(57)【要約】  本発明は、がんを治療するための組成物及び方法を提供する。この方法は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを投与することを含む。【選択図】図４Ａ【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法。
【請求項２】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニスト及びＰＤＬ２結合アンタゴニストからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１のそのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤＬ１へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤＬ２へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤＬ１及びＰＤＬ２の両方へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが抗体である、請求項３から７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがニボルマブである、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがペンブロリズマブである、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＣＴ−０１１である、請求項３に記載の方法。
【請求項１２】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＡＭＰ−２２４である、請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤＬ１結合アンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
ＰＤＬ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１へのＰＤＬ１の結合を阻害する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＰＤＬ１結合アンタゴニストが、Ｂ７−１へのＰＤＬ１の結合を阻害する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
ＰＤＬ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１及びＢ７−１の両方へのＰＤＬ１の結合を阻害する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
ＰＤＬ１結合アンタゴニストが抗ＰＤＬ１抗体である、請求項１３から１６の何れか一項に記載の方法。
【請求項１８】
抗ＰＤＬ１抗体がモノクローナル抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
抗ＰＤＬ１抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
抗ＰＤＬ１抗体が、ヒト化抗体又はヒト抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
ＰＤＬ１結合アンタゴニストが、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
抗体が、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号１）のＨＶＲ−Ｈ１配列、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）のＨＶＲ−Ｈ２配列及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）のＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖；並びにＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号４）のＨＶＲ−Ｌ１配列、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号５）のＨＶＲ−Ｌ２配列及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号６）のＨＶＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）又はＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩ  ＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ  ＳＡＳＦ  ＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤＬ２結合アンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
【請求項２５】
ＰＤＬ２結合アンタゴニストが抗体である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＰＤＬ２結合アンタゴニストがイムノアドヘシンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
抗体が、ＥＵ番号付けによる位置２９７にＡｓｎからＡｌａへの置換を有するヒトＩｇＧ１である、請求項８、１７から２３及び２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
ＯＸ４０結合アゴニストが、ＯＸ４０アゴニスト抗体、ＯＸ４０Ｌアゴニスト断片、ＯＸ４０オリゴマー受容体及びＯＸ４０イムノアドヘシンからなる群から選択される、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＯＸ４０結合アゴニストが、ヒトＯＸ４０と結合するＯＸ４０アゴニスト抗体である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
ＯＸ４０アゴニスト抗体が、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ０５６２又はＭＥＤＩ６３８３である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＯＸ４０アゴニスト抗体が全長ヒトＩｇＧ１抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
ＯＸ４０結合アゴニストが三量体ＯＸ４０Ｌ−Ｆｃタンパク質である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
ＯＸ４０結合アゴニストが、ＯＸ４０Ｌの１つ又は複数の細胞外ドメインを含むＯＸ４０Ｌアゴニスト断片である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
がんが、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮内膜がん、結腸がん、腎臓がん、食道がん、前立腺がん、結腸直腸がん、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫又は肝細胞性癌腫である、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
個体ががんを有する、又はがんと診断されている、請求項１から３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
治療が、治療の休止後に、個体において持続性の応答をもたらす、請求項１から３５の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
ＯＸ４０結合アゴニストが、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの前に、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと同時に、又はＰＤ−１軸結合アンタゴニストの後に投与される、請求項１から３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
個体がヒトである、請求項１から３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強する方法。
【請求項４０】
個体中のＣＤ８  Ｔ細胞が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストの投与の前と比較して増強されたプライミング、活性化、増殖及び／又は細胞溶解活性を有する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＣＤ８  Ｔ細胞の数が、組合せの投与の前と比較して上昇する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
ＣＤ８  Ｔ細胞が抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
Ｔｒｅｇ機能が、組合せの投与の前と比較して抑制される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
Ｔ細胞消耗が、組合せの投与の前と比較して減少する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニスト及びＰＤＬ２結合アンタゴニストからなる群から選択される、請求項３９から４４の何れか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１のそのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤＬ１へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤＬ２へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤＬ１及びＰＤＬ２の両方へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが抗体である、請求項４６から５０の何れか一項に記載の方法。
【請求項５２】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがニボルマブである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５３】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがペンブロリズマブである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５４】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＣＴ−０１１である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５５】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＡＭＰ−２２４である、請求項４６に記載の方法。
【請求項５６】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤＬ１結合アンタゴニストである、請求項４５に記載の方法。
【請求項５７】
ＰＤＬ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１へのＰＤＬ１の結合を阻害する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ＰＤＬ１結合アンタゴニストが、Ｂ７−１へのＰＤＬ１の結合を阻害する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
ＰＤＬ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１及びＢ７−１の両方へのＰＤＬ１の結合を阻害する、請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
ＰＤＬ１結合アンタゴニストが抗ＰＤＬ１抗体である、請求項５６から５９の何れか一項に記載の方法。
【請求項６１】
抗ＰＤＬ１抗体がモノクローナル抗体である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
抗ＰＤＬ１抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
抗ＰＤＬ１抗体が、ヒト化抗体又はヒト抗体である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
前記ＰＤＬ１結合アンタゴニストが、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される、請求項５６に記載の方法。
【請求項６５】
抗ＰＤＬ１抗体が、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号１）のＨＶＲ−Ｈ１配列、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）のＨＶＲ−Ｈ２配列及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）のＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖；並びにＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号４）のＨＶＲ−Ｌ１配列、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号５）のＨＶＲ−Ｌ２配列及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号６）のＨＶＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６６】
抗ＰＤＬ１抗体が、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）又はＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩ  ＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ  ＳＡＳＦ  ＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６０に記載の方法。
【請求項６７】
抗体が、ＥＵ番号付けによる位置２９７にＡｓｎからＡｌａへの置換を有するヒトＩｇＧ１である、請求項５１、６０から６３、６５及び６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤＬ２結合アンタゴニストである、請求項４５に記載の方法。
【請求項６９】
ＰＤＬ２結合アンタゴニストが抗体である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
ＰＤＬ２結合アンタゴニストがイムノアドヘシンである、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
ＯＸ４０結合アゴニストが、ＯＸ４０アゴニスト抗体、ＯＸ４０Ｌアゴニスト断片、ＯＸ４０オリゴマー受容体及びＯＸ４０イムノアドヘシンからなる群から選択される、請求項３９から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
ＯＸ４０結合アゴニストが、ヒトＯＸ４０と結合するＯＸ４０アゴニスト抗体である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
ＯＸ４０アゴニスト抗体が、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ０５６２又はＭＥＤＩ６３８３である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
ＯＸ４０アゴニスト抗体が全長ＩｇＧ１抗体である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
ＯＸ４０結合アゴニストが三量体ＯＸ４０Ｌ−Ｆｃタンパク質である、請求項３９から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
ＯＸ４０結合アゴニストが、ＯＸ４０Ｌの１つ又は複数の細胞外ドメインを含むＯＸ４０Ｌアゴニスト断片である、請求項３９から７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７７】
がんが、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮内膜がん、結腸がん、腎臓がん、食道がん、前立腺がん、結腸直腸がん、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫又は肝細胞性癌腫である、請求項３９から７６の何れか一項に記載の方法。
【請求項７８】
個体が、がんと診断されている、請求項３９から７７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７９】
治療が、治療の休止後に個体において持続性の応答をもたらす、請求項３９から７８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８０】
ＯＸ４０結合アゴニストが、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの前に、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと同時に、又はＰＤ−１軸結合アンタゴニストの後に投与される、請求項３９から７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
個体がヒトである、請求項３９から８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又はＯＸ４０結合アゴニストが、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、移植により、吸入により、髄腔内、脳室内又は鼻腔内投与される、請求項１から８１の何れか一項に記載の方法。
【請求項８３】
がんを治療する又はその進行を遅延させるための化学療法剤を投与することをさらに含む、請求項１から８２の何れか一項に記載の方法。
【請求項８４】
個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための医薬の製造におけるヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニストの使用であって、医薬は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、ＯＸ４０結合アゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物との組み合わせでの医薬の投与を含む、使用。
【請求項８５】
個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための医薬の製造におけるＯＸ４０結合アゴニストの使用であって、医薬は、ＯＸ４０結合アゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物との組み合わせでの医薬の投与を含む、使用。
【請求項８６】
個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるために使用するための、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物であって、治療は、第２の組成物との組み合わせでの前記組成物の投与を含み、第２の組成物は、ＯＸ４０結合アゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項８７】
個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるために使用するための、ＯＸ４０結合アゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物であって、治療は、第２の組成物との組み合わせでの前記組成物の投与を含み、第２の組成物は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む、組成物。
【請求項８８】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む医薬、並びに個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための、ＯＸ４０結合アゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物との組み合わせでの医薬の投与についての説明を含む添付文書を含むキット。
【請求項８９】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む第１の医薬、並びにＯＸ４０結合アゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む第２の医薬を含むキット。
【請求項９０】
個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための第１の医薬及び第２の医薬の投与についての説明を含む添付文書をさらに含む、請求項８９に記載のキット。
【請求項９１】
ＯＸ４０結合アゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む医薬、並びに個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物との組み合わせでの医薬の投与についての説明を含む添付文書を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願とのクロスリファレンス
本出願は、各々がその全内容が本明細書に出典明示により援用される、２０１３年１２月１７日に出願された米国仮出願番号第６１／９１７，２６４号及び２０１４年１１月１７日に出願された同６２／０８０，９９１号の優先権の利益を主張する。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される：配列表のコンピューター読み込み可能な形態（ＣＲＦ）（ファイル名：１４６３９２０３０６４０ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔ、記録日：２０１４年１２月１６日、サイズ：７２ＫＢ）。
【０００３】
本発明は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを投与することによって、がんを治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
Ｔ細胞への２つの異なるシグナルの提供は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による静止Ｔリンパ球のリンパ球活性化についての広く受容されたモデルである。Ｌａｆｆｅｒｔｙ等、Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ  ５３：２７−４２（１９７５）。このモデルは、非自己からの自己の識別及び免疫寛容をさらに提供する。Ｂｒｅｔｓｃｈｅｒ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １６９：１０４２−１０４９（１９７０）；Ｂｒｅｔｓｃｈｅｒ、Ｐ．Ａ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９６：１８５−１９０（１９９９）；Ｊｅｎｋｉｎｓ等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６５：３０２−３１９（１９８７）。一次シグナル、又は抗原特異的シグナルは、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）の情況において提示された外来抗原ペプチドの認識後にＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を介して伝達される。第２の又は共刺激シグナルは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に発現された共刺激分子によってＴ細胞に送達され、Ｔ細胞を誘導して、クローン増殖、サイトカイン分泌及びエフェクター機能を促進させる。Ｌｅｎｓｃｈｏｗ等、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：２３３（１９９６）。共刺激の非存在下では、Ｔ細胞は、抗原刺激に対して不応性になり得、有効な免疫応答を開始せず、消耗、又は外来抗原に対する寛容をさらに生じ得る。
【０００５】
この２シグナルモデルでは、Ｔ細胞は、陽性及び陰性の両方の二次共刺激シグナルを受ける。かかる陽性及び陰性シグナルの調節は、免疫寛容を維持し、自己免疫を防止しつつ、宿主の防御免疫応答を最大化するために重要である。陰性二次シグナルは、Ｔ細胞寛容の誘導に必要であると思われるが、陽性シグナルは、Ｔ細胞活性化を促進する。単純な２シグナルモデルは、ナイーブリンパ球についての妥当な説明をなおも提供するが、宿主の免疫応答は、ダイナミックなプロセスであり、共刺激シグナルは、抗原曝露されたＴ細胞にも提供され得る。共刺激の機構は、治療的に興味を持たれるが、それは、共刺激シグナルの操作が、細胞ベースの免疫応答を増強又は終結させるための手段を提供することが示されているからである。近年、Ｔ細胞機能不全又はアネルギーが、阻害受容体、プログラム死１ポリペプチド（ＰＤ−１）の誘導された持続性の発現と同時発生的に生じることが発見されている。結果として、ＰＤ−１、並びにプログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌｌ）及びプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）などの、ＰＤ−１との相互作用を介してシグナル伝達する他の分子の治療的標的化は、強く興味を持たれる領域である。
【０００６】
ＰＤ−Ｌ１は、多くのがんにおいて過剰発現され、予後不良と関連する場合が多い（Okazaki T等, Intern. Immun. 2007 19(7):813）（Thompson RH等, Cancer Res 2006, 66(7):3381）。興味深いことに、腫瘍反応性Ｔ細胞上のＰＤ−１の上方調節が、障害された抗腫瘍免疫応答に寄与し得ることを示す、正常組織中のＴリンパ球及び末梢血Ｔリンパ球とは対照的に、腫瘍浸潤性Ｔリンパ球の大部分は、ＰＤ−１を優勢に発現する（Blood 2009 114(8):1537）。これは、Ｔ細胞活性化の減弱及び免疫監視の回避を生じるための、ＰＤ−１発現Ｔ細胞と相互作用するＰＤ−Ｌ１発現腫瘍細胞によって媒介されるＰＤ−Ｌ１シグナル伝達の活用に起因し得る（Sharpe等, Nat Rev 2002）（Keir ME等, 2008 Annu. Rev. Immunol. 26:677）。したがって、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用の阻害は、腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性死滅を増強し得る。
【０００７】
ＰＤ−１、並びにプログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）及びプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）などの、ＰＤ−１との相互作用を介してシグナル伝達する他の分子の治療的標的化は、強く興味を持たれる領域である。ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達の阻害は、がん（例えば、腫瘍免疫）並びに急性及び慢性（例えば、遺残性）の両方の感染を含む感染の治療のためにＴ細胞免疫を増強するための手段として提唱されてきた。最適な治療的処置は、腫瘍増殖を直接阻害する薬剤によるＰＤ−１受容体／リガンド相互作用の遮断を組み合わせ得る。種々のがんの発達を治療、安定化、予防及び／又は遅延させるための最適な療法が、なおも必要とされている。
【０００８】
共刺激の機構は、治療的に興味を持たれるが、それは、共刺激シグナルの操作が、細胞ベースの免疫応答を増強又は終結させるための手段を提供することが示されているからである。ＯＸ４０（ＣＤ３４、ＴＮＦＲＳＦ４又はＡＣＴ３５抗原としても知られる）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞に共刺激シグナルを提供し、細胞増殖、生存、エフェクター機能及び遊走の増強につながり得る。ＯＸ４０シグナル伝達はまた、記憶Ｔ細胞発達及び機能も増強する。ＯＸ４０は、天然Ｔ細胞で構成的に発現されないが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合後に誘導される。ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌのリガンドは、主に、抗原提示細胞で発現される。ＯＸ４０は、活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞、活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞及び制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞によって高度に発現される。
【０００９】
ＯＸ４０シグナル伝達を、腫瘍細胞において調節解除されるその他のシグナル伝達経路と組み合わせることは、治療有効性をさらに増強し得る。したがって、種々のがん、免疫関連疾患及びＴ細胞機能障害性障害を治療する、又はその発生を遅延するためのこのような最適療法が依然として必要である。
【００１０】
特許出願、特許公開及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ寄託番号を含む、本明細書で引用される全ての参考文献は、各個々の参考文献が出典明示により援用されると具体的かつ個々に示されるかのように、その全内容が本明細書に出典明示により援用される。
【発明の概要】
【００１１】
一態様では、有効量のヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。
【００１２】
別の一態様では、有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強する方法が、本明細書で提供される。
【００１３】
さらなる態様では、感染（例えば、細菌又はウイルス又はその他の病原体による）を治療する方法が本明細書において提供される。一部の実施態様では、感染は、ウイルス及び／又は細菌によるものである。一部の実施態様では、感染は、病原体によるものである。一部の実施態様では、感染は、急性感染である。一部の実施態様では、感染は、慢性感染である。
【００１４】
別の一態様では、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させる（又は、一部の実施態様では、感染を治療する）ための医薬の製造におけるヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニストの使用であって、医薬は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物との組み合わせでの医薬の投与を含む、使用が、本明細書で提供される。
【００１５】
別の一態様では、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させる（又は、一部の実施態様では、感染を治療する）ための医薬の製造におけるＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）の使用であって、医薬は、抗ＨＥＲ２抗体及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含み、治療は、ＯＸ４０結合アゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物との組み合わせでの医薬の投与を含む、使用が、本明細書で提供される。
【００１６】
別の一態様では、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させる（又は、一部の実施態様では、感染を治療する）際の使用のための、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物であって、治療は、第２の組成物との組み合わせでのこの組成物の投与を含み、第２の組成物は、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む、組成物が、本明細書で提供される。
【００１７】
別の一態様では、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させる（又は、一部の実施態様では、感染を治療する）際の使用のための、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物であって、治療は、第２の組成物との組み合わせでのこの組成物の投与を含み、第２の組成物は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む、組成物が、本明細書で提供される。
【００１８】
別の一態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む医薬、並びに個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させる（又は、一部の実施態様では、感染を治療する）ための、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物との組み合わせでのこの医薬の投与についての説明を含む添付文書を含むキットが、本明細書で提供される。
【００１９】
別の一態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む第１の医薬、並びにＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む第２の医薬を含むキットが、本明細書で提供される。一部の実施態様では、このキットは、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させる（又は、一部の実施態様では、感染を治療する）ための第１の医薬及び第２の医薬の投与についての説明を含む添付文書をさらに含む。
【００２０】
別の一態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む医薬、並びに個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させる（又は、一部の実施態様では、感染を治療する）ための、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的な薬学的に許容される担体を含む組成物との組み合わせでのこの医薬の投与についての説明を含む添付文書を含むキットが、本明細書で提供される。
【００２１】
一部の実施態様では、このがんは、乳がん、肺がん、卵巣がん、胃がん、膀胱がん、膵臓がん、子宮内膜がん、結腸がん、腎臓がん、食道がん、前立腺がん、結腸直腸がん、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫又は肝細胞性癌腫である。
【００２２】
一部の実施態様では、この個体は、がんを有する、又はがんと診断されている。
【００２３】
一部の実施態様では、がん細胞（個体から得たがんの試料中の）は、ＰＤ−Ｌ１を発現しない。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、０％の試料を含む場合には、試料には存在しない。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカー発現は、タンパク質発現によって（例えば、免疫組織化学（ＩＨＣ）法によって）決定される。
【００２４】
一部の実施態様では、がん細胞（個体から得たがんの試料から得られた）は、ＰＤ−Ｌ１を発現する。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、０％を超える試料を含む場合に、試料中に存在する。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、試料においてタンパク質発現によって検出される。一部の実施態様では、タンパク質発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用して検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＩＨＣによって弱い染色強度、ＩＨＣによって中程度の染色強度又はＩＨＣによって強い染色強度として検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用して検出され、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＩＨＣによって中程度の染色強度又はＩＨＣによって強い染色強度として検出される。
【００２５】
一部の実施態様では、個体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストに対して耐性であるがんを有する。一部の実施態様では、個体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストに対して難治性である。一部の実施態様では、患者は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストに対して有効な反応を有さなかった。
【００２６】
一部の実施態様では、個体は、多量のＴ細胞浸潤物（例えば、診断試験を使用して決定されるような）を有するがんを有する。一部の実施態様では、個体は、少ない又は本質的に検出不能なＴ細胞浸潤物（例えば、診断試験を使用して決定されるような）を有するがんを有する。
【００２７】
上記及び本明細書において記載された方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）の治療又は投与は、治療の休止後に、個体において持続性の応答をもたらす。
【００２８】
一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤＬ１抗体）を用いる併用治療は、相乗的であり、それによって、組合せ中のＯＸ４０結合剤（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）の有効な用量は、単剤としてのＯＸ４０結合剤（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）の有効な用量と比較して低減される。
【００２９】
一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニストは、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの前に、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと同時に又はＰＤ−１軸結合アンタゴニストの後に投与される。一部の実施態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストは、同一組成物中にある。
【００３０】
一部の実施態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストは、別個の組成物中にある。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニスト及びＰＤＬ２結合アンタゴニストからなる群から選択される。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニストである。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、そのリガンド結合パートナーへのＰＤ−１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１へのＰＤ−１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２へのＰＤ−１の結合を阻害する。一部の実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１及びＰＤＬ２の両方へのＰＤ−１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗体である。一部の実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ニボルマブである。一部の実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ペンブロリズマブである。一部の実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＣＴ−０１１である。一部の実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４である。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１結合アンタゴニストである。一部の実施態様では、このＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１へのＰＤＬ１の結合を阻害する。一部の実施態様では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、Ｂ７−１へのＰＤＬ１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１及びＢ７−１の両方へのＰＤＬ１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤＬ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤＬ１抗体である。一部の実施態様では、抗ＰＤＬ１抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施態様では、抗ＰＤＬ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である。一部の実施態様では、抗ＰＤＬ１抗体は、ヒト化抗体又はヒト抗体である。一部の実施態様では、このＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される。一部の実施態様では、この抗体は、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号１）のＨＶＲ−Ｈ１配列、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）のＨＶＲ−Ｈ２配列及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）のＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖；並びにＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号４）のＨＶＲ−Ｌ１配列、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号５）のＨＶＲ−Ｌ２配列及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号６）のＨＶＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）又はＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩ  ＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号８）のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ  ＳＡＳＦ  ＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２結合アンタゴニストである。一部の実施態様では、このＰＤＬ２結合アンタゴニストは、抗体である。一部の実施態様では、このＰＤＬ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。一部の実施態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、１又は複数の非グリコシル化部位突然変異（例えば、置換）を含む抗体（例えば、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体又は抗ＰＤＬ２抗体）である。一部の実施態様では、置換突然変異は、アミノ酸位置Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５及びＤ２６５（ＥＵ番号付け）に１又は複数の置換を含む。一部の実施態様では、この置換突然変異は、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＤ２６５Ａ（ＥＵ番号付け）からなる群から選択される。一部の実施態様では、この抗体はヒトＩｇＧ１である。
【００３１】
一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニストは、ＯＸ４０アゴニスト抗体、ＯＸ４０Ｌアゴニスト断片、ＯＸ４０オリゴマー受容体及びＯＸ４０イムノアドヘシンからなる群から選択される。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ヒトＯＸ４０と結合する。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、本明細書に開示される（例えば、段落１９８−２２６に）抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか１種である。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ０５６２又はＭＥＤＩ６３８３である。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、全長ＩｇＧ１抗体である。一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニストは、三量体ＯＸ４０Ｌ−Ｆｃタンパク質である。一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニストは、米国特許第７９５９９２５号に記載される三量体ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質である。一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニストは、ＯＸ４０Ｌの１又は複数の細胞外ドメインを含む。任意の他の実施態様と組み合され得る一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体）は、ＭＥＤＩ６３８３ではない。任意の他の実施態様と組み合され得る一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体）は、ＭＥＤＩ０５６２ではない。一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体）は、ヒト及び／又はヒト化抗体である。一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体）は、枯渇抗ヒトＯＸ４０抗体（例えば、ヒトＯＸ４０を発現する細胞を枯渇させる）である。一部の実施態様では、ヒトＯＸ４０発現細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。一部の実施態様では、ヒトＯＸ４０発現細胞は、Ｔｒｅｇ細胞である。一部の実施態様では、枯渇は、ＡＤＣＣ及び／又は食作用によってである。一部の実施態様では、抗体は、ヒトエフェクター細胞によって発現されるＦｃγＲと結合し、ヒトエフェクター細胞機能を活性化することによってＡＤＣＣを媒介する。一部の実施態様では、抗体は、ヒトエフェクター細胞によって発現されたＦｃγＲと結合し、ヒトエフェクター細胞機能を活性化することによって食作用を媒介する。一部の実施態様では、ヒトエフェクター細胞は、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球及び好中球から選択される。一部の実施態様では、ヒトエフェクター細胞は、マクロファージである。一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体）は、機能的Ｆｃ領域を有する。一部の実施態様では、機能的Ｆｃ領域のエフェクター機能は、ＡＤＣＣである。一部の実施態様では、機能的Ｆｃ領域のエフェクター機能は、食作用である。一部の実施態様では、機能的Ｆｃ領域のエフェクター機能は、ＡＤＣＣ及び食作用である。一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１である。一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４である。
【００３２】
上及び本明細書に記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又はＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）は、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、移植により、吸入により、髄腔内、脳室内又は鼻腔内投与される。上及び本明細書に記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、この治療は、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための化学療法剤を投与することをさらに含む。一部の実施態様では、この個体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストとの併用治療の前に、化学療法剤で治療されている。一部の実施態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又はＯＸ４０結合アゴニストの組合せによって治療された個体は、化学療法剤治療に対して難治性である。本出願を通じて記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様は、がんを治療する又はその進行を遅延させるための化学療法剤を投与することをさらに含む。
【００３３】
上及び本明細書に記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、この個体中のＣＤ８  Ｔ細胞は、この組合せの投与の前と比較して増強されたプライミング、活性化、増殖及び／又は細胞溶解活性を有する。一部の実施態様では、ＣＤ８  Ｔ細胞の数は、この組合せの投与の前と比較して上昇する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞は、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞である。一部の実施態様では、Ｔｒｅｇ機能は、この組合せの投与の前と比較して抑制される。一部の実施態様では、Ｔ細胞消耗は、この組合せの投与の前と比較して減少する。一部の実施態様では、Ｔｒｅｇ細胞の数が、組合せの投与の前に対して減少する。一部の実施態様では、血漿インターフェロンガンマが、組合せの投与の前に対して増大される。一部の実施態様では、記憶Ｔエフェクター細胞の数が、組合せの投与の前に対して増大される。一部の実施態様では、記憶Ｔエフェクター細胞活性化及び／又は増殖が、組合せの投与の前に対して増大される。一部の実施態様では、記憶Ｔエフェクター細胞は、末梢血において検出される。一部の実施態様では、記憶Ｔエフェクター細胞の検出は、ＣＸＣＲ３の検出によってである。
【００３４】
対象から得た白血球を含む試料（例えば、末梢血）中の、１又は複数のマーカー遺伝子、タンパク質（単数又は複数）（例えば、サイトカイン、例えば、ガンマインターフェロン）及び／又は細胞組成物（例えば、Ｔｒｅｇの百分率及び／又はＴｒｅｇの絶対数；例えば、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の数）の発現レベルを測定することによってＯＸ４０アゴニスト治療の薬力学的活性をモニタリングするための方法であって、対象が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を用いて治療されており、１又は複数のマーカー遺伝子が、Ｔ細胞マーカー遺伝子又は記憶Ｔ細胞マーカー遺伝子（例えば、Ｔエフェクター記憶細胞のマーカー）から選択される方法並びに参照と比較される、対象から得た試料中の１又は複数のマーカー遺伝子、タンパク質（単数又は複数）及び／又は細胞組成物の発現レベルに基づいて薬力学的活性を実証するとして治療を決定するための方法であって、参照と比較される、１又は複数のマーカー遺伝子の発現レベルの増大が、ＯＸ４０アゴニスト治療の薬力学的活性を示す方法が、本明細書において提供される。マーカー遺伝子、タンパク質及び／又は細胞組成物の発現レベルは、本明細書に記載されるような１又は複数の方法によって測定され得る。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト治療及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト併用治療の薬力学的活性をモニタリングするための方法であって、個体から得た試料（例えば、末梢血試料）中の増殖ＣＤ８＋Ｔ細胞のレベル（例えば、Ｋｉ６７＋／総ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率）を測定することを含み、参照（例えば、併用治療の前のレベル）と比較される、試料中の増殖ＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルの増大が、併用治療の薬力学的活性を示す方法が、本明細書において提供される。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト治療及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト併用治療の薬力学的活性をモニタリングするための方法であって、個体から得た試料（例えば、末梢血試料）中の、活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３＋／総ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率）を測定することを含み、参照（例えば、併用治療の前のレベル）と比較される、試料中の活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルの増大が、併用治療の薬力学的活性を示す方法が、本明細書において提供される。
【００３５】
対象から得た白血球を含む試料（例えば、末梢血）中の、１又は複数のマーカー遺伝子、タンパク質（単数又は複数）（例えば、サイトカイン、例えば、ガンマインターフェロン）及び／又は細胞組成物（例えば、Ｔｒｅｇの百分率及び／又はＴｒｅｇの絶対数；例えば、末梢血試料中のＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の数）の発現レベルを測定することによって、ＯＸ４０アゴニスト治療に対する対象の応答性をモニタリングするための方法であって、対象が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を用いて治療されており、１又は複数のマーカー遺伝子が、Ｔ細胞マーカー遺伝子又は記憶Ｔ細胞マーカー遺伝子（例えば、Ｔエフェクター記憶細胞のマーカー）から選択される方法並びに対象を、参照と比較される、対象から得た試料中の１又は複数のマーカー遺伝子、タンパク質（単数又は複数）及び／又は細胞組成物の発現レベルに基づいた治療に対して応答性又は非応答性として分類するための方法であって、参照と比較される、１又は複数のマーカー遺伝子の発現レベルの増大が、ＯＸ４０アゴニスト治療に対する応答性又は応答性の欠如を示す方法が、本明細書において提供される。マーカー遺伝子、タンパク質及び／又は細胞組成物の発現レベルは、本明細書に記載されるような１又は複数の方法によって測定され得る。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト治療及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト併用治療の応答性をモニタリングするための方法であって、個体から得た試料（例えば、末梢血試料）中の増殖ＣＤ８＋Ｔ細胞のレベル（例えば、Ｋｉ６７＋／総ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率）を測定することを含み、参照（例えば、併用治療の前のレベル）と比較される、試料中の増殖ＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルの増大が、併用治療に対する応答性を示す方法が、本明細書において提供される。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト治療及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト併用治療の応答性をモニタリングするための方法であって、個体から得た試料（例えば、末梢血試料）中の、活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、ＣＸＣＲ３＋／総ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率）を測定することを含み、参照（例えば、併用治療の前のレベル）と比較される、試料中の活性化されたＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルの増大が、併用治療に対する応答性を示す方法が、本明細書において提供される。
【００３６】
本明細書に記載される種々の実施態様の特性のうち１つ、一部又は全てが組み合わされて、本発明の他の実施態様を形成し得ることを、理解すべきである。本発明のこれら及び他の態様は、当業者に明らかとなる。本発明のこれら及び他の実施態様は、以下の詳細な説明によってさらに記載される。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】図１は、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞が、ＣＴ２６結腸直腸同系腫瘍モデル（コントロール処理マウス）において高レベルのＰＤ−１阻害性受容体を発現することを示す図である。ＰＤ−１発現ＣＤ８＋ＴＩＬのおよそ半量は、ＯＸ４０を発現する。コントロール抗体を用いる治療の開始の２日後に、５匹のマウスのうちの１匹から得た代表的フローサイトメトリードットプロット。
【図２】（図２Ａ）は、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体単独及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体と組み合わせた抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いる治療が、腫瘍内Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の割合（ＣＤ４５＋細胞の総数に対する）を大幅に低減させたことを示す図である。（図２Ｂ）は、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体単独及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体と組み合わせた抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いる治療が、ＣＴ２６結腸直腸腫瘍モデルにおいて、腫瘍内Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の絶対数を大幅に低減させたことを示す図である。（図２Ａ）及び（図２Ｂ）の両方について、データは、治療の開始の９日後のものであり、各記号は、個体マウスを表す。マウスに、コントロール抗体又は抗ＰＤＬ１抗体を、１日目に第１の用量のために１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＢＩＷ（週に２回）で投薬した。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を、１日目に第１の用量のために０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷ（週に３回）で投薬した。
【図３】図３Ａ及びＢは、：抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いる治療が、ＣＴ２６結腸直腸同系腫瘍モデルにおける、（図３Ａ）腫瘍内骨髄（ＣＤｌ  ｌｂ＋Ｇｒ−ｌ低／中）細胞での、及び（図３Ｂ）腫瘍細胞でのＰＤＬ１発現を増強したことを示す図である。データは、治療の開始から９日後のものである。各点／四角は、１個体のマウスを表す。フローサイトメトリーによる幾何平均蛍光強度（ｇｅｏ  ＭＦＩ）によって測定されたＰＤＬ１発現。独立ｔ検定によって算出されるように、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５。本実験における投薬は、コントロール抗体のための、１日目の１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶの第１の用量と、それに続く、５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＢＩＷである。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体は、１日目の第１の用量のための０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶと、それに続く０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。
【図４Ａ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体を用いる治療が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＭＣ３８結腸直腸がん同系腫瘍モデルにおいて相乗的な組合せの有効性を実証する図である。（図４Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による、経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図４Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。コントロール抗体、抗ＰＤＬ１抗体又は抗ＯＸ４０アゴニスト抗体は、１日目に第１の用量のために１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、３週間１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。
【図４Ｂ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体を用いる治療が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＭＣ３８結腸直腸がん同系腫瘍モデルにおいて相乗的な組合せの有効性を実証する図である。（図４Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による、経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図４Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。コントロール抗体、抗ＰＤＬ１抗体又は抗ＯＸ４０アゴニスト抗体は、１日目に第１の用量のために１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、３週間１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。
【図５Ａ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体を用いる治療が、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＣＴ２６結腸直腸同系腫瘍モデルにおいて相乗的な組合せの有効性を実証したことを示す。（図５Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図５Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。コントロール抗体又は抗ＰＤＬ１は、１日目に第１の用量のために１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、続いて、３週間、５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体は、１日目に１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで単回用量として投与した。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。
【図５Ｂ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体を用いる治療が、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおけるＣＴ２６結腸直腸同系腫瘍モデルにおいて相乗的な組合せの有効性を実証したことを示す。（図５Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図５Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。コントロール抗体又は抗ＰＤＬ１は、１日目に第１の用量のために１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ、続いて、３週間、５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体は、１日目に１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで単回用量として投与した。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。
【図６Ａ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体単剤治療が、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてＣＴ２６結腸直腸がん同系腫瘍モデルにおいて用量応答性を示すことを示す。（図６Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図６Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。コントロール抗体を、１日目に第１の用量のために１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、３週間、ｌｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を、１日目に第１の用量のために０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで投薬し、続けて、３週間、ＴＩＷ  ＩＰで投薬した。
【図６Ｂ】抗ＯＸ４０アゴニスト抗体単剤治療が、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてＣＴ２６結腸直腸がん同系腫瘍モデルにおいて用量応答性を示すことを示す。（図６Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図６Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。コントロール抗体を、１日目に第１の用量のために１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、３週間、ｌｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を、１日目に第１の用量のために０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで投薬し、続けて、３週間、ＴＩＷ  ＩＰで投薬した。
【図７Ａ】最大下用量の抗ＯＸ４０アゴニスト抗体及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体を用いる併用治療が、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてＣＴ２６結腸直腸がん同系腫瘍モデルにおいて相乗的な組合せの有効性を実証したことを示す。（図７Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図７Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。コントロール抗体又は抗ＰＤＬ１を、１日目に第１の用量のために１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、３週間、１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。１日目に第１の用量ＩＶを用いて抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を０．１ｍｇ／ｋｇ与え、その後、３週間、０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。
【図７Ｂ】最大下用量の抗ＯＸ４０アゴニスト抗体及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体を用いる併用治療が、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてＣＴ２６結腸直腸がん同系腫瘍モデルにおいて相乗的な組合せの有効性を実証したことを示す。（図７Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図７Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。コントロール抗体又は抗ＰＤＬ１を、１日目に第１の用量のために１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、３週間、１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。１日目に第１の用量ＩＶを用いて抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を０．１ｍｇ／ｋｇ与え、その後、３週間、０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。
【図８Ａ】別個の実験において、単回０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ注射及び抗ＰＤＬ１の最大下の有効な用量で投薬された抗ＯＸ４０アゴニスト抗体が、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてＣＴ２６結腸直腸同系腫瘍モデルにおける相乗的な組合せの有効性を実証したことを示す。（図８Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図８Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。コントロール抗体又は抗ＰＤＬ１は、１日目に第１の用量のために１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、３週間、５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。抗ＯＸ４０抗体は、１日目に第１の又は単回用量ＩＶを用いて０．１ｍｇ／ｋｇを、続いて、３週間、０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。
【図８Ｂ】別個の実験において、単回０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶ注射及び抗ＰＤＬ１の最大下の有効な用量で投薬された抗ＯＸ４０アゴニスト抗体が、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいてＣＴ２６結腸直腸同系腫瘍モデルにおける相乗的な組合せの有効性を実証したことを示す。（図８Ａ）治療群、ｎ＝１０／群による経時的な（日）平均腫瘍量（ｍｍ３）測定値。（図８Ｂ）治療群による経時的な個体腫瘍量測定値。黒色線は、群の平均を示す。青色破線は、コントロール群の平均を示す。灰色線は、個体動物である。赤色線は、潰瘍化腫瘍又は過度の腫瘍の大きさのために研究から脱落した個体動物を示す。コントロール抗体又は抗ＰＤＬ１は、１日目に第１の用量のために１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶで、続いて、３週間、５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。抗ＯＸ４０抗体は、１日目に第１の又は単回用量ＩＶを用いて０．１ｍｇ／ｋｇを、続いて、３週間、０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷで投薬した。
【図９Ａ−Ｄ】図９Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、末梢血中の、増殖Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ細胞、血漿インターフェロン−ガンマ及び活性化されたＴ細胞のレベルに対する、ＯＸ４０アゴニスト抗体及びＰＤＬ１アンタゴニスト（抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体）を用いる併用治療の効果を示す図である。組合せによって治療されたＣＴ２６マウスから採取した末梢血の分析によって、エフェクター細胞増殖及び炎症性Ｔ細胞マーカーの増大が示された。ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９Ａ）、Ｔｒｅｇ細胞（図９Ｂ）、血漿インターフェロンガンマレベル（図９Ｃ）及び活性化されたＴ細胞（図９Ｄ）の増殖のレベルを調べた。（図９Ａ）増殖ＣＤ８＋Ｔ細胞のレベル（ｋｉ６７＋／総ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率として表される）は、ＯＸ４０アゴニスト抗体又はＰＤＬ１アンタゴニスト抗体単独を用いる治療に対して、ＯＸ４０アゴニスト抗体及びＰＤ−Ｌ１アンタゴニストの組合せを用いて治療した動物において大幅に増大した。（図９Ｂ）末梢血Ｔｒｅｇの低減が、ＯＸ４０アゴニスト抗体単剤を用いる治療及びＯＸ４０アゴニスト抗体及びＰＤＬ１アンタゴニストの組合せを用いる治療を用いて観察された。（図９Ｃ）血漿ガンマインターフェロン（ＩＦＮｇ）の増大が、ＯＸ４０アゴニスト及びＰＤＬ１アンタゴニストの組合せを用いる治療を用いて観察された。（図９Ｄ）活性化されたＴ細胞（具体的には、活性化された記憶Ｔｅｆｆ細胞）のレベルは、ＯＸ４０アゴニスト又はＰＤＬ１アンタゴニスト単独を用いる治療に対して、ＯＸ４０アゴニスト抗体及びＰＤ−Ｌ１アンタゴニストの組合せを用いて治療した動物において大幅に増大した。
【図１０】図１０は、ＯＸ４０発現の、尿路上皮膀胱がん（ＵＢＣ）及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を有するヒト患者から得られたがん試料におけるＰＤＬ１診断状態との関連を示す。組織試料は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を有する第１相臨床治験に参加している患者から得たものであり、腫瘍浸潤性免疫細胞（ＩＣ）の、ＭＰＤＬ３２８０Ａ．ＰＤ−Ｌ１バイオマーカー状態を、本明細書に開示されたようにＩＨＣを使用して決定した。ＯＸ４０発現レベルは、ｒｔＰＣＲ分析（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）を使用して決定した。三角は、患者が部分的又は完全臨床応答を有していたことを意味し、丸は、患者が、安定な疾患を示したことを意味し、四角は、患者が、進行性の疾患を有していたことを意味する。
【図１１Ａ−Ｆ】図１１Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ及びＦは、コントロール細胞試料の例示的ＩＨＣ分析を示す図である。（図１１Ａ）親のＨＥＫ−２９３細胞の陰性コントロールＩＨＣ染色、（図１１Ｂ）弱い染色強度を有する、組換えヒトＰＤ−Ｌ１を用いてトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞のＩＨＣ染色、（図１１Ｃ）中程度の染色強度を有する、組換えヒトＰＤ−Ｌ１を用いてトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞のＩＨＣ染色、（図１１Ｄ）強い染色強度を有する、組換えヒトＰＤ−Ｌ１を用いてトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞のＩＨＣ染色、（図ＨＥ）胎盤組織試料の陽性組織コントロールＩＨＣ染色、（図１１Ｆ）扁桃腺組織試料の陽性組織コントロールＩＨＣ染色。全てのＩＨＣ染色は、専売の抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用して実施した。
【図１２Ａ−Ｃ】図１２Ａ、Ｂ及びＣは、（図１２Ａ）トリプルネガティブ乳がん、（図１２Ｂ）悪性メラノーマ、（図１２Ｃ）ＮＳＣＬＣ、腺癌に由来する腫瘍試料の例示的ＰＤ−Ｌ１陽性ＩＨＣ染色を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
本出願の発明者らは、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体と抗ＰＤ−Ｌ１免疫療法との組合せが、腫瘍増殖の相乗された阻害、増加した奏功率を生じたことを示している。
【００３９】
一態様では、有効量のヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法、組成物及び使用が、本明細書で提供される。
【００４０】
別の一態様では、有効量のヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強するための方法、組成物及び使用が、本明細書で提供される。
【００４１】
別の態様では、有効量のヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを投与することを含む、がんを有する個体において感染（例えば、細菌又はウイルス又はその他の病原体による）を治療するための方法、組成物及び使用が、本明細書において提供される。
【００４２】
Ｉ．定義
本発明を詳細に記載する前に、本発明が、特定の組成物又は生物学的系に限定されず、当然変動し得ることを理解すべきである。本明細書で使用される用語法は、特定の実施態様を記載することのみを目的としており、限定を意図しないこともまた、理解すべきである。
【００４３】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「この（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他を示さない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「１つの（ａ）分子」に対する言及は、任意選択的に、２つ以上のかかる分子の組合せなどを含む。
【００４４】
用語「約」とは、本明細書で使用する場合、本技術分野の当業者に容易に公知のそれぞれの値についての、通常の誤差範囲を指す。本明細書の「約」値又はパラメータに対する言及は、その値又はパラメータ自体に関する実施態様を含む（及び記述する）。
【００４５】
本明細書に記載される本発明の態様及び実施態様は、その態様及び実施態様を「含む」、それら「からなる」及びそれら「から本質的になる」ことを含むと理解される。
【００４６】
本明細書において、用語「ＯＸ４０」とは、特に断りのない限り、霊長類（例えば、ヒト）などの哺乳動物及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含めた、任意の脊椎動物供給源から得られた天然ＯＸ４０を指す。この用語は、「全長」、未処理ＯＸ４０並びに細胞におけるプロセシングに起因するＯＸ４０の任意の形態を包含する。この用語はまた、ＯＸ４０の天然に存在する変異体、例えば、スプライシング変異体又は対立遺伝子変異体を包含する。シグナルペプチドを欠く例示的ヒトＯＸ４０のアミノ酸配列は、配列番号６０に示されている。
（ＬＨＣＶＧＤＴＹＰＳＮＤＲＣＣＨＥＣＲＰＧＮＧＭＶＳＲＣＳＲＳＱＮＴＶＣＲＰＣＧＰＧＦＹＮＤＶＶＳＳＫＰＣＫＰＣＴＷＣＮＬＲＳＧＳＥＲＫＱＬＣＴＡＴＱＤＴＶＣＲＣＲＡＧＴＱＰＬＤＳＹＫＰＧＶＤＣＡＰＣＰＰＧＨＦＳＰＧＤＮＱＡＣＫＰＷＴＮＣＴＬＡＧＫＨＴＬＱＰＡＳＮＳＳＤＡＩＣＥＤＲＤＰＰＡＴＱＰＱＥＴＱＧＰＰＡＲＰＩＴＶＱＰＴＥＡＷＰＲＴＳＱＧＰＳＴＲＰＶＥＶＰＧＧＲＡＶＡＡＩＬＧＬＧＬＶＬＧＬＬＧＰＬＡＩＬＬＡＬＹＬＬＲＲＤＱＲＬＰＰＤＡＨＫＰＰＧＧＧＳＦＲＴＰＩＱＥＥＱＡＤＡＨＳＴＬＡＫＩ）。
【００４７】
「ＯＸ４０活性化」とは、ＯＸ４０受容体の活性化を指す。一般に、ＯＸ４０活性化は、シグナル伝達をもたらす。
【００４８】
用語「抗ＯＸ４０抗体」及び「ＯＸ４０と結合する抗体」は、十分な親和性でＯＸ４０を結合可能であり、その結果、抗体が、ＯＸ４０の標的化において診断及び／又は治療薬として有用であるような抗体を指す。一実施態様では、抗ＯＸ４０抗体の、無関係の非ＯＸ４０タンパク質との結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるように、抗体のＯＸ４０との結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、ＯＸ４０と結合する抗体は、≦１μΜ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ−１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ−１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様では、抗ＯＸ４０抗体は、種々の種に由来するＯＸ４０の間で保存されているＯＸ４０のエピトープと結合する。
【００４９】
用語「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」とは、ＰＤ−１シグナル伝達軸に対するシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全を除去するように、ＰＤ−１軸結合パートナーとその結合パートナーのうちいずれか１又は複数との相互作用を阻害する分子を指し、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅）を回復又は増強させる結果となる。本明細書で使用する場合、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが含まれる。
【００５０】
用語「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」とは、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２などのその結合パートナーのうち１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する分子を指す。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、その結合パートナーのうち１又は複数へのＰＤ−１の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストには、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する他の分子が含まれる。一実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、機能不全性Ｔ細胞をあまり機能不全でなくする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−１を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して媒介される陰性共刺激シグナルを低減させる。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ）である。別の具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＫ−３４７５（ペムブロリズマブ）である。別の具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＣＴ−０１１（ピディリズマブ）である。別の具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＡＭＰ−２２４である。
【００５１】
用語「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」とは、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、Ｂ７−１などのその結合パートナーのうちいずれか１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する分子を指す。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、このＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１及び／又はＢ７−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、Ｂ７−１などのその結合パートナーのうち１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する他の分子が含まれる。一実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、機能不全性Ｔ細胞をあまり機能不全でなくする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ１を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して媒介される陰性共刺激シグナルを低減させる。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。具体的な一態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の具体的な一態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０５である。なお別の具体的な一態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＰＤＬ３２８０Ａである。なお別の具体的な一態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＥＤＩ４７３６である。
【００５２】
用語「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」とは、ＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１などのその結合パートナーのうちいずれか１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する分子を指す。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、その結合パートナーのうち１又は複数へのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、このＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ２アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１などのその結合パートナーのうちいずれか１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する他の分子が含まれる。一実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、機能不全性Ｔ細胞をあまり機能不全でなくする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ２を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して媒介される陰性共刺激シグナルを低減させる。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【００５３】
用語「機能不全」とは、免疫機能不全の情況において、抗原性刺激に対する免疫応答性が低減した状態を指す。この用語は、抗原認識が生じ得るが、次の免疫応答が、感染又は腫瘍増殖を制御するには効果がない、消耗及び／又はアネルギーの両方の共通要素を含む。
【００５４】
用語「機能不全性」は、本明細書で使用する場合、抗原認識に対する不応性又は無応答性、具体的には、抗原認識を下流のＴ細胞エフェクター機能、例えば、増殖、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２）及び／又は標的細胞死滅へと変換する能力の障害もまた含む。
【００５５】
用語「アネルギー」とは、Ｔ細胞受容体を介して送達される不完全又は不十分なシグナル（例えば、ｒａｓ活性化の非存在下での細胞内Ｃａ＋２における増加）から生じる、抗原刺激に対する無応答性の状態を指す。Ｔ細胞アネルギーは、共刺激の非存在下での抗原による刺激の際にも生じ得、共刺激の情況であっても、抗原による引き続く活性化に対して不応性になる細胞を生じる。この無応答性状態は、インターロイキン−２の存在によってしばしば覆され得る。アネルギー性Ｔ細胞は、クローン増殖を受けず、及び／又はエフェクター機能を獲得しない。
【００５６】
用語「消耗」とは、多くの慢性感染及びがんの間に生じる持続性のＴＣＲシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全の状態としての、Ｔ細胞消耗を指す。これは、不完全な又は欠損したシグナル伝達を介してではなく、持続性のシグナル伝達から生じるという点で、アネルギーから識別される。これは、乏しいエフェクター機能、阻害受容体の持続性の発現、及び機能的エフェクター又はメモリーＴ細胞のものとは異なる転写状態によって規定される。消耗は、感染及び腫瘍の最適な制御を防止する。消耗は、外的陰性調節経路（例えば、免疫調節性サイトカイン）並びに細胞固有の陰性調節（共刺激）経路（ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４など）の両方から生じ得る。
【００５７】
「Ｔ細胞機能を増強する」とは、持続性の若しくは増幅された生物学的機能を有するように、又は消耗した若しくは不活性なＴ細胞を更新若しくは再活性化するようにＴ細胞を誘導する、そのようにさせる又はそのように刺激することを意味する。Ｔ細胞機能を増強することの例には、以下が含まれる：介入前のそのようなレベルと比較した、ＣＤ８＋Ｔ細胞からのγ−インターフェロンの増加した分泌、増加した増殖、増加した抗原応答性（例えば、ウイルス、病原体又は腫瘍のクリアランス）。一実施態様では、増強のレベルは、少なくとも５０％、あるいは６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％である。この増強を測定する様式は、当業者に公知である。
【００５８】
「Ｔ細胞機能不全性障害」は、抗原性刺激に対する応答性の減少によって特徴を明らかにされる、Ｔ細胞の障害又は状態である。特定の一実施態様では、Ｔ細胞機能不全性障害は、ＰＤ−１を介した不適切な増加したシグナル伝達と特異的に関連する障害である。別の一実施態様では、Ｔ細胞機能不全性障害は、Ｔ細胞が、アネルギー性であるか、又はサイトカインを分泌する能力、増殖する能力若しくは細胞傷害活性を実行する能力が減少している、障害である。具体的な一態様では、この減少した応答性は、免疫原を発現する病原体又は腫瘍の、効果がない制御を生じる。Ｔ細胞機能不全によって特徴を明らかにされたＴ細胞機能不全性障害の例には、未解決の急性感染、慢性感染及び腫瘍免疫が含まれる。
【００５９】
「腫瘍免疫」とは、腫瘍が免疫認識及びクリアランスを逃れるプロセスを指す。したがって、治療概念として、腫瘍免疫は、かかる回避が減弱され、腫瘍が免疫系によって認識及び攻撃される場合に、「治療される」。腫瘍認識の例には、腫瘍結合、腫瘍収縮及び腫瘍クリアランスが含まれる。
【００６０】
「免疫原性」とは、特定の物質が免疫応答を誘発する能力を指す。腫瘍は、免疫原性であり、腫瘍免疫原性を増強させることは、免疫応答による腫瘍細胞のクリアランスを助ける。腫瘍免疫原性を増強させることの例には、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストによる治療が含まれる。
【００６１】
「持続性の応答」とは、治療の休止後に腫瘍増殖を低減させることに対する持続性の効果を指す。例えば、腫瘍サイズは、投与期の開始時のサイズと比較して、同じ又はより小さいままであり得る。一部の実施態様では、この持続性の応答は、治療持続期間と少なくとも同じ持続期間、治療持続期間の少なくとも１．５×、２．０×、２．５×又は３．０×の長さの持続期間を有する。
【００６２】
用語「薬学的製剤」とは、活性成分の生物活性を有効にするような形態であり、その製剤が投与される対象に対して許容できないほどに毒性であるさらなる成分を含まない、調製物を指す。かかる製剤は、滅菌である。「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、使用される活性成分の有効用量を提供するために、対象哺乳動物に合理的に投与され得る賦形剤である。
【００６３】
本明細書で使用する場合、用語「治療」とは、臨床病理学の過程の間に、治療されている個体又は細胞の天然の過程を改変するように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患進行の速度を減少させること、病状を改善又は緩和すること、及び寛解又は予後の改善が含まれる。例えば、個体は、がん性細胞の増殖を低減させること（又はがん性細胞を破壊すること）、疾患から生じる症候を減少させること、疾患に罹患している者の生活の質を増加させること、疾患を治療するために必要とされる他の薬物療法の用量を減少させること、及び／又は個体の生存を延長させることが含まれるがこれらに限定されない、がんと関連する１又は複数の症候が軽減又は排除される場合に、首尾よく「治療される」。
【００６４】
本明細書で使用する場合、「疾患の進行を遅延させる」とは、疾患（例えば、がん）の発達を延期する、邪魔する、減速する、遅らせる、安定化する、及び／又は先延ばしにすることを意味する。この遅延は、治療されている疾患及び／又は個体の履歴に依存して、変動する長さの時間であり得る。当業者に明らかなように、十分な又は顕著な遅延は、個体が疾患を発達させないという点において、事実上、予防を包含し得る。例えば、後期がん、例えば、転移の発達が、遅延され得る。
【００６５】
「有効量」は、特定の障害の測定可能な改善又は予防をもたらすために必要とされる、少なくとも最小量である。本明細書では、有効量は、患者の病状、年齢、性別及び体重、並びに抗体が個体において所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。有効量は、治療的に有益な効果が治療の任意の毒性又は有害な効果を上回る量でもある。予防的使用について、有益な又は所望の結果には、リスクを排除若しくは低減させること、重症度を低下させること、又は疾患、その合併症、及び疾患の発達の間に示される中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的及び／若しくは行動学的症候を含む疾患の発病を遅延させることなどの結果が含まれる。治療的使用について、有益な又は所望の結果には、疾患から生じる１若しくは複数の症候を減少させること、疾患に罹患している者の生活の質を増加させること、疾患を治療するために必要とされる他の薬物療法の用量を減少させること、標的化などを介した別の薬物療法の効果を増強すること、疾患の進行を遅延させること、及び／又は生存を延長させることなどの臨床結果が含まれる。がん又は腫瘍の場合、有効量の薬物は、がん細胞の数を低減させること；腫瘍サイズを低減させること；末梢臓器中へのがん細胞浸潤を阻害すること（即ち、ある程度まで減速させること、又は望ましくは停止させること）；腫瘍転移を阻害すること（即ち、ある程度まで減速させること、又は望ましくは停止させること）；腫瘍増殖をある程度まで阻害すること；及び／又は障害と関連する症候のうち１若しくは複数をある程度まで軽減することにおいて、効果を有し得る。有効量は、１又は複数の投与で投与され得る。本発明の目的のために、薬物、化合物又は薬学的組成物の有効量は、直接的又は間接的にのいずれかで予防的又は治療的処置を達成するために十分な量である。臨床的状況において理解されるように、薬物、化合物又は薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物又は薬学的組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。したがって、「有効量」は、１又は複数の治療剤を投与する情況において考慮され得、１又は複数の他の薬剤と併せて所望の結果が達成され得る又は達成される場合、単一の薬剤が有効量で与えられるとみなされ得る。
【００６６】
本明細書で使用する場合、「〜と併せて」とは、別の治療モダリティーに加えた、１つの治療モダリティーの投与を指す。このように、「〜と併せて」とは、個体への他の治療モダリティーの投与の前、その間又はその後の、１つの治療モダリティーの投与を指す。
【００６７】
「障害」は、哺乳動物を問題の障害に罹りやすくする病理学的状態を含む慢性及び急性の障害又は疾患が含まれるがこれらに限定されない、治療から利益を得る任意の状態である。
【００６８】
用語「細胞増殖性疾患」及び「増殖性疾患」とは、ある程度の異常な細胞増殖と関連する障害を指す。一実施態様では、この細胞増殖性疾患は、がんである。一実施態様では、この細胞増殖性疾患は、腫瘍である。
【００６９】
「腫瘍」とは、本明細書で使用する場合、悪性であるか良性であるかに関わらない、全ての腫瘍性細胞増殖（ｇｒｏｗｔｈ）及び増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、並びに全ての前がん性及びがん性の細胞及び組織を指す。用語「がん」、「がん性」、「細胞増殖性疾患」、「増殖性疾患」及び「腫瘍」は、本明細書では、相互に排他的に言及されるわけではない。
【００７０】
用語「がん」及び「がん性」とは、典型的には調節されない細胞増殖によって特徴を明らかにされた、哺乳動物における生理的状態を指す、又はかかる状態を記述する。がんの例には、カルシノーマ、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ系腫瘍が含まれるがこれらに限定されない。かかるがんのより特定の例には、扁平上皮がん（例えば、上皮性扁平細胞がん）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌及び肺扁平上皮癌を含む肺がん、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸がん及び消化管間質がんを含む胃（ｇａｓｔｒｉｃ）又は胃（ｓｔｏｍａｃｈ）がん、膵臓がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、尿路のがん、肝がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓又は腎がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝細胞癌、肛門癌、陰茎癌、メラノーマ、表在性伸展メラノーマ、悪性黒子型メラノーマ、末端性黒子性メラノーマ、結節性メラノーマ、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症と関連する異常な血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、メイグス症候群、脳、及び頭頸部がん、並びに関連する転移が含まれるがこれらに限定されない。特定の実施態様では、本発明の抗体による治療に適したがんには、乳がん、結腸直腸がん、直腸がん、非小細胞肺がん、膠芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、腎細胞がん、前立腺がん、肝臓がん、膵臓がん、軟組織肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド癌腫、頭頸部がん、卵巣がん、中皮腫及び多発性骨髄腫が含まれる。一部の実施態様では、このがんは、小細胞肺がん、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、メラノーマ、乳房癌、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）及び肝細胞癌から選択される。さらに、一部の実施態様では、このがんは、これらのがんの転移型を含む、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、膠芽細胞腫及び乳房癌から選択される。
【００７１】
用語「細胞傷害性剤」とは、本明細書で使用する場合、細胞にとって有害な（例えば、細胞死を引き起こす、増殖を阻害する、又は細胞機能を他の方法で邪魔する）、任意の薬剤を指す。細胞傷害性剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤；増殖阻害性剤；酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素；及び毒素、例えば、低分子毒素、又はそれらの断片及び／若しくは変異体を含む、細菌、真菌、植物若しくは動物起源の酵素的に活性な毒素が含まれるがこれらに限定されない。例示的な細胞傷害性剤は、抗微小管剤、白金配位錯体、アルキル化剤、抗生物質剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗薬、トポイソメラーゼＩ阻害剤、ホルモン及びホルモンアナログ、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体チロシンキナーゼ血管新生阻害剤、免疫療法剤、アポトーシス促進性剤、ＬＤＨ−Ａの阻害剤、脂肪酸生合成の阻害剤、細胞周期シグナル伝達阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、及びがん代謝の阻害剤から選択され得る。一実施態様では、この細胞傷害性剤は、タキサンである。一実施態様では、このタキサンは、パクリタキセル又はドセタキセルである。一実施態様では、この細胞傷害性剤は、白金剤である。一実施態様では、この細胞傷害性剤は、ＥＧＦＲのアンタゴニストである。一実施態様では、このＥＧＦＲのアンタゴニストは、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（例えば、エルロチニブ）である。一実施態様では、この細胞傷害性剤は、ＲＡＦ阻害剤である。一実施態様では、このＲＡＦ阻害剤は、ＢＲＡＦ及び／又はＣＲＡＦ阻害剤である。一実施態様では、このＲＡＦ阻害剤は、ベムラフェニブである。一実施態様では、この細胞傷害性剤は、ＰＩ３Ｋ阻害剤である。
【００７２】
「化学療法剤」には、がんの治療において有用な化合物が含まれる。化学療法剤の例には、エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍ．）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍ．）、ジスルフィラム、没食子酸エピガロカテキン、サリノスポラミドＡ、カーフィルゾミブ、１７−ＡＡＧ（ゲルダナマイシン）、ラディシコール、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨ−Ａ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、スニチニブ（スーテント（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ／Ｓｕｇｅｎ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フィナスネート（ｆｉｎａｓｕｎａｔｅ）（ＶＡＴＡＬＡＮＩＢ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ  Ｓｍｉｔｈ  Ｋｌｉｎｅ）、ロナファーニブ（ＳＣＨ  ６６３３６）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ  Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＧ１４７８、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びシトキサン（登録商標）シクロホスファミド；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）及びウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む、エチレンイミン及びメチルメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；カンプトテシン（トポテカン及びイリノテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）及びビセレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；副腎皮質ステロイド（プレドニゾン及びプレドニゾロンを含む）；酢酸シプロテロン；５α−レダクターゼ（フィナステリド及びデュタステリドを含む）；ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、モセチノスタット  ドラスタチン；アルデスロイキン、タルク  デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロマファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎｅ）、クロロホスファミド（ｃｈｌｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア類、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンω１Ｉ（Angew Chem. Intl. Ed. Engl. 1994 33:183-186）；ダインマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダインマイシン；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート；エスペラミシン；並びにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連の色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルチノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（登録商標）（ドキソルビシン）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシン）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトレキサート；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォミチン（ｅｌｆｏｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エルピチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド、例えば、メイタンシン及びアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダムノール（ｍｏｐｉｄａｍｎｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロサキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ及びアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、タキソール（パクリタキセル；Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、アブラキサン（登録商標）（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒフリー）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌ．）及びタキソテール（登録商標）（ドセタキセル、ドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）；Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）；クロラムブシル；ジェムザール（登録商標）（ゲムシタビン）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）（ビノレルビン）；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ゼローダ（登録商標））；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体が含まれる。
【００７３】
化学療法剤には、以下もまた含まれる：（ｉ）腫瘍に対するホルモンの作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）；クエン酸タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びフェアストン（登録商標）（クエン酸トレミフェン）が含まれる；（ｉｉ）副腎においてエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、ホルメスタン、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾ−ル；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）など；（ｉｉｉ）抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリン；ブセレリン、トリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）、酢酸メドロキシプロゲステロン、ジエチルスチルベストロール、プレマリン、フルオキシメステロン、オールトランスレチノイン酸、フェンレチニド、並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；（ｉｖ）プロテインキナーゼ阻害剤；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路中の遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｌｆ及びＨ−Ｒａｓなど；（ｖｉｉ）リボザイム、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））及びＨＥＲ２発現阻害剤；（ｖｉｉｉ）ワクチン、例えば、遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）及びＶＡＸＩＤ（登録商標）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）、ｒＩＬ−２；トポイソメラーゼ１阻害剤、例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；並びに（ｉｘ）上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸及び誘導体。
【００７４】
化学療法剤には、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ  Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）及び抗体薬物コンジュゲート、ゲムツズマブオゾガミシン（マイロターグ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）などの抗体も含まれる。本発明の化合物と組み合わせて薬剤としての治療可能性を有するさらなるヒト化モノクローナル抗体には、以下が含まれる：アポリズマブ、アセリズマブ（ａｓｅｌｉｚｕｍａｂ）、アトリズマブ、バピニューズマブ、ビバツズマブメルタンシン（ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ（ｃｅｄｅｌｉｚｕｍａｂ）、セルトリズマブペゴル、シドフシツズマブ（ｃｉｄｆｕｓｉｔｕｚｕｍａｂ）、シドツズマブ（ｃｉｄｔｕｚｕｍａｂ）、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ（ｅｒｌｉｚｕｍａｂ）、フェルビズマブ（ｆｅｌｖｉｚｕｍａｂ）、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガミシン、イノツズマブオゾガミシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ（ｍｏｔｏｖｉｚｕｍａｂ）、ナタリズマブ、ニモツズマブ（ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ）、ノロビズマブ（ｎｏｌｏｖｉｚｕｍａｂ）、ヌマビズマブ（ｎｕｍａｖｉｚｕｍａｂ）、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ（ｐａｓｃｏｌｉｚｕｍａｂ）、ペクフシツズマブ（ｐｅｃｆｕｓｉｔｕｚｕｍａｂ）、ペクツズマブ（ｐｅｃｔｕｚｕｍａｂ）、パキセリズマブ、ラリビズマブ（ｒａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、ラニビズマブ、レスリビズマブ（ｒｅｓｌｉｖｉｚｕｍａｂ）、レスリズマブ、レシビズマブ（ｒｅｓｙｖｉｚｕｍａｂ）、ロベリズマブ（ｒｏｖｅｌｉｚｕｍａｂ）、ルプリズマブ（ｒｕｐｌｉｚｕｍａｂ）、シブロツズマブ（ｓｉｂｒｏｔｕｚｕｍａｂ）、シプリズマブ、ソンツズマブ（ｓｏｎｔｕｚｕｍａｂ）、タカツズマブテトラキセタン（ｔａｃａｔｕｚｕｍａｂ  ｔｅｔｒａｘｅｔａｎ）、タドシズマブ（ｔａｄｏｃｉｚｕｍａｂ）、タリズマブ、テフィバズマブ（ｔｅｆｉｂａｚｕｍａｂ）、トシリズマブ、トラリズマブ（ｔｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ツコツズマブセルモロイキン（ｔｕｃｏｔｕｚｕｍａｂ  ｃｅｌｍｏｌｅｕｋｉｎ）、ツクシツズマブ（ｔｕｃｕｓｉｔｕｚｕｍａｂ）、ウマビズマブ（ｕｍａｖｉｚｕｍａｂ）、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ビジリズマブ、及びインターロイキン−１２  ｐ４０タンパク質を認識するように遺伝的に修飾された組換えの排他的にヒト配列の全長ＩｇＧ１λ抗体である抗インターロイキン−１２（ＡＢＴ−８７４／Ｊ６９５、Ｗｙｅｔｈ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ及びＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。
【００７５】
化学療法剤には、ＥＧＦＲに結合又は他の方法でそれと直接相互作用し、そのシグナル伝達活性を防止又は低減させる化合物を指す、「ＥＧＦＲ阻害剤」もまた含まれ、あるいは、「ＥＧＦＲアンタゴニスト」とも呼ばれる。かかる薬剤の例には、ＥＧＦＲに結合する抗体及び低分子が含まれる。ＥＧＦＲに結合する抗体の例には、以下が含まれる：ＭＡｂ  ５７９（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ  ８５０６）、ＭＡｂ  ４５５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ  ２２５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０８）、ＭＡｂ  ５２８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０９）（米国特許第４９４３５３３号、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ等を参照のこと）及びその変異体、例えば、キメラ化２２５（Ｃ２２５又はセツキシマブ；ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標））及び再構成（ｒｅｓｈａｐｅｄ）ヒト２２５（Ｈ２２５）（国際公開第９６／４０２１０号、Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．を参照のこと）；ＩＭＣ−１１Ｆ８、完全にヒトのＥＧＦＲ標的化抗体（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；ＩＩ型突然変異体ＥＧＦＲを結合する抗体（米国特許第５２１２２９０号）；米国特許第５８９１９９６号に記載されるような、ＥＧＦＲを結合するヒト化及びキメラ抗体；並びにＥＧＦＲを結合するヒト抗体、例えば、ＡＢＸ−ＥＧＦ又はパニツムマブ（国際公開第９８／５０４３３号、Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎを参照のこと）；ＥＭＤ  ５５９００（Stragliotto等 Eur. J. Cancer 32A:636-640 (1996)）；ＥＧＦＲ結合についてＥＧＦ及びＴＧＦ−アルファの両方と競合する、ＥＧＦＲに対するヒト化ＥＧＦＲ抗体ＥＭＤ７２００（マツズマブ）（ＥＭＤ／Ｍｅｒｃｋ）；ヒトＥＧＦＲ抗体、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３及びＥ７．６．３として公知であり、米国特許第６２３５８８３号に記載される、完全ヒト抗体；ＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ）；並びにｍＡｂ  ８０６又はヒト化ｍＡｂ  ８０６（Johns等, J. Biol. Chem. 279(29):30375-30384 (2004)）。この抗ＥＧＦＲ抗体は、細胞傷害性剤にコンジュゲートされ得、こうして、イムノコンジュゲートを生成する（例えば、欧州特許出願公開第６５９４３９号Ａ２、Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨを参照のこと）。ＥＧＦＲアンタゴニストには、米国特許第５６１６５８２号、米国特許第５４５７１０５号、米国特許第５４７５００１号、米国特許第５６５４３０７号、米国特許第５６７９６８３号、米国特許第６０８４０９５号、米国特許第６２６５４１０号、米国特許第６４５５５３４号、米国特許第６５２１６２０号、米国特許第６５９６７２６号、米国特許第６７１３４８４号、米国特許第５７７０５９９号、米国特許第６１４０３３２号、米国特許第５８６６５７２号、米国特許第６３９９６０２号、米国特許第６３４４４５９号、米国特許第６６０２８６３号、米国特許第６３９１８７４号、米国特許第６３４４４５５号、米国特許第５７６００４１号、米国特許第６００２００８号及び米国特許第５７４７４９８号、並びに以下のＰＣＴ公報：国際公開第９８／１４４５１号、国際公開第９８／５００３８号、国際公開第９９／０９０１６号及び国際公開第９９／２４０３７号に記載される化合物などの低分子が含まれる。特定の低分子ＥＧＦＲアンタゴニストには、以下が含まれる：ＯＳＩ−７７４（ＣＰ−３５８７７４、エルロチニブ、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ  １８３８０５（ＣＩ  １０３３、２−プロペンアミド、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−キナゾリニル］−、ジヒドロクロリド、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）；ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標））４−（３’−クロロ−４’−フルオロアニリノ）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ  １０５１８０（（６−アミノ−４−（３−メチルフェニル−アミノ）−キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ−１３８２（Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ２−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ−１６６（（Ｒ）−４−［４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール）；（Ｒ）−６−（４−ヒドロキシフェニル）−４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）；ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチンアミド）；ＥＫＢ−５６９（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）（Ｗｙｅｔｈ）；ＡＧ１４７８（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＡＧ１５７１（ＳＵ  ５２７１；Ｐｆｉｚｅｒ）；二重ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６又はＮ−［３−クロロ−４−［（３フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］−６［５［［［２メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］−２−フラニル］−４−キナゾリンアミン）。
【００７６】
化学療法剤には、先行する段落において指摘したＥＧＦＲ標的化薬物を含む「チロシンキナーゼ阻害剤」；低分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、Ｔａｋｅｄａから入手可能なＴＡＫ１６５；ＣＰ−７２４，７１４、ＥｒｂＢ２受容体チロシンキナーゼの経口選択的阻害剤（Ｐｆｉｚｅｒ及びＯＳＩ）；二重ＨＥＲ阻害剤、例えば、ＥＧＦＲを優先的に結合するが、ＨＥＲ２及びＥＧＦＲ過剰発現細胞の両方を阻害する、ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈから入手可能）；ラパチニブ（ＧＳＫ５７２０１６；Ｇｌａｘｏ−ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）、経口ＨＥＲ２及びＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤；ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手可能）；汎ＨＥＲ阻害剤、例えば、カネルチニブ（ＣＩ−１０３３；Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；Ｒａｆ−１阻害剤、例えば、Ｒａｆ−１シグナル伝達を阻害する、ＩＳＩＳ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なアンチセンス剤ＩＳＩＳ−５１３２；非ＨＥＲ標的化ＴＫ阻害剤、例えば、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）；多重標的化チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、スニチニブ（スーテント（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能）；ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、バタラニブ（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧから入手可能）；ＭＡＰＫ細胞外調節キナーゼＩ阻害剤ＣＩ−１０４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）；キナゾリン、例えば、ＰＤ  １５３０３５、４−（３−クロロアニリノ）キナゾリン；ピリドピリミジン；ピリミドピリミジン；ピロロピリミジン、例えば、ＣＧＰ  ５９３２６、ＣＧＰ  ６０２６１及びＣＧＰ  ６２７０６；ピラゾロピリミジン、４−（フェニルアミノ）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン；クルクミン（ディフェルロイルメタン（diferuloyl methane）、４，５−ビス（４−フルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分を含むチルホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎｅ）；ＰＤ−０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒ）；アンチセンス分子（例えば、ＨＥＲコード核酸に結合するもの）；キノキサリン（米国特許第５８０４３９６号）；トリホスチン（ｔｒｙｐｈｏｓｔｉｎ）（米国特許第５８０４３９６号）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；凡ＨＥＲ阻害剤、例えば、ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；Ａｆｆｉｎｉｔａｃ（ＩＳＩＳ  ３５２１；Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；ＰＫＩ  １６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ  ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ−１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）；セマキシニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ−７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ）；ＩＮＣ−１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；又は以下の特許公開のいずれかに記載されるもの：米国特許第５８０４３９６号；国際公開第１９９９／０９０１６号（Ａｍｅｒｉ���ａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）；国際公開第１９９８／４３９６０号（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｙａｎａｍｉｄ）；国際公開第１９９７／３８９８３号（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；国際公開第１９９９／０６３７８号（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；国際公開第１９９９／０６３９６号（Ｗａｒｎｅｒ  Ｌａｍｂｅｒｔ）；国際公開第１９９６／３０３４７号（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ）；国際公開第１９９６／３３９７８号（Ｚｅｎｅｃａ）；国際公開第１９９６／３３９７号（Ｚｅｎｅｃａ）及び国際公開第１９９６／３３９８０号（Ｚｅｎｅｃａ）もまた含まれる。
【００７７】
化学療法剤には、以下もまた含まれる：デキサメタゾン、インターフェロン、コルヒチン、メトプリン、シクロスポリン、アンホテリシン、メトロニダゾール、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アミホスチン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、ＢＣＧ生、ベバクジマブ（ｂｅｖａｃｕｚｉｍａｂ）、ベキサロテン、クラドリビン、クロファラビン、ダルベポエチンアルファ、デニロイキン、デクスラゾキサン、エポエチンアルファ、エルロチニブ、フィルグラスチム、酢酸ヒストレリン、イブリツモマブ、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、レナリドミド、レバミゾール、メスナ、メトキサレン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ）、オプレルベキン、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチム、テモゾロミド、ＶＭ−２６、６−ＴＧ、トレミフェン、トレチノイン、ＡＴＲＡ、バルルビシン、ゾレドロネート及びゾレドロン酸、並びにそれらの薬学的に許容される塩。
【００７８】
化学療法剤には、以下もまた含まれる：ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チキソコルトール、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ベタメサゾン、ベタメサゾンリン酸ナトリウム、デキサメタゾン、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン−１７−ブチレート、ヒドロコルチゾン−１７−バレレート、二プロピオン酸アクロメタゾン（ａｃｌｏｍｅｔａｓｏｎｅ  ｄｉｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、吉草酸ベタメサゾン、二プロピオン酸ベタメサゾン、プレドニカルベート、クロベタゾン−１７−ブチレート、クロベタゾール−１７−プロピオネート、カプロン酸フルオコルトロン、ピバル酸フルオコルトロン及び酢酸フルプレドニデン；免疫選択的抗炎症性ペプチド（ＩｍＳＡＩＤ）、例えば、フェニルアラニン−グルタミン−グリシン（ＦＥＧ）及びそのＤ−異性体形態（ｆｅＧ）（ＩＭＵＬＡＮ  ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＬＬＣ）；抗リウマチ薬、例えば、アザチオプリン、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）、Ｄ−ペニシラミン、金塩、ヒドロキシクロロキン、レフルノミドミノサイクリン（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ）、スルファサラジン、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）ブロッカー、例えば、エタネルセプト（エンブレル）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、アダリムマブ（ヒュミラ）、セルトリズマブペゴル（シムジア）、ゴリムマブ（シンポニー）、インターロイキン１（ＩＬ−１）ブロッカー、例えば、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ）、Ｔ細胞共刺激ブロッカー、例えば、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ）、インターロイキン６（ＩＬ−６）ブロッカー、例えば、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＥＲＡ（登録商標））；インターロイキン１３（ＩＬ−１３）ブロッカー、例えば、レブリキズマブ（ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ）；インターフェロンアルファ（ＩＦＮ）ブロッカー、例えば、ロンタリズマブ（Ｒｏｎｔａｌｉｚｕｍａｂ）；ベータ７インテグリンブロッカー、例えば、ｒｈｕＭＡｂベータ７；ＩｇＥ経路ブロッカー、例えば、抗Ｍ１プライム；分泌型ホモトリマーＬＴａ３及び膜結合型ヘテロトリマーＬＴａ１／β２ブロッカー、例えば、抗リンホトキシンアルファ（ＬＴａ）；放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；種々の治験薬剤、例えば、チオプラチン（ｔｈｉｏｐｌａｔｉｎ）、ＰＳ−３４１、フェニルブチレート、ＥＴ−１８−ＯＣＨ３又はファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（Ｌ−７３９７４９、Ｌ−７４４８３２）；ポリフェノール、例えば、ケルセチン、レスベラトロール、ピセアタンノール（ｐｉｃｅａｔａｎｎｏｌ）、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール（ｆｌａｖａｎｏｌ）、プロシアニジン、ベツリン酸及びそれらの誘導体；オートファジー阻害剤、例えば、クロロキン；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパ���ン（ｂｅｔａ−ｌａｐａｃｈｏｎｅ）；ラパコール（ｌａｐａｃｈｏｌ）；コルヒチン；ベツリン酸；アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、及び９−アミノカンプトテシン）；ポドフィロトキシン；テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、又はリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；並びに上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）；ワクチン、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン；ペリフォシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ又はエトリコキシブ）、プロテオソーム（ｐｒｏｔｅｏｓｏｍｅ）阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ＣＣＩ−７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；ソラフェニブ、ＡＢＴ５１０；Ｂｃｌ−２阻害剤、例えば、オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））；ピクサントロン；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、ロナファーニブ（ＳＣＨ  ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；並びに上記のうち２以上の組合せ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾロンの併用療法についての略号、ＣＨＯＰ；並びに５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせてオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を用いる治療レジメンについての略号、ＦＯＬＦＯＸ。
【００７９】
化学療法剤には、鎮痛、解熱及び抗炎症効果を有する非ステロイド系抗炎症薬もまた含まれる。ＮＳＡＩＤには、酵素シクロオキシゲナーゼの非選択的阻害剤が含まれる。ＮＳＡＩＤの具体的な例には、以下が含まれる：アスピリン、プロピオン酸誘導体、例えば、イブプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン及びナプロキセン、酢酸誘導体、例えば、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ジクロフェナク、エノール酸（ｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）誘導体、例えば、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム及びイソキシカム（ｉｓｏｘｉｃａｍ）、フェナム酸誘導体、例えば、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸、並びにＣＯＸ−２阻害剤、例えば、セレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブ、ロフェコキシブ及びバルデコキシブ。ＮＳＡＩＤは、関節リウマチ、変形性関節症、炎症性関節症、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ライター症候群、急性痛風、月経困難症、転移部骨痛、頭痛及び片頭痛、術後疼痛、炎症及び組織傷害に起因する軽度から中程度の疼痛、発熱、イレウス、並びに腎疝痛などの状態の症候性の救済のために示され得る。
【００８０】
「増殖阻害性剤」とは、本明細書で使用する場合、インビトロ又はインビボのいずれかで細胞の増殖を阻害する化合物又は組成物を指す。一実施態様では、増殖阻害性剤は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞の増殖を防止又は低減させる増殖阻害性抗体である。別の一実施態様では、この増殖阻害性剤は、Ｓ期にある細胞の百分率を顕著に低減させる薬剤であり得る。増殖阻害性剤の例には、細胞周期進行を（Ｓ期以外の場所で）ブロックする薬剤、例えば、Ｇ１停止及びＭ期停止を誘導する薬剤が含まれる。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン、並びにトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えば、ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド及びブレオマイシンが含まれる。Ｇ１停止させる薬剤、例えば、ＤＮＡアルキル化剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル及びａｒａ−Ｃは、Ｓ期停止にも波及する。さらなる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ及びＩｓｒａｅｌ編、Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １、Ｍｕｒａｋａｍｉ等による表題「Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ」（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、１９９５）の、例えばｐ．１３中に見出され得る。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、イチイの木から共に誘導される抗がん薬物である。ヨーロッパイチイから誘導されたドセタキセル（タキソテール（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセルの半合成アナログ（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリンダイマーからの微小管のアセンブリを促進し、脱重合を防止することによって微小管を安定化して、細胞における有糸分裂の阻害を生じる。
【００８１】
「放射線療法」とは、正常に機能するその能力又は細胞を完全に破壊するその能力を制限するような細胞への十分な損傷を誘導するための定方向のガンマ線又はベータ線の使用を意味する。投薬量及び治療の持続期間を決定するための当該技術分野で公知の多くの方法が存在することが理解される。典型的な治療は、１回限りの投与として与えられ、典型的な投薬量は、１日当たり１０から２００単位（グレイ）までの範囲である。
【００８２】
治療を目的とした「対象」又は「個体」とは、ヒト、飼育動物及び家畜、並びに動物園動物、競技用動物又は愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ネコ、乳牛などを含む、哺乳動物として分類される任意の動物を指す。好ましくは、この哺乳動物はヒトである。
【００８３】
本明細書で、用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、それらが所望の生物活性を示す限り、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及び抗体断片を具体的にカバーする。
【００８４】
「単離された」抗体は、同定されており、かつその天然の環境の成分から分離及び／又は回収された抗体である。その天然の環境の夾雑物成分は、抗体についての研究、診断的又は治療的使用に干渉する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性又は非タンパク質性の溶質が含まれ得る。一部の実施態様では、抗体は、（１）例えばＬｏｗｒｙ法によって決定されるように、９５重量％超の抗体まで、一部の実施態様では９９重量％超まで；（２）例えばスピニングカップシークエネーターの使用によって、Ｎ末端若しくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を取得するのに十分な程度まで、又は（３）例えば、クマシーブルー若しくは銀染色を使用して、還元若しくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質になるまで、精製される。抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないので、単離された抗体には、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体が含まれる。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも１回の精製工程によって調製される。
【００８５】
「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質である。各軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合によって重鎖に連結されるが、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で変動する。各重鎖及び軽鎖は、一定の間隔を空けた鎖内ジスルフィド架橋もまた有する。各重鎖は、一方の末端において１つの可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後にいくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の末端において１つの可変ドメイン（ＶＬ）を有し、その他方の末端において１つの定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインとアラインされ、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインとアラインされる。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の接触面を形成すると考えられる。
【００８６】
用語「定常ドメイン」とは、免疫グロブリンの他の部分、抗原結合部位を含む可変ドメインと比較してより保存されたアミノ酸配列を有する、免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン（集合的に、ＣＨ）、並びに軽鎖のＣＨＬ（又はＣＬ）ドメインを含む。
【００８７】
抗体の「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖又は軽鎖のＮ末端ドメインを指す。重鎖の可変ドメインは、「ＶＨ」と呼ばれ得る。軽鎖の可変ドメインは、「ＶＬ」と呼ばれ得る。これらのドメインは、一般に、抗体の最も可変性の部分であり、抗原結合部位を含む。
【００８８】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定の部分が、抗体間で配列が広範に異なり、その特定の抗原に対する各特定の抗体の結合及び特異性において使用されるという事実を指す。しかし、可変性は、抗体の可変ドメインを通じて均等に分布するわけではない。可変性は、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメイン中の、超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに濃縮される。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々、ベータ−シート構造を接続し、一部の場合にはベータ−シート構造の一部を形成するループを形成する３つのＨＶＲによって接続された、ベータ−シート立体配置を主として取る４つのＦＲ領域を含む。各鎖中のＨＶＲは、ＦＲ領域によって、他方の鎖由来のＨＶＲとごく接近して一緒に維持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)を参照のこと）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害における抗体の関与を示す。
【００８９】
任意の哺乳動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる、２つの明らかに異なる型のうちの１つに割り当てられ得る。
【００９０】
用語ＩｇＧ「アイソタイプ」又は「サブクラス」は、本明細書で使用する場合、それらの定常領域の化学的及び抗原性特性によって規定される免疫グロブリンのサブクラスのいずれかを意味する。
【００９１】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、抗体（免疫グロブリン）は、異なるクラスに割り当てられ得る。免疫グロブリンの５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２へとさらに分割され得る。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、γ、ε、γ及びμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び３次元立体配置は、周知であり、例えば、Ａｂｂａｓ等  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、４ｔｈ  ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｃｏ．、２０００）に、一般に記載されている。抗体は、抗体と１又は複数の他のタンパク質又はペプチドとの共有結合的又は非共有結合的会合によって形成される、より大きい融合分子の一部であり得る。
【００９２】
用語「全長抗体」、「インタクトな抗体」及び「全抗体」は、本明細書で相互交換可能に使用されて、以下に定義される抗体断片ではない、その実質的にインタクトな形態での抗体を指す。これらの用語は、特に、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
【００９３】
本明細書の目的のために、「ネイキッド抗体」は、細胞傷害性部分又は放射標識にコンジュゲートされていない抗体である。
【００９４】
「抗体断片」は、好ましくはその抗原結合領域を含む、インタクトな抗体の一部分を含む。一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体断片は、抗原結合断片である。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片；ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）；直鎖状抗体；単鎖抗体分子；並びに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
【００９５】
抗体のパパイン消化は、各々が単一抗原結合部位を有する、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、及びその名称が容易に結晶化するその能力を反映している１つの残留「Ｆｃ」断片を生じる。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、なおも抗原を架橋することが可能である、１つのＦ（ａｂ’）２断片を生じる。
【００９６】
「Ｆｖ」は、完全な抗原結合部位を含む最小抗体断片である。一実施態様では、二鎖Ｆｖ種は、緊密に非共有結合的に会合した１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインのダイマーからなる。単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種では、１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインは、軽鎖及び重鎖が、二鎖Ｆｖ種中のものと類似の「ダイマー」構造で会合し得るように、可動性ペプチドリンカーによって共有結合的に連結され得る。「Ｆｖ」は、各可変ドメインの３つのＨＶＲが相互作用してＶＨ−ＶＬダイマーの表面上の抗原結合部を規定する、この立体配置にある。集合的に、６つのＨＶＲが、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一可変ドメイン（又は抗原に対して特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりもより低い親和性ではあるが、抗原を認識及び結合する能力を有する。
【００９７】
Ｆａｂ断片は、重鎖及び軽鎖可変ドメインを含み、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）もまた含む。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１又は複数のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端における数残基の添加の分、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有する、Ｆａｂ’についての本明細書での命名である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学カップリングも公知である。
【００９８】
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖中に存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、ｓｃＦｖが抗原結合にとって所望の構造を形成するのを可能にするポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓｃＦｖの総説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編、（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９４）、ｐｐ．２６９−３１５を参照のこと。
【００９９】
用語「ディアボディ」とは、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を指し、これらの断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）中に、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間のペアリングを可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、これらのドメインは、別の鎖の相補的ドメインとペアリングするようにさせられ、２つの抗原結合部位を創出する。ディアボディは、二価又は二重特異性であり得る。ディアボディは、例えば、ＥＰ４０４０９７；国際公開第１９９３／０１１６１号；Ｈｕｄｓｏｎ等、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）中に、より完全に記載されている。トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）及びテトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）もまた、Ｈｕｄｓｏｎ等、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）中に記載されている。
【０１００】
用語「モノクローナル抗体」とは、本明細書で使用する場合、実質的に均一な抗体の集団から取得された抗体を指し、例えば、この集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る可能な突然変異、例えば、天然に存在する突然変異を除き、同一である。したがって、修飾語「モノクローナル」は、別々の抗体の混合物ではない抗体の特性を示す。特定の実施態様では、かかるモノクローナル抗体には、典型的には、標的を結合するポリペプチド配列を含む抗体が含まれ、ここで、標的結合ポリペプチド配列は、複数のポリペプチド配列からの単一標的結合ポリペプチド配列の選択を含むプロセスによって取得された。例えば、この選択プロセスは、複数のクローン、例えば、ハイブリドーマクローン、ファージクローン又は組換えＤＮＡクローンのプールからの独自のクローンの選択であり得る。選択された標的結合配列は、例えば、標的に対する親和性を改善するため、標的結合配列をヒト化するため、細胞培養物中でのその産生を改善するため、そのインビボでの免疫原性を低減させるため、多重特異性抗体を創出するためなどに、さらに改変され得、改変された標的結合配列を含む抗体もまた、本発明のモノクローナル抗体であることを、理解すべきである。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体調製物は、典型的には他の免疫グロブリンが夾雑していないという点で、有利である。
【０１０１】
修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から取得されるという抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば以下を含む種々の技術によって作製され得る：ハイブリドーマ法（例えば、Kohler及びMilstein, Nature, 256:495-97 (1975); Hongo等, Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow等, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling等, Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)）、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照のこと）、ファージディスプレイテクノロジー（例えば、Clackson等, Nature, 352: 624-628 (1991); Marks等, J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu等, J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee等, J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)；及びLee等, J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)を参照のこと）、並びにヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座又は遺伝子の一部又は全てを有する動物においてヒト又はヒト様抗体を産生するためのテクノロジー（例えば、国際公開第１９９８／２４８９３号；国際公開第１９９６／３４０９６号；国際公開第１９９６／３３７３５号；国際公開第１９９１／１０７４１号；Jakobovits等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits等, Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann等, Year in Immunol. 7:33 (1993);米国特許第５５４５８０７号；米国特許第５５４５８０６号；米国特許第５５６９８２５号；米国特許第５６２５１２６号；米国特許第５６３３４２５号；及び米国特許第５６６１０１６号；Marks等, Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg等, Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild等, Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); 並びにLonberg 及びHuszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)を参照のこと）。
【０１０２】
本明細書のモノクローナル抗体には、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同であるが、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来する抗体又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体、並びにそれらが所望の生物活性を示す限りにおいてかかる抗体の断片が、具体的に含まれる（例えば、米国特許第４８１６５６７号；及びMorrison等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)を参照のこと）。キメラ抗体には、抗体の抗原結合領域が、例えば目的の抗原を用いてマカクザルを免疫化することによって産生される抗体から誘導される、ＰＲＩＭＡＴＴＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれる。
【０１０３】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むキメラ抗体である。一実施態様では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び／又は能力を有する、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲ由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに洗練するために行われ得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものと対応し、ＦＲの全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。このヒト化抗体は、任意選択的に、典型的にはヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分もまた含む。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。例えば、Ｖａｓｗａｎｉ及びＨａｍｉｌｔｏｎ、Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ、Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ及びＧｒｏｓｓ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）；並びに米国特許第６９８２３２１号及び米国特許第７０８７４０９号もまた参照のこと。
【０１０４】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生され、及び／又は本明細書に開示されるようなヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製された抗体のものと対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に排除する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野で公知の種々の技術を使用して産生され得る。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１（１９９１）。ヒトモノクローナル抗体の調製のために、Ｃｏｌｅ等、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載される方法もまた、利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ及びｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、５：３６８−７４（２００１）もまた参照のこと。ヒト抗体は、抗原性曝露に応答してかかる抗体を産生するように修飾されているが、その内因性の遺伝子座が無能にされている、トランスジェニック動物、例えば、免疫ゼノマウス（ｘｅｎｏｍｉｃｅ）に抗原を投与することによって調製され得る（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）テクノロジーに関しては、米国特許第６０７５１８１号及び米国特許第６１５０５８４号を参照のこと）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマテクノロジーを介して生成されるヒト抗体に関しては、Ｌｉ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７−３５６２（２００６）もまた参照のこと。
【０１０５】
「種依存的抗体」は、第２の哺乳動物種由来の抗原のホモログに対して有する結合親和性よりも、第１の哺乳動物種由来の抗原に対してより強い結合親和性を有する抗体である。通常、この種依存的抗体は、ヒト抗原に「特異的に結合する」（例えば、約１×１０−７Ｍ以下、好ましくは約１×１０−８Ｍ以下、好ましくは約１×１０−９Ｍ以下の結合親和性（Ｋｄ）値を有する）が、第２の非ヒト哺乳動物種由来の抗原のホモログに対して、ヒト抗原に対するその結合親和性よりも、少なくとも約５０分の１又は少なくとも約５００分の１又は少なくとも約１０００分の１弱い、結合親和性を有する。この種依存的抗体は、上に定義したような種々の型の抗体のいずれかであり得るが、好ましくは、ヒト化又はヒト抗体である。
【０１０６】
用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」又は「ＨＶ」とは、本明細書で使用する場合、配列が超可変である及び／又は構造的に規定されたループを形成する、抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含む；３つはＶＨ中（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つはＶＬ中（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。天然抗体では、Ｈ３及びＬ３は、最も多様な６つのＨＶＲを示し、特に、Ｈ３は、抗体に繊細な特異性を付与することにおいて独自の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ等、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：３７−４５（２０００）；Ｊｏｈｎｓｏｎ及びＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１−２５（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００３）を参照のこと。実際、重鎖のみからなる天然に存在するラクダ科の抗体は、軽鎖の非存在下で、機能的かつ安定である。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）；Ｓｈｅｒｉｆｆ等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）を参照のこと。
【０１０７】
いくつかのＨＶＲ描写が使用されており、本明細書において包含される。カバット相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づいており、最も一般的に使用されるものである（Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造的ループの位置に言及している（Chothia及びLesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。ＡｂＭ  ＨＶＲは、カバットのＨＶＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの間の妥協を示しており、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェアによって使用されている。「接触（ｃｏｎｔａｃｔ）」ＨＶＲは、入手可能な複雑な結晶構造の解析に基づく。これらのＨＶＲの各々由来の残基は、以下に示される。
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【０１０８】
ＨＶＲは、以下のような「拡大ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬ中の２４−３６又は２４−３４（Ｌ１）、４６−５６又は５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７又は８９−９６（Ｌ３）並びにＶＨ中の２６−３５（Ｈ１）、５０−６５又は４９−６５（Ｈ２）及び９３−１０２、９４−１０２又は９５−１０２（Ｈ３）。これらの可変ドメイン残基は、これらの定義の各々について、Ｋａｂａｔ等、上記に従って番号付けされる。
【０１０９】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるようなＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【０１１０】
用語「カバットと同様の可変ドメイン残基番号付け」又は「カバットと同様のアミノ酸位置番号付け」及びそれらのバリエーションは、Ｋａｂａｔ等、上記中の抗体のコンパイルの重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインのために使用される番号付け系を指す。この番号付け系を使用して、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ若しくはＨＶＲの短縮又はそれら中への挿入に対応する、より少ない又はさらなるアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後の単一アミノ酸挿入（カバットに従う残基５２ａ）及び重鎖ＦＲの残基８２の後の挿入された残基（例えば、カバットに従う残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含み得る。残基のカバット番号付けは、抗体の配列と「標準的な」カバット番号付けされた配列との相同性の領域におけるアラインメントによって、所与の抗体について決定され得る。
【０１１１】
このカバット番号付け系は、可変ドメイン中の残基（軽鎖のおよそ残基１−１０７及び重鎖の残基１−１１３）に言及する場合に、一般に使用される（例えば、Kabat等, Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）。「ＥＵ番号付け系」又は「ＥＵインデックス」は、免疫グロブリン重鎖定常領域中の残基に言及する場合に、一般に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ等、上記において報告されたＥＵインデックス）。「カバットと同様のＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１  ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。
【０１１２】
表現「直鎖状抗体」とは、Ｚａｐａｔａ等（1995 Protein Eng, 8(10):1057-1062）に記載される抗体を指す。簡潔に述べると、これらの抗体は、相補的軽鎖ポリペプチドと一緒になって一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む。直鎖状抗体は、二重特異性又は単一特異性であり得る。
【０１１３】
本明細書で使用する場合、用語「結合する」、「〜に特異的に結合する」又は「〜に対して特異的である」とは、測定可能かつ再現性のある相互作用、例えば、生体分子を含む分子の不均一な集団の存在下での標的の存在を決定する、標的と抗体との間の結合を指す。例えば、標的（これはエピトープであり得る）に結合する又は特異的に結合する抗体は、他の標的に結合するよりも、より大きい親和性、結合活性で、より容易に、及び／又はより長い持続期間で、この標的を結合する抗体である。一実施態様では、無関係な標的への抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、標的への抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、標的に特異的に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ又は≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様では、抗体は、異なる種由来のタンパク質間で保存されたタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の一実施態様では、特異的結合は、排他的な結合を含み得るが、それを必要としない。
【０１１４】
用語「検出」は、直接及び間接検出を含めた、検出する任意の手段を含む。
【０１１５】
用語「バイオマーカー」は、本明細書において、試料において検出され得る、例えば、予測的な、診断的な、及び／又は予後的な指標を指す。バイオマーカーは、特定の分子的、病理学的、組織学的及び／又は臨床的特徴によって特徴を明らかにされる疾患又は障害（例えば、がん）の特定のサブタイプの指標として働き得る。一部の実施態様では、バイオマーカーは、遺伝子である。バイオマーカーとして、それだけには限らないが、ポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ及び／又はＲＮＡ）、ポリヌクレオチドコピー数の変化（例えば、ＤＮＡコピー数）、ポリペプチド、ポリペプチド及びポリヌクレオチド修飾（例えば、翻訳後修飾）、炭水化物及び／又は糖脂質ベースの分子マーカーが挙げられる。
【０１１６】
用語「バイオマーカーシグネチャー」、「シグネチャー」、「バイオマーカー発現シグネチャー」又は「発現シグネチャー」は、本明細書において同義的に使用され、その発現が、例えば、予測的な、診断的な及び／又は予後的な指標であるバイオマーカーの１種又はその組合せを指す。バイオマーカーシグネチャーは、特定の分子的、病理学的、組織学的及び／又は臨床的特徴によって特徴を明らかにされる疾患又は障害（例えば、がん）の特定のサブタイプの指標として働き得る。一部の実施態様では、バイオマーカーシグネチャーは、「遺伝子シグネチャー」である。用語「遺伝子シグネチャー」は、「遺伝子発現シグネチャー」と同義的に使用され、その発現が、例えば、予測的な、診断的な及び／又は予後的な指標であるポリヌクレオチドの１種又は組合せを指す。一部の実施態様では、バイオマーカーシグネチャーは、「タンパク質シグネチャー」である。用語「タンパク質シグネチャー」は、「タンパク質発現シグネチャー」と同義的に使用され、その発現が例えば、予測的な、診断的な及び／又は予後的な指標であるポリペプチドの１種又は組合せを指す。
【０１１７】
個体の臨床的利益の増大と関連しているバイオマーカーの「量」又は「レベル」は、生体試料において検出可能なレベルである。これらは、当業者に公知の、また本明細書において開示される方法によって測定され得る。評価されるバイオマーカーの発現レベル又は量は、治療に対する応答を調べるために使用され得る。
【０１１８】
一般に、用語「発現のレベル」又は「発現レベル」は、同義的に使用され、一般に、生体試料中のバイオマーカーの量を指す。「発現」とは、一般に、情報（例えば、遺伝子によってコードされる及び／又はエピジェネティックな）が、細胞中に存在し、作動する構造に変換されるプロセスを指す。したがって、本明細書において、「発現」とは、ポリヌクレオチドへの転写、ポリペプチドへの翻訳又はさらにポリヌクレオチド及び／又はポリペプチド修飾（例えば、ポリペプチドの翻訳後修飾）を指し得る。転写されたポリヌクレオチド、翻訳されたポリペプチドの断片又はポリヌクレオチド及び／若しくはポリペプチド修飾（例えば、ポリペプチドの翻訳後修飾）も、それらが、選択的スプライシングによって生じた転写物若しくは分解された転写物に起因するか、又は例えば、タンパク質分解によるポリペプチドの翻訳後プロセシングに起因するかに関わらず、発現されたと見なされなければならない。「発現された遺伝子」は、ｍＲＮＡとしてポリヌクレオチドに転写され、次いで、ポリペプチドに翻訳されるもの又はＲＮＡに転写されるが、ポリペプチドに翻訳されないもの（例えば、トランスファー及びリボソームＲＮＡ）も含む。
【０１１９】
「発現の上昇」、「発現レベルの上昇」又は「レベルの上昇」とは、疾患若しくは障害（例えば、がん）を患っていない個体（単数又は複数）又は内部コントロール（例えば、ハウスキーピングバイオマーカー）などのコントロールと比較した、個体におけるバイオマーカーの発現の増大又はレベルの増大を指す。
【０１２０】
「発現の低下」、「発現レベルの低下」又は「レベルの低下」とは、疾患若しくは障害（例えば、がん）を患っていない個体（単数又は複数）又は内部コントロール（例えば、ハウスキーピングバイオマーカー）などのコントロールと比較した、個体におけるバイオマーカーの発現の低減又はレベルの低減を指す。一部の実施態様では、発現の低下は、ほとんどない、ないし全くない発現である。
【０１２１】
用語「ハウスキーピングバイオマーカー」は、全ての細胞型において通常、同様に存在するバイオマーカー又はバイオマーカーの群（例えば、ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチド）を指す。一部の実施態様では、ハウスキーピングバイオマーカーは、「ハウスキーピング遺伝子」である。「ハウスキーピング遺伝子」とは、その活性が細胞機能の維持に必須であり、通常、全ての細胞型において同様に存在するタンパク質をコードする、遺伝子又は遺伝子の群を指す。
【０１２２】
「増幅」とは、本明細書において、一般に、所望の配列の複数のコピーを製造するプロセスを指す。「複数のコピー」とは、少なくとも２コピーを意味する。「コピー」は、必ずしも、鋳型配列に対する完全な配列相補性又は同一性を意味しない。例えば、コピーは、デオキシイノシンなどのヌクレオチド類似体、意図された配列変更（鋳型とハイブリダイズ可能であるが、相補的ではない配列を含むプライマーによって導入された配列変更など）及び／又は増幅の間に起こる配列エラーを含み得る。
【０１２３】
用語「マルチプレックス−ＰＣＲ」とは、単一反応において２以上のＤＮＡ配列を増幅する目的で２以上のプライマーセットを使用する単一の供給源（例えば、個体）から得た核酸で実施される単一のＰＣＲ反応を指す。
【０１２４】
ハイブリダイゼーション反応の「ストリンジェンシー」は、当業者ならば容易に決定でき、一般に、プローブの長さ、洗浄温度及び塩濃度に応じた経験的な算出である。一般に、より長いプローブは、適切なアニーリングのためにより高い温度を必要とし、より短いプローブは、より低い温度を必要とする。ハイブリダイゼーションは、相補鎖がその融解温度よりも低い環境中に存在する場合には、一般に、変性されたＤＮＡの、再アニーリングする能力に左右される。プローブ及びハイブリダイズ可能な配列間の所望の相同性の程度が高いほど、使用され得る関連温度が高い。結果として、より高い関連温度が、反応条件をよりストリンジェントにする傾向があり、より低い温度はあまりストリンジェントでないものにするということになる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーのさらなる詳細及び説明については、Ａｕｓｕｂｅｌ等、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、（１９９５年）を参照のこと。
【０１２５】
本明細書に記載されるような「ストリンジェントな条件」又は「高ストリンジェンシー条件」は、（１）洗浄のために、低イオン強度及び高温、例えば、５０℃の、０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムを使用するもの、（２）ハイブリダイゼーションの間の、ホルムアミドなどの変性剤、例えば、４２℃で、７５０ｍＭ塩化ナトリウム、７５ｍＭクエン酸ナトリウムを有する、ｐＨ６．５の、０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウムバッファーを有する５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミド又は（３）４２℃の５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハート液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（５０μｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳ及び１０％硫酸デキストランを使用する溶液における一晩ハイブリダイゼーション及び０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中、４２℃での１０分の洗浄と、それに続く、５５℃で、１０分の、ＥＤＴＡを含有する０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄によって同定され得る。
【０１２６】
「中程度のストリンジェントな条件」は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、１９８９年によって記載されるように同定され得、上記のものよりもストリンジェントでない洗浄溶液及びハイブリダイゼーション条件（例えば、温度、イオン強度及びＳＤＳ％）の使用を含む。中程度にストリンジェントな条件の一例として、２０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハート液、１０％硫酸デキストラン及び２０ｍｇ／ｍｌ変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液中、３７℃での一晩インキュベーションと、それに続く、約３７−５０℃の１×ＳＳＣ中でのフィルターの洗浄がある。当業者ならば、プローブ長などといった因子に対応するよう必要に応じた、温度、イオン強度などの調整方法を認識するであろう。
【０１２７】
「ポリメラーゼ連鎖反応」又は「ＰＣＲ」の技術は、本明細書において、一般に、１９８７年７月２８日に発行された米国特許第４６８３１９５号に記載されるように核酸、ＲＮＡ及び／又はＤＮＡの微量の特定の部分が増幅される手順を指す。一般に、配列情報は、対象の領域の末端から又はオリゴヌクレオチドプライマーが設計され得るような必要性を超えて入手可能であり、これらのプライマーは、増幅される鋳型の反対側の鎖と配列において同一又は同様となる。２種のプライマーの５’末端ヌクレオチドは、増幅される材料の末端と一致し得る。ＰＣＲは、特定のＲＮＡ配列、総ゲノムＤＮＡに由来する特定のＤＮＡ配列及び総細胞性ＲＮＡから転写されたｃＤＮＡ、バクテリオファージ又はプラスミド配列などを増幅するために使用され得る。全般的に、Ｍｕｌｌｉｓ等、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｓｙｍｐ．  Ｑｕａｎｔ．  Ｂｉｏｌ．、第５１巻：２６３（１９８７年）；  Ｅｒｌｉｃｈ編、ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ、１９８９）を参照のこと。本明細書において、ＰＣＲは、１つのものであると考えられるが、唯一ではなく、既知核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）のプライマーとしての使用を含む、核酸試験試料を増幅するための核酸ポリメラーゼ反応法の例は、核酸ポリメラーゼを使用して、核酸の特定の部分を増幅若しくは作製するか、又は特定の核酸と相補的である核酸の特定の部分を増幅若しくは作製する。
【０１２８】
「定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応」又は「ｑＲＴ−ＰＣＲ」とは、ＰＣＲ反応中の各ステップでＰＣＲ産物の量が測定されるＰＣＲの形態を指す。この技術は、Ｃｒｏｎｉｎ等、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．第１６４巻（ｌ）：３５−４２頁（２００４年）及びＭａ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ第５巻：６０７−６１６頁（２００４年）を含めた種々の刊行物において記載されてきた。
【０１２９】
用語「マイクロアレイ」とは、基板上の、ハイブリダイズできるアレイ要素、好ましくは、ポリヌクレオチドプローブの秩序配置を指す。
【０１３０】
用語「ポリヌクレオチド」は、単数又は複数で使用される場合、一般に、修飾されていないＲＮＡ若しくはＤＮＡ又は修飾されたＲＮＡ若しくはＤＮＡであり得る、任意のポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドを指す。したがって、例えば、本明細書において定義されるようなポリヌクレオチドは、制限するものではないが、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖領域を含むＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ並びに一本鎖及び二本鎖領域を含むＲＮＡ、一本鎖である場合も、より通常は、二本鎖である場合も、又は一本鎖及び二本鎖領域を含む場合もあるＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子を含む。さらに、用語「ポリヌクレオチド」とは、本明細書において、ＲＮＡ又はＤＮＡ又はＲＮＡ及びＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を指す。このような領域中の鎖は、同一分子に由来する場合も、異なる分子に由来する場合もある。領域は、１又は複数の分子の全てを含み得るが、より通常は、いくつかの分子の領域のみを含む。三重らせん領域の分子の１つは、オリゴヌクレオチドであることが多い。用語「ポリヌクレオチド」は、具体的に、ｃＤＮＡを含む。この用語は、１個又は複数の修飾された塩基を含有する、ＤＮＡ（ｃＤＮＡを含む）及びＲＮＡを含む。したがって、安定性のために、又はその他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡ又はＲＮＡは、その用語が本明細書において意図されるように「ポリヌクレオチド」である。さらに、イノシンなどの普通でない塩基又はトリチウム化塩基などの修飾された塩基を含むＤＮＡ又はＲＮＡが、本明細書において定義されるような用語「ポリヌクレオチド」内に含まれる。一般に、用語「ポリヌクレオチド」は、修飾されていないポリヌクレオチドの全ての化学的に、酵素的に及び／又は代謝的に修飾された形態並びにウイルス及び単純細胞及び複雑型細胞を含めた細胞に特徴的なＤＮＡ及びＲＮＡの化学的形態を包含する。
【０１３１】
用語「オリゴヌクレオチド」とは、制限するものではないが、一本鎖デオキシリボヌクレオチド、一本鎖又は二本鎖リボヌクレオチド、ＲＮＡ：ＤＮＡハイブリッド及び二本鎖ＤＮＡを含めた比較的短いポリヌクレオチドを指す。一本鎖ＤＮＡプローブオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドは、例えば、市販されている自動化オリゴヌクレオチドシンセサイザーを使用して化学的方法によって合成されることが多い。しかし、オリゴヌクレオチドは、インビトロ組換えＤＮＡ媒介性技術を含めた種々のその他の方法によって、並びに細胞及び生物中のＤＮＡの発現によって作製され得る。
【０１３２】
用語「診断」は、本明細書において、分子的又は病理学的状態、疾患又は状態（例えば、がん）の同定又は分類を指すよう使用される。例えば、「診断」は、特定の種類のがんの同定を指し得る。「診断」はまた、例えば、組織病理学的判定基準による、又は分子的特徴によるがんの特定のサブタイプ（例えば、１種のバイオマーカー若しくはバイオマーカーの組合せの発現（例えば、特定の遺伝子又は前記遺伝子によってコードされるタンパク質）によって特徴を明らかにされるサブタイプ）の分類を指し得る。
【０１３３】
用語「補助診断」は、本明細書において、疾患又は障害（例えば、がん）の特定の種類の症状又は状態の存在又は性質に関して臨床的判断を行うのを補助する方法を指すよう使用される。例えば、疾患又は状態（例えば、がん）の補助診断の方法は、個体から得た生体試料において特定のバイオマーカーを測定することを含み得る。
【０１３４】
用語「試料」とは、本明細書において、例えば、物理的、生化学的、化学的及び／又は生理的特性に基づいて特徴を明らかにされる及び／又は同定されるべき細胞実体及び／又はその他の分子実体を含有する、対象の対象及び／又は個体から得た、又はそれに由来する組成物を指す。例えば、語句「疾患試料」及びそのバリエーションは、特徴を明らかにされるべき細胞実体及び／又は分子実体を含有すると予測されるか、又は知られている対象の対象から得た任意の試料を指す。試料として、それだけには限らないが、初代細胞又は培養細胞又は細胞株、細胞上清、細胞溶解物、血小板、血清、血漿、硝子体液、リンパ液、滑液、卵胞液、精液、羊水、乳、全血、血液由来細胞、尿、脳脊髄液、唾液、痰、涙、汗、粘液、腫瘍溶解物及び組織培養培地、ホモジナイズした組織などの組織抽出物、腫瘍組織、細胞抽出物及びそれらの組合せが挙げられる。
【０１３５】
「組織試料」又は「細胞試料」は、対象又は個体の組織から得られた同様の細胞の収集物を意味する。組織又は細胞試料の供給源は、新鮮な、凍結した及び／又は保存された臓器、組織試料、生検及び／又は吸引物に由来するような固体組織；血液又は血漿などの任意の血液成分；脳脊髄液、羊水、腹水又は間質液などの体液；対象の妊娠又は発達中のいずれか時点で得られた細胞であり得る。組織試料はまた、初代細胞又は培養細胞又は細胞株であり得る。任意選択で、組織又は細胞試料は、疾患組織／臓器から得られる。組織試料は、防腐剤、抗凝固剤、バッファー、固定液、栄養素、抗生物質などといった、自然界では天然に組織と混合されない化合物を含有し得る。
【０１３６】
「参照試料」、「参照細胞」、「参照組織」、「コントロール試料」、「コントロール細胞」又は「コントロール組織」とは、本明細書において、比較目的で使用される試料、細胞、組織、標準又はレベルを指す。一実施態様では、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、同一対象又は個体の身体の健常な及び／又は非疾患性部分（例えば、組織又は細胞）から得られる。例えば、罹患細胞又は組織に隣接する健常な及び／又は非疾患性細胞又は組織（例えば、腫瘍に隣接する細胞又は組織）。別の実施態様では、参照試料は、同一対象又は個体の身体の未処理組織及び／又は細胞から得られる。さらに別の実施態様では、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、対象又は個体ではない個体の身体の健常な及び／又は非疾患性部分（例えば、組織又は細胞）から得られる。いっそう別の実施態様では、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、対象又は個体ではない個体の身体の未処理組織及び／又は細胞から得られる。
【０１３７】
本明細書における目的上、組織試料の「切片」は、組織試料の単一部分又は単一片、例えば、組織試料から切り出された組織又は細胞の薄いスライスを意味する。組織試料の同一切片が、形態学的及び分子レベルの両方で分析されるか、又はポリペプチド及びポリヌクレオチドの両方に関して分析され得ることが理解される限り、組織試料の複数の切片が採取され、分析に付され得るということは理解される。
【０１３８】
「相関する」又は「相関している」とは、多少なりとも、第１の分析若しくはプロトコールの性能及び／又は結果の、第２の分析若しくはプロトコールの性能及び／又は結果との比較を意味する。例えば、第１の分析若しくはプロトコールの結果を、第２のプロトコールの実施に使用できる、及び／又は第１の分析若しくはプロトコールの結果を、第２の分析若しくはプロトコールが実施されるべきか否かを調べるために使用できる。ポリペプチド分析又はプロトコールの実施態様に関して、ポリペプチド発現分析又はプロトコールの結果を、特定の治療計画が実施されるべきか否かを調べるために使用できる。ポリヌクレオチド分析又はプロトコールの実施態様に関して、ポリヌクレオチド発現分析又はプロトコールの結果を、特定の治療計画が実施されるべきであるか否かを調べるために使用できる。
【０１３９】
単語「標識」は、本明細書において使用される場合、検出可能な化合物又は組成物を指す。標識は、通常、直接的に又は間接的に、ポリヌクレオチドプローブ又は抗体などの試薬とコンジュゲート又は融合され、コンジュゲート又は融合されている試薬の検出を容易にする。標識は、それ自体、検出可能であり得る（例えば、放射性同位元素標識又は蛍光標識）か、又は酵素標識の場合には、検出可能な生成物をもたらす基質化合物又は組成物の化学変化を触媒し得る。
【０１４０】
医薬を用いる治療に対する患者の「有効応答」又は患者の「応答性」及び同様の言い回しは、がんなどの疾患又は障害の危機にあるか、又はそれを患っている患者に与えられた臨床上の又は治療上の利益を指す。一実施態様では、このような利益は、生存の延長（全生存及び悪化のない生存を含む）、目的応答（完全応答又は部分応答を含む）をもたらすこと又はがんの徴候若しくは症状を改善することのうち任意の１つ又は複数を含む。
【０１４１】
治療に対する「有効応答を有さない」患者とは、生存の延長（全生存及び悪化のない生存を含む）、目的応答（完全応答又は部分応答を含む）をもたらすこと又はがんの徴候若しくは症状を改善することのうちいずれか１つを有さない患者を指す。
【０１４２】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」とは、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ＮＫ細胞、好中球及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に結合している分泌された免疫グロブリンが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞と特異的に結合し、続いて、標的細胞を細胞毒で死滅させることを可能にする細胞傷害性の形態を指す。ＡＤＣＣを媒介するための主な細胞、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ第９巻：４５７−９２頁（１９９１年の）４６４頁の表３にまとめられている。対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５５００３６２号又は米国特許第５８２１３３７号又は米国特許第６７３７０５６号（Ｐｒｅｓｔａ）に記載されたものなどインビトロＡＤＣＣアッセイが実施され得る。このようなアッセイのための有用なエフェクター細胞として、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が挙げられる。あるいは、又はさらに、対象の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ等、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）第９５巻：６５２−６５６頁（１９９８年）に開示されるものなどの動物モデルにおいて評価され得る。ＡＤＣＣ活性を評価するための例示的アッセイは、本明細書における実施例において提供される。
【０１４３】
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」とは、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的な補体経路の活性化は、補体系（Ｃｌｑ）の第１の成分の、そのコグネイト抗原と結合している抗体（適当なサブクラスの）との結合によって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ第２０２巻：１６３（１９９６年）に記載されるようなＣＤＣアッセイが実施され得る。変更されたＦｃ領域アミノ酸配列を有するポリペプチド変異体（変異体Ｆｃ領域を有するポリペプチド）及び増大又は低減されたＣ１ｑ結合能が、例えば、米国特許第６１９４５５１号Ｂ１及び国際公開第１９９９／５１６４２号に記載されている。例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ等Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．第１６４巻：４１７８−４１８４頁（２０００年）も参照のこと。
【０１４４】
「枯渇抗ＯＸ４０抗体」は、ＯＸ４０発現細胞を死滅させるか、又は枯渇させる抗ＯＸ４０抗体である。ＯＸ４０発現細胞の枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害及び／又は食作用などの種々の機序によって達成され得る。ＯＸ４０発現細胞の枯渇は、インビトロでアッセイされ得、インビトロＡＤＣＣ及び食作用アッセイの例示的方法は、本明細書に提供されている。一部の実施態様では、ＯＸ４０発現細胞は、ヒトＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。一部の実施態様では、ＯＸ４０発現細胞は、ヒトＯＸ４０を発現するトランスジェニックＢＴ４７４細胞である。
【０１４５】
「エフェクター機能」とは、抗体アイソタイプにつれて変わる、抗体のＦｃ領域に起因し得るそれらの生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例として、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御及びＢ細胞活性化が挙げられる。
【０１４６】
「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域と結合する受容体を説明する。一部の実施態様では、ＦｃＲは、天然ヒトＦｃＲである。一部の実施態様では、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）と結合するものであり、これとして、対立遺伝子変異体、あるいはそれらの受容体のスプライシング形態を含めた、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が挙げられる。ＦｃγＲＩＩ受容体は、主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含む。
【０１４７】
活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴ  ＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシンベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（例えば、Daeron、Annu.Rev.Immunol.第15巻:203-234頁(1997年)を参照のこと)。ＦｃＲは、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ第９巻：４５７−９２頁（１９９１年）；Ｃａｐｅｌ等、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ第４巻：２５−３４頁（１９９４年）及びｄｅ  Ｈａａｓ等、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．第１２６巻：３３０−４１頁（１９９５年）に概説されている。将来同定されるべきものを含め、その他のＦｃＲも、本明細書において用語「ＦｃＲ」に包含される。用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」はまた、胎児への母系ＩｇＧの移行(Guyer等、J.Immunol.第117巻:587(1976年)及びKim等、J.Immunol.第24巻:249(1994年))及び免疫グロブリンのホメオスタシスの調節に預かる、新生児受容体、ＦｃＲｎを含む。ＦｃＲｎとの結合を測定する方法は公知である（例えば、Ghetie及びWard.、Immunol.Today第18巻(12):592-598頁(1997年);Ghetie等、Nature Biotechnology、第15巻(7):637-640頁(1997年);Hinton等、J.Biol.Chem.第279巻(8):6213-6216頁(2004年);国際公開第２００４／９２２１９号(Hinton等を参照のこと）。ヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドのインビボでのヒトＦｃＲｎとの結合及び血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現する、トランスジェニックマウス又はトランスフェクトされたヒト細胞株において、又は変異体Ｆｃ領域を有するポリペプチが投与された霊長類においてアッセイされ得る。国際公開第２０００／４２０７２号（Ｐｒｅｓｔａ）には、ＦｃＲとの結合が改善された又は減少した抗体変異体が記載されている。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第９巻（２）：６５９１−６６０４頁（２００１年）も参照のこと。
【０１４８】
「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的「エフェクター機能」として、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御などが挙げられる。このようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わされることを必要とし、例えば、本明細書における定義において開示されるような種々のアッセイを使用して評価され得る。
【０１４９】
「ヒトエフェクター細胞」とは、１又は複数のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を発揮する白血球を指す。特定の実施態様では、細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能（単数又は複数）を発揮する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例として、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞及び好中球が挙げられる。エフェクター細胞は、天然供給源から、例えば、血液から単離され得る。
【０１５０】
「ヒトエフェクター細胞を有する」がん又は生体試料とは、診断試験において、試料中に存在するヒトエフェクター細胞（例えば、浸潤ヒトエフェクター細胞）を有するものである。
【０１５１】
「ＦｃＲ発現細胞を有する」がん又は生体試料とは、診断試験において、試料中に存在するＦｃＲ発現を有するもの（例えば、浸潤ＦｃＲ発現細胞）である。一部の実施態様では、ＦｃＲは、ＦｃγＲである。一部の実施態様では、ＦｃＲは、活性化ＦｃγＲである。
【０１５２】
ＩＩ．ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト
有効量のヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを個体に投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強する方法もまた、本明細書で提供される。
【０１５３】
例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤＬ１結合アンタゴニスト及びＰＤＬ２結合アンタゴニストが含まれる。「ＰＤ−１」の代替名として、ＣＤ２７９及びＳＬＥＢ２が挙げられる。「ＰＤＬ１」の代替名として、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−４、ＣＤ２７４及びＢ７−Ｈが挙げられる。「ＰＤＬ２」の代替名として、Ｂ７−ＤＣ、Ｂｔｄｃ及びＣＤ２７３が挙げられる。一部の実施態様では、ＰＤ−１、ＰＤＬ１及びＰＤＬ２は、ヒトのＰＤ−１、ＰＤＬ１及びＰＤＬ２である。
【０１５４】
一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、そのリガンド結合パートナーへのＰＤ−１の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、このＰＤ−１リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１及び／又はＰＤＬ２である。別の一実施態様では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤＬ１の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ−１及び／又はＢ７−１である。別の一実施態様では、このＰＤＬ２結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤＬ２の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤＬ２結合パートナーは、ＰＤ−１である。このアンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドであり得る。
【０１５５】
一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体）である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ及びＣＴ−０１１からなる群から選択される。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤＬ１又はＰＤＬ２の細胞外又はＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシンである。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４である。ＭＤＸ−１１０６−０４、ＭＤＸ−１１０６、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８及びＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても公知のニボルマブは、国際公開第２００６／１２１１６８号に記載された抗ＰＤ−１抗体である。ＭＫ−３４７５、Ｍｅｒｃｋ  ３４７５、ラムブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）及びＳＣＨ−９００４７５としても公知のペンブロリズマブは、国際公開第２００９／１１４３３５号に記載された抗ＰＤ−１抗体である。ｈＢＡＴ又はｈＢＡＴ−１としても公知のＣＴ−０１１は、国際公開第２００９／１０１６１１号に記載された抗ＰＤ−１抗体である。Ｂ７−ＤＣＩｇとしても公知のＡＭＰ−２２４は、国際公開第２０１０／０２７８２７号及び国際公開第２０１１／０６６３４２号に記載されたＰＤＬ２−Ｆｃ融合可溶型受容体である。
【０１５６】
一部の実施態様では、この抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４）である。なおさらなる一実施態様では、配列番号１０由来の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１１由来の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗ＰＤ−１抗体が提供される。なおさらなる一実施態様では、重鎖及び／又は軽鎖配列を含む単離された抗ＰＤ−１抗体が提供され、ここで、
（ａ）この重鎖配列は、重鎖配列：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１０）、
と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の配列同一性を有し、又は
（ｂ）この軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１１）
と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の配列同一性を有する。
【０１５７】
一部の実施態様では、抗ＰＤ−１抗体は、ペンブロリズマブ（ＣＡＳ登録番号：１３７４８５３−９１−４）である。なおさらなる実施態様では、配列番号１２に由来する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号１３に由来する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗ＰＤ−１抗体が提供される。なおさらなる実施態様では、重鎖及び／又は軽鎖配列を含む単離された抗ＰＤ−１抗体が提供され、ここで
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＶＥ  ＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶ  ＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ  ＮＹＹＭＹＷＶＲＱＡ  ＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧ  ＩＮＰＳＮＧＧＴＮＦ  ＮＥＫＦＫＮＲＶＴＬ  ＴＴＤＳＳＴＴＴＡＹ  ＭＥＬＫＳＬＱＦＤＤ  ＴＡＶＹＹＣＡＲＲＤＹＲＦＤＭＧＦＤＹＷ  ＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ  ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰ  ＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥ  ＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳ  ＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶ  ＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳ  ＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴ  ＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳ  ＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳ  ＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ  ＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶ  ＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴ  ＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤ  ＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤ  ＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫ  ＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨ  ＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫ  ＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳ  ＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫ  ＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫ  ＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫ  ＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ  ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮ  ＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬ  ＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧ  ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥ  ＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳ  ＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１２）
に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％配列同一性を有し、又は
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴ  ＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＧＶＳＴＳＧＹＳＹＬＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬ  ＬＩＹＬＡＳＹＬＥＳ  ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧ  ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩ  ＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦ  ＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫ  ＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬ  ＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳ  ＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱ  ＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴ  ＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１３）
に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％配列同一性を有する。
【０１５８】
一部の実施態様では、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤＬ１抗体である。一部の実施態様では、抗ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される。ＭＤＸ−１１０５はまた、ＢＭＳ−９３６５５９として知られ、国際公開第２００７／００５８７４号に記載された抗ＰＤＬ１抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（それぞれ、配列番号２０及び２１に示される重鎖及び軽鎖可変領域配列）は、国際公開第２０１０／０７７６３４号Ａｌに記載される抗ＰＤＬ１である。ＭＥＤＩ４７３６は、国際公開第２０１１／０６６３８９号及びＵＳ２０１３／０３４５５９に記載される抗ＰＤＬ１抗体である。
【０１５９】
本発明の方法のために有用な抗ＰＤＬ１抗体及びそれを作製するための方法の例は、本明細書に出典明示により援用される、ＰＣＴ特許出願国際公開第２０１０／０７７６３４号Ａ１及び米国特許第８２１７１４９号に記載される。
【０１６０】
一部の実施態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、抗ＰＤＬ１抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤＬ１抗体は、ＰＤＬ１とＰＤ−１との間及び／又はＰＤＬ１とＢ７−１との間の結合を阻害することが可能である。一部の実施態様では、この抗ＰＤＬ１抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤＬ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である。一部の実施態様では、この抗ＰＤＬ１抗体は、ヒト化抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤＬ１抗体は、ヒト抗体である。
【０１６１】
国際公開第２０１０／０７７６３４号Ａｌに記載されるものなどのこのような抗体を含有する組成物を含めて、本発明において有用な抗ＰＤＬ１抗体は、がんを治療するためにＯＸ４０結合アゴニストと組み合わせて使用され得る。一部の実施態様では、抗ＰＤＬ１抗体は、配列番号７又は８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１６２】
一実施態様では、この抗ＰＤＬ１抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドを含有し、ここで、
（ａ）このＨＶＲ−Ｈ１配列は、ＧＦＴＦＳＸ１ＳＷＩＨ（配列番号１４）であり；
（ｂ）このＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＡＷＩＸ２ＰＹＧＧＳＸ３ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５）であり；
（ｃ）このＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）であり；
ここでさらに、Ｘ１は、Ｄ又はＧであり；Ｘ２は、Ｓ又はＬであり；Ｘ３は、Ｔ又はＳである。
【０１６３】
具体的な一態様では、Ｘ１はＤであり；Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＴである。別の一態様では、このポリペプチドは、式：（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）に従う、ＨＶＲ間に並置された可変領域重鎖フレームワーク配列をさらに含む。なお別の一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。さらなる一態様では、これらのフレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列のうち少なくとも１つは、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号１６）であり
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号１７）であり
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１８）であり
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１９）である。
【０１６４】
なおさらなる一態様では、この重鎖ポリペプチドは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む可変領域軽鎖とさらに組み合わされ、ここで、
（ａ）このＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＲＡＳＱＸ４Ｘ５Ｘ６ＴＸ７Ｘ８Ａ（配列番号２０）であり；
（ｂ）このＨＶＲ−Ｌ２配列は、ＳＡＳＸ９ＬＸ１０Ｓ（配列番号２１）であり；
（ｃ）このＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＱＱＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＰＸ１５Ｔ（配列番号２２）であり；
さらにここで、Ｘ４は、Ｄ又はＶであり；Ｘ５は、Ｖ又はＩであり；Ｘ６は、Ｓ又はＮであり；Ｘ７は、Ａ又はＦであり；Ｘ８は、Ｖ又はＬであり；Ｘ９は、Ｆ又はＴであり；Ｘ１０は、Ｙ又はＡであり；Ｘ１１は、Ｙ、Ｇ、Ｆ又はＳであり；Ｘ１２は、Ｌ、Ｙ、Ｆ又はＷであり；Ｘ１３は、Ｙ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであり；Ｘ１４は、Ｈ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであり；Ｘ１５は、Ａ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴである。
【０１６５】
なおさらなる一態様では、Ｘ４はＤであり；Ｘ５はＶであり；Ｘ６はＳであり；Ｘ７はＡであり；Ｘ８はＶであり；Ｘ９はＦであり；Ｘ１０はＹであり；Ｘ１１はＹであり；Ｘ１２はＬであり；Ｘ１３はＹであり；Ｘ１４はＨであり；Ｘ１５はＡである。なおさらなる一態様では、この軽鎖は、式：（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）に従う、ＨＶＲ間に並置された可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列のうち少なくとも１つは、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２３）であり
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２４）であり
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２５）であり
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２６）である。
【０１６６】
別の一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体又は抗原結合断片が提供され、ここで、
この重鎖は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、ここでさらに、
（ｉ）このＨＶＲ−Ｈ１配列は、ＧＦＴＦＳＸ１ＳＷＩＨであり；（配列番号１４）
（ｉｉ）このＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＡＷＩＸ２ＰＹＧＧＳＸ３ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５）であり
（ｉｉｉ）このＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）であり、
この軽鎖は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、ここでさらに、
（ｉ）このＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＲＡＳＱＸ４Ｘ５Ｘ６ＴＸ７Ｘ８Ａ（配列番号２０）であり
（ｉｉ）このＨＶＲ−Ｌ２配列は、ＳＡＳＸ９ＬＸ１０Ｓであり；（配列番号２１）かつ
（ｉｉｉ）このＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＱＱＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＰＸ１５Ｔである（配列番号２２）
【０１６７】
さらにここで、Ｘ１は、Ｄ又はＧであり；Ｘ２は、Ｓ又はＬであり；Ｘ３は、Ｔ又はＳであり；Ｘ４は、Ｄ又はＶであり；Ｘ５は、Ｖ又はＩであり；Ｘ６は、Ｓ又はＮであり；Ｘ７は、Ａ又はＦであり；Ｘ８は、Ｖ又はＬであり；Ｘ９は、Ｆ又はＴであり；Ｘ１０は、Ｙ又はＡであり；Ｘ１１は、Ｙ、Ｇ、Ｆ又はＳであり；Ｘ１２は、Ｌ、Ｙ、Ｆ又はＷであり；Ｘ１３は、Ｙ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであり；Ｘ１４は、Ｈ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであり；Ｘ１５は、Ａ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴである。
【０１６８】
具体的な一態様では、Ｘ１はＤであり；Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＴである。別の一態様では、Ｘ４はＤであり；Ｘ５はＶであり；Ｘ６はＳであり；Ｘ７はＡであり；Ｘ８はＶであり；Ｘ９はＦであり；Ｘ１０はＹであり；Ｘ１１はＹであり；Ｘ１２はＬであり；Ｘ１３はＹであり；Ｘ１４はＨであり；Ｘ１５はＡである。なお別の一態様では、Ｘ１はＤであり；Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＴであり、Ｘ４はＤであり；Ｘ５はＶであり；Ｘ６はＳであり；Ｘ７はＡであり；Ｘ８はＶであり；Ｘ９はＦであり；Ｘ１０はＹであり；Ｘ１１はＹであり；Ｘ１２はＬであり；Ｘ１３はＹであり；Ｘ１４はＨであり、Ｘ１５はＡである。
【０１６９】
さらなる一態様では、この重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含み、この軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含む。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる一態様では、この重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号１６）
ＨＣ−ＦＲ２  ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ                        （配列番号１７）
ＨＣ−ＦＲ３  ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ    （配列番号１８）
ＨＣ−ＦＲ４  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ                          （配列番号１９）。
【０１７０】
さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。さらなる態様では、１又は複数の軽鎖フレームワーク配列は、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ    （配列番号２３）
ＬＣ−ＦＲ２  ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ                    （配列番号２４）
ＬＣ−ＦＲ３  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ    （配列番号２５）
ＬＣ−ＦＲ４  ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ                          （配列番号２６）。
【０１７１】
なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、ヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一実施態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１７２】
なお別の一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤＬ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）この重鎖は、それぞれ、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号１）、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）と少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３配列をさらに含む、又は
（ｂ）この軽鎖は、それぞれ、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号４）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号５）及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号６）と少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３配列をさらに含む。
【０１７３】
具体的な一態様では、この配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。別の一態様では、この重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含み、この軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含む。なお別の一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる一態様では、この重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号１６）
ＨＣ−ＦＲ２  ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ                        （配列番号１７）
ＨＣ−ＦＲ３  ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ    （配列番号１８）
ＨＣ−ＦＲ４  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ                          （配列番号１９）。
【０１７４】
さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。さらなる態様では、１又は複数の軽鎖フレームワーク配列は、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ    （配列番号２３）
ＬＣ−ＦＲ２  ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ                    （配列番号２４）
ＬＣ−ＦＲ３  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ    （配列番号２５）
ＬＣ−ＦＲ４  ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ                          （配列番号２６）。
【０１７５】
なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、ヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一実施態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１７６】
なおさらなる一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）この重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号２８）、
と、少なくとも８５％の配列同一性を有し、又は
（ｂ）この軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９）
と、少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１７７】
具体的な一態様では、この配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。別の一態様では、この重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含み、この軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含む。なお別の一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。さらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる一態様では、この重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号１６）
ＨＣ−ＦＲ２  ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ                        （配列番号１７）
ＨＣ−ＦＲ３  ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ    （配列番号１８）
ＨＣ−ＦＲ４  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ                          （配列番号１９）。
【０１７８】
さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。さらなる態様では、１又は複数の軽鎖フレームワーク配列は、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ    （配列番号２３）
ＬＣ−ＦＲ２  ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ                    （配列番号２４）
ＬＣ−ＦＲ３  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ    （配列番号２５）
ＬＣ−ＦＲ４  ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ                          （配列番号２６）。
【０１７９】
なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、ヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、原核細胞における産生から生じる。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一実施態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１８０】
別のさらなる一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）この重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）、
と少なくとも８５％の配列同一性を有し、又は
（ｂ）この軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９）
と少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１８１】
なおさらなる一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）この重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号８）、又は
と少なくとも８５％の配列同一性を有し、
（ｂ）この軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９）
と少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１８２】
具体的な一態様では、この配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。別の一態様では、この重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含み、この軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含む。なお別の一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。さらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる一態様では、この重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号１６）
ＨＣ−ＦＲ２  ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ                        （配列番号１７）
ＨＣ−ＦＲ３  ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ    （配列番号１８）
ＨＣ−ＦＲ４        ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ                    （配列番号２７）。
【０１８３】
さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。さらなる態様では、１又は複数の軽鎖フレームワーク配列は、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ    （配列番号２３）
ＬＣ−ＦＲ２  ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ                    （配列番号２４）
ＬＣ−ＦＲ３  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ    （配列番号２５）
ＬＣ−ＦＲ４  ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ                          （配列番号２６）。
【０１８４】
なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、ヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。さらなる特別な態様では、最小のエフェクター機能は、原核細胞の製造に起因する。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一実施態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１８５】
さらに別の実施態様では、抗ＰＤＬ１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（ＣＡＳ登録番号：１４２２１８５−０６−５）である。なおさらなる実施態様では、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）又はＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩ  ＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号８）に由来する重鎖可変領域アミノ酸配列を含む重鎖可変領域及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ  ＳＡＳＦ  ＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号９）のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体が提供される。なおさらなる実施態様では、重鎖及び／又は軽鎖配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２９）
に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％配列同一性を有し、及び／又は
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３０）
に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％配列同一性を有する。
【０１８６】
なおさらなる実施態様では、本発明は、上記の抗ＰＤＬ１抗体のいずれかを、少なくとも１種の薬学的に許容される担体と組み合わせて含む組成物を提供する。
【０１８７】
なおさらなる実施態様では、抗ＰＤＬ１抗体の軽鎖又は重鎖可変領域配列をコードする、単離された核酸が提供され、ここで、
（ａ）重鎖は、それぞれ、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号１）、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３配列をさらに含み、
（ｂ）軽鎖は、それぞれ、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号４）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号５）及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号６）に対して少なくとも８５％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３配列をさらに含む。
【０１８８】
特別の態様では、配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並置される１又は複数のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並置される１又は複数のフレームワーク配列を含む。さらに別の態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。さらなる態様において、重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる態様では、重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる態様では、１又は複数の重鎖フレームワーク配列は、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号１６）
ＨＣ−ＦＲ２  ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ                        （配列番号１７）
ＨＣ−ＦＲ３  ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ    （配列番号１８）
ＨＣ−ＦＲ４  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ                          （配列番号１９）。
【０１８９】
なおさらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる態様では、１又は複数の軽鎖フレームワーク配列は、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ    （配列番号２３）
ＬＣ−ＦＲ２  ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ                    （配列番号２４）
ＬＣ−ＦＲ３  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ    （配列番号２５）
ＬＣ−ＦＲ４  ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ                          （配列番号２６）。
【０１９０】
なおさらなる特別な態様では、本明細書に記載される抗体（抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤＬ１抗体又は抗ＰＤＬ２抗体など）は、ヒト又はマウス定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる特別な態様では、最小エフェクター機能は、原核細胞における製造に起因する。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１９１】
なおさらなる一態様では、本明細書に記載される抗体のいずれかをコードする単離された核酸が本明細書で提供される。一部の実施態様では、この核酸は、以前に記載した抗ＰＤＬ１抗体、抗ＰＤ−１抗体、又は抗ＰＤＬ２抗体のいずれかをコードする核酸の発現に適切なベクターをさらに含む。なおさらなる具体的な一態様では、このベクターは、核酸の発現に適切な宿主細胞中をさらに含む。なおさらなる具体的な一態様では、この宿主細胞は、真核細胞又は原核細胞である。なおさらなる具体的な一態様では、この真核細胞は、哺乳動物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）である。
【０１９２】
抗体又はその抗原結合断片は、当該技術分野で公知の方法を使用して、例えば、以前に記載した抗ＰＤＬ１抗体、抗ＰＤ−１抗体、若しくは抗ＰＤＬ２抗体、又は抗原結合断片のいずれかをコードする核酸を発現に適切な形態で含む宿主細胞を、かかる抗体又は断片を産生するのに適切な条件下で培養すること、及びこの抗体又は断片を回収することを含むプロセスによって、作製され得る。
【０１９３】
一部の実施態様では、この単離された抗ＰＤＬ１抗体は、非グリコシル化されている。抗体のグリコシル化は、典型的には、Ｎ−結合型又はＯ−結合型のいずれかである。Ｎ−結合型とは、アスパラギン残基の側鎖への糖（炭水化物）部分の結合を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン、ここで、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である、は、アスパラギン側鎖への糖（炭水化物）部分の酵素的結合のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中のこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的グリコシル化部位を創出する。Ｏ結合グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンへの、糖類Ｎ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース又はキシロースのうち１つの結合を指すが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンもまた使用され得る。抗体からのグリコシル化部位の除去は、上記トリペプチド配列（Ｎ結合グリコシル化部位について）のうち１つが除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって、簡便には達成される。この改変は、グリコシル化部位内のアスパラギン、セリン又はスレオニン残基の、別のアミノ酸残基（例えば、グリシン、アラニン又は保存的置換）による置換によって行われ得る。
【０１９４】
本明細書の実施態様のいずれかでは、この単離された抗ＰＤＬ１抗体は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ寄託番号Ｑ９ＮＺＱ７．１に示されるようなヒトＰＤＬ１又はその変異体などの、ヒトＰＤＬ１に結合し得る。
【０１９５】
なおさらなる実施態様では、本発明は、本明細書において提供されるような抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤＬ２抗体又はその抗原結合断片及び少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組成物を提供する。一部の実施態様では、個体に投与される抗ＰＤＬ１、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤＬ２抗体又はその抗原結合断片は、１又は複数の薬学的に許容される担体を含む組成物である。本明細書に記載される又は当技術分野で公知の薬学的に許容される担体のいずれも使用され得る。
【０１９６】
一部の実施態様では、本明細書において記載される抗ＰＤＬ１抗体は、６０ｍｇ／ｍＬの量の抗体、約２０ｍＭの濃度の酢酸ヒスチジン、約１２０ｍＭの濃度のスクロース及び０．０４％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）を含む製剤中にあり、製剤は、約５．８のｐＨを有する。一部の実施態様では、本明細書において記載される抗ＰＤＬ１抗体は、約１２５ｍｇ／ｍＬの量の抗体、約２０ｍＭの濃度の酢酸ヒスチジン、約２４０ｍＭの濃度のスクロース及び０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）を含む製剤中にあり、製剤は、約５．５のｐＨを有する。
【０１９７】
ＩＩＩ．ＯＸ４０結合アゴニスト
有効量のヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストを個体に投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強する方法もまた、本明細書で提供される。
【０１９８】
ＯＸ４０結合アゴニストとして、例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）、ＯＸ４０Ｌアゴニスト断片、ＯＸ４０オリゴマー受容体及びＯＸ４０イムノアドヘシンが挙げられる。
【０１９９】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いる治療に先立つ増殖及び／又はサイトカイン製造と比較して、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞増殖を増大し、及び／又はＣＤ４＋エフェクターＴ細胞によるサイトカイン製造を増大する。一部の実施態様では、サイトカインは、ＩＦＮ−γである。
【０２００】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、記憶Ｔ細胞増殖を増大し、及び／又は記憶細胞によるサイトカイン製造を増大する。一部の実施態様では、サイトカインは、ＩＦＮ−γである。
【０２０１】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、エフェクターＴ細胞機能のＴｒｅｇ抑制を阻害する。一部の実施態様では、エフェクターＴ細胞機能は、エフェクターＴ細胞増殖及び／又はサイトカイン製造である。一部の実施態様では、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。
【０２０２】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＯＸ４０を発現する標的細胞においてＯＸ４０シグナル伝達を増大する。一部の実施態様では、ＯＸ４０シグナル伝達は、ＮＦｋＢ下流シグナル伝達をモニタリングすることによって検出される。
【０２０３】
一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、枯渇抗ヒトＯＸ４０抗体（例えば、ヒトＯＸ４０を発現する細胞を枯渇される）である。一部の実施態様では、ヒトＯＸ４０発現細胞は、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞である。一部の実施態様では、ヒトＯＸ４０発現細胞は、Ｔｒｅｇ細胞である。一部の実施態様では、枯渇は、ＡＤＣＣ及び／又は食作用によってである。一部の施態様では、抗体は、ヒトエフェクター細胞によって発現されたＦｃγＲと結合し、ヒトエフェクター細胞機能を活性化することによってＡＤＣＣを媒介する。一部の実施態様では、抗体は、ヒトエフェクター細胞によって発現されるＦｃγＲと結合し、ヒトエフェクター細胞機能を活性化することによって食作用を媒介する。例示的ヒトエフェクター細胞として、例えば、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、好中球が挙げられる。一部の実施態様では、ヒトエフェクター細胞は、マクロファージである。
【０２０４】
一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、機能的Ｆｃ領域を有する。一部の実施態様では、機能的Ｆｃ領域のエフェクター機能は、ＡＤＣＣである。一部の実施態様では、機能的Ｆｃ領域のエフェクター機能は、食作用である。一部の実施態様では、機能的Ｆｃ領域のエフェクター機能は、ＡＤＣＣ及び食作用である。一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１である。一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４である。
【０２０５】
一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ヒト又はヒト化抗体である。一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体）は、ＭＥＤＩ６３８３ではない。一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、ＯＸ４０アゴニスト抗体）は、ＭＥＤＩ０５６２ではない。
【０２０６】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される米国特許第７５５０１４０号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＤＲＹＳＱＶＨＹＡＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３１）の配列を含む重鎖及び／又はＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＡＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＹＹＮＨＰＴＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３２）の配列を含む軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７５５０１４０号に記載されるような抗体００８の少なくとも１つの、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７５５０１４０号に記載されるような抗体００８の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２０７】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国特許第７５５０１４０号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＤＩＱＭＴＱＳＰＤＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＡＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＱＹＹＮＨＰＴＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３３）の配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７５５０１４０号に記載されるような抗体ＳＣ０２００８の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７５５０１４０号に記載されるような抗体ＳＣ０２００８の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２０８】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国特許第７５５０１４０号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＨＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＧＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＧＴＧＧＧＴＹＹＡＤＳＶＭＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＹＤＮＶＭＧＬＹＷＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３４）の配列を含む重鎖及び／又はＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３５）の配列を含む軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７５５０１４０号に記載されるような抗体０２３の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７５５０１４０号に記載されるような抗体０２３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２０９】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される米国特許第７９６０５１５号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＳＳＳＴＩＤＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＳＧＷＹＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３６）の配列を含む重鎖可変領域及び／又はＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＥＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＳＹＰＰＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３７）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７９６０５１５号に記載されるような抗体１１Ｄ４の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７９６０５１５号に記載されるような抗体１１Ｄ４の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１０】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国特許第７９６０５１５号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＤＤＹＡＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＳＷＮＳＧＳＩＧＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＬＹＹＣＡＫＤＱＳＴＡＤＹＹＦＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号３８）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＥＩＶＶＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３９）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７９６０５１５号に記載されるような抗体１８Ｄ８の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、米国特許第７９６０５１５号に記載されるような抗体１８Ｄ８の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１１】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される国際公開第２０１２／０２７３２８号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＳＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＫＷＭＧＷＩＮＴＥＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＳＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＮＰＹＹＤＹＶＳＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号４０）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＹＬＹＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＨＹＳＴＰＲＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号４１）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１２／０２７３２８号に記載されるような抗体ｈｕ１０６−２２２の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１２／０２７３２８号に記載されるような抗体ｈｕ１０６−２２２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１２】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１２／０２７３２８号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＥＹＥＦＰＳＨＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＬＶＡＡＩＮＳＤＧＧＳＴＹＹＰＤＴＭＥＲＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＹＤＤＹＹＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号４２）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＨＳＲＥＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号４３）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１２／０２７３２８号に記載されるような抗体Ｈｕ１１９−１２２の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１２／０２７３２８号に記載されるような抗体Ｈｕ１１９−１２２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１３】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される国際公開第２０１３／０２８２３１号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＭＹＬＧＬＮＹＶＦＩＶＦＬＬＮＧＶＱＳＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＡＷＭＤＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡＥＩＲＳＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＥＳＶＮＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＴＷＧＥＶＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＴＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号４４）の配列を含む重鎖及び／又は
ＭＲＰＳＩＱＦＬＧＬＬＬＦＷＬＨＧＡＱＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＧＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＤＩＮＫＹＩＡＷＹＱＨＫＰＧＫＧＰＲＬＬＩＨＹＴＳＴＬＱＰＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＲＤＹＳＦＳＩＳＮＬＥＰＥＤＩＡＴＹＹＣＬＱＹＤＮＬＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４５）の配列を含む軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＭＹＬＧＬＮＹＶＦＩＶＦＬＬＮＧＶＱＳＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＡＷＭＤＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡＥＩＲＳＫＡＮＮＨＡＴＹＹＡＥＳＶＮＧＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＳＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＴＷＧＥＶＦＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号６１）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＭＲＰＳＩＱＦＬＧＬＬＬＦＷＬＨＧＡＱＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＧＫＶＴＩＴＣＫＳＳＱＤＩＮＫＹＩＡＷＹＱＨＫＰＧＫＧＰＲＬＬＩＨＹＴＳＴＬＱＰＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＲＤＹＳＦＳＩＳＮＬＥＰＥＤＩＡＴＹＹＣＬＱＹＤＮＬＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号６２）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１３／０２８２３１号に記載されるような抗体Ｍａｂ  ＣＨ１１９−４３−１の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１３／０２８２３１号に記載されるような抗体Ｍａｂ  ＣＨ１１９−４３−１の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１４】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される国際公開第２０１３／０３８１９１号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＫＱＫＰＧＱＧＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＳＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＮＹＹＧＳＳＬＳＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号４６）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＴＴＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４７）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１３／０３８１９１号に記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１３／０３８１９１号に記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１５】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１３／０３８１９１号に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＴＳＧＹＴＦＫＤＹＴＭＨＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＧＩＹＰＮＮＧＧＳＴＹＮＱＮＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＦＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＭＧＹＨＧＰＨＬＤＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＰ（配列番号４８）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＬＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＡＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＧＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＴＤＹＦＣＱＱＹＩＮＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号４９）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１３／０３８１９１号に記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１３／０３８１９１号に記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１６】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＳＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＮＹＹＧＳＳＬＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５０）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５１）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１７】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＭＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＶＴＩＴＳＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＮＹＹＧＳＳＬＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５０）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５２）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１８】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＩＴＳＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＮＹＹＧＳＳＬＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５３）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５１）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２１９】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＩＴＳＤＴＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＮＹＹＧＳＳＬＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５３）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５２）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２０】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＮＹＹＧＳＳＬＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５４）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５１）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２１】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＶＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＲＬＥＷＩＧＹＩＮＰＹＮＤＧＴＫＹＮＥＫＦＫＧＲＡＴＬＴＳＤＫＳＡＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＮＹＹＧＳＳＬＳＭＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５４）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＶＫＬＬＩＹＹＴＳＲＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＮＴＬＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５２）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン２０Ｅ５の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２２】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＫＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＹＰＮＮＧＧＳＴＹＮＱＮＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＧＹＨＧＰＨＬＤＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号５５）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＡＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＩＮＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５６）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２３】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＫＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＹＰＮＮＧＧＳＴＹＮＱＮＦＫＤＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＧＹＨＧＰＨＬＤＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号５５）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＡＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＳＧＧＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＩＮＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５７）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２４】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＫＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＹＰＮＮＧＧＳＴＹＮＱＮＦＫＤＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＧＹＨＧＰＨＬＤＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号５８）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＡＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＩＮＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５６）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２５】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＫＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＹＰＮＮＧＧＳＴＹＮＱＮＦＫＤＲＶＴＬＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＧＹＨＧＰＨＬＤＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号５８）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＡＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＳＧＧＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＩＮＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５７）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２６】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＫＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＹＰＮＮＧＧＳＴＹＮＱＮＦＫＤＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＧＹＨＧＰＨＬＤＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号５９）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＡＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＩＮＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号５６）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａｌに記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２７】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載される抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＫＤＹＴＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧＧＩＹＰＮＮＧＧＳＴＹＮＱＮＦＫＤＲＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＭＧＹＨＧＰＨＬＤＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号５９）の配列を含む重鎖可変領域及び／又は
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＡＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＳＧＧＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＩＮＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ  （配列番号５７）の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、国際公開第２０１４／１４８８９５号Ａ１に記載されるような抗体クローン１２Ｈ３の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２８】
一部の実施態様では、アゴニスト抗ヒトＯＸ４０抗体は、Ｌ１０６ＢＤ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ＃製品３４０４２０）である。一部の実施態様では、抗体は、抗体Ｌ１０６（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品＃３４０４２０）の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、抗体Ｌ１０６（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品＃３４０４２０）の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２２９】
一部の実施態様では、アゴニスト抗ヒトＯＸ４０抗体は、ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ＃２００７３）である。一部の実施態様では、抗体は、抗体ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ＃２００７３）の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、抗体ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ＃２００７３）の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２３０】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＭＥＤＩ６４６９である。一部の実施態様では、抗体は、抗体ＭＥＤＩ６４６９の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、抗体ＭＥＤＩ６４６９の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２３１】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＭＥＤＩ０５６２である。一部の実施態様では、抗体は、抗体ＭＥＤＩ０５６２の少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの超可変領域（ＨＶＲ）配列を含む。一部の実施態様では、抗体は、抗体ＭＥＤＩ０５６２の重鎖可変領域配列及び／又は軽鎖可変領域配列を含む。
【０２３２】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、上記で示されるＯＸ４０アゴニスト抗体のいずれか１種と同一のエピトープと結合するアゴニスト抗体である。
【０２３３】
一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、機能的Ｆｃ領域を有する。一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１である。一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ４である。一部の実施態様では、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体は、エフェクター機能を増大するよう遺伝子操作される（例えば、野生型ＩｇＧ１におけるエフェクター機能と比較して）。一部の実施態様では、抗体は、Ｆｃγ受容体との増大した結合を有する。一部の実施態様では、抗体は、Ｆｃ領域に付着される（直接的又は間接的に）フコースを欠く。例えば、このような抗体中のフコースの量は、１％−８０％、１％−６５％、５％−６５％又は２０％−４０％であり得る。一部の実施態様では、Ｆｃ領域は、２分されたオリゴ糖を含み、これでは、例えば、抗体のＦｃ領域に付着される二分岐オリゴ糖は、ＧｌｃＮＡｃによって二分される。一部の実施態様では、抗体は、ＡＤＣＣを改善する１又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３及び／又は３３４での置換（残基のＥＵ番号付け）を有するＦｃ領域を含む。
【０２３４】
本明細書において記載される方法にとって有用なＯＸ４０アゴニストは、抗体に制限されるようには全く意図されない、非抗体ＯＸ４０アゴニストが考慮され、当技術分野で周知である。
【０２３５】
上記のように、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ１３４Ｌとしても知られる）は、ＯＸ４０のリガンドとして働く。そのようなものとして、ＯＸ４０Ｌの一部又は全てを示すアゴニストは、ＯＸ４０アゴニストとして働き得る。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０Ｌの１つ又は複数の細胞外ドメインを含み得る。ＯＸ４０Ｌの細胞外ドメインの例として、ＯＸ４０結合ドメインを挙げることができる。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０Ｌの１つ又は複数の細胞外ドメインを含むが、タンパク質のその他の不溶性ドメイン、例えば、膜貫通ドメインを欠く、ＯＸ４０Ｌの可溶性形態であり得る。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０Ｌと結合できる、ＯＸ４０Ｌの１つ又は複数の細胞外ドメインを含む可溶性タンパク質である。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、例えば、有効性、半減期又はその他の所望の特徴を増大するために、別のタンパク質ドメインに連結され得る。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、免疫グロブリンＦｃドメインと連結している、ＯＸ４０Ｌの１つ又は複数の細胞外ドメインを含み得る。
【０２３６】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、米国特許第７６９６１７５号に記載されたＯＸ４０アゴニストのいずれか１種であり得る。
【０２３７】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、オリゴマー又は多量体分子であり得る。例えば、ＯＸ４０アゴニストは、タンパク質がオリゴマー形成することを可能にする１つ又は複数のドメイン（例えば、ロイシンジッパードメイン）を含有し得る。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、１つ又は複数のロイシンジッパードメインと連結している、ＯＸ４０Ｌの１つ又は複数の細胞外ドメインを含み得る。
【０２３８】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、欧州特許ＥＰ０６７２１４１Ｂｌに記載されたＯＸ４０アゴニストのいずれか１種であり得る。
【０２３９】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、三量体ＯＸ４０Ｌ融合タンパク質であり得る。例えば、ＯＸ４０アゴニストは、免疫グロブリンＦｃドメインと連結しているＯＸ４０Ｌの１つ又は複数の細胞外ドメインを及び三量体化ドメイン（制限するものではないが、イソロイシンジッパードメインを含む）を含み得る。
【０２４０】
一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、ＯＸ４０イムノアドヘシンなどの、国際公開番号国際公開第２００６／１２１８１０号に記載されるＯＸ４０アゴニストのいずれか１種であり得る。一部の実施態様では、ＯＸ４０イムノアドヘシンは、三量体ＯＸ４０−Ｆｃタンパク質であり得る。一部の実施態様では、ＯＸ４０アゴニストは、ＭＥＤＩ６３８３である。
【０２４１】
ＩＶ．抗体調製
本明細書に記載される抗体は、抗体を生成するために当該技術分野で利用可能な技術を使用して調製され、その例示的な方法は、以下のセクションに、より詳細に記載されている。
【０２４２】
この抗体は、目的の抗原（即ち、ＰＤ−Ｌ１（例えばヒトＰＤ−Ｌ１）、ＯＸ４０（例えばヒトＯＸ４０））に対するものである。好ましくは、この抗原は、生物学的に重要なポリペプチドであり、障害に罹患している哺乳動物へのこの抗体の投与は、その哺乳動物において治療的利益を生じ得る。
【０２４３】
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、≦１μＭ、≦１５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０２４４】
一実施態様では、Ｋｄは、以下のアッセイによって記載されるように、Ｆａｂバージョンの目的の抗体及びその抗原を用いて実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、標識されていない抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識された抗原によってＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体でコートされたプレートを用いて結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Chen等, J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照のこと）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が、５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コートされ、引き続いて、室温（およそ２３℃）で２から５時間にわたってＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンでブロッキングされる。非吸着剤プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］−抗原が、目的のＦａｂの段階希釈と混合される。次いで、目的のＦａｂは、一晩インキュベートされる；しかし、このインキュベーションは、平衡化が達成されることを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）にわたって継続し得る。その後、この混合物は、室温でのインキュベーション（例えば１時間にわたる）のために、捕捉プレートに移される。次いで、溶液が除去され、プレートが、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄される。プレートが乾燥したら、１５０μｌウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）が添加され、プレートは、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計数される。最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度は、競合的結合アッセイにおける使用のために選択される。
【０２４５】
別の実施態様によれば、Ｋｄは、〜１０反応単位（ＲＵ）で、固定化されている抗原ＣＭ５チップと共に２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用する表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給業者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原は、およそ１０反応単位（ＲＵ）のカップリングされたタンパク質を達成するために、５μｌ／分の流速での注入前に、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈される。抗原の注入後、１Ｍエタノールアミンが、未反応の基をブロッキングするために注入される。反応速度論的な測定のため、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中２倍段階希釈のＦａｂ（０．７８ｎＭ−５００ｎＭ）が、およそ２５μｌ／分の流速で２５℃で注入される。会合速度（association rate）（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、会合及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることによって、単純な一対一Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。例えば、Ｃｈｅｎ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと。会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）が、上記表面プラズモン共鳴アッセイによって１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、この会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）は、ストップフロー装備分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定した場合、漸増濃度の抗原の存在下で、ＰＢＳ、ｐＨ７．２中の２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の、２５℃における蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を使用することによって、決定され得る。
【０２４６】
（ｉ）抗原調製
他の分子に任意選択的にコンジュゲートされた可溶型抗原又はその断片は、抗体を生成するための免疫原として使用され得る。膜貫通分子、例えば、受容体について、これらの断片（例えば、受容体の細胞外ドメイン）は、免疫原として使用され得る。あるいは、膜貫通分子を発現する細胞が、免疫原として使用され得る。かかる細胞は、天然供給源（例えば、がん細胞株）から誘導され得るか、又は膜貫通分子を発現するように組換え技術によって形質転換された細胞であり得る。抗体を調製するために有用な他の抗原及びその形態は、当業者に明らかである。
【０２４７】
（ｉｉ）特定の抗体ベースの方法
ポリクローナル抗体は、好ましくは、適切な抗原及びアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物において惹起される。二官能性又は誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介したコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２又はＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ、式中、Ｒ及びＲ１は、異なるアルキル基である、を使用して、免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン又はダイズトリプシン阻害因子に、適切な抗原をコンジュゲートさせることが有用であり得る。
【０２４８】
動物は、例えば、１００μｇ又は５μｇのタンパク質又はコンジュゲート（それぞれ、ウサギ又はマウスについて）を、３容積の完全フロイントアジュバントと組み合わせ、この溶液を複数の部位に皮内注射することによって、抗原、免疫原性コンジュゲート又は誘導体に対して免疫化される。１カ月後、動物は、完全フロイントアジュバント中で、元の量の１／５から１／１０のペプチド又はコンジュゲートにより、複数の部位における皮下注射によって追加免疫される。７から１４日間後、動物は出血させられ、血清が、抗体価についてアッセイされる。動物は、力価がプラトーになるまで追加免疫される。好ましくは、この動物は、同じ抗原のコンジュゲートではあるが、異なるタンパク質に及び／又は異なる架橋試薬を介してコンジュゲートされたコンジュゲートで、追加免疫される。コンジュゲートは、タンパク質融合物として組換え細胞培養物中でも作製され得る。また、凝集剤、例えばミョウバンが、免疫応答を増強するために適切に使用される。
【０２４９】
本発明のモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ等、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載され、例えば、Ｈｏｎｇｏ等、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１４（３）：２５３−２６０（１９９５）、Ｈａｒｌｏｗ等、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ等、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１）、及びヒト−ヒトハイブリドーマに関するＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５−２６８（２００６）中にさらに記載されたハイブリドーマ法を使用して作製され得る。さらなる方法には、例えば、ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒト天然ＩｇＭ抗体に関する米国特許第７１８９８２６号に記載される方法が含まれる。ヒトハイブリドーマテクノロジー（トリオーマテクノロジー）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７−９３７（２００５）並びにＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０２５０】
種々の他のハイブリドーマ技術については、例えば、米国特許出願公開第２００６／２５８８４１号；米国特許出願公開第２００６／１８３８８７号（完全ヒト抗体）、米国特許出願公開第２００６／０５９５７５号；米国特許出願公開第２００５／２８７１４９号；米国特許出願公開第２００５／１００５４６号；米国特許出願公開第２００５／０２６２２９号；並びに米国特許第７０７８４９２号及び米国特許第７１５３５０７号を参照のこと。ハイブリドーマ法を使用してモノクローナル抗体を産生するための例示的なプロトコールは、以下に記載される。一実施態様では、マウス又は他の適切な宿主動物、例えば、ハムスターは、免疫化のために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生する又は産生することが可能なリンパ球を惹起するために免疫化される。抗体は、本発明のポリペプチド又はその断片、及びアジュバント、例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）／トレハロースジコリノミコラート（ＴＤＭ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｍｏｎｔ．）の複数回の皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物において惹起される。本発明のポリペプチド（例えば、抗原）又はその断片は、当該技術分野で周知の方法、例えば組換え方法を使用して調製され得、そのうちいくつかは、本明細書にさらに記載される。免疫化した動物由来の血清が、抗抗原抗体についてアッセイされ、追加免疫免疫化が、任意選択的に投与される。抗抗原抗体を産生する動物からリンパ球が単離される。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫化され得る。
【０２５１】
次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、適切な融剤、例えばポリエチレングリコールを使用して、骨髄腫細胞と融合される。例えば、Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６）を参照のこと。効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に対して感受性である骨髄腫細胞が、使用され得る。例示的な骨髄腫細胞には、マウス骨髄腫株、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来のもの、及びアメリカンタイプカルチャーコレクション、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２又はＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞が含まれるが、これらに限定されない。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫（heteromyeloma）細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生のために記載されている（Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur 等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)）。
【０２５２】
こうして調製されたハイブリドーマ細胞は、適切な培地、例えば、未融合の親骨髄腫細胞の増殖又は生存を阻害する１又は複数の物質を含む培地中で、播種及び増殖される。例えば、親骨髄腫細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止する物質、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む（ＨＡＴ培地）。好ましくは、無血清ハイブリドーマ細胞培養法は、例えば、Ｅｖｅｎ等、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２４（３）、１０５−１０８（２００６）に記載されるように、動物由来の血清、例えば、ウシ胎児血清の使用を低減させるために使用される。
【０２５３】
ハイブリドーマ細胞培養物の生産性を改善するためのツールとしてのオリゴペプチドが、Ｆｒａｎｅｋ、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１１−１２２（２００５）に記載されている。具体的には、標準的な培地は、特定のアミノ酸（アラニン、セリン、アスパラギン、プロリン）が、又はタンパク質加水分解物画分が富化されており、アポトーシスは、３から６アミノ酸残基から構成される合成オリゴペプチドによって顕著に抑制され得る。これらのペプチドは、ミリモル又はそれより高い濃度で存在する。
【０２５４】
ハイブリドーマ細胞が増殖している培地は、本発明の抗体に結合するモノクローナル抗体の産生についてアッセイされ得る。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法によって、又はインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素結合性免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって、決定され得る。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、スキャッチャード解析によって決定され得る。例えば、Ｍｕｎｓｏｎ等、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７：２２０（１９８０）を参照のこと。
【０２５５】
所望の特異性、親和性及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、それらのクローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ得、標準的な方法によって増殖され得る。例えば、Ｇｏｄｉｎｇ、上記を参照のこと。この目的のために適切な培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭ又はＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍としてインビボで増殖され得る。これらのサブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又はアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培地、腹水又は血清から適切に分離される。ハイブリドーマ細胞からのタンパク質の単離のための１つの手順は、米国特許出願公開第２００５／１７６１２２号及び米国特許第６９１９４３６号に記載されている。この方法は、結合プロセスにおいて、最小の塩、例えば、リオトロピックな塩を使用すること、及び好ましくは、溶出プロセスにおいて少量の有機溶媒もまた使用することを含む。
【０２５６】
（ｉｉｉ）ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（単数又は複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、種々の方法が、実施例３に記載される方法など、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてかかるライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で公知である。さらなる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ等編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）；Ｓｉｄｈｕ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；並びにＬｅｅ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０２５７】
特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、Ｗｉｎｔｅｒ等、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについて次いでスクリーニングされ得るファージライブラリーにおいてランダムに組換えられる。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片のいずれかとして、抗体断片をディスプレイする。免疫化された供給源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、ナイーブなレパートリーが、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ等、ＥＭＢＯ  Ｊ、１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、いずれの免疫化もなしに、広範な非自己及びまた自己抗原に対する抗体の単一供給源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローニングされ得る。最後に、ナイーブなライブラリーは、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１−３８８（１９９２）によって記載されるように、再編成されていないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、再編成をインビトロで達成するためにランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することによって、合成的にも作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許公開には、例えば、以下が含まれる：米国特許第５７５０３７３号並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、米国特許出願公開第２００５／０１１９４５５号、米国特許出願公開第２００５／０２６６０００号、米国特許出願公開第２００７／０１１７１２６号、米国特許出願公開第２００７／０１６０５９８号、米国特許出願公開第２００７／０２３７７６４号、米国特許出願公開第２００７／０２９２９３６号及び米国特許出願公開第２００９／０００２３６０号。
【０２５８】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書で、ヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。
【０２５９】
（ｉｖ）キメラ、ヒト化及びヒト抗体
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許４８１６５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。１つの例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又は非ヒト霊長類、例えばサル由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる一例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変化している「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
【０２６０】
特定の実施態様では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持したまま、ヒトに対する免疫原性を低減させるためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部分もまた含む。一部の実施態様では、ヒト化抗体中の一部のＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性又は親和性を回復させる又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基がそこから誘導される抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０２６１】
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５８２１３３７号、米国特許第７５２７７９１号、米国特許第６９８２３２１号及び米国特許第７０８７４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植を記載している）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェイシング」を記載している）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載している）；並びにＯｓｂｏｕｒｎ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ等、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングのための「ガイドされた選択」手法を記載している）にさらに記載されている。
【０２６２】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、以下が含まれるがこれらに限定されない：「ベストフィット」方法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Sims等 J. Immunol. 151:2296 (1993)を参照のこと）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Carter等 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta等 J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照のこと）；ヒト成熟（体細胞性に突然変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Almagro及びFransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照のこと）；並びにＦＲライブラリーをスクリーニングすることから誘導されたフレームワーク領域（例えば、Baca等, J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及びRosok等, J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照のこと）。
【０２６３】
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の種々の技術を使用して産生され得る。ヒト抗体は、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ及びｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）並びにＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に、一般に記載されている。
【０２６４】
ヒト抗体は、抗原性曝露に応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって、調製され得る。かかる動物は、典型的には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部分を含み、これが、内因性の免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、又は染色体外に存在する若しくは動物の染色体中にランダムに組み込まれる。かかるトランスジェニックマウスでは、内因性の免疫グロブリン遺伝子座は、一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を取得するための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）テクノロジーを記載している米国特許第６０７５１８１号及び米国特許第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）テクノロジーを記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）テクノロジーを記載している米国特許第７０４１８７０号、及びＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）テクノロジーを記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号もまた参照のこと。かかる動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾され得る。
【０２６５】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によっても作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は、記載されている（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及びBoerner等, J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマテクノロジーを介して生成されたヒト抗体は、Ｌｉ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７−３５６２（２００６）にも記載されている。さらなる方法には、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載された方法が含まれる。ヒトハイブリドーマテクノロジー（トリオーマテクノロジー）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７−９３７（２００５）並びにＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５−９１（２００５）にも記載されている。
【０２６６】
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。次いで、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わされ得る。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術は、以下に記載される。
【０２６７】
（ｖ）抗体断片
抗体断片は、伝統的手段、例えば酵素的消化によって、又は組換え技術によって、生成され得る。特定の情況では、抗体全体ではなく抗体断片を使用することに利点がある。より小さいサイズの断片は、迅速なクリアランスを可能にし、固形腫瘍への改善されたアクセスをもたらし得る。特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ等（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４を参照のこと。
【０２６８】
種々の技術が、抗体断片の産生のために開発されてきた。伝統的には、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された（例えば、Morimoto等, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)；及びBrennan等, Science, 229:81 (1985)を参照のこと）。しかし、これらの断片は、現在、組換え宿主細胞によって直接産生され得る。Ｆａｂ、Ｆｖ及びＳｃＦｖ抗体断片は全て、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で発現され得、大腸菌から分泌され得、したがって、大量のこれらの断片の容易な産生を可能にする。抗体断片は、上で議論した抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌から直接回収され得、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成するために化学カップリングされ得る（Carter等, Bio/Technology 10:163-167 (1992)）。別の手法によれば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、米国特許第５８６９０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技術は、熟練の施術者に明らかである。特定の実施態様では、抗体は、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。国際公開第９３／１６１８５号；米国特許第５５７１８９４号；及び米国特許第５５８７４５８号を参照のこと。Ｆｖ及びｓｃＦｖは、定常領域を欠く、インタクトな結合部位を有する唯一の種である；したがって、これらは、インビボでの使用の間の低減された非特異的結合に適切であり得る。ｓｃＦｖ融合タンパク質は、ｓｃＦｖのアミノ末端又はカルボキシ末端のいずれかにおいて、エフェクタータンパク質の融合を生じるように、構築され得る。Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、編Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ、上記を参照のこと。この抗体断片は、例えば、米国特許第５６４１８７０号などに記載される、「直鎖状抗体」でもあり得る。かかる直鎖状抗体は、単一特異性又は二重特異性であり得る。
【０２６９】
（ｖｉ）多重特異性抗体
多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有し、ここで、これらのエピトープは、通常、異なる抗原に由来する。かかる分子は通常、２つの異なるエピトープにのみ結合するが（即ち、二重特異性抗体、ＢｓＡｂ）、さらなる特異性を有する抗体、例えば、三重特異性抗体が、本明細書で使用する場合、この表現によって包含される。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製され得る。一態様では、ＯＸ４０及びＰＤ−１と結合する二重特異性抗体が提供される。一態様では、ＯＸ４０及びＰＤ−Ｌ１と結合する二重特異性抗体が提供される。
【０２７０】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野で公知である。全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の共発現に基づき、ここで、これら２つの鎖は、異なる特異性を有する（Millstein等, Nature, 305:537-539 (1983)）。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな仕分けに起因して、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０の異なる抗体分子の潜在的混合物を産生し、このうち１つだけが、正確な二重特異性構造を有する。通常はアフィニティークロマトグラフィー工程によって実施される正確な分子の精製は、かなり厄介であり、産物収量は低い。類似の手順が、国際公開第９３／０８８２９号及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ等、ＥＭＢＯＪ．、１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０２７１】
二重特異性抗体を作製するための当該技術分野で公知の１つの手法は、「ノブ・イントゥー・ホール」又は「突出・イントゥー・空洞」手法である（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照のこと）。この手法では、２つの免疫グロブリンポリペプチド（例えば、重鎖ポリペプチド）は、各々、接触面を含む。一方の免疫グロブリンポリペプチドの接触面は、他方の免疫グロブリンポリペプチド上の対応する接触面と相互作用し、それによって、２つの免疫グロブリンポリペプチドを会合させる。これらの接触面は、一方の免疫グロブリンポリペプチドの接触面中に位置する「ノブ」又は「突出」（これらの用語は、本明細書で相互交換可能に使用され得る）が、他方の免疫グロブリンポリペプチドの接触面中に位置する「ホール」又は「空洞」（これらの用語は、本明細書で相互交換可能に使用され得る）と対応するように、操作され得る。一部の実施態様では、このホールは、ノブと同一又は類似のサイズのものであり、２つの接触面が相互作用する場合に、一方の接触面のノブが他方の接触面の対応するホールにおいて位置付け可能であるように、適切に位置付けられる。理論に束縛されることは望まないが、これは、ヘテロ多量体を安定化し、ホモ多量体などの他の種よりも、ヘテロ多量体の形成を好むと考えられる。一部の実施態様では、この手法は、２つの異なる免疫グロブリンポリペプチドのヘテロ多量体化を促進して、異なるエピトープに対する結合特異性を有する２つの免疫グロブリンポリペプチドを含む二重特異性抗体を創出するために使用され得る。
【０２７２】
一部の実施態様では、ノブは、小さいアミノ酸側鎖を、より大きい側鎖で置き換えることによって、構築され得る。一部の実施態様では、ホールは、大きいアミノ酸側鎖を、より小さい側鎖で置き換えることによって、構築され得る。ノブ若しくはホールは、元の接触面中に存在し得るか、又はこれらは、合成により導入され得る。例えば、ノブ又はホールは、少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基を少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基で置き換えるように、接触面をコードする核酸配列を改変することによって、合成により導入され得る。核酸配列を改変するための方法には、当該技術分野で周知の標準的な分子生物学技術が含まれ得る。種々のアミノ酸残基の側鎖容積は、以下の表に示される。一部の実施態様では、元の残基は、小さい側鎖容積を有し（例えば、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン又はバリン）、ノブを形成するための移入残基は、天然に存在するアミノ酸であり、これには、アルギニン、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンが含まれ得る。一部の実施態様では、元の残基は、大きい側鎖容積を有し（例えば、アルギニン、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン）、ホールを形成するための移入残基は、天然に存在するアミノ酸であり、これには、アラニン、セリン、スレオニン及びバリンが含まれる。
2017501167.tif 000003
【０２７３】
一部の実施態様では、ノブ又はホールを形成するための元の残基は、ヘテロ多量体の３次元構造に基づいて同定される。３次元構造を取得するための当該技術分野で公知の技術には、Ｘ線結晶学及びＮＭＲが含まれ得る。一部の実施態様では、この接触面は、免疫グロブリン定常ドメインのＣＨ３ドメインである。これらの実施態様では、ヒトＩｇＧ１のＣＨ３／ＣＨ３接触面には、４つのアンチパラレルβ鎖上に位置する各ドメイン上の１６の残基が関与する。理論に束縛されることは望まないが、突然変異した残基は、好ましくは、ノブが、パートナーＣＨ３ドメイン中の補償的ホールではなく、周囲の溶媒によって収容され得るというリスクを最小化するために、２つの中心的アンチパラレルβ鎖上に位置する。一部の実施態様では、２つの免疫グロブリンポリペプチド中の対応するノブ及びホールを形成する突然変異は、以下の表中に提供される１又は複数の対に対応する。
2017501167.tif 000004
【０２７４】
突然変異は、元の残基、次にカバット番号付け系を使用した位置、次いで移入残基によって示される（全ての残基は、一文字アミノ酸コードで与えられる）。複数の突然変異は、コロンによって分離される。
【０２７５】
一部の実施態様では、免疫グロブリンポリペプチドは、上記表２に列挙された１又は複数のアミノ酸置換を含むＣＨ３ドメインを含む。一部の実施態様では、二重特異性抗体は、表２の左の列に列挙された１又は複数のアミノ酸置換を含むＣＨ３ドメインを含む第１の免疫グロブリンポリペプチド、及び表２の右の列に列挙された１又は複数の対応するアミノ酸置換を含むＣＨ３ドメインを含む第２の免疫グロブリンポリペプチドを含む。
【０２７６】
上に議論したようなＤＮＡの突然変異の後、１又は複数の対応するノブ形成又はホール形成突然変異を有する修飾された免疫グロブリンポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で公知の標準的な組換え技術及び細胞系を使用して発現及び精製され得る。例えば、米国特許第５７３１１６８号；米国特許第５８０７７０６号；米国特許第５８２１３３３号；米国特許第７６４２２２８号；米国特許第７６９５９３６号；米国特許第８２１６８０５号；米国特許出願公開第２０１３／００８９５５３号；及びＳｐｉｅｓｓ等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３１：７５３−７５８、２０１３を参照のこと。修飾された免疫グロブリンポリペプチドは、原核宿主細胞、例えば大腸菌、又は真核宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞を使用して産生され得る。対応するノブ保有及びホール保有免疫グロブリンポリペプチドは、共培養物中の宿主細胞において発現され得、ヘテロ多量体として一緒に精製され得るか、又はそれらは、単一培養物中で発現され得、別々に精製され得、インビトロでアセンブルされ得る。一部の実施態様では、細菌宿主細胞の２つの株（一方は、ノブを有する免疫グロブリンポリペプチドを発現し、他方は、ホールを有する免疫グロブリンポリペプチドを発現する）が、当該技術分野で公知の標準的な細菌培養技術を使用して共培養される。一部の実施態様では、これら２つの株は、例えば、培養物中で等しい発現レベルを達成するために、特定の比で混合され得る。一部の実施態様では、これら２つの株は、５０：５０、６０：４０又は７０：３０の比で混合され得る。ポリペプチド発現後、これらの細胞は、一緒に溶解され得、タンパク質が抽出され得る。ホモ多量体種対ヘテロ多量体種の存在比を測定することを可能にする当該技術分野で公知の標準的な技術には、サイズ排除クロマトグラフィーが含まれ得る。一部の実施態様では、各修飾された免疫グロブリンポリペプチドは、標準的な組換え技術を使用して別々に発現され、インビトロで一緒にアセンブルされ得る。アセンブリは、例えば、各修飾された免疫グロブリンポリペプチドを精製し、混合し、等質量でそれらを一緒にインキュベートし、ジスルフィドを還元し（例えば、ジチオスレイトールを用いて処理することによって）、濃縮し、ポリペプチドを再酸化することによって、達成され得る。形成された二重特異性抗体は、陽イオン交換クロマトグラフィーを含む標準的な技術を使用して精製され得、サイズ排除クロマトグラフィーを含む標準的な技術を使用して測定され得る。これらの方法のより詳細な説明については、Ｓｐｅｉｓｓ等、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３１：７５３−８、２０１３を参照のこと。一部の実施態様では、修飾された免疫グロブリンポリペプチドは、ＣＨＯ細胞中で別々に発現され得、上記方法を使用してインビトロでアセンブルされ得る。
【０２７７】
異なる手法によれば、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。この融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。融合物のうちの少なくとも１つ中に存在する軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが典型的である。免疫グロブリン重鎖融合物、及び所望の場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクター中に挿入され、適切な宿主生物中に共トランスフェクトされる。これは、構築において使用される３つのポリペプチド鎖の不等な比が最適な収量を提供する実施態様において、３つのポリペプチド断片の相互の割合を調整することにおいて、大きな柔軟性を提供する。しかし、等しい比での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高い収量を生じる場合、又はそのような比が特に重要なものでない場合、１つの発現ベクター中に２つ又は３つ全てのポリペプチド鎖についてのコード配列を挿入することが可能である。
【０２７８】
この手法の一実施態様では、二重特異性抗体は、一方のアーム中の第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、及び他方のアーム中のハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性を提供する）から構成される。二重特異性分子の半分のみにおける免疫グロブリン軽鎖の存在は、分離の容易な方法を提供するので、この非対称構造は、望ましくない免疫グロブリン鎖組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を促進することが見出された。この手法は、国際公開第９４／０４６９０号に開示されている。二重特異性抗体を生成することのさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０２７９】
国際公開第９６／２７０１１号に記載された別の手法によれば、抗体分子の対間の接触面は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーの百分率を最小化するために操作され得る。１つの接触面は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を構成する。この方法では、第１の抗体分子の接触面由来の１又は複数の小さいアミノ酸側鎖は、より大きい側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）で置き換えられる。大きい側鎖（複数可）と同一又は類似のサイズの補償的「空洞」は、大きいアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば、アラニン又はスレオニン）で置き換えることによって、第２の抗体分子の接触面上に創出される。これは、ホモダイマーなどの他の望ましくない最終産物を越えて、ヘテロダイマーの収量を増加させるための機構を提供する。
【０２８０】
二重特異性抗体には、架橋又は「ヘテロコンジュゲート」抗体が含まれる。例えば、このヘテロコンジュゲート中の抗体の一方は、アビジンにカップリングされ得、他方は、ビオチンにカップリングされ得る。かかる抗体は、例えば、望ましくない細胞へと免疫系細胞を標的化するため（米国特許第４６７６９８０号）、及びＨＩＶ感染の治療のため（国際公開第９１／００３６０号、国際公開第９２／２００３７３号及びＥＰ０３０８９）に提唱されている。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋法を使用して作製され得る。適切な架橋剤は、当該技術分野で周知であり、いくつかの架橋技術と一緒に、米国特許第４６７６９８０号に開示されている。
【０２８１】
抗体断片から二重特異性抗体を生成するための技術もまた、文献中に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を使用して調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体が、Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するためにタンパク質分解性に切断される手順を記載している。これらの断片は、隣接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を防止するために、ジチオール錯化剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元される。次いで、生成されたＦａｂ’断片は、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の一方は、メルカプトエチルアミンによる還元によってＦａｂ’−チオールに再変換され、二重特異性抗体を形成するために、等モル量の他方のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合される。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用され得る。
【０２８２】
近年の進歩により、二重特異性抗体を形成するために化学カップリングされ得るＦａｂ’−ＳＨ断片の、大腸菌からの直接的回収が促進されている。Ｓｈａｌａｂｙ等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生を記載している。各Ｆａｂ’断片は、大腸菌から別々に分泌され、二重特異性抗体を形成するために、インビトロの定方向化学カップリングに供される。
【０２８３】
二重特異性抗体断片を組換え細胞培養物から直接作製及び単離するための種々の技術もまた、記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドが、遺伝子融合によって、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。抗体ホモダイマーは、モノマーを形成するためにヒンジ領域において還元され、次いで、抗体ヘテロダイマーを形成するために再酸化された。この方法は、抗体ホモダイマーの産生のためにも利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ディアボディ」テクノロジーは、二重特異性抗体断片を作製するための代替的機構を提供している。これらの断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間のペアリングを可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、一方の断片のＶＨ及びＶＬドメインは、他方の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインとペアリングするようにされ、それによって、２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用によって二重特異性抗体断片を作製するための別の戦略もまた、報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【０２８４】
２つよりも多い結合価を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体が調製され得る。Ｔｕｆｔ等  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０２８５】
（ｖｉｉ）単一ドメイン抗体
一部の実施態様では、本発明の抗体は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部分又は軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部分を含む単一ポリペプチド鎖である。特定の実施態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６２４８５１６号Ｂ１を参照のこと）。一実施態様では、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部分からなる。
【０２８６】
（ｖｉｉｉ）抗体変異体
一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な変化を導入することによって、又はペプチド合成によって、調製され得る。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／又はかかるアミノ酸配列中への残基の挿入、及び／又はかかるアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入及び置換の任意の組合せが、最終コンストラクトが所望の特性を有することを条件として、最終コンストラクトに到達するために行われ得る。アミノ酸改変は、配列が作製された時点で、対象抗体アミノ酸配列中に導入され得る。
【０２８７】
（ｉｘ）置換、挿入及び欠失変異体
特定の実施態様では、１又は複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異誘発のための目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１中に、「保存的置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１中に、「例示的置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入され得、産物が、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングされ得る。
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【０２８８】
アミノ酸は、共通する側鎖特性に従ってグループ分けされ得る：
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ．鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２８９】
非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴う。
【０２９０】
１つの型の置換変異体には、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の１又は複数の超可変領域残基を置換することが関与する。一般に、さらなる研究のために選択される得られた変異体（複数可）は、親抗体と比較して、特定の生物特性における修飾（例えば、改善）（例えば、増加した親和性、低減された免疫原性）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物特性を実質的に保持している。例示的な置換変異体は、例えば、本明細書に記載されるものなどのファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して簡便に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１又は複数のＨＶＲ残基が突然変異され、変異体抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０２９１】
改変（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲ中に作製され得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、即ち、体細胞成熟プロセスの間に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照のこと）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において作製され得、得られた変異体のＶＨ又はＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築しそこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ等編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、（２００１））中に記載されている。親和性成熟の一部の実施態様では、多様性が、種々の方法のいずれか（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング又はオリゴヌクレオチド指定突然変異）によって、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが創出される。次いで、このライブラリーは、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法には、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４−６残基）がランダム化される、ＨＶＲ指定手法が関与する。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデル化を使用して、具体的に同定され得る。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的化される場合が多い。
【０２９２】
特定の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、かかる改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１又は複数のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的改変（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）が、ＨＶＲ中に作製され得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であり得る。上に提供される変異体ＶＨ及びＶＬ配列の特定の実施態様では、各ＨＶＲのいずれかは未改変であるか、又は１、２若しくは３以下のアミノ酸置換を含む。
【０２９３】
突然変異誘発のために標的化され得る抗体の残基又は領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５に記載されるように、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、抗体と抗原との相互作用が影響されるかどうかを決定するために、標的残基（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕ）の残基又は群が同定され、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）によって置き換えられる。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置において導入され得る。あるいは、又はさらに、抗体と抗原との間の接触点を同定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接残基は、置換のための候補として、標的化又は排除され得る。変異体は、それらが所望の特性を含むかどうかを決定するために、スクリーニングされ得る。
【０２９４】
アミノ酸配列挿入には、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体には、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴについて）又は抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの、抗体のＮ末端又はＣ末端への融合が含まれる。
【０２９５】
（ｘ）グリコシル化変異体
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１又は複数のグリコシル化部位が創出又は除去されるように、アミノ酸配列を改変することによって、簡便に達成され得る。
【０２９６】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した糖（炭水化物）が改変され得る。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合によって一般に結合された、分枝状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ等  ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。このオリゴ糖には、種々の糖（炭水化物）、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸、並びに二分岐オリゴ糖構造の「幹」中のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。一部の実施態様では、本発明の抗体中のオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体変異体を創出するために、行われ得る。
【０２９７】
一実施態様では、Ｆｃ領域を含む抗体変異体が提供され、ここで、Ｆｃ領域に結合した糖（炭水化物）構造は、ＡＤＣＣ機能を改善し得るフコースが低減されている、又はフコースを欠く。具体的には、野生型ＣＨＯ細胞において産生された同じ抗体上のフコースの量と比較して低減されたフコースを有する抗体が、本明細書で企図される。即ち、これらは、天然ＣＨＯ細胞（例えば、天然グリコシル化パターンを生じるＣＨＯ細胞、例えば、天然ＦＵＴ８遺伝子を含むＣＨＯ細胞）によって産生される場合に別のやり方で有するフコースよりも低い量のフコースを有することによって特徴を明らかにされる。特定の実施態様では、この抗体は、その上のＮ−結合グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％又は５％未満がフコースを含む抗体である。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％から８０％まで、１％から６５％まで、５％から６５％まで、又は２０％から４０％までであり得る。特定の実施態様では、この抗体は、その上のＮ−結合グリカンのいずれもがフコースを含まない抗体であり、即ち、ここで、この抗体は、完全にフコースがない、又はフコースを有さない、又はアフコシル化されている。フコースの量は、例えば国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される場合、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造体（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって、決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域中の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指す；しかし、Ａｓｎ２９７は、抗体における軽微な配列差異に起因して、２９７位の約±３アミノ酸上流又は下流、即ち、２９４位と３００位との間も位置し得る。かかるフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関する刊行物の例には、以下が含まれる：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ等Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ等  Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例には、以下が含まれる：タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ripka等 Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号Ａ１、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２号Ａ１、Ａｄａｍｓ等、特に、実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki等 Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y.等, Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照のこと）。
【０２９８】
抗体変異体には、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分された、二分されたオリゴ糖が、さらに提供される。かかる抗体変異体は、低減されたフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ等）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａ等）；米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ等）、及びＦｅｒｒａｒａ等、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、９３（５）：８５１−８６１（２００６）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体もまた、提供される。かかる抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌ等）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０２９９】
特定の実施態様では、本明細書に記載されるＦｃ領域を含む抗体変異体は、ＦｃγＲＩＩＩに結合することが可能である。特定の実施態様では、本明細書に記載されるＦｃ領域を含む抗体変異体は、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ活性を有する、又はヒト野生型ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む他の点では同じ抗体と比較して、ヒトエフェクター細胞の存在下で増加したＡＤＣＣ活性を有する。
【０３００】
（ｘｉ）Ｆｃ領域変異体
特定の実施態様では、１又は複数のアミノ酸修飾が、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域中に導入され得、それによって、Ｆｃ領域変異体を生成する。このＦｃ領域変異体は、１又は複数のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含み得る。
【０３０１】
特定の実施態様では、本発明は、一部ではあるが全てではないエフェクター機能を有する抗体変異体を企図し、これにより、かかる抗体変異体は、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）が不要又は有害である適用のための、望ましい候補になる。インビトロ及び／又はインビボの細胞傷害性アッセイが、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認するために実施され得る。例えば、抗体が、ＦｃγＲ結合を欠く（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確実にするために、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイが実施され得る。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）のｐ４６４の表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I.等 Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照のこと）及びHellstrom, I等, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；米国特許第５８２１３３７号（Bruggemann, M.等, J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照のこと）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法が使用され得る（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照のこと）。かかるアッセイのために有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又はさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ等  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて、インビボで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイもまた、抗体がＣ１ｑを結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認するために、実施され得る。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが実施され得る（例えば、Gazzano-Santoro等, J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S.等, Blood 101:1045-1052 (2003);並びにCragg, M.S.及びM.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定もまた、当該技術分野で公知の方法を使用して実施され得る（例えば、Petkova, S.B.等, Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照のこと）。
【０３０２】
低減されたエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうち１又は複数の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうち２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる（米国特許第７３３２５８１号）。
【０３０３】
ＦｃＲへの改善又は減退された結合を有する特定の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号及びShields等, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照のこと）。
【０３０４】
特定の実施態様では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。例示的な一実施態様では、そのＦｃ領域中に以下のアミノ酸置換を含む抗体：Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ及びＫ３３４Ａ。
【０３０５】
一部の実施態様では、改変された（即ち、改善又は減退されたのいずれかの）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる改変が、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号及びＩｄｕｓｏｇｉｅ等  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、Ｆｃ領域中に作製される。
【０３０６】
増加した半減期、及び胎児への母体ＩｇＧの移行を担う新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）（Guyer等, J. Immunol. 117:587 (1976)及びKim等, J. Immunol. 24:249 (1994)）に対する改善された結合を有する抗体は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ等）に記載されている。これらの抗体は、その中にＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１又は複数の置換を有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうち１又は複数における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（米国特許第７３７１８２６号）。Ｆｃ領域変異体の他の例については、Ｄｕｎｃａｎ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許５６４８２６０号；米国特許５６２４８２１号；並びに国際公開第９４／２９３５１号もまた参照のこと。
【０３０７】
（ｘｉｉ）抗体誘導体
本発明の抗体は、当該技術分野で公知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含むように、さらに修飾され得る。特定の実施態様では、抗体の誘導体化に適切な部分は、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定的な例には、以下が含まれるがこれらに限定されない：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダム共重合体のいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコール（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。このポリマーは、任意の分子量のものであり得、分枝状又は非分枝状であり得る。抗体に結合したポリマーの数は、変動し得、１つよりも多いポリマーが結合している場合、それらは、同じ又は異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は型は、改善すべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が規定された条件下で療法に使用されるかどうかなどが含まれるがこれらに限定されない考慮に基づいて、決定され得る。
【０３０８】
（ｘｉｉｉ）ベクター、宿主細胞及び組換え方法
抗体は、組換え方法を使用しても産生され得る。抗抗原抗体の組換え産生のために、抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）又は発現のために、複製可能なベクター中に挿入される。抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離及び配列決定され得る。多くのベクターが利用可能である。ベクター成分には、一般に、以下のうち１又は複数が含まれるがこれらに限定されない：シグナル配列、複製開始点、１又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター及び転写終結配列。
【０３０９】
（ａ）シグナル配列成分
本発明の抗体は、直接組換え産生され得るだけでなく、好ましくはシグナル配列又は成熟タンパク質若しくはポリペプチドのＮ末端において特異的切断部位を有する他のポリペプチドである、異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても、産生され得る。選択された異種シグナル配列は、好ましくは、宿主細胞によって認識及びプロセシングされる（例えば、シグナルペプチターゼによって切断される）シグナル配列である。天然抗体シグナル配列を認識及びプロセシングしない原核宿主細胞のために、このシグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐ又は熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列によって置換される。酵母分泌のために、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、ａ因子リーダー（サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）及びクルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）のα−因子リーダーを含む）、若しくは酸性ホスファターゼリーダー、カンジダ・アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）グルコアミラーゼリーダー、又は国際公開第９０／１３６４６号に記載されるシグナルによって、置換され得る。哺乳動物細胞発現では、哺乳動物シグナル配列並びにウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが、利用可能である。
【０３１０】
（ｂ）複製開始点
発現及びクローニングベクターの両方が、１又は複数の選択された宿主細胞においてベクターが複製するのを可能にする核酸配列を含む。一般に、クローニングベクターでは、この配列は、宿主染色体ＤＮＡとは独立してベクターが複製するのを可能にするものであり、複製開始点又は自律的に複製する配列が含まれる。かかる配列は、種々の細菌、酵母及びウイルスについて周知である。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製開始点は、ほとんどのグラム陰性細菌に適切であり、２μプラスミド開始点は、酵母に適切であり、種々のウイルス開始点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ）が、哺乳動物細胞においてクローニングベクターとして有用である。一般に、複製開始点成分は、哺乳動物発現ベクターには必要でない（ＳＶ４０開始点は、それが早期プロモーターを含むことのみに起因して、典型的に使用され得る）。
【０３１１】
（ｃ）選択遺伝子成分
発現及びクローニングベクターは、選択マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含み得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質若しくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート若しくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）栄養要求性欠損を補完するタンパク質、又は（ｃ）複合培地からは利用可能でない必須栄養素を供給するタンパク質をコードする、例えば、桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）のためのＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子。
【０３１２】
選択スキームの一例は、宿主細胞の増殖を停止させる薬物を利用する。異種遺伝子で首尾よく形質転換された細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、したがって、選択レジメンを生き残る。かかる優性選択の例は、薬物ネオマイシン、ミコフェノール酸及びハイグロマイシンを使用する。
【０３１３】
哺乳動物細胞に適切な選択マーカーの別の例は、抗体コード核酸を取り込む能力がある細胞の同定を可能にするもの、例えば、ＤＨＦＲ、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉ及び−ＩＩ、好ましくは霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。
【０３１４】
例えば、ＤＨＦＲ遺伝子で形質転換された細胞は、メトトレキサート（Ｍｔｘ）、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストを含む培地中で形質転換体を培養することによって同定される。これらの条件下で、ＤＨＦＲ遺伝子は、任意の他の共形質転換された核酸と一緒に増幅される。内因性のＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９０９６）が使用され得る。
【０３１５】
あるいは、ＧＳ遺伝子で形質転換された細胞は、Ｌ−メチオニンスルホキシイミン（Ｍｓｘ）、ＧＳの阻害剤を含む培地中で形質転換体を培養することによって同定される。これらの条件下で、ＧＳ遺伝子は、任意の他の共形質転換された核酸と一緒に増幅される。ＧＳ選択／増幅系は、上記ＤＨＦＲ選択／増幅系と組み合わせて使用され得る。
【０３１６】
あるいは、目的の抗体、野生型ＤＨＦＲ遺伝子及び別の選択マーカー、例えば、アミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）をコードするＤＮＡ配列で形質転換又は共形質転換された宿主細胞（特に、内因性のＤＨＦＲを含む野生型宿主）は、その選択マーカーのための選択剤、例えば、アミノグリコシド抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシン又はＧ４１８を含む培地中での細胞増殖によって選択され得る。米国特許第４９６５１９９号を参照のこと。
【０３１７】
酵母での使用に適切な選択遺伝子は、酵母プラスミドＹＲｐ７中に存在するｔｒｐ１遺伝子である（Stinchcomb等, Nature, 282:39 (1979)）。このｔｒｐ１遺伝子は、トリプトファン中で増殖する能力を欠く酵母の突然変異体株、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６又はＰＥＰ４−１に選択マーカーを提供する。Ｊｏｎｅｓ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、８５：１２（１９７７）。次いで、酵母宿主細胞ゲノム中のｔｒｐ１病変の存在が、トリプトファンの非存在下での増殖によって形質転換を検出するための有効な環境を提供する。同様に、Ｌｅｕ２欠損酵母株（ＡＴＣＣ  ２０，６２２又は３８，６２６）は、Ｌｅｕ２遺伝子を有する公知のプラスミドによって補完される。
【０３１８】
さらに、１．６μｍ環状プラスミドｐＫＤ１由来のベクターは、クルイベロミセス酵母の形質転換に使用され得る。あるいは、組換え仔ウシキモシンの大規模産生のための発現系が、クルイベロミセス・ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）について報告された。Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇ、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８：１３５（１９９０）。クルイベロミセスの工業株による成熟組換えヒト血清アルブミンの分泌のための安定な多コピー発現ベクターもまた、開示されている。Ｆｌｅｅｒ等、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、９：９６８−９７５（１９９１）。
【０３１９】
（ｄ）プロモーター成分
発現及びクローニングベクターは、一般に、宿主生物によって認識され、抗体をコードする核酸に動作可能に連結された、プロモーターを含む。原核生物宿主との使用に適切なプロモーターには、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼプロモーター、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、並びにハイブリッドプロモーター、例えば、ｔａｃプロモーターが含まれる。しかし、他の公知の細菌プロモーターが適切である。細菌系における使用のためのプロモーターは、抗体をコードするＤＮＡに動作可能に連結されたシャインダルガノ（Ｓ．Ｄ．）配列もまた含む。
【０３２０】
プロモーター配列は、真核生物について公知である。事実上全ての真核生物遺伝子が、転写が開始される部位からおよそ２５から３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始から７０から８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、ここで、Ｎは任意のヌクレオチドであり得る。ほとんどの真核生物遺伝子の３’末端には、コード配列の３’末端へのポリＡテイルの付加のためのシグナルであり得るＡＡＴＡＡＡ配列がある。これらの配列は全て、真核生物発現ベクター中に適切に挿入される。
【０３２１】
酵母宿主との使用に適切なプロモーター配列の例には、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ又は他の解糖酵素、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ及びグルコキナーゼについてのプロモーターが含まれる。
【０３２２】
増殖条件によって制御される転写のさらなる利点を有する誘導性プロモーターである他の酵母プロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ（ｉｓｏｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｃ）、酸性ホスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、並びにマルトース及びガラクトース利用を担う酵素についてのプロモーター領域である。酵母発現での使用に適切なベクター及びプロモーターは、ＥＰ７３６５７にさらに記載されている。酵母エンハンサーもまた、酵母プロモーターと共に有利に使用される。
【０３２３】
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの抗体転写は、例えば、ウイルス、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のゲノムから、又は異種哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーター若しくは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから取得されたプロモーターによって制御され得るが、かかるプロモーターが宿主細胞系と適合性であることを条件とする。
【０３２４】
ＳＶ４０ウイルスの早期及び後期プロモーターは、簡便には、ＳＶ４０ウイルス複製開始点もまた含むＳＶ４０制限断片として取得される。ヒトサイトメガロウイルスの最早期プロモーターは、簡便には、ＨｉｎｄＩＩＩ  Ｅ制限断片として取得される。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現させるための系は、米国特許第４４１９４４６号に開示されている。この系の修飾は、米国特許第４６０１９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ−インターフェロンｃＤＮＡの発現については、Ｒｅｙｅｓ等、Ｎａｔｕｒｅ  ２９７：５９８−６０１（１９８２）もまた参照のこと。あるいは、ラウス肉腫ウイルス長末端反復が、プロモーターとして使用され得る。
【０３２５】
（ｅ）エンハンサーエレメント成分
高等真核生物による本発明の抗体をコードするＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによってしばしば増加される。多くのエンハンサー配列が、現在、哺乳動物遺伝子から公知である（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン及びインスリン）。しかし、典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーを使用する。例には、複製開始点（ｂｐ１００−２７０）の後ろ側のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス早期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後ろ側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが含まれる。真核性プロモーターの活性化のための増強エレメントについては、Ｙａｎｉｖ、Ｎａｔｕｒｅ  ２９７：１７−１８（１９８２）もまた参照のこと。エンハンサーは、抗体コード配列に対して５’側又は３’側の位置においてベクター中にスプライスされ得るが、好ましくは、プロモーターの５’側の部位に位置する。
【０３２６】
（ｆ）転写終結成分
真核宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞）において使用される発現ベクターは、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列もまた含む。かかる配列は、真核生物又はウイルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’非翻訳領域及び時折３’非翻訳領域から、一般に入手可能である。これらの領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分においてポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。国際公開第９４／１１０２６号及びそこに開示された発現ベクターを参照のこと。
【０３２７】
（ｇ）宿主細胞の選択及び形質転換
本明細書のベクター中のＤＮＡをクローニング又は発現するために適切な宿主細胞は、上記原核生物、酵母又は高等真核生物細胞である。この目的のために適切な原核生物には、真正細菌、例えば、グラム陰性又はグラム陽性生物、例えば、腸内細菌科、例えば、大腸菌属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば、大腸菌、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウイニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えば、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、例えば、セラチア・マルセサンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）、及びシゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、並びに桿菌、例えば、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びバチルス・リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）（例えば、１９８９年４月１２日に公開されたＤＤ２６６７１０中に開示されたバチルス・リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）４１Ｐ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、例えば、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及びストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が含まれる。１つの好ましい大腸菌クローニング宿主は、大腸菌２９４（ＡＴＣＣ  ３１，４４６）であるが、他の株、例えば、大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ  ３１，５３７）及び大腸菌Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ  ２７，３２５）が適切である。これらの例は、限定ではなく例示である。
【０３２８】
全長抗体、抗体融合タンパク質及び抗体断片は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ない場合、例えば、治療抗体が、腫瘍細胞破壊においてそれ自体有効性を示す細胞傷害性剤（例えば、毒素）にコンジュゲートされる場合、細菌において産生され得る。全長抗体は、循環におけるより長い半減期を有する。大腸菌における産生は、より速く、よりコスト効率が高い。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号（Ｃａｒｔｅｒ等）、米国特許第５７８９１９９号（Ｊｏｌｙ等）、発現及び分泌を最適化するための翻訳開始領域（ＴＩＲ）及びシグナル配列を記載する米国特許第５８４０５２３号（Ｓｉｍｍｏｎｓ等）を参照のこと。大腸菌における抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００３）、ｐｐ．２４５−２５４もまた参照のこと。発現後、抗体は、可溶型画分中の大腸菌細胞ペーストから単離され得、例えば、アイソタイプに依存して、プロテインＡ又はＧカラムを介して精製され得る。例えばＣＨＯ細胞において発現された抗体を精製するためのプロセスと類似の最終精製が、実施され得る。
【０３２９】
原核生物に加えて、真核微生物、例えば、糸状菌又は酵母は、抗体コードベクターに適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）又は一般的なパン酵母は、下等真核宿主微生物のなかで最も一般的に使用される。しかし、いくつかの他の属、種及び株が、一般に入手可能であり、本明細書で有用である、例えば、分裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）；クルイベロミセス宿主、例えば、クルイベロミセス・ラクチス、クルイベロミセス・フラジリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ  １２，４２４）、クルイベロミセス・ブルガリカス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ  １６，０４５）、クルイベロミセス・ウィッカーハミー（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ  ２４，１７８）、クルイベロミセス・ワルティ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）（ＡＴＣＣ  ５６，５００）、クルイベロミセス・ドロソフィラルム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）（ＡＴＣＣ  ３６，９０６）、クルイベロミセス・サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）及びクルイベロミセス・マルシアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）など；ヤロウィア属（ｙａｒｒｏｗｉａ）（ＥＰ４０２２２６）；ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）（ＥＰ１８３０７０）；カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）；トリコデルマ・リージア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｉａ）（ＥＰ２４４２３４）；アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）；シュワンニオミセス属（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）、例えば、シュワンニオミセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）；並びに糸状菌、例えば、アカパンカビ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、アオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラディウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）など、及びアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）宿主、例えば、アスペルギルス・ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びアスペルギルス・ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）。治療タンパク質の産生のための酵母及び糸状菌の使用を議論する概説については、例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）を参照のこと。
【０３３０】
グリコシル化経路が「ヒト化」され、部分的に又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の産生を生じる、特定の真菌及び酵母株が選択され得る。例えば、Ｌｉ等、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）（ピキア・パストリスにおけるグリコシル化経路のヒト化を記載している）；及びＧｅｒｎｇｒｏｓｓ等、上記を参照のこと。
【０３３１】
グリコシル化された抗体の発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも誘導される。無脊椎動物細胞の例には、植物及び昆虫細胞が含まれる。多数のバキュロウイルス株及び変異体、並びにヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（イモムシ）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ  ａｅｇｙｐｔｉ）（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ  ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ショウジョウバエ）及びカイコガ（Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ）などの宿主由来の対応する許容昆虫宿主細胞が、同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、例えば、アウトグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ−１変異体及びカイコガＮＰＶのＢｍ−５株が、公に入手可能であり、かかるウイルスは、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために、本発明に従って本明細書でウイルスとして使用され得る。
【０３３２】
ワタ、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト、ウキクサ（アマ科（Ｌｉｎａｃｅａｅ））、アルファルファ（タルウマゴヤシ（Ｍ．ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ））及びタバコの植物細胞培養物もまた、宿主として利用され得る。例えば、米国特許第５９５９１７７号、米国特許第６０４０４９８号、米国特許第６４２０５４８号、米国特許第７１２５９７８号及び米国特許第６４１７４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）テクノロジーを記載している）を参照のこと。
【０３３３】
脊椎動物細胞が宿主として使用され得、培養物（組織培養物）中での脊椎動物細胞の繁殖は、常套的手順になっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胚腎臓株（懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３又は２９３細胞、Graham等, J. Gen Virol. 36:59 (1977)）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)）；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；ｂｕｆｆａｌｏラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Mather等, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)）；ＭＲＣ  ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒト肝がん株（Ｈｅｐ  Ｇ２）である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaub等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；並びに骨髄腫細胞株、例えば、ＮＳ０及びＳｐ２／０が含まれる。抗体産生に適切な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ及びＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００３）、ｐｐ．２５５−２６８を参照のこと。
【０３３４】
宿主細胞は、抗体産生のために上記発現又はクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために必要に応じて修飾された従来の栄養培地中で培養される。
【０３３５】
（ｈ）宿主細胞を培養する
本発明の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、種々の培地中で培養され得る。市販の培地、例えば、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）及びダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）が、宿主細胞を培養するために適切である。さらに、Ｈａｍ等、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ等、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４７６７７０４号；米国特許第４６５７８６６号；米国特許第４９２７７６２号；米国特許第４５６０６５５号；若しくは米国特許第５１２２４６９号；国際公開第９０／０３４３０号；国際公開第８７／００１９５号；又は米国再特許第３０９８５号に記載された培地のいずれかが、宿主細胞のための培地として使用され得る。これらの培地のいずれかには、必要に応じて、ホルモン及び／又は他の増殖因子（例えば、インスリン、トランスフェリン又は上皮増殖因子）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸塩）、バッファー（例えば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシン及びチミジン）、抗生物質（例えば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物）、微量元素（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として規定される）、並びにグルコース又は等価なエネルギー供給源が補充され得る。任意の他の必要なサプリメントもまた、当業者に公知の適切な濃度で含まれ得る。培養条件、例えば、温度、ｐＨなどは、発現のために選択された宿主細胞と共に以前に使用されたものであり、当業者に明らかである。
【０３３６】
（ｘｉｖ）抗体の精製
組換え技術を使用する場合、抗体は、細胞内で産生され得、細胞周辺腔中に、又は培地に直接分泌され得る。抗体が細胞内で産生される場合、第１の工程として、宿主細胞又は溶解された断片のいずれかの特定のデブリが、例えば、遠心分離又は限外濾過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒ等、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２）は、大腸菌の細胞周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順を記載している。簡潔に述べると、細胞ペーストが、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で、約３０分にわたって解凍される。細胞破片は、遠心分離によって除去され得る。抗体が培地中に分泌される場合、かかる発現系からの上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Ａｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して、最初に濃縮される。プロテアーゼ阻害剤、例えば、ＰＭＳＦが、タンパク質分解を阻害するために、上述の工程のいずれか中に含まれ得、抗生物質が、偶発的な夾雑物の増殖を防止するために含まれ得る。
【０３３７】
細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析及びアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製され得、アフィニティークロマトグラフィーが、典型的に好ましい精製工程の１つの中にある。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適切性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２又はγ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用され得る（Lindmark等, J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ３に推奨される（Guss等, EMBO J. 5:15671575 (1986)）。親和性リガンドが結合されるマトリックスは、アガロースである場合が最も多いが、他のマトリックスが利用可能である。機械的に安定なマトリックス、例えば、孔制御ガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼンは、アガロースを用いて達成できるものよりも、速い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が、精製に有用である。タンパク質精製のための他の技術、例えば、イオン交換カラム上での分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、陰イオン又は陽イオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）上のヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー上でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿もまた、回収される抗体に依存して利用可能である。
【０３３８】
一般に、研究、試験及び臨床における使用のための抗体を調製するための種々の方法は、上記方法と一致して、及び／又は目的の特定の抗体のために当業者に適切と思われるように、当該技術分野で十分に確立されている。
【０３３９】
Ｃ．生物学的に活性な抗体を選択する
上記のように産生された抗体は、治療展望から有益な特性を有する抗体を選択するため、又は抗体の生物活性を保持する製剤若しくは条件を選択するために、１又は複数の「生物活性」アッセイに供され得る。抗体は、その抗体が惹起された抗原に結合するその能力について選択され得る。例えば、当該技術分野で公知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなど）が使用され得る。
【０３４０】
例えば、抗ＰＤＬ１抗体について、抗体の抗原結合特性は、ＰＤＬ１に結合する能力を検出するアッセイにおいて評価され得る。一部の実施態様では、抗体の結合は、例えば、飽和結合；ＥＬＩＳＡ；及び／又は競合アッセイ（例えば、ＲＩＡ）によって決定され得る。また、抗体は、例えば、治療剤としてのその効率を評価するために、他の生物活性アッセイに供され得る。かかるアッセイは、当該技術分野で公知であり、標的抗原及び抗体についての目的の使用に依存する。例えば、抗体によるＰＤ−Ｌ１遮断の生物学的効果は、例えば、米国特許第８２１７１４９号に記載されるように、ＣＤ８＋Ｔ細胞、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）マウスモデル及び／又は同系腫瘍モデルにおいて評価され得る。
【０３４１】
目的の抗原上の特定のエピトープに結合する抗体（例えば、ＰＤ−Ｌ１への実施例の抗ＰＤＬ１抗体の結合をブロックするもの）についてスクリーニングするために、常套的クロスブロッキングアッセイ、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるものが、実施され得る。あるいは、例えば、Ｃｈａｍｐｅ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１３８８−１３９４（１９９５）に記載されるようなエピトープマッピングが、目的のエピトープに抗体が結合するかどうかを決定するために実施され得る。
【０３４２】
一態様では、生物活性を有するその抗ＯＸ４０抗体を同定するためのアッセイが提供される。生物活性として、例えば、ＯＸ４０（例えば、結合ヒト及び／又はカニクイザルＯＸ４０）と結合すること、ＯＸ４０媒介性シグナル伝達を増大すること（例えば、ＮＦｋＢ媒介性転写を増大すること）、ヒトＯＸ４０を発現する細胞（例えば、Ｔ細胞）を枯渇させること、例えば、エフェクターＴ細胞増殖を増大することによってＴエフェクター細胞機能（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）を増強すること及び／又はエフェクターＴ細胞によるサイトカイン製造（例えば、ガンマインターフェロン）を増大すること、例えば、記憶Ｔ細胞増殖を増大することによって記憶Ｔ細胞機能（例えば、ＣＤ４＋記憶Ｔ細胞）を増強すること及び／又は記憶Ｔ細胞によるサイトカイン製造を増大すること（例えば、ガンマインターフェロン）、制御性Ｔ細胞機能を阻害すること（例えば、エフェクターＴ細胞機能（例えば、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞機能、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞機能）のＴｒｅｇ抑制を低減することによって）を挙げることができる。インビボ及び／又はインビトロでこのような生物活性を有する抗体も提供される。
【０３４３】
特定の実施態様では、本発明の抗体は、このような生物活性について試験される。
【０３４４】
Ｔ細胞共刺激は、当技術分野で公知の方法を使用してアッセイされ得、例示的方法が本明細書において開示されている。例えば、Ｔ細胞（例えば、記憶又はエフェクターＴ細胞）は、末梢の白血球（例えば、フィコール勾配遠心分離を使用してヒト全血から単離された）から得ることができる。記憶Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋記憶Ｔ細胞）又はエフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔｅｆｆ細胞）は、当技術分野で公知の方法を使用してＰＢＭＣから単離され得る。例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＣＤ４＋記憶Ｔ細胞単離キット又はＭｉｌｔｅｎｙｉナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞単離キットが使用され得る。単離されたＴ細胞は、抗原提示細胞（例えば、ＣＤ３２及びＣＤ８０を発現する照射されたＬ細胞）の存在下で培養され、ＯＸ４０アゴニスト抗体の存在下又は不在下で抗ＣＤ３抗体の添加によって活性化される。Ｔ細胞増殖のアゴニストＯＸ４０抗体の効果は、当技術分野で周知の方法を使用して測定され得る。例えば、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）が使用されてもよく、結果はＭｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）で読み取られ得る。Ｔ細胞機能に対するアゴニストＯＸ４０抗体の効果はまた、Ｔ細胞によって製造されるサイトカインの分析によって決定され得る。一実施態様では、ＣＤ４＋Ｔ細胞によるインターフェロンガンマの製造は、例えば、細胞培養上清におけるインターフェロンガンマの測定値によって決定される。インターフェロンガンマを測定するための方法は、当技術分野で周知である。
【０３４５】
Ｔｒｅｇ細胞機能は、当技術分野で公知の方法を使用してアッセイされ得、例示的方法は、本明細書に開示されている。一例では、ＴｒｅｇのエフェクターＴ細胞増殖を抑制する能力がアッセイされる。Ｔ細胞は、当技術分野で公知の方法（例えば、記憶Ｔ細胞又はナイーブＴ細胞を単離すること）を使用してヒト全血から単離される。精製ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞は、標識され（例えば、ＣＦＳＥを用いて）、精製Ｔｒｅｇ細胞は、異なる試薬を用いて標識される。照射された抗原提示細胞（例えば、ＣＤ３２及びＣＤ８０を発現するＬ細胞）は、標識された精製ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞及び精製Ｔｒｅｇと同時培養される。同時培養は、抗ＣＤ３抗体を使用して活性化され、アゴニストＯＸ４０抗体の存在下又は不在下で試験される。適した時間（例えば、６日の同時培養）後に、ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞増殖のレベルは、ＦＡＣＳ分析を使用して、低下した標識染色（例えば、低下したＣＦＳＥ標識染色）での色素希釈によって追跡される。
【０３４６】
ＯＸ４０シグナル伝達は、当技術分野で周知の方法を使用してアッセイされ得、例示的方法は本明細書に開示されている。一実施態様では、ヒトＯＸ４０及びリポーター遺伝子（例えば、ベータルシフェラーゼ）と融合しているＮＦｋＢプロモーターを含むリポーター遺伝子を発現するトランスジェニック細胞が作製される。細胞へのＯＸ４０アゴニスト抗体の添加は、ＮＦｋＢ転写の増大をもたらし、これは、リポーター遺伝子についてのアッセイを使用して検出される。
【０３４７】
食作用は、例えば、単球由来マクロファージ又はＵ９３７細胞（成熟マクロファージの形態学及び特性を有するヒト組織球性リンパ腫細胞株）を使用することによってアッセイされ得る。ＯＸ４０発現細胞は、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体の存在下又は不在下で単球由来マクロファージ又はＵ９３７細胞に添加される。細胞を適した期間培養した後、１）マクロファージ又はＵ９３７細胞及び２）ＯＸ４０発現細胞のマーカーの染色を倍増する細胞の百分率を調べ、これを、ＯＸ４０発現細胞のマーカー（例えば、ＧＦＰ）を示す細胞の総数で除することによって食作用の百分率が決定される。分析は、フローサイトメトリーによって行われ得る。別の実施態様では、分析は、蛍光顕微鏡分析によって行われ得る。
【０３４８】
ＡＤＣＣは、例えば、当技術分野で周知の方法を使用してアッセイされ得る。例示的方法は、定義の節に記載されており、例示的アッセイは、実施例に開示されている。一部の実施態様では、ＯＸ４０のレベルは、ＡＤＣＣアッセイにおいて試験のために使用されるＯＸ４０発現細胞で特徴を明らかにされる。細胞は、検出可能に標識された抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＰＥ標識された）を用いて染色され得、次いで、蛍光のレベルがフローサイトメトリーを使用して決定され、結果は、中央値蛍光強度（ＭＦＩ）として示される。別の実施態様では、ＡＤＣＣは、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  Ｇｌｏアッセイキットによって分析され得る、細胞生存率／細胞傷害性は、化学発光によって決定され得る。
【０３４９】
種々の抗体の、ＦｃγＲＩＡ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ及びＦｃγＲＩＩＩＡの２種のアロタイプ（Ｆ１５８及びＶ１５８）に対する結合親和性は、それぞれの組換えＦｃγ受容体を使用するＥＬＩＳＡベースのリガンド結合アッセイで測定され得る。精製ヒトＦｃγ受容体は、Ｃ末端でＧｌｙ／６ｘＨｉｓ／グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）ポリペプチドタグと連結している受容体γ鎖の細胞外ドメインを含有する融合タンパク質として発現される。抗体の、そのヒトＦｃγ受容体との結合親和性は、以下のようにアッセイされる。低親和性受容体、すなわち、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）及びＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）の２種のアロタイプ、Ｆ−１５８及びＶ−１５８については、抗体は、１：３の抗体：架橋Ｆ（ａｂ’）２のおよそのモル比で、ヤギ抗ヒトカッパ鎖（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ；  Ｉｒｖｉｎｅ、ＣＡ）のＦ（ａｂ’）２断片と架橋することよって多量体として試験され得る。プレートを、抗ＧＳＴ抗体（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を用いてコーティングし、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いてブロッキングする。ＥＬｘ４０５（商標）プレートウォッシャー（Ｂｉｏｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ；  Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）を用い、０．０５％  Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて洗浄した後、２５ｎｇ／ウェルでプレートにＦｃγ受容体を添加し、室温で１時間インキュベートする。プレートを洗浄した後、試験抗体の段階希釈を多量体複合体として添加し、プレートを室温で２時間インキュベートした。プレートを洗浄して、結合していない抗体を除去した後、Ｆｃγ受容体と結合している抗体を、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）がコンジュゲートされたヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２のＦ（ａｂ’）２断片（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；  Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）を用いて検出し、続いて、基質、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ＆  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；  Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を添加する。試験されるＦｃγ受容体に応じてプレートを室温で５−２０分間インキュベートし、色の発色を可能にする。１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４を用いて反応を終結させ、マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ（登録商標）１９０、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ；  Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を用いて４５０ｎｍの吸光度を測定した。抗体の濃度に対して、抗体希釈物の複製物から得た平均吸光度値をプロットすることによって用量応答結合曲線を作製する。ＳｏｆｔＭａｘ  Ｐｒｏ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して結合曲線を４パラメータ方程式を用いてフィッティングした後に、Ｆｃγ受容体との結合から最大反応５０％が検出される抗体の有効濃度の値（ＥＣ５０）を求めた。
【０３５０】
上記のインビトロアッセイのいずれかにおいて使用するための細胞として、ＯＸ４０を天然に発現する、又はＯＸ４０を発現するよう遺伝子操作されている細胞又は細胞株が挙げられる。このような細胞として、ＯＸ４０を天然に発現する、活性化されたＴ細胞、Ｔｒｅｇ細胞及び活性化された記憶Ｔ細胞が挙げられる。このような細胞としてまた、ＯＸ４０を発現する細胞株及びＯＸ４０を普通は発現しないが、ＯＸ４０をコードする核酸でトランスフェクトされている細胞株が挙げられる。上記のインビトロアッセイのいずれかにおいて使用するための本明細書において提供された例示的細胞株として、ヒトＯＸ４０を発現するトランスジェニックＢＴ４７４細胞（ヒト乳がん細胞株）が挙げられる。
【０３５１】
上記のアッセイのいずれも、抗ＯＸ４０抗体の代わりに、又は抗ＯＸ４０抗体に加えて本発明のイムノコンジュゲートを使用して実施され得るということは理解される。
【０３５２】
上記のアッセイのいずれも、抗ＯＸ４０抗体及びさらなる治療薬（例えば、ＰＤ−１軸結合剤（例えば、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体）を使用して実施され得るということは理解される。
【０３５３】
Ｄ．薬学的組成物及び製剤
ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又は本明細書に記載される抗体（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物及び製剤もまた、本明細書で提供される。
【０３５４】
本明細書に記載されるような薬学的組成物及び製剤は、所望の程度の純度を有する活性成分（例えば、抗体又はポリペプチド）を、１又は複数の任意選択的な薬学的に許容される担体（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. 編 (1980)）と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、調製され得る。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される投薬量及び濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、これには、以下が含まれるがこれらに限定されない：バッファー、例えば、ホスフェート、シトレート及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロライド；ベンザルコニウムクロライド；ベンゼトニウムクロライド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む、単糖類、二糖類及び他の糖（炭水化物）；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）。本明細書の例示的な薬学的に許容される担体には、間質薬物分散剤、例えば、可溶型中性−活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶型ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、特定の例示的ｓＨＡＳＥＧＰ及び使用の方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び米国特許出願公開第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、１又は複数のさらなるグリコサミノグリカナーゼ（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎａｓｅ）、例えばコンドロイチナーゼと組み合わされる。
【０３５５】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されるものが含まれ、後者の製剤は、ヒスチジンアセテートバッファーを含む。
【０３５６】
本明細書の組成物及び製剤は、治療されている特定の適応症にとって必要な場合には１つよりも多い活性成分、好ましくは、互いに有害な影響を与えない相補的活性を有するもの、もまた含み得る。かかる活性成分は、意図した目的のために有効な量で組合せ中に適切に存在する。
【０３５７】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース若しくはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）中に、又はマクロエマルジョン中に、封入され得る。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０）に開示されている。
【０３５８】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の例には、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、造形品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態である。インビボ投与に使用される製剤は、一般に滅菌である。無菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を介した濾過によって、容易に達成され得る。
【０３５９】
ＩＶ．治療の方法
有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。一部の実施態様では、この治療は、治療の休止後に、個体において持続性の応答をもたらす。本明細書に記載される方法は、増強された免疫原性が所望される状態を治療すること、例えば、がんの治療のために腫瘍免疫原性を増加させることにおいて、使用を見出し得る。有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を個体に投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強する方法もまた、本明細書で提供される。さらなる態様では、感染（例えば、細菌又はウイルス又はその他の病原体による）を治療する方法が本明細書において提供される。一部の実施態様では、感染は、ウイルス及び／又は細菌によるものである。一部の実施態様では、感染は、病原体によるものである。一部の実施態様では、感染は、急性感染である。一部の実施態様では、感染は、慢性感染である。
【０３６０】
当技術分野で公知の、又は本明細書に記載されるＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストのいずれも、方法において使用され得る。
【０３６１】
一部の実施態様では、個体はヒトである。
【０３６２】
一部の実施態様では、個体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を用いる併用治療の前に、ＯＸ４０結合アゴニスト治療で治療されている。
【０３６３】
一部の実施態様では、個体は、１又は複数のＰＤ−１軸アンタゴニストに対して耐性である（耐性であると実証されている）がんを有する。一部の実施態様では、ＰＤ−１軸アンタゴニストに対する耐性には、がんの再発又は難治性がんが含まれる。再発は、治療後の、元の部位又は新たな部位におけるがんの再出現を指し得る。一部の実施態様では、ＰＤ−１軸アンタゴニストに対する耐性には、ＰＤ−１軸アンタゴニストによる治療の間の、がんの進行が含まれる。一部の実施態様では、ＰＤ−１軸アンタゴニストに対する耐性には、治療に応答しないがんが含まれる。このがんは、治療の開始時に耐性であり得るか、又は治療の間に耐性になり得る。一部の実施態様では、このがんは、早期段階又は後期段階にある。
【０３６４】
別の態様では、個体は、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーを発現する（例えば、診断試験において、発現すると示されている）がんを有する。一部の実施態様では、患者のがんは、低いＰＤ−Ｌ１バイオマーカーを発現する。一部の実施態様では、患者のがんは、高いＰＤ−Ｌ１バイオマーカーを発現する。方法、アッセイ及び／又はキットのいずれかの一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、０％の試料を含む場合には、試料には存在しない。
【０３６５】
方法、アッセイ及び／又はキットのいずれかの一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、０％を超える試料を含む場合には、試料中に存在する。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、少なくとも１％の試料中に存在する。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、少なくとも５％の試料中に存在する。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、少なくとも１０％の試料中に存在する。
【０３６６】
方法、アッセイ及び／又はキットのいずれかの一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＦＡＣＳ、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降法、免疫組織化学、免疫蛍光、ラジオイムノアッセイ、ドットブロット法、免疫検出法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光法、質量分析、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、マルチプレックスｑＰＣＲ又はＲＴ−ｑＰＣＲ、ＲＮＡ−ｓｅｑ、マイクロアレイ解析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技術及びＦＩＳＨ及びそれらの組合せからなる群から選択される方法を使用して試料において検出される。
【０３６７】
方法、アッセイ及び／又はキットのいずれかの一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、タンパク質発現によって試料において検出される。一部の実施態様では、タンパク質発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体を使用して検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＩＨＣによって弱い染色強度として検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＩＨＣによって中程度の染色強度として検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＩＨＣによって強い染色強度として検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、腫瘍細胞、腫瘍浸潤性免疫細胞、間質細胞及びそれらの任意の組合せで検出される。一部の実施態様では、染色は、膜染色、細胞質染色又はそれらの組合せである。
【０３６８】
方法、アッセイ及び／又はキットのいずれかの一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーがないことが、試料中に存在しないこと又は染色がないこととして検出される。方法、アッセイ及び／又はキットのいずれかの一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーの存在は、試料における何らかの染色として検出される。
【０３６９】
一部の実施態様では、本発明の併用療法は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）の投与を含む。このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストは、当該技術分野で公知の任意の適切な様式で投与され得る。例えば、このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストは、連続的に（異なる時点で）又は同時発生的に（同時に）投与され得る。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＯＸ４０結合アゴニストとは別々の組成物中にある。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＯＸ４０結合アゴニストと同じ組成物中にある。
【０３７０】
このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）は、同じ投与経路又は異なる投与経路によって投与され得る。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、静脈内で、筋肉内で、皮下で、局所で、経口で、経皮で、腹腔内で、眼窩内で、移植により、吸入により、髄腔内で、脳室内で又は鼻腔内で投与される。一部の実施態様では、このＯＸ４０結合アゴニストは、静脈内で、筋肉内で、皮下で、局所で、経口で、経皮で、腹腔内で、眼窩内で、移植により、吸入により、髄腔内で、脳室内で又は鼻腔内で投与される。有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストが、疾患の予防又は治療のために投与され得る。ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又はＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）の適切な投薬量は、治療される疾患の型、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストの型、疾患の重症度及び過程、個体の臨床状態、個体の臨床歴及び治療に対する応答、並びに主治医の裁量に基づいて決定され得る。一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤＬ１抗体）を用いる併用治療は、相乗的であり、それによって、組合せ中のＯＸ４０結合剤（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）の有効な用量は、単剤としてのＯＸ４０結合剤（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）の有効な用量と比較して低減される。
【０３７１】
一般的な割合として、ヒトに投与される抗体の治療的有効量は、１回の投与によるものであれ複数回の投与によるものであれ、患者の体重１ｋｇ当たり約０．０１から約５０ｍｇの範囲である。一部の実施態様では、使用される抗体は、例えば、毎日投与される約０．０１から約４５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約３５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約２５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約２０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約１５ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から約５ｍｇ／ｋｇ又は約０．０１から約１ｍｇ／ｋｇである。一部の実施態様では、この抗体は、１５ｍｇ／ｋｇで投与される。しかし、他の投薬レジメンが有用であり得る。一実施態様では、本明細書に記載される抗ＰＤＬ１抗体は、２１日サイクルの１日目に、約１００ｍｇ、約２００ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ又は約１４００ｍｇの用量でヒトに投与される。この用量は、点滴など、単一用量又は複数用量（例えば、２又は３用量）として投与され得る。併用治療で投与される抗体の用量は、単一治療と比較して低減され得る。この療法の進行は、従来の技術によって容易にモニタリングされる。
【０３７２】
一部の実施態様では、これらの方法は、さらなる療法をさらに含み得る。このさらなる療法は、放射線療法、手術（例えば、腫瘍摘出手術及び乳房切除術）、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法（ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｙ）、モノクローナル抗体療法、又は上述の組合せであり得る。このさらなる療法は、アジュバント又はネオアジュバント療法の形態であり得る。一部の実施態様では、このさらなる療法は、低分子酵素阻害剤又は抗転移剤の投与である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、副作用制限剤（例えば、治療の副作用の発生及び／又は重症度を低下させるための目的の薬剤、例えば、抗悪心剤など）の投与である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、放射線療法である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、手術である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、放射線療法及び手術の組合せである。一部の実施態様では、このさらなる療法は、ガンマ照射である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的化する療法、ＨＳＰ９０阻害剤、チューブリン阻害剤、アポトーシス阻害剤及び／又は化学防御剤である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２としても公知）、例えばブロッキング抗体、イピリムマブ（ＭＤＸ−０１０、ＭＤＸ−１０１又はＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても公知）、トレメリムマブ（チシリマブ（ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ）又はＣＰ−６７５，２０６としても公知）、Ｂ７−Ｈ３（ＣＤ２７６としても公知）例えばブロッキング抗体、ＭＧＡ２７１、ＴＧＦベータに対するアンタゴニスト、例えば、メテリムマブ（ｍｅｔｅｌｉｍｕｍａｂ）（ＣＡＴ−１９２としても公知）、フレソリムマブ（ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）（ＧＣ１００８としても公知）又はＬＹ２１５７２９９、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞又はＣＴＬ）の養子移入を含む治療、ドミナントネガティブＴＧＦベータ受容体、例えば、ドミナントネガティブＴＧＦベータＩＩ型受容体を含むＴ細胞の養子移入を含む治療、ＨＥＲＣＲＥＥＭプロトコール（例えば、ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖ同定子ＮＣＴ００８８９９５４を参照のこと）を含む治療、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９、４−１ＢＢ又はＩＬＡとしても公知）に対するアゴニスト、例えば活性化抗体、ウレルマブ（ｕｒｅｌｕｍａｂ）（ＢＭＳ−６６３５１３としても公知）、ＣＤ４０に対するアゴニスト、例えば、活性化抗体、ＣＰ−８７０８９３、ＯＸ４０（ＣＤ１３４としても公知）に対するアゴニスト、例えば活性化抗体、異なる抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＡｇｏｎＯＸ）、ＣＤ２７に対するアゴニスト、例えば活性化抗体、ＣＤＸ−１１２７、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、１−メチル−Ｄ−トリプトファン（１−Ｄ−ＭＴとしても公知）、抗体−薬物コンジュゲート（一部の実施態様では、メルタンシン（mertansine）又はモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）を含む）、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体−ＭＭＡＥコンジュゲート（ＤＮＩＢ０６００Ａ又はＲＧ７５９９としても公知）、トラスツズマブエム��ンシン（Ｔ−ＤＭ１、アド−トラスツズマブエムタンシン又はＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈとしても公知）、ＤＭＵＣ５７５４Ａ、エンドセリンＢ受容体（ＥＤＮＢＲ）を標的化する抗体−薬物コンジュゲート、例えば、ＭＭＡＥとコンジュゲートしたＥＤＮＢＲに対する抗体、血管新生阻害剤、ＶＥＧＦ、例えばＶＥＧＦ−Ａに対する抗体、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈとしても公知）、アンジオポエチン２（Ａｎｇ２としても公知）に対する抗体、ＭＥＤＩ３６１７、抗腫瘍剤、ＣＳＦ−１Ｒ（Ｍ−ＣＳＦＲ又はＣＤ１１５としても公知）を標的化する薬剤、抗ＣＳＦ−１Ｒ（ＩＭＣ−ＣＳ４としても公知）、インターフェロン、例えば、インターフェロンアルファ又はインターフェロンガンマ、Ｒｏｆｅｒｏｎ−Ａ、ＧＭ−ＣＳＦ（組換えヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、ｒｈｕＧＭ−ＣＳＦ、サルグラモスチム又はＬｅｕｋｉｎｅ（登録商標）としても公知）、ＩＬ−２（アルデスロイキン又はＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）としても公知）、ＩＬ−１２、ＣＤ２０を標的化する抗体（一部の実施態様では、このＣＤ２０を標的化する抗体は、オビヌツズマブ（ＧＡ１０１又はＧａｚｙｖａ（登録商標）としても公知）又はリツキシマブである）、ＧＩＴＲを標的化する抗体（一部の実施態様では、このＧＩＴＲを標的化する抗体は、ＴＲＸ５１８）、がんワクチン（一部の実施態様では、このがんワクチンは、ペプチドがんワクチンであり、一部の実施態様では、これは、個別化ペプチドワクチンである；一部の実施態様では、このペプチドがんワクチンは、多価長ペプチド、マルチペプチド、ペプチドカクテル、ハイブリッドペプチド、又はペプチドパルスした樹状細胞ワクチンである（例えば、Yamada等, Cancer Sci, 104:14-21, 2013を参照のこと）、アジュバント、ＴＬＲアゴニスト、例えば、Ｐｏｌｙ−ＩＣＬＣ（Ｈｉｌｔｏｎｏｌ（登録商標）としても公知）、ＬＰＳ、ＭＰＬ又はＣｐＧ  ＯＤＮ、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アルファ、ＩＬ−１、ＨＭＧＢ１、ＩＬ−１０アンタゴニスト、ＩＬ−４アンタゴニスト、ＩＬ−１３アンタゴニスト、ＨＶＥＭアンタゴニスト、例えばＩＣＯＳ−Ｌの投与によるＩＣＯＳアゴニストと、又はＩＣＯＳに対するアゴニスト抗体、ＣＸ３ＣＬ１を標的化する治療、ＣＸＣＬ１０を標的化する治療、ＣＣＬ５を標的化する治療、ＬＦＡ−１又はＩＣＡＭ１アゴニスト、セレクチンアゴニスト、標的化療法、Ｂ−Ｒａｆの阻害剤、ベムラフェニブ（Ｚｅｌｂｏｒａｆ（登録商標）としても公知）、ダブラフェニブ（Ｔａｆｉｎｌａｒ（登録商標）としても公知）、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）としても公知）、ＭＥＫの阻害剤、例えばＭＥＫ１（ＭＡＰ２Ｋ１としても公知）又はＭＥＫ２（ＭＡＰ２Ｋ２としても公知）、コビメチニブ（ＧＤＣ−０９７３又はＸＬ−５１８としても公知）、トラメチニブ（Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（登録商標）としても公知）、Ｋ−Ｒａｓの阻害剤、ｃ−Ｍｅｔの阻害剤、オナルツズマブ（ｏｎａｒｔｕｚｕｍａｂ）（ＭｅｔＭＡｂとしても公知）、Ａｌｋの阻害剤、ＡＦ８０２（ＣＨ５４２４８０２又はアレクチニブとしても公知）、ホスファチジルイノシトール３−キナー���（ＰＩ３Ｋ）の阻害剤、ＢＫＭ１２０、イデラリシブ（ＧＳ−１１０１又はＣＡＬ−１０１としても公知）、ペリフォシン（ＫＲＸ−０４０１としても公知）、Ａｋｔの阻害剤、ＭＫ２２０６、ＧＳＫ６９０６９３、ＧＤＣ−０９４１、ｍＴＯＲの阻害剤、シロリムス（ラパマイシンとしても公知）、テムシロリムス（ＣＣＩ−７７９又はＴｏｒｉｓｅｌ（登録商標）としても公知）、エベロリムス（ＲＡＤ００１としても公知）、リダフォロリムス（ＡＰ−２３５７３、ＭＫ−８６６９又はデフォロリムスとしても公知）、ＯＳＩ−０２７、ＡＺＤ８０５５、ＩＮＫ１２８、二重ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤、ＸＬ７６５、ＧＤＣ−０９８０、ＢＥＺ２３５（ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５としても公知）、ＢＧＴ２２６、ＧＳＫ２１２６４５８、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４（ＰＫＩ−５８７としても公知）である。さらなる療法は、本明細書において記載される１又は複数の化学療法剤であり得る。
【０３７３】
本明細書において記載される方法のいずれか（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストの組合せの有効量を投与することを含む併用治療）の有効性は、臨床又は前臨床モデルなどの当技術分野で公知の種々のモデルにおいて試験され得る。適した前臨床モデルが、本明細書に例示され、制限するものではないが、ＩＤ８卵巣がん、ＧＥＭモデル、Ｂ１６メラノーマ、ＲＥＮＣＡ腎細胞がん、ＣＴ２６結腸直腸がん、ＭＣ３８結腸直腸がん及びがんのクラウドマンメラノーマモデルをさらに含み得る。
【０３７４】
本明細書において記載される方法のいずれか（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストの組合せの有効量を投与することを含む併用治療）の有効性は、制限するものではないが、非小細胞肺がん、膵臓導管腺癌又はメラノーマのＧＥＭモデルを含めた、腫瘍を発生するＧＥＭモデルにおいて試験され得る。例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ、Ｅ．Ｌ．等（２００１年）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．第１５巻（２４）：３２４３−８頁（ＫｒａｓＧ１２Ｄの説明）及びＬｅｅ、Ｃ．Ｌ．等（２０１２年）Ｄｉｓ．Ｍｏｄｅｌ  Ｍｅｃｈ．第５巻（３）：３９７−４０２頁（ＦＲＴ媒介性ｐ５３ｎｕ１１対立遺伝子）に記載されるようなアデノウイルスリコンビナーゼ治療後に、ｐ５３ｎｕ１１バックグラウンドにおいてＫｒａｓＧ１２Ｄを発現するマウスは、非小細胞肺がんの前臨床モデルとして使用され得る。別の例として、Ｊａｃｋｓｏｎ、Ｅ．Ｌ．等（２００１年）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．第１５巻（２４）：３２４３−８頁（ＫｒａｓＧ１２Ｄの説明）及びＡｇｕｉｒｒｅ、Ａ．Ｊ．等（２００３年）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．第１７巻（２４）：３１１２−２６頁（ｐ１６／ｐ１９ｎｕ対立遺伝子）に記載されるｐ１６／ｐ１９ｎｕ１１バックグラウンドにおいてＫｒａｓＧ１２Ｄを発現するマウスが、膵臓導管腺癌（ＰＤＡＣ）の前臨床モデルとして使用され得る。さらなる例として、Ｄａｎｋｏｒｔ、Ｄ．等（２００７年）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．第２１巻（４）：３７９−８４頁（Ｂｒａｆｖ６００Ｅの説明）及びＴｒｏｔｍａｎ、Ｌ．Ｃ．等（２００３年）ＰＬｏＳ  Ｂｉｏｌ．第１巻（３）：Ｅ５９（ＰＴＥＮｎｕ１１対立遺伝子）に記載されるような誘導可能な（例えば、４−ＯＨＴ治療）リコンビナーゼ治療後に、メラニン細胞特異的ＰＴＥＮｎｕ１１バックグラウンドにおいてＢｒａｆｖ６００Ｅを発現するメラニン細胞を有するマウスは、メラノーマの前臨床モデルとして使用され得る。これらの例示的モデルのいずれかについて、腫瘍発生後に、マウスは、併用抗ＰＤＬ１及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）治療又はコントロール治療を受ける治療群に無作為に補充される。腫瘍の大きさ（例えば、腫瘍量）は、治療の過程の間測定され、全生存率もモニタリングされる。
【０３７５】
別の態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストの組合せの有効量を投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強する方法が、本明細書において提供される。
【０３７６】
本開示の方法の一部の実施態様では、がん（一部の実施態様では、診断試験を使用して調べられるような患者のがんの試料）は、上昇したレベルのＴ細胞浸潤を有する。本明細書において、がんのＴ細胞浸潤は、がん組織内の、そうでなければがん組織と関連した、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）などのＴ細胞の存在を指し得る。Ｔ細胞浸潤は、特定のがんにおける臨床成績の改善と関連する場合があることは当技術分野で公知である（例えば、Zhangら、N.Engl.J.Med.第348巻(3):203-213頁(2003年)を参照のこと)。
【０３７７】
しかし、Ｔ細胞消耗も、高レベルの阻害性共受容体を発現し、エフェクターサイトカインを産生する能力を欠く多数の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を有するがんの主要な免疫学的特徴である(Wherry、E.J. Nature immunology第12巻:492-499頁(2011年);Rabinovich,G.A.ら等、Annual review of immunology第25巻:267-296頁(2007年))。本開示の方法の一部の実施態様では、個体は、Ｔ細胞機能障害性障害を有する。本開示の方法の一部の実施態様では、Ｔ細胞機能障害性障害は、Ｔ細胞アネルギー又はサイトカインを分泌する、増殖する又は細胞溶解活性を実行する能力の低減によって特徴を明らかにされる。本開示の方法の一部の実施態様では、Ｔ細胞機能障害性障害は、Ｔ細胞消耗によって特徴を明らかにされる。本開示の方法の一部の実施態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞である。理論に捉われようとは思わないが、ＯＸ４０結合アゴニスト治療は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞）プライミング、活性化及び／又は増殖を、組合せの投与の前に対して増大し得る。一部の実施態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞である。
【０３７８】
本開示の方法の一部の実施態様では、がん（一部の実施態様では、患者のがんの試料は、診断試験を使用して調べられる）は、低レベルのＴ細胞浸潤を有する。一部の実施態様では、がん（一部の実施態様では、患者のがんの試料は、診断試験を使用して調べられる）は、検出可能ではないＴ細胞浸潤物を有する。一部の実施態様では、がんは、非免疫原性がん（例えば、非免疫原性結腸直腸がん及び／又は卵巣がん）である。理論に捉われようとは思わないが、ＯＸ４０結合アゴニスト治療は、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞）プライミング、活性化及び／又は増殖を、組合せの投与の前に対して増大し得る。
【０３７９】
本開示の方法の一部の実施態様では、個体において活性化されたＣＤ４及び／又はＣＤ８Ｔ細胞は、γ−ＩＦＮ＋産生ＣＤ４及び／又はＣＤ８Ｔ細胞及び／又は組合せの投与の前に対して増強された細胞溶解活性によって特徴を明らかにされる。γ−ＩＦＮ＋は、例えば、細胞固定、透過処理及びγ−ＩＦＮに対する抗体を用いた染色細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）を含めた当技術分野で公知の任意の手段によって測定され得る。細胞溶解活性は、例えば、エフェクター及び標的細胞を混合する細胞死滅アッセイを使用する当技術分野で公知の任意の手段によって測定され得る。
【０３８０】
一部の実施態様では、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、例えば、ＣＤ８ｂ発現の存在（例えば、Ｆｌｕｉｄｉｇｍを使用する、例えば、ｒｔＰＣＲによる）によって特徴を明らかにされる（Ｃｄ８ｂはまた、Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ８ベータ鎖；ＣＤ８抗原、アルファポリペプチドｐ３７としても知られている；受託番号は、ＮＭ＿１７２２１３である）。一部の実施態様では、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、末梢血に由来する。一部の実施態様では、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、腫瘍に由来する。
【０３８１】
一部の実施態様では、Ｔｒｅｇ細胞は、例えば、Ｆｏｘ３ｐ発現の存在（例えば、Ｆｌｕｉｄｉｇｍを使用する、例えば、ｒｔＰＣＲによる）によって特徴を明らかにされる（Ｆｏｘｐ３は、フォークヘッドボックスタンパク質Ｐ３；スクルフィン（ｓｃｕｒｆｉｎ）；ＦＯＸＰ３ｄｅｌｔａ７；免疫不全、多腺性内分泌障害、腸疾患、Ｘ連鎖としても知られる；受託番号は、ＮＭ＿０１４００９である）。一部の実施態様では、Ｔｒｅｇは、末梢血に由来する。一部の実施態様では、Ｔｒｅｇ細胞は、腫瘍に由来する。
【０３８２】
一部の実施態様では、炎症性Ｔ細胞は、例えば、Ｔｂｅｔ及び／又はＣＸＣＲ３発現の存在（例えば、Ｆｌｕｉｄｉｇｍを使用する、例えば、ｒｔＰＣＲによる）によって特徴を明らかにされる。一部の実施態様では、炎症性Ｔ細胞は、末梢血由来である。一部の実施態様では、炎症性Ｔ細胞は、腫瘍由来である。
【０３８３】
本開示の方法の一部の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８Ｔ細胞は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α及びインターロイキンからなる群から選択されるサイトカインの放出の増大を示す。サイトカイン放出は、ＣＤ４及び／又はＣＤ８Ｔ細胞を含有する試料において放出されたサイトカインの存在を検出するための、例えば、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ又は免疫組織学的分析を使用する当技術分野で公知の任意の手段によって測定され得る。
【０３８４】
本開示の方法の一部の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８Ｔ細胞は、エフェクター記憶Ｔ細胞である。本開示の方法の一部の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクター記憶Ｔ細胞は、ＣＤ４４ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌｌｏｗの発現を有することによって特徴を明らかにされる。ＣＤ４４ｈｉｇｈＣＤ６２Ｌｌｏｗの発現は、当技術分野で公知の任意の手段によって、例えば、組織（例えば、がん組織）の単細胞懸濁液を調製すること並びにＣＤ４４及びＣＤ６２Ｌに対する市販の抗体を使用して表面染色及びフローサイトメトリーを実施することによって検出され得る。本開示の方法の一部の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクター記憶Ｔ細胞は、ＣＸＣＲ３（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体３型、Ｍｉｇ受容体、ＩＰ１０受容体、Ｇタンパク質共役受容体９、インターフェロン誘導性タンパク質１０受容体としても知られる；受託番号ＮＭ＿００１５０４）の発現によって特徴を明らかにされる。一部の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクター記憶Ｔ細胞は末梢血由来である。一部の実施態様では、ＣＤ４及び／又はＣＤ８エフェクター記憶Ｔ細胞は、腫瘍由来である。
【０３８５】
本開示の方法の一部の実施態様では、個体へのヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストの有効量の投与は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストの投与前に対するＣＤ８Ｔ細胞上の炎症性マーカー（例えば、ＣＸＣＲ３）の増大によって特徴を明らかにされる。ＣＸＣＲ３／ＣＤ８Ｔ細胞は、当技術分野で公知の任意の手段及び実施例に記載される方法によって測定され得る。一部の実施態様では、ＣＸＣＲ３／ＣＤ８Ｔ細胞は、末梢血由来である。一部の実施態様では、ＣＸＣＲ３／ＣＤ８Ｔ細胞は、腫瘍由来である。
【０３８６】
本発明の方法の一部の実施態様では、Ｔｒｅｇ機能が、組合せの投与の前に対して抑制される。一部の実施態様では、Ｔ細胞消耗が、組合せの投与の前に対し減少する。
【０３８７】
一部の実施態様では、Ｔｒｅｇの数が、組合せの投与の前に対して減少する。一部の実施態様では、血漿インターフェロンガンマが、組合せの投与の前に対して増大される。Ｔｒｅｇ数は、ＣＤ４＋Ｆｏｘ３ｐ＋ＣＤ４５＋細胞の百分率を決定することによって（例えば、ＦＡＣＳ分析によって）評価され得る。一部の実施態様では、例えば、試料中のＴｒｅｇの絶対数が決定される。一部の実施態様では、Ｔｒｅｇは、末梢血由来である。一部の実施態様では、Ｔｒｅｇは、腫瘍由来である。
【０３８８】
一部の実施態様では、Ｔ細胞プライミング、活性化及び／又は増殖は、組合せの投与の前に対して増大される。一部の実施態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞である。一部の実施態様では、Ｔ細胞増殖は、Ｋｉ６７＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率を決定することによって（例えば、ＦＡＣＳ分析によって）検出される。一部の実施態様では、Ｔ細胞増殖は、Ｋｉ６７＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の百分率を決定することによって（例えば、ＦＡＣＳ分析によって）検出される。一部の実施態様では、Ｔ細胞は、末梢血由来である、一部の実施態様では、Ｔ細胞は、腫瘍由来である。
【０３８９】
当技術分野で公知の、又は本明細書に記載されるＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニストのいずれも、本開示の方法において使用され得る。
【０３９０】
ＶＩ．  検出及び診断の方法
一部の実施態様では、試料は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストを用いる治療に先立って（一部の実施態様では、ＯＸ４０結合アゴニスト、例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体を用いる治療、例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせた治療に先立って）得られる。一部の実施態様では、組織試料は、ホルマリン固定され、パラフィン包埋され、新鮮又は凍結されて記録保存される。
【０３９１】
一部の実施態様では、試料は、全血である。一部の実施態様では、全血は、免疫細胞、循環腫瘍細胞及びそれらの任意の組合せを含む。
【０３９２】
バイオマーカー（例えば、ＰＤ−Ｌ１）の存在及び／又は発現レベル／量は、それだけには限らないが、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、タンパク質、タンパク質断片及び／又は遺伝子コピー数を含めた当技術分野で公知の任意の適した基準に基づいて、定性的に及び／又は定量的に決定され得る。特定の実施態様では、第１の試料中のバイオマーカーの存在及び／又は発現レベル／量は、第２の試料中の存在／不在及び／又は発現レベル／量と比較して増大又は上昇される。特定の実施態様では、第１の試料中のバイオマーカーの存在／不在及び／又は発現レベル／量は、第２の試料中の存在及び／又は発現レベル／量と比較して低減又は低下される。特定の実施態様では、第２の試料は、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織である。遺伝子の存在／不在及び／又は発現レベル／量を決定するためのさらなる開示が本明細書に記載される。
【０３９３】
方法のいずれかの一部の実施態様では、発現の上昇とは、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織と比較した、本明細書において記載されるものなどの標準的な技術分野で公知の方法によって検出される、バイオマーカー（例えば、タンパク質又は核酸（例えば、遺伝子又はｍＲＮＡ））のレベルにおける約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のいずれかの全体的な増大を指す。特定の実施態様では、発現の上昇とは、試料中のバイオマーカーの発現レベル／量の増大を指し、増大は、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織におけるそれぞれのバイオマーカーの発現レベル／量の少なくとも約１．５Ｘ、１．７５Ｘ、２Ｘ、３Ｘ、４Ｘ、５Ｘ、６Ｘ、７Ｘ、８Ｘ、９Ｘ、１０Ｘ、２５Ｘ、５０Ｘ、７５Ｘ又は１００Ｘのいずれかである。一部の実施態様では、発現の上昇は、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞、コントロール組織又は内部コントロール（例えば、ハウスキーピング遺伝子）と比較して約１．５倍、約１．７５倍、約２倍、約２．２５倍、約２．５倍、約２．７５倍、約３．０倍又は約３．２５倍を超える全体的な増大を指す。
【０３９４】
方法のいずれかの一部の実施態様では、発現の低下とは、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織と比較した、本明細書において記載されるものなどの標準的な技術分野で公知の方法によって検出される、バイオマーカー（例えば、タンパク質又は核酸（例えば、遺伝子又はｍＲＮＡ））のレベルにおける、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上のいずれかの全体的な低下を指す。特定の実施態様では、発現の低下とは、試料中のバイオマーカーの発現レベル／量の低減を指し、低減は、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織におけるそれぞれのバイオマーカーの発現レベル／量の少なくとも約０．９Ｘ、０．８Ｘ、０．７Ｘ、０．６Ｘ、０．５Ｘ、０．４Ｘ、０．３Ｘ、０．２Ｘ、０．１Ｘ、０．０５Ｘ又は０．０１Ｘのいずれかである。
【０３９５】
試料中の種々のバイオマーカーの存在及び／又は発現レベル／量は、それだけには限らないが、免疫組織化学（「ＩＨＣ」）、ウエスタンブロット解析、免疫沈降、分子結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＦＡ、蛍光活性化セルソーティング（「ＦＡＣＳ」）、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ、プロテオミクス、定量的血液ベースのアッセイ（例えば、血清ＥＬＩＳＡのような）、生化学的酵素活性測定法、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、サザン分析、ノーザン分析、全ゲノム配列決定、定量的リアルタイムＰＣＲ（「ｑＲＴ−ＰＣＲ」）を含めたポリメラーゼ連鎖反応（「ＰＣＲ」）及び例えば、分岐ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡなどといったその他の増幅型の検出方法）、ＲＮＡ−Ｓｅｑ、ＦＩＳＨ、マイクロアレイ解析、遺伝子発現プロファイリング及び／又は遺伝子発現の連続分析（「ＳＡＧＥ」）並びにタンパク質、遺伝子及び／又は組織アレイ分析によって実施され得る多種多様なアッセイのうちのいずれか１種を含めたいくつかの方法によって分析され得、その多くは、当技術分野で公知であり、当業者によって理解されている。遺伝子及び遺伝子産物の状態を評価するための通常のプロトコールは、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ等編、１９９５年、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｕｎｉｔ  ２（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、４（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、１５（Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ）及び１８（ＰＣＲ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）に見出される。Ｒｕｌｅｓ  Ｂａｓｅｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ又はＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（「ＭＳＤ」）から入手できるものなどのマルチプレックスイムノアッセイも使用され得る。
【０３９６】
一部の実施態様では、バイオマーカーの存在及び／又は発現レベル／量は、（ａ）試料（対象がん試料などで、遺伝子発現プロファイリング、ＰＣＲ（ｒｔＰＣＲ又はｑＲＴ−ＰＣＲなど）、ＲＮＡ−ｓｅｑ、マイクロアレイ解析、セージ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技術又はＦＩＳＨを実施すること並びにｂ）試料中のバイオマーカーの存在及び／又は発現レベル／量を調べることを含む方法を使用して決定される。一部の実施態様では、マイクロアレイ方法は、ストリンジェントな条件下で上記の遺伝子をコードする核酸分子とハイブリダイズできる１又は複数の核酸分子を有するか、又は上記の遺伝子によってコードされる１又は複数のタンパク質と結合できる１又は複数のポリペプチド(ペプチド又は抗体など)を有するマイクロアレイチップの使用を含む。一実施態様では、ＰＣＲ法は、ｑＲＴ−ＰＣＲである。一実施態様では、ＰＣＲ法は、マルチプレックスＰＣＲである。一部の実施態様では、遺伝子発現は、マイクロアレイによって測定される。一部の実施態様では、遺伝子発現は、ｑＲＴ−ＰＣＲによって測定される。一部の実施態様では、発現は、マルチプレックスＰＣＲによって測定される。
【０３９７】
細胞中のｍＲＮＡの評価のための方法は、周知であり、例えば、相補的ＤＮＡプローブを使用するハイブリダイゼーションアッセイ（１又は複数の遺伝子に特異的な標識されたリボプローブを使用するｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ノーザンブロット及び関連技術など）及び種々の核酸増幅アッセイ（１又は複数の遺伝子に特異的な相補的プライマーを使用するＲＴ−ＰＣＲなど並びに例えば、分岐ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡなどといったその他の増幅型の検出方法）が挙げられる。
【０３９８】
哺乳動物に由来する試料は、ノーザン、ドットブロット又はＰＣＲ分析を使用してｍＲＮＡについて好都合にアッセイされ得る。さらに、このような方法は、生体試料中の標的ｍＲＮＡのレベルを決定すること（例えば、アクチンファミリーメンバーなどの「ハウスキーピング」遺伝子の比較コントロールｍＲＮＡ配列を同時に調べることによって）を可能にする１又は複数のステップを含み得る。任意選択で、増幅された標的ｃＤＮＡの配列が決定されることもある。
【０３９９】
任意選択的な方法は、マイクロアレイ技術によって組織又は細胞試料中の標的ｍＲＮＡなどのｍＲＮＡを調べる、又は検出するプロトコールプロトコールを含む。核酸マイクロアレイを使用して、試験及びコントロール組織試料から得た試験及びコントロールｍＲＮＡ試料を逆転写し、標識してｃＤＮＡプローブを作製する。次いで、プローブを、固相支持体上に固定化されている核酸のアレイとハイブリダイズする。アレイは、アレイの各メンバーの配列及び位置が公知であるように形成される。例えば、その発現が抗血管新生療法の臨床上の利益の増大又は低下と相関する遺伝子の選択が、固相支持体上に配置され得る。標識されたプローブの、特定のアレイメンバーとのハイブリダイゼーションは、プローブが由来する試料が、その遺伝子を発現することを示す。
【０４００】
一部の実施態様によれば、存在及び／又は発現レベル／量は、前記の遺伝子のタンパク質発現レベルを観察することによって測定される。特定の実施態様では、方法は、生体試料を、バイオマーカーの結合に寛容な条件下で、本明細書に記載されるバイオマーカーに対する抗体（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）と接触させること及び抗体とバイオマーカー間に複合体が形成されるか否かを検出することを含む。このような方法は、インビトロ法であっても、インビボ法であってもよい。一実施態様では、抗体は、ＰＤ−Ｌ１軸結合アンタゴニスト、例えば、個体の選択のためのバイオマーカーを用いる療法に適格な対象を選択するために使用される。
【０４０１】
特定の実施態様では、試料中のバイオマーカータンパク質の存在及び／又は発現レベル／量が、ＩＨＣ及び染色プロトコールを使用して調べられる。組織切片のＩＨＣ染色は、試料中のタンパク質の存在を決定する又は検出する信頼できる方法であるとわかっている。方法、アッセイ及び／又はキットのいずれかの一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１は、免疫組織化学によって検出される。一部の実施態様では、個体から得た試料中のＰＤ−Ｌ１バイオマーカーの発現の上昇は、タンパク質発現の上昇であり、さらなる実施態様において、ＩＨＣを使用して決定される。一実施態様では、バイオマーカーの発現レベルは、（ａ）抗体を用いる試料（対象がん試料など）のＩＨＣ分析を実施すること及びｂ）試料中のバイオマーカーの発現レベルを決定することを含む方法を使用して決定される。一部の施態様では、ＩＨＣ染色強度は、参照に対して決定される。一部の実施態様では、参照は、参照値である。一部の実施態様では、参照は、参照試料（例えば、非癌性患者から得たコントロール細胞株染色試料又は組織試料）である。
【０４０２】
ＩＨＣは、形態学的染色及び／又は蛍光ｉｎ−ｓｉｔｕハイブリダイゼーションなどのさらなる技術と組み合わせて実施され得る。ＩＨＣの２つの一般的な方法；直接及び間接アッセイが利用可能である。第１のアッセイによれば、抗体の標的抗原との結合は、直接的に決定される。この直接アッセイは、蛍光タグ又はさらなる抗体相互作用を伴わずに可視化され得る酵素標識一次抗体などの標識された試薬を使用する。通常の間接アッセイでは、コンジュゲートされていない一次抗体は、抗原と結合し、次いで、標識された二次抗体が、一次抗体と結合する。二次抗体が酵素標識にコンジュゲートされている場合には、抗原の可視化を提供するために発色性又は蛍光発生的基質が添加される。いくつかの二次抗体は、一次抗体上の異なるエピトープと反応し得るので、シグナル増幅が起こる。
【０４０３】
ＩＨＣに使用される一次及び／又は二次抗体は、通常、検出可能な部分を用いて標識される。多数の標識が利用可能であり、これらは、一般に以下のカテゴリーにグループ化され得る：（ａ）３５Ｓ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ及び１３１Ｉなどの放射性同位体、（ｂ）コロイド金粒子、（ｃ）それだけには限らないが、希土類キレート（ユウロピウムキレート）、テキサスレッド、ローダミン、フルオレセイン、ダンシル、リサミン、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フィコシアニン若しくはＳＰＥＣＴＲＵＭ  ＯＲＡＮＧＥ７及びＳＰＥＣＴＲＵＭ  ＧＲＥＥＮ７などの市販のフルオロフォア並びに／又は上記のいずれか１又は複数の誘導体を含めた蛍光標識、（ｄ）種々の酵素−基質標識が利用可能であり、米国特許第４２７５１４９号は、これらのいくつかの概説を提供している。酵素標識の例として、ルシフェラーゼ（例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ；米国特許第４７３７４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ウレアーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）などのペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類オキシダーゼ（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ）、複素環式オキシダーゼ（ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなど）、ラクトペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼなどが挙げられる。
【０４０４】
酵素−基質組合せの例として、例えば、基質として水素ペルオキシダーゼを用いる西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）；発色基質としてパラ−ニトロフェニルホスフェートを用いるアルカリホスファターゼ（ＡＰ）；及び発色基質（例えば、ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ）又は蛍光発生的基質（例えば、４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシダーゼ）を用いるβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ（β−Ｄ−Ｇａｌ）が挙げられる。これらの一般概説については、米国特許第４２７５１４９号及び同４３１８９８０号を参照のこと。
【０４０５】
方法のいずれかの一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１は、抗ＰＤ−Ｌ１診断抗体（すなわち、一次抗体）を使用する免疫組織化学によって検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１診断抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１と特異的に結合する。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１診断抗体は、非ヒト抗体である。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１診断抗体は、ラット、マウス又はウサギ抗体である。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１診断抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１診断抗体は、直接的に標識される。
【０４０６】
このように調製した試料は、マウントされ、カバースライドが被され得る。次いで、例えば、顕微鏡を使用してスライド評価が決定され、当技術分野で日常的に使用される染色強度基準が使用され得る。一実施態様では、腫瘍から得た細胞及び／又は組織が、ＩＨＣを使用して調べられる場合には、染色は、一般に、腫瘍細胞及び／又は組織において決定又は評価される（試料中に存在し得る間質又は周囲組織とは対照的に）ということは理解される。一部の実施態様では、腫瘍から得た細胞及び／又は組織がＩＨＣを使用して調べられる場合には、染色は、腫瘍内又は腫瘍周囲免疫細胞を含めた腫瘍浸潤性免疫細胞を決定又は評価することを含むということは理解される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーの存在は、以下の表４に記載されるような試料の＞０％において、試料の少なくとも１％において、試料の少なくとも５％において、又は試料の少なくとも１０％においてＩＨＣによって検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーの存在は、細胞の＜５％においてＩＨＣによって検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーの存在は、細胞の＜１％においてＩＨＣによって検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーの存在は、細胞の０％においてＩＨＣによって検出される。
【０４０７】
方法、アッセイ及び／又はキットのいずれかの一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーの存在は、任意の強度のＰＤ−Ｌ１染色を用いてＩＨＣによって検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、弱い染色強度としてＩＨＣによって検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、中程度の染色強度としてＩＨＣによって検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、強い染色強度としてＩＨＣによって検出される。
【０４０８】
一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、腫瘍細胞、腫瘍浸潤性免疫細胞及びそれらの組合せにおいてＩＨＣによって検出される。
【０４０９】
ＩＨＣにおける使用に適した抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、当技術分野で周知である。当業者ならば、例えば、本明細書に開示されるＩＨＣプロトコールを使用して抗ＰＤ−Ｌ１抗体と比較することによって、さらなる適した抗ＰＤ−Ｌ１抗体が同定され、特徴を明らかにされ得るということは理解している。
【０４１０】
陽性組織コントロールは、胎盤及び扁桃腺組織（強いＰＤ−Ｌ１染色強度）；組換えヒトＰＤ−Ｌ１でトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞（弱いから中程度及び強い強度の変動する程度のＰＤ−Ｌ１染色強度）を使用して例示される。例示的ＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣ基準については、以下が参照され得る。
2017501167.tif 000006
【０４１１】
一部の実施態様では、ＰＤＬ１状態は、上記の表４に提供されるガイドラインに従って診断される。
【０４１２】
一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣ診断評価の基準は、以下のとおりに提供される：
2017501167.tif 000007
【０４１３】
一部の実施態様では、ＰＤＬ１状態は、上記の表５に提供されるガイドラインに従って診断される。一部の実施態様では、ＩＨＣ０及び／又はＩＨＣ１のスコアを有する試料は、ＰＤＬ１バイオマーカー陰性であると考えられ得る。一部の実施態様では、ＩＨＣ２及び／又はＩＨＣ３のスコアを有する試料は、ＰＤＬ１バイオマーカー陽性と考えられ得る。一部の実施態様では、試料は、ＩＨＣ０、ＩＨＣ０及び／又は１、ＩＨＣ１、ＩＨＣ１及び／又は２、ＩＨＣ２、ＩＨＣ２及び／又は３又はＩＨＣ３と診断される。
【０４１４】
一部の実施態様では、ＰＤＬ１発現は、腫瘍又は腫瘍試料で評価される。本明細書において、腫瘍又は腫瘍試料は、腫瘍細胞によって占められる腫瘍面積の一部又は全てを包含し得る。一部の実施態様では、腫瘍又は腫瘍試料は、腫瘍関連腫瘍内細胞及び／又は腫瘍関連間質（例えば、近接する腫瘍周囲線維形成性間質）によって占められる腫瘍面積をさらに包含し得る。腫瘍関連腫瘍内細胞及び／又は腫瘍関連間質は、主な腫瘍塊と直接隣接する及び／又は近接する免疫浸潤物（例えば、本明細書に記載されるような腫瘍浸潤性免疫細胞）の面積を含み得る。一部の実施態様では、ＰＤＬ１発現は、腫瘍細胞で評価される。一部の実施態様では、ＰＤＬ１発現は、腫瘍浸潤性免疫細胞などの上記の腫瘍面積内の免疫細胞で評価される。
【０４１５】
代替法では、試料を、抗体−バイオマーカー複合体が形成するのに十分な条件下で、前記バイオマーカーに特異的である抗体と接触させてもよく、次いで、前記複合体を検出してもよい。バイオマーカーの存在は、血漿又は血清を含めた多種多様な組織及び試料をアッセイするためのウエスタンブロット法及びＥＬＩＳＡ手順によってなど、いくつかの方法で検出され得る。このようなアッセイ形式を使用する広範なイムノアッセイ技術が利用可能である、例えば、米国特許第４０１６０４３号及び米国特許第４４２４２７９号及び米国特許第４０１８６５３号を参照のこと。これらとして、非競合型の、並びに伝統的な競合結合アッセイにおける単一部位及び２部位又は「サンドイッチ」アッセイの両方が挙げられる。これらのアッセイはまた、標識された抗体の標的バイオマーカーとの直接結合も含む。
【０４１６】
組織又は細胞試料中の選択されたバイオマーカーの存在及び／又は発現レベル／量はまた、機能的又は活性ベースのアッセイによって調べられ得る。例えば、バイオマーカーが酵素である場合には、当技術分野で公知のアッセイを実施して、組織又は細胞試料中の所与の酵素活性の存在を決定又は検出してもよい。
【０４１７】
特定の実施態様では、試料は、アッセイされるバイオマーカーの量の相違及び使用される試料の品質の可変性並びにアッセイ実施間の可変性の両方について正規化される。このような正規化は、周知のハウスキーピング遺伝子を含めた特定の正規化バイオマーカーの発現を検出すること及び組み込むことによって達成され得る。あるいは、正規化は、アッセイされた遺伝子の全て又はその大きなサブセットの平均又は中央値シグナルをベースとする場合もある（グローバル正規化アプローチ）。遺伝子ごとベースで、対象腫瘍ｍＲＮＡ又はタンパク質の測定された正規化された量が、参照セット中に見られる量と比較される。対象あたり試験された腫瘍あたりの各ｍＲＮＡ又はタンパク質の正規化された発現レベルは、参照セットにおいて測定された発現レベルの百分率として表され得る。分析されるべき特定の対象試料中で測定される存在及び／又は発現レベル／量は、この範囲内の幾分かのパーセンタイルに入り、これは、当技術分野で周知の方法によって決定され得る。
【０４１８】
一実施態様では、試料は、臨床試料である。別の実施態様では、試料は、診断アッセイにおいて使用される。一部の実施態様では、試料は、原発性又は転移性腫瘍から得られる。組織生検は、腫瘍組織の代表的小片を得るために使用されることが多い。あるいは、腫瘍細胞は、対象の腫瘍細胞を含有するとわかっているか、又はそう考えられる組織又は流体の形態で間接的に得ることができる。例えば、肺がん病変の試料は、切除、気管支鏡検査、穿刺吸引、気管支擦過法によって、又は痰、胸腔液若しくは血液から得ることができる。遺伝子又は遺伝子産物は、がん若しくは腫瘍組織から、又は尿、痰、血清若しくは血漿などのその他の身体試料から検出され得る。がん性試料における標的遺伝子又は遺伝子産物の検出について上記で論じられた同一技術が、その他の身体試料に適用され得る。がん細胞は、がん病変から剥がれ落ち、このような身体試料中に現れることがある。このような身体試料をスクリーニングすることによって、これらのがんについての簡単な早期の診断が達成され得る。さらに、療法の進捗は、標的遺伝子又は遺伝子産物についてこのような身体試料を試験することによってより容易にモニタリングされ得る。
【０４１９】
特定の実施態様では、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、単一試料又は試験試料が得られる時とは異なる１又は複数の時点で得られる、同一対象又は個体から得た組み合わされた複数の試料である。例えば、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、試験試料が得られる時より早期の時点で同一対象又は個体から得られる。このような参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、参照試料ががんの初期診断の際に得られ、試験試料が、がんが転移性になったときに後に得られる場合に有用であり得る。
【０４２０】
特定の実施態様では、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、対象又は個体ではない１又は複数の健常な個体に由来する組み合わされた複数の試料である。特定の実施態様では、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、対象又は個体ではない、疾患又は障害（例えば、がん）を有する１又は複数の個体から得た組み合わされた複数の試料である。特定の実施態様では、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、正常組織から得られたプールされたＲＮＡ試料又は対象若しくは個体ではない１又は複数の個体から得たプールされた血漿若しくは血清試料である。特定の実施態様では、参照試料、参照細胞、参照組織、コントロール試料、コントロール細胞又はコントロール組織は、腫瘍組織から得られたプールされたＲＮＡ試料又は対象若しくは個体ではない疾患若しくは障害（例えば、がん）を有する１又は複数の個体から得たプールされた血漿若しくは血清試料である。
【０４２１】
一部の実施態様では、試料は、個体から得た組織試料である。一部の実施態様では、組織試料は、腫瘍組織試料（例えば、生検組織）である。一部の実施態様では、組織試料は、肺組織である。一部の実施態様では、組織試料は、腎組織である。一部の実施態様では、組織試料は、皮膚組織である。一部の実施態様では、組織試料は、膵臓組織である。一部の実施態様では、組織試料は、胃組織である。一部の実施態様では、組織試料は、膀胱組織である。一部の実施態様では、組織試料は、食道組織である。一部の実施態様では、組織試料は、中皮組織である。一部の実施態様では、組織試料は、乳房組織である。一部の実施態様では、組織試料は、甲状腺組織である。一部の実施態様では、組織試料は、結腸直腸組織である。一部の実施態様では、組織試料は、頭頸部組織である。一部の実施態様では、組織試料は、骨肉腫組織である。一部の実施態様では、組織試料は、前立腺組織である。一部の実施態様では、組織試料は、卵巣組織、ＨＣＣ（肝臓）、血液細胞、リンパ節及び／又は骨／骨髄組織である。一部の実施態様では、組織試料は、結腸組織である。一部の実施態様では、組織試料は、子宮内膜組織である。一部の実施態様では、組織試料は、脳組織（例えば、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫など）である。
【０４２２】
一部の実施態様では、腫瘍組織試料（用語「腫瘍試料」は、本明細書において同義的に使用される）は、腫瘍細胞によって占められる腫瘍面積の一部又は全てを包含し得る。一部の実施態様では、腫瘍又は腫瘍試料は、腫瘍関連腫瘍内細胞及び／又は腫瘍関連間質（例えば、近接する腫瘍周囲線維形成性間質）によって占められる腫瘍面積をさらに包含し得る。腫瘍関連腫瘍内細胞及び／又は腫瘍関連間質は、主な腫瘍塊と直接隣接する及び／又は近接する免疫浸潤物（例えば、本明細書において記載されるような腫瘍浸潤性免疫細胞）の面積を含み得る。
【０４２３】
方法のいずれかの一部の実施態様では、疾患又は障害は、腫瘍である。一部の実施態様では、腫瘍は、悪性がん性腫瘍（すなわち、がん）である。一部の実施態様では、腫瘍及び／又はがんは、固形腫瘍又は非固形又は軟組織腫瘍である。軟組織腫瘍の例として、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、成人急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、成熟Ｂ−細胞急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、前リンパ性白血病又はヘアリー細胞白血病）又はリンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ−細胞リンパ腫又はホジキン病）が挙げられる。固形腫瘍として、血液、骨髄又はリンパ系以外の身体組織の任意のがんが挙げられる。固形腫瘍は、上皮細胞起源のもの及び非上皮細胞起源のものにさらに分けられ得る。上皮細胞固形腫瘍の例として、胃腸管、結腸、結腸直腸（例えば、類基底結腸直腸癌）、乳房、前立腺、肺、腎臓、肝臓、膵臓、卵巣（例えば、類内膜卵巣癌）、頭頸部、口腔、胃、十二指腸、小腸、大腸、肛門、胆嚢、唇、鼻咽頭、皮膚、子宮、男性生殖器、泌尿器（例えば、尿路上皮癌、異形成尿路上皮癌、移行上皮癌）、膀胱及び皮膚の腫瘍が挙げられる。非上皮起源の固形腫瘍として、肉腫、脳腫瘍及び骨腫瘍が挙げられる。一部の実施態様では、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。一部の実施態様では、がんは、セカンドライン又はサードライン局所進行性又は転移性非小細胞肺がんである。一部の実施態様では、がんは、腺癌である。一部の実施態様では、がんは、扁平上皮癌である。一部の実施態様では、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、メラノーマ、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）又は肝細胞性癌である。一部の実施態様では、がんは、原発腫瘍である。一部の実施態様では、がんは、上記の種類のがんのいずれかに由来する第２の部位の転移性腫瘍である。
【０４２４】
方法のいずれかの一部の実施態様では、がんは、ヒトエフェクター細胞を示す（例えば、ヒトエフェクター細胞によって浸潤される）。例えば、ＩＨＣによってを含め、ヒトエフェクター細胞を検出するための方法は、当技術分野で周知である。一部の実施態様では、がんは、高レベルのヒトエフェクター細胞を示す。一部の実施態様では、ヒトエフェクター細胞は、１又は複数のＮＫ細胞、マクロファージ、単球である。一部の実施態様では、がんは、本明細書に記載される任意のがんである。一部の実施態様では、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、メラノーマ、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）又は肝細胞癌である。
【０４２５】
方法のいずれかの一部の実施態様では、がんは、ＦｃＲを発現する細胞を示す（例えば、ＦｃＲを発現する細胞によって浸潤される）。例えば、ＩＨＣによってをはじめ、ＦｃＲを検出するための方法は、当技術分野で周知である。一部の実施態様では、がんは、高レベルのＦｃＲを発現する細胞を示す。一部の実施態様では、ＦｃＲは、ＦｃγＲである。一部の実施態様では、ＦｃＲは、活性化ＦｃγＲである。一部の実施態様では、がんは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、メラノーマ、乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳がん）、胃がん、結腸直腸がん（ＣＲＣ）又は肝細胞癌である。
【０４２６】
一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＦＡＣＳ、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降法、免疫組織化学、免疫蛍光、ラジオイムノアッセイ、ドットブロット法、免疫検出方法、ＨＰＬＣ、表面プラズモン共鳴、光学分光法、質量分析、ＨＰＬＣ、ｑＰＣＲ、ＲＴ−ｑＰＣＲ、マルチプレックスｑＰＣＲ又はＲＴ−ｑＰＣＲ、ＲＮＡ−ｓｅｑ、マイクロアレイ解析、ＳＡＧＥ、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ技術及びＦＩＳＨ及びそれらの組合せからなる群から選択される方法を使用して試料中で検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＦＡＣＳ分析を使用して検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１バイオマーカーは、ＰＤ−Ｌ１である。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１発現は、血液試料において検出される。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１発現は、血液試料中の循環免疫細胞で検出される。一部の実施態様では、循環免疫細胞は、ＣＤ３＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一部の実施態様では、分析に先立って、免疫細胞は、血液試料から単離される。それだけには限らないが、細胞選別を含めた、このような細胞の集団を同定／濃縮するための任意の適した方法が使用され得る。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１発現は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体などのＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１軸経路の阻害剤を用いる治療に応答する個体から得た試料において上昇する。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１発現は、血液試料中のＣＤ３＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞などの循環免疫細胞で上昇する。
【０４２７】
対象から得た白血球を含む試料中の、１又は複数のマーカー遺伝子、タンパク質（単数又は複数）（例えば、サイトカイン、例えば、ガンマインターフェロン）及び／又は細胞組成物の発現レベル（例えば、Ｔｒｅｇの百分率及び／又はＴｒｅｇの絶対数；例えば、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞数）を測定することであって、対象が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を用いて治療されており、１又は複数のマーカー遺伝子が、Ｔ細胞マーカー遺伝子又は記憶Ｔ細胞マーカー遺伝子（例えば、Ｔエフェクター記憶細胞のマーカー）から選択されること並びに参照と比較して、対象から得た試料中の、１又は複数のマーカー遺伝子、タンパク質（単数又は複数）及び／又は細胞組成物の発現レベルに基づいて薬力学的活性を実証するとして治療を決定することであって、参照と比較した、１又は複数のマーカー遺伝子の発現レベルの増大が、ＯＸ４０アゴニスト治療の薬力学的活性を示すことによって、ＯＸ４０アゴニスト治療の薬力学的活性をモニタリングするための方法が、本明細書において提供される。マーカー遺伝子、タンパク質及び／又は細胞組成物の発現レベルは、本明細書において記載される１又は複数の方法によって測定され得る。
【０４２８】
本明細書において、「薬力学的（ＰＤ）活性」とは、対象への治療（例えば、ＰＤ−１軸アンタゴニスト治療と組み合わせたＯＸ４０アゴニスト）の効果を指し得る。ＰＤ活性の一例として、１又は複数の遺伝子の発現レベルの調節を挙げることができる。理論に拘束されようとは思わないが、遺伝子マーカーの発現を測定することなどによってＰＤ活性をモニタリングすることは、ＯＸ４０アゴニスト及びＰＤ−１軸アンタゴニストを調べる臨床治験の際に有利であり得ると考えられる。治療に対する応答、毒性などをモニタリングするために、ＰＤ活性をモニタリングすることが使用され得る。
【０４２９】
一部の実施態様では、１又は複数のマーカー遺伝子、タンパク質及び／又は細胞組成物の発現レベルは、治療（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせたＯＸ４０アゴニスト治療）を受けていない対象から得た試料を含み得る参照と比較され得る。一部の実施態様では、参照は、治療（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせたＯＸ４０アゴニスト治療）を受ける前の同一対象から得た試料を含み得る。一部の実施態様では、参照は、治療（例えば、ＰＤ−１軸アンタゴニストと組み合わせたＯＸ４０アゴニスト治療）を受けているその他の対象の１又は複数の試料から得た参照値を含み得る。例えば、患者の集団は治療され得、全体としての集団から、１又は複数の遺伝子の発現レベルの平均値、平均又は中央値が作製され得る。集団から得た、特徴を共有するがん（例えば、同一のがんの種類及び／又はステージ又はＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせたＯＸ４０アゴニストなどの共通の治療に対する曝露）から得た試料のセットが、臨床成績研究などを用いて研究され得る。このセットは、対象の試料が比較され得る参照、例えば、参照数を導くために使用され得る。本明細書に記載される参照のいずれも、ＰＤ活性をモニタリングするための参照として使用され得る。
【０４３０】
対象から得た白血球を含む試料中の、１又は複数のマーカー遺伝子、タンパク質（単数又は複数）（例えば、サイトカイン、例えば、ガンマインターフェロン）及び／又は細胞組成物の発現レベル（末梢血試料中の、例えば、Ｔｒｅｇの百分率及び／又はＴｒｅｇの絶対数；例えば、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞数）を測定することであって、対象が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を用いて治療されており、１又は複数のマーカー遺伝子が、Ｔ細胞マーカー遺伝子又は記憶Ｔ細胞マーカー遺伝子（例えば、Ｔエフェクター記憶細胞のマーカー）から選択されること並びに対象を、参照と比較して、対象から得た試料中の１又は複数のマーカー遺伝子、タンパク質（単数又は複数）及び／又は細胞組成物の発現レベルに基づいて治療に対して応答性又は非応答性として分類することであって、参照と比較した、１又は複数のマーカー遺伝子の発現レベルの増大が、ＯＸ４０アゴニスト治療に対する応答性又は応答性の欠如を示すことによって、ＯＸ４０アゴニスト治療に対する対象の応答性をモニタリングするための方法が、本明細書において提供される。マーカー遺伝子、タンパク質及び／又は細胞組成物の発現レベルは、本明細書に記載される１又は複数の方法によって測定され得る。
【０４３１】
一部の実施態様では、応答性をモニタリングするための参照は、治療（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせたＯＸ４０アゴニスト治療）を受けていない対象から得た試料を含み得る。一部の実施態様では、応答性をモニタリングするための参照は、治療（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせたＯＸ４０アゴニスト治療）を受ける前の同一対象から得た試料を含み得る。一部の実施態様では、応答性をモニタリングするための参照は、治療（例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせたＯＸ４０アゴニスト治療）を受けているその他の患者の１又は複数の試料から得た参照値を含み得る。例えば、患者の集団は治療され得、全体としての集団から、１又は複数の遺伝子の発現レベルの平均値、平均又は中央値が作製され得る。集団から得た、特徴を共有するがん（例えば、同一のがんの種類及び／又はステージ又はＯＸ４０アゴニストなどの共通の治療に対する曝露）から得た試料のセットが、臨床成績研究などを用いて研究され得る。このセットは、対象の試料が比較され得る参照、例えば、参照数を導くために使用され得る。本明細書に記載される参照のいずれも、ＰＤ活性をモニタリングするための参照として使用され得る。
【０４３２】
本開示の特定の態様は、試料中の１種若しくは複数の遺伝子又は１種若しくは複数のタンパク質の発現レベルの測定に関する。一部の実施態様では、試料は、白血球を含み得る。一部の実施態様では、試料は、末梢血試料（例えば、腫瘍を有する患者から得た）であり得る。一部の実施態様では、試料は、腫瘍試料である。腫瘍試料は、がん細胞、リンパ球、白血球、間質、血管、結合組織、基底板及び腫瘍と関連する任意のその他の細胞型を含み得る。一部の実施態様では、試料は、腫瘍浸潤白血球を含有する腫瘍組織試料である。一部の実施態様では、試料は、１又は複数の細胞型（例えば、白血球）を分離又は単離するよう処理され得る。一部の実施態様では、試料は、細胞型を分離又は単離することなく使用され得る。
【０４３３】
腫瘍試料は、制限するものではないが、生検、内視鏡又は外科的手順を含めた当技術分野で公知の任意の方法によって対象から得ることができる。一部の実施態様では、腫瘍試料は、凍結、固定（例えば、ホルマリン又は同様の固定液を使用することによる）及び／又はパラフィンワックス中への包理などの方法によって調製され得る。一部の実施態様では、腫瘍試料は、切片にされ得る。一部の実施態様では、新鮮腫瘍試料（すなわち、上記の方法によって調製されたもの）が使用され得る。一部の実施態様では、腫瘍試料は、ｍＲＮＡ及び／又はタンパク質完全性を保つために溶液中でインキュベーションすることによって調製され得る。
【０４３４】
一部の実施態様では、試料は、末梢血試料であり得る。末梢血試料は、白血球、ＰＢＭＣなどを含み得る。末梢血試料から白血球を単離するための当技術分野で公知の任意の技術が使用され得る。例えば、血液試料が、採取され得、試料のために、赤血球が溶解され得、白血球ペレットが単離され、使用され得る。別の例では、赤血球から白血球（例えば、ＰＢＭＣ）を分離するために、密度勾配分離が使用され得る。一部の実施態様では、新鮮末梢血試料（すなわち、上記の方法によって調製されていないもの）が使用され得る。一部の実施態様では、末梢血試料は、ｍＲＮＡ及び／又はタンパク質完全性を保つために溶液中でインキュベーションすることによって調製され得る。
【０４３５】
一部の実施態様では、治療に対する応答性とは、生存（全生存及び無増悪生存を含む）の延長；目的応答（完全応答又は部分応答を含む）をもたらすこと；又はがんの徴候若しくは症状の改善のうち任意の１又は複数を指し得る。一部の実施態様では、応答性とは、がん患者において腫瘍の状態、すなわち、応答、安定化又は進行を決定するためのＲＥＣＩＳＴガイドラインの公開されたセットに従う１又は複数の因子の改善を指し得る。これらのガイドラインのより詳細な考察については、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ等、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ２００９年；第４５巻：２２８−４７頁；Ｔｏｐａｌｉａｎら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ２０１２年；第３６６巻：２４４３−５４頁；Ｗｏｌｃｈｏｋ等、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎ  Ｒｅｓ  ２００９年；第１５巻：７４１２−２０頁；及びＴｈｅｒａｓｓｅ，Ｐ．等  Ｊ．  Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．第９２巻：２０５−１６頁（２０００年）を参照のこと。応答性対象とは、例えば、ＲＥＣＩＳＴ基準に基づいて１又は複数の因子によって、そのがん（単数又は複数）が改善を示す対象を指し得る。非応答性対象とは、例えば、ＲＥＣＩＳＴ基準に基づいて１又は複数の因子によって、そのがん（単数又は複数）が改善を示さない対象を指し得る。
【０４３６】
従来の応答基準は、新規病変の出現を含む最初の明らかな放射線学的進行が先行し得る遅延応答をもたらし得る免疫治療薬の抗腫瘍活性によって特徴を明らかにされるために適当ではない場合がある。したがって、新規病変の出現の可能性を説明し、その後の評価で放射線学的進行が確認されることを可能にする改変された応答基準が開発された。したがって、一部の実施態様では、応答性とは、免疫関連応答基準２（ｉｒＲＣ）に従う１又は複数の因子の改善を指し得る。例えば、Ｗｏｌｃｈｏｋ等、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎ  Ｒｅｓ  ２００９年；第１５巻：７４１２−２０頁を参照のこと。一部の実施態様では、新規病変は、規定の腫瘍量に加えられ、例えば、その後の評価での放射線学的進行についてたどられる。一部の実施態様では、非標的病変の存在は、完全応答の評価には含まれ、放射線学的進行の評価には含まれない。一部の実施態様では、放射線学的進行は、測定可能な疾患のみに基づいて決定され得、及び／又は最初に記述された日付から４週間を超える連続評価によって確認され得る。
【０４３７】
一部の実施態様では、応答性は、免疫活性化を含み得る。一部の実施態様では、応答性は、治療有効性を含み得る。一部の実施態様では、応答性は、免疫活性化及び治療有効性を含み得る。
【０４３８】
ＶＩ．製造品又はキット
本発明の別の一実施態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又はＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を含む製造品又はキットが提供される。一部の実施態様では、この製造品又はキットは、個体においてがんを治療する若しくはその進行を遅延させるため、又はがんを有する個体の免疫機能を増強するために、ＯＸ４０結合アゴニストと併せてＰＤ−１軸結合アンタゴニストを使用するための説明を含む添付文書をさらに含む。本明細書に記載されるＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又はＯＸ４０結合アゴニストのいずれかが、この製造品又はキット中に含まれ得る。
【０４３９】
一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）は、同じ容器中又は別々の容器中にある。適切な容器には、例えば、ビン、バイアル、バッグ及びシリンジが含まれる。この容器は、種々の材料、例えば、ガラス、プラスチック（例えば、ポリ塩化ビニル又はポリオレフィン）又は金属合金（例えば、ステンレス鋼又はハステロイ）から形成され得る。一部の実施態様では、この容器は、製剤を保持し、この容器上の又はこの容器に関連したラベルが、使用のための指示を示し得る。この製造品又はキットは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ及び使用説明書を伴う添付文書を含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を、さらに含み得る。一部の実施態様では、この製造品は、別の薬剤（例えば、化学療法剤及び抗腫瘍剤）のうち１又は複数をさらに含む。１又は複数の薬剤に適切な容器には、例えば、ビン、バイアル、バッグ及びシリンジが含まれる。
【０４４０】
本明細書は、当業者が本発明を実施することを可能にするのに十分であるとみなされる。本明細書に示され記載されたものに加えた、本発明の種々の修飾は、上述の説明から当業者に明らかとなり、添付の特許請求の範囲の範囲内である。本明細書で引用された全ての刊行物、特許及び特許出願は、全ての目的のために、その全内容が本明細書に出典明示により援用される。
【実施例】
【０４４１】
本発明は、以下の実施例を参照して、より完全に理解される。しかし、これらは、本発明の範囲を限定すると解釈すべきではない。本明細書に記載される実施例及び実施態様は、例示のみを目的としていること、及びそれに照らした種々の修飾又は変化が当業者に示唆され、本出願の精神及び範囲内並びに添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが理解される。
【０４４２】
材料及び方法
インビボ腫瘍モデル：ＣＴ２６及びＭＣ３８結腸直腸細胞株は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで維持された。ＣＴ２６研究のために、１０万個のＣＴ２６細胞を用いて、８−１０週齢の雌のＢａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）に右片側側腹部において皮下に接種した。ＭＣ３８研究のために、１０万個のＭＣ３８細胞を用いて、８−１０週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に右片側側腹部において皮下に接種した。腫瘍がおよそ１５０ｍｍ３の平均腫瘍量に達した時点で、マウスを採用し、治療群に無作為に分け、１日目の後に抗体治療を開始した。全ての動物研究をガイドライン及び動物福祉法(Animals Welfare Act)及び実験動物の管理と使用に関する指針(The Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)及びＩＡＣＵＣガイドラインに記載される規制に従って実施した。治療群は以下のとおりとした：１）コントロール抗体、１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶの第１の用量と、それに続く５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ、ＢＩＷｘ２、ｎ＝５；２）マウス抗マウスＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体（０Ｘ８６抗体に由来するラット抗マウスＯＸ４０可変領域を有するキメラ抗体及びマウスＩｇＧ２ａ  Ｆｃ。そのようなものとして、このマウス抗体は、制限するものではないが、ＡＤＣＣを含めたエフェクター機能可能である）、０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶの第１の用量と、それに続くＩＰ、ＴＩＷｘ２、ｎ＝５；３）マウス抗−ＰＤ−Ｌ１、１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶの第１の用量と、それに続く５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ、ＴＩＷｘ２、ｎ＝５；及び４）マウス抗マウスＯＸ４０モノクローナル抗体、０．１ｍｇ／ｋｇ  ＩＶの第１の用量と、それに続く、ＩＰ、ＴＩＷｘ２及びマウス抗−ＰＤ−Ｌ１、１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＶの第１の用量と、それに続く５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ  ＴＩＷｘ２、ｎ＝５。マウスを屠殺し、第１の用量の９日後に末梢血を回収した。
【０４４３】
抗体：全ての治療抗体は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで作製された。コントロール抗体は、抗ｇｐ１２０マウスＩｇＧ１、クローン１０Ｅ７．１Ｄ２とした。抗ＯＸ４０抗体は、クローンＯＸ−８６マウス−ＩｇＧ２ａとし（マウスＩｇＧ２ａ骨格にラット抗マウスＯＸ４０アゴニスト抗体ＯＸ−８６をクローニングすることによって作製された）、抗ＰＤＬ１は、クローン６Ｅ  １１．１．９マウスＩｇＧ１であった。投薬スケジュールは、図の説明文に示されるとおりとし、第１の又は単回用量は静脈内（ＩＶ）に投与し、その後の用量は、腹腔内に（ＩＰ）与えた。抗体は、ＰＢＳ又は２０ｍＭ酢酸ヒスチジン、２４０ｍＭスクロース、０．０２％  ポリソルベート２０、ｐＨ５．５のいずれかで希釈した。ＴＩＷは、１週間に投与３回を示し、ＢＩＷは、１週間に投与２回を示す。
【０４４４】
腫瘍処理及びフローサイトメトリー：腫瘍を回収し、剃刀の刃で刻み、その後、Ｃ−チューブ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ；  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）中、浸透プラットフォーム上で、５％ウシ胎児血清及び０．２５ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼＤ（Ｒｏｃｈｅ；  Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）及び０．１ｍｇ／ｍｌのＤＮアーゼＩ（Ｒｏｃｈｅ）を有するＲＰＭＩ−１６４０培地中、３７℃で１５分間消化した。インキュベート後、腫瘍をｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）で処理し、濾過し、洗浄して、単細胞懸濁液を作製した。細胞をＶｉ−Ｃｅｌｌカウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ；  Ｂｒｅａ、ＣＡ）でカウントした。
【０４４５】
末梢血を、フローサイトメトリーによってＴ細胞の活性化及び増殖について評価した。５０μＬの血液を、市販のＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＸＣＲ３に対する抗体（全て、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＫｉ６７に対する抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を製造業者の説明書によって用いて染色した。細胞を、ＰＢＳ中のＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ  Ｎｅａｒ−Ｉｎｆａｒｅｄ生存力色素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；  Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を用いて、氷上で３０分間まず染色し、次いで、洗浄した。次いで、細胞を、精製抗ＣＤ１６／−ＣＤ３２（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；  Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を用いてＦｃ受容体ブロックし、その後、ＰＢＳ＋０．５％  ＢＳＡ＋２ｍＭ  ＥＤＴＡバッファー中、氷上で３０分間で続いて表面染色した。ＰＤ−１及びＴ細胞のＯＸ４０発現を評価するために、細胞を以下のように染色した：ＰＤ１−ＦＩＴＣ、ＣＤ３−ＰｅｒＣｐ．Ｃｙ５．５、ＣＤ４−ＰＥ−Ｃｙ７、ＣＤ８  Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、ＣＤ４５  ｖ５００（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；ＯＸ４０  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、クローン  １Ｈ１）。種々の細胞型のＰＤＬ１発現を評価するために、染色は以下のとおりとした：ＣＤ１１ｂ−ＦＩＴＣ、Ｇｒ−１  ＰＥ−Ｃｙ７、ＣＤ８  Ａｌｅｘａ  ７００、ＣＤ４５  ｖ５００、ＣＤ４−ＰｅｒＣｐ．Ｃｙ５．５  （ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）；ＰＤＬ１−ビオチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、クローン６Ｆ８．２．５）と、それに続くストレプトアビジン−ＰＥ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。Ｆｏｘｐ３＋Ｔ制御性細胞集団を評価するために、細胞を、ＣＤ４５−ＰＥ−Ｃｙ７、ＣＤ４  ＰｅｒＣｐ−Ｃｙ５．５  （ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いてまず表面染色し、次いで、１×ｆｏｘｐ３固定／透過処理バッファー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ；  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）中、４Ｃで一晩固定した。次いで、細胞を１×ｆｏｘｐ３透過処理バッファー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中で透過処理し、Ｆｏｘｐ３−ＦＩＴＣ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて染色した。染色された細胞を、Ｆｏｒｔｅｓｓａ又はＦＡＣＳ  Ｃａｎｔｏ  ＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）でＦＡＣＳ  Ｄｉｖａソフトウェアを使用して獲得し、続いて、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで分析した。
【０４４６】
腫瘍摘出及びＦｌｕｉｄｉｇｍ発現分析：記載されたように、ＵＢＣ又はＮＳＣＬＣのアーカイブの腫瘍に由来するＦＦＰＥからＲＮＡを抽出した（Powles,T.等(2014年)Nature第515巻:558-62頁;Herbst,R.S.等(2014年)Nature第515巻:563-7頁）。手短には、腫瘍ＦＦＰＥ切片を、新生物組織を濃縮するよう大きく切り取り、腫瘍溶解バッファー及びプロテイナーゼＫを使用して組織を溶解して、完全な消化及び核酸の放出を可能にする。Ｈｉｇｈ  Ｐｕｒｅ  ＦＦＰＥ  ＲＮＡ  Ｍｉｃｒｏキット（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を製造業者のプロトコールに従って使用してＲＮＡを単離した。
【０４４７】
遺伝子−発現分析を、先に記載されたようにＢｉｏＭａｒｋ  ＨＤリアルタイムＰＣＲプラットフォーム（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）を使用して実施した（Ｓｈａｍｅｓ，Ｄ．Ｓ．等（２０１３年）ＰＬｏＳ  ＯＮＥ  ８：ｅ５６７６５）。発現パネルにおける全てのＴａｑ−ｍａｎアッセイは、ＦＡＭ−ＭＧＢであり、オーダーメイド又は特注設計のいずれかでＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓを通して注文され、４種の参照遺伝子：ＳＰ２、ＧＵＳＢ、ＴＭＥＭ５５Ｂ及びＶＰＳ３３Ｂを含む。各試料について４種の参照遺伝子（ＳＰ２、ＧＵＳＢ、ＴＭＥＭ５５Ｂ及びＶＰＳ３３Ｂ）のＣｔ値の幾何中央値を算出し、デルタＣｔ（ＤＣｔ）法を使用して以下のように発現レベルを決定した：Ｃｔ（標的遺伝子）２ＧｅｏＭｅｄｉａｎＣｔ（参照遺伝子）。研究での患者にわたる中央値ｍＲＮＡ発現レベル（イムノチップ（ｉＣｈｉｐ）によって測定されるような）を、カットオフとして使用して、高対低発現分類を導いた。Ｐ値は、ｔ検定によって決定した。
【０４４８】
ＰＤ−Ｌ１免疫組織化学（ＩＨＣ）：腫瘍試料又はがん細胞株のホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）切片を分析した。
【０４４９】
ホルマリン固定パラフィン包埋組織切片を脱パラフィンし、その後、抗原回復、ブロッキング及び一次抗ＰＤ−Ｌ１抗体ととものインキュベーションを行った。二次抗体ととものインキュベーション及び酵素的発色後、切片を対比染色し、一連のアルコール及びキシレン中で脱水し、その後、カバースリップを被せた。
【０４５０】
ＩＨＣには以下のプロトコールを使用した。４ｍｍ厚のホルマリン固定し、パラフィン包埋した（ＦＦＰＥ）組織切片を、４．３ｍｇ／ｍｌの濃度を使用する自動染色プラットフォームで抗ヒトＰＤ−Ｌ１ウサギモノクローナル抗体を用いてＰＤ−Ｌ１について染色し、ジアミノベンジジンによってシグナル可視化し、切片を、ヘマトキシリンを用いて対比染色した。ＰＤ−Ｌ１発現を、以下のスコアリングスキームを使用して腫瘍浸潤免疫細胞で評価した：
2017501167.tif 000008
【０４５１】
Ｖｅｎｔａｎａ  Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ  ＸＴ又はＢｅｎｃｈｍａｒｋ  Ｕｌｔｒａシステムを使用し、以下の試薬及び材料を使用してＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣ染色を実施した：
一次抗体：抗ＰＤ−Ｌ１ウサギモノクローナル一次抗体
試料の種類：種々の染色強度の、組織試料及びコントロール細胞ペレットのホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）切片
手順の種類：Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ：ＢｅｎｃｈＭａｒｋ  ＸＴ又はＢｅｎｃｈｍａｒｋ  Ｕｌｔｒａ
エピトープ回復条件：細胞コンディショニング、標準１（ＣＣ１、Ｖｅｎｔａｎａ、カタログ＃９５０−１２４）
一次抗体条件：１／１００、６．５μｇ／ｍｌ／３６℃で１６分
希釈剤：抗体希釈バッファー（担体タンパク質及びＢｒｉｇ−３５を含有するＴｒｉｓ緩衝生理食塩水）
【０４５２】
陰性コントロール：６．５μｇ／ｍｌのナイーブウサギＩｇＧ（細胞シグナル伝達）又は希釈剤単独
検出：Ｏｐｔｉｖｉｅｗ又はＵｌｔｒａｖｉｅｗ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＤＡＢ検出キット（Ｖｅｎｔａｎａ）及び増幅キット（適当な場合には）を製造業者説明書（Ｖｅｎｔａｎａ）に従って使用した。
対比染色：ＶｅｎｔａｎａヘマトキシリンＩＩ（カタログ＃７９０−２２０８）／及びＢｌｕｉｎｇ試薬（カタログ＃７６０−２０３７）（それぞれ、４分及び４分）
【０４５３】
Ｂｅｎｃｈｍａｒｋプロトコールは以下のとおりとした：
１．パラフィン（選択された）
２．脱パラフィン化（選択された）
３．細胞コンディショニング（選択された）
４．コンディショナー＃１（選択された）
５．標準ＣＣ１（選択された）
６．Ａｂインキュベーション温度（選択された）
７．３６Ｃ  Ａｂ  Ｉｎｃ．（選択された）
８．滴定（選択された）
９．自動分配（一次抗体）、（１６分間）インキュベートする
１０．対比染色（選択された）
１１．１滴の（ヘマトキシリンＩＩ）の適用（対比染色）、カバーガラスを適用し、（４分）インキュベートする
１２．後対比染色（選択された）
１３．１滴の（ＢＬＵＩＮＧ試薬）を適用し（後対比染色）、カバーガラスを適用し、（４分）インキュベートする
１４．セッケン水中でスライドを洗浄して、オイルを除去する
１５．水でスライドをすすぐ
１６．９５％エタノール、１００％エタノール−キシレン（Ｌｅｉｃａ自動染色器プログラム＃９）によってスライドを脱水する
１７．カバーガラスを被せる
【０４５４】
結果
ＯＸ４０は、活性化されたＣＤ４Ｔ細胞（Ｔｅｆｆ）及びＴ制御性（Ｔｒｅｇ）細胞で発現される共刺激分子であると知られている。ＯＸ４０は、ナイーブＴ細胞では構成的に発現されないが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合後に誘導される。ＴＣＲ刺激の存在下でのＯＸ４０の連結は、Ｔｅｆｆ細胞の活性化の増強及びＴｒｅｇ細胞の阻害の二重機序によってＴエフェクター細胞機能を増強することが知られている。抗ＯＸ４０治療は、インビトロＴｒｅｇ抑制アッセイにおいてＴｒｅｇ活性を低減するとわかった。これらの結果は、ＯＸ４０アゴニスト治療が、いくつかの重大なＴ細胞機能を調節できることを実証する。
【０４５５】
ＰＤ−Ｌ１シグナル伝達の阻害は、がん（例えば、腫瘍免疫）並びに急性及び慢性（例えば、持続性）感染の両方を含む感染の治療のためにＴ細胞免疫性を増強する手段として提案されている。
【０４５６】
本発明者らは、腫瘍内Ｔ細胞が、ＰＤ−１及びＯＸ４０を発現するか否かを調べた。図１に示されるように、腫瘍内ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＰＤ−１などの阻害性受容体を発現したが、これらの細胞の大きな割合はまた、ＯＸ４０も発現した。この結果は、Ｔエフェクター細胞のＯＸ４０刺激が、Ｔ細胞上で発現されるＰＤ−１及びその他の阻害性受容体の効果を相殺し得ることを示唆する。
【０４５７】
抗ＯＸ４０アゴニスト抗体（単剤）を用いる治療は、ＣＤ４５＋細胞総数に対する腫瘍内Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の割合を大幅に低下させ（ＣＤ４５は、白血球などの全ての造血細胞を規定する；図２Ａ）並びに腫瘍内Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの絶対数を大幅に低下させた（図２Ｂ）。さらに、抗ＯＸ４０アゴニスト抗体及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体の組合せを用いる治療は、ＣＤ４５＋細胞の総数に対する腫瘍内Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ細胞の割合（図２Ａ）並びに腫瘍内Ｆｏｘｐ３＋Ｔｒｅｇの絶対数（図２Ｂ）を大幅に低下させた。これらの結果は、ＯＸ４０アゴニストが抗ＰＤＬ１アンタゴニストと組み合わせて投与される場合には、腫瘍内Ｆｏｘｐ３＋ＴｒｅｇのＯＸ４０アゴニスト媒介性低下が維持されることを実証する。
【０４５８】
本発明者らは、ＰＤ−Ｌ１発現に対するＯＸ４０アゴニスト治療の効果を調べた。抗ＯＸ４０アゴニストを用いる治療は、腫瘍細胞及び腫瘍内骨髄細胞においてＰＤ−Ｌ１発現を大幅に増大し、これは、ＰＤ−Ｌ１が、ネガティブフィードバック法で抗ＯＸ４０有効性を制限し得ることを示唆した（図３Ａ＆Ｂ）。理論に捉われようとは思わないが、これらの結果は、ＯＸ４０アゴニストを用いる治療が、ＰＤ−Ｌ１発現を増大させたので、ＯＸ４０アゴニストを用いる治療が、ＰＤ−１軸阻害薬を用いる治療を増強し得ることを示唆する。臨床データは、ＰＤ１軸アンタゴニスト（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト抗体）に対する応答のために濃縮するにつれて、ＰＤＬ１発現の増大を伴う。
【０４５９】
抗ＯＸ４０アゴニスト抗体及び抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体を用いる治療は、ＣＴ２６及びＭＣ３８結腸直腸がん同系腫瘍モデルにおいて相乗的な組合せの有効性を実証した（図４Ａ＆Ｂ、５Ａ＆Ｂ）。個体腫瘍量測定値の分析（各実験において個体マウスから得た；図４Ｂ、５Ｂ）は、組合せで治療された動物は、いずれかの薬剤（ＯＸ４０アゴニスト、ＰＤＬ１アンタゴニスト）単独を用いて治療された動物と比較して高頻度で、大幅な腫瘍の大きさの低減を示すことを示した。言い換えれば、部分及び完全応答を有する動物の頻度は、いずれかの薬剤単独を用いて治療された動物と比較して、組合せで治療された動物において大幅に高い。
【０４６０】
組合せで治療されたＣＴ２６マウスから採取された末梢血の分析は、エフェクター細胞増殖及び炎症性Ｔ細胞マーカーの増大を示した（図９Ａ、Ｂ、Ｃ＆Ｄ）。ＣＤ８＋Ｔ細胞（図９Ａ）、Ｔｒｅｇ細胞（図９Ｂ）の増殖のレベル、血漿インターフェロンガンマレベル（図９Ｃ）及び活性化Ｔ細胞（図９Ｄ）を調べた。組合せアームにおける（いずれかの単剤アームに対して）増殖（Ｋｉ６７）、血漿インターフェロンガンマ及び炎症性マーカー（Ｔｂｅｔ、ＣＸＣＲ３）の増大は、ａＰＤＬ１（チェックポイント遮断）及びＯＸ４０（共刺激）活性の相乗作用を示した。
【０４６１】
具体的には、増殖ＣＤ８＋Ｔ細胞（ｋｉ６７＋／総ＣＤ８＋Ｔ細胞の百分率として表される）のレベルは、ＯＸ４０アゴニスト又はＰＤＬ１アンタゴニスト単独を用いた治療に対して、ＯＸ４０アゴニスト及びＰＤ−Ｌ１アンタゴニストの組合せを用いて治療された動物において大幅に増大した（図９Ａ）。組合せで治療された動物における増殖ＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、単剤で治療された集団の相加作用よりも高く、ＰＤ−１軸阻害と組み合わせたＯＸ４０アゴニスト治療の相乗作用は、末梢血マーカー及び細胞の分析によって検出され得ることを実証した。
【０４６２】
さらに、ＯＸ４０アゴニスト単剤を用いる治療を用いた場合に末梢血Ｔｒｅｇの低減が観察され、末梢血Ｔｒｅｇの低減は、組合せ（ＯＸ４０アゴニスト及びＰＤＬ１アンタゴニストの）療法アームにおいて維持された（図９Ｂ）。ＯＸ４０アゴニスト及びＰＤＬ１アンタゴニストの組合せを用いた場合に、血漿ガンマインターフェロンの増大が観察された（図９Ｃ）。
【０４６３】
ケモカイン受容体ＣＸＣＲ３は、ＣＸＣケモカイン受容体ファミリー中のＧαｉタンパク質共役受容体である。ＣＸＣＲ３の２種の変異体がある：ＣＸＣＲ３−Ａは、ＣＸＣケモカインＣＸＣＬ９（ＭＩＧ）、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）及びＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ）と結合するが、ＣＸＣＲ３−Ｂはまた、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０及びＣＸＣＬ１１に加えてＣＸＣＬ４とも結合できる(Clark-Lewis,I.等(2003年)。Biol. Chem.第278巻(l):289-95頁)。ＣＸＣＲ３は、活性化されたＴリンパ球及びＮＫ細胞及び一部の上皮細胞で主に発現される。ＣＸＣＲ３及びＣＣＲ５は、Ｔｈ１細胞で選択的に発現され、エフェクター記憶ＣＤ８Ｔ細胞で上方制御される(Groom,J.R.及びLuster,A.D.(2011年) Exp. Cell Res.第317巻(5):620-31頁)。ＣＸＣＲ３は、白血球輸送を調節できる。ケモカインのＣＸＣＲ３との結合は、種々の細胞応答、最も著しくは、炎症性細胞のインテグリン活性化、細胞骨格変化及び走化性遊走を誘導する(Groom,J.R.及びLuster,A.D.(2011年) Exp.Cell Res.第317巻(5):620-31頁)。
【０４６４】
活性化Ｔ細胞（具体的に言えば、ＣＸＣＲ３マーカーを使用して決定された活性化記憶Ｔｅｆｆ細胞）のレベルは、ＯＸ４０アゴニスト又はＰＤＬ１アンタゴニスト単独を用いる治療に対して、ＯＸ４０アゴニスト及びＰＤ−Ｌ１アンタゴニストの組合せを用いて治療された動物において大幅に増大した（図９Ｄ）。組合せで治療された動物におけるＴ記憶エフェクター細胞（ＣＸＣＲ３＋）のレベルは、単剤で治療された集団の相加作用よりも高く、ＰＤ−１軸阻害と組み合わせたＯＸ４０アゴニスト治療の相乗作用は、末梢血マーカー及び細胞の分析によって検出され得ることを実証した。併用治療アームにおけるＣＤ８Ｔ細胞での増殖（Ｋｉ６７）及び炎症性マーカー（ＣＸＣＲ３）の増大は、抗ＰＤＬ１（チェックポイント遮断）及び抗ＯＸ４０（共刺激）活性の相乗作用による細胞傷害性の増強を示唆し得る。
【０４６５】
さらに、併用治療効果は、例えば、いずれかの薬剤単独で治療された試料に対して、組合せによって治療された腫瘍試料においてｒｔＰＣＲ分析された（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）、エフェクター及び炎症性Ｔ細胞マーカーの増大によって検出され得る。例えば、Ｔｒｅｇ（Ｆｏｘ３ｐ）、ＣＤ８＋Ｔｅｆｆ（ＣＤ８ｂ）及び活性化Ｔ細胞のマーカー（例えば、Ｔｂｅｔ、ＣＸＣＲ３、例えば、インターフェロンガンマ応答関連遺伝子）が分析され得る。
【０４６６】
ＣＴ２６結腸直腸がん同系腫瘍モデルにおけるＯＸ４０アゴニスト抗体治療の用量応答効果を調べるために実験を実施した。抗ＯＸ４０アゴニスト抗体単剤治療は、用量応答性を示す（図６Ａ、Ｂ）。０．１ｍｇ／ｍｌ用量は、最大下有効性を示し、さらなる併用治療実験のために選択した。
【０４６７】
図７Ａ及びＢは、いずれかの薬剤単独を用いる治療と比較した、抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体と組み合わせた治療量以下の用量の抗ＯＸ４０アゴニスト抗体を用いる治療の結果を示す。相乗的な組合せの有効性が観察され、これは、ＰＤ−１軸アンタゴニストと組み合わせて治療される場合には、ＯＸ４０アゴニスト抗体最大有効用量はより低い場合があることを示唆した。
【０４６８】
図８Ａ及びＢは、いずれかの薬剤単独を用いる治療と比較した、抗ＰＤＬ１アンタゴニスト抗体と組み合わせた、治療量以下のレベルの抗ＯＸ４０アゴニスト抗体の単回用量を用いる治療の結果を示す。相乗的な組合せの有効性が観察され、これは、ＯＸ４０アゴニスト抗体が、ＰＤ−１軸アンタゴニストと組み合わせて提供される場合には、ＯＸ４０アゴニスト抗体最大有効用量は、より低い場合があることを示唆した。
【０４６９】
図１０は、ＯＸ４０発現の、尿路上皮膀胱がん（ＵＢＣ）及び非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）を有するヒト患者から得たがん試料におけるＰＤＬ１診断状態との関連を示す。組織試料は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ＭＰＤＬ３２８０Ａを用いる第１相臨床治験に参加している患者から得た。腫瘍浸潤性免疫細胞（ＩＣ）のＰＤ−Ｌ１バイオマーカー状態は、本明細書において開示されるようなＩＨＣを使用して決定した。ＯＸ４０発現レベルは、ｒｔＰＣＲ分析（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）を使用して決定した。ＵＢＣでは、０又は１のＰＤＬ１  ＩＨＣ状態を有する患者においてＯＸ４０発現が観察された。ＯＸ４０発現のレベルは、ＰＤＬ１  ＩＨＣ状態と相関しており、ＰＤＬ１発現の増大は、ＯＸ４０発現の増大と相関していた。ＮＳＣＬＣでは、ＩＨＣによるＰＤＬ１発現が低い又はない患者において（並びに２及び３のＰＤＬ１  ＩＨＣ状態を有する試料において）、ＯＸ４０の発現が観察された。これらの結果は、（ａ）ＰＤＬ１  ＩＨＣ０及び／又は１状態を有する患者におけるＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を用いる併用治療を用いた場合の応答の改善の可能性、（ｂ）先のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト治療に応答しない患者における、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を用いる併用治療を用いた場合の応答の改善の可能性及び（ｃ）ＰＤＬ１  ＩＨＣ２及び／又は３状態を有する患者における、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及びＯＸ４０結合アゴニスト（例えば、抗ヒトＯＸ４０アゴニスト抗体）を用いる併用治療を用いた場合の応答の改善の可能性を示唆する。
【０４７０】
がんの治療において使用するための抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＰＤＬ３２８０Ａを評価する臨床研究の結果は、ＰＤ−Ｌ１発現が、ＭＰＤＬ３２８０Ａに対する臨床応答と関連していることを示唆した。腫瘍浸潤性免疫細胞ＰＤＬ１発現の、治療応答との関連は、腫瘍細胞ＰＤＬ１発現の場合よりも強く現れるとわかった。腫瘍浸潤性免疫細胞は、ＩＦＮｇ発現に対してより感受性であり得、療法の前に既存のＴ細胞応答を抑制するよう選択的に作用し得る(Herbst,R.S.等(2014年)Nature第515巻:563-7頁)。理論に捉われようとは思わないが、ＯＸ４０アゴニスト治療は、ＩＦＮｇ発現を増大し得、腫瘍浸潤性免疫細胞におけるＰＤＬ１発現の増強及びＰＤ−１軸結合アンタゴニスト治療に対する応答性の同時の増大につながると考えられる。したがって、ＯＸ４０結合アゴニスト及びＰＤ−１軸結合アンタゴニストを含む併用治療は、より低いＰＤＬ１バイオマーカー状態を有する患者の治療において有用であり得る。
【０４７１】
ＩＨＣによるＰＤ−Ｌ１発現のスコアリング：腫瘍試料中のＰＤ−Ｌ１発現の有無を、ＩＨＣによってヒトホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織においてＰＤ−Ｌ１を検出できる抗ＰＤ−Ｌ１特異的抗体を使用して評価した。腫瘍試料中のＰＤ−Ｌ１の相対発現を測定し、定量化するために、ＰＤ−Ｌ１  ＩＨＣスコアリングシステムを、腫瘍細胞及び腫瘍浸潤性免疫細胞においてＰＤ−Ｌ１特異的シグナルを測定するために開発した。免疫細胞は、リンパ球及び／又はマクロファージ／組織球形態学を有する細胞として規定される。
【０４７２】
腫瘍細胞染色は、任意の強度の膜染色を示す全ての腫瘍細胞のパーセントとして表される。浸潤性免疫細胞染色は、任意の強度の染色を示す免疫細胞によって占められる総腫瘍面積のパーセントとして定義される。総腫瘍面積は、主腫瘍塊に直接隣接する、及びそれと近接する免疫浸潤物の面積を含む、悪性細胞並びに腫瘍関連間質を包含する。さらに、浸潤性免疫細胞染色は、全ての腫瘍浸潤性免疫細胞のパーセントとして定義される。
【０４７３】
腫瘍組織においてワイドダイナミックレンジのＰＤ−Ｌ１染色強度があった。細胞内局在性にかかわらず、シグナルはまた、強い、中程度、弱い又は陰性染色として分類される。
【０４７４】
図１１に示されるように、陰性シグナル強度は、ＨＥＫ−２９３細胞を使用して例示されるように任意の検出可能なシグナルがないことを特徴としていた（図１１Ａ）。対照的に、陽性シグナル強度は、組換えヒトＰＤ−Ｌ１を用いてトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞を使用して例示されるように、金から暗褐色膜染色を特徴としていた（図１１Ｂ−Ｄを参照のこと）。最後に、陽性シグナル強度はまた、金から暗褐色膜染色によって特徴を明らかにされる、胎盤栄養膜の染色（図１１Ｅ）及び扁桃陰窩の面積における（図１１Ｆ）及びしばしば、膜パターンにおける強い染色を特徴としている。腫瘍組織では、ＰＤ−Ｌ１陰性試料は、２０×対物レンズを使用して評価された場合に、検出可能なシグナルを有さない、又は弱い細胞質バックグラウンド染色のみと認定された。対照的に、ＰＤ−Ｌ１陽性試料は、腫瘍細胞及び／又は浸潤性免疫細胞において主に膜染色を実証した。低倍率で容易に認識される、細かい、淡褐色の膜を有する弱から、暗褐色の厚い膜を有する強まで可変強度を有するＰＤ−Ｌ１染色が観察された。
【０４７５】
３種の代表的ＰＤ−Ｌ１陽性腫瘍試料が、図１２に示されている。トリプルネガティブ乳がんについて、ほとんどの腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１について強陽性であり、膜及び細胞質染色の組合せを示すことが観察された（１００×倍率）（図１２Ａ）。悪性メラノーマについては、免疫細胞のクラスターが観察され、その一部は、ＰＤ−Ｌ１について膜染色を有し、稀な腫瘍細胞（矢印）がＰＤ−Ｌ１について膜染色を有していた（４００×倍率）（図１２Ｂ）。ＮＳＣＬＣ、腺癌については、ＰＤ−Ｌ１について強い染色を有する免疫細胞のクラスターが観察され、いくつかの腫瘍細胞（矢印）は、ＰＤ−Ｌ１について膜及び／又は細胞質染色を有する（４００×倍率）（図１２Ｃ）。
【０４７６】
陽性の場合における染色は、空間分布及び強度に関して限局性である傾向があった。任意の強度の染色を示す腫瘍又は免疫細胞の百分率を、視覚的に推定し、ＰＤ−Ｌ１状態を決定するために使用した。アイソタイプ陰性コントロールを使用して、試験試料中のバックグラウンドの存在を評価した。
【０４７７】
染色は、Ｈ＆Ｅのための１つの連続組織切片、抗ＰＤ−Ｌ１のための第２の連続組織切片及びアイソタイプ陰性コントロールのための第３の連続組織切片を必要とした。ＰＤ−Ｌ１がトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞株コントロール又は扁桃腺スライドを、アッセイ特異性のための実施コントロール及び参照として使用した。
【０４７８】
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【０４７９】
上記で示される表は、ＰＤＬ１状態を決定するためにＰＤＬ１染色基準を使用することの一実施態様を記載する。別の実施態様では、ＩＨＣ０及び／又は１のＩＨＣスコアを有する試料は、ＰＤＬ１陰性と考えられ得るが、ＩＨＣ２及び／又は３のＩＨＣスコアを有する試料は、ＰＤＬ１陽性と考えられ得る。一部の実施態様では、腫瘍自体でのＰＤＬ１発現（例えば、ＰＤＬ１染色）が評価される。
【０４８０】
いくつかの場合には、ＰＤ−Ｌ１陽性状態は、腫瘍細胞、関連腫瘍内及び近接する腫瘍周囲線維形成性間質によって占められる腫瘍面積の最大５０％における、腫瘍細胞又は腫瘍浸潤性免疫細胞のいずれかにおける任意の強度の識別可能なＰＤ−Ｌ１染色の存在を含み得る。したがって、ＰＤ−Ｌ１陽性染色は、任意の強度の染色を示す腫瘍細胞又は腫瘍浸潤性免疫細胞の５０％をも含む。
【０４８１】
抗ＰＤ−Ｌ１を用いて染色された評価可能なスライドを、上記のように評価した。陰性染色強度は、あらゆる検出可能なシグナル又は淡灰色−青を特徴とする（褐色又は黄褐色ではなく）シグナルがないこと及び膜増強がないことによって特徴を明らかにされた。膜染色がなかった（例えば、不在）場合には、陰性とした。
【０４８２】
理解の明確性を目的として例示及び実施例によって、前記の発明を幾分か詳細に説明したが、説明及び実施例は、本発明の範囲を制限すると考えられてはならない。本明細書に引用される全ての特許及び科学文献の開示内容は、全内容が出典明示により明確に援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ−Ｄ】
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【図１０】
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【図１１Ａ−Ｆ】
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【図１２Ａ−Ｃ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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