(57)【要約】本発明は、スタチン治療に起因する有害な副作用の軽減に関する。本発明はさらに、スタチン治療の少なくとも１つの副作用を軽減するためのロイコトリエンＣ4（ＬＴＣ４）媒介性活性の阻害剤の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）少なくとも１つのスタチン、および
（ｉｉ）システイニルロイコトリエンレセプター２（ＣｙｓＬＴＲ２）のアンタゴニストおよびロイコトリエンＣ４（ＬＴＣ４）生合成の阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの作用物質
を含む、薬学的組成物。
【請求項２】
前記スタチンが、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンからなる群より選択される、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記作用物質が、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストが、ＣｙｓＬＴＲ２の活性およびシステイニルロイコトリエンレセプター１（ＣｙｓＬＴＲ１）の活性を阻害する、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記作用物質が、ＬＴＣ４生合成の阻害剤である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記ＬＴＣ４生合成の阻害剤が、ミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２（ＭＧＳＴ２）、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）および５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）からなる群より選択される酵素の活性を阻害する、請求項５に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記５−ＬＯの阻害剤が、ジロートンまたはアトレロイトンである、請求項６に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
（ｉ）スタチン、
（ｉｉ）ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニスト、および
（ｉｉｉ）ＬＴＣ４生合成の阻害剤
を含む、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
スタチン治療を受けており、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防または減少するために使用するための、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記有害な副作用が、スタチンによって誘導されるミオパシーである、請求項９に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記ミオパシーが、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される、請求項１０に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防するためまたは減少させるための方法であって、前記方法は、少なくとも１つのスタチン、ならびにＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよびＬＴＣ４生合成の阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの作用物質を前記被験体に投与する工程を含み、前記被験体は、スタチン治療を受けており、前記スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある、方法。
【請求項１３】
前記有害な副作用が、スタチンによって誘導されるミオパシーである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ミオパシーが、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
（ｉ）少なくとも１つのスタチンを含む薬学的組成物、および
（ｉｉ）ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよびＬＴＣ４生合成の阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの作用物質を含む薬学的組成物
を備える、キット。
【請求項１６】
前記スタチンが、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンからなる群より選択される、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
前記作用物質が、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストである、請求項１５に記載のキット。
【請求項１８】
前記ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストが、ＣｙｓＬＴＲ２の活性およびＣｙｓＬＴＲ１の活性を阻害する、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
前記作用物質が、ＬＴＣ４生合成の阻害剤である、請求項１５に記載のキット。
【請求項２０】
前記ＬＴＣ４生合成の阻害剤が、ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯおよびＦＬＡＰからなる群より選択される酵素の活性を阻害する、請求項１９に記載のキット。
【請求項２１】
前記５−ＬＯの阻害剤が、ジロートンまたはアトレロイトンである、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
（ｉ）スタチンを含む薬学的組成物、
（ｉｉ）ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストを含む薬学的組成物、および
（ｉｉｉ）ＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む薬学的組成物
を備える、請求項１５に記載のキット。
【請求項２３】
スタチン治療を受けていて、前記スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある被験体に、前記スタチンおよび前記作用物質を投与するための指示書をさらに備える、請求項１５に記載のキット。
【請求項２４】
スタチン治療を受けており、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防または減少するために使用するための、請求項１５に記載のキット。
【請求項２５】
前記有害な副作用が、スタチンによって誘導されるミオパシーである、請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
前記ミオパシーが、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される、請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
前記使用が、前記被験体に前記スタチンを投与する前、投与している間、および／または投与した後に、前記作用物質を投与する工程を含む、請求項２４に記載のキット。
【請求項２８】
被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少のために使用するための少なくとも１つのＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストを含む薬学的組成物であって、前記被験体は、スタチン治療を受けていて、前記スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある、薬学的組成物。
【請求項２９】
前記有害な副作用が、スタチンによって誘導されるミオパシーである、請求項２８に記載の薬学的組成物。
【請求項３０】
前記ミオパシーが、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される、請求項２９に記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
前記スタチンが、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンからなる群より選択される、請求項２８に記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
前記ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストが、ＣｙｓＬＴＲ２の活性およびＣｙｓＬＴＲ１の活性を阻害する、請求項２８に記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯおよびＦＬＡＰからなる群より選択される酵素の活性を阻害する少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤をさらに含む、請求項２８に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
前記５−ＬＯの阻害剤が、ジロートンまたはアトレロイトンである、請求項３３に記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少において使用するための少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む薬学的組成物であって、前記被験体は、スタチン治療を受けていて、前記スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがあり、
前記少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯおよびＦＬＡＰからなる群より選択される酵素の活性を阻害する、
薬学的組成物。
【請求項３６】
前記有害な副作用が、スタチンによって誘導されるミオパシーである、請求項３５に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
前記ミオパシーが、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される、請求項３６に記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
前記スタチンが、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンからなる群より選択される、請求項３５に記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
前記５−ＬＯの阻害剤が、ジロートンまたはアトレロイトンである、請求項３５に記載の薬学的組成物。
【請求項４０】
少なくとも１つのＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストをさらに含む、請求項３５に記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
前記ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストが、ＣｙｓＬＴＲ２の活性およびＣｙｓＬＴＲ１の活性を阻害する、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防するためまたは減少させるための方法であって、少なくとも１つのＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストを前記被験体に投与する工程を含み、前記被験体は、スタチン治療を受けていて、前記スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある、方法。
【請求項４３】
前記有害な副作用が、スタチンによって誘導されるミオパシーである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストが、前記スタチンによって処置される被験体に、前記スタチンによる処置の前、前記スタチンによる処置と同時、または前記スタチンによる処置とともに投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストが、前記スタチンによって処置される被験体に、前記スタチンによる処置の後に投与される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防するためまたは減少させるための方法であって、少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤を前記被験体に投与する工程を含み、前記被験体は、スタチン治療を受けていて、前記スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがあり、
前記ＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯおよびＦＬＡＰからなる群より選択される酵素の活性を阻害する、
方法。
【請求項４７】
前記有害な副作用が、スタチンによって誘導されるミオパシーである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＬＴＣ４生合成の阻害剤が、前記スタチンによって処置される被験体に、前記スタチンによる処置の前、前記スタチンによる処置と同時、または前記スタチンによる処置とともに投与される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＬＴＣ４生合成の阻害剤が、前記スタチンによって処置される被験体に、前記スタチンによる処置の後に投与される、請求項４６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スタチン治療の副作用を軽減するためまたは減少させるための方法に関する。特に、本発明は、スタチン治療の有害な副作用の少なくとも１つを弱めるためのＬＴＣ４媒介性活性の阻害剤を含む組成物およびキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
小胞体（ＥＲ）は、多様な生理学的合図ならびに毒物によるストレスを受けやすく、通常、それらによって、ミスフォールドされたＥＲクライアントタンパク質が蓄積する。ＥＲのストレスは、多くの疾患に関連し、細胞死をもたらす。３つのＥＲストレスセンサータンパク質ＩＲＥ１α、ＰＥＲＫおよびＡＴＦ６は、ＥＲ膜に位置し、小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）と呼ばれる進化的に保存された順序のシグナル伝達経路を媒介する。最初のＵＰＲは、ＥＲにおけるミスフォールドしたタンパク質の過負荷を低減することによってストレスに立ち向かうことを目的としている。過剰なストレスの下では、同じＵＰＲセンサーが、細胞死を引き起こす。ストレスによって引き起こされるいくつかの細胞死の機序が特定されたが、ＥＲにおけるミスフォールドしたタンパク質の蓄積の毒性の根拠および関与する機序は、完全には理解されていない。
【０００３】
ストレスによって引き起こされる細胞死の中心的存在は、Ｃ／ＥＢＰ相同タンパク質ＣＨＯＰ（ＤＤＩＴ３、ＧＡＤＤ１５３）であり、これは、３つのＥＲストレスセンサーすべてによって誘導される。ＣＨＯＰは、Ｂｃｌ２タンパク質をダウンレギュレートすることおよびＢａｘをミトコンドリアに移行させることによって、アポトーシスを引き起こすと示された。ストレスによって引き起こされるＴＲＡＦ２−ＡＳＫ１−ＪＮＫ経路もまた、Ｂｃｌ２タンパク質を阻害することならびにＢｉｍ、ＢＡＸおよびＢＡＣを活性化することによって、アポトーシスを引き起こす。しかしながら、ある特定の細胞型およびストレス条件においては、Ｂｃｌ−２の阻害およびＡＳＫ−１またはＢａｘ／Ｂａｋの活性化が無くても細胞死が生じることから、細胞死を引き起こすさらなる経路の存在が示唆される。ＣＨＯＰは、酸化ストレスを介することによっても細胞死を引き起こすので、アポトーシス細胞死の機序と非アポトーシス細胞死の機序の両方を誘発する。
【０００４】
Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓを用いた研究から、ＥＲにおけるタンパク質のジスルフィド結合形成の副産物としてＨ2Ｏ2を生成するＥＲＯ１が、ＥＲストレスにおけるＲＯＳ産生物質であることが実証された。しかしながら、マウス細胞では、ＥＲチオール酸化酵素ＥＲＯ１α、ＥＲＯ１βおよびＰＲＤＸ４のすべてをコードする遺伝子における機能喪失変異が組み合わさると、Ｈ2Ｏ2の生成は減少するのではなく増加したので、上記の事実とは異なる。ゆえに、ＥＲストレスが酸化ストレスを引き起こす機序は謎のままである。代替機序を特定するために、構造的に関連する酵素であるミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ１（ＭＧＳＴ１）およびＭＧＳＴ２などの他のＥＲ酸化還元酵素の機序が研究された。ＭＧＳＴ１は、直接的な解毒と下流の酸化ストレスからの保護の両方によって細胞傷害性薬物に対して抵抗性を付与する生存促進因子として広く研究された。対照的に、酸化ストレスおよびＥＲストレスにおけるＭＧＳＴ２の役割は、広く研究されていない。
【０００５】
ＭＧＳＴ２は、ロイコトリエンＣ４シンターゼ（ＬＴＣ４Ｓ）のアイソザイムである。ＭＧＳＴ２は、主にマスト細胞およびいくつかの他の骨髄性細胞において発現される。Ｆｃレセプター活性化のような免疫学的合図は、マスト細胞において、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）およびＬＴＣ４Ｓの核膜への移行および共局在化によって、ＬＴＣ４生合成を惹起する。ｃＰＬＡ２は、リン脂質からアラキドン酸を放出し、５−ＬＯおよびＦＬＡＰは、それをＬＴＡ4に酸化し、ＬＴＣ４Ｓは、ＬＴＡ4をグルタチオンと結合体化することにより、ＬＴＣ４を形成する。次いで、ＬＴＣ４は、トランスポーターＭＲＰ１によって細胞外の環境に排出される。細胞表面の酵素はさらに、ＬＴＣ４をより安定な形態のＬＴＤ4（ＣＡＳ番号７３８３６−７８−９）およびＬＴＥ4（ＣＡＳ番号７５７１５−８９−８）に代謝する。３つすべてのロイコトリエンが、２つのＧタンパク質共役レセプターＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２に結合する。分泌されたＬＴＣ４およびその代謝産物は、平滑筋細胞の収縮を引き起こし、それにより、肺において気管支収縮および血管収縮を引き起こし、アレルギーおよび喘息の古典的な症状としてあらわれる。ゆえに、いくつかのＬＴＣ４レセプターアンタゴニスト（モンテルカスト（ＣＡＳ番号１５８９６６−９２−８；シクロペンチル３−｛２−メトキシ−４−［（ｏ−トリルスルホニル）カルバモイル］ベンジル｝−１−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルカルバメート）、プランルカスト（ＣＡＳ番号１０３１７７−３７−３；Ｎ−［４−オキソ−２−（１Ｈ−テトラゾール−５−イル）−４Ｈ−クロメン−７−イル］−４−（４−フェニルブトキシ）ベンズアミド）、ザフィルルカスト（ＣＡＳ番号１０７７５３−７８−６；シクロペンチル３−｛２−メトキシ−４−［（ｏ−トリルスルホニル）カルバモイル］ベンジル｝−１−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルカルバメート）およびシナルカスト（ｃｉｎａｌｕｋａｓｔ）（ＣＡＳ番号１２８３１２−５１−６；３−（｛３−［（Ｅ）−２−（４−シクロブチル−１，３−チアゾール−２−イル）エテニル］フェニル｝カルバモイル）−２，２−ジエチルプロパン酸））が開発され、これらは、喘息症状の処置について承認された薬物である。
【０００６】
ＬＴＣ４Ｓは、主にマスト細胞において発現され、アレルギーおよび喘息の状況において広く研究されてきたの対し、そのアイソザイムＭＧＳＴ２は、遍在的に発現されるが、その生理学的役割は、広く研究されてこなかった。
【０００７】
スタチンは、コレステロール生合成の律速酵素である３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリルコエンザイムＡ還元酵素（ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素、ＨＭＧＣＲ、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ０４０３５）の競合的阻害剤であり、高コレステロール血症に対する一次療法として役立ち、循環器疾患を予防するために役立つ。アテローム性動脈硬化症の減少といった主な結果をはじめとした、コレステロールを管理するためのスタチンの治療効果は、十分に確立されている。高いコレステロールレベルを低下させるため、またはリスクのある患者のコレステロールレベルの上昇を予防するために、患者は、アトルバスタチン（ＣＡＳ番号１３４５２３−００−５）、シンバスタチン（ＣＡＳ番号７９９０２−６３−９）、プラバスタチン（ＣＡＳ番号８１０９３−３７−０）、ロバスタチン（ＣＡＳ番号７５３３０−７５−５）およびフルバスタチン（ＣＡＳ番号９３９５７−５４−１）を含む一連のスタチンで処置される。セリバスタチン（ＣＡＳ番号１４５５９９−８６−６）は、１９９０年代後半に発売されたが、致命的な横紋筋融解症（損傷した骨格筋組織が壊れる状態）の報告が原因で、２００１年に世界市場から自主的に撤退した。
【０００８】
さらに、スタチンは、内皮機能、インスリン感度および炎症／免疫調節に関係するいくつかの多面的なコレステロール非依存的作用を有する。スタチンは、認知症および様々な癌、例えば、前立腺、皮膚、肺、結腸、膀胱、子宮および腎臓の処置において潜在的有用性を有するとも報告されている。
【０００９】
しかしながら、スタチン治療に関連する潜在的に重大な副作用がいくつか存在し、それは、重症度が筋炎から筋消耗（ｍｕｓｃｌｅ  ｗａｓｔａｇｅ）（横紋筋融解症）まで様々であり得るミオパシーを含む。それほど重大でない他の有害作用も報告されており、それらとしては、頭痛、関節痛、発熱、背痛、腹部痙攣、睡眠障害、鼻炎、静脈洞炎、咳嗽反射の刺激、眩暈および疲労が挙げられる。この群の薬物に対して報告された禁忌症のうち、最も一般的なものの２つは、疲労および／または筋痛（「筋肉痛」と呼ばれることが多い）である。スタチンでの処置中の有害な副作用のリスクは、ある特定の他の薬物、例えば、シクロスポリン、フィブリン酸（ｆａｂｒｉｃ  ａｃｉｄ）誘導体（例えば、ゲムフィブロジル）、ナイアシンまたは抗真菌薬の同時投与によって高まる。
【００１０】
実際に、筋力低下、疲労および疼痛を特徴とする軽度から中程度の筋肉痛から、筋線維の内容物の放出をもたらす広範囲かつ急性の筋線維破壊として定義され、生命を危うくする横紋筋融解症にまで及ぶミオパシー症状に起因して、推定５〜１０％の患者がスタチンの使用を中止する。種々のクラスのスタチンを使用し、スタチンを他の薬物または運動と組み合わせたとき、スタチン用量の増加とともに、筋炎（筋肉の炎症）およびミオパシー症状の報告が増加する。
【００１１】
スタチンによって誘導される筋損傷を説明するために、様々な仮説が提唱されている。スタチンの作用は、コレステロール合成の減少を介した間接的なものであり得るか、または種々の筋細胞標的に対する直接的な作用であり得る。スタチンミオパシーの機構的基盤は、おそらく多因子的であり、アポトーシスに対するスタチンの制御作用に部分的に起因する可能性がある。しかしながら、どのようにしてスタチンがアポトーシスを促進するかは、かなりあいまいである。インタクトな細胞において、スタチンは、カルシウムレベルの上昇、ミトコンドリアへのアポトーシス促進性タンパク質Ｂａｘの移行、ミトコンドリアの膜透過性遷移孔（ＰＴＰ）の開口、およびシトクロムＣの放出を引き起こすことが見出されており、その結果、アポトーシスがもたらされる。
【００１２】
インビトロおよびインビボにおけるいくつかの研究から、スタチンが、アポトーシスに加えて、酸化ストレスとネクローシスの両方を引き起こすことが実証された。最も重要なことには、いくつかのスタチンは、酸化ストレスを介することによっても細胞死を引き起こすタンパク質ＣＨＯＰ（ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質相同タンパク質）の誘導を特徴とする小胞体（ＥＲ）ストレスを誘導し、それにより、アポトーシス細胞死の機序と非アポトーシス細胞死の機序の両方が誘発された。スタチンの急性適用は、リアノジンレセプターを介して小胞体（ＥＲ）から大量のカルシウムを放出させるとも示された。ＥＲからのカルシウムの放出は、ＥＲストレスの証しであり、ＥＲストレスは、酸化ストレスを引き起こす。要するに、スタチンによって引き起こされるミオパシーは、ＥＲストレスによって引き起こされる酸化ストレスに少なくとも部分的に関わり、細胞死をもたらす。
【００１３】
ロイコトリエンは、酵素であるアラキドン酸５−リポキシゲナーゼ（５−リポキシゲナーゼ、５−ＬＯＸ、５−ＬＯ、ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｐ０９９１７）によるアラキドン酸の酸化によって白血球において産生されるエイコサノイド炎症メディエーターのファミリーである。その名称が暗示するように、ロイコトリエンは、白血球において初めて発見されたが、その後、他の免疫細胞においても見出された。ロイコトリエンは、免疫応答を制御するために、脂質シグナル伝達を用いて、それらを産生している細胞に情報を伝える（オートクラインシグナル伝達）か、または付近の細胞に情報を伝える（パラクリンシグナル伝達）。ロイコトリエンの産生は、通常、ヒスタミンおよびプロスタグランジンの産生を伴い、それらも、炎症メディエーターとして作用する。それらのいくつかの役割のうちの１つ（具体的には、ロイコトリエンＤ４）は、細気管支を裏打ちしている平滑筋の収縮を引き起こすことであり；それらの過剰産生は、喘息およびアレルギー性鼻炎における炎症の主な原因である。ロイコトリエンアンタゴニストを用いてロイコトリエンの産生または活性を阻害することによって、これらの障害が処置される。
【００１４】
ロイコトリエンは、大まかに３つのタイプに分けられる。ＬＴＣ４（ＣＡＳ番号７２０２５−６０−６）、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４（ＣＡＳ番号７５７１５−８９−８）およびＬＴＦ４（ＣＡＳ番号８３８５１−４２−７）は、それらの構造にアミノ酸のシステインが存在することに起因して、「システイニルロイコトリエン」と呼ばれることが多い。システイニルロイコトリエンは、アナフィラキシー遅延反応性物質（ＳＲＳ−Ａ）を構成する。ＬＴＦ４は、ＬＴＤ４と同様に、ＬＴＣ４の代謝産物であるが、グルタチオンのグルタミン酸残基を欠くＬＴＤ４とは異なり、ＬＴＦ４は、グルタチオンのグリシン残基を欠く。ＬＴＢ4は、インビボにおいて、酵素であるＬＴＡ4加水分解酵素によってＬＴＡ4から合成される。その主な機能は、好中球を組織損傷の領域にリクルートすることであるが、様々な免疫細胞による炎症性サイトカインの産生の促進も助ける。ＬＴＢ4の作用を阻止する薬物は、好中球媒介性の疾患の進行を遅延させる際にいくらかの有効性を示した。システイニル部分がアルファ−ケト酸に酸化されている（すなわち、そのシステインは、ピルビン酸によって置換されている）ＬＴＥ4の代謝産物であるＬＴＧ4の存在も仮定されている。
【００１５】
ロイコトリエンのレセプターは、薬理学的に３つのタイプ、すなわち、ＢＬＴレセプター、ＣｙｓＬＴ１レセプター（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ９Ｙ２７１）およびＣｙｓＬＴ２レセプター（ＵｎｉＰｒｏｔ  Ｑ９ＮＳ７５）に分類される。ＢＬＴレセプターは、ＬＴＢ４を特異的に認識する。ＣｙｓＬＴ１レセプターとＣｙｓＬＴ２レセプターの両方が、ペプチドロイコトリエン、すなわち、ロイコトリエンＣ４（ＬＴＣ４）、ロイコトリエンＤ４（ＬＴＤ４）およびロイコトリエンＥ４（ＬＴＥ４）を認識する。
【００１６】
Ｔｈｏｍｐｓｏｎら（非特許文献１）は、文献レビューを行い、スタチンに関連するミオパシーの臨床的概要を提供し、可能性のある媒介機序を論じた。その文献レビューでは、スタチンの臨床試験中の筋肉障害の報告は稀であり、セリバスタチンが、最も高頻度で関係するスタチンであることが見出された。そのレビューはさらに、スタチンがどのようにして骨格筋を損傷するかは明らかになっていないことを述べている。
【００１７】
したがって、スタチン治療に関連する主要な副作用を予防するためまたは回復させるための組成物および方法に対して、未だ対処されていないニーズが存在する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔａｔｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｍｙｏｐａｔｈｙ”，ＪＡＭＡ，２００３，Ｖｏｌ．２８９（１３）：１６８１−９０
【発明の概要】
【発明の効果】
【００１９】
本発明は、スタチン治療の１つ以上の重大な有害な副作用を処置するための薬学的組成物、方法およびキットを提供する。特に、本発明は、有効量の、スタチン治療の１つ以上の有害な副作用を弱めるための、ロイコトリエンＣ４（ＬＴＣ４）媒介性活性の少なくとも１つの阻害剤を含む薬学的組成物を提供する。
【００２０】
本発明は、ＬＴＣ４レセプターアンタゴニスト、特に、システイニルロイコトリエンレセプター２のアンタゴニストが、その所望の効果を維持しつつ、スタチンとして公知であるＨＭＧＣｏＡ（ヒドロキシ−３−メチルグルタリルコエンザイムＡ）還元酵素阻害剤の有害な副作用を弱めることができるという予想外の驚くべき知見に部分的に基づく。本発明はさらに、システイニルロイコトリエンレセプター２（ＣｙｓＬＴＲ２）のアンタゴニストが、筋細胞の培養物においてスタチンの有害な副作用を弱めることができるという予想外の驚くべき知見に部分的に基づく。ある特定の非筋細胞の細胞株において、システイニルロイコトリエンレセプター１（ＣｙｓＬＴＲ１）のアンタゴニストもまた、スタチンの毒性を減少させた。しかしながら、いかなる理論または機序にも拘束されることを望むものではないが、ＣｙｓＬＴＲ１のアンタゴニストは、下記の実施例の項において実証される、ＣｙｓＬＴＲ１とＣｙｓＬＴＲ２との二重特異性アンタゴニストであるＢＡＹ−ｕ９７７３の有効性に照らして、筋細胞をはじめとした種々の細胞型をスタチンの有害作用から保護するためになおも使用され得る。
【００２１】
本発明は、ＥＲストレスを引き起こす作用物質によって活性化され、細胞死の惹起において重大な役割を果たす、まだ認識されていない全般的なシグナル伝達カスケードを開示する。新たに発見されたシグナル伝達カスケードに基づいて、本発明は、スタチンによって引き起こされるＥＲストレスを弱めるがゆえにスタチン治療の１つ以上の有害な副作用を処置するための手段を提供する。
【００２２】
スタチンは、ネクローシスを引き起こし、それによって、核タンパク質ＨＭＧＢ１が放出される。ＨＭＧＢ１の放出は、マクロファージおよび顆粒球などの免疫細胞をリクルートし、局所炎症、さらに組織損傷を引き起こす。いかなる理論または機序にも関連づけられるものではないが、ＬＴＣ４阻害剤は、スタチンによって誘導される最初のネクローシスを弱める。ゆえに、ＬＴＣ４阻害剤は、炎症、特に、筋肉炎症の阻害剤として作用するのではなく、むしろ、例えばネクローシスによる細胞死の阻害剤として作用する。それゆえ、ＬＴＣ４阻害剤は、炎症を処置するのではなく、炎症の形成を妨げると理解される。本発明は、筋損傷または筋肉炎症の予防または処置としてＬＴＣ４阻害剤を使用することを初めて提案するものである。
【００２３】
１つの態様によると、本発明は、少なくとも１つのスタチン、ならびにＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよびＬＴＣ４生合成の阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの作用物質を含む薬学的組成物を提供する。
【００２４】
ある特定の実施形態において、スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００２５】
ある特定の実施形態において、上記作用物質は、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストである。いくつかの実施形態によると、ＣｙｓＬＴＲ２アンタゴニストは、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２（ＣＡＳ番号７１２３１３−３３−２）、ＢＡＹ−ｕ９７７３（ＣＡＳ番号１５４９７８−３８−８）、ＨＡＭＩ３３７９（ＣＡＳ番号７１２３１３−３５−４）およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。ある特定の実施形態において、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストは、ＣｙｓＬＴＲ２の活性およびシステイニルロイコトリエンレセプター１（ＣｙｓＬＴＲ１）の活性を阻害する。ある特定の実施形態において、上記作用物質は、ＬＴＣ４生合成の阻害剤である。ある特定の実施形態において、ＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２（ＭＧＳＴ２）、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）および５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）からなる群より選択される酵素の活性を阻害する。ある特定の実施形態において、ＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ジロートン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ）である。ある特定の実施形態において、５−ＬＯの阻害剤は、アトレロイトン（ａｔｒｅｌｅｕｔｏｎ）（ＣＡＳ番号１５４３５５−７６−７）である。ある特定の実施形態において、ＦＬＡＰの阻害剤は、ＭＫ−８８６（ＣＡＳ番号１１８４１４−８２−７）である。ある特定の実施形態において、上に記載された薬学的組成物は、スタチン、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよびＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む。
【００２６】
ある特定の実施形態において、上に記載された薬学的組成物は、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少において使用するためのものであり、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。
【００２７】
ある特定の実施形態によると、有害な副作用は、スタチンによって誘導されるミオパシーである。ある特定の実施形態において、そのミオパシーは、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００２８】
本発明は、別の態様において、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防するためまたは減少させるための方法を提供し、その方法は、少なくとも１つのスタチンならびにＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよびＬＴＣ４生合成の阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの作用物質をその被験体に投与する工程を含み、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。
【００２９】
ある特定の実施形態によると、有害な副作用は、スタチンによって誘導されるミオパシーである。ある特定の実施形態において、そのミオパシーは、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００３０】
本発明はさらに、別の態様において、少なくとも１つのスタチンを含む薬学的組成物、ならびにｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよびＬＴＣ４生合成の阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの作用物質を含む薬学的組成物を備えるキットを提供する。
【００３１】
ある特定の実施形態において、スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００３２】
ある特定の実施形態において、上記作用物質は、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストである。いくつかの実施形態によると、ＣｙｓＬＴＲ２アンタゴニストは、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２（ＣＡＳ番号７１２３１３−３３−２）、ＢＡＹ−ｕ９７７３（ＣＡＳ番号１５４９７８−３８−８）、ＨＡＭＩ３３７９（ＣＡＳ番号７１２３１３−３５−４）およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。ある特定の実施形態において、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストは、ＣｙｓＬＴＲ２の活性およびシステイニルロイコトリエンレセプター１（ＣｙｓＬＴＲ１）の活性を阻害する。ある特定の実施形態において、上記作用物質は、ＬＴＣ４生合成の阻害剤である。ある特定の実施形態において、ＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２（ＭＧＳＴ２）、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）および５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）からなる群より選択される酵素の活性を阻害する。ある特定の実施形態において、ＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ジロートンである。ある特定の実施形態において、５−ＬＯの阻害剤は、アトレロイトン（ＣＡＳ番号１５４３５５−７６−７）である。ある特定の実施形態において、ＦＬＡＰの阻害剤は、ＭＫ−８８６（ＣＡＳ番号１１８４１４−８２−７）である。ある特定の実施形態において、上に記載されたキットは、スタチンを含む薬学的組成物、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストを含む薬学的組成物、およびＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む薬学的組成物を備える。
【００３３】
ある特定の実施形態において、上に記載されたキットは、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある被験体に、スタチンおよび上記作用物質を投与するための指示書をさらに備える。ある特定の実施形態において、上に記載されたキットは、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少において使用するためのものであって、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。ある特定の実施形態において、有害な副作用は、スタチンによって誘導されるミオパシーである。ある特定の実施形態において、そのミオパシーは、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される。ある特定の実施形態において、使用は、被験体にスタチンを投与する前、投与している間、および／または投与した後に、上記作用物質を投与する工程を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００３４】
本発明はさらに、ある態様において、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少において使用するための、少なくとも１つのシステイニルロイコトリエンレセプター２（ＣｙｓＬＴＲ２）のアンタゴニストを含む薬学的組成物を提供し、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。
【００３５】
別の態様によると、本発明は、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少において使用するための、少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む薬学的組成物を提供し、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがあり、その少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２（ＭＧＳＴ２）、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）および５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）からなる群より選択される酵素の活性を阻害する。
【００３６】
ある特定の実施形態によると、有害な副作用は、スタチンによって誘導されるミオパシーである。ある特定の実施形態において、そのミオパシーは、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００３７】
ある特定の実施形態において、スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン（ＣＡＳ番号１４７５１１−６９−１）、プラバスタチン、ロスバスタチン（ＣＡＳ番号２８７７１４−４１−４）およびシンバスタチンならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００３８】
ある特定の実施形態において、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストは、ＣｙｓＬＴＲ２の活性およびシステイニルロイコトリエンレセプター１（ＣｙｓＬＴＲ１）の活性を阻害する。いくつかの実施形態によると、ＣｙｓＬＴＲ２アンタゴニストは、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２（ＣＡＳ番号７１２３１３−３３−２）、ＢＡＹ−ｕ９７７３（ＣＡＳ番号１５４９７８−３８−８）、ＨＡＭＩ３３７９（ＣＡＳ番号７１２３１３−３５−４）およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００３９】
ある特定の実施形態において、記載される薬学的組成物は、スタチン、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニスト、ならびにＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯおよびＦＬＡＰからなる群より選択される酵素の活性を阻害するＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。ある特定の実施形態において、５−ＬＯの阻害剤は、ジロートンである。ある特定の実施形態において、５−ＬＯの阻害剤は、アトレロイトンである。ある特定の実施形態において、ＦＬＡＰの阻害剤は、ＭＫ−８８６である。
【００４０】
ある特定の実施形態において、上に記載された薬学的組成物は、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニスト、ならびにミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２（ＭＧＳＴ２）、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）および５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）からなる群より選択される酵素の活性を阻害するＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む。
【００４１】
いくつかの実施形態によると、上に記載された薬学的組成物は、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される有効量のスタチンをさらに含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００４２】
さらなる実施形態によると、スタチンに対して使用される投与量は、それらの承認された適応症に対して別々に投与されるとき、その承認された薬物の投与量と同様の範囲内である。
【００４３】
本発明は、別の態様において、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防するためまたは減少させるための方法を提供し、その方法は、少なくとも１つのＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストをその被験体に投与する工程を含み、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。
【００４４】
本発明は、なおも別の態様において、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防するためまたは減少させるための方法を提供し、その方法は、少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤をその被験体に投与する工程を含み、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがあり、そのＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯおよびＦＬＡＰからなる群より選択される酵素の活性を阻害する。
【００４５】
ある特定の実施形態において、有害な副作用は、スタチンによって誘導されるミオパシーである。ある特定の実施形態において、有害な副作用は、スタチンによって誘導されるミオパシーである。
【００４６】
上に記載された方法のある特定の実施形態において、ロイコトリエン媒介性活性の阻害剤は、スタチンによって処置される被験体に、スタチンによる処置の前、スタチンによる処置と同時、またはスタチンによる処置とともに投与される。上に記載された方法のある特定の実施形態において、ロイコトリエン媒介性活性の阻害剤は、スタチンによって処置される被験体に、スタチンによる処置の後に投与される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００４７】
いくつかの実施形態において、本発明は、スタチン治療の１つ以上の副作用を処置するための方法を提供し、その方法は、スタチン治療を受けている被験体に、有効量のロイコトリエン媒介性活性の阻害剤を投与する工程を含む。いくつかの実施形態によると、ロイコトリエン媒介性活性の阻害剤は、単独で、または有効量のスタチンとともに、投与され得る。
【００４８】
被験体への任意の好適な投与経路が、本発明の組成物に対して使用され得る。好ましい投与様式は、処置される特定の適応症に依存し、当業者には明らかである。
【００４９】
いくつかの実施形態によると、本発明の薬学的組成物は、経口投与用の丸剤として提供され得る。
【００５０】
処置を構成する構成要素の組み合わせは、同時に（別々の剤形または単一の組成物として）、連続的に、または好適な時間間隔を空けて、投与され得る。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。それらの構成要素が、別々の剤形として投与される場合、すなわち、組み合された組成物としては投与されない場合、各構成要素は、同じ形態または異なる形態で、例えば、経口、経鼻、非経口または経皮的に、投与され得る。それらの化合物が、同時に、連続的に、または別々に投与されるとき、それらの構成要素は、別々の剤形として提供され得る。
【００５１】
それらの構成要素が、別々の剤形として投与される場合、すなわち、混和組成物としては投与されない場合、各構成要素は、同じ形態または異なる形態で、例えば、経口、経鼻、非経口、直腸、膣または経皮的に、投与され得る。それらの化合物が、同時に、連続的に、または別々に投与されるとき、それらの構成要素は、別々の剤形として提供され得る。必要に応じて、その組み合わせの構成要素は、キットの形態で提供されてもよく、ここで、そのキットは、好ましくは、それらの構成要素の別々の投与に適合した区分化された形態である。
【００５２】
あるいは、その組み合わせの構成要素が、同時に投与されるとき、それらは、２つ以上の構成要素を含む単一の組成物として提供されてもよいし、キットの形態で提供されてもよく、ここで、そのキットは、それらの構成要素を同時に投与するために区分化されている。
【００５３】
ロイコトリエン媒介性活性の阻害剤の薬学的組成物および治療的なスタチン薬物が、別々の剤形として投与される場合、各々は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体とともに製剤化されて、組成物を形成し得る。その治療の構成要素が、単一の組成物として投与される場合、その組成物は、必要に応じて、１つ以上の薬学的に許容可能な担体も含んでもよい。
【００５４】
薬学的組成物の製剤は、当業者に周知である。そのような組成物は、任意の好適な担体、例えば、希釈剤または賦形剤を含んでもよく、それらは、その組成物の他の成分と適合性であり、被験体にとって有害ではないという意味において、薬学的に許容可能である。
【００５５】
好適な担体には、従来のあらゆる溶媒、油、分散媒、充填剤、固体担体、コーティング、抗真菌剤および抗菌剤、皮膚透過剤（必要に応じて）、界面活性剤、等張剤および吸収剤などが含まれる。本発明の組成物は、他の生理的に活性な補助的な作用物質も含み得ることが理解されるだろう。
【００５６】
本発明の化合物および／または薬学的組成物は、当該分野で公知の任意の好適な方法によって投与され得る。例えば、非限定的な様式において、それは、局所的、非経口的、経口的、鼻腔内、静脈内、筋肉内、皮下に、または他の好適な手段によって、投与され得る。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。好ましい実施形態において、本発明の化合物および／または組成物は、経口投与のために適切に製剤化され得（るが、適切な状況下では他の形態も企図され得る）、カプセル、小袋に入った散剤、顆粒剤および錠剤などの別々の単位からなる群より選択される別々の単位の形態として製剤化され得る。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。別の実施形態によると、本発明の化合物および／または組成物は、散剤、顆粒剤、溶液、水性または非水性液体における懸濁液、油状物、ペースト、水中油型液体エマルジョンおよび油中水型液体エマルジョンからなる群より選択される形態で製剤化され得る。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。好ましい実施形態において、薬学的組成物は、スタチンとロイコトリエン媒介性活性の阻害剤の両方を含む経口投与用の単一の丸剤として製剤化される。
【００５７】
錠剤は、必要に応じて１種以上の副成分とともに、圧縮または成形によって作製され得る。圧縮錠剤は、必要に応じて、結合剤（例えば、不活性な希釈剤、保存剤  崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤または分散剤と混合された、自由流動性の形態の、例えば、散剤または顆粒剤の活性成分を、好適な機械において圧縮することによって、調製され得る。成形錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末状の化合物の混合物を好適な機械において成形することによって作製され得る。それらの錠剤は、必要に応じてコーティングされ得るかまたは刻み目が入れられ得、その中の活性成分の持続放出または制御放出を提供するために、例えば、所望の放出プロファイルを提供するために、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを様々な比率で用いて、製剤化され得る。胃以外の腸の部分において放出させるために、錠剤は、必要に応じて腸溶コーティングを伴って提供され得る。上記化合物は、硬または軟ゼラチンカプセルの形態でも提供され得る。本発明の組成物は、特に上で述べた活性成分に加えて、対象になっている組成物のタイプを考慮して、当該分野における従来の他の作用物質または添加物を含むことがあること、例えば、経口投与に適した組成物は、結合剤、甘味料、増粘剤、香味剤、崩壊剤、コーティング剤、保存剤、潤滑剤および／または時間遅延剤のようなさらなる作用物質を含み得ることが理解されるべきである。好適な甘味料としては、スクロース、ラクトース、グルコース、アスパルテームまたはサッカリンが挙げられる。好適な崩壊剤としては、トウモロコシデンプン、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、キサンタンガム、ベントナイト、アルギン酸または寒天が挙げられる。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００５８】
いくつかの実施形態によると、本発明の薬学的組成物を用いた併用療法の使用は、スタチンの副作用を減少させつつ、単一の治療として投与されるときの前記スタチンと同様のコレステロール低下作用を提供する。
【００５９】
いくつかの実施形態によると、上に記載された薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含む。
【００６０】
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の説明および図面から明らかになるだろう。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死の機序の模式的説明。
【図２Ａ−２Ｂ】ＥＲストレスは、ＭＧＳＴ２および５−ＬＯの発現を制御する。（図２Ａ）ヒトＷＩＳＨ上皮細胞およびヒトＨａＣａＴケラチノサイト前駆細胞（ｐｒｅ−ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ）をツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した後に、免疫ブロット法によって測定したときの、ミクロソームグルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＭＧＳＴ２）および切断型カスパーゼ３（Ｃａｓｐ．３）の発現の動態。（図２Ｂ）ヒトＷＩＳＨ上皮細胞をブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で、およびマウスＢ１６細胞をツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した後に、免疫ブロット法によって測定したときの、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）の発現の動態。
【図３】ヒトＷＩＳＨ細胞をブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で、およびマウスＢ１６細胞をツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した後に、免疫ブロット法によって測定したときの、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２の発現の動態。
【図４Ａ−４Ｅ】ＥＲストレスによって引き起こされるＲＯＳ蓄積は、ＭＧＳＴ２由来のＬＴＣ４によって媒介される。（図４Ａ）マウスＢ１６細胞に、コントロールｓｉＲＮＡまたはＭＧＳＴ２  ｓｉＲＮＡをトランスフェクトし、その細胞をツニカマイシンで処理し、スーパーオキシドアニオンの指示薬ジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）で染色した。ＩｍａｇｅＪプログラムによって測定されたときの、相対的なＤＨＥ蛍光強度の定量が示されている。Ｎ＝３，＊＊＊ｐ＜０．００１。（図４Ｂ）マウスＢ１６細胞に、コントロールｓｉＲＮＡまたはＭＧＳＴ２  ｓｉＲＮＡをトランスフェクトし、次いでその細胞をツニカマイシンで処理し、スーパーオキシドアニオンの指示薬ジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）で染色した。反復サンプルに対するｑＲＴ−ＰＣＲによって測定されたときのマウスＭＧＳＴ２  ｍＲＮＡのサイレンシング効率が示されている。Ｎ＝３，＊＊＊ｐ＜０．００１。（図４Ｃ）ヒトＨａＣａＴケラチノサイト前駆細胞を、ＭＲＰ１阻害剤のレベルサン（ｒｅｖｅｒｓａｎ）（２０μＭ）またはＬＴＣ４アンタゴニストのプランルカスト、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２もしくはＢＡＹ−ｕ９７７３有りまたは無しで、ブレフェルジンＡ（０．３３μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した。次いで、それらの細胞をＲＯＳ指示薬ＤＣＦＨ−ＤＡで染色した。相対的なＤＣＦ蛍光強度の定量的解析が示されている。レベルサンを除くすべての阻害剤が、ＲＯＳ蓄積を有意に阻害した。Ｎ＝３，＊ｐ＜０．０５。（図４Ｄ）コントロールｐｃＤＮＡ４ベクターまたはｐｃＭＧＳＴ２−ＦＬＡＧをトランスフェクションした後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞の抽出物の、抗ＦＬＡＧタグによる免疫ブロット法。（図４Ｅ）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、ｍｏｃｋをトランスフェクトする（コントロール）か、ｐｃＤＮＡ４またはｐｃＭＧＳＴ２−ＦＬＡＧをトランスフェクトし、次いで、ＤＨＥで染色した。相対的なＤＨＥ蛍光強度の定量的解析が示されている。Ｎ＝４，＊＊ｐ＜０．０１。
【図５】ＥＲストレスによって引き起こされるＲＯＳ蓄積は、ＬＴＣ４によって媒介される。マウスＢ１６細胞を、ＢＡＹ−ｕ９７７３（１μＭ）またはモンテルカスト（５μＭ）有りまたは無しでツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した。２４時間後、それらの細胞をＤＣＦ−ＤＡで染色した（１０μＭ，４０分間）。相対的なＤＣＦ蛍光強度の定量的解析が示されている。ＤＣＦの平均強度を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐのヒストグラム機能を用いて核染色の平均強度に対して正規化した。データは、３つの視野を測定した平均値±ＳＤである（＊＊ｐ＜０．０１）。
【図６Ａ−６Ｃ】ＥＲストレスによって引き起こされるＮＡＤＰＨオキシダーゼ４（ＮＯＸ４）の発現、核への移行およびＤＮＡ酸化は、ＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路によって媒介される。（図６Ａ）ヒトＷＩＳＨ細胞を、ＢＡＹ−ｕ９７７３、ＭＫ５７１またはモンテルカストの非存在下または存在下において、ビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した。ＮＯＸ４のレベルを免疫ブロット法によって評価した。（図６Ｂ）マウスＢ１６細胞を、モンテルカスト、ＢＡＹ−ｕ９７７３またはＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２の非存在下または存在下において、ビヒクル（コントロール）またはツニカマイシン（０．５μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した。ＮＯＸ４のレベルを免疫ブロット法によって評価した。（図６Ｃ）ヒトＨａＣａＴケラチノサイト前駆細胞を、プランルカストまたはＢＡＹ−ｕ９７７３の非存在下または存在下において、ビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（４８時間）で処理し、次いで、抗８−ＯＨｄＧで免疫染色した。８−ＯＨｄＧ蛍光強度の定量的解析が示されている。Ｎ＝３  ＊ｐ＜０．０５，＊＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図７Ａ−７Ｇ】ＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路は、ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死を媒介する。（図７Ａ）マウスＢ１６細胞に、コントロールｓｉＲＮＡ（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）またはＭＧＳＴ２特異的ｓｉＲＮＡ（ｓｉＭＧＳＴ２）をトランスフェクトし、その細胞をビヒクルまたはツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）（Ｔｍ）で処理し、次いで、クリスタルバイオレットで染色した。それらの細胞の相対的な生存率が示されている。Ｎ＝３＊＊＊ｐ＜０．０００１。（図７Ｂ）マウスＢ１６細胞に、コントロールｓｉＲＮＡ（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）またはＭＧＳＴ２特異的ｓｉＲＮＡ（ｓｉＭＧＳＴ２）をトランスフェクトし、ビヒクルまたはツニカマイシン（Ｔｍ）で処理し、次いで、クリスタルバイオレットで染色した。反復サンプルに対するｑＲＴ−ＰＣＲによって測定されたときのマウスＭＧＳＴ２  ｍＲＮＡのサイレンシング効率が示されている。Ｎ＝３，＊＊＊ｐ＜０．００１。（図７Ｃ）ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、ｍｏｃｋをトランスフェクトするか、ｐｃＤＮＡ４またはｐｃＭＧＳＴ２−ＦＬＡＧをトランスフェクトし、ビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理し、次いで、クリスタルバイオレットで染色した。それらの細胞の相対的な生存率が示されている。Ｎ＝３  ＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。（図７Ｄ）ヒトＨａＣａＴケラチノサイト前駆細胞を、ＢＡＹ−ｕ９７７３（８０ｎＭ）の非存在下または存在下において、ビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（ＢｆＡ，１．３３μｇ／ｍｌ，４８時間）で処理した。次いで、それらのプレートをクリスタルバイオレットで染色した。それらの細胞の相対的な生存率が示されている。Ｎ＝４  ＊＊＊ｐ＜０．０００１。（図７Ｅ）ヒトＷＩＳＨ細胞を、ＢＡＹ−ｕ９７７３（８０ｎＭ）の非存在下または存在下において、ビヒクル（コントロール）またはツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，４８時間）で処理し、次いで、ニュートラルレッドで染色した。それらの細胞の相対的な生存率が示されている。Ｎ＝４  ＊＊＊ｐ＜０．０００１。（図７Ｆ）ヒトＨａＣａＴケラチノサイト前駆細胞を、ジロートン（１０μＭ，２４時間）の存在下または非存在下において、ビヒクル（コントロール）またはＭＧ２６２（０．０５μＭ）で処理した。次いで、それらのプレートをクリスタルバイオレットで染色した。それらの細胞の相対的な生存率が示されている。Ｎ＝４，＊＊＊ｐ＜０．００１。（図７Ｇ）ヒトＷＩＳＨ細胞を、プランルカスト（１０μＭ）の非存在下または存在下において、ビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した。次いで、それらのプレートをクリスタルバイオレットで染色した。それらの細胞の相対的な生存率が示されている。Ｎ＝３，＊＊＊ｐ＜０．００１。
【図８Ａ−８Ｃ】ＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路の阻害剤は、ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死を弱める。（図８Ａ）ヒトＷＩＳＨ細胞を、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２の非存在下または存在下において、ビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，４８時間）で処理した。次いで、それらのプレートをクリスタルバイオレットで染色した。それらの細胞の相対的な生存率が示されている。Ｎ＝４，＊＊＊ｐ＜０．００１。（図８Ｂ）マウスＢ１６細胞を、ＭＫ５７１の存在下または非存在下において、ビヒクル（コントロール）またはツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）（Ｔｍ）、サプシガルジン（５０ｎＭ，２４時間）（Ｔｇ）またはブレフェルジンＡ（ＢｆＡ  １．３μＭ，２４時間）で２４時間処理した。それらのプレートをクリスタルバイオレットで染色した。それらの細胞の相対的な生存率が示されている。Ｎ＝４，＊＊＊ｐ＜０．００１。（図８Ｃ）ＭＫ５７１の存在下または非存在下においてビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（１．３μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理されたＢ１６細胞の培養液に放出されたネクローシスマーカーＨＭＧＢ１の免疫ブロット。ポンソー染色は、ローディングコントロールとして働く。
【図９Ａ−９Ｇ】ＭＧＳＴ２欠損は、ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死をインビボにおいて弱める。（図９Ａ）ＷＴおよびホモ接合型ＭＧＳＴ２欠損（ＫＯ）１２９ｓｖＥｖＢｒｄマウスの尾端由来のＤＮＡのＰＣＲによって得られたＰＣＲ産物のアガロースゲル電気泳動。ヘテロ接合型ＥＳ細胞（ＥＳ）のＤＮＡおよびネガティブＰＣＲコントロールも同様に示されている。（図９Ｂ）ＷＴおよびＭＧＳＴ２欠損マウス胚の２継代目の線維芽細胞をビヒクル（コントロール）またはツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した。次いで、それらのプレートをクリスタルバイオレットで染色した。ビヒクル（コントロール）またはツニカマイシンで処理された、２継代目のＷＴおよびＭＧＳＴ２欠損マウス胚のニュートラルレッド染色によって測定されたときの相対的な生存率が示されている。（図９Ｃ）ＷＴおよびＭＧＳＴ２欠損ＭＥＦにおける切断型カスパーゼ３（Ｃａｓｐ．３）の免疫ブロット法によって測定されたときの、ブレフェルジンＡによるアポトーシスの誘導。（図９Ｄ）ＷＴおよびＭＧＳＴ２欠損マウス胚の２継代目の線維芽細胞を、ビヒクル（コントロール）またはツニカマイシン（２μｇ／ｍｌ，２４時間）またはブレフェルジンＡ（０．２５μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理し、次いで、ＤＣＦＨ−ＤＡで染色した。ＤＣＦ蛍光強度の定量的解析が示されている。Ｎ＝３  ＊＊＊ｐ＜０．００１。（図９Ｅ）ツニカマイシン（１ｍｇ／ｋｇ）を、ＷＴおよびＭＧＳＴ２欠損マウス（５匹／群）に、時間＝０において１回、ｉｐ投与した。腎臓を切除し、切片をヘマトキシリン−エオシンで染色した。腎臓の近位尿細管に対する損傷の定量的解析が示されている。近位尿細管を含む腎臓の領域全体の像を、Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐの投げ縄ツールを用いて選択し、ＩｍａｇｅＪプログラムを用いて小腔をカウントした。Ｎ＝５，＊＊＊ｐ＜０．０３。（図９Ｆ）ツニカマイシン（２．５ｍｇ／ｋｇ）を、時間＝０において１回、ｉｐ投与したＷＴおよびＭＧＳＴ２欠損マウス（２０匹／群）の生存率。重篤な病的状態を示しているマウスを、苦痛を低減するために安楽死させた。（図９Ｇ）ツニカマイシン（２．５ｍｇ／ｋｇ）を時間＝０において１回、およびビヒクル（コントロール）またはプランルカスト（１ｍｇ／ｋｇ／日，３日間）をｉｐ投与したＷＴマウス（４匹／群）の生存率。重篤な病的状態を示しているマウスを、苦痛を低減するために安楽死させた。
【図１０】プランルカストは、シンバスタチンによって引き起こされる細胞死を弱める。プランルカスト（１０μＭ，４８時間）の存在下（破線）または非存在下（実線）において、記載の濃度のシンバスタチンで処理されたヒトＷＩＳＨ細胞の生存率。次いで、それらのプレートをクリスタルバイオレットで染色し、相対的な細胞生存率を測定した。
【図１１Ａ−１１Ｂ】ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２およびＢＡＹ−ｕ９７７３は、分化したＣ２Ｃ１２マウス筋細胞の、シンバスタチンによって引き起こされる細胞死を弱めるが、プランルカストは弱めない。（図１１Ａ）ビヒクル、プランルカスト（１０μＭ）、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２（１０μＭ）、ＢＡＹ−ｕ９７７３（１μＭ）またはメバロネート（７１．４μＭ）の存在下において１０ｕＭシンバスタチンで５日間処理された、筋細胞に分化した後のマウスＣ２Ｃ１２細胞の生存率。次いで、それらのプレートをクリスタルバイオレットで染色し、相対的な細胞生存率を測定した。（図１１Ｂ）染色強度の定量が示されている。
【図１２Ａ−１２Ｂ】ジロートンは、分化したＣ２Ｃ１２マウス筋細胞の、シンバスタチンによって引き起こされる細胞死を弱めるが、モンテルカストは、弱めない。（図１２Ａ）Ｃ２Ｃ１２不死化マウス筋芽細胞（１５，０００細胞／１００ｕｌ  ＤＭＥＭ）を、２４日間にわたって播種し、次いで、３日間にわたって分化させ（１×ＩＴＳ培地が補充された無血清培地によって開始される）、次いで、モンテルカスト（２μＭ）、ジロートン（１０μＭ）またはメバロネート（７１．４μＭ）有りまたは無しで、２０μｇ／ｍｌのシンバスタチンで処理した。４日後、それらの細胞をクリスタルバイオレットで染色し、光学顕微鏡下で撮影した。（図１２Ｂ）染色強度の定量が示されている。
【発明を実施するための形態】
【００６２】
本発明は、スタチン治療の１つ以上の有害な副作用を処置するための方法、薬学的組成物およびキットを提供する。特に、本発明は、有効量の、スタチン治療の１つ以上の有害な副作用を弱めるためのロイコトリエン媒介性活性の少なくとも１つの阻害剤を含む薬学的組成物を提供する。
【００６３】
本発明の発明者らは、細胞死の惹起において重大な役割を果たす、ＥＲストレスを引き起こす作用物質によって活性化されるまだ認識されていない全般的なシグナル伝達カスケードを明らかにした。新たに発見されたシグナル伝達カスケードに基づいて、本発明は、スタチンによって引き起こされるＥＲストレスを弱め、ゆえにスタチン治療の１つ以上の有害な副作用を処置するための手段を提供する。
【００６４】
本発明の理解を促進するために、いくつかの用語および句が下記に定義される。これらの用語および句は、説明の目的であって限定の目的ではなく、本明細書の用語法または語法は、本明細書中に提示される教示および指針に照らし、当業者の知識と組み合わせて当業者によって解釈されるべきであることが理解されるべきである。
【００６５】
本発明は、スタチンを投与されている患者における細胞死の惹起において重大な役割を果たす、ＥＲストレスを引き起こすスタチンによって活性化されるまだ認識されていない全般的なシグナル伝達カスケードを初めて明らかにした。本発明は、前記シグナル伝達カスケードを阻害することによって、スタチンによって引き起こされるＥＲストレスを弱める手段を提供する。さらに、本発明は、ＥＲストレスを引き起こす作用物質ならびにスタチンによって活性化されるまだ認識されていないシグナル伝達カスケードとして、ＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４を開示する。
【００６６】
本発明は、以下の予想外の発見に部分的に基づく：（ａ）特定の試薬、例えば、ツニカマイシン、サプシガルジンおよびブレフェルジンＡによって誘発されるＥＲストレスが、少なくとも部分的にロイコトリエンＣ4（ＬＴＣ４）の産生を介して細胞死を引き起こすこと；（ｂ）このＬＴＣ４は、酵素ＭＧＳＴ２によって生成され、ＥＲストレスは、ｃＰＬＡ２、５ＬＯおよびＦＬＡＰとの核膜への同時移行および共局在化によってＭＧＳＴ２を活性化すること；（ｃ）ＥＲストレスは、ＬＴＣ４の合成機構によって、２つのＬＴＣ４レセプターＣｙｓＬＴ１およびｃｙｓＬＴ２の核膜への移行および共局在化も引き起こし、それにより、ＬＴＣ４の局在化されたイントラクライン作用が可能になること；（ｄ）ＬＴＣ４とその内部移行されたレセプターとの結合によって、ＮＡＤＰＨオキシダーゼ４が活性化され、その結果、ＲＯＳが蓄積すること、およびＬＴＣ４は、ＥＲストレスに起因する酸化ストレスの主要なトリガーであること；および（ｅ）ＥＲストレスによって活性化されるＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路によって媒介されるＲＯＳの蓄積は、ＤＮＡ損傷およびその後の細胞死をもたらすこと（図１）。ＬＴＣ４の生合成機構およびそのレセプターは、ＥＲストレスに応答して核膜に移行し、核膜に共局在化する。これは、一般に「小胞体ストレス応答」（ＵＰＲ）と呼ばれる。結果として、ＮＯＸ４が活性化され、ＲＯＳが生成され、それにより、酸化的ＤＮＡ損傷およびその後の細胞死を招く。したがって、本発明は、ＥＲストレスによって活性化される、細胞死を引き起こす主要な経路を開示する。
【００６７】
本発明はさらに、ＬＴＣ４レセプターアンタゴニスト、例えば、モンテルカストおよびプランルカストが、スタチン、例えば、シンバスタチン、ならびにアトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン（ＣＡＳ番号７３５７３−８８−３）、ピタバスタチン、プラバスタチンおよびロスバスタチンの毒性を弱めたことを開示する。本発明はさらに、ＬＴＣ４レセプターアンタゴニストが、ＥＲストレスによって引き起こされる病的状態から野生型マウスを保護することを開示する。いくつかのＬＴＣ４レセプターアンタゴニスト（モンテルカスト、プランルカストなど）が開発され、それらは、喘息症状を処置するために承認された薬物である。薬物として承認されたＬＴＣ４レセプターアンタゴニストのすべてが、ＣｙｓＬＴ１レセプターの選択的阻害剤である。第２のＬＴＣ４レセプターであるＣｙｓＬＴ２に対しても選択的阻害剤が開発されたが、それらはこれまでに、臨床開発に進んでない。初期の研究は、２つのＬＴＣ４レセプターであるＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２が、異なる組織タイプにおいて等しく発現されないことを実証した。ゆえに、本発明は、スタチンの主要な有害な副作用のいくつかを軽減するための、ＣｙｓＬＴ２レセプターアンタゴニスト、ならびにｃｙｓＬＴ１レセプターアンタゴニストとＣｙｓＬＴ２レセプターアンタゴニストとの組み合わせも提供する。本発明は、スタチンの有害な副作用のいくつかを軽減するための非選択的ＬＴＣ４レセプターアンタゴニストの使用も開示する。本発明はさらに、スタチンの有害な副作用のいくつかを軽減するための、ロイコトリエン生合成の阻害剤を提供する。
【００６８】
１つの態様によると、本発明は、少なくとも１つのスタチン、ならびにＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよびＬＴＣ４生合成の阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの作用物質を含む薬学的組成物を提供する。
【００６９】
本発明は、別の態様において、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防するためまたは減少させるための方法を提供し、その方法は、少なくとも１つのスタチンならびにＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよびＬＴＣ４生合成の阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの作用物質をその被験体に投与する工程を含み、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。
【００７０】
本発明はさらに、別の態様において、少なくとも１つのスタチンを含む薬学的組成物、ならびにＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよびＬＴＣ４生合成の阻害剤からなる群より選択される少なくとも１つの作用物質を含む薬学的組成物を備えるキットを提供する。
【００７１】
本発明はさらに、ある態様において、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少において使用するための、少なくとも１つのシステイニルロイコトリエンレセプター２（ＣｙｓＬＴＲ２）のアンタゴニストを含む薬学的組成物を提供し、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。
【００７２】
別の態様によると、本発明は、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少において使用するための、少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む薬学的組成物を提供し、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがあり、その少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２（ＭＧＳＴ２）、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）および５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）からなる群より選択される酵素の活性を阻害する。
【００７３】
本発明は、別の態様において、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防するためまたは減少させるための方法を提供し、その方法は、少なくとも１つのＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストをその被験体に投与する工程を含み、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。
【００７４】
本発明は、なおも別の態様において、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用を予防するためまたは減少させるための方法を提供し、その方法は、少なくとも１つのＬＴＣ４生合成の阻害剤をその被験体に投与する工程を含み、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがあり、そのＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯおよびＦＬＡＰからなる群より選択される酵素の活性を阻害する。
【００７５】
コレステロール処置の分野は、この症状の克服に徹した広範囲の研究および資源のおかげでますます広がり、絶え間なく変化している。ゆえに、上で詳しく述べられたように、ヒトのコレステロールレベルに影響する任意のタイプの分子が、本発明に係る「スタチン」であると考えられる。用語「スタチン」は、本明細書中で使用されるとき、酵素であるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素を阻害することによって、ヒトにおいてコレステロールレベルを低下させるために使用される任意の作用物質、分子または薬物のことを指す。一般に、酵素ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素の酵素活性を低下させるかまたは無くす任意の分子が、本発明によって「スタチン」と考えられる。具体的には、３−ヒドロキシ−３−メチル−グルタリル−ＣｏＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）をメバロン酸に変換することによってＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素を弱める任意の分子が、本発明によって「スタチン」と考えられる。
【００７６】
用語「薬学的組成物」は、本明細書中で使用されるとき、少なくとも１つの生物学的に活性な作用物質および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体を含む任意の組成物のことを指す。生物学的に活性な分子の非限定的な例は、ロイコトリエンレセプターのアンタゴニスト、例えば、レセプターＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニスト、ならびにＬＴＣ４生合成の阻害剤、例えば、酵素ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯおよびＦＬＡＰの阻害剤である。用語「作用物質」は、本明細書中で使用されるとき、生物学的活性を有する任意の分子のことを指す。
【００７７】
本明細書中で使用されるとき、用語「薬学的に許容可能な担体」は、本発明の化合物が、意図された機能を果たし得るように、被験体内におけるまたは被験体への本発明の化合物の保持または輸送に関わる、薬学的に許容可能な材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒または封入材料を意味する。担体は、その製剤の他の成分と適合性であり、患者にとって有害ではないという意味において「許容可能」でなければならない。
【００７８】
用語「ロイコトリエンＣ４（ＬＴＣ４）レセプターのアンタゴニスト」、「ＣｙｓＬＴＲ１のアンタゴニスト」、「ＣｙｓＬＴＲ１アンタゴニスト」、「ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニスト」および「ＣｙｓＬＴＲ２アンタゴニスト」は、示されるロイコトリエンＣ４レセプターの活性または機能を阻止すること、阻害すること、減少することまたは干渉することができる任意の作用物質のことを指すために使用される。これらの用語はさらに、ロイコトリエンＣ４レセプターの発現を阻止すること、阻害すること、減少することまたは干渉することができる任意の作用物質のことを指す。ロイコトリエンＣ４レセプターのアンタゴニストの非限定的な例は、モンテルカスト、ザフィルルカストおよびプランルカストである。
【００７９】
本明細書中で使用されるとき、用語「ロイコトリエン媒介性活性の阻害剤」とは、ロイコトリエンレセプターアンタゴニスト、ロイコトリエン生合成阻害剤またはそれらの組み合わせのことを指す。本発明の知見によると、ロイコトリエンレセプターアンタゴニストとロイコトリエン生合成阻害剤の両方が、ロイコトリエン媒介性活性を阻害することができ、ゆえに、互いの代替物として、または互いと組み合わせて使用され得る。本明細書中で使用されるとき、用語「ＬＴＣ４媒介性活性の阻害剤」とは、ＬＴＣ４レセプターアンタゴニスト、ＬＴＣ４生合成阻害剤またはそれらの組み合わせのことを指す。本明細書中で使用されるとき、用語「ロイコトリエン」とは、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるロイコトリエンのことを指す。本明細書中で使用されるとき、用語「レセプターアンタゴニスト」とは、レセプターのリガンドのことを指し、そのリガンドは、そのレセプターに結合すると、そのレセプターの活性の完全または部分的な阻害を発揮するものであり、例えば、ＬＴＣ４レセプターアンタゴニストは、ＬＴＣ４レセプターの阻害を引き起こす。本明細書中で使用されるとき、用語「レセプターのリガンド」とは、そのレセプターに特異的に結合し、それにより、そのレセプターの活性化または阻害を引き起こす化合物のことを指す。本明細書中で使用されるとき、「ロイコトリエンレセプターアンタゴニスト」は、ロイコトリエンレセプターに特異的に結合することができ、前記レセプターを完全にまたは部分的に阻害する、すなわち不活性化することができる任意の化合物である。したがって、そのロイコトリエンレセプターアンタゴニストは、ロイコトリエンレセプターの結合および不活性化を介してその主な効果を発揮する化合物である。用語「ＬＴＣ４レセプターアンタゴニスト」、「ロイコトリエンレセプターアンタゴニスト」、「ＣｙｓＬＴ１レセプターアンタゴニスト」および「ＣｙｓＬＴ２レセプターアンタゴニスト」は、本明細書中では、レシピエントに投与されたとき、本明細書中に記載されるようなアンタゴニストを提供すること（直接または間接的に）ができる任意の薬学的に許容可能な塩、エステル、溶媒和物または水和物を包含すると意図されている。塩の調製は、当該分野で公知の方法によって行われ得る。いくつかの実施形態によると、ロイコトリエン媒介性活性の阻害剤は、ロイコトリエンＣ4（ＬＴＣ４）媒介性活性の阻害剤、ロイコトリエンＤ4（ＬＴＤ4）媒介性活性の阻害剤、ロイコトリエンＥ4（ＬＴＥ4）媒介性活性の阻害剤およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００８０】
用語「予防する」とは、スタチンを投与されている被験体において、スタチン治療に関連する急性および／または慢性の有害な副作用の最初の発生を抑止することまたは遅延させることを広く指す。その予防は、完全なもの、例えば、組織または細胞への損傷が全くないものであり得る。その予防は、部分的でもあり得、スタチンによって誘導される組織または細胞への損傷が、ＬＴＣ４レセプターアンタゴニストおよび／またはＬＴＣ４生合成阻害剤の作用なしに生じ得るものほどではない。
【００８１】
用語「減少する」とは、スタチンを投与されている被験体において、スタチン治療に関連する急性および／または慢性の有害な副作用の、全体的な重症度を低下させることおよび／または回復を促進することを広く指す。
【００８２】
用語「処置する」および「損傷を軽減する」は、本明細書中で使用されるとき、交換可能に、スタチンの毒性に関連するかまたはスタチンの毒性によって誘導される少なくとも１つの症状の縮小、軽減または回復を含む。用語「処置する」は、本明細書中で使用されるとき、防止的（例えば、予防的）、対症的および治癒的な処置も含む。
【００８３】
用語「ミオパシー」は、本明細書中で使用されるとき、筋線維が、多くの理由のうちのいずれか１つのせいで機能せず、その結果、筋力低下がもたらされる公知の筋疾患のうちのいずれか１つのことを指す。筋肉の痙攣、硬直および攣縮もまた、ミオパシーに関連し得る。筋疾患は、本質的に、神経筋の筋疾患または筋骨格の筋疾患に分類され得る。いくつかの症状、例えば、筋炎は、神経筋と筋骨格の両方の筋疾患と考えられ得る。ミオパシーは、遺伝性または後天性である。ある特定の実施形態において、用語「ミオパシー」とは、薬物誘導性ミオパシー、例えば、国際疾病分類（ＩＣＤ）−１０−ＣＭ診断コードＧ７２．０の下に列挙されるもののことを指す。
【００８４】
用語「筋炎」は、本明細書中で使用されるとき、筋肉の炎症のことを広く指す。筋炎は、細胞のネクローシスの結果として生じることが多いので、被験体の血液中のクレアチンキナーゼ（ネクローシスのマーカー）の増加は、通常、筋炎の徴候である。筋炎のタイプとしては、骨化性筋炎、特発性炎症性ミオパチー、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、多発性筋炎、封入体筋炎および化膿性筋炎が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態において、筋炎は、骨化性筋炎および特発性炎症性ミオパチーからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００８５】
用語「横紋筋融解症」は、本明細書中で使用されるとき、損傷した骨格筋組織が急速に崩壊する症状のことを指す。損傷した筋細胞の崩壊産物は、血流に放出され、これらのうちのいくつか、例えば、タンパク質ミオグロビンは、腎臓にとって有害であり、腎不全に至ることがある。筋痛、嘔吐および錯乱を含み得るそれらの症状の重症度は、筋損傷の程度および腎不全が発症するかに依存する。その診断は、通常、血液検査および尿検査を用いて行われる。
【００８６】
用語「被験体」または「それを必要とする被験体」は、本明細書中で交換可能に使用され、スタチン治療を受けていて、前記スタチン治療の有害な副作用に苦しんでいる被験体のことを指す。いくつかの実施形態によると、被験体は、ヒトである。いくつかの実施形態において、被験体は、哺乳動物である。
【００８７】
ある特定の実施形態において、被験体は、血液中の高レベルの低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロールに苦しんでいる。ある特定の実施形態において、被験体は、高コレステロール血症に苦しんでいる。用語「高コレステロール血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ）」、「高コレステロール血症（ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌａｅｍｉａ）」および「異脂肪血症」は、本明細書中で使用されるとき、血液中に高レベルのコレステロールが存在することを指す。高コレステロール血症は、「高脂血症」（血液中の高レベルの脂質）および「高リポ蛋白血症」（血液中の高レベルのリポタンパク質）の一形態である。
【００８８】
ある特定の実施形態において、スタチン治療を受けている被験体は、高用量のスタチンを投与されている。ある特定の実施形態において、句「高用量のスタチンを投与されている」は、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも８０または少なくとも８０ｍｇのスタチンを毎日投与されていることを意味する。
【００８９】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する」は、「〜を含むが、これらに限定されない」を意味する。用語「〜からなる」は、「〜を含み、これらに限定される」を意味する。本明細書中で使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。例えば、用語「化合物（ａ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」または「少なくとも１つの化合物」は、それらの混合物を含む複数の化合物を含み得る。
【００９０】
用語「レセプターの活性を阻害する」は、本明細書中で使用されるとき、シグナル伝達カスケードまたはレセプターの生物学的活性を妨げること、阻止することまたは弱めることができる任意の作用物質のことを指す。例えば、システイニルロイコトリエンは、Ｇタンパク質共役レセプターであるＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２を活性化し、それにより、非造血細胞におけるＭＧＳＴ２の活性化を含むシグナル伝達カスケードを惹起する。
【００９１】
用語「ロイコトリエン生合成阻害剤」は、本明細書中で使用されるとき、ミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２（ＭＧＳＴ２）阻害剤、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害剤、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）阻害剤およびそれらの組み合わせからなる群より選択される阻害剤のことを指す。用語「ＬＴＣ４生合成の阻害剤」は、本明細書中で使用されるとき、ＬＴＣ４の合成を妨げること、阻止することまたは弱めることができる任意の作用物質のことを指す。背景の項において詳述したように、ｃＰＬＡ２は、リン脂質からアラキドン酸を放出し、５−ＬＯおよびＦＬＡＰは、それを反応性の中間体であるＬＴＡ４に酸化し、ＬＴＣ４は、ＬＴＡ４をグルタチオンと結合体化することにより、ＬＴＣ４を形成する。これらの酵素のうちのいずれか１つの任意の阻害剤が、ＬＴＣ４生合成の阻害剤であると考えられる。用語「酵素の活性を阻害する」は、本明細書中で使用されるとき、酵素の活性を妨げること、阻止することまたは弱めることができる任意の作用物質のことを指す。
【００９２】
用語「治療有効量」は、本明細書中で使用されるとき、被験体に治療的な利益を提供する際および／またはスタチンが招く有害な副作用を予防する際に、被験体への単回または複数回投与において有効な、作用物質の量のことを指す。１つの実施形態において、治療的な利益は、そのような有害な副作用の症状を阻害することまたは回復することである。用語「治療有効量」は、本明細書中で使用されるとき、スタチン治療の有害な副作用を弱めつつ、例えばコレステロール低下作用を必要としている被験体に治療的な利益を提供する際に、被験体への単回または複数回投与において有効な、スタチンおよび／またはロイコトリエン媒介性活性の阻害剤の量のことも指す。
【００９３】
本明細書中で使用されるとき、用語「投与する」とは、哺乳動物細胞を本発明の化合物または組成物と接触させることを指す。スタチンによって引き起こされるかまたはスタチンに関わる症状の治療的な処置のために本発明を実施するために使用される組成物の有効量は、スタチン、スタチン治療のレジメン、投与様式、患者の年齢、体重および全般的な健康状態に応じて変動する。最終的には、主治医が、適切な量および投与レジメンを決定する。そのような量は、有効量と呼ばれる。
【００９４】
用語「有効量」および「有効な量」は、スタチン治療の有害な副作用を弱める際に有効な単回または複数回投与において、スタチンおよび／またはロイコトリエン媒介性活性の阻害剤を含む組成物の量および／または用量のことを指すために本明細書中において交換可能に使用される。例えば、非限定的な様式において、本発明の組成物によってスタチン治療の副作用を処置する場合、有効量のスタチンは、単一の治療として投与されるときの前記スタチンのコレステロール低下作用と同様の測定可能または検出可能なコレステロール低下作用をもたらす量である。いくつかの実施形態によると、ロイコトリエンレセプターアンタゴニストの有効量は、スタチン治療の有害作用の測定可能または検出可能な減少、阻止、阻害または予防をもたらす量である
【００９５】
本明細書中で使用されるとき、用語「方法」とは、所与のタスクを達成するための様式、手段、手法および手順のことを指し、それらには、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の分野の当業者に公知であるか、またはそれらの当業者によって公知の様式、手段、手法および手順から容易に開発される、様式、手段、手法および手順が含まれるがこれらに限定されない。
【００９６】
句「予防するまたは減少する」および「減少するまたは予防する」は、本明細書中で使用されるとき、被験体の細胞、組織または器官における状態または疾患が、その状態もしく疾患またはそれらの症状が出現する前、出現している間または出現した後に、作用物質の投与によって、予防されるかまたは重症度が低下されることを意味する。ゆえに、いくつかの実施形態において、句「予防するまたは減少する」および「減少するまたは予防する」は、「予防する」を意味する。他の実施形態において、句「予防するまたは減少する」および「減少するまたは予防する」は、「減少する」を意味する。
【００９７】
ある特定の実施形態において、スタチンは、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチンおよびシンバスタチンからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００９８】
いくつかの実施形態によると、ＣｙｓＬＴＲ２アンタゴニストは、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２（ＣＡＳ番号７１２３１３−３３−２）、ＢＡＹ−ｕ９７７３（ＣＡＳ番号１５４９７８−３８−８）、ＨＡＭＩ３３７９（ＣＡＳ番号７１２３１３−３５−４）およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【００９９】
ある特定の実施形態において、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストは、二重特異的であり、ＣｙｓＬＴＲ１の活性をさらに阻害する。ある特定の実施形態において、上に記載された薬学的組成物は、ＣｙｓＬＴＲ１のアンタゴニストおよびＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストを含む、ＬＴＣ４レセプターアンタゴニストの混合物または複数のＬＴＣ４レセプターアンタゴニストを含む。
【０１００】
ＬＴＣ４とそのレセプターＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２との相互作用を干渉することまたは阻止することのほかに、被験体の体内においてＬＴＣ４生合成を抑止することによって、ＬＴＣ４の生物学的活性は最小限に抑えられ得る。ある特定の実施形態において、上に記載された薬学的組成物は、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態において、上に記載された薬学的組成物は、ミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２（ＭＧＳＴ２）、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）および５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）からなる群より選択される酵素の活性を阻害するＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。ある特定の実施形態において、ＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ＭＧＳＴ２の活性を阻害する。ある特定の実施形態において、ＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ｃＰＬＡ２の活性を阻害する。ある特定の実施形態において、ＬＴＣ４生合成の阻害剤は、５−ＬＯの活性を阻害する。ある特定の実施形態において、５−ＬＯの阻害剤は、ジロートンである。ある特定の実施形態において、５−ＬＯの阻害剤は、アトレロイトンである。ある特定の実施形態において、ＬＴＣ４生合成の阻害剤は、ＦＬＡＰの活性を阻害する。ある特定の実施形態において、ＦＬＡＰの阻害剤は、ＭＫ−８８６である。
【０１０１】
ある特定の実施形態において、上に記載された薬学的組成物は、スタチン、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニスト、ならびにミクロソームグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ２（ＭＧＳＴ２）、細胞質型ホスホリパーゼＡ２（ｃＰＬＡ２）、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）および５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）からなる群より選択される酵素の活性を阻害するＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む。
【０１０２】
ある特定の実施形態において、上に記載された薬学的組成物は、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少において使用するためのものであり、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。
【０１０３】
ある特定の実施形態によると、有害な副作用は、スタチンによって誘導されるミオパシーである。ある特定の実施形態において、そのミオパシーは、筋炎および横紋筋融解症からなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１０４】
ある特定の実施形態において、被験体は、毎日少なくとも２０ｍｇのアトルバスタチンまたは毎日４０〜８０ｍｇのアトルバスタチンを投与されている。ある特定の実施形態において、被験体は、毎日０．８ｍｇのセリバスタチンを投与されている。ある特定の実施形態において、被験体は、毎日８０ｍｇ超のフルバスタチンを投与されている。ある特定の実施形態において、被験体は、毎日８０ｍｇ超のロバスタチンを投与されている。ある特定の実施形態において、被験体は、毎日少なくとも４ｍｇのピタバスタチンを投与されている。ある特定の実施形態において、被験体は、毎日４０ｍｇ超のプラバスタチンを投与されている。ある特定の実施形態において、被験体は、毎日少なくとも１０ｍｇのロスバスタチンまたは毎日２０〜４０ｍｇのロスバスタチンを投与されている。ある特定の実施形態において、被験体は、毎日少なくとも４０ｍｇのシンバスタチンまたは毎日８０ｍｇのシンバスタチンを投与されている。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１０５】
高レベルのコレステロールに苦しんでいる患者は、スタチンまたはスタチンの組み合わせによって処置されることが多い。これらのスタチンは、全身投与されるので、それらは、筋細胞と相互作用することによって有害な副作用を部分的に招くことが多い。ある特定の実施形態において、スタチンは、高レベルのコレステロールを処置する。ある特定の実施形態において、スタチンは、有害な副作用を誘導する。
【０１０６】
ある特定の実施形態において、上に記載されたキットは、スタチンを含む薬学的組成物、ＣｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストを含む薬学的組成物およびＬＴＣ４生合成の阻害剤を含む薬学的組成物を備える。ある特定の実施形態において、上に記載されたキットはさらに、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある被験体に、スタチンおよび上記作用物質を投与するための指示書を備える。ある特定の実施形態において、上に記載されたキットは、被験体の筋組織における、スタチンによって誘導される有害な副作用の予防または減少において使用するためのものであって、ここで、その被験体は、スタチン治療を受けていて、スタチンによって誘導される有害な副作用を経験しているかまたは経験するリスクがある。ある特定の実施形態において、その使用は、被験体にスタチンを投与する前、投与している間、および／または投与した後に、上記作用物質を投与する工程を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１０７】
いくつかの実施形態によると、本発明の薬学的組成物はさらに、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンおよびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される有効量のスタチンを含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１０８】
いくつかの実施形態によると、本発明の薬学的組成物による併用療法の使用は、スタチンの副作用を減少させつつ、単一の治療として投与されるときのスタチンのコレステロール低下作用と同様またはそれより良いコレステロール低下作用を提供し得る。
【０１０９】
さらなる実施形態によると、スタチンに対して使用される投与量は、それらの承認された適応症に対して別々に投与されるとき、その承認された薬物の投与量と同様の範囲内である。
【０１１０】
スタチン治療は、コレステロール処置の１つのカテゴリーである。スタチンが招く有害な副作用、例えば、ミオパシーを予防するためまたは減少させるために、ＬＴＣ４レセプターのアンタゴニスト、ＬＴＣ４生合成の阻害剤またはそれらの任意の組み合わせを含む上に記載された薬学的組成物が、スタチンによって処置されている被験体に、スタチンによる処置の前、スタチンによる処置と同時、スタチンによる処置とともに、スタチンによる処置の後、およびそれらの任意の組み合わせにおいて、投与され得ることが理解されなければならない。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１１１】
ある特定の実施形態において、被験体は、これまでスタチンによって処置されたことがない。他のある特定の実施形態において、被験体は、当該スタチンと機能が似たスタチンによって以前に処置されたことがある。ある特定の実施形態において、被験体は、以前に当該スタチンによって処置されたことがある。ある特定のそのような実施形態において、被験体は、以前に当該スタチンによって処置されたことがあり、当該スタチンが招く有害な副作用を得ると承知している。
【０１１２】
被験体への任意の好適な投与経路が、本発明の組成物に対して使用され得る。好ましい投与様式は、処置される特定の適応症に依存し、その好ましい投与様式は、当業者には明らかであろう。
【０１１３】
いくつかの実施形態によると、本発明の薬学的組成物は、経口投与用の丸剤、錠剤またはカプセル剤として提供され得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態によると、本発明の薬学的組成物は、静脈内投与用の散剤、溶液または懸濁液として提供され得る。
【０１１５】
ある特定の実施形態において、本発明によって提供される薬学的組成物は、スタチンを長時間放出するために製剤化される。本明細書中に開示される製剤に関する用語「長時間放出」は、その製剤が、活性成分を環境（例えば、血液、胃、腸、結腸）に直ちに放出するのではなく、所定の長さの時間にわたって活性成分を放出することを意味する。したがって、比較的一定の量または予想通りに変化する量の活性な作用物質が、指定の長さの時間にわたって送達され得る。「持続性作用」、「復効」、「徐放」、「調節放出」および「制御放出」などの表現もまた、そのような製剤または剤形を説明するために使用されてきた。ゆえに、長時間放出は、従来の短時間放出剤形と比べて少なくとも２倍低い投与頻度を可能にする剤形または製剤と説明され得る。本明細書中で使用されるとき、用語「活性成分」は、スタチン、ｃｙｓＬＴＲ２のアンタゴニストおよび／またはＬＴＣ４生合成の阻害剤を意味する。
【０１１６】
ある特定の実施形態において、本発明によって提供される薬学的組成物は、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０または８０ｍｇのスタチンを含む。
【０１１７】
処置を構成する構成要素の組み合わせは、同時に（別々の剤形または単一の組成物として）、連続的に、または好適な時間間隔を空けて、投与され得る。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。それらの構成要素が、別々の剤形として投与される場合、すなわち、組み合わされた組成物として投与されない場合、各構成要素は、同じ形態または異なる形態で、例えば、経口、経鼻、非経口または経皮的に投与され得る。それらの化合物が、同時に、連続的にまたは別々に投与されるとき、それらの構成要素は、別々の剤形として提供され得る。
【０１１８】
ある特定の実施形態において、本発明は、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンまたはコレステロール生合成の他の任意の阻害剤を含む群から選択されるスタチンと、承認された薬物、例えば、ジロートンおよび実験薬、例えば、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２、ＭＫ−８８６、アトレロイトンなどを含む群から選択されるＬＴＣ４活性の阻害剤との併用療法を提供する。その併用療法の投与量は、別々に投与されるときの承認された薬物の投与量と同様の範囲内であり得る。その併用療法は、任意の承認された投与形態によって投与され得、好ましくは、経口投与用の、スタチンとＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路の阻害剤の両方を含む単一の丸剤として提供される。
【０１１９】
１つの態様において、ＬＴＣ４阻害剤は、ＬＴＣ４、ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯ、ＦＬＡＰ、ＣｙｓＬＴＲ２およびそれらの任意の組み合わせからなる群より選択されるポリペプチドの発現を阻害することができるＲＮＡ干渉剤である。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態に相当する。
【０１２０】
本発明によると、「ＲＮＡ干渉剤」または「ＲＮＡｉ剤」は、二本鎖ＲＮＡ、または標的細胞内で二本鎖ＲＮＡを転写することができるように操作されたＤＮＡ構築物であり、その二本鎖ＲＮＡは、ＬＴＣ４、ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯ、ＦＬＡＰ、ＣｙｓＬＴＲ２からなる群より選択されるポリペプチドのヌクレオチド配列またはそのホモログもしくはフラグメントもしくは一部と少なくとも７０％相補的なＲＮＡ鎖を含む。
【０１２１】
さらなる実施形態によると、本発明は、ＬＴＣ４、ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯ、ＦＬＡＰ、ＣｙｓＬＴＲ２またはそのホモログもしくはフラグメントからなる群より選択されるポリペプチドのヌクレオチド配列と相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド配列を提供し、ここで、そのアンチセンスオリゴヌクレオチド配列は、前記ポリペプチドまたはそのホモログもしくはフラグメントに特異的にハイブリダイズすることができ、それにより、ＬＴＣ４の発現を阻害する。
【０１２２】
本願全体を通して、本発明の様々な実施形態は、範囲の形式で提示され得る。範囲の形式での記載は、単に便利さおよび簡潔さのためであって、本発明の範囲に対する不変の限定として解釈されるべきでないことが理解されるべきである。したがって、ある範囲の記載は、具体的に開示される、可能性のあるすべての部分的な範囲、ならびにその範囲内の個々の数値を有するとみなされるべきである。例えば、ある範囲、例えば、１〜６という記載は、具体的に開示される部分的な範囲、例えば、１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６など、ならびにその範囲内の個々の数値、例えば、１、２、３、４、５および６を有するとみなされるべきである。これは、その範囲の幅に関係なく適用される。
【０１２３】
明確にするために、別個の実施形態の文脈に記載されている本発明のある特定の特徴は、組み合わせて単一の実施形態として提供されることもあることが認識される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈に記載されている本発明の様々な特徴は、別々にもしくは任意の好適な部分的な組み合わせとして、または本発明の他の任意の記載された実施形態において適切であるように、提供されることもある。様々な実施形態の文脈に記載されているある特定の特徴は、その実施形態がそれらのエレメント無しには無効でない限り、それらの実施形態の必須の特徴であるとみなされるべきでない。
【０１２４】
上記の本明細書中に示され、下記の特許請求の範囲の項において特許請求されるような、本発明の様々な実施形態および態様は、以下の実施例において実験による裏付けを得ている。
【０１２５】
具体的な実施形態の前述の説明は、本発明の一般的性質を十分に明らかにしているので、その他の者は、現在の知識を適用することによって、過度の実験を行うことなく、かつその一般的な概念から逸脱することなく、そのような具体的な実施形態を容易に改変することおよび／または様々な用途に適合させることができ、ゆえに、そのような適合および改変は、開示される実施形態の意味およびその等価物の範囲内に包含されるべきであり、包含されると意図されている。本明細書中で使用される語法または用語法は、説明を目的とするものであって、限定を目的としていないことが理解されるべきである。開示される様々な機能を行うための手段、材料および工程は、本発明から逸脱することなく、種々の代替の形態をとってよい。
【０１２６】
以下の実施例は、本発明のいくつかの実施形態を十分に例証するために提示される。
しかしながら、それらは、本発明の広い範囲を限定すると決して解釈されるべきでない。当業者は、本発明の範囲から逸脱することなく、本明細書中に開示される原理の多くのバリエーションおよび改変を容易に考案し得る。
実施例
【実施例１】
【０１２７】
実施例１−ＥＲストレスはＭＧＳＴ２および５−ＬＯの発現を制御する
ヒトＷＩＳＨ上皮細胞およびヒト未分化ＨａＣａＴケラチノサイトにおけるＭＧＳＴ２のレベルに対するＥＲストレスの影響を測定するために、ヒトＷＩＳＨ上皮細胞およびヒトＨａＣａＴケラチノサイト前駆細胞をタンパク質グリコシル化阻害剤であるツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した後のミクロソームグルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＭＧＳＴ２）および切断型カスパーゼ３（Ｃａｓｐ．３）の発現の動態を、免疫ブロット法によって測定した。図２Ａに示されている結果は、タンパク質のミスフォールディングにおそらく起因して、ツニカマイシンによるこれらの細胞の処理が、ＥＲストレスをもたらすことを実証している。注目すべきことに、両方の細胞型において、ＭＧＳＴ２は、小胞体ストレス応答（ＵＰＲ）の初期の保護段階（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｐｈａｓｅ）の間にダウンレギュレートされ、後期の細胞死促進段階（ｄｅａｔｈ  ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ  ｐｈａｓｅ）において、切断型カスパーゼ３の増加と同時にアップレギュレートされた。ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死におけるＭＧＳＴ２およびその生成物ＬＴＣ４の役割を評価するために、ヒトＷＩＳＨ上皮細胞を、小胞体（ＥＲ）からゴルジ装置へのタンパク質輸送の阻害剤であるブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で、およびマウスＢ１６細胞をツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した後の５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）の発現の動態を測定するために免疫ブロット試験を行った。図２Ｂに示されている結果は、ロイコトリエン生合成の律速酵素である５−ＬＯもまた、ＥＲストレスに応答して、Ｕ字型（ｉｎｖｅｒｓｅ  ｂｅｌｌ−ｓｈａｐｅｄ）の発現パターンを示したことを実証している。ゆえに、ＬＴＣ４生合成の２つの重要な構成要素は、ＥＲストレスによって厳重に制御される。それらは、ＵＰＲの初期の生存促進段階（ｐｒｏ−ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｐｈａｓｅ）に弱められ、後期の細胞死促進段階にアップレギュレートされる。
【実施例２】
【０１２８】
実施例２−ＥＲストレスは、ＭＧＳＴ２および５−ＬＯの核移行を引き起こす
ＭＧＳＴ２、ｃＰＬＡ２、５−ＬＯおよびＦＬＡＰの細胞局在に対するＥＲストレスの影響を評価するために、無処理およびブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理されたＷＩＳＨ上皮細胞の免疫染色を行った。結果は、コントロールヒトＷＩＳＨ細胞において、ＭＧＳＴ２がその細胞のＥＲと核の両方に存在したこと（データ示さず）および５−ＬＯがその細胞の細胞質と核の両方に存在したこと（データ示さず）を示している。コントロール細胞ではそれらが共通して核内に局在したにもかかわらず、５−ＬＯは、ヒトＷＩＳＨ上皮細胞またはＨａＣａＴケラチノサイト前駆細胞においてＭＧＳＴ２と共局在化しなかった（データ示さず）。ＥＲからゴルジ装置へのタンパク質の輸送を阻止するトキシンであるブレフェルジンＡでＥＲストレスを引き起こすと、核膜マーカーのラミンおよび核マーカーのＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８で染色することによって測定したとき、ＭＧＳＴ２と５−ＬＯの両方が核に移行した（データ示さず）。さらに、ＥＲストレスは、ＷＩＳＨ細胞とＨａＣａＴ細胞の両方においてＭＧＳＴ２と５−ＬＯとの共局在化を引き起こした（データ示さず）。
【実施例３】
【０１２９】
実施例３−ＥＲストレスは、ＬＴＣ４の生合成機構全体の核移行を引き起こす
マスト細胞におけるＦｃレセプターの活性化は、ＬＴＣ４の生合成機構全体を核膜に移行させることによって、ＬＴＣ４の産生を惹起した。ゆえに、ＬＴＣ４の生合成に必要な他の２つの酵素の細胞局在に対するＥＲストレスの影響を調べるために、ブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した後のＷＩＳＨ細胞における５−ＬＯ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）および５−ＬＯの移行および共局在化を、免疫染色によって測定した。結果は、コントロール細胞において、ＦＬＡＰが、核およびＥＲに局在したのに対して、ｃＰＬＡ２は主に細胞質に存在したことを示している。コントロール細胞では重複して存在したにもかかわらず、５−ＬＯは、ＦＬＡＰまたはｃＰＬＡ２と共局在化しなかった（データ示さず）。ブレフェルジンＡを用いてＥＲストレスを引き起こすと、５−ＬＯの核への移行ならびにＦＬＡＰおよびｃＰＬＡ２との共局在化が誘発された（データ示さず）。したがって、ＥＲストレスは、ＬＴＣ４を生成することができる酵素セットの核への移行および共局在化を引き起こす。このＥＲストレスによって引き起こされる移行の事象は、それが免疫学的合図ではなくＥＲストレスによって誘導されることおよびＬＴＣ４ＳではなくＭＧＳＴ２が関わることを除いては、マスト細胞のＦｃレセプター活性化の際に見られる事象に類似している。
【実施例４】
【０１３０】
実施例４−ＥＲストレスは、ＭＧＳＴ２に基づくＬＴＣ４の生合成を引き起こす
ＭＧＳＴ２に基づく機構の、ＥＲストレスによって引き起こされる移行が、ＬＴＣ４の産生をもたらすかをさらに評価するために、ＥＤＣで固定された細胞の免疫染色を行うことにより、ＬＴＣ４生合成に対して異なる機序によって作用する、ＥＲストレスの３つの誘導物質の影響を測定した。ツニカマイシンは、タンパク質のグリコシル化を阻害し、サプシガルジンは、ＥＲから細胞質へのカルシウムイオンの放出を引き起こし、ブレフェルジンＡは、ＥＲからゴルジへのタンパク質輸送を阻止する。結果は、これらのトキシンによるＥＲストレスの誘導が、ＬＴＣ４の広範な生合成を誘発したことを実証している。要するに、これらの結果は、ＥＲストレスが、ＭＧＳＴ２、５−ＬＯ、ＦＬＡＰおよびｃＰＬＡ２の発現、核移行および共局在化によって、ＭＧＳＴ２が媒介するＬＴＣ４生合成を引き起こすことを示唆している。
【実施例５】
【０１３１】
実施例５−ＥＲストレスは、ＬＴＣ４レセプターの発現および核への移行を制御する
マスト細胞において、ＬＴＣ４は、分泌され、その２つの細胞膜レセプターＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２に結合することによって、近くの細胞に作用する。しかしながら、外から加えられたＬＴＣ４およびＬＴＤ４は、それらのレセプターの核膜への移行を引き起こすことが以前に実証された（Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｃ．Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２００５．６５（３）：ｐ．７３２−４２）。ヒトＷＩＳＨ細胞をブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した後およびマウスＢ１６細胞をツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した後のＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２の発現の動態解析を、免疫ブロット法を用いることによって行った。驚いたことに、図３に示される結果から理解できるように、ヒトＷＩＳＨ上皮細胞とマウスＢ１６細胞の両方において、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２は、ＵＰＲの初期の保護段階においてダウンレギュレートされ、ＵＰＲの後期の細胞死促進段階において回復し、さらに誘導された。
【０１３２】
さらに、上記結果は、ＥＲストレスが、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２の核膜への移行およびそれらと５−ＬＯとの共局在化も引き起こしたという予想外の驚くべき知見を実証している。したがって、ＥＲストレスの後、ＬＴＣ４生合成機構とＬＴＣ４レセプターの両方が、同じ細胞内コンパートメントに共局在化し、それにより、ＭＧＳＴ２によって生成されるＬＴＣ４のイントラクライン作用が促進される。
【実施例６】
【０１３３】
実施例６−ＥＲストレスは、ＭＧＳＴ２に基づくＬＴＣ４生合成を引き起こす
ＥＲストレスは、酸化ストレスを引き起こし、その逆もまた同じであるので、ＥＲストレスと酸化ストレスとは、密接に関連している。ゆえに、ＭＧＳＴ２およびその生成物ＬＴＣ４が、ＥＲストレスによって引き起こされるＲＯＳ蓄積に関わるかを判定するための試験を行った。以前に報告されたように、ツニカマイシンによって引き起こされるＥＲストレスは、スーパーオキシドアニオンの指示薬ジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）で染色することによって検出するとき、ＲＯＳの蓄積をもたらす。特異的なｓｉＲＮＡを用いてＭＧＳＴ２の効果的なサイレンシングを行った際（図４Ｂ）、ＥＲストレスによって引き起こされたＲＯＳ蓄積のレベルは、有意に低下し、コントロール細胞のレベルに達した（図４Ａ）。ＭＧＳＴ２は、ＧＳＨをＬＴＡ4だけでなく他の基質にも結合させることによってＧＳＨを消費する。ＭＧＳＴ２がＧＳＨの枯渇またはＬＴＣ４の生合成によってＲＯＳ蓄積を引き起こすかを明らかにするために、いくつかのＬＴＣ４レセプターアンタゴニストならびにＬＴＣ４の生合成または輸送の阻害剤を使用した。ロイコトリエンは、喘息の症状を媒介するので、ロイコトリエンの生合成、輸送および活性の多くの異なる阻害剤が利用可能である。レベルサンは、細胞からのＬＴＣ４の排出を阻害する。モンテルカストおよびプランルカストは、選択的ＣｙｓＬＴＲ１レセプターアンタゴニストであり、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２は、選択的ＣｙｓＬＴＲ２アンタゴニストであり、ＢＡＹ−ｕ９７７３は、ＣｙｓＬＴＲ１とＣｙｓＬＴＲ２の両方の二重阻害剤である。ブレフェルジンＡによってＥＲストレスを引き起こすと、指示薬ジクロロ−ジヒドロ−フルオレセインジアセテート（ＤＣＦＨ−ＤＡ，図４Ｃ、５）によって測定したとき、ＲＯＳが発生した。これらの結果は、驚いたことに予想外に、試験されたＣｙｓＬＴＲ１アンタゴニストおよびＣｙｓＬＴＲ２アンタゴニストのすべてが、ＥＲストレスによって引き起こされるＲＯＳ蓄積を有意に阻害したことを明らかにした（図４Ｃ、５）。
【０１３４】
ＬＴＣ４アンタゴニストとは対照的に、ＭＲＰ１トランスポーター阻害剤のレベルサン（２０μＭ）は、ＥＲストレスに応答して、ＲＯＳ蓄積に対して統計的に有意でない小さい阻害作用を有した（図４Ｃ）ことから、ＬＴＣ４活性は、主にイントラクラインであることが示唆される。この重要な知見は、２つのＬＴＣ４レセプターが核に移行するという以前の知見と一致したことから、ＥＲストレスによって引き起こされるＬＴＣ４の作用が主にイントラクラインであるという見解がさらに裏付けられた。ＲＯＳ蓄積におけるＭＧＳＴ２の役割は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるその過剰発現（図４Ｄ）によってさらに確立され、その過剰発現は、細胞のＲＯＳの著しい増加をもたらした（図４Ｅ）。まとめると、これらの結果は、ＭＧＳＴ２によって生成されるＬＴＣ４が、ＥＲストレスによって引き起こされる酸化ストレスの主要なメディエーターであることを示唆している。
【実施例７】
【０１３５】
実施例７−ＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路は、核ＮＡＤＰＨオキシダーゼ４（ＮＯＸ４）およびその後のＤＮＡ損傷を活性化する
最近の研究から、最も重要な細胞のＲＯＳ産生酵素としてＮＡＤＨ／ＮＡＤＰＨ酸化酵素（ＮＯＸ）が同定され、ＥＲストレスが、ＮＯＸ４アイソフォームをアップレギュレートすることによって酸化ストレスを引き起こすことが見出された。ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２が属するＧタンパク質共役レセプターのいくつかのリガンドは、ＮＯＸのレセプター媒介性活性化を介して酸化ストレスを誘発する。ヒトＷＩＳＨ細胞およびマウスＢ１６細胞を、ＢＡＹ−ｕ９７７３、ＭＫ５７１またはモンテルカストの非存在下または存在下においてビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理し、免疫ブロット法によってＮＯＸ４レベルを評価した。注目すべきことに、ＬＴＣ４レセプターアンタゴニストは、ＥＲストレスの際にＮＯＸ４の発現を大幅に阻害した（図６Ａ、６Ｂ）。さらに、ＷＩＳＨ細胞をビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（０．６６μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理し、固定し、免疫染色したところ、ＥＲストレスによって引き起こされる核へのＮＯＸ４の移行が明らかになった。ゆえに、ＥＲストレスの下での主要なＲＯＳ産生物質であるＮＯＸ４の発現および活性化は、ＬＴＣ４依存的である。
【０１３６】
ＥＲストレスに応答した核ＲＯＳの蓄積は、酸化的ＤＮＡ損傷をもたらし得る。ＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路が、ＥＲストレスによって引き起こされるＤＮＡ損傷に関与するかを試験するために、酸化されたＤＮＡ誘導体８−ヒドロキシ−２’デオキシグアノシン（ｄｅｘｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅ）（８−ＯＨｄＧ）の形成を測定した。ＨａＣａＴ細胞をブレフェルジンＡで処理すると、免疫染色によって測定したとき、核に８−ＯＨｄＧが出現した（図６Ｃ）。プランルカストを用いてＣｙｓＬＴＲ１とＬＴＣ４との結合を阻害すると、核における８−ＯＨｄＧの形成が有意に弱まり、ＢＡＹ−ｕ９７７３を用いてＣｙｓＬＴＲ１とＣｙｓＬＴＲ２の両方へのＬＴＣ４の結合を阻害すると、それはＤＮＡ損傷の減弱になおもより有効であった（図６Ｃ）。要するに、ＥＲストレスによって引き起こされるＤＮＡ損傷は、ＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路によって大幅に媒介された。
【実施例８】
【０１３７】
実施例８−ＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路は、ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死を媒介する
中程度のレベルのＲＯＳは、細胞の増殖を促進するが、「毒性閾値」と呼ばれるレベルより高い濃度は、細胞死を引き起こす。ＬＴＣ４が、この閾値を超えてＲＯＳを増加させる場合、低酸素症／再灌流による心筋細胞の死の場合に報告されるように、ＬＴＣ４は、ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死機構の一部になり得る。さらに、ＮＯＸ２の誘導は、ＥＲストレスによって引き起こされるマクロファージのアポトーシスをもたらす機序のうちの１つと特定された。ＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路が、ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死を媒介するかを判定するために、マウスＢ１６細胞に、コントロールｓｉＲＮＡ（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）またはＭＧＳＴ２特異的ｓｉＲＮＡ（ｓｉＭＧＳＴ２）をトランスフェクトし、その細胞をビヒクルまたはツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）（Ｔｍ）で処理し、次いで、クリスタルバイオレットで染色した。結果は、ＭＧＳＴ２の効果的なノックダウンによって、ＥＲストレスによって引き起こされるＢ１６メラノーマ細胞の死が有意に弱まったことを実証している（図７Ａ、７Ｂ）。逆の研究では、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞におけるＭＧＳＴ２の過剰発現が、細胞死を有意に増大させた（図７Ｃ）。結論として、ＭＧＳＴ２は、ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死に関与する。
【０１３８】
次に、ヒトＨａＣａＴケラチノサイト前駆細胞におけるＥＲストレスによって引き起こされる細胞におけるＭＧＳＴ２の生成物ＬＴＣ４の役割を調べる別の試験を行った。ＨａＣａＴ細胞を、ＢＡＹ−ｕ９７７３（８０ｎＭ）の非存在下または存在下において、ビヒクル（コントロール）またはブレフェルジンＡ（ＢｆＡ，１．３３μｇ／ｍｌ，４８時間）で処理し、次いで、クリスタルバイオレットで染色した。
【０１３９】
結果は、ＣｙｓＬＴＲ１とＣｙｓＬＴＲ２の二重アンタゴニストであるＢＡＹ−ｕ９７７３でヒトＨａＣａＴケラチノサイトを前処理すると、ブレフェルジンＡによって誘発されるＥＲストレスによって引き起こされる細胞死が弱まったことを示している（図７Ｄ）。ＢＡＹ−ｕ９７７３は、ニュートラルレッドアッセイによって測定したとき、ツニカマイシンによって誘導されるヒトＷＩＳＨ細胞の死も有意に弱めた（図７Ｅ）。プロテアソーム阻害剤は、ＥＲにおけるミスフォールドしたタンパク質の蓄積に起因して、ＥＲストレスおよびその後の細胞死を引き起こす。５−リポキシゲナーゼ阻害剤のジロートンは、脊髄損傷および脳虚血後のアポトーシス細胞死を減少させると以前に見出されていた。結果は、ジロートン（１０μＭ）が、ＨａＣａＴケラチノサイトを、プロテアソーム阻害剤ＭＧ２６２（５０ｎＭ，２４時間，図７Ｆ）によって引き起こされる細胞死から有意に保護したことを示している。２つのＬＴＣ４レセプターＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２は、マスト細胞およびヒト腸上皮細胞において二量体化する。ゆえに、これらのレセプターの一方の選択的阻害が、ＬＴＣ４活性の減弱にとって十分であり得る可能性がある。実際に、選択的ＣｙｓＬＴＲ１アンタゴニストであるプランルカスト（１０μＭ）は、ブレフェルジンＡによって引き起こされるヒトＷＩＳＨ細胞の死を有意に弱めた（図７Ｇ）。同様に、選択的ＣｙｓＬＴＲ２アンタゴニストであるＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２（５μＭ）は、これらの細胞をブレフェルジンＡから等しく保護した（図８Ａ）。
【０１４０】
ＭＫ５７１は、ＭＲＰ１阻害剤としての活性に加えて、強力な選択的ＣｙｓＬＴＲ１アンタゴニストである。ＭＫ５７１（１０μＭ）でマウスＢ１６メラノーマ細胞を前処理すると、ツニカマイシン、サプシガルジンおよびブレフェルジンＡによって引き起こされる細胞死が有意に弱まった（図８Ｂ）。この保護作用は、培養液へのＨＭＧＢ１の分泌の減少によって実証されたように、細胞ネクローシスの減少と相関した（図８Ｃ）。
【０１４１】
すべてまとめると、本明細書中に提供される結果によって、ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死を媒介する、まだ認識されていない、ＥＲストレスによって引き起こされるシグナル伝達経路が特定された。
【実施例９】
【０１４２】
実施例９−ＭＧＳＴ２欠損は、ＥＲストレスによって引き起こされる細胞死をインビボにおいて弱める
ホモ接合型ＭＧＳＴ２欠損マウスを、ＥＳ細胞の１２９ｓｖＥｖＢｒｄマウス株遺伝子トラップライブラリーから確立した。Ｍｇｓｔ２ノックアウトマウスならびにそれらのＷＴおよびヘテロ接合同腹仔の尾先端から得られたＤＮＡサンプルのＰＣＲによって、Ｍｇｓｔ２の標的化された対立遺伝子が、ヌル変異であることが確かめられた（図９Ａ）。ＭＧＳＴ２欠損マウスは、正常に繁殖し、それらの野生型同腹仔と識別不能であるとみられ、体重および食物摂取に有意差は無かった。ＷＴおよびＭＧＳＴ２欠損マウス胚の２継代目の線維芽細胞を、ビヒクル（コントロール）またはツニカマイシン（１μｇ／ｍｌ，２４時間）で処理した。次いで、それらのプレートをクリスタルバイオレットで染色した。結果は、ＭＧＳＴ２欠損マウスの２継代目の胎仔線維芽細胞（ＭＥＦＳ）が、ツニカマイシンによって誘発されるＥＲストレスによって引き起こされる細胞死に対して、ＷＴ  ＭＥＦＳよりも有意に抵抗性であったことを示している（図９Ｂ）。ＤＣＦＨ−ＤＡでの染色は、ＷＴ  ＭＥＦと比べて、ＥＲストレスに応答したＲＯＳ蓄積が実際に完全に無くなったことを明らかにした（図９Ｃ）。
【０１４３】
ＥＲストレスにおけるＭＧＳＴ２の役割をインビボにおいて評価するために、急性腎臓損傷のマウスモデルを用いた。０日目に、ＷＴマウスおよびＭＧＳＴ２欠損マウスにツニカマイシン（１ｍｇ／ｋｇ体重）をｉｐ注射した。４日目に回収され、ヘマトキシリン−エオシンで染色されたＷＴ腎臓切片の組織学的検査は、ＷＴマウスの近位尿細管に対する予想された損傷を明らかにしたのに対して、ＭＧＳＴ２欠損マウスにおける組織像は、小胞の数によって測定したとき、有意により軽度であった（図９Ｄ、９Ｅ）。ＥＲストレスによって引き起こされる病的状態におけるＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路の役割をさらに調べるために、より高用量のツニカマイシンをマウスに注射した。ＭＧＳＴ２欠損マウスは、ＷＴマウスよりも、２．５ｍｇ／ｋｇという単一用量のツニカマイシンに対して劇的に抵抗性であった（図９Ｆ）。さらに、２．５ｍｇ／ｋｇのツニカマイシンと同時にプランルカストを投与すると、ツニカマイシン単独と比べて、ＷＴマウスの罹患率および死亡率が大きく減少した（図９Ｇ）。
【実施例１０】
【０１４４】
実施例１０−プランルカストは、ヒトＷＩＳＨ細胞をシンバスタチンによって引き起こされる細胞死から保護する
スタチンによって引き起こされる細胞死におけるＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路の役割を調べるために、９６ウェルプレートにおけるヒトＷＩＳＨ上皮細胞を、プランルカスト（１０μＭ）またはビヒクルの存在下において様々な濃度のシンバスタチンまたはビヒクルで４８時間処理した。結果は、プランルカストが、広範囲（０．５〜４μｇ／ｍｌ）のシンバスタチン濃度によって引き起こされる細胞死を弱めたことを示している（図１０）。
【実施例１１】
【０１４５】
実施例１１−ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２およびＢＡＹ−ｕ９７７３は、マウスＣ２Ｃ１２筋細胞（ｍｙｏｃｙｃｅｓ）を、シンバスタチンによって引き起こされる細胞死から保護する
スタチンによって引き起こされる細胞死におけるＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路の役割を調べるために、９６ウェルプレート内の分化したマウスＣ２Ｃ１２筋細胞を、ビヒクル、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２（１０μＭ）もしくはＢＡＹ−ｕ９７７３（１μＭ）またはメバロン酸ナトリウムの存在下において、１０ｕＭシンバスタチンまたはビヒクルで５日間処理した。結果は、ＢＡＹ−ｃｙｓＬＴ２ならびにＢＡＹ−ｕ９７７３が、シンバスタチンによって引き起こされる細胞死を弱めたことを示している。対照的に、ＣｙｓＬＴＲ１アンタゴニストであるプランルカストは、これらの細胞をシンバスタチンの毒性作用から保護しなかった（図１１Ａ、１１Ｂ）。
【実施例１２】
【０１４６】
実施例１２−ジロートンは、マウスＣ２Ｃ１２筋細胞を、シンバスタチンによって引き起こされる細胞死から保護する
スタチンによって引き起こされる細胞死におけるＭＧＳＴ２−ＬＴＣ４経路の役割を調べるために、９６ウェルプレート内の分化したマウスＣ２Ｃ１２筋細胞を、ビヒクル、ジロートン（１０μＭ）またはメバロン酸ナトリウムの存在下において、２０ｕＭシンバスタチンまたはビヒクルで４日間処理した。結果は、ジロートンが、シンバスタチンによって引き起こされる細胞死を弱めたことを示している。対照的に、ＣｙｓＬＴＲ１アンタゴニストであるモンテルカストは、これらの細胞をシンバスタチンの毒性作用から保護しなかった（図１２Ａ、１２Ｂ）。
【実施例１３】
【０１４７】
実施例１３−スタチン治療の副作用の減弱におけるジロートンの作用
高コレステロール血症を処置するためにスタチン治療を受けていて、様々なレベルの筋肉痛および疲労に苦しんでいると報告していた患者に対するジロートンの作用を試験する。
【０１４８】
−１、０、＋１、＋２および＋４週目に患者に連絡を取るか、来院してもらう。１週目（ＷＫ（−１））の来院時に、患者のスタチン投薬の詳細を記録し、１日量を書き留める。また、ＭｃＧｉｌｌ疼痛質問票（Ｍｅｌｚａｃｋ，Ｒ．，１９７５“Ｔｈｅ  ＭｃＧｉｌｌ  Ｐａｉｎ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ：Ｍａｊｏｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｓｃｏｒｉｎｇ  Ｍｅｔｈｏｄｓ”．Ｐａｉｎ  １：２７７−２９９、この開示はその全体が参照により本明細書中に含められる）、疼痛評価指標（Ｐａｉｎ  Ｒａｔｉｎｇ  Ｉｎｄｅｘ）（ＰＲＩ）および現在の疼痛強度（Ｐｒｅｓｅｎｔ  Ｐａｉｎ  Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）（ＰＰＩ）に対するスケールを用いて、患者の疼痛をスコア付けする。２つのスコアを含むＰＲＩ指標では、より高いスコアが、疼痛レベルの上昇を示す。ＰＰＩ指標では、現在の疼痛に０から５のスコアが与えられ、ここで、０は、疼痛が無いことに相当し、５は、耐えがたい疼痛に相当する。患者は、ＷＫ（−１）において、疲労インパクトスケール（Ｆａｔｉｇｕｅ  Ｉｍｐａｃｔ  Ｓｃａｌｅ）（Ｆｉｓｋ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ，１９９４，“Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｆａｔｉｇｕｅ：Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆａｔｉｇｕｅ  Ｉｍｐａｃｔ  Ｓｃａｌｅ”，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，１８（Ｓｕｐｐｌ  １）：Ｓ７９−８３、この開示はその全体が参照により本明細書中に含められる）を用いて、疲労についてもスコア付けされる。
【０１４９】
ＷＫ（０）およびＷＫ（＋４）において、患者から血液サンプルを採取することにより、クレアチンキナーゼ濃度（ＣＫ）（単位／Ｌ）（筋肉外傷の血液尺度として）ならびにＨＤＬ−コレステロールまたはＬＤＬ−コレステロールおよびトリグリセリドレベルの個々のベースラインレベルを測定する。血中クレアチンキナーゼ濃度に対する正常範囲は、０〜２００単位／Ｌであることに注意されたい。
【０１５０】
ＷＫ（０）から開始し、この研究全体にわたって継続して、患者には、２４００ｍｇという総１日量のジロートンを、１日に４回（６００ｍｇ錠剤）または１日に２回、長時間放出１２００ｍｇ錠剤で経口投与されるように要請する。
【０１５１】
患者に対するジロートンの作用を試験するために、ＰＲＩ、ＰＰＩおよびＦＩＳスコアを測定する質問票を、その後、＋１、＋２および＋４週目に行った。＋１および＋２週目に、患者に電話で連絡を取り、自己評価の質問票をクリニックに郵送するように要請した。
【０１５２】
具体的な実施形態の前述の説明は、本発明の一般的性質を十分に明らかにしているので、その他の者は、現在の知識を適用することによって、過度の実験を行うことなく、かつその一般的な概念から逸脱することなく、そのような具体的な実施形態を容易に改変することおよび／または様々な用途に適合させることができ、ゆえに、そのような適合および改変は、開示される実施形態の意味およびその等価物の範囲内に包含されるべきであり、包含されると意図されている。本明細書中で使用される語法または用語法は、説明を目的とするものであって限定を目的としていないことが理解されるべきである。開示される様々な機能を行うための手段、材料および工程は、本発明から逸脱することなく、種々の代替の形態をとってよい。
【図１】
2017510558.tif 000002
【図２Ａ−２Ｂ】
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【図３】
2017510558.tif 000004
【図４Ａ−４Ｃ】
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【図４Ｄ−４Ｅ】
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【図５】
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【図６Ａ−６Ｃ】
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【図７Ａ−７Ｄ】
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【図７Ｅ】
2017510558.tif 000010
【図７Ｆ】
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【図７Ｇ】
2017510558.tif 000012
【図８Ａ−８Ｃ】
2017510558.tif 000013
【図９Ａ−９Ｄ】
2017510558.tif 000014
【図９Ｅ−９Ｇ】
2017510558.tif 000015
【図１０】
2017510558.tif 000016
【図１１Ａ−１１Ｂ】
2017510558.tif 000017
【図１２Ａ−１２Ｂ】
2017510558.tif 000018
【国際調査報告】
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