(57)【要約】本発明は、ヒト患者または他の動物宿主におけるＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染を治療または予防するための化合物、組成物及び方法に関する。前記化合物は、また、医薬組成物及びＨＣＶ感染の治療または予防のための方法と同様に、薬学的に許容される塩、プロドラッグ、及びそれの他の誘導体である。【選択図】図１
2017513852.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）の化合物であって、式（I）
【化１６】
2017513852.tif 000024
R １は 、独立して、Ｈ、Ｃ１−６のアルキル、アリール−Ｃ１−６のアルキル、Ｃ１−６のアルキル−アリール、またはアリールであり、
Ｒ２は、独立してＨ、Ｃ１−６のアルキル、アリール−Ｃ３−６分枝アルキルを含むＣ１−６のアルキル、Ｃ１−６のアルキル−アリール、アリール、Ｃ１−６のアルキルグアニジン、Ｃ１−６のアルキルアミノ、Ｃ１−６のアルキル−Ｓ−Ｃ１−６のアルキル、Ｃ１−６のアルキルチオール、Ｃ１−６のアルキルヒドロキシ、Ｃ１−６のアルキルアミド、Ｃ１−６のアルキルフェノキシ、Ｃ１−６のアルキルカルボキシヘテロアリール、及びアリール環が本明細書中で定義されるような１から３の置換基Ｚで置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−６のアルキルであり、
Ｒ３は、独立して、少なくとも１つのＲ３がＣｌである条件で、ＨまたはＣｌであり、
Ｒ４は、独立して、少なくとも１つのＲ４が−Ｓ（Ｏ）ｘ−Ｒ１である条件で、Ｈまたは−Ｓ（Ｏ）ｘ−Ｒ１であり、
Ｚは、（シクロアルキルを含む）Ｃ１−８のアルキル、低級アルケニル（Ｃ２−６）、低級アルキニル（Ｃ２−６）、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシカルボニル、カルボキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）、ハロアルキル、-ＯＲ '、− ＮＲ'Ｒ”、ヒドロキシ、ヒドロキシ−Ｃ１−６のアルキル、アルコキシアルキル（Ｃ２−８）、アルコキシカルボニル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、 −Ｃ２Ｒ'、−ＳＲ'、−Ｎ３、−Ｃ（＝ Ｏ）ＮＲ'Ｒ”、 −ＮＲ'Ｃ（＝ Ｏ）Ｒ ”、−Ｃ（＝ Ｏ）Ｒ'、−Ｃ（＝ Ｏ）ＯＲ'、−ＯＣ （＝ Ｏ）Ｒ'、−ＯＣ （＝ Ｏ）ＮＲ'Ｒ”、−ＮＲ'Ｃ（＝ Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ'、−ＳＯ２ＮＲ'Ｒ ”、−ＮＲ'ＳＯ２Ｒ”、Ｎ（Ｒ'）２、ＳＲ' 、ＯＣＯＲ'、Ｎ（ＣＯＲ'）R '、Ｎ（ＣＯＲ'）ＣＯＲ'、及びＳＣＯＲ'、から選択され、
各Ｒ 'およびＲ”は、独立して、Ｈ、低級アルキル（Ｃ１−６）、低級ハロアルキル（Ｃ１−６）、低級アルコキシ（Ｃ１−６）、低級アルケニル（Ｃ２−６）、低級アルキニル（Ｃ２−６）、低級シクロアルキル（Ｃ３−６）、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アルキルアリール、ベンジルのようなアリールアルキル（Ｃ１−６）であり、または二つのＲ 'が同じ窒素原子に存在する場合、それらは一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される０または１つのヘテロ原子を含むアルキル環（Ｃ３−６）を形成することができ、Ｒ '基は、上記で定義される、例えば、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、及びアルコキシアルキルのような１つ以上の置換基で置換されることができ、
ｊは０〜４で、ｘは０〜２である前記式（I）の化合物。
【請求項２】
次式の化合物であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｚ，Ｒ'、Ｒ”、ｊ及びｘは式（I）に関して定義されたとおりである、請求項１記載の前記化合物。
【化１７】
2017513852.tif 000025
【請求項３】
前記化合物が、Ｒ−またはＳ−立体配置、またはそのラセミまたはジアステレオマー混合物を含む，それらの混合物の形態である、請求項１記載の前記化合物。
【請求項４】
前記Ｒ２置換基がフェニルまたは本明細書で定義される置換基Ｚの一つ以上で置換されたフェニルである、請求項１記載の前記化合物。
【請求項５】
前記Ｒ１置換基の１，２、または３個が−ＣＨ３である、請求項１記載の前記化合物。
【請求項６】
各Ｒ１が−ＣＨ３及び前記Ｒ２置換基の両方が、フェニルまたは本明細書で定義される置換基Ｚの一つ以上で置換されたフェニルである、請求項１記載の前記化合物。
【請求項７】
次式の１つを有する、請求項１記載の化合物、または、薬学的に許容される塩またはそのプロドラッグ。
【化１８】
2017513852.tif 000026
【化１９】
2017513852.tif 000027
【化２０】
2017513852.tif 000028
【化２１】
2017513852.tif 000029
【請求項８】
次式の１つを有する、請求項１記載の化合物、または、薬学的に許容される塩またはそのプロドラッグ。
【化２２】
2017513852.tif 000030
【化２３】
2017513852.tif 000031
【化２４】
2017513852.tif 000032
【化２５】
2017513852.tif 000033
【請求項９】
請求項１〜８の任意の化合物、または薬学的に許容される塩またはそのプロドラッグ、及び薬学的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１０】
抗ＨＣＶ活性を有する１、２、または３個の追加の化合物をさらに含む、請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
その治療を必要とする患者に、請求項１〜８の任意の化合物の有効量を投与することを含む、ＨＣＶに感染した宿主を治療するための方法。
【請求項１２】
その予防を必要とする患者に、請求項１〜８の任意の化合物の予防有効量を投与することを含む、ＨＣＶの感染を予防するための方法。
【請求項１３】
その治療を必要とする患者に、請求項１〜８の任意の化合物の有効量を投与することを含む、宿主におけるＨＣＶ感染の生物学的活性を減少させる方法。
【請求項１４】
１、２、または３個の他の抗ＨＣＶ剤（複数可）と組み合わせて、薬学的に許容される担体中の請求項１〜８の任意の化合物の有効量を投与することを含む、ＨＣＶに感染した宿主を治療するための方法。
【請求項１５】
その予防を必要とする患者に、１、２、または３個の他の抗ＨＣＶ剤（複数可）と組み合わせて、薬学的に許容される担体中の請求項１〜８の任意の化合物の防有効量を投与することを含む、ＨＣＶの感染を予防するための方法。
【請求項１６】
ＨＣＶに感染した宿主を治療するための薬剤の調製における、請求項１〜８の任意の化合物の使用。
【請求項１７】
ＨＣＶの感染を予防するための薬剤の調製における、請求項１〜８の任意の化合物の使用。
【請求項１８】
宿主におけるＨＣＶ感染の生物学的活性を減少させるための薬剤の調製における、請求項１〜８の任意の化合物の使用。
【請求項１９】
ＨＣＶに感染した宿主を治療するための薬剤の調製において、前記薬剤がさらに１、２、または３個の他の抗ＨＣＶ剤（複数可）を含む、請求項１〜８の任意の化合物の使用。
【請求項２０】
ＨＣＶの感染を予防するための薬剤の調製において、前記薬剤がさらに１、２、または３個の他の抗ＨＣＶ剤（複数可）を含む、請求項１〜８の任意の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染を治療または予防するための化合物、方法及び組成物に関する。より具体的には、本発明は、具体的に置換された芳香族化合物、薬学的に許容される塩、またはそれらの他の誘導体、及びＨＣＶ感染症の治療におけるそれらの使用を記載している これらの化合物の大部分は、ＨＣＶ ＮＳ５Ａリンタンパク質を標的とする。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、世界中の１億８０００万人以上を感染させてきた。３００万人〜４００万人が毎年新たに感染し、その７０％が慢性肝炎を発症すると推定されている。ＨＣＶは、すべての肝癌例の５０から７６パーセント、及び先進国のすべての肝移植の３分の２の原因である。標準的な治療[ペグ化インターフェロンα+リバビリン（ヌクレオシドアナログ）]は、患者５０〜６０％においてのみ有効であり、重大な副作用と関連している。したがって、新たなＨＣＶ薬に対する緊急なニーズがある。
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルスゲノムは、ヌクレオカプシド及び脂質エンベロープに囲まれたプラス鎖ＲＮＡを含み、９．６ ｋｂのリボヌクレオチドから成り、約３０００個のアミノ酸の大きいポリペプチドをコードする単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＰ）エンコーディングを有する（ＤｙｍｏｃｋらのＡｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ２０００、１１、７９）。熟成後、このポリペプチドは、構造的および非構造（ＮＳタンパク質を産生するために、細胞及びウイルスのプロテアーゼによって少なくとも１０のタンパク質に切断される。ＨＣＶの場合、成熟非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、およびＮＳ５Ｂ）の生成は、２つのウイルスプロテアーゼにより行われる。すなわち、１）そのＮＳ２-ＮＳ３接合部で切断するメタロプロテアーゼ、及び２）ＮＳ３の下流のすべての後続の切断を媒介するＮＳ３（ＮＳ３プロテアーゼ）のＮ末端領域内に含まれるセリンプロテアーゼ）。ＮＳ４Ａタンパク質は、ＮＳ３タンパク質のタンパク質分解効率を高めるように見えるＮＳ４Ａ / ＮＳ３複合体形成を含む複数の機能を果たすように見える。ＮＳ５Ｂ（また、ＨＣＶポリメラーゼと呼ぶ）は、ポリメラーゼ活性を有し、鋳型となる一本鎖ウイルスＲＮＡゲノムからの二本鎖ＲＮＡの合成に関与している。ＮＳ５Ａは、複製複合体の構成要素として、ＨＣＶの複製を調節する非構造の５６−５８ｋＤａのタンパク質である。ＮＳ５Ａは細胞性タンパク質キナーゼによって高度にリン酸化され、リン酸化部位は、ＨＣＶ遺伝子型間で保存されている（Ｋａｔｚｅら２００１; Ｋｉｍら、１９９９）。
【０００４】
選択的にＨＣＶ複製を阻害するための新規の抗ウイルス戦略の発見は、 ＨＣＶの伝播に対する便利な細胞培養モデルの欠如によって長い間妨げられてきた（"Ｒｅｃｅｎｔ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ Ｍｏｎｏｓｐｈａｔｅ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ａｓ Ａｎｔｉ−ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ  Ｖｉｒｕｓ Ａｇｅｎｔｓ" Ｂｏｂｅｃｋ, Ｄ. Ｒ.; Ｃｏａｔｓ， Ｓ. Ｊ.; Ｓｃｈｉｎａｚｉ, Ｒ.Ｆ. Ａｎｔｉｖｉｒ. Ｔｈｅｒ. ２０１０;Ｂｏｏｋ Ｃｈａｐｔｅｒ: "Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ:Ｔｈｅ Ｃａｓｅ  ｏｆ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ  Ｖｉｒｕｓ．" Ｒａｙｍｏｎｄ  Ｆ.Ｓｃｈｉｎａｚｉ, Ｓｔｅｖｅｎ Ｊ. Ｃｏａｔｓ, Ｌｅｄａ Ｃ. Ｂａｓｓｉｔ, Ｊｏｈａｎ Ｌｅｎｎｅｒｓｔｒａｎd, Ｊａｍｅｓ Ｈ. Ｎｅｔｔｌｅｓ, ａｎｄ Ｓｅｌｗｙｎ Ｊ. Ｈｕｒｗｉｔｚ  ｉｎ: Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｖｏｌ. １８９, ２５−５１: Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ;Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ: Ｈａｎｓ−Ｇｅｏｒｇ Ｋｒａｕｓｓｌｉｃｈ ａｎｄ Ｒａｌｆ Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ （登録商標）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｂｅｒｌｉｎ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ ２００９)。このハードルは１９９９年にＨＣＶレプリコンシステムの確立で初めて克服された。（Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ, Ｒ., Ｎａｔ. Ｒｅｖ. Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ. ２００２,１,９１１−９１６ ａｎｄ Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ, Ｒ., Ｊ. Ｈｅｐａｔｏｌ.２００５, ４３, ２１０−２１６) ａｎｄ, ｉｎ ２００５, ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｒｏｂｕｓｔ ＨＣＶ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｏｄｅｌｓ（Ｗａｋｉｔａ, Ｔ.,ら , Ｎａｔ.Ｍｅｄ. ２００５, １１, ７９１−６; Ｚｈｏｎｇ, Ｊ., ら,Ｐｒｏｃ. Ｎａｔｌ.Ａｃａｄ. Ｓｃｉ. Ｕ．Ｓ．Ａ. ２００５, １０２, ９２９４−９; Ｌｉｎｄｅｎｂａｃｈ,Ｂ.Ｄ., ら, Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００５, ３０９, ６２３−６）。
【０００５】
特にＨＣＶ及び薬剤耐性ＨＣＶを治療するために、これらの薬剤を使用して、新しい抗ウイルス剤、これらの薬剤を含む組成物、及びこれらの薬剤を使用する治療方法を提供することが有利である。本発明は、そのような薬剤、組成物及び方法を提供する。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
本発明は、宿主におけるＨＣＶ感染を治療または予防するための化合物、方法及び組成物を提供する。本方法は、感染を治療または予防するための本明細書に記載される少なくとも１つの化合物の治療上または予防上有効な量、またはＨＣＶ感染の生物学的活性を減少させるのに十分な量を投与することを含む。医薬組成物は、ＨＣＶに感染した宿主を治療するために、薬学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせて、本明細書に記載の化合物の１つ以上を含む。これらの化合物は、ＨＣＶのヌクレオシド及び非ヌクレオシド阻害剤と組み合わせて使用することができる。本製剤はさらに、少なくとも１つの他の治療薬を含むことができる。また、本発明は、このような化合物を調製するためのプロセスを含む。
【０００７】
一実施形態では、活性化合物は、式（I）のものである。
【化１】
2017513852.tif 000003
Ｒ１は、独立して、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、アリール−Ｃ１−６のアルキル、Ｃ１−６のアルキル−アリール、またはアリールであり、
Ｒ２は、独立してＨ、Ｃ１−６のアルキル、アリール−Ｃ３−６分枝アルキルを含むＣ１−６のアルキル、Ｃ１−６のアルキル−アリール、アリール、Ｃ１−６のアルキルグアニジン、Ｃ１−６のアルキルアミノ、Ｃ１−６のアルキル−ＳＣ１−６のアルキル、Ｃ１−６のアルキルチオール、Ｃ１−６のアルキルヒドロキシ、Ｃ１−６のアルキルアミド、Ｃ１−６のアルキルフェノキシ、Ｃ１−６のアルキルカルボキシヘテロアリール、及びアリール環が本明細書中で定義されるような１から３の置換基Ｚで置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ６のアルキルであり、
Ｒ３は、独立して、少なくとも１つのＲ３がＣｌである条件で、ＨまたはＣｌであり、
Ｒ４は、独立して、少なくとも１つのＲ４が−Ｓ（Ｏ）ｘ−Ｒ１である条件で、Ｈまたは−Ｓ（Ｏ）ｘ−Ｒ１であり、
Ｚは、（シクロアルキルを含む）Ｃ１−８のアルキル、低級アルケニル（Ｃ２−６）、低級アルキニル（Ｃ２−６）、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシカルボニル、カルボキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）、ハロアルキル、-ＯＲ '、− ＮＲ'Ｒ”、ヒドロキシ、ヒドロキシ−Ｃ１−６のアルキル、アルコキシアルキル（Ｃ２−８）、アルコキシカルボニル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、 −Ｃ２Ｒ'、−ＳＲ'、−Ｎ３、−Ｃ（＝ Ｏ）ＮＲ'Ｒ”、 −ＮＲ'Ｃ（＝ Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝ Ｏ）Ｒ'、−Ｃ（＝ Ｏ）ＯＲ'、−ＯＣ （＝ Ｏ）Ｒ'、−ＯＣ （＝ Ｏ）ＮＲ'Ｒ”、−ＮＲ'Ｃ（＝ Ｏ）ＯＲ”、−ＳＯ２Ｒ'、−ＳＯ２ＮＲ'Ｒ”、−ＮＲ'ＳＯ２Ｒ”、Ｎ（Ｒ'）２、ＳＲ' 、ＯＣＯＲ'、Ｎ（ＣＯＲ'）Ｒ '、Ｎ（ＣＯＲ'）ＣＯＲ'、及びＳＣＯＲ'、から選択される。
【０００８】
各Ｒ 'およびＲ”は、独立して、Ｈ、低級アルキル（Ｃ１−６）、低級ハロアルキル（Ｃ１−６）、低級アルコキシ（Ｃ１−６）、低級アルケニル（Ｃ２−６）、低級アルキニル（Ｃ２−６）、低級シクロアルキル（Ｃ３−６）、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アルキルアリール、ベンジルのようなアリールアルキル（Ｃ１−６）であり、または二つのＲ 'が同じ窒素原子に存在する場合、それらは一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される０または１つのヘテロ原子を含むアルキル環（Ｃ３−６）を形成することができ、Ｒ '基は、上記で定義される、例えば、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、及びアルコキシアルキルのような１つ以上の置換基で置換されうる。
ｊは０−４で、ｘは０−２である。
【０００９】
本明細書に記載の化合物は、Ｒ−またはＳ−配置、またはそのラセミまたはジアステレオマー混合物を含む，それらの混合物の形態でありうる。
【００１０】
一実施形態では、１つまたは両方のＲ２置換基は、フェニル基または本明細書に定義される一つ以上の置換基Ｚで置換されたフェニル基である。
【００１１】
一実施形態では、Ｒ１置換基のうちの１つ、２つ、または３つが−ＣＨ３である。
【００１２】
一実施形態では、各Ｒ１は−ＣＨ３であり、両方のＲ２置換基はフェニル基または本明細書に定義される一つ以上の置換基Ｚで置換されたフェニル基である。
【００１３】
式（I）の化合物のサブセットは、式（IＡ）として以下に提供される。
【化２】
2017513852.tif 000004
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｚ、Ｒ’、Ｒ”、ｊ、及びｘは式（I）に関して定義されたものと同様である。
【００１４】
代表的な化合物は以下に示すものを含み、及びその−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３及び−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３類似体と同様にそのすべての他のジアステレオマー、を含む。
【化３】
2017513852.tif 000005
【００１５】
さらなる代表的な化合物は、以下の式のうちの１つを有し、及びそれの薬学的に許容できる塩及びプロドラックを有する。
【化４】
2017513852.tif 000006
【化５】
2017513852.tif 000007
【００１６】
本化合物は、例えば、従来のリバビリン/ペガシス療法を用いる併用療法において使用することができる。代表的な併用療法での使用のための抗ＨＣＶ剤としては、限定されるものではないが、ペグ化インターフェロン（ペガシス）とリバビリン、ＩＤＸ−３７５及びＩＤＸ−１８４（Ｉｄｅｎｉｘ），ＰＳＩ−７８５１及びＰＳＩ−７９７７（Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ）ダノプレビル（ＩｎｔｅｒＭｕｎｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ），ＲＧ７１２８（Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ），ＩＡＮＡ５９８（Ａｎａｄｙｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ），ＴＭＮ−１９１（Ｒ７２２７）のようなポリメラーゼ阻害薬との組み合わせ、ＲＧ７１２８とＲＧ７２２７（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ及びＩｎｔｅｒＭｕｎｅ），ＡＢＴ−０７２（Ａｂｂｏｔｔ），ＶＸ−９１６，ＶＸ−７５９，ＶＸ−２２２及びＶＸ−５００（Ｖｅｒｔｅｘ），Ｆｉｌｉｂｕｖｉｒ（ＰＦ−００８６８５５４）（Ｐｆｉｚｅｒ），ＧＳ９１９０（Ｇｉｌｅａｄ）の組合せで、単独で、またはリトナビル、及びＢｏｃｅｐｒｅｖｉｒ（ＳＣＨ５０３０３４）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｐｌｏｕｇｈ），ＢＩＬＮ-２０６１, Ｔｅｌａｐｒｅｖｉｒ(Ｖｅｒｔｅｘ), ＡＣＨ-１６２５(Ａｃｈｉｌｌｉｏｎ), ＧＳ−９２５６ (Ｇｉｌｅａｄ),ＢＩ ２０１３３５ (Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｐｈａｒｍａ), Ｖａｎｉｐｒｅｖｉｒ(ＭＫ-７００９) (Ｍｅｒｃｋ), ＳＣＨ９００５１８ (Ｎａｒｌａｐｒｅｖｉｒ) (Ｓｃｈｅｒｉｎｇ /Ｍｅｒｃｋ), ＴＭＣ４３５(Ｍｅｄｉｖｉｒ／Ｔｉｂｏｔｅｃ)のようなセリンプロテアーゼ阻害薬のようなブースターとともに使用されるもの、を含む。セリンプロテアーゼ阻害剤のさらなる例は、例えば、Ｒｅｉｓｅｒ and Ｔｉｍｍ，"Ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ａｓ ａｎｔｉ−ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ,"ＥｘｐｅｒｔＲｅｖｉｅｗ ｏｆ  Ａｎｔｉ−ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ Ｔｈｅｒａｐｙ, ７（５）：５３７−５４７ （Ｊｕｎｅ ２００９）に提供されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００１７】
本発明は、以下の詳細な説明を参照してよりよく理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】化合物３０の１３ＣＮＭＲスペクトルである。
【図２】化合物３０の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【発明の詳細な説明】
【００１９】
本明細書に記載の化合物は、細胞ベースのアッセイにおけるＨＣＶに対する阻害活性を示す。 したがって、本化合物は、宿主におけるＨＣＶを治療または予防するために使用することができ、またはウイルスの生物学的活性を低下させることができる。 ホストは、ＨＣＶに感染した哺乳類、特に、ヒトでありうる。本方法は、本明細書に記載の化合物の一つ以上の有効量を投与することを含む。
【００２０】
本明細書に記載される１つ以上の化合物を含む医薬製剤は、薬学的に許容される担体または賦形剤と組み合わせでもまた、本明細書に開示されている。 一実施形態では、製剤は、本明細書に記載の少なくとも１つの化合物及び少なくとも１つのさらなる治療剤を含む。
【００２１】
本発明は、以下の定義を参照してより良く理解されるであろう。
【００２２】
I．定義
「独立して」という用語は、独立に適用される変数は、適用から適用に独立して変化することを示すために本明細書中で使用される。 したがって、Ｒ”ＸＹＲ”のような化合物中のＲ”は、「独立して炭素又は窒素」であり、両方のＲ”は炭素でありうるし、両方のＲ”が窒素であってもよく、または一方のＲ”が炭素であり、他方のＲ”が窒素であってもよい。
【００２３】
本明細書で用いられる用語「鏡像異性的に純粋な」は、少なくとも約９５％、好ましくは、約９７％、９８％、９９％、またはその化合物の単一の鏡像異性体が１００％を含む化合物の組成物を意味する。
【００２４】
本明細書で使用する場合、用語「実質的に含まない」、または「実質的非存在下では」、は少なくとも８５〜９０重量％、好ましくは９５〜９８重量％、さらに好ましくは９９〜１００重量％のその化合物の指定された鏡像異性体を含む化合物の組成物を意味する。 好ましい実施形態において、本明細書に記載の化合物は、その他の鏡像異性体を実質的に含まない。
【００２５】
同様に、「単離された」という用語は、少なくとも８５〜９０重量％、好ましくは９５〜９８重量％、さらにより好ましくは９９〜１００重量％の化合物、他の化学種または鏡像異性体を含む残りものを含む化合物の組成物を意味する。
【００２６】
特に指定のない限り、本明細書で使用される用語「アルキル」は、アルキル基に置換基がある場合及びない場合を含めて、飽和直鎖、分岐、または環状、第一級、第二級、または第三級の炭化水素を意味する。 アルキル基は、置換されていなければ反応を干渉しない、またはプロセスにおいて改善を提供する任意の部分で随意的に置換することができ、これらの部分は以下のものに限定されるわけではないが、ハロ、ハロアルキル、ヒドロキシル、カルボキシル、アシル、アリール、アシルオキシ、アミノ、アミド、カルボキシル誘導体、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、チオール、イミン、スルホニル、スルファニル、スルフィニル、スルファモニル、エステル、カルボン酸、アミド、ホスホニル、ホスフィニル、ホスホリル、ホスフィン、チオエステル、チオエーテル、酸ハロゲン化物、無水物、オキシム、ヒドロジン、カルバメート、ホスホン酸、ホスホネート、を含み、保護されていない、または必要に応じて保護されていて良く、例えば、Ｇｒｅｅｎｅ,らの「 Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」, Ｊｏｈｎ ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ,Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ, １９９１に教示されているように、当業者に公知であり、参照により本明細書に組み込まれる。具体的にはＣＦ 3、ＣＨ 2 ＣＦ３を含む。
【００２７】
本文で、用語Ｃ（アルキル範囲）が使用されるときはいつも、この用語は、独立して、具体的かつ個別に提示されているかのように、そのクラスの各メンバーを含む。用語「アルキル」は、Ｃ１〜Ｃ２２のアルキルグループを含み、用語「低級アルキル」はＣ１〜Ｃ６のアルキルグループを含む。関連するアルキルラジカルは、接尾辞「―ａｎｅ」を接尾辞「 ―ｙｌ」と置き換えることによって命名されていることは当業者に理解される。
【００２８】
本明細書で使用される場合、「架橋アルキル」はビシクロまたはトリシクロアルカン、例えば、２：１：１ビシクロヘキサンを意味する。
【００２９】
本明細書で使用される「スピロアルキル」は、単一の（第四級）炭素原子に結合している２つの環を意味する。
【００３０】
用語「アルケニル」は、１つ以上の二重結合を含有している限り、直鎖又は分枝鎖の不飽和の非環式炭化水素基を意味する。本明細書で開示されるアルケニル基は、アルキル部分の置換基に関して記述したものに限定されるものではないが、これらを含む、反応プロセスに悪影響を与えない任意の部分で随意的に置換することができる。アルケニル基の非限定的な例は、エチレン、メチルエチレン、イソプロピリデン、１，２-エタン− ジイル、１，１-エタン− ジイル、１，３-プロパン-ジイル、１，２-プロパンジイル、１，３-ブタン - ジイル、１，４-ブタン - ジイルを含む。
【００３１】
用語「アルキニル」は、１つ以上の三重結合を含有している限り、直鎖又は分枝鎖の不飽和の非環式炭化水素基を意味する。アルキニル基は、アルキル部分の置換基に関して記述したものに限定されるものではないが、これらを含む、反応プロセスに悪影響しない任意の部分で随意的に置換することができる。適切なアルキニル基の非限定的な例は、エチニル、プロピニル、ヒドロキシプロピニル、ブチン−１−イル、ブチン−２−イル、ペンチン−１−イル、ペンチン−２−イル、４− メトキシペンチンー２−イル、３−メチルブチン−１−イル、ヘキシン−１−イル、ヘキシン−２−イル、及びヘキシン−３−イル、３，３ジメチルブチン−１−イル基を含む。
【００３２】
用語「アルキルアミノ」又は「アリールアミノ」は、それぞれ１つまたは２つのアルキルまたはアリール置換基を有するアミノ基を意味する。
【００３３】
本明細書中で使用される「保護された」は、別途定義されない限り、そのさらなる反応を防止するため、またはその他の目的のために、酸素、窒素、またはリン原子に付加される官能基を意味する。多種多様な酸素および窒素の保護基は有機合成の当業者に公知であり、例えば、上記ＧｒｅｅｎｅらのＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、に記載されている。
【００３４】
用語「アリール」は、単独または組み合わせて、そのような環がペンダント方式で結合しうる、または縮合しうる、１、２または３個の環を含む炭素環式芳香族系を意味する。アリール基の非限定的な例としては、フェニル、ビフェニル、またはナフチル、または芳香族環から水素を除去した後に残る他の芳香族基が挙げられる。アリールという用語は、置換及び非置換の部分を含む。 アリール基は、アルキル部分の置換基に関して記述したものに限定されるものではないが、これらを含む、反応プロセスに悪影響しない任意の部分で随意的に置換することができる。置換アリールの非限定的な例には、ヘテロアリールアミノ、Ｎ−アリール−Ｎ−アルキルアミノ、Ｎ−ヘテロアリール-Ｎ−アルキルアミノ、ヘテロアラルコキシ、アリールアミノ、アラルキルアミノ、アリールチオ、モノアリールアミドスルフォニル、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールチオ、ヘテロアリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、ヘテロアリールスルホニル、アロイル、ヘテロアロイル、アラルカノイル、ヘテロアラルカノイル、ヒドロキシアラルキル、ヒドロキシヘテロアラルキル、ハロアルコキシアルキル、アリール、アラルキル、アリールオキシ、アラルコキシ、アリールオキシアルキル、飽和ヘテロシクリル、部分的に飽和のヘテロシクリル、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールオキシアルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアルケニル、及びヘテロアリールアルケニル、カルボアラルコキシがある。
【００３５】
用語「アルカリール」または「アルキルアリール」は、アリール置換基を有するアルキル基を意味する。 用語「アラルキル」または「アリールアルキル」は、アルキル置換基を有するアリール基を意味する。
【００３６】
本明細書で使用する用語「ハロ」は、クロロ、ブロモ、ヨード及びフルオロを含む。
【００３７】
用語「アシル」は、エステル基の非カルボニル部分が、直鎖状、分枝状、もしくは環状のアルキルもしくは低級アルキル、メトキシメチルを含むがこれらに限定されないアルコキシアルキル、ベンジルを含むがこれらに限定されないアラルキル、フェノキシメチルのようなアリールオキシアルキル、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）で随意的に置換されたフェニルを含むがこれらに限定されないアリール、アルキル（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４を含むがこれらに限定されない）またはアルコキシ（Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４を含むがこれらに限定されない）、メタンスルフォニル含むがこれらに限定されないアルキルまたはアラルキルスルフォニルのようなスルホン酸エステル、モノ、ジまたはトリリン酸エステル、トリチルまたはモノメトキシトリチル、置換ベンジル、トリアルキルシリル（例えば、ジメチル-t-ブチルシリル）、またはジフェニルメチルシリルから選択されるカルボン酸エステルを意味する。エステル中のアリール基は最適にはフェニル基を含む。用語「低級アシル」は、非カルボニル部分が低級アルキルであるアシル基を意味する。
【００３８】
用語「アルコキシ」及び「アルコキシアルキル」は、メトキシ基等のアルキル部分を有する直鎖状または分岐状のオキシ含有基を包含する。 用語「アルコキシアルキル」は、またアルキル基に結合した１つ以上のアルコキシ基を有する、即ちモノアルコキシアルキル及びジアルコキシラジカルを形成するアルキル基を包含する。「アルコキシ」基は、さらに、「ハロアルコキシ」基を提供するために、例えばフルオロ、クロロまたはブロモなどの１つ以上のハロ原子で置換されうる。 このような基の例としては、フルオロメトキシ、クロロメトキシ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、フルオロエトキシ、テトラフルオロエトキシ、ペンタフルオロエトキシ、及びフルオロプロポキシが含まれる。
【００３９】
用語「アルキルアミノ」は、アミノ基に結合する、１つまたは２つのアルキル基をそれぞれ含む「モノアルキルアミノ」及び「ジアルキルアミノ」を意味する。用語のアリールアミノは、アミノ基に結合する、１つまたは２つのアリール基をそれぞれ含む「モノアリールアミノ」及び「ジアリールアミノ」を意味する。用語「アラルキルアミノ」は、アミノ基に結合するアラルキル基を包含する。用語のアラルキルアミノは、アミノ基に結合する、１つまたは２つのアラルキル基をそれぞれ含む「モノアラルキルアミノ」及び「ジアラルキルアミノ」を意味する。用語のアラルキルは、さらにアミノ基に結合した１つのアラルキル基及び１つのアルキル基を含む「モノアラルキルモノアルキルアミノ」を意味する。
【００４０】
本明細書で使用する用語「ヘテロ原子」は、酸素、硫黄、窒素及びリンを意味する。
【００４１】
本明細書で使用する用語「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」は、芳香環中に少なくとも１つの硫黄、酸素、窒素またはリンを含んでいる芳香族を意味する。
【００４２】
用語「複素環」、「ヘテロシクリル」、及びシクロヘテロアルキルは、酸素、硫黄、窒素、またはリンのようなヘテロ原子が少なくとも１つ環中に存在する、非芳香族環状基を意味する。
【００４３】
ヘテロアリールおよび複素環基の非限定的な例には、フリル、フラニル、ピリジル、ピリミジル、チエニル、イソチアゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ピラジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、キノリル、イソキノリル、ベンゾチエニル、イソベンゾフリル、ピラゾリル、インドリル、イソインドリル、ベンゾイミダゾリル、プリニル、カルバゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、イソオキサゾリル、ピロリル、キナゾリニル、シンノリニル、フタラジニル、キサンチニル、ヒポキサンチニル、チオフェン、フラン、ピロール、イソピロール、ピラゾール、イミダゾール、１，２，３−トリアゾール、１，２，４−トリアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、チアゾール、イソチアゾール、ピリミジンまたはピリダジン、及びプテリジニル、アジリジン、チアゾール、イソチアゾール、１，２，３−オキサジアゾール、チアジン、ピリジン、ピラジン、ピペラジン、ピロリジン、オキサジラン、フェナジン、フェノチアジン、モルホリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピラジニル、キノキサリニル、キサンチニルヒポキサンチニル、プテリジニル、５−アザシチジニル、５−アザウラシル、トリアゾロルピリジニル、イミダゾロピリジニル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリミジニル、アデニン、Ｎ６ -アルキルプリン、Ｎ ６−ベンジルプリン、Ｎ６ −ハロプリン、Ｎ６−ビニプリン、Ｎ６ −アセチレニックプリン、Ｎ６ −アシルプリン、Ｎ６ −ヒドロキシアルキルプリン、Ｎ６ -チオアルキルプリン、チミン、シトシン、６−アザピリミジン、２− メルカプトピリミジン、ウラシル、Ｎ５−アルキルピリミジン、Ｎ５−ベンジルピリミジン、Ｎ５−ハロピリミジン、Ｎ５−ビニルピリミジン、Ｎ５-アセチレニックピリミジン、Ｎ５ -アシルピリミジン、Ｎ５ -ヒドロキシプリン、およびＮ６ -チオアルキルプリン、及びイソオキサゾリルがある。芳香族複素環基は、アリールについて上述したように随意的に置換され得る。 複素環または芳香族複素環基は、ハロゲン、ハロアルキル、アルキル、アルコキシ、ヒドロキシ、カルボキシル誘導体、アミド、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノから選択される１つ以上の置換基で随意的に置換されうる。所望に応じてヘテロ芳香族は、部分的または完全に水素化することができる。 非限定的な例として、ジヒドロピリジンはピリジンの代わりに使用することができる。 複素環またはヘテロアリール基上の酸素及び窒素を含む官能基は、必要または所望に応じて保護することができる。 適切な保護基は当業者に周知であり、トリメチルシリル、ジメチルヘキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、及びｔ−ブチルジフェニルシリル、トリチルまたは置換トリチル、アルキル基、アセチル及びプロピオニル、メタンスルホニル、及びｐ− トルエンスルフォニルなどのアシル基が挙げられる。 複素環または複素環式芳香族基は、アリールについて上記したものに限定されるものではないがそれらを含む、反応に悪影響を与えない任意の部分で置換することができる。
【００４４】
本明細書で用いる用語「宿主」は、その中でウイルスが複製することができる単細胞又は多細胞生物を意味するものであり、細胞株及び動物を含むがこれらに限定されなく、好ましくは、ヒトである。あるいは、宿主はウイルスゲノムの一部を携帯することができ、その複製または機能は本発明の化合物によって変化させることができる。 宿主という用語は、具体的には、感染した細胞、ウイルスゲノム及び動物のすべてまたは一部でトランスフェクトされた細胞、及び動物、特に霊長類（チンパンジーを含むがこれらに限定されない）及びヒトを意味する。 本発明の大部分の動物適用において、宿主はヒト患者である。 しかし、特定の適応症には、獣医学的用途は、明らかに本発明により企図される（（例えば、チンパンジーの治療に使用するためのような）。
【００４５】
用語「ペプチド」は、１つのアミノ酸のカルボキシル基により他のアミノ基に結合された２つから１００のアミノ酸を含有する天然または合成化合物を意味する。
【００４６】
用語「薬学的に許容される塩またはプロドラッグ」は、患者への投与の際に、本化合物を提供する任意の薬学的に許容される形態（例えば、エステルのような）化合物を記述するために、本明細書を通して使用される。 薬学的に許容される塩は、薬学的に許容される無機または有機の塩基及び酸から誘導されるものが挙げられる。 適切な塩としては、カリウム及びナトリウムなどのアルカリ金属、カルシウム及びマグネシウムなどのアルカリ土類金属、製薬分野で公知の多数の他の酸から誘導されるものが挙げられる。 薬学的に許容されるプロドラッグは、本発明の化合物を形成するために、宿主において代謝される化合物、例えば、加水分解または酸化される化合物を意味する。 プロドラッグの典型的な例は、活性化合物の官能部分に生物学的に不安定な保護基を有する化合物が挙げられる。 プロドラッグは、活性化合物を生成するために、酸化、還元、アミノ化、脱アミノ化、ヒドロキシル化、脱ヒドロキシル化、加水分解、脱水、アルキル化、脱アルキル化、アシル化、脱アシル化、リン酸化または脱リン酸化されうる化合物を含む。本発明の化合物のプロドラッグ形態は、抗ウイルス活性を有することができ、そのような活性を示す化合物を形成するために代謝されうる、またはその両方である。
【００４７】
ＩＩ．活性化合物
一実施形態では、活性化合物は、式（I）である。
【化６】
2017513852.tif 000008
R １は 、独立して、Ｈ、Ｃ１−６のアルキル、アリール−Ｃ１−６のアルキル、Ｃ１−６のアルキル−アリール、またはアリールであり、
Ｒ２は、独立してＨ、Ｃ１−６のアルキル、アリール−Ｃ３−６分枝アルキルを含むＣ１−６のアルキル、Ｃ１−６のアルキル−アリール、アリール、Ｃ１−６のアルキルグアニジン、Ｃ１−６のアルキルアミノ、Ｃ１−６のアルキル−Ｓ−Ｃ１−６のアルキル、Ｃ１−６のアルキルチオール、Ｃ１−６のアルキルヒドロキシ、Ｃ１−６のアルキルアミド、Ｃ１−６のアルキルフェノキシ、Ｃ１−６のアルキルカルボキシヘテロアリール、及びアリール環が本明細書中で定義されるような１から３の置換基Ｚで置換されていてもよいヘテロアリール−Ｃ１−６のアルキルであり、
Ｒ３は、独立して、少なくとも１つのＲ３がＣｌである条件で、ＨまたはＣｌであり、
Ｒ４は、独立して、少なくとも１つのＲ４が−Ｓ（Ｏ）ｘ−Ｒ１である条件で、Ｈまたは−Ｓ（Ｏ）ｘ−Ｒ１であり、
Ｚは、（シクロアルキルを含む）Ｃ１−８のアルキル、低級アルケニル（Ｃ２−６）、低級アルキニル（Ｃ２−６）、ヘテロシクリル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルコキシカルボニル、カルボキシ、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）、ハロアルキル、-ＯＲ '、− ＮＲ'Ｒ”、ヒドロキシ、ヒドロキシ−Ｃ１−６のアルキル、アルコキシアルキル（Ｃ２−８）、アルコキシカルボニル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ２、 −Ｃ２Ｒ'、−ＳＲ'、−Ｎ３、−Ｃ（＝ Ｏ）ＮＲ'Ｒ”、 −ＮＲ'Ｃ（＝ Ｏ）Ｒ”、−Ｃ（＝ Ｏ）Ｒ'、−Ｃ（＝ Ｏ）ＯＲ'、−ＯＣ （＝ Ｏ）Ｒ'、−ＯＣ （＝ Ｏ）ＮＲ'Ｒ”、−ＮＲ'Ｃ（＝ Ｏ）ＯＲ "、−ＳＯ２Ｒ'、−ＳＯ２ＮＲ'Ｒ”、−ＮＲ'ＳＯ２Ｒ”、Ｎ（Ｒ'）２、ＳＲ' 、ＯＣＯＲ'、Ｎ（ＣＯＲ'）Ｒ'、Ｎ（ＣＯＲ'）ＣＯＲ'、及びＳＣＯＲ'、から選択される。
【００４８】
各Ｒ 'およびＲ”は、独立して、Ｈ、低級アルキル（Ｃ１−６）、低級ハロアルキル（Ｃ１−６）、低級アルコキシ（Ｃ１−６）、低級アルケニル（Ｃ２−６）、低級アルキニル（Ｃ２−６）、低級シクロアルキル（Ｃ３−６）、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アルキルアリール、ベンジルのようなアリールアルキル（Ｃ１−６）であり、または二つのＲ 'が同じ窒素原子に存在する場合、それらは一緒になって、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される０または１つのヘテロ原子を含むアルキル環（Ｃ３−６）を形成することができ、Ｒ '基は、上記で定義される、例えば、ヒドロキシアルキル、アミノアルキル、及びアルコキシアルキルのような１つ以上の置換基で置換されうる。
ｊは０〜４で、ｘは０〜２である。
【００４９】
本明細書に記載の化合物は、Ｒ−またはＳ−立体配置、またはそのラセミまたはジアステレオマー混合物を含む、それらの混合物の形態でありうる。
【００５０】
一実施形態では、１つまたは両方のＲ２置換基はフェニル基または本明細書に定義される一つ以上の置換基Ｚで置換されたフェニル基である。
【００５１】
一実施形態では、Ｒ１置換基のうちの１つ、２つ、または３つが−ＣＨ３である。
【００５２】
一実施形態では、各Ｒ１は−ＣＨ３であり、両方のＲ２置換基はフェニル基または本明細書に定義される一つ以上の置換基Ｚで置換されたフェニル基である。
【００５３】
式（I）の化合物のサブセットは、式（IＡ）として以下に提供される。
【化７】
2017513852.tif 000009
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｚ、Ｒ’、Ｒ”、ｊ、及びｘは式（I）に関して定義されたものと同様である。
【００５４】
代表的な化合物は以下に示すものを含み、及びその−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３及び−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３類似体と同様にそのすべての他のジアステレオマー、を含む。
【化８】
2017513852.tif 000010
【００５５】
さらなる代表的な化合物は、以下の式のうちの1つを有し、及びそれの薬学的に許容できる塩及びプロドラックを有する。
【化９】
2017513852.tif 000011
【化１０】
2017513852.tif 000012
【化１１】
2017513852.tif 000013
【００５６】
ＩＩＩ．立体異性とポリモーフィズム
本明細書に記載の化合物は、不斉中心を有し、すべての異性体形態が本発明に含まれており、ラセミ体、ラセミ混合物、個々のジアステレオマーまたは鏡像異性体として存在する。キラル中心を有する本発明の化合物は、光学活性及びラセミ体で存在し、かつ単離される。いくつかの化合物は多形性を示しえる。本発明は、本明細書に記載の有用な特性を有する本発明の化合物のラセミ体、光学活性体、多形、または立体異性体、またはそれらの混合物を包含する。光学活性体は、例えば、再結晶技術によるラセミ体の分割により、光学活性出発物質からの合成により、キラル合成により、またはキラル固定相を用いたクロマトグラフィー分離により、または酵素的分割により調製することができる。それぞれの化合物を精製することもでき、それから本明細書に記載の各種化合物を形成するため、その化合物の誘導体を作る、あるいはその化合物自身を精製することもできる。
【００５７】
本化合物の光学活性体は、例えば、再結晶技術によるラセミ体の分割、光学活性出発物質からの合成、キラル合成、またはキラル固定相を用いたクロマトグラフィー分離などに限定するものではないが、これらを含む任意の公知の方法で調製することができる。
【００５８】
光学的に活性な物質を得るための方法の例は、少なくとも以下のものを含む。
I）結晶の物理的分離：個々のエナンチオマーの巨視的結晶が手作業で分離される技術。本技術は個々のエナンチオマーの結晶が存在する場合、すなわち物質が塊であり、結晶が視覚的に区別される場合に使用できる。
ｉｉ）同時結晶化：個々のエナンチオマーがラセミ体の溶液から個々に結晶化され、後者が固体状態で塊の場合にのみ可能な技術。
ｉｉｉ）酵素分割：個々のエナンチオマーと酵素の反応速度が異なるおかげでラセミ体の部分的または完全に分離する技術。
iv）酵素的不斉合成：合成の少なくとも1つの工程が、所望のエナンチオマーの鏡像異性的に純粋な、または富化された合成前駆体を得るために酵素反応を使用する合成技術。
v）化学的不斉合成：所望の鏡像異性体は、キラル触媒またはキラル補助剤を用いて達成することができる生成物に不斉（すなわち、鏡像異性）を生じる条件下で、光学不活性な前駆体から合成される合成技術。
ｖｉ）ジアステレオマー分離：ラセミ体化合物が、個々のエナンチオマーをジアステレオマーに変換する鏡像異性的に純粋な試薬（キラル補助剤）と反応する技術。得られたジアステレオマーは、その後、それらの明確な構造の違いと、所望のエナンチオマーを得るために後で除去されるキラル補助剤のおかげで、クロマトグラフィーまたは結晶化により分離される。
ｖｉｉ）一次及び二次の不斉変換：ラセミ体からのジアステレオマーが所望のエナンチオマーからジアステレオマー溶液中に優位を生じるように平衡化する、または所望のエナンチオマーからのジアステレオマーの優先晶出が、最終的には原理的にすべての物質が所望のエナンチオマーから結晶性のジアステレオマーに変換されるように、平衡を摂動する技術。所望のエナンチオマーはそれから、ジアステレオマーから遊離される。
ｖｉｉｉ）速度論的分割：この技術は、速度条件下で、キラルまたは非ラセミ試薬または触媒とエナンチオマーの不均等な反応速度により、ラセミ体の部分的または完全な分割（または、部分的に分割された化合物のさらなる分割）の達成を意味する。
ｉｘ）非ラセミ前駆体からのエナンチオ特異的合成：所望のエナンチオマーを非キラル出発物質から得られ、ここで、合成の過程で立体化学的完全性がないか、または最小限にしか妥協されない合成技術。
x）キラル液体クロマトグラフィー：ラセミ体のエナンチオマーは、固定相（キラルＨＰＬＣに限定するものではないが、これを含む）との異なる相互作用によって液体移動相中で分離される技術。固定相はキラル材料から作製することができ、または移動相は異なる相互作用を誘発するために追加のキラル物質を含むことができる。
ｘI）キラルガスクロマトグラフィー：ラセミ体が揮発され、エナンチオマーが、固定非ラセミキラル吸着相を含むカラムと気体移動相中の異なる相互作用によって分離される技術。
ｘｉｉ）キラル溶媒による抽出：エナンチオマーが、１つのエナンチオマーの特定のキラル溶媒への優先的溶解によって分離される技術。
ｘｉｉｉ）キラル膜を横切る輸送：ラセミ化合物が薄膜バリアと接触するように配置される技術。バリアは、通常、２つの混和性流体を分離する、１つはラセミ体を含むもの、及び濃度または圧力のような駆動力が膜障バリアを横切る優先輸送を引き起こす。分離は、ラセミ体の一方のエナンチオマーのみを通過させる膜の非ラセミキラル性の結果として起こりうる。
【００５９】
擬似移動床クロマトグラフィーに限定されるものではないが、これを含むキラルクロマトグラフィーは、一実施形態で使用されている。多種多様なキラル固定相が商業的に入手可能である。
【００６０】
ＩＶ．塩またはプロドラッグ製剤
化合物が、安定な非毒性の酸または塩基塩を形成するのに十分に塩基性または酸性である場合は、その薬学的に許容される塩としての化合物の投与が適切でありえる。薬学的に許容される塩の例は、生理学的に許容されるアニオンを形成する酸で形成された有機酸付加塩、例えば、トシル酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、マロン酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、安息香酸塩、アスコルビン酸塩、α−ケトグルタル酸塩及びα−グリセロリン酸塩がある。これらに限定されないが、硫酸塩、硝酸塩、重炭酸塩及び炭酸塩を含む、適切な無機塩もまた形成されうる。
【００６１】
薬学的に許容される塩は、例えば、適当な酸とアミンなどの十分に塩基性の化合物を反応させ、生理学的に許容されるアニオンを与えることによるといった、当技術分野で公知の標準的な手順を用いて得ることができる。 カルボン酸のアルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウムまたはリチウム）またはアルカリ土類金属（例えば、カルシウム）塩もまた作製できる。
【００６２】
プロドラッグは不活性（または有意に活性の低い）形態で投与し、続いて活性代謝物に生体内で代謝される薬理学的物質である。低用量で所望の標的により多くの薬物を取得することは、多くの場合、プロドラッグの使用の根拠であり、一般的により良い吸収、分布、代謝、及び/または排泄（ＡＤＭＥ）特性に起因する。プロドラッグは、消化管からの吸収不良が通常は制限因子である、経口生物学的利用能を改善するために通常設計されている。さらに、プロドラッグ戦略の使用は、意図する標的に対する薬物の選択制を増加することができ、したがってオフターゲット効果の可能性を低減する。
【００６３】
Ｖ．治療法
ＨＣＶまたはその遺伝子断片に感染したヒトを含むがこれらに限定されていない宿主は、薬学的に許容される担体または希釈剤の存在下で、その患者に有効量の活性化合物または薬学的に許容されるプロドラッグまたは塩を投与することによって治療されうる。活性物質は、任意の適切な経路、例えば、経口、非経口、静脈内、皮内、皮下、または局所的に、液体または固体形態で投与することができる。
【００６４】
ＶI．組み合わせまたは交互療法
一実施形態では、本発明の化合物は、ポリメラーゼインヒビター、ＩＭＰＤＨインヒビター、プロテアーゼインヒビター、及び免疫ベースの治療剤から選択される少なくとも１つの他の抗ウイルス剤と一緒に使用することができる。
【００６５】
例えば、ＨＣＶ感染を治療または予防するのに使用されるとき、活性化合物またはそのプロドラッグ、または薬学的に許容される塩は限定されるものではないが、上述の組成物を含むその他の抗ＨＣＶとの組み合わせまたは交互に投与することができる。一般に、交互療法の間は、各薬剤の有効用量が逐次投与されるのに対し、併用療法では、２つ以上の薬剤の有効用量が一緒に投与される。投与量は、当業者に公知の他の因子と同様に、その薬物の吸収、不活性化及び排泄の速度に依存する。投与量の値はまた、緩和すべき状態の重症度によって変化することに留意すべきである。任意の特定の患者について、特定の投薬レジメン及びスケジュールは個々の必要性及び組成物の投与を管理または監督する人の専門的判断に従って、経時的に調整すべきであることを、さらに理解すべきである。
【００６６】
本明細書に記載の化合物と一緒に用いることができる抗ウイルス剤の非制限的な例は、以下の表に記載のものを含む。  
現在臨床開発中の抗C型肝炎化合物の表
【表１】
2017513852.tif 000014
【表２】
2017513852.tif 000015
【００６７】
ＶＩＩＩ．医薬組成物
ＨＣＶまたはその遺伝子断片に感染したヒトを含むがこれらに限定されていない宿主は、薬学的に許容される担体または希釈剤の存在下で、その患者に有効量の活性化合物または薬学的に許容されるプロドラッグまたは塩を投与することによって治療されうる。活性物質は、任意の適切な経路、例えば、経口、非経口、静脈内、皮内、皮下、または局所的に、液体または固体形態で投与することができる。
【００６８】
そのための化合物の好ましい用量は、一日当り患者の体重に関し、約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ、より一般的には約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは約０．５〜約２ｍｇ／ｋｇの範囲にあるであろう。薬学的に許容される塩及びプロドラッグの有効な用量範囲は、送達すべき親化合物の重量に基づいて計算することができる。塩またはプロドラッグ自身が活性を示す場合、有効投与量は、塩またはプロドラッグの重量を用いて、または当業者に公知の他の手段によって、上記のように推定できる。
【００６９】
化合物は、これらに限定されるものではないが、単位剤形当たり活性成分が７〜３００ｍｇ、好ましくは、７０〜１４０ｍｇを含む任意の適切な剤形単位で便利に投与される。５〜３００ｍｇの経口投薬が一般に便利である。
【００７０】
薬物組成物中の活性化合物の濃度は、薬物の吸収、不活性化及び排泄速度、ならびに当業者に公知の他の因子に依存するであろう。投与量の値はまた、緩和すべき状態の重症度によって変化することに留意すべきである。任意の特定の患者について、特定の投薬レジメン及びスケジュールは個々の必要性及び組成物の投与を管理または監督する人の専門的判断に従って、経時的に調整すべきであること及び、本明細書に記載された濃度範囲は例示的にすぎず、特許請求の組成物の範囲または実施を限定するものではないことを、さらに理解すべきである。活性成分は一度に投与されうるか、または様々な時間間隔で投与されるべき多数のより少ない用量に分割されうる。
【００７１】
活性化合物の投与の好ましい様式は経口である。経口組成物は、一般に不活性希釈剤または食用担体を含む。それらは、ゼラチンカプセルに封入または錠剤に圧縮される。経口治療投与の目的のために、活性化合物は賦形剤とともに組み込まれ、錠剤、トローチまたはカプセルの形態で使用される。薬学的に適合する結合剤及び/またはアジュバント物質を組成物の一部として含むことができる。
【００７２】
錠剤、ピル、カプセル、トローチなどは、任意の以下の成分、または類似の性質の化合物含むことができる。すなわち、微結晶セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤; 例えば、デンプンまたはラクトースなどの賦形剤；アルギン酸、プリモゲルまたはコーンスターチなどの崩壊剤; ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓのような潤滑剤; コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；スクロースまたはサッカリンなどの甘味剤; またはペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジ香料などの香味剤など。 投薬単位形態がカプセルである場合、それは、上記タイプの材料に加えて、脂肪油などの液体担体を含有することができる。 さらに、単位剤形は、投与単位の物理的形態を改変する様々な他の材料、例えば、糖コーティング、セラックまたは他の腸溶性薬剤を含むことができる。
【００７３】
化合物は、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウエハ、チューインガムなどの成分として投与することができる。 シロップは、活性化合物（複数可）に加えて、甘味剤としてのスクロース及びある種の保存剤、色素および着色剤及び香料を含有することができる。
【００７４】
化合物または薬学的に許容されるプロドラッグまたは塩はまた、所望の作用を損なわない他の活性物質と、または抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤または他の抗ウイルス化合物のような、所望の作用を補う材料と混合することができる。非経口、皮内、皮下、または局所適用のために使用される溶液または懸濁液は以下の成分を含みうる。すなわち、例えば注射用水、食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、 アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化剤； エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；及び酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩、及び塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの張度の調整のための薬剤などの緩衝液など。非経口製剤は、アンプル、使い捨て注射器、またはガラスまたはプラスチック製の複数用量バイアル中に封入することができる。
【００７５】
静脈内に投与される場合、好ましい担体は生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。
【００７６】
好ましい実施形態では、活性化合物は、インプラント及びマイクロカプセル化送達系を含むがこれらに限定されない制御放出製剤のように、身体からの迅速な排出に対して化合物を保護する担体を用いて調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸のような生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。例えば、腸溶性コーティングされた化合物は、胃酸による分解を防ぐために使用できる。そのような製剤の調製方法は当業者には明らかであろう。 適切な材料はまた、商業的に得られる。 
【００７７】
リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染細胞を標的とするリポソームに限定されないがこれを含む）もまた、薬学的に許容される担体として好ましい。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１（参照により組み込まれている）に記載されるような当業者に知られている方法に従って調製することができる。例えば、リポソーム製剤は、その後蒸発され、容器の表面に乾燥した脂質の薄膜を残す無機溶媒に適当な脂質（類）（例えばステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイルホスファチジルコリン、及びコレステロール）を溶解することによって調製できる。それから、活性化合物の水溶液を容器に導入する。次に、容器は、容器の側面から脂質物質を遊離させ、脂質凝集体を分散させるために、手で旋回され、その際、リポソーム懸濁液を形成する。
【００７８】
発明の説明で使用される用語は、一般的に使用され、当業者に知られている、本明細書で使用される場合、以下の略語は示された意味を有する。
ＡＣＮ      アクリロニトリル
ａｑ        水（溶）性
ＣＤＩ      カルボニルイミダゾール
ＤＩＰＥＡ  ジイソピル  エチルアミン（ヒューニッヒ塩基）
ＤＭＦ      Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ    ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ      １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ｈ          時間
ＨＯＢｔ    Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
Ｍ          モル
ｍｉｎ      分
Ｍｓ        メシレート
ＮＣＳ      Ｎ−クロロスクシンイミド
ＮＢＳ      Ｎ−ブロモスクシンイミド
ＮＩＳ      Ｎ−ヨードスクシンイミド
Ｐｙｒ      ピリジン
ｒｔ，ＲＴ  室温
ＴＢＡＴ    テトラブチルアンモニウム  トリフェニルジフルオロシリケート
ＴＢＴＵ    Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ '，Ｎ '−
テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
ＴＥＡ      トリメチルアミン
ＴＨＦ      テトラヒドロフラン
Ｔｓ        チシレート
【００７９】
IＸ．活性化合物を調製するための一般的なスキーム
活性化合物の容易な調製のための方法が提供される。本明細書に開示される化合物は、以下に詳細に記載されるように、または当業者に公知の他の方法により調製される。これらのスキームは、決して限定的なものではないこと、及び細部の変形が本発明の精神及び範囲から逸脱することなくなされ得ることが当業者によって、理解されるであろう。
【００８０】
種々の反応スキームを以下にまとめられる。
【００８１】
スキーム１は、本発明の活性化合物の合成、特に三置換イミダゾールの合成方法の非限定的な例である。
【００８２】
スキーム１．三置換イミダゾールの合成方法
スキーム１は、本発明の活性化合物の合成、特に三置換イミダゾールの合成方法の非限定的な例である 。
【００８３】
一般的なケト− エステルIＸは、ビスアルファ−ＬＧケト化合物ＶIIIから調製され、ここでＬＧ基は、水素化ナトリウム、ヒューニッヒ塩基、又はＴＥＡのような適切な塩基の存在下、ジオキサン、ＴＨＦ、またはアセトニトリルのような溶媒中、室温または温和な加熱（スキーム２）下で、適切な環式または非環式アミノ酸で置換することによる、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＯＭ，ＯＴ等の適当な脱離基である。キシレン、ＤＭＦ、ＴＨＦ、トルエンのような溶媒中、８〜３６時間加熱して、塩化アンモニウム、臭化アンモニウム、または酢酸アンモニウムなどのアンモニウムイオンの供給源とIＸを処理すると、イミダゾール誘導体Ｘが形成される。
【００８４】
炭素または窒素原子におけるイミダゾール環の広範囲な置換は当業者に公知の種々の方法で実行されうる。ハロゲン原子は、ＮＢＳ、ＮＣＳ及びＮＩＳ、及びＮ−フルオロベンゼンスルホンイミドなどの試薬を介して導入することができる。スズキとスティルのパラジウム触媒カップリング条件は、ヘテロアリール誘導体、アルケン、及びアルキン誘導体を提供する。アジドまたはシアノ基はＴＭＳＣＮまたはＴＭＳＮ３などの試薬を用いて導入することができる。窒素置換は、アシル化、アルキル化、または当業者に公知の他の方法によって達成される。
【００８５】
アミノ酸保護基の性質に応じて、それは、ＨＣｌ、トリフルオロ酢酸、又はＢＢｒ３のような強酸または強ルイス酸を介して除去されうる。水素化分解または金属による還元も保護基を除去することができる。
【００８６】
ＸIからマスクされていない窒素原子はアシル化、アルキル化、または当業者に公知の他の方法によって置換されうる。最終的に、式ＸIIの化合物は、ヒューニッヒ塩基などの塩基の存在下でＨＡＴＵ、ＥＤＣＩ、またはＰｙＢｏｐのような標準的なカップリング試薬の存在下で、適切に置換されたカルボン酸を用いてアシル化することによって実現される。
【００８７】
本発明は、さらに以下の非限定的な実施例に示される。スキーム１及び実施例１〜３は、ＨＣＶ阻害剤化合物を合成するための方法を、実施例４〜８は、それらの生物学的評価のための方法を示す。これらの実施例は決して限定的なものではないこと、及び細部の変形が本発明の精神及び範囲から逸脱することなくなされうることは、当業者により理解されるであろう。
【実施例１】
【００８８】
本発明を代表する具体的な化合物は、以下の実施例および反応順序に従って調製される。実施例及び反応順序を表す図は、本発明の理解を助けるために、例示により提供されるが、その後に続く特許請求の範囲に記載された本発明を決して限定するように解釈されるべきではない。本発明の化合物はまた、本発明のさらなる化合物を生成するために、後続の実施例において中間体として使用することができる。試みは必ずしも、任意の反応で得られる収率を最適化するために行われてきたわけではない。当業者は、反応時間、温度、溶媒及び/または試薬における通常の変更により、このような収量を増加させる方法を知っているであろう。
【００８９】
無水溶媒は、アルドリッチ社（ミルウォーキー、ＷＩ）及びＥＭＤケミカルズ社（ギブスタウン、ＮＪ）から購入した。試薬は、商業的供給源から購入した。特に断りのない限り、実施例で使用される材料は、容易に入手可能な商業的供給業者から入手するか、または化学合成の当業者に公知の標準的な方法により合成された。融点（ｍｐ）は電熱ディジット融点装置で測定し、補正はしていない。１Ｈおよび１３ＣＮＭＲスペクトルは、室温でバリアンユニティプラス４００分光計で測定し、内部標準テトラメチルシランからのｐｐｍダウンフィールドで報告された。重水素交換、デカップリング実験または２Ｄ-ＣＯＳＹが、プロトンの割り当てを確認するために行われた。信号の多重度は、ｓ（シングレット）、ｄ（ダブレット）、ｄｄ（ダブレットのダブレット）、ｔ（トリプレット）、ｑ（クアドロップレット）、ｂｒ（ブロード）、ｂｓ（ブロードシングレット）、ｍ（マルチプレット）で表わされている。すべてのＪ値はＨｚ単位である。質量スペクトルは、エレクトロスプレー技術を使用して、マイクロマスプラットフォームＬＣ分光計で測定された。元素分析は、アトランティックマイクロラボ社（ジョージア州ノークロス）によって行われた。 分析的ＴＬＣは、ワットマンＬＫ６Ｆシリカゲルプレート上で実施し、分取ＴＬＣはワットマンＰＫ５Ｆシリカゲルプレート上で実施した。 カラムクロマトグラフィーは、シリカゲルまたは逆相高速液体クロマトグラフィーにより実施された。
【００９０】
実施例１：
【化１２】
2017513852.tif 000016
３０
【００９１】
「化合物３０の合成のための手順」
スキーム１．中間体７の合成
【化１３】
2017513852.tif 000017
【００９２】
（２Ｓ、４Ｒ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル２−メチル４ − （（メチルスルホニル）オキシ）ピロリジン−１、２−ジカルボン酸２：ピリジン（７２ｍＬ）中のＮ−ＢＯＣ−ｔｒａｎｓ−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（１５ｇ、６１．１ミリモル）溶液に０℃で塩化メタンスルホニル（５.７７ ｍｌ、７４.５ミリモル）を加え、反応物を、4時間、同じ温度で撹拌し、室温に温め、一晩撹拌し続けた。溶媒を真空下で穏やかに除去し、酢酸エチル（６０ｍＬ）で希釈し、１Ｎ塩酸で洗浄し（（二回）、次いで第二の洗浄は、それが酸性のままであることを確認するために、pH試験紙を用いて試験した。次いで、有機層を、水、炭酸水素ナトリウム水溶液、水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、残渣はさらに精製することなく次の反応に用いられた。１８ｇ、収率９１％。
【００９３】
（２Ｓ,４Ｓ）−１−ｔｅｒｔ−ブチル  ２−メチル  ４−（メチルチオ）ピロリジン−１,２−ジカルボキシレート  ３：非水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の４−メチルスルフォニオキシプロリン２（４ｇ、１２．３ミリモル）の溶液にナトリウムチオメトキシド（１ｇ、１４．２ミリモル）を室温で加え、次に一晩撹拌し、水（４０ｍＬ）に注ぎ、エチルアセテート（３０ｍＬｘ２）で抽出し、水洗し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した結果、３．２ｇ（収率９４％）を得た（この材料は酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーの短いカラムにより精製してもよく、またはそのまま直接次の工程に使用する。
【００９４】
（２Ｓ,４Ｓ）−１−(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)-４-（メチルチオ）ピロリジン-2-カルボン酸４：メタノール（４０ｍＬ）及び水（４０ｍＬ）中の４−メチルチオプロリン３（５ｇ、１８．２ミリモル）溶液に水酸化リチウム（５ｇ、０．２モル）を加え、得られた反応混合物を一晩撹拌した。メタノールを真空下で蒸発させ、酢酸エチルで抽出し、そして分離した有機層を廃棄した。水層は６Ｎ−ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチルで抽出し、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、４ｇ（収率８５％）を得るまで濃縮した。
【００９５】
（２Ｓ,４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−４−（メチルチオ）ピロリジン−１−カルボキシレート７：アセトニトリル（１０ｍＬ）中のカルボン酸誘導体４（２ｇ、７．７ミリモル）の溶液に、２−ブロモ−１−（４−ブロモフェニル）エタノン５（２ ｇ、７．２ミリモル）及びＤＩＰＥＡ（１．３２ｍＬ，７．５７ミリモル）を室温で加え、得られた反応混合物を一晩撹拌した。１８時間で反応物を水に注ぎ、酢酸エチル（２０ｍＬｘ２）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮した。所望の化合物６を精製することなく次の反応に用いた。
【００９６】
粗製エステル６を、トルエン（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸アンモニウム（４ｇ）を添加した。得られた反応物を一晩１１０℃で加熱し、水で希釈し、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、白色固体２ｇ、収率６４％を得るために、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
【００９７】
スキーム２  中間体１２の合成
【化１４】
2017513852.tif 000018
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−ブロモフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１０：ＤＩＰＥＡ（９．７ｍＬ、５５．６ミリモル）を、５℃でアセトニトリル（１００ｍＬ）中の２−ブロモ−１−（４−ブロモフェニル）エタノン５（１５ｇ、５３．９ミリモル及び１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）―Ｌ−プロリン（１２ｇ、５５．７ミリモル）に加えた。得られた黄色溶液を室温に温め、一晩撹拌した。この混合物を、水（２０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬｘ２）、塩水（２０ｍＬ）、で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、黄色固体９を得るために真空下で蒸発させた。残渣を精製せずに次の反応に用いた。
【００９８】
残渣９をトルエン（２００ｍＬ）で希釈し、酢酸アンモニウム（２０ｇ）を添加した。得られた混合物を２４時間１３０℃で加熱した。冷却後、混合物を水に注ぎ、酢酸エチル（３０ｍＬｘ３）で抽出した。合わさった有機物を、水、飽和炭酸水素ナトリウム、水で洗浄し 、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣は、白色固体１４．８ｇ、収率７０％を得るために、酢酸エチル／ヘキサン（２０：１００〜５０：５０）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。さらに、化合物は、ヘキサン／酢酸メチル（５０：２０）溶媒中に懸濁することによって精製することができ、次に濾過し、同一の溶媒で洗浄して黄色の固体を得た。純度は次の反応に使用するのに十分である。
【００９９】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１１：１，４ジオキサン（６０ｍＬ）中で、化合物１０（４ｇ、１０．２ミリモル）と、ビス（ピナコラト）ジボロン（５．４４ｇ、２１．４ミリモル）、酢酸カリウム（２，５６ｇ、２６．０８ミリモル）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（４８０mg、０．４１ミリモル）の混応物を８０℃で２０時間、窒素下で撹拌した。出発物質が消費された後、混合物を濾過し、濾液を真空下で濃縮した。残渣をジクロロメタンおよび水で分配し、水層をジクロロメタン（２０ｍＬで２回）で抽出した。有機層は集めて、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、酢酸エチル／ヘキサン（１０：１００〜５０：５０）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した結果、３．６ｇ、収率８０％を得た。
【０１００】
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（４−クロロ−５−（４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピロリジン−１−カルボキシレート１２：ジクロロメタン（５ｍＬ）中の化合物１１（０．６１ｇ、１．３８ミリモル）の溶液に、ＮＣＳ（０．３１ｇ、２．３２ミリモル）を加えて、得られた反応混合物を一晩撹拌した。反応を完結させるため、３〜４部のＮＣＳ（０．１ｇ）を１６〜２４時間の間に加えた。反応混合物は水に注ぎ、ジクロロメタン（１０ｍＬｘ３回）で抽出した。合わさった有機層は飽和炭酸水素ナトリウム、ヒドロ亜硫酸ナトリウム、水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮し、酢酸エチル／ヘキサン（１：５〜１：１）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した結果、５００ｍｇ、収率７７％を得た。
【０１０１】
スキーム３  ３０の合成
【化１５】
2017513852.tif 000019
【０１０２】
（２Ｓ，４Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル２−（５−（４’−（２−（（Ｓ）−１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピロリジン−２−イル）−４−クロロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−[１，１’−ビフェニル]−４−イル）−１Ｈ−イミダゾールー２−イル）−４−（メチルチオ）ピロリジンー１−カルボキシレート１３：化合物７（０．４７ｇ、１．０７ミリモル）及び化合物１２（０．５ｇ、１．０５ミリモル）、炭酸水素ナトリウム（０．３８３ ｇ４．５５ミリモル）、ジエトキシメタン（３０ｍＬ）、水（９ｍＬ）、[１ 、１'ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン]ジクロロパラジウム（ＩＩ）（１３９．０９ミリグラム、０．１９ミリモル）の混合物を窒素下で一晩攪拌しながら８０℃で加熱した。１８時間後に反応物を冷却し、水に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮し、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した結果、０．５ｇ、収率６７％を得た。
【０１０３】
４−クロロ−５−（４ '− （２− （（２Ｓ，４Ｓ）−４−（メチルチオ）ピロリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−[１，１’−ビフェニル]−４−イル）−２− （（Ｓ）− ピロリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール・４ＨＣｌ 14：メタノール中（５ｍＬ）の１３化合物（５００ｍｇ、０．７０８ミリモル）の溶液に室温で６Ｎ ＨＣｌ（３ｍＬ）を加えた。反応物を５時間５０℃に温めた、得られたスラリーを蒸発させ、エタノールで３時間共蒸発させ、濾過し、少量のアセトニトリルで洗浄した結果、黄色の固体（次の反応に対して十分乾燥）３５０ｍｇ、収率７６％で得た。
【０１０４】
（Ｓ）−２−（（メトキシカルボニル）アミノ）−２−フェニル酢酸１５：炭酸ナトリウム（１．８３ ｇ、１７．２ミリモル）をＮａＯＨ（３３ｍＬの１Ｍ /Ｈ２Ｏ、３３ミリモル）及びL−フェニルグリシン（５．０ｇ、３３．２９ミリモル）の溶液に加え、得られた溶液を氷浴で冷却し、メチルクロロホルメート（２．８ ｍＬ、３６．１ミリモル）を冷却された溶媒に滴下した。添加終了後、反応混合物を３．２５時間室温で攪拌した。反応混合物はエーテルで洗浄（３０ｍＬｘ３回）し、水層は氷浴で冷却し、濃塩酸でｐＨ１〜２の範囲に酸性化し、ジクロルメタンで（３０ｍＬｘ３回）で抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮した結果、白色の固体を６．２ｇ、収率９０％で得た。
【０１０５】
メチル（（Ｓ）−２−（（２Ｓ，４Ｓ）−２−（５−（４' −（４−クロロ−２− （（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２（（メトキシカルボニル）アミノ）−２−フェニルアセチル）ピロリジン−２−イル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）− [１，１ '−ビフェニル] −４−イル）１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−４−（メチルチオ）ピロリジン−１−イル）−２−オキソ−１−フェニルエチル）カルバメート３０：
ＤＭＦ（２ｍＬ）中での化合物１４（５０ｍｇ、０．０７６ミリモル）及び（Ｓ）−２−（（メトキシカルボニル）アミノ−２−フェニル酢酸（４８ｍｇ、０．２３ミリモル）の撹拌溶液に、−３０℃でＤＩＰＥＡ（８１．５μＬ，０．４６ミリモル）を加え、次にＣＯＭＵ＊（９８．２５ｍｇ、０．２３ミリモル）を加えた。反応混合物を２〜２．５時間、−２０℃〜−１０℃で攪拌した（反応は、ＴＬＣで１つの主要なスポットであるべきで、そうなれば反応を停止する）。水（１ｍＬ）を冷たい反応物に添加し、得られた溶液は酢酸エチルで（１０ｍＬｘ２回）抽出した。合わせた有機物は水、飽和炭酸水素ナトリウム、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ジクロロメタン／メタノール（１００：１〜１００：５）を用いるシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した結果、淡黄色の固体５３ｍｇを、収率７８％で得た。
【０１０６】
化合物３０の１３Ｃ及び１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、それぞれ、図１及び図２に示す。
＊：１-シアノ−２−エトキシ−２− オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルフォリノ  カルベニウムヘキサフルオロホスフェート（１０７５１９８−３０−９）
【０１０７】
（Ｓ）−２−（（（メチルペルオキシ）メチル）アミノ−２−フェニル酢酸１の合成
Ｌ−α−フェニルグリシン（４ｇ、２６．４６ミリモル）ＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解し、次に水中（８０ｍＬ）で炭酸水素ナトリウム（６．６８ｇ、７９．５４ミリモル）を加え、さらにアイスバス冷却下でクロロギ酸メチル（２．２５ｍＬ、２９．１８ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を６ＮのＨＣｌでｐＨ ２〜３に酸性化し、次いで真空中でＴＨＦを除去し、濃縮した。水層を酢酸エチル（２０ｍＬ×２回）で抽出し、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、淡黄色の固体を得るために濃縮し、酢酸エチル及びヘキサン（体積比２０／６０）混合溶媒で数回トリチュレートした結果、白色の固体、４，７３ｇを、収率８４％で得た。
１：苛性ソーダ法による（Ｓ）−２−（（（メチルペルオキシ）メチル）アミノ−２−フェニル酢酸は、最終化合物を合成したとき微量のラセミ化を生じた。炭酸水素ナトリウム法は、完全な単一異性体を与えうる。
【０１０８】
実施例２：細胞毒性アッセイ
化合物の毒性は、前述したように（Ｓｃｈｉｎａｚｉ  Ｒ．Ｆ．，Ｓｏｍｍａｄｏｓｓｉ  Ｊ．-Ｐ．，Ｓａａｌｍａｎｎ  Ｖ．，Ｃａｎｎｏｎ  Ｄ．Ｌ．，Ｘｉｅ  Ｍ．−Ｙ．，Ｈａｒｔ  Ｇ．Ｃ．，Ｓｍｉｔｈ  Ｇ．Ａ．，＆  Ｈａｈｎ  Ｅ．Ｆ．  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９０，３４，１０６１−６７参照）ベラ、人間ＰＢＭ、ＣＥＭ（ヒトリンパ芽球）、ＭＴ−２、及びＨｅｐＧ２細胞において評価した。シクロヘキシミドは、ポジティブ細胞毒性対照として含め、溶媒に曝露した未処理細胞を陰性対照として含めた。シクロヘキシミドはポジティブ細胞毒性対照として含めた、溶媒に曝露された未処理細胞を陰性対照として含めました。 細胞毒性のＩＣ５０は、前述した中央値効果的な方法（Ｃｈｏｕ  Ｔ．−Ｃ  ＆  Ｔａｌａｌａｙ  Ｐ．  Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．１９８４，２２，２７〜５５；Ｂｅｌｅｎ‘ｋｉｉ  Ｍ．Ｓ．＆  Ｓｃｈｉｎａｚｉ  Ｒ．Ｆ．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．１９９４，２５，１〜１１）を用いて、濃度 - 反応曲線から得られた。
【０１０９】
実施例３：ＨｅｐＧ２細胞におけるミトコンドリア毒性アッセイ
I）細胞増殖に対する化合物の効果と乳酸生産：ＨｅｐＧ２細胞の成長に対する効果は０μΜ、０．１μΜ、１μΜ、１０μΜ及び１００μΜの薬剤の存在下で細胞をインキュベートすることによって決定することができる。細胞（ウェルあたり５ｘ１０ ４）を １０％ウシ胎児血清、１％ピルビン酸ナトリウム、及び１％ペニシリン/ストレプトマイシンを補充した非必須アミノ酸を有する最小必須培地中で、１２ウェル細胞培養クラスターに播種し、３７℃で４日間インキュベートした。インキュベーション期間の終わりに、細胞数は血球計を用いて決定することができる。また、Ｐａｎ−Ｚｏｕ  Ｘ−Ｒ，Ｃｕｉ  Ｌ，Ｚｈｏｕ  Ｘ−Ｊ，Ｓｏｍｍａｄｏｓｓｉ  Ｊ−Ｐ，Ｄａｒｌｅｙ−Ｕｓｍｅｒ  ＶＭ、“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｎ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ＨｅｐＧ２  ｃｅｌｌｓ”Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．２０００；４４：４９６〜５０３に教示されている。乳酸産生に対する化合物の効果を測定するために、保存培養からのＨｅｐＧ２細胞を希釈し、ウェル当たり２．５ｘ１０４細胞で１２ウェル培養プレートに播種することができる。種々の濃度（０μΜ、０．１μΜ、１μΜ、１０μΜ及び１００μΜ）の化合物を添加し、培養物を4日間、加湿５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で４日間インキュベートしうる。  4日目に、各ウェル中の細胞の数を決定することができ、培養培地を回収しうる。培地を濾過し、培地中の乳酸含有量は、比色乳酸アッセイ（シグマアルドリッチ）を用いて決定することができる。乳酸生成は、損なわれたミトコンドリア機能のマーカーと考えることができ、試験化合物の存在下で増殖させた細胞で検出された乳酸産生のレベルの上昇は、薬物誘発性細胞毒性効果を示すであろう。
【０１１０】
ｉｉ）ミトコンドリアＤＮＡ合成に対する化合物の影響：確にミトコンドリアＤＮＡ含量を定量化するためのリアルタイムＰＣＲアッセイが開発されている（Ｓｔｕｙｖｅｒ  ＬＪ，Ｌｏｓｔｉａ  Ｓ，Ａｄａｍｓ  Ｍ，Ｍａｔｈｅｗ  ＪＳ，ＰａｉＢＳ Ｇｒｉｅｒ  Ｊ，Ｔｈａｒｎｉｓｈ  ＰＭ，Ｃｈｏｉ  Ｙ，Ｃｈｏｎｇ  Ｙ，Ｃｈｏｏ  Ｈ，Ｃｈｕ  ＣＫ，Ｏｔｔｏ  ＭＪ，Ｓｃｈｉｎａｚｉ  ＲＦ．  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ２’，３’−ｄｉｄｅｏｘｙ−２’，３’−ｄｉｄｅｈｙｄｒｏｃｙｔｉｄｉｎｅ  ａｎａｌｏｇｓ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．  Ａｇｅｎｔｓ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．２００２；４６：３８５４〜６０を参照）。このアッセイは、ミトコンドリアＤＮＡ含量に対する化合物の効果を決定する、本出願に記載された全ての試験で使用できる。このアッセイでは、低継代番号ＨｅｐＧ２細胞は、コラーゲンコート９６ウェルプレートに５，０００細胞／ウェルで播種する。試験化合物は、０μΜ、０．１μΜ、１０μΜ及び１００μΜの最終濃度を得るために、培地に添加される。培養7日目に、細胞の核酸は、市販のカラム（Ｑｉａｇｅｎ社のＲＮｅａｓｙ ９６キット）を用いて調製される。これらのキットは、ＲＮＡ及びＤＮＡを同時精製し、したがって、全核酸がカラムから溶出する。ミトコンドリアのチトクロームｃオキシダーゼサブユニットII（ＣＯＸII）遺伝子及びβアクチンまたはｒＲＮＡ遺伝子は、ターゲット及び基準の増幅に適したプライマー及びプローブで、多重Ｑ−ＰＣＲプロトコールを用いて、溶出した核酸の５μｌから増幅される。ＣＯＸIIについては、次のセンス、プローブ及びアンチセンスプライマーは、それぞれ、使用される。５’−ＴＧＣＣＣＧＣＣＡＴＣＡＴＣＣＴＡ−３’、５’−テトラクロロ−６−カルボキシフルオレセン−ＴＣＣＴＣＡＴＣＧＣＣＣＴＣＣＣＡＴＣＣＣ−ＴＡＭＲＡ−３’及び、５’−ＣＧＴＣＴＧＴＴＡＴＧＴＡＡＡＧＧＡＴＧＣＧＴ−３’。βアクチン遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ  アクセス番号Ｅ０１０９４）のエクソン３に対するセンス、プローブ、及びアンチセンスプライマーは、それぞれ、５’−ＧＣＧＣＧＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＡ−３’、５’−６−ＦＡＭＣＡＣＣＡＣＧＧＣＣＧＡＧＣＧＧＧＡＴＡＭＲＡ−３’、及び５’−ＴＣＴＣＣＴＴＡＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴ−３’である。  ｒＲＮＡ遺伝子のためのプライマー及びプローブは、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍから市販されている。同等の増幅効率が全ての遺伝子について得られているので、比較ＣＴ法は、ミトコンドリアＤＮＡ合成の潜在的な阻害を調べるために使用することができる。比較ＣＴ法は、ターゲット（ＣＯＸII遺伝子）の量は、内因性の基準（βアクチンまたはｒＲＮＡ遺伝子）の量に正規化され、キャリブレータ（7日目での薬剤を含まない対照）と比較される、算術式を使用する。このアプローチのための算術式は２−ΔΔＣＴで与えられ、ここで、ΔΔＣＴは、（平均の目標試験サンプルのＣＴ−ターゲットコントロールのためのＣＴ）−（平均の参照試験のＣＴ−参照コントロールのＣＴ）である（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＭＲ，Ｋ  Ｗａｎｇ，ＪＢ，Ｓｍｉｔｈ，���Ｊ  Ｈｅｓｌｉｎ，ＲＢ  Ｄｉａｓｉｏ．  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｈｙｄｒｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  ｒｅｖｅｒｓｅ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ，Ａｎａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０００；２７８：１７５〜１８４参照）。薬物の存在下で増殖させた細胞におけるミトコンドリアＤＮＡ含有量の減少は、ミトコンドリア毒性を示すであろう。
【０１１１】
実施例４：  Ｎｅｕｒｏ２Ａ細胞におけるミトコンドリア毒性アッセイ
本発明の化合物の神経毒性を引き起こす可能性を推定するために、マウスのＮｅｕｒｏ２Ａ細胞（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション１３１）をモデル系として使用した（Ｒａｙ  ＡＳ，Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｓａｎｔｉａｇｏ  ＢＩ，Ｍａｔｈｅｗ  ＪＳ，Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｅ，Ｂｏｚｅｍａｎ  Ｃ，Ｘｉｅ  ＭＹ，Ｄｕｔｓｃｈｍａｎ  ＧＥ，Ｇｕｌｌｅｎ  Ｅ，Ｙａｎｇ  Ｚ，Ｈｕｒｗｉｔｚ  Ｓ，Ｃｈｅｎｇ  ＹＣ，Ｃｈｕ  ＣＫ，ＭｃＣｌｕｒｅ  Ｈ，Ｓｃｈｉｎａｚｉ  ＲＦ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＫＳ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｖｉｒｕｓ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｂｅｔａ−Ｄ−６−ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｏ−２’，３’−ｄｉｄｅｈｙｄｒｏ−２’，３’−ｄｉｄｅｏｘｙｇｕａｎｏｓｉｎｅ．  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００５，４９，１９９４−２００１参照）。細胞増殖を５０％阻害するのに必要な濃度（ＣＣ ５０）は、既述のように３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２,５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド色素のアッセイを用いて測定した。上記のように薬剤の定義された濃度における細胞の乳酸及びミトコンドリアＤＮＡレベルの摂動を行った。全ての実験において、ｄｄＣ及びＡＺＴを対照ヌクレオシド類似体として使用した。
【０１１２】
実施例５：骨髄細胞毒性についてのアッセイ
初代ヒト骨髄単核細胞をＣａｍｂｒｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社（ウォーカーズビル、メリーランド州）から商業的に入手することができる。ＣＦＵ−ＧＭアッセイは、ヒト組換え顆粒球/マクロファージコロニー刺激因子５０単位／ｍＬの存在下、二層軟寒天を用いて行うことができる、一方、ＢＦＵ−Ｅアッセイは、１単位/ｍＬのエリスロポエチンを含有するメチルセルロースのマトリックスを使用する（Ｓｏｍｍａｄｏｓｓｉ  ＪＰ，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｒ，  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ３’−ａｚｉｄｏ−３’ｄｅｏｘｙｔｈｙｍｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  ９−（１，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−２−ｐｒｏｐｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｇｕａｎｉｎｅ  ｆｏｒ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｐａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．１９８７；３１：４５２−４５４及びＳｏｍｍａｄｏｓｓｉ  ＪＰ，Ｓｃｈｉｎａｚｉ  ＲＦ，Ｃｈｕ  ＣＫ，Ｘｉｅ  ＭＹ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  （−）ａｎｄ  （＋）ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ  ｏｆ  ２’，３’−ｄｉｄｅｏｘｙ−３’−ｔｈｉａｃｙｔｉｄｉｎｅ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ  ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９２；４４：１９２１−１９２５参照）。各実験は、３つの異なるドナー由来の細胞で重複して行うことができる。ＡＺＴを陽性対照として使用することができる。細胞を、５％ＣＯ２で３７℃で１４〜１８日間、化合物の存在下でインキュベートすることができ、５０細胞を超えるコロニーは、ＩＣ５０を決定するために、倒立顕微鏡を用いて計数することができる。  ５０％阻害濃度（ＩＣ ５０）はＢＦＵ−Ｅ生存フラクション対薬剤濃度の対数の最小二乗線形回帰分析によって得ることができる。統計分析は、独立した非対の試料についてのＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定を用いて行うことができる。
【０１１３】
実施例６：ＨＣＶレプリコンアッセイ１
ＨＣＶレプリコンＲＮＡを含有するＨｕｈ７クローンＢ細胞は、５０００細胞/ウェルで９６ウェルプレートに播種され、そして化合物は、播種した後直ちに、三連で１０μΜで試験された。５日間のインキュベーション（３７℃、５％ＣＯ２）後、全細胞ＲＮＡを、ＧｅｎｔｒａのｖｅｒｓａＧｅｎｅ ＲＮＡ精製キットを用いて単離した。レプリコンＲＮＡ及び内部対照（ＴａｑＭａｎのｒＲＮＡ対照試薬、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）は、単一ステップの多重リアルタイムＲＴ−ＰＣＲアッセイで増幅された。化合物の抗ウイルス効果は、非薬物対照（ΔＣｔＨＣＶ）の閾値ＲＴ−ＰＣＲサイクルから試験化合物の閾値ＲＴ−ＰＣＲサイクルを差し引くことによって計算された。３．３のΔＣｔは、レプリコンＲＮＡレベルの１−ｌｏｇ減少分（９０％未満の出発物質に等しい）に相当する。 化合物の細胞毒性は、またΔＣｔｒＲＮＡ値を用いて計算される。２’−Ｃ−Ｍｅ−Ｃは陽性対照として使用した。ＥＣ９０及びＩＣ５Ｏ値2を決定するために、ΔＣｔ値は、最初の出発物質３の割合に変換した後、阻害％を計算するために使用した。
文献
・  Ｓｔｕｙｖｅｒ  Ｌら、Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｕｅ  ｔｈａｔ  ｂｌｏｃｋｓ  ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｒ  ｂｏｖｉｎｅ  ｖｉｒａｌ  ｄｉａｒｒｈｅａ  ａｎｄ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓｅｓ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ．  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ，Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００３，４７，２４４−２５４．
・  Ｒｅｅｄ  ＩＪ＆Ｍｕｅｎｃｈ  Ｈ，  Ａ  ｓｉｍｐｌｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｒ  ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｆｉｆｔｙ  ｐｅｒｃｅｎｔ  ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ．  Ａｍ．Ｊ．Ｈｙｇ．２７:４９７，１９３８．
・  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ
メジアン有効濃度（ＥＣ５０）は，ＨＣＶ１ｂ対して以下の範囲である。
Ａ＝１−１０μＭ
Ｂ＝１００−９９９ｎＭ
Ｃ＝１−９９ｎＭ
Ｄ＝＜１ｎＭ
【０１１４】
実施例７：ヒト肝ミクロソームにおけるＮＳ５Ａ阻害剤化合物Ａと化合物Ｂの代謝研究
目的：ヒト肝ミクロソームにおける化合物３０の代謝物を同定すること。
化学品：
メタノール及びアセトニトリルは（フィッシャーサイエンティフィック）から購入。
ギ酸はＡＣＲＯＳオーガニックから購入。
水を精製し、脱イオン化した。
計装
ＨＰＬＣシステムは、２つの三元ポンプ、真空脱気装置、サーモスタットオートサンプラー、及びサーモスタットカラムコンパートメント（カリフォルニア州サニーベールダイオネックス社）からなるＵｌｔｉｍａｔｅ３０００モジュラーＬＣシステムであった。ＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍ  Ｕｌｔｒａ型三重四重極質量分析計（サーモサイエンティフィック社、ウォルサム、ＭＡ、ＵＳＡ。）を検出するために使用した。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｘｃａｌｉｂｕｒのソフトウェアのバージョン２．０は、ＨＰＬＣ、質量分析装置を操作するため、及びデータ解析を実行するために使用された。
【０１１５】
方法の概要と結果
化合物（１μΜ最終濃度）は、リン酸カリウム緩衝液中でヒト肝臓ミクロソームとともにインキュベートされた。アッセイにおけるミクロソームのタンパク質濃度は１ｍｇ / ｍＬであり、最終的なＤＭＳＯのパーセントは０．２％未満であった。反応はＮＡＤＰＨの添加により開始し、２００μＬの８０％氷冷メタノール（内部標準ＲＳ−１１７４の１００ ｎＭを含む）により、６０分で停止した。サンプルを定性的及び定量に、ＬＣ−ＭＳ/ ＭＳにより分析した。
【０１１６】
勾配分離は３μｍの粒径（サーモエレクトロン、マサチューセッツ州ウォルサム）を有すＨｙｐｅｒｓｉｌ  ＧＯＬＤカラム（１００×１．０ミリメートル）で行った。移動相Ａは０．１％ギ酸を含む水からなり、Ｂは、アセトニトリルからなる。移動相Ｂは、８分間で１５％から１００％まで増加し、そして２分間100％で維持した。流速は５０μＬ/ｍｉｎに維持し、２５μＬ注入容積を用いた。オートサンプラーは４℃に維持し、カラムは３０℃に維持した。
【０１１７】
分析の最初の３．０分は廃棄した。質量分析計は、３．０ ｋＶのスプレー電圧、シースガス５０（任意単位）、イオンスイープガス０．２（任意の単位）、補助ガス５（任意単位）及びキャピラリー温度３００℃で負イオン化モードで操作した。衝突セル圧力は１．５ミリトールに維持した。駆体および産物イオンの遷移を以下の表に列挙した。
【０１１８】
実施例８：リード化合物のＨＣＶ活性及び細胞毒性の評価
特定の理論に拘束されることを望まないが、生体内での複数の生物学的活性物質を提供しうるチオメチル含む化合物のうち、抗ＨＣＶ活性と細胞毒性の欠如の最適な組み合わせは、少なくとも１つのチオメチルグループ及び０〜２の塩素原子を含む化合物に見出されるようだ。
【０１１９】
全体として、少なくとも１つのチオメチル及び少なくとも１つの塩素原子、理想的には、ピロリジン環に結合したフェニルアラニンを含有する、これらの化合物は、最高の毒性及び抗ＨＣＶ活性プロファイルを有する化合物を提供した。
【０１２０】
式（I）の範囲内の一連の化合物の活性及び細胞毒性は、上記実施例でのプロトコルを使用して評価し、そのデータを以下の表に要約する。
【表２】
2017513852.tif 000020
【表３】
2017513852.tif 000021
【表４】
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【表５】
2017513852.tif 000023
本発明は、本明細書に記載されている特定の実施形態による範囲に限定されるべきではない。実際、記載されたものに加えて、本発明の種々の改変が、前述の説明及び添付の図面から当業者に明らかになるであろう。このような改変は、添付の特許請求の範囲内に入ることが意図されている。
【０１２１】
種々の刊行物が本明細書に引用され、これらの開示は、その全体が参照により取り込まれている。
【図１】
2017513852.tif 000034
【図２】
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【国際調査報告】
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