(57)【要約】本発明は薬剤封入効率を増加させた高分子微粒球の製造方法に関するものであって、より詳細には内部水相（W1)及び油相（0)を製造する段階；内部水相と油相を混合してW/0エマルジョンを製造して、冷却する段階；外部水相（W2)と混合して、W1/O/W2エマルジョンを製造する段階；及びW1/O/W2エマルジョンを乾燥して回収する段階を含む高分子微粒球の製造方法に関するものである。本発明の方法は油相を固形化させる過程を特定温度を特定時間以上維持する過程を通じて薬剤封入効率を増加させ、高い薬剤含量を有する高分子微粒球を製造することができて制御放出型製剤製造に効果的である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）薬剤、増粘剤及び水性溶媒が含まれた内部水相(W1)を製造し、重合体及び脂溶性溶媒が含まれた油相(O)を製造する段階；
（ｂ）前記（ａ）段階で製造された内部水相と油相を混合してW1/Oエマルジョンを製造し、前記製造されたW1/0エマルジョンを冷却して粘度を増加させる段階；
（ｃ）前記（ｂ）段階で粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを、水性溶液が含まれ、温度が18℃以下に維持された外部水相(W2)に分散させて、温度を18℃以下で10分以上維持しながら混合して、W1/0/W2エマルジョンを製造する段階；及び
（ｄ）前記（ｃ）段階で製造されたW1/0/W2エマルジョンを乾燥して回収する段階；を含む高分子微粒球の製造方法。
【請求項２】
前記（ｃ）段階の外部水相(W2)の温度は10℃以上18℃以下であることを特徴とする請求項１記載の製造方法。
【請求項３】
前記（ｃ）段階の外部水相(W2)に、粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを分散させて、混合する温度は、10℃以上18℃以下であることを特徴とする請求項１記載の製造方法。
【請求項４】
前記（ｃ）段階の外部水相(W2)に、粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを分散させて、混合する温度を維持する時間は、10分以上あることを特徴とする請求項１記載の製造方法。
【請求項５】
前記温度は15℃以上18℃以下であることを特徴とする請求項３記載の製造方法。
【請求項６】
前記時間は30分以上であることを特徴とする請求項４記載の製造方法。
【請求項７】
前記薬剤はリュープロレリンアセテートであることを特徴とする請求項１記載の製造方法。
【請求項８】
請求項１の製造方法により製造された高分子微粒球。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は2014年04月07日に出願された大韓民国特許出願第10-2014-0041299号を優先権主張し、前記明細書全体は本出願の参考文献である。
【０００２】
本発明は、薬剤封入効率を増加させた高分子微粒球製造方法に関するものであって、より詳細には、内部水相(W1)及び油相(O)を製造する段階；内部水相と油相を混合してW1/Oエマルジョンを製造し、冷却する段階；外部水相(W2)と混合してW1/O/W2エマルジョンを製造する段階；及び製造されたW1/O/W2エマルジョンを乾燥して回収する段階を含む高分子微粒球製造方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
通常の速放性(rapid release)製剤に比べて制御放出性(controlled release)製剤は体内で一定時間薬剤を持続的に放出するので、薬剤の有効血中濃度を長期間維持することができる。従って、通常の製剤を頻繁に投与して発生する血中濃度の振幅を減少させ、それにより副作用も減らすことができ、ひいては投与頻度を減らすことにより患者の服薬順応度(compliance)を向上させる長所がある。
【０００４】
このような制御放出型製剤の開発のため、最近、生分解性高分子微粒球を利用した薬剤伝達実験が多角的になされており、生分解性ポリマー微粒球薬剤伝達システムは薬剤投与量を所望の期間内に定量で制御することができ、副作用を減らして薬の効果を高めることができる。
【０００５】
高分子微粒球を利用した薬剤伝達システム開発において、重要な点の一つが生産性の面で薬剤の封入効率を高めることである。
【０００６】
先行技術の米国登録特許US4,954,298では内部水相(W1)/油相(O)/外部水相(W2)からなされた高分子微粒球基盤の制御放出型製剤製造において、内部水相(W1)/油相(O)エマルジョンを冷却して粘度を増加させ、薬剤封入効率を改善している。
【０００７】
しかしながら、薬剤の封入効率を高めるための追加的な工程改善が必要である。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは、W1/0/W2タイプの薬剤含有高分子微粒球の製造において、薬剤封入効率を増加させる方法に関して研究を重ねている中で、W1/0エマルジョンをW2に混合してW1/0/W2を製造する過程を、特定温度以下で一定時間維持する条件で行う場合、薬剤封入効率が顕著に増加することを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
本発明の目的は、薬剤、増粘剤及び水性溶媒が含まれた内部水相(W1)を製造し、重合体及び脂溶性溶媒が含まれた油相(O)を製造する段階；前記段階で製造された内部水相と油相を混合してW1/0エマルジョンを製造し、前記製造されたW1/0エマルジョンを、冷却して粘度を増加させる段階；前記段階で粘度が増加されたW1/0エマルジョンを、水溶性溶液が含まれ、温度が18℃以下に維持された外部水相(W2)に分散させて温度を18℃以下で10分以上維持しながら混合して、W1/0/W2エマルジョンを製造する段階；及び前記段階で製造されたW1/0/W2エマルジョンを乾燥して回収する段階を含む高分子微粒球の製造方法を提供することである。
【００１０】
本発明の他の目的は、前記製造方法により製造された高分子微粒球を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
前記目的を達成するため、本発明は、薬剤、増粘剤及び水性溶媒が含まれた内部水相(W1)を製造し、重合体及び脂溶性溶媒が含まれた油相(O)を製造する段階；前記段階で製造された内部水相と油相を混合してW1/Oエマルジョンを製造し、前記製造されたW1/Oエマルジョンを冷却して粘度を増加させる段階；前記段階で粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを、水溶性溶液が含まれ、温度が18℃以下に維持された外部水相(W2)に分散させて温度を18℃以下で10分以上維持しながら混合して、W1/0/W2エマルジョンを製造する段階；及び前記で製造されたW1/0/W2エマルジョンを乾燥して回収する段階を含む高分子微粒球の製造方法を提供する。
【００１２】
本発明の他の目的を達成するため、本発明は前記製造方法により製造された高分子微粒球を提供する。
【００１３】
以下本発明を詳細に説明する。
【００１４】
本発明は（ａ）薬剤、増粘剤及び水性溶媒が含まれた内部水相(W1)を製造し、重合体及び脂溶性溶媒が含まれた油相(O)を製造する段階；
（ｂ）前記（ａ）段階で製造された内部水相と油相を混合してW1/Oエマルジョンを製造し、前記製造されたW1/Oエマルジョンを冷却して粘度を増加させる段階；
（ｃ）前記（ｂ）段階で粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを、水性溶液が含まれ、温度が18℃以下に維持された外部水相(W2)に分散させて、温度を18℃以下で10分以上維持しながら混合して、W1/0/W2エマルジョンを製造する段階；及び
（ｄ）前記（ｃ）段階で製造されたW1/0/W2エマルジョンを乾燥して回収する段階；を含む高分子微粒球製造方法を提供する。
【００１５】
以下本発明の製造方法を段階別に説明する。
【００１６】
（ａ）薬剤、増粘剤及び水性溶媒が含まれた内部水相(W1)を製造し、重合体及び脂溶性溶媒が含まれた油相(O)を製造する段階；
【００１７】
（ａ）段階ではW1/Oエマルジョンを製造するための内部水相及び油相を製造する。本発明の内部水相は薬剤、増粘剤及び水性溶媒を含むことを特徴とし、油相は重合体及び脂溶性溶媒を含むことを特徴とする。
前記薬剤は、疾病の診断、処置、緩和、治療又は予防に有用であるか、又は他の医学的目的に有用な、薬剤、生理学的製剤、生体活性化合物又はこれらの配合物を意味する。本発明の薬剤は化学的化合物、ペプチド、タンパク質、抗体、核酸又はこれらの塩を全て含み、好ましくは水溶性薬剤である。
【００１８】
さらに、好ましくは本発明の薬剤は生物学的活性を有するペプチドであり、最も好ましくはリュープロレリンアセテート(Leuprorelin acetate)である。
【００１９】
リュープロレリンアセテートはLHRH（黄体ホルモン分泌ホルモン）効現剤に分類されるホルモン製剤としてリュープロリド、硝酸リュープロレリン、リュープロレリン酢酸塩（Leuprolide acetate）とも記載される。テストステロン又はエストロゲン依存的なガン細胞においてこれらのホルモンを不足するようにして腫瘍の大きさを縮小するか萎縮させる作用を示し、主に乳房ガン、ホルモンに反応する前立腺癌、子宮内膜癌、子宮筋腫、中枢性思春期早発症の治療に使用されるが他の疾患治療目的にも使用できる。
【００２０】
前記増粘剤は内部水相の粘度を増加させてW1/Oエマルジョンを製造して冷却時の粘度増加の効果を高める。本発明の増粘剤は例えば、カゼイン、ゼラチン、コラーゲンなどの高分子化合物、セルロース、デキストリン、寒天などの炭水化物、キサンタンガムなどの天然ゴムであってもよく、好ましくはゼラチンである。
【００２１】
前記水性溶媒は水溶性である本発明の薬剤を溶解できる溶媒を意味し、一般的に、薬剤溶媒に使用される水性溶媒は制限無く使用できる。本発明の水性溶媒はこれに制限されないが、例えば、水、炭素数１〜４の低級アルコール（例、エタノール、メタノール、プロパノール等）、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフランなどでもよい。好ましくはエタノール、メタノール、水又はこれらの混合物である。より好ましくは本発明の水性溶媒は水である。
【００２２】
内部水相(W1)を構成する水性溶媒、薬剤及び増粘剤の重量比は水性溶媒の種類、薬剤種類によって異なり、これに制限されないが、例えば、水性溶媒：薬剤：増粘剤＝1：0.01〜2:0.01〜0.5の重量比で混合することができ、好ましくは水性溶媒１重量部当り薬剤0.05〜１重量部、増粘剤0.05〜0.2重量部の比で混合することができる。
【００２３】
内部水相(W1)の製造は水性溶媒、薬剤及び増粘剤を、順次に又は同時に、混合する方法で製造することができ、好ましくは内部水相を加温する条件で混合することができる。前記加温条件は好ましくは30〜80℃であり、より好ましくは50〜70℃である。
【００２４】
前記重合体は高分子微粒球の外部壁を構成する高分子化合物を意味し、本発明の重合体は、高分子微粒球製造に使用されるこの分野に公知の高分子化合物であれば制限無く使用することができ、好ましくは、これに制限されないが、例えば、ヒドロキシ脂肪酸のポリエステル、ポリ乳酸(poly(lactic acid))及びポリグリコール酸(poly(glycolic acid))の共重合体、ポリ乳酸又はポリラクチドのみの重合体、ポリ（乳酸‐CO‐グリコール酸）共重合体、ポリ（ラクチド‐CO‐グリコリド）共重合体(PLGA)、ポリホスファゼン、ポリイミノカーボネート、ポリホスホエステル、ポリアンハイドライド、ポリオルトエステル、乳酸とカプロラクトンの共重合体、ポリカプロラクトン、ボリヒドロキシバリレート、ボリヒドロキシブチレート。ポリアミノ酸、乳酸とアミノ酸の共重合体及びこれらの混合であって、より好ましくはポリ乳酸及びポリグリコール酸の共重合体である。本発明の製造方法で使用される重合体の重量平均分子量は特に制限はされないが、一般的に、2,000〜800,000であり、好ましくは5,000〜100,000であり、より好ましくは10,000〜50,000である。
【００２５】
前記ポリ乳酸及びポリグリコール酸の共重合体の乳酸とグリコール酸のモル比は0〜100:0〜100であって、好ましくは50〜90：10〜50（例えば、50:50、65:35、75:25、85:15、90:10)であって、より好ましくは70〜80:20〜30（例えば、75:25)である。
【００２６】
前記脂溶性溶媒は高分子量の重合体を溶解するためのものであって、一般的に、制御放出型製剤のための高分子微粒球製造に使用される脂溶性溶媒は、制限無く使用することができる。本発明の脂溶性溶媒は、例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン、トリクロロエタン、四塩化炭素などのハロゲン化炭化水素、エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類、エチルアセテート、ブチルアセテートなどの脂肪酸エステル、ベンゼン、トルエン、キシレンなどの芳香族炭化水素である。好ましくはハロゲン化炭化水素類であり、より好ましくはジクロロメタンである。
【００２７】
脂溶性溶媒の量は、重合体を溶解できる量であれば特に制限はされず、重合体の種類及び脂溶性溶媒の種類によって異なるが、例えば、重合体重量の0.1倍〜10倍であり、好ましくは0.5倍〜4倍であり、より好ましくは重合体重量の１〜２倍である。
【００２８】
油相(O)製造は脂溶性溶媒に重合体を混合する方法で製造することができ、必要に応じて混合機(stirrer,mixer)又は振盪機（vortex）を利用して混合することができる。
【００２９】
（ｂ）前記（ａ）段階で製造された内部水相と油相を混合してW1/Oエマルジョンを製造し、前記製造されたW1/Oエマルジョンを冷却して粘度を増加させる段階；
【００３０】
（ｂ）段階では前記（ａ）段階で製造された内部水相と油相を混合してW1/Oエマルジョンを製造した後、冷却して粘度を増加させる。
【００３１】
前記W1/Oエマルジョンは内部水相と油相を混合する方法で製造され、前記混合は公知の方法で行われている。前記混合方法は例えば、不連続式振盪方法、プロペラ型撹拌機、タービン型撹拌機などを利用した撹拌方法、コロイドミル方法、均質機方法又は超音波方法でもよく、好ましくは均質機方法である。本発明のW1/Oエマルジョンは、好ましくは、油相に内部水相を投与して、均質機で均質化する方法で製造することである。
【００３２】
内部水相と油相の混合比は、重合体、薬剤、水性溶媒、脂溶性溶媒の種類によって異なり、例えば、これに制限されないが、内部水相１重量当り油相が１〜100重量部の比で混合することであり、好ましくは内部水相１重量部当り油相が１〜20重量部の比で混合することができ、より好ましくは内部水相１重量部当り油相が５〜10重量部の比で混合することである。
【００３３】
製造されたW1/Oエマルジョンは冷却して粘度を増加させる。
【００３４】
粘度増加によって薬剤の封入効率が一部向上できる。しかしながら、このようなW1/Oエマルジョンの粘度増加だけによる封入効率増加効果は、その増加量に限界があって、制御放出型製剤製造に十分な封入効率を達成することができず、外部水相(W2)の温度調節及びその維持時間の調節が必ず必要である。
【００３５】
前記冷却温度は、本発明のW1/Oエマルジョンの粘度を増加させるに十分な温度であれば特に制限はされず、好ましくは18℃以下である。
【００３６】
（ｃ）前記（ｂ）段階で粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを、水溶性溶液が含まれ、温度が18℃以下に維持された外部水相(W2)に分散させて温度を18℃以下で10分以上維持しながら混合して、W1/O/W2エマルジョンを製造する段階；
【００３７】
（ｃ）段階では、前記粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを、外部水相(W2)に分散させて、W1/O/W2エマルジョンを製造する。
【００３８】
本発明の外部水相(W2)は水溶性溶液を含むことを特徴とする。
【００３９】
前記水溶性溶液は水性溶媒にエマルジョン化剤（エマルジョン安定化剤）が溶解された溶液を意味する。
【００４０】
前記水性溶媒は例えば、水、メタノール、エタノール、プロパノールなど炭素数１〜４の低級アルコール、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン又はこれらの混合物であり、好ましくはエタノール、メタノール、水又はこれらの混合物である。より好ましくは水である。
【００４１】
本発明の外部水相(W2)は、エマルジョン化剤の他に、さらに、外部水相のpH調節のための適切な緩衝剤、浸透圧調節のための浸透圧調節剤（例えば、マンニトール）を含んでもよい。前記緩衝剤又は浸透圧調節剤により薬剤の封入効率及び安定性が増加できる。
【００４２】
前記エマルジョン化剤は、安定的にエマルジョンを形成する公知のエマルジョン化剤であり、例えば、ゼラチン、ナトリウムオレエート、ナトリウムステアレート、ナトリウムラウリルスルフェート、ソジウムドデシルスルフェート（SDS)などの陰イオン性界面活性剤、Tween 80,Tween 60のようなポリオキシエチレンソルビタン脂肪エステル(Polysorbate)、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体なとの非イオン性界面活性剤、ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、レシチン、ヒアルロン酸又はこれらの混合物でもよく、好ましくはポリビニルアルコール(PVA,polyvinyl alcohol)である。
【００４３】
本発明のW1/0/W2エマルジョン製造段階は、外部水相(W2)の温度を18℃以下に維持した状態で、粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを分散させ、分散させる段階でも温度を18℃以下に少なくとも10分以上維持することを特徴とする。
【００４４】
W1/Oエマルジョンを外部水相に分散させる段階で、温度を18℃以下に少なくとも10分以上維持することにより薬剤の封入効率が増加する。このような点は、本発明で初めて公開されるものである。
【００４５】
前記分散段階の温度を18℃以下に維持するために前記外部水相(W2)の温度は18℃にすることが好ましく、より好ましくは10℃以上18℃以下である。
【００４６】
外部水相(W2)に、粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを分散させて混合する方法は、公知の混合方法を用いることができ、これに関しては、前記W1/Oエマルジョン製造の際、内部水相と油相を混合する方法に記載された通りである。
【００４７】
外部水相(W2)に、粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを分散させて混合する温度は、18℃以下に維持することが好ましく、より好ましくは10℃以上18℃以下であり、最も好ましくは15℃以上18℃以下である。
【００４８】
さらに、前記温度は、好ましくは、少なくとも10分以上維持される。10分未満に維持する場合、薬剤封入効率が急激に低下する。前記維持時間は、より好ましくは10分以上120分以下であり、最も好ましくは30分以上90分以下である。前記維持時間を120分以上持続させる場合、高分子微粒球の組成によって持続時間増加による封入効率増加程度が大きくないので非効率的である。
【００４９】
本発明の比較例及び実施例では、多様な温度を多様な時間を維持しながらW1/Oエマルジョンを製造して薬剤封入効率及び薬剤含量を測定した。
【００５０】
その結果、初期温度を20℃、25℃にした場合、封入効率が極めて低いことを確認し（比較例１，２）、初期温度を18℃にした場合にも、これを10分以上維持しない場合にも、薬剤封入効率が20%程度低いことを確認した（比較例３）。
【００５１】
これに対して、粘度が増加されたW1/Oエマルジョンを外部水相(W2)に分散の際、温度を18℃で10分間維持後、徐々に昇温した場合、薬剤封入効率が著しく改善されたことを確認して（実施例１）、前記温度を30分以上維持する場合、薬剤封入効率がさらに著しく改善されたことを確認した（実施例２〜４）。
【００５２】
（ｄ）前記（ｃ）段階で製造されたW1/0/W2エマルジョンを乾燥して回収する段階；
【００５３】
（ｄ）段階では、前記製造されたW1/0/W2エマルジョンを乾燥して高分子微粒球を製造してこれを回収する。
【００５４】
前記乾燥は、製造された高分子微粒球から溶媒を除去するため、一括的に使用される通常の方法で遂行できる。例えば、製造された高分子微粒球を単純に撹拌するか、加熱するか、窒素気体などを投与したり、減圧条件で撹拌したり、調節された真空条件で溶媒を蒸発させる方法で行うことができる。好ましくは減圧条件で撹拌して溶媒を除去する乾燥方法によって乾燥することができる。
【００５５】
前記回収は水相から高分子微粒球を分離して収得することを意味し、遠心分離、濾過など固形分を液状から分離する通常の方法で行うことができる。
【００５６】
前記（ｄ）段階で製造された高分子微粒球は、蒸留水などに再分散させて混合して再回収する洗浄段階をさらに行うこともできる。前記のような洗浄段階を通じて微粒子表面の薬剤残留物、外部水相(W2)に含まれたエマルジョン安定化剤などを除去することができる。
【００５７】
さらに、本発明の製造方法により製造された高分子微粒球を凍結乾燥などの方法により固形化して、より安定した高分子微粒球を製造することができる。より好ましくは製造された高分子微粒球を注射用水など適切な溶液に懸濁した後、公知の賦形剤（例えば、マンニトールなどの糖類）、分散剤などを混合した後、凍結乾燥して固形化することができる。
【００５８】
本発明の製造方法により高分子微粒球を製造する場合、高い薬剤封入効率で高分子微粒球を製造することができるので、薬剤の損失を減らして、経済的に制御放出型製剤を生産することができる。さらに、従来の方法に比べて薬剤含量も向上された高分子微粒球を製造することができる。
【００５９】
従って、本発明は本発明の方法により製造された高分子微粒球を提供する。
【００６０】
本発明の高分子微粒球は従来の方法により製造された高分子微粒球に比べて薬剤封入効率が高く、経済的に生産が可能で、薬剤含量が高い。
【００６１】
本発明の方法により製造された高分子微粒球は、含まれる薬剤の種類によって目的とする疾病治療に使用することができ、従って、本発明は本発明の高分子微粒球を有効成分として含む疾病治療用薬学的組成物を提供することができる。
【００６２】
前記疾病は、本発明の高分子微粒球に含まれる薬剤で治療可能な疾病であって、好ましくは前立腺癌、子宮内膜癌、子宮筋腫、中枢性思春期早発性である。
【００６３】
本発明による薬学的組成物は薬学的に有効な量の薬剤含有高分子微粒球を単独で含むか、又は一つ以上の薬学的に許容される担体をさらに含むことができる。前記“薬学的に有効な量”とは、陰性対照群に比べてそれ以上の反応を示す量を意味し、好ましくは疾病治療又は予防に十分な量であることを意味する。本発明による高分子微粒球の薬学的に有効な量は0.001〜1000mg/日/体重kg、好ましくは0.005〜1mg/日/体重kgである。しかしながら、前記薬学的に有効な量は疾患及びこれの重症度、患者の年齢、体重、健康状態、性別、投与経路及び治療期間などのようなさまざまな因子によって変化する。
【００６４】
前記“薬学的に許容される”とは、生理学的に許容され、ヒトに投与される時、活性成分の作用を阻害せず、通常的に胃腸障碍、眩気症のようなアレルギー反応又はこれと類似した反応を引起こさない非毒性の組成物を意味する。本発明の組成物は、前記薬学的に許容される担体とともに、この分野で公知の方法により、投与経路によって多様に剤形化できる。投与経路は、これに制限されないが、経口的又は非経口的に投与することができる。非経口的投与経路は例えば、経皮、鼻腔、腹腔、筋肉、皮下又は静脈などの多様な経路が含まれる。
【００６５】
非経口的に投与する場合、本発明の薬学的組成物は、適合した非経口用担体とともに注射剤、経皮投与剤及び鼻腔吸込み剤の形態で、この分野で公知の方法により剤形化することができる。前記注射剤の場合には必ず滅菌しなければならず、バクテリア及び真菌のような微生物の汚染から保護されるべきである。注射剤の場合、適した担体の例は、これに制限されないが、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）、これらの混合物及び／又は植物油を含む溶媒又は分散媒質が挙げられる。より好ましくは、適した担体には、ハンクス溶液、リンゲル溶液、トリエタノールアミンが含有されたPBSリン酸緩衝生理食塩水(phosphate buffered saline)又は注射用滅菌水、10%エタノール、40%プロピレングリコール及び5%デキストローズのような等張溶液などを使用できる。前記注射剤を微生物汚染から保護するために、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどのような多様な抗菌剤及び抗真菌剤をさらに含んでもよい。前記注射剤は殆どの場合、糖又はナトリウムクロライドのような等張化剤をさらに含むことができる。経皮投与剤の場合、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、外用液剤。パスター剤、リニメント剤、エアローゾル剤などの形態が含まれる。前記“経皮投与”とは、薬学的組成物を極所的に皮膚に投与して、薬学的組成物に含有された有効な量の活性成分が皮膚内に伝達されることを意味する。これらの剤形は製薬化学に一般的に、公知された処方書の文献(Remington's Pharmaceutical Science,15th Edition,1975,Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania)に記載されている。
【００６６】
その他の薬学的に許容される担体は、下記の文献に記載されているものを参考にすることができる(Remington's Pharmaceutical Science,19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995)。
【発明の効果】
【００６７】
以上述べた通り、本発明は、薬剤封入効率を増加させた高分子微粒球製造方法に関するものであって、より詳細には、内部水相(W1)及び油相(0)を製造する段階；内部水相と油相を混合してW1/0エマルジョンを製造して、冷却する段階；外部水相(W2)と混合してW1/0/W2エマルジョンを製造する段階；及び製造されたW1/0/W2エマルジョンを乾燥して回収する段階を含む高分子微粒球製造方法を提供する。本発明の方法は、油相を固定化させる過程を特定温度を特定時間以上維持する過程を通じて、薬剤封入効率を増加させ、高い薬剤含量を有する高分子微粒球を製造することができ、制御放出型薬剤製造に効果的である。
【発明を実施するための形態】
【００６８】
以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
ただし、下記実施例は本発明を例示するのみであって、本発明の内容が下記実施例に限定されるのではない。
【００６９】
＜比較例＞
一般的な方法で製造した微粒子の薬剤封入効率試験
【００７０】
＜比較例１＞W1/0エマルジョンの冷却に伴う封入効率測定
1gの蒸留水を、0.45gのリュープロレリンアセテート粉末と0.08gのゼラチン混合物に添加して、約60℃に加温しながら前記粉末を溶解させ、W1（内部水相）溶液を調製した。6.65gのジクロロメタンを4.0gのDL‐乳酸‐グリコール酸共重合体（重量平均分子量；10,000〜15,000)粉末に添加して、混合して０（油相）溶液を調製した。W1溶液を０溶液に添加してホモゲナイザー(homogenizer)でエマルジョン化させてW1/0エマルジョンを製造した。
【００７１】
W1/O相を約3℃で維持されたチラーを使用して粘度を増加させ、25℃に調節された1.0wt%ポリビニルアルコール(PVA)水溶液（1250ml、以下ボリュームは共通）を混合してホモミキサー(homomixer,Siverson,L4R)で撹拌してW1/0/W2エマルジョンを製造した。温度はエマルジョンを製造するあいだ継続して約25℃を維持した。製造されたW1/0/W2エマルジョンを４時間かけて乾燥させ、開口部が75μmのふるいを通じて濾過し、遠心分離して微粒子を回収した。回収した微粒子を蒸留水で再分散させ、混合後、繰返し遠心分離して十分に微粒子表面を洗浄して収得した高分子微粒子を凍結乾燥してリュープロレリンアセテートを含有した高分子微粒子（以後、“高分子微粒球”と称す）を得た。収得した高分子微粒球の薬剤含量及び薬剤封入効率を測定した。
【００７２】
高分子微粒球の薬剤含量測定試験は下記の方法で測定した。
【００７３】
高分子微粒球50mg程度を精密に計って100mL容量フラスコに入れて、DMSO 2mlで高分子微粒球を完全に溶かして表線を合わせ、超音波抽出して検液を製造し、液体クロマトグラフィー法で測定した。液体クロマトグラフィー法の分析は、
カラム：2.1mm x50mm,waters ACQUITY UPLC CSH C18 1.7μm 
検出器：紫外部吸光光度計（波長220nm)
流  速：0.5mL/min
移動相：0.2% トリフルオロ酢酸の水/アセトニトリル(75/25,v/v)溶液
の条件で行った。
【００７４】
実験の結果、比較例１の条件で実験した群は乾燥した高分子微粒球に含まれた薬剤の含量が3.4%（重量比）であって、薬剤封入効率は34.0%であることを確認した。
【００７５】
＜比較例２＞ W1/0/W2エマルジョン製造温度20℃の高分子微粒球の封入効率測定
0.5gの蒸留水を0.50gのリュープロレリンアセテート粉末と0.08gのゼラチン混合物に添加して、約60℃で加温しながら前記粉末を溶解させてW1溶液を調製した。8.0gのジクロロメタンを4.0gのDL‐乳酸‐グリコール酸共重合体（重量平均分子量；10,000〜15,000)粉末に添加して、混合して０溶液を調製した。W1溶液を０溶液に添加して、ホモゲナイザー(homogenizer)でエマルジョン化させ，W1/0エマルジョンを製造した。
【００７６】
W1/0相を約18℃で維持されたチラーを使用して粘度を増加させ、20℃に調節された1.0wt%ポリビニルアルコール(PVA)水溶液を混合してホモミキサー(homomizer,Siverson,L4R)で撹拌してW1/0/W2エマルジョンを製造した。エマルジョンを製造するあいだ継続して温度維持は比較例１より低い18℃〜20℃に維持し、時間によって維持される温度をチェックした。維持される温度は下記表１の通りである。製造されたW1/0/W2エマルジョンを４時間かけて乾燥させ、開口部が75μmのふるいを通じて濾過後、遠心分離して微粒子を回収した。回収した微粒子を蒸留水で再分散させて、混合後、繰返し遠心分離して十分に微粒子表面を洗浄した後、回収して凍結乾燥後高分子微粒球を収得した。収得した高分子微粒球の薬剤含量及び薬剤封入効率を比較例１と同様の方法で測定した。
【表１】
2017510664.tif 000002
【００７７】
実験の結果、比較例２の条件で実験した群の乾燥高分子微粒球に含まれた薬剤の含量は1.6%（重量比）であり、薬剤封入効率は15.0%であることを確認した。
【００７８】
これにより、W1/0/W2製造の際初期温度を20℃にし、以降18℃で維持した場合にも十分な薬剤封入効率を得られないことを確認した。
【００７９】
＜比較例３＞W1/0/W2エマルジョン製造温度18℃の高分子微粒球の封入効率測定
0.5gの蒸留水を0.50gのリュープロレリンアセテート粉末と0.08gのゼラチン混合物に添加して、約60℃で加温しながら前記粉末を溶解させ、W1溶液を調製した。8.0gのジクロロメタンを4.0gのDL‐乳酸‐グリコール酸共重合体（重量平均分子量：10,000〜15,000)粉末に添加して混合して０溶液を調製した。W1溶液を０溶液に添加して、ホモゲナイザーでエマルジョン化させてW1/Oエマルジョンを製造した。
【００８０】
W1相を約18℃に維持されたチラーを使用して粘度を増加させ、18℃に調節された0.25wt%ポリビニルアルコール水溶液を混合してホモミキサーで撹拌し、W1/0/W2エマルジョンを製造した。エマルジョンを製造するあいだ継続して温度維持は比較例１より低い18℃〜20℃に維持し、時間によって維持される温度は、比較例２とは異なり、初期温度を18℃から始めて、一定時間後20℃に維持させた。時間によって温度をチェックした。チェックした温度は表２の通りである。製造されたW1/0/W2エマルジョンを４時間かけて乾燥させ、開口部が75μmのふるいを通じて濾過後、遠心分離して微粒子を回収した。回収した微粒子を蒸留水で再分散させて、混合後繰返し遠心分離して十分に微粒子表面を洗浄した後、回収して凍結乾燥し、高分子微粒球を収得した。収得した高分子微粒球の薬剤含量及び薬剤封入効率を比較例１と同一な方法で測定した。
【００８１】
【表２】
2017510664.tif 000003
【００８２】
実験の結果、比較例３の条件で実験した群は、薬剤の含量が2.2%（重量比）であり、薬剤封入効率は20.2%であることを確認した。
【００８３】
これにより、W1/0/W2製造の際、初期温度を18℃にし、10分以内に、20℃に昇温して維持した場合にも十分な薬剤封入効率を得られないことを確認した。
【００８４】
＜実施例＞
本発明の方法で製造した微粒子の薬剤封入効率試験
＜実施例１＞W1/0/W2エマルジョン製造温度を18℃で10分以上維持した高分子微粒球の封入効率測定
0.5gの蒸留水を0.05gのリュープロレリンアセテート粉末と0.08gのゼラチン混合物に添加して、約60℃に加温しながら前記粉末を溶解させてW1溶液を調製した。8.0gのジクロロメタンを4.0gのDL‐乳酸‐グリコール酸共重合体（重量平均分子量：10,000〜15,000)粉末に添加して、混合して０溶液を調製した。W1溶液を０溶液に添加してホモゲナイザーでエマルジョン化させてW1/Oエマルジョンを製造した。
【００８５】
W1/O相を、約18℃に維持されたチラーを使用して、粘度を増加させ、18℃に調節された0.25wt%ポリビニルアルコール水溶液を混合して、ホモミキサーで撹拌し、W1/0/W2エマルジョンを製造した。エマルジョンを製造する間、温度は18℃から始まって10分間同一温度を維持し、徐々に昇温して60分で23℃になるようにした。時間によって温度をチェックした。チェックした温度は表３の通りである。製造されたW1/0/W2エマルジョンを４時間かけて乾燥させ、開口部が75μmのふるいを通じて濾過後、遠心分離して微粒子を回収した。回収した微粒子を蒸留水で再分散させて、混合後繰返し遠心分離して十分に微粒子表面を洗浄した後、回収して、凍結乾燥後高分子微粒球を収得した。収得した高分子微粒球の薬剤含量及び薬剤封入効率を比較例１と同一な方法で測定した。
【００８６】
【表３】
2017510664.tif 000004
【００８７】
実験の結果、実施例１の条件で実験した群は、薬剤の含量が8.1%（重量比）であり、薬剤封入効率は74.0%であることを確認した。
【００８８】
これにより、初期温度は同一であるが、10分以内に20℃まで昇温した比較例３に比べて10分後まで18℃を維持した実施例１の場合、薬剤含量及び薬剤封入効率が比較例３に比べて366%に著しく増加したことを確認した。これにより、W1/0/W2タイプの高分子微粒球製造の際、W2形成温度を18℃以下から始まり、その温度を10分以上維持する場合、薬剤含量及び薬剤封入効率が著しく向上することを確認した。
【００８９】
＜実施例２＞W1/0/W2エマルジョン製造温度15℃で30分以上維持した高分子微粒球の封入効率測定
1.0gの蒸留水を0.52gのリュープロレリンアセテート粉末と0.09gのゼラチン混合物に添加して、約60℃に加温しながら前記粉末を溶解させて、W1溶液を調製した。13.3gのジクロロメタンを4.0gのDL‐乳酸‐グリコール酸共重合体（重量平均分子量：10,000〜15,000)粉末に添加して、混合して０溶液を調製した。W1溶液を０溶液に添加して、ホモゲナイザーでエマルジョン化させて、W1/Oエマルジョンを製造した。
【００９０】
W1/O相を約15℃に維持されたチラーを使用してゲル化させ、15℃に調節された0.25wt%ポリビニルアルコール水溶液を混合して、ホモミキサーで撹拌し、W1/0/W2エマルジョンを製造した（回転数：約5,000rpm）。エマルジョンを製造するあいだ継続して温度維持は比較例４より低い15℃〜20℃に維持し、初期低温維持時間を増加させた。時間によって温度をチェックした。チェックした温度は表４の通りである。製造されたW1/0/W2エマルジョンを４時間かけて乾燥させ、開口部が75μmのふるいを通じて濾過後、遠心分離して微粒子を回収した。回収した微粒子を蒸留水で再分散させて、混合後、繰返し遠心分離して十分に微粒子表面を洗浄した後、回収して、凍結乾燥後高分子微粒球を収得した。収得した高分子微粒球の薬剤含量及び薬剤封入効率を、比較例１と同様の方法で測定した。
【００９１】
【表４】
2017510664.tif 000005
【００９２】
測定の結果、実施例２の条件で実験した群は、薬剤の含量が10.8%（重量比）であり、薬剤封入効率は96%であることを確認した。
【００９３】
これにより、実施例１に比べてW2の臨界温度以下の維持時間を30分まで増加させた場合、より向上した薬剤封入効率が示されたことを確認した。
【００９４】
＜実施例３及び４＞W1/0/W2エマルジョン製造温度18℃以下に継続維持した高分子微粒球の封入効率測定
0.5gの蒸留水を0.50gのリュープロレリンアセテート粉末と0.08gのゼラチン混合物に添加し、約60℃で加温しながら前記粉末を溶解させ、W1溶液を調製した。8.0gのジクロロメタンを4.0gのDL‐乳酸‐グリコール酸共重合体（重量平均分子量：10,000〜15,000)粉末に添加して、混合して０溶液を調製した。W1溶液を０溶液に添加してホモゲナイザーでエマルジョン化させてW1/Oエマルジョンを製造した。
【００９５】
W1/0相を約18℃（実施例３）又は17℃（実施例４）に維持されたチラーを使用して，粘度を増加させ、18℃（実施例３）又は17℃（実施例４）に調節された0.25wt%ポリビニルアルコール水溶液を混合して、ホモミキサーで撹拌し、W1/0/W2エマルジョンを製造し、エマルジョンを製造する間、継続して18℃以下に維持し、時間によって温度をチェックした。維持温度は表５の通りである。製造されたW1/0/W2エマルジョンを４時間かけて乾燥させ、開口部が75μmのふるいを通じて濾過後、遠心分離して微粒子を回収した。回収した微粒子を蒸留水で再分散させて、混合後繰返し遠心分離して十分に微粒子表面を洗浄後回収して、凍結乾燥後高分子微粒球を収得した。収得した高分子微粒球の薬剤含量及び薬剤封入効率を、比較例１と同様の方法で測定した。
【００９６】
【表５】
2017510664.tif 000006
【００９７】
測定の結果、実施例３の条件で実験した群は、薬剤の含量が10.3%（重量比）であり、薬剤封入効率は94.0%であることを確認した。さらに、実施例４の条件で実験した群は、薬剤の含量が10.4%（重量比）であり、薬剤封入効率は95%であることを確認した。
【００９８】
これにより、W2を15℃〜18℃に維持する場合、従来の製造方法による場合より薬剤封入効率が向上するので、良好な薬剤封入を通じた高分子微粒球製造が可能であることを確認した。
【産業上の利用可能性】
【００９９】
本発明は薬剤封入効率を増加させた高分子微粒球の製造方法に関するものであって、より詳細には内部水相(W1)及び油相(O)を製造する段階；内部水相と油相を混合してW1/Oエマルジョンを製造して、冷却する段階；外部水相(W2)と混合してW1/0/W2エマルジョンを製造する段階；及び製造されたW1/0/W2エマルジョンを乾燥して回収する段階を含む高分子微粒球製造方法を提供する。本発明の方法は油相を固形化する過程を特定温度を特定時間以上維持する過程を通じて薬剤封入効率を増加させ、高い薬剤含量を有する高分子微粒球を製造することができて、制御放出型薬剤製造に効果的であることから、産業上の利用可能性が高い。
【国際調査報告】
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