(57)【要約】  １つまたは２つ以上のステビオール配糖体を水溶液に加えて、ステビオール混合物をもたらす工程と、周囲温度でステビオール混合物のｐＨを約７〜９の範囲のｐＨに調整する工程と、次いで、十分な量の水溶液を使用して、ステビオール混合物のｐＨを約２〜４の範囲のｐＨに再調整して、約１０〜８０μｍの長さおよび約０．１〜２μｍの厚さのサイズを有し、最大約１０００〜３０００ｐｐｍの濃度を有する、１つまたは２つ以上の固体ステビオール配糖体粒子の安定懸濁液を含む液体飲料濃縮物をもたらす工程と、を含む、ステビオール配糖体の１つまたは２つ以上の安定懸濁液を含むシロップまたは濃縮物を調製する方法を提供する。シロップまたは濃縮物組成物も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも５００ｐｐｍの濃度で、約１０μｍ〜約８０μｍの長さおよび約０．１μｍ〜約２．０μｍの厚さのサイズを有する、１つまたは２つ以上の固体ステビオール配糖体粒子を含む、約２〜４の範囲のｐＨの安定な水性懸濁液を含む、液体飲料濃縮物。
【請求項２】
前記１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子の濃度が約１０００ｐｐｍ〜約３０００ｐｐｍの範囲である、請求項１に記載の濃縮物。
【請求項３】
前記ステビオール配糖体がレバウジオシドＢである、請求項１に記載の濃縮物。
【請求項４】
安息香酸ナトリウムを更に含む、請求項１に記載の濃縮物。
【請求項５】
１つまたは２つ以上の乳化剤を約０．１〜１．０重量％の濃度で更に含む、請求項１に記載の濃縮物。
【請求項６】
前記乳化剤が、アラビアゴム、モノグリセリドもしくはジグリセリドエステル、ショ糖エステル、メチルセルロース、他の界面活性剤、またはこれらの組み合わせである、請求項５に記載の濃縮物。
【請求項７】
香味料を更に含み、前記香味料が、レモン、ライム、オレンジ、ブドウ、レモンライム、コーラ、ルートビア、モモ、キーウィ、およびこれらの混合物である、請求項１に記載の濃縮物。
【請求項８】
前記懸濁液のＮＴＵが少なくとも１２００である、請求項１に記載の濃縮物。
【請求項９】
前記懸濁液のＮＴＵが１６００〜２２００である、請求項１に記載の濃縮物。
【請求項１０】
前記粒子が針を含み、前記濃縮物が３μｍを超える厚さの針を含まない、請求項１に記載の濃縮物。
【請求項１１】
１つまたは２つ以上のステビオール配糖体を水溶液に加えて、ステビオール混合物をもたらす工程と、
前記ステビオール混合物のｐＨを７超のｐＨに調整する工程と、
十分な量の酸性水溶液を使用して前記ステビオール混合物を約４．０未満のｐＨに調整して、任意追加的に、乳化剤の存在下で、約１０μｍ〜約８０μｍの長さおよび約０．１μｍ〜約２．０の厚さのサイズを有し、少なくとも５００ｐｐｍの濃度を有する、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子の安定懸濁液を含む液体飲料濃縮物をもたらす工程と、を含む、安定懸濁液または１つもしくは２つ以上のステビオール配糖体を含む液体飲料濃縮物の製造方法。
【請求項１２】
前記ステビオール混合物のｐＨが約７〜９の範囲に調整される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記懸濁液のＮＴＵが１６００〜２２００である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記液体飲料濃縮物のｐＨが約２〜４の範囲である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子の濃度が約１０００ｐｐｍ〜約３０００ｐｐｍの範囲である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記１つまたは２つ以上のステビオール配糖体がレバウジオシドＢを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記酸性水溶液がクエン酸、リン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、およびこれらの組み合わせである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記乳化剤が、アラビアゴム、モノグリセリドエステル、ジグリセリドエステル、ショ糖エステル、またはこれらの組み合わせである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記乳化剤が約０．１〜１重量％の濃度で存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記粒子が針を含み、前記濃縮物が３μｍを超える厚さの針を含まない、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２０１４年１月２９日に出願された、米国特許仮出願第６１／９３３，０５９号、名称「ＳＴＡＢＬＥ  ＳＵＳＰＥＮＳＩＯＮ  ＯＦ  Ａ  ＳＴＥＶＩＯＬ  ＧＬＹＣＯＳＩＤＥ  ＩＮ  ＣＯＮＣＥＮＴＲＡＴＥＤ  ＳＹＲＵＰ」の利益を主張し、その全体を参照として本明細書に組み込む。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、ステビオール配糖体に関する。より具体的には、本発明は、濃縮シロップ中でステビオール配糖体の安定な懸濁液を提供することに関する。
【背景技術】
【０００３】
砂糖代用品は、様々な食品および飲料製品での使用が大いに求められる。ステビオール配糖体は、ステビア属植物（ステビア・レバウディアナ・ベントニ（Stevia rebaudiana Bertoni））から抽出される、特に関心の高い甘味のある化合物である。
【０００４】
米国特許出願公開第２０１３／０１８９３９９号は、増加した粘度を有して、液体濃縮物の安定性を向上させる液体飲料を説明する。この濃縮物は、加水分解速度および酸化速度を遅らせる、１つまたは２つ以上の増粘剤を含む。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
濃縮シロップ中でのステビオール配糖体、例えば、レバウジオシドＢの使用は、かかるシロップから調製される最終製品の結果として得られる甘味および香味プロファイルのため、特に望ましい。レバウジオシドＢなどステビオール配糖体を含むかかる濃縮シロップの調製は、該シロップが大多数の飲料用途で適切に使用されるために低いｐＨを有さなければならないので、特に難題である。ステビオール配糖体を濃縮シロップに取り入れるためには該シロップ中のこの成分の溶解度は、通常、最終飲料中の該成分の所望濃度より約６倍は高くなければならない。濃縮シロップ中におけるステビオール配糖体、具体的には、レバウジオシドＢの安定懸濁液は、本発明の方法によって調製し得ることが判明している。
【０００６】
具体的には、レバウジオシドＢを含む液体飲料濃縮物中で安定懸濁液を調製する方法が提供され、この方法では、プロセスの第１工程におけるレバウジオシドＢのステビオール主鎖のＣ１９−カルボキシル基は、少なくとも約９９％が解離カルボキシル形態であり、プロセスの第２工程においては、少なくとも９９％がプロトン化されており、非イオン化カルボン酸形態である。この方法は、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体を水溶液に加えて、ステビオール混合物をもたらす工程と、ステビオール混合物のｐＨを約７〜９の範囲のｐＨに調整する工程と、次いで、十分な量の水溶液を使用して、ステビオール混合物を約２〜４の範囲のｐＨに調整して、約１０〜８０μｍの長さおよび約０．１〜２μｍの厚さを有し、約１０００〜３０００ｐｐｍの濃度を有する、１つまたは２つ以上の固体ステビオール配糖体粒子の安定懸濁液を含む液体飲料濃縮物をもたらす工程と、を含む。
【０００７】
本方法によって製造される濃縮シロップ中のステビオール配糖体の安定懸濁液は、それらの安定性および固有の組成プロファイルのため、「スローシロップ（throw syrup）」など飲料の前駆物質として特に有用である。驚くべきことに、ステビオール配糖体の安定懸濁液は、可溶化困難なステビオール配糖体（レバウジオシドＢ）を組み込むため、優れた香味プロファイルを有する本方法を使用することによって配合され得る。安定懸濁液の一部としてレバウジオシドＢを提供することにより、これまでに可能であったよりも高濃度でレバウジオシドＢを含む液体飲料濃縮物を製造できる。
【０００８】
本発明は、少なくとも５００ｐｐｍの濃度で１つまたは２つ以上のステビオール配糖体を含む安定懸濁液を含む、液体飲料濃縮物を更に提供する。この安定懸濁液は、約２〜４の範囲のｐＨにおいて、約１０〜８０μｍの長さおよび０．１〜２μｍの厚さの範囲のサイズの懸濁粒子を含む。いくつかの実施形態では、この粒子は、針状の結晶形状を有する。本明細書において、かかる粒子は「針」と呼ばれる。ある実施形態では、この安定懸濁液は、３μｍを超える厚さの針を実質的に含まない。他の実施形態では、この安定懸濁液は、３μｍを超える厚さの針を含まない。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下において説明する本発明の実施態様はすべてを網羅しているわけではなく、または、以下の発明を実施するための形態において開示されるそのままの形態に本発明を限定するものでもない。もっと正確に言えば、選択し、説明する実施形態の目的は、本発明の原理および実施についての当業者による深い認識および理解を助長できるようにすることである。
【００１０】
本明細書に開示する１つの実施形態は、約１０〜８０μｍの長さおよび０．１〜２μｍの厚さのサイズである、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子を含む、約２〜４のｐＨの安定懸濁液を含む、液体飲料濃縮物である。いくつかの実施形態では、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体は、少なくとも５００ｐｐｍの濃度でであってよい。他の実施形態では、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子は、少なくとも８００ｐｐｍの濃度であってよい。更に他の実施形態では、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子は、少なくとも１０００ｐｐｍの濃度であってよい。更に他の実施形態では１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子は、約１０００〜３０００ｐｐｍの範囲の濃度であってよい。この液体飲料濃縮物は、任意追加的に、約０．１〜１重量％の濃度で乳化剤を含んでよい。
【００１１】
好ましい実施形態では、ステビオール配糖体はレバウジオシドＢである。他のステビオール配糖体粒子も存在してよく、かかる更なる粒子としては、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＦ、ステビオールバイオシド、ステビオールモノシド、ステビオシド、ズルコシドＡ（duluoside A）、ルブソシド（rubososide）、他のステビオール配糖体、またはこれらの組み合わせが挙げられる。別の好ましい実施形態では、ステビオール配糖体は、レバウジオシドＡおよびレバウジオシドＢの組み合わせである。レバウジオシドＡ対レバウジオシドＢの比率は、１０：９０、２０：８０、３０：７０、４０：６０、５０：５０、６０：４０、７０：３０、８０：２０、もしくは９０：１０、またはこれらの比率の任意の範囲であってよい。
【００１２】
安定懸濁液は、任意追加的に、アラビアゴム、モノグリセリドおよび／もしくはジグリセリドエステル、ショ糖エステル、メチルセルロース、他の界面活性剤、またはこれらの組み合わせから選択される乳化剤を含んでよい。
【００１３】
任意追加的に、液体飲料濃縮物は、香味料を更に含む。香味料は、レモン、ライム、オレンジ、ブドウ、レモンライム、コーラ、ルートビア、モモ、キーウィ、およびこれらの混合物から選択されてよい。
【００１４】
いくつかの実施形態では、粒子は、針状の結晶形状を有する。本明細書において、かかる粒子は「針」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、この安定懸濁液は、３μｍを超える厚さの針を実質的に含まない。更に他の実施形態では、この安定懸濁液は、３μｍを超える厚さの針を含まない。
【００１５】
他の実施形態では、ネフェロメ濁度単位（ＮＴＵ）として機器で測定したとき、安定懸濁液の濁度は少なくとも１００である。他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも４００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも８００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも１２００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも１６００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも１８００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは１０００〜２５００の範囲である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは１６００〜２２００の範囲である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは１７００〜２０００の範囲である。
【００１６】
他の実施形態では、本方法は、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体を水溶液に加えて、ステビオール混合物をもたらす工程と、ステビオール混合物のｐＨを７超のｐＨに調整する工程と、十分な量の酸性水溶液を使用して、ステビオール混合物を調整して、約１０〜８０μｍの長さおよび約０．１〜２μｍの厚さのサイズを有し、少なくとも５００ｐｐｍの濃度を有する、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子の安定懸濁液を含む、ｐＨが４未満である液体飲料濃縮物をもたらす工程と、を含む。他の実施形態では、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子は、少なくとも８００ｐｐｍの濃度であってよい。更に他の実施形態では、１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子は、少なくとも１０００ｐｐｍの濃度であってよい。更に他の実施形態では。１つまたは２つ以上のステビオール配糖体粒子は、約１０００〜３０００ｐｐｍの範囲の濃度であってよい。
【００１７】
本方法の実施形態では、ステビオール混合物のｐＨは、約７〜９の範囲または約７．５〜８．５の範囲であってよい。
【００１８】
本方法の別の実施形態では、濃縮物の最終ｐＨは、約２〜４の範囲、または約３であってよい。
【００１９】
本方法のいくつかの実施形態では、粒子は、針状の結晶形状を有する。本明細書において、かかる粒子は「針」と呼ばれる。他の実施形態では、この安定懸濁液は、３μｍを超える厚さの針を実質的に含まない。更に他の実施形態では、この安定懸濁液は、３μｍを超える厚さの針を含まない。
【００２０】
本方法の他の実施形態では、ネフェロメ濁度単位（ＮＴＵ）として機器で測定したとき、安定懸濁液の濁度は少なくとも１００である。他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも４００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも８００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも１２００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも１６００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは少なくとも１８００である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは１０００〜２５００の範囲である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは１６００〜２２００の範囲である。更に他の実施形態では、ＮＴＵは１７００〜２０００の範囲である。
【００２１】
好ましい実施形態では、ステビオール配糖体はレバウジオシドＢである。任意追加的に、液体飲料濃縮物は、１つまたは２つ以上の追加のステビオール配糖体を含む。ステビオール配糖体の例としては、レバウジオシドＡ、レバウジオシドＣ、レバウジオシドＤ、レバウジオシドＥ、レバウジオシドＦ、ステビオシド、ルブソシド、ステビオールビオシド、およびズルコシドＡ、他のステビオールグリコシド、ならびにこれらの混合物が挙げられる。これらの更なるステビオール配糖体は、場合により、各々、約１０〜約８０００ｐｐｍの濃度で存在する。
【００２２】
任意追加的に、ステビオール混合物は、乳化剤の存在下で、十分な量の酸性水溶液と混合されてよい。乳化剤の例としては、アラビアゴム、モノグリセリドおよび／またはジグリセリドエステル、ショ糖エステル、メチルセルロース、他の界面活性剤、ならびにこれらの混合物が挙げられる。これらの乳化剤は、任意追加的に約０．１〜１．０重量％の濃度で存在する。
【００２３】
最終工程では、４未満のｐＨに飲料濃縮物のｐＨを下げて、ステビオール配糖体の安定懸濁液を形成する。一実施形態では、約２〜４のｐＨ範囲にｐＨを下げて、ステビオール配糖体の安定懸濁液を形成する。一実施形態では、約３のｐＨにｐＨを下げる。別の実施形態では、酸性水溶液を使用してｐＨを下げ、この酸は、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、リン酸、酒石酸およびこれらの混合物からなる群から選択される。一実施形態では、この混合は、周囲温度の穏やかな混合条件下で行われる。
【００２４】
任意追加的に、ステビオール混合物は、乳化剤の存在下で酸性水溶液を使用して調整される。
【００２５】
ステビオール配糖体粒子は、針、楕円形、円筒形、および当該技術分野において周知の他の形状など様々な形状で存在してよい。好ましい実施形態では、ステビオール配糖体粒子は、針形状である。
【００２６】
別の実施形態では、液体飲料濃縮物から液体飲料を製造する方法が提供される。本明細書に記載のように、液体飲料濃縮物が液体で希釈されて、液体飲料がもたらされる。いくつかの実施形態では、液体は水である。他の実施形態では、液体は炭酸水である。液体の例としては、炭酸ソフトドリンク、レディ・トゥ・ドリンク茶、スポーツドリンク、乳製ドリンク、ヨーグルト含有ドリンク、アルコール飲料、栄養ドリンク、フレーバーウォーター、ビタミンドリンク、フルーツドリンクおよびフルーツジュースが挙げられる。
【００２７】
任意追加的に、安定懸濁液は、香味料、防腐剤、乳化剤、着色剤、栄養甘味料および他の高甘味度甘味料、ビタミン、無機塩、および白濁剤など追加成分を含んでよい。一実施形態において、香味料は、レモン、ライム、オレンジ、ブドウ、レモンライム、コーラ、ルートビア、モモ、キーウィおよびそれらの混合物からなる群から選択される。
【００２８】
これらの任意追加成分は、ステビオール配糖体の安定懸濁液の調製プロセスにおける任意の段階で加えられてよい。
【実施例】
【００２９】
本発明の例示的な実施形態は、本発明の原理および実施を図示する以下の実施例に関して記載する。
【００３０】
（実施例１）
レバウジオシドＢの第１溶液は、５０ｍｇのレバウジオシドＢ固体を４７．５ｍＬの純水に加えることによって１０００ｐｐｍで調製した。この溶液を、９０℃に５分間加熱して、レバウジオシドＢを完全に溶解させた。加熱後、２．５ｍＬの１Ｍクエン酸ｐＨ３溶液をこの溶液に加えて、混合した。
【００３１】
第２溶液は、加熱せずに、レバウジオシドＢを可溶化して調製した。１Ｍ  ＮａＯＨを使用してｐＨを８．１に調整して、１％（１０，０００ｐｐｍ）のレバウジオシドＢ溶液を水中で調製した。レバウジオシドＢが完全に溶解し、溶液が透明になるまで、この溶液を攪拌した。５ｍＬの１％レバウジオシドＢ溶液を４２．５ｍＬの水に加えて、混合した。２．５ｍＬの１Ｍクエン酸ｐＨ３溶液をこの溶液に加えて混合し、約３．１の最終ｐＨをもたらした。
【００３２】
観察するために両溶液を室温で３０分間置き、次いで、翌日観察するために一晩４℃に置いた。当初、レバウジオシドＢの非加熱溶液が最初に沈殿したが、数分内に加熱溶液がただちにそれに続いた。水酸化ナトリウムを使用して可溶化したレバウジオシドＢの溶液は、溶液中で均質懸濁液を形成した。加熱溶液はより大きい粒子を形成し、バイアルの底部に沈殿した。懸濁液の特性は、今回も４℃で保持してから１６時間後に確認した。
【００３３】
Ｈａｃｈ  ２１００ＡＮ  Ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｔｅｒを使用して、溶液中の懸濁物の濁度を測定した。より高いＮＴＵ値を有する溶液は、より多い量の懸濁物を示す。加熱レバウジオシドＢ溶液は、多数の粒子がバイアルの底部に沈殿しているために、最小のＮＴＵ値を示した。更に、加熱レバウジオシドＢ溶液は、３μｍを超える厚さを有する多数の針を含んだ。それに対して、非加熱溶液は、著しく小さい針を含み、３μｍを超える厚さの針は１つもなかった。
【００３４】
この結果は、プロセスに連続ｐＨ調整工程が含まれる場合、非常に小さいレバウジオシドＢ粒子が形成され、水中で懸濁し得ることを示した。連続ｐＨ調整工程が含まれない場合、レバウジオシドＢ粒子は著しく大きくて、水中で懸濁できない。
【表１】
2017504343.tif 000002
【００３５】
（実施例２）
ステビオール配糖体の３％溶液（レバウジオシドＡおよびレバウジオシドＢの比率は６：４）および０．９％安息香酸ナトリウムを水中で調製した。ＮａＯＨを使用して、溶液のｐＨをｐＨ７．８に調整した。溶液を１：１０で希釈して、０．０５Ｍクエン酸緩衝液の最終ｐＨを３．０にした。溶液は、ただちに不透明になった。混合中に、１０個の連続試料を溶液から取り出した。脱イオン水で各試料を６倍に希釈し、レバウジオシドＡおよびレバウジオシドＢの濃度をＨＰＬＣで測定した。
【００３６】
Ｓｈｉｓｅｉｄｏ  Ｃａｐｃｅｌｌ  ＰＡＫ  Ｃ１８カラム、ＭＧＩＩ型（５μｍ、４．６×２５０ｍｍ）をステビオール配糖体分析に使用し、この分析に以下に記載の勾配を用いる。カラムを５５℃で維持する。
【表２】
2017504343.tif 000003
【００３７】
１０個の試料のレバウジオシドＢの濃度は、時間０および４℃での９６時間保存後において、最小偏差に極めて一致していた。この結果は、ステビオール配糖体の均質懸濁液がレバウジオシドＡおよびレバウジオシドＢで構成され、乳化剤または添加剤を使用せずに安息香酸ナトリウムを得ることができることを示した。
【表３】
2017504343.tif 000004
【００３８】
（実施例３）
水中に溶解させた１０００ｐｐｍのレバウジオシドＢを９０℃で２分間加熱して、第１溶液（溶液Ａ）を調製した。溶液を冷却し、５％の１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ２．０）と混合した。４００倍の倍率の光学顕微鏡で溶液中の粒子を観察した。
【００３９】
水（ｐＨ７．５）中に溶解させた１０００ｐｐｍのレバウジオシドＢを９０℃で２分間加熱して、第２溶液（溶液Ｂ）を調製した。溶液を冷却し、５％の１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ２．０）と混合し、室温で３時間置いた。４００倍の倍率の光学顕微鏡で溶液中の粒子を観察した。結果を表３に示す。
【表４】
2017504343.tif 000005
【００４０】
（実施例４）
水中に溶解させた１０００ｐｐｍのレバウジオシドＢおよび０．１重量％のアラビアゴムを９０℃で２分間加熱して、第１溶液（溶液Ａ）を調製した。溶液を冷却し、５％の１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ２．０）と混合した。４００倍の倍率の光学顕微鏡で溶液中の粒子を観察した。
【００４１】
水（ｐＨ７．５）中に溶解させた１０００ｐｐｍのレバウジオシドＢおよび０．１重量％のアラビアゴムを９０℃で２分間加熱して、第２溶液（溶液Ｂ）を調製した。溶液を冷却し、５％の１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ２．０）と混合し、室温で３時間置いた。４００倍の倍率の光学顕微鏡で溶液中の粒子を観察した。
【００４２】
次いで、各溶液を混合せずに４℃で３日間保管した。
【００４３】
結果を表４に示す。溶液Ｂは、バイアル内で紐状の網状組織を形成した。溶液Ａは、３日後に２相に分離したが、溶液Ｂは均質懸濁液のままであった。
【表５】
2017504343.tif 000006
【００４４】
表４に示すように、溶液Ｂでは、針が著しく小さい。加えて、溶液Ｂは、３μｍ超える厚さの針を１つも有さない。
【００４５】
（実施例５）
水中に溶解させた１０５０ｐｐｍのレバウジオシドＢを混合し、８０℃で３分間加熱して、第１溶液（溶液Ａ）を調製した。溶液Ａは、ただちに５％の１Ｍクエン酸（ｐＨ３．２）と混合し、室温まで１８時間冷却した。
【００４６】
水（８．０ｐＨに調整）中に溶解させた１０５０ｐｐｍのレバウジオシドＢを混合して、第２溶液（溶液Ｂ）を調製した。溶液Ｂは、５％の１Ｍクエン酸と混合し、室温で１８時間沈殿させた。
【００４７】
光学顕微鏡で結晶を観察した。結果を表５に示す。溶液Ａは懸濁を停止し、バイアルの底部に集められるが、溶液Ｂは、紐状の網状組織として形成された安定懸濁液であった。
【表６】
2017504343.tif 000007
【００４８】
表５に示すように、溶液ｂでは、溶液Ａと比較して、針が著しく小さい。溶液Ａは、極めて長い針であって、溶液Ｂの針よりも著しく厚い針を含む。加えて、溶液Ｂは、３μｍを超える厚さの針を１つも有さない。
【００４９】
本明細書で用いる場合、用語「約」または「おおよそ」は、当業者によって決定されるような、指定された特定のパラメータについての許容され得る範囲内を意味し、この範囲は、一部は、値の測定または判定の仕方、例えば、試料調製および測定システムの制限に依存することになる。そのような制限の例は、湿潤対乾燥環境での試料の調製、異なる計器、試料の高さのばらつき、および信号対雑音比が挙げられる。例えば、「約」は、述べられている値または値範囲より、その述べられている値の１／１０まで大きいまたは小さいという意味をもつことができるが、いずれかの値または値範囲をより広いこの定義に限定することを意図したものではない。例えば、約３０％の濃度値は、２７％〜３３％の間の濃度を意味する。用語「約」が先行する各値または値範囲は、述べられている絶対値または値範囲の実施形態を包含することを意図したものでもある。あるいは、特に生物学的システムまたはプロセスに関して、この用語は、値の１桁以内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味することができる。
【００５０】
本明細書および特許請求の範囲を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む（comprise）」ならびに語尾変化形、例えば「含む（comprises）」および「含む（comprising）」は、述べられている整数もしくは工程または整数もしくは工程群の包含を含意するが、いずれかの他の整数もしくは工程または整数もしくは工程群を排除することを含意しない。本願において用いる場合、「からなる」は、請求項構成要素に明記されていない一切の要素、工程または成分を除外する。本願において用いる場合、「から本質的になる」は、請求項の基本および新規特徴に大きな影響を及ぼさない材料または工程を除外しない。様々な実施形態の本開示では、実施形態の説明に用いる用語「含む」、「から本質的になる」および「から成る」を、他の２つの用語のいずれかと置き換えてもよい。
【００５１】
本明細書に引用するすべての特許、特許出願（仮出願を含む）および刊行物は、あらゆる目的で個々に組み込まれているかのごとく参照により組み込まれている。別段の指示がない限り、すべての部および百分率は、重量部および重量百分率あり、すべての分子量は、重量平均分子量である。上述の発明を実施するための形態は、理解を明確にするためにのみ提示してきた。本明細書から無用の限定を解するべきではない。本発明はここに示し、記載した厳密な細部に限定されるものではなく、当業者にとって明らかな変形形態は、請求項によって規定される本発明の中に含まれるものとする。
【国際調査報告】
2017504343.tif 000008