(57)【要約】  本発明により、抗ホルモン処置の有効性を向上させるため、または処置後のがんの再発もしくは進行を予防するための方法および組成物を提供する。また、本発明により、抗ホルモン処置を継続または開始するために処置抵抗性がん細胞、または処置不応性がん細胞を有する患者を再感受性化または感受性化させるための方法を提供する。さらに、本発明において、抗ホルモン処置の効果または抗ホルモン処置後のがんの再発もしくは転移の尤度の予後判定または診断のための方法を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ホルモン療法に対して処置抵抗性のがん細胞集団を再感受性化または感受性化させるための方法であって、前記処置抵抗性がん細胞を、前記細胞内のＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する化合物と接触させ、それにより、前記がん細胞を再感受性化または感受性化させることを含む方法。
【請求項２】
前記がん細胞がエストロゲン受容体（ＥＲ）陽性細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＥＲ陽性細胞が乳がんまたは卵巣がんの細胞である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記がん細胞がエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＥＲ陰性細胞が乳がんまたは卵巣がんの細胞である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記処置抵抗性がん細胞が患者内に存在しているものである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記患者が抗ホルモン療法での処置を受けたことがある患者である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ホルモン療法が、タモキシフェンまたはエストロゲンレベルを全身的に低下させ得る別の化合物での処置である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスが、ＮＡＤ＋サルベージ経路合成の向上、ＮＡＤ＋デノボ合成の向上、ＮＡＭＰＴ活性化の向上、または細胞内ＮＡＭＰＴレベルの向上によって上方調節される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＮＡＤ＋サルベージ経路合成の向上がＮＡＤ＋前駆体の投与によるものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＮＡＤ＋前駆体がニコチンアミド（ＮＡＭ）、ニコチン酸（Ｎａ）またはニコチンアミドリボシド（ＮＲ）である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスが、前記がん細胞に細胞内ＮＡＭＰＴレベルを上方調節する薬剤を導入することにより上方調節される、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記薬剤が、ＮＡＭＰＴをコードしているポリヌクレオチドまたは発現ベクターである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリヌクレオチドが前記患者に腫瘍マーカー標的化遺伝子送達によって投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ポリヌクレオチドが前記患者に幹細胞ベース遺伝子送達によって投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
細胞内ＮＡＭＰＴレベルの上方調節が、血液中のグルコース枯渇を誘導すること、またはがん細胞によるグルコースの消費を阻害することにより行われる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
抗ホルモン療法を受けているか、抗ホルモン療法で処置されたことがあるか、または抗ホルモン療法で処置されたことがない患者に、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する薬剤を投与し、それにより、前記患者において抗ホルモン療法の有効性を向上させる、またはがんの再発もしくは進行を予防することを含む、がん患者において抗ホルモン療法の有効性を向上させるため、またはがんの再発もしくは進行を予防するための方法。
【請求項１８】
前記がんがエストロゲン受容体（ＥＲ）陽性の乳がんまたは卵巣がんである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記がんがエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性の乳がんまたは卵巣がんである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記患者が、浸潤性もしくは非浸潤性の原発腫瘍を有しているか、原発腫瘍の外科的除去を受けたか、もしくは受けるつもりであるか、または転移性のがんを有している患者である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記患者が抗ホルモン療法を受けたことがある患者である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
前記患者が同時進行で抗ホルモン療法を受けている患者である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者が抗ホルモン療法を受けたことがない患者である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記患者に前記薬剤が、抗ホルモン療法の前、抗ホルモン療法と同時または抗ホルモン療法の後に投与される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランス上方調節が、ＮＡＤ＋酸化還元経路のモジュレーションまたはＮＡＤ＋非酸化還元経路のモジュレーションによるものである、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元経路が解糖経路、ペントースリン酸経路、細胞質基質内ＮＡＤ＋再生経路、クエン酸回路経路、グルタミノリシス経路、β酸化経路、ミトコンドリア呼吸経路、脂質合成経路、ニコチンアミドヌクレオチドトランスヒドロゲナーゼ経路、またはＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ経路を伴う経路である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＮＡＤ＋非酸化還元経路がＮＡＤ＋合成経路、ＮＡＤ＋消費経路またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ依存性経路である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記ＮＡＤ＋合成経路、前記ＮＡＤ＋消費経路または前記ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ依存性経路が、ＮＡＤ＋前駆体、ＮＡＤ＋合成に関与している酵素またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素によってモジュレートされる、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ＮＡＤ＋前駆体がニコチンアミド（ＮＡＭ）、ニコチン酸（Ｎａ）、ニコチンアミド−リボシド（ＮＲ）またはトリプトファンである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＮＡＤ＋前駆体がＮＡＤ＋合成の経路の代謝中間体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
ＮＡＤ＋合成に関与している前記酵素がＮＡＭＰＴである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
ＮＡＤ＋消費に関与している前記酵素がＰＡＲＰ、サーチュインまたはＣＤ３８である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
（１）患者を抗ホルモン療法で処置すること、および（２）該被験体に、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する化合物を投与することを含む、患者のがんを処置するための方法。
【請求項３４】
前記がんがエストロゲン受容体（ＥＲ）陽性である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性がんが乳がんまたは卵巣がんである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記がんがエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性がんが乳がんまたは卵巣がんである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗ホルモン療法が、エストロゲン受容体のアンタゴニスト化合物を治療有効量で含む医薬組成物の投与を含むものである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
前記抗ホルモン療法が、タモキシフェンまたはエストロゲンレベルを全身的に低下させ得る別の化合物での処置である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記化合物が前記被験体に、抗ホルモン療法での処置の前、該処置と同時進行で、または該処置の後に投与される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
前記患者を、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する前記化合物を投与する前に、最初に前記抗ホルモン療法で処置する、請求項３３に記載の方法。
【請求項４２】
さらに、工程（１）の後、前記患者を該抗ホルモン処置に対する抵抗性について検査することを含む、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記患者が、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する前記化合物を投与する前に抗ホルモン処置に対する抵抗性を発現した患者である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
さらに、（３）工程（２）の後、抗ホルモン療法での前記患者の処置を継続することを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４５】
ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランス上方調節が、ＮＡＤ＋酸化還元経路のモジュレーションまたはＮＡＤ＋非酸化還元経路のモジュレーションによるものである、請求項３３に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元経路が解糖経路、ペントースリン酸経路、細胞質基質内ＮＡＤ＋再生経路、クエン酸回路経路、グルタミノリシス経路、β酸化経路、ミトコンドリア呼吸経路、脂質合成経路、ニコチンアミドヌクレオチドトランスヒドロゲナーゼ経路、またはＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ経路を伴う経路である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＮＡＤ＋非酸化還元経路がＮＡＤ＋合成経路、ＮＡＤ＋消費経路またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ依存性経路である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＮＡＤ＋合成経路、前記ＮＡＤ＋消費経路または前記ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ依存性経路が、ＮＡＤ＋前駆体、ＮＡＤ＋合成に関与している酵素、またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素によってモジュレートされる、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＮＡＤ＋前駆体がニコチンアミド（ＮＡＭ）、ニコチン酸（Ｎａ）、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）またはトリプトファンである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ＮＡＤ＋前駆体がＮＡＤ＋合成経路の代謝中間体である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
ＮＡＤ＋合成に関与している前記酵素がＮＡＭＰＴである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
ＮＡＤ＋消費に関与している前記酵素がＰＡＲＰ、サーチュインまたはＣＤ３８である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
（ａ）患者のがんのＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベルもしくはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比、またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素のレベルもしくは活性を測定すること、および（ｂ）測定されたＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベル、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比、またはＮＡＤ＋消費に関与している前記酵素のレベルもしくは活性を、前記患者におけるがんの再発もしくは遠隔転移の高いリスク、または前記リスクがないことと相関させることを含む、がん患者において抗ホルモン療法後のがんの再発または遠隔転移を予後判定または診断するための方法。
【請求項５４】
ＮＡＤ＋消費に関与している前記酵素がＰＡＲＰ、サーチュインまたはＣＤ３８である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
（ａ）患者のがんのＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベル、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比、またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素のレベルもしくは活性を測定すること、および（ｂ）測定されたＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比、またはＮＡＤ＋消費に関与している前記酵素のレベルもしくは活性から、前記患者における処置後の抗ホルモン療法の効果を予後判定または診断することを含む、がん患者において抗ホルモン療法の効果を予後判定または診断するための方法。
【請求項５６】
ＮＡＤ＋消費に関与している前記酵素がＰＡＲＰ、サーチュインまたはＣＤ３８である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記がんが乳がんまたは卵巣がんである、請求項５３または５５に記載の方法。
【請求項５８】
前記がんがＥＲ陽性乳がんまたは低悪性度乳がんである、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
ＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比が前記抗ホルモン療法の前または前記抗ホルモン療法中に測定される、請求項５３に記載の方法。
【請求項６０】
工程（ｂ）が、前記患者のがんの測定されたＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比を、がんの再発または遠隔転移と関連している１つ以上の参照レベルと比較することを含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項６１】
工程（ｂ）が、さらに、該被験体の前記がんの測定されたレベルを、前記患者が、がんの再発または遠隔転移の高いリスクを有するかどうかの表示をもたらす値または表記に割り付けることを含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項６２】
前記割り付けられる値または表記が、がんの再発または遠隔転移の高いリスクを有する抗ホルモン療法で処置されたがん患者のレベル範囲と関連させた正規化されたスケール値に基づいたものである、請求項６１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
主題の特許出願は、米国特許仮出願第６２／０２５，５９６号（２０１４年７月１７日出願）の優先権の恩典を主張する。この先の出願の全開示内容は、引用により、その全体があらゆる目的のために本明細書に組み込まれる。
【０００２】
米国政府資金提供の記載
本発明は、米国立衛生研究所から受けた助成金番号Ｒ０１ＣＡ１７０７３７およびＲ０１ＣＡ１７０１４０による米国政府の補助を伴ってなされた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
がんは主な死亡原因の１つであり、転移性のがんは多くの場合、治らない。例えば、肺、肝臓、骨および脳への乳がんの転移は、乳がん患者の主要死因である。転移は、血流およびリンパ系によるがん細胞の播種を伴い、接着性および浸潤性の腫瘍細胞の機能ならびにその標的部位での生存能および増殖能に依存する。乳がんの死亡率は、診断および処置の進歩にもかかわらず依然として高い。根本的な大きな問題は、乳がんが高頻度で、多くの場合、見かけ上成功裡の治療の数年後に再発することである。死亡例の約９０％は転移によって引き起こされるが、これに対する有効な治療は存在していない。例えば、トリプルネガティブ乳がんは、エストロゲン受容体α（ＥＲα）、プロゲステロン受容体（ＰＲ）および受容体型チロシン−プロテインキナーゼｅｒｂＢ−２（ＨＥＲ２）の発現の欠如によって定義される最も急速進行型の乳がんである。トリプルネガティブ乳がんを有する患者は、その腫瘍がＥＲαの発現を欠損しているため、タモキシフェンまたはアロマターゼ阻害薬などの抗ホルモン療法では処置されない。現在、トリプルネガティブ乳がんを有効に治癒できる利用可能な処置がない。
【０００４】
乳がんの手術および処置における改善にもかかわらず、乳がん患者の死亡率は、おおむね変化がないままである。根本的な大きな問題は、一部の腫瘍細胞は処置抵抗性を有し、多くが処置抵抗性を発現し、多くの場合、最初の補助療法が見かけ上成功裡であった数年後に疾患の再発に至ることである。このようなものとしては、乳がん全体の大部分を構成するホルモン受容体陽性乳がんに対する主要な標的化治療であり標準治療である抗ホルモン処置が挙げられる。
【０００５】
当該技術分野において、腫瘍転移および処置抵抗性を予防することにより、がんをより有効に処置できる手段の必要性が存在している。本発明は、このおよび他の必要性に対する取り組みに関するものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一態様において、本発明により、抗ホルモン療法に対して処置抵抗性のがん細胞集団を再感受性化または感受性化（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅ）するための方法を提供する。該方法は、該処置抵抗性がん細胞を、該細胞内のＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する化合物と接触させ、それにより、該がん細胞を再感受性化または感受性化させることを伴うものである。一部の該方法は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性であるがん細胞、例えば、ＥＲ陽性の乳がんまたは卵巣がん細胞の処置に関するものである。他の一部の該方法は、エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性であるがん細胞、例えば、ＥＲ陰性の乳がんまたは卵巣がん細胞の処置に関するものである。
【０００７】
本発明の一部の方法では、処置抵抗性がん細胞が患者内に存在しているものである。例えば、処置は、抗ホルモン療法での処置を受けたことがある患者に存在するがん細胞に対するものであり得る。一部の方法では、抗ホルモン療法が、タモキシフェンまたはエストロゲンレベルエストロゲンレベルを全身的に低下させ得る別の化合物（もしくは低下させることを目的とする化合物）での処置である。一部の方法では、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスが、ＮＡＤ＋サルベージ経路合成の向上、ＮＡＤ＋デノボ合成の向上、ＮＡＭＰＴ活性化の向上、または細胞内ＮＡＭＰＴレベルの向上によって上方調節される。一部のこのような方法では、ＮＡＤ＋サルベージ経路合成の向上がＮＡＤ＋前駆体の投与によるものである。このような方法に使用されるＮＡＤ＋前駆体は、例えば、ニコチンアミド（ＮＡＭ）、ニコチン酸（Ｎａ）またはニコチンアミドリボシド（ＮＲ）であり得る。
【０００８】
本発明の他の一部の方法では、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスが、がん細胞に細胞内ＮＡＭＰＴレベルを上方調節する薬剤を導入することにより上方調節される。このような方法に適した薬剤は、例えば、ＮＡＭＰＴをコードしているポリヌクレオチドまたは発現ベクターであり得る。一部のこのような方法では、該ポリヌクレオチドは患者に腫瘍マーカー標的化遺伝子送達によって投与され得る。他の一部の方法では、該ポリヌクレオチドが患者に幹細胞ベース遺伝子送達によって投与される。他の一部の方法では、細胞内ＮＡＭＰＴレベルの上方調節が、血液中のグルコース枯渇を誘導すること、またはがん細胞によるグルコースの消費を阻害することにより行われる。
【０００９】
別の態様において、本発明により、がん患者において抗ホルモン療法の有効性を向上させるため、またはがんの再発もしくは進行を予防するための方法を提供する。このような方法は、抗ホルモン療法での処置を受けているか、抗ホルモン療法で処置されたことがあるか、または抗ホルモン療法で処置されたことがない患者に、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する薬剤を投与し、それにより、該患者において抗ホルモン療法の有効性を向上させる、またはがんの再発もしくは進行を予防することを伴うものである。一部のこのような方法では、がんがエストロゲン受容体（ＥＲ）陽性の乳がんまたは卵巣がんである。他の一部の方法では、がんがエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性の乳がんまたは卵巣がんである。一部の該方法は、浸潤性もしくは非浸潤性の原発腫瘍を有しているか、原発腫瘍の外科的除去を受けたか、もしくは受けるつもりであるか、転移性のがんを有している患者の処置に関するものである。一部の該方法は具体的には、抗ホルモン療法を受けたことがある患者に関するものである。一部の方法は具体的には、同時進行で抗ホルモン療法を受けている患者に関するものである。他の一部の該方法は具体的には、抗ホルモン療法を受けたことがない患者に関するものである。種々の方法において、患者には該薬剤が、抗ホルモン療法の前、抗ホルモン療法と同時または抗ホルモン療法の後に投与され得る。
【００１０】
一部の方法では、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスの上方調節が、ＮＡＤ＋酸化還元経路のモジュレーションまたはＮＡＤ＋非酸化還元経路のモジュレーションによるものである。一部のこのような方法では、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元経路が解糖経路、ペントースリン酸経路、細胞質基質内ＮＡＤ＋再生経路、クエン酸回路経路、グルタミノリシス経路、β酸化経路、ミトコンドリア呼吸経路、脂質合成経路、ニコチンアミドヌクレオチドトランスヒドロゲナーゼ経路、またはＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ経路を伴う経路である。一部の方法では、ＮＡＤ＋非酸化還元経路がＮＡＤ＋合成経路、ＮＡＤ＋消費経路またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ依存性経路である。一部のこのような方法では、ＮＡＤ＋合成経路、ＮＡＤ＋消費経路またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ依存性経路が、ＮＡＤ＋前駆体、ＮＡＤ＋合成に関与している酵素またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素によってモジュレートされる。このような方法において、ＮＡＤ＋前駆体はニコチンアミド（ＮＡＭ）、ニコチン酸（Ｎａ）、ニコチンアミド−リボシド（ＮＲ）またはトリプトファンであり得る。一部のこのような方法では、ＮＡＤ＋前駆体がＮＡＤ＋合成の経路の代謝中間体である。一部の方法では、ＮＡＤ＋合成に関与している酵素がＮＡＭＰＴである。一部の方法では、ＮＡＤ＋消費に関与している酵素がＰＡＲＰ、サーチュインまたはＣＤ３８である。
【００１１】
別の態様において、本発明により、患者のがんを処置するための方法を提供する。該方法は、（１）患者を抗ホルモン療法で処置すること、および（２）該被験体に、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する化合物を投与することを伴うものである。一部のこのような方法では、処置対象のがんがエストロゲン受容体（ＥＲ）陽性であるがん、例えば、ＥＲ陽性の乳がんまたは卵巣がんである。他の一部の方法では、処置対象のがんがエストロゲン受容体（ＥＲ）陰性がん、例えば、ＥＲ陰性の乳がんまたは卵巣がんである。一部の方法では、使用される抗ホルモン療法が、エストロゲン受容体のアンタゴニスト化合物を治療有効量で含む医薬組成物の投与を伴うものである。一部の方法では、使用される抗ホルモン療法が、タモキシフェンまたはエストロゲンレベルを全身的に低下させ得る別の化合物での処置である。種々の実施形態において、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元を上方調節する化合物は被験体に、抗ホルモン療法での処置の前、該処置と同時進行で、または該処置の後に投与される。一部の方法では、患者を、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する化合物を投与する前に、最初に抗ホルモン療法で処置する。一部のこのような方法は、さらに、工程（１）の後に、患者を抗ホルモン処置に対する抵抗性について検査することを含むものであり得る。一部の該方法は、該化合物を投与する前に抗ホルモン処置に対する抵抗性を発現した患者に関するものである。本発明の一部の方法は、さらに、工程（２）の後、抗ホルモン療法での患者の処置を継続することを含むものであり得る。
【００１２】
本発明の一部のがん処置方法では、ＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスの上方調節が、ＮＡＤ＋酸化還元経路のモジュレーションまたはＮＡＤ＋非酸化還元経路のモジュレーションによるものである。例えば、モジュレートされるＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元経路は解糖経路、ペントースリン酸経路、細胞質基質内ＮＡＤ＋再生経路、クエン酸回路経路、グルタミノリシス経路、β酸化経路、ミトコンドリア呼吸経路、脂質合成経路、ニコチンアミドヌクレオチドトランスヒドロゲナーゼ経路、またはＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ経路を伴う経路であり得る。他の一部の方法では、モジュレートされるＮＡＤ＋非酸化還元経路が、例えば、ＮＡＤ＋合成経路、ＮＡＤ＋消費経路またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ依存性経路であり得る。一部のこのような方法では、ＮＡＤ＋合成経路、ＮＡＤ＋消費経路またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ依存性経路が、ＮＡＤ＋前駆体、ＮＡＤ＋合成に関与している酵素、またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素によってモジュレートされ得る。一部の実施形態では、使用されるＮＡＤ＋前駆体が、例えば、ニコチンアミド（ＮＡＭ）、ニコチン酸（Ｎａ）、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）またはトリプトファンであり得る。他の一部の実施形態では、使用されるＮＡＤ＋前駆体がＮＡＤ＋合成経路の代謝中間体である。一部の方法では、ＮＡＤ＋合成に関与している酵素がＮＡＭＰＴである。他の一部の方法では、ＮＡＤ＋消費に関与している酵素がＰＡＲＰ、サーチュインまたはＣＤ３８である。
【００１３】
さらに別の態様において、本発明により、がん患者において抗ホルモン療法後のがんの再発または遠隔転移を予後判定または診断するための方法を提供する。該方法は、（ａ）患者のがんのＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベル、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比、またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素のレベルもしくは活性を測定すること、および（ｂ）測定されたＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベル、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比、またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素のレベルもしくは活性を、該患者のがんの再発もしくは遠隔転移の高いリスク、または該リスクがないことと相関させることを伴うものである。関連する一態様において、本発明により、がん患者において抗ホルモン療法の効果を予後判定または診断するための方法を提供する。このような方法は、（ａ）患者のがんのＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベル、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比、またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素のレベルもしくは活性を測定することおよび（ｂ）測定されたＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比、またはＮＡＤ＋消費に関与している酵素のレベルもしくは活性から、該患者における処置後の抗ホルモン療法の効果を予後判定または診断することを伴うものである。このような方法において、ＮＡＤ＋消費に関与している酵素は、例えば、ＰＡＲＰ、サーチュインまたはＣＤ３８であり得る。一部のこのような方法は、乳がんまたは卵巣がんの予後判定または診断に関するものである。一部のこのような方法では、がんがＥＲ陽性乳がんまたは低悪性度乳がんである。
【００１４】
一部の方法では、ＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比が抗ホルモン療法の前または抗ホルモン療法中に測定される。一部の方法では、工程（ｂ）が、患者のがんの測定されたＮＡＭＰＴレベル、ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比を、がんの再発または遠隔転移と関連している１つ以上の参照レベルと比較することを含む。一部の方法では、工程（ｂ）が、さらに、被験体のがんの測定されたレベルを、該患者が、がんの再発または遠隔転移の高いリスクを有するかどうかの表示をもたらす値または表記に割り付けることを含む。一部のこのような方法では、割り付けられる値または表記が、がんの再発または遠隔転移の高いリスクを有する抗ホルモン療法で処置されたがん患者のレベル範囲と関連させた正規化されたスケール値に基づいたものである。
【００１５】
本発明の性質および利点のさらなる理解は、本明細書の残りの部分および特許請求の範囲を参照することにより認識され得よう。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）合成サルベージ経路の概略を示す。ビタミンＢ３：ニコチンアミド（ＮＡＭ，ナイアシンアミドとしても知られている）は、食事で得られるＮＡＤ＋前駆体である。ＮＡＭもまた、ＮＡＤ＋消費の産物である。ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）はＮＡＭの利用と再利用に必須の酵素である。ＮＡＭＰＴは、ＮＡＤ＋の生合成の第１工程であるＮＡＭとホスホリボシルピロリン酸（ＰＲＰＰ）の縮合（によりニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ＋）が得られる）を触媒する。ニコチンアミドモノヌクレオチドアデニリルトランスフェラーゼ（ＮＭＮＡＴ）は、ＮＡＤ＋合成の第２工程と最後の工程を触媒する。
【図２】図２は、ＮＡＭＰＴ発現レベルがヒト乳房腫瘍におけるエストロゲン受容体αの状態と相関していることを示す。エストロゲン受容体（ＥＲ）陰性（ｎ＝３９５）およびＥＲ陽性腫瘍（ｎ＝１２２５）におけるＮＡＭＰＴ  ｍＲＮＡの発現の箱ひげ解析（Ｐ＜０．００００１）。
【図３】図３は、低ＮＡＭＰＴ発現では、ヒトＥＲ陽性乳がん細胞株ＭＣＦ７およびＴ４７Ｄにおいて４−ヒドロキシタモキシフェン耐性が誘導されることを示す。ＮＡＭＰＴノックダウン（ｓｈＮＡＭＰＴ）により、ＭＣＦ７およびＴ４７Ｄ細胞において、スクランブル（ｓｃｒａｍｂｌｅｄ）ｓｈＲＮＡ（ｓｈＣｔｒｌ）で形質導入した対照と比べてＮＡＭＰＴの（Ａ）ｍＲＮＡおよび（Ｂ）タンパク質の発現が低減された。（Ａ）ＮＡＭＰＴ  ｍＲＮＡレベルはリアルタイムＰＣＲによって解析し、β−Ｄ−グルクロニダーゼ（ＧＵＳＢ）に相対して示している（＊＊＊Ｐ＜０．００１）（ｎ＝３）。（Ｂ）ＮＡＭＰＴタンパク質の発現はウエスタンブロット解析によって解析した。ＮＡＭＰＴタンパク質の定量をβ−チューブリンの発現と関連付けた。（Ｃ）ＮＡＭＰＴノックダウン（ｓｈＮＡＭＰＴ）により、ＭＣＦ７およびＴ４７Ｄ細胞において、スクランブルｓｈＲＮＡ（ｓｈＣｔｒｌ）で形質導入した対照と比べて細胞内ＮＡＤ＋が低減された。細胞内ＮＡＤは、１×１０６細胞の全細胞抽出物において解析した。代謝産物濃度は、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ蛍光検出キット（Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）を用いて測定し、タンパク質含有量に対して正規化した。（Ｄ）未処理または０．００１、０．０５、０．１、１もしくは５μＭの４−ヒドロキシタモキシフェン（タモキシフェンの活性代謝産物）で１４日間処理した対照（ｓｈＣｔｒｌ）とＮＡＭＰＴ−ノックダウン（ｓｈＮＡＭＰＴ）ＭＣＦ７およびＴ４７Ｄ細胞（対比）の増殖。増殖はクリスタルバイオレット染色に基づいて測定し、未処理細胞の増殖に対する％として示している。群間を、対応なしの両側のスチューデントのｔ検定により、ｎ＝４で比較した（＊＊＊Ｐ＜０．００１，＊＊Ｐ＜０．０１  ＊Ｐ＜０．０５）。
【図４】図４は、ＮＡＤ＋前駆体であるニコチンアミドでの処理によりＭＣＦ７およびＴ４７Ｄ細胞における低ＮＡＭＰＴ誘導性タモキシフェン耐性がブロックされること、ならびにＮＡＤ＋前駆体での処理またはＮＡＭＰＴの下方調節はＭＣＦ７細胞におけるエストロゲン受容体α（ＥＲα）の発現および核内局在に影響しないことを示す。（Ａ）１μＭまたは０．１μＭの４−ヒドロキシタモキシフェン（タモキシフェンの活性代謝産物）にそれぞれ１４日間曝露した対照（ｓｈＣｔｒｌ）とＮＡＭＰＴ−ノックダウン（ｓｈＮＡＭＰＴ）ＭＣＦ７およびＴ４７Ｄ細胞（対比）の増殖に対するニコチンアミド処理（１０ｍＭ  ＮＡＭ）の効果。増殖はクリスタルバイオレット染色に基づいて測定し、未処理細胞（４−ヒドロキシタモキシフェンなし，ＮＡＭなし）の増殖に対する％として示している。群間を、対応なしの両側のスチューデントのｔ検定により、ｎ＝４で比較した（＊＊＊Ｐ＜０．００１，＊＊Ｐ＜０．０１  ＊Ｐ＜０．０５）。（Ｂ）ＮＡＭＰＴ  ＫＤ細胞は低いＮＡＤ＋絶対レベルを示し、ニコチンアミド処理により、対照（ＣＴ）またはＮＡＭＰＴ  ＫＤ（ｓｈＮＡＭＰＴ）乳がん細胞の両方においてＮＡＤ＋およびＮＡＤＨレベルが誘導される。ＮＡＤ＋とＮＡＤＨを独立して、１×１０６細胞の全細胞抽出物において解析した。代謝産物濃度は、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ蛍光検出キット（Ｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）を用いて測定した。（Ｃ）１０％のＦＢＳを補給したＥＭＥＭ培地中１０ｍＭのニコチンアミドで７日間の細胞処理後に測定したＭＣＦ７  ｓｈＣＴまたはｓｈＮＡＭＰＴ細胞内のＥＲαの分布。ＥＲαの局在を免疫蛍光により、抗ＥＲαクローンＳＰ１（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ）を用いて検出した。核はＤＡＰＩ染色によって検出した。代表的な画像を示す。
【図５】図５は、ＮＡＤ＋前駆体であるニコチンアミドおよびニコチンアミドリボシドによりＥＲ＋／低ＮＡＭＰＴ乳がん細胞におけるタモキシフェン感受性が回復することを示す。ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）はニコチンアミドよりも、低ＮＡＭＰＴ誘導性タモキシフェン耐性のブロックにおいて効率的であった。１または５μＭの４−ヒドロキシタモキシフェン（タモキシフェンの活性代謝産物）で７日間、（Ａ）１、５もしくは１０ｍＭのニコチンアミド（ＮＡＭ）または（Ｂ）１もしくは５ｍＭのニコチンアミドリボシド（ＮＲ）とともに、またはなしで処理した対照（ｓｈＣＴ）とＮＡＭＰＴ−ノックダウン（ｓｈＮＡＭＰＴ）ＭＣＦ７細胞（対比）の増殖。増殖はクリスタルバイオレット染色に基づいて測定し、未処理細胞（４−ヒドロキシタモキシフェンなし）の増殖に対する％として示している。群間を、対応なしの両側のスチューデントのｔ検定により、ｎ＝４で比較した（＊＊＊Ｐ＜０．００１，＊＊Ｐ＜０．０１  ＊Ｐ＜０．０５）。
【図６】図６は、低ＮＡＭＰＴ発現では、ＭＣＦ７  ＥＲ陽性ヒト乳がん細胞においてエストロゲン非依存性増殖が誘導されることを示す。（Ａ）１０％のＦＢＳを補給したＥＭＥＭ培地中、または１０％のチャコール処理済エストロゲン無含有ＦＢＳを補給したフェノールレッド無含有ＥＭＥＭ中で７日間培養した対照（ｓｈＣｔｒｌ）とＮＡＭＰＴノックダウン（ｓｈＮＡＭＰＴ）ＭＣＦ７細胞（対比）の増殖。増殖は、７日間の培養後にクリスタルバイオレット染色によって測定した。群間を、対応なしの両側のスチューデントのｔ検定により、ｎ＝３で比較した（＊＊＊Ｐ＜０．００１）。（Ｂ）１０％のチャコール処理済ＦＢＳを補給したエストロゲン無含有フェノールレッド無含有ＥＭＥＭ培地中で培養した対照（ｓｈＣｔｒｌ）とＮＡＭＰＴノックダウン（ｓｈＮＡＭＰＴ）ＭＣＦ７細胞（対比）の増殖。ＭＣＦ７細胞は処理しないか、または１０ｎＭの１７−β−エストラジオール（Ｅ２）で、１μＭの４−ヒドロキシタモキシフェンの非存在下または存在下（Ｅ２，Ｅ２＋４−ＯＨＴ）で７日間、１０ｍＭのニコチンアミド（ＮＡＭ）とともに、またはなしで処理した。増殖は、７日間の培養後にクリスタルバイオレット染色によって測定した。群間を、対応なしの両側のスチューデントのｔ検定により、ｎ＝３で比較した（＊Ｐ＜０．０５，＊＊＊Ｐ＜０．０１，＊＊＊Ｐ＜０．００１）。（Ｃ）ＮＡＤ＋レベルの変化は、ＥＲαの細胞成分内局在に影響を及ぼす。エストロゲンを７２時間欠乏させた後、１０ｎＭの１７−β−エストラジオール（Ｅ２）または１ｎＭのＥ２＋１０ｍＭのＮＡＭで２４時間処理したＭＣＦ−７  ｓｈＣＴおよびＭＣＦ−７  ｓｈＮＡＭＰＴ細胞内のＥＲαの分布。エストロゲンの欠乏および処理は、１０％のチャコール処理済ＦＢＳを補給したフェノールレッド無含有ＥＭＥＭ中で行った。ＥＲαを免疫蛍光により、Ｐｉｅｒｃｅ抗ＥＲα抗体（ＭＡ１−３９５３９）を用いて検出した。すべての条件の代表的な画像を示す。
【図７】図７は、ＭＣＦ７  ＥＲ陽性ヒト乳がん細胞における低ＮＡＭＰＴ発現では、マウスモデルにおいてエストロゲン非依存性腫瘍形成能が誘導されることを示す。ＭＣＦ７対照（ｓｈＣＴ）またはＮＡＭＰＴノックダウン（ｓｈＮＡＭＰＴ）細胞の移植によって誘導されたＳＣＩＤマウスにおける乳房脂肪パッド腫瘍のサイズ。マウスには、ＭＣＦ７対照細胞による腫瘍形成に必要なエストロゲンによる増殖刺激を消去するため、１７−β−エストラジオールペレットを埋め込まなかった。腫瘍サイズはキャリパー測定によって解析した（ｍｍ３）。箱ひげ図において、上の線は７５％四分位、下の線は２５％四分位、真ん中の線は中央値、ひげは最小値および最大値を表す。ノンパラメトリックマンホイットニー検定による群間比較（＊＊＊Ｐ＜０．００１）（ｎ＝７）。
【図８】図８は、ＮＡＤ＋前駆体であるニコチンアミドでの処理によりＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（トリプルネガティブヒト乳がん細胞株）のタモキシフェンに対する耐性がブロックされることを示す。未処理または０．５、１もしくは５μＭの４−ヒドロキシタモキシフェン（タモキシフェンの活性代謝産物）で１４日間、１０ｍＭのニコチンアミド（ＮＡＭ）での処理とともに、またはなしで処理したトリプルネガティブ乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞の増殖。増殖はクリスタルバイオレット染色に基づいて測定し、未処理細胞（４−ヒドロキシタモキシフェンなし，ＮＡＭなし）の増殖に対する％として示している。群間を、対応なしの両側のスチューデントのｔ検定により、ｎ＝３で比較した（＊＊Ｐ＜０．０１）。
【図９】図９は、グルコース枯渇によりヒト乳がん細胞におけるＮＡＭＰＴ発現が上方調節されることを示す。５ｍＭまたは０．１ｍＭのグルコースおよび１０％の透析ＦＢＳを含有する培地中で４８時間培養した親ＭＣＦ７細胞におけるＮＡＭＰＴ  ｍＲＮＡ発現レベル。ＮＡＭＰＴ  ｍＲＮＡレベルはリアルタイムＰＣＲによって解析し、ＧＵＳＢに相対して示している。群間を、対応なしの両側のスチューデントのｔ検定により、ｎ＝３で比較した（＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
【図１０】図１０は、高ＮＡＭＰＴレベルが低悪性度の乳がんおよびＥＲ陽性乳がんにおける良好な予後と相関していることを示す。（Ａ）エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性腫瘍または（Ｂ）グレード１の乳がん（受容体の状態に関係なく）を有する患者における無再発生存率（ＲＦＳ）（左パネル）または無遠隔転移生存率（ＤＭＦＳ）（右パネル）の１０年間にわたるカプランマイヤー解析，高ＮＡＭＰＴ（上の線，−０．１５〜３．９７のＬｏｇ２相対発現）または低ＮＡＭＰＴ（下の線，−２．３５〜−０．１５のＬｏｇ２相対発現）のいずれかで示している；（Ａ）高ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝５２）または低ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝１３８）におけるＲＦＳ，（ｐ＝０．０００９１）；高ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝６６）または低ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝７５）におけるＤＭＦＳ，（ｐ＝０．００３９２）；（Ｂ）高ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝２００）または低ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝５３８）におけるＲＦＳ，（ｐ＝０．０００１４）；高ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝３６１）または低ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝４９５）におけるＤＭＦＳ，（ｐ＝０．００００５）。
【図１１】図１１は、高ＮＡＭＰＴレベルが、タモキシフェンで処置したＥＲ陽性乳がんを有する患者における良好な予後と相関していることを示す。未処置またはタモキシフェン処置したＥＲ陽性乳がんを有する患者における無遠隔転移生存率（ＤＭＦＳ）の１０年間にわたるカプランマイヤー解析を、高ＮＡＭＰＴ（上の線，−０．３５５〜３．８５８のＬｏｇ２相対発現）または低ＮＡＭＰＴ（下の線，−２．３５１〜−０．３５５のＬｏｇ２相対発現）で示す。未処置の高ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝１９７）と低ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝２４０）（対比）におけるＤＭＦＳ，（Ｐ＝０．０８６０９）。タモキシフェン処置した高ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝１９６）と低ＮＡＭＰＴ腫瘍（ｎ＝１０３）（対比）におけるＤＭＦＳ，（Ｐ＝０．０８６０９）。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
Ｉ．序論
乳がん手術後の補助的抗ホルモン療法により平均余命が長くなる。タモキシフェンなどのエストロゲン受容体（ＥＲ）拮抗薬での処置は、ＥＲ陽性（ＥＲ−α）乳がんを有する閉経前の患者において局所および転移性の再発が発生するリスクを低下させ得る。しかしながら、重要な一部のＥＲ陽性患者（３０〜４０％）は、抗ホルモン治療しているにもかかわらず、遠隔転移を発生する。エストロゲンレベルを全身的に低下させることを目的とした化合物であるアロマターゼ阻害薬は、閉経後の患者のＥＲ陽性乳がんにはタモキシフェンよりも有効な処置薬であることが示されている。とは言え、抗ホルモン補助療法は、５年より長く受けることは推奨されていない。したがって、これらすべての理由で、現在の治療を改善するため、およびＥＲ陽性腫瘍を有した患者であって、抗ホルモン処置の終了後に再発しそうな患者を認定するための臨床的必要性が存在している。
【００１８】
ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）は、（プレＢ細胞コロニー分泌促進因子（ｐｒｅ−Ｂ−ｃｅｌｌ  ｃｏｌｏｎｙ−ｅｎｈａｎｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  １（ＰＢＥＦ１））またはビスファチンとしても知られている）は、食事によるＮＡＤ＋前駆体からのニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）生成、ならびにＮＡＤ＋サルベージ経路によるＮＡＤ＋再生の鍵となる酵素である。ＮＡＭＰＴは、ニコチンアミド（ＮＡＭ）（ナイアシンアミドまたはビタミンＢ３としても知られている）のニコチンアミドモノヌクレオチド（ＮＭＮ＋）への変換を触媒する（ホスホリボシルピロリン酸（ＰＲＰＰ）が共基質として使用される）。次いで、ＮＭＮ＋は、ニコチンアミドヌクレオチドアデニリルトランスフェラーゼ（ＮＭＮＡＴ）によってＮＡＤ＋に変換される。数百の代謝反応に加えて、ＮＡＤ＋はまた、ＮＡＤ＋消費酵素、例えば、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）、サーチュインおよびＣＤ３８によっても利用される（図１）。このようなタンパク質は、ＤＮＡ損傷の修復機構、細胞増殖、オートファジー、アポトーシス、細胞内代謝および種々の他の経路に関与している。ＮＡＤ＋消費酵素は、ＮＡＭを反応の副生成物として生成させる。ＮＡＭＰＴは、細胞内ＮＡＤ＋レベルの回復における必須のタンパク質である。ＮＡＤ＋は、主に解糖、グルタミノリシスおよびＴＣＡ回路における異化反応によってＮＡＤＨに還元され得る。ＮＡＤＨは、酵素反応の補因子として、またはエネルギー生産のための電子伝達系においてミトコンドリア複合体Ｉによって利用される。
【００１９】
腫瘍細胞、具体的には、高度に増殖性のＥＲ陰性または基底様乳がん細胞は、一般的に、高レベルのＤＮＡ損傷、ゲノム不安定性が蓄積され、高いＰＡＲＰ活性依存性を有する。ＰＡＲＰは、腫瘍細胞が細胞バイアビリティを維持するためにＮＡＤ＋を多く必要とすることと相関するＮＡＤ＋消費性ＤＮＡ損傷修復タンパク質である。当該技術分野において、高ＮＡＭＰＴ発現は、腫瘍細胞の生存をストレス下であっても、細胞内ＮＡＤ＋レベルをサポートすることにより高めることが示唆されている。例えば、Ｋｒｉｓｈｎａｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  ３９，８−２４（２０１０）；Ｂａｊｒａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４，１０８７−９６（２０１２）；およびＨｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ５，１２２９−１２３１（２００９）を参照のこと。一貫して、本発明者らは、乳がん遺伝子アレイデータベースを、Ｒｉｎｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６，ｅ１７９１１，２０１１）に報告された１８８１例の乳がん患者の転帰データと組み合わせて解析し、当該技術分野における他の報告（例えば、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ  Ｐｒｅｖ．２０，１８９２−９０１，２０１１）と合致してＥＲ陰性乳がんがＥＲ陽性乳がんよりも有意に高いレベルのＮＡＭＰＴ発現を有する（図２）ことを見出した。また、高ＮＡＭＰＴレベル（これは、高ＮＡＤ＋レベルまたは高速ＮＡＤ＋再生を誘導する）により、多くの化学療法アプローチの根拠である遺伝毒性療法に対する抵抗性が誘導され得ることも示唆されている。例えば、Ｆｏｌｇｕｅｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１，７４３４−４３（２００５）を参照のこと。したがって、劇的な細胞内ＮＡＤ＋枯渇を誘導することを目的としたＮＡＭＰＴ単独の化学的阻害、またはＰＡＲＰ阻害薬との併用での化学的阻害が、トリプルネガティブ乳がんに対する治療アプローチとして提案されている（例えば、Ｂａｊｒａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４，１０８７−９６，２０１２参照）。
【００２０】
ミトコンドリアＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ（複合体Ｉ）は、ミトコンドリア電子伝達系（ＥＴＣ）の最初の酵素である。ＮＡＤＨを基質として使用して複合体Ｉは電子をユビキノンに伝達し、プロトンがミトコンドリア膜内腔（ｉｎｔｒａｍｅｍｂｒａｎｅ  ｓｐａｃｅ）内にポンプされ、これにより、最終的にＡＴＰシンターゼよるＡＴＰ産生がもたらされる。また、複合体Ｉは、ＮＡＤＨデヒドロゲナーゼとしてのその主要活性によってミトコンドリア内および細胞内のＮＡＤ＋／ＮＡＤＨバランスを調節する。高い細胞内ＮＡＤ＋レベルをもたらすミトコンドリア複合体Ｉの活性の向上により、乳がん細胞において急速進行型表現型が抑止される（Ｓａｎｔｉｄｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２３：１０６８−１０８１，２０１３）。しかしながら、当該技術分野では、ミトコンドリア複合体Ｉの活性の向上によりまた、ＮＡＤ＋レベルの上昇によって、代謝ストレスを誘導するアプローチの抗増殖効果がブロックされ（Ｓａｎｔｉｄｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２３：１０６８−１０８１，２０１３）、ビグアニド（例えば、メトホルミン）として知られる抗がん薬の治療効果が劇的に抑止される（Ｂｉｒｓｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ５０８：１０８−１１２，２０１４）ことが知られている。
【００２１】
当該技術分野における上記の教示に鑑みると、ＥＲ陽性乳がん細胞におけるＮＡＭＰＴの低発現が低ＮＡＤ＋レベルまたは低ＮＡＤ＋再生能と関連しているかもしれないことが予測され得る。また、ＮＡＭＰＴの低発現では、該細胞が、遺伝毒性および細胞ストレス誘導性の治療処置、例えば、最も広く使用されているＥＲ標的化抗ホルモン療法またはアプローチに対して良好な応答性を示すようになることが予測され得る。さらに、ＮＡＤ＋前駆体での処置により、ＥＲ陽性乳がんにおける抗ホルモン療法の有効性が抑止され、この治療の増殖ブロック効果が打ち消されるかもしれないことが予測され得る。
【００２２】
本発明は、一部において、抗ホルモン療法の有効性がＮＡＤ＋レベルの上方調節によって有意におよびかなり向上し得るという本発明者らの驚くべき発見を根拠とするものである。上記のように、当該技術分野では、本発明以前は、ＮＡＤ＋合成サルベージ経路の阻害が将来有望な抗がん治療と考えられていた。例えば、Ｇａｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５６：６２７９−６２９６，２０１３；およびＳｈａｃｋｅｌｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｃａｎｃｅｒ  ４：４４７−４５６，２０１３を参照のこと。ＮＡＤ＋前駆体での処置は、単独薬剤として、ｍＴＯＲ活性のモジュレーションおよびオートファジーの誘導によって腫瘍の進行を抑止し得ることが報告された（Ｓａｎｔｉｄｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２３：１０６８−１０８１，２０１３）が、当該技術分野では、オートファジーの誘導により、ストレス下での腫瘍細胞の生存がサポートされることによって腫瘍形成が促進され得ることもまた知られていた。例えば、Ｗｈｉｔｅ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  １２，４０１−１０，２０１２を参照のこと。かかるストレスは、がん治療によって誘導され得る。具体的には、オートファジーの誘導により、ＥＲ陽性乳がんの標準治療である抗ホルモン処置の効果が抑止され得ることが示されている（例えば、Ｃｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．１１，１２８３−９４，２０１１参照）。したがって、当該技術分野で知られていたことにより、ＮＡＤ＋前駆体での処置は抗ホルモン処置の有効性を妨げ得ること、およびこの処置は、したがって、抗ホルモン処置などの他のがん治療と併用すべきでないことが示唆され得る。
【００２３】
当業者に予測され得ることとは反対に、本発明者らは、ＮＡＤ＋前駆体での処置によって抗ホルモン療法の有効性が有意におよびかなり向上することを実証した。ＮＡＤ＋前駆体での処置により、処置しない場合では抗ホルモン療法に非感受性の乳がん細胞（例えば、トリプルネガティブ乳がんまたは非応答性ＥＲ＋乳がん細胞）が実際に感受性化され得るとともに、ＥＲ＋乳がん細胞の感受性が高まり、抗ホルモン療法に不応性になった乳がん細胞（例えば、ＥＲ陽性乳がん細胞）が再感受性化され得ることがわかった。また、本明細書に詳述しているように、ＮＡＤ＋合成サルベージ経路の鍵となる酵素であるニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＮＡＭＰＴ）の発現レベルが乳がんにおける抗ホルモン療法の有効性と正に相関していることもわかった。本発明者らは、さらに、ＮＡＤ＋レベル、ＮＡＤ＋合成もしくはサルベージ経路の活性またはＮＡＭＰＴ活性化の向上により、抗ホルモン療法で処置されていたＥＲ陽性乳がんを有する患者における処置抵抗性およびがん再発が劇的に低減され得ることを見出した。さらに、本発明者らは、ＮＡＤ＋前駆体で処置したトリプルネガティブ乳がん細胞が抗ホルモン療法に応答性になることを見出した。要約すると、本発明者らの研究により、ＮＡＤ＋前駆体での処置により、処置不応性であるか、または処置不応性になった腫瘍細胞が抗ホルモン療法に対して再感受性化または感受性化され得ること、およびＮＡＤ＋前駆体での処置が、抗ホルモン処置に抵抗性であるか、または抵抗性になった腫瘍細胞を有する患者に有益であり得ることが実証された。
【００２４】
このような発見に従い、本発明により、ＥＲ陽性がんの抗ホルモン処置の有効性を向上させるため、または抗ホルモン療法に抵抗性のがん細胞を再感受性化もしくは感受性化させるための方法を提供する。該方法は、抗ホルモン処置を受けたことがあるか、または現在受けている患者に、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元比を上方調節し得る化合物を投与することを伴うものである。本明細書に詳述しているように、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨバランス上方調節は、例えば、ＮＡＤ＋レベルを上方調節すること、ＮＡＤ＋合成もしくはサルベージ経路を向上させること、またはＮＡＭＰＴを活性化させるか、もしくはＮＡＭＰＴ発現を誘導することによって行われ得る。さらに、本明細書に開示するデータは、腫瘍におけるＮＡＭＰＴ発現が、抗ホルモン療法（例えば、タモキシフェン処置）中のがん進行の確率および抗ホルモン療法後のがん再発の確率を調べるためのバイオマーカーとして使用され得ることを示す。また、本発明により、抗ホルモン療法で処置した患者におけるがんの再発の尤度を評価するための診断用ツールを提供する。
【００２５】
ＮＡＤ＋上方調節を抗ホルモン処置と併用することにより、全乳がん症例の過半数であるＥＲ陽性乳がんを有する患者に対する標準治療である治療の大きな障害が解決される。本明細書において実証されたように、これはまた、最も急速進行型サブタイプの乳がんの１つであるＥＲ陰性乳がんの新しい処置選択肢を表す。現在、患者の生存率を限定的にしており、本発明の方法によって解決され得るこのような大きな障害としては、疾患進行、疾患再発、処置抵抗性および初期の処置応答性の停止が挙げられる。また、このようなものとしては、分子的特色に基づいて疾患進行または再発の高いリスクを有する患者を処置の開始時および処置中に認定する必要性も挙げられる。さらに、このようなものとしては、処置応答性の初期の指標ならびに連続的指標としての分子マーカーの同定も挙げられる。
【００２６】
ＮＡＤ＋前駆体での処置と抗ホルモン療法の併用は、患者の転帰を向上させるためにエストロゲン応答性のがんの処置に非常に有益であり得る。ＮＡＤ＋前駆体での処置の無毒性の性質、ＮＡＤ＋前駆体と抗ホルモン療法との併用、および抗ホルモン療法の持続期間より長期間のＮＡＤ＋前駆体での処置を考慮すると、この処置の併用により、乳がん患者および他のホルモン応答性腫瘍を有する患者の生存率が有意に向上し得る。かかる処置レジメンは、高レベルのＮＡＭＰＴを発現しているＥＲ陽性腫瘍を有する患者とともに低レベルのＮＡＭＰＴを発現しているＥＲ陽性腫瘍を有する患者にも適している。予後不良となるであろう低ＮＡＭＰＴ発現腫瘍を有する患者では、ＮＡＤ＋前駆体での処置によって生存期間が有意に長くなり得る。さらに、ＮＡＤ＋前駆体での処置によって抗ホルモン療法の抗増殖効果が向上し得るため、臨床的に効率的な低用量での抗ホルモン療法も可能になり、当該技術分野で現在、充分に確立されている５年間までを超える抗ホルモン療法の長期使用が可能になる。本発明者らによって見出されたこの併用療法による処置期間の長期化により、生活の質を保持したまま全般的な転帰が最適化され得る。最後に、ＮＡＤ＋前駆体での処置と抗ホルモン療法の併用は、本発明以前は通常、抗ホルモン療法で処置しないＥＲ陰性がん患者にも有益であり得る。
【００２７】
以下のセクションに、本発明の実施のためのより詳細な手引きを示す。
【００２８】
ＩＩ．定義
特に定義していない限り、本明細書で用いる科学技術用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。以下の参考文献は、当業者に、本明細書で用いている用語の多くの一般的な定義を提供するものである：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｏｒｒｉｓ（編），Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（第１版，１９９２）；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．（編），Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（改訂版，２０００）；Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉｃ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｋｕｍａｒ（編），Ａｎｍｏｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．（２００２）；Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（編），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（第３版，２００２）；Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｈｕｎｔ（編），Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ（第１版，１９９９）；Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｈｌｅｒ（編），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｔｅｌｏｓ（１９９４）；Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｋｕｍａｒ  ａｎｄ  Ａｎａｎｄａｎｄ（編），Ａｎｍｏｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．（２００２）；およびＡ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｐａｐｅｒｂａｃｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ），Ｍａｒｔｉｎ  ａｎｄ  Ｈｉｎｅ（編），Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（第４版，２０００）。また、以下の定義は、読み手が本発明を実施するのを補助するために示したものである。
【００２９】
オートファジー（ａｕｔｏｐｈａｇｙ）（または「ａｕｔｏｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ」）は、リソソームの作用による不必要な、または機能不全の細胞成分の細胞分解を伴う基本的な異化機構である。細胞成分の分解によって細胞エネルギーレベルが維持されることにより飢餓時の細胞の生存が確実になり得る。オートファジーは、調節されている場合は、細胞成分の合成、分解および再利用が確実である。このプロセス中、標的化された細胞質構成成分が細胞残部からオートファゴソーム内に隔離され、次いで、これはリソソームと融合し、分解または再利用される。オートファジーには、一般的に；マクロオートファジー、ミクロオートファジーおよびシャペロン介在性オートファジーと示される３つの異なる形態が存在する。疾患の状況では、オートファジーは生存に対する適応的応答とみなされているが、他の場合では、これは、細胞の死滅および病的状態を促進させるようである。
【００３０】
特に記載のない限り、用語「患者」、「被験体」および「哺乳動物」は互換的に用いており、哺乳動物、例えば、ヒト患者および非ヒト霊長類、ならびに実験動物、例えば、ウサギ、ラットおよびマウスならびに他の動物をいう。動物には、あらゆる脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類および爬虫類が包含される。
【００３１】
「処置する」または「処置」は、疾患の症状、合併症もしくは生化学的徴候の発生を予防もしくは遅延させるため、該症状を緩和するため、または疾患、病状もしくは障害（例えば、がん、転移性のがん、もしくは転移性乳がん）のさらなる発症を停止もしくは抑止するための本発明の抗体組成物、化合物または薬剤の投与を包含している。処置は、予防的（疾患の発生を予防もしくは遅延させるため、またはその臨床症状もしくは潜在性症状の発現を予防するため）であってもよく、疾患の発現後の症状の治療的抑制または緩和であってもよい。
【００３２】
「がん」または「悪性腫瘍」は同義語として用いており、細胞の制御不能な異常増殖、罹病細胞が局所または血流およびリンパ系によって身体の他の部分に拡延する（すなわち、転移する）能力を特徴とするいくつかの疾患の任意のもの、ならびにいくつかの特徴的な構造的および／または分子的特色の任意のものをいう。「がん性」または「悪性細胞」は、細胞が特定の構造的特性を有しており、分化がみられず、浸潤および転移し得るものであることであると理解されたい。がんの例は、乳房、肺、脳、骨、肝臓、腎臓、結腸、前立腺、卵巣および膵臓のがんならびに黒色腫である。例えば、ＤｅＶｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．編，Ｃａｎｃｅｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，第６版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ．，２００１を参照のこと。
【００３３】
「進行がん」は、もはや原発腫瘍部位に局在していないがん、または米国がん合同委員会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ）（ＡＪＣＣ）によるステージＩＩＩもしくはＩＶのがんを意味する。
【００３４】
「転移」または「転移性（の）」は、腫瘍細胞が原発腫瘍（例えば、乳がん）から拡延して原発腫瘍が発生した部位または原発腫瘍が確立された部位から遠隔の位置（例えば、肺、肝臓、骨または脳）に二次腫瘍病変部を確立する能力をいう。「転移性」細胞は、典型的には、原発腫瘍部位の隣接組織または原発腫瘍部位の周囲の身体構造部に浸潤して破壊し得るものである。
【００３５】
ＮＡＤ＋の合成またはデノボ産生は、ＮＡＤ＋が合成される２つの代謝経路のうちの１つである。ほとんどの生物体では、ＮＡＤ＋は単純な成分から合成される。具体的な反応セットは生物体間で異なるが、共通の特色は動物および一部の細菌ではトリプトファン（Ｔｒｐ）または一部の細菌および植物ではアスパラギン酸のいずれかのアミノ酸からのキノリン酸（ＱＡ）の生成である。キノリン酸は、ホスホリボース部分の転移によってニコチン酸モノヌクレオチド（ＮａＭＮ）に変換される。次いで、アデニル酸部分を転移されるとニコチン酸アデニンジヌクレオチド（ＮａＡＤ）が形成される。最後に、ＮａＡＤのニコチン酸部分がニコチンアミド（ＮＡＭ）部分にアミド化されるとニコチンアミドアデニンジヌクレオチドが形成される。さらなる工程では、一部のＮＡＤ＋が、ＮＡＤ＋をリン酸化するＮＡＤ＋キナーゼによってＮＡＤＰ＋に変換される。ほとんどの生物体では、この酵素はリン酸基の供給源としてＡＴＰを利用するが、いくつかの細菌（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）および超好熱性古細菌Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｈｏｒｉｋｏｓｈｉｉは、代替ホスホリル供与体として無機ポリリン酸（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ）を利用する。
【００３６】
ＮＡＤ＋サルベージ経路は、ニコチンアミドなどの既に形成された成分を再利用してＮＡＤ＋に戻すプロセスをいう。単純なアミノ酸前駆体からのＮＡＤ＋デノボ合成の他に、細胞では、ニコチンアミドを含有する既に形成された化合物もサルベージされる。他の前駆体も知られているが、ニコチンアミド環を含有し、このようなサルベージ代謝経路に使用される３つの天然化合物はニコチン酸（Ｎａ）、ニコチンアミド（ＮＡＭ）およびニコチンアミドリボシド（ＮＲ）である。このような化合物は食事から摂取され得、この場合、ニコチン酸とニコチンアミドの混合物はビタミンＢ３またはナイアシンと称される。しかしながら、これらの化合物は細胞内でも産生され、この場合、ニコチンアミド部分はＡＤＰ−リボース転移反応においてＮＡＤ＋から放出される。実際、このようなサルベージ経路に関与する酵素は細胞核内に濃縮されているようであり、これにより、この細胞小器官内でＮＡＤ＋を消費する高レベル反応が代償され得る。また、細胞は、その周囲環境から細胞外ＮＡＤ＋を取り込む場合もあり得る。
【００３７】
用語「処置する」または「緩和する」は、疾患の症状、合併症もしくは生化学的徴候（例えば、がんの再発もしくは転移）の発生を予防もしくは遅延させるため、該症状を緩和するため、または疾患、病状もしくは障害のさらなる発症を停止もしくは抑止するための被験体への化合物または薬剤の投与を包含している。用語「処置する」または「緩和する」は、さらに、別の治療の有効性を向上させるため、または別の治療に対する応答性を回復させるための被験体への化合物または薬剤の投与を包含している。処置を必要とする被験体としては、疾患または障害に既に苦しんでいる被験体、ならびに障害を発症するリスクがある被験体が挙げられる。処置は、予防的（疾患の発生を予防もしくは遅延させるため、またはその臨床症状もしくは潜在性症状の発現を予防するため）であってもよく、疾患の発現後の症状の治療的抑制または緩和であってもよい。疾患または障害の処置において、治療用薬剤は、疾患の病態を直接減弱させるものであってもよく、疾患を他の治療用薬剤によってより容易に処置されるようにするものであってもよい。
【００３８】
「〜と併用する」、「併用療法」および「併用製剤品」は、一部の特定の実施形態では、第１の治療用薬剤（例えば、既知の抗がん薬）と第２の治療用薬剤（例えば、本明細書に記載のＮＡＤ＋上方調節化合物）の被験体への同時進行投与をいう。特に指定のない限り、各成分は、同時投与または任意の順番で異なる時点で逐次投与され得る。したがって、各成分は別々に投与してもよいが、所望の治療効果がもたらされるように時間的に充分に近接して投与され得る。がんを処置するための既知の薬物と本発明の医薬組成物との「併用投与」は、該薬物とＮＡＤ＋上方調節化合物を含む該組成物とを、該既知の薬物と本発明の組成物の両方が治療効果を有するような時点で投与することを意味する。かかる併用投与は、本発明のＮＡＤ＋上方調節化合物の投与に対して該既知の抗がん薬を同時進行で（すなわち、同時に）、該投与の前に、または該投与後に投与することを伴うものであり得る。当業者により、本発明の具体的な薬物および組成物の適切な投与のタイミング、投与シーケンスおよび投薬量が難なく決定され得よう。
【００３９】
「投薬単位」は、処置対象の具体的な個体のための投薬ユニットとして適した物理的に独立した単位をいう。各単位には、所望の（１または複数の）治療効果がもたらされるように計算された予め測定された量の（１または複数の）活性化合物が、必要とされる医薬用担体を伴って含有され得る。投薬単位形態の仕様は、（ａ）（１または複数の）活性化合物の特有の特徴および得ようとする具体的な（１または複数の）治療効果、ならびに（ｂ）かかる（１または複数の）活性化合物の配合技術に内在する制限によって決定され得る。
【００４０】
「薬学的に許容され得る」、「生理学的に耐容性の」およびその文法的変化形は、組成物、担体、希釈剤および試薬をいう場合、互換的に用いており、該物質が、該組成物の投与が禁止され得る程度に望ましくない生理学的効果を生じることなくヒトに投与され得る、またはヒトに接触して投与され得ることを表す。
【００４１】
「治療有効量」は、疾患を処置するために被験体に投与されたとき、該疾患の処置がなされるのに充分な量を意味する。
【００４２】
本明細書で用いる場合、用語「投与」は、薬物、プロドラッグ、抗体もしくは他の薬剤または治療的処置を生理学的系（例えば、被験体またはインビボ、インビトロもしくはエキソビボでの細胞、組織および器官）に与える行為をいう。ヒトの身体への例示的な投与経路は、目（経眼（ｏｐｔｈａｌｍｉｃ））、口（経口）、皮膚（経皮）、鼻（経鼻）、肺（吸入）、口腔粘膜（口腔内）、耳からのもの、注射（例えば、静脈内、皮下、腫瘍内、腹腔内など）によるものなどであり得る。
【００４３】
本明細書で用いる場合、用語「新生物性疾患」は、良性（非がん性）または悪性（がん性）のいずれかである細胞または組織の任意の異常な増殖をいう。
【００４４】
本明細書で用いる場合、用語「退縮」は、罹病した被験体、細胞、組織または器官が、非病原性の基礎の例示的な被験体、細胞、組織または器官と比べて非病的または低病的状態に戻っていることをいう。例えば、腫瘍の退縮としては、腫瘍量の減少ならびに（１または複数の）腫瘍の完全な消失が挙げられる。
【００４５】
腫瘍悪性度は、腫瘍細胞および腫瘍組織が顕微鏡下でどれほど異常に見えるかに基づいた腫瘍の記述である。これは、腫瘍がどれほど急速に成長および拡延しそうかの指標である。腫瘍の細胞および腫瘍の組織の構成が正常な細胞および組織のものに近い場合、腫瘍は「高分化型」と称される。このような腫瘍は、異常な外観の細胞を有し、正常な組織構造を欠くものであり得る「未分化型」または「低分化型」の腫瘍よりも低速で成長および拡延する傾向にある。鏡検的外観のこのような違いおよび他の違いに基づき、医師は、ほとんどのがんに数値による「悪性度」を割り付ける。腫瘍悪性度を決定するために使用される要素は、異なる型のがん間で異なり得る。
【００４６】
腫瘍悪性度はがんの病期と同じではない。がんの病期は、最初の（原発）腫瘍のサイズおよび／または程度（範囲（ｒｅａｃｈ））ならびにがん細胞が体中に拡延しているか否かを示す。がんの病期は、原発腫瘍の位置、腫瘍サイズ、所属リンパ節転移（近隣リンパ節へのがんの拡延）および存在する腫瘍の数などの要素に基づいたものである
グレード分類システムは、がんの型に応じて異なる。一般に、腫瘍は、異常性の量に応じて１、２、３または４としてグレード分類される。グレード１の腫瘍では、腫瘍細胞および腫瘍組織の構成は正常に近い外観である。このような腫瘍は成長および拡延が遅い傾向にある。対照的に、グレード３およびグレード４の腫瘍の細胞および組織は正常な細胞および組織と外観が似ていない。グレード３およびグレード４の腫瘍は低悪性度の腫瘍よりも急速に成長し、高速で拡延する傾向にある。
【００４７】
乳がんでは、Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍグレード分類システム（また、Ｓｃａｒｆｆ−Ｂｌｏｏｍ−Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎグレード分類システムのＥｌｓｔｏｎ−Ｅｌｌｉｓ改良版（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）とも称される）が通常使用される。このシステムでは、乳房腫瘍を以下の特色：（１）腺管形成：腫瘍組織のうちどれだけ多くが正常な乳（ｂｒｅａｓｔ（ｍｉｌｋ））管構造を有しているか；（２）核グレード：腫瘍細胞の核のサイズおよび形状の評価；ならびに（３）分裂速度：どれだけ多くの分裂中の細胞が存在しているか（これは、どれだけ速く腫瘍細胞が成長および分裂しているかの尺度である）に基づいてグレード分類する。各カテゴリーで１〜３のスコアを得る；スコア「１」は、細胞および腫瘍組織の外観が正常な細胞および組織に最も似ていることを意味し、スコア「３」は、細胞および組織の外観が最も異常であることを意味する。次いで、３つのカテゴリーのスコアを足して３〜９の合計スコアを得る。３つのグレード分類が可能である：（１）合計スコア＝３〜５：Ｇ１（低悪性度または高分化型）；（２）合計スコア＝６〜７：Ｇ２（中悪性度または中分化型）；および（３）合計スコア＝８〜９：Ｇ３（高悪性度または低分化型）。
【００４８】
ＩＩＩ．抗ホルモン療法に対する不応性がんの再感受性化
ホルモン療法（または抗ホルモン療法）は、ＥＲ陽性がん（例えば、ＥＲ陽性乳がん）を処置するために一般的に使用される全身療法の一形体である。これは、ほとんどの場合、手術後、がんが復活するリスクを低減させるのを補助するための補助療法として使用されるが、術前補助療法処置として同様に使用される場合もあり得る。また、これは、処置後に復活したがん、または拡延したがんを処置するためにも使用される。女性の卵巣は、閉経まではホルモンエストロゲンの主要供給源である。閉経後は、量は少なくなるが、依然として身体の脂肪組織で生成され、この場合、副腎で生成されたホルモンがエストロゲンに変換される。エストロゲンは、ホルモン受容体陽性であるがんの成長を促進させる。乳がんの３例のうち約２例は、ホルモン受容体陽性である、すなわち、ホルモンエストロゲン（ＥＲ陽性がん）および／またはプロゲステロン（ＰＲ陽性がん）の受容体を含むものである。乳がんに対するホルモン療法のほとんどの型は、エストロゲンが乳がん細胞に作用することを止めるもの、またはエストロゲンレベルを低下させるもののいずれかである。この種の処置はホルモン受容体陽性乳がんに有用であるが、腫瘍がホルモン受容体陰性（ＥＲおよびＰＲのどちらも陰性）である患者には有用でない。
【００４９】
本明細書に記載の研究により、ＮＡＭＰＴ活性化の向上もしくは発現誘導またはＮＡＤ＋合成サルベージ経路もしくはＮＡＤ＋レベルの向上によって、抗ホルモン療法で処置したＥＲ陽性がん（例えば、乳がんまたは卵巣がん）の処置抵抗性および再発が劇的に低減され得ることが実証されている。さらに、ＮＡＤ＋前駆体での処置により、この治療に対して不応性になった、または以前は応答性でなかった腫瘍細胞、例えば、ＥＲ陽性およびＥＲ陰性のがん細胞が、抗ホルモン療法に再感受性化および感受性化され得ること、ならびに該処置により、抗ホルモン処置に抵抗性である、または抵抗性になった腫瘍細胞を有する患者が恩恵を被るであろうことが示されている。したがって、本発明により、処置抵抗性のがん細胞を抗ホルモン薬に再感受性化させるための方法、または処置不応性がん細胞に苦しんでいる被験体を抗ホルモン処置に再感受性化させるための方法を提供する。好ましい一部の実施形態では、処置対象の患者は既にホルモン療法を受けたことがあり、その過程で、継続的な補助的抗ホルモン処置に対して抵抗性を発現した患者である。本発明の組成物は、補助的抗ホルモン薬でのさらなる処置に対するがん細胞の感受性を増強し得るものである。一部の実施形態では、患者は、ホルモン療法および本発明のＮＡＤ＋上方調節組成物で逐次処置または同時処置され得る。
【００５０】
種々の薬物によるホルモン療法を受けている、または受けたことがある患者が本発明の方法での処置に適している。このようなものとしては、タモキシフェン、アロマターゼ阻害薬およびエストロゲン受容体下方調節薬、例えばフルベストラントが挙げられる。例えば、患者は、タモキシフェンで先に処置してもよく、本発明の治療用組成物とともに同時進行で処置してもよい。タモキシフェンは乳がん細胞のエストロゲン受容体をブロックする。これは、エストロゲンが該受容体に結合して該細胞を増殖および分裂させることを止めるものである。タモキシフェンは、乳房細胞においては抗エストロゲン様に作用するが、子宮および骨などの他の組織ではエストロゲン様に作用する。これは、一部の組織ではエストロゲン様に作用するが、他の一部の組織では抗エストロゲン様に作用するため、選択的エストロゲン受容体モジュレーターまたはＳＥＲＭと称される。ホルモン受容体陽性浸潤性乳がんを有する女性では、手術後５年間、タモキシフェンを服用すると、がんが復活する可能性が約半分低減され、患者がより長く生きることが補助される。また、これは他方の乳房における新たな乳がんのリスクを低下させる。最近のいくつかの研究では、タモキシフェンを１０年間服用することが、さらにより有用であり得ることが示されている。ホルモン受容体陽性である非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）に対して処置された女性では、タモキシフェンを５年間服用するとＤＣＩＳが復活する可能性が低下する。また、これは、浸潤性乳がんになる可能性も低下させる。また、タモキシフェンは、転移性乳がんを有する女性においても腫瘍の成長を止め、さらには縮小させ得る。また、これは、乳がんを発症するリスクが高い女性のリスクを低下させるためにも使用され得る。
【００５１】
抗ホルモン処置薬の他の例としては、トレミフェン（フェアストン（登録商標））、フルベストラント（フェソロデックス（登録商標））、アロマターゼ阻害薬（ＡＩ）、酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））およびアンドロゲン（男性ホルモン）が挙げられる。トレミフェンはタモキシフェンと同様の薬物である。これもまたＳＥＲＭであり、同様の副作用を有する。これは、転移性乳がんの処置のみに対して承認されている。この薬物は、タモキシフェンを使用しており、効かなくなった場合は、おそらく効かない。フルベストラントは、まずエストロゲン受容体をブロックし、次いで一時的に消去もする薬物である。これはＳＥＲＭではない、すなわち、全身において抗エストロゲン様に作用する。フルベストラントは、ほとんどの場合、他のホルモン薬（タモキシフェンなど、多くの場合、アロマターゼ阻害薬）が効かなくなった後に、進行（転移性乳がん）を処置するために使用される。これは、現在、ＦＤＡにより、もはやタモキシフェンまたはトレミフェンには応答しない進行乳がんを有する閉経後の女性における使用に対してのみ承認されている。これは、場合によっては、閉経前の女性において、多くの場合、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニストと併用して卵巣機能を止めるために「適用外」使用される（下記参照）。
【００５２】
アロマターゼ阻害薬（ＡＩ）は、患者においてエストロゲンレベルを低下させ得る薬物である。閉経後の女性におけるエストロゲン産生を止める３つの薬物：レトロゾール（フェマーラ）、アナストロゾール（アリミデックス）およびエキセメスタン（アロマシン）が、初期乳がんおよび進行乳がんの両方の処置に対して承認されている。これは、閉経後の女性において少量のエストロゲンの生成を担う脂肪組織内の酵素（アロマターゼ）をブロックすることにより奏功する。これは、卵巣がエストロゲンを生成するのを止めることはできないため、卵巣が機能していない（閉経後などの）女性においてのみ有効である。これらの薬物は丸剤として毎日服用される。これまで、これらの各薬物ならびにその他のものは、乳がんの処置に効くようである。いくつかの研究で、これらの薬物が、補助的（手術後の）ホルモン療法として閉経後の女性において、タモキシフェンと比較されている。これらの薬物の単独またはタモキシフェンの後のいずれかでの使用は、タモキシフェンを５年間使用するだけよりも、後にがんが復活するリスクが、より良好に低減されることが示されている。
【００５３】
酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ（登録商標））は、通常、がんがその他のホルモン処置薬に応答しない女性に対する進行乳がんのホルモン処置薬として使用され得るプロゲステロン様薬物である。その主な副作用は体重増加であり、これは、場合によっては、進行がんを有する患者の体重減少を逆転させるために高用量で使用される。アンドロゲン（男性ホルモン）は、他のホルモン処置薬が進行乳がんに対して試された後に考慮されるのは稀であり得る。これは、場合によっては有効であるが、体毛の増加および声が太くなるなどの男性的な特徴の発現が引き起こされ得る。
【００５４】
また、診断時にエストロゲン受容体αがなかったため、ホルモン療法を受けたことがない患者も本発明の方法での処置に適している。このようなものとしては、タモキシフェンまたはアロマターゼ阻害薬をＮＡＤ＋またはＮＡＭＰＴを上方調節する薬剤と合わせて使用することが挙げられる。がん細胞、例えばトリプルネガティブ乳がんは、他のエストロゲン受容体、例えばエストロゲン受容体βを抗ホルモン療法の潜在的標的として発現している場合があり得る。本発明の組成物は、ＥＲα陰性（ＥＲ陰性）乳がん細胞を補助的抗ホルモン薬での処置に対して感受性化し得るものである。これにより、現在、毒性で非効率的な処置にしか供され得ないこの群の患者に対して新しい処置選択肢が提供される。
【００５５】
ＩＶ．ＮＡＭＰＴまたはＮＡＤ＋を上方調節することによるホルモン療法の有効性の向上
本発明により、がんに苦しんでいる、またはがん発症リスクがある患者を処置するためのホルモン療法（補助的抗ホルモン療法）との併用に有用な組成物および治療レジメンを提供する。本発明の一部の組成物は、抗ホルモン療法のための薬剤（例えば、タモキシフェン）と本明細書に記載のＮＡＤ＋またはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元を上方調節するための薬剤の組み合わせを含有するものである。一部の態様では、本明細書に記載の治療用薬剤は、乳がんおよび卵巣がんの抗ホルモン処置の有効性を向上させるために使用される。乳がんでは、新たな症例（米国では年間１７３，８８０例）のうち７５％がＥＲ＋であり、抗ホルモン療法で処置可能なものである。これらのＥＲ＋症例のうち４０％は抗ホルモン療法に応答しない。卵巣がんでは、新たな症例（米国では年間１８，３０９例）のうち８６％がＥＲ＋である。ＮＡＤ＋前駆体による処置について本明細書において例示しているように、本発明者らは、抗ホルモン療法の有効性が、ＮＡＭＰＴを活性化させるため、ＮＡＭＰＴ発現を誘導するため、ＮＡＤ＋合成サルベージ経路を向上させるため、または他の様式でＮＡＤ＋レベルを上方調節するための手段によって向上し得ることを実証した。ＮＡＭＰＴの活性化または発現誘導、ＮＡＤ＋合成サルベージ経路の向上、または他の手段によるＮＡＤ＋レベルの上方調節により、抗ホルモン療法で処置したＥＲ陽性がん（例えば、乳がんまたは卵巣がん）の抵抗性および再発が劇的に低減され得る。したがって、本発明により、抗ホルモン療法を、ＮＡＤ＋レベル（もしくはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランス）またはＮＡＭＰＴの活性（酵素活性化もしくは発現誘導）を上方調節するレジメンを併用する治療方法を提供する。
【００５６】
また、この治療レジメンは、抗ホルモン療法で処置した患者のＥＲ陽性がんおよび他の腫瘍の再発および進行の予防にも使用され得る。例えば、標準治療と併用する場合、臨床的疾患症状の非存在を特徴とする無症候期間を長くするため、およびがん進行を低速化して全般的に患者の生存期間を長くするために、ＮＡＤ＋前駆体での処置によるＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ代謝のモジュレーションが、ＥＲ陽性乳がん再発の予防に使用され得る。有効性がＮＡＤ＋代謝のモジュレーションの恩恵を被る標準治療の治療薬は、本明細書に記載の抗ホルモン療法薬、例えば、抗エストロゲン薬（例えば、タモキシフェン）、アロマターゼ阻害薬、およびエストロゲン受容体下方調節薬、例えばフルベストラントである。これらは、閉経前および閉経後の状況でＥＲ陽性乳がんを有する患者に広く使用されている主要な治療薬である。また、抗ホルモン療法は、高リスクの女性において乳がんを予防するためにも使用される。
【００５７】
また、本発明の治療方法は、ＥＲ陰性乳がんの再発および進行の予防にも使用され得る。例えば、ＮＡＤ＋前駆体での処置によるＮＡＤ＋レベルの誘導が、原発腫瘍の外科的除去および／または放射線処置もしくは化学療法処置後のトリプルネガティブ乳がん再発の予防に使用され得る。さらに、ＮＡＤ＋前駆体での処置により、トリプルネガティブ乳がんが抗ホルモン療法に対して感受性化され得る。ＮＡＤ＋前駆体と抗ホルモン共処置薬の併用により腫瘍再発が低減され得、患者の生存期間が長くなり得る。
【００５８】
任意のこのような状況において、ＮＡＤ＋代謝のモジュレーションにより、がん発症もしくはがん成長（例えば、乳がん）の予防が補助され得、がんを有する患者に対する抗ホルモン療法の治療有効性が向上され得、抗ホルモン療法後の疾患再発が予防され得、それに加えて、上記のように、抗ホルモン療法に抵抗性である、または抵抗性になった腫瘍細胞が再感受性化され得、トリプルネガティブ腫瘍細胞が抗ホルモン療法に対して感受性化され得る。これは、浸潤性または非浸潤性の原発腫瘍を有する患者（原発腫瘍の外科的除去の前および後）、ならびに転移性疾患を有する患者にも適用される。それにより、ＮＡＤ＋代謝の治療的モジュレーションによって標準治療との相乗効果が奏され得、患者の生存期間が長くなり得る。乳がん患者における使用に加え、タモキシフェンまたはアロマターゼ阻害薬などの抗エストロゲン薬は、卵巣がんなどの他の充実性腫瘍を有する患者を処置するためにも有用である。抗ホルモン療法で処置されていたこのような充実性腫瘍を有する患者もまた、ＮＡＤ＋上方調節処置と抗ホルモン療法との併用の恩恵を被る。
【００５９】
高レベルのＮＡＭＰＴを発現するＥＲ陽性腫瘍を有する患者ならびに低レベルのＮＡＭＰＴを発現するＥＲ陽性腫瘍を有する患者が、どちらも抗ホルモン処置とＮＡＤ＋上方調節処置（例えば、ＮＡＤ＋前駆体またはＮＡＭＰＴ発現の誘導による）の併用の恩恵を被り得る。低ＮＡＭＰＴ発現腫瘍を有する患者では、予後判定が不良な患者ほど、かかる併用処置によって生存期間が有意に長くなり得る。本発明の治療レジメンにより、ＥＲ陽性がん（例えば、乳がんおよび卵巣がん）の抗ホルモン処置に対する抵抗性が劇的に低減され得、以前に抗ホルモン療法で処置されたがんの再発がブロックされ得る。特に、ほとんどの乳がんはＥＲ陽性であり、したがって多くの場合、抗ホルモン療法で処置される。本発明の方法によるこの治療の有効性の向上と処置抵抗性および疾患再発の予防により、乳がん患者の生存率が有意に向上し得る。また、ＮＡＤ＋前駆体での処置によって抗ホルモン療法の抗増殖効果が向上するという本発明者らの観察結果に基づくと、ＮＡＤ＋上方調節により、臨床的に効率的な低用量での抗ホルモン療法が可能になり得、５年間までを超える抗ホルモン療法の長期使用が可能になり、生活の質を保持したまま全般的な転帰が最適化され得る。
【００６０】
また、トリプルネガティブ腫瘍を有する患者も、この新しい組み合わせによる処置選択肢の恩恵を被り得る。本明細書に記載のように、本発明の治療レジメンは、トリプルネガティブ腫瘍の再発を予防し、患者の生存率を有意に向上させ得るものである。
【００６１】
一般に、本発明の治療方法では、最終的にＮＡＤ＋レベルが上方調節され、がん処置の有効性が向上され得る薬剤が使用される。本発明の種々の実施形態において、ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元比を上方調節し得る薬剤が、抗ホルモン療法による処置を受けたことがある、または受けているがん患者に投与される。好ましい一部の実施形態では、該薬剤は、乳がんまたは卵巣がんの抗ホルモン処置の有効性を向上させるために使用される。以下に詳述するように、ＮＡＤ＋上方調節は、例えば、ＮＡＭＰＴの発現もしくは細胞内レベルを向上させること、またはＮＡＤ＋合成もしくはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを追加刺激することによって行われ得る。一部のこのような実施形態では、該方法は、ＮＡＤ＋前駆体の使用によってＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランス（ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比）を直接上方調節することに依存するものである。他の一部の実施形態では、治療効果は、例えば、ＮＡＭＰＴ発現の誘導によるＮＡＭＰＴ活性化によって得られる。
【００６２】
腫瘍細胞におけるＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスの上方調節は種々の手段によって行われ得る。このようなものとしては、ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元経路と非酸化還元経路の両方のモジュレーションが挙げられる。これらの経路はすべて、当該技術分野でよく知られた、または本明細書に記載の方法またはプロトコルに従ってモジュレートされ得る。いくつかのＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元経路は、モジュレートすると、本発明においてＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスが上方調節され得る。ＮＡＤ＋が合成されたら、これは、ＮＡＤＨに還元されて電子担体としての機能を果たすか、またはＮＡＤＰ＋にリン酸化され、さらにＮＡＤＰＨに還元されるかのいずれかである。ＮＡＤＨおよびＮＡＤＰＨは異化反応において酸化される。ＮＡＤＰ＋／ＮＡＤＰＨバランスは細胞内ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元状態に影響を及ぼす（例えば、Ｙｉｎｇ，Ａｎｔｉｏｘｉｄ．Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ．１０，１７９−２０６，２００８参照）。異化経路および同化経路などの細胞内ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスをモジュレートする治療標的となり得る経路としては、解糖経路、ペントースリン酸経路および細胞質基質内ＮＡＤ＋再生経路が挙げられる。
【００６３】
好気的解糖（ワールブルク効果）は、おそらく、腫瘍細胞においてみられる最も一般的な代謝性変化である。解糖によりＡＴＰ、ＮＡＤＨおよび重要代謝中間体が生成する。ＮＡＤ＋からのＮＡＤＨはＧＡＰＤＨによって生成する。ペントースリン酸経路は、ＮＡＤＰＨの生成に重要である（例えば、脂肪酸の合成およびグルタチオンの再生のため）、ならびにヌクレオチド生合成の重要中間体、例えばＮＡＤ＋の生成に重要である。ペントースリン酸経路はエネルギー経路ではないが、解糖中間体グルコース−６−Ｐによってもたらされる。この経路の活性化により、腫瘍サプレッサｐ５３によって制御され得る解糖フローが調節される。
【００６４】
また、細胞質基質内ＮＡＤ＋再生およびＮＡＤＨ細胞質基質／ミトコンドリア間シャトルの経路のモジュレーションも本発明に適している。高解糖速度はＮＡＤ＋レベルを低下させる。そのため、解糖自体およびセリン合成などのＮＡＤ＋依存性代謝反応が劇的に低減される。細胞質基質内のＮＡＤ＋を回復させるために、細胞は次の３つの経路を利用する：ａ）腫瘍細胞において高度に活性な乳酸デヒドロゲナーゼ。ｂ）グリセロール３−Ｐシャトル、これは、１個の電子が細胞質基質内ＮＡＤＨからミトコンドリアＦＡＤＨ２に移動し、これによりミトコンドリア複合体ＩＩがもたらされる。グリセロール３−Ｐシャトルの許容量は腫瘍細胞では低いことがわかった。ｃ）１個の電子が細胞質基質内ＮＡＤＨからミトコンドリアＮＡＤＨに移動する代替経路であるリンゴ酸アスパラギン酸シャトル。ミトコンドリアにおいて、複合体ＩによりＮＡＤＨからＮＡＤ＋が再生される。
【００６５】
本発明の実施におけるモジュレーションに適した他のＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元経路としては、脂質合成、クエン酸回路（ＴＣＡ）経路、グルタミノリシス、β酸化経路、ミトコンドリア呼吸経路、およびニコチンアミドヌクレオチドトランスヒドロゲナーゼ（ＮＮＴ）が挙げられる。これらの任意の経路のモジュレーションはすべて、直接または間接的にＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを改変し得る。ＮＡＤＰＨは、脂質合成中にＮＡＤＰ＋に酸化される（Ｋａｅｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４６５，５６２−４，２０１０）。ＴＣＡ回路は、代謝中間体ならびにＮＡＤＨおよびＦＡＤＨ２（これらは、それぞれ複合体Ｉおよび複合体ＩＩにＯＸＰＨＯＳをもたらす）の中心的供給源である。グルタミノリシス経路では、腫瘍は、ＮＡＤＨの生成によってエネルギーを生産するため、および重要代謝中間体を生成させるために高レベルのグルタミンを利用する。β酸化経路によりＮＡＤＨおよびＦＡＤＨ２が生成し、これらは、ミトコンドリア内への脂肪酸の輸送後、カルニチンシャトルによってＯＸＰＨＯＳをもたらす。ミトコンドリア呼吸経路に関して、ミトコンドリアの活動の向上によりＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ比の増大がもたらされる（Ｓａｎｔｉｄｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２３：１０６８−１０８１，２０１３）。ミトコンドリアの活動を向上させるための方策としては、カロリー制限またはグルコース枯渇を誘導または模倣するアプローチが挙げられる。さらに、ミトコンドリア複合体Ｉの活性を向上させるための方策、例えば、セレンまたはレスベラトロールでの処置によってＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ比の増大がもたらされ、これにより、さらに、抗ホルモン療法の有効性が向上し得る。例えば、Ｍｅｈｔａ，ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｉｎｆａｒｃｔ  ｖｏｌｕｍｅ  ａｆｔｅｒ  ｆｏｃａｌ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｉｓｃｈｅｍｉａ．ＢＭＣ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１３，７９，２０１２；およびＤｅｓｑｕｉｒｅｔ−Ｄｕｍａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８，３６６６２−７５，２０１３を参照のこと。最後に、ニコチンアミドヌクレオチドトランスヒドロゲナーゼ（ＮＮＴ）は、ミトコンドリア内に存在するプロトンポンプ酵素であり、ＮＡＤＰ＋をＮＡＤＰＨに還元し（ＮＡＤＨを電子供与体として利用する）、ミトコンドリア内のＮＡＤ＋レベルを増大させる。例えば、Ｇａｍｅｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８，１２９６７−７７，２０１３；およびＳｉｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８，１２９７８−１２９７８，２０１３；およびＯｌｇｕｎ，Ｂｉｏｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ  １０，５３１−４，２００９を参照のこと。
【００６６】
ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元経路以外に、腫瘍細胞におけるＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスの向上もまた、本発明の実施におけるＮＡＤ＋非酸化還元経路のモジュレーションによって実現され得る。このようなものとしては、例えば、ＮＡＤ＋合成またはＮＡＤ＋消費経路が挙げられる。合成されたら、ＮＡＤ＋は、ＮＡＤ＋依存性酵素（主にＰＡＲＰ、サーチュインまたはＣＤ３８）によって消費され得る。ＮＡＤ＋依存性酵素経路を調節するＮＡＤ＋合成または消費経路をモジュレートすることにより腫瘍細胞のＮＡＤ＋代謝の治療的向上を得るべき機会は数多く存在する。
【００６７】
ＮＡＤ＋合成のモジュレーションはＮＡＤ＋前駆体を使用することにより行われ得る。細胞内ＮＡＤ＋レベルは、前駆体、主にＮＡＭおよびＮＩＣからのＮＡＤ＋の生合成によって制御されるが、ニコチンアミドリボシド（ＮＲ）およびトリプトファンによっても制御される。他の潜在的前駆体としては、ＮＡＤ＋代謝中間体、例えば、キヌレニン、２−アミノ−３−カルボキシムコン酸−６−セミアルデヒドデカルボキシラーゼ、キノリン酸、ニコチン酸モノヌクレオチド、ニコチン酸アデニンジヌクレオチド、ニコチンアミドモノヌクレオチドが挙げられる（Ｙｉｎｇ，Ａｎｔｉｏｘｉｄ．Ｒｅｄｏｘ  Ｓｉｇｎａｌ．１０，１７９−２０６，２００８）。また、ＮＡＤ＋合成の調節は、ＮＡＤ＋の合成に関与している酵素の活性の発現をモジュレートすることによっても行われ得る。かかる酵素の例としては、ＮＲＫ１、ＮＲＫ２、ＱＰＥＴ、ＮＡＰＲＴ、ＮＭＮＡＴ１、ＮＭＮＡＴ２およびＮＭＮＡＴ３が挙げられる。例えば、Ｃｈｉａｒｕｇｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  １２，７４１−５２，２０１２を参照のこと。
【００６８】
また、本発明の実施におけるＮＡＤ＋レベルのモジュレーションは、ＮＡＤ＋消費経路を調節することによっても行われ得る。数百の代謝反応に加え、ＮＡＤ＋はまた、ＮＡＤ＋消費酵素、例えばＰＡＲＰ、サーチュインおよびＣＤ３８によっても利用される。例えば、Ｋｏｃｈ−Ｎｏｌｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５８５，１６５１−６，２０１１；Ｘｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｃｈ．Ａｇｅｉｎｇ  Ｄｅｖ．１３１，２８７−９８，２０１０；およびＩｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｏｂｅｓ．Ｍｅｔａｂ．１５  Ｓｕｐｐｌ  ３，２６−３３，２０１３；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４，２０４０８−１７，２００９；Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏａｎａｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．３：１３−２５，２０１１；Ｇａｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７０，８−１１，２０１０；およびＫｉｒｋｌａｎｄ，Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．１５，３−１１，２００９を参照のこと。また、任意のこのような酵素の酵素活性の発現のモジュレーションにより、腫瘍細胞においてＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスの改変がもたらされ得る。
【００６９】
ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルを直接モジュレートすること以外に、本発明の方法ではまた、ＮＡＭＰＴの発現または細胞内レベルを追加刺激し得る化合物または手段が使用され得る。例えば、該方法では、遺伝子治療を用いてＮＡＭＰＴレベルを向上させ、抗ホルモン療法後の腫瘍再発を予防することができる。遺伝子治療では、例えば、ＮＡＭＰＴの標的化発現のため、ＮＡＭＰＴをコードしている治療用導入遺伝子の腫瘍細胞特異的送達が使用され得る。あるいはまた、ＮＡＭＰＴ発現の向上は、幹細胞ベース遺伝子送達または腫瘍マーカー標的化遺伝子送達によって行われ得る。
【００７０】
他の一部の実施形態において、本発明の治療方法に使用される薬剤は、グルコース枯渇を誘導してＮＡＭＰＴ発現を向上させ得る化合物である。このようなものとしては、血液中のグルコースレベルを低下させ得る処置薬（メトホルミンなど）、腫瘍細胞によるグルコースの利用を阻害し得る処置薬（２−デオキシグルコースなど）、およびインスリンまたはＩＧＦのレベルを低下させ得る処置薬が挙げられる。
【００７１】
Ｖ．ホルモン療法の転帰の予後判定、診断およびモニタリング
本発明者らが実証したように、高ＮＡＭＰＴレベルは、タモキシフェン処置したＥＲ陽性乳がん患者における良好な予後および転帰と相関している。同様に、高ＮＡＤ＋レベルまたは高ＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベル比もまた、抗ホルモン療法後のがん再発の低リスクと相関している。したがって、腫瘍におけるＮＡＭＰＴ発現レベルおよび／またはＮＡＤ＋レベルは、抗ホルモン療法で処置した場合、処置下で進行するかまたは処置終了後に再発するリスクが高い患者を認定するための重要な指標であり得る。これらの測定値により、生存率を向上させるためのさらなる処置が必要であり得る、または該さらなる処置で最も恩恵を被り得る患者が認定され得る。例えば、腫瘍において低ＮＡＭＰＴレベルおよび／または低ＮＡＤ＋レベルを有し、抗ホルモン療法後にがん再発が起こりそうな患者の認定により、ＥＲ陽性がんを有する患者を処置し、全般的な転帰を改善するための早期の代替／さらなるストラテジーを採用することが容易になる。
【００７２】
したがって、本発明により、がんに対する抗ホルモン療法を受けたことがある、受けている、または受けるつもりである患者におけるホルモン療法の転帰または処置効果（例えば、がんの再発および転移）の予後判定、診断およびモニタリングための方法を提供する。一般に、診断は、患者の現在の病状の判定（例えば、再発の有無）であり、予後判定は、患者の将来的に進展する過程（例えば、将来的に再発が起こるリスクまたは処置に応答して改善する尤度）である。一部の実施形態では、がん患者（例えば、乳がんまたは卵巣がんに苦しんでいる被験体）は、抗ホルモン処置の効果がありそうかを診断または予後判定するためにかかる本発明の方法で検査され得る。好ましい一部の実施形態では、該方法は、乳がん、特にＥＲ陽性乳がんの抗ホルモン療法の診断または予後判定に関するものである。本発明の方法を用いてモニタリングされ得る処置効果としては、例えば、治療後の再発のリスク、遠隔転移および生存期間が挙げられる。
【００７３】
本発明の診断方法または予後判定方法は典型的には、ＮＡＭＰＴの発現もしくは細胞内レベル、ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比を、被験体に存在する、または被験体から採取した腫瘍細胞において測定することを伴うものである。測定は、好ましくは、抗ホルモン処置の開始前に行われる。また、処置中および処置後に、さらなる測定も行われ得る。腫瘍において測定されたＮＡＭＰＴ発現レベル（またはＮＡＤ＋レベルもしくはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比）を標準レベルまたは参照レベルと比較することにより、予後判定方法によって、抗ホルモン療法後に再発するリスクが高い乳がん（または卵巣がん）患者を認定することが可能になる。これにより、がんを有する患者を処置し、全般的な転帰を改善するための早期の代替手段またはさらなる手段を採用することが容易になり得る。
【００７４】
腫瘍におけるＮＡＭＰＴ発現レベル（またはＮＡＤ＋レベルもしくはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比）の測定は、当該技術分野で常套的に実施されている、または本明細書に具体的に例示した標準的な手法によって行われ得る。ＮＡＭＰＴの発現レベルはタンパク質レベルまたは核酸レベルで測定され得る。測定されるレベルは、発現産物の濃度の形の絶対的なものであってもよく、試料中の別の発現産物に対する目的の発現産物の相対濃度の形の相対的なものであってもよい。例えば、遺伝子の相対発現レベルは、試料中のハウスキーピング遺伝子の発現レベルに相対して示され得る。また、発現レベルを任意単位で、例えばシグナル強度に関連させて示してもよい。
【００７５】
一例としてＮＡＭＰＴ発現レベルを使用し、個々の発現レベルは、絶対的であれ相対的であれ、１つ以上の参照点との比較によって再発または転移の存在またはリスクの表示をもたらす値または他の表記に変換され得る。参照点としては、抗ホルモン療法を受けたことがあり、再発もしくは転移がない被験体におけるＮＡＭＰＴの平均発現レベルの測定値および／または抗ホルモン療法を受けたことがあり、再発もしくは転移を有する被験体における発現レベルの平均値が挙げられ得る。また、参照点としては、抗ホルモン療法を受けたことがあるがん患者（がん再発を有する患者、有しない患者を含む）においてみられるスケール値も挙げられ得る。かかる参照点は、試料において測定された値に関する絶対濃度または相対濃度の形で示され得る。
【００７６】
測定されたＮＡＭＰＴ発現レベルと参照レベル（１つまたは複数）間の比較のため、場合によっては、該参照レベル（１つまたは複数）との比較のために、測定されたレベルを正規化する（またはその逆の）必要がある。正規化は、がん再発または転移に無関連の発現レベルの変化（例えば、患者の全般的な健康状態の差または試料調製の差に由来するもの）を消去するため、または少なくとも最小限にする役割を果たす。正規化は、試料において測定された発現レベルのプロフィールの平均化にどの要素が必要とされるかを、参照レベルを求めた一組の参照試料における発現レベルを用いて決定することにより行われ得る。異なる組の発現レベル間でかかる正規化を行うための市販のソフトウェアが入手可能である。
【００７７】
測定されたＮＡＭＰＴ発現レベルと上記の１つ以上の参照点との比較により、がん再発に対する尤度または易発生性の値（すなわち、数値）または他の表記（例えば、記号もしくは文言（１つもしくは複数））を得る。一部の方法では、二元システムが使用される；すなわち、測定された遺伝子の発現レベルが、度合いに関係なく、がん再発の存在もしくは易発生性またはそれがないことを表示する値または他の表記に割り付けられる。例えば、発現レベルは、がん再発の存在または易発生性を示す＋１、およびがん再発の非存在または易発生性なしを示す−１の値に割り付けられ得る。かかる割り付けは、測定された発現レベルが、がん再発を有する乳がん患者における平均レベルに近いのか、またはがん再発を有しない乳がん患者における平均レベルに近いのかに基づいたものであり得る。他の方法では三元システムが使用され、この場合、発現レベルは、がん再発の存在もしくは易発生性またはそれがないことを表示する値または他の表記か、または発現レベルに情報価値はないという値または他の表記に割り付けられる。かかる割り付けは、発現レベルが、がん再発が起こっている乳がん患者における平均レベルに近いのか、がん再発がない乳がん患者における平均レベルに近いのか、またはかかるレベルの中間であるのかに基づいたものであり得る。例えば、発現レベルは、がん再発が起こっている患者における平均レベルに近いのか、がん再発が起こっていない患者における平均レベルに近いのか、または中間であるのかに応じて＋１、−１または０の値に割り付けられ得る。他の方法では、具体的な発現レベルがスケール値に割り付けられ、この場合、上限レベルは、患者ががん再発に対して易発生性であり得る規定の時点（例えば、術後１年目）における乳がん患者においてみられた最も高い発現レベルの尺度であり、該スケールの最も低いレベルは、乳がん患者においてみられた最も低い発現レベルの尺度である。好ましくは、かかるスケールは、同じスケールが異なる遺伝子にも使用され得るような正規化されたスケール（例えば、０から１まで）である。択一的に、測定された発現レベルのかかるスケール上の値は、スケールの上限レベルががん再発の存在もしくは易発生性またはそれがないことと関連しているかどうかに応じて陽性である、または陰性であると示される。用法が異なる遺伝子でも一貫している限り、がん再発またはそれがないことに対して、陽性という標示を使用しようが陰性という標示を使用しようが問題ではない。
【００７８】
一部の実施形態では、患者における抗ホルモン療法の効果の予後判定を得るために、腫瘍においてＮＡＭＰＴ発現レベルとＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比の両方が測定され得る。このような方法では、ＮＡＭＰＴ発現レベルおよびＮＡＤ＋／ＮＡＤＨレベルの比について得られた値または表記を合わせ、集計値が得られ得る。各レベルが、発現レベルががん再発の存在または易発生性を示す場合は＋１、および発現レベルががん再発の非存在または易発生性なしを示す場合は−１、および情報価値のない場合はゼロであってもよいスコアに割り付けられる場合、それぞれの値が足し算によって合わされ得る。スケールの上限点ががん再発の存在もしくは易発生性またはそれがないことと関連しているかどうかに応じて、各レベルが同じ正規化スケール上の値に割り付けられ、陽性である、または陰性であると割り付けられる場合、同じアプローチが使用され得る。疾患の個々のバイオマーカーの値を合わせ、単独マーカーとして使用され得る総合値にする他の方法は米国特許出願公開第２００４０１２６７６７号および国際公開第２００４／０５９２９３号に記載されている。
【００７９】
上記の方法により、患者における測定されたレベルの集計によって、抗ホルモン療法後、がんの再発もしくは転移を有している可能性があるかどうか、またはがんの再発もしくは転移が発生しそうかどうかを示す患者に関する値または他の表記が示され得る。かかる値は、患者が再発／転移のリスクを有する、もしくはそのリスクが高い、または逆に、再発／転移のリスクがない、もしくはそのリスクが低い、のいずれかであることの表示を示す。リスクは相対的用語であり、ある患者のリスクが他の患者のリスクと定性的または定量的のいずれかで比較される。例えば、ある患者の値が、再発を有する処置されたがん処置患者の集団のスケール値と比較され、該患者のリスクが他の患者のリスクと比べてどうであるかが判定され得る。
【００８０】
ＶＩ．医薬組成物およびキット
本明細書に開示したＮＡＭＰＴ発現、ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する薬剤（例えば、ＮＡＤ＋前駆体）とその他の治療用薬剤は、処置を必要とする被験体に直接投与され得る。しかしながら、このような治療用化合物は被験体に、該薬剤および／または他の活性薬剤を薬学的に許容され得る担体、希釈剤または賦形剤と一緒に含む単位投薬形態の医薬組成物で投与されることが好ましい。したがって、本発明により、１種類以上の本明細書に開示した薬剤を含む医薬組成物を提供する。また、本発明により、ホルモン療法の有効性を向上させるため、処置抵抗性がんを再感受性化させるため、または本明細書に記載の他の治療的適用のための医薬組成物または医薬の調製におけるこのような薬剤の使用を提供する。本発明の医薬組成物は、本明細書に記載の治療的適用または予防的適用のいずれかのために使用され得る。
【００８１】
典型的には、医薬組成物は、活性成分として、ＮＡＭＰＴ発現、ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを特異的に上方調節する化合物を含有している。一部の組成物は、ＮＡＭＰＴ発現、ＮＡＤ＋レベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する多種類（例えば、２種類以上）の化合物の組み合わせを含むものである。本明細書に記載のように、該組成物に、さらに、がんの再発または進行の処置または予防に適した他の治療用薬剤を含有させてもよい。活性成分は典型的には、１種類以上の薬学的に許容され得る担体を用いて製剤化される。医薬用担体は、組成物を強化もしくは安定化させるもの、または組成物の調製を容易にするためのものである。また、これは、その他の成分と適合性であり被験体に対して有害でないという意味において、薬学的および生理学的の両方で許容され得るものである必要がある。薬学的に許容され得る担体としては、生理学的に適合性である溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。使用される薬学的に許容され得る担体は、本明細書に記載の種々の投与経路に適したものである必要がある。例えば、安定性または薬理学的特性を向上させるため、ＮＡＭＰＴ発現（またはＮＡＤ＋レベルもしくはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランス）を上方調節する化合物を、投与前に担体タンパク質（オボアルブミンまたは血清アルブミンなど）と複合体形成してもよい。適切な薬学的に許容され得る担体を選択するためのさらなる手引きは、当該技術分野において、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，第２０版，２０００に示されている。
【００８２】
本発明の医薬組成物は、当該技術分野でよく知られ常套的に実施されている方法に従って調製され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，第２０版，２０００；およびＳｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこと。医薬組成物は、好ましくはＧＭＰ条件下で製造される。非経口投与のための製剤には、例えば、賦形剤、滅菌水もしくは生理食塩水、ポリアルキレングリコール（ポリエチレングリコールなど）、植物起源の油、または水素化ナフタレン（ｎａｐｔｈａｌｅｎｅ）が含有され得る。生体適合性生分解性のラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマーまたはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは、該化合物の放出を制御するために使用され得る。本発明の分子のための他の潜在的に有用な非経口送達系としては、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋込み可能な輸注システムおよびリポソームが挙げられる。吸入のための製剤は、賦形剤（例えば、ラクトース）を含有するものであってもよく、例えば、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココレートおよびデオキシコレートを含有する水性液剤であってもよく、経鼻滴剤の形態で、またはゲル剤としての投与のための油性液剤であってもよい。
【００８３】
医薬組成物は種々の形態に、例えば、顆粒剤、錠剤、丸剤、坐剤、カプセル剤、懸濁剤、軟膏、ローション剤などに調製され得る。製剤中の治療活性化合物の濃度は約０．１から１００重量％までで種々であり得る。治療用製剤は、製薬技術分野でよく知られた任意の方法によって調製される。治療用製剤は、処置に使用され得る任意の有効な手段によって送達され得る。例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｈａｒｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．編，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ（第１０版，２００１）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｅｎｎａｒｏ（編），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（第２０版，２００３）；およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｎｓｅｌ  ｅｔ  ａｌ．（編），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（第７版，１９９９）を参照のこと。
【００８４】
本発明の方法における使用のためのＮＡＭＰＴ発現（またはＮＡＤ＋レベルもしくはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランス）を上方調節する薬剤は被験体に、所望の治療効果（例えば、がんの再発または転移の解消または改善）がそれを必要とする被験体においてもたらされるのに充分な量で投与する必要がある。典型的には、治療に有効な用量または治療に効果がある用量の該薬剤が本発明の医薬組成物に使用される。本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投薬量レベルは、具体的な被験体、組成物および投与様式で被験体に対して毒性になることなく所望の治療応答が得られるのに有効な活性成分量が得られるように変更され得る。選択される投薬量レベルは、さまざまな薬物動態学的要素、例えば、使用される具体的な本発明の組成物の活性、投与経路、投与期間および使用される具体的な化合物の排出速度に依存する。また、処置持続期間、使用される具体的な組成物と併用して使用される他の薬物、化合物および／または物質、処置対象の被験体の年齢、性別、体重、体調、一般健康状態および既往歴などの要素にも依存する。至適投薬量を決定するための方法は、当該技術分野において、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，第２０版，２０００に記載されている。典型的には、医薬有効な投薬量は約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重（処置対象の被験体の）であり得る。
【００８５】
本明細書に記載のＮＡＭＰＴ発現（またはＮＡＤ＋レベルもしくはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランス）を上方調節する化合物および他の治療レジメンは通常、被験体に多数回に分けて投与される。各投薬間の間隔は、毎日、毎週、毎月または毎年であり得る。また該間隔は、被験体に使用している該化合物および該他の治療用薬剤の血液レベルを測定することにより示された時点という不規則なものであってもよい。一部の方法では、投薬量は、１〜１０００μｇ／ｍｌ、一部の方法では２５〜３００μｇ／ｍｌまたは１０〜１００μｇ／ｍｌの血漿中化合物濃度が得られるように調整される。あるいはまた、治療用薬剤を徐放製剤として投与してもよく、この場合、必要とされる投与頻度が低くなる。投薬量および頻度は、被験体における該化合物および該他の薬物の半減期に応じて異なる。投薬量および投与頻度は、処置が予防的であるか治療的であるかに応じて異なり得る。予防的適用では、比較的低い投薬量が比較的低頻度の間隔で長期間にわたって投与される。一部の被験体では、一生、処置を受けることが継続され得る。治療的適用では、疾患の進行が低減または停止するまで、好ましくは被験体が疾患の症状の一部または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投薬量が場合によっては必要とされる。その後、被験体には予防的レジメン（ｒｅｇｉｍｅ）が投与され得る。
【００８６】
また、本発明により、本明細書に開示の治療的適用を実施するためのキットを提供する。例えば、本発明により、抵抗性がん細胞を再感受性化させるため、またはＥＲ陽性がんもしくはＥＲ陰性がんに苦しんでいる被験体のがんの再発もしくは転移の処置のための治療用キットを提供する。本発明の治療用キットは典型的には、活性薬剤として、ＮＡＭＰＴレベルまたはＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ酸化還元バランスを上方調節する１種類以上の本記載の化合物を備えている。キットに、活性薬剤を投与するための適切な薬学的に許容され得る担体または賦形剤を含めてもよい。キットに適した薬学的に許容され得る担体または賦形剤は、コーティング、等張剤および吸収遅延剤、結合剤、接着剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、フレーバー剤、甘味剤、吸収剤、デタージェントおよび乳化剤であり得る。キットに含めることができる他の試薬としては、酸化防止剤、ビタミン、ミネラル、タンパク質、脂肪および炭水化物が挙げられる。
【００８７】
治療用キットに、さらに試薬を包装するための包装材を含めてもよく、該包装材内または該包装材上に注意事項を含めてもよい。キットに、さらに、使用のための適切な使用説明書およびキットの内容物の意図される使用を表示したラベルを含めてもよい。使用説明書は任意の書面または記録材に存在させ、キット上に、もしくはキットとともに供給するか、または別の様式でキットに付属させる。
【００８８】
本発明の治療用キットは、本明細書に記載の一部の治療的適用（例えば、ホルモン療法の有効性の向上）では単独で使用され得る。また、他の既知の治療レジメン（ｒｅｇｉｍｅｎｔ）と一緒に使用してもよい。例えば、ＥＲ陽性またはＥＲ陰性のがんに苦しんでいる被験体に、この治療用キットがホルモン療法のための既知の薬物（例えば、タモキシフェン）とともに使用され得る。本発明の治療用組成物および他の既知の処置レジメンは被験体に、本明細書に記載のように逐次投与しても同時投与してもよい。本発明のこのような治療的適用はすべて、キットの使用説明書に表示され得る。
【００８９】
［実施例］
以下の実施例は、本発明のさらなる実例を示すために示したものであって、本発明の範囲を限定するために示したものではない。本発明の他の変形例は、当業者に容易に自明となり、添付の特許請求の範囲に包含される。
【００９０】
［実施例１］
がん治療の有効性および抵抗性に影響を及ぼす代謝経路
腫瘍発生およびがん進行を駆動する機構をよりよく理解するため、本発明者らは、乳がん細胞における細胞内エネルギー代謝を解析した。本発明者らは、具体的には、腫瘍進行および治療抵抗性において役割を果たしている可能性のためＮＡＤ＋合成サルベージ経路に着目した。本発明者らは、主な型の乳がん処置に対する治療有効性および抵抗性の発現に影響を及ぼす具体的な代謝経路を特定した。
【００９１】
抗ホルモン療法に対するＥＲ陽性乳がん細胞の応答性に対するＮＡＭＰＴ発現の効果を直接解析するため、本発明者らは、ＮＡＭＰＴ発現のモジュレーションが、臨床的に広く使用されているＥＲアンタゴニストであるタモキシフェン（これは、その活性代謝産物４−ヒドロキシタモキシフェンを介して作用する）に対する腫瘍細胞の応答性に影響を及ぼすかどうか、およびどのように影響を及ぼすのかを調べた。これを行うため、本発明者らは最初に、ともにルミナルＡであり、増殖にエストロゲンを必要とするＥＲ陽性ヒト乳がん細胞株であるＭＣＦ７およびＴ４７Ｄ細胞におけるＮＡＭＰＴ発現を測定した。本発明者らは、ＮＡＭＰＴがこれらの細胞において発現されていることを見出し、本発明者らは、ｓｈＲＮＡアプローチを用いてＮＡＭＰＴ発現を実験的に低減させることにより研究モデルを作製した。ｓｈＲＮＡ（ｓｈＮＡＭＰＴ）での安定な形質導入によるＭＣＦ７およびｔ４７Ｄ細胞内へのＮＡＭＰＴの標的化により、ＮＡＭＰＴ  ｍＲＮＡレベルがそれぞれ、８３％および４４％低下し（図３Ａ）、ＮＡＭＰＴタンパク質レベルがそれぞれ、７０％および６０％低下した（図３Ｂ）。ｓｈＮＡＭＰＴでの安定な形質導入により、ＭＣＦ７とＴ４７Ｄのどちらの細胞株においても細胞内ＮＡＤ＋が低減された（図３Ｃ）。
【００９２】
重要なことに、本発明者らの結果により、公表されている研究に基づいて予測され得ることとは反対のことが明らかになった。具体的には、タモキシフェンの有効性を向上させるのではなく、ＥＲ陽性乳がん細胞におけるＮＡＭＰＴ発現の低減により、ＭＣＦ７およびＴ４７Ｄのどちらの細胞においても４−ヒドロキシタモキシフェンの抗増殖有効性が劇的に低下することがわかった（図３Ｄ）。この結果は全く予期されないものである。
【００９３】
［実施例２］
ＮＡＭＰＴ経路を上方調節することによる抗ホルモン療法の向上
実施例１に記載の結果は全く予期されないことである。それは、文献（例えば、Ｈｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｕｔｏｐｈａｇｙ  ５，１２２９−１２３１，２００９）に示唆されていること、およびストレス誘導性抗がん処置（例えば、抗ホルモン療法）の効果を抑止すると考えられている機構オートファジーがニコチンアミドによって誘導されることを示す本発明者らの独自の以前の研究（Ｓａｎｔｉｄｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２３：１０６８−１０８１，２０１３）とは反対であるためである。実施例１に記載の結果により、さらに、ＮＡＭＰＴ経路の活性化によってＥＲ陽性乳がん細胞における抗ホルモン療法が向上するかもしれないことが示唆される。
【００９４】
この臨床的に非常に重要な所見（これは、新しい潜在的治療アプローチを示す）をさらに解析するため、本発明者らは、エストロゲン陽性のＭＣＦ７およびＴ４７Ｄ乳がん細胞のタモキシフェン処置をＮＡＭ（ビタミンＢ３およびＮＡＤ＋前駆体）処置と併用した。図４Ａに示したように、ＮＡＭ処置により４−ヒドロキシタモキシフェンの抗増殖有効性が向上した。重要なことに、これは、内因性レベルのＮＡＭＰＴを発現している対照細胞とともに、この遺伝子の発現の実験的低減後に低レベルのＮＡＭＰＴを有する細胞においてもみられた。次に、本発明者らは、ＮＡＭ処置によって、基底または低レベルのＮＡＭＰＴを発現しているＭＣＦ７細胞においてＮＡＤ＋レベルが増大するかどうかを解析した。興味深いことに、本発明者らは、ＮＡＭにより、ＮＡＭＰＴの存在が低発現レベルであってもＮＡＤ＋レベルが有意に誘導されることを見出した（図４Ｂ）。ＮＡＤ＋前駆体での処置またはＮＡＭＰＴ下方調節は、ＭＣＦ７細胞を、１０％のＦＢＳを補給したＥＭＥＭ培地中で培養した場合、該細胞におけるＥＲαの発現および核内局在に影響せず、ＮＡＤ＋代謝は、発現または局在ではなく（ｒａｔｈｅｒ  ｔｈａｔ）ＥＲα活性を調節している可能性があることが示唆される（図４Ｃ）。さらに、図５に示したように、別のビタミンＢ３およびＮＡＤ＋前駆体であるニコチンアミドリボシド（ＮＲ）では、ＥＲ＋／ＮＡＭＰＴ低乳がん細胞におけるタモキシフェン感受性の回復においてＮＡＭよりも強力な活性が示された。このようなデータは、ＮＡＭＰＴの存在が低発現レベルであっても、ＮＡＤ＋前駆体での処置により、ＥＲ陽性乳がん細胞における抗ホルモン療法の治療有効性が有意に向上することを示す。このような所見により、ＮＡＤ＋前駆体での処置によって、ＮＡＭＰＴ発現が低い場合であってもタモキシフェン処置に対してＥＲ陽性乳がん細胞が感受性化されること；および乳がん細胞におけるＮＡＭＰＴレベルが、ＮＡＤ＋レベルのモジュレーションによってＥＲ陽性乳がん細胞のタモキシフェン応答性を調節し得ることが示唆される。
【００９５】
エストロゲン依存性成長およびタモキシフェン処置におけるＮＡＭＰＴおよびＮＡＤ＋サルベージ経路の調節的役割をさらに解析するため、本発明者らは最初に、ＭＣＦ７バリアント細胞がエストロゲン無含有培地中で成長する能力を解析した。本発明者らは、対照細胞（ＭＣＦ７ｓｈＣＴ）細胞の成長は、ＥＭＥＭフェノールレッド無含有培地（フェノールレッドの非特異的エストロゲン模倣効果を回避するため）と１０％チャコール処理済血清（血清からエストロゲンを消去するため）中で培養した場合、劇的に低減されることを見出した。重要なことに、低ＮＡＭＰＴ発現ＭＣＦ７細胞（ｓｈＮＡＭＰＴ）は、エストロゲンの非存在下であっても増殖能を有していた（図６Ａ）。興味深いことに、１７−β−エストラジオール（Ｅ２）は、ＭＣＦ７  ｓｈＣＴ細胞において増殖を誘導したが、ＭＣＦ７  ｓｈＮＡＭＰＴ細胞では誘導せず、４−ヒドロキシタモキシフェン処置は、ＭＣＦ７  ｓｈＣＴ細胞において増殖を低減させることができたが、ｓｈＮＡＭＰＴではできなかった（図６Ｂ）。重要なことに、ＮＡＭ処置は、ＭＣＦ７  ｓｈＣＴ細胞におけるエストロゲン誘導性増殖、ＭＣＦ７  ｓｈＮＡＭＰＴ細胞のエストロゲン非依存性増殖を劇的に抑止した。さらに、ＮＡＭ処置は、タモキシフェンの抗増殖効果に対してｓｈＣＴを感受性化し、ｓｈＮＡＭＰＴ細胞を再感受性化した（図６Ｂ）。図４Ｃにおいて、本発明者らは、１０％のＦＢＳ、エストロゲンの存在とは無関係にＥＲαの局在をモジュレートするホルモンおよび成長因子を含有する血清を補給したＥＭＥＭ培地中でＭＣＦ７細胞を培養した場合の該細胞におけるＥＲαの局在を解析した（Ｍｕｒｉｅｌ  Ｌｅ  Ｒｏｍａｎｃｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２０１１，３２（５）：５９７−６２２）。リガンド依存性ＥＲα核内局在のモジュレートに対するＮＡＭＰＴおよびＮＡＭ処置の役割をより深く解析するため、本発明者らは、細胞をフェノールレッド無含有ＥＭＥＭ／１０％のチャコール処理済ＦＢＳ中で培養することにより、細胞から成長因子およびエストロゲンを含むホルモン（あれば）を７２時間欠乏させた。次いで、乳がん細胞を２４時間、１０ｎＭのＥ２とともに、もしくはなしで、または１０ｎＭのＥ２＋１０ｍＭのＮＡＭとともに培養した。細胞の蛍光イメージングにより、対照（ｓｈＣＴ）とＮＡＭＰＴノックダウン（ｓｈＮＡＭＰＴ）細胞（対比）においてＥＲαの細胞成分内局在に有意差が示された（図６Ｃ）。エストロゲンの非存在下では、ＥＲαは対照細胞の細胞質内に分布していたが、ｓｈＮＡＭＰＴ発現細胞では、ＥＲαは核内に濃縮されていた。ＥＲαは、１０ｎＭのＥ２での刺激後、核内に局在した。重要なことに、２４時間の１０ｍＭのＮＡＭでの処置により、対照およびｓｈＮＡＭＰＴ発現細胞におけるＥＲαの核内局在が抑止された。ＥＲ陽性細胞のエストロゲン非依存性増殖のモジュレートにおけるＮＡＭＰＴおよびＮＡＤ＋代謝の役割を完全に理解するため、本発明者らは、ＭＣＦ７  ｓｈＣＴおよびｓｈＮＡＭＰＴ細胞をマウスの第４（４ｔｈ）乳房脂肪パッドに移植し、エストロゲン誘導性腫瘍成長を消去するための１７−β−エストラジオールペレットでの処���は行わなかった。
【００９６】
低ＮＡＭＰＴ発現では、外来性移植エストロゲンの存在がない場合であっても腫瘍成長が誘導された（図７）。１７−β−エストラジオールで処置しなかったこのようなマウスでは、ＭＣＦ７  ｓｈＣＴによる腫瘍発生はほぼ検出不能であった。総合すると、このようなデータは、低ＮＡＭＰＴ発現ＥＲ陽性腫瘍が、エストロゲンおよび抗ホルモン療法に対して非感受性になったことを示す。この所見は、ＮＡＤ＋前駆体での処置によって、抗ホルモン療法で処置したＥＲ陽性乳がんの抵抗性および再発が劇的に低減され、それにより、乳がん患者の生存率が有意に向上するかもしれないことを示唆する。
【００９７】
この新しい治療アプローチの可能性をさらに解析するため、本発明者らはまた、ＥＲα受容体発現がなく、抗ホルモン療法に対して抵抗性であることが知られているトリプルネガティブ乳がん細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１を、ＮＡＭ（ビタミンＢ３およびＮＡＤ＋前駆体）と４−ヒドロキシタモキシフェンの併用で処理した。図８に示したように、ＮＡＭ処置は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１をタモキシフェン誘導性抗増殖効果に対して感受性化させた。このようなデータは、ＥＲ陰性乳がん細胞であってもＮＡＤ＋前駆体での処置により、ＥＲαが存在しない場合であっても抗ホルモン療法の有効性が有意に誘導され得ることを示す。このような結果により、トリプルネガティブ乳がんに対する新しい処置選択肢の実現可能性が実証される。
【００９８】
本明細書に記載の研究により、ＮＡＤ＋前駆体ニコチンアミドでの処置によって抗ホルモン療法の有効性が有意におよび劇的に向上することが実証されている。この所見はさらに、ＮＡＭＰＴが、治療に対するがん細胞の応答性に重要な役割を果たしていることを示す。ＮＡＭＰＴ発現は、概日リズム、栄養摂取および運動による肝臓、脂肪組織および筋肉内でのエネルギー代謝により調節されることが報告されている。これとの関連において、抗ホルモン療法に対する乳がんの応答性におけるＮＡＭＰＴ発現の上記の重要性に鑑みて、本発明者らは、機構的および臨床的に非常に重要なさらなる研究を行った。本発明者らは、ＮＡＤ＋の蓄積を誘導し、ＮＡＤＨレベルを低下させることが知られているＭＣＦ７細胞におけるグルコース枯渇により、腫瘍細胞においてＮＡＭＰＴ発現が誘導されることを見出した（図９）。このようなデータにより、エネルギー代謝が乳がん細胞におけるＮＡＭＰＴ発現を調節していることが実証される。さらに、ＮＡＭＰＴおよびＮＡＤ＋が関連する機構により、ＮＡＤ＋代謝の治療的向上によって、見かけ上成功裡の抗ホルモン処置後の疾患再発率が低下することにより長期的な患者の転帰がモジュレートされ得ることを示す。具体的には、このデータは、ＮＡＭＰＴの活性化、発現誘導またはＮＡＤ＋合成サルベージ経路の向上によって抗ホルモン療法に対するＥＲ陽性乳がんの抵抗性が劇的に低減され、したがって、この主要な標準治療アプローチで処置した乳がんの再発が抑止される可能性があることを示唆する。そのため、ＮＡＤ＋合成サルベージ経路の活性の向上またはＮＡＭＰＴの活性および発現誘導のモジュレーションにより、乳がん患者の生存率が有意に向上する可能性がある。
【００９９】
［実施例３］
抗ホルモン療法の有効性の予後判定または診断
本発明者らにより観察されたこの予期されない結果により、さらに、乳がんにおけるＮＡＭＰＴ発現が、抗ホルモン療法の有効性をモニタリングするため、および抗ホルモン処置後の腫瘍再発の確率を調べるためのバイオマーカーとして使用できる可能性があることが示唆される。この可能性の臨床的エビデンスを調べるため、本発明者らは、ＮＡＭＰＴ発現が抗ホルモン療法の転帰と相関しているかどうかを解析した。本発明者らは、公表された臨床データベースを使用し、ＮＡＭＰＴ発現とＥＲ陽性乳がんを有する患者の予後判定との関係を調べた（図１０および１１）。１８８１例の乳がん患者の結果（Ｒｉｎｇｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ６，ｅ１７９１１，２０１１）は、ＥＲ陽性乳がんがＥＲ陰性乳がんよりも有意に低いＮＡＭＰＴ発現レベルを有していることを示していた（図２）。興味深いことに、本発明者らの解析により、さらに、ＥＲ陽性乳がんには、ＮＡＭＰＴ発現が高い亜群が含まれていることが明らかになった（図２の箱ひげの分布を参照のこと）。この群のＥＲ陽性乳がんでは、比較的高いＮＡＭＰＴ発現が良好な予後と相関している（図１０Ａ）。さらに、個々の乳がんサブタイプを注意深く解析することにより、本発明者らは、高ＮＡＭＰＴ発現レベルが、受容体の状態に関係なく低悪性度（グレード１）腫瘍における良好な予後と関連していることを見出した（図１０Ｂ）。この結果は、一般に低悪性度腫瘍が良好な予後判定と関連しているというＥＲ陽性亜群に関する所見と整合する。
【０１００】
重要なことに、ＮＡＭＰＴ発現がタモキシフェンでの処置の転帰にどのように影響するかを解析することにより、本発明者らは、ＥＲ陽性乳がんにおける高ＮＡＭＰＴ発現が、タモキシフェン処置後の無再発生存率および無遠隔転移生存率の大きな増大と関連していることを見出した（図１１）。ＮＡＭＰＴ発現は、未処置のＥＲ陽性乳がん患者における予後判定とは相関していない。
【０１０１】
このような臨床的結果により、高ＮＡＭＰＴ発現が腫瘍再発の劇的な低減と相関しているという本発明者らの所見が強固にされる。重要なことに、この臨床的結果は、さらに、ＮＡＤ＋前駆体での処置によって、ＥＲ陽性乳がんを有する患者における抗ホルモン療法の有効性が向上し、それにより、処置の転帰および患者の生存率が非常に大きく改善される可能性があることを示す。
【０１０２】
［実施例４］
乳がん再発を低減させるためのＮＡＭＰＴレベルのモジュレーション
遺伝子発現アレイデータを乳がんサブタイプおよび患者の転帰と組み合わせた本発明者らの解析に基づき、本発明者らは、ＮＡＭＰＴの高発現レベルが、タモキシフェン処置後のＥＲ陽性乳がんを有する患者における著しく良好な予後と相関していることを見出した。これは、抗ホルモン処置で処置される患者の腫瘍におけるＮＡＭＰＴ発現レベルが、処置終了後に再発するリスクが高い患者群を認定するための重要な尺度となる可能性があることを示唆する。また、この所見により、栄養（多量栄養素および微量栄養素、例えばビタミンＢ３（ＮＡＭＰＴ基質））ならびに生活様式に変化を導入することにより、低ＮＡＭＰＴ発現を有する患者においてＮＡＤ＋サルベージ経路の活性を向上させることを目的とした新しい無毒性治療アプローチの確立が支持される。当該技術分野において示唆されるようにＮＡＭＰＴを阻害するのではなく、この新しいアプローチは、発現誘導によるＮＡＭＰＴ活性化またはＮＡＤ＋サルベージ経路の向上に依存して、抗ホルモン療法で処置したＥＲ陽性乳がんの抵抗性および再発を低減させるという目的を達成するものである。
【０１０３】
このアプローチの実現可能性をさらに確認するため、臨床的に重要な設定において、タモキシフェン処置後のＥＲ陽性乳がんの転帰が判定され得る栄養摂取によって調節される重要な特色であるＮＡＭＰＴレベルを確立するための研究が行われ得る。この研究では、ＮＡＭＰＴ発現の調節および抗ホルモン療法に対するＥＲ陽性乳がんの応答性のモジュレーションにおける栄養素の役割が解析される。
【０１０４】
具体的には、インビトロ（培養細胞）およびインビボ（異種移植片モデル）アプローチを使用し、２種類の多量栄養素（グルコースおよびグルタミン）と１種類の微量栄養素（ビタミンＢ３）が、どのようにＮＡＭＰＴの発現をモジュレートし得るか、およびどのようにＮＡＤ＋レベルに影響を及ぼして抗ホルモン療法で処置したＥＲ陽性腫瘍細胞における乳がんの転帰をモジュレートし得るかが調べられ得る。短期間の実験では、処置期間中において臨床状況が模倣される。長期間の実験では、処置終了後の乳がん再発の状況が模倣される。また、処置終了後の抗ホルモン療法への応答および腫瘍再発のモジュレーションにおけるＮＡＭＰＴの具体的な役割は、インビトロおよびインビボでのアッセイでＮＡＭＰＴ発現を低下させることにより検討される。さらに、この研究には、細胞内ＮＡＤ＋代謝状態が、腫瘍再発に関連している可能性があるさらなるＤＮＡ改変の蓄積をどのように決定するかに関する研究を含める。このような研究には、本明細書に記載の、または当該技術分野でよく知られた標準的な実験手順（例えば、細胞内のＮＡＭＰＴレベルを測定するための）および材料が使用される。
【０１０５】
前述の本発明を、明瞭な理解を目的とした例示および実施例によってある程度詳細に説明したが、当業者には、本発明の教示に鑑みると、添付の特許請求の範囲の趣旨および範囲から逸脱することなく、一定の変更および修正がなされ得ることが容易に自明であろう。
【０１０６】
本明細書において挙げた刊行物、データベース、ＧｅｎＢａｎｋ配列、特許および特許出願はすべて、引用により、あたかも各々が具体的に個々に引用により組み込まれて示されているかのごとく、本明細書に組み込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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