(57)【要約】  治療を必要とする対象における、白血病の治療のための、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを本明細書で提供する。治療を必要とする対象における、急性骨髄性白血病の治療のための、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを本明細書で提供する。治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、この対象に、有効量の前記組み合わせまたはＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含む方法、及び、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、この対象に、有効量の前記組み合わせまたはＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含む方法もまた、本明細書で提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療に有効な量のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジンまたは製薬上許容できるその塩を含む、白血病を治療するための薬学的組み合わせ。
【請求項２】
前記白血病は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項３】
前記ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ６特異的阻害剤である、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項４】
前記ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤である、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項５】
前記ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤である、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項６】
前記ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は、式Ｉの化合物：
【化１】
2017524735.tif 000049
（式中、 
環Ｂはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、これらはそれぞれ、ＯＨ、ハロ、またはＣ１−６−アルキルによって任意に置換されていてよく、かつ
ＲはＨまたはＣ１−６−アルキルである。）
または製薬上許容できるその塩である、請求項３に記載の組み合わせ。
【請求項７】
前記式Ｉの化合物は、
【化２】
2017524735.tif 000050
または製薬上許容できるその塩である、請求項６に記載の組み合わせ。
【請求項８】
前記式Ｉの化合物は、
【化３】
2017524735.tif 000051
または製薬上許容できるその塩である、請求項６に記載の組み合わせ。
【請求項９】
前記ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は、式ＩＩの化合物：
【化４】
2017524735.tif 000052
（式中、
Ｒｘ及びＲｙは共に、それぞれに結合する炭素と共にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロへプチル、またはシクロオクチルを形成し、
各ＲＡは独立してＣ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり、かつ
ｍは０または１である。）
または製薬上許容できるその塩である、請求項３に記載の組み合わせ。
【請求項１０】
前記式ＩＩの化合物は、
【化５】
2017524735.tif 000053
または製薬上許容できるその塩である、請求項９に記載の組み合わせ。
【請求項１１】
前記式ＩＩの化合物は、
【化６】
2017524735.tif 000054
または製薬上許容できるその塩である、請求項９に記載の組み合わせ。
【請求項１２】
前記ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は、式ＩＩＩの化合物：
【化７】
2017524735.tif 000055
（式中、
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ２及びＲ３はＣ３−６−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ＯＲ６、Ｃ１−６−アルキル−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ヘテロシクロアルキル、Ｃ２−６−アルケニルからそれぞれ独立して選択され、
Ｒ６はＨまたはＣ１−６−アルキルであり、かつ
Ｒ７はＨまたはＣ３−６−シクロアルキルである。）
または製薬上許容できるその塩である、請求項４に記載の組み合わせ。
【請求項１３】
前記式ＩＩＩの化合物は、
【化８】
2017524735.tif 000056
または製薬上許容できるその塩である、請求項１２に記載の組み合わせ。
【請求項１４】
前記ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は、化合物：
【化９】
2017524735.tif 000057
または製薬上許容できるその塩である、請求項４に記載の組み合わせ。
【請求項１５】
前記ＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤は、式ＩＶの化合物：
【化１０】
2017524735.tif 000058
（式中、
Ｒｘは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＣＯ２Ｒ１、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）２からなる群から独立して選択され、
ＲｙはＨ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＣＯ２Ｒ１、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）２からなる群から選択され、
各Ｒ１は、それぞれの存在に関して独立して、Ｈ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ３−８−シクロアルキル、Ｃ３−７−ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−６−アルキル−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−アリール、及びＣ１−６−アルキル−ヘテロアリールからなる群から選択され、かつ
ＲｚはＣ１−６−アルキル、Ｃ３−８−シクロアルキル、Ｃ３−７−ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択される。
または製薬上許容できるその塩である、請求項５に記載の組み合わせ。
【請求項１６】
前記式ＩＶの化合物は、
【化１１】
2017524735.tif 000059
または製薬上許容できるその塩である、請求項１５に記載の組み合わせ。
【請求項１７】
前記ＨＤＡＣ阻害剤は、
【化１２】
2017524735.tif 000060
または製薬上許容できるその塩である、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項１８】
前記組み合わせは、製薬上許容できる担体を更に含む、請求項１に記載の組み合わせ。
【請求項１９】
治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、前記対象に、治療に有効な量のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジンまたは製薬上許容できるその塩を投与することを含む、方法。
【請求項２０】
前記白血病は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ６特異的阻害剤である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は、式Ｉの化合物：
【化１３】
2017524735.tif 000061
（式中、 
環Ｂはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、これらはそれぞれ、ＯＨ、ハロ、またはＣ１−６−アルキルにより任意に置換されてよく、かつ
ＲはＨまたはＣ１−６−アルキルである。）
または製薬上許容できるその塩である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記式Ｉの化合物は、
【化１４】
2017524735.tif 000062
または製薬上許容できるその塩である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記式Ｉの化合物は、
【化１５】
2017524735.tif 000063
または製薬上許容できるその塩である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は、式ＩＩの化合物：
【化１６】
2017524735.tif 000064
（式中、 
Ｒｘ及びＲｙは共に、それぞれに結合する炭素と共にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロへプチル、シクロオクチルを形成し、
各ＲＡは独立してＣ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり、かつ
ｍは０または１である。）
または製薬上許容できるその塩である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記式ＩＩの化合物は、
【化１７】
2017524735.tif 000065
または製薬上許容できるその塩である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記式ＩＩの化合物は、
【化１８】
2017524735.tif 000066
または製薬上許容できるその塩である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は、式ＩＩＩの化合物：
【化１９】
2017524735.tif 000067
（式中、
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ２及びＲ３はＣ３−６−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ＯＲ６、Ｃ１−６−アルキル−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ヘテロシクロアルキル、Ｃ２−６−アルケニルからそれぞれ独立して選択され、
Ｒ６はＨまたはＣ１−６−アルキルであり、かつ
Ｒ７はＨまたはＣ３−６−シクロアルキルである。）
または製薬上許容できるその塩である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３１】
前記式ＩＩＩの化合物は、
【化２０】
2017524735.tif 000068
または製薬上許容できるその塩である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は、化合物：
【化２１】
2017524735.tif 000069
または製薬上許容できるその塩である、請求項２２に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤は、式ＩＶの化合物：
【化２２】
2017524735.tif 000070
（式中、
Ｒｘは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＣＯ２Ｒ１、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）２からなる群から独立して選択され、
ＲｙはＨ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＣＯ２Ｒ１、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）２からなる群から選択され、
各Ｒ１は、それぞれの存在に関して独立して、Ｈ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ３−８−シクロアルキル、Ｃ３−７−ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−６−アルキル−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−アリール、及びＣ１−６−アルキル−ヘテロアリールからなる群から選択され、かつ
ＲｚはＣ１−６−アルキル、Ｃ３−８−シクロアルキル、Ｃ３−７−ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択される。）
または製薬上許容できるその塩である、請求項２３に記載の方法。
【請求項３４】
前記式ＩＶの化合物は、
【化２３】
2017524735.tif 000071
または製薬上許容できるその塩である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＨＤＡＣ阻害剤は、
【化２４】
2017524735.tif 000072
または製薬上許容できるその塩である、請求項１９に記載の方法。
【請求項３６】
治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、前記対象に治療に有効な量の式Ｉの化合物：
【化２５】
2017524735.tif 000073
（式中、 
環Ｂはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、これらはそれぞれ、ＯＨ、ハロ、またはＣ１−６−アルキルにより任意に置換されてよく、かつ
ＲはＨまたはＣ１−６−アルキルである。）
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項３７】
前記式Ｉの化合物は、
【化２６】
2017524735.tif 000074
または製薬上許容できるその塩である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記式Ｉの化合物は、
【化２７】
2017524735.tif 000075
または製薬上許容できるその塩である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、前記対象に治療に有効な量の式ＩＩの化合物：
【化２８】
2017524735.tif 000076
（式中、
Ｒｘ及びＲｙは共に、それぞれに結合する炭素と共にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロへプチル、シクロオクチルを形成し、
各ＲＡは独立してＣ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり、かつ
ｍは０または１である。）
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項４０】
前記式ＩＩの化合物は、
【化２９】
2017524735.tif 000077
または製薬上許容できるその塩である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記式ＩＩの化合物は、
【化３０】
2017524735.tif 000078
または製薬上許容できるその塩である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、前記対象に治療に有効な量の式ＩＩＩの化合物：
【化３１】
2017524735.tif 000079
（式中、
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ２及びＲ３はＣ３−６−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ＯＲ６、Ｃ１−６−アルキル−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ヘテロシクロアルキル、Ｃ２−６−アルケニルからそれぞれ独立して選択され、
Ｒ６はＨまたはＣ１−６−アルキルであり、かつ
Ｒ７はＨまたはＣ３−６−シクロアルキルである。）
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、方法。
【請求項４３】
前記式ＩＩＩの化合物は、
【化３２】
2017524735.tif 000080
または製薬上許容できるその塩である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、前記対象に、治療に有効な量の化合物：
【化３３】
2017524735.tif 000081
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項４５】
治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、前記対象に、治療に有効な量の化合物：
【化３４】
2017524735.tif 000082
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項４６】
治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、前記対象に治療に有効な量の式ＩＶの化合物：
【化３５】
2017524735.tif 000083
（式中、
Ｒｘは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＣＯ２Ｒ１、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）２からなる群から独立して選択され、
ＲｙはＨ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＣＯ２Ｒ１、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）２からなる群から選択され、
各Ｒ１は、それぞれの存在に関して独立して、Ｈ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ３−８−シクロアルキル、Ｃ３−７−ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−６−アルキル−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−６アルキル−アリール、及びＣ１−６−アルキル−ヘテロアリールからなる群から選択され、かつ
ＲｚはＣ１−６−アルキル、Ｃ３−８−シクロアルキル、Ｃ３−７−ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択される。）
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、前記方法。
【請求項４７】
前記式ＩＶの化合物は、
【化３６】
2017524735.tif 000084
または製薬上許容できるその塩である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、前記対象に治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤を投与することを含む、方法。
【請求項４９】
治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、前記対象に治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤を投与することを含む、方法。 
【請求項５０】
前記方法は、前記対象にアザシチジンを投与することを更に含む、請求項３６〜４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを投与することを含む、癌細胞の細胞生存能を低下させる方法。
【請求項５２】
ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを投与することを含む、癌細胞の分化を誘発する方法。
【請求項５３】
ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを投与することを含む、癌細胞のアポトーシスを誘発する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤による白血病の治療に関する。
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許仮出願番号第６２／０２１，４７３号（２０１４年７月７日出願）、同第６２／０６１，２３３号（２０１４年１０月８日出願）、及び同第６２／１４７，２１８号（２０１５年４月１４日出願）に関連する。これらの出願の各内容は、それら全体が本明細書に参考として組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
癌は、細胞の制御できない増殖を特徴とする。血液の細胞成分は、多能性造血幹細胞に由来する。その再生及び分化能により、幹細胞はリンパ球前駆細胞及び骨髄前駆細胞を生成し、これらは次いでリンパ球、好中球、好酸球、好塩基球、赤血球、及び血小板を産生する。白血病においては、多量の未熟白血球または芽球が存在する。４種類の主な白血病：急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）が認識されているが、より一般的でない種類も同様に知られている。
白血病は平均で、５年間での死亡率が４０％であり、２０１２年には世界で３５万人を超える人間が罹った。したがって、白血病治療を目的とする治療法の、引き続き差し迫った必要性が依然として存在する。 
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２１９８２号
【特許文献２】国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６０７９１号
【特許文献３】米国特許第１４／０６９，７４１号
【特許文献４】国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５２５７２号
【特許文献５】米国特許第１４／０６９，７４１号
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一態様では、治療に有効な量のヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジンまたは製薬上許容できるその塩を含む、白血病治療用の薬学的組み合わせを本明細書において提供する。一実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ６特異的阻害剤である。別の実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤である。別の実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤である。
【０００５】
一実施形態では、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は式Ｉの化合物
【化１】
2017524735.tif 000002
または製薬上許容できるその塩である。
【０００６】
別の実施形態では、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は式ＩＩの化合物
【化２】
2017524735.tif 000003
または製薬上許容できるその塩である。
【０００７】
別の実施形態では、ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は式ＩＩＩの化合物
【化３】
2017524735.tif 000004
または製薬上許容できるその塩である。
【０００８】
別の実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は
【化４】
2017524735.tif 000005
または製薬上許容できるその塩である。
【０００９】
別の実施形態では、ＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤は式ＩＶの化合物
【化５】
2017524735.tif 000006
または製薬上許容できるその塩である。
【００１０】
別の実施形態では、組み合わせは製薬上許容できる担体を更に含む。
【００１１】
別の態様では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジンまたは製薬上許容できるその塩を含む、治療に有効な量の薬学的組み合わせを投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。一実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ６特異的阻害剤である。別の実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤である。別の実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤である。
【００１２】
更に他の実施形態では、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は式Ｉの化合物
【化６】
2017524735.tif 000007
または製薬上許容できるその塩である。
【００１３】
別の実施形態では、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は式ＩＩの化合物
【化７】
2017524735.tif 000008
または製薬上許容できるその塩である。
【００１４】
別の実施形態では、ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は式ＩＩＩの化合物
【化８】
2017524735.tif 000009
または製薬上許容できるその塩である。
【００１５】
別の実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は
【化９】
2017524735.tif 000010
または製薬上許容できるその塩である。
【００１６】
別の実施形態では、ＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤は式ＩＶの化合物
【化１０】
2017524735.tif 000011
または製薬上許容できるその塩である。
【００１７】
別の態様では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に治療に有効な量の式Ｉの化合物
【化１１】
2017524735.tif 000012
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【００１８】
別の態様では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に治療に有効な量の式ＩＩの化合物
【化１２】
2017524735.tif 000013
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【００１９】
別の態様では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に治療に有効な量の式ＩＩＩの化合物
【化１３】
2017524735.tif 000014
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【００２０】
別の態様では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物
【化１４】
2017524735.tif 000015
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【００２１】
別の態様では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に治療に有効な量の式ＩＶの化合物
【化１５】
2017524735.tif 000016
または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【００２２】
一実施形態では、式ＩＶの化合物は
【化１６】
2017524735.tif 000017
または製薬上許容できるその塩である。
【００２３】
別の態様では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【００２４】
更に別の態様では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１Ａ】ＡＭＬ細胞でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの相乗効果を示す４つのグラフの集合である。それぞれのグラフは、Ｆａの関数としてプロットしたＣＩ値を示す。図１Ａは、ＨＬ−６０細胞上でのアザシチジン及び化合物Ａに関するデータを示す。
【図１Ｂ】ＡＭＬ細胞でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの相乗効果を示す４つのグラフの集合である。それぞれのグラフは、Ｆａの関数としてプロットしたＣＩ値を示す。図１Ｂは、ＨＬ−６０細胞上でのアザシチジン及び化合物Ｃに関するデータを示す。
【図１Ｃ】ＡＭＬ細胞でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの相乗効果を示す４つのグラフの集合である。それぞれのグラフは、Ｆａの関数としてプロットしたＣＩ値を示す。図１Ｃは、ＨＬ−６０細胞上でのアザシチジン及び化合物Ｅに関するデータを示す。
【図１Ｄ】ＡＭＬ細胞でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの相乗効果を示す４つのグラフの集合である。それぞれのグラフは、Ｆａの関数としてプロットしたＣＩ値を示す。図１Ｄは、ＨＬ−６０細胞上でのアザシチジン及び化合物Ｆに関するデータを示す。
【図２Ａ】ＨＤＡＣ阻害がＡＭＬにおけるアポトーシスを増大させ、ＡＭＬ１／ＥＴＯを抑制することを示すグラフ及び図の集合である。図２Ａ〜Ｃは、７２時間におけるＫａｓｕｍｉ−１の細胞周期についてのデータを示す。図２Ａは化合物Ｂについてのデータを示す。
【図２Ｂ】ＨＤＡＣ阻害がＡＭＬにおけるアポトーシスを増大させ、ＡＭＬ１／ＥＴＯを抑制することを示すグラフ及び図の集合である。図２Ａ〜Ｃは、７２時間におけるＫａｓｕｍｉ−１の細胞周期についてのデータを示す。図２Ｂは化合物Ｇについてのデータを示す。
【図２Ｃ】ＨＤＡＣ阻害がＡＭＬにおけるアポトーシスを増大させ、ＡＭＬ１／ＥＴＯを抑制することを示すグラフ及び図の集合である。図２Ａ〜Ｃは、７２時間におけるＫａｓｕｍｉ−１の細胞周期についてのデータを示す。図２Ｃは化合物Ｅについてのデータを示す。
【図２Ｄ】ＨＤＡＣ阻害がＡＭＬにおけるアポトーシスを増大させ、ＡＭＬ１／ＥＴＯを抑制することを示すグラフ及び図の集合である。図２Ｄは、ゲル、及び融合タンパク質ＡＭＬ１／ＥＴＯまたはＡＣＴＢの発現の写真を示す。データは化合物Ａ及びパノビノスタットについて示している。
【図３Ａ】ＡＭＬ細胞株の生存能に関する単剤活性を示す４つのグラフの集合である。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＴＨＰ−１（正立の塗りつぶした三角形）、ＭＶ−４−１１（小型の塗りつぶした菱形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（透明な正方形）、ＮＢ４（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を、濃度が増加した化合物Ｂ（図３Ａ）に曝し、薬剤処理に対する応答を測定した。
【図３Ｂ】ＡＭＬ細胞株の生存能に関する単剤活性を示す４つのグラフの集合である。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＴＨＰ−１（正立の塗りつぶした三角形）、ＭＶ−４−１１（小型の塗りつぶした菱形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（透明な正方形）、ＮＢ４（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を、濃度が増加した化合物Ａ（図３Ｂ）に曝し、薬剤処理に対する応答を測定した。
【図３Ｃ】ＡＭＬ細胞株の生存能に関する単剤活性を示す４つのグラフの集合である。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＴＨＰ−１（正立の塗りつぶした三角形）、ＭＶ−４−１１（小型の塗りつぶした菱形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（透明な正方形）、ＮＢ４（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を、濃度が増加した化合物Ｅ（図３Ｃ）に曝し、薬剤処理に対する応答を測定した。
【図３Ｄ】ＡＭＬ細胞株の生存能に関する単剤活性を示す４つのグラフの集合である。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＴＨＰ−１（正立の塗りつぶした三角形）、ＭＶ−４−１１（小型の塗りつぶした菱形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（透明な正方形）、ＮＢ４（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を、濃度が増加したアザシチジン（図３Ｄ）に曝し、薬剤処理に対する応答を測定した。
【図４Ａ】ＡＭＬ細胞株における分化及びアポトーシスでの単剤活性を示す６つのグラフの集合である。３つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（図４Ａ及び４Ｄ）、Ｋａｓｕｍｉ−１（図４Ｂ及び４Ｅ）、並びにＮＢ４（図４Ｃ及び４Ｆ）を、示した濃度の化合物で処理した。図４Ａでは、骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した。
【図４Ｂ】ＡＭＬ細胞株における分化及びアポトーシスでの単剤活性を示す６つのグラフの集合である。３つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（図４Ａ及び４Ｄ）、Ｋａｓｕｍｉ−１（図４Ｂ及び４Ｅ）、並びにＮＢ４（図４Ｃ及び４Ｆ）を、示した濃度の化合物で処理した。図４Ｂでは、骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した。
【図４Ｃ】ＡＭＬ細胞株における分化及びアポトーシスでの単剤活性を示す６つのグラフの集合である。３つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（図４Ａ及び４Ｄ）、Ｋａｓｕｍｉ−１（図４Ｂ及び４Ｅ）、並びにＮＢ４（図４Ｃ及び４Ｆ）を、示した濃度の化合物で処理した。図４Ｃでは、骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した。
【図４Ｄ】ＡＭＬ細胞株における分化及びアポトーシスでの単剤活性を示す６つのグラフの集合である。３つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（図４Ａ及び４Ｄ）、Ｋａｓｕｍｉ−１（図４Ｂ及び４Ｅ）、並びにＮＢ４（図４Ｃ及び４Ｆ）を、示した濃度の化合物で処理した。図４Ｄでは、処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図４Ｅ】ＡＭＬ細胞株における分化及びアポトーシスでの単剤活性を示す６つのグラフの集合である。３つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（図４Ａ及び４Ｄ）、Ｋａｓｕｍｉ−１（図４Ｂ及び４Ｅ）、並びにＮＢ４（図４Ｃ及び４Ｆ）を、示した濃度の化合物で処理した。図４Ｅでは、処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図４Ｆ】ＡＭＬ細胞株における分化及びアポトーシスでの単剤活性を示す６つのグラフの集合である。３つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（図４Ａ及び４Ｄ）、Ｋａｓｕｍｉ−１（図４Ｂ及び４Ｅ）、並びにＮＢ４（図４Ｃ及び４Ｆ）を、示した濃度の化合物で処理した。図４Ｆでは、処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図５Ａ】ＨＬ−６０細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞を、単剤としてのＤＭＳＯ、化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンとの組み合わせで９６時間処理した。骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した（図５Ａ）。
【図５Ｂ】ＨＬ−６０細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞を、単剤としてのＤＭＳＯ、化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンとの組み合わせで９６時間処理した。処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した（図５Ｂ）。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図５Ｃ】ＨＬ−６０細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞を、単剤としてのＤＭＳＯ、化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンとの組み合わせで９６時間処理した。骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した（図５Ｃ）。
【図５Ｄ】ＨＬ−６０細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞を、単剤としてのＤＭＳＯ、化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンとの組み合わせで９６時間処理した。処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した（図５Ｄ）。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図５Ｅ】ＨＬ−６０細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞を、単剤としてのＤＭＳＯ、化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンとの組み合わせで９６時間処理した。骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した（図５Ｅ）。
【図５Ｆ】ＨＬ−６０細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞を、単剤としてのＤＭＳＯ、化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンとの組み合わせで９６時間処理した。処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した（図５Ｆ）。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図６Ａ】Ｋａｓｕｍｉ−１細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した（図６Ａ）。
【図６Ｂ】Ｋａｓｕｍｉ−１細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した（図６Ｂ）。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図６Ｃ】Ｋａｓｕｍｉ−１細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した（図６Ｃ）。
【図６Ｄ】Ｋａｓｕｍｉ−１細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した（図６Ｄ）。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図６Ｅ】Ｋａｓｕｍｉ−１細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した（図６Ｅ）。
【図６Ｆ】Ｋａｓｕｍｉ−１細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した（図６Ｆ）。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図７Ａ】ＮＢ４細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した（図７Ａ）。
【図７Ｂ】ＮＢ４細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した（図７Ｂ）。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図７Ｃ】ＮＢ４細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した（図７Ｃ）。
【図７Ｄ】ＮＢ４細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した（図７Ｄ）。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図７Ｅ】ＮＢ４細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を測定した（図７Ｅ）。
【図７Ｆ】ＮＢ４細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す６つのグラフの集合である。細胞をＤＭＳＯ、単剤としての化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した（図７Ｆ）。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図８Ａ】ＡＭＬ細胞株を、増加用量の化合物Ｅ（図８Ａ）、化合物Ｈ（図８Ｂ）、化合物Ｃ（図８Ｃ）、化合物Ａ（図８Ｄ）、化合物Ｂ（図８Ｅ）、及び化合物Ｇ（図８Ｆ）に７２時間曝し、ＨＤＡＣ阻害に対する感度を確認したことを示す。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＮＢ４（正立の塗りつぶした三角形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（小型の塗りつぶした菱形）、ＭＶ４−１１（透明な正方形）、ＴＨＰ−１（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を本研究で使用した。
【図８Ｂ】ＡＭＬ細胞株を、増加用量の化合物Ｅ（図８Ａ）、化合物Ｈ（図８Ｂ）、化合物Ｃ（図８Ｃ）、化合物Ａ（図８Ｄ）、化合物Ｂ（図８Ｅ）、及び化合物Ｇ（図８Ｆ）に７２時間曝し、ＨＤＡＣ阻害に対する感度を確認したことを示す。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＮＢ４（正立の塗りつぶした三角形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（小型の塗りつぶした菱形）、ＭＶ４−１１（透明な正方形）、ＴＨＰ−１（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を本研究で使用した。
【図８Ｃ】ＡＭＬ細胞株を、増加用量の化合物Ｅ（図８Ａ）、化合物Ｈ（図８Ｂ）、化合物Ｃ（図８Ｃ）、化合物Ａ（図８Ｄ）、化合物Ｂ（図８Ｅ）、及び化合物Ｇ（図８Ｆ）に７２時間曝し、ＨＤＡＣ阻害に対する感度を確認したことを示す。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＮＢ４（正立の塗りつぶした三角形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（小型の塗りつぶした菱形）、ＭＶ４−１１（透明な正方形）、ＴＨＰ−１（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を本研究で使用した。
【図８Ｄ】ＡＭＬ細胞株を、増加用量の化合物Ｅ（図８Ａ）、化合物Ｈ（図８Ｂ）、化合物Ｃ（図８Ｃ）、化合物Ａ（図８Ｄ）、化合物Ｂ（図８Ｅ）、及び化合物Ｇ（図８Ｆ）に７２時間曝し、ＨＤＡＣ阻害に対する感度を確認したことを示す。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＮＢ４（正立の塗りつぶした三角形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（小型の塗りつぶした菱形）、ＭＶ４−１１（透明な正方形）、ＴＨＰ−１（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を本研究で使用した。
【図８Ｅ】ＡＭＬ細胞株を、増加用量の化合物Ｅ（図８Ａ）、化合物Ｈ（図８Ｂ）、化合物Ｃ（図８Ｃ）、化合物Ａ（図８Ｄ）、化合物Ｂ（図８Ｅ）、及び化合物Ｇ（図８Ｆ）に７２時間曝し、ＨＤＡＣ阻害に対する感度を確認したことを示す。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＮＢ４（正立の塗りつぶした三角形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（小型の塗りつぶした菱形）、ＭＶ４−１１（透明な正方形）、ＴＨＰ−１（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を本研究で使用した。
【図８Ｆ】ＡＭＬ細胞株を、増加用量の化合物Ｅ（図８Ａ）、化合物Ｈ（図８Ｂ）、化合物Ｃ（図８Ｃ）、化合物Ａ（図８Ｄ）、化合物Ｂ（図８Ｅ）、及び化合物Ｇ（図８Ｆ）に７２時間曝し、ＨＤＡＣ阻害に対する感度を確認したことを示す。６つのＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０（大型の塗りつぶした円）、ＮＢ４（正立の塗りつぶした三角形）、Ｋａｓｕｍｉ−１（小型の塗りつぶした菱形）、ＭＶ４−１１（透明な正方形）、ＴＨＰ−１（透明な倒立三角形）、及びＭＯＬＭ−１３（透明な菱形）を本研究で使用した。
【図９Ａ】指示用量の化合物によるＭＶ４−１１の処理を示す。図９Ａは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定した、骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を示す。化合物Ｅ、化合物Ｈ、化合物Ａ、及び化合物ＧはＣＤ１１ｂ陽性細胞の割合を増加させた。化合物Ｃでは影響がなかった。
【図９Ｂ】指示用量の化合物によるＭＶ４−１１の処理を示す。図９Ｂは、処理後７２時間でＥｄＵを組み込み、Ｆａｒ  Ｒｅｄにより染色した後の、フローサイトメトリーによる細胞周期の評価を示す。Ｇ０／Ｇ１期、Ｇ２／Ｍ期、Ｓ期及びｓｕｂＧ１期の間における細胞分布を測定した。
【図９Ｃ】指示用量の化合物によるＭＶ４−１１の処理を示す。図９Ｃは、処理後９６時間で、アネキシンＶ結合、及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することによる、フローサイトメトリーによるアポトーシスの評価を示す。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。
【図１０Ａ】示した用量の化合物による、以下のＡＭＬ細胞株：Ｋａｓｕｍｉ−１（図１０Ａ及び１０Ｂ）、ＨＬ−６０（図１０Ｃ及び１０Ｄ）並びにＮＢ４（図１０Ｅ及び１０Ｆ）の処理を示す。図１０Ａは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定した骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を示す。
【図１０Ｂ】示した用量の化合物による、以下のＡＭＬ細胞株：Ｋａｓｕｍｉ−１（図１０Ａ及び１０Ｂ）、ＨＬ−６０（図１０Ｃ及び１０Ｄ）並びにＮＢ４（図１０Ｅ及び１０Ｆ）の処理を示す。図１０Ｂは、処理後９６時間での、ＦＡＣＳによるアポトーシスの評価を示す（例えば図９Ｃを参照）。
【図１０Ｃ】示した用量の化合物による、以下のＡＭＬ細胞株：Ｋａｓｕｍｉ−１（図１０Ａ及び１０Ｂ）、ＨＬ−６０（図１０Ｃ及び１０Ｄ）並びにＮＢ４（図１０Ｅ及び１０Ｆ）の処理を示す。図１０Ｃは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定した骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を示す。
【図１０Ｄ】示した用量の化合物による、以下のＡＭＬ細胞株：Ｋａｓｕｍｉ−１（図１０Ａ及び１０Ｂ）、ＨＬ−６０（図１０Ｃ及び１０Ｄ）並びにＮＢ４（図１０Ｅ及び１０Ｆ）の処理を示す。図１０Ｄは、処理後９６時間での、ＦＡＣＳによるアポトーシスの評価を示す（例えば図９Ｃを参照）。
【図１０Ｅ】示した用量の化合物による、以下のＡＭＬ細胞株：Ｋａｓｕｍｉ−１（図１０Ａ及び１０Ｂ）、ＨＬ−６０（図１０Ｃ及び１０Ｄ）並びにＮＢ４（図１０Ｅ及び１０Ｆ）の処理を示す。図１０Ｅは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定した骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を示す。
【図１０Ｆ】示した用量の化合物による、以下のＡＭＬ細胞株：Ｋａｓｕｍｉ−１（図１０Ａ及び１０Ｂ）、ＨＬ−６０（図１０Ｃ及び１０Ｄ）並びにＮＢ４（図１０Ｅ及び１０Ｆ）の処理を示す。図１０Ｆは、処理後９６時間での、ＦＡＣＳによるアポトーシスの評価を示す（例えば図９Ｃを参照）。
【図１１Ａ】ＨＤＡＣ１／２阻害のアザシチジンとの組み合わせが、ＨＬ−６０細胞生存能の相乗的減少をもたらすことを示す。ＨＬ−６０細胞を、増加用量のアザシチジンと化合物Ｅ（図１１Ａ）、または化合物Ａ（図１１Ｂ）、または化合物Ｈ（図１１Ｃ）、または化合物Ｃ（図１１Ｄ）と処理し、ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ｇｌｏアッセイにより、７２時間の時点で細胞生存能を評価した。組み合わせ指数（ＣＩ）及び影響を受けた相対的なフラクション（Ｆａ）を、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアを使用して各用量レベルで測定した。１未満（陰影領域）のＣＩ値が測定されることは、薬剤間での相乗的相互作用を強力に支持している。
【図１１Ｂ】ＨＤＡＣ１／２阻害のアザシチジンとの組み合わせが、ＨＬ−６０細胞生存能の相乗的減少をもたらすことを示す。ＨＬ−６０細胞を、増加用量のアザシチジンと化合物Ｅ（図１１Ａ）、または化合物Ａ（図１１Ｂ）、または化合物Ｈ（図１１Ｃ）、または化合物Ｃ（図１１Ｄ）と処理し、ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ｇｌｏアッセイにより、７２時間の時点で細胞生存能を評価した。組み合わせ指数（ＣＩ）及び影響を受けた相対的なフラクション（Ｆａ）を、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアを使用して各用量レベルで測定した。１未満（陰影領域）のＣＩ値が測定されることは、薬剤間での相乗的相互作用を強力に支持している。
【図１１Ｃ】ＨＤＡＣ１／２阻害のアザシチジンとの組み合わせが、ＨＬ−６０細胞生存能の相乗的減少をもたらすことを示す。ＨＬ−６０細胞を、増加用量のアザシチジンと化合物Ｅ（図１１Ａ）、または化合物Ａ（図１１Ｂ）、または化合物Ｈ（図１１Ｃ）、または化合物Ｃ（図１１Ｄ）と処理し、ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ｇｌｏアッセイにより、７２時間の時点で細胞生存能を評価した。組み合わせ指数（ＣＩ）及び影響を受けた相対的なフラクション（Ｆａ）を、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアを使用して各用量レベルで測定した。１未満（陰影領域）のＣＩ値が測定されることは、薬剤間での相乗的相互作用を強力に支持している。
【図１１Ｄ】ＨＤＡＣ１／２阻害のアザシチジンとの組み合わせが、ＨＬ−６０細胞生存能の相乗的減少をもたらすことを示す。ＨＬ−６０細胞を、増加用量のアザシチジンと化合物Ｅ（図１１Ａ）、または化合物Ａ（図１１Ｂ）、または化合物Ｈ（図１１Ｃ）、または化合物Ｃ（図１１Ｄ）と処理し、ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ｇｌｏアッセイにより、７２時間の時点で細胞生存能を評価した。組み合わせ指数（ＣＩ）及び影響を受けた相対的なフラクション（Ｆａ）を、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアを使用して各用量レベルで測定した。１未満（陰影領域）のＣＩ値が測定されることは、薬剤間での相乗的相互作用を強力に支持している。
【図１２Ａ】ＭＶ４−１１細胞を、指示用量の単剤としての化合物Ｅもしくは化合物Ａもしくは化合物Ｂで、またはアザシチジンと組み合わせて処理することを示す。図１２Ａは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定したＣＤ１１ｂの表面量を示す。
【図１２Ｂ】ＭＶ４−１１細胞を、指示用量の単剤としての化合物Ｅもしくは化合物Ａもしくは化合物Ｂで、またはアザシチジンと組み合わせて処理することを示す。図１２Ｂは、処理後９６時間での、ＦＡＣＳによるアポトーシスの評価を示す。
【図１２Ｃ】ＭＶ４−１１細胞を、指示用量の単剤としての化合物Ｅもしくは化合物Ａもしくは化合物Ｂで、またはアザシチジンと組み合わせて処理することを示す。図１２Ｃは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定したＣＤ１１ｂの表面量を示す。
【図１２Ｄ】ＭＶ４−１１細胞を、指示用量の単剤としての化合物Ｅもしくは化合物Ａもしくは化合物Ｂで、またはアザシチジンと組み合わせて処理することを示す。図１２Ｄは、処理後９６時間での、ＦＡＣＳによるアポトーシスの評価を示す。
【図１２Ｅ】ＭＶ４−１１細胞を、指示用量の単剤としての化合物Ｅもしくは化合物Ａもしくは化合物Ｂで、またはアザシチジンと組み合わせて処理することを示す。図１２Ｅは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定したＣＤ１１ｂの表面量を示す。
【図１２Ｆ】ＭＶ４−１１細胞を、指示用量の単剤としての化合物Ｅもしくは化合物Ａもしくは化合物Ｂで、またはアザシチジンと組み合わせて処理することを示す。図１２Ｆは、処理後９６時間での、ＦＡＣＳによるアポトーシスの評価を示す。
【図１３Ａ】化合物Ａとアザシチジンで処理を行うと、アザシチジンまたはビヒクルのみでの処理と比べてｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍増殖が減少したことを示す。
【図１３Ｂ】化合物Ａとアザシチジンで処理を行うと、アザシチジンまたはビヒクルのみでの処理と比べて腫瘍体積の倍率変化が減少したことを示す。
【図１３Ｃ】化合物Ａとアザシチジンで処理を行うと、アザシチジンまたはビヒクルのみでの処理と比べてｉｎ  ｖｉｖｏ生残が増大したことを示す。
【図１４Ａ】ＡＭＬ患者に由来する６つの骨髄サンプルにおけるコロニー形成阻害における、化合物Ａ、化合物Ｊ及びアザシチジンのＩＣ５０値を示す。
【図１４Ｂ】ＨＤＡＣ１／２阻害のみ、及びアザシチジンと組み合わせた、ＡＭＬ患者の一次サンプル４０３１１１３ＳＨのコロニー形成への影響を示す。
【図１４Ｃ】ＨＤＡＣ１／２阻害のみ、及びアザシチジンと組み合わせた、ＡＭＬ患者の一次サンプルＶＭＢＭ０００７のコロニー形成への影響を示す。
【図１４Ｄ】ＨＤＡＣ１／２阻害のみ、及びアザシチジンと組み合わせた、ＡＭＬ患者の一次サンプル１８４０９０５１４のコロニー形成への影響を示す。
【図１４Ｅ】ＨＤＡＣ１／２阻害のみ、及びアザシチジンと組み合わせた、ＡＭＬ患者の一次サンプル１０３１１３ＳＨのコロニー形成への影響を示す。
【図１５Ａ】ＡＭＬ患者の骨髄に由来する、新鮮なＡＭＬ芽球の増殖阻害におけるアザシチジン、化合物Ａ及び化合物ＪのＩＣ５０値を示す。
【図１５Ｂ】ＡＭＬ患者の骨髄に由来する、新鮮なＡＭＬ芽球の増殖阻害におけるアザシチジン、化合物Ａ及び化合物ＪのＡＵＣ（曲線下面積）値を示す。
【図１５Ｃ】アザシチジンの化合物Ｊとの組み合わせは、５つの骨髄サンプルのうち４つにおいて、ＡＭＬ患者に由来する新鮮な初代ＡＭＬ細胞の増殖阻害における、２つの薬剤の相乗的相互作用をもたらすことを示す。
【図１６】化合物Ｅ及びアザシチジンは相乗的に、ＭＶ４−１１  ＡＭＬ細胞内でのＧＡＴＡ２発現を誘発することを示す。
【図１７Ａ】種々のＡＭＬ細胞株はＨＤＡＣ１／２阻害に対して感受性であることを示す。
【図１７Ｂ】示した化合物による処理の７２時間後にＦＡＣＳにより測定した、ＭＶ４−１１（ＡＭＬ）細胞内における骨髄（ｍｙｌｏｉｄ）分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を示す。
【図１７Ｃ】示した化合物による処理の７２時間後にフローサイトメトリーにより測定した、ＭＶ４−１１（ＡＭＬ）細胞の細胞周期評価を示す。
【図１７Ｄ】示した化合物による処理の７２時間後にフローサイトメトリーにより評価した、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していたＭＶ４−１１（ＡＭＬ）細胞、または死んだＭＶ４−１１（ＡＭＬ）細胞のそれぞれのフラクションを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
治療を必要とする対象における、白血病の治療のためのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを本明細書で提供する。治療を必要とする対象における、急性骨髄性白血病の治療のためのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせもまた、本明細書で提供される。本明細書においては、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、有効量のＨＤＡＣ阻害剤を投与すること、あるいは、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む上述の組み合わせを投与することを含む、上記方法もまた提供される。治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、有効量のＨＤＡＣ阻害剤を投与すること、あるいは、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む上述の組み合わせを投与することを含む、上記方法を本明細書で提供する。
定義
【００２７】
本明細書で使用する種々の用語の定義を以下に記載する。これらの定義は、個々に、またはより大きな群の一部としてのいずれかにより、特定の例において別様の限定が行われない限り、本明細書及び特許請求の範囲を通して用いられる用語に適用される。
【００２８】
用語「約」は通常、ある値の１０％、５％、または１％未満の、取り得る変化を示す。例えば、「約２５ｍｇ／ｋｇ」は通常、最も広範な意味においては、２２．５〜２７．５ｍｇ／ｋｇ、即ち２５±２．５ｍｇ／ｋｇの値を示す。
【００２９】
用語「アルキル」とは、ある種の実施形態においては、それぞれ１〜６（Ｃ１−６アルキル）、または１〜８個の炭素原子（Ｃ１−８アルキル）を含有する、飽和直鎖または分枝鎖炭化水素部位を意味する。Ｃ１−６アルキル部位の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル部位が挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−８アルキル部位の例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ネオペンチル、ｎ−ヘキシル、ヘプチル、及びオクチル部位が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
アルキル置換基中の炭素原子の数は接頭辞「Ｃｘ−ｙ」で示すことが可能であり、式中、ｘは置換基内の炭素原子の最小数、かつｙは置換基内の炭素原子の最大数である。同様に、Ｃｘ鎖は、ｘ個の炭素原子を含有するアルキル鎖を意味する。
【００３１】
用語「アルコキシ」とは、−Ｏ−アルキル部位を意味する。
【００３２】
用語「シクロアルキル」または「シクロアルキレン」は、単環式または多環式の、飽和または部分的不飽和環状炭素化合物に由来する一価の基を表す。Ｃ３−８−シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル及びシクロオクチルが挙げられるが、これらに限定されず、Ｃ３−１２−シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、及びビシクロ［２．２．２］オクチルが挙げられるが、これらに限定されない。少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する単環式または多環式環状炭素化合物に由来する基もまた考えられる。かかる基の例としては、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は、３〜６個の炭素原子を有する（Ｃ３−６シクロアルキル）。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は３〜８個の炭素原子を有する（Ｃ３−８シクロアルキル）。
【００３３】
用語「アリール」とは、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、インダニル、インデニル等を含むがこれらに限定されない、１つ以上の芳香環を有する、縮合または非縮合の単環式または多環式環状炭素系を意味する。いくつかの実施形態において、アリール基は６個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態において、アリール基は６〜１０個の炭素原子を有する（Ｃ６−１０−アリール）。いくつかの実施形態において、アリール基は６〜１６個の炭素原子を有する（Ｃ６−１６−アリール）。
【００３４】
用語「ヘテロアリール」とは、少なくとも１個の芳香環を有し、１個の環原子がＳ、Ｏ、Ｎ及びＳｉから選択される５〜１０個の環原子を有し、０、１または２個の環原子はＳ、Ｏ、Ｎ及びＳｉから独立して選択される更なるヘテロ原子であり、残りの環原子は炭素である、単環式または多環式（例えば二環式もしくは三環式、またはそれ以上）の、縮合または非縮合部位または環系を意味する。ヘテロアリールとしては、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、キノキサリニル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３５】
用語「ハロ」とは、ハロゲン、例えばフッ素、塩素、臭素、及びヨウ素を意味する。
【００３６】
用語「アルケニル」は、ある種の実施形態において、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する２〜６個の炭素原子（Ｃ２−６アルケニル）、または２〜８個の炭素原子（Ｃ２−８アルケニル）を含有する炭化水素部分に由来する一価の基を意味する。二重結合は、別の基に結合する箇所であっても、またはなくてもよい。アルケニル基としては、例えばエテニル、プロペニル、ブテニル、１−メチル−２−ブテン−１−イル、ヘプテニル、オクテニル等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
用語「シクロアルキル」は、単環式または多環式の、飽和または部分的不飽和環状炭素化合物に由来する一価の基を意味する。Ｃ３−８−シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロペンチル及びシクロオクチルが挙げられるが、これらに限定されず、Ｃ３−１２−シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、及びビシクロ［２．２．２］オクチルが挙げられるが、これらに限定されない。少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する単環式または多環式環状炭素化合物に由来する基もまた考えられる。かかる基の例としては、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニル等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は３〜６個の炭素原子を有する（Ｃ３−６シクロアルキル（ｃｙｃｌｃｏａｌｋｙｌ））。いくつかの実施形態において、シクロアルキル基は３〜８個の炭素原子を有する（Ｃ３−８シクロアルキル（ｃｙｃｌｃｏａｌｋｙｌ））。
【００３８】
用語「ヘテロシクロアルキル」とは、非芳香族の３、４、５、６もしくは７員環、または二環式もしくは三環式基の縮合または非縮合系を意味し、（ｉ）各環は、酸素、硫黄、及び窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を含有し、（ｉｉ）各５員環は０〜１個の二重結合を有し、かつ各６員環は０〜２個の二重結合を有し、（ｉｉｉ）窒素及び硫黄ヘテロ原子は所望により酸化されていてよく、（ｉｖ）窒素へテロ原子は所望により四級化されていてよく、かつ（ｉｖ）上記環のいずれかはベンゼン環に縮合していてよい。代表的なヘテロシクロアルキル基としては、［１，３］ジオキソラン、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、及びテトラヒドロフリルが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は４〜７、例えば４〜６員環である。
【００３９】
用語「ＨＤＡＣ」とはヒストンデアセチラーゼを意味し、これは、コアヒストン内のリジン残基からアセチル基を取り除くことによって、縮合し、転写によりサイレンシングされたクロマチンの形成をもたらす酵素である。現在１８種類の既知のヒストンデアセチラーゼが存在し、これらは４つの種類に分類される。ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、及びＨＤＡＣ８を含むクラスＩ  ＨＤＡＣは酵母菌ＲＰＤ３遺伝子に関係する。ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ９、及びＨＤＡＣ１０を含むクラスＩＩ  ＨＤＡＣは、酵母菌Ｈｄａ１遺伝子に関係する。サーチュインとしても知られているクラスＩＩＩ  ＨＤＡＣは、Ｓｉｒ２遺伝子に関係し、ＳＩＲＴ１〜７を含む。ＨＤＡＣ１１のみを含有するクラスＩＶ  ＨＤＡＣは、クラスＩ及びＩＩ  ＨＤＡＣの両方の特徴を有する。用語「ＨＤＡＣ」とは、別に明記されない限り、１８種類の既知のヒストンデアセチラーゼの１つ以上を意味する。
【００４０】
用語「ＨＤＡＣ６特異的」は、化合物がＨＤＡＣ６に、ＨＤＡＣ１またはＨＤＡＣ２等の任意の他の種類のＨＤＡＣ酵素よりも実質的に５倍、１０倍、１５倍、２０倍多く、またはそれを超える程度で結合することを意味する。すなわち、化合物は任意の他の種類のＨＤＡＣ酵素よりもＨＤＡＣ６に対して選択的である。例えば、１０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ６に結合し、５０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ１に結合する化合物はＨＤＡＣ６特異的である。一方、５０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ６に結合し、６０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ１に結合する化合物は、ＨＤＡＣ６特異的でない。
【００４１】
用語「ＨＤＡＣ１／２特異的」とは、化合物がＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ２に、ＨＤＡＣ３またはＨＤＡＣ６等の任意の他の種類のＨＤＡＣ酵素よりも実質的に５倍、１０倍、１５倍、２０倍多く、またはそれを超える程度で結合することを意味する。すなわち、化合物は任意の他の種類のＨＤＡＣ酵素よりもＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ２に対して選択的である。例えば、１０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ２に結合し、５０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ３に結合する化合物は、ＨＤＡＣ１／２特異的である。一方、５０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ１及びＨＤＡＣ２に結合し、６０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ３に結合する化合物はＨＤＡＣ１／２特異的でない。
【００４２】
用語「ＨＤＡＣ１／２／６特異的」とは、化合物がＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２及びＨＤＡＣ６に、ＨＤＡＣ３等の任意の他の種類のＨＤＡＣ酵素よりも実質的に５倍、１０倍、１５倍、２０倍多く、またはそれを超える程度で結合することを意味する。すなわち、化合物は任意の他の種類のＨＤＡＣ酵素よりもＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２及びＨＤＡＣ６に対して選択的である。例えば、１０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２及びＨＤＡＣ６に結合し、５０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ３に結合する化合物は、ＨＤＡＣ１／２特異的である。一方、５０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２及びＨＤＡＣ６に結合し、６０ｎＭのＩＣ５０でＨＤＡＣ３に結合する化合物はＨＤＡＣ１／２特異的でない。
【００４３】
用語「組み合わせ」とは、本開示で記載する治療的状態または疾患を治療するための、２つ以上の治療薬を意味する。かかる治療薬の組み合わせは、単一丸薬、カプセル、または静脈内注射用溶液の形態をとってよい。しかし、用語「組み合わせ」はまた、２つ以上の治療薬が別々の丸薬、カプセル、または静脈内注射用溶液である場合の状況も包含する。同様に、用語「併用療法」とは、本開示で記載する治療的状態または疾患を治療するための、２つ以上の治療薬の投与を意味する。かかる投与は、固定比率で有効成分を有する単一のカプセルもしくは複数のカプセル、または各活性成分用の個別の容器（例えばカプセル）等での、これらの治療薬のほぼ同時での同時投与を包含する。更に、かかる投与は、およそ同時、または異なる時間のいずれかでの、連続的方法での各種類の治療薬の使用もまた包含する。いずれかの場合において、治療レジメンは、本明細書で記載される状態または疾患の治療における、薬剤の組み合わせの有益な効果を提供する。
【００４４】
用語「白血病」とは、悪性血液疾患を意味する。用語「白血病」としては、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭＬ）、多形質急性白血病（ＢＡＬ）、毛様細胞性白血病（ＨＣＬ）、または急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
本明細書で使用する場合、用語「ＣＤ１１ｂ発現」とは、分化抗原分子１１Ｂ（ＣＤ１１ｂ）の発現を意味する。
【００４６】
用語「阻害剤」とは、用語「拮抗剤」と同義である。
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤
【００４７】
治療を必要とする対象における白血病の治療方法を本明細書で提供する。本明細書においては、治療を必要とする対象における、白血病（例えばＡＭＬ）の治療のための薬学的組み合わせもまた提供される。
【００４８】
本明細書において提供する組み合わせ及び方法は、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤を含む。ＨＤＡＣ阻害剤は任意のＨＤＡＣ阻害剤とすることができる。したがって、ＨＤＡＣ阻害剤は特定の種類のヒストンデアセチラーゼ酵素に対して選択的であるか、または非選択的であってよい。ＨＤＡＣ阻害剤は選択的ＨＤＡＣ阻害剤であることが好ましい。ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ６特異的阻害剤、ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤、またはＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤であることがより好ましい。
【００４９】
いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は式Ｉの化合物
【化１７】
2017524735.tif 000018
または製薬上許容できるその塩であり、
式中、
環Ｂはアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、これらはそれぞれ、ＯＨ、ハロ、またはＣ１−６アルキルにより任意に置換されてよく、かつ
ＲはＨまたはＣ１−６アルキルである。
【００５０】
代表的な式Ｉの化合物としては
【化１８】
2017524735.tif 000019
または製薬上許容できるその塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
式Ｉの選択的ＨＤＡＣ６阻害剤の調製及び性質は国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２１９８２号で提供されており、その内容全体が参考として本明細書に組み込まれている。
【００５２】
他の実施形態では、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は式ＩＩの化合物
【化１９】
2017524735.tif 000020
または製薬上許容できるその塩であり、
式中、
Ｒｘ及びＲｙは共に、それぞれに結合する炭素と共に、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロへプチル、またはシクロオクチルを形成する。
各ＲＡは独立してＣ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、または−ＮＨ２であり、かつ 
ｍは０、１、または２である。
【００５３】
代表的な式ＩＩの化合物としては
【化２０】
2017524735.tif 000021
または薬学的に許容されるそれらの塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５４】
式ＩＩの選択的ＨＤＡＣ６阻害剤の調製及び性質は国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６０７９１号で提供されており、その内容全体が参考として本明細書に組み込まれている。
【００５５】
いくつかの実施形態では、ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は式ＩＩＩの化合物
【化２１】
2017524735.tif 000022
または製薬上許容できるその塩であり、
式中、
Ｒ１はアリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ２及びＲ３はＣ３−６−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ＯＲ６、Ｃ１−６−アルキル−Ｃ３−６−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ヘテロシクロアルキル、及びＣ２−６−アルケニルからそれぞれ独立して選択され、
Ｒ６はＨまたはＣ１−６−アルキルであり、かつ
Ｒ７はＨまたはＣ３−６−シクロアルキルである。
【００５６】
式ＩＩＩの化合物は化合物Ｅ、または製薬上許容できるその塩で表されるが、これらに限定されない。
【化２２】
2017524735.tif 000023
【００５７】
別の実施形態では、ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は、Ｎ−（２−アミノ−５−（チオフェン−２−イル）フェニル）−２−（ピペラジン−１−イル）キノリン−６−カルボキサミド（または製薬上許容できるその塩）である。
【化２３】
2017524735.tif 000024
【００５８】
式ＩＩＩの選択的ＨＤＡＣ１／２阻害剤、及び化合物Ｊの調製及び性質は米国特許第１４／０６９，７４１号で提供されており、その内容全体が参考として本明細書に組み込まれている。
【００５９】
別の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は４−アセトアミド−Ｎ−（２−アミノ−５−フルオロフェニル）ベンズアミド（化合物Ｆ）、または製薬上許容できるその塩である。
【化２４】
2017524735.tif 000025
【００６０】
ＨＤＡＣ阻害剤化合物Ｆの調製及び性質は国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０５２５７２号で提供されており、その内容全体が参考として本明細書に組み込まれている。
【００６１】
いくつかの実施形態では、ＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤は式ＩＶの化合物
【化２５】
2017524735.tif 000026
または製薬上許容できるその塩である。
式中、
Ｒｘは−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＣＯ２Ｒ１、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）２からなる群から独立して選択され、
ＲｙはＨ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ１−６−アルコキシ、ハロ、−ＯＨ、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１、−ＣＯ２Ｒ１、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）２からなる群から選択され、
各Ｒ１は、それぞれの存在に関して独立して、Ｈ、Ｃ１−６−アルキル、Ｃ３−８−シクロアルキル、Ｃ３−７−ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１−６−アルキル−シクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−６−アルキル−アリール、及びＣ１−６−アルキルヘテロアリールからなる群から選択され、かつ
ＲｚはＣ１−６−アルキル、Ｃ３−８−シクロアルキル、Ｃ３−７−ヘテロシクロアルキル、アリール及びヘテロアリールからなる群から選択される。
【００６２】
式ＩＶの化合物は化合物Ｇ、または製薬上許容できるその塩によって表されるが、これらに限定されない。
【化２６】
2017524735.tif 000027
【００６３】
式ＩＶのＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤の調製及び性質は国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５９８６３号で提供されており、その内容全体が参考として本明細書に組み込まれている。
【００６４】
いくつかの実施形態では、本明細書で記載される化合物は非溶媒和している。他の実施形態では、化合物の１つ以上は溶媒和形態である。当技術分野において既知の通り、溶媒和物は、任意の製薬上許容できる溶媒、例えば水、エタノール等とすることができる。
組み合わせ／薬学的組み合わせ
【００６５】
治療を必要とする対象における白血病の治療のための組み合わせを本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、治療を必要とする対象における、白血病（例えばＡＭＬ）の治療のための、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを提供する。 
【００６６】
組み合わせのいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ６特異的阻害剤である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は式Ｉの化合物
【化２７】
2017524735.tif 000028
または製薬上許容できるその塩である。
【００６７】
好ましい実施態様において、式Ｉの化合物は
【化２８】
2017524735.tif 000029
または製薬上許容できるその塩である。
【００６８】
別の好ましい実施形態において、式Ｉの化合物は
【化２９】
2017524735.tif 000030
または製薬上許容できるその塩である。
【００６９】
他の特定の実施形態において、ＨＤＡＣ６特異的阻害剤は式ＩＩの化合物
【化３０】
2017524735.tif 000031
または製薬上許容できるその塩である。
【００７０】
好ましい実施態様において、式ＩＩの化合物は
【化３１】
2017524735.tif 000032
または製薬上許容できるその塩である。
【００７１】
別の好ましい実施形態において、式ＩＩの化合物は
【化３２】
2017524735.tif 000033
または製薬上許容できるその塩である。
【００７２】
組み合わせのいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤である。特定の実施形態において、ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は、式ＩＩＩの化合物
【化３３】
2017524735.tif 000034
または製薬上許容できるその塩である。
【００７３】
好ましい実施態様において、式ＩＩＩの化合物は
【化３４】
2017524735.tif 000035
または製薬上許容できるその塩である。
【００７４】
別の実施形態において、ＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤は化合物Ｊ
【化３５】
2017524735.tif 000036
または製薬上許容できるその塩である。
【００７５】
別の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は化合物Ｆ
【化３６】
2017524735.tif 000037
または製薬上許容できるその塩である。
【００７６】
組み合わせのいくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤である。他の特定の実施形態において、前記ＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤は式ＩＶの化合物
【化３７】
2017524735.tif 000038
または製薬上許容できるその塩である。
【００７７】
好ましい実施態様において、式ＩＶの化合物は
【化３８】
2017524735.tif 000039
または製薬上許容できるその塩である。
【００７８】
組み合わせのいくつかの実施形態において、アザシチジンは遊離塩基、または製薬上許容できるその塩であってよい。Ｃｉｈａｋ，“Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ５−ａｚａｃｙｔｉｄｉｎｅ  ｉｎ  ｅｕｋａｒｙｏｔｅｓ”，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．．３０（５），ｐｐ．４０５−４２２（１９７４）を参照のこと。５−アザシチジン（アザシチジン、及び４−アミノ−１−β−Ｄ−リボフラノシル−Ｓ−トリアジン−２（１Ｈ）−オンとしても知られている；Ｎａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｄｅｓｉｇｎａｔｉｏｎ  ＮＳＣ−１０２８１６；ＣＡＳ登録番号３２０−６７−２）は、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の治療のために、商標名ビダーザにて販売されている。
【００７９】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶの化合物、化合物Ｆ、及び化合物Ｊは中性形態で示されているものの、いくつかの実施形態では、これらの化合物は製薬上許容できる塩形態で使用される。本明細書で使用する場合、「製薬上許容できる塩」とは、開示した化合物の誘導体を意味し、存在する酸または塩基部位を塩形態に転換することにより、親化合物が改変される。好適な塩の一覧は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８  ａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）に見出され、これらはそれぞれ、その全体が本明細書に参照として組み込まれている。
投与／用量
【００８０】
いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶの化合物、化合物Ｆまたは化合物Ｊ）はアザシチジンと同時に投与される。同時投与は通常、両方の化合物が正確に同じ時間に、患者内に入ることを意味する。しかし、同時投与はまた、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンが異なる時間に患者内に入るが、最初に投与される化合物は、二番目に投与される化合物が中に入る前に患者に効果を及ぼす時間には投与されないように、時間差が極めて十分少ないという可能性も含む。かかる遅延時間は通常、１分未満、より典型的には３０秒未満に対応する。化合物が溶液中にある一実施例において、同時投与は化合物の組み合わせを含有する溶液を投与することにより達成されることができる。別の実施例において、一方がＨＤＡＣ阻害剤を含有し、他方がアザシチジンを含有する別々の溶液の同時投与を用いることができる。化合物が固体状である一実施例において、同時投与は、化合物の組み合わせを含有する組成物を投与することにより達成することができる。あるいは、同時投与は、一方がＨＤＡＣ阻害剤を含み、他方がアザシチジンを含む２つの別の組成物を投与することにより達成することができる。
【００８１】
別の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンは同時に投与されない。いくつかの実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤はアザシチジンより前に投与される。他の実施形態では、アザシチジンはＨＤＡＣ阻害剤より前に投与される。他の実施形態では、最初に投与される化合物は、二番目に投与される化合物が投与される前に患者に効果を及ぼす時間に投与される。通常、時間差は、最初に投与される化合物の、患者への効果が終了する時間を超えて、または、最初に投与される化合物が患者内で完全に、または実質的に取り除かれるかまたは失活される時間を超えては延びない。
【００８２】
いくつかの実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの一方または両方は、治療に有効な量または用量で投与される。「治療上有効な量」とは、患者にそれ自体を投与した時に、白血病を効果的に治療するＨＤＡＣ阻害剤（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶの化合物、化合物Ｆもしくは化合物Ｊ）またはアザシチジンの量である。特定の対象に関する、所与の例において「治療に有効な量」であることを証明する量は、検討中の疾病または状態を同様に治療した対象の１００％に有効でない場合があるが、かかる用量は当業者により「治療に有効な量」とみなされる。治療に有効な量に対応する化合物の量は、癌の種類、癌のステージ、治療中の患者の年齢、及び他の要因に強く依存する。一般に、これら化合物の治療に有効な量は、上で引用した支持参照文献に提供されている等、当該技術分野において公知である。
【００８３】
別の実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの一方または両方は、治療に有効な量または用量以下で投与される。治療に有効な量以下とは、患者にそれ自体を投与した時に、目的とする標的の生物活性を時間の経過とともに完全に阻害しないＨＤＡＣ阻害剤（式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶの化合物、化合物Ｆもしくは化合物Ｊ）またはアザシチジンの量である。
【００８４】
治療量、または治療量以下で投与されるか否かに関わらず、ＨＤＡＣ阻害剤とアザシチジンの組み合わせは白血病、例えばＡＭＬの治療に効果的でなければならない。例えば、治療量以下のアザシチジンの化合物は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶの化合物、化合物Ｆ、または化合物Ｊ（ＨＤＡＣ阻害剤）と組み合わせる場合に有効量となることができ、組み合わせが白血病の治療に効果的となる。例えば、治療量以下のアザシチジンの化合物は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩの化合物、化合物Ｆ、または化合物Ｊ（ＨＤＡＣ阻害剤）と組み合わせた場合に有効量となることができ、組み合わせは白血病の治療に効果的であり、化合物の一方または両方が単独で投与される場合に効果的でないが、組み合わせではこの量が効果的となる用量で、組み合わせが投与される。
【００８５】
いくつかの実施形態において、化合物の組み合わせは、白血病の治療で相乗効果（即ち相加効果よりも大きい）を示す。更なる実施形態では、化合物の組み合わせは、急性骨髄性白血病の治療において相乗効果（即ち相加効果よりも大きい）を示す。用語「相乗効果」とは、例えば、癌の症状の進行または癌の症状を遅らせる等の効果を生み出す、例えばＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジン等の２つの作用物質の、それぞれの作用物質が単独で投与される効果を単純に加えるよりも大きい作用を意味する。相乗効果は例えば、Ｓｉｇｍｏｉｄ−Ｅｍａｘ式（Ｈｏｌｆｏｒｄ，Ｎ．Ｈ．Ｇ．ａｎｄ  Ｓｃｈｅｉｎｅｒ，Ｌ．Ｂ．，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．６：４２９−４５３（１９８１））、Ｌｏｅｗｅ相加効果の式（Ｌｏｅｗｅ，Ｓ．ａｎｄ  Ｍｕｉｓｃｈｎｅｋ，Ｈ．，Ａｒｃｈ．Ｅｘｐ．Ｐａｔｈｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１４：３１３−３２６（１９２６））及びｍｅｄｉａｎ−ｅｆｆｅｃｔ式（Ｃｈｏｕ，Ｔ．Ｃ．ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．２２：２７−５５（１９８４））等の好適な方法を用いて計算することができる。上で言及した各式を実験データに当てはめて対応するグラフを生成することで、薬剤の組み合わせの効果を評価するのに役立つ。上で言及した式と関係する、対応するグラフはそれぞれ、濃度効果曲線、アイソボログラム曲線、及び組み合わせ指数曲線である。
【００８６】
本明細書において提供する好ましい実施形態は、式ＩのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせ及び方法である。したがって、一実施形態において、組み合わせ及び方法は化合物Ａ及びアザシチジンを含む。別の実施形態において、組み合わせ及び方法は化合物Ｂ及びアザシチジンを含む。本明細書において提供する別の好ましい実施形態において、組み合わせ及び方法は式ＩＩのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む。したがって、一実施形態において、組み合わせ及び方法は化合物Ｃ及びアザシチジンを含む。別の実施形態において、組み合わせ及び方法は化合物Ｄ及びアザシチジンを含む。本明細書において提供する別の好ましい実施形態において、組み合わせ及び方法は式ＩＩＩのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む。したがって、一実施形態において、組み合わせ及び方法は化合物Ｅ及びアザシチジンを含む。本明細書において提供する別の好ましい実施形態では、組み合わせ及び方法はＨＤＡＣ阻害剤化合物Ｊ及びアザシチジンを含む。本明細書において提供する別の好ましい実施形態において、組み合わせ及び方法はＨＤＡＣ阻害剤化合物Ｆ及びアザシチジンを含む。本明細書において提供する別の好ましい実施形態において、組み合わせ及び方法は式ＩＶのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む。したがって、一実施形態において、組み合わせ及び方法は化合物Ｇ及びアザシチジンを含む。
【００８７】
異なる実施形態において、組み合わせ、及び使用する有効量に応じて、化合物の組み合わせは白血病の増殖を阻害することができるか、白血病の安定状態を達成できるか、あるいは実質的または完全な白血病の退縮を達成することができる。
【００８８】
ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの量は、白血病の効果的治療をもたらさなければならないが、組み合わせる場合、これらの量は患者にとって過度に毒性を有しないことが好ましい（即ち、量は医学的ガイドラインにより確立されている毒性制限内にあることが好ましい）。いくつかの実施形態において、過度の毒性を防止する、かつ／または白血病のより効果的な治療を提供するために、投与される合計の用量に制限が設けられる。通常、本明細書で考慮される量は１日あたりである。しかし、半日及び２日、または３日サイクルもまた、本明細書で考慮される。
【００８９】
異なる投薬レジメンを使用して白血病を治療してよい。いくつかの実施形態において、上記の代表的用量のいずれかといった、１日分の用量は、３、４、５、６、７、８、９、または１０日間で、１日に１回、２回、３回、または４回投与される。癌のステージ及び重症度に応じて、高用量でより短い治療時間（例えば最大５日）を用いてよく、または低用量でより長い治療時間（例えば１０日以上、または数週間、または１ヶ月、またはそれ以上）を用いてよい。いくつかの実施形態において、１日１回または２回の用量を、隔日で投与する。いくつかの実施形態において、各用量は、一回用量として送達されるＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの両方を含有するが、別の実施形態において、各用量は個別の用量として送達されるＨＤＡＣ阻害剤またはアザシチジンを含有する。
【００９０】
純粋な形態または適切な医薬組成物中の、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶの化合物、化合物Ｆもしくは化合物Ｊ、またはこれらの製薬上許容できる塩もしくは溶媒和形態は、当該技術分野において公知の、容認された投与法または作用物質のいずれかを介して投与することができる。化合物は例えば、経口、経鼻、非経口（静脈内、筋肉内、または皮下）、局所、経皮、腟内、膀胱内、嚢内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、または直腸投与することができる。剤形は例えば、好ましくは正確な用量の簡便な投与に好適な単位剤形の、固体、半固体、凍結乾燥粉末、または液体用量剤形、例えば錠剤、丸薬、軟弾性または硬ゼラチンカプセル、粉末、溶液、懸濁液、座薬、エアゾール等とすることができる。特定の投与経路は経口投与、特に、便利な毎日の投薬レジメンが、治療される病気の重症度の度合いに従って調節可能なものである。
【００９１】
上述のように、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの薬学的組み合わせは、単一の単位用量または個別の投薬形態で投与されることができる。したがって、語句「薬学的組み合わせ」は、単一投与形態または個別の投薬形態のいずれかの、２つの薬剤の組み合わせを含む。即ち、本明細書を通して記載される製薬上許容できる担体及び賦形剤を、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンと単一の単位用量で組み合わせることが可能であり、同様に、これらの化合物が個別に投与される場合は、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンと個々に組み合わせることができる。
【００９２】
助剤及びアジュバント剤としては、例えば、保存剤、湿潤剤、懸濁剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、乳化剤、及び分配剤を挙げてよい。微生物の作用の防止は通常、種々の抗菌及び抗カビ剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等により提供される。等張剤（例えば糖類、塩化ナトリウム等）もまた含んでよい。注射可能な薬剤形態の長時間にわたる吸収は、吸収遅延剤、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを使用することによりもたらされることができる。助剤としてはまた、湿潤剤、乳化剤、ｐＨ緩衝剤、及び酸化防止剤、例えばクエン酸、モノラウリル酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、ブチル化ヒドロキシトルエン等を挙げることができる。
【００９３】
固体投薬形態はコーティング剤及びシェル、例えば当該技術分野において公知の腸溶性コーティング等により調製することができる。コーティング剤及びシェルは鎮圧剤を含有することができ、腸管の特定の部分にて、活性化合物または化合物類を遅れて放出するような組成物とすることができる。使用可能な組み込み組成物の例は高分子物質及びワックスである。活性化合物は、適切である場合、上述の賦形剤の１つ以上と共にマイクロカプセル化形態とすることもできる。
【００９４】
経口投与用の液体用量剤形としては、製薬上許容できるエマルション、溶液、懸濁液、シロップ剤、及びエリキシル剤が挙げられる。かかる投薬形態は、例えば、本明細書で記載されるＨＤＡＣ阻害剤もしくはアザシチジン、または製薬上許容できるそれらの塩と、担体内の任意の薬学的アジュバント、例えば水、生理食塩水、デキストロース水溶液、グリセロール、エタノール等；可溶化剤及び乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド；油類、特に綿実油、落花生油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油及びゴマ油、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタン脂肪酸エステル；またはこれらの物質の混合物等を溶解、分散等することにより溶液または懸濁液を形成することにより調製される。
【００９５】
通常、目的の投与方法に応じて、製薬上許容できる組成物は、約１重量％〜約９９重量％の、本明細書で記載される化合物または製薬上許容できるその塩、及び９９重量％〜１重量％の製薬上許容できる賦形剤を含有する。一実施例において、組成物の約５重量％〜約７５重量％は、本明細書で記載される化合物、または製薬上許容できるその塩であり、残りは好適な医薬品賦形剤である。
【００９６】
かかる投薬形態の実際の調製方法は当業者に周知であるか、または明らかとなるであろう。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄ．  （Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０）を参照のこと。
方法
【００９７】
治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、本明細書において提供する薬学的組み合わせを投与することを含む、上記方法を本明細書で提供する。更に、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象にＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含む、上記方法を本明細書で提供する。したがって、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを投与すること、あるいは、上記対象に治療に有効な量のＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。本明細書において提供する方法の好ましい実施形態では、白血病は急性骨髄性白血病である。本明細書において提供する方法の別の好ましい実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ６特異的、ＨＤＡＣ１／２特異的、またはＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤である。本明細書において提供する方法の別の好ましい実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩまたは式ＩＶの化合物である。本明細書において提供する方法の別の好ましい実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈまたは化合物Ｊである。
【００９８】
本明細書においては、治療を必要とする対象における、ＣＤ１１ｂを発現する癌の治療方法であって、上記対象に、本明細書において提供する薬学的組み合わせを投与することを含む、上記方法もまた提供される。更に、治療を必要とする対象におけるＣＤ１１ｂを発現する癌の治療方法であって、上記対象にＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含む、上記方法を本明細書で提供する。したがって、治療を必要とする対象におけるＣＤ１１ｂを発現する癌の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを投与すること、あるいは、上記対象に治療に有効な量のＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。本明細書において提供する方法の別の好ましい実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤はＨＤＡＣ６特異的、ＨＤＡＣ１／２特異的、またはＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤である。本明細書において提供する方法の別の好ましい実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩまたは式ＩＶの化合物である。本明細書において提供する方法の別の好ましい実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈまたは化合物Ｊである。
【００９９】
本明細書で考慮される対象は通常、ヒトである。しかし、対象は治療が所望される任意の哺乳類とすることができる。したがって、本明細書記載の方法はヒト、及び獣医学用途の両方に適用することができる。
【０１００】
用語「治療すること」または「治療」は、方法が、少なくとも、緩和された異常細胞増殖を有することを示す。例えば、本方法は、患者の白血病進行速度の低下、または白血病の継続した増殖もしくは拡大の防止、あるいは白血病の全体的な到達を低下させることができる。
【０１０１】
一実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ６特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【０１０２】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【０１０３】
更に他の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【０１０４】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に治療に有効な量の式Ｉの化合物、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【０１０５】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＩの化合物、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【０１０６】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＩＩの化合物、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【０１０７】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＶの化合物、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【０１０８】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ａ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【０１０９】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｂ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１１０】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｃ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン（ａｚａｃｉｔｄｉｎｅ）、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１１１】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｄ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１１２】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｅ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１１３】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｆ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１１４】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｇ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１１５】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｈ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１１６】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｊ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１１７】
一実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ６特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書で提供する。
【０１１８】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１１９】
更に他の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１２０】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に治療に有効な量の式Ｉの化合物、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１２１】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＩの化合物、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１２２】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＩＩの化合物、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１２３】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＶの化合物、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１２４】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ａ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１２５】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｂ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１２６】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｃ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン（ａｚａｃｉｔｄｉｎｅ）、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１２７】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｄ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１２８】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｅ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１２９】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｆ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１３０】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｇ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１３１】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｈ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１３２】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｊ、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１３３】
一実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ６特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。
【０１３４】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１３５】
更に他の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１３６】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式Ｉの化合物、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１３７】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＩの化合物、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１３８】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＩＩの化合物、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１３９】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＶの化合物、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１４０】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ａ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１４１】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｂ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１４２】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｃ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１４３】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｄ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１４４】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｅ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１４５】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｆ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１４６】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｇ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１４７】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｈ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１４８】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｊ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１４９】
一実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ６特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１５０】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１５１】
更に他の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量のＨＤＡＣ１／２／６特異的阻害剤、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１５２】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式Ｉの化合物、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１５３】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＩの化合物、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１５４】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＩＩの化合物、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１５５】
別の実施形態では、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の式ＩＶの化合物、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む上記方法を、本明細書において提供する。
【０１５６】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ａ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１５７】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｂ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１５８】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｃ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１５９】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｄ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１６０】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｅ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１６１】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｆ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１６２】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｇ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１６３】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｈ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１６４】
別の実施形態は、治療を必要とする対象における急性骨髄性白血病の治療方法であって、上記対象に、治療に有効な量の化合物Ｊ、または製薬上許容できるその塩を投与することを含む、上記方法である。
【０１６５】
本明細書においては、白血病細胞の移動及び／または浸潤の阻害方法もまた提供される。特に、阻害を必要とする対象における、白血病細胞の移動及び／または浸潤の阻害方法を本明細書で提供する。特に、阻害を必要とする対象における、白血病細胞、または両方の移動及び浸潤の阻害方法であって、上記対象に、治療に有効な量の、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、化合物Ａ、化合物Ｂ、化合物Ｃ、化合物Ｄ、化合物Ｅ、化合物Ｆ、化合物Ｇ、化合物Ｈ、または化合物ＪのＨＤＡＣ阻害剤を投与することを含む、上記方法を本明細書において提供する。一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は化合物Ｊ、または製薬上許容できるその塩である。
【０１６６】
ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを投与することによる、癌細胞の細胞生存能の低下方法を本明細書で提供する。一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は化合物Ｊ、または製薬上許容できるその塩である。
【０１６７】
本明細書においては、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを投与することによる、癌細胞分化の誘発方法もまた提供される。一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は化合物Ｊ、または製薬上許容できるその塩である。
【０１６８】
本明細書においては、ＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンを含む組み合わせを投与することによる、癌細胞アポトーシスの誘発方法もまた提供される。一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は化合物Ｊ、または製薬上許容できるその塩である。
キット
【０１６９】
別の実施形態において、キットが提供される。本明細書において提供するキットはとしては、本明細書において提供する化合物または組成物を含むパッケージが挙げられる。いくつかの実施形態において、キットはＨＤＡＣ阻害剤、または製薬上許容できるその塩、及びアザシチジン、または製薬上許容できるその塩を含む。
【０１７０】
語句「パッケージ」とは、本明細書で提示される化合物または組成物を含有するあらゆる容器を意味する。いくつかの実施形態において、パッケージは箱またはラッピングとすることができる。薬剤製品のパッケージングに使用するためのパッケージ材料は、当業者に既知である。薬剤パッケージ材料の例としては、ボトル、チューブ、吸入器、ポンプ、バッグ、バイアル瓶、容器、シリンジ、ボトル、並びに、選択された配合物、並びに目的の投与方法及び治療に適した任意のパッケージ材料が挙げられるが、これらに限定されない。 
【０１７１】
キットはまた、パッケージ内には含有されていないが、パッケージの外側に取り付けられた要素、例えばピペットも含有することができる。
【０１７２】
キットは更に、本明細書において提供する化合物または組成物を患者に投与するための取扱説明書を含有することができる。キットはまた、監督官庁、例えば米国食品医薬品局により認可された、本明細書の化合物の使用のための取扱説明書も含むことができる。キットはまた、化合物用のラベリングまたは添付文書を含有することができる。パッケージ及び／または添付文書は、それら自体が監督官庁により認可されてもよい。キットは、パッケージ内に固相または液相（緩衝液等が提供される）の化合物を含むことができる。キットはまた、本方法を実施することに関する、溶液調製のための緩衝液、及び、ある容器から別の容器に液体を移し替えるためのピペットを含むこともできる。
【実施例】
【０１７３】
説明の目的のため、及び本明細書において提供するある種の特定の実施形態を記載するために、実施例について以下で説明する。しかし、特許請求の範囲は、本明細書で説明する実施例によりいかなるようにも限定されるべきでない。開示された実施形態に対する種々の変更及び修正が当業者には明白であり、本明細書において提供する化学構造、置換基、誘導体、配合物及び／または方法に関するが、これらに限定されないものを含む、かかる変更及び修正は、本明細書において提供する精神、及び添付の特許請求の範囲の範囲を逸脱しないことができる。本明細書のスキームにおける構造の変数の定義は、本明細書で提示される式内での対応する位置の変数と同じである。
【０１７４】
式Ｉの化合物（化合物Ａ及びＢ）の合成はＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０２１９８２で提供され、その全体が本明細書に参照として組み込まれる。式ＩＩの化合物（化合物Ｃ及びＤ）の合成はＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０６０７９１で提供され、その全体が本明細書に参照として組み込まれる。式ＩＩＩの化合物、及び化合物Ｊの合成は米国出願第１４／０６９，７４１号で提供され、その全体が本明細書に参照として組み込まれる。式ＩＶの化合物（例えば化合物Ｇ）の合成は国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５９８６３号で提供され、その全体が本明細書に参照として組み込まれる。
【０１７５】
実施例１：２−（ジフェニルアミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ａ）の合成
【化３９】
2017524735.tif 000040
中間体２の合成：ＤＭＦ（１００ｍｌ）中のアニリン（３．７ｇ、４０ｍｍｏｌ）、化合物１（７．５ｇ、４０ｍｍｏｌ）、及びＫ２ＣＯ３（１１ｇ、８０ｍｍｏｌ）の混合物を脱気させ、窒素下にて１２０℃で一晩攪拌した。反応混合物を室温まで冷却してＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で希釈し、次いで飽和ブライン（２００ｍｌ×３）で洗浄した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４を通して乾燥させ、蒸発させて乾燥させ、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）により精製し、所望の生成物を白色固体（６．２ｇ、６４％）として得た。
【０１７６】
中間体３の合成：ＴＥＯＳ（２００ｍＬ）中の、化合物２（６．２ｇ、２５ｍｍｏｌ）、ヨードベンゼン（６．１２ｇ、３０ｍｍｏｌ）、ＣｕＩ（９５５ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１６．３ｇ、５０ｍｍｏｌ）の混合物を脱気させて窒素パージした。得られた混合物を１４０℃で１４時間攪拌した。室温まで冷却した後、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）で希釈した。９５％のＥｔＯＨ（２００ｍｌ）、及びシリカゲル上のＮＨ４Ｆ−Ｈ２Ｏ［５０ｇ、シリカゲル（５００ｇ、１００〜２００メッシュ）に、ＮＨ４Ｆ（１００ｇ）水溶液（１５００ｍｌ）を添加することにより予め調製］を加え、得られた混合物を室温で２時間保持した。固化した材料を濾過し、ＥｔＯＡｃで洗浄した。濾液を蒸発させて乾燥させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝１０／１）により精製し、黄色固体（３ｇ、３８％）を得た。
【０１７７】
中間体４の合成：化合物３（３．０ｇ、９．４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２００ｍｌ）溶液に２ＮのＮａＯＨ（２００ｍｌ）を加えた。混合物を６０℃で３０分間攪拌した。溶媒を蒸発させた後、溶液を２ＮのＨＣｌで中和し、白色沈殿物を得た。懸濁液をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍｌ）で抽出し、有機層を分離し、水（２×１００ｍｌ）、ブライン（２×１００ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４を通して乾燥させた。溶媒を除去して茶色固体（２．５ｇ、９２％）を得た。 
【０１７８】
中間体６の合成：化合物４（２．５ｇ、８．５８ｍｍｏｌ）、化合物５（２．５２ｇ、１２．８７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３．９１ｇ、１０．３０ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（４．４３ｇ、３４．３２ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で一晩攪拌した。反応混合物を濾過した後、濾液を蒸発させて乾燥させ、残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ＝２／１）により精製し、茶色固体（２ｇ、５４％）を得た。
【０１７９】
２−（ジフェニルアミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ａ）の合成：ＭｅＯＨ（５０ｍｌ）及びＤＣＭ（２５ｍｌ）中の、化合物６（２．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）、水酸化ナトリウム（２Ｎ、２０ｍＬ）の混合物を０℃で１０分間攪拌した。ヒドロキシルアミン（５０％）（１０ｍｌ）を０℃に冷却し、混合物に加えた。得られた混合物を室温で２０分間攪拌した。溶媒の除去後、混合物を１ＭのＨＣｌで中和して白色沈殿物を得た。粗生成物を濾過し、分取ＨＰＬＣにより精製して白色固体（９５０ｍｇ、４８％）を得た。
【０１８０】
実施例２：２−（（２−クロロフェニル）（フェニル）アミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｂ）の合成
【化４０】
2017524735.tif 000041
中間体２の合成：実施例１の中間体２の合成を参照のこと。
【０１８１】
中間体３の合成：ＤＭＳＯ（６９０ｍｌ）中の、化合物２（６９．２ｇ、１当量）、１−クロロ−２−ヨードベンゼン（１３５．７ｇ、２当量）、Ｌｉ２ＣＯ３（４２．０４ｇ、２当量）、Ｋ２ＣＯ３（３９．３２ｇ、１当量）、Ｃｕ（１当量、４５μｍ）の混合物を脱気させて窒素パージした。得られた混合物を１４０℃で攪拌した。反応を実施して、９３％収率で化合物３を得た。
【０１８２】
中間体４の合成：実施例１の中間体４の合成を参照のこと。
【０１８３】
中間体６の合成：実施例１の中間体６の合成を参照のこと。
【０１８４】
２−（（２−クロロフェニル）（フェニル）アミノ）−Ｎ−（７−（ヒドロキシアミノ）−７−オキソヘプチル）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｂ）の合成：実施例１での化合物Ａの合成を参照のこと。
【０１８５】
実施例３：２−（（１−（３−フルオロフェニル）−シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｃ）の合成
【化４１】
2017524735.tif 000042
中間体２の合成：乾燥ＤＭＦ（１０００ｍｌ）内の化合物１（１００ｇ、０．７４ｍｏｌ）の溶液に、１，５−ジブロモペンタン（１７０ｇ、０．７４ｍｏｌ）を加えた。ＮａＨ（６５ｇ、２．２当量）を滴加する一方、反応を氷浴中で冷却した。得られた混合物を５０℃で一晩激しく攪拌した。懸濁液を氷水で注意深くクエンチし、酢酸エチル（３×５００ｍｌ）で抽出した。合一させた有機層を濃縮して粗生成物を得、これをフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物２を淡色固体（１００、６７％）として得た。 
【０１８６】
中間体３の合成：化合物２（１００ｇ、０．４９ｍｏｌ）のＰＰＡ（５００ｍｌ）溶液を、１１０℃で５〜６時間加熱した。完了後、飽和ＮａＨＣＯ３溶液により、得られた混合物のｐＨを注意深く約８〜９に調節した。得られた沈殿物を収集し、水（１０００ｍｌ）で洗浄して、化合物３を白色固体（９５ｇ、８７％）として得た。
【０１８７】
中間体４の合成：化合物３（９５ｇ、０．４３ｍｏｌ）のｎ−ＢｕＯＨ（８００ｍｌ）溶液に、ＮａＣｌＯ（２６０ｍｌ、１．４当量）を加えた。次に、０℃で３ＮのＮａＯＨ（４００ｍＬ、２．８当量）を加え、反応物を室温で一晩攪拌した。得られた混合物をＥＡ（２×５００ｍｌ）で抽出し、合一させた有機層をブラインで洗浄した。溶媒を減圧下で除去して粗生成物を得、これをＨＣｌ塩で処理することで更に精製し、化合物４を白色粉末（７２ｇ、７３％）として得た。
【０１８８】
中間体６の合成：化合物４（２．２９ｇ、１０ｍｍｏｌ）のジオキサン（５０ｍｌ）溶液に、化合物５（１．８７ｇ、１．０当量）及びＤＩＰＥＡ（２．５８ｇ、２．０当量）を加えた。混合物を１１０〜１２０℃で一晩攪拌した。得られた混合物をシリカゲルカラム上で直接精製し、カップリング生成物である化合物６を白色固体（１．３７ｇ、４０％）として得た。
【０１８９】
２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｃ）の合成：
化合物６（１００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１０ｍＬ、１：１）溶液に、５０％のＮＨ２ＯＨ水溶液（２ｍＬ、過剰）を加えた。次に、ＭｅＯＨの飽和ＮａＯＨ溶液（２ｍｌ、過剰）を０℃で加え、反応を３〜４時間攪拌した。完了後、得られた混合物を濃縮し、２ＮのＨＣｌで酸性化してｐＨを４〜５にした。沈殿物を収集し、水（１０ｍｌ）で洗浄して過剰のＮＨ２ＯＨを除去した。得られた２−（（１−（３−フルオロフェニル）シクロヘキシル）アミノ）−Ｎ−ヒドロキシピリミジン−５−カルボキサミド沈殿物を白色粉末（７０ｍｇ、７３％）として乾燥させた。 
【０１９０】
実施例４：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（１−フェニルシクロプロピル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｄ）の合成
【化４２】
2017524735.tif 000043
中間体２の合成：化合物１、ベンゾニトリル（２５０ｇ、１．０当量）及びＴｉ（ＯｉＰｒ）４（１３３０ｍｌ、１．５当量）のＭＢＴＥ（３７５０ｍｌ）溶液を、窒素雰囲気下にて約−１０〜−５℃まで冷却した。ＥｔＭｇＢｒ（１６１０ｍｌ、３．０Ｍ、２．３当量）を６０分間にわたって滴加し、この間の反応の内部温度は５℃以下に保った。反応混合物を、１時間で１５〜２０℃まで温めた。ＢＦ３−エーテル（１３００ｍｌ、２．０当量）を６０分間にわたって滴加し、この間、内部温度は１５℃以下に維持した。反応混合物を１〜２時間、１５〜２０℃で攪拌し、低量のベンゾニトリルが残った時に停止した。１ＮのＨＣｌ（２５００ｍｌ）を滴加し、この間、内部温度は３０℃以下に維持した。ＮａＯＨ（２０％、３０００ｍｌ）を滴加してｐＨを約９．０にし、この間、温度は３０℃以下に依然として維持した。反応混合物をＭＴＢＥ（３Ｌ×２）及びＥｔＯＡｃ（３Ｌ×２）で抽出し、合一させた有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下（４５℃以下）で濃縮し、赤色油を得た。ＭＴＢＥ（２５００ｍｌ）を油に加えて透明溶液を得、乾燥ＨＣｌ気体でバブリングすると固体が沈殿した。この固体を濾過し、真空乾燥させて化合物２を１４３ｇ得た。
【０１９１】
中間体４の合成：化合物２（６２０ｇ、１．０当量）及びＤＩＰＥＡ（１０８０ｇ、２．２当量）をＮＭＰ（３１００ｍｌ）中に溶解させ、２０分間攪拌した。化合物３（６８０ｇ、１．０２当量）を加え、反応混合物を４時間、約８５〜９５℃まで加熱した。溶液を、ゆっくりと室温まで冷却させた。本溶液をＨ２Ｏ（２０Ｌ）に注ぎ、激しく攪拌することにより、固体の大部分を溶液から沈殿させた。混合物を濾過し、ケークを５０℃にて２４時間、減圧下にて乾燥させ、化合物４を８９６ｇ（固体、８６．８％）得た。
【０１９２】
Ｎ−ヒドロキシ−２−（（１−フェニルシクロプロピル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｄ）の合成：ＭｅＯＨ溶液（１００ｍｌ）を、攪拌しながら約０〜５℃まで冷却した。ＮＨ２ＯＨ  ＨＣｌ（１１０７ｇ、１０当量）を加え、続いてＮａＯＣＨ３（１０００ｇ、１２．０当量）を注意深く加えた。得られた混合物を０〜５℃で１時間攪拌し、濾過して固体を取り除いた。化合物４（４５０ｇ、１．０当量）を１回で反応混合物に加え、化合物４が消費されるまで２時間、１０℃で攪拌した。反応混合物のｐＨを、ＨＣｌ（６Ｎ）を添加することで約８．５〜９に調節し、結果的に沈殿させた。混合物を減圧下にて濃縮した。激しく攪拌しながら水（３０００ｍｌ）を残留物に加え、沈殿物を濾過により収集した。生成物をオーブン内で４５℃にて一晩乾燥させた（３４０ｇ、収率７９％）。
【０１９３】
実施例５：Ｎ−（２−アミノ−５−（チオフェン−２−イル）フェニル）−２−シクロプロピル−１−（２−モルホリノエチル）−１Ｈ−インドール−５−カルボキサミド（化合物Ｅ）の合成
【化４３】
2017524735.tif 000044
実験手順
工程１：化合物１のＤＣＥ溶液に、ＰＯＢｒ３及びイミダゾールを加えた。反応を８０℃で一晩攪拌した。反応に水及びＤＣＭを添加し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、減圧下にて乾燥させて化合物２を得た。
工程２：化合物２のＤＭＳＯ溶液に、化合物ａ及びＫＯＨを加えた。得られた反応混合物を４５℃で４時間攪拌し、Ｈ２ＯでクエンチしてＥＡで抽出した。合一させた有機層をゲルクロマトグラフィーにより精製し、所望の生成物である化合物３を得た。
工程３：トルエン及び水中の、化合物３、シクロプロピルボロン酸、Ｐｄ（ＯＡｃ）２、トリシクロヘキシルホスフィン、及びＫ３ＰＯ４の混合物を、窒素雰囲気下にて１００℃で一晩攪拌した。混合物を冷却し、濾過し、濃縮して残留物を得、これを分取ＴＬＣにより精製して化合物４を得た。
工程４：ＥｔＯＨ及びＴＨＦ中の化合物４及びＮａＯＨの混合物を、６０℃で５時間攪拌した。混合物を濃縮して残留物を得、これに飽和クエン酸水溶液を添加してＥＡで抽出した。有機層を分離し、乾燥させて濾過及び濃縮し、化合物５を得た。
工程５：ＤＭＦ中の化合物５、ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−４−（チオフェン−２−イル）フェニルカルバメート、ＨＯＡＴ、ＥＤＣＩ、及びＤＩＰＥＡの混合物を５５℃で一晩攪拌した。混合物に水を添加し、ＥＡで抽出した。有機層を分離し、乾燥させ、濾過及び濃縮して残留物を得、これを分取ＴＬＣにより精製して化合物６を得た。
工程６：化合物６のＤＣＭ溶液にＴＦＡを添加し、室温で１時間攪拌した。混合物を濃縮して残留物を得、これを分取ＨＰＬＣにより精製して化合物７を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ） δ ９．６３ （ｓ， １Ｈ）， ８．１６ （ｓ， １Ｈ）， ７．７９ − ７．７３ （ｍ， １Ｈ）， ７．５１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．３６ （ｄ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．３， ２．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．０， ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．２４ （ｓ， １Ｈ）， ５．１２ （ｓ， ２Ｈ）， ４．４３ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５７ （ｓ， ５Ｈ）， ２．７７ − ２．５８ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０９ （ｓ， １Ｈ）， １．０２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ０．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ， ２Ｈ）．ＬＣＭＳ： ｍ／ｚ ＝ ４８７．２ （Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９４】
実施例６：Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−フェニル−１−（フェニルカルバモイル）ピリミジン−４−イル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（化合物Ｇ）の合成
【化４４】
2017524735.tif 000045
工程１：化合物８（８５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）溶液に、イソシアナートベンゼン（４６ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）を室温で加えた。反応を２時間攪拌し、続いて減圧下で濃縮し化合物９を得た（８０ｇ、収率：６９％）。
工程２：化合物９（８０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）及びＤＣＭ（１ｍｌ）溶液に、０℃でＮＨ２ＯＨ（０．２ｍｌ）を添加した。反応を１０分間攪拌し、この時点でＮａＯＨ／ＭｅＯＨ（０．４ｍｌ）を添加した。反応を２時間攪拌した。得られた反応混合物を濃縮し、２ＮのＨＣｌを使用してｐＨ＝５に調節し、ＥＡ（１０ｍｌ）で抽出して分取ＨＰＬＣにより精製し、Ｎ−ヒドロキシ−２−（（４−フェニル−１−（フェニルカルバモイル）ピペリジン−４−イル）アミノ）ピリミジン−５−カルボキサミド（１４ｍｇ、１７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ） δ １０．８３ （ｓ， １Ｈ）， ８．９６ （ｓ， １Ｈ）， ８．６０ （ｓ， １Ｈ）， ８．４９ （ｓ， ２Ｈ）， ８．３７ （ｓ， １Ｈ）， ８．２０ （ｓ， １Ｈ）， ７．４７−７．４６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．４１−７．３９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２９−７．２６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．２３−７．２０ （ｍ， Ｊ ＝ ７．７ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１８−７．１５ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．９２ （ｔ， Ｊ ＝ ７．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．０３ （ｄ， Ｊ ＝ １３．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１３ （ｔ， Ｊ ＝ １２．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．６４ （ｄ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．９０ （ｔ， Ｊ ＝ １１．０ Ｈｚ， ２Ｈ）。ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４３３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９５】
実施例７：Ｎ−（２−アミノ−５−（チオフェン−２−イル）フェニル）−２−（ピペラジン−１−イル）キノリン−６−カルボキサミド化合物Ｊの合成
化合物Ｊの調製は米国特許第１４／０６９，７４１号に記載されており、以下にまとめている。
反応スキーム：
【化４５】
2017524735.tif 000046
実験手順
工程１：ＤＣＭ（５０ｍｌ）中の化合物１（１０ｇ、０．５３ｍｏｌ）及びｍ−ＣＰＢＡ（１８．４ｇ、０．１０６ｍｏｌ）の混合物を室温で一晩攪拌した。ＮａＨＣＯ３水溶液（４０ｍｌ、飽和）を反応混合物に加え、３０分間攪拌した。有機層を分離し、乾燥させ、濾過及び濃縮して残留物を得、これを酢酸エチル（５ｍｌ）中で再結晶し、化合物２を淡黄色固体として得ることができた。
工程２：化合物２（４．０ｇ、０．０２０）及びＤＭＦ（８ｍｌ）のＤＣＭ溶液に、ＳＯＣｌ２（８ｍｌ）を０℃でゆっくりと添加し、室温で５時間攪拌した。得られた混合物を濃縮して残留物を得、ＮａＨＣＯ３水溶液（飽和、２０ｍｌ）を含むＤＣＭ（５０ｍｌ）を添加し、３０分間攪拌した。有機層を分離して濃縮し、残留物を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して化合物３を白色固体として得た。
工程３：ＤＭＳＯ（１２０ｍｌ）中の、化合物３（１０ｇ、０．０４５ｍｏｌ）、ＣｕＩ（１０ｇ、０．５３ｍｏｌ）、Ｎ−ｂｏｃ−ピペラジン（２５ｇ、０．１３５ｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１８．６ｇ、０．１３５ｍｏｌ）の混合物を、一晩１００℃で攪拌した。ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）により監視することで、終了したら、３００ｍｌのＥＡ（酢酸エチル）を加え、続いて濾過した。混合物を濃縮して残留物を得、これに水（３００ｍｌ）及びクエン酸水溶液（飽和、３０ｍｌ）を加えた。室温で３０分間攪拌し、続いて濾過することにより、精製することなく次の工程で使用可能な化合物４を黄色固体として得た。
工程４：ＥｔＯＨ（１００ｍｌ）及びＴＨＦ（１００ｍｌ）中の化合物４（１８ｇ、粗製物）及び２ＭのＮａＯＨ（５０ｍｌ）の混合物を、７０℃で４時間攪拌した。ＴＬＣを使用して反応を監視することができる。反応混合物を濃縮して残留物にし、これに水（３００ｍｌ）及び飽和クエン酸水溶液（４０ｍｌ）を添加する。続いて濾過することにより、化合物５を黄色固体として得る。
工程５：ＤＭＦ中の化合物５（１当量）、ｔｅｒｔ−ブチル２−アミノ−４−（チオフェン−２−イル）フェニルカルバメート（１当量）、ＨＯＡＴ（１．５当量）、ＥＤＣＩ（２当量）、及びＤＩＰＥＡ（４当量）の混合物を、５５℃で一晩攪拌する。水を混合物に加え、ＥＡで抽出する。有機層を分離して乾燥させ、濾過及び濃縮して残留物を得、これを分取ＴＬＣにより精製して化合物７を得る。
工程６：２ｍｌのＤＣＭ中の化合物７（９５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（２ｍｌ）の混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させて粗生成物を得、これをＨＰＬＣにより精製して、白色生成物の化合物Ｊを得ることができる（１９ｍｇ、３０％）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ） δ ９．７９ （ｓ， １Ｈ）， ８．４２ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１７ − ８．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ７．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．１， ０．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３３ − ７．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ７．２５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．０， ３．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８３ （ｄ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．７３ （ｓ， ４Ｈ）， ２．８９ （ｓ， ４Ｈ）。ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ＝４３０（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１９６】
実施例８：ＨＤＡＣ酵素アッセイ
試験用化合物をＤＭＳＯ中で希釈して、最終濃度を５０倍にし、１０．３倍の希釈系列を作製する。化合物をアッセイバッファー（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１００ｍＭのＫｉｌｌ、０．００１％のＴｗｅｅｎ−２０、０．０５％のＢＡＳＥ、２０μＭのＴＥＣ）で希釈し、最終濃度を６倍にする。ＨＤＡＣ酵素（ＢＰＳ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入）を希釈し、アッセイバッファー内で最終濃度を１．５倍に希釈する。ジペプチド基質及びトリプシン（最終濃度が０．０５μＭ）をアッセイバッファー内で希釈し、最終濃度を６倍にする。これらのアッセイで使用する最終の酵素濃度は、３．３ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ１）、０．２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ２）、０．０８ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ３）及び２ｎｇ／ｍｌ（ＨＤＡＣ６）である。使用する最終の基質濃度は、１６μＭ（ＨＤＡＣ１）、１０μＭ（ＨＤＡＣ２）、１７μＭ（ＨＤＡＣ３）及び１４μＭ（ＨＤＡＣ６）である。５μＬの化合物、及び２０μＬの酵素を、黒色の不透明な３８４ウェルプレートのウェルに重ねて加える。酵素及び化合物を共に、室温で１０分間インキュベーションする。５μＬの基質を各ウェルに添加し、プレートを６０秒間振盪させ、Ｖｉｃｔｏｒの２マイクロリットルプレートリーダーに配置する。蛍光の推移を６０分間監視し、反応の線形速度を計算する。４パラメーター曲線キットにより、グラフパッドプリズムを使用してＩＣ５０を測定する。
【０１９７】
実施例９：ＡＭＬ細胞でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの相乗効果
ＨＤＡＣまたはＤＮＭＴ（ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ）の阻害は、ＡＭＬ細胞に対して毒性であることが示されている。異なるＨＤＡＣ阻害剤（化合物Ａ及び化合物ＣはＨＤＡＣ６選択的であり、化合物ＥはＨＤＡＣ１／２選択的であり、かつ化合物Ｆは対照である。）、並びにＤＮＭＴ阻害剤であるアザシチジンを、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイ（商標）により測定したＡＭＬ細胞生存能アッセイで組み合わせた。各ウェル内の同量の培養ＡＭＬ細胞と共に、ある化合物の連続希釈液を、各ウェルの列に左から右に加え、第２の化合物の連続希釈液を、これらのウェルの各行に上から下に混ぜ合わせた。したがって、試験プレート上のこれらのＡＭＬ細胞を、２つの化合物の種々の組み合わせに異なる濃度で曝した。各ウェルの生残細胞を、３７℃での７２時間のインキュベーション後に測定し、非生残細胞の割合を計算し、全ての細胞に対して正規化した。これらの値を、０〜１．０の範囲でＦａ（フラクション活性）として報告し、試験化合物の、単独でまたは組み合わせての細胞毒性を反映した。組み合わせ指数（ＣＩ）値を、ソフトウェアＣａｌｃｕＳｙｎを使用して計算し、組み合わせが相乗的（ＣＩ＜１．０）、相可的（ＣＩ＝１．０）、または拮抗的（ＣＩ＞１．０）かどうかを測定した。ＣＩ値を、図１Ａ〜Ｄに示すように、Ｆａの関数としてプロットした。実験データ変動による、起こりうるあらゆる偽陽性を回避するために、各グラフの網掛け領域に示すように、ＣＩ＜０．７の場合のみ、組み合わせを「相乗的」と測定した。これらの結果から、試験した組み合わせは、３つの試験ＡＭＬ細胞株：ＨＬ−６０、Ｋａｓｕｍｉ−３及びＴＨＰ−１からの相乗的データに基づいて、ＡＭＬ細胞において相乗的細胞毒性効果を有することが結論づけられた。最大の相乗効果が化合物Ｅ／アザシチジンの組み合わせから観察されたため、ＨＤＡＣ１／２阻害は、ＨＤＡＣ３またはＨＤＡＣ６よりも一層優位な効果を有するようである。これらの結果を図１Ａ〜Ｄに提示する。ここでは、左上のグラフ（図１Ａ）は、ＨＬ−６０細胞でのアザシチジン及び化合物Ａのデータを示し、右上のグラフ（図１Ｂ）は、ＨＬ−６０細胞でのアザシチジン及び化合物Ｃのデータを示し、左下のグラフ（図１Ｃ）は、ＨＬ−６０細胞でのアザシチジン及び化合物Ｅのデータを示し、かつ、右下のグラフ（図１Ｄ）は、ＨＬ−６０細胞でのアザシチジン及び化合物Ｆのデータを示す。したがって、図１Ａ〜Ｄのデータは、ＡＭＬ細胞株（Ｋａｓｕｍｉ−３、ＨＬ−６０、及びＴＨＰ−１）内では、アザシチジンが化合物Ａ及び他のＨＤＡＣアイソフォーム阻害剤と共に、著しい相乗的細胞殺傷を示すことを示している。相乗効果は主に、ＨＤＡＣ１／２阻害に由来する。
【０１９８】
実施例１０：ＨＤＡＣ阻害はアポトーシスを増大させ、ＡＭＬのＡＭＬ／ＥＴＯを抑制する
ＡＭＬ細胞死（アポトーシス）を引き起こすＨＤＡＣ阻害を、細胞を異なる濃度のＨＤＡＣ阻害剤に曝した後で、ＡＭＬ細胞をヨウ化プロピジウムで染色することにより測定した。ヨウ化プロピジウム染色パターンに基づいて４つの異なる細胞集団のＧ１、Ｓ、Ｇ２、及びサブＧ１を分離し、定量化した。サブＧ１細胞は死にかけの、または死細胞であり、この母集団の割合は、試験化合物の細胞毒性を反映したものとなっていた。ＨＤＡＣ阻害剤、特にＨＤＡＣ１／２選択的阻害剤化合物Ｅの濃度増加に対する関数としての、サブＧ１細胞の量の増加は、ＨＤＡＣ１／２がＡＭＬ細胞毒性の仲立ちをしたことを示唆している。これらの結果を図２Ａ〜Ｃに提示し、これらは、７２時間でのＫａｓｕｍｉ−１の細胞周期についてのデータを示す。図２Ａは化合物Ｂについてのデータを示し、図２Ｂは化合物Ｇについてのデータを示し、図２Ｃは化合物Ｅについてのデータを示す。
【０１９９】
ある種類のＡＭＬは署名染色体転座（ｓｉｇｎａｔｕｒｅ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）ｔ（８：２１）、それ故独自の融合タンパク質ＡＭＬ１／ＥＴＯの発現を有する。この融合タンパク質はＡＭＬ細胞増殖に決定的であると報告されており、汎ＨＤＡＣ阻害剤パノビノスタットは、ｔ（８：２１）転座を有するＡＭＬ細胞株Ｋａｓｕｍｉ−１での喪失を引き起こすことが可能である。本研究では、Ｋａｓｕｍｉ−１細胞を、異なる濃度のＨＤＡＣ阻害剤化合物Ａ、または別のＨＤＡＣ１／２／６選択的阻害剤化合物Ｇ（データは図示せず）に２４時間曝した。全ての細胞溶解物をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）により分離し、膜に移動させた（ウェスタンブロット）。ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合タンパク質を、ＡＭＬ１特異的抗体を使用して膜上で検出した。結果は、化合物Ａ及び化合物Ｇは共に、濃度に依存してこの融合タンパク質の量を減少させたことを示した。これらの結果を図２Ｄに提示する。
【０２００】
実施例１１：アイソフォーム選択的ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）においてアザシチジンと組み合わせて相乗効果を示す
ＡＭＬは、骨髄分化の欠陥、及び新生造血前駆細胞の増殖の増大を特徴とする造血幹細胞疾患の異種グループである。異常なエピジェネティック制御がＡＭＬの病因に重要な役割を果たす。ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤であるアザシチジンは、頻繁にＡＭＬを進行させる骨髄異形成症候群の治療に関して認可された。
【０２０１】
ＨＤＡＣ阻害剤はＡＭＬ治療に対する有望な作用物質として現れつつある。アイソフォーム選択的ＨＤＡＣ阻害剤は、薬剤毒性の組み合わせ、及び非選択的阻害剤で観察される他の副作用を減少させながら、有益な治療効果もまた実現するという可能性を有する。一例は、多発性骨髄腫の症状発現前モデルにおいて、ＨＤＡＣ６に対して１１倍選択的であり、ボルテゾミブ（Ｂｌｏｏｄ，２０［２１０］：４０６１）、及び免疫賦活剤（Ｑｕａｙｌｅ，ｅｔ  ａｌ，ＡＳＨ，２０１３）と相乗効果を示し、それ故に第Ｉ相試験において向上した安全性及び耐性プロファイルを大変示す、経口利用が可能な画期的医薬品のＨＤＡＣ阻害剤のリコリノスタット（ｒｉｃｏｌｉｎｏｓｔａｔ）（化合物Ａ）である（Ｒａｊｅ，ｅｔ  ａｌ，ＥＨＡ，２０１４）。
【０２０２】
本研究は、ＡＭＬ細胞における、ＨＤＡＣ６またはＨＤＡＣ１／２のいずれかに対して選択的なアザシチジン及びＨＤＡＣ阻害剤の組み合わせの効能を評価した。
【０２０３】
経時的変化研究により、ＨＤＡＣ阻害剤への長期的曝露の後での、分化の誘発、細胞周期停止の蓄積、及びアポトーシスの開始が示された（図３〜４を参照）。
【０２０４】
図３Ａ〜Ｄは、ＡＭＬ細胞株の生存能に対する単剤活性を示す。簡単に説明すると、以下の細胞株：ＨＬ−６０、ＴＨＰ−１、ＭＶ−４−１１、Ｋａｓｕｍｉ−１、ＮＢ４、及びＭＯＬＭ−１３のそれぞれを、濃度が増加した化合物Ｂ（図３Ａ）、化合物Ａ（図３Ｂ）、化合物Ｅ（図３Ｃ）、またはアザシチジン（図３Ｄ）のいずれかに曝し、薬剤処理に対する応答を測定した。化合物ＢはＨＤＡＣ６に対して約１０倍選択的である。化合物ＡはＨＤＡＣ６に対して約１０倍選択的である。化合物ＥはＨＤＡＣ１／２に対して選択的である。細胞株のパネルをアザシチジンでも処理し、その感度を測定した。したがって、図３Ａ〜Ｄのデータは、ＡＭＬ細胞株がＨＤＡＣ阻害に対して感度があることを示す。
【０２０５】
図４Ａ〜Ｆは、ＡＭＬ細胞株での分化及びアポトーシスにおける単剤活性を示す。手短に言えば、ＡＭＬ細胞株のＨＬ−６０（図４Ａ及び４Ｄ）、Ｋａｓｕｍｉ−１（図４Ｂ及び４Ｅ）、並びにＮＢ４（図４Ｃ及び４Ｆ）を、示した濃度の化合物で処理した。図４Ａ〜Ｃでは、骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を、処理後７２時間でのＦＡＣＳにより測定した。化合物Ｂ、化合物Ａ、及び化合物Ｅは、３つの細胞株全てにおいて、ＣＤ１１ｂ陽性細胞の割合を増加させた。アザシチジンは、ＨＬ−６０（図４Ａ）及びＫａｓｕｍｉ−１細胞（図４Ｂ）においてＣＤ１１ｂ陽性細胞を増加させ、ＮＢ４細胞（図４Ｃ）では最小限の影響を有した。図４Ｄ〜Ｆでは、処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。化合物Ｂ、化合物Ａ、及びアザシチジンによる処理では、対照細胞と比較してアポトーシスの増大が得られた。化合物ＥはＨＬ−６０（図４Ｄ）及びＫａｓｕｍｉ−１（図４Ｅ）細胞でアポトーシスを誘発したが、ＮＢ４細胞（図４Ｆ）では最小限の影響を有した。したがって、図４Ａ〜Ｆのデータは、ＡＭＬ細胞を化合物Ｂ、化合物Ａ、化合物Ｅ、及びアザシチジンで処理することにより、分化及びアポトーシスを誘発したことを示す。
【０２０６】
ＨＤＡＣ阻害剤のアザシチジンとの組み合わせは、ＡＭＬ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの、分化及びアポトーシスの相乗的誘発をもたらした（図５〜７を参照）。
【０２０７】
図５Ａ〜Ｆは、ＨＬ−６０細胞株でのＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す。簡単に説明すると、細胞を単剤としてＤＭＳＯ、化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて９６時間処理した。ＣＤ１１ｂの表面量（図５Ａ、５Ｃ、５Ｅ）及びアポトーシス（図５Ｂ、５Ｄ、５Ｆ）を、図４にあるようにフローサイトメトリーで評価した。化合物Ｂとアザシチジン、化合物Ａとアザシチジン、及び化合物Ｅとアザシチジンの組み合わせは、単剤処理と比較して、ＣＤ１１ｂ陽性細胞（図５Ａ、５Ｃ、５Ｅ）及びアポトーシス細胞（図５Ｂ、５Ｄ、５Ｆ）の相乗的増加をもたらした。したがって、図５Ａ〜Ｆのデータは、ＨＬ−６０細胞を化合物Ｂ、化合物Ａ、または化合物Ｅ、加えてアザシチジンで処理することにより、分化及びアポトーシスを著しく誘発したことを示す。
【０２０８】
図６Ａ〜Ｆは、Ｋａｓｕｍｉ−１細胞株におけるＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す。手短に言えば、細胞を、単剤としてＤＭＳＯ、化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。ＣＤ１１ｂの表面量を処理後７２時間で測定し（図６Ａ、６Ｃ、６Ｅ）、アポトーシスを処理後９６時間で評価した（図６Ｂ、６Ｄ、６Ｆ）。化合物Ｂ、化合物Ａ、または化合物Ｅのアザシチジンとの組み合わせは、単剤処理と比較して、ＣＤ１１ｂ陽性細胞（図６Ａ、６Ｃ、６Ｅ）及びアポトーシス細胞（図６Ｂ、６Ｄ、６Ｆ）の相乗的増加をもたらした。したがって、図６Ａ〜Ｆのデータは、Ｋａｓｕｍｉ−１細胞を、化合物Ｂ、化合物Ａ、または化合物Ｅ、加えてアザシチジンで処理することにより、分化及びアポトーシスを著しく誘発したことを示す。
【０２０９】
図７Ａ〜Ｆは、ＮＢ４細胞株におけるＨＤＡＣ阻害剤及びアザシチジンの組み合わせを示す。手短に言えば、細胞を、単剤としてＤＭＳＯ、化合物Ｂ、化合物Ａ、もしくは化合物Ｅで、またはアザシチジンと組み合わせて、示した濃度で処理した。ＣＤ１１ｂの表面量を処理後７２時間で測定し（図７Ａ、７Ｃ、７Ｅ）、アポトーシスを処理後９６時間で評価した（図７Ｂ、７Ｄ、７Ｆ）。化合物Ｂまたは化合物Ａとアザシチジンの組み合わせにより、ＣＤ１１ｂ陽性細胞の相乗的増加がもたらされた（図７Ａ、７Ｃ）。化合物Ｂ、化合物Ａ、または化合物Ｅとアザシチジンの組み合わせにより、単剤処理と比較してアポトーシス細胞の相乗的増加がもたらされた（図７Ｂ、７Ｄ、７Ｆ）。したがって、図７Ａ〜Ｆのデータは、ＮＢ４細胞を化合物Ｂ、化合物Ａ、または化合物Ｅに加えてアザシチジンで処理することにより、分化及びアポトーシスが著しく誘発されたことを示す。
【０２１０】
ＨＤＡＣ１／２に対して選択的なＨＤＡＣ阻害剤は、最も強力な細胞活性を示した。更に、ＨＤＡＣ阻害剤はＡＭＬ１−ＥＴＯ融合タンパク質の量を低下させた。これは本融合タンパク質を運搬する細胞株の生残に不可欠である。薬剤の組み合わせの可能性は、ＡＭＬの動物モデル及び初代ＡＭＬ細胞で発見されている。これらの発見を合わせることで、ＡＭＬ患者における、アザシチジンと組み合わせた選択的ＨＤＡＣ阻害剤の臨床的評価が支持される。
【０２１１】
実施例１２：ＨＤＡＣ１／２阻害が細胞生存能を低下させる
以下のＨＤＡＣ阻害剤を使用して、ＨＤＡＣ阻害剤に曝した際の、ＨＤＡＣ選択性とＡＭＬ細胞株の生存能との関係を評価した。
【表１】
2017524735.tif 000047
【０２１２】
上のパネルは、米国特許第１４／１６９，７３２号に記載されている（その全体が本明細書に組み込まれている）ＨＤＡＣ３選択的阻害剤、化合物Ｈを含む。
【化４６】
2017524735.tif 000048
【０２１３】
図８Ａ〜Ｆは、ＡＭＬ細胞株の生存能に対する単剤活性を示す。簡単に説明すると、以下の細胞株：ＨＬ−６０、ＮＢ４、ＭＶ４−１１、Ｋａｓｕｍｉ−１、ＴＨＰ−１、及びＭＯＬＭ−１３のそれぞれを、増加した用量の化合物Ｅ（図８Ａ）、化合物Ｈ（図８Ｂ）、化合物Ｃ（図８Ｃ）、化合物Ａ（図８Ｄ）、化合物Ｂ（図８Ｅ）、及び化合物Ｇ（図８Ｆ）のいずれかに７２時間曝し、ＨＤＡＣ阻害に対する感度を確認した。生存能を対照（ＤＭＳＯ処理した細胞）に対する割合として計算した。増殖阻害曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ６を使用して生成した。化合物ＥのＩＣ５０はＨＤＡＣ１／２選択的範囲内にある（図８Ａ）。化合物Ａ及び化合物ＧのＩＣ５０は、そのＩＣ５０値において、ＨＤＡＣ１／２に若干の阻害効果を有する（図８Ｄ及び８Ｆ）。化合物Ｃ及び化合物ＨのＩＣ５０は、それぞれＨＤＡＣ６及びＨＤＡＣ３に対する選択的範囲外であり、ＨＤＡＣ１／２に関して同様の阻害効果を有する（図８Ｃ及び８Ｂ）。これらのデータを合わせると、ＨＤＡＣ１／２阻害が細胞生存能を低下させることを示している。
【０２１４】
実施例１３：ＨＤＡＣ１／２阻害は、分化、細胞周期停止及びアポトーシスを誘発するのに十分である
図９Ａ〜Ｃは、指示用量の化合物によるＭＶ４−１１の処理を示す。図９Ａは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定した、骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を示す。化合物Ｅ、化合物Ｈ、化合物Ａ、及び化合物ＧはＣＤ１１ｂ陽性細胞の割合を増加させた。化合物ＣはＣＤ１１ｂ陽性細胞に影響を及ぼさなかった。図９Ｂは、ＥｄＵを組み込み、処理後７２時間でＦａｒ  Ｒｅｄにより染色した後の、フローサイトメトリーによる細胞周期の評価を示す。Ｇ０／Ｇ１期、Ｇ２／Ｍ期、Ｓ期及びｓｕｂＧ１期の間における細胞分布を測定した。化合物Ｅ、化合物Ａ、及び化合物Ｇは細胞周期停止を誘発した。図９Ｃは、処理後９６時間で、アネキシンＶ結合、及び細胞のヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することによる、フローサイトメトリーによるアポトーシスの評価を示す。次に、初期アポトーシス、後期アポトーシスで生残していた細胞、または死んだ細胞のそれぞれのフラクションを測定した。化合物Ｅ、化合物Ａ、及び化合物Ｇで処理することにより、対照細胞と比較してアポトーシスの増大が得られた。
【０２１５】
まとめると、ＨＤＡＣ１／２阻害は、ＡＭＬ細胞株内での分化、細胞周期停止及びアポトーシスを誘発するのに十分である。ＨＤＡＣ３阻害は分化マーカーＣＤ１１ｂのみを誘発する（即ち、細胞周期及びアポトーシスには効果がない）。選択的ＨＤＡＣ６阻害は明確な影響または効果を有しない。
【０２１６】
実施例１４：ＨＤＡＣ１／２阻害はＡＭＬ細胞での分化及びアポトーシスを誘発する
図１０Ａ〜Ｆは、以下のＡＭＬ細胞株：Ｋａｓｕｍｉ−１（図１０Ａ及び１０Ｂ）、ＨＬ−６０（図１０Ｃ及び１０Ｄ）、並びにＮＢ４（図１０Ｅ及び１０Ｆ）の、指示用量の化合物での処理を示す。図１０Ａ、１０Ｃ、及び１０Ｅは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定した骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を示す。化合物Ｅ及び化合物Ａは、３つの細胞株全てにおいて、ＣＤ１１ｂ陽性細胞の割合を増大させた。図１０Ｂ、１０Ｄ、及び１０Ｆは、ＦＡＣＳによるアポトーシスの評価を示す（例えば図９Ｃを参照）。
【０２１７】
化合物Ｅ及び化合物Ａによる処理は、対照細胞と比較してアポトーシスの増加をもたらした。更に、化合物Ｅ及び化合物Ａは、記載した３つの細胞株全てにおいて、用量依存的に分化及びアポトーシスを誘発した。
【０２１８】
実施例１５：ＨＤＡＣ１／２阻害は、ＨＬ−６０細胞内でアザシチジンと相乗効果を示す
図１１Ａ〜Ｄは、アザシチジンとＨＤＡＣ１／２阻害の組み合わせが、ＨＬ−６０細胞生存能の相乗的減少をもたらすことを示す。ＨＬ−６０細胞を、増加用量のアザシチジンと化合物Ｅ（図１１Ａ）、または化合物Ａ（図１１Ｂ）、または化合物Ｈ（図１１Ｃ）、または化合物Ｃ（図１１Ｄ）と処理し、ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ｇｌｏアッセイにより、７２時間の時点で細胞生存能を評価した。組み合わせ指数（ＣＩ）及び影響を受けた相対的なフラクション（Ｆａ）を、ＣａｌｃｕＳｙｎソフトウェアを使用して各用量レベルで測定した。１未満（陰影領域）のＣＩ値が測定されることは、薬剤間での相乗的相互作用を強力に支持している。
ＨＤＡＣ１／２阻害との組み合わせにおいて、アザシチジン活性の著しい向上が観察される。化合物Ｅは、最も強力なアザシチジンとの相乗的相互作用を示した。
【０２１９】
実施例１６：ＨＤＡＣ１／２阻害はアザシチジンの活性を向上させる
図１２Ａ〜Ｆは、ＭＶ４−１１細胞の、アザシチジンと化合物Ｅまたは化合物Ａまたは化合物Ｂによる処理により、分化及びアポトーシスが著しく誘発されたことを示す。ＭＶ４−１１細胞を、単剤として化合物Ｅもしくは化合物Ａもしくは化合物Ｂで、またはアザシチジンと組み合わせて、指示用量で処理した。図１２Ａ、１２Ｃ、及び１２Ｅは、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定したＣＤ１１ｂの表面量を示す。図１２Ｂ、１２Ｄ、及び１２Ｆは、処理後９６時間における、（例えば図９Ｃにおける様な）ＦＡＣＳによるアポトーシスの評価を示す。
【０２２０】
化合物Ｅとアザシチジン、化合物Ａとアザシチジン、及び化合物Ｂとアザシチジンの組み合わせは、ＣＤ１１ｂ陽性細胞の割合の更なる増加をもたらし、単剤のいずれかを超えてアポトーシス誘発を向上した。以上のように、本実施例は、ＨＤＡＣ１／２阻害と組み合わせた、アザシチジン活性の著しい向上を示す。
【０２２１】
実施例１７：化合物Ａは、アザシチジンによる腫瘍増殖阻害を向上させた
図１３Ａ〜Ｃは、化合物Ａとアザシチジンによる処理が、ｉｎ  ｖｉｖｏでの腫瘍増殖を低下させることを示す。ＭＶ４−１１細胞を移植したＮｃｒ  ｎｕ／ｎｕマウスをビヒクル、アザシチジン（５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ  ｑ３ｄ）、またはアザシチジン（５ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ  ｑ３ｄ）と化合物Ａ（５０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ５／２／５／２／５／２／５）で、最大４週間処理した。（Ａ）腫瘍体積を週に２回測定し、平均腫瘍体積±ＳＤをプロットする。（Ｂ）１日目に対する、１９日目における腫瘍体積の倍数変化をプロットする。（Ｃ）生残曲線をプロットした。単剤アザシチジンは腫瘍増殖を減少させ、ＭＶ４−１１の生残を増加させた。この効果は、化合物Ａを加えることにより更に向上した。
【０２２２】
実施例１８：ＨＤＡＣ１／２阻害は、初代（ｐＰｒｉｍａｒｙ）ＡＭＬサンプルコロニー形成アッセイにおいてアザシチジンの活性を向上させた
図１４Ａ〜Ｅは、ＨＤＡＣ１／２阻害のみ、及びアザシチジンとの組み合わせが初代ＡＭＬ患者サンプルのコロニー形成を減少させることを示す。（Ａ）ＡＭＬ患者に由来する６個の骨髄サンプルをメチルセルロース系培地で培養し、濃度が増加した化合物Ａ、化合物Ｊ及びアザシチジンで１４日間処理すると、コロニーが相当のサイズに達した。各薬剤に対するＩＣ５０値をプロットする。化合物Ａ、化合物Ｊ及びアザシチジンの中央ＩＣ５０値は、それぞれ９．７６μＭ、２．９５μＭ及び８．１１μＭである。３つの薬剤の相対的潜在能は、化合物Ｊ＞アザシチジン＞化合物Ａである。（Ｂ〜Ｅ）ＡＭＬ患者からの各骨髄サンプルを、濃度が増加したアザシチジンのみ、または１μＭもしくは３μＭの化合物Ｊ、または１μＭ、３μＭ、もしくは１０μＭの化合物Ａの存在下で処理した。各患者サンプルについて、ＩＣ５０値をプロットした。サンプル４０３１１１３ＳＨ（Ｂ）及びサンプルＶＭＢＭ０００７（Ｃ）に関して、化合物Ｊ及び化合物ＡはアザシチジンＩＣ５０値を低下させ、これは、これらの初代ＡＭＬ細胞増殖における、ＨＤＡＣ１／２阻害とアザシチジンの良好な組み合わせ効果を示している。サンプル１８４０９０５１４（Ｄ）に関して、３μＭの化合物Ｊ及び１０μＭの化合物Ａ（濃度はほぼＩＣ５０値）はアザシチジンＩＣ５０値を著しく低下させ、このことは、良好な組み合わせ効果を示している。サンプル１０３１１３ＳＨ（Ｅ）に関して、３μＭの化合物ＪのみがアザシチジンＩＣ５０を低下させた。これらを合わせると、化合物Ｊは、化合物Ａ及びアザシチジンよりも、初代ＡＭＬ細胞増殖の阻害に関してより強力である。ほぼＩＣ５０値、またはＩＣ５０値以下の濃度の化合物Ｊは、４つの初代ＡＭＬ細胞コロニー形成において、アザシチジンのＩＣ５０値を低下させた。
【０２２３】
実施例１９：アザシチジン、化合物Ａ及び化合物Ｊのｅｘ  ｖｉｖｏの薬理学的プロファイリング
図１５Ａ〜Ｃは、ＨＤＡＣ１／２阻害のみ、及びアザシチジンとの組み合わせが、ＡＭＬ患者の骨髄由来の新鮮なＡＭＬ芽球の増殖を阻害することを示す。（Ａ〜Ｂ）ＡＭＬ患者に由来する５つの骨髄サンプルを、濃度が増加したアザシチジン、化合物Ａ及び化合物Ｊで処理し、生残ＡＭＬ細胞を９６時間の時点でフローサイトメトリーにより定量化した。ＩＣ５０値（Ａ）及びＡＵＣ値（Ｂ）をプロットした。化合物Ａ、化合物Ｊ及びアザシチジンについての中央ＩＣ５０値は、それぞれ７．２μＭ、０．６μＭ、及び２．１μＭである。３つの薬剤の相対的潜在能は化合物Ｊ＞アザシチジン＞化合物Ａであり、図２の結果と一致する。（Ｃ）ＡＭＬ患者に由来する５つの骨髄サンプルを、用量が増加したアザシチジンと化合物Ｊで処理し、生残ＡＭＬ細胞を９６時間の時点でフローサイトメトリーにより定量化した。組み合わせ指数（Ｃｏｍｂ  ＩＤＸ）を計算し、中央Ｃｏｍｂ  ＩＤＸ値をプロットした。５つのサンプルのうち４つにおいて、Ｃｏｍｂ  ＩＤＸ値は１未満であり、これは、ＡＭＬ患者に由来する新鮮な初代ＡＭＬ細胞の増殖阻害における、２つの薬剤の相乗的相互作用を支持する。
【０２２４】
実施例２０：遺伝子発現プロファイリング
ＭＶ４−１１細胞を２×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌでプレートに配置し、１μＭのアザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｎｅ）、１μＭの化合物Ｅ、２μＭの化合物Ｅ、１μＭのアザシチジンと１μＭの化合物Ｅ、１μＭのアザシチジンと２μＭの化合物Ｅで２４時間及び４８時間処理した。細胞を収集し、ＲＮＡを単離した。ＲＮＡサンプルにＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ  ＰｒｉｍｅＶｉｅｗ遺伝子発現プロファイリングを実施した。４８時間における１μＭのアザシチジン、及び２μＭの化合物Ｅが、初期データ分析の焦点となった。分子署名をＧＳＥＡ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｇｓｅａ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ）により分析した。単一及び組み合わせ処理により上方制御された遺伝子及び署名は、下方制御したものを著しく超えており、このことは化合物のメカニズムに一致する。アザシチジンの化合物Ｅとの組み合わせ効果の仲立ちをする経路及び／または遺伝子を識別するために、単剤により上方制御され、かつ組み合わせ処理により更に上方制御された署名及び遺伝子を識別した。分化を進める主要な転写因子である、アポトーシス及びＣＥＢＰＡ経路を含む署名は、識別された最上の経路及び／または遺伝子の中にある。ＧＡＴＡ２及びＣＤ８６を含む６０種類を超える遺伝子が、この発現パターンに従う。
【０２２５】
実施例２１：ＭＶ４−１１  ＡＭＬ細胞株におけるＧＡＴＡ２発現の誘発
図１６。化合物Ｅとアザシチジンでの処理は、ＭＶ４−１１細胞内でＧａｔａ２を著しく誘発した。（Ａ〜Ｂ）ＭＶ４−１１細胞を、指示用量で４８時間及び７２時間、２×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬでプレートに配置した。ＲＮＡを調製し、ＧＡＴＡ２、及びＧＡＰＤＨを内部対照として分析した。１μＭのアザシチジン、及び１μＭの化合物Ｅは、４８時間及び７２時間の時点で、単剤としてのＧＡＴＡ２の量を誘発した。アザシチジン及び化合物Ｅの組み合わせは、両方の時点においてＧＡＴＡ２発現を更に誘発した。
【０２２６】
実施例２２：ＡＭＬ細胞株における単剤活性
図１７。化合物Ｊは、ＡＭＬ細胞における細胞生存能を低下させ、ＣＤ１１ｂ及びアポトーシスを誘発する。（Ａ）示したＡＭＬ細胞株を、濃度が増加した化合物Ｊに曝し、ＨＤＡＣ１／２阻害に対する感度を確認した。（Ｂ〜Ｄ）ＭＶ４−１１細胞を、示した濃度の化合物で処理した。（Ｂ）骨髄分化マーカーＣＤ１１ｂの表面量を、処理後７２時間にてＦＡＣＳにより測定した。化合物Ｊは、最も高いＣＤ１１ｂ陽性細胞の潜在能増加割合を示した。（Ｃ）処理後７２時間にてＥｄＵを取り込み、Ｆａｒ  Ｒｅｄで染色した後で、フローサイトメトリーにより細胞周期を評価した。Ｇ０／Ｇ１期、Ｇ２／Ｍ期、Ｓ期及びｓｕｂＧ１期の間における細胞分布を測定した。化合物Ｊ、化合物Ｅ及び化合物Ａは細胞周期停止及びアポトーシスを誘発した。（Ｄ）処理後９６時間にて、アネキシンＶ結合、及びヨウ化プロピジウムへの細胞膜透過性を測定することにより、フローサイトメトリーによりアポトーシスを評価した。初期アポトーシス、後期アポトーシスで生存していた細胞、または死んだ細胞の相対的なフラクションを、続いて測定した。化合物Ｊ、化合物Ｅ、及び化合物Ａによる処理では、対照細胞と比較して、アポトーシスの増大がもたらされた。
参照としての組み込み
【０２２７】
本出願を通して引用した全ての参考資料（参照文献、発行された特許、公開特許出願、及び同時係属特許出願を含む）の内容物は、それら全体が本明細書に明示的に組み込まれている。特に規定されない限り、本明細書で使用する全ての技術及び科学用語は、当業者に一般的に知られている意味に一致する。
均等物
【０２２８】
当業者は、ただ機械的な実験を使用して、本明細書で記載されて提供される特定の実施形態の多くの均等物を認識するか、または確認可能である。かかる均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることを目的としている。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
2017524735.tif 000092
【図３Ａ】
2017524735.tif 000093
【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
2017524735.tif 000095
【図３Ｄ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
2017524735.tif 000099
【図４Ｄ】
2017524735.tif 000100
【図４Ｅ】
2017524735.tif 000101
【図４Ｆ】
2017524735.tif 000102
【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
2017524735.tif 000105
【図５Ｄ】
2017524735.tif 000106
【図５Ｅ】
2017524735.tif 000107
【図５Ｆ】
2017524735.tif 000108
【図６Ａ】
2017524735.tif 000109
【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
2017524735.tif 000111
【図６Ｄ】
2017524735.tif 000112
【図６Ｅ】
2017524735.tif 000113
【図６Ｆ】
2017524735.tif 000114
【図７Ａ】
2017524735.tif 000115
【図７Ｂ】
2017524735.tif 000116
【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
2017524735.tif 000118
【図７Ｅ】
2017524735.tif 000119
【図７Ｆ】
2017524735.tif 000120
【図８Ａ】
2017524735.tif 000121
【図８Ｂ】
2017524735.tif 000122
【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
2017524735.tif 000124
【図８Ｅ】
2017524735.tif 000125
【図８Ｆ】
2017524735.tif 000126
【図９Ａ】
2017524735.tif 000127
【図９Ｂ】
2017524735.tif 000128
【図９Ｃ】
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【図１０Ａ】
2017524735.tif 000130
【図１０Ｂ】
2017524735.tif 000131
【図１０Ｃ】
2017524735.tif 000132
【図１０Ｄ】
2017524735.tif 000133
【図１０Ｅ】
2017524735.tif 000134
【図１０Ｆ】
2017524735.tif 000135
【図１１Ａ】
2017524735.tif 000136
【図１１Ｂ】
2017524735.tif 000137
【図１１Ｃ】
2017524735.tif 000138
【図１１Ｄ】
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【図１２Ａ】
2017524735.tif 000140
【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
2017524735.tif 000143
【図１２Ｅ】
2017524735.tif 000144
【図１２Ｆ】
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【図１３Ａ】
2017524735.tif 000146
【図１３Ｂ】
2017524735.tif 000147
【図１３Ｃ】
2017524735.tif 000148
【図１４Ａ】
2017524735.tif 000149
【図１４Ｂ】
2017524735.tif 000150
【図１４Ｃ】
2017524735.tif 000151
【図１４Ｄ】
2017524735.tif 000152
【図１４Ｅ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６】
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【図１７Ａ】
2017524735.tif 000158
【図１７Ｂ】
2017524735.tif 000159
【図１７Ｃ】
2017524735.tif 000160
【図１７Ｄ】
2017524735.tif 000161
【国際調査報告】
2017524735.tif 000162
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