(57)【要約】  少なくとも１種のＣ１−インヒビター（Ｃ１−ＩＮＨ）および少なくとも１種の第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）インヒビターの投与を含む、接触活性化系の障害を処置するための方法および組成物が開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の少なくとも１種の第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）インヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−インヒビター（Ｃ１−ＩＮＨ）を含む、血栓性障害、間質性肺障害、線維増殖性障害、突発性肺線維症、神経炎症性障害、キニン形成に関連する障害、補体活性化系の障害および虚血再灌流障害（ＩＲＩ）から選択される接触活性化系の障害の処置の使用のための、ＦＸＩＩインヒビターがＣ１  ＩＮＨではない組成物。
【請求項２】
有効量の少なくとも１種の第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）インヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−インヒビター（Ｃ１−ＩＮＨ）を含む、血栓性障害、間質性肺障害、線維増殖性障害、突発性肺線維症、神経炎症性障害、キニン形成に関連する障害、補体活性化系の障害および虚血再灌流障害（ＩＲＩ）から選択される障害の処置の使用のための、ＦＸＩＩインヒビターがＣ１  ＩＮＨではない組成物。
【請求項３】
障害が血栓性障害であり、静脈、動脈または毛細血管の血栓、心臓における血栓、慢性または急性の血栓塞栓症、血液と人工物表面との接触の間またはその後の血栓形成、脊髄損傷、外傷性脳損傷、二次性脳浮腫または中枢神経系の浮腫である、請求項１または２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
血栓性障害が、静脈、動脈または毛細血管の血栓であり、脳卒中、心筋梗塞、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）、門脈血栓症、血栓塞栓症、腎静脈血栓症、頸静脈血栓症、脳静脈洞血栓症、バッド・キアリ症候群、パジェット・シュレッター病（Ｐａｇｅｔ−Ｓｃｈｒｏｅｔｔｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）または無症候性脳虚血である、請求項３に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
障害が、キニン形成に関連する障害であり、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、二次性脳浮腫、中枢神経系の浮腫、低血圧ショックまたは血液と人工物表面との接触の間もしくはその後の浮腫である、請求項１または２に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
障害が、神経炎症性障害であり、脊髄損傷、外傷性脳損傷、多発性硬化症、横断性脊髄炎、視神経脊髄炎（デビック病）、二次性脳浮腫または中枢神経系の浮腫である、請求項１または２に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
障害が、局所もしくは遠隔ＩＲＩであり、特に、肺、心臓、脳、腎臓、腸、膵臓、肝臓もしくは四肢に影響を与えるか、または処置の不在下で多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）または全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）をもたらす遠隔ＩＲＩである、請求項１または２に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
障害が、外科手術介入、特に血管手術、心臓手術、神経外科手術、外傷手術、がん手術、整形手術、移植、低侵襲手術、または薬理学的活性物質の送達のためのデバイスまたは完全もしくは部分的閉塞を機械的に除去するデバイスの挿入によるＩＲＩである、請求項１または２に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターが、
（ｉ）野生型インフェスチン−４ポリペプチド配列（配列番号１）または
（ａ）配列番号１のＮ末端アミノ酸２〜１３位の外側に１〜５のアミノ酸突然変異を含むように改変された配列番号１；
および／または
（ｂ）配列番号１との少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の相同性および配列番号１由来の６つの保存されたシステイン残基の保持、
を含むポリペプチド配列
（ｉｉ）野生型ＳＰＩＮＫ−１ポリペプチド配列（配列番号２）または
（ａ）Ｎ末端アミノ酸２〜１３位を配列番号１のＮ末端アミノ酸２〜１３と置き換えるように突然変異され、場合により、配列番号１の配列とのポリペプチド配列の相同性を増加する１〜５の追加のアミノ酸突然変異を含むようにさらに改変された配列番号２、
および／または
（ｂ）配列番号２との少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％もしくは９９％の相同性および配列番号２由来の６つの保存されたシステイン残基の保持、
を含むポリペプチド配列、
（ｉｉｉ）ＳＰＩＮＫ−１突然変異体Ｋ１、Ｋ２またはＫ３（配列番号３、４または５）の１つ、
および／または
（ｉｖ）抗ＦＸＩＩ抗体、
を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
抗ＦＸＩＩ抗体が、
（ｉ）（ａ）配列番号８で示される重鎖ＣＤＲ１、配列番号１０で示される重鎖ＣＤＲ２および配列番号１２で示される重鎖ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、
および／または
（ｂ）配列番号１３で示される軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１４で示される軽鎖ＣＤＲ２および配列番号１６で示される軽鎖ＣＤＲ３を含むＶＬ領域、
または
（ｉｉ）（ａ）配列番号８で示される重鎖ＣＤＲ１、配列番号９で示される重鎖ＣＤＲ２および配列番号１１で示される重鎖ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、
および／または
（ｂ）配列番号１３で示される軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１４で示される軽鎖ＣＤＲ２および配列番号１５で示される軽鎖ＣＤＲ３を含むＶＬ領域、
または
（ｉｉｉ）配列番号６を含むＶＨ領域および配列番号７を含むＶＬ領域、
を含む、請求項９に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
抗ＦＸＩＩ抗体がＩｇＧ抗体である、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターが、ＰＥＧまたはアルブミン、アファミン、アルファ−フェトプロテイン、ビタミンＤ結合タンパク質、ヒトアルブミン、免疫グロブリンおよびＩｇＧのＦｃから選択される半減期強化ポリペプチドを含む融合パートナーと連結される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
半減期強化ポリペプチドが、リンカーを介してＦＸＩＩインヒビターと連結される、請求項１２に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターが、リンカーペプチドを介してＦＸＩＩインヒビターと接合されたヒトアルブミンを含む融合タンパク質である、請求項１２または１３に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが、患者が接触活性化系の障害を発症した後で投与される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１６】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが、（ｉ）注射もしくは注入として単回用量で、（ｉｉ）それぞれを注射もしくは注入として複数回用量で、または（ｉｉｉ）連続注入もしくは塗布として投与される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１７】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが静脈内投与される、請求項１６に記載の使用のための組成物。
【請求項１８】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが同時に投与されるか、または
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが、ＦＸＩＩインヒビターが最初に投与されるか、またはＣ１−ＩＮＨが最初に投与されるかのいずれかで連続して投与される、
請求項１〜１７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１９】
少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの直後、もしくは少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの後約１０分までに投与されるか、または
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターが少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨの直後に投与されるか、もしくは少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨの後約１０分までに投与される、
請求項１８に記載の使用のための組成物。
【請求項２０】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターが、約０．０１から約１０００ｍｇ／ｋｇ体重もしくは約１から約５００ｍｇ／ｋｇの範囲の濃度で投与され、および／または少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが、約０．０１ＩＵ／ｋｇから約５０００ＩＵ／ｋｇ体重もしくは約５から約５００ＩＵ／ｋｇの範囲の濃度で投与される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項２１】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが、接触活性化系の障害の初期の侵襲もしくはエピソードの直後または１時間、６時間、１２時間、１日、３日、５日もしくは１０日後までに投与される、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項２２】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが、少なくとも２回、少なくとも３回または少なくとも５回投与される、請求項２１に記載の使用のための組成物。
【請求項２３】
少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが血漿由来Ｃ１−インヒビターおよび／または組換えＣ１−インヒビター、特に天然に存在するヒトタンパク質と同一であるか、またはこれらの機能性変異体である、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項２４】
少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが、血漿由来ヒトＣ１エステラーゼインヒビターおよび／または組換えヒトＣ１エステラーゼインヒビターである、請求項２３に記載の使用のための組成物。
【請求項２５】
（ａ）少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビター、
（ｂ）少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨ、
（ｃ）接触活性化系の障害の処置におけるキットの使用に関する取扱い説明書、および
（ｄ）場合により、少なくとも１種のさらなる治療用活性化合物もしくは薬物、
を含み、
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが、別個の容器で提供されるか、または単一の容器内に一緒に混合されて提供され、ＦＸＩＩインヒビターがＣ１−ＩＮＨではない、接触活性化の障害の処置に使用するためのキット。
【請求項２６】
さらなる治療用活性化合物もしくは薬物が、ヘパリン、アセチルサリチル酸、クロピドグレルまたはジピリダモールである、請求項２５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、少なくとも１種のＣ１インヒビター（Ｃ１エステラーゼインヒビターまたはＣ１−ＩＮＨ）および少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターの、接触活性化系障害の処置における使用に関する。少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターを含む組成物もまた提供される。
【０００２】
脈管系の「外因性」（血管壁）または「内因性」（血液伝搬性）成分のいずれかにより誘発される、凝固に関する２つの輻湊する経路が存在する。「内因性」または接触活性化経路は、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ、ハーゲマン因子）が、高分子量キニノーゲンおよび血漿カリクレインが関与する反応において負に帯電した表面と接触した場合に開始される。第ＸＩＩ因子はセリンプロテアーゼであり、ひとたび活性化されると（ＦＸＩＩａ）、（直接またはプレカリクレインの活性化を介して）ポジティブフィードバック反応で循環するＦＸＩＩをさらに活性化する。ＦＸＩＩａは第ＸＩ因子も活性化し、血液凝固はトロンビンの生成を最高にする限定的なタンパク質分解による、さらなる因子の活性化が関与する反応カスケードにおいて進行し、トロンビンが血漿フィブリノーゲンをフィブリンに変換して、血小板を活性化する。
【０００３】
ＦＸＩＩは内因性経路中の開始因子であるが、ＦＸＩＩの欠損は突発性または損傷関連の出血合併症の増加には関係しない（非特許文献１）。実際に、ＦＸＩＩ欠損のヒトは、大手術の外科手術手技の間であっても異常な出血に悩まされない（非特許文献２）。
【０００４】
いくつかの先行する報告において、ＦＸＩＩの欠損は、静脈血栓のリスクの増加と関係していた（非特許文献３：非特許文献４）。この考えを支持する研究および症例報告は、肺塞栓症で死亡したＦＸＩＩ欠損の初発症例であるジョン・ハーゲマン（Ｊｏｈｎ  Ｈａｇｅｍａｎ）について言及している。しかし、この仮説は、ＦＸＩＩ欠損と血栓症とを関連付けるいくつかの症例報告の最近の再評価により異議が唱えられた（非特許文献５）。著者は、大部分の症例でＦＸＩＩとは独立して血栓性事象の原因となる、ＦＸＩＩ欠損と組み合わせて、随伴する先天的または獲得的血栓形成促進性リスク因子を同定した。十分に特徴付けられた患者を使用した大規模な疫学研究（非特許文献６）およびＦＸＩＩ欠損ファミリー（非特許文献７）は、ＦＸＩＩ欠損と血栓形成促進性リスクとの間に相関が無いことを示す。
【０００５】
より最近、Ｋｌｅｉｎｓｃｈｎｉｔｚらは、脳虚血の病理学的血栓症におけるＦＸＩＩの役割に関して報告した（非特許文献８）。またＦＸＩＩ欠損マウスにおける研究は、ＦＸＩＩが、新たに生じた血栓を安定化することによって、病理学的動脈血栓形成に関与することを示唆した。特許文献１および特許文献２を参照されたい。
【０００６】
Ｃ１−インヒビター（Ｃ１−ＩＮＨ）は、セリンプロテアーゼインヒビターでありかつ内在性接触活性化系の生理学的インヒビターである。Ｃ１−ＩＮＨは、ＦＸＩＩを含む、補体、カリクレイン−キニンおよび凝固系に関連するいくつかのプロテアーゼを阻害する。その古典的補体経路を制御する中心的役割および再灌流障害における補体媒介性炎症の関与に基づき、神経障害に対するＣ１−ＩＮＨ投与の効果および脳卒中後の梗塞サイズが調査されている。Ｃ１−ＩＮＨが強力な神経保護特性を有することが、脳虚血のマウスモデルにおいて見出された（例えば、非特許文献９を参照されたい）。さらに、Ｃ１−ＩＮＨはまた、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）を有する患者の承認された療法である。
【０００７】
血栓（血餅）形成は、血液の喪失を低減させる損傷に対する生理学的応答である。血管壁の損傷は、急激な接着、血小板の凝集、その後の血漿凝固系の活性化およびフィブリン含有血栓の形成を誘発し、これらが損傷部位（すなわち、血管壁の損傷）を塞ぐ。これらの事象は、外傷後の血液喪失を限定的なものとするが、病理学的状態下においては、病的な血管を閉塞させ、生命維持に必要な組織および臓器の虚血および／または梗塞につながる。続いて、血流の閉塞または途絶に対する二次的な炎症および／または他の生理学的応答が、組織または臓器をさらに損傷することがある。キニン−カリクレインまたは補体系の疾患および障害のような接触活性化経路に関連する他の疾患および障害は、同様に生命維持に必要な臓器および組織の損傷につながることがある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許出願第２００８／０２５４０３９号
【特許文献２】国際公開第２００６／０６６８７８号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｒａｔｎｏｆｆ＆Ｃｏｌｏｐｙ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ３４、６０２〜１３頁（１９５５）
【非特許文献２】Ｃｏｌｍａｎ，Ｒ．Ｗ．Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ．Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ｃｏｌｍａｎら編）１０３〜１２２頁（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、２００１）
【非特許文献３】Ｋｕｈｌｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．１３７、４５９〜４６４頁（２００４）
【非特許文献４】Ｈａｌｂｍａｙｅｒら、Ｗｉｅｎｅｒ  Ｍｅｄ．Ｗｏｃｈｓｃｈｒ．１４３、４３〜５０頁（１９９３）
【非特許文献５】Ｇｉｒｏｌａｍｉら、Ｊ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓ  １７、１３９〜１４３頁（２００４）
【非特許文献６】Ｋｏｓｔｅｒら、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．８７、４２２〜４２４頁（１９９４）
【非特許文献７】Ｚｅｅｒｌｅｄｅｒら、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８２、１２４０〜１２４６頁（１９９９）
【非特許文献８】Ｋｌｅｉｎｓｃｈｎｉｔｚら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３：５１３〜８頁（２００６）
【非特許文献９】Ｄｅ  Ｓｉｍｏｎｉら、Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．２３（２）：２３２〜２３９頁（２００３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
これらの初期研究にもかかわらず、血栓症のような接触活性化系の障害の処置の改善、特に、効能の改善を提供でき、および／または高価な治療剤の低用量の使用を可能にする処置が依然として必要である。この点を考慮して、本発明者らは動脈血栓症のような接触活性化系の障害の処置およびこれからの保護が、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビター（例えば、ｒＨＡ−インフェスチン−４）および少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨ（例えばＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標））を投与することによって、相乗的に強化可能であることを発見した。
【００１１】
したがって、少なくとも１種のＣ１−インヒビター（Ｃ１エステラーゼインヒビターまたはＣ１−ＩＮＨ）およびＣ１−ＩＮＨではない少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビター（ＦＸＩＩインヒビター）の、接触活性化系の障害の処置における使用を含む組合せ療法を本明細書において開示する。接触活性化系の障害は、血栓性障害、間質性肺障害、線維増殖性障害、突発性肺線維症、神経炎症性障害、キニン形成に関連する障害、補体活性化系の障害および虚血再灌流障害（ＩＲＩ）から選択することができ、療法は、有効量の少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−インヒビター、Ｃ１−ＩＮＨを投与することを含むことができる。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターは、野生型インフェスチン−４ポリペプチド配列（配列番号１）または配列番号１のＮ末端アミノ酸２〜１３位の外側に１〜５のアミノ酸突然変異を含有する、および／または配列番号１と少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％相同であり、配列番号１由来の６個の保存されたシステイン残基を保持するインフェスチン−４配列を含むことができる。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターは、野生型ＳＰＩＮＫ−１ポリペプチド配列（配列番号２）またはＮ末端アミノ酸２〜１３位が配列番号１のＮ末端アミノ酸２〜１３と置き換えられており、場合によりさらに、配列番号１の配列に対するポリペプチド配列の相同性が増加する１〜５の追加のアミノ酸突然変異を含む、および／または配列番号２に対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％相同であり、配列番号２由来の６個の保存されたシステイン残基を保持するように改変された野生型ＳＰＩＮＫ−１ポリペプチド配列を含むことができる。特定の実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターは、抗ＦＸＩＩ抗体を含むことができる。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターは、融合パートナー（例えば、半減期強化ポリペプチド）と、直接またはリンカーを介して連結される。
【００１３】
さまざまな実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは、血漿由来Ｃ１−インヒビターおよび／または組換えＣ１−インヒビターである。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは、天然に存在するヒトタンパク質と同一であるか、またはこれらの機能性変異体である。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは、血漿由来ヒトＣ１エステラーゼインヒビターおよび／または組換えヒトＣ１エステラーゼインヒビターである。
【００１４】
さまざまな実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは、予防的に投与され、またはこれらは、患者が接触活性化系の障害を発症した後に投与される。少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは、同時に投与することができ、ＦＸＩＩインヒビターが最初に投与されてもよく、またはＣ１−ＩＮＨが最初に投与されてもよい。少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは一度に投与されてもよく、または複数回投与することもできる（例えば、反復予防的処置として、または接触活性化系の障害の発生の間またはその後の反復処置として、慢性障害を処置するために反復投与される）。
【００１５】
いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビター、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨ、接触活性化系の障害の処置におけるキットの使用に関する取扱い説明書および場合により、少なくとも１種のさらなる治療用活性化合物または薬物を含み、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが、別個の容器で提供されるか、または単一の容器内に一緒に混合され、ＦＸＩＩインヒビターがＣ１−ＩＮＨではないキットが提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】第ＸＩＩ因子インヒビター（ｒＨＡ−インフェスチン−４）、Ｃ１−ＩＮＨまたはこの２つの組合せによる処置後の、ラットのＦｅＣｌ３誘導性動脈血栓症モデルにおける動脈閉塞の継時変化および閉塞率を示す図である。
【図２】第ＸＩＩ因子インヒビター（ｒＨＡ−インフェスチン−４）もしくはＣ１−ＩＮＨで個別に、または組合せによる処置後の、ラットのＦｅＣｌ３誘導性動脈血栓症モデルにおける閉塞率を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本出願の実施形態は、少なくとも１種の第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）インヒビターおよび少なくとも１種のＣ１エステラーゼインヒビター（Ｃ１−ＩＮＨ）を、接触活性化系の障害を処置するために患者に投与することを含む方法に関する。いくつかの実施形態において、組合せは、いずれかの成分を単剤療法として投与した場合と比較して相乗効果を提供する。いくつかの実施形態において、組合せの相乗有効性は、組合せのいずれかまたは両方の成分の投薬量を減らした使用を可能にし、潜在的に処置のコストおよびいずれかまたは両方の成分に対する免疫応答のような副作用の可能性のリスクを低下させることができる。加えて、組合せ療法は、組合せにより処置される疾患の病態生理の根底にある複数の経路と相互作用でき、潜在的に、より有効な処置を広範囲の患者集団に提供することができる。
【００１８】
定義
本出願において、（「１つの（ａ）」または「その（ｔｈｅ）」のような）単数形は、特に他のことが明記されない限り複数形を含む。さらに本出願において、「または」の使用は、特に他のことが明記されない限り「および／または」を意味する。さらに、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含んだ（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」のような他の形態の使用を限定するものではない。本明細書に記載の任意の範囲は、エンドポイントおよびエンドポイントの間のすべての値を含むことは理解されるべきである。
【００１９】
項の見出しは、単なる組織化目的であり、記載の主題を限定するものと解釈するべきではない。限定するものではないが特許、特許出願、論文、書籍および条約を含む本出願に引用のすべての参考文献または参考文献の一部を、どのような目的のためにも、参照によってその全体を本明細書に明白に組み入れる。参照によって組み入れる刊行物および特許または特許出願が本明細書に含まれる発明と矛盾する範囲において、本明細書は任意の矛盾材料に優先する。
【００２０】
本明細書において使用する場合、「ＦＸＩＩインヒビター」は、（活性化前の）第ＸＩＩ因子および活性化第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩａ）のいずれかまたは両方のインヒビターを指し、一方、「Ｃ１インヒビター」、「Ｃ１エステラーゼインヒビター」および「Ｃ１−ＩＮＨ」という用語は、補体系、カリクレイン−キニン系および／または凝固系に関連する、循環プロテアーゼの活性化を防止する、および／または活性化プロテアーゼを阻害する、Ｃ１複合体中のタンパク質と結合して、阻害する、セリンプロテアーゼインヒビターを指す。Ｃ１−ＩＮＨは、血漿性（すなわち血漿由来）、組換えまたは２つの組合せであってよい。Ｃ１−ＩＮＨは天然に存在するヒトタンパク質またはこれらの機能性変異体と同一であってよい。ＦＸＩＩインヒビターおよびＣ１−ＩＮＨは、野生型インヒビターの機能性変異体および断片を包含する。機能性変異体または断片は、ＦＸＩＩまたはＣ１の活性を阻害する野生型分子の能力の少なくとも５０％（例えば、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９９もしくは１００％またはこの間の任意の百分率）を保持する分子である。
【００２１】
本明細書において使用する場合、「接触活性化系の障害」は、凝固系、補体系およびカリクレイン−キニン系の１つまたはそれ以上の活性レベルに、病態生理学的に関与、影響および／またはこれらを改変する障害を指し、これら全てが接触活性化経路に関与する、またはこれに由来する。接触活性化系の障害としては、血栓性障害、キニン形成に関連する障害、間質性肺障害、補体活性化系の障害、補体活性化系の障害、神経炎症性障害または虚血再灌流障害（ＩＲＩ）が挙げられ、これらはすべて接触活性化経路の病理活性に関連する。
【００２２】
本明細書において使用する場合、「処置する」および「処置すること」という用語は、障害または疾患の少なくとも１つの兆候、症状または態様を、予防、阻害、除去、発症を遅延、遅延、低減、重症度の低下または緩和することを包含する。処置することは、処置が「治癒する」または「治癒すること」を包含するが等価ではないという点で症状の完全な除去を必要としない。いくつかの実施形態において、患者は障害を予防するために処置され、接触活性化系の障害を発症するリスクがある事が知られている対象（例えば、上記の障害の１つまたはそれ以上に関する１つまたはそれ以上の素因を有する対象）に療法を投与すること、または再発の可能性がある障害において、一次事象後に療法を投与する、例えば、一次事象を経験した患者において二次事象を阻害することのいずれかを意味する。例えば、血栓性障害の処置としては、血栓の形成、成長または塞栓の予防を挙げることができる。いくつかの実施形態において、「処置」または「処置すること」は、障害または疾患の効果を緩和することも含むことができる。「緩和すること」および「効果を緩和すること」という用語は、１つまたはそれ以上の患者の機能の損傷を生み出す障害または疾患のいくつかの態様を改善することを意味する。例えば、脳卒中の処置としては、（例えば、組織損傷または神経機能の喪失の程度により測定して）脳卒中の予防、脳卒中の効果の緩和または脳卒中の重症度の低下を挙げることができる。
【００２３】
本明細書において使用する場合、「患者」は、接触活性化経路の障害を有する、有していたまたはこの発症の可能性があり、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨの投与から利益を受ける任意のヒトまたは動物である。ＦＸＩＩインヒビターおよび／またはＣ１−ＩＮＨの投与は、限定するものではないが、非経口投与（例えば、硬膜下、皮下、静脈内、動脈内、筋肉内、髄腔内、鼻腔内、気管内、吸入および／または腹腔内注射）、経口および／または直腸投与ならびに点滴注入、スプレーの適用および／または注入技術による投与を含む、医薬品または治療剤を患者に送達する任意の公知の方法によるものである。特定の実施形態において、投与は、静脈内または皮下で行われる。
【００２４】
本明細書において使用する場合、「抗体」は、機能性抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを含み、免疫グロブリンおよびこれらの抗原結合部または断片を含む。機能性抗原結合部または断片は、完全長抗体の抗原に結合する能力および抗原を阻害する能力の少なくとも５０％（例えば、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９９もしくは１００％またはこれらの間の任意の百分率）を保持する分子である。抗体という用語は、限定するものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、単一特異的、多重特異的、非特異的、ヒト化、完全ヒト、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）、一本鎖、キメラ、合成、組換え、ハイブリッド、突然変異、復帰突然変異およびＣＤＲグラフト化抗体を含む。抗体という用語は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ＶＨＨ（ナノボディとも称される）のような抗体断片および二重特異性もしくは多重特異性抗体を含む抗原結合機能を保持する他の抗体断片もしくは変異体をさらに含む。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭを含む任意のアイソタイプである。本明細書において使用する場合、「抗原」は、抗体により結合される標的分子である。本明細書において使用する場合、「抗原結合部位」という用語は、抗原の一部またはすべてと結合できる、またはこれに相補的な抗体分子の一部を指す。
【００２５】
本明細書において使用する場合「相乗」効果は、単剤療法としてのＣ１−ＩＮＨおよび単剤療法としてのＦＸＩＩインヒビターの投与から観察される治療効果の合計より大きな、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの投与後に観察される治療効果を指す。例えば、相乗効果は、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターを血栓性事象のリスクのある、またはこれを患う患者に投与後の、単剤療法の合計から観察されるより大きな血流の増加および／または血栓症発生率の低減を含むことができる。同様に、接触活性化系の障害を処置される患者における相乗効果の別の例としては、Ｃ１−ＩＮＨおよびＦＸＩＩインヒビターの単剤療法の効果の相加から予想される効果を超える組織損傷の量または機能性喪失（例えば、神経機能の喪失）のレベルのより大幅な低減を挙げることができる。
【００２６】
Ｉ．接触活性化系の障害
いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨが開示され、接触活性化系の障害を処置する方法に使用される。該方法は、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨを、それを必要とする対象に投与することを含む。したがって、本発明はさらに、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび／または少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨを医薬として許容される賦形剤または担体中に含む、接触活性化系の障害の処置に使用するための１つまたはそれ以上の医薬組成物を提供する。同様に、本発明はさらに、接触活性化系の障害を処置するための薬剤の製造における、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび／または少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨを含む１つまたはそれ以上の組成物の使用を提供する。少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは、単独で使用されてもよく、または追加の治療用化合物がさらに投与されてもよい。
【００２７】
本明細書において開示の方法および組成物を使用して処置される「血栓性障害」は、血流を遮断または減少させる血栓（血餅）の形成を特徴とする任意の障害／疾患である。血栓は、血栓が形成されたその場所に留まるか、またははがれて血流の下流を閉塞する（血栓塞栓症）。いくつかの実施形態において、血栓症は、心臓および脳を含む体内のどこかの静脈（静脈血栓症）または動脈（動脈血栓症）において起こる。血栓症が冠循環において起こった場合、冠状動脈血栓症と称される。血栓症が脳循環において起こった場合、脳血栓症と称される。
【００２８】
血栓性障害は、静脈、動脈または毛細血管の血栓、心臓における血栓形成、慢性および／または急性血栓塞栓症（例えば、肺塞栓症、心房細動誘導性血栓形成後の脳血栓塞栓症（例えば、心房細動による脳卒中予防（ＳＰＡＦ））、（例えば、弁置換術、ステント、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＩ）、体外式膜型人工肺（ＥＣＭＯ）を有する患者または心肺バイパス手術（ＣＰＢ手術）を受ける患者における）ヒトまたは動物対象の血液と人工物表面との接触の結果としての血栓形成を含む。血栓は、脳卒中、心筋梗塞、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）、門脈血栓症、血栓塞栓症、腎静脈血栓症、頸静脈血栓症、脳静脈洞血栓症、バッド・キアリ症候群、パジェット・シュレッター病（Ｐａｇｅｔ−Ｓｃｈｒｏｅｔｔｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）または無症候性脳虚血（ＳＢＩ）を引き起こす。
【００２９】
本明細書に開示の方法および組成物を使用して処置される神経炎症性障害としては、脊髄損傷（ＳＣＩ）、脳卒中、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）、二次性脳浮腫、中枢神経系の浮腫、多発性硬化症（ＭＳ）、横断性脊髄炎または視神経脊髄炎（デビック病）が挙げられる。
【００３０】
本明細書に開示の方法および組成物を使用して処置されるキニン形成に関連する障害としては、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、二次性脳浮腫、中枢神経系の浮腫、低血圧ショック、播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）または敗血症が挙げられる。
【００３１】
本明細書に開示の方法および組成物を使用して処置される間質性肺障害としては、線維増殖性障害または突発性肺線維症のような突発性肺障害が挙げられる。
【００３２】
本明細書において使用する場合、「虚血再灌流障害」（ＩＲＩ）という用語は、虚血事象のため以前に血流不足を経験した組織または臓器の領域への血流の回復からもたらされる損傷を指す。ＩＲＩは、例えば自然事象（例えば、心筋梗塞後の血流の回復）、外傷により、または１つもしくはそれ以上の外科手術手技または血液供給の減少を受けたことがある組織または臓器への血流を回復させる他の治療介入により引き起こされる。このような外科手術手技としては、例えば、冠動脈バイパスグラフト手術、冠動脈形成術、臓器移植手術、待期手術、再建手術、血管手術、心臓手術、外傷手術、衝突または挫滅手術、がん手術、整形手術、移植または低侵襲手術を挙げることができる。いくつかの実施形態において、外科手術手技としては、血栓溶解剤もしくは血管拡張薬のような薬理学的活性物質の送達のためのデバイスまたは完全もしくは部分的閉塞、例えば血管の閉塞を機械的に除去するデバイスの挿入を挙げることができる。
【００３３】
虚血組織の再灌流は、局所、全身および／または遠隔応答の１つまたはそれ以上をもたらし、順に広範囲の微小血管機能障害および／または組織障壁機能の改変をもたらす。炎症反応はさらに、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）または多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）をもたらす。局所ＩＲＩは、血栓性過程、血栓塞栓性過程、炎症過程、細胞損傷、補体活性化および／または初期虚血部位における浮腫形成のような病態生理学的過程を指し、一方、本明細書において交換可能に使用される遠隔ＩＲＩまたは遠位ＩＲＩは、（１つまたは複数の）局所虚血臓器または（１つまたは複数の）組織とは異なる臓器または組織に影響を与える病態生理学的過程を指す。いくつかの実施形態において、遠隔ＩＲＩは、肺、心臓、脳、腎臓、腸、膵臓、肝臓または四肢／手足のような１つもしくはそれ以上の臓器に影響を与えるか、または処置の不在下で多臓器不全症候群（ＭＯＤＳ）または全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）をもたらす。
【００３４】
ひとたび血栓が形成されると、血管中の血流が減少または遮断され、周囲組織または個別の臓器の虚血を引き起こす。血流が回復されない場合、血管を伴う組織は損傷または破壊される（「梗塞」と称される）。血栓の位置に依存して、血栓性障害はさまざまな名称で知られている。したがって、さまざまな実施形態において、血栓の形成または特定の部位において血栓により引き起こされる状態を処置する方法が開示され、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨを含む組成物ならびにこれらの方法における該組成物の使用が開示される。
【００３５】
脳卒中は、血栓または特定の部位における血栓／血栓塞栓症の形成／蓄積により引き起こされる状態の一例であり、いくつかの実施形態において、脳卒中は本明細書に開示の組成物および組合せを使用して処置される。
【００３６】
脳卒中（脳血管障害（ＣＶＡ）または脳梗塞とも称される）は、原因に関係なく、血流の不足による脳機能の低下を伴う。脳卒中が、（例えば、血栓が血流を遮断したため）脳の一部の血流の不足により引き起こされる場合、虚血性脳卒中と称される。虚血性脳卒中には３つ主因が存在する：血栓症（局所的に形成される血餅による血管の閉塞）、塞栓症（体内の別の場所に形成される血餅による血管の閉塞）、および全身性低灌流（例えば、ショックによる血液供給の全体的減少）。血栓症および／または塞栓症は、動脈、静脈、細動脈、細静脈および／または毛細血管において起こる。「虚血性脳卒中」という用語は、大血管（例えば、内頸動脈、脊椎血管、ウィリス動脈輪）、小血管、毛細血管または洞（例えば脳静脈洞血栓症）のどこであろうと、脳の任意の領域において局所的に形成された血栓（すなわち、「血栓性脳卒中」）により引き起こされる脳卒中ならびに脳の内側または外側のどこか他の場所で形成された血餅が塞栓を形成し、その後脳の血管に留まった場合に引き起こされる脳卒中（「塞栓性脳卒中」）を含む。虚血性脳卒中はまた、一過性虚血性発作（「軽度脳卒中」として公知である）を含む。一過性虚血性発作において、虚血事象による神経機能障害は一過性であり、他の脳卒中のタイプとは対照的に、組織損傷（梗塞）は含まず、症状は可逆的である。いくつかの実施形態において、本開示は、虚血性脳卒中を処置するための方法および組成物を提供する。
【００３７】
脳卒中はまた、出血過程により引き起こされる、すなわち出血性脳卒中がある。出血（例えば、頭蓋内出血）は、概して、血管の破裂または頭蓋冠内のどこかの異常な血管構造によるものであり、両方のシナリオが最終的に脳組織の損傷につながる。いくつかの出血は、内部領域の虚血を発生させる（「出血性変化」）。出血性脳卒中は、軸内出血（脳内部の出血）または軸外出血（頭蓋内であるが脳外部の出血）である。いくつかの実施形態において、本明細書に開示の方法および組成物を使用して、出血性脳卒中が処置される。
【００３８】
脳卒中後、再灌流は、組織損傷の程度をさらに悪化させる、炎症および／または他のカスケードの活性化をもたらし得る。再灌流および炎症は、凝固、カリクレイン−キニン、および補体経路を含む様々なカスケードを活性化することができる。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書に開示の方法および組成物を使用して、脳卒中のこれらの二次性態様（例えば、虚血性または出血性の脳卒中の二次性態様）が処置される。
【００３９】
心筋梗塞は、血栓により引き起こされる別の状態である。心筋梗塞は、概して心臓組織の死を指す。心筋梗塞は、例えば、冠循環、多くの場合冠状動脈における血栓により引き起こされる。したがって、一実施形態において、本発明は、血栓により引き起こされる心筋梗塞の処置に使用するための方法および組成物を提供する。
【００４０】
さまざまな組織／部位の他の血栓性状態としては、深部静脈血栓症（ＤＶＴ）、門脈血栓症、腎静脈血栓症、頸静脈血栓症、バッド・キアリ症候群（肝静脈または下大静脈の遮断）、パジェット・シュレッター病（Ｐａｇｅｔ−Ｓｃｈｒｏｅｔｔｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）（上肢静脈の閉塞）、冠動脈血栓症（肝臓動脈の合併症）およびこのような事象のリスクがある患者（例えば、整形手術後、がん患者、外科患者、動けない患者）における他の血管血栓性事象が挙げられる。したがって、これらの実施形態において、これらの組織／部位の１つまたはそれ以上の血栓性状態の処置に使用するための方法および組成物が開示される。
【００４１】
血栓が自由になった場合（すなわち塞栓を起こした場合）、血栓は上記の組織臓器のいずれかにおいて血流を遮断する。血栓塞栓症の一般的な部位は肺である（「肺塞栓症」と呼ばれる）。動脈塞栓もまた、手足の血管を閉塞する。したがって、いくつかの実施形態において、肺または動脈の塞栓症のような血栓塞栓症の処置に使用するための方法および組成物が開示される。
【００４２】
複数の小型の血栓は、凝固因子の過剰な消費を伴う状態において血管の全体を通して形成される。播種性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）として公知のこの状態は、複数の組織の出血性および虚血性壊死につながる。したがって、いくつかの実施形態において、播種性血管内凝固症候群の処置に使用するための方法および組成物ならびに播種性血管内凝固症候群の処置に使用するための組成物が開示される。
【００４３】
いくつかの状態のいずれかが血栓の形成を引き起こす、またはこれに寄与する。例えば、血栓症は、血液の異常な構成（例えば、凝固性亢進または血栓形成傾向）、血管壁の質（内皮細胞損傷またはアテローム性動脈硬化）および／または血流の性質（血行停止、乱れ）により引き起こされる。
【００４４】
血栓形成の素因の例としては、アテローム性動脈硬化、心筋人工器官（例えば、ステントまた弁置換術）の存在、心臓弁疾患の存在、血液が一時的に異物表面と接触する医療手技（例えば、ＣＰＢ、ＥＣＭＯ、ＢＶＡＤ、経皮的冠動脈形成術）、心房細動（左心房または左心耳において血流の停滞を引き起こす）、がん、抗リン脂質抗体、ヘパリン起因性血小板減少症、感染症、経口避妊薬の使用、長期にわたる固定化（例えば、外科手術、肥満、心不全、麻痺、長距離の飛行または妊娠のため）、組織損傷（例えば、外傷または外科手術のため）および／または遺伝子欠損（例えば、第Ｖ因子ライデン変異、プロトロンビン２０２１０遺伝子の突然変異、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺまたは抗トロンビンの欠損）が挙げられる。血栓症は、経皮的冠動脈形成術のような手技のカテーテル挿入の後に続くことがある。他の素因は、血栓症の家族歴、血栓症の１つまたはそれ以上の以前のエピソード、５０齢以前の血栓症または異常な位置における血栓症が挙げられる。
【００４５】
臨床アッセイが、活性化プロテインＣ（ＡＰＣ）抵抗性第Ｖ因子およびさまざまなタンパク質欠損のような欠損を検出するために利用可能である。血栓の存在は、例えば、血管造影、超音波検査、ＭＲＩまたはＣＴスキャンを使用して確認される。いくつかのアッセイにおいて血栓が検出されるが、他のアッセイにおいて、梗塞領域が、血栓が存在するか、または存在したかどうかを示す。
【００４６】
本明細書に開示の方法および組成物による処置が適切な他の状態としては、二次性中枢神経系浮腫の形成の予防および／またはサイズの縮小を意図した投与を含む。二次性浮腫は、流体の局在または異常な蓄積、例えば脳実質内の蓄積からもたらされる脳または脊髄の体積の増加を含む。二次性浮腫は、二次性梗塞成長およびその後の神経損傷の共通原因である。例えば、本明細書に開示の方法および組成物を使用して、脳または脊髄の損傷のため、または脳卒中のような疾患のための二次性中枢神経系浮腫の発症のリスクがある、またはこれを発症していた患者が処置される。
【００４７】
いくつかの実施形態において、処置は、血栓の形成を予防するか、または血栓のサイズの成長を制限／阻害する。一実施形態において、処置は、梗塞の最終サイズ（例えば体積）を制限する。ある実施形態において、処置は、梗塞後の再灌流障害を予防するか、または損傷の程度を制限する。いくつかの実施形態において、処置は、血栓を溶解するか、または除去する１つまたはそれ以上の追加の薬剤（例えば、ｔＰＡ、プラミン）と組み合わせて投与されるが、本明細書に開示の組合せ療法は、血栓の再形成または成長を予防する。
【００４８】
ある実施形態において、処置は、血栓により血流が弱まるか、または遮断される組織において機能の改善および／または回復をもたらす。一実施形態において、処置は、例えば、超音波ドップラー、レーザードップラー、ＭＲＩ（例えば、トレーサーのウォッシュイン、ウォッシュアウト動態を測定する）、ストレインゲージ用量脈波法（ｓｔｒａｉｎ  ｇａｇｅ  ｐｌｅｔｈｙｓｍｏｇｒａｐｈｙ）、インピーダンス脈波法、光電血量測定計、熱対流プローブおよび／または血流測定に適切な他の技術により測定される、血栓の部位における血流の改善をもたらす。ある実施形態において、処置は、標準的な臨床神経学的または心理学的測定を使用して測定される、脳卒中後の神経損傷を低下させるか、または予防する。
【００４９】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは、一緒または個別に投与される。一実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨおよびＦＸＩＩインヒビターは、単回静脈内投与で一緒に投与される。別の実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターが最初に投与され、続いてＣ１−ＩＮＨが投与される。特定の実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨは、ＦＸＩＩインヒビターの投与の直後、またはおよそ５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、９０、１２０、１５０、１８０分もしくはそれ以上後（またはこの間の任意の時点で）で投与される。他の実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨが最初に投与され、続いてＦＸＩＩインヒビターが投与される。特定の実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは、Ｃ１  ＩＮＨの投与の直後、またはおよそ５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、９０、１２０、１５０、１８０分もしくはそれ以上後（またはこの間の任意の時点で）で投与される。
【００５０】
少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターによる処置は、接触活性化系の障害を予防するため、例えば、血栓性事象を予防するために予防的に行われる。処置はまた、接触活性化系の障害のエピソードの直後またはその後のいくつかの時点において投与される。例えば、処置は、血栓性またはＩＲＩ障害後の（例えば、二次性の虚血または炎症性損傷を予防するための）再灌流の開始直後または血栓の形成のような接触活性化系の障害のエピソード（すなわち損傷）後約４８時間まで、または約２４０時間までに投与される。血栓形成および障害の他のエピソードは、例えば、臨床的徴候／症状により、および／または診断的画像化またはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの結果により検出される。
【００５１】
特定の実施形態において、処置は、接触活性化系の障害の急性エピソードの直後、または該エピソードの後６時間未満（例えば、血栓形成、脳卒中またはＩＲＩ障害の再灌流後、約６時間未満）で開始される。いくつかの実施形態において、処置は、約４８時間まで、または２４０時間後までに開始される。いくつかの実施形態において、処置は、血栓の形成、または接触活性化系の障害の他の急性エピソードの直後、または該エピソードの後約５、１０、２０、３０、４０もしくは５０分、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３６、４８、７２、９６、１２０もしくは２４０時間（またはこの間の任意の時点で）で開始される。処置は、たとえ６時間後であっても、４８または２４０時間後であっても利益を有し得る。いくつかの実施形態において、処置は、初期損傷の発生後できる限り早く、好ましくは損傷後１時間未満、６時間未満または４８時間未満に投与される。いくつかの実施形態において、処置は、初期損傷の後約２４０時間以内に、または損傷後約４８時間以内、または損傷後約６時間以内または損傷後１時間以内に行われる。
【００５２】
いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの投与は、初期損傷後（例えば、血栓性閉塞後）の再灌流の開始直後、またはその後約１０日までに行われる。いくつかの実施形態において、処置は、再灌流の開始後できる限り早く、好ましくは再灌流の開始後１時間未満、６時間未満、または４８時間未満に投与される。いくつかの実施形態において、処置は、再灌流の開始直後または再灌流の開始後約５、１０、２０、３０、４０もしくは５０分または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、３６、４８、７２、９６、１２０もしくは２４０時間（またはこの間の任意の時点で）に投与される。いくつかの実施形態において、処置は、再灌流の開始後約２４０時間以内、または再灌流の開始後約４８時間以内、または再灌流の開始後約６時間以内、再灌流の開始後約１時間以内に行われる。
【００５３】
いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの投与は、接触活性化系の障害のリスクがある患者において初期損傷を予防するために（例えば、血栓形成のリスクのある患者において血栓形成を予防するために）予防的に行うことができる。予防的処置は、単回用量または１０分ごと、３０分ごと、１時間ごと、６時間ごと、１２時間ごと、２４時間ごと、３６時間ごと、４８時間ごと、７２時間ごと、９６時間ごと、１２０時間ごと、２４０時間ごと、１週間ごと、２週間ごと、１ヶ月ごともしくは２ヶ月ごと、またはこの間の任意の期間のような反復用量で行うことができる。周期的な用量は、設定された継続期間の間、例えば、治療過程の継続期間にわたって投与される。例えば、特定の医療手技を受けた患者は、血栓形成のリスクが上昇した状態にあると思われる。血栓性事象のリスクを有する手技の例としては、体外血液循環を伴う手技、侵襲的診断手技または移植を含む外科手術の手技が挙げられる。
【００５４】
いくつかの実施形態において、処置は、組織または臓器の損傷をもたらし得る血栓形成のリスクを低下させる特定の手技の間投与されるか、またはこれらの手技、例えば外科手術の手技および他の侵襲的診断手技の間または体外循環の間に起こる血栓性事象を処置するために投与される。いくつかの実施形態において、処置は、特定の手技の後で、血栓形成のリスクを低下させるために、またはこれらの手技の後、例えば外科手術後、再灌流手技の開始後、血栓溶解後、または体外血液循環後に起こる血栓性事象を処置するために投与される。手技の後の投与は、単回用量または複数回用量、例えば、１、２、３、４、５またはそれ以上の用量で行うことができる。反復用量は、３０分ごと、１時間ごと、６時間ごと、１２時間ごと、２４時間ごと、３６時間ごと、４８時間ごと、７２時間ごと、９６時間ごと、１２０時間ごと、もしくは２４０時間ごと、１週間ごと、２週間ごと、１ヶ月ごともしくは２ヶ月ごと（またはこの間の任意の期間）に、投与プロトコールの完了まで投与される。
【００５５】
いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの投与は、（例えば、慢性障害を処置するために）接触活性化系の障害のリスクがある患者を処置するために反復して行うことができる。このような処置は、複数回用量、例えば、２、３、４、５またはそれ以上の用量で、１２時間ごと、２４時間ごと、４８時間ごと、７２時間ごと、９６時間ごと、１２０時間ごと、２４０時間ごと、１週間ごと、２週間ごと、１ヶ月ごと、２ヶ月ごとまたはこの間の任意の期間の用量のような反復方法で行われる。
【００５６】
少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの（例えば、処置を必要とする患者への）投与は、単回用量または反復投与で、さまざまな生理学的に許容される塩形態のいずれかで、および／または許容される医薬品担体と共に、および／または医薬組成物の一部としての添加剤と共に行われてよい。したがって、特定の実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターは、（ｉ）１回、それぞれを個別の注射または注入として、または単一の組合せ注射または注入で、（ｉｉ）各成分の複数回用量または組合せ生成物の複数回用量、例えば２、３、４、５もしくはそれ以上の用量でそれぞれを注射または注入として、または（ｉｉｉ）注入または塗布として、投与される。注入／塗布は、一定期間にわたって、好ましくは３０分から２週間、または３０分から１週間、または３０分から６日、または３０分から５日、または３０分から４日、または３０分から３日、または３０分から２日、または３０分から１日、または３０分から１２時間、または３０分から６時間の期間（またはこの間の任意の期間）にわたって投与される。障害が血栓および／またはＩＲＩ損傷を伴うある実施形態において、投与は、２倍用量で、初期侵襲後であるが再灌流の開始前に１回、および初期損傷後の再灌流開始後に１回行われる。いくつかの実施形態において、投与は、例えば、脳または脊髄の損傷または疾患を有するか、または有していた患者において、二次性中枢神経系浮腫の形成を予防および／またはこのサイズを縮小することができる。
【００５７】
少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨを含む組成物および少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターを含む組成物は、治療有効量で患者に投与される。概して、治療有効量は、対象の年齢、全体状態および性別ならびに対象の医学的状態の重症度により変動し得る。投薬量は医師により決定され、必要に応じて観察された処置の効果に合わせて調整される。
【００５８】
少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨの治療有効用量は、例えば使用するインヒビターのタイプ、適応症、製剤または投与様式のような数多くの因子に依存し、各個別の適応症に関する前臨床試験および臨床試験で決定される。例えば、用量は、およそ０．０１ＩＵ／ｋｇから５０００ＩＵ／ｋｇ体重またはおよそ０．０１−１０００ＩＵ／ｋｇまたはおよそ５から５００ＩＵ／ｋｇまたはおよそ１０から２００ＩＵ／ｋｇまたはおよそ２０から１００ＩＵ／ｋｇの範囲であってよい。さまざまな実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨの用量は、およそ０．０１、０．１、０．５、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４５０、５００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００または５０００ＩＵ／ｋｇ体重（またはこの間の任意の値）である。Ｃ１−ＩＮＨを適切な速度で連続的に放出する保管場所もまた使用される。Ｃ１−ＩＮＨ投与のための例示的治療的範囲は、米国特許第５，９３９，３８９号に開示されており、この開示はその全体が組み込まれる。
【００５９】
少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの治療有効用量は、例えば適応症、製剤または投与の様式のような数多くの因子に依存すると思われ、各個別の適応症に関する前臨床試験および臨床試験で決定される。例えば、一実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターの用量は、約０．０１、０．１、１、５０、１００、２００、５００もしくは１０００ｍｇ／ｋｇ体重もしくはこの間の任意の用量または約０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜１０００、約１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、約１〜５００ｍｇ／ｋｇ、約１０〜２００ｍｇ／ｋｇ、約１０〜１００ｍｇ／ｋｇ、約５０〜５００ｍｇ／ｋｇ、約５０〜２００ｍｇ／ｋｇもしくは約１００〜２００ｍｇ／ｋｇの範囲もしくはこの間の任意の用量である。特定の実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは、ｒＨＡ−インフェスチン−４である。いくつかの実施形態において、ｒＨＡ−インフェスチン−４が使用される場合、用量は、約０．０１から１０００ｍｇ／ｋｇ体重の間、または約１から１０００ｍｇ／ｋｇの間または約１から５００ｍｇ／ｋｇの間または約５０から５００ｍｇ／ｋｇの間の範囲である。
【００６０】
いくつかの実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは抗ＦＸＩＩ抗体である。抗ＦＸＩＩ抗体の治療有効用量を伴う実施形態において、治療有効用量は、処置を必要とする患者または対象において正の治療効果をもたらす用量である。治療有効用量は、約０．００１から１００ｍｇ／ｋｇ体重または約０．０１から１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１から５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１から３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１から１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１から５ｍｇ／ｋｇ、約０．１から２ｍｇ／ｋｇもしくは約０．１から１ｍｇ／ｋｇの範囲またはこれらの間の任意の用量範囲であってよい。例えば、治療有効用量は、ＦＸＩＩａ活性を、対象において少なくとも約５０％または少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％もしくは１００％（またはこれらの間の任意の百分率）阻害する用量であってよい。
【００６１】
投与される医薬組成物は、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび／または少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターを単独の（１つまたは複数の）活性化合物として含んでもよく、または１つもしくはそれ以上の追加の化合物、組成物もしくは生物学的材料と組み合わせて送達されてもよい。追加の化合物の例としては、ビタミン、抗生物質および脳における血餅形成を除去または阻害することが意図される化合物（例えば、ヘパリン、アセチルサリチル酸、クロピドグレルまたはジピリダモール）が挙げられる。
【００６２】
特定の実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターを使用する接触活性化系の障害の処置は、単剤療法として投与した場合の、Ｃ１−ＩＮＨまたは第ＸＩＩ因子インヒビターのいずれかの治療効果を高める。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターを使用する接触活性化系の障害の処置は、相加効果、例えば、２つの単剤療法の合計から観察される効果と等価の効果を生み出すことができる。いくつかの実施形態において、この組合せは相乗的に作用して、２つの単剤療法の合計から見られる効果を強化する。いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨおよびＦＸＩＩインヒビターの使用は、いずれかまたは両方の成分の用量の濃度低下または投与スケジュールの頻度の減少を可能にし、一方、単剤療法として投与した場合のいずれかの成分のより高い用量濃度またはより頻繁な投与により観察される治療効果と同等またはそれを超える治療効果を達成する。
【００６３】
例えば、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターが、例えば１またはそれ以上の血管において血栓性事象の発生率を低下させるために使用される場合、閉塞される血管の断面直径の百分率または部分的もしくは完全に閉塞される血管の数が処置の前後で測定される。閉塞の測定は、当分野において公知の任意の標準的な方法、例えば超音波ドップラー、レーザードップラーフローメトリー、ＭＲＩ（トレーサーのウォッシュイン、ウォッシュアウト動態を測定する）、ストレインゲージ用量脈波法（ｓｔｒａｉｎ  ｇａｇｅ  ｐｌｅｔｈｙｓｍｏｇｒａｐｈｙ）、インピーダンス脈波法、光電血量測定計、熱対流プローブもしくは血流測定に適切な他の技術を使用して、または標準的な臨床神経学的または心理学的測定を使用して行われる。組合せ療法を使用する（例えば、閉塞される血管の百分率または部分的もしくは完全に閉塞されるサンプリングされた血管の百分率として測定して）減少は、Ｃ１−ＩＮＨまたはＦＸＩＩインヒビターだけを使用した、比較可能な患者または同じ患者における閉塞の減少百分率と比較される。いくつかの実施形態において、組合せ療法を使用した閉塞の減少は相加的（例えば、個別の処置の合計から観察される減少とほぼ同等の減少である）である。
【００６４】
いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビター療法を使用する場合に観察される閉塞の減少は相乗的である（例えば、単剤療法の効果の合計から観察される減少を超える）。特定の実施形態において、この組合せは、Ｃ１−ＩＮＨ療法単独により観察される減少を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％もしくは３００％（またはこの間の任意のパーセント）増加できるか、または完全な減少をさらにもたらす、すなわち閉塞が観察されない。組合せ療法におけるＣ１−ＩＮＨの用量の濃度は、観察される減少パーセントに影響を与える。いくつかの実施形態において、組合せ療法は、ＦＸＩＩインヒビター療法単独により観察される減少を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１０５％、１１０％、１１５％、１２０％、１２５％、１５０％、１７５％、２００％、２２５％、２５０％、２７５％もしくは３００％（またはこの間の任意のパーセント）増加させるか、またはさらに完全な減少をもたらす、すなわち閉塞が観察されない。組合せ療法におけるＦＸＩＩインヒビターの用量の濃度は、観察される減少パーセントに影響を与える。
【００６５】
特定の実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび／または少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは、接触活性化系の障害の少なくとも１つの症状が、個別に投与された場合のＦＸＩＩインヒビターおよびＣ１  ＩＮＨそれぞれの相加効果とほぼ等価の減少を生み出す濃度で投与される。
【００６６】
または、特定の実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび／または少なくとも１種のＣ１  ＩＮＨは、接触活性化系の障害の少なくとも１つの症状が、個別に投与された場合のＦＸＩＩインヒビターおよびＣ１  ＩＮＨそれぞれの相加効果を超える減少を生み出す濃度で投与される。
【００６７】
特定の実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの投与は、血栓の形成後、Ｃ１−ＩＮＨそれだけで投与された場合に観察される血管閉塞パーセントの２倍または３倍の減少を生み出す。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターの投与は、血栓の形成後、ＦＸＩＩインヒビターそれだけで投与された場合に観察される血管閉塞パーセントの２倍または３倍の減少を生み出す。
【００６８】
いくつかの実施形態において、接触活性化経路の障害に対する少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターによる処置の効果は、（例えば、梗塞、脳卒中またはＩＲＩの後の）組織損傷および／または二次性浮腫の程度を測定することによってモニターされる。組織損傷（例えば、脳卒中後の脳組織の損傷または梗塞後の心臓組織の損傷）の程度を測定するための方法としては、例えば、ＣＴスキャン、ＭＲＩ、超音波および／または動脈造影が挙げられる。いくつかの実施形態において、組織損傷は脳組織であり、組織損傷の程度は脳機能の臨床神経学的評価を使用して測定される。いくつかの実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターによる処置後の組織損傷および／または二次性浮腫の程度は、処置の不在下における組織損傷および／または浮腫と比較して、個別の単剤療法の合計から観察される量とほぼ等価の量が減少される。いくつかの実施形態において、組織損傷および／または二次性浮腫の程度は、個別の単剤療法の合計から観察される量を超える量が減少される。
【００６９】
特定の実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨおよび少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターは、単剤療法に使用される最適濃度と比較して減少された投薬量で投与される。これらの実施形態において、組合せ療法の相加効果または相乗効果は、治療効果を維持しながら低下された濃度の使用を可能にし、それによって、コストおよび／または治療剤に対する有害反応のリスク（例えば、免疫応答）を低下させる。
【００７０】
開示された方法の特定の実施形態において、患者は、彼らの臨床症状に対するケアの確立された基準に従って処置されなければならない。患者が脳卒中患者であるさまざまな実施形態において、患者は、可能であればＭＲＩまたは他の方法により検査され、脳損傷が虚血性であるか、または出血性であるかが決定されなければならない。
【００７１】
ＩＩ．第ＸＩＩ因子インヒビター
上記のように、「第ＸＩＩ因子」および「ＦＸＩＩ」という用語は、それぞれ、第ＸＩＩ因子（例えば、チモーゲンまたはペプチドの前駆形態）および活性化第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩａ）のいずれかまたは両方を指す。したがって、「ＦＸＩＩインヒビター」は、ＦＸＩＩａ切断産物のＦＸＩＩａアルファおよびＦＸＩＩａベータ（ＦＸＩＩｆとも呼ばれる）を含むＦＸＩＩおよびＦＸＩＩａ（αＦＸＩＩａとも呼ばれる）のいずれかまたは両方のインヒビターを含み得る。さらに、抗ＦＸＩＩ抗体としては、ＦＸＩＩおよびＦＸＩＩａのいずれかまたは両方と結合し、阻害する抗体が挙げられる。「ＦＸＩＩインヒビター」という用語は、半減期延長ポリペプチドに連結されたＦＸＩＩのインヒビターもまた意味し、これは、いくつかの実施形態においてリンカーを含む。使用可能なＦＸＩＩインヒビターの例としては、ｒＨＡ−インフェスチン−４、ＳＰＩＮＫ−１、抗ＦＸＩＩ抗体が挙げられ、ＦＸＩＩの活性を阻害する能力を保持するこれらのタンパク質の改変型／断片も含む。ある実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターはＳＰＩＮＫ−１または改変ＳＰＩＮＫ−１であり、Ｃ１−ＩＮＨはＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）である。ある実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターはインフェスチン−４または改変インフェスチン−４であり、Ｃ１−ＩＮＨはＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）である。ある実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは抗ＦＸＩＩ抗体であり、Ｃ１−ＩＮＨはＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）である。
【００７２】
いくつかの実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターはＦＸＩＩの直接的インヒビターである。「直接的」インヒビターという用語は、ＦＸＩＩ（またはＦＸＩＩａ）との接触（例えば結合）を介して作用する、すなわち、ＦＸＩＩインヒビターがＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａと結合し、その活性および／または活性化を阻害するインヒビターを意味する。対照的に、間接的インヒビターは、ＦＸＩＩ（またはＦＸＩＩａ）タンパク質と接触することなく作用する。例えば、アンチセンスＲＮＡがＦＸＩＩ遺伝子の発現を減少させるために使用され、または低分子が、第ＸＩ因子のようなＦＸＩＩａ反応パートナーの下流との相互作用を介してＦＸＩＩａの効果を阻害できる；これらはＦＸＩＩタンパク質と直接相互作用しない。したがって、間接的インヒビターは、直接的インヒビターとは対照的に、ＦＸＩＩタンパク質の上流または下流に作用する。直接的インヒビターのいくつかの例は下記に提示される。いくつかの実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは非内因性インヒビターであり、ヒトまたは動物の体内に自然に発生するインヒビターではない。
【００７３】
Ｃ１−ＩＮＨは、弱いＦＸＩＩインヒビターでもある。しかし、組合せ療法に使用されるＦＸＩＩインヒビターは、Ｃ１−ＩＮＨ以外のインヒビターである。
【００７４】
一実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは特異的ＦＸＩＩインヒビター、好ましくは特異的ＦＸＩＩａインヒビターである。
【００７５】
特異的ＦＸＩＩインヒビターは、モル比１：１で使用される場合、血漿セリンプロテアーゼまたはＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の他の内因性タンパク質を２５％以下阻害するインヒビターを指す。言い換えれば、特異的ＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａインヒビターは、前記インヒビターが、個別の血漿セリンプロテアーゼと前記インヒビターとがモル比１：１で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼを２５％以下阻害する。好ましくは、ＦＸＩＩインヒビターは、モル比１：１で使用される場合、ＦＸＩＩおよび／またはＦＸＩＩａ以外の血漿セリンプロテアーゼを２０％以下、好ましくは１５％以下、好ましくは１０％以下、好ましくは５％以下、好ましくは１％以下阻害する。例えば、特異的ＦＸＩＩ  ｍＡｂは、ＦＸＩａ対前記ｍＡｂのモル比が１：１である場合、血漿セリンプロテアーゼＦＸＩａをわずか５％しか阻害しないが、同じＦＸＩＩ  ｍＡｂは、ＦＸＩＩａを少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％阻害する。
【００７６】
本発明の一実施形態において、モル比１：１で個別の血漿セリンプロテアーゼ対前記インヒビターが使用される場合、１つの他の血漿セリンプロテアーゼは５０％を超えて阻害される。
【００７７】
本発明の別の実施形態において、モル比１：１で個別の血漿セリンプロテアーゼ対前記インヒビターが使用される場合、２種の他の血漿セリンプロテアーゼは５０％を超えて阻害される。
【００７８】
さらに別の実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは、ヒト化モノクローナル抗体、好ましくは完全ヒトモノクローナル抗体を含むヒトＦＸＩＩインヒビターである。
【００７９】
「相同性」は、本明細書において使用する場合、同一であるか、または保存的置換を構成するアミノ酸の百分率数を指す。相同性は、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒａｕｘら、１９８４、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２、３８７〜３９５頁）のような配列比較プログラムを使用して決定され、このプログラムは参照によって本明細書に組み入れる。このようにして、本明細書に引用された配列と同様または実質的に異なる長さの配列は、ギャップのアライメントへの挿入によって比較され、このようなギャップは、例えばＧＡＰにより使用される比較アルゴリズムによって決定される。
【００８０】
Ａ．インフェスチン−４
一実施形態において、本出願は、インフェスチンドメイン４（「インフェスチン−４」と称される）を含むＦＸＩＩインヒビターを提供する。インフェスチンは、シャーガス病を引き起こすことが公知である寄生生物トリパノソーマ・クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）に対する主要なベクターである、吸血昆虫、トリアトーマ・インフェスタンス（Ｔｒｉａｔｏｍａ  ｉｎｆｅｓｔａｎｓ）の中腸に由来する１種のセリンプロテアーゼインヒビターである（Ｃａｍｐｏｓ  ＩＴＮら、３２  Ｉｎｓｅｃｔ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．９９１〜９９７頁  ２００２；Ｃａｍｐｏｓ  ＩＴＮら、５７７  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．５１２〜５１６頁、２００４；国際公開第２００８／０９８７２０号）。この昆虫は、これらのインヒビターを使用して摂取された血液の凝固を防止する。インフェスチン遺伝子は、凝固経路中の異なる因子を阻害するタンパク質をもたらす４ドメインをコードする。特に、ドメイン４は、ＦＸＩＩａの強力なインヒビターであるタンパク質（インフェスチン−４）をコードする。インフェスチン−４は、出血性合併症をもたらすことなくマウスに投与されている（国際公開第２００８／０９８７２０号；Ｈａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１０；１２１：１５１０〜１７頁）。
【００８１】
さまざまな実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは、インフェスチン−４を含む。「インフェスチン−４」という用語は、本明細書において使用する場合、ＦＸＩＩを阻害する能力を保持する、野生型ペプチドの変異体または断片を包含する。いくつかの実施形態において、インフェスチン−４は、ＦＸＩＩａを阻害するその能力に関して選択される。特定の実施形態において、インフェスチン−４はインフェスチン−４の変異体を含み、該変異体はインフェスチンドメイン４および場合によりインフェスチンドメイン１、２および／または３を含む。一実施形態において、インフェスチン−４は（Ｈｉｓ）６−タグ付インフェスチン−４構築物である。別の実施形態において、インフェスチン−４は、インフェスチン−４に結合された、半減期強化ポリペプチド（例えば、アルブミン、ＩｇＧのＦｃドメインまたはＰＥＧ）のような融合パートナーを含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態において、リンカーが融合パートナーとインフェスチン−４とを連結する。さまざまな実施形態において、インフェスチン−４はＨａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１０；１１７：１１５３〜６０頁に記載のｒＨＡ−インフェスチン−４タンパク質である。一実施形態において、組成物は、柔軟なリンカーによりＨａｇｅｄｏｒｎらに記載のｒＨＡ−インフェスチン−４に結合されたアルブミンを含む。特定の実施形態において、ＦＸＩＩの他のインフェスチン−４インヒビターが使用され、これらの例は、国際公開第２００８／０９８７２０号およびＨａｇｅｄｏｒｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２０１０；１１７：１１５３〜６０頁に記載されており、これらは両方とも参照によってその全体を組み入れる。
【００８２】
野生型インフェスチン−４配列の例は配列番号１：ＥＶＲＮＰＣＡＣＦＲＮＹＶＰＶＣＧＳＤＧＫＴＹＧＮＰＣＭＬＮＣＡＡＱＴＫＶＰＧＬＫＬＶＨＥＧＲＣで提示される。
【００８３】
本明細書において使用する場合、インフェスチン−４の「変異体」という用語は、１またはそれ以上のアミノ酸の突然変異を有するポリペプチドを指し、「突然変異」は野生型インフェスチン−４配列（配列番号１）に対する置換、欠失または付加として定義される。「インフェスチン−４」という用語は、これらのインフェスチン−４変異体を包含する。インフェスチン−４の「変異体」は、野生型または突然変異インフェスチン−４配列の断片もまた含む。さまざまな実施形態において、野生型インフェスチン−４配列に対する１つまたはそれ以上の突然変異は、ＦＸＩＩを阻害するポリペプチドの機能性能力を実質的に改変しない。いくつかの実施形態において、１つまたはそれ以上の突然変異は、ＦＸＩＩを阻害するポリペプチドの能力を完全にまたは実質的に除去しない（例えば、変異体は、野生型インフェスチン−４の阻害能力の少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上を保持する）。このような変異体のさらなる例を下記に提供する。
【００８４】
一実施形態において、インフェスチン−４変異体は、野生型インフェスチン−４配列のアミノ末端由来のアミノ酸配列ＶＲＮＰＣＡＣＦＲＮＹＶ（配列番号２０、これらは配列番号１の残基２〜１３である）を含む。特定の実施形態において、変異体は、配列番号１の残基２〜１３を含んでよく、野生型インフェスチン−４配列と比較して少なくとも１つ、場合により５つまでのアミノ酸突然変異を、配列番号１の残基２〜１３の外側にさらに含む。いくつかの実施形態において、変異体は、野生型インフェスチン−４配列由来の６つの保存されたシステイン残基および／または野生型インフェスチン−４配列との少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の相同性を保持する。いくつかの実施形態において、インフェスチン−４の変異体は、野生型インフェスチン−４配列の保存されたＮ末端領域アミノ酸２〜１３を含み、少なくとも１つ、場合により５つまでのアミノ酸突然変異をこれらの保存されたＮ末端アミノ酸の外側に含み、野生型インフェスチン−４配列との違いをもたらす。本明細書において使用する場合、インフェスチン変異体の「Ｎ末端アミノ酸の外側」という用語は、配列番号１由来のアミノ酸２〜１３である配列番号２０：ＶＲＮＰＣＡＣＦＲＮＹＶの配列を含むアミノ酸の連続する伸長以外の、変異体のポリペプチド鎖に沿った任意のアミノ酸を指す。
【００８５】
別の実施形態において、インフェスチン−４変異体は、６つの保存されたシステイン残基および／または野生型インフェスチン−４配列との少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の相同性を含む。一実施形態において、６つの保存されたシステイン残基は、野生型インフェスチン−４配列、配列番号１の６、８、１６、２７、３１および４８位のアミノ酸である。一実施形態において、変異体は、最後の保存されたシステインを４８位に含む。他の実施形態において、システイン残基の正確な位置および相互の相対的な位置は、インフェスチン−４変異体における挿入または欠失のため野生型インフェスチン−４配列の６、８、１６、２７、３１および４８位から変化することがある。それにもかかわらず、これらの実施形態において、インフェスチン−４変異体は６つすべてのシステインを含む、および／または野生型インフェスチン−４配列との７０％、７５％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％またはこれらの間の任意の百分率の相同性を共有することができる。いくつかの実施形態において、インフェスチン−４変異体は、配列番号１由来のアミノ酸２〜１３および６つすべてのシステイン残基を保持し、野生型インフェスチン−４配列との７０％、７５％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％またはこれらの間の任意の百分率の相同性を共有する。
【００８６】
いくつかの実施形態において、インフェスチン−４変異体は、配列番号２１：ＤＳＬＧＲＥＶＲＮＰＣＡを含む。いくつかの実施形態において、この配列は、野生型インフェスチン−４配列の断片または完全長のＮ末端またはその近くに付加され、ヒトタンパク質ＳＰＩＮＫ−１に由来する。
【００８７】
いくつかの実施形態において、インフェスチン−４変異体は、野生型インフェスチン−４または変異体インフェスチン−４と、ヒトアルブミン（「ＨＡ」と称される）との間の融合構築物を含む。いくつかの実施形態において、ＨＡは組換えタンパク質である（「ｒＨＡ」と称される）。特定の実施形態において、インフェスチン−４およびＨＡタンパク質は直接接合されるか、またはリンカーポリペプチドを介して接合される。
【００８８】
一実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは、野生型インフェスチン−４ポリペプチド配列の変異体を含み、該変異体は、配列番号１のＮ末端アミノ酸２〜１３；Ｎ末端アミノ酸の外側の少なくとも１つ、場合により５つまでのアミノ酸突然変異；６つの保存されたシステイン残基；および／または野生型インフェスチン−４配列との少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の相同性を含む。
【００８９】
さまざまな実施形態において、ＦＸＩＩを阻害する能力を保持するインフェスチン−４の変異体が提供される。機能性阻害活性は、例えば、ＦＸＩＩ酵素活性の阻害を試験する直接アッセイ、凝固時間の延長（例えば、活性化部分トロンボプラスチン時間、ａＰＴＴ）、凝固の内因性経路を扱う臨床的凝固試験または凝固を評価するｉｎ  ｖｉｖｏ方法を含む、ｉｎ  ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ  ｖｉｖｏの特徴付けにより評価される。
【００９０】
インフェスチン−４変異体のさらなる例は、ＳＰＩＮＫ−１突然変異体であり、これらは以下に記載される。
【００９１】
Ｂ．ＳＰＩＮＫ−１突然変異体
さまざまな実施形態において、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターは、インフェスチン−４との高い類似性を有するヒトタンパク質を含み得る。インフェスチン−４との高い類似性を有するヒトタンパク質の一例は、ＳＰＩＮＫ−１、膵臓において発現されたカザール（Ｋａｚａｌ）タイプセリンプロテアーゼインヒビター（膵臓分泌性トリプシンインヒビター、ＰＳＴＩとしても公知）である。カザールタイプセリンプロテアーゼインヒビターファミリーは、公知のセリンプロテアーゼインヒビターの数多くのファミリーの１つである。さまざまな種に由来する多くの類似のタンパク質が記載されている（Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ  ＭおよびＫａｔｏ  Ｉ、４９  Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９３〜６２６頁、１９８０）。
【００９２】
野生型ＳＰＩＮＫ−１配列の一例は配列番号２  ＤＳＬＧＲＥＡＫＣＹＮＥＬＮＧＣＴＫＩＹＤＰＶＣＧＴＤＧＮＴＹＰＮＥＣＶＬＣＦＥＮＲＫＲＱＴＳＩＬＩＱＫＳＧＰＣで提示される。
【００９３】
さまざまな実施形態において、野生型ＳＰＩＮＫ−１配列（例えば配列番号２）はＦＸＩＩインヒビターとして使用される。「ＳＰＩＮＫ−１」という用語は、ＦＸＩＩを阻害する能力を実質的に保持するＳＰＩＮＫ−１の機能性変異体および断片もまた包含し、いくつかの実施形態において、これらのＳＰＩＮＫ−１変異体はＦＸＩＩインヒビターとして使用される。例えば、野生型配列のさまざまな変異体は、インフェスチン−４に対するＳＰＩＮＫ−１配列の相同性を増加させるために作製することができる。一実施形態において、ＳＰＩＮＫ−１は、配列番号１のＮ末端アミノ酸２〜１３を含むように突然変異される。
【００９４】
一実施形態において、変異体ＳＰＩＮＫ−１は、野生型インフェスチン−４配列のＮ末端部分（例えば、配列番号１のアミノ酸２〜１３）を含み、場合により、野生型インフェスチン−４配列に対する変異体の相同性を増加する少なくとも１、２、３、４または５つの追加のアミノ酸突然変異をＮ末端アミノ酸の外側に含む。別の実施形態において、変異体ＳＰＩＮＫ−１は、６つの保存されたシステイン残基を含み、野生型ＳＰＩＮＫ−１配列との少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性を有し、場合により、野生型インフェスチン−４配列に対する変異体の相同性を増加させるように突然変異されている。いくつかの実施形態において、ＳＰＩＮＫ−１変異体はまた、野生型インフェスチン−４配列のＮ末端部分（例えば、配列番号１のアミノ酸２〜１３）を含む。突然変異は、置換、欠失および／または付加を含む。「Ｎ末端アミノ酸の外側」にある突然変異は、配列ＶＲＮＰＣＡＣＦＲＮＹＶ（配列番号２０）、すなわち配列番号１のアミノ酸２〜１３を含むアミノ酸の連続する伸長以外の、変異体のポリペプチド鎖に沿った任意のアミノ酸における１つまたはそれ以上の突然変異を指す。「変異体」という用語は、ＳＰＩＮＫ−１の断片または突然変異ＳＰＩＮＫ−１配列を含む。
【００９５】
いくつかの実施形態において、ＳＰＩＮＫ−１の６つの保存されたシステイン残基は、野生型ＳＰＩＮＫ−１配列（例えば配列番号２）の９、１６、２４、３５、３８および５６位のアミノ酸である。一実施形態において、変異体は、野生型ＳＰＩＮＫ−１配列の最後のシステイン（すなわち、配列番号２の５６位のシステイン）を含む。いくつかの実施形態において、６つのシステインは突然変異されないが、システインの正確な位置および相互の相対的な位置は、ＳＰＩＮＫ−１変異体におけるどこか他の所の挿入および／または欠失のため、野生型ＳＰＩＮＫ−１配列の９、１６、２４、３５、３８および５６位から変化することがある。それにもかかわらず、これらの実施形態において、ＳＰＩＮＫ−１変異体は６つすべてのシステインを含む。
【００９６】
いくつかの実施形態において、ＳＰＩＮＫ−１の６つのシステインは突然変異されないが、ＳＰＩＮＫ−１は、野生型インフェスチン−４配列のＮ末端部分（例えば、配列番号１のアミノ酸２〜１３）を含み、および／または野生型ＳＰＩＮＫ−１配列との少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性を有し、および／またはＮ末端アミノ酸の外側のＳＰＩＮＫ−１配列中の１、２、３、４または５つの突然変異を含むように突然変異される。例えば、ＳＰＩＮＫ−１変異体は、配列番号１のＮ末端アミノ酸２〜１３；野生型インフェスチン−４配列に対する変異体の相同性を増加させる、Ｎ末端アミノ酸外側の少なくとも１つおよび５つまでのアミノ酸突然変異；野生型ＳＰＩＮＫ−１配列由来の６つの保存されたシステイン残基；および／または野生型ＳＰＩＮＫ−１配列との少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の相同性を含む。
【００９７】
いくつかの実施形態において、ＳＰＩＮＫ−１の変異体は、ＦＸＩＩを阻害するそれらの能力を実質的に保持する（例えば、変異体は、野生型ＳＰＩＮＫ−１の阻害活性の少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％またはそれ以上を保持する）。本明細書に開示の方法に使用されるＳＰＩＮＫ−１変異体の例としては、
Ｋ１：
ＤＳＬＧＲＥＶＲＮＰＣＡＣＦＲＮＹＶＰＶＣＧＴＤＧＮＴＹＰＮＥＣＶＬＣＦＥＮＲＫＲＱＴＳＩＬＩＱＫＳＧＰＣ；
Ｋ２：
ＤＳＬＧＲＥＶＲＮＰＣＡＣＦＲＮＹＶＰＶＣＧＴＤＧＮＴＹＧＮＥＣＭＬＣＡＥＮＲＫＲＱＴＳＩＬＩＱＫＥＧＰＣ；
および
Ｋ３：
ＤＳＬＧＲＥＶＲＮＰＣＡＣＦＲＮＹＶＰＶＣＧＴＤＧＮＴＹＧＮＥＣＭＬＮＣＡＥＮＲＫＲＱＴＳＩＬＩＱＫＥＧＰＣ
（それぞれ、配列番号３、４および５）が挙げられる。いくつかの実施形態において、さらなるアミノ酸置換が、インフェスチン−４との相同性を増加させるためにＫ１に対してＮ末端の外側で行われる。ＳＰＩＮＫ−１変異体Ｋ３の場合、５つのアミノ酸置換が、インフェスチン−４との相同性を増加させる。特定の実施形態において、ＳＰＩＮＫ−１変異体は、野生型ＳＰＩＮＫ−１配列との７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％（またはこれらの間の任意の百分率）の相同性を共有する。
【００９８】
Ｃ．ＦＸＩＩ抗体
さまざまな実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは、ＦＸＩＩと結合し、ＦＸＩＩの活性化および／または活性を阻害または低下させる抗ＦＸＩＩ抗体である。「抗第ＸＩＩ因子抗体」という用語は、完全長抗体およびこれらの機能性断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、ＦｖおよびｓｃＦｖのような抗原結合断片）を包含する。この用語はまた、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体ならびにＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＥのようなアイソタイプのいずれかの抗体ならびにＩｇＧ１のようなこれらの任意のサブクラスを包含する。抗体は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ハムスターまたはサルのような哺乳動物種に由来する。いくつかの実施形態において、抗体はヒト化またはＣＤＲグラフト化される。いくつかの実施形態において、抗体は、免疫原性、半減期を改変するように突然変異または改変されるか、および／または治療用抗体に関連する他の有利な特性をもたらすように突然変異または改変される。一実施形態において、抗体は、中和エピトープのようなＦＸＩＩの重鎖または軽鎖のエピトープに結合する抗ＦＸＩＩ抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ポリペプチド、核酸または小分子にコンジュゲートされる。「抗ＦＸＩＩ抗体」はまた、ＦＸＩＩａアルファおよびＦＸＩＩａベータの切断断片を含む、ＦＸＩＩのチモーゲンおよび活性化タンパク質（ＦＸＩＩａ）のいずれかまたは両方と結合する、および／またはこれを阻害する抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ＦＸＩＩａまたはＦＸＩＩａのアルファ鎖もしくはベータ鎖断片に特異的に結合する。
【００９９】
いくつかの実施形態において、抗ＦＸＩＩ抗体は、ＦＸＩＩａと結合してその活性化および／または活性を阻害する。抗ＦＸＩＩ抗体は、例えば、国際公開第２００６／０６６８７８号およびＲａｖｏｎら、Ｂｌｏｏｄ  ８６：４１３４〜４３頁（１９９５）に記載されており、これらの開示は参照によってそれらの全体を組み入れる。ヒト第ＸＩＩ因子に対する他のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）としては、Ｐｉｘｌｅｙら（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  １９８７；２６２、１０１４０〜４５頁）により記載されたＢ７Ｃ９  ｍＡｂ；Ｓｍａｌｌら（Ｂｌｏｏｄ  １９８５；６５：２０２〜１０頁）により記載されたｍＡｂ；Ｎｕｉｊｅｎｓら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８９；２６４：１２９４１〜４９頁）により記載れたモノクローナル抗体Ｆ１およびＦ３；国際公開第８９／１１８６５号に記載のＦＸＩＩの軽鎖に対するＢ６Ｆ５、Ｃ６Ｂ７およびＤ２Ｅ１０モノクローナル抗体；国際公開第９０／０８８３５号に記載のＦＸＩＩよりＦＸＩＩａ−βに選択的に結合するモノクローナル抗体；ならびに国際公開第９１／１７２５８号に記載の抗ＦＸＩＩ抗体ＯＴ−２が挙げられ、これらの開示は、参照によってそれらの全体を本明細書に組み入れる。
【０１００】
追加の抗第ＸＩＩ因子モノクローナル抗体は、国際公開第２０１３／０１４０９２Ａ１号に記載され、これは参照によってその全体を本明細書に組み入れる。いくつかの実施形態において、該抗体は、ヒト第ＸＩＩａ因子−ベータに対して不活性化ヒトＦＸＩＩより２倍を超えて高い結合親和性を有し、ヒト第ＸＩＩａ因子のアミド分解活性を阻害可能である。
【０１０１】
特定の実施形態において、抗ＦＸＩＩ抗体は、表１に提示される重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）の配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＦＸＩＩ抗体は、表１に示すＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含み、および／またはＶＣＤＲ１、ＶＣＤＲ２およびＶＣＤＲ３を含む。国際公開第２０１３／０１４０９２Ａ１号に記載の抗体３Ｆ７は、このような抗体の例である。
【０１０２】
【表１】
2017501968.tif 000002
【０１０３】
いくつかの実施形態において、抗体は、以下の特徴：（ａ）ヒトＦＸＩＩに結合する；（ｂ）配列番号６の配列と８５％を超えて同一、９０％、９５％、９８％または９９％を超えて同一であるような重鎖可変（ＶＨ）領域を含む；（ｃ）配列番号７の配列と８５％を超えて同一、９０％、９５％、９８％または９９％を超えて同一であるような軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む；（ｄ）配列番号８の配列と少なくとも８０％同一、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を超えて同一であるような重鎖ＣＤＲ１および／または配列番号９と少なくとも６０％同一、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を超えて同一であるような重鎖ＣＤＲ２および／または配列番号１１の配列と少なくとも８０％同一、８５％、９０％、９５％、９８％，または９９％同一であるような重鎖ＣＤＲ３を含む；（ｅ）配列番号１３と少なくとも５０％同一、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％同一であるような軽鎖ＣＤＲ１および／または配列番号１４と少なくとも５０％同一、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を超えて同一であるような軽鎖ＣＤＲ２と、および／または配列Ａ−Ｘ１−Ｗ−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｒ−Ｘ６−Ｘ７（配列番号１６）（式中、Ｘ１はＡまたはＳであり、Ｘ５はＬまたはＶであり、他のＸｎは任意のアミノ酸である）と少なくとも５０％同一、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％を超えて同一であるような軽鎖ＣＤＲ３を含む；（ｆ）ＫＤが１０−８Ｍより優れているヒト第ＸＩＩａ因子−ベータを結合する；（ｇ）ヒト第ＸＩＩａ因子−ベータとの結合に関してインフェスチン−４と競合する；または（ｈ）ヒトＩｇＧもしくはこれらの機能性変異体、好ましくはヒトＩｇＧ４もしくはこれらの機能性変異体である、の１つまたはそれ以上を有する。
【０１０４】
特定の実施形態において、抗ＦＸＩＩ抗体は、ヒトＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａと結合するＩｇＧ抗体であり、（ａ）配列番号８で示される重鎖ＣＤＲ１、配列番号１０で示される重鎖ＣＤＲ２および配列番号１２で示される重鎖ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または（ｂ）配列番号１３で示される軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１４で示される軽鎖ＣＤＲ２および配列番号１６で示される軽鎖ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。重鎖ＣＤＲ２は、配列ＧＩＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＴＶＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１０）（式中、Ｘ１はＲ、ＮまたはＤであり、Ｘ２はＰ、Ｖ、ＩまたはＭであり、Ｘ３はＳ、ＰまたはＡであり、Ｘ４はＧ、Ｌ、ＶまたはＴであり、Ｘ５は任意のアミノ酸であってよく、好ましくは、Ｘ５はＧ、Ｙ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、ＮまたはＭであり、およびＸ６はＴ、ＧまたはＳである）を含むことができる。重鎖ＣＤＲ３は、配列ＡＬＰＲＳＧＹＬＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＹＹＹＹＡＬＤＶ（配列番号１２）（式中、Ｘ１はＩ、ＭまたはＶであり、Ｘ２はＳまたはＫであり、Ｘ３はＰ、Ｋ、ＴまたはＨであり、およびＸ４は、Ｈ、Ｎ、ＧまたはＱである）を含むことができる。軽鎖ＣＤＲ３は、配列ＡＸ１ＷＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＲＸ６Ｘ７（配列番号１６）（式中、Ｘ１はＡまたはＳであり、Ｘ２はＤ、Ｙ、Ｅ、Ｔ、Ｗ、ＥまたはＳであり、Ｘ３はＡ、Ｎ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、Ｐ、ＱまたはＥであり、Ｘ４はＳ、Ｄ、Ｐ、Ｅ、ＱまたはＲであり、Ｘ５はＬまたはＶであり、Ｘ６はＧ、ＬまたはＫであり、およびＸ７はＶ、Ａ、Ｄ、Ｔ、ＭまたはＧである）を含むことができる。
【０１０５】
他の実施形態において、抗ＦＸＩＩ抗体は、ヒトＦＸＩＩ／ＦＸＩＩａと結合するＩｇＧ抗体の断片であり、（ａ）配列番号８で示される重鎖ＣＤＲ１、配列番号９で示される重鎖ＣＤＲ２および配列番号１１で示される重鎖ＣＤＲ３を含むＶＨ領域、および／または（ｂ）配列番号１３で示される軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１４で示される軽鎖ＣＤＲ２および配列番号１５で示される軽鎖ＣＤＲ３を含むＶＬ領域を含む。
【０１０６】
さまざまな実施形態において、抗ＦＸＩＩ抗体は、親和性が成熟した、キメラ、ＣＤＲグラフト化もしくはヒト化された抗体またはこれらの機能性抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗ＦＸＩＩ抗体は、（３Ｆ７と比較して）親和性が成熟した抗体ＶＲ１１５、ＶＲ１１２、ＶＲ２４、ＶＲ１１０およびＶＲ１１９から選択される（これらの抗体のＨＣＤＲ１〜３およびＬＣＤＲ１〜３に関する配列番号を、下記の表２に示す）。
【０１０７】
【表２】
2017501968.tif 000003
【０１０８】
上記のように、配列番号１０は縮重配列である。ＶＲ１１９は、配列番号１０（式中、Ｘ１はＮであり、Ｘ２はＶであり、Ｘ３はＰであり、Ｘ４はＬであり、Ｘ５はＹであり、およびＸ６はＧである）を含む。ＶＲ１１２は配列番号１０（式中、Ｘ１はＮであり、Ｘ２はＶであり、Ｘ３はＰであり、Ｘ４はＶであり、Ｘ５はＱであり、およびＸ６はＧである）を含む。ＶＲ１１５は配列番号１０（式中、Ｘ１はＤであり、Ｘ２はＩであり、Ｘ３はＰであり、Ｘ４はＴであり、Ｘ５はＫであり、およびＸ６はＧである）を含む。ＶＲ１１０は配列番号１０（式中、Ｘ１はＤであり、Ｘ２はＭであり、Ｘ３はＰであり、Ｘ４はＴであり、Ｘ５はＫであり、およびＸ６はＧである）を含む。ＶＲ２４は特有のＬＣＤＲ１：ＳＧＳＳＥＭＴＶＨＨＹＶＹ（配列番号１７）を含む。
【０１０９】
抗体のＣＤＲに関する実施形態において、ＣＤＲはＫＡＢＡＴナンバリングシステムにしたがって定義される。（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ．（１９９１））
【０１１０】
いくつかの実施形態において、抗体は抗ＦＸＩＩモノクローナル抗体またはｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＦＸＩＩａアミド分解活性アッセイ（国際公開第２０１３／０１４０９２号）において１：０．２のモル比でＦＸＩＩａ−アルファ対抗体を使用した場合に、ヒトＦＸＩＩａ−アルファを、４０％を超えて、５０％を超えて、６０％を超えて阻害するこれらの抗原結合断片である。いくつかの実施形態において、抗体またはこれらの抗原結合断片は、１：０．５のモル比でＦＸＩＩａ−アルファ対抗体を使用した場合に、ヒト第ＸＩＩａ因子−アルファを、８０％を超えて、８５％を超えて、または９０％を超えて阻害する。一実施形態において、抗体は、１：０．５のモル比で使用した場合、ヒトＦＸＩＩａ−アルファの完全、またはほぼ完全（例えば、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えて）な阻害を達成する。一実施形態において、抗体またはこれらの抗原結合断片は、抗体３Ｆ７の親和性と少なくともほぼ同等なヒトＦＸＩＩａに対する親和性を有する。
【０１１１】
Ｄ．ＨＥＬＰと連結されたＦＸＩＩインヒビター
本出願の別の態様は、半減期強化ポリペプチド（ＨＬＥＰ）のような融合パートナーまたはＰＥＧのような分子と連結されたＦＸＩＩインヒビターを提供する。一実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは小タンパク質である。したがって、（他の小タンパク質に関して観察されるように）急速な腎クリアランスが予想される（Ｗｅｒｌｅ  ＭおよびＢｅｒｎｋｏｐ−Ｓｃｈｎｕｒｃｈ  Ａ、Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ２００６；３０：３５１〜３６７頁を参照されたい）。ポリペプチド化合物の短い血漿半減期に対処するための１つの方法は、反復的にまたは連続注入を介して注射することである。別の取り組みは、ポリペプチドそれ自体の内因性血漿半減期を増加させることである。例えば、一実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは、半減期延長タンパク質と連結される。
【０１１２】
「半減期強化ポリペプチド」は、患者または動物において、ｉｎ  ｖｉｖｏのＦＸＩＩインヒビターの半減期を増加できるポリペプチド融合パートナーである。例としては、アルブミンならびに免疫グロブリンおよびＦｃドメインまたは誘導体のようなこれらの断片が挙げられ、これらは、ＦＸＩＩインヒビターと直接、または切断性もしくは非切断性のリンカーを介して融合される。Ｂａｌａｎｃｅら（国際公開第２００１／７９２７１号）は、ヒト血清アルブミンと融合された多数のさまざまな治療用ポリペプチドを含む融合ポリペプチドを記載した。
【０１１３】
「アルブミン」および「血清アルブミン」という用語は、ヒトアルブミン（ＨＡ）およびこれらの変異体を包含し、この完全成熟型（配列番号１９）ならびに他の種由来のアルブミンおよびこれらの変異体を本明細書に開示する。本明細書において使用する場合、「アルブミン」は、アルブミンのポリペプチドもしくはアミノ酸配列またはアルブミンの１つまたはそれ以上の機能活性（例えば、生物活性）を有するアルブミン変異体を指す。特定の実施形態において、アルブミンは、ＦＸＩＩインヒビターの治療活性を安定化または延長するために使用される。アルブミンは、任意の脊椎動物、特に任意の哺乳動物、例えばヒト、サル、ウシ、ヒツジまたはブタに由来する。非哺乳動物性アルブミンもまた使用でき、限定するものではないが、トリおよびサケ由来のアルブミンを含む。アルブミン連結ポリペプチドのアルブミン部分は、治療用ポリペプチド部分とは異なる動物に由来してもよい。アルブミン融合タンパク質の例のために国際公開第２００８／０９８７２０号を参照されたく、その全体は参照によって本明細書に組み入れる。
【０１１４】
一実施形態において、アルブミン変異体は、少なくとも１０、２０、４０、５０、６０または少なくとも７０アミノ酸長（またはこの間の任意の長さ）であるか、またはヒトアルブミン（ＨＡ）配列（例えば、配列番号１９）由来の１５、２０、２５、３０、５０またはそれ以上（またはこの間の任意の数）の連続するアミノ酸を含み得る、またはＨＡの特異的ドメインの一部もしくはすべてを含み得る。アルブミン変異体は、アミノ酸の置換、欠失または付加、保存的または非保存的置換のいずれかを含んでよく、このような変化は、半減期強化ポリペプチドの治療活性をもたらす活性部位または活性ドメインを実質的に改変しない。これらの変異体は、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％（またはこれらの間の任意の百分率）の相同性を共有できる。
【０１１５】
いくつかの実施形態において、アルブミン変異体は断片であり、アルブミンの少なくとも１つの全ドメインおよび／またはそれらのドメインの断片、例えば、ドメイン１（配列番号１９のアミノ酸１〜１９４）、２（配列番号１９のアミノ酸１９５〜３８７）、３（配列番号１９のアミノ酸３８８〜５８５）、１＋２（配列番号１９の１〜３８７）、２＋３（配列番号１９の１９５〜５８５）または１＋３（配列番号１９のアミノ酸１〜１９４＋アミノ酸３８８〜５８５）を含むことができる。各ドメインはそれ自体、２つの相同なサブドメインすなわち、配列番号１９の残基１〜１０５、１２０〜１９４、１９５〜２９１、３１６〜３８７、３８８〜４９１および５１２〜５８５と、残基Ｌｙｓ１０６からＧｌｕ１１９、Ｇｌｕ２９２からＶａｌ３１５およびＧｌｕ４９２からＡｌａ５１１を含む、柔軟なサブドメイン間リンカー領域とで構成される。したがって、いくつかの実施形態において、アルブミン変異体は、アルブミンの少なくとも１つの全サブドメインを含む。
【０１１６】
特定の実施形態において、限定するものではないがアルファ−フェトプロテイン（国際公開第２００５／０２４０４４号；ＢｅａｔｔｉｅおよびＤｕｇａｉｃｚｙｋ、２０  Ｇｅｎｅ  ４１５〜４２２頁、１９８２）、アファミン（ａｆａｍｉｎ）（Ｌｉｃｈｅｎｓｔｅｉｎら、２６９  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８１４９〜１８１５４頁、１９９４）およびビタミンＤ結合タンパク質（ＣｏｏｋｅおよびＤａｖｉｄ、７６  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２４２０〜２４２４頁、１９８５）を含む、アルブミンと構造的または進化的に関連する他のタンパク質（「アルブミンファミリータンパク質」）がＨＬＥＰとして使用される。これらのタンパク質をコードする遺伝子は、ヒト、マウスおよびラットの同じ染色体領域にマッピングされる構造的および機能的類似性を有する多重遺伝子クラスタを表す。アルブミンファミリーメンバーの構造的類似性は、これらがＨＬＥＰとして使用可能であることを示唆する。例えば、アルファ−フェトプロテインは、結合された治療用ポリペプチドの半減期をｉｎ  ｖｉｖｏで延長するために特許請求されている（国際公開第２００５／０２４０４４号）。したがって、いくつかの実施形態において、これらのタンパク質または治療活性を安定化または延長可能なこれらの変異体は、ＦＸＩＩもしくはＦＸＩＩａと連結されたＨＬＥＰとして使用され、任意の脊椎動物、特に任意の哺乳動物、例えばヒト、サル、ウシ、ヒツジもしくはブタまたは限定するものではないが、トリもしくはサケ由来を含む非哺乳動物性に由来する。いくつかの実施形態において、変異体は、１０もしくはそれ以上のアミノ酸長を含んでよく、または個別のタンパク質配列が由来する１５、２０、２５、３０、５０またはそれ以上の連続するアミノ酸を含んでもよく、または個別のタンパク質の特異的ドメインの一部もしくはすべてを含んでもよい。アルブミンファミリーメンバー融合タンパク質は、天然に存在する多形性変異体を含んでよい。
【０１１７】
特定の実施形態において、モノ−またはポリ−（例えば２−４）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分は融合パートナーとして使用され、ｉｎ  ｖｉｖｏの半減期を延長できる。ペグ化は、利用可能なペグ化反応のいずれかにより実行される。ペグ化タンパク質生成物を製造する例示的方法は、（ａ）ポリペプチドと（ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体のような）ポリエチレングリコールとを、タンパク質が１つまたはそれ以上のＰＥＧ基と結合する条件下で反応させること、および（ｂ）（１つまたは複数の）反応生成物を得ること、を全体に含むことができる。いくつかのＰＥＧ結合方法が存在する。例えば、ＥＰ０４０１３８４；Ｍａｌｉｋら、Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．、２０：１０２８〜１０３５頁（１９９２）；Ｆｒａｎｃｉｓ、Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ、３（２）：４〜１０頁（１９９２）；ＥＰ０１５４３１６；ＥＰ０４０１３８４；国際公開第９２／１６２２１号；国際公開第９５／３４３２６号；米国特許第５，２５２，７１４号を参照されたく、これらの全体は参照によって本明細書に組み入れる。
【０１１８】
いくつかの実施形態において、免疫グロブリン（Ｉｇ）はＨＬＥＰとして使用される。「免疫グロブリン」という用語は、Ｆｃ領域または１つもしくはそれ以上のＩｇ定常ドメインのようなこれらの機能性断片および変異体を包含する。いくつかの実施形態において、Ｉｇは、（１つまたは複数の）免疫グロブリン定常ドメインのＦｃ領域または一部を含む。定常領域は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡまたはＩｇＥ免疫グロブリンの定常領域である。いくつかの実施形態において、治療用ポリペプチド部分は、抗体のヒンジ領域または切断性ペプチドリンカーを介してＩｇと連結される。いくつかの特許および特許出願は、治療用タンパク質の半減期をｉｎ  ｖｉｖｏで延長するための、治療用タンパク質と免疫グロブリン定常領域との融合を記載しており（米国特許出願第２００４／００８７７７８号、国際公開第２００５／００１０２５号、国際公開第２００５／０６３８０８号、国際公開第２００３／０７６５６７号、国際公開第２００５／０００８９２号、国際公開第２００４／１０１７４０号、米国特許第６，４０３，０７７号）、これらは参照によって本明細書に組み入れる。したがって、いくつかの実施形態において、免疫グロブリン領域（例えば、Ｆｃドメイン、免疫グロブリンのＦｃ断片およびこれらの変異体）はＨＬＥＰとして使用される。いくつかの実施形態において、ＦＸＩＩのインヒビターは、Ｆｃドメインまたは免疫グロブリン定常領域の一部と、ＨＥＬＰとして融合される。いくつかの実施形態において、これらの融合タンパク質は、細菌、酵母、植物、動物（昆虫を含む）またはヒト細胞系のような原核生物または真核生物の宿主細胞において、またはトランスジェニック動物において発現される組換え分子として製造される（国際公開第２００８／０９８７２０号、参照によって本明細書に組み入れる）。
【０１１９】
ＳＰＩＮＫ突然変異体−Ｆｃ融合タンパク質の例、ＳＰＩＮＫ−Ｋ２−Ｆｃ融合タンパク質は、国際公開第２００８／０９８７２０号に記載される。
【０１２０】
Ｅ．リンカー
さまざまな実施形態において、介在するペプチドリンカーは、治療用ポリペプチドとＨＬＥＰとの間に導入される。一実施形態において、特にＨＬＥＰが治療用ポリペプチドの特異的活性に、例えば立体障害により干渉する可能性を有する場合、切断性リンカーが導入される。特定の実施形態において、リンカーは、内因性、外因性もしくは共通の凝固経路の凝固プロテアーゼのような、凝固に関与する酵素により切断可能である。内因性経路の凝固プロテアーゼとしては接触活性化経路中のプロテアーゼ、例えばＦＸｌｌａ、ＦＸｌａまたはＦＩＸａが挙げられる。一実施形態において、リンカーは、ＦＸｌｌａにより切断される。外因性経路のプロテアーゼとしては、組織因子経路中のプロテアーゼ、例えばＦＶＩＩａが挙げられる、共通経路のプロテアーゼとしては、フィブリノーゲンからフィブリンへの変換に関与するプロテアーゼ、例えばＦＸａ、ＦＩＩａ、およびＦＸＩＩＩａが挙げられる。
【０１２１】
ＩＩＩ．Ｃ１インヒビター
「Ｃ１インヒビター」、「Ｃ１エステラーゼインヒビター」および「Ｃ１−ＩＮＨ」という用語は、セリンプロテアーゼインヒビターおよびＣ１複合体中のタンパク質と結合してこのタンパク質を阻害するこれらの機能性断片を指し、循環プロテアーゼの活性化を防止する、および／または補体系、カリクレイン−キニン系および／または凝固系に関連する活性化されたプロテアーゼを阻害する。Ｃ１−ＩＮＨは、血漿性（すなわち血漿由来）、組換えまたはこの２つの組合せであってよい。Ｃ１−ＩＮＨにより阻害された凝固プロテアーゼは、第ＸＩａ因子および第ＸＩＩａ因子を含む。Ｃ１−ＩＮＨは、血漿性、組換えまたはこの２つの組合せであってよい。Ｃ１−ＩＮＨの例としては、血漿由来ＣＩＮＲＹＺＥ（商標）（Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ）、組換えＲＵＣＯＮＥＳＴ（商標）またはＲＨＵＣＩＮ（商標）（両方ともＰｈａｒｍｉｎｇ）および血漿由来ＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）が挙げられる。
【０１２２】
本明細書において使用する場合、Ｃ１−ＩＮＨは、ヒトもしくは動物に由来する天然セリンプロテアーゼインヒビターまたはこれらの活性断片を含むことができ、または同様の機能特性を提供する組換えペプチド、合成ペプチド、ペプチド模倣体またはペプチド断片を含むことができる。例えば、ヒト血漿由来Ｃ１−ＩＮＨは、例えば、低温殺菌およびナノろ過後に使用可能である。ヒトＣ１−ＩＮＨのアミノ酸配列の例は、国際公開第２００７／０７３１８６号に提供される（国際公開第２００７／０７３１８６号の配列番号１を参照されたい）。Ｃ１−インヒビターの構造および機能に関するさらなる開示のためには、米国特許第４，９１５，９４５号；米国特許第５，９３９，３８９号；米国特許第６，２４８，３６５号；米国特許第７，０５３，１７６号；および国際公開第２００７／０７３１８６号を参照されたく、これらは参照によってそれらの全体を本明細書に組み入れる。
【０１２３】
さまざまな実施形態において、本明細書に開示の方法および組成物に使用されるＣ１−インヒビターは、例えば、組換えＣ１−ＩＮＨを作製するための当業者に公知の方法に従って作製される。例えば、治療目的のＣ１−インヒビターの作製方法は、米国特許第４，９１５，９４５号に開示されており、この開示は参照によってその全体を本明細書に組み入れる。または、いくつかの実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨは、天然組織供給源から当分野において公知の技術を使用して回収および濃縮される。いくつかの実施形態において、組換え技術を使用して、トランスジェニック動物または細胞系において、組換えヒトＣ１−ＩＮＨのようなＣ１−ＩＮＨを作製することができる。Ｃ１−インヒビターを含む市販の製品は、例えば、血漿由来ＣＩＮＲＹＺＥ（商標）（Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ）、組換えＲＵＣＯＮＥＳＴ（商標）またはＲＨＵＣＩＮ（商標）（両方ともＰｈａｒｍｉｎｇ）および血漿由来ＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）である。ＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）は、遺伝性血管浮腫および先天性欠損のための処置が表示されている。組換えＣ１−ＩＮＨは公知の方法により製造される。
【０１２４】
いくつかの実施形態において、（ヒト血漿由来Ｃ１−ＩＮＨのような）１つまたはそれ以上の血漿由来Ｃ１−ＩＮＨが、本明細書に開示の組成物および方法に使用される。いくつかの実施形態において、（組換えヒトＣ１−ＩＮＨのような）１つまたはそれ以上の組換えＣ１−ＩＮＨが使用される。いくつかの実施形態において、１つまたはそれ以上の血漿由来Ｃ１−ＩＮＨ（好ましくはヒト血漿由来Ｃ１−ＩＮＨ）および１つまたはそれ以上の組換えＣ１−ＩＮＨ（好ましくは組換えヒトＣ１−ＩＮＨ）の組合せが使用される。
【０１２５】
ＩＶ．医薬組成物
本発明のさまざまな態様のいずれかにおいて、ＦＸＩＩインヒビターおよび／またはＣ１−ＩＮＨは、８０％を超える、または９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％を超える純度を有することができる。一実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターおよび／またはＣ１−ＩＮＨは、他のタンパク質および核酸のような巨大分子の混入に関して、９９．９％を超えて純粋である医薬品純粋状態を有することができ、感染性および発熱性作用物質は含まれない。
【０１２６】
特定の実施形態において、医薬組成物は、充填剤、増量剤、バッファー、安定剤または賦形剤のような少なくとも１種の添加剤を含んでよい。いくつかの例示的医薬製剤技術は、例えば、２００５  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ、Ｔｈｏｍｓｏｎ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ：Ｍｏｎｔｖａｌｅ、ＮＪ、２００４；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｇｅｎｎａｄｏら編、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、２０００；Ｋｉｂｂｅら、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（第３版、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ）、２０００）に記載されている。医薬品添加剤としては、例えば、マンニトール、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセリン、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。特定の実施形態において、医薬組成物は、ｐＨ緩衝化試薬および湿潤剤もしくは乳化剤をさらに含み得る。さらなる実施形態において、組成物は、防腐剤および／または安定剤を含み得る。医薬組成物は、凍結乾燥された、または安定な可溶性形態で製剤化される。ポリペプチドは、当分野において公知のさまざまな手順により凍結乾燥される。特定の実施形態において、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨを含む医薬組成物および／または少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターを含む医薬組成物は、接触活性化系の障害の処置に使用するために製造される。例えば、Ｃ１−ＩＮＨまたはＦＸＩＩインヒビターの（例えばフリーズドライによる）粉末または凍結乾燥型が提供され、水性医薬品が望ましい場合、粉末は医薬製剤の水性成分と混合し、ボルテックス混合または穏やかな撹拌のような適切な技術を使用して撹拌することによって溶解される。または、水性医薬品が望ましく、Ｃ１−ＩＮＨまたはＦＸＩＩインヒビターが既に水性形態である場合、これらの成分は、投与前に直接組み合わせることができる。特定の実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨは凍結乾燥形態で提供され、患者への投与前に水性ＦＸＩＩインヒビター組成物と組み合わされる。他の実施形態において、ＦＸＩＩインヒビターは凍結乾燥形態で提供され、投与前に水性Ｃ１−ＩＮＨと組み合わされる。さらに他の実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨおよびＦＸＩＩインヒビターは両方とも凍結乾燥形態で提供され、投与前に水性医薬品成分（例えば、追加の活性成分または充填剤、安定剤、溶媒もしくは担体のような不活性成分）と組み合わされる。さらに他の実施形態において、Ｃ１−ＩＮＨおよびＦＸＩＩインヒビターは両方とも水性形態で提供され、個別に投与されるか、または患者への投与前に組み合わされる。
【０１２７】
医薬組成物の製剤は、投与の意図される経路または他のパラメーターに依存して変動し得る（例えば、Ｒｏｗｅら、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ、第４版、ＡＰｈＡ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、２００３を参照されたい）。いくつかの実施形態において、医薬組成物は凍結乾燥されたケーキまたは粉末であってよい。凍結乾燥組成物は、静脈内注射による投与のために、例えば注射用滅菌水、ＵＳＰにより再構成される。他の実施形態において、組成物は、滅菌の、非発熱性溶液であってよい。またさらなる実施形態において、組成物は、丸薬または錠剤で、粉末形態で送達される。
【０１２８】
ＦＸＩＩインヒビターおよび／またはＣ１−ＩＮＨの製剤は、投与の医薬として適切な手段により患者に送達される。例えば、組成物は、非経口のように全身に投与される。非経口製剤は、ボーラス型または注入のいずれかで、公知の手順に従って静脈内または皮下投与される。非経口使用のための周知の好ましい液体担体としては、滅菌水、食塩水、水性デキストロース、糖溶液、エタノール、グリコールおよび油が挙げられる。全身使用のために、治療用タンパク質は静脈ラインまたは動脈ライン用に製剤化される。製剤は、注入により連続的に、またはボーラス注射により投与される。
【０１２９】
経口または直腸投与のための錠剤およびカプセルは、結合剤、充填剤、滑沢剤または湿潤剤などのような従来の賦形剤を含んでよい。経口または直腸用液体調製物は、水性もしくは油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップ、エリキシル剤などの形態であってよく、または使用前に水もしくは他の適切なビヒクルにより再構成するための乾燥生成物として提示されてもよい。このような液体調製物は、懸濁化剤、乳化剤、非水性ビヒクルおよび防腐剤のような従来の添加剤を含んでよい。いくつかの製剤は、パッチのような徐放系を包含する。
【０１３０】
接触活性化系の障害の処置のためのキットもまた開示される。特定の実施形態において、該キットは、（ａ）少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビター；（ｂ）個別の容器に梱包された、もしくは一緒に１つの容器に混合されたかのいずれかの少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨ、（ｃ）接触活性化系の障害の処置において使用するための取扱説明書、および場合により（ｄ）少なくとも１種のさらなる治療用活性物質、を含む。
【０１３１】
キットの成分は、１つまたはそれ以上のバイアルのような１つまたは異なる容器に含まれる。少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターは、液体形態であっても、または（例えば、凍結乾燥後の）固体形態であってもよい。液体形態の場合、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターは、プロリン、グリシンもしくはスクロースなどの安定剤および／または防腐剤のような添加剤または他の添加剤を含んでよい。同様に、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨは、液体形態であっても、または（例えば、凍結乾燥後の）固体形態であってもよい。液体形態の場合、Ｃ１−ＩＮＨは、プロリン、グリシンもしくはスクロースなどの安定剤および／または防腐剤のような添加剤または他の添加剤を含んでよい。
【０１３２】
特定の実施形態において、キットは、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨの投与前、同時または投与後に投与される、治療用活性化合物または薬物のような追加の化合物を含んでよい。このような化合物の例としては、ビタミン、抗生物質、抗ウイルス剤などが挙げられる。他の実施形態において、血餅の形成を除去または阻害することが意図される化合物（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、アセチルサリチル酸、クロピドグレルまたはジピリダモール）が、該キットに含まれる。
【０１３３】
さまざまな実施形態において、キットの使用に関する取扱い説明書は、接触活性化系の障害の処置におけるキット成分の使用のための指示書を含んでよい。取扱説明書は、少なくとも１種のＦＸＩＩインヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨの製造方法（例えば、フリーズドライタンパク質の場合、希釈または再構成）に関する情報をさらに含んでもよい。取扱説明書は、投薬量および／または投与の頻度に関するガイダンスをさらに含んでもよい。
【実施例】
【０１３４】
下記の実施例は、本開示の例示として機能し、決して本開示を限定するものではない。
【実施例１】
【０１３５】
ｒＨＡ−インフェスチン−４およびＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）の組合せ静脈内処置による、ラットのＦｅＣｌ３誘導性動脈血栓症における相乗抗血栓性効果
第ＸＩＩ因子インヒビターであるｒＨＡ−インフェスチン−４およびＣ１−インヒビター（ＩＮＨ）であるＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）による組合せ処置の効果を、ラットの動脈血栓症モデルにおいて評価した。
【０１３６】
処置群を表３に示した：
【０１３７】
【表３】
2017501968.tif 000004
【０１３８】
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手した雌ＣＤラット（７〜８週齢）に、深麻酔のｔ＝−５分において表３の記載の処置溶液の単回ｉ．ｖ．注射を行った。その後、血栓性閉塞に対する処置効果を定量化した。ベースラインの血流を、露出された頸動脈周辺に超音波流量プローブを配置することによって決定した。血栓症を開始するために、３５％の塩化第二鉄溶液を染み込ませたろ紙の２．５ｍｍ２（１×２．５ｍｍ）のパッチを、流量プローブの下流の頸動脈にｔ＝０分に配置した。３分後、ろ紙を除去して、血流を６０分間または血管の血栓性閉塞まで（すなわち、血流の中断）までモニターした。
【０１３９】
図１は、ＦｅＣｌ３塗布後の動脈閉塞の継時変化および閉塞率を表す。表４は、各処置群の閉塞率（すなわち、完全閉塞が観察された動物の数）を表す。
【０１４０】
【表４】
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【０１４１】
表４に示すように、頸動脈の３分の塩化第二鉄病変は、１０／１１（９１％）の等張性食塩水処置ラットに血栓性閉塞をもたらした（表４）。これらの血管閉塞は３２分以内に起こった（図１）。４ｍｇ／ｋｇのｒＨＡ−インフェスチン−４による予備処理は、１１匹のラットの群において動脈血栓症の部分的予防（５５％の閉塞）をもたらした。用量２０ＩＵ／ｋｇのＣ１−ＩＮＨ（ＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標））は非効率的（すなわち８２％の閉塞）であり、一方、ＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）と４ｍｇ／ｋｇのｒＨＡ−インフェスチン−４との組合せは動脈血栓症からの実質的な保護につながった（２０％の閉塞）。図２は、各処置群の閉塞された血管（すなわち閉塞ラット）の百分率をグラフで比較している。
【０１４２】
この研究は、ｒＨＡ−インフェスチン−４（４ｍｇ／ｋｇ）を２０ＩＵ／ｋｇのＣ１−ＩＮＨ（ＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標））と組み合わせた場合、動脈血栓症からの保護が相乗的に強化されことを実証した。
【実施例２】
【０１４３】
多発性硬化症のマウスＥＡＥモデル
少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨを使用する組合せ処置の効果を、マウス実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）動物モデルにおいて評価する（Ｓｔｕｖｅら、Ａｒｃｈ  Ｎｅｕｒｏｌ．２０１０；６７：１３０７〜１５頁）。処置群は、食塩水対照群、少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターによる処置群、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨによる処置群および少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨによる処置群を含み、場合により１つまたはそれ以上のコルチコステロイド、インターフェロンまたは酢酸グラチラマーによる処置群と比較した。Ｃ１−ＩＮＨはＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）であり、ＦＸＩＩインヒビターはｒＨＡ−インフェスチン−４または抗ＦＸＩＩａ抗体３Ｆ７である。
【０１４４】
ＥＡＥを、１０〜１２週齢の雌Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを２００μｇのＭＯＧ３５−５５により免疫化することによって誘導する。Ｃ５７Ｂｌ／６ＭＯＧ３５−５５マウスモデルは、治療用化合物の前臨床評価に一般的に使用される。（Ｋｒｉｓｈｎａｍｏｏｒｔｈｙ
＆Ｗｅｋｅｒｌｅ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００９；３９：２０３１〜３５頁）。このモデルのＥＡＥの経過は、ひとたび誘導されたら疾患は寛解しないので、ＭＳの一次性進行型と似ている。完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）をＭＯＧに補充して、１ｍｇ／ｍｌのエマルジョンを得、２×１００μｌを、深麻酔されたマウスの脇腹の２カ所の異なる部位に皮下注射した。
【０１４５】
処置を、１日１回の静脈内注射により５０日間にわたって投与した。異なる処置群におけるＥＡＥの経過を、２人の盲検調査者により下記のスコア系を使用して毎日モニターする：グレード０、異常なし；グレード１、尾の先端を引きずる；グレード２、尾を引きずる；グレード３、中程度の後肢の衰弱；グレード４、完全な後肢の衰弱；グレード５、軽度の不全対麻痺；グレード６、不全対麻痺；グレード７、重度の不全対麻痺または対麻痺；グレード８、四肢不全麻痺；グレード９、四肢麻痺または瀕死前状態；グレード１０、死亡。５０日のモニタリング期間にわたるスコアを比較して、異なる処置群にわたる何らかの改変、相加的もしくは相乗的効果を探した。５０日後、マウスを屠殺し、組織サンプルを回収し、ＥＡＥ進行に関して病理組織学的に評価する。
【実施例３】
【０１４６】
骨格虚血（Ｓｋｅｌｅｔａｌ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ）のラットモデル
少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨを使用する組合せ処置の効果を、骨格虚血のラットモデルにおいて評価する。処置群は、食塩水対照群、少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターによる処置群、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨによる処置群および少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨによる処置群を含む。Ｃ１−ＩＮＨはＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）であり、ＦＸＩＩインヒビターはｒＨＡ−インフェスチン−４である。
【０１４７】
雄Ｗｉｓｔａｒラットに麻酔をかけ、肢の毛を両方の後足から電気シェーバーで完全に除去する。ラットを温熱パッドの上に保ち、体温を３７℃に維持する。麻酔を誘導後およそ３０分、大腿動脈をクランプすることによって片方の後肢の虚血を３時間誘導する。虚血の３時間後、この肢を２４時間再灌流する。
【０１４８】
免疫蛍光法を使用して、閉塞および再灌流された筋肉由来の組織サンプル中の、補体系のさまざまな成分およびフィブリン／フィブリノーゲン、ヘパラン硫酸、ブラジキニン受容体Ｂ１およびブラジキニン受容体Ｂ２の蓄積を定量化する。組織サンプルをＰＢＳで洗浄し、水分を拭き取り、ドライアイス上でマトリックス（ＯＣＴ、Ｔｉｓｓｕｅ  ｔｅｋ）中に包埋する。サンプルを、一次抗体と一緒に終夜４℃においてインキュベートし、次いで二次抗体と一緒に１時間、室温においてインキュベートする。免疫蛍光レベルをさまざまなサンプルにおいて定量化し、異なる処置群にわたる何らかの改変、相加的もしくは相乗的効果を探した。さらに、組織の乾湿比を組織サンプルから計算し、筋肉生存度に対する効果を評価するために使用されるＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＵＳＡ）アッセイにおいて骨格ＩＲＩの間の浮腫形成に対する効果を評価する。
【実施例４】
【０１４９】
遺伝性血管浮腫のマウスモデル
少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨを使用する組合せ処置の効果を、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）のマウスモデルにおいて評価する。処置群は、食塩水対照群、少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターによる処置群、少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨによる処置群および少なくとも１種の第ＸＩＩ因子インヒビターおよび少なくとも１種のＣ１−ＩＮＨによる処置群を含み、場合により、Ｋｕｎｉｔｚドメイン血漿カリクレインインヒビター（ＤＸ８８）による処置群と比較した。Ｃ１−ＩＮＨはＢＥＲＩＮＥＲＴ（登録商標）（ＣＳＬ  Ｂｅｈｒｉｎｇ）であり、ＦＸＩＩインヒビターはｒＨＡ−インフェスチン−４または抗ＦＸＩＩａ抗体３Ｆ７である。
【０１５０】
生理学的なＣ１−ＩＮＨが発現しないマウス（Ｈａｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０９：１０５７〜１０６３頁（２００２））を入手し、ＨＡＥの症状について試験する。マウスに処置を投与し、次いで、投薬後に尾静脈にエバンスブルー色素（１００μｌ  ＰＢＳ中３０ｍｇ／ｋｇ；Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ、ＵＳＡ）を注射する。組織サンプルを、色素の注射３０分後に採取する。血管透過性を、血管系からの色素の溢出の程度を定量化することによって測定し、異なる処置群にわたる何らかの改変、相加的もしくは相乗的効果を探した。または、他のＣ１−ＩＮＨ−欠損マウス（Ｏｓｃｈａｔｚら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３４：２５８〜２６８頁（２０１１））が効能研究に使用できる。さらに、研究薬物による処置後、異なる浮腫誘発性刺激を局所的または静脈内のいずれかに適用し、次いで浮腫形成または静脈内のトレーサー適用を介してモニターされた、血管透過性の増加を評価することができる。
【０１５１】
先行する実施例は例示を意図するものであり、本開示を制限するものではない。開示された組成物および方法の他の実施形態は、本明細書の考察および本明細書に開示の組成物および方法の実行から当業者に明らかであると思われる。
【図１】
2017501968.tif 000006
【図２】
2017501968.tif 000007
【配列表】
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【国際調査報告】
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2017501968.tif 000009
2017501968.tif 000010
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