証する製造工程の改良や特定の臨床応用の同定は、技術に新たな前進を要求している。  
【０００６】
例えばクロマトグラフィーのようなタンパク質凝集物を除去する様々の技術は、幾つかの生成物を静脈内に投与されるとき、より許容できるようにし、そして、ウイルス除去／不活化工程を加えて、生成物を本質的に脂質及び非脂質包膜ウイルスのない状態としてきた。  
【０００７】
静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）は、一般に、静脈投与される血液製剤である。ＩＶＩＧは免疫不全の患者に投与され、そして、免疫不全に係わる二次的疾患への給付は、ますます興味深い第一又は第二選択の治療としてきた。  
【０００８】
ＩＶＩＧは、貯蔵されたヒト血漿から製造され、リンパ球と呼ばれる白血球を含有する。リンパ球は、（１）ナチュラルキラー細胞（細胞媒介細胞障害性先天的免疫において機能を果たすＮＫ細胞）、（２）Ｔ細胞（細胞媒介細胞障害性適応型免疫用）、及び（３）Ｂ細胞（体液性抗体動因適応免疫用）を含む３タイプの免疫細胞のいずれかである。  
【０００９】
抗体は、抗原への露出の後に、Ｂ細胞と形質細胞によって生成される。抗体は免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、又はＩｇＤであるが、過免疫者の場合、重要な抗体はＩｇＧである。ＩｇＧは、４つのポリペプチド鎖、２組のペプチド鎖、２組のＹ型配置の重鎖と軽鎖とからなる。ＩｇＧ分子の上端、Ｆａｂ又は抗体結合領域は、１つの重鎖と１つの軽鎖から作成され、抗原結合部位を形成する。このフラグメント可変（Ｆｖ）領域は様々のアミノ酸化合物からなり、各抗体を特有なものにしている。重要なことは、精製ＩＶＩＧ静脈内過免疫生成物がヒトＩｇＧタンパク質からなり、その少なくとも９６％は特異抗原に対する特異抗体を含有するＩｇＧであることだ。意義深いのは、２０００年代中後期から、単離精製されたＩＶＩＧのより効率的な製造の必要性が劇的に増加していることである。また特異性疾患及び疾病をターゲットとするＢ細胞とＴ細胞の割合を制限する生成物も望まれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、単離精製されたヒト免疫グロブリン・血漿生成物及びその製造方法、並びにＢ型肝炎ウイルスのような疾病及び感染症の治療におけるその製造及び使用方法に関する。精製ヒト免疫グロブリン・血漿生成物は、処置対象物における免疫細胞と関連タンパク質の濃度を調整することによって、様々の慢性及び急性、遺伝性及び後天性疾病を治療するのに有効である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明の実施態様では、様々の精製血漿生成物が、個人のリンパ球増殖を緩和してＨＢＶのようなウイルス感染症を治療するのに用いられる。
【００１２】
本発明のある実施態様は、精製血漿生成物の予防的又は治療的投与を介して、治療された個人の末梢血及び臓器におけるＢ及びＴ細胞濃度の調整を含んでいる。  
【００１３】
他の実施態様は、精製血漿生成物の予防的又は治療的投与を介して、治療された個人の末梢血及び臓器における顆粒白血球及びマクロファージ濃度の調整を含んでいる。
【００１４】
本発明の１つの実施態様では、ヒト血漿フラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストから静注用免疫グロブリンＧ（ＩＶＩＧ）を精製することによって、精製タンパク質複合体を得る。図７３。免疫グロブリンの主成分に加え、タンパク質複合体の分析から、生成物が以下のタンパク質を含有することが示される：１２０／Ｅ１９  ＩＧＨＶ４−３１、ＩＧＨＧ１  ４４ｋＤａ、１９１／Ｈ１８  ＩＧＨＶ４  ３１、ＩＧＨＧ１  ３２ｋＤａ、ＩＧＨＧ１推定上性質不明のタンパク質、ＤＫＦＺｐ６８６Ｇ１１１９０、及びＫＨタンパク質３３−３７。図７５。ＫＨタンパク質３３−３７を濃度３０％で配合したものは、Ｈ１Ｎ１、Ｈ５Ｎ１、口蹄疫（ｆｏｏｔ  ａｎｄ  ｍｏｕｔｈ  ｄｉｓｅａｓｅ）のようなウイルスに対して有効で、Ｂ型肝炎ＤＮＡの複製を停止させることがわかった。
【００１５】
本発明の他の実施形態では、高い抗体濃度のＢ型肝炎表面抗原を有するドナーのヒト血漿フラクションＩＩ＋ＩＩＩからＢ型肝炎免疫グロブリン（ＨＢＩＧ）を精製することによって、精製タンパク質複合体を得る。図７４。免疫グロブリン・タンパク質に加えて、ＨＢＩＧはタンパク質ＴＦ血清トランスフェリン（配列番号  １９７／Ｈ２４）を含有する。この複合体はＫＨタンパク質２２−３７を含有し、Ｂ型肝炎ウイルス性ＤＮＡの複製を停止するのに有効であることがわかった。
【００１６】
また他の実施形態では、精製タンパク質複合体がＢ型肝炎抗体の欠乏と戦うために処方される。図７７−７８。この精製タンパク質複合体は、８０％の精製した正常な免疫グロブリンと２０％の精製した高濃度のＢ型肝炎抗体を含有するＢ型肝炎免疫グロブリンを配合したものである。この実施態様では、両方の生成物は限外濾過により少なくとも３０％の濃度である。この実施形態の精製したタンパク質複合体は、ＫＨ２２−３７及びＫＨ５１と呼ばれるタンパク質を含む。ＫＨと称されるタンパク質に関する他の情報は以下の表にある。
【００１７】
関連する実施態様において、精製タンパク質複合体の製造方法は、両方の生成物用に非滅菌最終バルクを得る工程まで正常な免疫ブログリンとＢ型肝炎抗体を別々に製造する製造実施要領に従い、８０％の正常な免疫グロブリン非滅菌最終バルクを取って２０％のＢ型肝炎抗体非滅菌最終バルクと混合し、そして最終生成物を調合する除菌濾過を行うことからなる。図７７。
【００１８】
他の実施態様では、精製タンパク質複合体の製造方法は、８０％の正常な免疫ブログリンフラクションＩＩ＋ＩＩＩと２０％のＢ型肝炎抗体フラクションＩＩ＋ＩＩＩを取って、最終生成物が調合されるまで、正常な免疫ブログリンの生成用処理槽に各フラクションを溶かすことからなる。図７８。
【００１９】
本発明の実施形態は、感染症や疾病を処置するのに有効な特有の性質を有する様々のタンパク質を含有する精製タンパク質複合体を含む。「ＫＨ」記号は、精製タンパク質複合体に含まれる特定のタンパク質に割り当てられる。それらの記号を、タンパク質に対応する他の情報と共に、以下の表１−１から表１−２９に示す。
【００２０】
５３８の機能が５５ＫＨタンパク質（ＫＨ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）に確認されており、記述した発明の幾つかの実施態様に記載されたように広範囲の疾病、感染症、及び他の細胞障害を治療する特有の特徴を提供する。    
【００２１】
【表１−１】
2017525752.tif 000003
【００２２】
【表１−２】
2017525752.tif 000004
【００２３】
【表１−３】
2017525752.tif 000005
【００２４】
【表１−４】
2017525752.tif 000006
【００２５】
【表１−５】
2017525752.tif 000007
【００２６】
【表１−６】
2017525752.tif 000008
【００２７】
【表１−７】
2017525752.tif 000009
【００２８】
【表１−８】
2017525752.tif 000010
【００２９】
【表１−９】
2017525752.tif 000011
【００３０】
【表１−１０】
2017525752.tif 000012
【００３１】
【表１−１１】
2017525752.tif 000013
【００３２】
【表１−１２】
2017525752.tif 000014
【００３３】
【表１−１３】
2017525752.tif 000015
【００３４】
【表１−１４】
2017525752.tif 000016
【００３５】
【表１−１５】
2017525752.tif 000017
【００３６】
【表１−１６】
2017525752.tif 000018
【００３７】
【表１−１７】
2017525752.tif 000019
【００３８】
【表１−１８】
2017525752.tif 000020
【００３９】
【表１−１９】
2017525752.tif 000021
【００４０】
【表１−２０】
2017525752.tif 000022
【００４１】
【表１−２１】
2017525752.tif 000023
【００４２】
【表１−２２】
2017525752.tif 000024
【００４３】
【表１−２３】
2017525752.tif 000025
【００４４】
【表１−２４】
2017525752.tif 000026
【００４５】
【表１−２５】
2017525752.tif 000027
【００４６】
【表１−２６】
2017525752.tif 000028
【００４７】
【表１−２７】
2017525752.tif 000029
【００４８】
【表１−２８】
2017525752.tif 000030
【００４９】
【表１−２９】
2017525752.tif 000031
【００５０】
ＫＨタンパク質（ＫＨ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）１−５５の配列識別子及び受託番号と共にタンパク配列付加情報を下記表２−１から表２−９に示す。
【００５１】
【表２−１】
2017525752.tif 000032
【００５２】
【表２−２】
2017525752.tif 000033
【００５３】
【表２−３】
2017525752.tif 000034
【００５４】
【表２−４】
2017525752.tif 000035
【００５５】
【表２−５】
2017525752.tif 000036
【００５６】
【表２−６】
2017525752.tif 000037
【００５７】
【表２−７】
2017525752.tif 000038
【００５８】
【表２−８】
2017525752.tif 000039
【００５９】
【表２−９】
2017525752.tif 000040
【００６０】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細を、添付の図面と下記説明に定める。適用範囲は記載した説明から明白である。明細書及び実施例は解説するためのものであって、本開示の範囲を限定するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】図１は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血におけるＴ及びＢリンパ球の百分率を示すグラフである。
【図２】図２は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、ＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞系譜に詳細な分析を施した、末梢血におけるＴ及びＢリンパ球の百分率を示すグラフである。
【図３】図３は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率を示すグラフである。
【図４】図４は、ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（ＤＣ）とＧＲ−１＋顆粒白血球の百分率に詳細な分析を施した、末梢血におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率を示すグラフである。
【図５】図５は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血における樹状細胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ）と顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率を示すグラフである。
【図６】図６は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、ＧＲ−１対ＣＤ１１ｃ細胞の他の描写を示すグラフである。
【図７】図７は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血における単球の百分率を示すグラフである。
【図８】図８は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血における単球の他の描写を示すグラフである。
【図９】図９は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴ及びＢリンパ球の百分率を示すグラフである。
【図１０】図１０は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴ及びＢリンパ球の他の描写を示すグラフである。
【図１１】図１１は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率を示すグラフである。
【図１２】図１２は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、ＣＤ３Ｔ細胞をゲートした、脾臓におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の他の描写を示すグラフである。
【図１３】図１３は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴ細胞サブセット百分率を示すグラフである。
【図１４】図１４は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＣＤ４Ｔ細胞サブセット百分率のグラフである。
【図１５】図１５は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴ細胞サブセット百分率を示すグラフである。
【図１６】図１６は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＣＤ８Ｔ細胞サブセット百分率のグラフである。
【図１７】図１７は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓における調節性Ｔ細胞（Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）の百分率を示すグラフである。
【図１８】図１８は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓における調節性Ｔ細胞（Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）の百分率の他のグラフ表示である。
【図１９】図１９は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるｍＤｃとｐＤＣの百分率を示すグラフである。
【図２０】図２０は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるｍＤｃとｐＤＣの他のグラフ表示である。
【図２１】図２１は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるマクロファージと顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率を示すグラフである。
【図２２】図２２は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるマクロファージと顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率の他のグラフ表示である。
【図２３】図２３は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＴ細胞の百分率を示すグラフである。
【図２４】図２４は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ３Ｔ細胞の百分率を示すグラフである。
【図２５】図２５は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率を示すグラフである。
【図２６】図２６は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の他のグラフ表示である。
【図２７】図２７は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ４Ｔ細胞サブセット百分率を示すグラフである。
【図２８】図２８は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ４Ｔ細胞サブセット百分率の他のグラフ表示である。
【図２９】図２９は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ８Ｔ細胞サブセット百分率を示すグラフである。
【図３０】図３０は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ８Ｔ細胞サブセット百分率の他のグラフ表示である。
【図３１】図３１は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞（Ｆｏｘｐ３  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）の百分率を示すグラフである。
【図３２】図３２は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞（Ｆｏｘｐ３  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）の他のグラフ表示である。
【図３３】図３３は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節における樹状細胞（ＤＣｓ）の百分率を示すグラフである。
【図３４】図３４は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節における樹状細胞（ＤＣｓ）の百分率の他のグラフ表示である。
【図３５】図３５は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるマクロファージと顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率を示すグラフである。
【図３６】図３６は、治療用ＲＡＳＳ１０５（Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるマクロファージと顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率の他のグラフ表示である。
【図３７】図３７は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  Ｒａｓｓ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血におけるＴ及びＢリンパ球を示すグラフである。
【図３８】図３８は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血におけるＴ及びＢ細胞の他のグラフ表示である。
【図３９】図３９は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率を示すグラフである。
【図４０】図４０は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の他のグラフ表示である。
【図４１】図４１は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血における樹状細胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ）と顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率を示すグラフである。
【図４２】図４２は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血における樹状細胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｃｅｌｌｓ）と顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の他のグラフ表示である。
【図４３】図４３は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血における単球の百分率を示すグラフである。
【図４４】図４４は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、末梢血における単球の百分率の他のグラフ表示である。
【図４５】図４５は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴとＢリンパ球の百分率を示すグラフである。
【図４６】図４６は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴ及びＢリンパ球の百分率の他のグラフ表示である。
【図４７】図４７は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率を示すグラフである。
【図４８】図４８は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率の他のグラフ表示である。
【図４９】図４９は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴ細胞のサブセット百分率を示すグラフである。
【図５０】図５０は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴ細胞のサブセット百分率の他のグラフ表示である。
【図５１】図５１は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴ細胞のサブセット百分率を示すグラフである。
【図５２】図５２は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＴ細胞のサブセット百分率の他のグラフ表示である。
【図５３】図５３は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞（Ｆｏｘｐ３  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）を示すグラフである。
【図５４】図５４は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞（Ｆｏｘｐ３  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）の他のグラフ表示である。
【図５５】図５５は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるｐＤＣとｍＤＣの百分率を示すグラフである。
【図５６】図５６は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるｐＤＣとｍＤＣの百分率の他のグラフ表示である。
【図５７】図５７は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるマクロファージと顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率を示すグラフである。
【図５８】図５８は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、脾臓におけるマクロファージと顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率の他のグラフ表示である。
【図５９】図５９は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＴ細胞の百分率を示すグラフである。
【図６０】図６０は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ３Ｔ細胞の百分率の他のグラフ表示である。
【図６１】図６１は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率を示すグラフである。
【図６２】図６２は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率の他のグラフ表示である。
【図６３】図６３は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＴ細胞サブセット百分率を示すグラフである。
【図６４】図６４は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＴ細胞サブセット百分率の他のグラフ表示である。
【図６５】図６５は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＴ細胞サブセット百分率を示すグラフである。
【図６６】図６６は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＴ細胞サブセット百分率の他のグラフ表示である。
【図６７】図６７は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞（Ｆｏｘｐ３  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）の百分率を示すグラフである。
【図６８】図６８は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞（Ｆｏｘｐ３  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）の他のグラフ表示である。
【図６９】図６９は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節における樹状細胞（ＤＣｓ）の百分率を示すグラフである。
【図７０】図７０は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節における樹状細胞（ＤＣｓ）の百分率の他のグラフ表示である。
【図７１】図７１は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるマクロファージと顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率を示すグラフである。
【図７２】図７２は、予防用ＲＡＳＳ１０５（Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ  ＲＡＳＳ  １０５）の処置がある場合とない場合の、リンパ節におけるマクロファージと顆粒白血球（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ）の百分率の他のグラフ表示である。
【図７３】図７３は、フラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストからＡＦＯＤ  ＲＡＳＳ１０２の製造工程のプロセス・フローチャートである。
【図７４】図７４は、フラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストからのＡＦＯＤ  ＲＡＳＳ１０４  ＨＢＩＧ精製工程の製造の工程フローチャートである。
【図７５】図７５は、タンパク質ＴＦ血清トランスフェリンを含む免疫グロブリン・タンパク質以外のＨＢＩＧのタンパク質分析である。
【図７６】図７６は、フラクションＩＩ＋ＩＩＩペースト由来の免疫グロブリン、フラクションＩＩＩペーストから生成された免疫グロブリン、及びフラクションＩＩ＋ＩＩＩペーストから製造されたＢ型肝炎免疫グロブリンのタンパク質分析比較であり、主要な免疫グロブリン・タンパク質分析と共に各生成物中の異なるタンパク質を描写する。
【図７７】図７７は、ＡＦＯＤ  ＲＡＡＳ１０５の工程フローチャートである。
【図７８】図７８は、ＡＦＯＤ  ＲＡＡＳ１０５の工程フローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
（本発明の詳細な説明）
ＲＡＳＳ１０５で処置されたＨＢＶ感染ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおけるリンパ組織及び末梢血の特徴
【００６３】
（実施要領）
ＨＢＶ感染ＢＡＬＢ／Ｃマウスにおけるリンパ組織及び末梢血において多数の細胞系譜上のＲＡＳＳ１０５の影響を調査した。ＨＢＶ感染及びＲＡＳＳ１０５処置は、無錫市（Ｗｕｋｉ）でＩＤ単位に行われた。終了時に、血液サンプル及びリンパ組織はＦＡＣＳによる様々の細胞系譜の分析用として我々に提供された。
２つの実験を独立して行った。１つの実験はＲＡＳＳ１０５の治療的効果をテストするもので、もう１つの実験はＲＡＳＳ１０５の予防的効果をテストするものであった。
【００６４】
溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群と比較すると、ＲＡＳＳ１０５で治療的に処置した動物に観察される違いは、１）末梢血、脾臓及びリンパ節中のＴ細胞とＢ細胞の百分率がかなり減少したこと、２）ＣＤ６２Ｌは脾臓及びリンパ節中のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方でかなり減少したこと、３）末梢血及びリンパ節中の顆粒白血球及び単球／マクロファージがかなり増加したこと、４）脾臓及びリンパ節中の調整Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋）の百分率がかなり増加したこと、である。
【００６５】
しかし、ＲＡＳＳ１０５での予防的処置は幾分異なる結果となった。ＲＡＳＳ１０５で処置した群において、Ｔ−及びＢ−リンパ球もまた減少した。単球及びマクロファージの百分率は、僅かであるが増加した。
【００６６】
これらの結果は、ＲＡＳＳ１０５の投薬が免疫細胞系譜の発生頻度にかなり影響を与えることを示唆している。
【００６７】
略語を表３に示す。
【００６８】
【表３】
2017525752.tif 000041
【００６９】
（原料及び方法）
（原料）
（試薬）
ＦＩＴＣ、ラット反マウスＣＤ４、ＢＤ、目録：５５７３０７
ＰｅｒＣＰ−ＣＹ５．５、ラット反マウスＣＤ４、ＢＤ、目録：５５０５９４
ＦＩＴＣ、ラット反マウスＣＤ３分子複合体、ＢＤ、目録：５６１７９８
ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、ラット反マウスＣＤ３、ＢＤ、目録：５６０５２７
ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、ラット反マウスＣＤ８ａ、ＢＤ、目録：５５１１６２
ＰＥ、ラット反マウスＣＤ８ａ、ＢＤ、目録：５５３０３２
ＰＥ、ラット反マウスＢ２２０／ＣＤ４５Ｒ、ＢＤ、目録：５５３０８９
ＡＰＣ、ラット反マウスＣＤ１１ｂ、ＢＤ、目録：５５３３１２
ＡＰＣ、Ａｒ  ハム反マウスＣＤ１１ｃ、ＢＤ、目録：５５０２６１
ＰＥ、ラット反マウスＣＤ６２Ｌ、ＢＤ、目録：５５３１５１
ＡＰＣ、ラット反マウスＣＤ４４、ＢＤ、目録：５５９２５０
ＰＥ、ラット反マウスＧｒ−１（Ｌｙ−６Ｇ及びＬｙ−６Ｃ）、ＢＤ、目録：５５３１２８
Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ（登録商標）６４７、ラット反マウス  Ｆｏｘｐ３、ＢＤ、目録：５６０４０１
ＰｅｒＣＰ−ＣＹ５．５、ラット反マウスＣＤ１９、ＢＤ、目録：５５１００１
ＰＥ、ラット反マウスＣＤ２５、ＢＤ、目録：５５３０７５
ＡＣＫリジン緩衝液、インビトロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、目録：Ａ１０４９２−０１
ＲＰＭＩ１６４０媒体、インビトロゲン  ギブコ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｇｉｂｃｏ）、目録：２２４００１０５
ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｅｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ）、サーモ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、目録：ＳＨ３００２８．０１Ｂ．
ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ）、インビトロゲン  ギブコ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｇｉｂｃｏ）、目録：１００９９１４１
【００７０】
（機器）
Ｖｉ−ＣＥＬＬ細胞生存能力分析器（Ｖｉ−ＣＥＬＬ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｎａｌｙｚｅｒ）、ベックマン  コールター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）、目録：７３１０５０
ＦＡＣＳキャリバーフロー血球計算機（ＦＡＣＳ  ＶＣａｌｉｂｕｒｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）、ＢＤ、目録：３４２９７５
細胞ストレーナー（Ｃｅｌｌ  ｓｔｒａｉｎｅｒ）（７０μｍ）、ＢＤ、目録：３５２３５０
ＢＤファルコンチューブ（ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ  ｔｕｂｅｓ）（１２ｘ７５ｍｍ、５ｍｌ）、ＢＤ、目録：３５２０５４
【００７１】
（方法）
末梢血を心臓穿刺によって集めた。溶解用緩衝液で赤血球を除去した後、１倍のリン酸緩衝生理的食塩水（１×ＰＢＳ）を用いて２巡の洗浄を行い、単核細胞（単球、マクロファージ、樹脂細胞、及びリンパ球）と顆粒白血球を得た。７０μｍの細胞ストレーナーで濾過した後、脾臓とリンパ節細胞懸濁液を得た。細胞生存能力及び数は細胞表面染色によってＶｉ−ＣＥＬＬ細胞生存能力分析器を用いて分析した。細胞を遠心分離し、適切な蛍光性の抱合型抗体を含む染色緩衝液（０．０８％ＮａＮ３／ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ）に再懸濁した。４°Ｃの暗所で３０分間培養した後、細胞を０．０８％ＮａＮ３／ＰＢＳ（試料に対して２００μｌ）で二度洗い、ＢＤファルコンチューブ（１２ｘ７５ｍｍ、５ｍｌ）内に４００μｌの０．０８％ＮａＮ３／ＰＢＳで再懸濁した後、ＦＡＣＳ分析を行った。
【００７２】
（データ分析）
ＦＡＣＳデータをフロージョ（Ｆｌｏｗｊｏ）ソフトウエアで分析した。
【００７３】
（研究概要）
（研究開始日付及び終了日付）
ＨＢＶに感染したマウスで、免疫系に対するＲＡＳＳ１０５の治療的及び予防的効果を調べるために、研究を２部に分けた。
【００７４】
（研究目的）
本研究の目的は、ＲＡＳＳ１０５で処置されたＨＢＶ感染マウスのリンパ組織及び末梢血中の細胞構成に対するＲＡＳＳ１０５の効果を調べるものであった。
【００７５】
（研究結果）
（ＲＡＳＳ１０５を伴う治療的処置の効果）
（マウス情報）
同年齢の２匹の未処置（ｎａｉｖｅ）のマウスを含む全１０匹の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスを、ウーシーアップテック社（ＷｕｘｉＡｐｐｔｅｃ）の感染症（ＩＤ）群から移した。群と療法情報を表４に示す。
【００７６】
【表４】
2017525752.tif 000042
【００７７】
（末梢血における細胞集団）
赤血球を除去した後、末梢血中のＴ細胞系譜、Ｂ細胞、樹状細胞、顆粒白血球、及び単球／マクロファージをＦＡＣＳ分析により分析した。
【００７８】
全てのＴ細胞とＢ細胞をそれぞれＣＤ３とＣＤ１９によって特徴付けた。ＨＢＶ感染症では、未処置（ｎａｉｖｅ）のマウスに比べてＣＤ３＋Ｔ細胞の百分率が変わらなかった。ＲＡＳＳ１０５の治療用処置はＣＤ３＋Ｔ細胞とＣＤ１９＋Ｂ細胞の両方の百分率をかなり減少させた（図１）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図２に記載した。
【００７９】
図１。末梢血におけるＴ及びＢリンパ球の百分率。全リンパ球をゲート制御した。ＲＡＳＳ１０５による治療的処置後、Ｔ／Ｂ細胞の百分率は末梢血中においてかなり減少した。（テストより）
【００８０】
図２。末梢血中のＴ細胞とＢ細胞の割合。全リンパ球をゲート制御した。
【００８１】
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋（非ＣＤ４＋）Ｔ細胞系譜の百分率を更に分析するために、全ＣＤ３＋Ｔ細胞上にゲーティングを行った。結果、全群内のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率に相違がないことがわかった（図３）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図４に図示した。
【００８２】
図３。末梢血中のＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御し、更にＣＤ４／ＣＤ８割合のために分析した。
【００８３】
図４。末梢血中のＣＤ４とＣＤ８Ｔ細胞の割合。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御した。
【００８４】
末梢血中の全ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（ＤＣ）とＧｒ−１＋顆粒白血球の百分率を調べた。ＨＢＶ感染症はＣＤ１１ｃ＋ＤＣの百分率を減少させた、これは生体にも観察された現象である、一方、Ｇｒ−１＋顆粒白血球の百分率は影響を受けなかった。ＲＡＳＳ１０５の治療的処置はＣＤ１１ｃ＋ＤＣに何ら影響を示さなかったが、Ｇｒ−１＋顆粒白血球の百分率はかなり増加した（図５）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図６に図示した。
【００８５】
図５。末梢血中の樹状細胞と顆粒白血球のパーセント。全生細胞をゲート制御した。治療的処置後、顆粒白血球のパーセントは末梢血中において増加した（Ｔテストより）。
【００８６】
図６。末梢血中の顆粒白血球／樹状細胞の割合。全生細胞をゲート制御した。
【００８７】
表面マーカーＣＤ１１ｂ抗原を使って単球の百分率を調べた。溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群と比較したＧｒ−１＋顆粒白血球と同様かなり増加した（図７）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図８に図示した。
【００８８】
図７。末梢血中の単球の百分率。全生細胞をゲート制御した。処置後、末梢血中の単球の百分率はかなり増加した（ｔテスト）。
【００８９】
図８。末梢血中の単球の百分率。全生細胞をゲート制御した。
【００９０】
（脾臓における細胞集団）
Ｔ細胞系譜からなる脾臓における細胞系譜（ＣＤ４＋／ＣＤ８＋・Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞及び調節性Ｔ細胞）、Ｂ細胞、ｍＤＣ、ｐＤＣ、顆粒白血球及びマクロファージを、細胞表面と細胞内マーカーによって特徴付けた。
【００９１】
脾臓におけるＴ細胞とＢ細胞の百分率を調べた。ＲＡＳＳ１０５の治療的処置はＣＤ３＋Ｔ細胞とＣＤ１９＋Ｂ細胞の両方の百分率をかなり削減させた（図９）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図１０に図示した。
【００９２】
図９。脾臓におけるＴ及びＢリンパ球の百分率。全リンパ球をゲート制御した。ＲＡＳＳ１０５の治療的処置後、Ｔ細胞とＢ細胞のパーセントは脾臓においてかなり減少した。
【００９３】
図１０。脾臓におけるＴ及びＢリンパ球のパーセント。全リンパ球をゲート制御した。
【００９４】
ＣＤ４＋（非ＣＤ８＋）及びＣＤ８＋Ｔ細胞系譜の百分率を更に分析するために、全ＣＤ３＋Ｔ細胞上にゲーティングを行った。結果、全群内のＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率に相違がないことがわかった（図１１）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図１２に図示した。
【００９５】
図１１。脾臓におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御し、更にＣＤ４／ＣＤ８百分率のために分析した。
【００９６】
図１２。脾臓におけるＣＤ４とＣＤ８Ｔ細胞の割合。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御した。
【００９７】
３つのＴ細胞系譜、ナイーブＴ細胞（ＣＤ４４低ＣＤ６２Ｌ高）、中央メモリーＴ細胞（ＴＣＭＳ、ＣＤ４４高ＣＤ６２Ｌ高）及びエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭＳ、ＣＤ４４高ＣＤ６２Ｌ低）を、表面マーカーＣＤ４４及びＣＤ６２Ｌによって特徴付けた。ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞におけるこれらのＴ細胞系譜の百分率をそれぞれ分析した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方で、ＲＡＳＳ１０５の治療的処置後にナイーブＴ細胞とＴＣＭＳの百分率が減少し、ＴＥＭＳが増加した、これは合成物に脾臓においてナイーブＴ細胞からメモリーＴ細胞へのＴ細胞変換を促進させる効果があることを示している（図１３と図１５）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図１４と図１６に図示した。
【００９８】
図１３。脾臓におけるＴ細胞サブセット百分率。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【００９９】
図１４。脾臓におけるＣＤ４Ｔ細胞サブセット割合。全ＣＤ４Ｔ細胞がゲートで制御され、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１００】
図１５。脾臓におけるＴ細胞サブセット百分率。全ＣＤ８Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１０１】
図１６。脾臓におけるＣＤ８Ｔ細胞サブセット割合。全ＣＤ８Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１０２】
調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）を、反ＣＤ４及び反ＣＤ２５抗体の細胞表面染色の後、反Ｆｏｘｐ３抗体の細胞内染色によって分析した。脾臓におけるＴｒｅｇｓのパーセントは溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群に比べて増加した（図１７）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図１８に図示した。
【０１０３】
図１７。脾臓におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞の百分率。Ｆｏｘｐ３調節性Ｔ細胞を細胞内染色によって分析した。処置後、Ｔ制御細胞の百分率は増加した。
【０１０４】
図１８。脾臓における調節性Ｔ細胞の割合。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御した。
【０１０５】
脾臓における骨髄樹状細胞（ｍＤＣ、Ｂ２２０−ＣＤ１１ｃ＋）及び形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ、Ｂ２２０＋ＣＤ１１ｃ＋）を含む樹状細胞を分析した。全群内にｍＤｃとｐＤＣの大きな相違は観察されなかった（図１９）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図２０に図示した。
【０１０６】
図１９。脾臓におけるｐＤＣとｍＤＣの百分率。全生細胞をゲート制御した。合成物処置後大きな相違はなかった（ｔテストより）。
【０１０７】
図２０。脾臓におけるｍＤｃとｐＤＣの割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１０８】
脾臓におけるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ及びＧｒ−１＋顆粒白血球を分析した。図２１に示すように、脾臓におけるこれら細胞系譜の百分率には全群内で大きな改変はなかった。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図２２に図示した。
【０１０９】
図２１。脾臓におけるマクロファージ及び顆粒白血球の百分率。全生細胞をゲート制御した。合成物処置後、大きな相違はなかった（ｔテストより）。
【０１１０】
図２２。脾臓におけるマクロファージ／顆粒白血球の割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１１１】
（排水性リンパ節の細胞集団）
Ｔ細胞系譜（ＣＤ４＋／ＣＤ８＋・Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞及び調節性Ｔ細胞）、樹状細胞、顆粒白血球及びマクロファージを含む排水性リンパ節における細胞系譜を、細胞表面及び細胞内マーカーによって特徴付けた。
【０１１２】
リンパ節の全Ｔ細胞の百分率を分析した。ＨＢＶ感染症はＣＤ３＋Ｔ細胞の百分率に影響しなかったが、ＲＡＳＳ１０５の治療的処置は溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群と比べてＣＤ３＋Ｔ細胞の百分率をかなり減少させた（図２３）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図２４に図示した。
【０１１３】
図２３。リンパ節のＴ細胞の百分率。全リンパ球をゲート制御した。処置後、リンパ節のＴ細胞の百分率がかなり減少した（ｔテスト）。
【０１１４】
図２４。リンパ節のＣＤ３Ｔ細胞の割合。全リンパ球をゲート制御した。
【０１１５】
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞系譜の百分率を更に分析するために、全ＣＤ３＋Ｔ細胞上にゲーティングを行った。ＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率が減少する傾向にあったが、ＣＤ８＋Ｔ細胞は増加する傾向にあり、このことはＲＡＳＳ１０５の治療的処置がリンパ節のＣＤ４＋／ＣＤ８＋・Ｔ細胞の百分率に影響したかもしれないことを示している（図２５）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図２６に図示した。
【０１１６】
図２５。リンパ節のＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御し、更にＣＤ４／ＣＤ８割合を分析した。治療的処置後、ＣＤ４Ｔ細胞の百分率は減少した（ｔテストより）。
【０１１７】
図２６。リンパ節のＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の割合。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御し、更にＣＤ４／ＣＤ８割合を分析した。
【０１１８】
３つのＴ細胞系譜、ナイーブＴ細胞、ＴＣＭＳ及びＴＥＭＳを、表面マーカーＣＤ４４及びＣＤ６２Ｌによって特徴付けた。ＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞におけるこれらのＴ細胞系譜の百分率をそれぞれ分析した。リンパ節における結果を脾臓のものと比較した。ＣＤ４＋とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方で、ＲＡＳＳ１０５の治療的処置後にナイーブＴ細胞とＴＣＭＳの百分率が減少し、そしてＴＥＭＳが増加した、これは合成物にリンパ節においてナイーブＴ細胞からメモリーＴ細胞へのＴ細胞変換を促進させる効果があることを示している（図２７と図３０）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図２８と図３０に図示した。
【０１１９】
図２７。リンパ節におけるＣＤ４Ｔ細胞サブセット百分率。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群に比べて群全てに大きな相違はみられなかった。
【０１２０】
図２８。リンパ節におけるＣＤ４Ｔ細胞サブセット割合。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１２１】
図２９。リンパ節におけるＣＤ８Ｔ細胞サブセット百分率。全ＣＤ８Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１２２】
図３０。リンパ節におけるＣＤ８Ｔ細胞サブセット割合。全ＣＤ８Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１２３】
調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）を分析した。リンパ節におけるＴｒｅｇｓの百分率は大きな相違なく僅かに増加した（図３１）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図３２に図示した。
【０１２４】
図３１。リンパ節におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞の百分率。合成物処置後に大きな改変はなかった。
【０１２５】
図３２。リンパ節における調節性Ｔ細胞の割合。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御した。各群の１つの代表的な情報を示す。
【０１２６】
リンパ節の全樹状細胞を分析した。ＲＡＳＳ１０５の治療的処置はＨＢＶ感染症に誘発されたＤＣの減少を覆すかもしれない（図３３）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図３４に図示した。
【０１２７】
図３３。リンパ節のＤＣの百分率。全生細胞をゲート制御した。処置後、ＤＣのパーセントはかなり増加した（ｔテストより）。
【０１２８】
図３４。リンパ節におけるＤＣの割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１２９】
リンパ節におけるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ及びＧｒ−１＋顆粒白血球を分析した。ＣＤ１１ｂ＋マクロファージ及びＧｒ−１＋顆粒白血球の百分率は両方ともかなり増加した（図３５）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図３６に図示した。
【０１３０】
図３５。リンパ節におけるマクロファージと顆粒白血球の百分率。全生細胞をゲート制御した。リンパ節におけるマクロファージと顆粒白血球の百分率はかなり増加した（ｔテストより）。
【０１３１】
図３６。リンパ節（ｌｙｍｐｈ  ｎｉｄｅｓ）におけるマクロファージ／顆粒白血球の割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１３２】
（ＲＡＳＳ１０５を用いた予防処置の効果）
（マウス情報）
同年齢の２匹の未処置（ｎａｉｖｅ）のマウスを含む全１４匹の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスを、ウーシーアップテック社（ＷｕｘｉＡｐｐｔｅｃ）の感染症（ＩＤ）群から移した。群と療法情報を表５に示した。
【０１３３】
【表５】
2017525752.tif 000043
【０１３４】
（末梢血における細胞集団）
赤血球を除去した後、末梢血中のＴ細胞系譜、Ｂ細胞、樹状細胞、顆粒白血球、及び単球／マクロファージがＦＡＣＳ分析により分析した。
【０１３５】
全Ｔ細胞とＢ細胞を特徴付けた。治療的処置と違って、ＲＡＳＳ１０５の予防的処置では統計的有意性は見つからなかったが、ＣＤ３＋Ｔ細胞の百分率に影響を与えないでＣＤ１９＋Ｂ細胞の百分率を減少させた（図３７）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図３８に図示した。
【０１３６】
図３７。末梢血におけるＴ及びＢリンパ球のパーセント。全リンパ球をゲート制御した。
【０１３７】
図３８。末梢血におけるＴ細胞とＢ細胞の割合。全リンパ球をゲート制御した。
【０１３８】
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋（非ＣＤ４＋）Ｔ細胞系譜の百分率を更に分析するために、全ＣＤ３＋Ｔ細胞上にゲーティングを行った。治療的処置と違って、予防的処置はＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率を減少させ、ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を増加させた、このことはＲＡＳＳ１０５の潜在的影響が末梢血のＣＤ４＋／ＣＤ８＋・Ｔ細胞の比率を減少させることを示した（図３９）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図４０に図示した。
【０１３９】
図３９。末梢血におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御し、ＣＤ４／ＣＤ８百分率を更に分析した。ＲＡＳＳ１０５の予防的処置後、ＣＤ４Ｔ細胞の百分率は減少したがＣＤ８Ｔ細胞は増加した（ｔテストより）。
【０１４０】
図４０。末梢血におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の割合。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御した。
【０１４１】
末梢血中の全ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（ＤＣ）とＧｒ−１＋顆粒白血球の結果も、治療的処置におけるものと異なった。ＲＡＳＳ１０５の予防的処置はＨＢＶ感染症により誘発されたＤＣの減少を覆したが、末梢血における顆粒白血球に大きな影響はなかった（図４１）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図４２に図示した。
【０１４２】
図４１。末梢血における樹状細胞と顆粒白血球の百分率。全生細胞をゲート制御した。予防的処置後、末梢血（［ｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ）における樹状細胞のパーセントが増加した。
【０１４３】
図４２。末梢血における顆粒白血球／樹状細胞の割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１４４】
単球の百分率を調べた。全群内に大きな相違はなかった（図４３）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図４４に図示した。
【０１４５】
図４３。末梢血における単球の百分率。全生細胞をゲート制御した。
【０１４６】
図４４。末梢血における単球の割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１４７】
（脾臓の細胞集団）
Ｔ細胞系譜（ＣＤ４＋／ＣＤ８＋・Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞及び調節性Ｔ細胞）、Ｂ細胞、ｍＤＣ、ｐＤＣ、顆粒白血球及びマクロファージを含む脾臓における細胞系譜を、細胞表面及び細胞内マーカーによって特徴付けた。
【０１４８】
脾臓におけるＴ細胞とＢ細胞の百分率を調べた。治療的処置と違って、予防的処置はＣＤ３＋Ｔ細胞とＣＤ１９＋Ｂ細胞の百分率に影響を示さなかった（図４５）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図４６に図示した。  
【０１４９】
図４５。脾臓におけるＴ及びＢリンパ球の百分率。全リンパ球をゲート制御した。
【０１５０】
図４６。脾臓におけるＴ及びＢ細胞の割合。全リンパ球をゲート制御した。
【０１５１】
ＣＤ４＋（非ＣＤ８＋）及びＣＤ８＋Ｔ細胞系譜の百分率を更に分析するために、全ＣＤ３＋Ｔ細胞上にゲーティングを行った。脾臓内のＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率は僅かに減少し、ＣＤ８＋Ｔ細胞は僅かに増加した（図４７）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図４８に図示した。
【０１５２】
図４７。脾臓におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御し、更にＣＤ４／ＣＤ８割合を分析した。ＲＡＳＳ１０５による予防的処置後、ＣＤ４Ｔ細胞の百分率は僅かに減少したが、ＣＤ８Ｔ細胞は僅かに増加した（ｔテストより）。
【０１５３】
図４８。脾臓におけるＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の割合。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御し、ＣＤ４／ＣＤ８割合を更に分析した。
【０１５４】
ナイーブＴ細胞、中央メモリーＴ細胞及びエフェクターメモリーＴ細胞を調べた。脾臓におけるＣＤ４＋又はＣＤ８＋Ｔ細胞のこれらＴ細胞系譜の百分率をそれぞれ分析した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方で、ＲＡＳＳ１０５の予防的処置後にナイーブＴ細胞は減少し、そしてＴＥＭＳがかなり増加した（図４９及び図５０）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図５０と図５２に図示した。
【０１５５】
図４９。脾臓におけるＴ細胞サブセット百分率。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１５６】
図５０。脾臓におけるＣＤ４Ｔ細胞サブセット割合。全ＣＤ４Ｔ細胞がゲートで制御され、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１５７】
図５１。脾臓におけるＴ細胞サブセット百分率。全ＣＤ８Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１５８】
図５２。脾臓におけるＣＤ８Ｔ細胞サブセット割合。全ＣＤ８Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１５９】
調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）の結果を治療的処置のものと比較した。脾臓におけるＴｒｅｇの百分率はＲＡＳＳ１０５の予防的処置による溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群と比べて増加した（図５３）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図５４に図示した。
【０１６０】
図５３。脾臓におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞の百分率。Ｆｏｘｐ３調節性Ｔ細胞を細胞内染色することによって分析した。
【０１６１】
図５４。脾臓における調節性Ｔ細胞の割合。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御した。
【０１６２】
脾臓におけるｍＤＣ及びｐＤＣを含む樹状細胞を分析した。予防的処置後、全群内にｍＤｃとｐＤＣの大きな相違は観察されなかった（図５５）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図５６に図示した。
【０１６３】
図５５。脾臓におけるｐＤＣとｍＤＣの百分率。全生細胞をゲート制御した。合成物処置後大きな相違はなかった（ｔテストより）。
【０１６４】
図５６。脾臓におけるｍＤｃとｐＤＣの割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１６５】
脾臓におけるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ及びＧｒ−１＋顆粒白血球を分析した。図５７に示すように、マクロファージと顆粒白血球の百分率は増加したが、大きな違いは観察されなかった。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図５８に図示した。
【０１６６】
図５７。脾臓におけるマクロファージ及び顆粒白血球の百分率。全生細胞をゲート制御した。合成物処置後、大きな相違はなかった（ｔテストより）。
【０１６７】
図５８。脾臓におけるマクロファージ／顆粒白血球の割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１６８】
（排水性リンパ節の細胞集団）
Ｔ細胞系譜（ＣＤ４＋／ＣＤ８＋・Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞及び調節性Ｔ細胞）、ＤＣ、顆粒白血球及びマクロファージを含む排水性リンパ節における細胞系譜を、細胞表面及び細胞内マーカーによって特徴付けた。
【０１６９】
リンパ節の全Ｔ細胞の百分率を分析した。治療的処置と同様に、ＨＢＶ感染症はＣＤ３＋Ｔ細胞の百分率に影響しなかったが、ＲＡＳＳ１０５の予防的処置は溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群と比べてＣＤ３＋Ｔ細胞の百分率をかなり減少させた（図５９）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図６０に図示した。
【０１７０】
図５９。リンパ節のＴ細胞の百分率。全リンパ球をゲート制御した。処置後、リンパ節のＴ細胞のパーセントがかなり減少した（ｔテスト）。
【０１７１】
図６０。リンパ節のＣＤ３Ｔ細胞の割合。全リンパ球をゲート制御した。
【０１７２】
ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞系譜の百分率を更に分析するために、全ＣＤ３＋Ｔ細胞上にゲーティングを行った。治療的処置にみられたように、ＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率が減少する傾向にあったが、ＣＤ８＋Ｔ細胞は予防的処置後に増加する傾向にあった（図６１）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図６２に図示した。
【０１７３】
図６１。リンパ節のＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の百分率。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御し、更にＣＤ４／ＣＤ８割合を分析した。予防的処置後、ＣＤ４Ｔ細胞のパーセントは減少した（ｔテストより）。
【０１７４】
図６２。リンパ節のＣＤ４及びＣＤ８Ｔ細胞の割合。全ＣＤ３Ｔ細胞をゲート制御し、更にＣＤ４／ＣＤ８割合を分析した。
【０１７５】
ナイーブＴ細胞、中央メモリーＴ細胞及びエフェクターメモリーＴ細胞の結果は治療的処置のものと全く異なっていた。予防的処置はナイーブＴ細胞とＴＣＭＳにあまり影響を与えなかったが、ＴＥＭＳの百分率を増加させた（図６３及び図６５）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図６４と図６６に図示した。
【０１７６】
図６３。リンパ節におけるＴ細胞サブセット百分率。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群に比べてエフェクターメモリーＴ細胞を除いて大きな相違はみられなかった。
【０１７７】
図６４。リンパ節におけるＴ細胞サブセット割合。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１７８】
図６５。リンパ節におけるＴ細胞サブセット百分率。全ＣＤ８Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群に比べて全グルーブ内に大きな相違は見られなかった。
【０１７９】
図６６。リンパ節におけるＴ細胞サブセット割合。全ＣＤ８Ｔ細胞をゲート制御し、Ｔ細胞サブセットを決定した。
【０１８０】
調節性Ｔ細胞を分析した。全群内に大きな相違はなかった（図６７）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図６８に図示した。
【０１８１】
図６７。リンパ節におけるＦｏｘｐ３調節性Ｔ細胞の百分率。Ｆｏｘｐ３調節性Ｔ細胞を細胞内染色により分析した。合成物処置後に大きな改変はなかった（ｔテストにより）。
【０１８２】
図６８。リンパ節における調節性Ｔ細胞の割合。全ＣＤ４Ｔ細胞をゲート制御した。
【０１８３】
リンパ節における全樹状細胞の結果は治療的処置後のものと同様であった。ＲＡＳＳ１０５の予防的処置も溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群と比べてＤＣの百分率をかなり増加させた（図６９）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図７０に図示した。
【０１８４】
図６９。リンパ節のＤＣの百分率。全生細胞をゲート制御した。処置後、ＤＣの百分率はかなり増加した（ｔテストより）。
【０１８５】
図７０。リンパ節におけるＤＣの割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１８６】
リンパ節におけるＣＤ１１ｂ＋マクロファージ及びＧｒ−１＋顆粒白血球を分析した。ＣＤ１１ｂ＋マクロファージ及びＧｒ−１＋顆粒白血球は両方ともかなり増加した（図７１）。各群からの代表的なＦＡＣＳ情報を図７２に図示した。
【０１８７】
図７１。リンパ節におけるマクロファージと顆粒白血球の百分率。全生細胞をゲート制御した。ＲＡＳＳ１０５による治療的処置後、マクロファージと顆粒白血球の百分率はかなり増加した（ｔテストより）。
【０１８８】
図７２。リンパ節におけるマクロファージ／顆粒白血球の割合。全生細胞をゲート制御した。
【０１８９】
（結論）
ＨＢＶ感染したマウスのリンパ組織及び末梢血における異なる細胞系譜へのＲＡＳＳ１０５の影響をＦＡＣＳ分析により調査した。Ｔ細胞系譜（ＣＤ４＋／ＣＤ８＋・Ｔ細胞、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞及び調節性Ｔ細胞を含む）、Ｂ細胞、樹状細胞（ｍＤＣ、ｐＤＣを含む）、顆粒白血球及び単球／マクロファージを分析した。ＲＡＳＳ１０５を治療的及び予防的処置用に２通りの異なるスケジュールで投与した。
治療的処置には幾つかの興味ある発見があった。ＲＡＳＳ１０５で処置した動物は、溶媒（Ｖｅｃｈｉｃｌｅ）群のものと比較して、リンパ球の減少や顆粒白血球及び単球の増加を含み、多数の免疫細胞及び様々の系譜において変化を示した。予防的処置は免疫細胞においてあまり劇的ではない変化に導いた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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