(57)【要約】  本発明は、液体クロマトグラフィーキラル分離のための新規な固定相に関する。特定の基礎となる支持体と、知られているある特定のクラスのキラル選択剤との、本発明による特定の組み合わせによって、従来から知られているあらゆる支持体により得られるものと比べて、はるかに優れたキラル（エナンチオマー）分離がもたらされる。これらのキラル（エナンチオマー）分離は、従来の支持体によって得られるものと比べて、効率（理論段数）が著しく高く、分離度（Ｒｓ）が著しく高く、保持時間が著しく短く、かつ選択性が同等またはわずかに高いという点で向上している。
2017522579.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
支持体とキラル固定相とを含む固定相。
【請求項２】
支持体が、表面多孔性粒子（ＳＰＰ）を含む、請求項１に記載の固定相。
【請求項３】
キラル固定相が、キラル選択剤を含む、請求項１に記載の固定相。
【請求項４】
ＳＰＰが、約０．５μｍ〜約２０μｍの粒子径を有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項５】
ＳＰＰが、約１．３μｍ〜約１０μｍの粒子径を有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項６】
ＳＰＰが、約１．７μｍ〜約５．０μｍの粒子径を有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項７】
ＳＰＰが、約１．７、約２．７、および約４．０μｍからなる群から選択される粒子径を有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項８】
ＳＰＰが、約１．７μｍの粒子径を有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項９】
ＳＰＰが、約２．７μｍの粒子径を有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項１０】
ＳＰＰが、約４．０μｍの粒子径を有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項１１】
ＳＰＰが、約１００Å〜約３００Åのポアサイズを有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項１２】
ＳＰＰが、約１００Å〜約１５０Åのポアサイズを有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項１３】
ＳＰＰが、約１１０Å〜約１３０Åのポアサイズを有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項１４】
ＳＰＰが、約１２０Åのポアサイズを有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項１５】
ＳＰＰが、約１５０ｍ２／ｇ〜約５００ｍ２／ｇの表面積を有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項１６】
ＳＰＰが、約１２０ｍ２／ｇの表面積を有する、請求項２に記載の固定相。
【請求項１７】
キラル選択剤が、ＳＰＰに共有結合している、請求項３に記載の固定相。
【請求項１８】
キラル選択剤が、オリゴ糖および誘導体、環状オリゴ糖および誘導体、ペプチドおよび誘導体、糖ペプチドおよび誘導体、大環状糖ペプチドおよび誘導体、π錯体、キラルクラウンエーテル、リガンド交換体、ならびにイオン交換体からなる群から選択される、請求項３に記載の固定相。
【請求項１９】
キラル選択剤が、シクロデキストリン、誘導体化シクロデキストリン、シクロフルクタン、誘導体化シクロフルクタン、テイコプラニン、バンコマイシン、テイコプラニンアグリコン、リストセチンＡ、ダルババシン、ボロマイシン、ＤＮＢ−フェニルグリシン、ＤＮＢ−ジフェニルエチレンジアミン、ＤＮＢ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロフェナントレン−４−イル）ベンズアミド、ＤＮＢ−１，２−ジアミノシクロヘキサン、３，３’−ジフェニル−ビナフチル官能化（ｆｕｎｃｉｏｎａｌｉｚｅｄ）１８−クラウン−６、プロリン、ペニシラミン、ヒドロキシプロリン、キニーネ、誘導体化キニーネ、キニジン、および誘導体化キニジンからなる群から選択される、請求項３に記載の固定相。
【請求項２０】
表面多孔性粒子に結合したキラル選択剤を含む、表面多孔性粒子に基づくキラル固定相。
【請求項２１】
キラル選択剤が、ＳＰＰに共有結合している、請求項２０に記載の表面多孔性粒子。
【請求項２２】
キラル選択剤が、オリゴ糖および誘導体、環状オリゴ糖および誘導体、ペプチドおよび誘導体、糖ペプチドおよび誘導体、大環状糖ペプチドおよび誘導体、π錯体、キラルクラウンエーテル、リガンド交換体、ならびにイオン交換体からなる群から選択される、請求項２０に記載の表面多孔性粒子。
【請求項２３】
キラル選択剤が、シクロデキストリン、誘導体化シクロデキストリン、シクロフルクタン、誘導体化シクロフルクタン、テイコプラニン、バンコマイシン、テイコプラニンアグリコン、リストセチンＡ、ダルババシン、ボロマイシン、ＤＮＢ−フェニルグリシン、ＤＮＢ−ジフェニルエチレンジアミン、ＤＮＢ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロフェナントレン−４−イル）ベンズアミド、ＤＮＢ−１，２−ジアミノシクロヘキサン、３，３’−ジフェニル−ビナフチル官能化（ｆｕｎｃｉｏｎａｌｉｚｅｄ）１８−クラウン−６、プロリン、ペニシラミン、ヒドロキシプロリン、キニーネ、誘導体化キニーネ、キニジン、および誘導体化キニジンからなる群から選択される、請求項２０に記載の表面多孔性粒子。
【請求項２４】
キラル選択剤が、ネイティブもしくは誘導体化シクロフルクタン、またはネイティブもしくは誘導体化シクロデキストリンである、請求項２０に記載の表面多孔性粒子。
【請求項２５】
誘導体化シクロデキストリンおよび誘導体化シクロフルクタンの誘導体化基が、アルカン（例えば、Ｃ１〜Ｃ３０直鎖アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０分岐アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０不飽和アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０環状アルカン、ヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／または環状アルカン）、または芳香族（ベンジル、誘導体化ベンジル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、フェニル、誘導体化フェニル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、ナフチル、および誘導体化ナフチル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、またはビアリール）からなる群から選択される、請求項２４に記載の表面多孔性粒子。
【請求項２６】
表面多孔性粒子に結合したキラル選択剤が、エーテル、カルバメート、チオエーテル、チオカルバメート、エステル、トリアゾール、または尿素結合によって結合する、請求項２０に記載の表面多孔性粒子。
【請求項２７】
キラル選択剤が、大環状糖ペプチド、π錯体、およびアニオン性交換体、カチオン性交換体、または両性イオン性交換体の中から選択される、請求項２０に記載の表面多孔性粒子。
【請求項２８】
大環状糖ペプチドが、テイコプラニン、ボロマイシン、リストセチンＡ、ダルババシン、およびバンコマイシンの中から選択される、請求項２７に記載の表面多孔性粒子。
【請求項２９】
π錯体が、ジニトロベンゾイルフェニルグリシンである、請求項２７に記載の表面多孔性粒子。
【請求項３０】
アニオン性交換体が、ｔ−ブチルカルバモイル化キニーネである、請求項２７に記載の表面多孔性粒子。
【請求項３１】
表面多孔性粒子およびキラル選択剤を含む、液体クロマトグラフィーキラル分離のための固定相支持体。
【請求項３２】
表面多孔性粒子に結合し、従来型の固定相支持体に対して、より高い効率、より高い分離度、より短い保持時間、および同等ないしより高い選択性を含む優れたキラルクロマトグラフィー結果をもたらす中または小サイズのキラル選択剤を有する、表面多孔性粒子。
【請求項３３】
支持体と、特に、表面多孔性粒子に結合し、または不可逆的に吸着され、ブラシ型キラル表面多孔性粒子を形成する、小ないし中サイズのキラル選択剤とを含み、それによって従来型の支持体に対して、より高い効率、より高い分離度、およびより短い保持時間を含む優れたキラルクロマトグラフィー結果をもたらす、液体クロマトグラフィーキラル分離のための固定相支持体。
【請求項３４】
キラル分子のエナンチオマーが分離するように、キラル分子を含む混合物を、表面多孔性粒子に基づくキラル固定相と接触させることを含む、少なくとも１つのキラル分子をエナンチオ分離する方法。
【請求項３５】
オリゴ糖および誘導体、環状オリゴ糖および誘導体、ペプチドおよび誘導体、糖ペプチドおよび誘導体、大環状糖ペプチドおよび誘導体、π錯体、キラルクラウンエーテル、リガンド交換体、およびイオン交換体からなる群からキラル選択剤を選択すること、ならびにキラル選択剤を表面多孔性粒子に共有結合させること、それによって表面多孔性粒子キラル固定相を得ることを含む、表面多孔性粒子キラル固定相の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、２０１４年７月１７日に出願された、米国仮特許出願第６２／０２５，７１３号に対する優先権の利益を主張し、その内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【発明の概要】
【０００２】
本発明は、液体クロマトグラフィーキラル分離のための新規な固定相に関する。特定の基礎となる支持体と、知られているある特定のクラスのキラル選択剤との特定の組み合わせにより、従来から知られているあらゆる支持体によって得られるものと比べて、はるかに優れたキラル（エナンチオマー）分離がもたらされる。これらのキラル（エナンチオマー）分離は、従来の支持体によって得られるものと比べて、効率（理論段数）が著しく高く、分離度（Ｒｓ）が著しく高く、保持時間が著しく短く、かつ選択性が同等またはわずかに高いという点で向上している。
【０００３】
液体クロマトグラフィーのための知られているキラル選択剤のクラスとしては、以下のものがあげられる：１．大環状型（例えば、シクロデキストリン、クラウンエーテル、シクロフルクタン、抗生物質、ペプチドなど）、２．π錯体型（π酸性、π塩基性、および複合型）、３．ポリマー型（例えば、タンパク質、誘導体化セルロース、またはアミロース、キラル合成ポリマーなど）、および４．他の種々の型（リガンド交換、イオン交換など）。上記に列挙したクラスの例は、以下の文献に開示されている（その各々は、参照により本明細書に組み込まれる）：Ｄ．Ｗ．ＡｒｍｓｔｒｏｎｇおよびＷ．ＤｅＭｏｎｄ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｓｃｉ．、１９８４、２２、４１１、Ｄ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ、米国特許第４，５３９，３９９号、Ｄ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍ．、１９９０、６２、１６１０、Ａ．Ｍ．Ｓｔａｌｃｕｐら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１９９０、５１３、１８１、Ｇ．Ｄ．Ｙ．ＳｏｇａｈおよびＤ．Ｊ．Ｃｒａｍ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９７６、９８、３０３８、Ｔ．Ｓｈｉｎｂｏら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１９８７、４０５、１４５、Ｐ．Ｓｕｎら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、２００９、８１、１０２１５、Ｐ．ＳｕｎおよびＤ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ、２０１２、１２１７、４９０４、Ｄ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、ＵＴＡ０９−４２ＵＳ（６１３４１／３９０７６１）ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ｃｙｃｌｏｆｒｕｃｔａｎｓ  ａｓ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ａｇｅｎｔｓ、Ｄ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９４、６６、１４７３、Ｄ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ、米国特許第５，６２６，７５７号、Ａ．Ｂｅｒｔｈｏｄら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、２０００、７２、１７６７、Ｗ．Ｈ．ＰｉｒｋｌｅおよびＪ．Ｍ．Ｆｉｎｎ、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９８１、４６、２９３５、Ｗ．Ｈ．Ｐｉｒｋｌｅら、Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ、１９９１、３、１８３、Ｗ．Ｈ．ＰｉｒｋｌｅおよびＣ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ、Ｊ．Ｌｉｑ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１９９２、１１５、１９４７、Ｊ．Ｈｅｒｍａｎｓｓｏｎ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１９８３、２６９、７１、Ｓ．Ａｌｌｅｎｍａｒｋら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１９８３、２６９、Ｊ．Ｈａｇｉｎａｋａら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９５、６７、２５７９、Ｙ．Ｏｋａｍｏｔｏら、Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１９８４、７３９、Ｙ．Ｏｋａｍｏｔｏら、米国特許第５，２０２，４３３号、Ｙ．Ｏｋａｍｏｔｏら、米国特許第５，６７９，５７２号、Ｙ．Ｏｋａｍｏｔｏら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９８１、１０３、６９７１、Ｑ．Ｚｈｏｎｇら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ、２００５、１０６６、５５、Ｘ．Ｈａｎら、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ、２００６、６３、１３、Ｖ．Ａ．ＤａｖａｎｋｏｖおよびＳ．Ｖ．Ｒｏｇｏｚｈｉａ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１９７１、６０、２８０、Ｍ．ＬａｍｍｅｒｈｏｆｅｒおよびＷ．Ｌｉｎｄｎｅｒ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ、１９９８、８２９、１１５。下記の表１を参照されたい。
【０００４】
そこから分かるように、共有結合した小ないし中サイズのキラル選択剤だけが、本発明のために効果的に使用され得る。これは、部分的には、基礎となる支持体の特質に起因する。より大きなポリマー性キラル選択剤（上記クラスの３型）および吸着キラル選択剤は、無効であることが示されている（すなわち、これらが示す分離特性の増大は、あったとしても、わずかである）。
【０００５】
キラル選択剤の大環状、π錯体、および他の種々の型の例は、例えば、米国特許第４，５３９，３９９号、第５，６２６，７５７号、第７，６４８，６３６号で議論されておいる（これらの各内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。キラル選択剤のポリマー型の例は、例えば、米国特許第７，３２７，１０１号、第７，２２３，３３４号、および第５，６７９，５７２号で議論されている（これらの各内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。
【０００６】
前記の基礎となる支持体は、「表面多孔性粒子」（ＳＰＰ）または「コアシェル」粒子と呼ばれる。例えば、Ｊ．Ｊ．Ｄｅｓｔｅｆａｎｏら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｓｃｉ．、２００８、４６、２５４、Ｊ．Ｊ．Ｄｅｓｔｅｆａｎｏら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ．、２０１２、１２５８、７６、Ｓ．Ｆｅｋｅｔｅら、ＬＣＧＣ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ、２０１４、３２、４２０、米国特許第７，８４６，３３７号、ＥＰ２００８９７１ならびにＦ．ＧｒｉｔｔｉおよびＧ．Ｇｕｉｃｈｏｎ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２０１４を参照されたい。ＳＰＰの概略図および透過型電子顕微鏡写真については、それぞれ図１および２も参照されたい。ＳＰＰは、日常的な、アキラルな逆相分離（例えば、Ｃ１８、またはＣ８結合相材料）のために、または（むき出しのシリカ、またはニトリル結合材料のような）順相分離のために、非常に有利であった。ＳＰＰを用いた高度なキラル分離は、全くうまくいっていない。実際に、このようなＳＰＰ支持体をキラル固定相のために用いる唯一の試みにおいて、Ｋ．Ｌｏｍｓａｄｚｅら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ、２０１２、１２３４、５０に開示されているように、高度なキラル分離はなされていない（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。本発明者らは、より大きな、ポリマー性の誘導体化セルロース系キラル選択剤を使用し、吸着させる試みがこの失敗の原因であることを見出した。このようなキラル選択剤の大きさ、量、および厚さによって、現在の表面多孔性粒子（ＳＰＰ）支持体に要求される性能向上ができなくなっていた。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】ＳＰＰを示す概略図である。
【図２】ＳＰＰの透過型電子顕微鏡写真である。
【図３】シクロフルクタンキラル選択剤およびシクロフルクタン誘導体キラル選択剤の例である。
【図４】シクロデキストリンキラル選択剤およびシクロデキストリン誘導体キラル選択剤の例である。
【図５】大環状糖ペプチド（抗生物質）キラル選択剤の例である。
【図６】π錯体キラル選択剤の例である。
【図７】リガンド交換キラル選択剤（ペニシラミン）の例である。
【図８】キラルイオン交換キラル選択剤の例である。
【図９】異なる直径を有する３種類のＳＰＰの例の走査型電子顕微鏡写真である。
【図１０】Ｒ／Ｓ−フェニルプロピオン酸のエナンチオマー分離である。
【図１１】Ｒ／Ｓ−ミアンセリンのエナンチオマー分離である。
【図１２】Ｒ，Ｓ−ＢＩＮＡＭのエナンチオマー分離である。
【図１３】Ｒ，Ｓ−ＢＩＮＡＭのエナンチオマー分離である。
【図１４】ＮＯＢＩＮエナンチオマーの分離である。
【図１５】１−（１−ナフチル）エチルアミンエナンチオマーの分離である。
【図１６】Ｊａｃｏｂｓｅｎ触媒のエナンチオマーの分離である。
【図１７】（ＲＲ／ＳＳ）−ヒドロベンゾインエナンチオマーの分離である。
【図１８】ｔ−ブチルカルバモイル化キニーネに基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例である。
【図１９】フィプロニルエナンチオマーの分離である。
【図２０】フィプロニルのエナンチオマー分離に関する保持係数の比較である。
【図２１】アムロジピンエナンチオマーの分離である。
【図２２】２−フェニルプロピオン酸エナンチオマーの分離である。
【図２３】クロルタリドン（ｃｈｌｏｒｔｈａｌｄｏｎｅ）エナンチオマーの分離である。
【図２４】（１Ｒ，２Ｓ／１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノ−１，２−ジフェニルエタノールエナンチオマーの超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）分離である。
【図２５】ＮＯＢＩＮに関する段高さの依存性である。
【図２６】ＦＰＰ−ＣＳＰおよびＳＰＰ−ＣＳＰに関する、フィプロニルについての分析時間あたりの効率の、流速への依存性である。
【図２７】ＦＰＰ−ＣＳＰおよびＳＰＰ−ＣＳＰに関する、フィプロニルの分離度の、流速への依存性である。
【図２８】イソプロピル化シクロフルクタン６に基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例である。
【図２９】バンコマイシンに基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例である。
【図３０】３，５−ジメチルフェニルカルバモイルシクロフルクタン７に基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例である。
【図３１】テイコプラニンアグリコンに基づくＳＰＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例である。
【図３２】ヒドロキシプロピレート−β−シクロデキストリンに基づくＳＰＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例である。
【図３３】テイコプラニンに基づくＳＰＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例である。
【図３４】ＤＮＢ−フェニルグリシンに基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例である。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明者らは、ＳＰＰキラル固定相（ＣＳＰ）の性能向上は、特に、結合した、または不可逆的に吸着された、比較的小ないし中サイズのキラル選択剤を使用して、より「ブラシ」型のキラルＳＰＰを形成させることによって解決されることを見出した。この手法を用いることで、本出願人らは、これまでに報告されたいずれのものよりも、はるかに優れたエナンチオマー分離をもたらすＳＰＰ−ＣＳＰを得ることができた。実際に、驚いたことに、その分離は、Ｆ．ＧｒｉｔｔｉおよびＧ．Ｇｕｉｃｈｏｎ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ、２０１４、１３４８、８７〜９６（その内容は、参照により本明細書に組み込まれる）が開示しているように、理論的に予測された性能をしばしば上回ることが、結果によって示された。
【０００９】
【表１】
2017522579.tif 000003
【００１０】
このような優位性のある、優れたキラルＳＰＰ分離をもたらすことが示されたキラル選択剤の特定のクラスは、共有結合した、１．大環状ＣＳＰ、２．π錯体ＣＳＰ、ならびに４．他の種々のリガンド交換およびイオン交換ＣＳＰのいくつか、である。これらのキラル選択剤の例を図３〜８に示す。
【００１１】
以下の実施例に示すように、本発明のＳＰＰ−ＣＳＰは、標準的な直径が５μｍおよび３μｍの全多孔性粒子（ＦＰＰ）と比較して、分析時間あたり７倍におよぶより高い効率（流速３ｍＬ／分において）、より速い分析、より高い分離度（Ｒｓ）、加えて同等からわずかに高い選択性をもたらす。ＳＳＰ−ＣＳＰの優位性は、分析時間あたりの段数および分離度という観点から、より一層明確になる。示されているように、このことは、分析スケールおよび調製スケール（直径４または５μｍのＳＰＰを使用する）分離のいずれにおいても、ならびに超臨界／亜臨界流体キラルクロマトグラフィーにおいて、非常に有利である。
【００１２】
さらに、ＳＰＰに基づくキラル固定相は、超高速なエナンチオマー分離（例えば、１〜４０秒未満の範囲）をもたらす／行うための、最も強力な手法となることが示されるであろう。このような高速分離は、ハイスループットスクリーニングのために、および調製用分離のスループット向上のために重要である。
【００１３】
加えて、ＳＰＰの表面積は、ＦＰＰに比べて小さい。その結果、従来のＦＰＰ−ＣＳＰに比べて性能が高いＳＰＰキラル固定相を作製するために必要とされるキラル選択剤（それらの中には非常に高価なものもある）が少なくなる。さらに、このようなＳＰＰ−ＣＳＰは、全粒子径の大きさが、約０．５〜約２０μｍ、好ましくは約１．３〜約１０μｍ、より好ましくは約１．７〜約５．０μｍの範囲のＳＰＰで製造することができる。本発明によるＳＰＰ−ＣＳＰは、全粒子径が、例えば、約０．５μｍ、約０．６μｍ、約０．７μｍ、約０．８μｍ、約０．９μｍ、約１．０μｍ、約１．１μｍ、約１．２μｍ、約１．３μｍ、約１．４μｍなどのＳＰＰで製造することができる。いくつかの粒子、例えば約１．７、約２．７、および約４．０μｍの粒子の走査型電子顕微鏡写真を図９に示す。
【００１４】
本出願において、ＳＰＰ上における性能が、ＦＰＰ上における性能と比較される全てのＣＳＰは、同じ化学反応および同じ条件下で製造された。
【実施例】
【００１５】
無水トルエン、無水ピリジン、３−（トリエトキシシリル）プロピルイソシアネート、（３−グリシドキシプロピル）トリメトキシシラン、β−シクロデキストリン、酸化プロピレン、ジニトロベンゾイルクロリド（ｄｉｎｉｔｒｏｌｅｎｚｏｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、３，５−ジメチルフェニルイソシアナート（ｄｉｍｅｔｈｙｌｙｐｈｅｎｙｌｉｓｏｃｙａｎａｔｅ）、ナフチルエチルイソシアネート、アムロジピン、フィプロニル、２’−アミノ−１，１’−ビナフタレン−２−オール（ＮＯＢＩＮ）、１，２−ジフェニルエチルアミン、酢酸（ＡＡ）、およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）は、シグマアルドリッチ社（ミルウォーキー、ＷＩ、ＵＳＡ）から購入した。シクロフルクタン６は、ＡＺＹＰ（アーリントン、ＴＸ、ＵＳＡ）から供給された。ＨＰＬＣグレードのアセトニトリル（ＡＣＮ）、ヘプタン、エタノール（ＥｔＯＨ）、およびメタノール（ＭｅＯＨ）は、ＥＭＤ（ギブスタウン、ＮＪ）から入手した。全直径が５μｍの全多孔性シリカは、１００Åの平均ポアサイズ、および４６５ｍ２／ｇの平均表面積を有する。表面多孔性シリカ粒子は２．７μｍであり、１．７μｍの固形コア、０．５μｍの多孔性シェル、１００Åのポアサイズ、および１２０ｍ２／ｇの表面積を有する。直径が１．７μｍおよび４．０μｍのＳＰＰ粒子は、同様の表面積およびポアサイズを有する。
【００１６】
イソプロピル置換シクロフルクタンキラル固定相は、ＳｕｎおよびＡｒｍｓｔｒｏｎｇによるＰ．Ｓｕｎら、Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．２００９、８１、１０２１５、ならびにＰ．ＳｕｎおよびＤ．Ｗ．Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ、２０１２、１２１７、４９０４に記載された手順に従って合成した。シクロデキストリンに基づくＣＳＰは、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇの米国特許第４，５３９，３９９号に従って合成した。大環状抗生物質ＣＳＰは、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇの米国特許第５，６２６，７５７号に従って合成した。π錯体ＣＳＰは、ＡｒｍｓｔｒｏｎｇまたはＰｉｒｋｌｅ（例えば、米国特許第４，５３９，３９９号、米国特許第５，６２６，７５７号、Ｗ．Ｈ．ＰｉｒｋｌｅおよびＪ．Ｍ．Ｆｉｎｎ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、１９８１、４６、２９３５、ならびにＷ．Ｈ．Ｐｉｒｋｌｅら、Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ、１９９１、３、１８３を参照のこと）に従って合成した。リガンド交換ＣＳＰは、誘導体化ペニシラミンとドデシルベンゾイルクロリド（ｄｏｄｅｃｙｌｂｅｎｙｏｚｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）とによって合成した。精製した産物は、次いで、比較のためにＣ１８  ＳＰＰおよびＣ１８  ＦＰＰに不可逆的に吸着させた。イオン交換ＣＳＰは、Ｍ．ＬａｍｍｅｒｈｏｆｅｒおよびＷ．Ｌｉｎｄｎｅｒ  Ｊ．、Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ａ、１９９８、８２９、１１５に記載されたＬａｍｍｅｒｈｏｆｅｒおよびＬｉｎｄｎｅｒの方法によって、キニーネまたはキニジンを固定化することにより製造した。ＳＰＰキラル固定相の具体例を以下に示す。
【実施例１】
【００１７】
シクロフルクタンに基づくＳＰＰ  ＣＳＰの調製
シクロフルクタンは、１８〜２４個のヒドロキシル基を有する環状オリゴ糖である。これらのヒドロキシル基は、シクロフルクタン（またはシクロフルクタン誘導体）をＳＰＰシリカに共有結合させるための、反応性官能基として使用することができる。シクロフルクタンは、ネイティブ形態で、または誘導体化形態で、キラル選択剤として使用することができる。シクロフルクタン分子の誘導体化は、ＳＰＰシリカ上へのシクロフルクタン分子の固定化の前に行ってもよく、または後に行ってもよい。誘導体化基は、本質的に、アルカン（例えば、直鎖アルカンＣ１〜Ｃ３０、分岐アルカンＣ１〜Ｃ３０、不飽和アルカンＣ１〜Ｃ３０、環状アルカンＣ１〜Ｃ３０、またはヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／もしくは環状アルカン）、または芳香族（ベンジル、誘導体化ベンジル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、フェニル、誘導体化フェニル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、ナフチル、誘導体化ナフチル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、またはビアリール）のいずれかであり、前記誘導体化基は、数々の化学結合（例えば、エーテル結合、カルバメート結合、チオエーテル結合、チオカルバメート結合、エステル結合、トリアゾール結合、および尿素結合）によってシクロフルクタンに結合する。
【００１８】
ネイティブおよび誘導体化シクロフルクタンは、同様にして、ＳＰＰシリカに結合する。まず、２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロフルクタン（３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、３−トリエトキシシリルプロピルイソシアネート（４ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（５ｍＬ）を加え、反応容器を９０℃に５時間加熱した。一方、ＳＰＰシリカ（４ｇ）をまずオーブン（１２０℃）で４時間乾燥し、その後ディーン・スターク・トラップおよび２５０ｍＬ丸底２口フラスコを用いて共沸蒸留（トルエン、１２５ｍＬ）した。反応容器を、両方とも一旦室温まで放冷させ、シクロフルクタン／ＤＭＦ溶液をＳＰＰシリカ−トルエンスラリーに加え、得られた懸濁液を１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法によって、カルバメート結合したシクロフルクタンＣＳＰが生じる。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００１９】
あるいは、同様にカルバメート結合を形成する第２の結合化学反応を用いてもよい。ここで、ＳＰＰシリカ（３ｇ）を１２０℃で４時間乾燥した。次いで、トルエンを加え、残存する水を、ディーン・スターク・トラップを用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）させ、１ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランをシリカ（３．３ｇ）−トルエン（１２５ｍＬ）スラリーに加え、反応混合物を４時間還流した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してアミノ官能化ＳＰＰシリカを得た。次いで、１，６−ジイソシアネートヘキサン（２ｍＬ）を乾燥アミノ−シリカトルエンスラリーに加え（アルゴン下）、それを氷浴で冷却した。全てのジイソシアネートを加えた後、反応混合物を７０℃に５時間加熱した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン）し、最後にトルエン（無水、１２５ｍＬ）およびＴＥＡ（１０ｍＬ）中に再懸濁した。最後に、シクロフルクタン（１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）に溶解し、溶液をＳＰＰシリカ懸濁液に加え、得られたスラリーを１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法により、カルバメート結合および尿素結合したシクロフルクタンＣＳＰが生じる。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００２０】
第３の結合戦略により、シクロフルクタンおよびその誘導体が、どのようにしてエーテル結合で固定化され得るかの例が示されることになる。まず、５００ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロフルクタン（１０ｍｍｏｌ）を３００ｍＬの無水ＤＭＦ中にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、１ｇのＮａＨをこの溶液に加え、得られた懸濁液を、不活性環境中、室温で、３０分間撹拌した。次に、未反応のＮａＨをすべてろ過して除き、ろ液を清浄な、乾燥した５００ｍＬ丸底フラスコに移し、そこに２ｍＬの３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを加えた。この溶液を９０℃に５時間加熱し、室温まで放冷させた。次に、この溶液を、乾燥ＳＰＰシリカ（２１ｇ）が入った５００ｍＬ丸底２口フラスコに移し、得られた懸濁液を１１０℃に１６時間加熱した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【実施例２】
【００２１】
シクロデキストリンに基づくＳＰＰ  ＣＳＰの調製
シクロデキストリンは、１８〜２４個のヒドロキシル基を有する環状オリゴ糖である。これらのヒドロキシル基は、シクロデキストリン（またはシクロデキストリン誘導体）をＳＰＰシリカに共有結合させるための、反応性官能基として使用することができる。シクロデキストリンは、ネイティブ形態で、または誘導体化形態で、キラル選択剤として使用することができる。シクロデキストリン分子の誘導体化は、ＳＰＰシリカ上へのシクロデキストリン分子の固定化の前に行ってもよく、または後に行ってもよい。誘導体化基は、本質的に、アルカン（例えば、直鎖アルカンＣ１〜Ｃ３０、分岐アルカンＣ１〜Ｃ３０、不飽和アルカンＣ１〜Ｃ３０、環状アルカンＣ１〜Ｃ３０、またはヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／もしくは環状アルカン）、または芳香族（ベンジル、誘導体化ベンジル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、フェニル、誘導体化フェニル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、ナフチル、誘導体化ナフチル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、またはビアリール）のいずれかであり、前記誘導体化基は、数々の化学結合（例えば、エーテル結合、カルバメート結合、チオエーテル結合、チオカルバメート結合、エステル結合、トリアゾール結合、および尿素結合）によってシクロデキストリンに結合する。
【００２２】
ネイティブおよび誘導体化シクロデキストリンは、同様にして、ＳＰＰシリカに結合する。まず、２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロデキストリン（３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、３−トリエトキシシリルプロピルイソシアネート（４ｍｍｏｌ）および無水ピリジン（５ｍＬ）を加え、反応容器を９０℃に５時間加熱した。一方、ＳＰＰシリカ（４ｇ）をまずオーブン（１２０℃）で４時間乾燥し、その後ディーン・スターク・トラップおよび２５０ｍＬ丸底２口フラスコを用いて共沸蒸留（トルエン、１２５ｍＬ）した。反応容器を、両方とも一旦室温まで放冷させ、シクロデキストリン／ＤＭＦ溶液をＳＰＰシリカ−トルエンスラリーに加え、得られた懸濁液を１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法によって、カルバメート結合したシクロデキストリンＣＳＰが生じる。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００２３】
あるいは、同様にカルバメート結合を形成する第２の結合化学反応を用いてもよい。ここで、ＳＰＰシリカ（３ｇ）を１２０℃で４時間乾燥した。次いで、トルエンを加え、残存する水を、ディーン・スターク・トラップを用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）させ、１ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランをシリカ（３．３ｇ）−トルエン（１２５ｍＬ）スラリーに加え、反応混合物を４時間還流した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してアミノ官能化ＳＰＰシリカを得た。次いで、１，６−ジイソシアネートヘキサン（２ｍＬ）を乾燥アミノ−シリカトルエンスラリーに加え（アルゴン下）、それを氷浴で冷却した。全てのジイソシアネートを加えた後、反応混合物を７０℃に５時間加熱した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン）し、最後にトルエン（無水、１２５ｍＬ）およびＴＥＡ（１０ｍＬ）中に再懸濁した。最後に、シクロデキストリン（１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）に溶解し、溶液をＳＰＰシリカ懸濁液に加え、得られたスラリーを１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法により、カルバメート結合および尿素結合したシクロデキストリンＣＳＰが生じる。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００２４】
第３の結合戦略により、シクロデキストリンおよびその誘導体が、どのようにしてエーテル結合で固定化され得るかの例が示されることになる。まず、５００ｍＬ丸底フラスコ中で、シクロデキストリン（１０ｍｍｏｌ）を３００ｍＬの無水ＤＭＦ中にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、１ｇのＮａＨをこの溶液に加え、得られた懸濁液を、不活性環境中、室温で、３０分間撹拌した。次に、未反応のＮａＨをすべてろ過して除き、ろ液を清浄な、乾燥した５００ｍＬ丸底フラスコに移し、そこに２ｍＬの３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを加えた。この溶液を９０℃に５時間加熱し、室温まで放冷させた。次に、この溶液を、乾燥ＳＰＰシリカ（２１ｇ）が入った５００ｍＬ丸底２口フラスコに移し、得られた懸濁液を１１０℃に１６時間加熱した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【実施例３】
【００２５】
糖ペプチドに基づくＳＰＰ  ＣＳＰの調製
大環状糖ペプチド（例えば、テイコプラニン、ボロマイシン、リストセチンＡ、ダルババシン、およびバンコマイシン）は、糖ペプチド（または糖ペプチドアナログ、例えばテイコプラニンアグリコン）をＳＰＰシリカに共有結合させるために使用することができる、アミン官能基およびヒドロキシル官能基を有している。大環状糖ペプチドをＳＰＰシリカ上に化学的に固定化するために使用することができる、数々の結合化学反応が存在する（例えば、エーテル、カルバメート、チオエーテル、チオカルバメート、エステル、トリアゾール、および尿素）。下記に、キラル選択剤のモデルとしてテイコプラニンを用いた、結合戦略の例を示す。
【００２６】
まず、２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、テイコプラニン（３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（６０ｍＬ）にアルゴンブランケット下で溶解し、ＴＥＡ（３ｍＬ）を加えた。次いで、３−トリエトキシシリルプロピルイソシアネート（４ｍｍｏｌ）を加え、反応容器を９０℃に５時間加熱した。一方、ＳＰＰシリカ（４ｇ）をまずオーブン（１２０℃）で４時間乾燥し、その後ディーン・スターク・トラップおよび２５０ｍＬ丸底２口フラスコを用いて共沸蒸留（トルエン、１２５ｍＬ）した。反応容器を、両方とも一旦室温まで放冷させ、テイコプラニン／ＤＭＦ溶液をＳＰＰシリカ−トルエンスラリーに加え、得られた懸濁液を１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法によって、カルバメート結合したテイコプラニンＣＳＰが生じる。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００２７】
あるいは、同様にカルバメート結合を形成する第２の結合化学反応を用いてもよい。ここで、ＳＰＰシリカ（３ｇ）を１２０℃で４時間乾燥した。次いで、トルエンを加え、残存する水を、ディーン・スターク・トラップを用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）させ、１ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランをシリカ（３．３ｇ）−トルエン（１２５ｍＬ）スラリーに加え、反応混合物を４時間還流した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してアミノ官能化ＳＰＰシリカを得た。次いで、１，６−ジイソシアネートヘキサン（２ｍＬ）を乾燥アミノ−シリカトルエンスラリーに加え（アルゴン下）、それを氷浴で冷却した。全てのジイソシアネートを加えた後、反応混合物を７０℃に５時間加熱した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン）し、最後にトルエン（無水、１２５ｍＬ）中に再懸濁し、ＴＥＡ（１０ｍＬ）を加えた。最後に、テイコプラニン（１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２５ｍＬ）に溶解し、溶液をＳＰＰシリカ懸濁液に加え、得られたスラリーを１６時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。この方法により、カルバメート結合および尿素結合したテイコプラニンＣＳＰが生じる。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００２８】
第３の結合戦略により、テイコプラニンおよびその誘導体が、どのようにしてエーテル結合で固定化され得るかの例が示されることになる。まず、５００ｍＬ丸底フラスコ中で、テイコプラニン（１０ｍｍｏｌ）を３００ｍＬの無水ＤＭＦ中にアルゴンブランケット下で溶解した。次いで、１ｇのＮａＨをこの溶液に加え、得られた懸濁液を、不活性環境中、室温で、３０分間撹拌した。次に、未反応のＮａＨをすべてろ過して除き、ろ液を清浄な、乾燥した５００ｍＬ丸底フラスコに移し、そこに２ｍＬの３−グリシドキシプロピルトリメトキシシランを加えた。この溶液を９０℃に５時間加熱し、室温まで放冷させた。次に、この溶液を、乾燥ＳＰＰシリカ（２１ｇ）が入った５００ｍＬ丸底２口フラスコに移し、得られた懸濁液を１１０℃に１６時間加熱した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【実施例４】
【００２９】
π錯体に基づくＳＰＰ  ＣＳＰの調製
π錯体に基づくＳＰＰキラル固定相は、数々の結合技術によって作製することができる。ここで、π錯体に基づくＳＰＰキラル固定相を作製するための、結合戦略（ｓｔｒａｔａｇｉｅｓ）の３つの例を示す。示されるキラル選択剤の第１のモデルは、ジニトロベンゾイルフェニルグリシンである。この例は、数々の、芳香族誘導体化アミノ酸に基づくＳＰＰ  ＣＳＰを製造するために使用することができる技術を示す。
【００３０】
まず、アミノプロピル官能化シリカを調製した。ＳＰＰシリカ（２０ｇ）を５００ｍＬ丸底２口フラスコに入れ、３２５ｍＬのトルエンを加えた。残存する水を、ディーン・スターク・トラップ用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）させ、１．６ｍＬの（３−アミノプロピル）トリエトキシシランをシリカ−トルエンスラリーに加え、反応混合物を１５時間還流した。その後、懸濁液をろ過し、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してアミノ官能化ＳＰＰシリカを得た。次に、Ｒ−（−）−Ｎ−（３，５−ジニトロベンゾイル）−フェニルグリシン（５ｇ）を１００ｍＬのＴＨＦに溶解し、溶液を、５ｇのアミノプロピルＳＰＰシリカが入った２５０ｍＬ丸底２口フラスコに加えた。次いで、懸濁液にＥＥＤＱ（４ｇ）を加え、反応液を室温で１６時間撹拌した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００３１】
ＤＮＢ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロフェナントレン−４−イル）ベンズアミドキラル選択剤は、初め、シリカへの結合に使用することができるオレフィン官能基を有している。以下の２つの結合戦略は、末端アルケンを有する、あらゆるブラシ型キラル選択剤、およびπ錯体キラル選択剤に適用することができる。第１の方法は、オレフィンの直接ヒドロシリル化を必要とし、次いでシリカ上に固定化される。具体的には、オレフィン形態のＤＮＢ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロフェナントレン−４−イル）ベンズアミドをＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解し、ＩＰＡ（１０ｍＬ）および酢酸（０．５ｍＬ）が入った１００ｍＬ丸底フラスコに加えた。次いで、ヘキサクロロ白金酸（５ｍｇ）をフラスコに加え、反応液を６５℃に３０分間加熱した。その後、反応溶液を室温まで冷却し、トリエトキシシラン（２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を５時間加熱還流し、その後溶液を除去した。エトキシシリル化した粗製物を無水ピリジン（２５ｍＬ）に溶解し、ＳＰＰシリカ（４ｇ）−トルエン（１００ｍＬ）スラリーに加えた。懸濁液を終夜還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００３２】
あるいは、オレフィンのＤＮＢ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロフェナントレン−４−イル）ベンズアミドキラル選択剤を、フリーラジカル開始剤を使用することによって、メルカプト官能化ＳＰＰシリカ上に導入することができる。これを行うために、まず、ＳＰＰシリカ（２０ｇ）を、３２５ｍＬのトルエンが入った５００ｍＬ丸底２口フラスコに入れて、メルカプトプロピルシリカを製造した。残存する水を、ディーン・スターク・トラップ用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）し、１．６ｍＬの（３−メルカプトプロピル）トリエトキシシランをシリカ−トルエンスラリーに加え、反応混合物を１５時間還流した。その後、懸濁液をろ過、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してメルカプト官能化ＳＰＰシリカを得た。次いで、メルカプトプロピルＳＰＰシリカ（６ｇ）をＴＨＦ（２００ｍＬ）でスラリー化し、オレフィン（４ｇ）をＡＩＢＮ（４００ｍｇ）と共に加えた。得られた懸濁液を１５時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【実施例５】
【００３３】
イオン交換に基づくＳＰＰ  ＣＳＰの調製
イオン交換ＳＰＰに基づくＣＳＰは、本質的に、アニオン性、カチオン性、または両性イオン性であり得る。電荷を持ち、ＳＰＰシリカに結合できるあらゆるブラシ型キラル選択剤を、イオン交換キラル選択剤として使用し得る。簡単に言えば、イオン交換キラル選択剤（ｔ−ブチルカルバモイル化キニーネ）の例を、ＣＳＰのモデルとして使用し得る。キニーネは、ＳＰＰシリカに結合するために使用することができるヒドロキシル基を有しているが、この場合には、ヒドロキシル基は、まずｔ−ブチルイソシアネートで誘導体化される。ヒドロキシル基を誘導体化した後も、キニーネは、ＳＰＰシリカに結合するために使用することができる第３級アミンおよび末端アルケンを依然として有している。陰イオン交換特性を維持するために、アミン基はフリーのままであるべきである。よって、キニーネ誘導体は、末端アルケンによって結合される。キニーネをＳＰＰシリカに化学結合するために用いられる方法が２つある。第１の方法は、オレフィンの直接ヒドロシリル化を必要とし、次いでシリカ上に固定化される。具体的には、オレフィン形態のｔ−ブチルキニーネを、酢酸（０．５ｍＬ）が入った１００ｍＬ丸底フラスコ中でＩＰＡ（１０ｍＬ）に溶解した。次いで、ヘキサクロロ白金酸（５ｍｇ）をフラスコに加え、反応液を６５℃に３０分間加熱した。その後、反応溶液を室温まで冷却し、トリエトキシシラン（２ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を５時間加熱還流し、その後溶液を除去した。エトキシシリル化した粗製物を無水ピリジン（２５ｍＬ）に溶解し、ＳＰＰシリカ（４ｇ）−トルエン（１００ｍＬ）スラリーに加えた。懸濁液を終夜還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００３４】
あるいは、オレフィンのｔ−ブチルカルバモイル化キニーネキラル選択剤を、フリーラジカル開始剤を使用することによって、メルカプト官能化ＳＰＰシリカ上に付加することができる。これを行うために、まず、ＳＰＰシリカ（２０ｇ）を、３２５ｍＬのトルエンが入った５００ｍＬ丸底２口フラスコに入れて、メルカプトプロピルシリカを製造した。残存する水を、ディーン・スターク・トラップ用いて除去し、トルエン−ＳＰＰシリカスラリーを共沸蒸留した。懸濁液を放冷（＜４０℃）し、１．６ｍＬの（３−メルカプトプロピル）トリエトキシシランをシリカ−トルエンスラリーに加え、反応混合物を１５時間還流した。その後、懸濁液をろ過、洗浄（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）し、乾燥してメルカプト官能化ＳＰＰシリカを得た。次いで、メルカプトプロピルＳＰＰシリカ（６ｇ）をＴＨＦ（２００ｍＬ）でスラリー化し、オレフィン（４ｇ）をＡＩＢＮ（４００ｍｇ）と共に加えた。得られた懸濁液を１５時間還流した。その後、反応物をろ過し、洗浄した（トルエン、ジクロロメタン、イソプロパノール、メタノール、水、アセトン）。得られたＳＰＰ  ＣＳＰを乾燥し、次いでステンレス鋼管中にスラリー充填した。
【００３５】
使用したクロマトグラフシステムは、ダイオードアレイ検出器、オートサンプラー、およびクォータナリポンプから構成されるアジレント１２６０ＨＰＬＣ（アジレント・テクノロジー社、サンタクララ、ＣＡ、ＵＳＡ）である。全てのＨＰＬＣ実験において、注入量は０．５μＬであった。移動相は、真空下で５分間超音波処理して脱気した。分析物は、メタノールに溶解するか、適当な移動相に溶解した。分析物の原液は、必要であれば、移動相でさらに希釈した。極性有機溶媒モード、順相モード、および逆相モードで用いた移動相を、各例の下に示す。
【００３６】
異なる固定相の性能を比較する場合、重要なパラメーターは、１．分離時間、２．効率（Ｎまたは理論段数）、３．選択性（α）、４．分離度（Ｒｓ）、および５．ピーク形状、である。ＳＰＰに基づくキラル固定相が、全多孔性粒子（ＦＰＰ）に基づく従来型のキラル固定相に対して優位なのは、これらのパラメーターのほとんど、また、しばしば全てが、本特許に含まれる種類のキラル選択剤のためのＳＰＰに有利であるという点である。現在、ほとんどのキラル分離で用いられている従来型ＦＰＰ粒子は、直径５μｍの粒子である。このような従来型粒子とＳＰＰ粒子のＣＳＰ、その特性、およびキラル選択剤（イソプロピルＣＦ６の）導入量の比較を、下記の表２に示す。
【００３７】
【表２】
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【００３８】
本発明によれば、ＳＰＰのポアサイズは、約１００Å〜約３００Å、好ましくは約１００Å〜約１５０Å、より好ましくは約１１０Å〜約１３０Åの範囲である。本発明によるＳＰＰは、約１２０Åのポアサイズを有する。また、本発明によれば、ＳＰＰの表面積は、約１００ｍ２／ｇ〜約５００ｍ２／ｇ、好ましくは約１００ｍ２／ｇ〜約４００ｍ２／ｇ、約１００ｍ２／ｇ〜約３００ｍ２／ｇ、または約１００ｍ２／ｇ〜約２００ｍ２／ｇ、より好ましくは約１１０ｍ２／ｇ〜約１５０ｍ２／ｇの範囲である。本発明によるＳＰＰの表面積は、約１２０ｍ２／ｇである
【００３９】
ＳＰＰの表面積はＦＰＰと比較してはるかに小さいが、にもかかわらず、ＳＰＰで、キラル選択剤についてより高い相対的被覆度（すなわちμｍｏｌ／ｍ２）が実際に得られたことに注目されたい。これは、非ポリマー型である１、２、および４のＣＳＰについて、同等の、また、しばしばより高い選択性（α）を実現する上で、より重要な因子である。また、これは、優れた性能を有するカラムを製造するために必要な、高価なキラル選択剤がはるかに少量であることを示し、このことは、これらのＳＰＰ  ＣＳＰの、別の重要なパラメーターである。
【００４０】
本発明によるＳＰＰ  ＣＳＰが、比較用のＦＰＰに対して、同等ないしより高いエナンチオマー選択性（α）を有することを表す例を図１０および１１に示す。図１０は、５および３μｍのＦＰＰ、ならびに２．７μｍのＳＰＰに結合したヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンキラル選択剤に関する、単一組成の移動相条件を用いた、Ｒ／Ｓ−フェニルプロピオン酸のエナンチオマー分離の比較である。ＳＰＰ相が効率を顕著に改善するのみならず、選択性も改善することに注目することが重要である。単一組成の移動相は、１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ  ｐＨ４．１／ＡＣＮ（７５／２５）であった。流速は１．０ｍＬ／分であり、ＵＶ２５４ｎｍで検出した。図１１は、５μｍのＦＰＰ、および２．７μｍのＳＰＰに結合したバンコマイシンキラル選択剤を用いた、Ｒ／Ｓ−ミアンセリンのエナンチオマー分離を示す。ＳＰＰ相において、エナンチオマー選択性（ａ）が改善し、保持時間がより短いことに注目することが重要である。メタノールおよび０．０５％ギ酸アンモニウムの単一組成の移動相を用いた。流速は１．０ｍＬ／分であり、ＵＶ２５４ｎｍで検出した。
【００４１】
ＳＰＰ  ＣＳＰに関する優れた換算理論段高さ（ｈ）、およびよりよいピーク形状を表すデータを下記の表に示す。この「ｈ」が小さいほど、カラムの充填はより適切である可能性があり、それによってより高い効率、すなわちより高い理論段数がもたらされることに注目されたい。
【００４２】
【表３】
2017522579.tif 000005
【００４３】
【表４】
2017522579.tif 000006
【００４４】
図１２は、ＳＰＰに基づくＣＳＰ（図１２の下側の曲線）と同じ移動相とを用いたＲ，Ｓ−ＢＩＮＡＭのエナンチオマー分析についての、優れた効率（Ｎ）、分離度（Ｒｓ）、およびより短い分析時間を示す。より具体的には、図１２は、ＳＰＰおよびＦＰＰに結合したイソプロピル化シクロフルクタン６による、１．０ｍＬ／分、Ｔｃｏｌ＝２５℃における、Ｒ，Ｓ−ＢＩＮＡＭのエナンチオマー分離を示す。全てのカラムは、５ｃｍ×０．４６ｃｍ（直径）であった。ヘプタン−エタノール（９２：８）の単一組成移動相（ＭＰ）モードを用いた。
【００４５】
図１３は、移動相組成を、保持時間が同等となるように調節した他は、図１２と同様の分離を示す。この場合には、ＳＰＰに基づくＣＳＰ（下側の曲線）の性能は、全多孔性粒子（ＦＰＰ）に基づく固定相と比較して、より一層高い。これらのエナンチオマー分離は、ＳＰＰおよびＦＰＰに結合したイソプロピル化シクロフルクタン６を用いて、１．０ｍＬ／分、Ｔｃｏｌ＝２５℃で実施した。全てのカラムは、５ｃｍ×０．４６ｃｍ（直径）であった。分離は、分析時間が一定で、各カラムについて移動相組成を変えて実施した。移動相（ＭＰ）＝（ｉ）ヘプタン−エタノール（８２：１８）、（ｉｉ）ヘプタン−エタノール（８５：１５）、（ｉｉｉ）ヘプタン−エタノール（８２：１８）、および（ｉｖ）ヘプタン−エタノール（９２：８）であった。
【００４６】
図１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、および２４は、現在市販されている同じキラル選択剤を用いたＦＰＰと比較して、より高い効率、より高い分離度、およびより速い分析時間をもたらす種々のＳＰＰに基づくＣＳＰの能力の追加の例である。
【００４７】
図１４は、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したイソプロピル化シクロフルクタン６キラル選択剤を用いた、ＮＯＢＩＮエナンチオマーの分離を示す。移動相は、ヘプタン／エタノール（９５／５）であった。ＳＰＰ−ＣＳＰを用いた分離はほぼ半分の時間で完了したが、どちらのクロマトグラムでも観測された分離度に注目されたい。このような優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴うことなく、効率の向上がもたらされた結果である。
【００４８】
図１５は、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したイソプロピル化シクロフルクタン６キラル選択剤を用いた、１−（１−ナフチル）エチルアミンエナンチオマーの分離を示す。移動相は、０．３％の酢酸（ＡＡ）および０．２％のトリエチルアミン（ＴＥＡ）を含む、アセトニトリル／メタノール（６０／４０）であった。ＳＰＰ−ＣＳＰを使用した場合に、分離度および効率が向上したことに注目されたい。また、ＳＰＰ−ＣＳＰを用いて分離を行った場合、分析時間が大幅に短かった。優位性には、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴うことなく、効率の向上がもたらされたことが含まれる。
【００４９】
図１６は、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンキラル選択剤を用いた、Ｊａｃｏｂｓｅｎ触媒のエナンチオマーの分離を示す。移動相は、ＡＣＮ／メタノール（９５／５）であった（流速：１．０ｍＬ／分）。ＳＰＰ−ＣＳＰを用いた分離がほぼ半分の時間で完了したが、ＳＰＰでは分離度がより高いことに注目されたい。このような優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴うことなく、効率の向上がもたらされた結果である。
【００５０】
図１７は、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンキラル選択剤を用いた、（ＲＲ／ＳＳ）−ヒドロベンゾインエナンチオマーの分離を示す。移動相は、１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ（ｐＨ４．１）／ＡＣＮ（７５／２５）であった（流速：１．０ｍＬ／分）。ＳＰＰ−ＣＳＰを用いた分離がほぼ半分の時間で完了したが、どちらのクロマトグラムでもベースライン分離が観測されたことに注目されたい。このような優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴うことなく、効率の向上がもたらされた結果である。
【００５１】
図１８は、ｔ−ブチルカルバモイル化キニーネに基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例を示す。１００ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ：ＭｅＯＨ（２０：８０）（混合液は、酢酸でｐＨａ６．０に合わせた）、１．０ｍＬ／分、２２℃。
【００５２】
図１９は、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したイソプロピル化シクロフルクタン６キラル選択剤を用いた、フィプロニルエナンチオマーの分離を示す。移動相は、ヘプタン／エタノール（９５／５）であった。ＳＰＰ−ＣＳＰを使用した場合に、分離度および効率が向上したことに注目されたい。また、ＳＰＰ−ＣＳＰを用いて分離を行った場合、分析時間が大幅に短かった。優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴うことなく、効率の向上がもたらされた結果である。
【００５３】
図２０は、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したイソプロピレート化キラル選択剤を用いた、フィプロニルのエナンチオマー分離に関する保持係数の比較を示す。移動相組成は、全ての化合物の保持が同様になるように変化させた。ＦＰＰクロマトグラムについては、移動相は、ヘプタン／エタノール（９２／８）であった。ＳＰＰクロマトグラムについては、移動相は、ヘプタン／エタノール（９５／５）であった。どちらの場合も、流速は、１．０ｍＬ／分であった。この例は、ＳＰＰ−ＣＳＰを用いた場合に、分離性能が総合的に向上することを明確に実証する。ＳＰＰ−ＣＳＰについて、分離度が大幅に向上していることに注目されたい。
【００５４】
図２１は、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したイソプロピル化シクロフルクタン６キラル選択剤を用いた、アムロジピンエナンチオマーの分離を示す。移動相は、０．３％の酢酸（ＡＡ）および０．２％のトリエチルアミン（ＴＥＡ）を含む、アセトニトリル／メタノール（８０／２０）であった。ＳＰＰ−ＣＳＰを用いた分離はほぼ半分の時間で完了したが、どちらのクロマトグラムでも同等の分離度が観測されたことに注目されたい。このような優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴うことなく、効率の向上がもたらされた結果である。
【００５５】
図２２は、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンキラル選択剤を用いた、２−フェニルプロピオン酸エナンチオマーの分離を示す。移動相は、１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ（ｐＨ４．１）／ＡＣＮ（７５／２５）であった（流速：１．０ｍＬ／分）。ＳＰＰ−ＣＳＰを用いた分離はほぼ半分の時間で完了したが、どちらのクロマトグラムでも同等の分離度が観測されたことに注目されたい。このような優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴うことなく、効率の向上がもたらされた結果である。
【００５６】
図２３は、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンキラル選択剤を用いた、クロルタリドン（ｃｈｌｏｒｔｈａｌｄｏｎｅ）エナンチオマーの分離を示す。ＳＰＰ−ＣＳＰを用いた分離はほぼ半分の時間で完了したが、どちらのクロマトグラムでもベースライン分離が観測されたことに注目されたい。移動相は、１０ｍＭ  ＮＨ４ＯＡｃ（ｐＨ４．１）／ＡＣＮ（８５／１５）であった（流速：１．０ｍＬ／分）。このような優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴うことなく、効率の向上がもたらされた結果である。
【００５７】
図２４は、ＳＦＣにおける、ＦＰＰおよびＳＰＰに結合したイソプロピル化シクロフルクタン６キラル選択剤を用いた、（１Ｒ，２Ｓ／１Ｓ，２Ｒ）−２−アミノ−１，２−ジフェニルエタノールエナンチオマーのＳＦＣ分離を示す。移動相は、二酸化炭素／メタノール（８０／２０）（０．３％のＴＦＡおよび０．２％のＴＥＡをメタノールに加えた）であった。ＳＰＰ−ＣＳＰを使用した場合に、分離度および効率が向上したことに注目されたい。また、ＳＰＰ−ＣＳＰを用いて分離を行った場合、分析時間が大幅に短かった。優位性は、ＳＰＰによって、選択性の低下を伴うことなく、効率の向上がもたらされた結果である。
【００５８】
ＳＰＰに基づく固定相に関する、上記した全ての優位性は、ＦＰＰに対して、ＳＰＰは独特な構造であることによる。図２５は、理論段相当高さ（Ｈ）対移動相の線速度のｖａｎ  Ｄｅｅｍｔｅｒプロットである。「Ｈ」は、小さいほどよく、高流速における曲線の上昇が急峻でないほどよい。このような速度論的解析において、ＳＰＰは、明らかに、はるかに高い性能を示す。ＦＰＰ−ＣＳＰおよびＳＰＰ−ＣＳＰに関する、ＮＯＢＩＮについての段高さ（最初に溶出したエナンチオマーに基づく）の、流速への依存性。分離条件は、どちらのＣＳＰについても同じである。結合したイソプロピル化シクロフルクタン６キラル選択剤を用いた。ＳＰＰに基づくＣＳＰに関して、高流速（例えば、３．０ｍＬ／分）において効率低下が抑制され、それが高速分離を行う際に非常に有利であることに注目することが重要である。
【００５９】
図２６は、ＦＰＰ−ＣＳＰおよびＳＰＰ−ＣＳＰに関する、フィプロニルについての分析時間あたりの効率（最初に溶出したエナンチオマーに基づく）の、流速への依存性のプロットである。ＳＰＰはより優れていることが、明確に示されている。分離条件は、いずれのＣＳＰにおいても同じであった。どちらの場合も、結合したイソプロピル化シクロフルクタン６キラル選択剤を用いた。ＳＰＰに基づくＣＳＰに関して、高流速（例えば、３ｍＬ／分）において分析時間あたりの効率の改善が促進されることに注目することが重要である。この利点は、多数の化合物をハイスループット分析するために有用である。
【００６０】
図２７は、時間あたりのエナンチオマー分離度（Ｒｓ）対流速のプロットである。ここでもまた、ＳＰＰは、はるかに優れている。フィプロニルについての分離度（最初に溶出したエナンチオマーに基づく）の、ＦＰＰ−ＣＳＰおよびＳＰＰ−ＣＳＰに関する流速への依存性は、ＳＰＰ−ＣＳＰの優位性を示す。分離条件は、各ＣＳＰについて同じである。どちらの場合も、結合したイソプロピル化シクロフルクタン６キラル選択剤を用いた。高流速（例えば、３ｍＬ／分）において分析時間あたりの分離度の改善が促進されることに注目することが重要である。この利点は、多数の化合物をハイスループット分析するために有用である。
【００６１】
ＳＰＰを用いて製造したＣＳＰが極めて高効率であり、そのＣＳＰを含有するカラムが、直径２μｍ未満のＦＰＰを含有するカラムよりも背圧が低いという事実のため、本出願人らは、出願人らのＳＰＰで、超高速キラル分離を容易に行うことができる。種々のキラル選択剤を用いて製造したＳＰＰ−ＣＳＰについての例を図２８〜３４に示す。
【００６２】
図２８は、イソプロピル化シクロフルクタン６に基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例を示す。ＡＣＮ／ＭｅＯＨ／ＴＦＡ／ＴＥＡ、７０／３０／０．３／０．２、４．５ｍＬ／分、２２℃。
【００６３】
図２９は、バンコマイシンに基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例を示す。ＭｅＯＨ、５．０ｍＬ／分、６０℃。
【００６４】
図３０は、３，５−ジメチルフェニルカルバモイル化シクロフルクタン７に基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例を示す。Ｈｅｔｐ／ＥｔＯＨ、９０／１０、４．８ｍＬ／分、２２℃。
【００６５】
図３１は、テイコプラニンアグリコンに基づくＳＰＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例を示す。ＭｅＯＨ、４．７ｍＬ／分、６０℃。
【００６６】
図３２は、ヒドロキシプロピレート化−β−シクロデキストリンに基づくＳＰＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例を示す。ＡＣＮ／ＭｅＯＨ／ＴＦＡ／ＴＥＡ、９７／３／０．３／０．２、４．８ｍＬ／分、６０℃。
【００６７】
図３３は、テイコプラニンに基づくＳＰＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例を示す。水／ＭｅＯＨ、６０／４０、３．０ｍＬ／分、２２℃。
【００６８】
図３４は、ＤＮＢ−フェニルグリシンに基づくＳＰＰ  ＣＳＰを用いた、高効率で高速なエナンチオマー分離の例を示す。ヘプタン：エタノール（９５：５）、５．０ｍＬ／分、２２℃。
【００６９】
以下は、本発明によるいくつかの実施形態である。
【００７０】
実施形態１。支持体とキラル固定相とを含む固定相。
【００７１】
実施形態２。支持体が、表面多孔性粒子（ＳＰＰ）を含む、実施形態１に記載の固定相。
【００７２】
実施形態３。キラル固定相が、キラル選択剤を含む、実施形態１に記載の固定相。
【００７３】
実施形態４。ＳＰＰが、約０．５μｍ〜約２０μｍの粒子径を有する、実施形態２に記載の固定相。
【００７４】
実施形態５。ＳＰＰが、約１．３μｍ〜約１０μｍの粒子径を有する、実施形態２に記載の固定相。
【００７５】
実施形態６。ＳＰＰが、約１．７μｍ〜約５．０μｍの粒子径を有する、実施形態２に記載の固定相。
【００７６】
実施形態７。ＳＰＰが、約１．７、約２．７、および約４．０μｍの中から選択される粒子径を有する、実施形態２に記載の固定相。
【００７７】
実施形態８。ＳＰＰが、約１．７μｍの粒子径を有する、実施形態２に記載の固定相。
【００７８】
実施形態９。ＳＰＰが、約２．７μｍの粒子径を有する、実施形態２に記載の固定相。
【００７９】
実施形態１０。ＳＰＰが、約４．０μｍの粒子径を有する、実施形態２に記載の固定相。
【００８０】
実施形態１１。ＳＰＰが、約１００Å〜約３００Åのポアサイズを有する、実施形態２に記載の固定相。
【００８１】
実施形態１２。ＳＰＰが、約１００Å〜約１５０Åのポアサイズを有する、実施形態２に記載の固定相。
【００８２】
実施形態１３。ＳＰＰが、約１１０Å〜約１３０Åのポアサイズを有する、実施形態２に記載の固定相。
【００８３】
実施形態１４。ＳＰＰが、約１２０Åのポアサイズを有する、実施形態２に記載の固定相。
【００８４】
実施形態１５。ＳＰＰが、約１５０ｍ２／ｇ〜約５００ｍ２／ｇの表面積を有する、実施形態２に記載の固定相。
【００８５】
実施形態１６。ＳＰＰが、約１２０ｍ２／ｇの表面積を有する、実施形態２に記載の固定相。
【００８６】
実施形態１７。キラル選択剤が、ＳＰＰに共有結合している、実施形態３に記載の固定相。
【００８７】
実施形態１８。キラル選択剤が、オリゴ糖および誘導体、環状オリゴ糖および誘導体、ペプチドおよび誘導体、糖ペプチドおよび誘導体、大環状糖ペプチドおよび誘導体、π錯体、キラルクラウンエーテル、リガンド交換体、ならびにイオン交換体の中から選択される、実施形態３に記載の固定相。
【００８８】
実施形態１９。キラル選択剤が、シクロデキストリン、誘導体化シクロデキストリン、シクロフルクタン、誘導体化シクロフルクタン、テイコプラニン、バンコマイシン、テイコプラニンアグリコン、リストセチンＡ、ダルババシン、ボロマイシン、ＤＮＢ−フェニルグリシン、ＤＮＢ−ジフェニルエチレンジアミン、ＤＮＢ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロフェナントレン−４−イル）ベンズアミド、ＤＮＢ−１，２−ジアミノシクロヘキサン、３，３’−ジフェニル−ビナフチル官能化（ｆｕｎｃｉｏｎａｌｉｚｅｄ）１８−クラウン−６、プロリン、ペニシラミン、ヒドロキシプロリン、キニーネ、誘導体化キニーネ、キニジン、および誘導体化キニジンの中から選択される、実施形態３に記載の固定相。
【００８９】
実施形態２０。表面多孔性粒子に結合したキラル選択剤を含む、表面多孔性粒子に基づくキラル固定相。
【００９０】
実施形態２１。キラル選択剤が、ＳＰＰに共有結合している、実施形態２０の表面多孔性粒子。
【００９１】
実施形態２２。キラル選択剤が、オリゴ糖および誘導体、環状オリゴ糖および誘導体、ペプチドおよび誘導体、糖ペプチドおよび誘導体、大環状糖ペプチドおよび誘導体、π錯体、キラルクラウンエーテル、リガンド交換体、ならびにイオン交換体の中から選択される、実施形態２０の表面多孔性粒子。
【００９２】
実施形態２３。キラル選択剤が、シクロデキストリン、誘導体化シクロデキストリン、シクロフルクタン、誘導体化シクロフルクタン、テイコプラニン、バンコマイシン、テイコプラニンアグリコン、リストセチンＡ、ダルババシン、ボロマイシン、ＤＮＢ−フェニルグリシン、ＤＮＢ−ジフェニルエチレンジアミン、ＤＮＢ−Ｎ−（１，２，３，４−テトラヒドロフェナントレン−４−イル）ベンズアミド、ＤＮＢ−１，２−ジアミノシクロヘキサン、３，３’−ジフェニル−ビナフチル官能化（ｆｕｎｃｉｏｎａｌｉｚｅｄ）１８−クラウン−６、プロリン、ペニシラミン、ヒドロキシプロリン、キニーネ、誘導体化キニーネ、キニジン、および誘導体化キニジンの中から選択される、実施形態２０の表面多孔性粒子。
【００９３】
実施形態２４。キラル選択剤が、ネイティブもしくは誘導体化シクロフルクタン、またはネイティブもしくは誘導体化シクロデキストリンである、実施形態２０の表面多孔性粒子。
【００９４】
実施形態２５。誘導体化シクロフルクタンおよび誘導体化シクロデキストリンの誘導体化基が、アルカン（例えば、Ｃ１〜Ｃ３０直鎖アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０分岐アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０不飽和アルカン、Ｃ１〜Ｃ３０環状アルカン、ヘテロ原子（例えば、Ｎ、Ｓ、Ｏ）を含むＣ１〜Ｃ３０の直鎖および／または環状アルカン）、または芳香族（ベンジル、誘導体化ベンジル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、フェニル、誘導体化フェニル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、ナフチル、誘導体化ナフチル（例えば、ＮＯ２、Ｃｌ、Ｆ、Ｂｒ、ＣＨ３官能化）、またはビアリール）である、実施形態２４に記載の表面多孔性粒子。
【００９５】
実施形態２６。表面多孔性粒子に結合したキラル選択剤が、エーテル、カルバメート、チオエーテル、チオカルバメート、エステル、トリアゾール、または尿素結合によって結合する、実施形態２０に記載の表面多孔性粒子。
【００９６】
実施形態２７。キラル選択剤が、大環状糖ペプチド、π錯体、およびアニオン性交換体、カチオン性交換体、または両性イオン性交換体の中から選択される、実施形態２０に記載の表面多孔性粒子。
【００９７】
実施形態２８。大環状糖ペプチドが、テイコプラニン、ボロマイシン、リストセチンＡ、ダルババシン、およびバンコマイシンの中から選択される、実施形態２７に記載の表面多孔性粒子。
【００９８】
実施形態２９。π錯体が、ジニトロベンゾイルフェニルグリシンである、実施形態２７に記載の表面多孔性粒子。
【００９９】
実施形態３０。アニオン性交換体が、ｔ−ブチルカルバモイル化キニーネである、実施形態２７に記載の表面多孔性粒子。
【０１００】
実施形態３１。表面多孔性粒子およびキラル選択剤を含む、液体クロマトグラフィーキラル分離のための固定相支持体。
【０１０１】
実施形態３２。表面多孔性粒子に結合し、従来型の固定相支持体に対して、より高い効率、より高い分離度、より短い保持時間、および同等ないしより高い選択性を含む優れたキラルクロマトグラフィー結果をもたらす中または小サイズのキラル選択剤を有する、表面多孔性粒子。
【０１０２】
実施形態３３。支持体と、特に、表面多孔性粒子に結合し、または不可逆的に吸着され、ブラシ型キラル表面多孔性粒子を形成する、小ないし中サイズのキラル選択剤とを含み、それによって従来型の支持体に対して、より高い効率、より高い分離度、およびより短い保持時間を含む優れたキラルクロマトグラフィー結果をもたらす、液体クロマトグラフィーキラル分離のための固定相支持体。
【０１０３】
実施形態３４。キラル分子のエナンチオマーが分離するように、キラル分子を含む混合物を、表面多孔性粒子に基づくキラル固定相と接触させることを含む、少なくとも１つのキラル分子をエナンチオ分離する方法。
【０１０４】
実施形態３５。オリゴ糖および誘導体、環状オリゴ糖および誘導体、ペプチドおよび誘導体、糖ペプチドおよび誘導体、大環状糖ペプチドおよび誘導体、π錯体、キラルクラウンエーテル、リガンド交換体、およびイオン交換体の中からキラル選択剤を選択すること、ならびにキラル選択剤を表面多孔性粒子に共有結合させること、それによって表面多孔性粒子キラル固定相を得ることを含む、表面多孔性粒子キラル固定相の製造方法。
【０１０５】
本発明の好ましい実施形態を本明細書に記載したが、本明細書に示した記載は例示にすぎない。本明細書に記載した本発明のさらなる改変に当業者は気づくであろうし、そのような全ての改変は、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲内であるとみなされる。
【図１】
2017522579.tif 000007
【図２】
2017522579.tif 000008
【図３】
2017522579.tif 000009
【図４】
2017522579.tif 000010
【図５】
2017522579.tif 000011
【図６】
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【図７】
2017522579.tif 000013
【図８】
2017522579.tif 000014
【図９】
2017522579.tif 000015
【図１０】
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【図１１】
2017522579.tif 000017
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
2017522579.tif 000020
【図１５】
2017522579.tif 000021
【図１６】
2017522579.tif 000022
【図１７】
2017522579.tif 000023
【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
2017522579.tif 000029
【図２４】
2017522579.tif 000030
【図２５】
2017522579.tif 000031
【図２６】
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【図２７】
2017522579.tif 000033
【図２８】
2017522579.tif 000034
【図２９】
2017522579.tif 000035
【図３０】
2017522579.tif 000036
【図３１】
2017522579.tif 000037
【図３２】
2017522579.tif 000038
【図３３】
2017522579.tif 000039
【図３４】
2017522579.tif 000040
【国際調査報告】
2017522579.tif 000041