(57)【要約】  本発明は、式Ｉ：    【化１】2017500309.tif 000080 の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供し、式中、Ａは  【化２】2017500309.tif 000081 であり、Ｗ、Ｙ、Ｘ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は本明細書において規定されるとおりである。【選択図】  なし
2017500309.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物またはその薬学的に許容できる塩：
【化１】
2017500309.tif 000075
（式中、
Ａは、
【化２】
2017500309.tif 000076
であり；
Ｗは、ＣＨまたはＮであり；
Ｙは、ＣＨまたはＮであり；
Ｘは、ＣＨまたはＮであり；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＦ３またはＦであり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、またはＣＮであり；
Ｒ３は、ＨまたはＦであるか；あるいは
Ｒ２およびＲ３は一緒になって、隣接する炭素原子に結合しているＯＣＨ２Ｏ基であり；
Ｒ４は、Ｈ、ＣｌまたはＣＨ２ＯＨである）。
【請求項２】
式：
【化３】
2017500309.tif 000077
の請求項１記載の化合物または塩。
【請求項３】
式：
【化４】
2017500309.tif 000078
の請求項１または請求項２のいずれかに記載の化合物または塩。
【請求項４】
Ａが
【化５】
2017500309.tif 000079
である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項５】
Ｒ１がＣＨ３である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項６】
Ｒ３がＨである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項７】
Ｒ２がＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨまたはＯＣＨ３である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項８】
Ｒ２がＣＨ２ＯＨである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項９】
Ｒ２およびＲ３が一緒になって、隣接する炭素原子に結合しているＯＣＨ２Ｏ基である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項１０】
Ｒ４がＣｌである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項１１】
３−［［６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸；
３−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸；および
３−［［３−（３−クロロフェニル）ナフタレン−１−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項１２】
患者における変形性関節炎を治療する方法であって、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１３】
患者におけるリウマチ性関節炎を治療する方法であって、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１４】
患者における変形性関節炎またはリウマチ性関節炎に伴う疼痛を治療する方法であって、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１５】
療法に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項１６】
変形性関節炎の治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項１７】
リウマチ性関節炎の治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項１８】
変形性関節炎またはリウマチ性関節炎に伴う疼痛の治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項１９】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩と、１種以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の概要】
【０００１】
本発明は、特定の新規ジメチル安息香酸化合物、この化合物を含む医薬組成物、生理障害を治療するためのこの化合物の使用方法、ならびにこの化合物の合成に有用な中間体及びプロセスに関する。
【０００２】
本発明は炎症状態の治療の分野にあり、この炎症状態は、変形性関節炎及びリウマチ性関節炎を含め、さらにはこれらの状態に伴う疼痛を含めた関節炎等である。関節炎は、米国だけでも数百万人の患者に発症しており、身体障害の主因である。治療には、しばしばＮＳＡＩＤｓ（非ステロイド性抗炎症薬）またはＣＯＸ−２阻害剤が含まれ、これらは有害な心血管の副作用を起こす可能性がある。よって、高血圧等の良好でない心血管プロファイルを有する患者は、ＮＳＡＩＤｓまたはＣＯＸ−２阻害剤の使用から除外される可能性がある。したがって、好ましくは現治療法の副作用を有さない、変形性関節炎及びリウマチ性関節炎の代替治療法の必要性がある。
【０００３】
４種のプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）受容体サブタイプが、以下：ＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３及びＥＰ４として同定されている。ＥＰ４は、リウマチ性関節炎及び変形性関節炎のげっ歯類モデルにおいて、関節炎症性疼痛に関する主要な受容体であることが開示されている。したがって、選択的ＥＰ４アンタゴニストは、関節痛を含めた関節炎の治療に有用である可能性がある。さらに、ＥＰ４拮抗作用は、ＰＧＩ２及びＴｘＡ２等のプロスタノイドの生合成を妨げないので、選択的ＥＰ４アンタゴニストは、ＮＳＡＩＤｓ及びＣＯＸ−２阻害剤で見られる潜在的な心血管の副作用を有しない可能性があることが示唆されている。
【０００４】
国際公開第９６／０２５０９号は、例えば肺障害、ＣＮＳ障害、神経性炎症及び炎症性疼痛を含めた様々な障害の治療に有用な選択的、非ペプチドＮＫ３アンタゴニストである特定のキノリン誘導体を開示している。さらに、米国特許第７，７０５，０３５号は、変形性関節炎、リウマチ性関節炎ならびに急性及び慢性疼痛等の様々な障害を治療するのに有用なＥＰ４リガンド、アゴニストまたはアンタゴニストとして有用な特定のインドリンアミド誘導体を開示している。
【０００５】
本発明は、ＥＰ４の阻害剤である特定の新規化合物、ならびにＥＰ１、ＥＰ２及びＥＰ３と比較してＥＰ４の選択的阻害剤である特定の新規化合物を提供する。さらに、本発明は、従来のＮＳＡＩＤｓと比較して心血管の副作用または胃腸管の副作用を減少させる可能性を有する特定の新規化合物を提供する。
【０００６】
したがって、本発明は、式Ｉ：
【化１】
2017500309.tif 000003
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供し、式中、Ａは：
【化２】
2017500309.tif 000004
であり；
ＷはＣＨまたはＮであり；
ＹはＣＨまたはＮであり；
ＸはＣＨまたはＮであり；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＦ３またはＦであり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、またはＣＮであり；
Ｒ３は、ＨまたはＦであるか；あるいは
Ｒ２及びＲ３は一緒になって、隣接する炭素原子に結合しているＯＣＨ２Ｏ基であり；
Ｒ４は、Ｈ、ＣｌまたはＣＨ２ＯＨ
である。
【０００７】
本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、患者における関節炎を治療する方法も提供する。本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、患者における変形性関節炎を治療する方法も提供する。さらに本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、患者におけるリウマチ性関節炎を治療する方法を提供する。本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、患者における関節炎に伴う疼痛を治療する方法も提供する。本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、患者における変形性関節炎またはリウマチ性関節炎に伴う疼痛を治療する方法をさらに提供する。
【０００８】
さらに本発明は、療法に使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。さらに本発明は、関節炎の治療に使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。特に本発明は、変形性関節炎の治療に使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。さらに本発明は、リウマチ性関節炎の治療に使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。本発明は、関節炎に伴う疼痛の治療に使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩も提供する。本発明は、変形性関節炎またはリウマチ性関節炎に伴う疼痛の治療に使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩も提供する。さらに本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の、関節炎治療薬を製造するための使用を提供する。さらに本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の、変形性関節炎治療薬を製造するための使用を提供する。本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の、リウマチ性関節炎治療薬を製造するための使用を提供する。本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の、変形性関節炎またはリウマチ性関節炎に伴う疼痛治療薬を製造するための使用を提供する。
【０００９】
本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩と、１種以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物をさらに提供する。本発明は、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩の合成用新規中間体及びプロセスも包含する。
【００１０】
本明細書で使用される場合、「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療すること（ｔｏ  ｔｒｅａｔ）」という用語には、存在する症状または障害の進行または重症度を、抑制すること、遅延させること、停止することまたは逆行させることが含まれる。
【００１１】
本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、マウス、モルモット、ブタ、ラット、ネコ、イヌまたはヒト等の哺乳動物を指す。好ましい患者はヒトであることが理解されよう。
【００１２】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、診断または治療下の患者に単回または複数回投与することにより、その患者において所望の効果を与える本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩の量または用量を指す。
【００１３】
本明細書で使用される場合、「Ｒ２及びＲ３は一緒になって、隣接する炭素原子に結合しているＯＣＨ２Ｏ基である」という記載は、以下の構造を指し、例えば対応する酸素原子がフェニル基上の隣接炭素に結合している。
【化３】
2017500309.tif 000005
【００１４】
有効量は、公知の技術を使用することによって、且つ同様の状況下で得られた結果を観察することによって、当業者としての担当診断医によって容易に決定され得る。患者に対する有効量の決定においては、担当診断医によっていくつかの因子が考慮され、この因子には、哺乳動物の種；その大きさ、年齢及び全体的な健康状態；関連する特定の疾患または障害；その疾患または障害の程度または合併症または重症度；個々の患者の反応；投与される特定の化合物；投与方法；投与される製剤の生物学的利用能特性；選択される用法；併用薬の使用；ならびに他の関連状況が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００１５】
式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩は、広範囲の投与量にわたり概して有効である。例えば、１日当たりの用量は通常、約０．０１〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内である。いくつかの例においては、上述の範囲の下限値未満の用量レベルが十分以上であってもよく、一方、他の場合においては、さらに多くの用量が、許容可能な副作用を有して利用されてもよく、したがって、上記の用量範囲は決して本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００１６】
本発明の化合物は、化合物を生物にとって利用しやすいものにする任意の経路によって投与される医薬組成物として製剤化されることが好ましい。最も好ましくは、このような組成物は経口投与用である。このような医薬組成物、及びこの組成物を調製するプロセスは、当業者に周知である。（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（Ｄ．Ｂ．  Ｔｒｏｙ編、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００６）を参照のこと。）
【００１７】
式Ｉの化合物は本発明の治療方法に特に有用であるが、特定の基、置換基及び立体配置が好ましい。以下の段落は、このような好ましい基、置換基及び立体配置を記載する。これらの好ましさは、本発明の新規化合物、ならびに本発明の治療方法、用途及び医薬組成物に適用できることが理解されるであろう。
【００１８】
式Ｉａ及び式Ｉｂの化合物が好ましい。
【化４】
2017500309.tif 000006
【００１９】
式Ｉａが最も好ましい。
【００２０】
上記式Ｉｂにおいて見られるように、フェニル環上の２つの各メチル基に対しカルボン酸がメタ位にある場合、ＷはＣでなくてはならず、ＣＨであってはならないことが当業者に理解されよう。
【００２１】
Ａが：
【化５】
2017500309.tif 000007
であることも好ましい。
【００２２】
Ａが：
【化６】
2017500309.tif 000008
であることがさらに好ましい。
【００２３】
Ａが：
【化７】
2017500309.tif 000009
であることが特に好ましい。
【００２４】
Ａが：
【化８】
2017500309.tif 000010
であることがさらに特に好ましい。
【００２５】
Ａが：
【化９】
2017500309.tif 000011
であることが最も特に好ましい。
【００２６】
ＷがＣＨであることが好ましい。
【００２７】
ＹがＣＨであることが好ましい。
【００２８】
ＷがＣＨである場合、ＹがＣＨであることが最も好ましい。
【００２９】
Ｒ１がＣＨ３であることが好ましい。
【００３０】
Ｒ２が、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、またはＯＣＨ３であることが好ましい。
【００３１】
Ｒ２がＣＨ２ＯＨであることがさらに好ましい。
【００３２】
Ｒ２及びＲ３が一緒になって、隣接する炭素原子に結合しているＯＣＨ２Ｏ基であることも好ましい。
【００３３】
Ｒ３がＨであることがさらに好ましい。
【００３４】
Ｒ２がＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、またはＯＣＨ３である場合、Ｒ３がＨであることが好ましい。
【００３５】
Ｒ２がＣＨ２ＯＨである場合、Ｒ３がＨであることがさらに好ましい。
【００３６】
Ｒ４がＣｌであることが好ましい。
好ましい化合物は、
３−［［６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸；
３−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸；及び
３−［［３−（３−クロロフェニル）ナフタレン−１−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸；ならびにそれらの薬学的に許容できる塩である。
【００３７】
本明細書で使用される場合、「ｋＰａｇ」はキロパスカルゲージ圧を指し；「Ｂｏｃ」はｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を指し；「ＤＭＥＭ」はダルベッコ改変イーグル培地を指し；「ＡＣＮ」はアセトニトリルを指し；「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を指し；「ＤＩＥＡ」はＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを指し；「ＤＭＡＰ」は４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ピリジンを指し；「ＤＭＳＯ」はジメチルスルホキシドを指し；「ＤＭＦ」はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを指し；「ＥｔＯＨ」はエタノールを指し；「ＴＨＦ」はテトラヒドロフランを指し；「ＭｅＯＨ」はメタノールを指し；「ＥｔＯＡｃ」は酢酸エチルを指し；「Ｅｔ２Ｏ」はジエチルエーテルを指し；「ＴＢＭＥ」はｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルを指し；「ＢＯＰ−Ｃｌ」はビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスホン酸クロリドを指し；「ｍＣＰＢＡ」は３−クロロ過安息香酸を指し；「ＫＨＭＤＳ」はカリウムビス（トリメチルシリル）アミドを指し；「ｈ」は時間を指し；「ＰＧＥ２」はプロスタグランジンＥ２を指し；「ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を指し；「ＩＢＭＸ」は（３−イソブチル−１−メチルキサンチン）を指し；「ＭＥＳ」は（２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホンを指し；「ＨＥＰＥＳ」は（２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸）を指し；「Ｓ−Ｐｈｏｓ」は２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，６’−ジメトキシビフェニルを指し；「ＨＴＲＦ」は均一時間分解蛍光技術を指し；「ＨＥＫ」はヒト胚腎臓を指し；「ＨＢＳＳ」はハンクス平衡塩溶液を指し；「ＲＴ」は室温を指し；「ＥＣ８０」は、その薬剤で可能な最大有効度の８０％を示す薬剤濃度を指し；「ＩＣ５０」は、その薬剤で可能な最大阻害反応の５０％を示す薬剤濃度を指す。
【００３８】
薬学的に許容できる塩、及びそれらを調製する一般的方法は、当該分野において周知である。例えば、Ｇｏｕｌｄ，  Ｐ．Ｌ．、「Ｓａｌｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｂａｓｉｃ  ｄｒｕｇｓ」、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，  ３３：  ２０１−２１７  （１９８６）；Ｂａｓｔｉｎ，  Ｒ．Ｊ．ら、「Ｓａｌｔ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｎｅｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｎｔｉｔｉｅｓ」、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，  ４：  ４２７−４３５  （２０００）；及びＢｅｒｇｅ，  Ｓ．Ｍ．ら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ６６：  １−１９，  （１９７７）を参照のこと。本発明の化合物は、当業者に周知の技術及び条件を使用して、塩酸塩等の薬学的に許容できる塩に容易に変換され、薬学的に許容できる塩として単離されてもよいことを合成分野の当業者は理解するであろう。さらに、式Ｉの化合物は、対応する薬学的に許容できる塩から、対応する遊離塩基または遊離酸に容易に変換され、対応する遊離塩基または遊離酸として単離されてもよいことを合成分野の当業者は理解するであろう。
【００３９】
本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩は、当該分野において公知の様々な手順によって調製してもよく、それらのいくつかを以下のスキーム、調製例及び実施例に例示する。記載される各経路の特定の合成工程は、違う方法で組み合わせるか、または異なるスキームからの工程と共に組み合わせて、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容できる塩を調製してもよい。以下のスキームにおける各工程の生成物は、抽出、蒸発、沈殿、クロマトグラフィー、濾過、粉砕及び結晶化を含めた従来の方法によって回収することができる。試薬及び出発材料は当業者に容易に入手可能である。別段の指定がない限り、全ての置換基は上で規定される通りである。これらのスキーム、調製例及び実施例は、本発明の範囲を限定することを決して意図するものではないことが理解されよう。
【００４０】
スキーム１
【化１０】
2017500309.tif 000012
【００４１】
調製例１：３−アミノ−２，４−ジメチル−安息香酸メチル
【化１１】
2017500309.tif 000013
【００４２】
スキーム１、工程Ａ。１，３−ジメチル−２−ニトロベンゼン（６８．５ｇ、４５３．２ｍｍｏｌ）に、硫酸（２７．２ｍＬ、５１０ｍｍｏｌ）、酢酸（５４３．８ｍＬ、９．４９ｍｏｌ）、ヨウ素（４６ｇ、１８１．３ｍｍｏｌ）及びＨＩＯ４（９１．９ｇ、４０３．３ｍｍｏｌ）を加える。反応物を９０℃で７日間加熱する。反応混合物を周囲温度に冷却し、水（５００ｍＬ）を加える。得られた固体を濾過により回収し、冷水で洗浄する。固体を減圧下、４５℃で一晩乾燥させ、黄色固体として１−ヨード−２，４−ジメチル−３−ニトロ−ベンゼンを得る（１１９ｇ、９５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００．１６ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．８０（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、２．３７（ｓ、３Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）。
【００４３】
スキーム１、工程Ｂ。機械撹拌しながら、１−ヨード−２，４−ジメチル−３−ニトロ−ベンゼン（７０ｇ、２５２．７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（２．８ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）、１，４−ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（６．５ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（４６２ｍＬ）、トリエチルアミン（８８．２ｍＬ）及びメタノール（２８０ｍＬ）を、２ＬのＰａｒｒオートクレーブに加える。Ｐａｒｒオートクレーブを密閉し、ＣＯでパージして、５５１．６ｋＰａ（８０ｐｓｉｇ）まで加圧する。混合物を１００℃で２時間加熱する。混合物を周囲温度まで冷却し、次いで通気する。次に、混合物を減圧下で濃縮乾固する。ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）及び水（３００ｍＬ）を加える。層を分離し、水層を捨てる。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥して濾過し、濃縮乾固して、赤色油状物質として２，４−ジメチル−３−ニトロ−安息香酸メチルを得る。それを静置して結晶化させる（５２ｇ、９８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（３００．１３ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ７．８９（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．１９（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．９１（ｓ、３Ｈ）、２．４９（ｓ、３Ｈ）、２．３３（ｓ、３Ｈ）。
【００４４】
スキーム１、工程Ｃ。メタノール（３７０ｍＬ）に溶かした２，４−ジメチル−３−ニトロ−安息香酸メチル（３７ｇ、１７６．９ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％パラジウム炭素５０％湿潤（５．６ｇ）を加える。反応物を水素でバブリングし、水素雰囲気下に６日間置く。混合物を珪藻土で濾過し、濾液を蒸発乾固する。得られた残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中の２０％ＥｔＯＡｃで溶出させて精製し、黄色油状物質として３−アミノ−２，４−ジメチル−安息香酸メチルを得る（２０．５ｇ、６５％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１８０．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４５】
スキーム２
【化１２】
2017500309.tif 000014
【００４６】
調製例２：４−アミノ−３，５−ジメチル−安息香酸メチル
【化１３】
2017500309.tif 000015
【００４７】
スキーム２、工程Ａ。ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）に溶かした３，５−ジメチル−４−ニトロ−安息香酸（１０．０ｇ、０．０５１２ｍｏｌ）の溶液に、塩化チオニル（１０ｍｌ）を０℃で加え、反応物を８０℃に加熱する。１６時間後、反応混合物を室温まで冷却し、溶媒を減圧下で除去する。残渣を水（５０ｍｌ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液でｐＨ７〜８にし、ＥｔＯＡｃ（２×１２０ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を減圧下で除去して、淡黄色固体として３，５−ジメチル−４−ニトロ−安息香酸メチルを得る（１０．７１ｇ、９８．３％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：δ７．８３（ｓ、２Ｈ）、３．８８（ｓ、３Ｈ）、２．３０（ｓ、６Ｈ）。
【００４８】
スキーム２、工程Ｂ。メタノール（１００ｍＬ）に溶かした３，５−ジメチル−４−ニトロ−安息香酸メチル（１０．０ｇ、０．０４７８ｍｏｌ）の溶液に、鉄粉末（１５．７ｇ、０．２８６９ｍｏｌ）及び３７％ＨＣｌ（１．７２ｇ、０．０４７８ｍｏｌ）を０℃で加える。反応混合物を８０℃で１６時間加熱する。混合物を室温まで冷却し、珪藻土で濾過し、ＭｅＯＨで洗浄する。濾液を濃縮して、褐色固体として標題化合物を得る（７．８ｇ、９９％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１８０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４９】
スキーム３
【化１４】
2017500309.tif 000016
【００５０】
調製例３：６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸
【化１５】
2017500309.tif 000017
【００５１】
スキーム３、工程Ａ。ＣＨ２Ｃｌ２（１３０ｍＬ）に溶かした３−メチルピリジン−２−カルボン酸メチル（１３．０ｇ、０．０８６ｍｏｌ）の溶液に、メタ−クロロペルオキシ安息香酸（８９．０５ｇ、０．２５８ｍｏｌ、５０％ｗ／ｗ）を０℃で少しずつ加える。反応混合物を０℃で１５分間撹拌し、次に周囲温度までゆっくり温める。１６時間後、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１００ｍＬ）を加える。混合物を３０分間撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。合わせた有機層を０．５Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（２×５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮して、黄白色固体として３−メチル−１−オキシド−ピリジン−１−イウム−２−カルボン酸メチルを得る（１３．０ｇ、８９．９％）。残渣は、さらなる精製なしで、次工程で使用する。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１６８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５２】
スキーム３、工程Ｂ。３−メチル−１−オキシド−ピリジン−１−イウム−２−カルボン酸メチル（１３．０ｇ、０．０７７ｍｏｌ）に、ＰＯＣｌ３（３０．０ｍＬ）を０℃で３０分以上かけて加える。反応混合物を０℃で１５分間撹拌し、次に周囲温度までゆっくり温める。１６時間後、反応混合物を０℃に冷却し、過剰なＰＯＣｌ３を減圧下で除去する。次に、氷を加えることにより粗製残渣を急冷し、水及びＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈する。有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液、水及び飽和食塩水で順次洗浄し；硫酸ナトリウムで乾燥し；濾過し；減圧下で濃縮する。粗生成物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中の５〜１０％ＥｔＯＡｃで溶出させて精製し、白色固体として６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチルを得る（３．００ｇ、２０．９％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１８６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５３】
スキーム３、工程Ｃ。ＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶かした６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（０．５００ｇ、２．７０２ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（５ｍＬ）を０℃で加える。混合物を５０℃で２時間加熱する。反応混合物をクエン酸水溶液で酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）で抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮して、黄白色固体として標題化合物を得る（０．４５ｇ、９７％）。残渣は、さらなる精製なしで、次工程で使用する。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１７２．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５４】
スキーム４
【化１６】
2017500309.tif 000018
【００５５】
調製例４：３−［（５−ブロモ−２−メチル−ベンゾイル）アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル
【化１７】
2017500309.tif 000019
【００５６】
スキーム４、工程Ａ。ＴＨＦ（５．０ｍｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２（５．０ｍｌ）及びＤＭＦ（５０．０μｌ、６４６．６μモル）に溶かした５−ブロモ−２−メチル−安息香酸（１．０ｇ、４．７ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化オキサリル（２．６ｍｌ、５．１ｍｍｏｌ）を０℃で滴下する。反応混合物を、ゆっくり周囲温度に温まるまで放置する。２時間後、溶媒を減圧下で除去する。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍｌ）で希釈し、混合物を０℃に冷却する。３−アミノ−２，４−ジメチル安息香酸メチル（９５７．９ｍｇ、４．７０ｍｍｏｌ）を加え、その後Ｎ，Ｎ−ジメチルピリジン−４−アミン（２８．４ｍｇ、０．２３２ｍｍｏｌ）及びピリジン（１．１ｍｌ、１４．０ｍｍｏｌ）を加える。冷却浴を取り除き、周囲温度に温まるまで透明溶液を放置する。２時間後、溶液を濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、及び飽和食塩水で順次洗浄する。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ヘキサン中の３０％ＥｔＯＡｃで粉砕し、固体を濾過して標題化合物を得る（６８０．０ｍｇ；３８．９％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３７６．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００５７】
以下の化合物は、適切なカルボン酸及びアミンを使用して、本質的には上記の方法（スキーム４、工程Ａ）により調製する。
【表１】
2017500309.tif 000020
【００５８】
調製例６：３−［［５−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−２−メチル−ベンゾイル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル
【化１８】
2017500309.tif 000021
【００５９】
スキーム４、工程Ｂ。１，４−ジオキサン（３．０ｍｌ）及びＨ２Ｏ（０．３ｍｌ）に溶かした３−［（５−ブロモ−２−メチル−ベンゾイル）アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（０．１８ｇ、０．４７８ｍｍｏｌ）の溶液に、（３−（ヒドロキシメチル）フェニル）ボロン酸（８７．２ｍｇ、０．５７４ｍｍｏｌ）を加え、その後Ｋ２ＣＯ３（１３２．２ｍｇ、０．９５６ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ２Ｃｌ２（１９．５ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物をアルゴンで５分間パージし、次に１１０℃で加熱する。２時間後、反応物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、濃縮する。残渣を、ヘキサン中の４０％ＥｔＯＡｃを使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。生成物をＴＢＭＥで粉砕し、濾過して標題化合物を得る（０．１０５ｇ、５４．４％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４０４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６０】
以下の化合物は、適切なカルボン酸エステル及びボロン酸を使用して、本質的には上記の方法により調製する。
【表２−１】
2017500309.tif 000022
【表２−２】
2017500309.tif 000023
【００６１】
実施例１：３−［［５−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−２−メチル−ベンゾイル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸
【化１９】
2017500309.tif 000024
【００６２】
スキーム４、工程Ｃ。ＴＨＦ（２．０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（１．０ｍｌ）に溶かした３−［［５−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−２−メチル−ベンゾイル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（０．１０２ｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（０．５ｍｌ）を加える。５０℃で１２時間加熱後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化する。得られた沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空オーブン中４０℃で１時間乾燥させて、白色固体として標題化合物を得る（９５．０ｍｇ、９６．５％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９０．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６３】
以下の化合物は、本質的には実施例１に記載の方法により、調製例に記載されている対応するカルボン酸エステルから調製する。
【表３−１】
2017500309.tif 000025
【表３−２】
2017500309.tif 000026
【００６４】
調製例１７：３−［［５−ブロモ−２−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル
【化２０】
2017500309.tif 000027
【００６５】
ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍｌ）に溶かした５−ブロモ−２−（トリフルオロメチル）安息香酸（１．０ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、３−アミノ−２，４−ジメチル安息香酸メチル（０．４４ｇ、２．４７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．０ｍｌ、７．０６ｍｍｏｌ）を室温で加える。１０分間撹拌した後、１−プロパンホスホン酸環状無水物（ＥｔＯＡｃ中の５０％溶液、５．６ｍｌ、８．８３ｍｍｏｌ）をシリンジで加える。周囲温度で１４時間後、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水で洗浄後、飽和食塩水で洗浄する。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ヘキサン中の２０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色固体として標題化合物を得る（０．６ｇ、３９％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４３０．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６６】
以下の化合物は、適切なカルボン酸及びアミンを使用して、本質的には上の調製例１７に記載の方法により調製する。
【表４】
2017500309.tif 000028
【００６７】
実施例１２：４−［［５−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸
【化２１】
2017500309.tif 000029
【００６８】
スキーム４、工程Ｃ。ＴＨＦ（８．０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（２．０ｍｌ）に溶かした４−［［５−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−２−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸メチル（０．０９ｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２．０ｍｌ）を加える。室温で１２時間撹拌後、反応混合物を濃縮し、水／アセトニトリル（１０〜９０％）中の０．１％ＴＦＡを使用して分取ＨＰＬＣにより精製して、標題化合物を得る（２５．０ｍｇ、２９．７％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４４４．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６９】
調製例１９：３−［（５−ブロモ−２−フルオロ−ベンゾイル）アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル
【化２２】
2017500309.tif 000030
【００７０】
ＣＨ２Ｃｌ２（５．０ｍｌ）に溶かした５−ブロモ−２−フルオロ−安息香酸（０．５ｇ、２．２８ｍｏｌ）の溶液に、３−アミノ−２，４−ジメチル安息香酸メチル（０．３８ｇ、２．１７ｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（１．１７ｇ、９．１３ｍｏｌ）を室温で加える。１０分間撹拌した後、１−プロパンホスホン酸環状無水物（ＥｔＯＡｃ中の５０％溶液、２．０ｍｌ、３．４２ｍｏｌ）をシリンジで加える。周囲温度で１６時間後、反応混合物を水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、２２％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、黄白色固体として標題化合物を得る（０．８０ｇ、９３％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３８０．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００７１】
以下の化合物は、適切なカルボン酸及びアミンを使用して、本質的には上の調製例１９に記載の方法により調製する。
【表５】
2017500309.tif 000031
【００７２】
実施例１３：３−［［２−フルオロ−５−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］ベンゾイル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸
【化２３】
2017500309.tif 000032
【００７３】
ＴＨＦ（５．０ｍｌ）及びｔ−ブタノール（５．０ｍｌ）に溶かした３−［［２−フルオロ−５−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］ベンゾイル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（０．３０ｇ、０．７３７ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら４Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（５．０ｍｌ）を加える。６０℃で１６時間加熱後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮して、黄白色固体として標題化合物を得る（０．１９ｇ、６５．５％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９２．１（Ｍ−Ｈ）＋。
【００７４】
以下の化合物は、適切なカルボン酸エステルを使用して、本質的には上の実施例１３の方法により調製する。
【表６】
2017500309.tif 000033
【００７５】
スキーム５
【化２４】
2017500309.tif 000034
【００７６】
調製例２３：３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボン酸メチル
【化２５】
2017500309.tif 000035
【００７７】
スキーム５、工程Ａ。１，４−ジオキサン（１７ｍＬ）及び水（３．０ｍｌ）に溶かした６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（１．０ｇ、５．３９ｍｍｏｌ）、フェニルボロン酸（０．７９ｇ、６．４７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（１．６４ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物をアルゴンで１５分間パージし、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ２Ｃｌ２（１３１．９ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を再度アルゴンで５分間パージする。１１０℃で２時間加熱後、反応混合物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。粗製残渣を、ヘキサン中の０〜２０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、透明油状物質として標題化合物を得る（９８５．０ｇ、８０．５％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２２８．０（Ｍ−Ｈ）＋。
【００７８】
調製例２４：３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボン酸
【化２６】
2017500309.tif 000036
【００７９】
スキーム５、工程Ｂ。ＴＨＦ（５．０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（５．０ｍｌ）に溶かした６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（９８５ｍｇ、４．３３ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（８．７ｍｌ）を加える。混合物を周囲温度で３時間撹拌し、減圧下で濃縮し、１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ３に酸性化する。得られた沈殿を濾過により単離し、水で洗浄し、真空オーブン中４０℃で乾燥させて、標題化合物を得る（６８５．０ｍｇ、７４．１％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２１４．０（Ｍ−Ｈ）＋。
【００８０】
調製例２５：２，４−ジメチル−３−［（３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］安息香酸メチル
【化２７】
2017500309.tif 000037
【００８１】
スキーム５、工程Ｃ。ＣＨ２Ｃｌ２（８ｍｌ）に溶かした３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボン酸（３４２．０ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）の溶液に、３−アミノ−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（２８７．４ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（６９９．３ｍｇ、４．０１ｍｍｏｌ）を室温で加える。１０分間撹拌した後、１−プロパンホスホン酸環状無水物（ＥｔＯＡｃ中の５０％溶液、１．２２ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）をシリンジで加える。５０℃で１５時間後、反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２／ＴＢＭＥで粉砕し、得られた沈殿を濾過によって単離して、白色粉末として標題化合物を得る（０．４１ｇ、６８％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３７５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８２】
実施例１５：２，４−ジメチル−３−［（３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］安息香酸
【化２８】
2017500309.tif 000038
【００８３】
スキーム５、工程Ｄ。ＴＨＦ（３．０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３．０ｍｌ）及びＨ２Ｏ（１．０ｍｌ）に溶かした２，４−ジメチル−３−［（３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］安息香酸メチル（０．２８ｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（０．１５７ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を加える。５０℃で１時間加熱後、反応混合物をｐＨ約６に酸性化する。水層を固体ＮａＣｌで飽和し、ＥｔＯＡｃ（４×２０ｍＬ）で抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をジエチルエーテルで粉砕して、白色固体として標題化合物を得る（０．２３１ｇ、８５．７％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３６１．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８４】
２，４−ジメチル−３−［（３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］安息香酸の代替合成（実施例１５）
スキーム６
【化２９】
2017500309.tif 000039
【００８５】
スキーム６、工程Ａ。３−メチルピリジン−２−カルボニトリル（１６．８ｇ、１３９ｍｍｏｌ）を含む丸底フラスコに、塩化メチレン（７０ｍＬ）、及びメチルトリオキソレニウム（ＶＩＩ）（１．４２ｇ、５．５７ｍｍｏｌ）、過酸化水素（２４ｍＬ、２７９ｍｍｏｌ）をゆっくり加える。混合物を一晩撹拌し、さらに２４時間撹拌した。撹拌を止め、層を分離する。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、濃縮する。残渣をＴＢＭＥ（１５０ｍＬ）で粉砕し、固体を濾過し、減圧下で乾燥して、黄色固体として３−メチル−１−オキシド−ピリジン−１−イウム−２−カルボニトリルを得る（１６．２ｇ、８６．７％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１３５．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８６】
スキーム６、工程Ｂ。３−メチル−１−オキソ−ピリジン−２−カルボニトリル（１６．２ｇ、１２０．７７ｍｍｏｌ）、トルエン（８ｍＬ）、及び塩化ホスホリル（１６．８３ｍＬ；１８１．２ｍｍｏｌ）を丸底フラスコに入れる。混合物を９０℃で９０分間撹拌し、室温まで冷却し、２Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４（４８３ｍＬ；９６６ｍｍｏｌ）水溶液に滴下する。混合物を３０分間撹拌し、層を分離する。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥して濾過し、濃縮して、６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニトリルを得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１５３．０（Ｍ＋Ｈ）＋。この粗製物に、フェニルボロン酸（１７．９４ｇ、１４４．９ｍｍｏｌ）、トルエン（１３０ｍＬ）、炭酸ナトリウム（１９０．２ｇ、３６２．３１ｍｍｏｌ）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロリド（８５６ｍｇ；１．２１ｍｍｏｌ）を加える。混合物を８０℃で１時間撹拌し、室温に冷却する。層を分離し、有機層をＭｇＳＯ４で乾燥して濾過し、濃縮する。この物質を、ヘキサン中の２０〜１００％塩化メチレンを使用して、シリカゲルクロマトグラフィー（４００ｇ  ＩＳＣＯ（登録商標）カートリッジ）により精製して、３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボニトリル（６．７ｇ、２８．６％）を得た。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１９５．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８７】
スキーム６、工程Ｃ。エタノール（３０ｍＬ）に溶かした３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボニトリル（６．１０ｇ、３１．４１ｍｍｏｌ）の淡黄色懸濁液に、１８Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１０．７ｍＬ、１８８．４３ｍｍｏｌ）及び水（１０．９８ｍＬ）を加える。黄色懸濁液を１００℃で１８時間加熱し、２２℃に冷却する。混合物を水（１００ｍＬ）で希釈し、１２Ｍ  ＨＣｌ水溶液（１８．６ｍＬ、２１９．８ｍｍｏｌ）で中和して、ｐＨ約１にする。固体を濾過し、水で洗浄し、減圧下４５℃で乾燥して、白色固体として３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボン酸を得る（６．５０ｇ、９４．２％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２１４．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８８】
スキーム６、工程Ｄ。３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボン酸（５．５２ｇ、２５．８９ｍｍｏｌ）に、塩化チオニル（１８．９ｍＬ、２５８．９ｍｍｏｌ）を２２℃で加える。黄色溶液を２２℃で８時間撹拌し、濃縮して、淡褐色固体として３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボニルクロリドを得る（７．０ｇ、２５ｍｍｏｌ）。この物質をＴＨＦ（７０ｍＬ）で希釈し、窒素下２２℃において、ＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶かした３−アミノ−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（４．５４ｇ、２５．３２ｍｍｏｌ）の溶液で処理する。ピリジン（６．１ｍＬ、７５．９７ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、反応混合物を４５分間撹拌する。懸濁液を濾過し、固体をＥｔＯＡｃですすぎ、濾液を褐色油状物質になるまで濃縮する。油状物質を水（５０ｍＬ）で処理し、超音波浴に１０分間入れる。懸濁液を濾過し、固体を水で洗浄し、乾燥して、淡褐色固体として２，４−ジメチル−３−［（３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］安息香酸メチルを得る（９．８１ｇ、９５．８％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３７５．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００８９】
スキーム６、工程Ｅ。ＴＨＦ（９０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（３６ｍＬ）に溶かした２，４−ジメチル−３−［（３−メチル−６−フェニル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］安息香酸メチル（９．００ｇ、２３．８０ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（７１．４ｍＬ、７１．４ｍｍｏｌ）を加える。混合物を５０℃で４時間加熱し、２２℃に冷却し、濃縮して有機溶媒を除去する。水性残渣を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で洗浄し、１０％  ＨＣｌ水溶液（１３．５ｍＬ、４０．４ｍｍｏｌ）で最終ｐＨ約３まで酸性化する。固体を濾過し、水で洗浄し、アセトン／水から再結晶し、真空オーブン中４５℃で１８時間乾燥して、黄白色固体として標題化合物を得る（６．２０ｇ、７２．３％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３６１．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９０】
スキーム７
【化３０】
2017500309.tif 000040
【００９１】
調製例２６
３−［［６−（４−クロロフェニル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル
【００９２】
スキーム７、工程Ａ。ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍｌ）に溶かした６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸（０．８ｇ、４．６ｍｍｏｌ）の溶液に、３−アミノ−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（０．８４ｇ、４．６ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（９４５．０ｍｇ、９．３ｍｍｏｌ）を室温で加える。１０分間撹拌した後、１−プロパンホスホン酸環状無水物（ＥｔＯＡｃ中の５０％溶液、２．９７ｇ、９．３ｍｍｏｌ）をシリンジで加える。３５℃で２時間後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中の１０％ＥｔＯＡｃで溶出させて精製し、無色油状物質として３−［（６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチルを得る（１．１ｇ、７２％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３３３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９３】
スキーム７、工程Ｂ。１，４−ジオキサン（５．０ｍｌ）及びＨ２Ｏ（１．０ｍｌ）に溶かした３−［（６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（２３０．０ｍｇ、０．６９２ｍｍｏｌ）の溶液に、（４−クロロフェニル）ボロン酸（１２０．０ｍｇ、０．７６１ｍｍｏｌ）を加え、その後Ｎａ２ＣＯ３（２２０．０ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ２Ｃｌ２（６０．０ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物をアルゴンで５分間パージし、次に１００℃で加熱する。１４時間後、反応物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、濃縮する。残渣を、ヘキサン中の５０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得る（０．１７ｇ、６０．７％）。
【００９４】
以下の化合物は、適切なカルボン酸エステル及びボロン酸を使用して、本質的には上の調製例２６に記載の方法により調製する。
【表７−１】
2017500309.tif 000041
【表７−２】
2017500309.tif 000042
【００９５】
実施例１６
３−［［６−（４−クロロフェニル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸
【００９６】
スキーム７、工程Ｃ。ＴＨＦ（８．０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（２．０ｍｌ）に溶かした３−［［６−（４−クロロフェニル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（０．１７ｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２．０ｍｌ）を加える。４０℃で１２時間加熱後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化する。得られた沈殿を濾過し、水で洗浄し、水／アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡを使用して分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として標題化合物を得る（１５５ｍｇ、９５．９％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９５．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９７】
実施例１７
３−［［６−（３−クロロフェニル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸
【化３１】
2017500309.tif 000043
【００９８】
スキーム７、工程Ｃ。ＴＨＦ（８．０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（２．０ｍｌ）に溶かした３−［［６−（１，３−ベンゾジオキソ−ル−５−イル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（０．１７ｇ、０．４１６ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で撹拌しながら２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２．０ｍｌ）を加える。６０℃で２時間加熱後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮して、白色固体として標題化合物を得る（０．１０４ｇ、６４％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００９９】
以下の化合物は、適切なカルボン酸エステルを使用して、本質的には上の実施例１７に記載の方法により調製する。
【表８】
2017500309.tif 000044
【０１００】
実施例２２
３−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸
【化３２】
2017500309.tif 000045
【０１０１】
スキーム７、工程Ｃ。ＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶かした３−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（０．１３ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で撹拌しながら２Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（２ｍｌ）を加える。５０℃で２時間加熱後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化し、濃縮する。粗生成物を、水／ＣＨ３ＣＮ中の５ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃの１０〜９０％勾配を使用し、分取ＨＰＬＣにより精製して、白色固体として標題化合物を得る（０．１２２ｇ、９７％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９１．１２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１０２】
以下の化合物は、適切なカルボン酸エステルを使用して、本質的には上の実施例２２に記載の方法により調製する。
【表９】
2017500309.tif 000046
【０１０３】
スキーム８
【化３３】
2017500309.tif 000047
【０１０４】
３−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸の代替合成（実施例２２）
【０１０５】
スキーム８、工程Ａ。エタノール（１０Ｌ）に溶かした３−メチルピリジン−２−カルボン酸（１０００ｇ、７．３ｍｏｌ）の溶液に、濃硫酸（１．２１６Ｌ、２１．９ｍｏｌ）を４５分以上かけて加える。反応物を１９時間加熱還流し、冷却し、固体炭酸水素ナトリウム（約４ｋｇ）で処理してｐＨ約８にする。混合物をＥｔＯＡｃ（１０Ｌ）で希釈し、フィルターセルで濾過する。溶媒を減圧下で除去して、３−メチルピリジン−２−カルボン酸エチルを得る（９３９ｇ、７８％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）１６６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０６】
スキーム８、工程Ｂ。ＨＯＡｃ（４．５Ｌ）に溶かした３−メチルピリジン−２−カルボン酸エチル（４５２ｇ、２．７４ｍｏｌ）の溶液に、３０％過酸化水素（１．５２Ｌ、１３．７ｍｏｌ）を加える。混合物を６０℃で４．５時間加熱し、次に一晩で室温に冷却する。反応物を亜硫酸ナトリウム／氷水（１０Ｌ）に注ぎ、塩化メチレン（２×４Ｌ）で抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で濃縮して、淡黄色油状物質として３−メチル−１−オキシド−ピリジン−１−イウム−２−カルボン酸エチルを得る（５０２ｇ、定量）。ＭＳ（ｍ／ｚ）１８２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０７】
スキーム８、工程Ｃ。ＤＭＦ（２．４５Ｌ、２４．８ｍｏｌ）及び塩化メチレン（４．５Ｌ）の溶液に、オキシ塩化リン（１．１６Ｌ、１２．４ｍｏｌ）を０℃で〜１時間かけて滴下する。反応物を０℃で３０分間撹拌し、次に３−メチル−１−オキシド−ピリジン−１−イウム−２−カルボン酸エチル（４５０ｇ、２．４８ｍｏｌ）を加える。反応物を、ゆっくり室温に温まるよう一晩放置し、反応混合物を氷水（１０Ｌ）に注ぐ。１０％炭酸ナトリウムを用いてｐＨをｐＨ約８に調節し、混合物を１時間撹拌する。層を分離し、水層を塩化メチレン（２×２Ｌ）で抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮して、ベージュ色半固体として６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸エチルを得る（４２５ｇ、８６％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）２００［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０８】
スキーム８、工程Ｄ。６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸エチル（７５０ｇ、４．０５ｍｏｌ）を、イソプロパノール（１４Ｌ）に溶かしたＫＯＨ（２７２ｇ、４．８４ｍｏｌ）の溶液に約２０分かけて少しずつ加える。混合物を２時間撹拌し、濾過し、イソプロパノール（５００ｍＬ）及びヘプタン（２Ｌ）で順次洗浄する。固体を減圧下、５０℃で４８時間乾燥して、白色固体として６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸カリウムを得る（７６７ｇ、９７％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）２１０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０９】
スキーム８、工程Ｅ。ＤＭＦ（４．７５Ｌ）に入れた６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸カリウム（３００ｇ、１．４３１ｍｏｌ）の混合物に、固体のＢＯＰ−Ｃｌ（６６２．９ｇ、２．６０４ｍｏｌ）を加える。〜５℃での穏やかな発熱反応後、混合物を１時間撹拌する。３−アミノ−２，４−ジメチル−安息香酸メチル塩酸塩（２７７．７ｇ、１．２８８ｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（９５０ｍＬ、５．４３８ｍｏｌ）を反応物に順次加える。混合物を一晩撹拌し、水（１０Ｌ）及び氷（４ｋｇ）に注ぐ。１時間撹拌後、混合物を濾過し、固体を水で洗浄し、減圧下５０℃で１２時間乾燥する。固体をヘプタン（１２Ｌ）中で１時間スラリー化し、濾過し、減圧下５０℃で乾燥して、３−［（６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（４３０ｇ、９０％）を得る。ＭＳ（ｍ／ｚ）３３３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１０】
スキーム８、工程Ｆ。ジオキサン（２．５Ｌ）に溶かした３−［（６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（２５０ｇ、０．７５１ｍｏｌ）及び３−（ヒドロキシメチル）フェニルボロン酸（１３７ｇ、０．９０２ｍｏｌ）の溶液に、２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３（１．１３Ｌ、２．２５３ｍｏｌ）を加える。混合物を４０℃に温め、窒素流で１時間脱気する。ビストリフェニルホスフィンパラジウムジクロリド（２６．４ｇ、０．０３７６ｍｏｌ）を加え、反応物を窒素流でさらに２０分間脱気する。反応物を１．５時間加熱還流し、室温に冷却し、珪藻土で濾過し、減圧下で濃縮して有機溶媒を除去する。水性混合物をＥｔＯＡｃ（２×２Ｌ）で抽出する。合わせた有機層を飽和食塩水で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、濃縮する。残渣をトルエン（１．５Ｌ）に溶解し、シリカゲル（２ｋｇ）上に載せる。カラムから、ヘプタン中０〜５０％ＥｔＯＡｃの勾配を用いて溶出させる。生成物の分画を、ベージュ色固体になるまで濃縮する（〜３００ｇ）。固体を２−メチルテトラヒドロフラン（２．５Ｌ）に溶解し、メルカプトプロピルシリカゲルで処理し、撹拌しながら５０℃で２時間加熱し、一晩で室温に冷却する。混合物を濾過し、シリカゲルをＥｔＯＡｃ（３Ｌ）ですすぐ。溶媒を減圧下で除去して白色固体（２９７ｇ）を得て、これをイソプロパノール（１．５Ｌ）で希釈し、透明溶液が得られるまで加熱還流する。溶液を一晩冷却し、沈殿を濾過により単離し、真空オーブン中５０℃で乾燥して、３−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチルを得る（２５６ｇ、８４％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）４０５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１１】
スキーム８、工程Ｇ。ＭｅＯＨ（２Ｌ）に溶かした３−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル（２０７ｇ、０．５１２ｍｏｌ）の溶液に、水酸化カリウム（８６ｇ、１．５３７ｍｏｌ、３当量）を加える。反応物を１６時間加熱還流し、室温に冷却し、減圧下で濃縮乾固する。残渣を、水（２Ｌ）とＴＢＭＥとの間で分割する。水層を１０％ＨＣｌでｐＨ約２に調節し、沈殿を濾過し、水（１Ｌ）及びヘプタン（１Ｌ）で洗浄し、減圧下５０℃で乾燥する（１９７ｇ、９８％）。固体を別の実施からの物質と合わせ（合計２２６ｇ）、エタノール（２Ｌ）中で２時間還流する。室温に冷却後、固体を濾過し、減圧下５０℃で１６時間乾燥して、標題化合物を得る（２１１ｇ）。ＭＳ（ｍ／ｚ）３９１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１２】
実施例２５
４−［［６−（１，３−ベンゾジオキソ−ル−５−イル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸
【化３４】
2017500309.tif 000048
【０１１３】
スキーム４、工程Ｃ。水（１．０ｍｌ）に溶かしたＬｉＯＨ（５０ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）の水溶液に、ＴＨＦ（２．０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（２．０ｍｌ）中の４−［［６−（１，３−ベンゾジオキソ−ル−５−イル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸メチル（２４０．０ｍｇ、０．５７３ｍｍｏｌ）を加える。周囲温度で３時間後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をジエチルエーテルから結晶化させて、標題化合物を得る（０．２ｇ、８６．４％）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：４０５．２（Ｍ＋１）＋。
【０１１４】
スキーム９
【化３５】
2017500309.tif 000049
【０１１５】
調製例３９：４−アミノ−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸エチル
【０１１６】
スキーム９、工程Ａ。酢酸（８ｍｌ）に溶かした３，５−ジメチルピリジン（２０．０ｇ、１８６．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、過酸化水素（６０．０ｍｌ、１．９６ｍｏｌ）を室温で加える。７０℃で２４時間加熱後、反応混合物を水で希釈し、５％ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。有機層を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２中の１０％ＭｅＯＨを使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、黄白色粉末として３，５−ジメチル−１−オキシド−ピリジン−１−イウムを得る（１２．２ｇ、５３．１％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１２４．１（Ｍ＋１）＋。
【０１１７】
スキーム９、工程Ｂ。硝酸（２０．０ｍｌ、４６３．０８ｍｍｏｌ）に、硫酸（６０ｍｌ、１．１３ｍｏｌ）を０℃でゆっくり加え、その後３，５−ジメチル−１−オキシド−ピリジン−１−イウム（８．０ｇ、６４．９６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を７０℃で６時間加熱し、水で希釈し、５％ＭｅＯＨ：ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。有機層を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２中の１０％ＭｅＯＨを使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、３，５−ジメチル−４−ニトロ−１−オキシド−ピリジン−１−イウムを得る（３．８ｇ、３４．８％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１６９．０９（Ｍ＋１）＋。
【０１１８】
スキーム９、工程Ｃ。３，５−ジメチル−４−ニトロ−１−オキシド−ピリジン−１−イウム（３．５ｇ、２０．６９ｍｍｏｌ）及びシアン化亜鉛（４．８６ｇ、４１．３８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３０ｍｌ）に溶かした溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイルクロリド（２．８６ｍｌ、３１．０４ｍｍｏｌ）をアルゴン下で滴下する。１００℃で１６時間加熱後、反応混合物を氷水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ヘキサン中の２０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、２種の化合物を得る。３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピリジン−２−カルボニトリル（０．４７ｇ、１２．８％）、１Ｈ  ＮＭＲ（３００．１６ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．５８（ｓ、１Ｈ）、２．５２（ｓ、３Ｈ）、２．３９（ｓ、３Ｈ）、及び４−クロロ−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボニトリル（１．０５ｇ、３０．５％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１６７．０７（Ｍ＋１）＋。
【０１１９】
スキーム９、工程Ｄ。エタノール（２ｍｌ）に溶かした３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピリジン−２−カルボニトリル（０．４５ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）の溶液に、濃硫酸（２ｍｌ、３７．５２ｍｍｏｌ）を０℃で滴下する。９０℃で１８時間加熱後、反応混合物を氷上に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出する。有機層を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ヘキサン中の４０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピリジン−２−カルボン酸エチルを得る（０．３５ｇ、６１．５％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２２５．１（Ｍ＋１）＋。
【０１２０】
スキーム９、工程Ｅ。エタノール（５ｍｌ）に溶かした３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピリジン−２−カルボン酸エチル（０．３０ｇ、１．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％Ｐｄ活性炭素（０．０６ｇ）を加え、混合物をアルゴンで１０分間パージし、その後水素ガスを加える。５時間後、反応混合物を珪藻土で濾過し、エタノールで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮して、４−アミノ−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸エチルを得る（０．２４ｇ、９２．３％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１９５．１７（Ｍ＋１）＋。
【０１２１】
スキーム９、工程Ｆ。１，４−ジオキサン（６ｍｌ）に溶かした４−クロロ−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボニトリル（０．６ｇ、３．６０ｍｍｏｌ）とフェニルメチルアミン（０．５８ｇ、５．４０ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴンでパージし、炭酸セシウム（３．５２ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）、Ｓ−Ｐｈｏｓ（１４７．５ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及びトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（３２９．７ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を加える。１００℃で４時間加熱後、反応混合物をフィルターセルで濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄する。濾液を減圧下で濃縮し、残渣を、ヘキサン中の４０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、４−（ベンジルアミノ）−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボニトリル（０．６１ｇ、７１．４％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２３８．０６（Ｍ＋１）＋。
【０１２２】
スキーム９、工程Ｇ。エタノール（５．０ｍｌ）に溶かした４−（ベンジルアミノ）−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボニトリル（０．６ｇ、２．５３ｍｍｏｌ）の溶液に、濃硫酸（５．０ｍｌ）を０℃で滴下し、反応混合物を室温に温める。１００℃で３２時間加熱後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２中の１０％ＭｅＯＨを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得る（０．４ｇ、８１．４％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１９５．１（Ｍ＋１）＋。
【０１２３】
スキーム１０
【化３６】
2017500309.tif 000050
【０１２４】
実施例２６
４−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸
【０１２５】
スキーム１０、工程Ａ。ＴＨＦ（１５ｍＬ）に溶かした６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸（２２０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン下０℃でクロロギ酸イソブチル（１９２．６ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（２５９．４ｍｇ、２．５６ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を０℃で４０分間撹拌し、ＴＨＦ（１．５ｍＬ）に溶かした４−アミノ−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸エチル（２４９ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）の溶液を加える。５０℃で１８時間後、中性アルミナを充填したカラム上に反応混合物を注ぎ、フラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中の４０％ＥｔＯＡｃで溶出させて精製し、４−［（６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸エチル（０．０３ｇ、７．６％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３４８．０（Ｍ＋１）＋。
【０１２６】
スキーム１０、工程Ｂ。１，４−ジオキサン（１．０ｍｌ）及び水（０．５ｍｌ）に溶かした４−［（６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸エチル（３０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液に、（３−（ヒドロキシメチル）フェニル）ボロン酸（１４．４ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を加え、その後Ｃｓ２ＣＯ３（５６．２ｍｇ、０．１７２ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ２Ｃｌ２（１４．１ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物をアルゴンで５分間パージし、次いで１００℃で加熱する。２時間後、反応混合物を室温に冷却し、珪藻土で濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄する。濾液を濃縮し、残渣を、ヘキサン中の５０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、無色油状物質として４−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸エチルを得る（０．０２ｇ、６０．８％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４２０．３（Ｍ＋１）＋。
【０１２７】
スキーム１０、工程Ｃ。水（１ｍｌ）に溶かしたＬｉＯＨ（１８．０１ｍｇ、０．４２９ｍｍｏｌ）の水溶液に、ＴＨＦ（１ｍｌ）及びＭｅＯＨ（１ｍｌ）中の４−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸エチル（３６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を加える。周囲温度で３時間後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をペンタンで粉砕し、濾過して、標題化合物を得る（０．０２ｇ、５６．８％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９２．２（Ｍ＋１）＋。
【０１２８】
スキーム１１
【化３７】
2017500309.tif 000051
【０１２９】
調製例４０：５−アミノ−４，６−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル
【０１３０】
スキーム１１、工程Ａ。塩化メチレン（４０．０ｍｌ）に溶かした３−アミノ−２，４−ジメチルピリジン（１ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化メチレン（１０．０ｍｌ）に溶かした臭素（０．５５ｍｌ、４０．６４ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で５分以上かけて加える。周囲温度で１２時間後、反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣を、ヘキサン中の１０〜１００％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、６−ブロモ−２，４−ジメチル−ピリジン−３−アミンを得る（９９２ｍｇ、６０．３％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２０１．０（Ｍ＋１）＋。
【０１３１】
スキーム１１、工程Ｂ。６−ブロモ−２，４−ジメチル−ピリジン−３−アミン（０．９９ｇ、４．９２ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１１２ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、ＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ２Ｃｌ２（３３１ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）、ＣＨ３ＣＮ（３０．０ｍｌ）、トリエチルアミン（１．７５ｍｌ）及びＭｅＯＨ（２０．０ｍｌ）を、１００ｍｌＰａｒｒオートクレーブに機械撹拌しながら加える。Ｐａｒｒオートクレーブを密閉し、ＣＯでパージして、６８９．５ｋＰａ（１００ｐｓｉｇ）まで加圧する。混合物を８５℃で３時間加熱する。混合物を周囲温度まで冷却し、通気する。混合物を濾過し、ＭｅＯＨですすぎ、減圧下で濃縮乾固する。残渣を、溶離液として塩化メチレン中の０〜５％の２Ｍ  ＮＨ３／ＭｅＯＨの勾配を使用して、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。生成物の分画を合わせ、濃縮する。残渣をＥｔＯＡｃで粉砕し、濾過する。濾液を濃縮して、標題化合物を得る（５３７．０ｍｇ、６０．４％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：１８１．０（Ｍ＋１）＋。
【０１３２】
スキーム１２
【化３８】
2017500309.tif 000052
【０１３３】
実施例２７
５−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−４，６−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸
【０１３４】
スキーム１２、工程Ａ。１，４−ジオキサン（１７．９ｍｌ）及びＨ２Ｏ（２．９ｍｌ）に溶かした６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（１．０ｇ、５．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、（３−（ヒドロキシメチル）フェニル）ボロン酸（０．９８２ｇ、６．４７ｍｍｏｌ）を加え、その後Ｋ２ＣＯ３（１．８６ｇ、１３．４７ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ２Ｃｌ２（１３１．９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物をアルゴンで５分間パージし、次に１１０℃で加熱する。２時間後、反応物を室温に冷却し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、濃縮する。残渣を、ヘキサン中の７０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチルを得る（０．７１３ｇ、５１．４％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：２５８．０（Ｍ＋１）＋。
【０１３５】
スキーム１２、工程Ｂ。ＣＨ２Ｃｌ２（１３．９ｍｌ）に溶かした６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（７１３．０ｍｇ、２．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、１Ｈ−イミダゾール（２８５．８ｍｇ、４．１６ｍｍｏｌ）を加え、その後、ｔ−ブチルジメチルクロロシラン（５１６．７ｍｇ、３．３３ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温で２時間撹拌し、次に水、飽和ＮａＨＣＯ３溶液及び飽和食塩水で順次洗浄する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、濃縮して、６−［３−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（９２０．０ｍｇ、８９．４％）を得る。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３７２．２（Ｍ＋１）＋。
【０１３６】
スキーム１２、工程Ｃ。ＴＨＦ（５．０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（５．０ｍＬ）に溶かした６−［３−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（９２０．０ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら１Ｎ  ＬｉＯＨ（２０７．８ｍｇ、４．９５ｍｍｏｌ）の水溶液を加える。周囲温度で２時間撹拌後、混合物を水で希釈し、１０％ＭｅＯＨ／塩化メチレンで抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、濃縮する。残渣を、ヘキサン中の０〜１００％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、６−［３−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸を得る（５８９．０ｍｇ、６６．５％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３５８．２（Ｍ＋１）＋。
【０１３７】
スキーム１２、工程Ｄ。ＴＨＦ（８．４ｍｌ）に溶かした６−［３−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボン酸（３００．０ｍｇ、０．８３９ｍｍｏｌ）の溶液に、クロロギ酸イソブチル（１２８．６ｍｇ、０．９２３ｍｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（１０１．８ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応混合物を０℃で２０分間撹拌し、ＴＨＦ（２．０ｍｌ）に溶かした５−アミノ−４，６−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（１５１．２ｍｇ、０．８３９ｍｍｏｌ）の溶液を加える。反応混合物を周囲温度に温める。１２時間後、反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、濃縮する。残渣を、ヘキサン中の０〜４０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、５−［［６−［３−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−４，６−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸メチルを得る（１９２ｍｇ、４４％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：５２０．２（Ｍ＋１）＋。
【０１３８】
スキーム１２、工程Ｅ。ＴＨＦ（２．０ｍｌ）に溶かした５−［［６−［３−［［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−４，６−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（１９０ｍｇ、０．３６６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ中の１．０Ｍ  Ｂｕ４ＮＦ（０．５４８ｍｌ、０．５４８ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応混合物を周囲温度にゆっくり温める。２時間後、反応混合物を氷水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、濃縮する。残渣を、ヘキサン中の０〜４０％ＥｔＯＡｃを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、５−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−４，６−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸メチルを得る（１３３．０ｍｇ、８９．８％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４０６．２（Ｍ＋１）＋。
【０１３９】
スキーム１２、工程Ｆ。ＴＨＦ（２．０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（２．０ｍｌ）に溶かした５−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−４，６−ジメチル−ピリジン−２−カルボン酸メチル（１３０．０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（０．６４ｍｌ）を加える。周囲温度で２時間後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化する。得られた沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空オーブン中４０℃で１時間乾燥して、白色固体として標題化合物を得る（８８．０ｍｇ、７０．０％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９２．２（Ｍ＋１）＋。
【０１４０】
調製例４１：４−［［６−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸メチル
【化３９】
2017500309.tif 000053
【０１４１】
ＣＨ２Ｃｌ２（８．０ｍｌ）に溶かした６−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−カルボン酸（０．４０ｇ、１．７７ｍｍｏｌ）の溶液に、４−アミノ−３，５−ジメチル安息香酸メチル（０．３１８ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．５７３ｇ、４．４３ｍｍｏｌ）を室温で加える。混合物を１０分間撹拌した後、１−プロパンホスホン酸環状無水物（ＥｔＯＡｃ中の５０％溶液、１．３５ｇ、２．１３ｍｍｏｌ）をシリンジで加える。周囲温度で３６時間後、反応混合物を５０℃で７日間加熱する。反応混合物を濃縮し、ＭｅＯＨで粉砕して、白色固体として標題化合物を得る（４５６．０ｍｇ、６６．５％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３８７．２（Ｍ＋１）。
【０１４２】
以下の化合物は、適切なカルボン酸及びアミンを使用して、本質的には上の調製例４１に記載の方法により調製する。
【表１０】
2017500309.tif 000054
【０１４３】
スキーム１３
【化４０】
2017500309.tif 000055
【０１４４】
調製例４３：４−［［６−（３−メトキシフェニル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸メチル
【化４１】
2017500309.tif 000056
【０１４５】
スキーム１３、工程Ａ。ジオキサン（４ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中の４−［（６−クロロ−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル）アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸メチル（２００ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）、（３−メトキシフェニル）ボロン酸（１９８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１７０ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍｇ）の混合物を、マイクロ波反応器内で、１１０℃で１２０分加熱する。混合物を疎水性フリットで濾過し、塩化メチレン（２×１０ｍＬ）で洗浄する。濾液を濃縮し、ヘキサン中の１５％酢酸エチルを使用してシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、生成物として４−［［６−（３−メトキシフェニル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸メチルを得る（１９４ｍｇ、収率４１％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４０５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４６】
以下の化合物は、適切なカルボン酸エステル及びボロン酸を使用して、本質的には上の調製例４３に記載の方法により調製する。
【表１１−１】
2017500309.tif 000057
【表１１−２】
2017500309.tif 000058
【０１４７】
実施例２８
４−［［６−（３−メトキシフェニル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸
【化４２】
2017500309.tif 000059
【０１４８】
スキーム１３、工程Ｂ。ＭｅＯＨ（３ｍＬ）、ＴＨＦ（２ｍＬ）及び１Ｎ  ＮａＯＨ（１．２ｍＬ）中の４−［［６−（３−メトキシフェニル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸メチル（１９４ｍｇ、０．４７９ｍｍｏｌ）のスラリーを、室温で３晩以上撹拌する。反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ（１．２ｍＬ）で処理し、水で希釈する。固体を減圧濾過により回収し、減圧下で乾燥して、標題化合物を得る（１７２ｍｇ、収率９２％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９１．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４９】
以下の化合物は、適切なカルボン酸エステルを使用して、本質的には上の実施例２８に記載の方法により調製する。
【表１２−１】
2017500309.tif 000060
【表１２−２】
2017500309.tif 000061
【０１５０】
スキーム１４
【化４３】
2017500309.tif 000062
【０１５１】
実施例３６
３，５−ジメチル−４−［（２−フェニルキノリン−４−カルボニル）アミノ］安息香酸
【０１５２】
スキーム１４、工程Ａ。ＣＨ２Ｃｌ２（６．０ｍｌ）に溶かした２−フェニルキノリン−４−カルボン酸（１９３．５ｇ、０．７７６ｍｍｏｌ）の溶液に、４−アミノ−３，５−ジメチル−安息香酸エチル（１５０．０ｇ、０．７７６ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．３３８ｍｌ、１．９４ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応混合物を１０分間撹拌し、１−プロパンホスホン酸環状無水物（酢酸エチル中の５０％溶液、０．５５５ｍｌ、０．９３２ｍｍｏｌ）をシリンジで加える。混合物を周囲温度で４８時間撹拌し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。残渣をＣＨ２Ｃｌ２で粉砕し、濾過して、白色固体として３，５−ジメチル−４−［（２−フェニルキノリン−４−カルボニル）アミノ］安息香酸エチルを得る（９３．５ｍｇ、２８．４％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４２５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５３】
スキーム１４、工程Ｂ。ＴＨＦ（３．０ｍｌ）に溶かした３，５−ジメチル−４−［（２−フェニルキノリン−４−カルボニル）アミノ］安息香酸エチル（９３．５ｍｇ、０．２２０ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（１．０ｍｌ）を加える。５０℃で８時間加熱後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化する。得られた沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空オーブン中４０℃で１時間乾燥して、白色固体として標題化合物を得る（７０．０ｍｇ、８０．２％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３９７．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５４】
スキーム１５
【化４４】
2017500309.tif 000063
【０１５５】
調製例５１：４−［（２−クロロキノリン−４−カルボニル）アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸エチル
【化４５】
2017500309.tif 000064
【０１５６】
スキーム１５、工程Ａ。ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍｌ）に溶かした２−クロロキノリン−４−カルボン酸（１．０７ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、４−アミノ−３，５−ジメチル−安息香酸エチル（１．００ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２．２６ｍｌ、１２．９４ｍｍｏｌ）を０℃で加える。反応混合物を１０分間撹拌した後、１−プロパンホスホン酸環状無水物（酢酸エチル中の５０％溶液、３．７０ｍｌ、６．２１ｍｍｏｌ）をシリンジで加える。反応混合物を周囲温度で２４時間撹拌し、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮する。得られた残渣をＭｅＯＨで粉砕し、濾過する。濾液を、高ｐＨ逆相クロマトグラフィー（５％ＭｅＯＨ／ＣＨ３ＣＮ中、０〜１００％の１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）により精製して、白色固体として標題化合物を得る（０．４９ｇ、２５％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：３８３．１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１５７】
以下の化合物は、適切なカルボン酸及びアミンを使用して、本質的には上の調製例５１に記載の方法により調製する。
【表１３】
2017500309.tif 000065
【０１５８】
調製例５４：４−［［２−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］キノリン−４−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸エチル
【化４６】
2017500309.tif 000066
【０１５９】
スキーム１５、工程Ｂ。１，４−ジオキサン（１７．０ｍｌ）及びＨ２Ｏ（２．５ｍｌ）に溶かした４−［（２−クロロキノリン−４−カルボニル）アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸エチル（０．４９ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）の溶液に、（３−（ヒドロキシメチル）フェニル）ボロン酸（２３１．９ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を加え、その後Ｋ２ＣＯ３（４３９．２ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ）及びＰｄＣｌ２（ｄｐｐｆ）・ＣＨ２Ｃｌ２（１０３．９ｍｇ、０．０１２７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物をアルゴンで５分間パージし、次に１１０℃で加熱する。３時間後、混合物を冷却し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出する。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、濃縮する。残渣を、ヘキサン中の４０％酢酸エチルを使用してシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、標題化合物を得る（０．４２ｇ、７２．３％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４５５．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６０】
以下の化合物は、適切なカルボン酸エステル及びボロン酸を使用して、本質的には上の調製例５４に記載の方法により調製する。
【表１４−１】
2017500309.tif 000067
【表１４−２】
2017500309.tif 000068
【０１６１】
ａ）１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）：１０．２３（ｓ、１Ｈ）、８．３７−８．３６（ｍ、１Ｈ）、８．３２−８．３０（ｍ、１Ｈ）、８．１２（ｄ、Ｊ＝１．９Ｈｚ、１Ｈ）、８．１１−８．０８（ｍ、１Ｈ）、７．８３−７．８３（ｍ、１Ｈ）、７．７６−７．７４（ｍ、３Ｈ）、７．６２−７．５９（ｍ、２Ｈ）、７．４９（ｔ、Ｊ＝７．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．３８−７．３６（ｍ、１Ｈ）、５．２９（ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ、１Ｈ）、４．６１−４．６０（ｍ、２Ｈ）、４．３０（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、２．３９（ｓ、６Ｈ）、１．３１（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）。
【０１６２】
実施例３７
４−［［２−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］キノリン−４−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸
【化４７】
2017500309.tif 000069
【０１６３】
スキーム１５、工程Ｃ。ＴＨＦ（１０．０ｍｌ）及びＭｅＯＨ（３．０ｍｌ）に溶かした４−［［２−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］キノリン−４−カルボニル］アミノ］−３，５−ジメチル−安息香酸エチル（０．４２ｇ、０．９２０ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しながら１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（１．９ｍｌ）を加える。４０℃で１２時間加熱後、反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ１〜２に酸性化する。得られた沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空オーブン中４０℃で１時間乾燥して、白色固体として標題化合物を得る（３３３．０ｍｇ、８４．９％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４２７．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６４】
以下の化合物は、適切なカルボン酸エステルを使用して、本質的には上の実施例３７に記載の方法により調製する。
【表１５−１】
2017500309.tif 000070
【表１５−２】
2017500309.tif 000071
【０１６５】
調製例６１：３−［（３−ブロモナフタレン−１−カルボニル）アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル
【化４８】
2017500309.tif 000072
【０１６６】
ＣＨ３ＣＮ（１０．０ｍｌ）に溶かした３−ブロモナフタレン−１−カルボン酸（０．４２ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）と３−アミノ−２，４−ジメチル安息香酸メチル（０．３０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、三塩化リン（０．２９２ｍｌ、３．３５ｍｍｏｌ）を０℃で加える。マイクロ波反応器中１００℃で１．５時間加熱後、反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥して濾過し、減圧下で濃縮して、黄白色泡状物質として標題化合物を得る（０．６０ｇ、８６．７％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４１２．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６７】
スキーム１６
【化４９】
2017500309.tif 000073
【０１６８】
３−［［３−（３−クロロフェニル）ナフタレン−１−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸の代替調製（実施例４３）
【０１６９】
スキーム１６、工程Ａ。反応器に水１０Ｌと、炭酸水素ナトリウム５８５ｇ（６．９７０ｍｏｌ）を入れる。溶液を５０℃に加熱し、窒素を１５分間注入する。３−ブロモ−１−ナフタレンカルボン酸５００ｇ（１．９９１ｍｏｌ）を加え、混合物を７５℃に加熱する。酢酸パラジウム４．４７ｇ（１９．９ｍｍｏｌ）を加える。３−クロロフェニルボロン酸３５８ｇ（２．２９０ｍｏｌ）を５０ｇずつ、１時間以上かけて入れる。７５℃で２時間撹拌する。２５℃に冷却し、水２Ｌ、２５％水酸化ナトリウム水溶液０．５Ｌ、及びＴＨＦ１．５Ｌを加える。水溶液を、２×２Ｌのヘプタンで洗浄する。洗浄した水溶液に、ＴＨＦ１０Ｌ及び酢酸エチル２．５Ｌを加える。８９０ｇの３７％ＨＣｌを加え、ｐＨを約２にする。相を分離し、ＴＨＦ２Ｌと酢酸エチル０．５Ｌの混合物を用いて水相を抽出する。合わせた有機溶液を飽和食塩水１Ｌで洗浄する。活性炭素１００ｇを使用して溶液を２０℃で１時間処理し、混合物を珪藻土で濾過する。金属スカベンジングシリカ４００ｇを加え、懸濁液を５０℃に加熱後、５０℃で４時間撹拌する。２０℃に冷却し、濾過してシリカを取り除く。新しいスカベンジャー４００ｇを入れて同じ操作を繰り返す。２０℃に冷却し、濾過してスカベンジャーを除去し、溶液を減圧下で蒸発乾固する。粗製物質をＴＨＦ８Ｌに溶解し、ヘプタン１２Ｌを加える。溶液を９００ｇのシリカ床で濾過し、ＴＨＦとヘプタン２〜３の混合物４×９００ｍＬで抽出する。濾液を減圧下で蒸発させて懸濁液を得る。固体を濾過により回収し、５０℃、２〜１０ｍｂａｒで４時間乾燥して、３−（３−クロロフェニル）ナフタレン−１−カルボン酸５０２ｇ（８９％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ７．４８−７．５１（ｍ、１Ｈ）、７．５６（ｔ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．６１−７．６９（ｍ、２Ｈ）、７．８１−７．８３（ｍ、１Ｈ）、７．９２（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０−８．１３（ｍ、１Ｈ）、８．４２（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．５４（ｄ、Ｊ＝２．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．８５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、１３．３５（ｂｒｓ、１Ｈ）。
【０１７０】
スキーム１６、工程Ｂ。２０Ｌの反応器に、３−（３−クロロフェニル）ナフタレン−１−カルボン酸４８５ｇ（１．７１５ｍｏｌ）、ピリジン１３６ｇ（１．７１５ｍｏｌ）、及びトルエン４．８５Ｌを入れる。混合物を７５℃に加熱し、塩化チオニル３０６ｇ（２．５７３ｍｏｌ）を約１５分以上かけて加える。反応混合物を７５℃で３時間撹拌し、塩化チオニル１０２ｇ（０．８５８ｍｏｌ）を加え、残りの出発物質の酸を消費させる。反応混合物を１時間撹拌後、７５℃で上層をデカンテーションし、下の廃棄層を捨てる。塩化チオニル１０２ｇ（０．８５８ｍｏｌ）と、ピリジン３４ｇ（０．４２９ｍｏｌ）を加える。反応混合物を７５℃で１時間撹拌する。反応混合物を２０〜２５℃で一晩維持する。有機層を２×０．５Ｌの水で洗浄する。水２．４２５Ｌに溶かした３−アミノ−２，４−ジメチル−安息香酸メチル３７０ｇ（１．７１５ｍｏｌ）の溶液を反応器に一度で加える。水４．８５０Ｌに溶かした炭酸水素カリウム８５９ｇ（８．５７７ｍｏｌ）の溶液を４０分以上かけて加える。反応混合物を２０〜２５℃で２時間撹拌する。ＴＨＦ４．８５０Ｌを加え、固体が全て溶解するまで撹拌する。デカンテーションし、下の水相を捨てる。２．５７ｇのＮａ２Ｓ・９Ｈ２Ｏを水０．９７０Ｌに溶かした溶液で上の有機相を洗浄し、水相を捨てる。有機層を飽和食塩水０．９７０Ｌで３回洗浄し、次に１Ｎ塩酸０．９７０Ｌ、最後に飽和食塩水０．９７０Ｌで洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥する。生成物溶液（ＴＨＦ−トルエン）を減圧下で濃縮して、ＴＨＦを除去する。結晶性生成物を用いてバッチに種晶添加し、約１時間以上かけて４５℃から３７℃に温度を下げる。結晶化が進行する際、トルエン１．９４Ｌを加え、温度を２０℃に下げる。２時間撹拌後、生成物を濾過により回収する。生成物の塊をＴＢＭＥ１．９４Ｌで洗浄し、一定重量になるまで８０℃、２〜１０Ｔｏｒｒで乾燥する。固体を５５℃でアセトン０．９７０Ｌに溶解し、ＴＢＭＥ１．９４０Ｌを加える。溶液を１時間以上かけて２０℃に冷却し、生成物を結晶化させる。２０℃で２時間撹拌後、白色の結晶性固体を濾過により回収し、一定重量になるまで８０℃、２〜１０Ｔｏｒｒで乾燥する。短いシリカ床（１．５ｋｇ、３部）でのクロマトグラフィーにより、ジクロロメタンで溶出させて物質を精製し、白色固体として３−［［３−（３−クロロフェニル）ナフタレン−１−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル４４２ｇ（５８％）を得る。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ）δ２．４１（ｓ、３Ｈ）、２．５３（ｓ、３Ｈ）、３．８５（ｓ、３Ｈ）、７．３０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５１（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．５９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．６３−７．６５（ｍ、２Ｈ）、７．６９（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．９０（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．０２（ｓ、１Ｈ）、８．１０−８．１４（ｍ、１Ｈ）、８．２０（ｓ、１Ｈ）、８．３７−８．４０（ｍ、１Ｈ）、８．４６（ｓ、１Ｈ）、１０．２０（ｂｒｓ、１Ｈ）。
【０１７１】
スキーム１６、工程Ｃ。２０Ｌの反応器に、水酸化カリウム１７８ｇ（３．１７６ｍｏｌ）と、水１．５９Ｌを入れる。混合物を、完全に溶解するまで撹拌する。イソプロパノール４．７Ｌを加え、溶液を６５℃に加熱する。ＴＨＦ１．８８Ｌに溶かした３−［［３−（３−クロロフェニル）ナフタレン−１−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸メチル４７０ｇ（１．０５９ｍｏｌ）の溶液を、６５℃で、反応器に約１時間で加える。添加終了後、反応混合物を６５℃で２時間撹拌する。活性炭素２３．５ｇを加え、混合物を６５℃で１時間撹拌する。混合物を２０℃に冷却し、珪藻土で濾過する。イソプロパノール０．９４Ｌで塊をすすぎ、その後２×０．９４Ｌの水ですすぐ。溶液を減圧下で濃縮して有機溶媒を除去する。水溶液を１０Ｌの反応器に移し、水３．７６Ｌで希釈する。０．９５Ｌの３Ｎ  ＨＣｌを加えることにより、ｐＨ３．０に酸性化する。イソプロパノール０．９４Ｌを加え、懸濁液を２０℃で一晩撹拌する。生成物を濾過により回収し、水２．８２Ｌで洗浄する。粗生成物を５０℃で、週末を通して乾燥する。乾燥した固体を２０Ｌの反応器に移し、アセトン４．７０Ｌを加え、懸濁液を２時間加熱還流する。懸濁液を３時間以上かけて２０℃に冷却し、この温度で一晩維持する。懸濁液を８℃に冷却し、１時間撹拌する。生成物を濾過により回収し、アセトン１．４１Ｌで塊を洗浄する。５０℃、２〜１０Ｔｏｒｒで一晩乾燥し、白色固体として標題化合物を得る（３７８．０ｇ、収率８３％）。質量スペクトル（ｍ／ｚ）：４３０．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１７２】
生体外でのヒトＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３及びＥＰ４に対する結合
ｈＥＰ１及びｈＥＰ４膜を、ヒトＥＰ１（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＹ２７５４７０）またはＥＰ４（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＹ４２９１０９）受容体を安定に発現する組換えＨＥＫ２９３細胞から調製する。ｈＥＰ２及びｈＥＰ３膜を、ＥＰ２（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＹ２７５４７１）またはＥＰ３（アイソフォームＶＩ：Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＹ４２９１０８）受容体プラスミドで一過的にトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞から調製する。凍結した細胞ペレットを、テフロン（登録商標）／ガラスホモジナイザーを使用して、均質化緩衝液中で均質化する。膜タンパク質を一定分量ずつ分け、−８０℃で保存する前にドライアイス上で急速凍結させる。均質化緩衝液は、１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）と、２５０ｍＭのスクロースと、１ｍＭのＥＤＴＡと、０．３ｍＭのインドメタシンとを含み、さらにＲｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（カタログ番号１６９７４９８）から入手したＣｏｍｐｌｅｔｅ（商標）をＥＤＴＡと共に含んだ。
【０１７３】
各受容体に対する［３Ｈ］−ＰＧＥ２結合についてのＫｄ値を、飽和結合研究または相同競合によって決定する。化合物は、３倍連続希釈を使用し、９６ウェルフォーマットで試験して１０点曲線を作成する。希釈した化合物を、０．３〜０．５ｎＭの［３Ｈ］−ＰＧＥ２（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、１１８〜１８０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）の存在下で、２０μｇ／ウェルのＥＰ１、１０μｇ／ウェルのＥＰ２、１μｇ／ウェルのＥＰ３または１０〜２０μｇ／ウェルのＥＰ４膜と共に、２５℃で９０分間インキュベートする。結合反応は、０．５ｍＬのポリスチレン９６ウェルディープウェルプレートを使用して、２００μＬのＭＥＳ緩衝液（ＫＯＨを含む１０ｍＭ  ＭＥＳ  ｐＨ６．０、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び１ｍＭ  ＥＤＴＡ）中で実施する。２μＭのＰＧＥ２の存在及び非存在下で結合を比較することにより、非特異的結合を算出する。膜を濾過（ＴｏｍＴｅｋ収集器）によって回収し、冷たい緩衝液（ＫＯＨを含む１０ｍＭ  ＭＥＳ  ｐＨ６．０、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２）で４回洗浄し、６０℃のオーブン中で乾燥させ、ＴｏｐＣｏｕｎｔ検出器を使用して放射能をカウント毎分（ＣＰＭ）として定量する。パーセント特異結合は、２μＭのＰＧＥ２存在下での結合について補正した、任意の阻害剤の非存在下での結合のパーセントとして算出する。データは、ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））で示されるような４パラメータ非線形ロジスティック方程式（ＡＢａｓｅ  Ｅｑｕａｔｉｏｎ  ２０５）を使用して分析する。式中、ｙ＝％特異阻害、Ａ＝曲線の最小値；Ｂ＝曲線の最大値；Ｃ＝相対ＩＣ５０＝最大値から最小値までのデータ範囲に基づき、５０％阻害を引き起こす濃度；Ｄ＝勾配、Ｓｌｏｐｅ＝曲線の傾き。ＩＣ５０値からのＫｉの変換（Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋［Ｌ］／Ｋｄ）、式中、［Ｌ］はリガンド濃度）。結果は相乗平均±標準偏差として表し；ｎ＝独立測定数である。標準偏差はデルタ法により算出し、ＳＤｌｏｇＫｉ×相乗平均×ｌｎ（１０）である。
【０１７４】
本明細書の実施例１〜４３の化合物を、本質的に上記のとおり試験すると、ｈＥＰ４についてのＫｉ値は１μＭ未満を示す。
【表１６】
2017500309.tif 000074
【０１７５】
表１のデータは、実施例１及び実施例２２の化合物が、ｈＥＰ１、ｈＥＰ２及びｈＥＰ３よりも強くｈＥＰ４に結合していることを実証しており、ｈＥＰ４受容体への選択性を示している。
【０１７６】
生体外ヒトＥＰ４機能的アンタゴニスト活性
試験は、ヒトＥＰ４受容体を安定に発現する組換えＨＥＫ２９３細胞において実施する。細胞株は、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５００μｇ／ｍｌジェネテシン、及び２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを追加した、高グルコース及び塩酸ピリドキシン含有ＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で培養することによって維持する。コンフルエントな培養物を、５％ＣＯ２を含む雰囲気下、３７℃で増殖させる。細胞は、２．５％トリプシン−ＥＤＴＡを使用して回収し、１０７細胞／ｍＬで凍結培地（６％ＤＭＳＯを含むＦＢＳ）中に懸濁させ、一定分量ずつを液体窒素中で保存する。試験直前に細胞をＤＭＥＭ中で解凍し、遠心分離し、ｃＡＭＰ緩衝液中で再懸濁させる。
【０１７７】
ＥＰ４アンタゴニストによるＰＧＥ２刺激ｃＡＭＰ産生の阻害は、ＨＴＲＦ（Ｃｉｓｂｉｏカタログ番号６２ＡＭ４ＰＥＢ）を使用して測定する。４０００細胞に相当する一定分量を、ＥＣ８０のＰＧＥ２（Ｓｉｇｍａから入手した０．１８８ｎＭ  ＰＧＥ２、カタログ番号Ｐ５６４０−１０ｍｇ）及びアンタゴニストを含有するｃＡＭＰ試験緩衝液５０μＬと共に室温で２０分間インキュベートする。ｃＡＭＰ試験緩衝液は、５００ｍＬ  ＨＢＳＳ（ハンクス平衡塩溶液）、０．１％ＢＳＡ、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、及び２００μＭ  ＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ  Ｉ５８７９）を含有する。ＣＪ−０４２７９４（４−｛（１Ｓ）−１−［（｛５−クロロ−２−［（４−フルオロフェニル）オキシ］フェニル｝カルボニル）アミノ］エチル｝安息香酸）は陽性対照として役立つ（Ｍｕｒａｓｅ，  Ａ．ら、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ８２：２２６−２３２  （２００８）を参照のこと）。ｃＡＭＰ濃度を測定するため、溶解緩衝液中のｃＡＭＰ−ｄ２複合体及び抗ｃＡＭＰ−クリプテート複合体を、処理した細胞と共に室温で１時間インキュベートする。ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）プレート読取り器（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を使用してＨＴＲＦ信号を検出して、６６５ｎｍでの蛍光と６２０ｎｍでの蛍光の比を算出する。各実験で作成したｃＡＭＰ検量線を使用して、生データをｃＡＭＰ量（ｐｍｏｌ／ウェル）に変換する。データは、ｙ＝（Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ））））で示されるような４パラメータ非線形ロジスティック方程式（ＡＢａｓｅ  Ｅｑｕａｔｉｏｎ  ２０５）を使用して分析する。式中、ｙ＝％特異阻害、Ａ＝曲線の最小値；Ｂ＝曲線の最大値；Ｃ＝相対ＩＣ５０＝最大値から最小値までのデータ範囲に基づき、５０％阻害を引き起こす濃度；Ｄ＝勾配、Ｓｌｏｐｅ＝曲線の傾き。結果は相乗平均±標準偏差として表し；ｎ＝独立測定数である。標準偏差はデルタ法により算出し、ＳＤｌｏｇＩＣ５０×相乗平均×ｌｎ（１０）である。
【０１７８】
本質的に上記のとおりの手順に従って行うと、実施例１の化合物は、２．３１±２．０２ｎＭ（ｎ＝２）のＩＣ５０を有する。これは、実施例１の化合物が生体外でヒトＥＰ４のアンタゴニストであることを実証している。
【０１７９】
生体外ラットＥＰ４機能的アンタゴニスト活性
ラットＥＰ４  ｃＤＮＡ（Ｇｅｎｅｂａｎｋ受入番号ＮＭ＿０３２７６）をｐｃＤＮＡ３．１ベクターにクローニングし、続いて受容体発現のためＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトする。ラットＥＰ４安定クローンをスケールアップし、次いで今後の化合物スクリーニング用に細胞バンクとして凍結させる。ｒＥＰ４細胞においてＥＰ４アンタゴニスト化合物を試験するため、凍結細胞を解凍し、次いで細胞をｃＡＭＰ試験緩衝液中で再懸濁させる。ｃＡＭＰ緩衝液は、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＳＨ３０２３７）、０．１％ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ、１５２６０）及び１２５μＭ  ＩＢＭＸ（Ｓｉｇｍａ、Ｉ５８７９）を追加した、フェノールレッド不含ＨＢＳＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＳＨ３０２６８）によって作製する。細胞を、９６ウェルハーフエリア平底ポリスチレン黒色プレート（Ｃｏｓｔａｒ３６９４）に播種する。化合物をＤＭＳＯで連続希釈して、１０点濃度反応曲線を得る。次に、希釈した化合物をｃＡＭＰ試験緩衝液に加える。ｃＡＭＰ試験緩衝液は、１／１００のＤＭＳＯ／緩衝液比でＰＧＥ２（Ｃａｙｍａｎ１４０１０、ＥＣ８０を得る所定濃度）を含有する。細胞を、ＰＧＥ２（ＥＣ８０濃度）存在下、室温で３０分間、化合物で処理する。細胞から産生したｃＡＭＰ濃度を、ｃＡＭＰ  ＨＴＲＦ試験キット（Ｃｉｓｂｉｏ  ６２ＡＭ４ＰＥＣ）によって定量する。プレートは、ＨＴＲＦ最適化プロトコル（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用してＥｎＶｉｓｉｏｎプレート読取り器で読み取る。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  （ｖ．  ４）非線形回帰、Ｓ字用量反応曲線フィッティングを使用してＩＣ５０を算出する。
【０１８０】
本質的に上記の手順に従って行うと、ラットＥＰ４で測定される実施例１の化合物が有するＩＣ５０は、１．５１ｎＭである。これは、実施例１の化合物が、生体外でラットＥＰ４のアンタゴニストであることを実証している。
【０１８１】
ヒト全血における生体外アンタゴニスト活性
マクロファージ／単球からのＬＰＳ誘発ＴＮＦα産生に対するＰＧＥ２の阻害効果は、ＥＰ４受容体によって媒介されると考えられる（Ｍｕｒａｓｅ，  Ａ．ら、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ８２：２２６−２３２  （２００８）を参照のこと）。ヒト全血におけるＬＰＳ誘発ＴＮＦα産生に対するＰＧＥ２の阻害効果を逆転する、実施例１の化合物の能力は、機能的活性の兆候である。
【０１８２】
正常なボランティアドナーから血液を採取し、ヘパリンナトリウムバキュテナーチューブに入れる。ドナーは、提供の４８時間以内にＮＳＡＩＤｓもしくはセレコキシブを摂取していないか、または提供の２週間以内にグルココルチコイドを摂取していない。全てのチューブ／ドナーを５０ｍＬのＦａｌｃｏｎ円錐型遠心管にプールし、９８μＬ／ウェルを９６ウェル組織培養プレート（Ｆａｌｃｏｎ３０７２）に分配する。化合物をＤＭＳＯ内で、最終１００倍で希釈し、１μＬ／ウェルを３回繰り返して血液に加えて、７点濃度反応曲線を得る。血液を、５％ＣＯ２湿潤雰囲気中３７℃で３０分間、化合物で前処理し、その後、０．２ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）／ＰＢＳ＋／−１ｍＭ  ＰＧＥ２（Ｃａｙｍａｎ１４０１０）中の１ｍｇ／ｍＬリポ多糖（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ０１１１：Ｂ４）の溶液１μＬ／ウェルを加え、最終ＬＰＳ濃度１０μｇ／ｍＬ＋／−１０ｎＭ  ＰＧＥ２を得る。プレートを、５％ＣＯ２湿潤雰囲気中、３７℃で２０〜２４時間インキュベートする。プレートを、１８００×ｇで、２２℃で１０分間、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ５８１０Ｒ遠心機で遠心分離する。血漿を細胞層から除去し、ｖ底ポリプロピレンプレートに移す。２μＬ血漿中のＴＮＦα濃度を、Ｉｍｍｕｌｏｎ  ４  ＨＢＸプレート（Ｔｈｅｒｍｏ３８５５）及び３，３’，５，５’−テトラメチルビフェニル−４，４’−ジアミン基質（ＫＰＬ５０−７６−０３）を使用して、市販の酵素免疫測定法（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＤＹ２１０）によって定量する。プレートは、ＳＯＦＴｍａｘＰＲＯ  （ｖ．  ４．３．１）ソフトウェアを使用して、プレート読取り器（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｖｅｒｓａｍａｘ）で、Ａ４５０〜Ａ６５０において読み取る。Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  （ｖ．  ４）非線形回帰、用量反応Ｓ字曲線フィッティングを使用してＩＣ５０を算出する。結果は相乗平均±標準偏差として表し；ｎ＝独立測定数である。標準偏差はデルタ法により算出し、ＳＤｌｏｇＩＣ５０×相乗平均×ｌｎ（１０）である。
【０１８３】
本質的に上記の手順に従って行うと、実施例１の化合物は、０．０５９５±０．０３７８μＭ（ｎ＝３）のＩＣ５０を有する。これは、実施例１の化合物が、ヒト血液ＴＮＦα誘発試験においてＥＰ４アンタゴニストであることを実証している。
【手続補正書】
【提出日】平成28年7月14日(2016.7.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物またはその薬学的に許容できる塩：
【化１】
2017500309.tif 000082
（式中、
Ａは、
【化２】
2017500309.tif 000083
であり；
Ｗは、ＣＨまたはＮであり；
Ｙは、ＣＨまたはＮであり；
Ｘは、ＣＨまたはＮであり；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＦ３またはＦであり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、またはＣＮであり；
Ｒ３は、ＨまたはＦであるか；あるいは
Ｒ２およびＲ３は一緒になって、隣接する炭素原子に結合しているＯＣＨ２Ｏ基であり；
Ｒ４は、Ｈ、ＣｌまたはＣＨ２ＯＨである）。
【請求項２】
式：
【化３】
2017500309.tif 000084
の請求項１記載の化合物または塩。
【請求項３】
式：
【化４】
2017500309.tif 000085
の請求項１または請求項２のいずれかに記載の化合物または塩。
【請求項４】
Ａが
【化５】
2017500309.tif 000086
である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項５】
Ｒ１がＣＨ３である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項６】
Ｒ３がＨである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項７】
Ｒ２がＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨまたはＯＣＨ３である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項８】
Ｒ２がＣＨ２ＯＨである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項９】
Ｒ２およびＲ３が一緒になって、隣接する炭素原子に結合しているＯＣＨ２Ｏ基である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項１０】
Ｒ４がＣｌである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物または塩。
【請求項１１】
３−［［６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸；
３−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸；および
３−［［３−（３−クロロフェニル）ナフタレン−１−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸である、請求項１に記載の化合物またはその塩。
【請求項１２】
患者における変形性関節炎を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を含む医薬組成物。
【請求項１３】
患者におけるリウマチ性関節炎を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を含む医薬組成物。
【請求項１４】
患者における変形性関節炎またはリウマチ性関節炎に伴う疼痛を治療するための医薬組成物であって、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を含む医薬組成物。
【請求項１５】
療法に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項１６】
変形性関節炎の治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項１７】
リウマチ性関節炎の治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項１８】
変形性関節炎またはリウマチ性関節炎に伴う疼痛の治療に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
【請求項１９】
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩と、１種以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８３】
本質的に上記の手順に従って行うと、実施例１の化合物は、０．０５９５±０．０３７８μＭ（ｎ＝３）のＩＣ５０を有する。これは、実施例１の化合物が、ヒト血液ＴＮＦα誘発試験においてＥＰ４アンタゴニストであることを実証している。
以下に、本願の当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］  以下の式の化合物またはその薬学的に許容できる塩：
【化５０】
2017500309.tif 000087
（式中、
Ａは、
【化５１】
2017500309.tif 000088
であり；
Ｗは、ＣＨまたはＮであり；
Ｙは、ＣＨまたはＮであり；
Ｘは、ＣＨまたはＮであり；
Ｒ１は、ＣＨ３、ＣＦ３またはＦであり；
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＣＦ３、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＣＨ３、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、またはＣＮであり；
Ｒ３は、ＨまたはＦであるか；あるいは
Ｒ２およびＲ３は一緒になって、隣接する炭素原子に結合しているＯＣＨ２Ｏ基であり；
Ｒ４は、Ｈ、ＣｌまたはＣＨ２ＯＨである）。
［２］  式：
【化５２】
2017500309.tif 000089
の［１］記載の化合物または塩。
［３］  式：
【化５３】
2017500309.tif 000090
の［１］または［２］のいずれかに記載の化合物または塩。
［４］  Ａが
【化５４】
2017500309.tif 000091
である、［１］〜［３］のいずれかに記載の化合物または塩。
［５］  Ｒ１がＣＨ３である、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物または塩。
［６］  Ｒ３がＨである、［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物または塩。
［７］  Ｒ２がＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＨまたはＯＣＨ３である、［１］〜［６］のいずれかに記載の化合物または塩。
［８］  Ｒ２がＣＨ２ＯＨである、［１］〜［７］のいずれかに記載の化合物または塩。
［９］  Ｒ２およびＲ３が一緒になって、隣接する炭素原子に結合しているＯＣＨ２Ｏ基である、［１］〜［５］のいずれかに記載の化合物または塩。
［１０］  Ｒ４がＣｌである、［１］〜［４］のいずれかに記載の化合物または塩。
［１１］  ３−［［６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸；
３−［［６−［３−（ヒドロキシメチル）フェニル］−３−メチル−ピリジン−２−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸；および
３−［［３−（３−クロロフェニル）ナフタレン−１−カルボニル］アミノ］−２，４−ジメチル−安息香酸である、［１］に記載の化合物またはその塩。
［１２］  患者における変形性関節炎を治療する方法であって、［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
［１３］  患者におけるリウマチ性関節炎を治療する方法であって、［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
［１４］  患者における変形性関節炎またはリウマチ性関節炎に伴う疼痛を治療する方法であって、［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩の有効量を、そのような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
［１５］  療法に使用するための、［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
［１６］  変形性関節炎の治療に使用するための、［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
［１７］  リウマチ性関節炎の治療に使用するための、［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
［１８］  変形性関節炎またはリウマチ性関節炎に伴う疼痛の治療に使用するための、［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩。
［１９］  ［１］〜［１１］のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩と、１種以上の薬学的に許容できる担体、希釈剤または賦形剤とを含む医薬組成物。
【国際調査報告】
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