(57)【要約】本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを結合、中和、及び治療するのに効果的な抗インフルエンザＡウイルス抗体、そのような抗体を含む組成物、及びその使用方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防又は治療するための方法であって、該抗体が三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号５８のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６１のアミノ酸配列を含む
方法。
【請求項２】
抗体が配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抗体が配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号７４のアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域が配列番号７５のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
抗体が配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
抗体が配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
抗体が重鎖と軽鎖を含み、重鎖が配列番号７６のアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖が配列番号７７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防又は治療するための方法であって、該抗体が三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１が配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２が配列番号６３のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２が配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３が配列番号６７のアミノ酸配列を含む
方法。
【請求項９】
抗体が配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
抗体が配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
抗体が重鎖可変領域と軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が配列番号７８のアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖可変領域が配列番号７９のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
抗体が配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
抗体が配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
抗体が重鎖と軽鎖を含み、重鎖が配列番号８０のアミノ酸配列を含み、かつ軽鎖が配列番号８１のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
方法が追加の治療剤を投与することをさらに含み、追加の治療剤がノイラミニダーゼ阻害剤、抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ノイラミニダーゼ阻害剤がオセルタミビル、ザナミビル又はペラミビルである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療又は予防のための医薬の製造における、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【請求項１８】
インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療又は予防における使用のための、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体を含む組成物。
【請求項１９】
インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療又は予防における使用のための、請求項１から１４のいずれか一項に記載の抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、全内容が本明細書において出典明示により援用される２０１４年１月２７日出願の米国仮特許出願第６１／９３１９４９号の利益を主張する。
【０００２】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全内容は本明細書において出典明示により援用される。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１５年１月１３日に作成され、Ｐ５７８２Ｒ１−ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、大きさは５１１０６バイトである。
【０００３】
発明の分野
本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの結合、中和、及び治療に効果的な抗インフルエンザＡ型ウイルス抗体、そのような抗体を含む組成物、並びにそれらの使用方法を提供する。
【背景技術】
【０００４】
インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスは、通常鳥の間で広まり、アジアの家禽群で風土病であるインフルエンザウイルスの亜群の一つである。最近まで、このインフルエンザウイルスは、ヒトにおいては見られなかった。重度のヒトへの感染に関連する新たな再集合体鳥インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスは、２０１３年初頭に中国で最初に報告された。（例えば、Gao et al. (2013) NEJM 368:1888-1897を参照。）この２０１３年春の鳥インフルエンザウイルス感染のヒトにおける最初の大流行は、１３２の確認例及び４４人の死亡をもたらした。感染した個体のほとんどは、感染した家禽との直接接触を介してウイルスに罹患したと思われる。
【０００５】
現在まで、鳥インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスのヒトからヒトへの持続的な伝染は観察されていない。しかし、ヒトのように咳やくしゃみを介して相互に感染するフェレットを使った研究では、ヒトから単離された一つのインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス株が呼吸器飛沫を介してフェレットからフェレットへ伝染しうることが示された。
【０００６】
重大な関心事は、このウイルスのパンデミックの可能性である。インフルエンザウイルスは絶えず変化するため、鳥インフルエンザ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスがヒト間で伝染するようになる可能性、またそのような伝染が世界的なパンデミックにつながる可能性は除外できない。Ｈ７Ｎ９インフルエンザウイルスがヒトからヒトへ効率的に伝染する能力を得た場合、ヒトはこのような種類のウイルスに対する防御免疫応答がないため、世界的な大流行が起こりうる。したがって、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスのヒト感染を治療及び予防するのに効果的な新たな治療法に対するニーズが存在する。
【０００７】
本発明は、このニーズを満たし、かつ鳥インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染治療の他の利益も提供する。
【発明の概要】
【０００８】
本発明は、抗ヘマグルチニン（抗ＨＡ）抗体、抗ヘマグルチニン抗体を含む組成物、及びそれらを使用する方法を提供する。本発明の抗ヘマグルチニン抗体は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを中和するのに効果的であり、また本発明の抗ヘマグルチニン抗体は、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、特に抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体である。
【０００９】
本発明者らは、Ｈ７  ＨＡタンパク質に結合し、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを中和するのに効果的な広域中和ヒト抗体を発見した。本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、例えばインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス分離株であるＡ／上海／１／２０１３及びＡ／安徽／１／２０１３のＨ７ＨＡを結合するのに効果的である。さらに、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、遺伝子再集合による（ｒｅａｓｓｏｒｔｅｄ）Ｈ７Ｎ９インフルエンザＡウイルス株であるＡ／上海／２／２０１３  ＩＤＣＤＣ  ＲＧ３２Ａを中和するのに効果的である。
【００１０】
いくつかの実施態様において、本発明の分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号５８のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
【００１１】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、及び／又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号５８のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
【００１２】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの軽鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
【００１３】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの重鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号５８のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
【００１５】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号５８のアミノ酸配列を含む。
【００１６】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は配列番号７４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７５のアミノ酸配列を含む。
【００１７】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００１８】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００１９】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖及び軽鎖を含み、ここで、重鎖は配列番号７６のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号７７．のアミノ酸配列を含む。
【００２０】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００２１】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００２２】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号５８のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
【００２３】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は配列番号７４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７５のアミノ酸配列を含む。
【００２４】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は配列番号７６のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
【００２５】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は配列番号７６のアミノ酸配列からなり、軽鎖は配列番号７７のアミノ酸配列からなる。
【００２６】
いくつかの実施態様において、本発明の分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６３のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【００２７】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、及び／又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６３のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【００２８】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの軽鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＬＶＲ−Ｌ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【００２９】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの重鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６３のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号６４のアミノ酸配列を含む。
【００３０】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【００３１】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６３のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号６４のアミノ酸配列を含む。
【００３２】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は配列番号７８のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
【００３３】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００３４】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００３５】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖及び軽鎖を含み、ここで、重鎖は配列番号８０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号８１のアミノ酸配列を含む。
【００３６】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００３７】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００３８】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６３のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【００３９】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は配列番号７８のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
【００４０】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は配列番号８０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号８１のアミノ酸配列を含む。
【００４１】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は配列番号８０のアミノ酸配列からなり、軽鎖は配列番号８１のアミノ酸配列からなる。
【００４２】
いくつかの実施態様において、本発明の分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号７０のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号７１のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号７３のアミノ酸配列を含む。
【００４３】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、及び／又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号７０のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号７１のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号７３のアミノ酸配列を含む。
【００４４】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの軽鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＬＶＲ−Ｌ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号７１のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号７３のアミノ酸配列を含む。
【００４５】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの重鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号７０のアミノ酸配列を含む。
【００４６】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号７１のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号７３のアミノ酸配列を含む。
【００４７】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６９のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号７０のアミノ酸配列を含む。
【００４８】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は配列番号８２のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
【００４９】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【００５０】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【００５１】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖及び軽鎖を含み、ここで、重鎖は配列番号８４のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号８５のアミノ酸配列を含む。
【００５２】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【００５３】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【００５４】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６８のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６９のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号７０のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号７１のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号７２のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号７３のアミノ酸配列を含む。
【００５５】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は配列番号８２のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号８３のアミノ酸配列を含む。
【００５６】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は配列番号８４のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号８５のアミノ酸配列を含む。
【００５７】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、治療又は中和するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は配列番号８４のアミノ酸配列からなり、軽鎖は配列番号８５のアミノ酸配列からなる。
【００５８】
本発明はまた、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体をコードする分離された核酸も提供する。本発明はまた、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体をコードする核酸を含むベクターも提供する。本発明はまた、本発明の核酸又はベクターを含む宿主細胞も提供する。ベクターは、例えば発現ベクターのような組換えベクターなど、いかなる種類のものでもよい。種々の宿主細胞のいずれも使用することができる。一実施態様において、宿主細胞は原核細胞、例えば大腸菌である。別の実施態様において、宿主細胞は真核細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような哺乳動物細胞である。
【００５９】
本発明はさらに、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を製造する方法を提供する。本発明は、例えば、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体（本明細書に定義されているもので、完全長抗体及びその断片を含む）を作製するための方法を提供し、該方法は、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体又はその断片が産生されるように、該抗体又はその断片をコードする本発明の組換えベクターを適切な宿主細胞中に発現させることを含む。いくつかの実施態様において、該方法は、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体（又はその断片）をコードする核酸が発現するように、該核酸を含む宿主細胞を培養することを含む。該方法は、宿主細胞培養株又は宿主細胞培地から抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体又はその断片を回収することをさらに含んでもよい。
【００６０】
本発明はまた、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤も提供する。該薬学的製剤は、追加の治療剤（例えば、オセルタミビル、ザナミビル又はペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；他の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、他の抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体等の他の抗体）をさらに含んでもよい。
【００６１】
本発明はまた、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物も提供する。該組成物は、追加の治療剤（例えば、オセルタミビル、ザナミビル又はペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；他の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、他の抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体等の他の抗体）をさらに含んでもよい。
【００６２】
本発明はまた、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の予防における使用のための、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物も提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の予防における使用のための、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む薬学的組成物を提供する。本発明はさらに、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療における使用のための、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療における使用のための、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む薬学的組成物を提供する。本発明はさらに、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の阻害における使用のための、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の阻害又は中和における使用のための、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む薬学的組成物を提供する。
【００６３】
本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物は、医薬の製造においても使用されうる。該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の阻害、治療又は予防における使用のためであってよい。ある実施態様において、該医薬は、追加の治療剤（例えば、オセルタミビル、ザナミビル又はペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；他の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、他の抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体等の他の抗体）をさらに含んでもよい。
【００６４】
本発明はまた、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物の有効量を必要する患者に投与し、それによりインフルエンザＡウイルスの感染を阻害することを含む、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの感染を阻害するための方法も提供する。本発明はまた、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物の有効量を必要する患者に投与し、それによりインフルエンザＡウイルスの感染を治療することを含む、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの感染を治療するための方法も提供する。本発明はまた、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物の有効量を必要とする患者に投与し、それによりインフルエンザＡウイルスの感染を予防することを含む、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの感染を予防するための方法も提供する。本発明はまた、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物の有効量を提供し、それによりインフルエンザＡウイルスの感染を中和することを含む、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを中和するための方法も提供する。
【００６５】
本発明はまた、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含む組成物の有効量を必要とする患者に投与し、かつ該患者に追加の治療剤の有効量を投与し、それによりインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの感染を阻害、治療又は予防することを含む、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの感染を阻害、治療又は予防するための方法も提供する。いくつかの実施態様において、追加の治療剤は、オセルタミビル、ザナミビル又はペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤である。他の実施態様において、追加の治療剤は、他の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体である。他の実施態様において、追加の治療剤は、他の抗ヘマグルチニン抗体である。さらに他の実施態様において、追加の治療剤は抗Ｍ２抗体である。このような併用治療の種々の態様において、該治療剤はほぼ同時に投与されるか、共に投与されるか、又は逐次的若しくは連続的に投与される。特定の実施態様において、抗ノイラミニダーゼ阻害剤は、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体の投与の前に投与される。
【００６６】
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体の使用を提供する。該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の阻害、治療又は予防における使用のためであってよい。ある実施態様において、該医薬は、追加の治療剤（例えば、オセルタミビル、ザナミビル又はペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；他の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、他の抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体等の他の抗体）をさらに含んでもよい。
【００６７】
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明の核酸の使用を提供する。該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の阻害、治療又は予防における使用のためであってよい。該医薬はまた、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の中和における使用のためであってもよい。ある実施態様において、該医薬は、追加の治療剤（例えば、オセルタミビル、ザナミビル、ペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；他の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、他の抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体等の他の抗体）をさらに含んでもよい。
【００６８】
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明の発現ベクターの使用を提供する。該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の阻害、治療又は予防における使用のためであってよい。該医薬はまた、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の中和における使用のためであってもよい。ある実施態様において、該医薬は、追加の治療剤（例えば、オセルタミビル、ザナミビル又はペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；他の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、他の抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体等の他の抗体）をさらに含んでもよい。
【００６９】
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明の宿主細胞の使用を提供する。該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の阻害、治療又は予防における使用のためであってよい。該医薬はまた、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の中和における使用のためであってもよい。ある実施態様において、該医薬は、追加の治療剤（例えば、オセルタミビル、ザナミビル又はペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；別の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、別の抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体等の別の抗体など）をさらに含んでもよい。
【００７０】
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明の製造品の使用を提供する。該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の阻害、治療又は予防における使用のためであってよい。該医薬はまた、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の中和における使用のためであってもよい。ある実施態様において、該医薬は、追加の治療剤（例えば、オセルタミビル、ザナミビル又はペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；別の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、別の抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体等の別の抗体など）をさらに含んでもよい。
【００７１】
他の態様において、本発明は、医薬の製造における本発明のキットの使用を提供する。該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の阻害、治療又は予防における使用のためであってよい。該医薬はまた、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の中和における使用のためであってもよい。ある実施態様において、該医薬は、追加の治療剤（例えば、オセルタミビル、ザナミビル又はペラミビル等のノイラミニダーゼ阻害剤；別の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体、別の抗ヘマグルチニン抗体又は抗Ｍ２抗体等の別の抗体など）をさらに含んでもよい。
【００７２】
種々の態様において、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、Ｈ７ヘマグルチニンに結合する。いくつかの態様において、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスのＨ７ヘマグルチニンに結合する。他の態様において、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、Ｈ７ヘマグルチニンに結合し、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを中和する。いくつかの態様において、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、インビトロ、インビボ、又はインビトロ及びインビボのインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを中和する。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１Ａ】ＥＬＩＳＡによるｍＡｂ１のＨ７ヘマグルチニンへの結合を示すデータである。
【図１Ｂ】ＥＬＩＳＡによるｍＡｂ２のＨ７ヘマグルチニンへの結合を示すデータである。
【図１Ｃ】ＥＬＩＳＡによるｍＡｂ３のＨ７ヘマグルチニンへの結合を示すデータである。
【図２】図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃはそれぞれ、ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、及び陰性対照抗体によるインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス株であるＡ／上海／２／２０１３  ＩＤＣＤＣ  ＲＧ３２Ａのインビトロでの中和を示すデータである。
【図３】ｍＡｂ１の重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
【図４】ｍＡｂ２の重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
【図５】ｍＡｂ３の重鎖、軽鎖、重鎖可変領域、及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を示す。
【図６】ｍＡｂ１、ｍＡｂ２、及びｍＡｂ３の重鎖超可変領域及び軽鎖超可変領域（すなわちＣＤＲ）のアミノ酸配列を示す。
【図７】インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスであるＡ／安徽／１／２０１３のＨ７ヘマグルチニンの核酸配列を示す。
【図８】インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスであるＡ／上海／１／２０１３のＨ７ヘマグルチニンの核酸配列を示す。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
Ｉ．定義
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」とは、下記に定義されるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークから得られる軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「から得られる」アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又はそれはアミノ酸配列の変化を含んでもよい。幾つかの実施態様において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
【００７５】
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有結合相互作用の総和の強度を指す。本明細書では、特に明記しない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。一般的に、分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、解離定数（Ｋｄ）によって表される。親和性は、本明細書に記載したものを含め、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示であって例示的な実施態様は、以下で説明される。
【００７６】
「親和性成熟」抗体とは、変化を有しない親抗体と比較して、一又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）に一又は複数の変化があり、かかる変化が抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす抗体を指す。
【００７７】
用語「抗ヘマグルチニン抗体」及び「ヘマグルチニンに結合する抗体」とは、抗体が、インフルエンザウイルスのヘマグルチニンを含むヘマグルチニンを標的とする際に診断薬及び／又は治療剤として抗体が有用であるように、十分な親和性でヘマグルチニンに結合する抗体を指す。一実施態様において、無関係の非ヘマグルチニンタンパク質への抗ヘマグルチニン抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）による測定の場合、該抗体のヘマグルチニンへの結合の約１０％未満である。ある実施態様において、ヘマグルチニンに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある実施態様において、抗ヘマグルチニン抗体は、インフルエンザＡウイルスの異なる株、サブタイプ、及び分離株由来のヘマグルチニンの間で保存されているヘマグルチニンのエピトープに結合する。
【００７８】
本明細書における用語「抗体」は最も広い意味で用いられ、種々の抗体構造を包含し、限定されるものではない、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の抗原結合活性を示す限り、抗体断片を含む。
【００７９】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の抗原に結合する部分を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。「抗体断片」はまた、インタクトな抗体のヘマグルチニンに結合してインフルエンザＡウイルスを中和する部分を含む、インタクトな抗体以外の分子も指す。抗体断片の例としては、限定されるものではないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線形抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む。
【００８０】
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原に対する結合を５０％以上阻害する抗体を指し、逆に参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原に対する結合を５０％以上阻害する。例示的な競合アッセイが、本明細書において提供される。
【００８１】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の起源又は種に由来し、一方重鎖及び／又は軽鎖の残りは異なる起源又は種に由来する抗体を指す。
【００８２】
抗体の「クラス」は、その重鎖が保有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体には五つの主要なクラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩＧＡ１、及びＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれαa、δd、εe、γg、及びμと呼ばれる。
【００８３】
本明細書で用いられる「細胞傷害性剤」という用語は、細胞の機能を阻害若しくは阻止し、且つ／又は細胞死若しくは細胞破壊を生ずる物質を指す。細胞傷害性剤は、限定されるものではないが、放射性同位体（例えばＡｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）：化学療法剤又は薬物（例えばメトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）；増殖阻害剤；酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素；抗生物質；小分子毒素等の毒素、又は細菌、真菌、植物若しくは動物由来の酵素活性毒素（それらの断片及び／又は変異体を含む）、及び以下に開示される種々の抗腫瘍剤又は抗癌剤を含む。
【００８４】
「エフェクター機能」とは、抗体のアイソタイプにより変わる、抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；貪食；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）のダウンレギュレーション；並びにＢ細胞の活性化を含む。
【００８５】
薬剤、例えば薬学的製剤の「有効量」とは、所望の治療的又予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での有効な量を指す。
【００８６】
本明細書において用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために用いられる。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端にまで及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても、存在してなくともよい。本明細書に明記されていない限り、Ｆｃ領域又は定常領域内のアミノ酸残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991に記載のように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
【００８７】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に四つのＦＲのドメイン、すなわちＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ配列及びＦＲ配列は、一般にＶＨ（又はＶＬ）の次の配列に現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【００８８】
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書中で互換的に使用され、天然型抗体構造と実質的に類似の構造を有するか、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００８９】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養株」は互換可能に使用され、外因性の核酸が導入された細胞を指し、該細胞の子孫を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含み、それには初代形質転換細胞及び、継代の数に関係なく、それに由来する子孫が含まれる。子孫は親細胞と核酸含量が完全に同一でなくてもよく、突然変異を含んでいてもよい。本明細書には、最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異型子孫が含まれる。
【００９０】
「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞により産生されるか、又はヒト抗体のレパートリー若しくは他のヒト抗体をコードする配列を利用する非ヒト供給源に由来する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、特に非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。
【００９１】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからなされる。一般的には、配列のサブグループは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242, Bethesda MD (1991), vols. 1-3にあるようなサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、該サブグループは上掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．にあるようなサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、該サブグループは上掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．にあるようなサブグループＩＩＩである。
【００９２】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲのアミノ酸残基及びヒトＦＲのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインのすべてを実質的に含み、ＨＶＲ（例えばＣＤＲ）のすべて又は実質的にすべてが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲのすべて又は実質的にすべてがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、場合によって、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
【００９３】
本明細書で用いられる「超可変領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変である抗体可変ドメインの領域（「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」）及び／又は構造的に既定されるループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域及び／又は抗原に接触する残基（「抗原コンタクト（ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｏｎｔａｃｔ）」を含有する抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般的に、抗体は、ＶＨに三つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに三つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の計六つのＨＶＲを含む。本明細書において、例示的なＨＶＲは、
（ａ）アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987))；
（ｂ）アミノ酸残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、８９〜９７（Ｌ３）、３１〜３５ｂ（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ〜３６（Ｌ１）、４６〜５５（Ｌ２）、８９〜９６（Ｌ３）、３０〜３５ｂ（Ｈ１）、４７〜５８（Ｈ２）、及び９３−１０１（Ｈ３）に生じる抗原コンタクト(MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996))；及び
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６〜５６（Ｌ２）、４７〜５６（Ｌ２）、４８〜５６（Ｌ２）、４９〜５６（Ｌ２）、２６〜３５（Ｈ１）、２６〜３５ｂ（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、９３〜１０２（Ｈ３）、及び９４〜１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、及び／又は（ｃ）の組み合わせ
を含む。
【００９４】
特に断らない限り、可変ドメイン内のＨＶＲ残基及び他の残基（例えばＦＲ残基）は、上掲のＫａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．に従い、本明細書において番号が付けられる。
【００９５】
「イムノコンジュゲート」とは、細胞傷害性剤を含むがそれに限定されない、一又は複数の異種分子にコンジュゲートした抗体である。
【００９６】
「個体」又は「対象」とは、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されるものではないが、家畜動物（例えばウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えばヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）を含む。ある実施態様において、個体又は対象はヒトである。
【００９７】
「単離された」抗体とは、その自然環境の成分から分離されたものである。いくつかの実施態様において、抗体は、例えば電気泳動（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えばイオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）により決定される場合、９５％以上又は９９％以上の純度に精製される。抗体純度の評価法の総説としては、例えばFlatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)を参照のこと。
【００９８】
「単離された」核酸とは、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、しかし、その核酸分子は、染色体外又はその自然の染色体上の位置とは異なる染色体位置に存在している。
【００９９】
「抗ヘマグルチニン抗体をコードする分離された核酸」とは、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする一又は複数の核酸分子（又はその断片）を指し、それは、単一のベクター内又は別々のベクター内のそのような核酸分子及び宿主細胞内の一又は複数の場所に存在するそのような核酸分子を含む。
【０１００】
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、例えば自然発生的な変異を含むか又はモノクローナル抗体調製物の製造時に発生するような、起こり得る変異体抗体（通常、これらの変異体は少量存在し得る）を除いて、集団を構成する個々の抗体が同一であり、且つ／又は同じエピトープに結合する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の製造を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、限定されるものではないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含めた様々な技術によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのこれらの方法及びその他の例示的な方法は本明細書に記載されている。
【０１０１】
「ネイキッド抗体」とは、異種の部分（例えば細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は薬学的製剤中に存在してもよい。
【０１０２】
「天然型の抗体」とは、天然に生じる、様々な構造をとる免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然型のＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している二つの同一の軽鎖と二つの同一の重鎖からなる約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて三つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、各軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端にかけて、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）とラムダ（λ）と呼ばれる、二つの種類のうちのいずれかに割り当てることができる。
【０１０３】
「添付文書」という用語は、治療製品の商品包装に通例含まれる説明書を指すのに用いられ、適応症、用法、用量、投与、併用療法、当該治療製品の使用に関する禁忌及び／又は注意事項についての情報を含む。
【０１０４】
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントを得るように配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなさない、参照ポリペプチドのアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基の百分率として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアのような公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較する配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含めた、配列を整列させるための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書において、アミノ酸配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、ジェネンテック社によって著作され、ソースコードは米国著作権庁、ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。また、ＡＬＩＧＮ−２は、ジェネンテック社（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸのＶ４．０Ｄを含めたＵＮＩＸオペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルされる。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されて変動しない。
【０１０５】
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂとの又はそれに対する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂと若しくはそれに対して、ある程度のアミノ酸配列同一性％を有するか又は含む所与のアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２のＡ及びＢのアラインメントによって完全一致であるとスコアされたアミノ酸残基の数であり、ＹはＢのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％とは異なると認識されるであろう。特に断らない限り、本明細書で使用されるすべてのアミノ酸配列同一性％値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落に記載のようにして得られる。
【０１０６】
用語「薬学的製剤」は、その中に含有されている活性成分の生物学的活性が有効になることを可能にするような形態であって、製剤が投与される対象にとって許容できないほど毒性である追加の成分を含まない調製物を指す。
【０１０７】
「薬学的に許容される担体」とは、有効成分以外の薬学的製剤中の成分であって、対象に対して非毒性である成分を指す。薬学的に許容される担体は、限定されなるものではないが、バッファー、賦形剤、安定剤又は保存剤を含む。
【０１０８】
本明細書で用いられる用語「ヘマグルチニン」とは、特に断らない限り、任意のインフルエンザウイルス源からの任意の天然型ヘマグルチニンを指す。該用語は、「完全長」のヘマグルチニン、処理前のヘマグルチニン、及びインフルエンザウイルス又はインフルエンザウイルス感染細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のヘマグルチニンを包含する。該用語はまた、天然に存在するヘマグルチニンの変異体、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子変異体をも包含する。本明細書で用いられる用語「ヘマグルチニン」は、Ｈ７ヘマグルチニンを含む。
【０１０９】
本明細書で用いられる場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及び「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」など、その文法的変形）は、治療されている個体の自然経過を変えようと試みる臨床的介入を指し、予防のため、又は臨床病理の過程において実施されうる。治療の望ましい効果は、限定されるものではないが、疾患の発症又は再発を予防すること（例えばインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の発症又は再発を予防すること）、症状の低減（例えば軽減すること）又は緩和、疾患の直接的又は間接的な任意の病理学的帰結の縮小、疾患の進行の速度を遅らせること、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含む。いくつかの実施態様において、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるか、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
【０１１０】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。通常、天然型抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、各々が四つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と三つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む類似構造を有する。（例えば、Kindt et al., Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照されたい。）抗原結合特異性を付与するには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分である。さらに、ある特定の抗原に結合する複数の抗体を、その抗原に特異的に結合するある一つの抗体に由来するＶＨドメイン又はＶＬドメインを用いて単離し、相補的なＶＬドメイン又はＶＨドメインそれぞれのライブラリーをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐortolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照のこと。
【０１１１】
本明細書で使用される用語「ベクター」は、それが連結されている別の核酸を伝播することができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター及び導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。ある種のベクターは、それが作動可能に連結された核酸の発現を指示することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と言う。
【０１１２】
ＩＩ．組成物及び方法
一態様において、本発明は、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体及びその使用に部分的に基づく。ある実施態様において、Ｈ７ヘマグルチニンに結合する抗体が提供される。本発明の抗体は、例えばインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の診断、治療又は予防に有用である。
【０１１３】
鳥インフルエンザ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに対する例示的な抗体
一態様において、本発明は、Ｈ７ヘマグルチニンに結合する分離された抗体を提供する。ある実施態様において、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、Ｈ７ヘマグルチニンに結合する。他の実施態様において、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９ウイルスをインビトロで中和する。他の実施態様において、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスをインビボで中和する。さらに他の実施態様において、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を減少させ、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防し、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を阻害し又はインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を治療する。いくつかの実施態様において、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、インフルエンザウイルス膜と感染細胞のエンドソーマル膜とのヘマグルチニン媒介性融合を防ぎ、阻害し又は減少させ（したがって、ウイルスＲＮＡの感染細胞細胞質への侵入を防ぎ、阻害し又は減少させ、ひいてはインフルエンザウイルス感染のさらなる伝播を防ぎ、阻害し又は減少させる）
【０１１４】
いくつかの実施態様において、本発明の分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は、ＳＥのアミノ酸配列を含む。
【０１１５】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、及び／又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
【０１１６】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの軽鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＬＶＲ−Ｌ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
【０１１７】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの重鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む。
【０１１８】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
【０１１９】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む。
【０１２０】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は配列番号７４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７５のアミノ酸配列を含む。
【０１２１】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１２２】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０１２３】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖及び軽鎖を含み、ここで、重鎖は配列番号７６のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
【０１２４】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１２５】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０１２６】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防又は治療するための方法を提供し、ここで、該抗体は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号５６のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号５８のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号５９のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６１のアミノ酸配列を含む。
【０１２７】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防又は治療するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は配列番号７４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７５のアミノ酸配列を含む。
【０１２８】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防又は治療するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は配列番号７６のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
【０１２９】
いくつかの実施態様において、本発明の分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【０１３０】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、及び／又は六つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【０１３１】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの軽鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＬＶＲ−Ｌ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【０１３２】
いくつかの実施態様において、本発明は、三つの重鎖超可変領域（（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む。
【０１３３】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【０１３４】
いくつかの実施態様において、本発明は、少なくとも一つ、二つ、及び／又は三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む分離された抗ヘマグルチニン抗体（分離された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、ここで、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６３のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む。
【０１３５】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、ここで、重鎖可変領域は配列番号７８のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
【０１３６】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１３７】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
【０１３８】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、重鎖及び軽鎖を含み、ここで、重鎖は配列番号８０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号８１のアミノ酸配列を含む。
【０１３９】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体（分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０１４０】
いくつかの実施態様において、本発明の分離株された抗ヘマグルチニン抗体  （分離株された抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０１４１】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防又は治療するための方法を提供し、ここで、該抗体は、三つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３）及び三つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３）を含み、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は配列番号６２のアミノ酸配列を含み、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は配列番号６３のアミノ酸配列を含み、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は配列番号６４のアミノ酸配列を含み、
（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は配列番号６５のアミノ酸配列を含み、
（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ
（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
【０１４２】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防又は治療するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は配列番号７８のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
【０１４３】
いくつかの実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか又は感染するリスクがある対象に抗体の治療的有効量を投与することを含むインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防又は治療するための方法を提供し、ここで、該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は配列番号８０のアミノ酸配列を含み、軽鎖は配列番号８１のアミノ酸配列を含む。
【０１４４】
上記のいずれの実施態様においても、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、ヒト化されている。一実施態様において、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、上記の実施態様のいずれかと同様のＨＶＲを含み、例えばヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークのようなアクセプターヒトフレームワークをさらに含む。
【０１４５】
他の態様では、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、配列番号７４及び７８からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、Ｈ７ヘマグルチニンへ結合する能力を保持する。ある実施態様では、配列番号７４又は７８において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。場合によっては、抗ヘマグルチニン抗体（抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７４又は７８のＶＨ配列を（配列の翻訳後修飾も含めて）含む。
【０１４６】
他の態様では、配列番号７５及び７９からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体が提供される。ある実施態様において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、Ｈ７ヘマグルチニンへ結合する能力を保持する。ある実施態様では、配列番号７５又は７９において、合計１から１０のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。ある実施態様において、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。場合によっては、抗ヘマグルチニン抗体（抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、配列番号７５又は７９のＶＬ配列を（配列の翻訳後修飾も含めて）含む。
【０１４７】
他の態様において、上に示した実施態様のいずれかと同様のＶＨ、及び上に示した実施態様のいずれかと同様のＶＬを含む抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体が提供される。一実施態様において、該抗体は、配列番号７４又は７８のＶＨ配列、及び配列番号７５又は７９のＶＬ配列を（配列の翻訳後修飾も含めて）含む。
【０１４８】
さらなる態様において、本発明は、本明細書で提供される抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。ある実施態様において、例えば配列番号７５のＶＨ配列及び配列番号７５のＶＬ配列、又は配列番号７８のＶＨ配列及び配列番号７９のＶＬ配列を含む抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１４９】
本発明のさらなる態様において、上記の任意の実施態様に記載の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、キメラ、ヒト化又はヒト抗体を含めたモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ又はＦ（ａｂ’）２断片である。他の態様において、該抗体は、完全長抗体（例えばインタクトな、例えばＩｇＧ１抗体）又は本明細書において定義された他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
【０１５０】
さらなる態様において、上記の任意の実施態様に記載の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、以下のセクション１〜７に記載されているようにして、任意の機能を単独で又は組み合わせて組み込むことができる。
【０１５１】
１．抗体親和性
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０１５２】
一実施態様において、Ｋｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。一実施態様において、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の力価測定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原を用いてＦａｂを均衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体をコーティングしたプレートを用いて結合した抗原を捕捉することによって測定する（例としてChen, et al., J. Mol. Biol.293:865-881(1999)を参照）。アッセイ条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）で一晩コーティングし、その後２％（ｗ／ｖ））のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳて２〜５時間室温（およそ２３℃）でブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ  ＃２６９６２０）で、目的のＦａｂの段階希釈液と１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を混合する（例えばPresta et al., Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致する）。ついで目的のＦａｂを一晩インキュベートする。ただし、インキュベーションは、平衡状態に達したことを確認するために長時間（例えば約６５時間）続くかもしれない。その後、混合物を捕捉プレートに移し、室温で（例えば１時間）インキュベートする。次いで、溶液を除去し、０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））を含むＰＢＳでプレートを８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０ＴＭ；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、このプレートをＴＯＰＣＯＵＮＴＴＭガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計測する。最大結合の２０％又はそれ以下を与える各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおいて使用するために選定する。
【０１５３】
他の実施態様によると、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いたアッセイは、〜１０反応単位（ＲＵ）の固定化した抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃で実施される。一実施態様では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５，ＢＩＡＣＯＲＥ  Ｉｎｃ．）が、供給業者の指示書に従い、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化される。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、未反応基をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入する。速度論的な測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭから５００ｎＭ））を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０ＴＭ）界面活性剤を含有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中、およそ２５ｕｌ／分の流速にて２５℃で注入する。会合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることによる単純１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する。例えば、Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881 (1999)を参照のこと。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる会合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、分光計、例えば流動停止を備えた分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯＴＭ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される抗原の濃度上昇下で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の２５℃での蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、帯域通過＝１６ｎｍ）の増減を測定する蛍光消光技術を用いることにより会合速度を決定することができる。
【０１５４】
２．抗体断片
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片は、限定されるものではないが、Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆａｂ’−ＳＨ，Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、並びに下記の他の断片を含む。ある抗体断片の総説については、Hudson et al. Nat. Med.9:129-134 (2003)を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えばPluckthunのThe Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York), pp. 269-315 (1994)を参照。また、国際公開第９３／１６１８５号、並びに米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、かつインビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
【０１５５】
ダイアボディは、二価又は二重特異性でありうる二つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４０９７号、国際公開第１９９３／０１１６１号、Hudson et al., Nat. Med.9:129-134 (2003)、及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993）を参照。トリアボディ及びテトラボディも、Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
【０１５６】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインのすべて若しくは一部、又は軽鎖可変ドメインのすべて若しくは一部を含む抗体断片である。ある実施態様において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Domantis, Inc., Waltham, MA；例えば米国特許第６２４８５１６号を参照）。
【０１５７】
抗体断片は、本明細書に記載の組換え宿主細胞（例えば大腸菌又はファージ）による産生の他、インタクトな抗体のタンパク質消化を含むがこれらに限定されない、種々の技術で作製することができる。
【０１５８】
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体はキメラ抗体である。いくつかのキメラ抗体が、例えば米国特許第４８１６５６７号及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)）に記載されている。一例を挙げれば、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えばマウス、ラット、ハムスター、ウサギ又は非ヒト霊長類（サルなど）由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例としては、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれから変更された「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
【０１５９】
ある実施態様において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したままヒト化されている。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲなどのＨＶＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、一又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、場合によってヒト定常領域の少なくとも一部を含むであろう。いくつかの実施態様において、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、非ヒト抗体（例えばＨＶＲ残基が由来する抗体）の対応する残基で置換され、例えば抗体特異性又は親和性が回復又は改善される。
【０１６０】
ヒト化抗体及びそれらの製造方法は、例えばAlmagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)にて総説されており、さらにRiechmann et al., Nature332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA86:10029-10033 (1989)、米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号、及び第７０８７４０９号、Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)（特異性決定領域（ＳＤＲ）のグラフティングを記述）、Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)（「リサーフェシング」を記述）、Dall’Acqua et al., Methods36:43-60 (2005)（「ＦＲシャッフリング」を記述）、並びにOsbourn et al., Methods36:61-68 (2005)及びKlimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」アプローチを記述）に記載されている。
【０１６１】
ヒト化に用いることができるヒトフレームワーク領域は、限定されるものではないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えばSims et al. J. Immunol.151:2296 (1993)を参照）、軽鎖可変領域又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えばCarter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えばAlmagro and  Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照）、及びＦＲライブラリースクリーニング由来のフレームワーク領域（例えばBaca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及びRosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照）を含む。
【０１６２】
４．ヒト抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で知られている種々の技術又は本明細書に記載の技術を用いて作製することができる。ヒト抗体は、van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001)及びLonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)に一般的に記載されている。
【０１６３】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製することができる。このような動物は、典型的には内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換するか、又は染色体外に存在するか若しくは該動物の染色体にランダムに組み込まれているヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべて又は一部を含む。このようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、通常は不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)を参照。また、例えばＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術を記載している米国特許第６０７５１８１号及び第６１５０５８４号、ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号、Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７０４１８７０号、及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたし。このような動物により生成されるインタクトな抗体のヒト可変領域は、例えば異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に改変され得る。
【０１６４】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の製造のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒト異種骨髄腫細胞株が記述されている。（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al.,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987）、及びBoerner et al.,J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照。）また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体もLi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)に記載されている。さらなる方法は、例えば米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の作製について説明している）及びNi, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)（ヒト−ヒトハイブリドーマについて説明している）に記載されているものを含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005)及びVollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)に記載されている。
【０１６５】
ヒト抗体はまた、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。このような可変ドメイン配列は、次に所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。
【０１６６】
５．ライブラリー由来の抗体
本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作成して所望の結合特性を有する抗体のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングするための種々の方法が、当該技術分野で知られている。そのような方法は、例えばHoogenboom et al.のMethods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001）にて総説され、さらに例えばMcCafferty et al., Nature 348:552-554、Clackson et al., Nature352: 624-628 (1991)、Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)、Marks and BradburyのMethods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003)、Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)、Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)、Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)、及びLee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)に記載されている。
【０１６７】
いくつかのファージディスプレイ法では、ＶＨ遺伝子のレパートリー及びＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに組換え、次いでWinter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)に記載のようにして、抗原結合ファージをスクリーニングする。ファージは、典型的には単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片のいずれかとして抗体断片を提示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)に記載されているように、ナイーブレパートリーを（例えばヒトから）クローニングして、全く免疫化せずに広範な非自己抗原及び自己抗原に対する抗体の単一の供給源を提供することもできる。最後に、Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)によって記載されているように、幹細胞由来の再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを用いて可変性に富むＣＤＲ３領域をコードし、インビトロでの再配列を達成することにより、ナイーブライブラリーを合成的に作成することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを説明している特許公報は、例えば米国特許第５７５０３７３号並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、第２００５／０１１９４５５号、第２００５／０２６６０００号、第２００７／０１１７１２６号、第２００７／０１６０５９８号、第２００７／０２３７７６４号、第２００７／０２９２９３６号、及び第２００９／０００２３６０号を含む。
【０１６８】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書においてヒト抗体又はヒト抗体の断片とみなされる。
【０１６９】
６．多重特異性抗体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体．である。多重特異性抗体は、少なくとも二つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある実施態様において、結合特異性のうちの一方はヘマグルチニンに対するものであり、もう一方は任意の他の抗原に対するものである。ある実施態様において、二重特異性抗体は、ヘマグルチニンの二つの異なるエピトープに結合しうる。二重特異性抗体はまた、ヘマグルチニンを発現する細胞に細胞傷害性剤を局在化させるために使用することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
【０１７０】
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されるものではないが、異なる特異性を有する二組の免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現(Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）及び「ノブ・イン・ホール」技術（例えば米国特許第５７３１１６８号を参照）を含む。多重特異抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するために静電ステアリング効果（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔｓ）を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４号）、二つ以上の抗体又は断片を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号及びBrennan et al., Science, 229: 81 (1985）を参照）、二重特異性抗体を作製するためにロイシンジッパーを用いること（例えばKostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)を参照）、二重特異性抗体断片を作製するために  「ダイアボディ」技術を用いること（例えばHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）、及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを用いること（例えばGruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）、並びに、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように三重特異性抗体を調製することによっても作製することができる。
【０１７１】
「オクトパス抗体（Ｏｃｔｏｐｕｓ  ａｎｔｉｂｏｄｙ）」を含めた三つ以上の機能性抗原結合部位を有する操作抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば米国特許出願第２００６／００２５５７６号参照）。
【０１７２】
本明細書中の抗体又は断片はまた、ヘマグルチニン及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」すなわち「ＤＡＦ」を含む（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）。
【０１７３】
７．抗体変異体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましいこともある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することにより、又はペプチド合成により調製することができる。このような修飾は、例えば抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はそれへの挿入、及び／又はそれの置換を含む。最終コンストラクトが所望の特性、例えば抗原結合を有していることを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせが、最終構築物に到達するまでなされうる。
【０１７４】
ａ）置換変異体、挿入変異体、及び欠失変異体
ある実施態様では、一又は複数のアミノ酸置換を伴う抗体変異体が提供される。置換突然変異の目的の部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換は、「好ましい置換」と題して表１に示す。より実質的な変更は、「例示的置換」と題して表１に示し、アミノ酸側鎖のクラスを参照して下記にさらに説明する。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物の所望の活性、例えば抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下又はＡＤＣＣ若しくはＣＤＣの改善をスクリーニングすることができる。
2017508002.tif 000002
アミノ酸は以下の共通の側鎖特性に従ってグループ化することができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスのうちの一クラスのメンバーを別のクラスのもと交換することを必要とする。
【０１７５】
置換変異体の一つの種類は、親抗体（例えばヒト化又はヒト抗体）の一又は複数の超可変領域残基を置換することを伴う。通常、さらなる研究用に得られる変異体は、親抗体と比較して、特定の生物学的特性（例えば親和性の上昇、免疫原性の低下）に修飾（（例えば改善）を有し、かつ／又は親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持する。例示的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、例えば本明細書に記載のファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用いて、簡便に生成することができる。簡潔に言えば、一又は複数のＨＶＲ残基を突然変異させ、変異体抗体をファージ上に提示させ、特定の生物活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングする。
【０１７６】
改変（例えば置換）は、例えば抗体の親和性を向上させるために、ＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち体細胞成熟過程中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされた残基（例えばChowdhury, Methods Mol. Biol.207:179-196 (2008)を参照）、及び／又は抗原に接する残基内で行うことができ、得られる変異体ＶＨ又はＶＬの結合親和性が試験される。二次ライブラリーから構築し選択し直すことによる親和性成熟が、例えばHoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施態様において、多様性が、種々の方法（例えば変異性ＰＣＲ、鎖シャッフリング又はオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）のいずれかにより、成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。次いで、二次ライブラリーが作成される。次いで、該ライブラリーは、所望の親和性を持つ任意の抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するするもう一つの方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば一度に４〜６残基）をランダム化するＨＶＲ指向のアプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発又はモデリングを用いて、特異的に同定することができる。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が多くの場合標的とされる。
【０１７７】
ある実施態様において、置換、挿入又は欠失は、 これらの改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、一又は複数のＨＶＲ内で生じうる。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的改変（例えば本明細書において提供される保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような改変は、例えばＨＶＲ内の残基に接する抗原の外側であってもよい。上記の変異体ＶＨ配列及びＶＬ配列に関するある実施態様において、各ＨＶＲは変化しないか、又はわずか一つ、二つ若しくは三つのアミノ酸置換を含む。
【０１７８】
突然変異誘発のために標的とすることができる抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085により記載されているように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、残基又は標的残基のグループ（例えばａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）が、同定され、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えばアラニン又はポリアラニン）により置換され、抗原と抗体の相互作用が影響を受けるかどうかが決定される。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入されうる。代替的に又は追加的に、抗体と抗原の接点を同定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされてもよいし、又は排除されてもよい。変異体は、所望の特性を含むかどうかを決定するためにスクリーニングされうる。
【０１７９】
アミノ酸配列挿入物は、１残基から１００以上の残基を有するポリペプチドの長さに及ぶアミノ−及び／又はカルボキシル末端融合体、 並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入物を含む。末端挿入物の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体を含む。抗体分子のその他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えばＡＤＥＰＴのための）又はポリペプチドとの、抗体のＮ末端又はＣ末端への融合体を含む。
【０１８０】
ｂ）グリコシル化変異体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を上昇又は低下させるように改変される。グリコシル化部位の抗体への付加又は欠失は、一又は複数のグリコシル化部位が創出又は削除されるようにアミノ酸配列を改変することにより、簡便に達成することができる。
【０１８１】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに付着する糖質を変えることができる。哺乳動物細胞によって産生された天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合により一般に付着した分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Wright et al.のTIBTECH 15:26-32 (1997)を参照。オリゴ糖は、様々な糖、例えばマンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、並びに二分岐オリゴ糖構造の「幹」におけるＧｌｃＮＡｃに付着したフコースを含みうる。いくつかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体変異体を作製するためになされうる。
【０１８２】
一実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接的に又は間接的に）付着するフコースを欠く糖鎖構造を有して提供される。例えば、そのような抗体のフコースの量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％又は２０％から４０％でありうる。フコースの量は、 例えば国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるＡｓｎ２９７に付着するすべての糖構造（例えば複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７の糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７とはＦｃ領域内のおよそ２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体のわずかな配列変異に起因して、２９７位のおよそ±３アミノ酸上流又は下流に、すなわち２９４位から３００位に位置する場合もある。このようなフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例は、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第２０００／６１７３９号、国際公開第２００１／２９２４６号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、国際公開第２００３／０８５１１９号、国際公開第２００３／０８４５７０号、国際公開第２００５／０３５５８６号、国際公開第２００５／０３５７７８号、国際公開第２００５／０５３７４２号、国際公開第２００２／０３１１４０号、Okazaki et al., J. Mol. Biol.336:1239-1249 (2004)、Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)を含む。脱フコシル化抗体を産生できる細胞株の例は、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌの米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、及びＡｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．の国際公開第２００４／０５６３１２号（特に実施例１１））及びノックアウト細胞株、例えばアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えばYamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)、Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)、及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照）を含む。
【０１８３】
抗体変異体は、二分オリゴ糖、例えば抗体のＦｃ領域に付着した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されているオリゴ糖をさらに備えている。そのような抗体変異体は、低下したフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。そのような抗体変異体の例は、例えば国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）、及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に付着したオリゴ糖中に少なくとも一のガラクトース残基を持つ抗体変異体も提供される。そのような抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有しうる。そのような抗体変異体は、例えば国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）、国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１８４】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
ある実施態様において、一又は複数のアミノ酸修飾を、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入し、それによりＦｃ領域変異体を生成することができる。Ｆｃ領域変異体は、一又は複数のアミノ酸位置でアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えばヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含みうる。
【０１８５】
ある実施態様において、本発明はすべてではないがいくつかのエフェクター機能を有する抗体変異体を企図しており、該機能は、該変異体を、インビボでの抗体の半減期は重要であっても、ある種のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣなど）は不要又は有害である用途のための望ましい候補とならしめる。ＣＤＣ活性及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／喪失を確認するために、インビトロ及び／又はインビボでの細胞傷害性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体が、ＦｃgＲ結合を欠く（それ故おそらくＡＤＣＣ活性を欠く）がＦｃＲｎ結合能力を保持することを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞であるＮＫ細胞はＦｃ(ＲＩＩＩのみを発現する一方、単球は、Ｆｃ(ＲＩ、Ｆｃ(ＲＩＩ、及びＦｃ(ＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)の４６４頁の表３に要約されている。目的分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えばHellstrom, I et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照）及びHellstrom, I et al., Proc. Nat’l Acad. Sci. USA82:1499-1502 (1985)、5,821,337 (Bruggemann, M. et al.,J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えばフローサイトメトリー用のＡＣＴＩＴＭ非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．  Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）参照）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替的に又は追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えばClynes et al. Proc. Nat’l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)に開示されているような動物モデルにおいて評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイはまた、抗体がＣ１ｑに結合できないこと、それ故ＣＤＣ活性を欠ｋｕことを確認するために行うこともできる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる（例えば、Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)、Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003)、及びCragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood103:2738-2743 (2004)を参照）。ＦｃＲｎ結合及びインビボでのクリアランス／半減期の決定もまた、当技術分野で知られている方法を用いて実施することができる（例えばPetkova, S.B. et al., Int’l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照）。
【０１８６】
エフェクター機能が低下した抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの一又は複数の置換を伴うものを含む（米国特許第６７３７０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含めた、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうちの二以上において置換を有するＦｃ突然変異体を含む（米国特許第７３３２５８１号）。
【０１８７】
ＦｃＲへの改善又は減少した結合を有する特定の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６７３７０５６号、国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShields et al., J. Biol. Chem.9(2): 6591-6604 (2001)を参照）。
【０１８８】
ある実施態様において、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する一又は複数のアミノ酸置換、例えばＦｃ領域の２９８位、３３３位、及び／又は３３４位での置換（残基のＥＵ番号付け）を伴うＦｃ領域を含む。
【０１８９】
いくつかの実施態様において、例えば米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びIdusogie et al. J. Immunol.164: 4178-4184 (2000)に記載されているように、変更された（すなわち改善されたか又は減少した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす改変がＦｃ領域においてなされる。
【０１９０】
増加した半減期を有し、かつ母体ＩｇＧの胎児への移動を担う新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体（Guyer et al., J. Immunol.117:587 (1976)及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一又は複数の置換を伴うＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域の残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうちの一又は複数での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を伴うものを含む（米国特許第７３７１８２６号）。
【０１９１】
Ｆｃ領域の変異体のその他の例に関しては、Duncan & Winter, Nature322:738-40 (1988)、米国特許第５６４８２６０号、米国特許第５６２４８２１号、及び国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
【０１９２】
ｄ）システイン操作抗体変異体
ある実施態様において、抗体の一又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば「チオＭＡｂ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施態様において、置換される残基が抗体の接近可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が抗体の接近可能部位に配置され、抗体を他の部分、例えば薬物部分又はリンカー−薬剤部分にコンジュゲートさせ、本明細書中でさらに記載されるように免疫コンジュゲートを作るために使用することができる。ある実施態様において、次の残基のいずれか一つ又はそれ以上がシステインと置換されうる：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば米国特許第７５２１５４１号に記載のように生成されうる。
【０１９３】
ｅ）抗体誘導体
ある実施態様において、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で知られており、容易に入手可能なさらなる非タンパク質部分を含むようにさらに修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部分は、限定されるものではないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物を含む（ただし、これらに限定されない）。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のために製造上の利点を有しうる。ポリマーは、任意の分子量であってよく、分枝状でも非分枝状でもよい。抗体に付着するポリマーの数は変化してもよく、一を超えるポリマーが付着する場合、それらは同じか又は異なる分子であってよい。一般的に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、改善されるべき抗体の特定の特性又は機能、その抗体誘導体が限定条件の下での治療に使用されるかどうかを含めた（ただし、これらに限定されない）考慮事項に基づいて決定することができる。
【０１９４】
他の実施態様において、放射線への曝露によって選択的に加熱されてもよい非タンパク質部分と抗体とのコンジュゲートが提示される。一実施態様において、非タンパク質部分は、カーボンナノチューブである(Kam et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605 (2005))。放射線は、任意の波長であってよく、通常の細胞に害を与えないが抗体−非タンパク質部分の近位細胞が死滅する温度に非タンパク質部分を加熱する波長を含むがこれに限定されない。
【０１９５】
Ｂ．組換え方法及び組成物
抗体は、例えば米国特許第４８１６５６７号に記載されるように、組換え方法及び組成物を用いて製造することができる。一態様において、本明細書に記載の抗ヘマグルチニン抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列（例えば抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードしうる。さらなる実施態様において、そのような核酸を含む一又は複数のベクター（例えば発現ベクター）が提供される。さらなる実施態様において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施態様において、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及びＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第ニのベクターを含む（例えば、これらで形質転換されている）。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ系細胞（例えばＹ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様において、上述のように、抗体の発現に適した条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意選択的に宿主細胞（又は宿主細胞培地）から抗体を回収することとを含む、抗ヘマグルチニン抗体を作製する方法が提供される。
【０１９６】
抗ヘマグルチニン抗体の組換え製造のため、例えば上述のように、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／又は発現のために一又は複数のベクターに挿入される。そのような核酸は、容易に単離可能であり、従来の手順を用いて（例えば抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
【０１９７】
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適した宿主細胞は、本明細書に記載の原核生物細胞又は真核細胞を含む。例えば、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ない場合には、抗体は、細菌内で生成されうる。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号、及び第５８４０５２３号を参照。（また、大腸菌における抗体断片の発現について記載している、Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254も参照のこと）。発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離され、さらに精製されうる。
【０１９８】
原核生物に加えて、グリコシル化経路が「ヒト化」されていて、部分的又は完全なヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の生成をもたらす真菌株及び酵母株を含めた糸状菌又は酵母などの真核微生物も、抗体をコードするベクターのための適切なクローニング宿主又は発現宿主である。Gerngross, Nat. Biotech.22:1409-1414 (2004)及びLi et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)を参照のこと。
【０１９９】
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物細胞の例は、植物細胞及び昆虫細胞を含む。多数のバキュロウイルス株が同定されており、これらは特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併せて使用することができる。
【０２００】
植物細胞培養物を宿主として利用することもできる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号、及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物における抗体産生に関するＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術を記載）を参照のこと。
【０２０１】
脊椎動物細胞も宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は有用でありうる。有用な哺乳動物宿主細胞株のその他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）で形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えばGraham et al.,J.Gen Virol.36:59(1977)に記載されている２９３又は２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスのセルトリ細胞（例えばＭａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されているＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２）、例えばMather et al.,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)に記載されているＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaub et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、並びにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の総説については、例えばYazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照。
【０２０２】
Ｃ．アッセイ
本明細書で提供される抗ヘマグルチニン抗体は、当技術分野で周知の種々のアッセイによって同定され、その物理的／化学的性質及び／又は生物学的活性についてスクリーニングされ、又は特徴付けされうる。
【０２０３】
１．結合アッセイ及びその他のアッセイ
一態様において、本発明の抗体は、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットなどの周知の方法により、その抗原結合活性について試験される。
【０２０４】
別の態様において、Ｈ７ヘマグルチニンの結合に関して本明細書に記載の任意の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス（抗Ｈ７ヘマグルチニン）抗体と競合する抗体を同定するために、競合アッセイが用いられうる。ある実施態様において、そのような競合する抗体は、ここに記載の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体（例えば、配列番号７４のＶＨ配列及び配列番号７４のＶＬ配列、又は配列番号７８のＶＨ配列及び配列番号７９のＶＬ配列を含む抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）により結合されている同じエピトープ（例えば線状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための代表的な方法が、Methods in Molecular Biology vol. 66(Humana Press, Totowa, NJ)に掲載のMorris (1996) 「Epitope Mapping Protocols,」に詳細に示されている。
【０２０５】
代表的な競合アッセイでは、ヘマグルチニンに結合する第一の標識抗体と、ヘマグルチニンへの結合について第一の抗体と競合する能力について試験する第二の非標識抗体とを含む溶液中で固定化したヘマグルチニンをインキュベートする。第二の抗体はハイブリドーマ上清に存在してもよい。対照として、固定化したヘマグルチニンを、第一の標識抗体を含むが第二の非標識抗体は含まない溶液中でインキュベートする。ヘマグルチニンへの第一の抗体の結合を許容する条件下でインキュベートした後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化したヘマグルチニンに結合した標識の量を測定する。固定化したヘマグルチニンに結合した標識の量が対照資料と比較して試験試料中で実質的に減少している場合、それは、第二の抗体がヘマグルチニンへの結合に関して第一の抗体と競合していることを示している。Harlow and Lane (1988) Antibodies:  A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)を参照。
【０２０６】
２．活性アッセイ
一態様では、アッセイは、生物活性を有する抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体及びその断片を同定するために提供される。生物活性は、例えばインフルエンザＡ（ＨｙＮ９）ウイルスヘマグルチニンに特異的に結合すること、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを中和すること等を含みうる。また、インビボ及び／又はインビトロでそのような生物活性を有する抗体又はその断片を含む抗体及び組成物も提供される。
【０２０７】
ある実施態様では、本発明の抗体は、そのような生物活性について試験される。そのようなアッセイの例示的な説明については、実施例４、５、６、７、８、及び９を参照のこと。
【０２０８】
Ｄ．イムノコンジュゲート
本発明はまた、本明細書において一又は複数の細胞傷害性剤、例えば化学療法剤若しくは薬物、増殖阻害剤、毒素（例えばタンパク質毒素、細菌、真菌、植物若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素又はその断片）又は放射性同位体にコンジュゲートした抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。
【０２０９】
一実施態様において、イムノコンジュゲートは、その中の抗体が、メイタンシノイド（米国特許第５２０８０２０号、第５４１６０６４号、及び欧州特許（ＥＰ）第０４２５２３５号を参照）；アウリスタチン、例えばモノメチルアウリスタチン薬物部分であるＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５６３５４８３号、第５７８０５８８号、及び第７４９８２９８号を参照）；ドラスタチン；カリケアマイシン又はその誘導体（米国特許第５７１２３７４号、第５７１４５８６号、第５７３９１１６号、第５７６７２８５号、第，５７７０７０１号、第５７７０７１０号、第５７７３００１号、及び第５８７７２９６号；Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993)；及びLode et al., Cancer  Res. 58:2925-2928 (1998)を参照）；アントラサイクリン、例えばダウノマイシン又はドキソルビシン（Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006)；Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006)；Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005)；Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA97:829-834 (2000);Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters12:1529-1532 (2002);King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002)；及び米国特許第６６３０５７９号を参照）；メトトレキサート；ビンデシン；タキサン、例えばドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル（ｌａｒｏｔａｘｅｌ）、テセタキセル（ｔｅｓｅｔａｘｅｌ）、及びオルタタキセル（ｏｒｔａｔａｘｅｌ）；トリコテセン；及びＣＣ１０６５を含む（ただし、これらに限定されない）一又は複数の薬物にコンジュゲートしている抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。
【０２１０】
他の実施態様において、イムノコンジュゲートは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン、クロチン、サポンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含む（ただし、これらに限定されない）酵素的に活性な毒素又はその断片にコンジュゲートしている、本明細書に記載の抗体を含む。
【０２１１】
他の実施態様では、イムノコンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートして放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載の抗体を含む。種々の放射性同位体が、放射性コンジュゲートの製造のために入手可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体を含む。検出のために用いられる場合、放射性コンジュゲートは、シンチグラフ検査用の放射性原子、例えばｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴イメージング、ＭＲＩとしても知られている）のためのスピン標識、例えば再びヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含む。
【０２１２】
抗体と細胞傷害性剤とのコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えばジメチルアジピミダート  ＨＣｌ）、活性エステル（例えばジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えばグルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えばビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えばビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えばトルエン  ２，６−ジイソシアネート）、及び二活性フッ素化合物（例えば１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を使用して作製することができる。例えば、リシンイムノトキシンは、Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)に記載のようにして調製することができる。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体へのコンジュゲーションのためのキレート剤の例である。国際公開第９４／１１０２６号を参照。リンカーは、細胞内で細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)；米国特許第５２０８０２０号）が使用されうる。
【０２１３】
本明細書に記載のイムノコンジュゲート又はＡＤＣは、限定されるものではないが、市販（例えばPierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.Aより）のＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、スルホ−ＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）等の架橋試薬を用いて調製したものが特に考えらえる。
【０２１４】
Ｅ．診断及び検出のための方法並びに組成物
ある実施態様において、本明細書で提供されるいずれの抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体も、生体試料中のＨ７ヘマグルチニン又はインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの存在を検出するのに有用である。本明細書で使用する「検出（する）」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。ある実施態様において、生体試料は、肺、上気道、鼻管、血液、痰のような細胞若しくは組織を含むか、又は鼻腔スワブ若しくは咽頭スワブにより得られた生体試料を含む。
【０２１５】
一態様において、診断又は検出の方法における使用のための抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体が提供される。さらなる態様では、生体試料中のＨ７ヘマグルチニン又はインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの存在を検出する方法が提供される。ある実施態様において、該方法は、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体のＨ７ヘマグルチニンへの結合を許容する条件下で生体試料を本明細書に記載の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体と接触させること、及び抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体とＨ７ヘマグルチニンとの間に複合体が形成されているか否かを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ法又はインビボ法である。一実施態様において、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を用いる療法のための適格な対象を選択するために用いられ、例えばここでＨ７ヘマグルチニンは患者の選択のためのバイオマーカーである。
【０２１６】
本発明の抗体を用いて診断することができる例示的な疾患は、鳥の他に小児、幼児、成人、高齢者におけるインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染症などのインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染症を含む。
【０２１７】
ある実施態様において、標識抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体が提供される。標識は、限定されるものではないが、（例えば蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識のような）直接的に検出される標識又は部分、及び（例えば酵素反応又は分子間相互作用を介して）間接的に検出される酵素又はリガンドのような部分を含む。例示的な標識は、限定されるものではないが、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、フルオロフォア（例えば希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体）、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ（例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類オキシダーゼ（例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ）、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、複素環式オキシダーゼ（例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ）、その他、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化する酵素（例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ又はミクロペルオキシダーゼ）、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定なフリーラジカル等を含む。
【０２１８】
Ｆ．薬学的製剤
本明細書に記載の抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）の薬学的製剤は、所望の純度を有する該抗体と、一又は複数の任意選択的な薬学的に許容される担体を混合することにより（Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で調製される。通常、薬学的に許容される担体は、用いられる用量及び濃度で受容者に対して非毒性であり、限定されるものではないが、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えばオクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール、メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む単糖類、二糖類、及びその他の糖質；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール等の糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）などの介在性薬物分散剤、例えばｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質をさらに含む。ｒＨｕＰＨ２０を含めた特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの一又は複数の追加的グルコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【０２１９】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性抗体製剤は、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載のものを含み、後者の製剤はヒスチジン−アセテートバッファーを含む。
【０２２０】
本明細書中の製剤はまた、治療される特定の適応症に必要な一を超える活性成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものを含有してもよい。さらに、例えばノイラミニダーゼ阻害剤、抗ヘマグルチニン抗体、抗Ｍ２抗体等を提供することが望ましいことがある。そのような活性成分は、適切には、意図する目的に有効な量の組み合わせで存在する。
【０２２１】
活性成分は、例えばコアセルベーション技術又は界面重合法によって調製されたマイクロカプセル、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースマイクロカプセル又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセルに、コロイド薬物送達システム（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）に、又はマクロエマルジョンに封入することができる。そのような技術は、RemingtonのPharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
【０２２２】
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性調製物の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、このマトリックスは成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。
【０２２３】
インビボ投与に使用される製剤は、一般的に滅菌されていなければならない。滅菌状態は、例えば滅菌濾過膜を通して濾過により容易に達成することができる。
【０２２４】
Ｇ．治療方法及び組成物
本明細書で提供される抗ヘマグルチニン抗体（例えは抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）のいずれも、治療方法において使用することができる。
【０２２５】
一態様において、医薬としての使用のための抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）が提供される。さらなる態様では、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療、予防又は阻害における使用のための抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７  ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）が提供される。ある実施態様において、治療方法における使用のための抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）が提供される。ある実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染している個体を治療する方法における使用のための抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、該方法は、抗-ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）の有効量を該個体に投与することを含む。そのような一実施態様において、該方法は、少なくとも一の追加の治療剤、例えば下記に記載のものの有効量を該個体に投与することをさらに含む。さらなる実施態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスのウイルス膜と感染細胞のエンドソーマル膜とのヘマグルチニン媒介性融合を防ぎ、阻害し又は減少させ、ひいてはウイルスＲＮＡの感染細胞細胞質への侵入を防ぎ、感染のさらなる伝播を防ぐことにおける使用のための抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供する。ある実施態様において、本発明は、個体におけるインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、阻害又は治療する方法における使用のための抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供し、該方法は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、阻害又は治療するために、抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）の有効量を該個体に投与することを含む。上記のいずれの実施態様に記載の「個体」も、好ましくはヒトである。
【０２２６】
さらなる態様において、本発明は、医薬の製造又は調製における抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）の使用を提供する。一実施態様において、該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療用である。さらなる実施態様において、該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染している個体に該医薬の有効量を投与することを含む、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を治療する方法における使用のためのものである。そのような一実施態様において、該方法は、少なくとも一の追加の治療剤、例えば下記に記載のものの有効量を該個体に投与することをさらに含む。さらなる実施態様において、該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスのウイルス膜と感染細胞のエンドソーマル膜とのヘマグルチニン媒介性融合を防ぎ、阻害し又は減少させ、ひいてはウイルスＲＮＡの感染細胞細胞質への侵入を防ぎ、感染のさらなる伝播を防ぐためである。さらなる実施態様において、該医薬は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防し、阻害し又は減少させるために、該医薬の有効量を個体に投与することを含む、個体においてインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防、阻害又は治療する方法における使用のためである。上記のいずれの実施態様に記載の「個体」も、ヒトであってよい。
【０２２７】
さらなる態様において、本発明は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を治療するための方法を提供する。一実施態様において、該方法は、そのようなインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染している個体に、抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）の有効量を投与することを含む。そのような一実施態様において、該方法は、本明細書に記載のように、少なくとも一の追加の治療剤の有効量を該個体に投与することをさらに含む。上記のいずれの実施態様に記載の「個体」も、ヒトであってよい。
【０２２８】
本発明は、個体（例えば対象又は患者）におけるインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を阻害、予防又は治療するのに効果的である抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を提供する。いくつかの態様では、本発明の抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、該個体のインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を予防するために、個体を予防的に治療するのに効果的である。
【０２２９】
いくつかの態様では、本発明の抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を用いる治療に適した個体は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染しているか、感染の疑いがある個体である。いくつかの実施態様では、そのような個体は、幼児、小児、成人、高齢者を含む。いくつかの実施態様では、該個体は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染で入院している。他の実施態様では、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染している個体は、例えば免疫不全、妊娠、肺疾患、心疾患、腎疾患のような一若しくは複数の併存疾患又は共感染（例えば細菌性肺炎若しくはウイルス性肺炎などの細菌感染又はウイルス感染）を有する。
【０２３０】
いくつかの実施態様において、本発明の抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）での個体の治療は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の重症度を低下させるか、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染期間を短縮するか、又はインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの感染力を低下させる。他の態様において、本発明の抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）を用いるインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療は、入院期間の短縮、集中治療室（ＩＣＵ）使用に対するニーズの削減又は抑制、補助呼吸若しくは人工呼吸に対するニーズの削減又は抑制、補助酸素使用に対するニーズの削減又は抑制、及び死亡率の削減を含めた追加的恩恵を提供する。いくつかの態様において、入院期間の短縮は、１日、２日、３日、４日、５日又は５日以上である。いくつかの態様において、集中治療室使用に対するニーズの削減は、１日、２日、３日、４日、５日又は５日以上である。いくつかの態様において、補助呼吸若しくは人工呼吸に対するニーズの削減は、１日、２日、３日、４日、５日又は５日以上である。いくつかの態様において、補助酸素使用に対するニーズの削減は、１日、２日、３日、４日、５日又は５日以上である。いくつかの態様において、本発明の抗ヘマグルチニン抗体での個体の治療は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の徴候、例えば発熱、鼻感冒、悪寒、のどの痛み、筋肉痛、身体の痛み、頭痛、咳、鼻づまり、虚弱又は疲労、目のチカチカ又は涙目、及び全身違和感等を減らす。
【０２３１】
いくつかの態様において、本発明の抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）での個体の治療は、呼吸数の正常化までの時間の短縮、又は酸素飽和度の正常化までの時間の短縮といった呼吸機能の正常化までの時間を短縮する。いくつかの態様において、本発明の抗ヘマグルチニン抗体での個体の治療は、正常な酸素飽和度、例えば補充酸素投与なしで２４時間測定した場合に約９２％以上の酸素飽和度に戻る間での時間を短縮する。他の態様において、本発明の抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）での個体の治療は、心拍数、血圧、呼吸数、及び体温といったバイタルサインの正常化までの時間を短縮する。
【０２３２】
いくつかの態様において、本発明の抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）での個体の治療は、例えばインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの力価．などのウイルス学的エンドポイントを改善する。ウイルス力価は、例えば定量的ＰＣＲ又は組織培養感染用量（ＴＣＩＤ５０）などにより測定したウイルスの曲線下面積（ＡＵＣ）といった、当業者に知られている種々の方法により測定することができる。いくつかの態様では、該治療は、定量的ＰＣＲ又はＴＣＩＤ５０により測定したウイルスのＡＵＣを５０％以上減少させる。
【０２３３】
本発明の種々の態様において、本明細書で提供される抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、発症後（例えば発病後）約１２時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約６０時間、約７２時間、約８４時間、及び約９６時間で投与される場合、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を治療するのに効果的である。他の態様において、本明細書で提供される抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、発症後約２４〜４８時間で投与される（例えば、個体が２４〜４８時間症候性であった）場合、発症後約４８時間〜７２時間で投与される場合、又は発症後約７２時間〜９６時間で投与される場合、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を治療するのに効果的である。本発明のある実施態様において、本発明の抗ヘマグルチニン抗体（例えば抗Ｈ７ヘマグルチニン抗体、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体）は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を治療又は削減するのに効果的であり、発症後４８時間以上現在の標準治療（例えばオセルタミビル）の治療ウインドウを広げる。
【０２３４】
さらなる態様において、本発明は、例えば上述の任意の治療方法における使用のための、本明細書で提供される任意の抗ヘマグルチニン抗体を含む薬学的製剤を提供する。一実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される任意の抗ヘマグルチニン抗体及び薬学的に許容される担体を含む。他の実施態様において、薬学的製剤は、本明細書で提供される任意の抗ヘマグルチニン抗体と、少なくとも一の追加の治療剤（例えば下記に記載のもの）とを含む。
【０２３５】
本発明の抗体は、単独で又は他の薬剤と組み合わせて治療において使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも一の追加の治療剤と共投与されうる。ある実施態様において、追加の治療剤は、ノイラミニダーゼ阻害剤（例えばザナミビル、オセルタミビルリン酸塩、ペラミビル、アマンタジン、リマンタジン）、抗Ｍ２抗体、抗ヘマグルチニン抗体等である。いくつかの態様では、ノイラミニダーゼ阻害剤と共投与される本発明の抗ヘマグルチニン抗体を用いるインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染している個体の治療は、どちらかの薬剤を単独で用いる治療と比較して、相乗的治療効果をもたらす。
【０２３６】
このような上記の併用療法は、併用投与（二以上の治療剤が、同一又は別々の製剤に含まれている）、及び本発明の抗体の投与が、追加の治療剤（複数可）の投与の前、投与と同時、及び／又は投与の後に起こりうる個別投与を包含する。一態様において、抗ヘマグルチニン抗体の投与と追加の治療剤の投与は、相互に約１ヶ月以内、又は約１、２若しくは３週以内、約１、２、３、４、５若しくは６日以内、又は約１、２、３、４、５、６、８、１０、１２、１６、２０若しくは２４時間以内に起こる。
【０２３７】
本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内を含めた任意の適切な手段により投与することができ、また、局所治療が望まれるのであれば、病巣内投与であってもよい。非経口点滴は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与を含む。投薬は、その投与が短期間か又は長期わたるか否かに部分的に依存し、例えば注射（静脈内注射又は皮下注射など）といった任意の適切な経路により行うことができる。単回投与又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含む（ただしこれらに限定されない）様々な投与スケジュールが、本明細書で企図される。
【０２３８】
本発明の抗体は、医療実施基準に一致した様式で製剤化され、投薬され、投与される。こうした観点において考慮すべき因子として、治療される特定の疾患、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床症状、疾患の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与計画、及び医師に既知のその他の因子が挙げられる。本発明の抗体は、必要ではないが任意で、問題の疾患の予防又は治療のために現在使用されている一又は複数の薬剤とともに製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、疾患又は治療の種類、及び上記以外の因子によって決まる。そのような他の薬剤は、一般的には本明細書に記載されているのと同じ用量及び投与経路で、又は本明細書に記載の用量の約１から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路で使用される。
【０２３９】
疾患の予防又は治療に適した本発明の抗体の用量は、（単独で又は一若しくは複数の追加の治療剤との併用で用いられる場合）治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体の投与が予防的目的か治療的目的か、治療歴、患者の病歴及び抗体に対する応答、並びに主治医の裁量に依存するであろう。本発明の抗体は、単回又は一連の治療にわたって患者へ適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば一回又は複数回の個別投与によるか、連続注入によるかに関わらず、約１μｇ／ｋｇから約４５ｍｇ／ｋｇ（例えば約１．０ｍｇ／ｋｇから約１５ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者への投与のための初期候補用量となりうる。一つの典型的な１日用量は、上記の因子に応じて約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲であろう。数日以上にわたる反復投与に関しては、状態に応じて、治療は一般に疾患症状の望まれる抑制が起こるまで持続されるであろう。本発明の抗体の例示的な用量は、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約４５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ，又は約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの範囲である。したがって、約１．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ，又は４５ｍｇ／ｋｇ（又はその任意の組み合わせ）の一又は複数の用量が患者に投与されうる。そのような用量は、例えば毎日、２日毎、３日毎等、間欠的に投与されてもよい。初期の高負荷用量の後、一以上の低用量を投与してよい。用量はまた、例えば２００ｍｇ、４００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ、１０００ｍｇ、１２００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１８００ｍｇ、２０００ｍｇ、２２００ｍｇ、２４００ｍｇ、２５００ｍｇ、２６００ｍｇ、２８００ｍｇ、３０００ｍｇ、３２００ｍｇ、３４００ｍｇ、３６００ｍｇ等の固定用量であってもよい。本療法の進捗は、一般的な手法及びアッセイにより容易にモニターされる。
【０２４０】
上記の製剤又は治療方法いずれも、抗ヘマグルチニン抗体の代わりに又はそれに加えて本発明のイムノコンジュゲートを用い、行うことができる。
【０２４１】
Ｈ．製造品
本発明の他の態様では、上述した疾患の治療、予防、及び／又は診断に有用な材料を含有する製造品が提供される。製造品は、容器、及び容器表面の若しくは容器に付随するラベル又は添付文書を含む。好適な容器は、例えばビン、バイアル、シリンジ、ＩＶ輸液バッグ等を含む。容器は、ガラス又はプラスチックなどの種々の材料から形成されうる。容器は、疾患の治療、予防、及び／又は診断に効果的である、単独の又は別の組成物と併用の組成物を収容し、滅菌のアクセスポートを有しうる（例えば、容器は皮下注射針で貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。該組成物中の少なくとも一の活性剤は、本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、該組成物が特定の疾患の治療のために使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）本発明の抗体を含む組成物を中に収容する第一の容器、及び（ｂ）さらなる細胞傷害性剤又はその他の治療剤含む組成物を中に収容する第二の容器を含んでもよい。本発明の本実施態様における製造品は、組成物が特定の疾患を治療するために使用されうることを示す添付文書をさらに含んでもよい。代替的に又は追加的に、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液を含む第二（又は第三）の容器をさらに含んでもよい。製造品は、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含めた、商業的及び使用者の観点から望ましいその他の材料をさらに含んでもよい。
【０２４２】
上記のいずれの製造品も、ヘマグルチニン抗体の代わりに又はそれに加えて、本発明のイムノコンジュゲートを含んでもよい。
【実施例】
【０２４３】
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供された一般的な説明を前提として、他の様々な実施態様が実施されうることが理解される。
【０２４４】
実施例１．抗ヘマグルチニン抗体のファージディスプレイによる同定
前述の通り、以下のような季節性インフルエンザウイルスワクチンを接種したヒトドナーから単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から構築したファージディスプレイライブラリーを用いるファージディスプレイにより、本明細書に記載の抗インフルエンザウイルスｍＡｂ３を同定した。（内容全体が本明細書おいて出典明示により援用される米国特許出願シリアル番号１４／０７７４１４を参照のこと。）
【０２４５】
実施例２．形質芽細胞の濃縮及び増殖
本明細書に記載の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスｍＡｂ１及び抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスｍＡｂ２を、前述の形質芽細胞の濃縮及び増殖技術を用いて同定した。（それぞれ全内容が本明細書おいて出典明示により援用される、Nakamura et al. (2013) Cell Host & Microbe 14:93-103及び米国特許出願シリアル番号１４／０７７４１４を参照のこと。）
【０２４６】
採血の７日前に季節性インフルエンザワクチンＦｌｕｖｉｒｉｎ（登録商標）（ノバルティス  ロット＃１１１７９６Ｐ１）を接種した正常ヒトドナーのロイコパックをＢｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐａｃｉｆｉｃ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）から得た。標準的方法を用い、末梢単核細胞（ＰＢＭＣ）を該ロイコパックから単離した。６−８週齢のメスのＳＣＩＤ／ベージュマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）から購入し、全米実験動物協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の動物愛護ガイドライン（Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ）に従い、ジェネンテック社にて収容、飼養した。実験研究はすべて、ジェネンテック実験動物研究の施設内動物管理使用委員会（ｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｌａｂ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）の承認の下、ＡＡＡＬＡＣｉ（国際実験動物ケア評価認証協会）認定施設内で、実験動物のケアと使用に関する指針及び関連法令、規則に従って実施された。健康なヒトドナーのロイコパック又は血液は、書面によるインフォームド・コンセントを提出し、欧米の治験審査委員会（ｔｈｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ）の倫理的承認を得た後、採取された。
【０２４７】
抗原誘導性のインビボ形質芽細胞濃縮及び増殖は、ＰＢＭＣの脾臓内移植を用いて以下の通り実施された。単離されたＰＢＭＣをヘマグルチニン抗原（Ｂ細胞１００万個毎に０．１−２μｇ）と共に再懸濁させ、３７℃で３０分間インキュベートした（ＰＢＭＣ／抗原プレミックス）。このインキュベーションに続き、ＰＢＭＣを洗浄して非結合抗原を除去した。交差反応性ヘマグルチニン抗体を産生した形質芽細胞を濃縮するために、ＰＢＭＣ／抗原プレミックス及び単一細胞選別用に用いるヘマグルチニン抗原変異体を、インフルエンザワクチンＦｌｕｖｉｒｉｎ（登録商標）中に含有されるヘマグルチニン抗原変異体とは異なるように特定して選択した。したがって、本試験で使用されるヘマグルチニン抗原は、インフルエンザＡウイルス分離株Ａ／ＮＷＳ／１９３３のＨ１ヘマグルチニン、インフルエンザＡウイルス分離株Ａ／香港／８／１９６８のＨ３ヘマグルチニン、及びインフルエンザＡウイルス分離株Ａ／オランダ／２１９／２００３のＨ７ヘマグルチニンを含んでいた。これらのヘマグルチニン抗原は、標準的な分子生物学の手法を用いてジェネンテックにて作製された。
【０２４８】
６−８週齢のメスのＳＣＩＤ／ベージュマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）に、セシウム１３７線源を使用し、吸収線量３５０ラドで半致死的に照射した。照射後７日間、飲料水にポリミキシンＢ（１１０ｍｇ／Ｌ）及びネオマイシン（１．１ｇ／Ｌ）を添加した。照射の４時間後、各マウスの左わき腹を剪毛し、Ｂｅｔａｄｉｎｅ（登録商標）（Ｐｕｒｄｕｅ  Ｐｈａｒｍａ，Ｓｔａｍｆｏｒｄ，ＣＴ）及び７０％アルコールで前処理した。無菌の手術手順を用い、麻酔下で外科手技を実施した。各マウスの肋骨境界腺の真下の皮膚を１センチ切開し、続いて腹壁と腹膜の切開を行った。各マウスの脾臓を注意深く露出させ、ＰＢＳ３０μＬに再懸濁させた５０×１０６ヒトＰＢＭＣを注射した。切り込みは、５−Ｏ  Ｖｉｃｒｙｌ（登録商標）縫合糸（Ｅｔｈｉｃｏｎ，Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，ＮＪ）を使用して筋層で、外科用ステープラーを使用して皮膚で閉じられた。抗原特異的な細胞の選別実験のために、移植後８日目にマウスを殺処分し、その脾臓を収集した。
【０２４９】
マウスから得た脾臓細胞の単一細胞懸濁液を、ヒトＩｇＧ＋形質芽細胞をＣＤ３８ｈｉｇｈＩｇＧ＋発現として明らかにする抗ヒトモノクローナル抗体ＣＤ３８  ＰＥＣｙ７（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）とＩｇＧ  Ｄｙｌｉｇｈｔ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）のカクテルで染色した。単離された脾臓細胞の懸濁液中のヘマグルチニン交差反応性形質芽細胞を同定するために、該脾臓細胞をインフルエンザウイルスＡ分離株Ａ／ＮＷＳ／１９３３のヘマグルチニンＨ１及びインフルエンザウイルスＡ分離株Ａ／香港／８／１９６８のヘマグルチニンＨ３で染色した。尚、これらは、Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ−Ｌｉｎｋ（登録商標）標識キット（Ｉｎｎｏｖａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）を使用して、それぞれＦＩＴＣ又はＰＥと予めコンジュゲートさせたものである。
【０２５０】
次いで試料を、ヨウ化プロピジウムの存在下で死細胞を排除してＡｒｉａ高速セルソーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で解析し、抗ヘマグルチニン特異的形質芽細胞を単一細胞方式で選別して５％低ＩｇＧウシ胎児血清で補充した５０μｌのＲＰＭＩ細胞培地を含む９６ウェル組織培養プレートに入れた。（Ｇｉｂｃｏ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）
【０２５１】
実施例３．単一形質芽細胞のＩｇＧクローニング
ヘマグルチニンＨ１及びＨ３交差反応性ヒト形質芽細胞（上に記載）を単一細胞選別した。単一形質芽細胞を選別して、５％低ＩｇＧウシ胎児血清含有ＲＰＭＩを５０μｌ含むＵ字底型９６ウェルマイクロウェルプレートに直接入れた。該プレートを６００ｘｇで５分間遠心分離し（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｂｒｅａ，ＣＡ）、培地を吸引により注意深く除去した。細胞を再懸濁させ、同じ手順に従い、ＰＢＳ  ９０μｌ中で二回洗浄した。
【０２５２】
可変重鎖及び可変軽鎖をコードするｃＤＮＡ生成のため、各細胞を、ＲＮａｓｅｏｕｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）２ユニット、０．５ｍＭの４ｄＮＴＰ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）、１．５ｍＭのＭｇＣｌ２、３７．５ｍＭのＫＣｌ、１０ｍＭのＤＴＴ（ジチオスレイトール）、０．２５％  Ｎｏｎｉｄｅｔ  Ｐ４０（ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｍａｒｂｌｅｈｅａｄ，ＭＡ）、ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）０．１ｍｇ／ｍｌ、２５ｍＭのトリス（ｐＨは８．３）、ＩｇＧ１−４の定常領域、カッパ鎖定常領域、及びラムダ鎖定常領域に特異的なオリゴヌクレオチド０．２５ｐｍｏｌ（下記）、並びにＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）４０Ｕを含有する６μｌの逆転写酵素（ＲＴ）反応混合液に再懸濁させた。
【０２５３】
ＩｇＧ１−４定常：ＧＡＡＧＴＡＧＴＣＣＴＴＧＡＣＣＡＧＧＣＡＧ  （配列番号１）
カッパ定常：ＣＴＣＡＧＣＧＴＣＡＧＧＧＴＧＹＴＧＣＴＧＡＧ  （配列番号２）
ラムダ定常：ＧＧＧＴＫＴＧＧＴＳＧＴＣＴＣＣＡＣ  （配列番号３）
【０２５４】
反応物を３０分おきに３回、それぞれ４５℃、５０℃、５５℃でインキュベートした。インキュベーションに続いて、反応混合物をＴＥバッファー（１０ｍｍのトリス  ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ）で１５μｌに希釈した。２μｌの上記希釈ＲＴカクテルとＡｄｖａｎｔａｇｅ−ＧＣ  ２  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｍｉｘ  （Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を製造業者の示す手順に従って使用して最初のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施し、ＩｇＧ重鎖、カッパ鎖、及びラムダ鎖を増幅させた。ＰＣＲ増幅は、以下に示す可変重鎖及び可変軽鎖の生殖細胞系配列並びに定常領域配列に基づく縮重オリゴヌクレオチドを使用して実施した。
ＩＧＶＨ１ａ    ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣ  （配列番号４）
ＩＧＶＨ１ｂ    ＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧＧＧＣ  （配列番号５）
ＩＧＶＨ２      ＣＡＧＧＴＣＡＣＣＴＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＴＧＧＴＣＣ  （配列番号６）
ＩＧＶＨ３      ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧ  （配列番号７）
ＩＧＶＨ４      ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧＡＧＴＣＧＧＧＣＣＣ  （配列番号８）
ＩＧＶＨ５      ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＴＣＴＧＧ  （配列番号９）
ＩＧＶＨ６      ＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＡＧＴＣＡＧＧＴＣＣ  （配列番号１０）
ＩＧＶＨ７      ＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＡＴＣＴＧＧ  （配列番号１１）
ＩＧＫＶ１      ＧＨＣＡＴＣＣＲＧＷＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣ  （配列番号１２）
ＩＧＫＶ２      ＧＡＴＲＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＹＣＡＧＷＣＴＣ  （配列番号１３）
ＩＧＫＶ３      ＧＡＡＡＴＷＧＴＲＷＴＧＡＣＲＣＡＧＴＣＴＣ  （配列番号１４）
ＩＧＫＶ４      ＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣ  （配列番号１５）
ＩＧＫＶ５      ＧＡＡＡＣＧＡＣＡＣＴＣＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣ  （配列番号１６）
ＩＧＫＶ６      ＧＡＷＲＴＴＧＴＧＭＴＧＡＣＷＣＡＧＴＣＴＣ  （配列番号１７）
ＩＧＬＶ１      ＣＡＧＴＣＴＧＴＧＹＴＧＡＣＫＣＡＧＣＣＲＣＣＣＴＣ  （配列番号１８）
ＩＧＬＶ２      ＣＡＧＴＣＴＧＣＣＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＴ  （配列番号１９）
ＩＧＬＶ３      ＴＣＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＷＣＡＧＳＨＶＣＣＣＫＣ  （配列番号２０）
ＩＧＬＶ４      ＣＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＲＴＣＶＣＣＣＴＣ  （配列番号２１）
ＩＧＬＶ５      ＣＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＡＣＴＴＣ  （配列番号２２）
ＩＧＬＶ６      ＡＡＴＴＴＴＡＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＣＣＡＣ  （配列番号２３）
ＩＧＬＶ７      ＣＡＧＧＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＣＣ  （配列番号２４）
ＩＧＬＶ８      ＣＡＧＡＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＡＧＣＣ  （配列番号２５）
ＩＧＬＶ９      ＣＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣ  （配列番号２６）
ＨＣ３０１．５定常  ＧＣＡＧＣＣＣＡＧＧＧＣＳＧＣＴＧＴＧＣ  （配列番号２７）
カッパ１０２定常  ＧＣＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＧＧＣＡＧＴＴＣＣＡＧ  （配列番号２８）
ラムダ２０２定常  ＣＴＴＧＲＡＧＣＴＣＣＴＣＡＧＡＧＧＡＧ  （配列番号２９）
【０２５５】
重鎖及び軽鎖ＰＣＲ増幅反応はそれぞれ次の二つの反応に分かれる：重鎖ファミリーＶＨ．１、２、３（プライマー  ＩＧＶＨ１ａ、ＩＧＶＨ１ｂ、ＩＧＶＨ２、ＩＧＶＨ３）とＶＨ．４、５、６、７（プライマーＩＧＶＨ４、ＩＧＶＨ５、ＩＧＶＨ６、及びＩＧＶＨ７）；カッパ鎖ファミリーＶＫ．１、２、３（プライマーＩＧＫＶ１、ＩＧＫＶ２、及びＩＧＫＶ３）とＶＫ．４、５、６（プライマーＩＧＶＫ４、ＩＧＶＫ５、及びＩＧＶＫ６）；及びラムダ鎖ファミリーＶＬ．１、２、３、４、５（ＩＧＬＶ１、ＩＧＬＶ２、ＩＧＬＶ３、ＩＧＬＶ４、及びＩＧＬＶ５）とＶＬ．６、７、８、９（プライマーＩＧＬＶ６、ＩＧＬＶ７、ＩＧＬＶ８、及びＩＧＬＶ９）。温度サイクルのためにタッチダウンＰＣＲ増幅手順を用いた。
【０２５６】
この反応に続いて、ＰＣＲ増幅産物を、エキソヌクレアーゼ１（Ｅｘｏ）及びシュリンプアルカリホスファターゼ（ＳＡＰ）で処理し、過剰なヌクレオチド及びプライマーを各ＰＣＲ増幅反応から除去した（Ｕ．Ｓ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｍａｒｂｌｅｈｅａｄ，ＭＡ）。最初のＰＣＲ増幅産物を、重鎖と軽鎖両方の可変配列を決定するために、サンガー配列決定を用いて直接に配列決定した。哺乳動物のシグナル配列と定常領域クローニング配列を以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて挿入するために、生殖細胞系列が一致した重鎖可変及び軽鎖可変オリゴヌクレオチドを使用して第２のネステッドＰＣＲ増幅を実施した。
ｓＶＨ１ａ：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＧ  （配列番号３０）
ｓＶＨ２：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＡＴＣＡＣＣＴ  （配列番号３１）
ｓＶＨ３ｖｖ：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧ  （配列番号３２）
ｓＶＨ３ｇｌ：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＧＧ  （配列番号３３）
ｓＶＨ４：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＣＡＧＧ  （配列番号３４）
ｓＶＨ５：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＧＧＴＧＣＡ  （配列番号３５）
ｓＶＨ６：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＧＴＡＣＡＧＣ  （配列番号３６）
ｓＶＨ７：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＧＴＧＣＡ  （配列番号３７）
ｓＶＫ１：    
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧ  （配列番号３８）
ｓＶＫ２：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＴＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＴＧＣ  （配列番号３９）
ｓＶＫ３：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＣＴＴＴＧ  （配列番号４０）
ｓＶＫ４：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＣＣＣＴＧＧＣＴＧＴＧ  （配列番号４１）
ｓＶＫ５：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＡＡＣＧＡＣＡＣＴＣＡＣＧＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＣ  （配列番号４２）
ｓＶＫ６：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＧＡＡＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＴＴＣＧ  （配列番号４３）
ｓＶＬ１：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＴＣＴＧＴＧＹＴＧＡＣＫＣＡＧＣＣＲＣＣＣＴＣ  （配列番号４４）
ｓＶＬ２：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＴＣＴＧＣＣＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＴ  （配列番号４５）
ｓＶＬ３：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＴＣＣＴＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＷＣＡＧＳＨＶＣＣＣＫＣ  （配列番号４６）
ｓＶＬ４：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＲＴＣＶＣＣＣＴＣ  （配列番号４７）
ｓＶＬ５：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＡＣＴＴＣ  （配列番号４８）
ｓＶＬ６：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＡＡＴＴＴＴＡＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＣＣＡＣ  （配列番号４９）
ｓＶＬ７：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＧＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＴＣＡＧＧＡＧＣＣＣ  （配列番号５０）
ｓＶＬ８：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＡＣＴＧＴＧＧＴＧＡＣＣＣＡＧＧＡＧＣＣ  （配列番号５１）
ｗＶＬ９：
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＧＡＴＧＧＴＣＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＣＴＴＴＴＴＣＴＡＧＴＡＧＣＡＡＣＴＧＣＡＡＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＴＴＣＡＣＡＧＣＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＴＣＡＧＣＣＡＣＣ  （配列番号５２）
重鎖定常：
ＧＣＣＡＧＧＧＧＧＡＡＧＡＣＣＧＡＴＧ  （配列番号５３）
カッパ定常：
ＣＴＧＧＧＡＴＡＧＡＡＧＴＴＡＴＴＣＡＧＣＡＧＧＣＡＣＡＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＡＧＡＴＴＴＣＡＡＣＴＧＣＴＣ  （配列番号５４）
ラムダ定常：
ＣＴＴＧＲＡＧＣＴＣＣＴＣＡＧＡＧＧＡＧ  （配列番号５５）
【０２５７】
ＰＣＲ増幅反応は、製造者の推奨に従い、ＰｒｉｍｅＳｔａｒ  ＨＳ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｗｉｔｈ  ＧＣ（Ｔａｋａｒａ  Ｂｉｏ，Ｓｈｉｇａ，Ｊａｐａｎ）を使用して設定した。ＰＣＲ増幅反応に続き、増幅産物を上記のＥｘｏ／ＳＡＰで処理した。重可変鎖及び軽可変鎖をコードするＰＣＲ増幅産物を、制限エンドヌクレアーゼ除去手順を使用して哺乳動物発現ベクターに挿入した。キュンケル突然変異誘発法を用いて、ＰＣＲ増幅産物２０μｌをＩｇＧ１、カッパ鎖、及びラムダ鎖の一本鎖ＤＮＡヒト鋳型にアニールした。（Kunkel(1985)PNAS 82:488-492参照。）正しく挿入された構築物がＤＮＡ配列決定により確認された。重鎖及び軽鎖をコードする核酸を含有するプラスミドを、一過性発現のためのＦｕｇｅｎｅトランスフェクション試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を用いて２９３Ｔヒト胎児性腎臓細胞にコトランスフェクトし、発現及び結合について以下の実施例４に記載のように解析した。
【０２５８】
実施例４．Ｈ７ヘマグルチニンＥＬＩＳＡスクリーニングアッセイ
抗インフルエンザｍＡｂ１、抗インフルエンザｍＡｂ２、及び抗インフルエンザｍＡｂ３のＨ７  ＨＡに結合する能力、以下の試験を実施した。 
【０２５９】
Ａ／上海／１／２０１３（図７；配列番号８６））及びＡ／安徽／１／２０１３（図８；配列番号８７）のＨ７  ＨＡをコードする核酸は、Ａｎ  ＯｒｉＧｅｎｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ社傘下のＢｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社（ワシントン州ボセル市）により合成された。Ｈ７  ＨＡタンパク質をコードする核酸は、トランスフェクション及び発現の前に、哺乳動物発現ベクターｐＲＫ．ｓｍ（ジェネンテック社）にサブクローニングされた。Ｈ７  ＨＡタンパク質は、酵素結合免疫吸着アッセイ検出の前に、２９３Ｔ細胞の表面に完全長タンパク質として発現された。
【０２６０】
完全長ＨＡライセートを生成するために、リン酸カルシウム法を用い、１０ｃｍの培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ  カタログ＃４３０１６７）上の２９３Ｔ細胞をＨ７  ＨＡ発現プラスミドでトランスフェクトした。４８時間後、１ｍＬのライセートバッファー（５０ｍＭのトリス（ｐＨは８）、５ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨは８）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（ＥＭＤ、カタログ＃９４１０）及びＰｒｏｔｅａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｃｏｃｋｔａｉｌ  Ｔａｂｌｅｔ（ロッシュ、カタログ＃１１８３６１５３００１）を用いて室温で２０分間細胞を処理した。ライセートを１０分間、１４０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を−８０℃で保存し、ＥＬＩＳＡ試験で使用した。
【０２６１】
ＥＬＩＳＡ試験のために、５μｇ／ｍｌのスノードロップレクチン（Ｓｉｇｍａ  カタログ＃Ｌ−８２７５）が入ったＰＢＳを用い、Ｎｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ  ９６ウェルプレート（カタログ＃４３９４５４）を室温で６時間コーティングした。次いで、プレートをＷａｓｈｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＰＢＳ、ｐＨ７．４＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０（ＥＭＤ、カタログ＃１２９６））で洗浄し、Ｂｌｏｃｋｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＰＢＳ，ｐＨ７．４，＋０．５％  ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン、Ｇｉｂｃｏ  カタログ＃１５２６０））中、室温で１時間インキュベートした。次いで、該プレートを洗浄し、Ａｓｓａｙ  Ｄｉｌｕｅｎｔ（ＰＢＳ、ｐＨ７．４，＋０．５％  ＢＳＡ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０）中で２９３Ｔ細胞ライセート（１：３００）と共に４°Ｃで一晩インキュベートした。次いで、該プレートを洗浄し、Ａｓｓａｙ  Ｄｉｌｕｅｎｔ中で段階希釈抗体と共に室温で１．５時間インキュベートした。
【０２６２】
次の洗浄工程の後、Ａｓｓａｙ  Ｄｉｌｕｅｎｔ中で１：３００００のヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ＃１０９−０３６−０９８）又は１：２００００のヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ＃１１５−０３５−０７１）と共に該プレートを室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、ＴＭＢ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＫＰＬ、カタログ＃５０−６５−００）と共に室温で５〜１０分間インキュベートし、次いで反応を停止させるために１Ｍのリン酸を添加した。ＢｉｏＴｅｋ  Ｓｙｎｅｒｇｙ２プレートリーダーとＧｅｎ５ソフトウェアを使用して、４５０ｎＭでの吸光度を測定した。抗体のＨ７  ＨＡへの結合に関するデータ解析及びグラフは、Ｐｒｉｓｍソフトウェアで作成した。
【０２６３】
３抗体すべてについてＥＬＩＳＡアッセイを実施し、Ａ／上海／１／２０１３及びＡ／安徽／１／２０１３のＨ７  ＨＡタンパク質への結合を試験した。陰性対照として、Ｈ７  ＨＡタンパク質を含有しないライセートに対するＥＬＩＳＡにより全３抗体の結合を試験した。抗インフルエンザｍＡｂ１（図１Ａ）、抗インフルエンザｍＡｂ２（図１Ｂ）、及び抗インフルエンザｍＡｂ３（図１Ｃ）は、試験した両方のＨ７  ＨＡタンパク質に対して特異的結合を示した。試験した最も高い抗体濃度（２５０００ｎｇ／ｍｌ）でも、３抗体すべてについて陰性対照ライセートに対する極めて低い結合活性が観察された。（図１Ａ、１Ｂ、及び１Ｃ参照）ＥＬＩＳＡ結合データは、各抗体に対する結合のＩＣ５０値および９５％信頼区間を算出するシグモイド用量反応曲線に適合させた。（以下の表２参照）
2017508002.tif 000003
【０２６４】
これらの結果は、本アッセイで試験した３抗体すべてが２０１３年の鳥インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの中国での大流行の最中に分離された最初のヒトインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス株であるＡ／上海／１／２０１３及びＡ／安徽／１／２０１３のＨ７  ＨＡタンパク質に特異的に結合できることを示した。
【０２６５】
実施例５．インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスのインビトロ中和
本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体のインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスをインビトロで中和する能力について、以下の通りに試験した。
【０２６６】
インビトロ中和試験は、カリフォルニア州サンディエゴ市のＶｉｒａｐｕｒ  ＬＬＣのＢＳＬ３施設内で実施された。インビトロ中和試験では、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス株であるＡ／上海／２／２０１３  ＩＤＣＤＣ  ＲＧ３２Ａが使用された。中和試験のために、ウイルスの感染単位約１００を、２００から１．５６μｇ／ｍｌの濃度で各抗体と混合し、１時間インキュベートした。次いで、透明な平底９６ウェルプレートで培養したＭＤＣＫ細胞のコンフルエントな単層上に、このウイルス／抗体混合物を置いた。各抗体濃度を３重試験した。抗体の存在下で、該ウイルスをＭＤＣＫ細胞に６８〜７２時間、３７℃で感染させた。感染後、この抗体ウイルス液を除去し、ＭＤＣＫ細胞を固定してクリスタルバイオレットで染色し、感染ＭＤＣＫ単層及び非感染ＭＤＣＫ単層を可視化した。ＭＤＣＫ細胞のインタクトな非感染単層が含まれるウェルはクリスタルバイオレットでダークブルーに染まり、感染ＭＤＣＫ単層を呈するウェルはクリスタルバイオレットでダークブルーに染まらない。
【０２６７】
最も強いＨ７  ＨＡ結合能を示した抗インフルエンザＡウイルスｍＡｂ１及び抗インフルエンザＡウイルスｍＡｂ２は、２００〜２５μｇ／ｍｌの抗体濃度で完全にインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染をブロックすることができた（図２Ａ及び２Ｂ）。グループ２インフルエンザＡウイルスを中和するのに効果的であることが先に示された（全内容が本明細書において出典明示により援用される米国特許出願シリアル番号１４／０７７４１４を参照）抗ヘマグルチニン抗体  （ＨＶＲ−Ｌ３の６位でＴｙｒ残基の代わりにＴｒｐ残基を含むｍＡｂ  ８１．３９）は、本アッセイではインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを中和するのに効果的ではなかった（データは示していない）。このことは、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体は、効果的にインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを中和することの予期せぬ利点を有することを示す。
【０２６８】
陰性対照として、Ｈ７  ＨＡに結合しない抗体のインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染力をブロックする能力についても試験した。この陰性対照抗体は、試験した最も高い抗体濃度（２００μｇ／ｍｌ）でも、インビトロ中和能力を全く示さなかった（図２Ｃ）。本アッセイでのｍＡｂ１（抗Ｆｌｕ１）及びｍＡｂ２（抗Ｆｌｕ２）の最小阻止濃度値（ＭＩＣ）は２５μｇ／ｍｌであった。一方、陰性対照抗体のＭＩＣは決定することができなかった（表３）。
2017508002.tif 000004
【０２６９】
これらの結果から、本発明のモノクローナル抗体が用量依存的にインビトロでインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを中和できたことが示された。これらの結果は、本発明の抗体がインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療及び予防に効果的であることを示した。
【０２７０】
実施例６．マウス及びフェレットにおける抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体のインビボ有効性
マウス及びフェレットのインフルエンザＡウイルス感染モデルは、抗インフルエンザ療法の予防的及び治療的有効性を試験するのにしばしば用いられる。フェレットは、ヒトインフルエンザＡウイルス感染に臨床的に関連する動物モデルと考えられている。（Matsuoka et al., (2009) Current Protocols in Microbiology,, Chapter 15, Unit 15G 12参照）
【０２７１】
マウス及びフェレットにおける抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体のインビボ有効性は、以下のように発揮される。ＤＢＡ／２Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）又はオスのフェレット（Ｍｕｓｔｅｌａ  ｐｕｔｏｒｉｕｓ  ｆｕｒｏ）に、インフルエンザ培地（ＤＭＥＭ、０．２％  ＢＳＡ、ＴＰＣＫで処理したトリプシン２μｇ／ｍＬ）で希釈した最小ＬＤ１００量の種々のインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスクレード５０μｌを鼻腔内感染させる。抗体の静脈内投与の前に、インフルエンザウイルス感染を２４〜７２時間進行させる。
【０２７２】
インフルエンザＨ７Ｎ９ウイルス感染から７２時間後、２００μｌのＰＢＳに様々な用量（例えば４５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、及び０．６ｍｇ／ｋｇ）で、様々な量の抗体をマウス及びフェレットに静脈内投与する。感染後２１日目まで、マウス及びフェレットの体調と生存を毎日モニターし、体重も毎日測定する。
【０２７３】
インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスへの感染から２４時間後、４８時間後、及び７２時間後に様々な量の抗体を投与されたマウス及びフェレットの生存率（時系列、日単位）を決定する。結果は、本発明のモノクローナル抗体が種々のインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染を治療するのに効果的であることを示す。さらに、このようなデータは、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに感染後少なくとも７２時間までに投与される場合、本発明のモノクローナル抗体がインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの治療に効果的であることを示す。
【０２７４】
実施例７．マウス及びフェレットにおける抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）抗体のインビボ有効性
マウス及びフェレットにおける抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）抗体のインビボ有効性を、オセルタミビルリン酸塩（タミフル（登録商標））の有効性と比較するため、以下の試験を実施する。６週齢のＢａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，Ｃａ）に致死量の１００倍のインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス５０μｌを鼻腔内感染させる。オスのフェレット（Ｍｕｓｔｅｌａ  ｐｕｔｏｒｉｕｓ  ｆｕｒｏ）を、例えば１ｘ１０３ｐｆｕの鼻腔内用量のインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに曝露させる。感染から４８時間後、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）抗体を単回投与として（例えば約４５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ又は０．６ｍｇ／ｋｇ）又は対照ＩｇＧを２００μｌのＰＢＳ中で静脈内投与する。これらの実験で、１日２回（ＢＩＤ）２ｍｇ投与を５日間からなるオセルタミビルの投与レジメンを、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体の単回投与レジメンと比較する。
【０２７５】
各治療群の死亡率（パーセント）を決定する。結果は、本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）抗体は、オセルタミビルと比較して、マウス及びフェレットにおけるインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療により効果的であることを示す。
【０２７６】
実施例８．オセルタミビルの共投与あり及びなしでのマウス及びフェレットにおける抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体のインビボ有効性
オセルタミビルの投与は、発症後４８時間以内であれば、ヒトインフルエンザＡウイルス感染を削減するのに効果的である。残念ながら、オセルタミビルは、４８時間を超えて症候性であった患者においては最小の効果しか示さない。したがって、抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体とオセルタミビルの共投与がそれぞれの単独治療よりも改善された有効性を示すか否かを試験するために、以下の実験が実施される。これらの実験は、上の実施例７に記載したようなマウス又はフェレットのインフルエンザ感染モデルを用いて実施する。簡潔に述べれば、単回亜有効量の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）抗体、対照ＩｇＧ、２ｍｇ  ＢＩＤのオセルタミビルの静脈内投与の前、又は単回投与の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）抗体と５日間のオセルタミビル治療の併用の前に、メスのＢａｌｂ／Ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に致死量の１００倍のインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスを感染させ、オスのフェレット（Ｍｕｓｔｅｌａ  ｐｕｔｏｒｉｕｓ  ｆｕｒｏ）を鼻腔内用量（例えば１ｘ１０３ｐｆｕ）のインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスに７２時間曝露させる。
【０２７７】
各治療群の死亡率（パーセント）を決定する。抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体をノイラミニダーゼ阻害剤であるオセルタミビルと組み合わせて使用する併用療法の間に相乗効果が生じたのかどうかを決定するために、比較がなされる。
【０２７８】
その結果は、本発明の抗ヘマグルチニン抗体を広範に中和することがフェレットにおけるインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の治療において高度に保護的であり、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染から２４、４８、及び７２時間で投与した時、オセルタミビルよりも、よく効くことを示した。
【０２７９】
実施例９．予防的治療
本発明の抗体は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス感染の予防的治療において有用である。該治療は、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスへの曝露又は感染のリスクがある個体に予防的療法を施す。本発明の抗インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルス抗体を予防的インビボ動物モデルで試験し、ヒトにおけるインフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスの大流行に対応して該抗体が予防的治療を提供する能力を確かめる。複数匹のインビボＨ７Ｎ９動物モデルは、軽症疾患から死亡までの臨床転帰を有するマウス及びフェレットから得られる。５から５０ｍｇ／ｍｌの濃度の該抗体の該動物への感染前の静脈内送達を用いて、インフルエンザＡ（Ｈ７Ｎ９）ウイルスへの感染及び該ウイルスに関連する重症疾患を緩和するための抗体の予防的活性を評価する。
【０２８０】
統計解析
統計データは、ＪＭＰバージョン９．０．２ソフトウェア（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）を使用して算出した。生存実験は、ログランク検定を用いて比較した。＜０．０５のＰ値を有意とみなした。ＩＣ５０曲線及びＩＣ５０値をプロットし、Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン５．０ソフトウェアを用いて算出した。
【０２８１】
前述の発明は理解を明確にするために例示及び実施例によってある程度詳細に説明されているが、説明及び実施例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用されるすべての特許及び科学文献の開示内容は、その全体が出典明示により援用される。
【図１Ａ】
2017508002.tif 000005
【図１Ｂ】
2017508002.tif 000006
【図１Ｃ】
2017508002.tif 000007
【図２】
2017508002.tif 000008
【図３】
2017508002.tif 000009
【図４】
2017508002.tif 000010
【図５】
2017508002.tif 000011
【図６】
2017508002.tif 000012
【図７】
2017508002.tif 000013
【図８】
2017508002.tif 000014
【配列表】
2017508002000001.app
【国際調査報告】
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2017508002.tif 000016
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