(57)【要約】本発明は、抗ＧＰＣ３抗体及びイムノコンジュゲートならびにその使用方法を提供する。【選択図】図８【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＧＰＣ３を結合する分離抗体であって、前記抗体が、以下から選択されるエピトープに結合する前記分離抗体。
ａ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜１３７内のエピトープ；
ｂ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープ；
ｃ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４２０〜４７０内のエピトープ；及び
ｄ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４７０〜５０９内のエピトープ。
【請求項２】
前記抗体が、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜１３７内のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体が、シノモルグスサル、マウス、及びラットから選択される少なくとも１つの種に由来するＧＰＣ３に結合する、請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、シノモルグスサル、マウス、及びラットに由来するＧＰＣ３に結合する、請求項３に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体が、配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体が、配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体が、配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
ａ）配列番号：２のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号：３のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＬ配列；または
ｃ）（ａ）と同様のＶＨ及び（ｂ）と同様のＶＬ。
【請求項９】
前記抗体が、以下を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
ａ）配列番号：２のアミノ酸配列を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号：３のアミノ酸配列を有するＶＬ配列；
ｃ）配列番号：２のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＨ；
ｄ）配列番号：３のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＬ配列；
ｅ）（ａ）または（ｃ）と同様のＶＨ及び（ｂ）または（ｄ）と同様のＶＬ。
【請求項１０】
前記抗体が、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体が、完全長成熟ヒトＧＰＣ３に結合するが、配列番号：１のアミノ酸２５〜３５８からなるヒトＧＰＣ３のＮ−末端フラグメントに結合せず、配列番号：１のアミノ酸３５９〜５６０またはアミノ酸３５９〜５８０からなるヒトＧＰＣ３のＣ−末端フラグメントに結合しない、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体が、配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項１、１０、及び１１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗体が、配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項１、１０、１１、及び１２のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体が、配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１及び１０から１３のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体が、以下を含む、請求項１及び１０から１４のいずれか１項に記載の抗体。
ａ）配列番号：２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号：２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＬ配列；または
ｃ）（ａ）と同様のＶＨ及び（ｂ）と同様のＶＬ。
【請求項１６】
前記抗体が、以下を含む、請求項１及び１０から１５のいずれか１項に記載の抗体。
ａ）配列番号：２６のアミノ酸配列を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号：２７のアミノ酸配列を有するＶＬ配列；
ｃ）配列番号：２６のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＨ；
ｄ）配列番号：２７のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＬ配列；または
ｅ）（ａ）または（ｃ）と同様のＶＨ及び（ｂ）または（ｄ）と同様のＶＬ。
【請求項１７】
前記抗体が、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４２０〜４７０内のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項１８】
前記抗体が、シノモルグスサル、アカゲザル、マウス、及びラットから選択される少なくとも１つの種に由来するＧＰＣ３に結合する、請求項１または請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体が、シノモルグスサル、アカゲザル、マウス、及びラットに由来するＧＰＣ３に結合する、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項１及び１７から１９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体が、配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項１及び１７から２０のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２２】
前記抗体が、配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１及び１７から２１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体が、以下を含む、請求項１及び１７から２２のいずれか１項に記載の抗体。
ａ）配列番号：１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号：１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＬ配列；または
ｃ）（ａ）と同様のＶＨ及び（ｂ）と同様のＶＬ。
【請求項２４】
前記抗体が、以下を含む、請求項１及び１７から２３のいずれか１項に記載の抗体。
ａ）配列番号：１８のアミノ酸配列を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号：１９のアミノ酸配列を有するＶＬ配列；
ｃ）配列番号：１８のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＨ；
ｄ）配列番号：１９のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＬ配列；または
ｅ）（ａ）または（ｃ）と同様のＶＨ及び（ｂ）または（ｄ）と同様のＶＬ。
【請求項２５】
前記抗体が、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４７０〜５０９内のエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項２６】
前記抗体が、シノモルグスサルＧＰＣ３に結合する、請求項１または請求項２５に記載の抗体。
【請求項２７】
前記抗体が、ラットＧＰＣ３に結合しない、請求項１、２５、及び２６のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む、請求項１及び２５から２７のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項１及び２５から２８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１及び２５から２９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３１】
前記抗体が、以下を含む、請求項１及び２５から３０のいずれか１項に記載の抗体。
ａ）配列番号：１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号：１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＬ配列；または
ｃ）（ａ）と同様のＶＨ及び（ｂ）と同様のＶＬ。
【請求項３２】
前記抗体が、以下を含む、請求項１及び２５から３１のいずれか１項に記載の抗体。
ａ）配列番号：１０のアミノ酸配列を有するＶＨ配列；
ｂ）配列番号：１１のアミノ酸配列を有するＶＬ配列；
ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＨ；
ｄ）配列番号：１１のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＬ配列；または
ｅ）（ａ）または（ｃ）と同様のＶＨ及び（ｂ）または（ｄ）と同様のＶＬ。
【請求項３３】
ＧＰＣ３に結合する分離抗体であって、前記抗体が、（ａ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、前記分離抗体。
【請求項３４】
ＧＰＣ３に結合する分離抗体であって、前記抗体が、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、前記分離抗体。
【請求項３５】
ＧＰＣ３に結合する分離抗体であって、前記抗体が、（ａ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、前記分離抗体。
【請求項３６】
ＧＰＣ３に結合する分離抗体であって、前記抗体が、（ａ）配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、前記分離抗体。
【請求項３７】
単クローン性抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３８】
ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項３９】
ＧＰＣ３を結合する抗体フラグメントである、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４０】
ＧＰＣ３が、配列番号：１のアミノ酸２５〜５８０を含むヒトＧＰＣ３である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４１】
前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ抗体である、先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項４２】
先行請求項のいずれか１項に記載の抗体をコードする分離核酸。
【請求項４３】
請求項４２に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項４４】
前記抗体が、生成されるように、請求項４３に記載の宿主細胞を培養することを含む抗体の生成方法。
【請求項４５】
請求項１から４１のいずれか１項に記載の抗体及び細胞毒性薬剤を含むイムノコンジュゲート。
【請求項４６】
式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有する請求項４５に記載のイムノコンジュゲートであって、式中、
（ａ）Ａｂが、前記請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体である；。
（ｂ）Ｌが、リンカーである；
（ｃ）Ｄが、細胞毒性薬剤である；及び
（ｄ）ｐが、１〜８の範囲である、前記イムノコンジュゲート。
【請求項４７】
前記細胞毒性薬剤が、マイタンシノイド、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン、及びネモルビシン誘導体から選択される、請求項４６に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項４８】
Ｄが、式Ａのピロロベンゾジアゼピンである；
2017522861.tif 000054
Ａ；
式中、点線が、Ｃ１及びＣ２またはＣ２及びＣ３間の二重結合任意の存在を示す；
Ｒ２が、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、または、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから独立して選択され、さらに任意でハロまたはジハロから選択され、式中、ＲＤが、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから独立して選択される；
Ｒ６及びＲ９が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、または、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択される；
Ｒ７が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択される；
Ｑが、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立して選択される；
Ｒ１１が、Ｈ、またはＲのいずれかであり、または、Ｑが、Ｏ、ＳＯ３Ｍであり、Ｍが、金属カチオンである；
Ｒ及びＲ’それぞれが、任意で置換Ｃ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル及びＣ５−２０アリール基から独立して選択され、任意で基ＮＲＲ’に関して、Ｒ及びＲ’が、これらが結合する窒素原子とともに任意で置換４、５、６または７員の複素環式環を形成する；
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７が、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７それぞれに対して定義されるとおりである；
Ｒ″が、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖が、１つ以上のヘテロ原子及び／または任意で置換されている芳香環によって中断されていてもよく；及び
Ｘ及びＸ’が、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択される、請求項４６に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項４９】
Ｄが、以下の構造を有し、
2017522861.tif 000055
；
式中、ｎが０または１である、請求項４８に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項５０】
Ｄが、ネモルビシン誘導体である、請求項４６に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項５１】
Ｄが、以下から選択される構造を有する、請求項５０に記載のイムノコンジュゲート。
2017522861.tif 000056
；及び
2017522861.tif 000057
。
【請求項５２】
前記リンカーが、プロテアーゼによって開裂可能である、請求項４６から５１のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項５３】
前記リンカーが、酸不安定性である、請求項４６から５１のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項５４】
前記リンカーが、ヒドラゾンを含む、請求項５３に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項５５】
以下から選択される式を有する、請求項４６に記載のイムノコンジュゲート。
2017522861.tif 000058
；
及び
2017522861.tif 000059
。
【請求項５６】
ｐが、２〜５の範囲である請求項４６から５５のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
【請求項５７】
請求項４５から５７のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート及び製剤的に許容可能なキャリアを含む医薬製剤。
【請求項５８】
さらに追加の治療薬剤を含む、請求項５７に記載の医薬製剤。
【請求項５９】
請求項１から４１のいずれか１項に記載の抗体及び製剤的に許容可能なキャリアを含む医薬製剤。
【請求項６０】
さらに追加の治療薬剤を含む、請求項５９に記載の医薬製剤。
【請求項６１】
有効量の請求項１から４１のいずれか１項に記載の抗体、請求項４５から５６のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートまたは請求項５６から５９のいずれか１項に記載の医薬製剤を個体に投与することを含む、ＧＰＣ３−陽性癌を有する個体の治療方法。
【請求項６２】
前記ＧＰＣ３−陽性癌が、肝臓癌である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
さらに追加の治療薬剤を個体に投与することを含む、請求項６１または請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
ＧＰＣ３−陽性細胞の増殖の抑制方法であって、請求項１から４１のいずれか１項に記載の抗体、または請求項４５から５６のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートが、前記細胞の表面上のＧＰＣ３に結合することを許容する条件下で、前記細胞を、前記抗体または前記イムノコンジュゲートに暴露し、これにより、前記細胞の増殖を抑制することを含む、前記方法。
【請求項６５】
前記細胞が、肝臓癌細胞である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
標識に結合する請求項１から４１のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項６７】
前記標識が、陽電子放出体である、請求項６６に記載の抗体。
【請求項６８】
前記陽電子放出体が、８９Ｚｒである、請求項６７に記載の抗体。
【請求項６９】
生体試料中のヒトＧＰＣ３の検出方法であって、請求項１から４１及び６６から６８のいずれか１項に記載の抗ＧＰＣ３抗体が、自然ヒトＧＰＣ３に結合するのを許容する条件下で、前記生体試料と前記抗ＧＰＣ３抗体を接触させること、ならびに、複合体が、前記生体試料中の前記抗ＧＰＣ３抗体及び自然ヒトＧＰＣ３間に、形成されるかどうかを検出することを含む、前記方法。
【請求項７０】
前記生体試料が、肝臓癌試料である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
ＧＰＣ３−陽性癌の検出方法であって、（ｉ）ＧＰＣ３−陽性癌を有する、または有する疑いのある被験者に、請求項１から４１及び６６から６８のいずれか１項に記載の抗ＧＰＣ３抗体を含む標識抗ＧＰＣ３抗体を投与すること、及び（ｉｉ）前記標識抗ＧＰＣ３抗体の検出が、前記被験者中のＧＰＣ３−陽性癌を示す、前記被験者中の前記標識抗ＧＰＣ３抗体を検出することを含む、前記方法。
【請求項７２】
前記標識抗ＧＰＣ３抗体が、陽電子放出体に結合する抗ＧＰＣ３抗体を含む、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記陽電子放出体が、８９Ｚｒである、請求項７２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ＧＰＣ３抗体及びイムノコンジュゲートならびにその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
グリピカン−３（ＧＰＣ３）は、グリピカンファミリーのメンバーであり、グリコシルホスファチジルイノシトールアンカーを介して細胞表面に結合したヘパラン硫酸プロテオグリカンである。ＧＰＣ３は、肝細胞癌生検の７０％超に高く発現するが、隣接した非腫瘍組織に発現しないことが示されている。ＧＰＣ３−陰性ＨＣＣ患者よりＧＰＣ３−陽性ＨＣＣ患者の無病生存率の方が、有意に低い。
【０００３】
ＧＰＣ３−関連状態、例えば、癌の診断及び治療のためにＧＰＣ３を標的とする安全で効果的な薬剤の技術が必要である。本発明は、その必要性を満たし、他の利益を提供する。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、抗ＧＰＣ３抗体及びイムノコンジュゲートならびにその使用方法を提供する。
【０００５】
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３に結合する分離抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗体が、ＧＰＣ３に結合し、以下の特性の１つ以上を有する。
ａ）遺伝子組換えヒトＧＰＣ３に結合する；
ｂ）遺伝子組換えシノモルグスサルＧＰＣ３に結合する；
ｃ）ＨｅｐＧ２細胞の表面上の内因性ＧＰＣ３に結合する；
ｄ）２９３細胞の表面上に発現したシノモルグスサルＧＰＣ３に結合する；
ｅ）癌細胞の表面上の内因性ＧＰＣ３に結合する；
ｆ）肝細胞癌細胞の表面上の内因性ＧＰＣ３に結合する；
ｇ）ＨｅｐＧ２、Ｈｅｐ３Ｂ、Ｈｕｈ７、及びＪＨＨ−７から選択される細胞株の細胞の表面上の内因性ＧＰＣ３に結合する；
ｈ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜１３７内のエピトープに結合する；
ｉ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープに結合する；
ｊ）完全長成熟ヒトＧＰＣ３（例えば、配列番号：１のアミノ酸２５〜５６０またはアミノ酸２５〜５８０）に結合するが、ヒトＧＰＣ３（配列番号：１のアミノ酸２５〜３５８）のＮ−末端フラグメントまたはヒトＧＰＣ３（配列番号：１のアミノ酸３５９〜５６０またはアミノ酸３５９〜５８０）のＣ−末端フラグメントに結合しない；
ｋ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４２０〜４７０内のエピトープに結合する；
ｌ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４７０〜５０９内のエピトープに結合する；
ｍ）抗体７Ｈ１によりヒトＧＰＣ３への結合と競合する；
ｎ）抗体４Ｇ７によりヒトＧＰＣ３への結合と競合する；
ｏ）抗体１５Ｇ１によりヒトＧＰＣ３への結合と競合する；及び／または
ｐ）抗体４Ａ１１によりヒトＧＰＣ３への結合と競合する。
【０００６】
いくつかの実施形態では、ヒトＧＰＣ３が、配列番号：１の配列（完全長ＧＰＣ３前駆体）を含む、または配列番号：１のアミノ酸２５〜５８０（完全長成熟ＧＰＣ３）を含む。
【０００７】
いくつかの実施形態では、ヒトＧＰＣ３を結合する分離抗体が提供され、抗体が、以下から選択されるエピトープに結合する。
ａ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜１３７内のエピトープ；
ｂ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープ；
ｃ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４２０〜４７０内のエピトープ；及び
ｄ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４７０〜５０９内のエピトープ。
【０００８】
いくつかの実施形態では、ヒトＧＰＣ３を結合する分離抗体が提供され、抗体が、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜１３７内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体が、シノモルグスサル、マウス、及びラットから選択される少なくとも１つの種に由来するＧＰＣ３に結合する。いくつかの実施形態では、抗体が、シノモルグスサル、マウス、及びラットに由来するＧＰＣ３に結合する。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号：３のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＬ配列；または（ｃ）ａ）と同様のＶＨ及び（ｂ）と同様のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号：３のアミノ酸配列を有するＶＬ配列；（ｃ）配列番号：２のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＨ；（ｄ）配列番号：３のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＬ配列；または（ｅ）（ａ）または（ｃ）と同様のＶＨ及び（ｂ）または（ｄ）と同様のＶＬを含む。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ヒトＧＰＣ３を結合する分離抗体が提供され、抗体が、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、ヒトＧＰＣ３を結合する分離抗体が提供され、抗体が、完全長成熟ヒトＧＰＣ３に結合するが、配列番号：１のアミノ酸２５〜３５８からなるヒトＧＰＣ３のＮ−末端フラグメントに結合せず、配列番号：１のアミノ酸３５９〜５６０またはアミノ酸３５９〜５８０からなるヒトＧＰＣ３のＣ−末端フラグメントに結合しない。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号：２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＬ配列；または（ｃ）ａ）と同様のＶＨ及び（ｂ）と同様のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：２６のアミノ酸配列を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号：２７のアミノ酸配列を有するＶＬ配列；（ｃ）配列番号：２６のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＨ；（ｄ）配列番号：２７のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＬ配列；または（ｅ）（ａ）または（ｃ）と同様のＶＨ及び（ｂ）または（ｄ）と同様のＶＬを含む。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ヒトＧＰＣ３を結合する分離抗体が提供され、抗体が、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４２０〜４７０内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体が、シノモルグスサル、アカゲザル、マウス、及びラットから選択される少なくとも１つの種に由来するＧＰＣ３に結合する。いくつかの実施形態では、抗体が、シノモルグスサル、アカゲザル、マウス、及びラットに由来するＧＰＣ３に結合する。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号：１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＬ配列；または（ｃ）ａ）と同様のＶＨ及び（ｂ）と同様のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：１８のアミノ酸配列を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号：１９のアミノ酸配列を有するＶＬ配列；（ｃ）配列番号：１８のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＨ；（ｄ）配列番号：１９のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＬ配列；または（ｅ）（ａ）または（ｃ）と同様のＶＨ及び（ｂ）または（ｄ）と同様のＶＬを含む。
【００１１】
いくつかの実施形態では、ヒトＧＰＣ３を結合する分離抗体が提供され、抗体が、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４７０〜５０９内のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗体が、シノモルグスサルＧＰＣ３に結合する。いくつかの実施形態では、抗体が、ラットＧＰＣ３に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号：１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するＶＬ配列；または（ｃ）ａ）と同様のＶＨ及び（ｂ）と同様のＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：１０のアミノ酸配列を有するＶＨ配列；（ｂ）配列番号：１１のアミノ酸配列を有するＶＬ配列；（ｃ）配列番号：１０のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＨ；（ｄ）配列番号：１１のアミノ酸配列に基づくヒト化ＶＬ配列；または（ｅ）（ａ）または（ｃ）と同様のＶＨ及び（ｂ）または（ｄ）と同様のＶＬを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３に結合する分離抗体が提供され、抗体が、（ａ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３に結合する分離抗体が提供され、抗体が、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３に結合する分離抗体が提供され、抗体が、（ａ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１５】
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３に結合する分離抗体が提供され、抗体が、（ａ）配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１６】
本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、抗体は、単クローン性抗体としてよい。本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、抗体は、ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体としてよい。本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、抗体は、ＧＰＣ３を結合する抗体フラグメントとしてよい。本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａまたはＩｇＧ２ｂ抗体としてよい。
【００１７】
本明細書に記載の実施形態のいずれかでは、ＧＰＣ３は、配列番号：１のアミノ酸２５〜５８０を含むヒトＧＰＣ３としてよい。
【００１８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする分離核酸が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする核酸を含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含む抗体の生成方法が提供され、その結果、抗体が生成される。
【００１９】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体及び細胞毒性薬剤を含むイムノコンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートが、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、（ａ）Ａｂが、請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体である；（ｂ）Ｌがリンカーである；（ｃ）Ｄが細胞毒性薬剤である；及び（ｄ）ｐが１〜８の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐが、２〜５の範囲である。いくつかの実施形態では、細胞毒性薬剤が、マイタンシノイド、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン、及びネモルビシン誘導体から選択される。
【００２０】
いくつかの実施形態では、Ｄが式Ａのピロロベンゾジアゼピンであり、
2017522861.tif 000002
Ａ；
式中、点線が、Ｃ１及びＣ２またはＣ２及びＣ３間の二重結合任意の存在を示す；
Ｒ２が、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、または、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから独立して選択され、さらに任意でハロまたはジハロから選択され、式中、ＲＤが、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから独立して選択される；
Ｒ６及びＲ９が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、または、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択される；
Ｒ７が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択される；
Ｑが、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立して選択される；
Ｒ１１が、Ｈ、またはＲのいずれかであり、または、Ｑが、Ｏ、ＳＯ３Ｍであり、Ｍが、金属カチオンである；
Ｒ及びＲ’それぞれが、任意で置換Ｃ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル及びＣ５−２０アリール基から独立して選択され、任意で基ＮＲＲ’に関して、Ｒ及びＲ’が、これらが結合する窒素原子とともに任意で置換４、５、６または７員の複素環式環を形成する；
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７が、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７それぞれに対して定義されるとおりである；
Ｒ″が、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖が、１つ以上のヘテロ原子及び／または任意で置換されている芳香環によって中断されていてもよく；及び
Ｘ及びＸ’が、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択される。
【００２１】
いくつかの実施形態では、Ｄが以下の構造を有し：
2017522861.tif 000003
；
式中、ｎが０または１である。
【００２２】
いくつかの実施形態では、Ｄがネモルビシン誘導体である。いくつかの実施形態では、Ｄが以下から選択される構造を有する。
2017522861.tif 000004
；及び
2017522861.tif 000005
。
【００２３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体を含むイムノコンジュゲートが提供され、リンカーが、プロテアーゼによって切断可能である。いくつかの実施形態では、リンカーが、酸不安定性である。いくつかの実施形態では、リンカーが、ヒドラゾンを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体を含むイムノコンジュゲートが提供され、イムノコンジュゲートが、以下から選択される式を有する。
2017522861.tif 000006
；及び
2017522861.tif 000007
。
【００２５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のイムノコンジュゲート及び製剤的に許容可能なキャリアを含む医薬製剤が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体及び製剤的に許容可能なキャリアを含む医薬製剤が提供される。いくつかの実施形態では、医薬製剤が、さらに追加の治療薬剤を含む。
【００２６】
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌を有する個体の治療方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法が、有効量の本明細書に記載の抗体、本明細書に記載のイムノコンジュゲート、または本明細書に記載の医薬製剤を個体に投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌が肝臓癌である。いくつかの実施形態では、方法が、さらに追加の治療薬剤を個体に投与することを含む。
【００２７】
いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性細胞の増殖の抑制方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法が、抗体またはイムノコンジュゲートが細胞の表面上のＧＰＣ３に結合するのを許容する条件下で、有効量の本明細書に記載の抗体または本明細書に記載のイムノコンジュゲートを個体に投与し、これにより、細胞の増殖を抑制することを含む。いくつかの実施形態では、細胞が、肝臓癌細胞である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体が、標識に結合する。いくつかの実施形態では、標識が、陽電子放出体である。いくつかの実施形態では、陽電子放出体が、８９Ｚｒである。
【００２９】
いくつかの実施形態では、生体試料中のヒトＧＰＣ３の検出方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法が、抗ＧＰＣ３抗体が自然ヒトＧＰＣ３に結合するのを許容する条件下で、本明細書に記載の抗ＧＰＣ３抗体と生体試料を接触させること、ならびに、複合体が生体試料中の抗ＧＰＣ３抗体及び自然ヒトＧＰＣ３間に、形成されるかどうかを検出することを含む。いくつかの実施形態では、生体試料が、肝臓癌試料である。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌の検出方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法が、（ｉ）ＧＰＣ３−陽性癌を有する、または有する疑いのある被験者に、本明細書に記載の抗ＧＰＣ３抗体を含む標識抗ＧＰＣ３抗体を投与すること、及び（ｉｉ）標識抗ＧＰＣ３抗体の検出が、被験者中のＧＰＣ３−陽性癌を示す、被験者中の標識抗ＧＰＣ３抗体を検出することを含む。いくつかの実施形態では、標識抗ＧＰＣ３抗体が、陽電子放出体に結合する抗ＧＰＣ３抗体を含む。いくつかの実施形態では、陽電子放出体が、８９Ｚｒである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】実施例１に記載したとおり、正常及び疾患及び腫瘍組織中のＧＰＣ３の発現を示す。
【図２】実施例１に記載したとおり、正常肝臓、肝臓癌、及び疾患肝臓中のＧＰＣ３の発現を示す。
【図３】実施例１に記載したとおり、種々のステージの肝細胞癌及び他の肝臓疾患中のＧＰＣ３の発現を示す。
【図４】図４Ａ〜Ｂは、抗ＧＰＣ３抗体７Ｈ１、４Ａ１１、１５Ｇ１、及び４Ｇ７の（Ａ）軽鎖可変領域配列及び（Ｂ）重鎖可変領域配列のアラインメントを示す。
【図５】実施例２に記載したとおり、ＦＡＣＳによって測定され、抗体７Ｈ１が、２９３Ｓ細胞、ＨｅｐＧ２  Ｘ１細胞、及びＧＰＣ３を発現している２９３Ｓ細胞（２９３ＳＧＰＣ３ＦＬ）に結合することを示す。
【図６】ヒトＧＰＣ３タンパク質配列、ヒトＧＰＣ３の３つのフラグメントの特定の特徴の模式図を示し、実施例２に記載したとおり、ウェスタンブロットが、抗体７Ｈ１のＧＰＣ３フラグメントへの結合を示す。
【図７】実施例２に記載したとおり、ＦＡＣＳによって測定され、抗体７Ｈ１及び４Ｇ７、ならびに対照抗体１Ｇ１２（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）が、２９３Ｓ細胞、ＧＰＣ３のＣ−末端フラグメントを発現している２９３Ｓ細胞（Ｃｔ＿ＧＰＣ３）及びＧＰＣ３のＮ−末端フラグメントを発現している２９３Ｓ細胞（Ｎｔ＿ＧＰＣ３）に結合することを示す。
【図８】実施例２に記載したとおり、ヒトＧＰＣ３タンパク質配列及びヒトＧＰＣ３の４つのフラグメントの特定の特徴の模式図を示す。
【図９】実施例２に記載したとおり、ＦＡＣＳによって測定され、抗体４Ａ１１及び１５Ｇ１が、完全長ＦＰＣ３及び２９３Ｓ細胞中に発現した図８のフラグメントのうちの３つに結合することを示す。
【図１０】実施例２に記載したとおり、抗体１５Ｇ１及び４Ａ１１が、種々の種に由来するＧＰＣ３に結合することを示す。
【図１１】実施例２に記載したとおり、ヒト、シノモルグスサル、アカゲザル、マウス、及びラットに由来するＧＰＣ３のアラインメントを示す。
【図１２】実施例５に記載したとおり、（Ａ）マレイミドアセタールＰＮＵ−１５９６８２抗体−薬剤コンジュゲートの構造及び（Ｂ）モノメチルジスルフィドＮ１０−結合ＰＢＤ抗体−薬剤コンジュゲートの構造を示す。
【図１３】図１３Ａ〜Ｂは、実施例６に記載したとおり、ＦＡＣＳによって、抗体４Ｇ７、７Ｈ１、及び４Ａ１１を用いて検出する、（Ａ）ＨｅｐＧ２  Ｘ１細胞及び（Ｂ）分離ＨｅｐＧ２  Ｘ１異種移植腫瘍細胞の表面上のＧＰＣ３の発現を示す。
【図１４】実施例６に記載したとおり、種々の抗体−薬剤コンジュゲートによる治療時のＨｅｐＧ２  Ｘ１異種移植モデル中の腫瘍容量（ｍｍ３）の経時的な変化を示す。
【図１５】図１５Ａ〜Ｂは、実施例７に記載したとおり、ＦＡＣＳによって、抗体４Ｇ７、７Ｈ１、及び４Ａ１１を用いて検出する、（Ａ）ＪＨＨ７細胞及び（Ｂ）分離ＪＨＨ７異種移植腫瘍細胞の表面上のＧＰＣ３の発現を示す。
【図１６】実施例７に記載したとおり、種々の抗体−薬剤コンジュゲートによる治療時のＪＨＨ７異種移植モデル中の腫瘍容量（ｍｍ３）の経時的な変化を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
Ｉ．定義
本明細書の目的のための「受容体ヒトフレームワーク」は、以下に定義したとおり、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含む、フレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」受容体ヒトフレームワークが、これらの同じアミノ酸配列を含んでよい、またはそれがアミノ酸配列変化を含有してよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸変化の数が、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬ受容体ヒトフレームワークは、配列がＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００３２】
「親和性」は、分子（例えば、抗体）及びその結合パートナー（例えば、抗原）の単一結合部位間の非共有相互作用の総和の力を指す。「結合親和性」は、特に指示がないかぎり、本発明に用いる場合、結合ペア（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１相互作用を示す内因性結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載の方法を含む当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の実例となる例示的実施形態が、以下に記載されている。
【００３３】
「親和性成熟」抗体は、変性がない親抗体と比べて１つ以上超可変領域（ＨＶＲ）中に１つ以上の変性がある抗体を指し、かかる変性の結果、抗体の抗原に対する親和性が改善される。
【００３４】
用語「抗ＧＰＣ３抗体」及び「ＧＰＣ３に結合する抗体」は、抗体が、ＧＰＣ３を標的とする場合、診断薬剤及び／または治療薬剤として有用であるように十分な親和性でＧＰＣ３を結合することができる抗体を指す。１つの実施形態では、類似性のない非ＧＰＣ３タンパク質への抗ＧＰＣ３抗体の結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定したＧＰＣ３への抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、ＧＰＣ３に結合する抗体の解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）である。特定の実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、異なる種に由来するＧＰＣ３に保存されているＧＰＣ３のエピトープに結合する。
【００３５】
用語「抗体」は、本明細書では、最も広い意味で用いられ、所望の抗原−結合活性を示す限り、これらに限定されないが、単クローン性抗体、多クロ−ン性抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを含むさまざまな抗体構造を包含する。
【００３６】
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部を含み、インタクト抗体が結合する抗原を結合するインタクト抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；二重特異性抗体；直鎖抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；及び抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられるこれらに限定されない。
【００３７】
タンパク質の定義領域内の「エピトープに結合する抗体」は、タンパク質に結合するためのその領域内に１つ以上のアミノ酸の存在を必要とする抗体である。特定の実施形態では、タンパク質の定義領域内の「エピトープに結合する抗体」が、タンパク質のアミノ酸を欠失または変異させる欠失または変異分析によって同定され、抗体の得られた変化したタンパク質（例えば、エピトープを含む変化したタンパク質）への結合が、変化していないタンパク質への結合の少なくとも２０％であると測定される。いくつかの実施形態では、タンパク質の定義領域内の「エピトープに結合する抗体」が、タンパク質のアミノ酸が欠失または変異する欠失または変異分析によって同定され、抗体の得られた変化したタンパク質（例えば、エピトープを含む変化したタンパク質）への結合が、変化していないタンパク質への結合の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％であると測定される。例示的欠失（切断）分析が、実施例２に記載されている。特定の実施形態では、抗体の結合が、実施例２に記載したとおり、ＦＡＣＳによって測定される、または好適な結合アッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡまたは表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される。
【００３８】
参照抗体によりポリペプチド、例えば、ＧＰＣ３への結合と競合する抗体は、競合アッセイで参照抗体のポリペプチドへの結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、逆に言えば、参照抗体が、競合アッセイで抗体のポリペプチドへの結合を５０％以上ブロックする。例示的競合アッセイが、本明細書の実施例２に提供したとおり、エピトープビニングアッセイである。いくつかの実施形態では、競合は、表面プラズモン共鳴アッセイを用いて評価してよい。
【００３９】
「アミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープ」は、Ｓ３５９へのＮ−末端である１つ以上のＧＰＣ３アミノ酸残基及びＲ３５８へのＣ−末端である１つ以上のアミノ酸残基を含むエピトープを指す。特定の実施形態では、抗体のかかるエピトープへの結合は、Ｓ３５９へのＮ−末端である１つ以上のＧＰＣ３アミノ酸残基及び／またはＲ３５８へのＣ−末端である１つ以上のアミノ酸残基を欠失または変異させる欠失または変異分析によって測定することができ、抗体の得られた変化したタンパク質（例えば、エピトープを含む変化したタンパク質）への結合が、変化していないタンパク質への結合の少なくとも２０％であると測定される。特定の実施形態では、抗体のかかるエピトープへの結合は、Ｓ３５９へのＮ−末端である１つ以上のＧＰＣ３アミノ酸残基及び／またはＲ３５８へのＣ−末端である１つ以上のアミノ酸残基を欠失または変異させる欠失または変異分析によって測定することができ、抗体の得られた変化したタンパク質（例えば、エピトープを含む変化したタンパク質）への結合が、変化していないタンパク質への結合の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％であると測定される。いくつかの実施形態では、アミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープに結合する抗体が、完全長ＧＰＣ３に結合するが、アミノ酸残基Ｒ３５８（例えば、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜３５８）で終わるＧＰＣ３のＮ−末端フラグメントに結合せず、アミノ酸残基Ｓ３５９（例えば、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸３５９〜５６０または３５９〜５８０）で始まるＧＰＣ３のＣ−末端フラグメントに結合しない。
【００４０】
用語「癌」及び「癌性」は、通常、細胞成長／増殖が制御されないことを特徴とする哺乳動物の生理学的状態を指す、または表す。癌の例としては、癌腫、肝臓癌、肝細胞癌、膵癌、肺癌、結腸癌、乳癌、前立腺癌、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４１】
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定のソースまたは種に由来し、重鎖及び／または軽鎖の残りが異なるソースまたは種に由来する抗体を指す。
【００４２】
抗体の「クラス」は、その重鎖が有する定常ドメインまたは不変領域の型を指す。抗体の主要な５つのクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのうちいくつかは、さらにサブクラス（イソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。
【００４３】
用語「細胞毒性薬剤」は、本明細書に用いる場合、細胞機能を抑制または妨害する、及び／または細胞死または細胞破壊を引き起こす物質を指す。細胞毒性薬剤としては、これらに限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体）；化学療法薬または薬剤（例えば、メトトレキセート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルピシンまたは他のインターカレート剤）；成長阻害剤；これらの酵素及びフラグメント、例えば、核酸分解酵素；抗生物質；毒素、例えば、細菌、真菌、植物または動物由来の小分子毒素または酵素活性毒素（これらのフラグメント及び／または変異型を含む）；及び以下に記載したさまざまな抗腫瘍薬剤または抗癌薬剤が挙げられる。
【００４４】
「エフェクター機能」は、抗体イソタイプで変化する抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体−依存性細胞−媒介細胞障害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体のダウンレギュレーション（例えば、Ｂ細胞受容体）；及びＢ細胞活性が挙げられる。
【００４５】
「有効量」の薬剤、例えば、医薬製剤は、所望の治療または予防的結果を得るために必要な用量及び必要な期間で効果的な量を指す。
【００４６】
用語「エピトープ」は、抗体が抗原分子に結合する特定の部位を指す。
【００４７】
用語「Ｆｃ領域」は、本明細書では、不変領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ−末端領域を定義するために用いられる。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異型Ｆｃ領域を含む。１つの実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域が、Ｃｙｓ２２６、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端へ伸びる。しかし、Ｆｃ領域のＣ−末端リシン（Ｌｙｓ４４７）が、存在してよい、または存在しなくてよい。本明細書に特に指示がない限り，Ｆｃ領域または不変部領域中のアミノ酸残基の番号付与は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版に記載のとおり、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付与体系に従う。Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１。
【００４８】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。それゆえに、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）中の以下の配列：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４に現れる。
【００４９】
用語「完全長抗体」、「インタクト抗体」及び「全抗体」は、本明細書に交換可能で用いられ、天然抗体の構造と実質的にほぼ同じ構造を有する抗体、または本明細書に定義されるとおりのＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。
【００５０】
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養」は、交換可能で用いられ、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の後代細胞を含む。宿主細胞は、「形質転換体」及び「形質転換細胞」を含み、一次形質転換細胞及び継代の数に関係なくこれらに由来する後代細胞を含む。後代細胞は、核酸内容物が親細胞と完全に同一でなくてもよく、変異を含有してよい。当初の形質転換細胞中でスクリーニングまたは選択されるものと同じ機能または生物活性を有する変異後代細胞が、本明細書に含まれる。
【００５１】
「ヒト抗体」は、ヒトまたはヒト細胞によって生成される抗体またはヒト抗体レパートリーまたは他のヒト抗体をコードする配列を用いる非ヒトソースに由来する抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。特に非ヒト抗原−結合残基を含むヒト化抗体は、ヒト抗体のこの定義から除外される。
【００５２】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列のセクション中に最も一般的に生じるアミノ酸残基を示すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列のセクションは、可変ドメイン配列のサブグループに由来する。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３に記載のとおりのサブグループである。１つの実施形態では、ＶＬのサブグループが、前記のＫａｂａｔらに記載のとおり、サブグループカッパＩである。１つの実施形態では、ＶＨのサブグループが、前記のＫａｂａｔらに記載のとおり、サブグループＩＩＩである。
【００５３】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲに由来するアミノ酸残基及びヒトＦＲに由来するアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施形態では、ヒト化抗体が、少なくとも１つ可変ドメイン、及び通常２つの可変ドメインのすべてを実質的に含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト抗体の可変ドメインに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてがヒト抗体の可変ドメインに対応する。ヒト化抗体が、任意で、ヒト抗体に由来する抗体不変領域の少なくとも一部を含んでよい。抗体の「ヒト化形態」、例えば、非ヒト抗体は、ヒト化された抗体を指す。
【００５４】
用語「超可変領域」または「ＨＶＲ」は、本明細書に用いる場合、配列中で超可変である、及び／または構造的に定義されるループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの各領域を指す。一般に、天然４鎖抗体は、６つのＨＶＲ：ＶＨ中の３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬ中の３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。ＨＶＲは、一般に、超可変ループ及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）に由来するアミノ酸残基を含み、後者は、配列可変性が最も高く、及び／または抗原認識に関与している。例示的超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）で生じる（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）。例示的ＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４〜３４、Ｌ２のアミノ酸残基５０〜５６、Ｌ３のアミノ酸残基８９〜９７、Ｈ１のアミノ酸残基３１〜３５Ｂ、Ｈ２のアミノ酸残基５０〜６５、及びＨ３のアミノ酸残基９５〜１０２で生じる。（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版．Ｐｕｂｌｉｃ  ＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１））。ＶＨ中のＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは、一般に超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、また、抗原に接触する残基である「特異性決定残基」、または「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、短縮型ＣＤＲ、またはａ−ＣＤＲと称されるＣＤＲの領域内に含有される。例示的ａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基３１〜３４、Ｌ２のアミノ酸残基５０〜５５、Ｌ３のアミノ酸残基８９〜９６、Ｈ１のアミノ酸残基３１〜３５Ｂ、Ｈ２のアミノ酸残基５０〜５８、及びＨ３のアミノ酸残基９５〜１０２で生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照。）特に指示がないかぎり、本明細書では、前記のＫａｂａｔらに従って可変ドメイン中のＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）に番号を付与する。
【００５５】
「イムノコンジュゲート」は、これらに限定されないが細胞毒性薬剤を含む１つ以上の異種分子（単数及び複数）に結合する抗体である。
【００５６】
「個体」または「被験者」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長動物（例えば、ヒト及び非ヒト霊長動物、例えば、サル）、ウサギ、及びげっ歯類動物（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、個体または被験者が、ヒトである。
【００５７】
「分離抗体」は、その自然環境の成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態では、抗体が、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点分離法（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはロマトグラフ（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって測定したとおり、９５％超または９９％純度に精製される。抗体純度の評価方法の再検討では、例えば、Ｆｌａｔｍａｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照。
【００５８】
「分離核酸」は、その自然環境の成分から分離された核酸分子を指す。分離核酸は、核酸分子を当初から含有する細胞中に含有される核酸分子を含むが、核酸分子は、染色体外に存在する、またはその天然染色体位置と異なる染色体位置に存在する。
【００５９】
「抗ＧＰＣ３抗体をコードする分離核酸」は、抗体重鎖及び軽鎖（またはこれらのフラグメント）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一ベクターまたは別々のベクター中にかかる核酸分子（単数及び複数）を含み、かかる核酸分子（単数及び複数）は、宿主細胞中の１つ以上の位置に存在している。
【００６０】
用語「ＧＰＣ３」、本明細書に用いる場合、細胞中のＧＰＣ３前駆体タンパク質のプロセッシングにより生ずる天然成熟ＧＰＣ３を指す。当該用語は、特に指示がない限り、哺乳動物、例えば、霊長動物（例えば、ヒト及びシノモルグスサル）及びげっ歯類動物（例えば、マウス及びラット）を含む脊椎動物ソースに由来するＧＰＣ３を含む。当該用語は、また、ＧＰＣ３の自然変異体、例えば、スプライス変異体またはアレリック変異体を含む。シグナル配列（シグナル配列、アミノ酸１〜２４を有する）を有する例示的ヒトＧＰＣ３前駆体タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号：１に示している。例示的成熟ヒトＧＰＣ３のアミノ酸配列は、配列番号：１のアミノ酸２５〜５８０である。シグナル配列を有し、非限定例であるシノモルグスサル、アカゲザル、マウス、及びラットのＧＰＣ３前駆体タンパク質のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号：３７〜４１に示している。
【００６１】
用語「ＧＰＣ３−陽性癌」は、その表面上にＧＰＣ３を発現する細胞を含む癌を指す。いくつかの実施形態では、細胞表面上のＧＰＣ３の発現が、例えば、免疫組織化学、ＦＡＣＳなどの方法で、例えば、抗体〜ＧＰＣ３を用いて測定される。あるいは、ＧＰＣ３ｍＲＮＡ発現が、細胞表面上のＧＰＣ３発現と関係していると考えられており、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲ（定量的ＲＴ−ＰＣＲを含む）から選択される方法によって測定することができる。
【００６２】
用語「ＧＰＣ３−陽性細胞」は、その表面上にＧＰＣ３を発現する細胞を指す。
【００６３】
用語「単クローン性抗体」は、本明細書に用いる場合、実質的に均質な抗体の集団から得られた抗体を指す。すなわち、当該集団を含む個々の抗体は、例えば、自然に生じる変異または単クローン性抗体調製物の生成中に生じる変異を含有し、生じる可能性がある変異型（かかる変異型は一般に少量で存在する）抗体を除いて、同じものである、及び／または同じエピトープを結合する。通常、異なる決定因子（エピトープ）に向けられた異なる抗体を含む多クロ−ン性抗体調製とは対照的に、単クローン性抗体調製物の各単クローン性抗体は、抗原の単一決定因子に向けられる。したがって、修飾語「単クローン性」は、抗体の実質的に均質な集団から得られているとおりの抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の生成を必要とするとは解釈されない。例えば、本発明に従って用いられる単クローン性抗体は、これらに限定されないが、ハイブリドーマ法、遺伝子組み換えＤＮＡ法、ファージ提示法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むさまざまな技術によって生成してよく、単クローン性抗体を生成するためのかかる方法及び他の例示的方法が本明細書に記載されている。
【００６４】
「裸抗体」は、異種部分（例えば、細胞毒性部分）または放射性同位元素標識に結合されない抗体を指す。裸抗体は、医薬製剤中に存在してよい。
【００６５】
「天然抗体」は、構造を変化させる自然免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一軽鎖及び２つの同一重鎖からなる約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各重鎖が、Ｎ−末端からＣ−末端まで、可変領域（ＶＨ）を有し、これは、また、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインと称され、３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）に続く。同様に、各軽鎖が、Ｎ−末端からＣ−末端まで、可変領域（ＶＬ）を有し、これは、また、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインと称され、定常軽（ＣＬ）ドメインに続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づくカッパ（κ）及びラムダ（λ）と称される２つの型の１つに対応付けしてよい。
【００６６】
用語「添付文書」は、適応、使用法、用量、投与、組み合わせ治療、禁忌及び／またはかかる治療製品の使用に関わる注意事項についての情報を含有し、治療製品の商業包装に慣例的に含まれる指示書を指すために用いられる。
【００６７】
参照ポリペプチド配列に関しての「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列同一性の一部として保存的置換を考慮せず、必要であれば、最大パーセント配列同一性を実現するために、配列をアラインし、ギャップを導入した後の参照リペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、当技術分野の技術内にあるさまざまな方法で、例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウエア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアを用いて実現することができる。当業者であれば、比較される配列の完全長を越える最大アラインメントを実現するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインするための好適なパラメーターを決定することができる。しかし、本明細書の目的では、％アミノ酸配列同一性値が、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ−２を用いて生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータープログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作製され、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ  Ｏｆｆｉｃｅ、ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＤ．Ｃ．、２０５５９にユーザードキュメンテーションとともにファイルされ、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公に入手可能であり、またはソースコードからコンパイルしてよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、デジタルＵＮＩＸＶ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルしなければならない。全配列比較パラメーターは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変化しない。
【００６８】
ＡＬＩＧＮ−２がアミノ酸配列比較に用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂとの、所与のアミノ酸配列Ｂによる、または所与のアミノ酸配列Ｂに対する所与のアミノ酸配列Ａ（代わりに所与のアミノ酸配列Ｂとの、所与のアミノ酸配列Ｂによる、または所与のアミノ酸配列Ｂに対する特定の％アミノ酸配列同一性を有する、または含む所与のアミノ酸配列Ａとして表現することができる）の％アミノ酸配列同一性は、以下のとおり、計算される。
フラクションＸ／Ｙの１００倍
Ｘは、プログラムのアラインメントＡ及びＢで配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって同一性マッチとスコアされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さは、アミノ酸配列Ｂの長さと等しくなく、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性と等しくないと理解される。特に記載しない限り、本明細書に用いられる全％アミノ酸配列同一性値は、直前の段落に記載されるとおり、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータープログラムを用いて得られる。
【００６９】
用語「医薬製剤」は、その中に含有される有効成分の生物活性が効果的となるような形態中にあり、製剤が投与される被験者に対して容認できないほど毒性がある追加成分を含有しない調製物を指す。
【００７０】
「製剤的に許容可能なキャリア」は、被験者に対して毒性がなく、有効成分以外の医薬製剤中の成分を指す。製剤的に許容可能なキャリアとしては、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７１】
本明細書に使用する場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（およびその文法的変化、例えば、「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）は、治療される患者の自然経過を変えようとする臨床的介入を意味し、予防のためまたは臨床病理学の経過の間に実施することができるものである。治療の望ましい効果としては、疾患の発症または再発を防ぐこと、症状の軽減、疾患の直接または間接的な病理的結果の減少、転移の阻止、疾患進行率を低下させること、疾患病態の改善または好転、および緩解または改善した予後が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体が疾患の発症を遅らせる、または疾患の進行を遅らせるために用いられる。
【００７２】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与している抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、一般に、ほぼ同じ構造を有し、各ドメインが４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、ＫｉｎｄｔらＫｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第６版，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照。）単一ＶＨまたはＶＬドメインは、抗原−結合特異性を与えるのに十分なものとしてよい。さらに、特定の抗原を結合する抗体は、それぞれの相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリー、をスクリーニングするためにＶＨまたはＶＬドメインを用いて抗原を結合する抗体から分離してよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；  Ｃｌａｒｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照。
【００７３】
用語「ベクター」は、本明細書に用いる場合、結合しているもう１つの核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。当該用語は、自己複製核酸構造としてのベクターならびに導入された宿主細胞のゲノムに組み入れられるベクターを含む。特定のベクターは、機能的に結合している核酸の発現を命令することができる。かかるベクターは、本明細書では「発現ベクター」を指す。
【００７４】
「アルキル」は、ノルマル、第二級、第三級または環状炭素原子を含有するＣ１−Ｃ１８炭化水素である。その例は、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３である。
【００７５】
用語「Ｃ１−Ｃ８アルキル」は、本明細書に用いる場合、１〜８個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖、飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ８アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチル、−ｎ−オクチル、−ｎ−ノニル及び−ｎ−デシルが挙げられるが、これらに限定されない；また、分枝鎖Ｃ１−Ｃ８アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、２−メチルブチルが挙げられるが、これらに限定されない；不飽和Ｃ１−Ｃ８アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２、３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、−３−メチル−１−ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−Ｃ８アルキル基は、非置換とする、または、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）または’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮを含む１つ以上の基で置換することができる；各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される。
【００７６】
用語「Ｃ１−Ｃ１２アルキル」は、本明細書に用いる場合、１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖、飽和または不飽和炭化水素を指す。Ｃ１−Ｃ１２アルキル基は、非置換とする、または、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮを含む１つ以上の基で置換することができる；各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される。
【００７７】
用語「Ｃ１−Ｃ６アルキル」は、本明細書に用いる場合、１〜６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖、飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ６アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−及びｎ−ヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない；また、分枝鎖Ｃ１−Ｃ６アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、及び２−メチルブチルが挙げられるが、これらに限定されない；不飽和Ｃ１−Ｃ６アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及び−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、及び３−ヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−Ｃ６アルキル基は、非置換とする、または、Ｃ１−Ｃ８アルキル基について前記に記載したとおり、１つ以上の基で置換することができる。
【００７８】
用語「Ｃ１−Ｃ４アルキル」は、本明細書に用いる場合、１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖、飽和または不飽和炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ４アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎブチルが挙げられるが、これらに限定されない；また、分枝鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチルが挙げられるが、これらに限定されない不飽和Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及び−イソブチレニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−Ｃ４アルキル基は、非置換とする、または、Ｃ１−Ｃ８アルキル基について前記に記載したとおり、１つ以上の基で置換することができる。
【００７９】
「アルコキシ」は、酸素に単結合したアルキル基である。例示的アルコキシ基としては、メトキシ（−ＯＣＨ３）及びエトキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ３）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ１−Ｃ５アルコキシ」は、１〜５個の炭素原子を有するアルコキシ基である。アルコキシ基は、非置換とする、または、アルキル基について前記に記載したとおり、１つ以上の基で置換することができる。
【００８０】
「アルケニル」は、不飽和、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ２二重結合の少なくとも１つの部位を有するノルマル、第二級、第三級または環状炭素原子を含有するＣ２−Ｃ１８炭化水素である。その例としては、エチレンまたはビニル（-ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（-ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（-Ｃ５Ｈ７）、及び５−ヘキセニル（-ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２−Ｃ８アルケニル」は、不飽和、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ２二重結合の少なくとも１つの部位を有する２〜８個のノルマル、第二級、第三級または環状炭素原子を含有する炭化水素である。
【００８１】
「アルキニル」は、不飽和、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ三重結合の少なくとも１つの部位を有するノルマル、第二級、第三級または環状炭素原子を含有するＣ２−Ｃ１８炭化水素である。その例としては、アセチレン基（−Ｃ≡ＣＨ）及びプロパルギル基（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２−Ｃ８アルキニル」は、不飽和、すなわち、炭素−炭素、ｓｐ三重結合の少なくとも１つの部位を有する２〜８個のノルマル、第二級、第三級または環状炭素原子を含有する炭化水素である。
【００８２】
「アルキレン」は、１〜１８個の炭素原子の飽和、分枝鎖または直鎖または環状炭化水素ラジカルを指し、親アルカンの同じ炭素原子または２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって誘導される２個の一価ラジカル中心を有する。典型的なアルキレンラジカルとしては、メチレン（−ＣＨ２−）１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８３】
「Ｃ１−Ｃ１０アルキレン」は、式−（ＣＨ２）１−１０−の直鎖、飽和炭化水素基である。Ｃ１−Ｃ１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン及びデカレンが挙げられる。
【００８４】
「アルケニレン」は、２〜１８個の炭素原子の不飽和、分枝鎖または直鎖または環状炭化水素ラジカルを指し、親アルケンの同じ炭素原子または２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって誘導される２個の一価ラジカル中心を有する。典型的なアルケニレンラジカルとしては、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８５】
「アルキニレン」は、２〜１８個の炭素原子の不飽和、分枝鎖または直鎖または環状炭化水素ラジカルを指し、親アルキンの同じ炭素原子または２個の異なる炭素原子から２個の水素原子を除去することによって誘導される２個の一価ラジカル中心を有する。典型的なアルキニレンラジカルとしては、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）、及び４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８６】
「アリール」は、炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。炭素環式芳香族基または複素環式芳香族基は、非置換とする、または、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）または’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ含む１つ以上の基で置換することができる；各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される。
【００８７】
「Ｃ５−Ｃ２０アリール」は、炭素環式芳香環中に５〜２０個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ２０アリール基の例としては、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５−Ｃ２０アリール基は、アリール基について前記に記載したとおり、置換する、または非置換とすることができる。「Ｃ５−Ｃ１４アリール」は、炭素環式芳香環中に５〜１４個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ１４アリール基の例としては、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５−Ｃ１４アリール基は、アリール基について前記に記載したとおり、置換する、または非置換とすることができる。
【００８８】
「アリレン」は、２つの共有結合を有するアリール基であり、以下の構造に示したとおり、オルト、メタ、またはパラ配置とすることができる。
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フェニル基は、非置換とする、または、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）または’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮを含む４個までの基で置換することができる；各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される。
【００８９】
「アリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つが、アリールラジカルで置換されている環状アルキルラジカルを指す。典型的なアリールアルキル基としては、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどが挙げられるが、これらに限定されない。アリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子、例えば、アルカニル、アルケニルまたはアルキニル基を含むアルキル部分を含み、アリールアルキル基は、１〜６個の炭素原子であり、及びアリール部分は、５〜１４個の炭素原子である。
【００９０】
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端またはｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つが、ヘテロアリールラジカルで置換されている環状アルキルラジカルを指す。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子、例えば、アルカニル、アルケニルまたはアルキニル基を含むアルキル部分を含み、ヘテロアリールアルキル基は、１〜６個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分は、５〜１４個の炭素原子であり、１〜３個のヘテロ原子は、Ｎ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３〜７個の環員（２〜６個の炭素原子）を有する単環、または７〜１０個の環員（４〜９個の炭素原子及びＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系としてよい。
【００９１】
「置換アルキル」、「置換アリール」、及び「置換アリールアルキル」それぞれは、１つ以上の水素原子それぞれが、独立して置換基で置換されているアルキル、アリール、及びアリールアルキルを意味する。典型的な置換基としては、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、または、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ−３、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２が挙げられるが、これらに限定されない；各Ｘは、独立してハロゲン：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩである；及び各Ｒは、独立してＨ、Ｃ２−Ｃ１８アルキル、Ｃ６−Ｃ２０アリール、Ｃ３−Ｃ１４複素環、保護基またはプロドラッグ部分である。また、前記のアルキレン、アルケニレン、及びアルキニレン基を同様に置換してよい。
【００９２】
「ヘテロアリール」及び「複素環」は、１つ以上の環原子が、ヘテロ原子、例えば、窒素、酸素、及び硫黄である環系を指す。複素環ラジカルは、３〜２０個の炭素原子及びＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む。複素環は、３〜７個の環員（２〜６個の炭素原子及びＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する単環または７〜１０個の環員（４〜９個の炭素原子及び１〜３個のヘテロ原子から選択されるＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳ）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系としてよい。
【００９３】
例示的複素環が、例えば、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６８）、特にＣｈａｐｔｅｒｓ１、３、４、６、７、及び９；“Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０〜現在）、特にＶｏｌｕｍｅｓ１３、１４、１６、１９、及び２８；及びＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。
【００９４】
複素環の例としては、例えば、ピリジル、ジヒドロイピリジル（ｄｉｈｙｄｒｏｙｐｙｒｉｄｙｌ）、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化型テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル（ａｚｏｃｉｎｙｌ）、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソキサゾリル、オキシンドリル、ベンゾキサゾリニル、及びイサチノイル（ｉｓａｔｉｎｏｙｌ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９５】
例えば及びこれらに限定されない、炭素結合複素環は、ピリジンの２、３、４、５、もしくは６位、ピリダジンの３、４、５、もしくは６位、ピリミジンの２、４、５、もしくは６位、ピラジンの２、３、５、もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、もしくはテトラヒドロピロールの２、３、４、もしくは５位、オキサゾール、イミダゾール、もしくはチアゾールの２、４、もしくは５位、イソキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４、もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３、もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、もしくは８位で結合される。さらにより典型的には、炭素結合複素環としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、または５−チアゾリルが挙げられる。
【００９６】
窒素結合複素環は、例えば、これらに限定されないが、またはアジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール、またはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、およびカルバゾールまたはβ−カルボリンの９位で結合される。さらにより典型的には、窒素結合複素環としては１−アジリジル、１−アゼテジル（ａｚｅｔｅｄｙｌ）、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、および１−ピペリジニルが挙げられる。
【００９７】
「Ｃ３−Ｃ８複素環」は、環炭素原子うちの１〜４個が、独立してＯ、Ｓ及びＮからなる基からのヘテロ原子で置換されている芳香族または非芳香族Ｃ３−Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３−Ｃ８複素環の代表的な例としては、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、及びテトラゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ３−Ｃ８複素環は、非置換とする、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）または’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮを含む７個までの基で置換することができ；各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される。
【００９８】
「Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子のうちの１個が、結合で置換されている前記で定義したＣ３−Ｃ８複素環基を指す。Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロは、非置換とする、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）または’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮを含む６個までの基で置換することができ；各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される。
【００９９】
「Ｃ３−Ｃ２０複素環」は、環炭素原子うちの１〜４個が、独立してＯ、Ｓ及びＮからなる基からのヘテロ原子で置換されている芳香族または非芳香族Ｃ３−Ｃ２０炭素環を指す。Ｃ３−Ｃ２０複素環は、非置換とする、または、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）または’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮを含む７個までの基で置換することができ；各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される。
【０１００】
「Ｃ３−Ｃ２０ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子のうちの１個が、結合で置換されている前記で定義したＣ３−Ｃ２０複素環基を指す。
【０１０１】
「炭素環」は、単環として３〜７個の炭素原子または二環として７〜１２個の炭素原子を有する飽和または不飽和環を意味する。単環式炭素環は、３〜６個の環原子を有し、さらにより典型的には５または６個の環原子を有する。二環式炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］または［６，６］系として配置される７〜１２個の環原子、またはビシクロ［５，６］または［６，６］系として配置される９または１０個の環原子を有する。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。
【０１０２】
「Ｃ３−Ｃ８炭素環」は、３−、４−、５−、６−、７−または８−員の飽和または不飽和非芳香族炭素環式環である。代表的なＣ３−Ｃ８炭素環としては、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチル、及び−シクロオクタジエニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ３−Ｃ８炭素環基は、非置換とする、または、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）または’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮを含む１つ以上の基で置換することができる；各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される。
【０１０３】
「Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ」は、炭素環基の水素原子のうちの１個が結合で置換されている前記で定義したＣ３−Ｃ８複素環基を指す。
【０１０４】
「リンカー」は、薬剤部分に抗体を共有結合する原子の共有結合または鎖を含む化学部分を指す。種々の実施形態では、リンカーが、二価ラジカル（例えば、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイル）部分、例えば、−（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ−、アルキルオキシ（例えば、ポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）及びアルキルアミノ（例えば、ポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の反復単位；ならびにコハク酸塩、コハク酸アミド、ジグリコール酸塩、マロン酸塩、及びカプロアミドを含む二酸エステル及びアミドを含む。種々の実施形態では、リンカーは、１つ以上のアミノ酸残基、例えば、バリン、フェニルアラニン、リジン、及びホモリジンを含むことができる。
【０１０５】
用語「キラル」は鏡像パートナーを重ね合わせることができない特性を有する分子を意味する、一方、用語「アキラル」はその鏡像パートナーに重ね合わせることができる分子を意味する。
【０１０６】
用語「立体異性体」は化学的組成が同一であるが、空間での原子または基の配置に関しては異なる化合物を意味する。
【０１０７】
「ジアステレオマー」は２つ以上のキラル中心を有し、その分子は互いの鏡像ではない立体異性体を意味する。ジアステレオマーは異なる物理的特性、例えば融点、沸点、スペクトル特性、および反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は電気泳動およびクロマトグラフィーなどの高度溶解分析手順下で分離することができる。
【０１０８】
「鏡像異性体」は互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を意味する。
【０１０９】
本明細書に一般的に用いられる立体化学の定義および約束ごとはＳ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，版，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；  ａｎｄ  Ｅｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は光学活性形態で存在する、すなわち、これらは平面偏光の面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を記載する際に、接頭辞ＤおよびＬ、またはＲおよびＳ、が用いられ、そのキラル中心（単数または複数）についての分子の絶対的配置を示す。接頭辞ｄおよびｌまたは（＋）および（−）が用いられ、化合物による平面偏光の回転の印を示し、（−）またはｌは化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄの接頭辞がついた化合物は右旋性である。所与の化学構造については、それらが互いの鏡像であることを除いて、それらの立体異性体は同一である。特定の立体異性体はまた、鏡像異性体と呼ぶことができる、およびかかる異性体の混合物は鏡像異性体混合物と呼ばれることがある。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ化合物と呼ばれ、化学反応または工程において立体選択または立体特異性がない場合に生じさせることができる。用語「ラセミ混合物」および「ラセミ化合物」は、光学活性のない２つの鏡像異性体種の等モル濃度混合物を意味する。
【０１１０】
「脱離基」は、もう１つの官能基によって置換することができる官能基を指す。特定の脱離基が、当技術分野でよく知られており、例としては、ハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、メタンスルホニル（メシル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフル酸塩）、およびトリフルオロメチルスルホン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１１】
用語「保護基」は、化合物上の他の官能基と反応しながら、特定の官能基をブロックまたは保護するために一般に用いられる置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物中のアミノ官能基をブロックまたは保護するアミノ基に結合する置換基である。好適なアミノ−保護基としては、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、および９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅｔｈｙｌｅｎｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）（Ｆｍｏｃ）が挙げられるが、これらに限定されない。保護基の一般的な説明およびそれらの使用については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１、またはより新しい版を参照。
【０１１２】
ＩＩ．組成物及び方法
１つの態様では、本発明は、部分的に、ＧＰＣ３に結合する抗体及びかかる抗体を含むイムノコンジュゲートに基づいている。本発明の抗体及びイムノコンジュゲートは、例えば、ＧＰＣ３−陽性癌の診断または治療に有用である。
【０１１３】
Ａ．例示的抗ＧＰＣ３抗体
本明細書では、ＧＰＣ３に結合する分離抗体が提供される。シグナル配列（アミノ酸１〜２４）を有する例示的自然ヒトＧＰＣ３前駆体タンパク質配列が、配列番号：１に提供され、配列番号：１のアミノ酸２５〜５８０に対応する対応成熟ＧＰＣ３タンパク質配列が提供される。
【０１１４】
特定の実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、少なくとも１つ以上の以下の特性を任意の組み合わせで有する。
ａ）遺伝子組換えヒトＧＰＣ３に結合する；
ｂ）遺伝子組換えシノモルグスサルＧＰＣ３に結合する；
ｃ）ＨｅｐＧ２細胞の表面上の内因性ＧＰＣ３に結合する；
ｄ）２９３細胞の表面上に発現したシノモルグスサルＧＰＣ３に結合する；
ｅ）癌細胞の表面上の内因性ＧＰＣ３に結合する；
ｆ）肝細胞癌細胞の表面上の内因性ＧＰＣ３に結合する；
ｇ）ＨｅｐＧ２、Ｈｅｐ３Ｂ、Ｈｕｈ７、及びＪＨＨ−７から選択される細胞株の細胞の表面上の内因性ＧＰＣ３に結合する；
ｈ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜１３７内のエピトープに結合する；
ｉ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープに結合する；
ｊ）完全長成熟ヒトＧＰＣ３（例えば、配列番号：１のアミノ酸２５〜５６０またはアミノ酸２５〜５８０）に結合するが、ヒトＧＰＣ３（配列番号：１のアミノ酸２５〜３５８）のＮ−末端フラグメントまたはヒトＧＰＣ３（配列番号：１のアミノ酸３５９〜５６０（ＧＰＩ結合なし）またはアミノ酸３５９〜５８０（ＧＰＩ結合あり））のＣ−末端フラグメントに結合しない；
ｋ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４２０〜４７０内のエピトープに結合する；
ｌ）ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４７０〜５０９内のエピトープに結合する；
ｍ）抗体７Ｈ１によりヒトＧＰＣ３への結合と競合する；
ｎ）抗体４Ｇ７によりヒトＧＰＣ３への結合と競合する；
ｏ）抗体１５Ｇ１によりヒトＧＰＣ３への結合と競合する；及び／または
ｐ）抗体４Ａ１１によりヒトＧＰＣ３への結合と競合する。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、抗体の特性が、本明細書に記載のとおり、例えば、以下の実施例に記載のとおり測定される。いくつかの実施形態では、エピトープの結合が、例えば、実施例２に記載したとおり、欠失（切断）分析を用いて測定される。いくつかの実施形態では、エピトープの結合が、例えば、実施例２に記載したとおり、ＦＡＣＳによって測定される、または好適な結合アッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡまたは表面プラズモン共鳴アッセイによって測定される。非限定実施例として、いくつかの実施形態では、完全長ＧＰＣ３またはＧＰＣ３フラグメントが、細胞（例えば、２９３細胞）の表面上に発現し、細胞の表面上のＧＰＣ３への抗体結合が、ＦＡＣＳによって検出される。
【０１１６】
抗体７Ｈ１及び他の実施形態
本明細書に提供される特定の実施形態が、部分的に、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜１３７内のエピトープに結合する抗体７Ｈ１の発現に基づく。いくつかの実施形態では、本明細書にヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜１３７内のエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかのかかる実施形態では、本明細書に抗体７Ｈ１の１つ以上のＨＶＲ配列を含む抗体が提供される。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む抗ＧＰＣ３抗体を提供する。
【０１１８】
１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。１つの実施形態では、抗体が、配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。もう１つの実施形態では、抗体が、配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらに１つの実施形態では、抗体が、配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらに１つの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１１９】
もう１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。１つの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１２０】
もう１つの態様では、本発明の抗体が、（ａ）（ｉ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つの、少なくとも２つの、または３つ全部のＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１２１】
もう１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１２２】
前記の実施形態のいずれかでは、抗ＧＰＣ３抗体が、ヒト化される。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が前記の実施形態のいずれかのとおりのＨＶＲを含み、さらにヒト受容体フレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。特定の実施形態では、ヒト受容体フレームワークが、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。特定の実施形態では、ヒト受容体フレームワークが、以下の変異のいずれか１つを含むヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１２３】
もう１つの態様では、抗ＧＰＣ３抗体が、配列番号：２のアミノ酸配列との配列同一性が、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：２のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶＨ配列が、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、配列がＧＰＣ３に結合する能力を保持することを含む抗ＧＰＣ３抗体を含有する。特定の実施形態では、計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：２中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、計１〜５個のアミノ酸が、配列番号：２中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失が、ＨＶＲ（すなわち、ＦＲ）の外の領域で生じる。任意で、抗ＧＰＣ３抗体が、その配列の翻訳後修飾を含む配列番号：２のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨが、：（ａ）配列番号：４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。
【０１２４】
もう１つの態様では、抗体が配列番号：３のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＧＰＣ３抗体が提供される。特定の実施形態では、配列番号：３のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶＬ配列が、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、配列がＧＰＣ３に結合する能力を保持することを含む抗ＧＰＣ３抗体を含有する。特定の実施形態では、計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：３中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、計１〜５個のアミノ酸が、配列番号：３中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失が、ＨＶＲ（すなわち、ＦＲ）の外の領域で生じる。任意で、抗ＧＰＣ３抗体が、その配列の翻訳後修飾を含む配列番号：３のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬが、（ａ）配列番号：７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。
【０１２５】
もう１つの態様では、抗体前記に提供した実施形態のいずれかのとおりのＶＨ、及び前記に提供した実施形態のいずれかのとおりのＶＬを含む抗ＧＰＣ３抗体が提供される。１つの実施形態では、抗体が、配列番号：２及び配列番号：３中のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれが、これらの配列の翻訳後修飾を含む。もう１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、配列番号：２及び配列番号：３中のそれぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１２６】
さらに１つの態様では、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が、本明細書に提供される。例えば、特定の実施形態では、配列番号：２のＶＨ配列及び配列番号：３のそれぞれのＶＬ配列を含む抗ＧＰＣ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１２７】
図４Ｂに示したとおり、Ｋａｂａｔナンバリングに従ったＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメイン、及び、図４Ａに示したとおり、Ｋａｂａｔナンバリングに従ったＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗体が、図４Ｂに示したとおり、ＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／またはＨＶＲ３−ＬＣ配列、及びＦＲ１−ＬＣ、ＦＲ２−ＬＣ、ＦＲ３−ＬＣ及び／またはＦＲ４−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体が、図４Ａに示したとおり、ＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／またはＨＶＲ３−ＨＣ配列、及びＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ及び／またはＦＲ４−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１２８】
本発明のさらに１つの態様では、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＧＰＣ３抗体が、ヒト抗体を含む単クローン性抗体である。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。もう１つの実施形態では、抗体が、完全長抗体、例えば、本明細書に定義されるとおり、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ２ａ抗体または他の抗体クラスまたはイソタイプである。
【０１２９】
さらに１つの態様では、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＧＰＣ３抗体が、単独で、または組み合わせて、以下に記載したとおり、特徴のいずれかを組み入れてよい。
【０１３０】
抗体４Ａ１１及び他の実施形態
本明細書に提供される特定の実施形態が、部分的に、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４７０〜５０９内のエピトープに結合する抗体４Ａ１１の発現に基づく。いくつかの実施形態では、本明細書にヒトＧＰＣ３のアミノ酸４７０〜５０９内のエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかのかかる実施形態では、本明細書に抗体４Ａ１１の１つ以上のＨＶＲ配列を含む抗体が提供される。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む抗ＧＰＣ３抗体を提供する。
【０１３２】
１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。１つの実施形態では、抗体が、配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。もう１つの実施形態では、抗体が、配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらに１つの実施形態では、抗体が、配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらに１つの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１３３】
もう１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。１つの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１３４】
もう１つの態様では、本発明の抗体が、（ａ）（ｉ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：１４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つの、少なくとも２つの、または３つ全部のＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１３５】
もう１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１３６】
前記の実施形態のいずれかでは、抗ＧＰＣ３抗体が、ヒト化される。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が前記の実施形態のいずれかのとおりのＨＶＲを含み、さらにヒト受容体フレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。特定の実施形態では、ヒト受容体フレームワークが、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。特定の実施形態では、ヒト受容体フレームワークが、以下の変異のいずれか１つを含むヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１３７】
もう１つの態様では、抗ＧＰＣ３抗体が、配列番号：１０のアミノ酸配列との配列同一性が、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：１０のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶＨ配列が、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、配列がＧＰＣ３に結合する能力を保持することを含む抗ＧＰＣ３抗体を含有する。特定の実施形態では、計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１０中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、計１〜５個のアミノ酸が、配列番号：１０中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失が、ＨＶＲ（すなわち、ＦＲ）の外の領域で生じる。任意で、抗ＧＰＣ３抗体が、その配列の翻訳後修飾を含む配列番号：１０のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨが、：（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。
【０１３８】
もう１つの態様では、抗体が配列番号：１１のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＧＰＣ３抗体が提供される。特定の実施形態では、配列番号：１１のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶＬ配列が、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、配列がＧＰＣ３に結合する能力を保持することを含む抗ＧＰＣ３抗体を含有する。特定の実施形態では、計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１１中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、計１〜５個のアミノ酸が、配列番号：１１中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失が、ＨＶＲ（すなわち、ＦＲ）の外の領域で生じる。任意で、抗ＧＰＣ３抗体が、その配列の翻訳後修飾を含む配列番号：１１のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬが、（ａ）配列番号：１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。
【０１３９】
もう１つの態様では、抗体前記に提供した実施形態のいずれかのとおりのＶＨ、及び前記に提供した実施形態のいずれかのとおりのＶＬを含む抗ＧＰＣ３抗体が提供される。１つの実施形態では、抗体が、配列番号：１０及び配列番号：１１中のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれが、これらの配列の翻訳後修飾を含む。もう１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、配列番号：１０及び配列番号：１１中のそれぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１４０】
さらに１つの態様では、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が、本明細書に提供される。例えば、特定の実施形態では、配列番号：１０のＶＨ配列及び配列番号：１１のそれぞれのＶＬ配列を含む抗ＧＰＣ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１４１】
図４Ｂに示したとおり、Ｋａｂａｔナンバリングに従ったＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメイン、及び、図４Ａに示したとおり、Ｋａｂａｔナンバリングに従ったＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗体が、図４Ｂに示したとおり、ＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／またはＨＶＲ３−ＬＣ配列、及びＦＲ１−ＬＣ、ＦＲ２−ＬＣ、ＦＲ３−ＬＣ及び／またはＦＲ４−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体が、図４Ａに示したとおり、ＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／またはＨＶＲ３−ＨＣ配列、及びＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ及び／またはＦＲ４−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１４２】
本発明のさらに１つの態様では、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＧＰＣ３抗体が、ヒト抗体を含む単クローン性抗体である。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。もう１つの実施形態では、抗体が、完全長抗体、例えば、本明細書に定義されるとおり、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ２ａ抗体または他の抗体クラスまたはイソタイプである。
【０１４３】
さらに１つの態様では、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＧＰＣ３抗体が、単独で、または組み合わせて、以下に記載したとおり、特徴のいずれかを組み入れてよい。
【０１４４】
抗体１５Ｇ１及び他の実施形態
本明細書に提供される特定の実施形態が、部分的に、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸４２０〜４７０内のエピトープに結合する抗体１５Ｇ１の発現に基づく。いくつかの実施形態では、本明細書にヒトＧＰＣ３のアミノ酸４２０〜４７０内のエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかのかかる実施形態では、本明細書に抗体１５Ｇ１の１つ以上のＨＶＲ配列を含む抗体が提供される。
【０１４５】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む抗ＧＰＣ３抗体を提供する。
【０１４６】
１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。１つの実施形態では、抗体が、配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。もう１つの実施形態では、抗体が、配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらに１つの実施形態では、抗体が、配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらに１つの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１４７】
もう１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。１つの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１４８】
もう１つの態様では、本発明の抗体が、（ａ）（ｉ）配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：３０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つの、少なくとも２つの、または３つ全部のＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１４９】
もう１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１５０】
前記の実施形態のいずれかでは、抗ＧＰＣ３抗体が、ヒト化される。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が前記の実施形態のいずれかのとおりのＨＶＲを含み、さらにヒト受容体フレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。特定の実施形態では、ヒト受容体フレームワークが、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。特定の実施形態では、ヒト受容体フレームワークが、以下の変異のいずれか１つを含むヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１５１】
もう１つの態様では、抗ＧＰＣ３抗体が、配列番号：２６のアミノ酸配列との配列同一性が、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：２６のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶＨ配列が、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、配列がＧＰＣ３に結合する能力を保持することを含む抗ＧＰＣ３抗体を含有する。特定の実施形態では、計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：２６中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、計１〜５個のアミノ酸が、配列番号：２６中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失が、ＨＶＲ（すなわち、ＦＲ）の外の領域で生じる。任意で、抗ＧＰＣ３抗体が、その配列の翻訳後修飾を含む配列番号：２６のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨが、：（ａ）配列番号：２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。
【０１５２】
もう１つの態様では、抗体が配列番号：２７のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＧＰＣ３抗体が提供される。特定の実施形態では、配列番号：２７のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶＬ配列が、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、配列がＧＰＣ３に結合する能力を保持することを含む抗ＧＰＣ３抗体を含有する。特定の実施形態では、計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：２７中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、計１〜５個のアミノ酸が、配列番号：２７中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失が、ＨＶＲ（すなわち、ＦＲ）の外の領域で生じる。任意で、抗ＧＰＣ３抗体が、その配列の翻訳後修飾を含む配列番号：２７のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬが、（ａ）配列番号：３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。
【０１５３】
もう１つの態様では、抗体前記に提供した実施形態のいずれかのとおりのＶＨ、及び前記に提供した実施形態のいずれかのとおりのＶＬを含む抗ＧＰＣ３抗体が提供される。１つの実施形態では、抗体が、配列番号：２６及び配列番号：２７中のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれが、これらの配列の翻訳後修飾を含む。もう１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、配列番号：２６及び配列番号：２７中のそれぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１５４】
さらに１つの態様では、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が、本明細書に提供される。例えば、特定の実施形態では、配列番号：２６のＶＨ配列及び配列番号：２７のそれぞれのＶＬ配列を含む抗ＧＰＣ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１５５】
図４Ｂに示したとおり、Ｋａｂａｔナンバリングに従ったＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメイン、及び、図４Ａに示したとおり、Ｋａｂａｔナンバリングに従ったＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗体が、図４Ｂに示したとおり、ＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／またはＨＶＲ３−ＬＣ配列、及びＦＲ１−ＬＣ、ＦＲ２−ＬＣ、ＦＲ３−ＬＣ及び／またはＦＲ４−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体が、図４Ａに示したとおり、ＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／またはＨＶＲ３−ＨＣ配列、及びＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ及び／またはＦＲ４−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１５６】
本発明のさらに１つの態様では、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＧＰＣ３抗体が、ヒト抗体を含む単クローン性抗体である。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。もう１つの実施形態では、抗体が、完全長抗体、例えば、本明細書に定義されるとおり、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ２ａ抗体または他の抗体クラスまたはイソタイプである。
【０１５７】
さらに１つの態様では、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＧＰＣ３抗体が、単独で、または組み合わせて、以下に記載したとおり、特徴のいずれかを組み入れてよい。
【０１５８】
抗体４Ｇ７及び他の実施形態
本明細書に提供される特定の実施形態は、部分的に、完全長ヒトＧＰＣ３に結合するが、Ｎ−末端フラグメントまたはヒトＧＰＣ３のＣ−末端フラグメントに結合しない抗体４Ｇ７の発現に基づく。これは、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープに結合することを示唆している。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体が、完全長成熟ヒトＧＰＣ３に結合するが、ヒトＧＰＣ３のＮ−末端フラグメント（配列番号：１のアミノ酸２５〜３５８）に結合せず、ヒトＧＰＣ３のＣ−末端フラグメント（配列番号：１のアミノ酸３５９〜５６０（ＧＰＩ結合なし）またはアミノ酸３５９〜５８０（ＧＰＩ結合あり））に結合しない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体が、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープに結合する。いくつかのかかる実施形態では、本明細書に抗体４Ｇ７の１つ以上のＨＶＲ配列を含む抗体が提供される。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、本発明は、（ａ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む抗ＧＰＣ３抗体を提供する。
【０１６０】
１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。１つの実施形態では、抗体が、配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。もう１つの実施形態では、抗体が、配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらに１つの実施形態では、抗体が、配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらに１つの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｃ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【０１６１】
もう１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。１つの実施形態では、抗体が、（ａ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１６２】
もう１つの態様では、本発明の抗体が、（ａ）（ｉ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号：２２から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つの、少なくとも２つの、または３つ全部のＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）（ｉ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全部のＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【０１６３】
もう１つの態様では、本発明は、（ａ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１６４】
前記の実施形態のいずれかでは、抗ＧＰＣ３抗体が、ヒト化される。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が前記の実施形態のいずれかのとおりのＨＶＲを含み、さらにヒト受容体フレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークを含む。特定の実施形態では、ヒト受容体フレームワークが、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。特定の実施形態では、ヒト受容体フレームワークが、以下の変異のいずれか１つを含むヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１６５】
もう１つの態様では、抗ＧＰＣ３抗体が、配列番号：１８のアミノ酸配列との配列同一性が、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号：１８のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶＨ配列が、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、配列がＧＰＣ３に結合する能力を保持することを含む抗ＧＰＣ３抗体を含有する。特定の実施形態では、計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１８中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、計１〜５個のアミノ酸が、配列番号：１８中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失が、ＨＶＲ（すなわち、ＦＲ）の外の領域で生じる。任意で、抗ＧＰＣ３抗体が、その配列の翻訳後修飾を含む配列番号：１８のＶＨ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨが、：（ａ）配列番号：２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号：２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号：２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。
【０１６６】
もう１つの態様では、抗体が配列番号：１９のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％である軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＧＰＣ３抗体が提供される。特定の実施形態では、配列番号：１９のアミノ酸配列との同一性が少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であるＶＬ配列が、参照配列に対して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、配列がＧＰＣ３に結合する能力を保持することを含む抗ＧＰＣ３抗体を含有する。特定の実施形態では、計１〜１０個のアミノ酸が、配列番号：１９中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、計１〜５個のアミノ酸が、配列番号：１９中で置換、挿入及び／または除去される。特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失が、ＨＶＲ（すなわち、ＦＲ）の外の領域で生じる。任意で、抗ＧＰＣ３抗体が、その配列の翻訳後修飾を含む配列番号：１９のＶＬ配列を含む。特定の実施形態では、ＶＬが、（ａ）配列番号：２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）配列番号：２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｃ）配列番号：２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つまたは３つのＨＶＲを含む。
【０１６７】
もう１つの態様では、抗体前記に提供した実施形態のいずれかのとおりのＶＨ、及び前記に提供した実施形態のいずれかのとおりのＶＬを含む抗ＧＰＣ３抗体が提供される。１つの実施形態では、抗体が、配列番号：１８及び配列番号：１９中のＶＨ及びＶＬ配列を含み、それぞれが、これらの配列の翻訳後修飾を含む。もう１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、配列番号：１８及び配列番号：１９中のそれぞれのＶＨ及びＶＬ配列を含む抗体のヒト化形態を含む。
【０１６８】
さらに１つの態様では、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が、本明細書に提供される。例えば、特定の実施形態では、配列番号：１８のＶＨ配列及び配列番号：１９のそれぞれのＶＬ配列を含む抗ＧＰＣ３抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１６９】
図４Ｂに示したとおり、Ｋａｂａｔナンバリングに従ったＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及びＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメイン、及び、図４Ａに示したとおり、Ｋａｂａｔナンバリングに従ったＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及びＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗体が、図４Ｂに示したとおり、ＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／またはＨＶＲ３−ＬＣ配列、及びＦＲ１−ＬＣ、ＦＲ２−ＬＣ、ＦＲ３−ＬＣ及び／またはＦＲ４−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体が、図４Ａに示したとおり、ＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／またはＨＶＲ３−ＨＣ配列、及びＦＲ１−ＨＣ、ＦＲ２−ＨＣ、ＦＲ３−ＨＣ及び／またはＦＲ４−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１７０】
本発明のさらに１つの態様では、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＧＰＣ３抗体が、ヒト抗体を含む単クローン性抗体である。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。もう１つの実施形態では、抗体が、完全長抗体、例えば、本明細書に定義されるとおり、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ２ａ抗体または他の抗体クラスまたはイソタイプである。
【０１７１】
さらに１つの態様では、前記の実施形態のいずれかに従った抗ＧＰＣ３抗体が、単独で、または組み合わせて、以下に記載したとおり、特徴のいずれかを組み入れてよい。
【０１７２】
１．抗体親和性
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体の解離定数（Ｋｄ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０.１ｎＭ、≦０.０１ｎＭ、または≦０.００１ｎＭであり、任意で、１０−１３Ｍ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）である。
【０１７３】
１つの実施形態では、Ｋｄが、以下のアッセイに記載したとおり、対象の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原で実行される放射性同位元素標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原とＦａｂを平衡化し、その後、抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンにより、室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、対象のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）の抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致）。その後、対象のＦａｂを一晩インキュベートする；しかし、インキュベーションは、平衡に到達することを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、捕捉プレートに移す。その後、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中の０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥した場合、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）により１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイに使用するために選択する。
【０１７４】
もう１つの実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用した表面プラスモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて測定される。簡潔にいうと、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＮＨＳ）により、供給業者の指示に従って活性化する。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）まで希釈した後、５μｌ／分の流速で注入し、およそ１０応答単位（ＲＵ）のカップリングタンパク質を得る。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応基をブロックする。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ−５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中に、２５℃で、およそ２５μｌ／分の流速で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して、会合センサグラム及び解離センサグラムに同時に適合させることによって、算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）を、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出する。例えば、Ｃｈｅｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照。前記の表面プラスモン共鳴アッセイによるオン速度が、１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、その後、オン速度は、蛍光消光技術を使用することによって、測定することができる。蛍光消光技術は、分光計、例えば、撹拌キュベットを備えるストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定されるとおり、漸増濃度の抗原の存在下で、２５oＣで、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ抗−抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加または減少を測定する。
【０１７５】
２．抗体フラグメント
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体が、抗体フラグメントである。抗体フラグメントとしては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖフラグメント、ならびに以下に記載した他のフラグメントが挙げられるがこれらに限定されない。特定の抗体フラグメントの再検討には、ＨｕｄｓｏｎらＮａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照。ｓｃＦｖフラグメントの再検討には、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  及び  Ｍｏｏｒｅ  編，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照；また、ＷＯ  ９３／１６１８５；及び米国特許第５，５７１，８９４号及び５，５８７，４５８号を参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増大しているＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントの考察には、米国特許第５，８６９，０４６号を参照。
【０１７６】
二重特異性抗体は、二価または二重特異性としてよい２つの抗原−結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、ＥＰ  ４０４，０９７；ＷＯ  １９９３／０１１６１；Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照。三量体及び四量体は、また、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
【０１７７】
単一−ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む抗体フラグメントである。特定の実施形態では、単一−ドメイン抗体が、ヒト単一−ドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６  Ｂ１号を参照）である。
【０１７８】
抗体フラグメントは、本明細書に記載したとおり、これらに限定されないが、インタクト抗体の蛋白分解ならびに遺伝子組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による生成を含むさまざまな技術によって生成することができる。
【０１７９】
３．キメラ及びヒト化抗体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体が、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体が、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。１つの例では、キメラ抗体が、非ヒト可変領域（例えば、可変領域に由来するマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長動物、例えば、サル）及びヒト不変領域を含む。さらに１つの例では、キメラ抗体が、クラスまたはサブクラスが、親抗体のクラスまたはサブクラスから変化した「クラス変換」抗体である。キメラ抗体は、これらの抗原−結合フラグメントを含む。
【０１８０】
特定の実施形態では、キメラ抗体が、ヒト化抗体である。通常、非ヒト抗体は、ヒト化され、ヒトまで免疫原性を低下させるが、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持する。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはこれらの一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはこれらの一部）がヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意で、また、ヒト不変領域の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基が、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基に由来する抗体）からの対応する残基で置換され、例えば、抗体特異性または親和性を回復させる、または改善する。
【０１８１】
ヒト化抗体及びその生成方法が、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に再検討されており、さらに例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号，７，５２７，７９１号，６，９８２，３２１号、及び７，０８７，４０９号Ｋａｓｈｍｉｒｉら，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記載している）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「表面再建」を記載している）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載している）；及びＯｓｂｏｕｒｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａら，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングへの「ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ」アプローチを記載している）に記載されている。
【０１８２】
ヒト化に用いてよいヒトフレームワーク領域としては、「最良適合」法（例えば、ＳｉｍｓらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照）を用いて選択されるフレームワーク領域；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、ＣａｒｔｅｒらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照）；ヒト成熟（体細胞性変異）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照，）；及びスクリーニングＦＲライブラリー（例えば、Ｂａｃａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照）に由来するフレームワーク領域が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１８３】
４．ヒト抗体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体が、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で知られるさまざまな技術を用いて生成することができる。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
【０１８４】
ヒト抗体は、修飾され、抗原チャレンジに反応してヒト可変領域でインタクトヒト抗体またはインタクト抗体を生成するトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製してよい。かかる動物は、通常、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置換する、または染色体外に存在する、またはランダムに動物の染色体に統合されるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座が、一般に不活性化される。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の再検討では、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載している米国特許第６，０７５，１８１号及び６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７，０４１，８７０号、及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号）を参照。かかる動物によって生成されるインタクト抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト不変領域と結合することによってさらに修飾してよい。
【０１８５】
ヒト抗体は、また、ハイブリドーマに基づく方法によって生成することができる。ヒト単クローン性抗体の生成のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が、記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照）。ヒトＢ−細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体が、また、Ｌｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。さらに、方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からの単クローン性ヒトＩｇＭ抗体の生成を記載している）及びＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されたものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ技術）が、また、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及び  Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０１８６】
ヒト抗体は、また、ヒト−由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を分離することによって生成してよい。かかる可変ドメイン配列は、その後、所望のヒト定常ドメインと結合してよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術が、以下に記載されている。
【０１８７】
５．ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性または活性を有する抗体の組合せライブラリーをスクリーニングすることによって分離してよい。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体のかかるライブラリーをスクリーニングするためのさまざまな方法が、当技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍらｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に再検討されており、さらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ、ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ、ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）；Ｓｉｄｈｕら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載されている。
【０１８８】
特定のファージディスプレイ方法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーが、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローンされ、ファージライブラリーにランダムに再結合され、その後、Ｗｉｎｔｅｒら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されたとおり、抗原−結合ファージのためにスクリーニングすることができる。ファージは、通常、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント、またはＦａｂフラグメントとして抗体フラグメントを提示する。免疫化ソースからのライブラリーは、ハイブリドーマを構成する必要がなく、免疫原に高−親和性抗体をもたらす。代わりに、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローンし、広範囲の非自己に抗体の単一ソースをもたらすことができ、また、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら，ＥＭＢＯ  Ｊ、１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されたとおり、免疫処置なしで自己抗原をもたらすことができる。最終的に、ナイーブライブラリーは、また、幹細胞からの非再配列Ｖ−遺伝子セグメントをクローニングすることによって、及びランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを用いて合成的に生成し、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ、Ｊ．ＭｏｌＢｉｏｌ、２２７：３８１−３８８（１９９２）によって記載されたとおり、高可変ＣＤＲ３領域をコードし、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで再配列することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許公開としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、及び米国特許公開第２００５／００７９５７４号、２００５／０１１９４５５号、２００５／０２６６０００号、２００７／０１１７１２６号、２００７／０１６０５９８号、２００７／０２３７７６４号、２００７／０２９２９３６号、及び２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【０１８９】
ヒト抗体ライブラリーから分離される抗体または抗体フラグメントが、本明細書のヒト抗体またはヒト抗体フラグメントと考えられる。
【０１９０】
６．多重特異性抗体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体が、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位の結合特異性を有する単クローン性抗体である。特定の実施形態では、結合特異性の一方が、ＧＰＣ３の結合特異性であり、他方が、他の抗原の結合特異性である。特定の実施形態では、結合特異性の一方が、ＧＰＣ３の結合特異性であり、他方が、ＣＤ３の結合特異性である。例えば、米国特許第５，８２１，３３７号を参照。特定の実施形態では、二重特異性抗体が、ＧＰＣ３の２つの異なるエピトープに結合してよい。二重特異性抗体は、また、ＧＰＣ３を発現する細胞に対して細胞毒性薬剤を局在化させるために用いてよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体フラグメントとして調製することができる。
【０１９１】
多重特異性抗体を生成する技術としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の遺伝子組み換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら，ＥＭＢＯＪ．１０：３６５５（１９９１）を参照）、及び「ノブ−イン−ホール」エンジニアリング（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体は、また、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を生成するための静電ステアリング効果をエンジニアリングすること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体またはフラグメントを架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）を参照）；二重特異性抗体を生成するためにロイシンジッパーを用いて（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照）；二重特異性抗体フラグメントを生成するための「二重特異性抗体」技術を用いて（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照）；及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照）を用いて；及び、例えば、ＴｕｔｔらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されたとおり、三重特異性抗体を調製することによって生成してよい。
【０１９２】
また、「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有するエンジニアリングされた抗体が、本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照）。
【０１９３】
本明細書の抗体またはフラグメントは、また、ＧＰＣ３ならびにもう１つの異なる抗原ＧＰＣ３（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照）に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」を含む。
【０１９４】
７．抗体変異体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が、検討されている。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが好ましいものとしてよい。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に好適な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製してよい。かかる修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失及び／または挿入及び／または置換が挙げられる。最終構成が、所望の特性、例えば、抗原−結合を有するという条件で、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを生成して、最終構成に達することができる。
【０１９５】
ａ）置換、挿入、及び欠失変異体
特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換型突然変異生成の対象の部位としては、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。表１の「好ましい置換」の項目名の下に、保存的置換を示している。表１の「例示的置換」の項目名の下に、より実質的な変化を提供しており、アミノ酸側鎖クラスに関してさらに以下に記載している。対象の抗体にアミノ酸置換を導入してよく、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、またはＡＤＣＣまたはＣＤＣの改善のために生成物をスクリーニングしてよい。
表１
2017522861.tif 000009
2017522861.tif 000010
【０１９６】
非保存的置換では、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換する。
【０１９７】
置換型変異体の１つの型は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを必要とする。一般に、さらに試験のために選択される得られた変異体（単数及び複数）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性の修飾（例えば、改善）（例えば、親和性の増大、免疫原性の低下）を有する、及び／または親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持している。例示的置換型変異体は、例えば、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技術、例えば、本明細書に記載したものを用いて、都合良く生成することができる親和性成熟抗体である。簡潔にいうと、１つ以上のＨＶＲ残基が変異され、変異体抗体が、ファージ上に提示され、特定の生物活性（例えば、結合親和性）のためにスクリーニングされる。
【０１９８】
例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲ中で変性（例えば、置換）を行ってよい。ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異されるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照）、及び／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）中で、かかる変性を行ってよく、結果として生じる変異体ＶＨまたはＶＬが、結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築し、それから再選択することによる親和性成熟が、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍらｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら，ｅｄ．，ＨｕｍａｎＰｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、さまざまな方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性突然変異生成）のいずれかによって成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。その後、二次ライブラリーが、作製される。ライブラリーは、その後、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を特定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するためのもう１つの方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６残基）が無作為化されるＨＶＲ指向性アプローチを含む。特に、例えば、アラニンキャニング突然変異生成またはモデリングを用いて、抗原結合に関与する残基を特定してよい。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が、標的とされることが多い。
【０１９９】
特定の実施形態では、かかる変性が実質的に抗原を結合する抗体の能力を低下させない限り、置換、挿入、または欠失が、１つ以上のＨＶＲ内で生じてよい。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的変性（例えば、本明細書に提供されるとおり、保存的置換）をＨＶＲ中で行ってよい。かかる変性は、ＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側としてよい。前記に提供した変異体ＶＨ及びＶＬ配列の特定の実施形態では、各ＨＶＲが変化しない、または１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換だけを含有する。
【０２００】
突然変異生成を標的とすることができる抗体の残基または領域の特定の有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されたとおり、「アラニンキャニング突然変異生成」と称されている。この方法では、抗体の抗原との相互作用が影響を受けているかどうかを測定するために、標的残基（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ）の残基または基が、特定され、中性または陰性荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置換される。最初の置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置に、さらに置換を導入してよい。代わりに、または追加で、抗体及び抗原間の接触点を特定するために、抗原−抗体複合体の結晶構造が用いられる。置換の候補として、かかる接触残基及び隣接残基を標的としてよい、または除外してよい。変異体をスクリーニングして所望の特性を含有するかどうかを決定してよい。
【０２０１】
アミノ酸配列挿入は、長さが１つの残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドまでの範囲のアミノ末端融合及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ−末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入型変異体としては、抗体のＮ−末端またはＣ−末端の酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ用）または抗体の血清半減期を増大させるポリペプチドへの融合が挙げられる。
【０２０２】
ｂ）グリコシル化変異体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増大または低下させるように変化される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が、生成または除去されるようにアミノ酸配列を変化させることによって都合良く実施してよい。
【０２０３】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合される糖を変化させてよい。哺乳動物細胞によって生成される天然抗体は、通常、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ−結合によって一般に結合する分枝二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら  ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照。オリゴ糖は、さまざまな糖、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」中のＧｌｃＮＡｃに結合するフコースを含んでよい。いくつかの実施形態では、本発明の抗体中のオリゴ糖の修飾は、特定の改善した特性を有する抗体変異体を生成するように行ってよい。
【０２０４】
１つの実施形態では、Ｆｃ領域に結合（直接または間接）するフコースを欠く糖構造を有する抗体変異体が、提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％または２０％〜４０％としてよい。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６に記載されたとおり、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるとおり、Ａｓｎ２９７に結合する全糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計と比較して、Ａｓｎ２９７で糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって、測定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域中の位置２９７あたりに位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）；しかし、Ａｓｎ２９７は、また、抗体中のマイナー配列変異により、位置２９７の±３アミノ酸上流または下流あたり、すなわち、位置２９４〜３００に位置してよい。かかるフコシル化変異体は、改善したＡＤＣＣ機能を有してよい。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ、Ｌ．）；米国特許第号２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照。「非フコシル化」または「フコース−欠損」抗体変異体に関係した公開の例としては、米国特許第２００３／０１５７１０８号；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；米国特許第２００３／０１１５６１４号；米国特許第２００２／０１６４３２８号；米国特許第２００４／００９３６２１号；米国特許第２００４／０１３２１４０号；米国特許第２００４／０１１０７０４号；米国特許第２００４／０１１０２８２号；米国特許第２００４／０１０９８６５号；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；ＯｋａｚａｋｉらＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−ＯｈｎｕｋｉらＢｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。非フコシル化抗体を生成することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化のＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞欠損（ＲｉｐｋａらＡｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；米国特許出願第２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１、Ａｄａｍｓら，特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−ＯｈｎｕｋｉらＢｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ、Ｙ．ら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照）が挙げられる。
【０２０５】
さらに、例えば、抗体のＦｃ領域に結合する二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分される、二分オリゴ糖を有する抗体変異体が提供される。かかる抗体変異体は、フコシル化を低下させる、及び／またはＡＤＣＣ機能を改善させてしてよい。かかる抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。また、Ｆｃ領域に結合するオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体が、提供される。かかる抗体変異体は、ＣＤＣ機能を改善してよい。かかる抗体変異体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ、Ｓ．）に記載されている。
【０２０６】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸修飾を導入し、これにより、Ｆｃ領域変異体を生成してよい。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置でのアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含んでよい。
【０２０７】
特定の実施形態では、本発明が、いくつかのエフェクター機能を有するが、全エフェクター機能を有しない抗体変異体を意図し、これが、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗体の半減期が、重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）は、不要または有害である用途の好ましい候補となる。ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低下／除去を確認するために、Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ  ｖｉｖｏ細胞傷害アッセイを実施することができる。抗体が、ＦｃγＲ結合を欠くが（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性がある）、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確実にするために、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施することができる。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞、ＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩだけを発現するが、単球は、Ｆｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４ページの表３にまとめられている対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの非限定例が、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．らＰｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９−７０６３（１９８６））及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９−１５０２（１９８５）を参照）；第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照）に記載されている代わりに、非放射性アッセイ法を用いてよい（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照）。かかるアッセイのための有用なエフェクター細胞としては、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代わりに、または追加で、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、動物モデルで、対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価してよく、例えば、ＣｌｙｎｅｓらＰｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌＡｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されている。また、抗体が、Ｃ１ｑを結合することができず、それゆえにＣＤＣ活性を欠くことを確認するためにＣ１ｑ結合アッセイを実施してよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら，Ｂｌｏｏｄ１０１：１０４５−１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．  ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ１０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照）。また、当技術分野で知られている方法を用いて、ＦｃＲｎ結合及びｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス／半減期測定を実施することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照）。
【０２０８】
エフェクター機能が低下した抗体が、１つ以上のＦｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９が置換されるものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ変異体は、２つ以上のアミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７で置換されるＦｃ変異体を含み、残基２６５及び２９７がアラニンに置換されるいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む。
【０２０９】
ＦｃＲへの結合が改善または低下した特定の抗体変異体が、記載されている（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照）。
【０２１０】
特定の実施形態では、抗体変異体が、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／または３３４（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域で変化が行われ、その結果、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されたとおり、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）が変化（すなわち、改善または低下）する。
【０２１２】
半減期が増大し、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善した抗体は、母親のＩｇＧの胎児への輸送の原因となっており（Ｇｕｙｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））、米国特許第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体が、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異体としては、１つ以上のＦｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４または４３４で置換されるもの、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換が挙げられる（米国特許第７，３７１，８２６号）。
【０２１３】
また、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及びＦｃ領域変異体．の他の例に関するＷＯ９４／２９３５１を参照。
【０２１４】
ｄ）システインエンジニアリング抗体変異体
特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換される、システインエンジニアリング抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を生成することが好ましいものとしてよい。特定の実施形態では、置換残基が、抗体の到達可能部位で生じる。システインでこれらの残基を置換することによって、これにより、反応性チオール基が抗体の到達可能部位に位置し、反応性チオール基を用いて、さらに本明細書に記載したとおり、抗体を他の部分、例えば、薬剤部分またはリンカー−薬剤部分に結合し、イムノコンジュゲートを生成してよい。特定の実施形態では、システインで以下の残基のうち１つ以上を置換してよい：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）；重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）。システインエンジニアリング抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるとおり、生成してよい。
【０２１５】
ｅ）抗体誘導体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、さらに修飾して、当技術分野で知られ、容易に入手可能な追加の非タンパク質部分を含有してよい。抗体の誘導体化に好適な部分は、水溶性ポリマーを含むが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マイレン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリルプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、及びこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中のその安定性のため、製造での利点がある可能性がある。ポリマーは、任意の分子量としてよく、分枝鎖または非分枝鎖としてよい。１つ以上のポリマーが結合される場合、抗体に結合するポリマーの数は、変化させてよく、それらは、同じまたは異なる分子とすることができる。一般に、誘導体化に用いられるポリマーの数及び／または型は、これらに限定されないが、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定された条件下での治療に用いられるかどうかなどを含む、留意点に基づいて決定することができる。
【０２１６】
もう１つの実施形態では、放射線への暴露によって選択的に加熱してよい抗体及び非タンパク質部分のコンジュゲートが提供される。１つの実施形態では、非タンパク質部分が、カーボンナノチューブである（Ｋａｍら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長としてよく、通常の細胞を害さないが、抗体−非タンパク質部分の近位の細胞が死ぬ温度まで非タンパク質部分を加熱する波長が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１７】
Ｂ．遺伝子組換え方法及び組成物
例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されたとおり、遺伝子組換え方法及び組成物を用いて、抗体を生成してよい。１つの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＰＣ３抗体をコードする分離核酸が提供される。かかる核酸が、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードしてよい。さらに１つの実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらに１つの実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞が、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、これらで形質転換される）。１つの実施形態では、宿主細胞が、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体を生成する方法が提供される、当該方法が、前記に提供したとおり、抗体の発現に好適な条件下で、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養すること、及び任意で宿主細胞（または宿主細胞培地）からの抗体を回復させることを含む。
【０２１８】
抗ＧＰＣ３抗体の遺伝子組換え生成のために、例えば、前記に記載のとおり、抗体をコードする核酸を分離し、さらに宿主細胞中のクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクターに挿入する。かかる核酸直ちに分離してよく、従来の方法を用いて（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）、配列決定してよい。
【０２１９】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞としては、本明細書に記載の前核または真核細胞が挙げられる。例えば、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要でない場合、細菌中で抗体を生成してよい。細菌中の抗体フラグメント及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、５，７８９，１９９号、及び５，８４０，５２３号を参照（また、Ｅ．ｃｏｌｉ中の抗体フラグメントの発現を記載しているＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，版，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４を参照）。発現後に、可溶性フラクション中の細菌細胞ペーストから抗体を分離してよく、さらに精製することができる。
【０２２０】
原核生物に加えて、真核微生物、例えば、糸状菌または酵母菌が、抗体をコードするベクターに好適なクローニングまたは発現宿主である。これは、グリコシル化経路が「ヒト化」されている真菌及び酵母菌株を含み、その結果、部分的または完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体が生成される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照。
【０２２１】
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、また、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞とともに、特にスポドプテラフルギペルダ細胞のトランスフェクションに用いてよい多くのバキュロウイルス株が確認されている。
【０２２２】
また、宿主として、植物細胞培養を用いることができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、６，０４０，４９８号、６，４２０，５４８号、７，１２５，９７８号、及び６，４１７，４２９号を参照（トランスジェニック植物中の抗体を生成するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）。
【０２２３】
また、宿主として、脊椎動物細胞を用いてもよい。例えば、懸濁成長に適合する哺乳動物細胞株が、有用である可能性がある。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例が、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系；ヒト胎児腎臓系（例えば、Ｇｒａｈａｍら，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されたとおり、２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されたとおり、ＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒら，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されたとおり、ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６（１９８０））；及び骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げられる。抗体生成に好適な特定の哺乳動物宿主細胞株の再検討には、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照。
【０２２４】
Ｃ．アッセイ
当技術分野で知られている種々のアッセイによって、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体を、特定し、スクリーニングし、またはその物理／化学特性及び／または生物学的活性を特徴づけてよい。
【０２２５】
１つの態様では、本発明の抗体が、例えば、公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ、またはウェスタンブロットによって、その抗原結合活性について試験される。
【０２２６】
もう１つの態様では、競合アッセイを用いて、本明細書に記載の抗体のいずれかとＧＰＣ３への結合が競合する抗体を特定してよい。特定の実施形態では、かかる競合抗体が、本明細書に記載の抗体によって結合される同じエピトープ（例えば、直鎖または立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための例示的方法の詳細が、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「ＥｐｉｔｏｐｅＭａｐｐｉｎｇＰｒｏｔｏｃｏｌｓ，」ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。
【０２２７】
例示的競合アッセイでは、ＧＰＣ３（例えば、本明細書に記載の抗体のいずれか）に結合する第１の標識抗体及びＧＰＣ３への結合が第１の抗体と競合するその能力を試験するための第２の未標識抗体を含む溶液中で、固定化されたＧＰＣ３をインキュベートする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上澄み液中に存在してよい。対照として、第１の標識抗体を含むが、第２の未標識抗体を含まない溶液中で、固定化されたＧＰＣ３をインキュベートする。インキュベート後、第１の抗体のＧＰＣ３への結合を許容する条件下で、過剰非結合抗体を除去し、固定化されたＧＰＣ３に関係する標識の量を測定する。固定化されたＧＰＣ３に関係する標識の量が、対照試料と比較して、試験試料中で実質的に減少する場合、これは、第２の抗体が、ＧＰＣ３への結合が第１の抗体と競合していることを示唆している。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照。
【０２２８】
Ｄ．イムノコンジュゲート
本発明また、１つ以上の細胞毒性薬剤、例えば、化学療法薬または薬剤、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、または動物由来の酵素的活性毒素、またはこれらのフラグメント）、または放射性同位体（すなわち、放射性コンジュゲート）に結合する本明細書の抗ＧＰＣ３抗体を含むイムノコンジュゲートを提供する。
【０２２９】
イムノコンジュゲートにより、薬剤部分の腫瘍への標的デリバリーが可能になり、いくつかの実施形態では、その細胞内蓄積により、非結合薬剤の全身的投与の結果、正常細胞に対して許容できないレベルの毒性となる可能性がある（Ｐｏｌａｋｉｓ  Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ５：３８２−３８７）。
【０２３０】
抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗原−発現腫瘍細胞に強力な細胞毒性薬剤を標的とすることによって、抗体及び細胞毒性薬剤の両者の特性を組み合わせ（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ９：９８２−１００４）、これにより、有効性を最大化し、標的外毒性を最少化することによって治療指数が向上する標的化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．ａｎｄ  ＳｅｎｔｅｒＰ．Ｄ．（２００８）Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４−１６９；Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．（２００８）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１：９８−１０７）。
【０２３１】
本発明のＡＤＣ化合物は、抗癌性活性を有するものを含む。いくつかの実施形態では、ＡＤＣ化合物が、薬剤部分に結合された、すなわち共有結合された抗体を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、リンカーを介して薬剤部分に共有結合されている。本発明の抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）は、腫瘍組織へ有効用量の薬剤を選択的にデリバリーし、これにより、選択性が広がる、すなわち、治療指数（「治療窓」）を向上しながら、より少ない有効用量を実現することができる。
【０２３２】
抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）の薬剤部分（Ｄ）は、細胞毒性または細胞増殖抑制効果を有する任意の化合物、部分または基を含んでよい。薬剤部分が、これらに限定されないが、チューブリン結合、ＤＮＡ結合または挿入、及びＲＮＡポリメラーゼ、タンパク質合成、及び／またはトポイソメラーゼの抑制を含む機序により、その細胞毒性及び細胞増殖抑制効果を付与してよい。例示的薬剤部分としては、マイタンシノイド、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシン及びその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、及び立体異性体、イソスター、類似体、及び細胞毒性活性を有するこれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。以下にさらに詳細にかかるイムノコンジュゲートの非限定例を記載する。
【０２３３】
１．例示的抗体−薬剤コンジュゲート
抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）化合物の例示的実施形態が、腫瘍細胞を標的とする抗体（Ａｂ）、薬剤部分（Ｄ）、及びＡｂをＤに結合するリンカー部分（Ｌ）を含む。いくつかの実施形態では、抗体が、１つ以上のアミノ酸残基、例えば、リジン及び／またはシステインを介してリンカー部分（Ｌ）に結合される。
【０２３４】
例示的ＡＤＣが、式Ｉを有する。
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ  Ｉ
式中、ｐは、１〜約２０である。いくつかの実施形態では、抗体に結合することができる薬剤部分の数が、遊離システイン残基の数によって制限される。いくつかの実施形態では、遊離システイン残基が、本明細書に記載の方法によって抗体アミノ酸配列に導入される。式Ｉの例示的ＡＤＣとしては、１、２、３、または４個のエンジニアリングシステインアミノ酸を有する抗体が挙げられるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ら（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３−１３８）。いくつかの実施形態では、１つ以上の遊離システイン残基が、エンジニアリングを用いないで抗体中に既に存在しており、この場合、薬剤に抗体を結合するために既存の遊離システイン残基を用いてよい。いくつかの実施形態では、１つ以上の遊離システイン残基を生成するために抗体の結合前に、抗体を還元条件にさらす。
【０２３５】
ａ）例示的リンカー
「リンカー」（Ｌ）は、抗体（Ａｂ）に１つ以上の薬剤部分（Ｄ）を結合して、式Ｉの抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するために用いることができる二官能性または多官能性部分である。いくつかの実施形態では、薬剤及び抗体に共有結合するための反応性官能基を有するリンカーを用いて抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）を調製することができる。例えば、いくつかの実施形態では、抗体（Ａｂ）のシステインチオールが、リンカーまたは薬剤−リンカー中間体の反応性官能基と結合を形成し、ＡＤＣを生成することができる。
【０２３６】
１つの態様では、リンカーが、共有結合を形成する抗体上に存在する遊離システインと反応することができる官能基を有する。かかる反応性官能基の非限定例としては、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、活性化エステル、例えば、スクシンイミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、及びイソチオシアネートが挙げられる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ら（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１５（４）：７６５−７７３の７６６ページの結合方法、及び本明細書の実施例を参照。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、リンカーが、抗体上に存在する求電子性基と反応することができる官能基を有する。かかる求電子性基の例としては、アルデヒド及びケトンカルボニル基が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子が、抗体上の求電子性基と反応し、抗体単位と共有結合を形成することができる。かかる反応性官能基の非限定例としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３８】
リンカーは、１つ以上のリンカー成分を含んでよい。例示的リンカー成分としては、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、及び４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（「ＭＣＣ」）が挙げられる。種々のリンカー成分が、当技術分野で知られており、そのうちのいくつかを以下に記載している。
【０２３９】
リンカーは、薬剤の放出を促進する「開裂可能リンカー」としてよい。開裂可能リンカーの非限定例としては、酸−不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンを含む）、プロテアーゼ−感受性（例えば、ペプチダーゼ−感受性）リンカー、光分解性リンカー、またはジスルフィド−含有リンカーが挙げられる（Ｃｈａｒｉら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許第５２０８０２０号）。
【０２４０】
いくつかの実施形態では、リンカー成分が、抗体をもう１つのリンカー成分または薬剤部分に結合する「ストレッチャー単位」を含む。ストレッチャー単位の非限定例を以下に示している（波線は、抗体、薬剤、または追加のリンカー成分との共有結合の部位を示す）。
2017522861.tif 000011
ＭＣ
2017522861.tif 000012
ＭＰ
2017522861.tif 000013
ｍＰＥＧ
2017522861.tif 000014
【０２４１】
いくつかの実施形態では、リンカー成分が、直接またはストレッチャー単位及び／またはアミノ酸単位を介して、抗体を薬剤部分に結合する「スペーサー」単位を含む。スペーサー単位は、「自壊性」または「非自壊性」としてよい。「非自壊性」スペーサー単位は、スペーサー単位の一部または全部が、ＡＤＣの開裂時に、薬剤部分に結合したままのものである。非自壊性スペーサー単位の例としては、グリシンスペーサー単位及びグリシン−グリシンスペーサー単位が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、腫瘍−細胞関連プロテアーゼによるグリシン−グリシンスペーサー単位を含有するＡＤＣの酵素的開裂の結果、ＡＤＣの残りからグリシン−グリシン−薬剤部分が放出される。いくつかのかかる実施形態では、グリシン−グリシン−薬剤部分は、腫瘍細胞中で加水分解ステップにかけられ、こうして、薬剤部分からグリシン−グリシンスペーサー単位が切断される。
【０２４２】
「自壊性」スペーサー単位は、薬剤部分の放出を可能にする。特定の実施形態では、リンカーのスペーサー単位が、ｐ−アミノベンジル単位を含む。いくつかのかかる実施形態では、ｐ−アミノベンジルアルコールが、アミド結合を介してアミノ酸単位に結合され、カルバメート、メチルカルバメート、またはカーボネートが、ベンジルアルコール及び薬剤間に生成される（Ｈａｍａｎｎら（２００５）ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００５）１５：１０８７−１１０３）。いくつかの実施形態では、スペーサー単位が、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）である。いくつかの実施形態では、ＡＤＣが、以下の構造を有する自壊性リンカーを含む。
2017522861.tif 000015
式中、Ｑが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロ、または−シノである；ｍが、０〜４の範囲の整数である；及びｐが、１〜約２０の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐが、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４の範囲である。
【０２４３】
自壊性スペーサーの他の例としては、ＰＡＢ基、例えば、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（米国特許第７，３７５，０７８号；Ｈａｙら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）及びオルト−またはパラ−アミノベンジルアセタールと電子的にほぼ同じ芳香族化合物が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アミド結合加水分解時に環形成されるスペーサー、例えば、置換及び非置換４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら（１９９５）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ２：２２３）、好適に置換したビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ  ら（１９７２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）及び２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙ，ら（１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）を用いることができる。薬剤のグリシン残基のα−炭素への結合が、ＡＤＣに有用である可能性がある自壊性スペーサーのもう１つの例である（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙら（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）。
【０２４４】
いくつかの実施形態では、リンカーＬは、分岐多官能性リンカー部分を介して、１つ以上の薬剤部分が抗体に共有結合するための樹状型リンカーとしてよい（Ｓｕｎら（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ１２：２２１３−２２１５；Ｓｕｎら（２００３）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１１：１７６１−１７６８）。樹状リンカーは、抗体に対する薬剤の分子比、すなわち、ＡＤＣの効力に関係している添加量を増大させることができる。したがって、抗体が、１つだけの反応性システインチオール基を有する場合、樹状リンカーを介して、多くの薬剤部分を結合してよい。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、リンカーが、溶解度及び／または反応性を調節する基で置換される。非限定例として、荷電置換基、例えば、スルホネート（−ＳＯ３−）またはアンモニウムが、リンカー試薬の水溶解性を増大し、ＡＤＣを調製するために用いられる合成経路に応じて、抗体及び／または薬剤部分とリンカー試薬のカップリング反応を促進する、またはＤとＡｂ−Ｌ（抗体−リンカー中間体）のカップリング反応、もしくはＡｂとＤ−Ｌ（薬剤−リンカー中間体）のカップリング反応を促進する可能性がある。いくつかの実施形態では、リンカーの一部が、抗体に結合し、リンカーの一部が薬剤に結合し、その後、Ａｂ−（リンカー部分）ａが、薬剤−（リンカー部分）ｂに結合し、式ＩのＡＤＣを形成する。いくつかのかかる実施形態では、抗体が、１つ以上の（リンカー部分）ａ置換基を含み、その結果、１つ以上の薬剤が、式ＩのＡＤＣ中の抗体に結合する。
【０２４６】
本発明の化合物は、これらに限定されないが、以下のリンカー試薬で調製されるＡＤＣを明確に意味する：ビス−マレイミド−トリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート］（ＳＭＰＨ）、イミノイミノチオラン（ＩＴ）、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、及びスクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ならびにビス−マレイミド試薬：ジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４−ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）２（以下に示した）、及びＢＭ（ＰＥＧ）３（以下に示した）を含む；イミドエステル（例えば、ジメチルアジピミデートＨＣｌ）の二官能性誘導体、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド）、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン２，６−ジイソシアネート）、及びビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）。いくつかの実施形態では、ビス−マレイミド試薬が、抗体中のシステインのチオール基のチオール−含有薬剤部分、リンカー、またはリンカー−薬剤中間体への結合を可能にする。チオール基と反応性がある他の官能基としては、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート、及びイソチオシアネートが挙げられるが、これらに限定されない。
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【０２４７】
特定の有用なリンカー試薬は、種々の商業的供給元、例えば、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）から得ることができる，または当技術分野に記載の方法；例えば，Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ，ら（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：５２５７−６０；Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：５３５２−５３５５；Ｆｒｉｓｃｈら（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．７：１８０−１８６；米国特許第６２１４３４５号；ＷＯ０２／０８８１７２；米国特許第２００３１３０１８９号；米国特許第２００３０９６７４３号；ＷＯ０３／０２６５７７；ＷＯ０３／０４３５８３；及びＷＯ０４／０３２８２８に従って、合成することができる。
【０２４８】
炭素−１４−標識１−イソチオシアネートベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）が、放射性ヌクレオチドの抗体への結合のための例示的キレート薬剤である。例えば、ＷＯ９４／１１０２６を参照。
【０２４９】
ｂ）例示的薬剤部分
（１）メイタンシン及びマイタンシノイド
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートが、１つ以上のマイタンシノイド分子に結合する抗体を含む。マイタンシノイドは、メイタンシンの誘導体であり、チューブリン重合を抑制することによって作用する有糸分裂阻害剤（ｍｉｔｏｔｏｔｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ）である。メイタンシンは、東アフリカの低木メイテナスセラタから最初に分離された（米国特許第３８９６１１１号）。その後、特定の微生物が、また、マイタンシノイド、例えば、マイタンシノール及びＣ−３マイタンシノールエステルを生成することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成マイタンシノイドは、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号；４，２４８，８７０号；４，２５６，７４６号；４，２６０，６０８号；４，２６５，８１４号；４，２９４，７５７号；４，３０７，０１６号；４，３０８，２６８号；４，３０８，２６９号；４，３０９，４２８号；４，３１３，９４６号；４，３１５，９２９号；４，３１７，８２１号；４，３２２，３４８号；４，３３１，５９８号；４，３６１，６５０号；４，３６４，８６６号；４，４２４，２１９号；４，４５０，２５４号；４，３６２，６６３号；及び４，３７１，５３３号に開示されている。
【０２５０】
マイタンシノイド薬剤部分は、（ｉ）発酵または発酵生成物の化学修飾もしくは誘導体化によって調製するために比較的入手しやすい、（ｉｉ）非ジスルフィドリンカーを介した抗体への結合に好適な官能基による誘導体化に適している、（ｉｉｉ）血しょう中で安定している、及び（ｉｖ）さまざまな腫瘍細胞株に対して効果的であるため、抗体−薬剤コンジュゲート中の魅力的な薬剤部分である。
【０２５１】
マイタンシノイド薬剤部分として用いるのに好適な特定のマイタンシノイドが、当技術分野で知られており、公知の方法に従って、天然ソースから分離することができる、または遺伝子組み換え技術を用いて生成することができる（例えば、Ｙｕら（２００２）ＰＮＡＳ９９：７９６８−７９７３を参照）。マイタンシノイドは、また、公知の方法に従って合成的に調製してよい。
【０２５２】
例示的マイタンシノイド薬剤部分としては、修飾された芳香環を有するもの、例えば、Ｃ−１９−デクロノ（米国特許第４２５６７４６号）（例えば、アンサマイトシンＰ２の水素化リチウムアルミニウム還元によって調製される）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロノ（米国特許第４３６１６５０号及び４３０７０１６号）（例えば、ストレプトマイセスもしくはアクチノマイセスを用いる脱メチル、またはＬＡＨを用いる脱塩素によって調製される）；及びＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロノ（米国特許第４，２９４，７５７号）（例えば、塩化アシルを用いるアシル化によって調製される）、及び芳香環の他の位置で修飾されたものが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２５３】
また、例示的マイタンシノイド薬剤部分としては、修飾を有するもの、例えば、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号）（例えば、Ｈ２ＳまたはＰ２Ｓ５とマイタンシノールの反応によって調製される）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）；Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（例えば、ノカルジアから調製される）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（例えば、ストレプトマイセスによるマイタンシノールの変換によって調製される）；Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号及び４３１５９２９号）（例えば、トレウィアヌドルフローラから分離される）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４３６２６６３号及び４３２２３４８号）（例えば、ストレプトマイセスによるマイタンシノールの脱メチルによって調製される）；及び４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号）（例えば、マイタンシノールの三塩化チタニウム／ＬＡＨ還元によって調製される）が挙げられる。
【０２５４】
マイタンシノイド化合物の多くの位置が、結合位置として有用である。例えば、従来のカップリング技術を用いるヒドロキシル基との反応によってエステル結合を形成してよい。いくつかの実施形態では、反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位置、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位置、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位置、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位置で生じてよい。いくつかの実施形態では、結合が、マイタンシノールまたはマイタンシノール構造類似体のＣ−３位置で形成される。
【０２５５】
マイタンシノイド薬剤部分は、以下の構造を有するものを含む。
2017522861.tif 000017
式中、波線は、マイタンシノイド薬剤部分の硫黄原子のＡＤＣのリンカーとの共有結合を示す。各Ｒは、独立してＨまたはＣ１−Ｃ６アルキルとしてよい。アミド基を硫黄原子に結合するアルキレン鎖は、メタニル、エタニルまたはプロピルとしてよい、すなわち、ｍが１、２、または３である（米国特許第６３３４１０号；米国特許第５２０８０２０号；Ｃｈａｒｉら（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１；Ｌｉｕ  ら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３）。
【０２５６】
マイタンシノイド薬剤部分の全立体異性体が、本発明のＡＤＣのために検討されている、すなわち、キラル炭素のＲ及びＳ配置のいずれの組み合わせも検討されている（米国特許第７２７６４９７号米国特許第６９１３７４８号；米国特許第６４４１１６３号；米国特許第６３３４１０号（ＲＥ３９１５１）；米国特許第５２０８０２０号；Ｗｉｄｄｉｓｏｎら（２００６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９：４３９２−４４０８、参照によりその全体が組み入れられる）。いくつかの実施形態では、マイタンシノイド薬剤部分が、以下の立体化学を有する。
2017522861.tif 000018
【０２５７】
マイタンシノイド薬剤部分の例示的実施形態としては、以下の構造を有するＤＭ１；ＤＭ３；及びＤＭ４が挙げられるが、これらに限定されない。
2017522861.tif 000019
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式中、波線は、薬剤の硫黄原子の抗体−薬剤コンジュゲートのリンカー（Ｌ）との共有結合を示す。
【０２５８】
他の例示的マイタンシノイド抗体−薬剤コンジュゲートが、以下の構造及び略名（式中、Ａｂが、抗体であり、ｐが、１〜約２０である）を有する。いくつかの実施形態では、ｐが、１〜１０であり、ｐが、１〜７であり、ｐが、１〜５である、またはｐが１〜４である。
2017522861.tif 000022
Ａｂ−ＳＰＰ−ＤＭ１
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Ａｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１
【０２５９】
ＤＭ１がＢＭＰＥＯリンカーを介して抗体のチオール基に結合する例示的抗体−薬剤コンジュゲートは、以下の構造及び略名を有する。
2017522861.tif 000024
式中、Ａｂが、抗体である；ｎが、０、１、または２である；及びｐが、１〜約２０である。いくつかの実施形態では、ｐが、１〜１０であり、ｐが、１〜７であり、ｐが、１〜５である、またはｐが１〜４である。
【０２６０】
マイタンシノイドを含有するイムノコンジュゲート、この生成方法、及びこの治療的利用が、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号及び５，４１６，０６４号；米国特許第２００５／０２７６８１２Ａ１号；及びＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｐａｔｅｎｔ  ＥＰ  ０  ４２５２３５Ｂ１に開示されており、これらの開示は、参照により本明細書に明確に組み入れられる。また、ＬｉｕらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３（１９９６）；及びＣｈａｒｉらＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７−１３１（１９９２）を参照。
【０２６１】
いくつかの実施形態では、抗体またはマイタンシノイド分子の生物活性を有意に減少させることなく、マイタンシノイド分子に抗体を化学的に結合することによって、抗体−マイタンシノイドコンジュゲートを調製してよい。例えば、米国特許第５，２０８，０２０号（この開示は、参照により本明細書に明確に組み入れられる）を参照。いくつかの実施形態では、１抗体分子当たり平均３〜４個のマイタンシノイド分子が結合されたＡＤＣが、抗体の機能または溶解性に否定的に影響を及ぼすことなく、標的細胞の細胞傷害性を向上させるのに有効であることを示した。いくつかの例では、毒素／抗体の１つの分子でも、裸抗体の使用より、細胞傷害性を向上させることが予測される。
【０２６２】
抗体−マイタンシノイドコンジュゲートを生成するための例示的結合基が、例えば、本明細書に記載のもの及び米国特許第５２０８０２０号；ＥＰ  Ｐａｔｅｎｔ０４２５２３５Ｂ１；ＣｈａｒｉらＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許第２００５／０２７６８１２Ａ１号；及び米国特許第２００５／０１６９９３Ａ１号に開示されたものを含み、これらの開示は、参照により本明細書に明確に組み入れられる。
【０２６３】
（２）カリケアミシン
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートが、１つ以上のカリケアミシン分子に結合する抗体を含む。抗生物質のカリケアミシンファミリー、及びこれらの構造類似体は、ピコモル濃度以下で二本鎖ＤＮＡ切断を生じさせることができる（Ｈｉｎｍａｎら，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５３：３３３６−３３４２；Ｌｏｄｅら，（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ５８：２９２５−２９２８）。カリケアミシンは、作用の細胞内部位を有するが、特定の例では、容易に血しょう膜を通過しない。したがって、いくつかの実施形態では、抗体媒介細胞内移行によるこれらの薬剤の細胞摂取が、その細胞毒性作用を大きく向上させる可能性がある。カリケアミシン薬剤部分を有する抗体−薬剤コンジュゲートを調製する方法の非限定例が、例えば、米国特許第５７１２３７４号；米国特許第５７１４５８６号；米国特許第５７３９１１６号；及び米国特許第５７６７２８５号に記載されている。
【０２６４】
（４）ピロロベンゾジアゼピン
いくつかの実施形態では、ＡＤＣが、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＢ二量体が、特定のＤＮＡ配列を認識し、特定のＤＮＡ配列に結合する。天然物アントラマイシン、ＰＢＤは、１９６５年に最初に報告された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ら，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９３−５７９５；Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ，ら，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９１−５７９３）。それ以後、三環ＰＢＤ足場の二量体（米国特許第６８８４７９９号；米国特許第７０４９３１１号；米国特許第７０６７５１１号；米国特許第７２６５１０５号；米国特許第７５１１０３２号；米国特許第７５２８１２６号；米国特許第７５５７０９９号）を含む、多くのＰＢＤが、自然物及び構造類似体とも、報告されている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ，ら，（１９９４）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５）。特定の理論によって束縛されることを意図しないが、二量体構造が、Ｂ−型ＤＮＡの小溝に対して、イソヘリシティーに適した三次元形状を与え、結合部位にぴったり合うフィットをもたらすと考えられている（Ｋｏｈｎ，ＩｎＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）；Ｈｕｒｌｅｙ及びＮｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，（１９８６）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９：２３０−２３７）。Ｃ２アリール置換基を有する二量体ＰＢＤ化合物が、細胞毒性薬剤として有用であることが示された（Ｈａｒｔｌｅｙら（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７０（１７）：６８４９−６８５８；Ａｎｔｏｎｏｗ（２０１０）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５３（７）：２９２７−２９４１；Ｈｏｗａｒｄら（２００９）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１９（２２）：６４６３−６４６６）。
【０２６５】
いくつかの実施形態では、ＰＢＤ化合物は、ｉｎ  ｖｉｖｏで除去可能である窒素保護基を有するＮ１０位置でこれを保護することによって、プロドラッグとして用いることができる（ＷＯ００／１２５０７；ＷＯ２００５／０２３８１４）。
【０２６６】
ＰＢＤ二量体は、抗体に結合され、得られたＡＤＣが、抗癌特性を有することを示した（米国特許第２０１０／０２０３００７号）。ＰＢＤ二量体上の結合部位の非限定例としては、５員環ピロロ環、ＰＢＤ単位間のつなぎ鎖、及びＮ１０−Ｃ１１イミン基（ＷＯ２００９／０１６５１６；米国特許第２００９／３０４７１０号；米国特許第２０１０／０４７２５７号；米国特許第２００９／０３６４３１号；米国特許第２０１１／０２５６１５７号；ＷＯ２０１１／１３０５９８）が挙げられる。
【０２６７】
ＡＤＣのＰＢＤ二量体成分の非限定例が、式Ａの成分、
2017522861.tif 000025
Ａ
ならびに塩及びこれらの溶媒和物であり、式中、
波線が、リンカーとの共有結合部位を示す；
点線が、Ｃ１及びＣ２またはＣ２及びＣ３間の二重結合の任意の存在を示す；
Ｒ２が、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから独立して選択され、さらに任意でハロまたはジハロから選択され、式中、ＲＤが、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから独立して選択される；
Ｒ６及びＲ９が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択される；
Ｒ７が、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、または、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択される；
Ｑが、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立して選択される；
Ｒ１１が、Ｈ、またはＲのいずれかであり、または、Ｑが、Ｏ、ＳＯ３Ｍであり、Ｍが、金属カチオンである；
Ｒ及びＲ’それぞれが、任意で置換Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、Ｃ３−２０複素環、及びＣ５−２０アリール基から独立して選択され、任意で基ＮＲＲ’に関して、Ｒ及びＲ’が、これらが結合する窒素原子とともに任意で置換４、５、６または７員の複素環式環を形成する；
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７が、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７それぞれに対して定義されるとおりである；
Ｒ″が、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖が、１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅ及び／または芳香環、例えば、ベンゼンまたはピリジンによって中断されていてもよく；及び
Ｘ及びＸ’が、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択される。
【０２６８】
いくつかの実施形態では、Ｒ及びＲ’それぞれが、任意で置換Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−２０複素環、及びＣ５−２０アリール基から独立して選択され、任意で基ＮＲＲ’に関して、Ｒ及びＲ’が、これらが結合する窒素原子とともに任意で置換４、５、６または７員の複素環式環を形成する。
【０２６９】
いくつかの実施形態では、Ｒ９及びＲ１９が、Ｈである。
【０２７０】
いくつかの実施形態では、Ｒ６及びＲ１６が、Ｈである。
【０２７１】
いくつかの実施形態では、Ｒ７及びＲ１７が、ともにＯＲ７Ａであり、Ｒ７Ａが、任意で置換Ｃ１−４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７Ａが、Ｍｅである。いくつかの実施形態では、Ｒ７Ａが、ＣＨ２Ｐｈであり、Ｐｈが、フェニル基である。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、Ｘが、Ｏである。
【０２７３】
いくつかの実施形態では、Ｒ１１が、Ｈである。
【０２７４】
いくつかの実施形態では、各単量体単位中にＣ２及びＣ３間の二重結合がある。
【０２７５】
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２が、Ｈ及びＲから独立して選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２が、独立してＲである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２が、独立して任意で置換Ｃ５−２０アリールまたはＣ５−７アリールまたはＣ８−１０アリールである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２が、独立して任意で置換フェニル、チエニル、ナフチル、ピリジル、キノリニル、またはイソキノリニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２が、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ−ＲＤ、及び＝Ｃ（ＲＤ）２から独立して選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２それぞれが、＝ＣＨ２である。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２それぞれが、Ｈである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２それぞれが、＝Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２それぞれが、＝ＣＦ２である。いくつかの実施形態では、Ｒ２及び／またはＲ１２が、独立して＝Ｃ（ＲＤ）２である。いくつかの実施形態では、Ｒ２及び／またはＲ１２が、独立して＝ＣＨ−ＲＤである。
【０２７６】
いくつかの実施形態では、Ｒ２及び／またはＲ１２が、＝ＣＨ−ＲＤである場合、各基は、独立して以下に示した配置のいずれかを有してよい。
2017522861.tif 000026
いくつかの実施形態では、＝ＣＨ−ＲＤが、配置（Ｉ）である。
【０２７７】
いくつかの実施形態では、Ｒ″が、Ｃ３アルキレン基またはＣ５アルキレン基である。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例示的ＰＢＤ二量体成分が、式Ａ（Ｉ）の構造を有する。
2017522861.tif 000027
Ａ（Ｉ）；
式中、ｎが０または１である。
【０２７９】
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例示的ＰＢＤ二量体成分が、式Ａ（ＩＩ）の構造を有する。
2017522861.tif 000028
Ａ（ＩＩ）；
式中、ｎが０または１である。
【０２８０】
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例示的ＰＢＤ二量体成分が、式Ａ（ＩＩＩ）の構造を有する。
2017522861.tif 000029
Ａ（ＩＩＩ）；
式中、ＲＥ及びＲＥ″それぞれが、ＨまたはＲＤから独立して選択され、ＲＤが、前記のとおり定義される；及び
式中、ｎが０または１である。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、ｎが、０である。いくつかの実施形態では、ｎが、１である。いくつかの実施形態では、ＲＥ及び／またはＲＥ″が、Ｈである。いくつかの実施形態では、ＲＥ及びＲＥ″が、Ｈである。いくつかの実施形態では、ＲＥ及びＲＥ″が、ＲＤであり、ＲＤが、任意で置換Ｃ１−１２アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＥ及びＲＥ″が、ＲＤであり、ＲＤが、メチルである。
【０２８２】
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例示的ＰＢＤ二量体成分が、式Ａ（ＩＶ）の構造を有する。
2017522861.tif 000030
Ａ（ＩＶ）；
式中、Ａｒ１及びＡｒ２それぞれが、独立して任意で置換Ｃ５−２０アリールである；Ａｒ１及びＡｒ２は、同じものまたは異なるものとしてよい；及び
式中、ｎが０または１である。
【０２８３】
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例示的ＰＢＤ二量体成分が、式Ａ（Ｖ）の構造を有する。
2017522861.tif 000031
Ａ（Ｖ）；
式中、Ａｒ１及びＡｒ２それぞれが、独立して任意で置換Ｃ５−２０アリールである；Ａｒ１及びＡｒ２は、同じものまたは異なるものとしてよい；及び
式中、ｎが０または１である。
【０２８４】
いくつかの実施形態では、Ａｒ１及びＡｒ２それぞれが、任意で置換フェニル、フラニル、チオフェニル及びピリジルから独立して選択される。いくつかの実施形態では、Ａｒ１及びＡｒ２それぞれが、独立して任意で置換フェニルである。いくつかの実施形態では、Ａｒ１及びＡｒ２それぞれが、独立して任意で置換チエン−２−イルまたはチエン−３−イルである。いくつかの実施形態では、Ａｒ１及びＡｒ２それぞれが、独立して任意で置換キノリニルまたはイソキノリニルである。キノリニルまたはイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位置を介してＰＢＤコアに結合することができる。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４−イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イルおよびキノリン−８−イルとしてよい。いくつかの実施形態では、キノリニルが、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イルから選択される。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４−イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イルおよびイソキノリン−８−イルとしてよい。いくつかの実施形態では、イソキノリニルが、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルから選択される。
【０２８５】
さらに、ＡＤＣのＰＢＤ二量体成分の非限定例が、式Ｂの成分、
2017522861.tif 000032
Ｂ
ならびに塩及びこれらの溶媒和物であり、式中、
波線が、リンカーとの共有結合部位を示す；
ＯＨに結合した波線が、ＳまたはＲ配置を示す；
ＲＶ１及びＲＶ２が、Ｈ、メチル、エチル及びフェニル（フェニルは、任意で、特に４位置で、フルオロで置換してよい）及びＣ５−６ヘテロシクリルから独立して選択される；式中、ＲＶ１及びＲＶ２は、同じものまたは異なるものとしてよい；及び
ｎが、０または１である。
【０２８６】
いくつかの実施形態では、ＲＶ１及びＲＶ２が、Ｈ、フェニル、及び４−フルオロフェニルから独立して選択される。
【０２８７】
いくつかの実施形態では、Ｂ環のＮ１０イミン、Ｃ環のＣ−２エンド／エキソ位置、またはＡ環を結合するつなぎ鎖単位（以下の構造Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）を参照）を含む、ＰＢＤ二量体薬剤部分の種々の部位の１つで、リンカーを結合してよい。
【０２８８】
ＡＤＣのＰＢＤ二量体成分の非限定例が、式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）を含む。
2017522861.tif 000033
Ｃ（Ｉ）
2017522861.tif 000034
Ｃ（ＩＩ）
【０２８９】
式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）は、そのＮ１０−Ｃ１１イミン形態中に示されている。例示的ＰＢＤ薬剤部分が、また、以下の表に示したとおり、カルビノールアミン及び保護カルビノールアミン形態を含む。
2017522861.tif 000035
式中：
Ｘが、ＣＨ２（ｎ＝１〜５）、Ｎ、またはＯである；
Ｚ及びＺ’が、ＯＲ及びＮＲ２から独立して選択され、Ｒが、１〜５個の炭素原子を含有する第一級、第二級または第三級アルキル鎖である；
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２及びＲ’２それぞれが、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール（を含む置換したアリール）、Ｃ５−Ｃ２０ヘテロアリール基、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＯＨ、及び−ＳＨから独立して選択され、いくつかの実施形態では、アルキル、アルケニル及びアルキニル鎖が、５個までの炭素原子を含む；
Ｒ３及びＲ’３が、Ｈ、ＯＲ、ＮＨＲ、及びＮＲ２から独立して選択され、Ｒが、１〜５個の炭素原子を含有する第一級、第二級または第三級アルキル鎖である；
Ｒ４及びＲ’４が、Ｈ、Ｍｅ、及びＯＭｅから独立して選択される；
Ｒ５が、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−Ｃ２０アリール（ハロ、ニトロ、シアノ、アルコキシ、アルキル、ヘテロシクリルによって置換したアリールを含む）及びＣ５−Ｃ２０ヘテロアリール基から選択され、いくつかの実施形態では、アルキル、アルケニル及びアルキニル鎖が、５個までの炭素原子を含む；
Ｒ１１が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または保護基（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、または自壊性単位を含む部分、例えば、バリン−シトルリン−ＰＡＢ）である；
Ｒ１２が、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、または保護基である；
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、Ｒ’２、Ｒ５、もしくはＲ１２のうちの１つの水素、またはＡ環の間の−ＯＣＨ２ＣＨ２（Ｘ）ｎＣＨ２ＣＨ２Ｏ−スペーサーの水素が、ＡＤＣのリンカーに結合される結合で置換されている。
【０２９０】
ＡＤＣの例示的ＰＢＤ二量体部分としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない（波線は、リンカーとの共有結合部位を示す）。
2017522861.tif 000036
ＰＢＤ二量体；
【０２９１】
さらにＰＢＤ二量体を含むＡＤＣの非限定例は、モノメチルジスルフィドＮ１０−結合ＰＢＤ（以下に示した）を抗体に結合することによって生成してよく、
2017522861.tif 000037
、
モノメチルジスルフィドＮ１０−結合ＰＢＤ抗体−薬剤コンジュゲートが生成される。
2017522861.tif 000038
【０２９２】
二量体−マレイミド−アセタールのリンカーは、酸不安定性である。
【０２９３】
当技術分野で知られている方法に従って、ＰＢＤ二量体及びＰＢＤ二量体を含むＡＤＣを調製してよい。例えば、ＷＯ２００９／０１６５１６；米国特許第２００９／３０４７１０号；米国特許第２０１０／０４７２５７号；米国特許第２００９／０３６４３１号；米国特許第２０１１／０２５６１５７号；ＷＯ２０１１／１３０５９８を参照。
【０２９４】
（５）アントラサイクリン
いくつかの実施形態では、ＡＤＣが、アントラサイクリンを含む。アントラサイクリンが、細胞毒性活性を示す抗生物質化合物である。特定の理論によって束縛されることを意図しないが、研究では、アントラサイクリンが、１）薬剤分子を細胞のＤＮＡへ挿入し、これにより、ＤＮＡ−依存性核酸合成を抑制すること；２）遊離ラジカルの薬剤によって生成し、その後、細胞マクロ分子と反応させ、細胞を損傷させること、及び／または３）薬剤分子の細胞膜との相互作用を含む、多くのさまざまな機序によって細胞を殺すように作用する可能性があることを示している（例えば、Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎら，「Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  Ａｎｄ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｏｆ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ」  ｉｎ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  Ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ；Ｎ．Ｒ．Ｂａｃｈｕｒ，「Ｆｒｅｅ  ＲａｄｉｃａｌＤａｍａｇｅ」ｉｄ．ａｔ  ｐｐ．９７−１０２を参照）。アントラサイクリンは、その細胞毒性の可能性のために、多くの癌、例えば、白血病、乳癌腫、肺癌腫、卵巣腺癌及び肉腫の治療に用いられている（例えば、Ｐ．Ｈ−Ｗｉｅｒｎｉｋ，ｉｎ  Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ：Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｓｔａｔｕｓ  Ａｎｄ  ＮｅｗＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ  ｐ１１を参照）。
【０２９５】
アントラサイクリンの非限定例としては、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノマイシン、ネモルビシン、及びこれらの誘導体が挙げられる。ダウノルピシン及びドキソルビシンのイムノコンジュゲート及びプロドラッグが、調製され、研究されている（Ｋｒａｔｚら（２００６）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３；Ｊｅｆｆｒｅｙら（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１６：３５８−３６２；Ｔｏｒｇｏｖら（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１；Ｎａｇｙら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９７：８２９−８３４；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら（２００２）Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１２：１５２９−１５３２；Ｋｉｎｇら（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３；ＥＰ０３２８１４７；米国特許第６６３０５７９号）。抗体−薬剤コンジュゲートＢＲ９６−ドキソルビシンは、腫瘍−関連抗原ルイス−Ｙと特異的に反応し、第Ｉ相試験及び第ＩＩ相試験で評価されている（Ｓａｌｅｈら（２０００）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ１８：２２８２−２２９２；Ａｊａｎｉら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．６：７８−８１；Ｔｏｌｃｈｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ１７：４７８−４８４）。
【０２９６】
ＰＮＵ−１５９６８２は、ネモルビシンの強力な代謝物質（または誘導体）である（Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ，ら（２００５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ１１（４）：１６０８−１６１７）。ネモルビシンは、ドキソルビシンのグリコシドアミノ上に２−メトキシモルホリノ基を有するドキソルビシンの半合成類似体であり、肝細胞癌のための第ＩＩ／ＩＩＩ相試験（Ｓｕｎら（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２２，Ａｂｓ１４４８；Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４：第１版，Ａｂｓ４６４９；Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉら（２００６）Ｊｏｕｒ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２４：１４１１６）を含む、臨床評価中である（Ｇｒａｎｄｉら（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．１７：１３３；Ｒｉｐａｍｏｎｔｉら（１９９２）Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ６５：７０３；）。
【０２９７】
ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含むＡＤＣの非限定例が、式Ｉａに示されている。
2017522861.tif 000039
式中、Ｒ１が、水素原子、ヒドロキシまたはメトキシ基であり、Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基、またはこれらの製剤的に許容可能な塩である；
Ｌ１及びＺがともに、本明細書に記載のとおりのリンカー（Ｌ）である；
Ｔが、本明細書に記載のとおりの抗体（Ａｂ）である；及び
ｍが、１〜約２０である。いくつかの実施形態では、ｍが、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
【０２９８】
いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２がともに、メトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０２９９】
さらに、ネモルビシンまたはネモルビシン誘導体を含むＡＤＣの非限定例が、式Ｉｂに示されている。
2017522861.tif 000040
式中、Ｒ１が、水素原子、ヒドロキシまたはメトキシ基であり、Ｒ２が、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基、またはこれらの製剤的に許容可能な塩である；
Ｌ２及びＺがともに、本明細書に記載のとおりのリンカー（Ｌ）である；
Ｔが、本明細書に記載のとおりの抗体（Ａｂ）である；及び
ｍが、１〜約２０である。いくつかの実施形態では、ｍが、１〜１０、１〜７、１〜５、または１〜４である。
【０３００】
いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２がともに、メトキシ（−ＯＭｅ）である。
【０３０１】
いくつかの実施形態では、ネモルビシンを含有するＡＤＣのネモルビシン成分が、ＰＮＵ−１５９６８２である。いくつかのかかる実施形態では、ＡＤＣの薬剤部分が、以下の構造のうちの１つを有してよい：
2017522861.tif 000041
；または
2017522861.tif 000042
；
式中、波線は、リンカー（Ｌ）への結合を示す。
【０３０２】
ＰＮＵ−１５９６８２を含むアントラサイクリンは、いくつかの結合部位及び本明細書に記載のリンカーを含むさまざまなリンカーを介して、抗体に結合してよい（米国特許第２０１１／００７６２８７号；ＷＯ２００９／０９９７４１；米国特許第２０１０／００３４８３７号；ＷＯ２０１０／００９１２４）。
【０３０３】
ネモルビシン及びリンカーを含む例示的ＡＤＣとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
2017522861.tif 000043
ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂ；
2017522861.tif 000044
ＰＮＵ−１５９６８２−マレイミド−Ａｂ。
【０３０４】
ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂのリンカーは、酸不安定性である。
【０３０５】
（６）他の薬剤部分
薬剤部分が、また、ゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒら（２０００）Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１；Ｍａｎｄｌｅｒら（２０００）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１０：１０２５−１０２８；Ｍａｎｄｌｅｒら（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．１３：７８６−７９１）；及び、これらに限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、（緑膿菌からの）菌体外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチンタンパク質、洋種ヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サポアオナリアオフィシナリス阻害剤、ゲロニン、マイトジェリン、レストリクトシン、フェノマイシン、ネオマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセンを含む酵素的活性毒素及びこれらのフラグメントを含む。例えば、ＷＯ９３／２１２３２を参照。
【０３０６】
薬剤部分が、また、核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ）を含む。
【０３０７】
特定の実施形態では、イムノコンジュゲートが、放射性が高い原子を含んでよい。放射性結合抗体の生成のために、さまざまな放射性同位体が入手可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートが、検出に用いられる場合、シンチグラフィー検査のための放射性原子、例えば、Ｔｃ９９またはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（また、磁気共鳴イメージング、ＭＲＩとして知られる）のためのスピンラベル、例えば、ジルコニウム−８９、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガトリニウム、マンガンもしくは鉄を含んでよい。ジルコニウム−８９は、例えば、ＰＥＴイメージングのために、種々の金属キレート薬剤と錯体形成してよく、抗体に結合してよい（ＷＯ２０１１／０５６９８３）。
【０３０８】
公知の方法で、イムノコンジュゲートに放射性標識または他の標識を組み入れてよい。例えば、１つ以上の水素の代わりに１つ以上のフッ素−１９原子を含む好適なアミノ酸前駆体を用いて、ペプチドを生合成してよい、または化学合成してよい。いくつかの実施形態では、抗体中のシステイン残基を介して、標識、例えば、Ｔｃ９９、Ｉ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８及びＩｎ１１１を結合することができる。いくつかの実施形態では、抗体のリジン残基を介して、イットリウム−９０を結合することができる。いくつかの実施形態では、ＩＯＤＯＧＥＮ方法（Ｆｒａｋｅｒら（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０：４９−５７）を用いて、ヨウ素−１２３を組み入れることができる。「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ」（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９８９）が、特定の他の方法を記載している。
【０３０９】
特定の実施形態では、イムノコンジュゲートが、プロドラッグ−活性化酵素に結合する抗体を含んでよい。いくつかのかかる実施形態では、プロドラッグ−活性化酵素が、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法薬、ＷＯ８１／０１１４５を参照）を活性薬剤、例えば、抗癌薬剤に変換する。いくつかの実施形態では、かかるイムノコンジュゲートが、抗体依存性酵素媒介プロドラッグ治療（「ＡＤＥＰＴ」）に有用である。抗体に結合してよい酵素としては、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬剤に変換するのに有用である、アルカリホスファターゼ；スルフェート含有プロドラッグを遊離薬剤に変換するのに有用である、アリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗癌薬剤、５−フルオロウラシルに変換するのに有用である、シトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬剤に変換するのに有用である、プロテアーゼ、例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、ズブチリシン、カルボキシペプチダーゼ及びカテプシン（例えば、カテプシンＢ及びＬ）；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有用である、Ｄ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬剤に変換するのに有用である、炭水化物分解酵素、例えば、β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼ；β−ラクタムにより誘導体化された薬剤を遊離薬剤に変換するのに有用である、β−ラクタマーゼ；及び、フェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基、それぞれによりそのアミン窒素で誘導体化された薬剤を遊離薬剤に変換するのに有用である、ペニシリンアミダーゼ、例えば、ペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、当技術分野でよく知られている遺伝子組換えＤＮＡ技術によって、抗体に酵素を共有結合してよい。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照。
【０３１０】
ｃ）薬剤負荷
薬剤負荷は、式Ｉの分子中の１抗体当たりの薬剤部分の平均数ｐによって表される。薬剤負荷の範囲は、１抗体当たり、１〜２０の薬剤部分（Ｄ）としてよい。式ＩのＡＤＣが、薬剤部分の範囲１〜２０で結合された抗体の集合を含む。結合反応によるＡＤＣの調製での１抗体当たりの薬剤部分の平均数は、従来の手段、例えば、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣによって特徴づけることができる。また、ｐによるＡＤＣの量的分布を測定してよい。いくつかの例では、ｐが他の薬剤負荷によるＡＤＣからの特定の値である均質なＡＤＣの分離、精製、及び特性指摘は、逆相ＨＰＬＣまたは泳動などの手段によって実現することができる。
【０３１１】
いくつかの抗体−薬剤コンジュゲートでは、抗体上の結合部位の数によりｐを制限することができる。例えば、結合が、前記の特定の例示的実施形態のとおり、システインチオールである場合、抗体が、唯一またはいくつかのシステインチオール基を有してよい、またはリンカーが結合する可能性がある唯一またはいくつかの十分な反応性のチオール基を有してよい。特定の実施形態では、薬剤負荷が高い、例えば、ｐが５より大きいと、特定の抗体−薬剤コンジュゲートの凝集、不溶解性、毒性、または分子透過性の損失を生じる可能性がある。特定の実施形態では、ＡＤＣの平均薬剤負荷が、１〜約８；約２〜約６；または約３〜約５の範囲である。確かに、特定のＡＤＣでは、１抗体当たりの薬剤部分の最適な割合は、８未満としてよく、約２〜約５としてよいことが示された（米国特許第７４９８２９８号）。
【０３１２】
特定の実施形態では、薬剤部分の理論的最大値より少ないと、結合反応中に抗体に結合される。抗体が、例えば、以下に記載のとおり、薬剤−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しないリジン残基を含有してよい。一般に、抗体は、薬剤部分に結合する可能性がある多くの遊離及び反応性システインチオール基を含有しない；確かに、抗体中のほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。特定の実施形態では、部分または全体還元条件下で、還元剤、例えば、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）で抗体を還元し、反応性システインチオール基を生成してよい。特定の実施形態では、抗体が、変性条件に供され、反応性求核基、例えば、リジンまたはシステインを現す。
【０３１３】
ＡＤＣの負荷（薬剤／抗体比）は、さまざまな方法で、例えば、（ｉ）抗体と比較して薬剤−リンカー中間生成物またはリンカー試薬の分子過剰を制限すること、（ｉｉ）結合反応時間または温度を制限すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分または制限還元条件によって制御することができる。
【０３１４】
１つ以上の求核基が、薬剤−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応すると、その後、得られた生成物が、ＡＤＣ化合物の抗体に結合される１つ以上の薬剤部分の分配との混合物となると理解しなければならない。１抗体当たりの薬剤の平均数は、抗体に対して特異的であり、薬剤に対して特異的であるデュアルＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって、混合物から計算してよい。質量分析によって混合物中の個々のＡＤＣ分子を特定してよく、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離してよい（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈら（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ１９（７）：２９９−３０７；Ｈａｍｂｌｅｔｔら（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０；Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ら“Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４；Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ら．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ２００４を参照）。特定の実施形態では、電気泳動およびクロマトグラフィーによって、結合混合物から単一負荷値を有する均質なＡＤＣを分離してよい。
【０３１５】
ｄ）イムノコンジュゲートを調製する特定の方法
（１）抗体の求核基を二価のリンカー試薬と反応させ、共有結合を介してＡｂ−Ｌを形成し、続いて薬剤部分Ｄと反応させること；及び（２）薬剤部分の求核基を二価のリンカー試薬と反応させ、共有結合を介してＤ−Ｌを形成し、続いて抗体の求核基と反応させることを含む、当業者に知られる有機化学反応、条件、及び試薬を用いるいくつかの経路によって、式ＩのＡＤＣを調製してよい。
【０３１６】
抗体の求核性基としては、（ｉ）Ｎ−末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えばリジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えば、システイン、及び（ｉｖ）抗体がグリコシル化されている糖ヒドロキシルまたはアミノ基が挙げられるが、これらに限定されない。アミン、チオール、及びヒドロキシル基は、求核性であり、（ｉ）活性エステル、例えば、ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、及び酸ハロゲン化物；（ｉｉ）アルキル及びベンジルハロゲン化物、例えば、ハロアセトアミド；及び（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、及びマレイミド基を含むリンカー部分及びリンカー試薬上の求電子性基と反応して、共有結合を形成することができる。特定の抗体は、還元可能鎖間ジスルフィド、すなわち、システイン架橋を有する。還元剤、例えば、ＤＴＴ（ジチオトレイトール）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）による処理によって抗体をリンカー試薬と結合反応させてよく、その結果、抗体が、である全体的にまたは部分的に還元される。したがって、それぞれのシステイン架橋は、理論上、２つの反応性チオール求核基を形成する。リジン残基の修飾によって、例えば、２−イミノイミノチオラン（トラウト試薬）とリジン残基を反応させることによって、抗体に追加の求核基を導入することができ、その結果、アミンがチオールに変換される。また、１つ、２つ、３つ、４つ以上のシステイン残基を導入することによって（例えば、１つ以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異体抗体を調製することによって）、抗体に反応性チオール基を導入してよい。
【０３１７】
また、リンカー試薬または薬剤上の求核基と、抗体上の求電子性基、例えば、アルデヒドまたはケトンカルボニル基の反応によって、本発明の抗体−薬剤コンジュゲートを生成してよい。リンカー試薬の有用な求核基としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。１つの実施形態では、抗体が、修飾され、リンカー試薬または薬剤の求核置換基と反応することができる求電子性部分が導入される。もう１つの実施形態では、リンカー試薬または薬剤部分のアミン基と反応する可能性があるアルデヒドまたはケトン基を形成するために、例えば、過ヨウ素酸酸化試薬でグリコシル化抗体の糖を酸化してよい。得られたイミンシッフ塩基は、安定した結合を形成する可能性がある、または、例えば、ボロヒドリド試薬によって還元され、安定したアミン結合を形成する可能性がある。１つの実施形態では、ガラクトースオキシダーゼまたはメタ過ヨウ素酸ナトリウムとグリコシル化抗体の炭水化物部分を反応させて、薬剤（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）の好適な基と反応することができる抗体中のカルボニル（アルデヒド及びケトン）基を生成してよい。もう１つの実施形態では、Ｎ−末端セリンまたはトレオニン残基を含有する抗体が、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応することができ、その結果、最初のアミノ酸の代わりにアルデヒドが生成される（Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ＆Ｓｔｒｏｈ，（１９９２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．３：１３８−１４６；米国特許第５３６２８５２号）。かかるアルデヒドは、薬剤部分またはリンカー求核基と反応することができる。
【０３１８】
薬剤部分の例示的求核基としては、（ｉ）活性エステル、例えば、ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、及び酸ハロゲン化物；（ｉｉ）アルキル及びベンジルハロゲン化物、例えば、ハロアセトアミド；（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、及びマレイミド基を含むリンカー部分及びリンカー試薬上の求電子性基と反応して、共有結合を形成することができる、アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジド基が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３１９】
ＡＤＣを調製するために用いてよい架橋試薬の非限定例が、本明細書の「例示的リンカー」と表題のついたセクションに記載されている。タンパク質部分及び化学部分を含む２つの部分を結合するためのかかる架橋試薬を用いる方法が、当技術分野で知られている。いくつかの実施形態では、例えば、遺伝子組換え技術またはペプチド合成によって、抗体及び細胞毒性薬剤を含む融合タンパク質を生成してよい。遺伝子組換えＤＮＡ分子が、互いに隣接した、またはコンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離された、コンジュゲートの抗体及び細胞毒性部分をコードする領域を含んでよい。
【０３２０】
さらにもう１つの実施形態では、腫瘍事前標的化に利用するために「受容体」（例えば、ストレプトアビジン）に抗体を結合してよく、抗体−受容体コンジュゲートが、患者に投与され、続いて、清澄剤を用いて循環から非結合コンジュゲートを除去し、その後、細胞毒性薬剤（例えば、薬剤または放射性核種）に結合する「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する。
【０３２１】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体のいずれかが、生体試料中のＧＰＣ３の存在を検出するのに有用である。用語「検出する」は、本明細書に用いる場合、定量的または定性的検出を包含する。「生体試料」は、例えば、細胞または組織（例えば、癌性または癌性の可能性があるリンパ系組織、例えば、リンパ球、リンパ芽球、単球、骨髄単球、及びこれらの混合物を含む生検材料）を含む。
【０３２２】
１つの実施形態では、診断または検出の方法に用いられる抗ＧＰＣ３抗体が提供される。さらに１つの態様では、生体試料中のＧＰＣ３の存在の検出方法が提供される。特定の実施形態では、方法が、抗ＧＰＣ３抗体がＧＰＣ３に結合するのを許容する条件下で、本明細書に記載の抗ＧＰＣ３抗体と生体試料を接触させること、ならびに、複合体が生体試料中の抗ＧＰＣ３抗体及びＧＰＣ３間に、形成されるかどうかを検出することを含む。かかる方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ法としてよい。１つの実施形態では、抗ＧＰＣ３抗体が、抗ＧＰＣ３抗体による治療に適格である被験者を選択するために用いられ、例えば、ＧＰＣ３が、患者の選択のためのバイオマーカーである。さらに１つの実施形態では、生体試料が、細胞または組織である。
【０３２３】
さらに１つの実施形態では、例えば、癌を診断、予測、または病期分類する、治療の好適なコースを決定する、または治療に対する癌の応答をモニタリングする目的のために、例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏ画像撮影によって、被験者中のＧＰＣ３−陽性癌を検出するために、抗ＧＰＣ３抗体が、ｉｎ  ｖｉｖｏで用いられる。ｉｎ  ｖｉｖｏ検出のための当技術分野で知られている１つの方法が、例えば、ｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎら，Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ１２：１３７９−１３８９（２００７）及びＶｅｒｅｌら，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載されたとおり、免疫−ポジトロン放出断層撮影（免疫−ＰＥＴ）である。かかる実施形態では、被験者中のＧＰＣ３−陽性癌を検出するための方法が提供され、当該方法が、ＧＰＣ３−陽性癌を有する、または有する疑いのある被験者に標識抗ＧＰＣ３抗体を投与すること、及び被験者中の標識抗ＧＰＣ３抗体を検出することを含み、標識抗ＧＰＣ３抗体の検出は、被験者中のＧＰＣ３−陽性癌を示す。特定のかかる実施形態では、標識抗ＧＰＣ３抗体が、陽電子放出体、例えば、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉに結合する抗ＧＰＣ３抗体を含む。特定の実施形態では、陽電子放出体が、８９Ｚｒである。
【０３２４】
さらに実施形態では、診断または検出の方法が、ＧＰＣ３の存在を試験するための生体試料に基質に固定化された第１の抗ＧＰＣ３抗体を接触させること、第２の抗ＧＰＣ３抗体に基質を暴露すること、及び第２の抗ＧＰＣ３が、生体試料中の第１の抗ＧＰＣ３抗体及びＧＰＣ３間の複合体に結合されるかどうかを検出することを含む。基質は、任意の支持培地、例えば、ガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ、及び他の基質としてよい。特定の実施形態では、生体試料が、細胞または組織を含む。特定の実施形態では、第１または第２の抗ＧＰＣ３抗体が、本明細書に記載の抗体のいずれかである。
【０３２５】
前記の実施形態のいずれかに従って診断または検出してよい例示的障害としては、ＧＰＣ３−陽性癌、例えば、ＧＰＣ３−陽性肝臓癌、ＧＰＣ３−陽性肝細胞癌、ＧＰＣ３−陽性膵癌、ＧＰＣ３−陽性肺癌、ＧＰＣ３−陽性結腸癌、ＧＰＣ３−陽性乳癌、ＧＰＣ３−陽性前立腺癌、ＧＰＣ３−陽性白血病、及びＧＰＣ３−陽性リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ−陽性癌が、肝臓癌である。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ−陽性癌が、肝細胞癌である。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌が、抗ＧＰＣ３免疫組織化学（ＩＨＣ）またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコア「０」超を受けている癌であり、これは、非常に弱い、または腫瘍細胞の９０％超に染色なしに対応する。もう１つの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌が、１＋、２＋または３＋レベルで、ＧＰＣ３を発現する。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌が、ＧＰＣ３ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、ＧＰＣ３を発現する癌である。いくつかの実施形態では、ＲＴ−ＰＣＲが、定量的ＲＴ−ＰＣＲである。
【０３２６】
特定の実施形態では、標識抗ＧＰＣ３抗体が提供される。標識としては、直接に検出される標識または部分（例えば、蛍光、発色、高電子密度、化学発光、及び放射性標識）、ならびに、間接的に、例えば、酵素的反応または分子相互作用を介して検出される部分、例えば、酵素またはリガンドが挙げられるが、これらに限定されない。例示的標識としては、放射線同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、発蛍光団、例えば、希土キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカリドオキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼ、ヘテロサイクリックオキシダーゼ、例えば、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、これは色素前駆体、例えば、ＨＲＰを酸化させるために過酸化水素を用いる酵素と結合され、ラクトペルオキシダーゼ、またはミクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカルなどが挙げられるが、これらに限定されない。もう１つの実施形態では、標識が、陽電子放出体である。陽電子放出体としては、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉが挙げられるこれらに限定されない。特定の実施形態では、陽電子放出体が、８９Ｚｒである。
【０３２７】
Ｆ．医薬製剤
本明細書に記載のとおり、抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートの医薬製剤が、１つ以上の任意の製剤的に許容可能なキャリアを有し、所望の程度の純度を有するかかる抗体またはイムノコンジュゲートを混合することによって調製され（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．版（１９８０））、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。製剤的に許容可能なキャリアは、一般に用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して毒性がなく、緩衝液、例えば、ホスフェート、シトレート、及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノ−ル；シクロヘキサノ−ル；３−ペンタノ−ル；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；造塩対立イオン、例えば、ナトリウム；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；及び／または非イオン界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書の例示的製剤的に許容可能なキャリアが、さらに侵入型薬剤分散剤、例えば、可溶性中性−活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標），ＢａｘｔｅｒＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）を含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む特定の例示的ｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法が、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び２００６／０１０４９６８号に記載されている。１つの態様では、ｓＨＡＳＥＧＰが、１つ以上の追加のグリコサミノグリカン（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎａｓｅｓ）、例えば、コンドロイチナーゼと混合される。
【０３２８】
例示的凍結乾燥抗体またはイムノコンジュゲート製剤が、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体またはイムノコンジュゲート製剤が、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されたものを含み、後者の製剤は、ヒスチジン−アセテート緩衝液を含む。
【０３２９】
本明細書の製剤は、また、治療される特定の適応症に必要な１つ以上の有効成分、好ましくは互いに有害に作用しない相補的活性を有するものを含有してよい。
【０３３０】
有効成分は、例えば、コアセルヴェーション技術によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセル中に閉じ込めてよく、例えば、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルであり、それぞれ、コロイド薬剤デリバリー系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノパーティクル及びナノカプセル）中またはマクロエマルジョン中に調製される。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．版（１９８０）に開示されている。
【０３３１】
持続性放出調製物を調製してよい。好適な持続性放出調製物の例としては、抗体またはイムノコンジュゲートを含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが挙げられ、そのマトリックスは、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。
【０３３２】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に用いられる製剤は、一般に無菌である。例えば、無菌濾過膜を介した濾過によって容易に滅菌を実施してよい。
【０３３３】
Ｇ．治療方法及び組成物
方法、例えば、治療方法に、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートのいずれかを用いてよい。
【０３３４】
１つの態様では、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートが、ＧＰＣ３−陽性細胞の増殖の抑制方法に用いられ、当該方法が、抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートが細胞の表面上のＧＰＣ３に結合するのを許容する条件下で、抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートに細胞を暴露し、これにより、細胞の増殖を抑制することを含む。特定の実施形態では、方法が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ法である。さらに実施形態では、細胞が、リンパ球、リンパ芽球、単球、または骨髄単球細胞である。
【０３３５】
Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から市販されているＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙを用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞増殖の抑制をアッセイしてよい。このアッセイは、代謝活性細胞の指示薬である存在するＡＴＰの定量化に基づいて培養中の生存可能細胞の数を測定する。Ｃｒｏｕｃｈら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７号を参照。アッセイは、９６−または３８４−ウェルフォーマットで実施してよく、自動ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適用できるようにする。Ｃｒｅｅら（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４を参照。アッセイ手順は、単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養された細胞に直接添加することを含む。これにより、細胞リーシス及びルシフェラーゼ反応によって生じる発光シグナルの生成がもたらされる。発光シグナルは、存在するＡＴＰの量に比例し、培養に存在する生存可能細胞の数に直接比例する。データは、ルミノメーターまたはＣＣＤカメラ画像撮影装置によって記録することができる。発光アウトプットは、相対発光量（ＲＬＵ）として示される。
【０３３６】
もう１つの態様では、薬剤として使用される抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートが提供される。さらに態様では、治療方法に使用される抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートが提供される。特定の実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌を治療するのに使用される抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートが提供される。特定の実施形態では、本発明は、ＧＰＣ３−陽性癌を有する個体の治療方法に使用される抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートを提供し、当該方法が、個体に有効量の抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートを投与することを含む。１つのかかる実施形態では、方法が、さらに、例えば、以下に記載したとおり、有効量の少なくとも１つの追加の治療薬剤を個体に投与することを含む。
【０３３７】
さらに１つの態様では、薬剤の製造または調製に抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートの使用のために、本発明が提供される。１つの実施形態では、薬剤が、ＧＰＣ３−陽性癌の治療用である。さらに１つの実施形態では、薬剤が、ＧＰＣ３−陽性癌の治療方法に使用するためのものであり、当該方法が、ＧＰＣ３−陽性癌を有する個体に有効量の薬剤を投与することを含む。１つのかかる実施形態では、方法が、さらに、例えば、以下に記載したとおり、有効量の少なくとも１つの追加の治療薬剤を個体に投与することを含む。
【０３３８】
さらに１つの態様では、本発明は、ＧＰＣ３−陽性癌を治療するための方法を提供する。１つの実施形態では、方法が、かかるＧＰＣ３−陽性癌を有する個体に有効量の抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートを投与することを含む。１つのかかる実施形態では、方法が、さらに、以下に記載したとおり、有効量の少なくとも１つの追加の治療薬剤を個体に投与することを含む。
【０３３９】
前記の実施形態のいずれかに従ったＧＰＣ３−陽性癌は、例えば、ＧＰＣ３−陽性肝臓癌、ＧＰＣ３−陽性肝細胞癌、ＧＰＣ３−陽性膵癌、ＧＰＣ３−陽性肺癌、ＧＰＣ３−陽性結腸癌、ＧＰＣ３−陽性乳癌、ＧＰＣ３−陽性前立腺癌、ＧＰＣ３−陽性白血病、またはＧＰＣ３−陽性リンパ腫としてよい。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌が、抗ＧＰＣ３免疫組織化学（ＩＨＣ）またはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）スコア「０」超を受けている癌であり、これは、非常に弱い、または腫瘍細胞の９０％超に染色なしに対応する。もう１つの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌が、１＋、２＋または３＋レベルで、ＧＰＣ３を発現する。いくつかの実施形態では、ＧＰＣ３−陽性癌が、ＧＰＣ３ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、ＧＰＣ３を発現する癌である。いくつかの実施形態では、ＲＴ−ＰＣＲが、定量的ＲＴ−ＰＣＲである。
【０３４０】
前記の実施形態のいずれかに従った「個体」は、ヒトとしてよい。
【０３４１】
さらに１つの態様では、本発明は、例えば、前記の治療方法のいずれかに使用するために、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートのいずれかを含む医薬製剤を提供する。１つの実施形態では、医薬製剤が、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートのいずれか及び製剤的に許容可能なキャリアを含む。もう１つの実施形態では、医薬製剤が、例えば、以下に記載したとおり、本明細書に提供される抗ＧＰＣ３抗体またはイムノコンジュゲートのいずれか及び少なくとも１つの追加の治療薬剤を含む。
【０３４２】
単独で、または他の薬剤と組み合わせて、治療に本発明の抗体またはイムノコンジュゲートを用いることができる。例えば、少なくとも１つの追加の治療薬剤とともに本発明の抗体またはイムノコンジュゲートを投与してよい。
【０３４３】
前記のかかる組み合わせ治療が、投与の組み合わせ（２つ以上の治療薬剤が、同じまたは別々の製剤中に含まれる）、及び別々の投与を包含し、この場合、本発明の抗体またはイムノコンジュゲートの投与は、追加の治療薬剤及び／またはアジュバントの投与の前、同時に、及び／または後に行うことができる。また、放射線治療と組み合わせて、本発明の抗体またはイムノコンジュゲートを用いることができる。
【０３４４】
非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに、局所治療に必要であれば、腫瘍内投与を含む任意の好適な手段によって、本発明の抗体またはイムノコンジュゲート（及び任意の追加の治療薬剤）を投与することができる。非経口的注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。投与が、短期または長期であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路によって、例えば、注入、例えば、静脈内または皮下注入によって投与することができる。これらに限定されないが、さまざまな時期にわたる単一または複数の投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むさまざまな投与計画が、本明細書で検討されている。
【０３４５】
良質の医療行為と一致する方法で、本発明の抗体またはイムノコンジュゲートが製剤化され、投薬され、投与される。この文脈で考慮される因子としては、治療する特定の障害、治療する特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的状態、障害の原因、薬剤がデリバリーされる部位、投与の方法、投与のスケジュール、及び医師に知られる他の因子が挙げられる。抗体またはイムノコンジュゲートを必要しないが、該当する障害を予防または治療するために、任意で現在用いられる１つ以上の薬剤とともに製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体またはイムノコンジュゲートの量、障害または治療の型、及び前記に記載した他の因子に依存する。これらは、本明細書に記載のとおりの同じ用量及び投与経路で、または本明細書に記載の用量の約１〜９９％で、または好適であると経験的に／臨床的に決定される、任意の用量で、及び任意の経路によって、一般に用いられる。
【０３４６】
疾患の予防または治療のため、本発明の抗体またはイムノコンジュゲートの好適な用量（単独で、または１つ以上の他の追加の治療薬剤と組み合わせて用いられる）は、治療される疾患の型、抗体またはイムノコンジュゲートの型、疾患の重症度及び過程、抗体またはイムノコンジュゲートが予防または治療目的のために投与されるかどうか、以前の治療、患者の病歴及び抗体への反応、ならびに担当医師の自由裁量に依存する。抗体またはイムノコンジュゲートは、１回の治療または一連の治療にわたって好適に患者に投与される。疾患の型及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別々の投与、または連続注入によるかどうかにより約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体またはイムノコンジュゲートを患者への投与の最初の候補用量とすることができる。典型的な１日の投薬量は、前記記載の因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／Ｋｇまたはそれ以上の範囲とすることができる。数日間またはそれより長期にわたる繰り返し投与では、状態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで、治療が、一般に維持される。抗体またはイムノコンジュゲートの１つの例示的用量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲である。このため、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ（またはこれらの任意の組み合わせ）のうちの１つ以上の用量を患者に投与してよい。断続的に、例えば、毎週または３週間ごとにかかる用量を投与してよい（例えば、患者は、約２〜約２０、または、例えば、約６の用量の抗体を受けるように）。最初に高負荷の用量を投与し、続いて、１つ以上の低用量を投与してよい。しかし、他の用量計画を有用なものとしてよい。この治療の進捗は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。
【０３４７】
本発明のイムノコンジュゲート及び抗ＧＰＣ３抗体の両者を用いて、前記の製剤または治療方法のいずれかを実施してよいと理解される。
【０３４８】
Ｈ．製品
本発明のもう１つの態様では、前記に記載した障害の治療、予防及び／または診断に有用な材料を含有する製品が提供される。製品は、容器及び容器上に、または容器とともにラベルまたは添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、さまざまな材料、例えば、ガラスまたはプラスチックで形成してよい。容器は、組成物自体または障害を治療、予防及び／または診断するのに効果的なもう１つの組成物と混合される組成物を保持し、無菌アクセスポート（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、または皮下注入針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルとすることができる）を有してよい。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の抗体またはイムノコンジュゲートである。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選択した状態を治療するために用いられることを示す。さらに、製品は、（ａ）本発明の抗体またはイムノコンジュゲートを含む組成物を含有する第１の容器；及び（ｂ）さらに細胞毒性またはその逆の治療薬剤を含む組成物を含有する第２の容器を含んでよい。本発明の本実施形態の製品は、さらに、特定の状態を治療するために組成物を用いることができることを示す添付文書を含んでよい。代わりに、または追加で、製品は、さらに、製剤的に許容可能な緩衝液、例えば、注入用滅菌精製水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液またはブドウ糖溶液を含む第２の（または第３の）容器を含んでよい。当該製品は、さらに、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む商業的観点及び使用者の観点から好ましい他の材料を含んでよい。
【実施例】
【０３４９】
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。前記に提供した一般的説明を考慮すれば、種々の他の実施形態を実施してよいと理解される。
【０３５０】
実施例１：ヒトＧＰＣ３発現
遺伝子発現情報を含有するプロプライエタリデータベース（ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）、Ｇｅｎｅ  Ｌｏｇｉｃ  Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を用いてヒトＧＰＣ３遺伝子発現を分析した。マイクロアレイプロファイルビューアを用いて、ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）データベースのグラフィカル分析を実施した。図１は、種々の組織のヒトＧＰＣ３遺伝子発現の図示である。ｙ−軸上のスケールは、ハイブリダイゼーションシグナル強度に基づく遺伝子発現レベルを示す。点が、記載した組織それぞれの名前から伸びた線の左右に現れている。線の左に現れている点は、正常組織の遺伝子発現を示し、線の右に現れている点は、腫瘍及び疾患組織の遺伝子発現を示す。図１は、正常なカウンターパートと比較して、特定の腫瘍または疾患組織のＧＰＣ３遺伝子発現の増大を示す。例えば、ＧＰＣ３が、肝臓腫瘍及び疾患組織に実質的に過剰発現している。
【０３５１】
図２は、ＧＰＣ３が、肝細胞癌に実質的に過剰発現しており、肝硬変にいくぶん過剰発現していることを示す。ＧＰＣ３が、正常肝臓に過剰発現しておらず、種々の他の肝臓疾患にも過剰発現していない。
【０３５２】
また、肝細胞癌の異なるステージのｃＤＮＡ試料中で、及び、肝硬変、脂肪変性、肝炎、慢性肝炎、及び肝臓の腺腫（ＯｒｉＧｅｎｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を含む他の肝臓疾患からの試料中でｑＰＣＲによって、ＧＰＣ３の発現を測定した。ＧＰＣ３発現をＲＰＬ１９に標準化した。図３に示したとおり、ＧＰＣ３が、ステージＩＶ肝細胞癌試料中で高く発現した。また、ＧＰＣ３が、発現した１つの慢性肝炎試料で高く発現した。このアッセイを用いて、副腎、脳、子宮頸、結腸、副睾丸、食道、脂肪、心臓、小腸、頭蓋内動脈、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、リンパ球、乳腺、筋肉、鼻粘膜、視神経、卵巣、卵管、すい臓、心膜、下垂体、胎盤、前立腺、直腸、網膜、精嚢、皮膚、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃腺、気管、尿管、膀胱、子宮、虫部垂、膣、及び大静脈を含むさまざまな正常ヒト組織中に有意なＧＰＣ３発現を検出しなかった。
【０３５３】
実施例２：単クローン性抗体生成
Ａ．ＧＰＣ３細胞外ドメイン免疫処置及び抗体特性化
以下の手順を用いて、哺乳動物発現系に発現したＣ−末端Ｆｌａｇ（ＲＡＤＹＫＤＤＤＤＫ）に融合した遺伝子組換えｈｕＧＰＣ３細胞外ドメイン（ＥＣＤ、１〜５４７のアミノ酸）を有する５匹のＢａｌｂ／ｃマウスに抗原投与することによって、抗ヒト（ｈｕ）ＧＰＣ３単クローン性抗体を生成した。
【０３５４】
陽性クローンを増殖し、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、及び免疫組織化学（ＩＨＣ）によって、ｈｕＧＰＣ３、ｃｙｎｏＧＰＣ３、及びＨｅｐＧ２細胞への結合を再スクリーニングした。抗体７Ｈ１及び４Ｇ７を含む１３の抗体を選択し、精製した。抗体７Ｈ１の重鎖及び軽鎖可変領域配列を、それぞれ配列番号：２及び３に示している。抗体４Ｇ７の重鎖及び軽鎖可変領域配列を、それぞれ配列番号：２６及び２７に示している。図４Ａ〜Ｂを参照。
【０３５５】
ＩＨＣによって、抗体７Ｈ１が、肝膿瘍癌組織マイクロアレイ、ＪＨＨ細胞、ＨｅｐＧ２細胞、及びＧＰＣ３で安定してトランスフェクトされた細胞と強く反応することがわかり、ＦＡＣＳによって、抗体７Ｈ１及び４Ｇ７が、ＧＰＣ３を発現しているＨｅｐＧ２  Ｘ１細胞及び２９３Ｓ細胞と強く反応することがわかった。図５は、抗体７Ｈ１の例示的ＦＡＣＳデータを示す。ウェスタンブロットによって、抗体７Ｈ１が、また、ヒト、シノモルグスサル、ラット、及びマウスＧＰＣ３を検出する。
【０３５６】
競合アッセイを用いて、抗ＧＰＣ３抗体のエピトープビニングを実施した。Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ３８４測定器（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いて、ストレプトアビジンバイオセンサー上で、１０μｇ／ｍｌで、６００秒間、ビオチン化ＧＰＣ３を捕捉した。６００秒間、１０μｇ／ｍｌを添加することによって飽和までの第１の抗体の結合を実現した。５μｇ／ｍｌで、競合抗体に同じバイオセンサーを浸漬し、６００秒間、結合を測定した。第２の抗体が、飽和量の第１の抗体の存在下で結合できないのは、２つの抗体が同じエピトープビン中にあったことを示す；第２の抗体が、飽和量の第１の抗体の存在下で結合できるのは、２つの抗体が異なるエピトープビン中にあったことを示す。第１の飽和抗体として抗体７Ｈ１を用いた。第１の飽和抗体として抗体４Ｇ７を用いて次の実験を実施した。抗体７Ｈ１及び４Ｇ７が、異なるエピトープビン中にあることがわかった。
【０３５７】
さらに抗体７Ｈ１及び４Ｇ７のエピトープを精製するために、ヒトＧＰＣ３のＣ−末端切断構成体を生成した。ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜１３７、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜２４７、及びヒトＧＰＣ３のアミノ酸２５〜３５８を含む、３つの異なるＣ−末端切断を生成した。３つのＣ−末端切断それぞれが、ＧＰＣＮ−末端シグナル配列（ＳＳ）及びＣ−末端グリコホスファチジルイノシトールアンカー（ＧＰＩ結合）を含んだ。図６を参照。ＦＡＣＳによって、抗体７Ｈ１が、２９３Ｓ細胞の表面上に過渡的に発現した３つ全部の構成体に結合することがわかり、また、ウェスタンブロットによって３つ全部の構成体に結合することがわかった。図６を参照。ＦＡＣＳによって、抗体４Ｇ７が、ヒトＧＰＣ３のＮ−末端（アミノ酸２５〜３５８）またはＣ−末端（アミノ酸３５９〜５６０）フラグメントへの有意な結合を示さなかった。これは、４Ｇ７のエピトープが、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９で、フーリン切断部位に及んでいる可能性を示唆する。図７を参照（Ｃ−末端フラグメント結合の陽性対照として、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸５１１〜５８０に生じさせたＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ抗体１Ｇ１２を用いた）。ヒトＡ１１８Ｃシステイン−エンジニアリングＩｇＧ１及びＩｇκ不変領域（配列番号：４２及び４３）を有するキメラ抗体として抗体７Ｈ１を再配列した。
【０３５８】
Ｂ．ＧＰＣ３短縮細胞外ドメイン免疫処置及び抗体特性化
ＧＰＣＮ−末端シグナル配列（ＳＳ）及びＣ−末端グリコホスファチジルイノシトールアンカー（ＧＰＩ結合）を有するｈｕＧＰＣ３アミノ酸３５９〜５６０をコードするＤＮＡを有する５匹のＢａｌｂ／ｃマウスに抗原投与することによって、ヒトＧＰＣ３の細胞外ドメインのＣ−末端部分に対する単クローン性抗体を生成した。７週間、１週間あたり１回、流体力学的尾静脈（ＨＴＶ）注入により、５０μｇのＤＮＡ及び２．５μｇのマウスＧＭ−ＣＳＦで、マウスに抗原投与した。ＦＡＣＳによって、免疫処置に用いられる同じｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−５６０）構成体を発現している２９３細胞への結合について、血清をスクリーニングした。融合後、１０のハイブリドーマが、ＥＬＩＳＡによって、ヒトＧＰＣ３細胞外ドメイン（アミノ酸１〜５６０）を結合した抗体を発現し、ハイブリドーマが、ＦＡＣＳによって、２９３細胞上に発現したｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−５６０）を結合した抗体を発現した。抗体４Ａ１１及び１５Ｇ１を含む、ヒトＩｇＧ１  Ａ１１８Ｃシステインエンジニアリング重鎖及びＩｇκ軽鎖不変領域を有する３つの抗体をクローンした。抗体４Ａ１１の重鎖及び軽鎖可変領域配列を、それぞれ配列番号：１０及び１１に示している。抗体１５Ｇ１の重鎖及び軽鎖可変領域配列を、それぞれ配列番号：１８及び１９に示している。図４Ａ〜Ｂを参照。
【０３５９】
さらに抗体４Ａ１１及び１５Ｇ１のエピトープを精製するために、ｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−５８９）のＣ−末端切断構成体を生成した。ヒトＧＰＣ３のアミノ酸３５９〜４２０、ヒトＧＰＣ３のアミノ酸３５９〜４７０、及びヒトＧＰＣ３のアミノ酸３５９〜５０９を含む、３つの異なるＮ−末端切断を生成した。３つのＣ−末端切断それぞれが、ＨＳＶＮ−末端シグナル配列（ＳＳ）及びｇＤ配列（配列番号：４１）及びＣ−末端グリコホスファチジルイノシトールアンカー（ＧＰＩ結合）を含んだ。図８を参照。２９３細胞の表面上にｈｕＧＰＣ切断構成体を発現させ、ＦＡＣＳによって抗体結合を測定した。陽性対照として抗−ｇＤを用いた。陰性対照としてベクター−トランスフェクトされた２９３細胞を用いた。抗体４Ａ１１が、ｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−５５９）及びｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−５０９）に結合したが、ｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−４７０）またはｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−４２０）に結合しなかった。これは、ヒトＧＰＣのアミノ酸４７０〜５０９内のエピトープに結合することを示す。図９を参照。抗体１５Ｇ１が、ｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−５５９）、ｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−５０９）、及びｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−４７０）に結合したが、ｈｕＧＰＣ（ａａ３５９−４２０）に結合しなかった。これは、ヒトＧＰＣのアミノ酸４２０〜４７０内のエピトープに結合することを示す。図９を参照。
【０３６０】
ＦＡＣＳによって、完全長Ｎ−末端ｇＤ−標識シノモルグスサルＧＰＣ３及び２９３細胞の表面上に発現した完全長Ｎ−末端ｇＤ−標識ラットＧＰＣ３への結合について、抗体１５Ｇ１及び４Ａ１１を試験した。両抗体とも、シノモルグスサルＧＰＣ３に結合した。また、１５Ｇ１は、ラットＧＰＣ３に結合したが、４Ａ１１は、結合しなかった。図１０を参照。図１１に示したとおり、１５Ｇ１エピトープは、ヒト、シノモルグスサル、アカゲザル、マウス、及びラットＧＰＣ３間で、高く保存されており、一方、４Ａ１１エピトープは、特に霊長動物及びげっ歯類動物ＧＰＣ３間のいくつかの配列変異を含有する。７Ｈ１エピトープは、また、ヒト、シノモルグスサル、アカゲザル、マウス、及びラットＧＰＣ３間で、高く保存されており、前記のとおり、抗体７Ｈ１は、ウェスタンブロットによってヒト、シノモルグスサル、ラット、及びマウスＧＰＣ３を検出する。
【０３６１】
実施例３：単クローン性抗体の内在化
Ｈｅｐ３Ｂ．２．１−７、ＨｅｐＧ２、及びＪＨＨ７細胞中で、内在化について抗体７Ｈ１、４Ｇ７、１５Ｇ１、及び４Ａ１１をアッセイした。２時間、及び２０時間、３７℃で、抗体内在化を測定した。２時間または２０時間、３７℃で、または４℃で、１時間、４μｇ／ｍｌで、抗体と細胞をインキュベートした。その後、ＰＢＳで細胞を洗浄し、４％パラホルムアルデヒドで固定化し、５分間、３７℃で、０．０５％サポニンで透過化した。その後、１時間、室温で、リソソームマーカーとしての抗−ＬＡＭＰＩ抗体（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）と、細胞をインキュベートし、洗浄し、その後、１時間、室温で、抗−ヒト−Ｃｙ３及び抗−ラビット−Ａｌｅｘａ４８８とインキュベートした。細胞を洗浄し及びその後、マウント培地でマウントした。強度に基づいて視覚的に染色を定量した。
【０３６２】
２時間時点で、抗体の非常に小さな内在化を観察した。２０時間時点で、それぞれの細胞株中の抗体のリソソームへの内在化の程度を表２にまとめた。
2017522861.tif 000045
２０時間で、Ｎ−末端結合抗体７Ｈ１が、Ｃ−末端結合抗体４Ａ１１及び１５Ｇ１と異なる内在化特性を示した。アミノ酸Ｒ３５８／Ｓ３５９でフーリン切断部位にまたがるエピトープに結合すると予測される抗体４Ｇ７が、他の抗体と異なる内在化特性を示した。
【０３６３】
実施例４：ＧＰＣ３発現細胞株の遊離ネモルビシン誘導体及び遊離ピロロベンゾジアゼピンへの感受性
以下の構造を有する遊離ネモルビシン誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、
2017522861.tif 000046
、
または以下の構造を有する遊離ピロロベンゾジアゼピン、ＳＧ−２０５７、
2017522861.tif 000047
、
への感受性について、以下のとおり、種々のＧＰＣ３発現細胞株を試験した。９６−ウェルクリアボトムプレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中の５０μｌの正常成長培地で、１ウェル当たり１０００細胞でプレートした細胞を用いて、ＰＮＵ−１５９６８２またはＳＧ−２０５７の存在下で増殖を評価した。２４時間後、３連ウェルに薬剤の段階希釈液と追加の５０μｌの培地を添加した。３日または５日後，細胞Ｔｉｔｅｒ−ＧｌｏＩＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．）を用いて、及びＥｎＶｉｓｉｏｎ２１０１マルチラベルリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で、細胞数を測定した。実験の結果を表３にまとめている。
2017522861.tif 000048
2017522861.tif 000049
表３に示したとおり、試験した全細胞株が、両薬剤に感受性である。
【０３６４】
実施例５：抗ＧＰＣ３抗体薬剤コンジュゲートの生成
大規模抗体生成のために、ＣＨＯ細胞中で抗体を生成した。ＣＨＯ細胞中にＶＬ及びＶＨをコードするベクターをトランスフェクトし、タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーによって細胞培養培地からＩｇＧを精製した。
【０３６５】
薬剤−リンカー部分マレイミドアセタールＰＮＵ−１５９６８２（図１２Ａを参照）またはモノメチルジスルフィドＮ１０−結合ＰＢＤ（図１２Ｂを参照）に重鎖Ａ１１８Ｃ変異（７Ｈ１チオ−ＨＣＡ１１８Ｃ、４Ａ１１チオ−ＨＣＡ１１８Ｃ、１５Ｇ１チオ−ＨＣＡ１１８Ｃ）を有するキメラ７Ｈ１、４Ａ１１、または１５Ｇ１（ヒトＩｇＧ１／カッパ）を結合することによって、抗ＧＰＣ３抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）を生成した。最初に分離されたとおり、抗体中のエンジニアリングシステイン残基は、細胞チオール（例えば、グルタチオン）とジスルフィドが混合されて存在し、このため、結合に利用できない。これらの抗体の部分還元（例えば、ＤＴＴによる）、精製、及びデヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）による再酸化により、例えば、Ｊｕｎｕｔｕｌａら（２００８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：９２５−９３２及び米国特許第２０１１／０３０１３３４号に、以前に記載されたとおり、結合に利用できる遊離システインスルフヒドリル基を有する抗体が得られる。簡潔にいうと、抗体が、薬剤−リンカー部分と混合され、薬剤−リンカー部分が、抗体の遊離システイン残基に結合される。数時間後、ＡＤＣを精製した。それぞれのＡＤＣの薬剤負荷（１抗体当たり薬剤部分の平均数）を測定し、ＰＢＤコンジュゲートでは、１．４〜１．８であり、ＰＮＵコンジュゲートでは、１．４〜１．８であった。
【０３６６】
実施例６：ＨｅｐＧ２  Ｘ１細胞株異種移植モデルでの抗ＧＰＣ３抗体薬剤コンジュゲートの有効性
ヒトＨｅｐＧ２  Ｘ１異種移植モデルを用いて、抗ＧＰＣ３ＡＤＣの有効性を検討した。側腹部の尾の付け根にＨｅｐＧ２  Ｘ１の１０００万の細胞を雌Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）それぞれに接種した。異種移植腫瘍が、１００〜３００ｍｍ３の平均腫瘍容量に達した場合（第０日と称する）、動物を無作為化によりそれぞれ７〜１０匹のマウスの群に割り付け、図１３に示した用量で、ＡＤＣの単一静脈内注入を受けさせた。全試験期間を通じて１週間に１〜２回、マウスの腫瘍及び体重を測定した。体重減少が、開始時の体重の２０％を越えた場合、マウスをすみやかに安楽死させた。腫瘍が、３０００ｍｍ３に達した、または切迫潰瘍形成の徴候を示した後に、全動物を安楽死させた。注入後の第１、７及び１４日に、ＰＫブリードによって抗体の存在を確認した。抗体４Ｇ７、７Ｈ１、及び４Ａ１１を用いて、ＦＡＣＳによって、異種移植マウスから分離されたＨｅｐＧ２  Ｘ１細胞及びＨｅｐＧ２  Ｘ１腫瘍の表面上にＧＰＣ３の発現を確認した。図１３Ａ〜Ｂを参照。
【０３６７】
図１４に示したとおり、７Ｈ１−ジスルフィド−ＰＢＤ（７．９８ｍｇ／ｋｇ）及び４Ａ１１ジスルフィド−ＰＢＤ（７．５１ｍｇ／ｋｇ）の両者で、実質的な腫瘍成長抑制を実現した。この実験では、ＰＮＵコンジュゲート（７Ｈ１−アセタール−ＰＮＵ及び４Ａ１１−アセタール−ＰＮＵ）の方が、有効性が低かった。
【０３６８】
実施例７：ＪＨＨ７細胞株異種移植モデルでの抗ＧＰＣ３抗体薬剤コンジュゲートの有効性
ヒトＪＨＨ７異種移植モデルを用いて、抗ＧＰＣ３ＡＤＣの有効性を検討した。側腹部の尾の付け根にＪＨＨ７の３００万の細胞を雌ＮＣＲ．ヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ；ＣａｍｂｒｉｄｇｅＣｉｔｙ，ＩＮ）それぞれに接種した。異種移植腫瘍が、１００〜３００ｍｍ３の平均腫瘍容量に達した場合（第０日と称する）、動物を無作為化によりそれぞれ７〜１０匹のマウスの群に割り付け、図１３に示した用量で、ＡＤＣの単一静脈内注入を受けさせた。全試験期間を通じて１週間に１〜２回、マウスの腫瘍及び体重を測定した。体重減少が、開始時の体重の２０％を越えた場合、マウスをすみやかに安楽死させた。腫瘍が、３０００ｍｍ３に達した、または切迫潰瘍形成の徴候を示した後に、全動物を安楽死させた。注入後の第１、４及び１４日に、ＰＫブリードによって抗体の存在を確認した。抗体４Ｇ７、７Ｈ１、及び４Ａ１１を用いて、ＦＡＣＳによって、異種移植マウスから分離されたＪＨＨ７細胞及びＪＨＨ７腫瘍の表面上にＧＰＣ３の発現を確認した。図１５Ａ〜Ｂを参照。
【０３６９】
図１６に示したとおり、７Ｈ１−ジスルフィド−ＰＢＤ（７．９８ｍｇ／ｋｇ）及び４Ａ１１ジスルフィド−ＰＢＤ（７．５１ｍｇ／ｋｇ）の両者で、実質的な腫瘍成長抑制を実現した。この実験では、ＰＮＵコンジュゲート（７Ｈ１−アセタール−ＰＮＵ及び４Ａ１１−アセタール−ＰＮＵ）の方が、有効性が低かった。
【０３７０】
理解を明確するため、図および実施例により前記発明の詳細を記載したが、説明および実施例が、本発明の範囲を限定するものと解釈してはならない。本明細書に記載した全特許および科学文献の開示は、全体が明確に参照として組み入れられる。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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