(57)【要約】  本発明は、毛髪の紫外線損傷又は銅による損傷を測定する方法を目的とし、当該方法は、タンパク質フラグメントを水溶液によって毛髪試料から溶出させる工程と、溶媒を用いて前記タンパク質を抽出する工程と、前記タンパク質フラグメント試料をＭＡＬＤＩ−ＭＳによって分析し、その結果としてタンパク質フラグメント結果を得る工程と、標識タンパク質フラグメントの存在を同定し、高分解能のＯｒｂｉｔｒａｐ−ＭＳを用いてアミノ酸配列を同定することにより前記フラグメントが何であるか同定する工程であって、前記タンパク質フラグメントはＳ１００Ａ３のタンパク質フラグメントである工程を含む。
2017524897.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
毛髪の紫外線損傷を測定する方法であり、
ａ）タンパク質フラグメントを水溶液によって毛髪試料から溶出させる工程と、
ｂ）溶媒を用いてタンパク質を抽出する工程と、
ｃ）タンパク質フラグメント試料をＭＡＬＤＩ−ＭＳによって分析し、その結果としてタンパク質フラグメント結果を得る工程と、
ｄ）標識タンパク質フラグメントの存在を同定し、高分解能のＯｒｂｉｔｒａｐ−ＭＳを用いてアミノ酸配列を同定することにより前記フラグメントが何であるか同定する工程であって、前記タンパク質フラグメントはＳ１００Ａ３のタンパク質フラグメントである工程を含む、方法。
【請求項２】
前記Ｓ１００Ａ３のタンパク質フラグメントはｍ／ｚ  １２７８である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｓ１０００Ａ３のタンパク質フラグメントはアセチル化ＡＲＰＬＥＱＡＶＡＡＩＶアミドというアミノ酸配列を有する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
毛髪の紫外線損傷の処置を同定する請求項１から３のいずれか一項に記載の方法であり、
ａ）毛髪試料Ａに対して処置用組成物を塗布し、試料Ｂに対しては処置用組成物を塗布しない工程と、
ｂ）毛髪試料Ａ及び毛髪試料Ｂに紫外線を当てる工程と、
ｃ）タンパク質フラグメントを水溶液によって毛髪試料から溶出させる工程と、
ｄ）溶媒を用いて前記タンパク質を抽出する工程と、
ｅ）試料中に存在する固有の変形パターンを同定することにより前記標識タンパク質フラグメントを同定又は測定する工程であって、前記ＭＡＬＤＩ−ＭＳタンパク質フラグメントからＳ１００Ａ３のタンパク質フラグメントが得られ、試料Ａは試料Ｂと比べてＳ１００Ａ３のタンパク質フラグメントが減少している工程を含む、方法。
【請求項５】
前記処置用組成物はキレート剤を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記キレート剤は、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＥＤＤＳ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジグルタル酸（ＥＤＤＧ）、２−ヒドロキシプロピレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＨＰＤＤＳ）、グリシンアミド−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＧＡＤＳ）、エチレンジアミン−Ｎ−Ｎ’−ビス（ｏ−ヒドロキシフェニル酢酸）（ＥＤＤＨＡ）、ヒスチジン、アルギニン、リシン、アスパラギン、トリプトファン、セリン、グルタミン、アラニン、グリシン、及びプロリン、亜鉛ピリチオン又はピリチオンの金属塩、これらの塩、これらの誘導体、並びにこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記処置用組成物は抗酸化剤を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗酸化剤は、アスコルビン酸及びその塩、脂肪酸のアスコルビルエステル、アスコルビン酸誘導体、トコフェロール、トコフェロールソルベート、トコフェロールアセテート、トコフェロールの他のエステル、ブチル化ヒドロキシ安息香酸及びその塩、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸、没食子酸及びそのアルキルエステル、尿酸及びその塩及びアルキルエステル、ソルビン酸及びその塩、リポ酸、アミン、スルフヒドリル化合物、ジヒドロキシフマル酸及びその塩、リシンピドレート、アルギニンピロレート、ノルジヒドログアヤレト酸、バイオフラボノイド、リジン、メチオニン、プロリン、スーパーオキシドジスムターゼ、シリマリン、茶抽出物、ブドウ果皮／種子抽出物、メラニン、ローズマリー抽出物、並びにこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記処置用組成物は日焼け止め剤を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記日焼け止め剤は、アミノ安息香酸、アヴォベンゾン、シノキセート、ジオキシベンゾン、ホモサラート、アントラニル酸メンチル、オクトクリレン、メトキシ桂皮酸オクチル、サリチル酸オクチル、オキシベンゾン、パジマートＯ、フェニルベンズイミダゾールスルホン酸、スルイソベンゾン、二酸化チタン、トロラミンサリチル酸、酸化亜鉛、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記処置用組成物は、マグネシウム、亜鉛、カルシウム、これらの塩、及びこれらの混合物からなる群から選択される二価金属を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
毛髪の銅による損傷を測定する請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法であり、
ａ）タンパク質フラグメントを水溶液によって毛髪試料から溶出させる工程と、
ｂ）溶媒を用いてタンパク質を抽出する工程と、
ｃ）タンパク質フラグメント試料をＭＡＬＤＩ−ＭＳによって分析し、その結果としてタンパク質フラグメント結果を得る工程と、
ｄ）標識タンパク質フラグメントの存在を同定し、高分解能のＯｒｂｉｔｒａｐ−ＭＳを用いてアミノ酸配列を同定することにより前記フラグメントが何であるか同定する工程であって、前記タンパク質フラグメントはＳ１００Ａ３のタンパク質フラグメントである工程を含む、方法。
【請求項１３】
毛髪の紫外線損傷を測定する請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法であって、毛髪をＭＡＬＤＩイメージングにより分析し、その結果としてタンパク質フラグメント結果を得る工程を含む、方法。
【請求項１４】
毛髪の銅による損傷を測定する請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法であって、毛髪をＭＡＬＤＩイメージングにより分析し、その結果としてタンパク質フラグメント結果を得ることを含む、方法。
【請求項１５】
前記方法はマーケティング又は広告の主張を裏付けるために使用される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示の実施形態は、抽出されたタンパク質フラグメントの評価及び同定によって毛髪への紫外線損傷を測定するためのプロセスを目的とする。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質損失による毛髪損傷は周知の問題であるが、ほとんどの人は毛髪に生じているタンパク質損失の量又は毛髪の一般的健康レベルを認識していない。タンパク質損失は毎日の出来事及び環境因子、例えば紫外線（ＵＶ）への曝露、脱色、染毛、パーマ、毛髪矯正、機械的な操作、及び塩水との接触によって引き起こされ得る。
【０００３】
分子レベルでの適正な毛髪構造は、健康な外観、艶、及び感触を有する毛髪の重要な特徴である。毛髪はほとんどタンパク質からなり、頭皮から出た後は再生不可能である。したがって、毛髪の全体的なタンパク質の健全性を保護する製品を有することが重要である。したがって、タンパク質及び繊維レベルでの毛幹の保護は、毛髪の健全な外観の確保のために重要である。
【０００４】
毛髪から抽出したタンパク質フラグメントを同定し、タンパク質フラグメントの種類を毛髪損傷の種類と相関させることは、１）毛髪への損傷の種類を正しく同定することを可能にし、２）損傷を予防する製品、あるいは脱色剤及び／又は他の組成物の場合は損傷を起こさない製品を設計するために必要な情報を提供できる。加えて、毛髪疾患の特定の種類を同定することも重要である。損傷及び／又は処置に対する反応は、毛髪疾患のある人の毛髪と正常な毛髪とでは異なる。したがって、特定の種類の損傷に対するタンパク質レベルでの毛髪の反応に基づいて、存在する毛髪疾患の種類を示すことが可能であり得る。
【０００５】
天候による損傷の影響
環境因子（日射、大気汚染物質、風、海水、プールの水中の塩素）による天候の影響が毛髪に損傷を生じさせ、この影響は形態的レベルで検出可能であることが広く知られている。更に、日光、プールの水、及びパーマ液、脱色剤、矯正剤、及びある種の染毛剤などの化粧品は、毛髪を化学的に変化させ、キューティクルの剥離や摩耗及び繊維の枝毛への過敏性が増すことから明らかなように、その化学的及び機械的分解の傾向を高める。紫外線Ａ波及び紫外線Ｂ波による毛髪損傷は、消費者にとって重大な問題であり、毛髪の物理特性及び美容特性の両方に影響を及ぼす。
【０００６】
紫外線による損傷の影響
（太陽からのような）光の照射が毛髪に損傷を生じさせ、毛髪のタンパク質、細胞膜複合脂質、及び毛髪の色素を劣化させることは定説となっている。可視光及び紫外線Ａ波／紫外線Ｂ波はいずれも、毛髪の構造に損傷を生じさせる。この損傷により細胞膜複合体がもろくなり、光の照射に曝された毛髪には多段階の破砕が観察される。
【０００７】
更に、日光及び紫外線は、人の毛髪の濡れた状態での引張特性を減じさせることが示されている。これらの影響は、ある特定の波長にというよりも、毛髪が曝された照射の総量に関連付けられている。しかし、光の照射による毛髪タンパク質の劣化は、２５４から４００ｎｍの波長領域で主に生じることが近年示されてきた。
【０００８】
また、タンパク質フラグメントが同定されれば、タンパク質損失の結果である利用可能な結合を利用する製品、特に特定の損傷種類のための製品を製造できる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本開示は概して、毛髪から抽出されたタンパク質フラグメントを毛髪損傷の種類と相関させることによって紫外線（ＵＶ）による毛髪損傷を検出するためのシステム及び方法に関する。
【００１０】
本発明の実施形態は、毛髪の紫外線損傷を測定する方法を目的とし、当該方法は、タンパク質フラグメントを水溶液によって毛髪試料から溶出させる工程と、溶媒を用いて前記タンパク質を抽出する工程と、前記タンパク質フラグメント試料をＭＡＬＤＩ−ＭＳによって分析し、その結果としてタンパク質フラグメント結果を得る工程と、標識タンパク質フラグメントの存在を同定し、高分解能のＯｒｂｉｔｒａｐ−ＭＳを用いてアミノ酸配列を同定することにより前記フラグメントが何であるか同定する工程であって、前記タンパク質フラグメントはＳ１００Ａ３のタンパク質フラグメントである工程を含む。
【００１１】
本発明の更なる実施形態は、毛髪の紫外線損傷の処置を同定する方法を目的とし、当該方法は、毛髪試料Ａに対して処置用組成物を塗布し、試料Ｂに対しては処置用組成物を塗布しない工程と、毛髪試料Ａ及び毛髪試料Ｂに紫外線を当てる工程と、タンパク質フラグメントを水溶液によって毛髪試料から溶出させる工程と、
溶媒を用いて前記タンパク質を抽出する工程と、試料中に存在する固有の変形パターンを同定することにより標識タンパク質フラグメントを同定又は測定する工程であって、前記ＭＡＬＤＩ−ＭＳタンパク質フラグメントからＳ１００Ａ３のタンパク質フラグメントが得られ、試料Ａは試料Ｂと比べてＳ１００Ａ３のタンパク質フラグメントの強度が減少している工程を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】未処置の毛髪についての標識タンパク質フラグメントのＭＡＬＤＩ質量スペクトルである。
【図２】紫外線を受けた毛髪についての標識タンパク質フラグメントのＭＡＬＤＩ質量スペクトルである。
【図３】脱色された毛髪についての標識タンパク質フラグメントのＭＡＬＤＩ質量スペクトルである。
【図４】紫外線への曝露を０時間、２５時間、５０時間、７５時間行い測定した、ｍ／ｚ  １２７８ピーク強度の測定値のグラフである。
【図５】増加する銅濃度に曝された毛髪の紫外線への曝露を０時間、２０時間、４０時間行い測定した、ｍ／ｚ  １２７８ピーク強度の測定値のグラフである。
【図６】高分解能のＯｒｂｉｔｒａｐ質量スペクトロメーターにより得られたｍ／ｚ  １２７８タンパク質フラグメントのＭＳ／ＭＳフラグメントイオンスペクトルであり、Ｓ１００Ａ３のフラグメントとしてその配列を示している（アセチル化ＡＲＰＬＥＱＡＶＡＡＩＶアミド）。
【図７】キーラント（ＥＤＤＳ）を含有しないシャンプーと０．１％のキーラント（ＥＤＤＳ）を含有するシャンプーについて、タンパク質損失の総量の測定値のグラフである。
【図８】キーラント（ＥＤＤＳ）を含有しないシャンプーと０．１％のキーラント（ＥＤＤＳ）を含有するシャンプーについて、ｍ／ｚ  １２７８強度の測定値のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書で使用するとき、「毛髪」は、頭髪又はまつげのような、人又は動物由来のケラチン繊維を意味する。更に、本明細書で使用するとき、「ケラチンタンパク質」という用語は、毛髪に存在するタンパク質を意味するものと理解される。本明細書で使用するとき、「タンパク質フラグメント」という用語は、損傷されケラチンタンパク質構造体から剥がれたアミノ酸及びアミノ酸より大きいタンパク質であるが、静電相互作用、又は弱い水素結合マトリックスのタンパク質及び脂質、あるいはケラチンタンパク質構造体への組み込みを含まないその他の任意の力によって、毛髪構造体内に保持されているものを意味する。
【００１４】
本明細書で使用するとき、「標識タンパク質」は、特定の毛髪損傷の種類及び／又は損傷を及ぼす処置と相関しているタンパク質フラグメントを意味する。
【００１５】
本明細書で使用するとき、「溶出する」、「溶出している」などは、還元剤又は抽出剤を一切添加せずに水溶液と毛髪を接触させることによって、ケラチンタンパク質構造を変更せずに、かつ毛髪試料に存在する（静電相互作用、弱い水素結合マトリックスのタンパク質及び脂質、又はケラチンタンパク質構造体への組み込みを含まないその他の任意の力による結合以外の）化学結合を破壊若しくは還元せずに、毛髪からタンパク質を取り出すことを意味する。
【００１６】
本明細書で使用するとき、「溶出可能」とは、毛髪試料に存在するタンパク質フラグメントが、還元剤又は抽出剤を一切添加せずに水溶液において毛髪構造体から取り出されることが可能なことを意味する。更に、「溶出可能」は、タンパク質が、本質的に水からなる水溶液において、静電相互作用、弱い水素結合マトリックスのタンパク質及び脂質、又はケラチンタンパク質構造体への組み込みを含まないその他の任意の力による結合以外のケラチンタンパク質構造体に存在する化学結合の破壊又は還元を伴わずに、毛髪構造体から運び出すことができることを意味する。
【００１７】
ケラチンタンパク質構造を変更せずに毛髪からタンパク質フラグメントを抽出するために水溶液を用いて毛髪損傷を検出し示すための方法が開発されてきた。毛髪から抽出されたタンパク質フラグメントは、分析される。タンパク質フラグメントの分析を基に、毛髪に及んだ損傷の種類を特定すること、特に毛髪に及んだ損傷の原因を決定することが可能である。そのような特定の標識タンパク質フラグメントとしては、毛髪が紫外線及び／又は銅に曝されたときに生成される標識タンパク質フラグメントが挙げられる。毛髪試料を検査し、タンパク質フラグメントを抽出し、抗体に基づく検出及び／又は質量分析法を用いて、得られたタンパク質フラグメントの試験を行うことができる。一実施形態では、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法すなわち「ＭＡＬＤＩ−ＭＳ」としても知られているマトリックス支援レーザー脱着イオン化法（「ＭＡＬＤＩ」）を用いてタンパク質フラグメントの評価を行う。この技法は質量分析法で用いられるソフトイオン化法である。ＭＡＬＤＩ−ＭＳは、ペプチド及びタンパク質のような生体分子、並びにポリマーのような大きい有機分子の分析に用いることができる。ＭＡＬＤＩでは、α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸（ＣＨＣＡ）のような紫外線吸収性マトリックスで検体を最初に共結晶化してからパルスレーザー（ＹＡＧ又は窒素レーザー）放射線に曝す。これは検体／マトリックス結晶の蒸発／脱着を引き起こし、質量分析質に伝達されて検出されるイオンを生成する。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦでは飛行時間質量分析質が用いられる。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦデータは、分子量の情報を生成するためにＭＳモード（例えばペプチド）で収集してもよく、ＭＳ／ＭＳモード（例えばペプチド配列／構造情報）で収集してもよい。典型的なＭＡＬＤＩ質量スペクトル収集は１分未満で行われるので、関心のある試料の分子種の高速スクリーニングに使用することができる。未処置の毛髪と紫外線及び／又は銅に曝された毛髪のように異なる条件下で処置された試料で得られた質量スペクトルの比較によって、変化及び分子標識を検出することができる。
【００１８】
ＭＡＬＤＩ−ＭＳは、酵素によるタンパク質の分解とともに行っても、それを用いずに行ってもよい。次いで、タンパク質フラグメントの試験結果を既知の標識タンパク質フラグメントのライブラリと比較して毛髪損傷の種類を同定し、場合によっては毛髪損傷の発生源（すなわち脱色）を同定する。これは損傷の「フィンガープリンティング」を可能にする。すなわち、毛髪試料を検査し、その結果に特定の標識タンパク質フラグメントが含まれていれば、それは毛髪試料が特定の原因によって損傷されていることを意味する。
【００１９】
タンパク質フラグメントを評価するための更なる方法としては、液体クロマトグラフィー電気スプレー質量分析や多重反応モニタリング（ＭＲＭ）質量分析が挙げられ（ただしこれに限定されず）、タンパク質フラグメントに対する抗体を生成することができ、ＥＬＩＳＡ検定を開発することができる。
【００２０】
更に、ｉＴＲＡＱ（Ｉｓｏｂａｒｉｃ  Ｔａｇｓ  ｆｏｒ  Ｒｅｌａｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ａｂｓｏｌｕｔｅ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）法で、ＡＢ−Ｓｃｉｅｘ（マサチューセッツ州Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ）から入手可能な試薬を使用して、タンパク質フラグメントの各リシン側鎖及び遊離Ｎ末端基に対するアイソバリックタグの共有結合アミン連鎖を確立することができる。これは、ＭＡＬＤＩ−ＭＳによって同時に複数の試料の試験を実行することを可能にする。複数の試料の試験をＭＡＬＤＩ−ＭＳで同時に実行することは、試験のばらつきによる試験データの変動を最小限にする。
【００２１】
更に、ＭＡＬＤＩ−イメージング質量分析を用いて、毛髪のような表面上に直接、化学種をマッピングすることもできる。損傷した毛髪のペプチドフラグメントは、毛髪繊維上で直接検出し可視化することができる。同一のデータ収集時に得られたＭＡＬＤＩ画像中の標識ペプチド強度が比較できる。例えば、未処置、脱色、又は紫外線曝露した毛髪の単一の繊維を、導電性の両面接着テープを用いて、ＭＡＬＤＩプレート上に直接載せることができる。α−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸（ＣＨＣＡ）のようなＭＡＬＤＩマトリックスの適用後、当該領域にわたってレーザービームを走査することにより、毛髪繊維の表面をイメージングモードで分析することができる。ＭＡＬＤＩイメージングモードで得られたデータは、Ｂｉｏｍａｐなどのイメージングソフトウェアを用いて処理することができる。毛髪繊維表面に存在する特定の損傷標識上のイオン強度マップ（例えば、紫外線照射によるｍ／ｚ  １２７８、脱色によるｍ／ｚ  １０３７）を生成して目視で比較することができる。
【００２２】
多様な異なる組成物又は処置によって毛髪見本を損傷して、得られたタンパク質フラグメントを損傷されていない同様の毛髪見本と比較分析することによって、これらの標識タンパク質フラグメントのライブラリを生成できる。毛髪が受けた損傷の種類に基づいて同じ標識タンパク質の結果が見出されるであろうと考えられるので、ＭＡＬＤＩ−ＭＳによって標識タンパク質フラグメントを同定できる。これは、標識タンパク質フラグメントが毛髪損傷の種類又は原因の指標となることを意味する。紫外線及び／又は銅による毛髪損傷は特定の標識タンパク質フラグメントをもたらし、脱色による毛髪損傷は特定の標識タンパク質フラグメントをもたらすなどである。
【００２３】
化学的に未処置、紫外線曝露、及び脱色処置された毛髪からの水抽出物の可溶性タンパク質分画をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により検査して、紫外線又は銅によって損傷した毛髪に特有の標識イオンを同定する。特にｍ／ｚ  １２７８（図２）における１つの標識が、紫外線によって損傷した全ての試料（ｎ＝２０）に生じることが分かる。この標識は、少量ではあるが未処置及び脱色された毛髪にも見られる。これは、収集される前に提供者の毛髪が自然の天候や紫外線に曝されたことによるものであろうと考えられる。この標識イオン強度が制御された紫外線曝露を強めることにより上昇することは、これが紫外線により誘発されたタンパク質劣化の標識であることを示しており、日射に曝されることによる毛髪タンパク質の酸化に起因すると考えられる。
【００２４】
加えて、この方法を使用して個人の毛髪が処置に対して正常な反応を有するかどうかを示すこともできる。例えば、特定の毛髪疾患を有する個人の場合、その人からの毛髪試料は「正常な」反応を有する人からのものと同じ標識タンパク質フラグメントを生成しない可能性がある。毛髪疾患を有する人は、正常な反応によって示されるより多い、少ない、及び／又は場合によってはそれと異なる標識タンパク質フラグメントを生成する可能性がある。毛髪疾患反応ライブラリもまた、上述のような損傷に関する標識タンパク質フラグメントのライブラリと同様に作製できる。したがって、この毛髪疾患用の検査には、個人の毛髪を特定の損傷を及ぼす処置に曝露し、次いでその損傷を及ぼす処置から生成された標識タンパク質フラグメントによって毛髪疾患を同定することが含まれ得る。
【００２５】
この毛髪タンパク質損失検査法の一実施形態では、可溶性タンパク質フラグメントと不溶性タンパク質フラグメントを別々に分析する。可溶性タンパク質フラグメントと不溶性タンパク質フラグメントを別々に分析することは、タンパク質フラグメントの検出の感度を高めることができる。加えて、これらのタンパク質フラグメントを別々に分析することは、毛髪損傷の場所の決定を改善し得る。可溶性タンパク質フラグメントと不溶性タンパク質フラグメントを別々に測定するために、毛髪繊維を取り出した後、水中の試料を遠心分離するか、又は可溶性部分から不溶性の部分を沈殿させることができる。
【００２６】
方法
毛髪試料は、以下の方法により処置及び分析できる。
【００２７】
毛髪の銅による処置：化学的に未処置の毛髪を、硬度９グレインの流水に４５分間晒す。銅を０．００ｐｐｍ、０．０５ｐｐｍ、及び０．１０ｐｐｍ含有する水を用いて、３組の毛髪の房を作製する。実験の前に、毛髪中の銅の濃度を、誘導結合されたプラズマ原子分光法（ＩＣＰ−ＯＥＳ）測定法により確認する。
【００２８】
毛髪房の紫外線による処置：銅で処置された毛髪を、Ａｔｌａｓ  Ｃｉ３０００＋ｗｅａｔｈｅｒ−ｏ−ｍｅｔｅｒ（Ａｔｌａｓ、米国イリノイ州Ｃｈｉｃａｇｏ）を用いた照射によって紫外線曝露する。内部及び外部水晶フィルターを用いて、広域スペクトルの、４２０ｎｍにおける特定の照度１．４８Ｗ  ｍ２の屋外日光をシミュレーションする。照射プロセスの間、温度及び相対湿度はそれぞれ３５℃及び８０％  ＲＨに維持される。毛髪房は、示された時間にわたり照射される。
【００２９】
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ用の試料作製：化学的に未処置、紫外線及び／又は銅によって処置された毛髪房から０．２から０．３ｇの毛髪試料（長さ２）を収集し、これらをガラスシンチレーションバイアルに投入する。蒸留水を１０：１（毛髪１ｇに対する水ｍＬ単位）の割合で加える。試料をＤＶＸ−２５００  Ｍｕｌｔｉ−Ｔｕｂｅ  Ｖｏｒｔｅｘｅｒプラットフォーム（ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、米国ペンシルベニア州Ｒａｄｎｏｒ）上で、２５００ｒｐｍの速度で１時間振とうする。マトリックス支援レーザー脱着イオン化飛行時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）質量分析により、水抽出物からのペプチド標識イオンを検出する。毛髪からの水抽出物は、ＭＡＬＤＩマトリックスα−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸（５ｍｇ／ｍＬのα−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸を８０％のアセトニトリル／水／０．１％のトリフルオロ酢酸に溶解）と１：１で混合される。１マイクロリットルのこの混合物を目標プレートに落とし、ＭＡＬＤＩ分析の前に室温で空気乾燥させる。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＴＯＦ  ４８００  Ｐｌｕｓ  Ｍａｓｓ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＡＢ−Ｓｃｉｅｘ、米国マサチューセッツ州Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ）が、正イオンリフレクトロンモードで使用される。この質量スペクトロメーターは、２００Ｈｚ周波数のＮｄ：ＹＡＧレーザーを用い、波長３５５ｎｍで動作する。ＭＡＬＤＩプロセスで生成されたイオンは、２０ｋＶで加速される。ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量スペクトルは、８００から４０００Ｄａの質量範囲で生成される。レーザー強度は、３５００から４０００Ｖの間に設定されている。データは、サブスペクトルごとに５０ショットの試料スポットに対して、スペクトルごとに計１０００ショットを無作為抽出するように、自動的に収集される。各抽出に対するペプチド標識ピークの強度が測定され定量化される。
【００３０】
シャンプーの処方及び処置：１０．５％のＳＬＥ１Ｓ、１．５％のＳＬＳ、及び１．０％のコカミドプロピルベタイン界面活性剤を含有する単純な界面活性剤シャンプーが処方される。０．１％有効レベルのＮ，Ｎ’エチレンジアミン二コハク酸（ＥＤＤＳ）が示されたようにテストシャンプー製品に追加される。染色処置された毛髪をシャンプーで２０サイクル洗浄し、ＩＣＰ法によって銅摂取を分析する。各洗浄サイクルでは、毛髪見本の毛髪１ｇに対して０．１ｇのシャンプーを用い、３０秒間泡立てて、その後３０秒間洗い流すことを計２回シャンプーを使って繰り返す。その後、毛髪は８０℃に温めた箱内で乾燥させる。
【００３１】
ｍ／ｚ  １２７８ペプチド標識に対する銅キレート化の影響：化学的に未処置の毛髪房を、０．０５ｐｐｍの銅を含有する水中に４５分間浸して予め銅で処置する。毛髪内の銅の濃度はＩＣＰ−ＯＥＳ測定法によって確認する。毛髪をキーラント（０．１％  ＥＤＤＳ）を含有するシャンプーと含有しないシャンプーで２０サイクル洗浄し、５サイクル終了ごとに３時間人工的な照射を施す。各洗浄サイクルでは、毛髪１ｇに対して０．１ｇのシャンプーを用い、３０秒間泡立てて、その後３０秒間洗い流すことを計２回シャンプーを使って繰り返す。毛髪は、各サイクルが終了すると８０℃に温めた箱内で乾燥させる。
【００３２】
タンパク質損失総量の測定：各毛髪房から０．２から０．３ｇの毛髪試料（長さ２）を収集し、これらをガラスシンチレーションバイアルに投入する。蒸留水を１０：１（毛髪１ｇに対する水ｍＬ単位）の割合で加える。試料をＤＶＸ−２５００  Ｍｕｌｔｉ−Ｔｕｂｅ  Ｖｏｒｔｅｘｅｒプラットフォーム（ＶＷＲ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、米国ペンシルベニア州Ｒａｄｎｏｒ）上で、２５００ｒｐｍの速度で１時間振とうする。抽出物中のタンパク質濃度を、豚ゼラチン標準値に対して修正Ｌｏｗｒｙ検定を用いて判定する（修正Ｌｏｗｒｙタンパク質試験キットはＰｉｅｒｃｅ（米国イリノイ州Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ）製）。
【００３３】
タンパク質フラグメントの同定：ＭＡＬＤＩ−ＭＳで最初に検出された標識ペプチドｍ／ｚ  １２７８を同定し配列を決定するため、紫外線曝露された毛髪からの水抽出物を、６０分の傾斜、７５ｕｍ  ｉ．ｄ．ｘ１５ｃｍ  Ｃ１８逆相カラム及びＥａｓｙｓｐｒａｙイオン化インターフェースを用いて、オンラインのナノＬＣ−高分解能Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析によって分析する。このＯｒｂｉｔｒａｐシステムは、１０ｐｐｍを超える質量測定精度を有する。Ｍａｓｃｏｔソフトウェアを用いてＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔデータベースを検索して、標識フラグメントｍ／ｚ  １２７８．７の親タンパク質を同定する。ナノＬＣ−Ｏｒｂｉｔｒａｐデータのタンパク質データベースの検索は、Ｎ−末端アセチル化、メチオニン酸化、アミド化などのある種の一般的な変形を加えながら行われる。
【００３４】
結果：
図１、図２、及び図３は、未処置の毛髪試料及び処置された毛髪試料からの抽出物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦスペクトルを示す。図１では、フラグメントの特定の組が未処置の毛髪から発せられている。図２に示すとおり、紫外線処置された毛髪について、フラグメントの特定の組が発せられている。また、図３に示すとおり、脱色された毛髪について、フラグメントの特定の組が発せられている。合わせてこれらはｍ／ｚ  １２７８標識タンパク質フラグメントが毛髪の紫外線処置後に増加していることを示している。
【００３５】
図４は、紫外線処置された毛髪からのｍ／ｚ  １２７８バイオマーカーの定量化されたＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ信号強度を示し、ｍ／ｚ  １２７８ピークが紫外線線量に依存して生成されることを示している。紫外線曝露の時間経過を経た毛髪からの水抽出物の可溶性タンパク質分画を、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により検査する。このデータは、ｍ／ｚ  １２７８標識タンパク質フラグメントの濃度が未処置の毛髪への紫外線曝露に応じて増加することを示している。
【００３６】
表１は、ｍ／ｚ  １２７８標識タンパク質フラグメントが紫外線曝露の長さに応じて増加することが分かることを示している。
【００３７】
【表１】
2017524897.tif 000003
【００３８】
図５は、銅で処置され、紫外線処置された毛髪からのｍ／ｚ  １２７８バイオマーカーの定量化されたＭＡＬＤＩ−ＭＳ信号強度を示し、ｍ／ｚ  １２７８ピークが銅の濃度及び紫外線線量に依存して生成されることを示している。用量反応実験を化学的に未処置の毛髪に異なる濃度の銅を処置したものに対して繰り返し、毛髪内に酸化還元金属が存在すると、紫外線曝露によりｍ／ｚ  １２７８標識ペプチドの生成が増加するかどうかを判定する。データは、未処置の毛髪中の銅の濃度と紫外線曝露後のｍ／ｚ  １２７８標識ペプチドの存在との間に明らかな正の相関関係があることを示している。相関関係は、紫外線曝露されていない（０時間）の場合にも存在し、非紫外線誘発損傷メカニズムにおいて銅が影響を与えていることを示している。これらの発見は、ｍ／ｚ  １２７８ペプチドフラグメントの一貫した解放により、銅が特定の毛髪タンパク質の紫外線誘発酸化分解に寄与する触媒として働くというメカニズムを裏付けている。毛髪中の最終的な銅の濃度は、誘導結合されたプラズマ原子分光法（ＩＣＰ−ＯＥＳ）測定法により確認する。
【００３９】
図６は、ナノＬＣ−高分解能Ｏｒｂｉｔｒａｐによるｍ／ｚ  １２７８バイオマーカーのＭＳ／ＭＳペプチド配列決定によって、Ｓ１００Ａ３を親タンパク質として同定し、Ｓ１００Ａ３のこの特定の断片化は紫外線及び／又は銅の刺激を受けた毛髪の損傷に対する固有のバイオマーカーであることを示している。紫外線による損傷標識イオンｍ／ｚ  １２７８は、配列Ａｃ−ＡＲＰＬＥＱＡＶＡＡＩＶ−ＮＨ２（分子量＝１２７７．７４５７）を計算値（１２７７．７４５５）の０．１ｐｐｍの精度で一致させ、これにより正確な配列決定が行われる。標識ｍ／ｚ  １２７８．７からの質量分析フラグメントイオンは、例えば４５２．２、５８１．３、７０９．４、７８０．７などのａシリーズイオンと、例えば６０９．３、７３７．４、１０４９．７、１１６２．８などのｂシリーズイオンとを主に示し、これはアルギニン残基がこのペプチドのＮ−末端付近に存在するためである。一価のイオンｍ／ｚ  １２７８．７に加え、この標識ペプチドの二価のイオンｍ／ｚ  ６４０．３も、−０．０７ｐｐｍの質量測定精度で同じナノＬＣ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ分析において検出される。Ｍａｓｃｏｔソフトウェアを用いてＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔタンパク質データベースを検索して、標識フラグメントｍ／ｚ  １２７８の親タンパク質はＳ１００Ａ３であると同定する。Ｓ１００Ａ３は、必須の毛髪キューティクルタンパク質であると文献に特定されており、毛幹の健全性にとって重要である。このデータは、ｍ／ｚ  １２７８標識ペプチドの生成によるＳ１００Ａ３の断片化の特性及び毛髪内銅濃度との関係を示している。続いて行われる公開されているＳ１００Ａ３の結晶構造の構造分析により、タンパク質の二量体型中の金属イオン結合部位（すなわち銅及び亜鉛）の位置が、ｍ／ｚ  １２７８フラグメント切断部位に近接していることを示し、銅がペプチド断片化に近接していることが本件に見られるＳ１００Ａ３の特定の断片化の一因であることを示している。
【００４０】
図７は、銅キーラントを含有するシャンプーで予め処置した毛髪房における、紫外線の刺激によるタンパク質損失の減少を示している。キーラントは、その２つの可能な酸化状態間の酸化還元金属の１−電子触媒サイクルを防ぐことにより、金属が誘発するラジカル形成を制御することが知られている。従来の研究により、ＥＤＤＳ（Ｎ，Ｎ’エチレンジアミン二コハク酸）により、染髪時に使用される酸化条件において銅が誘発するラジカル形成を防ぐことができることが示されている。図７は、０．１％  ＥＤＤＳを含有するシャンプーで洗浄した銅で処置した毛髪が、触媒銅イオンの蓄積を防ぐことにより、紫外線によるタンパク質損失の総量を抑えられることを示している。
【００４１】
図８は、紫外線の刺激によるｍ／ｚ  １２７８バイオマーカー生成が、銅キーラントを含有するシャンプーで予め処置した毛髪房では減少していることを示している。図７に示すものと同じ毛髪の水抽出物を使用したＭＡＬＤＩ−ＭＳスペクトルは、シャンプー中の０．１％のＥＤＤＳ（Ｎ，Ｎ’エチレンジアミン二コハク酸）が紫外線による毛髪損傷のｍ／ｚ  １２７８ペプチド標識の銅により誘発された形成を減少させることを示し、ここでも断片化の特性及び毛髪内の銅の濃度に対するｍ／ｚ  １２７８ペプチド標識の相対感度を示している。
【００４２】
本発明の一実施形態では、毛髪の紫外線による損傷を抑えるために様々な処置が施されてもよい。かかる処置の非限定的な例を以下に挙げる。
【００４３】
キレート剤
本発明の一実施形態では、処置用組成物はキーラントを含んでもよい。用語「キーラント」（又は「キレート剤」若しくは「金属イオン封鎖剤」）とは、当該技術分野において周知であり、各々が金属イオンとキレートを形成できる分子又は異なった分子の混合物を指す。キレートは、その内部で化合物（キーラント）が２又はそれ以上の箇所で金属イオンへと配位されて、当該金属を含む原子の環となる無機錯体である。キーラントは、金属イオンとともに配位結合を形成する２個又はそれ以上の電子供与原子を含有する。
【００４４】
いずれのキーラントも本明細書で使用するのに好適である。キーラントは、当該技術分野において周知であり、それらの非包括的なリストは、ＡＥマーテル（ＡＥ  Ｍａｒｔｅｌｌ）及びＲＭスミス（ＲＭ  Ｓｍｉｔｈ）著、「臨界安定度定数（Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  Ｃｏｎｓｔａｎｔｓ）」（第１巻、プレナム出版社（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ）（ニューヨーク＆ロンドン（１９７４年））、並びにＡＥマーテル（ＡＥ  Ｍａｒｔｅｌｌ）及びＲＤハンコック（ＲＤ  Ｈａｎｃｏｃｋ）著、「水溶液中の金属錯体（Ｍｅｔａｌ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｉｎ  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」（プレナム出版社（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ）（ニューヨーク＆ロンドン（１９９６年））に見出すことができ、両者共、本明細書に参考として組み込まれ、Ｋｅｌｌｅｔｔらの米国特許第５，７４７，４４０号に開示されている。
【００４５】
本明細書の使用に好適なアミノカルボン酸キーラントの例としては、ニトリロ三酢酸及びポリアミノカルボン酸、例えばジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン二コハク酸（ＥＤＤＳ）、エチレンジアミンジグルタル酸（ＥＤＧＡ）、２−ヒドロキシプロピレンジアミン二コハク酸（ＨＰＤＳ）、グリシンアミド−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＧＡＤＳ）、エチレンジアミン−Ｎ−Ｎ’−ジグルタル酸（ＥＤＤＧ）、２−ヒドロキシプロピレンジアミン−Ｎ−Ｎ’−二コハク酸（ＨＰＤＤＳ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、これらの塩、及びこれらの誘導体が挙げられる。
【００４６】
本明細書の使用に好適な、他のアミノカルボン酸型キーラントは、Ｎ−２−ヒドロキシエチルＮ，Ｎ二酢酸又はグリセリルイミノ二酢酸（ＥＰ−Ａ−３１７，５４２号及びＥＰ−Ａ−３９９，１３３号に記載されている）、イミノ二酢酸−Ｎ−２−ヒドロキシプロピルスルホン酸及びアスパラギン酸Ｎ−カルボキシメチルＮ−２−ヒドロキシプロピル−３−スルホン酸（ＥＰ−Ａ−５１６，１０２号に記載されている）などのイミノ二酢酸誘導体、β−アラニン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸、アスパラギン酸−Ｎ，Ｎ’−二酢酸、アスパラギン酸−Ｎ−一酢酸及びイミノ二コハク酸キーラント（ＥＰ−Ａ−５０９，３８２号に記載されている）、エタノールジグリシン酸、これらの塩、及びこれらの誘導体である。
【００４７】
ＥＰ−Ａ−４７６，２５７号には好適なアミノ系キーラントが記載されている。ＥＰ−Ａ−５１０，３３１号にはコラーゲン、ケラチン、又はカゼインに由来する好適なキーラントが記載されている。更なる非限定的な例としては、好適なアルキルイミノ二酢酸キーラントが挙げられる。ジピコリン酸及び２−ホスホノブタン−１，２，４−トリカルボン酸もまた好適である。
【００４８】
好適なアミノカルボン酸キーラントには、ジアミン−Ｎ，Ｎ’−二ポリ酸及びモノアミンモノアミド−Ｎ，Ｎ’−二ポリ酸キーラント、これらの塩、及びこれらの誘導体が挙げられる。好適なポリ酸は、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、ｏ−ヒドロキシフェニル基、ｍ−ヒドロキシフェニル基、及びｐ−ヒドロキシフェニル基から独立して選択された少なくとも２つの酸性基を含有する。好ましくは、少なくとも１つの酸部位がカルボキシル基部位である。好適なポリ酸には、二塩基酸、三塩基酸、及び四塩基酸が挙げられ、好ましくは二塩基酸である。好ましい塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類、アンモニウム、又は置換アンモニウム塩が挙げられる。ＥＤＴＡは四酸（tetramonoacid）であり、この種の好ましいキーラントには属さない。
【００４９】
本明細書の使用に好ましいアミノカルボン酸は、ジアミン−Ｎ，Ｎ’−二ポリ酸及びモノアミンモノアミド−Ｎ，Ｎ’−二ポリ酸であり、このポリ酸種は二酸であり、好ましくは約３から１０個、より好ましくは約４から６個、更に好ましくは約４個の炭素原子による炭素鎖長を有する二酸である。本明細書の使用に好適な例示的ジアミン二ポリ酸としては、欧州特許ＥＰ０６８７２９２号に開示されているエチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＥＤＤＳ）、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジグルタル酸（ＥＤＤＧ）、及び２−ヒドロキシプロピレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＨＰＤＤＳ）や、調製方法がＥＰ３３１５５６号に開示されているＥＤＤＨＡ（エチレンジアミン−Ｎ−Ｎ’−ビス（ｏ−ヒドロキシフェニル酢酸））が挙げられる。好ましいモノアミンモノアミド−Ｎ，Ｎ’−二ポリ酸は、ＵＳ  ４，９８３，３１５号に記載されているグリシンアミド−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＧＡＤＳ）である。
【００５０】
本明細書の使用に非常に好ましいのは、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＥＤＤＳ）、この誘導体、及びこの塩である。本明細書の使用に好ましいＥＤＤＳ化合物は、遊離酸型及びこの塩である。好ましい塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、又は置換アンモニウム塩が挙げられる。非常に好ましい塩は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、及びカルシウム塩である。ＥＤＤＳのこれらの好ましいナトリウム塩の例としては、Ｎａ2ＥＤＤＳ及びＮａ3ＥＤＤＳが挙げられる。
【００５１】
本明細書の使用に非常に好ましいのは、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二コハク酸（ＥＤＤＳ）、この誘導体、及びこの塩である。本明細書の使用に好ましいＥＤＤＳ化合物は、遊離酸型及びこの塩である。好ましい塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、又は置換アンモニウム塩が挙げられる。非常に好ましい塩は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、及びカルシウム塩である。ＥＤＤＳのこれらの好ましいナトリウム塩の例としては、Ｎａ2ＥＤＤＳ及びＮａ3ＥＤＤＳが挙げられる。
【００５２】
ＥＤＤＳの酸性型の構造は以下のとおりである。
【００５３】
【化１】
2017524897.tif 000004
【００５４】
ＥＤＤＳは、例えば無水マレイン酸及びエチレンジアミンなどの、容易に入手可能で安価な出発物質から合成することができる。無水マレイン酸及びエチレンジアミンからＥＤＤＳを合成すると、２つの非対称の炭素原子によって［Ｒ，Ｒ］、［Ｓ，Ｓ］、及び［Ｓ，Ｒ］（２５％  Ｓ，Ｓ、５０％  Ｒ，Ｓ、及び２５％  Ｒ，Ｒ）の３つの光学異性体の混合物ができる。ＥＤＤＳの生分解は光学異性体に特異であり、［Ｓ，Ｓ］異性体の分解が最も速く広範に及ぶ。
【００５５】
ジアミン−Ｎ，Ｎ’−二ポリ酸及びモノアミンモノアミド−Ｎ，Ｎ’−二ポリ酸キーラント以外の好ましいキーラントとしては、Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−二酢酸（ＨＢＥＤ）、この塩、及びこの誘導体である。
【００５６】
【化２】
2017524897.tif 000005
【００５７】
好適なＨＢＥＤの誘導体は、Ｎｏｖａｒｔｉｓが譲受人のＷＯ９７４４３１３号に挙げられている。
【００５８】
好適なポリリン酸キーラントとしては、１以上のＰ原子を含有し、Ｐ−Ｏ−Ｐ結合を有する分子が挙げられる。ポリリン酸キーラント及び塩（ポリリン酸塩）は直鎖であり得、一般的に式［ＰnＯ3n+1］(n+2)-Ｍ(n+2)+で表され、式中、ＭはＨ+、Ｎａ+、又はＫ+などの好適な対イオンであり、ｎは整数である。ポリリン酸型キーラント及びそのポリリン酸塩は、環状であり得、式［ＰnＯ3n］n-Ｍn+で表される。とりわけ代表的な例としては、トリポリリン酸ナトリウム、二リン酸四ナトリウム、ヘキサメタリン酸、及びメタリン酸ナトリウムが挙げられる。
【００５９】
好適なホスホン酸キーラントとしては、アミノアルキレンポリ（アルキレンホスホン酸）、エタン１−ヒドロキシジホスホン酸、及びニトリロトリメチレンホスホン酸、これらの塩、及びこれらの誘導体が挙げられる。この種の好適なキーラントは、参照により本明細書に組み込まれる、ＲｅｅｓｅらによるＵＳ  ４，１３８，４７８号及びＢｅｒｔｈらによるＵＳ  ３，２０２，５７９号、ＵＳ３，５４２，９１８号に開示されている。
【００６０】
本明細書で使用される好ましいホスホン酸型キーラントは、以下の式（Ｉ）で表される。
【００６１】
【化３】
2017524897.tif 000006
式中、各Ｘは独立して水素又はアルキルラジカル、好ましくは水素又は１から４個の炭素原子を有するアルキルラジカルから選択され、更に好ましくは水素であり、各Ｒ1は独立して−ＰＯ3Ｈ2又は次の式（ＩＩ）で表される基から選択される。
【００６２】
【化４】
2017524897.tif 000007
【００６３】
本明細書で使用される式（Ｉ）による好ましいキーラントは、アミノトリ−（１−エチルホスホン酸）、エチレンジアミンテトラ−（１−エチルホスホン酸）、アミノトリ−（１−プロピルホスホン酸）、アミノトリ−（イソプロピルホスホン酸）、及び次の式（ＩＩＩ）で表されるキーラントである。
【００６４】
【化５】
2017524897.tif 000008
式中、各Ｒ2は独立して−ＰＯ3Ｈ2又は次の式（ＩＶ）で表される基から選択される。
【００６５】
【化６】
2017524897.tif 000009
【００６６】
本明細書で使用される式（ＩＶ）による特に好ましいキーラントは、アミノトリ−（メチレンホスホン酸）、エチレン−ジアミン−テトラ−（メチレンホスホン酸）（ＥＤＴＭＰ）、及びジエチレン−トリアミン−ペンタ−（メチレンホスホン酸）（ＤＴＰＭＰ）である。
【００６７】
好適に使用されるその他のキーラントは、ヒスチジン、アルギニン、リジン、アスパラギン、トリプトファン、セリン、グルタミン、アラニン、グリシン、及びプロリンなどのアミノ酸である。更なる非限定的な例は、亜鉛ピリチオン又はピリチオンの金属塩である。
【００６８】
処置用組成物中のキーラントの濃度は、約０．０１重量％ほどの低さ、又は約１０重量％ほどの高さであることができるが、この高い方の濃度（すなわち１０重量％）を超えると、配合及び／又は人の安全性の問題が生じることがある。一実施形態では、キーラントの濃度は、処置用組成物の重量比で、少なくとも約０．０５重量％、少なくとも約０．１重量％、少なくとも約０．２５重量％、少なくとも約０．５重量％、少なくとも約１重量％、又は少なくとも約２重量％であってもよい。約４重量％超の濃度を使用することができるものの、追加効果は得られない。
【００６９】
日焼け止め剤
本発明の一実施形態では、処置用組成物は好適な日焼け止め剤を含んでいてもよく、当該日焼け止め剤は、アミノ安息香酸、アヴォベンゾン、シノキセート、ジオキシベンゾン、ホモサラート、アントラニル酸メンチル、オクトクリレン、メトキシ桂皮酸オクチル、サリチル酸オクチル、オキシベンゾン、パジマートＯ、フェニルベンズイミダゾールスルホン酸、スルイソベンゾン、二酸化チタン、トロラミンサリチル酸、酸化亜鉛、及びこれらの組み合わせを含んでいるがこれらに限定されない。
【００７０】
ヘアケア製品中の典型的な日焼け止め剤濃度は、ヘアケア組成物の約０．１重量％から約２５重量％の範囲であってもよい。
【００７１】
二価塩
本発明の一実施形態では、処置剤は二価塩の好適な例を含んでいてもよく、当該二価塩は、マグネシウム、亜鉛、又はカルシウムの二価塩、例えばグルコン酸塩、塩化物、クエン酸塩、炭酸塩、又は酢酸塩対イオンを含んでいるがこれらに限定されない。当該塩は、無水又は水和物の形であってもよい。
【００７２】
二価塩の好適な濃度は、約０．０１重量％、又は約１０重量％ほどの高さの範囲であってもよい。
【００７３】
抗酸化剤／ラジカルスカベンジャー
本発明の組成物は、安全かつ有効な量の抗酸化剤／ラジカルスカベンジャーを含んでいてもよい。抗酸化剤／ラジカルスカベンジャーは、角質層の剥がれの増加及び質感の変化をもたらし得る紫外線照射からの保護、並びに肌に損傷を生じ得るその他の環境要因からの保護に特に有用である。安全かつ有効な量の抗酸化剤／ラジカルスカベンジャーを、好ましくは組成物の約０．１重量％から約１０重量％、より好ましくは約１重量％から約５重量％を本発明の組成物に加えてもよい。
【００７４】
抗酸化剤／ラジカルスカベンジャー、例えば、アスコルビン酸（ビタミンＣ）及びその塩、脂肪酸のアスコルビルエステル、アスコルビン酸誘導体（例えば、マグネシウムアスコルビルホスフェート）、トコフェロール（ビタミンＥ）、トコフェロールソルベート、トコフェロールアセテート、トコフェロールの他のエステル、ブチル化ヒドロキシ安息香酸及びその塩、６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−カルボン酸（商標名Ｔｒｏｌｏｘ（登録商標）で市販されている）、没食子酸及びそのアルキルエステル、特に没食子酸プロピル、尿酸及びその塩及びアルキルエステル、ソルビン酸及びその塩、リポ酸、アミン（例えば、Ｎ，Ｎ−ジエチルヒドロキシルアミン、アミノグアニジン）、スルフヒドリル化合物（例えば、グルタチオン）、ジヒドロキシフマル酸及びその塩、リシンピドレート、アルギニンピロレート、ノルジヒドログアヤレト酸、バイオフラボノイド、リジン、メチオニン、プロリン、スーパーオキシドジスムターゼ、シリマリン、茶抽出物、ブドウ果皮／種子抽出物、メラニン、ローズマリー抽出物が使用されてもよい。好ましい抗酸化剤／ラジカルスカベンジャーは、トコフェロールソルベート及びトコフェロールの他のエステルから選択され、より好ましくはトコフェロールソルベートである。例えば、局所組成物における本発明に適用可能なトコフェロールソルベートの用法は、米国特許第４，８４７，０７１号に記載されている。
【００７５】
本明細書に開示される寸法及び値は、記載される正確な数値に厳密に限られるとして理解されるべきではない。むしろ、特に断らない限り、それぞれのそのような寸法は、記載される値とその値の周辺の機能的に同等の範囲との両方を意味するものとする。例えば、「４０ｍｍ」として開示される寸法は、「約４０ｍｍ」を意味することを意図する。
【００７６】
本明細書で引用されているあらゆる文献は、あらゆる相互参照特許又は関連特許を含め、明示的に除外されたり、別段に限定されたりしている場合を除き、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いかなる文献の引用も、本明細書中で開示又は特許請求される任意の発明に対する先行技術であるとはみなされず、あるいはそれを単独で又は他の任意の参考文献（単数又は複数）と組み合わせたときに、そのような発明全てを教示、示唆、又は開示するとはみなされない。更に、本文書における用語の任意の意味又は定義が、参照することによって組み込まれた文書内の同じ用語の意味又は定義と矛盾する範囲において、本文書におけるその用語に与えられた意味又は定義が適用されるものとする。
【００７７】
以上、本発明の特定の実施形態を図示、説明したが、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく他の様々な変更及び改変を実施することが可能である点は当業者には自明であろう。したがって、本発明の範囲内に含まれるそのような全ての変更及び修正は、添付の特許請求の範囲にて網羅することが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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2017524897.tif 000019
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