(57)【要約】  塞栓療法の間に、特に、ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合するＳＤＦ−１アンタゴニストおよび別の化学療法薬または放射線療法の組合せを投与することによって、種々の種類の癌／腫瘍を治療するための方法。このような併用療法は、いずれかの薬剤単独を用いる治療と比較して相互作用を示す。したがって、方法は、いずれかの薬剤単独による治療に必要な高投与量によって引き起こされる副作用に対して低い許容度しか有さない癌患者にとって特に有益である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
塞栓療法の間に対象において癌を治療または腫瘍成長を低減もしくは停止するための医薬の調製における、任意選択で、１種以上のその他の化学療法薬および／または放射線療法と組み合わせた、ケモカイン受容体アンタゴニストとしてのペプチドの使用であって、
ペプチドが、ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合する、使用。
【請求項２】
ペプチドが、
（１）配列番号１、２もしくは３によって表されるアミノ酸配列、または
（２）配列番号１、２もしくは３における１つもしくはいくつかの保存的置換によって得られるアミノ酸配列
をさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
化学療法薬が、抗有糸分裂剤、白金ベースの化学療法薬、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、ピリミジン類似体、トポイソメラーゼ阻害剤およびアジュバントからなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
抗有糸分裂剤が、ドセタキセルまたはパクリタキセルまたはそれらの医薬上許容される類似体もしくは塩である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
白金ベースの化学療法薬が、シスプラチン、カルボプラチン、イプロプラチンまたはオキサリプラチンまたはそれらの医薬上許容される塩である、請求項３に記載の使用。
【請求項６】
受容体チロシンキナーゼ阻害剤が、ソラフェニブ、スニチニブまたはパゾパニブまたはそれらの医薬上許容される塩である、請求項３に記載の使用。
【請求項７】
ピリミジン類似体が、ゲムシタビン、５−ＦＵまたはカペシタビンまたはそれらの医薬上許容される塩である、請求項３に記載の使用。
【請求項８】
トポイソメラーゼ阻害剤が、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシンまたはラメラリンＤまたはそれらの医薬上許容される塩である、請求項３に記載の使用。
【請求項９】
アジュバントが、フォリン酸またはその医薬上許容される塩である、請求項３に記載の使用。
【請求項１０】
化学療法薬が、５−ＦＵ、フォリン酸およびオキサリプラチンの組み合わせ、５−ＦＵ、フォリン酸およびイリノテカンの組み合わせ、カペシタビンおよびオキサリプラチンの組み合わせ、またはシスプラチンおよびゲムシタビンの組合せである、請求項３に記載の使用。
【請求項１１】
放射線が、Ｘ線、γ線、または身体の外側の機械によって、もしくは癌／腫瘍細胞の近くに身体中に置かれた放射性物質からのいずれかで送達された荷電粒子である、請求項１から請求項１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
放射性物質が、放射性ヨウ素である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
癌が、卵巣癌、子宮癌、乳癌、肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌、膀胱癌、腎癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、骨癌、皮膚癌、内臓癌、副腎および褐色細胞腫、白血病および悪性軟部腫瘍からなる群から選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項１４】
ペプチドおよび化学療法薬が、同時に投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項１５】
ペプチドおよび化学療法薬が、逐次投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項１６】
塞栓療法が、経動脈的塞栓療法（ＴＡＥ）、経動脈的化学塞栓療法（ＴＡＣＥ）または放射線塞栓療法（ＲＥ）である、請求項１に記載の使用。
【請求項１７】
対象がヒトである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１８】
塞栓療法の間に、対象に、任意選択で、１種以上のその他の化学療法薬および／または放射線療法と組み合わせてペプチドを投与するステップを含む、対象において癌を治療するまたは腫瘍成長を低減もしくは停止する方法であって、
ペプチドが、ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合する、方法。
【請求項１９】
ペプチドが、
（１）配列番号１、２もしくは３によって表されるアミノ酸配列または
（２）配列番号１、２もしくは３における１つもしくはいくつかの保存的置換によって得られるアミノ酸配列
をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬分野に属する。特に、本発明は、塞栓療法の間に対象において癌を治療するまたは腫瘍成長を低減もしくは停止するためのケモカイン受容体アンタゴニストとしてのペプチドの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
サイトカインは、免疫応答を調節する単球またはリンパ球を含めた種々の細胞によって分泌される可溶性タンパク質である。ケモカインは、化学誘引物質タンパク質のスーパーファミリーである。ケモカインは、種々の生物学的応答を調節し、それらは、身体臓器組織への白血球およびリンパ球の複数の系統の動員を促進する。ケモカインは、タンパク質中の最初の２つのシステイン残基の相対位置に従って、２つのファミリーに分類され得る。一方のファミリーでは、例えば、ＣＸＣケモカイン等のように、最初の２つのシステインは、１つのアミノ酸残基によって分かれている。もう一方のファミリーでは、例えば、ＣＣケモカイン等のように、最初の２つのシステインは、隣接している。
【０００３】
ケモカインの分子標的は、細胞表面受容体である。１つのこのような受容体として、ＣＸＣケモカイン受容体４（ＣＸＣＲ４）があり、これは、Ｇｌと共役しており、これまでは、ＬＥＳＴＲ（非特許文献１）、ＨＵＭＳＴＲ（非特許文献２）およびＦｕｓｉｎ（非特許文献３）と呼ばれていた７回膜貫通型タンパク質である。ＣＸＣＲ４は、造血起源の細胞で広く発現されており、ヒト免疫不全ウイルス１（ＨＩＶ−１）のＣＤ４．ｓｕｐ．＋を有する主要な共受容体である（非特許文献３）。
【０００４】
現在、ＣＸＣＲ４の唯一の既知天然リガンドは、間質細胞由来因子１（ＳＤＦ−１）である。間質細胞由来因子−１α（ＳＤＦ−１α）および間質細胞由来因子−１β（ＳＤＦ−１β）は、密接に関連するメンバーである（一緒に、ＳＤＦ−１と本明細書において呼ばれる）。ＳＤＦ−１αおよびＳＤＦ−１βの天然アミノ酸配列は、これらのタンパク質をコードするゲノム配列と同様、公知である（特許文献１および特許文献２）。
【０００５】
ＳＤＦ−１は、骨髄前駆体細胞の輸送、排出およびホーミングにおいて基本的な役割を有すると報告されている点で、その他のケモカインとは機能的に異なる（非特許文献４および非特許文献５）。ＳＤＦ−１はまた、その他のＣＸＣケモカインと約２２％アミノ酸配列同一性しか有さない点で構造的に異なっている（非特許文献６）。ＳＤＦ−１は、いくつかの細胞型によって構成的に産生されると思われ、骨髄間質細胞において特に高レベルが見られる（非特許文献７および非特許文献６）。ＳＤＦ−１の基本的な生理学的役割は、種間でのＳＤＦ−１配列の高度保存によって暗示されている。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＳＤＦ−１は、単球および骨髄由来前駆体細胞を含めた幅広い細胞の走化作用を刺激する（非特許文献４および非特許文献６）。特に注目すべきことは、休止および活性化Ｔ−リンパ球の高パーセンテージを刺激するその能力である（非特許文献６および非特許文献８）。
【０００６】
ＳＤＦ−１の３次元結晶構造は、記載されている（非特許文献９）。ＳＤＦ−１の構造活性分析（非特許文献９）は、Ｎ末端残基１〜８または１〜９が受容体結合に関与しているが、１〜８および１〜９ペプチド単独では、受容体結合を示すｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性を示さなかったことを示し、これは、ペプチドは、受容体との結合に必要なコンホメーションを想定しないという報告された結論を支持する。この結果は、タンパク質スキャフォールドの残部および／またはタンパク質中の他の場所にある種々のコンセンサス受容体結合部位が、受容体とのＮ末端結合にとってコンホメーション的必要条件を媒介するのに重要であることを暗示すると解釈された（非特許文献９）。これらの結果に基づいて、残基１〜１７中に２つの結合部位、Ｎ末端部位および上流ＲＦＦＥＳＨ部位を含む、ＣＸＣＲ４とのＳＤＦ−１結合について２部位モデルが提案されている（非特許文献９）。２つの推定結合部位は、配列：ＫＰＶＳＬＳＹＲ−ＣＰＣ−ＲＦＦＥＳＨを特徴としており、これでは、２つの推定結合部位が、全ＣＸＣケモカインファミリーを特徴付けるＣＸＣモチーフによって接続している（非特許文献９）。これらの２つの推定結合領域は、その他のＣＣおよびＣＸＣケモカインにおいて重要であると同定されている（非特許文献９および非特許文献９）。これは、さまざまなケモカインのＮ末端領域は、受容体活性化にとって重要であるが、ＳＤＦ−１以外のケモカインのＮ末端ペプチドは、受容体結合活性を欠き、受容体アゴニストではないと報告されている知見と一致している（非特許文献９および非特許文献９）。
【０００７】
ＣＸＣＲ４は、ＨＩＶ−１の主要な共受容体であるという事実と一致して、ＳＤＦ−１は、ＣＤ４．ｓｕｐ．＋細胞へのＨＩＶ−１侵入を遮断する（非特許文献１０および非特許文献１１）。ＨＩＶ侵入を選択的に干渉するが、ＳＤＦ−１シグナル伝達を干渉しないＳＤＦ−１由来ペプチドを同定するために努力が払われてきた（非特許文献１２）。ＳＤＦ−１の幅広い潜在的なＣＸＣＲ４結合断片が、ＨＩＶ感染の遮断において使用するために提案されている（特許文献３；特許文献４）。これらの参考文献が明確にするように、ＳＤＦ−１またはＳＤＦ−１の断片の抗ＨＩＶ活性は、ＣＸＣＲ４受容体の拮抗作用に左右されない。
【０００８】
インターフェロンγは、活性化Ｔ−リンパ球（Ｔ細胞）によって放出され、強力な免疫調節物質として作用する重要なサイトカインである。ｉｎ  ｖｉｖｏでのＴ細胞によるインターフェロンγ産生は、身体中のその他の細胞に、さらなるサイトカイン、酵素および免疫応答の多数の態様を調節可能である抗体を放出させ得る。活性化Ｔ細胞のインターフェロンγを産生する能力に影響を及ぼす薬剤は、免疫調節物質として特性決定される。
【０００９】
自己免疫疾患は、一般に、特に、Ｔ細胞を含めた白血球によるサイトカイン、リンホトキシンおよび抗体の過剰産生によって引き起こされると理解されている疾病の群である。自己免疫反応の際に、Ｔ細胞は、自己免疫反応の病的症状の発生につながるインターフェロンγなどのケミカルメディエーターを放出すると理解される。したがって、自己免疫疾患の治療は、Ｔ細胞からのインターフェロンγの放出を阻害可能な薬剤の使用を含み得る。このような自己免疫疾患として、例えば、多発性硬化症（ＭＳ）、ギランバレー症候群、筋萎縮性側索硬化症（Ａｍｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、パーキンソン病、アルツハイマー病、痛風、ループスおよびＴ細胞が主要な役割を果たす任意のその他のヒト疾病を包含し得る。
【００１０】
インターフェロンβは、種々の自己免疫疾患の治療において治療適用を有するとわかっているサイトカインである。ＭＳなどの自己免疫疾患では、Ｔｈ１型Ｔ細胞の活性化が、自己免疫応答の主な成分であると考えられている。ＭＳでは、自己免疫応答は、ミエリン鞘ニューロン軸索を攻撃する。Ｔｈ１細胞活性化の伝統的なマーカーの１種として、インターフェロンγの産生がある。ＭＳの治療のための治療薬としてのインターフェロンβの開発では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでリンパ球からのインターフェロンγの産生の速度を低下させるインターフェロンβの能力を実証するために研究が実施された（非特許文献１３）。インターフェロンβを用いる治療によるインターフェロンγ放出の低減は、ＭＳの治療におけるインターフェロンβの有効性の指標である。インターフェロンβなどの既存の薬剤の効果を促進するよう相乗的に働き得る薬剤を含め、インターフェロンγの産生を阻害するその他の薬剤、特に、自己免疫疾患の治療において使用するための薬剤が継続的に必要である。
【００１１】
固形腫瘍成長は、一般に脈管形成（新血管新生）依存性であり、従って、脈管形成阻害剤が、固形腫瘍および転移の治療のための薬剤として使用されてきた。脈管構造において内皮細胞（ＥＣ）は、脈管形成において重要な役割を果たし、従って、この活性を標的とする治療薬が必要である。脈管形成の間の血管内皮細胞の増殖、遊走および分化は、種々のケモカインおよびケモカイン受容体の複雑な相互作用によって正常および疾患状態の両方において調節されると理解されている。ＣＸＣＲ４は、血管ＥＣで発現され、このような細胞では、報告によれば、すべての調べられたケモカイン受容体の中で最も豊富な受容体である（非特許文献１４）。
【００１２】
先行技術（特許文献５）には、配列番号１、配列番号２または配列番号３と類似のアミノ酸配列を有するＣＸＣＲ４受容体リガンド、ＳＤＦ−１ポリペプチドアンタゴニストが、種々の実施形態において脈管形成抑制および抗腫瘍活性を示すと示されていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１３】
【特許文献１】米国特許第５，５６３，０４８号明細書
【特許文献２】米国特許第５，７５６，０８４号明細書
【特許文献３】国際公開第１９９７／０２８２５８号
【特許文献４】国際公開第１９９８／００４６９８号
【特許文献５】米国特許出願公開第２０１１／１３６，０９７号明細書
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ，Ｍ．、Ｇｅｉｓｅｒ，Ｔ．、Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ，Ｔ．、Ｚｗａｈｌｅｎ，Ｒ．、Ｂａｇｇｉｏｎｌｉｎｉ，Ｍ．およびＭｏｓｅｒ，Ｂ．、（１９９４年）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、第２６９巻、２３２〜２３７頁
【非特許文献２】Ｆｅｄｅｒｓｐｐｉｅｌ，Ｂ．、Ｄｕｎｃａｎ，Ａ．Ｍ．Ｖ．、Ｄｅｌａｎｅｙ，Ａ．、Ｓｃｈａｐｐｅｒｔ，Ｋ．、Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ，Ｉ．およびＪｉｒｉｋ，Ｆ．Ｒ．（１９９３年）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ第１６巻、７０７〜７１２頁
【非特許文献３】Ｆｅｎｇ，Ｙ．、Ｂｒｏｅｄｅｒ，Ｃ．Ｃ、Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｐ．Ｅ．およびＢｅｒｇｅｒ，Ｅ．Ａ．（１９９６年）ＨＩＶ−１  ｅｎｔｒｙ  ｃｏｆａｃｔｏｒ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｃＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｓｅｖｅｎ−ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ第２７２巻、８７２〜８７７頁
【非特許文献４】Ａｉｕｔｉ，Ａ．、Ｗｅｂｂ，Ｉ．Ｊ．、Ｂｌｅｕｌ，Ｃ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｔ．およびＧｕｉｅｒｒｅｚ−Ｒａｍｏｓ，Ｊ．Ｃ、（１９９６年）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．第１８５号、１１１〜１２０頁
【非特許文献５】Ｎａｇａｓａｗａ，Ｔ．、Ｈｉｒｏｔａ，Ｓ．、Ｔａｃｈｉｂａｎａ，Ｋ．、Ｔａｋａｋｕｒａ  Ｎ．、Ｎｉｓｈｉｋａｗａ，Ｓ．−Ｉ．、Ｋｉｔａｍｕｒａ，Ｙ．、Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｎ．、Ｋｉｋｕｔａｎｉ，Ｈ．およびＫｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．、（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ第３８２号、６３５〜６３８頁
【非特許文献６】Ｂｌｅｕｌ，Ｃ．Ｃ、Ｆｕｈｌｂｒｉｇｇｅ，Ｒ．Ｃ、Ｃａｓａｓｎｏｖａｓ，Ｊ．Ｍ．、Ａｉｕｔｉ，Ａ．およびＳｐｒｉｎｇｅｒ，Ｔ．Ａ．、（１９９６年）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．第１８４巻、１１０１〜１１０９頁
【非特許文献７】Ｓｈｉｒｏｚｕ，Ｍ．、Ｎａｋａｎｏ，Ｔ．、Ｉｎａｚａｗａ，Ｊ．、Ｔａｓｈｉｒｏ，Ｋ．、Ｔａｄａ，Ｈ．Ｓｈｉｎｏｈａｒａ，Ｔ．およびＨｏｎｊｏ，Ｔ．（１９９５年）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、第２８巻、４９５〜５００頁
【非特許文献８】Ｃａｍｐｂｅｌｌ，Ｊ．Ｊ．、Ｈｅｎｄｒｉｃｋ，Ｊ．、Ｚｌｏｔｎｉｋ，Ａ．、Ｓｉａｎｉ，Ｍ．Ａ．、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｄ．Ａ．およびＢｕｔｃｈｅｒ，Ｅ．Ｃ（１９９８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２７９巻３８１〜３８３頁
【非特許文献９】Ｃｒｕｍｐ，Ｍ．、Ｇｏｎｇ  Ｊ．−Ｈ．、Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ，Ｐ．、Ｒａｊａｒａｔｈｎａｍ，Ｋ．、Ａｍａｒａ，Ａ．、Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓ，Ｆ．、Ｖｉｒｅｌｉｚｉｅｒ，Ｊ．−Ｌ．、Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｍ．、Ｓｙｋｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＣｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ，Ｉ．（１９９７年）ＥＭＢＯ  Ｊ．、第１６巻、６９９６〜７００７頁
【非特許文献１０】Ｏｂｅｒｌｉｎ，Ｅ．、Ａｍａｒａ，Ａ．、Ｂａｃｈｅｌｅｒｉｅ，Ｆ．、Ｂｅｓｓｉａ，Ｃ、Ｖｉｒｅｌｉｚｉｅｒ，Ｊ．−Ｌ．、Ａｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓｄｅｄｏｓ，Ｆ．、Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｏ．、Ｈｅａｒｄ，Ｊ．−Ｍ．、Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ，Ｉ．、Ｌｅｇｌｅｒ，Ｄ．Ｆ．、Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒ，Ｍ．、Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，Ｍ．およびＭｏｓｅｒ，Ｂ．（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ、第３８２巻、８３３〜８３５頁
【非特許文献１１】Ｂｌｅｕｌ，Ｃ．Ｃ、Ｆａｒｚａｎ，Ｍ．、Ｃｈｏｅ，Ｈ．、Ｐａｒｏｌｉｎ，Ｃ、Ｃｌａｒｋ−Ｌｅｗｉｓ，Ｉ．、Ｓｏｄｒｏｋｓｉ，Ｊ．およびＳｐｒｉｎｇｅｒ，Ｔ．Ａ．（１９９６年）Ｎａｔｕｒｅ、第３８２巻、８２９〜８３３頁
【非特許文献１２】Ｈｅｖｅｋｅｒ，Ｎ．ら、１９９８年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ第８巻（７）：３６９〜３７６頁
【非特許文献１３】Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．１９９８年；第４４巻：２７〜３４頁およびＮｅｕｒｏｌｏｇｙ  １９９８年；第５０巻：１２９４〜１３００頁
【非特許文献１４】Ｇｕｐｔａら、１９９８年
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本明細書において、本発明者らは、ヒトにおける塞栓療法と同様であるラットにおけるこれらのＳＤＦ−１アンタゴニストの肝動脈結紮手順との組合せは、肝臓癌異種移植片の成長を阻害することを実証する。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
したがって、本発明は、塞栓療法の間に対象において癌を治療または腫瘍成長を低減もしくは停止するための医薬の調製における、任意選択で、１種以上のその他の化学療法薬および／または放射線療法と組み合わせた、ケモカイン受容体アンタゴニストとしてのペプチドの使用に関するもので、上記ペプチドは、ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合するものである。
【００１７】
本発明はまた、塞栓療法の間に、対象に、任意選択で、１種以上のその他の化学療法薬および／または放射線療法と組み合わせたペプチドを投与するステップを含む、対象において癌を治療または腫瘍成長を低減もしくは停止する方法に関し、これでは、ペプチドは、ヒトＣＸＣＲ４と特異的に結合する。
【００１８】
好ましくは、上記ペプチドは、
（１）配列番号１、２もしくは３によって表されるアミノ酸配列、または
（２）配列番号１、２もしくは３における１つもしくはいくつかの保存的置換によって得られるアミノ酸配列
をさらに含む。
【００１９】
好ましくは、上記ペプチドは、配列番号１、２もしくは３のアミノ酸配列または１つもしくはいくつかの保存的置換（例えば、１、２、３、４、５、６、７または８つの保存的置換）に起因するその変異体からなり得る。
【００２０】
好ましくは、対象は、ヒトである。
【００２１】
一実施形態では、化学療法薬は、抗有糸分裂剤、白金ベースの化学療法薬、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、ピリミジン類似体、トポイソメラーゼ阻害剤およびアジュバントからなる群から選択される少なくとも１種である。
【００２２】
好ましくは、抗有糸分裂剤は、ドセタキセルまたはパクリタキセルまたはそれらの医薬上許容される類似体もしくは塩であり、白金ベースの化学療法薬は、シスプラチン、カルボプラチン、イプロプラチンまたはオキサリプラチンまたはそれらの医薬上許容される塩であり、受容体チロシンキナーゼ阻害剤は、ソラフェニブ、スニチニブまたはパゾパニブまたはそれらの医薬上許容される塩であり、ピリミジン類似体は、ゲムシタビン、５−ＦＵまたはカペシタビンまたはそれらの医薬上許容される塩であり、トポイソメラーゼ阻害剤は、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシンまたはラメラリンＤまたはそれらの医薬上許容される塩であり、アジュバントは、フォリン酸またはその医薬上許容される塩である。
【００２３】
あるいは、化学療法薬は、５−ＦＵ、フォリン酸およびオキサリプラチンの組み合わせ；５−ＦＵ、フォリン酸およびイリノテカンの組み合わせ；カペシタビンおよびオキサリプラチンの組み合わせ；またはシスプラチンおよびゲムシタビンの組合せである。
【００２４】
一実施形態では、放射線は、Ｘ線、γ線または身体の外側の機械によって、もしくは癌／腫瘍細胞の近くに身体中に置かれた放射性物質からのいずれで送達された荷電粒子である。好ましくは、放射性物質は、放射性ヨウ素である。
【００２５】
一実施形態では、癌は、卵巣癌、子宮癌、乳癌、肺癌、肝臓癌、結腸直腸癌、膀胱癌、腎癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、骨癌、皮膚癌、内臓癌、副腎および褐色細胞腫、白血病および悪性軟部腫瘍からなる群から選択される。
【００２６】
一実施形態では、ペプチドおよび化学療法薬は、同時に投与される。別の実施形態では、ペプチドおよび化学療法薬は、逐次投与される。
【００２７】
一実施形態では、塞栓療法は、経動脈的塞栓療法（ＴＡＥ）、経動脈的化学塞栓療法（ＴＡＣＥ）または放射線塞栓療法（ＲＥ）である。
【００２８】
具体的には、本発明は、塞栓療法におけるＣＸＣＲ４アンタゴニスト／阻害剤の新規治療的使用を提供する。すなわち、本発明は、併用療法を提供する。特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４アンタゴニストは、以下のように治療的に、またはこのような治療的処置：癌の治療および脈管形成の調節のための医薬を製造するために使用され得る。本発明のいくつかの態様では、ＣＸＣＲ４阻害剤は、塞栓療法手順の間に別の化学療法薬と伴にまたは伴わずに使用され得る。本発明は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストの治療的用量が、医薬上許容される製剤中で投与される、医療の対応する方法を提供する。したがって、本発明はまた、当分野において従来のように、または以下に記載されるように、ＣＸＣＲ４アンタゴニストと、医薬上許容される賦形剤または担体とを含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、生理学的に供されるｐＨで水溶液中で可溶性であることが有利であり得る。
【００２９】
本発明において使用するためのＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＳＤＦ−１の実質的に精製されたペプチド断片、修飾された断片、類似体または医薬上許容される塩を含むペプチド化合物であり得る。いくつかの実施形態では、ペプチド化合物は、Ｘが、水素およびＳＤＦ−１の少なくとも一部に対して相同なポリペプチドからなる群から選択される、Ｎ末端アミノ酸配列：ＫＧＶＳＬＳＹＲＣ−Ｘ（配列番号３）を含み得る。
【００３０】
さらなる実施形態では、ペプチド化合物は、二量体化されたＮ末端アミノ酸配列（カルボキシル末端からアミノ末端へ書かれた第２の二量体とともに本明細書において表される）：ＫＧＶＳＬＳＹＲ−Ｘ−ＲＹＳＬＳＶＧＫ（配列番号１、ＣＴＣＥ−９９０８と名付けられた）を含み得、式中、Ｘは、α−およびε−アミノ基両方が、アルギニン残基とのアミド結合形成と関連しており、リシルカルボキシル（ｃａｒｂｏｘｌ）基が酢酸反応によって保護され得るリシンアミノ酸であり得る。さらに別の実施形態では、ペプチド化合物は、二量体化されたＮ末端アミノ酸（カルボキシル末端からアミノ末端へ書かれた第２の二量体とともに本明細書において表される）：ＫＧＶＳＬＳＹＲＣ−Ｘ−ＣＲＳＬＳＶＧＫ（配列番号２）をさらに含み得、式中、Ｘは、α−およびε−アミノ基の両方が、システイン残基とのアミド結合形成と関連しており、リシルカルボキシル（ｃａｒｂｏｘｇｌ）基が酢酸反応によって保護され得るリシンアミノ酸であり得る。あるいは、前記の二量体化ペプチド化合物では、Ｘは、ペプチドを共有結合によって連結する架橋形成部分であり得、その結果、複数のペプチドが架橋によって接続されて、化合物中に複数のＮ末端を提供する。
【００３１】
本発明の一態様に従って、ＣＸＣＲ４のアンタゴニストは、リンパ腫および癌腫などの癌ならびに再狭窄を含めた、ヒト病理学的疾患において脈管形成および細胞成長を調節するために治療的に使用され得る。一実施形態では、本明細書において例示されるように、ペプチドＣＸＣＲ４アンタゴニストは、哺乳類癌のマウスモデルにおいて脈管形成および腫瘍成長を阻害するために使用された。
【００３２】
種々の態様では、本発明は、ＣＸＣＲ４アンタゴニストを利用する。いくつかの実施形態では、本発明において使用するためのＣＸＣＲ４アンタゴニストは、ＳＤＦ−１αまたはＳＤＦ−１βいずれかの実質的に精製されたペプチド断片、修飾されたペプチド断片、類似体または医薬上許容される塩であり得る。ＣＸＣＲ４のＳＤＦ−１由来ペプチドアンタゴニストは、既知生理学的アッセイおよび種々の合成技術によって同定され得る（各々、参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｒｕｍｐら、１９９７年、Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ第１６巻（２３）６９９６〜７００７頁およびＨｅｖｅｋｅｒら、１９９８年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ第８巻（７）：３６９〜３７６頁に開示されるものなど）。ＳＤＦ−１のこのような類似体として、それらが、ＣＸＣＲ４拮抗活性を有するという条件で、天然に存在するアイソフォームもしくは遺伝的変異体などの天然ＳＤＦ−１の相同体または天然ＳＤＦ−１配列の少なくとも一部に対して、４０％の配列同一性、６０％の配列同一性もしくは、好ましくは、８０％の配列同一性などのＳＤＦ−１に対する実質的な配列類似性を有するポリペプチドが挙げられる。いくつかの実施形態では、化学的に類似のアミノ酸は、天然ＳＤＦ−１配列中のアミノ酸と置換され得る（保存的アミノ酸置換を提供するために）。
【００３３】
配列番号１、２または３は、ケモカイン受容体アンタゴニストとしての、特に、ＣＸＣＲ４のアンタゴニストとしての活性に対する任意の有害作用を伴わずに、１個またはいくつかのアミノ酸残基（単数または複数）の付加、欠失または置換による変異体を有し得ると予測される。配列番号１、２または３中の１、２、３またはさらには４個、最大８個のアミノ酸残基の種々の保存的置換がある。例えば、保存的置換は、酸性アミノ酸（例えば、ＧｌｕおよびＡｓｐ）、アルカリ性アミノ酸（例えば、ＬｙｓおよびＡｒｇ）、ヒドロキシルアミノ酸（例えば、ＳｅｒおよびＴｈｒ）または芳香族アミノ酸（例えば、Ｐｈｅ、ＴｒｐおよびＴｙｒ）の中で起こり得る。特に、配列番号１または２のＸは、ＬｙｓまたはＡｒｇであり得る。
【００３４】
特定の実施形態では、治療上または予防上有効な量のＣＸＣＲ４アンタゴニストの好ましい範囲は、０．０１ｎＭ〜０．１Ｍ、特に、０．１ｎＭ〜０．０５Ｍ、さらに詳しくは、５ｎＭ〜１５ｍＭ、最も特には、０．１ｍＭ〜１０ｍＭであり得る。投与量の値は、軽減されるべき状態の、特に、多発性硬化症の重症度に応じて変わり得るということは留意されるべきである。任意の特定の対象について、指定の投与計画は、個々の必要性および組成物を投与するまたは組成物の投与を監督する人物の専門的判断に従って継時的に調整されなければならないこと、ならびに本明細書に示される投与量範囲は、単に例示的なものであって、組成物の範囲または実施を制限するよう意図されないことはさらに理解されるべきである。
【００３５】
組成物中の活性化合物の量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重などの因子に従って変わり得る。投与計画は、最適治療反応を提供するよう調整され得る。例えば、単回ボーラスが投与されてもよく、いくつかの分割容量が経時的に投与されてもよく、または用量は、治療状況の緊急事態によって示されるように比例的に低減または増大されてもよい。投与の容易性および投与量の均一性のために、非経口組成物を投与単位形に製剤化することは特に有利である。投与単位形とは、本明細書において、治療される哺乳類対象のための単位投与量として適している生理学的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果をもたらすよう算出された所定量の活性化合物を含有する。本発明の投与単位形の仕様は、（ａ）活性化合物の独特の特徴および達成される特定の治療効果ならびに（ｂ）個体における感受性の治療のための、このような活性化合物を配合する技術分野に固有の制限によって指示され、ならびにそれらに直接的に左右される。
【００３６】
本明細書において、用語「医薬上許容される担体」または「賦形剤」として、生理学的に適合する、ありとあらゆる溶媒、分散媒、被膜、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。一実施形態では、担体は、非経口投与に適している。あるいは、担体は、静脈内、腹腔内、筋肉内、舌下または経口投与に適したものであり得る。医薬上許容される担体は、滅菌注射用溶液または分散物の即時調製のための、滅菌水溶液または分散物および滅菌散剤を含む。医薬上活性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と適合しない場合を除き、本発明の医薬組成物におけるその使用が考慮される。補足的な活性化合物（例えば、１種以上のその他の化学療法薬）も、組成物中に組み込まれ得る。
【００３７】
本発明のペプチドは、Ｂｏｄａｎｓｋｙ，Ｍ．  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ（１９９３年）およびＧｒａｎｔ，Ｇ．Ａ．（編）Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：  Ａ  Ｕｓｅｒ’ｓ  Ｇｕｉｄｅ，  Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９２年）に記載されるものなどの標準技術を使用して化学的に合成され得る（これらのすべては、参照により本明細書に組み込まれる）。自動ペプチドシンセサイザーは、市販されている（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ  Ｍｏｄｅｌ  ３９６；Ｍｉｌｌｉｇｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ  ９６００）。
【００３８】
さらに、本発明のペプチドは、ペプチドをコードする核酸分子を使用して標準組換えＤＮＡ技術に従って調製され得る。ペプチドをコードするヌクレオチド配列は、遺伝暗号を使用して決定され得、このヌクレオチド配列を有するオリゴヌクレオチド分子は、標準ＤＮＡ合成法によって（例えば、自動化ＤＮＡシンセサイザーを使用して）合成され得る。あるいは、ペプチド化合物をコードするＤＮＡ分子は、標準分子生物学技術に従って、天然前駆体タンパク質遺伝子またはｃＤＮＡから導かれ得る（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）および／または制限酵素消化を使用して）。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】肝動脈結紮と組み合わせた配列番号１ペプチド二量体（ＣＴＣＥ−９９０８とも呼ばれる）（ＨＡＬ＋ＣＴＣＥ−９９０８）は、肝細胞癌腫において腫瘍の大きさを低減した。肝動脈結紮と組み合わせてＣＴＣＥ−９９０８を用いて治療されたラット（ＨＡＬ＋ＣＴＣＥ−９９０８）は、最大８０％の腫瘍退縮を示した。これは、発光評価によっておよび剖検での両方で明らかである。
【図２】肝動脈結紮と組み合わせたＣＴＣＥ−９９０８は、循環造血前駆細胞の数を減少させた。肝動脈結紮単独と比較して、ＨＡＬおよび１２．５ｍｇ／ｋｇのＣＴＣＥ−９９０８を用いる治療は、ＣＸＣＲ４＋Ｆｌｔ−１＋造血前駆細胞を約８０％〜９０％低減した。これらの細胞の動員の低減は、腫瘍の縮みの一因であり得る。
【図３】肝動脈結紮（ＨＡＬ）を伴うかまたは伴わないＣＴＣＥ−９９０８は、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）のラットモデルの生存を有意に増大した。ＨＡＬ単独および偽手術は、ＨＣＣを有するラットの生存に有意には影響を及ぼさなかった。２５ｍｇ／ｋｇのＣＴＣＥ−９９０８治療単独は、ＨＡＬ単独および偽手術と比較して生存を有意に増大した。ＨＡＬと組み合わせた１２．５ｍｇ／ｋｇおよび２５ｍｇ／ｋｇの両方でのＣＴＣＥ−９９０８は、ＣＴＣＥ−９９０８単独と比較して生存をさらに増大した。
【発明を実施するための形態】
【００４０】
本発明は、以下の実施例への言及によって以下にさらに示される。本発明は実施例に制限されないということは理解されるべきである。
【実施例】
【００４１】
［実施例１］
この実施例は、ラット肝動脈結紮モデルを使用して腫瘍成長に対するＣＸＣＲ４アンタゴニストの阻害効果を示す。
【００４２】
使用されるＣＸＣＲ４アンタゴニストは、短いペプチド二量体アンタゴニストＣＴＣＥ−９９０８（配列番号１）であった。ラット同所性肝細胞癌腫（ＨＣＣ）モデルを、ラットＨＣＣ細胞株、ＣＲＬ−１６０１のバッファローラットの肝臓の左葉への注射によって確立した。ラットＨＣＣ細胞株をバッファローラットから作製したので、バッファローラット中のｉｎ  ｖｉｖｏ形成された腫瘍は、臨床設定を模倣し得る。腫瘍細胞注射の２週間後、ラットを以下の群に無作為化した：
１）偽手術、ｎ＝６、
２）肝動脈結紮、ｎ＝６、
３）１２．５ｍｇ／ｋｇ／日のＣＴＣＥ−９９０８、ｎ＝６、
４）２５ｍｇ／ｋｇ／日のＣＴＣＥ−９９０８、ｎ＝６、
５）１２．５ｍｇ／ｋｇ／日のＣＴＣＥ−９９０８と組み合わせた肝動脈結紮、ｎ＝６、
６）２５ｍｇ／ｋｇ／日のＣＴＣＥ−９９０８と組み合わせた肝動脈結紮、ｎ＝６。
【００４３】
自然低酸素症は、通常、大きなＨＣＣ腫瘍小結節において生じる。肝動脈結紮の手順は、塞栓療法手順の治療的アプローチ、切除不能なＨＣＣの最もよく使用される治療を模倣することである。この治療的アプローチは、一方では、腫瘍細胞壊死につながり、他方、残りの腫瘍細胞に、より重度の低酸素状態を誘導し、脈管形成促進因子の放出およびその後の腫瘍再成長につながる。したがって、この提案された研究において、本発明者らは、肝動脈結紮と伴にまたは伴わずにＣＴＣＥ−９９０８を適用して、ＨＣＣの治療のために単独または虚血性低酸素症と組み合わせて使用されたこの薬物の効果を調査した。ＣＲＬ−１６０１  ＨＣＣ細胞株は、ＣＸＣＲ４陰性である。したがって、ＣＴＣＥ−９９０８は、腫瘍細胞自体に対して直接効果を有さない。
【００４４】
第１の群（対照）には、偽手術とそれに続く洗浄のための水を施した。第２、第５および第６の群には、肝動脈結紮を行った。第３および第５の群には、１２．５ｍｇ／ｋｇの用量のＣＴＣＥ−９９０８を皮下に毎日与えた。第４および第６の群には、２５ｍｇ／ｋｇの用量のＣＴＣＥ−９９０８を皮下に毎日与えた。治療は、４週間継続した。最後の治療の１週間後、対照および治療群の両方を屠殺した。肝臓機能とともに原発腫瘍の寸法を測定した。原発腫瘍および転移における微小血管密度、腫瘍細胞の増殖指数、腫瘍細胞のアポトーシス状態および形態学を、免疫組織化学によって分析した。肺をホルマリンで固定し、パラフィン中に包埋し、連続的に切片を作製し、スライド上に乗せた。転移性腫瘍遺伝子座の数を分析した。血漿ＳＤＦ−１は、ＥＬＩＳＡによって分析した。フローサイトメトリーによる造血前駆細胞および内皮前駆体細胞の分析のために、血液を採取した。
【００４５】
この研究は、臨床設定において経動脈的化学塞栓療法を模倣する肝細胞癌腫（ＨＣＣ）のラットモデルを調べた。ラットＨＣＣを、肝臓の左葉中に移植し、２週間成長させ、その時点で、腫瘍量は、直径１０ｍｍより大きかった。次いで、ラットに肝動脈結紮（ＨＡＬ）および１２．５ｍｇ／ｋｇ／日または２５ｍｇ／ｋｇ／日のＣＴＣＥ−９９０８治療を４週間与えた。最後のＣＴＣＥ−９９０８治療の１週間後、ラットを屠殺し、それぞれ、発光およびフローサイトメトリーによって腫瘍ならびに循環細胞の評価を行った。
【００４６】
ＣＴＣＥ−９９０８治療は、すべてのラットによって十分に許容された。ＨＡＬととものＣＴＣＥ−９９０８は、腫瘍退縮を最大８０％誘導した（図１）。循環造血前駆細胞の低減（約８０％〜９０％）が観察された（図２）。これは、血管新生および脈管形成を阻害することによって、相当に腫瘍の縮みの一因となり得る。ラットの生存は、対応して増大した。ＨＡＬ単独は、偽手術に対して生存を変更しなかった。ＣＴＣＥ−９９０８単独は、生存を有意に増大した。ＣＴＣＥ−９９０８のＨＡＬとの組合せは、生存をさらに増強した（図３）。
【００４７】
［実施例２］
オープンラベルの際に、用量設定試験は、コホートあたり部位あたり１対象を用いる加速性滴定設計後および１００％用量増大後に、ＣＸＣＲ４受容体アンタゴニスト化合物を用いる種々の固形腫瘍の治療において、安全性だけでなく、幾分かの有効性も実証した。研究デザインに従って、中程度の毒性の場合には、５ｍｇ／ｋｇの最大用量または用量制限毒性が達成されるまで、より多くの対象およびさらなる用量増大（４０％）を含むようコホートが拡大されるものとした。用量増大の際に５ｍｇ／ｋｇコホートにおいて、１つの中程度の毒性の場合しか観察されず、したがって、標準相の患者は、すべて５ｍｇ／ｋｇを用いて治療した。
【００４８】
対象に４連続週間毎日投薬し（週末および休日を含まない）、対象がその治療を完了した後に用量制限毒性を評価した。研究から離脱し、少なくとも１６用量の研究薬を与えられなかった対象を、同一用量レベルで置き換えて、加速性相においてコホートあたり少なくとも１人の対象が治療を完了したことを確実にした。
【００４９】
研究の間に報告された毒性を、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＮＣＩ）ＣＴＣＡＥ（有害事象についての共通技術用語判定基準（Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ））ｖ３．０に従って段階分けした。用量制限毒性（ＤＬＴ）は、以下の通りに規定した：
ａ）任意の段階≧３可逆性非血液学的治療関連毒性または
ｂ）任意の不可逆性段階≧２非血液学的治療関連毒性または
ｃ）任意の段階≧４  ４週間の治療の間に１０日より長く持続する血液学的治療関連毒性。
【００５０】
この研究の目的のために、中程度の毒性を、ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ  ｖ３．０に従って規定した。有害事象は、それらが生じた時点で治療した。対象が研究中である期間の間は、治験薬または市販薬または治療は、対象の悪性腫瘍を治療する目的で投与しなかった。
【００５１】
研究の間に合計８の中程度の毒性が観察されたが、ＤＬＴは報告されなかった。したがって、この研究の間に難治性腫瘍を有する対象においてＣＴＣＥ−９９０８の最大耐容量（ＭＴＤ）は、確立されなかった。さらなる用量増大は、ＭＴＤを決定し得る。多数の標的化療法と同様に、ＭＴＤは、決して到達されない場合もあり、生物学的に有効な用量ではない場合もある。しかし、この研究において、いくつかの有効性傾向が観察された：１人の小腸対象における最大７ヶ月間の安定な疾患を含めた、その最後の治療サイクルの終わりでの５人の対象における全体的に安定な疾患および１人の卵巣癌対象および１人の結腸直腸癌対象における腫瘍マーカーの低減。これらは、１、２．５および５ｍｇ／ｋｇ／日用量で観察された。これらの用量は、第２相研究のために考慮され得る。さらなる研究は、その他の治療と組み合わせた、またはその他の患者集団におけるＣＴＣＥ−９９０８の使用を考慮し得る。
参考文献
出願／特許番号                      出願日
１１１３６０９７／７４２３０１１    ２００５年５月２３日
０９６４６１９２                    ２００１年３月２日
６９４６４４５                      １９９９年３月１２日
０９６４６１９２                    ２００１年３月２日
ＰＣＴ／ＣＡ９９／００２２１        １９９９年３月１２日
【図１】
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【図２】
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【図３】
2017508005.tif 000004
【配列表】
2017508005000001.app
【国際調査報告】
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2017508005.tif 000006
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