(57)【要約】  １以上のＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む治療剤を含む、ヒトＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドに対する特異性を有する治療剤、このような治療剤を含む組成物およびＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質機能不全（例えば病原的な産生、修飾または機能）が関連する癌、前癌病変または他の疾患状態を処置または予防するためにこのような組成物を使用する方法が本明細書中で提供される。
2017504622.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体、ペプチドおよびアプタマーまたはそれらの断片からなる群から選択される、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質。
【請求項２】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対して特異的なモノクローナル抗体である、請求項１に記載の物質。
【請求項３】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドが、配列番号２で示されるアミノ酸配列またはその一部を有する、請求項２に記載の物質。
【請求項４】
前記モノクローナル抗体が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対して特異的である、請求項２に記載の物質。
【請求項５】
前記モノクローナル抗体が、６−１、６−２、１０−１、１０−２および１０−３からなる群から選択されるモノクローナル抗ＣＬＰＴＭ１Ｌクローンである、請求項２に記載の物質。
【請求項６】
前記モノクローナル抗体が、表２で示される突然変異のうち１以上を有するＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドに対して特異的である、請求項２に記載の物質。
【請求項７】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドである、請求項１に記載の物質。
【請求項８】
請求項１から６の何れかに記載の化合物と、医薬的に許容可能な担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項９】
薬剤としての使用のための、請求項１から７の何れかに記載の物質。
【請求項１０】
薬剤の製造における、請求項１から７の何れかに記載の物質の使用。
【請求項１１】
（ａ）請求項８に記載の医薬組成物と、（ｂ）ヒト対象において固形腫瘍を処置するための説明書を提供する差し込み物と、を含む製品。
【請求項１２】
腫瘍を処置または予防するための方法であって、それを必要とする対象に、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む治療的有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含み、それによって前記対象において前記腫瘍が処置または予防される、方法。
【請求項１３】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、抗体、ペプチドおよびアプタマーまたはそれらの断片からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対して特異的なモノクローナル抗体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドが、配列番号２で示されるアミノ酸配列またはその一部を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記モノクローナル抗体が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対して特異的である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化部分が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記腫瘍が、神経膠芽腫、肉腫、癌腫およびリンパ腫からなる群から選択される固形腫瘍である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
前記腫瘍が、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、結腸癌、結直腸癌、乳癌、子宮頸癌、脳癌、食道癌および胃癌またはその前癌病変からなる群から選択される癌または前腫瘍病変と関連がある、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
前記腫瘍が、肺癌またはその前癌病変と関連がある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記対象がヒトである、請求項１２に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍が、化学療法剤に対して耐性を示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項２３】
前記化学療法剤が、シスプラチンおよびゲムシタビンからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記化合物が医薬的に許容可能な担体とともに投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２５】
ＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質機能不全と関連する疾患または状態を処置または予防する方法であって、前記疾患または状態のリスクがあるか、それを有するものとして診断されるか、またはその症状を示す対象の細胞、組織または臓器にＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む化合物を投与することを含む、方法。
【請求項２６】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質機能不全が、病原的なタンパク質産生、病原的なタンパク質修飾または病原的なタンパク質機能のうち１以上を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記疾患または状態が、腫瘍、癌または前腫瘍病変である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記腫瘍が、神経膠芽腫、肉腫、癌腫およびリンパ腫からなる群から選択される固形腫瘍である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記腫瘍が化学療法剤に対して耐性を示す、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記化学療法剤が、シスプラチンおよびゲムシタビンからなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、抗体、ペプチドおよびアプタマーまたはそれらの断片からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対して特異的なモノクローナル抗体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
前記モノクローナル抗体が、表２で示される突然変異のうち１以上を有するＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドに対して特異的である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記モノクローナル抗体が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対して特異的である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記化合物が医薬的に許容可能な担体とともに投与される、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
【０００２】
本願は、その全体において示されるかのように参照により本明細書中に組み込まれる、２０１４年１月１４日提出の米国仮出願第６１／９２７，３３０号の優先権を主張する。
連邦政府資金による研究開発の記載
【０００３】
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈにより授与されるＧｒａｎｔ  Ｎｏ．Ｕ１９  ＣＡ１２８１４７のもと、連邦政府の支援によりなされた。連邦政府は本発明において一定の権利を有する。
【０００４】
本発明は全般的に、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドを標的とするための化合物および組成物ならびにＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質機能不全（例えば、病原的な産生、修飾または機能）が関連する癌または他の状態を処置または予防するためにこのような化合物および組成物を用いるための方法に関する。特に本発明は、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化部分を含む治療剤および非小細胞肺癌などのＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質機能不全が関連する疾患または状態を処置または予防するために対象にこのような治療剤を投与する方法に関する。本明細書中で、治療剤、医薬組成物および方法が提供される。
【背景技術】
【０００５】
癌は、癌遺伝子および腫瘍抑制遺伝子の突然変異で始まる疾患である。これらの重要な遺伝子の突然変異によって、癌細胞が発生し、最終的にはヒトの身体で見られる様々なあるタイプの細胞の病原的な複製（正常な制御調節が失われ、過剰な細胞増殖につながる。）が起こる。腫瘍形成、腫瘍生存および癌転移には、足場非依存性の成長および遺伝毒性物質誘導性アポトーシスおよびアノイキス、細胞外基質からの腫瘍細胞脱離と関連しているプログラム細胞死機序からの防御が必要である。腫瘍細胞は、周囲組織に浸潤するため、および転移するためにアポトーシスおよびアノイキスからの防御を必要とする。
【０００６】
当技術分野で、癌を処置または予防するための方法、特に腫瘍成長を遅延させるかまたは食い止め、転移を予防する方法が必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
第一の態様において、本発明は、抗体、ペプチド、アプタマーまたはそれらの断片からなる群から選択されるＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む化合物を提供する。ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質は、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対して特異的なモノクローナル抗体であり得る。ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドは、配列番号２で示されるアミノ酸配列またはその一部を有し得る。本モノクローナル抗体は、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対して特異的であり得る。本モノクローナル抗体は、６−１、６−２、１０−１、１０−２および１０−３からなる群から選択されるモノクローナル抗ＣＬＰＴＭ１Ｌクローンであり得る。本モノクローナル抗体は、表２で示される突然変異のうち１以上を有するＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドに対して特異的であり得る。一部のケースにおいて、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質は、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドである。
【０００８】
別の態様において、本発明は、本明細書中で提供される化合物と、医薬的に許容可能な担体と、を含む医薬組成物を提供する。
【０００９】
また別の態様において、薬剤としての使用のための、本明細書中で提供される化合物または組成物による物質が本明細書中で提供される。薬剤の製造におけるこのような物質の使用がさらに提供される。
【００１０】
さらなる態様において、本発明の医薬組成物およびヒト対象への投与のための説明書を含む製品が本明細書中で提供される。
【００１１】
別の態様において、対象において腫瘍を処置または予防するための方法が本明細書中で提供される。本方法は、典型的に、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む治療的有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含み、それによって対象においてその腫瘍が処置または予防される。一部のケースにおいて、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質は、抗体、ペプチドおよびアプタマーまたはそれらの断片からなる群から選択される。ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質は、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対して特異的なモノクローナル抗体であり得る。ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドは、配列番号２で示されるアミノ酸配列またはその一部を有し得る。本モノクローナル抗体は、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対して特異的であり得る。本モノクローナル抗体は、表２で示される突然変異のうち１以上を有するＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドに対して特異的であり得る。ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質は、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドであり得る。
【００１２】
一部のケースにおいて、腫瘍は、神経膠芽腫、肉腫、癌腫およびリンパ腫からなる群から選択される固形腫瘍である。一部のケースにおいて、腫瘍は、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、結腸癌、結直腸癌、乳癌、子宮頸癌、脳癌、食道癌および胃癌またはその前腫瘍病変からなる群から選択される癌または前腫瘍病変と関連がある。腫瘍は、肺癌またはその前腫瘍病変と関連があり得る。腫瘍は、化学療法剤に対して耐性を示し得る。化学療法剤は、シスプラチンおよびゲムシタビンからなる群から選択され得る。一部のケースにおいて、本化合物は医薬的に許容可能な担体とともに投与される。
【００１３】
また別の態様において、対象においてＣＬＰＴＭ１Ｌをコードする核酸配列の過剰発現または不適切な発現が関連する疾患または状態を処置または予防する方法が本明細書中で提供される。本方法は、典型的に、疾患または状態のリスクがあるか、それを有するものとして診断されるか、またはその症状を示す対象の細胞、組織または臓器にＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む化合物を投与することを含む。疾患または状態は、癌、腫瘍、（例えば固形腫瘍）または前腫瘍病変であり得る。腫瘍、癌または前腫瘍病変は、肺癌、膵臓癌、神経膠芽腫、前立腺癌、皮膚癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、結腸癌、結直腸癌、乳癌、子宮頸癌、脳癌、食道癌、胃癌、リンパ腫、慢性白血病および急性白血病からなる群から選択され得る。腫瘍は、化学療法剤に対して耐性を示し得る。化学療法剤は、シスプラチンおよびゲムシタビンからなる群から選択され得る。ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質は、抗体、ペプチドおよびアプタマーまたはそれらの断片からなる群から選択され得る。ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質は、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対して特異的なモノクローナル抗体であり得る。ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドは、配列番号２で示されるアミノ酸配列またはその一部を有し得る。一部のケースにおいて、本モノクローナル抗体は、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対して特異的である。本モノクローナル抗体は、表２で示される突然変異のうち１以上を有するＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドに対して特異的であり得る。ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質は、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドであり得る。本化合物は医薬的に許容可能な担体とともに投与され得る。
【００１４】
本発明のこれらおよび他の特性、態様および長所は、続く記載からより詳しく理解されよう。本記載において、添付の図面を参照するが、これは、本明細書の一部を形成し、限定ではなく説明のために本発明の実施形態が示される。好ましい実施形態の記載は、本発明を限定するものではなく、全ての変更、同等物および代替物を包含するものとする。したがって、本発明の範囲を解釈するために本明細書中で記載される特許請求の範囲を参照すべきである。
【００１５】
次の本発明の詳細な記載を考慮すると、本発明がより詳細に理解され、上記で示されるもの以外の特性、態様および長所が明らかになろう。詳細な記載は、次の図面を参照する：
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１（Ａ）（Ｂ）は、より大きな細胞外領域内の小さな障害領域（アミノ酸残基１４２から１６２）によって分離される２個の個別の球状ドメインの存在を明らかにする構造データを示す。
【図２Ａ】図２Ａは、形質膜内のヒトＣＬＰＴＭ１Ｌ配列の配向、２個の細胞外球状ドメイン（ＥＣＲ１およびＥＣＲ２）、間質の障害領域、膜貫通領域および同定されているグリコシル化細胞表面ペプチド（青色）および予想部位Ｎ−グリコシル化部位（緑色）を含むＣＬＰＴＭ１Ｌ予想構造の要約を示す。各ＥＣＲを標的とするＣＬＰＴＭ１Ｌペプチドに対して作製したモノクローナル抗体は括弧で示される。プロッターアプリケーション（Ｏｍａｓｉｔｓら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ３０（６）：８８４−６（２０１４））を用いて画像を作製した。
【図２Ｂ】図２Ｂは、予想構造を変化させる、細胞外領域１およびいくつかの膜貫通ドメインを欠くＣＬＰＴＭ１Ｌのスプライシング変異体を示す。このアイソフォームの発現パターンは知られていない。
【図３】図３は、ヒトＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質に対して特異的なモノクローナル抗体を産生させるためのエピトープの選択を示す。モノクローナル抗体設計のためのフォーカス領域は、予想細胞外ドメインの秩序領域を含んだ。グリコシル化部位は除外した。
【図４】図４はＣＬＰＴＭ１Ｌ局在性を明らかにする。（Ａ）ＣＬＰＴＭ１Ｌ、膜貫通受容体ＥＧＦＲおよび核タンパク質サイクリンＤ１に対する細胞表面および細胞全体のタンパク質溶解液のウエスタンブロッティング。ウエスタンブロッティングのために、モノクローナル抗体６−１、１０−２および１０−３を使用した。（Ｂ）細胞核を染色するためのＤＡＰＩ色素およびヒトＣＬＰＴＭ１Ｌの予想細胞外Ｎ−末端に対するポリクローナル抗体を用いた透過処理していない（ｎｏｎ−ｐｅｒｍｅａｂｌｉｚｅｄ）Ａ５４９肺腫瘍細胞の免疫蛍光染色と、それに続くＣＬＰＴＭ１Ｌを検出するための二次ＦＩＴＣ結合抗体。対照として非特異的抗体を使用した。染色は、タンパク質の点状の形質膜局在性を示す。（Ｃ）モノクローナル抗体を用いたＨ８３８細胞におけるＣＬＰＴＭ１Ｌに対するウエスタンブロッティング。（Ｄ）モノクローナルＣＬＰＴＭ１Ｌ抗体６−１（１０００Ｘ）および１０−２（４００Ｘ）を用いた、透過処理していないＡ５４９細胞の免疫蛍光染色。免疫蛍光のために、モノクローナル抗体６−１および１０−２を使用した。
【図５Ａ】図５Ａ〜Ｃは、正常な膵管上皮を超えて膵臓腫瘍組織においてＣＬＰＴＭ１Ｌ発現が上昇することおよび発現がより高いことが生存率が低いことと相関することを明らかにするグラフおよび画像を示す。図５Ａは、３１名の患者での膵臓腫瘍と正常な膵管上皮組織におけるＣＬＰＴＭ１Ｌに対して特異的な抗体での染色の免疫組織化学的スコアリングを示す。
【図５Ｂ】図５Ｂは、ＣＬＰＴＭ１Ｌ発現の三分位値に階層化したカプラン−マイヤー生存曲線を示す。
【図５Ｃ】図５Ｃは、腫瘍の代表的染色を示す。
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｄは、腫瘍細胞においてＣＬＰＴＭ１Ｌを標的化することによって、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＡｋｔ生存シグナル伝達が調整され、シスプラチンでの死滅に対して細胞を感受性にすることを明らかにする。図６Ａは、Ａ５４９細胞をポリクローナル抗ＣＬＰ抗体（１：１０００＝１μｇ／ｍＬ）で処理することによって、抗アポトーシス分子Ｂｃｌ−ｘＬおよび総Ａｋｔの蓄積が減少したことを示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、抗ＣＬＰＴＭ１Ｌによって、２４時間にわたるシスプラチン処理時の死滅に対する感受性が有意に上昇した（ｐ＜０．０５）グラフである。
【図６Ｃ】図６Ｃは、モノクローナル抗ＣＬＰ（１０−２）での処理によって、ゲムシタビン（７２時間にわたり５００μＭ）による死滅に対する膵臓腺癌細胞の感受性が上昇したグラフである。
【図６Ｄ】図６Ｄは、モノクローナル抗ＣＬＰ（１０−２）での膵臓腺癌細胞の処理によって、リン酸化Ａｋｔの蓄積が減少したことを示す。
【図７Ａ】図７Ａは、抗ＣＬＰ抗体（Ａｂ）での処理によってインビトロでのヒト肺腫瘍および気管支上皮細胞の足場非依存性の成長が阻害されることを明らかにするグラフを示す。０．８％下層寒天層上に重ねた０．４％上層寒天でのコロニー形成により測定した場合のヒト肺腫瘍細胞の足場非依存的な成長は、溶媒対照処理細胞と比較して、抗ＣＬＰＴＭ１Ｌ処理によって５５％から６５％阻害された（ｐ＜０．０５）。プレーティングから１日後に処理を行い、１週間後に再び行った。ＥＧＦ処理によって、Ｂｅａｓ２Ｂヒト気管支上皮細胞において足場非依存的な成長が誘導され、これは抗ＣＬＰ  Ａｂでの処理時に７６％阻害された。
【図７Ｂ】図７Ｂは、抗ＣＬＰ抗体（Ａｂ）での処理によってインビトロでのヒト肺腫瘍および気管支上皮細胞の足場非依存性の成長が阻害されることを明らかにする画像を示す。
【図８Ａ】図８Ａ〜Ｂは、抗ＣＬＰＴＭ１Ｌ抗体による膵臓腫瘍細胞のコロニー増殖阻害を明らかにする。図８Ａは、３つ組で、１０％ＦＢＳ入りのＤＭＥＭ／Ｆ１２中細胞１０００個／ウェルの６ウェルプレート上にＰａｎｃ−１膵臓腫瘍細胞をプレーティングした。プレーティング後、指定の抗体を５μｇ／ｍＬで培地に添加した。
【図８Ｂ】図８Ｂは、培養中で５日後、メタノール中での固定および０．５％クリスタルバイオレットでの染色後にコロニー／ウェルを数えたグラフである。**ｐ＝０．００５。
【図９Ａ】図９Ａ〜Ｂは、確立されたヒト肺腫瘍の成長の阻害に対する異種移植モデルを示す。図９Ａは、Ａ５４９腫瘍細胞を皮下注射し、腫瘍確立後、第０、５、１２日に、対照腹水、ポリクローナル抗ＣＬＰＴＭ１Ｌまたはモノクローナル抗ＣＬＰＴＭ１Ｌクローンで処理した無胸腺ヌードマウスでの平均腫瘍体積を示す。エラーバーは平均の標準誤差を表す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、第１７日での個々の腫瘍の腫瘍体積を示す。エラーバーは標準偏差を表す。*ｐ＜０．０５、**ｐ＜０．００５。
【図１０】図１０は、モノクローナル抗ＣＬＰＴＭ１Ｌ抗体のインビトロ抗腫瘍効果の特徴をまとめた表である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本願で言及される刊行物、特許および特許出願は全て、それぞれ個々の刊行物、特許および特許出願が具体的におよび個々に参照により組み込まれることが示されるかのように、それらの全体において参照により本明細書に組み込まれる。
【００１８】
本発明は、少なくとも一部、ＣＬＰＴＭ１Ｌが非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）において一般的に過剰発現される、およびＣＬＰＴＭ１Ｌが遺伝毒性アポトーシスから肺腫瘍細胞を防御するという発明者らの発見に基づく。特に、ＣＬＰＴＭ１Ｌの欠失は、複数のモデルにおいてインビボで確実かつ顕著に腫瘍形成を阻害した。口唇口蓋裂膜貫通タンパク質様タンパク質１（ＣＬＰＴＭ１Ｌ）としても知られるシスプラチン耐性関連タンパク質−９（ＣＲＲ９）は、多重ゲノムワイド関連（ＧＷＡ）研究により定められるように染色体５ｐ１５．３３に位置する。ＣＬＰＴＭ１Ｌ遺伝子は、肺癌の初期にコピー数が増加することが多く、肺癌易罹患性と遺伝子型によって関連付けられる、第５番染色体上の遺伝子座内にある。例えば、ＣＬＰＴＭ１Ｌ遺伝子の付近およびＣＬＰＴＭ１Ｌ遺伝子内にある遺伝子変異体は、肺癌、子宮頸癌、卵巣癌、膵臓癌、膀胱癌、神経膠腫、前立腺癌、基底細胞癌および黒色腫に関連する。作用機序は完全に解明されていないが、ＣＬＰＴＭ１ＬはＢｃｌ−ｘＬ生存タンパク質蓄積に関与すると考えられる。実際に、発明者らは、以前に、ＣＬＰＴＭ１Ｌが化学療法的処置を受けた腫瘍細胞を遺伝毒性物質誘導性アポトーシスから防御し、足場非依存的な成長およびＲａｓにより推進される肺腫瘍形成のためにＣＬＰＴＭ１Ｌが必要とされることを明らかにした。
【００１９】
発明者らは、ＣＬＰＴＭ１Ｌが形質膜に局在し、細胞外であると予想されるＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質のＮ末端領域を標的とするポリクローナル抗体は、ＣＬＰＴＭ１ＬのＲＮＡ干渉による欠失；具体的にはＢｃｌ−ｘＬおよびＡｋｔ阻害、化学療法に対する感受性上昇および足場依存性により導き出されるものと同等の表現型を導き出すことをさらに発見した。したがって、本発明は、免疫グロブリン、組成物および、固形腫瘍および癌の予防または処置のために、および腫瘍細胞の化学療法に対する感受性上昇のために、ヒトＣＬＰＴＭ１Ｌを標的化するためのこのような組成物を使用する方法に関する。本明細書中で使用される場合、「固形腫瘍」という用語は、通常は嚢胞または液状領域を含有しない組織の異常な塊を指す。非癌性の腫瘍は「良性」と記載され、一方で癌性の腫瘍は「悪性」と記載される。異なるタイプの固形腫瘍は、それらを形成する特定の細胞に対して名付けられ、例えば肉腫は結合組織細胞（骨、軟骨、脂肪など）から形成され、癌腫は上皮組織細胞（乳房、結腸、膵臓など）から形成され、リンパ腫はリンパ組織細胞（リンパ節、脾臓、胸腺など）から形成される。固形腫瘍の全タイプの処置が本発明の範囲内である。
【００２０】
ヒトＣＬＰＴＭ１Ｌ遺伝子（配列番号１；Ｇｅｎｂａｎｋ  ＩＤ  ＡＡＨ２５３０５．１）は、５３８個のアミノ酸ポリペプチド（配列番号２；ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ：Ｑ９６ＫＡ５．１）をコードする。ヒトＣＬＰＴＭ１Ｌの遺伝子産物は、初期ｍＲＮＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ  ＩＤ  ＢＣ０１６３９９．１；配列番号３）および２つのさらなる予想転写スプライシング変異体（Ｅｎｓｅｍｂｌ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ  ＩＤ：ＥＮＳＴ０００００３２０９２７およびＥＮＳＴ０００００５０７８０７）を含む。これらの予想されるスプライシング変異体は、それぞれ５０２および３６９個のアミノ酸のタンパク質をコードする。スプライシング変異体予想法は、Ｗｏｒｌｄ  Ｗｉｄｅ  Ｗｅｂ上のｕｓｅａｓｔ．ｅｎｓｅｍｂｌ．ｏｒｇ／ｉｎｆｏ／ｄｏｃｓ／ｇｅｎｅｂｕｉｌｄ／ｇｅｎｏｍｅ＿ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ．ｈｔｍｌで利用可能である。
【００２１】
本発明の組成物
【００２２】
ある態様において、本発明は、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対する特異性を有するＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物を提供する。本明細書中に記載のように、本発明の組成物は、様々な臨床適用のための治療剤および医薬組成物として有用である。特に、１以上のＣＬＰＴＭ１Ｌエピトープに対する特異性を有する（すなわちこれに標的化される）、抗体、抗体断片、免疫複合体、二特異性抗体、三特異性抗体およびキメラ抗原受容体を含む、１以上のＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む治療組成物が本明細書中で提供される。１以上のＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化ペプチドを含む組成物もまた提供される。本明細書中で使用される場合、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質は、ＣＬＰＴＭ１ＬポリペプチドまたはＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの１以上のエピトープまたはそれらの断片に対して特異的に結合し、および／またはＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの１以上のエピトープまたはそれらの断片での結合に競合する、分子または複合体である。
【００２３】
本明細書中で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、単数形の「ポリペプチド」ならびに複数形の「ポリペプチド」を包含するものとし、アミド結合（ペプチド結合としても知られる。）により直線的に連結されるモノマー（アミノ酸）から構成される分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２以上のアミノ酸の何らかの鎖（単数または複数）を指し、具体的な長さの生成物を指すものではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」または２以上のアミノ酸の鎖（単数または複数）を指すために使用される何らかの他の用語は「ポリペプチド」の定義内に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの用語の何れかの代わりに、またはこれと交換可能に使用され得る。「ポリペプチド」という用語はまた、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解性の切断または非天然のアミノ酸による修飾を含むが限定されない、ポリペプチドの発現後修飾の生成物も指すものとする。ポリペプチドは、天然の生物学的起源由来であり得るか、または組み換え技術により作製され得るが、指定される核酸配列から必ずしも翻訳されない。これは、化学合成によるものを含め、何らかの方式で作製され得る。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、「抗体」および「抗体（複数形）」という用語は「免疫グロブリン」および「免疫グロブリン（複数形）」と同義であり、これらの用語は、本明細書中で交換可能に使用される。「抗体」および「抗体（複数形）」という用語は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を含むが限定されない、免疫グロブリン全体を含む。抗体という用語は、生化学的に区別され得る様々な広いクラスのポリペプチドを包含する。当業者にとって当然のことながら、重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタまたはイプシロン（γ、μ、α、δ、ε、ν）として分類され、それらの中にいくつかのサブクラスがある（例えばγ１−γ４）。それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧまたはＩｇＥとして抗体の「クラス」を決定することは、この鎖の性質である。免疫グロブリンサブクラス（アイソタイプ）例えば、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4、ＩｇＧ5などは特徴がよく分かっており、機能的な特定化を付与することが知られている。
【００２５】
本発明に適切な抗体はまた、抗体断片またはその修飾生成物も含み、ただし、これらは本発明で適切に使用することができるものとする。適切な抗体断片は、単一の可変ドメインＦｖ（Ｓｋｅｒｒａ  ＆  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０３８−４１（１９８８））、ｓｃＦｖ（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−８３（１９８８））、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）2または他のタンパク質分解性断片など、免疫グロブリンの少なくとも１個の可変ドメインを含む。「抗体」および「抗体（複数形）」という用語はキメラ抗体；ヒトおよびヒト化抗体；組み換えおよび改変抗体、複合型抗体およびそれらの断片をさらに含む。ヒト化抗体は、ヒト以外の哺乳動物からの抗体（例えばマウス抗体）の相補性決定領域（ＣＤＲ）がヒト抗体のＣＤＲに移入されている抗体である。キメラおよびヒト化抗体は、米国特許第５，５６５，３３２号明細書で開示されるものなどの標準的なプロトコールに従い作製することができる。他の抗体方式は例えば「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（Ｅｄｓ．）（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  １９９６）に記載されている。何らかの形式で、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、放射性活性物質および薬物を含むが限定されない様々な分子に複合化されるかまたは結合されているＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化免疫グロブリンも本発明に包含される。このような複合型抗体は、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化免疫グロブリンを化学的に修飾することによって得ることができる。複合型抗体を得るための方法は当技術分野で公知であり、利用可能である。
【００２６】
本発明の抗体はポリクローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。好ましくは、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化免疫グロブリンはモノクローナルである。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を作製する方法は当技術分野で公知であり、全般的に、例えば米国特許第６，８２４，７８０号明細書に記載されている。典型的には、本発明の抗体は、以下でさらに記載されるように、当技術分野で利用可能なベクターおよび方法を用いて、組み換えにより作製される。ヒト抗体はまた、インビトロでの活性化Ｂ細胞（米国特許第５，５６７，６１０号明細書および同第５，２２９，２７５号明細書参照）によっても作製され得る。ヒト抗体はまた、内因性免疫グロブリン産生なくヒト抗体の完全レパートリーを作製可能であるトランスジェニック動物（例えばマウス）においても作製され得る。例えば、キメラおよび生殖細胞系列突然変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪH）遺伝子のホモ接合型欠失の結果、内因性抗体産生が完全に阻害されることが記載されている。このような生殖細胞系列突然変異マウスへのヒト生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入の結果、抗原負荷時にヒト抗体が産生される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）；米国特許第５，５４５，８０６号明細書、同第５，５６９，８２５号明細書、同第５，５９１，６６９号明細書；米国特許第５，５４５，８０７号明細書；および国際公開第９７／１７８５２号パンフレットを参照。このような動物に対して、本発明のポリペプチドを含むヒト抗体を産生させるために遺伝子操作し得る。
【００２７】
本明細書中に記載の抗体の起源は、本発明において特に限定されないが；本抗体は好ましくは哺乳動物由来であり、より好ましくはヒト由来である。本発明に適切なモノクローナル抗体は、標準的ハイブリドーマ法によって調製することができる。例えば、標準的ハイブリドーマ法は、得られるモノクローナル抗体がＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドに対して特異的であり、関連タンパク質の間で交差反応性を示さないことを確実にするために差次的結合アッセイを利用する。あるいは、本発明に適切なモノクローナル抗体は、ファージディスプレイなどの抗体改変法を用いて調製することができる。抗体ファージディスプレイライブラリから特異性が高い抗体を得るための方法は、当技術分野で公知であり、いくつかのファージ抗体ライブラリが例えばＭｏｒｐｈｏＳｙｓ（Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ）およびＤｙａｘ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｍａｓｓ．）から市販されている。適切なファージディスプレイ法は、例えば米国特許第６，３００，０６４号明細書および同第５，９６９，１０８号明細書および「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ」、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（Ｅｄｓ．）（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ  １９９６））に記載されている。抗体重鎖および軽鎖遺伝子がファージ抗体から回収されたら、本発明による使用のために何らかの適切な形式の抗体、例えば全抗体、Ｆａｂ断片、ｓｃＦｖなど、を調製し得る。
【００２８】
本明細書中で開示される抗体は、鳥類および哺乳動物を含む何らかの動物起源由来であり得る。好ましくは、本抗体は、ヒト、マウス、ロバ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ラマ、ウマまたはニワトリ抗体である。
【００２９】
本発明に適切なポリクローナル抗体は、従来からの動物に基づく方法を用いて調製することができる。例えば、ポリペプチド免疫原（例えばＣＬＰＴＭ１Ｌのペプチド）を用いて適切な動物に免疫付与することができる。免疫付与した動物におけるポリペプチド抗体力価は、固定化ポリペプチドを用いた酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によるなど、標準的技術によって経時的に監視することができる。抗原に対して特異的な抗体は、哺乳動物から（例えば血液から）単離することができ、例えばＩｇＧ分画を得るためのプロテインＡクロマトグラフィーを含め、当業者にとって公知の技術によってさらに精製することができる。一部のケースにおいて、免疫付与後の適切な時間に（例えば抗体力価が最大であるときに）、抗体産生細胞を動物から得て、モノクローナル抗体を調製するために使用することができる。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、免疫グロブリンまたは抗体が特異的に結合する抗原上（例えばＣＬＰＴＭ１Ｌ上）の部位を指す。一般に、エピトープは、特有の空間的な立体配座で少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５個の連続または非連続アミノ酸を含む。例えばＥｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照。本明細書中で使用される場合、「特異的な結合」、「選択的な結合」、「選択的に結合」および「特異的に結合」という用語は、その抗原結合ドメインを介したエピトープに対する抗体結合を指し、結合は、抗原結合ドメインとエピトープとの間のある相補性を必要とする。一般に、抗体は、およそ１０-7Ｍ未満、例えばおよそ１０-8Ｍ未満、１０-9Ｍまたは１０-10Ｍまたはそれより小さいなどの親和性（一般に解離定数ＫDにより表される）で、特異的にまたは選択的に結合する。本明細書中で使用される場合、「親和性」という用語は、分子（例えばペプチド、ポリペプチドまたは抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば標的または抗原）との間の非共有結合の合計の強度を指す。別段の断りがない限り、本明細書中で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー間（例えばペプチドとその標的との間または抗体とその抗原との間）の１：１相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。「ＫD」および「Ｋd」という用語は同義であり、特定の分子Ｘ−結合パートナーＹの相互作用の解離平衡定数を指す。抗体の親和性は、表面プラズモン共鳴など、当技術分野で公知の方法を用いて容易に決定することができる。抗体親和性を決定するための他の従来技術は、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら（Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ５１：６６０（１９４９））により記載のものなど、当技術分野で公知である。抗体のその抗原、細胞または組織への結合特性は、一般に、例えば免疫蛍光に基づくアッセイ、例えば免疫組織化学（ＩＨＣ）および／または蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を含む免疫検出方法を用いて決定し、評価し得る。
【００３１】
代表的な実施形態において、本発明の抗体は、およそ１０-7Ｍ未満、例えばおよそ１０-8Ｍ未満、１０-9Ｍまたは１０-10Ｍまたはそれより低いなどの解離平衡定数（ＫD）でＣＬＰＴＭ１Ｌに結合する。
【００３２】
表１は、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化モノクローナル抗体を作製するのに有用なエピトープのアミノ酸配列を示す。「開始」および「終止」位置は、配列番号２として示されるヒトＣＬＰＴＭ１Ｌのアミノ酸配列に対して番号付与される（ＵｎｉＰｒｏｔ  ＩＤ：Ｑ９６ＡＫ５−１）。
【表１】
2017504622.tif 000003
【００３３】
実施例セクションでより詳細に記載されるように、次の基準を用いてモノクローナル抗体産生のために、表１の影付きボックスで表されるエピトープを最初に選択した：（ａ）ＣＬＰＴＭ１Ｌの予想される表面露出球状ドメイン内に存在するエピトープ（例えば位置３２から２８４の残基）；（ｂ）予想されるグリコシル化部位を回避するエピトープ（例えば位置９１、１０１および２２９の残基）；（ｃ）予想される障害領域を回避するエピトープ（例えば位置１４１から１６２）；および（ｄ）親水性、フォールディング能および抗原提示に基づき高いスコアとなるアミノ酸配列を有するエピトープ。
【００３４】
組織培養で増殖し得る骨髄腫細胞と抗体産生Ｂ細胞を融合させることによりハイブリッド細胞株を作製する過程であるハイブリドーマ技術によって、モノクローナル抗体を得ることができる。得られたハイブリドーマ株は、特異性が単一のモノクローナル抗体を産生する。
【００３５】
代表的な実施形態において、本明細書中で提供される組成物は、化学的または構造的に修飾、複合化、キメラ化、ヒト化されるか、または改変された抗体である、ＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な免疫グロブリン（例えばポリクローナルまたはモノクローナル抗体）を含む。例えば、本発明の組成物は、免疫複合体として修飾されるＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な抗体を含む。本明細書中で使用される場合、「免疫複合体」という用語は、（１）高い特異性で抗原（例えば癌細胞抗原）に結合する抗体、（２）エフェクター分子および（３）リンカーを含む治療剤を指す。エフェクター分子は、治療剤、プロドラッグ、ペプチド、タンパク質、酵素、ウイルス、脂質、生体反応修飾物質、医薬品およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）からなる群から選択され得る。好ましくは、エフェクター分子は抗癌細胞活性を有する。例えば、Ｓｍａｇｌｏら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１１（１１）：６３７−４８（２０１４）を参照。
【００３６】
適切なリンカーは、チオエステル結合、ジスルフィド結合、ヒドラゾン結合またはペプチドを含むが限定されず、これらであり得る。好ましくは、リンカーは、移行中にエフェクターが抗体から分離せず、標的化癌細胞または腫瘍間質にエフェクターを確かに放出することを確実にするように機能する。総説については、Ｓｍａｇｌｏら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１１：６３７−４８（２０１４）を参照。何らかの特定の機序または作用様式によって縛られるものではないが、免疫複合体は、治療剤（例えば化学療法）の強力な抗癌効果ならびに癌細胞抗原特異的なモノクローナル抗体の非常に特異的な癌標的化特性を保持するので、特に効果的な抗癌剤であると考えられる。代表的な実施形態において、本発明の免疫複合体は、薬理作用のある物質、放射性同位体および毒素；ＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的なモノクローナルまたはポリクローナル抗体部分；およびリンカーから選択される治療剤を含む。
【００３７】
一部のケースにおいて、本発明のＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な免疫グロブリンは、二特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡｂ、ＢｓＡｂ）である。本明細書中で使用される場合、「二特異性モノクローナル抗体」、「ＢｓＭＡｂ」および「ＢｓＡｂ」という用語は、交換可能に使用され、２つの異なるモノクローナル抗体またはそれらの断片を含む改変免疫グロブリンを指す。したがって、二特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。代表的な二特異性抗体は、単一抗原の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のこのような抗体は、第一の抗原結合部位を第二の抗原に対する結合部位と組み合わせ得る。例えば、ＢｓＭＡｂは、癌細胞を標的とし、死滅させるために、免疫細胞（例えばＴ細胞、Ｂ細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、貪食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球、肥満細胞）および癌細胞抗原（例えばＣＬＰＴＭ１Ｌ）に同時に結合するように改変することができる。
【００３８】
本発明の二特異性抗体は、ヒトまたはヒトＦｃ断片、例えばヒトＩｇＧ  Ｆｃ断片などをさらに含み得る。ＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な免疫グロブリンは、何らかの適切な方法に従い、ヒト化され得るかまたはＦｃ修飾に供され得る。本明細書中で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は一般に、非ヒトである起源からヒト抗体に１以上のアミノ酸残基が導入されているヒト抗体を指す。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「輸入」残基と呼ばれることが多く、一般的に「輸入」可変ドメインから選び取られる。ヒト化は、従来、輸入超可変領域配列をヒト抗体の対応する配列に対して置換することによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））の方法に従い行われる。したがって、このような「ヒト化」抗体は、実質的に１個未満のインタクトなヒト可変ドメインが、非ヒト種由来の対応する配列によって置換されているキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号明細書）である。二特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（例えばＦ（ａｂ’）2二特異性抗体）として調製することができる。国際公開第９６／１６６７３号パンフレットは二特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲＩＩＩ抗体を記載し、米国特許第５，８３７，２３４号明細書は二特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲＩ抗体を開示する。二特異性抗ＥｒｂＢ２／Ｆｃα抗体は国際公開第９８／０２４６３号パンフレットで示されている。米国特許第５，８２１，３３７号明細書は二特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＣＤ３抗体を教示する。全長二特異性抗体の従来からの産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいており、この２本の鎖は異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。
【００３９】
本明細書中で使用される場合、「Ｆｃ」断片という用語は、ジスルフィド結合により結び付けられる２本の重（Ｈ）鎖のカルボキシ末端部分を指す。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域での配列により決定され、この領域はまた、ある種のタイプの細胞上で見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）により認識される部分でもある。エフェクター領域への結合を増大または低下させるためにＦｃ領域を修飾し得る。例えばＶｉｎｃｅｎｔおよびＺｕｒｉｎｉ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊ．７（１２）：１４４４−５０（２０１２）を参照。Ｆｃ改変の他の例としては、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）の半減期を変更することが挙げられる。例えば、サルベージ受容体結合エピトープ残基を含むインビボ半減期が延長した抗体断片が米国特許第５，８６９，０４６号明細書に記載されている。さらに、ＦｃＲｎを介したＩｇＧの再利用を促進するためにｐＨ依存性抗原結合の変化を適用し得、これによりさらなる標的分子への結合が可能となる。総説については、ＫａｎｅｋｏおよびＮｉｗａ，Ｂｉｏｄｒｕｇｓ  ２５（１）：１−１１（２０１１）を参照。抗体断片の作製のための他の技術は熟練者にとって明らかであろう。
【００４０】
何らかの特定の機序または作用様式により縛られるものではないが、二特異性モノクローナル抗体は抗体依存性の細胞介在性の細胞傷害性の上昇を示すと考えられる（Ｃｈａｍｅｓら、ｍＡｂｓ  １：６，５３９−５４７（２００９））。したがって、本発明のＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化二特異性モノクローナル抗体の有効用量は、従来からのモノクローナルＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的抗体の有効用量よりも低いものであり得る。一部のケースにおいて、このような二特異性抗体の有効用量は、従来からのモノクローナル抗体よりも１桁以上小さい。例えば、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化二特異性モノクローナル抗体の有効用量は、０．０１ｍｇ・ｍ-2・ｄ-1（ミリグラム／平方メートル体表面積／日）前後であり得る。
【００４１】
細胞傷害剤を癌細胞に局在化させるために二特異性抗体を使用することもできる。これらの抗体は、癌／腫瘍−結合アームおよび細胞傷害剤（例えばサポリン、抗インターフェロン−α、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサートまたは放射性同位体ハプテン）に結合するアームを保持する。
【００４２】
二特異性抗体はまた、２を超える価数を有する抗体も含む。例えば、二特異性抗体は、本明細書中で使用される場合、抗体介在性の細胞傷害性（標的癌細胞上の腫瘍関連抗原との相互作用を介して）およびＴ細胞介在性細胞傷害性（細胞傷害性Ｔリンパ球の認識を介して）ならびに抗腫瘍免疫記憶（マクロファージなどの補助細胞上のマーカーとＦｃ領域の相互作用を介して）を誘導可能な抗体である三機能性ハイブリッド抗体を含む。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）を参照。例えば、ＣＤ１６、ＣＤ１９およびＣＤ２２に対する二および三特異性抗体は、Ｂ細胞白血病に対してナチュラルキラー細胞活性化を活性化することが示されている（Ｇｌｅａｓｏｎら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ．１１（１２）：２６７４−８４（２０１２））。
【００４３】
（三機能性ハイブリッド抗体としても知られる）三特異性抗体は、マクロファージおよびＮＫ細胞の効率的な動員を通じた相加的な腫瘍死滅能およびマクロファージなどの補助細胞との直接的接触を通じたＴ細胞の効率的な同時刺激を提供する、それぞれが異なる抗原結合特性を有する親マウスｌｇＧ２ａおよびラットｌｇＧ２ｂモノクローナル抗体由来の軽鎖および重鎖を含む。腫瘍細胞、Ｔ細胞および補助細胞を含む三細胞複合体を形成させることによって、三機能性ハイブリッド抗体は、効率的な腫瘍細胞破壊に必要とされる協調的なシグナル伝達事象を誘導する。とりわけ、協調的なシグナル伝達事象は、食作用およびパーフォリン介在壊死などの破壊過程を制御する免疫エフェクター機序である。例えば、絨毛膜胚（ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ）抗原（ＣＥＡ）およびＴ細胞共受容体ＣＤ３およびＣＤ２８を標的とする三特異性抗体は、ＣＥＡ陽性腫瘍を死滅させるためにＴリンパ球を動員することが示されている（Ｗａｎｇら、Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３５（４）：５５５−６５（２００４））。
【００４４】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、例えば、抗体の、抗原依存性の細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を促進するために、エフェクター機能に関して修飾される。これは、抗体のＦｃ領域において１以上のアミノ酸置換を導入することによって達成され得る。あるいはまたはさらに、システイン残基をＦｃ領域に導入し、それによってこの領域における鎖間のジスルフィド結合形成を可能にし得る。このようにして作製されたホモ二量体抗体は、内部移行能が改善し、および／または補体介在性細胞死滅およびＡＤＣＣが向上しているものであり得る。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）を参照。Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載のようなヘテロ二機能性架橋剤を用いて、抗感染活性が向上しているホモ二量体抗体も調製し得る。あるいは、二重Ｆｃ領域を有する抗体を操作することができ、それによって、補体溶解およびＡＤＣＣ能が向上している可能性がある。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９−２３０（１９８９）を参照。
【００４５】
他のケースにおいて、本発明のＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な抗体は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞において具現化される。本明細書中で使用される場合、「キメラ抗原受容体Ｔ細胞」という用語は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む遺伝子操作された抗体−Ｔ細胞キメラを指す。本明細書中に記載のように、本発明のキメラ抗原受容体Ｔ細胞は、ＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な抗体の抗原特異性および細胞性免疫の多機能性および効力を有する治療剤である。キメラ抗原受容体Ｔ細胞療法のための技術は当技術分野で公知であり、利用可能である。例えばＫｅｎｄｅｒｉａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７４（２２）：６３８３−９（２０１４）を参照。
【００４６】
代表的な実施形態において、本明細書中で提供されるＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な免疫グロブリンは、結合特性が変化しているか、または例えば親和性向上または親和性成熟によって標的抗原に対する親和性が向上するように修飾される。本明細書中で使用される場合、「親和性成熟抗体」という用語は、可変領域に１以上のアミノ酸置換があり、その結果、そのような置換を保持しない親（出発）抗体と比較した場合に、抗原に対する抗体の親和性が向上している、抗体またはその断片を指す。抗体親和性促進技術は当技術分野で公知であり、利用可能である。例えば、ランダム突然変異誘発（Ｇｒｏｖｅｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，３１３：１２９−３９，２００６）および部位特異的突然変異誘発法（Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：３８０９−１３，１９９４）は公知である。一部のケースにおいて、これらの突然変異誘発法は、その後のスクリーニングのための変異体のライブラリを作製するために、例えば、インビトロディスプレイに基づく技術、例えばファージまたはリボソームディスプレイなどと組み合わせる（ＡｌｍａｇｒｏおよびＳｔｒｏｈｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ，Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．３０７−３２７．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂｅｎｃｈ  ｔｏ  Ｃｌｉｎｉｃ．Ｅｄ．Ｚｈｉｑｉａｎｇ  Ａｎ．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．２００９）。好ましくは、本明細書中に記載のような親和性向上または親和性成熟により得られる修飾抗体は、出発抗体と比較して、標的抗原に対して、２倍、５倍、１０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍、２０００倍、３０００倍、４０００倍、５０００倍、１００００倍またはそれを超える活性向上を示す。例えば、ＫａｎｅｋｏおよびＺｕｒｉｎｉは治療用抗体の最適化を概説する。
【００４７】
一部のケースにおいて、本発明の免疫グロブリンは、１以上の突然変異を有するＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドを特異的に標的とする。標的とされ得るＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドのフレームシフトおよびミスセンス突然変異は、表２で示されるものを含み得るが限定されない。アミノ酸残基位置は、配列番号２として示されるヒトＣＬＰＴＭ１Ｌのアミノ酸配列に対して付番される。コード配列突然変異に対するヌクレオチド位置は、配列番号１として示されるヒトＣＬＰＴＭ１Ｌのヌクレオチド配列に対して付番される。体細胞ＣＬＰＴＭ１Ｌ突然変異は、自律神経節、乳房、中枢神経系、子宮内膜、腎臓、大腸、肝臓、肺、卵巣、前立腺、皮膚、胃および上気道の腫瘍において見られた。既知の各ＣＬＰＴＭ１Ｌ突然変異は稀であり（試験した腫瘍の＜３％）、これらの突然変異の機能的影響は不明である。
【表２】
2017504622.tif 000004
【００４８】
別の態様において、本発明は、１以上のＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な免疫グロブリンに複合化されるナノ粒子を提供する。一般に、抗体複合化ナノ粒子は、高い親和性で標的に結合し、生体バリア（例えば脳血管関門（ＢＢＢ））を通過することができるので、分子および細胞標的化に有利である。したがって、本明細書中で提供される抗体複合化ナノ粒子は、インビボ診断、臨床治療、標的化薬物送達、遺伝子治療、細胞標識／追跡および分子イメージングなどの様々な生物医学的応用に有用である。一部のケースにおいて、本発明のナノ粒子は、脂質に基づくビヒクル（例えばリポソーム、固形脂質ナノ粒子、ミセル）；ポリマー担体、例えばヒドロゲル、ポリマーソーム（ｐｏｌｙｍｅｒｓｏｍｅ）、デンドリマーおよびナノファイバー；金属性ナノ粒子（例えば、金、銀、チタン）；炭素構造（例えばナノチューブ、ナノホーン、ナノダイヤモンド（ＮＤ）、グラフェム（ｇｒａｐｈｅｍｅ））；または無機粒子（例えばシリカ）である。例えばＣｈｏｗおよびＨｏ，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ  ５：２１６ｒｖ４（２０１３）；Ｍｏｎｔｅｎｅｇｒｏら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．６５：６７７−６８８（２０１３）を参照。
【００４９】
さらなる態様において、本発明は、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドを標的とする免疫グロブリンと少なくとも１つの医薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤とを含む組成物を提供する。本明細書中で使用される場合、「医薬的に許容可能な」という句は、健全な医学的判断の範囲内で、合理的なベネフィット／リスク比と釣り合う、過度な毒性、刺激、アレルギー性反応または他の問題もしくは合併症なく、ヒトおよび動物の組織との接触における使用に適切である、物質、化合物、材料、組成物および／または剤形を指す。
【００５０】
別の態様において、本発明の組成物は、ＣＬＰＴＭ１Ｌアミノ酸配列の一部から構成されるペプチドを含む。例えば、本発明は、配列番号４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５のアミノ酸配列を有するペプチドを提供する（表１参照）。本発明のさらなるＣＬＰＴＭ１Ｌペプチドは、上記で定められるエピトープ特性に従い選択されるペプチドを含む。ペプチドは、配列番号２の８から２２個のアミノ酸長の部分を表し得る。一部のケースにおいて、ＣＬＰＴＭ１Ｌペプチドは治療剤として具現化され得る。例えば、ＣＬＰＴＭ１Ｌペプチドは、ペプチドワクチン、リガンド阻止ペプチドまたは競合阻害ペプチドにおいて具現化され得る。このような薬剤は、肺癌を処置または予防するための有用な治療剤となると予想される。ペプチドワクチンは、予防的アプローチに特に適している。ＣＬＰＴＭ１Ｌエピトープ、ＣＬＰＴＭ１Ｌ免疫グロブリンまたは何らかの他のＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化治療剤が、肺、子宮頸部、骨髄芽球性白血病、膵臓、膀胱、神経膠腫、前立腺、基底細胞癌および黒色腫を含むが限定されない、多くの癌のタイプの処置または予防において有用であろうことがさらに予想される。
【００５１】
一部のケースにおいて、本発明の組成物は、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的分子に対する特異性を有するアプタマーである。本明細書中で使用される場合、「アプタマー」という用語は、アプタマーを特定の高次構造に限定する特有の構造特性ゆえに、特異的な標的分子（例えば、タンパク質、リン脂質、鉄チャネル、核酸、細胞全体）に対して高い親和性および特異性を有する構造化オリゴヌクレオチドに基づくまたはペプチドに基づく分子を指す。リボ核酸（ＲＮＡ）および１本鎖デオキシリボ核酸（ｓｓＤＮＡ）アプタマーなどのオリゴヌクレオチドアプタマー。ペプチドアプタマーは、タンパク質足場に対して両端で連結される短いペプチド領域を含むコンビナトリアルタンパク質分子である。ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的分子に対して高い親和性および特異性を有する治療用アプタマーを設計し、同定するための方法は当技術分野で公知である。例えば、Ｒｏｈｌｏｆｆら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ３：ｅ２０１（２０１４）；Ｚｈｕら、Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ  ４（９）：９３１−９４４（２０１４）；ＥｌｌｉｎｇｔｏｎおよびＳｚｏｓｔａｋ，Ｎａｔｕｒｅ  ３４６：８１８−８２２（１９９０）を参照。
【００５２】
本明細書中で提供される組成物は、少なくとも１つの医薬的に許容可能な希釈剤、賦形剤または担体を含み得る。本明細書中で使用される場合、「医薬的に許容可能な担体」とは、当業者にとって公知であるような、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩、保存剤、薬物、薬物安定化剤、ゲル、結合剤、賦形剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、香味剤、色素などの材料およびそれらの組み合わせである（例えば、参照により本明細書中に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，ｐｐ．１２８９−１３２９を参照）。何らかの従来からの担体が活性成分と非相溶性である場合を除き、治療または医薬組成物中でのその使用が企図される。
【００５３】
選択される投与経路にかかわらず、適切な水和形態で使用され得る本発明の治療剤および／または本発明の医薬組成物は、当業者にとって公知の従来からの方法によって医薬的に許容可能な剤形に処方することができる。
【００５４】
ある一定の実施形態において、本明細書中で提供される医薬組成物は、１以上のＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質と、化学療法剤と、医薬的に許容可能な担体と、を含む。化学療法剤としては、白金に基づく薬剤、例えばシスプラチン、ゲムシタビンおよびカルボプラチンなど；ナイトロジェンマスタードアルキル化剤；ニトロソウレアアルキル化剤、例えばカルムスチン（ＢＣＮＵ）および他のアルキル化剤など；代謝拮抗剤、例えばメトトレキサートなど；プリン類似体代謝拮抗剤；ピリミジン類似体代謝拮抗剤、例えばフルオロウラシル（５−ＦＵ）およびゲムシタビンなど；ホルモン性抗新生物剤、例えばゴセレリン、ロイプロリドおよびタモキシフェンなど；天然の抗新生物剤、例えばタキサン（例えばドセタキセルおよびパクリタキセル）、アルデスロイキン、インターロイキン−２、エトポシド（ＶＰ−１６）、インターフェロンアルファおよびトレチノイン（ＡＴＲＡ）など；抗生物質天然抗新生物剤、例えばブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシンおよびマイトマイシンなど；およびビンカアルカロイド天然抗新生物剤、例えばビンブラスチンおよびビンクリスチンなどが挙げられるが限定されない。
【００５５】
その他の実施形態において、本明細書中で提供される本発明の組成物は、治療薬またはプロドラッグ、例えば上記で認められたもの以外の化学療法剤、スカベンジャー化合物、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗炎症剤、血管収縮薬および抗凝固剤、癌ワクチン適用に有用な抗原または対応するプロドラッグを含むが限定されない１以上の他の生物学的に活性のある物質をさらに含み得る。
【００５６】
本発明の組成物を使用する方法
【００５７】
ある態様において、本発明は、ＣＬＰＴＭ１Ｌを阻害することによって、対象において疾患または状態を処置または予防する方法を対象とする。例えば、本発明は、ＣＬＰＴＭ１Ｌを標的とし、特異的に結合する免疫グロブリンまたは免疫グロブリンを含む組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。本明細書中で使用される場合、「対象」という用語は、ＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質機能不全（例えば病原的な産生、修飾または機能）が関連する疾患または状態、またはＣＬＰＴＭ１Ｌとの遺伝学的関連がある疾患または状態（例えばＣＬＰＴＭ１Ｌ遺伝子座コピー数の増加または疾患または障害になり易い遺伝子型が関連する疾患もしくは状態）を有する、有する疑いがある、または有し易い個体を指す。「対象」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」は、診断、予後診断または治療が所望される、何らかの対象、特に哺乳動物対象を意味する。哺乳動物対象としては、ヒト、家畜、農場の動物および動物園、スポーツまたはペット動物、例えばイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、畜牛、雌牛などが挙げられる。
【００５８】
本明細書中で使用される場合、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、疾患、状態または障害を駆逐する目的のための、患者の管理およびケアを指す。これらの用語は、予防性の、すなわち予防的および軽減のための処置の両方を包含する。一部のケースにおいて、「処置される（ｔｒｅａｔｅｄ）」という用語は、疾患または状態の進行における何らかの有益な効果を指す。有益な効果には、その用語が適用される疾患もしくは状態またはこのような疾患もしくは状態の１以上の症状または発現を、逆転する、緩和する、進行を阻害する、防ぐまたはその可能性を軽減することが含まれ得る。疾患または状態が腫瘍、癌または癌関連状態である場合、処置することは、癌を駆逐する目的のための患者の管理およびケアを指し得、癌または癌関連状態の何らかの態様（例えば、転移、腫瘍成長）を、逆転する、緩和する、進行を阻害する、防ぐ、サイズを縮小させる、または可能性を低下させる、重症度を低下させることを含み得る。患者の健康および福祉における治療的な有益効果としては、（１）癌を治癒させること；（２）癌の進行を遅延させること；（３）腫瘍の退縮を引き起こすこと；または（４）癌の１以上の症状を緩和することが挙げられるが限定されない。本明細書中で使用される場合、「予防すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」および「予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」という用語は、ある一定の疾患または状態の完全な予防だけでなく、その用語が適用される疾患または状態を部分的または実質的に減弱させる、リスクを低下させる、または成長もしくは再発を遅延させることも指す。
【００５９】
一部のケースにおいて、本明細書中で提供される方法は、本明細書中で提供される組成物を投与することによって対象において腫瘍癌を処置または予防することを対象とする。代表的な実施形態において、本方法は、固形腫瘍を処置または予防することを必要とする対象へのＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物の投与を受ける対象において固形腫瘍を処置または予防する。本明細書中で使用される場合、「癌」という用語は、固形腫瘍および血液性の腫瘍（例えば白血病）が挙げられるが限定されない。癌という用語には、皮膚、組織、臓器、骨、軟骨、血液および血管の疾患が含まれるが限定されない。この用語は、原発性および転移性癌の両方をさらに包含する。したがって、一部のケースにおいて、本発明により提供されるような癌を処置または予防する方法は、腫瘍または腫瘍細胞の成長を、阻害する、抑制する、または防ぐ方法を含む。それを必要とする対象としては、例えば、前癌腫瘍、癌（例えば非小細胞肺癌）を含む腫瘍があることが診断されている対象または、以前の処置では効果がなかった対象を含め、処置されている対象が挙げられ得る。
【００６０】
一部のケースにおいて、本発明に適切な固形腫瘍は、「難治性」または「耐性」固形腫瘍であるとみなされ、これは、固形腫瘍が処置に反応しないという意味である。腫瘍は、処置の開始時に耐性であり得るか、または処置中に耐性を発現し得る。本明細書中に記載のＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質の処置および／または予防的投与の影響を受け易いありとあらゆる腫瘍が、当然ではあるが、本発明の範囲内である一方で、本明細書中で提供される組成物および方法は難治性腫瘍の処置において特に有用であると予想される。
【００６１】
本明細書中で提供される方法は、ＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質機能不全（例えば病原的な産生、修飾または機能）が関連する疾患もしくは状態の何れかのタイプまたはＣＬＰＴＭ１Ｌとの遺伝学的関連がある何らかの疾患もしくは状態（例えばＣＬＰＴＭ１Ｌ遺伝子座コピー数の増加または疾患または障害になり易い遺伝子型が関連する疾患もしくは状態）を処置または予防するのに適切である。代表的な実施形態において、本明細書中で提供される方法は、癌、腫瘍（例えば固形腫瘍）または前腫瘍病変（例えば前癌病変）の処置または予防のためのものである。本明細書中で提供されるような処置または予防の方法に適切な癌の例としては、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、結腸癌、結直腸癌、乳癌、子宮頸癌、脳癌、食道癌および胃癌が挙げられるが限定されない。固形腫瘍は、肺、膵臓、前立腺、乳房、腎臓の癌および前腫瘍病変および他の肉腫、癌腫および神経膠芽腫と関連があり得る。本明細書中で提供されるような処置または予防方法に適切な他の疾患または状態としては、リンパ腫、慢性白血病および急性白血病が挙げられるが限定されない。
【００６２】
一部のケースにおいて、本明細書中で提供される方法は、疾患または状態が化学療法剤に耐性を示す対象において疾患または状態を処置または予防するために実施することができる。例えば、対象は、化学療法剤、例えばシスプラチンまたはゲムシタビンなどに対して耐性を示す癌などの疾患または状態を有するものとして診断または同定され得る。ＣＬＰＴＭ１Ｌは、シスプラチン耐性卵巣腫瘍細胞株において高く発現されることが分かった。さらに、ＣＬＰＴＭ１Ｌは、遺伝毒性状態下で抗アポトーシスであると思われる。処置がシスプラチンを投与することを含む癌の例としては、肺癌、結直腸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、細気管支肺胞細胞肺癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部の癌、皮膚黒色腫、眼球内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ、ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、結腸癌、乳癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織肉腫、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞癌、胆道癌、慢性白血病、急性白血病、リンパ球性リンパ腫、ＣＮＳ新生物、脊髄軸の癌（ｓｐｉｎａｌ  ａｘｉｓ  ｃａｎｃｅｒ）、脳幹神経膠腫、多形膠芽細胞腫、星状細胞腫、神経鞘腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平細胞癌および下垂体腺腫腫瘍または腫瘍転移が挙げられる。
【００６３】
一部のケースにおいて、本明細書中で提供される方法は、次のもの：Ｋ−Ｒａｓ、Ｈ−Ｒａｓ、Ｎ−Ｒａｓ、ＲＡＳＳＦＩ、ＰＩ３ＫＣＡ、ＰＴＥＮ、ＥＧＦＲ、ＦＧＦＲ１、ＰＤＧＦＲＡ、ＢＲＡＦ、ＡＫＬ、ＲＯＳ１、ＢＣＬ−ｘ、ＢＩＭ、ＢＡＤ、ＢＡＸ、ＡＫＴおよびｍＴＯＲのうち少なくとも１つの少なくとも一部の、突然変異、転位、増幅または欠失が関連する癌を処置または予防するために実施することができる。代表的な実施形態において、本明細書中で提供される方法は、これらの遺伝子のうち少なくとも１つがＣＬＰＴＭ１Ｌにより制御されることが疑われるかまたは制御されることが実証される癌を処置または予防するために実施することができる。
【００６４】
一部のケースにおいて、本明細書中で提供される方法は、以前または現在放射線療法を受けている癌を処置または予防するために実施することができる。本明細書中で使用される場合、「放射線療法」という用語は、電離放射線での固形腫瘍および癌の処置の何らかの方式を指し、これには、外部ビーム放射線療法、定位放射線療法、仮想シミュレーション、三次元原体照射療法、強度変調放射線療法、電離粒子療法および放射性同位体療法が挙げられるが限定されない。
【００６５】
他のケースにおいて、本明細書中で提供される方法は、化学療法剤、例えばアルキル化剤、架橋剤、代謝拮抗剤、抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤または有糸分裂阻害剤などを使用して以前化学療法が行われていたかまたは現在行われている癌を処置または予防するために実施することができる。本明細書中で使用される場合、「化学療法剤」という用語は、腫瘍または癌に罹患している患者に治療的有効量で投与される場合、患者の健康および福祉において、有益な治療効果を有する何らかの物質を指す。患者の健康および福祉における治療的な有益効果としては、（１）癌を治癒させること；（２）癌の進行を遅延させること；（３）腫瘍の退縮を引き起こすこと；または（４）癌の１以上の症状を緩和することが挙げられるが限定されない。本明細書中で使用される場合、化学療法剤としてはまた、固形腫瘍を患うかまたは１以上の治療処置計画の結果として実質的に癌が無くなっている患者に予防的な量で投与される場合に患者の健康および福祉において有益な効果を有する何らかの物質も挙げられる。
【００６６】
本方法はまた、このような治療剤の使用が見込まれる場合、癌を処置または予防するために実施することができる。例えば、本明細書中で提供される方法は、ＣＬＰＴＭ１Ｌを標的化することによって、ＤＮＡ障害により誘発されるアポトーシスに対して癌細胞が感受性にされる癌を処置または予防するために有用である。本明細書中で使用される場合、「感受性にする（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅ）」および「感受性にされる（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ）」という用語は、細胞が、薬剤、処置、環境、刺激または状態に対してより反応性にされることを指す。例えば、「感受性にされた」細胞は、この反応の大きさの増大または何らかのタイプの反応の増大を示し得る。代表的な実施形態において、癌細胞は、本明細書中で提供される方法に従い、ＣＬＰＴＭ１Ｌを標的とすることによってＤＮＡ障害に対して感受性にされた場合、アポトーシス増加を示す。
【００６７】
一部のケースにおいて、本明細書中で提供される方法は、１以上の化学療法剤、例えばアルキル化剤、架橋剤、代謝拮抗剤、抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤または有糸分裂阻害剤などでは効果がないと疑われるかまたは効果がないことが実証されている癌を処置または予防するために実施することができる。例えば、本明細書中で提供される方法は、免疫グロブリンを用いてＣＬＰＴＭ１Ｌを標的とすることによって、架橋剤およびトポイソメラーゼ阻害剤での細胞傷害性処置に対して癌細胞が感受性になる癌を処置または予防するために適切であり得る。
【００６８】
代表的な実施形態において、本明細書中で提供されるような癌を処置または予防する方法は、それを必要とする対象に２以上のＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な免疫グロブリンを投与することを含む。この２以上のＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な免疫グロブリンは、同時にまたは連続的に投与することができる。例えば、本方法は、２以上のＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な免疫グロブリンを投与することを含み得、この免疫グロブリンは、化学療法剤（例えばシスプラチン、ゲムシタビン）に対するＣＬＰＴＭ１Ｌ発現腫瘍細胞の感受性を上昇させる能力および／またはＣＬＰＴＭ１Ｌ発現腫瘍細胞に対する細胞傷害性に関する能力の促進のために選択される。この組み合わせは、異なるポリペプチドに対してまたは同じポリペプチド上の異なるエピトープに対して特異性を有する抗体を含み得る。このような併用療法は、腫瘍反応を向上させ、単剤に対する腫瘍細胞の耐性を覆すことが示されている。例えば、Ｗｅｉｎｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：３１７−３２７（２０１０）を参照。
【００６９】
別の態様において、免疫複合体を投与することを含む、対象において癌を処置または予防する方法が本明細書中で提供される。本明細書中に記載のように、免疫複合体は有効な細胞傷害性および抗癌治療剤である。
【００７０】
さらなる態様において、癌を処置または予防することを必要とする対象に活性化Ｔ細胞を投与することを含む、対象において癌を処置または予防する方法が本明細書中で提供される。このような活性化Ｔ細胞療法は一般に、エクスビボ活性化およびＴ細胞の増殖を含む。総説については、Ｓｌａｎｅｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７４：７１６８−７１７４（２０１４）を参照。一部のケースにおいて、Ｔ細胞を対象から得て、次いで精製し、増殖させ、エクスビボで活性化する。活性化は、癌細胞特異的または腫瘍特異的な抗原（例えば本明細書中で提供されるモノクローナル抗体）の存在下で、精製し、増殖させたＴ細胞を培養することを含む。得られた活性化Ｔ細胞を対象に戻す。このようにして活性化されたＴ細胞は、免疫賦活能力が向上している。代表的な実施形態において、１以上のＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的なモノクローナル抗体（例えばｍＡｂ  ６−１、１０−２および１０−３）の存在下で、本明細書中で提供される方法に従い、処置を必要とする対象から得たＴ細胞を培養する。
【００７１】
本明細書中で提供されるような癌を処置または予防する方法は、何らかの適切な時間に実施することができる。一部のケースにおいて、本明細書中で提供されるようなＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物が、例えば対象からの生体試料中での癌または前腫瘍病変（例えば前癌病変）の診断後に対象に投与される。他のケースにおいて、本明細書中で提供されるようなＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物は、対象からの生体試料中でのＣＬＰＴＭ１Ｌのコピー数上昇または発現の同定後に対象に投与され、この発現レベルは、癌リスクを構成するために経験的に決定される閾値を上回る。
【００７２】
このような閾値の決定には、癌の発生と正常組織におけるＣＬＰＴＭ１Ｌ発現を関連付ける、現在および将来のデータの分析が含まれる。肺組織に関して、癌リスクを構成するために経験的に決定される閾値は、周囲組織から採取された健常試料での平均発現と比較して、１以上の試験肺組織試料に対する平均発現が少なくとも２倍高いものであり得る。一部のケースにおいて、ＣＬＰＴＭ１Ｌの発現が、試料採取組織の周辺の組織と比較して、試験試料（例えば癌細胞を含む疑いがある組織）においてより高いと判定される場合に処置が指示され得る。他のケースにおいて、処置は、ＣＬＰＴＭ１Ｌの量の上昇が腫瘍細胞表面上に存在することが決定される場合に指示され得る。このようなＣＬＰＴＭ１Ｌレベルの上昇は、例えば循環腫瘍細胞における、または固形腫瘍におけるフローサイトメトリーによって検出することができる。本明細書中で提供されるようなＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物は、癌の発生に対する１以上の指標またはリスク因子の同定時に、または対象からの生体試料中の癌と関連する遺伝子型の同定後に、対象に投与することができる。腫瘍形成を予防するかまたは遅延させるために、本明細書中で提供されるようなＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物は、癌または前腫瘍病変の前にまたはそれがないときに対象に投与される。このようなケースにおいて、本組成物は予防剤として投与される。
【００７３】
本明細書中で提供される方法に従う処置または予防は、対象が外科手術、放射線および／または化学療法により処置される前、処置中または処置後に行われ得る。一部のケースにおいて、化学療法または放射線療法前の本明細書中で提供される方法に従う処置によって、従来からの治療法の転帰が改善され得る。代表的な実施形態において、本明細書中で提供されるようなＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物は、放射線療法、化学療法または外科手術などの１以上の他の処置または予防手段と同時に対象に投与される。
【００７４】
本明細書中で提供されるようなＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物は、意図される目的を達成するかまたは当業者により適切とみなされる何らかの方法によって対象に投与される。例えば、本発明の組成物は、医薬品として投与することができ、経口または非経口投与を介して全身的にまたは局所的に投与され得る。本明細書中で使用される場合、「投与」という用語は、経口および非経口投与を含む。経口投与は、例えば経口剤の投与を含む。このような経口剤としては、例えば顆粒剤、粉剤、錠剤、カプセル剤、溶液、エマルションおよび懸濁液が挙げられる。非経口投与としては、例えば注射の投与が挙げられる。このような注射としては、例えば、皮下注射、筋肉内注射および腹腔内注射が挙げられる。一部のケースにおいて、点滴などの静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、坐薬、浣腸、経口腸溶錠剤などが選択され得る。
【００７５】
適切な投与方式は、対象の身体における１または複数の腫瘍の物理的な位置に基づいて決定され得る。代表的な実施形態において、本明細書中で提供されるようなＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物は、肺癌または前癌病変の診断を受けている対象に投与され、この組成物は、経口または静脈内投与される。あるいは、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物は、意図される処置領域に局所的に投与することができる。例えば、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物は、外科手術中に局所注射によって投与することができる。
【００７６】
組成物は、単位剤形でそれを必要とする対象に投与することができ、個別の剤形はそれぞれ、一部のケースにおいて医薬的に許容可能な担体とともに投与された場合に所望の治療効果を引き出すために計算された活性成分または化合物の所定量を含有する。
【００７７】
治療的有効用量は、症状を改善する、例えばこのような状態の処置、治癒、予防または改善に十分である化合物の量に関する。代表的な実施形態において、治療的有効量または用量は、遊離抗体が血中に存在するような量である。投与量決定について、細胞培養物においてまたは実験動物において化合物の毒性および治療効果を評価することは有利であり得る。例えば、ＬＤ50（すなわち、集団の５０％について致死となる用量）およびＥＤ50（すなわち集団の５０％で治療的に有効となる用量）を決定することができる。これらの計算から、ヒトでの使用のための投与量の範囲を処方することができる。投与量の範囲は、投与方式などの要因によって変動し得る。治療的有効量の本明細書中で提供される医薬組成物は、約０．００１から１００ｍｇ抗体／ｋｇ対象体重（例えば約０．０１から１００ｍｇ／ｋｇ体重；約０．１から４０ｍｇ／ｋｇ体重；約１から２０ｍｇ／ｋｇ体重）の範囲であり得る。
【００７８】
一部のケースにおいて、モノクローナル抗体に対する適切な用量は、０．００５ｍｇ／ｋｇから最大耐性用量であり得る。一部のケースにおいて、本明細書中で提供されるような医薬組成物の適切な用量は、対象の体表面積に従い決定し、組成物が投与される対象の身長および体重を用いて計算することができる。このようなケースにおいて、用量は、組成物の特定量／ｍ2（例えばｍｇ／ｍ2）として提供され得る。一部のケースにおいて、適切な用量は、およそ１０ｍｇ／ｍ2からおよそ４０ｍｇ／ｍ2のモノクローナル抗体であり得る。ミリグラム（ｍｇ）／キログラム（ｋｇ）対象体重に変換する場合、１５ｍｇ／ｍ2の用量は約０．４ｍｇ／ｋｇと同じである。Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｐ．５０（４）：２１９−２４４（１９６６）を参照のこと。投与量計算に関するさらなる情報は、Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｄｒｕｇ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００２），Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓａｆｅ  ｓｔａｒｔｉｎｇ  ｄｏｓｅ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  ｈｅａｌｔｈｙ  ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ，Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡで見出すことができる。
【００７９】
本明細書中で提供されるようなモノクローナル抗体を含む医薬組成物の質量は、必要に応じて、抗体＋送達物質または医薬的に許容可能な担体の質量を指し得ることが理解されよう。一部のケースにおいて、本明細書中で提供される組成物に適切な投与量および投与量の範囲は、薬物動態データ（すなわち薬物代謝およびクリアランス）を用いて決定することができる。本明細書中で使用される場合、「薬物動態」は、薬物または医薬組成物が、吸収される、分布する、代謝される、および身体から排泄される過程を指す。
【００８０】
臨床医、医師および他の医療の専門家は、医師または他の医療専門家によって本明細書中で提供される方法に従い、それを必要とする対象に組成物を投与することができる。一部のケースにおいて、本組成物の単回投与は十分であり得る。他のケースにおいて、様々な間隔（例えば、週に１回、週に２回、毎日、毎月）で、または何らかの適切な処置計画に従い、本組成物の複数回の投与が行われる。処置の持続期間は、本明細書中で提供される組成物の投与が対象により耐容される限り、単回投与または定期的な複数回投与であり得る。
【００８１】
本明細書中で提供される方法に従う処置に対する対象の反応を、判定、検出または監視するために、何らかの適切な方法を実施することができる。本明細書中で使用される場合、「処置に対する対象の反応を判定する」とは、本明細書中で提供される組成物の投与に対する、または本明細書中で提供される方法に従う処置に対する反応における、対象での治療の結果の評価を指す。例えば、ＣＬＰＴＭ１Ｌに標的化されたＲＮＡｉ誘導コンストラクトを含む組成物に対する対象の反応の指標としての疾患進行（例えば腫瘍サイズの変化）の何らかの変化を検出および／または監視するために、対象の状態を連続的に監視するか、または適切な時間間隔で（例えば定期的なまたは不定期の時間点）で評価することができる。一部のケースにおいて、例えば腫瘍サイズまたは腫瘍成長速度（例えば腫瘍拡大または縮小、腫瘍成長速度の抑制または加速）の何らかの変化を検出または監視するために、腫瘍を測定することができる。例えば、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャンおよびＸ線（例えば胸部Ｘ線）などの検出方法を使用することができる。一部のケースにおいて、腫瘍退縮を検出および測定するか、または病変の進行を検出するために、超音波検査を使用することができる。他のケースにおいて、腫瘍または前腫瘍病変の評価は、例えば生検試料の細胞診断または組織学を含み得る。固形腫瘍の場合、本明細書中で提供されるような処置に対する対象の反応の評価は、ＲＥＣＩＳＴ（「固形癌効果判定基準」）を評価することを含み得る。ＲＥＣＩＳＴ基準は、対象の疾患または状態を処置するために使用される治療に対する対象の反応を評価するために使用することができる。総説については、Ｔｈｅｒａｓｓｅら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２：２０５−１６，２０００を参照。
【００８２】
一部のケースにおいて、本明細書中に記載の処置または予防方法の効果を検出または監視するために、バイオマーカー（例えばｍＲＮＡ、タンパク質）を使用することができる。代表的な実施形態において、バイオマーカーの使用は、ａ）本明細書中で提供される組成物を投与すること；ｂ）様々な時間点（投与の前、投与中および／または投与後）で対象から採取された１以上の生体試料中で本発明に従いバイオマーカーのレベルを判定すること；およびｃ）処置の特定のフェーズ中に得られた生体試料に対してなされた判定を比較し、対照と、または様々な処置フェーズで得られた対象の試料に対して判定されたレベルとそれらを比較することを含み得る。骨および血液腫瘍の場合、バイオマーカーを用いた評価は、１以上の腫瘍マーカーについて発現レベルを検出または監視することおよび、例えば平均血小板体積、血小板数、白血球数およびヘモグロビンレベルを含む血液学的指標を評価することを含み得る。本明細書中で提供される方法に従うＣＬＰＴＭ１Ｌ特異的な物質を含む組成物の投与後の陽性転帰の他の指標または「有効性マーカー」は、（１）腫瘍または標的組織においてＣＬＰＴＭ１Ｌ転写産物および／またはタンパク質レベルを低下させること、および（２）腫瘍または標的組織におけるリン酸化ＡｋｔまたはＢｃｌ−ｘＬタンパク質レベルの低下を含み得る。これらの有効性マーカーは、生検、吸引液または洗浄液によって、続いて代表的な実施形態においては、特異的な抗体を用いて、適切な診断テスト、例えばＰＣＲ、ウエスタンブロッティング、免疫組織化学などによって、決定され得る。本明細書中に記載の転帰基準または評価方法の何れかに対する陽性の結果は、対象の疾患または状態を処置または予防するための、本方法の有効性を示す。
【００８３】
本明細書中で提供される方法に従うＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物の投与に対する陽性反応の指標は、例えば、処置前レベルまたは未処置試料と比較した、腫瘍または標的組織におけるＣＬＰＴＭ１Ｌ転写産物および／またはＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質レベルの顕著な低下（例えば対照試料中の発現のおよそ６０％から８０％まで発現が低下）を含み得る。一部のケースにおいて、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む組成物の投与に対する陽性反応の指標は、処置前レベルまたは未処置試料と比較した、腫瘍または標的組織におけるリン酸化Ａｋｔおよび／またはＢｃｌ−ｘＬタンパク質の顕著なレベル低下または処置前レベルまたは未処置試料と比較した、腫瘍または標的組織におけるアポトーシスの顕著な増加であり得る。ＲＥＣＩＳＴ基準によれば、処置に対する部分的反応は、ベースライン合計最長直径を参照とした、標的病変の最長直径の合計の少なくとも３０％の縮小により示され得、処置に対する完全または実質的な完全反応は、処置前に対象に対して得られる測定（すなわちベースライン測定）と比較した、または対照と比較した全ての標的病変の完全またはほぼ完全な消失、または疾患進行の比較低下により示され得る。一部のケースにおいて、処置に対する反応は、本明細書中に記載の組成物を投与されなかった１以上の対象と比較して評価される。本明細書中で提供される方法に従う処置に対する対象の反応を評価するための他のパラメーターは、転移性成長の相対的低下を検出すること；固形腫瘍に対するＲＥＣＩＳＴ基準における何らかの改善を検出すること；短期または長期生存を実証すること；無病生存を実証すること；腫瘍マーカーの発現の上昇または低下を検出すること；血液および骨癌に対する血液学的変化を検出すること；放射線療法および／または化学療法に対する陽性もしくは陰性反応を検出もしくは監視すること；および処置される疾患または状態の再発の増加または減少を検出することを含む。一部のケースにおいて、本明細書中で提供される方法に従い処置される対象は、部分反応とみなすための十分な縮小も、処置開始からの最長直径の最小合計を参考とする進行性疾患とみなすための十分な拡大もない安定疾患の兆候を示し得る（Ｔｈｅｒａｓｓｅら、上出）。
【００８４】
特異的な治療に対する対象の反応の判定は、腫瘍学において使用され、当業者にとって公知である、何らかの評価基準を用いて判定することができる。疾患の進行を説明するために有用な評価パラメーターとして、無病進行、すなわち本明細書中で使用される場合、試験期間中に疾患再発がなかった完全寛解である対象の比率を示す；客観的奏功、すなわち本発明で使用される場合、完全または部分反応が観察される被処置対象の比率を示す；腫瘍対照、すなわち本発明で使用される場合、完全反応、部分反応、やや有効または安定疾患≧６カ月が観察される被処置者の比率に関連する；無増悪生存、すなわち本明細書中で使用される場合、処置開始から癌成長の最初の測定までの時間として定義される；が挙げられる。好ましい実施形態において、対象の反応は、無増悪期間および生存時間から選択されるパラメーターによって判定される。代表的な実施形態において、本明細書中で提供される処置または予防方法に対する対象の反応は、統計学的に有意であるべきである。反応が統計学的に有意であるか否かの判定は、信頼区間、ｐ値の決定、スチューデントｔ検定、マン・ホイットニー検定などの統計学的評価ツールを用いて行うことができる。好ましい信頼区間は少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である。好ましくはｐ値は０．２、０．１または０．０５である。
【００８５】
対象が処置されている間、２４時間中所定の時間に関連指標の１以上を測定することによって、対象の健康を監視し得る。投与および処方の補給物、量、時間を含む処置の態様は全て、このような監視の結果に基づいて最適化し得る。同じパラメーターを測定することによって改善の程度を判定するために、患者を定期的に再評価することができる。例えば、第一のこのような再評価は、治療の開始後、適切な長さの時間（例えば、約２週間、約４週間、約８週間以上）の終了時に行うことができ、その後の再評価は、その後適切な間隔で行うことができる（例えば治療中４から８週間ごと、次いで３、６、９カ月以上ごと）。
【００８６】
冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法的な目的の１または複数（すなわち少なくとも１つ）を指すために本明細書中で使用される。例として、「抗体」という用語は、１つの抗体または複数の抗体を意味する。このようにして、「ａ」（または「ａｎ」）、「１以上の」および「少なくとも１つ」という用語は、本明細書中で交換可能に使用される。
【００８７】
本発明が様々な変更および代替的な形態を受け入れる余地がある一方で、その具体的な実施形態が図面において例として示されており、本明細書中で詳述する。しかし、具体的な実施形態の本明細書中の記載は、開示される特定の形態に本発明を限定するものではないが、それどころか、添付の特許請求の範囲により定められるような本発明の精神および範囲内に入る全ての変更、同等物および代替物を包含するものとすることを理解されたい。
【００８８】
本発明は、次の非限定的な実施例を考慮するとより詳細に理解される。
【実施例】
【００８９】
実施例１−ＣＬＰＴＭ１Ｌの構造分析
【００９０】
発明者らは、質量分析により同定される、６個の膜貫通ドメイン、細胞外球状ドメイン（ＥＣＲ１およびＥＣＲ２）、障害領域およびＮ−グリコシル化細胞表面ペプチドを含むＣＬＰＴＭ１Ｌの基本構造モデルを作製した（図２Ａ）。ＥＣＲ１およびエクソン１、２および９を欠くＣＬＰＴＭ１Ｌの推定あるいはスプライシングアイソフォームがある（図２Ｂ）。グリコシル化（Ｎ−結合）アミノ酸残基は、ヒトＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質配列（配列番号２）の位置９１、１０１および２２９で予想される。ヒトＣＬＰＴＭ１Ｌのアミノ酸残基９１（データは示さない。）および残基２２９に対してグリコシル化の質量分析による証拠が報告されている（Ｃｈｅｎら、Ｊ  Ｐｒｏｔｅｏｍｅ  Ｒｅｓ．２００９；８：６５１−６１）。形質膜タンパク質の場合、これはグリコシル化領域の細胞外配向性を強く示す。この細胞外領域が、より大きな細胞外領域内の小さな障害領域（アミノ酸残基１４２−１６２）によって分離される２個の個別の球状ドメインを含むことが予想される（図１）。
【００９１】
ＣＬＰＴＭ１Ｌの発明者らの分析から形質膜局在性および細胞表面露出の可能性が示唆されたにもかかわらず、ＣＬＰＴＭ１Ｌの細胞内局在性はあまりよく研究されておらず、形質膜局在性は以前に報告されなかった。ある試験から、ＣＬＰＴＭ１Ｌがミトコンドリアに局在し得ることが示唆された。Ｎｉら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ７：ｅ５２５９８，２０１２を参照。腫瘍細胞の表面でのＣＬＰＴＭ１Ｌ露出の可能性は、外因性物質でこのタンパク質を標的とする能力に顕著な関連がある。
【００９２】
モノクローナル抗体は限定的であり、一貫性があり、再現性があり、操作可能なので、発明者らは、ヒトＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質を標的化するモノクローナル抗体のパネルの産生を請け負った。モノクローナル抗体を生成させるペプチドエピトープの設計は、いくつかの要素を考慮に入れた。発明者らは、ＣＬＰＴＭ１Ｌの細胞表面に露出された球状ドメイン（残基３２から２８４）、グリコシル化部位（９１、１０１、２２９）を回避し、障害領域（１４１から１６２）を回避し、親水性、フォールディング能および抗原提示に基づいてスコアが高いアミノ酸残基を優先させる、内に存在するようにエピトープを設計した。モノクローナル抗体産生に対して、８個のエピトープ、各１１アミノ酸長を選択した（図３；表１の影付きボックスも参照。）。８から２２個のアミノ酸のペプチドに対してポリクローナル抗体を作製し得る一方で、特異的なモノクローナル抗体産生に対して９から１１アミノ酸のエピトープが一般に選択される。同様のパラメーターに基づいて選択される他の可能性のあるエピトープは表１の影の付いていないボックスで表される。
【００９３】
腫瘍細胞の表面でのＣＬＰＴＭ１Ｌの局在性を確認するために、発明者らは、ビオチン化およびストレプトアビジン樹脂での抽出によって、Ａ５４９ヒト肺腫瘍細胞から細胞表面タンパク質を単離した。細胞全体および細胞表面溶解液のウエスタン分析によって、細胞表面でＣＬＰＴＭ１Ｌが多く存在することが明らかになった（図４Ａ）。細胞全体溶解液シグナルに対して、細胞表面局在化対照として使用されるＥＧＦＲは、ＣＬＰＴＭ１Ｌよりも低い強度で細胞表面で検出された。核タンパク質対照として知られるサイクリンＤ１は、細胞表面で検出されなかった。ＣＬＰＴＭ１Ｌに対する透過処理していないＡ５４９細胞の免疫蛍光染色から、点状の細胞表面染色パターンが明らかになった（図４Ｂ）。
【００９４】
ＣＬＰＴＭ１Ｌの検出および表面ＣＬＰＴＭ１Ｌの免疫蛍光標識のために、ＣＬＰＴＭ１Ｌの細胞外球状ドメインを標的とする発明者らのモノクローナル抗体パネルを試験した。ウエスタンブロットによって全ての抗体が６２キロダルトンのＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質を強く検出した（図４Ｃ；一部データを示さない）。全抗体によって、透過処理していないＡ５４９細胞上で免疫蛍光に対して使用した場合、細胞表面染色パターンが得られ、ＥＣＲ２を標的とする抗体は、より明瞭な点状の染色を呈した（図４Ｄ；一部データを示さない）。
【００９５】
実施例２−ＣＬＰＴＭ１Ｌモノクローナル抗体のインビトロ分析
【００９６】
ＣＬＰＴＭ１Ｌ発現が、アジュバント療法で処置したＫ−Ｒａｓ推進性の膵臓癌と関連があったか否かを調べるために、発明者らは、適合した生存データを用いて３１名の患者において利用可能な膵臓組織マイクロアレイを利用した。ＣＬＰＴＭ１Ｌ免疫組織化学（ＩＨＣ）が行われた腫瘍の染色強度を３名の病理学者がスコア化し、スコアの平均を算出した。正常な膵管上皮において染色は均一に陰性であり、一方で腫瘍細胞の９４％（２９／３１）で陽性であった（ｒ＝０．７８、ｐ＜５ｘ１０−１０）（図５Ａ）。陰性（０）、弱（＋１）、中（＋２）または強（＋３）として腫瘍をスコア化した。独立したスコアの平均を算出した。腫瘍の平均スコアは１．４６であり、一方で正常な膵管上皮では０であった（ｐ＜０．０５）。１．１５以下の平均スコアにより定められるようにＣＬＰＴＭ１Ｌを低レベルで発現する腫瘍は生存率が上昇し、一方で発現が高い患者ほど、生存時間が短かった。腫瘍組織において低ＣＬＰＴＭ１Ｌ発現を示す患者の生存期間中央値は２４カ月であり、一方で腫瘍組織でのＣＬＰＴＭ１Ｌ発現が中程度および高い患者の生存期間中央値はそれぞれ１１カ月および１４カ月であった（図５Ｂ）。ＣＬＰＴＭ１Ｌ抗体で染色された代表的組織を図５Ｃで示す。
【００９７】
発明者らは、腫瘍細胞においてＣＬＰＴＭ１Ｌを標的化することによって、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＡｋｔ生存シグナル伝達が調整され、シスプラチンでの死滅に対して細胞が感受性にされることを以前明らかにした。ヒトＣＬＰＴＭ１Ｌのアミノ酸残基１８から３０７に対して作製したポリクローナル抗体を０、１および５μｇ／ｍＬの濃度でＡ５４９ヒト肺腫瘍細胞に適用した。ポリクローナル抗体処理を行って４８時間培養した後、Ｂｃｌ−ｘＬ、総Ａｋｔ１およびホスホＡｋｔ１に対してウエスタンブロッティングを行った。抗ＣＬＰＴＭ１Ｌ処理によるＢｃｌ−ｘＬおよびＡｋｔ１の両方の蓄積における用量依存的低下を観察した（図６Ａ）。シスプラチンに対する感受性におけるポリクローナル抗体による処理の効果を調べるために、０．０１から１μｇ／ｍＬの抗ＣＬＰＴＭ１Ｌの希釈液で２４時間、細胞を処理した。次いで細胞を０、１０および２０μＭの濃度で４８時間、シスプラチンに曝露した。抗ＣＬＰＴＭ１Ｌによる処理の結果、抗体の用量に依存してシスプラチン処理後の細胞生存能が低下した（図６Ｂ）。これらの結果から、抗体を用いた、シスプラチン死滅に対する感受性上昇が明らかになる。
【００９８】
モノクローナル抗ＣＬＰ（１０−２）での処理によって、ゲムシタビン（７２時間にわたり５００μＭ）による死滅に対する膵臓腺癌細胞の感受性が上昇し（図６Ｃ）、リン酸化Ａｋｔの蓄積も減少した（図６Ｄ）。
【００９９】
さらに、発明者らのモノクローナル抗体パネルでのＡ５４９およびＨ８３８ヒト肺腫瘍細胞の処理の結果、有効性の範囲で、Ｂｃｌ−ｘＬおよびＡｋｔリン酸化が激減した。ウエスタン分析から、エピトープ６および１０を標的とする抗体での処理の結果、Ｂｃｌ−ｘＬおよびホスホＡｋｔ１蓄積の用量依存的な減少が起こることが明らかになった。同様に、抗ＣＬＰＴＭ１Ｌモノクローナル抗体での腫瘍細胞の処理によって、シスプラチン死滅に対する感受性上昇が成し遂げられた。エピトープ１０に対して作製したモノクローナル抗体は、Ａ５４９細胞の足場非依存的な増殖を効果的に阻害した。ＣＬＰＴＭ１Ｌの細胞外ドメインに対して作製した全てのモノクローナル抗体の中でも、エピトープ１０に対して作製したもののみが、Ｈ８３８細胞の足場非依存性の腫瘍スフェロイド成長を阻害するのに有効であった。各抗体クローンに対するこれらの結果の要約を図１０で与える。
【０１００】
図８で示されるように、発明者らはまた、モノクローナル抗ＣＬＰＴＭ１Ｌ抗体での処理によって、膵臓腫瘍細胞のコロニー増殖が阻害されたことも発見した。Ｐａｎｃ１膵臓腺癌細胞を低密度でプレーティングし、抗ＣＬＰＴＭ１Ｌ  ６−１、１０−２または対照マウスＩｇＧで処理した（図８Ａ−Ｂ）。増殖５日後に得られたコロニーの数は、抗ＣＬＰＴＭ１Ｌ処理により最大４７％抑制された。
【０１０１】
実施例３−ヒト肺腫瘍異種移植モデルにおけるＣＬＰＴＭ１Ｌモノクローナル抗体の効果
【０１０２】
確立されたヒト肺腫瘍異種移植片の成長の阻害について、異種移植モデルにおいて、ＥＣＲ１におけるエピトープ６（配列番号６）およびＥＣＲ２におけるエピトープ１０（配列番号１０）に対して作製したモノクローナル抗体を評価した。Ａ５４９細胞異種移植片を確立し、マウスを等しい平均腫瘍サイズおよび分散の群に分けた。分類後第０、５および１２日に、マウスを１μＬ／ｇ（２から３ｍｇ／ｋｇ抗体と同等と推定）の指定されたモノクローナル抗体クローンまたは対照腹水で腹腔内処置した。１ｍｇ／ｋｇポリクローナル抗体で１つの群を同様に処置した。ポリクローナル抗体およびモノクローナルクローン６−１は、処置後１７日間にわたり、中程度であるが有意に腫瘍成長を阻害した（図９）。エピトープ１０（１０−２および１０−３）に対して作製した抗体は、腫瘍成長においてより頑強で、より顕著な阻害効果を有した。モノクローナルクローン１０−２は、腫瘍成長を８８％阻害した（ｐ＜０．００５）。
【０１０３】
上記で示した実施例およびデータから、インビボおよびインビトロで抗ＣＬＰＴＭ１Ｌ免疫グロブリンが抗腫瘍物質であることが明らかになる。さらに、これらは、ＣＬＰＴＭ１Ｌの細胞外ドメインを標的とすることにおいて効果的であると予想される特異的なエピトープを記載する。
【図１】
2017504622.tif 000005
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年5月28日(2015.5.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体、ペプチドおよびペプチドアプタマーまたはそれらの断片からなる群から選択される、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質。
【請求項２】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対して特異的なモノクローナル抗体である、請求項１に記載の物質。
【請求項３】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドが、配列番号２で示されるアミノ酸配列またはその一部を有する、請求項２に記載の物質。
【請求項４】
前記モノクローナル抗体が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対して特異的である、請求項２に記載の物質。
【請求項５】
前記モノクローナル抗体が、６−１、６−２、１０−１、１０−２および１０−３からなる群から選択されるモノクローナル抗ＣＬＰＴＭ１Ｌクローンである、請求項２に記載の物質。
【請求項６】
前記モノクローナル抗体が、表２で示される突然変異のうち１以上を有するＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドに対して特異的である、請求項２に記載の物質。
【請求項７】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するエピトープに対して特異性を有する、請求項１に記載の物質。
【請求項８】
請求項１から６の何れかに記載の化合物と、医薬的に許容可能な担体と、を含む、医薬組成物。
【請求項９】
薬剤としての使用のための、請求項１から７の何れかに記載の物質。
【請求項１０】
薬剤の製造における、請求項１から７の何れかに記載の物質の使用。
【請求項１１】
（ａ）請求項８に記載の医薬組成物と、（ｂ）ヒト対象において固形腫瘍を処置するための説明書を提供する差し込み物と、を含む製品。
【請求項１２】
腫瘍を処置または予防するための方法であって、それを必要とする対象に、ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む治療的有効量の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含み、それによって前記対象において前記腫瘍が処置または予防される、方法。
【請求項１３】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、抗体、ペプチドおよびアプタマーまたはそれらの断片からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対して特異的なモノクローナル抗体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドが、配列番号２で示されるアミノ酸配列またはその一部を有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記モノクローナル抗体が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対して特異的である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化部分が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するエピトープに対して特異性を有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１８】
前記腫瘍が、神経膠芽腫、肉腫、癌腫およびリンパ腫からなる群から選択される固形腫瘍である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１９】
前記腫瘍が、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、皮膚癌、膀胱癌、腎臓癌、卵巣癌、結腸癌、結直腸癌、乳癌、子宮頸癌、脳癌、食道癌および胃癌またはその前癌病変からなる群から選択される癌または前腫瘍病変と関連がある、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
前記腫瘍が、肺癌またはその前癌病変と関連がある、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記対象がヒトである、請求項１２に記載の方法。
【請求項２２】
前記腫瘍が、化学療法剤に対して耐性を示す、請求項１２に記載の方法。
【請求項２３】
前記化学療法剤が、シスプラチンおよびゲムシタビンからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記化合物が医薬的に許容可能な担体とともに投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項２５】
ＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質機能不全と関連する疾患または状態を処置または予防する方法であって、前記疾患または状態のリスクがあるか、それを有するものとして診断されるか、またはその症状を示す対象の細胞、組織または臓器にＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質を含む化合物を投与することを含む、方法。
【請求項２６】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌタンパク質機能不全が、病原的なタンパク質産生、病原的なタンパク質修飾または病原的なタンパク質機能のうち１以上を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記疾患または状態が、腫瘍、癌または前腫瘍病変である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記腫瘍が、神経膠芽腫、肉腫、癌腫およびリンパ腫からなる群から選択される固形腫瘍である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記腫瘍が化学療法剤に対して耐性を示す、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記化学療法剤が、シスプラチンおよびゲムシタビンからなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、抗体、ペプチドおよびアプタマーまたはそれらの断片からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＣＬＰＴＭ１Ｌ標的化物質が、ＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドの少なくとも一部に対して特異的なモノクローナル抗体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
前記モノクローナル抗体が、表２で示される突然変異のうち１以上を有するＣＬＰＴＭ１Ｌポリペプチドに対して特異的である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記モノクローナル抗体が、配列番号４から２５からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するペプチドに対して特異的である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記化合物が医薬的に許容可能な担体とともに投与される、請求項２５に記載の方法。
【国際調査報告】
2017504622.tif 000024