(57)【要約】  本発明は、１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される、アルカプトン尿症の治療に使用するためのニチシノン（２−［２−ニトロ−４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−１，３−シクロヘキサンジオンに関する。本発明はまた、ニチシノンが１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される、アルカプトン尿症の治療に使用するためのニチシノンを含む医薬組成物に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される、アルカプトン尿症の治療に使用するためのニチシノン。
【請求項２】
１日あたり少なくとも６ｍｇの投薬量で投与される、請求項１に記載のニチシノン。
【請求項３】
１日あたり少なくとも８ｍｇの投薬量で投与される、請求項１又は２に記載のニチシノン。
【請求項４】
１日あたり少なくとも１０ｍｇの投薬量で投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項５】
１日あたり少なくとも４ｍｇから最大１５ｍｇの投薬量で投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項６】
１日あたり８〜１２ｍｇの投薬量で投与される、請求項１〜５のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項７】
１日あたり１０ｍｇの投薬量で投与される、請求項１〜６のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項８】
１日１回投与される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項９】
経口投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項１０】
１つ以上の医薬として許容される賦形剤と混合した、ニチシノンを含む医薬組成物として投与される、請求項１〜９のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項１１】
ニチシノンが１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される、アルカプトン尿症の治療に使用するためのニチシノンを含む医薬組成物。
【請求項１２】
ニチシノンが請求項２〜９のいずれか１項に定義される投薬量で投与される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
１つ以上の医薬として許容される賦形剤をさらに含む、請求項１１又は１２に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニトシノンが１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される、アルプトロプトン尿症の治療に使用するためのニチシノン（２−［２−ニトロ−４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−１，３−シクロヘキサンジオン）に関する。本発明はまた、ニチシノンが１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される、アルププトプトン尿症の治療に使用するためのニチシノンを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルカプトン尿症（ＡＫＵ）は、酵素ホモゲンチセート１，２−ジオキシゲナーゼ（ＨＧＤ）の欠乏によって引き起こされる常染色体劣性障害である。２５万人から１００万人ごとに約１人に影響を与える希少な疾患である。ＨＧＤがないため、アルカプトン尿症患者は、アミノ酸チロシンを完全に代謝することができず、その結果、ホモゲンチジン酸（ＨＧＡ）の血漿（または血清）レベルが高くなる。ＡＫＵ患者で形成されるＨＧＡの多くの効率的で顕著な尿排泄にもかかわらず、その一部は、ベンゾキノン酢酸（ＢＱＡ）を介してメラニン様ポリマー色素に酸化される。この色素ポリマーは、浸透圧と呼ばれる過程で結合組織（特に軟骨）に沈着する。これは、早期に発症する脊椎関節および滑膜関節の重度の関節炎を引き起こす。２０代後半または３０代前半まで、暗色の尿以外の臨床的特徴はほとんどない。その後、進行性関節炎の痛みが始まり、脊椎およびすべての滑膜関節に影響を及ぼす。高レベルのＨＧＡはさらに、心臓弁の損傷を引き起こし、腎臓結石や男性の前立腺結石の形成をもたらす。
【０００３】
現在、ＡＫＵ患者のＨＧＡを低下させるために利用可能な承認された得る薬理学的治療はなく、治療選択肢は、理学療法、外科手術および鎮痛を含む後遺症の治療に限定される。ＨＧＡのメラニン様ポリマー色素への酸化的変換を阻害するためのビタミンＣによる治療は、有用であることは証明されていない（Ｌａ  Ｄｕ．Ａｌｋａｐｔｏｎｕｒｉａ．Ｉｎ：Ｓｃｒｉｖｅｒ，Ｂｅａｕｄｅｔ，Ｓｌｙ，Ｖａｌｌｅ  ａｎｄ  Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ（ｅｄｓ），Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ．ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１，ｖｏｌ．２，ｐ．２１０９−２１２）。フェニルアラニンおよびチロシンの摂取を制限する食事療法は、成人におけるＨＧＡを十分に低下させるのに有効であることは示されておらず、ＡＫＵの症状を改善するための実証可能な有効性を有していない（ｄｅ  Ｈａａｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｈｅｒｉｔ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓ．１９９８，ｖｏｌ．２１，ｎｏ．８，ｐ．７９１−７９８）。そのような食事制限は、さらに維持することが困難である。
【０００４】
ニチシノンは、ＡＫＵ患者の血漿／血清ＨＧＡレベルおよび尿排泄を減少させることが示されている（Ｐｈｏｒｎｐｈｕｔｋｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２００２，ｖｏｌ．３４７，ｎｏ．２６，ｐ．２１１１−２１２１；Ｓｕｗａｎｎａｒａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ２００５，ｖｏｌ．５４，ｐ．７１９−７２８；Ｉｎｔｒｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｔａｂ．２０１１，ｖｏｌ．１０３，ｎｏ．４，ｐ．３０７−３１４）。
【０００５】
ニチシノン（２−［２−ニトロ−４−（トリフルオロメチル）ベンゾイル］−１，３−シクロヘキサンジオン）は、酵素４−ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ（ＨＰＰＤ）の競合阻害剤である。商品名Ｏｒｆａｄｉｎ（登録商標）で、４−ヒドロキシフェニルピルビン酸の代謝分解をブロックすることにより作用する、高脂血症１型（ＨＴ−１）の治療に使用される。それにより、ニチシノンは、ＨＴ−１患者におけるＨＧＡの形成、および毒性中間体マレイルアセトアセテート（ＭＡＡ）およびフマリルアセトアセテート（ＦＡＡ）の蓄積を防止する（スキーム１参照）。
【０００６】
ニチシノンは、２ｍｇ／日の投薬量で長期（３６ヶ月）臨床試験におけるＡＫＵの治療についても調査されている。ニチシノンの尿排泄は、前処置レベルと比較して平均約９５％低下したが、試験は一次有効性変数、股関節回転に影響を示さなかった（Ｉｎｔｒｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．Ｍｅｔａｂ．２０１１，ｖｏｌ．１０３，ｎｏ．４，ｐ．３０７−３１４）。
【発明の概要】
【０００７】
したがって、ＡＫＵの改善された治療が引き続き必要とされる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、すべての患者（未処置対照を含む）について基準時および４週目のＨＧＡの尿排泄のプロットを示す。
【図２】図２は、ニチシノンで治療された患者について４週目のｕ−ＨＧＡ24（μｍｏｌ）のプロットを示す。
【図３】図３は、ニチシノンで治療された患者の基準時および４週目のチロシンの１日平均血清濃度（μｍｏｌ／Ｌ）のプロットを示す。
【図４】図４は、すべての患者（未処置対照を含む）について４週目のＨＧＡの尿排泄およびチロシンの血清濃度のプロットを示す。
【図５】図５は、ニチシノンで治療された患者について４週目のＨＧＡの尿排泄およびチロシンの血清濃度のプロットを示す。
【図６】図６は、ニチシノンで治療された患者（毎日１〜８ｍｇ）について平均一日血清チロシン濃度とＨＧＡの尿排泄の間の関係を示す。
【図７】図７は、ニチシノンで治療された患者（毎日２〜８ｍｇ）について平均一日血清チロシン濃度とＨＧＡの尿排泄の間の関係を示す。ｕ−ＨＧＡ２４＝３４８４μｍｏｌおよびｓ−Ｔｙｒ  ＝５９６μｍｏｌ／Ｌである、２ｍｇニチシノンに対する１人の患者のデータは示されていない。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
ニチシノンを用いた治療の必然的な結果は、チロシンレベルの上昇である。したがって、ＨＴ−１の治療において、血漿チロシンレベルを５００μｍｏｌ／Ｌ未満に保つためには、より制限されたチロシンおよびフェニルアラニン食事を実施することが推奨される。食事制限が適用されない場合のアルカプトン尿症におけるニチシノンの３年間の研究では、未治療患者のチロシンレベルは約６０μＭであったのに対して、毎日ニチシノン２ｍｇを受けた患者２０人は３３２〜１５２８μＭのチロシンレベルを有し、平均８００μＭであった（Ｉｎｔｒｏｎｅら、上記）。安定であるが可変的に増加した血漿チロシン濃度は、ニチシノンの３〜４週間後に見られた。従って、チロシン濃度を食事制限なしで許容可能なレベル以下に保つことは困難である。
【００１０】
高血清チロシンレベルの臨床的結果の１つは、チロシン結晶の眼内での沈殿であり、角膜刺激または痛みをもたらす。患者はまた、視力のぼけまたは障害などの視力の問題を経験することもある。これらの症状は治療中止後に消失するが、治療を再開すると再発する。高血清チロシン濃度の別の臨床的結果は、認知機能に対する負の効果である。最近の研究（Ｂｅｎｄａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．２０１４，ｖｏｌ．１６４，ｎｏ．２，ｐ．３９８−４０１）において、ニチシノンで治療された小児のＩＱは、影響を受けていない兄弟よりもかなり低いことが判明した。別の研究（Ｍａｓｕｒｅｌ−Ｐａｕｌｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｈｅｒｉｔ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓ．２００８，ｖｏｌ．３１，ｎｏ．１，ｐ．８１−８７）は、認知障害を報告し、２３人の就学年齢の患者のうちＨＴ−１の８人をニチシノンで処置した。これら８人の患者のうち６人において、主要な認知障害（記憶および集中困難、遅さ）が認められた。
【００１１】
これらの副作用の観点から、血清チロシンレベルをできるだけ低く保つことが非常に重要である。健康な人では、通常、血清チロシンレベルは約４０〜９０μｍｏｌ／Ｌであり、５００μｍｏｌ／Ｌを超えるレベルは一般に避けなければならない。しかしながら、２ｍｇ／日のニチシノン投与量で、血清チロシンレベルはすでに６００〜１０００μｍｏｌ／Ｌである。
【００１２】
血清チロシンレベルの上昇は、ＨＰＰＤのニチシノンによる阻害の結果である（スキーム１参照）。したがって、血清または尿ＨＧＡのいずれもの減少は、血清チロシンの同時増加によって反映されると考えられた。たった２ｍｇ／日のニチシノン投薬量で観察された高血清チロシンレベルに関して、したがって、高濃度のニチシノンを使用することは不可能であると考えられた。これは、より高いチロシンレベルおよびより深刻なチロシン血症に関連する副作用さえ引き起こすためである。
【００１３】
【化１】
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【００１４】
本発明の基礎をなす試験中、ニチシノンの投薬量を増加させると、２４時間のＨＧＡの尿排泄（Ｕ−ＨＧＡ２４）は明らかな投薬量に関連した様式で減少することが見出された。しかしながら、ニチシノンの投薬量の増加に伴って、チロシンの平均血清濃度（ｓ−Ｔｙｒ）がわずかに増加したにもかかわらず、チロシンに対する投薬量−応答関係は、ＨＧＡの尿排泄で見られたものよりもあまり明確ではなかった。１つの例外を除いて、１日あたり２ｍｇ以上のニチシノン投薬量は、２０００μｍｏｌ未満のｕ−ＨＧＡ２４値をもたらした。ｕ−ＨＧＡ２４値が２０００μｍｏｌ未満に減少した場合、ｓ−Ｔｙｒ値とｕ−ＨＧＡ２４値の間に相関は見られなかった。
【００１５】
したがって、驚くべきことに、以前にアルカプトン尿症の治療に使用されていたよりもかなり高い投薬量でのニチシノンの投与は、血清中のチロシンレベルをさらにわずかに増加させるだけで、ＨＧＡの形成を９９％以上に抑制することができる。換言すれば、例えばチロシン関連の副作用のリスクを増加させることなく、ニチシノンの投薬量を増加させることができる。
【００１６】
したがって、第１の態様では、本発明は、ニプトシノンが１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される、アルカプトン尿症の治療に使用するためのニチシノンに関する。
【００１７】
本明細書に開示されるニチシノンの１日投薬量は、固定された１日投薬量を表す。これは、投薬量が、例えば、患者の体重に基づいて調整されないことを意味する。したがって、１日あたり少なくとも４ｍｇのニチシノンの投薬量は、患者に投与されるニチシノンの固定された１日投薬量の最低レベルを表す。
【００１８】
本発明の好ましい実施形態において、ニチシノンは、１日あたり少なくとも６ｍｇの投薬量で投与される。より好ましい実施形態において、ニチシノンは、１日あたり少なくとも８ｍｇの投薬量で投与される。さらにより好ましい実施形態において、ニチシノンは、１日あたり少なくとも１０ｍｇの投薬量で投与される。
【００１９】
１日あたり８ｍｇの投薬量でニチシノンを投与すると、ＨＧＡの尿排泄が＞９９％を超えるまで低下することが見出されている。１日あたり１０ｍｇの投薬量は、ＨＧＡの形成をほぼ完全に抑制するのに十分であると推定される。したがって、別の好ましい実施形態では、ニチシノンは１日あたり８〜１２ｍｇの投薬量で投与される。最も好ましい実施形態では、ニチシノンは１日あたり１０ｍｇの投薬量で投与される。
【００２０】
副作用の危険性を制限するために、ニチシノンの投薬量は１日あたり１５ｍｇを超えてはならない。そのような投薬量は、大部分の患者において約９９．９％までｕ−ＨＧＡを減少させるのに十分であるべきであるという外挿によって推定することができる。したがって、一実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも４ｍｇから最大１５ｍｇの投薬量で投与される。別の実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも６ｍｇから最大１５ｍｇの投薬量で投与される。さらに別の実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも８〜最大１５ｍｇの投薬量で投与される。さらに別の実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも１０ｍｇから最大１５ｍｇの投薬量で投与される。
【００２１】
本発明はまた、アルカプトン尿症を治療するための医薬の製造におけるニチシノンの使用に関し、ニチシノンは上記の投薬量で投与される。本発明はまた、上記の投薬量でそのような治療を必要とする患者にニチシノンを投与することを含む、アルカプトン尿症を治療するための方法に関する。
【００２２】
別の実施形態では、本発明は、本明細書に開示されるアルカプトン尿症の治療に使用のためのニチシノンに関し、ニチシノンが、１つ以上の医薬として許容される賦形剤と混合して、ニチシノンを含む医薬組成物として投与される。
【００２３】
別の態様では、本発明は、アルカプトン尿症の治療に使用するためのニチシノンを含む医薬組成物に関し、ニチシノンは１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される。好ましい実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも６ｍｇの投薬量で投与される。より好ましい実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも８ｍｇの投薬量で投与される。最も好ましい実施形態では、ニチシノンは１日あたり８ｍｇ〜１２ｍｇ、例えば１日あたり１０ｍｇの投薬量で投与される。別の実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも４から最大１５ｍｇの投薬量で投与される。別の実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも６ｍｇから最大１５ｍｇの投薬量で投与される。さらに別の実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも８から最大１５ｍｇの投薬量で投与される。さらに別の実施形態では、ニチシノンは、１日あたり少なくとも１０ｍｇから最大１５ｍｇの用量で投与される。ニチシノンを含む医薬組成物は、１つ以上の医薬として許容される賦形剤をさらに含んでもよい。
【００２４】
ニチシノンの１日投薬量は、１日１回投与される単回投薬量であってもよく、または１日数回投与される２回以上でより少ない投薬量に分割されてもよい。投与の頻度は一定のままであってもよく、または治療期間中に変動してもよい。好ましくは、ニチシノンは、単回投約として１日１回投与される。一実施形態では、ニチシノンは経口投与される。
【００２５】
ニチシノンは、１つ以上の医薬として許容される賦形剤と混合して、治療有効量の有効成分を含む組成物で投与することができる。ニチシノンを含む組成物は、例えば、カプセル、錠剤、溶液および経口分散液として製剤化することができる。経口投与に適切な液体医薬組成物は、ＷＯ２０１２／１７７２１４に開示されている。上記液体医薬組成物は、有効量の微粉化ニチシノンと、ｐＨが２．５〜３．５の範囲、好ましくはｐＨ３．０であるクエン酸緩衝液の懸濁液を含む。
【００２６】
本発明は、以下の実施例によってさらに説明されるが、これは、本発明を何ら限定するものではない。全ての引用文献および参考文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２７】
省略形
ＡＫＵ  アルカプトン尿症
Ｃav  ２４時間の投与間隔での平均血清濃度
ＦＡＡ  フマリルアセトアセテート
ＦＡＨ  フマリルアセトアセタートヒドロラーゼ
ＨＧＡ  ホモゲンチジン酸
ＨＧＤ  ホモゲンチセート１，２−ジオキシゲナーゼ
ＨＰＰＡ  ４−ヒドロキシフェニルピルビン酸
ＨＰＰＤ  ４−ヒドロキシフェニルピルビン酸ジオキシゲナーゼ
ＨＴ−１  １型遺伝性高脂血症
ＬＬＯＱ  定量下限
ＭＡＡ  マレイルアセトアセテート
ｓ−ＨＧＡ  ＨＧＡの血清濃度
ｓ−Ｔｙｒ  チロシンの血清濃度
ｕ−ＨＧＡ２４  ２４時間中のＨＧＡの尿排泄
【実施例】
【００２８】
実施例１
ニチシノンの投薬量−応答試験
方法
試験設計
無処置対照群を用いた無作為化されたオープンラベルのパラレル群の投薬量−応答試験を実施した。ＡＫＵ患者は、１日１回、１ｍｇ、２ｍｇ、４ｍｇ若しくは８ｍｇのいずれかでニチシノンを受けるように（経口投与）、又は処置なし（対照）となるように無作為化された。４０人の患者が無作為化され、５つのグループ（グループあたり８人の患者）に等しく分布された。
【００２９】
患者
試験対象患者基準
患者は、試験に含めるために次の基準を満たさなければならなかった。
−尿中ホモゲンチシン酸排泄値の上昇が確認されたことにより確認されたＡＫＵの診断。
−年齢≧１８歳。
−治験訪問のための治験現場への訪問を希望及び可能なこと。
−書面によるインフォームドコンセントも対して署名されていること。
【００３０】
除外基準
以下のいずれかの存在は、試験に含めることから患者を除外した。
−現在、妊娠中または授乳中であること。
−信頼できる避妊法を使用していないで、懐妊の潜在性を有する女性患者。
−ニチシノンまたは治験薬の成分のいずれかに対するアレルギーが知られていること。
−現在、角膜症または制御されていない緑内障。
−現在、悪性腫瘍。
−制御不能な高血圧（１８０ｍｍＨｇ以上の収縮期血圧または９５ｍｍＨｇ以上の拡張期血圧）。
−不安定な心血管疾患。
−血清カリウム＜３．０ｍｍｏｌ／Ｌ。
−ｅＧＦＲ＜６０ｍＬ／分。
−ＡＬＴ＞通常の３倍の上限。
−ヘモグロビン＜１０．０ｇ／ｄＬ。
−血小板＜１００×１０9／Ｌ。
−白血球数＜３．０×１０９／Ｌ。
−アルコール又は薬物乱用の既往歴。
−無作為化の３ヶ月以内に別の臨床試験に参加すること。
−無作為化の６０日以内のニチシノンによる治療を受けること。
−医療従事者との遵守またはコミュニケーションを妨げる精神医学的疾患または神経学的疾患。
−予期せぬことに、与えられた指示または試験手順に協力できない予期しない不可能性。
−治験責任医師の意見では、患者が試験対象に不適切とする他の医学的状態。
【００３１】
治療
ニチシノンは、４ｍｇ／ｍＬを含有する経口懸濁液として投与された。以下の投薬量を１日１回、朝に投与した：
１ｍｇ  ０．２５ｍｌ
２ｍｇ  ０．５０ｍｌ
４ｍｇ  １．００ｍｌ
８ｍｇ  ２．００ｍｌ
各投薬量は、８人の患者のグループに与えられ、８人の患者からなる未処置の対照グループがあった。
【００３２】
評価
尿中ＨＧＡ
２４時間にわたるＨＧＡの尿排泄（Ｕ−ＨＧＡ２４）を０週目、２週目および４週目に評価した。尿を３０ｍＬの５Ｎ  Ｈ2ＳＯ4を含む２．５Ｌボトルに回収した。回収間隔の正確な長さおよび回収した尿の量を記録した。尿中のＨＧＡ濃度を液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＬＣＭＳＭＳ）により測定した。回収された尿の量に濃度を掛け、２４時間の回収期間からのいずれかの逸脱を補正することにより、ＨＧＡの２４時間排泄を計算した（回収間隔内に試料がなかったという報告はなかった）。
【００３３】
血清チロシンおよびＨＧＡ
血清ＨＧＡ（ｓ−ＨＧＡ）およびチロシン（ｓ−Ｔｙｒ）濃度の測定は、０週目、２週目および４週目に行った。全来院時に、以下の時点で完全な２４時間プロファイルを決定した：（朝食後）および投与後の０．５、１、２、３、４、６、８、１０、１２、１５、１８、２４時間後。
【００３４】
血清中のＨＧＡおよびチロシンの濃度は、液体クロマトグラフィータンデム質量分析法（ＬＣＭＳＭＳ）によって測定した。ＨＧＡの定量限界（ＬＬＯＱ）は３．１μｍｏｌ／Ｌであった。
【００３５】
ＨＧＡおよびチロシンの最大および一日平均血清濃度を決定した。毎日の平均濃度は、台形則によって計算した濃度対時間曲線の面積を２４で除して求めた。
【００３６】
統計学
すべてのデータは、平均、標準偏差、中央値、最小値および最大値を含む記述統計学とともに提示される。
【００３７】
結果
人口統計および基準の特徴
患者基準データを表１に示す。
【００３８】
【表１】
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【００３９】
全体として、１３人の女性と２７人の男性がこの試験に参加した。全ての患者は本試験を完了し、試験の結果に影響を与えるプロトコルの偏差はなかった。
【００４０】
２４時間中のＨＧＡの尿排泄（ｕ−ＨＧＡ24）
基準および４週でのＨＧＡの尿排泄を表２に示す。ｕ−ＨＧＡ24の相対的減少を表３に示す。
【００４１】
【表２】
2017514820.tif 000005
【００４２】
【表３】
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【００４３】
結果は、図１（未処理の対照群を含む全ての患者）と、良好な分解能については図２（ニチシノン治療患者のみ）にグラフで示される。表および図から分かるように、ニチシノンによる治療は、ＨＧＡの尿排泄量の用量依存的な減少をもたらし、データの個人間の変動もまた用量の増加とともに減少する。
【００４４】
血清ＨＧＡ
合計１４人の患者は、すべての試料においてＨＧＡ濃度が定量下限値（３．１ｍｍｏｌ／Ｌ）を下回っていたため、この変数のすべての統計値を計算することも、これらの１４人のデータをグラフに含めることもできなかった。基準および４週目の２４時間のサンプリング期間のＨＧＡの平均血清濃度が表４において可能な限り示されている。
【００４５】
【表４】
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【００４６】
表４のデータは、多くの患者がＬＬＯＱを下回る濃度を有していたため、血清ＨＧＡの投薬量−応答関係に関して明確な結論を導くことができない。しかしながら、ＬＬＯＱを下回るＨＧＡ濃度を有する患者の数が増加することは、この変数についても投薬量−応答関係があったことを示している。２ｍｇについて３人の患者、４ｍｇについて４人、８ｍｇについて７人であった。２４時間の投薬間隔全体で回収したし量のいずれにおいても定量可能な濃度ではなった。
【００４７】
血清チロシン
２４時間にわたり測定されたチロシンの平均血清濃度は、基準および４週について表５に示される。
【００４８】
【表５】
2017514820.tif 000008
【００４９】
図３は、すべての投薬量について、基準および４週目のチロシンの一日平均血清濃度（μｍｏｌ／Ｌ）を示す。ｓ−Ｔｙｒの個体間変動はすべての投薬量について同じ大きさであることがわかる。
【００５０】
ｕＨＧＡ２４と血清チロシン間の相関
血清ＨＧＡ濃度または尿排泄量が減少したときにチロシン濃度がどのように上昇するかを例証するために、これらの変数を以下に示される一連の数値でまとめて提示する。
【００５１】
ｕ−ＨＧＡ２４の減少および血清チロシンの同時増加は、図４、およびより良い分解能について図５（ニチシノン治療患者のみ）における全ての患者について示される。
【００５２】
これらの図から、ＨＧＡの尿排泄は、ニチシノン投薬量の増加に伴って明確な投薬量−応答に関連した様式で減少することが分かる（最高投薬量について最大９９％を超える）。ｕ−ＨＧＡ24の個人間の変動性はまた、ニチシノンの投薬量の増加とともに減少する。
【００５３】
同時に、チロシンの血清濃度に対する投薬量−応答関係は、ｕ−ＨＧＡ24について観察されたものよりもあまり明確ではない。ニチシノンの投薬量の増加に伴って平均ｓ−Ｔｙｒがわずかに増加するが、最低投薬量（１ｍｇ）と最高投薬量（８ｍｇ）の間の増加は中程度である。さらに、ｓ−Ｔｙｒにおける個体間の変動性は、すべての用量について同じ大きさである。
【００５４】
ｕ−ＨＧＡ24と血清チロシン間の関係もまた図６に示される。ｓ−ＴｙｒとＵ−ＨＧＡ24の間に明確な相関はない。しかしながら、ＨＧＡ24が２０００μｍｏｌ以上である場合、ｓ−Ｔｙｒは５００〜７００μｍｏｌ／Ｌの範囲にある。ｕ−ＨＧＡ24が２０００μｍｏｌ以下に減少すると（すなわち、大部分の患者について２ｍｇ以上の投薬量である）、ｓ−Ｔｙｒは６００〜１０００μｍｏｌ／Ｌの範囲にあるが、ｓ−Ｔｙｒとｕ−ＨＧＡ24の間に相関はない。これは、図７に示されており、２ｍｇ、４ｍｇおよび８ｍｇ投薬量のデータのみが示されている（一人の患者について２ｍｇであるデータ、ｕ−ＨＧＡ24＝３４８４μｍｏｌおよびｓ−Ｔｙｒ＝５９６μｍｏｌ／Ｌ、示されていない）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年1月5日(2017.1.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される、ヒト患者のアルカプトン尿症の治療に使用するためのニチシノン。
【請求項２】
１日あたり少なくとも６ｍｇの投薬量で投与される、請求項１に記載のニチシノン。
【請求項３】
１日あたり少なくとも８ｍｇの投薬量で投与される、請求項１又は２に記載のニチシノン。
【請求項４】
１日あたり少なくとも１０ｍｇの投薬量で投与される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項５】
１日あたり少なくとも４ｍｇから最大１５ｍｇの投薬量で投与される、請求項１〜４のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項６】
１日あたり８〜１２ｍｇの投薬量で投与される、請求項１〜５のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項７】
１日あたり１０ｍｇの投薬量で投与される、請求項１〜６のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項８】
１日１回投与される、請求項１〜７のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項９】
経口投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項１０】
１つ以上の医薬として許容される賦形剤と混合した、ニチシノンを含む医薬組成物として投与される、請求項１〜９のいずれか１項に記載のニチシノン。
【請求項１１】
ニチシノンが１日あたり少なくとも４ｍｇの投薬量で投与される、アルカプトン尿症の治療に使用するためのニチシノンを含む医薬組成物。
【請求項１２】
ニチシノンが請求項２〜９のいずれか１項に定義される投薬量で投与される、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
１つ以上の医薬として許容される賦形剤をさらに含む、請求項１１又は１２に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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