(57)【要約】  病理学的プロセスの一部として血管新生又は新生血管形成が関与する眼障害を治療する方法。こうしたタイプの網膜障害は、（ａ）網膜血管障害（たとえば、糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞、及び未熟児網膜症）、（ｂ）網膜下新生血管障害（たとえば、新生血管加齢性黄斑変性、眼ヒストプラスマ症、病的近視）、（ｃ）眼内腫瘍（たとえば、眼黒色腫、眼リンパ腫、及び網膜芽細胞腫）として分類可能である。これらの眼障害の治療は、少なくとも１種の追加のバイオ活性剤と任意選択的に組み合わせて、有効量のヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）アンタゴニスト、黄体形成ホルモン（ＬＨ）アンタゴニスト、又はｈＣＧ／ＬＨレセプターアンタゴニストを投与することを含む。
2017521452.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要とされる患者において眼障害の可能性を低減するか又はその進行を阻害する方法であって、前記眼障害の影響を改善するのに有効な追加のバイオ活性剤と任意選択的に組み合わせて有効量のｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストを前記患者に投与することを含む方法。
【請求項２】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが１５０ｋＤａ未満の分子量を有する低分子エンティティーである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが２０〜８０ｋＤａの分子量を有する低分子エンティティーである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが眼に局所適用される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが３０〜５０ｋＤａの分子量を有する低分子エンティティーである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが眼に局所適用される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが脱グリコシル化ｈＣＧ、突然変異ｈＣＧ、又は脱グリコシル化もされているｈＣＧ突然変異体である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが脱グリコシル化ｈＣＧである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが突然変異ｈＣＧである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが脱グリコシル化もされている突然変異ｈＣＧである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記脱グリコシル化ｈＣＧが天然に存在するｈＣＧよりも少ないＮ結合炭水化物を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記脱グリコシル化ｈＣＧが天然に存在するｈＣＧよりも少なくとも５５％少ない炭水化物を有する、請求項８又は１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記脱グリコシル化ｈＣＧが天然に存在するｈＣＧよりも少なくとも９５％少ない炭水化物を有する、請求項８又は１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが追加のバイオ活性剤と組み合わせて共投与される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記追加のバイオ活性剤が、ラニビズマブ、アフリベルセプト、ペガプタニブ(pegatanib)、ベルテポルフィン、トリアムシノロン、及びベバシズマブからなる群から選択される少なくとも１種の作用剤である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記眼障害が網膜障害である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記眼障害が糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞、及び未熟児網膜症からなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記眼障害が、黄斑変性、眼ヒストプラスマ症、及び病的近視からなる群から選択される網膜下新生血管障害の群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記眼障害が、ｈＣＧ又はＬＨを分泌することが知られていない眼内腫瘍からなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストがｈＣＧ／ＬＨ抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
担体、添加剤、及び／又は賦形剤と組み合わせて、ラニビズマブ、アフリベルセプト、ペガプタニブ(pegatanib)、ベルテポルフィン、トリアムシノロン、及びベバシズマブからなる群から選択される少なくとも１種の作用剤と組み合わされた有効量のｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストを含む医薬組成物。
【請求項２２】
２０〜８０ｋＤａの分子量を有する低分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストの眼科用溶液を含む医薬組成物。
【請求項２３】
前記低分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが３０〜５０ｋＤａの分子量を有する、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
２０〜８０ｋＤａの分子量を有する低分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストの局所適用点眼剤溶液を含む医薬組成物。
【請求項２５】
前記低分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが３０〜５０ｋＤａの分子量を有する、請求項２４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、ヒト絨毛性ゴナドトロピンアンタゴニストを利用した新生血管形成が関与する眼障害（たとえば、糖尿病性網膜症、加齢性黄斑変性、未熟児網膜症）の進行の予防方法という名称で２０１４年７月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／０２４，６０９号明細書に基づく優先権の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、眼障害の治療及び／又は予防の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
高レベルの血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）は、網膜及び網膜下の新生血管形成（病的血管の成長）が関与する眼障害の進行に関連することが知られている。ＶＥＧＦは、内皮細胞成長及び新生血管形成を刺激し、且つ網膜血管透過性を増加させる。そのほかに、ＶＥＧＦの過剰発現は、腫瘍進行に関連することが知られている。
【０００４】
病的血管の成長が関与する眼障害の例は、以下のように分類可能である。これらの眼障害のほとんどはＶＥＧＦ関連である（すなわち、高ＶＥＧＦレベルがそれらの進行に寄与しうる）。
（ａ）網膜血管障害（糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞、及び未熟児網膜症が含まれるが、これらに限定されるものではない）。網膜血管障害の病態生理は、存在する網膜血管からの漏出及び／又は新生血管形成が関与する。
（ｂ）網膜下新生血管障害（新生血管加齢性黄斑変性、眼ヒストプラスマ症、病的近視が含まれるが、これらに限定されるものではない）。網膜下新生血管障害の病態生理は、通常は無血管の外網膜及び網膜下腔の中への新しい血管の成長が関与する。
（ｃ）眼内腫瘍（眼黒色腫、眼リンパ腫、及び網膜芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されるものではない）。
【０００５】
眼ＶＥＧＦレベルをアップレギュレートする原動力は、主に網膜虚血に起因するとされてきた。ＶＥＧＦ関連眼疾患（たとえば以上に列挙したもの）を治療するために抗ＶＥＧＦ抗体及び人工ＶＥＧＦ捕捉タンパク質が現在使用されており、いくつかの有望な結果が得られている。しかしながら、これらの作用剤は、通常は疾患プロセスの後期にのみ使用され、すべての患者に奏功するわけでない。加えて、ＶＥＧＦは脈絡毛細管板の維持に重要であるので、長期抗ＶＥＧＦ治療は網膜の地図状萎縮をもたらすおそれがあり、ＶＥＧＦの「全」除去は長期治療後に悪影響をもたらすおそれがある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、少なくとも１種の追加のバイオ活性剤と任意選択的に組み合わせて有効量のヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）アンタゴニスト、黄体形成ホルモン（ＬＨ）アンタゴニスト、又はｈＣＧ／ＬＨレセプターアンタゴニストを投与することにより網膜障害を治療する方法である。この治療は、ＬＨ／ｈＣＧレセプター活性化をブロックすることにより（直接に若しくは競合阻害により）又はホルモン自体をブロックすることにより（すなわちホルモンに対する抗体により）ホルモン誘導ＶＥＧＦ合成をブロックする。これは、網膜のＶＥＧＦ誘導新生血管形成又は血管新生（典型的には増殖性眼障害進行として存在する）を予防する。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】ｈＣＧのアミノ酸配列を示すとともにグリコシル化（Ｎ結合又はＯ結合のいずれかで）されたアミノ酸も示している。
【図２】１３２０及び１６００ＩＵ／ｋｇの用量でｈＣＧを用いて新生血管形成実験を行ったときの網膜前核数を示している。
【図３】ｈＣＧ投与マウスにおける眼ＶＥＧＦアップレギュレーションを示している。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
用語
本発明の原理の理解を促進する目的で、好ましい実施形態を参照し、具体的な用語を用いてそれを説明する。それにもかかわらず、それにより本発明の範囲の限定を意図するものではなく、本発明が関連する技術分野の当業者であれば普通に思い付くであろうような本発明の変更形態及びさらなる修正形態並びに本明細書に示される本発明の原理のさらなる適用形態が企図されることは理解されよう。
【０００９】
以下の用語は、好ましい実施形態の本発明を説明するために用いられるものとする。本明細書に示される具体的な定義が不在の場合、本発明の説明に用いられる用語は、当業者が理解する共通の意味が与えられるものとする。
【００１０】
ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）及び黄体形成ホルモン（ＬＨ）は同一のレセプターを共有する。「ｈＣＧ」という用語は、天然に存在するか又は合成の「ヒト絨毛性ゴナドトロピン」の任意のアイソフォームを意味し、且つ「ＬＨ」という用語は、天然に存在するか又は合成の「黄体形成ホルモン」の任意のアイソフォームを意味する。本特許では、ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが参照される場合、ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストは、「ｈＣＧアンタゴニスト」、「ＬＨアンタゴニスト」、「ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニスト」、「ｈＣＧレセプターアンタゴニスト」、「ＬＨレセプターアンタゴニスト」、又は「ｈＣＧ／ＬＨレセプターアンタゴニスト」として定義される。これらの用語は同義的に用いられ、指定の化合物の適切で有効な誘導体又はフラグメント、たとえば、生理学的に許容可能なエステル又は生理学的に許容可能なカチオン若しくはアニオンを利用した塩を含むことが意図される。
【００１１】
本明細書で用いられる「ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニスト」という用語は、ｈＣＧ若しくはＬＨホルモン又はそれらの組合せレセプターのいずれかに結合する無効化部分を意味する。
【００１２】
「活性成分」という用語は、ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストを意味する。
【００１３】
本明細書で用いられる場合、「薬学的に許容可能な担体」、「希釈剤」、「添加剤」、又は「賦形剤」という用語は、本発明の好ましい実施形態に係る治療方法に従って患者又は被験者に適切な化合物を投与するために活性成分を単独又は組合せのいずれかで使用可能な化学組成物を意味する。
【００１４】
本明細書で用いられる場合、「生理学的に許容可能な」エステル又は塩という用語は、医薬組成物の任意の他の成分と相溶可能で、組成物が投与される被験者に有害でない、活性成分のエステル形又は塩形を意味する。
【００１５】
本明細書で用いられる場合、「油性」液体とは、炭素含有液体分子を含み且つ水よりも低い極性を呈する液体のことである。
【００１６】
「ＤＲ」という用語は「糖尿病性網膜症」の略である。
【００１７】
「患者」又は「被験者」という用語は、その患者又は被験者で意図された結果をもたらすようにｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが投与される必要のある動物（一般にヒト）を記載するために本明細書全体を通じて用いられる。患者の年齢は、新生児（未熟児網膜症の場合に見られる）から成人（糖尿病性網膜症又は加齢性黄斑変性の場合に最もよく見られる）にまで及びうる。患者は非妊娠者又は妊娠者でありうる。
【００１８】
「有効量」という用語は、好ましい実施形態の方法で使用した場合に意図された結果をもたらすように使用される本組成物（ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニスト）の量を記載するために本明細書全体を通じて用いられる。本発明の多くの態様では、有効量という用語は患者の治療との関連で用いられる。
【００１９】
本明細書で用いられる場合、「薬学的に許容可能な添加剤」は、次のもの、すなわち、界面活性剤、分散剤、不活性希釈剤、顆粒化剤及び崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味剤、風味剤、着色剤、保存剤、ゼラチンなどの生理学的分解性組成物、水性の媒体及び溶媒、油性の媒体及び溶媒、懸濁化剤、分散剤又は湿潤剤、乳化剤、粘滑剤、緩衝剤、塩、増粘剤、充填剤、乳化剤、抗酸化剤、抗生物質、抗菌類剤、安定化剤、並びに薬学的に許容可能な高分子材料又は疎水性材料の１つ以上を含むが、これらに限定されるものではない。本発明の医薬組成物中に含まれうる他の「添加剤」は当技術分野で公知であり、たとえば、Ｇｅｎａｒｏ，ｅｄ．（１９８５，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）に記載されている。
【００２０】
方法全般
好ましい実施形態の方法は、血管新生又は新生血管形成の促進によりｈＣＧ又はＬＨが一因となりうる網膜病態を含めて任意の眼障害に罹患している患者を治療するために使用しうる。
【００２１】
治療方法は、少なくとも１種の追加のバイオ活性剤と任意選択的に組み合わせた有効量の眼ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）アンタゴニスト、黄体形成ホルモン（ＬＨ）アンタゴニスト、又はｈＣＧ／ＬＨレセプターアンタゴニストの投与を含む。この治療は、網膜ＬＨ／ｈＣＧレセプター活性化をブロックすることにより（直接に若しくは競合阻害により）又はホルモン自体をブロックすることにより（たとえばホルモンに対する抗体により）ホルモン誘導ＶＥＧＦ合成をブロックする。これは、網膜のＶＥＧＦ誘導新生血管形成又は血管新生（典型的には増殖性眼障害進行として存在する）を予防する。治療のための投与経路の例としては、局所（たとえば点眼剤の形態で）、眼内、結膜下、硝子体内、任意の形態で眼内、髄腔内、静脈内、非経口、腹腔内、経口、鼻腔内が挙げられうるが、これらに限定されるものではない。点眼剤の形態の局所適用が好ましい。
【００２２】
治療される例示的な疾患
ｈＣＧ又はＬＨが一因となりうる血管新生眼障害及び／又は新生血管眼障害の例としては、以下のものが挙げられうる。
（ａ）網膜血管障害（糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞、及び未熟児網膜症が含まれるが、これらに限定されるものではない）。
（ｂ）網膜下血管障害（血管加齢性黄斑変性、眼ヒストプラスマ症、病的近視が含まれるが、これらに限定されるものではない）。
（ｃ）眼腫瘍（眼黒色腫、眼リンパ腫、及び網膜芽細胞腫が含まれるが、これらに限定されるものではない）。
【００２３】
ホルモン誘導眼ＶＥＧＦ合成をブロックする方法は、眼腫瘍の進行を予防するために使用可能である。今まで、ｈＣＧアンタゴニストは、ｈＣＧ関連腫瘍を治療するために使用することが提案されてきた。ｈＣＧ関連腫瘍とは、ｈＣＧを特異的に分泌する腫瘍（たとえば、生殖細胞腫瘍、ある特定の肺癌及び膀胱癌）のことである。しかしながら、本発明の方法は、眼ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニスト又は眼ｈＣＧ／ＬＨレセプターアンタゴニストを用いて眼ＶＥＧＦ合成をブロックすることにより任意の眼腫瘍（腫瘍自体がｈＣＧを分泌するか否かにかかわらず）の進行をブロックする。眼ＶＥＧＦレベルの増加（腫瘍自体により引き起こされない場合でも）は、腫瘍成長に寄与しうる。ＬＨ／ｈＣＧアンタゴニストは卵巣過剰刺激症候群、妊娠性絨毛性疾患、及びｈＣＧ分泌腫瘍での使用がこれまで提案されてきたが、眼障害での使用はこれまで提案されてこなかった。
【００２４】
理論的考察
理論により拘束されることを望むものではないが、好ましい実施形態の方法は、新生血管形成／血管新生（ＶＥＧＦが一因となりうる）が関与する眼障害の進行を予防する新規な方法を提供する網膜でのＬＨ／ｈＣＧレセプター活性のレギュレーションを含むものと思われる。本方法は、ＶＥＧＦ関連眼疾患の新しい治療標的としてＶＥＧＦ産生の上流で生じるホルモンシグナリング経路の標的化を含むものと考えられる。具体的には、好ましい実施形態の方法は、黄体形成ホルモン（ＬＨ）又はヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）のいずれかにより活性化されるＬＨ／ｈＣＧレセプターに重点を置くものと思われる。
【００２５】
例示的なｈＣＧ／ＬＨアンタゴニスト
例示的なｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストとしては、低分子アンタゴニスト及び抗体アンタゴニストなどの高分子アンタゴニスト［分子量（ＭＷ）＞１５０ｋＤａ］の両方が挙げられる。低分子アンタゴニストが好ましい。１５０ｋＤａ未満の低分子アンタゴニストは、都合のよい安全な送達モードを提供する点眼剤として製剤化するのに役立つ。低分子アンタゴニストは、点眼剤（局所）適用により効率的な眼内浸透を達成するのに十分な程度に少なくすべきであるが、硝子体からのクリアランスを遅くするのに十分な程度に大きくすべきである。好ましくは、２０〜８０ｋＤａ、より好ましくは３０〜５０ｋＤａの分子量を有するべきである。
【００２６】
好ましい実施形態で使用しうる低分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストの例であるｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストは、脱グリコシル化ｈＣＧ、突然変異ｈＣＧ、又は脱グリコシル化及び突然変異の両方が行われたｈＣＧ分子を含みうる。ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストの１クラスの例は「脱グリコシル化ｈＣＧ」であり、本明細書で用いられる場合、天然に存在するｈＣＧと比較して炭水化物残基数が減少したｈＣＧを意味する。一実施形態では、脱グリコシル化ｈＣＧは、天然に存在するｈＣＧよりも少ないＮ結合炭水化物を含む。
【００２７】
先行技術にはｈＣＧを脱グリコシル化する方法が記載されている。たとえば、ｈＣＧは、ノイラミニダーゼ処理により又はフッ化水素処理により脱グリコシル化が可能である。米国特許出願公開第２００８／００３９３７２Ａ１号明細書には、天然に存在するｈＣＧと比較してＮ結合炭水化物数が減少した脱グリコシル化ｈＣＧの実施形態が記載されている。一実施形態では、脱グリコシル化ｈＣＧは、そのα及びβサブユニットがライゲートされて一体化されており（融合又はヨーク結合）、且つ４つのＮ結合炭水化物部位のうち３つが部位特異的突然変異誘発により改変されている。米国特許出願公開第２００８／００３９３７２号明細書に記載のｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストは、本出願で使用されるアンタゴニストの好ましい実施形態である。脱グリコシル化されたｈＣＧのα又はβサブユニットもまた、本発明の目的ではｈＣＧの阻害剤として使用しうる。ｈＣＧの突然変異形又はｈＣＧのα若しくはβサブユニットは、本発明で使用されるそのほかのｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストである。
【００２８】
脱グリコシル化ｈＣＧは、シアル酸残基、Ｎ−アセチルグルコサミン残基、Ｎ−ガラクトサミン残基、ガラクトース残基、マンノース残基、又はフコース残基の数が天然に存在するｈＣＧと比較して減少していてもよい。脱グリコシル化ｈＣＧは、炭水化物が天然に存在するｈＣＧよりも少なくとも約５０％〜９０％少なくてもよい。とくに、脱グリコシル化ｈＣＧは、炭水化物が天然に存在するｈＣＧよりも少なくとも約５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、又は９９＋％少なくてもよい。図１は、ｈＣＧのアミノ酸配列を示すとともにグリコシル化（Ｎ結合又はＯ結合のいずれかで）されたアミノ酸も示している。これらのアミノ酸は、ｈＣＧのαサブユニットのアミノ酸５２及び７８がアスパラギンであり、且つｈＣＧのβサブユニットのアミノ酸１３及び３０がアスパラギンであり、且つアミノ酸１２１、１２７、１３２、及び１３８がセリンである。本発明によれば、グリコシル残基は、本発明に有用なｈＣＧ阻害剤を提供するように修飾しうる（一般に、本明細書に別途記載したように短縮又は脱グリコシル化される）。そのほかに、ｈＣＧの配列内の１個以上のアミノ酸残基を修飾することにより得られる突然変異ｈＣＧ分子もまた、本発明で使用しうる。本発明で使用されるアンタゴニストとして好ましいｈＣＧ突然変異体としては、アミノ酸のうちの１個をグリコシル化できないアミノ酸で置換することによりグリコシル化が排除された突然変異ｈＣＧ分子が挙げられる。ｈＣＧのαサブユニットのアミノ酸５２及び７８のアスパラギン、並びにｈＣＧのβサブユニットのアミノ酸１３及び３０のアスパラギン、並びにアミノ酸１２１、１２７、１３２、及び１３８のセリンから選択される１個以上のアミノ酸の置換又は脱離は、本発明によりｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストとして使用しうるｈＣＧ突然変異体をもたらす。
【００２９】
使用可能な大分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストは、ＬＨ、ｈＣＧ、及び／又はＬＨ／ｈＣＧレセプターに対する抗体（モノクローナル抗体若しくはポリクローナル抗体のいずれか）又は抗体フラグメントである。かかる抗体の産生に必要とされる方法、技術、及び技能は容易に利用可能である。ＬＨ抗体、ｈＣＧ抗体、及びＬＨ／ｈＣＧレセプター抗体は市販されている。
【００３０】
例示的な医薬組成物
好ましい実施形態で投与される医薬組成物は、被験者への投与に好適な形態で有効量のｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストを単独で含むか、或いは医薬組成物は、活性成分と、１種以上の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、添加剤、賦形剤、及び／若しくは１種以上の追加の成分、又はこれらのいくつかの組合せと、を含みうる。好ましい実施形態に係る医薬組成物は、本明細書に別途記載したように、１ｎｇ／ｋｇ／日〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の用量のｈＣＧ／ＬＨアンタゴニスト又はその変異体を治療が必要とされる患者又は被験者に送達するように製剤化し投与しうる。
【００３１】
本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学技術分野で公知であるか又は今後開発される任意の方法により調製しうる。一般に、かかる調製方法は、活性成分を担体又は１種以上の他の副成分と一体化させる工程と、次いで、必要であれば又は望ましければ、造形又は包装を行って所望の単回又は複数回用量ユニットにする工程と、を含む。
【００３２】
本発明の医薬組成物は、単回単位用量として又は複数の単回単位用量として大量に調製、包装、又は販売を行いうる。本明細書で用いられる場合、「単位用量」とは、所定量の活性成分を含む医薬組成物の個別量のことである。活性成分の量は、一般に、被験者に投与される活性成分の投与量又はかかる投与量の便利な部分量たとえばかかる投与量の１／２若しくは１／３に等しい。
【００３３】
本発明の医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容可能な担体、及び任意の追加の成分の相対量は、治療される被験者のアイデンティティー、サイズ、及び病態に依存して、さらには組成物の投与経路に依存して、さまざまであろう。例として、組成物は０．１％未満〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含みうる。本発明の医薬組成物の制御放出製剤又は持続放出製剤は、従来技術を用いて作製しうる。
【００３４】
好ましい実施形態の方法に有用な医薬組成物は、経口、経直腸、経腟、非経口、局所、経肺、鼻腔内、経頬、経眼（局所、眼内、硝子体内、結膜下が含まれるが、これらに限定されるものではない）、坐剤、エアロゾル、又は他の投与経路に好適な製剤として投与、調製、包装、及び／又は販売を行いうる。投与経路は当業者であれば容易に分かるであろう。また、治療される疾患のタイプ及び重症度、治療される患者のタイプ及び年齢などをはじめとする任意の数の因子に依存するであろう。
【００３５】
点眼剤として使用される局所適用製剤が好ましい。かかる製剤は、たとえば、点眼剤の形態、たとえば、水性又は油性の液体担体中の活性成分の０．１〜１．０％（Ｗ／Ｗ）溶液剤及び／又はサスペンジョン剤の形態をとりうる。かかる滴剤は、緩衝剤、塩、又は本明細書に記載の１種以上の他の追加の成分をさらに含みうる。
【００３６】
たとえば、本発明の方法に係るペプチド、フラグメント、若しくは誘導体、及び／又はそれらをコードする核酸を投与するために、ナノ粒子、リポソーム、再封赤血球(resealed erythrocyte)、免疫系システムなどの他の可能な製剤も使用しうる。
【００３７】
経口投与に好適な本発明の医薬組成物の製剤は、個別の固体投与ユニットの形態で、限定されるものではないが、それぞれ所定量の活性成分を含有する錠剤、ハード若しくはソフトカプセル剤、カシェ剤、トローチ剤、又はロゼンジ剤の形態で、調製、包装、又は販売を行いうる。経口投与に好適な他の製剤としては、粉末状若しくは顆粒状の製剤、水性若しくは油性のサスペンジョン剤、水性若しくは油性の溶液剤、又はエマルジョン剤が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００３８】
経口投与に好適な本発明の医薬組成物の液体製剤は、液体形態で又は使用前に水若しくは他の好適な媒体により再構成することを意図した乾燥製品の形態で、調製、包装、及び販売を行いうる。
【００３９】
化合物は、１日数回程度の頻度で被験者に投与可能であるか、又はより少ない頻度で、たとえば、１日１回、１週間に１回、２週間ごとに１回、１ヶ月に１回、若しくはさらにより少ない頻度で、たとえば、数ヶ月ごとに１回さらには１年間に１回以下で投与しうる。投与頻度は当業者であれば容易に分かるであろう。また、任意の数の因子、たとえば、限定されるものではないが、治療される網膜疾患のタイプ及び重症度、投与経路、被験者の年齢に依存するであろう。
【００４０】
種々の動物への投与に好適な組成物にするためのヒトへの投与に好適な医薬組成物の改変はよく理解されており、通常の技能を有する獣医薬理学者であれば、かりに実験を行うとしても通常の実験を行うだけで、かかる改変の設計及び実施が可能である。本発明の医薬組成物の投与が企図される被験者としては、ヒト及び他の霊長動物、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ネコ、イヌなどの商業関連の哺乳動物をはじめとする哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４１】
眼病態の治療或いは眼疾患状態及び／又は病態又はその症状の改善を行いうる具体的な方法に関連する以上に記載の本発明の種々の実施形態が、文脈内で、本明細書に具体的に挙げられていない総体的症状の治療又は消散に関連しうることは、当業者であれば分かるであろう。
【実施例】
【００４２】
実施例の検討
以下の実施例１は、酸素誘導網膜症（ＯＩＲ）のマウスモデルの網膜新生血管形成に及ぼすｈＣＧの酸化誘導網膜症作用のマウスモデルで、ｈＣＧの投与が異常な網膜新生血管形成を促進することを実証する。ＯＩＲマウスモデルは、増殖性網膜症（たとえば糖尿病性網膜症及び未熟児網膜症）を調べる多くの研究の基礎になっていた。この実験のデータは、ＬＨ／ｈＣＧシグナリングが網膜新生血管形成に影響を及ぼしうるという考え方を支持する。以下の実施例１ではｈＣＧを使用した。なぜなら、それはＬＨ（２０分間）よりもかなり長い半減期（＞２４時間）を有するので、ＬＨ／ｈＣＧレセプターの活性化が関与する実験で使用するうえでより実用的であるからである。ＬＨサロゲートとしてのｈＣＧの使用は、ＬＨが関与する臨床研究及び前臨床研究の両方に共通する。
【００４３】
実施例１：図２参照
以下の実験は、１３２０及び１６００ＩＵ／ｋｇの用量のｈＣＧが酸化誘導網膜症のマウスモデルで網膜新生血管形成を有意に増加することを実証するために行った。したがって、ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストは、新生血管形成が関与する眼障害の治療を支援しうる。
【００４４】
目的
この研究の目的は、酸素誘導網膜症（ＯＩＲ）のマウスモデルで網膜新生血管形成に及ぼす腹腔内送達ヒト絨毛性ゴナドトロピンホルモン（ｈＣＧ）の影響を評価することであった。
【００４５】
方法
５匹の仔マウスのうち３匹は同腹仔であり、各処置グループで１匹ずつ使用した。出生後７日目の動物（Ｐ７）を７５％酸素雰囲気に５日間暴露することにより網膜症を誘導した（Ｐ７〜Ｐ１２）。次いで、動物を正常酸素中に維持した。連続して１０日間にわたり１３２０又は１６００ＩＵ／ｋｇのｈＣＧ及び媒体対照を１日１回腹腔内（ｉｐ）投与することにより動物を処置した（Ｐ５〜Ｐ１４）。Ｐ１７で両方の眼球を取り出して組織診断を行った。
【００４６】
網膜前核、すなわち、両眼の組織切片で内境界膜の硝子体側内に延在する新しい血管の核をカウントすることにより、網膜新生血管形成を評価した。
【００４７】
結果：図２参照
投与したにもかかわらず、動物の行動及び体重は、媒体処置同腹仔と比較してｈＣＧ処置により変化しなかった。媒体グループの２匹の仔マウスは、Ｐ６及びＰ７で死亡していることが分かった。これらの死は仔の母親放棄が原因であった。１３２０及び１６００ＩＵ／ｋｇの用量で１日１回腹腔内投与されたｈＣＧホルモンは、網膜前核数をそれぞれ６３％（ｐ＝０．００４）及び５１％（ｐ＝０．００８５）有意に増加させた。
【００４８】
これらの実験条件では、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）の複数回の腹腔内投与に仔マウスは十分に耐えた。１３２０及び１６００ＩＵ／ｋｇの用量のｈＣＧは、ＯＩＲのマウスモデルで網膜新生血管形成を有意に増加させた。
【００４９】
実施例２：
ＨＣＧは、眼ＶＥＧＦレギュレーターとして機能することにより眼血管新生を促進しうる。ＶＥＧＦは、糖尿病性網膜症、黄斑変性、及び未熟児網膜症に関与しているとされてきた。したがって、ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストはこれらの障害に役立ちうる。図３を参照されたい。
【００５０】
子宮血管系では、血管新生促進ホルモンｈＣＧは、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）及び２つのＶＥＧＦレセプター（ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２）の重要なレギュレーターであることから、ｈＣＧは眼ＶＥＧＦレギュレーターとしても機能することが提案される。初期ＲＯＰの特徴である未成熟網膜血管系の退縮は、ＶＥＧＦの高酸素症誘導抑制から生じる。進行期ＲＯＰに特有の異常新生血管形成は、より初期の酸素誘導ＶＥＧＦ抑制を過度に行う(overcompensate for)網膜のＶＥＧＦの盛んなのアップレギュレーションから生じる。以下の実験を行った。
【００５１】
相対量チャート（キャリブレーターとして各グループセットに１つの対照）
ＰＢＳ（対照媒体）対ｈＣＧ（試験化合物）の腹腔内投与後のネズミ神経網膜ＶＥＧＦＡ発現
Ｐ＝出生後日数（すなわち、Ｐ７＝出生後７日目）、
（ＳＤＳ  ｖ１．４、ｄｄＣＴ研究、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７５００  Ｆａｓｔ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ）。
【００５２】
１３２０ＩＵ／ｋｇ腹腔内ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）又はリン酸緩衝生理食塩水をＣ５７ＢＬ／６野生型マウスに腹腔内投与した。
（ａ）グループ１：Ｐ７ネズミ新生仔にｈＣＧ又はＰＢＳのいずれかを注射し、１日後に網膜処置を行った。（同腹仔として生まれた４匹のマウスのうち１匹は発育不全仔であった。発育不全仔は眼の発生が典型的に遅れているので、対照として使用しなかった。したがって、グループ１は、１匹の対照マウス（ＰＢＳ）と２匹の試験マウス（ｈＣＧ）とを有する。２匹の各試験マウスは網膜ＶＥＧＦａ発現の増加を示したが、増加は２匹のうち１匹で有意（ｐ＜０．０５）に達した。２匹の試験マウスの結果を平均したところ、対照と比較して未成熟ＨＣＧ処置網膜で網膜ＶＥＧＦａ発現の７０％増加が見られた。
【００５３】
（ｂ）グループ２：Ｐ２５若年成体マウスにｈＣＧ又はＰＢＳのいずれかの注射を行い、翌日に網膜処置を行った。このグループには２匹の対照マウスと２匹の試験マウスとが存在した。２匹の試験マウスのうち１匹は、網膜ＶＥＧＦａ発現が非有意に２０％低下し、他の試験マウスは、ＶＥＧＦａ発現が各対照よりも７０％の有意な（ｐ＜０．０５）増加を呈した。
（ｃ）グループ３：Ｐ２９／Ｐ３０若年成体マウスにｈＣＧ又はＰＢＳのいずれかを連続して２日間のそれぞれで１用量ずつ２用量で投与し、２回目の投与の翌日に網膜処置を行った。このグループには１匹の対照マウス（ＰＢＳ）と１匹の試験マウス（ｈＣＧ）とが存在した。対照マウスに対して試験マウスではＶＥＧＦａ発現が有意に（ｐ＜０．０５）４００％に増加した。
【００５４】
以上の実験の結果は添付の図３に示されている。試験されたマウスでｈＣＧはＶＥＧＦの有意なアップレギュレーションを呈するという証拠が得られる。
【００５５】
当然ながら、以上は本発明の好ましい実施形態の説明であり、添付の特許請求の範囲に示される本発明の範囲及び趣旨から逸脱することがないように種々の変化及び変更を加えうることは理解されよう。
【図１】
2017521452.tif 000003
【図２】
2017521452.tif 000004
【図３】
2017521452.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成28年4月28日(2016.4.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要とされる患者において眼障害の可能性を低減するか又はその進行を阻害する方法であって、前記眼障害の影響を改善するのに有効な追加のバイオ活性剤と任意選択的に組み合わせて有効量のｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストを前記患者に投与することを含む方法。
【請求項２】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが１５０ｋＤａ未満の分子量を有する低分子エンティティーである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが２０〜８０ｋＤａの分子量を有する低分子エンティティーである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが眼に局所適用される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが３０〜５０ｋＤａの分子量を有する低分子エンティティーである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが眼に局所適用される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが脱グリコシル化ｈＣＧ、突然変異ｈＣＧ、又は脱グリコシル化もされているｈＣＧ突然変異体である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが脱グリコシル化ｈＣＧである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが突然変異ｈＣＧである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが脱グリコシル化もされている突然変異ｈＣＧである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記脱グリコシル化ｈＣＧが天然に存在するｈＣＧよりも少ないＮ結合炭水化物を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが天然に存在するｈＣＧよりも少なくとも５５％少ない炭水化物を有する脱グリコシル化ｈＣＧである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが天然に存在するｈＣＧよりも少なくとも９５％少ない炭水化物を有する脱グリコシル化ｈＣＧである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが追加のバイオ活性剤と組み合わせて共投与される、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記追加のバイオ活性剤が、ラニビズマブ、アフリベルセプト、ペガプタニブ(pegatanib)、ベルテポルフィン、トリアムシノロン、及びベバシズマブからなる群から選択される少なくとも１種の作用剤である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記眼障害が網膜障害である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記眼障害が糖尿病性網膜症、網膜静脈閉塞、及び未熟児網膜症からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記眼障害が、黄斑変性、眼ヒストプラスマ症、及び病的近視からなる群から選択される網膜下新生血管障害の群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記眼障害が、ｈＣＧ又はＬＨを分泌することが知られていない眼内腫瘍からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストがｈＣＧ／ＬＨ抗体である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
担体、添加剤、及び／又は賦形剤と組み合わせて、ラニビズマブ、アフリベルセプト、ペガプタニブ(pegatanib)、ベルテポルフィン、トリアムシノロン、及びベバシズマブからなる群から選択される少なくとも１種の作用剤と組み合わされた有効量のｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストを含む、眼障害の可能性を低減するか又はその進行を阻害するための医薬組成物。
【請求項２２】
２０〜８０ｋＤａの分子量を有する低分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストの眼科用溶液を含む医薬組成物。
【請求項２３】
前記低分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが３０〜５０ｋＤａの分子量を有する、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
２０〜８０ｋＤａの分子量を有する低分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストの局所適用点眼剤溶液を含む医薬組成物。
【請求項２５】
前記低分子ｈＣＧ／ＬＨアンタゴニストが３０〜５０ｋＤａの分子量を有する、請求項２４に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2017521452.tif 000006
2017521452.tif 000007