(57)【要約】  本発明は、糖タンパク質IIb／IIIaに結合し、画像診断、特に血栓の磁気共鳴画像法に使用することができる化合物に関する。開示される化合物は、十分な画像化感度と合わせて、糖タンパク質IIb／IIIa受容体への結合を可能にする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（I）：
【化１】
2017506633.tif 000052
（Xは
【化２】
2017506633.tif 000053
から選択される基を表し、
Yは
【化３】
2017506633.tif 000054
を表し、
R1は水素、メチル、エチル、プロピルまたはイソ−プロピルを表し；
R2は水素、メチル、エチル、プロピルまたはイソ−プロピルを表し；
R3は水素、メチル、エチル、プロピルまたはイソ−プロピルを表し；
Gは
【化４】
2017506633.tif 000055
を表し、
R4は水素、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピルまたはベンジルを表し；
R5は水素、メチル、エチルまたはプロピルを表し；
R6は水素、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピルまたはベンジルを表し；
Mはガドリニウムを表し；
mは1または2を表し；
nは2、3、4、5または6の整数を表し；
qは0または1を表す）
の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物。
【請求項２】
Xが
【化５】
2017506633.tif 000056
から選択される基を表し、
Yが
【化６】
2017506633.tif 000057
を表し、
R1が水素またはメチルを表し；
R2が水素またはメチルを表し；
R3が水素またはメチルを表し；
Gが
【化７】
2017506633.tif 000058
を表し、
R4が水素またはメチルを表し；
R5が水素またはメチルを表し；
R6が水素またはメチルを表し；
Mがガドリニウムを表し；
mが1または2を表し；
nが2、3、4、5または6の整数を表し；
qが0または1を表す、
請求項1に記載の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物。
【請求項３】
Xが
【化８】
2017506633.tif 000059
から選択される基を表し、
Yが
【化９】
2017506633.tif 000060
を表し、
R1が水素を表し；
R2が水素を表し；
R3が水素を表し；
Gが
【化１０】
2017506633.tif 000061
を表し、
R4が水素またはメチルを表し；
R5が水素またはメチルを表し；
R6が水素を表し；
Mがガドリニウムを表し；
mが1を表し；
nが2、3または4の整数を表し；
qが0または1を表す、
請求項1または2に記載の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物。
【請求項４】
Xが
【化１１】
2017506633.tif 000062
から選択される基を表し、
Yが
【化１２】
2017506633.tif 000063
を表し、
R1が水素を表し；
R2が水素を表し；
R3が水素を表し；
Gが
【化１３】
2017506633.tif 000064
を表し、
R4が水素またはメチルを表し；
R5が水素を表し；
R6が水素を表し；
Mがガドリニウムを表し；
mが1を表し；
nが3または4を表し；
qが0または1を表す、
請求項1から3のいずれか一項に記載の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物。
【請求項５】
Xが
【化１４】
2017506633.tif 000065
から選択される基を表し、
Yが
【化１５】
2017506633.tif 000066
を表し、
R1が水素を表し；
R2が水素を表し；
R3が水素を表し；
Gが
【化１６】
2017506633.tif 000067
を表し、
R4がメチルを表し；
R5が水素を表し；
R6が水素を表し；
Mがガドリニウムを表し；
mが1を表し；
nが4を表し；
qが1を表す、
請求項1から4のいずれか一項に記載の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物。
【請求項６】
オクタガドリニウム2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（N−｛2−［4，7，10−トリス（カルボキシラトメチル）−1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1−イル］プロパノイル｝グリシル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（5−｛（1S）−2−カルボキシ−1−［（｛（3R）−1−［3−（ピペリジン−4−イル）プロパノイル］ピペリジン−3−イル｝カルボニル）アミノ］エチル｝ピリジン−3−イル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド
からなる群から選択される、請求項1から5のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
画像診断のための請求項1から6のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
診断薬を製造するための請求項1から6のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
診断薬を製造するための請求項1から6のいずれか一項に記載の化合物またはその混合物の使用。
【請求項１０】
血栓を画像化するための診断薬を製造するための請求項1から6のいずれか一項に記載の化合物またはその混合物の使用。
【請求項１１】
患者の体組織を画像化する方法であって、前記患者に薬学的に許容される担体中の有効量の請求項1から6のいずれか一項に記載の1種または複数の化合物を投与するステップと、前記患者をNMR断層撮影に供するステップとを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特許請求項で特徴付けられる品目、すなわち、血栓の磁気共鳴画像法に有用な金属キレートおよび哺乳動物の体内の血栓を画像化するためのその使用に関する。より具体的には、本発明は、血栓を画像化するための常磁性キレートで標識された高親和性、特異的結合糖タンパク質IIb／IIIa拮抗薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
1．序論
心筋梗塞（MI）、脳卒中、一過性脳虚血発作（TIA）および肺塞栓症（PE）は、世界中の罹患率および死亡率の主な原因である。これらの生命を脅かす臨床事象はほとんど、体中に広がる異なる血管に位置し、大きさおよび組成が異なり得る血栓によって引き起こされる。脳卒中またはTIAの原因は、例えば、心臓の左心房（LA）または心臓と脳との間の大きな動脈の1つ、例えば、頚動脈内の血栓であり得る。PEの場合、通常は下腿に位置する静脈血栓が原因となり得る。
【０００３】
成長している血栓で、血小板凝集の最後の共通のステップが、血小板の内側の架橋をもたらす、活性化糖タンパク質IIb／IIIa（GPIIb／IIIa）と血中フィブリノーゲンの結合によって特徴付けられる。糖タンパク質IIb／IIIa阻害剤の設計および開発（Scarborough R．M．、Gretler D．D．、J．Med．Chem．2000、43、3453〜3473）は、抗血小板および抗血栓活性に関する薬理学的研究で大きな関心が寄せられてきた。
【０００４】
しかしながら、医療従事者は、短期治療設定で血栓症を予防する化合物だけでなく、血栓を画像化する満足のいく方法も必要としている。
【０００５】
より具体的には、血栓画像化は、血栓形成部位の同定が治療効果の監視に必須である血栓溶解介入などの臨床用途にとって極めて重要である。
【０００６】
例えば、血栓画像化は、不要な予防的適用およびそれと共に危険な抗凝固処置（例えば、凝固能力低下による重度の出血）を回避するのに役立つ。
【０００７】
このような診断法から利益を得ることができる患者集団は巨大である。アメリカ心臓協会の「Heart disease and Stroke Statistics−2010 Update」によると、米国内だけで、1760万人が冠動脈心疾患を患っている。毎年、推定785000人のアメリカ人が新たな冠動脈発作にかかり、およそ470000人が再発性発作にかかる。毎年、約795000人の患者が新たなまたは再発性の発作を経験する。これらのうちの約610000例は初めての発作である。全発作のうち、87％が虚血性であり、そのほとんどは血栓塞栓性の原因による（Lloyd−Jones，Dら、Circulation、2010、121（7）：e46〜215頁）。米国の一過性脳虚血発作（TIA）の発生率は、1年におよそ200000〜500000例と推定され、集団有病率は2．3％であり、これは約500万人となる（Easton，J．D．ら、Stroke、2009、40（6）：2276〜2293頁）。TIAを有する個体は、90日脳卒中リスクが3．0〜17．3％であり、10年脳卒中リスクが18．8％である。合わせた10年脳卒中、心筋梗塞または血管死リスクは42．8％にすらなる（Clark，T．G．、M．F．G．MurphyおよびP．M．Rothwell、Journal of Neurology，Neurosurgery＆Psychiatry、2003年74（5）：577〜580頁）。
【０００８】
画像化は、血栓の同定における最先端である。現在、血栓画像化は、血管領域に応じた異なる様式によっている。頚動脈超音波を使用して頚動脈血栓を探し、経食道心エコー法（TEE）で心室腔血塊を探し、超音波で深部静脈血栓を探し、CTがPE検出のゴールドスタンダードとなっている。
【０００９】
2．先行技術の説明、解決すべき課題およびその解答
上記技術の成功にもかかわらず、血栓検出および監視のための画像化溶液が依然として強く必要とされている：第1に、サービスを十分に受けていない一定の血管領域が存在する。例えば、最善の画像化の努力にもかかわらず、虚血性脳卒中のなお30％〜40％は「潜在性」である、すなわち、不明確な原因のものである、または換言すれば、血栓塞栓症の原因は残念ながらまだ同定されていない（Guercini，F．ら、Journal of Thrombosis and Hemostasis、2008年6（4）：549〜554頁）。潜在性脳卒中の根底にある原因には、大動脈弓または頭蓋内動脈の粥状動脈硬化が含まれる。特に、弓または他の主要な血管の粥腫破裂が潜在性脳卒中の主な原因であると考えられており、日常的な方法で検出することが極めて困難である。経食道心エコー法（TEE）研究からの近年の臨床試験データは、潰瘍化した大動脈弓粥腫が潜在性脳卒中と関連しているが、大動脈弓の肥厚した血管壁の存在は虚血性脳卒中を予測しないことを示した。血栓標的化特異的画像化手法は、粥状動脈硬化巣の存在下で血塊を同定する大きな可能性を有する。
【００１０】
さらに、単一の様式を使用して体中の血栓を同定する手法が依然として強く必要とされている。例えば、TIAまたは脳卒中のフォローアップでは、塞栓の原因を探すために現在複数の検査が要求されている（Ciesienski，K．L．およびP．Caravan、Curr Cardiovasc Imaging Rep．、2010年4（1）：77〜84頁）。
【００１１】
糖タンパク質IIb／IIIa阻害剤の治療的適用（Scarborough R．M．、Gretler D．D．、J．Med．Chem．2000、43、3453〜3473）に、従来から大きな関心が寄せられてきた。一方、3種の糖タンパク質IIb／IIIa拮抗薬が商業的に入手可能である：組換え抗体（アブシキシマブ）、環状ヘプタペプチド（エプチフィバチド）および合成非ペプチド阻害剤（チロフィバン）。チロフィバン（商品名AGGRASTAT（登録商標））は、スルホンアミドのクラスに属し、上記医薬品の中で唯一の合成低分子である。Dugganら、1994、米国特許第5292756号明細書は、血栓形成によって引き起こされる疾患を予防および治療するための治療薬としてスルホンアミドフィブリノーゲン受容体拮抗薬を開示した。
【００１２】
高度に特異的な非ペプチド糖タンパク質IIb／IIIa拮抗薬が先行技術で記載されている（Damianoら、Thrombosis Research 2001 104、113〜126；Hoekstra，W．J．ら、J．Med．Chem．、1999、42、5254〜5265）。これらの化合物は、抗血小板および抗血栓活性を有する治療薬として有効な、GPIIb／IIIa拮抗薬であることが知られている（国際公開第99／21832号パンフレット、国際公開第97／41102号パンフレット、国際公開第95／08536号パンフレット、国際公開第96／29309号パンフレット、国際公開第97／33869号パンフレット、国際公開第9701／60813号パンフレット、米国特許第6515130号明細書参照）。
【００１３】
これまで、血栓画像化のための糖タンパク質IIb／IIIa特異的造影剤について報告している刊行物はほんのわずかしかない。米国特許第5508020号明細書は、Tc−99m結合部分を介してテクネチウム−99mで標識した哺乳動物体内の部位を画像化するための放射性標識ペプチド、このようなペプチドを作製するための方法およびキットを記載している。SPECTトレーサーアプチシド（apticide）（AcuTect（登録商標））は、血栓画像化の必要性を満たす手法である。アプチシドはGPIIb／IIIa受容体に特異的に結合するTc−99m標識ペプチドである。DeanおよびLister−Jamesは、活性化血小板の表面上のGPIIb／IIIa受容体に特異的に結合するペプチドを記載している（米国特許第5645815号明細書；米国特許第5830856号明細書および米国特許第6028056号明細書）。著者らは、アプチシドを使用した深部静脈血栓症の検出を示している。しかしながら、テクネチウム標識ペプチドの非特異的結合および低いシグナル対ノイズ比がこの方法の欠点であり、血栓画像化の低い解像度をもたらす。米国特許出願公開第2007／0189970号明細書は、糖タンパク質IIb／IIIaに結合することができる化合物を記載している。開示されている化合物は、陽電子放射同位体または11Cで標識されている。国際公開第2013／023795号パンフレットは、GPIIb／IIIa受容体に結合するための18F標識化合物および陽電子放射断層撮影法（PET）を使用することによって血栓を特異的に画像化するための診断薬としてのその使用を開示している。特異的血栓画像化のための格医学手法に加えて、複数の病態、特に、心血管、がん関連および炎症性病態の診断に有用な磁気共鳴画像法のための特異的高緩和度化合物が、米国特許出願公開第2004／112839号明細書および米国特許出願公開第2006／0239926号明細書に記載されている。Klinkら（Arterioscler Thromb Vasc Biol．2010、30（3）：403〜410）は、環状ペプチド（シクロ［Cys−Arg−Gly−Asp−Cys］）をGd−DOTA（P975）に対する小型リンカーとカップリングすることによるガドリニウム系造影剤を記載している。P975のガドリニウム1個当たりの緩和度は9L／（mmol s）であり、標準的なガドリニウム用量が血栓症のMRI検出に使用される（100μmol Gd／kg体重）。
【００１４】
Uppalら（Stroke 2010、41（6）：1271〜1277）は、フィブリン標的化ペプチド（EP2104R）をカップリングすることによるガドリニウム系造影剤を記載している。EP2104Rのガドリニウム1個当たりの緩和度は10．6L／（mmol s）である（Overoye−Chanら、J．Am．Chem．Soc．2008、130、6025〜6039）。血栓症のMRI画像法のために、30μmol Gd／kg体重（7．5μmol EP2104R／kg bw）のガドリニウム用量が使用される。
【００１５】
標的特異的結合剤（biovector）と常磁性キレートを会合する原理は長い間知られているが、特異的MRI造影剤は臨床試験ではまだ試験されていない。
【００１６】
しかしながら、標的化MRI手法はいくつかの困難を提示する。主な困難は、MRI技術の比較的低い感度から生じる。MRIの本質的に低い感度のために、検出可能なMR造影を生成するために標的部位での造影剤の高い局所濃度が要求される。臨床的に利用可能な造影剤の検出限界はインビトロおよび前臨床動物試験では約20μmol Gd／L（Ciesienskiら、Curr Cardiovasc Imaging Rep．2010、4（1）、77〜84）であり、堅牢な臨床用途では125μmol Gd／L（Caravanら、Chem．Soc．Rev．、2006、35、512〜523）である。
【００１７】
この要件を満たす1つの手法は、分子1個当たりの緩和度またはガドリニウム含量を増加させるというものである。
【００１８】
国際公開第2004／112839号パンフレットでは、9頁10〜15行において、「発明者らは特異的医用画像製品のために小型分子を使用することが好ましいという技術的バイアスに逆らった。実際、発明者らは、使用したHRキレートの立体障害が、特異的製品のその標的に対する親和性を損なわないことに気づくことができた。8〜20kD程度の分子量にもかかわらず、製品はその特異的標的部位に有効に到達する。」と述べられている。
【００１９】
本発明の化合物は、大きなガドリニウムキレート標識の立体障害にもかかわらず、高い緩和度およびGPIIbIIIa標的に対する高い親和性を有することがここで分かった。
【００２０】
本発明の化合物の驚くべき技術的効果は、有意な用量の減少の可能性である。
【００２１】
この驚くべき効果は、磁気共鳴画像法実験によって確認された。本発明の高親和性結合剤の使用濃度は、臨床的標準用量よりも有意に低かった（数桁）。確立された造影剤の使用される標準用量は100μmol Gd／kg体重であり、これは適用2分後に約590μmol Gd／Lの平均血漿濃度をもたらす（製品特性の要約：注射用Gadovist 1．0mmol／ml溶液、Fachinformation Gadovist（登録商標）1．0mmol／ml Injektionslosung）。記載される化合物の使用血漿濃度（0．8μmolガドリニウム／L）は、承認されている市販品よりも数桁低かった。
【００２２】
極めて低い用量を使用する驚くべき効果がインビボでのサル実験で確認された（総用量：4μmol Gd／kg体重は0．5μmol 分子／kg体重に相当する）。
Klinkら（100μmol Gd／kg体重、Arterioscler Thromb Vasc Biol．2010、30（3）：403〜410）およびUppalら（30μmol Gd／kg／体重、Stroke 2010、41（6）：1271〜1277）によって記載されている最先端の前臨床血栓特異的画像化MRI実験と比べて、投与量は少なくとも7．5倍〜最大25倍低かった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】米国特許第5292756号明細書
【特許文献２】国際公開第99／21832号パンフレット
【特許文献３】国際公開第97／41102号パンフレット
【特許文献４】国際公開第95／08536号パンフレット
【特許文献５】国際公開第96／29309号パンフレット
【特許文献６】国際公開第97／33869号パンフレット
【特許文献７】国際公開第9701／60813号パンフレット
【特許文献８】米国特許第6515130号明細書
【特許文献９】米国特許第5508020号明細書
【特許文献１０】米国特許第5645815号明細書
【特許文献１１】米国特許第5830856号明細書
【特許文献１２】米国特許第6028056号明細書
【特許文献１３】米国特許出願公開第2007／0189970号明細書
【特許文献１４】国際公開第2013／023795号パンフレット
【特許文献１５】米国特許出願公開第2004／112839号明細書
【特許文献１６】米国特許出願公開第2006／0239926号明細書
【特許文献１７】国際公開第2004／112839号パンフレット
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Scarborough R．M．、Gretler D．D．、J．Med．Chem．2000、43、3453〜3473
【非特許文献２】Lloyd−Jones，Dら、Circulation、2010、121（7）：e46〜215頁
【非特許文献３】Easton，J．D．ら、Stroke、2009、40（6）：2276〜2293頁
【非特許文献４】Clark，T．G．、M．F．G．MurphyおよびP．M．Rothwell、Journal of Neurology，Neurosurgery＆Psychiatry、2003年74（5）：577〜580頁
【非特許文献５】Guercini，F．ら、Journal of Thrombosis and Hemostasis、2008年6（4）：549〜554頁
【非特許文献６】Ciesienski，K．L．およびP．Caravan、Curr Cardiovasc Imaging Rep．、2010年4（1）：77〜84頁
【非特許文献７】Scarborough R．M．、Gretler D．D．、J．Med．Chem．2000、43、3453〜3473
【非特許文献８】Damianoら、Thrombosis Research 2001 104、113〜126
【非特許文献９】Hoekstra，W．J．ら、J．Med．Chem．、1999、42、5254〜5265
【非特許文献１０】Klinkら、Arterioscler Thromb Vasc Biol．2010、30（3）：403〜410
【非特許文献１１】Uppalら、Stroke 2010、41（6）：1271〜1277
【非特許文献１２】Overoye−Chanら、J．Am．Chem．Soc．2008、130、6025〜6039
【非特許文献１３】Ciesienskiら、Curr Cardiovasc Imaging Rep．2010、4（1）、77〜84
【非特許文献１４】Caravanら、Chem．Soc．Rev．、2006、35、512〜523
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
本発明は、糖タンパク質IIb／IIIaに結合し、画像診断、特に血栓の磁気共鳴画像法に使用することができる化合物に関する。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
開示される化合物は、十分な画像化感度と合わせて、糖タンパク質IIb／IIIa受容体への結合を可能にする。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】親和性アッセイ：第1のステップで、ヒト血小板から精製したヒトGPIIb／IIIaを96ウェル固体プレート上に固定した。48時間後、プレートを洗浄し、非特異的結合部位をRoti（登録商標）−Blockでブロッキングした。2．次のステップで、プレートを、増加する濃度の新規な化合物（阻害剤）と混合したトリチウム標識した既知のGPIIb／IIIa結合剤（3H）と同時にインキュベートした。阻害剤の親和性が高いほど、トリチウム標識した既知のGPIIb／IIIa結合剤（3H）の結合分画が少なくなる。阻害剤によって置き換えられていないトリチウム標識した化合物（3H）の分画を、マイクロプレートシンチレーションカウンターで測定した。
【図２】3Dターボスピンエコーシーケンス（1．5T、Siemens Avanto、小型末端コイル、TR 1050ms、TE 9．1ms、0．5×0．5×0．6mm3）を用いた、インビトロ血小板リッチ血栓およびインキュベーション溶液（実施例1）の磁気共鳴画像法。図2aでは、造影剤を添加していないインビトロ対照血栓が示されている。対照血栓のシグナル強度は、周囲媒体よりもわずかに高いが、図2bに示される実施例1でインキュベートしたインビトロ血栓のシグナルよりも明らかに低い。図2cでは、ヒト血漿中10μmol物質／Lの最終濃度の実施例1を含むインキュベーション溶液が表されている。シグナル強度はインビトロ血小板リッチ血栓2aおよび2bの周囲血漿溶液よりも高い。  図2bのインビトロ血栓を、図2cに示す溶液でインキュベートする。20分のインキュベーション期間後、血栓を血漿溶液で3回洗浄した。図2bのインキュベートしたインビトロ血栓のシグナル強度は、図2aの対照血栓よりも明らかに高いシグナルを示す。
【図３】3Dターボスピンエコーシーケンス（1．5T、Siemens Avanto、小型末端コイル、TR 1050ms、TE 9．1ms、0．5×0．5×0．6mm3）を用いた、インビトロ血小板リッチ血栓およびインキュベーション溶液（実施例1）の磁気共鳴画像法。図3aでは、造影剤を添加していないインビトロ対照血栓が示されている。対照血栓のシグナル強度は、周囲媒体よりもわずかに高いが、図3bに示される実施例1でインキュベートしたインビトロ血栓のシグナルよりも明らかに低い。図3cでは、ヒト血漿中0．1μmol物質／L（0．8μmol Gd／L）の最終濃度の実施例1を含むインキュベーション溶液が表されている。シグナル強度はインビトロ血小板リッチ血栓3aおよび3bの周囲血漿溶液に匹敵する。図3bのインビトロ血栓を、図3cに示す溶液でインキュベートする。20分のインキュベーション期間後、血栓を血漿溶液で3回洗浄した。図3bのインキュベートしたインビトロ血栓のシグナル強度は、図3aの対照血栓よりも明らかに高いシグナルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
第1の態様によると、本発明は、一般式（I）：
【化１】
2017506633.tif 000002
（式中、
Xは
【化２】
2017506633.tif 000003
から選択される基を表し、
Yは
【化３】
2017506633.tif 000004
を表し、
R1は水素、メチル、エチル、プロピルまたはイソ−プロピルを表し；
R2は水素、メチル、エチル、プロピルまたはイソ−プロピルを表し；
R3は水素、メチル、エチル、プロピルまたはイソ−プロピルを表し；
Gは
【化４】
2017506633.tif 000005
を表し、
R4は水素、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピルまたはベンジルを表し；
R5は水素、メチル、エチルまたはプロピルを表し；
R6は水素、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピルまたはベンジルを表し；
Mはガドリニウムを表し；
mは1または2を表し；
nは2、3、4、5または6の整数を表し；
qは0または1を表す）
の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物を網羅する。
【００２９】
本発明の化合物は、種々の所望の置換基の位置および性質に応じて、1個または複数の不斉中心を含み得る。不斉炭素原子は、（R）または（S）配置で存在し得るので、単一の不斉中心の場合にはラセミ混合物、また複数の不斉中心の場合にはジアステレオマー混合物をもたらし得る。特定の例では、所与の結合、例えば、特定の化合物の2個の置換芳香環を接合する中心結合の周りの回転が制限されるために非対称が存在する場合もある。
【００３０】
好ましい化合物は、より望ましい生物学的活性をもたらすものである。本発明の化合物の分離された、純粋なまたは部分的に精製された異性体および立体異性体あるいはラセミまたはジアステレオマー混合物も本発明の範囲に含まれる。このような材料の精製および分離は、当技術分野で知られている標準的技術によって達成することができる。
【００３１】
光学異性体は、従来法によるラセミ混合物の分割、例えば、光学活性酸もしくは塩基を用いたジアステレオ異性体塩の形成または共有結合性ジアステレオマーの形成によって得ることができる。適当な酸の例には、酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジトルオイル酒石酸およびカンファースルホン酸がある。ジアステレオ異性体の混合物は、当技術分野で知られている方法、例えば、クロマトグラフィーまたは分別結晶によって、その物理的および／または化学的違いに基づいて個々のジアステレオマーに分離することができる。その後、光学活性塩基または酸を分離したジアステレオマー塩から遊離させる。光学異性体の別の分離法は、エナンチオマーの分離を最大化するために選択してもよい、従来の誘導体化を用いるまたは用いない、キラルクロマトグラフィー（例えば、キラルHPLCカラム）の使用を含む。適当なキラルHPLCカラムは、Daicelによって製造されており、例えば、数ある中でも全て日常的に選択可能なChiracel ODおよびChiracel OJがある。誘導体化を用いるまたは用いない酵素分離も有用である。本発明の光学活性化合物はさらに、光学活性出発物質を利用したキラル合成によっても得ることができる。
【００３２】
異性体の異なる型を互いから限定するために、IUPAC Rules Section E（Pure Appl Chem 45、11〜30、1976）が参照される。
【００３３】
本発明は、単一の立体異性体として、または任意の比の前記立体異性体、例えば、R−もしくはS−異性体またはE−もしくはZ−異性体の任意の混合物として本発明の化合物の全ての可能な立体異性体を含む。本発明の化合物の単一の立体異性体、例えば、単一のエナンチオマーまたは単一のジアステレオマーの単離は、任意の適当な先行技術の方法、例えば、クロマトグラフィー、特にキラルクロマトグラフィーによって達成することができる。
【００３４】
さらに、本発明の化合物は、本発明の化合物の少なくとも1個の窒素が酸化されているという点で定義されるN−オキシドとして存在することができる。本発明は、全てのこのような可能なN−オキシドを含む。
【００３５】
本発明はまた、本明細書に開示される化合物の有用な形態、例えば、代謝産物、水和物、溶媒和物、プロドラッグ、塩、特に薬学的に許容される塩、および共沈物に関する。
【００３６】
本発明の化合物は水和物または溶媒和物として存在することができ、本発明の化合物は例えば、化合物の結晶格子の構造要素として極性溶媒、特に水、メタノールまたはエタノールを含む。極性溶媒、特に水の量は、化学量論比または非化学量論比で存在し得る。化学量論的溶媒和物の場合、例えば、水和物、半−、（セミ−）、一−、セスキ−、二−、三−、四−、五−等溶媒和物、または水和物がそれぞれ可能である。本発明は、全てのこのような水和物または溶媒和物を含む。
【００３７】
さらに、本発明の化合物は塩の形態で存在し得る。前記塩は任意の塩、有機または無機付加塩のいずれか、特に薬学で習慣的に使用される任意の薬学的に許容される有機または無機付加塩であり得る。
【００３８】
「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明の化合物の比較的非毒性の無機または有機酸付加塩を指す。例えば、S．M．Bergeら「Pharmaceutical Salts」、J．Pharm．Sci．1977、66、1〜19を参照されたい。具体的な中性塩の製造は米国特許第5560903号明細書に記載されている。
【００３９】
本発明の化合物の適当な薬学的に許容される塩は、例えば、十分に塩基性の、鎖中または環内に窒素原子を有する本発明の化合物の酸付加塩、例えば、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、重硫酸、リン酸または硝酸による酸付加塩、または有機酸、例えば、ギ酸、酢酸、アセト酢酸、ピルビン酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、ウンデカン酸、ラウリル酸、安息香酸、サリチル酸、2−（4−ヒドロキシベンゾイル）−安息香酸、ショウノウ酸、ケイヒ酸、シクロペンタンプロピオン酸、ジグルコン酸、3−ヒドロキシ−2−ナフトエ酸、ニコチン酸、パモ酸、ペクチニン酸、過硫酸、3−フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、2−ヒドロキシエタンスルホネート、イタコン酸、スルファミン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ドデシル硫酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、2−ナフタレンスルホン酸、ナフタリンジスルホン酸、カンファースルホン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、アジピン酸、アルギン酸、マレイン酸、フマル酸、D−グルコン酸、マンデル酸、アスコルビン酸、グルコヘプタン酸、グリセロリン酸、アスパラギン酸、スルホサリチル酸、ヘミ硫酸またはチオシアン酸による酸付加塩であり得る。
【００４０】
さらに、十分に酸性の本発明の化合物の別の適当な薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウムもしくはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えば、カルシウムもしくはマグネシウム塩、アンモニウム塩または生理学的に許容されるカチオンを与える有機塩基による塩、例えば、N−メチル−グルカミン、ジメチル−グルカミン、エチル−グルカミン、リジン、ジシクロヘキシルアミン、1，6−ヘキサジアミン、エタノールアミン、グルコサミン、サルコシン、セリノール、トリス−ヒドロキシ−メチル−アミノメタン、アミノプロパンジオール、sovak塩基、1−アミノ−2，3，4−ブタントリオールによる塩である。さらに、塩基性窒素含有基は、低級ハロゲン化アルキル（例えば、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルならびにブチル）；硫酸ジアルキル（例えば、硫酸ジメチル、ジエチルおよびジブチル）；および硫酸ジアミル、長鎖ハロゲン化物（例えば、塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルならびにステアリル）、ハロゲン化アラルキル（例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル）などの剤によって四級化され得る。
【００４１】
当業者であれば、請求される化合物の酸付加塩が、いくつかの既知の方法のいずれかを介して化合物と適当な無機酸または有機酸の反応によって調製され得ることをさらに認識するだろう。あるいは、本発明の酸性化合物のアルカリおよびアルカリ土類金属塩は、種々の既知の方法を介して本発明の化合物を適当な塩基と反応させることによって調製される。
【００４２】
本発明は、単一の塩として、または任意の比の前記塩の任意の混合物として本発明の化合物の全ての可能な塩を含む。
【００４３】
本文中、特に実験節において、本発明の中間体および実施例の合成について、化合物を対応する塩基または酸による塩型として言及する場合、それぞれの調製および／または精製工程によって得られる前記塩型の正確な化学量論的組成は、ほとんどの場合、未知である。
【００４４】
特に指定しない限り、例えば、「塩酸塩」、「トリフルオロアセテート」、「ナトリウム塩」または「xHCl」、「xCF3COOH」、「xNa＋」などの化学名または構造式の接尾辞は、化学量論的指定としてではなく、単なる塩型として理解されるべきである。
【００４５】
合成中間体もしくは実施例化合物またはこれらの塩を、（定義する場合）未知の化学量論的組成の水和物などの溶媒和物として、調製および／または精製工程によって得た場合にもこれが同様にあてはまる。
【００４６】
「血栓（複数可）」という用語は、全ての種類の凝血塊（静脈および動脈血栓）を記載するものである。「血栓（複数可）」という用語は、「血栓性堆積」および「血栓形成部位」などの句のいずれの用語も含む。血栓は通常、止血の血液凝固ステップの結果として、または病理学的に血栓性障害などの異なる原因の結果として生じる。本研究では、血栓を含む全ての血小板、ならびに血管樹のどこかで詰まった循環血栓（塞栓）も含まれる。
【００４７】
第2の態様では、本発明は、上記の一般式（I）：
（式中、
Xは
【化５】
2017506633.tif 000006
から選択される基を表し、
Yは
【化６】
2017506633.tif 000007
を表し、
R1は水素またはメチルを表し；
R2は水素またはメチルを表し；
R3は水素またはメチルを表し；
Gは
【化７】
2017506633.tif 000008
を表し、
R4は水素またはメチルを表し；
R5は水素またはメチルを表し；
R6は水素またはメチルを表し；
Mはガドリニウムを表し；
mは1または2を表し；
nは2、3、4、5または6の整数を表し；
qは0または1を表す）
の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物を網羅する。
【００４８】
第3の態様では、本発明は、上記の一般式（I）：
（式中、
Xは
【化８】
2017506633.tif 000009
から選択される基を表し、
Yは
【化９】
2017506633.tif 000010
を表し、
R1は水素を表し；
R2は水素を表し；
R3は水素を表し；
Gは
【化１０】
2017506633.tif 000011
を表し、
R4は水素またはメチルを表し；
R5は水素またはメチルを表し；
R6は水素を表し；
Mはガドリニウムを表し；
mは1を表し；
nは2、3または4の整数を表し；
qは0または1を表す）
の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物を網羅する。
【００４９】
第4の態様では、本発明は、上記の一般式（I）：
（式中、
Xは
【化１１】
2017506633.tif 000012
から選択される基を表し、
Yは
【化１２】
2017506633.tif 000013
を表し、
R1は水素を表し；
R2は水素を表し；
R3は水素を表し；
Gは
【化１３】
2017506633.tif 000014
を表し、
R4は水素またはメチルを表し；
R5は水素を表し；
R6は水素を表し；
Mはガドリニウムを表し；
mは1を表し；
nは3または4を表し；
qは0または1を表す）
の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物を網羅する。
【００５０】
第5の態様では、本発明は、上記の一般式（I）：
（式中、
Xは
【化１４】
2017506633.tif 000015
から選択される基を表し、
Yは
【化１５】
2017506633.tif 000016
を表し、
R1は水素を表し；
R2は水素を表し；
R3は水素を表し；
Gは
【化１６】
2017506633.tif 000017
を表し、
R4はメチルを表し；
R5は水素を表し；
R6は水素を表し；
Mはガドリニウムを表し；
mは1を表し；
nは4を表し；
qは1を表す）
の化合物、またはその立体異性体、互変異性体、N−オキシド、水和物、溶媒和物もしくは塩、またはこれらの混合物を網羅する。
【００５１】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Xは
【化１７】
2017506633.tif 000018
から選択される基を表す）
の化合物を網羅する。
【００５２】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Xは
【化１８】
2017506633.tif 000019
から選択される基を表す）
の化合物を網羅する。
【００５３】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Xは
【化１９】
2017506633.tif 000020
を表す）
の化合物を網羅する。
【００５４】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Xは
【化２０】
2017506633.tif 000021
を表す）
の化合物を網羅する。
【００５５】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Yは
【化２１】
2017506633.tif 000022
を表す）
の化合物を網羅する。
【００５６】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Yは
【化２２】
2017506633.tif 000023
を表す）
の化合物を網羅する。
【００５７】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Yは
【化２３】
2017506633.tif 000024
を表す）
の化合物を網羅する。
【００５８】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Yは
【化２４】
2017506633.tif 000025
を表す）
の化合物を網羅する。
【００５９】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R1は水素、メチル、エチル、プロピルまたはイソ−プロピルを表す）
の化合物を網羅する。
【００６０】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R1は水素またはメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００６１】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R1は水素を表す）
の化合物を網羅する。
【００６２】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R1はメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００６３】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R2は水素、メチル、エチル、プロピルまたはイソ−プロピルを表す）
の化合物を網羅する。
【００６４】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R2は水素またはメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００６５】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R2は水素を表す）
の化合物を網羅する。
【００６６】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R2はメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００６７】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R3は水素、メチル、エチル、プロピルまたはイソ−プロピルを表す）
の化合物を網羅する。
【００６８】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R3は水素またはメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００６９】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R3は水素を表す）
の化合物を網羅する。
【００７０】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R3はメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００７１】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Gは
【化２５】
2017506633.tif 000026
を表す）
の化合物を網羅する。
【００７２】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R4は水素、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピルまたはベンジルを表す）
の化合物を網羅する。
【００７３】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中
R4は水素またはメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００７４】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R4は水素を表す）
の化合物を網羅する。
【００７５】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R4はメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００７６】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中
R5は水素、メチル、エチルまたはプロピルを表す）
の化合物を網羅する。
【００７７】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R5は水素またはメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００７８】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R5は水素を表す）
の化合物を網羅する。
【００７９】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R5はメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００８０】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R6は水素、メチル、エチル、プロピル、イソ−プロピルまたはベンジルを表す）
の化合物を網羅する。
【００８１】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中
R6は水素またはメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００８２】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R6は水素を表す）
の化合物を網羅する。
【００８３】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
R6はメチルを表す）
の化合物を網羅する。
【００８４】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
Mはガドリニウムを表す）
の化合物を網羅する。
【００８５】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
mは1または2を表す）
の化合物を網羅する。
【００８６】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
mは1を表す）
の化合物を網羅する。
【００８７】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
mは2を表す）
の化合物を網羅する。
【００８８】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
nは2、3、4、5または6を表す）
の化合物を網羅する。
【００８９】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
nは2、3または4を表す）
の化合物を網羅する。
【００９０】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
nは3または4を表す）
の化合物を網羅する。
【００９１】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
nは3を表す）
の化合物を網羅する。
【００９２】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
nは4を表す）
の化合物を網羅する。
【００９３】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
qは0または1を表す）
の化合物を網羅する。
【００９４】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
qは0を表す）
の化合物を網羅する。
【００９５】
さらなる態様では、本発明は上記の一般式（I）（式中、
qは1を表す）
の化合物を網羅する。
【００９６】
さらなる態様では、本発明は、
オクタガドリニウム2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（N−｛2−［4，7，10−トリス（カルボキシラトメチル）−1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1−イル］プロパノイル｝グリシル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（5−｛（1S）−2−カルボキシ−1−［（｛（3R）−1−［3−（ピペリジン−4−イル）プロパノイル］ピペリジン−3−イル｝カルボニル）アミノ］エチル｝ピリジン−3−イル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド
からなる群から選択される一般式（I）の化合物を網羅する。
【００９７】
本発明の別の態様は、画像診断のための一般式（I）の化合物の使用である。
【００９８】
好ましくは、診断への本発明の化合物の使用が磁気共鳴画像法（MRI）を用いて行われる。
【００９９】
本発明はまた、診断薬を製造するための一般式（I）の化合物も含む。
【０１００】
本発明の別の態様は、診断薬を製造するための一般式（I）の化合物またはその混合物の使用である。
【０１０１】
本発明の別の態様は、血栓を画像化するための診断薬を製造するための一般式（I）の化合物またはその混合物の使用である。
【０１０２】
患者の体組織を画像化する方法は、患者に薬学的に許容される担体中の有効量の一般式（I）の1種または複数の化合物を投与するステップと、患者をNMR断層撮影に供するステップとを含む。このような方法は、米国特許第5560903号明細書に記載されている。
【０１０３】
診断薬を製造するため、例えば、ヒトまたは動物対象に投与するために、一般式（I）の化合物または混合物を好都合には医薬担体または賦形剤と一緒に製剤化する。本発明の造影剤は、好都合には医薬製剤助剤、例えば、安定剤、抗酸化剤、pH調整剤、香味剤などを含んでもよい。本発明による診断剤の製造は、当技術分野で既知の方法でも行われる（米国特許第5560903号明細書参照）。これらは非経口もしくは経腸投与用にまたは体腔への直接投与用に製剤化され得る。例えば、非経口製剤は、0．0001〜5mmol金属／kg体重、特に0．005〜0．5mmol金属／kg体重の本発明による式（I）の化合物の用量の滅菌溶液または懸濁液を含む。よって、本発明の剤は、生理学的に許容される担体媒体、好ましくは注射用水中の溶液、懸濁液、分散液、シロップ等などの慣用的な医薬製剤であり得る。造影剤を非経口投与用に製剤化する場合、これは好ましくは等張性または高張性であり、pH7．4に近い。
【０１０４】
さらなる態様では、本発明は、心筋梗塞、肺塞栓症、脳卒中および一過性脳虚血発作などの血栓塞栓性疾患を有する患者を診断する方法に関する。この方法は、a）このような診断を必要とするヒトに、上および本明細書に記載されるヒト中の化合物を検出するための本発明の化合物を投与するステップと、b）好ましくは磁気共鳴画像法（MRI）によって、化合物のヒトへの投与から生じるシグナルを測定するステップとを含む。
【０１０５】
さらなる態様では、本発明は、大動脈瘤、慢性血栓塞栓性肺高血圧症（CETPH）、心房細動および冠動脈血栓などの生命を脅かす疾患を有する患者を診断する方法に関する。この方法は、a）このような診断を必要とするヒトに、上および本明細書に記載されるヒト中の化合物を検出するための本発明の化合物を投与するステップと、b）好ましくは磁気共鳴画像法（MRI）によって、化合物のヒトへの投与から生じるシグナルを測定するステップとを含む。
【０１０６】
さらなる態様では、本発明は、心血管リスク患者を診断および健康監視する方法に関する。この方法は、a）このような診断を必要とするヒトに、上および本明細書に記載されるヒト中の化合物を検出するための本発明の化合物を投与するステップと、b）好ましくは磁気共鳴画像法（MRI）によって、化合物のヒトへの投与から生じるシグナルを測定するステップとを含む。
【０１０７】
一般的合成
本発明による化合物を以下のスキーム1および2により調製することができる。
【０１０８】
以下に記載されるスキームおよび手順は、本発明の一般式（I）の化合物への合成経路を示すが、限定的であることを意図していない。スキームに例示されている変換の順序を様々に修正することができることが当業者に自明である。そのため、スキームに例示されている変換の順序は限定的であることを意図していない。適当な保護機ならびにその導入および切断は当業者に周知である（例えば、T．W．GreeneおよびP．G．M．WutsのProtective Groups in Organic Synthesis、第3版、Wiley 1999参照）。具体的な例を後の段落で記載する。
【０１０９】
単独でまたは別の基の一部として本明細書で使用される「アミン保護基」という用語は、当業者に知られているまたは自明であり、それだけに限らないが、保護基、すなわち、カルバメート、アミド、イミド、N−アルキルアミン、N−アリールアミン、イミン、エナミン、ボラン、N−P保護基、N−スルフェニル、N−スルホニルおよびN−シリルのクラスから選択され、それだけに限らないが、参照により本明細書に含まれる、教科書GreeneおよびWuts、Protecting groups in Organic Synthesis、第3版、494〜653頁に記載されるものから選択される。「アミン保護基」は、好ましくはカルボベンジルオキシ（Cbz）、p−メトキシベンジルカルボニル（MozもしくはMeOZ）、tert−ブチルオキシカルボニル（BOC）、9−フルオレニルメチルオキシカルボニル（FMOC）、ベンジル（Bn）、p−メトキシベンジル（PMB）、3，4−ジメトキシベンジル（DMPM）、p−メトキシフェニル（PMP）、トリフェニルメチル（トリチル）、メトキシフェニルジフェニルメチル（MMT）である、または保護アミノ基は1，3−ジオキソ−1，3−ジヒドロ−2H−イソインドール−2−イル（フタルイミド）もしくはアジド基である。
【０１１０】
単独でまたは別の基の一部として本明細書で使用される「カルボキシル保護基」という用語は、当業者に知られているまたは自明であり、それだけに限らないが、保護基、すなわち、エステル、アミドおよびヒドラジドのクラスから選択され、それだけに限らないが、参照により本明細書に含まれる、教科書GreeneおよびWuts、Protecting groups in Organic Synthesis、第3版、369〜453頁に記載されるものから選択される。「カルボキシル保護基」は、好ましくはメチル、エチル、プロピル、ブチル、tert−ブチル、アリル、ベンジル、4−メトキシベンジルまたは4−メトキシフェニルである。
【０１１１】
一般的に、GP IIbIIIa結合剤部分の合成は文献に記述されている：
1）J．Med．Chem．1999、42、5254〜5265
2）Organic Progress Research＆Development 2003、7、866〜872
3）国際公開第2013／023795号パンフレット
立体選択的合成経路を実験部で詳細に記載する。ピリジニウムブロミドAへの主要な経路をスキーム1に例示する：
【化２６】
2017506633.tif 000027
スキーム1
PG：保護基
【０１１２】
臭化物Aと、金属錯体と結合したアルキンのパラジウム触媒Sonogashira反応が、スキーム2に示されるように一般式（I）の化合物を産する。好ましくは、最終的なカップリング反応を、水溶性パラジウム錯体、例えば、｛パラジウム［2−（ジメチルアミノメチル）フェニル］［1，3，5−トリアザ−7−ホスファアダマンタン］クロリド（Organometallics 2006、25、5768〜5773）またはパラジウム配位子としての三ナトリウム3，3’，3’’−ホスファントリイルトリス（4，6−ジメチルベンゼンスルホネート）（Eur．J．Org．Chem．2010、3678〜3683）の使用の下で、部分的水性溶媒中で行う。四量体または八量体アミド骨格によってアルキン官能基と架橋したガドリニウム含有単位の合成を、当業者に既知のペプチドカップリング技術によって達成し、実験部に詳細に記載する。
【化２７】
2017506633.tif 000028
スキーム2
一般式（I）の所望の金属錯体複合体の単離および精製を、限外濾過法と組み合わせて、慣用的なクロマトグラフィー法、ポリガドリニウム錯体の場合、例えば、分取HPLCまたはサイズ排除クロマトグラフィーによって達成することができる。
【０１１３】
試験部
【０１１４】
【表１Ａ】
2017506633.tif 000029
【表１Ｂ】
2017506633.tif 000030
【０１１５】
材料および計装
合成作業に使用する化学物質は、試薬等級品質のものとし、得たままで使用した。
【０１１６】
1H−NMRスペクトルはそれぞれCDCl3、D2OまたはDMSO−d6中で測定した（294K、Bruker DRX Avance 400MHz NMR分光計（B0＝9．40T）、共鳴周波数：1H用1H 300MHz分光計について400．20MHz）。化学シフトは、内部標準（δ＝0ppm）としてのナトリウム（トリメチルシリル）プロピオネート−d4（D2O）またはテトラメチルシラン（DMSO−d6）に対するppmで示す。
【０１１７】
実施例を以下のHPLCに基づく分析法によって分析および特徴付けして、特徴的な保持時間および質量スペクトルを測定した：
方法1：UPLC（ACN−HCOOH）：
機器：Waters Acquity UPLC−MS SQD 3001；カラム：Acquity UPLC BEH C18 1．7 50×2．1mm；溶離液A：水＋0．1％ギ酸、溶離液B：アセトニトリル；勾配：0〜1．6分1〜99％B、1．6〜2．0分99％B；流量0．8ml／分；温度：60℃；注入：2μl；DADスキャン：210〜400nm；ELSD。
【０１１８】
方法2：UPLC（ACN−HCOOH極性）：
機器：Waters Acquity UPLC−MS SQD 3001；カラム：Acquity UPLC BEH C18 1．7 50×2．1mm；溶離液A：水＋0．1％ギ酸、溶離液B：アセトニトリル；勾配：0〜1．7分1〜45％B、1．7〜2．0分45〜99％B；流量0．8ml／分；温度：60℃；注入：2μl；DADスキャン：210〜400nm；ELSD。
【実施例】
【０１１９】
実施例1
オクタガドリニウム2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（N−｛2−［4，7，10−トリス（カルボキシラトメチル）−1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1−イル］プロパノイル｝グリシル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（5−｛（1S）−2−カルボキシ−1−［（｛（3R）−1−［3−（ピペリジン−4−イル）プロパノイル］ピペリジン−3−イル｝カルボニル）アミノ］エチル｝ピリジン−3−イル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド
【化２８】
2017506633.tif 000031
【０１２０】
実施例1a
tert−ブチル3−アミノ−3−［5−ブロモピリジン−3−イル］プロパ−2−エノエート
【化２９】
2017506633.tif 000032
ジイソプロピルアミン（9．2mL、65mmol）を0℃でエチルマグネシウムブロミドのジエチルエーテル中3M溶液（10．9mL、32．7mmol）に添加し、さらなるジエチルエーテル（20mL）を添加した。0℃で1時間後、酢酸tert−ブチル（4．3mL、32．7mmol）を添加し、攪拌を30分間続けた。ジエチルエーテル（42mL）中5−ブロモピリジン−3−カルボニトリル（2．0g、10．9mmol）を0℃で添加した。2時間後、0℃で飽和塩化アンモニウム水溶液を添加した。相を分離し、水相をジエチルエーテルで抽出した。合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、0〜60％）によって精製するとtert−ブチル3−アミノ−3−（5−ブロモピリジン−3−イル）プロパ−2−エノエート1．12gが得られた。
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ＝1．44（s，9H），4．77（s，1H），7．15（br．，2H），8．22（t，1H），8．75（d，1H），8．76（d，1H）ppm．
【０１２１】
実施例1b
tert−ブチル（3S）−3−アミノ−3−（5−ブロモピリジン−3−イル）プロパノエート
【化３０】
2017506633.tif 000033
クロロ（1，5−シクロオクタジエン）ロジウム（I）二量体（39mg、80μmol）および（R）−（−）−1−［（S）−2−ジ−tert−ブチル−ホスフィノ）フェロセニル］エチルジ−（4−トリフルオロメチルフェニル）ホスフィン（108mg、160μmol）に、アルゴン雰囲気下、2，2，2−トリフルオロエタノール（5．8mL）を添加し、溶液を40分間攪拌した。圧力容器内の脱気2，2，2−トリフルオロエタノール（11．6mL）中tert−ブチル3−アミノ−3−（5−ブロモピリジン−3−イル）プロパ−2−エノエート（1．59g 5．32mmol）にロジウム触媒溶液を添加し、溶液を11barの水素圧力下50℃で22時間攪拌した。溶液を減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、12〜100％、引き続いて酢酸エチル中メタノール0〜15％）によって精製するとエナンチオマー豊富化した（enantiomerically enriched）tert−ブチル（3S）−3−アミノ−3−［5−（ベンジルオキシ）ピリジン−3−イル］プロパノエート1．16gが得られた。
1H−NMR（300MHz，CDCl3）：δ＝1．43（s，9H），2．59（d，2H），4．42（t，1H），7．92（t，1H），8．58（d，1H），8．53（d，1H）ppm．
α＝−17．6°（c＝1．0g／100mL、CHCl3）
【０１２２】
実施例1c
tert−ブチル4−｛3−［（3R）−3−｛［（2，5−ジオキソピロリジン−1−イル）オキシ］カルボニル｝ピペリジン−1−イル］−3−オキソプロピル｝ピペリジン−1−カルボキシレート
【化３１】
2017506633.tif 000034
1，2−ジメトキシエタン（13．5mL）中（3R）−1−｛3−［1−（tert−ブトキシカルボニル）ピペリジン−4−イル］プロパノイル｝ピペリジン−3−カルボン酸（1．91g、5．18mmol、Bioorg．Med．Chem．2005、13、4343〜4352、化合物10）に、N−ヒドロキシスクシンイミド（0．60g、5．18mmol）および1，3−ジシクロヘキシルカルボジイミド（1．18g、5．7mmol）を添加した。溶液を室温で4時間攪拌し、同時に沈殿が形成した。次いで、混合物を0℃に冷却し、濾過し、固体をジエチルエーテルで洗浄した。濾液およびジエチルエーテル洗液を合わせ、濃縮すると、粗tert−ブチル4−｛3−［（3R）−3−｛［（2，5−ジオキソピロリジン−1−イル）オキシ］カルボニル｝ピペリジン−1−イル］−3−オキソプロピル｝ピペリジン−1−カルボキシレート2．61gが得られた。
UPLC（ACN−HCOOH）：Rt＝1．13分。
MS（ES＋）：m／e＝466．31（M＋H）＋．
【０１２３】
実施例1d
tert−ブチル4−｛3−［（3R）−3−（｛（1S）−1−［5−ブロモピリジン−3−イル］−3−tert−ブトキシ−3−オキソプロピル｝カルバモイル）ピペリジン−1−イル］−3−オキソプロピル｝ピペリジン−1−カルボキシレート
【化３２】
2017506633.tif 000035
DMF（17mL）中tert−ブチル（3S）−3−アミノ−3−（5−ブロモピリジン−3−イル）プロパノエート（1．33g、4．42mmol）に、0℃でジクロロメタン（17mL）中tert−ブチル4−｛3−［（3R）−3−｛［（2，5−ジオキソピロリジン−1−イル）オキシ］カルボニル｝ピペリジン−1−イル］−3−オキソプロピル｝ピペリジン−1−カルボキシレート（2．54g、4．91mmol）およびトリエチルアミン（1．85mL、13．2mmol）を添加した。3時間後、飽和塩化アンモニウム水溶液を添加して混合物をクエンチし、相を分離し、水相をジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、12〜100％、引き続いて酢酸エチル中メタノール0〜15％）によって精製するとtert−ブチル4−｛3−［（3R）−3−（｛（1S）−1−［5−ブロモピリジン−3−イル］−3−tert−ブトキシ−3−オキソプロピル｝カルバモイル）ピペリジン−1−イル］−3−オキソプロピル｝ピペリジン−1−カルボキシレート2．1gが得られた。
UPLC（ACN−HCOOH）：Rt＝1．35分。
MS（ES＋）：m／e＝651．4／653．4（M＋H）＋．
【０１２４】
実施例1e
（3S）−3−（5−ブロモピリジン−3−イル）−3−［（｛（3R）−1−［3−（ピペリジン−4−イル）プロパノイル］ピペリジン−3−イル｝カルボニル）アミノ］プロパン酸
【化３３】
2017506633.tif 000036
tert−ブチル4−［3−（（3R）−3−｛［（1S）−1−（5−ブロモピリジン−3−イル）−3−tert−ブトキシ−3−オキソプロピル］カルバモイル｝ピペリジン−1−イル）−3−オキソプロピル］ピペリジン−1−カルボキシレート（600mg、0．94mmol）をギ酸に溶解し、12分間100℃に加熱した。溶媒を真空中で留去し、残渣を分取HPLC（C18−Chromatorex−10μm）によって精製した。（3S）−3−（5−ブロモピリジン−3−イル）−3−［（｛（3R）−1−［3−（ピペリジン−4−イル）プロパノイル］ピペリジン−3−イル｝
カルボニル）アミノ］プロパン酸330mgが得られた。
UPLC（ACN−HCOOH）：Rt＝0．57分。
MS（ES＋）：m／e＝495．2，497．2（M＋H）＋．
【０１２５】
実施例1f
2−［4−（3−ヒドロキシフェニル）ブチル］−1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオン
【化３４】
2017506633.tif 000037
3，5−ジブロモフェノール（6．0g、23．8mmol）、2−（ブタ−3−エン−1−イル）−1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオン（9．8g、49mmol）、酢酸パラジウム（II）（53mg、0．24mmol）およびトリス（2−メチルフェニル）ホスファン（145mg、0．48mmol）をアセトニトリル（125mL）およびトリエチルアミン（6．6mL）中90℃で5時間攪拌した。室温で15時間攪拌し、濃縮した後、2−［4−（3−ブロモ−5−ヒドロキシフェニル）ブタ−3−エン−1−イル］−1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオンおよび2，2’−［（5−ヒドロキシ−ベンゼン−1，3−ジイル）ジブタ−1−エン−1，4−ジイル］ビス（1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオン）の混合物が得られ、これをシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、0〜30％）によって分離するとブロモ中間体3．47gが得られた。2−［4−（3−ブロモ−5−ヒドロキシフェニル）ブタ−3−エン−1−イル］−1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオンをメタノール（230mL）、水（18mL）および酢酸エチル（192mL）に溶解し、水素雰囲気下、パラジウム炭（10％、437mg）の存在下、40℃で2．5時間攪拌した。反応混合物をceliteの通路を通して濾過し、減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、0〜60％）によって精製すると2−［4−（3−ヒドロキシフェニル）ブチル］−1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオン2．41gが得られた。
1H−NMR（300MHz，DMSO−d6）：δ＝1．41−1．67（m，4H），2．47（m，2H），3．58（t，2H），6．47−6．65（m，3H），6．96−7．10（t，1H），7．76−7．92（m，4H），9．21（s，1H）ppm．
【０１２６】
実施例1g
3−［4−（1，3−ジオキソ−1，3−ジヒドロ−2H−イソインドール−2−イル）ブチル］フェニルトリフルオロメタンスルホネート
【化３５】
2017506633.tif 000038
ピリジン（30mL）中2−［4−（3−ヒドロキシフェニル）ブチル］−1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオン（4．24g、14．4mmol）に0℃でトリフルオロメタンスルホン酸無水物（3．2mL、18．7mmol）を添加した。混合物を0℃で1時間攪拌し、水とジエチルエーテルの混合物を添加し、相を分離し、水相をジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機抽出物を0．5M塩酸で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶液を減圧下で濃縮すると同時に、トルエンを蒸留の終了前に2回添加し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、0〜70％）によって精製すると3−［4−（1，3−ジオキソ−1，3−ジヒドロ−2H−イソインドール−2−イル）ブチル］フェニルトリフルオロメタンスルホネート5．34gが得られた。
1H−NMR（300MHz，DMSO−d6）：δ＝1．50−1．69（m，4H），2．68（t，2H），3．55−3．67（t，2H），7．22−7．38（m，3H），7．46（t，1H），7．77−7．94（m，4H）ppm．
【０１２７】
実施例1h
2−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）−1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオン
【化３６】
2017506633.tif 000039
DMF（20mL）中3−［4−（1，3−ジオキソ−1，3−ジヒドロ−2H−イソインドール−2−イル）ブチル］フェニルトリフルオロメタンスルホネート（5．3g、12．5mmol）、ジクロロパラジウム（II）ビス（トリフェニルホスファン）（440mg、0．63mmol）、ヨウ化銅（120mg、0．63mmol）およびN，N−ジイソプロピルエチルアミン（11mL、63mmol）にDMF（11mL）中エチニル（トリメチル）シラン（8．7mL、63mmol）を50℃で11時間にわたって添加した。混合物を50℃で25時間攪拌すると同時に、DMF（5．6mL）中エチニル（トリメチル）シラン（4．4mL、32mmol）添加を18時間後に繰り返した。水とジエチルエーテルの混合物を添加し、相を分離し、水相をジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、0〜25％）によって精製すると2−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）−1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオン3．86gが得られた。
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ＝0．22（s，19H），1．48−1．65（m，4H），2．59（t，2H），3．59（t，2H），7．17−7．33（m，4H），7．75−7．91（m，4H）ppm．
【０１２８】
実施例1i
4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブタン−1−アミン
【化３７】
2017506633.tif 000040
THF（83mL）中2−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）−1H−イソインドール−1，3（2H）−ジオン（3．86g、10．3mmol）に、メチルヒドラジン（8．1mL、15．4mmol）を添加し、溶液を40℃で41時間攪拌すると同時に、沈殿が形成した。反応混合物を40mLの体積に濃縮し、0℃で濾過した。固体を少量の冷たいTHFで洗浄し、合わせた濾液を減圧下で濃縮すると同時に、トルエンを蒸留の終了前に2回添加すると、4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブタン−1−アミン2．63gが得られた。
1H−NMR（300MHz，DMSO−d6）：δ＝0．22（s，9H），1．26−1．41（m，2H），1．47−1．64（m，2H），2．52−2．62（m，4H），7．10−7．33（m，4H）ppm．
【０１２９】
実施例1j
N−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アラニンアミド
【化３８】
2017506633.tif 000041
DMF（40mL）中4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブタン−1−アミン（2．6g、9．7mmol）を、0℃でN−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］アラニンN−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（5．0g、10．2mmol）、N，N−ジイソプロピルエチルアミン（8．2mL、48．7mmol）およびHATU（5．2g、13．6mmol）のDMF（50mL）中新たに調製した溶液に添加した。1時間攪拌した後、混合物を冷却濾過し、濾液を濃縮すると同時に、残っている微量のDMFをトルエンの存在下で蒸留し、アミノ相シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、0〜40％）によって精製するとN−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アラニンアミド4．25gが得られた。
1H−NMR（300MHz，DMSO−d6）：δ＝0．22（s，9H），1．35−1．43（m，2H），1．36（s，18H），1．44−1．60（m，2H），2．92−3．21（m，4H），3．93（dd，1H），6．62（d，1H），6．71（t，1H），7．15−7．34（m，4H），7．80（t，1H）ppm．
【０１３０】
実施例1k
3−オキソ−3−［（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アミノ］プロパン−1，2−ジアミニウムジクロリド
【化３９】
2017506633.tif 000042
DMF（18．5mL）中N−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アラニンアミド（4．28g、8．0mmol）にジオキサン中塩酸（4M、18mL）を添加した。溶液を2つの圧力容器に分割し、これらを密閉し、マイクロ波反応器中80℃で16分間照射した。合わせた反応溶液を1，4−ジオキサン（300mL）で希釈し、50mLの体積に濃縮し、再度1，4−ジオキサン（200mL）で希釈した。混合物を攪拌すると同時に、沈殿が形成し、これを濾過によって回収すると3−オキソ−3−［（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アミノ］プロパン−1，2−ジアミニウムジクロリド1．77gが得られた。
1H−NMR（300MHz，DMSO−d6）：δ＝0．22（s，9H），1．46（quin，2H），1．61（m，2H），2．58（t，2H），3．02−3．14（m，1H），3．17−3．27（m，3H），4．19（t，1H），7．15−7．38（m，4H），8．58（br．，6H），8．82（t，1H）ppm．
【０１３１】
実施例1m
N−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］アラニル−3−（｛N−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］アラニル｝アミノ）−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アラニンアミド
【化４０】
2017506633.tif 000043
DMF（40mL）中3−オキソ−3−［（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アミノ］プロパン−1，2−ジアミニウムジクロリド（1．77g、4．38mmol）およびN，N−ジイソプロピルエチルアミン（4．4mL）を、0℃でN−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］−アラニンN−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（4．4g、9．19mmol）、N，N−ジイソプロピルエチルアミン（14mL）およびHATU（4．66g、12．3mmol）のDMF（50mL）中新たに調製した溶液に添加した。60分間攪拌した後、混合物を濃縮し、アミノ相シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、0〜100％）によって精製するとN−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］アラニル−3−（｛N−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］アラニル｝−アミノ）−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アラニンアミド3．37gが得られた。
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ＝0．23（s，9H），1．39（s，36H），1．46（quin，2H），1．59（quin，2H），2．58（t，2H），3．08−3．38（m，6H），3．91−4．09（m，2H），4．19−4．36（m，1H），6．19（br，1H），6．31（br，1H），6．45（br，1H），7．14−7．32（m，4H），7．45−7．69（br，2H）ppm．
【０１３２】
実施例1n
3−（｛（3−｛［2，3−ジアンモニオプロパノイル］アミノ｝−1−オキソ−1−［（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アミノ］プロパン−2−イル｝アミノ）−3−オキソプロパン−1，2−ジアミニウムテトラクロリド
【化４１】
2017506633.tif 000044
DMF（21mL）中N−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］アラニル−3−（｛N−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］アラニル｝アミノ）−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アラニンアミド（4．48g、4．46mmol）に、ジオキサン中塩酸（4M、33mL）を添加した。反応容器を密閉し、マイクロ波反応器中80℃で10分間照射した。室温に冷却した後、攪拌しながら反応混合物を1，4−ジオキサン（360mL）にゆっくり添加した。形成した沈殿を濾過によって回収すると3−（｛（3−｛［2，3−ジアンモニオプロパノイル］アミノ｝−1−オキソ−1−［（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アミノ］プロパン−2−イル｝アミノ）−3−オキソプロパン−1，2−ジアミニウムテトラクロリド2．78gが得られた。
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ＝0．22（s，9H），1．42−1．48（m，2H），1．53−1．58（m，2H），2．53−2．62（m，2H），3．07−3．11（m，2H），3．50（br，6H），4．26（br．，1H），4．33（br．，1H），4．39−4．53（m，1H），7．16−7．36（m，4H），8．40−9．10（m，12H）ppm．
【０１３３】
実施例1o
2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド
【化４２】
2017506633.tif 000045
DMF（16mL）中3−（｛（3−｛［2，3−ジアンモニオプロパノイル］アミノ｝−1−オキソ−1−［（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）アミノ］プロパン−2−イル｝アミノ）−3−オキソプロパン−1，2−ジアミニウムテトラクロリド（1．0g、1．39mmol）およびN，N−ジイソプロピルエチルアミン（4．7mL）を、20℃でN−（tert−ブトキシカルボニル）−3−［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］−アラニンN−シクロヘキシルシクロヘキサンアミン（3．1g、6．37mmol）およびHATU（2．95g、7．76mmol）のDMF（16mL）およびN，N−ジイソプロピルエチルアミン（4．7mL）中新たに調製した溶液に添加した。1時間攪拌し、6℃で18時間保管した後、冷混合物を濾過し、沈殿をDMFで洗浄した。濾液を濃縮し、トルエンと共蒸留し、残渣をアミノ相シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中酢酸エチル、0〜100％）によって精製すると2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド1．38gが得られた。
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ＝0．23（s，9H），1．39（s，36H），1．46（quin，2H），1．59（quin，2H），2．58（t，2H），3．08−3．38（m，6H），3．91−4．09（m，2H），4．19−4．36（m，1H），6．19（br，1H），6．31（br，1H），6．45（br，1H），7．14−7．32（m，4H），7．45−7．69（br，2H）ppm．
【０１３４】
実施例1p
2，3−ビス−（｛2，3−ビス［（2，3−ジアンモニオプロパノイル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミドオクタクロリド
【化４３】
2017506633.tif 000046
DMF（7．8mL）中2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（tert−ブトキシカルボニル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド（1．15g、0．7mmol）に、ジオキサン中塩酸（4M、7．8mL）を添加した。反応容器を密閉し、マイクロ波反応器中80℃で10分間照射した。さらなるジオキサン中塩酸（4M、4mL）およびDMF（6mL）を濁った混合物に添加し、マイクロ波反応器中80℃で10分間の照射を繰り返した。室温に冷却した後、攪拌しながら溶液を1，4−ジオキサン（100mL）にゆっくり添加した。形成した沈殿を濾過によって回収すると2，3−ビス−（｛2，3−ビス［（2，3−ジアンモニオプロパノイル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミドオクタクロリド810mgが得られた。
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ＝0．22（s，9H），1．44（br，2H），1．55（br，2H），2．53−2．62（m，2H），3．08（br，2H），3．30−3．78（br．m，21H），4．28（br．，3H），4．43（br．，2H），4．53（br．，1H），4．64（br．，1H），7．20−7．36（m，4H），8．40−9．10（br．m，24H）ppm．
【０１３５】
実施例1q
オクタガドリニウム2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（N−｛2−［4，7，10−トリス（カルボキシラトメチル）−1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1−イル］プロパノイル｝グリシル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド
【化４４】
2017506633.tif 000047
ガドリニウム2，2’，2’’−［10−（1−｛［2−（4−ニトロフェノキシ）−2−オキソエチル］アミノ｝−1−オキソプロパン−2−イル）−1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1，4，7−トリイル］トリアセテート（2．43g、3．2mmol）を固体として60℃でDMSO（8．5mL）、DMF（9．0mL）およびピリジン（0．6mL）中2，3−ビス−（｛2，3−ビス［（2，3−ジアンモニオプロパノイル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミドオクタクロリド（200mg、170μmol）に添加した。混合物を60℃で6日間攪拌すると同時に、トリエチルアミンを添加し（1日目：33μL、4日目：153μL、5日目：120μL）、4日目の後にさらなるDMF（8．0mL）およびDMSO（12mL）によって希釈した。ガドリニウム2，2’，2’’−［10−（1−｛［2−（4−ニトロフェノキシ）−2−オキソエチル］アミノ｝−1−オキソプロパン−2−イル）−1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1，4，7−トリイル］トリアセテート（1．0g、1．3mmol）の添加を4日目の後に繰り返した。混合物を真空下で濃縮し、水で希釈し、水酸化ナトリウム水溶液によってpH7に調整し、低分子量成分を限外濾過（酢酸セルロース膜、最小NMWL 5000g／mol、Millipore）を介して分離した。保持液（retentate）を回収すると部分的に脱シリル化したオクタガドリニウム2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（N−｛2−［4，7，10−トリス（カルボキシラトメチル）−1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1−イル］プロパノイル｝グリシル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド0．69gが得られた。
UPLC（ACN−HCOOH極性）：Rt＝0．81分。
MS（ES−）：m／e＝2870．0（M−2H）2−．
【０１３６】
実施例1r
オクタガドリニウム2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（N−｛2−［4，7，10−トリス（カルボキシラトメチル）−1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1−イル］プロパノイル｝グリシル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（5−｛（1S）−2−カルボキシ−1−［（｛（3R）−1−［3−（ピペリジン−4−イル）プロパノイル］ピペリジン−3−イル｝カルボニル）アミノ］エチル｝ピリジン−3−イル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド
（3S）−3−（5−ブロモピリジン−3−イル）−3−［（｛（3R）−1−［3−（ピペリジン−4−イル）プロパノイル］ピペリジン−3−イル｝カルボニル）アミノ］プロパン酸（13mg、26μmol）、トリエチルアミン（20μL、130μmol）、ならびに水（0．3mL）およびアセトニトリル（0．7mL）中テトラメチルアンモニウムフルオリド（1．2mg、13μmol）に、酢酸パラジウム（II）（6．0mg、27μmol）を水（7mL）中三ナトリウム3，3’，3’’−ホスファントリイルトリス（4，6−ジメチルベンゼンスルホネート）（70mg、107μmol）と30分間80℃に加熱することによって調製した赤色触媒溶液1．4mLを添加した。脱気水（20mL）中オクタガドリニウム2，3−ビス−｛［2，3−ビス（｛2，3−ビス［（N−｛2−［4，7，10−トリス（カルボキシラトメチル）−1，4，7，10−テトラアザシクロドデカン−1−イル］プロパノイル｝グリシル）アミノ］プロパノイル｝アミノ）プロパノイル］アミノ｝−N−（4−｛3−［（トリメチルシリル）エチニル］フェニル｝ブチル）プロパンアミド（302mg、52μmol）を60℃で10時間にわたって添加した。混合物を60℃でさらに15時間加熱すると同時に、前もって調製したパラジウム触媒溶液（0．7mL）の添加を繰り返した。室温に冷却した後、混合物を濃縮し、残渣を水（150mL）で希釈し、酢酸セルロース膜、最小NMWL 10000g／mol（Millipore）を通して濾過した。濾液を回収し、限外濾過を酢酸セルロース膜、最小NMWL 5000g／mol（Millipore）を通して繰り返した。保持液を濃縮し、分取HPLC（C18−YMC ODS AQ−10μm、水中アセトニトリル＋0．1％ギ酸、1％〜25％）によって精製すると、濃縮後に標記化合物14．4mgが得られた。
UPLC（ACN−HCOOH極性）：Rt＝0．84分。
MS（ES−）：m／e＝3040．6（M−2H）2−．
【０１３７】
基準（参照）化合物
（3S）−3−［（｛（3R）−1−［3−（ピペリジン−4−イル）プロパノイル］ピペリジン−3−イル｝カルボニル）アミノ］−3−｛6−［3H］−ピリジン−3−イル｝プロパン酸
【化４５】
2017506633.tif 000048
（3S）−3−（6−ブロモピリジン−3−イル）−3−｛［（3R）−1−（3−ピペリジン−4−イル−プロパノイル）ピペリジン−3−カルボニル］アミノ｝プロパン酸（1．85mg、3．73μmol）をDMF（500μL）とトリエチルアミン（25μL）の混合物に溶解した。この溶液に、パラジウム炭（20％）（6．45mg）を添加し、混合物をトリチウム多岐管と接続してトリチウムガスを用いて一晩トリチウム標識した。その後、反応混合物を3回多岐管中低温維持して（cryostatically）蒸発させた。得られた粗生成物を半分取HPLC（Kromasil 100 C8 5μm（250×4．6mm）、溶離液：35mMアンモニア／メタノール、流量：1mL／分）で精製した。回収した分画は2061MBqの（S）−3−｛5−3H−ピリジン−3−イル｝−3−｛［（R）−1−（3−ピペリジン−4−イル−プロパノイル）ピペリジン−3−カルボニル］アミノ｝プロパン酸（放射化学収率：12．6％；放射化学純度：98％；比放射能：7．81Ci／mmol）を含んでいた。
【０１３８】
実施例2
ヒトGPIIb／IIIa受容体に対する試験化合物の親和性
使用したGPIIb／IIIa親和性アッセイの手順を図1に模式的に示す。
精製ヒト糖タンパク質IIb／IIIa（20mM Tris−HCl、0．1M NaCl、0．1％Triton X−100、1mM CaCl2、0．05％NaN3、50％グリセロール、pH7．4）をEnzyme Research Laboratories Inc．（South Bend、IN）から購入した。GPIIb／IIIa受容体を、0．01％ウシ血清アルブミン（ウシ血清からのアルブミン−凍結乾燥粉末、≧96％、Sigma）を含むリン酸緩衝食塩水（カルシウムおよびマグネシウムを含むダルベッコリン酸緩衝食塩水（D−PBS（＋））、GIBCO（登録商標）、Invitrogen）に希釈した。
GPIIb／IIIa受容体を、277Kおよび280Kで、ならびに0．1μg／ウェル〜1μg／ウェルの濃度で、96ウェル固体プレート（Immuno Plate MaxiSorp（商標）、Nunc、Roskilde、デンマーク）に48時間、少なくとも（100μ／ウェル、48〜最高96時間）固定した。陰性対照として、プレートの一列（n＝8）を2％ウシ血清アルブミン（200μL／ウェル、ウシ血清からのアルブミン−凍結乾燥粉末、≧96％、Sigma、D−PBS（＋）に希釈）とインキュベートした。
洗浄緩衝液（230μL／ウェル、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（D−PBS（−））はカルシウムもマグネシウムも含まない、GIBCO（登録商標）、Invitrogen）で3回洗浄した後、プレートを2％ウシ血清アルブミン（ウシ血清からのアルブミン−凍結乾燥粉末、≧96％、Sigma）を含む特別なブロッキング溶液（200μL／ウェル、Roti（登録商標）−Block、Car Roth GmbH Co KG、Karlsruhe）と室温で1時間インキュベートすることによって、残りの露出したプラスチックおよび非特異的結合部位をブロッキングした。
洗浄緩衝液で3回洗浄した後、トリチウム標識した基準化合物（60nM、3H標識化合物）50μLおよび新規な化合物（阻害剤）50μLを各ウェルに同時に添加し、室温で1時間インキュベートした。数種類の濃度の各新規阻害剤（0．1、1、2、5、10、20、50、100、200、500、1000、2000、5000、10000および20000nM）を調べた。阻害剤の各濃度で4連の測定を行った。試験した阻害剤についての結果を表1に要約する。
トリチウム標識した基準化合物の最大値を、阻害剤を添加しないで測定した（n＝8）。3H−基準化合物の非特異的結合を除外するために、糖タンパク質受容体を含まないウェルを陰性対照（n＝12、単にGPIIb／IIIa受容体を含まないだけで同一の処理）として使用した。
1時間後、プレートをリン酸緩衝食塩水（200μL／ウェル、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（D−PBS（＋））、GIBCO（登録商標）、Invitrogen）で3回洗浄した。次いで、液体シンチレーションカクテル（MicroScint（商標）40水溶液、Perkin Elmer）140μLを各ウェルに添加した。室温で15分後、プレートをマイクロプレートシンチレーションカウンター（TopCount NXT v2．13、Perkin Elmer、Packard Instrument Company）で測定した。
図1は、GPIIb／IIIaアッセイの概略図を示している。第1のステップで、ヒト血小板から精製したヒト糖タンパク質IIb／IIIaを96ウェル固体プレート上に固定した。48時間後、少なくともプレートを洗浄し、非特異的結合部位をRoti（登録商標）−Blockでブロッキングした。2．次のステップで、プレートをトリチウム標識基準化合物および新規な低分子化合物（阻害剤）と同時にインキュベートした。3．阻害剤の親和性が高いほど、基準化合物の結合分画が少ない。阻害剤によって置き換えられていないトリチウム標識した基準化合物の分画を、マイクロプレートシンチレーションカウンターで測定した。阻害剤の親和性が高いほど、トリチウム標識した基準化合物の結合分画が少ない。このアッセイによって、親和性（IC50値）を測定することができた。上記試験は、式（I）の化合物が血栓を画像化するための造影剤として有用であることを示している。結果を表1に要約する。
【０１３９】
【表２】
2017506633.tif 000049
【０１４０】
実施例3
試験化合物とヒト活性化血小板の結合
各実験のために、新鮮な血液を10mLクエン酸塩チューブ（Sarstedt S−Monovette 02．1067．001、10mL、クエン酸塩3．13％）を用いて有志者から採取した。10mLクエン酸塩チューブを10回慎重に反転させて血液および抗凝固薬を混合した。遠心分離（一体型回転および旋回装置を備えるHeraeus miniTherm CTT、旋回速度：19回転／分、Heraeus Instruments GmbH、Hanau／ドイツ）まで、チューブを37℃の温度でインキュベーターで保管した。
血漿調製のために、チューブ遠心分離を室温において1811gで15分間行った（Eppendorf、遠心分離5810R）。血小板リッチ血漿を作製するために、室温において201gで15分間遠心分離した。チューブを室温で30分間静置してよい分離を得た。分離した血小板リッチ血漿を最終的に453gでさらに3分間遠心分離して残りの赤血球を除去した。5μMの最終濃度のアデノシン二リン酸（ADP、Sigma）を用いて、血小板リッチ血漿を活性化した。活性化血小板リッチ血漿を20分間および異なる濃度のガドリニウム標識化合物と3分間インキュベートし、その後、1360gで3分間遠心分離した。上清20μLを取って濃度を測定した（n＝3）。ペレットを再懸濁し、血漿少なくとも750μLで2回洗浄し、その後、血漿750μLおよび塩化カルシウム50μL（50μL 2％）に再分散した。誘導結合プラズマ質量分析（ICP−MS Agilent 7500a）を用いて、上清およびペレットのガドリニウム濃度を測定した。
10μM、1μMおよび0．1μMのインキュベーション濃度のガドリニウム標識化合物についての結果を表2に要約する。
【０１４１】
【表３】
2017506633.tif 000050
【０１４２】
実施例4
磁気共鳴画像法
MRI画像実験を血小板リッチ血漿で行った。新鮮な血液を用いた血小板リッチ血漿の調製は、LK JenningsらBlood 1986 1、173〜179に記載されているが、遠心分離手順に関して修正した。手短に言えば、新鮮な血液を10mLクエン酸塩チューブ（Sarstedt S−Monovette 02．1067．001、10mL、クエン酸塩3．13％）を用いて有志者から採取した。10mLクエン酸塩チューブを10回慎重に反転させて血液および抗凝固薬を混合した。血液試料を室温において110gで15分間遠心分離した（Eppendorf、遠心分離5810R）。チューブを室温で30分間保管してよい分離を得た。分離した血漿分画を室温において240gで3分間遠心分離して残りの赤血球を除去した。赤血球ペレットを除去した。5μmol／Lの最終濃度のアデノシン二リン酸（ADP、Sigma）を用いて、上清中の血小板を活性化した。
活性化血小板リッチ血漿溶液を実施例1で37℃において20分間インキュベートして10μmol物質／L（図2）および0．1μmol物質／L（図3）の最終濃度を達成した。インキュベーション後、試料を720gで3分間遠心分離した。上清を除去し、ペレットを、繰り返しの再分散およびその後の遠心分離によって3回ヒト血漿750μLで洗浄した。最後の洗浄ステップで、塩化カルシウム（70μL 2％）をヒト血漿に添加して血小板凝集を誘導した。40分後、得られた血小板リッチ血栓を2．0mLチューブ（2．0mL Eppendorf微量遠心管）に固定し、ヒト血漿の磁気共鳴画像法を室温で行った。
小型末端コイルを備えた臨床1．5Tシステム（Siemens Avanto）を用いて画像法を行った。繰り返し時間（TR）1050msおよびエコー時間9．1msおよびターボ因子25のT1加重3Dターボスピンエコーシーケンス（3D TSE）を使用した。3Dブロックはそれぞれ切片厚さ0．6mmの18枚の切片を含んでいる。3D TSEシーケンスの空間分解能は、256×172×18ピクセルの画像マトリックスで0．5×0．5×0．6mm3であった。シグナル平均値の数字は16であり、得られた全取得時間は17分41秒であった。
磁気共鳴画像法結果を図2および図3に示す。
図2aでは、造影剤を添加していないインビトロ対照血栓が示されている。対照血栓のシグナル強度は、周囲媒体よりもわずかに高いが、図2bに示される実施例1でインキュベートしたインビトロ血栓のシグナルよりも明らかに低い。図2cでは、ヒト血漿中10μmol物質／Lの最終濃度の実施例1を含むインキュベーション溶液が表されている。シグナル強度はインビトロ血小板リッチ血栓2aおよび2bの周囲血漿溶液よりも高い。
図2bのインビトロ血栓を、図2cに示す溶液でインキュベートする。20分のインキュベーション期間後、血栓を血漿溶液で3回洗浄した。図2bのインキュベートしたインビトロ血栓のシグナル強度は、図2aの対照血栓よりも明らかに高いシグナルを示す。
図3aでは、造影剤を添加していないインビトロ対照血栓が示されている。対照血栓のシグナル強度は、周囲媒体よりもわずかに高いが、図3bに示される実施例1でインキュベートしたインビトロ血栓のシグナルよりも明らかに低い。図3cでは、ヒト血漿中0．1μmol物質／L（0．8μmol Gd／L）の最終濃度の実施例1を含むインキュベーション溶液が表されている。シグナル強度はインビトロ血小板リッチ血栓3aおよび3bの周囲血漿溶液に匹敵する。図3bのインビトロ血栓を、図3cに示す溶液でインキュベートする。20分のインキュベーション期間後、血栓を血漿溶液で3回洗浄した。図3bのインキュベートしたインビトロ血栓のシグナル強度は、図3aの対照血栓よりも明らかに高いシグナルを示す。
【０１４３】
実施例5
カニクイザルにおける得意的血栓結合
実施例1に記載される化合物の特異的結合をカニクイザル（雌、3．0kg体重）で調べた。
サルをキシラジン（Rompun（登録商標）、Bayer HealthCare、Leverkusen、ドイツ）、0．12mL／Kgおよびケタミン（Ketavet（登録商標）、Pfizer）0．12mL／Kg体重の混合物で筋肉内麻酔した。試験の間、必要に応じて、少量のキシラジン／ケタミン（1＋1）を筋肉内注射した。左総頚動脈を塩化鉄III溶液（10％）に10分間さらした。血栓誘導後、サルに1μmolガドリニウム／kg体重（0．125μmol分子／kg体重に相当する）を静脈内で受けさせた。その後、右頚動脈を塩化鉄III溶液（10％）に8分間さらし、サルに1μmolガドリニウム／kg体重の反復投与を静脈内で受けさせた。
最初の2回の造影剤適用後、右頚動脈を外科的に露出させ、紙やすり（600−CAMI Grit designation）によって事前に粗面化したポリエチレンチューブ（INTRAMEDIC Polyethylene Tubing、Clay Adams、PE50）を容器に挿入し、下行大動脈に進め、そこに30分間留めてチューブの粗面上に血栓を発達させた。カテーテル処置30分および90分後、サルに1μmolガドリニウム／kg体重（0．125μmol分子／kg体重に相当する）を静脈内で受けさせた。最後の造影剤適用40分後、ペントバルビタール（Narcoren）を用いて動物を屠殺した。血液、左および右頚動脈の血栓、右頚動脈、左頚動脈、頚静脈および大動脈中のガドリニウム濃度を、誘導結合プラズマ質量分析（ICP−MS Agilent 7500a）を用いて測定した。データを表3に要約する。
【０１４４】
【表４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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