(57)【要約】  本発明は、ペプチド模倣リンカー及びその抗体薬物コンジュゲート、これらを含有する薬学的組成物、並びにがんの予防又は治療のための治療法におけるこれらの使用に関する。【選択図】図１
2017504606.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ
｛式中、
Ａｂは、抗体であり、
Ｌは、下記の式
−Ｓｔｒ−（ＰＭ）−Ｓｐ−
［式中、
Ｓｔｒは、Ａｂに共有結合しているストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、結合、又は薬物部分に共有結合しているスペーサー単位であり、
ＰＭは、
2017504606.tif 000296
（式中、Ｗは、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル−又はヘテロシクロアルキルであり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ−ＣＨ３、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｎ−（ＣＨ３）２、Ｃ１−Ｃ６アルケニル又はＣ１−Ｃ６アルキレニルであり、
各Ｒ１は、独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル又はヘテロアリールアルキルであり、あるいはＲ３及びＲ２は一緒になって、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルを形成し得、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２−であり、あるいはＲ４及びＲ５は一緒になって、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成し得る）
からなる群から選択される非ペプチド化学部分である］
によって表されるペプチド模倣リンカーであり、
ｐは、１−８の整数であり、
Ｄは、薬物部分である｝
によって表される抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項２】
Ｙが、ヘテロアリールであり、Ｒ４及びＲ５が一緒に、シクロブチル環を形成する、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項３】
Ｙが、
2017504606.tif 000297
からなる群から選択される部分である、請求項１又は２に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項４】
Ｓｔｒが、下記の式
2017504606.tif 000298
［式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）Ｏ−、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１−５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］
によって表される化学部分であり、
Ｓｐが、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−又は−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、
項１又は２に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項５】
Ｓｔｒが、式
2017504606.tif 000299
［式中、Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−、Ｎ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）−Ｎ（Ｒｃ）及びＮ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）から選択され、各Ｒｃは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］
を有し、
Ｓｐが、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−又は−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、
請求項１又は２に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項６】
Ａｂが、抗体であり、
Ｌが、下記の式
2017504606.tif 000300
［式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキルである］
によって表される非ペプチド化学部分である、請求項１又は４に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項７】
Ａｂが、抗体であり、
Ｌが、下記の式
2017504606.tif 000301
［式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は一緒に、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成する］
によって表される非ペプチド化学部分である、請求項１、４又は５に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項８】
Ａｂが、抗体であり、
Ｌが、下記の式
2017504606.tif 000302
［式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である］
によって表される非ペプチド化学部分である、請求項１又は４に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項９】
下記の式
2017504606.tif 000303
(I)(A1)
［式中、
Ｓｔｒは、下記の式
2017504606.tif 000304
（式中、
Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１−５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである）
によって表される化学部分であり、
ｐは、１、２、３又は４である］
によって表される、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項１０】
下記の式
2017504606.tif 000305
(I)(B1)
［式中、
Ｓｔｒは、下記の式
2017504606.tif 000306
（式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１−５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである）
によって表される化学部分であり、
ｐは、１、２、３又は４である］
によって表される、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項１１】
Ｙが、ヘテロアリール、アリール又はアルケニルであり、Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンである、請求項４から６及び９の何れか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項１２】
Ｙが、
2017504606.tif 000307
である、請求項１又は９に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項１３】
Ｙが、
2017504606.tif 000308
である、請求項１又は９に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項１４】
Ｙが、
2017504606.tif 000309
である、請求項１又は９に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項１５】
Ｓｔｒが、下記の式
2017504606.tif 000310
［式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ６アルキレンである］、
によって表される化学部分であり、
Ｓｐが、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−又は−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒが、アリールであり、Ｒｂが、（Ｃ１−Ｃ３アルキレン）Ｏ−である、請求項９から１４の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
下記の式
2017504606.tif 000311
(I)(A2)
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
ｐは、１、２、３又は４である］
によって表される、請求項１、４、６又は９に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項１７】
下記の式
2017504606.tif 000312
(I)(B2)
［式中、
ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、前記アルキルは、置換されていないか、あるいはＲ４及びＲ５は、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成し得る］
によって表される、請求項１、４、７又は１０に記載の抗体−薬物コンジュゲート化合物。
【請求項１８】
Ｄが、式
2017504606.tif 000313
［式中、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒ２２は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒａａ及びＲｂｂは、Ｈ、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され、
あるいはＲａａ及びＲｂｂは、５員又は６員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｔは、Ｃ３−Ｃ１２アルキレン、Ｙ１、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、及び（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）から選択されるテザー基であり、Ｙ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１１、アリール、及びヘテロアリールから選択され、アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）ｍ、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキルで独立して任意選択的に置換されており、アルキルは、１個又は複数のＦで置換されていてもよく、ｍは、０又は１であり、あるいはアルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｌへの結合で独立して任意選択的に置換されており（Ｌへの結合は、任意選択的な置換基の１つを介して接続し得る）、
Ｄ’は、
2017504606.tif 000314
（式中、波線は、Ｔへの結合の部位を示す）
から選択される薬物部分であり、
Ｘ１及びＸ２は、Ｏ及びＮＲ３３から独立して選択され、Ｒ３３は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから選択され、あるいはＸ１及びＸ２は、それぞれ独立して、非存在であり、
Ｒ４４は、Ｈ、ＣＯ２Ｒ、Ｃ（Ｏ）、又はＬへの結合であり、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はベンジルであり、
Ｒ５５は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］
を有するダイマー薬物部分である、請求項１から１７に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項１９】
下記の式
2017504606.tif 000315
(I)(B6)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ２０は、Ｈ又はＭｅである］
によって表される、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項２０】
下記の式
2017504606.tif 000316
(I)(B7)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ２０は、Ｈ又はＭｅである］
によって表される、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項２１】
下記の式
2017504606.tif 000317
(I)(B8)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である］
によって表される、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項２２】
下記の式
2017504606.tif 000318
(I)(B9)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、非存在又はＯであり、
各Ｒ１１は、独立して、Ｃ（Ｏ）Ｎ−ピペラジン（ＣＨ３）又はＰ（Ｏ）３Ｈ２である］
によって表される、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項２３】
式（Ｉ）（Ｂ）（ＬＤ１）
2017504606.tif 000319
(I)(D)(LD1)
［式中、
Ｓｔｒは、抗体に共有結合することができるストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、結合、又は薬物部分に共有結合しているスペーサー単位であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２−であり、あるいはＲ４及びＲ５は、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成し得、
Ｄは、薬物部分である］
の非ペプチド化合物。
【請求項２４】
下記の式
2017504606.tif 000320
(I)(B)(LD2)
［式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｒ４及びＲ５は一緒に、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成する］
によって表される、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
下記の式
2017504606.tif 000321
(I)(B)(LD3)
によって表される、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２６】
式
2017504606.tif 000322
(I)(A)(LD1)
［式中、
Ｓｔｒは、抗体に共有結合することができるストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、薬物部分に共有結合している任意選択的なスペーサー単位であり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルケニル、Ｃ１−Ｃ６アルケニル又は−Ｃ１−Ｃ６アルケニル−ＮＨ−であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル又はヘテロアリールアルキルであり、あるいはＲ３及びＲ２は、一緒になって、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルを形成し得、
Ｄは、薬物部分である］
の化合物。
【請求項２７】
下記の式
2017504606.tif 000323
(I)(A)(LD2)
［式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンである］
によって表される、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
下記の式
2017504606.tif 000324
(I)(A)(LD3)
によって表される、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｓｔｒが、下記の式
2017504606.tif 000325
［式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキルアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１−５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］
を有し、
Ｓｐが、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−又は−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、
請求項２３又は２６に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒが、アリールであり、Ｒｂが、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｏ−である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｒ６が、−（ＣＨ２）ｑであり、ｑが１〜１０である、請求項２３又は２６に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｓｔｒが、式
2017504606.tif 000326
［式中、Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ、Ｎ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）−Ｎ（Ｒｃ）及びＮ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）から選択され、各Ｒｃは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである」
を有し、
Ｓｐが、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−又は−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、
請求項１８又は２１に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒが、アリールであり、Ｒｂが、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｏ−である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項３４】
ｐが、２である、請求項１から２２の何れか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項３５】
前記抗体が、
ＣＬＬ１；
ＢＭＰＲ１Ｂ；
Ｅ１６；
ＳＴＥＡＰ１；
０７７２Ｐ；
ＭＰＦ；
ＮａＰｉ２ｂ；
Ｓｅｍａ  ５ｂ；
ＰＳＣＡ  ｈｌｇ；
ＥＴＢＲ；
ＭＳＧ７８３；
ＳＴＥＡＰ２；
ＴｒｐＭ４；
ＣＲＩＰＴＯ；
ＣＤ２１；
ＣＤ７９ｂ；
ＦｃＲＨ２；
ＨＥＲ２；
ＮＣＡ；
ＭＤＰ；
ＩＬ２０Ｒα；
Ｂｒｅｖｉｃａｎ；
ＥｐｈＢ２Ｒ；
ＡＳＬＧ６５９；
ＰＳＣＡ；
ＧＥＤＡ；
ＢＡＦＦ−Ｒ；
ＣＤ２２；
ＣＤ７９ａ；
ＣＸＣＲ５；
ＨＬＡ−ＤＯＢ；
Ｐ２Ｘ５；
ＣＤ７２；
ＬＹ６４；
ＦｃＲＨ１；
ＩＲＴＡ２；
ＴＥＮＢ２；
ＰＭＥＬ１７；
ＴＭＥＦＦ１；
ＧＤＮＦ−Ｒａ１；
Ｌｙ６Ｅ；
ＴＭＥＭ４６；
Ｌｙ６Ｇ６Ｄ；
ＬＧＲ５；
ＲＥＴ；
ＬＹ６Ｋ；
ＧＰＲ１９；
ＧＰＲ５４；
ＡＳＰＨＤ１；
Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ；
ＴＭＥＭ１１８；
ＧＰＲ１７２Ａ；
ＭＵＣ１６及び
ＣＤ３３
からなる群から選択されるポリペプチドの１つ又は複数に結合する、請求項１から２２の何れか一項に記載の抗体コンジュゲート。
【請求項３６】
Ｄが、抗腫瘍剤又は抗生物質部分である、請求項１から３５の何れか一項に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｄが、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル及びダウノルビシンからなる群から選択される、請求項１から３６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｄが、式
2017504606.tif 000327
［式中、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒ２２は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒａａ及びＲｂｂは、Ｈ、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され、
あるいはＲａａ及びＲｂｂは、５員又は６員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｔは、Ｃ３−Ｃ１２アルキレン、Ｙ１、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、及び（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）から選択されるテザー基であり、Ｙ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１１、アリール、及びヘテロアリールから選択され、アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）ｍ、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキルで独立して任意選択的に置換されており、アルキルは、１個又は複数のＦで置換されていてもよく、ｍは、０又は１であり、あるいはアルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｌへの結合で独立して任意選択的に置換されており（Ｌへの結合は、任意選択的な置換基の１つを介して接続し得る）、
Ｄ’は、
2017504606.tif 000328
（式中、波線は、Ｔへの結合の部位を示す）
から選択される薬物部分であり、
Ｘ１及びＸ２は、Ｏ及びＮＲ３３から独立して選択され、Ｒ３３は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから選択され、あるいはＸ１及びＸ２は、それぞれ独立して、非存在であり、
Ｒ４４は、Ｈ、ＣＯ２Ｒ、Ｃ（Ｏ）、又はＬへの結合であり、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はベンジルであり、
Ｒ５５は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］
を有するダイマー薬物部分である、請求項２３から３３の何れか一項に記載の化合物。
【請求項３９】
抗体と１−８つの、請求項２３から３３に記載の化合物とを共有結合させることによって調製される、抗体コンジュゲート化合物。
【請求項４０】
治療を必要とするヒトにおいて疾患を治療する方法であって、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲートの有効量を前記ヒトに投与することを含む、方法。
【請求項４１】
請求項１に記載の化合物及びその薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
【請求項４２】
前記抗体が、
ＣＬＬ１；
ＳＴＥＡＰ１；
ＮａＰｉ２ｂ；
ＳＴＥＡＰ２；
ＴｒｐＭ４；
ＣＲＩＰＴＯ；
ＣＤ２１；
ＣＤ７９ｂ；
ＦｃＲＨ２；
ＨＥＲ２；
ＣＤ２２；
ＣＤ７９ａ；
ＣＤ７２；
ＬＹ６４；
Ｌｙ６Ｅ；
ＭＵＣ１６；及び
ＣＤ３３
からなる群から選択されるポリペプチドの１つ又は複数に結合する、請求項３０に記載の化合物。
【請求項４３】
前記抗体が、ＣＤ３３に結合する、請求項１から２２の何れか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項４４】
前記抗ＣＤ３３抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項３４に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項４５】
前記抗ＣＤ３３抗体が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、請求項３４に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項４６】
前記抗体が、ＮａＰｉ２ｂに結合する、請求項１から２２の何れか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項４７】
前記ＮａＰｉ２ｂ抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項４６に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項４８】
前記ＮａＰｉ２ｂ抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、請求項４６に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項４９】
前記ＮａＰｉ２ｂ抗体が、配列番号９のアミノ酸配列及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項５０】
前記抗体が、ＣＤ−２２に結合する、請求項１から２２の何れか一項に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項５１】
前記ＣＤ−２２抗体が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、請求項５０に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項５２】
前記ＣＤ−２２抗体が、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、請求項５０に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項５３】
前記ＣＤ−２２抗体が、配列番号４９のアミノ酸配列及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む、請求項５０に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【請求項５４】
前記ＣＤ−２２抗体が、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号５０のアミノ酸配列と少なくとも９５％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項５０に記載の抗体−薬物コンジュゲート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願とのクロスリファレンス
米国特許法施行規則１．５３（ｂ）によって出願されたこの非仮出願は、米国特許法１１９（ｅ）の元で、これらの全てのその全体が出典明示によって本明細書に援用されている２０１３年１２月１６日に出願された米国特許仮出願第６１／９１６６６１号、及び２０１３年１２月１６日に出願された米国特許仮出願第６１／９１６６９１号の利益を主張するものである。
【０００２】
配列表
本出願は配列表を含有するが、これはＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出されており、出典明示によってその全体が本明細書に援用されている。２０１４年１２月１２日に作製された前記ＡＳＣＩＩコピーは、Ｐ５７６０ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは３５，０４７バイトである。
【０００３】
発明の分野
本発明は、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）のリンカーとして有用である新規なペプチド模倣化合物に関する。本発明はまた、ペプチド模倣リンカーを含有するＡＤＣに関する。本発明はまた、ヒトにおいて疾患を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
腫瘍細胞に直接抗がん薬を送達するモノクローナル抗体（ｍＡＢ）の使用は、近年に至って非常に多くの注目を集めてきた。２つの新規な抗体−薬物コンジュゲートが、がんの治療についてＦＤＡによって承認されている。Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）は、再発性又は難治性ホジキンリンパ腫及び全身性未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）の治療に適応されるＣＤ３０に対する抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）（ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン）は、ＨＥＲ２−陽性の後期（転移性）乳がんを有する患者について承認されている新規な治療法である。ＡＤＣにおいて強力な抗腫瘍活性及び許容される治療指数の両方を有する治療薬を得るために、設計のいくつかの態様を最適化し得る。特に、リンカーの化学構造は、ＡＤＣの有効性及び安全性の両方に対して有意な影響を有することができることは周知である（Ducry及びStump、Bioconjugate Chem、2010、21、5-13）。正しいリンカーを選択することは、がん細胞の目的の細胞のコンパートメントへの適正な薬物送達に影響を与える。リンカーは一般に、２つのカテゴリー：切断可能なもの（例えば、ペプチド、ヒドラゾン、若しくはジスルフィド）又は切断可能でないもの（例えば、チオエーテル）に分割することができる。リソソーム酵素（例えば、カテプシンＢ）によって加水分解することができるペプチドリンカー、例えば、バリン−シトルリン（Ｖａｌ−Ｃｉｔ）が、薬物を抗体と接続するために使用されてきた（米国特許第６２１４３４５号）。部分的に、全身性循環におけるこれらの相対的な安定性、及び腫瘍において薬物を効率的に放出する能力によって、これらは特に有用であった。Ｖａｌ−Ｃｉｔリンカーを含有するＡＤＣは、インビボで相対的に安定的であることが示されてきた（薬物放出についての〜７日でのｔ１／２（Doroninaら(2008)、Bioconjugate Chem.、19、1960-1963）。しかし、天然ペプチドによって表される化学的空間は限定される。したがって、ペプチドのように作用し、リソソームのプロテアーゼによって効果的に切断されることができる種々の非ペプチドリンカーを有することが望ましい。非ペプチド構造のより大きな多様性は、ペプチドリンカーによっては可能とならない新規で有益な特性を生じさせ得る。本明細書において提供するのは、リソソーム酵素によって切断することができる、ＡＤＣのための異なるタイプの非ペプチドリンカーである。
【発明の概要】
【０００５】
本発明は、式（Ｉ）
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ
｛式中、
Ａｂは、抗体であり、
Ｌは、下記の式
−Ｓｔｒ−（ＰＭ）−Ｓｐ−
［式中、
Ｓｔｒは、Ａｂに共有結合しているストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、結合、又は薬物部分に共有結合しているスペーサー単位であり、
ＰＭは、
2017504606.tif 000003
（式中、Ｗは、−ＮＨ−ヘテロシクロアルキル−又はヘテロシクロアルキルであり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ−ＣＨ３、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｎ−（ＣＨ３）２、Ｃ１−Ｃ６アルケニル又はＣ１−Ｃ６アルキレニルであり、
各Ｒ１は、独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル又はヘテロアリールアルキルであり、あるいはＲ３及びＲ２は一緒になって、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルを形成し得、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２−であり、あるいはＲ４及びＲ５は、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成し得る）
からなる群から選択される非ペプチド化学部分である］
によって表されるペプチド模倣リンカーであり、
ｐは、１−８の整数であり、
Ｄは、薬物部分である｝
によって表される抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０００６】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートの薬学的組成物に関する。
【０００７】
本発明はまた、がんを治療する方法、治療法における式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートの使用、及びがんを治療するための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物の使用に関する。
【０００８】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートを調製する方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＨＬ−６０ヒト急性骨髄性白血病腫瘍を有するＳＣＩＤマウスにおけるＣＤ３３ＡＤＣ（ＣＤ３３ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＡＤＣ３−２及びＡＤＣ２−２）の有効性比較を示すグラフである。
【図２】ＯＶＣＡＲ３Ｘ２．１ヒト卵巣腫瘍を有するＳＣＩＤ−ベージュマウスにおけるＮａＰｉ２ｂ  ＡＤＣ（ＮａＰｉ２ｂ  ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＡＤＣ２−１及びＡＤＣ３−１）の有効性比較を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本明細書において提供するのは、リソソーム酵素によって切断可能である、ＡＤＣのための異なるタイプの非ペプチドリンカーである。例えば、ジペプチド（例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ）の中央のアミド結合は、アミド模倣物で置き換えられており、且つ／又はアミノ酸全体（例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔジペプチド中のバリンアミノ酸）は、非アミノ酸部分（例えば、シクロアルキルジカルボニル構造（例えば、環サイズ＝４又は５））で置き換えられていた。
【００１１】
本発明は、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００１２】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、Ｙがヘテロアリールであり、Ｒ４及びＲ５は一緒にシクロブチル環を形成する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００１３】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、Ｙが、
2017504606.tif 000004
からなる群から選択される部分である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００１４】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、
Ｓｔｒが、下記の式
2017504606.tif 000005
［式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）Ｏ−、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、アリールアリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１−５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］、
によって表される化学部分であり、
Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、
抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００１５】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、Ｓｔｒが、式
2017504606.tif 000006
［式中、Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−、Ｎ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）−Ｎ（Ｒｃ）及びＮ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）から選択され、各Ｒｃは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］
を有し、Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−又はＳｐ−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００１６】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、
Ａｂが、抗体であり、
Ｌが、下記の式
2017504606.tif 000007
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ１０アルキルである］
によって表される非ペプチド化学部分である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００１７】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、
Ａｂが抗体であり、
Ｌが、下記の式
2017504606.tif 000008
［式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は一緒に、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成する］
によって表される非ペプチド化学部分である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００１８】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、
Ａｂが抗体であり、
Ｌが、下記の式
2017504606.tif 000009
［式中、Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である］
によって表される非ペプチド化学部分である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００１９】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、下記の式
2017504606.tif 000010
(I)(A1)
［式中、
Ｓｔｒは、下記の式
2017504606.tif 000011
（式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１−５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである）
によって表される化学部分であり、
ｐは、１、２、３又は４である］
によって表される抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００２０】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000012
(I)(B1)
［式中、
Ｓｔｒは、下記の式
2017504606.tif 000013
（式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１−５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである）
によって表される化学部分であり、
ｐは、１、２、３又は４である］
によって表される式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００２１】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、下記の式
2017504606.tif 000014
(I)(C1)
［式中、
Ｓｔｒは、下記の式
2017504606.tif 000015
（式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１−５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである）
によって表される化学部分であり、
ｐは、１、２、３又は４である］
によって表される、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００２２】
本発明はまた、上記の抗体−コンジュゲートの任意の１つであって、Ｙが、ヘテロアリール、アリール又はアルケニルであり、Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンである、抗体−コンジュゲートに関する。
【００２３】
本発明はまた、上記の抗体−コンジュゲート（Ｉ）及び（Ｉ）（Ａ１）の任意の１つであって、Ｙが、
2017504606.tif 000016
である、抗体−コンジュゲートに関する。
【００２４】
本発明はまた、上記の抗体−コンジュゲート（Ｉ）及び（Ｉ）（Ａ１）の任意の１つであって、Ｙが、
2017504606.tif 000017
である、抗体−コンジュゲートに関する。
【００２５】
本発明はまた、上記の抗体−コンジュゲート（Ｉ）及び（Ｉ）（Ａ１）の任意の１つであって、Ｙが、
2017504606.tif 000018
である、抗体−コンジュゲートに関する。
【００２６】
本発明はまた、上記の抗体−コンジュゲート（Ｉ）（Ａ１）、（Ｉ）（Ｂ１）、及び（Ｉ）（Ｃ１）の任意の１つであって、
Ｓｔｒが、下記の式
2017504606.tif 000019
［式中、Ｒ６は、アリール及びヘテロアリールから選択される１−３個の基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキレンである］
によって表される化学部分であり、
Ｓｐが、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−又は−Ａｒ−Ｒｂ−［式中、Ａｒは、アリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ３アルキレン）Ｏ−である］である、
抗体−コンジュゲートに関する。
【００２７】
本発明はまた、上記の抗体−コンジュゲート（Ｉ）（Ａ１）、（Ｉ）（Ｂ１）、及び（Ｉ）（Ｃ１）の任意の１つであって、
Ｓｔｒが下記の式
2017504606.tif 000020
［式中、Ｒ６は、アリール及びヘテロアリールから選択される１−３個の基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキレンである］
によって表される化学部分であり、
Ｓｐが、−Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−である、
抗体−コンジュゲートに関する。
【００２８】
本発明はまた、上記の抗体−コンジュゲート（Ｉ）及び（Ｉ）（Ａ１）の任意の１つであって、下記の式
2017504606.tif 000021
(I)(A2)
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
ｐは、１、２、３又は４である］
によって表される、抗体−コンジュゲートに関する。
【００２９】
本発明はまた、上記の抗体−コンジュゲート（Ｉ）及び（Ｉ）（Ｂ１）の任意の１つであって、下記の式
2017504606.tif 000022
(I)(B2)
［式中、
ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり、前記アルキルは、置換されていないか、あるいはＲ４及びＲ５は、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成し得る］
によって表されるる、抗体−コンジュゲートに関する。
【００３０】
本発明はまた、上記の抗体−コンジュゲート（Ｉ）及び（Ｉ）（Ｃ１）の任意の１つであって、下記の式
2017504606.tif 000023
(I)(C2)
［式中、
ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である］
によって表される、抗体−コンジュゲートに関する。
【００３１】
本発明はまた、（Ｉ）の抗体−コンジュゲートであって、下記の式
2017504606.tif 000024
(I)(B3)
［式中、
ｐは、１、２、３又は４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である］
によって表される、抗体−物コンジュゲートに関する。
【００３２】
本発明はまた、（Ｉ）（Ｂ３）の抗体−薬物コンジュゲートであって、
Ｓｔｒが、下記の式
2017504606.tif 000025
［式中、Ｒ６は、アリール及びヘテロアリールから選択される１−３個の基で置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキレンである］
によって表される化学部分である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００３３】
本発明はまた、（Ｉ）（Ｂ３）の抗体−薬物コンジュゲートであって、Ｒ１が（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００３４】
本発明はまた、（Ｉ）（Ｂ３）の抗体−薬物コンジュゲートであって、、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００３５】
本発明はまた、（Ｉ）、（Ｉ）（Ｂ１）、（Ｉ）（Ｂ２）及び（Ｉ）（Ｂ３）の抗体−薬物コンジュゲートであって、Ｒ１が（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００３６】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、Ｄが、式
2017504606.tif 000026
［式中、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒ２２は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒａａ及びＲｂｂは、Ｈ、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され、
あるいはＲａａ及びＲｂｂは、５員又は６員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｔは、Ｃ３−Ｃ１２アルキレン、Ｙ１、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、及び（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）から選択されるテザー基であり、Ｙ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１１、アリール、及びヘテロアリールから選択され、アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）ｍ、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキルで独立して任意選択的に置換されており、アルキルは、１個又は複数のＦで置換されていてもよく、ｍは、０又は１であり、あるいはアルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｌへの結合で独立して任意選択的に置換されており（Ｌへの結合は、任意選択的な置換基の１つを介して接続し得る）、
Ｄ’が、
2017504606.tif 000027
（式中、波線は、Ｔへの結合の部位を示す）
から選択される薬物部分であり、
Ｘ１及びＸ２は、Ｏ及びＮＲ３３（式中、Ｒ３３は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから選択される）から独立して選択され、あるいはＸ１及びＸ２は、それぞれ独立して、非存在であり、
Ｒ４４は、Ｈ、ＣＯ２Ｒ（式中、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はベンジルである）、Ｃ（Ｏ）、又はＬへの結合であり、
Ｒ５５は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］
を有するダイマー薬物部分である、体−薬物コンジュゲートに関する。
【００３７】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000028
(I)(B4)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｄは、
2017504606.tif 000029
（式中、Ｘ１は、非存在又はＯであり、
Ｒ１１は、Ｃ（Ｏ）Ｎ−ピペラジン（ＣＨ３）又はＰ（Ｏ）３Ｈ２である）
である］
によって表される式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００３８】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、下記の式
2017504606.tif 000030
(I)(B5)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｄは、
2017504606.tif 000031
（式中、
Ｘ１は、非存在又はＯであり、
Ｒ１１は、Ｃ（Ｏ）Ｎ−ピペラジン（ＣＨ３）又はＰ（Ｏ）３Ｈ２である）
である］
によって表される、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００３９】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであて、下記の式
2017504606.tif 000032
(I)(B6)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ２０は、Ｈ又はＭｅである］
によって表される、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４０】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ６）の抗体−薬物コンジュゲートであって、Ｒ２０がＨであり、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４１】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲート（Ｂ６）であって、Ｒ２０がＭｅであり、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４２】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、下記の式
2017504606.tif 000033
(I)(B7)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ２０は、Ｈ又はＭｅである］
によって表される、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４３】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲート（Ｂ７）であって、Ｒ２０がＨであり、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４４】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲート（Ｂ７）であって、Ｒ２０がＭｅであり、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４５】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、下記の式
2017504606.tif 000034
(I)(B8)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である］
によって表される、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４６】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲート（Ｂ８）であって、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４７】
本発明はまた、式（Ｉ）の抗体−薬物コンジュゲートであって、下記の式
2017504606.tif 000035
(I)(B9)
［式中、
Ａｂは、Ｈｅｒ２、ＣＬＬ１、ＣＤ３３、ＣＤ２２及びＮａＰｉ２ｂから選択される標的に結合する抗体であり、
Ｐは、１−４であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、非存在又はＯであり、
各Ｒ１１は、独立して、Ｃ（Ｏ）Ｎ−ピペラジン（ＣＨ３）又はＰ（Ｏ）３Ｈ２である］
によって表される、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４８】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ９）の抗体−薬物コンジュゲートであって、Ｘ１が非存在であり、Ｒ１１がＰ（Ｏ）３Ｈ２であり、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００４９】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ６）、（Ｉ）（Ｂ７）、（Ｉ）（Ｂ８）及び（Ｉ）（Ｂ９）の上記の抗体−薬物コンジュゲートの何れかであって、ＡｂがＨｅｒ２に結合する抗体である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００５０】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ６）、（Ｉ）（Ｂ７）、（Ｉ）（Ｂ８）及び（Ｉ）（Ｂ９）の上記の抗体−薬物コンジュゲートの何れかであって、Ａｂが、ＣＬＬ１に結合する抗体である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００５１】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ６）、（Ｉ）（Ｂ７）、（Ｉ）（Ｂ８）及び（Ｉ）（Ｂ９）の上記の抗体−薬物コンジュゲートの何れかであって、ＡｂがＣＤ３３に結合する抗体である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００５２】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ６）、（Ｉ）（Ｂ７）、（Ｉ）（Ｂ８）及び（Ｉ）（Ｂ９）の上記の抗体−薬物コンジュゲートの何れかであって、ＡｂがＣＤ２２に結合する抗体である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００５３】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ６）、（Ｉ）（Ｂ７）、（Ｉ）（Ｂ８）及び（Ｉ）（Ｂ９）の上記の抗体−薬物コンジュゲートの何れかであって、ＡｂがＮａＰｉ２ｂに結合する抗体である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００５４】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの何れかであって、Ｙ１がＦ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）ｍ、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキルで置換されていてもよいフェニルであり、アルキルは１つ又は複数のＦで置換されていてもよく、ｍは０又は１である、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００５５】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ）（ＬＤ１）
2017504606.tif 000036
(I)(B)(LD1)
［式中、
Ｓｔｒは、抗体に共有結合することができるストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、結合、又は薬物部分に共有結合しているスペーサー単位であり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２−であり、あるいはＲ４及びＲ５は、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成し得、
Ｄは、薬物部分である］
の非ペプチド化合物に関する。
【００５６】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000037
(I)(B)(LD2)
［式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｒ４及びＲ５は一緒に、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル環を形成する］
によって表される非ペプチド化合物に関する。
【００５７】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000038
(I)(B)(LD3)
によって表される非ペプチド化合物に関する。
【００５８】
本発明はまた、式
2017504606.tif 000039
(I)(A)(LD1)
［式中、
Ｓｔｒは、抗体に共有結合することができるストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、薬物部分に共有結合している任意選択的なスペーサー単位であり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−Ｃ６アルキレン、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−ＮＨ−ＣＨ３、Ｃ１−Ｃ６アルキレン−Ｎ−（ＣＨ３）２、Ｃ１−Ｃ６アルケニル又はＣ１−Ｃ６アルキレニルであり、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル又はヘテロアリールアルキルであり、あるいはＲ３及びＲ２は一緒になって、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキルを形成し得、
Ｄは、薬物部分である］
の非ペプチド化合物に関する。
【００５９】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000040
(I)(A)(LD2)
［式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンである］
によって表される非ペプチド化合物に関する。
【００６０】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000041
(I)(A)(LD3)
によって表される非ペプチド化合物に関する。
【００６１】
本発明はまた、上記の非ペプチド化合物の何れかであって、Ｓｔｒが下記の式
2017504606.tif 000042
［式中、Ｒ６は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキレン）、及びＣ１−Ｃ１０アルキレン−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）−Ｃ２−Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ７ヘテロシクロアルキルアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１−５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであえる］
を有し、Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒｂ−であり、Ａｒは、アリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である、非ペプチド化合物に関する。
【００６２】
本発明はまた、Ｒ６がＣ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｓｐが−Ａｒ−Ｒｂ−［式中、Ａｒはアリールであり、Ｒｂは（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｏ−である］である非ペプチド化合物に関する。
【００６３】
本発明はまた、Ｒ６が−（ＣＨ２）ｑであり、ｑが１〜１０である、非ペプチド化合物に関する。
【００６４】
本発明はまた、Ｓｔｒが、式
2017504606.tif 000043
［式中、Ｒ７は、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン、Ｃ１−Ｃ１０アルキレン−Ｏ、Ｎ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）−Ｎ（Ｒｃ）及びＮ（Ｒｃ）−（Ｃ２−Ｃ６アルキレン）から選択され、各Ｒｃは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］、
を有し、Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒｂ−（式中、Ａｒは、アリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ１０アルキレン）Ｏ−である）である、非ペプチド化合物に関する。
【００６５】
本発明はまた、Ｒ６が、Ｃ１−Ｃ１０アルキレンであり、Ｓｐが、−Ａｒ−Ｒｂ−（式中、Ａｒは、アリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）Ｏ−である）である、非ペプチド化合物に関する。
【００６６】
本発明はまた、上記の式（ＩＶ）、（ＩＶ）（Ａ）、（ＩＶ）（Ｂ）、（Ｖ）、（Ｖ）（Ａ）及び（Ｖ）（Ｂ）の非ペプチド化合物の任意の１つであって、Ｄが、式
2017504606.tif 000044
［式中、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒ２２は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒａａ及びＲｂｂは、Ｈ、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され、
あるいはＲａａ及びＲｂｂは、５員又は６員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｔは、Ｃ３−Ｃ１２アルキレン、Ｙ１、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、及び（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）から選択されるテザー基であり、Ｙ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１１、アリール、及びヘテロアリールから選択され、アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）ｍ、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキルで独立して任意選択的に置換されており、アルキルは、１個又は複数のＦで置換されていてもよく、ｍは、０又は１であり、あるいはアルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｌへの結合で独立して任意選択的に置換されており（Ｌへの結合は、任意選択的な置換基の１つを介して接続し得る）、
Ｄ’は、
2017504606.tif 000045
（式中、波線は、Ｔへの結合の部位を示す）
から選択される薬物部分であり、
Ｘ１及びＸ２は、Ｏ及びＮＲ３３から独立して選択され、Ｒ３３は、Ｈ、Ｃ（Ｏ）、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから選択され、あるいはＸ１及びＸ２は、それぞれ独立して、非存在であり、
Ｒ４４は、Ｈ、ＣＯ２Ｒ、Ｃ（Ｏ）、又はＬへの結合であり、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はベンジルであり、
Ｒ５５は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］
を有するダイマー薬物部分である、非ペプチド化合物に関する。
【００６７】
本発明はまた、上記のリンカー薬物化合物の何れかであって、
Ｙ１が、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＮＨＣ（Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）ｍ、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキルで置換されていてもよいフェニルであり、アルキルは１つ又は複数のＦで置換されていてもよく、ｍは０又は１である、リンカー薬物化合物に関する。
【００６８】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000046
(I)(B)(LD4)
［式中、
Ｄは、下記の式
2017504606.tif 000047
の薬物部分である」
の化合物に関する。
【００６９】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000048
(I)(B)(LD5)
［式中、
Ｄは、下記の式
2017504606.tif 000049
（式中、Ｘ１は、非存在又はＯであり、
Ｒ１１は、Ｃ（Ｏ）Ｎ−ピペラジン（ＣＨ３）又はＰ（Ｏ）３Ｈ２である）
の薬物部分である］
の化合物に関する。
【００７０】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000050
(I)(B)(LD6)
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ２０は、Ｈ又はＭｅである］
の化合物に関する。
【００７１】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ）（ＬＤ６）の化合物であって、Ｒ２０がＨであり、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、化合物に関する。
【００７２】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ）（ＬＤ６）の化合物であって、Ｒ２０がＭｅであり、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、化合物に関する。
【００７３】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000051
(I)(B)(LD7)
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ２０は、Ｈ又はＭｅである］
の化合物に関する。
【００７４】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ）（ＬＤ７）の化合物であって、Ｒ２０がＨであり、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、化合物に関する。
【００７５】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ）（ＬＤ７）の化合物であって、Ｒ２０がＭｅであり、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、化合物に関する。
【００７６】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000052
(I)(B)(LD8)
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２である］
の化合物に関する。
【００７７】
本発明はまた、式（Ｉ）（Ｂ）（ＬＤ８）の化合物であって、Ｒ１が（ＣＨ２）４ＮＨ２である、化合物に関する。
【００７８】
本発明はまた、下記の式
2017504606.tif 000053
(I)(B)(LD9)
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ６アルキル−ＮＨ２、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１−Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｘ１及びＸ２は、それぞれ独立して、非存在又はＯであり、
各Ｒ１１は、独立して、Ｃ（Ｏ）Ｎ−ピペラジン（ＣＨ３）又はＰ（Ｏ）３Ｈ２である］
の化合物に関する。
【００７９】
本発明はまた、上記のコンジュゲートの任意の１つであって、Ｄが、クリンダマイシン、ノボビオシン、レタパムリン、ダプトマイシン、ＧＳＫ−２１４０９４４、ＣＧ−４００５４９、シタフロキサシン、テイコプラニン、トリクロサン、ナプチリドン、ラデゾリド、ドキソルビシン、アンピシリン、バンコマイシン、イミペネム、ドリペネム、ゲムシタビン、ダルババンシン、及びアジスロマイシンからなる群から選択される抗生物質部分である、コンジュゲートに関する。このような抗生物質の殺菌性及び静菌性作用の機序には、これらに限定されないが、（ｉ）細胞壁であるペプチドグリカン伸長の阻害（バンコマイシン、テイコプラニン、ダルババンシン）；（ｉｉ）細胞壁、ペニシリン−結合タンパク質架橋の阻害（イミペネム、ドリペネム、アンピシリン）；（ｉｉｉ）細胞膜脱分極（ダプトマイシン）；（ｉｖ）ＤＮＡ複製の撹乱（ゲムシタビン）；（ｖ）ＤＮＡ結合（ドキソルビシン）；（ｖｉ）エノイルＡＣＰ−レダクターゼＦＡＢＩ（ＣＧ−４００５４９、トリクロサン、ナプチリドン）；（ｖｉｉ）リボソームタンパク質合成、リボソーム３０Ｓの阻害（クリンダマイシン、レタパムリン、ラデゾリド）；並びに（ｖｉｉｉ）トポイソメラーゼ（ｔｏｐｏＩＩＡ）阻害剤（ノボビオシン、シタフロキサシン、ＧＳＫ−２１４０９４４）が含まれる。構造的に、大部分の抗生物質は、（ｉ）アミノグリコシド；（ｉｉ）ベータ−ラクタム；（ｉｉｉ）マクロライド／環状ペプチド；（ｉｖ）テトラサイクリン；（ｖ）フルオロキノリン／フルオロキノロン；（ｖｉ）及びオキサゾリジノンにグループ化することができる。Ｓｈａｗ，  Ｋ．及びＢａｒｂａｃｈｙｎ，  Ｍ．（２０１１）、Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  １２４１：４８−７０；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ，  Ｊ．（２０１１）  Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  １２４１：１２２−１５２を参照されたい。
【００８０】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲート又は本明細書に記載されている抗体−抗生物質コンジュゲートの任意のであって、ｐが１であるものに関する。
【００８１】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲート又は本明細書に記載されている抗体−抗生物質コンジュゲートの任意の１つであって、ｐが２であるものに関する。
【００８２】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲート又は本明細書に記載されている抗体−抗生物質コンジュゲートの任意の１つであって、ｐが３であるものに関する。
【００８３】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲート又は本明細書に記載されている抗体−抗生物質コンジュゲートの任意のであって、ｐは、４であるものに関する。
【００８４】
本発明は、抗生物質回避を防止することを目標とする新規な抗菌療法であって、通常の抗生物質療法を逃れる細菌の集団を標的とすることによる、抗菌療法を提供する。新規な抗菌治療は、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡを含めた）上で見出される細胞壁成分に対して特異的な抗体が強力な抗生物質に化学的に連結している、抗体抗生物質コンジュゲート（ＡＡＣ）によって達成される。抗生物質は、大部分の哺乳動物細胞型において見出されるリソソームのプロテアーゼであるカテプシンＢによって切断されるように設計されている、プロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーを介して抗体に接合している（Dubowchikら(2002) Bioconj. Chem. 13：855-869）。リンカーが切断されるまで抗生物質が（抗体の大きなサイズによって）不活性であるという点で、ＡＡＣは、プロドラッグとして作用する。自然感染において見出される黄色ブドウ球菌のかなりの割合は、宿主における感染の過程のある時点において宿主細胞、主に、好中球及びマクロファージによって取り込まれるので、宿主細胞内にいる時間は、細菌が抗生物質活性を逃れるかなりの機会を提供する。本発明のＡＡＣは、細菌が宿主細胞によって取り込まれた後に、黄色ブドウ球菌に結合し、ファゴリソソーム内で抗生物質を放出するように設計される。この機序によって、ＡＡＣは、特に、黄色ブドウ球菌が通常の抗生物質によって十分に治療されない場所において活性抗生物質を濃縮させることができる。本発明は特定の作用機序によって制限又は定義されない一方で、ＡＡＣは、３つの潜在的な機序によって抗生物質活性を改善させる。（１）ＡＡＣは、細菌を取り込む哺乳動物細胞内に抗生物質を送達し、それによって、細菌が隔離されているファゴリソソーム中に十分に拡散されない抗生物質の力価を増加させる。（２）ＡＡＣは、細菌をオプソニン化し、それによって食細胞による遊離細菌の取込みを増加させ、且つ抗生物質を局所的に放出して、細菌がファゴリソソーム中に隔離されている間に細菌を死滅させる。（３）ＡＡＣは、抗生物質を抗体に連結させることによって、インビボでの抗生物質の半減期を改善させる（薬物動態の改善）。ＡＡＣの改善された薬物動態は、黄色ブドウ球菌が濃縮されている領域において十分な抗生物質の送達を可能とし、その一方で、全身的に投与する必要がある抗生物質の全体的な用量を制限する。この特性は、最少の抗生物質の副作用を伴って持続性の感染を標的とするＡＡＣによる長期療法を可能とするはずである。
【００８５】
本発明はまた、抗体−抗生物質コンジュゲートである抗体−薬物コンジュゲートであって、抗体が細菌に結合し、Ｄが抗生物質部分であるものに関する。
【００８６】
本発明はまた、上記の抗体−抗生物質コンジュゲートの任意の１つであって、Ｄが、クリンダマイシン、ノボビオシン、レタパムリン、ダプトマイシン、ＧＳＫ−２１４０９４４、ＣＧ−４００５４９、シタフロキサシン、テイコプラニン、トリクロサン、ナプチリドン、ラデゾリド、ドキソルビシン、アンピシリン、バンコマイシン、イミペネム、ドリペネム、ゲムシタビン、ダルババンシン、及びアジスロマイシンを含む群から選択される薬物である、抗体−抗生物質コンジュゲートに関する。
【００８７】
本発明の別の態様は、本発明の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物を含む薬学的組成物である。
【００８８】
本発明の別の態様は、患者に治療有効量の本発明の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物を投与することによって細菌感染を治療する方法である。一実施態様において、患者は、ヒトである。一実施態様において、細菌感染は、黄色ブドウ球菌感染である。いくつかの実施態様において、患者は、黄色ブドウ球菌感染と診断されている。いくつかの実施態様において、細菌感染を治療することは、細菌添加を低減させることを含む。
【００８９】
別の実施態様において、治療法は、第２の治療剤を投与することをさらに含む。さらなる実施態様において、第２の治療剤は、抗生物質である。
【００９０】
一実施態様において、本発明の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物と組み合わせて投与される第２の抗生物質は、構造クラス：（ｉ）アミノグリコシド；（ｉｉ）ベータ−ラクタム；（ｉｉｉ）マクロライド／環状ペプチド；（ｉｖ）テトラサイクリン；（ｖ）フルオロキノリン／フルオロキノロン；（ｖｉ）及びオキサゾリジノンから選択される。
【００９１】
一実施態様において、本発明の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物と組み合わせて投与される第２の抗生物質は、リファマイシン、クリンダマイシン、ノボビオシン、レタパムリン、ダプトマイシン、ＧＳＫ−２１４０９４４、ＣＧ−４００５４９、シタフロキサシン、テイコプラニン、トリクロサン、ナプチリドン、ラデゾリド、ドキソルビシン、アンピシリン、バンコマイシン、イミペネム、ドリペネム、ゲムシタビン、ダルババンシン、及びアジスロマイシンから選択される。
【００９２】
本発明の別の態様は、本発明の抗体又は抗体−抗生物質コンジュゲート化合物を作製するプロセスである。
【００９３】
本発明の別の態様は、本発明の薬学的組成物及び使用説明書を含む細菌感染を治療するためのキットである。
【００９４】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、
ＣＬＬ１
ＢＭＰＲ１Ｂ；
Ｅ１６；
ＳＴＥＡＰ１；
０７７２Ｐ；
ＭＰＦ；
ＮａＰｉ２ｂ；
Ｓｅｍａ  ５ｂ；
ＰＳＣＡ  ｈｌｇ；
ＥＴＢＲ；
ＭＳＧ７８３；
ＳＴＥＡＰ２；
ＴｒｐＭ４；
ＣＲＩＰＴＯ；
ＣＤ２１；
ＣＤ７９ｂ；
ＦｃＲＨ２；
ＨＥＲ２；
ＮＣＡ；
ＭＤＰ；
ＩＬ２０Ｒα；
Ｂｒｅｖｉｃａｎ；
ＥｐｈＢ２Ｒ；
ＡＳＬＧ６５９；
ＰＳＣＡ；
ＧＥＤＡ；
ＢＡＦＦ−Ｒ；
ＣＤ２２；
ＣＤ７９ａ；
ＣＸＣＲ５；
ＨＬＡ−ＤＯＢ；
Ｐ２Ｘ５；
ＣＤ７２；
ＬＹ６４；
ＦｃＲＨ１；
ＩＲＴＡ２；
ＴＥＮＢ２；
ＰＭＥＬ１７；
ＴＭＥＦＦ１；
ＧＤＮＦ−Ｒａ１；
Ｌｙ６Ｅ；
ＴＭＥＭ４６；
Ｌｙ６Ｇ６Ｄ；
ＬＧＲ５；
ＲＥＴ；
ＬＹ６Ｋ；
ＧＰＲ１９；
ＧＰＲ５４；
ＡＳＰＨＤ１；
Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ；
ＴＭＥＭ１１８；
ＧＰＲ１７２Ａ；
ＭＵＣ１６及び
ＣＤ３３
からなる群から選択されるポリペプチドの１つ又は複数に結合する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００９５】
本発明はまた、それを必要とするヒトにおいて疾患を治療する方法であって、請求項１に記載の抗体−薬物コンジュゲートの治療有効量を前記ヒトに投与することを含む、方法に関する。
【００９６】
本発明はまた、請求項１に記載の化合物及びその薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物に関する。
【００９７】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、
ＣＬＬ１；
ＳＴＥＡＰ１；
ＮａＰｉ２ｂ；
ＳＴＥＡＰ２；
ＴｒｐＭ４；
ＣＲＩＰＴＯ；
ＣＤ２１；
ＣＤ７９ｂ；
ＦｃＲＨ２；
ＨＥＲ２；
ＣＤ２２；
ＣＤ７９ａ；
ＣＤ７２；
ＬＹ６４；
Ｌｙ６Ｅ；
ＭＵＣ１６；及び
ＣＤ３３
からなる群から選択されるポリペプチドの１つ又は複数に結合する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００９８】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、ＣＤ３３に結合する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【００９９】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体がＣＤ２２に結合する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１００】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体がＮａＰｉ２ｂに結合する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１０１】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体がＣＬＬ１に結合する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１０２】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体がＨｅｒ２に結合する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１０３】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、ＣＤ３３に結合し、抗ＣＤ３３抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１０４】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、ＣＤ３３に結合し、抗ＣＤ３３抗体が、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１０５】
いくつかの実施態様において、抗体−薬物コンジュゲートの抗体は、ＣＤ３３に結合する。いくつかの実施態様において、抗体−薬物コンジュゲートの抗体は、（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号２１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【０１０６】
いくつかの実施態様において、抗体は、上記で提供した実施態様の何れかにおけるようなＶＨ、及び上記で提供した実施態様の何れかにおけるようなＶＬを含む。一実施態様において、抗体は、これらの配列の翻訳後修飾を含めた、それぞれ、配列番号２５及び配列番号２６のＶＬ及びＶＨ配列を含む。
【０１０７】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体がＮａＰｉ２ｂに結合する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１０８】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、ＮａＰｉ２ｂに結合し、ＮａＰｉ２ｂ抗体が、配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１０９】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、ＮａＰｉ２ｂに結合し、ＮａＰｉ２ｂ抗体が、配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１１０】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、ＮａＰｉ２ｂに結合し、ＮａＰｉ２ｂ抗体が、配列番号９アミノ酸配列及び配列番号１０のアミノ酸配列を含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１１１】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体がＣＤ２２に結合する、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１１２】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、ＣＤ２２に結合し、ＣＤ２２抗体が、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１１３】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、ＣＤ２２に結合し、ＣＤ２２抗体が、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１１４】
本発明はまた、上記の抗体−薬物コンジュゲートの任意の１つであって、抗体が、ＣＤ２２に結合し、ＣＤ２２抗体が、配列番号４９アミノ酸配列及び配列番号５０のアミノ酸配列を含む、抗体−薬物コンジュゲートに関する。
【０１１５】
定義
特に断りのない限り、下記の用語及び語句は、本明細書において使用する場合、下記の意味を有することを意図する。商品名が本明細書において使用されるとき、出願人等は、商品名製品の製剤、ジェネリック薬物、及び商品名製品の医薬品有効成分（一又は複数）を独立して含むことを意図する。
【０１１６】
用語「ペプチド模倣物」又はＰＭは、本明細書において使用する場合、非ペプチド化学部分を意味する。ペプチドは、１つのアミノ酸のカルボキシル基が別のアミノ基と反応するとき形成される共有結合的化学結合であるペプチド（アミド）結合によって連結しているアミノ酸モノマーの短鎖である。最も短いペプチドは、単一のペプチド結合によって接合した２つのアミノ酸からなるジペプチドであり、それに続いてトリペプチド、テトラペプチドなどがある。ペプチド模倣化学部分は、非アミノ酸化学部分を含む。ペプチド模倣化学部分はまた、１つ又は複数の非アミノ酸の化学単位によって分離されている１つ又は複数のアミノ酸を含み得る。ペプチド模倣化学部分は、その化学構造の任意の部分においてペプチド結合によって連結した２つ又はそれ超の隣接するアミノ酸を含有しない。
【０１１７】
用語「アミノ酸」は、本明細書において使用する場合、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、メチオニン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン又はシトルリンを意味する。
【０１１８】
用語「抗生物質」（ａｂｘ又はＡｂｘ）は、微生物、例えば、細菌の増殖を特異的に阻害するか、又は死滅させるが、投与した濃度及び投与間隔で宿主に致死的でない任意の分子を含む。特定の態様において、抗生物質は、投与した濃度及び投与間隔で宿主に対して無毒性である。細菌に対して有効である抗生物質は、殺菌性（すなわち、直接死滅させる）又は静菌性（すなわち、分裂を防止する）として広範に分類することができる。抗殺菌性抗生物質は、狭域又は広域としてさらに再分類することができる。広域抗生物質は、より小さな範囲又は細菌の特定のファミリーに対して有効である狭域抗生物質と対照的に、グラム陽性菌及びグラム陰性菌の両方を含めた広範囲の細菌に対して有効なものである。抗生物質の例は、（ｉ）アミノグリコシド、例えば、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、パロマイシン、（ｉｉ）アンサマイシン、例えば、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、（ｉｉｉ）カルバセフェム、例えば、ロラカルベフ、（ｉｖ）カルバペネム、例えば、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン、メロペネム、（ｖ）セファロスポリン（第１世代）、例えば、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン、セファレキシン、（ｖｉ）セファロスポリン（第２世代）、例えば、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、（ｖｉ）セファロスポリン（第３世代）、例えば、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、（ｖｉｉ）セファロスポリン（第４世代）、例えば、セフェピム、（ｖｉｉｉ）セファロスポリン（第５世代）、例えば、セフトビプロール、（ｉｘ）糖ペプチド、例えば、テイコプラニン、バンコマイシン、（ｘ）マクロライド、例えば、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン、スペクチノマイシン、（ｘｉ）モノバクタム、例えば、アズトレオナム、（ｘｉｉ）ペニシリン、例えば、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリン、ピペラシリン、チカルシリン、（ｘｉｉｉ）抗生物質ポリペプチド、例えば、バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢ、（ｘｉｖ）キノロン、例えば、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、レボフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、ノルフロキサシン、トロバフロキサシン、（ｘｖ）スルホンアミド、例えば、マフェニド、プロントジル、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルフイソオキサゾール、トリメトプリム、トリメトプリム−スルファメトキサゾール（ＴＭＰ−ＳＭＸ）、（ｘｖｉ）テトラサイクリン、例えば、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン、並びに（ｘｖｉｉ）その他のもの、例えば、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、クリンダマイシン、リンコマイシン、エタンブトール、ホスホマイシン、フシジン酸、フラゾリドン、イソニアジド、リネゾリド、メトロニダゾール、ムピロシン、ニトロフラントイン、プラテンシマイシン、ピラジナミド、キヌプリスチン／ダルホプリスチン、リファンピン／リファンピシン又はチニダゾールを含む。
【０１１９】
用語「メチシリン耐性黄色ブドウ球菌」（ＭＲＳＡ）は、代わりに多剤耐性黄色ブドウ球菌又はオキサシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＯＲＳＡ）として公知であるが、ペニシリン（例えば、メチシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン、オキサシリンなど）及びセファロスポリンを含むベータ−ラクタム抗生物質に耐性である黄色ブドウ球菌の任意の株を指す。「メチシリン感受性黄色ブドウ球菌」（ＭＳＳＡ）は、ベータ−ラクタム抗生物質に対して感受性である黄色ブドウ球菌の任意の株を指す。
【０１２０】
用語「抗体」は本明細書において最も広範な意味で使用され、これらが所望の生物活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ダイマー、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を特にカバーする（Millerら(2003) Jour. of Immunology 170：4854-4861）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラでよく、又は他の種に由来し得る。抗体は、特異的抗原を認識し、これに結合することができる、免疫系によって生じるタンパク質である。（Janeway, C.、Travers、P.、Walport, M.、Shlomchik (2001) Immuno Biology、第5版、Garland Publishing、New York）。標的抗原は一般に、複数の抗体上のＣＤＲによって認識される、またエピトープと称される多数の結合部位を有する。異なるエピトープに特異的に結合する各抗体は、異なる構造を有する。このように、１つの抗原は、複数の対応する抗体を有し得る。抗体は、完全長免疫グロブリン分子、又は完全長免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分、すなわち、対象とする標的又はその部分の抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を含み、このような標的は、これらに限定されないが、自己免疫疾患と関連する自己免疫抗体を産生するがん細胞（一又は複数）を含む。本明細書において開示されている免疫グロブリンは、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又は免疫グロブリン分子のサブクラスでよい。免疫グロブリンは、任意の種に由来することができる。一態様において、しかし、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、又はウサギ起源のものである。
【０１２１】
用語「抗体断片（一又は複数）」は、本明細書において使用する場合、完全長抗体の部分、一般に、その抗原結合又は可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；二特異性抗体；直鎖状抗体；ミニボディ（Olafsenら(2004) Protein Eng. Design & Sel. 17(4)：315-323）、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生される断片、抗イデオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及びがん細胞抗原、ウイルス抗原又は微生物抗原に免疫特異的に結合する上記のいずれかのエピトープ結合断片、単鎖抗体分子；並びに抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれる。
【０１２２】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書において使用する場合、実質的に均一な抗体の集団から得た抗体を指し、すなわち、集団を含む個々の抗体は、微量で存在し得る可能な天然に存在する変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位に対している。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。これらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体に汚染されずに合成し得るという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一集団から得たという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈されない。例えば、本発明によって使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）  Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ方法によって作製し得、又は組換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４８１６５６７号；米国特許第５８０７７１５号を参照されたい）によって作製し得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）  Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７に記載されている技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーから単離し得る。
【０１２３】
モノクローナル抗体は、本明細書において、「キメラ」抗体を特に含み、ここでは重鎖及び／又は軽鎖の部分が、特定の種に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるか、又は類似であり、一方、鎖（一又は複数）の残りの部分は、これらが所望の生物活性を示す限り、別の種に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体、及びこのような抗体の断片における対応する配列と同一であるか、又は類似である（米国特許第４８１６５６７号；及びMorrisonら(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA、81：6851-6855）。対象とするキメラ抗体は、本明細書において、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原−結合配列、及びヒト定常領域配列を含む「ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ」抗体を含む。
【０１２４】
用語「インタクトな抗体」は、本明細書において使用する場合、ＶＬ及びＶＨドメイン、並びに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体でよい。インタクトな抗体は、抗体のＦｃ定常領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異Ｆｃ領域）に起因するこれらの生物活性を指す、１つ又は複数の「エフェクター機能」を有し得る。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；並びに細胞表面受容体、例えば、Ｂ細胞受容体及びＢＣＲのダウンレギュレーションが含まれる。
【０１２５】
用語「Ｆｃ領域」は、本明細書において使用する場合、定常領域の少なくとも部分を含有する、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味する。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異Ｆｃ領域を含む。一実施態様において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端まで伸長する。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもよいか、又は存在しなくてもよい。本明細書において他に特定しない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１に記載されているような、またＥＵインデックスと称されるＥＵ番号付け系による。
【０１２６】
用語「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、本明細書において使用する場合、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は一般に、ＶＨ（又はＶＬ）における下記の配列において現れる。ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
【０１２７】
これらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、インタクトな抗体は、異なる「クラス」に割り当てることができる。５つの主要なクラスのインタクトな免疫グロブリン抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分割し得る。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元配置は、周知である。Ｉｇ形態は、ヒンジ修飾又はヒンジレス形態を含む（Rouxら(1998) J. Immunol. 161：4083-4090；Lundら(2000) Eur. J. Biochem. 267：7246-7256；米国特許出願第２００５／００４８５７２号；米国特許出願第２００４／０２２９３１０号）。
【０１２８】
用語「ヒト抗体」は、本明細書において使用する場合、ヒト若しくはヒト細胞によって産生されるか、又はヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体コード化配列を利用する非ヒト源に由来する抗体に対応する、アミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合性残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
【０１２９】
用語「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、本明細書において使用する場合、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列のセレクション中の最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークを指す。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列のセレクションは、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、９１−３２４２、Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ  （１９９１）、第１−３巻におけるようなサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループは、上述のＫａｂａｔ等におけるようなサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループは、上述のＫａｂａｔ等におけるようなサブグループＩＩＩである。
【０１３０】
用語「ヒト化抗体」は、本明細書において使用する場合、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここではＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全ては、非ヒト抗体のこれらに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全ては、ヒト抗体のこれらに対応する。ヒト化抗体は任意選択的に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも部分を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けてきた抗体を指す。
【０１３１】
用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、本明細書において使用する場合、配列が超可変であり、且つ／又は構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般に、天然の４鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、３つはＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）中であり、３つはＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）中である。ＨＶＲは一般に、超可変ループから、及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、後者は、最も高い配列可変性のものであり、且つ／又は抗原認識に関与している。例示的超可変ループは、アミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）、及び９６−１０１（Ｈ３）において起こる。（Chothia及びLesk、J. Mol. Biol. 196：901-917 (1987)。）例示的ＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５、及びＨ３の９５−１０２において起こる。（Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest、第5版、Public Health Service、National Institutes of Health、Bethesda、MD(1991)。）ＶＨ中のＣＤＲ１を例外として、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原と接触する残基である「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」を含む。ＳＤＲは、短縮型−ＣＤＲ、又はａ−ＣＤＲと称されるＣＤＲの領域内に含有される。例示的ａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８、及びＨ３の９５−１０２において起こる。（Almagro及びFransson、Front. Biosci.13：1619-1633(2008)を参照されたい。）別途指示がない限り、ＨＶＲ残基及び可変ドメイン中の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において上述のＫａｂａｔ等によって番号付けされる。
【０１３２】
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、本明細書において使用する場合、抗原への抗体の結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは一般に、同様の構造を有し、それぞれのドメインは、４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Kindtら、Kuby Immunology、第6版、W.H. Freeman and Co.、p91 (2007)を参照されたい。）単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原−結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、それぞれ、相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングする抗原を結合する抗体からのＶＨ又はＶＬドメインを使用して単離し得る。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５０：８８０−８８７  （１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８  （１９９１）を参照されたい。
【０１３３】
用語「ベクター」は、本明細書において使用する場合、これが連結している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、及び宿主細胞中に導入された宿主細胞のゲノム中に組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、これらが動作可能に連結している核酸の発現を指向することができる。このようなベクターは、本明細書において、「発現ベクター」と称される。
【０１３４】
用語「遊離システインアミノ酸」は、本明細書において使用する場合、親抗体中に操作されており、チオール官能基（−ＳＨ）を有し、分子内又は分子間ジスルフィド架橋として対になっていないシステインアミノ酸残基を指す。
【０１３５】
用語「リンカー」、「リンカー単位」、又は「連結」は、本明細書において使用する場合、抗体へと薬物部分を共有結合する原子の鎖を含む化学部分を意味する。様々な実施態様において、リンカーは、Ｌとして特定されている二価基である。
【０１３６】
用語「薬物部分」は、本明細書において使用する場合、細胞機能を阻害若しくは防止し、且つ／又は細胞死若しくは破壊をもたらす物質を意味する。細胞傷害性剤には、これらに限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤又は薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）；増殖阻害剤；酵素及びその断片、例えば、核酸分解酵素；並びに下記で開示されている様々な抗腫瘍剤又は抗がん剤が含まれる。
【０１３７】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「アシル」は、基−Ｃ（Ｏ）Ｒ’を指し、Ｒ’は、それぞれが本明細書において定義されるような、アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、又はヘテロシクリルである。
【０１３８】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「アルコキシ」は、基−ＯＲ’を指し、Ｒ’は、上記に定義されているようなＣ１−Ｃ４アルキル又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルである。「アルコキシ」の例には、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、プロポキシ、ブトキシ、ｔ−ブトキシ、イソブトキシ、シクロプロポキシ、及びシクロブトキシ、及びそのハロゲン化形態、例えば、フルオロメトキシ及びジフルオロメトキシが含まれる。
【０１３９】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「アルキル」は、１−１２個の（Ｃ１−Ｃ１２）炭素原子を有する直鎖状又は分岐状の一価又は二価の炭化水素鎖基を指し、これは置換されていなくても、本発明内に含まれる複数の置換度、例えば、１、２、３、４、５若しくは６で置換されていてもよい。置換基の例は、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸及びアルキルチオからなる群から選択される。「アルキル」の例には、本明細書において使用する場合、これらに限定されないが、メチル（Ｍｅ，−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ，−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ，ｎ−プロピル，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ，ｉ−プロピル，−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ，ｎ−ブチル，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ，ｉ−ブチル，−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ，ｓ−ブチル，−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ，ｔ−ブチル，−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル，−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３、並びに二価（「アルキレン」）及びその置換バージョンが含まれる。置換アルキルの例には、これらに限定されないが、ヒドロキシメチル、ジフルオロメチル及びトリフルオロメチルが含まれる。
【０１４０】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において別段の定義がない限り、用語「アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和の部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ２二重結合を有する２−８個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ１０）の任意の長さの直鎖状又は分岐状の一価又は二価の炭化水素鎖基を意味し、アルケニル基は、「アルキル」の定義において上記で記載した１個又は複数の置換基で独立して置換されていてもよく、「ｃｉｓ」及び「ｔｒａｎｓ」配向、又は代わりに、「Ｅ」及び「Ｚ」配向を有する基を含む。アルケニルの例には、これらに限定されないが、エテニル又はビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、プロパ−１−エニル（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）、プロパ−２−エニル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、２−メチルプロプ−１−エニル、ブタ−１−エニル、ブタ−２−エニル、ブタ−３−エニル、ブタ−１，３−ジエニル、２−メチルブタ−１，３−ジエン、ヘキサ−１−エニル、ヘキサ−２−エニル、ヘキサ−３−エニル、ヘキサ−４−エニル、ヘキサ−１，３−ジエニル、並びに二価（「アルケニレン」）及びその置換バージョンが含まれる。
【０１４１】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において別段の定義がない限り、用語「アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和の部位、すなわち、炭素−炭素ｓｐ三重結合を有する２〜８個の炭素原子（Ｃ２−Ｃ１０）の任意の長さの直鎖状又は分岐状の一価又は二価の炭化水素基を指し、アルキニル基は、アルキルの定義における上記の１つ又は複数の置換基で独立して置換されていてもよく、アルキニルの例には、これらに限定されないが、エチニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパ−１−イニル（−Ｃ≡ＣＣＨ３）、プロパ−２−イニル（プロパルギル、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）、ブタ−１−イニル、ブタ−２−イニル及びブタ−３−イニル、並びに二価（「アルキニレン」）及びその置換バージョンが含まれる。
【０１４２】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「アルキルアミノ」は、基−ＮＲ’Ｒ’’を指し、Ｒ’は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、Ｒ’’は、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、アルキルアミノの例には、これらに限定されないが、メチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、プロピルアミノ及びシクロプロピルアミノが含まれる。
【０１４３】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「アミド」は、基−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’を指し、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、アミドの例には、これらに限定されないが、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ３、及び−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２が含まれる。
【０１４４】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「アリール」は、芳香族炭化水素環系を指す。環系は、単環式又は縮合多環式（例えば、二環式、三環式など）、置換又は非置換でよい。様々な実施態様において、単環式アリール環は、Ｃ５−Ｃ１０、又はＣ５−Ｃ７、又はＣ５−Ｃ６であり、これらの炭素数は、環系を形成する炭素原子の数を指す。Ｃ６環系、すなわち、フェニル環は、アリール基である。様々な実施態様において、多環式環は、二環式アリール基であり、二環式アリール基の例には、Ｃ８−Ｃ１２、又はＣ９−Ｃ１０が含まれる。１０個の炭素原子を有するナフチル環は、多環式アリール基である。アリールについての置換基の例は、「任意選択的に置換されている」の定義において下記で記載する。
【０１４５】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「シアノ」は、基−ＣＮを指す。
【０１４６】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、「シクロアルキル」は、非芳香族、置換又は非置換、飽和又は部分不飽和炭化水素環基を指す。置換基の例は、「任意選択的に置換されている」の定義において記載する。一例において、シクロアルキル基は、３−１２個の炭素原子（Ｃ３−Ｃ１２）である。他の例において、シクロアルキルは、Ｃ３−Ｃ８、Ｃ３−Ｃ１０又はＣ５−Ｃ１０である。他の例において、シクロアルキル基は、単環として、Ｃ３−Ｃ８、Ｃ３−Ｃ６又はＣ５−Ｃ６である。別の例において、シクロアルキル基は、二環として、Ｃ７−Ｃ１２である。別の例において、シクロアルキル基は、スピロ系として、Ｃ５−Ｃ１２である。単環式シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、ペルジュウテロシクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル及びシクロドデシルが含まれる。７−１２個の環原子を有する二環式シクロアルキルの例示的配置には、これらに限定されないが、［４，４］、［４，５］、［５，５］、［５，６］又は［６，６］環系が含まれる。例示的架橋二環式シクロアルキルには、これらに限定されないが、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン及びビシクロ［３．２．２］ノナンが含まれる。スピロシクロアルキルの例には、スピロ［２．２］ペンタン、スピロ［２．３］ヘキサン、スピロ［２．４］ヘプタン、スピロ［２．５］オクタン及びスピロ［４．５］デカンが含まれる。
【０１４７】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「エステル」は、基−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’を指し、Ｒ’は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルである。
【０１４８】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「複素環」、「ヘテロシクロアルキル」又は「ヘテロシクリル」は、２−１２個の環炭素原子及び１−３個の環ヘテロ原子を含有する、非置換及び置換単環式又は多環式非芳香環系を指す。多環式環系は、縮合二環式若しくは三環式、スピロ又は架橋でよい。ヘテロ原子の例は、Ｎ−オキシド、酸化硫黄、及びジオキシドを含めて、Ｎ、Ｏ、及びＳを含む。一実施態様において、環は、３−８員であり、完全に飽和しているか、又は１つ若しくは複数の不飽和度を有する。複数の置換度は、本定義内に含まれる。置換基の例を、下記に定義する。「複素環式」基の例には、これらに限定されないが、テトラヒドロフラニル、ピラニル、１，４−ジオキサニル、１，３−ジオキサニル、オキソラニル、オキセタニル、２−オキサ−６−アザスピロ［３．３］ヘプタン−６−イル、ピペリジニル、ピロリジニル、モルホリニル、アゼチジニル、ピペラジニル、ピロリジノニル、ピペラジノニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、及びこれらの様々な互変異性体が含まれる。
【０１４９】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「ヘテロアリール」は、特許請求の範囲において他に定義しない限り、１−９個の炭素（一又は複数）及び少なくとも１個のヘテロ原子を含有する芳香環系を指す。ヘテロ原子の例は、Ｎ、Ｏ、及びＳを含む。ヘテロアリールは、単環式又は多環式、置換又は非置換でよい。単環式ヘテロアリール基は、環中に２−６個の環炭素原子及び１−３個の環ヘテロ原子を有してもよく、一方、多環式ヘテロアリールは、３−９個の環炭素原子及び１−５個の環ヘテロ原子を含有し得る。多環式ヘテロアリール環は、縮合環、スピロ環又は架橋環の接合点を含有してもよく、例えば、二環式ヘテロアリールは、多環式ヘテロアリールである。二環式ヘテロアリール環は、８−１２員の原子を含有し得る。単環式ヘテロアリール環は、５−８員の原子（炭素及びヘテロ原子）を含有し得る。例示的ヘテロアリール基には、これらに限定されないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、フラニル、イミダゾリル、インドリル、アザインドリル、アザベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイミダゾリル、テトラジニル、テトラゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリジニル、ピリミジニル、ピロリル、キノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、トリアジニル、トリアゾリル、チアゾリル及びチオフェニルが含まれる。ヘテロアリールについての置換基の例を、「任意選択的に置換されている」の定義において下記に記載する。
【０１５０】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「ヘテロアリールアルキル」は、基（ヘテロアリール）Ｃ１−Ｃ３アルキルを意味する。
【０１５１】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「アリールアルキル」は、基（アリール）Ｃ１−Ｃ３アルキルを意味する。
【０１５２】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「尿素」は、基−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’を指し、Ｒ’及びＲ’’は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルである。
【０１５３】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「任意選択的に」は、それに続いて記載した事象（一又は複数）が起こってもよいか、又は起こらなくてもよいことを意味し、起こる事象（一又は複数）及び起こらない事象（一又は複数）の両方を含む。
【０１５４】
本明細書において使用する場合、他に定義しない限り、語句「任意選択的に置換されている」、「置換されている」又はそのバリエーションは、１個又は複数の置換基、例えば、１個、２個又は３個の置換基を伴う複数の置換度を含めた任意選択的な置換を表す。この語句は、本明細書において記載及び記述した置換の重複性であると解釈すべきではない。例示的任意選択的な置換基は、アシル、Ｃ１−Ｃ６アルキル、スルホニル、アミノ、スルホンアミド、スルホキシド、アルコキシ、シアノ、ハロ、尿素、エステル、カルボン酸、アミド、ヒドロキシ、オキソ、及びニトロを含む。
【０１５５】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「治療」は、特定の状態を軽減し、状態の１つ又は複数の症候を解消又は低減させ、状態の進行を遅延又は解消することを指す。
【０１５６】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「有効量」は、例えば、研究者又は臨床医によって探究されている組織、系、動物、又はヒトの生物学又は医学的奏功を引き出す薬物又は医薬品の量を意味する。
【０１５７】
本明細書において使用する場合、特許請求の範囲において他に定義しない限り、用語「治療的有効量」は、このような量を受けていない対応する対象と比較して、疾患、障害、若しくは副作用の治療、又は疾患若しくは障害の進歩の速度の減少をもたらす任意の量を意味する。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理的機能を増強するのに有効な量を含む。治療法における使用のために、治療的有効量の式Ｉの化合物、及びその塩は、未加工の化学物質として投与し得る。さらに、活性成分は、薬学的組成物として提示し得る。
【０１５８】
本発明はまた、実験セクションにおける実施例の任意の１つに関する。
【０１５９】
語句「薬学的に許容される塩」は、本明細書において使用する場合、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）又はリンカー−薬物部分の薬学的に許容される有機塩又は無機塩を指す。例示的な塩には、これらに限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、琥珀酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸塩））が含まれる。薬学的に許容される塩は、別の分子、例えば、酢酸イオン、コハク酸イオン又は他の対イオンを含むことが関与し得る。対イオンは、親化合物上の電荷を安定化する任意の有機又は無機部分であり得る。さらに、薬学的に許容される塩は、その構造中に複数個の電荷を帯びた原子を有し得る。複数の電荷を帯びた原子が薬学的に許容される塩の部分である実例は、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容される塩は、１つ若しくは複数の電荷を帯びた原子及び／又は１つ若しくは複数の対イオンを有することができる。
【０１６０】
薬学的に許容されない他の塩は、本発明の化合物の調製において有用であり得、これらは本発明のさらなる態様を形成すると考えるべきである。これらの塩、例えば、シュウ酸塩又はトリフルオロ酢酸塩は、それら自体で薬学的に許容されないものである一方、本発明の化合物及びこれらの薬学的に許容される塩を得ることにおける中間体として有用な塩の調製において有用であり得る。
【０１６１】
本発明の化合物は、固体又は液体形態で存在し得る。固体状態において、これは結晶形態若しくは非結晶形態で、又はその混合物として存在し得る。薬学的に許容される溶媒和物は、結晶性又は非結晶性化合物のために形成し得ることを当業者は認識する。結晶性溶媒和物において、溶媒分子は、結晶化の間に結晶格子中に組み込まれる。溶媒和物は、これらに限定されないが、エタノール、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸、エタノールアミン、若しくは酢酸エチルなどの非水性溶媒が関与し得、又はこれらは、結晶格子中に組み込まれる溶媒として水が関与し得る。水が結晶格子中に組み込まれた溶媒である溶媒和物は典型的には、「水和物」と称される。水和物は、化学量論的水和物、及び不定量の水を含有する組成物を含む。本発明は、全てのこのような溶媒和物を含む。
【０１６２】
様々なその溶媒和物を含めた結晶形態で存在する本発明の特定の化合物は、多型（すなわち、異なる結晶構造で生じる能力）を示し得ることを当業者はさらに認識する。これらの異なる結晶形態は典型的には、「多形」として公知である。本発明は、全てのこのような多形を含む。多形は、同じ化学組成を有するが、結晶性固形状態のパッキング、幾何学的配置、及び他の記述的特性において異なる。したがって、多形は、異なる物理的特性、例えば、形状、密度、硬度、変形性、安定性、及び溶解特性を有し得る。多形は典型的には、異なる融点、ＩＲスペクトル、及びＸ線粉末回折パターンを示し、これは同定のために使用し得る。例えば、化合物の作製において使用される反応条件又は試薬を変更又は調節することによって異なる多形を生成し得ることを当業者は認識する。例えば、温度、圧力、又は溶媒における変化は、多形を生じさせ得る。さらに、１つの多形は、特定の条件下で別の多形に自発的に変換し得る。
【０１６３】
本発明の化合物又はその塩は、立体異性形態で存在し得る（例えば、これは１個又は複数個の不斉炭素原子を含有する）。個々の立体異性体（光学異性体及びジアステレオマー）並びにこれらの混合物は、本発明の範囲内に含まれる。同様に、式（Ｉ）の化合物又は塩は、式において示されるもの以外の互変異性形態で存在し得、これらはまた本発明の範囲内に含まれることが理解される。本発明は、本明細書の上記で定義した特定の群の全ての組合せ及びサブセットを含むことを理解すべきである。本発明の範囲は、立体異性体の混合物及び精製した光学異性体又は鏡像異性的／ジアステレオマー的に濃縮された混合物を含む。本発明は、本明細書の上記で定義する特定の群の全ての組合せ及びサブセットを含むことを理解すべきである。
【０１６４】
本発明はまた、本発明の化合物の同位体標識された形態を含むが、１個又は複数の原子は、天然で通常見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子で置き換えられているという事実がある。本発明の化合物及びその薬学的に許容される塩中に組み込むことができる同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素、及び塩素の同位体、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ及び１２５Ｉを含む。
【０１６５】
上記の同位体及び／又は他の原子の他の同位体を含有する本発明の化合物及び前記化合物の薬学的に許容される塩は、本発明の範囲内である。本発明の同位体標識された化合物、例えば、その中に放射性同位体、例えば、３Ｈ、１４Ｃが組み込まれているものは、薬物及び／又は基質組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム標識、すなわち、３Ｈ、及び炭素−１４、すなわち、１４Ｃ、同位体は一般に、これらの調製の容易さ及び検出性のために使用される。１１Ｃ及び１８Ｆ同位体は、ＰＥＴ（ポジトロン放出断層撮影）において有用であり、１２５Ｉ同位体は、ＳＰＥＣＴ（単光子放出コンピュータ断層撮影法）において有用であり、全ては脳イメージングにおいて有用である。さらに、より重い同位体、例えば、重水素、すなわち、２Ｈによる置換によって、より大きな代謝安定性、例えば、インビボでの半減期の増加又は投与必要量の低減からもたらされる特定の治療上の利益をもたらすことができ、したがって、いくつかの状況において好ましくてもよい。式Ｉの同位体標識された化合物及び下記の本発明は一般に、同位体標識されていない試薬を容易に利用可能な同位体標識された試薬で置換することによって、スキーム及び／又は下記の実施例において開示されている手順を行うことによって調製することができる。
【０１６６】
ＡＤＣの薬学的組成物
本発明の治療用抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の薬学的製剤は典型的には、薬学的に許容される非経口ビヒクルを有する非経口投与、すなわち、ボーラス、静脈内、腫瘍内注射のために、及び単位投薬注射可能形態で調製される。所望の程度の純度を有する抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤又は安定剤と任意選択的に混合する（Remington's Pharmaceutical Sciences (1980)、第16版、Osol, A.編）。
【０１６７】
システイン操作抗体
本発明の化合物は、システイン操作抗体を含む抗体−薬物コンジュゲートを含み、野性型又は親抗体の１つ又は複数のアミノ酸は、システインアミノ酸で置き換えられている。任意の形態の抗体を、このように操作、すなわち、変異導入し得る。例えば、親Ｆａｂ抗体断片を操作して、本明細書において「ＴｈｉｏＦａｂ」と称されるシステイン操作Ｆａｂを形成し得る。同様に、親モノクローナル抗体を操作して、「ＴｈｉｏＭａｂ」を形成し得る。単点突然変異は、ＴｈｉｏＦａｂにおいて単一の操作されたシステイン残基を生じさせ、一方、単点突然変異は、ＩｇＧ抗体のダイマーの性質によって、ＴｈｉｏＭａｂにおいて２つの操作されたシステイン残基を生じさせることに留意すべきである。置き換えられた（「操作された」）システイン（Ｃｙｓ）残基を有する変異体は、新たに導入された操作されたシステインチオール基の反応性について評価される。チオール反応性値は、相対的な０−１．０の範囲の数値的用語であり、任意のシステイン操作抗体について測定することができる。本発明のシステイン操作抗体のチオール反応性値は、０．６−１．０；０．７−１．０；又は０．８−１．０の範囲である。
【０１６８】
突然変異誘発によってシステイン操作抗体を調製するために、アミノ酸配列変異体をコードする開始ポリペプチドのＤＮＡは、当該技術分野で公知の種々の方法によって調製される。これらの方法には、これらに限定されないが、従前に調製されたポリペプチドをコードするＤＮＡの部位特異的（又はオリゴヌクレオチド媒介）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、及びカセット突然変異誘発による調製が含まれる。組換え抗体の変異体は、制限断片操作によって、又は合成オリゴヌクレオチドによるオーバーラップ伸長ＰＣＲによってまた構築し得る。変異原性プライマーは、システインコドン置き換え（一又は複数）をコードする。標準的な突然変異誘発技術を用いて、このような変異システイン操作抗体をコードするＤＮＡを生じさせることができる。一般のガイダンスは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８９；及びＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、１９９３において見出すことができる。
【０１６９】
システインアミノ酸は、抗体における反応部位において操作し得、鎖内又は分子間ジスルフィド連結を形成しない（Junutulaら、2008b Nature Biotech.、26(8)：925-932；Dornanら(2009) Blood、114(13)：2721-2729；米国特許第７５２１５４１号；米国特許第７７２３４８５号；国際公開第２００９／０５２２４９号、Shenら(2012) Nature Biotech.、30(2)：184-191；Junutulaら(2008) Jour of Immun. Methods、332：41-52）。操作されたシステインチオールは、チオール反応性求電子基、例えば、マレイミド又はアルファ−ハロアミドを有する本発明のリンカー試薬又はリンカー−薬物中間体と反応して、システイン操作抗体（ＴｈｉｏＭａｂ）及び薬物（Ｄ）部分を有するＡＤＣを形成し得る。このように、薬物部分の場所は、設計し、コントロールし、知ることができる。薬物添加量は、コントロールすることができる。これは、操作されたシステインチオール基が典型的には、チオール−反応性リンカー試薬又はリンカー−薬物中間体と高収率で反応するからである。重鎖又は軽鎖上の単一の部位において置換によってシステインアミノ酸を導入するように抗体を操作することによって、対称的抗体上の２つの新規なシステインが生じる。概ね２の薬物添加量、及び概ね均一のコンジュゲーション生成物ＡＤＣを達成することができる。
【０１７０】
本発明のシステイン操作抗体は好ましくは、これらの野性型親抗体カウンターパートの抗原結合能力を保持する。このように、システイン操作抗体は、好ましくは具体的には、抗原に結合することができる。このような抗原は、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、細胞表面受容体タンパク質及び他の細胞表面分子、膜貫通タンパク質、シグナル伝達タンパク質、細胞生存調節因子、細胞増殖調節因子、組織発達又は分化と関連する（例えば、機能的に寄与することが公知であるか、又は疑われている）分子、リンホカイン、サイトカイン、細胞周期調節に関与している分子、脈管形成に関与している分子、及び血管新生と関連する（例えば、機能的に寄与することが公知であるか、又は疑われている）分子を含む。腫瘍関連抗原は、クラスター分化因子（すなわち、ＣＤタンパク質）であり得る。そこにシステイン操作抗体が結合することができる抗原は、上記のカテゴリーの１つのサブセットのメンバーであり得、前記カテゴリーの他のサブセット（一又は複数）は、（対象とする抗原に関して）異なる特徴を有する他の分子／抗原を含む。
【０１７１】
システイン操作抗体は、鎖内ジスルフィド基の還元及び再酸化によるリンカー−薬物中間体とのコンジュゲーションのために調製される。
【０１７２】
腫瘍関連抗原：
これらに限定されないが、システイン操作抗体を含めた、がんの治療において本発明の抗体−薬物コンジュゲート中で有用であり得る抗体には、これらに限定されないが、細胞表面受容体及び腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する抗体が含まれる。特定の腫瘍関連抗原は当該技術分野で公知であり、当該技術分野で周知である方法及び情報を使用して抗体を生じさせることにおいて使用するために調製することができる。がんの診断及び治療法のための有効な細胞の標的を発見する試みにおいて、研究者は、１つ又は複数の正常な非癌性細胞（一又は複数）上と比較して１つ又は複数の特定のタイプ（一又は複数）のがん細胞の表面上に特異的に発現している膜貫通又は他の腫瘍関連ポリペプチドを同定することを探求してきた。しばしば、このような腫瘍関連ポリペプチドは、非癌性細胞の表面上と比較して、がん細胞の表面上でより豊富に発現している。このような腫瘍関連細胞表面抗原ポリペプチドの同定は、さらに具体的には抗体をベースとする治療法による破壊のためのがん細胞を標的とする能力を生じさせた。
腫瘍関連抗原ＴＡＡの例は、これらに限定されないが、下記に列挙したものが含まれる。便宜上、これらの抗原に関する情報は、これらの全てが当該技術分野で公知であるが、下記で列挙し、名称、代替名称、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号及び主要な出典（一又は複数）、下記の国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）の核酸及びタンパク質配列同定規定を含む。下記で列挙したＴＡＡに対応する核酸及びタンパク質配列は、公共データベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋにおいて利用可能である。抗体によって標的とされる腫瘍関連抗原は、引用した参考文献において同定される配列に対して少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、若しくは９５％の配列同一性を有し、及び／又は引用した参考文献において見出される配列を有するＴＡＡと実質的に同じ生物学的特性若しくは特性を示す全てのアミノ酸配列変異体及びアイソフォームを含む。例えば、変異体配列を有するＴＡＡは一般に、列挙した対応する配列を有するＴＡＡに特異的に結合する抗体に特異的に結合することができる。本明細書において特に記載した出典における配列及び開示は、出典明示によって明白に援用されている。
【０１７３】
（１）ＢＭＰＲ１Ｂ（骨形成タンパク質受容体−タイプＩＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿００１２０３）
ｔｅｎ  Ｄｉｊｋｅ，Ｐ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６４  （５１５５）：１０１−１０４  （１９９４）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１４  （１１）：１３７７−１３８２  （１９９７））；国際公開第２００４０６３３６２号（請求項２）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；米国特許出願第２００３１３４７９０−Ａ１号（ｐ３８−３９）；国際公開第２００２１０２２３５号（請求項１３；ｐ２９６）；国際公開第２００３０５５４４３号（ｐ９１−９２）；国際公開第２００２９９１２２号（実施例２；ｐ５２８−５３０）；国際公開第２００３０２９４２１号（請求項６）；国際公開第２００３０２４３９２号（請求項２；図１１２）；国際公開第２００２９８３５８号（請求項１；ｐ１８３）；国際公開第２００２５４９４０号（ｐ１００−１０１）；国際公開第２００２５９３７７号（ｐ３４９−３５０）；国際公開第２００２３０２６８号（請求項２７；ｐ３７６）；国際公開第２００１４８２０４号（実施例；図４）
ＮＰ＿００１１９４骨形成タンパク質受容体、タイプＩＢ／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００１１９４．１−
クロスリファレンス：ＭＩＭ：６０３２４８；ＮＰ＿００１１９４．１；ＡＹ０６５９９４
（２）Ｅ１６（ＬＡＴ１、ＳＬＣ７Ａ５、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿００３４８６）
Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２５５  （２）、２８３−２８８  （１９９９）、Ｎａｔｕｒｅ  ３９５  （６６９９）：２８８−２９１  （１９９８）、Ｇａｕｇｉｔｓｃｈ、Ｈ．Ｗ．ら（１９９２）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６７  （１６）：１１２６７−１１２７３）；国際公開第２００４０４８９３８号（実施例２）；国際公開第２００４０３２８４２号（実施例ＩＶ）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００２７８５２４号（実施例２）；国際公開第２００２９９０７４号（請求項１９；ｐ１２７−１２９）；国際公開第２００２８６４４３号（請求項２７；ｐ２２２、３９３）；国際公開第２００３００３９０６号（請求項１０；ｐ２９３）；国際公開第２００２６４７９８号（請求項３３；ｐ９３−９５）；国際公開第２０００１４２２８号（請求項５；ｐ１３３−１３６）；米国特許出願第２００３２２４４５４号（図３）；国際公開第２００３０２５１３８号（請求項１２；ｐ１５０）；
ＮＰ＿００３４７７溶質担体ファミリー７（カチオン性アミノ酸輸送体、ｙ＋系）、メンバー５／ｐｉｄ＝ＮＰ＿００３４７７．３−ホモサピエンス（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）
クロスリファレンス：ＭＩＭ：６００１８２；ＮＰ＿００３４７７．３；ＮＭ＿０１５９２３；ＮＭ＿００３４８６＿１
（３）ＳＴＥＡＰ１（前立腺の６回膜貫通上皮抗原、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿０１２４４９）
Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６１  （１５）、５８５７−５８６０  （２００１）、Ｈｕｂｅｒｔ，  Ｒ．Ｓ．ら（１９９９）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９６  （２５）：１４５２３−１４５２８）；国際公開第２００４０６５５７７号（請求項６）；国際公開第２００４０２７０４９号（図１Ｌ）；欧州特許第１３９４２７４号（実施例１１）；国際公開第２００４０１６２２５号（請求項２）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；米国特許出願第２００３１５７０８９号（実施例５）；米国特許出願第２００３１８５８３０号（実施例５）；米国特許出願第２００３０６４３９７号（図２）；国際公開第２００２８９７４７号（実施例５；ｐ６１８−６１９）；国際公開第２００３０２２９９５号（実施例９；図１３Ａ、実施例５３；ｐ１７３、実施例２；図２Ａ）；
ＮＰ＿０３６５８１前立腺の６回膜貫通上皮抗原
クロスリファレンス：ＭＩＭ：６０４４１５；ＮＰ＿０３６５８１．１；ＮＭ＿０１２４４９＿１
（４）０７７２Ｐ（ＣＡ１２５、ＭＵＣ１６、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＦ３６１４８６）
Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７６  （２９）：２７３７１−２７３７５  （２００１）；国際公開第２００４０４５５５３号（請求項１４）；国際公開第２００２９２８３６号（請求項６；図１２）；国際公開第２００２８３８６６号（請求項１５；ｐ１１６−１２１）；米国特許出願第２００３１２４１４０号（実施例１６）；
クロスリファレンス：ＧＩ：３４５０１４６７；ＡＡＫ７４１２０．３；ＡＦ３６１４８６＿１
（５）ＭＰＦ（ＭＰＦ、ＭＳＬＮ、ＳＭＲ、巨核球増強因子、メソテリン、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿００５８２３）Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，  Ｎ．ら、Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６９  （２）、８０５−８０８  （１９９４）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９６  （２０）：１１５３１−１１５３６  （１９９９）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９３  （１）：１３６−１４０  （１９９６）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０  （３７）：２１９８４−２１９９０  （１９９５）；国際公開第２００３１０１２８３号（請求項１４）；（国際公開第２００２１０２２３５号（請求項１３；ｐ２８７−２８８）；国際公開第２００２１０１０７５号（請求項４；ｐ３０８−３０９）；国際公開第２００２７１９２８号（ｐ３２０−３２１）；国際公開第９４１０３１２号（ｐ５２−５７）；クロスリファレンス：ＭＩＭ：６０１０５１；ＮＰ＿００５８１４．２；ＮＭ＿００５８２３＿１
（６）Ｎａｐｉ３ｂ／ＮａＰｉ２ｂ（ＮＡＰＩ−３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、タイプＩＩナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿００６４２４）
Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７７  （２２）：１９６６５−１９６７２  （２００２）、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ６２  （２）：２８１−２８４  （１９９９）、Ｆｅｉｌｄ，  Ｊ．Ａ．ら、（１９９９）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２５８  （３）：５７８−５８２）；国際公開第２００４０２２７７８号（請求項２）；欧州特許第１３９４２７４号（実施例１１）；国際公開第２００２１０２２３５号（請求項１３；ｐ３２６）；欧州特許第８７５５６９号（請求項１；ｐ１７−１９）；国際公開第２００１５７１８８号（請求項２０；ｐ３２９）；国際公開第２００４０３２８４２号（実施例ＩＶ）；国際公開第２００１７５１７７号（請求項２４；ｐ１３９−１４０）；
クロスリファレンス：ＭＩＭ：６０４２１７；ＮＰ＿００６４１５．１；ＮＭ＿００６４２４＿１
（７）Ｓｅｍａ５ｂ（ＦＬＪ１０３７２、ＫＩＡＡ１４４５、Ｍｍ．４２０１５、ＳＥＭＡ５Ｂ、ＳＥＭＡＧ、セマフォリン５ｂ  Ｈｌｏｇ、ｓｅｍａドメイン、７回トロンボスポンジンリピート（タイプ１及びタイプ１−様）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）及び短い細胞質ドメイン、（セマフォリン）５Ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＢ０４０８７８）
Ｎａｇａｓｅ  Ｔ．ら（２０００）  ＤＮＡ  Ｒｅｓ．  ７  （２）：１４３−１５０）；国際公開第２００４０００９９７号（請求項１）；国際公開第２００３００３９８４号（請求項１）；国際公開第２００２０６３３９号（請求項１；ｐ５０）；国際公開第２００１８８１３３号（請求項１；ｐ４１−４３、４８−５８）；国際公開第２００３０５４１５２号（請求項２０）；国際公開第２００３１０１４００号（請求項１１）；
アクセッション：Ｑ９Ｐ２８３；ＥＭＢＬ；ＡＢ０４０８７８；ＢＡＡ９５９６９．１．Ｇｅｎｅｗ；ＨＧＮＣ：１０７３７；
（８）ＰＳＣＡ  ｈｌｇ（２７０００５０Ｃ１２Ｒｉｋ、Ｃ５３０００８Ｏ１６Ｒｉｋ、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２、ＲＩＫＥＮ  ｃＤＮＡ２７０００５０Ｃ１２遺伝子、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＹ３５８６２８）；Ｒｏｓｓら（２００２）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６２：２５４６−２５５３；米国特許出願第２００３１２９１９２号（請求項２）；米国特許出願第２００４０４４１８０号（請求項１２）；米国特許出願第２００４０４４１７９号（請求項１１）；米国特許出願第２００３０９６９６１号（請求項１１）；米国特許出願第２００３２３２０５６号（実施例５）；国際公開第２００３１０５７５８号（請求項１２）；米国特許出願第２００３２０６９１８号（実施例５）；欧州特許第１３４７０４６号（請求項１）；国際公開第２００３０２５１４８号（請求項２０）；
クロスリファレンス：ＧＩ：３７１８２３７８；ＡＡＱ８８９９１．１；ＡＹ３５８６２８＿１
（９）ＥＴＢＲ（エンドセリンタイプＢ受容体、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＹ２７５４６３）；
Ｎａｋａｍｕｔａ  Ｍ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １７７、３４−３９、１９９１；Ｏｇａｗａ  Ｙ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １７８、２４８−２５５、１９９１；Ａｒａｉ  Ｈ．ら、Ｊｐｎ．  Ｃｉｒｃ．  Ｊ．  ５６、１３０３−１３０７、１９９２；Ａｒａｉ  Ｈ．ら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６８、３４６３−３４７０、１９９３；Ｓａｋａｍｏｔｏ  Ａ．、Ｙａｎａｇｉｓａｗａ  Ｍ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １７８、６５６−６６３、１９９１；Ｅｌｓｈｏｕｒｂａｇｙ  Ｎ．Ａ．ら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６８、３８７３−３８７９、１９９３；Ｈａｅｎｄｌｅｒ  Ｂ．ら、Ｊ．  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ２０、ｓ１−Ｓ４、１９９２；Ｔｓｕｔｓｕｍｉ  Ｍ．ら、Ｇｅｎｅ  ２２８、４３−４９、１９９９；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９９、１６８９９−１６９０３、２００２；Ｂｏｕｒｇｅｏｉｓ  Ｃ．ら、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．  Ｍｅｔａｂ．  ８２、３１１６−３１２３、１９９７；Ｏｋａｍｏｔｏ  Ｙ．ら、Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２、２１５８９−２１５９６、１９９７；Ｖｅｒｈｅｉｊ  Ｊ．Ｂ．ら、Ａｍ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｇｅｎｅｔ．  １０８、２２３−２２５、２００２；Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．ら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  ５、１８０−１８５、１９９７；Ｐｕｆｆｅｎｂｅｒｇｅｒ  Ｅ．Ｇ．ら、Ｃｅｌｌ  ７９、１２５７−１２６６、１９９４；Ａｔｔｉｅ  Ｔ．ら、Ｈｕｍ．  Ｍｏｌ．  Ｇｅｎｅｔ．  ４、２４０７−２４０９、１９９５；Ａｕｒｉｃｃｈｉｏ  Ａ．ら、Ｈｕｍ．  Ｍｏｌ．  Ｇｅｎｅｔ．５：３５１−３５４、１９９６；Ａｍｉｅｌ  Ｊ．ら、Ｈｕｍ．  Ｍｏｌ．  Ｇｅｎｅｔ．  ５、３５５−３５７、１９９６；Ｈｏｆｓｔｒａ  Ｒ．Ｍ．Ｗ．ら、Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．  １２、４４５−４４７、１９９６；Ｓｖｅｎｓｓｏｎ  Ｐ．Ｊ．ら、Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  １０３、１４５−１４８、１９９８；Ｆｕｃｈｓ  Ｓ．ら、Ｍｏｌ．  Ｍｅｄ．  ７、１１５−１２４、２００１；Ｐｉｎｇａｕｌｔ  Ｖ．ら、（２００２）  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  １１１、１９８−２０６；国際公開第２００４０４５５１６号（請求項１）；国際公開第２００４０４８９３８号（実施例２）；国際公開第２００４０４００００号（請求項１５１）；国際公開第２００３０８７７６８号（請求項１）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００２６１０８７号（図１）；国際公開第２００３０１６４９４号（図６）；国際公開第２００３０２５１３８号（請求項１２；ｐ１４４）；国際公開第２００１９８３５１号（請求項１；ｐ１２４−１２５）；欧州特許第５２２８６８号（請求項８；図２）；国際公開第２００１７７１７２号（請求項１；ｐ２９７−２９９）；米国特許出願第２００３１０９６７６号；米国特許第６５１８４０４号（図３）；米国特許第５７７３２２３号（請求項１ａ；３１−３４欄）；国際公開第２００４００１００４号；
（１０）ＭＳＧ７８３（ＲＮＦ１２４、仮定上のタンパク質ＦＬＪ２０３１５、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿０１７７６３）；
国際公開第２００３１０４２７５号（請求項１）；国際公開第２００４０４６３４２号（実施例２）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２００３０８３０７４号（請求項１４；ｐ６１）；国際公開第２００３０１８６２１号（請求項１）；国際公開第２００３０２４３９２号（請求項２；図９３）；国際公開第２００１６６６８９号（実施例６）；
クロスリファレンス：ローカスＩＤ：５４８９４；ＮＰ＿０６０２３３．２；ＮＭ＿０１７７６３＿１
（１１）ＳＴＥＡＰ２（ＨＧＮＣ＿８６３９、ＩＰＣＡ−１、ＰＣＡＮＡＰ１、ＳＴＡＭＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴＭＰ、前立腺がんと関連する遺伝子１、前立腺がんと関連するタンパク質１、前立腺２の６回膜貫通上皮抗原、６回膜貫通前立腺タンパク質、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＦ４５５１３８）
Ｌａｂ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８２  （１１）：１５７３−１５８２  （２００２）；国際公開第２００３０８７３０６号；米国特許出願第２００３０６４３９７号（請求項１；図１）；国際公開第２００２７２５９６号（請求項１３；ｐ５４−５５）；国際公開第２００１７２９６２号（請求項１；図４Ｂ）；国際公開第２００３１０４２７０号（請求項１１）；国際公開第２００３１０４２７０号（請求項１６）；米国特許出願第２００４００５５９８号（請求項２２）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；米国特許出願第２００３０６０６１２号（請求項１２；図１０）；国際公開第２００２２６８２２号（請求項２３；図２）；国際公開第２００２１６４２９号（請求項１２；図１０）；
クロスリファレンス：ＧＩ：２２６５５４８８；ＡＡＮ０４０８０．１；ＡＦ４５５１３８＿１
（１２）ＴｒｐＭ４（ＢＲ２２４５０、ＦＬＪ２００４１、ＴＲＰＭ４、ＴＲＰＭ４Ｂ、一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー４、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿０１７６３６）
Ｘｕ，  Ｘ．Ｚ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９８  （１９）：１０６９２−１０６９７  （２００１）、Ｃｅｌｌ  １０９  （３）：３９７−４０７  （２００２）、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７８  （３３）：３０８１３−３０８２０  （２００３）；米国特許出願第２００３１４３５５７号（請求項４）；国際公開第２０００４０６１４号（請求項１４；ｐ１００−１０３）；国際公開第２００２１０３８２号（請求項１；図９Ａ）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２００２３０２６８号（請求項２７；ｐ３９１）；米国特許出願第２００３２１９８０６号（請求項４）；国際公開第２００１６２７９４号（請求項１４；図１Ａ〜Ｄ）；
クロスリファレンス：ＭＩＭ：６０６９３６；ＮＰ＿０６０１０６．２；ＮＭ＿０１７６３６＿１
（１３）ＣＲＩＰＴＯ（ＣＲ、ＣＲ１、ＣＲＧＦ、ＣＲＩＰＴＯ、ＴＤＧＦ１、奇形がん由来増殖因子、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿００３２０３又はＮＭ＿００３２１２）
Ｃｉｃｃｏｄｉｃｏｌａ，  Ａ．ら、ＥＭＢＯ  Ｊ．  ８  （７）：１９８７−１９９１  （１９８９）、Ａｍ．  Ｊ．  Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅｔ．  ４９  （３）：５５５−５６５  （１９９１）；米国特許出願第２００３２２４４１１号（請求項１）；国際公開第２００３０８３０４１号（実施例１）；国際公開第２００３０３４９８４号（請求項１２）；国際公開第２００２８８１７０号（請求項２；ｐ５２−５３）；国際公開第２００３０２４３９２号（請求項２；図５８）；国際公開第２００２１６４１３号（請求項１；ｐ９４−９５、１０５）；国際公開第２００２２２８０８号（請求項２；図１）；米国特許第５８５４３９９号（実施例２；１７−１８欄）；米国特許第５７９２６１６号（図２）；
クロスリファレンス：ＭＩＭ：１８７３９５；ＮＰ＿００３２０３．１；ＮＭ＿００３２１２＿１
（１４）ＣＤ２１（ＣＲ２（補体受容体２）又はＣ３ＤＲ（Ｃ３ｄ／エプスタインバーウイルス受容体）又はＨｓ．７３７９２Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｍ２６００４）
Ｆｕｊｉｓａｋｕら（１９８９）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６４  （４）：２１１８−２１２５；Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．ら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １６７、１０４７−１０６６、１９８８；Ｍｏｏｒｅ  Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８４、９１９４−９１９８、１９８７；Ｂａｒｅｌ  Ｍ．ら、Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３５、１０２５−１０３１、１９９８；Ｗｅｉｓ  Ｊ．Ｊ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８３、５６３９−５６４３、１９８６；Ｓｉｎｈａ  Ｓ．Ｋ．ら（１９９３）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １５０、５３１１−５３２０；国際公開第２００４０４５５２０号（実施例４）；米国特許出願第２００４００５５３８号（実施例１）；国際公開第２００３０６２４０１号（請求項９）；国際公開第２００４０４５５２０号（実施例４）；国際公開第９１０２５３６号（図９．１−９．９）；国際公開第２００４０２０５９５号（請求項１）；
アクセッション：Ｐ２００２３；Ｑ１３８６６；Ｑ１４２１２；ＥＭＢＬ；Ｍ２６００４；ＡＡＡ３５７８６．１。
（１５）ＣＤ７９ｂ（ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ７９β、ＩＧｂ（免疫グロブリン−関連ベータ）、Ｂ２９、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿０００６２６又は１１０３８６７４）
Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  （２００３）  １００  （７）：４１２６−４１３１、Ｂｌｏｏｄ  （２００２）  １００  （９）：３０６８−３０７６、Ｍｕｌｌｅｒら（１９９２）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２２  （６）：１６２１−１６２５；国際公開第２００４０１６２２５号（請求項２、図１４０）；国際公開第２００３０８７７６８号、米国特許出願第２００４１０１８７４号（請求項１、ｐ１０２）；国際公開第２００３０６２４０１号（請求項９）；国際公開第２００２７８５２４号（実施例２）；米国特許出願第２００２１５０５７３号（請求項５、ｐ１５）；米国特許第５６４４０３３号；国際公開第２００３０４８２０２号（請求項１、ｐ３０６及び３０９）；国際公開第９９／５５８６５８号、米国特許第６５３４４８２号（請求項１３、図１７Ａ／Ｂ）；国際公開第２０００５５３５１号（請求項１１、ｐ１１４５−１１４６）；
クロスリファレンス：ＭＩＭ：１４７２４５；ＮＰ＿０００６１７．１；ＮＭ＿０００６２６＿１
（１６）ＦｃＲＨ２（ＩＦＧＰ４、ＩＲＴＡ４、ＳＰＡＰ１Ａ（ＳＨ２ドメイン含有ホスファターゼアンカータンパク質１ａ）、ＳＰＡＰ１Ｂ、ＳＰＡＰ１Ｃ、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿０３０７６４、ＡＹ３５８１３０）
Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  １３  （１０）：２２６５−２２７０  （２００３）、Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ５４  （２）：８７−９５  （２００２）、Ｂｌｏｏｄ  ９９  （８）：２６６２−２６６９  （２００２）、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９８  （１７）：９７７２−９７７７  （２００１）、Ｘｕ，  Ｍ．Ｊ．ら（２００１）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２８０  （３）：７６８−７７５；国際公開第２００４０１６２２５号（請求項２）；国際公開第２００３０７７８３６号；国際公開第２００１３８４９０号（請求項５；図１８Ｄ−１−１８Ｄ−２）；国際公開第２００３０９７８０３号（請求項１２）；国際公開第２００３０８９６２４号（請求項２５）；
クロスリファレンス：ＭＩＭ：６０６５０９；ＮＰ＿１１０３９１．２；ＮＭ＿０３０７６４＿１
（１７）ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ２、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｍ１１７３０）
Ｃｏｕｓｓｅｎｓ  Ｌ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  （１９８５）  ２３０（４７３０）：１１３２−１１３９）；Ｙａｍａｍｏｔｏ  Ｔ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１９、２３０−２３４、１９８６；Ｓｅｍｂａ  Ｋ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ８２、６４９７−６５０１、１９８５；Ｓｗｉｅｒｃｚ  Ｊ．Ｍ．ら、Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  １６５、８６９−８８０、２００４；Ｋｕｈｎｓ  Ｊ．Ｊ．ら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７４、３６４２２−３６４２７、１９９９；Ｃｈｏ  Ｈ．−Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  ４２１、７５６−７６０、２００３；Ｅｈｓａｎｉ  Ａ．ら（１９９３）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １５、４２６−４２９；国際公開第２００４０４８９３８号（実施例２）；国際公開第２００４０２７０４９号（図１Ｉ）；国際公開第２００４００９６２２号；国際公開第２００３０８１２１０号；国際公開第２００３０８９９０４号（請求項９）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；米国特許出願第２００３１１８５９２号；国際公開第２００３００８５３７号（請求項１）；国際公開第２００３０５５４３９号（請求項２９；図１Ａ〜Ｂ）；国際公開第２００３０２５２２８号（請求項３７；図５Ｃ）；国際公開第２００２２２６３６号（実施例１３；ｐ９５−１０７）；国際公開第２００２１２３４１号（請求項６８；図７）；国際公開第２００２１３８４７号（ｐ７１−７４）；国際公開第２００２１４５０３号（ｐ１１４−１１７）；国際公開第２００１５３４６３号（請求項２；ｐ４１−４６）；国際公開第２００１４１７８７号（ｐ１５）；国際公開第２０００４４８９９号（請求項５２；図７）；国際公開第２０００２０５７９号（請求項３；図２）；米国特許第５８６９４４５号（請求項３；３１−３８欄）；国際公開第９６３０５１４号（請求項２；ｐ５６−６１）；欧州特許第１４３９３９３号（請求項７）；国際公開第２００４０４３３６１号（請求項７）；国際公開第２００４０２２７０９号；国際公開第２００１００２４４号（実施例３；図４）；
アクセッション：Ｐ０４６２６；ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６７；ＡＡＡ３５８０８．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１１７６１；ＡＡＡ３５８０８．１。
（１８）ＮＣＡ（ＣＥＡＣＡＭ６、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｍ１８７２８）；
Ｂａｒｎｅｔｔ  Ｔ．ら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３、５９−６６、１９８８；Ｔａｗａｒａｇｉ  Ｙ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  １５０、８９−９６、１９８８；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９９：１６８９９−１６９０３、２００２；国際公開第２００４０６３７０９号；欧州特許第１４３９３９３号（請求項７）；国際公開第２００４０４４１７８号（実施例４）；国際公開第２００４０３１２３８号；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２００２７８５２４号（実施例２）；国際公開第２００２８６４４３号（請求項２７；ｐ４２７）；国際公開第２００２６０３１７号（請求項２）；
アクセッション：Ｐ４０１９９；Ｑ１４９２０；ＥＭＢＬ；Ｍ２９５４１；ＡＡＡ５９９１５．１．ＥＭＢＬ；Ｍ１８７２８；
（１９）ＭＤＰ（ＤＰＥＰ１、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＢＣ０１７０２３）
Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９９  （２６）：１６８９９−１６９０３  （２００２）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００２６４７９８号（請求項３３；ｐ８５−８７）；ＪＰ０５００３７９０（図６−８）；国際公開第９９４６２８４号（図９）；
クロスリファレンス：ＭＩＭ：１７９７８０；ＡＡＨ１７０２３．１；ＢＣ０１７０２３＿１
（２０）ＩＬ２０Ｒα（ＩＬ２０Ｒａ、ＺＣＹＴＯＲ７、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＦ１８４９７１）；
Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．ら、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  １３、２２６５−２２７０、２００３；Ｍｕｎｇａｌｌ  Ａ．Ｊ．ら、Ｎａｔｕｒｅ  ４２５、８０５−８１１、２００３；Ｂｌｕｍｂｅｒｇ  Ｈ．ら、Ｃｅｌｌ  １０４、９−１９、２００１；Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６７、３５４５−３５４９、２００１；Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ  Ｊ．ら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７７、４７５１７−４７５２３、２００２；Ｐｌｅｔｎｅｖ  Ｓ．ら（２００３）  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４２：１２６１７−１２６２４；Ｓｈｅｉｋｈ  Ｆ．ら（２００４）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７２、２００６−２０１０；欧州特許第１３９４２７４号（実施例１１）；米国特許出願第２００４００５３２０号（実施例５）；国際公開第２００３０２９２６２号（ｐ７４−７５）；国際公開第２００３００２７１７号（請求項２；ｐ６３）；国際公開第２００２２２１５３号（ｐ４５−４７）；米国特許出願第２００２０４２３６６号（ｐ２０−２１）；国際公開第２００１４６２６１号（ｐ５７−５９）；国際公開第２００１４６２３２号（ｐ６３−６５）；国際公開第９８３７１９３号（請求項１；ｐ５５−５９）；
アクセッション：Ｑ９ＵＨＦ４；Ｑ６ＵＷＡ９；Ｑ９６ＳＨ８；ＥＭＢＬ；ＡＦ１８４９７１；ＡＡＦ０１３２０．１。
（２１）ブレビカン（ＢＣＡＮ、ＢＥＨＡＢ、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＦ２２９０５３）
Ｇａｒｙ  Ｓ．Ｃ．ら、Ｇｅｎｅ  ２５６、１３９−１４７、２０００；Ｃｌａｒｋ  Ｈ．Ｆ．ら、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  １３、２２６５−２２７０、２００３；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇ  Ｒ．Ｌ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９９、１６８９９−１６９０３、２００２；米国特許出願第２００３１８６３７２号（請求項１１）；米国特許出願第２００３１８６３７３号（請求項１１）；米国特許出願第２００３１１９１３１号（請求項１；図５２）；米国特許出願第２００３１１９１２２号（請求項１；図５２）；米国特許出願第２００３１１９１２６号（請求項１）；米国特許出願第２００３１１９１２１号（請求項１；図５２）；米国特許出願第２００３１１９１２９号（請求項１）；米国特許出願第２００３１１９１３０号（請求項１）；米国特許出願第２００３１１９１２８号（請求項１；図５２）；米国特許出願第２００３１１９１２５号（請求項１）；国際公開第２００３０１６４７５号（請求項１）；国際公開第２００２０２６３４号（請求項１）；
（２２）ＥｐｈＢ２Ｒ（ＤＲＴ、ＥＲＫ、Ｈｅｋ５、ＥＰＨＴ３、Ｔｙｒｏ５、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＭ＿００４４４２）
Ｃｈａｎ，Ｊ．及びＷａｔｔ，  Ｖ．Ｍ．、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ６  （６）、１０５７−１０６１  （１９９１）、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １０  （５）：８９７−９０５  （１９９５）、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  ２１：３０９−３４５  （１９９８）、Ｉｎｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃｙｔｏｌ．  １９６：１７７−２４４  （２０００）；国際公開第２００３０４２６６１号（請求項１２）；国際公開第２０００５３２１６号（請求項１；ｐ４１）；国際公開第２００４０６５５７６号（請求項１）；国際公開第２００４０２０５８３号（請求項９）；国際公開第２００３００４５２９号（ｐ１２８−１３２）；国際公開第２０００５３２１６号（請求項１；ｐ４２）；
クロスリファレンス：ＭＩＭ：６００９９７；ＮＰ＿００４４３３．２；ＮＭ＿００４４４２＿１
（２３）ＡＳＬＧ６５９（Ｂ７ｈ、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＸ０９２３２８）
米国特許出願第２００４０１０１８９９号（請求項２）；国際公開第２００３１０４３９９号（請求項１１）；国際公開第２００４０００２２１号（図３）；米国特許出願第２００３１６５５０４号（請求項１）；米国特許出願第２００３１２４１４０号（実施例２）；米国特許出願第２００３０６５１４３号（図６０）；国際公開第２００２１０２２３５号（請求項１３；ｐ２９９）；米国特許出願第２００３０９１５８０号（実施例２）；国際公開第２００２１０１８７号（請求項６；図１０）；国際公開第２００１９４６４１号（請求項１２；図７ｂ）；国際公開第２００２０２６２４号（請求項１３；図１Ａ−１Ｂ）；米国特許出願第２００２０３４７４９号（請求項５４；ｐ４５−４６）；国際公開第２００２０６３１７号（実施例２；ｐ３２０−３２１、請求項３４；ｐ３２１−３２２）；国際公開第２００２７１９２８号（ｐ４６８−４６９）；国際公開第２００２０２５８７号（実施例１；図１）；国際公開第２００１４０２６９号（実施例３；ｐ１９０−１９２）；国際公開第２０００３６１０７号（実施例２；ｐ２０５−２０７）；国際公開第２００４０５３０７９号（請求項１２）；国際公開第２００３００４９８９号（請求項１）；国際公開第２００２７１９２８号（ｐ２３３−２３４、４５２−４５３）；国際公開第０１１６３１８号；
（２４）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原前駆体、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＪ２９７４３６）
Ｒｅｉｔｅｒ  Ｒ．Ｅ．ら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  ９５、１７３５−１７４０、１９９８；Ｇｕ  Ｚ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９、１２８８−１２９６、２０００；Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  （２０００）  ２７５（３）：７８３−７８８；国際公開第２００４０２２７０９号；欧州特許第１３９４２７４号（実施例１１）；米国特許出願第２００４０１８５５３号（請求項１７）；国際公開第２００３００８５３７号（請求項１）；国際公開第２００２８１６４６号（請求項１；ｐ１６４）；国際公開第２００３００３９０６号（請求項１０；ｐ２８８）；国際公開第２００１４０３０９号（実施例１；図１７）；米国特許出願第２００１０５５７５１号（実施例１；図１ｂ）；国際公開第２０００３２７５２号（請求項１８；図１）；国際公開第９８５１８０５号（請求項１７；ｐ９７）；国際公開第９８５１８２４号（請求項１０；ｐ９４）；国際公開第９８４０４０３号（請求項２；図１Ｂ）；
アクセッション：Ｏ４３６５３；ＥＭＢＬ；ＡＦ０４３４９８；ＡＡＣ３９６０７．１。
（２５）ＧＥＤＡ（Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＹ２６０７６３）；
ＡＡＰ１４９５４脂肪腫ＨＭＧＩＣ融合−パートナー−様タンパク質／ｐｉｄ＝ＡＡＰ１４９５４．１−ホモサピエンス
種：ホモサピエンス（ヒト）
国際公開第２００３０５４１５２号（請求項２０）；国際公開第２００３０００８４２号（請求項１）；国際公開第２００３０２３０１３号（実施例３、請求項２０）；米国特許出願第２００３１９４７０４号（請求項４５）；
クロスリファレンス：ＧＩ：３０１０２４４９；ＡＡＰ１４９５４．１；ＡＹ２６０７６３＿１
（２６）ＢＡＦＦ−Ｒ（Ｂ細胞−活性化因子受容体、ＢＬｙＳ受容体３、ＢＲ３、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＦ１１６４５６）；ＢＡＦＦ受容体／ｐｉｄ＝ＮＰ＿４４３１７７．１−ホモサピエンス
Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，  Ｊ．Ｓ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９３  （５５３７）、２１０８−２１１１  （２００１）；国際公開第２００４０５８３０９号；国際公開第２００４０１１６１１号；国際公開第２００３０４５４２２号（実施例；ｐ３２−３３）；国際公開第２００３０１４２９４号（請求項３５；図６Ｂ）；国際公開第２００３０３５８４６号（請求項７０；ｐ６１５−６１６）；国際公開第２００２９４８５２号（１３６−１３７欄）；国際公開第２００２３８７６６号（請求項３；ｐ１３３）；国際公開第２００２２４９０９号（実施例３；図３）；
クロスリファレンス：ＭＩＭ：６０６２６９；ＮＰ＿４４３１７７．１；ＮＭ＿０５２９４５＿１；ＡＦ１３２６００
（２７）ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２−Ｂアイソフォーム、ＢＬ−ＣＡＭ、Ｌｙｂ−８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ−２、ＦＬＪ２２８１４、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＫ０２６４６７）；
Ｗｉｌｓｏｎら（１９９１）  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １７３：１３７−１４６；国際公開第２００３０７２０３６号（請求項１；図１）；
クロスリファレンス：ＭＩＭ：１０７２６６；ＮＰ＿００１７６２．１；ＮＭ＿００１７７１＿１
（２８）ＣＤ７９ａ（ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９α、免疫グロブリン−関連アルファ、Ｉｇベータ（ＣＤ７９Ｂ）と共有結合的に相互作用し、その表面上でＩｇＭ分子と複合体を形成し、Ｂ−細胞分化に関与するシグナルを伝達するＢ細胞特異的タンパク質）、ｐＩ：４．８４、ＭＷ：２５０２８ＴＭ：２［Ｐ］遺伝子染色体：１９ｑ１３．２、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿００１７７４．１０）
国際公開第２００３０８８８０８号、米国特許出願第２００３０２２８３１９号；国際公開第２００３０６２４０１号（請求項９）；米国特許出願第２００２１５０５７３号（請求項４、ｐ１３−１４）；国際公開第９９５８６５８号（請求項１３、図１６）；国際公開第９２０７５７４号（図１）；米国特許第５６４４０３３号；Ｈａら（１９９２）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８（５）：１５２６−１５３１；Ｍｕｅｌｌｅｒら（１９９２）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ２２：１６２１−１６２５；Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら（１９９４）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４０（４）：２８７−２９５；Ｐｒｅｕｄ’ｈｏｍｍｅら（１９９２）  Ｃｌｉｎ．  Ｅｘｐ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ９０（１）：１４１−１４６；Ｙｕら（１９９２）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４８（２）  ６３３−６３７；Ｓａｋａｇｕｃｈｉら（１９８８）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ７（１１）：３４５７−３４６４；
（２９）ＣＸＣＲ５（バーキットリンパ腫受容体１、ＣＸＣＬ１３ケモカインによって活性化され、リンパ球移動及び液性防御において機能し、ＨＩＶ−２感染並びに恐らくＡＩＤＳ、リンパ腫、骨髄腫、及び白血病の発生において役割を果たしているＧタンパク質共役受容体）；３７２ａａ、ｐＩ：８．５４ＭＷ：４１９５９ＴＭ：７［Ｐ］遺伝子染色体：１１ｑ２３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿００１７０７．１）
国際公開第２００４０４００００号；国際公開第２００４０１５４２６号；米国特許出願第２００３１０５２９２号（実施例２）；米国特許第６５５５３３９号（実施例２）；国際公開第２００２６１０８７号（図１）；国際公開第２００１５７１８８号（請求項２０、ｐ２６９）；国際公開第２００１７２８３０号（ｐ１２−１３）；国際公開第２０００２２１２９号（実施例１、ｐ１５２−１５３、実施例２、ｐ２５４−２５６）；国際公開第９９２８４６８号（請求項１、ｐ３８）；米国特許第５４４００２１号（実施例２、４９−５２欄）；国際公開第９４２８９３１（ｐ５６−５８）；国際公開第９２１７４９７号（請求項７、図５）；Ｄｏｂｎｅｒら（１９９２）  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２２：２７９５−２７９９；Ｂａｒｅｌｌａら（１９９５）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｊ．  ３０９：７７３−７７９；
（３０）ＨＬＡ−ＤＯＢ（ペプチドに結合し、これらをＣＤ４＋Ｔリンパ球に提示するＭＨＣクラスＩＩ分子（Ｉａ抗原）のベータサブユニット）；２７３ａａ、ｐＩ：６．５６ＭＷ：３０８２０ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：６ｐ２１．３、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿００２１１１．１）
Ｔｏｎｎｅｌｌｅら（１９８５）  ＥＭＢＯ  Ｊ．  ４（１１）：２８３９−２８４７；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９８９）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２９（６）：４１１−４１３；Ｂｅｃｋら（１９９２）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２８：４３３−４４１；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇら（２００２）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ９９：１６８９９−１６９０３；Ｓｅｒｖｅｎｉｕｓら（１９８７）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６２：８７５９−８７６６；Ｂｅｃｋら（１９９６）  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２５５：１−１３；Ｎａｒｕｓｅら（２００２）  Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ５９：５１２−５１９；国際公開第９９５８６５８号（請求項１３、図１５）；米国特許第６１５３４０８号（３５−３８欄）；米国特許第５９７６５５１号（１６８−１７０欄）；米国特許第６０１１１４６号（１４５−１４６欄）；Ｋａｓａｈａｒａら（１９８９）  Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３０（１）：６６−６８；Ｌａｒｈａｍｍａｒら（１９８５）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６０（２６）：１４１１１−１４１１９；
（３１）Ｐ２Ｘ５（プリン受容体Ｐ２Ｘリガンド開口型イオンチャネル５、細胞外ＡＴＰによって開閉され、シナプス伝達及び神経発生に関与し得、その欠失が特発性排尿筋不安定の病態生理に関与し得る）；４２２ａａイオンチャネル）、ｐＩ：７．６３、ＭＷ：４７２０６ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１７ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿００２５５２．２）
Ｌｅら（１９９７）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ４１８（１−２）：１９５−１９９；国際公開第２００４０４７７４９号；国際公開第２００３０７２０３５号（請求項１０）；Ｔｏｕｃｈｍａｎら（２０００）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  １０：１６５−１７３；国際公開第２００２２２６６０号（請求項２０）；国際公開第２００３０９３４４４号（請求項１）；国際公開第２００３０８７７６８号（請求項１）；国際公開第２００３０２９２７７号（ｐ８２）；
（３２）ＣＤ７２（Ｂ−細胞分化抗原ＣＤ７２、Ｌｙｂ−２）タンパク質配列Ｆｕｌｌ  ｍａｅａｉｔｙ．．．ｔａｆｒｆｐｄ（１．．３５９；３５９ａａ）、ｐＩ：８．６６、ＭＷ：４０２２５ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：９ｐ１３．３、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿００１７７３．１）
国際公開第２００４０４２３４６号（請求項６５）；国際公開第２００３０２６４９３号（ｐ５１−５２、５７−５８）；国際公開第２０００７５６５５号（ｐ１０５−１０６）；Ｖｏｎ  Ｈｏｅｇｅｎら（１９９０）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １４４（１２）：４８７０−４８７７；Ｓｔｒａｕｓｂｅｒｇら（２００２）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９９：１６８９９−１６９０３；
（３３）ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ファミリーのＬＹ６４（リンパ球抗原６４（ＲＰ１０５）、タイプＩ膜タンパク質は、Ｂ細胞活性化及びアポトーシスをレギュレートし、機能喪失は、全身性狼瘡を有する患者における疾患活性の増加と関連する）；６６１ａａ、ｐＩ：６．２０、ＭＷ：７４１４７ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：５ｑ１２、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿００５５７３．１）
米国特許出願第２００２１９３５６７号；国際公開第９７０７１９８号（請求項１１、ｐ３９−４２）；Ｍｉｕｒａら（１９９６）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３８（３）：２９９−３０４；Ｍｉｕｒａら（１９９８）  Ｂｌｏｏｄ  ９２：２８１５−２８２２；国際公開第２００３０８３０４７号；国際公開第９７４４４５２号（請求項８、ｐ５７−６１）；国際公開第２０００１２１３０号（ｐ２４−２６）；
（３４）ＦｃＲＨ１（Ｆｃ受容体−様タンパク質１、Ｃ２タイプＩｇ−様及びＩＴＡＭドメインを含有する免疫グロブリンＦｃドメインについての推定上の受容体は、Ｂ−リンパ球分化において役割を有し得る）；４２９ａａ、ｐＩ：５．２８、ＭＷ：４６９２５ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１−１ｑ２２、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＮＰ＿４４３１７０．１）
国際公開第２００３０７７８３６号；国際公開第２００１３８４９０号（請求項６、図１８Ｅ−１−１８−Ｅ−２）；Ｄａｖｉｓら（２００１）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９７７２−９７７７；国際公開第２００３０８９６２４号（請求項８）；欧州特許第１３４７０４６号（請求項１）；国際公開第２００３０８９６２４号（請求項７）；
（３５）ＩＲＴＡ２（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体トランスロケーション関連２、Ｂ細胞発生及びリンパ腫形成において可能性のある役割を有する推定上の免疫受容体；いくつかのＢ細胞悪性腫瘍において起こるトランスロケーションによる遺伝子のディレギュレーション）；９７７ａａ、ｐＩ：６．８８ＭＷ：１０６４６８ＴＭ：１［Ｐ］遺伝子染色体：１ｑ２１、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ヒト：ＡＦ３４３６６２、ＡＦ３４３６６３、ＡＦ３４３６６４、ＡＦ３４３６６５、ＡＦ３６９７９４、ＡＦ３９７４５３、ＡＫ０９０４２３、ＡＫ０９０４７５、ＡＬ８３４１８７、ＡＹ３５８０８５；マウス：ＡＫ０８９７５６、ＡＹ１５８０９０、ＡＹ５０６５５８；ＮＰ＿１１２５７１．１
国際公開第２００３０２４３９２号（請求項２、図９７）；Ｎａｋａｙａｍａら（２０００）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２７７（１）：１２４−１２７；国際公開第２００３０７７８３６号；国際公開第２００１３８４９０号（請求項３、図１８Ｂ−１−１８Ｂ−２）；
（３６）ＴＥＮＢ２（ＴＭＥＦＦ２、ｔｏｍｏｒｅｇｕｌｉｎ、ＴＰＥＦ、ＨＰＰ１、ＴＲ、推定上の膜貫通プロテオグリカン、増殖因子及びフォリスタチンのＥＧＦ／ヘレグリンファミリーに関連する）；３７４ａａ、ＮＣＢＩアクセッション：ＡＡＤ５５７７６、ＡＡＦ９１３９７、ＡＡＧ４９４５１、ＮＣＢＩ  ＲｅｆＳｅｑ：ＮＰ＿０５７２７６；ＮＣＢＩ遺伝子：２３６７１；ＯＭＩＭ：６０５７３４；ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ  Ｑ９ＵＩＫ５；Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号ＡＦ１７９２７４；ＡＹ３５８９０７、ＣＡＦ８５７２３、ＣＱ７８２４３６
国際公開第２００４０７４３２０号（配列番号８１０）；ＪＰ２００４１１３１５１（配列番号２、４、８）；国際公開第２００３０４２６６１号（配列番号５８０）；国際公開第２００３００９８１４号（配列番号４１１）；欧州特許第１２９５９４４号（ｐ６９−７０）；国際公開第２００２３０２６８号（ｐ３２９）；国際公開第２００１９０３０４号（配列番号２７０６）；米国特許出願第２００４２４９１３０号；米国特許出願第２００４０２２７２７号；国際公開第２００４０６３３５５号；米国特許出願第２００４１９７３２５号；米国特許出願第２００３２３２３５０号；米国特許出願第２００４００５５６３号；米国特許出願第２００３１２４５７９号；Ｈｏｒｉｅら（２０００）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ６７：１４６−１５２；Ｕｃｈｉｄａら（１９９９）  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  Ｒｅｓ．  Ｃｏｍｍｕｎ．  ２６６：５９３−６０２；Ｌｉａｎｇら（２０００）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６０：４９０７−１２；Ｇｌｙｎｎｅ−Ｊｏｎｅｓら（２００１）  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  Ｏｃｔ  １５；９４（２）：１７８−８４；
（３７）ＰＭＥＬ１７（銀ホモログ；ＳＩＬＶ；Ｄ１２Ｓ５３Ｅ；ＰＭＥＬ１７；（ＳＩ）；（ＳＩＬ）；ＭＥ２０；ｇｐ１００）ＢＣ００１４１４；ＢＴ００７２０２；Ｍ３２２９５；Ｍ７７３４８；ＮＭ＿００６９２８；ＭｃＧｌｉｎｃｈｅｙ，Ｒ．Ｐ．ら（２００９）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １０６  （３３）、１３７３１−１３７３６；Ｋｕｍｍｅｒ，  Ｍ．Ｐ．ら（２００９）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２８４  （４）、２２９６−２３０６；
（３８）ＴＭＥＦＦ１（ＥＧＦ−様及び２つのフォリスタチン−様ドメイン１を有する膜貫通タンパク質；Ｔｏｍｏｒｅｇｕｌｉｎ−１；Ｈ７３６５；Ｃ９ｏｒｆ２；Ｃ９ＯＲＦ２；Ｕ１９８７８；Ｘ８３９６１）ＮＭ＿０８０６５５；ＮＭ＿００３６９２；Ｈａｒｍｓ，  Ｐ．Ｗ．  （２００３）  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １７  （２１）、２６２４−２６２９；Ｇｅｒｙ，  Ｓ．ら（２００３）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２  （１８）：２７２３−２７２７；
（３９）ＧＤＮＦ−Ｒａ１（ＧＤＮＦファミリー受容体アルファ１；ＧＦＲＡ１；ＧＤＮＦＲ；ＧＤＮＦＲＡ；ＲＥＴＬ１；ＴＲＮＲ１；ＲＥＴ１Ｌ；ＧＤＮＦＲ−アルファ１；ＧＦＲ−ＡＬＰＨＡ−１；Ｕ９５８４７；ＢＣ０１４９６２；ＮＭ＿１４５７９３）ＮＭ＿００５２６４；Ｋｉｍ，  Ｍ．Ｈ．ら（２００９）  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２９  （８）、２２６４−２２７７；Ｔｒｅａｎｏｒ，  Ｊ．Ｊ．ら（１９９６）  Ｎａｔｕｒｅ  ３８２  （６５８６）：８０−８３；
（４０）Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、ローカスＥ；Ｌｙ６７、ＲＩＧ−Ｅ、ＳＣＡ−２、ＴＳＡ−１）ＮＰ＿００２３３７．１；ＮＭ＿００２３４６．２；ｄｅ  Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ら（２００３）  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １０３  （６）、７６８−７７４；Ｚａｍｍｉｔ，  Ｄ．Ｊ．ら（２００２）  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２  （３）：９４６−９５２；
（４１）ＴＭＥＭ４６（ｓｈｉｓａホモログ２（アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ  ｌａｅｖｉｓ））；ＳＨＩＳＡ２）ＮＰ＿００１００７５３９．１；ＮＭ＿００１００７５３８．１；Ｆｕｒｕｓｈｉｍａ，  Ｋ．ら（２００７）  Ｄｅｖ．  Ｂｉｏｌ．  ３０６  （２）、４８０−４９２；Ｃｌａｒｋ，  Ｈ．Ｆ．ら（２００３）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  １３  （１０）：２２６５−２２７０；
（４２）Ｌｙ６Ｇ６Ｄ（リンパ球抗原６複合体、ローカスＧ６Ｄ；Ｌｙ６−Ｄ、ＭＥＧＴ１）ＮＰ＿０６７０７９．２；ＮＭ＿０２１２４６．２；Ｍａｌｌｙａ，  Ｍ．ら（２００２）  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ８０  （１）：１１３−１２３；Ｒｉｂａｓ，  Ｇ．ら（１９９９）  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６３  （１）：２７８−２８７；
（４３）ＬＧＲ５（Ｇタンパク質共役受容体５を含有するロイシンリッチリピート；ＧＰＲ４９、ＧＰＲ６７）ＮＰ＿００３６５８．１；ＮＭ＿００３６６７．２；Ｓａｌａｎｔｉ，  Ｇ．ら（２００９）  Ａｍ．  Ｊ．  Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．  １７０  （５）：５３７−５４５；Ｙａｍａｍｏｔｏ，  Ｙ．ら（２００３）  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３７  （３）：５２８−５３３；
（４４）ＲＥＴ（ｒｅｔがん原遺伝子；ＭＥＮ２Ａ；ＨＳＣＲ１；ＭＥＮ２Ｂ；ＭＴＣ１；（ＰＴＣ）；ＣＤＨＦ１２；Ｈｓ．１６８１１４；ＲＥＴ５１；ＲＥＴ−ＥＬＥ１）ＮＰ＿０６６１２４．１；ＮＭ＿０２０９７５．４；Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，  Ｈ．ら（２００９）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．  １００  （１０）：１８９５−１９０１；Ｎａｒｉｔａ，  Ｎ．ら（２００９）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２８  （３４）：３０５８−３０６８；
（４５）ＬＹ６Ｋ（リンパ球抗原６複合体、ローカスＫ；ＬＹ６Ｋ；ＨＳＪ００１３４８；ＦＬＪ３５２２６）ＮＰ＿０５９９９７．３；ＮＭ＿０１７５２７．３；Ｉｓｈｉｋａｗａ，  Ｎ．ら（２００７）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６７  （２４）：１１６０１−１１６１１；ｄｅ  Ｎｏｏｉｊ−ｖａｎ  Ｄａｌｅｎ，  Ａ．Ｇ．ら（２００３）  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １０３  （６）：７６８−７７４；
（４６）ＧＰＲ１９（Ｇタンパク質共役受容体１９；Ｍｍ．４７８７）ＮＰ＿００６１３４．１；ＮＭ＿００６１４３．２；Ｍｏｎｔｐｅｔｉｔ，Ａ．及びＳｉｎｎｅｔｔ，Ｄ．（１９９９）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．１０５（１−２）：１６２−１６４；Ｏ’Ｄｏｗｄ，  Ｂ．Ｆ．ら（１９９６）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３９４  （３）：３２５−３２９；
（４７）ＧＰＲ５４（ＫＩＳＳ１受容体；ＫＩＳＳ１Ｒ；ＧＰＲ５４；ＨＯＴ７Ｔ１７５；ＡＸＯＲ１２）ＮＰ＿１１５９４０．２；ＮＭ＿０３２５５１．４；Ｎａｖｅｎｏｔ，  Ｊ．Ｍ．ら（２００９）  Ｍｏｌ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  ７５  （６）：１３００−１３０６；Ｈａｔａ，  Ｋ．ら（２００９）  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２９  （２）：６１７−６２３；
（４８）ＡＳＰＨＤ１（アスパルテートベータ−ヒドロキシラーゼドメイン含有１；ＬＯＣ２５３９８２）ＮＰ＿８５９０６９．２；ＮＭ＿１８１７１８．３；Ｇｅｒｈａｒｄ，  Ｄ．Ｓ．ら（２００４）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  １４  （１０Ｂ）：２１２１−２１２７；
（４９）チロシナーゼ（ＴＹＲ；ＯＣＡＩＡ；ＯＣＡ１Ａ；チロシナーゼ；ＳＨＥＰ３）ＮＰ＿０００３６３．１；ＮＭ＿０００３７２．４；Ｂｉｓｈｏｐ，  Ｄ．Ｔ．ら（２００９）  Ｎａｔ．  Ｇｅｎｅｔ．  ４１  （８）：９２０−９２５；Ｎａｎ，  Ｈ．ら（２００９）  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １２５  （４）：９０９−９１７；
（５０）ＴＭＥＭ１１８（ｒｉｎｇフィンガータンパク質、膜貫通２；ＲＮＦＴ２；ＦＬＪ１４６２７）ＮＰ＿００１１０３３７３．１；ＮＭ＿００１１０９９０３．１；Ｃｌａｒｋ，  Ｈ．Ｆ．ら（２００３）  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．  １３  （１０）：２２６５−２２７０；Ｓｃｈｅｒｅｒ，  Ｓ．Ｅ．ら（２００６）  Ｎａｔｕｒｅ  ４４０  （７０８２）：３４６−３５１
（５１）ＧＰＲ１７２Ａ（Ｇタンパク質共役受容体１７２Ａ；ＧＰＣＲ４１；ＦＬＪ１１８５６；Ｄ１５Ｅｒｔｄ７４７ｅ）ＮＰ＿０７８８０７．１；ＮＭ＿０２４５３１．３；Ｅｒｉｃｓｓｏｎ，  Ｔ．Ａ．ら（２００３）  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １００  （１１）：６７５９−６７６４；Ｔａｋｅｄａ，  Ｓ．ら（２００２）  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ５２０  （１−３）：９７−１０１。
【０１７４】
一実施態様において、抗体は、下記のポリペプチド：ＢＭＰＲ１Ｂ；Ｅ１６；ＳＴＥＡＰ１；０７７２Ｐ；ＭＰＦ；ＮａＰｉ２ｂ；Ｓｅｍａ５ｂ；ＰＳＣＡ  ｈｌｇ；ＥＴＢＲ；ＭＳＧ７８３；ＳＴＥＡＰ２；ＴｒｐＭ４；ＣＲＩＰＴＯ；ＣＤ２１；ＣＤ７９ｂ；ＦｃＲＨ２；ＨＥＲ２；ＮＣＡ；ＭＤＰ；ＩＬ２０Ｒα；ブレビカン；ＥｐｈＢ２Ｒ；ＡＳＬＧ６５９；ＰＳＣＡ；ＧＥＤＡ；ＢＡＦＦ−Ｒ；ＣＤ２２；ＣＤ７９ａ；ＣＸＣＲ５；ＨＬＡ−ＤＯＢ；Ｐ２Ｘ５；ＣＤ７２；ＬＹ６４；ＦｃＲＨ１；ＩＲＴＡ２；ＴＥＮＢ２；ＰＭＥＬ１７；ＴＭＥＦＦ１；ＧＤＮＦ−Ｒａ１；Ｌｙ６Ｅ；ＴＭＥＭ４６；Ｌｙ６Ｇ６Ｄ；ＬＧＲ５；ＲＥＴ；ＬＹ６Ｋ；ＧＰＲ１９；ＧＰＲ５４；ＡＳＰＨＤ１；チロシナーゼ；ＴＭＥＭ１１８；ＧＰＲ１７２Ａ；及びＣＤ３３の１つ又は複数に結合する。
【０１７５】
一実施態様において、抗体は、ＢＭＰＲ１Ｂに結合する。
【０１７６】
一実施態様において、抗体は、Ｅ１６に結合する。
【０１７７】
一実施態様において、抗体は、ＳＴＥＡＰ１に結合する。
【０１７８】
一実施態様において、抗体は、０７７２Ｐに結合する。
【０１７９】
一実施態様において、抗体は、ＭＰＦに結合する。
【０１８０】
一実施態様において、抗体は、ＮａＰｉ２ｂに結合する。
【０１８１】
一実施態様において、抗体は、Ｓｅｍａ  ５ｂに結合する。
【０１８２】
一実施態様において、抗体は、ＰＳＣＡ  ｈｌｇに結合する。
【０１８３】
一実施態様において、抗体は、ＥＴＢＲに結合する。
【０１８４】
一実施態様において、抗体は、ＭＳＧ７８３に結合する。
【０１８５】
一実施態様において、抗体は、ＳＴＥＡＰ２に結合する。
【０１８６】
一実施態様において、抗体は、ＴｒｐＭ４に結合する。
【０１８７】
一実施態様において、抗体は、ＣＲＩＰＴＯに結合する。
【０１８８】
一実施態様において、抗体は、ＣＤ２１に結合する。
【０１８９】
一実施態様において、抗体は、ＣＤ７９ｂに結合する。
【０１９０】
一実施態様において、抗体は、ＦｃＲＨ２に結合する。
【０１９１】
一実施態様において、抗体は、ＨＥＲ２に結合する。
【０１９２】
一実施態様において、抗体は、ＮＣＡに結合する。
【０１９３】
一実施態様において、抗体は、ＭＤＰに結合する。
【０１９４】
一実施態様において、抗体は、ＩＬ２０Ｒａに結合する。
【０１９５】
一実施態様において、抗体は、ブレビカンに結合する。
【０１９６】
一実施態様において、抗体は、ＥｐｈＢ２Ｒに結合する。
【０１９７】
一実施態様において、抗体は、ＡＳＬＧ６５９に結合する。
【０１９８】
一実施態様において、抗体は、ＰＳＣＡに結合する。
【０１９９】
一実施態様において、抗体は、ＧＥＤＡに結合する。
【０２００】
一実施態様において、抗体は、ＢＡＦＦ−Ｒに結合する。
【０２０１】
一実施態様において、抗体は、ＣＤ２２に結合する。
【０２０２】
一実施態様において、抗体は、ＣＤ７９ａに結合する。
【０２０３】
一実施態様において、抗体は、ＣＸＣＲ５に結合する。
【０２０４】
一実施態様において、抗体は、ＨＬＡ−ＤＯＢに結合する。
【０２０５】
一実施態様において、抗体は、Ｐ２Ｘ５に結合する。
【０２０６】
一実施態様において、抗体は、ＣＤ７２に結合する。
【０２０７】
一実施態様において、抗体は、ＬＹ６４に結合する。
【０２０８】
一実施態様において、抗体は、ＦｃＲＨ１に結合する。
【０２０９】
一実施態様において、抗体は、ＩＲＴＡ２に結合する。
【０２１０】
一実施態様において、抗体は、ＴＥＮＢ２に結合する。
【０２１１】
一実施態様において、抗体は、ＰＭＥＬ１７に結合する。
【０２１２】
一実施態様において、抗体は、ＴＭＥＦＦ１に結合する。
【０２１３】
一実施態様において、抗体は、ＧＤＮＦ−Ｒａ１に結合する。
【０２１４】
一実施態様において、抗体は、Ｌｙ６Ｅに結合する。
【０２１５】
一実施態様において、抗体は、ＴＭＥＭ４６に結合する。
【０２１６】
一実施態様において、抗体は、Ｌｙ６Ｇ６Ｄに結合する。
【０２１７】
一実施態様において、抗体は、ＬＧＲ５に結合する。
【０２１８】
一実施態様において、抗体は、ＲＥＴに結合する。
【０２１９】
一実施態様において、抗体は、ＬＹ６Ｋに結合する。
【０２２０】
一実施態様において、抗体は、ＧＰＲ１９に結合する。
【０２２１】
一実施態様において、抗体は、ＧＰＲ５４に結合する。
【０２２２】
一実施態様において、抗体は、ＡＳＰＨＤ１に結合する。
【０２２３】
一実施態様において、抗体は、チロシナーゼに結合する。
【０２２４】
一実施態様において、抗体は、ＴＭＥＭ１１８に結合する。
【０２２５】
一実施態様において、抗体は、ＧＰＲ１７２Ａに結合する。
【０２２６】
一実施態様において、抗体は、ＣＤ３３に結合する。
【０２２７】
親抗体はまた、アルブミン−結合ペプチド（ＡＢＰ）配列を含む融合タンパク質であり得る（Dennisら(2002)「Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins」 J Biol Chem. 277：35035-35043；国際公開第０１／４５７４６号）。本発明の抗体は、（ｉ）Ｄｅｎｎｉｓら（２００２）  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．  ２７７：３５０３５−３５０４３の表ＩＩＩ及びＩＶ、ｐ３５０３８；（ｉｉ）米国特許出願第２００４０００１８２７号の［００７６］；並びに（ｉｉｉ）国際公開第０１／４５７４６号のｐ１２−１３において教示されているＡＢＰ配列を有する融合タンパク質を含み、これらの全ては、出典明示によって本明細書中に援用されている。
【０２２８】
抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号において記載されているように、及び当該技術分野で公知にように、組換え方法及び組成物を使用して産生し得る。いくつかの実施態様において、抗体は、真核生物宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）において産生される。いくつかの実施態様において、抗体は、原核宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））において産生される。
【０２２９】
ある特定の実施態様において、１つ又は複数のアミノ酸修飾を、本明細書において提供する抗体のＦｃ領域中に導入して、それによってＦｃ領域変異体を生じさせ得る。Ｆｃ領域変異体は、１つ又は複数のアミノ酸の位置においてアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
【０２３０】
ある特定の実施態様において、本発明は、全てではないがいくらかのエフェクター機能を有する抗体変異体を意図し、これによって本発明はインビボでの抗体の半減期が重要である用途のために望ましい候補となるが、特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）は必要がないか、又は有害である。インビトロ及び／又はインビボでの細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。
【０２３１】
ＡＤＣの薬物添加量
薬物添加量は、抗体当たりの薬物部分の平均数である。薬物添加量は、抗体（Ａｂ）当たり１−８つの薬物（Ｄ）の範囲でよく、すなわち、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、及び８つの薬物部分は、抗体に共有結合している。ＡＤＣの組成物は、１−８の一連の薬物とコンジュゲートした抗体のコレクションを含む。コンジュゲーション反応からのＡＤＣの調製物中の抗体当たりの薬物の平均数は、通常の手段、例えば、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、電気泳動、及びＨＰＬＣによって特徴を明らかにし得る。ｐに関するＡＤＣの定量的分布をまた決定し得る。ＥＬＩＳＡによって、ＡＤＣの特定の調製物中のｐの平均値を決定し得る（Hamblettら(2004) Clin. Cancer Res. 10：7063-7070；Sandersonら(2005) Clin. Cancer Res. 11：843-852）。しかし、ｐ（薬物）値の分布は、抗体−抗原結合、及びＥＬＩＳＡの検出限界によって識別可能でない。また、抗体−薬物コンジュゲートの検出のためのＥＬＩＳＡアッセイは、薬物部分が抗体、例えば、重鎖若しくは軽鎖断片、又は特定のアミノ酸残基のどこに結合しているかを決定しない。場合によって、均一ＡＤＣ（ｐは、他の薬物添加量を有するＡＤＣからの特定の値である）の分離、精製、及び特徴づけは、手段、例えば、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動によって達成し得る。
【０２３２】
いくつかの抗体−薬物コンジュゲートについて、ｐは、抗体上の結合部位の数によって限定し得る。例えば、抗体は、１個若しくはいくつかのみのシステインチオール基を有し得、又はそれを介してリンカーが結合し得る１個若しくはいくつかのみの十分に最も反応性のチオール基を有し得る。より高い薬物添加量、例えば、ｐ＞５は、特定の抗体−薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、毒性、又は細胞の透過性の喪失をもたらし得る。
【０２３３】
典型的には、薬物部分の理論上の最大値より少ない数が、コンジュゲーション反応の間に抗体にコンジュゲートする。抗体は、リンカー−薬物中間体（Ｘ−Ｌ−Ｄ）又はリンカー試薬と反応しない、例えば、多くのリジン残基を含有し得る。最も反応性のリジン基のみが、アミン−反応性リンカー試薬と反応し得る。また、最も反応性のシステインチオール基のみが、チオール−反応性リンカー試薬又はリンカー−薬物中間体と反応し得る。一般に、抗体は、もしあれば多くの薬物部分に連結し得る遊離及び反応性システインチオール基を含有しない。化合物の抗体中の大部分のシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在し、部分的又は完全な還元条件下で還元剤、例えば、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はＴＣＥＰで還元しなければならない。ＡＤＣの添加量（薬物／抗体比、「ＤＡＲ」）は、（ｉ）抗体に対して過剰モルのリンカー−薬物中間体又はリンカー試薬を制限すること、（ｉｉ）コンジュゲーション反応時間又は温度を制限すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分的又は制限的還元的条件を含めたいくつかの異なる様式でコントロールし得る。
【０２３４】
抗体の複数の求核基又は求電子基が、リンカー−薬物中間体、又はリンカー試薬、それに続いてダイマー薬物部分試薬と反応する場合、このように得られた生成物は、抗体に結合した薬物部分の分布、例えば、１、２、３などを伴う抗体−薬物コンジュゲートの混合物である。液体クロマトグラフィー方法、例えば、ポリマー逆相（ＰＬＲＰ）及び疎水性相互作用（ＨＩＣ）は、混合物中の化合物を薬物添加量値によって分離し得る。単一の薬物添加量値（ｐ）を有するＡＤＣの調製物は単離し得、しかし、これらの単位の添加量値ＡＤＣは、薬物部分が抗体上の異なる部位においてリンカーを介して結合し得るため、まだ不均一混合物であり得る。このように、本発明の抗体−薬物コンジュゲート組成物は、抗体−薬物コンジュゲート化合物の混合物を含み、抗体は、１つ又は複数の薬物部分を有し、薬物部分は、様々なアミノ酸残基において抗体に結合し得る。
【０２３５】
例示的薬物部分
メイタンシン及びメイタンシノイド
いくつかの実施態様において、イムノコンジュゲートは、１個又は複数のメイタンシノイド分子にコンジュゲートした抗体を含む。メイタンシノイドはメイタンシンの誘導体であり、チューブリン重合を阻害するように作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは、東アフリカ灌木メイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａ）から最初に単離された（米国特許第３８９６１１１号）。その後に、特定の微生物がまた、メイタンシノイド、例えば、メイタンシノール及びＣ−３メイタンシノールエステルを産生することが発見された（米国特許第４１５１０４２号）。合成メイタンシノイドは、例えば、米国特許第４１３７２３０号；同第４２４８８７０号；同第４２５６７４６号；同第４２６０６０８号；同第４２６５８１４号；同第４２９４７５７号；同第４３０７０１６号；同第４３０８２６８号；同第４３０８２６９号；同第４３０９４２８号；同第４３１３９４６号；同第４３１５９２９号；同第４３１７８２１号；同第４３２２３４８号；同第４３３１５９８号；同第４３６１６５０号；同第４３６４８６６号；同第４４２４２１９号；同第４４５０２５４号；同第４３６２６６３号；及び同第４３７１５３３号に開示されている。
【０２３６】
メイタンシノイド薬物部分は、（ｉ）発酵産物の発酵又は化学修飾又は誘導体化によって調製するのに相対的に利用可能であり、（ｉｉ）非ジスルフィドリンカーを介した抗体へのコンジュゲーションに適した官能基を有する誘導体化の影響を受けやすく、（ｉｉｉ）血漿中で安定的であり、（ｉｖ）種々の腫瘍細胞株に対して有効であるため、抗体−薬物コンジュゲート中の誘引性の薬物部分である。
【０２３７】
メイタンシノイド薬物部分として使用するのに適した特定のメイタンシノイドは当該技術分野で公知であり、公知の方法によって自然源から単離するか、又は遺伝子操作技術を使用して産生することができる（例えば、Yuら(2002) PNAS 99：7968-7973を参照されたい）。メイタンシノイドはまた、公知の方法によって合成的に調製し得る。
【０２３８】
例示的メイタンシノイド薬物部分には、これらに限定されないが、修飾された芳香族環を有するもの、例えば、Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４２５６７４６号）（例えば、アンサマイトシンＰ２を水素化アルミニウムリチウム還元することによって調製）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（又はＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号及び同第４３０７０１６号）（例えば、ストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）若しくはアクチノミセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）を使用した脱メチル化、又はＬＡＨを使用した脱塩素化によって調製）；及びＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４２９４７５７号）（例えば、塩化アシルを使用したアシル化によって調製）、及び芳香族環の他の位置において修飾を有するものが含まれる。
【０２３９】
例示的メイタンシノイド薬物部分はまた、修飾、例えば：Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号）（例えば、メイタンシノールとＨ２Ｓ又はＰ２Ｓ５との反応によって調製）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）；Ｃ−１４−ヒドロキシメチル又はアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（例えば、Ｎｏｃａｒｄｉａから調製）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（例えば、ストレプトミセス属によるメイタンシノールの変換によって調製）；Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号及び同第４３１５９２９号）（例えば、トレウィア・ヌディフローラ（Ｔｒｅｗｉａ  ｎｕｄｌｆｌｏｒａ）から単離）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４３６２６６３号及び同第４３２２３４８号）（例えば、ストレプトミセス属によるメイタンシノールの脱メチル化によって調製）；並びに４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号）（例えば、メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元によって調製）を有するものを含む。
【０２４０】
メイタンシノイド化合物上の多くの位置は、連結位置として有用である。例えば、エステル連結は、通常のカップリング技術を使用してヒドロキシル基との反応によって形成し得る。いくつかの実施態様において、反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位において起こり得る。いくつかの実施態様において、連結は、メイタンシノール又はメイタンシノールアナログのＣ−３位において形成される。
【０２４１】
メイタンシノイド薬物部分は、構造
2017504606.tif 000054
［式中、波線は、ＡＤＣのリンカーへのメイタンシノイド薬物部分の硫黄原子の共有結合を示す］
を有するものを含む。各Ｒは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり得る。アミド基を硫黄原子に結合させるアルキレン鎖は、メタニル、エタニル、又はプロピルであり得、すなわち、ｍは、１、２、又は３である（米国特許第６３３４１０号；米国特許第５２０８０２０号；Chariら(1992) Cancer Res. 52：127-131；Liuら(1996) Proc. Natl. Acad. Sci USA 93：8618-8623）。
【０２４２】
メイタンシノイド薬物部分の全ての立体異性体、すなわち、不斉炭素におけるＲ及びＳ配置の任意の組合せが、本発明のＡＤＣについて意図される（米国特許第７２７６４９７号；米国特許第６９１３７４８号；米国特許第６４４１１６３号；米国特許第６３３４１０号（ＲＥ３９１５１）；米国特許第５２０８０２０号；Widdisonら(2006) J. Med. Chem. 49：4392-4408、これらは、その全体が出典明示によって援用されている）。いくつかの実施態様において、メイタンシノイド薬物部分は、下記の立体化学配置
2017504606.tif 000055
を有する。
【０２４３】
メイタンシノイド薬物部分の例示的実施態様には、これらに限定されないが、構造
2017504606.tif 000056
2017504606.tif 000057
2017504606.tif 000058
［式中、波線は、抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への薬物の硫黄原子の共有結合を示す］
を有するＤＭ１；ＤＭ３；及びＤＭ４が含まれる。
【０２４４】
他の例示的メイタンシノイド抗体−薬物コンジュゲートは、下記の構造及び略語を有する：
2017504606.tif 000059
［式中、Ａｂは、抗体であり、ｐは、１−約２０であり、いくつかの実施態様において、ｐは、１−１０であり、ｐは、１−７であり、ｐは、１−５であり、又はｐは、１−４である］。
【０２４５】
ＤＭ１がＢＭＰＥＯリンカーを介して抗体のチオール基へ連結している例示的抗体−薬物コンジュゲートは、構造及び略語を有する：
2017504606.tif 000060
［式中、Ａｂは、抗体であり、ｎは、０、１、又は２であり、ｐは、１−約２０である。いくつかの実施態様において、ｐは、１−１０であり、ｐは、１−７であり、ｐは、１−５であり、又はｐは、１−４で］。
【０２４６】
メイタンシノイドを含有するイムノコンジュゲート、これらを作製する方法、及びこれらの治療上の使用は、例えば、これらの開示が出典明示によって明白に援用されている米国特許第５２０８０２０号及び同第５４１６０６４号；米国特許出願第２００５／０２７６８１２Ａ１号；及び欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号に開示されている。また、Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９３：８６１８−８６２３  （１９９６）；及びＣｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１  （１９９２）を参照されたい。
【０２４７】
いくつかの実施態様において、抗体−メイタンシノイドコンジュゲートは、抗体又はメイタンシノイド分子の生物活性を有意に減少させることなく、抗体をメイタンシノイド分子に化学的に連結することによって調製し得る。例えば、米国特許第５２０８０２０号（その開示は出典明示によって明白に援用されている）を参照されたい。いくつかの実施態様において、抗体分子当たりコンジュゲートされた平均で３−４個のメイタンシノイド分子を有するＡＤＣは、抗体の機能又は溶解度に悪影響を与えることなく、標的細胞の細胞傷害性を増強することにおいて有効性を示してきた。場合によって、毒素／抗体の１個の分子さえ、ネイキッド抗体の使用を超えた細胞傷害性を増強させることが予想される。
【０２４８】
抗体−メイタンシノイドコンジュゲートを作製するための例示的結合基は、例えば、本明細書に記載されているもの、並びにこれらの開示が出典明示によって明白に援用されている米国特許第５２０８０２０号；欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号；Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５２：１２７−１３１  （１９９２）；米国特許出願第２００５／０２７６８１２Ａ１号；及び米国特許出願第２００５／０１６９９３Ａ１号において開示されているものを含む。
【０２４９】
カリケアマイシン
いくつかの実施態様において、イムノコンジュゲートは、１個又は複数のカリケアマイシン分子にコンジュゲートした抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリー、及びそのアナログは、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡ切断を生じさせることができる（Hinmanら(1993) Cancer Research 53：3336-3342；Lodeら(1998) Cancer Research 58：2925-2928）。カリケアマイシンは細胞内の作用部位を有するが、場合によっては、原形質膜を容易に通過しない。したがって、抗体媒介内部移行によるこれらの薬剤の細胞取込みは、いくつかの実施態様において、これらの細胞傷害性効果を非常に増強し得る。カリケアマイシン薬物部分を有する抗体−薬物コンジュゲートを調製する非限定的な例示的方法は、例えば、米国特許第５７１２３７４号；米国特許第５７１４５８６号；米国特許第５７３９１１６号；及び米国特許第５７６７２８５号に記載されている。
【０２５０】
ＣＢＩダイマー
いくつかの実施態様において、薬物部分は、下記の式
2017504606.tif 000061
［式中、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒ２２は、Ｈ、Ｐ（Ｏ）３Ｈ２、Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、又はＬへの結合から選択され、
Ｒａａ及びＲｂｂは、Ｈ、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択され、
あるいはＲａａ及びＲｂｂは、５員又は６員ヘテロシクロアルキル基を形成し、
Ｔは、Ｃ３−Ｃ１２アルキレン、Ｙ１、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）−Ｙ１−（Ｃ１−Ｃ６アルキレン）、（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルケニレン）、及び（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）−Ｙ１−（Ｃ２−Ｃ６アルキニレン）から選択されるテザー基であり、Ｙ１は、独立して、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１１、アリール、及びヘテロアリールから選択され、アルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｆ、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、ＮＨ２、ＮＨＣＨ３、Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＰ（Ｏ）３Ｈ２、及びＣ１−Ｃ６アルキルで独立して任意選択的に置換されており、アルキルは、１個又は複数のＦで置換されていてもよく、あるいはアルキレン、アルケニレン、アリール、及びヘテロアリールは、Ｌへの結合で独立して任意選択的に置換されており、
Ｄ’は、
2017504606.tif 000062
（波線は、Ｔへの結合の部位を示す）
から選択される薬物部分であり、
Ｘ１及びＸ２は、Ｏ及びＮＲ３３から独立して選択され、Ｒ３３は、Ｈ、及び１個又は複数のＦで置換されていてもよいＣ１−Ｃ６アルキルから選択され、あるいはＸ１及びＸ２は、それぞれ独立して、非存在であり、
Ｒ４４は、Ｈ、ＣＯ２Ｒ、Ｃ（Ｏ）又はＬへの結合であり、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はベンジルであり、
Ｒ５５は、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルである］
を有するＣＢＩダイマーである。
【０２５１】
他の薬物部分
薬物部分はまた、ゲルダナマイシン（Mandlerら(2000) J. Nat. Cancer Inst. 92(19)：1573-1581；Mandlerら(2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10：1025-1028；Mandlerら(2002) Bioconjugate Chem. 13：786-791）；並びにこれらに限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌から）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サポンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテシンを含めた酵素的活性毒素及びその断片を含む。例えば、国際公開第９３／２１２３２号を参照されたい。薬物部分はまた、核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼ又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ）を含む。
【０２５２】
抗生物質
抗体にコンジュゲートすることができる抗生物質は、クリンダマイシン、ノボビオシン、レタパムリン、ダプトマイシン、ＧＳＫ−２１４０９４４、ＣＧ−４００５４９、シタフロキサシン、テイコプラニン、トリクロサン、ナプチリドン、ラデゾリド、ドキソルビシン、アンピシリン、バンコマイシン、イミペネム、ドリペネム、ゲムシタビン、ダルババンシン、及びアジスロマイシンを含む。このような抗生物質の殺菌性及び静菌性作用の機序には、これらに限定されないが、（ｉ）細胞壁であるペプチドグリカン伸長の阻害（バンコマイシン、テイコプラニン、ダルババンシン）；（ｉｉ）細胞壁、ペニシリン−結合タンパク質架橋の阻害（イミペネム、ドリペネム、アンピシリン）；（ｉｉｉ）細胞膜脱分極（ダプトマイシン）；（ｉｖ）ＤＮＡ複製の撹乱（ゲムシタビン）；（ｖ）ＤＮＡ結合（ドキソルビシン）；（ｖｉ）エノイルＡＣＰ−レダクターゼＦＡＢＩ（ＣＧ−４００５４９、トリクロサン、ナプチリドン）；（ｖｉｉ）リボソームタンパク質合成、リボソーム３０Ｓの阻害（クリンダマイシン、レタパムリン、ラデゾリド）；並びに（ｖｉｉｉ）トポイソメラーゼ（ｔｏｐｏＩＩＡ）阻害剤（ノボビオシン、シタフロキサシン、ＧＳＫ−２１４０９４４）が含まれる。構造的に、大部分の抗生物質は、（ｉ）アミノグリコシド；（ｉｉ）ベータ−ラクタム；（ｉｉｉ）マクロライド／環状ペプチド；（ｉｖ）テトラサイクリン；（ｖ）フルオロキノリン／フルオロキノロン；（ｖｉ）及びオキサゾリジノンにグループ化することができる。Ｓｈａｗ，  Ｋ．及びＢａｒｂａｃｈｙｎ，  Ｍ．（２０１１）  Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  １２４１：４８−７０；Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ，  Ｊ．（２０１１）  Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  １２４１：１２２−１５２を参照されたい。
【０２５３】
ある特定の実施態様において、イムノコンジュゲートは、高度に放射性の原子を含み得る。種々の放射性同位体は、放射性コンジュゲートされた抗体の産生のために利用可能である。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が含まれる。いくつかの実施態様において、イムノコンジュゲートが検出のために使用されるとき、これはシンチグラフィー研究のための放射性原子、例えば、Ｔｃ９９若しくはＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴イメージング、ＭＲＩとしてもまた公知である）のためのスピン標識、例えば、ジルコニウム−８９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン若しくは鉄を含み得る。ジルコニウム−８９は、例えば、ＰＥＴイメージングのために、様々な金属キレート剤と複合体化し、抗体にコンジュゲートし得る（国際公開第２０１１／０５６９８３号）。放射性又は他の標識は、公知の方法でイムノコンジュゲート中に組み込み得る。例えば、ペプチドは、例えば、１個又は複数の水素の代わりに１個又は複数のフッ素−１９原子を含む適切なアミノ酸前駆体を使用して、生合成又は化学的に合成し得る。いくつかの実施態様において、標識、例えば、Ｔｃ９９、Ｉ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８及びＩｎ１１１は、抗体中のシステイン残基を介して結合することができる。いくつかの実施態様において、イットリウム−９０は、抗体のリジン残基を介して結合することができる。いくつかの実施態様において、ＩＯＤＯＧＥＮ法（Frakerら(1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80： 49-57を使用して、ヨウ素−１２３を組み込むことができる。「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ」（Ｃｈａｔａｌ，  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９８９）は、特定の他の方法を記載している。
【０２５４】
ある特定の実施態様において、イムノコンジュゲートは、プロドラッグ−活性化酵素にコンジュゲートした抗体を含み得る。いくつかのこのような実施態様において、プロドラッグ−活性化酵素は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、国際公開第８１／０１１４５号を参照されたい）を活性薬物、例えば、抗がん薬に変換する。このようなイムノコンジュゲートは、いくつかの実施態様において、抗体依存性酵素媒介プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体にコンジュゲートし得る酵素には、これらに限定されないが、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；無毒性５−フルオロシトシンを抗がん薬、５−フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なプロテアーゼ、例えば、セラチア属プロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ及びカテプシン（例えば、カテプシンＢ及びＬ）；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するように有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な炭水化物切断酵素、例えば、β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼ；β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なβ−ラクタマーゼ；並びにそれらのアミン窒素においてそれぞれ、フェノキシアセチル又はフェニルアセチル基で誘導体化されている薬物を遊離薬物に変換するのに有用なペニシリンアミダーゼ、例えば、ペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼが含まれる。いくつかの実施態様において、酵素は、抗体に当該技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術によって共有結合し得る。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８  （１９８４）を参照されたい。
【０２５５】
治療の適応症及び方法
本発明の抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を使用して、例えば、腫瘍抗原の過剰発現によって特徴が明らかにされる様々な疾患又は障害を治療し得ることが意図されている。例示的状態又は過剰増殖性疾患は、良性又は悪性の固形腫瘍及び血液学的障害、例えば、白血病及びリンパ性悪性腫瘍を含む。その他のものは、ニューロン、グリア、アストロサイト、視床下部、腺、マクロファージ、上皮、間質、胞胚腔、炎症、血管新生、及び自己免疫を含めた免疫の障害を含む。
【０２５６】
ある特定の実施態様において、上述したものなどの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含む本発明のＡＤＣは、固形腫瘍、例えば、卵巣腫瘍を治療する方法において使用される。別の実施態様において、抗ＣＤ３３抗体を含む本発明のＡＤＣ、例えば、本明細書に記載されているものは、血液悪性腫瘍、例えば、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、びまん性大細胞型造血性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、慢性リンパ球性白血病、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び骨髄細胞白血病（ＭＣＬ）を治療する方法において使用され、Ｂ細胞に関連するがん及び増殖性疾患を含む。その内容が出典明示によって援用されている米国特許第８２２６９４５号；Ｌｉら（２０１３）  Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ．  Ｔｈｅｒ．  １２（７）：１２５５−１２６５；Ｐｏｌｓｏｎら（２０１０）  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ２４：１５６６−１５７３；Ｐｏｌｓｏｎら（２０１１）  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ  ２０（１）：７５−８５を参照されたい。
【０２５７】
別の実施態様において、抗ＭＵＣ１６抗体、例えば、本明細書に記載されているものを含む本発明のＡＤＣは、卵巣、乳房及び膵臓がんを治療する方法において使用される。がんは、ＭＵＣ１６／ＣＡ１２５／Ｏ７７２Ｐポリペプチドの発現又は活性と関連し得る。その内容が出典明示によって援用されている国際公開第２００７／００１８５１号；米国特許第７９８９５９５号；米国特許第８４４９８８３号；米国特許第７７２３４８５号；Ｃｈｅｎら（２００７）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６７（１０）：  ４９２４−４９３２；Ｊｕｎｕｔｕｌａら、（２００８）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，  ２６（８）：９２５−９３２を参照されたい。
【０２５８】
ある特定の実施態様において、上述したものなどの抗ＨＥＲ２抗体を含む本発明のＡＤＣは、がん、例えば、乳房又は胃のがん、さらに具体的には、ＨＥＲ２＋乳房又は胃のがんを治療する方法において使用され、この方法は、このようなＡＤＣを、このような治療を必要としている患者に投与することを含む。このような一実施態様において、ＡＤＣは、抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブ又はペルツズマブを含む。
【０２５９】
一般に、治療される疾患又は障害は、過剰増殖性疾患、例えば、がんである。本明細書において治療されるがんの例には、これらに限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病又はリンパ性悪性腫瘍が含まれる。このようながんのより特定の例には、扁平上皮がん（例えば、上皮性扁平細胞がん）、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん及び肺の扁平上皮癌腫を含めた肺がん、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸がんを含めた胃がん又は胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ  ｏｒ  ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵臓がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮の癌腫、唾液腺がん、腎臓がん又は腎がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝細胞がん、肛門癌腫、陰茎癌腫、及び頭頸部がんが含まれる。
【０２６０】
治療において抗体−薬物コンジュゲートを使用し得る自己免疫疾患は、リウマチ障害（例えば、関節リウマチ、シェーグレン症候群、強皮症、狼瘡、例えば、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）及びループス腎炎、多発性筋炎／皮膚筋炎、寒冷グロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、及び乾癬性関節炎）、変形性関節症、自己免疫胃腸及び肝障害（例えば、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、自己免疫胃炎及び悪性貧血、自己免疫肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、及びセリアック病）、脈管炎（例えば、チャーグストラウス脈管炎、ウェゲナー肉芽腫症、及び多発性動脈炎を含めたＡＮＣＡが関連する脈管炎）、自己免疫神経障害（例えば、多発性硬化症、オプソクローヌスミオクローヌス症候群、重症筋無力症、視神経脊髄炎、パーキンソン病、アルツハイマー病、及び自己免疫多発ニューロパシー）、腎障害（例えば、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、及びベルジェ病）、自己免疫皮膚障害（例えば、乾癬、じん麻疹、じんま疹、尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、及び皮膚紅斑性狼瘡）、血液学的障害（例えば、血小板減少性紫斑病、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血後紫斑病、及び自己免疫性溶血性貧血）、アテローム性動脈硬化症、ブドウ膜炎、自己免疫聴覚疾患（例えば、内耳疾患及び聴力損失）、ベーチェット病、レイノー症候群、臓器移植、及び自己免疫内分泌障害（例えば、糖尿病が関連する自己免疫疾患、例えば、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、アジソン病、及び自己免疫甲状腺疾患（例えば、グレーブス病及び甲状腺炎））を含む。より好ましいこのような疾患は、例えば、関節リウマチ、潰瘍性大腸炎、ＡＮＣＡが関連する脈管炎、狼瘡、多発性硬化症、シェーグレン症候群、グレーブス病、ＩＤＤＭ、悪性貧血、甲状腺炎、及び糸球体腎炎を含む。
【０２６１】
疾患の予防又は治療のために、ＡＤＣの適当な投与量は、上記に定義されているような治療される疾患のタイプ、疾患の重症度及び過程、分子が予防又は治療目的のために投与されているかどうか、従前の治療法、患者の臨床歴、抗体への応答、並びに主治医の裁量によって決まる。分子は、単回で、又は一連の治療にわたって患者に適切に投与される。疾患のタイプ及び重症度によって、約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１−２０ｍｇ／ｋｇ）の分子は、例えば、１つ若しくは複数の別々の投与によろうと、又は連続的注入によろうと、患者への投与のための最初の候補投与量である。典型的な１日投与量は、上記の要因によって、約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ超の範囲であり得る。患者に投与されるＡＤＣの例示的投与量は、約０．１から約１０ｍｇ／患者体重ｋｇの範囲である。
【実施例】
【０２６２】
ペプチド模倣リンカー薬物部分を調製する方法；ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０４２５６０を本明細書に出典明示により援用する。
【０２６３】
実施例１．  ７−（４−（（４−（（２Ｒ，５Ｓ，Ｚ）−５−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−４−フルオロ−６−メチル−２−（３−ウレイドプロピル）ヘプタ−３−エンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000063
2017504606.tif 000064
【０２６４】
工程１．１−１（１０．０ｇ、８５．３６ｍｍｏｌ）、１−２（１３．３ｇ、８９．７９ｍｍｏｌ）の混合物を、１５０℃で１時間撹拌した。混合物を２５℃に冷却し、固体を熱水に溶解した。混合物を氷浴中で冷却し、沈殿物を濾取し、水で洗浄した。濾過ケーキを乾燥して、１−３を白色固体として得た（１９．０ｇ、９０．０％）。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 11.96(br, 1H), 7.78-7.77(m, 4H), 3.52(t, J=6.8Hz, 2H), 2.18(t, J=7.2Hz, 2H), 1.59-1.51(m, 2H), 1.47-1.41(m, 2H).
【０２６５】
工程２．１−３（９．０ｇ、３６．４０ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１００ｍＬ）中混合物に、室温で（ＣＯＣｌ）２（１５．０ｍＬ、１５７．７６ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１ｍＬ）を滴下した。反応混合物を室温で０．５時間撹拌した後、これを減圧下に濃縮した。残留物を無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）を用いてコエバポレートさせて、塩化アシルを黄色固体として得た。
【０２６６】
１−４（６．６ｇ、３７．２５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）中混合物に、Ｎ２下−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ（１５．０ｍＬ、２．５Ｍ、３７．５ｍｍｏｌ）を滴下した。ＴＨＦ中の塩化アシル（４０ｍＬ）を−７８℃で混合物中にゆっくり加えた。反応混合物を−７８℃で１５分間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（３０ｍＬ）でクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃと水との間で分配した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ３：１）により精製して、粗製の化合物１−５を白色固体として得た（１３．０ｇ、８７．９％）。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 7.89-7.83(m, 4H), 7.32-7.28(m, 2H), 7.25-7.22(m, 1H), 7.19-7.17(m, 2H), 4.66-4.60(m, 1H), 4.30(t, J=8.4Hz, 1H), 4.17(dd, J=9.2, 2.8Hz, 1H), 3.61(t, J=6.4Hz, 2H), 3.00-2.78(m, 4H), 1.70-1.60(m, 4H).
【０２６７】
工程３．１−６（３．０ｇ、２５．３９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に、ＰＣＣ（１０．９ｇ、５０．７８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下２５℃で１６時間撹拌した後、これをシリカプラグに通して濾過した。濾液を２５℃の浴温で減圧下に濃縮して、化合物１−７を油状物として得た（１．８ｇ、６１．０％）。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 9.18(d, J=18.4Hz, 1H), 5.79(dd, J=32.8, 9.2Hz, 1H), 3.02-2.93(m, 1H), 1.13(d, J=6.8Hz, 6H).
【０２６８】
工程４．１−５（６．０ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液を、氷浴で０℃に冷却した。ＤＣＭ中のＢｕ２ＢＯＴｆ（１Ｍ、１５ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を、続いてＥｔ３Ｎ（３．０３ｇ、３０ｍｍｏｌ）を内温が３℃未満を維持する速度で滴下した。氷浴をドライアイス−アセトン浴に置き換えた。内温が−６５℃未満に低下した時点で、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物１−７（１．５ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液をドライアイス−アセトン浴中で２０分間、次いで氷浴温で１時間撹拌した。反応混合物を水性リン酸バッファー（ｐＨ＝７．０、２０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）でクエンチした。この濁った溶液に、ＭｅＯＨ／３０％Ｈ２Ｏ２の混合物（２：１、２０ｍＬ）を内温が１０℃未満を維持する速度で加えた。溶液を更に１時間撹拌した後、揮発物を２５−３０℃の浴温にて回転蒸発器上で除去した。スラリー液をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層を飽和したＮａ２ＳＯ３溶液（１５ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ３溶液（３０ｍＬ）及びブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ３：１）により精製して、粗製物１−８を油状物として得た（４．０ｇ、５９．７％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０５．０［Ｍ−１７］。
【０２６９】
工程５．１−８（４．０ｇ、７．６５ｍｍｏｌ）及びＣｌ３ＣＣＮ（１．６７ｇ、１１．４８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下０℃でＤＢＵ（２３４ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中５％−２０％石油）により精製して、１−９（３．０ｇ、５８．８％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０５．１［Ｍ−１６０］。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 8.47(s, 1H), 7.83-7.80(m, 2H), 7.72-7.69(m, 2H), 7.36-7.28(m, 2H), 7.28-7.22(m, 3H), 5.69-5.63(q, 1H), 4.89(dd, J=37.6, 9.6Hz, 1H), 4.63-4.58(m, 2H), 4.20-4.11(m, 2H), 3.74-3.69(m, 2H), 3.35(dd, J=13.2, 3.2Hz, 1H), 2.78-2.69(m, 2H), 1.99-1.85(m, 2H), 1.80-1.76(m, 2H), 0.96-0.92(q, 6H).
【０２７０】
工程６．１−９（３．０ｇ、４．５０ｍｍｏｌ）のキシレン（５ｍＬ）中溶液を、マイクロ波中１３５℃で２時間加熱した。混合物を２５℃に冷却し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中５％−１０％−５０％ＰＥ）により精製して、１−１０（１．４ｇ、４６．７％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６８５．０［Ｍ＋Ｈ２Ｏ］。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.83-7.81(m, 2H), 7.71-7.69(m, 2H), 7.36-7.32(m, 2H), 7.29-7.25(m, 1H), 7.21-7.19(m, 2H), 6.90(d, J=8.8Hz, 1H), 5.11(dd, J=36.4, 9.6Hz, 1H), 4.81-4.76(m, 1H), 4.68-4.64(m, 1H), 4.30-4.16(m, 3H), 3.75-3.68(m, 2H), 3.27(dd, J=13.2, 3.2Hz, 1H), 2.80-2.74(q, 1H), 2.08-2.05(m, 1H), 1.93-1.90(m, 1H), 1.76-1.70(m, 2H), 1.65-1.62(m, 1H), 1.00(dd, J=6.8, 3.2Hz, 6H).
【０２７１】
工程７．化合物１−１０（１．４ｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（容量／容量４：１、１０ｍＬ）中溶液に、Ｈ２Ｏ２（１．４３ｇ、水中３０％、１２．６ｍｍｏｌ）を、続いてＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２６４．６ｍｇ、６．３ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２５℃で１．５時間撹拌した後、飽和したＮａ２ＳＯ３溶液（８ｍＬ）を加えた。溶媒を除去し、残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ×２）で抽出した。水溶液を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化し、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（１０／１、２５ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、化合物１−１１（１．０ｇ、９３．４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５２７．０［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０２７２】
工程８．化合物１−１１（１．０ｇ、１．９７ｍｍｏｌ）及び（４−アミノフェニル）メタノール（３６４ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ（容量／容量２：１、７．５ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下０℃でＥＥＤＱ（７３２ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中３０％石油）により精製して、粗製の化合物１−１３（１．０ｇ、８２．８％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６１４．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０２７３】
工程９．化合物１−１３（１．０ｇ、１．６３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）中溶液に、０℃でＮａＢＨ４（３６４．８ｍｇ、９．６０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌し、水（１０ｍＬ）を加えて反応をクエンチした。次いでＣｂｚ−Ｃｌ（４１０．４ｍｇ、２．４０ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。混合物を０℃で１時間撹拌した。混合物を水で希釈し、ＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０：１−５：１）により精製して、粗製の化合物１−１４（３００ｍｇ、３１．２％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６０２．０［Ｍ＋Ｈ］。
【０２７４】
工程１０．化合物１−１４（３００ｍｇ、０．４９８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中溶液に、ＮＨ２ＮＨ２・ｘＨ２Ｏ（４８ｍｇ、５０％、０．７４８ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を１時間加熱還流した。反応混合物を濃縮し、残留物（１−１５）を更には精製せずに次の反応に直接使用した。
【０２７５】
工程１１．化合物１−１５（２８１．０ｍｇ、０．４９６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中の撹拌された溶液に、ＴＥＡ（１００ｍｇ、０．９９２ｍｍｏｌ）及びＣＤＩ（１６２．７ｍｇ、０．９９２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２９℃で１時間撹拌した後、ＮＨ３Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）を加え、混合物を２９℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物１−１６（５０ｍｇ、１９．６％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５１５．１［Ｍ＋１］。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9.94(s, 1H), 7.66(d, J=9.2Hz, 1H), 7.53(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35-7.29(m, 5H), 7.22(d, J=8.4Hz, 2H), 5.94(t, J=6.0Hz, 1H), 5.36(s, 2H), 5.10(t, J=6.0Hz, 1H), 5.05-4.94(m, 3H), 4.42(d, J=4.2Hz, 2H), 3.92-3.83(m, 1H), 3.46-3.44(m, 1H), 3.01-2.90(m, 2H), 1.92-1.85(m, 1H), 1.65-1.63(m, 1H), 1.44-1.28(m, 3H), 0.88(t, J=6.4Hz, 6H).
【０２７６】
工程１２．化合物１−１６（５０ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中混合物に、ＤＩＰＥＡ（６３ｍｇ、０．４８５ｍｍｏｌ）を加えた。ＰＮＰカーボネート（８７ｍｇ、０．２９１ｍｍｏｌ）を２５℃で加えた。反応混合物を２５℃で８時間撹拌し、ノルフロキサシン（９３ｍｇ、０．２９１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で更に３時間撹拌した後、これを濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１（３５ｍｇ、４２．０％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．８８５分、Ｍ／２＋Ｈ＋＝４３０．７。方法＝５−９５／２分。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.32(s, 1H), 10.04(s, 1H), 8.95(s, 1H), 7.94(d, J=12.8Hz, 1H), 7.66(d, J=8.8Hz, 1H), 7.60(d, J=8.8Hz, 2H), 7.34-7.28(m, 7H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 5.94(t, J=5.2Hz, 1H), 5.36(s, 2H), 5.06-4.94(m, 5H), 4.59-4.57(q, 2H), 3.92-3.84(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.49-3.43(q, 1H), 3.33-3.31(m, 4H), 3.01-2.90(m, 2H), 1.90-1.83(m, 1H), 1.68-1.65(m, 1H), 1.41(d, J=6.8Hz, 5H), 1.33-1.23(m, 1H), 0.86(t, J=6.8Hz, 6H).
【０２７７】
実施例２．  ７−（４−（（４−（（２Ｒ，５Ｓ，Ｚ）−５−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−４−フルオロ−２，６−ジメチルヘプタ−３−エンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000065
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【０２７８】
工程１．ＮａＨ（１．８２ｇ、４５．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）中混合物に、０℃でＴＨＦ（２０ｍＬ）中の２−１（１０．０ｇ、４１．３ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで−７８℃に冷却した。ＴＨＦ（５ｍＬ）中の化合物２−２（２．９８ｇ、４１．３ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を２５℃にゆっくり加温し、２５℃で１６時間撹拌した。飽和したＮＨ４Ｃｌ溶液を、続いて水（５０ｍＬ）を０℃でゆっくり加え、混合物をＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝５０：１）により精製して、２−３（２．２ｇ、３３％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 5.73(dd, J=10.4, 22.0Hz, 1H), 4.30(q, J=7.2Hz, 2H), 3.37-3.31(m, 1H), 1.35(t, J=7.2Hz, 3H), 1.08-1.04(m, 6H).
【０２７９】
工程２．２−３（１２．０ｇ、７４．９１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８０ｍＬ）中溶液に、０℃でＬｉＡｌＨ４（５．６９ｇ、１４９．８２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で２時間撹拌した後、これを飽和したＮＨ４Ｃｌ溶液（１ｍＬ）でクエンチした。有機溶媒を減圧下に除去し、混合物を水（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗生成物２−４（８．０ｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 5.06(dd, J=10.4, 21.2Hz, 1H), 4.24(d, J=21.2Hz, 2H), 2.42-2.37(m, 1H), 1.03-0.99(m, 6H).
【０２８０】
工程３．２−４（８．０ｇ、３３．８６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に、２５℃でＰＣＣ（２９．２ｇ、６７．７２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下３時間加熱還流した後、これを２５℃に冷却し、シリカゲルのプラグに通して濾過した。濾液を濃縮して、粗製物２−５（５．１ｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 9.19(d, J=18.0Hz, 1H), 5.79(dd, J=9.6, 32.8Hz, 1H), 3.01-2.95(m, 1H), 1.15-1.13(m, 6H).
【０２８１】
工程４．ＤＣＭ中Ｂｕ２ＢＯＴｆ（１Ｍ、６６ｍＬ、６６ｍｍｏｌ）を、２−６（１５．３７ｇ、６５．８８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）中溶液に、続いてＥｔ３Ｎ（８．８９ｇ、８７．８４ｍｍｏｌ）を、内温が３℃未満を維持する速度で滴下した。これを−６５℃に冷却し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の２−５（５．１ｇ、４３．９２ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液をドライアイス−アセトン浴中で２０分間、次いで氷浴で１時間撹拌した。反応混合物をｐＨ７水性リン酸バッファー（５０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）でクエンチした。この濁った溶液に、ＭｅＯＨ／３０％Ｈ２Ｏ２の混合物（２：１、９０ｍＬ）を内温が１０℃未満に維持される速度で加えた。溶液を更に１時間撹拌した後、揮発物を２５−３０℃の浴温にて回転蒸発器上で除去した。得られたスラリー液をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層を飽和したＮａ２ＳＯ３溶液（１５０ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍＬ）及びブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ３：１）により精製して、２−７（８．８ｇ、５７％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.36-7.27(m, 3H), 7.21-7.19(m, 2H), 4.85(dd, J=9.2, 38.4Hz, 1H), 4.73-4.67(m, 1H), 4.53-4.50(m, 1H), 4.27-4.19(m, 2H), 3.99-3.95(m, 1H), 3.24(dd, J=3.2, 13.6Hz, 1H), 3.17-3.16(m, 1H), 2.83-2.74(m, 2H), 1.29(d, J=6.8Hz, 3H), 1.02-0.99(m, 6H).
【０２８２】
工程５．２−７（２．０ｇ、５．７２ｍｍｏｌ）及びＣｌ３ＣＣＮ（１．２４ｇ、８．５８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下０℃でＤＢＵ（１７４ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中５％−２０％石油）により精製して、２−８（１．５５ｇ、５５％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 8.47(s, 1H), 7.35-7.27(m, 3H), 7.25-7.19(m, 2H), 5.81-5.75(m, 1H), 4.98-4.85(m, 1H), 4.64-4.59(m, 1H), 4.40-4.36(m, 1H), 4.22-4.17(m, 2H), 3.27-3.24(m, 1H), 2.83-2.71(m, 2H), 1.40-1.38(m, 3H), 0.99-0.95(m, 6H).
【０２８３】
工程６．２−８（１．５５ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）のキシレン（１０ｍＬ）中溶液を、１３５℃で３０時間加熱した。これを室温に冷却し、溶媒を減圧下に除去した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ中５％−１０％−５０％石油）により精製して、２−９（４５０ｍｇ、２９％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.35-7.28(m, 3H), 7.21-7.20(m, 2H), 6.75(d, J=8.4Hz, 1H), 5.20(dd, J=9.2, 37.6Hz, 1H), 4.76-4.65(m, 2H), 4.28-4.17(m, 3H), 3.27-3.23(m, 1H), 2.79(dd, J=9.6, 13.2Hz, 1H), 2.07-2.00(m, 1H), 1.33(d, J=7.2Hz, 3H), 1.00-0.94(m, 6H).
【０２８４】
工程７．２−９（９５０ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ及びＨ２Ｏ（容量／容量４：１、１０ｍＬ）中溶液に、Ｈ２Ｏ２（１．３８ｍｇ、１１．５２ｍｍｏｌ）を、続いて水（２ｍＬ）中ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２４２ｍｇ、５．７６ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１０℃で１時間撹拌した後、飽和したＮａ２ＳＯ３溶液（８ｍＬ）を加えた。溶媒を除去し、残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ×２）で洗浄した。水溶液を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ１に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、２−１０（４２０ｍｇ、６５％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３３４．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０２８５】
工程８．２−１０（４２０ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）及び（４−アミノフェニル）メタノール（２３３ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下０℃でＥＥＤＱ（６２３ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１０℃で３時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル中３０％石油）により精製して、２−１１（３００ｍｇ、５４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４３９．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０２８６】
工程９．２−１１（３００ｍｇ、０．６８２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（６ｍＬ）中溶液に、０℃でＮａＢＨ４（３００ｍｇ、７．９４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１０℃で３時間撹拌した。水（０．５ｍＬ）を加え、ＥｔＯＨを減圧下に除去した。粗製物をＴＨＦ（４ｍＬ）と飽和したＮａＨＣＯ３溶液（４ｍＬ）との混合物に溶解し、ＣｂｚＣｌ（１４０ｍｇ、８．１８ｍｍｏｌ）を１０℃で加えた。混合物を１０℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をＤＣＭ（８ｍＬ×２）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、２−１２（１２５ｍｇ、４３％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.53-7.46(m, 2H), 7.36-7.25(m, 7H), 5.11-5.00(m, 3H), 4.56(s, 2H), 3.94-3.87(m, 1H), 3.63-3.59(m, 1H), 1.98-1.92(m, 1H), 1.27(d, J=6.8Hz, 3H), 0.96-0.93(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４２９．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０２８７】
工程１０．２−１２（２０ｍｇ、０．０４６７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、１０℃でＰＮＰカーボネート（４３ｍｇ、０．１４０ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（２４ｍｇ、０．１８７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した後、溶媒を除去し、残留物をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。この溶液に１０℃でＤＩＥＡ（２４ｍｇ、０．１８７ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（２２ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を１０℃で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２（１４．１ｍｇ、３９％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.35(br, 1H), 10.02(s, 1H), 8.95(s, 1H), 7.95-7.91(m, 1H), 7.69-7.58(m, 3H), 7.34-7.19(m, 8H), 5.12-5.00(m, 5H), 4.59-4.57(m, 2H), 3.87-3.81(m, 1H), 3.60-3.51(m, 5H), 3.30(s, 4H), 1.89-1.83(m, 1H), 1.40(t, J=7.2Hz, 3H), 1.20-1.81(m, 3H), 0.87(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７７４．８［Ｍ＋Ｈ＋］
【０２８８】
実施例３．  １−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（（Ｓ）−１−（チオフェン−３−イル）エチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000067
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【０２８９】
工程１．化合物３−１（２ｇ、１５．９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、２０℃でＮＨ４ＯＡｃ（１２．２ｇ、０．１５９ｍｏｌ）及びＮａＢＨ３ＣＮ（３．５ｇ、５５．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２０℃で１６時間撹拌した後、これを濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）とＮａＯＨ溶液（５Ｍ、５ｍＬ）（ｐＨ＞１３に調節）との間で分配した。有機層をブライン（２０ｍＬ×２）で洗浄し、濃縮し、カラム（ＤＣＭ中２０％−３０％ＭｅＯＨ）により精製して、粗製の化合物３−２（８００ｍｇ、収率４０％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6)  δ 7.63-7.61(d, J=8.0Hz, 1H), 7.58-5.57(m, 1H), 7.25-7.23(d, J=8.0Hz, 2H), 4.53-4.48(m, 1H), 1.51-1.49(d, J=8.0Hz, 3H).
【０２９０】
工程２．化合物３−３（５００ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、２０℃で化合物３−２（６００ｍｇ、４．７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ、３ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（７４０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２０℃で２時間撹拌した後、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、３−４（３６０ｍｇ、収率５７％）を得た。化合物３−４（３００ｍｇ）をＳＦＣ分離により分離して、２つの異性体３−４Ａ及び３−４Ｂを得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6)  δ 10.03(s, 1H), 8.12-8.10(m, 1H), 7.9 -7.75(m, 1H), 7.55-7.52(m, 2H), 7.45-7.35(m, 2H), 7.3-7.2(m, 3H), 7.04(m, 1H), 6.0(m, 1H), 5.5-5.2(m, 2H), 5.1-5.0(m, 1H), 4.45-4.35(m, 3H), 3.1-2.9(m, 4H), 2.43-2.39(m, 4H), 1.8-1.7(m, 3H), 1.7-1.5(m, 1H), 1.5-1.33(m, 5H).
【０２９１】
工程３．化合物３−４Ｂ（１１０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、２０℃でＰＮＰ（１３０ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．５ｍｌ、３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下２０℃で１．５時間撹拌した後、ノルフロキサシン（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２０℃で更に１時間撹拌し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例３（１０２．１ｍｇ、５７％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.15(s, 1H), 8.93(s, 1H), 8.10-8.08(d, 1H), 8.04(s, 1H), 7.93-7.90(m, 2H), 7.60-7.58(d, J=8.0Hz, 2H), 7.41-7.39(d,, 2H), 7.32-7.30(d, J=8.0Hz, 2H), 7.25(d, 1H), 7.20(d, 1H), 7.04-7.02(d, 1H), 6.0(m, 1H), 5.40(s, 2H), 5.1-5.0(m, 3H), 4.6-4.5(m, 2H), 4.5-4.35(m, 1H), 3.59(s, 1H), 3.2(s, 4H), 3.1-2.9(m, 2H), 2.42-2.40(m, 4H), 1.8-1.7(m, 3H), 1.7-1.6(m, 1H), 1.5-1.3(m, 8H).
【０２９２】
実施例４．  （Ｓ）−１−エチル−７−（４−（（４−（２−（１−（エチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−グアニジノペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000069
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【０２９３】
工程１．化合物４−１（１．３ｇ、２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ／２０ｍＬ）中溶液に、（４−アミノ−フェニル）−メタノール（３７０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（９８９ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。残留物をカラム（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１／３）により精製して、４−３（１．９４ｇ、収率：９０％）を得た。
【０２９４】
４−３（１．４４ｇ、２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、シリンジにより室温で４−４（１．２ｍｌ、９．５６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。残留物を濃縮し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルにより洗浄し、次いで濾過し、濾過ケーキを混合して、４−５（７００ｍｇ、収率：７０％）を得た。
【０２９５】
工程２．４−５（７００ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍｌ）中溶液に、４−６（４２４ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（２２２ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ）の水（１０ｍｌ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に調節した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機層を濃縮し、カラム（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１／３）により精製して、４−７（４００ｍｇ、収率：３７％）を得た。
【０２９６】
工程３．４−７（２５０ｍｇ、０．３６５ｍｍｏｌ）、ＰＮＰカーボネート（２２３ｍｇ、０．７３１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＰＥＡ（１４２ｍｇ、１．０９５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物（４−８）を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０２９７】
工程４．最終工程からの混合物に室温でノルフロキサシン（２３４ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した後、これを分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、４−９（収率：３０％）を得た。
【０２９８】
工程５．化合物４−９（１００ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に、０℃でＴＦＡのＤＣＭ中溶液（１：５）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。混合物をＮＨ３・Ｈ２ＯによりｐＨ＝９に塩基性化した。残留物を分取ＨＰＬＣ次いでＳＦＣにより精製して、実施例４（１６．０ｍｇ、収率：１５％）を得た。
1H NMR(400MHz, メタノール-d4) δ 8.83(s, 1H), 8.55(s, 1H), 7.97(d, J=13.2Hz, 1H), 7.62(d, J=7.6Hz, 2H), 7.35(d, J=7.6Hz, 2H), 7.17(s, 1H), 5.13(s, 2H), 4.55-4.52(m, 3H), 3.72(s, 4H), 3.34(s, 4H), 3.31-3.24(m, 4H), 2.58-2.54(m, 4H), 2.00-1.69(m, 6H), 1.52(s, 3H), 1.15-0.11(m, 3H).
【０２９９】
実施例５．  １−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（（Ｓ）−１−フェニルエチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０３００】
工程１．化合物５−１（５０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）及び５−２（１５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中混合物を、室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、分取ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／１０）により精製して、５−３（５０ｍｇ、９９％）を得た。
【０３０１】
工程２．化合物５−３（４０ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）、ＰＮＰカーボネート（４８ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＰＥＡ（３０ｍｇ、０．２３６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物（５−４）を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０３０２】
工程３．最終工程からの混合物に室温でノルフロキサシン（５１ｍｇ、０．１５７ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例５（７ｍｇ、収率：８％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOH-d4) δ 8.86(s, 1H), 8.46(s, 1H), 8.00(d, J=12.8Hz, 1H), 7.61(d, J=8Hz, 2H), 7.35-7.33(m, 2H), 7.30(d, J=7.2Hz, 2H), 7.24(d, J=7.2Hz, 2H), 7.20(d, J=14Hz, 2H), 7.16(s, 2H), 5.12(s, 2H), 5.04(d, J=7.2Hz, 1H), 4.50-4.47(m, 4H), 3.71(s, 4H), 3.34(s, 4H), 3.22-3.03(m, 2H), 2.60-2.51(m, 4H), 1.94-1.86(m, 3H), 1.74-1.71(m, 1H), 1.60-1.45(m, 7H).
【０３０３】
実施例６．  １−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（（Ｓ）−１−（チオフェン−２−イル）エチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０３０４】
実施例６を実施例３と同様の手順を用いて調製した。中間体を実施例１０と分かち合った。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6)  δ 15.3(s, 1H), 10.13(s, 1H), 8.93(s, 1H), 8.25(d, 1H), 7.94-7.91(d, J=12.0Hz, 1H), 7.8(d, 1H), 7.60-7.58(d, J=8.0Hz, 2H), 7.33-7.30(d, J=8.0Hz, 3H), 7.20(d, 1H), 6.92-6.91(m, 2H), 5.95(m, 1H), 5.40(s, 1H), 5.25-5.15(m, 1H), 5.04(s, 2H), 4.65-4.4(m, 2H), 4.5-4.4(m, 1H), 3.7-3.5(s, 4H), 3.3(s, 4H), 3.1-2.85(m, 2H), 2.44-2.42(m, 4H), 1.8-1.7(m, 3H), 1.7-1.55(m, 1H), 1.46-1.45(d, J=4.0Hz, 1H), 1.45-1.3(m, 5H).
【０３０５】
実施例７．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（（Ｒ）−３−（アリルオキシ）−３−オキソ−１−（チオフェン−３−イル）プロピルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000074
2017504606.tif 000075
【０３０６】
工程１．化合物７−１（１０．０ｇ、８９．１７ｍｍｏｌ）及びＣＨ２（ＣＯＯＨ）２（９．３ｇ、８９．１７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）中溶液に、ＮＨ４ＯＡｃ（１３．７ｇ、１７８．３３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を８０℃で６時間撹拌した。これを室温に冷却し、濾過し、ＥｔＯＨ（１００ｍＬ）で洗浄した。濾過ケーキを集め、減圧下に濃縮して、化合物７−２（８．０ｇ、５２．６％）を白色固体として得た。
1H NMR D2O 400MHz, δ 7.44(s, 2H), 7.13(d, J=3.2Hz, 1H), 4.69(t, J=7.2Hz, 1H), 2.84-2.73(m, 2H).
【０３０７】
工程２．化合物７−２（６．０ｇ、３５．０４ｍｍｏｌ）の化合物７−３（６０．０ｇ）中混合物に、ＴＭＳＣｌ（１３．４ｍＬ、ρ＝０．８５、１０５．１３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物をＮ２下室温で終夜撹拌した。混合物を減圧下に濃縮し、残留物をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ溶液によりｐＨ１に調節し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で洗浄した。水相をＮＨ３Ｈ２ＯによりｐＨ１２に調節し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。混合したＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮して、化合物７−４を油状物として得た（４．０ｇ、５４．１％）。
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 7.45-7.43(q, 1H), 7.31(s, 1H), 7.15(d, J=4.8Hz, 1H), 5.91-5.85(m, 1H), 5.27(dd, J=17.2, 1.6Hz, 1H), 5.20-5.17(m, 1H), 4.53(d, J=5.2Hz, 2H), 4.31-4.27(m, 1H), 2.73-2.61(m, 2H).
【０３０８】
工程３．化合物７−５（１．０ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中混合物に、ＤＩＰＥＡ（６３６ｍｇ、４．９２ｍｍｏｌ）を、続いてＨＡＴＵ（１．４ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１５分間撹拌し、化合物７−４（６２４ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物７−６を白色固体として得た（８００ｍｇ、５４．１％）。
化合物７−６を１．５ｇにスケールアップし、ＳＦＣにより分離して、７−６ａ（５８０ｍｇ）及び７−６ｂ（５６０ｍｇ）を得た。
７−６ａ
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．７７３分、ＭＳ＝６００．１［Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 10.05(s, 1H), 8.25(d, J=8.4Hz, 1H), 7.74(d, J=7.9Hz, 1H), 7.56(d, J=8.4Hz, 2H), 7.45-7.43(q, 1H), 7.31(d, J=2.6Hz, 1H), 7.24(d, J=8.4Hz, 2H), 7.08(d, J=4.0Hz, 1H), 5.97(t, J=5.6Hz, 1H), 5.90-5.80(m, 1H), 5.43-5.37(m, 3H), 5.27(dd, J=17.4, 1.5Hz, 1H), 5.17(dd, J=10.4Hz, 1.3Hz, 1H), 5.17(t, J=5.7Hz, 1H), 4.51(d, J=5.3Hz, 2H), 4.44-4.39(m, 3H), 3.06-2.98(m, 1H), 2.97-2.88(m, 3H), 2.48-2.39(m, 4H), 1.78-1.70(m, 3H), 1.64-1.55(m, 1H), 1.42-1.28(m, 2H).
７−６ｂ
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．７６２分、ＭＳ＝６００．１［Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 10.04(s, 1H), 8.26(d, J=8.4Hz, 1H), 7.79(d, J=7.7Hz, 1H), 7.57(d, J=8.4Hz, 2H), 7.39-7.37(q, 1H), 7.31(s, 1H), 7.24(d, J=8.4Hz, 2H), 7.07(d, J=4.9Hz, 1H), 5.97(t, J=5.5Hz, 1H), 5.91-5.81(m, 1H), 5.43-5.36(m, 3H), 5.26(dd, J=17.3, 1.4Hz, 1H), 5.18(d, J=10.4Hz, 1H), 5.11(t, J=5.7Hz, 1H), 4.53-4.52(m, 2H), 4.44-4.40(m, 3H), 3.05-2.98(m, 1H), 2.97-2.85(m, 3H), 2.46-2.33(m, 4H), 1.77-1.72(m, 3H), 1.64-1.56(m, 1H), 1.42-1.30(m, 2H).
【０３０９】
工程４．７−６ａ（５０ｍｇ、０．０８３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（１０７ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）を、続いてＰＮＰカーボネート（６０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。次いでノルフロキサシン（６４ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で更に２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例７を白色固体として得た（４１．７ｇ、５３．５％）。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８５８分、ＭＳ＝４７３．３［１／２Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 15.32(br, 1H), 10.15(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.23(d, J=8.0Hz, 1H), 7.91(d, J=13.0Hz, 1H), 7.77(d, J=7.5Hz, 1H), 7.62(d, J=8.0Hz, 2H), 7.44-7.42(q, 1H), 7.35-7.31(m, 3H), 7.19(br, 1H), 7.08(d, J=4.5Hz, 1H), 5.98(br, 1H), 5.89-5.80(m, 1H), 5.44-5.37(m, 3H), 5.23(d, J=17.6Hz, 1H), 5.16(d, J=10.5Hz, 1H), 5.07(s, 2H), 4.57(br, 2H), 4.51(d, J=5.5Hz, 2H), 4.45-4.40(m, 1H), 3.61(br, 4H), 3.31(br, 4H), 3.06-3.01(m, 1H), 2.95-2.90(m, 3H), 2.47-2.40(m, 4H), 1.76-1.72(m, 3H), 1.62-1.59(m, 1H), 1.40-1.35(m, 5H).
【０３１０】
実施例８．  １−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（（Ｒ）−１−（チオフェン−３−イル）エチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000076
2017504606.tif 000077
実施例３の合成からの中間体を用い、実施例８を実施例３と同様の手順を用いて調製した。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.14(s, 1H), 8.92(s, 1H), 8.05-8.03(d, 1H), 7.93-7.90(d, J=12.0Hz, 1H), 7.85-7.83(d, 1H), 7.61-7.59(d, J=8.0Hz, 1H), 7.36-7.35(m, 1H), 7.33-7.31(d, J=8.0Hz, 2H), 7.24(s, 1H), 7.20(m, 1H), 5.5(m, 1H), 7.04-7.03(m, 1H), 6.0(m, 1H), 5.40(s, 2H), 5.1-5.0(m, 3H), 4.6-4.5(m, 2H), 4.5-4.35(m, 1H), 3.59(s, 1H), 3.2(s, 4H), 3.05-2.9(m, 2H), 2.44-2.41(m, 4H), 1.8-1.7(m, 3H), 1.7-1.6(m, 1H), 1.5-1.35(m, 8H).
【０３１１】
実施例９．  １−エチル−６−フルオロ−７−（４−（（４−（（２Ｓ）−２−（１−（４−メチルペンタン−２−イルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000078
実施例９を実施例５と同様の手順を用いて調製した。
ＬＣＭＳ：（５−９５ＡＢ、１．５分）、Ｔ＝０．８５８分、Ｍ＝８．３５２（Ｍ＋１）；
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.22(s, 1H), 8.85(s, 1H), 7.89-7.71(m, 2H), 7.65-7.64(d, J=8.8Hz, 2H), 7.53-7.50(m, 1H), 7.34-7.31(d, J=8.8Hz, 2H), 7.18-7.13(m, 1H), 6.06(s, 1H), 5.45(d, J=3.2Hz, 2H), 5.05(s, 2H), 4.60-4.42(m, 2H), 3.91-3.88(t, J=6.4Hz, 1H), 3.59(s, 4H), 3.26(s, 4H), 3.03-2.99(m, 1H), 2.97-2.91(m, 1H), 2.41-2.39(m, 5H), 1.74-1.71(m, 3H), 1.7-1.5(m, 2H), 1.5-1.3(m, 6H), 1.2-1.1(m, 1H), 1.03 -1.00(m, 3H), 0.81(m, 6H).
【０３１２】
実施例１０．  １−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（（Ｒ）−１−（チオフェン−２−イル）エチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000079
実施例１０を実施例３と同様の手順を用いて調製した。中間体を実施例６と分かち合った。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6)  δ 15.3(s, 1H), 10.13(s, 1H), 8.94(s, 1H), 8.25(d, 1H), 7.94-7.91(d, J=12.0Hz, 1H), 7.8(d, 1H), 7.62-7.60(d, J=8.0Hz, 2H), 7.34-7.31(d, J=8.0Hz, 2H), 7.28-7.27(d, J=4.0Hz, 1H), 7.20(d, 1H), 6.93(s, 1H), 6.90-6.88(m, 1H), 5.95(m, 1H), 5.40(s, 1H), 5.25-5.15(m, 1H), 5.05(s, 2H), 4.65-4.4(m, 2H), 4.5-4.4(m, 1H), 3.7-3.5(s, 4H), 3.3(s, 4H), 3.1-2.85(m, 2H), 2.44-2.42(m, 4H), 1.85-1.7(m, 3H), 1.7-1.55(m, 1H), 1.47-1.46(d, J=4.0Hz, 1H), 1.46-1.3(m, 5H).
【０３１３】
実施例１１．  １−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（４−（（４−（（２Ｓ）−２−（１−（ペンタン−２−イルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000080
実施例１１を実施例５と同様の手順を用いて調製した。
ＬＣＭＳ：（５−９５ＡＢ、１．５分）、Ｔ＝０．８４８分、Ｍ＝８２１．２（Ｍ＋１）；
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.15-10.13(m, 1H), 8.96(s, 1H), 7.97-7.93(d, J=13.2Hz, 1H), 7.81-7.74(m, 1H), 7.63(d, J=8.8Hz, 2H), 7.50-7.46(m, 1H), 7.34(d, J=8.4Hz, 2H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 5.98-5.95(t, J=5.6Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.06(s, 2H), 4.60-4.57(q, J=6.8Hz, 2H), 4.44-4.42(m, 1H), 3.81(m, 1H), 3.60(s, 4H), 3.49-3.36(s, 4H), 3.33-3.29(m, 2H), 3.1-2.9(m, 2H), 2.42-2.39(m, 4H), 1.73(m, 4H), 1.63-1.58(m, 1H), 1.41(m, 5H), 1.35-1.30(m, 2H), 1.04-1.02(m, 3H), 0.84-0.78(m, 3H).
【０３１４】
実施例１２．  （Ｓ）−１−エチル−６−フルオロ−７−（４−（（４−（２−（１−（イソプロピルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000081
2017504606.tif 000082
【０３１５】
工程１．化合物１２−１（１２０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１７１ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１９５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中混合物を、室温で３０分間撹拌した。次いで化合物１２−２（９ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、分取ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／１０）により精製して、１２−３（１８０ｍｇ、１３６％）を得た。
【０３１６】
２．化合物１２−３（１８０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＰＮＰカーボネート（２４５ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＰＥＡ（１５６ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物（１２−４）を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０３１７】
工程３．最終工程の混合物に、室温でノルフロキサシン（２５９ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１２（１８．５ｍｇ、収率：２工程で６％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOH-d4) δ 8.88(s, 1H), 8.02-7.99(d, J=13.2Hz, 1H), 7.65-7.62(d, J=8.8Hz, 3H), 7.37-7.35(d, J=8.4Hz, 2H), 7.19(d, J=6.4Hz, 1H), 5.13(s, 2H), 4.54-4.50(m, 4H), 4.06-4.01(m, 1H), 3.73(s, 4H), 3.35(s, 4H), 3.26-3.19(m, 2H), 2.57-2.52(m, 4H), 1.94-1.90(m, 2H), 1.81-1.74(m, 2H), 1.59-1.53(m, 3H), 1.21-1.13(m, 6H).
【０３１８】
実施例１３．  （Ｓ）−１−エチル−７−（４−（（４−（２−（１−（エチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000083
2017504606.tif 000084
【０３１９】
工程１．化合物１３−１（１ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）及びジオキサン中ＨＣｌ（４Ｍ、１０ｍＬ）の混合物を、室温で２時間撹拌した。溶液を濃縮して、１３−２を得た。
【０３２０】
工程２．化合物１３−２（６５１ｍｇ、２．３２６ｍｍｏｌ）のＤＭＥ−Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ／２ｍＬ）中溶液に、化合物１３−３（６２３ｍｇ、２．３２６ｍｍｏｌ）及び飽和ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）の混合物を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。溶液を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、１３−４を得た。
1H NMR(400MHz, メタノール-d4) δ 7.62(d, J=8.4Hz, 2H), 7.33(d, J=8.8Hz, 2H), 4.57-4.52(m, 3H), 3.29-3.10(m, 4H), 2.60-2.53(m, 4H), 2.05-1.50(m, 6H), 1.16(t, J=7.6Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４３４．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３２１】
工程３．１３−４（６０ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（９０ｍｇ、０．６９５ｍｍｏｌ）及びＰＮＰカーボネート（８４ｍｇ、０．２７７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で２日間撹拌した。混合物を濃縮し、ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、ノルフロキサシン（８８ｍｇ、０．２７８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で１．５時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１３を得た。
1H NMR(400MHz, メタノール-d4) δ 8.86(s, 1H), 8.00(d, J=13.2Hz, 1H), 7.63(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35(d, J=8.8Hz, 2H), 7.18(d, J=6.8Hz, 1H), 5.11(s, 2H), 4.57-4.48(m, 3H), 3.71(s, 4H), 3.33-3.32(m, 4H), 3.26-3.08(m, 4H), 2.60-2.47(m, 4H), 1.93-1.50(m, 10H), 1.14(t, J=7.2Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７７９．４。［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３２２】
実施例１４．  １−エチル−６−フルオロ−７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（（Ｒ）−３−メチルブタン−２−イルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000085
実施例１４を実施例５と同様の手順を用いて調製した。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6)  δ 10.16(s, 1H), 8.96(s, 1H), 7.97-7.93(d, J=13.2Hz, 1H), 7.85-7.83(d, J=7.6Hz, 1H), 7.63-7.61(d, J=8.8Hz, 2H), 7.43-7.41(d, J=8.8Hz, 1H), 7.35-7.33(d, J=8.8Hz, 2H), 7.22-7.21(d, J=6.8Hz, 1H), 6.00-5.97(m, 1H), 5.43(s, 2H), 5.07(s, 2H), 4.61-4.56(m, 2H), 4.46-4.41(m, 1H), 3.62(m, 6H), 3.41(s, 2H), 3.30(s, 4H), 3.12-2.89(m, 2H), 2.45-2.39(m, 4H), 1.76-1.62(m, 4H), 1.44-1.39(m, 3H), 1.00(d, J=6.8Hz, 3H), 0.82(d, J=5.6Hz, 6H).
【０３２３】
実施例１５．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（３，３−ジメチル−１−（（Ｒ）−１−フェニルエチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０３２４】
工程１．Ｐｈ３Ｐ（９１．８ｇ、３５０ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（２５０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、０℃で臭素（５６ｇ、３５０ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ（４０ｍＬ）中溶液を滴下した。次いで化合物１５−１（１８．２ｇ、１７５ｍｍｏｌ）を混合物に加えた。反応物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去し、残留物を蒸留して、１５−２を明黄色油状物として得た（１４ｇ、３５％）。
1H NMR CDCl3 400MHz, δ 3.40(s, 4H), 1.17(s, 6H).
【０３２５】
工程２．ＮａＨ（３．４ｇ、６０％、８４．９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）中懸濁液に、化合物１５−３（１１．１４ｇ、６９．６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。混合物をＮ２下７０℃で１時間加熱した。次いで化合物１５−２（８．０ｇ、３４．８ｍｍｏｌ）を加え、Ｎ２下６０時間撹拌した。混合物をＮＨ４Ｃｌの水溶液（３００ｍＬ中２０ｇ）中に注ぎ入れ、ＰＥ（５０ｍＬ×５）で抽出した。有機相を濃縮し、クロマトグラフィー（ＰＥ）により精製して、化合物１５−４（３．０ｇ、収率：３７．９％）を得た。
1H NMR CDCl3 400MHz δ 4.21- 4.16(m, 4H), 2.36(s, 4H), 1.26-1.22(m, 6H), 1.11(s, 6H).
【０３２６】
工程３．化合物１５−４（３．０ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、室温でＫＯＨ水溶液（８５％、７７９ｍｇ、１３．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を７６℃で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）とＨ２Ｏ（１２５ｍＬ）との間で分配した。水性相を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝３にまで酸性化し、ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ×２）で抽出した。有機層を濃縮して、化合物１５−５（１．９ｇ、６８．３％）を油状物として得た。
1H NMR CDCl3 400MHz, δ 11.62(s, 1H), 4.26-4.21(m, 2H), 2.42(s, 4H), 1.29-1.26(m, 3H), 1.15-1.13(d, J=7.2Hz, 6H).
【０３２７】
工程４．化合物１５−５（５００ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８ｍＬ）中の撹拌された溶液に、室温でＨＡＴＵ（２８５．０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１９３．５ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、１５−６（９０．９ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９０：１０）により精製して、化合物１５−７を白色固体として得た（７０ｍｇ、４６．２％）
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８０７分、ＭＳ＝３０３．９［Ｍ＋１］
1H NMR CDCl3 400MHz, δ 7.34-7.22(m, 5H), 6.19(d, J=7.2Hz, 1H), 5.14-5.06(m, 1H), 4.22-4.16(m, 2H), 2.46-2.31(m, 4H), 1.46(d, J=6.8Hz, 3H), 1.25-1.21(m, 3H), 1.09(s, 6H).
【０３２８】
工程５．化合物１５−７（７０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１ｍＬ／２ｍＬ／２ｍＬ）中の撹拌された溶液に、室温でＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１９．４ｍｇ、０．４６２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。有機溶媒を除去し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）とＨ２Ｏ（２５ｍＬ）との間で分配した。水性相を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で抽出した。有機相を濃縮して、化合物１５−８を白色固体として得た（５０ｍｇ、７８．７％）。
1H NMR CDCl3 400MHz, δ 7.34-7.23(m, 5H), 6.30(d, J=7.2Hz, 1H), 5.14-5.07(m, 1H), 2.50-2.31(m, 4H), 1.48(d, J=6.8Hz, 3H), 1.11(d, J=16Hz, 6H).
【０３２９】
工程６．化合物１５−８（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）中の撹拌された溶液に、室温でＨＡＴＵ（１０２．６ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４６．４４ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。化合物１５−９（５３ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を反応混合物中に加え、室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、クロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝８５：１５）により精製して、化合物１５−１０（６０ｍｇ、６１．８％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８０３分、ＭＳ＝５３８．２［Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4 400MHz, δ 8.19(d, J=8Hz, 1H), 7.58(d, J=8.4Hz, 2H), 7.31-7.17(m, 7H), 5.07-5.00(m, 1H), 4.56(s, 2H), 4.51-4.47(m, 1H), 3.21-3.17(m, 1H), 2.45-2.35(m, 4H), 1.89-1.85(m, 1H), 1.75-1.72(m, 1H), 1.55-1.47(m, 5H), 1.08(d, J=2Hz, 6H).
【０３３０】
工程７．化合物１５−１０（６０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中の撹拌された溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（１５−１１）（６６．９ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（７０．９ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。混合物（１５−１２）を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０３３１】
工程８．最終工程の反応混合物に室温でノルフロキサシン（７０．２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し、分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１５（１４．４ｍｇ、収率：１４．８％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８８７分、ＭＳ＝８８３．４．４［Ｍ＋１］、４４２．４［１／２Ｍ＋１］
1H NMR DMSO - d6 400MHz, δ 10.24(s, 1H), 8.94(s, 1H), 8.39(s, 1H), 8.13(d, J=2Hz, 1H), 7.965-7.963(m, 2H), 7.63(d, J=8.4Hz, 2H), 7.47(d, J=8.8Hz, 2H), 7.30-7.26(m, 4H), 7.19-7.18(m, 2H), 6.05(s, 1H), 5.46(s, 2H), 5.07(s, 2H), 4.97-4.91(m, 1H), 4.57(s, 2H), 4.45(s, 1H), 3.62(s, 4H), 3.35(s, 4H), 3.05-3.02(m, 1H), 2.96-2.92(m, 1H), 2.32-2.26(m, 4H), 1.73-1.71(m, 1H), 1.63-1.61(m, 1H), 1.42-1.37(m, 8H), 0.99(s, 6H).
【０３３２】
実施例１６．  （Ｓ）−１−エチル−７−（４−（（４−（２−（１−（エチルカルバモイル）シクロペンタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０３３３】
工程１．化合物１６−１（１０ｇ、６２．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５０ｍＬ）中溶液に、室温で１，４−ジブロモブタン（１４．８ｇ、６８．６ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２１．５ｇ、１５５．８ｍｍｏｌ）及び化合物１６−２（１．４ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）とＨ２Ｏ（８０ｍＬ）との間で分配し、混合した有機相を乾燥し、濃縮して、化合物１６−３を油状物として得た（１０．０ｇ、収率：７５％）。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 4.15-4.10(m, 4H), 2.14-2.10(m, 4H), 1.64-1.61(m, 4H), 1.20-1.17(m, 6H).
【０３３４】
工程２．化合物１６−３（６．０ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、室温で８５％ＫＯＨ水溶液（１．８５ｇ、２８．０ｍｍｏｌ）を加え、７６℃で３時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）とＨ２Ｏ（３０ｍＬ）との間で分配した。水性相を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を乾燥し、濃縮して、化合物１６−４を油状物として得た（２．５ｇ、収率：４８．０％）。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 10.61-10.60(m, 1H), 4.21-4.15(m, 2H), 2.21-2.18(m, 4H), 1.72-1.65(m, 4H), 1.26-1.22(m, 3H).
【０３３５】
工程３．化合物１６−４（２．５ｇ、１３．４ｍｍｏｌ）及び化合物１６−５（１．６２ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＣＣ（３．０４ｇ、１４．７４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下室温で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、粗製の化合物１６−６を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
1H NMR(400MHz, MeOH-d4) δ 4.23-4.18(m, 2H), 2.79(s, 4H), 2.36-2.23(m, 4H), 1.76-1.72(m, 4H), 1.30-1.28(t, J=7.2Hz, 3H).
【０３３６】
工程４．化合物１６−６（１．０ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）中溶液に、室温で化合物１６−７（６５８．７ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、化合物１６−８を白色固体として得た（１５０ｍｇ、収率：１４．２％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４４９．０［Ｍ＋１］。
【０３３７】
工程５．化合物１６−８（１５０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（３ｍＬ／３ｍＬ／１．５ｍＬ）中溶液に、室温でＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２８．１４ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）とＨ２Ｏ（２０ｍＬ）との間で分配した。水性相を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出し、濃縮して、粗製の化合物１６−９を白色固体として得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４２０．９［Ｍ＋１］。
【０３３８】
工程６．化合物１６−９（２５０ｍｇ、０．５９５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）中溶液に、室温でＨＡＴＵ（３３９．２ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２６８．６ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）を加え、３０分間撹拌した。エチルアミン塩酸塩（９６．９８ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を反応混合物中に加え、室温で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、化合物１６−１０を白色固体として得た（３０ｍｇ、収率：１１．３％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４４７．９［Ｍ＋１］。
1H NMR(400MHz, DMSO - d6)  δ 9.99(s, 1H), 7.75-7.73(m, 2H), 7.57-7.55(m, 2H), 7.23-7.21(m, 2H), 5.97-5.94(m, 1H), 5.39(s, 2H), 5.11-5.08(m, 1H)，4.41-4.36(m, 2H), 4.35-4.32(s, 1H)，3.13-3.06(m, 2H), 2.97-2.90(m, 2H), 2.16-2.14(m,2H), 2.11-2.05(m, 1H), 1.95-1.93(m, 1H), 1.92-1.91(m, 1H), 1.51-1.49(m, 4H), 1.39-1.37(m, 1H), 1.20-1.19(m, 2H), 1.02-0.98(t, J=7.2Hz, 3H).
【０３３９】
工程７．化合物１６−１０（３０ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、０℃で化合物１６−１１（４０．７ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４３．２２ｍｇ、０．３３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で５時間撹拌した後、これを更には精製せずに次の工程に直接使用した。
【０３４０】
工程８．最終工程からの混合物（１６−１２）に室温で化合物１６−１３（４２．８ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、次いで分取ＨＰＬＣにより精製して、所望の生成物実施例１６（３５．０ｍｇ、収率：６６．０％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.32(s, 1H), 10.09(s, 1H), 8.95(s, 1H), 7.93(d, J=13.2Hz, 1H), 7.80-7.71(m, 2H), 7.62(d, J=8.4Hz, 2H), 7.32(d, J=8.4Hz, 2H), 7.18(d, J=8.0Hz, 1H), 5.98-5.91(m, 1H), 5.39(s, 2H), 5.04(s, 2H), 4.60-4.52(m, 2H), 4.38-4.32(m, 1H), 3.59(s, 4H), 3.30(s, 4H), 3.12-3.08(m, 2H), 2.96-2.85(m, 2H), 2.14-2.11(m, 2H), 2.10-2.00(m, 1H), 1.94-1.89(m, 1H), 1.63-1.40(m, 5H), 1.38-1.30(m, 5H), 1.02-0.98(t, J=7.2Hz, 3H).
【０３４１】
実施例１７．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（（Ｓ）−３−（アリルオキシ）−３−オキソ−１−（チオフェン−３−イル）プロピルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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実施例７の合成からの中間体を用い、実施例１７を実施例７と同様の手順を用いて調製した。
【０３４２】
実施例１８．  （Ｓ）−１−エチル−７−（４−（（４−（２−（１−（エチルカルバモイル）シクロヘキサンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
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【０３４３】
工程１．化合物１８−１（４．０ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、室温で８５％ＫＯＨ水溶液（１．１５ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を７６℃で３時間撹拌した後、これを濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）とＨ２Ｏ（２５ｍＬ）との間で分配した。水性相を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×２）で抽出した。有機層を濃縮して、化合物１８−２を油状物として得た（２．５ｇ、収率：７１．４％）。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 4.20-4.15(m, 2H), 2.03-1.90(m, 4H), 1.56-1.47(m, 6H), 1.45-1.43(t, 4.0Hz, 3H).
【０３４４】
工程２．化合物１８−２（２．５ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）及び１８−３（１．５１ｇ、１３．１３ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＣＣ（２．８３ｇ、１３．３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下室温で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して粗製の化合物１８−４を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した（２．０ｇ、収率：５３．８％）。
【０３４５】
工程３．化合物１８−４（２．０ｇ、６．７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）中の撹拌された溶液に、室温で化合物１８−５（１．２６ｇ、４．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、化合物１８−６を白色固体として得た（７００ｍｇ、収率：２２．４％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４６３．０［Ｍ＋１］。
【０３４６】
工程４．化合物１８−６（７００ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（４ｍＬ／４ｍＬ／２ｍＬ）中溶液に、室温でＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１２６．０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、これを濃縮し、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）とＨ２Ｏ（３０ｍＬ）との間で分配し、水性相を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ×２）で抽出し、濃縮して、粗製の化合物１８−７を白色固体として得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４３５．０［Ｍ＋１］。
【０３４７】
工程５．化合物１８−７（３００ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）中溶液に、室温でＨＡＴＵ（３９５．２ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２６７．０３ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。エチルアミン（１１２．４７ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を反応混合物中に加え、室温で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、化合物１８−８（６０ｍｇ、収率：１８．８％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４６２．０［Ｍ＋１］。
1H NMR(400MHz, MeOH - d4)  δ 7.62(d, J=8.4Hz, 2H), 7.28(d, J=8.8Hz, 2H), 4.58(s, 1H), 4.54-4.50(m, 3H)，3.62-3.57(m, 1H), 3.26-3.18(s, 2H)，3.10-3.07(m, 2H), 2.16-2.02(m, 2H), 1.85 -1.81(m, 3H), 1.73-1.71(m, 1H), 1.59-1.50(m, 5H), 1.18-1.14(m, 1H), 1.12-1.09(m, 3H).
【０３４８】
工程６．化合物１８−８（１００ｍｇ、０．２１６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍｌ）中の撹拌された溶液に、０℃で化合物１８−９（１３１．３ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１３９．３ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物（１８−１０）を室温で３時間撹拌し、更には精製せずに次の工程に使用した。
【０３４９】
工程７．最終工程からの混合物（１８−１０）に室温でノルフロキサシン（１８−１１）（１３７．９ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。混合物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１８（９８．０ｍｇ収率：５６．２％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO - d6)  δ 15.30(s, 1H), 10.09(s, 1H), 8.93(s, 1H), 7.92(d, J=13.2Hz, 1H), 7.78-7.72(m, 1H), 7.67(d, J=7.6Hz, 1H), 7.63(d, J=8.8Hz, 2H), 7.32(d, J=8.8Hz, 2H), 7.18(d, J=8.0Hz, 1H), 5.98-5.92(m, 1H), 5.38(s, 2H), 5.04(s, 2H), 4.57-4.55(m, 2H), 4.39-4.31(m, 1H), 3.59(s, 4H), 3.31(s, 4H), 3.31-3.08(m, 2H), 3.00-2.86(m, 2H), 2.12-2.03(m, 1H), 2.01-1.91(m, 1H), 1.90-1.83(m, 3H), 1.58-1.67(m, 1H), 1.40-1.25(m, 11H), 1.01-0.97(t, J=7.2Hz, 3H).
【０３５０】
実施例１９．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（２，２−ジメチル−３−オキソ−３−（（Ｒ）−１−フェニルエチルアミノ）プロパンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000093
2017504606.tif 000094
【０３５１】
工程１．化合物１９−１（５．０ｇ、３１．２２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（７０ｍＬ）中溶液に、０℃でＮａＨ（３．７５ｇ、９３．６５ｍｍｏｌ、ｃ＝６０％）をゆっくり加えた。混合物を０℃で１０分間撹拌した後、ＭｅＩ（６．１５ｍＬ、１２４．８８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下し、反応混合物を０℃で２時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、濾過し、濾液を減圧下に濃縮した。残留物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、濾過し、濾液を濃縮して、化合物１９−２（３．５ｇ、５９．６％）を油状物として得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 4.13-4.08(q, 4H), 1.33(s, 6H), 1.16(t, J=6.8Hz, 6H).
【０３５２】
工程２．化合物１９−２（３．０ｇ、１５．９４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、ＫＯＨ水溶液（８５％、８９４ｍｇ、１５．９４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１時間加熱還流した。有機溶媒を減圧下に除去した後、これをＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＰＥ（１０ｍＬ×２）で洗浄した。水性相を濃ＨＣｌ溶液でｐＨ２に調節し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。混合したＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮して、化合物１９−３（１．５ｇ、５８．８％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 3.98-3.93(q, 4H), 1.17(s, 6H), 1.12(t, J=7.2Hz, 3H).
【０３５３】
工程３．化合物１９−３（１．０ｇ、６．２４ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中混合物に、ＤＩＰＥＡ（１．６１ｇ、１２．４８ｍｍｏｌ）を、続いてＨＡＴＵ（２．８５ｇ、７．４９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１５分間撹拌した後、化合物１９−４（９０８ｍｇ、７．４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、クエン酸溶液（１０ｍＬ×３）、ブライン（１０ｍＬ×１）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝５：１）により精製して、化合物１９−５を白色固体として得た（１．３０ｇ、７９．３％）。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8.00(d, J=8.0Hz, 1H), 7.31-7.28(m, 4H), 7.22-7.18(m, 1H), 4.97-4.90(m, 1H), 4.12-4.01(m, 2H), 1.36(d, J=6.8Hz, 3H), 1.33(d, J=2.4Hz, 6H), 1.14(d, J=6.8Hz, 3H).
【０３５４】
工程４．化合物１９−５（１．５ｇ、５．７０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏの混合物（１５ｍＬ／５ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４７８ｍｇ、１１．４０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２時間加熱還流した。有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液をＤＣＭ（５ｍＬ×３）で洗浄した。これを濃ＨＣｌ溶液でｐＨ１に調節し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合したＥｔＯＡｃ層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮して、化合物１９−６を白色固体として得た（８００ｍｇ、５９．７％）。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 12.45(br, 1H), 7.95(d, J=8.0Hz, 1H), 7.32-7.27(m, 4H), 7.23-7.17(m, 1H), 4.97-4.90(m, 1H), 1.36(d, J=6.8Hz, 3H), 1.31(d, J=3.6Hz, 6H).
【０３５５】
工程５．化合物１９−６（１６７ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（１８３ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を、続いてＨＡＴＵ（３２３ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１０分間撹拌し、化合物１９−７（２００ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した後、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物１９−８を白色固体として得た（８０ｍｇ、２２．７％）。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.05(s, 1H), 8.11(d, J=8.0Hz, 1H), 7.88(d, J=7.6Hz, 1H), 7.57-7.54(m, 2H), 7.32-7.25(m, 4H), 7.22-7.15(m, 3H), 5.95(t, J=5.6Hz, 1H), 5.39(s, 2H), 5.08(br, 1H), 4.98-4.94(m, 1H), 4.41(s, 2H), 4.36-4.31(m, 1H), 3.00-2.89(m, 2H), 1.78-1.75(m, 1H), 1.63-1.59(m, 1H), 1.40-1.33(m, 8H), 1.30(s, 3H).
【０３５６】
工程６．化合物１９−８（８０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（４ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（１０３ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）を、続いてＰＮＰカーボネート（９７ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。これをＮ２下室温で２時間撹拌した後、ノルフロキサシン（１０２ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌し、濾過し、濾液を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例１９を白色固体として得た（８１ｍｇ、６０．０％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．８５４分、Ｍ／２＋Ｈ＋＝４２２．２．方法＝５−９５／１．５分。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.30(br, 1H), 10.16(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.11(d, J=8.0Hz, 1H), 7.95-7.91(m, 2H), 7.64(d, J=8.8Hz, 2H), 7.35-7.27(m, 6H), 7.21-7.17(m, 2H), 5.97(t, J=5.6Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.07(s, 2H), 5.00-4.97(m, 1H), 4.58-4.55(m, 2H), 4.39-4.33(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.31(s, 4H), 3.02-2.92(m, 2H), 1.80-1.78(m, 1H), 1.64-1.62(m, 1H), 1.42-1.33(m, 14H).
【０３５７】
実施例２０．  （Ｓ）−７−（４−（（４−（６−アミノ−２−（１−（エチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000095
2017504606.tif 000096
【０３５８】
工程１．化合物２０−１（５ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ中の撹拌された溶液に、室温で化合物２０−２（５．５ｍｌ、５３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物をＨ２Ｏで抽出し、混合した水層を濃縮して、２０−３を得た。（収率：９５％）
【０３５９】
工程２．化合物２０−４（１．５ｇ、５．６ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５０ｍｌ）中溶液に、化合物２０−３（２．７５ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（９４０ｍｇ、１１．２ｍｍｏｌ）の水（５０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ３に酸性化した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機層を濃縮して、化合物２０−５を得た。（収率：８０％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４００．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３６０】
工程３．化合物２０−５（１ｇ、２．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭとＭｅＯＨとの混合物（２０ｍＬ、１０ｍＬ）中溶液に、（４−アミノ−フェニル）メタノール（２０−６）（４６２ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（１．２３６ｇ、５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。残留物をカラム（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１／３）により精製して、２０−７（収率：６０％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０５．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３６１】
工程４．化合物２０−７（１８０ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（６ｍＬ）中溶液に、０℃で化合物２０−８（２１９ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１４０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物（２０−９）を更には精製せずに次の工程に使用した。（収率：１００％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６７０．６［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３６２】
工程５．粗製物２０−９の混合物に、室温でノルフロキサシン（２３０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物２０−１１を得た。（収率：６０％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８５０．５［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３６３】
工程６．化合物２０−１１に０℃でＴＦＡ及びＤＣＭ（１：１）の溶液を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。混合物をＮＨ３・Ｈ２ＯでｐＨ＝９に塩基性化した。残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、実施例２０（収率：３０％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6)
δ 10.26(s, 1H), 9.43(HCOOH), 8.97(d, J=7.6Hz, 1H), 7.99-7.89(m, 6H), 7.67-7.65(m, 2H), 7.39-7.33(m, 2H), 7.23-7.21(m, 1H), 5.06(s, 2H), 4.72-4.60(m, 2H), 4.40(s, 1H), 3.80-3.55(m, 6H), 3.31(s, 4H), 3.15-3.12(m, 2H), 2.76-2.73(m, 2H), 2.48-2.41(m, 2H), 1.81-1.69(m, 4H), 1.59-1.55(m, 2H), 1.43-1.34(m, 5H), 1.07-0.98(m, 3H).
【０３６４】
実施例２１．  （Ｓ）−７−（４−（（４−（５−アミノ−２−（１−（エチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）ペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000097
2017504606.tif 000098
【０３６５】
工程１．２１−１（１０．０ｇ、０．０６ｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３００ｍＬ）中溶液に、Ｃｕ２（ＯＨ）２ＣＯ３（２４．０ｇ、０．１２ｍｏｌ）を加えた。混合物を１００℃で１時間撹拌した後、これを素早く濾過した。Ｎａ２ＣＯ３（２０．０ｇ、０．１８ｍｏｌ）を濾液に加えた。これを室温で２０分間撹拌した後、ＡｌｌｏｃＣｌ（１２．０ｇ、０．１０ｍｏｌ）を室温で滴下し、室温で３時間撹拌した。混合物を濾過し、Ｈ２Ｏで洗浄し、次いでエタンチオアミド（７．５ｇ、０．１０ｍｏｌ）を加えた。これを５０℃で３時間撹拌した後、ＨＣｌ（水溶液）を加えてｐＨ＝３−４に調節した。混合物を１時間加熱還流した。熱混合物を濾過した後、白色固体が沈殿するまで濾液を濃縮した。これを室温に冷却し、濾過して、２１−２を白色固体として得た（４．５ｇ、３５％）
【０３６６】
工程２．２１−２（１．０ｇ、４．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（１．９ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）及び化合物２１−３（１．２ｇ、４．６ｍｍｏｌ）を加えた。これを１００℃で４時間撹拌した後、混合物を室温に冷却した。水（１００ｍＬ）を加え、続いてＨＣｌ（水溶液）を加えてｐＨ＝２−３に調節した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、粗製物２１−４を茶褐色固体として得た（１．３ｇ、粗製物）。
【０３６７】
工程３．２１−４（１．２ｇ、３．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、ＥＥＤＱ（１．１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）及び（４−アミノフェニル）メタノール（７５０ｍｇ、６．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌した後、水（５０ｍＬ）を加えた。混合物をＤＣＭ（６０ｍＬ×２）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：２０）により精製して、２１−５を黄色油状物として得た（５００ｍｇ、３０％）。
【０３６８】
工程４．２１−５（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（６５０ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）及びＰＮＰカーボネート（３２０ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去し、残留物をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（４００ｍｇ、３．０ｍｏｌ）及びノルフロキサシン（３８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１００℃で５時間撹拌し、次いで室温に冷却した。飽和したＮａＣｌ（１００ｍＬ）を加え、濾過して、粗生成物を黄色固体として得た（３００ｍｇ、ＭＳ＝８２０．２、Ｍ＋１）。
【０３６９】
上記粗生成物（３００ｍｇ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（８０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び１、３−ジメチルピリミジン−２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）−トリオン（１．０ｇ、６．４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下５０℃で１６時間撹拌し、室温に冷却した。混合物を濾過し、濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２１（２４ｍｇ、８％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10,37(s, 1H), 8.94(s, 1H), 7.94-7.89(m, 6H), 7.65-7.63(d, J=8.4Hz, 2H), 7.37-7.31(m, 2H), 7.19(d, J=7.6Hz, 1H), 5.04(s, 2H), 4.63-4.54(m, 2H), 4.47-4.41(m, 1H), 3.68-3.53(m, 6H), 3.29(s, 4H), 3.14-3.08(m, 2H), 2.80-2.77(m, 2H), 2.48-2.42(m, 2H), 1.88-1.63(m, 6H), 1.48(t, J=6.8Hz, 3H), 1.05-0.95(t, J=7.2Hz, 3H).
【０３７０】
実施例２２．  ７−（４−（（４−（２−（３−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）イソオキサゾール−５−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000099
2017504606.tif 000100
【０３７１】
工程１．化合物２２−１（５０．０ｇ、０．４３ｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（９０．０ｇ、０．８５ｍｏｌ）のＴＨＦ及びＨ２Ｏ（３００ｍＬ／３００ｍＬ）中懸濁液に、０℃でＣｂｚＣｌ（８４．０ｇ、０．４９ｍｏｌ）をゆっくり加えた。反応混合物を室温に加温し、室温で１６時間撹拌した。有機溶媒を除去し、水溶液をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。水溶液を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ＝２に酸性化し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×２）で抽出した。混合した有機層をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗製物２２−２を白色固体として得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０３７２】
工程２．化合物２２−２（２０ｇ、７９．６ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２００ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（３５ｇ、９２．１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２８ｇ、２１７ｍｍｏｌ）を加えた。これを室温で１５分間撹拌した後、Ｎ−メトキシメタンアミン塩酸塩（１１ｇ、１１２．８ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を３時間撹拌した後、これを１Ｍ  ＨＣｌ、飽和したＮａＨＣＯ３及びブラインで洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、化合物２２−３（１２ｇ、５１．２％）を得た。
【０３７３】
工程３．ＤＩＢＡＬ−Ｈ（３０ｍＬ、トルエン中１Ｍ）を、Ｎ２下−７８℃で化合物２２−３（４ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中溶液に滴下した。溶液を−７８℃で６時間撹拌した後、これをＭｅＯＨ（１００ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）でクエンチした。懸濁液を濾別し、濾液をＮａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を除去し、残留物をシリカゲルカラム上で精製して、化合物２２−４を無色油状物として得た（１．１ｇ、３４．４％）。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 9.65(s, 1H), 7.37-7.32(m, 5H), 5.35-5.33(m, 1H), 5.12(s, 2H), 4.38-4.32(m, 1H), 2.36-2.28(m, 1H), 1.05-1.03(d, J=7.2Hz, 3H), 0.95(d, J=6.8Hz, 3H).
【０３７４】
工程４．化合物２２−４（１１０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中溶液に、酢酸ナトリウム（５７．５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（４９ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を８０℃で１６時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を水に溶解し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×２）で抽出した。混合した有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮して、化合物２２−５を白色固体として得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.97(s, 0.6H), 10.73(s, 0.3H), 7.49-7.45(m, 1H), 7.39-7.29(m, 5H), 7.18(d, J=7.2Hz, 0.3H), 6.54(d, J=6.8Hz, 0.6H), 5.02(s, 2H), 4.63-4.58(m, 0.6H), 3.88-3.82(m, 0.3H), 1.89-1.78(m, 1H), 0.84(q, J=6.8Hz, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２５１．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３７５】
工程５．化合物２２−５（８００ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、ＮＣＳ（４７０ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を４０℃で１時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）で希釈した。有機層を分離し、ブライン（３０ｍＬ×５）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して化合物２２−６を得、これを次の工程に直接使用した。
【０３７６】
工程６．化合物２２−７（１６８ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、０℃でＴＥＡ（２４０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。これを３０分間撹拌した後、化合物２２−６（１．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液をゆっくり加えた。反応混合物を室温に加温し、室温で１６時間撹拌した。水を反応混合物に加え、層を分離し、水層をＤＣＭ（２０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲルカラム上で精製して、化合物２２−８を淡黄色固体として得た（１５０ｍｇ、３９．３％）。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.34-7.31(m, 5H), 6.09(s, 1H), 5.41(d, J=8.0Hz, 1H), 5.14-5.06(m, 2H), 4.96(d, J=6.4Hz, 1H), 4.78-4.74(q, J=9.2Hz, 1H), 2.17-2.08(m, 1H), 1.55(d, J=6.8Hz, 3H), 1.03(d, J=6.8Hz, 3H), 0.96-0.91(t, J=9.6Hz, 6H).
【０３７７】
工程７．化合物２２−８（１ｇ、３．１４ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、０℃でＭｓＣｌ（５ｇ、４３．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に加温し、室温で３時間撹拌した。水を反応混合物に加え、層を分離し、水層をＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラム上で精製して、化合物２２−９を無色油状物として得た（１．２ｇ、９６．４％）。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.36-7.33(m, 5H), 6.26(s, 1H), 5.82-5.77(q, J=13.6Hz, 1H), 5.32-5.31(d, J=8.8Hz, 1H), 5.14-5.08(m, 2H), 4.80-4.77(m, 1H), 3.00(s, 3H), 2.20-2.12(m, 1H), 1.79-1.77(d, J=6.8Hz, 3H), 0.97-0.93(q, J=10Hz, 6H).
【０３７８】
工程８．ＣｓＦ（６９０ｍｇ、４．５４ｍｍｏｌ）を含むフラスコをＮ２でパージし、ＴＭＳＣＮ（７５０ｍｇ、７．５７ｍｍｏｌ）及び無水ＤＭＦ（２．５ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１５分間撹拌し、淡黄色懸濁液が生成した。化合物２２−９（６００ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液を加えた。混合物をＮ２下５０℃で１６時間撹拌した後、水（５０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加え、層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。混合した有機層をＮａＨＣＯ３水溶液、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物２２−１０（６０ｍｇ、１２．１％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.37-7.33(m, 5H), 6.22(s, 1H), 5.28-5.26(m, 1H), 5.15-5.08(m, 2H), 4.80-4.76(m, 1H), 4.12-4.06(m, J=14.8Hz,1H), 2.19-2.14(m, 1H), 1.74-1.70(d, J=7.2Hz, 3H), 0.98-0.93(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３２７．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３７９】
工程９．化合物２２−１０（５００ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、ＮａＯＨ水溶液（４Ｍ、５ｍＬ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した後、有機溶媒を除去し、水層をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈した。層を分離し、水層を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ＝２に酸性化した。これをＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×２）で抽出した。混合した有機層をブラインで洗浄し、乾燥し、濃縮して粗製の化合物２２−１１を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０３８０】
工程１０．ＥＥＤＱ（３００ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を、Ｎ２下０℃で化合物２２−１１（２２０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）及び（４−アミノフェニル）メタノール（１５５ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物を室温に加温し、Ｎ２下室温で１時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣ分離により精製して、２２−１２及び２２−１３を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD-d4) δ 7.49-7.47(d, J=8.4Hz, 2H), 7.27-7.23(m, 7H), 6.23(s, 1H), 5.05-4.97(m, 2H), 4.48(s, 3H), 4.00-3.94(q, J=14.0Hz, 1H), 2.04-1.95(m, 1H), 1.52  1.51(d, J=7.2Hz, 3H), 0.91-0.90(d, J=6.8Hz, 3H), 0.82-0.80(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４７３．９［Ｍ＋Ｎａ＋］、４９７．０［Ｍ＋２Ｎａ＋］。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.54-7.52(d, J=8.4Hz, 2H), 7.31-7.29(m, 7H), 6.29(s, 1H), 5.05(s, 2H), 4.55(s, 3H), 4.05-4.00(m, 1H), 2.10-2.00(m, 1H), 1.58-1.56(d, J=7.2Hz, 3H), 0.97-0.96(d, J=6.8Hz, 3H), 0.87-0.85(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４７３．８［Ｍ＋Ｎａ＋］、４９６．９［Ｍ＋２Ｎａ＋］。
【０３８１】
工程１１．２２−１２又は２２−１３（３０ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（４０．４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を２０時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ）及びノルフロキサシン（６３．５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２２を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.32(s, 1H), 10.37(s, 1H), 8.97(s, 1H), 7.97-7.94(d, J=13.2Hz, 1H), 7.83-7.81(d, J=10.8Hz, 1H), 7.62-7.60(d, J=8.4Hz, 2H), 7.37-7.21(m, 8H), 6.34(s, 1H), 5.07-5.01(m, 4H), 4.60-4.56(m, 2H), 4.47-4.43(m, 1H), 4.08-4.03(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.33(s, 4H), 1.97-1.92(m, 1H), 1.49-1.47(d, J=7.2Hz, 3H), 1.43-1.39(t, J=7.2Hz, 3H), 0.91-0.90(d, J=4.8Hz, 3H), 0.77-0.76(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７９７．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３８２】
実施例２３．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチル−２−オキソピロリジン−１−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000101
2017504606.tif 000102
【０３８３】
工程１．Ｌ−アラニン２３−１（１８ｇ、０．２ｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）中溶液に、炭酸ナトリウム（３２ｇ、０．３０ｍｏｌ）を加えた。溶液は澄み、０℃に冷却した。ＴＨＦ（２００ｍＬ）中のＣｂｚＣｌ（４０ｇ、２３５ｍｍｏｌ）を、温度を５℃未満に維持しながら１時間で加えた。これを室温で更に３時間撹拌した後、溶液をＥｔＯＡｃで洗浄した。次いで水溶液を酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、化合物２３−２を得た。
【０３８４】
工程２．塩化チオニル（３．２７ｍＬ、４４．８ｍｍｏｌ）を、０℃でＣＢｚ−Ｌ−アラニン２３−２（１０．０ｇ、４４．８ｍｍｏｌ）及びベンズアルデヒドジメチルアセタール（６．７３ｍｍｌ、４４．８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ中の撹拌混合物に加えた。これを３０分間撹拌した後、無水ＺｎＣｌ２（６．１１ｇ、４４．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で３時間撹拌し、次いで更に０．２当量のＺｎＣｌ２／ＳＯＣｌ２を加えた。次いで混合物を水（１０℃未満）でクエンチし、ＭＴＢＥ（１５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、シリカゲル上でのカラムにより精製して、化合物２３−４を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.41-7.39(m, 10H), 6.65(s, 1H), 5.18-5.16(m, 2H), 4.47-4.52(m, 1H), 1.63-1.57(m, 3H).
【０３８５】
工程３．化合物２３−４（１５．０ｇ、４８．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（８０ｍＬ）中溶液に、−７８℃でＬｉＨＭＤＳ（１Ｍ、６３ｍＬ）を１時間で滴下し、溶液を−７８℃で２０分間撹拌した。次いでヨウ化アリル（６．３ｍＬ、６８．９ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、反応物を−７８℃で３時間撹拌した。混合物を室温に加温し、更に１２時間撹拌した。混合物をエーテルで希釈し、ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１００ｍＬ）でクエンチした。混合物をエーテル（１５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、シリカゲル上でのカラムにより精製して、化合物２３−５（１５ｇ、８８％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.34-7.14(m, 9H), 6.82-6.81(m, 1H), 6.28-6.21(m, 2H), 5.62-5.56(m, 1H), 5.23-5.08(m, 2H), 5.01-4.84(m, 2H), 3.36-3.19(m, 1H), 2.50-2.45(m, 1H), 1.65(s, 2H), 1.62-1.60(m, 1H).
【０３８６】
工程４．溶液が青色に変色するまで、オゾンを−７８℃で化合物２３−５（７．８ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ中溶液に吹き込んだ。これが無色に変化するまでＮ２を溶液に吹き込み、次いでＭｅ２Ｓ（３３ｍＬ）を加え、−７８℃で１時間撹拌した。これを室温に加温した後、溶媒をエバポレートさせて、化合物２３−６を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 9.66(s, 1H), 7.42-7.16(m, 9H), 6.80-6.78(m, 2H), 6.57(s, 1H), 4.99-4.96(m, 1H), 4.86-4.83(m, 1H), 4.13-4.02(m, 1H), 3.10-3.05(m, 1H), 1.76(s, 3H).
【０３８７】
工程５．化合物２３−６（１．０ｇ、２．８３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、化合物２３−７（４３８ｍｇ、４．２４ｍｍｏｌ）、ＮａＣＮＢＨ３（２６３ｍｇ、４．２４ｍｍｏｌ）及びＮａＯＡｃ（１００ｍｇ）を加えた。酢酸を加えてｐＨを６．０に調節した。反応物をＮ２下室温で２４時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物をＤＣＭ（５０ｍＬ×２）で抽出し、１０％ＨＣｌ及び水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、カラムで精製して、化合物２３−８を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.37-7.29(m, 5H), 5.35(s, 1H), 5.11-5.03(m, 2H), 4.89-4.88(m, 1H), 3.71(s, 3H), 3.41-3.35(m, 2H), 2.45-2.43(m, 1H), 2.32-2.31(m, 1H), 1.47-1.39(m, 6H).
【０３８８】
工程６．化合物２３−８（３３４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ水溶液（４当量）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を水に溶解し、ＨＣｌ水溶液でｐＨ３．０に酸性化した。これをエーテル（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を混合し、乾燥し、濃縮して化合物２３−９を得、これを次の工程に直接使用した。
【０３８９】
工程７．化合物２３−９（３２０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、ＥＥＤＱ（２４７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び化合物２３−１０（１２３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で１時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣで精製して、２３−１１を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.55-7.52(m, 2H), 7.34-7.27(m, 7H), 5.05(s, 2H), 4.65-4.58(m, 1H), 4.54(s, 2H), 3.61-3.59(m, 2H), 2.60-2.45(m, 1H), 2.10-2.00(m, 1H), 1.56-1.54(m, 3H), 1.33(s, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４４８．１［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０３９０】
工程８．２３−１１（４２ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（２当量）及びＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）を加えた。溶液を１６時間加熱還流した。溶媒をエバポレートさせ、残留物を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）及びノルフロキサシン（４当量）を加えた。混合物を室温で３０分間撹拌し、溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２３を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.77(s, 1H), 7.91-7.88(m, 1H), 7.50-7.48(m, 2H), 7.25-7.23(m, 7H), 7.10-7.00(m, 1H), 5.02(s, 2H), 4.96(s, 2H), 4.61-4.42(m, 6H), 4.15-4.08(m, 1H), 3.62(s, 4H), 3.52-3.50(m, 2H), 2.50-2.40(m, 1H), 2.00-1.92(m, 1H), 1.47-1.41(m, 6H), 1.27(s, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７７１．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３９１】
実施例２４．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−１，１，１−トリフルオロ−４−メチルペンタン−２−イルアミノ）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000103
2017504606.tif 000104
【０３９２】
工程１．化合物２４−１（９．９３ｇ、３５．２８ｍｍｏｌ）及び２−メチルプロパン−２−スルフィンアミド（４．２８ｇ、３５．２８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液に、０℃でＴｉ（ＯＥｔ）４（３２．１９ｇ、１４１．１２ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を２５℃で１６時間撹拌した後、水（２５ｍＬ）を０℃で滴下した。混合物を濾過し、濾液をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。溶媒を除去して、粗生成物２４−２（１１ｇ、８１．１％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３８５．３［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３９３】
工程２．ＴＭＳＣＦ３（３．５５ｇ、２４．９６ｍｍｏｌ）を、−７８℃で２４−２（６．４ｇ、１６．６４ｍｍｏｌ）及びＴＭＡＦ（１．８６ｇ、１９．９７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に滴下した。溶液を−７８℃で２時間撹拌した後、これを水（２ｍＬ）でゆっくりクエンチし、次いで水（５０ｍＬ）で希釈した。混合物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を濃縮し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、２４−３（３．３ｇ、４４％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.37-7.20(m, 10H), 4.21-4.11(m, 1H), 3.98-3.93(m, 3H), 3.65-3.61(m, 2H), 2.88-2.85(m, 1H), 2.29-2.20(m, 1H), 1.22(s, 9H), 1.13-1.11(m, 3H), 0.95-0.91(m, 3H).
【０３９４】
工程３．２４−３（３．３ｇ、７．２６ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ中４Ｍ  ＨＣｌ（２５ｍＬ）の混合物を２５℃で６時間撹拌した。溶媒を除去して、２４−４の粗生成物（２．８ｇ）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３５１．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３９５】
工程４．２４−４（９００ｍｇ、２．５７ｍｍｏｌ）、２−オキソプロパン酸（９０５ｍｇ、１０．２８ｍｍｏｌ）及びＨＯＡｃ（６１７ｍｇ、１０．２８ｍｍｏｌ）のＤＣＥ（１２ｍＬ）中溶液に、２５℃でＮａＢＨ（ＡｃＯ）３（２．１８ｇ、１０．２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で１６時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製して、２４−５（７００ｍｇ、６４．５％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４２３．３［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３９６】
工程５．２４−５（７００ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＳＯＣｌ２（３９５ｍｇ、３．３２ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を５０℃で１６時間撹拌した後、これを２５℃に冷却し、溶媒を減圧下に除去して、２４−６の粗生成物（６２０ｍｇ、粗製物）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４３７．３［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３９７】
工程６．２４−６（５２０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）及びＢｏｃ２Ｏ（２６０ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（８ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を加えた。混合物をＨ２下２５℃で１６時間撹拌した後、これを濾過し、溶媒を除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ５：１）により精製して、２４−７（３９０ｍｇ、９２％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３５７．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３９８】
工程７．２４−７（３９５ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、ＭｅＯＨ中４Ｍ  ＨＣｌ（５ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２５℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をＤＣＭ（８ｍＬ）に溶解した。ＣｂｚＣｌ（２７６ｍｇ、１．６２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（２１９ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、混合物を２５℃で６時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＴＬＣにより精製して、化合物８（１１０ｍｇ、２６％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：３９１．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０３９９】
工程８．化合物８（１１０ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（０．５ｍＬ：０．５ｍＬ：０．５ｍＬ）中溶液に、２５℃でＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（４２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２５℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を水（３ｍＬ）で溶解した。水溶液を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ２に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、化合物９（１００ｍｇ、９４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：３７７．１ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４００】
工程９．２４−９（１２０ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）及び（４−アミノフェニル）メタノール（７９ｍｇ、０．６３８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下０℃でＥＥＤＱ（１５８ｍｇ、０．６３８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で６時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＴＬＣ、次いでＳＦＣ分離により精製して、主要な異性体（７２ｍｇ）２４−１０及び少量の異性体（２６ｍｇ）を得た。各異性体の絶対配置は決定されていない。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.65-7.63(m, 2H), 7.37-7.27(m, 7H), 5.14-5.07(m, 2H), 4.56(s, 2H), 3.81-3.79(m, 1H), 3.59-3.57(m, 1H), 3.37-3.35(m, 1H), 2.11-2.10(m, 1H), 1.33(d, J=6.8Hz, 3H), 0.93(d, J=6.8Hz, 3H), 0.87(d, J=6.4Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：４８２．２ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４０１】
工程１０．２４−１０（２０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５ｍＬ）中溶液に、２５℃でＰＮＰカーボネート（３８ｍｇ、０．１２５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２１ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で１８時間加熱した。溶媒を除去し、残留物をＤＭＦ（１．５ｍＬ）に溶解した。ノルフロキサシン（２０ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２５℃で２時間撹拌した。混合物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２４（１１．２ｍｇ、３３％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.86(s, 1H), 8.41(s, 1H), 8.1-7.94(m, 1H), 7.70-7.68(m, 2H), 7.37-7.09(m, 9H), 5.13-5.09(m, 4H), 4.89-4.86(m, 2H), 3.80-3.57(m, 6H), 3.38-3.28(m, 3H), 2.20-2.07(m, 1H), 1.52(s, 3H), 1.33(t, J=6.8Hz, 3H), 0.937(d, J=6.8Hz, 3H), 0.87(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：８２７．３ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４０２】
実施例２５．  ７−（４−（（４−（（２Ｓ，５Ｒ）−５−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２，６−ジメチル−４−オキソヘプタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000105
2017504606.tif 000106
【０４０３】
工程１．化合物２５−１（２ｇ、１７．０７ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（７．０６６ｇ、５１．２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５０ｍＬ）中溶液に、臭化ベンジル（８．７ｇ、５１．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５時間加熱還流した後、固体を濾別し、濾液を減圧下に濃縮し、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：１０）により精製して、２５−２（３．５２ｇ、５８．１％）を得た。
【０４０４】
工程２．ジメチルメチルホスホネート（６．７８ｇ、５４．７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液に、−７８℃でＬＤＡ（２ｍｏｌ／Ｌ、２７ｍＬ）を１時間かけて滴下した。これを−７８℃で１時間撹拌した後、２５−２（３．５２ｇ、９．１２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液を−７８℃で滴下した。混合物を１時間撹拌し、これをＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、濃縮して、２５−３の粗生成物を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した（３．１２ｇ、８４．９％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４０３．９［Ｍ＋Ｈ＋］、４２５．９［Ｍ＋Ｎａ＋］
【０４０５】
工程３．２５−３（３．１２ｇ、７．７５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液に、０℃で水素化ナトリウム（３７２ｍｇ、９．３ｍｍｏｌ、６０％）を加えた。これを０℃で３０分間撹拌した後、２−オキソ−プロピオン酸エチルエステル（１．３４９ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液を滴下した。混合物をＮ２下室温で１６時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、２５−４（２．８５ｇ、９３．６％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３９４．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４０６】
工程４．２５−４（２．８５ｇ、７．３ｍｍｏｌ）及び硫酸（７５０ｍｇ、７．３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（６０ｍＬ）中溶液に、１０％パラジウム担持活性炭（１ｇ）を加えた。これを水素下６時間撹拌した後、反応混合物をセライトのパッドに通して濾過し、濃縮して、所望の生成物２５−５（３．６５ｇ、１００％）を得た。
【０４０７】
工程５．２５−５（３．６５ｇ、７．３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２．２１ｇ、２１．９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１５０ｍＬ）中溶液に、氷浴中でＣｂｚＣｌ（１．３６ｇ、８．０３ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。混合物を室温で２時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮して、粗生成物２５−６を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３５０．２［Ｍ＋Ｈ＋］、３７２．２［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０４０８】
工程６．２５−６（１．６ｇ、４．５８ｍｍｏｌ）のＨ２ＯとＴＨＦとの混合物（４０ｍＬ、１：３）中溶液に、水酸化リチウム水和物（１．９３ｇ、４５．８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮して、粗生成物２５−７（１．４３ｇ、９７．３％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３４４．１［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０４０９】
工程７．化合物２５−７（１．０ｇ、３．１１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、ＥＥＤＱ（１．５２ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）及び２５−８（７６５ｍｇ、６．２２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下０℃で１６時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、２５−９、２５−１０、２５−１１及び２５−１２を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.49(d, J=8.8Hz, 2H), 7.35-7.25(m, 7H), 5.06(s, 2H), 4.53(s, 2H), 4.12(d, J=5.6Hz, 1H), 3.07-3.92(m, 2H), 2.62-2.57(m, 1H), 2.26-2.21(m, 1H), 1.18(d, J=6.8Hz, 3H), 0.95(d, J=6.8Hz, 3H), 0.81(d, J=6.8Hz, 3H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４２７．２［Ｍ＋Ｈ＋］、４４９．１［Ｍ＋Ｎａ＋］、４０９．２［Ｍ−ＯＨ］。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.49(d, J=8.8Hz, 2H), 7.33-7.20(m, 7H), 5.07(s, 2H), 4.53(s, 2H), 4.12(d, J=5.6Hz, 1H), 3.28-2.92(m, 2H), 2.63-2.57(m, 1H), 2.27-2.19(m, 1H), 1.18(d, J=6.8Hz, 3H), 0.95(d, J=6.8Hz, 3H), 0.81(d, J=6.8Hz, 3H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４２７．２［Ｍ＋Ｈ＋］、４４９．１［Ｍ＋Ｎａ＋］、４０９．２［Ｍ−ＯＨ］。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.41(d, J=6.8Hz, 2H), 7.39-7.16(m, 7H), 5.03-4.96(m, 2H), 4.47(s, 2H), 3.89(d, J=6.4Hz, 1H), 2.93-2.82(m, 2H), 2.49-2.43(m, 1H), 2.10-2.05(m, 1H), 1.07(d, J=6.8Hz, 3H), 0.82(d, J=6.8Hz, 3H), 0.77(d, J=6.8Hz, 3H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４２７．２［Ｍ＋Ｈ＋］、４４９．１［Ｍ＋Ｎａ＋］、４０９．２［Ｍ−ＯＨ］。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.02(d, J=18.8Hz, 2H), 7.79-7.29(m, 7H), 5.16-5.08(m, 2H), 4.56(s, 2H), 4.01(d, J=6.0Hz, 1H), 3.32-2.94(m, 2H), 2.60-2.55(m, 1H), 2.24-2.12(m, 1H), 1.19(d, J=6.8Hz, 3H), 0.95-0.88(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４０９．０［Ｍ−ＯＨ］。
【０４１０】
工程８．２５−９（１００ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（１４７ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（６１ｍｇ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（６１ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（１５０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２５を白色固体として得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.33(s, 1H), 10.01(s, 1H), 8.96(s, 1H), 7.94(d, J=12.8Hz, 1H), 7.72(d, J=8.0Hz, 1H), 7.58(d, J=8.4Hz, 2H), 7.37-7.30(m, 7H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 5.05-5.04(m, 4H), 4.59-4.58(m, 2H), 3.84-3.80(m, 1H), 3.61(s, 4H), 2.94-2.89(m, 2H), 2.12-2.05(m, 1H), 1.42-1.39(m, 3H), 1.07(d, J=6.0Hz, 3H), 0.82(d, J=6.4Hz, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７７２．６［Ｍ＋Ｈ＋］、３８６．７［Ｍ／２＋Ｈ＋］。
【０４１１】
実施例２６．  ７−（４−（（４−（２−（５−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０４１２】
工程１．２６−１（１０．０ｇ、７８．７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１８０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１８０ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１６．９ｇ、３９３．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した後、これを濃ＨＣｌでｐＨ＝６に酸性化した。次いで粗製物を（２００ｍＬ×３）で抽出し、濃縮して、２６−２を得た。
【０４１３】
工程２．２６−２（２ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２４７ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４００ｍＬ）中の撹拌された溶液に、２６−３（５．８９ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（４．２６ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で２時間撹拌した後、これを水（２００ｍＬ×３）、ブライン（１００ｍＬ）で順次洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、２６−４を得た。
【０４１４】
工程３．２６−４（３ｇ、８．７ｍｍｏｌ）及びバージェス試薬（３．１ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中混合物を、室温で２４時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、２６−５を得た。
【０４１５】
工程４．２６−５（１．６７ｇ、５．０９ｍｍｏｌ）とＮａＯＨ（６６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（６６ｍＬ）及びＨ２Ｏ（６６ｍＬ）中溶液との混合物を８０℃で１２時間加熱した。これを室温に冷却した後、混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で洗浄し、水層をｐＨ５−６に調節し、ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、２６−６を得た。
【０４１６】
工程５．２６−６（１．４７ｇ、４．２３ｍｍｏｌ）、２６−７（１．５６ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（３．１４ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中混合物を、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、２６−８及び２６−９を得た。
【０４１７】
工程６．２６−８（４０ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）、ＰＮＰ（５７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中混合物を、５０℃で１２時間撹拌した。これを濃縮し、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のノルフロキサシン（８２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３４ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）と混合した。これを室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２６（３０．５ｍｇ、４３．６％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.33(s, 1H), 10.44(s, 1H), 8.97(s, 1H), 8.12-8.08(m, 1H), 7.95(d, J=13.2Hz, 1H), 7.58(d, J=8.4Hz, 2H), 7.37-7.34(m, 7H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 5.05(d, J=14.8Hz, 4H), 4.59-4.58(m, 3H), 4.19-4.17(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.38(s, 4H), 2.10-2.07(m, 1H), 1.58(dd, J=2.0, 7.2Hz, 3H), 1.40(t, J=6.8Hz, 3H), 0.93(d, J=6.8Hz, 3H), 0.82(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７９８．３［Ｍ＋Ｈ＋］、８２０．２［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０４１８】
実施例２７．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（２−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）チアゾール−５−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000109
2017504606.tif 000110
【０４１９】
工程１．２７−１（８ｇ、３１．８ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６．４３ｇ、６３．６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液に、−７８℃でクロロギ酸エチル（３．４５ｇ、３１．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液を滴下した。反応物を−７８℃で１時間撹拌した後、ＮＨ３・Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）を加えた。反応物を２時間かけて室温に加温した。白色固体を濾取し、乾燥して、２７−２（５．１ｇ、６３．８％）を得た。
【０４２０】
工程２．２７−２（３ｇ、１２ｍｍｏｌ）及びローソン試薬（９．７ｇ、２４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液を、７０℃で１６時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をカラム（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３）により精製して、２７−３（２．９ｇ、９０．６％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２６７．１［Ｍ＋Ｈ＋］、２８９．１［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０４２１】
工程３．２７−３（３ｇ、１１．２６ｍｍｏｌ）、ＫＨＣＯ３（３．３８ｇ、３３．８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＥ（４０ｍＬ）中溶液に、２７−３ａ（１１．３１ｇ、２２．５２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中溶液を滴下した。反応物を−４０℃で１６時間撹拌した後、水（５０ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を加え、有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。粗製の中間体及び２、６−ジメチルピリジン（３．３ｇ、３０．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中混合物に、−４０℃で無水２，２，２−トリフルオロ酢酸（３．２ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくり滴下した。反応物を−１０℃で２時間撹拌した後、水（１００ｍＬ）及びＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を加えた。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製して、２７−４（２ｇ、６７．７％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３９１．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４２２】
工程４．２７−４（２ｇ、５．１３ｍｍｏｌ）のＣＨ３ＯＨとＨ２Ｏとの混合物（６０ｍＬ／２０ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム（２．１５ｇ、５１．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、ｐＨを希薄ＨＣｌ（５％）で５に調節し、混合物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮して、２７−５を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３６３．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４２３】
工程５．２７−５（１ｇ、２．７６ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（７５０ｍｇ、５．５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中溶液に、０℃で（４−アミノフェニル）メタノール（６８０ｍｇ、５．５２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で２時間、次いで室温で１６時間撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮し、分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、２７−６及び２７−７（各３７０ｍｇ、２８．７％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.55(d, J=8.4Hz, 2H), 7.36-7.29(m, 8H), 5.11(s, 2H), 4.80(d, J=6.8Hz, 1H), 4.56(s, 2H), 4.07-4.01(m, 1H), 2.33-2.25(m, 1H), 1.60(d, J=6.8Hz, 3H), 0.96-0.91(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４６８．０［Ｍ＋Ｈ＋］、４９０．２［Ｍ＋Ｎａ＋］。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 8.90(s, 1H), 7.49-7.23(m, 9H), 7.05(s, 1H), 5.48-5.45(m, 1H), 5.14-5.10(m, 2H), 5.03-4.99(m, 1H), 4.61(s, 2H), 3.94-3.88(m, 1H), 2.42-2.34(m, 1H), 1.63(d, J=7.2Hz, 3H), 1.02-1.94(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４８９．９［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０４２４】
工程６．２７−６（５０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（６７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２８ｍｇ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（６０ｍｇ、０４７ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（６０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２７を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.34(s, 1H), 10.17(s, 1H), 8.97(s, 1H), 8.10(d, J=8.4Hz, 1H), 7.95(d, J=8.4Hz, 1H), 7.60(d, J=8.4Hz, 2H), 7.36-7.31(m, 7H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 5.05(s, 4H), 4.66-4.56(m, 3H), 4.03-3.97(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.35(s, 4H), 2.20-2.14(m, 1H), 1.47-1.39(m, 6H), 0.87-0.80(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８１３．１、［Ｍ＋Ｈ＋］、４０７．１［Ｍ／２＋Ｈ＋］。
【０４２５】
実施例２８．  ７−（４−（（４−（（Ｒ）−２−（（Ｓ）−６−（ベンジルオキシカルボニル）−７−イソプロピル−５−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアゾール−３−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000111
2017504606.tif 000112
【０４２６】
工程１．２８−１（１２ｇ、０．１ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中溶液に、０℃でＳＯＣｌ２（１０ｍＬ）を１０分で加えた。混合物を室温で１２時間撹拌した後、溶媒を除去して、所望の生成物２８−２を得た。
【０４２７】
工程２．２８−２（２．６ｇ、５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液にＴＥＡ（２ｍＬ）を加え、溶液が澄むまで０℃で撹拌した。次いでＣｂｚＣｌ（１０．２ｇ、６ｍｍｏｌ）を１時間で滴下し、５℃未満の温度で維持した。次いで混合物を室温で更に１０時間撹拌した。溶液をＤＣＭ（１００ｍＬ）で溶解し、ＨＣｌ水溶液、ＮａＨＣＯ３水溶液及び水で洗浄し、有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、次いで溶媒をエバポレートさせて、２８−３を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２６５．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４２８】
工程３．２８−３（２．６５ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２５ｍＬ）中溶液に、ＮＨ２ＮＨ２・Ｈ２Ｏ（５ｍＬ、８０％）を加えた。混合物を室温で６時間撹拌した後、固体を濾取して、２８−４を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.36-7.30(m, 5H), 5.07(s, 2H), 4.59(s, 1H), 3.84-3.82(m, 1H), 0.94-0.91(m, 6H).
【０４２９】
工程４．化合物２８−４（２．６５ｇ、１０ｍｍｏｌ）、２８−５（４．２ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）及び無水ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）を密封容器中１５０℃で２４時間加熱した。溶媒を除去して、所望の生成物２８−６を得た。
【０４３０】
工程５．２８−６（７４０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）及び水（１０ｍＬ）中溶液に、ＮａＯＨ（４００ｍｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で１時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をカラムにより精製して、２８−７を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.32-7.26(m, 5H), 5.10-5.05(m, 2H), 4.61-4.59(m, 1H), 3.94-3.92(m, 1H), 2.16-2.14(m, 1H), 1.55-1.53(m, 3H), 0.99-0.82(m, 6H).
【０４３１】
工程６．２８−７（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、（４−アミノフェニル）メタノール（２５０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（２４７ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、２８−８及び２８−９を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.57(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35-7.30(m, 7H), 5.13-5.05(m, 2H), 4.63(d, J=7.6Hz, 1H), 4.57(s, 2H), 4.07-4.02(m, 1H), 2.23-2.17(m, 1H), 1.66(d, J=7.2Hz, 3H), 0.98(d, J=6.8Hz, 3H), 0.87(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４５２．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.57(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35-7.30(m, 7H), 5.13-5.05(m, 2H), 4.63(d, J=7.6Hz, 1H), 4.57(s, 2H), 4.00-3.99(m, 1H), 2.19-2.17(m, 1H), 1.66(s, 3H), 0.98(d, J=5.6Hz, 3H), 0.87(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４７３．９［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０４３２】
工程７．２８−８（４５ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（６２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１ｍＬ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した後、溶媒を除去し、残留物をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（１．０ｍＬ）及びノルフロキサシン（６５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例２８を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8.97(s, 1H), 7.97-7.94(m, 2H), 7.48-7.23(m, 10H), 5.17(s, 2H), 5.04(s, 2H), 4.61-4.58(m, 2H), 4.50-4.40(m, 1H), 3.69-3.63(m, 4H), 3.40-3.35(m, 1H), 3.29-3.26(m, 4H), 2.09-2.08(m, 1H), 1.91-1.88(m, 2H), 1.41(t, J=7.2Hz, 3H), 0.96-0.89(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：８２３．３ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４３３】
実施例２９．  ７−（４−（（４−（（Ｒ）−２−（２−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）チアゾール−５−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000113
2017504606.tif 000114
実施例２９を実施例２７と同様の手順を用いて調製した。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.33(brs, 1H), 10.17(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.10(d, J=8.4Hz, 1H), 7.95(d, J=8.4Hz, 1H), 7.60(d, J=8.4Hz, 2H), 7.36-7.31(m, 7H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 5.05(s, 4H), 4.66-4.56(m, 3H), 4.03-3.97(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.35(s, 4H), 2.20-2.14(m, 1H), 1.47-1.39(m, 6H), 0.87-0.80(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８１３．１、［Ｍ＋Ｈ＋］、４０７．３［Ｍ／２＋Ｈ＋］。
【０４３４】
実施例３０．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−（ベンジルオキシカルボニル）−７−イソプロピル−５−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［５，１−ｃ］［１，２，４］トリアゾール−３−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000115
実施例３０を実施例２８と同様の手順を用いて調製した。
2017504606.tif 000116
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8.99(s, 1H), 8.14-7.93(m, 2H), 7.57-7.19(m, 10H), 5.19(s, 2H), 5.11-5.03(m, 2H), 4.62-4.56(m, 2H), 4.51-4.47(m, 1H), 3.67-3.57(m, 4H), 3.52-3.50(m, 1H), 3.40-3.35(m, 4H), 2.25-2.15(m, 1H), 1.90(s, 2H), 1.41(t, J=7.2Hz, 3H), 0.98-0.84(m, 6H).
【０４３５】
実施例３１．  ７−（４−（（４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２，６−ジメチル−４−オキソヘプタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000117
2017504606.tif 000118
工程１．実施例３１を実施例２５と同様の手順を用いて調製した。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.29(s, 1H), 9.98(s, 1H), 8.92(s, 1H), 7.90(d, J=13.2Hz, 1H), 7.57-7.54(m, 3H), 7.32-7.24(m, 7H), 7.17(d, J=7.6Hz, 1H), 5.05-4.97(m, 4H), 4.56-4.54(m, 2H), 3.95-3.92(m, 1H), 3.58(s, 4H), 3.26(s, 4H), 2.93-2.83(m, 2H), 2.57-2.52(m, 1H), 2.16-2.08(m, 1H), 1.45-1.35(m, 3H), 1.07(d, J=6.4Hz, 3H), 0.85(d, J=8.2Hz, 3H), 0.75(d, J=8.0Hz, 3H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７７２．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４３６】
実施例３２．  ７−（４−（（４−（（２Ｒ，５Ｒ）−５−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２，６−ジメチル−４−オキソヘプタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000119
工程１．実施例２５の合成からの中間体を用い、実施例３２を実施例２５と同様の手順を用いて調製した。
2017504606.tif 000120
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.30(s, 1H), 10.03(s, 1H), 8.97(s, 1H), 7.95(d, J=12.8Hz, 1H), 7.74(d, J=8.4Hz, 1H), 7.58(d, J=8.4Hz, 2H) 7.37-7.31(m, 7H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H) 5.09-5.02(m, 4H), 4.60-4.56(m, 2H), 3.84-3.80(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.34(s, 4H), 2.92-2.85(m, 2H), 2.12-2.08(m, 1H), 2.05(s, 1H), 1.42-1.39(m, 3H), 1.07(d, J=6.8Hz, 3H), 0.82(d, J=6.8Hz, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７７２．４［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４３７】
実施例３３．  ７−（４−（（４−（（２Ｒ，５Ｓ）−５−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２，６−ジメチル−４−オキソヘプタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000121
2017504606.tif 000122
工程１．実施例２５の合成からの中間体を用い、実施例３３を実施例２５と同様の手順を用いて調製した。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.34(s, 1H), 10.02(s, 1H), 8.97(s, 1H), 7.95(d, J=12.8Hz, 1H), 7.58(d, J=8.4Hz, 3H), 7.36-7.29(m, 7H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 5.08-5.00(m, 4H), 4.61-4.56(m, 2H), 3.99-3.95(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.31(s, 4H), 2.96-2.85(m, 2H), 2.50-2.47(m, 1H), 2.19-2.13(m, 1H), 1.42-1.39(m, 3H), 1.08(d, J=6.0Hz, 3H), 0.90(d, J=6.0Hz, 3H), 0.82(d, J=6.4Hz, 3H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７７２．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４３８】
実施例３４．  ７−（４−（（４−（２−（５−（（Ｒ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）−１，３，４−オキサジアゾール−２−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
実施例２６の合成からの中間体を用い、実施例３４を実施例２６と同様の手順を用いて調製した。
2017504606.tif 000123
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.32(s, 1H), 10.46(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.09(s, 1H), 7.94(d, J=13.2Hz, 1H), 7.58(d, J=8.0Hz, 2H), 7.36-7.33(m, 7H), 7.20(d, J=6.4Hz, 1H), 5.04(d, J=15.2Hz, 4H), 4.62-4.57(m, 3H), 4.22-4.21(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.35(s, 4H), 2.13-2.11(m, 1H), 1.58(d, J=5.6Hz, 3H), 1.40(t, J=6.8Hz, 3H), 0.93(d, J=6.0Hz, 3H), 0.81(d, J=6.4Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７９８．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４３９】
実施例３５．  ７−（４−（（４−（（２Ｓ，５Ｓ）−５−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−４−ヒドロキシ−２，６−ジメチルヘプタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000124
2017504606.tif 000125
工程１．実施例２５（１２０ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ３ＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、氷浴中ＮａＢＨ４（６ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例３５を固体として得た（４０ｍｇ）。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.33(s, 1H), 9.88(s, 1H), 8.96(s, 1H), 7.94(d, J=12.8Hz, 1H), 7.62(d, J=8.4Hz, 2H), 7.37-7.20(m, 8H), 6.95(d, J=10.0Hz, 1H), 5.05-4.99(m, 4H), 4.59-4.57(m, 3H), 3.61(s, 4H), 3.47-3.42(m, 1H), 3.30(s, 4H), 2.72-2.66(m, 1H) 2.07-2.04(m, 1H), 1.59-1.51(m, 2H), 1.45-1.35(m, 3H), 1.05(d, J=8.0Hz, 3H), 0.85-0.75(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３８７．７［Ｍ／２＋Ｈ＋］。
【０４４０】
実施例３６．  ７−（４−（（４−（２−（５−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000126
【０４４１】
工程１．２８−８（８０ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、１５℃でＢｏｃ２Ｏ（２３２ｍｇ、１．０６２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１０７ｍｇ、１．０６２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１５℃で１６時間撹拌した後、ＤＣＭを減圧下に除去し、残留物を石油エーテル（５ｍＬ×３）で洗浄した。得られた固体をＤＣＭ（３ｍＬ）に溶解し、ＰＮＰカーボネート（１０８ｍｇ、０．３５４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（９２ｍｇ、０．７０８ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１５℃で２時間撹拌した後、溶媒を減圧下に除去し、残留物をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解し、ノルフロキサシン（１７０ｍｇ、０．５３１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（９２ｍｇ、０．７０８ｍｍｏｌ）を加えた。これを１５℃で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例３６の混合物（３７ｍｇ、２６％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8.96(s, 1H), 7.95(d, J=13.2Hz, 1H), 7.60(d, J=8.4Hz, 2H), 7.34-7.20(m, 8H), 5.06-5.00(m, 4H), 4.59-4.41(m, 3H), 4.08-3.82(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.29(s, 4H), 2.15-2.07(m, 1H), 1.50-1.49(m, 3H), 1.40(t, J=7.2Hz, 3H), 0.88-0.87(m, 3H), 0.75-0.73(m, 3H).
【０４４２】
実施例３７．  ７−（４−（（４−（２−（５−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）イソオキサゾール−３−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000127
2017504606.tif 000128
【０４４３】
工程１．３７−１（５ｇ、４３．１ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（３．０２ｇ、４３．１ｍｍｏｌ）のピリジン（５０ｍＬ）中混合物を、７０℃で１６時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をＤＭＦ（３０ｍＬ）に溶解し、ＮＣＳ（５．７３ｇ、４３．１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物（３７−２）を精製せずに次の工程に直接使用した。
【０４４４】
工程２．３７−２（５ｇ、３０．２ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（２５０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、アスコルビン酸ナトリウム（１９８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、Ｎａ２ＣＯ３（１．１ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨとＨ２Ｏとの混合物（２０ｍＬ／２０ｍＬ）中混合物に、０℃で（１−イソプロピル−プロパ−２−イニル）−カルバミン酸ベンジルエステル（１．２ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃で１６時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、３７−３を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３６１．１［Ｍ＋Ｈ＋］
【０４４５】
工程３．３７−３（１５０ｍｇ、０．４１７ｍｍｏｌ）のＴＨＦとＨ２Ｏとの混合物（８ｍＬ／４ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム水和物（１４５ｍｇ、４．１７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を除去し、混合物をＥｔＯＡｃで洗浄した。これを酸性化した後、これをＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して粗生成物３７−４を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した（１２３ｍｇ、８４．８％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３４７．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４４６】
工程４．３７−４（１２３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及び（４−アミノフェニル）メタノール（８７ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中混合物に、０℃でＥＥＤＱ（１７４ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、３７−５（６３ｍｇ、３９．４％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.44-7.42(m, 2H), 7.23-7.19(m, 7H), 6.23(d, J=2.8Hz, 1H), 4.99-4.98(m, 2H), 4.58-4.54(m, 1H), 4.46(s, 2H), 3.90-3.85(m, 1H), 2.10-2.01(m, 1H), 1.45-1.43(m, 3H), 089-0.79(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４３４．１［Ｍ−ＯＨ］。
【０４４７】
工程５．３７−５（４０ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（５７ｍｇ、０．１７７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２３ｍｇ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（２３ｍｇ）及びノルフロキサシン（５４ｍｇ、０．１７８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例３７を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.30(s, 1H), 10.28(s, 1H), 8.93(s, 1H), 7.95-7.89(m, 2H), 7.57(d, J=8.8Hz, 2H), 7.35-7.12(m, 8H), 6.32(d, J=4.4Hz, 1H), 5.02(d, J=11.6Hz, 4H), 4.56-4.52(m, 3H), 3.97-3.91(m, 1H), 3.57(s, 4H), 3.29(s, 4H), 2.03-1.96(m, 1H), 1.41-1.35(m, 6H), 0.85-0.75(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７９７．３［Ｍ＋Ｈ＋］、３９９．３［Ｍ／２＋Ｈ＋］。
【０４４８】
実施例３８．  ７−（４−（（４−（２−（５−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）チアゾール−２−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000129
2017504606.tif 000130
【０４４９】
工程１．３８−１（４０ｇ、０．３４ｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下０℃でＳＯＣｌ２（２８ｍＬ、０．３８ｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１２時間撹拌した後、溶媒を除去して、粗生成物３８−２を得た。
【０４５０】
工程２．ＣｂｚＣｌ（５３ｍＬ、０．３７ｍｏｌ）を、３８−２（５７ｇ、０．３４ｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（７２ｇ、０．６８ｍｏｌ）の水（３００ｍＬ）中混合物に２０分かけて滴下した。混合物を室温で１２時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して粗生成物を得、これをシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）により精製して、化合物３８−３を得た。
【０４５１】
工程３．化合物３８−３（１０ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、ＣｌＣＨ２Ｉ（２６．６ｇ、１５１ｍｍｏｌ）を加えた。これを−７８℃に冷却した後、ＬＤＡを２時間でゆっくり加えた。これをＮ２下−７８℃で３０分間撹拌した後、ＴＨＦ中のＨＯＡｃ（２１ｍＬ、３７７ｍｍｏｌ）を−７０℃下に加えた。これを室温に加温し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）を加え、混合物をブラインに注ぎ入れた。これをＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）により精製して、化合物３８−４を得た。
【０４５２】
工程４．化合物３８−４（５ｇ、１７．６ｍｍｏｌ）及びＮａＮ３（１．８ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１時間撹拌した後、これを水に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮して、化合物３８−５の粗生成物を得た。
【０４５３】
工程５．化合物３８−５（４．８４ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中溶液に、ＳｎＣｌ・２Ｈ２Ｏ（７．５ｇ、３３．３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物（３８−６）を次の工程に直接使用した。
【０４５４】
工程６．化合物３８−６（３．７５ｇ、１４．２ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ３（１１．９３ｇ、１４２ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ２Ｏ（３．４１ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１５ｍＬ）及びジオキサン（１５ｍＬ）中混合物を、室温で１時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ×３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１から２：１）により精製して、化合物３８−７を得た。化合物３８−７（１．６ｇ、４．４３ｍｍｏｌ）とＭｅＯＨ中４Ｍ  ＨＣｌ（２０ｍＬ）との混合物を室温で１時間撹拌した後、これをエバポレートさせて化合物３８−６を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０４５５】
工程７．化合物３８−６（１．１７ｇ、４．４３ｍｍｏｌ）及び化合物３８−８（６４３ｍｇ、４．８７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、ＥＥＤＱ（１．３１ｇ、５．３１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物３８−９を得た。
【０４５６】
工程８．化合物３８−９（１ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下ローソン試薬（１．１８ｇ、２．９１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃で１時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物３８−１０を得た。
【０４５７】
工程９．化合物３８−１０（６３０ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１０５ｍｇ、２．５１ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を室温で１時間撹拌した後、これを濃ＨＣｌでｐＨ＝６に酸性化した。混合物を（５０ｍＬ×３）で抽出し、減圧下に濃縮して、化合物３８−１１を得た。
【０４５８】
工程１０．化合物３８−１１（４３８ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）、化合物３８−１２（４４６ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（６９０ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４６８ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（８９５ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物を、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、３８−１３（２００ｍｇ、３５．４％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.54(d, J=8.4Hz, 3H), 7.31-7.25(m, 7H), 5.06-5.04(m, 2H), 4.64(d, J=8.0Hz, 1H), 4.55(s, 2H), 4.21(m, 1H), 2.14-2.04(m, 1H), 1.63(d, J=6.8Hz, 3H), 0.99(d, J=6.8Hz, 3H), 0.89-0.86(m, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４６７．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４５９】
工程１１．３８−１３（５０ｍｇ、０．１０７ｍｍｏｌ）、ＰＮＰ（６５ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４１ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中混合物を、５０℃で１２時間撹拌した。これを濃縮し、ノルフロキサシン（１０２ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（４１ｍｇ、０．３２１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物に加えた。これを室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例３８（２４ｍｇ、２７．６％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.32(s, 1H), 10.40(s, 1H), 8.96(s, 1H), 7.96-7.88(m, 2H), 7.61(d, J=8.4Hz, 2H), 7.51(s, 1H), 7.36-7.20(m, 8H), 5.07(s, 2H), 5.02-5.00(m, 2H), 4.59-4.55(m, 3H), 4.24-4.22(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.32(s, 4H), 1.97-1.92(m, 1H), 1.52(d, J=6.8Hz, 3H), 1.40(t, J=6.8Hz, 3H), 0.92(d, J=6.0Hz, 3H), 0.79-0.77(m, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８１３．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４６０】
実施例３９．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−５−グアニジノペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０４６１】
工程１．化合物３９−１（１ｇ、４ｍｍｏｌ）、化合物３９−２（４５９ｍｇ、４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、０℃でＤＣＣ（９０８ｍｇ、４．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、化合物３９−３（収率：９０％）を得た。
【０４６２】
工程２．化合物３９−４（２ｇ、３．１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ／２０ｍＬ）中溶液に、４−アミノ−フェニル−メタノール（３９−６０）（５７０ｍｇ、４．６ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（１．５３２ｍｇ、６．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１／３）により精製して、化合物３９−６（２ｇ、収率：８６％）を得た。
【０４６３】
工程３．化合物３９−６（２ｇ、２．６５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、室温で化合物３９−７（１．３ｍＬ、１３．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これを濃縮し、ＭＴＢＥで洗浄し、濾過して、化合物３９−８（収率：８０％）を得た。
【０４６４】
工程４．化合物３９−８（６４０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中溶液に、化合物３９−３（６４０ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（３０４ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ３に酸性化した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機層を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１／２）により精製して、３９−９（５１０ｍｇ、収率：５５％）を得た。
【０４６５】
工程５．化合物３９−９（２００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）、ＰＮＰカーボネート（１５８ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＰＥＡ（１０１ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物に、室温でノルフロキサシン（１７０ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、化合物３９−１０（収率：２工程で３０％）を得た。
【０４６６】
工程６．化合物３９−１０（１００ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）に、０℃でＴＦＡとＤＣＭとの混合物（ＴＦＡ／ＤＣＭ＝１／５）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した後、これをＮＨ３・Ｈ２ＯによりｐＨ＝９に塩基性化した。残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、実施例３９（１３．８ｍｇ、１５％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８２６分、ＭＳ＝８５８．２［Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4 400MHz, δ 8.80(s, 1H), 8.55(s, 1H), 7.98(d, J=13.2Hz, 1H), 7.58(s, 2H), 7.36-7.27(m, 9H),7.15(m, 1H), 5.11(d, J=16.4Hz, 4H), 4.57-4.50(m, 4H), 3.94(d, J=7.2Hz, 1H), 3.71(m, 4H), 3.22(s, 2H), 2.07(d, J=6.8Hz, 1H), 1.95(s, 1H), 1.83-1.79(m, 1H), 1.70(d, J=1.6Hz, 2H), 1.51(s, 3H), 0.97-0.96(m, 6H).
【０４６７】
実施例４０．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（チオフェン−２−イル）プロパンアミド）ヘキサンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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2017504606.tif 000134
【０４６８】
工程１．化合物４０−１（１ｇ、５．８５ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（６ｍＬ）及びジオキサン（９ｍＬ）中混合物に、０℃でＫ２ＣＯ３（２．０２ｇ、１４．６３ｍｍｏｌ）及びＣｂｚ−Ｃｌ（１．２ｇ、７．０１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で洗浄した。水性相を１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２５ｍｌ×２）で抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮して、粗製の化合物４０−２を油状物として得た（１．５ｇ、収率：８４．３％）。
ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、０．９５４分、ＭＳ＝３０５．８［Ｍ＋１］、３２７．８［Ｍ＋Ｎａ＋］
1H NMR DMSO-d6 400MHz δ 7.65-7.63(d, J=8.0Hz, 1H), 7.37-7.29(m, 6H), 6.94-6.90(m, 2H), 5.01(s, 2H), 4.2-4.1(m, 1H), 3.31-3.27(m, 1H), 3.12-3.06(m, 1H).
【０４６９】
工程２．化合物４０−２（２．０ｇ、６．５５ｍｍｏｌ）、化合物４０−３（８２９．１５ｍｇ、７．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２５ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＣＣ（１．４９ｇ、７．２１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下室温で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、粗製の化合物４０−４を得、これを更には精製せずに次の工程に直接使用した（２．２ｇ、収率：８４．６％）。
ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、１．０４０分、ＭＳ＝４２４．８［Ｍ＋Ｎａ＋］
【０４７０】
工程３．化合物４０−５（５ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、シリンジにより室温でピペリジン（４．５ｇ、５２．８ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で３０分間撹拌した後、これを減圧下に濃縮し、残留物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）とＨ２Ｏ（５０ｍｌ）との間で分配した。水性相を濃縮して、粗製の化合物４０−６（２．０ｇ、７６％）を白色固体として得、これを次の工程に直接使用した。
【０４７１】
工程４．化合物４０−４（９８０ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中溶液に、化合物４０−６（５００ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（３７４ｍｇ、４．４６ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で洗浄し、水性相を１５％クエン酸溶液でｐＨ＝３に酸性化した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物４０−７を白色固体として得た（２００ｍｇ、１８．４％）。
ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、１．１２３分、ＭＳ＝４３４．１［Ｍ＋１−Ｂｏｃ＋］、５５６．１［Ｍ＋Ｎａ＋］
【０４７２】
工程５．化合物４０−７（３００ｍｇ、０．５６３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ／１０ｍＬ）中溶液に、４−アミノ−フェニル−メタノール（４０−８）（１０３．９ｍｇ、０．８４５ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（２０８．８２ｍｇ、０．８４５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これを濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：３）により精製して、化合物４０−９を白色固体として得た（２６０ｍｇ、収率：７２．３％）。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８８０分、ＭＳ＝５３９．０［Ｍ＋１−Ｂｏｃ＋］、６６１．０［Ｍ＋Ｎａ＋］
1H NMR CDCl3 400MHz, δ 8.51(s, 1H), 7.44(d, J=8Hz, 2H), 7.24-7.19(m, 6H), 7.05-7.03(m, 1H), 6.78-6.73(m, 3H), 5.52(d, J=3.2Hz, 1H), 5.03(s, 2H)，4.56(s, 2H)，4.46-4.39(m, 2H), 3.25(d, J=5.6Hz, 2H), 2.98(s, 2H), 1.87-1.83(m, 1H), 1.39(d, J=7.6Hz, 2H), 1.35(s, 9H), 1.25-1.17(m, 2H).
【０４７３】
工程６．化合物４０−９（２５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＰＮＰカーボネート（２３７．１４ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２５１．６ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物（４０−１１）を更には精製せずに次の工程に直接使用した。
【０４７４】
工程７．４０−１１の混合物に、室温でノルフロキサシン（２４９．１ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した後、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、粗製の化合物４０−１３（２２０ｍｇ、収率：５７．３％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．９６４分、ＭＳ＝４４２．６［１／２Ｍ＋１］、９８４．４［Ｍ＋１］
【０４７５】
工程８．化合物４０−１３（１２０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）に、室温でＤＣＭ：ＴＦＡの混合物（５：１、３ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した後、これをアンモニアでｐＨ＝７に調節し、次いで濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例４０（２９ｍｇ、収率：１６．９％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８２６分、ＭＳ＝８８４．３［Ｍ＋１］、４４２．８［１／２Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 10.23(s, 1H), 8.93(s, 1H), 8.44(s, 1H), 8.42(s, 0.5H, HCOOH), 7.92(d, J=13.2Hz, 1H), 7.93-7.61(m, 3H), 7.33-7.25(m, 8H), 7.20-7.16(m, 1H), 6.88-6.86(m, 2H), 5.63(s, 2H), 4.97(s, 2H), 4.58-4.53(m, 2H), 4.40-4.31(m, 1H), 4.30-4.19(m, 1H), 3.58(s, 4H), 3.28-3.19(m, 4H), 3.19-3.03(m, 2H), 3.04-2.96(m, 2H), 2.69-2.64(m, 2H), 1.73-1.67(m, 2H), 1.57-1.49(m, 2H), 1.47-1.34(m, 3H), 1.32-1.28(m, 2H).
【０４７６】
実施例４１．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アセトアミド−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０４７７】
工程１．水（１０ｍＬ）中の化合物４１−１（４７０．６ｍｇ、４ｍｍｏｌ）を６分間超音波処理した後、Ａｃ２Ｏを４分かけて加えた。混合物を濃縮し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、濾過し、濃縮して、粗製物４１−２を白色固体として得た（３５０ｍｇ、５５％）。
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 7.94-7.92(d, J=8.0 1H), 4.10-4.08(m, 1H), 2.01-1.99(m, 1H), 1.84(s, 1H), 0.83-0.80(m, 6H)
【０４７８】
工程２．化合物４１−２（１６０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びＨＯ−Ｓｕ（１２２ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、室温でＤＣＣ（２１８ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下室温で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液を濃縮して、４１−３（２４２ｍｇ、収率：９５％）を得た。
【０４７９】
工程３．化合物４１−３（２４２ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）、４１−４（２６５ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１５ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温で３時間撹拌した後、これを濾過し、分取ＨＰＬＣにより精製して、４１−５（７０ｍｇ、収率：１７．７％）を得た。
【０４８０】
工程４．化合物４１−５（６０ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（８７ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５６ｍｇ、０．４２７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。ノルフロキサシン（９１ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例４１（４０ｍｇ、収率：３７％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．７８４分、ＭＳ＝７６７．１［Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 9.96(s, 1H), 8.93(s, 1H), 8.10(d, J=7.6Hz, 1H), 7.92(d, J=12.4Hz, 1H), 7.86(d, J=8.8Hz, 1H), 7.58(d, J=8.4Hz, 2H), 7.31(d, J=8.8Hz, 2H), 7.18(d, J=7.2Hz, 1H), 5.96-5.94(m, 1H), 5.38(s, 2H), 5.03(s, 2H), 4.58-4.53(m, 2H), 4.38-4.32(m, 1H), 4.17-4.14(m, 1H), 3.58(s, 4H), 3.26(s, 4H), 3.00-2.91(m, 2H), 1.96-1.92(m, 1H), 1.86(s, 3H), 1.68-1.55(m, 2H), 1.38(m, 5H), 0.85-0.80(m, 6H).
【０４８１】
実施例４２．  ７−（４−｛４−［（Ｓ）−６−アミノ−２−（（Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−フェニル−プロピオニルアミノ）−ヘキサノイルアミノ］−ベンジルオキシカルボニル｝−ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸
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【０４８２】
工程１．４２−１（２００ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）溶液に、ＤＩＥＡ（０．１８ｍｌ、０．９９ｍｍｏｌ）を加え、次いでカルボノクロリド酸（４−ニトロフェニル）（１５０ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を、続いてピリジン（０．０３ｍｌ、０．３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２８℃で終夜撹拌した。混合物を濃縮乾固し、ＥｔＯＡｃ中に溶解し、飽和ＮＨ４Ｃｌ、ブラインにより洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。粗製物をエーテルで粉砕し、濾過して、明黄色固体４２−２（１９０ｍｇ、７９％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ９７０．７［Ｍ＋Ｈ＋］。
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【０４８３】
工程２．１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（５９ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）中懸濁液に、ＤＩＥＡ（０．１１ｍＬ、０．６２ｍｍｏｌ）を加え、次いで４２−２（１２０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を一度に加えると、反応が完結するまで、ゆっくり黄色溶液になった。反応混合物を氷水中に注ぎ入れ、ＤＣＭで抽出した。有機層を飽和したＮＨ４Ｃｌ、ブラインにより洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮して、４２−３（１４０ｍｇ、９９％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ１１５０．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
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【０４８４】
工程３．４２−３（１４５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍｌ）溶液にアニソール（０．０５ｍｌ、０．５０ｍｍｏｌ）を加え、氷浴に冷却し、次いでＴＦＡ（０．１ｍｌ、１．００ｍｍｏｌ）を滴下した。１０分後、反応は完結し、氷浴を除去した。反応混合物を濃縮乾固し、ＤＣＭ中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３／水、ブラインにより洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮した。粗製物をＤＣＭで粉砕し、濾過して、明黄色固体４２（３８ｍｇ、３４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８７８．７［Ｍ＋Ｈ＋］。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.13(s, 1H), 8.86(s, 1H), 8.26(s, 1H), 7.91(d, J=12.7Hz, 1H), 7.62(d, J=8.2Hz, 2H), 7.48(d, J=9.2Hz, 1H), 7.38-7.10(m, 13H), 5.07(s, 2H), 4.95(s, 2H), 4.51(s, 2H), 4.40(s, 1H), 4.33(s, 1H), 3.61(s, 4H), 3.03(d, J=12.2Hz, 2H), 1.69(d, J=15.5Hz, 3H), 1.39(t, J=6.8Hz, 8H).
【０４８５】
実施例４３．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（チオフェン−２−イル）プロパンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000141
2017504606.tif 000142
【０４８６】
工程１．化合物４３−１（１７８ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ）及び化合物４３−２（７９ｍｇ、０．６８８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、１０℃でＴＨＦ（０．５ｍＬ）中のＤＣＣ（１４９ｍｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１０℃で６時間撹拌した。固体を濾過し、溶媒を除去した。残留物をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。混合物を１時間静置し、濾過して、更にＤＣＵを除去した。濾液をエバポレートさせて、粗製の化合物４３−３（２４５ｍｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.21(d, J=5.2Hz, 1H), 7.02-6.96(m, 2H), 5.30-4.93(m, 1H), 3.54-3.40(m, 2H), 2.82(s, 4H), 1.44(s, 9H).
【０４８７】
工程２．化合物４３−３（２４５ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２ｍＬ）中溶液に、化合物４３−４（１７５ｍｇ、０．９９８ｍｍｏｌ）の水（２ｍＬ）中溶液を加えた。溶液を１０℃で１６時間撹拌した。飽和したＮａＨＣＯ３溶液（３ｍＬ）を加え、混合物をＤＣＭ（１５ｍＬ×２）で洗浄した。水層を１Ｍ  ＨＣｌ溶液でｐＨ３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗生成物４３−５（２７０ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４２９．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４８８】
工程３．化合物４３−５（２７０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ中ＨＣｌ（４Ｍ、５ｍＬ）中溶液を、１０℃で２時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、残留物をＨ２Ｏ／ＴＨＦ（容量／容量１：１．３ｍＬ）に溶解し、次いでＮａ２ＣＯ３（１３４ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）及びＣｂｚＣｌ（１６７ｍｇ、０．９７９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１０℃で２時間撹拌し、次いでＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（７９ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を１０℃で１時間撹拌した。有機溶媒を除去し、水溶液をＤＣＭ（１５ｍＬ×２）で洗浄した。水層を１Ｍ  ＨＣｌ溶液でｐＨ２に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗生成物（１８２ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４６３．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４８９】
工程４．化合物４３−６（１８０ｍｇ、０．３８９ｍｍｏｌ）及び（４−アミノフェニル）メタノール（１４４ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下ＥＥＤＱ（２８９ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３０℃で１６時間撹拌した。混合物を分取ＨＰＬＣにより精製して、４３−６（８０ｍｇ、３６％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.55-7.53(m, 2H), 7.32-7.27(m, 7H), 7.17-7.15(m, 1H), 6.88-6.84(m, 2H), 5.11-5.03(m, 2H), 4.55(s, 2H), 4.50-4.39(m, 2H), 3.38-3.36(m, 1H), 3.19-3.05(m, 3H), 1.89-1.50(m, 4H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５６８．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４９０】
工程５．４３−７（２０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、１０℃でＰＮＰカーボネート（２１ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１８ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１０℃で２４時間撹拌した後、ノルフロキサシン（１７ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（９ｍｇ、０．０６９５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を１０℃で１時間撹拌し、分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例４３（７ｍｇ、２２％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.16(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.33-8.32(m, 1H), 7.94(d, J=12.0Hz, 1H), 7.63-7.57(m, 3H), 7.35-7.19(m, 10H), 6.91-6.90(m, 2H), 6.04(m, 1H), 5.44(s, 2H), 5.06(s, 2H), 5.00(s, 2H), 4.59-4.29(m, 4H), 3.61(s, 4H), 3.21(s, 4H), 3.04-2.94(m, 4H), 1.71-1.61(m, 2H), 1.45-1.38(m, 5H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ９１３．３［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０４９１】
実施例４４．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（２−（６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサンアミド）アセトアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000143
2017504606.tif 000144
【０４９２】
工程１．化合物４４−１（６００ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）及び化合物４４−２（９３６ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、室温で３時間撹拌して、４４−３を混合物として得た。
【０４９３】
工程２．化合物４４−３（２．１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、化合物４４−４（０．６ｍＬ、４．５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＭＴＢＥ（３０ｍＬ×３）で洗浄し、濾過し、濾液を濃縮して、４４−５（５９７ｍｇ、収率：７０％）を得た。
【０４９４】
工程３．化合物４４−７（７５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中溶液に、化合物４４−６（３４０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（２５２ｍｇ、３ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機層を濃縮して、粗製の化合物４４−８（３５０ｍｇ）を得た。
【０４９５】
工程４．４４−８（３５０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）及び４４−９（１５７ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）中溶液に、ＤＣＣ（２８１ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）を加えた。これを窒素下１６時間撹拌した後、これを濃縮して、４４−１０（４８０ｍｇ、収率：１００％）を得た。
【０４９６】
工程５．化合物４４−１０（４０４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）、化合物４４−５（８３５ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温で３時間撹拌した後、これを濾過し、分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物４４−１１（１１０ｍｇ、収率：１６％）を得た。
【０４９７】
工程６．化合物４４−１１（８５ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（８２ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５２ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を加えた。これを室温で１６時間撹拌した。ノルフロキサシン（８５ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で更に１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例４４（７０ｍｇ、収率：５１％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．７９４分、ＭＳ＝９７７．３［Ｍ＋１］，４８９．３［１／２Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 15.32(s, 1H), 9.90(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.17(s, 2H), 8.11(s, 1H), 7.95(d, J=13.6Hz, 1H), 7.82(d, J=8.4Hz, 1H), 7.62(d, J=8.8Hz, 2H), 7.33(d, J=8.4Hz, 2H), 7.21(d, J=9.6Hz, 1H), 5.98(s, 1H), 5.41(s, 2H), 5.06(s, 2H), 4.59(d, J=7.2Hz, 2H), 4.35(s, 1H), 4.22(d, J=14.8Hz, 1H), 3.76-3.73(m, 2H), 3.61(s, 4H), 3.28(s, 4H), 3.12-2.86(m, 2H), 2.60(s, 4H), 2.07(d, J=6.8Hz, 2H), 1.98(s, 1H), 1.80-1.56(m, 2H), 1.47-1.39(m, 9H), 1.18(s, 2H), 0.87-0.82(m, 6H).
【０４９８】
実施例４５．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（３−フルオロフェニル）プロパンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000145
2017504606.tif 000146
【０４９９】
工程１．化合物４５−１（１７８ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）及び化合物４５−２（７６ｍｇ、０．６６２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、１０℃でＴＨＦ（０．５ｍＬ）中のＤＣＣ（１４３ｍｇ、０．６９３ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１０℃で３時間撹拌した後、固体を濾過し、溶媒を除去した。残留物をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。混合物を１時間静置し、次いで濾過して、更にＤＣＵを除去した。濾液をエバポレートさせて、粗製の化合物４５−３（２５０ｍｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.69-7.27(m, 1H), 7.23-6.95(m, 3H), 4.98-4.85(m, 1H), 3.33-3.14(m, 2H), 2.82(s, 4H), 1.37(s, 9H).
【０５００】
工程２．化合物４５−３（２５０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（２ｍＬ）中溶液に、化合物４５−４（１７３ｍｇ、０．９８６ｍｍｏｌ）の水（２ｍＬ）中溶液を加えた。溶液を１０℃で１６時間撹拌した。飽和したＮａＨＣＯ３溶液（３ｍＬ）を加え、混合物をＤＣＭ（５ｍＬ×２）で洗浄した。水層を１Ｍ  ＨＣｌ溶液でｐＨ３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗生成物４５−５（２８０ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４４１．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５０１】
工程３．化合物４５−５（２４０ｍｇ、０．５４５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ中４Ｍ  ＨＣｌ（５ｍＬ）中溶液を１０℃で２時間撹拌した後、溶媒を減圧下に除去し、残留物をＨ２Ｏ／ＴＨＦ（容量／容量１：１、３ｍＬ）に溶解した。Ｎａ２ＣＯ３（１１６ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）及びＣｂｚＣｌ（１３９ｍｇ、０．８１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１０℃で２時間撹拌し、次いでＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（６７ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を１０℃で１時間撹拌した。溶媒を除去し、水溶液をＤＣＭ（５ｍＬ×２）で洗浄し、１Ｍ  ＨＣｌ溶液でｐＨ２に酸性化した。これをＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して、粗生成物４５−６（１９８ｍｇ）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４７５．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５０２】
工程４．化合物４５−６（１９２ｍｇ、０．４０５ｍｍｏｌ）及び（４−アミノフェニル）メタノール（１５０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下ＥＥＤＱ（３００ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を３０℃で１６時間撹拌した後、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、４５−７（７０ｍｇ、３０％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.55-7.53(m, 2H), 7.31-7.17(m, 8H), 7.05-7.00(m, 2H), 6.91-6.86(m, 1H), 5.07-4.99(m, 2H), 4.56(s, 2H), 4.49-4.41(m, 2H), 3.17-3.06(m, 3H), 2.91-2.85(m, 1H), 1.87-1.50(m, 4H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５８０．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５０３】
工程５．４５−７（２０ｍｇ、０．０３４５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、１０℃でＰＮＰカーボネート（２１ｍｇ、０．０６９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１８ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１０℃で２４時間撹拌した後、ノルフロキサシン（１７ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（９ｍｇ、０．０６９５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１０℃で１時間撹拌し、分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例４５（１７ｍｇ、５３％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.32(br, 1H), 10.12(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.30-8.28(m, 1H), 7.94(d, J=13.2Hz, 1H), 7.62(d, J=8.4Hz, 2H), 7.52(d, J=8.8Hz, 1H),7.35-7.13(m, 11H), 7.04-7.00(m, 1H), 5.99(m, 1H), 5.43(s, 2H), 5.06(s, 2H), 4.95(s, 2H), 4.61-4.33(m, 4H), 3.61(s, 4H), 3.32(s, 4H), 3.06-2.66(m, 4H), 1.75-1.60(m, 2H), 1.45-1.35(m, 5H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ９２５．５［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５０４】
実施例４６．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−２−カルボン酸
2017504606.tif 000147
2017504606.tif 000148
【０５０５】
工程１．化合物４６−１（２００ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、氷浴中ベンジルカルボノクロリデート（２２６ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎａ２ＣＯ３（２７０ｍｇ、２．５４ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液を、激しく撹拌しながら７℃又はそれ以下で滴下した。混合物を１６時間撹拌した後、有機層を分離し、希薄ＨＣｌ（０．１Ｍ、６０ｍＬ）及び飽和したＮａＨＣＯ３溶液（６０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、化合物４６−２を白色固体として得た（２５０ｍｇ、６７．６％）。
【０５０６】
工程２．化合物４６−２（２５０ｍｇ、０．８８７ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシピロリジン−２、５−ジオン（１０２ｍｇ、０．８８７ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中混合物に、０℃でＤＣＣ（１８３ｍｇ、０．８８７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し、濾過した。濾液を真空中で濃縮して、化合物４６−３の粗生成物を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０５０７】
工程３．化合物４６−３（７１０ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）のＤＭＥとＨ２Ｏとの混合物（１０ｍＬ／１０ｍＬ）中溶液に、０℃で化合物４６−４（３２７ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（２３６ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮した。粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物４６−５の所望の生成物を白色固体として得た（４２１ｍｇ、５０．２％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４４９．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５０８】
工程４．化合物４６−５（４１０ｍｇ、０．９１５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、ＥＥＤＱ（４４８ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）及び４−アミノフェニル−メタノール（２２５ｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣ分離で精製して、４６−６Ａ及び４６−６Ｂを得た。
４６−６Ａ
1H NMR(400MHz, MeOD-d4) δ 7.54(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35-7.29(m, 7H), 5.12(s, 2H), 4.55-4.49(m, 4H), 3.30-3.03(m, 2H), 2.83-2.53(m, 2H), 1.93-1.75(m, 4H).ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ５５３．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
４６−６Ｂ
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.94(s, 1H), 9.31(d, J=9.2Hz, 1H), 8.53(d, J=9.6Hz, 1H), 8.26(d, J=9.6Hz, 2H), 8.00-7.96(m, 5H), 7.90(d, J=9.6Hz, 2H), 6.45-6.44(m, 1H), 5.81(s, 1H), 5.48-5.36(m, 3H), 4.77-4.69(m, 4H), 3.09-2.95(m, 2H), 2.79-2.64(m, 2H), 1.64-1.20(m, 4H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５５３．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５０９】
工程５．４６−６Ａ（２０ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（２２ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１４ｍｇ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（９ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（２３ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例４６を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.33(s, 1H), 10.11(s, 1H), 8.97(s, 1H), 8.34(d, J=7.6Hz, 1H), 7.95(d, J=12.8Hz, 1H), 7.78(d, J=8.4Hz, 1H), 7.60(d, J=8.4Hz, 2H), 7.37-7.21(m, 8H), 6.00-5.98(m, 1H), 5.97(s, 2H), 5.43-5.03(m, 4H), 4.61-4.37(m, 4H), 3.61(s, 4H), 3.31(s, 4H), 3.04-2.49(m, 4H), 1.70-1.20(m, 7H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４５０．３［Ｍ／２＋Ｈ＋］。
【０５１０】
実施例４７．  ７−（４−（（４−（（Ｒ）−３−（２−アミノ−２−オキソエチルチオ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
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【０５１１】
工程１．化合物４７−１（１２０ｍｇ、０．４１１ｍｍｏｌ）の４Ｍ  ＨＣｌ／１，４−ジオキサン（５ｍＬ）中混合物を、室温で２時間撹拌した。混合物を濃縮して、４７−２を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ１９３．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５１２】
工程２．化合物４７−２（１．３ｇ、６．８５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、化合物４７−３（２．０６５ｇ、８．２２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（４．４１８ｇ、３４．２５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．０１８ｇ、７．５３５ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（１．７ｇ、８．９０５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。溶液を濾過し、固体を更には精製せずに次の工程に使用した（４７−４）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４２５．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５１３】
工程３．化合物４７−４（５００ｍｇ、１．１７６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（６ｍＬ／２ｍＬ／２ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ（８５ｍｇ、７．０５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌した。混合物を濃縮し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物４７−５を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４１２．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５１４】
工程４．化合物４７−５（６００ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ＤＭＦ（１０ｍＬ／２ｍＬ）中溶液に、４−アミノ−フェニル−メタノール（２１６ｍｇ、１．７５ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（５４１ｍｇ、２．１９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＨ２Ｏでクエンチした。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製し、次いでＳＦＣにより精製して、４７−６Ａ及び４７−６Ｂを得た。
４７−６Ａ
1H NMR(400MHz, MeOD-d4) δ 7.57(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35-7.26(m, 7H), 5.06(s, 2H), 4.71-4.68(m, 1H), 4.54(s, 2H), 3.97(d, J=6.4Hz, 2H), 3.25(m, 2H), 3.13-3.08(m, 1H), 3.0-2.93(m, 1H), 2.13-2.01(m, 1H), 0.98-0.95(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５１７．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
４７−６Ｂ
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9.93(m, 1H), 8.597-8.56(m, 1H), 7.61-7.1(m, 11H), 5.13-5.00(m, 3H), 4.63-4.59(m, 1H), 4.44-4.41(m, 2H), 3.92-3.90(m, 2H), 3.17-2.84(m, 4H), 2.00-1.96(m, 1H), 0.90-0.89(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５１７．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５１５】
工程５．４７−６Ａ（４０ｍｇ、０．０７７５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、炭酸ビス−（４−ニトロ−フェニル）エステル（２０ｍｇ、０．０９３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１５ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を４５℃で１６時間撹拌した。溶液を濃縮し、ＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解し、ノルフロキサシン（５０ｍｇ、０．１５５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例４７（５．５ｍｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.25(s, 1H), 8.93-8.89(m, 1H), 8.40-8.34(m, 2H), 7.63-7.61(m, 4H), 7.36-7.35(m, 8H), 7.13(m, 2H), 5.06-5.03(4H), 4.62-4.52(m, 3H), 3.94-3.91(m, 1H), 3.36(m, 4H), 3.19(m, 4H), 3.00-2.86(m, 3H), 2.03-1.95(m, 1H), 1.38(m, 3H), 0.88-0.83(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８６２．４［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５１６】
実施例４８．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（フラン−２−イル）プロパンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000151
2017504606.tif 000152
【０５１７】
工程１．化合物４８−１（１．０ｇ、６．４５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ及びＮａＨＣＯ３溶液中混合物に、シリンジにより０℃でＣｂｚＣｌを加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌し、分取ＨＰＬＣにより精製して、４８−２（収率：３２％）を得た。
【０５１８】
工程２．化合物４８−２（３８０ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）、化合物４８−３（１５１ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＣＣ（２７１ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下室温で１６時間撹拌した。溶液を濾過し、濾液を濃縮して４８−４を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した（収率：９０％）。
【０５１９】
工程３．化合物４８−４（５４０ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１５ｍｌ）中溶液に、化合物４８−５（３６４ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（１７４ｍｇ、２．０７ｍｍｏｌ）の水（１５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ３．０に酸性化した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機層を濃縮して、化合物４８−６（収率：９０％）を得た。
ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、０．８２６分、ＭＳ＝４４７．１［Ｍ＋１］
【０５２０】
工程４．化合物４８−６（４２０ｍｇ、０．９４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ／ＭｅＯＨ（２０ｍＬ／１０ｍＬ）中溶液に、４−アミノ−フェニル−メタノール（１７４ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（４９５ｍｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＨ２Ｏでクエンチした。残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、４８−８（収率：５０％）を得た。
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 9.98(s, 1H), 8.20(d, J=8Hz, 1H), 7.56-7.49(m, 3H), 7.37(s, 1H), 7.35-7.30(m, 5H), 7.24(d, J=8.8Hz, 3H), 6.33-6.32(m, 1H), 6.13(d, J=3.2Hz, 1H), 5.98-5.95(t, J=6.0Hz, 1H), 5.41(s, 2H), 5.11-5.08(t, J=5.6Hz, 1H), 4.99(d, J=13.2Hz, 2H), 4.44-4.35(m, 3H), 3.33-2.83(m, 4H), 1.71-1.58(m, 2H), 1.44-1.34(m, 2H).
【０５２１】
工程５．化合物４８−９（３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＰＮＰカーボネート（３７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物（４８−１０）を更には精製せずに次の工程に使用した（収率：９５％）
ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、１．０９２分、ＭＳ＝７１７．１［Ｍ＋１］
【０５２２】
工程６．最終工程からの４８−１０とノルフロキサシンとの混合物を室温で１時間撹拌した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製し、次いでＳＦＣにより精製して、実施例４８を得た。（収率：３０％）
1H NMR DMSO-d6 400MHz δ 10.08(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.22(d, J=7.2Hz, 1H), 7.95(d, J=13.2Hz, 1H), 7.62(s, 1H), 7.60(s, 1H), 7.53(d, J=8.4Hz, 1H), 7.50(s, 1H), 7.36-7.33(m, 5H), 7.30(d, J=7.6Hz, 4H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 6.33-6.32(m, 1H), 6.13(d, J=2.4Hz, 1H), 5.99-5.96(m, 1H), 5.42(s, 2H), 5.07(s, 2H), 5.01(d, J=1.6Hz, 2H), 4.61-4.56(m, 2H), 4.45-4.35(m, 2H), 3.62(d, J=10.4Hz, 5H), 3.06-3.01(m, 2H), 2.89-2.83(m, 2H), 2.55-2.45(m, 2H), 1.71-1.58(m, 2H), 1.42(s, 5H).
【０５２３】
実施例４９．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000153
2017504606.tif 000154
【０５２４】
工程１．化合物４９−１（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及び化合物４９−２（１３８ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。反応混合物を室温で３時間撹拌し、濾過し、分取ＨＰＬＣにより精製して、４９−３（１００ｍｇ、収率：５４％）を得た。
【０５２５】
工程２．化合物４９−３（６０ｍｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（８７ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５６ｍｇ、０．４２７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。ノルフロキサシン（９１ｍｇ、０．２８５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例４９（４０ｍｇ、収率：３７％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８６６分、ＭＳ＝８５９．２［Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 15.32-15.28(m, 1H), 10.08(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.11(d, J=7.2Hz, 1H), 7.94(d, J=13.2Hz, 1H), 7.61(d, J=8.4Hz, 2H), 7.37-7.30(m, 8H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 5.78(d, J=4.8Hz, 1H), 5.41(s, 2H), 5.05(d, J=9.6Hz, 4H), 4.58(d, J=7.2Hz, 2H), 4.41(d, J=5.6Hz, 1H), 3.93(s, 1H), 3.33(s, 4H), 3.04-2.93(m, 2H), 2.00-1.95(m, 1H), 1.68(s, 2H), 1.60-1.58(m, 5H), 1.42(d, J=7.2Hz, 6H).
【０５２６】
実施例５０．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−３−（ピペリジン−４−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000155
2017504606.tif 000156
【０５２７】
工程１．ＤＣＭ／ＴＦＡ（５：１，容量：容量）の混合物（１ｍＬ）を０℃で実施例５６（５０ｍｇ、５２ｍｍｏｌ）に加えた。混合物を０℃で１時間撹拌した。ＬＣＭＳは８０％所望の生成物及び２０％ＳＴＭを示した。混合物を分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例５０（３１．２ｍｇ、７０％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８１１分、ＭＳ＝８５６．２［Ｍ＋１］、４２８．８［１／２Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4 400MHz, δ 8.81(s, 1H), 8.54(s, 1H), 7.98-7.95(m, 1H), 7.59-7.57(m, 2H), 7.36-7.32(m, 7H), 7.2-7.1(m, 1H), 5.12-5.09(m, 4H), 4.7-4.4(m, 3H), 3.88-3.86(m, 1H), 3.70(m, 4H), 3.3(m, 4H), 3.0-2.8(m, 2H), 2.1-1.7(m, 6H), 1.6-1.3(m, 5H), 0.98-0.96(m, 6H).
【０５２８】
実施例５１．  ７−（４−｛４−［（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリルアミノ）−プロピオニルアミノ］−ベンジルオキシカルボニル｝−ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000157
実施例５１を実施例４２と同様の手順を用いて調製した。
2017504606.tif 000158
【０５２９】
工程１．１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−７−（ピペラジン−１−イル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（１２９ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍｌ）中懸濁液に、ＤＩＥＡ（０．３０ｍｌ、１．６９ｍｍｏｌ）を加え、次いで５１−１（１２０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を一度に加えると、反応が完結するまで、ゆっくり黄色溶液になった。反応混合物を氷水中に注ぎ入れ、ＤＣＭで抽出した。有機層を飽和ＮＨ４Ｃｌ、ブラインにより洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、５１（１２５ｍｇ、４８％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７７３．３［Ｍ＋Ｈ＋］。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.29(s, 1H), 9.98(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.14(d, J=6.8Hz, 1H), 7.95(d, J=13.1Hz, 1H), 7.59(d, J=8.3Hz, 2H), 7.47-7.12(m, 8H), 5.05(d, J=9.9Hz, 4H), 4.70-4.48(m, 2H), 4.42(t, J=7.0Hz, 1H), 3.91(t, J=7.8Hz, 1H), 3.61(s, 4H), 1.98(d, J=6.8Hz, 1H), 1.53-1.14(m, 6H), 0.86(dd, J=17.7, 6.7Hz, 6H).
【０５３０】
実施例５２．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｒ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（トリメチルシリル）プロパンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000159
2017504606.tif 000160
【０５３１】
工程１．５２−１（３．３１ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、１０℃でＤＢＵ（１．６７ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌した。（ＣＯＣｌ）２（１．８３ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、−７８℃でＤＭＳＯ（１．２８ｇ、１６．３２ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、化合物５２−１（１．０ｇ、９．６０ｍｍｏｌ）とＤＢＵとの混合物を５分かけて加えた。３０分後、Ｅｔ３Ｎ（３．５９ｇ、３５．５２ｍｍｏｌ）を加え、３０分後、イリド５２−２を−７８℃で加えた。３０分間後、反応混合物を室温に加温し、室温で６時間撹拌した。混合物を１Ｍ  ＨＣｌ溶液でクエンチした。溶媒を除去した後、残留物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物５２−３（９４０ｍｇ、３２％）を得た。
1H NMR: 400MHz, CDCl3, δ 7.37-7.30(m, 5H), 6.58(s, 1H), 5.15(s, 2H), 3.76(s, 3H), 0.16-0.13(s, 9H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３０８．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５３２】
工程２．含水Ｐｄ／Ｃ（０．１ｇ）を、室温で化合物５２−３（０．５ｇ、１．６ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物をＨ２（５０ｐｓｉ）下室温で４時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮して化合物５２−４を得、これを更には精製せずに次の工程に直接使用した。
1H NMR: CDCl3, 400MHz, δ 7.36-7.30(m, 5H), 5.10(s, 2H), 4.42-4.36(m, 1H), 3.72(s, 3H), 1.17-1.11(dd, J=6.4, 14.8Hz, 1H), 0.99-0.93(dd, J=9.2, 14.8Hz, 1H), 0.04(s, 9H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３１０．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５３３】
工程３．化合物５２−４（２２０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（５ｍＬ／５ｍＬ）中溶液に、０℃でＬｉＯＨ（４４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に加温し、２０時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出し、水層を１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ＝２に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をブライン（２０ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、濃縮した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物５２−５を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８０．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５３４】
工程４．化合物５２−５（１４５ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び５２−６（５７ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＣＣ（１０２．３ｍｇ、０．４９５ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液を滴下した。反応混合物を０−５℃で３時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解した。沈殿物を濾過し、濾液を濃縮して、粗生成物５２−７を白色固体として得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０５３５】
工程５．化合物５２−７（上記得られた、０．４９ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１５ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１５ｍＬ）中溶液に、化合物５２−８（１２９．５ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（６１．８ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下室温で１６時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物（５２−９）を更には精製せずに次の工程に使用した。
1H NMR: DMSO-d6, 400MHz, δ 7.97(dd, J=7.6, 29.2Hz, 1H), 7.35-7.29(m, 5H), 5.93-5.92(m, 1H), 5.36(s, 2H), 5.07-4.98(m, 2H), 4.15-4.07(m, 2H), 2.95-2.90(m, 2H), 1.75-1.64(m, 1H), 1.58-1.49(m, 1H), 0.98-0.87(m, 2H), -0.01(s, 9H).
【０５３６】
工程６．化合物５２−９（１６０ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及び（４−アミノフェニル）メタノール（６５．２ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下０℃でＥＥＤＱ（１７５ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に加温し、Ｎ２下１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、５２−１０及び５２−１１を得た。
ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、１．１５１分、ＭＳ＝５５８．１［Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4, 400MHz, δ 9.99(s, 1H), 7.92(d, J=8.0Hz, 1H), 7.55(d, J=8.8Hz, 1H), 7.45-7.24(m, 8H), 6.01-5.98(m, 1H), 5.41(s, 2H), 5.11(t, J=5.2Hz, 1H), 5.05(d, J=4.8Hz, 2H), 4.44(d, J=5.6Hz, 3H), 4.15-4.08(m, 1H), 3.08-2.87(m, 2H), 1.72-1.41(m, 4H), 1.02-0.90(m, 2H), 0(s, 9H).
ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、１．１３０分、ＭＳ＝５５８．１［Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4, 400MHz, δ 9.89(s, 1H), 8.16(d, J=8.0Hz, 1H), 7.59-7.57(d, J=8.8Hz, 2H), 7.45-7.24(m, 8H), 6.01-5.95(m, 1H), 5.41(s, 2H), 5.11(t, J=5.6Hz, 1H), 5.03(d, J=11.2Hz, 2H), 4.43(d, J=5.6Hz, 2H), 4.42-4.38(m, 1H), 4.20-4.12(m, 1H), 3.05-2.87(m, 2H), 1.72-1.41(m, 4H), 0.95(d, J=8.0Hz, 2H), 0(s, 9H).
【０５３７】
工程７．５２−１１（３０ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（４０．４ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を２０時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ）及びノルフロキサシン（６３．５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例５２を得た。
ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、１．２６９分、ＭＳ＝９０３．０［Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6, 400MHz, δ 10.00(s, 1H), 8.97(s, 1H), 8.18(d, J=10.4Hz, 1H), 7.94(d, J=13.2Hz, 1H), 7.63(d, J=8.4Hz, 2H), 7.40(d, J=8.4Hz, 1H), 7.35-7.30(m, 7H), 7.21(d, J=7.6Hz, 1H), 5.96(t, J=6.4Hz, 1H), 5.41(s, 2H), 5.06(s, 2H), 5.02(d, J=9.6Hz, 2H), 4.61-4.55(m, 2H), 4.41-4.36(m, 1H), 4.21-4.12(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.33(s, 4H), 3.03-2.90(m, 2H), 1.71-1.68(m, 1H), 1.58-1.53(m, 1H), 1.41(t, J=7.2Hz, 4H), 1.42-1.31(m, 1H), 0.93(d, J=6.8Hz, 2H), -0.01(s, 9H).
【０５３８】
実施例５３．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−４，４，４−トリフルオロブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−２−カルボン酸
2017504606.tif 000161
実施例４６の合成からの中間体を用い、実施例５３を実施例４６と同様の手順を用いて調製した。
2017504606.tif 000162
【０５３９】
工程１．４６−６Ｂ（２３ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（２５ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１６ｍｇ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（１６ｍｇ、０．１２３ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（２６ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例５３を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.33(s, 1H), 10.03(s, 1H), 8.97(s, 1H), 8.51(d, J=8.0Hz, 1H), 7.45(d, J=13.2Hz, 1H), 7.79(d, J=8.4Hz, 1H), 7.63(d, J=8.4Hz, 2H), 7.36-7.21(m, 8H), 5.98-5.96(m, 1H), 5.41(s, 2H), 5.07-5.01(m, 4H), 4.59-4.42(m, 4H), 3.61(s, 4H), 3.31(s, 4H), 3.17-2.50(m, 4H), 1.71-1.60(m, 7H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８９８．８［Ｍ＋Ｈ＋］、４５０．３［Ｍ／２＋Ｈ＋］。
【０５４０】
実施例５４．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（トリメチルシリル）プロパンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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実施例５２の合成からの中間体を用い、実施例５４を実施例５２と同様の手順を用いて調製した。
2017504606.tif 000164
ＬＣＭＳ：（１０−８０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、１．２７４分、ＭＳ＝９０３．０［Ｍ＋１］
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.10(s, 1H), 8.97(s, 1H), 7.95(d, J=13.2Hz, 2H), 7.61(d, J=8.4Hz, 2H), 7.40(d, J=8.4Hz, 1H), 7.37-7.29(m, 7H), 7.21(d, J=10.8Hz, 1H), 5.98(t, J=6.4Hz, 1H), 5.05(d, J=8.8Hz, 2H), 5.01(d, J=13.2Hz, 2H), 4.62-4.56(m, 2H), 4.43-4.40(m, 1H), 4.14-4.08(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.33(s, 4H), 3.05-2.91(m, 2H), 1.76-1.52(m, 2H), 1.48-1.39(m, 5H), 1.01-0.89(m, 2H), -0.01(s, 9H).
【０５４１】
実施例５５．  ７−（４−（（４−（（Ｒ）−３−（２−アミノエチルチオ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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2017504606.tif 000166
【０５４２】
工程１．化合物５５−１（１．５５ｇ、１０ｍｍｏｌ）、５５−１ａ（２．５１ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３．０３ｇ、３０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中混合物に、ＨＡＴＵ（３．８ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（６０ｍＬ×３）で洗浄し、ＮａＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮し、カラム（ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃ）により精製して、化合物５５−２（３．２１ｇ、９１．２％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３５３．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５４３】
工程２．無水ＤＣＭ（６０ｍＬ）中のトリフェニルホスフィン（２．８７ｇ、１０．９４ｍｍｏｌ）を、０℃で良く撹拌された化合物５５−２（３．２１ｇ、９．１２ｍｍｏｌ）及びテトラブロモメタン（４．５４ｇ、１３．６８ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ中溶液に１０−１５分かけて滴下した。混合物を室温で９−１０時間撹拌した後、これをペンタン（２００ｍＬ）で処理し、得られた沈殿物を濾別し、ペンタンで数回洗浄した。混合したペンタン溶液を５％ＮａＨＣＯ３、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒をエバポレートさせ、油状物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝４：１）により精製して、化合物５５−３（３．４３ｇ、９０．７％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４１４．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５４４】
工程３．化合物５５−３（３．４３ｇ、８．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、化合物５５−４（１．１２ｇ、４．０ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１．１５ｇ、８．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、化合物５５−５の粗生成物（３．６７ｇ、８６．４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４１２．０［Ｍ−ＢＯＣ＋Ｈ＋］、５３４．１［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０５４５】
工程４．化合物５５−５（３．６７ｇ、６．２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ／１０ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（２．６ｇ、６２．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、溶媒を除去し、水（３０ｍＬ）を加えた。これをＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、真空中で濃縮して化合物５５−６を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した（３ｇ、９６．９％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３９８．２［Ｍ−ＢＯＣ＋Ｈ＋］。
【０５４６】
工程５．化合物５５−６（５００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、（４−アミノ−フェニル）−メタノール（２４６ｍｇ、２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２５８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＨＡＴＵ（３８０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣ分離で精製して、５５−７ａ及び５５−７ｂを得た。
５５−７ａ
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.60(d, J=8.8Hz, 2H), 7.31-7.24(m, 7H), 5.06(s, 2H), 4.67-4.64(m, 1H), 4.53(s, 2H), 3.88(d, J=7.6Hz, 1H), 3.28-3.11(m, 3H), 2.89-2.84(m, 1H), 2.67-2.57(m, 2H), 2.08-1.99(m, 1H), 1.41(s, 9H), 1.01-1.99(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０３．０［Ｍ＋Ｈ＋−ＢＯＣ］。
５５−７ｂ
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.56(d, J=8.8Hz, 2H), 7.34-7.25(m, 7H), 5.08(s, 2H), 4.66-4.63(m, 1H), 4.54(s, 2H), 3.96(d, J=7.6Hz, 1H), 3.22-3.04(m, 3H), 2.90-2.80(m, 1H), 2.69-2.57(m, 2H), 2.13-2.03(m, 1H), 1.40(s, 9H), 0.98-0.94(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０２．９［Ｍ＋Ｈ＋−ＢＯＣ］、６２４．５［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０５４７】
工程６．５５−７ａ（２８ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（３０ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）及びノルフロキサシン（２９ｍｇ、０．０９４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物５５−８（３８ｍｇ、８４．４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ９４８．４［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５４８】
工程７．化合物５５−８（３８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＨＣｌ／ＣＨ３ＯＨ（４ｍｏｌ／Ｌ）を１０分かけて加えた。混合物を室温で１時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例５５を白色固体として得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.86(s, 1H), 7.97(d, J=13.2Hz, 1H), 7.66(d, J=8.4Hz, 2H), 7.34(d, J=8.8Hz, 2H), 7.27-7.22(m, 5H), 7.14(d, J=7.2Hz, 1H), 5.08(d, J=21.6Hz, 4H), 4.73-4.51(m, 1H), 4.50-4.48(m, 2H), 3.81(d, J=8.0Hz, 1H), 3.69(s, 4H), 3.34(s, 4H), 3.25-2.91(m, 3H), 2.90-2.79(m, 3H), 2.09-2.00(m, 1H), 1.55-1.45(m, 3H), 1.09-1.00(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８４８．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５４９】
実施例５６．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−３−（１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ピペリジン−４−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000167
2017504606.tif 000168
【０５５０】
工程１．化合物５６−２（１５０ｍｇ、０．５５１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ／２ｍＬ）中溶液に、ＮａＨＣＯ３（１３８ｍｇ、１．６５３ｍｍｏｌ）及び化合物５６−１（２８７ｍｇ、０．８２７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で終夜撹拌した後、これをＨＣｌ（１Ｎ）でｐＨ＝６に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を乾燥し、濃縮して５６−３を得、これをシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１０／１から１／１０）により精製した。
ＬＣＭＳ：（０−６０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、１．３０９分、ＭＳ＝４０６．３［Ｍ＋１−Ｂｏｃ＋］
【０５５１】
工程２．化合物５６−３（１．２ｇ、２．３７６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、化合物５６−４（４３９ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１．７ｇ、５．０６４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で終夜撹拌した。溶液をＨ２Ｏでクエンチし、ＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を乾燥し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝１０／１から１／１０）により精製して、５６−５を得た。
ＬＣＭＳ：（０−６０、ＡＢ、２分、ＥＳＩ）、１．４１３分、ＭＳ＝５１１．２［Ｍ＋１−Ｂｏｃ＋］
【０５５２】
工程３．無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物５６−５（１００ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）に、Ｎ２下０℃でＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ、３ｍｍｏｌ）及びＰＮＰカーボネート（２００ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、４．１当量）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した。混合物にノルフロキサシン（１０２ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ、２当量）を加え、１時間撹拌した。混合物を分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例５６（６０ｍｇ、４０％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、１．０６４分、ＭＳ＝９５６．３［Ｍ＋１］
1H NMR: MeOH-d4 400MHz, δ 8.84(s, 1H), 7.97-7.93(dd, J=16, 1H), 7.59-7.57(m, 2H), 7.35-7.27(m, 7H), 7.20-7.10(m, 1H), 5.11-5.07(m, 4H), 4.6-4.5(m, 1H), 4.55-4.45(m, 2H), 4.10-3.90(m, 3H), 3.75-3.65(m, 4H), 3.3(m, 4H), 2.80-2.50(m, 2H), 2.1-2.0(m, 1H), 1.8-1.6(m, 5H), 1.6-1.5(m, 3H), 1.43(s, 9H), 1.2-1.0(m, 2H), 0.96-0.94(d, J=6.8Hz, 6H).
2017504606.tif 000169
2017504606.tif 000170
【０５５３】
工程１．化合物５７−２（１０ｇ、１００ｍｍｏｌ）の氷酢酸（３０ｍＬ）中溶液を、Ｎ２下化合物５７−１（１３．１ｇ、１００ｍｍｏｌ）の氷酢酸（１５０ｍＬ）中溶液に１５分かけて加えた。これを室温で１時間撹拌した後、白色不均一反応混合物を５時間加熱還流した。ほとんどの酢酸を真空下に除去した。残留物を水とＤＣＭとの間で分配した。ＤＣＭを除去し、茶褐色油状物を少量のＥｔＯＡｃに溶解し、ＰＥに注ぎ入れた。白色沈殿物を濾別して、５７−３（１２ｇ、収率：５６％）を得た。
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 11.98(s, 1H), 3.34-3.31(m, 2H), 2.61(m, 4H), 2.19-2.16(m, 2H), 1.50-1.43(m, 4H), 1.23(d, J=7.2Hz, 2H).
【０５５４】
工程２．化合物５７−３（１２ｇ、５６．３ｍｍｏｌ）及び過剰のトリエチルアミン（２５ｍＬ、１６８．９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に、過剰の化合物５７−４（３６ｇ、１４０．８ｍｍｏｌ）を１５分かけて加えた。混合物をＮ２下室温で６時間撹拌した。混合物は均一になり、４０℃で３時間撹拌した。これを濃縮し、水及びブラインで洗浄し、無水ＭｇＳＯ４で脱水した。これを濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）により精製して、５７−５（４ｇ、収率：２３％）を得た。
1H NMR MeOD-d4 400MHz, δ 3.54-3.50(m, 2H), 2.86(d, J=3.2Hz, 4H), 2.71(d, J=2.8Hz, 4H), 2.66-2.63(m, 2H), 1.79-1.75(m, 2H), 1.65-1.59(m, 2H), 1.45-1.41(m, 2H).
【０５５５】
工程３．化合物５７−６（３７５ｍｇ、２．８６ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中溶液に、化合物５７−５（８００ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（６５６ｍｇ、７．８ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機層を濃縮して、粗製の化合物５７−７（１．２ｇ、不純物を含む）を得た。
【０５５６】
工程４．化合物５７−８（２．０ｇ、４．１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中混合物に、化合物５７−９（３．８ｇ、２４．３４ｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（９４６ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６０℃で３時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、濾過し、濾過ケーキを分取ＨＰＬＣにより精製して、５７−１０（１．０ｇ、６０．４％）を得た。
【０５５７】
工程５．化合物５７−７（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１７５ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１１９ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。次いで化合物５７−１０（１２４ｍｇ、１１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、５７−１１ａ及び５７−１１ｂ（各３０ｍｇ、５％）を得た。
【０５５８】
工程６．化合物５７−１１ａ（３０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）及びＰＮＰカーボネート（２６ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＰＥＡ（１７ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し、ノルフロキサシン（２７ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）を室温で加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例５７（１４ｍｇ、収率：１５％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８３２分、ＭＳ＝５２９．４［１／２Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4 400MHz, δ 8.89(s, 1H), 8.33(d, J=4.6Hz, 1H), 8.06-8.01(m, 2H), 7.63(d, J=8.4Hz, 2H), 7.50-7.40(m, 1H), 7.39(d, J=8.4Hz, 2H), 7.21(s, 1H), 5.55-5.51(m, 1H), 5.15(s, 2H), 4.92(s, 1H), 4.58(s, 6H), 3.74(s, 4H), 3.49-3.46(m, 2H), 3.35-3.33(m, 4H), 2.69(s, 4H), 2.26-2.22(m, 4H), 1.65-1.57(m, 9H), 1.56-1.29(m, 5H), 1.01(d, J=6.8Hz, 3H), 0.93(d, J=6.4Hz, 3H), 0.92-0.81(m, 6H)
【０５５９】
実施例５８．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０５６０】
工程１．ＣｂｚＣｌ（２６．７ｍＬ、０．１９ｍｏｌ）を、５８−１（２０ｇ、０．１７ｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（３６ｇ、０．３４ｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）中混合物に２０分かけて滴下した。これを室温で１２時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×２）で洗浄した。水層をｐＨ＝２に調節し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×４）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、５８−２を得た。
【０５６１】
工程２．５８−２（２０ｇ、７９．３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（８．４ｇ、８７．２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４５．２ｇ、１１８．９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ３Ｎ（４５．８ｍＬ、３１７．１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。有機層を濃ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和したＮａＣｌで洗浄し、濃縮した。粗製物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、５８−３を得た。
【０５６２】
工程３．ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の化合物５８−３（６．０ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）をドライアイス／アセトン浴中で−７８℃に冷却した。ＤＩＢＡＬ−Ｈ（３０．６ｍＬ、３０．６ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を−７８℃で４時間撹拌した。過剰の水素化物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）でクエンチし、溶液を室温に加温した。溶媒を除去した後、５８−４を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０５６３】
工程４．５８−４（４．８０ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）、化合物５（４．７０ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（５．６４ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中混合物を、室温で１２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を除去し、粗製物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により精製して、５８−６を得た。
【０５６４】
工程５．５８−７（１０ｇ、６８．４ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＯＨ）２ＣＯ３（１５．１２ｇ、６８．４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１００ｍＬ）中溶液を、３０分間加熱還流した。還流の間生成した固体を熱いうちに濾去した。濾液を０℃に冷却し、固体のＮａ２ＣＯ３（１．０ｇ）を加えることによりｐＨ９に調節した。ＡｌｌｏｃＣｌ（１０．８ｍＬ、１０２．６ｍｍｏｌ）を滴下し、その間溶液を０℃で撹拌した。添加の間、固体のＮａ２ＣＯ３（２０ｇ）を加えることにより反応混合物をｐＨ９で維持した。反応混合物を室温に加温し、１２時間撹拌した。反応の間に生成した青色固体生成物を濾取して、定量的収率で得た。上記集めた固体のＯｒｎ（Ａｌｌｏｃ）の銅塩をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）に懸濁し、２当量のチオアセトアミド（６．５１１ｇ、８６．６６ｍｍｏｌ）をこれに加えた。アルカリ性懸濁液を５０℃で３時間撹拌し、この間固体はゆっくり溶解した。次いで溶液を２Ｍ  ＨＣｌでｐＨ２に酸性化し、更に５分間沸騰させた。沈殿したＣｕＳを濾去した。濾液を真空下に濃縮して約１００ｍＬにし、この時点で生成物のＯｒｎ（Ａｌｌｏｃ）５８−８の塩酸塩が白色固体として定量的収率で沈殿した。
【０５６５】
工程６．ＮａＮ３（８．５ｇ、１２９．７ｍｍｏｌ）の蒸留Ｈ２Ｏ（４５ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（７５ｍＬ）中溶液を、氷浴上で冷却した。Ｔｆ２Ｏ（４．４ｍＬ、２５．９４ｍｍｏｌ）を５分かけてゆっくり加え、撹拌しながら２時間続けた。混合物を分離漏斗中に入れ、ＣＨ２Ｃｌ２相を除去した。水性部分をＣＨ２Ｃｌ２（３５ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジドを含む有機画分をプールし、飽和したＮａ２ＣＯ３で１回洗浄し、更には精製せずに使用した。化合物５８−８（２．９９ｇ、１２．９７ｍｍｏｌ）を、蒸留Ｈ２Ｏ（９０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１８０ｍＬ）中でＫ２ＣＯ３（２．６９ｇ、１９．４６ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（４８６ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）と混合した。ＣＨ２Ｃｌ２中のトリフリルアジド（１５０ｍＬ）を加え、混合物を室温で１２時間撹拌した。引き続き、有機溶媒を圧力下に除去し、水性スラリー液を０．２Ｍリン酸バッファーｐＨ６．２（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×２）で抽出して、スルホンアミド副生成物を除去した。次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。もう一度ＥｔＯＡｃ抽出（４００ｍＬ×３）を行って生成物を得た。ＥｔＯＡｃ抽出物を混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、エバポレートさせて５８−９を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０５６６】
工程７．５８−９（３．３２ｇ、１２．９７ｍｍｏｌ）、５８−６（１．５０ｇ、６．４８ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（３６２ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中混合物を、５０℃で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、５８−１０（２．３ｇ、３６．４％）を得た。
【０５６７】
工程８．５８−１０（２．３３ｇ、４．７８ｍｍｏｌ）、５８−１１（１．７６ｍｇ、１４．３ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（３．５５ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中混合物を、室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣ分離により精製して、５８−１２（３２６ｍｇ）及び５８−１３（３０ｍｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.04(s, 1H), 7.55-7.53(m, 2H), 7.33-7.30(m, 7H), 5.91-5.87(m, 1H), 5.45-5.41(m, 1H), 5.27-5.23(m, 1H), 5.15-5.11(m, 1H), 5.07(d, J=2.8Hz, 2H), 4.70-4.68(m, 1H), 4.55(s, 2H), 4.48-4.46(m, 2H), 3.34-3.32(m, 1H), 3.09-3.07(m, 2H), 2.28-2.22(m, 3H), 1.54-1.50(m, 2H), 1.44-1.35(m, 2H), 0.93(d, J=6.8Hz, 3H), 0.87(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５９３．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.04(s, 1H), 7.55-7.52(m, 2H), 7.32-7.27(m, 7H), 5.91-5.87(m, 1H), 5.43-5.42(m, 1H), 5.27-5.22(m, 1H), 5.15-5.12(m, 1H), 5.07(d, J=3.6Hz, 2H), 4.70-4.68(m, 1H), 4.55(s, 2H), 4.47(d, J=5.2Hz, 2H), 3.07-3.05(m, 2H), 2.22-2.14(m, 3H), 1.54-1.50(m, 2H), 1.44-1.20(m, 2H), 0.92(d, J=6.8Hz, 3H), 0.87(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５９３．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５６８】
工程９．５８−１２（１００ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）、ＰＮＰ（１０３ｍｇ、０．３３８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（６６ｍｇ、０．５０７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中混合物を５０℃で１２時間撹拌し、溶媒を除去した。上記粗生成物（１２８ｍｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）、ノルフロキサシン（１６０ｍｇ、０．５０７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（６６ｍｇ、０．５０７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物を、室温で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、中間体１００ｍｇを得た。ＴＨＦ（５ｍＬ）中の中間体（５０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）及び１，３−ジメチルバルビツール酸（６７ｍｇ、０．４２６ｍｍｏｌ）に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１２ｍｇ、０．０１０６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で１２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例５８（２０．６ｍｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8.96(s, 1H), 8.47-8.43(m, 1H), 8.09(s, 1H), 7.96-7.93(m, 1H), 7.74-7.72(m, 1H), 7.62-7.60(m, 2H), 7.38-7.29(m, 7H), 7.22-7.20(m, 1H), 5.52-5.49(m, 1H), 5.07(s, 2H), 5.02(d, J=4.8Hz, 2H), 4.62-4.58(m, 3H), 3.62(s, 4H), 3.15(s, 4H), 2,67-2.66(m, 2H), 2.15-2.09(m, 3H), 1.54-1.52(m, 2H), 1.40(t, J=7.2Hz, 3H), 1.23-1.18(m, 2H), 0.84(d, J=6.4Hz, 3H), 0.78(d, J=6.4Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８５４．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５６９】
実施例５９．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−２−（６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000173
2017504606.tif 000174
【０５７０】
工程１．化合物５９−２（１１８ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５ｍＬ）中溶液に、化合物５９−１（２００ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（１２２ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機層を濃縮して、粗製の化合物５９−３（２４０ｍｇ）を得た。
【０５７１】
工程２．化合物５９−３（２４０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（５０６ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（２５８ｍｇ、２．０１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、室温で３０分間撹拌した。次いで化合物５９−４（２６９ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、５９−５ａ及び５９−５ｂ（各４０ｍｇ、８％）を得た。
【０５７２】
工程３．化合物５９−５ａ（４０ｍｇ、０．０５４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（３４ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２１ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１．５時間撹拌した。ノルフロキサシン（３５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌し、濃縮し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製した（１４ｍｇ、収率：２０％）。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８３８分、ＭＳ＝５４６．５［１／２Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 10.64(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.22(d, J=9.2Hz, 1H), 8.04(d, J=8.4Hz, 1H), 8.04-7.92(m, 2H), 7.61(d, J=8.4Hz, 2H), 7.36(d, J=8.4Hz, 2H), 7.22-7.20(m, 5H), 7.14(s, 1H), 6.06(d, J=6Hz, 1H), 5.50-5.47(m, 1H), 5.44(s, 2H), 5.07(s, 2H), 4.90-4.86(m, 1H), 4.61-4.58(m, 3H), 3.61(s, 4H), 3.34-3.25(m, 4H), 3.04-2.91(m, 4H), 2.75-2.71(m, 2H), 2.60(s, 4H), 2.14-2.11(m, 2H), 2.09-2.00(m, 2H), 1.42-1.29(m, 10H), 1.40(d, J=7.2Hz, 2H), 0.85-0.79(m, 6H).
【０５７３】
実施例６０．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−２−（６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000175
2017504606.tif 000176
【０５７４】
工程１．化合物６０−２（８３ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５ｍＬ）中溶液に、化合物６０−１（２００ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（１２２ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ３に酸性化した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機層を濃縮して、化合物６０−３（１６０ｍｇ、不純物含有、収率：８０％）を得た。
【０５７５】
工程２．化合物６０−３（１６０ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３９０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（２００ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、室温で３０分間撹拌した。次いで化合物６０−４（２０７ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。次いで混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、６０−５ａ及び６０−５ｂ（各々、６０ｍｇ及び６０ｍｇ、８％及び８％）を得た。
【０５７６】
工程３．化合物６０−５ａ（６０ｍｇ、０．０８６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（６０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１．５時間撹拌した。ノルフロキサシン（６０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例６０（４７．９ｍｇ、収率：５４％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８２４分、ＭＳ＝５２２．４［１／２Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 10.1(s, 1H), 8.93(s, 1H), 8.15-8.13(d, 1H), 7.99(s, 1H), 7.93-7.90(d, 1H), 7.81-7.79(d, 1H), 7.57-7.55(d, J=8.0Hz, 2H), 7.35-7.33(d, J=8.0Hz, 2H), 7.20-7.18(m, 1H), 6.0(m, 1H), 5.5(m, 1H), 5.40(s, 2H), 5.04(s, 2H), 4.8(m, 1H), 4.6-4.5(m, 2H), 4.2-4.1(m, 1H), 3.6(s, 4H), 3.2(m, 6H), 3.05-2.9(m, 2H), 2.57(s, 4H), 2.15-2.0(m, 5H), 1.9-1.8(m, 1H), 1.5-1.35(m, 7H), 1.3-1.1(m, 4H), 0.82-0.80(m, J=8.0Hz, 3H), 0.76-0.70(m, 9H).
【０５７７】
実施例６１．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（（Ｒ）−２−（６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサンアミド）プロパンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000177
2017504606.tif 000178
【０５７８】
工程１．化合物６１−２（６４ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５ｍＬ）中溶液に、化合物６１−１（２００ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（１２２ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）の水（５ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。得られた懸濁液をＥＡで抽出した。混合した有機層を濃縮して、化合物６１−３を得た。（１００ｍｇ、不純物を含む、収率：６０％）
【０５７９】
工程２．化合物６１−３（１００ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２６７ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１３６ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、室温で３０分間撹拌した。化合物６１−４（１４２ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、分取ＨＰＬＣにより精製して、６１−５ａ及び６１−５ｂ（各々、４３ｍｇ、２２ｍｇ、６％、３％）を得た。
【０５８０】
工程３．化合物６１−５ｂ（２２ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（２０ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１．５時間撹拌した。ノルフロキサシン（２０ｍｇ、０．０６６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例６１（１４．６ｍｇ、収率：４３％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８０５分、ＭＳ＝５０８．３［１／２Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4 + CDCl3 400MHz, δ8.83(s, 1H), 8.02-7.99(m, 2H), 7.77(溶媒:CDCl3), 7.59-7.57(d, J=8.0Hz, 2H), 7.36-7.34(d, J=8.0Hz, 2H), 7.15-7.13(m, 1H), 5.5(m, 1H), 5.11(s, 2H), 4.95-4.9(m, 1H), 4.55-4.45(m, 2H), 4.4-4.35(m, 1H), 3.7(s, 4H), 3.45(m, 2H), 3.4(s, 4H), 3.25-3.05(m, 2H), 2.66(s, 4H), 2.3-2.1(m, 5H), 1.6-1.5(m, 7H), 1.5-1.3(m, 2H), 1.3-1.2(m, 5H), 0.96-0.94(d, J=8.0Hz, 3H), 0.87-0.85(d, J=8.0Hz, 3H).
【０５８１】
実施例６２．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２，２−ジメチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000179
2017504606.tif 000180
【０５８２】
工程１．ＣｂｚＣｌ（２４ｍＬ、０．１７ｍｏｌ）を、６２−１（２０ｇ、０．１５ｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（３２ｇ、０．３０ｍｏｌ）の水（１００ｍＬ）中混合物に２０分かけて滴下した。反応混合物を１２時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×２）で洗浄した。水層をｐＨ＝２に調節し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×４）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮して６２−２を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０５８３】
工程２．６２−２（１０ｇ、３７．７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン（４．０ｇ、４１．５ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２１．３ｇ、５６．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中混合物に、Ｅｔ３Ｎ（２１．８ｍＬ、１５０．８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した後、溶媒を除去し、粗製物を水（２００ｍＬ）で溶解した。水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。抽出物を濃ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ３水溶液、飽和したＮａＣｌで洗浄した。これを濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、６２−３を得た。
【０５８４】
工程３．ＤＩＢＡＬ−Ｈ（１９．５ｍＬ、１９．４６ｍｍｏｌ）を、−７８℃で化合物３（４ｇ、１２．９７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６０ｍＬ）中溶液に滴下した。混合物を−７８℃で４時間撹拌した後、過剰の水素化物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）でクエンチし、得られた溶液を室温に加温した。溶液を濃縮して化合物４を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０５８５】
工程４．６２−４（３．２３ｇ、１２．９７ｍｍｏｌ）、６２−５（２．９９ｇ、１５．５６ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（３．５８ｇ、２５．９４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４０ｍＬ）中混合物を室温で１２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により精製して、６２−６を得た。
【０５８６】
工程５．Ｔｆ２Ｏ（４．４ｍＬ、２５．９４ｍｍｏｌ）を、０℃でＮａＮ３（８．３ｇ、１２９．７ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（４５ｍＬ）とＤＣＭ（７５ｍＬ）との混合物中溶液に５分かけてゆっくり加えた。これを２時間撹拌した後、ＤＣＭ層を分離し、水性部分をＤＣＭ（３５ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジドを含む有機画分をプールし、飽和したＮａ２ＣＯ３で１回洗浄し、６２−７（２．２７ｇ、１２．９７ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．６９ｇ、１９．４６ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（３２３ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（９０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１８０ｍＬ）中混合物に加えた。混合物を１２時間撹拌した後、有機溶媒を圧力下に除去し、水性スラリー液をリン酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ６．２、１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×２）で抽出した。次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ＝２に酸性化し、（４００ｍＬ×３）で抽出した。有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して６２−８を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０５８７】
工程６．６２−８（２．６１ｇ、１２．９７ｍｍｏｌ）、６２−６（１．５９ｇ、６．４８ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（３６２ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物を５０℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、６２−９を得た。
【０５８８】
工程７．６２−９（９６８ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）、６２−１０（８０１ｍｇ、６．５０ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（１．６１ｇ、６．５０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中混合物を室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、６２−１１（３９５．９ｍｇ、３３．１％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.11(s, 1H), 7.59-7.56(m, 2H), 7.37-7.27(m, 7H), 5.55-5.51(m, 1H), 5.13-5.05(m, 2H), 4.79(s, 1H), 4.58(s, 2H), 3.34-3.32(m, 1H), 3.25-3.11(m, 1H), 2.28-2.22(m, 2H), 1.48-1.41(m, 2H), 0.96(s, 9H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５５１．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５８９】
工程８．６２−１１（１９０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）、ＰＮＰカーボネート（１２６ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１３２ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中混合物を５０℃で１２時間撹拌した後、溶媒を除去し、ノルフロキサシン（３２３ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１３２ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物に加えた。これを室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例６２（６．２ｍｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.31(s, 1H), 10.66(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.15(s, 1H), 7.94(d, J=13.2Hz, 1H), 7.72-7.70(m, 1H), 7.60(d, J=8.0Hz, 2H), 7.38-7.28(m, 8H), 6.04-6.03(m, 1H), 5.52-5.51(m, 1H), 5.42(s, 2H), 5.07(s, 2H), 5.03-5.01(m, 2H), 4.66(d, J=9.6Hz, 1H), 4.58-4.56(m, 2H), 3.61(s, 4H), 3.41(s, 4H), 3.02-2.98(m, 2H), 2.12-2.02(m, 2H), 1.42-1.39(m, 3H), 1.26-1.23(m, 2H), 0.84(s, 9H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８９７．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５９０】
実施例６３．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサンアミド）プロパンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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実施例６１の合成からの中間体を用い、実施例６３を実施例６１と同様の手順を用いて調製した。
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【０５９１】
工程１．化合物６１−５ａ（４３ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（４０ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．４ｍｌ、２．４ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１．５時間撹拌した。ノルフロキサシン（４０ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例６３（３３．８ｍｇ、収率：５２％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８０３分、ＭＳ＝５０８．４［１／２Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4 400MHz, δ 8.86(s, 1H), 8.15-8.12(d, 1H), 8.10-8.05(m, 1H), 8.05-7.98(d, 1H), 7.62-7.60(d, J=8.0Hz, 2H), 7.37-7.35(d, J=8.0Hz, 2H), 7.20-7.18(m, 1H), 5.5(m, 1H), 5.12(s, 2H), 4.95-4.9(m, 1H), 4.6-4.5(m, 2H), 4.42-4.38(m, 1H), 3.7(s, 4H), 3.41(m, 2H), 3.3(s, 4H), 3.25-3.1(m, 2H), 2.63(s, 4H), 2.35-2.2(m, 5H), 1.6-1.5(m, 7H), 1.5-1.3(m, 2H), 1.35-1.33(d, J=8.0Hz, 3H), 1.3-1.2(m, 2H), 0.95-0.93(d, J=8.0Hz, 3H), 0.91-0.88(d, J=8.0Hz, 3H).
【０５９２】
実施例６４．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−アセトアミド−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０５９３】
工程１．６４−１（１．１ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ中の撹拌された溶液に、０℃で６４−２（４．５ｍＬ、５７ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（９ｍＬ、６２．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下室温で３時間撹拌した。反応混合物を水（３０ｍＬ）中に注ぎ入れ、ＤＣＭで抽出し、混合した有機層をＮａＣｌ水溶液で洗浄し、濃縮して、６４−３（収率：９５％）を得た。
【０５９４】
工程２．化合物６４−３（１３９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、６４−４（３０２ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）、Ｃｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（７５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を室温でＤＭＦ（８ｍＬ）に溶解した。混合物を６０℃で２時間撹拌した。混合物６４−５を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０５９５】
工程３．６４−５の粗製混合物に、室温で６４−６（１．１２３ｇ、９．１２ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（３ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２雰囲気下室温で１６時間撹拌した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製し、次いでＳＦＣにより精製して、６４−７を得た。（収率：８０％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４４６．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５９６】
工程４．６４−７（３０ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＰＮＰカーボネート（４２ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２７ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物６４−８を更には精製せずに次の工程に使用した。（収率：９５％）
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６１１．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０５９７】
工程５．６４−８の混合物に室温でノルフロキサシン（４４ｍｇ、０．１３６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。残留物を分取ＨＰＬＣにより精製し、次いでＳＦＣにより精製して、実施例６４（収率：３０％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.62(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.17(d, J=9.2Hz, 1H), 8.06(d, J=6.8Hz, 1H), 7.94(d, J=13.2Hz, 1H), 7.60(d, J=8.4Hz, 2H), 7.36(d, J=8.0Hz, 2H), 7.21(d, J=6.0Hz, 1H), 6.02(d, J=4.4Hz, 1H), 5.51-5.42(m, 3H), 5.07(s, 2H), 4.90-4.86(m, 1H), 4.59-4.57(m, 2H), 3.65-3.61(m, 4H), 3.06-2.96(m, 2H), 2.12-1.87(m, 3H), 1.86(s, 3H), 1.48-1.35(m, 3H), 1.28(s, 2H), 0.89-0.72(m, 6H).
【０５９８】
実施例６５．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
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【０５９９】
工程１．Ｔｆ２Ｏ（８．８ｍＬ、５１．９ｍｍｏｌ）を、０℃でＮａＮ３（１６．９ｇ、２５９．４ｍｍｏｌ）の蒸留Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）とＣＨ２Ｃｌ２（４５ｍＬ）との混合物中溶液に５分かけてゆっくり加えた。これを２時間撹拌した後、有機相を分離し、水性部分をＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジドを含む有機画分をプールし、飽和したＮａ２ＣＯ３で１回洗浄し、６５−１（２．３ｇ、１２．９７ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．６９ｇ、１９．４６ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（６５ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（９０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１８０ｍＬ）中混合物に加えた。混合物を２６℃で１２時間撹拌した後、有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈した。混合物を濃ＨＣｌでｐＨ＝６に酸性化し、次いでリン酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ６．２、５０ｍＬ）で希釈した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で洗浄し、次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ＝２に酸性化した。混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して６５−２を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６００】
工程２．６５−２（２．６ｇ、１２．９７ｍｍｏｌ）、６５−３（１．５ｇ、６．４８ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＭｅＣＮ）４ＰＦ６（３０４ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中混合物を５０℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、６５−４（５１６ｍｇ、１８％）を得た。
【０６０１】
工程３．６５−４（２８５ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）、６５−５（２４４ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（４９０ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中混合物を２４℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、６５−６（２５０ｍｇ、７０．４％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.10(s, 1H), 7.58(s, 2H), 7.45-7.20(m, 7H), 5.55-5.52(m, 1H), 5.10-5.05(m, 2H), 4.77-4.58(m, 3H), 3.22-3.21(m, 2H), 2.33-2.15(m, 3H), 1.49-1.47(m, 2H), 0.97(s, 3H), 0.90(s, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５３８．３［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６０２】
工程４．６５−６（１２７ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ＰＮＰ（１４３ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（９２ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物を５０℃で１２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＤＩＰＥＡ（９３ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（２３０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）と混合した。これを２４℃で４時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例６５（３０ｍｇ、１４．１％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.32(s, 1H), 10.63(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.08(s, 1H), 7.94(d, J=13.2Hz, 1H), 7.71(d, J=9.2Hz, 1H), 7.60(d, J=8.4Hz, 2H), 7.38-7.29(m, 8H), 7.21(d, J=7.6Hz, 1H), 6.02(s, 1H), 5.48-5.47(m, 1H), 5.42(s, 2H), 5.06(s, 2H), 5.02(s, 2H), 4.62-4.60(m, 3H), 3.61(s, 4H), 3.44(s, 4H), 3.02-2.99(m, 2H), 2.12-2.02(m, 3H), 1.40(t, J=6.8Hz, 3H), 1.27-1.24(m, 2H), 0.84(d, J=6.8Hz, 3H), 0.78(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８８３．７［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６０３】
実施例６６．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）（シクロプロピル）メチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０６０４】
工程１．６６−１（５．０ｇ、４３．４３ｍｍｏｌ）及びＮａ２ＣＯ３（６．９ｇ、６５．１５ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５０ｍＬ）中混合物に、０℃でＣｂｚＣｌ（８．８９ｇ、５２．１２ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×２）で洗浄した。水性相を濃ＨＣｌでｐＨ２に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮して、６６−２（１１ｇ、粗製物）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.38-7.29(m, 5H), 5.13-5.08(m, 2H), 4.72-4.68(m, 1H), 1.12-1.09(m, 1H), 0.61-0.43(m, 4H).
【０６０５】
工程２．６６−２（５００ｍｇ、２．００６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２３５ｍｇ、２．４０７ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（６０９ｍｇ、６．０１８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物に、２５℃でＨＡＴＵ（１．１４ｇ、３．００９ｍｍｏｌ）を加えた。これを２５℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を水（１０ｍＬ）で溶解した。水層をＥｔＯＡｃ（８ｍＬ×２）で抽出した。有機層を飽和したＮａ２ＣＯ３溶液（１０ｍＬ）、１Ｎ  ＨＣｌ溶液（１０ｍＬ）、次いで水（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、６６−３（４００ｍｇ、６８％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２９３．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６０６】
工程３．トルエン中ＤＩＢＡＬ−Ｈ（１Ｍ、１８ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）を−７８℃で６６−３（３．５ｇ、１１．９７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中混合物に加えた。混合物を−７８℃で３時間撹拌した後、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）を滴下した。混合物を２５℃に加温した。溶媒を除去し、これをＭｅＯＨ（２５ｍＬ）に溶解し、Ｋ２ＣＯ３（３．３１ｇ、２３．９４ｍｍｏｌ）及び６６−４（２．７６ｇ、１４．３６ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。溶媒を除去した後、粗製物を１Ｎ  ＨＣｌ溶液（３０ｍＬ）で溶解し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝５：１−２：１）により精製して、６６−５（１．５ｇ、５５％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.41-7.30(m, 5H), 5.12-5.05(m, 3H), 4.47(m, 1H), 2.24(s, 1H), 1.18-1.11(m, 1H), 0.56-0.47(m, 4H).
【０６０７】
工程４．Ｃｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（３６６ｍｇ、０．９８１ｍｍｏｌ）を、２５℃で６６−６（２．６３ｇ、１３．０８ｍｍｏｌ）及び６６−５（１．５ｇ、６．５４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物をＮ２下５０℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、６６−７（３．０ｇ、５３％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8.01(s, 1H), 7.83-7.81(m, 1H), 7.37-7.14(m, 5H), 5.97(br, 1H), 5.40-5.38(m, 1H), 5.03-4.99(m, 2H), 4.32-4.28(m, 1H), 2.94(s, 2H), 2.17-2.07(m, 2H), 1.30-1.10(m, 3H), 0.50-0.26(m, 4H).
【０６０８】
工程５．６６−７（１．０ｇ、２．３２ｍｍｏｌ）、６６−８（５７１ｍｇ、４．６４ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（１．１５ｇ、４．６４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５ｍＬ）中溶液を、２５℃で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、６６−９（５００ｍｇ）及び６６−１０（１１２ｍｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.60(s, 1H), 8.10(s, 1H), 7.82(d, J=9.2Hz, 1H), 7.56-7.54(m, 2H), 7.36-7.25(m, 7H), 6.08-6.05(m, 1H), 5.51-5.43(m, 3H), 5.14(t, J=5.6Hz, 1H), 5.03(s, 2H), 4.44(d, J=5.6Hz, 2H), 4.31(t, J=8.4Hz, 1H), 3.04-2.97(m, 2H), 2.15-2.08(m, 2H), 1.30-1.23(m, 3H), 0.49-0.30(m, 4H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５３６．３［Ｍ＋Ｈ＋］。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.54(s, 1H), 8.09(s, 1H), 7.82-7.80(m, 1H), 7.56-7.54(m, 2H), 7.36-7.26(m, 7H), 6.03-6.01(m, 1H), 5.49-5.42(m, 3H), 5.13(t, J=5.6Hz, 1H), 5.03(s, 2H), 4.44(d, J=5.6Hz, 2H), 4.29(t, J=8.4Hz, 1H), 3.04-2.97(m, 2H), 2.14-2.05(m, 2H), 1.30-1.25(m, 3H), 0.49-0.30(m, 4H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５３６．４［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６０９】
工程６．６６−９（８０ｍｇ、０．１４９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液に、２５℃でＰＮＰカーボネート（１３６ｍｇ、０．４４７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（７７ｍｇ、０．５９６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２０時間加熱還流した。溶媒を除去し、残留物をＤＭＦ（２ｍＬ）に溶解し、ノルフロキサシン（７２ｍｇ、０．２２４ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（９６ｍｇ、０．７４５ｍｍｏｌ）を２５℃で加え、混合物を２５℃で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、実施例６６（２３ｍｇ、１８％）を得た。
1H NMR(400MHz, MDSO-d6) δ 15.33(s, 1H), 10.65(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.14(s, 1H), 8.09(s, 1H), 7.96-7.81(m, 2H), 7.62-7.60(m, 2H), 7.38-7.20(m, 8H), 6.04-6.00(m, 1H), 5.48-5.43(m, 1H), 5.07(s, 2H), 5.02(s, 2H), 4.59-4.57(m, 2H), 4.40-4.31(m, 1H), 3.61(s, 4H), 3.32(s, 4H), 3.03-2.99(m, 2H), 2.20-2.11(m, 2H), 1.40(t, J=7.2Hz, 3H), 1.30-1.23(m, 3H), 0.48-0.23(m, 4H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８８１．４［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６１０】
実施例６７．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（２−（６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサンアミド）アセトアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０６１１】
工程１．化合物６７−２（７５ｍｇ、１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１０ｍＬ）中溶液に、化合物６７−１（３１０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（２５２ｍｇ、３ｍｍｏｌ）の水（１０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃで洗浄し、１０％ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化した。得られた懸濁液をＥｔＯＡｃで抽出した。混合した有機層を濃縮して、化合物６７−３（２７０ｍｇ、不純物を含む）を得た。
【０６１２】
工程２．化合物６７−３（２００ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）及び化合物６７−４（９０ｍｇ、０．７７７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、室温でＤＣＣ（１６１ｍｇ、０．７７７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下室温で１６時間撹拌した。これを濃縮し、濾液を濃縮して、６７−５（２００ｍｇ、収率：７４％）を得た。
【０６１３】
工程３．化合物６７−５（２００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）、化合物６７−６（１０７ｍｇ、０．２６５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解し、反応混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を濾過し、分取ＨＰＬＣにより精製して、６７−７（２５ｍｇ、収率：６．３％）を得た。
【０６１４】
工程４．化合物６７−７（２５ｍｇ、０．０３８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（２５ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１５ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌した。ノルフロキサシン（３０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例６７（２０ｍｇ、収率：４８％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８０２分、ＭＳ＝５０１．３［１／２Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4 +CDCl3 400MHz, δ8.83(s, 1H), 7.99(d, J=13.2Hz, 2H), 7.59(d, J=6.8Hz, 2H), 7.35(d, J=8.0Hz, 2H), 7.11(s, 1H), 5.51(s, 1H), 5.12(s, 2H), 4.95(s, 1H), 4.47(s, 2H), 3.86(s, 2H), 3.71(s, 4H), 3.48-3.44(m, 2H), 3.31(s, 4H), 3.25(s, 1H), 3.15(s, 1H), 2.67(s, 4H), 2.26-2.20(m, 5H), 1.65-1.61(m, 6H), 1.58-1.52(m, 1H), 1.33-1.29(m, 4H), 0.95(d, J=6.8Hz, 3H), 0.88(d, J=6.4Hz, 3H).
【０６１５】
実施例６８．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０６１６】
工程１．粗製の化合物６８−１（５００ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン／Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ／５ｍＬ）中溶液に、ジオキサン（１０ｍＬ）中のＫ２ＣＯ３（４２８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及びＦｍｏｃ−Ｃｌ（４１６ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これを濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の１５％−２０％ＭｅＯＨ）により精製して、化合物６８−２（２８６ｍｇ、３７％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．７０９分、ＭＳ＝６２６．１［Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4 400MHz, δ 8.06(s, 1H), 7.80-7.78(d, J=7.2Hz, 2H), 7.67-7.63(t, J=6.8Hz, 2H), 7.58-7.56(d, J=8.4Hz, 2H), 7.39-7.27(m, 6H), 5.6-5.5(m, 1H), 4.69-4.67(d, J=7.2Hz, 1H), 4.57(s, 2H), 4.40-4.36(m, 2H), 4.25-4.15(m, 1H), 3.3-3.2(m, 1H), 3.2-3.1(m, 1H), 2.35-2.15(m, 3H), 1.55-1.35(m, 2H), 0.98-0.97(d, J=6.8Hz, 3H), 0.90-0.88(d, J=6.8Hz, 3H).
【０６１７】
工程２．化合物６８−２（２００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（１８５ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を窒素下室温で１．５時間撹拌した。ノルフロキサシン（１９７ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌した。次いでピペリジン（０．１ｍＬ、１ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、混合物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物６８−４（２５０ｍｇ、４−ニトロフェノール含有）を得た。これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６１８】
工程３．化合物６８−４（１００ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、化合物５（５０ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２３℃で２時間撹拌した。混合物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例６８（２０ｍｇ、収率１６％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８０３分、ＭＳ＝９４２．４［Ｍ＋１］、４７１．８［１／２Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 15.3(s, 1H), 10.60(s, 1H), 8.94(s, 1H), 8.1(d, 1H) 8.01(s, 1H),7.94-7.90(dd, J=12.8Hz, 1H), 7.58-7.56(d, J=8.8Hz, 2H), 7.34-7.32(d, J=8.8Hz, 2H), 7.2(d, 1H), 6.97(s, 2H), 6.0(m, 1H), 5.5-5.4(m, 1H), 5.40(s, 2H), 5.04(s, 2H), 4.9-4.85(m, 1H), 4.6-4.5(m, 2H), 3.58(s, 4H), 3.4-3.3(m, 6H), 3.1-2.9(m, 2H), 2.2-2.0(m, 5H), 1.6-1.4(m, 7H), 1.3-1.2(m, 4H), 0.80-0.78(d, J=6.8Hz, 3H), 0.76-0.74(d, J=6.8Hz, 3H).
【０６１９】
実施例６９．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）ペンチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０６２０】
工程１．Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１６ｇ、１５２．５ｍｍｏｌ）及び６９−１（５ｇ、３８．１ｍｍｏｌ）の混合物に、ＴＨＦ（４０ｍＬ）中のＣｂｚ−ＯＳｕ（１１．４ｇ、４５．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをｐＨ＞１０に調節し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で洗浄した。水層を濃ＨＣｌでｐＨ＜１に酸性化した。溶液をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して６９−２（９．７ｇ、９５．９％）を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６２１】
工程２．６９−２（９．７ｇ、３６．６ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（３．９ｇ、４０．２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２０．８ｇ、５４．８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中混合物に、Ｅｔ３Ｎ（２１ｍＬ、１４６．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、粗製物を水（１５０ｍＬ）で溶解し、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を飽和したＮａＨＣＯ３、濃ＨＣｌ、飽和したＮａＣｌで洗浄し、濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、６９−３（１０．１ｇ、８９．６％）を得た。
【０６２２】
工程３．ＤＩＢＡＬ−Ｈ（１９．５ｍＬ、トルエン中１Ｍ）を、−７８℃で６９−３（４．０ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中溶液に滴下した。反応混合物を−７８℃で２時間撹拌した後、過剰のＤＩＢＡＬを無水ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）によりクエンチし、混合物を室温に加温した。これを濃縮して６９−４（３．２ｇ、粗製物）を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６２３】
工程４．６９−４（３．２ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）、６９−５（３．０ｇ、１５．６ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（３．６ｇ、２６．０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中混合物を室温で１６時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により精製して、６９−６（１．９ｇ、６０．３％）を得た。
【０６２４】
工程５．Ｔｆ２Ｏ（３．３ｍＬ、１９．６ｍｍｏｌ）を、０℃でＮａＮ３（６．３ｇ、９７．８ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（３０ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（４８ｍＬ）中溶液にゆっくり加えた。これを２時間撹拌した後、有機相を分離し、水性相をＣＨ２Ｃｌ２（２４ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジドを含む有機画分をプールし、飽和したＮａ２ＣＯ３で１回洗浄し、更には精製せずに使用した。ＣＨ２Ｃｌ２中のトリフリルアジド溶液を、６９−７（１．７１ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．０３ｇ、１４．６７ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（２４５ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５４ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１０８ｍＬ）中混合物に加えた。混合物を２６℃で１２時間撹拌した後、有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）で希釈した。混合物を濃ＨＣｌでｐＨ６に酸性化し、リン酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ６．２、２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×２）で洗浄した。次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ＝２に酸性化した。これを（３００ｍＬ×３）で抽出し、抽出物をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して６９−８を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６２５】
工程６．６９−８（２．０ｇ、９．７８ｍｍｏｌ）、６９−６（１．２ｇ、４．８９ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（２７３ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物を５０℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、６９−９（６００ｍｇ、２７．５％）を得た。
【０６２６】
工程７．６９−９（６００ｍｇ、１．３４ｍｍｏｌ）、６９−１０（４９６ｍｇ、４．０３ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（９９６ｍｇ、４．０３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５ｍＬ）中混合物を２３℃で４時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、６９−１１（３５０ｍｇ、４７．４％）及び６９−１２（２３．１ｍｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.02(s, 1H), 7.54(d, J=6.8Hz, 2H), 7.34-7.25(m, 7H), 5.49-5.46(m, 1H), 5.08(s, 2H), 4.55(s, 2H), 3.37-3.33(m, 1H), 3.24-3.16(m, 1H), 2.24-1.80(m, 3H), 1.45-1.43(m, 7H), 1.41(s, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５５２．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 10.53(s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.55(d, J=9.2Hz, 1H), 7.35(d, J=4.0Hz, 2H), 7.31-7.26(m, 7H), 6.04(s, 1H), 5.50-5.43(m, 3H), 5.12 -5.03(m, 3H), 4.77-4.73(m, 1H), 4.44(d, J=3.2Hz, 2H), 3.08-2.91(m, 2H), 2.24-2.16(m, 2H), 1.90-1.71(m, 2H), 1.35-1.20(m, 6H), 0.86-0.83(m, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５５２．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６２７】
工程８．６９−１１（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ＰＮＰカーボネート（１０９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（７０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中混合物を、５０℃で１２時間撹拌した。これを濃縮し、ＤＩＰＥＡ（７０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（１７２ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物に加えた。これを２３℃で４時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例６９（６９．３ｍｇ、４３％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.32(s, 1H), 10.63(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.02(s, 1H), 7.94(d, J=12.8Hz, 1H), 7.70(d, J=8.0Hz, 1H), 7.60(d, J=8.8Hz, 2H), 7.38-7.20(m, 8H), 6.03(s, 1H), 5.49-5.42(m, 3H), 5.07(s, 2H), 5.04(d, J=4.0Hz, 2H), 4.72-4.71(m, 1H), 4.58-4.57(m, 2H), 3.67(s, 4H), 3.61(s, 4H), 3.06-3.01(m, 2H), 2.12-2.07(m, 2H), 1.80-1.68(m, 2H), 1.42-1.38(m, 3H), 1.34(s, 6H), 0.84(s, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８９７．４［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６２８】
実施例７０．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３トリアゾール−１−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４，４ａ，８ａ−テトラヒドロキノリン−３−カルボン酸
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【０６２９】
工程１．化合物７０−１（３．０ｇ、２５．６１ｍｍｏｌ）の水（２０ｍＬ）中混合物に、Ｎａ２ＣＯ３（２．７１ｇ、２５．６１ｍｍｏｌ）を加えた。ＣｂｚＣｌ（４．８１ｇ、２８．１７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２８℃で１６時間撹拌した。混合物を濾過し、ＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×２）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮して、化合物７０−２（５．９ｇ、９２％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 8.21-7.30(m, 5H), 5.86(br, 1H), 5.15(s, 2H), 4.37-4.34(m, 1H), 2.28-2.21(m, 1H), 1.01-0.84(m, 6H).
【０６３０】
工程２．化合物７０−２（５．９ｇ、２３．４８ｍｍｏｌ）、Ｎ−メトキシメタンアミン塩酸塩（２．５２ｇ、２５．８３ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（７．１３ｇ、７０．４４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６０ｍＬ）中溶液に、２８℃でＨＡＴＵ（１３．４ｇ、３５．２２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２８℃で３時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を水（３０ｍＬ）に溶解した。水層をＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。粗製物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、化合物７０−３（４．５ｇ、６５％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２９５．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６３１】
工程３．化合物７０−３（５８８ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８ｍＬ）中混合物に、−７８℃でトルエン中ＤＩＢＡＬ−Ｈ（１Ｍ、２．４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を−７８℃で２時間撹拌した後、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）を滴下した。混合物を室温に加温した。溶媒を除去し、粗製物を次の工程に直接使用した。
【０６３２】
上記粗製物のＭｅＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５５３ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）及び化合物７０−４（４６１ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２６℃で８時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２０：１）により精製して、化合物７０−５（３００ｍｇ、６５．２％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２３２．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６３３】
工程４．ＮａＮ３（２．０ｇ、３０．７６ｍｍｏｌ）の蒸留Ｈ２Ｏ（４．５ｍＬ）及びＤＣＭ（７．５ｍＬ）中混合物に、０℃でＴｆ２Ｏ（１．５７ｇ、５．５５ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を０℃で３時間撹拌した。水層をＤＣＭ（４ｍＬ×２）で抽出し、飽和したＮａ２ＣＯ３溶液（８ｍＬ）で洗浄した。化合物７０−６（２４９ｍｇ、２．７９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（５７８ｍｇ、４．１９ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（７ｍｇ、２７．９ｕｍｏｌ）のＨ２Ｏ（９ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１８ｍＬ）中混合物に、ＤＣＭ中のトリフリルアジド（１５．５ｍＬ）を滴下した。混合物を２６℃で終夜撹拌した後、有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈した。これを濃ＨＣｌでｐＨ６に酸性化し、リン酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ６．２、５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ２に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、エバポレートさせて７０−７を得、これを更には精製せずに次の  工程に使用した。
【０６３４】
工程５．化合物７０−７（３２１ｍｇ、２．７９ｍｍｏｌ）及び化合物７０−５（２７８ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、Ｃｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（６７ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＮ２下５０℃で２時間加熱した。溶媒を除去した後、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中２．５−５％ＭｅＯＨ）により精製して、化合物７０−８（９０ｍｇ、２２％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 7.65(s, 1H), 7.37-7.32(m, 5H), 5.05(s, 2H), 4.64(s, 1H), 3.35(s, 4H), 2.02(s, 1H), 0.85-0.67(m, 6H).
【０６３５】
工程６．化合物７０−８（１．４ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）及び化合物７０−９（１．４９ｇ、１２．１２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５ｍＬ）中溶液に、２５℃でＥＥＤＱ（３．０ｇ、１２．１２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２５℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、混合物（１．１ｇ）を得た。２つの異性体をＳＦＣ分離により精製して、７０−１０ａ（２５０ｍｇ）及び他の光学異性体７０−１０ｂ（１１６ｍｇ）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.03(s, 1H), 7.57-7.54(m, 2H), 7.35-7.28(m, 7H), 5.57(q, J=7.2Hz, 1H), 5.13-5.06(m, 2H), 4.72-4.65(m, 1H), 4.58(s, 2H), 2.21-2.17(m, 1H), 1.87(d, J=7.2Hz, 3H), 0.97(d, J=6.8Hz, 3H), 0.90(d, J=6.8Hz, 3H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４５２．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６３６】
工程７．７０−１０ａ（１００ｍｇ、０．２２１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、２５℃でＰＮＰカーボネート（２０２ｍｇ、０．６６３ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１１４ｍｇ、０．８８４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２４時間加熱還流した後、溶媒を除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝２０：１）により精製して、中間体（９０ｍｇ）を得た。ＤＭＦ（２ｍＬ）中のノルフロキサシン溶液（７０ｍｇ、０．２１９ｍｍｏｌ）に、ＤＩＰＥＡ（９４ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２５℃で１５分間撹拌した後、上記中間体（９０ｍｇ、０．２１９ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、実施例７０（２６．５ｍｇ、２３％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.32(s, 1H), 10.61(s, 1H), 8.98(s, 1H), 8.07(s, 1H), 7.95-7.92(m, 1H), 7.71-7.58(m, 3H), 7.38-7.16(m, 8H), 5.52(m, 1H), 5.10-5.00(m, 4H), 4.63-4.52(m, 3H), 3.60(s, 4H), 3.30(s, 4H), 2.10-2.00(m, 1H), 1.75(d, J=7.6Hz, 3H), 1.42(t, J=7.6Hz, 3H), 0.88-0.75(m, 6H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ７９７．６［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６３７】
実施例７１．  ７−（４−（（４−（（２Ｓ）−６−アミノ−２−（４−（１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（チオフェン−２−イル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000197
2017504606.tif 000198
【０６３８】
工程１．化合物７１−１（５００ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中混合物に、Ｅｔ３Ｎ（５５９ｍｇ、５．５２ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１．０４９ｇ、２．７６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１５分間撹拌し、次いでＮＨＭｅ（ＯＭｅ）ＨＣｌ（２６９ｍｇ、２．７６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）及び水（３０ｍＬ）で抽出し、混合した有機層を乾燥し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、７１−２（５００ｍｇ、８６．４％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 7.34(d, J=4.8Hz, 1H), 7.22(d, J=9.2Hz, 1H), 6.94-6.89(m, 2H), 4.56(s, 1H), 3.70(s, 3H), 3.11(s, 3H), 3.09-2.95(m, 2H), 1.35(s, 9H).
【０６３９】
工程２．化合物７１−２（５００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）に溶解し、ドライアイス／アセトン浴中で−７８℃に冷却した。ＤＩＢＡＬ−Ｈ（４．８ｍＬ、４．７７ｍｍｏｌ、トルエン中１．０Ｍ）を滴下し、得られた溶液を−７８℃で３時間撹拌した。過剰の水素化物をＭｅＯＨ（５ｍＬ）でクエンチし、得られた溶液を室温に加温した。溶液をエバポレートさせて、化合物７１−３を得、更には精製しなかった。
【０６４０】
工程３．粗製の化合物７１−３（４０６ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）、化合物７１−４（６１１ｍｇ、３．１８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（６５９ｍｇ、４．７７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を真空で濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）により精製して、７１−５（２５０ｍｇ、６２．３％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 7.45(d, J=8.4Hz, 1H), 7.35(dd, J=4.8, 1.2Hz, 1H), 6.96-6.92(m, 2H), 4.35-4.31(m, 1H), 3.19(d, J=1.2Hz, 1H), 3.10-3.08(m, 2H), 1.36(s, 9H).
【０６４１】
工程４．化合物７１−５（２５０ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＨＣｌ−ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ、４．０Ｍ、２０．００ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。混合物を２５℃にて真空で濃縮して、７１−６をＨＣｌ塩として得た（１８０ｍｇ、９６．９％）。
【０６４２】
工程５．ＴＨＦ（２ｍＬ）中のＣｂｚ−Ｃｌ（２８７ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）を、化合物７１−６（１７０ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）の飽和したＮａＨＣＯ３水溶液（２ｍＬ）中溶液中に滴下した。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×３）及びＨ２Ｏ（１０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝５：１）により精製して、化合物７１−７（２５０ｍｇ、９６．３％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 7.93(d, J=8.4Hz, 1H), 7.38-7.31(m, 6H), 6.96-6.93(m, 2H), 5.02(s, 2H), 4.45-4.39(m, 1H), 3.26(d, J=2.0Hz, 1H), 3.13(dd, J=6.8, 2.0Hz, 2H).
【０６４３】
工程６．化合物７１−７（２８０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）及び化合物７１−８（４００ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、Ｃｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（３７ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌して７１−９を得、これを次の工程に直接使用した。
【０６４４】
工程７．粗製の化合物７１−９（５４７ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物に、ＥＥＤＱ（４８４ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）及び化合物７１−１０（１８１ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＮ２下室温で終夜撹拌した。混合物を分取ＨＰＬＣにより精製して、７１−１１（１００ｍｇ、１５．４％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.54(s, 1H), 8.11-8.06(m, 1H), 7.90(t, J=8.4Hz, 1H), 7.53(d, J=8.8Hz, 2H), 7.36-7.26(m, 8H), 6.92-6.89(m, 1H), 6.85(d, J=3.2Hz, 1H), 6.79(t, J=4.8Hz, 1H), 5.44-5.40(m, 1H), 5.14(t, J=6.0Hz, 1H), 5.06-4.93(m, 3H), 4.44(d, J=5.6Hz, 2H), 3.43-3.38(m, 1H), 3.01-3.24(m, 1H), 2.90-2.85(m, 2H), 2.12-2.07(m, 2H), 1.43-1.39(m, 2H), 1.37(s, 9H), 1.18-1.10(m, 2H).
【０６４５】
工程８．化合物７１−１１（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＰＥＡ（１１６ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ）、ＰＮＰカーボネート（９１ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で２時間撹拌した後、ノルフロキサシンを加えた。混合物を℃で更に１時間撹拌し、これを分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物７１−１２（１２０ｍｇ、７９．４％）を得た。
【０６４６】
工程９．化合物７１−１２（１００ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中混合物に、ＴＦＡ（０．５ｍＬ）を加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。次いで混合物をＤＭＦで希釈し、ＮＨ３Ｈ２ＯでｐＨ８に滴下調節した。得られた混合物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例７１（６３ｍｇ、６９．４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．８３０分、Ｍ／２＋Ｈ＋＝４５４．８。方法＝５−９５／２分。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.84(bs, 1H), 8.96(s, 1H), 8.46(s, 1H), 8.13-8.09(m, 1H), 7.96-7.89(m, 2H), 7.61(d, J=8.8Hz, 2H), 7.38-7.30(m, 8H), 7.21(d, J=7.2Hz, 1H), 6.92-6.90(m, 1H), 6.86(d, J=2.0Hz, 1H), 5.49-5.45(m, 1H), 5.08-4.92(m, 5H), 4.60-4.55(m, 2H), 3.61(s, 4H), 3.34-3.26(m, 6H), 2.70-2.66(m, 2H), 2.19-2.08(m, 2H), 1.57-1.49(m, 2H), 1.42-1.37(m, 3H), 1.23-1.16(m, 2H).
【０６４７】
実施例７２．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−フェニルエチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ヘキサンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000199
2017504606.tif 000200
【０６４８】
工程１．化合物７２−１（１４．７ｇ、０．１ｍｏｌ）の水（３００ｍＬ）中溶液に、Ｃｕ２（ＯＨ）２ＣＯ３（３８ｇ、０．１ｍｏｌ）を加えた。これを１時間加熱還流した。固体を濾別し、濾液のｐＨをＮａ２ＣＯ３を加えることにより９．０に調節した。Ｎａ２ＣＯ３を加えることによりｐＨを９．０で維持しながら、Ａｌｌｏｃ−Ｃｌ（１４．４ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。混合物を室温で１２時間撹拌した。青色固体を濾取し、水（３００ｍＬ）に再度溶解した。チオアセトアミド（２０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を５０℃で３時間撹拌した。溶液をＨＣｌでｐＨ２．０に酸性化し、１０分間沸騰させた。ＣｕＳを濾別し、溶液を１００ｍＬに濃縮し、７２−２を濾取した。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 5.94-5.88(m, 1H), 5.30-5.26(m, 1H), 5.18-5.15(m, 1H), 4.55-4.93(m, 1H), 3.50(brs, 1H), 3.13-3.09(m, 2H), 2.00-1.70(m, 2H), 1.54-1.41(m, 4H).
【０６４９】
工程２．ＮａＮ３（１．７８ｇ、２７．４５ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５ｍＬ）とＤＣＭ（７．５ｍＬ）との混合物中溶液に、Ｔｆ２Ｏ（０．９３ｍＬ、５．５５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、これをＤＣＭ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＣＯ３水溶液で洗浄し、濃縮して１０ｍＬにした。化合物７２−２（６４０ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）を、続いてＫ２ＣＯ３（５７７ｍｇ、４．１９ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４（７ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｏ（９ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１８ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１２時間撹拌した。有機溶媒をエバポレートさせ、溶液を水で希釈し、ｐＨをＨＣｌで６．０に調節し、リン酸バッファー（０．２５Ｍ、ｐＨ６．２、５０ｍＬ）で希釈した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を乾燥して化合物７２−３を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６５０】
工程３．７２−３（５６０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、７２−４（１．１２ｇ、４．０ｍｍｏｌ）及び触媒のＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６を加えた。混合物をＮ２下５０℃で３時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、７２−５を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５３６．２［Ｍ＋Ｈ＋］
【０６５１】
工程４．７２−５（４８０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、ＥＥＤＱ（２４７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び７２−６（１２３ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物をＮ２下０℃で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣ分離で精製して、７２−７及び７２−８を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.91(s, 1H), 7.55-7.52(m, 2H), 7.33-7.15(m, 12H), 5.89-5.87(m, 1H), 5.42-5.38(m, 1H), 5.28-5.23(m, 1H), 5.15-5.02(m, 3H), 4.58(s, 2H), 4.51-4.47(m, 2H), 3.31-3.05(m, 4H), 2.20-2.15(m, 2H), 1.53-1.50(m, 2H), 1.31-1.21(m, 2H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６４１．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.95(s, 1H), 7.56(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35-7.17(m, 12H), 5.95-5.88(m, 1H), 5.45-5.41(m, 1H), 5.30-5.26(m, 1H), 5.18-5.03(m, 3H), 4.58(s, 2H), 4.51-4.50(m, 2H), 3.31-3.23(m, 1H), 3.15-3.01(m, 3H), 2.23-2.15(m, 2H), 1.56-1.53(m, 2H), 1.32-1.22(m, 2H).ＬＣＭＳ：ｍ／ｚ６４１．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６５２】
工程５．７２−７（５９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（６２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１ｍＬ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解した。ＤＩＰＥＡ（０．２ｍＬ）及びノルフロキサシン（６５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物をカラムにより精製した。無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の中間体にＰｄ（ＰＰｈ３）４（１１６ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下室温で１２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物をシリカゲル上でのカラムにより精製して、実施例７２を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 8.86(s, 1H), 8.47(s, 1H), 8.01-7.93(m, 2H), 7.59-7.57(m, 2H), 7.39-7.37(m, 2H), 7.27-7.14(m, 11H), 5.41(s, 1H), 5.14(s, 2H), 5.09-4.92(m, 3H), 4.59-4.50(m, 2H), 3.72-3.71(m, 4H), 3.30(s, 4H), 3.21-3.19(m, 2H), 2.89-2.85(m, 2H), 2.25-2.23(m, 2H), 1.69-1.67(m, 2H), 1.52-1.49(m, 3H), 1.40-1.20(m, 2H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ９０２．５［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６５３】
実施例７３．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタン−２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）プロパンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４，４ａ，８ａ−テトラヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000201
2017504606.tif 000202
【０６５４】
工程１．Ｎａ２ＣＯ３水溶液（８２ｇ、０．７８ｍｏｌ）及び化合物７３−１（２０ｇ、０．１９ｍｏｌ）の混合物に、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のＣｂｚ−ＯＳｕ（５７ｇ、０．２３ｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをｐＨ＞１０に調節し、溶液をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ×２）で抽出した。水層を濃ＨＣｌでｐＨ＜１に酸性化し、溶液をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×２）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して化合物７３−２（４５ｇ、０．１９ｍｏｌ）を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６５５】
工程２．化合物７３−２（２０ｇ、８４．３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（８．９ｇ、９２．７ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４８．１ｇ、１２６．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）中混合物に、Ｅｔ３Ｎ（４８．７ｍＬ、３３７．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を水（３００ｍＬ）で溶解した。水層をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×３）で抽出した。有機層を飽和したＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、濃ＨＣｌ（１００ｍＬ）、飽和したＮａＣｌ（１００ｍＬ）で洗浄した。溶媒を除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、化合物７３−４（１２．９ｇ、４６．０ｍｍｏｌ）を得た。
【０６５６】
工程３．ＤＩＢＡＬ（１７．８ｍＬ、トルエン中１Ｍ）を、−７８℃で化合物７３−４（４．１５ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中溶液に滴下した。得られた溶液を−７８℃で２時間撹拌し、過剰のＤＩＢＡＬを無水ＭｅＯＨ（５ｍＬ）でクエンチし、得られた溶液を室温に加温した。溶液を濃縮して化合物７３−５（３．２７ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６５７】
工程４．化合物７５−５（３．２７ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）、７３−６（２．９６ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（４．１ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中混合物を室温で１６時間撹拌した後、溶媒を減圧下に除去し、粗残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を除去した後、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により精製して、化合物７３−７（６０６ｍｇ、２．７９ｍｍｏｌ）を得た。
【０６５８】
工程５．ＮａＮ３（３．２ｇ、４９．３ｍｍｏｌ）の蒸留Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（１６ｍＬ）中混合物に、０℃でＴｆ２Ｏ（１．７ｍＬ、９．９ｍｍｏｌ）を５分かけてゆっくり加えた。これを２時間撹拌した後、有機相を分離し、水性相をＣＨ２Ｃｌ２（８ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジドを含む有機画分を飽和したＮａ２ＣＯ３で１回洗浄し、化合物７３−８（０．８６ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１．０２ｇ、７．４０ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（２５ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）の蒸留Ｈ２Ｏ（１８ｍＬ）及びＭｅＯＨ（３６ｍＬ）中混合物に加えた。混合物を２６℃で１２時間撹拌した後、有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、濃ＨＣｌでｐＨ６に酸性化し、０．２Ｍリン酸バッファーｐＨ６．２（５０ｍＬ）で希釈した。これをＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で洗浄し、次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。これをＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出し、混合した層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６５９】
工程６．化合物７３−９（０．９９ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）、化合物７３−７（０．５４ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）２ＰＦ６（１１５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物を、５０℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物７３−１０（２５０ｍｇ、２３％）を得た。
【０６６０】
工程７．化合物７３−１０（１９９ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、化合物７３−１１（１７６ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（３５３ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物を、２４℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、７３−１２（１００ｍｇ、３９．１％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.98(s, 1H), 7.54(d, J=8.4Hz, 2H), 7.33-7.31(m, 6H), 7.10(s, 1H), 5.55-5.49(m, 1H), 4.98(s, 2H),4.55(s, 3H), 2.35(s, 1H), 1.84(d, J=6.4Hz, 3H), 1.69(s, 3H),0.94(d, J=6.8Hz, 3H), 0.79(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４６５．９［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６６１】
工程８．７３−１２（１５０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、ＰＮＰ（１７３ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１１１ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中混合物を、５０℃で１２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を更には精製せずに次の工程に使用した。ＤＭＦ（５ｍＬ）中の混合物（２００ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１１２ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（３１６ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）を２５℃で４時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例７３（３８．９ｍｇ、１４．８％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 8.69(s, 1H), 8.11(d, J=12.8Hz, 1H), 7.94(s, 1H), 7.59(s, 1H), 7.50(d, J=8.0Hz, 2H), 7.32-7.27(m, 6H), 6.82(d, J=6.4Hz, 1H), 5.45(s, 1H), 5.38-5.37(m, 1H). 5.10(s, 2H),4.97(s, 2H), 4.34-4.29(m, 2H), 3.71(d, J=2.4Hz, 4H), 3.25(s, 4H), 2.52-2.46(m, 1H), 1.94-1.91(m, 3H), 1.74(s, 3H),1.58-1.56(m, 3H), 0.93(d, J=7.2Hz, 3H), 0.82(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８１１．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６６２】
実施例７４．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（４−フルオロフェニル）エチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４，４ａ，８ａ−テトラヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000203
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【０６６３】
工程１．Ｔｆ２Ｏ（３．１５ｍＬ、１８．４ｍｍｏｌ）を、氷浴中でＮａＮ３（５．９３ｇ、９１．３ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１８ｍＬ）及びＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に撹拌しながら５分かけてゆっくり加えた。これを０℃で２時間撹拌した後、有機相を分離した。水性部分をＤＣＭ（３０ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジドを含む有機画分をプールし、飽和したＮａ２ＣＯ３で１回洗浄し、更には精製せずに使用した。化合物７４−１（１．６ｇ、９．１４ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（１．９０ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（４６ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）をＨ２Ｏ（３３ｍＬ）及びＭｅＯＨ（６６ｍＬ）中で混合した。ＤＣＭ中のトリフリルアジドを加え、混合物を２０℃で１２時間撹拌した。有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液をＨ２Ｏ（６０ｍＬ）で希釈し、濃ＨＣｌでｐＨ６に酸性化し、０．２Ｍリン酸バッファーｐＨ６．２（６０ｍＬ）で希釈した。これをＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ×２）で抽出して、スルホンアミド副生成物を除去した。次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。これをＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×３）で抽出し、有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、エバポレートさせて７４−２を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６６４】
工程２．７４−２（１．８４ｇ、９．１４ｍｍｏｌ）、７４−３（１．３６ｇ、４．５７ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＣＮ）４ＰＦ６（２１３ｍｇ、０．６８７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中混合物を、５０℃で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、７４−４（４７０ｍｇ、２０．６％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４９９．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６６５】
工程３．７４−４（３００ｍｇ、０．６０２ｍｍｏｌ）、７４−５（１４８ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（２９４ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物を、２０℃で１０時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、７４−６（１６０ｍｇ、４４．１％）及び７４−７（９５ｍｇ、２６．２％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.5(s, 1H), 8.07(s, 1H), 7.80(d, J=9.2Hz, 1H), 7.53(d, J=6.8Hz, 2H), 7.51-7.18(m, 8H), 7.05-7.00(m, 2H), 6.03-6.00(m, 1H), 5.47-5.41(m, 3H), 5.12-5.09(m, 1H), 4.99-4.88(m, 3H) 4.42(d, J=5.6Hz, 2H), 3.17-2.92(m, 4H),2.14-2.05(m, 2H), 1.28-1.22(m, 2H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６０４．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.56(s, 1H), 8.03(s, 1H), 7.81(d, J=9.2Hz, 1H), 7.51(d, J=6.8Hz, 2H), 7.28-7.18(m, 8H), 7.04-7.00(m, 2H), 6.06-6.03(m, 1H), 5.49-5.41(m, 3H), 5.13-5.10(m, 1H), 4.99-4.87(m, 3H) 4.42(d, J=5.6Hz, 2H), 3.18-2.92(m, 4H),2.13-2.02(m, 2H), 1.24-1.23(m, 2H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６０４．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６６６】
工程４．７４−６（５０ｍｇ、０．０８２ｍｍｏｌ）、ＰＮＰ（５３ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３２ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中混合物を、５０℃で１２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を更には精製せずに使用した。上記粗生成物（１１０ｍｇ、粗製物、０．０８２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３２ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（５１ｍｇ、０．１６６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物を、２０℃で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例７４（２５ｍｇ、３２．１％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.64-15.33(m, 1H), 10.67(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.21-7.03(m, 17H), 6.08(s, 1H), 5.47(s, 3H), 5.08(s, 2H), 5.01-4.91(m, 3H), 4.58(s, 2H). 3.61(s, 4H),3.31(s, 4H), 3.20-2.96(m, 4H), 2.12(s, 2H), 1.41-1.24(m, 5H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ９４９．１［Ｍ＋Ｈ＋］、４７５．３［Ｍ／２＋Ｈ＋］。
【０６６７】
実施例７５．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−アミノ−３−メチルブチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000205
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【０６６８】
工程１．ＴＨＦ（６０ｍＬ）中のＣｂｚ−ＨＯＳｕ（２２．８ｇ、９１．４ｍｍｏｌ）を、７５−１（１０．０ｇ、７６．２ｍｍｏｌ）の水（６０ｍＬ）とＴＨＦ（３０ｍＬ）との混合物中混合物に１５分かけて滴下した。混合物をＮａ２ＣＯ３（２４．２ｇ、２２８．６ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を２５℃で１６時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ×３）で抽出した。水性相を濃ＨＣｌでｐＨ＝２に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下に濃縮して、７５−２（２１．０ｇ粗製物）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８８．１［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０６６９】
工程２．７５−２（５．０ｇ、１８．８５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（２．２ｇ、２２．６２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５．７ｇ、５６．５５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１５０ｍＬ）中溶液に、２５℃でＨＡＴＵ（１０．８ｇ、２８．２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を水（８０ｍＬ）で溶解した。水層をＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を２Ｎ  ＨＣｌ溶液（８０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、７５−３（４．１ｇ、７１％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ３０９．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６７０】
工程３．トルエン中ＤＩＢＡＬ−Ｈ（１Ｍ、１６ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を、−７８℃で７５−３（４．１ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５ｍＬ）中混合物に滴下した。混合物を−７８℃で２時間撹拌した後、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）を滴下した。混合物を２５℃に加温し、溶媒を除去し、ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）に溶解した。この溶液にＫ２ＣＯ３（３．６８ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）及び７５−４（３．０７ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。溶液を２５℃で１６時間撹拌した後、溶媒を除去し、粗製物を１Ｎ  ＨＣｌ溶液（３０ｍＬ）で溶解し、ＥｔＯＡｃ（３６０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、真空中で濃縮した。粗製物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ＝２０：１）により精製して、７５−５（１．９ｇ、５８％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２４６．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６７１】
工程４．Ｃｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（４３２ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を、２５℃で７５−６（３．１１ｇ、１５．４８ｍｍｏｌ）及び化合物５（１．９ｇ、７．７４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍＬ）中溶液に加えた。反応混合物をＮ２下５０℃で２時間加熱した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、７５−７（２．１ｇ、６１％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 7.95(s, 1H), 7.69(d, J=8.8Hz, 1H), 7.36-7.29(m, 5H), 5.96(br, 1H), 5.38-5.35(m, 1H), 5.07-4.99(m, 2H), 4.82-4.77(m, 1H), 2.94(s, 2H), 2.16-2.06(m, 2H), 1.68-1.56(m, 3H), 1.28-1.05(m, 2H), 0.92-0.80(m, 6H).
【０６７２】
工程５．７５−７（５００ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）、７５−８（４１４ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（８３１ｍｇ、３．３６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物を、２５℃で２時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝５：１）により精製して、７５−９（３５０ｍｇ、５７％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.02(s, 1H), 7.56-7.54(m, 2H), 7.33-7.27(m, 7H), 5.50-5.46(m, 1H), 5.07(s, 2H), 4.95-4.91(m, 1H), 4.55(s, 2H), 3.25-3.07(m, 2H), 2.25-2.21(m, 2H), 1.77-1.64(m, 3H), 1.44-1.40(m, 2H), 0.96-0.95(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５５２．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６７３】
工程６．７５−９（１２０ｍｇ、０．２１８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、２５℃でＰＮＰカーボネート（１９９ｍｇ、０．６５４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１１３ｍｇ、０．８７２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５０℃で１８時間加熱した後、溶媒を除去し、残留物をＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解した。ノルフロキサシン（１０４ｍｇ、０．３２７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１４１ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２５℃で６時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例７５（９０ｍｇ、４６％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.34(s, 1H), 10.64(s, 1H), 8.97(s, 1H), 8.13(s, 1H), 8.04(s, 1H), 7.97-7.93(m, 1H), 7.73-7.70(m, 1H), 7.61-7.59(m, 2H), 7.38-7.20(m, 8H), 6.03(m, 1H), 5.47-5.43(m, 1H), 5.07-5.03(m, 4H), 4.82-4.74(m, 1H), 4.59-4.57(m, 2H), 3.61(s, 4H), 3.34(s, 4H), 2.90-3.01(m, 2H), 2.10-2.07(m, 2H), 1.62-1.56(m, 3H), 1.42-1.38(m, 3H), 1.27(m, 2H), 0.90-0.89(m, 6H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８９７．４［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６７４】
実施例７６．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサンアミド）−４−メチルペンタンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
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実施例５７の合成からの中間体を用い、実施例７６を実施例５７と同様の手順を用いて調製した。
2017504606.tif 000208
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８２８分、ＭＳ＝５２９．４［１／２Ｍ＋１］
1H NMR メタノール-d4 400MHz, δ 8.89(s, 1H), 8.09(s, 1H), 8.00(d, J=13.2Hz, 1H), 7.62(d, J=8Hz, 2H), 7.38(d, J=8Hz, 2H), 7.20(s, 1H), 5.51(d, J=5.2Hz, 1H), 5.15(s, 2H), 4.96(d, J=6.8Hz, 1H), 4.88(s, 2H), 4.60(s, 4H), 3.73(s, 4H), 3.46-3.42(m, 2H), 3.35(s, 4H), 2.65(s, 4H), 2.30-2.22(m, 4H), 1.65-1.56(m, 9H), 1.54-1.28(m, 5H), 1.00-0.97(m, 12H).
【０６７５】
実施例７７．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサンアミド）−３−フェニルプロパンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000209
実施例５９の合成からの中間体を用い、実施例７７を実施例５９と同様の手順を用いて調製した。
2017504606.tif 000210
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８４１分、ＭＳ＝５４６．５［１／２Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 10.66(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.34(d, J=9.2Hz, 1H), 8.09(s, 1H), 8.04(d, J=8.8Hz, 1H), 7.95(d, J=12.8Hz, 1H), 7.61(d, J=8.4Hz, 2H), 7.36(d, J=8.8Hz, 2H), 7.28-7.17(m, 6H), 6.05(s, 1H), 5.55-5.48(m, 1H), 5.43(s, 2H), 5.07(s, 2H), 4.90-4.86(m, 1H), 4.59-4.58(m, 3H), 3.61(s, 4H), 3.34-3.23(m, 4H), 3.04-2.95(m, 4H), 2.78(s, 1H), 2.59(s, 4H), 2.05-1.98(m, 4H), 1.43-1.22(m, 10H), 1.04(d, J=7.2Hz, 2H), 0.77(d, J=6.8Hz, 3H), 1.42(d, J=6.8Hz, 3H),.
【０６７６】
実施例７８．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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実施例６０の合成からの中間体を用い、実施例７８を実施例６０と同様の手順を用いて調製した。
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【０６７７】
工程１．化合物６０−５ｂ（５０ｍｇ、０．０７２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、室温でＰＮＰカーボネート（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（０．５ｍＬ、３ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で１．５時間撹拌した。ノルフロキサシン（５０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で更に１時間撹拌した。混合物を濃縮し、濾過し、分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）により精製して、実施例７８（３８．８ｍｇ、収率：５２％）を得た。
ＬＣＭＳ：（５−９５、ＡＢ、１．５分、ＥＳＩ）、０．８３３分、ＭＳ＝５２２．４［１／２Ｍ＋１］
1H NMR DMSO-d6 400MHz, δ 10.1(s, 1H), 8.93(s, 1H), 8.25-8.22(d, 1H), 8.04(s, 1H), 7.93-7.90(d, 1H), 7.81-7.79(d, 1H), 7.58-7.56(d, J=8.0Hz, 2H), 7.35-7.33(d, J=8.0Hz, 2H), 7.20-7.18(m, 1H), 6.0(m, 1H), 5.5(m, 1H), 5.40(s, 2H), 5.04(s, 2H), 4.9-4.87(m, 1H), 4.6-4.5(m, 2H), 4.2-4.1(m, 1H), 3.6(s, 4H), 3.2(m, 6H), 3.05-2.9(m, 2H), 2.55(s, 4H), 2.18-2.0(m, 5H), 1.9-1.8(m, 1H), 1.5-1.35(m, 7H), 1.3-1.05(m, 4H), 0.84-0.77(m, 12H).
【０６７８】
実施例７９．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−グアニジノペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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2017504606.tif 000214
【０６７９】
工程１．化合物７９−１（２ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）中溶液に、０℃で飽和したＫ２ＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）を、続いてＣｂｚ−Ｃｌ（３．９５８ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２８℃で１時間撹拌した後、これをＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）及びＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で抽出した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して化合物７９−２（５ｇ、１００％）を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 7.36-7.31(m, 5H), 6.92(d, J=8.8Hz, 1H), 5.01(s, 2H), 3.39-3.32(m, 3H), 1.80-1.76(m, 1H), 0.85-0.80(m, 6H).
【０６８０】
工程２．化合物７９−２（６．８ｇ、２８．７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下０℃でＤＭＰ（１４．５９ｍｇ、３４３．４ｍｍｏｌ）を加えた。５分後、反応混合物を室温に加温し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を０℃に冷却し、ＮａＨＣＯ３／Ｎａ２ＳＯ３（１：１）の飽和した溶液で洗浄した。分離後、有機層をもう一度洗浄した。混合した水層をＤＣＭ（３０ｍＬ×２）で抽出した。これをＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、濃縮して化合物７９−３（５．３ｇ、７９％）を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9.51(d, J=0.8Hz, 1H), 7.72-7.61(m, 1H), 7.43-7.30(m, 5H), 5.04(s, 2H), 3.91-3.88(m, 1H), 2.18-2.13(m, 6H), 0.94-0.82(m, 6H).
【０６８１】
工程３．化合物７９−３（粗製物、４．９ｇ、１２．７６ｍｍｏｌ）、化合物７９−４（４．９ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中溶液に、Ｋ２ＣＯ３（５．２８ｇ、３８．２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。混合物を濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により精製して、所望の生成物７９−５（１．３０ｇ、４４％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 7.74(d, J=8.8Hz, 1H), 7.37-7.29(m, 5H), 5.01(s, 2H), 4.09-4.05(m, 1H), 3.16(d, J=2.4Hz, 1H), 1.76(d, J=6.8Hz, 1H), 0.91(d, J=6.8Hz, 3H), 0.87(d, J=6.8Hz, 3H).
【０６８２】
工程４．化合物７９−６（２ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、化合物７９−７（１．６ｍＬ、１５．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、これを真空で濃縮し、ＭＴＢＥで洗浄し、濾過して、所望の生成物７９−８（１．３１５ｇ、１００％）を得た。
【０６８３】
工程５．ＮａＮ３（１．６ｇ、１５．４５ｍｍｏｌ）の蒸留Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中混合物を氷浴上で冷却した。Ｔｆ２Ｏ（１．１ｍＬ、６．１８ｍｍｏｌ）を５分かけてゆっくり加え、２時間撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２相を除去し、水性相をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジドを含む有機画分をプールし、飽和したＮａ２ＣＯ３（４０ｍＬ）で１回洗浄し、更には精製せずに使用した。化合物７９−８（１．３１５ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（６４１ｍｇ、４．６３５ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（１５５ｍｇ、０．６１８ｍｍｏｌ）を、蒸留Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２０ｍＬ）に加えた。ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中のトリフリルアジド溶液を加え、混合物を室温で終夜撹拌した。有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、濃ＨＣｌでｐＨ６に酸性化し、次いで０．２Ｍリン酸バッファーｐＨ６．２（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出して、スルホンアミド副生成物を除去した。次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（２０：１）抽出（４×１００ｍＬ）をもう一度行って生成物を得た。これらのＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ抽出物を混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、エバポレートさせて化合物７９−９を得、更には精製しなかった（６００ｍｇ、４３％）。
【０６８４】
工程６．化合物７９−９（５００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）及び７９−５（３０７ｇ、１．３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、Ｃｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（１６５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を５０℃で２時間撹拌し、混合物（７９−１０）を次の工程に直接使用した。
【０６８５】
工程７．化合物７９−１０（粗製物、７５２ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物に、ＥＥＤＱ（５４４ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）及び化合物７９−１１（２０３ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で撹拌し、Ｎ２下室温に終夜加温した。混合物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣ分離により精製して、化合物７９−１２（２５０ｍｇ、３０％）を得た。
【０６８６】
工程８．化合物７９−１２（９０ｍｇ、０．１１４ｍｍｏｌ）及びＰＮＰカーボネート（６９ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、ＤＩＰＥＡ（４５ｍｇ、０．３４２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＮ２下２１℃で３時間撹拌した。混合物（７９−１３）を精製せずに次の工程に直接使用した。
【０６８７】
工程９．前工程からの溶液に、ノルフロキサシン（７５ｍｇ、０．２２８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２１℃で１時間撹拌した。混合物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物７９−１４（８０ｍｇ、６２％）を得た。
【０６８８】
工程１０．化合物７９−１４（６０ｍｇ、０．０５３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＴＦＡ（１ｍＬ）を加えた。反応混合物を１６℃で５時間撹拌した。混合物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣにより精製して、実施例７９（３０ｍｇ、６４％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．８３７分、Ｍ＋Ｈ＋＝８８２．２．方法＝５−９５／１．５分。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8.94(s, 1H), 8.48(s, 1H), 8.12(s, 1H), 7.92(d, J=12.4Hz, 1H), 7.76(d, J=8.8Hz, 1H), 7.61(s, 1H), 7.34(m, 10H), 5.07-4.99(m, 5H), 4.59(d, J=7.2Hz, 1H), 3.61(s, 4H), 3.17(m, 6H), 3.12(s, 2H), 2.18-2.03(m, 4H), 1.39(s, 5H), 0.84(d, J=6.4Hz, 3H), 0.78(d, J=6.0Hz, 3H).
【０６８９】
実施例８０．  （Ｓ）−７−（４−（（４−（２−（４−（２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）プロパン−２−イル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
2017504606.tif 000215
2017504606.tif 000216
【０６９０】
工程１．ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のＣｂｚ−ＯＳｕ（５７ｇ、０．２３ｍｏｌ）を、Ｎａ２ＣＯ３水溶液（８２ｇ、０．７８ｍｏｌ）及び８０−１（２０ｇ、０．１９ｍｏｌ）の混合物に加えた。これを室温で１６時間撹拌した後、これをｐＨ＞１０に調節し、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ×２）で洗浄した。水層をプールし、濃ＨＣｌでｐＨ＜１に酸性化した。これをＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×２）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、エバポレートさせて、８０−２（４５ｇ、９７．８％）を得た。
【０６９１】
工程２．８０−２（２０ｇ、８４．３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（８．９ｇ、９２．７ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（４８．１ｇ、１２６．４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２００ｍＬ）中混合物に、Ｅｔ３Ｎ（４８．７ｍＬ、３３７．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を水（３００ｍＬ）で溶解した。水層をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×３）で抽出し、有機層を飽和したＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ）、濃ＨＣｌ（１００ｍＬ）及び飽和したＮａＣｌ（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、８０−３（１２．９ｇ、５４．６％）を得た。
【０６９２】
工程３．ＤＩＢＡＬ−Ｈ（１７．８ｍＬ、トルエン中１Ｍ）を、−７８℃で８０−３（４．１５ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中溶液に滴下し、得られた溶液を−７８℃で２時間撹拌した。過剰のＤＩＢＡＬを無水ＭｅＯＨ（５ｍＬ）によりクエンチし、溶液を室温に加温した。溶液を濃縮して８０−４（３．２７ｇ）を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６９３】
工程４．８０−４（３．２７ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）、８０−５（２．９６ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（４．１ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中混合物を、室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下に除去し、粗残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）で分配した。有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を減圧下に除去し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により精製して、８０−６（６０６ｍｇ、１８．９％）を得た。
【０６９４】
工程５．Ｔｆ２Ｏ（１．７ｍＬ、９．９ｍｍｏｌ）を、０℃でＮａＮ３（３．２ｇ、４９．３ｍｍｏｌ）の蒸留Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）及びＣＨ２Ｃｌ２（１６ｍＬ）中溶液に５分かけてゆっくり加えた。２時間後、有機相を分離し、水性相をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ×２）で抽出した。混合したトリフリルアジドを含む有機画分をプールし、飽和したＮａ２ＣＯ３で１回洗浄し、更には精製せずに使用した。
【０６９５】
８０−７（０．８６ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１．０２ｇ、７．４０ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（２５ｍｇ、０．０９９ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１８ｍＬ）及びＭｅＯＨ（３６ｍＬ）中混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２中のトリフリルアジド（３２ｍＬ）を加え、混合物を２６℃で１２時間撹拌した。有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液をＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈した。これを濃ＨＣｌでｐＨ６に酸性化し、リン酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ６．２、５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で洗浄した。次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ２に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して８０−８を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０６９６】
工程６．８０−８（０．９９ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）、８０−６（０．５４ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６（１１５ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中混合物を、５０℃で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、８０−９（２５０ｍｇ、２３％）を得た。
【０６９７】
工程７．８０−９（１９９ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、８０−１０（１７６ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（３５３ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物を、２４℃で２時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、８０−１１（２１１ｍｇ、８４％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.00(s, 1H), 7.56(dd, J=1.6, 8.4Hz, 2H), 7.33-7.31(m, 7H), 5.48-5.44(m, 2H), 4.99(s, 2H), 4.56(s, 2H), 3.23-3.16(m, 1H), 3.09-3.03(m, 1H), 2.26-2.20(m, 2H), 1.68(s, 6H), 1.51-1.45(m, 1H), 1.39-1.29(m, 1H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５２４．３［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６９８】
工程８．８０−１１（１５０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）、ＰＮＰカーボネート（１７３ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１１１ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中混合物を５０℃で１２時間撹拌した後、溶媒を除去し、ＤＩＰＥＡ（１１２ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（３１６ｍｇ、０．８７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に加え、２５℃で４時間撹拌した。溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例８０（１１３ｍｇ、４５％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.65(s, 1H), 8.96(s, 1H), 7.98-7.93(m, 2H), 7.63-7.60(m, 3H), 7.38-7.20(m, 9H), 6.05(s, 1H), 5.44(s, 3H), 5.07(s, 2H), 4.93(s, 2H), 4.59-4.57(m, 2H), 3.61(s, 4H), 3.02-2.98(m, 2H), 2.12-2.02(m, 2H), 1.57(d, J=4.0Hz, 6H), 1.42-1.38(m, 3H), 1.28-1.23(m, 2H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８６９．３［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０６９９】
実施例８１．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−フェニルエチル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４，４ａ，８ａ−テトラヒドロキノリン−３−カルボン酸
2017504606.tif 000217
2017504606.tif 000218
【０７００】
工程１．Ｃｂｚ−Ｌ−フェニルアラニン（３．０ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（４．５７ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（３．８７ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）を加えた。これを室温で１５分間撹拌した後、Ｎ−メトキシメタンアミン塩酸塩（１．２ｇ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を更に１時間撹拌した後、これをＤＣＭ（６０ｍＬ×３）で抽出し、１０％ＨＣｌ水溶液（６０ｍＬ）及び水（６０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、８１−２（３．２ｇ、９４％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.36-7.14(m, 10H), 5.42-5.40(m, 1H), 5.13-5.02(m, 3H), 3.69(s, 3H), 3.18(s, 3H), 3.11-3.06(m, 1H), 2.94-2.89(m, 1H).
【０７０１】
工程２．ＤＩＢＡＬ−Ｈ（２０ｍＬ、トルエン中１Ｍ）を、Ｎ２下−７８℃で８１−２（３．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中溶液に加えた。溶液を−７８℃で６時間撹拌した後、混合物をＭｅＯＨ（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）でクエンチした。これを濾過し、濾液をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮し、８１−３を更には精製せずに次の工程に直接使用した
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８４．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０７０２】
工程３．８１−３（１０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中溶液に、０℃でＫ２ＣＯ３（２．７６ｇ、２０ｍｍｏｌ）及び８１−４（２．３１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を０℃で１２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィーにより精製して、８１−５を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ２８０．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０７０３】
工程４．ＮａＮ３（１．７８ｇ、２７．４５ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５ｍＬ）とＤＣＭ（７．５ｍＬ）との混合物中溶液に、Ｔｆ２Ｏ（０．９３ｍＬ、５．５５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、これをＤＣＭ（６０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＣＯ３水溶液で洗浄し、１０ｍＬに濃縮した。次いで８１−６（５００ｍｇ、２．８ｍｍｏｌ）を、続いてＫ２ＣＯ３（５７７ｍｇ、４．１９ｍｍｏｌ）、ＣｕＳＯ４（７ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、Ｈ２Ｏ（９ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１８ｍＬ）を加えた。混合物を室温で１２時間撹拌した。有機溶媒をエバポレートさせた後、これを水（２０ｍＬ）で希釈し、ｐＨをＨＣｌで６．０に調節し、次いでリン酸バッファー（０．２５Ｍ、ｐＨ６．２、５０ｍＬ）で希釈した。混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水して、８１−７を得、これを次の工程に直接使用した。
【０７０４】
工程５．８１−５（５６０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、８１−７（８０４ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）及び触媒のＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６を加えた。混合物をＮ２下５０℃で３時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、８１−８を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.00(s, 1H), 7.57(d, J=8.4Hz, 2H), 7.35-7.18(m, 12H), 5.50-5.45(m, 1H), 5.14-5.11(m, 1H), 5.05-5.03(m, 2H), 4.58(s, 2H), 3.26-3.24(m, 2H), 3.13-3.12(m, 2H), 2.35-2.15(m, 2H), 1.55-1.35(m, 2H).
【０７０５】
工程６．８１−８（４８０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、Ｎ２下ＥＥＤＱ（２４７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び８１−９（１２３ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣ及びＳＦＣ分離により精製して、８１−１０及び８１−１１を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 8.00-7.95(m, 1H), 7.58-7.56(m, 2H), 7.35-7.18(m, 12H), 5.51-5.47(m, 1H), 5.15-5.09(m, 1H), 5.55-5.00(m, 2H), 4.58(s, 2H), 3.33-3.20(m, 2H), 3.16-3.09(m, 2H), 2.25-2.18(m, 2H), 1.43-1.38(m, 2H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５８６．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.96(s, 1H), 7.57(d, J=8.8Hz, 2H), 7.35-7.18(m, 12H), 5.52-5.48(m, 1H), 5.13-4.87(m, 3H), 4.58(s, 2H), 3.33-3.15(m, 2H), 3.14-3.07(m, 2H), 2.27-2.14(m, 2H), 1.46-1.31(m, 2H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５８６．１［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０７０６】
工程７．８１−１０（５９ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、ＰＮＰカーボネート（６２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１ｍＬ）を加えた。混合物を１６時間加熱還流した。溶媒を除去した後、残留物をＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．３ｍＬ）及びノルフロキサシン（６５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を除去した後、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例８１を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 15.35(br s, 1H), 10.66(s, 1H), 8.97(s, 1H), 8.10(s, 1H), 7.95(d, J=12.8Hz, 1H), 7.85-7.83(m, 1H), 7.62(d, J=8.4Hz, 2H), 7.39-7.19(m, 13H), 6.07-6.02(m, 1H), 5.51-5.45(m, 3H), 5.07(s, 2H), 5.01-4.92(m, 3H), 4.59(d, J=7.6Hz, 2H), 3.61(s, 4H), 3.44-3.38(m, 4H), 3.21-3.16(m, 1H), 3.06-2.98(m, 3H), 2.12-2.00(m, 2H), 1.45-1.15(m, 5H).ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ９３１．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０７０７】
実施例８２．  （Ｓ）−７−（４−（（４−（２−（４−（１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）シクロプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸
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2017504606.tif 000220
【０７０８】
工程１．８２−１（１０ｇ、９８．９ｍｍｏｌ）のＮａ２ＣＯ３水溶液（４１．９ｇ、３９５．６ｍｍｏｌ）中混合物に、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のＣｂｚ−ＯＳｕ（２９．６ｇ、１１８．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これをｐＨ＞１０に調節し、溶液をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ×２）で洗浄した。水層を濃ＨＣｌでｐＨ＜１に酸性化し、溶液をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して８２−２（２３ｇ、粗製物）を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０７０９】
工程２．８２−２（１０ｇ、４２．５ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（４．５ｇ、４６．８ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２４．２ｇ、６３．８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に、Ｅｔ３Ｎ（２４．６ｍＬ、１７０．０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、粗製物を水（３００ｍＬ）で溶解した。水層をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×３）で抽出した。有機層を飽和したＮａＨＣＯ３、希薄ＨＣｌ、飽和したＮａＣｌで洗浄し、濃縮し、シリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝２：１）により精製して、８２−３（１０．８ｇ、９１．３％）を得た。
【０７１０】
工程３．ＤＩＢＡＬ−Ｈ（２２．５ｍＬ、トルエン中１Ｍ）を、−７８℃で８２−３（４．２ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中溶液に滴下した。混合物を−７８℃で２時間撹拌した後、過剰のＤＩＢＡＬを無水ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）によりクエンチし、得られた溶液を室温に加温した。溶液を濃縮して８２−４（３．３ｇ、粗製物）を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０７１１】
工程４．８２−４（３．３ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）、８２−５（３．０ｇ、１８．１ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（４．１ｇ、３０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）中混合物を室温で１６時間撹拌した後、溶媒を減圧下に除去し、粗残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を除去した後、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により精製して、８２−６（１．８ｇ、５５．６％）を得た。
【０７１２】
工程５．Ｔｆ２Ｏ（４．７ｍＬ、２７．９ｍｍｏｌ）を、０℃でＮａＮ３（９．２ｇ、１３９．３ｍｍｏｌ）の蒸留Ｈ２Ｏ（３０ｍＬ）及びＤＣＭ（４８ｍＬ）中混合物にゆっくり加えた。これを２時間撹拌した後、ＤＣＭ層を分離し、水性部分をＣＨ２Ｃｌ２（２４ｍＬ×２）で抽出した。トリフリルアジドを含む有機画分をプールし、飽和したＮａ２ＣＯ３で１回洗浄し、更には精製せずに使用した。
【０７１３】
ＣＨ２Ｃｌ２中のトリフリルアジド（９６ｍＬ）を、８２−７（２．４４ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２．８９ｇ、２０．９ｍｍｏｌ）及びＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（３４７ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（５４ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１０８ｍＬ）中混合物に加えた。混合物を２６℃で１２時間撹拌した後、有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液をＨ２Ｏ（２００ｍＬ）で希釈した。混合物を濃ＨＣｌでｐＨ＝６に酸性化し、リン酸バッファー（０．２Ｍ、ｐＨ６．２、２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×２）で洗浄した。次いで水性相を濃ＨＣｌでｐＨ＝２に酸性化した。これをＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して８２−８を得、これを更には精製せずに次の工程に使用した。
【０７１４】
工程６．８２−８（２．８ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）、８２−６（１．５ｇ、７．０ｍｍｏｌ）及びＣｕ（ＣＮ）４ＰＦ６（７７９ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中混合物を５０℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、８２−９（２００ｍｇ、６．９％）を得た。
【０７１５】
工程７．８２−９（４１０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）、８２−１０（３６４ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（７３０ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物を２４℃で２時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、８２−１１（３５０ｍｇ、６８％）を得た。
1H NMR(400MHz, MeOD) δ 7.96(s, 1H), 7.60(d, J=8.4Hz, 2H), 7.42-7.35(m, 7H), 5.50-5.46(m, 1H), 5.14(s, 2H), 4.61(s, 2H), 3.24-3.22(m, 1H), 3.15-3.13(m, 1H), 2.30-2.15(m, 2H), 1.46-1.40(m, 4H), 1.29(s, 2H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５２２．０［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０７１６】
工程８．８２−１１（２００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、ＰＮＰ（２３４ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１４９ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中混合物を５０℃で１２時間撹拌した後、これを濃縮し、ＤＩＰＥＡ（１４９ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）及びノルフロキサシン（３６７ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（８ｍＬ）中溶液に加えた。これを２３℃で４時間撹拌した後、溶媒を除去し、残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、実施例８２（５０ｍｇ、１５．２％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 10.62(s, 1H), 8.96(s, 1H), 8.18(s, 1H), 7.96-7.89(m, 2H), 7.62-7.60(m, 2H), 7.38-7.36(m, 7H), 7.22-7.20(m, 1H), 6.04(s, 1H), 5.43(s, 3H), 5.07(s, 2H), 5.03(s, 2H), 4.59-4.57(m, 2H), 3.67(s, 6H), 3.30--2.98(m, 4H), 2.20-2.09(m, 2H), 1.42-1.38(m, 3H), 1.25-1.22(s, 4H), 1.13(s, 2H).
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８６７．０５［Ｍ＋Ｈ＋］、８８９．１６［Ｍ＋Ｎａ＋］。
【０７１７】
実施例８３．  ７−（４−（（４−（（Ｓ）−５−アミノ−２−（４−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）ペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニル）ピペラジン−１−イル）−１−エチル−６−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸。
実施例８３を実施例５８と同様の手順を用いて調製した。
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1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8.96(s, 1H), 8.47-8.39(m, 1H), 8.08(s, 1H), 7.94(d, J=13.2Hz, 1H), 7.74(d, J=9.2Hz, 1H), 7.61(d, J=8.4Hz, 2H), 7.38-7.29(m, 8H), 7.22-7.20(m, 1H), 5.49-5.47(m, 1H), 5.07(s, 2H), 5.02(d, J=6.0Hz, 2H), 4.62-4.55(m, 3H), 3.60(s, 4H), 3.16(s, 4H), 2.77-2.70(m, 2H), 2.20-2.15(m, 2H), 2.09-2.00(m, 1H), 1.40(t, J=6.8Hz, 5H), 1.23(s, 1H), 0.85(d, J=6.8Hz, 3H), 0.78(d, J=6.8Hz, 3H).
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ８４０．２［Ｍ＋Ｈ＋］。
【０７１８】
リンカー−薬物化合物を調製する方法
ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＬＤ１の調製
（１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（１−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル８−（６−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−６−オキソヘキシルオキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート
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【０７１９】
実施例１．  ２，２，２−トリフルオロ酢酸化合物と（１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（１−（（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル８−（（６−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−６−オキソヘキシル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（１：１）（ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＬＤ１）。
フェノール１（３．３４ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の撹拌された均一溶液に、窒素雰囲気下２０℃でジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ（１２．５ｍＬ、５０．０ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、反応混合物を窒素下２０℃で更に２０時間撹拌した。混合物を石油エーテル（２５０ｍＬ）で希釈し、窒素下２０℃で２０分間撹拌した。溶媒をデカントし、石油エーテル（２５０ｍＬ）を用いて手順をもう一度繰り返した。得られた固体を２５℃で１時間真空下で乾固して、化合物２（２．７ｇ、１００％）を得た；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.80(s, 1H), 8.15(d, J=8.3Hz, 1H), 7.87(d, J=8.2Hz, 1H), 7.58(br t, J=7.5Hz, 1H), 7.43(br t, J=7.4Hz, 1H), 6.81(s, 1H), 4.27-4.17(m, 1H), 4.01(dd, J=11.0, 3.2Hz, 1H), 3.93-3.74(m, 3H), 2つのプロトンが認められず.粗生成物を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０７２０】
アミン２（２．７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）及びジオキサン（３０ｍＬ）中の撹拌された不均一混合物に、窒素雰囲気下０℃で無水トリフルオロ酢酸（ＴＦＡＡ）（３．４ｍＬ、２４．０ｍｍｏｌ）を、続いてジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（８．７１ｍＬ、５０．０ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、反応混合物を窒素下０℃で更に５０分間撹拌した。酢酸エチル（４００ｍＬ）を加え、１Ｎ  ＨＣｌ（２００ｍＬ）を０℃で加え、混合物を窒素下２０分間撹拌した。酢酸エチル層を分離し、１Ｎ  ＨＣｌ（２００ｍＬ）及び水（２×２００ｍＬ）で順次洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃の浴温で減圧下にエバポレートさせて、３（３．３ｇ、１００％）を緑灰色固体として得た。この物質を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０７２１】
フェノール３（３．３ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（４０ｍＬ）中の撹拌された均一溶液に、窒素雰囲気下２０℃でジ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト（４．３１ｍＬ、１３．０ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、反応混合物を窒素下２０℃で５−１０分間撹拌し、次いでテトラゾール（ＣＨ３ＣＮ中３％溶液、３８．０ｍＬ、１３．０ｍｍｏｌ）を１７分かけて滴下した。最終の反応混合物を窒素下２０℃で１９時間更に撹拌した。混合物を氷浴中で冷却し、３０％Ｈ２Ｏ２（１１．３ｍＬ、１００．０ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、反応混合物を２０℃で更に１時間３０分撹拌した。混合物を撹拌しながら０℃で２０分間酢酸エチル（３００ｍＬ）及び１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（５００ｍＬ）で希釈した。酢酸エチル層を分離し、水（２００ｍＬ）、飽和したＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）で順次洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃の浴温で減圧下にエバポレートさせて、琥珀色油状物を得た。シリカゲル上でのクロマトグラフィー（酢酸エチル：石油エーテル１：３で溶出）により精製して、化合物４（４．７ｇ、９０％）を無色泡状固体として得た、ｍｐ３９−４２℃；［α］Ｄ−６１．８°（ｃ１．０２、ＣＨＣｌ３）。分析値．（Ｃ２３Ｈ２８ＣｌＦ３ＮＯ５Ｐ）計算値：Ｃ、５２．９３；Ｈ、５．４１；Ｎ、２．６８．実測値：Ｃ、５３．０５；Ｈ、５．４３；Ｎ、２．８０。
【０７２２】
アルコール５（４．１４ｇ、６．９５ｍｍｏｌ）（J.Med.Chem.2003、46、2132-2151）の無水ＤＣＭ（２５ｍＬ）中の撹拌された溶液に、無水酢酸（３．３０ｍＬ、３４．８ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５．８１ｍＬ、４１．７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２０℃で３時間３０分撹拌した。無水ＭｅＯＨ（４．０ｍＬ）を加え、混合物を３０分間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と水（４００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、エバポレートさせて、酢酸塩６（４．２８ｇ、９６％）を油状物として得た；［α］Ｄ−５７．４°（ｃ０．２１、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 9.10(s, 1H), 7.17(s, 1H), 6.87(s, 1H), 6.01-5.87(m, 1H), 5.32(dd, J=17.2, 1.5Hz, 1H), 5.21(dd, J=10.4, 1.4Hz, 1H), 4.89(s, 2H), 4.54(d, J=5.4Hz, 2H), 4.39-4.20(m, 3H), 3.93(t, J=6.4Hz, 2H), 3.75(s, 3H), 3.46-3.27(m, 2H), 2.13-1.90(m, 4H), 1.89-1.60(m, 7H), 1.54-1.40(m, 2H), 2つのプロトンがDMSOピークにより不明確.ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ２７Ｈ３６Ｃｌ３Ｎ２Ｏ９としての計算値：６３７．１４８１、実測値：６３７．１４７５［ＭＨ＋］；Ｃ２７Ｈ３５Ｃｌ３Ｎ２ＮａＯ９としての計算値：６５９．１３００、実測値：６５９．１３０３［ＭＮａ＋］；Ｃ２７Ｈ３５Ｃｌ３ＫＮ２Ｏ９としての計算値：６７５．１０４０、実測値：６７５．１０３５［ＭＫ＋］。
【０７２３】
酢酸塩６（４．２７ｇ、６．６９ｍｍｏｌ）のアセトン（７５ｍＬ）、水（５０ｍＬ）及びＴＨＦ（３０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、亜鉛粉末（１７．５ｇ、２６８ｍｍｏｌ）及びＮＨ４Ｃｌ（２８．６ｇ、５３５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を窒素雰囲気下２０℃で４２時間撹拌した。アセトン（１００ｍＬ）を加え、混合物を１０分間撹拌し、上清をデカントした。手順を２回繰り返し、混合した上清を減圧下にエバポレートさせて、アセトン及びＴＨＦを除去した。残留物を水（５０ｍＬ）で希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨを約１に酸性化した。酸性混合物を石油エーテル（２×２００ｍＬ）で洗浄し、ＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を水（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、溶媒をエバポレートさせて、酸７（２．７２ｇ、８０％）を油状物として得た；［α］Ｄ−７３．５°（ｃ１．１２、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 11.99(s, D2Oと交換可能, 1H), 9.10(s, D2Oと交換可能, 1H), 7.17(s, 1H), 6.87(s, 1H), 6.00-5.86(m, 1H), 5.32(dd, J=17.2, 1.5Hz, 1H), 5.20(dd, J=10.4, 1.5Hz, 1H), 4.57-4.52(m, 2H), 4.37-4.03(m, 3H), 3.93(t, J=6.5Hz, 2H), 3.75(s, 3H), 3.40-3.10(m, 2H), 2.23(t, J=7.3Hz, 2H), 2.07-1.93(m, 4H), 1.89-1.66(m, 5H), 1.62-1.49(m, 2H), 1.47-1.34(m, 2H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ２５Ｈ３５Ｎ２Ｏ９としての計算値：５０７．２３３７、実測値：５０７．２３４０［ＭＨ＋］；Ｃ２５Ｈ３４ＫＮ２Ｏ９としての計算値：５４５．１８９６、実測値：５４５．１９０６［ＭＫ＋］；Ｃ２５Ｈ３４Ｎ２ＮａＯ９としての計算値：５２９．２１５７、実測値：５２９．２１６９［ＭＮａ＋］。
【０７２４】
トリフルオロアセトアミド４（１．３８ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素雰囲気下０℃でＣｓ２ＣＯ３（１．０３ｇ、３．１７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で２時間３０分撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（１５０ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水（１００ｍＬ）で再度洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃の浴温で減圧下にエバポレートさせて、不安定なアミン８（１．１７ｇ）を淡黄色泡状固体として得た。
【０７２５】
この粗製物を０−２０℃で２２時間、無水ＤＭＡ（１４ｍＬ）中の酸７（１．２４ｇ、２．４５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１．４１ｇ、７．３５ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（８４ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）で処理した。混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と水（３００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水（１００ｍＬ）で再度洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、エバポレートさせた。シリカゲル上でのクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：石油エーテル２：１で溶出）により精製して、アミド９（１．４９ｇ、６６％）を淡黄色泡状固体として得た、ｍｐ５５−５９℃；［α］Ｄ−６８．０°（ｃ１．００、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 9.10(s, D2Oと交換可能, 1H), 8.56(s, 1H), 8.03(d, J=8.1Hz, 1H), 7.92(d, J=8.4Hz, 1H), 7.57(t, J=8.1Hz, 1H), 7.47(t, J=7.6Hz, 1H), 7.19(s, 1H), 6.86(s, 1H), 5.99-5.86(m, 1H), 5.32(dd, J=17.2, 1.6Hz, 1H), 5.20(dd, J=10.4, 1.5Hz, 1H), 4.53(d, J=5.4Hz, 2H), 4.45-3.84(m, 10H), 3.74(s, 3H), 3.44-3.26(m, 2H), 2.68-2.47(m, 2H), 2.02(br s, 3H), 1.93-1.43(m, 10H), 1.474及び1.469(2 s, 18H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ４６Ｈ６２ＣｌＮ３Ｏ１２Ｐとしての計算値：９１４．３７５４、実測値：９１４．３７４９［ＭＨ＋］；Ｃ４６Ｈ６１ＣｌＫＮ３Ｏ１２Ｐとしての計算値：９５２．３３１３、実測値：９５２．３３８１［ＭＫ＋］；Ｃ４６Ｈ６１ＣｌＮ３ＮａＯ１２Ｐとしての計算値：９３６．３５７４、実測値：９３６．３５８９［ＭＮａ＋］。
【０７２６】
カルバミン酸塩９（５４８ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（８ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素雰囲気下２０℃でＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（１７．１ｍｇ；９．８％Ｐｄ）及びピロリジン（０．４９ｍＬ、６．００ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２０℃で３０分間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（１５０ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水（５０ｍＬ）で再度洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃の浴温で減圧下にエバポレートさせた。粗生成物をシリカゲル上でのクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ５０：１で溶出）により精製して、アニリン１０（３２３ｍｇ、６５％）を淡黄色泡状固体として得た、ｍｐ４６−４９℃；［α］Ｄ−８５．２°（ｃ０．３６、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 8.56(s, 1H), 8.04(d, J=8.3Hz, 1H), 7.93(d, J=8.4Hz, 1H), 7.58(t, J=8.2Hz, 1H), 7.47(t, J=8.1Hz, 1H), 6.67(s, 1H), 6.37(s, 1H), 5.09(s, D2Oと交換可能, 2H), 4.46-3.85(m, 10H), 3.63(s, 3H), 3.52-3.34(m, 2H), 2.69-2.50(m, 2H), 2.08-1.94(m, 1H), 2.01(s, 3H), 1.91-1.61(m, 7H), 1.58-1.44(m, 2H), 1.476及び1.470(2 s, 18H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ４２Ｈ５８ＣｌＮ３Ｏ１０Ｐとしての計算値：８３０．３５２２、実測値：８３０．３５４３［ＭＨ＋］。
【０７２７】
アニリン１０（２９３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２０２ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（７ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素雰囲気下２０℃でジホスゲンの無水ＤＣＭ中溶液（０．０５Ｍ、６．７ｍＬ、０．３３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５分間撹拌し、次いでアルコール１１（１．５４ｇ、３．５４ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を窒素雰囲気下２０℃で６８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）と水（２００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水（１００ｍＬ）で再度洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、３０℃の浴温でエバポレートさせた。得られたオレンジ色油状物をシリカゲル上でのクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ：石油エーテル３０：０．５：１０で溶出）により精製して、カルバミン酸塩１２（３８５ｍｇ、８４％）を泡状固体として得た、ｍｐ７２−７５℃；［α］Ｄ−５５．２°（ｃ０．５３、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.04(s, D2Oと交換可能, 1H), 9.12(br s, D2Oと交換可能, 1H), 8.56(s, 1H), 8.03(d, J=8.3Hz, 1H), 7.92(d, J=8.4Hz, 1H), 7.65-7.52(m, 3H, D2Oの後では2Hに減少), 7.46(t, J=7.8Hz, 2H), 7.31(d, J=8.5Hz, 2H), 7.20(br s, 1H), 6.86(s, 1H), 6.75(分解不十分なt, D2Oと交換可能, 1H), 5.97-5.83(m, 1H), 5.30(br d, J=17.3Hz, 1H), 5.17(br d, J=10.6Hz, 1H), 5.18-4.97(m, 2H), 4.51-3.85(m, 13H), 3.74(s, 3H), 3.43-3.23(m, 2H, 水のピークにより一部不明確), 2.94-2.83(m, 2H), 2.65-2.50(m, 2H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.07-1.91(m, 1H), 2.01(br s, 3H), 1.88-1.43(m, 11H), 1.473-1.468(2 s, 18H), 1.43-1.20(m, 4H), 1.35(s, 9H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６５Ｈ８９ＣｌＮ６Ｏ１７Ｐとしての計算値：１２９１．５６６５、実測値：１２９１．５７０５［ＭＨ＋］；Ｃ６５Ｈ８８ＣｌＫＮ６Ｏ１７Ｐとしての計算値：１３２９．５２６２、実測値：１３２９．５２６４［ＭＫ＋］；Ｃ６５Ｈ８８ＣｌＮ６ＮａＯ１７Ｐとしての計算値：１３１３．５５５４、実測値：１３１３．５５２４［ＭＮａ＋］。
【０７２８】
酢酸塩１２（３６６ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１．１４ｇ、８．２４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（９ｍＬ）及びＭｅＯＨ（９ｍＬ）中混合物を、０℃で３時間３０分撹拌した。混合物を冷ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）及び氷水（１５０ｍＬ）と共に１０分間撹拌した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水（１００ｍＬ）で再度洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃の浴温でエバポレートさせて、アルコール１３（３４３ｍｇ、９７％）を無色泡状固体として得た、ｍｐ７１−７５℃；［α］Ｄ−５８．２°（ｃ０．５７、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.04(s, D2Oと交換可能, 1H), 9.11(br s, D2Oと交換可能, 1H), 8.56(s, 1H), 8.03(d, J=8.3Hz, 1H), 7.92(d, J=8.4Hz, 1H), 7.65-7.53(m, 3H, D2Oの後では2Hに減少), 7.46(t, J=7.6Hz, 2H), 7.32(d, J=8.6Hz, 2H), 7.27(br s, 1H), 6.93(s, 1H), 6.75(分解不十分なt, D2Oと交換可能, 1H), 5.97-5.82(m, 1H), 5.29(br d, J=17.2Hz, 1H), 5.17(br d, J=10.5Hz, 1H), 5.03(br s, 2H), 4.73(t, J=5.8Hz, D2Oと交換可能, 1H), 4.50-3.82(m, 11H), 3.74(s, 3H), 3.62-3.44(m, 2H), 3.40-3.21(m, 2H, 水のピークにより一部不明確), 2.95-2.80(m, 2H), 2.65-2.50(m, 2H, DMSOのピークにより一部不明確), 1.93-1.21(m, 16H), 1.473-1.468(2 s, 18H), 1.35(s, 9H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６３Ｈ８６ＣｌＫＮ６Ｏ１６Ｐとしての計算値：１２８７．５１５８、実測値：１２８７．５１１３［ＭＫ＋］；Ｃ６３Ｈ８６ＣｌＮ６ＮａＯ１６Ｐとしての計算値：１２７１．５４１９、実測値：１２７１．５３８１［ＭＮａ＋］。
【０７２９】
アルコール１３（３２２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１４ｍＬ）中の撹拌された溶液に、０℃でＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（ＤＭＰ）（１３１ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を３分かけて少しずつ加えた。反応混合物を０℃で更に２時間、次いで２０℃で５０時間撹拌した。混合物をＤＣＭ（４０ｍＬ）及び１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（４０ｍＬ）で希釈し、２０℃で１０分間撹拌し、次いでＤＣＭ（２００ｍＬ）と飽和したＮａＨＣＯ３溶液（１５０ｍＬ）との間で分配した。ＤＣＭ層を分離し、水層をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で更に抽出した。混合したＤＣＭ抽出物を飽和したＮａＨＣＯ３溶液（２×１００ｍＬ）及び水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃の浴温でエバポレートさせた。得られたオレンジ色油状物をシリカゲル上でのクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ４０：１で溶出）により精製して、１４（２２８ｍｇ、７１％）を淡茶褐色泡状固体として得た、ｍｐ９８℃（分解）；［α］Ｄ＋７４．５°（ｃ０．２６、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.02(s, D2Oと交換可能, 1H), 8.56(s, 1H), 8.04(d, J=8.3Hz, 1H), 7.92(d, J=8.4Hz, 1H), 7.65-7.47(m, 5H, D2Oの後では4Hに減少), 7.25-7.12(m, 2H, br s及び1H、D2O交換で), 7.03(s, 1H), 6.83-6.64(m, 2H), 6.48(br s, D2Oと交換可能, 1H), 5.96-5.80(m, 1H), 5.52-5.39(m, d、D2O交換で, J=9.6Hz, 1H), 5.27(br d, J=16.8Hz, 1H), 5.21-5.10(m, 2H), 4.81(br d, J=12.3Hz, 1H), 4.54-3.85(m, 8H), 3.83-3.70(m, 5H), 3.53-3.21(m, 3H, 水のピークにより一部不明確), 2.93-2.82(m, 2H), 2.64-2.47(m, 2H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.10-1.20(m, 16H), 1.470及び1.464(2 s, 18H), 1.34(s, 9H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６３Ｈ８４ＣｌＫＮ６Ｏ１６Ｐとしての計算値：１２８５．５００２、実測値：１２８５．４９３８［ＭＫ＋］；Ｃ６３Ｈ８４ＣｌＮ６ＮａＯ１６Ｐとしての計算値：１２６９．５２６２、実測値：１２６９．５２２０［ＭＮａ＋］。
【０７３０】
１４（１２５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素雰囲気下２０℃でＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（２．９ｍｇ；９．８％Ｐｄ）及びピロリジン（０．０８ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２０℃で撹拌し、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ２０：１）により監視した。４０分後、更にＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（５．８ｍｇ；９．８％Ｐｄ）及びピロリジン（０．１６ｍＬ、２．００ｍｍｏｌ）を加え、混合物を更に３時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水（５０ｍＬ）で再度洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃の浴温でエバポレートさせた。粗生成物１５（９４ｍｇ、８１％）を更には精製せずに次の工程に使用した。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ５９Ｈ８１ＣｌＮ６Ｏ１４Ｐとしての計算値：１１６３．５２３１、実測値：１１６３．５１８８［ＭＨ＋］。
【０７３１】
１５（９１ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＡ（１．０ｍＬ）中溶液を、窒素雰囲気下２０℃でプリフォームした（２０℃で１０分間）酸１６（３６ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（３４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びＴｓＯＨ（４．０ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＡ（０．５ｍＬ）中混合物で処理した。１０分後、ＤＩＰＥＡ（０．０１６ｍＬ、０．０７８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２３時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、飽和したＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）で更に洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）した。２５℃の浴温で溶媒をエバポレートさせて粗生成物を得、これをシリカゲル上でのクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３：ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ３０：１０：２で溶出）により精製して、１７（６３ｍｇ、５６％）を淡茶褐色泡状固体として得た；ｍｐ６７−７０℃；［α］Ｄ＋２３．９°（ｃ２．０９、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.05(s, D2Oと交換可能, 1H), 8.56(s, 1H), 8.03(d, J=8.3Hz, 1H), 7.92(d, J=8.4Hz, 1H), 7.84-7.71(m, 2H, D2Oと交換可能), 7.62-7.52(m, 3H), 7.46(t, J=7.7Hz, 1H), 7.22-7.13(m, 2H), 7.03(br s, 1H), 6.96(s, 2H), 6.71(br s, 2H, D2Oの後では1Hに減少), 6.49(br s, D2Oと交換可能, 1H), 5.51-5.41(m, しかしD2O交換でd、J=9.5Hz, 1H), 5.15(d, J=12.2Hz, 1H), 4.82(br d, J=12.4Hz, 1H), 4.47-3.85(m, 8H), 3.77(br s, 3H), 3.52-3.20(m, 3H, 水のピークにより一部不明確), 3.12-3.20(m, しかしD2O交換でt、J=6.7Hz, 2H), 2.92-2.80(m, 2H), 2.65-2.50(m, 2H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.39(t, J=7.9Hz, 2H), 2.07-1.24(m, 28H), 1.469及び1.463(2 s, 18H), 1.33(s, 9H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ７４Ｈ９８ＣｌＮ８ＮａＯ１８Ｐとしての計算値：１４７５．６３１７、実測値：１４７５．６２６７［ＭＮａ＋］。
【０７３２】
１７（４５ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素下２０℃でＴＦＡ（１．０ｍＬ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。石油エーテル（２０ｍＬ）を加え、混合物を３０分間撹拌した。上清をデカントし、ＥｔＯＡｃ：石油エーテル（１：５）（２×２０ｍＬ）を用いて手順を繰り返した。得られた固体を集め、分取ＨＰＬＣ［Ｓｙｎｅｒｇｉ  ＰｏｌａｒＲＰカラム；ＴＦＡ水溶液（ｐＨ＝２．５６；９０％から２％）／ＣＨ３ＣＮ中１０％水（１０％から９８％）；流速１２ｍＬ／分で２３分かけて濃度勾配溶出］により精製して、純粋なＣＢＩ−ＰＢＤ  ＬＤ１（１７．５ｍｇ、３８％）をベージュ色固体として得た、純度（ＨＰＬＣ）：９９．１％；［α］Ｄ＋５４．９°（ｃ０．１８、ＭｅＯＨ）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.20(s, D2Oと交換可能, 1H), 8.50(s, 1H), 8.20-7.78(m, 7H, D2Oの後では1Hに減少), 8.12(d, J=9.1Hz, 1H), 7.72-7.47(m, 4H, D2Oの後では3Hに減少), 7.40(t, J=7.5Hz, 1H), 7.17(br d, J=7.3Hz, 2H), 7.03(br s, 1H), 6.97(s, 2H), 6.66(br s, D2Oと交換可能, 1H), 5.51(br s, 1H), 5.48(br d, J=9.7Hz, 1H), 5.32-5.18(m, しかしD2Oの後d、J=12.6Hz, 1H), 4.75(br d, J=12.4Hz, 1H), 4.44-3.81(m, 8H), 3.77(s, 3H), 3.52-3.21(m, 5H, 水のピークにより一部不明確), 3.04(qであるが、D2Oの後ではJ=6.8Hzのt, 2H), 2.80-2.68(m, 2H), 2.39(t, J=7.7Hz, 2H), 2.12-1.08(m, 28H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６１Ｈ７５ＣｌＮ８Ｏ１６Ｐとしての計算値：１２４１．４７２２、実測値：１２４１．４７００［ＭＨ＋］；Ｃ６１Ｈ７４ＣｌＮ８ＮａＯ１６Ｐとしての計算値：１２６３．４５４１、実測値：１２６３．４５３１［ＭＮａ＋］。
【０７３３】
ＣＢＩ−ＣＢＩ  ＬＤ４の合成
４−（（Ｓ）−２−（１−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（Ｓ）−１−（クロロメチル）−３−（５−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−５−オキソペンタノイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルカルバメート
2017504606.tif 000226
2017504606.tif 000227
2017504606.tif 000228
2017504606.tif 000229
【０７３４】
実施例２．  ４−（（Ｓ）−２−（１−（（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−３−（５−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−５−オキソペンタノイル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル）カルバメート（ＣＢＩ−ＣＢＩ  ＬＤ４）。
イミン１８（４９７ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素下２０℃でジオキサン中の４Ｍ  ＨＣｌ（０．６３ｍＬ、２．５ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、反応混合物を２０℃で１時間撹拌した。揮発物を２０℃で減圧下にエバポレートさせて黄色固体を得、これを２０℃でＥｔＯＡｃと石油エーテルとの混合物（１：１０）（２００ｍＬ）と共に３０分間撹拌した。上清をデカントし、手順を繰り返した。得られた固体を０℃でＮａ２ＣＯ３水溶液（２Ｎ、２００ｍＬ）及びＤＣＭ（２００ｍＬ）の混合物と共に１５分間撹拌した。ＤＣＭ層を分離し、水（１００ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃でエバポレートさせて、アニリン１９（３２２ｍｇ、９７％）を不安定な固体として得た；1H NMR [(CD3)2SO] δ 8.01(d, J=8.4Hz, 1H), 7.94-7.78(m, 2H), 7.52(t, J=7.3Hz, 1H), 7.39(t, J=7.5Hz, 1H), 4.20-3.72(m, 5H), 1.54(s, 9H), 2つのプロトンが認められず.ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ１８Ｈ２２ＣｌＮ２Ｏ２としての計算値：３３３．１３６４、実測値：３３３．１３５５［ＭＨ＋］；Ｃ１８Ｈ２１ＣｌＫＮ２Ｏ２としての計算値：３７１．０９２３、実測値：３７１．０９２０［ＭＫ＋］；Ｃ１８Ｈ２１ＣｌＮ２ＮａＯ２としての計算値：３５５．１１８４、実測値：３５５．１１７９［ＭＮａ＋］。この物質を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０７３５】
アニリン１９（３２２ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（７３０ｍｇ、６．００ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の撹拌された均一混合物に、窒素下２０℃でジホスゲンの無水ＤＣＭ中溶液（０．１０Ｍ、１１ｍＬ、１．１０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２０分間撹拌し、次いで固体のｐ−ニトロベンジルアルコール（１．５３ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）を加えた。最終の反応混合物を窒素下２０℃で１８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）と水（３００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。３０℃で溶媒をエバポレートさせて淡黄色固体を得、これをシリカゲル上でのクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ：石油エーテル２０：１：１０で溶出）により精製して、カルバミン酸塩２０（４１１ｍｇ、８３％）を淡黄色固体として得た、ｍｐ１４１−１４２℃；［α］Ｄ−１５．０°（ｃ０．２０、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 9.85(s, 1H), 8.36-8.15(m, 3H), 8.05(d, J=8.4Hz, 1H), 7.88(d, J=8.3Hz, 1H), 7.72(d, J=8.6Hz, 2H), 7.57-7.49(m, 1H), 7.45-7.36(m, 1H), 5.35(s, 2H), 4.27-4.12(m, 2H), 4.10-3.96(m, 2H), 3.94-3.81(m, 1H), 1.52(s, 9H).分析値．（Ｃ２６Ｈ２６ＣｌＮ３Ｏ６）計算値：Ｃ、６１．００；Ｈ、５．１２；Ｎ、８．２１。実測値：Ｃ、６１．２７；Ｈ、５．０５；Ｎ、８．２５。
【０７３６】
２０（２８２ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素下０℃でトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（３ｍＬ）を加えた。添加後、反応混合物を０℃で１時間１５分撹拌し、次いでＤＣＭ（３００ｍＬ）と冷Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２Ｎ、３００ｍｌ）との間で分配した。ＤＣＭ層を分離し、冷Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２Ｎ、１００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃でエバポレートさせて、オレンジ色固体を得た。この固体を無水ＤＭＡ（４ｍＬ）に溶解し、酸２１（２９７ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（３１７ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）及びＴｓＯＨ（１９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を窒素下２０℃で２２時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）と水（３００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。２５℃で溶媒をエバポレートさせて油状物を得、これをシリカゲル上でのクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ２：１で溶出）により精製して、アミド２２（１８１ｍｇ、３５％）を粘稠性固体として得た、［α］Ｄ−２６．８°（ｃ０．３７、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 9.84(s, 1H), 8.62(s, 1H), 8.59(s, 1H), 8.28(d, J=8.5Hz, 2H), 8.04(d, J=8.5Hz, 2H), 7.92(d, J=8.2Hz, 2H), 7.72(d, J=8.3Hz, 2H), 7.63-7.57(m, 2H), 7.51-7.39(m, 2H), 5.34(s, 2H), 4.48-4.17(m, 6H), 4.10-3.97(m, 2H), 3.97-3.84(m, 2H), 2.82-2.54(m, 4H), 2.04-1.91(m, 2H), 1.49(s, 18H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ４７Ｈ５１Ｃｌ２ＫＮ４Ｏ１０Ｐとしての計算値：９７１．２３５１、実測値：９７１．２３４４［ＭＫ＋］；Ｃ４７Ｈ５１Ｃｌ２Ｎ４ＮａＯ１０Ｐとしての計算値：９５５．２６１２、実測値：９５５．２６２１［ＭＮａ＋］。
【０７３７】
ニトロ化合物２２（４７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のアセトン：水：ＴＨＦ（１０：５：１）（６ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素下０℃でＺｎ粉末（６５．４ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びＮＨ４Ｃｌ（１０７ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、反応混合物を０℃で４０分間撹拌した。反応混合物をセライトに通して濾過し、冷ＤＣＭで数回洗浄した。混合した濾液を冷水（５０ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃でエバポレートさせて、黄色泡状固体を得た。この固体を無水ＤＭＡ（１ｍＬ）に溶解し、プリフォームした（２０℃で１０分）Ｆｍｏｃ−Ｌ−シトルリン（２９．８ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（１８．５ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（０．３ｍＬ）中混合物に加えた。反応混合物を窒素下２０℃で４８時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。２５℃で溶媒をエバポレートさせて油状物を得、これをシリカゲル上でのクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ１０：１）により精製して、２３（２４ｍｇ、３８％）を粘稠性固体として得た、［α］Ｄ−３１．９°（ｃ０．２８、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.09(s, 1H), 9.66(s, 1H), 8.62(s, 1H), 8.59(s, 1H), 8.10-7.25(m, 21H), 6.04-5.94(m, 1H), 5.53-5.29(m, 2H), 5.13(s, 2H), 4.51-4.08(m, 10H), 4.08-3.82(m, 4H), 3.11-2.90(m, 2H), 2.80-2.54(m, 4H), 2.04-1.92(m, 2H), 1.80-1.30(m, 4H), 1.49(s, 18H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６８Ｈ７５Ｃｌ２Ｎ７Ｏ１２Ｐとしての計算値：１２８２．４５８３、実測値：１２８２．４５３６［ＭＨ＋］；Ｃ６８Ｈ７４Ｃｌ２ＫＮ７Ｏ１２Ｐとしての計算値：１３２０．４１４２、実測値：１３２０．４１１９［ＭＫ＋］；Ｃ６８Ｈ７４Ｃｌ２Ｎ７ＮａＯ１２Ｐ：１３０４．４４０２としての計算値、実測値：１３０４．４３８８［ＭＮａ＋］。
【０７３８】
２３（８６ｍｇ、０．０６７ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＡ（３ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素下０℃でピペリジンのＤＭＡ中溶液（１．００Ｍ、０．５８ｍＬ、０．５８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を０℃で１時間３０分撹拌した。ＥｔＯＡｃと石油エーテルとの混合物（１：１０、６０ｍＬ）を加え、混合物を０℃で４０分間撹拌した。上清をデカントし、更にＥｔＯＡｃ−石油エーテル（１：３、５０ｍＬ次いで３０ｍＬ）を用いて手順を繰り返した。残留した油状物を２０℃で１時間真空で乾固して、中間体アミン２４（６７ｍｇ、９４％）を粘稠性固体として得た。この固体を更には精製せずに次の工程に使用した。
【０７３９】
酸８（３０．４ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（２５．３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及びＴｓＯＨ（２．２ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＡ（０．７ｍＬ）中混合物を、窒素下２０℃で１０分間撹拌した。この混合物に、上記アミン２４（６７ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）の溶液を、続いてＤＩＰＥＡ（０．０１１ｍＬ、０．０６５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素下２０℃で２０時間撹拌した。氷水（３０ｍＬ）を加え、混合物を０℃で３０分間撹拌した。分離した固体を濾別し、乾燥し、シリカゲル上でのクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＥｔＯＡｃ；ＭｅＯＨ１０：１０：１で溶出）により精製して、２５（４４ｍｇ、５４％）を粘稠性固体として得た、［α］Ｄ−５１．６°（ｃ０．１６、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.15(s, D2Oと交換可能, 1H), 9.66(s, D2Oと交換可能, 1H), 8.62(s, 1H), 8.59(s, 1H), 8.08-7.76(m, 6H, D2O交換の後では4Hに減少), 7.69-7.34(m, 8H), 6.97(s, 2H), 5.96(t, J=5.7Hz, D2Oと交換可能, 1H), 5.40(s, D2Oと交換可能, 2H), 5.11(s, 2H), 4.50-4.15(m, 7H), 4.02-3.82(m, 4H), 3.25(t, 水のピークにより一部不明確, J=6.8Hz, 2H), 3.13-2.86(m, 4H), 2.81-2.56(m, 4H), 2.45-2.33(m, 4H), 2.05-1.91(m, 2H), 1.83-1.09(m, 12H), 1.49(s, 18H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６８Ｈ８３Ｃｌ２Ｎ９Ｏ１４Ｐとしての計算値：１３５０．５１６９、実測値：１３５０．５１７０［ＭＨ＋］；Ｃ６８Ｈ８２Ｃｌ２ＫＮ９Ｏ１４Ｐとしての計算値：１３８８．４７２７、実測値：１３８８．４７７１［ＭＫ＋］；Ｃ６８Ｈ８２Ｃｌ２Ｎ９ＮａＯ１４Ｐとしての計算値：１３７２．４９８８、実測値：１３７２．４９９２［ＭＮａ＋］。
【０７４０】
２５（３０．３ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素下２０℃でＴＦＡ（１．０ｍＬ）を加えた。添加後、混合物をこの温度で１分間撹拌した。冷石油エーテル（２０ｍＬ）を加え、混合物を０℃で１５分間撹拌した。上清をデカントし、ＥｔＯＡｃ−石油エーテル（１：３、２×２０ｍＬ）を用いて手順を繰り返した。得られた固体を集め、２０℃で真空で乾固して、ＣＢＩ−ＣＢＩ  ＬＤ４（２５．３ｍｇ、９３％）をベージュ色固体として得た、［α］Ｄ−１８６°（ｃ０．０５９、ＭｅＯＨ）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.13(s, D2Oと交換可能, 1H), 9.66(s, D2Oと交換可能, 1H), 8.62(s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.10(d, J=8.4Hz, 1H), 8.00(d, J=8.5Hz, 1H), 7.94-7.73(m, 4H, D2O交換の後では2Hに減少), 7.65(d, J=8.4Hz, 2H), 7.60-7.32(m, 6H), 6.97(s, 2H), 6.00(t, J=5.5Hz, D2Oと交換可能, 1H), 5.45(br s, D2Oと交換可能, 2H), 5.13(s, 2H), 4.52-4.15(m, 7H), 4.10-3.82(m, 4H), 3.28(t, 水のピークにより一部不明確, J=6.9Hz, 2H), 3.13-2.84(m, 4H), 2.81-2.56(m, 4H), 2.47-2.34(m, 4H), 2.08-1.89(m, 2H), 1.84-1.53(m, 4H), 1.53-1.09(m, 8H), 2Hが認められず.ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６０Ｈ６５Ｃｌ２Ｎ９Ｏ１４Ｐとしての計算値：１２３６．３７７１、実測値：１２３６．３７７２［Ｍ−Ｈ］−。
【０７４１】
（１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（１−（（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル８−（（６−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）オキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−６−オキソヘキシル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレートビス（２，２，２−トリフルオロアセテート）（ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＬＤ２）及び（１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（１−（（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル８−（（６−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）オキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−６−オキソヘキシル）オキシ）−７，１１−ジメトキシ−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレートビス（２，２，２−トリフルオロアセテート）（ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＬＤ３）の調製物
工程Ａ：
化合物１５（ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０４２５６０における６５ｊ）の合成：
（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサンアミド）ベンジル８−（６−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（４−メチルピペラジン−１−カルボニルオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−６−オキソヘキシルオキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート
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【０７４２】
工程１．（Ｓ）−２，２，２−トリクロロエチル６−（５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ヘキサン酸５４ｃ
Ｔｅｒｃｅｌ等（２００３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ４６：２１３２−２１５１の手順により調製した（Ｓ）−（２−アミノ−４−ヒドロキシ−５−メトキシフェニル）（２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル）メタノン５４ａ（７．６ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）及びジ炭酸ジ−ｔ−ブチル（１２．４８ｇ、５７．２ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１４０ｍＬ）中混合物を、窒素雰囲気中還流下に１８時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、２Ｎ  ＮａＯＨ（５７．２ｍＬ、１１４ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（７０ｍＬ）を加えた。混合物を室温で６時間撹拌した。揮発物を３５−４０℃（浴温）で減圧下にエバポレートさせた。氷水（２５０ｍＬ）を加え、ｐＨを０℃で８−９に調節した。混合物を室温で石油エーテル−酢酸エチル（２０：１）（２×４００ｍＬ）と共に１５分間撹拌した。有機層を分離し、廃棄した。水層をＤＣＭ（４×３００ｍＬ）で抽出し、混合した抽出物を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下にエバポレートさせて、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−ヒドロキシ−２−（２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−４−メトキシフェニルカルバメート５４ｂを桃白色固体として得た（９．３６ｇ、８９％）；ｍｐ１５４−１５６℃；1H NMR [(CD3)2SO] δ 9.51(s, 1H), 8.90(s, 1H), 7.27(s, 1H), 6.91(s, 1H), 4.73(t, J=5.8Hz, 1H), 4.16-4.02(m, 1H), 3.73(s, 3H), 3.64-3.34(m, 4H), 1.99-1.60(m, 4H), 1.43(s, 9H).分析値．（Ｃ１８Ｈ２６Ｎ２Ｏ６）計算値：Ｃ、５９．００；Ｈ、７．１５；Ｎ、７．６５。実測値：Ｃ、５８．９４；Ｈ、７．３１；Ｎ、７．３９。
【０７４３】
５４ｂ（２．８８ｇ、７．８７ｍｍｏｌ）及びＴｅｒｃｅｌ等（２００３）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ４６：２１３２−２１５１における手順により調製した６−ブロモヘキサン酸２，２，２−トリクロロエチル（３．８６ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＡ（７ｍＬ）中溶液に、無水Ｋ２ＣＯ３（２．６１ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で６８時間撹拌した。これを氷水（６００ｍＬ）中に注ぎ入れ、生成物を酢酸エチル（６００ｍＬ）中に抽出した。抽出物を冷（０℃）２Ｎ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（２×４００ｍＬ）及び水（４００ｍＬ）で順次洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）した。溶媒をエバポレートさせて茶褐色油状物を得、これをＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ−酢酸エチル＝２：１）により精製して、純粋な（Ｓ）−２，２，２−トリクロロエチル６−（５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ヘキサン酸５４ｃ（３．６２ｇ、７６％）を淡黄色泡状物として得た；ｍｐ３６−３９℃；1H NMR [(CD3)2SO] δ 9.90(s, 1H), 7.33(s, 1H), 6.93(s, 1H), 4.89(s, 2H), 4.74(t, J=5.8Hz, 1H), 4.17-4.02(m, 1H), 3.94(t, J=6.4Hz, 2H), 3.73(s, 3H), 3.63-3.26(m, 4H), 2.55-2.46(m, 2H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.00-1.55(m, 8H), 1.53-1.36(m, 11H).分析値．（Ｃ２６Ｈ３７Ｎ２Ｏ８）計算値：Ｃ、５１．０３；Ｈ、６．０９；Ｎ、４．５８。実測値：Ｃ、５１．３３；Ｈ、６．２１；Ｎ、４．３５。
【０７４４】
工程２：（Ｓ）−１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート５８ｂ
（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（クロロメチル）−５−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−カルキシレート５１ａ（３．３３８ｇ、１０ｍｍｏｌ）、塩化４−メチルピペラジン−１−カルボニル塩酸塩（５．９８ｇ、３０ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（３．５ｇ、３５ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（１．３４ｇ、１１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）中混合物を、室温で２日間撹拌した。図１２参照。混合物を水で洗浄し、溶媒を乾燥し、真空下に除去して、（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル１−（クロロメチル）−５−（４−メチルピペラジン−１−カルボニルオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−カルボキシレート５８ａ（Boger D.L.等、Synthesis、(1999)、1505-1509）を定量的収率で得た：ｍｐ９８℃；1H NMR(CDCl3) δ 8.11(br, 1H), 7.84(d, J=8.4Hz, 1H), 7.70(d, J=8.4Hz, 1H), 7.50(ddd, J=8.2, 6.9, 1.1Hz, 1H), 7.37(ddd, J=8.1, 6.9, 1.0Hz, 1H), 4.34-4.20(m, 1H), 4.17-4.10(m, 1H), 4.01-3.98(m, 1H), 3.94(dd, J=9.6, 2.4Hz, 1H), 3.87-3.80(br, 2H), 3.68-3.60(br, 2H), 3.47(t, J=10.8Hz, 1H), 2.57-2.48(m, 4H), 2.83(s, 3H), 1.58(s, 9H);分析値．Ｃ２４Ｈ３０ＣｌＮ３Ｏ４としての計算値：Ｃ、６２．７；Ｈ、６．６；Ｎ、９．１。実測値：Ｃ、６２．５；Ｈ、６．８；Ｎ、９．２％。
【０７４５】
５８ａ（２．３０ｇ、５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中溶液を、０℃にて過剰のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で４時間処理し、混合物を冷ＮＨ３水溶液で中和した。ヘキサンで希釈すると固体の沈殿が生成し、これを濾取し、水及びヘキサンで洗浄し、乾燥して、（Ｓ）−１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート５８ｂ（１．６０ｇ、８９％）を得た：ｍｐ１４４−１４７℃；1H NMR(CDCl3) δ 7.69(d, J=8.4Hz, 1H), 7.63(d, J=8.4Hz, 1H), 7.45(ddd, J=8.3, 6.9, 1.2Hz, 1H), 7.25(ddd, J=8.4, 6.8, 1.2Hz, 1H), 6.82(s, 1H), 5.30(s, 1H), 4.17-4.05(m, 2H), 4.03-3.96(m, 2H), 3.89-3.77(m, 4H), 3.54(t, J=10.9Hz, 1H), 3.20-2.90(m, 4H), 2.76(s, 3H).分析値．Ｃ１９Ｈ２２ＣｌＮ３Ｏ２としての計算値：Ｃ、６３．４；Ｈ、６．２；Ｎ、１１．７。実測値：Ｃ、６３．２；Ｈ、６．２；Ｎ、１１．５％。
【０７４６】
工程３：（Ｓ）−３−（６−（４−（（Ｓ）−２−（アセトキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−５−アミノ−２−メトキシフェノキシ）ヘキサノイル）−１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート６５ｄ
（Ｓ）−２，２，２−トリクロロエチル６−（５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ヘキサン酸５４ｃ（１．６６ｇ、２．７１ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、室温で無水酢酸（１．２９ｍＬ、１３．６ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２．２７ｍＬ、１６．３ｍｍｏｌ）を加えた。図１７参照。反応混合物を更に４時間撹拌した。無水ＭｅＯＨ（１．５ｍＬ）を加え、混合物を３０分間撹拌した。酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え、酢酸エチル層を分離し、次いで水で数回洗浄した。酢酸エチル溶液を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、エバポレートさせて、（Ｓ）−２，２，２−トリクロロエチル６−（４−（２−（アセトキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシフェノキシ）ヘキサン酸６５ａ（１．８ｇ、１００％）を淡黄色糊状物として得た；1H NMR [(CD3)2SO] δ 8.82(br s, 1H), 7.27(s, 1H), 6.86(s, 1H), 4.89(s, 2H), 4.39-4.20(m, 3H), 3.93(t, J=6.4Hz, 2H), 3.74(s, 3H), 3.50-3.33(m, 2H), 2.10-1.94(m, 4H), 1.92-1.61(m, 7H), 1.53-1.42(m, 2H), 1.43(s, 9H), 2H DMSOのピークにより一部不明確.ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ２８Ｈ３９Ｃｌ３Ｎ２ＮａＯ９としての計算値：６７５．１６１３、実測値：６７５．１６０３［ＭＮａ＋］。Ｃ２８Ｈ４０Ｃｌ３Ｎ２Ｏ９としての計算値：６５３．１７９４、実測値：６５３．１７７８［ＭＨ＋］。
【０７４７】
６５ａ（１．７６ｇ、２．６９ｍｍｏｌ）のアセトン（３０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）及びＴＨＦ（１２ｍＬ）の混合物中の撹拌された溶液に、窒素下Ｚｎ（７．０６ｇ、１０８ｍｍｏｌ）及びＮＨ４Ｃｌ（１１．６ｇ、２１６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２３時間撹拌した。酢酸エチル（１００ｍＬ）を加え、混合物を１５分間撹拌した。有機層をデカントした。更に酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で抽出を繰り返した。混合した有機溶液を水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、セライトに通して濾過し、エバポレートさせて、（Ｓ）−６−（４−（２−（アセトキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシフェノキシ）ヘキサン酸６５ｂ（１．３６ｇ、９６％）を粘稠性無色泡状物として得た；1H NMR [(CD3)2SO] δ 11.49(非常にbr s, 1H), 8.83(s, 1H), 7.27(s, 1H), 6.86(br s, 1H), 4.39-4.02(m, 3H), 3.93(t, J=6.4Hz, 2H), 3.74(s, 3H), 3.51-3.33(m, 2H, 水のピークにより一部不明確), 2.21(t, J=7.1Hz, 2H), 2.11-1.93(m, 4H), 1.90-1.66(m, 5H), 1.62-1.50(m, 2H), 1.50-1.35(m, 2H), 1.43(s, 9H).分析値．（Ｃ２６Ｈ３８Ｎ２Ｏ９）計算値：Ｃ、５９．７６；Ｈ、７．３３；Ｎ、５．３６。実測値：Ｃ、５９．６６；Ｈ、７．４９；Ｎ、５．２９。
【０７４８】
６５ｂ（０．８７ｇ、２．４１ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート５８ｂ（１．２６ｇ、２．４１ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＡ（５ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素雰囲気下０℃でｐ−ジオキサン中４Ｍ  ＨＣｌ（１．２１ｍＬ、４．８２ｍｍｏｌ）を、続いてＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１．３９ｇ、７．２３ｍｍｏｌ）及び無水ＴｓＯＨ（８３ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を窒素下０℃で２１時間撹拌し、次いで酢酸エチル（５００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）との間で分配した。酢酸エチル層を分離し、水層を更に酢酸エチル（２００ｍＬ）で更に抽出した。混合した酢酸エチル抽出物を水（２００ｍＬ）、飽和したＮａＨＣＯ３溶液（２×２００ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を乾燥し、エバポレートさせて、（Ｓ）−３−（６−（４−（（Ｓ）−２−（アセトキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−メトキシフェノキシ）ヘキサノイル）−１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート６５ｃ（１．６６ｇ、８０％）をベージュ色固体−泡状物として得た；ｍｐ８４−８７℃；1H NMR [(CD3)2SO] δ 8.84(br s, 1H), 8.21(s, 1H), 7.95(d, J=8.3Hz, 1H), 7.81(d, J=8.3Hz, 1H), 7.58(br t, J=7.7, 1H), 7.46(br t, J=8.1Hz, 1H), 7.29(s, 1H), 6.86(s, 1H), 4.40(t, J=10.0Hz, 1H), 4.36-3.86(m, 10H), 3.83-3.74(m, 1H), 3.73(s, 3H), 3.54-3.36(m, 4H), 2.67-2.34(m, 6H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.26(s, 3H), 2.02(br s, 3H), 1.93-1.62(m, 8H), 1.60-1.47(m, 2H), 1.42(s, 9H).分析値．（Ｃ４５Ｈ５８ＣｌＮ５Ｏ１０・１１／２Ｈ２Ｏ）計算値：Ｃ、６０．６３；Ｈ、６．９０；Ｎ、７．８６。実測値：Ｃ、６０．３９；Ｈ、６．６６；Ｎ、８．０８。
【０７４９】
６５ｃ（２．１７ｇ、２．５１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素雰囲気下０℃でＴＦＡ（２０ｍＬ）を加えた。添加後、混合物をこの温度で２．５時間更に撹拌した。混合物をＮａＨＣＯ３（５０ｇ）、水（７００ｍＬ）及びＤＣＭ（５００ｍＬ）の冷却（０℃）混合物中に注ぎ入れ、１５分間撹拌した。（ｐＨ約８）。ＤＣＭ層を分離し、更にＮａＨＣＯ３水溶液（２００ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）した。溶媒をエバポレートさせて、（Ｓ）−３−（６−（４−（（Ｓ）−２−（アセトキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−５−アミノ−２−メトキシフェノキシ）ヘキサノイル）−１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート６５ｄを淡茶褐色固体−泡状物として得た（１．７６ｇ、９２％）；ｍｐ６２℃；1H NMR [(CD3)2SO] δ 8.21(s, 1H), 7.95(d, J=8.3Hz, 1H), 7.81(d, J=8.3Hz, 1H), 7.57(br t, J=7.6Hz, 1H), 7.46(br t, J=7.2Hz, 1H), 6.67(s, 1H), 6.37(s, 1H), 5.09(s, 2H), 4.41(t, J=9.7Hz, 1H), 4.36-4.20(m, 3H), 4.17-4.00(m, 3H), 3.97-3.86(m, 3H), 3.81-3.70(m, 2H), 3.63(s, 3H), 3.54-3.32(m, 5H), 2.66-2.34(m, 6H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.26(s, 3H), 2.08-1.96(m, 1H), 2.10(s, 3H), 1.93-1.63(m, 7H), 1.57-1.45(m, 2H).分析値．（Ｃ４０Ｈ５０ＣｌＮ５Ｏ８・１／２Ｈ２Ｏ）計算値：Ｃ、６２．１３；Ｈ、６．６５；Ｎ、９．０６。実測値：Ｃ、６２．１２；Ｈ、６．７６；Ｎ、８．７７。
【０７５０】
工程４：６５ｇ
2017504606.tif 000234
（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸６５ｅ（３．３０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（３．７１ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＡ（１０ｍＬ）中混合物を、窒素下室温で１５分間撹拌した。図１８参照。このプリフォームした混合物に、４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）メチル）アニリン（ＤＭＦ中にて対応するｐ−ニトロベンジルアルコール及びＴＢＤＭＳＣｌから調製し、続いてＺｎ／ＮＨ４Ｃｌを用いて還元した）（２．３７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＡ（３ｍＬ）中溶液を加えた。最終の反応混合物を窒素雰囲気下室温で２３時間更に撹拌した。混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）と水（５００ｍＬ）との間で分配した。酢酸エチル層を分離し、飽和したＮａＨＣＯ３（２×３００ｍＬ）及び水（３００ｍＬ）で順次洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）した。溶媒をエバポレートさせてオレンジ色油状物を得、これをシリカカラムクロマトグラフィー（１０−３５％石油エーテル−酢酸エチル濃度勾配）により精製して、ＴＢＤＭＳ−保護化リジン６５ｆ（４．８７ｇ、８９％）を粘稠性ベージュ色固体−泡状物として得た；1H NMR [(CD3)2SO] δ 9.97(s, 1H), 7.55(d, J=8.50Hz, 2H), 7.44(d, J=7.8Hz, 1H), 7.21(d, J=8.5Hz, 2H), 6.75(t, J=5.3Hz, 1H), 5.99-5.82(m, 1H), 5.28(br d, J=17.2Hz, 1H), 5.17(br d, J=10.5Hz, 1H), 4.64(s, 2H), 4.46(d, J=5.2Hz, 2H), 4.12-4.02(m, 1H), 2.93-2.83(m, 2H), 1.70-1.52(m, 2H), 1.46-1.20(m, 4H), 1.35(s, 9H), 0.89(s, 9H), 0.06(s, 6H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ２８Ｈ４７Ｎ３ＮａＯ６Ｓｉとしての計算値：５７２．３１２６、実測値：５７２．３１３６［ＭＮａ＋］。
【０７５１】
６５ｆ（４．８１ｇ、８．７５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、室温でフッ化テトラブチルアンモニウムのＴＨＦ中１Ｍ溶液（１７．５ｍＬ、１７．５ｍｍｏｌ）を加えた。添加後、混合物をこの温度で更に２．５時間撹拌した。ＮＨ４Ｃｌ水溶液（３００ｍＬ）を加え、生成物を酢酸エチル（５００ｍＬ）中に抽出した。酢酸エチルを水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。溶媒をエバポレートさせて、ベンジルアルコールリジン６５ｇ（３．８１ｇ、１００％）をベージュ色固体として得た；ｍｐ１０１−１０３℃；1H NMR [(CD3)2SO] δ 9.94(s, 1H), 7.52(d, J=8.4Hz, 2H), 7.44(d, J=7.8Hz, 1H), 7.23(d, J=8.4Hz, 2H), 6.76(t, J=5.4Hz, 1H), 5.97-5.84(m, 1H), 5.29(br d, J=17.2Hz, 1H), 5.17(br d, J=10.4Hz, 1H), 5.08(t, J=5.7Hz, 1H), 4.47(d, J=5.3Hz, 2H), 4.43(d, J=5.7Hz, 2H), 4.13-4.03(m, 1H), 2.96-2.82(m, 2H), 1.72-1.52(m, 2H), 1.46-1.20(m, 4H), 1.36(s, 9H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ２２Ｈ３３Ｎ３ＮａＯ６としての計算値：４５８．２２６２、実測値：４５８．２２７２［ＭＮａ＋］；Ｃ２２Ｈ３３Ｎ３ＫＯ６としての計算値：４７４．２００１、実測値：４７４．１９９８［ＭＫ＋］。
【０７５２】
工程５：（Ｓ）−３−（６−（４−（（Ｓ）−２−（アセトキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−５−（（４−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサンアミド）ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−２−メトキシフェノキシ）ヘキサノイル）−１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート６５ｈ
６５ｄ（７６４ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（３６７ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素下室温でジホスゲンの無水ＤＣＭ中溶液（０．０５ｍｍｏｌ／ｍＬ、１２ｍＬ、０．６０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を更に２０分間撹拌した。図１９参照。この混合物に、６５ｇ（３．９７ｇ、９．１３ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（８０ｍＬ）中溶液を加えた。最終の反応混合物を窒素雰囲気下室温で４８時間更に撹拌した。混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）と水（３００ｍＬ）との間で分配した。酢酸エチル層を分離し、水層を酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で更に抽出した。混合した酢酸エチル溶液を更に水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。３０℃（浴温）で溶媒をエバポレートさせてオレンジ色油状物を得、これをシリカカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル−ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、（Ｓ）−３−（６−（４−（（Ｓ）−２−（アセトキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−５−（（４−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサンアミド）ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−２−メトキシフェノキシ）ヘキサノイル）−１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート６５ｈ（１．０４ｇ、８５％）を淡オレンジ色固体として得た；ｍｐ９０−９３℃；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.04(s, 1H), 9.10(br s, 1H), 8.21(s, 1H), 7.95(d, J=8.3Hz, 1H), 7.81(d, J=8.3Hz, 1H), 7.63-7.53(m, 3H), 7.51-7.42(m, 2H), 7.32(d, J=8.5Hz, 2H), 7.21(br s, 1H), 6.85(br s, 1H), 6.79-6.72(m, 1H), 5.97-5.83(m, 1H), 5.29(br d, J=17.2Hz, 1H), 5.17(br d, J=10.4Hz, 1H), 5.08-4.96(m, 2H), 4.52-4.37(m, 3H), 4.37-3.85(m, 10H), 3.83-3.66(m, 2H), 3.74(s, 3H), 3.54-3.41(m, 2H), 3.41-3.23(m, 2H, 水のピークにより一部不明確), 2.95-2.83(m, 2H), 2.66-2.34(m, 6H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.25(s, 3H), 2.07-1.92(m, 4H), 1.87-1.45(m, 11H), 1.45-1.20(m, 4H), 1.35(s, 9H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６３Ｈ８２ＣｌＮ８Ｏ１５としての計算値：１２２５．５５８３、実測値：１２２５．５５５７［ＭＨ＋］；Ｃ６３Ｈ８１ＣｌＮ８ＮａＯ１５としての計算値：１２４７．５４０２、実測値：１２４７．５４０１［ＭＮａ＋］；Ｃ６３Ｈ８１ＣｌＫＮ８Ｏ１５としての計算値：１２６３．５１４２、実測値：１２６３．５１４１［ＭＫ＋］。
【０７５３】
６５ｈ（１．０１ｇ、０．８２４ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１．１４ｇ、８．２４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中混合物を、室温で１時間４０分撹拌した。混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、氷水（２００ｍＬ）と共に１０分間撹拌した。ＤＣＭ層を分離し、水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で更に抽出した。混合したＤＣＭ溶液を更に水（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）した。２５℃（浴温）で溶媒をエバポレートさせて、（Ｓ）−３−（６−（５−（（４−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサンアミド）ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−４−（（Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−カルボニル）−２−メトキシフェノキシ）ヘキサノイル）−１−（クロロメチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート６５ｉ（０．９４ｇ、９６％）をベージュ色固体として得た；ｍｐ１０４−１０７℃；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.04(s, 1H), 9.17(br s, 1H), 8.21(s, 1H), 7.95(d, J=8.4Hz, 1H), 7.80(d, J=8.3Hz, 1H), 7.63-7.53(m, 3H), 7.51-7.42(m, 2H), 7.38-7.21(m, 3H), 6.93(s, 1H), 5.32(t, J=5.4Hz, 1H), 5.98-5.83(m, 1H), 5.30(br d, J=17.2Hz, 1H), 5.17(br d, J=11.7Hz, 1H), 5.03(s, 2H), 4.73(t, J=5.7Hz, 1H), 4.52-4.36(m, 3H), 4.36-4.17(m, 2H), 4.17-3.85(m, 6H), 3.83-3.66(m, 2H), 3.73(s, 3H), 3.61-3.40(m, 4H), 3.40-3.20(m, 2H, 水のピークにより一部不明確), 2.94-2.83(m, 2H), 2.67-2.34(m, 6H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.25(s, 3H), 1.96-1.45(m, 12H), 1.45-1.20(m, 4H), 1.35(s, 9H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６１Ｈ８０ＣｌＮ８Ｏ１４としての計算値：１１８３．５４７７、実測値：１１８３．５４４５［ＭＨ＋］；Ｃ６１Ｈ７９ＣｌＮ８ＮａＯ１４としての計算値：１２０５．５２９６、実測値：１２０５．５２５６［ＭＮａ＋］；Ｃ６１Ｈ７９ＣｌＫＮ８Ｏ１４としての計算値：１２２１．５０３６、実測値：１２２１．５０２６［ＭＫ＋］。
【０７５４】
６５ｉ（０．９２ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、０℃でＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎペルヨージナン（ＤＭＰ、１，１，１−トリアセトキシ−１，１−ジヒドロ−１，２−ベンゾヨードキソール−３（１Ｈ）−オン、ＣＡＳ  Ｒｅｇ．Ｎｏ．８７４１３−０９−０、４９２ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を（８分かけて）少しずつ添加した。添加完了後、反応混合物を０℃で２時間、次いで室温で４５時間更に撹拌した。混合物をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、室温で１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３（１００ｍＬ）と共に１０分間撹拌した。得られた混合物をＤＣＭ（４００ｍＬ）と飽和したＮａＨＣＯ３溶液（４００ｍＬ）との間で分配した。ＤＣＭ層を分離し、水層をＤＣＭ（２×１００ｍＬ）で更に抽出した。混合したＤＣＭ溶液を飽和したＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍＬ）及び水（２００ｍＬ）で更に洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）した。２５℃（浴温）で溶媒をエバポレートさせて淡茶褐色固体を得、これをＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ−酢酸エチル−ＭｅＯＨ＝１５：１５：１から１５：１５：３の濃度勾配）により精製して、（Ｓ）−４−（（Ｓ）−２−（アリルオキシカルボニルアミノ）−６−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサンアミド）ベンジル８−（６−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（４−メチルピペラジン−１−カルボニルオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−６−オキソヘキシルオキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート６５ｊ（０．６４ｇ、７０％）を淡黄色固体として得た；ｍｐ１３７℃（分解）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.02(s, 1H), 8.21(s, 1H), 7.95(d, J=8.4Hz, 1H), 7.80(d, J=8.3Hz, 1H), 7.65-7.38(m, 5H), 7.18(d, J=7.0Hz, 2H), 7.03(s, 1H), 6.82-6.63(m, 2H), 6.49(分解不十分なd, J=4.7Hz, D2Oと交換可能, 1H), 5.96-5.82(m, 1H), 5.46(分解不十分なdd, J=9.8, 4.7Hz, D2Oの後ではdになった, J=10.1Hz, 1H), 5.27(br d, J=17.1Hz, 1H), 5.21-5.10(m, 2H), 4.81(br d, J=12.3Hz, 1H), 4.51-4.17(m, 5H), 4.13-3.84(m, 4H), 3.84-3.67(m, 2H), 3.77(s, 3H), 3.55-3.20(m, 6H, 水のピークにより一部不明確), 2.66-2.30(m, 6H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.26(s, 3H), 2.10-1.20(m, 16H), 1.35(s, 9H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６１Ｈ７８ＣｌＮ８Ｏ１４としての計算値：１１８１．５３２１、実測値：１１８１．５２８６［ＭＨ＋］；Ｃ６１Ｈ７７ＣｌＮ８ＮａＯ１４としての計算値：１２０３．５１４０、実測値：１２０３．５１３０［ＭＮａ＋］；Ｃ６１Ｈ７７ＣｌＫＮ８Ｏ１４としての計算値：１２１９．４８７９、実測値：１２１９．４８６１［ＭＫ＋］。
【０７５５】
工程Ｂ：
（１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（１−（（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル８−（（６−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）オキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−６−オキソヘキシル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレートビス（２，２，２−トリフルオロアセテート）（ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＬＤ２）及び（１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−６−アミノ−２−（１−（（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル８−（（６−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）オキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−６−オキソヘキシル）オキシ）−７，１１−ジメトキシ−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレートビス（２，２，２−トリフルオロアセテート）（ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＬＤ３）
2017504606.tif 000235
2017504606.tif 000236
１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）シクロブタンカルボン酸（１６）（２００ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）（ＰＣＴ国際出願２００２、国際公開第２００２０７６９６８Ａ１号）、１−（５−アミノペンチル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン塩酸塩（１７）（２１８ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）（J.Med.Chem.2013、56、7890-7901）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（５７６ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）及びＴｓＯＨ（３５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の混合物に、ＤＭＡ（２ｍＬ）を加えた。混合物を２０℃で１５分間撹拌し、ＤＩＰＥＡ（０．１７ｍＬ、１．００ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２０時間更に撹拌し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、冷１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）、飽和したＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）及び水（１００ｍＬ）で順次洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）した。溶媒をエバポレートさせて、ｔｅｒｔ−ブチル１−（（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（１８）（２９０ｍｇ、８０％）を淡黄色固体として得た、ｍｐ６３−６５℃；1H NMR [(CD3)2SO] δ 7.58(t, J=5.6Hz, 1H), 7.00(s, 2H), 3.37(t, J=7.0Hz, 2H), 3.03(q, J=6.0Hz, 2H), 2.40-2.23(m, 4H), 1.85-1.64(m, 2H), 1.55-1.32(m, 4H), 1.38(s, 9H), 1.26-1.01(m, 2H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ１９Ｈ２９Ｎ２Ｏ５としての計算値：３６５．２０７１、実測値：３６５．２０７１［ＭＨ＋］；Ｃ１９Ｈ２８Ｎ２ＮａＯ５としての計算値：３８７．１８９０、実測値：３８７．１８９８［ＭＮａ＋］；Ｃ１９Ｈ２８ＫＮ２Ｏ５としての計算値：４０３．１６３０、実測値：４０３．１６２９［ＭＫ＋］。
【０７５６】
１８（７９４ｍｇ、２．１８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、メタンスルホン酸（２．８３ｍＬ、４３．６ｍｍｏｌ）を加えた。濁った混合物を２０℃で２時間３０分撹拌した。混合物をＤＣＭ（２００ｍＬ）で希釈し、水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。ＤＣＭ溶液を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、２５℃（浴温）でエバポレートさせて、１−（（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（１９）（６３６ｍｇ、９５％）を淡黄色固体として得た、ｍｐ１００−１０２℃；1H NMR [(CD3)2SO] δ 12.46(br s, 1H), 7.63(t, J=5.4Hz, 1H), 7.00(s, 2H), 3.37(t, J=7.0Hz, 2H), 3.02(q, J=5.9Hz, 2H), 2.42-2.28(m, 4H), 1.89-1.63(m, 2H), 1.55-1.32(m, 4H), 1.29-1.11(m, 2H).分析値．（Ｃ１５Ｈ２０Ｎ２Ｏ５）計算値：Ｃ、５８．４３；Ｈ、６．５４；Ｎ、９．０９。実測値：Ｃ、５８．５４；Ｈ、６．３９；８．８４。
【０７５７】
（１１ａＳ）−４−（（Ｓ）−２−（（（アリルオキシ）カルボニル）アミノ）−６−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ヘキサンアミド）ベンジル８−（（６−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）オキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−６−オキソヘキシル）オキシ）−１１−ヒドロキシ−７−メトキシ−５−オキソ−２，３，１１，１１ａ−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］ピロロ［１，２−ａ］［１，４］ジアゼピン−１０（５Ｈ）−カルボキシレート（１５）（１７７ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）（参照出願特許：ＧＥＮＥＮＬＡＷ−＃４４６５０８）の無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中の撹拌された均一溶液に、窒素雰囲気下２０℃でピロリジン（０．１２２ｍＬ、１．５０ｍｍｏｌ）を、続いてＰｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（４．２８ｍｇ、９．８％Ｐｄ）を加えた。添加後、反応混合物を２０℃（Ｎ２）で２５分間更に撹拌した。混合物を石油エーテル（５０ｍＬ）で希釈し、２０℃（Ｎ２）で１０分間撹拌した。溶媒をデカントし、ＤＣＭ−石油エーテル（１：１０）（２×３０ｍＬ）を用いて手順を繰り返した。後に残った固体をＤＣＭ（１００ｍＬ）に溶解し、水（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）した。２５℃（浴温）で溶媒をエバポレートさせて、遊離アミンをベージュ色固体として得た（１４０ｍｇ、８５％）。多少のこの物質（１１０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を、２０℃（窒素雰囲気下）でプリフォームした（２０℃で１０分間）１９（３４ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（５８ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）及びＴｓＯＨ（３．４ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＡ（１ｍＬ）中混合物で処理した。１０分後、ＤＩＰＥＡ（０．０２ｍＬ、０．１０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２２時間更に撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間で分配した。ＥｔＯＡｃ層を分離し、飽和したＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）、水（１００ｍＬ）で更に洗浄し、次いで乾燥（ＭｇＳＯ４）した。２５℃（浴温）で溶媒をエバポレートさせて粗生成物を得、これをＳｉＯ２カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ−ＥｔＯＡｃ−ＭｅＯＨ＝２０：１０：３）により精製して、２０（９２ｍｇ、６６％）を淡黄色固体として得た；ｍｐ１０６−１０９℃；［α］Ｄ＋４３．１°（ｃ０．４１８、ＣＨＣｌ３）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.06(s, D2Oと交換可能, 1H), 8.21(s, 1H), 7.95(d, J=8.4Hz, 1H), 7.85-7.77(m, 2H, D2Oの後では1Hに減少), 7.75(d, J=8.0Hz, D2Oと交換可能, 1H), 7.65-7.51(m, 3H), 7.46(t, J=7.6Hz, 1H), 7.24-7.11(m, 2H), 7.03(s, 1H), 6.96(s, 2H), 6.79-6.66(m, 2H, D2Oの後では1Hに減少), 6.54-6.43(m, D2Oと交換可能, 1H), 5.52-5.41(mであるが、D2Oの後ではJ=9.5Hzのd, 1H), 5.15(d, J=12.0Hz, 1H), 4.81(d, J=12.0Hz, 1H), 4.47-4.18(m, 5H), 4.08-3.98(m, 1H), 3.97-3.86(m, 2H), 3.84-3.67(m, 5H), 3.56-3.21(m, 8H, 水のピークにより一部不明確), 3.12-3.02(mであるが、D2Oの後ではJ=6.2Hzのt, 2H), 2.92-2.80(m, 2H), 2.65-2.33(m, 10H, DMSOのピークにより一部不明確), 2.25(s, 3H), 2.15-1.12(m, 23H), 1.33(s, 9H).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ７２Ｈ９２ＣｌＮ１０Ｏ１６としての計算値：１３８７．６３７６、実測値：１３８７．６３１９［ＭＨ＋］；Ｃ７２Ｈ９１ＣｌＮ１０ＮａＯ１６としての計算���：１４０９．６１９５、実測値：１４０９．６１４６［ＭＮａ＋］；Ｃ７２Ｈ９１ＣｌＫＮ１０Ｏ１６としての計算値：１４２５．５９３５、実測値：１４２５．５８７５［ＭＫ＋］。
【０７５８】
２０（７９ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中の撹拌された溶液に、窒素下２０℃でＴＦＡ（５ｍＬ）を加えた。添加後、混合物をこの温度で２０分間更に撹拌した。石油エーテル（１００ｍＬ）を加え、混合物を２０℃で３０分間撹拌した。溶媒を除去し、後に残った油状物を更にＥｔＯＡｃ−石油エーテル（１：１０）（３×５０ｍＬ）と共に撹拌した。残留した油状物をＭｅＯＨに溶解し、溶液をエバポレートさせて、ガラス状固体（７６ｍｇ）を得、これを分取ＨＰＬＣ［ＳｙｎｅｒｇｉＭａｘ  ＲＰカラム、４μ、２１×２５０ｍｍ；水−ＴＦＡ（ｐＨ＝２．５６；９５％から５５％）／ＣＨ３ＣＮ中１０％Ｈ２Ｏ（５％から４５％）；濃度勾配時間３０分；流速：１２ｍＬ／分］により精製して、（ｉ）ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＬＤ２（２６．２ｍｇ、３０％）を淡琥珀色固体として得た；ＨＰＬＣ純度：９８．５％；［α］Ｄ＋３０．０°（ｃ０．２３３、ＭｅＯＨ）；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.08(s, D2Oと交換可能, 1H), 9.82(br s, D2Oと交換可能, 1H), 8.27(s, 1H), 7.97(d, J=8.4Hz, 1H), 7.92-7.79(m, 3H, D2Oの後では1Hに減少), 7.67-7.52(m, 5H, D2Oの後では3Hに減少), 7.46(t, J=8.0Hz, 1H), 7.21-7.11(m, 2H), 7.04(s, 1H), 6.97(s, 2H), 6.75(s, 1H), 6.50(br s, 1H, D2Oと交換可能), 5.45(br dであるが、D2Oの後ではJ=9.0Hzのd, 1H), 5.10(br d, J=13Hz, 1H), 4.87(br d, J=12Hz, 1H), 4.55-4.10(m, 5H), 4.50(dd, J=11.4, 3.4Hz, 1H), 4.01-3.88(m, 2H), 3.76(s, 3H), 3.39-3.22(m, 4H), 3.14-3.03(m, 2H), 2.89(s, 3H), 2.81-2.69(m, 2H), 2.65-2.55(m, 1H), 2.47-2.34(m, 4H), 2.07-1.13(m, 23H), 残りの12Hは水及びDMSOのピークにより不明確.ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６７Ｈ８４ＣｌＮ１０Ｏ１４としての計算値：１２８７．５８５２、実測値：１２８７．５８４５［ＭＨ＋］；Ｃ６７Ｈ８３ＣｌＮ１０ＮａＯ１４としての計算値：１３０９．５６７１、実測値：１３０９．５６５４［ＭＮａ＋］。
【０７５９】
精製して（ｉｉ）ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＬＤ３（１１．２ｍｇ、１５％）もベージュ色固体として得た；ＨＰＬＣ純度：９２．６％；1H NMR [(CD3)2SO] δ 10.07(s, D2Oと交換可能, 1H), 9.90(br s, D2Oと交換可能, 1H), 8.27(s, 1H), 7.96(d, J=8.5Hz, 1H), 7.93-7.76(m, 3H, D2Oの後では1Hに減少), 7.73-7.51(m, 5H, D2Oの後では3Hに減少), 7.46(t, J=8.2Hz, 1H), 7.16-7.08(m, 2H), 7.04(s, 1H), 6.97(s, 2H), 6.85(s, 1H), 5.33(br d, J=7.8Hz, 1H), 5.07(br d, J=12Hz, 1H), 4.93(br d, J=13Hz, 1H), 4.56-4.10(m, 5H), 3.77(s, 3H), 3.62-3.23(m, 6H), 3.44(s, 3H), 3.15-3.01(m, 2H), 2.89(s, 3H), 2.82-2.69(m, 2H), 2.66-2.55(m, 1H), 2.46-2.34(m, 4H), 2.11-1.12(m, 23H), 残りの13Hは水及びDMSOのピークにより不明確.ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚＣ６８Ｈ８６ＣｌＮ１０Ｏ１４としての計算値：１３０１．６００８、実測値：１３０１．５９５２［ＭＨ＋］；Ｃ６８Ｈ８５ＣｌＮ１０ＮａＯ１４としての計算値：１３２３．５８２７、実測値：１３２３．５７７８［ＭＮａ＋］。
【０７６０】
（２Ｅ，２’Ｅ）−３，３’−（２−（３−（（Ｓ）−２−（１−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）プロパンアミド）−１，４−フェニレン）ジアクリル酸の調製物
2017504606.tif 000237
【０７６１】
ＩＮＴ１２の合成：
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2017504606.tif 000239
２（１．３５ｇ、４．３４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、ＨＡＴＵ（２．２０ｇ、５．７９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１．１２ｇ、８．６８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で１０分間撹拌した後、化合物１（１．０ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をＮ２下２５℃で１５時間撹拌した。水（２０ｍＬ）を加え、これをＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮した。これをフラッシュカラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１）により精製して、粗生成物３（２．２５ｇ）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ：（５−９５ＡＢ、１．５分）、１．０７５分、［Ｍ−１１４］＋＝５２７．０。
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【０７６２】
化合物３（１．９５ｇ、３．０５ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、ピペリジン（２．６０ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下２５℃で２．５時間撹拌した。これをＨ２Ｏ（２０ｍＬ×３）、ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。これを濃縮し、ＰＥ（２０ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥して、粗生成物４（２．４ｇ）を黄色固体として得た。
2017504606.tif 000241
【０７６３】
化合物９（３．０ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）のＤＭＥ／Ｈ２Ｏ（４０ｍＬ／２０ｍＬ）中溶液に、ＮａＨＣＯ３（２．８８ｇ、３４．３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２５℃で１５分間撹拌した後、化合物１０（５．５４ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下２５℃で１６時間撹拌した。溶媒を除去し、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）を加えた。これをＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。水相のｐＨをＨＣｌ溶液で３に調節し、これをＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機相をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、粗生成物１１を無色油状物として得た。
2017504606.tif 000242
【０７６４】
化合物１１（５．６４ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１２０ｍＬ）中溶液に、ＨＯＳｕ（２．０７ｇ、１７．９８ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（３．７０ｇ、１７．９８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下２５℃で１５時間撹拌した。これを濾過し、濃縮した。残留物をＰＥ（３０ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥し、濃縮して、粗生成物１２（８．３０ｇ）を白色固体として得た。
2017504606.tif 000243
【０７６５】
化合物４（１．６５ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に、化合物１２（２．０３ｇ、４．７５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下２５℃で１５時間撹拌した。水（３０ｍＬ）を加え、これをＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機相をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。これを濃縮して粗生成物を得、これをＰＥ（３０ｍＬ×４）及びＭＴＢＥ／ＰＥ（１５ｍＬ／４５ｍＬ×２）で洗浄し、乾燥して、生成物５（０．９６ｇ、収率：３３％）を明黄色固体として得た。
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【０７６６】
化合物５（０．９６ｇ、１．３２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（４ｍＬ）、ＴＨＦ（８ｍＬ）及びＨ２Ｏ（８ｍＬ）中溶液に、ＬｉＯＨ−Ｈ２Ｏ（１１１ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下２５℃で３０分間撹拌した。有機溶媒を減圧下に除去し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）を加えた。ＨＣｌ溶液を加えてｐＨを３−４に調節した。これをＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×４）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をＰＥ（３０ｍＬ）及びＭＴＢＥ（１０ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥して、生成物６（６２０ｍｇ、収率：６７％）を白色固体として得た。
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【０７６７】
化合物６（６２０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＩＥＡ（５７３ｍｇ、４．４３ｍｍｏｌ）及びＢｏｐ−Ｃｌ（２４８ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。化合物７（１７７．５９ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物をＮ２下０℃で３０分間撹拌した後、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）を加え、これをＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ×３）で抽出した。混合した有機相をブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、粗生成物を得た。これをＭＴＢＥ（１０ｍＬ×２）及びＰＥ（５０ｍＬ×３）で洗浄し、乾燥して、生成物８（６９０ｍｇ、収率：９０％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ：（５−９５ＡＢ、１．５分）、０．８７５分、ＭＳ＝８６４．２［Ｍ＋１］；
2017504606.tif 000246
【０７６８】
化合物８（３００ｍｇ、０．３４７ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、ＴＦＡ（２．０ｍＬ）を滴下した。混合物をＮ２下２５℃で３０分間撹拌した後、溶媒を除去した。残留物をＤＭＦに溶解し、分取ＨＰＬＣ（ＨＣＯＯＨ）により精製して、生成物（２Ｅ，２’Ｅ）−３，３’−（２−（３−（（Ｓ）−２−（１−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）プロパンアミド）−１，４−フェニレン）ジアクリル酸（８１．４ｍｇ、収率：３１％）を明黄色粉体として得た。1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9.93(s, 2H), 6.13(s, 1H), 7.82-7.46(m, 8H), 6.98(s, 2H), 6.55-6.51(d, J=16.0Hz, 2H), 5.98(s, 1H), 5.41(s, 2H), 4.22(s, 1H), 3.03-2.90(m, 6H), 2.67-2.50(m, 4H), 2.36(s, 4H), 1.69(s, 3H), 1.46-1.33(m, 7H), 1.23-1.16(d, J=28Hz, 2H).
【０７６９】
ＣＢＩ−ＣＢＩ  ＬＤ５の調製物
４−（（Ｓ）−２−（１−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル２，５−ビス（（Ｅ）−３−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−３−オキソプロパ−１−エニル）フェニルカルバメート
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【０７７０】
２
氷浴中で冷却した１（２３０ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（２８７ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）及び数滴の水を加えた。混合物を氷浴中で１時間撹拌し、次いで酢酸エチルと水との間で再度分配した。水性相を酢酸エチルで３回抽出した。混合した有機抽出物を水及びブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、セライトに通して濾過し、溶媒を除去した。得られた残留物を酢酸エチルに溶解し、Ｆｌｏｒｉｓｉｌのパッドに通して濾過して、粗製物２を灰白色ゴム状物として得（１８８ｍｇ、１００％）、これを更には精製せずに直接使用した。
【０７７１】
４
２（１８０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）（上記した手順により調製したて）に、（２Ｅ，２’Ｅ）−３，３’−（２−（３−（（Ｓ）−２−（１−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）プロパンアミド）−１，４−フェニレン）ジアクリル酸３（１００ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１８５ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）、トルエンスルホン酸（２．１ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を終夜撹拌した後、ほとんどのＤＭＡを真空下に除去し、残留物を酢酸エチルとＮａＨＣＯ３水溶液との間で再度分配した。水性相を酢酸エチルで３回抽出した。混合した有機抽出物を水で、続いてブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、セライトのパッドに通して濾過した。溶媒を除去し、得られた残留物を最少量のＤＣＭに溶解し、ヘプタンを加えることにより沈殿させて粗生成物（２０７ｍｇ）を得、これを分取ＨＰＬＣ［カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ−Ｍａｘ  ＲＰ  ４μ、２５０×２１．２０ｍｍ；移動相：Ａ／Ｂ＝２０％から１％（Ａ：ギ酸アンモニウムｐＨ３．４５、Ｂ：水中９０％アセトニトリル）；流速１２ｍＬ／分］により更に精製して、４（６５ｍｇ、３３％）を黄色固体として得た。1H NMR(CDCl3) δ 9.67(br s, 1H), 8.67(br s, 2H), 8.18-7.98(m, 4H), 7.90-7.72(m, 3H), 7.66-7.58(m, 6H), 7.50-7.28(m, 8H), 6.84-6.62(m, 4H), 6.66(s, 2H, マレイミド), 6.00(br s, 1H), 5.23-5.13(m, 2H), 4.80-4.70(m, 1H), 4.40-3.85(m, 6H), 3.50-3.40(m, 6H), 3.20-3.14(m, 2H), 2.90-2.75(m, 2H), 2.60-2.45(m, 4H), 1.92-1.80(m, 2H), 1.62, 1.60, 1.57, 1.56(4s, 36H), 1.55-1.40(m, 6H), 1.30-1.20(m, 3H). 31P NMR(CDCl3) δ -15.44(s), 15.82(s).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）実測値ｍ／ｚ１６６６．６０５１（Ｍ＋Ｎａ）。Ｃ８３Ｈ１０１Ｃｌ２Ｎ９ＮａＯ１８Ｐ２は１６６６．６００９を必要とする。
【０７７２】
５
氷浴中で冷却した４（２５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（０．６ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（０．２ｍＬ、２．６１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を氷浴中で０．５時間撹拌した。全ての揮発物成分を０℃でポンプオフし、得られた残留物を酢酸エチルで粉砕し、次いでＴＨＦ及び石油エーテルで洗浄して、５（ＣＢＩ−ＣＢＩ  ＬＤ５）を黄色固体として得た（１９ｍｇ、８８％）。1H NMR(DMSO) δ10.33(br s, 1H), 9.63(s, 1H), 8.70(s, 1H), 8.95(s, 1H), 8.14-8.11(m, 4H), 7.96-7.90(m, 4H), 7.81-7.69(m, 6H), 7.64-7.54(m, 2H), 7.50-7.39(m, 4H), 7.33-7.26(m, 2H), 6.97(s, 2H, マレイミド), 6.13(br s, 2H), 5.14(s, 2H), 4.58(s, 4H), 4.40-4.30(m, 4H), 4.08-3.95(m, 4H), 3.29(t, J=6.9Hz, 2H), 2.99-2.94(m, 4H), 2.39-2.33(m, 2H), 1.71-1.67(m, 4H), 1.40-1.35(m, 6H), 1.12-1.10(m, 3H). 31P NMR(DMSO) δ -5.91(s).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）実測値ｍ／ｚ１４４２．３４３８（Ｍ＋Ｎａ）。Ｃ６７Ｈ６９Ｃｌ２Ｎ９ＮａＯ１８Ｐ２は１４４２．３５０５を必要とする。
【０７７３】
ＣＢＩ−ＣＢＩ  ＬＤ６
４−（（Ｓ）−２−（１−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル２，５−ビス（（Ｅ）−３−（（Ｓ）−１−（クロロメチル）−５−（ホスホノオキシ）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３（２Ｈ）−イル）−３−オキソプロパ−１−エニル）フェニルカルバメート
工程Ａ：（Ｓ）−Ｎ−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチル）−Ｎ−（１−（４−（ヒドロキシメチル）フェニルアミノ）−１−オキソ−５−ウレイドペンタン−２−イル）シクロブタン−１，１−ジカルボキサミド
スキーム
2017504606.tif 000248
【０７７４】
手順
2017504606.tif 000249
化合物１（１５０ｇ、１．５３ｍｏｌ）を、化合物２（２０１ｇ、１．５３ｍｏｌ）のＨＯＡｃ（１０００ｍＬ）中の撹拌された溶液に加えた。混合物を室温で２時間撹拌した後、これを８時間加熱還流した。有機溶媒を減圧下に除去し、残留物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ×３）で抽出し、Ｈ２Ｏで洗浄した。混合した有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、粗生成物を得た。これを石油エーテルで洗浄して、化合物３を白色固体として得た（２５０ｇ、７７．４％）。
2017504606.tif 000250
【０７７５】
ＤＰＰＡ（１３０ｇ、４７３ｍｍｏｌ）及びＴＥＡ（４７．９ｇ、４７３ｍｍｏｌ）を、化合物３（１００ｇ、４７３ｍｍｏｌ）のｔ−ＢｕＯＨ（２００ｍＬ）中溶液に加えた。混合物をＮ２下８時間加熱還流した。混合物を濃縮し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝３：１）により精製して、化合物４（１３ｇ、１０％）を得た。
2017504606.tif 000251
【０７７６】
化合物４（２８ｇ、９９２ｍｍｏｌ）の無水ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）中溶液に、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を滴下した。混合物を室温で５時間撹拌した後、これを濾過し、固体を乾燥して、化合物５（１６ｇ、７３．７％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6): δ 8.02(s, 2H), 6.99(s, 2H), 3.37-3.34(m, 2H), 2.71-2.64(m, 2H), 1.56-1.43(m, 4H), 1.23-1.20(m, 2H).
2017504606.tif 000252
【０７７７】
化合物６（１７．５０ｇ、０．１０ｍｏｌ）のジオキサンとＨ２Ｏとの混合物（５０ｍＬ／７５ｍＬ）中混合物に、Ｋ２ＣＯ３（３４．５５ｇ、０．２５ｍｏｌ）を加えた。Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（３０．９６ｇ、０．１２ｍｏｌ）を０℃でゆっくり加えた。反応混合物を２時間かけて室温に加温した。有機溶媒を減圧下に除去し、水性スラリー液を６Ｍ  ＨＣｌ溶液でｐＨ＝３に調節し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×３）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、濾過し、減圧下に濃縮して、所望の生成物７（３８．０ｇ、９５．６％）を得た。（後に化合物７は市販されるようになった。）
2017504606.tif 000253
【０７７８】
化合物７（４ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＤＣＭとＭｅＯＨとの混合物（１００ｍＬ／５０ｍＬ）中溶液に、４−アミノ−フェニル−メタノール（８）（１．６ｇ、１３ｍｍｏｌ、１．３当量）及びＥＥＤＱ（３．２ｇ、１３ｍｍｏｌ、１．３当量）を加えた。混合物をＮ２下室温で１６時間撹拌した後、これを濃縮して、茶褐色固体を得た。ＭＴＢＥ（２００ｍＬ）を加え、これを１５℃で２時間撹拌した。固体を濾取し、ＭＴＢＥ（５０ｍＬ×２）で洗浄して、粗生成物９をオレンジ色固体として得た（４．２ｇ、８４％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５０３．０［Ｍ＋１］。
2017504606.tif 000254
【０７７９】
化合物９（４．２ｇ、８．３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の撹拌された溶液に、室温でピペリジン（１．６５ｍＬ、１７ｍｍｏｌ、２当量）を滴下した。混合物を室温で３０分間撹拌し、固体沈殿物が生成した。無水ＤＣＭ（５０ｍＬ）を加え、混合物は直ちに透明になった。混合物を室温で更に３０分間撹拌し、ＬＣＭＳは、化合物９が消費されていることを示した。これを減圧下に濃縮乾固（ピペリジンが残っていないことを確認した）し、残留物をＥｔＯＡｃとＨ２Ｏ（５０ｍＬ／２０ｍＬ）との間で分配した。水性相をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で洗浄し、濃縮して、１０を油状残留物として得た（２．２ｇ、９４％）（少量のＤＭＦを含んでいた）。
2017504606.tif 000255
【０７８０】
化合物１１（８ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（５０ｍＬ）中溶液に、化合物１０（６．０ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（７．４８ｇ、８９．０ｍｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）中溶液を加えた。混合物を室温で１６時間撹拌した後、これを減圧下に濃縮乾固し、残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、粗製の化合物１２を白色固体として得た（６．４ｇ、６８．７％）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４３５．０［Ｍ＋１］。
2017504606.tif 000256
【０７８１】
化合物１２（６．４ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦとＭｅＯＨとの混合物（２０ｍＬ／１０ｍＬ）中の撹拌された溶液に、室温でＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１．２ｇ、２８．６ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した後、溶媒を減圧下に除去し、得られた残留物を分取ＨＰＬＣにより精製して、化合物１３（３．５ｇ、収率：５８．５％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ４０６．９［Ｍ＋１］。
1H NMR(400MHz, メタノール-d4)  δ 8.86(d, J=8.4Hz, 2H), 8.51(d, J=8.4Hz, 2H), 5.88-5.85(m, 1H), 5.78(s, 2H), 4.54-4.49(m, 3H), 4.38-4.32(m, 1H), 3.86  - 3.75(m, 1H), 3.84-3.80(m, 2H), 3.28-3.21(m, 1H), 3.30-3.24(m, 1H), 3.00-2.80(m, 1H), 2.37-2.28(m, 2H).
2017504606.tif 000257
【０７８２】
ＤＩＰＥＡ（１．５９ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）及びＢＯＰ−Ｃｌ（６９２ｍｇ、２．７１ｍｍｏｌ）を、０℃で化合物１３（１．０ｇ、２．４６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）中溶液に加え、続いて化合物５（５９２ｍｇ、２．７１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃で０．５時間撹拌した。反応混合物をクエン酸溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）で抽出した。有機層を乾燥し、濃縮し、残留物をシリカゲル上でのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、化合物１４（１．０ｇ、７１％）を得た。
1H NMR(400MHz, DMSO-d6): δ 10.00(s, 1H), 7.82-7.77(m, 2H), 7.53(d, J=8.4Hz, 2H), 7.19(d, J=8.4Hz, 2H), 6.96(s, 2H), 5.95(t, J=6.4Hz, 1H), 5.39(s, 2H), 5.08(t, J=5.6Hz, 1H), 4.40-4.35(m, 3H), 4.09(d, J=4.8Hz, 1H), 3.01(d, J=3.2Hz, 2H), 3.05-2.72(m, 4H), 2.68-2.58(m, 3H), 2.40-2.36(m, 4H), 1.72-1.70(m, 3H), 1.44-1.42(m, 1H), 1.40-1.23(m, 6H), 1.21-1.16(m, 4H).
【０７８３】
工程Ｂ：（２Ｅ，２’Ｅ）−３，３’−（２−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−１，４−フェニレン）ジアクリル酸の合成
スキーム
2017504606.tif 000258
【０７８４】
手順
2017504606.tif 000259
化合物１（１．５ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）のジオキサン（４．０ｍＬ）中溶液に、化合物２（２．７４ｇ、８５．６ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３．４５ｇ、１０７ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ｔ−Ｂｕ３Ｐ）２（０．５５ｇ、４．３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をマイクロ波照射下１２０℃で２．０時間撹拌した。反応を４回繰り返した（１を合計６．０ｇ使用した）。混合した反応混合物を濃縮し、水（２０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００．０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。これを濃縮し、カラム（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１０：１）により精製して、所望の生成物（３．８ｇ、４７％）を得た。
2017504606.tif 000260
【０７８５】
化合物３（３．８ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ（１２０．０ｍＬ）中溶液に、Ｆｅ（２．８３ｇ、５０．７ｍｍｏｌ）及びＮＨ４Ｃｌ（５．４ｇ、１０１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１００℃で２．０時間撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（６０．０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、濃縮して、生成物（２．５ｇ、７２％）を得た。
2017504606.tif 000261
【０７８６】
トリホスゲン（２２４ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）の溶液に、氷浴中で化合物４（７２５ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５３０．３ｍｇ、５．２５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５．０ｍＬ）中溶液を滴下した。出発物質が無くなるまで、反応混合物を２１℃で１．０時間撹拌した。反応混合物を水（５．０ｍＬ×２）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。これを濃縮し、ＤＣＭ（５．０ｍＬ）に溶解した。化合物５（１．０ｇ、１．７５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、反応混合物を２１℃で３．０時間撹拌した。反応物をＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）でクエンチし、カラム（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、所望の生成物（３８０ｍｇ、２３％）を得た。
2017504606.tif 000262
【０７８７】
化合物６（３００．０ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０．０ｍＬ）中溶液にＴＦＡ（２．０ｍＬ）を加え、混合物を２１℃で３０．０分間撹拌した。混合物をＮＨ３・Ｈ２ＯでｐＨ６に調節した。沈殿を濾取して、生成物（２Ｅ，２’Ｅ）−３，３’−（２−（（４−（（Ｓ）−２−（１−（５−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ペンチルカルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジルオキシ）カルボニルアミノ）−１，４−フェニレン）ジアクリル酸（１１２．０ｍｇ、収率４２％）を得た。
ＬＣＭＳ（１０−８０、ＡＢ、２．０分）ＲＴ＝０．９６２分、［Ｍ＋１］＋＝８３０．０；
1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 12.45(br, 2H), 10.10(s, 1H)，9.55(s, 1H), 7.50-7.81(m, 8H), 7.34(m, 2H), 6.95(s, 2H), 6.47-6.57(m, 2H), 5.96(s, 1H), 5.40(s, 2H), 5.05(s, 2H), 4.36-4.39(m, 1H), 2.98-3.06(m, 6H), 2.35-2.39(m, 4H), 1.15-1.73(m, 13H).
【０７８８】
工程Ｃ：
2017504606.tif 000263
８
２（１８４ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）（上記した手順により調製したて）に、３（８０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ・ＨＣｌ（１６５ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）、トルエンスルホン酸（２．０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡ（０．５ｍＬ）を加えた。混合物を終夜撹拌した後、ほとんどのＤＭＡを真空下に除去し、残留物を酢酸エチルとＮａＨＣＯ３水溶液との間で再度分配した。水性相を酢酸エチルで３回抽出した。混合した有機抽出物を水で、続いてブラインで洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、セライトのパッドに通して濾過した。溶媒を除去し、得られた残留物を最少量のＤＣＭに溶解し、ヘプタンを加えることにより沈殿させて粗生成物（１９５ｍｇ）を得、これを分取ＨＰＬＣ［カラム：Ｓｙｎｅｒｇｉ−Ｍａｘ  ＲＰ  ４μ、２５０×２１．２０ｍｍ；移動相：Ａ／Ｂ＝９０％から２％（Ａ：ギ酸アンモニウムｐＨ３．４５、Ｂ：水中９０％アセトニトリル）；流速１２ｍＬ／分］により更に精製して、４（５６ｍｇ、３４％）を黄色固体として得た。1H NMR(DMSO) δ10.02(s, 1H), 8.67(s, 2H), 8.14-8.06(m, 4H), 7.97(d, J=8.4Hz, 2H), 7.86-7.76(m, 4H), 7.70(d, J=15.2Hz, 1H), 7.63-7.59(m, 2H), 7.53-7.49(m, 2H), 7.29-7.23(m, 2H), 6.96(s, 2H, マレイミド), 5.91(br s, 1H), 5.36(br s, 2H), 4.65-4.50(m, 4H), 4.44-4.37(m, 2H), 4.28-4.22(m, 2H), 4.05-3.95(m, 4H), 3.60(t, J=6.6Hz, 1H), 3.07-3.00(m, 2H), 2.95-2.88(m, 2H), 2.68-2.58(m, 2H), 2.42-2.32(m, 3H), 1.78-1.62(m, 4H), 1.51, 1.50, 1.49, 1.48(4s, 36H), 1.49-1.28(m, 11H). 31P NMR(CDCl3) δ -15.44(s), 15.46(s).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）実測値ｍ／ｚ１５８８．５８２７（Ｍ＋Ｎａ）。Ｃ７８Ｈ９９Ｃｌ２Ｎ９ＮａＯ１７Ｐ２は１５８８．５９０３を必要とする。
【０７８９】
５
氷浴中で冷却した４（２５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（０．６ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（０．２ｍＬ、２．６１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を氷浴中で０．５時間撹拌した。エーテルを加え、得られた沈殿物を濾取し、酢酸エチル、ＴＨＦ及び石油エーテルで洗浄して、５（ＣＢＩ−ＣＢＩ  ＬＤ６）を茶褐色固体として得た（１８ｍｇ、８６％）。1H NMR(DMSO) δ10.01(br s, 1H), 8.60(br s, 2H), 8.16-8.09(m, 4H), 7.96-7.93(m, 2H), 7.88-7.58(m, 8H), 7.46(t, J=7.7Hz, 2H), 7.30-7.25(m, 2H), 6.97(s, 2H, マレイミド), 6.10(br s, 1H), 5.35(br s, 2H), 4.60-4.18(m, 6H), 4.05-3.95(m, 4H), 3.45-3.29(m, 5H), 3.04-2.87(m, 4H), 2.68-2.60(m, 2H), 2.40-2.30(m, 4H), 1.72-1.57(m, 4H), 1.43-1.28(m, 5H), 1.20-1.07(m, 3H). 31P NMR(DMSO) δ -5.82(s).ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）実測値ｍ／ｚ１３４２．３５６２（Ｍ＋Ｈ）。Ｃ６２Ｈ６８Ｃｌ２Ｎ９Ｏ１７Ｐ２は１３４２．３５８０を必要とする。
【０７９０】
ＡＤＣを調製する方法
還元及び再酸化によるコンジュゲーションのためのシステイン操作抗体の調製
特定の条件下で、システイン操作抗体は、本発明のリンカー−薬物中間体とのコンジュゲーションのために、還元剤、例えば、ＤＴＴ（クレランド試薬、ジチオスレイトール）又はＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩による処理によって反応性とし得る；Ｇｅｔｚら（１９９９）  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、第２７３巻：７３−８０；Ｓｏｌｔｅｃ  Ｖｅｎｔｕｒｅｓ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）。ＣＨＯ細胞上で発現している完全長システイン操作モノクローナル抗体（ＴｈｉｏＭａｂ）（Gomezら(2010) Biotechnology and Bioeng. 105(4)：748-760；Gomezら(2010) Biotechnol. Prog. 26：1438-1445）を、例えば、約５０倍過剰なＤＴＴで室温にて一晩還元し、新たに導入したシステイン残基及び培養培地中に存在するシステインの間に形成し得るジスルフィド結合を還元した。
【０７９１】
軽鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔによって番号付けする（Kabatら、Sequences of proteins of immunological interest、(1991)、第5版、US Dept of Health and Human Service、National Institutes of Health、Bethesda、MD）。重鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔ系であると留意する場合以外は、ＥＵ番号付け系によって番号付けする（Edelmanら(1969) Proc. Natl. Acad. of Sci. 63(1)：78-85）。単一文字のアミノ酸の略語を使用する。
【０７９２】
ＣＨＯ細胞において発現している完全長システイン操作モノクローナル抗体（ＴｈｉｏＭａｂ）は、細胞培養条件によって、操作されたシステイン上にシステイン付加体（シスチン）又はグルタチオン付加を担持する。操作されたシステインの反応性チオール基を遊離するために、ＴｈｉｏＭａｂを５００ｍＭのホウ酸ナトリウム及び５００ｍＭの塩化ナトリウムに約ｐＨ８．０にて溶解し、約５０−１００倍過剰の１ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（Getzら(1999)Anal. Biochem.、第273巻：73-80；Soltec Ventures, Beverly, MA）で３７℃にて約１−２時間還元する。代わりに、ＤＴＴは、還元剤として使用することができる。鎖間ジスルフィド結合の形成を、非還元のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、又は変性逆相ＨＰＬＣ  ＰＬＲＰカラムクロマトグラフィーによってモニターした。還元したＴｈｉｏＭａｂを希釈し、１０ｍＭの酢酸ナトリウム中のｐＨ５中のＨｉＴｒａｐ  ＳＰ  ＦＦカラムへと添加し、０．３Ｍの塩化ナトリウム、又は１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含有する５０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７．５を含有するＰＢＳで溶出させる。
【０７９３】
再酸化を行うことによって親Ｍａｂ中に存在するシステイン残基の間にジスルフィド結合を再確立させた。溶出された還元したＴｈｉｏＭａｂを、１５Ｘ又は２ｍＭのデヒドロアスコルビン酸（ｄｈＡＡ）でｐＨ７にて３時間、又は５０ｍＭのＴｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７．５中で３時間、又は２ｍＭの硫酸銅水溶液（ＣｕＳＯ４）で室温にて一晩処理する。当該技術分野で公知の他の酸化体、すなわち、酸化剤、及び酸化条件を使用し得る。周囲空気による酸化はまた有効であり得る。この穏やかな部分再酸化工程は、高度な正確さを伴って効率的に鎖内ジスルフィドを形成する。バッファーをセファデックスＧ２５樹脂上の溶出によって交換し、１ｍＭのＤＴＰＡを有するＰＢＳで溶出させる。溶液の２８０ｎｍでの吸光度からの低減した抗体濃度、及びＤＴＮＢ（Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩ）との反応によるチオール濃度を決定することによって、及び４１２ｎｍでの吸光度の決定によって、チオール／Ａｂ値をチェックする。
【０７９４】
液体クロマトグラフィー／質量分析は、広範な質量範囲を伴うＴＳＱ  Ｑｕａｎｔｕｍトリプル四重極（商標）質量分析計で行った（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）。試料は、７５℃に加熱したＰＲＬＰ−Ｓ（登録商標）、１０００Ａ、マイクロ口径カラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓｈｒｏｐｓｈｉｒｅ、ＵＫ）上でクロマトグラフにかけた。３０−４０％Ｂ（溶媒Ａ：水中の０．０５％ＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル中の０．０４％ＴＦＡ）からの直線勾配を使用し、エレクトロスプレー源を使用して溶出剤を直接イオン化した。Ｘｃａｌｉｂｕｒ（登録商標）データシステムによってデータを集め、ＰｒｏＭａｓｓ（登録商標）（Ｎｏｖａｔｉａ、ＬＬＣ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）を使用して逆重畳積分を行った。ＬＣ／ＭＳ分析の前に、抗体又は薬物コンジュゲート（５０マイクログラム）を、ＰＮＧａｓｅ  Ｆ（２単位／ｍｌ；ＰＲＯｚｙｍｅ、Ｓａｎ  Ｌｅａｎｄｒｏ、ＣＡ）で３７℃にて２時間処理し、Ｎ結合型糖鎖を除去した。
【０７９５】
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）試料を、ブチルＨＩＣ  ＮＰＲカラム（２．５ミクロン粒径、４．６ｍｍ×３．５ｃｍ）（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）上に注入し、０．８ｍｌ／分（Ａ：５０ｍＭのリン酸カリウム中１．５Ｍの硫酸アンモニウム、ｐＨ７、Ｂ：５０ｍＭのリン酸カリウム、ｐＨ７、２０％イソプロパノール）にて０−７０％Ｂの直線勾配で溶出させる。多波長検出器及びＣｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを備えたＡｇｉｌｅｎｔ１１００シリーズＨＰＬＣシステムを使用して、抗体毎に異なる比の薬物を有する抗体種を分解及び定量化した。本発明のシステイン操作抗体は、上記の一般法によって調製することができる。
【０７９６】
抗体へのリンカー−薬物中間体のコンジュゲーション（手順１）
操作抗体システインを、ＣＨＯ細胞において発現しているようにグルタチオン及び／又はシステインを伴う混合ジスルフィドとしてブロックした。これらのシステインは、コンジュゲーションの前に「非ブロック化」されなくてはならない。
【０７９７】
２０ｍＭのスクシネート、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＥＤＴＡ中の非ブロック化抗体（５−１２ｍｇ／ｍＬ）を、７５−１００ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ７．５−８（１ＭのＴｒｉｓを使用）にもたらした。共溶媒（ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、又はＤＭＡ、それに続いてリンカー−薬物（ＤＭＳＯ又はＤＭＦ中））を抗体溶液に加え、１０−１３％の最終％−有機溶媒、及び抗体濃度に対して２．５−１０Ｘの最終濃度のリンカー−薬物を得た。反応を室温にて１−１２時間進行させた（最大のコンジュゲーションが達成されるまで）。陽イオン交換クロマトグラフィー及び／又は使い捨てカラム（それぞれ、Ｓ  ｍａｘｉ若しくはＺｅｂａ）を使用したゲル濾過によって、コンジュゲーション反応物を精製した。分析用ＳＥＣによって粗コンジュゲートが有意に凝集した場合（例えば、＞１０％）、調製用ゲル濾過（Ｓ２００カラム）によるさらなる精製を行った。コンジュゲートをそれに続いて、ゲル濾過又は透析を使用して、製剤バッファー（２０ｍＭのＨｉｓ−アセテート、ｐＨ５．５、２４０ｍＭのショ糖）中に交換した。Ｔｗｅｅｎ−２０を精製したコンジュゲートにそれに続いて加え、０．０２％の最終濃度とした。最終コンジュゲート濃度は、２．４−７．５ｍｇ／ｍＬの範囲であった（％収率：非ブロック化抗体から３４−８１％）。コンジュゲートをＬＣＭＳによって分析し、薬物−抗体比（ＤＡＲ）の測定値を得たが、これは１．３−２．１の範囲であった（平均：１．８）。分析的ＳＥＣ（Ｚｅｎｉｘ又はＳｈｏｄｅｘカラム）を使用して、コンジュゲートをまた高分子量凝集物の存在について分析した。最終の精製したコンジュゲートは、０−１０％の範囲の凝集を示した。コンジュゲートをまた、エンドトキシン汚染についてアセスメントしたが、これは、全ての場合において、１．３ＥＵ／ｍｇを超えなかった。遊離非コンジュゲート薬物は、最終コンジュゲートの１％を超えなかった。
【０７９８】
抗体へのリンカー−薬物中間体のコンジュゲーション（手順２、代替手順）
上記の例の還元及び再酸化手順後、抗体を、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）バッファーに溶解し、氷上で冷却する。チオール−反応性官能基、例えば、マレイミド又はブロモ−アセトアミドを有する過剰な約１．５モルから２０当量のリンカー−薬物中間体を、ＤＭＳＯに溶解し、アセトニトリル及び水に希釈し、ＰＢＳ中の冷却し、還元し、再酸化した抗体に加える。約１時間後、過剰なマレイミドを加え、反応物をクエンチし、未反応の抗体チオール基をキャップする。コンジュゲーション混合物を添加し、ＨｉＴｒａｐ  ＳＰ  ＦＦカラムを通して溶出させて、過剰な薬物−リンカー中間体及び他の不純物を除去し得る。反応混合物を遠心限外濾過によって濃縮し、システイン操作抗体薬物コンジュゲートを精製し、ＰＢＳ中のＧ２５樹脂を通す溶出によって脱塩し、滅菌条件下で０．２μｍフィルターを通して濾過し、貯蔵のために冷凍する。
【０７９９】
本発明のＡＤＣは、上記のセクションに記載されている手順によって調製することができる。
【０８００】
アッセイ
次いで、選択したリンカーを試験し、インビトロ及びインビボでのアッセイにおいて活性であることが見出された。切断データを、下記の表において示す。
【０８０１】
カテプシンＢ切断アッセイ
ペプチドリンカーと同様に、ＡＤＣのための非ペプチドリンカーは、適正な薬物放出のためにリソソーム中で切断可能であると予想される。細胞の消化オルガネラとして、リソソームは、酸性ｐＨにて最適な加水分解活性を示すいくらかのプロテアーゼが濃縮されている。カテプシンＢは代表的なリソソームのプロテアーゼであり、ＡＤＣペプチドリンカー（ｒｅｆ）の活性化の一因となることが示されてきた。最初のスクリーニングとして、抗体とのコンジュゲーションに適した切断可能なリンカー−薬物コンストラクトを同定するために精製したカテプシンＢを使用したアッセイを開発した。ノルフロキサシンを使用して、リンカー−薬物の薬物成分を表した。コントロールペプチド（例えば、Ｖａｌ−Ｃｉｔ）に対する切断の百分率並びに切断反応の動力学的パラメーター（Ｋｍ及びＶｍａｘ）を、所与の時点において測定した。アッセイの詳細な記載を下で示す。このアッセイから、種々のタンパク質分解性活性及び構造的に多様なリンカーを同定し、後でＡＤＣの作製において使用した。
【０８０２】
基質として実験用リンカー−薬物を使用したカテプシンＢ切断活性を、ＬＣ／ＭＳを使用してノルフロキサシンの放出をモニターすることによって測定した。様々な濃度のリンカー−薬物（３倍段階希釈）を、２０ｎＭのカテプシンＢ（ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号２１９３６４、ヒト肝臓）、１０ｍＭのＭＥＳ、ｐＨ６．０、１ｍＭのＤＴＴ、０．０３％ＣＨＡＰＳ、及び２５ｎＭのノルフロキサシン−ｄ５内標準（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号ｓｃ−３０１４８２）を含有する２０ｕＬの反応物中でインキュベートした。反応物を３７℃にて１時間インキュベートし、それに続いて６０ｕＬの２％ギ酸を添加し、反応物をクエンチした。試料を、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  ＢＥＨフェニルカラム（２．１ｍｍ×５０ｍｍ、Ｗａｔｅｒｓカタログ番号１８６００２８８４）上で２ｕＬの停止反応物を注入することによって分析した。試料を、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ上で２分の線状勾配（０％−８０％）のアセトニトリル、０．１％ギ酸を使用して精製した。ノルフロキサシン及びノルフロキサシン−ｄ５内標準を、ポジティブＭＲＭモードで作動するＡＢ  Ｓｃｉｅｘ  ＱＴｒａｐ５５００トリプル四重極質量分析計を使用して検出した（ノルフロキサシン３２０→２３３ｍ／ｚ、ノルフロキサシン−ｄ５  ３２５→２３３ｍ／ｚ）。定量化したノルフロキサシン（内標準で規準化）をリンカー−薬物濃度に対してプロットし、このように得られたプロットを、速度定数Ｋｍ及びＶｍａｘについてＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用してＭｉｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｅｎフィットで曲線の当てはめを行った。
【０８０３】
インビトロでの細胞増殖アッセイ
ＡＤＣの有効性を、下記のプロトコール（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ＧＬＯ（商標）発光細胞生存能力アッセイ、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐを用いた細胞増殖アッセイによって測定した。Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ＴＢ２８８；Ｍｅｎｄｏｚａら（２００２）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６２：５４８５−５４８８）：
１．培地中の約１０４個の細胞（ＳＫＢＲ−３、ＢＴ４７４、ＭＣＦ７又はＭＤＡ−ＭＢ−４６８）を含有する１００μｌのアリコートの細胞培養物を、９６ウェル不透明壁プレートの各ウェルに入れた。
２．培地を含有し、細胞を含有しないコントロールウェルを調製した。
３．ＡＤＣを実験ウェルに加え、３−５日間インキュベートした。
４．プレートを、概ね３０分間室温に平衡化させた。
５．各ウェル中に存在する細胞培地の容量と等しい容量のＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ＧＬＯ（商標）試薬を加えた。
６．内容物をオービタルシェーカー上で２分間混合し、細胞溶解を誘導した。
７．プレートを室温にて１０分間インキュベートし、発光シグナルを安定化した。
８．発光を記録し、ＲＬＵ＝相対発光ユニットとしてグラフにおいて報告した。
【０８０４】
データは、標準偏差エラーバーを伴う、反復試験の各セットについて発光の平均としてプロットする。プロトコールは、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ  ＧＬＯ（商標）発光細胞の修飾である。
培地：ＳＫ−ＢＲ−３は、５０／５０／１０％ＦＢＳ／グルタミン／２５０μｇ／ｍＬ中で増殖する。Ｇ−４１８ＯＶＣＡＲ−３は、ＲＰＭＩ／２０％ＦＢＳ／グルタミン中で増殖する。
【０８０５】
インビボアッセイ
１．抗ＣＤ３３抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効性を、ＨＬ−６０又はＥＯＬ−１のマウス異種移植モデル（ヒト急性骨髄性白血病）において調査した。ＨＬ−６０細胞株は、ＡＴＣＣ（アメリカンタイプカルチャーコレクション；Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から得て、ＥＯＬ−１細胞株は、ＤＳＭＺに由来した（Ｇｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ；Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）。
【０８０６】
雌性Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）にそれぞれ、側腹部領域において皮下にＨＬ−６０又はＥＯＬ−１の５百万個の細胞を接種した。異種移植片腫瘍が１００−３００ｍｍ３の平均腫瘍体積に達したとき（０日目と称する）、動物をそれぞれ７−１０匹のマウスの群に無作為化し、ＡＤＣの単一の静脈内注射を投与した。ＡＤＣの投与の概ね４時間前に、動物に過剰な量（３０ｍｇ／ｋｇ）の抗ｇＤコントロール抗体を腹腔内に投与し、腫瘍細胞上の可能性のある非特異的抗体結合部位をブロックした。マウスの腫瘍及び体重を、研究を通して１週間に１−２回測定した。体重減少がこれらの開始体重の＞２０％であるとき、マウスを迅速に安楽死させた。腫瘍が３０００ｍｍ３に達するか、又は差し迫った潰瘍の徴候を示す前に、全ての動物を安楽死させた。
【０８０７】
２．抗Ｎａｐｉ２Ｂ抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効性を、ＯＶＣＡＲ３−Ｘ２．１（ヒト卵巣がん）のマウス異種移植モデルにおいて調査した。ＯＶＣＡＲ３細胞株は、ＡＴＣＣ（アメリカンタイプカルチャーコレクション；Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から得て、亜系統ＯＶＣＡＲ３−Ｘ２．１は、マウスにおける最適な増殖のためにＧｅｎｅｎｔｅｃｈにおいて生じさせた。
【０８０８】
雌性Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤ−ベージュマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）にそれぞれ、胸部乳房脂肪パッド領域において１千万個のＯＶＣＡＲ３−Ｘ２．１細胞を接種した。異種移植片腫瘍が１００−３００ｍｍ３の平均腫瘍体積に達したとき（０日目と称する）、動物をそれぞれ７−１０匹のマウスの群に無作為化し、ＡＤＣの単一の静脈内注射を投与した。マウスの腫瘍及び体重を、研究を通して１週間に１−２回測定した。体重減少がこれらの開始体重の＞２０％であるとき、マウスを迅速に安楽死させた。腫瘍が３０００ｍｍ３に達するか、又は差し迫った潰瘍の徴候を示す前に、全ての動物を安楽死させた。
【０８０９】
３．抗ＣＤ２２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効性を、ＢＪＡＢ−ｌｕｃ（ヒトバーキットリンパ腫）又はＷＳＵ−ＤＬＣＬ２（ヒトびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）のマウス異種移植モデルにおいて調査する。ＢＪＡＢ細胞株は、ＤＳＭＺ（Ｇｅｒｍａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ；Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から得て、亜系統ＢＪＡＢ−ｌｕｃは、ルシフェラーゼ遺伝子を安定的に発現するようにＧｅｎｅｎｔｅｃｈにおいて生じさせる。ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２細胞株はまた、ＤＳＭＺに由来する。
【０８１０】
雌性Ｃ．Ｂ−１７ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）にそれぞれ、側腹部領域において皮下にＢＪＡＢ−ｌｕｃ又はＷＳＵ−ＤＬＣＬ２の２千万個の細胞を接種する。異種移植片腫瘍が１００−３００ｍｍ３の平均腫瘍体積に達したとき（０日目と称する）、動物をそれぞれ７−１０匹のマウスの群に無作為化し、ＡＤＣの単一の静脈内注射を投与した。マウスの腫瘍及び体重を、研究を通して１週間に１−２回測定する。体重減少がこれらの開始体重の＞２０％であるとき、マウスを迅速に安楽死させる。腫瘍が３０００ｍｍ３に達するか、又は差し迫った潰瘍の徴候を示す前に、全ての動物を安楽死させる。
【０８１１】
４．マウスＭＭＴＶ−ＨＥＲ２ファウンダー＃５の同種移植モデル（マウスの乳房腫瘍）において抗Ｈｅｒ２抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効性を調査する。ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２ファウンダー＃５（Ｆｏ５）モデル（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈにおいて開発）は、トランスジェニックマウスモデルであり、ここでは、ヒトＨＥＲ２遺伝子が、マウスの乳房腫瘍ウイルスプロモーター（ＭＭＴＶ−ＨＥＲ２）の転写制御の元で、乳腺上皮において過剰発現している。過剰発現は、ヒトＨＥＲ２受容体を過剰発現している乳房腫瘍の自発的発生をもたらす。ファウンダー動物（ファウンダー＃５、Ｆｏ５）の１つからの乳房腫瘍を、腫瘍断片の累代移植によってＦＶＢマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）において増殖させた。
【０８１２】
有効性研究のために、Ｆｏ５トランスジェニック乳房腫瘍を、雌性ｎｕ／ｎｕマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）の胸部乳房脂肪パッド中にサイズが概ね２ｍｍ×２ｍｍの腫瘍断片として外科的に移植する。同種移植腫瘍が１００−３００ｍｍ３の平均腫瘍体積に達したとき（０日目と称する）、動物をそれぞれ７−１０匹のマウスの群に無作為化し、ＡＤＣの単一の静脈内注射を投与した。マウスの腫瘍及び体重を、研究を通して１週間に１−２回測定する。体重減少がこれらの開始体重の＞２０％であるとき、マウスを迅速に安楽死させる。腫瘍が３０００ｍｍ３に達するか、又は差し迫った潰瘍の徴候を示す前に、全ての動物を安楽死させる。
【０８１３】
生物学的データ
リンカー−薬物化合物構造及びカテプシンＢ切断データ
下記のリンカー−薬物化合物は、下記の式
Ｃａｐ−ＰＭ−Ｓｐ−Ｔ
［式中、Ｃａｐは、カテプシンＢアッセイにおいてアミノ基を保護するキャッピング基であり（例えば、ＣＢＺ及びエチル）；ＰＭは、ペプチド模倣部分であり、ｓｐは、スペーサーであり、Ｔは、薬物部分の代替で］
として一般化することができる。
【０８１４】
下記の表におけるＣＡＴ  Ｂ切断データは、本発明の非ペプチドリンカーの切断割合が、ペプチドリンカー（４０−５６）と匹敵することを示す。ペプチドリンカーは、抗体薬物コンジュゲートにおいて広範に使用されてきており、活性薬物部分を放出する。したがって、本非ペプチドリンカーを含むコンジュゲートは、同様の結果をインビトロ及びインビボで達成することができると予想される。
2017504606.tif 000264
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【０８１５】
ＡＤＣリンカー−薬物構造
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【０８１６】
配列
ＮａＰｉ２ｂヒト化抗体：
一実施態様において、本発明のＡＤＣのＮａＰｉ２ｂ抗体は、３つの軽鎖超可変領域及び３つの重鎖超可変領域（配列番号１−６）を含み、これらの配列を下記に示す。
【０８１７】
一実施態様において、本発明のＡＤＣのＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号７の可変軽鎖配列及び配列番号８の可変重鎖配列を含む。
【０８１８】
一実施態様において、本発明のＡＤＣのＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号９の軽鎖配列及び配列番号１０の重鎖配列を含む。
2017504606.tif 000286
【０８１９】
抗ＣＤ３３ヒト化抗体：
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、３つの軽鎖超可変領域及び３つの重鎖超可変領域を含み、これらの配列（配列番号１１−１６）を下記に示す。
【０８２０】
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１７の可変軽鎖配列及び配列番号１８の可変重鎖配列を含む。
2017504606.tif 000287
【０８２１】
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号１９の軽鎖配列及び配列番号２０の重鎖配列を含む。
【０８２２】
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、３つの軽鎖超可変領域及び３つの重鎖超可変領域を含み、これらの配列（配列番号１９−２４）を下記に示す。
【０８２３】
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号２５の可変軽鎖配列及び配列番号２６の可変重鎖配列を含む。
【０８２４】
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号２７の可変軽鎖配列及び配列番号２８の可変重鎖配列を含む。
【０８２５】
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号２９の可変軽鎖配列及び配列番号３０の可変重鎖配列を含む。
【０８２６】
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ３３抗体は、配列番号３１の可変軽鎖配列及び配列番号３２の可変重鎖配列を含む。
2017504606.tif 000288
【０８２７】
抗ＣＤ２２ヒト化抗体：
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ２２抗体は、３つの軽鎖超可変領域及び３つの重鎖超可変領域（配列番号４１−４６）を含み、これらの配列を下記に示す。
【０８２８】
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ２２抗体は、配列番号４７の可変軽鎖配列及び配列番号４８の可変重鎖配列を含む。
【０８２９】
一実施態様において、本発明のＡＤＣの抗ＣＤ２２抗体は、配列番号４９の軽鎖配列及び配列番号５０の重鎖配列を含む。
2017504606.tif 000289
2017504606.tif 000290
【０８３０】
ＡＤＣインビトロデータ
下記のＡＤＣを上記のインビトロアッセイにおいて試験したが、活性であることが見出された。前記ＡＤＣの活性を、下記の表において例示する。ＮａＰｉ２ｂ  ＡＤＣは、非標的化コントロールとして使用した。
2017504606.tif 000291
2017504606.tif 000292
2017504606.tif 000293
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2017504606.tif 000295
【０８３１】
ＡＤＣインビボデータ
図１は、ＨＬ−６０ヒト急性骨髄性白血病腫瘍を有するＳＣＩＤマウスにおけるＣＤ３３ＡＤＣの有効性比較を示す。ＣＤ３３ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＡＤＣ３−２は、ビヒクル群と比較した、腫瘍増殖の用量依存的な阻害を示した。非標的化コントロールＮａＰｉ２ｂ  ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＡＤＣ３−１は、腫瘍増殖に対して最小の効果を有した。
【０８３２】
図２は、ＯＶＣＡＲ３Ｘ２．１ヒト卵巣腫瘍を有するＳＣＩＤ−ベージュマウスにおけるＮａＰｉ２ｂ  ＡＤＣの有効性比較を示す。ＮａＰｉ２ｂ  ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＡＤＣ２−１及びＡＤＣ３−１は、ビヒクル群と比較して、腫瘍増殖の中程度の阻害を示した。ＮａＰｉ２ｂ  ＣＢＩ−ＰＢＤ  ＡＤＣ２−１及びＡＤＣ３−１の抗腫瘍活性は匹敵し、３ｍｇ／ｋｇの抗体用量（＝７３ｕｇ／ｍ２の薬物用量）で腫瘍増殖に遅延がもたらされた。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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