(57)【要約】  式（Ｉ）の８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩と、アセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用。医薬品。
2017510597.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化２】
2017510597.tif 000005
で示される８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩と、アセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用。
【請求項２】
８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンが、塩基の形で使用されることを特徴とする、請求項１記載の併用。
【請求項３】
アセチルコリンエステラーゼインヒビターが、ドネペジル、リバスチグミン又はガランタミンであることを特徴とする、請求項１又は２記載の併用。
【請求項４】
ドネペジルが、塩酸塩の形で使用されることを特徴とする、請求項３記載の併用。
【請求項５】
８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンが、遊離塩基 １〜２００mg当量の１日用量で投与されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項記載の併用。
【請求項６】
活性成分として、請求項１〜５のいずれか一項記載のアセチルコリンエステラーゼインヒビターと併用した８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩を、１種以上の薬学的に許容し得る賦形剤と組合せて含む、医薬組成物。
【請求項７】
脳の老化に及び神経変性疾患に伴う認知障害の処置において使用するための、請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
アルツハイマー病に伴う認知障害の処置において使用するための、請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】
鬱病の症状を有する患者におけるアルツハイマー病に伴う認知障害の処置において使用するための、請求項８記載の医薬組成物。
【請求項１０】
脳の老化に及び神経変性疾患に伴う認知障害の処置用医薬品の製造における、請求項１〜５のいずれか一項記載の併用の使用。
【請求項１１】
アルツハイマー病に伴う認知障害の処置用医薬品の製造における、請求項１０記載の併用の使用。
【請求項１２】
鬱病の症状を有する患者におけるアルツハイマー病に伴う認知障害の処置用医薬品の製造における、請求項１１記載の併用の使用。
【請求項１３】
脳の老化に及び神経変性疾患に伴う認知障害の処置のための、請求項１〜５のいずれか一項記載の併用。
【請求項１４】
アルツハイマー病に伴う認知障害の処置のための、請求項１３記載の併用。
【請求項１５】
鬱病の症状を有する患者におけるアルツハイマー病に伴う認知障害の処置のための、請求項１４記載の併用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脳の老化に及び神経変性疾患に伴う認知障害の処置において使用するための医薬組成物を得るための、式（Ｉ）：
【０００２】
【化１】
2017510597.tif 000003
で示される８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩と、アセチルコリンエステラーゼインヒビターとの新しい併用に関する。
【背景技術】
【０００３】
８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンは、特許出願WO 2008/085506に記載されるグルタミン酸ＡＭＰＡ受容体陽性アロステリックモジュレーターである。更に正確には、式（Ｉ）の化合物は、認知促進性を持ち、シナプス可塑性を向上させ、そして神経保護性を示すため、本化合物は、中枢神経系の疾患の処置において、そして更には、脳の老化に及び神経変性疾患に伴う認知障害の処置において有意義なある活性を得ている。
【０００４】
本発明は、式（Ｉ）の８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン、又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩と、アセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用、更には脳の老化に及び神経変性疾患に伴う認知障害の処置において有意義なその特性に関する。
【０００５】
アルツハイマー病のような、脳の老化に伴う神経変性疾患は、記憶障害及び認知機能不全を特徴とする。認知障害は一般に、例えば、グルタミン酸及びアセチルコリンのようなある種の神経伝達物質を合成及び放出するニューロンの能力の低下を伴う（Robbins et al., Trends in Pharmacol. Sci. 2006(3), 27, 141-148）。更に、シナプス可塑性の及び神経突起の進行性消失が観察され、そしてニューロン脱落は、脳のある特定の領域において加速される。病態生理学的研究により、グルタミン酸作動性神経伝達の欠損は、アルツハイマー病の進行に密接に関連していることが明白に証明された（Advokat et al., Neuroscience & Biobehav. Rev. 1992, 16, 13-24; Francis et al., Progress in Neurobiology 1992, 39(5), 517-545）。
【０００６】
グルタミン酸作動系において、ＡＭＰＡ（「α−アミノ−３−ヒドロキシ−５−メチル−４−イソオキサゾールプロピオン酸」）受容体は、生理学的なニューロン興奮性の現象に、そして特に、記憶の過程に関与する現象に最も関与する受容体であると考えられる。例えば、学習は、認知過程に不可欠である脳の領域の１つである、海馬におけるＡＭＰＡのその受容体への結合増大に関連することが証明されている。
【０００７】
同時に、コリン作動性ニューロンの進行性変性が、アルツハイマー病の経過中に観察される。アセチルコリンエステラーゼの作用をブロックすることにより脳内のアセチルコリンレベルの低下を制限するために、ドネペジルのようなアセチルコリンエステラーゼインヒビターが、アルツハイマー病の対症療法において現在使用されている。アセチルコリンエステラーゼインヒビターは、ＡＭＰＡ受容体陽性アロステリックモジュレーターのように、エピソード記憶及び作業記憶の種々の動物モデルにおいて認知性を向上させられることが明らかになっている（Black, Psychopharmacol. 2005, 179, 154-163; O’Neill et al., IDrugs 2007, 10(3), 185-192; Yuede et al., Behav. Pharmacol., 2007, 18(5 6), 347-363）。したがって認知機能の向上には、ＡＭＰＡ受容体若しくはグルタミン酸、又はアセチルコリンのいずれかを標的とする、２タイプの方策に基づくことができる。
【０００８】
驚くべきことに、本発明は、アセチルコリンエステラーゼインヒビターの効果が、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンの、又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩の効果により増強されることを明らかにした。したがって、これらの化合物の同時投与は、アセチルコリンエステラーゼインヒビターの単純投与と比較して、患者の認知能力を向上させることができるが、処置に伴う有害な作用（特に、吐き気若しくは下痢のような消化器障害、頭痛又は疲労）が観察されたり増加することもない。言い換えれば、単独投与に従来使用される用量より低い治療用量のアセチルコリンエステラーゼインヒビターを用いる処理が、同等かそれ以上の認知成績を伴い、かつ有害作用の少ない効果を伴うことが想定できる。
【０００９】
更に驚くべきことに、亜活性用量で投与される８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン、又はその付加塩と、こちらも亜活性用量で投与されるアセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用は、認知に及ぼす良好な成績の相乗効果を引き起こす。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、エピソード記憶のモデルである、文脈連続識別試験における実験の手順を示す。
【図２】図２は、文脈連続識別試験における実験の結果を示す。
【図３】図３は、文脈連続識別試験における実験の結果を示す。
【図４】図４は、覚醒マウスにおいて電気刺激により誘導される興奮性シナプス後電位（ＥＰＳＰ）の試験の結果を示す。
【００１１】
予測できなかったこれらの効果により、脳の老化に及び神経変性疾患に伴う認知障害の処置において、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン、又はその付加塩と、アセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用を利用することが想定できる。アルツハイマー病に伴う認知障害は、特に対象となる。更には、鬱病の症状を有する患者におけるアルツハイマー病に伴う認知障害が対象となる。
【００１２】
好ましくは、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンは、本発明に関連して塩基の形で使用される。
【００１３】
本発明のアセチルコリンエステラーゼインヒビターとしては、フィゾスチグミン、リバスチグミン、ガランタミン、ドネペジル、タクリン及びフペルジンＡから選択されよう。好ましい実施態様では、アセチルコリンエステラーゼインヒビターは、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される。ドネペジルは、好ましくは塩酸塩の形で、リバスチグミンは酒石酸水素塩の形で、そしてガランタミンは臭化水素酸塩の形で使用される。有利には、アセチルコリンエステラーゼインヒビターは、ドネペジルである。
【００１４】
更には、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンと、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択されるアセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用は、アルツハイマー病に伴う認知障害、そして特に鬱病の症状を有する患者におけるアルツハイマー病に伴う認知障害の処置に使用される。
【００１５】
本発明はまた、脳の老化に及び神経変性疾患に伴う認知障害の処置用の医薬組成物を入手するための、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン、又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩と、アセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用の使用に関する。
【００１６】
更には、本発明は、アルツハイマー病に伴う認知障害、そして特に鬱病の症状を有する患者におけるアルツハイマー病に伴う認知障害の処置用の医薬組成物を入手するための、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン、又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩と、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択されるアセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用の使用に関する。
【００１７】
本発明はまた、１種以上の薬学的に許容し得る賦形剤と組合せた、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン、又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩と、アセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用を含む、医薬組成物に関する。
【００１８】
有利には、本発明は、１種以上の薬学的に許容し得る賦形剤と組合せた、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン、又は薬学的に許容し得る酸若しくは塩基とのその付加塩と、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択されるアセチルコリンエステラーゼインヒビターとの併用を含む、医薬組成物に関する。
【００１９】
本発明の医薬組成物において、活性成分の質量分率（組成物の総質量分の活性成分の質量）は、５〜５０％である。
【００２０】
本発明の医薬組成物としては、特に経口、非経口そして特に静脈内、経皮（per- or trans-cutaneous）、鼻内、直腸内、経舌、眼内又は呼吸器経路による投与に適切なもの、そして更に具体的には錠剤、糖衣錠、舌下錠、ゼラチンカプセル剤、グロセット（glossettes）、カプセル剤、トローチ剤、注射製剤、エアゾール剤、点眼又は点鼻剤、坐剤、クリーム剤、軟膏剤、皮膚用ゲル剤、経皮パッチ剤などに言及することができる。
【００２１】
８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンとアセチルコリンエステラーゼインヒビター化合物に加えて、本発明の医薬組成物は、希釈剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定化剤、保存料、吸収剤、着色料、甘味料、香味料などから選択される、１種以上の賦形剤又は担体を含む。
【００２２】
何ら限定を暗示することなく、言及することができる例は、以下を包含する：
−希釈剤には：乳糖、デキストロース、ショ糖、マンニトール、ソルビトール、セルロース、グリセリン；
−滑沢剤には：シリカ、タルク、ステアリン酸並びにそのマグネシウム及びカルシウム塩、ポリエチレングリコール；
−結合剤には：ケイ酸アルミニウム及びマグネシウム、デンプン、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及びポリビニルピロリドン；
−崩壊剤には：寒天、アルギニン酸及びそのナトリウム塩、発泡性混合物。
【００２３】
併用の化合物は、同時に又は連続して投与することができる。好ましい投与経路は、経口経路である。別の有利な投与経路は、経皮パッチである。対応する医薬組成物により、活性成分の即時又は遅延放出が可能となる。更に、併用の化合物は、それぞれ活性成分の一方を含む２つ別々の医薬組成物の形で、あるいは活性成分が混合されている単一の医薬組成物の形で投与することができる。
【００２４】
好ましい医薬組成物は、錠剤である。
【００２５】
使用される用量は、患者の性別、年齢及び体重、投与経路、疾患の及び併用療法の性質により変化し、そして２４時間当たり８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンの遊離塩基 １〜２００mg当量、そして更に好ましくは１日当たり５〜５０mgの範囲である。アセチルコリンエステラーゼインヒビターの用量は、それ自体で投与されるときに使用される用量以下であろう。ドネペジルの場合には、用量は、１日当たり０．５〜３０mgであり、好ましい１日用量は５〜１０mgである。リバスチグミンの場合には、用量は、１日当たり０．５〜２０mgであり、好ましい１日用量は１．５〜１４mgである。ガランタミンの場合には、用量は、１日当たり１〜３０mgであり、好ましい１日用量は８〜２４mgである。
【００２６】
薬理学的試験
【００２７】
［実施例Ａ］
エピソード記憶のモデルである、文脈連続識別試験における実験
それ自体で又は組合せて投与される、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンの及びドネペジル（後者は塩酸塩の形で使用される）の作用は、平均月齢 １４〜１５ヶ月（１群当たりｎ＝１２）を有するＣ５７ＢＬ／６マウスでの文脈連続識別試験を用いて試験された（Celerier et al., Learn Mem. 2004, 11(2), 196-204; Tronche et al., Behav. Brain Res. 2010, 215(2), 255-260)）。このモデルにおいて、中齢マウスは、何ら空間記憶の欠損なしに、若齢マウスと比較して文脈記憶の特異的機能不全を示す。アルツハイマー病を患う患者もまた、非常に初期段階で文脈エピソード記憶障害を示すため、このモデルは、アルツハイマー病において被験物の作用を評価するのに適切である（Gold et al., Expert Rev. Neurother. 2008, 8(12), 1879-1891）。
【００２８】
高い囲みの箱に入れたマウスは、４個の穴（この穴の１個だけに餌を付け、Ｄ１とＤ２では反対の穴に餌を付ける）を有する床上の２タイプの連続した空間識別（Ｄ１：白色床、次にＤ２：黒色床）を学習する。各識別は、特定の床（白色又は黒色）上で実施されるが、これが、各識別に特異的な内部文脈を構成する。学習段階の２４時間後、マウスを白色の文脈床に戻して、以下のパラメーターを測定する：
−  正しい応答の割合（即ち、白色床上の獲得訓練中に餌を付けられていた穴の覗き込み％）、
−  妨害応答の割合（即ち、マウスに提示された最後の文脈である、黒色床上の獲得訓練中に餌を付けられていた穴の覗き込み％）、及び
−  間違いの割合（即ち、白色床でも黒色床でも、獲得の間に餌を付けられていなかった２個の穴の覗き込み％）（図１を参照のこと）。
【００２９】
結果は、担体で処置された中齢マウスが、４つ穴プレート上の本試験において偶然のレベルに近い正しい応答の割合を示すことを明らかにした（≒２５％）。ドネペジル塩酸塩（経口で塩基 ０．１mg/kg）で９日間の長期処置後、担体に比較して正しい応答の割合のわずかな有意でない上昇が観察される（３５．５％対２６．４％、図２を参照のこと）。対照的に、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン 経口で０．１及び０．３mg/kgの用量で９日間の長期処置後には、正しい応答のレベルは、担体に比較して４０％を超えて有意に上昇する（０．１mg/kgで４３．７％ 正しい応答、及び０．３mg/kgで４８％ 正しい応答）（図２中でＳで示される化合物）。最後に、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン（経口で塩基 ０．１mg/kg）とドネペジル（経口で塩基 ０．１mg/kg）との併用の投与により、正しい応答が担体それ自体に比較して１００％を超えて大きいため、これらの応答のレベルは有意に上昇した（この併用で６１．１％ 正しい応答、対して担体それ自体では２６．４％）。これらの結果は、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンの存在下のドネペジルの作用の明白な増強を示す。
【００３０】
更に、正しい応答のレベルの上昇と妨害応答のレベルの低下との間に非常に良好な相関関係が観察され、よって各化合物の及びそれらの併用の文脈記憶に及ぼす特異的作用を確認している。したがって、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン（経口で塩基 ０．１mg/kg）とドネペジル（経口で塩基 ０．１mg/kg）との併用の投与は、文脈記憶強度（正しい応答−妨害応答）を、化合物それら自体で観察される強度と比較して有意に上昇させる。併用について観察されるこの上昇は、それら自体で投与される化合物の作用の単なる加算性により説明することができず、これらが同時投与されるときの、この２種の化合物の活性の相乗効果を示す（図３を参照のこと）。
【００３１】
結果は、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンとドネペジルとの併用した投与により、全く予想外である顕著な相乗効果が得られることを明らかにした。更に、薬物動態解析により、この２つの処置の間に、上記の相乗効果を正当化するか、又はこれを妨げる、薬物動態学型の相互作用が存在しないことが分かった。
【００３２】
［実施例Ｂ］
Irwinの一次観察試験
それ自体で又は併用して投与された、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンの及びドネペジル（後者は塩酸塩の形）の安全性に関する作用は、Ｃ５７ＢＬ／６マウス（１群ｎ＝４個体）においてIrwinの一次観察試験法を用いて試験した。行動変化、生理学的及び神経毒性症状、直腸温、及びまた瞳孔径を、Irwinのグリッドに由来する標準化観察グリッドを用いて記録した。
【００３３】
それ自体で緊急投与されたか又は同時投与における、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン（経口で塩基 ３〜１００mg/kg）及びドネペジル（経口で塩基 ０．３及び１mg/kg）は、標準化観察グリッドによりマウスに何ら変化を誘導しないことが観察された。高用量（経口で塩基 ３及び１０mg/kg）では、それ自体で投与されたドネペジルは、身震い、軽度から中等度の鎮静、筋緊張の消失、及び接触に対する反応の低下を誘導する。８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン（経口で塩基 ３〜１００mg/kg）と同時投与されるとき、３及び１０mg/kgのドネペジルで観察された作用の増強は観察されなかった。更に、本試験において、薬物動態解析により、この２つの処置の間に、上記の観察を正当化するか、又はこれを妨げる、薬物動態学型の相互作用は存在しないことが分かった。
【００３４】
結論として、上記の結果は、良好な安全性プロフィールを持ち、薬物動態学的相互作用のない、認知能力に関する８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンとドネペジルとの間の活性の相乗効果を示している。
【００３５】
［実施例Ｃ］
覚醒マウスにおいて電気刺激により誘導される興奮性シナプス後電位（ＥＰＳＰ）の試験
海馬における８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン及びリバスチグミンの間の相乗的電位を試験するために、これら２化合物を、単回経口投与後、及び亜活性用量の２化合物の同時投与で、覚醒マウスにおいて電気生理学的に評価した。覚醒マウスにおいて電気刺激により誘導されるＥＰＳＰを試験すると、ニューロン活動の基礎であり、かつ記憶及び学習の過程に繋がる電気生理学的現象を生理学的に試験することができる。学習及び記憶は、実際に神経回路の変化を必要とする。したがって、興奮性シナプス後電位に作用することによる、被験物又は被験物の併用を用いるシナプス反応の促進によって、学習を促進できるようになるか、又は老化に伴う記憶力低下若しくはアルツハイマー病のような神経変性疾患の場合に生じる記憶力低下に対抗できるようになる（Shapiro, Arch. Neurol. 2001, 58, 874-881）。
【００３６】
試験は以下のとおり行われた：
月齢 ３ヶ月のＣ５７ＢＬ／６マウスを、マスクを用いて送達される０．８〜３％ ハロタンで麻酔する。一旦麻酔されたら、刺激及び記録電極をそれぞれマウスの海馬の貫通線維及び歯状回に挿入する。電極の移植後、完全に回復させるために、マウスをケージで自由に給餌及び給水させながら５〜７日間保持する。各移植マウスは、実験の最後まで単独でケージに入れておく。
回復後、貫通線維に据えた刺激電極に３パルス/分で施されるペアパルス（パルス幅 １０μS、負−正）を用いて、誘発反応の安定なベースラインを誘導する。パルスの間隔は、４０msに固定する（Gruart et al., J. Neurosci. 2006, 24, 1077-1087）。安定なベースラインが得られるまでフィールドＥＰＳＰをモニターする（３０分間）。次に被験物又は担体を投与し、誘発フィールド電位を記録する。化合物は、それ自体又は同時投与で以下の用量で経口投与する：リバスチグミン（０．０３mg/kg、経口）；８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン（図４でＳで示される化合物；３mg/kg、経口）；担体（蒸留水中１％（w/v）ヒドロキシエチルセルロース及び１％（v/v）ポリソルベート80）。被験物それぞれのｔｍａｘに関連する反応速度のために、化合物の投与は、以下のとおり行われた：８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン及びリバスチグミンは、上記のペアパルスの誘導のそれぞれ４５分及び３０分前に強制経口投与により投与された。マウスの群を均質にするために、２種の被験物の一方のみを投与したマウスには、２回目の投与で担体を投与する。次に化合物又は担体の最終投与のおよそ２．５時間後に誘発電位を記録する。
【００３７】
結果は、ベースラインレベルで、全群が同一である（有意な差がない）ことを示した（図４を参照のこと、「ベースライン」）。種々の化合物の投与後、結果は統計的に差がある（処置と時間の間の二元配置ＡＮＯＶＡ；ｐ＜０．００１）。事後解析により、
−  それ自体で３mg/kg 経口の単回用量で投与されるとき、８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンは、担体群に比較して、独立３時点（ペアパルスの誘導の４５、１１５及び１２０分後）を除いてフィールドＥＰＳＰの振幅の有意な変更を誘導しないこと、そしてこのことはこの用量が亜活性量であることを示すこと（図４、三角形の曲線及び表１を参照のこと）；
−  それ自体で０．０３mg/kgの単回用量で投与されるとき、リバスチグミンは、担体群に比較して、独立３時点（ペアパルスの誘導の４５、６５及び１１５分後）を除いてフィールドＥＰＳＰの振幅の有意な変更を誘導しないこと、そしてこのことはこの用量が亜活性量であることを示すこと（図４、四角形の曲線及び表１を参照のこと）；
−  ２化合物、３mg/kg 経口の単回用量の８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン及び０．０３mg/kg 経口の単回用量のリバスチグミンの併用は、担体群に比較して、ほぼ全記録期間を通じて（特に、リバスチグミンの投与の２５〜８０分後、そして次に９０〜９５分後、次いで１０５〜１３０分後及び１４０〜１５０分後；ｐ＜０．０５）フィールドＥＰＳＰの振幅の有意な上昇を誘導すること（図４、十字の曲線及び表１を参照のこと）が分かった。
【００３８】
【表１】
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結果は、併用した８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオンとリバスチグミンの投与により、顕著なかつ全く予想外の相乗効果を得ることができることを明らかにした。
【００３９】
［実施例Ｄ］
医薬組成物
８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン ５mg並びにドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択されるアセチルコリンエステラーゼインヒビター １０mgの用量を含有する、錠剤 １０００錠のための処方：
８−シクロプロピル−３−［２−（３−フルオロフェニル）エチル］−７，８−ジヒドロ−３Ｈ−［１，３］オキサジノ［６，５−ｇ］［１，２，３］ベンゾトリアジン−４，９−ジオン                                                    ５ｇ
アセチルコリンエステラーゼインヒビター                    １０ｇ
トウモロコシデンプン                                      ２０ｇ
マルトデキストリン                                      ７．５ｇ
コロイダルシリカ                                        ０．２ｇ
デンプングリコール酸ナトリウム                              ３ｇ
ステアリン酸マグネシウム                                    １ｇ
乳糖                                                      ５５ｇ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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