(57)【要約】  本開示は、例えば、病原体の汚染を減らすことによって、殻付き卵の品質を向上させるための生物的防除の組み合わせおよび方法を提供し、この組み合わせは、少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分とを含み、殻付き卵の表面に塗布する前に、前記第１の成分と第２の成分を合わせて製剤にし、この方法は、生物的防除の組み合わせを殻付き卵に塗布する工程を含む。また、生物的防除の組み合わせと、その使用のための指示とを含むパッケージが本開示によって提供される。
2017522303.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
殻付き卵の品質を向上させる方法において使用するための生物的防除の組み合わせであって、
前記組み合わせは、少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分とを含み、前記殻付き卵の表面に塗布する前に、前記第１の成分と前記第２の成分とを合わせて製剤にする、生物的防除の組み合わせ。
【請求項２】
前記殻付き卵の品質の向上は、
（ａ）生物学的汚染を消毒すること、
（ｂ）前記製剤を受け入れた殻付き卵の集合からの代表的な卵を用いたハウ鮮度指数に従って決定される鮮度グレードが向上すること、
（ｃ）受精卵の孵化率が向上すること、
（ｄ）未受精卵の保存期間が延びること、
からなるパラメータの少なくとも１つによって示される、
請求項１に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項３】
前記生物学的汚染は、細菌病原体および真菌病原体からなる群から選択される１つ以上の病原体であり、前記生物的防除の組み合わせが、前記殻付き卵を消毒するための方法で使用される、
請求項２に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項４】
前記天然油は、植物油である、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項５】
前記天然油は、少なくとも１種類の精油を含む、
請求項４に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項６】
前記精油は、オレガノ油である、
請求項５に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項７】
前記植物油は、炭素を豊富に含む栄養油である、
請求項５に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項８】
前記粒状物質は、シリカ（ＳｉＯ２）粒子を含む、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項９】
粒状物質は、合成シリカビーズを含む、
請求項８に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１０】
前記粒状物質は、粒度分布が１０〜２５μｍの範囲である、
請求項１〜９のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１１】
前記粒状物質は、４００〜５００ｍ２Ｎ２／ｇの範囲の表面積、および、３００〜３５０ＤＢＰ／粒状物１００グラムの範囲の油保持能の少なくとも１つによって特徴付けられる、
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１２】
前記第１の成分の合計重量に対して０．１％〜２％（ｗ／ｖ）の量の天然油を含む、
請求項１〜１１のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１３】
少なくとも１種類の界面活性剤を含む、
請求項１〜１２のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１４】
前記界面活性剤は、脂肪酸カリウム塩を含む、
請求項１３に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１５】
前記第１の成分は、５％〜１０％の前記界面活性剤を含む、
請求項１２または１３に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１６】
前記第２の成分は、ゲルの形態である、
請求項１〜１５のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１７】
前記第２の成分は、１種類以上のゲル生成多糖類を含む、
請求項１〜１６のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１８】
前記拮抗細菌は、土壌伝染性細菌であるか、または、植物の部位から単離された細菌である、
請求項１〜１７のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項１９】
前記カクテル中のそれぞれの前記拮抗細菌は、唯一の炭素源としてのゴマ油上で成長することができる、
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項２０】
前記カクテル中に、総数が５００ＣＦＵ／ｍｌ〜５，０００ＣＦＵ／ｍｌの範囲のそれぞれの拮抗細菌を含む、
請求項１〜１９のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項２１】
拮抗細菌の前記カクテルは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ（登録番号ＣＢＳ１３３２５２）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｌｃａｌｉｐｈｉｌａ（登録番号ＣＢＳ１３３２５４）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（登録番号ＣＢＳ１３３２５５）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｄｒｉｎａ（登録番号  ＣＢＳ１３３２５６）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ（登録番号ＣＢＳ１３３２５７）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ（登録番号ＣＢＳ１３３２５８）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ（登録番号ＣＢＳ１３４５６８）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐａｎｉｕｓ（登録番号ＣＢＳ１３３２５９）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａ（登録番号ＣＢＳ１３４５６６）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｈｉｓ（登録番号ＣＢＳ１３４５６７）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ（登録番号ＣＢＳ１３４５６８）からなる群から選択される少なくとも２種類の細菌を含む、
請求項１〜２０のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項２２】
少なくとも１つの無機塩を含む、
請求項１〜２１のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項２３】
前記無機塩は、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、アンモニウムトリサルフェート、硝酸アンモニウムカルシウム、硝酸カルシウム、リン酸二アンモニウム、リン酸一カルシウム、塩化カリウム、硝酸カリウムおよび硫酸カリウムからなる群から選択される、
請求項２２に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項２４】
前記無機塩は、前記第１の成分に対して１％〜３％（ｗ／ｗ）の量である、
請求項２２または２３に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項２５】
前記無機塩の量は、約１．５％〜約２．５％である、
請求項２４に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項２６】
少なくとも１種類の界面活性剤を含む、
請求項１〜２５のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせ。
【請求項２７】
殻付き卵の品質を向上させるための方法であって、
前記方法は、少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分とを含む、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の生物的防除の組み合わせの成分を含む生物的防除製剤を前記殻付き卵に塗布することを含む、方法。
【請求項２８】
前記卵に塗布するまでの最長で２４時間の時間枠の間に、前記生物的防除の組み合わせの前記第１の成分と前記第２の成分とを混合することを含む、
請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記製剤は、塗布の２時間前以降に調製される、
請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記混合することは、前記第１の成分を水に懸濁させてエマルションを生成することと、前記エマルションを、拮抗細菌の前記カクテルを含む第２の成分と混合することとを含む、
請求項２８または２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記第１の成分は、界面活性剤と、前記粒状物質に吸着した前記少なくとも１種類の天然油とを含み、第２の成分は、ゲルの形態の拮抗細菌の前記カクテルを含む、
請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記少なくとも１種類の無機塩を含む生物的防除製剤を供給するための塗布の前に、前記第１の成分と前記第２の成分に少なくとも１種類の無機塩を添加することを含む、
請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記生物的防除製剤は、前記卵を製剤に浸すこと、前記卵の殻に前記組成物を噴霧すること、前記組成物を吸収させた基材の上で前記卵を転がすこと、前記卵の殻に前記組成物を刷毛塗りすること、前記生物的防除製剤を含む霧に前記卵をさらすことのいずれか１つまたは組み合わせによって前記卵の殻に塗布される、
請求項２７〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
産卵日からの経過期間中に少なくとも１回、前記卵に生物的防除製剤を塗布することを含む、
請求項２７〜３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記製剤の最初の塗布の後に、前記生物的防除製剤を含む霧環境に前記卵をさらすことを含む、
請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
殻付き卵の品質を向上させるための生物的防除製剤を調製するための、
（ｉ）少なくとも１種類の天然油を含む粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、
（ｉｉ）拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分と、
を含む成分の生物的防除の組み合わせの使用。
【請求項３７】
前記殻付き卵の品質の向上は、（ｉ）生物学的汚染を消毒すること、（ｂ）前記製剤を受け入れた殻付き卵の集合からの代表的な卵を用いたハウ鮮度指数に従って決定される鮮度グレードが向上すること、（ｃ）受精卵の孵化率が上がること、（ｄ）未受精卵の保存期間が長くなること、からなるパラメータの少なくとも１つによって示される、
請求項３４に記載の使用。
【請求項３８】
土壌伝染性の病原体、空気によって運ばれる病原体、肥料病原体、および、水によって運ばれる病原体から選択される病原体を消毒するための、
請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記病原体は、細菌および真菌からなる群から選択される、
請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記病原体は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｅｓ、Ｐｅｎｅｃｉｌｌｉｕｍ  ｏｘａｌｉｃｕｍ、Ｐｅｎｅｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｕｇｕｌｏｓｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｇｒａｍｉｎａｒｉｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｍｕｃｏｒ  ｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｐｐ．、Ｃｌａｄｏｓｐｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｍｏｎｉｌｉａ  ｓｐｐ．からなる群から選択される真菌である、
請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
前記病原体は、Ｅ．Ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓ（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  Ｓｐｐ．、Ｓｅｒｒａｔｉａ  Ｍａｒｃｅｓｃｅｎｅｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐ．からなる群から選択される細菌である、
請求項３９に記載の使用。
【請求項４２】
少なくとも１種類の天然油を含む乾燥粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、微生物の病原体の拮抗薬を含む少なくとも１つの第２の成分とを混合して組み合わせを得ることを含む、殻付き卵を消毒するための生物的防除製剤を調製する方法。
【請求項４３】
前記組み合わせと、少なくとも１種類の無機塩とを混合することを含む、
請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記製剤は、請求項１〜２４のいずれか一項に定義されるとおりである、
請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４５】
殻付き卵の品質を向上させるためのパッケージであって、
（ａ）少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、
（ｂ）拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分と、
（ｃ）殻付き卵の品質を向上させるための生物的防除製剤を調製するための前記少なくとも１つの第１の成分と前記少なくとも１つの第２の成分とを使用するための指示であって、前記少なくとも１つの第１の成分と、前記少なくとも１つの第２の成分とを混合することを少なくとも含む前記指示と、
を含む、パッケージ。
【請求項４６】
前記指示は、請求項２７〜３５のいずれか一項に記載の方法を行うことを含む、
請求項４５に記載のパッケージ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、殻付き卵の病原体の生物的防除に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景技術）
本明細書に開示する特定事項に対する背景として関連すると考えられる参考文献を以下に列挙する。
【０００３】
−Ｉｎｎｅ  Ｇａｎｔｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｅｇｇ  ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓ」ＲＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ  ３３：７１８−７３８（２００９）。
【０００４】
−国際特許出願公開第ＷＯ０８／０８４４８５号。
−国際特許出願公開第ＷＯ１０／１０１６７９号。
上述の参考文献の提示は、これらの参考文献がいかなる様式にも本明細書に開示する特定事項の特許性に関連することを意味すると解釈すべきではない。
【０００５】
（背景）
養鶏業において、顧客の健康上の安全性を高めるために、もっと効果的な消毒技術の需要が増してきている。
【０００６】
卵の衛生が良好だと、卵の外殻の汚染量が減ることによって、初生雛の生存能力および品質と、消費卵の安全性が向上することがわかっている。卵の品質に影響を与える可能性がある細菌およびカビは、卵周囲の環境に多く存在し、特に、卵が置かれる土壌に多く存在する。卵の殻と接触すると、細菌およびカビは、殻を通って卵に入り込み、卵の品質において、種々の態様に影響を与えることがあり、特に、胚の死亡率を高め、黄身の感染を引き起こし、第一週での雛の死亡率の上昇などが起こり得る。
【０００７】
卵は、卵巣または経卵伝染による垂直伝播、または殻または経殻による水平伝播の２つの異なる経路によって汚染される場合がある。垂直伝播によって、細菌は、殻形成の前に、感染した生殖組織から卵に導入される。この伝播形態は、大部分が病原体の細菌、すなわち、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａに関連する。水平伝播は、通常、卵が、糞の排出も行う総排出腔を通って放出されるときに、卵の殻が糞で汚染されることから生じる。水平伝播は、農家、ペットおよびげっ歯類のような環境媒介生物を介する汚染も含む。
【０００８】
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  Ｅｎｔｅｒｉｔｉｄｉｓによる卵の汚染機構は、まとめられている［Ｉｎｎｅ  Ｇａｎｔｏｉｓ  ｅｔ  ａｌ．ＲＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ  ３３：７１８−７３８（２００９）］。
【０００９】
病原体の水平伝播を最低限にすることによって、卵の生産性を上げようとする試みは、卵をインキュベーションする間の環境条件の最適化、卵への抗菌剤注射、殻表面の微生物の数を減らすための燻蒸剤または他の種類の消毒剤での処理、衛生状態の向上などを含む。
【００１０】
それに加え、卵の殻を処理するための方法が開発された。酸化剤水溶液のような抗微生物剤の塗布や、他には、卵内部に浸透せず、卵の殻を覆うコーティングを生成することを伴う、抗菌剤を用いない処理が挙げられる。
【００１１】
例えば、ＷＯ０８／０８４４８５号は、（ａ）コーティング剤を含むコーティング組成物で卵の殻表面を処理し、卵の殻表面にコーティングを生成することと、（ｂ）孵化を起こさせるための条件下で卵をインキュベーションすることとを含み、前記種卵の孵化率が、（ａ）に定義されるように処理されていないコントロール卵と比較して向上する、種卵の孵化を向上させるための組成物および方法を記載する。
【００１２】
ＷＯ１０／１０１６７９号は、（ａ）液体溶媒と膜生成コーティング剤と１種類以上の界面活性剤とを含む液体コーティング組成物で卵の外側表面を処理することと、（ｂ）前記液体コーティング組成物から、卵の上にコーティングを生成することと、（ｃ）孵化を起こさせるための条件下で卵をインキュベーションすることとを含み、鳥類の卵の生産性は、（ａ）〜（ｂ）に定義されるように処理されていないコントロール卵と比較して高くなる、受精した鳥類の卵の生産性を高めるための方法を記載する。このコーティングは、殻の機械的な強化、有害な環境条件からの保護、汚染予防、卵の血統の識別を容易にし、保存期間中または運搬期間中の適切な気体の交換を可能にするために記載されている。
【発明の概要】
【００１３】
本開示は、殻付き卵の品質を向上させる方法で使用するための生物的防除の組み合わせであって、この生物的防除の組み合わせは、少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分とを含み、殻付き卵の表面に塗布する前に、前記第１の成分と第２の成分を合わせて生物的防除の製剤にする、生物的防除の組み合わせを提供する。
【００１４】
本開示との関連で、殻付き卵の品質の向上は、
（ａ）生物学的汚染を消毒すること、
（ｂ）ハウ鮮度指数を用い、前記製剤を受け入れた殻付き卵の集合からの代表的な卵を用いて決定されるような、殻付き卵の鮮度グレードが向上すること、
（ｃ）受精卵の孵化率が向上すること、
（ｄ）食用（未受精）卵の保存期間が長くなることといったパラメータの１つによって少なくとも示される。
【００１５】
別の態様によれば、本開示は、殻付き卵の品質を向上させるための方法であって、この方法は、本明細書に開示される生物的防除の組み合わせの成分を含む生物的防除製剤を殻付き卵に塗布することを含み、この生物的防除の組み合わせは、少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分とを含む、方法を提供する。
【００１６】
さらに別の態様によれば、本開示は、殻付き卵の品質を向上させるための生物的防除製剤を調製するための、（ｉ）少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、（ｉｉ）拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分とを含む成分の生物的防除の組み合わせの使用を提供する。
【００１７】
ある実施形態において、生物的防除の組み合わせは、少なくとも１つの第１の成分と少なくとも１つの第２の成分が別個に密閉された２部品のパッケージの形態で提供され、このパッケージは、殻付き卵の品質を向上させるための成分の使用のための指示をさらに含む。
【００１８】
本明細書に開示される特定事項をよりよく理解し、どのように実施され得るかを例示するために、添付の図面を参照しつつ、単なる非限定的な例として実施形態をここに記載する。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１Ａ〜１Ｂは、本明細書に開示される生物的防除製剤を使用して処理した卵の写真画像（図１Ａ）と、処理をせずに、コロニー（矢印で示される）を示す卵の写真画像（図１Ｂ）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本開示は、土壌伝染性の拮抗細菌（第１の成分）と天然油（第２の成分）、例えばオレガノ油およびゴマ油のカクテルから得られる水系製剤が、少なくとも鳥類の卵の表面の病原体付着量を、完全になくさないにしても、減らすのに効果的であったという知見に基づいている。この製剤は、２種類の活性成分、すなわち、細菌と天然油（粒状物質の上）のカクテルを使用前に混合することによって調製され、その効果は、得られた混合物に、一般的に使用される無機塩であるリン酸二アンモニウムを少量加えたときにさらに向上した。
【００２１】
生物的防除製剤の塗布により、汚染レベル（細菌および真菌のいずれかまたは両方）を下げ、さらに、または、受精卵の孵化率を向上させ、および／または食用（未受精）卵の保存期間を延ばすことのいずれか１つを示すことができる。
【００２２】
本明細書に開示される知見に基づき、本願発明者らは、本明細書に定義される少なくとも第１の成分および第２の成分によって提供される生物的防除製剤を塗布すると、殻付き卵（孵化用であるか、または食用であるかによらない）の品質に全体的に予測されない向上を与えたと結論付けた。
【００２３】
従って、その第１の態様によれば、本発明は、殻付き卵の品質を向上させる方法で使用するための生物的防除の組み合わせ（キットまたはパッケージの形態で与えられてもよい）であって、この組み合わせは、少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分とを含み、卵の殻の表面に使用する前に、第１の成分と第２の成分を合わせて生物的防除製剤にする、生物的防除の組み合わせを提供する。
【００２４】
さらなる態様によれば、本発明は、殻付き卵の品質を向上させるための方法であって、この方法は、少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む第１の成分と、本明細書に開示される拮抗細菌のカクテルを含む第２の成分とを含む生物的防除の組み合わせの成分を含む生物的防除製剤を殻付き卵に塗布することを含む、方法を提供する。
【００２５】
さらに、殻付き卵の品質を向上させるための生物的防除製剤（好ましくは、水系製剤）を調製するための、本明細書に定義される少なくとも１つの第１の成分と少なくとも１つの第２の成分とを含む成分の組み合わせの使用が、本開示のさらなる態様によって提供される。
【００２６】
さらになお、第４のさらなる態様によれば、殻付き卵の表面を消毒するための製剤を調製する方法が、本開示によって提供される。
最後に、本明細書には、殻付き卵の品質を向上させるためのパッケージであって、このパッケージは、少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む少なくとも１つの第１の成分と、拮抗細菌のカクテルを含む少なくとも１つの第２の成分と、殻付き卵の品質を向上させるための生物的防除製剤を調製するための前記少なくとも１つの第１の成分と前記少なくとも１つの第２の成分を使用するための指示とを含み、この指示が、前記少なくとも１つの第１の成分と、前記少なくとも１つの第２の成分とを混合することを少なくとも含む、パッケージが提供される。
【００２７】
以下の記載は、本開示のそれぞれの態様および全ての態様に適用する。
本開示との関連で、殻付き卵（すなわち、炭酸カルシウムを含む外側被覆を有する卵）の「品質の向上」と称する場合、限定されないが、卵の殻表面での病原体（例えば、真菌、細菌）汚染の減少、卵の中の病原体汚染の減少（典型的には、本開示に従って処理される卵の集合から採取したサンプル卵に基づいて決定される）；保存期間の延長（未処理の卵の保存期間と比較して）、ハウ指数に従って決定される鮮度の上昇、孵化レベルの上昇を含め、鳥類の育成分野で知られている任意のパラメータの向上を意味すると理解すべきであり、全て当該技術分野で知られている手順によって決定される。
【００２８】
さらに、本開示との関連で、「孵化率を上げる」は、孵化した卵の数の統計学的な増加および／または孵化した雛の良好な健康状態および当該技術分野で知られている任意の他のパラメータの上昇を示す。この増加は、未処理の卵の一群との比較に基づいて決定される。
【００２９】
さらになお、本開示との関連で、「保存期間を延ばす」は、同じ条件で保存した未処理の卵の鮮度と比較して、未受精卵の鮮度の（平均で）少なくとも１日の延長を示す。
製剤は、好ましくは水と共に、生物的防除の組み合わせの２つの成分（前記少なくとも１つの第１の成分および少なくとも１つの第２の成分）を少なくとも混合することによって調製される。２つの成分を混合した／合わした結果、生物的防除製剤が得られ、その内容を以下にさらに記載する。
【００３０】
ある実施形態において、生物的防除製剤は、調製してすぐに塗布され、すなわち、新しく調製された製剤であり、従って、混合は、塗布のすぐ前であると考えられる。新しく調製された製剤と称する場合、生物的防除の組み合わせ（すなわち、生物的防除製剤）の少なくとも第１の成分および第２の成分を混合してから４８時間以内、時に、２４時間以内、好ましくは、１２時間以内、または６時間以内に卵の殻に塗布されると理解すべきである。ある実施形態において、生物的防除の組み合わせは、２成分を混合してから約１２時間の時間枠の間に使用される。
【００３１】
この２種類の異なる成分（すなわち、少なくとも１つの第１の成分と、少なくとも１つの第２の成分）は、その内容が以下に記載されており、卵に塗布するのに適した生物的防除製剤を生成するように水で希釈する。
【００３２】
生物的防除製剤は、任意の種類の殻付き卵を消毒するのに適用可能であり、殻の表面の病原体付着量を少なくとも減らすのに効果的である。従って、本開示との関連で、卵と称する場合、卵白を保持する薄い膜の上に殻のコーティングを有する任意の卵を意味すると理解すべきである。殻は、固い殻または柔らかい殻であってもよい。ある実施形態において、殻は、鳥類（鳥）の卵の殻のような固い殻である。いくつかの他の実施形態において、殻は、ウミガメの殻のような柔らかい殻である。
【００３３】
ある実施形態において、卵は、鳥類（鳥）の卵である。任意の種類の鳥、例えば、愛玩用の鳥類、食用卵を産卵する鳥類および野生鳥類を含む。
食用卵を産卵する鳥と称する場合、卵を産卵する任意の種類の鳥を包含することを理解すべきであり、すなわち、未受精のときは哺乳動物によって消費され、限定されないが、食用卵の最も一般的な提供動物であるニワトリおよびカモ、キジ、ウズラ、ガチョウ、シチメンチョウ、ダチョウ、ハトおよびエミューのような他の食用の卵が挙げられる。
【００３４】
本開示に従ってその品質を向上させるために処理される卵は、食用（すなわち、未受精）卵または受精卵であってもよい。以下の例に示されるように、処理、具体的には、消毒は、孵化の品質を下げず、または害さず、そのため、生殖の品質に対して不活性であると考えられる。
【００３５】
本開示に従って得られる生物的防除製剤は、放し飼いの鳥の卵、および鳥小屋、鳥用の囲いまたはインキュベーターの中に置かれる卵に塗布することができる。いずれかの成長環境下で、卵の殻（柔らかいか、または固い）は、潜在的に種々の病原体、特に、雛の成長に影響を与え得る病原体または哺乳動物の取り扱いまたは卵（受精卵または未受精卵）の消費において疾患を引き起こし得る病原体を保有していることが知られている。
【００３６】
病原体と称する場合、特に、疾患を引き起こす生物学的薬剤を包含すると理解すべきである。限定されないが、土壌伝染性の病原体、空気によって運ばれる病原体、肥料病原体、水によって運ばれる病原体を含め、任意の供給源からの細菌、真菌および原生動物が挙げられるだろう。
【００３７】
ある実施形態において、病原体は、細菌または真菌である。
病原体が真菌である場合、疾患を引き起こす真菌の非限定的な例としては、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｅｓ、Ｐｅｎｅｃｉｌｌｉｕｍ  ｏｘａｌｉｃｕｍ、Ｐｅｎｅｃｉｌｌｉｕｍ  ｒｕｇｕｌｏｓｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｏｇｒａｍｉｎａｒｉｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｍｕｃｏｒ  ｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｓｐｐ．、Ｃｌａｄｏｓｐｒｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｓｐｐ．、Ｍｏｎｉｌｉａ  ｓｐｐ．からなる群から選択されるいずれかが挙げられる。
【００３８】
病原体が細菌である場合、疾患を引き起こす細菌の非限定的な例としては、Ｅ．Ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（例えば、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓ（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  Ｓｐｐ．、Ｓｅｒｒａｔｉａ  Ｍａｒｃｅｓｃｅｎｅｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐ．からなる群から選択されるいずれかが挙げられる。
【００３９】
この組み合わせは、少なくとも殻の表面に潜在的に存在する病原体の制御に効果的である。卵の殻の消毒または制御（または生物的防除）と称する場合、従来の統計学的試験によって決定されるような、卵表面に１種類以上の病原体が存在する結果としての疾患の進行リスクが統計学的に顕著に減ることであると理解すべきである。消毒は、少なくとも卵の殻の表面の１種類以上の病原体のレベル／濃度／量の減少、および前記表面の１種類以上の病原体の完全な排除を含んでいてもよい。ある実施形態において、消毒は、卵の殻の外側表面の病原体の少なくとも２対数分の減少を含む。
【００４０】
生物的防除製剤は、当該技術分野で利用可能な任意の技術によって塗布することができる。この技術としては、限定されないが、生物的防除の組み合わせの成分を合わせたものを含む製剤に卵を浸すこと、卵の殻に製剤を噴霧すること、前記製剤を吸収させた基材の上で卵を転がすこと、卵の殻に溶液を刷毛塗りすること、このような製剤から作られる霧に卵を入れるか、または霧の中に維持することが挙げられる。
【００４１】
ある好ましい実施形態において、生物的防除製剤は、生物的防除成分を合わせたものを含む溶液を卵に噴霧することによって塗布される。
この塗布によって、卵の殻にコーティングを与える。コーティングは、卵の殻の連続的な（完全な）コーティングであってもよく、または非連続であってもよく、すなわち、殻の表面は、コーティングのない領域と、天然油および／または少なくとも１種類の拮抗細菌によるコーティングを有する領域とを有するか、または、コーティングは、蜘蛛の巣の糸を構成する組み合わせを用いた網状または蜘蛛の巣状のコーティングである。
【００４２】
ある実施形態において、この連続または非連続のコーティングは、卵の中から、または卵の中への気体の交換に関し、不活性である。言い換えると、塗布した組み合わせによって作られるコーティングは、卵の内側（卵内部）と外側表面との間の酸素または他の気体の交換を妨害しない。
【００４３】
ある実施形態において、生物的防除製剤は、内側の膜の外側に維持され、卵の内側の膜を超えて浸透せず、卵内部および卵白とは接触しない。
生物的防除の組み合わせは、販売または他の目的のために、産卵日から孵化するまで、またはインキュベーターまたは他の種類の囲いから取り出すまで（卵が食用卵の場合）の期間中、１回または１回より多く使用することができる。
【００４４】
生物的防除製剤の１回の塗布が、望ましい消毒効果を達成するのに十分な場合があるが、ある実施形態において、製剤は、卵が孵化するまで、または囲い／インキュベーターから移動するまで、少なくとも２回、時には、２回以上塗布される。
【００４５】
いくつかの他の実施形態において、生物的防除の組み合わせは、このようにして作られた製剤を卵に１回塗布し、次いで、生物的防除製剤を含む霧環境に連続的または周期的に卵を維持することによって使用される。
【００４６】
ここで、生物的防除の組み合わせの第１の成分および第２の成分の内容に戻る。
生物的防除の組み合わせの第１の成分および第２の成分の内容物（組成）は、本明細書で以下に記載され、公開番号第ＷＯ２０１４／１７０８９４号を有し、その内容が全体的に参考として本明細書に組み込まれる国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＬ２０１４／０５０３４８号にさらに詳細に記載される。
【００４７】
上述のように、使用前に、第１の成分と第２の成分を一緒に混合する。この混合の際に、安定なエマルションが得られ、次いで、これを水で希釈してもよく、消毒される卵に塗布するのに適している。ある実施形態において、この混合は、まず、少なくとも１つの第１の成分を水に懸濁させてエマルションを生成することと、次いで、このエマルションを少なくとも１つの第２の成分と混合することとを含む。さらなる物質（例えば、無機塩）を調製の任意の段階で加えてもよい。
【００４８】
第１の成分は、少なくとも１種類の天然油を保持する粒状物質を含む。
本開示との関連で、「粒状物質」との用語は、複数の粒子の形態の物質を示すために用いられる。粒子は、限定されないが、精密に丸いビーズからアモルファス構造までを含む任意の粒状形態であってもよい。粒状物質は、任意の形態の粉末を含む。
【００４９】
ある実施形態において、粒状物質は、二酸化ケイ素（ＳｉＯ２、短縮して本明細書ではシリカと称する）を含む。シリカは、天然に存在するシリカ粒子（例えば、ベントナイトクレイビーズ）および合成シリカビーズであってもよい。
【００５０】
ある実施形態において、粒状物質は、合成シリカ粒子を含む。本開示の観点で使用可能な種々の合成シリカ粒子が存在する。例えば、粒状物質は、沈殿した合成アモルファスシリカビーズ、例えば、Ｔｉｘｏｓｉｌ、Ｓｉｐｅｒｎａｔ  ５０Ｓ（ＳｉＯ２、２０μｍ）およびＡｅｒｏｓｉｌ  ２００といった市販製品を含んでいてもよい。
【００５１】
いくつかの他の実施形態において、粒状物質は、天然油を吸収する能力を有する、合成または天然に誘導されるビーズを含む。このようなビーズとしては、限定されないが、ラテックスビーズ；炭酸カルシウム吸収粒子；セルロースビーズ；ポリスチレン吸収ビーズ、例えば、疎水性の架橋したポリスチレンコポリマー吸収性樹脂であるＡｍｂｅｒｌｉｔｅ（登録商標）ＸＡＤ（登録商標）−２；石炭：ＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭビーズ；エマルサン−アルギネートビーズ；キトサンビーズ；アルギン酸ナトリウム；スチレン−マレイン酸コポリマービーズおよびスチレン−ジビニルベンゼンビーズ；セルロース紙ビーズが挙げられるだろう。
【００５２】
最終的な製剤を良好に分布させるために、ある実施形態によれば、粒状物質（粒子）は、粒度分布が１０〜２５μｍの範囲である。
粒状物質は、限定されないが、ある実施形態において、４００〜５００ｍ２  Ｎ２／ｇの範囲の表面積、３００〜３５０ＤＢＰ／粒状物１００グラムの範囲の油保持能の１つ以上によって特徴付けられてもよい。
【００５３】
少なくとも１つの第１の成分は、天然油の１種類以上の組み合わせを保持する粒状物質を含む。本開示との関連で、「天然油」は、天然から得られる任意の有機油を包含すると理解すべきである。
【００５４】
天然油は、好ましくは、植物から誘導される油である。ある実施形態において、天然油は、製油として知られる。
精油は、好ましくは、抗微生物特性（例えば、抗細菌特性、抗真菌特性、抗線虫特性）を示すことが知られている製油である。抗微生物特性と称する場合、以下にさらに記載するように、任意の微生物の病原体に対して効果的であると理解すべきである。これに限定されないが、本開示に従って使用される精油は、Ｏｒｉｇａｎｕｍ  ｖｕｌｇａｒｅ  ａｎｄ  Ｏｒｉｇａｎｕｍ  ｓｐｐ．（例えば、オレガノ）、Ｍｅｎｔｈａ  ｓｐｐ．（ミント）、Ｔｈｙｍｕｓ  ｓｐｐ．（タイム）、Ｍｙｒｔｕｓ  ｓｐｐ．、Ｏｃｉｍｕｎ  ｓｐｐ．（例えば、Ｏｃｉｍｕｎ  ｂａｓｉｌｉｃｕｍ、バジルとしても知られる）、Ｌａｖａｎｄｕｌａ  ｓｐｐ．（例えば、ラベンダー）、Ｍｉｃｒｏｍｅｒｉａ  ｓｐｐ．、Ｃｏｒｉａｎｄｕｍ  ｓｐｐ．（例えば、コリアンダー／パセリ）、Ａｌｏｙｓｉａ  ｓｐｐ．、Ｍｅｌｉｓｓａ  ｓｐｐ．、Ｓａｌｖｉａ  ｓｐｐ．、Ｐｅｔｏｓｅｌｉｎｕｍ  ｓｐｐ．、Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｓｐｐ．（例えば、ローズマリー）、Ｐｒｕｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．、Ｃｕｍｉｎｕｍ  ｓｐｐ（例えば、クミン）といった植物から誘導されるものであってもよい。
【００５５】
いくつかの他の実施形態において、天然油は、炭素源として、例えば、拮抗微生物のための餌／栄養分として使用される植物から誘導される油である。これらは、本明細書では、「炭素系油」または「炭素を豊富に含む栄養油」という用語で呼ばれる。ある実施形態において、炭素系油は、植物油である。これに限定されないが、炭素系油は、ゴマ油、オリーブ油、ピーナッツ油、綿実油、大豆油、パーム油、ヒマワリ油、ベニバナ油、キャノーラ油、ヒマシ油、ココナツ油、落花生油からなる群から選択される。
【００５６】
本開示との関連で、「天然油」と称する場合、１種類の油および油の組み合わせについて言及すると理解すべきである。ある実施形態において、天然油は、両方とも天然源であるような少なくとも１種類の精油と少なくとも１種類の炭素系油の組み合わせを包含する。
【００５７】
ある実施形態において、天然油は、少なくとも１種類の炭素系油と組み合わせて、少なくともオレガノ油を含む。オレガノ油を、時には、少なくともゴマ油と合わせる。
第１の成分中の（例えば、粒状物質によって保持される）天然油の量は、使用される天然油の種類、付着量、粒状物質の種類、粒状物質に天然油が付着する状態、付着のために使用される界面活性剤または溶媒などに依存して、さまざまであってもよい。
【００５８】
粒状物質への油の付着と称する場合、油と粒状物質（例えば、シリカ粒子）との任意の会合形態を意味すると理解すべきである。これに限定されないが、油は、粒子の上および／または中に吸収されることによって、粒状物質によって保持される。粒子と油の会合は可逆性であり、すなわち、適切な条件下で（例えば、水と接触する場合）、油は、粒子から簡単に放出され、エマルションを生成する。
【００５９】
ある実施形態において、粒状物質は、（付着の後に）粒状物質の合計重量の２０％〜５０％（ｗ／ｗ）の天然油を保持する。これも以下に例示されるように、ＨＰＬＣまたはＧＣクロマトグラフィーのような従来の技術によって決定される。いくつかの他の実施形態において、粒状物質は、約３０％（ｗ／ｗ）の天然油を保持する（「約」は、２５〜３５％、時には２８％〜３２％、または３０％付近の範囲を包含する）。
【００６０】
ある実施形態において、天然油は、製油のみ、または少なくとも１種類の製油と少なくとも１種類の炭素系（炭素を豊富に含む）油の組み合わせを含む。このように、天然油と称する場合、精油および炭素系油を包含すると理解すべきである。少なくとも１種類の精油と少なくとも１種類の炭素系油の比率は、６０：４０〜１００：０の範囲であり、時には、その範囲は、約８０：２０である。
【００６１】
油の組み合わせが使用される場合、粒状物質に一緒に吸収されてもよく、すなわち、同じ粒状物質が１種類より多い油を保持すると理解すべきである。ある実施形態において、取り扱いを容易にするために、それぞれの種類の油が、異なる種類の粒状物質が作られるように、粒状物質に別個に保持され、それぞれは、保持する油の種類によって特徴付けられる。
【００６２】
従って、オレガノとゴマを８０：２０の比率で与える粒状物質について言及する場合、８０％がオレガノ油を保有する粒状物質、２０％がゴマ油を保有する粒状物質の２種類の集合の混合物、またはそれぞれの粒子が所定の比率または望ましい比率で２種類の油を吸収した粒子の１種類の集合として理解すべきである（すなわち、油はあらかじめ混合され、次いで、吸収担体／粒子と接触させる）。油の種類にかかわらず、粒状物質の合計重量の２０％〜５０％が、粒状物質に付着した油によって提供される。
【００６３】
粒状物質は、少なくとも１種類の界面活性剤も含んでいてもよい。理解されるように、界面活性剤は、液体の表面張力を下げ、そのため、２種類の液体間の界面張力を下げ、例えば、エマルションを生成する化合物である。界面活性剤は、イオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤および双性イオン性（または非イオン性）界面活性剤を含め、使用しても安全である（例えば、植物または動物に対して非毒性である）と当該技術分野で知られている任意の種類の界面活性剤であってもよい。
【００６４】
ある実施形態において、界面活性剤は、有機農業に許容され得る界面活性剤である。本開示に従って使用される可能な界面活性剤の非限定的なリストとしては、ポリエチレングリコール、ソルビタントリオレエート（Ｔｗｅｅｎ、例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８５、Ｔｗｅｅｎ  ６５、Ｔｗｅｅｎ  Ｒ８５）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｓｐａｎ  ４０）、卵レシチン、Ｚｏｈａｒ  ＬＱ−２１５（脂肪酸カリウム）およびＺｏｈａｒ  ＰＴ−５０（脂肪酸カリウム）、Ｃａｒｖａｃｒｏｌが挙げられる。
【００６５】
いくつかの他の実施形態において、界面活性剤は、脂肪酸塩を含む。この塩は、カリウム塩、カルシウム塩、ナトリウム塩のようなアルカリおよびアンモニウム塩を含んでいてもよい。
【００６６】
ある実施形態において、脂肪酸塩は、脂肪酸のカリウム塩（石鹸塩としても知られる）を含み、時には、殺虫剤、除草剤、殺真菌剤および／または殺藻類剤として使用される。ある実施形態において、脂肪酸カリウム塩は、天然脂肪酸、例えば、動物脂肪および植物油の中に見出される天然脂肪酸に水酸化カリウムを添加することによって得られてもよい。脂肪酸は、オリーブ、綿の実、大豆、ピーナッツ、ヒマワリ、ココナツ、ナタネ、ゴマ油、アマランサス、トウモロコシ、ジャトロファから抽出されてもよい。
【００６７】
界面活性剤を生成する脂肪酸は、合成脂肪酸および半合成（例えば、修飾を受けた天然脂肪酸）であってもよい。
ある実施形態によれば、少なくとも１種類の界面活性剤は、殺虫活性および／または殺真菌活性を有すると認識されている界面活性剤であるか、または殺虫活性および／または殺真菌活性を有するというラベルが付けられている。限定されないが、殺虫性および／または殺真菌性の界面活性剤としては、Ｚｏｈａｒ  ＰＴ−５０およびＺｏｈａｒ  ＬＱ−２１５といった市販製品が挙げられ、両方ともＺｏｈａｒ  Ｄａｌｉａ（イスラエル）によって製造される。
【００６８】
特定の実施形態において、界面活性剤は、Ｚｏｈａｒ  ＰＴ−５０およびＺｏｈａｒ  ＬＱ−２１５から選択される。
これらの界面活性剤の組成は、Ｚｏｈａｒ  Ｄａｌｉａから入手可能である。例えば、Ｚｏｈａｒ  ＰＴ−５０は、以下の表１に示すような組成を有することが知られている。
【００６９】
【表１】
2017522303.tif 000003
第１の成分中の界面活性剤の量は、さまざまであってもよい。しかし、ある実施形態において、粒状物質は、界面活性剤または界面活性剤の組み合わせを５％〜１０％（ｗ／ｗ）含む。
【００７０】
第１の成分は、第２の成分と混合する前に、粒状物質を含み、本質的に乾燥した形態である。「本質的に乾燥した」と称する場合、第１の成分が、少量の水、ある実施形態において、１０％（ｗ／ｗ）を超えない量の水を含んでいてもよいと理解すべきである。ある他の実施形態またはさらなる実施形態において、第１の成分の含水量は、１％〜７％（ｗ／ｗ）の範囲内である。さらにいくつかの他の実施形態において、「本質的に乾燥した」は、従来の方法によって水が検出されない（すなわち、検出可能な量の水が存在しない）ことを包含すると理解すべきである。
【００７１】
第１の成分は、ある程度の痕跡量の有機溶媒も含有していてもよい。以下にさらに記載されるように、溶媒は、粒状物質の調製に必要な場合があり、その溶媒が毒性ではない限り、ある程度の残存量が残っていてもよい。ある実施形態において、第１の成分は、溶媒を含まない（すなわち、検出可能な量の有機溶媒を含有しない）か、または、痕跡量、すなわち、５％、４％、３％または２％（ｗ／ｗ）を超えない量の有機溶媒を含む。溶媒は、典型的には、有機揮発性極性溶媒であり、例えば、これに限定されないが、溶媒は、アセトン、イソプロピルアルコール（イソプロパノール、ＩＰＡ）、アセトニトリル、アセトン、エタノールおよびメタノールからなる群から選択される。ある実施形態において、痕跡量のアルコールが、第１の成分中で検出される。
【００７２】
第１の成分の粒状物質は、粒状物質が水または第２の成分と接触したときに安定なエマルションを生成する能力において固有である。このことは、特に、第１の成分中の界面活性剤の存在に起因して達成される。界面活性剤は、成分を乾燥させる前に、油を含む粒子に添加される。
【００７３】
安定なエマルションと称する場合、エマルションを生成してから少なくとも１時間、時には、少なくとも２時間、３時間、４時間、５時間、１０時間、１２時間、または２４時間後の水（分散媒体）中の油（分散相）の分散物について言及するものと理解すべきである。言い換えると、安定性は、油相と水相の分離がないことによって決定される。分離がないことは、視覚観察を含め、当該技術分野で知られた任意の方法によって決定されてもよい。
【００７４】
エマルションを生成するために、粒状物質を水と混合するか、または第２の成分を含有する水と混合する。水の量は、粒状物質の量に依存する。ある実施形態において、粒状物質１グラムに対し（その３０％が油である）、１リットルのエマルションを与えるように水が加えられる。そのため、１リットルのエマルション中、０．１グラムの粒状物質は、油濃度０．０３％（ｖ／ｖ）を与える。ある実施形態において、最終的なエマルション中の油の割合は、０．０３％〜２％（ｖ／ｖ）の範囲である。
【００７５】
ある実施形態において、粒状物質と水の混合によって、液滴の大きさが１〜２０μｍ、ある実施形態において、３〜１０μｍの範囲のエマルションが得られる。
ある実施形態において、エマルションは、抗微生物性エマルションである。
【００７６】
第２の成分に戻ると、第２の成分は、拮抗活性を有する。本開示との関連で、微生物の病原体の拮抗薬（拮抗細菌）または病原体の拮抗薬と称する場合、植物の病原体を阻害する生物学的存在であると理解するべきである（植物の病原体は、植物病原体（ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｇｅｎ）と呼ばれることもある）。阻害は、本開示との関連で、病原体の成長を少なくとも５０％、少なくとも７０％、少なくとも９０％減らすか、または病原体を本質的に除外すると理解すべきである。植物の病原体は、本発明との関連で、限定されないが、細菌、真菌、原生動物、線虫、または任意の他の疾患を引き起こす寄生虫を含め、原核生物または真核生物であってもよい。このように、少なくとも１つの拮抗薬の微生物活性は、抗細菌性、抗真菌性、抗原性動物性、抗線虫性などの任意の１つであってもよい。
【００７７】
第２の成分は、少なくとも２種類の拮抗細菌を含み、ある好ましい実施形態において、第２の成分は、数種類の拮抗薬のカクテルを含む。このカクテルは、２種類以上、時に、３種類、４種類、５種類、６種類、７種類、８種類、９種類、１０種類、１１種類、１２種類、１３種類、１４種類または１５種類の拮抗薬を同じ濃度または異なる濃度で合わせた組み合わせであると理解すべきである。
【００７８】
ある実施形態において、少なくとも１つの拮抗薬は、唯一の炭素源としてのゴマ油上で成長することができる種類の拮抗薬である。このような拮抗薬は、唯一の炭素源としてゴマを用いて従来の培養アッセイを行い、実験成長期間生き残った品種を同定することによって容易に同定されるだろう。具体的には、本開示に従って使用可能な拮抗細菌は、トマト黒斑細菌病の原因であるＣｌａｖｉｂａｃｔｅｒ  ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ  ｓｕｂｓｐ．Ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ（ＣＢＭ）に対して少なくとも拮抗活性をもたない他の細菌とは区別され得るもの、または炭素系油（例えば、ゴマ油）上で成長することができるものである。一実施形態において、全ての拮抗細菌が成長する（試験した非拮抗細菌は成長しない）炭素系油は、ゴマ油である。
【００７９】
ある実施形態において、拮抗薬は、静菌薬と呼ばれることもあり、すなわち、有機体の成長を遅らせ、いくつかの他の実施形態において、拮抗薬は、殺菌剤と呼ばれることがあり、すなわち、有機体を殺す。
【００８０】
ある実施形態において、微生物の病原体の少なくとも１種類の拮抗薬は、土壌伝染性の拮抗薬である。この観点で、少なくとも１つの拮抗薬は、微生物の病原体に耐性（例えば、部分的に抵抗性）または抵抗性であることが示された植物の根、土壌および／または根圏から得られ、単離されてもよいことを理解すべきである。
【００８１】
いくつかの他の実施形態において、微生物の病原体の拮抗薬は、例えば、植物の部位、例えば、葉、茎、花、脈管系から単離された植物から誘導される拮抗薬である。
微生物の病原体の拮抗薬は、土壌に存在し、そのため、土壌から誘導されてもよく（すなわち、土壌伝染性）、植物の部位（例えば、脈管系）から誘導されてもよい。
【００８２】
上述のように、少なくとも１つの第２の成分は、２種類より多い拮抗薬を含んでいてもよい。ある実施形態において、第２の成分は、同じゲル（すなわち、カクテル）に数種類の拮抗薬の組み合わせを含む。しかし、いくつかの他の実施形態において、拮抗薬の組み合わせが使用される場合、この組み合わせは、それぞれ別個のゲルに保有され、使用前にのみ混合することができる。組み合わせまたは２種類以上の拮抗細菌を使用する場合、この組み合わせは、本明細書では拮抗薬のカクテルと呼ばれる。
【００８３】
拮抗薬の組み合わせが使用される場合、拮抗薬は、同じ量（ＣＦＵ／ｍｌ）または異なる量で植物に与えられてもよい／塗布されてもよい。
ある実施形態によれば、第２の成分中の拮抗薬の量（単一の拮抗薬として、または拮抗薬のカクテルとして）は、５００〜５，０００ＣＦＵ／ｍｌの範囲であってもよい。拮抗薬間の比率は、カクテルとして使用される場合、処理される病原体の種類に依存して、さまざまであってもよく、従来の実験室での方法によって、例えば、培養皿中の最良の静菌／殺菌効果を前もって決定してもよい。
【００８４】
ある実施形態において、好ましい拮抗薬は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ（登録番号ＣＢＳ１３３２５２）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｌｃａｌｉｐｈｉｌａ（登録番号ＣＢＳ１３３２５４）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ（登録番号ＣＢＳ１３３２５５）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｅｄｒｉｎａ（登録番号  ＣＢＳ１３３２５６）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ（登録番号ＣＢＳ１３３２５７）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ  （Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ．ＣＢＳ１３３２５８）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ（登録番号ＣＢＳ１３４５６８）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐａｎｉｕｓ（登録番号ＣＢＳ１３３２５９）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａ（登録番号ＣＢＳ１３４５６６）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｈｉｓ（登録番号ＣＢＳ１３４５６７）からなる群から選択される。
【００８５】
上に列挙した少なくとも１種類の拮抗薬と組み合わせて使用可能な他の拮抗薬は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  Ｎｏｘｉｏｕｓ  Ａｎｉｍａｌｓ  ａｎｄ  Ｐｌａｎｔｓ［編集Ｐｈｉｌｉｐｐｅ  Ｃ．Ｎｉｃｏｔ  ２０１１］によるＲｅｐｏｒｔの表４に与えられ、その内容は、本明細書に参考として組み込まれる。
【００８６】
これに加え、上に列挙した少なくとも１つの好ましい拮抗薬と合わせる拮抗薬は、種々の文献、例えば、限定されないが、本明細書に参考として組み込まれる以下の文献の中に見出されるだろう。
【００８７】
【表２】
2017522303.tif 000004
上述のように、ある実施形態において、拮抗薬は、唯一の炭素源としてのゴマ油上で成長することができる種類の拮抗薬である。
【００８８】
生物的防除製剤を（エマルションの形態で）調製するために、水が使用される（ゲルからの水に加えて）。水が加えられる場合、水の合計量は、第１の成分の量に依存するだろう。ある実施形態において、第１の成分１グラムに対し（例えば、その３０％が油である）、第１の成分の１リットルのエマルションを与えるように水が加えられる。そのため、１リットルのエマルション中、０．１グラムの粒状物質は、油濃度０．０３％（ｖ／ｖ）を与える。
【００８９】
ある実施形態において、最終的なエマルション中の油の割合は、０．０３％〜２％（ｖ／ｖ）の範囲である。
上述のことに従って、最終的な製剤は、２０グラムの第１の成分の粉末（その３０％が油である）、１２０ｍｌの第２の成分の拮抗薬ゲルから与えられてもよく、第１の成分と第２の成分を水と混合し、０．３％（ｖ／ｖ）の油を含有する２０リットルのエマルションを生成する。
【００９０】
同様に、生物的防除製剤は、５０グラムまたは１００グラムの第１の成分の粉末と、１２０ｍｌの第２の成分の拮抗薬ゲルから与えられてもよく、第１の成分と第２の成分を水と混合し、０．３％（ｖ／ｖ）の油を含有する５０リットルまたは１００リットルのエマルションを生成する。
【００９１】
ある実施形態において、第１の成分および第２の成分を少なくとも１種類の無機塩とも合わせる。非限定的な例として示されるように、無機塩を添加すると、真菌成長に対する生物的防除製剤の活性のスペクトルおよび／または効率が少なくとも増加するため、消毒効果が向上した。
【００９２】
本開示に従って使用可能な種々の無機塩が存在する。これに限定されないが、無機塩は、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、アンモニウムトリサルフェート、硝酸アンモニウムカルシウム、硝酸カルシウム、リン酸二アンモニウム、リン酸一カルシウム、塩化カリウム、硝酸カリウムおよび硫酸カリウムからなる群から選択される１種類以上の塩であってもよい。
【００９３】
一実施形態において、無機塩は、リン酸二アンモニウム（ＤＡＰ）である。
ある実施形態において、無機塩は、第１の成分に対し、１％〜３％（ｗ／ｗ）の量であり、時に、約１．５％〜約２．５％、または約２％の量である。
【００９４】
無機塩は、最終的な製剤に第３の成分として加えられてもよく、または、第１の成分に含まれていてもよい。そのため、ある実施形態によれば、第１の成分は、少なくとも１種類の有機塩を含む。ある実施形態において、無機塩は、粒状物質によって運ばれる。
【００９５】
（いくつかの非限定的な例の記載）
生物的防除製剤
卵の生物的防除のための製剤は、乾燥粒状物質と拮抗細菌のカクテルの２成分を混合することによって調製した。
【００９６】
精油粉末の調製
（材料）
油粉末を調製するために、以下の材料を使用した。
【００９７】
天然油：
オレガノ油１００％（精油）およびゴマ油１００％（炭素系油）、両方ともＭａｋｅｓ  Ｓｃｅｎｔｓ  Ｎａｔｕｒａｌ  ＳＰＡ  ｌｉｎｅ（ランカスター、ＰＡ、ＵＳＡ）から購入した。
【００９８】
界面活性剤：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入したＣａｒｖａｃｒｏｌ。
シリカビーズ：Ｅｖｏｎｉｋ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ＡＧから購入したＳｉｐｅｒｎａｔ  ５０Ｓ（ＳｉＯ２、２０μｍ）。
【００９９】
溶媒：イソプロパノール（ＩＰＡ）、Ｇａｄｏｔ。
（方法）
実験室スケールの製造のために、２０〜５０ｍｌの大きさの実験瓶、スパチュラ、マグネチックスターラー、加熱プレートを含め、一般的な実験室のガラス機器の設定を用い、天然油、界面活性剤およびシリカビーズを含有する粉末を調製した。一般的に、天然油を計量し、２０ｍｌのバイアル中、それぞれを選択した界面活性剤と別個に混合し、このバイアルに溶媒を加えた。それぞれの油の混合物を混合し、均一な溶液が得られるまで、約４０℃の温度まで加熱した。この均一な溶液に、液体がシリカビーズに吸収されるまで、シリカビーズを加えた。全ての溶媒が蒸発するまで、瓶をドラフトに一晩放置した。
【０１００】
最終的な乾燥粉末中のそれぞれの油の付着量は、３０〜４２％であった。乾燥粉末は、２％〜７％の水を含有していた。
この油粉末の代替的な製剤は、公開番号ＷＯ２０１４／ＸＸＸＸＸＸを有し、その内容が全体的に本明細書に参考として組み込まれる国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＬ２０１４／０５０３４８号に詳細に記載される。
【０１０１】
拮抗薬カクテルの調製
（材料）
拮抗薬カクテルは、活性原理として、土壌伝染性細菌の混合物を含む。製造のための単離、同定および培養条件は、公開番号ＷＯ２０１４／ＸＸＸＸＸＸを有し、その内容が全体的に本明細書に参考として組み込まれる国際特許出願第ＰＣＴ／ＩＬ２０１４／０５０３４８号に詳細に記載される。
【０１０２】
表１は、ＣＢＳ−ＫＮＡＷ研究所に２０１２年１１月１９日に寄託し、最終的な組み合わせ／カクテルに使用される種のリストを提供する。これらの種は、グリコール溶液（１５％）中、−８０℃で保存した。
表１：寄託した拮抗薬
【０１０３】
【表３】
2017522303.tif 000005
（方法）
拮抗微生物ゲルの調製
表１に列挙した単離された拮抗薬を、増殖のために使用される培地（０．１５％の顆粒化寒天（Ｄｉｆｃｏ）を追加した、ペプトン（１０グラム／リットル）、酵母抽出物（２０グラム／リットル）、グリセロール（１０グラム／リットル）、ＭｇＳＯ４（０．１グラム／リットル）、ＣａＣＯ３（２グラム／リットル））が入ったエレンマイヤーフラスコに別個に移し、それぞれの拮抗薬の濃度は１０７〜１０８ＣＦＵ／ｍｌであり、２８℃で７２時間振とうした。その後、得られたゲル状のカクテルは、使用するまで室温でゲル形態を保持していた。この拮抗薬は、細菌の集合を２以下の対数分減少させつつ、この形態で１２ヶ月までこの形態を保つことができることが示されている。
【０１０４】
細菌の長期間保存
拮抗細菌は、拮抗細菌の長期間（２９４日）の生存を補助することがわかっている培地が入った寒天の形態で維持された。
【０１０５】
表１に列挙したそれぞれの拮抗細菌は、土壌炭素源であるオレガノ油を用いた長期間の培養期間生き残る能力によっても特徴付けられる。
生物的防除製剤の調製
卵に塗布する前に、オレガノ油とゴマ油を保有する乾燥粒状物質と、カクテル中にそれぞれの細菌を１０７〜１０８ＣＦＵ／ｍｌ保有する寒天ゲルとを混合することによって、生物的防除製剤を調製した。次いで、それぞれの細菌について１０３ＣＦＵ／ｍｌを下回らない濃度を得るように、この混合物を水で希釈した。
【０１０６】
最終物中の油粒状物質の濃度を、液体の重量／体積によって定義した。本明細書で与えられる種々の実験において、粒状物質の濃度は、０．０２％〜２．０％の範囲であり、各実験のための実際の濃度は、その実験に関連する文章中に示されている。
【０１０７】
油粒状物質と細胞カクテルを、所定の濃度（上に定義した範囲内）にするための量の水と混合した後、生物的防除カクテルを調製し、その調製から１２時間以内に使用する準備ができた。
【０１０８】
活性を上げるために、以下の１つ以上の添加剤も、粒状物質の重量に対し、２％（ｗ／ｗ）の濃度で製剤に混合した。炭酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸水素カリウム、二塩基性リン酸アンモニウム。
【０１０９】
次いで、この成分を、０．３％のゲルと０．５％の粉末を含み、合計体積が５０Ｌになるように水で希釈した。
卵の消毒
受精したニワトリの種卵に以下の実験を行った。それぞれの試験群は、産卵から２４時間までの１５個の卵を含んでいた。
【０１１０】
生物的防除製剤は、粒状物質の重量／体積によって定義される。拮抗薬カクテル中のそれぞれの細菌の量は同じであり、上に引用した範囲である。
実施例Ｉ
全部で７５個の卵を５つの処理群（群あたり１５個）に分け、過剰な生物的防除製剤が流れ落ちるまで、生物的防除製剤を加圧噴霧した。それぞれの群を、表２に詳細に示される異なる濃度の粒状物質で処理した。
表２：５００ｍｌの加圧噴霧機で、異なる濃度での消毒
【０１１１】
【表４】
2017522303.tif 000006
次いで、卵を８時間風乾させ、その時点で、以下の技術を用い、それぞれの卵を調べた。
【０１１２】
−両末端にスワブを有する培地を用いてサンプルを集める。一方は、細菌を集めるために使用され（細菌を培養するのに適した培地を保有する）、他方は、真菌を集めるために使用される（真菌を培養するのに適した培地を保有する）。
【０１１３】
−卵からサンプルを集める前に滅菌水で湿らせた二本の先端を有する綿スワブによってサンプルを集め、次いで、この綿の先端を卵の殻の上で交換することによって、それぞれの卵からサンプルを集める。次いで、それぞれの綿の先端をスワブから取り外し、９．５ｍｌの滅菌水が入った滅菌管に入れ、ボルテックス攪拌した。この管をサンプルの種々の希釈源として使用し、次いで、それぞれの希釈したサンプルを複数個ずつ作成し、真菌の培養または大腸菌群の培養のための培地を含むペトリ皿に置いた。
【０１１４】
３７℃で５日間インキュベーションした後、コロニーの数を計測し、代表的な結果が表３に与えられている。
表３：異なる濃度の生物的防除を用いて消毒した後のコロニー生成単位
【０１１５】
【表５】
2017522303.tif 000007
このアッセイを数回繰り返し、それぞれ同様の結果を与えたことを示している。これらの結果は、細菌が、病原体の真菌よりも消毒処理に対して感度が高かったという事実にかかわらず、卵の病原体の汚染を減らす際に、消毒処理が顕著に効果的であったことを示している。
【０１１６】
さらなる実験において、Ｅ．Ｃｏｌｉで人工的に汚染した卵で、生物的防除製剤の効果を試験した（ポジティブコントロールとして）。具体的には、卵に、電気噴霧機（Ｂｏｓｈ、ＰＦＳ５５）を用い、Ｅ．Ｃｏｌｉ溶液を液体が垂れ落ちるまで噴霧し、約４時間乾燥させ、その後、生物的防除製剤（粒子濃度０．８％）で卵を処理した。この実験を５回繰り返し、それぞれの回に、試験した群あたり６個の卵を試験した。
【０１１７】
８時間風乾させた後、滅菌水で湿らせた二本の先端を有する綿スワブを用いてそれぞれの卵を試験し、この綿の先端を卵の殻の上で、殻の異なる領域で少なくとも４回交換する。次いで、それぞれの綿の先端をスワブから取り外し、５ｍｌの滅菌水が入った滅菌管に入れ、十分にボルテックス攪拌した。この管をサンプルの種々の希釈源として使用し、次いで、それぞれの希釈したサンプルを、細菌または真菌の培養に適した培地を含むペトリ皿に置き、細菌の場合、３５℃で４８時間、または真菌の場合、２８℃で５日間インキュベーションした。次いで、コロニーを計測し、疑わしいものは同定に送った。この手順を５回繰り返し、３つの結果を表４に与えている。
表４：異なる濃度の生物的防除を用いて消毒した後のコロニー生成単位
【０１１８】
【表６】
2017522303.tif 000008
この結果は、卵の人工的な噴霧によって、病原体数が顕著に（対数単位で）増加したが、生物的防除製剤を用いた消毒は、細菌汚染および真菌汚染に対して両方とも効果的であったことを示す。
【０１１９】
なおさらなる実験において、条件は同じであるが、群あたり１７０個の卵を用い（合計で８５０個の卵）、同様の結果が得られ、０．４％の濃度から、処理の有効性に差が無かったことを示している。
【０１２０】
上の内容に基づき、０．６％（１．０グラム）、０．８％（２．０グラム）および１．０％（２．５グラム）を含む製剤、コントロールとして使用される水を用い、数回の同定試験を行った。
【０１２１】
表５Ａ〜５Ｂは、（同様の結果および同じ結論を与えるいくつかの実験のうち）２つの例示的な実験から得られた結果を示す。
表５Ａ：異なる濃度の生物的防除を用いて処理した後のコロニー生成単位
【０１２２】
【表７】
2017522303.tif 000009
【０１２３】
【表８】
2017522303.tif 000010
実施例−効果の持続時間
さらなる実験において、消毒処理の有効性の持続時間を評価した。具体的には、病原体汚染の量を、以下に示すように、処理日と処理から数日後に決定した。
【０１２４】
具体的には、卵（１５個）を、０．８％（２グラム）の粒状物質を含む生物的防除製剤または水（コントロールとして）のいずれかで処理した。上述（実施例１）のように、綿スワブ（上述のような）を用いて卵の殻表面からサンプルを採取し、５日間インキュベーションした。病原体数を表６に与えている。
表６：異なる濃度の生物的防除を用いて処理した後のコロニー生成単位
【０１２５】
【表９】
2017522303.tif 000011
この結果は、消毒処理が、噴霧から１０日後まで効果的であることを示す。特に、コントロール群の計測数も減っているが、生物的防除処理の後にのみ、計測数は「０」まで減少した。
【０１２６】
実施例ＩＩＩ−真菌成長に対する添加剤の影響
真菌成長に対する種々の添加剤の影響を調べた。試験した真菌は、Ｆｕｓａｒｉｕｍ  Ｓｐｐ．の２種類の単離物（単離物１番および単離物２番）、ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍおよびｔｒｙｃｈｏｄｅｒｍａを含んでいた。
【０１２７】
生物的防除製剤を用いずに、以下の非毒性の添加剤の影響を調べた。炭酸水素ナトリウム、リン酸二アンモニウム、硫酸マグネシウム七水和物、炭酸水素カリウム。これらの添加剤は、真菌成長阻害剤としての本願発明者らの以前の実験に基いて選択した。
【０１２８】
表７は、コロニー（センチメートル単位）の大きさに対し、添加したそれぞれの添加剤の量をまとめている。ペトリ皿中のコロニーの寸法（直径）が大きいほど、添加剤の阻害効果が低い。処理前のコロニーの初期の直径は、０．５ｃｍであった。従って、処理後に、直径が０．５ｃｍであることは、添加剤がコロニーの成長を防ぐのに効果的であったことの指標であった。
【０１２９】
この結果は、リン酸二ナトリウムが、真菌の成長を予防するのに最も効果的であったことも示す。
【０１３０】
【表１０】
2017522303.tif 000012
表７に示される結果に関し、リン酸二アンモニウムを生物的防除製剤との組み合わせのために選択した。具体的には、０．４％（ｗ／ｖ）の第１の成分（粒状物）を含む新しく調製した生物的防除製剤に、所定量のリン酸二アンモニウム（２％（ｗ／ｖ）ＤＡＰ）を加えた。真菌成長に対する混合物の影響をコントロール（水処理のみ）と比較して調べ、その結果を表８に提示する。
表８：真菌成長に対するリン酸二アンモニウムの影響
【０１３１】
【表１１】
2017522303.tif 000013
この表で、「＋＋＋」は、顕著な真菌の成長、すなわち、特定の処理の阻害効果がないことを示し、「＋＋」は、中程度の成長、すなわち、真菌成長に対する部分的な阻害効果を示し、「＋」は、ある程度成長するが顕著ではない成長、すなわち、成長に対する高い効果を示し、「−」は、成長しないこと、すなわち、顕著な抗真菌効果を示す。
【０１３２】
この結果は、市販の肥料ＤＡＰを生物的防除製剤に添加すると、真菌成長に対する生物的防除製剤の活性スペクトルおよび効率が上昇したことを示す。
実施例ＩＶ−孵化に対する生物的防除製剤の影響
孵化率に対する生物的防除製剤の影響も試験した。
【０１３３】
同じ群れからの卵を同じ日に集め、インキュベーションした。それぞれの卵に、電気噴霧機（Ｂｏｓｈ、ＰＦＳ５５）を用い、垂れ落ちるまで生物的防除製剤（粉末の濃度％は少ない（以下の表に示されるパーセント、それぞれの細菌の濃度は１０３ＣＦＵ／ｍｌで一定））を噴霧した。
【０１３４】
ポジティブコントロールとして、一群の卵に、鳥類および他の家禽類のための市販の消毒剤であるｂｒｏｍｏｓｅｐｔ  ５０％（５０％ジデシルジメチルアンモニウムブロミド溶液）を同様に噴霧した。この実験は、それぞれの繰り返しに８０個の卵を含む５回の繰り返しを含んでいた（合計４００個の卵を調べた）。それぞれの処理群を別個のトレイに置いた。孵化日に、販売に適した雛（従来の基準に従う）を数え、結果を表９にまとめている。
表９：孵化に対する生物的防除製剤の影響
【０１３５】
【表１２】
2017522303.tif 000014
この結果は、生物的防除製剤が、商業的な標準であるＢｒｏｍｏｓｅｐｔ  ５０％と少なくとも同様に効果的であったことを示す。
【０１３６】
実施例Ｖ−食用（未受精）卵の鮮度に対する生物的防除製剤の影響
この試験の目的は、食用卵の品質に重要な以下の因子に対する、本明細書に開示する生物的防除製剤の影響を決定することである。
【０１３７】
−大腸菌群による卵の殻の汚染制御；
−真菌およびカビによる卵の殻の汚染制御；
−汚染物質が殻を浸透するのを予防すること；
−所定の時間点（間隔）に沿って測定されるハウ単位に従う鮮度保存レベルによって決定される卵の保存期間の向上。
【０１３８】
（材料および方法）
処理３時間前に、農場から新鮮な未受精卵を集めた。
処理群は、以下のものを含んでいた。
【０１３９】
コントロール群−卵が処理を受けていない
処理群−２％の粒状物質と、５×１０４ＣＦＵ／ｍｌの数の細菌カクテルとを含む最終的な製剤を用いたＵＬＶ噴霧によって卵を処理した。
【０１４０】
コントロール群および処理群を７℃〜５℃；２５℃±２℃；３０℃±０．５℃、３０℃±０．５℃の種々の温度でインキュベーションした。
全ての群を部屋の（通常の）湿度で、または具体的に示されている場合、９０％より高い湿度（高湿度）でインキュベーションした。
【０１４１】
全インキュベーション時間は６０日間であり、以下の試験のために、１日目から１０日間隔で６個の卵のサンプルを採取した。（１）真菌の集合；（２）細菌の集合（Ｅ．ｃｏｌｉとＳａｌｍｏｎｅｌｌａ）；（３）鮮度−ハウ単位とグレード、後者は、以下の卵鮮度指数に従う。
ハウ単位             グレード
７２以上             ＡＡ
７１〜６０           Ａ
５９〜３１           Ｂ
３０以下             Ｃ
（結果）
Ａ．卵表面の汚染
以下の表１０Ａ〜１０Ｄは、大腸菌群のレベル（Ｅ．ｃｏｌｉおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐを合わせた／全集合に存在するＣＦＵ／卵）、卵表面の真菌、卵の鮮度グレードをインキュベーション温度の関数として与える。値は、全集合の平均である−ＣＦＵ／卵。
表１０Ａ−５℃〜７℃でインキュベーションした後の卵の品質
【０１４２】
【表１３】
2017522303.tif 000015
【０１４３】
【表１４】
2017522303.tif 000016
【０１４４】
【表１５】
2017522303.tif 000017
これに加え、２５℃、９０％より高い湿度で１４日間インキュベーションした後の処理済卵（図１Ａ）および未処理卵（図１Ｂ）の写真画像を示す図１Ａおよび図１Ｂを参照する。卵の殻での真菌の成長は、図１Ｂから明らかである。
【０１４５】
【表１６】
2017522303.tif 000018
特に、破壊した卵黄または乾燥した卵黄は、３０℃で３０日以上保存すると、卵の鮮度が維持されなかったことを示す。
【０１４６】
Ｂ．卵の中の汚染
以下の表１１Ａ〜１１Ｅは、大腸菌群のレベル（Ｅ．ｃｏｌｉおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐを合わせた／全集合に存在するＣＦＵ／卵）、卵内部の真菌（汚染物質の浸透度）をインキュベーション温度の関数として与える。値は、全集合の平均である−ＣＦＵ／卵。
【０１４７】
【表１７】
2017522303.tif 000019
【０１４８】
【表１８】
2017522303.tif 000020
【０１４９】
【表１９】
2017522303.tif 000021
【０１５０】
【表２０】
2017522303.tif 000022
【０１５１】
【表２１】
2017522303.tif 000023
上に提示した結果は、以下の結論を導く。
【０１５２】
−卵は、病原体を消費者に運ぶ可能性を有している。
−高い湿度は、卵の殻表面での大腸菌と真菌の成長を促進／補助し、卵内部に浸透する可能性がある。
【０１５３】
−冷蔵庫の外（７℃より高い温度）での卵の保存は、卵の鮮度グレードを下げる。
−全ての試験した条件下で、本明細書に開示する製剤を用いた処理は、コントロール（未処理）より優れており、グレードが高く、卵の殻表面および卵内部での真菌および大腸菌群の細菌（Ｅ．ｃｏｌｉとＳａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ．の複合物）による汚染が少ないことを示している。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【国際調査報告】
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