(57)【要約】  本発明は、発毛を増進し及び皮膚再生を促進するのに有用な組成物及び方法に関する。特に、本発明は、発毛を増進または誘発し、かつ皮膚再生を促進するための、トリメブチン、その塩、もしくはその活性代謝物を含む局所組成物を提供する。トリメブチンまたはその薬学的に許容される塩もしくは活性代謝物を含む組成物、及び発毛または皮膚再生を促進する方法におけるその使用。好ましくは、トリメブチンは、マレイン酸トリメブチンまたはＮ−デスメチルトリメブチンである。組成物は、好ましくは、ゲルのような局所投与のための形態である。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚修復または創傷治癒を促進する方法であって、それを必要とする対象に、有効量のトリメブチンまたはその薬学的に許容される塩もしくは活性代謝物を含む組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記トリメブチンが、マレイン酸トリメブチンまたはＮ−デスメチルトリメブチンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記対象が火傷もしくは潰瘍を有するか、皮膚喪失をもたらす感染を有しているもしくは以前に感染していたか、皮膚修復を必要とする外科的処理を受けたか、または皮膚喪失をもたらす傷害を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が、前記創傷が実質的に治癒するまで投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
発毛を促進するまたは脱毛に関連する状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量のトリメブチンまたはその薬学的に許容される塩もしくは活性代謝物を含む組成物を投与することを含む、方法。
【請求項６】
前記トリメブチンが、マレイン酸トリメブチンまたはＮ−デスメチルトリメブチンである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記脱毛に関連する状態が、アンドロゲン性脱毛症、円形脱毛症、成長期脱毛症、自己誘発脱毛症、休止期脱毛症、瘢痕性脱毛症、化学療法もしくは放射線治療の結果としての脱毛、毛髪移植の補充、頭蓋のプライミング、及び毒性化学物質への曝露の結果としての脱毛からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物は、脱毛症状が改善するまで投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記脱毛症状が、頭頂部の漸次薄化、円形または斑状の禿、毛髪の突発性剥離、全身の脱毛、及び毛髪の過度の脱落からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記方法が、前記対象が発毛の改善を体験するかどうかをモニタリングすることをさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記発毛の改善が、毛髪密度の増加、硬毛密度、軟毛密度、または累積被毛厚さの増加、成長期毛髪数の増加、休止期毛髪数の減少、総毛髪数の増加、及び線形発毛速度の増加からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物が第２の薬剤とともに投与される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の薬剤が、アルプロスタジル、ラタノプロスト、２型５−α−還元酵素阻害剤であるフィナステリド、１型及び２型５−α−還元酵素阻害剤であるデュタステリド、フルタミド、ビカルタミド、プレグナン誘導体、プロゲステロン誘導体、利尿薬、及びカリウムチャネル開口薬からなる群より選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記対象がヒトである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物が、局所投与のためのゲル、クリーム、ローション、軟膏、フォーム、粉末、溶液、スプレー、エマルジョン、または懸濁液として製剤化される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物が、局所投与のためのゲルとして製剤化される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記組成物が、約２％（ｖ／ｖ）〜約２０％（ｖ／ｖ）のマレイン酸トリメブチンを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記組成物が、約２０％（ｖ／ｖ）〜約５０％（ｖ／ｖ）のプロピレングリコール、約１０％（ｖ／ｖ）〜約４０％のエタノール、及び約１０％（ｖ／ｖ）〜約７０％（ｖ／ｖ）の水をさらに含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記組成物が、経口投与のために製剤化される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法
【請求項２０】
前記組成物が約５ｍｇ〜約１００ｍｇのマレイン酸トリメブチンを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物が１日に１回以上投与される、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物が少なくとも２〜２０日間投与される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記組成物が２０日間を超えて投与される、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物が、皮膚由来前駆体（ＳＫＰ）の増殖またはＳＫＰ活性を増加させる、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
ＳＫＰの細胞増殖を増加させることができる化合物をスクリーニングする方法であって、
（ａ）ＳＫＰを、（ａ）トリメブチンまたはその類似体、アルプロスタジル、２型５−α−還元酵素阻害剤であるフィナステリド、１型及び２型５−α−還元酵素阻害剤であるデュタステリド、フルタミド、ビカルタミド、プレグナン誘導体、プロゲステロン誘導体、利尿薬、及びカリウムチャネル開口薬から選択される、第１の薬剤、ならびに（ｂ）候補化合物と接触させることと、
（ｂ）前記ＳＫＰの増殖速度を決定することと、を含み、
前記第１の薬剤のみと接触したＳＫＰと比較して、前記候補化合物の存在下での前記ＳＫＰの前記増殖速度の増加は、前記候補化合物がＳＫＰの細胞増殖を増加させることを示す、方法。
【請求項２６】
前記トリメブチンが、マレイン酸トリメブチンまたはＮ−デスメチルトリメブチンである、請求項２５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本明細書に開示される非限定的な実施形態は、一般的に、発毛を増進し、皮膚再生を促進し、創傷治癒に有用な組成物及び方法に関する。本明細書に開示される非限定的な実施形態は、一般に、細胞増殖を増加させることができる化合物をスクリーニングする方法にも関する。
【０００２】
対象における皮膚の再生または発毛誘導のための（例えば、皮膚の再生または発毛の誘発が有益な疾患または状態の治療のための）不適切な方法がある。さらに、創傷治癒の障害は、罹患率及び死亡率の大きな原因である。創傷治癒プロセスは、分化した細胞及び幹細胞の両方ならびにサイトカイン／ケモカイン、成長因子及び皮膚マトリックス成分が有効な創傷治癒に必須である複雑な生物学的プロセスである。高価な成長因子はしばしば細胞増殖に必要であり、その場合でさえ、増殖はしばしば最適ではない。したがって、成長因子の作用を置換または増強し、培養中の細胞、特に幹細胞、例えば、皮膚由来前駆体（ｓｋｉｎ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ）（ＳＫＰ）の増大した増殖を可能にする分子が望ましい。
【０００３】
したがって、ＳＫＰなどの細胞の増殖及び自己再生を促進する分子の必要性が存在する。これらの分子は、化粧品及び医療目的（例えば、発毛、皮膚再生及び創傷治癒）に非常に有利であり得る。
【発明の概要】
【０００４】
本明細書に記載の第１の態様では、皮膚修復または創傷治癒を促進する方法であって、それを必要とする対象に、有効量のトリメブチンまたはその薬学的に許容される塩もしくは活性代謝物を含む組成物を投与することを含む、方法が提供される。
【０００５】
特定の非限定的な実施形態では、対象は火傷または潰瘍を有し、皮膚喪失をもたらす感染を有しているもしくは以前に皮膚修復を必要とする外科的処理を受けたか、または皮膚喪失をもたらす傷害を有する。特定の実施形態では、前記組成物は、創傷が実質的に治癒するまで投与される。
【０００６】
本明細書に記載の第２の態様では、発毛を促進する方法または脱毛に関連する状態を治療する方法であって、それを必要とする対象に、有効量のトリメブチンまたはその薬学的に許容される塩もしくは活性代謝物を含む組成物を、投与することを含む方法、が提供される。
【０００７】
特定の非限定的な実施形態では、脱毛に関連する状態は、アンドロゲン性脱毛症、円形脱毛症、成長期脱毛症、自己誘発脱毛症、休止期脱毛症、瘢痕性脱毛症、化学療法もしくは放射線治療の結果としての脱毛、毛髪移植の補充（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ  ｈａｉｒ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、頭蓋のプライミング（ｐｒｉｍｉｎｇ  ｓｋｕｌｌ）、毒性化学物質への曝露の結果としての脱毛からなる群から選択される。特定の非限定的な実施形態では、脱毛症の症状が改善するまで組成物が投与され、脱毛症の症状は、頭頂部の漸次薄化、円形または斑状の禿、毛髪の突発性剥離、全身の脱毛、及び毛髪の過度の脱落からなる群から選択される。
【０００８】
本明細書に記載の別の非限定的な実施形態では、上記の方法は、対象が発毛の改善を体験するかどうかをモニタリングすることをさらに含み、前記発毛の改善が、毛髪密度の増加、硬毛密度、軟毛密度、または累積被毛厚さの増加、成長期毛髪数の増加、休止期毛髪数の減少、総毛髪数の増加、及び線形発毛速度の増加からなる群から選択される。
【０００９】
上記方法のさらに他の非限定的な実施形態において、組成物は、第２の薬剤とともに投与され、前記第２の薬剤は、アルプロスタジル、ラタノプロスト、２型５−α−還元酵素阻害剤であるフィナステリド、１型及び２型５−α−還元酵素阻害剤であるデュタステリド、フルタミド、ビカルタミド、プレグナン誘導体、プロゲステロン誘導体、利尿薬、及びカリウムチャネル開口薬からなる群より選択される。
【００１０】
すべての非限定的な実施形態において、トリメブチンは、マレイン酸トリメブチンまたはＮ−デスメチルトリメブチンであり得る。特に非限定的な実施形態では、対象はヒトである。いくつかの非限定的な実施形態では、組成物は、局所投与のためのゲル、クリーム、ローション、軟膏、フォーム、粉末、溶液、スプレー、エマルジョン、または懸濁液として製剤化される。他の非限定的な実施形態では、組成物は、局所投与のためのゲルとして製剤化される。他の非限定的な実施形態では、組成物は、約２％（ｖ／ｖ）〜約５０％（ｖ／ｖ）（例えば、約２％（ｖ／ｖ）〜約５％（ｖ／ｖ）、約２％（ｖ／ｖ）〜約１０％（ｖ／ｖ）、約２％（ｖ／ｖ）〜約２０％（ｖ／ｖ）、約５％（ｖ／ｖ）〜約１０％（ｖ／ｖ）、約１０％（ｖ／ｖ）〜約１５％（ｖ／ｖ）、約１０％（ｖ／ｖ）〜約２０％（ｖ／ｖ）、約１５％〜約２０％（ｖ／ｖ）、約２０％（ｖ／ｖ）〜約３０％（ｖ／ｖ）、約２５％（ｖ／ｖ）から約３０％（ｖ／ｖ）、約３０％（ｖ／ｖ）〜約３５％（ｖ／ｖ）、約３５％（ｖ／ｖ）〜約４０％（ｖ／ｖ）、約４０％（ｖ／ｖ）〜約４５％（ｖ／ｖ）、約４５％（ｖ／ｖ）〜約５０％（ｖ／ｖ））のマレイン酸トリメブチンを含む。さらに他の非限定的な実施形態において、組成物は、経口投与のために製剤化され、該組成物は、約５ｍｇ〜約８００ｍｇ（例えば、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１５ｍｇ、約１０ｍｇ〜約２０ｍｇ、約１５ｍｇ〜約２０ｍｇ、約２０ｍｇ〜約２５ｍｇ、約２０ｍｇ〜約３０ｍｇ、約２５ｍｇ〜約３０ｍｇ、約３０ｍｇ〜約３５ｍｇ、約３０ｍｇ〜約４０ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約２００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約３００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約４００ｍｇ、約４００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜約８００ｍｇ）のマレイン酸トリメブチンを含む。
【００１１】
任意の非限定的な実施形態において、組成物は、１日に１回または複数回投与され得る。いくつかの非限定的な実施形態では、組成物は少なくとも２乃至２０日間投与される。他の非限定的な実施形態では、組成物は２０日間以上投与される。任意の非限定的な実施形態において、組成物は、ＳＫＰの増殖またはＳＫＰ活性を増加させることができる。
【００１２】
本明細書に記載の第３の態様では、細胞増殖を増加させることができる化合物のスクリーニング方法であって、ＳＫＰを、（ａ）トリメブチンまたはその類似体、アルプロスタジル、２型５−α−還元酵素抑制剤であるフィナステリド、１型及び２型５−α−還元酵素阻害剤であるデュタステリド、フルタミド、ビカルタミド、プレグナン誘導体、プロゲステロン誘導体、利尿薬、及びカリウムチャネル開口薬からなる群から選択される第１の薬剤及び（ｂ）候補化合物と接触させることと、（ｂ）前記ＳＫＰの増殖速度を決定することと、を含み、前記第１の薬剤のみと接触した前記ＳＫＰと比較して、前記候補化合物の存在下でのＳＫＰの増殖速度の増加は、候補化合物がＳＫＰの細胞増殖を増加させることを示す、方法を提供する。
【００１３】
すべての非限定的な実施形態において、トリメブチンは、マレイン酸トリメブチンまたはＮ−デスメチルトリメブチンであり得る。
【００１４】
これら及び他の態様及び特徴は、添付の図面と併せて特定の非限定的な実施形態の以下の説明を検討することにより、当業者には明らかになるであろう。
【００１５】
定義
本明細書中で使用される場合、用語「投与」または「投与する」は、組成物の投薬量を対象に与える方法を指す。投与方法は、種々の因子、例えば組成物の成分、ならびに疾患、障害または状態の性質及び重症度に依存し得る。「一緒に投与される」という句は、２つ以上の活性剤（例えば、本明細書に記載の化合物のいずれか）が単一組成物中に一緒に製剤化されること、または２つ以上の活性剤（例えば、本明細書に記載の化合物のいずれか）を組み合わせて、対象に投与することを意味する。
【００１６】
「対象」とは、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、哺乳動物）を意味する。
【００１７】
「局所適用」とは、例えば、手またはワイプ、パフ、ローラー、またはスプレーのようなアプリケータの使用によって外皮に直接的に塗り広げることを意味する
【００１８】
「化粧品として許容可能な」とは、過度の毒性、不適合性、不安定性、刺激及び／またはアレルギー反応なしに、組織（例えば、皮膚）と接触させて使用するのに適した製品または化合物を意味する。この用語は、化粧品としてのみ使用する成分／製品（例えば、成分／製品を医薬品として使用することができる）を限定することを意図するものではない。
【００１９】
「局所用担体」または「皮膚用に許容される担体」とは、担体が、過度の毒性、不適合性、不安定性、アレルギー応答などを伴わずに真皮組織と接触して使用するのに適していることを意味する。賦形剤は、例えば、抗接着防止剤、酸化防止剤、結合剤、コーティング剤、圧縮助剤、崩壊剤、染料（着色剤）、皮膚軟化剤、乳化剤、充填剤（希釈剤）、フィルム形成剤もしくはコーティング剤、香味料、香料、滑剤（流動促進剤）、潤滑剤、印刷インキ、吸着剤、懸濁剤もしくは分散剤、甘味料、または水和水を含むことができる。例示的な賦形剤としては、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム（二塩基性）、ステアリン酸カルシウム、クロスカルメロース、架橋ポリビニルピロリドン、クエン酸、クロスポビドン、システイン、エチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、マルチトール、マルトース、マンニトール、メチオニン、メチルセルロース、メチルパラベン、微結晶セルロース、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポビドン、アルファ化デンプン、プロピルパラベン、パルミチン酸レチニル、シェラック、二酸化ケイ素、カルボキシメチルセルロース、クエン酸ナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ソルビトール、デンプン（トウモロコシ）、ステアリン酸、ステアリン酸、スクロース、タルク、二酸化チタン、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリアクリル酸（カルボマー）、ステアリルアルコール、イソプロピルアルコール、セチルアルコール、ヤシ油、チャノキ油、アロエ、小麦胚芽油、セテアレス−１５、及びキシリトールが含まれるが、これらに限定されない。
【００２０】
「予防」とは、疾患、障害、状態、または疾患、障害または状態に関連する１つまたは複数の症状を有するか、または有し得る対象に予防的処理が与えられることを意味する。
【００２１】
疾患、障害、または状態の「減少または減少させること」とは、治療のない場合における範囲または時間経過と比較して、疾患、障害または状態の程度及び／または望ましくない臨床症状を軽減され及び／または進行の時間経過を遅延させ延長させることを意味する。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「毛髪」とは、頭皮、頭、顔及び／または体毛を意味し、頭皮、まつ毛、眉、口ひげ、ひげ、耳、鼻、胸、恥骨、脇などが含まれるがこれらに限定されない。
【００２３】
「有効量」とは、調節または治療される状態（例えば、発毛または創傷治癒）において陽性の改変を誘導するのに十分であるが、深刻な副作用を回避するのに十分な程度に生理活性化合物または組成物の量を意味する。安全で有効な量の化合物または組成物は、処理される特定の状態、最終使用者の年齢及び身体状態、処理／予防される状態の重篤度、処理の持続時間、他の処理の性質、使用される特定の化合物または生成物／組成物、利用される特定の化粧品として許容される担体、及び類似の因子により変更できる。
【００２４】
「トリメブチン」は、トリメブチンの遊離塩基、トリメブチンの塩、またはトリメブチンの活性代謝物を意味する。本明細書に記載のトリメブチンの塩及び活性代謝物には、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）またはＮ−デスメチルトリメブチンが含まれるが、これらに限定されない。
【００２５】
「発毛を誘導または促進する」とは、新しい毛髪サイクルの早期の誘導及び／または毛髪サイクルの活性成長期（成長期）の延長、及び／または毛髪の成長速度の増加、及び／または毛幹の幅を増加させることを意味し、毛髪の成長の誘発及びそれを目に見えるようにすることを含むが、これに限定されない。本明細書で使用される「毛質の改善」とは、毛幹の直径を増加させること、及び／または毛髪体積、毛髪の輝き、及び／または毛の厚さのような毛髪の視覚特性を向上させること、及び／または毛幹の特性に影響すること、より滑らかな外観または感触を作り出すこと、及び／または光沢を増加させることを含むが、これに限定されない。
【００２６】
「治療」とは、有益なまたは望ましい結果、例えば臨床成績を得るためのアプローチを意味する。有益なまたは望ましい結果には、疾患、障害、状態、または疾患、障害、または状態に関連する１つ以上の症状の、緩和、改善、または予防が含まれ得るが、これらに限定されない。疾患、障害、または状態の程度の減少；疾患、障害または状態の安定化（すなわち、悪化しない）；疾患、障害、または状態の進行を遅延または低下させること；ならびに疾患、障害または状態の改善または緩和を含む。「治療」はまた、治療を受けていない場合の予想される生存と比較して、生存を延長することを意味し得る。
【００２７】
「小分子」とは、約１０００Ｄａ未満（例えば、９００、８００、７００、６００、５００、または４００Ｄａ未満）の分子量を有する分子を意味する。
【００２８】
本明細書に記載の化合物は、異性体例えばジアステレオマー及びエナンチオマー、塩、エステル、アミド、チオエステル、溶媒和物、及びそれらの多形、ならびに本明細書に記載の化合物のラセミ混合物及び純粋な異性体を含む、それらの薬学的に許容される形態のいずれかの本明細書に記載のものが含まれる。一例として、「マレイン酸トリメブチン」は、遊離塩基ならびにその薬学的に許容される塩を意味する。
【００２９】
「薬学的に許容される塩」という用語は、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずにヒト及び下等動物の組織との接触に使用するのに適した及び合理的な利益／リスク比に見合っているこれらの塩を表す。薬学的に許容される塩は、当技術分野において周知である。この塩は、本明細書に記載の化合物の最終的な単離及び精製の間にその場で、または遊離塩基官能基を適切な有機酸と反応させることによって別々に調製することができる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリル酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メシル酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなど、ならびに非毒性のアンモニウム、第４級アンモニウム、及びアミンカチオンであって、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどが含まれるが、これらに限定されないものを含む。
【００３０】
本明細書に記載の化合物の一般的な記載において、置換基中の特定のタイプの原子の数は、一般に１〜４個の炭素原子を含むアルキル基またはＣ１−４アルキル基などの範囲として与えられる。そのような範囲への言及は、特定された範囲内にある整数の原子のそれぞれを有する基についての特定の言及を含むことが意図される。例えば、１〜４個の炭素原子のアルキル基は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３及びＣ４のそれぞれを含む。例えば、Ｃ１〜１２ヘテロアルキルは、１個以上のヘテロ原子に加えて１〜１２個の炭素原子を含む。他の数の原子及び他のタイプの原子も同様の方法で示すことができる。
【００３１】
本明細書における端点による数値範囲の記述は、その範囲内に包含されるすべての数を含むことが意図される（例えば、１〜５の記述は１、１．５、２、２．７５、３、３．８０、４、及び５を含む）。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は、他に指示がない限り、「少なくとも１つ」または「１つ以上」を意味する。さらに、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の指示対象を含む。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１Ａ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ａ〜１Ｅは、それぞれ、ヒトＳＫＰ培養における球数に対するＡｌｐ、ＴＭ、ケンフェロール（Ｋａｅ）、ＭＧ６２４、及びプラモキシン（Ｐｒａｍ）の用量反応作用を示すグラフである。
【図１Ｂ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ａ〜１Ｅは、それぞれ、ヒトＳＫＰ培養における球数に対するＡｌｐ、ＴＭ、ケンフェロール（Ｋａｅ）、ＭＧ６２４、及びプラモキシン（Ｐｒａｍ）の用量反応作用を示すグラフである。
【図１Ｃ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ａ〜１Ｅは、それぞれ、ヒトＳＫＰ培養における球数に対するＡｌｐ、ＴＭ、ケンフェロール（Ｋａｅ）、ＭＧ６２４、及びプラモキシン（Ｐｒａｍ）の用量反応作用を示すグラフである。
【図１Ｄ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ａ〜１Ｅは、それぞれ、ヒトＳＫＰ培養における球数に対するＡｌｐ、ＴＭ、ケンフェロール（Ｋａｅ）、ＭＧ６２４、及びプラモキシン（Ｐｒａｍ）の用量反応作用を示すグラフである。
【図１Ｅ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ａ〜１Ｅは、それぞれ、ヒトＳＫＰ培養における球数に対するＡｌｐ、ＴＭ、ケンフェロール（Ｋａｅ）、ＭＧ６２４、及びプラモキシン（Ｐｒａｍ）の用量反応作用を示すグラフである。
【図１Ｆ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｆは、１００ｎＭのＡｌｐ、ＴＭ、Ｋａｅ、ＭＧ６２４、またはＰｒａｍで処理した後のヒトＳＫＰ球数の増加を示すグラフである。
【図１Ｇ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｇは、１００ｎＭのＡｌｐ、ＴＭ、Ｋａｅ、ＭＧ６２４またはＰｒａｍで処理した後のラットＳＫＰ球数の増加を示すグラフである。
【図１Ｈ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｈ及び１Ｉは、それぞれＡＬＰ及びＴＭによる処理に対するラットＳＫＰの用量反応曲線を示すグラフである。
【図１Ｉ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｈ及び１Ｉは、それぞれＡＬＰ及びＴＭによる処理に対するラットＳＫＰの用量反応曲線を示すグラフである。
【図１Ｊ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｊ及び１Ｋは、ＡＬＰ、ＴＭ、またはＡＬＰ及びＴＭの組み合わせがＳＫＰ球数及び球体サイズにそれぞれ及ぼす影響を示すグラフである。
【図１Ｋ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｊ及び１Ｋは、ＡＬＰ、ＴＭ、またはＡＬＰ及びＴＭの組み合わせがＳＫＰ球数及び球体サイズにそれぞれ及ぼす影響を示すグラフである。
【図１Ｌ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｌは、ＳＫＰ球数に対するＡＬＰ、ＴＭ、またはラタノプロスト（Ｌａｔａｎ）の効果を示すグラフである。
【図１Ｍ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｍ及び１Ｎは、ＡｌｐまたはＴＭで処理したマウスの創傷床におけるＫｉ６７＋細胞の増加を示す画像及びグラフである。
【図１Ｎ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｍ及び１Ｎは、ＡｌｐまたはＴＭで処理したマウスの創傷床におけるＫｉ６７＋細胞の増加を示す画像及びグラフである。
【図１Ｏ】ハイスループット薬物スクリーニングにおいてＳＫＰ活性を増加させる薬物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）及びアルプロスタジル（Ａｌｐ））の同定を示す。図１Ｏは、Ｋｉ６７陽性ＮＩＨ−３Ｔ３細胞がＡｌｐまたはＴＭ処理によって影響を受けないことを示すグラフである。
【図２Ａ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ａ及び２Ｂは、それぞれ、創傷後７日目または９日目の、対照と比較した、ＴＭまたはＡｌｐで処理したマウスにおける創傷閉鎖率を示すプロットである。
【図２Ｂ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ａ及び２Ｂは、それぞれ、創傷後７日目または９日目の、対照と比較した、ＴＭまたはＡｌｐで処理したマウスにおける創傷閉鎖率を示すプロットである。
【図２Ｃ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ｃは、創傷後９日目のＡｌｐまたはＴＭ９で処理したマウスにおける創傷ギャップ及び幅の形態計測分析を示す画像である。ＮＥは新しい上皮を示し、ＲＤは再生真皮を示し、ＯＷは元のパンチ創傷の境界を示す。
【図２Ｄ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ｄ〜２Ｆは、創傷後９日目の創傷の幅、上皮ギャップ、及び新しい皮膚組織に対するＡｌｐまたはＴＭの効果を示すグラフである。
【図２Ｅ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ｄ〜２Ｆは、創傷後９日目の創傷の幅、上皮ギャップ、及び新しい皮膚組織に対するＡｌｐまたはＴＭの効果を示すグラフである。
【図２Ｆ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ｄ〜２Ｆは、創傷後９日目の創傷の幅、上皮ギャップ、及び新しい皮膚組織に対するＡｌｐまたはＴＭの効果を示すグラフである。
【図２Ｇ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ｇ及び２Ｈは、ＡｌｐまたはＴＭで処理したマウスの創傷床におけるＫｉ６７＋細胞の増加を示す画像及びグラフである。
【図２Ｈ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ｇ及び２Ｈは、ＡｌｐまたはＴＭで処理したマウスの創傷床におけるＫｉ６７＋細胞の増加を示す画像及びグラフである。
【図２Ｉ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ｉ及び２Ｊは、ＡｌｐまたはＴＭで処理したマウスの創傷床におけるＣＤ−３１＋血管の増加を示す画像及びグラフである。ＬＥは新表皮の先端を示し、ＲＤは再生真皮を示す。
【図２Ｊ】マウスにおける創傷治癒に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図２Ｉ及び２Ｊは、ＡｌｐまたはＴＭで処理したマウスの創傷床におけるＣＤ−３１＋血管の増加を示す画像及びグラフである。ＬＥは新表皮の先端を示し、ＲＤは再生真皮を示す。
【図３Ａ】真皮の増殖及び厚さを増加させることによって、マウスにおける真皮維持に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図３Ａは、ＴＭで１週間処理した真皮におけるＫｉ６７＋細胞の増加を示す画像であり、ＴＭで３週間処理した後に測定した真皮の厚みを示す画像である。
【図３Ｂ】真皮の増殖及び厚さを増加させることによって、マウスにおける真皮維持に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図３Ｂは、ＡｌｐまたはＴＭの１週間局所適用後の真皮Ｋｉ６７＋細胞の数を示すプロットである。
【図３Ｃ】真皮の増殖及び厚さを増加させることによって、マウスにおける真皮維持に対するＴＭまたはＡｌｐの局所適用の効果を示す。図３Ｃは、ＡｌｐまたはＴＭの３週間局所適用後の皮膚の厚さを示すプロットである。
【図４】発毛に対するＴＭ及びＡｌｐの効果を示す。グラフは、Ａｌｐ及びＴＭ処理マウスの毛の長さを示す。ｎ＝４マウス／群。
【図５】薬物処理された創傷床におけるＳＫＰ球数を測定することによって、ＳＫＰの自己複製及び増殖に対するＴＭ及びＡｌｐの効果の画像及びグラフを示す。
【図６】薬剤処理対照におけるＳＫＰ球数を測定することによって、ＳＫＰの自己再生及び増殖に対するＴＭ及びＡｌｐの効果の画像及びグラフを示す。
【図７Ａ】ＴＭまたはＡｌｐによる局所処理は、ＴＭまたはＡｌｐの非存在下で処理された皮膚から培養されたＳＫＰにおいて自己再生を変化させ、急激なＴＭまたはＡｌｐ処理はＳＫＰ遺伝子発現を変化させることを示す。図７Ａは、対照皮膚と比較して、Ａｌｐ処理及びＴＭ処理された創傷及び損傷されていない皮膚における転写類似性を示す、ＳＫＰ集団の遺伝子発現ヒートマップ及び階層的クラスタリングの画像である。
【図７Ｂ】ＴＭまたはＡｌｐによる局所処理は、ＴＭまたはＡｌｐの非存在下で処理された皮膚から培養されたＳＫＰにおいて自己再生を変化させ、急激なＴＭまたはＡｌｐ処理はＳＫＰ遺伝子発現を変化させることを示す。図７Ｂは、対照皮膚と比較して７日間Ａｌｐ及びＴＭで処理した創傷ＳＫＰにおける差次的に発現した遺伝子の数の重なりを示す図である。
【図７Ｃ】ＴＭまたはＡｌｐによる局所処理は、ＴＭまたはＡｌｐの非存在下で処理された皮膚から培養されたＳＫＰにおいて自己再生を変化させ、急激なＴＭまたはＡｌｐ処理はＳＫＰ遺伝子発現を変化させることを示す。図７Ｃ及び７Ｄは、対照皮膚と比較してＡｌｐ及びＴＭで２４時間処理した創傷ＳＫＰにおける差次的遺伝子発現を示す遺伝子発現ヒートマップの図及び画像である。
【図７Ｄ】ＴＭまたはＡｌｐによる局所処理は、ＴＭまたはＡｌｐの非存在下で処理された皮膚から培養されたＳＫＰにおいて自己再生を変化させ、急激なＴＭまたはＡｌｐ処理はＳＫＰ遺伝子発現を変化させることを示す。図７Ｃ及び７Ｄは、対照皮膚と比較してＡｌｐ及びＴＭで２４時間処理した創傷ＳＫＰにおける差次的遺伝子発現を示す遺伝子発現ヒートマップの図及び画像である。
【図７Ｅ】ＴＭまたはＡｌｐによる局所処理は、ＴＭまたはＡｌｐの非存在下で処理された皮膚から培養されたＳＫＰにおいて自己再生を変化させ、急激なＴＭまたはＡｌｐ処理はＳＫＰ遺伝子発現を変化させることを示す。図７Ｅは、対照皮膚と比較して、Ａｌｐ及びＴＭで２４時間処理した創傷ＳＫＰにおける差次的に発現した上位５０個の遺伝子におけるオーバーラップを示す図である。
【図８Ａ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ａ及び８Ｂは、ＡｌｐまたはＴＭでの処理後にＳＫＰがＥＲＫ１／２リン酸化の増加を示したことを示すウエスタンブロットの画像及び走査デンシオメトリーのグラフである。
【図８Ｂ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ａ及び８Ｂは、ＡｌｐまたはＴＭでの処理後にＳＫＰがＥＲＫ１／２リン酸化の増加を示したことを示すウエスタンブロットの画像及び走査デンシオメトリーのグラフである。
【図８Ｃ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ｃは、対照と比較して、ＡｌｐもＴＭも、リン酸化された、活性化されたＳＴＡＴ３、ＧＳＫ３ベータ、Ａｋｔ１、またはＣＲＥＢを増加させなかったことを示すウエスタンブロットの画像である。
【図８Ｄ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ｄは、トラメチニブ（ＭＥＫｉ）が培養ＳＫＰにおけるＥＲＫ１／２リン酸化を阻害することを示すウエスタンブロットの画像である。
【図８Ｅ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ｅ及び８Ｆは、ＭＥＫｉがＳＫＰクローン球の数及びサイズの両方を減少させたことを示すグラフである。
【図８Ｆ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ｅ及び８Ｆは、ＭＥＫｉがＳＫＰクローン球の数及びサイズの両方を減少させたことを示すグラフである。
【図８Ｇ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ｇ及び８Ｈは、ＭＥＫ阻害がＫｉ６７による免疫染色によるＳＫＰ増殖を減少させたことを示す画像及びグラフである。
【図８Ｈ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ｇ及び８Ｈは、ＭＥＫ阻害がＫｉ６７による免疫染色によるＳＫＰ増殖を減少させたことを示す画像及びグラフである。
【図８Ｉ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ｉは、Ａｌｐ及びＴＭの存在下でのＥＲＫ１／２リン酸化がＭＥＫｉインキュベーションによって抑制されたことを示すウエスタンブロットの画像である。
【図８Ｊ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ｊは、ＭＥＫｉとのインキュベーションが球数を減少させ、ＡｌｐもＴＭもＭＥＫ阻害を補償しないことを示すグラフである。
【図８Ｋ】マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を介したシグナル伝達が、ＳＫＰ自己複製に必要であることを示す。図８Ｋは、ＭＥＫｉが、ＴＭで２４時間培養したＳＫＰにおける下流遺伝子発現の全体的な減少をもたらすことを示す遺伝子発現ヒートマップの画像である（ヒートマップ）。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明者らは、皮膚由来前駆細胞（ＳＫＰ）活性を増加させることができる高処理薬物スクリーニングからの薬理学的物質を発見した。ＳＫＰは、組織の維持及び修復において決定的な役割を果たす成体哺乳動物組織に見出される皮膚由来前駆細胞の集団である。成体哺乳類では、これらの組織前駆細胞は、経時的または病的状態で枯渇し、それらの枯渇は、これらの細胞が特定の組織を修復及び維持する能力に影響を及ぼす。ＳＫＰは、真皮、特に真皮乳頭及び真皮鞘に位置し、種々の細胞型で分化することができる。本発明者らは以前に真皮に移植されたＳＫＰが新しい毛包の形成を誘導し、毛髪を成長させることを示した。加えて、我々はまた、ＳＫＰが真皮を補充し及び維持し、皮膚創傷治癒に関与するために新しい細胞を生成し得ることを示した（Ｂｉｅｒｎａｓｋｉｅら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ．５：６１０−６２３、２００９）。ＳＫＰの遺伝的枯渇は、早期の毛髪及び皮膚老化を引き起こすことも示されている（Ｓｕら、Ｃｅｌｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ．５：６４−７５、２００９）。これらの以前の発見に照らして、本明細書に記載の非限定的な実施形態の目標は、組織修復及び再生を増強することができるようにＳＫＰ活性を増加させる薬理学的薬剤（例えば、小分子化合物）を使用することによって内因性ＳＫＰを補充することである。したがって、本明細書に記載の非限定的な実施形態は、発毛を促進し、脱毛に関連する症状を治療し、創傷治癒及び皮膚再生を促進するのに有用なマレイン酸トリメブチン、他のトリメブチン塩、及びその活性代謝物を含む組成物を特徴とする。
【００３５】
トリメブチン塩及びその誘導体
本明細書に記載の非限定的な実施形態では、トリメブチン（３，４，５−トリメトキシ安息香酸ジメチルアミド−２−フェニルブチルエステル；３，４，５−トリメトキシ安息香酸２−（ジメチルアミノ）−２−フェニルブチルエステル、または２−（ジメチルアミノ）−２−フェニルブチル３，４，５−トリメトキシベンゾエートとも称される。）、遊離塩基、その塩、またはその活性代謝物である。トリメブチンの活性代謝産物には、Ｎ−デスメチルトリメブチン（ノルトリメブチンとも称される。）及びそれらの対応する立体異性体、（Ｒ）−Ｎ−デスメチルトリメブチン及び（Ｓ）−Ｎ−デスメチルトリメブチンが含まれる。トリメブチンの塩には、マレイン酸トリメブチン（商標）及び米国特許第７，６６６，９０７号に開示された化合物のいずれかが含まれ、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【００３６】
細胞
本明細書において同定された化合物は、ＳＫＰのような幹細胞の増殖を増加させるために使用され得る。ＳＫＰは、米国特許出願公開第２００４／００３３５９７号及び第２００７／０２４８５７４号に記載されている。ＳＫＰは、以下の分子マーカーの少なくとも１つ、２つ、３つまたはそれ以上を発現することができる：ネスチン、ＷＮＴ−１、ビメンチン、バーシカン、フィブロネクチン、Ｓ１００β、ｓｌｕｇ、ｓｎａｉｌ、ｔｗｉｓｔ、Ｐａｘ３、Ｓｏｘ９、Ｄｅｒｍｏ−１及びＳｏｘ２。ＳＫＰはまた、中枢神経系神経幹細胞と比較してｓｌｕｇ、ｓｎａｉｌ、ｔｗｉｓｔ及びＰａｘ３のレベルを増加させることができる。望ましくは、本明細書に記載の多分化能幹細胞は、以下の分子マーカーの少なくとも１，２，３またはそれ以上の測定可能なレベルを発現しない：メラノブラスト及びメラノサイトのマーカーであるチロシナーゼ、ｃ−ｋｉｔ、ｔｒｙｐ−１及びＤＣＴ。多分化能性幹細胞はまた、シュワン細胞の以下のマーカーの１つ以上を発現しなくてもよい：ＭＢＰ、Ｐ０、ｐ７５ＮＴＲ、及びＳｏｘ１０。
【００３７】
ＳＫＰは、様々な非神経細胞（例えば、毛包細胞、骨細胞、平滑筋細胞、または脂肪細胞）及び神経細胞（例えば、ニューロン、星状細胞、シュワン細胞または希突起膠細胞）に分化することができる。
【００３８】
ＳＫＰは当該分野で記載されているように単離することができる。一例では、マウス胚（Ｅ１５−１９）、マウスまたはラット新生仔（Ｐ２−Ｐ６）、または成体（３週齢以上）の背部または顔面皮膚を動物から解剖し、２〜３ｍｍ２片に切断した。組織を０．１％トリプシンで、３７℃で１０〜４５分間消化し、機械的に分離させ、４０μｍ細胞ストレーナー（Ｆａｌｃｏｎ）でろ過した。
【００３９】
細胞培養
細胞（例えば、ＳＫＰ）は、本明細書に記載されるか、または当技術分野で公知のような標準的な細胞培養条件下で培養され得る。一例において、ＳＫＰは、Ｔｏｍａ  ら、（Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．３：７７８−７８４，２００１）に記載されように培養される。分離した細胞（例えば、上記のようなもの）をペレット化し、２０ｎｇ／ｍｌのＥＧＦ及び４０ｎｇ／ｍｌのＦＧＦ２（いずれもＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ製）を含むＤＭＥＭ−Ｆ１２，３：１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でプレーティングした（以下、増殖培地と称する。）。細胞を３７℃、５％ＣＯ２組織培養インキュベーター内の２５ｃｍ２組織培養フラスコ（Ｆａｌｃｏｎ）で培養した。ＳＫＰを機械的に分離する球体によって継代し、７５％の新しい培地及び２５％の最初のフラスコから馴化培地で１：３に分割した。ニューロン分化のために、ＳＫＰ球体または一次分離皮膚細胞を機械的に分離させ、４０ｎｇ／ｍｌ  ＦＧＦ２及び１０％ＦＢＳ（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）を補充したＤＭＥＭ−Ｆ１２  ３：１中ポリ−Ｄ−リジン／ラミニンで被覆したチャンバースライド（Ｎｕｎｃ）で５〜７日間プレーティングした。次いで、１０ｎｇ／ｍｌのＮＧＦ（Ｃｅｄａｒ  Ｌａｎｅ）、１０ｎｇ／ｍｌのＢＤＮＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、及び１０ｎｇ／ｍｌのＮＴ３（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を添加して、ＦＧＦ２を含まない、同じ培地で細胞をさらに５−７日間培養した。シュワン細胞分化のために、分離した球体を、１０％ＦＢＳを補充したＤＭＥＭ−Ｆ１２  ３：１中で７日間培養し、次いで４μＭフォルスコリン（Ｓｉｇｍａ）を補充した同じ培地に切り替えた。
【００４０】
対象の治療
発毛と脱毛に関連する状態
本明細書に記載される化合物及び組成物は、発毛の誘導、及び様々なタイプの脱毛症及び脱毛に関連する他の状態の治療に有用である。脱毛症は、ヒトにおいて最も一般的な発毛障害である。脱毛は頭皮から最も一般的に発生する。しかし、眉毛、まつ毛、ひげ、及び身体部位を含む、いずれかの髪を保有する領域に影響をする可能性がある。脱毛症は、毛包が正常であるが発毛のサイクルが異常である障害、及び毛包が損傷した障害に分類することができる。脱毛症の６つの主要なタイプの脱毛症が知られている：アンドロゲン性脱毛症、円形脱毛症、成長期脱毛症、自己誘発脱毛症、休止期脱毛症、及び瘢痕性脱毛症。
【００４１】
アンドロゲン型脱毛症には、男性型脱毛症及び女性型脱毛症が含まれる。アンドロゲン型脱毛症はすべての脱毛症の９５％を占める。この遺伝的に決定された障害は、大きく、厚く、着色した硬毛が、より薄く、より短く、不確定な毛髪に、そして最終的に短く、うっすらとした、着色のない軟毛に徐々に変換することを経る進行性である。患者は、通常は少なくとも２：１である硬毛対軟毛比が低下する。毛包の小型化に続いて、線維路（ｆｉｂｒｏｕｓ  ｔｒａｃｔ）が残る。この障害を有する患者は、通常、典型的な脱毛分布を有する。
【００４２】
男性型脱毛症は、生え際の後退から始まり、完全な脱毛をもたらすが、女性型脱毛症は生え際及び生え際の後ろで広範に毛が薄くなり、生え際の後退はない。男性型脱毛症は、テストステロンレベルが高い場合には十代後半から２０代前半に始まり、一方女性型脱毛症は３０代後半から始まり、テストステロンレベルが低下するとピークに達する。男性型脱毛症は全男性の７０％にまで罹るが、女性型脱毛症は女性の３０％までで罹る。男性型脱毛症の素因を有する女性は、高用量のテストステロンが与えられると、典型的な男性型脱毛症を急速に発症する。
【００４３】
脱毛症はＴリンパ球が毛包を攻撃し、毛髪が成長を停止して休止期に入る自己免疫疾患であると考えられている。休止期の終わりに、毛が脱落する。脱毛症は、男性と女性の両方に等しく罹り、幼児期に最初に経験されることが多い。脱毛症の重症度に応じて命名された脱毛症の３つのサブタイプがある：（ｉ）頭皮に軽度の斑状の脱毛を伴う、脱毛症；（ｉｉ）すべての頭髪の喪失を伴う全頭脱毛症；（ｉｉｉ）頭髪及びすべての体毛の喪失を伴う、全身性脱毛症。
【００４４】
成長期脱毛症は、化学療法または放射線治療の特定のタイプの間に生じる脱毛症など、化学物質または放射線への曝露の結果として、またはタリウム及びヒ素などの有毒化学物質への曝露の結果として生じる突発性の脱毛症である。成長期脱毛症では、毛髪は休止期に入らない。脱毛症は通常、化学物質または放射線への曝露の発生後１〜３週間で突然起こる。ほとんどの場合、治療が終わると発毛は正常に戻る。脱毛症を引き起こす可能性が最も高い薬剤には、アムサクリン、シスプラチン、シトシンアラビノシド、シクロホスファミド、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド・イホスファミド、ビンクリスチンが含まれる。特定の薬物によって誘発された脱毛症から保護する薬剤は、異なる薬物に対する保護において効果的でないことが見出されている。例えば、細菌Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓから得られた組成物は、シトシンアラジノシド及びドキソルビシンの使用に関連する脱毛症を防ぐために使用されている。この組成物は、シクロホスファミドによって誘発された脱毛症には効果がなかった。
【００４５】
自己誘発性脱毛症は、意識的または無意識のうちに引き起こされ得る。２つの主なタイプの自己誘発性脱毛は、抜毛症及び牽引性脱毛症である。抜毛症は、毛髪を連続的に引っ張ったり引き抜いたりすることによって生じる自己誘発性脱毛症である。これは、小児、青年、女性の間で最も一般的に起こり、男性の２倍の女性が罹る。髪はしばしば頭皮上の別個の区域で引き抜かれ、何人かの個人はまた眉毛やまつ毛を引き抜く。抜毛症の治療にはカウンセリングや精神医学的補助が必要な場合があり、場合によっては抗うつ薬が処方されることもある。牽引性脱毛症は、通常、様々なタイプの髪型に起因して毛髪が連続的かつ過度に引っ張られることによって引き起こされ、徐々に脱毛が永続的になることがある。一般的に、この場合、脱毛を逆転させるには、毛髪及び毛包の牽引力を低下させる髪型の変化で十分である。
【００４６】
休止期脱毛症は突然または重度のストレスに関連した脱毛であり、頭皮全体にわたって薄く見られる。突然のまたはストレスの多い事象は、毛包が早期に成長を停止し、休止期に入る可能性がある。その後、毛髪は約３ヶ月間休止期にとどまり、その後、大量の毛髪が脱落する。ほとんどの場合、脱毛は一時的であり、すぐに回復する。場合によっては、根本的な原因が取り除かれるまで脱毛が続く。休止期脱毛症に至る可能性のある事象には出産、妊娠の終了、避妊薬の開始または停止、様々な薬の使用、及び重度の情緒ストレスが含まれる。妊娠中のホルモンエストロゲン及びプロゲステロンのレベルの増加は、正常よりも多くの毛髪を成長期に残す原因となる。出産または妊娠終了後、休止期に入るのが遅れた毛包の多くは、ホルモン濃度の急激な低下のために突然休止期に入る。副作用として脱毛症を引き起こす可能性がある薬物には、アロプリノールなどの抗痛風剤、ヘパリン及びクマリンのような血液希釈剤、クロフィブラート及びゲムフィブロジルなどのコレステロール低下薬が含まれる。休止期脱毛症はまた、愛する人の死亡、事故、虐待または他の重度の外傷性事象のような外傷性事象の後に起こり得る。これらの事象は、毛包が休止期に早期に入るように誘発する可能性があり、その場合、脱毛の量の増加は、事象の約３ヶ月後に気付くことになる。休止期脱毛症他の原因には、甲状腺機能不全（甲状腺機能低下症または甲状腺機能亢進症であって、甲状腺が甲状腺ホルモンであるチロキシンをそれぞれあまりにも少なくまたはあまりにも多く生産する場合に起こる）、糖尿病、貧血、及び自己免疫疾患、全身性エリテマトーデスが含まれる。
【００４７】
瘢痕性脱毛症は、感染による毛包の炎症の結果として生じる。瘢痕性脱毛症は、円板状エリテマトーデス、びまん性結合組織疾患；主に皮膚及び粘膜を襲う炎症性疾患である扁平苔癬；再増殖の可能性のない稀な瘢痕性脱毛症である、Ｂｒｏｃｑの萎縮性脱毛症；通常頭皮の正中線にあり、出生時に存在する小さな水疱のある萎縮領域としてしばしば生じる稀な疾患である、先天性皮膚形成不全症；または先天性脱毛症によって引き起こされ得る。他の種類の脱毛症には、梅毒の二次症状である梅毒性脱毛症；強皮症；及び頭部白癬（白癬）が含まれる。
【００４８】
細書に記載された組成物は、毛髪移植の補充、頭蓋のプライミングにも有用であり、毛髪移植後に投与することができる。
【００４９】
創傷治癒及び皮膚修復
本明細書に記載の化合物及び組成物は、創傷治癒及び皮膚修復の促進にも有用である。傷の治癒時間に応じて、急性または慢性に分類することができる。急性創傷として分類されるものは、予測される時間内に（合併症なしに）うまく治癒しない。慢性創傷に分類されるものは、治癒に時間がかかり、いくつかの合併症があるかもしれない。創傷は開放または閉鎖であってよい。開放創は、（穿通創のような）外部環境に開いている、下にある組織及び／または臓器の露出を伴う創傷である。閉鎖創は、下にある組織及び器官の露出を伴わずに生じる損傷を有する（非穿通創）。創傷を分類する別の方法は、創傷がきれいであるか汚染されているかを判定することである。清潔な創傷には、異物や破片にないのに対し、汚染された創傷や感染した創傷には、汚れ、病原体の断片、細菌または他の異物が含まれている可能性がある。
【００５０】
創傷の起源は、内的または外的のいずれかであり得る。内部傷は、免疫系及び神経系機能の障害及び／またはその領域への血液、酸素または栄養素の供給の減少、例えば慢性の医学的疾患（糖尿病、アテローム性動脈硬化症、深部静脈血栓症）の場合、に起因する。外傷は、通常、穿通物体または非穿通性の外傷、ならびに以下のようなその他の様々な原因によって引き起こされる：非穿通性の創傷は、通常、鈍的な外傷または他の表面との摩擦の結果であり、創傷は皮膚を貫通せず、及び擦過傷（外皮層の擦過傷）、裂傷（断裂のような創傷）、挫傷（皮膚下の血液及び死細胞の蓄積により腫れた打撲傷）、脳震盪（重大な外部創傷のない頭部の器官及び組織への損傷）を含み；穿通性創傷は、皮膚の全層を突き破って下の組織や器官にまで及ぶ外傷から生じ、及び刺創（ナイフなどの鋭利な物体からの外傷）、皮膚切傷、外科的創傷（外科処置を行うための皮膚の意図的な切断）、銃創（銃器に起因する創傷）を含み；その他の傷には、熱や寒さの極端な温度による熱傷が含まれ、熱傷（火傷、日焼けや凍傷など）、化学物質の接触や吸入による皮膚や肺の損傷に起因する薬剤創傷、ヒト、犬、コウモリ、げっ歯類、ヘビ、サソリ、クモ及びダニに起因する咬傷や刺傷、及び電気的創傷は、通常、身体に高電圧の電流が流れるのに続発する表面的なやけど様または刺傷様の創傷であり、より重度の内部損傷を含み得る。
【００５１】
対象のモニタリング
本明細書に記載の方法は、脱毛、発毛、及び本明細書に記載の化合物または組成物による治療への応答のモニタリングも含むことができる。毛髪を促進する薬剤の有効性を判定するためには、ヒトの発毛及び脱毛の分析のための定量的な方法が必要である。医師は、様々な等級付けシステム、毛髪引っ張り試験法（ｈａｉｒ  ｐｕｌｌ  ｔｅｓｔ）、皮膚鏡検査法、及びコンピュータ支援フォトトリコグラム法によって、身体及び頭皮の毛髪分布を評価することができる。場合によっては、トリコグラムや生検も有用な手段である。研究目的のために、毛髪の構造を分析するための方法として、光コヒーレントトモグラフィー、電子顕微鏡法、生化学法、原子間力顕微鏡法及び共焦点レーザー走査顕微鏡法を用いることができる。臨床研究では、発毛と治療への反応をモニターするために、グローバル写真、毛髪重量測定、フォトトリコグラム、及び異なる臨床スコアリングシステムを使用することもできる。
【００５２】
脱毛、発毛及び治療に対する応答をモニターするための上記方法のいずれかにおいて、毛髪成長の改善または処理に対する陽性反応は、毛髪密度の増加、硬毛密度の増加、軟毛密度、または累積被毛厚さの増加、成長期毛髪数の増加、休止期毛髪数の減少、総毛髪数の増加、及び線形発毛速度の増加として測定される。
【００５３】
本明細書に記載の化合物及び組成物の投与前、投与中及び投与後に対象に対して創傷治癒の評価をさらに行うことができる。創傷治癒は、以下に説明する器具及びツールを用いてモニターすることができる。
【００５４】
治癒のための褥瘡スケール（ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｕｌｃｅｒ  ｓｃａｌｅ  ｆｏｒ  ｈｅａｌｉｎｇ：ＰＵＳＨ）は、長さ×幅、滲出量、及び組織タイプの創傷パラメータをモニタリングすることによって、褥瘡治癒を追跡するように設計されたツールである。ＰＳＳＴは、褥瘡における創傷治癒を記述するように設計され、褥瘡は、スコアリングされた１５点と２点の非スコア項目から構成される。スコアリングされた項目は、創傷の大きさ及び深度、組織の特徴及び創傷の滲出物の変数を評価し、非スコアの項目は、創傷の位置及び形状を調べた。セッシングスケール（ｓｅｓｓｉｎｇ  ｓｃａｌｅ（ＳＳ））は、創傷治癒過程全体にわたって創傷治癒の進行を測定するために設計された７段階のスケールである。Ｓｕｓｓｍａｎ創傷治癒ツール（ＳＷＨＴ）は、創傷治癒プロセス全体を通して組織の状態及びサイズを記述する創傷治癒の急性モデルに基づいている。このツール自体は、創傷の属性、位置、治癒段階、及び組織損傷の程度に関するデータを収集する２１の項目で構成されている。創傷治癒尺度（ＷＨＳ）は、褥瘡の逆の病期分類の代替手段である。このスケールは、既存のＮＰＵＡＰ病期分類システムに基づいており、治癒で生じる生理学的変化を反映する８つのアルファベットの修飾因子を伴う。Ｂａｒｂｅｒ  Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  Ｔｏｏｌ（ＢＭＴ）は、経時的な創傷容積の変化を追跡し、創傷進行は時間の経過とともに治癒率として提示される。
【００５５】
創傷治癒の評価のために、創傷治癒に要する時間もまた、本明細書に記載の組成物による治療の有効性の尺度となり得る。創傷治癒は、治癒の段階（例えば、止血、炎症段階、増殖段階、及びリモデリングまたは成熟段階）を経るのにかかる日数によって測定することができ、または傷の症状が減退し、損傷した部位が視覚的に治癒する（例えば腫脹がなく、発赤がなく、出血がなく、痛みや圧痛がない）のに要する日数を定性的に観察することができる。本明細書に記載の組成物での治療は、治療なしで治癒する日数と比較して、創傷治癒の日数を例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間で治癒する日数を減少させることができる。
【００５６】
併用療法
本明細書に記載の組成物はまた、例えば２型５−α−還元酵素阻害剤であるフィナステリド（プロペシア（Ｐｒｏｐｅｃｉａ））、及び１型及び２型５−α−還元酵素阻害剤であるデュタステリド、フルタミド、ビカルタミド、プレグナン誘導体、プロゲステロン誘導体、ＦＣＥ  ２８２６０等の実験薬剤などの薬物として入手可能な発毛を促進することが知られている化合物と併用して使用することができる。スピロノラクトン及び他の利尿剤もまた、場合によっては女性に適応されるので利用することができる（アルドラクトン：アルドステロン受容体アンタゴニストとしても知られている）。発毛を促進することが知られているミノキシジル（Ｒｏｇａｉｎｅ）のようなカリウムチャンネルオープナーも、特に有望な組み合わせであると考えられている。５α−還元酵素阻害作用を有する可能性のある薬草治療には、ソウパルメット（Ｓａｗ  Ｐａｌｍｅｔｔｏ）及びピグムアフリカナム（Ｐｙｇｅｕｍ  ａｆｒｉｃａｎｕｍ）が含まれる。そのような活性を有することができる他の薬剤は、ベータ−システロール、セピコントロール及びリコリス、ガンマ−リノレン酸、亜鉛及び亜鉛塩、緑茶カテキン（−）エピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）及び他の不飽和脂肪酸（Ｔｅｈｍｉｎｇ  ＬＩＡＮＧ及びＳｈｕｔｓｕｎｇ  ＬＩＡＯ）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（１９９２）２８５，５５７−５６２）。ブドウ種子、リンゴ種子、リンゴジュース及びオオムギ抽出物は、発毛を誘発する可能性のある薬剤でもあり得る。
【００５７】
さらなる組み合わせには、亜鉛、カルシニューリン阻害剤、例えばＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓによって産生されるマクロライド抗生物質であるＦＫ５０６（Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ、Ｆｕｊｉｍｙｃｉｎ）及びその誘導体、またはサイクリックエンドペプチドであるシクロスポリンＡ、アルプロスタジル、ラタノプロスト、ならびにＴ細胞特異的免疫抑制剤などが含まれる。
【００５８】
医薬組成物の製剤化
本明細書に記載の任意の化合物または組成物の投与は、細胞増殖を増加させ、皮膚の修復または皮膚の健康を増強し、または発毛を促進する化合物の濃度をもたらす任意の適切な手段によるものであってよい。化合物は、任意の適切な担体物質中に任意の適切な量で含有され得、一般に、組成物の全重量の１〜９５重量パーセントの量で存在する。組成物は、経口、皮膚（例えば、局所またはパッチ）、皮膚、非経口（例えば、静脈または筋肉内）、直腸、鼻、膣、吸入、眼または頭蓋内投与経路に適した剤形で提供され得る。したがって、組成物は、例えば、錠剤、カプセル、丸薬、散剤、顆粒、懸濁液、乳液、溶液、ヒドロゲルを含むゲル、ペースト、軟膏、クリーム、硬膏剤、灌注（ｄｒｅｎｃｈ）、浸透圧送達装置、坐剤、浣腸剤、注射剤、インプラント、スプレー、またはエアロゾルに適した剤形で提供できる。薬学的組成物は、従来の薬学的プラクティス（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、２０００年、ＡＲ  Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ及びＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  ａｎｄ  ＪＣ  Ｂｏｙｌａｎ編、１９８８−１９９９、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）に従って製剤化できる。
【００５９】
医薬組成物は、投与の直後に、または投与後の任意の所定の時間または時限に、活性化合物を放出するように製剤化され得る。後者のタイプの組成物は、制御放出製剤として一般に知られており、これには、（ｉ）長時間にわたり本明細書に記載の薬剤を実質的に一定濃度で体内に生成する製剤；（ｉｉ）所定の遅延時間後に、長期間にわたって本明細書に記載の薬剤を実質的に一定濃度で体内に生成する製剤；（ｉｉｉ）薬剤の血漿レベルの変動に関連する望ましくない副作用の最小化と同時に、体内の薬剤の比較的一定した有効レベルを維持することによって、所定の期間中薬剤作用を持続させる製剤（鋸歯状運動パターン（ｓａｗｔｏｏｔｈ  ｋｉｎｅｔｉｃ  ｐａｔｔｅｒｎ））；（ｉｖ）薬剤の作用を局在化する製剤、例えば、疾患の組織または器官に隣接するか、または疾患組織または器官内に制御放出組成物を空間的に配置する；（ｖ）投与の利便性を達成する製剤、例えば、１週間に１回または２週間に１回の組成物の投与；（ｖｉ）化合物を特定の標的細胞型に送達するために担体または化学的誘導体を使用することによって薬剤の作用を標的とする製剤。胃腸管における狭い吸収窓（ｎａｒｒｏｗ  ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｗｉｎｄｏｗ）または比較的短い生物学的半減期を有する化合物では、化合物の投与は制御放出製剤の形態であり得る。
【００６０】
放出速度が問題の化合物の代謝速度を上回る制御放出を得るために、多くの戦略のいずれかを遂行することができる。一例では、制御放出は、様々なタイプの制御放出組成物及びコーティングを含む、様々な製剤パラメータ及び成分の適切な選択によって得られる。したがって、化合物は、投与の際に制御された様式で化合物を放出する医薬組成物中に適切な賦形剤とともに製剤化される。例としては、単一または複数の単位錠剤またはカプセル組成物、油性溶液、懸濁液、乳液、マイクロカプセル、分子複合体、マイクロスフェア、ナノ粒子、パッチ及びリポソームが含まれる。
【００６１】
局所製剤
本明細書に記載の医薬組成物は、局所投与のために製剤化することができる。対象は、本明細書に記載の有効量の化合物を、皮膚への局所適用によって投与することができる。本明細書に記載された組成物は下記幅広い種類の生成物に作製でき、ローション、クリーム、ゲル、スティック、スプレー、軟膏、クレンジング液体洗浄剤及び固形バー、シャンプー、ペースト、パウダー、フォーム、ムース、及びワイプが含まれるなどの固体及び液体組成物を含むがこれらに限定されない。これらの製品タイプは、いくつかのタイプの化粧品として許容可能な局所的または皮膚学的に許容される担体を含み得、溶液、エマルジョン（例えば、マイクロエマルジョン及びナノエマルジョン）、ゲル、固体及びリポソームを含むが、これらに限定されない。以下はそのような担体の非限定的な例である。他の担体は、当業者によって製剤化することができる。
【００６２】
本明細書に記載の局所組成物は、溶液として製剤化することができる。溶液は、水性溶媒（例えば、化粧品として許容可能な水性溶媒の約５０％〜約９９．９９％または約９０％〜約９９％）を含むことができる。このような組成物は約３０％の溶媒を含むことができるが、これは製剤に依存して変化し得る。そのような溶媒は、毛包への送達を首尾良くするための良好な担体であるエタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、それらの混合物などを含み得る。好ましくは、本明細書に記載の組成物は、好ましくは約２０％（ｖ／ｖ）〜約５０％（ｖ／ｖ）のプロピレングリコール（例えば、約２０％（ｖ／ｖ）〜約３０％（ｖ／ｖ）、約２５％（ｖ／ｖ）〜約３０％（ｖ／ｖ）、約３０％（ｖ／ｖ）〜約３５％（ｖ／ｖ）、約３５％（ｖ／ｖ）〜４０％（ｖ／ｖ）、約４０％（ｖ／ｖ）〜約４５％（ｖ／ｖ）、約４５％（ｖ／ｖ）〜約５０％（ｖ／ｖ））、約１０％〜４０％（ｖ／ｖ）のエタノール（例えば、約１０％（ｖ／ｖ）〜約１５％（ｖ／ｖ）、約１５％（ｖ／ｖ）〜約２０％（ｖ／ｖ）、約２０％（ｖ／ｖ）〜約２５％（ｖ／ｖ）、約２５％（ｖ／ｖ）〜３０％（ｖ／ｖ）、約３０％（ｖ／ｖ）〜約３５％（ｖ／ｖ）、約３５％（ｖ／ｖ）〜約４０％（ｖ／ｖ））及び、約１０％〜７５％（ｖ／ｖ）の水（例えば、約１０％（ｖ／ｖ）〜約１５％（ｖ／ｖ）、約１５％（ｖ／ｖ）〜約２０％（ｖ／ｖ）、約２０％（ｖ／ｖ）〜約２５％（ｖ／ｖ）、約３０％（ｖ／ｖ）〜３５％（ｖ／ｖ）、約３５％（ｖ／ｖ）〜約４５％（ｖ／ｖ）、約４５％（ｖ／ｖ）〜約５５％（ｖ／ｖ）、約５５％（ｖ／ｖ）〜約６５％（ｖ／ｖ）、約６０％（ｖ／ｖ）〜約７０％（ｖ／ｖ））により製剤化される。
【００６３】
局所用組成物はまた、皮膚軟化剤を含む溶液として製剤化され得る。そのような組成物は、約２％〜約５０％の皮膚軟化剤を含有することができる。本明細書で使用される場合、「皮膚軟化剤」は、乾燥の防止または軽減、ならびに皮膚の保護のために使用される材料を指す。様々な適切な皮膚軟化剤が知られており、本明細書で使用することができる。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ、Ｗｅｎｎｉｎｇｅｒ  ａｎｄ  ＭｃＥｗｅｎ編、ｐｐ．１６５６−６１，１６２６、及び１６５４−５５（Ｔｈｅ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ、Ｔｏｉｌｅｔｒｙ、ａｎｄ  Ｆｒａｇｒａｎｃｅ  Ａｓｓｏｃ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．、７ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９７）には、適切な材料の多数の例が含まれている。ローションは溶液から作ることができる。ローションは、代表的には約１％〜約２０％（より好ましくは約５％〜約１０％）の皮膚軟化剤と約５０％〜約９０％（より好ましくは約６０％〜約８０％％）の水を含む。本明細書に記載の組成物は、クリームとして製剤化することができる。クリームは、代表的には約５％〜約５０％（より好ましくは約１０％〜約２０％）の皮膚軟化剤と、約４５％〜約８５％（より好ましくは約５０％〜約７５％）の水を含む。溶液から製剤化され得るさらに別のタイプの製品は、軟膏である。軟膏は、動植物油または半固体炭化水素の単純な基剤から構成されてもよい。軟膏は、約２％〜約１０％の皮膚軟化剤、及び約０．１％〜約２％の増粘剤を含むことができる。上のＩＮＣＩハンドブックは、本明細書に記載の組成物及び方法において有用な許容される増粘剤または増粘剤のリストを含む。
【００６４】
本明細書に記載の局所組成物はまた、エマルジョンとして製剤化することもできる。  担体がエマルジョンである場合、担体の約１％〜約１０％（より好ましくは約２％〜約５％）が１種以上の乳化剤で構成されるべきである。乳化剤は、非イオン性、陰イオン性または陽イオン性であり得る。適切な乳化剤は、例えばＩＮＣＩハンドブック、１６７３〜１６８６頁に見出すことができる。
【００６５】
ローション及びクリームはまた、エマルジョンとして製剤化されてもよい。代表的には、このようなローションは０．５％〜約５％の乳化剤を含むことができる。そのようなクリームは、代表的には約１％〜約２０％（より好ましくは約５％〜約０％）の皮膚軟化剤、約２０％〜約８０％（より好ましくは、３０％〜約７０％）の水；約１％〜約１０％（より好ましくは約２％〜約５％）の乳化剤を含むことができる。化粧品分野では、単一の乳液スキンケア調製物、例えば水中油型及び油中水型の、ローション及びクリームがよく知られている。水中油中水型のような多相エマルジョン組成物も有用である。一般に、そのような単一または多相エマルジョンは、水、皮膚軟化剤、及び乳化剤を必須成分として含有する。
【００６６】
本明細書に記載の組成物はまた、本明細書に記載の組成物の局所適用と同時に毛髪を洗浄、処置、コンディショニング及び着色するための染料及び他のヘアケア製品と組み合わせて、シャンプー、ヘアコンディショニング製品、リーブオンヘアマスク、ムース、スプレーの形態にあってもよい。
【００６７】
本明細書に記載の局所組成物は、ゲル（例えば、適切なゲル化剤を用いた水性ゲル）として製剤化することができる。水性ゲルのための適切なゲル化剤には、天然ガム、アクリル酸及びアクリレートポリマー及びコポリマー、ならびにセルロース誘導体（例えば、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、（ＰＥＧ）、またはプロピレングリコール（ＰＧ））を含むがこれらに限定されない。油（例えば鉱油）に適したゲル化剤には、水素化ブチレン／エチレン／スチレンコポリマー及び水素化エチレン／プロピレン／スチレンコポリマーが含まれるが、これらに限定されない。そのようなゲルは、代表的には、そのようなゲル化剤を約０．１重量％〜５重量％含む。ミクロゲルを使用して、製剤の毛包送達を増強することができる。
【００６８】
本明細書に記載の局所用組成物はまた、固形製剤（例えば、ワックス系スティック、マスカラ、石けんバー組成物、粉末または粉末を含むワイプ）に製剤化することができる。本明細書に記載される局所用組成物は、上記成分に加えて、皮膚及び毛髪に使用するための組成物において従来から使用されている、広範囲の追加の油溶性、有機溶剤可溶性及び／または水溶性材料を、当業者が確立したレベルで含むことができる。例えば７０％エタノール及び３０％プロピレングリコールまたはこれらの２つの薬剤の可変量の製剤は、活性物質の増強された送達のために使用され得る。
【００６９】
本明細書に記載の組成物は、１種以上の界面活性剤を含有してもよい。１つの非限定的な実施形態において、組成物は、起泡性（ｌａｔｈｅｒｉｎｇ）界面活性剤を含み得る。起泡性界面活性剤は、水と混合して機械的に撹拌したときに泡を発生する界面活性剤である。１つの非限定的な実施形態では、起泡性界面活性剤は、ＡＳＴＭ  Ａｎｎｕａｌ  Ｂｏｏｋ  ｏｆ  ＡＳＴＭ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  １００１  Ｓｅｃｔｉｏｎ  １５  Ｖｏｌｕｍｅ  １５．０４に記載されている、表面活性剤の発泡特性に関する標準試験方法Ｄ１１７３−５３における、少なくとも２０ｍｍ、例えば少なくとも５０ｍｍの初期発泡体高さ測定値（濃度５リットル／リットル、温度４９℃、水硬度８グレイン／ガロンを使用する）を有する。起泡性界面活性剤の例としては、アニオン性、ノニオン性、カチオン性及び両性起泡性界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。アニオン性起泡性界面活性剤の非限定的な例としては、サルコシン酸塩、硫酸塩、イセチオン酸塩、タウレート、リン酸塩、乳酸塩及びグルタミン酸塩からなる群から選択されるものが挙げられる。具体的な例には、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸アンモニウム、ラウレス硫酸アンモニウム、ラウレス硫酸ナトリウム、トリデセス硫酸ナトリウム、セチル硫酸アンモニウム、セチル硫酸ナトリウム、ココイルイセチオン酸アンモニウム、ラウロイルイセチオン酸ナトリウム、ラウロイル乳酸ナトリウム、ラウロイル乳酸トリエタノールアミン、乳酸カプロイルナトリウム、ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、ミリストイルサルコシン酸ナトリウム、ココイルサルコシン酸ナトリウム、ラウロイルメチルタウリンナトリウム、ココイルメチルタウリンナトリウム、ラウロイルグルタミン酸ナトリウム、ミリストイルグルタミン酸ナトリウム及びココイルグルタミン酸ナトリウム及びそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されない。非イオン性起泡性界面活性剤の非限定的な例には、アルキルグルコシド、アルキルポリグルコシド、ポリヒドロキシ脂肪酸アミド、アルコキシル化脂肪酸エステル、起泡性スクロースエステル、アミンオキシド及びそれらの混合物からなる群から選択されるものが含まれる。特定の例としては、Ｃ８−Ｃ１４グルコースアミド、Ｃ８−Ｃ１４アルキルポリグルコシド、スクロースココエート、スクロースラウレート、ラウラミンオキシド、ココアミンオキシド及びそれらの混合物からなる群から選択される非イオン性界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。両性起泡性界面活性剤（双性イオン性起泡性界面活性剤をも含む）の非限定例は、ベタイン、スルタイン、ヒドロキシスルタイン、アルキルイミノアセテート、イミノジアルカノエート、アミノアルカノエート及びそれらの混合物からなる群から選択されるものである。両性界面活性剤の非限定的な例には、ラウロアンフォジアセテート二ナトリウム、ラウロアンフォアセテートナトリウム、ジメチルベタイン、ココアミドプロピルベタイン、ココアミドプロピルヒドロキシスルタイン、及びそれらの混合物が含まれる。
【００７０】
本明細書に記載の組成物は、１種以上の追加の化粧品として活性のある作用物質及び上述の成分をさらに含有してもよい。化粧品として活性のある薬剤は合成化合物または天然源から単離、精製または濃縮されたまたは化合物、または組織に化粧品としてのまたは治療的効果を有する化合物の混合物を含有する天然抽出物であってもよく、これに限定されるものではないが、抗酵母剤、抗真菌剤及び抗細菌剤などの抗微生物剤、消炎剤、抗老化剤、抗寄生虫剤、外用鎮痛剤、日焼け止め剤、光防護剤、抗酸化剤、角質溶解剤、洗剤／界面活性剤、保湿剤、栄養剤、ビタミン、ミネラル、エネルギーエンハンサー、抗発汗剤、収れん剤、発毛促進剤、毛髪着色剤、顔料、硬化剤、皮膚コンディショニングのための薬剤、ふけ防止剤、及び臭気マスキング剤などの臭気制御剤またはｐＨ変更剤を含むが、これらに限定されない。１つの非限定的な実施形態では、化粧品として活性のある薬剤は、これ限定されないが、ヒドロキシ酸、過酸化ベンゾイル、Ｄ−パンテノール、オクチルメトキシシンナメート、二酸化チタン、オクチルサリチラート、ホモサレート、アボベンゾン、カロテノイド、フリーラジカルスカベンジャー、スピントラップ、レチノイン酸（トレチノイン）などのレチノイド及びレチノール及びパルミチン酸レチニルなどのレチノイド前駆体、ビタミンＥ（アルファ、ベータまたはデルタトコフェロール及び／またはそれらの混合物）などのビタミン、セラミド、多価不飽和脂肪酸、必須脂肪酸、酵素、酵素阻害剤、鉱物、プロゲステロンのようなホルモン、ヒドロコルチゾン、２−ジメチルアミノエタノールのようなステロイド、塩化銅のような金属（鉄または亜鉛を含むがこれに限定されない）塩、Ｃｕ：Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓのような銅を含むペプチド、コエンザイムＱ１０、アミノ酸、ビタミン、アセチル補酵素Ａ、ナイアシン、リボフラビン、チアミン、リボース、ＮＡＤＨ、ＦＡＤＨ２などの電子伝達体、アロエベラなどの植物抽出物、カツミレ、ダイズ、及びそれらの誘導体及び混合物からなる群から選択できる。化粧品として活性な薬剤は、本明細書に記載の組成物中に、組成物の約０．００１重量％〜約２０重量％、約０．００５重量％〜約１０重量％、または約０．０１重量％〜約５重量％の量で、存在し得る。また、本明細書に記載の組成物及び方法において特に有効であると期待されるのは、合成または天然５−α還元酵素阻害剤、またはこれに限定されるものではないが、セピコントロール（カプリル酸グリシン、サルコシン及びシンナモムゼイラニカムバークエキス（Ｃｉｎａｍｏｍｕｍ  Ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍ  Ｂａｒｋ  Ｅｘｔｒａｃｔ））、甘草粉末または抽出物などが含まれる。
【００７１】
口腔用固体剤形
経口使用のための製剤には、無毒性の薬学的に許容される賦形剤との混合物中に有効成分を含む錠剤が含まれ、このような製剤は当業者に知られている（例えば、米国特許第５，８１７，３０７号、第５，８２４，３００号、第５，８３０，４５６号、第５，８４６，５２６号、第５，８８２，６４０号、第５，９１０，３０４号、第６，０３６，９４９号、第６，０３６，９４９号、第６，３７２，２１８号、これらは参照により本明細書に組み込まれる）。これらの賦形剤は例えば、不活性希釈剤または充填剤（例えばショ糖、ソルビトール、糖、マンニトール、微結晶セルロース、馬鈴薯デンプンを含むデンプン、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、またはリン酸ナトリウム；造粒剤及び崩壊剤（例えば、微晶質セルロースを含むセルロース誘導体、ジャガイモデンプンを含むデンプン、クロスカルメロースナトリウム、アルギン酸塩、またはアルギン酸）；結合剤（例えば、スクロース、グルコース、ソルビトール、アカシア、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、アルファ化デンプン、微晶質セルロース、マグネシウムアルミニウムシリケート、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、またはポリエチレングリコール）；及び潤滑剤、滑剤、及び粘着防止剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、硬化植物油、またはタルク）であってよい。他の薬学的に許容される賦形剤は、着色剤、香味剤、可塑剤、湿潤剤、緩衝剤などであり得る。
【００７２】
錠剤は、コーティングされていなくてもよく、または胃腸管における崩壊及び吸収を随意に遅延させ、それにより長期間にわたって持続作用を提供するために、既知の技術によってコーティングされてもよい。コーティングは、予め決められたパターンで（例えば、制御放出製剤を達成するために）化合物を放出するように適合させることができ、または胃通過後（腸溶コーティング）まで薬剤を放出しないようにすることができる。コーティングは、糖コーティング、フィルムコーティング（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アクリレートコポリマー、ポリエチレングリコール及び／またはポリビニルピロリドンに基づく）または腸溶コーティング（例えば、メタクリルヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、ポリビニルアセテートフタレート、セラック、及び／またはエチルセルロース）を含むが、これらに限定されない。さらに、例えばモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルのような時間遅延材料を使用してもよい。
【００７３】
固体錠剤組成物は、望ましくない化学変化（例えば、活性物質の放出前の化学的分解）から組成物を保護するように適合されたコーティングを含み得る。コーティングは、上記のＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙに記載されているのと同様の様式で固形剤に適用することができる。
【００７４】
本明細書に記載の組成物は、錠剤中で一緒に混合してもよく、または分割してもよい。一例では、第１の薬剤が錠剤の内側に含まれ、第２の薬剤が外側にあり、第２の薬剤の実質的な部分が第１の薬剤の放出前に放出される。
【００７５】
経口使用のための製剤はまた、咀嚼錠剤として、または有効成分が不活性固体希釈剤（例えば、ジャガイモデンプン、乳糖、微結晶セルロース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリン）と混合された硬質ゼラチンカプセルとして、または有効成分が水または油性媒体、例えば、ピーナッツ油、流動パラフィン、またはオリーブ油と混合されている軟質ゼラチンカプセル剤として使用することができる。粉剤及び顆粒剤は、例えば、ミキサー、流動床装置または噴霧乾燥装置を使用して、慣用の方法で錠剤及びカプセルの下で上記の成分を用いて調製することができる。
【００７６】
非経口組成物
本明細書に記載の、または本明細書に記載の方法を用いて同定された化合物を含有する組成物は、従来の無毒性の薬学的に許容される担体及びアジュバントを含有する投薬形態、製剤、または適切な送達装置を介して、注射（皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内など）、注入または移植により非経口的に投与することができる。そのような組成物の製剤化及び調製は、医薬製剤の当業者に周知である。
【００７７】
非経口的使用のための組成物は、単位剤形（例えば、単回用量アンプル）、または数回用量を含み、適切な防腐剤が添加され得るバイアル（以下参照）で提供され得る。組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、注入装置、または移植のための送達装置の形態であってもよく、または使用前に水または他の適切なビヒクルで再構成される乾燥粉末として提供されてもよい。活性薬剤とは別に、組成物は適切な非経口的に許容される担体及び／または賦形剤を含み得る。活性剤は、制御放出のために、マイクロスフェア、マイクロカプセル、ナノ粒子、リポソームなどに組み込むことができる。さらに、組成物は、懸濁化剤、可溶化剤、安定化剤、ｐＨ調整剤、等張化剤、及び／または分散剤を含み得る。
【００７８】
上記のように、医薬組成物は、滅菌注射に適した形態であり得る。そのような組成物を調製するために、適切な活性剤を、非経口的に許容される液体ビヒクルに溶解または懸濁させる。許容されるビヒクル及び溶媒として使用できるものは、水、適切な量の塩酸、水酸化ナトリウムまたは適切な緩衝液の添加により適切なｐＨに調節された水、１，３−ブタンジオール、リンガー溶液、デキストロース溶液及び等張塩化ナトリウム溶液である。  水性製剤はまた、１種以上の防腐剤（例えば、メチル、エチル、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート）を含有してもよい。化合物の１つが水にわずかまたはわずかに可溶性である場合には、溶解促進剤または可溶化剤を添加することができ、または溶媒はプロピレングリコールなどを１０〜６０％ｗ／ｗ含むことができる。
【００７９】
投薬量
本明細書に記載される任意の化合物の用量は、投与方法、細胞増殖の増加量、皮膚修復、発毛、または所望の皮膚健康増強、及び治療する対象の年齢、体重及び健康状態を含むいくつかの要因に依存する。
【００８０】
本明細書に記載される治療方法に関して、化合物の対象への投与は、特定の投与様式、投与量、または投薬頻度に限定されることは意図されていない。本明細書に記載される治療方法は、細胞増殖を増加させ、皮膚修復または皮膚の健康を増強するか、または発毛治療を促進するのに十分な用量を提供する、経口、皮膚、皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、膀胱内、関節内、病巣内または任意の他の経路を含む、あらゆる投与様式を考慮する。化合物は、単回投与または複数回投与で対象に投与することができる。例えば、本明細書に記載の化合物は、例えば、２、３、４、５、６、７、８、１０、１５、２０、またはそれ以上の週の間、１週間に１回投与され得る。任意の特定の対象について、個々の必要性及び化合物の投与を管理または監督する者の専門的判断に従って、特定の投与計画を経時的に調整すべきであることは理解されるべきである。例えば、化合物の用量は、低用量が発毛または創傷治癒を促進するのに十分な活性を提供しない場合に増加させることができる。逆に、化合物の投与量は、本明細書に記載された方法によって評価される発毛または創傷治癒の改善がある場合には減少させることができる。
【００８１】
本明細書に記載の組成物は、単位剤形で投与することができ、及び例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」（第２０版、Ａ．Ｒ  Ｇｅｎｎａｒｏ編、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ）に記載される、製薬業界で周知の方法のいずれかによって調製することができる。製剤中の少なくとも１つの活性化合物の濃度は、投与される薬物の投薬量及び投与経路を含む多くの要因に依存して変化する。
【００８２】
本明細書に記載の化合物は、製薬業界で一般的に使用されている非毒性酸付加塩または金属錯体などの薬学的に許容される塩として任意に投与することができる。酸付加塩の例は、酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸またはトリフルオロ酢酸などの有機酸；タンニン酸、カルボキシメチルセルロースなどの高分子酸；塩酸、臭化水素酸、硫酸リン酸等の無機酸などが含まれる。金属錯体には、亜鉛、鉄などが含まれる。
【００８３】
組成物は、任意の有用な方法で調製することができる。例えば、少なくとも１つの治療薬をエタノールに溶解し、プロピレングリコール（ＰＧ）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の混合物に加える。別の例において、組成物は、Ｃ−１２とＣ−１６の間で変化する炭素単位を有する中鎖脂肪酸のジメチルアラニンアミドの経皮浸透増強剤をさらに含む。より具体的には、活性化合物単独またはそれらの組み合わせは、軟膏形態またはクリーム形態で調製することができる。これらの形態では、治療剤及びビヒクルの単位用量は、０．１ｍｇ〜１０００ｍｇの範囲、より好ましくは５０ｍｇ〜６００ｍｇの範囲であり得る。例えば、投薬量は、約０．１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約４０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０．２ｍｇ〜約２０ｍｇ、約０．３ｍｇ〜約１５ｍｇ、約０．４ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約１ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約１ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約３０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約２０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約０．５ｍｇ〜約５ｍｇ；約１ｍｇ〜約５０ｍｇ、約１ｍｇ〜約３０ｍｇ、約１ｍｇ〜約２０ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１ｍｇ〜約５ｍｇ；約５ｍｇ〜約５０ｍｇ、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ、約５ｍｇ〜約１０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約２０ｍｇ〜約２００ｍｇ、約３０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約１００ｍｇの有効成分、約５０ｍｇ〜約３００ｍｇ、約５０ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約１００ｍｇ〜約３００ｍｇ、または約１００ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇの有効成分を含むことができる。
【００８４】
組成物中の活性化合物は、０．５％〜３０％（ｖ／ｖ）の範囲であり得る。より好ましい範囲は５％〜２０％（ｖ／ｖ）である。別の非限定的な実施形態において、組成物は、０．５％〜２％、１％〜２％、２．５％〜５％、８％〜１２％、１０％〜２０％、または２０％〜３０％（ｖ／ｖ））の少なくとも１つの化合物（すなわち、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ））を含む。一実施形態において、活性化合物は、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも２．５％、少なくとも３％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、または少なくとも２５％（ｖ／ｖ）の量で組成物中に存在し、及び例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）またはＮ−デスメチルトリメブチンであり得る。
【００８５】
適切な投薬量の最適化は、組成物中に使用される活性化合物または活性化合物の組み合わせの薬物動態を考慮して、当業者によって容易になされ得る。投薬量を設定する際に考慮すべき要因には、治療剤の比活性；対象の状態または症状の重症度；対象の年齢、状態、体重、性別、及び食事；併用療法の使用（または非併用）ならびにその他の臨床的要因が含まれる。
【００８６】
投与は、そのサイクルが所与の回数（例えば、２〜１０サイクル）で、または無期限に繰り返される、毎日、毎週（または他の複数日の間隔で）につき１回または複数回、または断続的なスケジュールで行うことができる。組成物は、少なくとも２日間（例えば、２日、３日、４日、５日間、１週間または２週間）投与することができる。組成物は、１日１回または最大１日４回（例えば、１日１回、１日２回、１日３回、または１日４回）投与することができる。組成物は、症状が現れるか、または症状が治まるまで投与することができる。組成物はまた、慢性的に（例えば、２０日以上、例えば、２１日、３０日、６０日間、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月間、１年、２年または３年間）投与することもできる。１つの非限定的な実施形態において、組成物は、本明細書に記載の少なくとも１つの活性化合物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）またはＮ−デスメチルトリメブチン）２〜１０％（ｖ／ｖ）を含む。別の実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）またはＮ−デスメチルトリメブチン）の１日の総投与量は、約５０ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日（例えば、５０ｍｇ／日、５５ｍｇ／日、６０ｍｇ／日、６５ｍｇ／日、７０ｍｇ／日、７５ｍｇ／日、８０ｍｇ／日、８５ｍｇ／日、９０ｍｇ／日、９５ｍｇ／日、１００ｍｇ／日、１５０ｍｇ／日、１６０ｍｇ／日、１８０ｍｇ／日、または２００ｍｇ／日）である。
【実施例】
【００８７】
実施例１．ＳＫＰの細胞増殖を増強する化合物のスクリーニング
発毛及び皮膚の形態形成を増強するためのＳＫＰの潜在的な臨床的使用を考慮して、既に使用されているＳＫＰ活性を増加させ得る薬物を同定するために高スループット薬物スクリーニングを行った。ＳＫＰの増殖を促進する分子（例えば、小分子）を同定するために、代謝活性に応答して蛍光シグナルを生じるＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ（登録商標）色素を用いて細胞増殖を測定する簡単で再現性のある堅牢なアッセイが開発された。化合物（１μＭ〜５μＭ）を９６ウェル非コーティングプレートにシングレットで添加し、３０００継代の早期継代分離球細胞をロボットで播種し、プレートを基本増殖培地でインキュベートした。３０時間後、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅを加え、さらに２４時間後に減少を評価した。通常、陽性コントロールと陰性コントロールとの間にＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ減少の差が８〜１０倍ある。Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ減少が特定のスクリーニングにおけるすべての化合物の平均から３標準偏差だけ増加した場合、化合物はヒットと同定された。このアッセイでは、シグナルの変動性が低く、３．５〜４．５％の範囲のＣＶ値及び無次元の統計学的パラメータＺ’及びＺファクター＞０．５は優れたアッセイを示す（スミスら、ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．２：３７１−３８４，２０１０．）。使用された化学ライブラリーには、１２８０個の独自の低分子化合物を含むＬＯＰＡＣ１２８０コレクション、及び既に臨床で使用されている４４６個の化合物を含むＮＩＨコレクションライブラリーが含まれていた。このスクリーニングを用いて、以下の表１に示されるように、げっ歯類及びヒト細胞培養の両方においてＳＫＰ球数が増加したいくつかの化合物を同定した。
【表１】
2017528505.tif 000003
【００８８】
次いで、ヒットを、げっ歯類及びヒトＳＫＰ培養物の両方における用量反応球形成アッセイの二次スクリーニングによって検証し、それは、アルプスタジル（Ａｌｐ）、マレイン酸トリメブチン（ＴＭ）、ケンペロール（Ｋａｅ）、ＭＧ６２４（ＭＧ）、及びプラモキシン（それぞれ図１Ａ〜１Ｅ）を確認した。特に、ａｌｐ、ＴＭ及びＫａｅは、１〜１０ｎＭという低い用量で球数を増強した。比較は、１００ｎＭですべての薬物が球体形成を同程度に促進することを示した（図１Ｆ）。新生仔ラットＳＫＰを用いた二次球形成アッセイにおいても同様の結果が得られた（図１Ｇ）。
【００８９】
Ａｌｐ及びＴＭは、ラットＳＫＰを用いた用量反応曲線によってさらに特徴付けられた。球数は、Ａｌｐ及びＴＭの両方について用量依存的に増加した（図１Ｈ〜１Ｉ）。クローン密度アッセイを行って、ＳＫＰの自己再生及び増殖に対する薬剤の効果を検証した。Ｊｉｎｎｏら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２８：２０２７−２０４０、２０１０に記載されているように、ＳＫＰを分離させ、１．６％メチルセルロースを含有する培地中で２，５００細胞／ｍＬで播種した。その後、１００ｎＭのＡｌｐ、ＴＭ、Ａｌｐ及びＴＭ、またはＤＭＳＯで細胞を処理し、１４日後に球形成をスコアリングした。このデータは、Ａｌｐ及びＴＭ細胞のコントロールに対する球数及びサイズの堅固な増加を示し、Ａｌｐ及びＴＭの両方が添加された場合、さらなる増加はなく、Ａｌｐ及びＴＭに対する同様の作用メカニズムを示唆する（図１Ｊ〜１Ｋ）。比較のために、齧歯類及びヒトの皮膚において生物活性を有するプロスタグランジン（ＰＧＦ２）であるラタノプロスト（Ｌａｔａｎ）で細胞を処理した。Ａｌｐ、ＴＭ及びＬａｔａｎの治療後１４日間、球数の有意な増加があった（図１Ｌ）。最後に、ＳＫＰ増殖を直接測定した。ラットＳＫＰを３〜４日間培養し、さらにＡｌｐまたはＴＭでさらに２日間処理し、増殖マーカーＫｉ６７で免疫染色した。Ａｌｐ及びＴＭはいずれも、Ｋｉ６７陽性球細胞を約６０％増加させた（図１Ｍ〜１Ｎ）。これらの薬剤は、Ｋｉ６７陽性ＮＩＨ−３Ｔ３細胞が同様のアッセイで影響を受けなかったので、一般的なマイトジェンではない（図１０Ｏ）。したがって、アルプロスタジル及びＴＭは、ＳＫＰの増殖及び自己再生を増加させる。
【００９０】
実施例２．ＴＭの創傷治癒に対する効果を実証するアッセイ
Ａｌｐ及びＴＭの効果は、インビボでのげっ歯類モデルにおいてさらに検証された。使用したモデルは、中年（９ヶ月齢）のＣ５７／Ｂ１６マウスの背部皮膚で実施された全厚生検パンチ創傷であった（図２Ａ〜２Ｉ）。これらの実験では、背中の皮膚の毛を剃毛して皮膚を露出させ、直径６ｍｍの創傷を生検パンチで行った。Ａｌｐ、ＴＭまたはビヒクルは、水−エタノール−プロピレングリコール（ＰＧ）の組成物中に再構成され、創傷周囲に毎日９日間適用された。局所的分析を実施して、創傷閉鎖の程度及び形態計測分析を評価した。創傷閉鎖の分析のために、デジタル写真を創傷後０日、３日、７日及び９日に採取した。画像を較正するためにルーラーを使用し、傷のマージンの輪郭を手動で描いた。創傷閉鎖率は、以前Ｊｏｈｎｓｔｏｎら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ１（１）：３８−４５，２０１３．に報告されているように、手術日の創傷サイズのパーセンテージとして計算した。創傷床の中央部分からのヘマトキシリン及びエオジンで染色されたパラフィン組織切片について、創傷パラメータの形態計測分析を行った。切片を走査し、画像を一緒にスティッチングして完全な創傷床を示した。様々なパラメータの形態学的分析は、前出のＪｏｈｎｓｔｏｎらに記載されているように行った。
【００９１】
創傷治癒実験は、薬剤処理マウスにおいて創傷閉鎖が有意に促進されることを明らかにした。７日目に、ビヒクル処理対照とは対照的に、ＡｌｐまたはＴＭ処理マウスのほぼ半分が完全に治癒した（図２Ａ）。９日目までに、ビヒクル処理マウスの４４％と比較して、薬物処理マウスの７０〜７８％が治癒した（図２Ｂ）。９日目の創傷床の中央部分からのヘマトキシリン及びエオシン染色されたパラフィン切片の形態計測分析により、これらの結果が確認された（図２Ｃ）。創傷の幅及び上皮間隙は、ＡｌｐまたはＴＭ処理マウスにおいて有意に小さかった（図２Ｄ〜２Ｅ）。真皮組織再生もまた、新しい真皮組織のより厚い層で増強された（図２Ｆ）。アルプロスタジル処理マウスでは、これは、損傷７日後に新たに形成された真皮の最先端でＫｉ６７陽性増殖真皮細胞の増加と一致した（図２Ｇ〜２Ｈ）。アルプロスタジルまたはＴＭを用いた治療は、同じ領域のＣＤ３１陽性血管も増加させた（図２Ｉ〜２Ｊ）。これらの結果は、Ａｌｐ及びＴＭが創傷床における増殖を促進し、血管を増加させることを実証する。
【００９２】
実施例３．発毛及び皮膚維持を促進するＴＭの効果を実証するアッセイ
皮膚の維持及び形態ならびに発毛におけるＡｌｐ及びＴＭの役割をさらに評価するために、別のインビボのモデルを使用した。発毛アッセイでは、若いマウスの背毛を脱毛して新しい毛周期を誘発した。髪が休息期にあるマウスのみが研究に含まれた。３週間の間、脱毛部位に薬物を毎日塗布した。１６日目、１９日目、２１日に新しく育った毛を採取し、長さを測定した。毛包密度、毛周期及び皮膚の厚さを評価するために、試験終了時に皮膚試料を採取した。皮膚アッセイでは、マウスの背毛を剃毛して皮膚を露出させ、薬剤を１週間または３週間局所適用した。次いで、皮膚の厚さ及び増殖を分析することによって皮膚の形態を評価した。
【００９３】
ＴＭまたはＡｌｐによる局所治療の１週間で、Ｋｉ６７陽性増殖細胞の数は真皮で増加し、ＴＭまたはＡｌｐ処理の３週間以内に真皮の厚さの増加が見られた（図３Ａ〜３Ｃ）。さらに、薬物処理したマウスは、対照よりも長い毛を有する傾向を示した。毛の長さに対する効果は、対照よりも２００μＭの範囲で長い（図４）。薬剤処理マウスの毛周期／毛包形態において差異は見られなかった。
【００９４】
実施例４．インビボでの内在性ＳＫＰの動員を実証するアッセイ
Ａｌｐ及びＴＭの局所適用の効果が特異的であるか、及びインビボでのＳＫＰの動員によるかどうかを評価するために、老化した傷ついたマウスまたは負傷していないマウスの背部皮膚に１週間局所的に薬物を適用する実験を行った。創傷床または対照皮膚を切開し、ＳＫＰを単離し、球体を形成させた。その後、二次ＳＫＰ球体を球体形成アッセイに使用した。球形成アッセイ及びＳＫＰ分離法は、Ｂｉｅｒｎａｓｋｉｅら、Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．１：２８０３−２８１２、２００６及びＪｉｎｎｏら、Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  ２８：２０２７−２０４０、２０１０を参照。
【００９５】
図５及び６は、薬物処理創傷床（図５）または薬物処理皮膚（図６）から誘導されたＳＫＰが、対照細胞（薬物処理なし）よりも有意に良好に増殖及び自己再生することができることを示す。総合すると、これらのデータは、Ａｌｐ及びＴＭのインビボ局所適用がＳＫＰの長期自己再生を増強することを示唆し、したがって、Ａｌｐ及びＴＭは、加齢皮膚における創傷治癒及び真皮維持を増強することができる。
【００９６】
実施例５．ＳＫＰ自己複製のＡｌｐ及びＴＭ長期間増強のトランスクリプトーム解析
ＳＫＰの自己複製に対するＡｌｐ及びＴＭ処理の長期的影響を評価するために、トランスクリプトーム分析を実施例４に記載の二次ＳＫＰ球集団で行った。ＲＮＡを、薬物処理した創傷床、薬物から培養したＳＫＰから単離した−処理された皮膚、及び制御皮膚。次いで、各二次ＳＫＰ球集団の３つの独立した生物学的複製について、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＧｅｎｅＣｈｉｐ  Ｍｏｕｓｅ  Ｇｅｎｅ  ２．０  ＳＴアレイを用いて転写産物レベルを評価した。ｌｏｇ２正規化された遺伝子発現データのユークリッド距離行列の偏った階層的クラスタリング（完全連鎖法を用いる）により、各ＳＫＰ治療集団について一緒にクラスター化された生物学的複製が証明された。さらに、クラスター分析により、Ａｌｐ処理及びＴＭ処理された創傷及び損傷されていない皮膚からの二次ＳＫＰ集団は、対照皮膚から単離されたＳＫＰ集団よりもより類似した転写物を示すことが明らかになった（図７Ａ）。
【００９７】
異なるＳＫＰ集団の転写類似性を確証するために、差次的遺伝子発現分析を、Ｒｉｔｃｈｉｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．４３（７）：ｅ４，２０１５に記載されるように、ｌｉｍｍａ  ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージを使用して行った。対照皮膚と比較して、Ａｌｐ処理創傷皮膚及びＴＭ処理創傷皮膚由来のＳＫＰにおいて、それぞれ１６５個の遺伝子及び２９１個の遺伝子のみが差次的に発現された（両方の比較についてｐ＜０．０１）（図７Ｂ）。これらの差次的に発現される遺伝子のうち、Ａｌｐ処理された皮膚及びＴＭ処理された皮膚由来のＳＫＰ間で共有されるのは２１のみであった。したがって、薬物処理された創傷床または薬物処理された皮膚からのＳＫＰ集団は、転写的に類似しており、Ａｌｐ及びＴＭ処理は、培養されたＳＫＰ集団の自己再生を増強した。
【００９８】
実施例６．ＳＫＰ自己複製に対するＡｌｐ及びＴＭの急性効果のトランスクリプトーム解析
Ａｌｐ及びＴＭの急性効果を評価するために、ＳＫＰを継代し、２４時間ＡｌｐまたはＴＭで鋭意処理し、続いてマイクロアレイ分析を行った。この分析は、対照皮膚対Ａｌｐ処理皮膚及び対照皮膚対ＴＭ処理皮膚のペアワイズ比較においてそれぞれ４５７及び５４５の差次的に発現した遺伝子を同定した。より有意に異なる遺伝子の半分以上（２９５）が、２つのグループ（図７Ｃ）の間で共有され、変化は一般ＴＭ（図７Ｄ）よりもＡｌｐに対してより高い大きさのものであった。さらに、ペアワイズ比較で同定された上位５０個の異なる発現遺伝子のうち、２３個の差次的に発現される遺伝子は、Ａｌｐ及びＴＭで処理されたＳＫＰ間で共有された（図７Ｅ）。これらの結果は、Ａｌｐ及びＴＭで処理したＳＫＰの増殖の根底にある機構的な収束を示している。
【００９９】
次に、Ｆａｌｃｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｌｅｍａｎ、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａ．Ｏｘｆ．Ｅｎｇｌ．２３：２５７−２５８，２００７に記載されているように、ＧＯｓｔａｔｓ  ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒパッケージを用いて遺伝子オントロジー（ＧＯ）濃縮分析を行った。Ａｌｐ及びＴＭの生物学的効果と一致して、細胞増殖に関連する遺伝子は、以下の表２に示すように、Ａｌｐ及びＴＭの両方について有意に濃縮された。以下の表３に示されるように、特に、ＭＡＰキナーゼ経路の遺伝子は、Ａｌｐ及びＴＭの両方に対して高度に濃縮されており、この経路の活性化がＳＫＰの自己再生において役割を果たす可能性があることを示している。
【表２】
2017528505.tif 000004
【表３】
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【０１００】
実施例７：Ａｌｐ及びＴＭは、ＳＫＰにおけるＭＥＫ−ＥＲＫ自己複製経路を活性化する
Ａｌｐ及びＴＭがＳＫＰにおけるマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ−細胞外シグナル調節キナーゼ（ＭＥＫ−ＥＲＫ）経路を活性化したかどうかを評価するために、分離ＳＫＰを２４時間培養し、１００ｎＭのＡｌｐまたはＴＭをＳＫＰ培養物に添加した後、リン酸化された活性化ＥＲＫ１／２を標的とするウエスタンブロット分析を行った。ＦＧＦ２及びＥＧＦで培養されたＳＫＰは、ＡｌｐまたはＴＭでの処理後約２倍に増加した基礎レベルのＥＲＫ１／２リン酸化を示した（図８Ａ及び８Ｂ）。対照的に、ＡｌｐもＴＭも、対照と比較して、ＳＴＡＴ３、ＧＳＫ３β、Ａｋｔ１またはＣＲＥＢのリン酸化された活性化形態を増加させなかった（図８Ｃ）。
【０１０１】
ＭＥＫ−ＥＲＫ活性がＳＫＰ自己複製に重要であるかどうかを評価するために、Ｇｉｌｍａｒｔｉｎら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１７：９８９−１０００，２０１１に記載されているように、高度に選択的なＭＥＫ１／２阻害剤トラメチニブ（ＧＳＫ１１２０２１２）を使用した。トラメチニブは、まず培養ＳＫＰにおける基礎ＥＲＫ１／２リン酸化を阻害することが示された（図８Ｄ）。次に、メチルセルロースコロニー形成アッセイを使用して、ＳＫＰの自己再生に対するＭＥＫ−ＥＲＫ活性の重要性を判定し、トラメチニブは、ＦＧＦ２及びＥＧＦで増殖したクローン球の数及びサイズの両方を減少させることが示された（図８Ｅ及び８Ｆ）。ＭＥＫ阻害はまた、トラメチニブの存在下または非存在下で４８時間培養したＳＫＰ球のＫｉ６７免疫染色によってモニターされるように、ＳＫＰの増殖を減少させたが生存は減少させなかった（図８Ｇ〜８Ｈ）。
【０１０２】
３つの別々の証拠から、ＭＥＫ−ＥＲＫ活性も薬物誘発自己複製にとって重要であることが示された。第一に、トラメチニブは、２４時間培養したＳＫＰにおいて、Ａｌｐ及びＴＭがＥＲＫ１／２リン酸化を増加させる能力を抑制した（図８Ｉ）。第二に、７日間の球体アッセイにおいて１００ｎＭのトラメチニブを用いたＭＥＫの阻害は、球数の堅牢な減少をもたらし、ＴＭもＡｌｐもこの減少を補償しなかった（図８Ｊ）。第三に、マイクロアレイは、ＳＫＰをＴＭ中で２４時間培養すると、トラメチニブが部分的に遺伝子発現の下流の変化を減少させることを明らかにした。具体的には、ＴＭ処理によって変化した上位５０個の遺伝子のうち２９個は、トラメチニブもまた培養物中に含まれる場合、減少した倍数変化を示した（図８Ｋ）。
【０１０３】
他の実施形態
前述のことは、より適切な非限定的な実施形態のいくつかを概説したことに留意されたい。これらの非限定的な実施形態は、多くの用途に使用することができる。したがって、特定の構成及び方法についての説明がなされているが、これらの非限定的な実施形態の意図及び概念は、他の構成及び用途にも適しており、適用可能である。開示された非限定的な実施形態に対する修正が達成され得ることは、当業者には明らかであろう。記載された非限定的な実施形態は、そのより顕著な特徴及び適用のいくつかの単なる例示であると解釈されるべきである。他の有益な結果は、これらの非限定的な実施形態を異なる方法で適用することによって、または当業者に知られている方法で修正することによって実現することができる。これには、上記で特段の記載がない限り、様々な非限定的な実施形態の間の特徴、要素、及び／または機能の混合及び一致が含まれ、明確に意図されている。
【０１０４】
個々の刊行物、特許出願、または特許が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、本明細書で言及したすべての刊行物、特許出願及び特許は、参照により本明細書に援用される。
【図１Ａ】
2017528505.tif 000006
【図１Ｂ】
2017528505.tif 000007
【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
2017528505.tif 000011
【図１Ｇ】
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【図１Ｈ】
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【図１Ｉ】
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【図１Ｊ】
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【図１Ｋ】
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【図１Ｌ】
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【図１Ｍ】
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【図１Ｎ】
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【図１Ｏ】
2017528505.tif 000020
【図２Ａ】
2017528505.tif 000021
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図２Ｈ】
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【図２Ｉ】
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【図２Ｊ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図８Ｆ】
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【図８Ｇ】
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【図８Ｈ】
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【図８Ｉ】
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【図８Ｊ】
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【図８Ｋ】
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【国際調査報告】
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