(57)【要約】本発明は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）が、免疫系および免疫応答をモジュレートするという独創的な発見に関する。具体的には、本発明は、多機能性Ｔ細胞の生存およびウイルスクリアランスを増加させる、ＰＳＧＬ−１アゴニストおよびアンタゴニストを提供する。本発明は、ＰＳＧＬ−１モジュレーターを使用して、感染性疾患、がんならびに免疫疾患および障害ならびに炎症性疾患および障害を処置する方法をさらに提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、Ｔ細胞媒介性疾患または障害を処置する方法。
【請求項２】
前記ＰＳＧＬ−１モジュレーターが、アゴニストまたはアンタゴニストである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｔ細胞媒介性疾患または障害が、感染性疾患、がん、自己免疫性障害および炎症性障害からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記感染性疾患が、ボツリヌス中毒、腺ペスト、カリシウイルス感染（ノロウイルスおよびサポウイルス）、水痘、クラミジア、コレラ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染、感冒（急性ウイルス鼻咽喉炎；急性コリーザ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、デング熱、ジフテリア、エボラ出血熱、淋病、手足口病（ＨＦＭＤ）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ感染、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、単純ヘルペス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染、エプスタイン・バーウイルス感染性単核症（Ｍｏｎｏ）、インフルエンザ（ｆｌｕ）、レジオネラ症（レジオネラ病）、ハンセン病、ライム病（ライムボレリア症）、マラリア、マールブルグ出血熱（ＭＨＦ）、麻疹、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、髄膜炎、ムンプス、百日咳（Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（百日咳（Ｗｈｏｏｐｉｎｇ  ｃｏｕｇｈ））、ペスト、進行性多巣性白質脳症、狂犬病、ライノウイルス感染、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ）、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、疥癬、敗血症、細菌性赤痢（細菌赤痢）、帯状疱疹（帯状ヘルペス）、天然痘（痘瘡）、梅毒、破傷風（開口障害）、結核、腸チフス熱、渓谷熱、ウイルス性肺炎、ウエストナイル熱および黄熱からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記がんが、前立腺、結腸、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頸部、神経（中枢および末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟部組織、脾臓、胸部および尿生殖路からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記自己免疫性障害が、アジソン病、筋萎縮性側索硬化症、クローン病、クッシング症候群、１型糖尿病、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、全身性エリテマトーデス、移植片拒絶および血管炎からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記ＰＳＧＬ−１モジュレーターが、アゴニストであり、前記Ｔ細胞媒介性疾患または障害が、自己免疫性疾患または障害あるいは炎症性疾患または障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＰＳＧＬ−１モジュレーターが、アンタゴニストであり、前記Ｔ細胞媒介性疾患または障害が、がんまたは感染性疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ＰＳＧＬ−１モジュレーターが、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＣＤ４＋依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が、増加する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ウイルス特異的Ｔ細胞が、増加する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ＴｒｅｇおよびＤＣ応答が、増加する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ＦｏｘＰ３、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βおよび／またはＭＨＣクラスＩＩの発現が、増加する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７のＣＤ８＋分泌が、増加する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
ＰＤ−１、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の発現が、減少または増加する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ＣＤ２５およびＴ−ｂｅｔの発現が、増加する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
ウイルスクリアランスが、増加する、請求項４に記載の方法。
【請求項１９】
ＰＳＧＬ−１モジュレーターを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、Ｔ細胞応答を誘発する方法。
【請求項２０】
前記ＰＳＧＬ−１モジュレーターが、アゴニストまたはアンタゴニストである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記被験体が、感染性疾患、がん、自己免疫性障害または炎症性障害を有する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＰＳＧＬ−１モジュレーターが、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ＣＤ４＋依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が、増加する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
ＴｒｅｇおよびＤＣ応答が、増加する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
ＦｏｘＰ３、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βおよび／またはＭＨＣクラスＩＩの発現が、増加する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７のＣＤ８＋分泌が、増加する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
ＰＤ−１、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の発現が、減少または増加する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２９】
ＣＤ２５およびＴ−ｂｅｔの発現が、増加する、請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、Ｔ細胞機能を回復させる方法。
【請求項３１】
前記ＰＳＧＬ−１モジュレーターが、アゴニストまたはアンタゴニストである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記被験体が、感染性疾患、がん、自己免疫性障害または炎症性障害を有する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記ＰＳＧＬ−１モジュレーターが、抗体、小分子、タンパク質または核酸である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ＣＤ４＋依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が、増加する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
ＴｒｅｇおよびＤＣ応答が、増加する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
ＦｏｘＰ３、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βおよび／またはＭＨＣクラスＩＩの発現が、増加する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３８】
ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７のＣＤ８＋分泌が、増加する、請求項３０に記載の方法。
【請求項３９】
ＰＤ−１、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の発現が、減少または減少する、請求項３０に記載の方法。
【請求項４０】
ＣＤ２５およびＴ−ｂｅｔの発現が、増加する、請求項３０に記載の方法。
【請求項４１】
Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターと、医薬キャリアとを含む、医薬組成物。
【請求項４２】
前記ＰＳＧＬ−１モジュレーターが、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項４２に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．  §１１９（ｅ）の下の、２０１４年７月０８日に出願された米国第６２／０２２，１９１号に対する優先権の利益を主張するし、その内容の全体が参考として本明細書に援用される。
【０００２】
本発明は、一部には、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）によって授与された助成金番号：Ｐ０１ＡＩ０４６５３０−１４、Ｒ０１ＡＩ０６８９５−０１Ａ１およびＰ３０ＣＡ０３０１９９−３２の下、政府支援によってなされた。アメリカ合衆国政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、全般的には、抗体、より具体的には、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターの使用ならびに免疫応答をモジュレートし、感染性疾患、がんならびに免疫および炎症関連疾患および障害を処置するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
Ｔリンパ球による免疫応答は、微生物に対する宿主保護にとって重大な意味を持つが、慢性感染において機能不全になる場合がある。ＨＩＶならびにＢ型肝炎およびＣ型肝炎等、慢性ウイルス感染により、Ｔ細胞応答は、進行性機能喪失を有し、多くのＴ細胞が、アポトーシスを起こす。残るＴ細胞は、機能不全状態、すなわち、表現型疲弊（ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ  ｅｘｈａｕｓｔｉｏｎ）において停止している。理解が不完全ではあるが、いくつかの根底にある機構が、クローン１３株（Ｃｌ１３）による慢性感染のリンパ球性脈絡髄膜炎（ｃｈｏｄｏｍｅｎｉｎｇｉｔｉｔｓ）ウイルス（ＬＣＭＶ）モデルにおけるＴ細胞疲弊について同定された。このモデルにおいて、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、抗原およびＩ型インターフェロンに慢性的に曝露されており、ＰＤ−１、ＬＡＧ−３、ＣＤ１６０およびＢＴＬＡを含む免疫阻害性受容体の（ｉｆ）発現が上方調節される。細胞は、運動性も失い、転写調節変更を示し、阻害性サイトカイン、ＩＬ−１０およびＴＧＦβの産生増加を有する。時間と共に、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、その増殖ポテンシャル、細胞傷害性機能ならびにＩＬ−２、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γを産生する能力を失う。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、阻害性受容体の上方調節および機能喪失により同様に変更された分化を呈する。重要なことに、ウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞は、疲弊したＣＤ８＋Ｔ細胞をレスキューすることができ、これに、ウイルスクリアランスを媒介させることができる。ＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＬ−２およびＩＬ−２１の産生は、欠陥のあるＣＤ８＋Ｔ細胞応答の反転に寄与すると考えられ、適切なエフェクター分化に必要な鍵となるサイトカインが、慢性感染後に限定的になることを暗示する。したがって、数種類の統合されたプロセスの相互関係が組み合わさり、慢性ウイルス感染を排除する免疫系の能力を無効にする。
【０００５】
皮膚、肺および腎臓を含む多くのがんは、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎を含む慢性ウイルス感染において観察されるものと同様に、免疫抑制の同様の状態を確立し、免疫機能不全の多くの共通の特色を共有する。これらは、応答するＴ細胞の死、ならびにＰＤ−１、Ｌａｇ−３およびＣＴＬＡ−４を含む阻害性受容体の上方調節を含む。したがって、抗腫瘍Ｔ細胞応答の重大な意味を持つ機能のブーストを目標とする免疫療法が、このような設定におけるがんの根絶に必要である。そこで、慢性ウイルスおよび腫瘍が、過剰な免疫応答を防止する天然のチェック機構を奪うことにより免疫系を乗っ取ることが明らかである。主要な生物医学研究問題は、この免疫抑制を反転し、腫瘍排除を促進するための治療法をいかにして開発するかである。
【０００６】
そこで、Ｔ細胞機能不全の反転が、広範囲の臨床設定において免疫応答を再建し、疾患消散を達成し得ることが明らかである。接着機構は、リンパ系および非リンパ系組織の両方におけるＴ細胞の蓄積を調節する。接着分子発現のモジュレートは、エフェクターおよびメモリーＴ細胞発生に影響を与えるため、ならびに異なる分化ステージにおける細胞を区別するために使用されてきた。受容体のセレクチンファミリー、Ｌ、ＥおよびＰのリガンドである、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）は、慢性ＬＣＭＶ感染後にＴ細胞において高度に誘導される。ＰＳＧＬ−１は、炎症組織へのＴ細胞輸送を調節し、定常状態条件下および炎症応答後のリンパ系組織へのＴ細胞遊走を媒介するために主に認識される。ＰＳＧＬ−１は、応答消散後の骨髄へのメモリーＴ細胞ホーミングを調節することもできる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
免疫阻害性受容体（例えば、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４）を遮断することにより、また、抗腫瘍Ｔ細胞により、広範囲のがんの免疫破壊を大幅に改善することができる新たな処置にもかかわらず、有効性は、患者サブセット（多くの場合、＜３０％）に限定される。よって、非応答性患者における有効な免疫療法を達成するために免疫系を利用する新たな戦略を開発する決定的な必要がある。
【０００８】
本発明は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）が、免疫系および免疫応答をモジュレートするという独創的な発見に関する。具体的には、本発明は、多機能性Ｔ細胞の生存およびウイルスクリアランスを増加させる、ＰＳＧＬ−１アゴニストおよびアンタゴニストを提供する。本発明は、ＰＳＧＬ−１モジュレーターを使用して、感染性疾患、がんならびに免疫疾患および障害ならびに炎症性疾患および障害を処置する方法をさらに提供する。
【０００９】
一実施形態では、本発明は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、Ｔ細胞媒介性疾患または障害を処置する方法を提供する。一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アゴニストまたはアンタゴニストである。別の態様では、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、感染性疾患、がん、自己免疫性障害または炎症性障害である。具体的な態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アゴニストであり、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、自己免疫性疾患または障害あるいは炎症性疾患または障害である。ある特定の態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アンタゴニストであり、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、がんまたは感染性疾患である。
【００１０】
一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である。具体的な態様では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。別の態様では、ＣＤ４＋依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、増加する。追加的な態様では、ウイルス特異的Ｔ細胞は、増加する。別の態様では、ＴｒｅｇおよびＤＣ応答は、増加する。さらなる態様では、ＦｏｘＰ３、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βおよび／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、増加する。ある態様では、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７のＣＤ８＋分泌は、増加する。他の態様では、ＰＤ−１、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の発現は、減少または増加する。一態様では、ＣＤ２５およびＴ−ｂｅｔの発現は、増加する。別の態様では、ウイルスクリアランスは、増加する。
【００１１】
追加的な実施形態では、本発明は、ＰＳＧＬ−１モジュレーターを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、Ｔ細胞応答を誘発する方法を提供する。ある態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アゴニストまたはアンタゴニストである。別の態様では、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、感染性疾患、がん、自己免疫性障害または炎症性障害である。一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である。具体的な態様では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。別の態様では、ＣＤ４＋依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、増加する。追加的な態様では、ウイルス特異的Ｔ細胞は、増加する。別の態様では、ＴｒｅｇおよびＤＣ応答は、増加する。さらなる態様では、ＦｏｘＰ３、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βおよび／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、増加する。ある態様では、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７のＣＤ８＋分泌は、増加する。他の態様では、ＰＤ−１、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の発現は、減少または増加する。一態様では、ＣＤ２５およびＴ−ｂｅｔの発現は、増加する。
【００１２】
さらなる実施形態では、本発明は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、Ｔ細胞機能を回復させる方法を提供する。ある態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アゴニストまたはアンタゴニストである。別の態様では、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、感染性疾患、がん、自己免疫性障害または炎症性障害である。一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である。具体的な態様では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。別の態様では、ＣＤ４＋依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、増加する。追加的な態様では、ウイルス特異的Ｔ細胞は、増加する。別の態様では、ＴｒｅｇおよびＤＣ応答は、増加する。さらなる態様では、ＦｏｘＰ３、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βおよび／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、増加する。ある態様では、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７のＣＤ８＋分泌は、増加する。他の態様では、ＰＤ−１、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の発現は、減少または増加する。一態様では、ＣＤ２５およびＴ−ｂｅｔの発現は、増加する。
【００１３】
一実施形態では、本発明は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターと、医薬キャリアとを含む医薬組成物を提供する。一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である。追加的な態様では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１Ａ〜図１Ｅは、ＬＣＭＶクローン１３感染後のＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスにおけるＰＳＧＬ−１動態およびウイルス特異的Ｔ細胞の蓄積を示す。ＷＴマウスは、黒色バーまたは黒丸で表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスは、白色バーで表す。（Ａ）非感染ＷＴマウス由来の血液におけるＣＤ８＋Ｔ細胞と比べたＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＳＧＬ−１レベルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）。（Ｂ）８−感染後日数（ｄｐｉ）の脾臓における、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞頻度および絶対数を列挙した。（Ｃ）ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞頻度のＦＡＣＳプロット。（Ｄ）８−ｄｐｉの脾臓におけるウイルス特異的ＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度および絶対数。（Ｅ）ウイルス特異的ＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞頻度のＦＡＣＳプロット。
【００１５】
【図２】図２Ａ〜図２Ｅは、ウイルス特異的ＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｔ細胞が、増殖ではなく生存の増強を呈することを示す。ＷＴマウスは、黒色バーで表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスは、白色バーで表す。（Ａ〜Ｂ）８−ｄｐｉに単離されたＷＴおよびＰＳＧＬ−１の脾臓由来のＧＰ３３−４１＋ＣＤ４＋細胞（Ａ）およびＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋細胞（Ｂ）のレベル。（Ｃ〜Ｄ）１０−ｄｐｉに単離されたＷＴおよびＰＳＧＬ−１の脾臓由来のＩＬ７Ｒα（Ｃ）およびＢｃｌ−２（Ｄ）のレベル。（Ｅ）１０−ｄｐｉのＷＴおよびＰＳＧＬ−１の血液由来のＣＤ２５のレベル。
【００１６】
【図３】図３Ａ〜図３Ｇは、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスにおける増強されたエフェクターＴ細胞機能を示す。ＷＴマウスは、黒色バーで表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスは、白色バーで表す。（Ａ）ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋細胞におけるＩＮＦ−γおよびＩＮＦ−γ＋ＴＮＦ−αの産生。（Ｂ）ＮＰ３９６−４０４＋ＣＤ８＋細胞におけるＩＮＦ−γおよびＩＮＦ−γ＋ＴＮＦ−αの産生。（Ｃ）ＣＤ１０７＋ＩＮＦ−γ＋Ｔｅｔ＋細胞の産生。（Ｄ）ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋細胞におけるグランザイムＢの産生。（Ｅ）ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋細胞におけるＴ−ｂｅｔの産生。（Ｆ）ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋細胞におけるＥｏｍｅｓの産生。（Ｇ）ＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋細胞におけるＩＮＦ−γ、ＩＮＦ−γ＋ＴＮＦ−αおよびＩＮＦ−γ＋ＴＮＦ−α＋ＩＬ−２の産生。
【００１７】
【図４】図４Ａ〜図４Ｄは、ウイルス特異的Ｔ細胞における阻害性受容体発現を示す。ＷＴマウスは、黒色バーで表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスは、白色バーで表す。（Ａ）ウイルス特異的ＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋Ｔ細胞、７ｄｐｉにおけるＰＤ−１のレベル。（Ｂ）ウイルス特異的ＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋Ｔ細胞、８ｄｐｉにおけるＰＤ−１のレベル。（Ｃ）ウイルス特異的ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋細胞およびＮＰ３９６−４０４＋ＣＤ８＋細胞、８ｄｐｉにおけるＰＤ−１のレベル。（Ｄ）ウイルス特異的ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋細胞におけるＣＤ１６０およびＢＴＬＡのレベル。
【００１８】
【図５】図５Ａ〜図５Ｇは、ＰＳＧＬ−１  ＫＯウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞の蓄積が、細胞固有であり、疲弊したＣＤ８＋Ｔ細胞のＰＳＧＬ−１ライゲーションが、その生存を減少したことを示す。ＷＴおよびＰＳＧ−Ｌ−１  ＫＯナイーブＰ１４トランスジェニックＴ細胞は、丸で表す、または１ＰＳＧＬ−１  ＫＯナイーブＳｍａｒｔａトランスジェニックＣＤ４＋Ｔ細胞は、四角で表す。（Ａ〜Ｂ）ＷＴおよびＰＳＧ−Ｌ−１  ＫＯナイーブＰ１４トランスジェニックＴ細胞（丸）または１ＰＳＧＬ−１  ＫＯナイーブＳｍａｒｔａトランスジェニックＣＤ４＋Ｔ細胞（四角）、１ｄｐｉ由来の脾臓（Ａ）または肺（Ｂ）におけるＷＴに対するＰＳＧＬ−１  ＫＯの比。（Ｃ〜Ｄ）脾臓、１ｄｐｉにおけるＷＴ（丸）およびＰＳＧＬ−１  ＫＯ（四角）Ｐ１４細胞（Ｃ）またはＳｍａｒｔａ細胞（Ｄ）の数。（Ｅ）２−ｄｐｉのＷＴまたはＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｐ１４細胞におけるＣＦＳＥ希釈。（Ｆ〜Ｇ）９−ｄｐｉに単離された脾細胞由来の、プロピジウム陰性ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度（Ｆ）およびＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１レベル（Ｇ）。
【００１９】
【図６】図６Ａ〜図６Ｅは、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスが、加速されたウイルス制御および広範囲の免疫病理を有することを示す。（Ａ〜Ｃ）８−ｄｐｉにおける黒丸または黒色バーで表されるＷＴマウスおよび白色四角または白色バーで表されるＰＳＧＬ−１  ＫＯマウス由来の血清ＬＣＭＶウイルスレベル（Ａ）、生存曲線（Ｂ）および血清キナーゼレベル（Ｃ）。（Ｄ）非感染および８日目の感染ＷＴおよびＰＳＧＬ−１  ＫＯ肺のＨ＆Ｅ組織像。（Ｅ）非感染および８−ｄｐｉのＷＴおよびＰＳＧＬ−１  ＫＯの肺における病理スコア。
【００２０】
【図７】図７Ａ〜図７Ｅは、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスにおける最適ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞機能が、ＣＤ４＋Ｔ細胞ヘルプに依存することを示す。黒色バーまたは黒丸で表されるＷＴマウス、白色バーまたは白色四角で表されるＰＳＧＬ−１  ＫＯマウス、および灰色バーまたは灰色三角で表されるＰＳＧＬ−１  ＫＯ  ＣＤ４枯渇マウス。（Ａ）脾臓におけるＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の絶対数。（Ｂ）８−ｄｐｉの血液におけるＧＰ３３−４１およびＮＰ３９６−４０４ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度。（Ｃ）１０−ｄｐｉの脾臓におけるサイトカイン産生ＧＰ３３−４１ＣＤ８＋Ｔ細胞の絶対数。（Ｄ）ｄｐｉ１０日目の脾臓におけるＧＰ３３−４１＋およびＮＰ３９６−４０４＋特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１レベル。（Ｅ）１０−ｄｐｉの生存率および血清ウイルスレベル。
【００２１】
【図８】図８Ａ〜図８Ｅは、Ｃｌ１３感染後のウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の動態を示す。ＷＴ（黒色四角またはバー）またはＰＳＧＬ１−ＫＯ（白色四角またはバー）マウス。（Ａ〜Ｄ）ｄｐｉ４日目、６日目および８日目（Ａ、Ｂ、Ｃ）ならびにｄｐｉ３０日目の（Ｄ）ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＰ３９６−４０４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の絶対数。（Ｅ）ドットプロットは、代表的なマウスを表す。
【００２２】
【図９】図９Ａ〜図９Ｄは、ＰＳＧＬ−１  ＫＯウイルス特異的Ｔ細胞が、有効に遊走し、肺に蓄積することを示す。（Ａ〜Ｄ）ＤｂＧＰ３３−４１四量体もしくはＤｂＮＰ３９６−４０４四量体（Ａ〜Ｂ）またはＩＡｂ−ＧＰ６６−７６（Ｃ〜Ｄ）で染色した、ｄｐｉ７．５日目のＷＴ（黒色バー）またはＰＳＧＬ１−Ｋ０（白色バー）マウス肺由来の細胞。
【００２３】
【図１０】図１０Ａ〜図１０Ｅは、ウイルス特異的Ｔ細胞におけるサイトカイン受容体レベルを示す。ＷＴマウスは、黒色四角またはバーで表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスは、白色四角またはバーで表す。（Ａ）４、６および８ｄｐｉのＧＰ３３−４１細胞におけるＩＬ−７Ｒαのレベル。（Ｂ）４、６および８ｄｐｉのＮＰ３９６−４０４細胞におけるＩＬ−７Ｒαのレベル。（Ｃ）９ｄｐｉのＩＬ−２１のレベル。（Ｄ）９ｄｐｉのＣＤ１２２のレベル。（Ｅ）９ｄｐｉのＩＬ−６Ｒのレベル。
【００２４】
【図１１】図１１Ａ〜図１１Ｅは、増加したサイトカインレベルが、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウス由来のエフェクターＴ細胞によって発現されることを示す。ＷＴマウスは、黒色バーで表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスは、白色バーで表す。（Ａ〜Ｃ）１０ｄｐｉのＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＮＦ−γ（Ａ、Ｃ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）の産生。（Ｄ〜Ｅ）１０ｄｐｉのＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＴＮＦ−α（Ｄ）およびＩＬ−２（Ｅ）の産生。
【００２５】
【図１２】図１２Ａ〜図１２Ｅは、ウイルス特異的Ｔ細胞における阻害性受容体発現を示す。ＷＴマウスは、黒色バーで表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスは、白色バーで表す。（Ａ〜Ｅ）ｐｄ８日目の脾臓における（Ａ〜Ｂ）、ｄｐｉ１５日目（Ｃ）、ｄｐｉ３０日目（Ｄ）の血液における、およびｄｐｉ１１２日目の脾臓における（Ｅ）ウイルス特異的ＧＰ３３−４１−およびＮＰ３９６−４０４−ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１、ＣＤ１６０およびＢＴＬＡのレベル。
【００２６】
【図１３】図１３Ａ〜図１３Ｅは、ナイーブＷＴ細胞およびＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｐ１４細胞の感染前表現型ならびにＷＴ細胞およびＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｐ１４細胞の増殖を示す。ＷＴマウスは、黒色バーで表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯトランスジェニックＰ１４＋Ｔｇマウスは、白色バーで表す。（Ａ〜Ｂ）ＣＤ４４およびＣＤ６２Ｌ（Ａ）ならびにＣＤ２５、ＣＤ６９およびＣＤＩ２７（Ｂ）で染色した脾臓。（Ｃ）ｄｐｉ１３日目の脾臓および肺におけるＷＴまたはＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｐ１４細胞の頻度。（Ｄ）ｄｐｉ１３日目の脾臓および肺におけるＢｒｄｕ取り込み。（Ｅ）脾臓における代表的ヒストグラム。
【００２７】
【図１４】図１４Ａ〜図１４Ｂは、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスにおけるよりより大きな病理を示す。ＷＴ非感染マウスは、黒丸で表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯ非感染マウスは、白色バー、四角で表し、ＷＴ感染マウスは、黒色三角で表し、ＰＳＧＬ−１  ＫＯ感染マウスは、白色三角マウスで表す。（Ａ）ＷＴおよびＰＳＧＬ−１  ＫＯ肺および肝臓の病理スコア。（Ｂ）ｄｐｉ９日目のＷＴマウスおよびＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスから単離された胃、小腸および大腸。
【００２８】
【図１５】図１５Ａ〜図１５Ｄは、Ｃｌ１３感染後のウイルス特異的ＰＳＧＬ−１ＫＯ  Ｔ細胞の蓄積を示す。（Ａ〜Ｄ）感染後８ｄｐｉ（Ａ）および３０ｄｐｉ（Ｂ）の血液におけるならびに８ｄｐｉの脾臓（Ｃ）および肺（Ｄ）における、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が列挙された。
【００２９】
【図１６】図１６Ａ〜図１６Ｃは、ＰＳＧＬ−１  ＫＯ由来のＣＤ８＋Ｔ細胞の増強された抗ウイルス機能を示す。（Ａ〜Ｃ）ＮＰ３９６−４０４またはＧＰ３３−４１ペプチドにより刺激され、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α（Ａ、Ｂ）またはＣＤ１０７（Ｃ）に関して解析された脾臓細胞。
【００３０】
【図１７】図１７Ａ〜図１７Ｂは、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の減少した阻害性受容体発現を示す。（Ａ〜Ｂ）ＰＤ−１（Ａ）ならびにＣＤ６０およびＢＴＬＡ（Ｂ）のレベルから、ウイルス特異的Ｔ細胞を評価した。
【００３１】
【図１８】図１８Ａ〜図１８Ｃは、ＰＳＧＬ−１  ＫＯ  ＣＤ４＋Ｔ細胞が、減少した阻害性受容体発現により、改善された生存および機能を呈することを示す。（Ａ〜Ｃ）頻度（Ａ）、サイトカイン応答（Ｂ）ならびにＰＤ−１およびＢＴＬＡレベル（Ｃ）を８ｄｐｉに測定した。
【００３２】
【図１９】図１９Ａ〜図１９Ｂは、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスが、慢性ＬＣＭＶを取り除き、より多量の循環炎症性サイトカインを有することを示す。（Ａ）感染後のウイルス力価。（Ｂ）８ｄｐｉにおけるサイトカインレベル。
【００３３】
【図２０】図２０Ａ〜図２０Ｄは、Ｔ細胞生存、ならびにＰＤ−１がウイルス感染に対する応答後およびＰＳＧＬ−１遮断後にＰＧＳＬ−１欠乏によってモジュレートされることを示す。（Ａ〜Ｄ）感染後に解析されたＮＰ３９６−４０４（Ａ）およびＧＰ３３−４１（Ｂ）特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞のレベル。（Ｃ）ＷＴマウスおよびＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスから測定されたＰＤ−１のウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞レベル。（Ｄ）ＩＡＶ特異的ＮＰ３９６−４０４またはＬＣＭＶ特異的ＮＰ３９６−４０４ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１レベルを８ｄｐｉに測定した。
【００３４】
【図２１】図２１Ａ〜図２１Ｂは、腫瘍微小環境におけるＴ細胞によるＰＳＧＬ−１およびＰＤ−１発現を示す。（Ａ）ＣＤ４＋細胞の頻度（左）、該ＣＤ４＋細胞のＰＳＧＬ−１発現（中央）およびＰＳＧＬ−１ｌｏ細胞、対、高ＰＳＧＬ−１ｈｉｇｈ細胞によるＰＤ−１の発現（右）。（Ｂ）ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度（左）、その高ＰＳＧＬ−１発現（中央）およびＰＤ−１の不均一発現。
【００３５】
【図２２】図２２Ａ〜図２２Ｂは、メラノーマ＋耳におけるＣＤ８＋Ｔ細胞によるＰＳＧＬ−１発現およびＰＳＧＬ−１結合を示す。（Ａ）ＣＤ４４ｈｉＣＤ８＋Ｔ細胞  対  ＣＤ４４ｌｏＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１およびＰＳＧＬ−１の発現。（Ｂ）ＰＳＧＬ−１の機能的な結合を有するＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度。
【００３６】
【図２３】図２３Ａ〜図２３Ｂは、メラノーマ腫瘍におけるＣＤ３＋Ｔ細胞ならびにＣＤ４＋ＴｒｅｇおよびＣＤ４＋非Ｔｒｅｇの頻度を示す。（Ａ）ＣＤ３＋Ｔ細胞単核（ｍｏｎｏｃｕｃｌｅａｒ）細胞。（Ｂ）フローサイトメトリーによる破壊された腫瘍内の高頻度での、ＰＳＧＬ−１＋、ＰＤ−１＋（ダブルポジティブ）ＣＤ４＋非Ｔｒｅｇ（エフェクターＴ細胞）およびＴｒｅｇ。
【００３７】
【図２４】図２４は、メラノーマにおける免疫細胞および該免疫細胞のＰＳＧＬ−１発現の存在を示す。（Ａ）メラノーマ腫瘍内で同定された、Ｔ細胞（ＣＤ４＋非Ｔｒｅｇ、Ｔｒｅｇ、ＣＤ８＋細胞）、ＮＫ  Ｔ細胞、ＮＫ細胞、樹状細胞（ＤＣ、ＭＨＣ  ＩＩ＋、ＣＤ１１ｃ）骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ、Ｇｒ１＋、ＣＤ１１ｂ）およびマクロファージ（Ｍφ、Ｆ４／８０＋、ＣＤ１１ｂ＋）。（Ｂ）ＰＳＧＬ−１を発現したこれらの免疫細胞サブセット。
【００３８】
【図２５】図２５Ａ〜図２５Ｆは、ＷＴマウスと比較したＰＳＧＬ−１欠損マウスの抗腫瘍応答を示す。（Ａ）腫瘍体積および重量。（Ｂ）エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度。（Ｃ）ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞によるＰＤ−１の発現。（Ｄ〜Ｆ）ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞によるサイトカイン産生。
【発明を実施するための形態】
【００３９】
本発明は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）が、免疫系および免疫応答をモジュレートするという独創的な発見に関する。具体的には、本発明は、多機能性Ｔ細胞の生存およびウイルスクリアランスを増加させる、ＰＳＧＬ−１アゴニストおよびアンタゴニストを提供する。本発明は、ＰＳＧＬ−１モジュレーターを使用して、感染性疾患、がんならびに免疫疾患および障害ならびに炎症性疾患および障害を処置する方法をさらに提供する。
【００４０】
本組成物および方法について記載する前に、かかる組成物、方法および条件は変動し得るため、本発明は、記載されている特定の組成物、方法および実験条件に限定されないことを理解されたい。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲においてのみ限定されるため、本明細書において使用されている用語法が、特定の実施形態について記載することのみを目的とし、限定を意図しないことも理解されたい。
【００４１】
他に規定がなければ、本明細書に使用されている全ての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様のまたは同等の任意の方法および材料を本発明の実施または検査に使用してもよいが、好まれる方法および材料をここに記載する。下に記す定義は、本開示を理解するためのものであるが、決して、当業者による用語の理解に取って代わると見なされるべきものではない。
【００４２】
本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される通り、文脈がそれ以外を明らかに指示しない限り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、複数の参照を含む。よって、例えば、「その（ｔｈｅ）方法」への言及は、本開示等々を読むことにより当業者に明らかとなる、本明細書に記載されている種類の１種または複数の方法および／またはステップを含む。
【００４３】
抗体は通常、２本の同一軽（Ｌ）鎖および２本の同一重（Ｈ）鎖で構成された、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１個の共有結合性ジスルフィド結合によって重鎖に連結されているが、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変動する。各重鎖および軽鎖は、規則的に間隔をあけた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）と続くいくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）およびその他端に定常ドメインを有する；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列され、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列される。特定のアミノ酸残基が、軽鎖および重鎖可変ドメインの間の界面を形成すると考えられる。各可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３個のセグメントで構成され、可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、β−シート立体配置を大部分は採用する４個のＦＲ領域を含み、これらは、β−シート構造の一部を接続し、場合によってはこれを形成するループを形成する３個のＣＤＲによって接続される。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲによってごく接近して一体に保持され、他の鎖由来のＣＤＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接的に関与しないが、抗体依存性細胞性細胞傷害における抗体の関与等、様々なエフェクター機能を示す。
【００４４】
その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンの５種の主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、これらのうちいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は、周知である。
【００４５】
抗体のＦｃ領域は、細胞表面受容体および補体系の一部のタンパク質と相互作用する抗体のテイル領域である。この特性により、抗体が免疫系を活性化することができる。ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤ抗体アイソタイプにおいて、Ｆｃ領域は、抗体の２本の重鎖の第２および第３の定常ドメインに由来する２個の同一タンパク質断片で構成される；ＩｇＭおよびＩｇＥ  Ｆｃ領域は、各ポリペプチド鎖における３個の重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２〜４）を含有する。ＩｇＧのＦｃ領域は、高度に保存されたＮ−グリコシル化部位を有する。Ｆｃ断片のグリコシル化は、Ｆｃ受容体媒介性活性に必須である。この部位に結合したＮ−グリカンは、複合型の主にコア−フコシル化された二分岐構造（ｄｉａｎｔｅｎｎａｒｙ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）である。加えて、少量のこのようなＮ−グリカンは、バイセクト型ＧｌｃＮＡｃおよびα−２，６連結型シアル酸残基も有する。
【００４６】
用語「抗体」は、本明細書において使用する場合、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２個のインタクトな抗体から形成された多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）および所望の生物学的活性を示す限りにおいて抗体断片を指す。
【００４７】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の部分、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合または可変領域を含む。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、およびトリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）など；直鎖状抗体；単鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成された多特異性抗体が挙げられる。
【００４８】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書において使用する場合、実質的に同種抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る起こり得る天然起源の変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して指向される。さらに、各モノクローナル抗体は、抗原における単一の決定基に対して指向される。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンによって汚染されていない、ハイブリドーマ培養によって合成されるという点が有利である。例えば、本発明に従って使用するべきモノクローナル抗体は、ハイブリドーマによって、組換えＤＮＡ方法によって作製する、またはファージ抗体ライブラリーから単離することができる。
【００４９】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖の部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）と共に、所望の生物学的活性を示す限りにおいてかかる抗体の断片を特に含む。
【００５０】
「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合性部分配列等）である。大部分に関して、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性および容量を有するマウス、ラットまたはウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、相当する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出せない残基を含むことができる。このような修飾は、抗体性能をさらに精緻化および最大化するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１個、典型的には２個の可変ドメインのうち実質的に全てを含み、ＣＤＲのうち全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、ＦＲのうち全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、最適には、少なくとも免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の部分、典型的にはヒト免疫グロブリンの部分も含む。
【００５１】
「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体断片は、単一のポリペプチド鎖において存在する、抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインを含む。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、ｓＦｖに抗原結合のための所望の構造を形成させることができるポリペプチドリンカーを、ＶＨドメインおよびＶＬドメインの間にさらに含む。
【００５２】
用語「融合分子」および「融合タンパク質」は、互換的に使用され、組換え方法、化学的方法または他の適した方法によって共有結合により連結（すなわち、融合）された、生物学的活性ポリペプチド、通常、ＨＶＥＭまたは抗体およびエフェクター分子、通常、タンパク質またはペプチド配列を指すことを企図する。必要に応じて、融合分子は、ペプチドリンカー配列を介して１つまたは数箇所の部位において融合されていてよい。あるいは、ペプチドリンカーを使用して、融合分子の構築を支援することができる。特に好まれる融合分子は、融合タンパク質である。一般に、融合分子は、コンジュゲート分子でも構成され得る。
【００５３】
Ｆｃ−融合タンパク質（Ｆｃキメラ融合タンパク質、Ｆｃ−Ｉｇ、Ｉｇに基づくキメラ融合タンパク質およびＦｃ−タグタンパク質としても公知）は、目的のペプチドまたはタンパク質に遺伝学的に連結された、ＩｇＧのＦｃドメインで構成される。Ｆｃ−融合タンパク質は、ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究に価値ある試薬になった。
【００５４】
Ｆｃ融合結合パートナーは、単一のペプチド、細胞表面受容体との結合によりシグナル伝達分子を活性化するリガンド、二量体形成により活性化される受容体の細胞外ドメイン、またはタンパク質マイクロアレイにおいて結合パートナーの同定に使用されるベイトタンパク質に及び得る。
【００５５】
ｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＦｃドメインの最も価値ある特色の１つは、目的のタンパク質の血漿半減期を劇的に延長することができることであり、これは、生物療法薬のために、改善された治療有効性をもたらし；Ｆｃ−融合タンパク質を魅力的な生物療法剤にした特質である。
【００５６】
本明細書において使用する場合、用語「核酸」または「核酸配列」は、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはこれらのうちのいずれかの任意の断片を指し；一本鎖であっても二本鎖であってもよい、ゲノムまたは合成起源のＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｉＲＮＡ）を含み、例えば、ｉＲＮＡ、リボヌクレオタンパク質（例えば、例えば、二本鎖ｉＲＮＡ、例えば、ｉＲＮＰ）、核酸、すなわち、天然ヌクレオチドの公知の類似体を含有するオリゴヌクレオチドを含む、起源が天然または合成の、センスもしくはアンチセンス鎖またはペプチド核酸（ＰＮＡ）、または任意のＤＮＡ様もしくはＲＮＡ様材料であり得る。
【００５７】
本明細書において使用する場合、用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書において互換的に使用され、翻訳後修飾、例えば、リン酸化またはグリコシル化に関係なく、２個またはそれを超えるサブユニットアミノ酸、アミノ酸アナログまたは他のペプチド模倣物の化合物を指す。サブユニットは、ペプチド結合または例えば、エステルもしくはエーテル結合等の他の結合によって連結することができる。全長ポリペプチド、トランケートされたポリペプチド、点変異体、挿入変異体、スプライスバリアント、キメラタンパク質およびこれらの断片は、この定義によって包含される。様々な実施形態では、ポリペプチドは、少なくとも１０アミノ酸または少なくとも２５または少なくとも５０または少なくとも７５または少なくとも１００または少なくとも１２５または少なくとも１５０または少なくとも１７５または少なくとも２００アミノ酸を有することができる。
【００５８】
本明細書において使用する場合、用語「小分子」は、およそ１０−９ｍのサイズを有する、生物学的プロセスの調節に役立つことができる低分子量（＜９００ダルトン）有機化合物を指す。大部分の薬物は、小分子である。小分子は種々の生物学的機能を有し得、細胞シグナル伝達分子として、医学における薬物として、農業における農薬として、および多くの他の役割において働くことができる。これらの化合物は、天然（二次代謝物等）または人工（抗ウイルス薬等）であり得；疾患に対する有益な効果を有し得る（薬物等）、または有害であり得る（催奇形物質および発癌物質等）。核酸およびタンパク質等のバイオポリマーならびに多糖（デンプンまたはセルロース等）は、小分子ではないが、これらの構成物単量体（それぞれリボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチド、アミノ酸および単糖）は多くの場合、小分子と見なされる。
【００５９】
本明細書において使用する場合、用語「処置する」または「処置」または「緩和」は、治療的処置、予防的および／または防止的方策を指し、その目的は、標的とする病理学的状態または障害を防止または減速（減弱）することである。処置を必要とする者は、既に障害を有する者と共に、障害を有する傾向がある者または障害を防止するべき者を含む。
【００６０】
用語「治療剤」は、本明細書において使用する場合、患者または被験体に投与したときに所望の治療効果を誘導することができる化学化合物または組成物を含む。本発明の治療剤の例は、抗ＰＳＧＬ−１抗体またはＰＳＧＬ−１融合タンパク質である。
【００６１】
本明細書において使用する場合、疾患の処置に使用される薬物の、用語「有効量」または「治療有効量」は、疾患の重症度を低下させる、疾患もしくはその処置に関連する１種もしくは複数の症状の重症度を低下させる、または処置されている状態に続いてある頻度で生じ得る、より重篤な症状もしくはより重篤な疾患の発病を遅延させることができる量である。「有効量」は、言及されている目的に関して、経験的におよびルーチン様式で決定することができる。
【００６２】
治療剤は、被験体を処置するために、局所的、非経口的、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、静脈内および／または病巣内投与を含む、任意の適した手段により投与することができる。
【００６３】
本明細書において使用する場合、用語「Ｔ細胞媒介性疾患または障害」は、ＰＳＧＬ−１モジュレーターによる処置から利益を得る任意の状態を指す。抗ＰＳＧＬ−１処置から利益を得る疾患および障害の例として、感染性疾患、がんならびに免疫疾患および障害、自己免疫性疾患および障害ならびに炎症性疾患および障害が挙げられる。特に、がんまたは感染性疾患を有する被験体は、ＰＳＧＬ−１アンタゴニスト処置から利益を得ることができ、自己免疫性疾患または障害あるいは炎症性疾患または障害を有する被験体は、ＰＳＧＬ−１アゴニスト処置から利益を得ることができる。
【００６４】
生物の身体が、感受性細胞に付着しこれに進入することができる病原性ウイルス、感染性ウイルス粒子（ビリオン）、真菌または細菌に侵入されると、感染が生じる。膨大な数のウイルスが、感染性疾患を引き起こす。感染性疾患の例として、ボツリヌス中毒、腺ペスト、カリシウイルス感染（ノロウイルスおよびサポウイルス）、水痘、クラミジア、コレラ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染、感冒（急性ウイルス鼻咽喉炎；急性コリーザ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、デング熱、ジフテリア、エボラ出血熱、淋病、手足口病（ＨＦＭＤ）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ感染、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、単純ヘルペス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染、エプスタイン・バーウイルス感染性単核症（Ｍｏｎｏ）、インフルエンザ（ｆｌｕ）、レジオネラ症（レジオネラ病）、ハンセン病、ライム病（ライムボレリア症）、マラリア、マールブルグ出血熱（ＭＨＦ）、麻疹、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、髄膜炎、ムンプス、百日咳（Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（百日咳（Ｗｈｏｏｐｉｎｇ  ｃｏｕｇｈ））、ペスト、進行性多巣性白質脳症、狂犬病、ライノウイルス感染、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ）、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、疥癬、敗血症、細菌性赤痢（ｓｈｉｇｅｌｌｏｓｉｓ）（細菌赤痢（ｂａｃｉｌｌａｒｙ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｙ））、帯状疱疹（帯状ヘルペス）、天然痘（痘瘡）、梅毒、破傷風（開口障害）、結核、腸チフス熱（ｔｙｐｈｏｉｄ  ｆｅｖｅｒ）、渓谷熱、ウイルス性肺炎、ウエストナイル熱および黄熱が挙げられるがこれらに限定されない。
【００６５】
感染性疾患は、一般的に、抗ウイルス剤、抗細菌剤または抗真菌剤で処置される。抗ウイルス剤として、アバカビル、アシクロビル（Ａｃｉｃｌｏｖｉｒ）、アシクロビル（Ａｃｙｃｌｏｖｉｒ）、アデホビル、アマンタジン、アンプレナビル、アンプリジェン（Ａｍｐｌｉｇｅｎ）、アルビドール、アタザナビル、アトリプラ、バラビル（Ｂａｌａｖｉｒ）、シドホビル、コンビビル、ドルテグラビル、ダルナビル、デラビルジン、ジダノシン、ドコサノール、エドクスジン、エファビレンツ、エムトリシタビン、エンフビルチド、エンテカビル、エコリエベル（Ｅｃｏｌｉｅｖｅｒ）、ファムシクロビル、ホミビルセン、ホスアンプレナビル、ホスカルネット、ホスホネット、融合阻害剤、ガンシクロビル、イバシタビン、イムノビル（Ｉｍｕｎｏｖｉｒ）、イドクスウリジン、イミキモド、インジナビル、イノシン、インテグラーゼ阻害剤、インターフェロンＩＩＩ型、インターフェロンＩＩ型、インターフェロンＩ型、インターフェロン、ラミブジン、ロピナビル、ロビリド、マラビロク、モロキシジン、メチサゾン、ネルフィナビル、ネビラピン、ネクサビル（Ｎｅｘａｖｉｒ）、ヌクレオシド類似体、ノビル（Ｎｏｖｉｒ）、オセルタミビル、ペグインターフェロンアルファ−２ａ、ペンシクロビル、ペラミビル、プレコナリル、ポドフィロトキシン、プロテアーゼ阻害剤、ラルテグラビル、逆転写酵素阻害剤、リバビリン、リマンタジン、リトナビル、ピラミジン（Ｐｙｒａｍｉｄｉｎｅ）、サキナビル、ソホスブビル、スタブジン、相乗的増強剤（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）、ティーツリーオイル、テラプレビル、テノホビル、テノホビルジソプロキシル、チプラナビル、トリフルリジン、トリジビル、トロマンタジン、ツルバダ、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ビクリビロク、ビダラビン、ビラミジン、ザルシタビン、ザナミビルおよびジドブジンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００６６】
抗細菌剤として、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、スペクチノマイシン（Ｂｓ）、ゲルダナマイシン、ハービマイシン（Ｈｅｒｂｉｍｙｃｉ）、リファキシミン、ロラカルベフ、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、メロペネム、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｉｎ）またはセファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｈｉｎ）、セファレキシン、セファクロル、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル、セフトビプロール、テイコプラニン、バンコマイシン、テラバンシン、ダルババンシン、オリタバンシン（Ｏｒｉｔａｖａｎｃｉ）、クリンダマイシン、リンコマイシン、ダプトマイシン、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、スピラマイシン、アズトレオナム、フラゾリドン、ニトロフラントイン（Ｂｓ）、オキサゾリジノン（Ｂｓ）、リネゾリド、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリン、ペニシリン、ピペラシリン、ペニシリンＧ、テモシリン、チカルシリン、バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢ、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン、テマフロキサシン、マフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルアミド（Ｓｕｌｆａｎｉｌｉｍｉｄｅ）、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、ストレプトマイシンおよびホスホマイシンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００６７】
抗真菌剤として、アンホテリシンＢ、カンジシジン、フィリピン、ハマイシン、ナタマイシン、ニスタチン、リモシジン、ビホナゾール、ブトコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ルリコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール、セルタコナゾール、スルコナゾール、チオコナゾール、アルバコナゾール、エフィナコナゾール、エポキシコナゾール、フルコナゾール、イサブコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、プロピコナゾール、ラブコナゾール、テルコナゾール、ボリコナゾール、アバファンギン（Ａｂａｆｕｎｇｉｎ）、アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン、アニデュラファンギン、カスポファンギンおよびミカファンギンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００６８】
免疫疾患または障害は、免疫系の機能不全である。このような障害は、いくつかの異なる仕方で：罹患した免疫系の構成成分（複数可）によって；免疫系が過活動であるか不活発であるかによって、および状態が先天性であるか後天性であるかによって特徴付けることができる。自己免疫性疾患は、身体に通常存在する物質および組織に対する身体の異常な免疫応答（自己免疫）から生じる。自己免疫性疾患の根底にある病態生理学の主な理解は、自己免疫性疾患の間での際立った程度の遺伝的共有を同定した、ゲノムワイド関連スキャンの適用であった。
【００６９】
自己免疫性障害として、急性播種性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、アジソン病、無ガンマグロブリン血症、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症（別名ルー・ゲーリック病）、強直性脊椎炎、抗リン脂質抗体症候群、抗合成酵素症候群（Ａｎｔｉｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、自己免疫性再生不良性貧血、自己免疫性心筋症、自己免疫性腸疾患、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ増殖性症候群、自己免疫性膵炎、自己免疫性末梢性ニューロパチー、自己免疫性多内分泌（ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｅ）症候群、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性蕁麻疹、自己免疫性ブドウ膜炎、バロー（Ｂａｌｏ）病／バロー同心円性硬化症、ベーチェット病、ベルジェ病、ビッカースタッフ型脳炎、ブラウ症候群、水疱性類天疱瘡、がん、キャッスルマン病、セリアック病、シャーガス病、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、慢性閉塞性肺疾患、慢性再発性多巣性骨髄炎、チャーグ・ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、コーガン症候群、寒冷凝集素症、補体成分２欠乏症、接触性皮膚炎、頭蓋動脈炎、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、クッシング症候群、皮膚性白血球破砕性血管炎、デゴス病、ダーカム病、疱疹状皮膚炎、皮膚筋炎、１型糖尿病、びまん性皮膚全身性硬化症、円板状エリテマトーデス、ドレスラー症候群、薬物誘発性ループス、湿疹、子宮内膜症、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、好酸球性肺炎、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、胎児赤芽球症、本態性混合型クリオグロブリン血症、エヴァンス症候群、進行性骨化性線維異形成症、線維化肺胞炎（または特発性肺線維症）、胃炎、胃腸類天疱瘡、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本脳症、橋本甲状腺炎、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、妊娠ヘルペス、別名、妊娠性類天疱瘡、化膿性汗腺炎、ヒューズ・ストーヴィン（Ｈｕｇｈｅｓ−Ｓｔｏｖｉｎ）症候群、低ガンマグロブリン血症（Ｈｙｐｏｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉ）、特発性炎症性脱髄性疾患、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡ腎症、封入体筋炎、間質性膀胱炎、若年性特発性関節炎、別名、若年性関節リウマチ、川崎病、ランバート・イートン筋無力症症候群、白血球破砕性血管炎、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病、ルポイド肝炎、別名、自己免疫性肝炎、エリテマトーデス、マジード症候群、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発血管炎、ミラー・フィッシャー症候群、混合性結合組織病、モルフェア、ムッハ・ハーベルマン病、別名、急性痘瘡状苔癬状粃糠疹、多発性硬化症、重症筋無力症、筋肉炎、メニエール病、ナルコレプシー、視神経脊髄炎、神経性筋強直症、眼（Ｏｃｃｕｌａｒ）瘢痕性類天疱瘡、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、オード（Ｏｒｄ）甲状腺炎、回帰性リウマチ、ＰＡＮＤＡＳ（連鎖球菌に関連する小児自己免疫性精神神経障害）、傍腫瘍性小脳変性症、発作性夜間血色素尿症（ＰＮＨ）、パリー・ロンベルグ（Ｐａｒｒｙ  Ｒｏｍｂｅｒｇ）症候群、扁平部炎（ｐａｒｓ  ｐｌａｎｉｔｉｓ）、パーソネージ・ターナー症候群、尋常性天疱瘡、静脈周囲脳脊髄炎、悪性貧血、ＰＯＥＭＳ症候群、結節性多発動脈炎、リウマチ性多発筋痛症、多発性筋炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、進行性炎症性ニューロパチー、乾癬、乾癬性関節炎、赤芽球癆、壊疽性膿皮症、ラスムッセン脳炎、レイノー現象、ライター症候群、再発性多発軟骨炎、下肢静止不能症候群（Ｒｅｓｔｌｅｓｓ  ｌｅｇ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、統合失調症、シュミット症候群、シュニッツラー症候群、強膜炎、強皮症、血清病、シェーグレン症候群、脊椎関節症、スティッフパーソン症候群、スチル病、亜急性細菌性心内膜炎（ＳＢＥ）、スザック症候群、スイート症候群、シデナム舞踏病、交感性眼炎、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、血小板減少症、トロサ・ハント症候群、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、未分化脊椎関節症、蕁麻疹様血管炎、血管炎、白斑、ウェゲナー肉芽腫症が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７０】
炎症性疾患は、膨大な種類のヒト疾患の基礎をなす障害の大型の群である。免疫系は多くの場合、アレルギー反応および一部のミオパチーの両方において実証される、炎症性障害に関与し、多くの免疫系障害は、異常な炎症をもたらす。炎症性プロセスにおいて病原学的起源を有する非免疫疾患は、がん、粥状動脈硬化および虚血性心疾患を含む。多種多様なタンパク質が、炎症に関与し、それらのうちいずれか１種は、該タンパク質の正常な機能および発現を損なうまたは他の仕方で調節不全にする遺伝的変異を受けやすい。炎症に関連する障害の例として、尋常性ざ瘡、喘息、自己免疫性疾患、セリアック病、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、過敏症、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、サルコイドーシス、移植片拒絶、血管炎、間質性膀胱炎、粥状動脈硬化、アレルギー、ミオパチー、白血球欠損およびがんが挙げられる。
【００７１】
用語「免疫モジュレーター」は、本明細書において使用する場合、免疫系をモジュレートする任意の治療剤を指す。免疫モジュレーターの例として、エイコサノイド、サイトカイン、プロスタグランジン、インターロイキン、ケモカイン、チェックポイント調節因子、ＴＮＦスーパーファミリーメンバー、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバーおよびインターフェロンが挙げられる。免疫モジュレーターの具体例として、ＰＧＩ２、ＰＧＥ２、ＰＧＦ２、ＣＣＬ１４、ＣＣＬ１９、ＣＣＬ２０、ＣＣＬ２１、ＣＣＬ２５、ＣＣＬ２７、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ−８、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１１、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ１、ＩＬ２、ＩＬ３、ＩＬ４、ＩＬ５、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ８、ＩＬ９、ＩＬ１０、ＩＬ１１、ＩＬ１２、ＩＬ１３、ＩＬ１５、ＩＬ１７、ＩＬ１７、ＩＮＦ−α、ＩＮＦ−β、ＩＮＦ−ε、ＩＮＦ−γ、Ｇ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＣＴＬＡ、ＣＤ２０、ＰＤ１、ＰＤ１Ｌ１、ＰＤ１Ｌ２、ＩＣＯＳ、ＣＤ２００、ＣＤ５２、ＬＴα、ＬＴαβ、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ２７Ｌ、４１ＢＢＬ、ＦａｓＬ、Ｏｘ４０Ｌ、Ａｐｒｉｌ、ＴＬ１Ａ、ＣＤ３０Ｌ、ＴＲＡＩＬ、ＲＡＮＫＬ、ＢＡＦＦ、ＴＷＥＡＫ、ＣＤ４０Ｌ、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＡＰＰ、ＮＧＦ、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦＲ２、ＬＴβＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２７、４−１ＢＢ、Ｆａｓ、Ｏｘ４０、ＡＩＴＲ、ＤＲ３、ＣＤ３０、ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４、ＲＡＮＫ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、Ｆｎ１４、ＣＤ４０、ＥＤＡＲ  ＸＥＤＡＲ、ＤＲ６、ＤｃＲ３、ＮＧＦＲ−ｐ７５およびＴａｊが挙げられる。免疫モジュレーターの他の例として、トシリズマブ（Ａｃｔｅｍｒａ）、ＣＤＰ８７０（Ｃｉｍｚｉａ）、エンテラセプト（ｅｎｔｅｒａｃｅｐｔ）（Ｅｎｂｒｅｌ）、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）、Ｋｉｎｅｒｅｔ、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、リツジマブ（ｒｉｔｕｚｉｍａｂ）（Ｒｉｔｕｘａｎ）、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ）、Ａｖｏｎｅｘ、Ｒｅｂｉｆ、ＲｅｃｉＧｅｎ、Ｐｌｅｇｒｉｄｙ、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ、Ｃｏｐａｘｏｎｅ、Ｎｏｖａｔｒｏｎｅ、ナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ）、フィンゴリモド（Ｇｉｌｅｎｙａ）、テリフルノミド（Ａｕｂａｇｉｏ）、ＢＧ１２、Ｔｅｃｆｉｄｅｒａおよびアレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ、Ｌｅｍｔｒａｄａ）が挙げられる。
【００７２】
がんは、身体の他の部分に侵入または広がる潜在力を有する異常細胞成長に関与する疾患の群である。国立がん研究所（ｎａｔｉｏｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）によって記載される例示的ながんは、急性リンパ芽球性白血病、成人；急性リンパ芽球性白血病、小児；急性骨髄性白血病、成人；副腎皮質癌；副腎皮質癌、小児；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；ＡＩＤＳ関連悪性病変；肛門がん；星状細胞腫、小児小脳；星状細胞腫、小児大脳；胆管がん、肝外；膀胱がん；膀胱がん、小児；骨がん、骨肉腫／悪性線維性組織球腫；脳幹神経膠腫、小児；脳腫瘍、成人；脳腫瘍、脳幹神経膠腫、小児；脳腫瘍、小脳星状細胞腫、小児；脳腫瘍、大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、小児；脳腫瘍、上衣腫、小児；脳腫瘍、髄芽腫、小児；脳腫瘍、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児；脳腫瘍、視覚路および視床下部神経膠腫、小児；脳腫瘍、小児（その他）；乳がん；乳がんおよび妊娠；乳がん、小児；乳がん、男性；気管支腺腫／カルチノイド、小児：カルチノイド腫瘍、小児；カルチノイド腫瘍、胃腸；癌、副腎皮質；癌、島細胞；原発不明の癌；中枢神経系リンパ腫、原発性；小脳星状細胞腫、小児；大脳星状細胞腫／悪性神経膠腫、小児；子宮頸がん；小児がん；慢性リンパ球性白血病；慢性骨髄性白血病；慢性骨髄増殖性障害；腱鞘の明細胞肉腫；結腸がん；結腸直腸がん、小児；皮膚Ｔ細胞リンパ腫；子宮内膜がん；上衣腫、小児；上皮がん、卵巣；食道がん；食道がん、小児；ユーイングファミリー腫瘍；頭蓋外胚細胞腫瘍、小児；性腺外胚細胞腫瘍；肝外胆管がん；眼がん、眼球内メラノーマ；眼がん、網膜芽細胞腫；胆嚢がん；胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（Ｓｔｏｍａｃｈ））がん；胃（Ｇａｓｔｒｉｃ）（胃（Ｓｔｏｍａｃｈ））がん、小児；胃腸カルチノイド腫瘍；胚細胞腫瘍、頭蓋外、小児；胚細胞腫瘍、性腺外；胚細胞腫瘍、卵巣；妊娠性絨毛性腫瘍；神経膠腫、小児脳幹；神経膠腫、小児視覚路および視床下部；ヘアリー細胞白血病；頭頸部がん；肝細胞（肝臓）がん、成人（原発性）；肝細胞（肝臓）がん、小児（原発性）；ホジキンリンパ腫、成人；ホジキンリンパ腫、小児；妊娠中のホジキンリンパ腫；下咽頭がん；視床下部および視覚路神経膠腫、小児；眼球内メラノーマ；島細胞癌（膵内分泌部）；カポジ肉腫；腎臓がん；喉頭がん；喉頭がん、小児；白血病、急性リンパ芽球性、成人；白血病、急性リンパ芽球性、小児；白血病、急性骨髄性、成人；白血病、急性骨髄性、小児；白血病、慢性リンパ球性；白血病、慢性骨髄性；白血病、ヘアリー細胞；口唇および口腔がん；肝臓がん、成人（原発性）；肝臓がん、小児（原発性）；肺がん、非小細胞；肺がん、小細胞；リンパ芽球性白血病、成人急性；リンパ芽球性白血病、小児急性；リンパ球性白血病、慢性；リンパ腫、ＡＩＤＳ関連；リンパ腫、中枢神経系（原発性）；リンパ腫、皮膚Ｔ細胞；リンパ腫、ホジキン、成人；リンパ腫、ホジキン；小児；リンパ腫、妊娠中のホジキン；リンパ腫、非ホジキン、成人；リンパ腫、非ホジキン、小児；リンパ腫、妊娠中の非ホジキン；リンパ腫、原発性中枢神経系；マクログロブリン血症、ワルデンストレーム；男性乳がん；悪性中皮腫、成人；悪性中皮腫、小児；悪性胸腺腫；髄芽腫��小児；メラノーマ；メラノーマ、眼球内；メルケル細胞癌；中皮腫、悪性；潜伏性原発性による転移性扁平上皮頸部がん；多発性内分泌新形成症候群、小児；多発性骨髄腫／形質細胞新生物；菌状息肉症；骨髄異形成症候群；骨髄性白血病、慢性；骨髄性白血病、小児急性；骨髄腫、多発性；骨髄増殖性障害、慢性；鼻腔および副鼻腔がん；鼻咽頭がん；鼻咽頭がん、小児；神経芽細胞腫；非ホジキンリンパ腫、成人；非ホジキンリンパ腫、小児；妊娠中の非ホジキンリンパ腫；非小細胞肺がん；口腔がん、小児；口腔および口唇がん；中咽頭がん；骨肉腫／骨の悪性線維性組織球腫；卵巣がん、小児；卵巣上皮がん；卵巣胚細胞腫瘍；卵巣低悪性度腫瘍；膵臓がん；膵臓がん、小児、膵臓がん、島細胞；副鼻腔および鼻腔がん；副甲状腺がん；陰茎がん；褐色細胞腫；松果体およびテント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児；下垂体腫瘍；形質細胞新生物／多発性骨髄腫；胸膜肺芽細胞腫；妊娠および乳がん；妊娠およびホジキンリンパ腫；妊娠および非ホジキンリンパ腫；原発性中枢神経系リンパ腫；原発性肝臓がん、成人；原発性肝臓がん、小児；前立腺がん；直腸がん；腎細胞（腎臓）がん；腎細胞がん、小児；腎盂および尿管、移行細胞がん；網膜芽細胞腫；横紋筋肉腫、小児；唾液腺がん；唾液腺がん、小児；肉腫、ユーイングファミリー腫瘍；肉腫、カポジ；肉腫（骨肉腫）／骨の悪性線維性組織球腫；肉腫、横紋筋肉腫、小児；肉腫、軟部組織、成人；肉腫、軟部組織、小児；セザリー症候群；皮膚がん；皮膚がん、小児；皮膚がん（メラノーマ）；皮膚癌、メルケル細胞；小細胞肺がん；小腸がん；軟部組織肉腫、成人；軟部組織肉腫、小児；潜伏性原発性、転移性による扁平上皮頸部がん；胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（Ｇａｓｔｒｉｃ））がん；胃（ｓｔｏｍａｃｈ）（胃（Ｇａｓｔｒｉｃ））がん、小児；テント上原始神経外胚葉性腫瘍、小児；Ｔ細胞リンパ腫、皮膚性；精巣がん；胸腺腫、小児；胸腺腫、悪性；甲状腺がん；甲状腺がん、小児；腎盂および尿管の移行細胞がん；絨毛性腫瘍、妊娠性；原発部位不明、小児のがん；小児の珍しいがん；尿管および腎盂、移行細胞がん；尿道がん；子宮肉腫；腟がん；視覚路および視床下部神経膠腫、小児；外陰部がん；ワルデンストレームマクログロブリン血症；ならびにウィルムス腫瘍を含む。
【００７３】
用語「化学療法剤」は、本明細書において使用する場合、がんの処置に使用される任意の治療剤を指す。化学療法剤の例として、アクチノマイシン、アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カルボプラチン、カペシタビン、シスプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、シタラビン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、エピルビシン、エポチロン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イダルビシン、イマチニブ、イリノテカン、メクロレタミン、メルカプトプリン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テニポシド、チオグアニン、トポテカン、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍａｍａｂ）、アービタックス（セツキシマブ）、マツズマブ、ＩＭＣ−ＩＩＦ  ８、ＴｈｅｒａＣＩＭ  ｈＲ３、デノスマブ、アバスチン（ベバシズマブ）、ヒュミラ（アダリムマブ）、ハーセプチン（トラスツズマブ）、レミケード（インフリキシマブ）、リツキシマブ、シナジス（パリビズマブ）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン（ｏｘｏｇａｍｉｃｉｎ））、ラプティバ（エファリズマブ）、タイサブリ（ナタリズマブ）、ゼナパックス（ダクリキシマブ（ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ））、ＮｅｕｔｒｏＳｐｅｃ（テクネチウム（９９ｍＴｃ）ファノレソマブ（ｆａｎｏｌｅｓｏｍａｂ））、トシリズマブ、ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ（インジウム−Ｉｌｌ標識カプロマブペンデチド）、ベキサール（トシツモマブ）、ゼヴァリン（イットリウム９０にコンジュゲートされたイブリツモマブチウキセタン（ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８））、ゾレア（オマリズマブ）、ＭａｂＴｈｅｒａ（リツキシマブ）、ＲｅｏＰｒｏ（アブシキシマブ）、ＭａｂＣａｍｐａｔｈ（アレムツズマブ）、シムレクト（バシリキシマブ）、ＬｅｕｋｏＳｃａｎ（スレソマブ（ｓｕｌｅｓｏｍａｂ））、ＣＥＡ−Ｓｃａｎ（アルシツモマブ）、ベルルマ（Ｖｅｒｌｕｍａ）（ノフェツモマブ（ｎｏｆｅｔｕｍｏｍａｂ））、パノレクス（Ｐａｎｏｒｅｘ）（エドレコロマブ）、アレムツズマブ、ＣＤＰ  ８７０およびナタリズマブが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７４】
免疫系は、疾患から保護する、生物内の生物学的構造およびプロセスの系である。この系は、病原体および他の異物から身体を保護し、感染した細胞および悪性細胞を破壊し、細胞デブリを除去する、相互作用する細胞、細胞産物および細胞形成組織の拡散した複雑なネットワークである：系は、胸腺、脾臓、リンパ節およびリンパ組織、幹細胞、白血球、抗体およびリンホカインを含む。Ｂ細胞またはＢリンパ球は、適応免疫系の液性免疫におけるリンパ球の一種であり、免疫監視に重要である。Ｔ細胞またはＴリンパ球は、細胞媒介性免疫において中心的役割を果たすリンパ球の一種である。２種のメジャーなＴ細胞のサブタイプが存在する：キラーＴ細胞およびヘルパーＴ細胞。加えて、免疫応答のモジュレートにおける役割を有するサプレッサーＴ細胞が存在する。キラーＴ細胞は、クラスＩ  ＭＨＣ分子にカップリングした抗原のみを認識する一方、ヘルパーＴ細胞は、クラスＩＩ  ＭＨＣ分子にカップリングした抗原のみを認識する。これら２種の抗原提示機構は、２種のＴ細胞の異なる役割を反映する。第３のマイナーなサブタイプは、ＭＨＣ受容体に結合されていないインタクトな抗原を認識するγδＴ細胞である。対照的に、Ｂ細胞抗原特異的受容体は、Ｂ細胞表面における抗体分子であり、抗原プロセシングを全く必要とせず、病原体全体を認識する。Ｂ細胞の各系列は、異なる抗体を発現するため、Ｂ細胞抗原受容体の完全セットは、身体が製造し得るあらゆる抗体を表す。
【００７５】
Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）は、細胞遊走を惹起することが公知の、造血細胞によって発現され、接着分子のセレクチンファミリー、Ｐ、ＥおよびＬに対する高度に保存されたリガンドである。セレクチンは、細胞接着分子のより広範なファミリーの一部である。ＰＳＧＬ−１は、ファミリーの全３メンバーに結合することができるが、Ｐ−セレクチンに最高親和性で結合する。大部分の白血球上に発現される重度にグリコシル化されたシアロムチンであるＰＳＧＬ−１は、炎症において発現される血管セレクチンにおける白血球ローリングのためのセレクチンリガンドとして、また、リンパ系臓器への静止Ｔ細胞ホーミングの促進因子としての二重機能を有する。ＰＳＧＬ−１は、骨髄への造血幹細胞ホーミング、胸腺への前駆体ホーミングおよびケモカインとの相互作用を介したＳＬＯへのＴ細胞ホーミング等、他の場面において役割を果たすことが判明した。ＰＳＧＬ−１欠乏は、少なくとも３種の異なる仕方で、ＣＤ８＋Ｔ細胞恒常性に影響するようである：１）Ｔ細胞のリンパ節進入に干渉し、これにより、リンパ節における恒常性サイトカインおよび他の生存促進性シグナルへのアクセスを制限することによる；２）リンパ節滞留時間を延長し、これにより、その中の生存促進性シグナルへのＴ細胞の曝露を拡張することによる；ならびに３）サイトカインに対するＴ細胞感受性を増加させることによる。
【００７６】
慢性ウイルス感染は、宿主免疫系の抑制がなされたにもかかわらず両者共に生存した、宿主および病原体の間の入り組んだバランスである恒常性状態の変更を表す。接着分子ＰＳＧＬ−１は、細胞遊走において主に機能すると考えられるが、その発現、シグナル伝達能力および結合特異性は、感染の間の追加的な役割を示唆する。
【００７７】
ＰＳＧＬ−１は、複数の免疫阻害性受容体の発現レベルに関連付けられた、Ｔ細胞応答の以前には認識されていない負の調節因子である。したがって、ＰＳＧＬ−１は、がんを含む免疫障害および炎症性障害を処置するための有意な橋渡しの潜在能（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）を有する。増強された細胞傷害性、サイトカイン産生およびウイルスクリアランスによって測定される通り、ＰＳＧＬ−１欠乏によって、ＣＤ８＋Ｔ細胞が、マウスモデルにおいてインフルエンザウイルスおよびリンパ球性脈絡髄膜炎（ｃｈｏｒｉｏｍｅｎｅｎｇｉｔｉｓ）（ＬＣＭＶ）ウイルスに対しより大きいエフェクター応答を開始することが可能になることが示された。さらに、エフェクターＴ細胞およびメモリーＴ細胞は、生存が改善されるため、上昇した頻度で残存する。ＬＣＭＶバリアント株、クローン１３による慢性感染モデルにおいて、ＰＳＧＬ−１欠乏は、慢性感染を防止する。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、エフェクター機能を保持し、ＰＤ−１といくつかの他の阻害性受容体の高発現を含む疲弊のホールマークを発生することができない。疲弊の特徴を有するＣＤ８＋Ｔ細胞は、メラノーマ患者の血液、リンパ節および腫瘍浸潤細胞において見出される。抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−１または抗ＣＴＬＡ−４による臨床治験は、ある程度の顕著な有効性を示したが、複数の受容体の遮断が、より大きい影響を有するであろうという概念が、メラノーマ患者由来のＴ細胞の試験によって示唆される。ＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｔ細胞のより優れた機能は、複数の阻害性受容体がより低レベルであることに関連するため、本発明者らは、ＰＳＧＬ−１の遮断が、メラノーマに対するＴ細胞免疫応答の改善に必要な特質を有し得ることを提案する。ＰＳＧＬ−１は、その寛容原性機能が、ＰＳＧＬ−１欠乏により失われる、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）およびＤＣによっても発現される。よって、ＰＳＧＬ−１の遮断は、エフェクターＴ細胞の応答を増強し得るのみならず、ＴｒｅｇおよびＤＣの免疫抑制性応答も制限することができる。
【００７８】
後述する実施例に記載する通り、ＰＳＧＬ−１が、予想外にＴ細胞機能の調節因子としての役割を果たすことが確立された。該Ｔ細胞機能の調節因子は慢性ウイルスによって利用され、エフェクターＴ細胞免疫を阻止して、持続性感染を可能にするが、同時に免疫媒介性宿主組織損傷を制限することができる。ＰＳＧＬ−１欠損宿主において、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｔ細胞疲弊のホールマークを獲得することができず、代わりに、頑強な多機能エフェクターへと発達し、それは、高いレベルで維持され、ＣＤ４＋Ｔ細胞を機構的に必要とした結果である、早期ウイルスクリアランスを続いて促進した。この有効な抗ウイルス免疫は、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞の両方における阻害性受容体の発現低下、ならびに炎症促進性サイトカインおよび免疫病理の全身性レベル増加に関連した。ＣＤ４＋Ｔ細胞の非存在下で、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおけるＣＤ８＋Ｔ細胞は、阻害性受容体を下方調節することができず、機能疲弊を呈し、ウイルスクリアランスを支持することができなかった。したがって、ＣＤ４＋細胞のＰＳＧＬ−１依存性阻害の軽減は、ＣＤ８＋Ｔ細胞による有効な抗ウイルス応答の誘導の鍵となる。ＰＳＧＬ−１は、ウイルス制御低下にも寄与し得る、ＣＤ８＋エフェクター細胞およびＣＤ４＋エフェクター細胞生存の制限におけるＴ細胞固有の役割も果たす。
【００７９】
Ｃｌ１３感染後の持続性ウイルス複製は、生存サイトカインである、ＩＬ−２、１Ｌ−７および１Ｌ−２１の産生、利用能およびこれに対する応答を消滅させることにより、ＣＤ８＋Ｔ細胞疲弊およびアポトーシスを駆動する。重要なことに、ＰＳＧＬ−１欠乏は、ＩＬ−７ＲαおよびＢｃ１−２の発現の増加および持続に関連し、ＩＬ−７Ｒαシグナル伝達増強が、エフェクターＴ細胞生存を改善するための一機構をもたらすことを示唆する。この結論は、ＩＬ−７の治療的投与が、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大し、そのエフェクター機能を増加させ、持続的Ｃｌ１３感染を防止するという知見によって支持される。ＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ８＋Ｔ細胞における高親和性ＩＬ−２受容体、ＣＤ２５の発現増加、およびＣＤ４＋Ｔ細胞からのＩＬ−２のより優れた利用能も、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞の生存および機能の改善の基礎をなすことができる。以前の試験は、ＩＬ−２が、Ｃｌ１３感染マウスに投与されると、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を増加させ、ウイルス負荷を低下させることを示した。ＣＤ８＋Ｔ細胞による進行性機能喪失は、ＩＬ−２および１Ｌ−７によって反転され得るＴＧＦ−αによって媒介されるアポトーシスにより高親和性クローンの排除をもたらし得るため、本発明者らの知見は、組み合わせて、ウイルス特異的ＣＤ８−＋Ｔ細胞に対する増強されたＩＬ−７シグナルおよび１Ｌ−２シグナルが、生存の機構に寄与し得ることを示唆する。しかし、ＩＬ−２１の血清レベル上昇は、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおけるＣＤ８＋Ｔ細胞応答のピークにおいて検出され、ＩＬ−２１は、慢性ＬＣＭＶ感染の間、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を持続させるため、ＣＤ４＋Ｔ細胞および他の細胞型によって産生されるこのγｃサイトカインも、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞生存の機構に寄与し得る。Ｔ濾胞性ヘルパー細胞（Ｔｆｈ）の生成および機能に必要なＩＬ−６のレベル増加も観察され、これにより、慢性ＬＣＭＶの最終的な制御に寄与する抗体応答改善をもたらした。以下に記載する結果は、ＷＴマウスにおいて、ＰＳＧＬ−１が、数種類の生存促進性サイトカインに対するウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞生存応答を制限することにより、また、ＣＤ４  Ｔ細胞ヘルプに関係付けられた鍵となるサイトカインの産生を制約することにより、Ｃｌ１３に対するＴ細胞応答の減弱における中心的役割を果たすことを示す。
【００８０】
慢性ウイルス感染は、数種類の免疫阻害性受容体に関連する機能不全の状態における抗ウイルスＴ細胞応答を維持する。解析された受容体、ＰＤ−１、ＣＤ１６０およびＢＴＬＡのそれぞれが、Ｃｌ１３感染後のＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ８＋エフェクターおよびＣＤ４＋エフェクターにおいて下方モジュレートされ、抗ウイルス応答が、劇的に改善されたことが際立つ。結果は、ＰＳＧＬ−１が、正常には、過剰なＴ細胞応答を防止する調節性プログラムの鍵となる部分であることを暗示する。ＰＳＧＬ−１欠乏は、静止Ｔ細胞に明らかな効果がなかった上に、固有の炎症応答ももたらさなかった；しかし、その非存在は、Ｃｌ１３感染後に免疫病理および死亡率増加をもたらす。このことは、持続性抗原に対する過剰なＴ細胞応答および宿主組織破壊のバランス保持におけるＰＳＧＬ−１の機能を強調する。機構的には、抗原刺激中のＰＳＧＬ−１のライゲーションが、疲弊したＣＤ８＋Ｔ細胞の生存低下および残る生存細胞におけるＰＤ−１上方調節をもたらしたことが判明し、ＰＳＧＬ−１シグナル伝達が、この受容体の発現に関連することが示された。
【００８１】
ＣＤ８＋Ｔ細胞機能不全に通常関連する転写調節の変化は、ｈｏｍｅｓの発現低下およびＴ−ｂｅｔ増強を含み、これは、急性感染中のメモリー形成とは対照的に慢性感染中のエフェクター分化に有利である。これらの転写因子は、慢性ＬＣＭＶ感染における反対の役割を有し、より多くの疲弊したウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞が、より高いレベルのｈｏｍｅｓおよび低下したＴ−ｂｅｔレベルを発現する。Ｔ−ｂｅｔ発現上昇は、ＰＤ−１発現を抑制するため、ＰＳＧＬ−１欠乏が、ｈｏｍｅｓ低下およびより多くのＴ−ｂｅｔを引き起こしたことが際立ち、転写調節および疲弊マーカーの変化が、ＰＳＧＬ−１発現に関連するという概念をさらに支持する。
【００８２】
高ＰＳＧＬ−１発現は、寛容原性ＤＣおよび大部分の抑制性Ｔｒｅｇを表す、機能調節に関連付けられてきたＤＣおよびＴｒｅｇを含む多くの細胞型に見出すことができ、したがって、ＰＳＧＬ−１は、慢性感染の間にＴ細胞機能不全に間接的に寄与する他の細胞における役割を果たすことができる。しかし、本発明者らの結果は、これらの効果が、ＰＳＧＬ−１欠乏の場面において生じる場合、ＰＳＧＬ−１の調節活性の実現にＣＤ４１１−Ｔ細胞の活性を必要とすることを示す。ＰＳＧＬ−１欠損マウスは、微妙な表現型を有することが報告されており、本発明者らのデータは、感染が、深刻なＰＳＧＬ−１依存性阻害効果の誘導に必要であることを示す。胸腺へのプレＴ細胞およびリンパ節へのナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の変更された輸送にもかかわらず、おそらくより大きいターンオーバーのため、メモリー表現型細胞は、若干増加したが、末梢性ナイーブＴ細胞は、ＰＳＧＬ−１の非存在下で正常に生成されるようである。エフェクター細胞生存におけるＰＳＧＬ−１欠乏のＴ細胞固有効果およびＣＤ４＋Ｔ細胞枯渇による増強された抗ウイルス免疫の反転を考慮すると、ＰＳＧＬ−１欠乏の場面における調節のより微妙な側面は、この試験の成果に本質的な寄与を為すとは思われない。
【００８３】
抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１および／または抗ＣＴＬＡ−４による近年の臨床治験は、慢性ウイルスまたは腫瘍に対する免疫が、阻害経路に干渉することにより改善され得るという概念を支持する。さらに、阻害性受容体の組合せの標的化が、より大きい有効性をもたらすことができ、複数の阻害性受容体は、ＰＳＧＬ−１によって減少するため、この受容体は、その阻害がいくつかの臨床的な場面におけるＴ細胞応答を改善し得る新規標的となることができる。
【００８４】
一実施形態では、本発明は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、Ｔ細胞媒介性疾患または障害を処置する方法を提供する。一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アゴニストまたはアンタゴニストである。別の態様では、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、感染性疾患、がん、自己免疫性障害または炎症性障害である。追加的な態様では、感染性疾患は、ボツリヌス中毒、腺ペスト、カリシウイルス感染（ノロウイルスおよびサポウイルス）、水痘、クラミジア、コレラ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染、感冒（急性ウイルス鼻咽喉炎；急性コリーザ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）、デング熱、ジフテリア、エボラ出血熱、淋病、手足口病（ＨＦＭＤ）、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ感染、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、Ｅ型肝炎、単純ヘルペス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）感染、エプスタイン・バーウイルス感染性単核症（Ｍｏｎｏ）、インフルエンザ（ｆｌｕ）、レジオネラ症（レジオネラ病）、ハンセン病、ライム病（ライムボレリア症）、マラリア、マールブルグ出血熱（ＭＨＦ）、麻疹、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、髄膜炎、ムンプス、百日咳（Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）（百日咳（Ｗｈｏｏｐｉｎｇ  ｃｏｕｇｈ））、ペスト、進行性多巣性白質脳症、狂犬病、ライノウイルス感染、ロッキー山紅斑熱（ＲＭＳＦ）、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ（重症急性呼吸器症候群）、疥癬、敗血症、細菌性赤痢（細菌赤痢）、帯状疱疹（帯状ヘルペス）、天然痘（痘瘡）、梅毒、破傷風（開口障害）、結核、腸チフス熱、渓谷熱、ウイルス性肺炎、ウエストナイル熱または黄熱である。ある特定の態様では、がんは、前立腺、結腸、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頸部、神経（中枢および末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟部組織、脾臓、胸部または尿生殖路である。さらなる態様では、自己免疫性障害は、アジソン病、筋萎縮性側索硬化症、クローン病、クッシング症候群、１型糖尿病、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、全身性エリテマトーデス、移植片拒絶または血管炎である。具体的な態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アゴニストであり、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、自己免疫疾患または障害あるいは炎症性疾患または障害である。ある特定の態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アンタゴニストであり、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、がんまたは感染性疾患である。
【００８５】
一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である。具体的な態様では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。別の態様では、ＣＤ４＋依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、増加する。追加的な態様では、ウイルス特異的Ｔ細胞は、増加する。別の態様では、ＴｒｅｇおよびＤＣ応答は、増加する。さらなる態様では、ＦｏｘＰ３、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βおよび／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、増加する。ある態様では、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７のＣＤ８＋分泌は、増加する。他の態様では、ＰＤ−１、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の発現は、減少または減少する。一態様では、ＣＤ２５およびＴ−ｂｅｔの発現は、増加する。別の態様では、ウイルスクリアランスは、増加する。追加的な態様では、方法は、治療剤の投与をさらに含む。さらなる態様では、治療剤は、免疫モジュレーター、化学療法剤、抗ウイルス剤、抗細菌剤または抗真菌剤である。
【００８６】
追加的な実施形態では、本発明は、ＰＳＧＬ−１モジュレーターを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、Ｔ細胞応答を誘発する方法を提供する。ある態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アゴニストまたはアンタゴニストである。別の態様では、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、感染性疾患、がん、自己免疫性障害または炎症性障害である。一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である。具体的な態様では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。別の態様では、ＣＤ４＋依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、増加する。追加的な態様では、ウイルス特異的Ｔ細胞は、増加する。別の態様では、ＴｒｅｇおよびＤＣ応答は、増加する。さらなる態様では、ＦｏｘＰ３、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βおよび／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、増加する。ある態様では、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７のＣＤ８＋分泌は、増加する。他の態様では、ＰＤ−１、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の発現は、減少または増加する。一態様では、ＣＤ２５およびＴ−ｂｅｔの発現は、増加する。
【００８７】
さらなる実施形態では、本発明は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターを、それを必要とする被験体に投与するステップを含む、Ｔ細胞機能を回復させる方法を提供する。ある態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、アゴニストまたはアンタゴニストである。別の態様では、Ｔ細胞媒介性疾患または障害は、感染性疾患、がん、自己免疫性障害または炎症性障害である。一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である。具体的な態様では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。別の態様では、ＣＤ４＋依存性ＣＤ８＋Ｔ細胞応答は、増加する。追加的な態様では、ウイルス特異的Ｔ細胞は、増加する。別の態様では、ＴｒｅｇおよびＤＣ応答は、増加する。さらなる態様では、ＦｏｘＰ３、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−βおよび／またはＭＨＣクラスＩＩの発現は、増加する。ある態様では、ＩＦＮγ、ＴＮＦαおよびＣＤ１０７のＣＤ８＋分泌は、増加する。他の態様では、ＰＤ−１、ＢＴＬＡおよびＣＤ１６０の発現は、減少または増加する。一態様では、ＣＤ２５およびＴ−ｂｅｔの発現は、増加する。追加的な態様では、方法は、治療剤の投与をさらに含む。さらなる態様では、治療剤は、免疫モジュレーター、化学療法剤、抗ウイルス剤、抗細菌剤または抗真菌剤である。
【００８８】
一実施形態では、本発明は、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）モジュレーターと、医薬キャリアとを含む医薬組成物を提供する。一態様では、ＰＳＧＬ−１モジュレーターは、抗体、小分子、タンパク質、融合タンパク質または核酸である。追加的な態様では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体である。
【００８９】
本発明を、そのあらゆる態様において、次の実施例においてさらに説明する。しかし、実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義される。
【実施例】
【００９０】
（実施例１）
ＰＳＧＬ−１発現は、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞において増加し、ＰＳＧＬ−１欠損マウスは、Ｃｌ１３感染の間にウイルス特異的Ｔ細胞の蓄積を有する
【００９１】
慢性ウイルス感染におけるＰＳＧＬ−１を試験するために、９０−ｄｐｉまでにウイルス血症ならびに２００日の感染後日数（ｄｐｉ）までに脳および腎臓における検出可能ウイルスをもたらすＬＣＭＶ  Ｃｌ１３ウイルスを使用した。ＧＰ３３−４１＋ＬＣＭＶエピトープに特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＳＧＬ−１レベルを先ず四量体染色によって試験した。ＰＳＧＬ−１は、全Ｔ細胞によって発現されるが、そのレベルは、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞と比較してウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞において増加した（図１ａ）。抗ウイルス応答に対するＰＳＧＬ−１の寄与を試験するために、ＷＴマウスまたはＰＳＧＬ−１欠損マウスをＣｌ１３に感染させ、ＬＣＭＶ  ＧＰ３３−４１＋エピトープおよびＮＰ３９６−４０４＋エピトープに特異的なＣＤ８＋Ｔ細胞を解析した。ＰＳＧＬ−１欠損マウスは、８−ｄｐｉにＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞の大幅に増加した頻度および数を有した（図１ｂ）。ＣＤ８＋Ｔ細胞蓄積の差は、４−ｄｐｉ後まで観察されず（図８ａ〜ｂ）、３０−ｄｐｉにわたって四量体細胞を維持した（図８ｃ〜ｅ）。ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおけるＮＰ３９６−４０４＋Ｔ細胞の保存が最も印象的であった（図１ｂ、ｃ）が、これは、このような細胞が、ＷＴマウスにおいて３０−ｄｐｉまでに大部分は欠失されるからである（図８ｃ〜ｅ）。ウイルス特異的ＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおいて増加したことも判明した（図１ｄ、ｅ）。この差は、５−ｄｐｉまでに観察された（図７ａ）。
【００９２】
内皮におけるＥ−セレクチンおよびＰ−セレクチンによる、Ｔ細胞におけるＰＳＧＬ−１の関与は、炎症部位への遊走に重要である場合があるため、ＰＳＧＬ−１欠損マウスの血液および脾臓におけるＣＤ８＋Ｔ細胞蓄積は、末梢部位への損なわれた遊走に起因し得る。脾臓とは異なり、Ｔ細胞進入に接着受容体調節を必要とする、代わりの感染部位を表す肺を試験した。脾臓における知見と一致して、ＰＳＧＬ−１欠損マウスの肺におけるウイルス特異的ＣＤ８＋（図９ａ、ｂ）およびＣＤ４＋Ｔ細胞（図９ｃ、ｄ）は、ＷＴマウスよりも大きい程度まで蓄積した。結果は、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおいて、ウイルス特異的Ｔ細胞が、ＷＴ細胞よりも際立って多い数で保存されることを示す。
（実施例２）
ＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ８＋Ｔ細胞は、増強された生存を有する
【００９３】
増強された増殖および／または生存は、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおけるウイルス特異的Ｔ細胞の蓄積をもたらすことができる。増殖を評価するために、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞によるｉｎ  ｖｉｖｏ  ＢｒｄＵ取り込みを８−ｄｐｉに解析した。ＢｒｄＵは、およそ５０％（−５０％）のＷＴ  ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を標識したが、僅かおよそ２５％（−２５％）のＰＳＧＬ−１欠損ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を標識した（図２ａ）。同様に、ＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ４＋ウイルス特異的細胞よりも２×多いＷＴ  ＧＰ６６−７６ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ＢｒｄＵを取り込んだ（図２ｂ）。分裂は、より多い数のＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ８＋Ｔ細胞をもたらすとは思われなかったため、ＣＤ８＋エフェクター細胞による生存分子、ＩＬ−７Ｒαおよびその下流シグナル伝達標的Ｂｃ１−２の発現レベルを試験した。１０−ｄｐｉに、ＰＳＧＬ−１欠損マウス由来のＧＰ３３−４１＋Ｔ細胞およびＮＰ３９６−４０４＋Ｔ細胞の両方は、ＷＴ細胞と比較して、増加したレベルのＩＬ−７Ｒα（図２ｃ）およびＢｃ１−２（図２ｄ）を呈した。さらに、ＰＳＧＬ−１欠損ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＩＬ−７Ｒαレベルは、増殖期（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ｐｈａｓｅ）を通してＷＴ細胞のものよりも高かった（図１０ａ、ｂ）。ＰＳＧＬ−１欠損マウス由来のＧＰ３３−４１＋Ｔ細胞およびＮＰ３９６−４０４＋Ｔ細胞におけるＣＤ２５レベルも増加した（図２ｅ）一方、ＩＬ−２１Ｒ、ＣＤ１２２およびＩＬ−６Ｒを含む、Ｔ細胞生存を増強し得る他のサイトカインの受容体は、同様であったまたは低下した（図１０ｃ〜ｅ）。合わせると、これらの知見は、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおけるウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積が、生存増強の結果である可能性が最も高かったことを示す。
（実施例３）
ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおけるウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞は、多機能エフェクターである
【００９４】
ＷＴマウスにおける慢性ウイルス感染は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−２を産生するならびにこれらのサイトカインのうち２種以上を同時に産生するＣＤ８＋Ｔ細胞能力の逐次喪失をもたらすため、サイトカイン産生を試験した。ＷＴ細胞と比較して、ＩＦＮγおよびＩＦＮ−γ＋ＴＮＦ−αを共に分泌するＰＳＧＬ−１欠損ＧＰ３３−４１＋Ｔ細胞のはるかに高い頻度が見出された（図３ａ）。ＮＰ３９６−４０４＋Ｔ細胞応答も機能的であった（図３ｂ）。細胞当たり、ＷＴにおいてＧＰ３３−４１＋Ｔ細胞のおよそ１０％がＩＦＮ−γを産生したのに対し、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおいておよそ７０％が産生した（図３ａ）。さらに、ウイルス特異的ＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ８＋Ｔ細胞は、有意により高いレベルのサイトカインを産生した（図１１ａ、ｂ）。ＧＰ３３−４１＋およびＮＰ３９６−４０４＋ＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ８＋Ｔ細胞の両方が、増強されたＣＤ１０７ａレベルを有し、ＩＦＮ−γ分泌（ｓｅｃｔｉｏｎ）と共に、より優れた細胞傷害性脱顆粒を示した（図３ｃ）が、ＷＴおよびＰＳＧＬ−１欠損ＧＰ３３−４１＋ＣＤ８＋Ｔ細胞は、グランザイムＢ（Ｇｚｒｎｂ）タンパク質のレベルに関して異ならなかった（図３ｄ）。
【００９５】
転写プログラムは、急性ＬＣＭＶ感染  対  慢性ＬＣＭＶ感染で異なる。Ｔ−ｂｅｔは、急性感染の間のＣＤ８＋Ｔ細胞エフェクターおよびメモリー分化の調節において重要であるが、Ｃｌ１３感染の間、疲弊したＣＤ８＋Ｔ細胞は、低下したＴ−ｂｅｔ発現を有し、これはＰＤ−１レベルを持続させるように作用する。Ｔ−ｂｅｔは、ＰＤ−１をコードするＰｄｃｄｌ遺伝子に直接的に結合し、その発現を抑制することができるため、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＴ−ｂｅｔレベルを試験したところ、ＷＴ細胞と比較して、１０−ｄｐｉのＰＳＧＬ−１欠損マウスのＧＰ３３−４４＋Ｔ細胞における発現増加を見出した（図３ｅ）。さらに、ＷＴ  Ｃｌ１３感染マウスにおける死に運命付けられた最終分化ＣＤ８＋Ｔ細胞をマークする高Ｅｏｍｅｓレベルは、ＰＳＧＬ−１欠損マウスのＧＰ３３−４１＋Ｔ細胞において低下した（図３ｆ）。よって、ＷＴマウスにおけるＣＤ８＋Ｔ細胞は、Ｃｌ１３感染の間に疲弊を発生するが、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおいて、これは代わりに、多機能エフェクターを生成する。
【００９６】
持続性感染中のＣＤ４＋Ｔ細胞の重要性は、ＣＤ４＋Ｔ細胞枯渇Ｃｌ１３感染マウスが、ウイルス血症を制御できないことによって強調される。ＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋細胞により、サイトカイン産生に関して改善された機能性も観察された（図３ｇ、図１１ｃ〜ｅ）。ＰＳＧＬ−１欠損マウス由来のより多くのウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＷＴマウス由来のものと比較して上昇したＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−２を産生し、これらのウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞は多機能的であり、ダブル／トリプルサイトカイン産生株の数が増加した（図３ｇ）だけではなく、より高いレベルのサイトカインも産生した（図１１ｃ〜ｅ）。これらの知見は、Ｃｌ１３感染後に、ＷＴマウスよりも多い数の機能的に優れたウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔエフェクター細胞が、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおいて発生することを実証する。
（実施例４）
ＰＳＧＬ−１欠損Ｔ細胞は、低下した阻害性受容体発現を有する
【００９７】
Ｔ細胞疲弊は、一部には、ＰＤ−１、ＣＤ１６０、Ｌａｇ−３およびＢＴＬＡを含む複数の阻害分子の発現の結果であるため、感染後のＷＴマウスおよびＰＳＧＬ−１欠損マウスのウイルス特異的Ｔ細胞におけるこれらの受容体を試験した。ウイルス特異的ＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１レベルが、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおいて７−ｄｐｉまでに減少し始め、８日目にさらに減少したことが判明した（図４ａ、ｂ）。この時点で、ＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ４  Ｔ細胞におけるＢＴＬＡレベルも減少した（図４ｂ）。同様に、ＷＴと比較して、ＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ８＋Ｔ細胞は、８−ｄｐｉに、より低いレベルのＰＤ−１を発現したが、同様のレベルのＣＤ１６０およびＢＴＬＡを発現した（図１２ａ、ｂ）。ＰＳＧＬ−１欠損ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞は、９−ｄｐｉまでに全３種の受容体の発現の減少を示した（図４ｃ、ｄ）。さらに、ＰＤ−１下方調節は、１５、３０および１１２−ｄｐｉで持続された（図１２ｃ〜ｅ）。これらの知見は、協調的に調節しなかったが、低下した阻害性受容体レベルは、Ｃｌ１３感染後のＰＳＧＬ−１欠損マウスのウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞における機能性と相関することを示す。
（実施例５）
ウイルス特異的ＰＳＧＬ−１欠損Ｔ細胞の蓄積は、細胞固有である
【００９８】
ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおけるＣｌ１３に対する改善された応答のいずれの特色が、Ｔ細胞に固有であるかに取り組むために、ＷＴおよびＬＣＭＶのＧＰ３３−４１エピトープに特異的なＰＳＧＬ−１欠損ＴＣＲトランスジェニックＣＤ８＋Ｐ１４細胞を使用し、これらの細胞をＷＴ宿主に移入した。ＷＴ細胞およびＰＳＧＬ−１欠損Ｐ１４細胞の活性化状態をｅｘ  ｖｉｖｏで直接的に試験したところ、ＣＤ４４およびＣＤ６２Ｌの（図１３ａ）ならびにＣＤ２５、ＣＤ６９およびＩＬ−７Ｒαの（図１３ｂ）同様の発現レベルを見出した。続いて、ＷＴ細胞およびＰＳＧＬ−１欠損Ｐ１４細胞を１：１比でＷＴ宿主に共トランスフェクトし、１日後にＣｌ１３にマウスを感染させた。ＰＳＧＬ−１欠損Ｐ１４細胞とＷＴ  Ｐ１４細胞との増加した比が、５および７−ｄｐｉに脾臓（図５ａ）および肺（図５ｂ）において見出された。この増加は、脾臓におけるより多い数のＰＳＧＬ−１欠損Ｐ１４細胞（図５ｃ）ならびに１３−ｄｐｉの脾臓および肺における頻度増加（図１３ｃ）によっても反映された。この蓄積は、８−ｄｐｉ（データを示さず）および１３−ｄｐｉ（図１３ｄ、ｅ）におけるＢｒｄＵ取り込みによって測定される増殖増加の結果ではなく、これは、ＰＳＧＬ−１欠損Ｔ細胞が、ＷＴ細胞よりも十分に生存したという概念を支持する。さらに、ＷＴ細胞およびＰＳＧＬ−１欠損Ｐ１４細胞におけるＣＦＳＥ希釈は、２−ｄｐｉにおいて同一であり、実際にこの時点で、ＷＴ細胞は、僅かな蓄積利点を有していた（図５ｅ）。より大きい蓄積にもかかわらず、ＰＳＧＬ−１欠損細胞は、予想通り、Ｃｌ１３感染によりＷＴ環境において応答する際に、疲弊した表現型（減少したサイトカイン産生および高ＰＤ−１）を呈した（データを示さず）。よって、ＰＳＧＬ−１欠損ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の蓄積は、細胞固有であったが、その機能回復は、ＰＳＧＬ−１欠損環境における追加的な因子に依存する。次に、ＷＴ細胞およびＰＳＧＬ−１欠損トランスジェニックＳｍａｒｔａ  ＣＤ４＋Ｔ細胞により、ウイルス特異的ＣＤ４＋細胞におけるＰＳＧＬ−１の機能を試験した。ＷＴマウスに共移入されると、平行増加した数により、感染後の脾臓（図５ａ）および肺（図５ｂ）において５−ｄｐｉおよび７−ｄｐｉに、ＷＴ細胞に対するＰＳＧＬ−１−欠損細胞の増加した比が観察された（図５ｄ）。細胞固有生存を有するにもかかわらず、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋ＰＳＧＬ−１欠損エフェクターの両方が、ＷＴ環境において機能的にレスキューされ得ない。
（実施例６）
ＰＳＧＬ−１ライゲーションは、疲弊したＣＤ８＋Ｔ細胞の生存を減少させる
【００９９】
ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＳＧＬ−１ライゲーションの影響を決定するために、ＣＤ８＋Ｔ細胞が機能的に疲弊されるポイントである９−ｄｐｉにＷＴマウスから脾細胞を単離した。４日間のＧＰ３３−４１刺激後に、およそ７％の生存可能四量体（ｔｅｔｒａｒｎｅｒ）＋ＣＤ８＋Ｔ細胞が見出された（図５ｆ）。抗ＰＳＧＬ−１抗体の存在下でＧＰ３３−４１ペプチドにより脾細胞を刺激した場合、四量体ＣＤ８＋Ｔ細胞生存は、ＩｇＧまたは抗ＰＳＧＬ−１のみを含有する培地による培養物におけるものと同様のレベルまで、およそ５０％減少した（図５ｆ）。ＰＤ−１レベルは、ペプチド刺激後に増加し、このようなレベルは、ペプチド刺激中に抗ＰＳＧＬ−１が存在する場合、さらに上昇した（図５ｇ）。これらの結果は、抗原刺激中のＰＳＧＬ−１ライゲーションが、ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の生存を制限し、そのＰＤ−１発現を増強することができることを示す。
（実施例７）
ＰＳＧＬ−１欠損マウスは、慢性ＬＣＭＶ制御を排除するが、免疫病理の増強を示す
【０１００】
減少した免疫阻害性受容体発現と共に、改善された機能的ＣＤ４＋Ｔ細胞応答およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答が、ＷＴマウスと比較してＰＳＧＬ−１欠損マウスにおいて観察されたため、Ｃｌ１３ウイルスを制御するＰＳＧＬ１欠損マウスの能力を試験した。３０−ｄｐｉまでに上昇したウイルス血症を有したＷＴマウスと比較して、ＰＳＧＬ−１欠損マウスは、１５−ｄｐｉまでに血液からウイルスを排除したことが判明した（図６ａ）。しかし、改善された抗ウイルスＴ細胞応答は、＞５０％死亡率に関連し、死亡は８−ｄｐｉに始まった（図６ｂ）。全身性炎症に取り組むために、炎症促進性サイトカインを試験し、ＰＳＧＬ−１欠損マウスが、ＩＬ−６、ＩＬ−２１、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γの劇的に上昇した血清レベルを有したことを観察した（図６ｃ）。さらに、８−ｄｐｉの肺浸潤（図６ｄ、図１４ａ）、水腫および炎症（図６ｄ、ｅ）を含む肺の免疫病理は、ＰＳＧＬ−１欠損感染マウスにおいて増加した。病変の進展は、腎臓、肝臓および腸においても明らかであった（図１４ａ、ｂ）。よって、ＰＳＧＬ−１欠損マウスは、ＷＴマウスよりもさらに有効にウイルス複製を制御したが、これは、免疫病理により広範囲の炎症および増加した死亡率をもたらす。したがって、ＰＳＧＬ−１は、過度に過剰増殖性なエフェクター応答を制限するように機能する。
（実施例８）
ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおける最適なウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞機能は、ＣＤ４＋Ｔ細胞を必要とする
【０１０１】
ＣＤ８  Ｔ細胞応答の影響におけるＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＰＳＧＬ−１欠乏の役割と一貫して、５−ｄｐｉまでにＰＳＧＬ−１欠損マウスにおいてＧＰ６６−７６＋ＣＤ４＋Ｔ細胞の増加が観察され、９−ｄｐｉまでに蓄積をさらに増加した（図７ａ）。その寄与を試験するために、抗ＣＤ４抗体を投与することにより、ＰＳＧＬ−１欠損マウス由来のＣＤ４＋Ｔ細胞を枯渇させた。Ｃｌ１３に対するＣＤ８＋Ｔ細胞応答を、対照抗体で処置したマウス由来のＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ８＋Ｔ細胞のものまたはＷＴ  Ｔ細胞のものと比較した。ＣＤ４＋Ｔ細胞枯渇ＰＳＧＬ−１欠損マウスが、ＷＴマウスに見られるレベルまで低下した頻度のＧＰ３３−４１＋Ｔ細胞およびＮＰ３９６−４０４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を有したことが判明した（図７ｂ）。さらに、ＣＤ４＋Ｔ細胞枯渇ＰＳＧＬ−１欠損マウスは、１０−ｄｐｉに、ＣＤ４＋Ｔ細胞を有したＰＳＧＬ−１欠損マウスと比較して、低下した数のＩＦＮ−γＴ細胞およびＩＦＮ−γ＋ＴＮＦ−α＋ＣＤ８＋Ｔ細胞を有した（図７ｃ）。これは、ＧＰ３３−４１＋Ｔ細胞およびＮＰ３９６−４０４＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１レベルの変化とよく似ており、ＰＤ−１レベルは高いままであり、ＷＴ細胞におけるレベルと同様のレベルであった（図７ｄ）。１０−ｄｐｉに血清Ｃｌ１３レベルが低下したＰＳＧＬ−１欠損マウスとは異なり、ＣＤ４＋Ｔ細胞枯渇マウスにおいて、ウイルスレベルは依然として、ＷＴマウスにおけるものに匹敵していた（図７ｅ）一方、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおける力価は、この時点で減少していた。さらに、１０−ｄｐｉ後のＰＳＧＬ−１欠損マウスの死亡率は、ＣＤ４＋Ｔ細胞枯渇マウスにおいて防止された（図７ｅ）。これらの結果は、ウイルス特異的ＰＳＧＬ−１欠損ＣＤ８＋Ｔ細胞は、機能疲弊をエスケープするために、ＣＤ４＋Ｔ細胞からのヘルプを必要とすることを示す。よって、その改善された数および機能によって、ＣＤ４＋Ｔ細胞が、ＰＳＧＬ−１欠乏の場面においてＣＤ８＋Ｔ細胞機能をモジュレートすることが決定された。
（実施例９）
材料＆方法
【０１０２】
マウス。Ｃ５７ＢＬ／６．１マウスおよびＳｅｌｐｌｇ−／−マウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。特定の病原体を含まない施設においてマウスを飼育および維持し、Ｓａｎｆｏｒｄ−Ｂｕｒｎｈａｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの従来のＢＳＬ−２施設において感染させた。Ｓｅｌｐｌｇ−／−マウスを、１０世代を超えてＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスと戻し交配した。ＰＩ４およびＳｍａｒｔａ  ＴＣＲトランスジェニックマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｄ．Ｓｕｒｈ（Ｔｈｅ  Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）から得た。これらのマウスを、Ｌｙ５．１（Ｂ６．ＳＪＬ−ＰｔｐｒｃａＰｅｐｃｂ／ＢｏｙＪ）マウスまでおよびＴｈｙ１．１（Ｂ６．ＰＬ−Ｔｈｙｌａ／ＣｙＪ）、Ｓｅｌｐｌｇ−／−マウスまで飼育した。実験に使用したマウスは、少なくとも６週齢であった。実験は、Ｓａｎｆｏｒｄ−Ｂｕｒｎｈａｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ＩＡＣＵＣ規制を遵守しかつ獣医の承認を受けた。
【０１０３】
感染、増殖および細胞移入。ＬＣＭＶ  Ｃｌ１３株をベビーハムスター腎臓細胞において増殖させ、Ｖｅｒｏアフリカミドリザル腎臓細胞において力価決定した。凍結したストックをＭ  Ｖｅｒｏ細胞培地に希釈し、２×１０６プラーク形成単位（ＰＦＵ）のＬＣＭＶ  Ｃｌ１３をｉ．ｖ．注射した。増殖を評価するために、感染後８または１３日目に、脾臓および肺からリンパ球を単離する１６時間前に、マウスに２ｍｇのＢｒｄＵ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）をｉ．ｐ．注射した。養子移入のため、ＷＴ  Ｐ１４およびＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｐ１４細胞を精製し（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈ）、１×１０３個の細胞をＷＴマウスにｉ．ｖ．移入し、１日後にＬＣＭＶ  Ｃ１１３を該マウスに感染させた。
【０１０４】
フローサイトメトリーおよび染色。４℃で２０分間または室温で１時間１５分間、ＦＡＣＳ染色バッファー（２％ＦＢＳおよび０．０１％アジ化ナトリウム）を補充したＰＢＳにおける四量体染色のために、細胞を表面染色した。Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ製の次の抗体を使用した：抗ＣＤ８α（クローン５３−６．７）、抗ＰＤ−１（クローンＲＭＰ１−３０）、抗ＣＤ４（クローンＧＫＩ．５）、抗ＣＤ９０．１（クローンＯＸ−７）、抗ＣＤ４５．１（クローンＡ２０）、抗ＩＬ−２１Ｒ（クローン４Ａ９）、抗ＣＤ１２６（クローンＤ７７１５Ａ７）、抗ＣＤ４４（クローンＩＭ７）、抗ＣＤ６２Ｌ（クローンＭＥＬ−１４）。次のクローンは、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製であった：抗ＣＤ１２７（ＩＬ−７ＲａクローンＡ７Ｒ３４）、抗ＣＤ１６０（クローンｅｂｉｏｃｎｘ−３）、抗ＢＴＬＡ（クローン６ｆ７）。次の抗体は、ＢＤ製であった：抗ＣＤ１２２（クローンＴＭ−（３１）、抗ＢｃＩ−２（クローン３Ｆ１１）、抗ＣＤ１０７（クローン１Ｄ４Ｂ）、抗ＣＤ１６２（クローン２ＰＨ１）、抗ＣＤ２５（クローン３Ｃ７）、抗ＣＤ６９（クローンＨ１２Ｆ３）、抗Ｖα２（クローンＢ２０．１）。Ｈ−２Ｄｂ−ＧＰ３３−４１、Ｈ−２Ｄｂ−ＮＰ３９６−４０４四量体は、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒから購入した。ｌＡｂ−６６−７７四量体は、ＮＩＨコア施設により提供された。細胞をＦＡＣＳ染色バッファーで２回洗浄し、ＰＢＳ中１％ホルムアルデヒドで１５分間固定した。細胞を２回洗浄し、ＦＡＣＳ染色バッファーに再懸濁した。細胞内サイトカイン染色のため、細胞をＣｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ）で固定および透過処理し（ｐｅｒｉｎｅａｂｉｌｉｚｅｄ）、抗ＧｚｍＢ（クローンＭＨＧＢＯ５：ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、抗ＴＮＦ−α（クローンＭＰ６−ＸＴ２２：ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ＩＦＮ−γ（クローンＸＩＶＩＧ１．２：Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ＩＬ−２（クローンＪＥＳ６−５Ｈ４：ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ製のキットを使用して、ＢｒｄＵ染色を行った。転写因子検出のため、細胞を、ＦｏｘＰ３染色キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して固定および透過処理し、抗Ｔｂｅｔ（クローン４Ｂ１０：Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗Ｅｏｍｅｓ（クローンＤａｎ１１ｍａｇ：ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色した。染色された細胞をＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ）において解析した。
【０１０５】
Ｅｘ  ｖｉｖｏペプチド刺激。感染動物由来の２×１０６個の脾細胞を９６ウェル丸底プレートに播種した。２ｐｇ／ｍＬのＧＰ３３−４１、ＮＰ３９６−４０４またはＧＰ６１−８０ペプチド（ＡｎａＳｐｅｃ）、５０Ｕ／ｍＬ  ＩＬ−２（ＮＣＩ）および１μｇ／ｍｌブレフェルジンＡ（Ｓｉｇｍａ）により、５時間３７℃で細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで刺激した。次に、刺激された細胞を洗浄し、表面染色し、続いて細胞内を染色した。Ｅｘ  ｖｉｖｏ  ＰＳＧＬ−１ライゲーション。９日目のＬＣＭＶ  Ｃｌ１３感染動物由来の２×１０６個の脾細胞を９６ウェル丸底プレートに播種した。ｉｎ  ｖｉｔｒｏで４日間３７℃にて、１０ｍＭ  ｈｅｐｅｓ（Ｃｅｌｌｇｒｏ）１×ＭＥＭ非必須アミノ酸（Ｃｅｌｌｇｒｏ）、１ｍＭピルビン酸ナトリウム（Ｃｅｌｌｇｒｏ）および１０％熱不活化ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（Ｃｅｌｌｇｒｏ）培地における５０Ｕ／ｍＬ  ＩＬ−２（ＮＩＨ）ならびに次の条件で細胞を刺激した：１０μｇ／ｍＬラットＩｇＧ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、１０μｇ／ｍＬ抗ＰＳＧＬ−１（４ＲＡＩＯ  ＢｉｏＸＣｅｌｌ）、２ｐｇ／ｍＬのＧＰ３３−４１（ＡｎａＳｐｅｃ）または抗ＰＳＧＬ−１（４ＲＡ１０  ＢｉｏＸＣｅｌｌ）＋２μｇ／ｍＬのＧＰ３３−４１（ＡｎａＳｐｅｃ）。次に、培養された細胞を洗浄し、１０分間室温にてヨウ化プロピジウム（１μｇ／ｍＬ）で染色した。細胞を洗浄し、１時間１５分間、室温にてＦＲＣＳ染色バッファー中抗ＣＤ８αａ、Ｈ−２Ｄ−ＧＰ３３−４１四量体（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）、抗ＰＤ−１で染色した。染色された細胞をＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ）において解析し、ＰＩ＋細胞を除外することにより生細胞を決定した。
【０１０６】
ＣＦＳＥ標識。非感染ＷＴおよびＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｐ１４  ＴＣＲトランスジェニックマウス（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈ）の脾臓からＣＤ８＋Ｔ細胞を負に富化した。同数の精製ＷＴ細胞およびＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｐ１４細胞をプールし、３７℃にて１０分間、５μＭ  ＣＦＳＥ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識し、ＰＢＳで洗浄した。ＷＴ細胞およびＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｐ１４細胞を１：１比（それぞれ１×１０６個の細胞）でｉ．ｖ．によりＷＴレシピエントに共移入した。２×１０６  ＰＦＵ  ＬＣＭＶ  Ｃｌ  １３にＷＴ宿主を感染させ、ＣＦＳＥ希釈をｄｐｉ２日目にＦＡＣＳにより試験した。
【０１０７】
ＣＤ４枯渇。マウスに、−１日目および０日目にＣＤ４枯渇抗体（クローンＧＭ．５、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）の２回の５００μｇ腹腔内注射を与え、続いてＬＣＭＶ  Ｃｌ１３に感染させた。処置したマウスの血液および脾臓においてＣＤ４枯渇の有効性を確認した。
【０１０８】
サイトカインおよび病理。ｄｐｉ８日目にＷＴマウスおよびＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスから血清を単離し、マルチプレックス９−ビーズカスタムサイトカインアレイ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、ＩＬ−６、ＩＬ−２１、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γのサイトカインレベルを試験した。Ｌｕｍｉｎｅｘ  ＩＳ２００機器において試料を解析した。肝臓、腎臓および肺を亜鉛ホルマリン（ｚ−ｆｉｘ  Ａｎａｔｅｃｈ）で固定し、パラフィンに包埋し、切片作製した。組織をＨ＆Ｅで染色し、Ａｐｅｒｉｏ  ＳｃａｎＳｃｏｐｅを使用してデジタル的にスキャンした。病理スコアリングは、病理学者による組織試料の盲検評価であった。スコアは０〜３．５に及び、ゼロは、病理なしを示し、より大きいスコアは、病理増加を示した。
【０１０９】
データ解析。ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）を使用して、フローサイトメトリーデータを解析した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、グラフを作製した。
【０１１０】
統計解析。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して実験群を解析し、スチューデントｔ検定を使用して有意性をｐ＜０．０５に設定した。Ｍａｎｔｅｌ−ＣｏｘおよびＧｅｈａｎ−Ｂｒｅｓｌｏｗ−Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定を使用して、生存曲線を比較した。
（実施例１０）
抗ウイルス応答
【０１１１】
マウスにおける慢性感染を生じさせるＬＣＭＶ  Ｃｌ１３ウイルスの試験において、ＰＳＧＬ−１欠乏が、感染後に増加した数のウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞をもたらし（図１５Ａ、Ｂ）、これが少なくともｄ３０まで継続した（図１５Ｃ）ことが発見され、Ｔ細胞持続における持続的な影響が示された。この知見は、Ｃｌ１３感染後に欠失されるＮＰ３９６−４０４特異的Ｔ細胞に関して注目すべきである。この効果は、増殖（ｅｘｐａｎｓｉｏｎ）の増大よりも寧ろ、改善されたＴ細胞生存によるものであった（示さず）。ＰＳＧＬ−１は、白血球ホーミングを調節し、ＬＣＭＶ感染は、全身性であるため、末梢部位、この場合は肺へのＴ細胞リクルートメントを検査して、効果があったかを調べた。しかし、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスにおいて、ＷＴマウスよりも多い数のウイルス特異的Ｔ細胞が存在し（図１５Ｄ）、これは遊走能力の全般的な損傷を除外した。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、Ｃｌ１３感染後にエフェクター機能を徐々に失い、先ず能力は、ＩＬ−２、ＴＮＦ−α、最後にＩＦＮ−γおよびＣＴＬ活性を産生する。有効な抗ウイルス応答において、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、複数のエフェクター機能を同時に発現する。図１６に示す通り、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウス由来のＧＰ３３−４１特異的Ｔ細胞およびＮＰ３９６−４０４特異的Ｔ細胞の両方は、ＷＴマウス由来のウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞よりも高い頻度のＩＦＮ−γ＋細胞およびＩＦＮ−γ／ＩＮＦ−αダブル＋細胞を示し（図１６Ａ、Ｂ）、これにより、より優れた機能性が示された。ＩＦＮ−γ産生と組み合わせた細胞傷害性脱顆粒もより大きかった（図１６Ｃ）。データは、ＰＳＧＬ−１が、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答に予測外の減弱効果を有することを実証する。
【０１１２】
疲弊したＣＤ８＋Ｔ細胞は、複数の免疫阻害性受容体、特に、ＰＤ−１、同様にＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＡＧ３、ＴＩＭ−３および２Ｂ４の発現によって特徴付けられる。ＣＤ８＋Ｔ細胞における低下したレベルの阻害性受容体が、ＧＰ３３−４１特異的Ｔ細胞およびＮＰ３９６−４０４特異的Ｔ細胞の両方に関して、改善された機能に関連することが判明した（図１７）。より低レベルの２Ｂ４およびＬＡＧ３も見出された（示さず）。ＷＴマウスおよびＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスにおけるＣｌ１３に応答するＣＤ４＋Ｔ細胞を解析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞に関して示す通り、より十分な生存に関連した、ＫＯマウスにおいて大幅に増加した頻度のウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞が存在した（図１８Ａ）。さらに、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウス由来のウイルス特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＷＴマウス由来のものよりも多くのサイトカインを産生し、より多くの多機能細胞も同様に存在した（図１８Ｂ）。より優れた機能は、阻害性受容体、ＰＤ−１およびＢＴＬＡの発現減少に関連した（図１８Ｃ）。これらのデータは、ＰＳＧＬ−１が、Ｔ細胞における遊走媒介よりも広範な機能を有し、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答およびＣＤ４＋Ｔ細胞応答の両方のリプレッサーとして作用することを示す。改善されたＴ細胞機能および生存が、抗ウイルス応答に影響したか決定するために、ウイルスクリアランスを測定した。図１７Ａに示す通り、ＰＳＧＬ−１欠乏は、Ｃｌ１３ウイルスが排除されることを可能にした。ＷＴマウスと比較して、ＰＳＧＬ−１  ＫＯマウスの血清において、より大きいレベルのサイトカインＩＬ−６、１Ｌ−２１、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γも検出され（図１９Ｂ）、これにより、改善された応答の読み出し情報がもたらされた。抗ウイルス免疫におけるＰＳＧＬ−１をさらに試験するために、Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  ＬＣＭＶ株による感染後のＰＤ−１発現レベルが、免疫系によって迅速に排除されるかどうかを解析した。ＧＰ３３−４１ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図２０Ｂ）よりもＮＰ３９６−４０４ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞（図２０Ａ）に対するＰＤ−１の早期およびより明白な効果を有する、この設定におけるＣＤ８＋Ｔ細胞のより優れた持続（図２０）が観察された。両方のクローンに対して、ＰＳＧＬ−１  ＫＯ  Ｔ細胞のより低レベルのＰＤ−１が観察された（図２０Ｃ）。ＰＳＧＬ−１におけるＰＤ−１のレベルを標的とすることができるかどうかに取り組むために、抗ＰＳＧＬ−１遮断抗体（４ＲＡ１０）または対照ＩｇＧを、インフルエンザＡウイルス（ＩＡＶ）またはＣｌ１３  ＬＣＭＶによる感染後にＷＴマウスに投与した。抗ＰＳＧＬ−１処置群は、増加した頻度のウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を有し（示さず）、このような細胞は、対照よりも低レベルのＰＤ−１を発現した（図２０Ｄ）。総合するとまたは知見は、ＰＳＧＬ−１が、Ｔ細胞応答の下方モジュレートにおける以前には未知の一般的な役割を有することを示す。
（実施例１１）
ＢＲＡＦＶ６００Ｅ  ＰＴＥＮメラノーマモデル
【０１１３】
侵襲性ヒトメラノーマの最良の現在利用できるマウスモデルの１つは、患者のおよそ６５％に存在するＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異を、ＰＴＥＮのサイレンシングと組み合わせる誘導性遺伝的モデルであり、組合せは、患者のおよそ２０％に見出される。ＢＲＡＦＶ６００ＥおよびＰＴＥＮの欠失のＣｒｅ／Ｌｏｘ誘導は、タモキシフェンによる皮膚の局在化処置による、メラニン細胞−チロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｎｓｅ）プロモーター、Ｔｒｙ：ＣｒｅＥＲの活性化により、メラニン細胞において一時的に制御される。２週間までに発生する色素性病変および１ヶ月間までの転移性疾患を伴う、１００％発現性（ｐｅｎｅｔｒａｎｃｅ）が存在する。皮膚関連腫瘍内のＣＤ３＋Ｔ細胞およびＣＤ４５＋単核細胞が検出された（データを示さず）。フローサイトメトリーによって腫瘍を解析した。ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方が、容易に検出された（図２１Ａ、Ｂ、左パネル）。ＰＳＧＬ−１は、ＣＤ４＋細胞のおよそ１／２において発現され、これらの細胞が、高ＰＤ−１を有する（図２１Ａ、中央および右パネル）。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、排他的にＰＳＧＬ−Ｐであり、ＰＤ−１の混合型発現を有した（図２１Ｂ）。さらに、メラノーマ＋耳において、増加したＰＤ−１およびＰＳＧＬ−１発現は、活性化ＣＤ４４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞において検出された（図２２Ａ）。このような疲弊したＰＤ−１ｈｉ  Ｔ細胞は、機能的ＰＳＧＬ−１結合も有した（図２２Ｂ）。これらの知見は、腫瘍浸潤ＣＤ８＋Ｔ細胞が、増加したＰＤ−１、ＰＳＧＬ−１およびＰＳＧＬ−１結合活性を有することを示す。追加的な試験において、タモキシフェンによる皮膚の局在化処置により、メラニン細胞−チロシナーゼプロモーター、Ｔｙｒ：：ＣｒｅＥＲの活性化によるメラニン細胞におけるＢＲＡＦＶ６００Ｅ変異およびＰＴＥＮの欠失のＣｒｅ／Ｌｏｘ誘導により、マウスにおいてメラノーマを誘導した。処置後１ヶ月目に、本発明者らは、フローサイトメトリーにより、破壊された腫瘍内にＣＤ３＋Ｔ細胞単核細胞（図２３Ａ）ならびにＰＳＧＬ−１＋、ＰＤ−１＋（ダブルポジティブ）ＣＤ４＋非Ｔｒｅｇ（エフェクターＴ細胞）およびＴｒｅｇを高頻度で観察した（図２３Ｂ）。比較により、僅かなＴ細胞は、腫瘍を有するマウスまたは腫瘍を有さないマウスのいずれかの皮膚流入領域ＬＮにおいて両方の分子を発現した。ＣＤ３＋Ｔ細胞は、メラノーマの至る所に分布することが判明し（図２３Ａ）、ＣＤ４＋非ＴｒｅｇおよびＴｒｅの両方が検出可能であり、ＰＤ−１およびＰＳＧＬ−１を共発現した（図２３Ｂ）。このようなマウス由来のメラノーマの追加的な試験は、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞、Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣおよびＤＣ、ＮＫ細胞、ＮＫ  Ｔ細胞ならびにマクロファージ（ｍａｃｒｏｐｐｈａｇｅ）を含む、免疫細胞をフローサイトメトリーによって容易に区別することができることを示す（図２４）。
（実施例１２）
ＰＳＧＬ−１発現細胞ならびに原発性および転移性メラノーマ内のその応答を同定すること。
【０１１４】
免疫細胞は、メラノーマ発生と共に変化する：腫瘍成長の動態が確立され、６週齢での側腹部におけるＴｙｒ：ＣｒｅＥＲ；Ｂｒａｆ／Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘマウスの４ヒドロキシタモキシフェン（４−ＨＴ）処置により浸潤が発生する。免疫組織化学検査（Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｒｎｉｓｔｒｙ）を使用して、腫瘍が検出されたら、毎週の間隔で腫瘍を評価し、ＣＤ４４−およびＣＤ８＋Ｔ細胞ならびに腫瘍周縁部におけるこれらの局在化  対  腫瘍への浸潤に特に着目する。フローサイトメトリー試験のため、原発性メラノーマおよび流入領域ＬＮが比較され、他の皮膚部位、ＬＮおよび肺への転移後に生じた変化を評価する。４−ＨＴ処置後の経時的な腫瘍、流入領域リンパ節および非流入領域リンパ節、血液、脾臓ならびに肺における、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋およびＦｏｘＰ３＋ＴｒｅｇにおけるＰＳＧＬ−１および阻害性受容体発現（ＰＤ−１、Ｔｉｍ−３、Ｌａｇ−１、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ−４およびＣＤ１６０）を解析する。Ｂ１６メラノーマモデルの試験は、メラニン細胞（ｒｎｅｌａｎｏｃｙｔｅ）および悪性メラノーマ細胞によって発現されるヒトメラノソームマトリックスの構造的構成成分であるｇｐ１００２５−３３のマウスホモログであるｐｍｅｌ−１のペプチドｇｐ１００２５−３３（ＫＶＰＲＮＱＤＷＬ）をロードされたＭＨＣクラスＩ四量体を使用して、腫瘍特異的ＣＤ８４−Ｔ細胞をモニターすることができることを示した。このペプチドは、ＢＲＡＦＶ６００Ｅ  ＰＴＥＮメラノーマモデルにおいて誘導されたメラノーマによって発現される。したがって、腫瘍特異的Ｔ細胞応答を試験するために、市販のｐｍｅｌ−四量体を使用する。メラノーマ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度に変化があるかどうかについて、該細胞によるＰＳＧＬ−１発現レベルに取り組み、該細胞が、阻害性受容体発現における全体的なＣＤ８＋Ｔ細胞集団からの差を示すかどうかに取り組む。抗ＣＤ３刺激後の細胞内染色（ＩＣＳ）を使用して、サイトカイン産生（ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α）によりＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の機能をモニターし、ｐｍｅｌペプチド再刺激を使用して、腫瘍特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞によるサイトカイン産生を評価する。ＣＤ８＋Ｔ細胞について。グランザイムＢ染色により、また、ＣＤ１０７を測定することによる脱顆粒により、細胞傷害活性を検査する。
【０１１５】
機能（１６）と相関する、ＦｏｘＰ３発現レベルによるＴｒｅｇの免疫抑制活性、ならびにＩＣＳにより１Ｌ−１０およびＴＧＦ−β産生を検査する。メラノーマおよび流入領域ＬＮにおけるエフェクターＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞とＴｒｅｇとの比を評価して、皮膚におけるメラノーマの出現後の経時的に生じる変化を決定する。飲料水中ＢｒｄＵ投与を使用することにより、これらの集団の増殖を試験し、４−ＨＴ処置後１、２、３または４週目に処置を開始し、メラノーマ、リンパ系組織および血液におけるＴ細胞を解析する。腫瘍微小環境をさらに調べること。ＤＣ（ＭＨＣ  ＩＩ＋、ＣＤ１１ｃ＋）、ＭＤＳＣ（Ｇｒ１＋、ＣＤ１１ｂ＋）およびＭ４（Ｆ４／８０＋、ＣＤ１１ｂ＋）の頻度を解析する。これらの集団における機能に取り組むために、ＩＣＳを使用して、それぞれ免疫原性ＤＣ  対  寛容原性ＤＣ（１７）およびＭ１マクロファージ  対  Ｍ２マクロファージに関連するＩＬ−１２および１Ｌ−１０の産生を解析するが、なお、ＩＬ−１０は、ＭＤＳＣを区別する。
（実施例１３）
ＰＳＧＬ−１の標的化が、メラノーマの発生およびその転移を遅延または制御することができるか決定すること。
【０１１６】
メラノーマにおけるＰＳＧＬ−１の影響。骨髄キメラアプローチを使用して、ＰＳＧＬ−１欠乏が、メラノーマ内またはリンパ系区画における免疫細胞の機能に変化をもたらすかについて取り組む。放射線照射したＴｙｒ：ＣｒｅＥＲ；Ｂｒａｆ／ＰｔｅｎｌｏｘｉｌｏｘマウスにＰＳＧＬ−１  ＫＯ骨髄を注射し、８週間後に４−ＨＴで処置することにより、ＰＳＧＬ−１欠乏を造血細胞において作製する。対照にはＷＴ骨髄を与える。腫瘍成長および転移に関する変化を評価し、組織学的検査およびフローサイトメトリーを使用して、これらの試験において定義される最良の読み出し情報および時点に着目して、腫瘍微小環境、リンパ系区画、肺および血液における頻度および機能ならびに免疫細胞における阻害性受容体発現の変化を評価する。阻害性受容体の欠乏または遮断は、炎症の発生に関連するため、組織学的検査により自己免疫／免疫病理の証拠を試験する。
【０１１７】
図２５は、ＰＳＧＬ−１欠損マウスにおける増強された抗腫瘍Ｔ細胞応答を示す。ＷＴ（黒色バーまたは黒丸）およびＰＳＧＬ−１  ＫＯ（白色バーまたは四角）に、メラノーマ細胞（Ｙｕｍｍ  １．５、ｄ１４に腫瘍重量および注射後１２日目までに体積）の皮下注射を与えた（Ａ）。腫瘍１グラム当たりのエフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞（左）およびＣＤ４＋Ｔ細胞（右）の絶対数（Ｂ）。エフェクターＴ細胞におけるＰＤ−１発現（Ｃ）。ＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｄ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｅ）によるサイトカイン（Ｃｙｏｋｉｎｅ）産生。代表的サイトカイン染色を（Ｆ）に示す。
【０１１８】
ＰＳＧＬ−１欠乏のＴ細胞固有効果に取り組むために、２種のアプローチを使用する。第１に、アレル的にマークされたＷＴ細胞を有するキメラとの比較のため、ＰＳＧＬ−１がＴ細胞において排他的に欠失されるキメラを生成する。これを達成するため、致死的に放射線照射されたＴｙｒ：ＣｒｅＥＲ；Ｂｒａｆ／Ｐｔｅｎｌｏｘ／ｌｏｘマウス（Ｔｈｙ１．２，ＣＤ４５．２）を、８０：２０比のＴＣＲ  ＷＳ  ＫＯ骨髄細胞（ＣＤ４５．２）：ＰＳＧＬ−１  ＫＯ骨髄細胞（Ｔｈｙ１．１，ＣＤ４５．２）により再構成する。８週間後にマウスを４−ＨＴで処置し、腫瘍の発生および転移ならびにＴ細胞の応答を評価する。第２のアプローチとして、ｐｍｅｌ  Ｔｇマウスを飼育してＰＳＧＬ−１  Ｔｈｙ１．１，ＣＤ４５．２  ＫＯマウスとし、該マウスまたはＷＴ  ｐｍｅｌ  Ｔｇマウス（Ｔｈｙ１．１，ＣＤ４５．２）から単離されたＣＤ８＋Ｔ細胞を、最適化された用量でＴｙｒ：ＣｒｅＥＲ；Ｂｒａｆ／Ｐｔｅｎ  ｌｏｘ／ｌｏｘ（Ｔｈｙ１．２，Ｌｙ５．２）に注射する。代替として、本発明者らは、誘導された原発性メラノーマに由来するメラノーマ細胞株（Ｙｕｍｍ  １．５）を使用した。ＷＴマウスまたはＰＳＧＬ−１欠損マウスに、５×１０５個の用量の腫瘍細胞をｓ．ｃ．（右側腹部）に植え込んだ。図２４において、体積および重量（Ａ）により腫瘍成長をモニターし、エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞の頻度を決定した（Ｂ）。ＰＳＧＬ−１欠損マウスは、より小さい腫瘍を有し、より多い数のＴ細胞を含有した。Ｔ細胞は、より低レベルのＰＤ−１を発現し（Ｃ）、サイトカイン産生によって測定される通り、より機能的であった（Ｄ〜Ｆ）。
【０１１９】
免疫療法阻害ＰＳＧＬ−１機能。アゴニストｍＡｂ（４ＲＡ１０）または組換えＰＳＧＬ−１  Ｆｃ融合タンパク質によるＰＳＧＬ−１の遮断が、Ｔ細胞機能不全の反転によりメラノーマの成長および／または転移を制御することができるかについて決定する。原発性メラノーマの処置としての、また、転移が起こった後の処置としての、これらの試薬を検査する。原発性腫瘍について、腫瘍へのｍＡｂの局所注射を、全身性処置と比較する。局所処置のため、原発性腫瘍検出のときに、１００μｇの出発用量の抗ＰＳＧＬ−１または対照ＩｇＧを使用する。全身性処置のため、３００μｇ／ｍＡｂ／用量をｉ．ｐ．注射し、処置は一日おきに５日間行い、動物の腫瘍成長および皮膚転移を追跡する。１ヶ月目に、ｐｍｅｌ−四量体＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、阻害性受容体の表面発現、ならびに血液、脾臓、ＬＮおよび示されている通り腫瘍におけるその応答に関して動物を試験する。原発性腫瘍の検出後１、２、３または４週目に、全身性ｍＡｂ処置の開始の効果を試験して、抗ＰＳＧＬ−１が、進行する疾患に関して抗腫瘍応答に影響することができるかどうかに取り組む。ＰＳＧＬ−１を遮断するための第２の戦略として、ＰＳＧＬ−１  Ｆｃを投与し、対照としてヒトＩｇを投与する。ＥＬＩＳＡによって３〜４日毎に血清中ｍＡｂおよび融合タンパク質レベルを評価して、半減期（１／２  ｌｉｖｅｓ）を決定し、これらの試薬の減衰によりＴ細胞表現型および／または応答に変化があるかどうかに取り組む。治療の開始後に、毎週の間隔で血清中のＩＬ−６、ＩＬ−２１、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γのレベルを測定して、サイトカインレベルの変化が生じるか、また、改善された抗Ｔ細胞腫瘍活性または腫瘍消散との関連があるかどうかを決定する。
【０１２０】
上述の実施例を参照しつつ本発明について記載してきたが、本発明の精神および範囲内に改変形態および変形形態が包含されることが理解されよう。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ制限される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１Ａ−１１Ｅ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７Ａ−１７Ｂ】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ−２１Ｂ】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【国際調査報告】
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