(57)【要約】様々なタイプの癌の治療における治療上利益を提供するための細胞毒性剤として有用でありうる新規なツブリシン誘導体単独で、または抗体との薬物複合体として提供される。ツブリシン誘導体は、メチル及びエチル置換ピペリジンを含むテトラペプチド構造からなる。ツブリシン複合体は、スクシンイミドリンカーを介してモノクローナル抗体をさらに含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2017510661.tif 000118
Ｉ
［式中：
Ｒ１は、ＣＨ３、またはＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｒ３は、ＨまたはＮＨ２であり、そして
ｎは、１または２である］
で示される構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
ｎが、１であり、Ｒ１が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、メチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３が、ＮＨ２である、請求項１に記載の化合物。.
【請求項５】
ｎが、１であり、Ｒ１が、メチルであり、Ｒ２が、メチルであり、そしてＲ３が、ＮＨ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
式（Ｉｉ）
【化２】
2017510661.tif 000119
（Ｉｉ）
で示される化合物。
【請求項７】
式（Ｉｉｉ）
【化３】
2017510661.tif 000120
（Ｉｉｉ）
で示される化合物。
【請求項８】
式（Ｉｉｉｉ）
【化４】
2017510661.tif 000121
（Ｉｉｉｉ）
で示される化合物。
【請求項９】
式（Ｉｉｖ）
【化５】
2017510661.tif 000122
（Ｉｉｖ）
で示される化合物。
【請求項１０】
式（Ｉｖ）
【化６】
2017510661.tif 000123
（Ｉｖ）
で示される化合物。
【請求項１１】
式（Ｉｖｉ）
【化７】
2017510661.tif 000124
（Ｉｖｉ）
で示される化合物。
【請求項１２】
式ＩＩ
【化８】
2017510661.tif 000125
（ＩＩ）
［式中：
Ｒ１は、ＣＨ３、またはＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｒ４は、ＣＨ３、（ＣＨ２）４ＮＨ２、または（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ５は、Ｈ、またはＣ（ＣＨ３）（ＣＨ３）であり、
Ｒ６は、ＮＨＣ（＝Ｏ）、またはＣＨ２であり、
ｎは、１または２であり；そして
ｍは、０、１、２、または３である］
で示される構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
ｎが１であり、Ｒ１が、メチルである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ２が、メチルである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３が、ＮＨ２である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１６】
ｎが１であり、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がメチルであり、そしてＲ３がＮＨ２である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ４が、（ＣＨ２）４ＮＨ２である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ５が、Ｈである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ６が、ＣＨ２である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項２０】
ｍが、１である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項２１】
ｎが、１であり、ｍが、１であり、Ｒ１が、メチルであり、Ｒ２が、メチルであり、Ｒ３が、ＮＨ２であり、Ｒ４が、（ＣＨ２）４ＮＨ２であり、Ｒ５が、Ｈであり、そしてＲ６が、ＣＨ２である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項２２】
式（ＩＩｉ）
【化９】
2017510661.tif 000126
（ＩＩｉ）
で示される化合物。
【請求項２３】
式（ＩＩｉｉ）
【化１０】
2017510661.tif 000127
（ＩＩｉｉ）
で示される化合物。
【請求項２４】
式（ＩＩｉｉｉ）
【化１１】
2017510661.tif 000128
（ＩＩｉｉｉ）
で示される化合物。
【請求項２５】
式（ＩＩｉｖ）
【化１２】
2017510661.tif 000129
（ＩＩｉｖ）
で示される化合物。
【請求項２６】
式ＩＩ
【化１３】
2017510661.tif 000130
（ＩＩ）
［式中：
Ｒ１は、ＣＨ３、またはＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり、
Ｒ４は、ＣＨ３、（ＣＨ２）４ＮＨ２、または（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）であり、
Ｒ６は、ＮＨＣ（＝Ｏ）、またはＣＨ２であり、
ｎは、１または２であり；そして
ｍは、０、１、２または３である］
で示される構造を有する化合物および抗体の複合体である、抗体薬物複合体。
【請求項２７】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項２６に記載の抗体薬物複合体。
【請求項２８】
前記抗体が、癌抗原に特異的である、請求項２６に記載の抗体薬物複合体。
【請求項２９】
前記抗体が、アレムツズマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、ゲムツズマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、またはトラスツズマブである、請求項２６に記載の抗体薬物複合体。
【請求項３０】
式（ＩＩｉ）
【化１４】
2017510661.tif 000131
（ＩＩｉ）
で示される化合物および抗体の複合体である、抗体薬物複合体。
【請求項３１】
式（ＩＩｉｉ）
【化１５】
2017510661.tif 000132
（ＩＩｉｉ）
で示される化合物および抗体の複合体である、抗体薬物複合体。
【請求項３２】
式（ＩＩｉｉｉ）
【化１６】
2017510661.tif 000133
（ＩＩｉｉｉ）
で示される化合物および抗体の複合体である、抗体薬物複合体。
【請求項３３】
式（ＩＩｉｖ）
【化１７】
2017510661.tif 000134
（ＩＩｉｖ）
で示される化合物および抗体の複合体である、抗体薬物複合体。
【請求項３４】
請求項１〜２５のいずれか１項に記載の化合物を含む、医薬組成物。
【請求項３５】
請求項２６〜３３のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体を含む、医薬組成物。
【請求項３６】
癌に罹っている対象に、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の化合物の有効量を投与することを特徴とする癌の治療方法。
【請求項３７】
前記対象が、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、神経膠芽腫、神経膠腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮体癌、骨髄腫、唾液腺癌、腎臓癌、基底細胞癌、メラノーマ、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、精巣癌、食道腺癌、頭頚部癌s、粘膜性卵巣癌、胆管細胞癌、または腎乳頭癌に罹っているものである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
癌に罹っている対象に、請求項２６〜３３のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体の有効量を投与することを特徴とする癌の治療方法。
【請求項３９】
前記対象が、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、神経膠芽腫、神経膠腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮体癌、骨髄腫、唾液腺癌、腎臓癌、基底細胞癌、メラノーマ、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、精巣癌、食道腺癌、頭頚部癌、粘膜性卵巣癌、胆管細胞癌、または腎乳頭癌である、請求項３８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
ツブリシン類は、粘液細菌から単離された細胞分裂停止テトラペプチドの一クラスである（Sasse F et al J. Antibiotics, 2000, 879）。ツブリシン類の共通の特徴は、それらのテトラペプチド構造にあり、そのうち、Ｉｌｅのみが天然に存在するアミノ酸であり、他の３つは、複雑な非天然アミノ酸：Ｍｅｐ（Ｒ−Ｎ−ピペコリン酸）、Ｔｕｖ（ツブバリン）およびＴｕｔ（ツブリロシン）またはＴｕｐ（ツブフェニルアラニン）である。のちにさらなるメンバーが公開された（Steinmettz et al, Angew. Chem. Int. Ed.2004, 4888）。ほとんどの天然に存在するツブリシンは、チューブリン多量体化の阻害に関連する癌細胞株に対してｐＭ細胞毒性活性を有する。ツブリシンの作用機序は、ツブリシンＡが、ベータ−チューブリン結合剤（ホモプシン、ドラスタチン、およびヘミアステリン）の他のビンカ領域よりチューブリン多量体化を阻害する際に有効であることを示したＳａｓｓｅ（Khalil MW et al ChemBioChem, 2006, 678）によって説明された。天然に存在するツブリシンは、ドラスタチンより一貫した高い毒性を示した。さらに、ツブリシンＡは、癌細胞株でアポトーシスを誘導することが報告され（Kaur G et al, Biochem. J, 2006, 235）、動物モデルにおいて強力な抗腫瘍活性に加えて抗血管形成活性が示された。これらの発見後、天然に存在するツブリシンの強力な能力を有する合成類似物質を発見することに多大な労力が注ぎ込まれた。Ｎ，Ｏ−アセタールを含有するＴｕｖの存在は、合成ツブリシン類を誘導し、それらの安定性に関する懸念を生じた。いくつかの群で同定された合成類似体は、細胞毒性活性を大きく損なうことなく、Ｎ，Ｏ−アセタールを単なるメチル基で置き代えられた（Patterson, A et al, Chem. Eur. J. 2007, 9534; Wipf P et al Org. Lett. 2007, 1605）。
【背景技術】
【０００２】
いくつかの報告は、ツブリシンの葉酸との複合体（Leamon CP et al, Cancer Res. 2008, 9839）、シクロデキストリンナノ複合体（Schluep TS et al Clin. Cancer Res. 2009, 15:181）ならびにデンドリマー複合体（Floyd WC, ChemMedChem 2011, 49）を開示している。１つの報告は、ツブリシンのモノクローナル抗体に対する複合体を開示する（ＵＳ２０１１／００２７２７４）。新規のツブリシン誘導体は、様々なタイプの癌の薬物複合体として単独で、他の化学療法薬との組み合わせ治療で、治療上の利益を提供するための細胞毒性剤として有用でありうる。
【発明の概要】
【０００３】
本開示は、式Ｉ：
【化１】
2017510661.tif 000002
Ｉ
［式中：
Ｒ１は、ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３；
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３；
Ｒ３は、ＨまたはＮＨ２であり；ならびに
ｎは、１または２である］
で示される構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【０００４】
ある態様において、ｎは、１であり、Ｒ１は、メチルである。
【０００５】
ある態様において、Ｒ２は、メチルである。
【０００６】
ある態様において、Ｒ３は、ＮＨ２である。
【０００７】
ある態様において、ｎは、１であり、Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、メチルであり、ならびにＲ３は、ＮＨ２である。式Ｉの化合物は、細胞毒性を有し、癌の治療に有用でありうる。
【０００８】
本本開示はまた、式ＩＩ：
【化２】
2017510661.tif 000003
（ＩＩ）
［式中：
Ｒ１は、ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ４は、ＣＨ３、（ＣＨ２）４ＮＨ２、または（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２であり；
Ｒ５は、Ｈ；Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）であり；
Ｒ６は、ＮＨＣ（＝Ｏ）またはＣＨ２であり；
ｎは、１または２であり；ならびに
ｍは、０、１、２、または３である］
で示される構造を有する化合物を提供する。
【０００９】
ある態様において、ｎは、１であり、Ｒ１は、メチルである。
【００１０】
ある態様において、Ｒ２は、メチルである。
【００１１】
ある態様において、Ｒ３は、ＮＨ２である。
【００１２】
ある態様において、ｎは、１であり、Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、メチルであり、ならびにＲ３は、ＮＨ２である。
【００１３】
ある態様において、Ｒ４は、（ＣＨ２）４ＮＨ２である。
【００１４】
ある態様において、Ｒ５は、Ｈである。
【００１５】
ある態様において、Ｒ６は、ＣＨ２である。
【００１６】
ある態様において、ｍは、１である。
【００１７】
ある態様において、ｎは、１であり、ｍは、１であり、Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、メチルであり、Ｒ３は、ＮＨ２であり、Ｒ４は、（ＣＨ２）４ＮＨ２であり、Ｒ５は、Ｈであり、ならびにＲ６は、ＣＨ２である。
【００１８】
式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物は、従来の手法により抗体に抱合されて、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を提供しうる。ある態様において、式ＩおよびＩＩの本開示化合物は、抗体のリジンまたはシステインにより抗体に抱合されて、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を提供しうる。抗体がモノクローナル抗体である本開示のいくつかの抗体薬物複合体が提供される。抗体が癌抗原に特異的である本開示の他の抗体薬物複合体が提供される。抗体が、アレムツズマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブ、セツキシマブ、ゲムツズマブ、イピリムマブ、オファツムマブ、パニツムマブ、リツキシマブ、トシツモマブ、またはトシツモマブである本開示の他の抗体薬物複合体が提供される。
【００１９】
本開示はまた、式Ｉの化合物またはその医薬的に許容される塩および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。本開示のＡＤＣおよび医薬的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【００２０】
本開示により、癌に罹っている対象に、有効量の式Ｉの化合物または式ＩＩの化合物を投与することを特徴とする癌の治療方法もまた提供される。本開示により、抗体に抱合された式Ｉの化合物または式ＩＩの化合物の抗体薬物複合体の有効量を投与することを特徴とする癌の治療方法もまた提供される。本開示のある態様において、前記対象は、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、神経膠芽腫、神経膠腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、乳癌、大腸癌、結腸直腸癌、子宮体癌、骨髄腫、唾液腺癌、腎臓癌、基底細胞癌、メラノーマ、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、精巣癌、食道腺癌、頭頚部癌、粘膜性卵巣癌、胆管細胞癌、または腎乳頭癌に罹っている患者である。
【００２１】
式Ｉの化合物を含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを特徴とする癌の治療方法もまた提供される。本開示により、本開示のＡＤＣを含む医薬組成物を、それを必要とする対象に投与することを特徴とする癌の治療方法もまた提供される。
【００２２】
ある態様において、前記方法は、少なくとも１つのさらなる治療剤を投与することをさらに特徴とする。ある態様において、少なくとも１つのさらなる治療剤は、放射性核種または化学療法薬である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本開示は、式Ｉ：
【化３】
2017510661.tif 000004
Ｉ
［式中：
Ｒ１は、ＣＨ３またはＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ３は、ＨまたはＮＨ２であり；ならびに
ｎは、１または２である］
で示される構造を有する化合物またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００２４】
ある態様において、ｎは、１であり、Ｒ１は、メチルである。
【００２５】
ある態様において、Ｒ２は、メチルである。
【００２６】
ある態様において、Ｒ３は、ＮＨ２である。
【００２７】
ある態様において、ｎは、１であり、Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、メチルであり、ならびにＲ３は、ＮＨ２である。
【００２８】
式Ｉによる本開示の化合物の特定の例には、化合物（Ｉｉ）〜（Ｉｖｉ）
【化４】
2017510661.tif 000005
（Ｉｉ）
【化５】
2017510661.tif 000006
（Ｉｉｉ）
【化６】
2017510661.tif 000007
（Ｉｉｉｉ）
【化７】
2017510661.tif 000008
（Ｉｉｖ）
【化８】
2017510661.tif 000009
（Ｉｖ）
【化９】
2017510661.tif 000010
（Ｉｖｉ）
が含まれる。
【００２９】
本開示は、式ＩＩ：
【化１０】
2017510661.tif 000011
（ＩＩ）
［式中：
Ｒ１は、ＣＨ３、またはＣＨ２ＣＨ３であり；
Ｒ２は、ＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ４は、ＣＨ３、（ＣＨ２）４ＮＨ２、または（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ２であり；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）であり；
Ｒ６は、ＮＨＣ（＝Ｏ）、またはＣＨ２であり；
ｎは、１または２であり；ならびに
ｍは、０、１、２、または３である］
の構造を有する化合物を提供する。
【００３０】
ある態様において、ｎは、１であり、Ｒ１は、メチルである。
【００３１】
ある態様において、Ｒ２は、メチルである。
【００３２】
ある態様において、Ｒ３は、ＮＨ２である。
【００３３】
ある態様において、ｎは、１であり、Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、メチルであり、ならびにＲ３は、ＮＨ２である。
【００３４】
ある態様において、Ｒ４は、（ＣＨ２）４ＮＨ２である。
【００３５】
ある態様において、Ｒ５は、Ｈである。
【００３６】
ある態様において、Ｒ６は、ＣＨ２である。
【００３７】
ある態様において、ｍは、１である。
【００３８】
式ＩＩによる本開示の化合物の具体的な例には、化合物（ＩＩｉ）〜（ＩＩｉｖ）
【化１１】
2017510661.tif 000012
（ＩＩｉ）
【化１２】
2017510661.tif 000013
（ＩＩｉｉ）
【化１３】
2017510661.tif 000014
（ＩＩｉｉｉ）
【化１４】
2017510661.tif 000015
（ＩＩｉｖ）
が含まれる。
【００３９】
本開示のある態様において、ｎは、１である。本開示の他の態様において、ｎは、２である。ｎが２である場合、ピペリジン環上のＲ１置換基は、環内の単一炭素原子であってもよく、あるいは、環内の異なる炭素原子であってもよい。本開示のある態様において、ｎが１である場合、前記環のＲ１置換基は、窒素に対してパラである。本開示の他の態様において、ｎが１である場合、Ｒ１置換基は、ピペリジン環内の窒素に対してメタである。
【００４０】
式ＩおよびＩＩの化合物は、抗体に抱合されて、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成していてもよい。ＡＤＣ複合体において、式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物は、それらが抱合されている抗体によって目的の治療標的に送達される治療部分として供される。式Ｉおよび式ＩＩの化合物および抗体の抱合によって形成されるＡＤＣを含む医薬組成物もまた提供される。式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物を用いるＡＤＣの調製方法もまた提供される。本開示のＡＤＣを投与することを特徴とするそれを必要とする癌の治療方法もまた提供される。本発明のＡＤＣを化学療法薬と組み合わせて投与することを特徴とする癌の治療方法もまた提供される。
【００４１】
本発明がより容易に理解できるようにするため、一定の用語が最初に定義される。さらなる定義は詳細な説明を通して説明される。
【００４２】
前記に記載の明細書は、当業者が実施態様を実施できるために十分であると考えられる。前記明細書および実施例は、一定の実施態様を詳細に記載し、本発明者らによって考えられる最良の様式を記載する。しかしながら、いかに詳細な記載がなされていたとしても、本実施態様は多くの方法で実施されてもよく、特許請求の範囲はそのいかなる均等物をも含むものであると理解される。
【００４３】
本発明を詳細に記載する前に、本発明は、特定の組成物またはプロセス工程に限定されるべきではなく、そのようなものは代えることができるものと理解されるべきである。本明細書および特許請求の範囲で用いられるように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」には、特に文脈が示していない限り、複数の対象が含まれるものである。用語「ａ」（または「ａｎ」）、ならびに用語「１つまたはそれ以上の」および「少なくとも１つの」は、本明細書で交換可能に用いることができる。
【００４４】
さらに、本明細書で用いられる「および／または」は、一方とともに、もしくは一方を有しない２つの特定の特徴または構成成分の各々の具体的な開示として解釈されるべきである。よって、本明細書で「Ａおよび／またはＢ」などの用語で用いられる用語「および／または」は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むものとされる。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの用語で用いられる用語「および／または」は、下記の態様の各々を包含するものとされる：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。
【００４５】
他で定義されていない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本開示に関連する当業者によって一般に理解される用語と同一の意味を有する。例えば、 the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press；およびthe Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、本開示で用いられる多くの用語の一般的な辞書の技術の１つを提供する。
【００４６】
単位、接頭辞、および記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）で認められた形で表示される。数字範囲は、その範囲を定義する数字が含まれる。特に断りがなければ、アミノ酸配列は、アミノ基からカルボキシ基の方向に左から右に記載される。本明細書で提供される表題は、様々な態様を限定するものではなく、本明細書を全体として参照しうる。よって、すぐ下で定義される用語は、明細書全体を参照して十分に定義されている。
【００４７】
用語「を含む」とともに態様が本明細書に記載される場合、「からなる」および／または「から必須としてなる」の用語で記載される類似する態様もまた提供されるものと理解される。
【００４８】
アミノ酸は、それらの一般に知られる三文字表記、またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会によって推奨される一文字表記のいずれかによって本明細書で示される。
【００４９】
用語「阻害する」、「妨害する」、および「抑制する」は、本明細書で交換可能に用いられ、生物学的活性の統計学的な有意な減少（活性の全阻害を含む）を意味する。例えば、「阻害」は、生物学的活性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％の減少を意味しうる。
【００５０】
細胞増殖は、細胞分裂の割合、および／または細胞分裂を経験する細胞集団内の細胞のフラクション、および／または最終分化または細胞死による細胞集団からの細胞喪失の割合（例えば、チミジン取り込み）を測定する当業者で認識されている技術を用いて試験することができる。
【００５１】
本明細書で交換可能に用いられる用語「抗体」または「免疫グロブリン」には、全体抗体およびそれらの抗原結合フラグメントもしくは単鎖、ならびにそれらの組み合わせ（例えば、二重特異性抗体）が含まれる。
【００５２】
典型的な抗体には、ジスルフィド結合によって相互接続されている少なくとも２つの重鎖（Ｈ）および２つの軽鎖（Ｌ）が含まれる。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、ＶＨと略称される）および重鎖定常領域（本明細書では、ＣＨと略称される）から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、ＶＬと略称される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬから構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＷ）と呼ばれるより保存されている領域で散在される相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性領域にさらに細分化することができる。各ＶＨおよびＶＬは、下記の順番でアミノ末端からカルボキシル末端に編成される３つのＣＤＲおよび４つのＦＷから構成される：ＦＷ１、ＣＤＲ１、ＦＷ２、ＣＤＲ２、ＦＷ３、ＣＤＲ３、ＦＷ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫グロブリンの宿主組織または因子（免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞および伝統的な補体系の第１因子（Ｃ１ｑ））を含む）への結合を介在することができる。本開示の抗体の例としては、典型的な抗体、ｓｃＦｖｓ、およびそれらの組み合わせであって、例えば、ｓｃＦｖは、典型的な抗体の重鎖および／または軽鎖のいずれかのＮ末端に共有結合しているか（例えば、ペプチド結合または化学リンカーにより）、あるいは典型的な抗体の重鎖および／または軽鎖に挿入されている。
【００５３】
用語「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位を介して、標的、例えば、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、またはこれらの組み合わせを認識し、特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で用いられるように、用語「抗体」には、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント）、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ジスルフィドで安定化したｓｃＦｖ、複数特異性抗体（例えば、少なくとも２つのインタクトな抗体および／またはその抗原結合フラグメントから作成された二重特異性抗体）、キメラ化抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原決定部分を含む融合タンパク質、ならびに抗原認識部位を含む他の改変免疫グロブリン分子（前記抗体が所望の生物学的活性を示す場合に限る）が包含される。
【００５４】
抗体は、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューとそれぞれ呼ばれるそれらの重鎖定常ドメインの同一性に基づいて、５つの主要なクラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ、またはそれらのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２）のいずれかでありうる。異なるクラスの免疫グロブリンは、異なる周知のサブユニット構造および三次立体構造を有する。抗体は、そのままであるか、あるいは毒素、放射性同位体などの他の分子に抱合されて、ＡＤＣを形成しうる。
【００５５】
用語「抗原結合フラグメント」は、インタクトな抗体の部分を意味し、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を示す。抗体の抗原結合機能が全長抗体のフラグメントによって達成されうることが当該技術分野で知られている。抗体フラグメントの例としては、下記に限定されないが、抗体フラグメントから形成されるＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント、直鎖抗体、単鎖抗体、および複数特異性抗体が挙げられる。
【００５６】
「モノクローナル抗体」は、単一抗原決定因子またはエピトープの高度に特異的な認識および結合に関連する均一な抗体集団を意味する。これは、典型的に、異なる抗原決定因子に対して異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。
【００５７】
用語「モノクローナル抗体」には、インタクトおよび全長モノクローナル抗体の両方ならびに抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、抗体部分を含む融合タンパク質、ならびに抗原認識部位を含む他の改変免疫グロブリン分子が包含される。さらに、「モノクローナル抗体」は、以下に限定されないが、ハイブリドーマ、ファージ選択、組み換え発現、および遺伝子組み換え動物（例えば、遺伝子組み換えマウスにおけるヒト抗体発現）による多くのいずれかの方法で作成されたこのような抗体を意味する。
【００５８】
用語「ヒト化抗体」は、最小限の非ヒト（例えば、マウス）配列を含有するように改変されている非ヒト（例えば、マウス）免疫グロブリンに由来する抗体を意味する。典型的に、ヒト化抗体は、ＣＤＲに由来する残基が、所望される特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター）のＣＤＲに由来する残基によって置き代えられるヒト免疫グロブリンである（Jones et al., 1986, Nature, 321:522-525；Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323-327；Verhoeyen et al., 1988, Science, 239:1534-1536）。ある例において、ヒト免疫グロブリンのＦＷ残基は、所望される特異性、および／または親和性、および／または能力を有する非ヒト種に由来する抗体における対応する残基で置き代えられる。
【００５９】
用語「抗体薬物複合体」（ＡＤＣ）は、少なくとも１つの式Ｉの化合物または式ＩＩの化合物に抱合された目的のエピトープに結合する少なくとも１つの抗体を含む複合体を意味する。式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物は、抗体に抱合されて抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を形成し、それにより式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物は、それらが抱合されている抗体によって目的の治療標的に送達される治療部分として供されうる。
【００６０】
ある態様において、ＡＤＣには、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、または１０個の治療部分が含まれる。ある特定の態様において、ＡＤＣには、２個、３個、または４個の治療部分が含まれる。ある態様において、全ての治療部分は、同一である。ある態様において、少なくとも１つの治療部分は、残りの部分と異なる。
【００６１】
治療部分は、式Ｉの化合物の単一分子または式ＩＩの化合物の単一分子を意味する。
【００６２】
用語「対象」は、動物（例えば、哺乳類）であって、下記に限定されないが、特定の治療のレシピエントであるヒト、非ヒト霊長類、げっ歯類などを意味する。典型的に、用語「対象」および「患者」は、ヒト対象について本明細書では交換可能に用いられる。
【００６３】
用語「医薬組成物」は、活性成分の生物学的活性を可能にするような形態であり、この組成物が投与される対象に許容されない毒性を有するさらなる成分を含有しない調製物を意味する。このような組成物は無菌でありうる。
【００６４】
「治療する」または「治療」または「治療するため」または「軽減する」または「軽減するため」などの用語は、（１）診断された病状または障害の症状を治癒し、遅延させ、軽減し、および／または進行を止める治療的手段、ならびに（２）標的とする病状または障害の発症を予防し、および／または遅延させる予防的もしくは予防手段の両方を意味する。よって、治療を必要とするものには、障害にすでに罹っているもの；障害に罹りやすいもの；ならびに障害が予防されるべきものが含まれる。ある態様において、対象は、患者が、例えば、特定タイプの癌の総合的、部分的、もしくは一次的な寛解を示す場合、本開示の方法による癌のために継続して「治療される」。
【００６５】
用語「癌」、「腫瘍」、「癌性」、および「悪性」は、制御されていない細胞増殖によって一般に特徴付けられる哺乳類における身体的状態を意味するか、または記載する。癌の例としては、以下に限定されないが、腺癌、リンパ腫、芽細胞腫、メラノーマ、肉腫、および白血病を含む癌が挙げられる。このような癌のより具体的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸癌、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、神経膠芽腫、神経膠腫、子宮頚癌、卵巣癌、肝臓癌（例えば、肝癌および肝細胞癌）、膀胱癌、乳癌（ホルモン介在性乳癌を含み、例えば、Innes et al. (2006) Br. J. Cancer 94:1057-1065を参照のこと）、大腸癌、結腸直腸癌、子宮体癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、唾液腺癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌およびウィルムス腫瘍、基底細胞癌、メラノーマ、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、精巣癌、食道腺癌、様々なタイプの頭頚部癌および粘液性起源の癌、例えば、粘膜性卵巣癌、胆管細胞癌（肝臓）、および腎乳頭癌が挙げられる。
【００６６】
本明細書で用いられる用語「細胞毒性剤」は、広く定義され、細胞の機能を抑制し、もしくは阻害し、および／または細胞（細胞死）の破壊を引き起こし、および／または抗悪性腫瘍／抗増殖性効果を示す物質を意味する。例えば、細胞毒性剤は、腫瘍性腫瘍細胞の発生、成熟、または拡大を直接的もしくは間接的に防ぐ。前記用語にはまた、細胞分裂停止効果のみを引き起こし、細胞毒性効果を生じないような薬剤が含まれる。前記用語には、下記で特定されるような化学療法薬、ならびに他のＨＥＲ２アンタゴニスト、抗血管形成薬、チロシンキナーゼ阻害剤、タンパク質キナーゼＡ阻害剤、サイトカインファミリーのメンバー、放射性同位体、ならびに細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素学的に活性な毒素などの毒素類が含まれる。
【００６７】
用語「化学療法薬」は、天然または合成化学化合物を含む用語「細胞毒性剤」の一部である。化学療法薬の例としては、アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン化合物、アルキルスルホネート、ならびにアルキル化作用を有する他の化合物、例えば、ニトロソ尿素、シスプラチンおよびダカルバジン；代謝拮抗剤、例えば、葉酸、プリンまたはピリミジンアンタゴニスト；分裂阻害剤、例えば、ビンカアルカロイドおよびポドフィロトキシン誘導体；細胞傷害性抗生物質およびカンプトテシン誘導体が挙げられる。他の化学治療薬は、アミホスチン（ｅｔｈｙｏｌ（登録商標））、シスプラチン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標））、リポソーマルドキソルビシン（ｄｏｘｉｌ（登録商標））、ゲムシタビン（ｇｅｍｚａｒ（登録商標））、ダウノルビシン、リポソーマルダウノルビシン（ｄａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、シタラビン、エトポシド、メトトレキセート、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ブレオマイシン、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、アルデスロイキン、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１、１０−ヒドロキシ−７−エチル−カンプトテシン（ＳＮ３８）、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））、ダカルバジン、フロキシウリジン、フルダラビン、ヒドロキシウレア、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、イリノテカン、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペグアスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロランブシルアロマターゼ阻害剤、およびこれらの組み合わせである。
【００６８】
本開示の方法によれば、本開示の化合物およびＡＤＣは、患者に投与されて癌に関する陽性治療寛解を促進しうる。癌治療に関する用語「陽性治療寛解」は、前記疾患に付随する症状における改善を意味する。
【００６９】
例えば、前記疾患における改善は、完全寛解として特徴付けることができる。用語「完全寛解」は、過去の試験結果の正常化を伴い、臨床的に検出可能な疾患の不存在を意味する。あるいは、前記疾患における改善は、部分寛解であるものとして分類することができる。「陽性治療寛解」には、癌の進行および／または期間の減少または阻害、癌の重症度の減少または軽減、および／または本開示の化合物の投与から生じるこれらの１つまたはそれ以上の症状の緩和が包含される。
【００７０】
具体的な態様において、このような用語は、本開示の化合物の投与による１個、２個もしくは３個またはそれ以上の結果を意味する：
（１）癌細胞集団の安定化、減少または排除；
（２）癌増殖の安定化または減少；
（３）癌形成の障害；
（４）原発性、局所性および／または転移性癌の根絶、除去、または制御；
（５）死亡率の低下；
（６）無病、無再発、無進行、および／または全体の生存、期間または割合の増加；
（７）寛解率、寛解持続期間、あるいは寛解または回復患者数の増加；
（８）入院率の低下；
（９）入院期間の減少；
（１０）癌の大きさが維持され、増加しないか、あるいは１０％以下、好ましくは５％以下、好ましくは４％以下、好ましくは２％以下で増加すること；
（１１）回復患者数の増加；ならびに
（１２）癌を治療するために別途に必要とされるであろう補助剤治療（例えば、化学療法またはホルモン療法）数の減少。
【００７１】
臨床的な寛解は、ＰＥＴ、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ放射線画像、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーもしくは蛍光標示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）解析、組織学的検査、肉眼所見、および血液化学検査などのスクリーニング技術（下記に限定されないが、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、クロマトグラフィーなどによって検出可能な変化を含む）を用いて評価することができる。これらの陽性治療寛解に加えて、治療を受けている対象は、疾患に関連する症状における改善の有益な効果を受けることができる。
【００７２】
本開示の化合物は、癌、例えば、大腸癌、肺癌、胃癌、頭頸部扁平細胞癌、および乳癌の治療に有用と知られているか、あるいは用いられているか、または現在使用中である、薬剤または薬剤の組み合わせを含む、癌のための公知の治療と組み合わせて用いることができる。抗癌剤には、悪性腫瘍、例えば、癌の増殖を治療するために用いられる薬物が含まれる。薬物治療は、単独で、または外科手術もしくは放射線療法などの他の治療と組み合わせて用いることができる。いくつかのクラスの薬物は、関連する臓器の性質に応じて、癌治療に用いることができる。例えば、乳癌は、一般にエストロゲン類によって刺激され、これらの性ホルモンを不活性化する薬物で治療することができる。同様に、前立腺癌は、男性ホルモンのアンドロゲンを不活性化する薬物で治療することができる。
【００７３】
本開示の特定の方法における使用のための抗癌剤としては、特に、抗体、代謝拮抗剤、アルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管標的薬、キナーゼ阻害剤、タンパク質合成阻害剤、免疫治療薬、ホルモン療法、グルココルチコイド、アロマターゼ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、化学療法薬、タンパク質キナーゼＢ阻害剤、フォスファチジルイノシトール ３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）阻害剤、ＲＬｒ９、ＣＤ２８９、酵素阻害剤、抗ＴＲＡＩＬ、ＭＥＫ阻害剤などが挙げられる。
【００７４】
組み合わせ治療が、別の治療薬の投与と組み合わせた本開示の化合物の投与を含む場合、本開示の方法には、別々の製剤または単一医薬製剤、およびいずれかの順序による連続投与を用いた共投与が包含される。ある態様において、本明細書に記載の式Ｉの化合物、式ＩＩの化合物、および／またはＡＤＣは、他の薬物と組み合わせて投与され、前記抗体または抗原結合フラグメント、変異型、またはこれらの誘導体、および治療薬は、連続して、いずれかの順序で、または一緒に（すなわち、同時に、または同一期間内に）投与することができる。
【００７５】
組み合わせ治療は、「相乗」を提供し、「相乗的な」効果を示すことができ、すなわち、その効果は、一緒に用いられる活性成分が、別々にそれらの化合物を用いることから生じる効果の合計よりも高い場合に達成される。相乗的効果は、活性成分が：（１）共製剤化され、投与されるか、あるいは合わせた単位用量製剤で一緒に送達され；（２）別々の製剤として交互に、もしくは並行して送達され；または（３）他の計画によって送達される場合に達成することができる。別の治療で送達される場合、相乗的効果は、化合物が、例えば、別のシリンジで異なる注射によって連続して投与されるか、または送達される場合に達成することができる。一般に、別の治療期間中、各活性成分の有効な用量は、連続して、すなわち、順次投与される一方、組み合わせ治療では、２つまたはそれ以上の活性成分の有効な用量は、一緒に投与される。
【００７６】
本開示（治療剤）の化合物およびＡＤＣは、経口、非経口、吸入または局所経路によって患者に投与されてもよい。本明細書で用いられる用語「非経口」としては、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸、または膣投与が挙げられる。しかしながら、本明細書の記載に適合する他の方法において、ＡＤＣは、本発明の化合物を選択的に標的として、治療薬を有害な細胞集団の部位に直接送達し、それによりその障害のある部位の治療薬への露出を増加させるために用いることができる。
【００７７】
本明細書に記載されるように、本開示の治療剤は、癌のインビボ治療のための医薬的に許容される組成物で投与することができる。典型的に、本開示の化合物は、静脈内投与のための溶液または（生理食塩水、５％ デキストロース、または同様の等張溶剤等とともに）静脈内溶液を調製するための再構成用の凍結乾燥された濃縮物として製剤化される。前記医薬組成物には、例えば、水、イオン交換剤、タンパク質、緩衝物質、および塩を含む医薬的に許容される担体が含まれうる。保存添加剤もまた存在しうる。担体は、溶媒または分散媒体でありうる。本明細書に記載の治療方法における使用に適する製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co.) 16th ed. (1980)に記載される。
【００７８】
ある場合において、無菌の注射溶液は、本開示の治療薬を適当な溶媒の必要な量で含ませ、続いて滅菌濾過することによって調製することができる。さらに、前記調製物は、包装され、キットの形態で販売することができる。このような製品は、添付された組成物が疾患または障害に罹っているか、または罹りやすい対象を治療するために有用であることを示す表示または添付文書を有しうる。
【００７９】
非経口製剤は、単回ボーラス投与、点滴または充填ボーラス投与、続いて維持投与が行われうる。これらの組成物は、具体的な固定または変動間隔、例えば、１日１回、または「必要に応じて」に基づいて投与することができる。
【００８０】
前記組成物は、単回用量、複数回用量として、または点滴で設定された期間にわたり投与することができる。投薬計画はまた、適切な所望の反応（例えば、治療または予防応答）を提供するように調整することができる。
【００８１】
例えば、大腸癌、肺癌、胃癌、頭頸部扁平上皮癌、メラノーマ、膵臓癌、前立腺癌、および乳癌を含む癌の治療のための本開示の組成物の治療上有効な用量は、投与方法、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトまたは動物であるか、他の投与される薬剤、および治療が予防または治療であるかを含む、多くの異なる因子によって変動する。通常、前記患者は、ヒトであるが、非ヒト哺乳類（遺伝子組み換え哺乳類を含む）もまた治療することができる。治療用量は、安全性および有効性を最適化するための当業者に公知の所定の方法を用いて漸増することができる。
【００８２】
投与される本開示の治療薬の量は、過度の実験を要することなく当業者によって容易に決定することができる。投与様式および薬剤の各量に影響を与える因子としては、以下に限定されないが、疾患の重症度、病歴、ならびに治療を受けている個体の年齢、身長、体重、健康、および身体状態が挙げられる。同様に、投与される抗ＨＥＲ２結合分子、例えば、抗体、またはそのフラグメント、変異型、もしくは誘導体の量は、投与様式に依存し、対象がこの薬の単一用量もしくは複数回用量を受けるかどうかに依存する。
【００８３】
本開示はまた、例えば、乳癌、大腸癌、肺癌、胃癌、頭頸部扁平上皮癌、メラノーマ、膵臓癌、および前立腺癌を含む癌のタイプの治療薬の製造における本開示の治療薬の使用について提供する。
【００８４】
本開示はまた、癌のタイプを治療するための対象の治療薬の製造における本開示の治療薬の使用について提供する。ある態様において、該薬は、少なくとも１つの他の療法で前もって治療を受けている対象に用いられる。
【００８５】
「前治療された」または「前治療」は、標的とする対象が、本開示の化合物を含む薬剤を受容する前に１つまたはそれ以上の他の療法を受容している（例えば、少なくとも１つの他の抗癌療法で治療されている）ことを意味する。前記対象は、治療前に前治療に対する応答者である必要はない。よって、薬剤を受容する対象は、過去の治療による前治療、または複数の治療を含む１つまたはそれ以上の過去の治療による前治療に応答し、または応答し得なかったものでありうる。
【００８６】
本開示はまた、治療薬および少なくとも１つの他の治療を、単一組成物で共投与を、あるいは別々の組成物で同時または重複時期で一緒に共投与を提供する。
【００８７】
本開示はまた、癌を治療するための対象の治療薬の製造における治療薬の使用であって、前記治療薬が、対象が少なくとも１つの他の療法で治療される前に投与される使用を提供する。
【実施例】
【００８８】
本開示の態様は、本開示の特定の化合物および中間体の製造、ならびに本開示の化合物の使用方法を詳細に記載する下記の非限定的な実施例を参照することによりさらに定義することができる。原料および方法の両方に対する多くの改変は、本開示の範囲から逸脱することなく実施することができることが当業者にとって明らかである。
【００８９】
他に示されていない限り：
（ｉ）特に記載されていなければ、操作が、室温または周囲温度、すなわち、１８−２５℃の範囲で行われる場合；温度は摂氏温度（℃）で付与され；
（ｉｉ）溶液は、無水硫酸ナトリウムもしくは硫酸マグネシウムで乾燥させ；有機溶媒の蒸発は、減圧下（４．５〜３０ｍｍＨｇ）にて３０℃までの浴温でロータリーエバポレーターを用いて行われ；
（ｉｉｉ）クロマトグラフィーは、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーを意味し；薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲルプレート上で行われ；
（ｉｖ）一般に、反応経過は、ＴＬＣまたは液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）に従い、反応時間は、例示のみを付与するに過ぎず；
（ｖ）最終生成物は、条件を満たしたプロトン核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルおよび／または質量スペクトルデータを示し；
（ｖｉ）収率は、例示のみを付与し、必ずしも精力的なプロセス開発によって得ることができるものではなくてもよく；より多くの物質が必要であれば調製を繰り返し；
（ｖｉｉ）付与される場合、他に記載がなければ、核磁気共鳴（ＮＭＲ）データは、主要な診断用プロトンのためのデルタ（Δ）値の形であり、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）と比較して１００万分の１（ｐｐｍ）で付与され、ｄ６−ＤＭＳＯ中で３００または４００ＭＨｚで測定され；
（ｖｉｉｉ）化学記号は、それらの通常の意味を示し；
（ｉｘ）溶媒比は、体積：体積（ｖ／ｖ）の用語で付与され；
（ｘ）化合物の精製は、１つまたはそれ以上の下記の方法を用いて行われ：
ａ）通常のシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー；
ｂ）シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（Ｉｓｃｏ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）分離システムを使用）：ＲｅｄｉＳｅｐ順相フラッシュカラム、流速、３０−４０ｍｌ／分（ＩＳＣＯ ＭＰＬＣ
ｃ）Ｇｉｌｓｏｎ ｓｅｍｉｐｒｅｐ ＨＰＬＣ分離システム：ＹＭＣ ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＱカラム、１００ｘ２０ｍｍ、Ｓ５μｍ １２ｎｍ、水（０．１％ トリフルオロ酢酸）および溶媒としてのアセトニトリル（０．１％ トリフルオロ酢酸），２０分；ならびに
（ｘｉ）下記の略語が用いられる：
Ｂｏｃ              ｔ−ブトキシカルボニル；
ＤＣＭ              ジクロロメタン；
ＤＩＡＤ            アゾジカルボン酸ジイソプロピル；
ＤＩＣ              Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド；
ＤＣＣ              Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド；
ＤＩＥＡ            ジエチルイソプロピルアミン；
ＤＭＡ              Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド；
ＤＭＦ              Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド；
ＥＤＣＩ            １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
ＥｔＯＡｃ          酢酸エチル；
Ｅｔ２Ｏ             ジエチルエーテル；
Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ    ９−フルオレニルメチル Ｎ−スクシンイミジル カルボネート
ＭｅＯＨ            メタノール；
Ｎａ２ＣＯ３         炭酸ナトリウム；
ＮａＨＣＯ３        炭酸水素ナトリウム；
ＲＴ                室温；
ＴＥＡ              トリエチルアミン
ＴＦＡ              トリフルオロ酢酸；
ＴＨＦ              テトラヒドロフラン
ＨＡＴＵ            １−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム ３−オキシド ヘキサフルオロホスフェート
ＤＡＳＴ            三フッ化ジエチルアミノ硫黄
ＡＣＮ              アセトニトリル
Ｂｏｃ２Ｏ           二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル
メルドラム酸        ２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−４，６−ジオン
【００９０】
化合物１〜５の合成のための一般的スキーム
【化１５】
2017510661.tif 000016
【００９１】
中間体１
【化１６】
2017510661.tif 000017
ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）および水（４０．０ｍＬ）中の（２Ｒ，４Ｒ）−４−メチルピペリジン−２−カルボン酸（２ｇ，１３．９７ｍｍｏｌ）の溶液に、パラホルムアルデヒド（２．５２ｇ，２７．９４ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％）（０．８ｇ，７．５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を、水素雰囲気下にて室温で終夜攪拌した。ＴＬＣにより、該反応は完了しなかった。さらに１当量のパラホルムアルデヒド（２．５２ｇ，２７．９４ｍｍｏｌ）を加え、該反応混合物をさらに２４時間攪拌した。ＴＬＣにより該反応が完了したことが示され、反応混合物を濾過し、該触媒をＭｅＯＨで洗浄した（２×３０ｍＬ）。濾液を減圧中で濃縮して、粗生成物を白色の固形物として得、これをエーテルで洗浄し（３×３０ｍＬ）、高真空で終夜乾燥させて、（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボン酸（１）（１．８７０ｇ，８５％）を白色の固形物として得た。LC-MS: 158 (M+ 1); 1H NMR (400 MHz, D2O)  δ  ppm 0.97 (d, J=5.52 Hz, 3 H), 1.54 (br. s, 1 H), 1.71 - 1.87 (m, 3 H), 1.91 - 2.07 (m, 1 H),  2.84 (s, 3 H),  3.13 (td, J=8.41, 3.76 Hz, 1 H), 3.35 (m, 1 H),  3.65 (m, 1 H).
【００９２】
中間体２
【化１７】
2017510661.tif 000018
Ｂｏｃ２Ｏ（２４３．０ｇ，１．１ｍｏｌ）を、室温で攪拌しながらアセトン（１Ｌ）および水（１Ｌ）中の（Ｒ）−３−アミノ−４−メチルペンタン酸（市販品として入手可能な）（１３３．０ｇ，１．０ｍｏｌ）およびＮａ２ＣＯ３（２１２ｇ，２．０ｍｏｌ）の懸濁液に滴下して加えた。反応混合液を終夜攪拌し、該有機溶媒を減圧下で留去した。該残渣を水（１Ｌ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで洗浄した（５００ｍＬ×３）。該水層を、２Ｎ ＨＣｌ溶液でｐＨ＝３まで酸性にし、生じた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（８００ｍＬ×３）。抽出物を合わせて、食塩水で洗浄し（８００ｍＬ×１）、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して、化合物（２）（２２４．０ｇ，収率９７％）を油状物として得て、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。
【００９３】
中間体３
【化１８】
2017510661.tif 000019
トリエチルアミン（６７ｇ，０．６１ｍｏｌ）を、０℃で攪拌しながらＣＨ２Ｃｌ２（１．４Ｌ）中の中間体２（１４０．０ｇ，０．６１ｍｏｌ）およびＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（７４．１ｇ，０．７６ｍｏｌ）の懸濁液に加えた。該懸濁液を０．５時間攪拌し、ＥＤＣI（７４ｇ，０．６１ｍｏｌ）を０℃で少しずつ加えた。反応混合液を０℃で２時間攪拌し、水（８００ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、５％ ＫＨＳＯ４溶液（８００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（８００ｍＬ×３）、続いて食塩水（８００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。該残渣を、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：５）、化合物（３）（１４１．０ｇ，収率８４％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 5.26 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.15 (s, 3H), 2.60~2.80 (m, 2H), 1.85 (m, 1H), 1.41 (s, 9H), 0.90 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
【００９４】
中間体４
【化１９】
2017510661.tif 000020
ヨードエタン（２５０．０ｇ，１．６ｍｏｌ）を、０℃で攪拌しながらＤＭＦ（１．１Ｌ）中の中間体３（５５．０ｇ，０．２ｍｏｌ）の溶液に加えた。続いて、ＮａＨ（６０％懸濁液，２４．０ｇ，０．６０ｍｏｌ）を０℃で少しずつ加え、該反応混合物を室温に温め、１２時間攪拌した。該反応を水（２Ｌ）で慎重にクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）を加えた。有機層を分離し、５％ ＫＨＳＯ４溶液（８００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（８００ｍＬ×３）、そして食塩水（８００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。該残渣を、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１０）、ｔｅｒｔ−ブチル （Ｒ）−エチル（１−（メトキシ（メチル）アミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−３−イル）カルバメート（３５．１ｇ，収率５８％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 3.70 (s, 3H), 3.65 (m, 1H), 3.10~3.30 (m, 5H), 2.50~2.95 (m, 2H), 1.90~2.20 (m, 1H), 1.40~1.55 (m, 9H), 1.10 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
【００９５】
中間体５
【化２０】
2017510661.tif 000021
ｎ−ＢｕＬｉ（１０６ｍＬ，ヘキサン中で２．５Ｎ，０．１７ｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２下にて−７８℃で攪拌しながら１時間にわたって、乾燥ＴＨＦ（５００ｍＬ）中の中間体５０（７４ｇ，０．２４ｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。該懸濁液をさらに３０分間攪拌し、続いて、乾燥ＴＨＦ（３００ｍＬ）中の中間体４（５１．０ｇ，０．１７ｍｏｌ）の溶液を−７８℃で３０分かけて滴下して加えた。反応混合液を−７８℃で１時間攪拌し、続いて室温に温め、１２時間攪拌した。該反応物を２０％ 塩化アンモニウム水溶液（１Ｌ）でクエンチし、該有機溶媒を減圧下で留去した。生じた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（８００ｍＬ×３）。有機層を合わせて、５％ ＫＨＳＯ４溶液（８００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（８００ｍＬ×３）、そして食塩水（８００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１０）、ｔｅｒｔ−ブチル （Ｒ）−（１−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）チアゾール−２−イル）−４−メチル−１−オキソペンタン−３−イル）（エチル）カルバメート（５８．１ｇ，収率７３％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.53 (m, 1H), 4.90 (s, 2H), 4.04 (m, 1H), 3.35 (m, 2H), 3.15 (m, 2H), 2.00 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 0.80~1.20 (m, 21H), 0.14 (s, 6H).
【００９６】
中間体６
【化２１】
2017510661.tif 000022
ＬｉＢＨ４（４．８ｇ，０．２２ｍｏｌ）を、室温で攪拌しながら０．５時間かけて、メタノール（５００ｍＬ）中の中間体５（４７．１ｇ，０．１ｍｏｌ）の溶液に少しずつ加えた。該懸濁液を２時間攪拌し、該溶媒を減圧下で留去した。該残渣をＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）中に溶解させ、得られた溶液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５００ｍＬ×３）および食塩水（５００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質を、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：６）、ｔｅｒｔ−ブチル（（１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル）（エチル）カルバメート（１３．５ｇ，収率２８％）およびその異性体（化合物６’）（２１．０ｇ，収率４５％）を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3) d ppm -0.06 - 0.05 (m, 6 H) 0.76 - 0.89 (m, 15 H) 1.12 (t, J=6.97 Hz, 3 H) 1.39 (s, 9 H) 1.55 - 2.05 (m, 3 H) 2.86 - 3.21 (m, 2 H) 3.76 - 3.96 (m, 1 H) 4.73 (d, J=1.13 Hz, 4 H) 7.01 (s, 1 H).
【００９７】
中間体７
【化２２】
2017510661.tif 000023
塩化アセチル（４５．２ｇ，０．５８ｍｏｌ）を、０℃で攪拌しながら１０分かけて、ピリジン（５００ｍＬ）中の中間体６（３４．０ｇ，７２ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。反応混合液を室温に温め、１２時間攪拌した。該反応を水（２００ｍＬ）でクエンチし、該溶媒を減圧下で留去した。該残渣をＣＨ２Ｃｌ２（８００ｍＬ）で処理し、生じた混合物を５％ ＫＨＳＯ４溶液（８００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（８００ｍＬ×３）および食塩水（８００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質を、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１０）、（１Ｒ，３Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（エチル）アミノ）−１−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）チアゾール−２−イル）−４−メチルペンチルアセテート（２５．７ｇ，収率６９％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.15 (m, 1H), 5.95 (m, 1H), 4.84 (s, 2H), 4.04 (m, 1H), 3.10 (m, 2H), 2.35 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.00 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.80~1.10 (m, 15H), 0.08 (s, 6H).
【００９８】
中間体８
【化２３】
2017510661.tif 000024
ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のフッ化テトラブチルアンモニウム（６５．３ｇ，０．２５ｍｏｌ）の溶液を、０℃で攪拌しながらＴＨＦ（３００ｍＬ）中の中間体７（２５．７ｇ，５０ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。反応混合液を室温にし、４時間攪拌した。水（８００ｍＬ）を加え、該有機溶媒を減圧下で留去した。該残渣をＣＨ２Ｃｌ２（８００ｍＬ）で処理し、生じた混合物を５％ ＫＨＳＯ４溶液（８００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（８００ｍＬ×３）および食塩水（８００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をシリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：４）、（１Ｒ，３Ｒ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（エチル）アミノ）−１−（４−（ヒドロキシメチル）チアゾール−２−イル）−４−メチルペンチル アセテート（１９．５ｇ，収率９８％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.26 (m, 1H), 5.95 (m, 1H), 4.83 (m, 2H), 4.10 (m, 1H), 3.17 (m, 2H), 2.40 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.18 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.56 (s, 9H), 1.10~1.30 (m, 3H), 0.80~1.05 (m, 6H).
【００９９】
中間体９
【化２４】
2017510661.tif 000025
デス・マーチン試薬（３２．７ｇ，７５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３００ｍＬ）中の中間体８（２０．０ｇ，５０ｍｍｏｌ）の溶液に加え、該反応混合物を室温で１２時間攪拌した。該混合物を水酸化ナトリウム溶液（１Ｎ，３００ｍＬ×３）、チオ硫酸ナトリウム溶液（１Ｎ，３００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３（３００ｍＬ×３）溶液、続いて食塩水（３００ｍＬ×１）でそれぞれ洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮して、対応するアルデヒド化合物を得た。この粗アルデヒド化合物をｔｅｒｔ−ブチルアルコール（５００ｍＬ）中に溶解させ、水（３００ｍＬ）中の亜塩素酸ナトリウム（８０％，３６．４ｇ，３２０ｍｍｏｌ）およびリン酸二水素ナトリウム一水和物（１０５ｇ，０．７７ｍｏｌ）の溶液を、室温で１時間かけて滴下して加えた。反応混合液を３時間攪拌し、塩酸溶液（０．１Ｎ，５００ｍＬ）で希釈した。生じた混合物をＥｔＯＡｃで抽出し（５００ｍＬ×１）、該有機層を合わせて、５％ ＫＨＳＯ４溶液（５００ｍＬ×３）および食塩水（５００ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、乾燥するまで濃縮した。該残渣を、シリカゲル上のフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝１００：５）、２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）（エチル）アミノ）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボン酸（１５．４ｇ，収率５８％）を得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.90 (br s, 1H), 8.27 (s, 1H), 5.96 (m, 1H), 4.07 (m, 1H), 3.15 (m, 1H), 2.35 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.18 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.20 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.98 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
【０１００】
中間体１０
【化２５】
2017510661.tif 000026
ＤＣＭ（６０ｍＬ）中の中間体９（６．５ｇ，１５．６８ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でＴＦＡ（３０ｍＬ）を滴下して加えた。該混合物を０℃で１時間攪拌した。該溶媒を減圧中で蒸発させて、粗２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（エチルアミノ）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボン酸を得た。粗生成物をさらに精製することなく次の工程に使用した（７．２グラム）。LC-MS : 315 (M + 1),
【０１０１】
中間体１１
【化２６】
2017510661.tif 000027
アセトン（３００ｍＬ）および水（１５０ｍＬ）の混合液中の中間体１０（５ｇ，１１．６７ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（９．８０ｇ，１１６．７１ｍｍｏｌ）の溶液に、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）カルボネート（３．９４ｇ，１１．６７ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で終夜攪拌した。ＬＣ／ＭＳにより、該反応が完了したことが示された。該混合物を塩酸で（ｐＨ２）まで酸性にし、アセトンを減圧中で蒸発させた。該生成物をＤＣＭで抽出した（３×３００ｍＬ）。有機抽出物を合わせて、０．１％ ＨＣｌ溶液（２００ｍＬ）、食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧中で蒸発させた。該残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製して（シリカゲル，ＭｅＯＨ／ＤＣＭ，ＭｅＯＨ ０％〜５％）、２−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）（エチル）アミノ）−１−アセトキシ−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボン酸（３．５３ｇ，５４．６％）を白色の固形物として得た。LC-MS : 537.2 (M+1); 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ  ppm 0.84 (d, J=6.78 Hz, 3 H),  0.92 - 1.05 (m, 5 H), 1.14 (d, J=3.01 Hz, 1 H), 1.73 (dt, J=10.23, 6.43 Hz, 1 H), 1.92 - 2.05 (m, 1 H), 2.12 - 2.27 (m, 4 H), 2.28 - 2.44 (m, 1 H), 2.90 - 3.33 (m, 2 H), 3.98 (t, J=9.29 Hz, 1 H), 4.12 - 4.32 (m, 1 H), 4.47 - 4.82 (m, 2 H), 5.95 (dd, J=10.92, 2.89 Hz, 1 H), 7.29 - 7.45 (m, 4 H), 7.55 - 7.69 (m, 2 H), 7.72 - 7.81 (m, 2 H), 8.22 - 8.29 (m, 1 H).
【０１０２】
中間体１２
【化２７】
2017510661.tif 000028
ＤＭＡＰ（１０６ｇ，０．８６ｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１．５Ｌ）中のＢｏｃ−Ｌ−４−ニトロ−フェニルアラニン（１８００ｇ，０．５８ｍｏｌ）およびメルドラム酸（９２ｇ，０．６４ｍｏｌ）の溶液に加えた。生じた溶液をＮ２雰囲気下で−５℃に冷却し、ジクロロメタン（１Ｌ）中のＤＣＣ（２４０ｇ，１．１６ｍｏｌ）を１時間かけて加えた。該混合物を０〜５℃で終夜攪拌した。続いて、沈殿したＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルウレアを濾過により除去し、該濾液を５％ ＨＣｌ溶液（１Ｌ×３）、そして食塩水（１Ｌ×１）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。ＭｇＳＯ４を濾過により除去し、有機層を乾燥するまで濃縮した。該残渣をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１：１，５００ｍＬ）でトリチュレートし、乾燥させて、ｔｅｒｔ−ブチル （Ｓ）−（１−（２，２−ジメチル−４，６−ジオキソ−１，３−ジオキサン−５−イル）−３−（４−ニトロフェニル）−１−オキソプロパン−２−イル）カルバメート（１３０．０ｇ，収率５１％）を黄色の固形物として得た
【０１０３】
中間体１３
【化２８】
2017510661.tif 000029
ＡｃＯＨ（４００ｍＬ）を、Ｎ２下にて−５℃でジクロロメタン（１．５Ｌ）中の中間体１２（１３０．０ｇ，０．２９８ｍｏｌ）の溶液に加えた。固形物ＮａＢＨ４（２２．７ｇ，０．５９７ｍｏｌ）を２時間かけて少しずつ加えた（ガス発生と発熱）。−５℃でさらに３時間攪拌し、ＴＬＣにより、該反応が完了したことが示された。該混合物を食塩水（１Ｌ）でクエンチした。有機層を分離し、水（１Ｌ×２）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｌ×３）、続いて食塩水（１Ｌ×３）で順次洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。濾液を乾燥するまで濃縮し、ｔｅｒｔ−ブチル （Ｒ）−（１−（２，２−ジメチル−４，６−ジオキソ−１，３−ジオキサン−５−イル）−３−（４−ニトロフェニル）プロパン−２−イル）カルバメート（７０．３ｇ，収率５５％）を黄色の固形物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.18 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.41 (d, J=8.7 Hz, 2H), 4.58 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 3.85 (m,1H), 2.97 (d, J=6.6 Hz, 2H), 2.27 (m ,2H), 1.80 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.35 (s, 9H).
【０１０４】
中間体１４
【化２９】
2017510661.tif 000030
Ｋ２ＣＯ３（３５ｇ，０．２５ｍｏｌ）およびＭｅＩ（３６ｇ，０．２５ｍｏｌ）を、アセトン（４００ｍＬ）およびＤＭＦ（４００ｍＬ）中の中間体１３（７０．３ｇ，０．１６７ｍｏｌ）の溶液に加えた。該混合物を室温で終夜攪拌した。ＴＬＣにより出発物質が使い果たされたことが示された。水（２Ｌ）を加え、該混合物をさらに１時間攪拌した。沈殿した固形物を濾過により回収し、水で洗浄し、乾燥させて、ｔｅｒｔ−ブチル （Ｓ）−（１−（４−ニトロフェニル）−３−（２，２，５−トリメチル−４，６−ジオキソ−１，３−ジオキサン−５−イル）プロパン−２−イル）カルバメート（３４．５ｇ，収率４７％）を淡黄色の固形物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.17 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.34 (d, J=8.7 Hz, 2H), 4.22 (m, 1H), 3.85 (m,1H), 2.85 (m, 2H), 2.22 (m ,2H), 1.73 (s, 3H), 1.73 (s, 3H), 1.52 (s, 3H), 1.31 (s, 9H).
【０１０５】
中間体１５
【化３０】
2017510661.tif 000031
中間体１４（３４．５ｇ，７９．１ｍｍｏｌ）をトルエン（５００ｍＬ）中に溶解させた。該溶液を４０時間加熱還流させた。ＴＬＣにより、該反応の完了が示された。溶媒を留去して、ｔｅｒｔ−ブチル （５Ｒ）−３−メチル−５−（４−ニトロベンジル）−２−オキソピロリジン−１−カルボキシレート（３０ｇ）を得て、さらに精製することなく次の工程に使用した。
【０１０６】
中間体１６
【化３１】
2017510661.tif 000032
Ｋ２ＣＯ３（２２ｇ，０．１６ｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（３００ｍＬ）中の中間体１５（３０ｇ，７９ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。該混合物を室温で３時間攪拌した。ＴＬＣにより、完全な変換が示された。該溶媒を留去し、残渣をジクロロメタン（５００ｍＬ）中に溶解させ、食塩水で洗浄し（５００ｍＬ×３）、ＭｇＳＯ４で乾燥させた。ＭｇＳＯ４を濾過により留去し、有機層を乾燥するまで濃縮した。該残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１０）でさらに精製し、メチル （４Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチル−５−（４−ニトロフェニル）ペンタノエート（２３．５ｇ，２ステップで８１％の収率）を１：１のジアステレオマー混合物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.13 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.34 (d, J=8.7 Hz, 2H), 4.43 (m, 1H), 3.85 (m,1H), 3.65 (s ,3H), 2.85 (m, 2H), 2.65 (m ,1H), 1.85 (m, 1H), 1.50 (m, 1H), 1.30 (s, 9H), 1.15 (t, J=6.6 Hz, 3H).
【０１０７】
中間体１７
【化３２】
2017510661.tif 000033
５０ｇの化合物（１６）を、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＤ ２１×２５０ｍｍ，５μカラム（移動相Ａ ９０％ 二酸化炭素および移動相Ｂ イソプロパノール １０％を６０ｍｌ／分の流速で使用）上でＳＦＣ（超臨界流体クロマトグラフィー）を用いるキラルクロマトグラフィーにかけた。４０℃で分離を行い、２７０ｎＭで検出した。基準の分離を行い、２つのフラクションを単離した。ピークＢは、所望のメチル （２Ｓ，４Ｒ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチル−５−（４−ニトロフェニル）ペンタノエートであり、固形物２７．４ｇ（５５％）として得た。＞９９：１のジアステレオマー過剰量（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＡカラム ４．６×２５０ｍｍ，５μ、ヘキサン中で１０％の１：１のメタノール：イソプロパノール（０．１％ ジエチルアミン改質剤を含有））。LC/MS (2分, 酸_CV10.olp法  367 (M + 1), 1.16分. 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) d ppm 8.16 (d, J=8.53 Hz, 2 H) 7.46 (d, J=8.53 Hz, 2 H) 3.79 - 3.93 (m, 1 H) 3.68 (s, 3 H) 2.90 - 2.99 (m, 1H) 2.71 - 2.81 (m, 1 H) 2.47 - 2.59 (m, 1 H) 1.81 - 1.95 (m, 1 H) 1.55 - 1.66 (m, 1 H) 1.32 (s, 9 H) 1.21 - 1.25 (m, 2 H) 1.16 (d, J=7.03 Hz, 3 H) 
【０１０８】
中間体１８
【化３３】
2017510661.tif 000034
６Ｎ ＨＣｌ水溶液中の中間体１７の溶液（８．０ｍＬ，２６３．３０ｍｍｏｌ）をマイクロ波にて１３０℃で３０分間加熱した。反応混合液を凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−アミノ−２−メチル−５−（４−ニトロフェニル）ペンタン酸を固形物として得た。該生成物をさらに精製することなく次の工程に使用した（３．２ｇ）。LC-MS  : 253 (M + 1);  1H NMR (400 MHz, D2O)  δ ppm 1.12 (d, J=7.28 Hz, 3 H),  1.62 - 1.76 (m, 1 H),  1.90 - 2.02 (m, 1 H), 2.56 - 2.68 (m, 1 H), 3.02 - 3.11 (m, 2 H), 3.58 - 3.69 (m, 1 H), 7.47 (d, J=8.53 Hz, 2 H), 8.18 (d, J=8.78 Hz, 2 H).
【０１０９】
中間体１９
【化３４】
2017510661.tif 000035
アセトン（３０ｍＬ）および水（１５ｍＬ）の混合液中の中間体１８（０．４３ｇ，１．４９ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ３（１．２５１ｇ，１４．８９ｍｍｏｌ）の溶液に、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル カルボネート（０．５０２ｇ，１．４９ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で終夜攪拌した。ＬＣ／ＭＳにより、該反応の完了が示された。該混合物を塩酸でｐＨ２まで酸性にし、アセトンを減圧中で蒸発させた。該生成物をＤＣＭで抽出した（３×６０ｍＬ）。有機抽出物を合わせて、１Ｎ ＨＣｌ溶液（４０ｍＬ）、食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧中で蒸発させた。該残渣をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製して（ＥｔＯＡｃ ＤＣＭ中で０％〜１００％）、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−２−メチル−５−（４−ニトロフェニル）ペンタン酸（０．６３０ｇ，８９％）を白色の固形物として得た。LC-MS : 475.5 (M+H); 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.81 - 1.06 (m, 1 H), 1.08 - 1.28 (m, 2 H), 1.33 - 1.75 (m, 1 H), 1.77 - 2.11 (m, 1 H), 2.36 - 2.69 (m, 2 H), 2.76 - 3.18 (m, 1 H), 3.43 - 4.08 (m, 1 H), 4.09 - 4.19 (m, 1 H), 4.21 - 4.53 (m, 2 H), 4.54 - 4.80 (m, 1 H), 7.18 - 7.58 (m, 8 H), 7.66 - 7.82 (m, 2 H), 7.95 - 8.17 (m, 2 H), 8.67 (br. s., 1 H.
【０１１０】
中間体２０
【化３５】
2017510661.tif 000036
ＤＩＥＡ（０．４１９ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（４．５ｍＬ）中の中間体１９（０．３８０ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）の溶液に加え、該混合物を室温で５分間攪拌し、続いて２−クロロトリチル クロリド樹脂（０．４ｍｍｏｌ／ｇの荷重，０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）を該混合物に加えた。該混合物を室温で終夜攪拌し、得られた樹脂をＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、次いでＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、続いてＤＩＥＡ（０．４１９ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１：１，５ｍＬ）で室温にて３０分間処理した。得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、そしてＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、高真空中で終夜乾燥させた。少量の化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析した。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS:  475 (M + 1).
【０１１１】
中間体２１
【化３６】
2017510661.tif 000037
樹脂中間体２０（０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２０％ ピペリジンを加えた。該混合物を室温で６分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、ＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 253 (M + H).
【０１１２】
中間体２２
【化３７】
2017510661.tif 000038
中間体２１の樹脂（０．５ｇ，１．８８ｍｍｏｌ）に、室温でＤＭＦ（５ｍＬ）中の中間体１１（１．１０８ｇ，２．０７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．４２８ｇ，３．７６ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（０．５００ｍＬ，３．７６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．６５６ｍＬ，３．７６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 771 (M + H).
【０１１３】
中間体２３
【化３８】
2017510661.tif 000039
中間体２２の樹脂（０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２０％ ピペリジンを加えた。該混合物を室温で６分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、ＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS:  549 (M + 1).
【０１１４】
中間体２４
【化３９】
2017510661.tif 000040
ＤＣＭ（１２０ｍＬ）中の（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−３−メチルペンタン酸（Ｆｍｏｃ−イソロイシン）（７ｇ，１９．８１ｍｍｏｌ）およびピリジン（１．６０２ｍＬ，１９．８１ｍｍｏｌ）の溶液に、カニューレにより１０分かけてＤＣＭ（２０ｍＬ）中のＤＡＳＴ（３．１１ｍＬ，２３．７７ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応混合液を室温で１時間攪拌し、ＤＣＭ（８０ｍＬ）で希釈し、氷冷水で洗浄し（２×２００ｍＬ）、該有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧中で蒸発させて、（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル （２Ｓ，３Ｓ）−１−フルオロ−３−メチル−１−オキソペンタン−２−イルカルバメート（６．６５ｇ，９４％）を白色の固形物として得た。エステル化試験を行って、無水ＭｅＯＨ（０．３ｍＬ）およびＤＩＥＡ（０．０３０ｍＬ）中にＦｍｏｃ−Ｉｌｅ−Ｆ（５ｍｇ）を溶解させ、室温で１５分間反応させることにより定量的な酸フッ化物の形成を確認した。続いて、該混合物を減圧中で蒸発させ、ＬＣ／ＭＳにより解析し、１％以下のＦｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨの存在が示された。1H NMR (400 MHz, CDCl3) d ppm 0.83 - 1.12 (m, 6 H) 1.18 - 1.37 (m, 1 H) 1.42 - 1.59 (m, 1 H) 2.01 (br. s., 1 H) 4.26 (t, J=6.78 Hz, 1 H) 4.44 - 4.63 (m, 3 H) 5.20 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 7.31 - 7.39 (m, 2 H) 7.40 - 7.47 (m, 2 H) 7.61 (d, J=7.28 Hz, 2 H) 7.80 (d, J=7.53 Hz, 2 H)
【０１１５】
中間体２５
【化４０】
2017510661.tif 000041
中間体２３の樹脂（０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）に、室温でＤＣＭ（５ｍＬ）中の中間体２４（０．５６９ｇ，１．６０ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４．８９ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．４１９ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で終夜攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、ＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、高真空中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析した。ＬＣ／ＭＳにより該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS:  884 (M + H).
【０１１６】
中間体２６
【化４１】
2017510661.tif 000042
中間体２５の樹脂（０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２０％ ピペリジンを加えた。該混合物を室温で６分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、ＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS:  662 (M + 1).
【０１１７】
中間体２７
【化４２】
2017510661.tif 000043
樹脂中間体２６（０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の中間体１（０．２５２ｇ，１．６０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．６０８ｇ，１．６０ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（０．３２０ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．４１９ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、そしてＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 801 (M + 1).
【０１１８】
中間体２８
【化４３】
2017510661.tif 000044
樹脂中間体２７に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の塩化スズ（ＩＩ）二水和物（１．８０５ｇ，８．００ｍｍｏｌ）、および酢酸ナトリウム（０．１９７ｇ，２．４０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で４時間攪拌した。生じた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 771 (M + H).
【０１１９】
化合物１
【化４４】
2017510661.tif 000045
樹脂中間体２８（０．１ｇ，０．１６ｍｍｏｌ）に、室温でＤＣＭ（１ｍＬ）、水（０．２００ｍＬ）およびＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。該混合物を室温で２０分間攪拌し、続いて濾過し、該樹脂を水／ＴＦＡで洗浄し（１：１，３×２ ｍＬ）、該濾液を減圧中で蒸発させた。該残渣を逆相ＨＰＬＣにより精製して（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ０．１％ ＴＦＡ（１４分でＡＣＮ ５％〜５０％））。純粋なフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ−エチル−３−メチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−５−（４−アミノフェニル）−２−メチルペンタン酸（０．０５０ｇ，３５．３％）を固形物として得た。LC/MS : 771.8 [M+1]; 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) d ppm 7.8 (s, 1 H) , 7.30 (d, J=8.53 Hz, 2 H),  7.08 - 7.18 (m, 2 H), 5.66 (d, J=13.05 Hz, 1 H), 4.57 (d, J=8.53 Hz, 1 H), 4.29 (ddd, J=9.98, 6.71, 2.89 Hz, 1 H), 3.90 (br. s., 1 H), 3.73 (d, J=6.27 Hz, 1 H), 3.24 - 3.33 (m, 1 H), 2.84 (d, J=7.28 Hz, 2 H), 2.68 (br. s., 3 H), 2.40 - 2.53 (m, 2 H), 2.20 - 2.36 (m, 1 H), 2.03 - 2.12 (m, 4 H), 1.75 - 2.00 (m, 7 H), 1.64 (ddd, J=14.12, 10.23, 4.02 Hz, 2 H), 1.42 - 1.57 (m, 2 H), 1.30 (t, J=7.15 Hz, 3 H), 1.01 - 1.17 (m, 7 H), 0.88 - 0.98 (m, 7 H), 0.84 (t, J=7.40 Hz, 3 H), 0.77 d, J=6.53 Hz, 3 H).
【０１２０】
中間体２９
【化４５】
2017510661.tif 000046
ＭｅＯＨ（４．０ｍＬ）および水（４．０ｍＬ）中の２−エチルピペリジン−２−カルボン酸（３２０ｍｇ，１．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、パラホルムアルデヒド（３７２ｍｇ，４．１３ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％）（８８ｍｇ，０．８３ｍｍｏｌ）を加えた。１当量の炭酸ナトリウム（１７５ｍｇ，１．６５ｍｍｏｌ）を加え、該反応混合物を水素雰囲気下にて室温で終夜攪拌した。ＬＣ／ＭＳにより出発物質の完全な変換が示された。反応混合液を珪藻土に通して濾過した。該濾過ケーキをＭｅＯＨで洗浄した（２×３０ｍＬ）。濾液を減圧中で濃縮して粗生成物を得た。該粗固形物をメタノール（５０ｍＬ）中に懸濁し、得られた懸濁液を濾過し、該濾液を濃縮して、２−エチル−１−メチルピペリジン−２−カルボン酸（２０２ｍｇ，７１．４％）を固形物として得た。LC/MS: 172 (M + 1); 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 3.58 (td, J=12.80, 3.51 Hz, 1 H), 3.09 - 3.20 (m, 1 H), 2.81 (s, 3 H), 2.17 - 2.29 (m, 1 H), 1.54 - 1.84 (m, 7 H), 0.98 (t, J=7.40 Hz, 3 H).
【０１２１】
中間体３０
【化４６】
2017510661.tif 000047
樹脂中間体２６（０．２ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の中間体２９（０．０８２ｇ，０．４８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２４３ｇ，０．６４ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（０．１２７ｍＬ，０．９６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．１６８ｍＬ，０．９６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×４ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×４ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×４ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 815 (M + H).
【０１２２】
中間体３１
【化４７】
2017510661.tif 000048
樹脂中間体３０に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の塩化スズ（ＩＩ）二水和物（０．５４４ｇ，２．４１ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．０５９ｇ，０．７２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で４時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、そしてＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS:  785 (M + H).
【０１２３】
化合物２
【化４８】
2017510661.tif 000049
樹脂中間体３１に、室温でＤＣＭ（２ｍＬ）およびＴＦＡ（０．４９３ｍＬ，６．４０ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で２０分間攪拌した。該樹脂をＤＣＭ／ＴＦＡ（１：１，３×２ｍＬ）で洗浄し、該濾液を減圧中で蒸発させた。該残渣を逆相ＨＰＬＣにより精製した（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ０．１％ ギ酸，ＡＣＮ １０％〜５０％，１４分）。該純粋なフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ−エチル−２−（２−エチル−１−メチルピペリジン−２−カルボキサミド）−３−メチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−５−（４−アミノフェニル）−２−メチルペンタン酸（０．０５７ｇ，２０．３１％）を白色の固形物として得た。LC-MS : 785 (M + H).; 1H NMR (400 MHz, CD3OD)  δ ppm 7.98 (s, 1 H), 6.87 (m, J=8.28 Hz, 2 H), 6.54 (m, J=8.03 Hz, 2 H), 5.63 - 5.73 (m, 1 H), 4.60 - 4.71 (m, 3H), 4.17 (br. s., 2 H), 3.76 (dd, J=14.93, 7.15 Hz, 1 H), 2.69 (d, J=6.53 Hz, 2 H), 2.42 (br. s., 1 H), 2.36 (s, 3 H), 2.29 (br. s., 2 H), 2.03 - 2.12 (m, 3 H), 1.88 (d, J=9.79 Hz, 3 H), 1.79 (br. s., 2 H), 1.49 - 1.64 (m, 5 H),  1.43 (br. s., 2 H),  1.23-1.35 (m, 4 H),  1.11 (d, J=7.78 Hz, 1 H),  1.06 (d, J=7.03 Hz, 4 H),  0.93 (d, J=15.81 Hz, 3 H), 0.94 (d, J=15.56 Hz, 3 H),  0.70 - 0.87 (m, 9 H).
【０１２４】
中間体３２
【化４９】
2017510661.tif 000050
ＡＣＮ（２０ｍＬ）中の１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−２−メチルピペリジン−２−カルボン酸（１ｇ，４．１１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．８５２ｇ，６．１７ｍｍｏｌ）の懸濁液に、臭化ベンジル（０．７３３ｍＬ，６．１７ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。生じた反応混合物を室温で終夜攪拌した。ＬＣ／ＭＳにより、所望生成物の生成が示された。反応混合物を水（２ｍＬ）で希釈し、酢酸エチルで抽出した（２×３０ｍＬ）。抽出物を合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィーで精製して（シリカゲル，ヘキサン／酢酸エチル，８０／２０溶離液）、２−ベンジル １−（ｔｅｒｔ−ブチル） ２−メチルピペリジン−１，２−ジカルボキシレート（１．２７ｇ，９２％）を油状物として得た。LC-MS: 356 (M+ Na); 1H NMR (400 MHz, CD2Cl2) δ ppm 7.33 - 7.45 (m, 5 H), 5.13 - 5.27 (m, 2 H), 3.91 - 4.09 (m, 1 H) ,2.83 - 3.09 (m, 1 H), 2.10 -2.32 (m, 1 H), 1.56 - 1.72 (m, 1 H), 1.30 - 1.51 (m, 12 H),  1.09 (qd, J=12.42, 4.64 Hz, 1 H),  0.90 - 0.98 (m, 3 H).
【０１２５】
中間体３３
【化５０】
2017510661.tif 000051
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の中間体３２（１．２ｇ，３．６０ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（４．１６ｍＬ，５３．９９ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。生じた反応混合物を室温で２時間攪拌した。ＬＣ／ＭＳによりＢｏｃの完全な脱保護が示された。溶媒を減圧下で留去した。粗製物質を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で塩基性にし、該水層を酢酸エチルで抽出した（２×５０ｍＬ）。抽出物を合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、次いで濃縮して、ベンジル ２−メチルピペリジン−２−カルボキシレート（８１０ｍｇ）を油状物として得た。該粗生成物を精製することなく次の工程に使用した。LC/MS: 234 (M + 1).
【０１２６】
中間体３４
【化５１】
2017510661.tif 000052
ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の中間体３３（１．４５ｇ，６．２２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２．３８８ｍＬ，１３．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃でクロロギ酸ベンジル（０．８７５ｍＬ，６．２２ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。生じた溶液を室温で２時間攪拌した。反応混合液を３０ｍＬのＤＣＭで希釈し、４ｍＬの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、５分間攪拌した。有機層を分離し、水層をＤＣＭで抽出した（２×３０ｍＬ）。有機抽出物を合わせて、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィーで精製して（シリカゲル，ヘキサン／酢酸エチル，９０／１０）、ジベンジル ２−メチルピペリジン−１，２−ジカルボキシレート（１．３２ｇ，５８％）を油状物として得た。LC-MS: 268 (M + 1); 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ ppm 7.21 - 7.42 (m, 10 H), 5.04 - 5.18 (m, 2 H), 5.00 (br. s., 2 H), 4.91 (br. s., 1 H), 3.88 (d, J=12.80 Hz, 1 H), 3.17 (t, J=9.54 Hz, 1 H), 1.83 - 1.97 (m, 1 H), 1.55 - 1.78 (m, 4 H), 1.51 (s, 3 H).
【０１２７】
中間体３５
【化５２】
2017510661.tif 000053
中間体３４を、２種類のエナンチオマーのＳＦＣキラルカラム分割（Ｃｈｉｒａｌｐａｋ ＡＤ，二酸化炭素／メタノール ９０％−１０％）にかけて、所望生成物ジベンジル （Ｒ）−２−メチルピペリジン−１，２−ジカルボキシレートを単離した，LC-MS: 368 (M + 1); 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.19 - 7.44 (m, 10 H), 5.04 - 5.15 (m, 2 H), 5.00 (br. s., 2 H), 3.88 (d, J=13.05 Hz, 1 H), 3.17 (t, J=9.54 Hz, 1 H), 1.84 - 1.97 (m, 1 H), 1.55 - 1.78 (m, 5 H), 1.51 (s, 3 H); % ee :> 98 :  旋光度: [α] D:   +2 (メタノール)
【０１２８】
中間体３６
【化５３】
2017510661.tif 000054
メタノール（１０ｍＬ）中の中間体３５（６００ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）の溶液に、パラホルムアルデヒド（４９．０ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）およびパラジウム炭素（１７４ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を水素雰囲気下にて室温で終夜攪拌した。ＬＣ／ＭＳにより、出発物質の消費が示された。反応混合液を濾過し、該触媒をＭｅＯＨで洗浄した（２×３０ｍＬ）。濾液を減圧中で濃縮して、粗生成物を白色の固形物として得、これをエーテルで洗浄し（３×３０ｍＬ）、高真空中で終夜乾燥させて、１，２−ジメチルピペリジン−２−カルボン酸（２３０ｍｇ，９０％）を白色の固形物として得た。LC-MS : 158 (M + 1); 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4)  δ ppm 3.03 - 3.18 (m, 1 H), 2.76 (br. s., 3 H), 2.01 (br. s., 1 H), 1.83 (br. s., 2 H), 1.72 - 1.81 (m, 1 H), 1.62 - 1.71 (m, 2 H), 1.48 (s, 3 H).; 旋光度 : αD  +24  (メタノール).
【０１２９】
中間体３７
【化５４】
2017510661.tif 000055
中間体樹脂２６（０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の中間体３６（０．１８９ｇ，１．２０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．６０８ｇ，１．６０ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（０．３１８ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．４１９ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 801 (M + 1).
【０１３０】
中間体３８
【化５５】
2017510661.tif 000056
樹脂中間体３７（０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の塩化スズ（ＩＩ）二水和物（１．３８４ｇ，６．１３ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（０．１５１ｇ，１．８４ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で４時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 771 (M + H).
【０１３１】
化合物３
【化５６】
2017510661.tif 000057
樹脂中間体３８（０．１５ｇ，０．２４ｍｍｏｌ）に、室温でＤＣＭ（５ｍＬ）、およびＴＦＡ（０．３７０ｍＬ，４．８０ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で１０分間攪拌し、続いて濾過し、ＤＣＭで洗浄した（２×５０ｍＬ）。該濾液を減圧中で蒸発させた。該残渣を逆相ＨＰＬＣにより精製した（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ０．１％ ギ酸，１４分でＡＣＮ １０％〜５０％）。純粋なフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ−エチル−３−メチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−５−（４−アミノフェニル）−２−メチルペンタン酸（０．０３７ｇ，１７．８６％）を固形物として得た。LC/MS: 771 (M + 1); 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.97 (s, 1 H), 6.87 (d, J=8.03 Hz, 2 H), 6.53 (d J=8.03 Hz, 2 H), 5.67 (d, J=12.80 Hz, 1 H), 4.59 (d, J=8.28 Hz, 1 H), 4.17 (br. s., 2 H), 3.72 (d, J=7.28 Hz, 1 H), 2.69 (d, J=6.27 Hz, 3 H), 2.42 (br. s., 2 H), 2.28 (br. s., 2 H),  2.17 (s, 3 H), 2.07 (s, 3 H),1.74 - 1.94 (m, 3 H), 1.45 - 1.62 (m, 4 H), 1.36 (br. s., 3 H), 1.27 (t, J=7.03 Hz, 3 H), 1.10 (s, 3 H), 1.06 (d, J=7.03 Hz, 4 H), 0.95 (d, J=6.53 Hz, 3 H), 0.90 (d, J=6.78 Hz, 4 H), 0.83 (t, J=7.40 Hz, 4 H), 0.74 (d, J=6.27 Hz, 3 H). 
【化５７】
2017510661.tif 000058
【０１３２】
中間体３９
【化５８】
2017510661.tif 000059
トリエチルアミン（４０ｇ，０．４ｍｏｌ）を、０℃で攪拌しながらＤＣＭ（５００ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン（９０ｇ，０．３４ｍｏｌ）およびＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（３６．５ｇ，０．３７ｍｏｌ）の懸濁液に加えた。該懸濁液を１０分間攪拌し、ＥＤＣＩ（ＨＣｌ塩，７２ｇ，０．３７ｍｏｌ）を加えた。該懸濁液を０℃でさらに３時間攪拌した。該混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｌ）でクエンチした。該層を分離し、該水層をＤＣＭで再抽出した（５００ｍＬ×３）。有機層を合わせて、水（１Ｌ×３）、５％ ＫＨＳＯ４水溶液（１Ｌ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１Ｌ×３）、および食塩水（１Ｌ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィーでさらに精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１）、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル １−（メトキシ（メチル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イルカルバメート（８５．１ｇ，収率８１％）を白色の固形物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.15~7.26 (m, 5H), 5.25 (bs, 1H), 4.95 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.14 (s, 3H), 2.83~3.07 (m, 2H), 1.37 (s, 9H). 
【０１３３】
中間体４０
【化５９】
2017510661.tif 000060
乾燥ＴＨＦ（５００ｍＬ）中の中間体３９（９７．１ｇ，０．３１５ｍｏｌ）の溶液を、−１０℃で攪拌しながら、乾燥ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のＬｉＡｌＨ４（１２．０ｇ，０．３１６ｍｏｌ）の懸濁液に１時間かけて滴下して加えた。該懸濁液を０℃でさらに３時間攪拌し、続いて−１０℃で水（１２ｍＬ）、１５％ ＮａＯＨ水溶液（１２ｍＬ）、および水（１２ｍＬ×３）でクエンチした。０．５時間攪拌し、該混合物を濾過し、該濾液を乾燥するまで濃縮して、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル １−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イルカルバメート（４５．２ｇ，粗生成物）、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 9.65 (s, 1H), 7.17~7.33 (m, 5H), 4.80 (m, 1H), 2.80~3.15 (m, 2H), 1.45 (s, 9H). 
【０１３４】
中間体４１
【化６０】
2017510661.tif 000061
酢酸エチル（４００ｍＬ）中のトリフェニルホスフィン（１７３．７ｇ，０．６６ｍｏｌ）およびエチル ２−ブロモ−プロピオネート（１００ｇ，０．５５ｍｏｌ）の溶液を、終夜加熱還流した。冷却し、該混合物を濾過した。該ケーキを酢酸エチルで洗浄し、乾燥させて、ホスホニウム塩を得た。ホスホニウム塩をＤＣＭ（４００ｍＬ）中に溶解させた。モレキュラ・シーブス（４Ａ，５０ｇ）を加え、続いて室温で攪拌しながらトリエチルアミン（１１１ｇ，１．１ｍｏｌ）を滴下して加えた。該混合物をさらに１時間攪拌し、続いて濾過した。濾液を水（３００ｍＬ×３）、５％ ＫＨＳＯ４水溶液（３００ｍＬ×３）、そして食塩水（３００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィーでさらに精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１０）、エチル（トリフェニルホスホラニリデン）プロピオネート（１０５ｇ，収率５２％）を固形物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.34~8.10 (m, 15H), 4.02 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.68 (m, 3H), 1.01 (t, J=7.2 Hz, 3H). 
【０１３５】
中間体４２
【化６１】
2017510661.tif 000062
ＤＣＭ（５００ｍＬ）中の中間体４０（５２ｇ，０．２１ｍｏｌ）および中間体４１（７６ｇ，０．２１ｍｏｌ）の溶液を、室温で１４時間攪拌した。該溶媒を減圧下で留去した。該残渣をフラッシュクロマトグラフィーでさらに精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１０）、（Ｓ）−エチル ４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メチル−５−フェニルペンタ−２−エノエート（４５．３ｇ，収率６４％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.17~7.32 (m, 5H), 6.53 (dd, J=1.2 and 9 Hz, 1H), 4.63 (m, 2H), 4.18 (q, J=7.2 Hz, 2H), 2.76~2.95 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.42 (s, 9H), 1.28 (t, J=7.2 Hz, 3H). 
【０１３６】
中間体４３
【化６２】
2017510661.tif 000063
中間体４２（４５ｇ，０．１３５ｍｏｌ）を１０％ Ｐｄ／Ｃ（１０ｇ）を含有するＭｅＯＨ（６００ｍＬ）中に溶解させた。反応混合液を水素雰囲気下にて室温で１６時間攪拌した。反応混合液を珪藻土に通して濾過し、該濾液を減圧下で濃縮した。該残渣をアセトン（２００ｍＬ）中に溶解させ、ＮａＯＨ水溶液（２Ｍ，１３５ｍＬ）を０℃で加えた。該混合物を室温で１０時間攪拌した。反応混合液をＨＣｌ水溶液（２Ｍ，１３５ｍＬ）に注ぎ入れ、ＤＣＭで抽出した（３００ｍＬ×３）。有機抽出物を合わせて、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、そして減圧下で濃縮して、（Ｒ）−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メチル−５−フェニルペンタン酸を得て（４１．０ｇ，〜１００％収率）、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。ＬＣ／ＭＳによりその構造を確認した。
【０１３７】
中間体４４
【化６３】
2017510661.tif 000064
中間体４３（２８ｇ，０．０９１ｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中に溶解させ、−４０℃に冷却した。この溶液に、トリエチルアミン（１０．１ｇ，０．０９９ｍｏｌ）を加え、続いてクロロギ酸エチル（１１ｇ，０．１０ｍｏｌ）を１５分かけて滴下して加えた。反応混合液を−４０℃でさらに１時間攪拌し、続いて濾過して、沈殿した物質を取り除いた。濾液を０℃に冷却し、水（２０ｍＬ）中の水素化ホウ素ナトリウム（７．５ｇ，０．１９７ｍｏｌ）を含有する懸濁液で３０分にわたり処理した。反応混合液を０℃で３０分間攪拌し、室温でさらに３０分間攪拌した。該混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で希釈し、食塩水（５００ｍＬ）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃで抽出した（２００ｍＬ×３）。有機抽出物を合わせて、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５００ｍＬ×２）、そして食塩水（５００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮して、油状残渣を供した。該残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１０：１）、ｔｅｒｔ−ブチル （２Ｒ，４Ｓ）−５−ヒドロキシ−４−メチル−１−フェニルペンタン−２−イルカルバメート（１７．５ｇ，収率６５％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.15~7.29 (m, 5H), 4.60 (m, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.45 (d, J=5.7 Hz, 2H), 2.71~2.11 (m, 4H), 1.78 (m, 1H), 1.55 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 1.25 (m, 1H). 
【０１３８】
中間体４５
【化６４】
2017510661.tif 000065
デス・マーチンペルヨージナン（３９ｇ，８９．４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（３００ｍＬ）中の中間体４４（１７．５ｇ，５９．７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、該懸濁液を室温で１５時間攪拌した。該混合物をＮａＯＨ溶液（１Ｎ，３００ｍＬ×３）、および食塩水（３００ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過し、減圧下で濃縮した。該残渣を、フラッシュクロマトグラフィーで精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：６）、ｔｅｒｔ−ブチル （３Ｓ，５Ｒ）−５−ベンジル−３−メチル−２−オキソピロリジン−１−カルボキシレート（９．１ｇ，収率５３％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.16~7.35 (m, 5H), 4.30 (m, 1H), 3.15 (dd, J=3.3 および 13.2 Hz, 1H), 2.73 (dd, J=9.6 and 13.2 Hz), 2.42 (m, 1H), 2.00~2.10 (m, 2H), 1.58 (s, 9H), 1.15 (d, J=6.9 Hz, 3H). 
【０１３９】
中間体４６
【化６５】
2017510661.tif 000066
中間体４５（９．０ｇ，３１．１ｍｍｏｌ）およびＨＣｌ溶液（４Ｎ，１５０ｍＬ）を４時間加熱還流した。冷却し、該溶媒を減圧下で留去した。該残渣をアセトン（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）中に溶解させた。該溶液のｐＨを２Ｍ ＮａＯＨ溶液で８．５に調整し、アセトン（２０ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ＯＳｕ（１２ｇ，３５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、この溶液のｐＨを、この工程中に２Ｍ ＮａＯＨ溶液で８〜９に保った。該懸濁液を４時間攪拌し、続いて２Ｍ ＨＣｌ溶液でｐＨ３まで酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した（２００ｍＬ×３）。有機層を合わせて、水（１００ｍＬ×３）、５％ ＫＨＳＯ４水溶液（１００ｍＬ×３）、そして食塩水（１００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィーで精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１）、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−２−メチル−５−フェニルペンタン酸（５．３ｇ，収率４０％）を得た。LC-MS : 430 [M+1]; 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ  ppm 7.78 - 7.83 (m, 2 H), 7.59 - 7.65 (m, 2 H), 7.37 - 7.43 (m, 2 H), 7.28 - 7.35 (m, 2 H), 7.14 - 7.26 (m, 5 H),6.94 - 7.01 (m, 1 H), 4.28 - 4.36 (m, 1 H), 4.21 - 4.27 (m, 1 H), 4.10 - 4.16 (m, 1 H), 3.84 - 3.93 (m, 1 H), 2.68 - 2.82 (m, 2 H), 2.48 - 2.60 (m, 1 H), 1.86- 1.95 (m, 1 H), 1.42 - 1.51 (m, 1 H), 1.17 (d, J=7.03 Hz, 3 H), 1.09 - 1.14 (m, 1 H). 
【０１４０】
スキーム
【化６６】
2017510661.tif 000067
【０１４１】
中間体４７
【化６７】
2017510661.tif 000068
クロロギ酸エチル（１２．６ｍＬ，０．１３ｍｏｌ）を、−２０℃で無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のＩ−Ｍｅ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｖａｌ−ＯＨ（２７．３ｇ，０．１２ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１４．７ｍＬ，０．１３ｍｏｌ）の溶液に１５分かけて滴下して加え、得られた白色懸濁液をさらに３０分間攪拌した。ジアゾメタン溶液（０．３６ｍｏｌ，６０ｇのＮ−ニトロソ−Ｎ−メチルウレアから調製し、エーテル（５００ｍＬ）中の水酸化カリウムで乾燥させ、続いてカニューレにより該反応混合物に入れた。該混合物を室温にし、さらに５時間攪拌し、続いて酢酸溶液（１０％，２５０ｍＬ）で慎重にクエンチした。該層を分離し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（３００ｍＬ×３）および食塩水（３００ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、約２００ｍＬまで濃縮した。該残渣をＴＨＦ（９００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）中に溶解させた。該溶液を４０℃に加熱し、酢酸銀（５００ｍｇ）を加えた。該懸濁液を５時間攪拌し、続いて約３００ｍＬに濃縮した。該残渣をＥｔＯＡｃで抽出した（５００ｍＬ×３）。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム（３００ｍＬ×３）および食塩水（３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して、（Ｒ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ）−４−メチルペンタン酸（２３．８ｇ，収率８１％）を得て、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 10.08 (bs, 1H), 4.00 (m, 1H), 2.75 (m, 3H), 2.55 (m, 2H), 1.43 (s, 9h), 0.85~0.84 (m, 6H).
【０１４２】
中間体４８
【化６８】
2017510661.tif 000069
トリエチルアミン（３４．３ｍＬ，０．２４４ｍｏｌ）を、０℃で攪拌しながらＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）中の中間体４７（６０ｇ，０．２４４ｍｏｌ）およびＮ，Ｏ−ジメチルヒドロアミン塩酸塩（２３．９ｇ，０．２４４ｍｏｌ）の懸濁液に加えた。該懸濁液をこの温度で０．５時間攪拌し、続いてＥＤＣＩ（４６．９ｇ，０．２４４ｍｏｌ）を０℃で少しずつ加えた。反応混合液を０℃でさらに２時間攪拌し、次いで水（３００ｍＬ）でクエンチした。有機層を分離し、５％ ＫＨＳＯ４溶液（３００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３００ｍＬ×３）、そして食塩水（３００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。該残渣をシリカゲルクロマトグラフィーによりさらに精製し（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：３）、ｔｅｒｔ−ブチル （Ｒ）−（１−（メトキシ（メチル）アミノ）−４−メチル−１−オキソペンタン−３−イル）（メチル）カルバメート（５２ｇ，収率７４％）を油状物として得た。
【０１４３】
中間体４９
【化６９】
2017510661.tif 000070
ｔｅｒｔ−ブチル ニトリル（０．６１ｍｏｌのＮａＮＯ２および１１０ｍＬのｔｅｒｔ−ブチル アルコールから調製）を、０℃でＡＣＮ（５００ｍＬ）中のＣｕＢｒ２（２６０ｇ，１．１６ｍｏｌ）およびエチル ２−アミノチアゾール−４−カルボキシレート（１００ｇ，０．５８ｍｏｌ）の懸濁液に１時間かけて滴下して加えた。該混合物を室温で１２時間攪拌し、続いてＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）および水（８００ｍＬ）でクエンチした。該混合物を濾過し、該濾液を水層および有機層に分割した。該水層をＥｔＯＡｃで抽出した（８００ｍＬ×２）。有機抽出物を合わせて、５％ ＫＨＳＯ４溶液（３００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３００ｍＬ×３）、そして食塩水（３００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮して、エチル ２−ブロモチアゾール−４−カルボキシレート（７９．４ｇ，収率５８％）を得て、さらに精製することなく次の工程に使用した。1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 7.45 (s, 1H), 4.20 (q, J=7.2 Hz, 2H), 1.25 (t, J=7.2 Hz, 3H).
【０１４４】
中間体５０
【化７０】
2017510661.tif 000071
ＮａＢＨ４（１６．５ｇ，０．４３ｍｏｌ）を、５０℃で攪拌しながらエタノール（５００ｍＬ）中の中間体４９（６８ｇ，０．２８８ｍｏｌ）の溶液に０．５時間かけて少しずつ加えた。該懸濁液を５時間加熱還流し、ＮａＢＨ４（８．２５ｇ，０．２２ｍｏｌ）の別のバッチを少しずつ加えた。該混合物をさらに１２時間加熱還流した。これを室温に冷まし、該溶媒を減圧下で留去し、残渣をＤＣＭ（５００ｍＬ）中に溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３００ｍＬ×３）、続いて食塩水（３００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮して、該アルコール化合物を得た。該アルコール化合物をＤＭＦ（３００ｍＬ）中に溶解させ、イミダゾール（２８．３ｇ，０．４１６ｍｏｌ）を加えた。ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のＴＢＳ−Ｃｌ（６２．４ｇ，０．４１６ｍｏｌ）の溶液を、室温でこの溶液に滴下して加えた。該混合物を１２時間攪拌し、次いで水（８００ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した（８００ｍＬ×２）。有機抽出物を合わせて、５％ ＫＨＳＯ４水溶液（３００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３００ｍＬ×３）、そして食塩水（３００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。該残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：３０）、２−ブロモ−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）チアゾール（４２．０ｇ，２ステップで４７％収率）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.15 (t, J=1.5 Hz, 1H), 4.84 (d, J=1.5 Hz, 2H), 0.94 9s, 9H), 0.12 (s, 6H).
【０１４５】
中間体５１
【化７１】
2017510661.tif 000072
ｎ−ＢｕＬｉ（７７ｍＬ，ヘキサン中で２．５Ｎ，０．１９ｍｏｌ）の溶液を、Ｎ２にて−７８℃で攪拌しながら、乾燥ＴＨＦ（５００ｍＬ）中の中間体５０（５３．９ｇ，０．１７５ｍｏｌ）の溶液を１時間かけて滴下して加えた。該懸濁液をこの温度で３０分間攪拌した。続いて、乾燥ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の中間体４８（５０．４ｇ，０．１７５ｍｏｌ）の溶液を−７８℃で３０分かけて滴下して加えた。反応混合液をこの温度で１時間攪拌し、続いて室温に温め、１２時間攪拌した。該混合物を２０％ 塩化アンモニウム溶液（１Ｌ）でクエンチし、該有機溶媒を減圧下で留去した。生じた混合物をＥｔＯＡｃで抽出した（５００ｍＬ×３）。有機層を合わせて、５％ ＫＨＳＯ４溶液（５００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５００ｍＬ×３）、そして食塩水（５００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィーでさらに精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１０）、（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル １−（４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）チアゾール−２−イル）−４−メチル−１−オキソペンタン−３−イル（メチル）カルバメート（３８．１ｇ，収率４８％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.55 (m, 1H), 4.91 (s, 2H), 4.27 (m, 1H), 3.20~3.60 (m, 2H), 1.90 (m, 1H), 1.03 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.97 (s, 9H), 0.88 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.15 (s, 6H). 
【０１４６】
中間体５２
【化７２】
2017510661.tif 000073
ＮａＢＨ４（４．７ｇ，１２５ｍｍｏｌ）を、室温で攪拌しながらメタノール（２００ｍＬ）中の中間体５１（３８．０ｇ，８３．３ｍｍｏｌ）の溶液に０．５時間かけて少しずつ加えた。該懸濁液を２時間攪拌し、ＮａＢＨ４（１．５ｇ，４０ｍｍｏｌ）の別のバッチを加え、該混合物をさらに２時間攪拌した。該溶媒を減圧下で留去し、残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中に溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ×３）、そして食塩水（２００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をシリカゲルクロマトグラフィーによりさらに精製し（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：６）、ｔｅｒｔ−ブチル （１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル（メチル）カルバメート（１６．２ｇ，収率４２％）およびｔｅｒｔ−ブチル （（１Ｓ，３Ｒ）−１−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル）（メチル）カルバメート（異性体，１７．３ｇ，収率４５％）を得た。
ｔｅｒｔ−ブチル （１Ｒ，３Ｒ）−１−（４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）チアゾール−２−イル）−１− ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル（メチル）カルバメート（１Ｒ，３Ｒ−異性体）：1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.11 (s, 1H), 4.98 (bs, 1H), 4.80 (s, 2H), 4.68 (dt, J=11.7 Hz, 1H), 3.95 (dt, J=3.3 および 12 Hz, 1H), 2.75 (s, 3H), 1.70 ~1.95 (m, 2H), 1.49 (s, 9H), 0.95 (s, 9H), 0.85~0.95 (m, 6H), 0.15 (s, 6H).
ｔｅｒｔ−ブチル （（１Ｓ，３Ｒ）−１−（４−（（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）メチル）チアゾール−２−イル）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンタン−３−イル）（メチル）カルバメート（１Ｓ，３Ｒ−異性体）：1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.07 (s, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.81 (s, 2H), 4.81 (bs, 1H), 3.86 (dt, J=3.3 および 10.5 Hz, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.25 (m, 1H), 1.74 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.00 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.96 (s, 9H), 0.84 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.15 (s, 6H).
【０１４７】
中間体５３
【化７３】
2017510661.tif 000074
塩化アセチル（２２．５ｍＬ，０．３１６ｍｏｌ）を、０℃で攪拌しながらピリジン（１４０ｍＬ）中の中間体５２（１９．７ｇ，４３ｍｍｏｌ）の溶液に１時間かけて滴下して加えた。反応混合液を室温に温め、１２時間攪拌した。該混合物を水（２００ｍＬ）でクエンチし、該有機溶媒を減圧下で留去した。該残渣をＤＣＭ（５００ｍＬ）中に溶解させ、５％ ＫＨＳＯ４水溶液（２００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ×３）、および食塩水（２００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィーで精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：１０）、（１Ｒ，３Ｒ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ）−１−（４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）チアゾール−２−イル）−４−メチルペンチルアセテート（１８．５ｇ，収率８６％）を油状物として得た。ＬＣ／ＭＳによりその構造を確認した。
【０１４８】
中間体５４
【化７４】
2017510661.tif 000075
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のフッ化テトラブチルアンモニウム（４５．７ｇ，１７５ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で攪拌しながらＴＨＦ（１００ｍＬ）中の中間体５３（１７．５ｇ，３５ｍｍｏｌ）の溶液に滴下して加えた。反応混合液を室温に温め、１２時間攪拌した。該混合物を水（１００ｍＬ）でクエンチし、該有機溶媒を減圧下で留去した。該残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中に溶解させ、５％ ＫＨＳＯ４水溶液（２００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ×３）、そして食塩水（２００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィーで精製し（シリカゲル，ＥｔＯＡｃ／ヘキサン＝１：４）、（１Ｒ，３Ｒ）−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ）−１−（４−（ヒドロキシメチル）チアゾール−２−イル）−４−メチルペンチルアセテート（９．３ｇ，収率６９％）を油状物として得た。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.15 (d, J=3 Hz, 1H), 5.81~5.86 (m, 1H), 4.74 (d, J=3Hz, 2H), 4.11 (m, 1H), 2.70 および 2.63 (s, 3H), 2.31 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.05 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.47 (s, 9H), 0.98 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.86 (d, J=6.6 Hz, 3H). 
【０１４９】
中間体５５
【化７５】
2017510661.tif 000076
デス・マーチンペルヨージナン（１４．９ｇ，３４．２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２５０ｍＬ）中の中間体５４（８．８ｇ，２２．８ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合液を室温に温め、１２時間攪拌し、続いて水酸化ナトリウム水溶液（１Ｎ，２００ｍＬ×３）、チオ硫酸ナトリウム水溶液（１Ｎ，２００ｍＬ×３）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ×３）、食塩水（２００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮して、アルデヒドを得た。この粗アルデヒド化合物を、ｔｅｒｔ−ブチル アルコール（２５０ｍＬ）、ならびに水（１５０ｍＬ）中の亜塩素酸ナトリウム（８０％，１１．６ｇ，１０２ｍｍｏｌ）およびリン酸二水素ナトリウム一水和物（３３．６ｇ，２４４ｍｍｏｌ）の溶液に室温で１時間かけて滴下して加えた。反応混合液をさらに１６時間攪拌し、続いて塩酸（０.１Ｎ，１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（２００ｍＬ×３）。有機層を合わせて、５％ ＫＨＳＯ４水溶液（２００ｍＬ×３）、そして食塩水（２００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮して、２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（メチル）アミノ）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボン酸（７．５ｇ，収率８２％）を得て、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.26 (s, 1H), 5.87~6.01 (m, 1H), 4.15 (m, 1H), 2.72 および 2.65 (s, 3H), 2.35 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.18 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.00 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.88 (d, J=6.6 Hz, 3H). 
【０１５０】
中間体５６
【化７６】
2017510661.tif 000077
ＴＦＡ（３０ｍＬ）を、ジクロロメタン（８０ｍＬ）中の中間体５５（７．４ｇ，１８．５ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。該混合物を１２時間攪拌し、該溶媒を減圧下で留去した。該残渣をアセトン（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）中に溶解させた。該溶液のｐＨを２Ｍ ＮａＯＨ水溶液で８．５に調整し、アセトン（５０ｍＬ）中のＦｍｏｃ−ＯＳｕ（６．２ｇ，１８．５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下して加え、この溶液のｐＨをこの工程の間、２Ｍ ＮａＯＨ水溶液で８〜９に保った。該懸濁液を４時間攪拌し、２Ｍ ＨＣｌ水溶液でｐＨ３に酸性にし、ＥｔＯＡｃで抽出した（２００ｍＬ×３）。有機層を合わせて、水（１００ｍＬ×３）、５％ ＫＨＳＯ４水溶液（１００ｍＬ×３）、そして食塩水（１００ｍＬ×１）で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、乾燥するまで濃縮した。粗製物質をフラッシュクロマトグラフィーで精製し（シリカゲル，ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２＝１：４０）、２−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）（メチル）アミノ）−１−アセトキシ−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボン酸を得た（５．１ｇ，収率５３％）。LC-MS : 523 [M+1]; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d ppm 0.56 (br. s., 1 H) 0.67 - 0.82 (m, 2 H) 0.83 - 0.96 (m, 2 H) 1.64 (dt, J=10.36, 6.57 Hz, 1 H) 1.88 (s, 1 H) 2.07 (s, 2 H) 2.09 - 2.17 (m, 1 H) 2.19 - 2.33 (m, 1 H) 2.52 - 2.67 (m, 3 H) 3.86 - 4.01 (m, 1 H) 4.08 (s, 1 H) 4.12 - 4.21 (m, 1 H) 4.29 - 4.40 (m, 1 H) 4.68 (dd, J=10.61, 5.56 Hz, 1 H) 5.85 (dd, J=10.86, 3.28 Hz, 1 H) 7.19 - 7.27 (m, 2 H) 7.27 - 7.35 (m, 2 H) 7.42 - 7.58 (m, 2 H) 7.61 - 7.71 (m, 2 H) 8.11 - 8.19 (m, 1 H) 
【０１５１】
中間体５７
【化７７】
2017510661.tif 000078
ＤＩＥＡ（０．４１９ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１．５ｍＬ）中の中間体４６（０．３４４ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）の溶液に加え、該混合物を室温で５分間攪拌し、続いて２−クロロトリチル クロリド樹脂（０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）を該混合物に加えた。該混合物を室温で４時間攪拌し、得られた樹脂をＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、そしてＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、続いてＭｅＯＨ／ＤＣＭ（１：１，５ｍＬ）中のＤＩＥＡ（０．４１９ｍＬ，２．４０ｍｍｏｌ）で室温にて３０分間処理した。得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、そしてＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、高真空中で終夜乾燥させた。少量の化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析した。該乾燥させた樹脂を次の工程に使用した。LC/MS: 430 (M + 1).
【０１５２】
中間体５８
【化７８】
2017510661.tif 000079
樹脂中間体５７（０．５ｇ，０．８０ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の２０％ ピペリジンを加えた。該混合物を室温で６分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、ＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 208 (M + 1).
【０１５３】
中間体５９
【化７９】
2017510661.tif 000080
樹脂中間体５８（０．４ｇ，０．６４ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（４ｍＬ）中の中間体５６（０．３５１ｇ，０．６７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．４８７ｇ，１．２８ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（０．２５６ｍＬ，１．９２ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．３３５ｍＬ，１．９２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。。該混合物を室温で２時間攪拌した。生じた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、ＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 712 (M + 1).
【０１５４】
中間体６０
【化８０】
2017510661.tif 000081
樹脂中間体５９（０．４ｇ，０．６４ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（４ｍＬ）中の２０％ ピペリジンを加えた。該混合物を、室温で６分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、ＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 491 (M + H).
【０１５５】
中間体６１
【化８１】
2017510661.tif 000082
樹脂中間体６０（０．４ｇ，０．６４ｍｍｏｌ）に、室温でＤＣＭ（４ｍＬ）中の中間体２４（０．３４１ｇ，０．９６ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３．９１ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．３３５ｍＬ，１．９２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で１時間攪拌した。得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、ＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、高真空中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。LC/MS: 825 (M + 1).
【０１５６】
中間体６２
【化８２】
2017510661.tif 000083
樹脂中間体６１（０．４ｇ，０．６４ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（４ｍＬ）中の２０％ ピペリジンを加えた。該混合物を室温で６分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×６ｍＬ）、ＤＣＭ（３×６ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 603 (M + 1).
【化８３】
2017510661.tif 000084
【０１５７】
中間体６３
【化８４】
2017510661.tif 000085
Ｈ２Ｏ／ＥｔＯＨ（７２０ｍＬ，５／１）中の４，４−ジメチルシクロヘキサノン（３０ｇ，０．２３８ｍｏｌ）、ヒドロキシルアミン塩酸塩（３２．８ｇ，０．４７６ｍｏｌ）、および酢酸ナトリウム（３９．０ｇ，０．４７６ｍｏｌ）の溶液を、加熱還流した。該反応をＴＬＣによりモニターし、反応完了後、室温に冷ました。これをジクロロメタン（５００ｍＬ）で希釈した。有機層を分離し、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を減圧下で留去し、４，４−ジメチルシクロヘキサノン オキシムを無色の固形物として得て、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。
【０１５８】
中間体６４
【化８５】
2017510661.tif 000086
キシレン（１０００ｍＬ）中の五塩化リン（１２０ｇ，０．５７６ｍｏｌ）の攪拌スラリーに、キシレン（４００ｍＬ）中の中間体６３（２７．２ｇ，０．１９２ｍｏｌ）の溶液を２０分かけて加えた。反応混合液を、添加中、水浴を用いて３０〜３６℃に保った。次いで、これを８０℃に加熱し、１．５時間攪拌した。該均一の反応混合物を室温に冷まし、飽和炭酸ナトリウム水溶液（２０００ｍＬ）に注ぎ入れた。該混合物を終夜静置し、該沈殿物を収集した。３，３−ジクロロ−５，５−ジメチルアゼパン−２−オン（２８．４ｇ）を褐色の固形物として得、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.51 (bs, 1H), 3.39-3.44 (m, 1H), 3.16-3.21 (m, 1H), 1.41-1.51 (m, 2H), 1.17 (s, 2H), 0.99 (s, 6H).
【０１５９】
中間体６５
【化８６】
2017510661.tif 000087
中間体６４（２５．８，０．１２３モル）を氷酢酸（１３００ｍＬ）中に溶解させ、室温でＰｄ／Ｃ（１３ｇ，１０％）上にて水素の４０ａｔｍ下で２時間攪拌した。触媒を濾過して除去し、該濾液を減圧濃縮した。ＤＣＭ（２００ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）を、該残渣に加え、該混合物を１０分間攪拌した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧濃縮して、３−クロロ−５，５−ジメチルアゼパン−２−オン（１９．１ｇ）を得て、さらに精製することなく次の工程で使用した。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 6.19 (brs, 1H), 4.75 (d, J = 11 Hz, 1H), 3.30-3.36 (m, 1H), 3.11-3.17 (m, 1H), 1.91-2.09 (m, 2H), 1.39-1.59 (m, 2H), 1.14 (s, 3H), 1.04 (s, 3H).
【０１６０】
中間体６６
【化８７】
2017510661.tif 000088
中間体６５（１６．１ｇ，０．０９２ｍｏｌ）およびＢａ（ＯＨ）２（３５．１ｇ，０．１１ｍｏｌ）を入れたフラスコに、水（４００ｍＬ）を加えた。この混合物を１１０℃で２時間攪拌した。次いで、これを室温に冷まし、ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の塩化ＣＢＺ（２０．６ｇ，０．１２１ｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で終夜攪拌し、続いて１Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ３に調整した。該粗生成物を酢酸エチルで抽出した（２×２００ｍＬ）。抽出物を合わせて、食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。該残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−４，４−ジメチルピペリジン−２−カルボン酸を粘稠性油状物として得た（７ｇ）。1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.33-7.38 (m, 5H), 5.16-5.19 (m, 2H), 4.78-4.88 (m, 1H), 3.95-3.99 (m, 1H), 3.23-3.27 (m, 1H), 2.07 (s, 2H), 1.64-1.71 (m, 1H), 1.37-1.40 (m, 2H), 0.97 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).
【０１６１】
中間体６７
【化８８】
2017510661.tif 000089
２種類のエナンチオマーを、移動相Ａ ９０％ 二酸化炭素／移動相Ｂ １０％ エタノールを用いてｃｈｉｒａｌｐａｋ ＩＣにより分割した（２１０ｎｍで検出）。（Ｒ）−１−（（ベンジルオキシ）カルボニル）−４，４−ジメチルピペリジン−２−カルボン酸：LC-MS : 292  [M+1];  1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) d ppm 0.93 (s, 3 H) 0.98 (s, 3 H) 1.40 (d, J=11.80 Hz, 2 H) 1.68 (dd, J=14.05, 7.28 Hz, 1 H) 1.99 - 2.18 (m, 1 H) 3.27 (m, J=12.30 Hz, 1 H) 3.97 (m, J=12.80 Hz, 1 H) 4.69 - 4.95 (m, 1 H) 5.11 - 5.25 (m, 2 H) 7.28 - 7.44 (m, 5 H) 9.63 (br. s, 1 H) 
【０１６２】
中間体６８
【化８９】
2017510661.tif 000090
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）および水（２０．００ｍＬ）中の中間体６７（１．１４ｇ，３．９１ｍｍｏｌ）の溶液に、パラホルムアルデヒド（０．７０５ｇ，７．８３ｍｍｏｌ）およびＰｄ／Ｃ（１０％）（０．４ｇ，３．７６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液を水素雰囲気下にて室温で終夜攪拌した。ＴＬＣから、該反応は完了していなかった。さらにパラホルムアルデヒド（０．７０５ｇ，７．８３ｍｍｏｌ）を加え、該反応混合物を水素雰囲気下にて室温で終夜攪拌した。ＴＬＣにより、該反応が完了したことが示された。反応混合液を濾過し、該触媒をＭｅＯＨで洗浄した（２×２０ｍＬ）。濾液を減圧中で濃縮して、粗生成物を白色の固形物として得て、これをエーテルで洗浄し（３×２０ｍＬ）、高真空中で終夜乾燥させて、（Ｒ）−１，４，４−トリメチルピペリジン−２−カルボン酸（０．６７１ｇ，１００％）を白色の固形物として得た。LC-MS: 172  [M+1]; 1H NMR (400 MHz, D2O)  d ppm 0.96 (s, 3 H) 1.01 (s, 3 H) 1.49 - 1.63 (m, 3 H) 1.83 (dt, J=14.56, 2.64 Hz, 1 H) 2.79 (s, 3 H) 3.08 - 3.18 (m, 1 H) 3.27 - 3.34 (m, 1 H) 3.54 (dd, J=12.80, 3.26 Hz, 1 H).
【０１６３】
中間体６９
【化９０】
2017510661.tif 000091
樹脂中間体６２（０．１ｇ，０．１６ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の中間体６８（０．０５５ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．１２２ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（０．０６４ｍＬ，０．４８ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．０５６ｍＬ，０．３２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×２ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍＬ）、そしてＤＣＭ（３×２ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS : 756 (M+1).
【０１６４】
化合物４
【化９１】
2017510661.tif 000092
樹脂中間体６９（０．１ｇ，０．１３ｍｍｏｌ）に、ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。該混合物を室温で２０分間攪拌し、続いて濾過し、該樹脂をＤＣＭ／ＴＦＡで洗浄し（１：１，３×２ｍＬ）、該濾液を減圧中で蒸発させた。該残渣を逆相ＨＰＬＣにより精製した（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ０．１％ ＴＦＡ ＡＣＮ ５％〜７５％，１４分）。該純粋なフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−Ｎ，３−ジメチル−２−（（Ｒ）−１，４，４−トリメチルピペリジン−２−カルボキサミド）ペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−２−メチル−５−フェニルペンタン酸（３０ｍｇ，収率３０％）を白色の固形物として得た。LC-MS : 756.5 [M+1]; 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) d ppm 0.75 (dd, J=6.53, 2.01 Hz, 3 H),  0.85 (td, J=7.34, 3.64 Hz, 4 H),  0.90 - 0.99 (m, 11 H),  1.01 - 1.16 (m, 9 H),  1.45 - 1.66 (m, 6 H),  1.67 - 1.85 (m, 4 H),  1.86 - 1.97 (m, 1 H),  2.03 - 2.06 (m, 3 H),  2.16 - 2.34 (m, 2 H),  2.39 - 2.51 (m, 1 H),  2.66 (d, J=1.25 Hz, 3 H),  2.75 - 2.85 (m, 2 H),  3.02 (d, J=1.25 Hz, 3 H),  3.16 (br. s., 1 H),  3.79 - 3.93 (m, 1 H),  4.29 (br. s., 2 H),  4.57 - 4.66 (m, 1 H),  5.55 - 5.70 (m, 1 H),  7.01 - 7.18 (m, 5 H),  7.98 (d, J=1.25 Hz, 1 H).
【０１６５】
中間体７０
【化９２】
2017510661.tif 000093
樹脂中間体６２（０．１ｇ，０．１６ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の中間体１（０．０５０ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．１２２ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（０．０６４ｍＬ，０．４８ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．０５６ｍＬ，０．３２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×２ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍＬ）、そしてＤＣＭ（３×２ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 742 (M+1).
【０１６６】
化合物５
【化９３】
2017510661.tif 000094
樹脂中間体７０（０．１ｇ，０．１６ｍｍｏｌ）に、ＤＣＭ（１ｍＬ）およびＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。該混合物を室温で２０分間攪拌し、続いて濾過し、該樹脂をＤＣＭ／ＴＦＡ（１：１，３×２ｍＬ）で洗浄し、該濾液を減圧中で蒸発させた。該残渣を逆相ＨＰＬＣにより精製した（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ ０．１％ ＴＦＡ，ＡＣＮ ５％〜５０％ １４分）。純粋なフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−２−メチル−５−フェニルペンタン酸（０．０４０ｇ，２９．２％）を白色の固形物として得た。LC-MS : 742 (M+1); 1H NMR (400 MHz, CD3OD)  δ ppm 0.71 - 0.78 (m, 3 H), 0.80 - 0.87 (m, 3 H), 0.93 (dd, J=9.91, 6.65 Hz, 6 H), 1.07 (d, J=7.03 Hz, 6 H) ,1.42 - 1.65 (m, 3 H), 1.74 - 1.85 (m, 3 H), 1.86 - 1.98 (m, 3 H), 2.05 (s, 4 H), 2.16 - 2.35 (m, 2 H), 2.38 - 2.51 (m, 1 H), 2.59 - 2.72 (m, 3 H), 2.77 - 2.83 (m, 2 H), 3.02 (s, 3 H), 3.84 - 3.94 (m, 1 H), 4.20 - 4.35 (m, 2 H), 4.56 - 4.65 (m, 1 H), 5.57 - 5.67 (m, 1 H), 7.03 - 7.09 (m, 1 H), 7.13 (s, 4 H), 7.91 - 8.02 (m, 2 H).
【０１６７】
中間体７１
【化９４】
2017510661.tif 000095
ＤＣＭ（２４ｍＬ）中のエチル ２−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−Ｎ，３−ジメチルペンタンアミド）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキシレート（Patterson A. et al J. Org. Chem. 2008, 73, 4362に記載されるとおり調製）（１．２ｇ，２．４０ｍｍｏｌ）の溶液に、同等体積のＴＦＡ（２４．００ｍＬ）を、１時間攪拌しながら加えた。続いて、該溶液を濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）で１回洗浄した。水性フラクションをＥｔＯＡｃで２回逆抽出し、有機フラクションを合わせて、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、Ｂｏｃ脱保護遊離アミンを得て、これをさらに精製することなく次の工程に使用した。ＣＨ２Ｃｌ２（２４ｍＬ）中のこのアミン化合物に、ＨＯＢＴ（０．３６８ｇ，２．４０ｍｍｏｌ）および中間体１（０．３９６９ｇ，２．５２ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、該混合物を、塩を入れた氷水浴内で攪拌しながら冷却し、ＰＳ−カルボジイミド（１．２３ｍｍｏｌ／ｇ）（２．５９８ｇ，２．８８ｍｍｏｌ）を加えた。該浴を室温に温め、１４時間攪拌し続けた。次いで、該混合物を濾過し、該樹脂をＤＣＭで洗浄し、該濾液を濃縮した。該粗混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で１回洗浄した。水性フラクションをＥｔＯＡｃで２回逆抽出し、有機フラクションを合わせて、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、４−メチルＭｅｐ−結合中間体を得て、これをさらに精製することなく使用した。ジオキサン（２４ｍＬ）で希釈した該粗中間体に、脱気した水（２４ｍＬ）中のＬｉＯＨ（０．２３０ｇ，９．６０ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。５時間攪拌し、該溶液を濃縮した。該残渣を、順相フラッシュクロマトグラフィーを用いることによりシリカゲルカラムにより精製した（ＤＣＭ／ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ（９０：１０：１〜７０：３０：１で溶出）（０〜１００％のグラジエントとしてＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ）。該純粋なフラクションを濃縮し、最終的に高真空下で乾燥させて、２−（（１Ｒ，３Ｒ）−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルペンタンアミド）−１−ヒドロキシ−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボン酸（１．００３ｇ，８２％）をアモルファス固形物として得た。LC/MS: 509 [M+1].
【０１６８】
中間体７２
【化９５】
2017510661.tif 000096
ピリジン（１９．４７ｍＬ）中の中間体７１（１．００２６ｇ，１．９６ｍｍｏｌ）の溶液を、氷水浴内で冷却し、無水酢酸（０．９２７ｍＬ，９．８２ｍｍｏｌ）を攪拌しながら加えた。該浴を室温に温め、２４時間攪拌し続けた。次いで、該溶液を氷水浴内で冷却し、脱気した水／ジオキサン（４０ｍＬ）中の１：１（ｖ／ｖ）溶液を加えた。該浴を室温に温め、２２時間攪拌し続けた。該残渣を蒸発により濃縮し、残渣を逆相クロマトグラフィーにより精製し（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（０．１％ ＴＦＡ）を使用，ＡＣＮ ５％〜５０％，１４分）、純粋なフラクションを凍結乾燥させて、２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボン酸（０．９４５ｇ，７２．２％）を無色の固形物として得た。LC-MS : 551 [M+1]; 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ ppm 0.85 (d, J=6.53 Hz, 3 H), 0.88 - 0.98 (m, 4 H), 0.98 - 1.08 (m, 6 H), 1.10 - 1.28 (m, 4 H), 1.59 (ddd, J=13.49, 7.47, 2.89 Hz, 1 H), 1.70 (d, J=14.05 Hz, 1 H), 1.81 - 2.12 (m, 5 H), 2.12 - 2.25 (m, 3 H), 2.32 (d, J=7.78 Hz, 2 H), 2.72 - 2.93 (m, 4 H), 3.07 - 3.18 (m, 4 H), 4.02 (d, J=10.54 Hz, 1 H), 4.10 - 4.39 (m, 1 H), 4.65 - 4.76 (m, 1 H), 5.64 - 5.80 (m, 1 H), 8.30 - 8.39 (m, 1 H), 8.66 (d, J=7.28 Hz, 1 H).
【０１６９】
中間体７３
【化９６】
2017510661.tif 000097
中間体７２（１００ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）を、０℃でＤＣＭ（５ｍＬ）中の２，３，４，５，６−ペンタンフルオロフェノール（４９．３２ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（４１．３４μｌ，０．２７ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。該溶液を室温にし、４時間攪拌し、続いて該溶媒を減圧下で留去した。ＥｔＯＡｃ（４ｍＬ）を該混合物に加え、得られた懸濁液を吸入濾過して、濾液中の所望の活性化した酸を得た。該ＥｔＯＡｃを減圧下で留去し、続いて乾燥ＤＭＦ（１．３ｍＬ）を加え、次いで中間体１８（５２．２ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（０．２１３ｍＬ）を加えた。該混合物を終夜攪拌し、続いてＤＭＦを高真空下で留去した。該残渣を逆相クロマトグラフィーにより精製し（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（１０ｍＭ 酢酸アンモニウムを含有），ＡＣＮ １０％〜８０％，２０分）、純粋なフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−２−メチル−５−（４−ニトロフェニル）ペンタン酸（８５ｍｇ，５９．３％）を無色の固形物として得た。LC/MS : 787 [M+1]
【０１７０】
化合物６
【化９７】
2017510661.tif 000098
２５ｍＬの丸底フラスコに、攪拌バー、中間体７３（８４．５ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（５ｍＬ）を入れ、Ｐｄ−Ｃ１０％（５０ｍｇ，０．４７ｍｍｏｌ）を窒素下で加えた。該混合物を、室温で水素バルーンを用いて１時間水素化した。該粗ＬＣ／ＭＳにより、出発物質の生成物への完全な変換が示された。反応混合液を珪藻土パッドに通して濾過し、フィルター上にてＭｅＯＨで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、最終的に高真空下で乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ，３−ジメチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−５−（４−アミノフェニル）−２−メチルペンタン酸（７９ｍｇ，９７％）を固形物として得た。LC-MS : 757 [M+1];  1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ  ppm 8.10 (s, 1 H) 6.99 (d, J=8.28 Hz, 2 H) 6.65 (d, J=8.28 Hz, 2 H) 5.66 - 5.78 (m, 1 H) 4.71 - 4.80 (m, 1H) 4.24 - 4.43 (m, 2 H) 3.13 (s, 3 H) 2.77 - 2.83 (m, 2 H) 2.61 - 2.71 (m, 1 H) 2.49 - 2.56 (m, 1 H) 2.44 (s, 3 H) 2.27 - 2.40 (m, 2 H) 2.17 (s, 3 H) 1.86 - 2.04 (m, 4 H) 1.74 - 1.83 (m, 1 H) 1.53 - 1.69 (m, 3 H) 1.31 (br. s., 3H) 1.17 (d, J=7.03 Hz, 4H) 0.98 - 1.07 (m, 8 H) 0.93 (d, J=7.53 Hz, 6H) 0.83 - 0.87 (m, 3 H).
【０１７１】
化合物７−１０のための一般的な合成スキーム
【化９８】
2017510661.tif 000099
【０１７２】
中間体７４
【化９９】
2017510661.tif 000100
樹脂中間体２８（０．２ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（４ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニルアミノ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸（０．３００ｇ，０．６４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．２４３ｇ，０．６４ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（０．１２８ｍＬ，０．９６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（０．１６８ｍＬ，０．９６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×２ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×２ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×２ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂中間体７４を次の工程に使用した。LC/MS:  1221 (M + 1).
【０１７３】
中間体７５
【化１００】
2017510661.tif 000101
樹脂中間体７４（０．２ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の２０％ ピペリジンを加えた。該混合物を室温で６分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×３ｍＬ）、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂中間体７５を次の反応工程に使用した。LC/MS:  999 (M + H).
【０１７４】
中間体７６
【化１０１】
2017510661.tif 000102
樹脂中間体７５（０．２ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）に、室温でＤＭＦ（２ｍＬ）中の２，５−ジオキソピロリジン−１−イル ６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（０．１４８ｇ，０．４８ｍｍｏｌ）の溶液、続いてＮ−メチルモルホリン（０．１０６ｍＬ，０．９６ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×３ｍＬ）、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂中間体７６を次の工程に使用した。LC/MS: 1192 (M + 1).
【０１７５】
化合物７
【化１０２】
2017510661.tif 000103
樹脂中間体７６（０．２ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）に、室温でＤＣＭ（１ｍＬ）、およびＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。該混合物を室温で２０分間攪拌し、濾過した。該樹脂をＤＣＭ／ＴＦＡ（１：１，３×２ｍＬ）で洗浄し、濾液を合わせて、減圧中で蒸発させた。該残渣を逆相ＨＰＬＣにより精製した（ＡＣＮ／水 ０．１％ＴＦＡ，ＡＣＮ ５％〜７５％，１４分）。純粋なフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ−エチル−３−メチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−５−（４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）フェニル）−２−メチルペンタン酸（０．０９５ｇ，２２．４８％）を白色の固形物として得た。LC-MS: 1092 [M+1]; 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ ppm 7.99 (s, 1 H), 7.34 (d ,  J =8.53 Hz, 2 H), 7.10 (d , J=8.53 Hz, 2 H), 6.66 (s, 2 H), 5.64 (d, J=10.79 Hz, 1 H), 4.50 - 4.61 (m, 1 H), 4.21 - 4.35 (m, 2 H), 3.92 (d, J=9.29 Hz, 1 H), 3.69 (br. s., 1 H), 3.37 (t, J=7.15 Hz, 2 H), 3.15-3.35 ( m, 4H), 3.04 (dt, J=3.58, 1.85 Hz, 1 H), 2.84 (t, J=7.65 Hz, 2 H), 2.76 (d, J=7.03 Hz, 2 H), 2.62 (br. s., 2 H), 2.38 - 2.52 (m, 2 H), 2.25 (t, J=11.54 Hz, 1 H), 2.16 (t, J=7.40 Hz, 2 H), 2.04 - 2.11 (m, 4 H), 1.70 - 2.00 (m, 7 H) 1.42 - 1.69 (m, 11 H), 1.34 - 1.40 (m, 1 H), 1.27 (t, J=6.78 Hz, 3 H), 1.16 - 1.24 (m, 2 H), 1.01 - 1.14 (m, 7 H), 0.90 (d, J=6.78 Hz, 3 H), 0.94 (d, J=6.53 Hz, 3 H), 0.84 (t, J=7.40 Hz, 3 H), 0.79 (d, J=6.53 Hz, 3 H).
【０１７６】
中間体７７
【化１０３】
2017510661.tif 000104
樹脂中間体２８に、ＤＭＦ（３８ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−５−ウレイドペンタン酸（３．８８ｇ，９．７６ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３．７１ｇ，９．７６ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（２．５９ｍＬ，１９．５２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３．４１ｍＬ，１９．５２ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×１００ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×１００ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂中間体７７を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 1150  (M + 1).
【０１７７】
中間体７８
【化１０４】
2017510661.tif 000105
樹脂中間体７７に、ＤＭＦ（３５ｍＬ）中の２０％ ピペリジンの溶液を加えた。該混合物を室温で６分間攪拌した。生じた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×１００ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×１００ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより分析し、弱いシグナルが示された。生じた樹脂中間体７８を次の工程反応に使用した。LC/MS: 928 (M + 1).
【０１７８】
中間体７９
【化１０５】
2017510661.tif 000106
樹脂中間体７８に、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタン酸（１．５２９ｇ，４．５０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．７１３ｇ，４．５０ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（１．２９４ｍＬ，９．７６ｍｍｏｌ）、およびＤＩＰＥＡ（１．７０５ｍＬ，９．７６ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×７５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×７５ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×７５ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂中間体７９を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 1250 (M + 1).
【０１７９】
中間体８０
【化１０６】
2017510661.tif 000107
樹脂中間体７９に、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の２０％ ピペリジンの溶液を加えた。該混合物を室温で６分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×７５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×７５ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×７５ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂中間体８０を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 1028 (M + 1).
【０１８０】
中間体８１
【化１０７】
2017510661.tif 000108
樹脂中間体８０に、室温でＤＭＦ（１８ｍＬ）中の２，５−ジオキソピロリジン−１−イル ６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（１．１５７ｇ，３．７５ｍｍｏｌ）の溶液、続いて４−メチルモルホリン（１．０３２ｍＬ，９．３８ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×７５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×７５ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×７５ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の樹脂を、ＴＦＡを加えることにより切り出し、ＬＣ／ＭＳにより分析し、所望生成物の形成が示された。樹脂中間体８１を次の工程に使用した。LC/MS: 1220 (M + 1).
【０１８１】
化合物８
【化１０８】
2017510661.tif 000109
化合物８１からの樹脂に、ＤＣＭ（４０ｍＬ）中のＴＦＡ（２．８９ｍＬ，３７．５４ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で５分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、さらに５０ｍＬ ＤＣＭで洗浄した。抽出物を合わせて、濃縮した。粗製物質を逆相ＨＰＬＣにより精製した（Ｃ１８カラム，０．１％ ＴＦＡ／水／０．１ ＴＦＡ アセトニトリル，０−４０％，３０分の方法）。純粋なフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ−エチル−３−メチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−５−（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）フェニル）−２−メチルペンタン酸（０．６２０ｇ，１２．３８％）を白色の固形物として得た。LC-MS: 1220 (M + 1); 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 8.03 (s, 1 H), 7.30 - 7.44 (m, 2 H), 7.07 (d, J=8.53 Hz, 2 H), 6.69 (s, 2 H), 5.53 - 5.68 (m, 1 H), 4.52 -4.63 (m, 1 H), 4.19 - 4.40 (m, 3 H), 4.01 - 4.12 (m, 2 H), 3.89 - 3.99 (m, 1 H), 3.56 - 3.74 (m, 1 H), 3.33 - 3.43 (m, 2 H), 3.23 - 3.32 (m, 1 H), 2.96 - 3.13(m, 4 H), 2.83 - 2.95 (m, 1 H), 2.66 - 2.83 (m, 3 H), 2.57 (br. s., 3 H), 2.40 - 2.52 (m, 2 H), 2.14 - 2.24 (m, 3 H), 2.02 - 2.11 (m, 4 H), 1.87 - 2.00 (m, 5 H), 1.72 - 1.87 (m, 4 H), 1.42 - 1.68 (m, 10 H), 1.16 - 1.28 (m, 5H), 1.09 (d, J=7.03 Hz, 6 H,) 0.76 - 0.96 (m, 16 H).
【０１８２】
中間体８２
【化１０９】
2017510661.tif 000110
樹脂中間体３８（０．３５ｇ，０．５６ｍｍｏｌ）に、ＤＭＦ（５ｍＬ）中の（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサン酸（０．５２５ｇ，１．１２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（０．４２６ｇ，１．１２ｍｍｏｌ）、２，４，６−トリメチルピリジン（０．２２３ｍＬ，１．６８ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０．２９３ｍＬ，１．６８ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で２時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×５ｍＬ）、およびＤＣＭ（３×５ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂中間体８２を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 1221 (M + 1).
【０１８３】
中間体８３
【化１１０】
2017510661.tif 000111
樹脂中間体８２に、ＤＭＦ（４ｍＬ）中の２０％ ピペリジンを加えた。該混合物を室温で６分間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×５ｍＬ）、ＤＣＭ（３×５ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂中間体８３を次の工程の反応に使用した。LC/MS:  999 (M + 1).
【０１８４】
中間体８４
【化１１１】
2017510661.tif 000112
樹脂中間体８３に、室温でＤＣＭ（４ｍＬ）中の２，５−ジオキソピロリジン−１−イル ６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサノエート（０．２５９ｇ，０．８４ｍｍｏｌ）の溶液、続いて４−メチルモルホリン（０．１８５ｍＬ，１．６８ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で６時間攪拌し、得られた樹脂を濾過し、ＤＭＦ（３×５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３×５ｍＬ）、ＤＣＭ（３×５ｍＬ）で洗浄し、減圧中で乾燥させた。少量の該化合物を樹脂から切り出し、ＬＣ／ＭＳにより解析し、該反応の完了が示された。生じた樹脂中間体８４を次の工程の反応に使用した。LC/MS: 1192 (M + 1).
【０１８５】
中間体８５
【化１１２】
2017510661.tif 000113
樹脂中間体８４（０．３５ｇ，０．５６ｍｍｏｌ）に、ＤＣＭ（５ｍＬ）中のＴＦＡ（０．２１６ｍＬ，２．８０ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で１０分間攪拌した。該溶媒を減圧下で留去した。該残渣をＤＭＳＯ中に溶解させ、逆相ＨＰＬＣにより精製した（０．１ ＴＦＡ／水／アセトニトリル，２０−８０％，１４分）。純粋な生成物を含有するフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（１，２−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ−エチル−３−メチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−５−（４−（（Ｓ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）フェニル）−２−メチルペンタン酸（０．１２３ｇ，１８．４２％）を白色の固形物として得た。LC/MS:  1192 (M + 1).
【０１８６】
化合物９
【化１１３】
2017510661.tif 000114
中間体８５（９５ｍｇ，０．０８ｍｍｏｌ）に、ＤＣＭ（１ｍＬ）中のＴＦＡ（０．１２３ｍＬ，１．５９ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。該混合物を室温で１時間攪拌した。該溶媒を減圧下で留去した。該残渣をＤＭＳＯ中に溶解させ、逆相ＨＰＬＣにより精製した（０．１ ＴＦＡ／水／アセトニトリル，１０−７０％，１０分）。純粋な生成物を含有するフラクションを凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（Ｒ）−１，２−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ−エチル−３−メチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−５−（４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）ヘキサンアミド）フェニル）−２−メチルペンタン酸（５３．０ｍｇ，５０．４％）を白色の固形物として得た。LC-MS : 1092 (M + 1).; 1H NMR (400 MHz, CD3OD)  δ  ppm 7.97 (s, 1 H), 7.36 (d, J=8.28 Hz, 2 H), 7.11 (d, J=8.28 Hz, 2 H), 6.65 (s, 2 H), 5.63 (d, J=11.29 Hz, 1 H), 4.34 (dd, J=8.28, 5.77 Hz, 1 H), 4.26 (br. s., 1 H),3.75-3.60 (m, 1 H),  3.32 - 3.46 (m, 4 H), 3.30-3.25 (m, 1 H), 2.71 - 2.90 (m, 5 H), 2.49 - 2.62 (m, 3 H), 2.27 (t, J=12.05 Hz, 1 H), 2.17 (t, J=7.40 Hz, 3 H) 2.00 - 2.12 (m, 5 H), 1.84 - 1.96 (m, 3 H), 1.72 - 1.84 (m, 4 H), 1.58 - 1.69 (m, 5 H), 1.47 - 1.56 (m, 4 H), 1.36 - 1.44 (m, 5 H), 1.14 - 1.30 (m, 6 H), 1.01 - 1.10 (m, 4 H), 0.93 (dd, J=13.93, 6.65 Hz, 7 H), 0.74 - 0.86 (m, 7 H).
【０１８７】
中間体８６
【化１１４】
2017510661.tif 000115
樹脂中間体７５（０．２０ｇ，０．１６ｍｍｏｌ）に、室温でＤＣＭ中の２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパノエート（８５ｍｇ，０．３２ｍｍｏｌ）の溶液、続いてＤＩＥＡ（０．０５６ｍＬ，０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で４時間攪拌し、得られた樹脂をＤＭＦ（３×３ｍＬ）、ＤＣＭ（３×３ｍＬ）、およびＭｅＯＨ（３×３ｍＬ）で洗浄し、減圧下で乾燥させた。少量の化合物をＴＦＡ／ＤＣＭ（１：２）で該樹脂から切り出した。該溶媒を蒸発させ、該粗生成物をＬＣ／ＭＳにより解析した。ＬＣ／ＭＳにより、該カップリング反応の完了が示された。LC/MS:  1050.37 (M+1).
【０１８８】
化合物１０
【化１１５】
2017510661.tif 000116
樹脂中間体８６（０．２０ｇ，０．１６ｍｍｏｌ）に、室温でＴＦＡ／ＤＣＭ（１：２，３ｍＬ）を加えた。該混合物を室温で１０分間攪拌し、濾過した。該樹脂をＤＣＭ（３×３ｍＬ）で洗浄し、全ての濾液を合わせて、減圧下で蒸発させて、粗生成物を得た。該粗生成物を逆相ＨＰＬＣにより精製した（Ｈ２ＯおよびＣＨ３ＣＮ（０．１％ ＴＦＡを含有），ＣＨ３ＣＮ ５％〜４０％，１２ＣＶの長さ）。収集したフラクションを合わせて、凍結乾燥させて、（２Ｓ，４Ｒ）−４−（２−（（１Ｒ，３Ｒ）−１−アセトキシ−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−２−（（２Ｒ，４Ｒ）−１，４−ジメチルピペリジン−２−カルボキサミド）−Ｎ−エチル−３−メチルペンタンアミド）−４−メチルペンチル）チアゾール−４−カルボキサミド）−５−（４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（３−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）プロパンアミド）ヘキサンアミド）フェニル）−２−メチルペンタン酸を白色の粉末（７０ｍｇ，３５％）として得た。LC/MS: 1050.37 (M+1); 1H NMR (400 MHz, メタノール-d4) δ 7.99 (s, 1H), 7.35 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.10 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.65 (s, 2H), 5.64 (d, J = 10.9 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.28 (td, J = 11.3, 10.0, 6.1 Hz, 2H), 3.92 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.69 (q, J = 6.8 Hz, 3H), 3.31 - 3.23 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 2.83 (t, J = 7.7 Hz, 3H), 2.76 (d, J = 7.1 Hz, 3H), 2.63 (s, 3H), 2.50 - 2.40 (m, 4H), 2.25 (t, J = 12.8 Hz, 1H), 2.06 (s, 4H), 2.00 - 1.69 (m, 8H), 1.69 - 1.52 (m, 6H), 1.53 - 1.31 (m, 4H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.08 (d, J = 7.1 Hz, 7H), 0.92 (dd, J = 13.7, 6.7 Hz, 7H), 0.83 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 0.78 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
【０１８９】
抱合の一般的な説明
抗体を含有するＡＤＣは、標準的な方法、例えば、以下に限定されないが、アルデヒド／シッフ結合、スルフヒドリル結合、酸不安定性結合、シス−アコニチル結合、ヒドラゾン結合、Hamblett, Clin. Cancer Res. 2004, 10, 7063-7070；Doronina et al., Nat. Biotechnol. 2003, 21(7), 778-784、およびFrancisco et al., Blood, 2003, 102, 1458-1465によって記載される方法に類似する方法、および下記の非限定的な例の適当な改変によって調製されてもよい。抗体は、ｐＨ７．２でＰＢＳ中の４０モル当量のＴＣＥＰおよび１ｍＭのＥＤＴＡを３７℃で３時間使用する還元条件下で処理することにより、チオール反応性種、例えば、システイン、グルタチオン、金属類を除去し、抗体中の鎖間ジスルフィド結合を減らす。この工程に続いて、１０，０００ＭＷＣＯ透析カセット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、４℃でＰＢＳ、ｐＨ７．２、１ｍＭ ＥＤＴＡで２回透析を行う。ジスルフィド結合は、ＰＢＳ、ｐＨ７．２、１ｍＭ ＥＤＴＡ中に２５℃で、抗体に対してデヒドロアスコルビン酸で４時間酸化させることによって再形成させる。その後、２０モル当量の式ＩＩの化合物は、ＰＢＳ、ｐＨ７．２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｖ／ｖ％ ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で２５℃にて１時間インキュベートすることによって、抗体の反応性チオール基を介して抱合させる。前記複合体は濾過により精製する。抱合反応は、４モル当量のＮ−アセチルシステイン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を加えてクエンチする。該抗体薬物複合体は、５ｍＭ ＮａＰＯ４中にてｐＨ６で２０Ｋ ＭＷＣＯカセットを用いて４℃で終夜透析し、続いて５ｍＬ セラミックスヒドロキシアパタイト（ＣＨＴ）タイプＩＩカートリッジ（Ｂｉｏｒａｄ）を用いて精製する。前記複合体を１０ｍＭ ＮａＰＯ４、ｐＨ６および０〜２Ｍ ＮａＣｌ直線グラジエントを用いてカートリッジから溶出し、濃縮し、２０ｍＭ ヒスチジン−ＨＣｌ、ｐＨ６．０中の透析を用いて緩衝液交換により製剤化することができる。
【０１９０】
インビトロ増殖アッセイ
Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（P.O. Box 1549, Manassa, VA 20108 (USA)）から取得したヒト癌細胞株集団（ＤＵ１４５、ＮＣＩ−Ｎ８７、およびＭＤＡ−ＭＢ−３６１）を用いて、本発明のツブリシン化合物の相対的な細胞毒性を決定した。前記細胞は、８０μｌの体積中に組織培養処理した９６ウェルプレートの１ウェルあたり２，０００〜５，０００個の密度で培地中にプレーティングし、終夜接着させた。５Ｘ濃度の各試験化合物は、培地中の試験試料を希釈することによって調製した。２０マイクロリットルの各試験試料を細胞に２回もしくは３回加え、最終用量曲線を段階的な１：４の連続希釈系で４μｇ／ｍｌから６１ｐｇ／ｍｌまでの範囲とした。処理した細胞は、３７℃／５％ ＣＯ２で７２〜１４４時間培養した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ発光生存アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、相対的な細胞毒性を決定した。簡単に説明すると、１００μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬を各ウェルに加え、軽く振盪させながら室温で１０分間インキュベートさせ、続いて各試料の５６０ｎＭでの吸光度をＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＥｎＶｉｓｉｏｎルミノメーターを用いて読み取った。細胞生存率を下記の式によって算出した：（処理した試料の平均発光／コントロール（未処理）試料の平均発光）Ｘ１００。ＩＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアによるロジスティック非線形回帰分析を用いて決定した。全ての化合物を全ての細胞株に対してアッセイしなかった。表Ｉは、アッセイのデータを提供する。
表Ｉ
【表１】
2017510661.tif 000117
【０１９１】
本明細書で引用される全ての参考文献（特許文献、特許出願文献、論文、教科書など）およびそこで引用される参考文献は、すでに存在していない範囲において、全ての目的について全体を援用することにより本明細書に取り込まれるものである。
【国際調査報告】
2017510661.tif 000135