(57)【要約】  本明細書の一部の実施形態によれば、炎症性病態の予防および治療のための方法および組成物が提供される。一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーター、例えば、ミルテホシンを含む組成物が提供される。一部の実施形態において、組成物は、スルファチドおよび／またはＲＡＲアゴニストをさらに含む。一部の実施形態において、組成物は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞のアクチベーターおよび／またはＩ型ＮＫＴ細胞のインヒビターを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象における少なくとも１つの炎症性病態を緩和または予防する方法であって、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーターを対象に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象に対するＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニストを前記対象に投与することをさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターおよび前記ＲＡＲアゴニストが同時投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストが別個に投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターおよび前記ＲＡＲアゴニストが逐次投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターが経口投与される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシン、ミルテホシンアナログ、またはリン脂質の少なくとも１つを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、またはＬＳＭのアナログを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、請求項１〜７のいずれか一項に
記載の方法。
【請求項１５】
前記ＲＡＲアゴニストがＡＴＲＡまたはイソトレチノインを含む、請求項３〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＲＡＲアゴニストがタザロテンを含む、請求項３〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＲＡＲアゴニストがレチノールまたはレチノールのエステルを含む、請求項３〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＩＩ型ＮＫＴ細胞の活性化が前記ＩＩ型ＮＫＴ細胞によるＩＬ−２の産生、ＩＩ型ＮＫＴ細胞の増殖、またはＩＩ型ＮＫＴ細胞の表面上のＣＤ６９の発現の少なくとも１つを含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化の阻害がアルファ−ＧａｌＣｅｒ／ＣＤ１ｄ−テトラマー＋ＴＣＲ−ベータ＋細胞の蓄積の阻害を含む、請求項３〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
対象における少なくとも１つの炎症性病態を緩和または予防する方法であって、ある量のＮＫＴ−２アクチベーターおよびある量のスルファチドを前記対象に投与することを含み、前記ＮＫＴ−２アクチベーターの量および前記スルファチドの量が、全体として、前記対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である、方法。
【請求項２１】
前記炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記スルファチドおよびＮＫＴ−２アクチベーターが同時投与される、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記スルファチドおよびＮＫＴ−２アクチベーターが別個に投与される、請求項２０または２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターが経口投与される、請求項２０〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターの量が前記対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分であり、および前記スルファチドの量が前記対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記対象に対するＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニストを前記対象に投与することをさらに含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターおよび前記ＲＡＲアゴニストが同時投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストが別個に投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターおよび前記ＲＡＲアゴニストが逐次投与される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシン、ミルテホシンアナログ、またはリン脂質の少なくとも１つを含む、請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、またはＬＳＭのアナログを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、請求項３０〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記スルファチドが以下の化学構造：
2017537984.tif 000345
（式中、Ｒ１は、原子の手、水素、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルケニルおよびＣ５〜Ｃ１２糖からなる群から選択され；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ４は、水素、ヒドロキシ基およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ５は、水素、ヒドロキシル、カルボニル、アルコキシおよび原子の手からなる群から選択され；Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンルからなる群から選択され；Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンルか
らなる群から選択され；およびＲ８は、水素、ヒドロキシル基、カルボニル、アルコキシ基および原子の手からなる群から選択される）
を有する、請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記スルファチドが以下の化学構造：
2017537984.tif 000346
を有する、請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記ＲＡＲアゴニストがＡＴＲＡまたはイソトレチノインを含む、請求項２０〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＲＡＲアゴニストがタザロテンを含む、請求項２０〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記ＲＡＲアゴニストがレチノールまたはレチノールのエステルを含む、請求項２０〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
対象におけるＩ型ＮＫＴ細胞媒介組織損傷を阻害する方法であって、有効量のＮＫＴ−２アクチベーターを前記対象に投与することを含み、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化が低減される、方法。
【請求項４３】
前記炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシン、ミルテホシンアナログ、またはリン脂質の少なくとも１つを含む、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、またはＬＳＭのアナログを含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９
Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、請求項４４〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、請求項４４〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項５１】
対象における少なくとも１つの炎症性病態の緩和または予防において使用される組成物であって、前記対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーターを含む組成物。
【請求項５２】
前記対象に対するＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニストをさらに含む、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】
前記炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、肝硬変、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、請求項５１または５２に記載の組成物。
【請求項５４】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシン、ミルテホシンアナログ、またはリン脂質の少なくとも１つを含む、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５５】
前記リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、またはＬＳＭのアナログを含む、請求項５４に記載の組成物。
【請求項５６】
前記ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５８】
前記ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、請求項５４〜５７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５９】
前記ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、請求項５４〜５８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６０】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６１】
前記ＲＡＲアゴニストがＡＴＲＡまたはイソトレチノインを含む、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６２】
前記ＲＡＲアゴニストがタザロテンを含む、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６３】
前記ＲＡＲアゴニストがレチノールまたはレチノールのエステルを含む、請求項５２〜６０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６４】
経口投与のために配合される、請求項５１〜６３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６５】
対象における少なくとも１つの炎症性病態の緩和または予防において使用される組成物であって、
ある量のＮＫＴ−２アクチベーター；および
ある量のスルファチド
を含み、
前記ＮＫＴ−２アクチベーターの量および前記スルファチドの量が、全体として、前記対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である、組成物。
【請求項６６】
前記炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、自己免疫性肝炎、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターの量が前記対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分であり、および前記スルファチドの量が前記対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である、請求項６５または６６に記載の組成物。
【請求項６８】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシン、ミルテホシンアナログ、またはリン脂質の少なくとも１つを含む、請求項６５〜６７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６９】
前記リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、またはＬＳＭのアナログを含む、請求項６８に記載の組成物。
【請求項７０】
前記ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、請求項６５〜６７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７２】
前記ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７３】
前記ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７４】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、請求項６５〜６７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７５】
前記スルファチドが以下の化学構造：
2017537984.tif 000347
（式中、Ｒ１は、原子の手、水素、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルケニルおよびＣ５〜Ｃ１２糖からなる群から選択され；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ４は、水素、ヒドロキシ基およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ５は、水素、ヒドロキシル、カルボニル、アルコキシおよび原子の手からなる群から選択され；Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンルからなる群から選択され；Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンルからなる群から選択され；およびＲ８は、水素、ヒドロキシル基、カルボニル、アルコキシ基および原子の手からなる群から選択される）
を有する、請求項６５〜７４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７６】
前記スルファチドが以下の化学構造：
2017537984.tif 000348
を有する、請求項６５〜７４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７７】
前記対象におけるＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニストをさらに含む、請求項６５〜７６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７８】
前記ＲＡＲアゴニストがＡＴＲＡまたはイソトレチノインを含む、請求項７７に記載の組成物。
【請求項７９】
前記ＲＡＲアゴニストがタザロテンを含む、請求項７７に記載の組成物。
【請求項８０】
前記ＲＡＲアゴニストがレチノールまたはレチノールのエステルを含む、請求項７７に記載の組成物。
【請求項８１】
前記炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターの量が前記対象の肝臓中のＣＤ８αα＋Ｔ細胞を活性化させるために十分である、請求項１〜５０または８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１〜５０または８１もしくは８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
前記単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞が前記ＮＫＴ−２アクチベーターよりも前に前記対象に投与される、請求項８２または８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞が前記ＮＫＴ−２アクチベーターと同時に前記対象に投与される、請求項８２または８３に記載の方法。
【請求項８６】
前記単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞が前記ＮＫＴ−２アクチベーターに続いて前記対象に投与される、請求項８２または８３に記載の方法。
【請求項８７】
哺乳動物から細胞試料を得ること；
前記細胞試料からＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を単離すること；および
前記単離Ｔ細胞を拡大させること
をさらに含む、請求項８２〜８６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
前記哺乳動物が前記対象である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
前記哺乳動物が前記対象以外の生物である、請求項８７に記載の方法。
【請求項９０】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋である、請求項８２〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ１２２＋である、請求項８２〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ１２２＋である、
請求項８２〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の２つ以上の混合物を含む、請求項８２〜９２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９４】
対象における少なくとも１つの炎症性病態を緩和または予防する方法であって、
単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を前記対象に投与すること；および
ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーターを前記対象に投与すること
を含む方法。
【請求項９５】
前記炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、請求項９４または９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、請求項９４または９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターの量が前記対象の肝臓中のＣＤ８αα＋Ｔ細胞を活性化させるために十分である、請求項９４〜９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
前記単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞が前記ＮＫＴ−２アクチベーターよりも前に前記対象に投与される、請求項９４〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
前記単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞が前記ＮＫＴ−２アクチベーターと同時に前記対象に投与される、請求項９４〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
前記単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞が前記ＮＫＴ−２アクチベーターに続いて前記対象に投与される、請求項９４〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
哺乳動物から細胞試料を得ること；
前記細胞試料からＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を単離すること；および
前記単離Ｔ細胞を拡大させること
をさらに含む、請求項９４〜１０１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
前記哺乳動物が前記対象である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記哺乳動物が前記対象以外の生物である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０５】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋である、請求項９４〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０６】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ１２２＋である、請求項９４〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ１２２＋である、前記９４〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の２つ以上の混合物を含む、請求項９４〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
前記炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、請求項５１〜８０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１０】
前記ＮＫＴ−２アクチベーターの量が前記対象の肝臓中のＣＤ８αα＋Ｔ細胞を活性化させるために十分である、請求項５１〜８０または１０９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１１】
前記対象への投与において使用される単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞をさらに含む、請求項５１〜８０または１０９もしくは１１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１２】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋である、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１３】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ１２２＋である、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１４】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ１２２＋である、請求項１１１に記載の組成物。
【請求項１１５】
前記単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の２つ以上の混合物を含む、請求項１１１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、参照により全体として本明細書に組み込まれる、“ＰＲＥＶＥＮＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＴＲＥＡＴＭＥＮＴ  ＯＦ  ＩＮＦＬＡＭＭＡＴＯＲＹ  ＣＯＮＤＩＴＩＯＮＳ”という名称の２０１４年１２月９日に出願された米国仮特許出願第６２／０８９，６９０号明細書の優先権の利益を主張する。
【０００２】
本明細書の一部の実施形態は、肝臓の炎症性病態の予防および治療におけるＩＩ型および／またはＩ型ＮＫＴ細胞をモジュレートする組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
過剰のアルコール使用は、西洋諸国における肝疾患の主な原因である。肝傷害の証拠は、１日４杯以上のアルコール飲料（４杯の１２オンスビール、４杯のグラスワイン、または男性について４オンスの、女性についてその半量のハードリカー）を消費する個体において観察される。どのようにアルコールが肝臓を損傷するかは完全に理解されていないが、慢性アルコール消費は、炎症促進性サイトカイン（ＴＮＦ−アルファ、ＩＬ６およびＩＬ８）の分泌、酸化ストレス、脂質過酸化、およびアセトアルデヒド毒性をもたらし、それらは肝細胞の炎症、アポトーシスおよび最終的に線維症をもたらす。
【０００４】
アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）は、３つの主な段階：アルコール性脂肪肝疾患、アルコール性肝炎、および肝硬変を有する。アルコール性脂肪肝疾患は、肝臓中の脂肪酸の蓄積を特徴とし、通常、無症状であり、個体がアルコールを数週間自制する場合に可逆的である。重症の症例において、虚弱、悪心、腹部疼痛、食欲損失、および倦怠感が経験され得る。ほとんどの大量飲酒者があるレベルの脂肪肝疾患を呈し、一部の症例では、大量飲酒の必要性は１週間未満の期間にわたり毎日行うことで足りるが、大量飲酒者の５人に１人のみがアルコール性肝炎を発症し、４人に１人が肝硬変を発症する。アルコール性肝炎は、肝細胞の炎症を特徴とし、一般に禁酒により可逆的である。肝硬変は、炎症、線維化（細胞硬化）、および体内の化学物質の解毒を妨げる膜損傷を特徴とし、瘢痕化および壊死をもたらし、一般に不可逆的である。
【０００５】
アルコール性肝疾患における肝組織損傷の異なる段階の基礎となる細胞および分子機序は、十分に理解されていない。いくつかの分野で進展が見られたが、この疾患を食い止めるための有効な治療アプローチは依然として存在しない。これは、一部には、肝臓が免疫学的にも解剖学的にも独特な臓器であるという事実に起因する。例えば、肝実質細胞は代謝機能を有する一方、非実質細胞は免疫機能を果たす。肝臓は、肝実質細胞に加えて、いくつかの非実質細胞、例えば、ＬＳＥＣ、クップファー細胞、樹状細胞、ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞を含有し、それらの全てが免疫に関与し得る。どのように免疫応答が調整されて、アルコール誘発性損傷に対する寛容または免疫のいずれかがもたらされるかは不明である。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本明細書の一部の実施形態によれば、対象における少なくとも１つの炎症性病態を緩和または予防する方法が提供される。本方法は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーターを対象に投与することを含み得る。
【０００７】
本明細書の一部の実施形態によれば、対象における少なくとも１つの炎症性病態を緩和
または予防する方法が提供される。本方法は、ある量のＮＫＴ−２アクチベーターおよびある量のスルファチドを対象に投与することを含み得、ＮＫＴ−２アクチベーターの量およびスルファチドの量は、全体として、対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である。
【０００８】
本明細書の一部の実施形態によれば、対象におけるＩ型ＮＫＴ細胞媒介組織損傷を阻害する方法が提供される。本方法は、有効量のＮＫＴ−２アクチベーターを対象に投与することを含み得、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化が低減される。
【０００９】
本明細書の一部の実施形態によれば、対象における少なくとも１つの炎症性病態の緩和または予防において使用される組成物が提供される。本組成物は、対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーターを含み得る。
【００１０】
本明細書の一部の実施形態によれば、対象における少なくとも１つの炎症性病態を緩和または予防において使用される組成物が提供される。本組成物は、ある量のＮＫＴ−２アクチベーターおよびある量のスルファチドを含み得、ＮＫＴ−２アクチベーターの量およびスルファチドの量は、全体として、対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である。
【００１１】
多数の代替形態も本明細書において提供される。  
【００１２】
代替形態１は、対象における少なくとも１つの炎症性病態を緩和または予防する方法を含み、それが提供される。本方法は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーターを対象に投与することを含み得る。
【００１３】
代替形態２は、炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、代替形態１の方法を含む。
【００１４】
代替形態３は、対象に、対象へのＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニストを投与することをさらに含む、代替形態１〜２のいずれか１つの方法を含む。
【００１５】
代替形態４は、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストが同時投与される、代替形態３の方法を含む。
【００１６】
代替形態５は、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストが別個に投与される、代替形態３の方法を含む。
【００１７】
代替形態６は、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストが逐次投与される、代替形態３の方法を含む。
【００１８】
代替形態７は、ＮＫＴ−２アクチベーターが経口投与される、代替形態１〜６のいずれか１つの方法を含む。
【００１９】
代替形態８は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシン、ミルテホシンアナログ、ま
たはリン脂質の少なくとも１つを含む、代替形態１〜７のいずれか１つの方法を含む。
【００２０】
代替形態９は、リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、またはＬＳＭのアナログを含む、代替形態８の方法を含む。
【００２１】
代替形態１０は、ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、代替形態９の方法を含む。
【００２２】
代替形態１１は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、代替形態１〜７のいずれか１つの方法を含む。
【００２３】
代替形態１２は、ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、代替形態８〜１１のいずれか１つの方法を含む。
【００２４】
代替形態１３は、ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、代替形態８〜１１のいずれか１つの方法を含む。
【００２５】
代替形態１４は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、代替形態１〜７のいずれか１つの方法を含む。
【００２６】
代替形態１５は、ＲＡＲアゴニストがＡＴＲＡまたはイソトレチノインを含む、代替形態３〜１４のいずれか１つの方法を含む。
【００２７】
代替形態１６は、ＲＡＲアゴニストがタザロテンを含む、代替形態３〜１４のいずれか１つの方法を含む。
【００２８】
代替形態１７は、ＲＡＲアゴニストがレチノールまたはレチノールのエステルを含む、代替形態３〜１４を含む。
【００２９】
代替形態１８は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞の活性化がＩＩ型ＮＫＴ細胞によるＩＬ−２の産生、ＩＩ型ＮＫＴ細胞の増殖、またはＩＩ型ＮＫＴ細胞の表面上のＣＤ６９の発現の少なくとも１つを含む、代替形態１〜１７のいずれか１つの方法を含む。
【００３０】
代替形態１９は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化の阻害がアルファ−ＧａｌＣｅｒ／ＣＤ１ｄ−テトラマー＋ＴＣＲ−ベータ＋細胞の蓄積の阻害を含む、代替形態３〜１８のいずれか１つの方法を含む。
【００３１】
代替形態２０は、対象における少なくとも１つの炎症性病態を緩和または予防する方法であって、ある量のＮＫＴ−２アクチベーターおよびある量のスルファチドを対象に投与することを含み、ＮＫＴ−２アクチベーターの量およびスルファチドの量は、全体として、対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である、方法を含む。
【００３２】
代替形態２１は、炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、代替形態２０の方
法を含む。
【００３３】
代替形態２２は、スルファチドおよびＮＫＴ−２アクチベーターが同時投与される、代替形態２０または代替形態２１の方法を含む。
【００３４】
代替形態２３は、スルファチドおよびＮＫＴ−２アクチベーターが別個に投与される、代替形態２０または代替形態２１の方法を含む。
【００３５】
代替形態２４は、ＮＫＴ−２アクチベーターが経口投与される、代替形態２０〜２３のいずれか１つの方法を含む。
【００３６】
代替形態２５は、ＮＫＴ−２アクチベーターの量が対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分であり、およびスルファチドの量が対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である、代替形態２０〜２４のいずれか１つの方法を含む。
【００３７】
代替形態２６は、対象に対するＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニストを対象に投与することをさらに含む、代替形態２０〜２５のいずれか１つの方法を含む。
【００３８】
代替形態２７は、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストが同時投与される、代替形態２６の方法を含む。
【００３９】
代替形態２８は、スルファチドおよびＮＫＴ−２アクチベーターが別個に投与される、代替形態２６の方法を含む。
【００４０】
代替形態２９は、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストが逐次投与される、代替形態２６の方法を含む。
【００４１】
代替形態３０は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシン、ミルテホシンアナログ、またはリン脂質の少なくとも１つを含む、代替形態２０〜２９のいずれか１つの方法を含む。
【００４２】
代替形態３１は、リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、ＬＳＭのアナログを含む、代替形態３０の方法を含む。
【００４３】
代替形態３２は、ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、代替形態３１の方法を含む。
【００４４】
代替形態３３は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、代替形態２０〜２９のいずれか１つの方法を含む。
【００４５】
代替形態３４は、ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、代替形態３０〜３２のいずれか１つの方法を含む。
【００４６】
代替形態３５は、ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、代替形態３０〜３２のいずれか１つの方法を含む。
【００４７】
代替形態３６は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、代替形態２０〜２
９のいずれか１つの方法を含む。
【００４８】
代替形態３７は、スルファチドが以下の化学構造：
【化１】
2017537984.tif 000002
（式中、Ｒ１は、原子の手、水素、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルケニルおよびＣ５〜Ｃ１２糖からなる群から選択され；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ４は、水素、ヒドロキシ基およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ５は、水素、ヒドロキシル、カルボニル、アルコキシおよび原子の手からなる群から選択され；Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンル（ａｌｋｙｎｌ）からなる群から選択され；Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンルからなる群から選択され；およびＲ８は、水素、ヒドロキシル基、カルボニル、アルコキシ基および原子の手からなる群から選択される）
を有する、代替形態２０〜３６のいずれか１つの方法を含む。
【００４９】
代替形態３８は、スルファチドが以下の化学構造：
【化２】
2017537984.tif 000003
を有する、代替形態２０〜３６のいずれか１つの方法を含む。
【００５０】
代替形態３９は、ＲＡＲアゴニストがＡＴＲＡまたはイソトレチノインを含む、代替形態２０〜３５のいずれか１つの方法を含む。
【００５１】
代替形態４０は、ＲＡＲアゴニストがタザロテンを含む、代替形態２０〜３８のいずれか１つの方法を含む。
【００５２】
代替形態４１は、ＲＡＲアゴニストがレチノールまたはレチノールのエステルを含む、
代替形態２０〜３８のいずれか１つの方法を含む。
【００５３】
代替形態４２は、対象におけるＩ型ＮＫＴ細胞媒介組織損傷を阻害する方法であって、有効量のリン脂質を対象に投与することを含み、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化が低減される、方法を含む。
【００５４】
代替形態４３は、炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、代替形態４２を含む。
【００５５】
代替形態４４は、リン脂質がミルテホシン、ミルテホシンアナログ、またはリン脂質の少なくとも１つを含む、代替形態４２〜４３のいずれか１つの方法を含む。
【００５６】
代替形態４５は、リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、ＬＳＭのアナログを含む、代替形態４４の方法を含む。
【００５７】
代替形態４６は、ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、代替形態４５の方法を含む。
【００５８】
代替形態４７は、リン脂質がミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、代替形態４２〜４３のいずれか１つの方法を含む。
【００５９】
代替形態４８は、ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、代替形態４４〜４７のいずれか１つの方法を含む。
【００６０】
代替形態４９は、ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、代替形態４４〜４７のいずれか１つの方法を含む。
【００６１】
代替形態５０は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、代替形態４２〜４３のいずれか１つの方法を含む。
【００６２】
代替形態５１は、対象における少なくとも１つの炎症性病態の緩和または予防において使用される組成物であって、対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーターを含む組成物を含む。
【００６３】
代替形態５２は、対象に対するＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニストをさらに含む、代替形態５１の組成物を含む。
【００６４】
代替形態５３は、炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、肝硬変、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、自己免疫性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、
代替形態４８〜４９のいずれか１つの組成物を含む。
【００６５】
代替形態５４は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシン、ミルテホシンアナログ、またはリン脂質の少なくとも１つを含む、代替形態５１〜５３のいずれか１つの組成物を含む。
【００６６】
代替形態５５は、リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、またはＬＳＭのアナログを含む、代替形態５４の組成物を含む。
【００６７】
代替形態５６は、ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、代替形態５５の組成物を含む。
【００６８】
代替形態５７は、リン脂質がミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、代替形態５１〜５３のいずれか１つの組成物を含む。
【００６９】
代替形態５８は、ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、代替形態５４〜５７のいずれか１つの組成物を含む。
【００７０】
代替形態５９は、ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、代替形態５１〜５７のいずれか１つの組成物を含む。
【００７１】
代替形態６０は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、代替形態５１〜５３のいずれか１つの組成物を含む。
【００７２】
代替形態６１は、ＲＡＲアゴニストがＡＴＲＡまたはイソトレチノインを含む、代替形態５２〜６０のいずれか１つの組成物を含む。
【００７３】
代替形態６２は、ＲＡＲアゴニストがタザロテンを含む、代替形態５２〜６０のいずれか１つの組成物を含む。
【００７４】
代替形態６３は、ＲＡＲアゴニストがレチノールまたはレチノールのエステルを含む、代替形態５２〜６０のいずれか１つの組成物を含む。
【００７５】
代替形態６４は、経口投与のために配合される、代替形態５１〜６３のいずれか１つの組成物を含む。
【００７６】
代替形態６５は、対象における少なくとも１つの炎症性病態の緩和または予防において使用される組成物であって、ある量のＮＫＴ−２アクチベーターおよびある量のスルファチドを含み、ＮＫＴ−２アクチベーターの量およびスルファチドの量は、全体として、対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である、組成物を含む。
【００７７】
代替形態６６は、炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、自己免疫性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、代替形態６１の組成物を含む。
【００７８】
代替形態６７は、ＮＫＴ−２アクチベーターの量が対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分であり、およびスルファチドの量が対象におけるＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分である、代替形態６５〜６６のいずれか１つの組成物を含む。
【００７９】
代替形態６８は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシン、ミルテホシンアナログ、またはリン脂質の少なくとも１つを含む、代替形態６５３〜６７のいずれか１つの組成物を含む。
【００８０】
代替形態６９は、リン脂質がリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、またはＬＳＭのアナログを含む、代替形態６８の組成物を含む。
【００８１】
代替形態７０は、ＬＰＣがＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０）の１つを含む、代替形態６９の組成物を含む。
【００８２】
代替形態７１は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、代替形態６５〜６７のいずれか１つの組成物を含む。
【００８３】
代替形態７２は、ミルテホシンアナログが表２．１または表２．２からの化合物を含む、代替形態６８〜７１のいずれか１つの組成物を含む。
【００８４】
代替形態７３は、ミルテホシンアナログが表２．１からの化合物を含む、代替形態６８〜７１のいずれか１つの組成物を含む。
【００８５】
代替形態７４は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、代替形態６５〜６７のいずれか１つの組成物を含む。
【００８６】
代替形態７５は、スルファチドが以下の化学構造：
【化３】
2017537984.tif 000004
（式中、Ｒ１は、原子の手、水素、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルケニルおよびＣ５〜Ｃ１２糖からなる群から選択され；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ４は、水素、ヒドロキシ基およびアルコキシ基からなる群から選択され；Ｒ５は、水素、ヒドロキシル、カルボニル、アルコキシおよび原子の手からなる群から選択され；Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンルからなる群から選択され；Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンルからなる群から選択され；およびＲ８は、水素、ヒドロキシル基、カルボニル、アルコキシ
基および原子の手からなる群から選択される）
を有する、代替形態６５〜７４のいずれか１つの組成物を含む。
【００８７】
代替形態７６は、スルファチドが以下の化学構造：
【化４】
2017537984.tif 000005
を有する、代替形態６５〜７４のいずれか１つの組成物を含む。
【００８８】
代替形態７７は、対象におけるＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニストをさらに含む、代替形態６５〜７６のいずれか１つの組成物を含む。
【００８９】
代替形態７８は、ＲＡＲアゴニストがＡＴＲＡまたはイソトレチノインを含む、代替形態７７の組成物を含む。
【００９０】
代替形態７９は、ＲＡＲアゴニストがタザロテンを含む、代替形態７７の組成物を含む。
【００９１】
代替形態８０は、ＲＡＲアゴニストがレチノールまたはレチノールのエステルを含む、代替形態７７の組成物を含む。
【００９２】
代替形態８１は、炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、代替形態１〜５０のいずれか１つの方法を含む。
【００９３】
代替形態８２は、ＮＫＴ−２アクチベーターの量が対象の肝臓中のＣＤ８αα＋Ｔ細胞を活性化させるために十分である、代替形態１〜５０または８１のいずれか１つの方法を含む。
【００９４】
代替形態８３は、単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を対象に投与することをさらに含む、代替形態１〜５０または８１〜８２のいずれか１つの方法を含む。
【００９５】
代替形態８４は、単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞がＮＫＴ−２アクチベーターよりも前に対象に投与される、代替形態８２〜８３の１つの方法を含む。
【００９６】
代替形態８５は、単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞がＮＫＴ−２アクチベーターと同時に対象に投与される、代替形態８２〜８３の１つの方法を含む。
【００９７】
代替形態８６は、単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞がＮＫＴ−２アクチベーターに続いて対象に投与される、代替形態８２〜８３の１つの方法を含む。
【００９８】
代替形態８７は、哺乳動物から細胞試料を得ること、細胞試料からＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を単離すること、および単離Ｔ細胞を拡大させることをさらに含む、代替形態８２〜８７のいずれか１つの方法を含む。
【００９９】
代替形態８８は、哺乳動物が対象である、代替形態８７の方法を含む。
【０１００】
代替形態８９は、哺乳動物が対象以外の生物である、代替形態８７の方法を含む。
【０１０１】
代替形態９０は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋である、代替形態８２〜８９のいずれか１つの方法を含む。
【０１０２】
代替形態９１は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ１２２＋である、代替形態８２〜８９のいずれか１つの方法を含む。
【０１０３】
代替形態９２は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ１２２＋である、代替形態８２〜８９のいずれか１つの方法を含む。
【０１０４】
代替形態９３は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の２つ以上の混合物である、代替形態８２〜９２のいずれか１つの方法を含む。
【０１０５】
代替形態９４は、対象における少なくとも１つの炎症性病態を緩和または予防する方法であって、単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を対象に投与すること、およびＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーターを対象に投与することを含む方法を含む。
【０１０６】
代替形態９５は、炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、代替形態９４の方法を含む。
【０１０７】
代替形態９６は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンまたはミルテホシンアナログの少なくとも１つを含む、代替形態９４〜９５のいずれか１つの方法を含む。
【０１０８】
代替形態９７は、ＮＫＴ−２アクチベーターがミルテホシンを含む、代替形態９４〜９５のいずれか１つの方法を含む。
【０１０９】
代替形態９８は、ＮＫＴ−２アクチベーターの量が対象の肝臓中のＣＤ８αα＋Ｔ細胞を活性化させるために十分である、代替形態９４〜９７のいずれか１つの方法を含む。
【０１１０】
代替形態９９は、単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞がＮＫＴ−２アクチベーターよりも前に対象に投与される、代替形態９４〜９８のいずれか１つの方法を含む。
【０１１１】
代替形態１００は、単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞がＮＫＴ−２アクチベーターと同時に対象に投与される、代替形態９４〜９８のいずれか１つの方法を含む。
【０１１２】
代替形態１０１は、単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞がＮＫＴ−２アクチベーターに続いて対象に投与される、代替形態９４〜９８のいずれか１つの方法を含む。
【０１１３】
代替形態１０２は、哺乳動物から細胞試料を得ること、細胞試料からＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞を単離すること、および単離Ｔ細胞を拡大させることをさらに含む、代替形態９４〜１０１のいずれか１つの方法を含む。
【０１１４】
代替形態１０３は、哺乳動物が対象である、代替形態１０２の方法を含む。
【０１１５】
代替形態１０４は、哺乳動物が対象以外の生物である、代替形態１０２の方法を含む。
【０１１６】
代替形態１０５は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋である、代替形態９４〜１０４のいずれか１つの方法を含む。
【０１１７】
代替形態１０６は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ１２２＋である、代替形態９４〜１０４のいずれか１つの方法を含む。
【０１１８】
代替形態１０７は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ１２２＋である、代替形態９４〜１０４のいずれか１つの方法を含む。
【０１１９】
代替形態１０８は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の２つ以上の混合物を含む、代替形態９４〜１０４のいずれか１つの方法を含む。
【０１２０】
代替形態１０９は、炎症性病態が、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）からなる群から選択される、代替形態５１〜８０のいずれか１つの組成物を含む。
【０１２１】
代替形態１１０は、ＮＫＴ−２アクチベーターの量が対象の肝臓中のＣＤ８αα＋Ｔ細胞を活性化させるために十分である、代替形態５１〜８０または１０９のいずれか１つの組成物を含む。
【０１２２】
代替形態１１１は、対象への投与において使用される単離ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞をさらに含む、代替形態５１〜８０または１０９もしくは１１０のいずれか１つの組成物を含む。
【０１２３】
代替形態１１２は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋である、代替形態１１１の組成物を含む。
【０１２４】
代替形態１１３は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ１２２＋である、代替形態１１１の組成物を含む。代替形態１１４は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ１２２＋である、代替形態１１１の組成物を含む。
【０１２５】
代替形態１１５は、単離Ｔ細胞がＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の２つ以上の混合物を含む、代替形態１１１の組成物を含む。
【図面の簡単な説明】
【０１２６】
【図１】本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンによるＩＩ型ＮＫＴ細胞の刺激を示すグラフである。
【図２Ａ】本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンの注射後のＩ型ＮＫＴ細胞拡大の阻害を示すグラフである。
【図２Ｂ】本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンの注射後のＩ型ＮＫＴ細胞拡大の阻害を示すフローサイトメトリーデータを示す一連のグラフである。
【図３Ａ】本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンによる処理後のＣｏｎＡ誘発性肝炎の阻害を示すグラフである。
【図３Ｂ】本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンによる処理後のＣｏｎＡ誘発性肝炎の阻害を示す一連の顕微鏡写真である。
【図３Ｃ】図３Ｂの白黒復元写真である。
【図４Ａ】本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンにより処理されたマウスにおけるアルコール性肝疾患（ＡＬＤ）中のＩ型ＮＫＴ細胞の蓄積の阻害を示すグラフである。
【図４Ｂ】本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンにより処理されたマウスにおけるアルコール性肝疾患（ＡＬＤ）中のＩ型ＮＫＴ細胞の蓄積の阻害を示すフローサイトメトリーデータを示す一連のグラフである。
【図４Ｃ】本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンにより処理されたマウスにおけるアルコール性肝疾患（ＡＬＤ）中の活性化（ＣＤ６９＋）Ｉ型ＮＫＴの細胞の蓄積の阻害を示すグラフである。
【図４Ｄ】本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンにより処理されたマウスにおけるアルコール性肝疾患（ＡＬＤ）中の好中球の蓄積の阻害を示すグラフである。
【図５】多発性硬化症のプロトタイプの慢性および再発実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の本明細書の一部の実施形態によるミルテホシンによる処理を示すグラフである。
【図６】多発性硬化症のプロトタイプの慢性実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のスルファチドによる処理を示すグラフである。
【図７】ヒトＰＢＭＣにおけるＩ型ＮＫＴ細胞のインビトロ拡大が、本明細書の一部の実施形態によるミルテホシン処理後に阻害されることを示すグラフである。
【図８】本明細書の一部の実施形態によるＭＢＰＡｃ１−９（ミエリン塩基性タンパク質）の注射によるＥＡＥの誘発後の日数単位で異なる量の拡大Ｔｒｅｇ細胞集団を受けたマウスの平均疾患スコアを示すグラフのペアである。図８Ａは、２Ｄ１１細胞が注射されたマウスについての結果を示す。図８Ｂは、ｐ４２−５０反応性Ｔ細胞系が注射されたマウスについての結果を示す。
【図９】インビボのアゴニスト抗Ｖβ６ｍＡｂによるマウスの処理が、本明細書の一部の実施形態によるＣＤ８αα＋Ｖβ６＋Ｔ細胞の活性化およびＥＡＥの予防をもたらすことを示す一連のグラフである。図９Ａは、フローサイトメトリーによる細胞の特徴付けを示す。図９Ｂは、リアルタイムＰＣＲデータに基づくＶβ６およびＶβ８．２の相対量を示す。図９Ｃは、ＴＬ−テトラマー／ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１２７】
本明細書の一部の実施形態によれば、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーターを含む組成物は、多数の炎症性病態のいずれかの緩和または予防において有用であり得る。いかなる理論によっても限定されるものではないが、本明細書において、ＩＩ型ＮＫＴ細胞は活性化時、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害し得、したがって、炎症と関連するＩ型ＮＫＴ細胞媒介損傷を緩和または予防し得ることが企図される。したがって、一部の実施形態において、炎症性病態を緩和または予防する方法は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター、例えば、ミルテホシンまたはミルテホシンのアナログを含む組成物を投与することを含む。任意選択的に、組成物は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のスルファチドを含み得る。任意選択的に、組成物は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニストを含み得る。
【０１２８】
（ＮＫＴ細胞）
肝臓は、自然免疫系の多数の特殊化した細胞、例として、クップファー細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞および樹状細胞を保有する。ＮＫＴ細胞は、それらがＮＫ細胞の細胞表面受容体（例えば、ＮＫ１．１）を共有し、さらにＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、それらが脂質抗原をＣＤ１ｄ分子に関連して認識し、自然免疫応答を適応免疫に橋渡しすることを可能にするという点で独特である。ＮＫＴ細胞は、組織の炎症および関連する細胞損傷に寄与する他の細胞の活性を調節する能力を有する。ＮＫＴ細胞は、活性化時、大量のＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−４、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子、ならびに複数の他のサイトカインおよびケモカインを急速に分泌する。ＮＫＴ細胞はＴｈ１およびＴｈ２サイトカインの両方を分泌し得るため、インビボでのＮＫＴ細胞活性化の結果を予測することは困難であり得る。状況に応じて、ＮＫＴ細胞活性化は、異なる免疫応答を促進または抑制するイベントのカスケードの引き金となる。一部の状況において、ＮＫＴ細胞の活性化は、ＮＫ細胞、樹状細胞（ＤＣ）およびＢ細胞の活性化をもたらす。ＮＫＴ細胞の態様は、参照により全体として本明細書に組み込まれるＫｕｍａｒ，“ＮＫＴ−ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ：Ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｔｅｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ”Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２０１３，５９：６１８−６２０において考察されている。
【０１２９】
ＮＫＴ細胞は、単形性ＭＨＣクラスＩ様分子ＣＤ１ｄと関連して提示される脂質抗原を認識する。ＣＤ１ｄ拘束性ＮＫＴ細胞は、Ｉ型（「Ｉ型ＮＫＴ細胞」または「ＮＫＴ−１」細胞とも称される）およびＩＩ型（「ＩＩ型ＮＫＴ細胞」または「ＮＫＴ−２」細胞とも称される）に分類され、それらは、ＣＤ１ｄ分子により提示される異なる脂質抗原を認識する。両方のＮＫＴ細胞サブセットは主にＮＫ１．１＋（マウス）またはＣＤ１６１＋／ＣＤ５６＋（ヒト）である一方、それらの相対数はマウスおよびヒトにおいて異なり、すなわち、マウスではＩ型ＮＫＴ細胞が優勢である一方、ヒトではＩＩ型ＮＫＴ細胞サブセットが優勢である。
【０１３０】
インバリアントＮＫＴ細胞としても公知のＩ型は、マウスではＶα１４−Ｊα１８およびＶβ８．２、Ｖβ７、もしくはＶβ２、またはヒトではＶα２４−ＪαＱおよびＶβ１１により特徴付けられる、半不変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し、海洋海綿由来の糖脂質アルファ−ガラクトシルセラミド（「アルファ−ＧａｌＣｅｒ」または「αＧａｌＣｅｒ」）と強反応性であり、フローサイトメトリーにおいてアルファ−ＧａｌＣｅｒ／ＣＤ１ｄ−テトラマーにより識別される。Ｉ型ＮＫＴ細胞はまた、脂質ベースの抗原、例えば、細菌由来の脂質および自己糖脂質イソグロボトリヘキソシルセラミド（ｉＧｂ３）を認識する。Ｉ型ＮＫＴ細胞は、記憶マーカーをディスプレイし、サイトカインについての予備形成されたｍＲＮＡを貯蔵する点で独特である。Ｊα１８遺伝子を欠くマウス（Ｊα１
８マウス）は、Ｉ型ＮＫＴ細胞のみを欠損する。
【０１３１】
ＩＩ型ＮＫＴ細胞は、Ｉ型ＮＫＴ細胞と異なり、いくつかの他の細胞サブセット、例として、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性をモジュレートし得る制御性細胞である。ＩＩ型ＮＫＴ細胞は、マウスおよびヒトの両方において、自己糖脂質スルファチド（３’−スルホガラクトシルセラミド）を認識する。フローサイトメトリーにおいてスルファチド／ＣＤ１ｄ−テトラマーを使用して識別することができるＩＩ型ＮＫＴ細胞の主要なサブセットは、Ｖβ８．１／Ｖβ３．１−Ｊβ２．７およびＶα１／Ｖα３−Ｊα７遺伝子セグメントを主に利用し、スルファチドと反応性である。ＩＩ型ＮＫＴ細胞の活性化は、候補薬剤に対するＩＩ型ＮＫＴ細胞のインビトロ増殖応答を評価することにより、ならびにＣ６９発現を評価することおよびＩＦＮ−ガンマ、ＩＬ−４またはＩＬ−１３についての細胞内サイトカイン染色またはリアルタイムＰＣＲによりサイトカイン分泌プロファイルを評価することにより評価することができる。さらに、Ｉ型ＮＫＴ細胞をアネルギー化する活性化ＩＩ型ＮＫＴ細胞の能力は、ＣＦ８Ｅ希釈分析およびアルファ−ＧａｌＣｅｒ／ＣＯ１ｄ−テトラマー細胞の細胞内サイトカイン染色を使用してアルファ−ＧａｌＣｅｒ（Ｉ型ＮＫＴ細胞の強力なアクチベーター）に対するＩ型ＮＫＴ細胞の増殖応答を評価することにより評価することができる。本明細書の一部の実施形態によるＮＫＴ細胞（Ｉ型またはＩＩ型）の活性化は、チミジン取り込みに基づく刺激指数として定量することができる（例えば、図２Ａ参照）。
【０１３２】
本明細書において使用される「ＮＫＴ−２アクチベーター」は、この元となる用語のバリエーションを含め、ＩＩ型ＮＫＴ細胞との接触時、ＩＩ型ＮＫＴ細胞によるＩＬ−２の分泌、ＩＩ型ＮＫＴ細胞の増殖、またはＩＩ型ＮＫＴ細胞の表面上のＣＤ６９発現の上昇の少なくとも１つを誘導する化合物を指す。本明細書の方法、キットおよび組成物による好適な例示的なＮＫＴ−２アクチベーターとしては、限定されるものではないが、ミルテホシン、ミルテホシンアナログ（例えば、表２．１および表２．２に列記される化合物）、リン脂質、例えば、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）（例えば、ＬＰＣ（Ｃ１８：０）、ＬＰＣ（Ｃ１６：０）、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））、ＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））、および／またはＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ）（Ｃ２４：０））、ＬＰＣのアナログ、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、リゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）、および／またはＬＳＭのアナログが挙げられる。いかなる理論によっても限定されるものではないが、本明細書の一部の実施形態によるＮＫＴ−２アクチベーターは、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化し得、次いでそれがＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害し得ることが企図される。
【０１３３】
一部の実施形態において、ＩＩ型ＮＫＴ細胞の活性化は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞によるＩＬ−２の分泌、ＩＩ型ＮＫＴ細胞の増殖、ＩＩ型ＮＫＴ細胞の表面上のＣＤ６９発現の上昇、それらの任意の２つ、それらの任意の３つ、またはそれらの４つ全てを含む。
【０１３４】
一部の実施形態において、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化の阻害は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の増殖の阻害、Ｉ型ＮＫＴ細胞の蓄積の低減、Ｉ型ＮＫＴ細胞の表面上のＣＤ６９発現の減少、それらの任意の２つ、またはそれらの３つ全てを含む。
【０１３５】
（虚血再灌流傷害後のＮＫＴ−２アクチベーターならびにＩ型およびＩＩ型ＮＫＴ細胞）
再灌流傷害は、虚血期間後に臓器または組織に対して血液供給が回復される時に生じる。肝再灌流傷害は、一般に、手術または外傷に関連して生じ、肝臓移植後の移植組織の質および機能において主要な役割を果たす。虚血再灌流傷害（ＩＲＩ）の発症は、クップファー細胞活性化、反応性酸素種の放出、ＣＤ４＋細胞動員および炎症促進性サイトカインの分泌により特色付けられる（約１〜約６時間の再灌流に続く）初期期間と、好中球蓄積および壊死の誘導により特徴付けられる（約６〜約４８時間の再灌流の初期段階に続く）後期期間との、少なくとも２段階で生じる。典型的には、Ｉ型ＮＫＴ細胞も、虚血再灌流
後に活性化され、ＩＦＮ−ガンマを分泌する。ＮＫＴ−２アクチベーター、例えば、ミルテホシンの投与が、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を刺激し（図１参照）、Ｉ型ＮＫＴ細胞拡大を阻害し得る（図２Ａおよび図２Ｂ参照）ことが示されたため、本明細書の一部の実施形態によるＮＫＴ−２アクチベーター、例えば、ミルテホシンおよびミルテホシンのアナログならびにリン脂質は、虚血再灌流と関連するＩ型ＮＫＴ活性化の阻害に有用であり得ることが企図される。
【０１３６】
したがって、一部の実施形態において、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター、例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログ、またはリン脂質を含む組成物が、虚血再灌流傷害の治療、改善、予防、またはその発症リスク低減における使用のために提供される。任意選択的に、組成物は、Ｉ型ＮＫＴ細胞を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト、例えば、タザロテンをさらに含む。任意選択的に、組成物は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のスルファチドをさらに含む。一部の実施形態において、組成物は、虚血再灌流傷害を罹患し、または発症するリスクのある対象に投与する。
【０１３７】
一部の実施形態において、全体として、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンのアナログまたはリン脂質）および十分な量のスルファチドを含む組成物が、虚血再灌流傷害の治療、改善、予防、その発症リスク低減における使用のために提供される。任意選択的に、組成物は、Ｉ型ＮＫＴ細胞を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト（例えば、タザロテン）をさらに含む。一部の実施形態において、組成物は、虚血再灌流傷害を罹患し、またはその発症リスクのある対象に投与する。任意選択的に、組成物は、経口投与用である。
【０１３８】
一部の実施形態において、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）は、ＩＲＩを罹患し、またはそのリスクのある対象に投与する。任意選択的に、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト（例えば、タザロテン）を対象に投与する。任意選択的に、投与は、経口である。任意選択的に、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のスルファチドを対象にさらに投与する。一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストを同時投与する。一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストを別個に投与する。一部の実施形態において、最初にＮＫＴ−２アクチベーターを投与し、続いてＲＡＲアゴニストを投与する。一部の実施形態において、最初にＲＡＲアゴニストを投与し、続いてＮＫＴ−２アクチベーターを投与する。一部の実施形態において、ＲＡＲアゴニストおよびＮＫＴ−２アクチベーターの交互投与を実施する。
【０１３９】
（肝疾患におけるＮＫＴ−２アクチベーターならびに活性化Ｉ型およびＩＩ型ＮＫＴ細胞）
それぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第８，０４４，０２９号明細書および米国特許出願公開第２０１１／０１１８１９７号明細書、および米国特許出願公開第２０１４／０１８７５０４号明細書に記載のとおり、自己糖脂質リガンドであるスルファチド、および合成スルファチドアナログの投与は、Ｉ型およびＩＩ型ＮＫＴ細胞の活性をモジュレートし得る。いかなる理論によっても限定されるものではないが、スルファチドのＣＤ１ｄ依存性認識は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞および主に形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）を活性化させるが、通常型樹状細胞（ｃＤＣ）集団（通常、１型ＮＫＴ細胞により活性化される）を活性化せず、ＩＬ−１２およびＭＩＰ２依存的に肝臓中へのＩ型ＮＫＴ細胞の急速な動員をもたらす。しかしながら、動員されたＩ型ＮＫＴ細胞は、活性化されず、サイトカインを分泌せず、アネルギーの状態になる。スルファチドのインビボ投
与は、ａ）アルファ−ＧａｌＣｅｒによる刺激に応答してＩ型ＮＫＴ細胞のインビトロ増殖を抑制し、ｂ）細胞質内ＩＦＮ−ガンマ染色によるスルファチド／ＣＤ１ｄ−テトラマー＋細胞の割合を増加させることが示されている。
【０１４０】
虚血再灌流傷害の初期段階中の肝臓Ｉ型ＮＫＴ細胞によるＩＦＮ−ガンマの分泌は、スルファチドを受けたマウスにおいて、非処理動物に比べて顕著に減少することが観察されている。さらに、Ｊα１８−／−マウスにおけるＩ型ＮＫＴ細胞の不存在の場合と同様に、虚血／再灌流後の肝傷害は、スルファチドにより処理されたマウスにおいて著しく減少する。この観察は、肝虚血および再灌流傷害の媒介におけるＩ型ＮＫＴ細胞についての病因的役割を示す。いかなる理論によっても限定されるものではないが、Ｉ型ＮＫＴ細胞によるＩＦＮ−ガンマ分泌の役割は、虚血臓器傷害の一般的な特性であり得る。なぜなら、腎臓の虚血再灌流傷害も１型ＮＫＴを欠くＪα１８−／−マウスにおいて減衰されるためである。
【０１４１】
ＩＲＩと同様に、スルファチドまたはＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）の投与は、肝細胞壊死の低減、ならびに肝細胞損傷のマーカーであるアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の血清レベルの低減により示されるとおり、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）誘発性肝炎から保護し得る。さらに、ＣｏｎＡの１２時間前のミルテホシンの投与は、２４時間後のＡＬＴの血清レベルを低減させ（図３Ａ）、肝切片のＨ＆Ｅ染色により決定されたとおり細胞の壊死を低減させた（図３Ｂ）。いかなる理論によっても拘束されるものではないが、これらの観察は、ＣｏｎＡ誘発性肝炎におけるＩ型ＮＫＴ細胞についての病因的役割、ならびにスルファチドおよび／またはリン脂質（例えば、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログ）の保護的役割を示す。
【０１４２】
いかなる理論によっても限定されるものではないが、肝損傷、ＩＲＩおよびＣｏｎＡ誘発性肝炎の両方のモデルからのデータは、多様な原因から生じる肝炎症においてＩ型ＮＫＴ細胞が有害な役割を担い、スルファチド／ＮＫＴ−２アクチベーター反応性ＩＩ型ＮＫＴ細胞がる保護的役割を担う免疫調節経路と一致する。このような保護は、Ｉ型ＮＫＴ細胞によるサイトカイン分泌の阻害（表現型阻害）、未熟骨髄細胞（ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１＋）ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１−およびＮＫ細胞の肝臓動員の著しい低減と関連する。Ｉ型ＮＫＴ細胞の阻害はまた、通常型樹状細胞（ｃＤＣ）の寛容化または調節とも関連し、それらは、阻害されたＩ型ＮＫＴ細胞と一緒になって、適応性Ｔｈ１／Ｔｈ１７ＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化／拡大を阻害する。これは、スルファチドおよび／またはＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンのアナログまたはリン脂質）の投与がＩＩ型ＮＫＴ細胞の活性を刺激し、続いてそれがＩ型ＮＫＴ細胞活性およびＩ型ＮＫＴ細胞媒介炎症により引き起こされる肝損傷を阻害するモデルをもたらす。
【０１４３】
したがって、一部の実施形態において、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）を含む組成物が、肝傷害または肝疾患の治療における使用のために提供される。任意選択的に、組成物は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト（例えば、タザロテン）をさらに含む。任意選択的に、組成物は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のスルファチドをさらに含む。一部の実施形態において、組成物は、肝傷害を罹患し、または肝傷害もしくは肝疾患、例えば、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、肝硬変、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎の発症リスクのある対象に投与する。
【０１４４】
一部の実施形態において、全体として、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）および十分な量のスルファチドを含む組成物が、肝傷害または肝疾患の治療、改善、予防、または発症リスク低減における使用のために提供される。任意選択的に、組成物は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト（例えば、タザロテン）をさらに含む。一部の実施形態において、組成物は、肝傷害または肝疾患、例えば、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、肝硬変、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎を罹患し、またはその発症リスクのある対象に投与する。
【０１４５】
一部の実施形態において、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）を、肝傷害または肝疾患を罹患し、またはそのリスクのある対象に投与する。任意選択的に、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト（例えば、タザロテン）を対象に投与する。任意選択的に、投与は、経口である。任意選択的に、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のスルファチドを対象にさらに投与する。一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストを同時投与する。一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストを別個に投与する。一部の実施形態において、最初にＮＫＴ−２アクチベーターを投与し、続いてＲＡＲアゴニストを投与する。一部の実施形態において、最初にＲＡＲアゴニストを投与し、続いてＮＫＴ−２アクチベーターを投与する。一部の実施形態において、ＲＡＲアゴニストおよびＮＫＴ−２アクチベーターの交互投与を実施する。一部の実施形態において、対象は、肝傷害または肝疾患、例えば、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、肝硬変、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎を罹患し、またはその発症リスクがある。
【０１４６】
（アルコール性肝疾患におけるＮＫＴ細胞）
アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）は、過剰のアルコール消費により引き起こされる肝細胞の損傷の結果として発症する。複数の損傷が、ＡＬＤの臨床兆候が観察される前に要求され得る。しかしながら、慢性的アルコール消費に続いて、肝臓において、著しく増加した数のＩ型ＮＫＴ細胞（アルファ−ＧａｌＣｅｒ／ＣＤ１ｄ−テトラマー＋細胞）、ＣＤ４＋細胞、およびＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１＋骨髄細胞が観察されているが、ＩＩ型ＮＫＴ細胞もＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１−細胞も観察されていない。ＣＤ６９マーカーの発現の向上は、Ｉ型ＮＫＴ細胞が少なくとも部分的に活性化されることをさらに示す。したがって、疾患のいかなる臨床徴候の不存在下（前臨床期）でも、炎症応答を媒介する細胞が、過剰のアルコール消費に続いて肝臓中に蓄積する。Ｉ型ＮＫＴ細胞の不存在下（Ｊα１８−／−マウス）において、慢性的アルコール消費後の肝臓中のＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１＋骨髄細胞の蓄積は、著しく低減する。いかなる理論によっても限定されるものではないが、これらのデータは、Ｉ型ＮＫＴ細胞が、ＡＬＤの前臨床期の媒介に関与することを示唆する。  
【０１４７】
ＡＬＤの前臨床期におけるＩ型ＮＫＴ細胞についての役割を示唆するデータと一致して、過剰アルコール消費後の肝損傷の臨床兆候は、例えば、組織学および肝酵素分析により計測される場合、Ｉ型ＮＫＴ細胞欠損（Ｊα１８−／−）マウスにおいて著しく低減する。いかなる理論によっても限定されるものではないが、これらのデータは、Ｉ型ＮＫＴ細胞が、肝臓のアルコール性損傷において重要な役割を果たすことを示唆する。  
【０１４８】
ＮＫＴ細胞は、それが脂質抗原をＣＤ１ｄ分子に関連して認識することを可能にするＴ
細胞受容体を発現する。特定の理論により拘束されるものではないが、Ｉ型ＮＫＴ細胞は、エタノール消費に続いて、ＣＤ１ｄを発現する抗原提示細胞（ＡＰＣ）による酸化された自己脂質の局所的提示により、肝臓において活性化される。次いで、活性化されたＩ型ＮＫＴ細胞は、クップファー細胞活性化、顆粒球の動員／活性化、それに続く肝細胞の炎症性損傷をもたらす多段階プロセスを開始する。
【０１４９】
図４Ａおよび図４Ｂに示されるとおり、アルコール性肝疾患のネズミモデルにおけるエタノールと同時のミルテホシンの投与は、エタノール単独投与と比較してＩ型ＮＫＴ細胞の蓄積を阻害した。さらに、図４Ｃに示されるとおり、エタノールと同時のミルテホシンの投与は、エタノール単独投与と比較して活性化（ＣＤ６９＋）ＮＫＴ細胞のレベルも低減させた。さらに、図４Ｄに示されるとおり、エタノールと同時のミルテホシンの投与は、エタノール単独投与と比較して好中球のレベルも低減させた。
【０１５０】
アルコール消費後のＮＫＴ細胞サブタイプ間の相互作用により肝損傷についての段階が定まり、重度の場合、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）になる。本明細書に記載のいくつかの実施形態は、アルコール消費後の肝臓の傷害を治療、緩和または予防するために、Ｉ型ＮＫＴ細胞およびＩＩ型ＮＫＴ細胞の相対する役割ならびに他の肝細胞とのそれらの相互作用を操作するための方法および組成物に関する。
【０１５１】
スルファチド処理は、過剰のアルコール消費後の肝損傷からのほぼ完全な保護をもたらす。特定の理論により拘束されるものではないが、スルファチドの保護効果は、Ｉ型ＮＫＴ細胞およびｃＤＣに対する阻害効果を発揮するＩＩ型ＮＫＴ細胞の直接的な活性化を通じて媒介され得る。  
【０１５２】
したがって、本明細書の一部の実施形態は、肝臓のアルコール誘発性傷害を治療、改善、および／または予防するためにＮＫＴ細胞サブタイプの活性をモジュレートすることに関する。本明細書に記載のとおり、ＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシン）、スルファチドまたはレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストの投与は、アルコール誘発性肝損傷を阻害する。例えば、ミルテホシンの経口投与は、エタノールにより誘発されるＩ型ＮＫＴ細胞蓄積および活性化、ならびに好中球蓄積を低減させる（図４Ａ、４Ｂ、Ｃ、および４Ｄ参照）。
【０１５３】
いくつかの実施形態は、スルファチドに反応性のＩＩ型ＮＫＴ細胞の主要なサブセットについてのアルコール誘発性肝傷害における保護的な役割に関する。スルファチドによるこのＮＫＴ細胞サブセットの活性化は、過剰のアルコール消費後のＩ型ＮＫＴ細胞媒介傷害を阻害する。スルファチド媒介保護は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞の活性化ならびに肝臓Ｉ型ＮＫＴ細胞によるＩＦＮ−ガンマ分泌の阻害ならびに肝臓中への骨髄細胞、例えば、ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１ｉｎｔおよびＧｒ−１−サブセットおよびＮＫ細胞のＩ型ＮＫＴ細胞媒介動員の抑制と関連する。
【０１５４】
したがって、一部の実施形態において、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログ）を含む組成物が、アルコール性肝疾患の治療、改善、または予防における使用のために提供される。任意選択的に、化合物は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト（例えば、タザロテン）をさらに含む。任意選択的に、組成物は、経口投与用である。
【０１５５】
一部の実施形態において、全体として、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログ）および十分な量のスルファチドを含む組成物が、アルコール性肝疾患の治療、改善、予防、
またはそのリスク低減における使用のために提供される。任意選択的に、化合物は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト（例えば、タザロテン）をさらに含む。任意選択的に、組成物は、経口投与用である。
【０１５６】
一部の実施形態において、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログ）は、アルコール性肝疾患を罹患し、またはその発症リスクのある対象に投与する。任意選択的に、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト（例えば、タザロテン）を対象に投与する。任意選択的に、投与は、経口である。任意選択的に、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のスルファチドを対象にさらに投与する。一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストを同時投与する。一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターおよびＲＡＲアゴニストを別個に投与する。一部の実施形態において、最初にＮＫＴ−２アクチベーターを投与し、続いてＲＡＲアゴニストを投与する。一部の実施形態において、最初にＲＡＲアゴニストを投与し、続いてＮＫＴ−２アクチベーターを投与する。一部の実施形態において、ＲＡＲアゴニストおよびＮＫＴ−２アクチベーターの交互投与を実施する。
【０１５７】
（スルファチド）
一部の実施形態において、スルファチドは、例えば、Ｓｉｇｍａ  Ｉｎｃ．（Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）から入手される約２０種の異なる種類の混合物であるウシ脳由来スルファチドを含む。他の実施形態において、スルファチドは半合成であり、単一種のスルファチド、例えば、Ｍａｉｔｒｅｙａ  Ｉｎｃ（Ｐｌｅａｓａｎｔ  Ｇａｐ，ＰＡ，ＵＳＡ）から入手されるシス−テトラコセノイルスルファチドまたはリゾスルファチドを含む。さらに他の実施形態において、スルファチドは、完全に合成のスルファチドであり得る。
【０１５８】
ウシ脳ミエリン由来のスルファチドは、飽和／不飽和主アシル鎖（Ｃ２４）の２：１混合物からなり、不飽和はＣ１９に存在する。いくつかの実施形態は、合成スルファチドアナログ、例えば、飽和アシル鎖（Ｃ２４）および不飽和鎖（Ｃ２４：１）を有するアナログ、ならびに脂肪酸またはスフィンゴシン部分において異なる長さのアシル鎖（より短いおよびより長い、例えば、Ｃ１８、Ｃ３２）からなるアナログ、およびガラクトース部分上に３’と４’−の硫酸化基（３’−８０３と４’−８０３）を有する位置異性体の使用に関する。
【０１５９】
一部の実施形態において、スルファチドは、以下の化学式Ｉ：
【化５】
2017537984.tif 000006
（式中、Ｒ１は、原子の手、水素、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルケニルまたはＣ５〜Ｃ１２糖であり得；Ｒ２は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、またはアルコキシ基であり得；Ｒ３は、水素、ヒドロキシ基、メトキシ基、エトキシ基、またはアルコキシ基であり得；Ｒ４は、水素、ヒドロキシ基またはアルコキシ基であり得；Ｒ５は、水素、ヒドロキシ基、カルボニル、アルコキシ基または原子の手であり得；Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０
置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニル、またはＣ１〜Ｃ４０アルキンルであり得；Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニル、またはＣ１〜Ｃ４０アルキンルであり得；およびＲ８は、水素、ヒドロキシ基、カルボニル、アルコキシ基または原子の手であり得る）
を有する。
【０１６０】
他の実施形態において、スルファチドは、以下の化学式ＩＩ：
【化６】
2017537984.tif 000007
（式中、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンルからなる群から選択され；およびＲ２は、水素、ヒドロキシル基、カルボニル、アルコキシ基および原子の手からなる群から選択される）
を有する。
【０１６１】
別の実施形態において、スルファチドは、以下の化学構造：
【化７】
2017537984.tif 000008
を有する。
【０１６２】
本明細書において使用される用語「アルキル」は、任意の非分枝または分枝の飽和炭化水素を意味する。用語「置換アルキル」は、任意の非分枝または分枝の置換飽和炭化水素を意味する。環式化合物、すなわち、環式炭化水素およびヘテロ原子を有する環式化合物の両方は、「アルキル」の意味の範囲内である。
【０１６３】
本明細書において使用される用語「置換」は、官能基による水素原子の任意の置換を意味する。
【０１６４】
本明細書において使用される用語「官能基」は、その一般的な定義を有し、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、過ハロゲン化アルキル、シロアルキル（ｃｙｌｏａｌｋｙｌ）、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ベンジル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シアノ、およびニトロからなる群から好ましくは選択される化学部分を指す。
【０１６５】
本明細書において使用される用語「ハロゲン」および「ハロゲン原子」は、元素の周期表の第１７列の放射安定性原子の任意の１つ、好ましくは、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を指し、フッ素および塩素が特に好ましい。
【０１６６】
本明細書において使用される用語「アルケニル」は、任意の非分枝または分枝の、置換または非置換の不飽和炭化水素を意味する。用語「置換アルケニル」は、１つ以上の官能基により置換されている、任意の非分枝または分枝の、置換不飽和炭化水素を意味し、非分枝Ｃ２〜Ｃ６アルケニル第２級アミン、置換Ｃ２〜Ｃ６第２級アルケニルアミン、および非分枝Ｃ２〜Ｃ６アルケニル第３級アミンは、「置換アルキル」の定義の範囲内である。環式化合物、すなわち、不飽和環式炭化水素およびヘテロ原子を有する環式化合物の両方は、「アルケニル」の意味の範囲内である。
【０１６７】
本明細書において使用される用語「アルコキシ」は、任意の非分枝または分枝の、置換または非置換の、飽和または不飽和のエーテルを指す。
【０１６８】
本明細書において使用される用語「スルファチド」は、その一般的な慣例の意味を保持し、分子の糖部分中に１つ以上のスルフェート基を含有するセレブロシド硫酸エステルを指す。
【０１６９】
本明細書において使用される用語「セレブロシド」は、糖を含有し、一般に、脳および神経組織中で通常見出されるタイプの任意の脂質化合物を指す。
【０１７０】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、薬学的に許容可能な非毒性のその塩の形態であり得る。式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の塩としては、酸付加塩、例えば、無機酸、例えば、塩酸、硫酸、硝酸およびリン酸または有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、オレイン酸、パルミチン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルタミン酸、パントテン酸、ラウリルスルホン酸、メタンスルホン酸およびフタル酸との塩が挙げられる。
【０１７１】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、その溶媒和物（例えば、水和物）の形態であり得る。
【０１７２】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、スルファチドを合成する目的の任意の方法により生成することができる。
【０１７３】
式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物はまた、天然物（例えば、生物有機体）から単離し、カラムクロマトグラフィーなどにより精製することができる。
【０１７４】
一実施形態において、スルファチドは、化学式：（２Ｓ，３Ｒ，４Ｅ）−Ｎ−ネルボニック（ｎｅｒｖｏｎｉｃ）−１−［−Ｄ−（３−スルフェート）−ガラクトピラノシル］−２−アミノ−オクタデセン−３−オールを有する。この化学式はまた、シス−テトラコセノイルスルファチドとも称される。
【０１７５】
一部の実施形態において、患者に投与されるスルファチドの具体的な量は、治療される
疾患または病態、ならびに治療される患者の年齢、体重および性別に応じて変動する。一般に、そのような最終濃度を例えば腸または血液中で達成するため、本実施形態の単回投与量組成物中のスルファチド分子の量は、一般に、約０．１ミリグラム〜約１００ミリグラム、好ましくは、約２．０ミリグラム〜約６０ミリグラム、より好ましくは、約２０ミリグラム〜約５０ミリグラムである。同様に、本実施形態の単回経口投与量組成物中の第２の治療化合物の量は、一般に、約０．０１ミリグラム〜約１０００ミリグラム、より好ましくは、約０．１ミリグラム〜約１００ミリグラムの範囲内である。当然、正確な投与量は、治療される疾患または障害により変動するが、好ましい範囲は容易に決定可能である。一部の実施形態において、患者はヒトである。
【０１７６】
一部の実施形態において、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重のスルファチド、例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重、０．２ｍｇ／ｋｇ体重、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、２ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、９ｍｇ／ｋｇ体重、または０．２〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重、０．２〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．２〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．２〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、２〜５ｍｇ／ｋｇ体重、２〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、または５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重などの範囲のスルファチドを対象に投与する。好ましくは、この投与量を必要に応じて反復する。任意選択的に、投与量を反復することができる。任意選択的に、投与量は、１日５回、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、またはそれよりも低頻度で、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０日ごとに１回反復することができ、それには列記される値の任意の２つの間の範囲、例えば、１〜２日ごと、１〜３日ごと、１〜５日ごと、１〜１０日ごと、１〜２０日ごと、２〜３日ごと、３〜５日ごと、３〜１０日ごと、３〜２０日ごと、５〜１０日ごと、または５〜２０日ごとが含まれる。
【０１７７】
（レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニスト）
本明細書に記載のとおり、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストであるオールトランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）の投与は、アルコール消費により引き起こされる肝損傷を顕著に阻害する。エタノール摂取は、肝臓レチニルエステルを枯渇させ、多くの生物学的機能を支持し、ＦｏｘＰ３＋ＴｒｅｇへのナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞分化の発生、安定性および機能をＩＬ−６の存在下においても向上させ得るビタミンＡの生物学的に活性な形態であるオールトランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）の生理学的レベルを変更する。本明細書に記載のいくつかの実施形態は、ＡＴＲＡがＩ型ＮＫＴ細胞のエフェクター機能を阻害する、例として、それらの細胞によるサイトカイン分泌を抑制するという知見に関する。さらに、ＡＴＲＡは、Ｉ型ＮＫＴ細胞活性に対する直接的な阻害効果を有し、抗原提示細胞の不存在下でその阻害効果を発揮する。さらに、ＡＴＲＡは、タンパク質抗原、例えば、ミエリン塩基性タンパク質またはＭＢＰＡｃ１−９を認識する通常型ＭＨＣ拘束性ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性を直接的には阻害しない。特定の理論により拘束されるものではないが、これらのデータは、ＡＴＲＡが、Ｉ型ＮＫＴ細胞を阻害することにより過剰アルコール消費により引き起こされる肝損傷を防ぐことを示す。
【０１７８】
本明細書に記載のとおり、ＲＡＲアゴニストは、Ｉ型ＮＫＴ細胞の阻害を誘導する。さらに、過剰のアルコール消費から生じるＩ型ＮＫＴ細胞媒介炎症により引き起こされる肝損傷をＲＡＲアゴニストの投与により予防、低減または軽減することができる。肝臓は、種々の異なる理由から炎症状態になり得る。例えば、肝炎症は、細菌またはウイルス感染、傷害、または自己の免疫系からの攻撃により引き起こされ得る。炎症は、通常、保護的な応答であり、治癒プロセスの必須段階である一方、長期のまたは慢性的な炎症は傷害を引き起こし得る。本明細書に記載のいくつかの実施形態は、炎症に続き、それに関連し、またはそれにより引き起こされる肝傷害をもたらす自然免疫機序のＲＡＲアゴニスト媒介
モジュレーションに関する。一部の実施形態は、Ｉ型ＮＫＴ細胞活性のＲＡＲアゴニスト媒介阻害のための方法および組成物であって、非自己識別される病原体に対する自然免疫応答に影響を与えることなくまたはほとんど影響を与えずに、消化管由来または代謝産物由来の抗原に対する寛容を提供するように自然免疫系構成成分間の相互作用をモジュレートする方法および組成物に関する。
【０１７９】
ＲＡＲアゴニストはＩ型ＮＫＴ細胞を直接アネルギー化し得るため、ＲＡＲアゴニストは、Ｉ型ＮＫＴ細胞が病因的役割を果たす任意の適応症を治療するために使用することができる。本開示の実施形態により治療することができる疾患の一部の例としては、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）が挙げられる。
【０１８０】
一部の実施形態において、自己免疫または免疫関連の疾患または障害の種々の適応症が、Ｉ型ＮＫＴ細胞活性のＲＡＲアゴニスト媒介阻害により治療、予防または軽減される。特に、本実施形態の一態様は、自己免疫または免疫関連の疾患または障害、例えば、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ＡＩＤＳ、アルツハイマー病、関節リウマチ、インスリン依存性真性糖尿病、自己免疫性肝炎、喘息、セリアック病、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症などの症状を罹患する患者を有効量のＲＡＲアゴニストにより治療する方法に関する。一部の実施形態において、Ｉ型ＮＫＴ細胞活性のＲＡＲアゴニスト媒介阻害は、喘息症状を治療、予防または軽減する。一部の実施形態において、患者はヒトである。
【０１８１】
一部の実施形態は、ＲＡＲアゴニストを投与することにより虚血再灌流後のＩ型ＮＫＴ細胞媒介炎症を阻害または予防する方法に関する。Ｉ型ＮＫＴ細胞は、虚血再灌流傷害などの病態において病因的役割を果たす。再灌流傷害は、種々の組織において、虚血期間後に血液供給が回復される場合に生じ得る。例としては、圧挫後の骨格筋組織、心筋梗塞もしくは心臓手術または虚血性心疾患に関連する心筋、脳卒中または脳外傷に関連する神経組織、ならびに手術または外傷に関連する肝組織および腎組織が挙げられる。虚血再灌流傷害はまた、臓器移植における移植組織の質および機能において主要な役割を果たす。虚血再灌流傷害は、入院期間の延長および長期移植片生着の減少の主な原因である。一部の実施形態において、Ｉ型ＮＫＴ細胞活性のＲＡＲアゴニスト媒介阻害は、手術または外傷に関連する肝虚血再灌流傷害を阻害または予防する。
【０１８２】
本明細書に記載の実施形態は、１つ以上のレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストによるＩ型ＮＫＴ細胞活性の阻害に関する。レチノイン酸受容体は、３つの主要なサブタイプ：ＲＡＲα、ＲＡＲβ、およびＲＡＲγを含む。一部の実施形態は、１つ以上の汎活性ＲＡＲアゴニスト、そのような汎活性ＲＡＲアゴニストの前駆体およびそれらの混合物によるＩ型ＮＫＴ細胞活性の阻害に関する。本明細書において使用される用語「汎活性ＲＡＲアゴニスト」は、ＲＡＲα、ＲＡＲβ、およびＲＡＲγに実質的に等しくまたは非選択的に影響を与える、例えば、活性化させるＲＡＲアゴニストを指す。一部の実施形態は、ＲＡＲαに比べてＲＡＲβおよびＲＡＲγの少なくとも一方、好ましくは両方に、選択的にまたはさらには特異的に影響を与える、例えば、活性化させるために有効な、１つ以上の活性ＲＡＲアゴニスト、そのような活性ＲＡＲアゴニストの前駆体およびそれらの混合物によるＩ型ＮＫＴ細胞活性の阻害に関する。この文脈において使用される用語「選択的に」は、ＲＡＲアゴニストの前駆体およびそれらの混合物が、ＲＡＲαに比べてＲＡＲβおよびＲＡＲγの少なくとも一方、好ましくは両方に影響を与えるためにより有効、好ま
しくは少なくとも約１０倍または約１００倍〜約１０００倍またはそれを超えて有効であることを意味する。一部の実施形態は、１つ以上のサブタイプ選択的ＲＡＲアゴニスト、そのようなサブタイプ選択的ＲＡＲアゴニストの前駆体およびそれらの混合物によるＩ型ＮＫＴ細胞活性の阻害に関する。本明細書において使用される用語「サブタイプ選択的ＲＡＲアゴニスト」は、１つのＲＡＲサブタイプに選択的に影響を与える、例えば、活性化させるＲＡＲアゴニストを指す。ＲＡＲα、ＲＡＲβ、およびＲＡＲγ選択性を有するレチノイド化合物は、当技術分野において公知であり、例えば、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第６，５３４，５４４号明細書および同第６，０２５，３８８号明細書に開示されている。
【０１８３】
いくつかの実施形態は、１つ以上のレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）アゴニストを投与することにより炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性を阻害する方法に関する。ＲＡＲアゴニストの例としては、限定されるものではないが、表１に列記されるＲＡＲアゴニストが挙げられる。
【０１８４】
【表１】
2017537984.tif 000009
2017537984.tif 000010
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【０１８５】
一部の実施形態において、炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性は、ＡＴＲＡ、レチノール、９−シス−ＲＡもしくは１３−シス−ＲＡ、トレチノイン、ＡＭ５８０、ＡＣ５５６４９
、ＣＤ１５３０またはタザロテンからなる群から選択される１つ以上のＲＡＲアゴニストにより阻害される。一部の実施形態において、炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性は、１つ以上のポリオレフィン性レチノイド、例えば、イソレチノインおよびアシトレチンにより阻害される。一部の実施形態において、炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性は、エトレチナート、アシトレチンおよびイソトレチノインからなる群から選択される１つ以上のＲＡＲアゴニストにより阻害される。
【０１８６】
いくつかの実施形態は、タザロテン、タザロテン酸またはそれらの混合物による炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性の阻害に関する。タザロテンは、対応する遊離酸であるタザロテン酸に代謝されるエチルエステルプロドラッグである。タザロテンは、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）の天然リガンドであるオールトランス型レチノイン酸と比較して限られた立体構造的柔軟性を提供する、柔軟性のない環固定構造を有する。この構造変化が、ＲＡＲについての特異性ならびにＲＡＲβおよびＲＡＲγについての選択性を有するタザロテン酸を付与する。
【０１８７】
ＲＡＲアゴニストの例としてはさらに、シス−およびトランス−レチノイン酸のエステル、例えば、アルキルエステル、例えば、第１級、第２級または第３級アルコール、例として、限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソ−ブチル、ヘキシル、ヘプチル、エチルへキシル、オクチル、ノニル、ラウリル、オレイル、ステアリル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ベンジル、アルファ−メチルベンジル、アルファ−プロピルフェニル、アミル、イソ−アミル、アニシル、セチル、メンチル、シンナミル、ピナコール、フリル、またはミリスチルが挙げられる。
【０１８８】
ＲＡＲアゴニストの薬学的に許容可能な塩もＩ型ＮＫＴ細胞活性を阻害するために使用することができる。十分に酸性、十分に塩基性、またはその両方の官能基を保有し、したがって、多数の有機または無機塩基、ならびに無機および有機酸のいずれかと反応して塩を形成し得る本明細書に開示される化合物である。
【０１８９】
塩基性基を有するＲＡＲアゴニストから酸付加塩を形成するために使用することができる酸の例としては、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸などおよび有機酸、例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェニル−スルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などが挙げられる。このような塩の例としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシン−１，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ガンマ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩などが挙げられる。
【０１９０】
酸性基を有するＲＡＲアゴニストからの塩基付加塩を形成するために使用することができる塩基の例としては、限定されるものではないが、アルカリ金属、例えば、ナトリウム、カリウム、およびリチウムの水酸化物；アルカリ土類金属、例えば、カルシウムおよびマグネシウムの水酸化物；他の金属、例えば、アルミニウムおよび亜鉛の水酸化物；アンモニア、および有機アミン、例えば、非置換またはヒドロキシ置換のモノ−、ジ−、またはトリアルキルアミン；ジシクロへキシルアミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メ
チル、Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ−、ビス−、もしくはトリス−（２−ヒドロキシ−低級アルキルアミン）、例えば、モノ−、ビス−、もしくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシ低級アルキル）−アミン、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、またはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；ならびにアミノ酸（例えば、アルギニン、リジン）などが挙げられる。
【０１９１】
本明細書において使用される用語「患者」または「対象」は、治療法上の治療のレシピエントを指し、動物界内の全ての生物体を含む。好ましい実施形態において、動物は、哺乳動物、例えば、ヒト、ウシ、ヒツジ、ブタ、ネコ、バッファロー、イヌ、ヤギ、ウマ、ロバ、シカおよび霊長類の科の範囲内にある。一部の実施形態において、動物は、非ヒト哺乳動物を含む。最も好ましい動物は、ヒトである。したがって、一部の実施形態において、患者または対象はヒトである。
【０１９２】
本明細書において使用される用語「治療する」、「治療すること」および「治療」は、それぞれ「予防する」、「予防すること」および「予防」を含む。
【０１９３】
本明細書において使用される薬剤の「有効量」という用語は、炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性から生じる肝損傷を治療、阻害、または予防するのに十分な量である。
【０１９４】
一部の実施形態は、ＡＬＤの臨床兆候よりも前のスルファチドおよび／またはＲＡＲアゴニストによる患者の前治療に関する。いくつかの実施形態において、患者は、大量アルコール消費よりも前の有効量のスルファチドおよび／またはＲＡＲアゴニストにより治療される。一部の他の実施形態において、患者は、大量アルコール消費の約０．５時間〜約１８時間前に、有効量のスルファチドおよび／またはＲＡＲアゴニストにより治療される。一部の他の実施形態において、患者は、慢性的なアルコール消費の期間中、有効量のスルファチドおよび／またはＲＡＲアゴニストにより治療される。一部の実施形態において、患者はヒトである。
【０１９５】
一部の実施形態において、患者に投与されるＲＡＲアゴニストの具体的な量は、治療される疾患または病態、ならびに治療される患者の年齢、体重および性別に応じて変動する。一般に、そのような最終濃度を例えば腸または血液中で達成するため、本実施形態の単回投与量組成物中のＲＡＲアゴニストの量は、一般に、約０．１ミリグラム〜約１００ミリグラム、好ましくは、約２．０ミリグラム〜約６０ミリグラム、より好ましくは、約２０ミリグラム〜約５０ミリグラムである。好適な用量の例としては、約０．１〜約１０ｍｇ／日；約０．５〜約２ｍｇ／日；約０．０１〜１００ｍｇ／日；約１〜約５０ｍｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約１．０ｍｇ／日；約１．０ｍｇ／日〜約５．０ｍｇ／日；約５．０ｍｇ／日〜約１０．０ｍｇ／日；約１０．０ｍｇ／日〜約１５ｍｇ／日；約１５．０ｍｇ／日〜約２０．０ｍｇ／日；約２０．０ｍｇ／日〜約２５．０ｍｇ／日；約３０．０ｍｇ／日〜約３５．０ｍｇ／日；約３５．０ｍｇ／日〜約４０．０ｍｇ／日；約４０．０ｍｇ／日〜約４５．０ｍｇ／日；約４５．０ｍｇ／日〜約５０．０ｍｇ／日；約５０．０ｍｇ／日〜約５５．０ｍｇ／日；約５５．０〜約６０．０ｍｇ／日；約６０．０ｍｇ／日〜約６５．０ｍｇ／日；約６５．０ｍｇ／日〜約７０．０ｍｇ／日；約７０．０ｍｇ／日〜約７５．０ｍｇ／日；約７５．０ｍｇ／日〜約８０．０ｍｇ／日；約８０．０ｍｇ／日〜約８５．０ｍｇ／日；約８５．０〜約９０．０ｍｇ／日；約８５．０ｍｇ／日〜約９０．０ｍｇ／日；約９０．０ｍｇ／日〜約９５．０ｍｇ／日；および約９５．０ｍｇ／日〜約１００．０ｍｇ／日を含む。当然、正確な投与量は、治療される疾患または障害により変動するが、好ましい範囲は容易に決定可能である。一部の実施形態において、患者はヒトである。
【０１９６】
タザロテンを経口投与してＩ型ＮＫＴ細胞活性の低減をもたらす場合、タザロテンの１日投与量は、好ましくは、約０．３ｍｇ／日〜約７ｍｇ／日または約８ｍｇ／日の範囲内、より好ましくは、約０．６ｍｇ／日〜約６．５ｍｇ／日または約７ｍｇ／日の範囲内にある。一部の実施形態において、経口投与されるタザロテンは、０．４ｍｇ／日、０．７５ｍｇ／日、１．５ｍｇ／日、２．８ｍｇ／日、３ｍｇ／日、４．５ｍｇ／日、６ｍｇ／日および６．３ｍｇ／日を含むタザロテンの１日投与量で投与される。
【０１９７】
実施形態によれば、患者の症状を緩和するために投与することができ、または障害機序自体を中和するためにＲＡＲアゴニストを投与することができる。ある実施形態において、ＲＡＲアゴニストは、予防的措置として投与することができる。一部の実施形態において、複数回用量のＲＡＲアゴニストを投与する。これらの治療目的が関連することが多いこと、および治療が種々の因子に基づき特定の患者について調整し得ることが当業者により認識される。これらの因子としては、患者の年齢、性別、または健康状態、および自己免疫または免疫関連の疾患または障害の進行を挙げることができる。患者のための治療方法は、それに応じて、投与量、投与のタイミング、投与経路について調整することができ、他の治療物の同時または逐次投与により調整することができる。一部の実施形態において、患者はヒトである。
【０１９８】
一部の実施形態において、１つ以上のＲＡＲアゴニスト化合物は、単独でまたは別の治療化合物との組合せで投与することができる。例えば、１つ以上のＲＡＲアゴニスト化合物は、スルファチドとの組合せで投与することができる。アルコール性肝疾患、炎症性疾患、自己免疫疾患または再灌流傷害の治療において使用される任意の現在公知の治療化合物を使用することができる。一部の実施形態において、ＲＡＲアゴニストは、硫化水素（Ｈ２Ｓ）との組合せで投与することができる。一部の実施形態において、ＲＡＲアゴニストは、酸化防止剤との組合せで投与することができる。一部の実施形態において、ＲＡＲアゴニストは、例えば、コルチコステロイド、生物学的製剤、例えば、抗ＴＮＦ−アルファおよび抗ＩＬ−６）、免疫調節薬（例えば、ＲＵ−４８６）、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ、例えば、レフルノミド）、ＣＯＸ−２インヒビター（セレコキシブ）、非ステロイド抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ、例えば、ナプロキセン）、経口抗糖尿病薬（ＯＡＤ、例えば、メトホルミンまたはシタグリプテン（ｓｉｔａｇｌｉｐｔｅｎ）、ＧＬＰ−１アゴニスト、インスリン、ＰＰＡＲアゴニスト／アンタゴニスト、ＥＧＦメディエーター（抗癌剤）、肝癌を治療するために有効な他の薬剤、肝癌のための細胞ベースの治療物；Ｃ型肝炎、多発性硬化症またはエリテマトーデスのためのインターフェロン（ＩＦＮ）；およびＬＦＡ−１アンタゴニストとの組合せで投与することができる。  
【０１９９】
本明細書に記載のＲＡＲアゴニスト化合物およびスルファチド化合物は、医薬組成物中に組み込まれる活性成分として使用することができる。一部の実施形態において、医薬組成物は、単一の活性成分を含み得る。一部の実施形態において、医薬組成物は、２、３、４、５つまたはそれを超える活性成分を含み得る。全ての投与方式、例えば、経口投与、直腸投与、非経口投与、局所投与、または静脈内、筋肉内、胸骨内もしくは皮下注射による、もしくは吸入による好適な形態での投与が企図される。配合物は、適切な場合、区別される投与量単位で簡便に提供することができ、薬学の技術分野において周知の方法のいずれかにより調製することができる。活性成分は、通常、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤とともに、公知の慣行に従って配合される。したがって、医薬組成物は、液剤、散剤、エリキシル剤、注射液剤、懸濁液、坐剤などとして配合することができる。
【０２００】
一部の実施形態において、炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性は、ＡＴＲＡ、レチノール、９−シス−ＲＡもしくは１３−シス−ＲＡ、トレチノイン、ＡＭ５８０、ＡＣ５５６４９、ＣＤ１５３０またはタザロテンからなる群から選択される１つ以上のＲＡＲアゴニスト
により阻害される。一部の実施形態において、炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性は、１つ以上のポリオレフィン性レチノイド、例えば、イソレチノインおよびアシトレチンにより阻害される。一部の実施形態において、炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性は、エトレチナート、アシトレチンおよびイソトレチノインからなる群から選択される１つ以上のＲＡＲアゴニストにより阻害される。
【０２０１】
いくつかの実施形態は、タザロテン、タザロテン酸またはそれらの混合物による炎症促進性Ｉ型ＮＫＴ細胞活性の阻害に関する。タザロテンは、対応する遊離酸であるタザロテン酸に代謝されるエチルエステルプロドラッグである。タザロテンは、レチノイン酸受容体（ＲＡＲ）の天然リガンドであるオールトランス型レチノイン酸と比較して限られた立体構造的柔軟性を提供する、柔軟性のない環固定構造を有する。この構造変化が、ＲＡＲについての特異性ならびにＲＡＲβおよびＲＡＲγについての選択性を有するタザロテン酸を付与する。
【０２０２】
ＲＡＲアゴニストの例としてはさらに、シス−およびトランス−レチノイン酸のエステル、例えば、アルキルエステル、例えば、第１級、第２級または第３級アルコール、例として、限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピル、ブチル、イソ−ブチル、ヘキシル、ヘプチル、エチルへキシル、オクチル、ノニル、ラウリル、オレイル、ステアリル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ベンジル、アルファ−メチルベンジル、アルファ−プロピルフェニル、アミル、イソ−アミル、アニシル、セチル、メンチル、シンナミル、ピナコール、フリル、またはミリスチルが挙げられる。
【０２０３】
ＲＡＲアゴニストの薬学的に許容可能な塩もＩ型ＮＫＴ細胞活性を阻害するために使用することができる。十分に酸性、十分に塩基性、またはその両方の官能基を保有し、したがって、多数の有機または無機塩基、ならびに無機および有機酸のいずれかと反応して塩を形成し得る本明細書に開示される化合物である。
【０２０４】
塩基性基を有するＲＡＲアゴニストから酸付加塩を形成するために使用することができる酸の例としては、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸などおよび有機酸、例えば、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ−ブロモフェニル−スルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸などが挙げられる。このような塩の例としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、ギ酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオール酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−二酸塩、ヘキシン−１，６−二酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、ガンマ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、マンデル酸塩などが挙げられる。
【０２０５】
酸性基を有するＲＡＲアゴニストからの塩基付加塩を形成するために使用することができる塩基の例としては、限定されるものではないが、アルカリ金属、例えば、ナトリウム、カリウム、およびリチウムの水酸化物；アルカリ土類金属、例えば、カルシウムおよびマグネシウムの水酸化物；他の金属、例えば、アルミニウムおよび亜鉛の水酸化物；アンモニア、および有機アミン、例えば、非置換またはヒドロキシ置換のモノ−、ジ−、またはトリアルキルアミン；ジシクロへキシルアミン；トリブチルアミン；ピリジン；Ｎ−メチル、Ｎ−エチルアミン；ジエチルアミン；トリエチルアミン；モノ−、ビス−、もしく
はトリス−（２−ヒドロキシ−低級アルキルアミン）、例えば、モノ−、ビス−、もしくはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジ−低級アルキル−Ｎ−（ヒドロキシ低級アルキル）−アミン、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、またはトリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン；Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン；ならびにアミノ酸（例えば、アルギニン、リジン）などが挙げられる。
【０２０６】
一部の実施形態において、患者に投与されるＲＡＲアゴニストの具体的な量は、処置される疾患または病態、ならびに治療される患者の年齢、体重および性別に応じて変動する。一般に、そのような最終濃度を例えば腸または血液中で達成するため、本実施形態の単回投与量組成物中のＲＡＲアゴニストの量は、一般に、約０．１ミリグラム〜約１００ミリグラム、好ましくは、約２．０ミリグラム〜約６０ミリグラム、より好ましくは、約２０ミリグラム〜約５０ミリグラムである。好適な用量の例としては、約０．１〜約１０ｍｇ／日；約０．５〜約２ｍｇ／日；約０．０１〜１００ｍｇ／日；約１〜約５０ｍｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約１．０ｍｇ／日；約１．０ｍｇ／日〜約５．０ｍｇ／日；約５．０ｍｇ／日〜約１０．０ｍｇ／日；約１０．０ｍｇ／日〜約１５ｍｇ／日；約１５．０ｍｇ／日〜約２０．０ｍｇ／日；約２０．０ｍｇ／日〜約２５．０ｍｇ／日；約３０．０ｍｇ／日〜約３５．０ｍｇ／日；約３５．０ｍｇ／日〜約４０．０ｍｇ／日；約４０．０ｍｇ／日〜約４５．０ｍｇ／日；約４５．０ｍｇ／日〜約５０．０ｍｇ／日；約５０．０ｍｇ／日〜約５５．０ｍｇ／日；約５５．０〜約６０．０ｍｇ／日；約６０．０ｍｇ／日〜約６５．０ｍｇ／日；約６５．０ｍｇ／日〜約７０．０ｍｇ／日；約７０．０ｍｇ／日〜約７５．０ｍｇ／日；約７５．０ｍｇ／日〜約８０．０ｍｇ／日；約８０．０ｍｇ／日〜約８５．０ｍｇ／日；約８５．０〜約９０．０ｍｇ／日；約８５．０ｍｇ／日〜約９０．０ｍｇ／日；約９０．０ｍｇ／日〜約９５．０ｍｇ／日；および約９５．０ｍｇ／日〜約１００．０ｍｇ／日を含む。当然、正確な投与量は、治療される疾患または障害により変動するが、好ましい範囲は容易に決定可能である。一部の実施形態において、患者はヒトである。
【０２０７】
タザロテンを経口投与してＩ型ＮＫＴ細胞活性の低減をもたらす場合、タザロテンの１日投与量は、好ましくは、約０．３ｍｇ／日〜約７ｍｇ／日または約８ｍｇ／日の範囲内、より好ましくは、約０．６ｍｇ／日〜約６．５ｍｇ／日または約７ｍｇ／日の範囲内にある。一部の実施形態において、経口投与されるタザロテンは、０．４ｍｇ／日、０．７５ｍｇ／日、１．５ｍｇ／日、２．８ｍｇ／日、３ｍｇ／日、４．５ｍｇ／日、６ｍｇ／日および６．３ｍｇ／日を含むタザロテンの１日投与量で投与される。
【０２０８】
実施形態によれば、患者の症状を緩和するために投与することができ、または障害機序自体を中和するためにＲＡＲアゴニストを投与することができる。ある実施形態において、ＲＡＲアゴニストは、予防的措置として投与することができる。一部の実施形態において、複数回用量のＲＡＲアゴニストを投与する。これらの治療目的が関連することが多いこと、および処置が種々の因子に基づき特定の患者について調整し得ることが当業者により認識される。これらの因子としては、患者の年齢、性別、または健康状態、および自己免疫または免疫関連の疾患または障害の進行を挙げることができる。患者のための治療方法は、それに応じて、投与量、投与のタイミング、投与経路について調整することができ、他の治療物の同時または逐次投与により調整することができる。一部の実施形態において、患者はヒトである。
【０２０９】
一部の実施形態において、１つ以上のＲＡＲアゴニスト化合物は、単独でまたは別の治療化合物との組合せで投与することができる。例えば、１つ以上のＲＡＲアゴニスト化合物は、ＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）、スルファチド、またはＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホ
シンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）およびスルファチドとの組合せで投与することができる。
【０２１０】
（ＮＫＴ−２アクチベーター）
多数のＮＫＴ−２アクチベーターを本明細書の一部の実施形態により使用することができる。一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターは、リン脂質、例えば、リゾリン脂質、例えば、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）、ミルテホシン、またはミルテホシンアナログを含む。ＩＩ型ＮＫＴ細胞に対する一部のＬＰＣ化合物の効果は、参照により全体として本明細書に組み込まれるＭａｒｉｃｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌｙｓｏｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｂｙ  Ｔｙｐｅ
ＩＩ  ＮＫＴ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａｎ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ”Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  ｏｎｌｉｎｅ  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２６  ２０１４，１４００６９９により記載されている。
【０２１１】
一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターは、式ＩＶの式：
【化８】
2017537984.tif 000013
（式中、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ４０アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ４０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ４０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ４０アルキンルからなる群から選択される）
を有するＬＰＣを含む。例示的なＬＰＣとしては、構造が以下に示されるＬＰＣ（Ｃ１８：０）
【化９】
2017537984.tif 000014
、構造が以下に示されるＬＰＣ（Ｃ１６：０）
【化１０】
2017537984.tif 000015
、構造が以下に示されるＬＰＣ（Ｃ１８：１（９Ｚ））
【化１１】
2017537984.tif 000016
、構造が以下に示されるＬＰＣ（Ｃ１８：１（１オレイル））
【化１２】
2017537984.tif 000017
および構造が以下に示されるＬｉｇｎＡ（ＬＰＣ（Ｃ２４：０））
【化１３】
2017537984.tif 000018
が挙げられる。好適なＮＫＴ−２アクチベーターとして企図される追加の例示的リン脂質としては、限定されるものではないが、リゾ血小板活性化因子（ＬＰＡＦ）、例えば、構造が以下に示されるＬＰＡＦ（Ｃ１８：０）
【化１４】
2017537984.tif 000019
および構造が以下に示されるリゾスフィンゴミエリン（ＬＳＭ）
【化１５】
2017537984.tif 000020
が挙げられる。
【０２１２】
一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターは、ミルテホシンを含む。ミルテホシンの構造を以下に示す。
【化１６】
2017537984.tif 000021
【０２１３】
一部の実施形態において、ＮＫＴ−２アクチベーターは、ミルテホシンアナログを含む。本明細書において使用される「ミルテホシンアナログ」は、ミルテホシンの構造アナログおよびミルテホシンの機能アナログを広く指す。本明細書の一部の実施形態による一部のミルテホシンアナログは、式Ｖの化合物：
【化１７】
2017537984.tif 000022
（式中、Ｒは、Ｃ１〜Ｃ３０アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルキル、Ｃ１〜Ｃ３０アルケニル、Ｃ１〜Ｃ３０置換アルケニルおよびＣ１〜Ｃ３０アルキンルからなる群から選択される）
を含む。
【０２１４】
本明細書の一部の実施形態により使用することができる例示的なミルテホシンアナログとしては、限定されるものではないが、以下の表２．１および２．２に列記される化合物が挙げられる。
【０２１５】
【表２】
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【０２１６】
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【０２１７】
一部の実施形態において、ミルテホシンアナログは、表２．１に示される化合物のいずれかを含み、それからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態において、ミ
ルテホシンアナログは、表２．１から選択される化合物を含み、それからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態において、ミルテホシンアナログは、表２．１または表２．２に示される化合物のいずれかを含み、それからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態において、ミルテホシンアナログは、表２．１または表２．２から選択される化合物を含み、それからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態において、ミルテホシンアナログは、表２．２に示される化合物のいずれかを含み、それからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態において、ミルテホシンアナログは、表２．２から選択される化合物を含み、それからなり、または本質的にそれからなる。一部の実施形態において、ミルテホシンアナログは、式Ｖの化合物を含み、それからなり、または本質的にそれからなる。
【０２１８】
ミルホテシンおよびミルテホシンアナログの全ての投与方式、例えば、経口投与、直腸投与、非経口投与、局所投与、または静脈内、筋肉内、胸骨内もしくは皮下注射による、もしくは吸入による好適な形態での投与が企図される。配合物は、適切な場合、区別される投与量単位で簡便に提供することができ、薬学の技術分野において周知の方法のいずれかにより調製することができる。活性成分は、通常、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤とともに、公知の慣行に従って配合される。したがって、医薬組成物は、液剤、散剤、エリキシル剤、注射液剤、懸濁液、坐剤などとして配合することができる。
【０２１９】
ミルテホシンは、経口または局所投与に好適であり得る。したがって、一部の実施形態において、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログを経口投与する。一部の実施形態において、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログを局所投与する。一部の実施形態において、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログを静脈内、筋肉内、胸骨内もしくは皮下注射または吸入による好適な形態で投与する。
【０２２０】
本明細書の一部の実施形態によれば、患者に投与されるミルテホシンまたはミルテホシンアナログの具体的な量は、治療される疾患または病態、ならびに治療される患者の年齢、体重および性別に応じて変動する。一部の実施形態において、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログは、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で投与する。一部の実施形態において、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログは、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重、０．２ｍｇ／ｋｇ体重、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、２ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、４ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、６ｍｇ／ｋｇ体重、７ｍｇ／ｋｇ体重、８ｍｇ／ｋｇ体重、９ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で、列記される値の任意の２つの間の範囲、例えば、約０．２〜０．５ｍｇ／ｋｇ体重、０．２〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．２〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．２〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜１ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜３ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、１〜３ｍｇ／ｋｇ体重、１〜５ｍｇ／ｋｇ体重、１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、２〜３ｍｇ／ｋｇ体重、２〜５ｍｇ／ｋｇ体重、２〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、または５〜１０ｍｇ／ｋｇ体重を含め、投与する。好ましくは、この投与量を必要に応じて反復する。任意選択的に、投与量は、１日５回、１日４回、１日３回、１日２回、１日１回、またはそれよりも低頻度で、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、もしくは２０日ごとに１回反復することができ、列記される値の任意の２つの間の範囲、例えば、１〜２日ごと、１〜３日ごと、１〜５日ごと、１〜１０日ごと、１〜２０日ごと、２〜３日ごと、３〜５日ごと、３〜１０日ごと、３〜２０日ごと、５〜１０日ごと、または５〜２０日ごとを含む。一部の実施形態において、少なくとも２つの投与量、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、または１００投与量を列記される値の任意の２つの間の範囲、例えば、２〜１０、２〜２０、２〜５０、２〜１００、５〜１０、５〜５０、５〜１００、１０〜２０、１０〜５０、１０〜１００、２０〜５０、または
２０〜１００投与量を含め、投与する。一部の実施形態において、患者はヒトである。
【０２２１】
一部の実施形態において、ミルテホシンまたはミルテホシンアナログが投与される対象は、炎症性病態、例えば、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、自己免疫性肝炎、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）を有する。
【０２２２】
（医薬組成物）
本明細書に記載のＮＫＴ−２アクチベーター、例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質、ＲＡＲアゴニスト化合物、およびスルファチド化合物は、医薬組成物中に取り込まれる活性成分として使用することができる。一部の実施形態において、医薬組成物は、単一の活性成分を含み得る。一部の実施形態において、医薬組成物は、２、３、４、５つ以上の活性成分を含み得る。以下のＮＫＴ−２アクチベーターの組成物のいずれも、炎症性病態、例えば、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）の治療、改善、または予防における使用のためのものであり得る。
【０２２３】
一部の実施形態において、医薬組成物は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）を含む。任意選択的に、医薬組成物は、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト、例えば、レチノイド、例えば、タザロテンをさらに含む。
【０２２４】
一部の実施形態において、医薬組成物は、全体として、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）および十分な量のスルファチドを含む。
【０２２５】
一部の実施形態において、医薬組成物は、全体として、ＩＩ型ＮＫ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）および十分な量のスルファチドを含み、Ｉ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト、例えば、レチノイド（例えば、タザロテン）をさらに含む。
【０２２６】
一部の実施形態において、医薬組成物は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）、およびＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のスルファチドを含む。
【０２２７】
一部の実施形態において、医薬組成物は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のＮＫＴ−２アクチベーター（例えば、ミルテホシンもしくはミルテホシンアナログまたはリン脂質）、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のスルファチド、およびＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のＲＡＲアゴニスト、例えば、レチノイド（例えば、タザロテン）を含む。
【０２２８】
一部の実施形態において、医薬組成物は、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させるために十分な量のミルテホシンまたはミルテホシンアナログおよびＩ型ＮＫＴ細胞の活性化を阻害するために十分な量のタザロテンを含む。
【０２２９】
全ての投与方式、例えば、経口投与、直腸投与、非経口投与、局所投与、または静脈内、筋肉内、胸骨内もしくは皮下注射による、もしくは吸入による好適な形態での投与が企図される。配合物は、適切な場合、区別される投与量単位で簡便に提供することができ、薬学の技術分野において周知の方法のいずれかにより調製することができる。活性成分は、通常、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤とともに、公知の慣行に従って配合される。したがって、医薬組成物は、液剤、散剤、エリキシル剤、注射液剤、懸濁液、坐剤などとして配合することができる。医薬配合物についてのアプローチは、参照により全体として本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９５）に詳述されている。
【０２３０】
一部の実施形態による活性成分は、経口投与について、散剤、賦形剤とのブレンド、液体または溶液、懸濁剤、固溶体の形態で活性物質を含む錠剤、硬ゼラチンカプセル、軟ゼラチンカプセルとして、投与用に配合することができる。一部の実施形態による活性成分は、口腔内投与（舌下またはバッカル）について、急速に溶解する固体剤形もしくは発泡錠、薄型フィルム、バッカルカシェ剤として、または液体もしくは半固体の形態、例えば、ゲル剤、液剤、乳剤、懸濁剤として、投与用に配合することができる。一部の実施形態による活性成分は、注射について、水性もしくは非水性の液剤、懸濁剤または乳剤として、投与用に配合することができる。油ベースの液剤および懸濁剤は、天然およびまたは合成の油、例えば、ダイズ油、綿実油、鉱油、ゴマ油、ヒマシ油、硬化植物油、蜜蝋の混合物を含む。一部の実施形態による活性成分は、経皮投与について、クリーム剤、ゲル剤、乳剤、水性ベースの液剤、油ベースの液剤、懸濁剤、フィルム剤、貼付剤、フォーム剤として、投与用に製剤化することができる。一部の実施形態による活性成分は、経鼻投与について、散剤、懸濁剤、液剤、乳剤として、投与用に配合することができる。一部の実施形態による活性成分は、肺送達について、微粉化散剤として、投与用に配合することができる。経口投与は、初回通過代謝および代謝酵素の誘導と関連する。したがって、経口投与されるレチノイン酸の投与量強度および投与計画は、最適効果について調整することができる。代替的な送達経路、例えば、舌下、バッカル、注射、肺および経皮が経口投与と比べて好ましいことがある。代替的な投与経路、例えば、記載される投与経路は、初回通過代謝およびＧＩ吸収を回避し、より少ない酵素誘導を示し、安定な反復用量薬物動態を提供する。
【０２３１】
本実施形態による医薬配合物は、即時放出性または調節放出性（例えば、持続放出性、拍動放出性、制御放出性、遅延放出性、徐放性）であり得る。薬理学的量の経口投与されるレチノイド異性体は即時活性であるため、副作用を有し得る。この副作用は、治療法における経口レチノイドの使用の深刻な制約であった。局所適用されるレチノイドは催奇形の易罹病性をほとんど有さないが、それらの使用を制限するこの投与経路と関連する他の毒性、例として、皮膚刺激が存在する。経口および局所毒性の両方についての主な理由は、レチノイドが投与時に完全に即時に利用可能であることである。インビボでより緩慢に、より継続的にレチノイドを利用可能にし得るプロセスは、レチノイドの利用可能性のピークと谷を回避し、それにより、より長い期間にわたりインビボ有効レベルの化合物を提供し、さらに過剰量の物質の突発的な利用可能性から生じることが多い毒性を回避し、または大幅に低減させる。レチノール、レチノールのエステル、特にレチノールの脂肪エステル、レチノイン酸またはレチノイン酸エステルの油ベースの注射配合物は、筋肉内に週単位で投与することができ、そのような原理による徐放性全身送達を提供し得る。
【０２３２】
一部の実施形態は、本明細書に記載の本実施形態の１つ以上の活性成分の経口剤形の配合に関する。１０ｇのレチノイン酸を蜜蝋、ブチルヒドロキシアニソール、エデト酸二ナトリウム、硬化ダイズ油フレーク、硬化植物油およびダイズ油アルコールの混合物中でわずかに昇温させて、高剪断混合により溶解させる。この混合物を、経口投与のために、２ｍｇ、５ｍｇおよび１０ｍｇの投与量強度において軟ゼラチンカプセル中に密封する。
【０２３３】
一部の実施形態は、本実施形態の１つ以上の活性成分を含有する生体接着性バッカル錠の配合に関する。２４％の活性成分、２１％のＨＰＭＣ、１８％のコーンスターチ、２４％のラクトース、１％のシリカ、２．５％のＰｏｌｙｃａｒｂｏｐｈｉｌ（Ｎｏｖｅｏｎ）、７．５％のカルボマー９７４Ｐ、１．２％のタルクおよび０．７％のステアリン酸マグネシウムを含有する賦形剤のブレンドを調製する。このブレンドを直径約１ｃｍの錠剤に圧縮した。
【０２３４】
一部の実施形態は、本実施形態の１つ以上の活性成分を含有する舌下フィルムの配合に関する。以下のものを５０ｇの水中で混合する：３ｇのＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｅ５、５ｇのＭｅｔｈｏｃｅｌ  Ｅ５０、１ｇのＫｌｕｃｅｌ、１ｇのマルトデキストリン、１ｇのクエン酸、３ｇのスクラロース、５ｇのオレンジ香味料、０．２ｇのパラベン、０．１のエデト酸ナトリウムおよび５ｇのソルビトール。１ｇのレチノイン酸を添加し、混合物を撹拌しながら脱ガスする。この組成物をポリエステルフィルム支持体全体にわたって薄く広げ、分解を回避するために直射光の不存在下において空気中で乾燥させる。次いで、このフィルムを２〜１０ｍｇの用量を生成するためのサイズに切断する。
【０２３５】
一部の実施形態は、１つ以上のスルファチド、ＲＡＲアゴニストまたはそれらの任意の組合せを好ましくは医薬組成物として含み得るキットに関する。一部の実施形態において、シス−テトラコセノイルが、薬学的に許容可能な担体中で提供される。一部の実施形態において、ＡＴＲＡが、薬学的に許容可能な担体中で提供される。一部の実施形態において、タザロテンが、薬学的に許容可能な担体中で提供される。いくつかの実施形態において、硫化水素（Ｈ２Ｓ）を任意選択的に提供することができる。いくつかの実施形態において、１つ以上の酸化防止剤を任意選択的に提供することができる。いくつかの実施形態において、キットは、好適な包装および／または使用説明書をさらに含み得る。キットはまた、１つ以上のスルファチド、ＲＡＲアゴニストまたはそれらの任意の組合せの送達のための手段、例えば、吸入器、スプレーディスペンサー（例えば、鼻腔用スプレー）、注射用注射器、注射針、ＩＶバッグ、またはカプセル剤、錠剤、坐剤のための圧力パックを含み得る。１つ以上のスルファチド、ＲＡＲアゴニストまたはそれらの任意の組合せは、乾燥もしくは凍結乾燥形態であり得、または溶液、特に滅菌溶液中に存在し得る。乾燥形態である場合、キットは、液体配合物を調製するための薬学的に許容可能な希釈剤を含み得る。キットは、投与のためまたは組成物を分注するためのデバイス、例として、限定されるものではないが、注射器、ピペット、経皮貼付剤、または吸入剤を含有し得る。一部の実施形態は、長期、例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、または８週間以上にわたり有効な治療を個体に提供するために十分な投与量の化合物または組成物を含有するキットに関する。
【０２３６】
（ＣＤ８制御性Ｔ細胞）
本明細書の一部の実施形態によるＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞の投与およびＮＫＴ−２アクチベーターの投与の組合せが、炎症性病態、例えば、自己免疫疾患の治療または予防に有用であり得ることが企図される。一部の実施形態において、ＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞は、炎症性病態を有し、またはその発症リスクのある対象に投与する。ＮＫＴ−２インヒビターを対象に投与することもできる。任意選択的に、ＮＫＴ−２インヒビターは、ミルテホシンを含む。任意選択的に、炎症性病態は、脂肪肝疾患、アルコール誘発性肝炎、非アルコール性
脂肪性肝炎、自己免疫性肝炎、肝硬変、非アルコール性脂肪肝疾患、線維症、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性硬化症、劇症肝硬変、特発性肝炎、ウイルス誘発性肝炎（Ａ型、Ｂ型、Ｃ型およびその他）、肝胆道癌と関連する炎症性肝炎、多発性硬化症、１型糖尿病、虚血再灌流傷害、実質臓器移植、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、および炎症性腸疾患（クローン病および大腸炎）の少なくとも１つ、またはそれらの列記される項目の２つ以上の組合せを含む。
【０２３７】
免疫系は平衡状態を維持する一方、外来抗原および自己抗原に応答する。外来抗原に対する免疫応答後の恒常性を維持するため、または自己抗原に対する有害応答を予防もしくは停止させるための制御機序としては、ＣＴＬＡ−４媒介Ｔ細胞阻害、活性化誘導細胞死（ＡＩＣＤ）、ＩＬ−２媒介調節、および制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）（１Ａｂｂａｓ，Ａ．Ｋ．，Ｌｏｈｒ，Ｊ．，Ｋｎｏｅｃｈｅｌ，Ｂ．＆Ｎａｇａｂｈｕｓｈａｎａｍ，Ｖ．Ｔ  ｃｅｌｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ａｎｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  Ｒｅｖ  ３，４７１−５（２００４））が挙げられる。ＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞の誘導は、ＰＣＴ国際公開第２００７／１３６５１８号パンフレットおよび米国特許出願公開第２００７／０２８６８４９号明細書にも記載されており、そのそれぞれは参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０２３８】
枯渇抗体または特異的遺伝子ノックアウトを有する動物を使用する実験は、自己免疫疾患（Ｋｏｈ，Ｄ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．Ｌｅｓｓ  ｍｏｒｔａｌｉｔｙ  ｂｕｔ  ｍｏｒｅ  ｒｅｌａｐｓｅｓ  ｉｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ＣＤ８−／−ｍｉｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５６，１２１０−３（１９９２））、移植寛容（Ｓｅｙｄｅｌ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉ−ＣＤ８
ａｂｒｏｇａｔｅｓ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ＣＤ４−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｉｓｌｅｔ  ａｌｌｏｇｒａｆｔ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４０，１４３０−４（１９９１））、新生児寛容（Ｆｉｅｌｄ，Ａ．Ｃ．，Ｃａｃｃａｖｅｌｌｉ，Ｌ．，Ｂｌｏｃｈ，Ｍ．Ｆ．＆Ｂｅｌｌｏｎ，Ｂ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ＣＤ８＋Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｎｅｏｎａｔａｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｏ  ａ  Ｔｈ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７０，２５０８−１５（２００３））、ならびに正常細胞性および体液性免疫応答の恒常性（Ｎａｎｄａ，Ｎ．Ｋ．＆Ｓｅｒｃａｒｚ，Ｅ．Ａ  ｔｒｕｎｃａｔｅｄ
Ｔ  ｃｅｌｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉｇｅｎｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ．Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８４，１０３７−４３（１９９６））におけるＣＤ８＋リンパ球についての重要な調節的役割を示した。
【０２３９】
多発性硬化症において、例えば、免疫系は、ミエリン膜からの一部の自己抗原を外来物として病理学的に認識し、それらに対する免疫応答を開始する。これは脱髄、神経細胞（ニューロン）を覆う絶縁および保護性脂肪タンパク質であるミエリンの破壊的除去をもたらす。多発性硬化症における脱髄は、ＣＮＳ中の抗原提示イベントから開始され、または全身分子模倣応答による末梢活性化後に誘導されるＴ細胞ガイド免疫応答により媒介される。
【０２４０】
いかなる理論によっても限定されるものではないが、ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔｒｅｇ細胞は、自己免疫および免疫関連の疾患および障害の適応症を治療および／または予防するために有用であり得る。ＮＫＴ−２アクチベーター、例えば、ミルテホシンは、対象の肝臓中のＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞を誘導し得る（例えば、図８Ａ〜Ｂ参照）。したがって、一部の実施形態において、ＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞は、本明細書に記載の炎症性病態を有し、または有するリスクのある対象に投与する。任意選択的に、ＮＫＴ−２インヒビターを対象にさらに投与する。一部の実施形態において、ＮＫＴ−２インヒビターは、ミルテホ
シンを含む。任意選択的に、投与されるＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞は、対象からのものである（すなわち、「自家移植」ＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞）。任意選択的に、投与されるＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞は、別の個体からのものである（すなわち、「同種異系」ＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞）。任意選択的に、投与されるＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞は、対象に投与する前に拡大し、例えば、細胞は、インビトロで拡大することができる。炎症性病態、例えば、自己免疫疾患または障害の原因である病原性自己反応性免疫応答を治療および低減または排除し得ることが企図される。
【０２４１】
一般に、例えば、腸または血液中の有効な最終濃度を達成するため、本明細書の実施形態による単回投与量組成物中の拡大されるＴｒｅｇ細胞集団の量は、一般に、約１０，０００〜約１兆個の細胞、好ましくは、約１００，０００〜約１億個の細胞、より好ましくは、約１００万〜約５０００万個の細胞、いっそうより好ましくは、約１０００万〜約３０００万個の細胞、いっそうより好ましくは、約１５００万〜約２５００万個の細胞、いっそうより好ましくは、約２０００万個の細胞である。同様に、本実施形態の単回経口投与量組成物中の二次治療化合物の量は、一般に、約０．０１ミリグラム〜約１０００ミリグラム、より好ましくは、約０．１ミリグラム〜約１００ミリグラムの範囲内である。任意選択的に、正確な投与量は、治療される疾患または障害により変動し、好ましい範囲は容易に決定可能である。
【０２４２】
一部の実施形態において、拡大されるＴｒｅｇ細胞集団は、薬学的に許容可能なビヒクルと組み合わせることができる。好適な薬学的に許容可能なビヒクルとしては、例えば、リン酸緩衝生理食塩水が挙げられる。一実施形態において、約１，０００〜約３，０００，０００個の細胞／ｋｇ体重のＴｒｅｇ細胞を患者に投与する。好ましくは、約１００，０００〜約１００万個の細胞／ｋｇ体重のＴｒｅｇ細胞を投与する。この投与量は、毎時間、毎日、毎週、毎月または不定期に必要に応じて反復することができる。例示的な投与量および投与計画を以下に考察する。
【０２４３】
一部の実施形態において、投与されるＴｒｅｇ細胞は、ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋細胞を含む。一部の実施形態において、投与されるＴｒｅｇ細胞は、ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＩＬ−２Ｒβ＋（ＣＤ１２２＋）を含む。一部の実施形態において、投与されるＴｒｅｇ細胞は、ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ１２２＋を含む。いかなる理論によっても限定されるものではないが、ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇ細胞およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋、ＣＤ１２２＋Ｔｒｅｇ細胞のそれぞれもインビボで活性化されるＶβ８．２＋ＣＤ４Ｔ細胞の集団を制御し、本明細書に記載のＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋Ｔｒｅｇ細胞と類似の手法で利用し得ることが企図される。
【０２４４】
一部の実施形態において、制御性Ｔ細胞は、それが得られた同一の対象に投与する。他の実施形態において、制御性Ｔ細胞は、それが得られた対象以外の対象に投与することができる。さらに他の実施形態において、制御性Ｔ細胞は、対象でない哺乳動物から得ることができる。一部の実施形態において、投与される制御性Ｔ細胞は、制御性Ｔ細胞を投与する対象、制御性Ｔ細胞を投与する対象以外の対象および非対象哺乳動物の少なくとも２つから得られる細胞の混合物を含む。
【０２４５】
一部の実施形態において、成長因子、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７およびＩＬ−１５を有する抗ＣＤ３コートプレートを使用してＴ細胞集団を拡大させる。一部の実施形態において、Ｔｒｅｇは、組換えＴＣＲタンパク質またはペプチド、例えば、ＴＣＲＶβ８．２鎖に由来するｐ４２−５０を使用してインビトロで拡大することができる。任意選択的に、疾患特異的病原性Ｔ細胞により利用されるＴＣＲＶβまたはＶα鎖遺伝子を決定するこ
とができる。次いで、それらのＴＣＲＶβまたはＶα鎖遺伝子に対応するタンパク質を体内に導入して適切なＴｒｅｇ細胞集団を活性化させることができる。
【０２４６】
治療Ｔｒｅｇ細胞集団の多数の異なる投与方式および方法が、本明細書に記載の実施形態により好適である。一部の実施形態において、送達経路としては、例えば、静脈内、腹腔内、吸入、筋肉内、皮下、鼻腔および経口投与または当技術分野において利用可能な任意の他の送達経路が挙げられる。特定の投与経路に応じて、剤形は、例えば、固体、半固体、液体、蒸気またはエアロゾル製剤であり得る。剤形としては、例えば、医薬組成物の技術分野において利用可能な添加剤、滑沢剤、安定剤、緩衝剤、コーティング剤、および賦形剤を挙げることができる。
【０２４７】
多数の異なる医薬配合物が本明細書に記載の実施形態により企図される。一部の実施形態において、医薬配合物は、ＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞および本明細書に記載のＮＫＴ−２アクチベーターを含む。一部の実施形態において、医薬配合物は、ＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞およびミルテホシンを含む。一部の実施形態において、医薬配合物は、以下のタイプのＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞：ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の少なくとも１つを含み、本明細書に記載のＮＫＴ−２アクチベーターをさらに含む。一部の実施形態において、医薬配合物は、以下のタイプのＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞：ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の少なくとも１つを含み、ミルテホシンをさらに含む。一部の実施形態において、第１の医薬配合物は、ＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞を含み、第２の医薬配合物は、本明細書に記載のＮＫＴ−２アクチベーターを含む。
【０２４８】
一部の実施形態において、第１の医薬配合物は、ＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞を含み、第２の医薬配合物は、ミルテホシンを含む。一部の実施形態において、第１の医薬配合物は、以下のタイプのＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞：ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の少なくとも１つを含み、第２の医薬配合物は、ＮＫＴ−２アクチベーターを含む。一部の実施形態において、第１の医薬配合物は、以下のタイプのＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞：ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ２００＋Ｔ細胞、ＣＤ８αα＋ＴＣＲαβ＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、およびＣＤ８αα＋、ＴＣＲαβ＋、ＣＤ２００＋ＣＤ１２２＋Ｔ細胞の少なくとも１つを含み、第２の医薬配合物は、ミルテホシンを含む。一部の実施形態において、第１および第２の医薬配合物は、同時に投与する。一部の実施形態において、第１および第２の医薬配合物は、異なる時間において投与する。一部の実施形態において、第１の医薬配合物は、第２の医薬配合物よりも前に投与する。一部の実施形態において、第２の医薬配合物は、第１の医薬配合物よりも前に投与する。任意選択的に、本明細書に記載の医薬配合物のいずれも、以下の薬学的に許容可能なビヒクルなど：賦形剤、例えば、溶媒（例えば、水、生理食塩水）、増量剤および充填剤（例えば、ラクトース、デンプン、結晶性セルロース、マンニトール、マルトース、リン酸水素カルシウム、軟質無水ケイ酸および炭酸カルシウム）；助剤、例えば、可溶化剤（例えば、エタノールおよびポリソルベート）、結合剤（例えば、デンプン、ポリビニルピロリジン、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースおよびアラビアゴム）、崩壊剤（例えば、デンプンおよびカルボキシメチルセルロースカルシウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクおよび硬化油）、安定剤（例えば、ラクトース、マンニトール、マルトース、ポリソルベート、マクロゴール、およびポリオキシエチレン硬化ヒマシ油）、等張剤、湿潤剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤および可溶化剤；ならびに添加剤、例えば、酸化防止剤、保存剤、着香剤および芳香剤、鎮痛剤、安定剤、着色剤および甘味剤
を使用する慣用の方法により調製することができる。
【０２４９】
以下の実施例は、説明目的のために提供されるにすぎず、決して本明細書に記載の実施形態を限定するものではない。
【実施例１】
【０２５０】
プレート結合ＣＤ１ｄアッセイにおいて、ミルホテシンは、ＩＩ型ＮＫＴ細胞ハイブリドーマ、Ｈｙ１９．３を刺激し得る。ＣＤ１ｄタンパク質コート９６ウェルプレートを、示される脂質と６時間インキュベートし、洗浄し、ＩＩ型ＮＫＴ細胞Ｈｙ１９．３を添加し（５０，０００個の細胞／ウェル）、１６時間後に上清中のＩＬ−２を計測した。ＬＳＦ、リゾスルフタチド（ｌｙｓｏｓｕｌｆｔａｔｉｄｅ）；ＬＰＣ、リゾホスファチジルコリン。
【０２５１】
これらのデータは、リゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ）のアナログのミルテホシンがＣＤ１ｄ分子に結合し、ＩＩ型ＮＫＴ細胞を刺激し得ることを示す。
【実施例２】
【０２５２】
ナイーブＢ６マウスを、ＤＭＳＯ（対照）またはミルテホシン１ｍｇ（ＤＭＳＯ中で溶解させ、ＰＢＳ中に希釈した）により経口強制摂取を使用して７日間毎日処理した。脾細胞は、アルファ−ＧａｌＣｅｒの存在または不存在下においてインビトロで９０時間培養した。１０ｎｇ／ｍｌのアルファ−ＧａｌＣｅｒ濃度におけるＩ型ＮＫＴ細胞の刺激（刺激指数として）および拡大（アルファ−ＧａｌＣｅｒ／ＣＤ１ｄ−テトラマー＋細胞によるＦＡＣＳ染色として）を図２Ａおよび図２Ｂの両方に示す。
【０２５３】
図２Ａおよび図２Ｂのデータは、ミルテホシン処理動物において、Ｉ型ＮＫＴ細胞増殖および拡大の有意な阻害が、その認識リガンドアルファ−ＧａｌＣｅｒの存在下で存在することを示す。
【０２５４】
これらのデータは、他の脂質、例えば、スルファチド（糖脂質）またはリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣ、リン脂質）がＩＩ型ＮＫＴ細胞を活性化させ、Ｉ型ＮＫＴ細胞の不活性化または阻害をもたらす観察と一致する。
【実施例３】
【０２５５】
ＢＬ／６マウスの群に、ＤＭＳＯ／ＰＢＳまたはミルテホシンのいずれかを投与し、１２時間後にＣｏｎＡを投与し、肝切片のＨ＆Ｅ染色により肝傷害を判定し、２４時間後に血清中の肝酵素、例えば、ＡＬＴを試験した（図３Ａおよび図３Ｂ）。示されるデータは、２つの独立実験の代表値である。
【０２５６】
図３Ｂに示されるとおり、壊死を示す染色（赤色のＨ＆Ｅ染色）１がｃｏｎＡにより処理された肝切片において観察されたが、壊死の減少を示す染色（低減した赤色のＨ＆Ｅ染色）２がｃｏｎＡおよびミルテホシンにより処理された肝切片において観察された。
【０２５７】
したがって、ＣｏｎＡ誘発性肝炎の阻害が、ミルテホシンによる処理後に観察された。これらのデータは、スルファチドまたはＬＰＣと同様、ミルテホシンによるマウスの処理が、以下のＣｏｎＡ注射後の肝傷害の有意な阻害をもたらすことを示す。
【実施例４】
【０２５８】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの群に、ミルテホシン（１日当たり約５００マイクログラム）またはＤＭＳＯ／ＰＢＳのいずれかを含有する液体アルコール（ＥｔＯｈ）食餌または等カロリー対照（対照）食餌を１０日間給餌した。１１日目、大量摂取（長期的大量摂取給餌
）の９時間後、Ｉ型ＮＫＴ細胞（アルファ−ＧａｌＣｅｒ／ＣＤ１ｄ−テトラマー＋細胞）または好中球（Ｌｙ−６Ｇ＋ＣＤ１１ｂ＋）の蓄積および活性化を肝臓中で試験した。図４Ａおよび図４Ｂに示されるとおり、対照食餌群と比較して、Ｉ型ＮＫＴ細胞は、液体長期的大量摂取ＥｔＯｈ食餌を給餌されたマウスの肝臓中に蓄積する。図４Ｃおよび図４Ｄにも示されるとおり、Ｉ型ＮＫＴ細胞は、肝臓中への好中球（Ｌｙ−６Ｇ＋ＣＤ１１ｂ＋細胞）の蓄積を伴い活性化される（アルファ−ＧａｌＣｅｒ／ＣＤ１ｄ−テトラマー＋細胞におけるＣＤ６９細胞表面発現の発現により試験）。活性化Ｉ型ＮＫＴ細胞および好中球の蓄積は、ＡＬＤ中に肝細胞傷害をもたらす炎症カスケードをもたらす。特に、ミルテホシンにより処理されたマウスにおいて、それらの細胞は両方とも蓄積せず、肝傷害からの保護をもたらす。
【０２５９】
これらのデータは、ミルテホシンにより処理されたマウスにおけるアルコール性肝疾患（ＡＬＤ）中の活性化Ｉ型ＮＫＴ細胞および好中球の蓄積の阻害を示す。したがって、ミルテホシンは炎症性肝疾患、例として、ＡＬＤ、ＮＡＳＨ、ＰＢＣ、ＰＳＣ、ウイルス性肝炎などの治療において使用し得ることが企図される。
【実施例５】
【０２６０】
スルファチドによる処理が、ＳＪＬマウスにおける慢性および再発ＥＡＥの有意な阻害をもたらすことが観察されている。しかしながら、図６に示されるとおり、スルファチドによる経口処理は経口的に与えた場合、最初に疾患を阻害するが、それほど効率的でない。いかなる理論によっても限定されるものではないが、スルファチドが消化管中でそれほど安定的でないことが企図され、それは観察された低い効率と一致する。図６を参照すると、Ｂ６マウスの群をスルファチド（ＰＢＳ中２００マイクロリットル中２００マイクログラム）により、疾患誘発１日前から開始して７日間経口処理した。臨床的麻痺を毎日モニタリングし、１〜５までスコアリングした。最初に４〜５日間の保護が存在するが、次いで両方の群のマウスが類似の重症度の疾患を罹患する。いかなる理論によっても限定されるものではないが、両方の群の観察された類似性は、消化管中のスルファチドの不安定性と一致する。
【０２６１】
図５に示されるとおり、相対的に安定的であるはずのミルテホシンによる経口処理が、多発性硬化症のプロトタイプの慢性および再発ＥＡＥを阻害し得るか否かを試験した。ＳＪＬマウスの群に、ミルテホシン（２００マイクロリットルの１０％のＤＭＳＯ／ＰＢＳ中１ｍｇ）または対照（ＤＭＳＯ／ＰＢＳ）を、１週間に２回、矢印により示されるとおり経口強制摂取させた。疾患の臨床的重症度をマウスの両方の群において麻痺としてスケール１〜５で毎日モニタリングし、示した。
【０２６２】
図５のデータは、多発性硬化症のプロトタイプの慢性および再発実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）のミルテホシンによる処理についての結果をまとめる。これらの実験は、Ｔ細胞媒介自己免疫疾患、例として、ＭＳ、ＴＩＤＤ、ＲＡ、ループスおよびＩＢＤなどをミルテホシンにより治療し得ることを示す。
【実施例６】
【０２６３】
ＰＢＭＣ（１×１０６個／ウェル）を１００ｎｇ／ｍｌのαＧａｌＣｅｒ、１００ｎｇ／ｍｌのαＧａｌＣｅｒ＋５μｇ／ｍｌのミルテホシンによりインビトロで刺激し、または刺激しなかった。１２日後、細胞をハーベストし、Ｉ型ＮＫＴ細胞の割合をフローサイトメトリーにより評価した。ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏを使用して染色された細胞を回収した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータを分析した。ヒトＩ型ＮＫＴ細胞をＣＤ３＋／Ｖα２４Ｊα１８ＴＣＲ＋細胞（ＣＤ１ｄ拘束性Ｉ型ＮＫＴ細胞）として識別し、図７のゲート区域中の％ＮＫＴ細胞として示す。フレッシュＰＢＭＣ（培養なし）およびインビトロ拡大後のＰＢＭＣからのＩ型ＮＫＴ細胞の割合をそれぞれのプロット内に
示す。図７に示されるデータは、６つ以上の独立実験の代表値である。
【０２６４】
したがって、本明細書の一部の実施形態によれば、ミルテホシン処理がヒトＩ型ＮＫＴ細胞の拡大をもたらし得ることが示される。
【０２６５】
本出願において、単数形の使用は、特に具体的な記載のない限り、または本開示に照らして当業者により理解されるとおり単数形が唯一の機能的実施形態でない限り、複数形を含み得る。したがって、例えば、「１つの（ａ）」は、２つ以上を意味し得、「一実施形態」は、その記載が複数の実施形態に当てはまることを意味し得る。
【０２６６】
上記の詳細な説明および実施例は、ある実施形態を詳述する。しかしながら、上記のものが本文中でどのように詳述され得ようとも、本発明は、多くの手法で実施することができ、本発明を添付の特許請求の範囲およびその任意の均等物に従って解釈すべきことが認識される。
【実施例７】
【０２６７】
雌ＳＪＬ／Ｊマウスの群に、疾患過程の前およびその間に、図２に示されるとおり１ｍｇのミルテホシンを経口投与した。マウスを５９日目に安楽死させた。ＣＤ４、ＣＤ８αおよびＣＤ８βｍＡｂにより染色された肝単核細胞のフローサイトメトリープロファイルを図８Ａ〜Ｂに示す。興味深いことに、制御性ＣＤ８αα＋Ｔ細胞が肝臓中で有意に増加する一方、他のＣＤ４＋およびＣＤ８αβ＋Ｔ細胞は対照と処理群で異なることはなかった。
【０２６８】
したがって、本明細書の一部の実施形態によるＮＫＴ−２アクチベーター、例えば、ミルテホシンの投与は、肝臓中のＣＤ８αα＋Ｔ細胞の誘導を増加させ得る。
【実施例８】
【０２６９】
ＣＤ８Ｔｒｅｇのインビボ制御性潜在性を決定するため、２Ｄ１１細胞を同種マウス中に静脈内で養子移植した。２４時間後、ＥＡＥ誘発のためにレシピエントをＭＢＰＡｃ１−９／ＣＦＡ／ＰＴにより免疫化し、臨床的症状を毎日モニタリングし、１〜５のスケールで３５〜４５日間スコアリングした：１が尾部麻痺であり；２が後肢麻痺であり；３が後方身体麻痺であり；４が後肢および部分身体麻痺であり；５が全身麻痺または瀕死である。図８Ａに示されるとおり、１００万個の２Ｄ１１細胞を注射されたマウスは、対照群におけるものよりも軽度の疾患から急速に回復する。疾患を制御する能力が特定のクローンの長期培養のアーティファクトである見込みを除外するため、短期ｐ４２−５０反応性Ｔ細胞系を生成し、類似の養子移植実験において使用した。図８Ｂに示されるとおり、ｐ４２−５０反応性Ｔ細胞系の５００万個の細胞を受けるマウスは、ＭＢＰ誘発ＥＡＥから完全に保護され、１００万個の細胞のみの移植は軽度の麻痺からのより急速な回復を可能とする。２つの無関連ＴＣＲペプチドに対して生じた短期Ｔ細胞系の養子移植は、ＥＡＥに対する効果を有さなかった（データ示さず）。図８Ａ〜Ｂ参照。
【０２７０】
したがって、本明細書の一部の実施形態によるＣＤ８Ｔｒｅｇ系およびクローンの養子移植は、ＥＡＥからの急速な回復および保護をもたらす。したがって、本明細書の一部の実施形態によるＣＤ８Ｔｒｅｇ細胞系およびクローンの養子移植が、少なくとも１つの炎症性病態を緩和および／または予防し得ることが企図される。
【実施例９】
【０２７１】
ＣＤ８ＴｒｅｇによるＴＣＲＶβ６鎖の主な使用法を、抗Ｖβ６ｍＡｂによるマウスの処理がＣＤ８ＴｒｅｇレパートリーおよびＭＢＰＡｃ１−９誘発ＥＡＥの過程に対する任意の影響を有したか否かの試験により示す。抗ＴＣＲＶβ６ｍＡｂ（ＲＲ４−７、３００
μｇ／マウス）の単回静脈内注射後、脾細胞を異なる時間においてＶβ６＋細胞の存在下でインビボ試験した。予測されるとおり、抗ＴＣＲＶβ６ｍＡｂ注射は、早期活性化マーカーＣＤ６９の発現（図９Ａ、第２列）と、それに続く細胞表面Ｖβ６発現の下方調節（図９Ａ、第１列）により決定されたとおり、インビボでＴＣＲＶβ６＋Ｔ細胞の早期活性化をもたらした。抗ＴＣＲＶβ６ｍＡｂの効果は、ＴＣＲ特異的であった。なぜなら、Ｖβ８＋Ｔ細胞は同一実験条件下で影響されなかったためである（図９Ａ、第３および第４列）。抗ＴＣＲＶβ６処理マウスからの脾細胞におけるＴＣＲＶβ６ｍＲＮＡ発現のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析は、大部分であるが全てでないＴＣＲＶβ６＋Ｔ細胞が連続処理後に枯渇したことを明らかにした（図９Ｂおよびデータ示さず）。
【０２７２】
腸中の上皮内リンパ球（ＩＥＬ）中に主に存在するＣＤ８ααＴ細胞は、自己アゴニストによる枯渇に相対的に耐性であり、Ｔ細胞受容体を介する活性化に対するそれらの応答がＣＤ８αβＴ細胞と異なり得る。ＴＬ−テトラマーによる染色を使用して抗ＴＣＲＶβ６ｍＡｂ投与が末梢中のＣＤ８ααＴ細胞の枯渇または活性化をもたらすか否かを試験した。図９Ｃのデータは、ＴＬ−テトラマー＋ＣＤ８＋細胞が抗体投与後に枯渇しないことを示す。実際、ｐ４２−５０に対するインビトロリコール応答のわずかな増加が、抗体処理マウスにおいて見出された（データ示さず）。ＣＤ８αα＋Ｖβ６＋Ｔ細胞の活性化後の調節機能をさらに試験するため、ＥＡＥ誘発のためにマウスの群をＭＢＰＡｃ１−９／ＣＦＡ／ＰＴにより免疫化した。１日および１週間後、低用量の抗ＴＣＲＶβ６ｍＡｂ（１００μｇ／マウス）、アイソタイプ対照ｍＡｂ（１００μｇ／マウス）、またはＰＢＳのいずれかを静脈内注射した。２回目の注射後に臨床的症状を毎日モニタリングした。図９Ｄおよび表４のデータは、抗ＴＣＲＶβ６ｍＡｂによるＶβ６＋Ｔ細胞のインビボ活性化が、Ｂ１０．ＰＬマウスにおいてＥＡＥからの保護をもたらしたことを示す。対照的に、アイソタイプ対照ｍＡｂまたは無関連ｍＡｂを注射された群の動物は、疾患から保護されなかった（データ示さず）。
【０２７３】
抗ＴＣＲＶβ６ｍＡｂ（３００μｇ／マウス）による単回静脈内注射後、Ｖβ６＋細胞の活性化（ＣＤ６９発現）とそれに続く下方調節／枯渇が見られたが、Ｖβ８＋Ｔ細胞では見られなかった。０、１、および３日目、脾細胞をＴＣＲＶβ６−ＦＩＴＣ／ＣＤ８α−ＰＥ／ＣＤ６９−ＰｅｒＣＰ（第１および第２列）またはＴＣＲＶβ８−ＦＩＴＣ／ＣＤ８α−ＰＥ／ＣＤ６９−ＰｅｒＣＰ（第３および第４列）により染色した。細胞をＴＣＲＶβ６／ＣＤ８α＋Ｔ細胞（第２列）またはＴＣＲＶβ８／ＣＤ８α＋Ｔ細胞（第４列）のいずれかに対してゲーティングして早期活性化マーカーＣＤ６９の発現を分析した。データは、２つの独立実験の代表値である。（ｂ）リアルタイムＰＣＲにより決定された抗Ｖβ６注射後のＶβ６＋Ｔ細胞の有意な枯渇。ｍＲＮＡの発現は、２つの内部対照遺伝子（Ｌ３２およびシクロフィリン）に対する正規化後の相対量として提示される。データは、２つの独立実験の代表値である。（ｃ）ＴＬ−テトラマー＋ＣＤ８Ｔ細胞は、抗ＴＣＲＶβ６注射後に枯渇しなかった。抗体注射後に示される日数で脾細胞をＣＤ８α−ＦＩＴＣ／ＴＬ−テトラマー−ＰＥにより染色した。データは、２つの独立実験の代表値である。（ｄ）抗ＴＣＲＶβ６ｍＡｂを注射されたマウスは、ＥＡＥから保護される。ＭＢＰＡｃ１−９／ＣＦＡ／ＰＴによるＥＡＥの誘発１および７日後、マウスの群に抗ＴＣＲＶβ６ｍＡｂ（１００μｇ／マウス）またはＩｇＧアイソタイプ対照またはＰＢＳを注射した。麻痺疾患を方法に記載のとおりモニタリングした。データは、３つの独立実験から合わせた。
【０２７４】
【表３】
2017537984.tif 000343
【０２７５】
【表４】
2017537984.tif 000344
【０２７６】
したがって、本明細書の一部の実施形態によるインビボのＴＣＲＶβ６＋Ｔ細胞の活性
化は、ＥＡＥからの保護をもたらす。
【図１】
2017537984.tif 000349
【図２Ａ】
2017537984.tif 000350
【図２Ｂ】
2017537984.tif 000351
【図３Ａ】
2017537984.tif 000352
【図３Ｂ】
2017537984.tif 000353
【図３Ｃ】
2017537984.tif 000354
【図４Ａ】
2017537984.tif 000355
【図４Ｂ】
2017537984.tif 000356
【図４Ｃ】
2017537984.tif 000357
【図４Ｄ】
2017537984.tif 000358
【図５】
2017537984.tif 000359
【図６】
2017537984.tif 000360
【図７】
2017537984.tif 000361
【図８Ａ】
2017537984.tif 000362
【図８Ｂ】
2017537984.tif 000363
【図９Ａ】
2017537984.tif 000364
【図９Ｂ】
2017537984.tif 000365
【図９Ｃ】
2017537984.tif 000366
【国際調査報告】
2017537984.tif 000367
2017537984.tif 000368
2017537984.tif 000369
2017537984.tif 000370
2017537984.tif 000371
2017537984.tif 000372