(57)【要約】  本発明は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を含む併用治療、並びにがんの治療のために腫瘍免疫原性を増加させる方法などの、増強された免疫原性が所望される状態を治療する方法を含む、その使用のための方法を記載する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法。
【請求項２】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、そのリガンド結合パートナーへのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の両方へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＭＤＸ−１１０６である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＭｅｒｃｋ  ３７４５である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＣＴ−０１１である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＡＭＰ−２２４である、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
【請求項１４】
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、Ｂ７−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１及びＢ７−１の両方へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体がモノクローナル抗体である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ヒト化抗体又はヒト抗体である、請求項１７から１９の何れか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２２】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１５のＨＶＲ−Ｈ１配列、配列番号１６のＨＶＲ−Ｈ２配列及び配列番号３のＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖；並びに配列番号１７のＨＶＲ−Ｌ１配列、配列番号１８のＨＶＲ−Ｌ２配列及び配列番号１９のＨＶＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである、請求項２に記載の方法。
【請求項２５】
ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが抗体である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストがイムノアドヘシンである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
抗体が、ＥＵ番号付けに従って２９７位においてＡｓｎからＡｌａへの置換を有するヒトＩｇＧ１である、請求項８、１７から２３及び２５の何れか一項に記載の方法。
【請求項２８】
抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である、請求項１から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項２９】
抗ＣＤ２０抗体がＧＡ１０１抗体である、請求項１から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
ＧＡ１０１が、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ヒトＣＤ２０抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ＧＡ１０１抗体が、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＧＡ１０１抗体が、配列番号５８のアミノ酸配列及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
ＧＡ１０１抗体がオビヌツズマブである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
ＧＡ１０１抗体が、配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
抗ＣＤ２０抗体が多重特異性抗体である、請求項１から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
抗ＣＤ２０抗体が二重特異性抗体である、請求項１から２７の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
個体がヒトである、請求項１から３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
個体ががんを有する、又はがんと診断されている、請求項１から３７の何れか一項に記載の方法。
【請求項３９】
がんがＣＤ２０発現がんである、請求項１から３８の何れか一項に記載の方法。
【請求項４０】
がんが非固形腫瘍である、請求項１から３９の何れか一項に記載の方法。
【請求項４１】
がんが、リンパ腫又は白血病である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
白血病が、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）又は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
リンパ腫が非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
個体が、再発した又は難治性の又は以前に治療されていない慢性リンパ球性白血病に罹患している、請求項３９又は４０に記載の方法。
【請求項４５】
個体が、難治性の又は再発した濾胞性リンパ腫又はびまん性大Ｂ細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）に罹患している、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
治療が、治療の休止後に、個体において持続性の応答をもたらす、請求項１から４５の何れか一項に記載の方法。
【請求項４７】
抗ＣＤ２０抗体又はＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、持続的に又は断続的に投与される、請求項１から４６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４８】
抗ＣＤ２０抗体が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの前に投与される、請求項１から４７の何れか一項に記載の方法。
【請求項４９】
抗ＣＤ２０抗体が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと同時に投与される、請求項１から４７の何れか一項に記載の方法。
【請求項５０】
抗ＣＤ２０抗体が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの後に投与される、請求項１から４７の何れか一項に記載の方法。
【請求項５１】
有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強する方法。
【請求項５２】
個体中のＣＤ８  Ｔ細胞が、組合せの投与の前と比較して増強されたプライミング、活性化、増殖及び／又は細胞溶解活性を有する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
ＣＤ８  Ｔ細胞活性化が、組合せの投与の前と比較して上昇した頻度のγ−ＩＦＮ＋ＣＤ８  Ｔ細胞及び／又は増強された細胞溶解活性によって特徴付けられる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
ＣＤ８  Ｔ細胞の数が、組合せの投与の前と比較して上昇する、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
ＣＤ８  Ｔ細胞が抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞である、請求項５１から５４の何れか一項に記載の方法。
【請求項５６】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される、請求項５１から５５の何れか一項に記載の方法。
【請求項５７】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−１結合アンタゴニストである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、そのリガンド結合パートナーへのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項５７に記載の方法。
【請求項６１】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の両方へのＰＤ−１の結合を阻害する、請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが抗ＰＤ−１抗体である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６３】
ＰＤ−１結合アンタゴニストが、ＭＤＸ−１１０６、Ｍｅｒｃｋ  ３７４５又はＣＴ−０１１である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
ＰＤ−１結合アンタゴニストがＡＭＰ−２２４である、請求項５７に記載の方法。
【請求項６５】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである、請求項５６に記載の方法。
【請求項６６】
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、Ｂ７−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＰＤ−１及びＢ７−１の両方へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６９】
ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項６５に記載の方法。
【請求項７０】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体がモノクローナル抗体である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、ヒト化抗体又はヒト抗体である、請求項６９から７１の何れか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストが、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される、請求項６５に記載の方法。
【請求項７４】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号１５のＨＶＲ−Ｈ１配列、配列番号１６のＨＶＲ−Ｈ２配列及び配列番号３のＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖；並びに配列番号１７のＨＶＲ−Ｌ１配列、配列番号１８のＨＶＲ−Ｌ２配列及び配列番号１９のＨＶＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む、請求項６９から７２の何れか一項に記載の方法。
【請求項７５】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニストがＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである、請求項５６に記載の方法。
【請求項７７】
ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが抗体である、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストがイムノアドヘシンである、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
抗体が、ＥＵ番号付けに従って２９７位においてＡｓｎからＡｌａへの置換を有するヒトＩｇＧ１である、６２、６９から７５及び７７の何れか一項に記載の方法。
【請求項８０】
抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である、請求項５１から７９の何れか一項に記載の方法。
【請求項８１】
抗ＣＤ２０抗体がＧＡ１０１抗体である、請求項５１から７９の何れか一項に記載の方法。
【請求項８２】
ＧＡ１０１が、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ヒトＣＤ２０抗体である、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
ＧＡ１０１抗体が、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８４】
ＧＡ１０１抗体が、配列番号５８のアミノ酸配列及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８５】
ＧＡ１０１抗体がオビヌツズマブである、請求項８１に記載の方法。
【請求項８６】
ＧＡ１０１抗体が、配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項８１に記載の方法。
【請求項８７】
抗ＣＤ２０抗体が多重特異性抗体である、請求項５１から７９の何れか一項に記載の方法。
【請求項８８】
抗ＣＤ２０抗体が二重特異性抗体である、請求項５１から７９の何れか一項に記載の方法。
【請求項８９】
個体がヒトである、請求項５１から８８の何れか一項に記載の方法。
【請求項９０】
個体ががんを有する、又はがんと診断されている、請求項５１から８９の何れか一項に記載の方法。
【請求項９１】
がんがＣＤ２０発現がんである、請求項５１から９０の何れか一項に記載の方法。
【請求項９２】
がんが非固形腫瘍である、請求項５１から９１の何れか一項に記載の方法。
【請求項９３】
がんが、リンパ腫又は白血病である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
白血病が、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）又は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
リンパ腫が非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
個体が、再発した又は難治性の又は以前に治療されていない慢性リンパ球性白血病に罹患している、請求項９１に記載の方法。
【請求項９７】
個体が、難治性の又は再発した濾胞性リンパ腫又はびまん性大Ｂ細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）に罹患している、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
抗ＣＤ２０抗体又はＰＤ−１軸結合アンタゴニストが、持続的に又は断続的に投与される、請求項５１から９７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９９】
抗ＣＤ２０抗体が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの前に投与される、請求項５１から９８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１００】
抗ＣＤ２０抗体が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと同時に投与される、請求項５１から９８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
抗ＣＤ２０抗体が、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの後に投与される、請求項５１から９８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト又は抗ＣＤ２０抗体が、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、移植により、吸入により、髄腔内、脳室内又は鼻腔内投与される、請求項１から１０１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０３】
抗ＰＤ−Ｌ１抗体が、３週間毎に１回、１２００ｍｇの用量で個体に静脈内投与される、請求項２３、２４、７４及び７５の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
抗ＣＤ２０抗体が、サイクル１の１、８及び１５日目、並びにサイクル２から８の１日目に１回、１０００ｍｇの用量で個体に静脈内投与される、請求項３０から３４及び８２から８５の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０５】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト、及び個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるために抗ＣＤ２０抗体と組み合わせてＰＤ−１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含む添付文書を含む、キット。
【請求項１０６】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を含む、キット。
【請求項１０７】
個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるためにＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を使用するための説明書を含む添付文書をさらに含む、請求項１０６に記載のキット。
【請求項１０８】
抗ＣＤ２０抗体、及び個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるためにＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせて抗ＣＤ２０抗体を使用するための説明書を含む添付文書を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願とのクロスリファレンス
本出願は、各々その全内容が本明細書に出典明示により援用される、２０１３年１２月１７日出願の米国仮特許出願第６１／９１７２６４号及び２０１４年８月７日出願の米国仮特許出願第６２／０３４７６６号の優先権の利益を主張する。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される：配列表のコンピューター読み込み可能な形態（ＣＲＦ）（ファイル名：１４６３９２０２７９４０ＳｅｑＬｉｓｔ．ｔｘｔ、記録日：２０１４年１２月１６日、サイズ：５７ＫＢ）。
【背景技術】
【０００３】
Ｔ細胞への２つの異なるシグナルの提供は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）による静止Ｔリンパ球のリンパ球活性化についての広く受容されたモデルである。Ｌａｆｆｅｒｔｙ等、Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ  ５３：２７−４２（１９７５）。このモデルは、非自己からの自己の識別及び免疫寛容をさらに提供する。Ｂｒｅｔｓｃｈｅｒ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １６９：１０４２−１０４９（１９７０）；Ｂｒｅｔｓｃｈｅｒ、Ｐ．Ａ．、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．ＵＳＡ  ９６：１８５−１９０（１９９９）；Ｊｅｎｋｉｎｓ等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６５：３０２−３１９（１９８７）。一次シグナル、又は抗原特異的シグナルは、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）の情況において提示された外来抗原ペプチドの認識後にＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を介して伝達される。第２の又は共刺激シグナルは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に発現された共刺激分子によってＴ細胞に送達され、Ｔ細胞を誘導して、クローン増殖、サイトカイン分泌及びエフェクター機能を促進させる。Ｌｅｎｓｃｈｏｗ等、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：２３３（１９９６）。共刺激の非存在下では、Ｔ細胞は、抗原刺激に対して不応性になり得、有効な免疫応答を開始せず、消耗、又は外来抗原に対する寛容をさらに生じ得る。
【０００４】
この２シグナルモデルでは、Ｔ細胞は、陽性及び陰性の両方の二次共刺激シグナルを受ける。かかる陽性及び陰性シグナルの調節は、免疫寛容を維持し、自己免疫を防止しつつ、宿主の防御免疫応答を最大化するために重要である。陰性二次シグナルは、Ｔ細胞寛容の誘導に必要であると思われるが、陽性シグナルは、Ｔ細胞活性化を促進する。単純な２シグナルモデルは、ナイーブリンパ球についての妥当な説明をなおも提供するが、宿主の免疫応答は、ダイナミックなプロセスであり、共刺激シグナルは、抗原曝露されたＴ細胞にも提供され得る。共刺激の機構は、治療的に興味を持たれるが、それは、共刺激シグナルの操作が、細胞ベースの免疫応答を増強又は終結させるための手段を提供することが示されているからである。近年、Ｔ細胞機能不全又はアネルギーが、阻害受容体、プログラム死１ポリペプチド（ＰＤ−１）の誘導された持続性の発現と同時発生的に生じることが発見されている。結果として、ＰＤ−１、並びにプログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌｌ）及びプログラム死リガンド２（ＰＤ−Ｌ２）などの、ＰＤ−１との相互作用を介してシグナル伝達する他の分子の治療的標的化は、強く興味を持たれる領域である。
【０００５】
ＰＤ−Ｌ１は、多くのがんにおいて過剰発現され、予後不良と関連する場合が多い（Okazaki T等, Intern. Immun. 2007 19(7):813）（Thompson RH等, Cancer Res 2006, 66(7):3381）。興味深いことに、腫瘍反応性Ｔ細胞上のＰＤ−１の上方調節が、障害された抗腫瘍免疫応答に寄与し得ることを示す、正常組織中のＴリンパ球及び末梢血Ｔリンパ球とは対照的に、腫瘍浸潤性Ｔリンパ球の大部分は、ＰＤ−１を優勢に発現する（Blood 2009 114(8):1537）。これは、Ｔ細胞活性化の減弱及び免疫監視の回避を生じるための、ＰＤ−１発現Ｔ細胞と相互作用するＰＤ−Ｌ１発現腫瘍細胞によって媒介されるＰＤ−Ｌ１シグナル伝達の活用に起因し得る（Sharpe等, Nat Rev 2002）（Keir ME等, 2008 Annu. Rev. Immunol. 26:677）。したがって、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１相互作用の阻害は、腫瘍のＣＤ８＋Ｔ細胞媒介性死滅を増強し得る。
【０００６】
その直接的リガンド（例えば、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２）を介したＰＤ−１軸シグナル伝達の阻害は、がんの治療のためのＴ細胞免疫（例えば、腫瘍免疫）を増強するための手段として提案されてきた。さらに、結合パートナーＢ７−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害することによって、Ｔ細胞免疫と類似の増強が観察されている。さらに、ＰＤ−１シグナル伝達の阻害を、腫瘍細胞において調節解除される他のシグナル伝達経路（例えば、ＭＡＰＫ経路、「ＭＥＫ」）と組み合わせることで、治療有効性をさらに増強し得る。しかし、最適な治療的処置は、ＰＤ−１遮断単独によっては提供されない独自の免疫増強特性を任意選択的にさらに含む、腫瘍増殖を直接阻害する薬剤と、ＰＤ−１受容体／リガンド相互作用の遮断を組み合わせる。種々のがんの発達を治療、安定化、予防及び／又は遅延させるためのかかる最適な療法が、なおも必要とされている。
【０００７】
本明細書に開示される全ての参考文献、刊行物及び特許出願は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される。
【発明の概要】
【０００８】
一態様では、有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。
【０００９】
別の一態様では、有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体の組合せを投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強する方法が、本明細書で提供される。一部の実施態様では、この個体中のＣＤ８  Ｔ細胞は、この組合せの投与の前と比較して増強されたプライミング、活性化、増殖及び／又は細胞溶解活性を有する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞活性化は、この組合せの投与の前と比較して上昇した頻度のγ−ＩＦＮ＋ＣＤ８  Ｔ細胞及び／又は増強された細胞溶解活性によって特徴付けられる。一部の実施態様では、ＣＤ８  Ｔ細胞の数は、この組合せの投与の前と比較して上昇する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞は、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞である。
【００１０】
別の一態様では、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための医薬の製造におけるヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニストの使用であって、医薬は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択の薬学的に許容される担体を含み、治療は、抗ＣＤ２０抗体及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた医薬の投与を含む、使用が、本明細書で提供される。
【００１１】
別の一態様では、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための医薬の製造における抗ＣＤ２０抗体の使用であって、医薬は、抗ＣＤ２０抗体及び任意選択の薬学的に許容される担体を含み、治療は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせた医薬の投与を含む、使用が、本明細書で提供される。
【００１２】
別の一態様では、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させる際の使用のための、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む組成物であって、治療は、第２の組成物と組み合わせたこの組成物の投与を含み、第２の組成物は、抗ＣＤ２０抗体及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む、組成物が、本明細書で提供される。
【００１３】
別の一態様では、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させる際の使用のための、抗ＣＤ２０抗体及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む組成物であって、治療は、第２の組成物と組み合わせたこの組成物の投与を含み、第２の組成物は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む、組成物が、本明細書で提供される。
【００１４】
別の一態様では、がんを有する個体において免疫機能を増強するための医薬の製造における、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニストの使用であって、医薬は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択の薬学的に許容される担体を含み、この治療は、抗ＣＤ２０抗体及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせたこの医薬の投与を含む、使用、が本明細書で提供される。一部の実施態様では、この個体中のＣＤ８  Ｔ細胞は、この組合せの投与の前と比較して増強されたプライミング、活性化、増殖及び／又は細胞溶解活性を有する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞活性化は、この組合せの投与の前と比較して上昇した頻度のγ−ＩＦＮ＋ＣＤ８  Ｔ細胞及び／又は増強された細胞溶解活性によって特徴付けられる。一部の実施態様では、ＣＤ８  Ｔ細胞の数は、この組合せの投与の前と比較して上昇する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞は、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞である。
【００１５】
別の一態様では、がんを有する個体において免疫機能を増強するための医薬の製造における、抗ＣＤ２０抗体の使用であって、この医薬は、抗ＣＤ２０抗体及び任意選択の薬学的に許容される担体を含み、この治療は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択的の薬学的に許容される担体を含む組成物と組み合わせたこの医薬の投与を含む、使用が本明細書で提供される。一部の実施態様では、この個体中のＣＤ８  Ｔ細胞は、この組合せの投与の前と比較して増強されたプライミング、活性化、増殖及び／又は細胞溶解活性を有する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞活性化は、この組合せの投与の前と比較して上昇した頻度のγ−ＩＦＮ＋ＣＤ８  Ｔ細胞及び／又は増強された細胞溶解活性によって特徴付けられる。一部の実施態様では、ＣＤ８  Ｔ細胞の数は、この組合せの投与の前と比較して上昇する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞は、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞である。
【００１６】
別の一態様では、がんを有する個体において免疫機能を増強することにおける使用のための、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む組成物であって、この治療は、第２の組成物と組み合わせたこの組成物の投与を含み、この第２の組成物は、抗ＣＤ２０抗体及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む、組成物、が本明細書で提供される。一部の実施態様では、この個体中のＣＤ８  Ｔ細胞は、この組合せの投与の前と比較して増強されたプライミング、活性化、増殖及び／又は細胞溶解活性を有する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞活性化は、この組合せの投与の前と比較して上昇した頻度のγ−ＩＦＮ＋ＣＤ８  Ｔ細胞及び／又は増強された細胞溶解活性によって特徴付けられる。一部の実施態様では、ＣＤ８  Ｔ細胞の数は、この組合せの投与の前と比較して上昇する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞は、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞である。
【００１７】
別の一態様では、がんを有する個体において免疫機能を増強することにおける使用のための、抗ＣＤ２０抗体及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む組成物であって、この治療は、第２の組成物と組み合わせたこの組成物の投与を含み、この第２の組成物は、ヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び任意選択の薬学的に許容される担体を含む、組成物が本明細書で提供される。一部の実施態様では、この個体中のＣＤ８  Ｔ細胞は、この組合せの投与の前と比較して増強されたプライミング、活性化、増殖及び／又は細胞溶解活性を有する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞活性化は、この組合せの投与の前と比較して上昇した頻度のγ−ＩＦＮ＋ＣＤ８  Ｔ細胞及び／又は増強された細胞溶解活性によって特徴付けられる。一部の実施態様では、ＣＤ８  Ｔ細胞の数は、この組合せの投与の前と比較して上昇する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞は、抗原特異的ＣＤ８  Ｔ細胞である。
【００１８】
上及び本明細書に記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、このがんは、非固形腫瘍である。一部の実施態様では、このがんは、リンパ腫又は白血病である。一部の実施態様では、この白血病は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）又は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。一部の実施態様では、このリンパ腫は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大Ｂ細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）又は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
【００１９】
上及び本明細書に記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストからなる群から選択される。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−１結合アンタゴニストである。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、そのリガンド結合パートナーへのＰＤ−１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１へのＰＤ−１の結合、ＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合、又はＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２の両方へのＰＤ−１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗体である。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＭＤＸ−１１０６、Ｍｅｒｃｋ  ３４７５、ＣＴ−０１１又はＡＭＰ−２２４である。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストである。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ１の結合、Ｂ７−１へのＰＤ−Ｌ１の結合、又はＰＤ−１及びＢ７−１の両方へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト化抗体又はヒト抗体である。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される。一部の実施態様では、この抗体は、配列番号１５のＨＶＲ−Ｈ１配列、配列番号１６のＨＶＲ−Ｈ２配列及び配列番号３のＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖；並びに配列番号１７のＨＶＲ−Ｌ１配列、配列番号１８のＨＶＲ−Ｌ２配列及び配列番号１９のＨＶＲ−Ｌ３配列を含む軽鎖を含む。一部の実施態様では、この抗体は、配列番号２４若しくは２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストである。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、抗体である。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、１又は複数の非グリコシル化部位突然変異（例えば、置換）を含む抗体（例えば、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体又は抗ＰＤＬ２抗体）である。一部の実施態様では、この置換突然変異には、アミノ酸位置Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５及びＤ２６５（ＥＵ番号付け）における１又は複数の置換が含まれる。一部の���施態様では、この置換突然変異は、Ｎ２９７Ｇ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＤ２６５Ａ（ＥＵ番号付け）からなる群から選択される。一部の実施態様では、この抗体は、ヒトＩｇＧ１である。一部の実施態様では、この抗体（例えば、抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤＬ１抗体又は抗ＰＤＬ２抗体）は、ＥＵ番号付けに従って２９７位においてＡｓｎからＡｌａへの置換を有するヒトＩｇＧ１である。
【００２０】
上及び本明細書に記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、本明細書に記載されるリツキシマブである。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、本明細書に記載されるヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、本明細書に記載されるＧＡ１０１抗体である。一部の実施態様では、このＧＡ１０１は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ヒトＣＤ２０抗体である。一部の実施態様では、このＧＡ１０１抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。一部の実施態様では、このＧＡ１０１抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、このＧＡ１０１抗体は、オビヌツズマブとして公知である。一部の実施態様では、上記ＧＡ１０１抗体は、オビヌツズマブではない。一部の実施態様では、このＧＡ１０１抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号５９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブでもオビヌツズマブでもない。
【００２１】
上及び本明細書に記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、多重特異性抗体である。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、二重特異性抗体である。
【００２２】
上及び本明細書に記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体又はＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、持続的に投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体又はＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、断続的に投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの前に投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストと同時に投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの後に投与される。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又は抗ＣＤ２０抗体は、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、移植により、吸入により、髄腔内、脳室内又は鼻腔内投与される。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、３週間毎に１回、１２００ｍｇの用量で個体に静脈内投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、サイクル１の１、８及び１５日目、並びにサイクル２から８の１日目に１回、１０００ｍｇの用量で個体に静脈内投与される。一部の実施態様では、この個体はヒトである。
【００２３】
別の一態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト、及び個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるために抗ＣＤ２０抗体と組み合わせてＰＤ−１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含む添付文書を含むキットが、本明細書で提供される。別の一態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を含むキットが、本明細書で提供される。一部の実施態様では、このキットは、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるためにＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を使用するための説明書を含む添付文書をさらに含む。別の一態様では、抗ＣＤ２０抗体、及び個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるためにＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせて抗ＣＤ２０抗体を使用するための説明書を含む添付文書を含むキットが、本明細書で提供される。別の一態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト、及びがんを有する個体において免疫機能を増強するために抗ＣＤ２０抗体と組み合わせてＰＤ−１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含む添付文書を含むキットが、本明細書で提供される。別の一態様では、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体、並びにがんを有する個体において免疫機能を増強するためにＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を使用するための説明書を含む添付文書を含むキットが、本明細書で提供される。別の一態様では、抗ＣＤ２０抗体、及びがんを有する個体において免疫機能を増強するためにＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせて抗ＣＤ２０抗体を使用するための説明書を含む添付文書を含むキットが、本明細書で提供される。
【００２４】
上及び本明細書に記載される方法、使用、組成物及びキットの一部の実施態様では、この個体はヒトである。一部の実施態様では、この個体は、がんを有する、又はがんと診断されている。一部の実施態様では、この個体は、再発した又は難治性のがん（例えば、非固形腫瘍）に罹患している。一部の実施態様では、この個体は、白血病（例えば、ＣＬＬ、ＡＭＬ）又はリンパ腫（例えば、ＮＨＬ）に罹患している。一部の実施態様では、この個体は、再発した又は難治性の又は以前に治療されていないＣＬＬに罹患している。一部の実施態様では、この個体は、難治性の又は再発した濾胞性リンパ腫又はびまん性大Ｂ細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）に罹患している。
【００２５】
本明細書に記載される種々の実施態様の特性のうち１つ、一部又は全てが組み合わされて、本発明の他の実施態様を形成し得ることを、理解すべきである。本発明のこれら及び他の態様は、当業者に明らかとなる。本発明のこれら及び他の実施態様は、以下の詳細な説明によってさらに記載される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】Ｂ細胞枯渇に対する、抗ＣＤ２０抗体と組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の効果を決定するために実施した実験の結果を示す図である。図１Ａは、ＣＤ１９＋Ｂリンパ球のパーセント（％）を示す。図１Ｂは、ＣＤ４＋Ｔリンパ球のパーセント（％）を示す。図１Ｃは、ＣＤ８＋Ｔリンパ球のパーセント（％）を示す。
【図２】Ａ２０細胞を使用したマウスモデルにおける腫瘍増殖に対する、抗ＣＤ２０抗体と組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の効果を決定するために実施した実験の結果を示す図である。治療群１−４は、実施例２に詳細に記載されている。これらのグラフは、個々のプロット（Ｔｒｅｌｌｉｓプロット）を示し、経時的な各治療の腫瘍容積の「三次スプラインフィット」を示す。これは、治療群毎の全てのデータをフィットさせる最良の滑らかな曲線を選択する数学的アルゴリズムである。
【図３】Ａ２０ｐＲＫ−ＣＤ２０−ＧＦＰ細胞を使用したマウスモデルにおける腫瘍増殖に対する、抗ＣＤ２０抗体と組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１抗体の投与の効果を決定するために実施した実験の結果を示す図である。治療群１−６は、実施例２に詳細に記載されている。これらのグラフは、個々のプロット（Ｔｒｅｌｌｉｓプロット）を示し、経時的な各治療の腫瘍容積の「三次スプラインフィット」を示す。これは、治療群毎の全てのデータをフィットさせる最良の滑らかな曲線を選択する数学的アルゴリズムである。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
Ｉ．一般的技術
本明細書で記載又は言及される技術及び手順は、一般に十分に理解されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ３ｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ等編、（２００３））；シリーズＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）：ＰＣＲ  ２：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ及びＧ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ編（１９９５））、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ編（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ａｎｄ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８７））；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ）編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ及びＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ及びＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３−８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ及びＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ及びＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓ等編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ等編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  （Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ及びＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８−１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ及びＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ及びＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  （Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ及びＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）；並びにＣａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ等編、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９３）に記載された広く利用される方法など、当業者によって、従来の方法を使用して、一般に使用される。
【００２８】
ＩＩ．定義
用語「アンタゴニスト」は、最も広い意味で使用され、本明細書に開示される天然ポリペプチドの生物活性を部分的又は完全にブロック、阻害又は中和する任意の分子を含む。類似の様式で、用語「アゴニスト」は、最も広い意味で使用され、本明細書に開示される天然ポリペプチドの生物活性を模倣する任意の分子を含む。適切なアゴニスト又はアンタゴニスト分子には、具体的には、アゴニスト又はアンタゴニスト抗体又は抗体断片、天然ポリペプチドの断片又はアミノ酸配列変異体、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、有機低分子などが含まれる。ポリペプチドのアゴニスト又はアンタゴニストを同定するための方法は、ポリペプチドを候補アゴニスト又はアンタゴニスト分子と接触させ、そのポリペプチドと通常関連する１又は複数の生物活性における検出可能な変化を測定することを含み得る。
【００２９】
用語「アプタマー」とは、ポリペプチドなどの標的分子に結合することが可能な核酸分子を指す。例えば、本発明のアプタマーは、Ｂ−ｒａｆポリペプチドに、又はＢ−ｒａｆの発現若しくは活性をモジュレートするシグナル伝達経路中の分子に、特異的に結合し得る。アプタマーの生成及び治療的使用は、当該技術分野で十分確立されている。例えば、米国特許第５４７５０９６号、及び加齢性黄斑変性を治療するためのＭａｃｕｇｅｎ（登録商標）（Ｅｙｅｔｅｃｈ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）の治療有効性を参照のこと。
【００３０】
用語「ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト」とは、ＰＤ−１シグナル伝達軸に対するシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全を除去するように、ＰＤ−１軸結合パートナーとその結合パートナーのうちいずれか１又は複数との相互作用を阻害する分子であり、Ｔ細胞機能（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅）を回復又は増強させる結果となる。本明細書で使用する場合、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが含まれる。
【００３１】
用語「ＰＤ−１結合アンタゴニスト」とは、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２などのその結合パートナーのうち１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する分子である。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ−１の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２へのＰＤ−１の結合を阻害する。例えば、ＰＤ−１結合アンタゴニストには、抗ＰＤ−１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する他の分子が含まれる。一実施態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、機能不全性Ｔ細胞をあまり機能不全でなくする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−１を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して媒介される陰性共刺激シグナルを低減させる。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０６である。別の具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＭｅｒｃｋ  ３４７５である。別の具体的な一態様では、ＰＤ−１結合アンタゴニストは、本明細書に記載されるＣＴ−０１１である。
【００３２】
用語「ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト」とは、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、Ｂ７−１などのその結合パートナーのうちいずれか１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する分子である。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、このＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＰＤ−１及び／又はＢ７−１へのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１、Ｂ７−１などのその結合パートナーのうち１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する他の分子が含まれる。一実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、機能不全性Ｔ細胞をあまり機能不全でなくする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ１を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して媒介される陰性共刺激シグナルを低減させる。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。具体的な一態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＹＷ２４３．５５．Ｓ７０である。別の具体的な一態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＤＸ−１１０５である。なお別の具体的な一態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、本明細書に記載されるＭＰＤＬ３２８０Ａである。
【００３３】
用語「ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニスト」とは、ＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１などのその結合パートナーのうちいずれか１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する分子である。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、このＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、ＰＤ−１へのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ２アンタゴニストには、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、オリゴペプチド、並びにＰＤ−Ｌ２とＰＤ−１などのその結合パートナーのうちいずれか１又は複数との相互作用から生じるシグナル伝達を減少、ブロック、阻害、無効化又は干渉する他の分子が含まれる。一実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、機能不全性Ｔ細胞をあまり機能不全でなくする（例えば、抗原認識に対するエフェクター応答を増強する）ように、ＰＤ−Ｌ２を介したシグナル伝達を媒介したＴリンパ球上で発現される細胞表面タンパク質によって又はそれを介して媒介される陰性共刺激シグナルを低減させる。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、イムノアドヘシンである。
【００３４】
用語「機能不全」とは、免疫機能不全の情況において、抗原性刺激に対する免疫応答性が低減した状態を指す。この用語は、抗原認識が生じ得るが、次の免疫応答が、感染又は腫瘍増殖を制御するには効果がない、消耗及び／又はアネルギーの両方の共通要素を含む。
【００３５】
用語「機能不全性」は、本明細書で使用する場合、抗原認識に対する不応性又は無応答性、具体的には、抗原認識を下流のＴ細胞エフェクター機能、例えば、増殖、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２）及び／又は標的細胞死滅へと変換する能力の障害もまた含む。
【００３６】
用語「アネルギー」とは、Ｔ細胞受容体を介して送達される不完全又は不十分なシグナル（例えば、ｒａｓ活性化の非存在下での細胞内Ｃａ＋２における増加）から生じる、抗原刺激に対する無応答性の状態を指す。Ｔ細胞アネルギーは、共刺激の非存在下での抗原による刺激の際にも生じ得、共刺激の情況であっても、抗原による引き続く活性化に対して不応性になる細胞を生じる。この無応答性状態は、インターロイキン−２の存在によってしばしば覆され得る。アネルギー性Ｔ細胞は、クローン増殖を受けず、及び／又はエフェクター機能を獲得しない。
【００３７】
用語「消耗」とは、多くの慢性感染及びがんの間に生じる持続性のＴＣＲシグナル伝達から生じるＴ細胞機能不全の状態としての、Ｔ細胞消耗を指す。これは、不完全な又は欠損したシグナル伝達を介してではなく、持続性のシグナル伝達から生じるという点で、アネルギーから識別される。これは、乏しいエフェクター機能、阻害受容体の持続性の発現、及び機能的エフェクター又はメモリーＴ細胞のものとは異なる転写状態によって規定される。消耗は、感染及び腫瘍の最適な制御を防止する。消耗は、外的陰性調節経路（例えば、免疫調節性サイトカイン）並びに細胞固有の陰性調節（共刺激）経路（ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４など）の両方から生じ得る。
【００３８】
「Ｔ細胞機能を増強する」とは、持続性の若しくは増幅された生物学的機能を有するように、又は消耗した若しくは不活性なＴ細胞を更新若しくは再活性化するようにＴ細胞を誘導する、そのようにさせる又はそのように刺激することを意味する。Ｔ細胞機能を増強することの例には、以下が含まれる：介入前のそのようなレベルと比較した、ＣＤ８＋Ｔ細胞からのγ−インターフェロンの増加した分泌、増加した増殖、増加した抗原応答性（例えば、ウイルス、病原体又は腫瘍のクリアランス）。一実施態様では、増強のレベルは、少なくとも５０％、あるいは６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％又は２００％である。この増強を測定する様式は、当業者に公知である。
【００３９】
「Ｔ細胞機能不全性障害」は、抗原性刺激に対する応答性の減少によって特徴付けられる、Ｔ細胞の障害又は状態である。特定の一実施態様では、Ｔ細胞機能不全性障害は、ＰＤ−１を介した不適切な増加したシグナル伝達と特異的に関連する障害である。別の一実施態様では、Ｔ細胞機能不全性障害は、Ｔ細胞が、アネルギー性であるか、又はサイトカインを分泌する能力、増殖する能力若しくは細胞傷害活性を実行する能力が減少している、障害である。具体的な一態様では、この減少した応答性は、免疫原を発現する病原体又は腫瘍の、効果がない制御を生じる。Ｔ細胞機能不全によって特徴を明らかにされたＴ細胞機能不全性障害の例には、未解決の急性感染、慢性感染及び腫瘍免疫が含まれる。
【００４０】
「腫瘍免疫」とは、腫瘍が免疫認識及びクリアランスを逃れるプロセスを指す。したがって、治療概念として、腫瘍免疫は、かかる回避が減弱され、腫瘍が免疫系によって認識及び攻撃される場合に、「治療される」。腫瘍認識の例には、腫瘍結合、腫瘍収縮及び腫瘍クリアランスが含まれる。
【００４１】
「免疫原性」とは、特定の物質が免疫応答を誘発する能力を指す。腫瘍は、免疫原性であり、腫瘍免疫原性を増強させることは、免疫応答による腫瘍細胞のクリアランスを助ける。腫瘍免疫原性を増強させることの例には、抗ＰＤＬ抗体及び抗ＣＤ２０抗体による治療が含まれる。
【００４２】
「持続性の応答」とは、治療の休止後に腫瘍増殖を低減させることに対する持続性の効果を指す。例えば、腫瘍サイズは、投与期の開始時のサイズと比較して、同じ又はより小さいままであり得る。一部の実施態様では、この持続性の応答は、治療持続期間と少なくとも同じ持続期間、治療持続期間の少なくとも１．５×、２．０×、２．５×又は３．０×の長さの持続期間を有する。
【００４３】
本明細書で使用する場合、「がん」及び「がん性」とは、調節されない細胞増殖によって典型的には特徴を明らかにされた、哺乳動物における生理的状態を指す、又はそれを記述する。この定義には、良性及び悪性がん、並びに休眠腫瘍又は微小転移が含まれる。がんの例には、カルシノーマ、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病が含まれるがこれらに限定されない。かかるがんのより特定の例には、扁平上皮がん、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺癌、及び肺の扁平上皮癌を含む）、腹膜のがん、肝細胞がん、胃（gastric）又は胃（stomach）がん（胃腸がんを含む）、膵臓がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓又は腎がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝細胞癌及び種々の型の頭頸部がん、並びにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ；中悪性度／濾胞性ＮＨＬ；中悪性度びまん性ＮＨＬ；高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ；高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ；高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ；巨大腫瘤病変ＮＨＬ；マントル細胞リンパ腫；ＡＩＤＳ関連リンパ腫；及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症を含む）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）；急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）；ヘアリー細胞白血病；慢性骨髄芽球性白血病；及び移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症と関連する異常な血管増殖、浮腫（例えば、脳腫瘍に関連するもの）、メイグス症候群が含まれるがこれらに限定されない。がんの例には、上記型のがんのいずれかの原発腫瘍、又は上記型のがんのいずれか由来の、第２の部位における転移性腫瘍が含まれ得る。
【００４４】
用語「抗体」には、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ディアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）及び単鎖分子、並びに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ）が含まれる。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書で「抗体」と相互交換可能に使用される。
【００４５】
基本的４鎖抗体単位は、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖から構成されるヘテロテトラマー糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれるさらなるポリペプチドと一緒に、５つの基本的ヘテロテトラマー単位からなり、１０個の抗原結合部位を含むが、ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と組み合わせて、多価集合体を形成するように重合し得る２−５の基本的４鎖単位を含む。ＩｇＧの場合、この４鎖単位は、一般に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１つのジスルフィド共有結合によってＨ鎖に連結されるが、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに依存して、１又は複数のジスルフィド結合によって互いに連結される。各Ｈ及びＬ鎖は、一定の間隔を空けた鎖内ジスルフィド架橋もまた有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端において１つの可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後に、α及びγ鎖の各々については３つの定常ドメイン（ＣＨ）を有し、μ及びεアイソタイプについては４つのＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端において１つの可変ドメイン（ＶＬ）を有し、その後に、その他方の末端において１つの定常ドメインを有する。ＶＬは、ＶＨとアラインされ、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）とアラインされる。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の接触面を形成すると考えられる。ＶＨ及びＶＬのペアリングは、一緒になって、単一抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造及び特性については、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．Ｓｔｉｅｓ、Ａｂｂａ  Ｉ．Ｔｅｒｒ及びＴｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．Ｐａｒｓｏｌｗ（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ、１９９４、ｐ７１及びＣｈａｐｔｅｒ  ６を参照のこと。任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に異なる型のうち１つに割り当てられ得る。それらの重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、異なるクラス又はアイソタイプに割り当てられ得る。それぞれ、α、δ、ε、γ及びμと呼ばれる重鎖を有する、免疫グロブリンの５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭが存在する。γ及びαクラスは、ＣＨ配列及び機能における比較的軽微な差異に基づいて、サブクラスへとさらに分割され、例えば、ヒトは、以下のサブクラス発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を。
【００４６】
抗体の「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の重鎖又は軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ、「ＶＨ」及び「ＶＬ」と呼ばれ得る。これらのドメインは、一般的には、（同じクラスの他の抗体と比較して）抗体の最も可変性の部分であり、抗原結合部位を含む。
【００４７】
用語「可変」とは、可変ドメインの特定のセグメントが、抗体間で配列が広範に異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を規定する。しかし、可変性は、可変ドメインの全スパンを通じて均等に分布するわけではない。その代り、可変性は、軽鎖及び重鎖の両方の可変ドメイン中の、超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれる３つのセグメントに濃縮される。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々、ベータ−シート構造を接続し、一部の場合にはベータ−シート構造の一部を形成するループを形成する３つのＨＶＲによって接続された、ベータ−シート立体配置を主として取る４つのＦＲ領域を含む。各鎖中のＨＶＲは、ＦＲ領域によって、他方の鎖由来のＨＶＲとごく接近して一緒に維持され、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat等, Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)を参照のこと）。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害における抗体の関与を示す。
【００４８】
用語「モノクローナル抗体」とは、本明細書で使用する場合、実質的に均一な抗体の集団から取得された抗体を指し、即ち、この集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る可能な天然に存在する突然変異及び／又は翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原性部位に対するものである。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養物によって合成され、他の免疫グロブリンが夾雑していないという点で、有利である。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から取得されるという抗体の特性を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば以下を含む種々の技術によって作製され得る：ハイブリドーマ法（例えば、Kohler及びMilstein, Nature, 256:495-97 (1975); Hongo等, Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow等, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling等, Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)）、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照のこと）、ファージディスプレイテクノロジー（例えば、Clackson等, Nature, 352: 624-628 (1991); Marks等, J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu等, J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee等, J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)；及びLee等, J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)を参照のこと）、並びにヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座又は遺伝子の一部又は全てを有する動物においてヒト又はヒト様抗体を産生するためのテクノロジー（例えば、国際公開第１９９８／２４８９３号；国際公開第１９９６／３４０９６号；国際公開第１９９６／３３７３５号；国際公開第１９９１／１０７４１号；Jakobovits等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits等, Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann等, Year in Immunol. 7:33 (1993);米国特許第５５４５８０７号；米国特許第５５４５８０６号；米国特許第５５６９８２５号；米国特許第５６２５１２６号；米国特許第５６３３４２５号；及び米国特許第５６６１０１６号；Marks等, Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg等, Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild等, Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); 並びにLonberg 及びHuszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)を参照のこと）。
【００４９】
用語「ネイキッド抗体」とは、細胞傷害性部分又は放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。
【００５０】
用語「全長抗体」、「インタクトな抗体」又は「全抗体」は、相互交換可能に使用されて、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態での抗体を指す。特に、全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものが含まれる。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体であり得る。一部の場合には、インタクトな抗体は、１又は複数のエフェクター機能を有し得る。
【００５１】
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合及び／又は可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片；ディアボディ；直鎖状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Zapata等, Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]を参照のこと）；単鎖抗体分子、並びに抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、及び１つの残留「Ｆｃ」断片、容易に結晶化するその能力を反映する命名、を生じた。このＦａｂ断片は、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と共に、Ｌ鎖全体からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価である、即ち、単一抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有する２つのジスルフィド連結されたＦａｂ断片に大まかに対応し、抗原を架橋することがなおも可能である、単一の大きいＦ（ａｂ’）２断片を生じる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１又は複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端において数個のさらなる残基を有する分、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有する、Ｆａｂ’についての本明細書での命名である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として産生された。抗体断片の他の化学カップリングも公知である。
【００５２】
Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一緒にされた両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域中の配列によって決定され、この領域は、特定の型の細胞上で見出されるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識される。
【００５３】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、緊密に非共有結合的に会合した１つの重鎖及び１つの軽鎖可変領域ドメインのダイマーからなる。これら２つのドメインのフォールディングから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する、６つの超可変ループ（各々Ｈ及びＬ鎖由来の３つのループ）を生じる。しかし、単一可変ドメイン（又は抗原に対して特異的な３つのＨＶＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりもより低い親和性ではあるが、抗原を認識及び結合する能力を有する。
【００５４】
「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」としても略称される「単鎖Ｆｖ」は、単一ポリペプチド鎖へと接続されたＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、このｓＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に、抗原結合にとって所望の構造をｓｃＦｖが形成するのを可能にするポリペプチドリンカーをさらに含む。ｓＦｖの総説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照のこと。
【００５５】
本発明の抗体の「機能的断片」は、インタクトな抗体の抗原結合若しくは可変領域、又は修飾されたＦｃＲ結合能力を保持する若しくは有する抗体のＦｃ領域を一般には含む、インタクトな抗体の一部分を含む。抗体断片の例には、直鎖状抗体、単鎖抗体分子及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。
【００５６】
用語「ディアボディ」とは、Ｖドメインの鎖間ペアリングが達成されるが鎖内ペアリングが達成されないように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５−１０残基）を有するｓＦｖ断片（上述の段落を参照のこと）を構築することによって調製され、それによって、二価断片、即ち、２つの抗原結合部位を有する断片を生じる、小さい抗体断片を指す。二重特異性ディアボディは、２つの抗体のＶＨ及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する、２つの「クロスオーバー」ｓＦｖ断片のヘテロダイマーである。ディアボディは、例えば、ＥＰ４０４０９７；国際公開第９３／１１１６１号；Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）中に、より詳細に記載される。
【００５７】
本明細書のモノクローナル抗体には、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する抗体又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同であるが、鎖（複数可）の残部が、別の種に由来する抗体又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、並びにそれらが所望の生物活性を示す限りにおいてかかる抗体の断片が、具体的に含まれる（米国特許第４８１６５６７号；Morrison等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)）。本明細書の目的のキメラ抗体には、抗体の抗原結合領域が、例えば目的の抗原を用いてマカクザルを免疫化することによって産生される抗体から誘導される、ＰＲＩＭＡＴＴＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれる。本明細書で使用する場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【００５８】
非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むキメラ抗体である。一実施態様では、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ（以降定義する）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び／又は能力を有する、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲ由来の残基によって置き換えられた、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（「ＦＲ」）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体中にもドナー抗体中にも見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、結合親和性などの抗体性能をさらに洗練するために行われ得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリン配列のものと対応し、ＦＲ領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のものであるが、これらのＦＲ領域は、例えば結合親和性、異性化、免疫原性などの抗体性能を改善する、１又は複数の個々のＦＲ残基置換を含み得る。ＦＲ中のこれらのアミノ酸置換の数は、典型的には、Ｈ鎖中に６以下、Ｌ鎖中に３以下である。このヒト化抗体は、任意選択的に、典型的にはヒト免疫グロブリンのものである、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分もまた含む。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照のこと。例えば、Ｖａｓｗａｎｉ及びＨａｍｉｌｔｏｎ、Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ、Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５−１１５（１９９８）；Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３：１０３５−１０３８（１９９５）；Ｈｕｒｌｅ及びＧｒｏｓｓ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８−４３３（１９９４）；並びに米国特許第６９８２３２１号及び米国特許第７０８７４０９号もまた参照のこと。
【００５９】
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生され、及び／又は本明細書に開示されるようなヒト抗体を作製するための技術のいずれかを使用して作製された抗体のものと対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に排除する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当該技術分野で公知の種々の技術を使用して産生され得る。Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１（１９９１）。ヒトモノクローナル抗体の調製のために、Ｃｏｌｅ等、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載される方法もまた、利用可能である。ｖａｎ  Ｄｉｊｋ及びｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、５：３６８−７４（２００１）もまた参照のこと。ヒト抗体は、抗原性曝露に応答してかかる抗体を産生するように修飾されているが、その内因性の遺伝子座が無能にされている、トランスジェニック動物、例えば、免疫ゼノマウス（ｘｅｎｏｍｉｃｅ）に抗原を投与することによって調製され得る（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）テクノロジーに関しては、米国特許第６０７５１８１号及び米国特許第６１５０５８４号を参照のこと）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマテクノロジーを介して生成されるヒト抗体に関しては、Ｌｉ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７−３５６２（２００６）もまた参照のこと。
【００６０】
用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」又は「ＨＶ」とは、本明細書で使用する場合、配列が超可変である及び／又は構造的に規定されたループを形成する、抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６つのＨＶＲを含む；３つはＶＨ中（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、３つはＶＬ中（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。天然抗体では、Ｈ３及びＬ３は、最も多様な６つのＨＶＲを示し、特に、Ｈ３は、抗体に繊細な特異性を付与することにおいて独自の役割を果たすと考えられている。例えば、Ｘｕ等、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３：３７−４５（２０００）；Ｊｏｈｎｓｏｎ及びＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１−２５（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）を参照のこと。実際、重鎖のみからなる天然に存在するラクダ科の抗体は、軽鎖の非存在下で、機能的かつ安定である。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３６３：４４６−４４８（１９９３）；Ｓｈｅｒｉｆｆ等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）を参照のこと。
【００６１】
いくつかのＨＶＲ描写が使用されており、本明細書において包含される。カバット相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づいており、最も一般的に使用されるものである（Kabat等, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造的ループの位置に言及している（Chothia及びLesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。ＡｂＭ  ＨＶＲは、カバットのＨＶＲとＣｈｏｔｈｉａの構造的ループとの間の妥協を示しており、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデル化ソフトウェアによって使用されている。「接触（ｃｏｎｔａｃｔ）」ＨＶＲは、入手可能な複雑な結晶構造の解析に基づく。これらのＨＶＲの各々由来の残基は、以下に示される。
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【００６２】
ＨＶＲは、以下のような「拡大ＨＶＲ」を含み得る：ＶＬ中の２４−３６又は２４−３４（Ｌ１）、４６−５６又は５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７又は８９−９６（Ｌ３）並びにＶＨ中の２６−３５（Ｈ１）、５０−６５又は４９−６５（Ｈ２）及び９３−１０２、９４−１０２又は９５−１０２（Ｈ３）。これらの可変ドメイン残基は、これらの定義の各々について、Ｋａｂａｔ等、上記に従って番号付けされる。
【００６３】
表現「カバットと同様の可変ドメイン残基番号付け」又は「カバットと同様のアミノ酸位置番号付け」及びそれらのバリエーションは、Ｋａｂａｔ等、上記中の抗体のコンパイルの重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインのために使用される番号付け系を指す。この番号付け系を使用して、実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ若しくはＨＶＲの短縮又はそれら中への挿入に対応する、より少ない又はさらなるアミノ酸を含み得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後の単一アミノ酸挿入（カバットに従う残基５２ａ）及び重鎖ＦＲの残基８２の後の挿入された残基（例えば、カバットに従う残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含み得る。残基のカバット番号付けは、抗体の配列と「標準的な」カバット番号付けされた配列との相同性の領域におけるアラインメントによって、所与の抗体について決定され得る。
【００６４】
「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるようなＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００６５】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」又は「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も共通して存在するアミノ酸残基を示すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ等、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ  Ｅｄ．  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）と同様のサブグループである。例がＶＬについて含まれ、このサブグループは、Ｋａｂａｔ等、上記と同様の、サブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ又はカッパＩＶであり得る。さらに、ＶＨについて、このサブグループは、Ｋａｂａｔ等、上記と同様の、サブグループＩ、サブグループＩＩ又はサブグループＩＩＩであり得る。あるいは、ヒトコンセンサスフレームワークは、例えば、ドナーフレームワーク配列を種々のヒトフレームワーク配列の収集とアラインさせることによって、ドナーフレームワークに対するその相同性に基づいてヒトフレームワーク残基が選択される場合に、その特定の残基において上記から誘導され得る。ヒト免疫グロブリンフレームワーク「から誘導される」アクセプターヒトフレームワーク、又はヒトコンセンサスフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含み得るか、又は既存のアミノ酸配列変化を含み得る。一部の実施態様では、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下又は２以下である。
【００６６】
「ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔ等、上記の可変重鎖サブグループＩＩＩ中のアミノ酸配列から取得されるコンセンサス配列を含む。一実施態様では、このＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークのアミノ酸配列は、以下の配列の各々の少なくとも一部分又は全てを含む：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（ＨＣ−ＦＲ１）（配列番号４）、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（ＨＣ−ＦＲ２）、（配列番号５）、ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（ＨＣ−ＦＲ３、配列番号６）、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（ＨＣ−ＦＲ４）、（配列番号７）。
【００６７】
「ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワーク」は、Ｋａｂａｔ等、上記の可変軽鎖カッパサブグループＩ中のアミノ酸配列から取得されるコンセンサス配列を含む。一実施態様では、このＶＨサブグループＩコンセンサスフレームワークのアミノ酸配列は、以下の配列の各々の少なくとも一部分又は全てを含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（ＬＣ−ＦＲ１）（配列番号１１）、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（ＬＣ−ＦＲ２）（配列番号１２）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（ＬＣ−ＦＲ３）（配列番号１３）、ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（ＬＣ−ＦＲ４）（配列番号１４）。
【００６８】
例えばＦｃ領域の特定の位置における「アミノ酸修飾」とは、特定の残基の置換若しくは欠失、又は特定の残基に隣接する少なくとも１つのアミノ酸残基の挿入を指す。特定の残基に「隣接する」挿入は、その１から２残基以内の挿入を意味する。この挿入は、特定の残基に対してＮ末端又はＣ末端であり得る。本明細書の好ましいアミノ酸修飾は、置換である。
【００６９】
「親和性成熟した」抗体は、その１又は複数のＨＶＲ中に、改変（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性における改善を生じる１又は複数の改変を有するものである。一実施態様では、親和性成熟した抗体は、標的抗原に対して、ナノモル又はさらにはピコモルの親和性を有する。親和性成熟した抗体は、当該技術分野で公知の手順によって産生される。例えば、Ｍａｒｋｓ等、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインシャッフリングによる親和性成熟を記載している。ＨＶＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えば以下によって記載されている：Ｂａｒｂａｓ等  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ等  Ｇｅｎｅ  １６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ等  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）。
【００７０】
本明細書で使用する場合、用語「〜に特異的に結合する」又は「〜に対して特異的である」とは、測定可能かつ再現性のある相互作用、例えば、生体分子を含む分子の不均一な集団の存在下での標的の存在を決定する、標的と抗体との間の結合を指す。例えば、標的（これはエピトープであり得る）に特異的に結合する抗体は、他の標的に結合するよりも、より大きい親和性、結合活性で、より容易に、及び／又はより長い持続期間で、この標的を結合する抗体である。一実施態様では、無関係な標的への抗体の結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、標的への抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施態様では、標的に特異的に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ又は≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施態様では、抗体は、異なる種由来のタンパク質間で保存されたタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の一実施態様では、特異的結合は、排他的な結合を含み得るが、それを必要としない。
【００７１】
本明細書で使用する場合、用語「イムノアドヘシン」は、異種タンパク質（「アドヘシン」）の結合特異性を免疫グロブリン定常ドメインのエフェクター機能と組み合わせる、抗体様分子を指定する。構造的に、イムノアドヘシンは、抗体の抗原認識及び結合部位以外の所望の結合特異性を有するアミノ酸配列（即ち、「異種」である）と、免疫グロブリン定常ドメイン配列との融合物を含む。イムノアドヘシン分子のアドヘシン部分は、典型的には、受容体又はリガンドの結合部位を少なくとも含む近接するアミノ酸配列である。イムノアドヘシン中の免疫グロブリン定常ドメイン配列は、任意の免疫グロブリン、例えば、ＩｇＧ−１、ＩｇＧ−２（ＩｇＧ２Ａ及びＩｇＧ２Ｂを含む）、ＩｇＧ−３若しくはＩｇＧ−４サブタイプ、ＩｇＡ（ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む）、ＩｇＥ、ＩｇＤ又はＩｇＭから取得され得る。これらのＩｇ融合物は、好ましくは、Ｉｇ分子内の少なくとも１つの可変領域の代わりに、本明細書に記載されるポリペプチド又は抗体のドメインの置換を含む。特に好ましい一実施態様では、この免疫グロブリン融合物は、ＩｇＧ１分子のヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３、又はヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３領域を含む。免疫グロブリン融合物の産生については、１９９５年６月２７日に発行された米国特許第５４２８１３０号もまた参照のこと。例えば、本発明の併用療法に有用な第２の医薬として有用なイムノアドヘシンには、免疫グロブリン配列の定常ドメインに融合された、ＰＤ−Ｌ１若しくはＰＤ−Ｌ２の細胞外若しくはＰＤ−１結合部分、あるいはＰＤ−１の細胞外又はＰＤ−Ｌ１若しくはＰＤ−Ｌ２結合部分を含むポリペプチド、例えば、それぞれ、ＰＤ−Ｌ１  ＥＣＤ−Ｆｃ、ＰＤ−Ｌ２  ＥＣＤ−Ｆｃ及びＰＤ−１  ＥＣＤ−Ｆｃが含まれる。Ｉｇ  Ｆｃと細胞表面受容体のＥＣＤとのイムノアドヘシン組合せは、可溶型受容体と呼ばれる場合がある。
【００７２】
「融合タンパク質」及び「融合ポリペプチド」とは、共有結合的に一緒に連結された２つの部分を有するポリペプチドを指し、これらの部分の各々は、異なる特性を有するポリペプチドである。この特性は、生物特性、例えば、インビトロ又はインビボでの活性であり得る。この特性は、単純な化学的又は物理的特性、例えば、標的分子への結合、反応の触媒などでもあり得る。これら２つの部分は、単一のペプチド結合によって直接、又はペプチドリンカーを介してであるが互いにリーディングフレームに、連結され得る。
【００７３】
「ＰＤ−１オリゴペプチド」、「ＰＤ−Ｌ１オリゴペプチド」又は「ＰＤ−Ｌ２オリゴペプチド」は、本明細書に記載されるように、それぞれ受容体、リガンド又はシグナル伝達成分を含む、それぞれＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２陰性共刺激ポリペプチドに好ましくは特異的に結合するオリゴペプチドである。かかるオリゴペプチドは、公知のオリゴペプチド合成方法を使用して化学的に合成され得、又は組換えテクノロジーを使用して調製若しくは精製され得る。かかるオリゴペプチドは、通常、少なくとも約５アミノ酸長、あるいは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００アミノ酸長又はそれ超である。かかるオリゴペプチドは、周知の技術を使用して同定され得る。これに関して、ポリペプチド標的に特異的に結合することが可能なオリゴペプチドについてオリゴペプチドライブラリーをスクリーニングするための技術が、当該技術分野で周知であることに留意されたい（例えば、米国特許第５５５６７６２号、米国特許第５７５０３７３号、米国特許第４７０８８７１号、米国特許第４８３３０９２号、米国特許第５２２３４０９号、米国特許第５４０３４８４号、米国特許第５５７１６８９号、米国特許第５６６３１４３号；ＰＣＴ国際公開第８４／０３５０６号及び国際公開第８４／０３５６４号；Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 81:3998-4002 (1984)；Geysen等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 82:178-182 (1985)；Geysen等, Synthetic Peptides as Antigens, 130-149 (1986)；Geysen等, J. Immunol. Meth., 102:259-274 (1987)；Schoofs等, J. Immunol., 140:611-616 (1988)、Cwirla, S. E.等 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6378 (1990)；Lowman, H.B.等Biochemistry, 30:10832 (1991)；Clackson, T.等 Nature, 352: 624 (1991)；Marks, J. D.等, J. Mol. Biol., 222:581 (1991)；Kang, A.S.等 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8363 (1991)並びにSmith, G. P., Current Opin. Biotechnol., 2:668 (1991)を参照のこと）。
【００７４】
「ブロッキング」抗体又は「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原の生物活性を阻害又は低減させるものである。一部の実施態様では、ブロッキング抗体又はアンタゴニスト抗体は、実質的に又は完全に、抗原の生物活性を阻害する。本発明の抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、抗原刺激に対する機能不全性状態からＴ細胞による機能的応答（例えば、増殖、サイトカイン産生、標的細胞死滅）を回復させるように、ＰＤ−１を介したシグナル伝達をブロックする。
【００７５】
「アゴニスト」又は活性化抗体は、それが結合する抗原によるシグナル伝達を増強又は開始させるものである。一部の実施態様では、アゴニスト抗体は、天然リガンドの存在なしに、シグナル伝達を引き起こす又は活性化する。
【００７６】
本明細書で、用語「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位におけるアミノ酸残基から又はＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付け系に従って残基４４７）は、例えば、抗体の産生若しくは精製の間に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって、除去され得る。したがって、インタクトな抗体の組成物は、全てのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、並びにＫ４４７残基あり及びなしの抗体の混合物を有する抗体集団を含み得る。本発明の抗体における使用のための適切な天然配列Ｆｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が含まれる。
【００７７】
「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述する。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、これには、これらの受容体の対立遺伝子変異体及び選択的スプライス形態を含むＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体が含まれ、ＦｃγＲＩＩ受容体には、その細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有する、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシン−ベース阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)を参照のこと。ＦｃＲは、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ等、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；並びにｄｅ  Ｈａａｓ等、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）に概説される。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書の用語「ＦｃＲ」によって包含される。
【００７８】
用語「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」には、胎児への母体ＩｇＧの移行を担う新生児受容体ＦｃＲｎもまた含まれる。Ｇｕｙｅｒ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４）。ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は、公知である（例えば、Ghetie及びWard, Immunol. Today 18: (12): 592-8 (1997)；Ghetie等, Nature Biotechnology 15 (7): 637-40 (1997)；Hinton等, J. Biol. Chem. 279 (8): 6213-6 (2004)；国際公開第２００４／９２２１９号（Ｈｉｎｔｏｎ等））を参照のこと。ＦｃＲｎへのインビボ結合及びヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスジェニックマウス若しくはトランスフェクトされたヒト細胞株において、又は変異体Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与される霊長類において、アッセイされ得る。国際公開第２００４／４２０７２号（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合を改善又は減退させた抗体変異体を記述している。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）もまた参照のこと。
【００７９】
語句「実質的に低減された」又は「実質的に異なる」は、本明細書で使用する場合、２つの数値（一般に、一方は分子と関連し、他方は参照／コンパレータ分子と関連する）間の十分に高い程度の差異を示し、その結果、当業者は、これら２つの値間の差異を、これらの値（例えばＫｄ値）によって測定された生物特性の情況内で統計的に有意であるとみなす。これら２つの値間の差異は、例えば、参照／コンパレータ分子についての値の関数として、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超及び／又は約５０％超である。
【００８０】
用語「実質的に類似」又は「実質的に同じ」は、本明細書で使用する場合、２つの数値（例えば、一方は本発明の抗体と関連し、他方は参照／コンパレータ抗体と関連する）間の十分に高い程度の類似性を示し、その結果、当業者は、これら２つの値間の差異を、これらの値（例えばＫｄ値）によって測定された生物特性の情況内でほとんど又は全く生物学的に及び／又は統計的に有意でないとみなす。これら２つの値間の差異は、例えば、参照／コンパレータ値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満及び／又は約１０％未満である。
【００８１】
「担体」には、本明細書で使用する場合、使用される投薬量及び濃度においてそれに曝露されている細胞又は哺乳動物にとって非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤が含まれる。しばしば、生理学的に許容される担体は、ｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例には、以下が含まれる：バッファー、例えば、ホスフェート、シトレート及び他の有機酸；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む、単糖類、二糖類及び他の糖（炭水化物）；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖アルコール、例えば、マンニトール又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；並びに／又は非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）。
【００８２】
「添付文書」とは、適応症、用法、投薬量、投与、禁忌症、包装された製品と組み合わされる他の医薬、及び／又はかかる医薬の使用に関する警告などについての情報を含む、医薬の市販の包装中に通例含まれる指示に関する情報を含む、医薬の市販の包装中に通例含まれる説明書を指す。
【００８３】
本明細書で使用する場合、用語「治療」とは、臨床病理学の過程の間に、治療されている個体又は細胞の天然の過程を改変するように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、疾患進行の速度を減少させること、病状を改善又は緩和すること、及び寛解又は予後の改善が含まれる。例えば、個体は、がん性細胞の増殖を低減させること（又はがん性細胞を破壊すること）、疾患から生じる症候を減少させること、疾患に罹患している者の生活の質を増加させること、疾患を治療するために必要とされる他の薬物療法の用量を減少させること、疾患の進行を遅延させること、及び／又は個体の生存を延長させることが含まれるがこれらに限定されない、がんと関連する１又は複数の症候が軽減又は排除される場合に、首尾よく「治療される」。
【００８４】
本明細書で使用する場合、「疾患の進行を遅延させる」とは、疾患（例えば、がん）の発達を延期する、邪魔する、減速する、遅らせる、安定化する、及び／又は先延ばしにすることを意味する。この遅延は、治療されている疾患及び／又は個体の履歴に依存して、変動する長さの時間であり得る。当業者に明らかなように、十分な又は顕著な遅延は、個体が疾患を発達させないという点において、事実上、予防を包含し得る。例えば、後期がん、例えば、転移の発達が、遅延され得る。
【００８５】
本明細書で使用する場合、「がんの再発を低減又は阻害する」は、腫瘍若しくはがんの再発又は腫瘍若しくはがんの進行を低減又は阻害することを意味する。本明細書に開示する場合、がんの再発及び／又はがんの進行には、がんの転移が含まれるがこれに限定されない。
【００８６】
「有効量」は、特定の障害の測定可能な改善又は予防をもたらすために必要とされる、少なくとも最小濃度である。本明細書では、有効量は、患者の病状、年齢、性別及び体重、並びに抗体が個体において所望の応答を惹起する能力などの因子に従って変動し得る。有効量は、治療的に有益な効果が治療の任意の毒性又は有害な効果を上回る量でもある。予防的使用について、有益な又は所望の結果には、リスクを排除若しくは低減させること、重症度を低下させること、又は疾患、その合併症、及び疾患の発達の間に示される中間の病理学的表現型の生化学的、組織学的及び／若しくは行動学的症候を含む疾患の発病を遅延させることなどの結果が含まれる。治療的使用について、有益な又は所望の結果には、疾患から生じる１若しくは複数の症候を減少させること、疾患に罹患している者の生活の質を増加させること、疾患を治療するために必要とされる他の薬物療法の用量を減少させること、標的化などを介した別の薬物療法の効果を増強すること、疾患の進行を遅延させること、及び／又は生存を延長させることなどの臨床結果が含まれる。がん又は腫瘍の場合、有効量の薬物は、がん細胞の数を低減させること；腫瘍サイズを低減させること；末梢臓器中へのがん細胞浸潤を阻害すること（即ち、ある程度まで減速させること、又は望ましくは停止させること）；腫瘍転移を阻害すること（即ち、ある程度まで減速させること、又は望ましくは停止させること）；腫瘍増殖をある程度まで阻害すること；及び／又は障害と関連する症候のうち１若しくは複数をある程度まで軽減することにおいて、効果を有し得る。有効量は、１又は複数の投与で投与され得る。本発明の目的のために、薬物、化合物又は薬学的組成物の有効量は、直接的又は間接的にのいずれかで予防的又は治療的処置を達成するために十分な量である。臨床的状況において理解されるように、薬物、化合物又は薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物又は薬学的組成物と併せて達成されてもされなくてもよい。したがって、「有効量」は、１又は複数の治療剤を投与する情況において考慮され得、１又は複数の他の薬剤と併せて所望の結果が達成され得る又は達成される場合、単一の薬剤が有効量で与えられるとみなされ得る。
【００８７】
本明細書で使用する場合、「〜と併せて」とは、別の治療モダリティーに加えた、１つの治療モダリティーの投与を指す。このように、「〜と併せて」とは、個体への他の治療モダリティーの投与の前、その間又はその後の、１つの治療モダリティーの投与を指す。
【００８８】
本明細書で使用する場合、「完全寛解」又は「ＣＲ」とは、全ての標的病変の消失を指す；「部分寛解」又は「ＰＲ」とは、ベースラインＳＬＤを参照とした、標的病変の最長の直径の合計（ＳＬＤ）における少なくとも３０％の減少を指す；「安定」又は「ＳＤ」とは、治療開始以降の最小のＳＬＤを参照とした、ＰＲに適格であるのに不十分な標的病変の収縮、またＰＤに適格であるのに不十分な増加、を指す。
【００８９】
本明細書で使用する場合、「進行性疾患」又は「ＰＤ」とは、治療開始以降に記録された最小のＳＬＤを参照とした、標的病変のＳＬＤにおける少なくとも２０％の増加、又は１若しくは複数の新たな病変の存在を指す。
【００９０】
本明細書で使用する場合、「無増悪生存」（ＰＦＳ）とは、治療されている疾患（例えば、がん）がその間に悪化しない、治療の間及びその後の時間の長さを指す。無増悪生存には、患者が完全寛解又は部分寛解を経験した時間の量、並びに患者が安定を経験した時間の量が含まれ得る。
【００９１】
本明細書で使用する場合、「全奏効率」（ＯＲＲ）とは、完全寛解（ＣＲ）率及び部分寛解（ＰＲ）率の合計を指す。
【００９２】
本明細書で使用する場合、「全生存」とは、特定の持続期間の時間の後に生きているであろう、群中の個体の百分率を指す。
【００９３】
「化学療法剤」は、がんの治療において有用な化学化合物である。化学療法剤の例には、アルキル化剤、例えば、チオテパ及びシクロホスファミド（シトキサン（登録商標））；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）及びウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホルアミド及びトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含む、エチレンイミン及びメチルメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン（ｂｕｌｌａｔａｃｉｎｏｎｅ））；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン（ｂｅｔａ−ｌａｐａｃｈｏｎｅ）；ラパコール（ｌａｐａｃｈｏｌ）；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログトポテカン（ハイカムチン（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；ペメトレキセド；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）及びビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン（ｐａｎｃｒａｔｉｓｔａｔｉｎ）；ＴＬＫ−２８６；ＣＤＰ３２３、経口アルファ−４インテグリン阻害剤；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン（ｓｐｏｎｇｉｓｔａｔｉｎ）；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン（novembichin）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア類、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特に、カリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Nicolaou等, Angew. Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)を参照のこと）；ダインマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダインマイシン；エスペラミシン；並びにネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連の色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルチノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏ��ｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（detorubicin）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射（ドキシル（登録商標））及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサート、ゲムシタビン（ジェムザール（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、エポチロン及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキサート、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン及びイマチニブ（２−フェニルアミノピリミジン誘導体）、並びに他のｃ−Ｋｉｔ阻害剤；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充薬、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトレキサート；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エフロルニチン；酢酸エルピチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ  ａｃｅｔａｔｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド、例えば、メイタンシン及びアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロサキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン（ｒｈｉｚｏｘｉｎ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ（���ｅｒｒａｃｕｒｉｎ  Ａ）、ロリジンＡ及びアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（アブラキサン（商標））及びドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（タキソテール（登録商標））；クロラムブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボリン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体；並びに上記のうち２以上の組合せ、例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン及びプレドニゾロンの併用療法についての略号、ＣＨＯＰ、並びに５−ＦＵ及びロイコボリンと組み合わせてオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を用いる治療レジメンについての略号、ＦＯＬＦＯＸが含まれる。
【００９４】
化学療法剤のさらなる例には、がんの増殖を促進し得るホルモンの効果を調節、低減、ブロック又は阻害するように作用し、全身性又は全身治療の形態である場合が多い、抗ホルモン剤が含まれる。これらは、ホルモン自体であり得る。例には、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びトレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））を含む、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体下方制御因子（ＥＲＤ）；エストロゲン受容体アンタゴニスト、例えば、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））；卵巣を抑制又はシャットダウンするように機能する薬剤、例えば、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト、例えば、酢酸リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリン及びトリプトレリン；抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド及びビカルタミド；並びに副腎においてエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、エキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））、ホルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））及びアナストロゾ−ル（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））などが含まれる。さらに、化学療法剤のかかる定義には、ビスホスホネート、例えば、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）又はＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））又はリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路中の遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ及び上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）など；ワクチン、例えば、ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；抗エストロゲン、例えば、フルベストラント；Ｋｉｔ阻害剤、例えば、イマチニブ又はＥＸＥＬ−０８６２（チロシンキナーゼ阻害剤）；ＥＧＦＲ阻害剤、例えば、エルロチニブ又はセツキシマブ；抗ＶＥＧＦ阻害剤、例えば、ベバシズマブ；イリノテカン；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ラパチニブ及び二トシル酸ラパチニブ（ＧＷ５７２０１６としても公知のＥｒｂＢ−２及びＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ低分子阻害剤）；１７ＡＡＧ（ヒートショックタンパク質（Ｈｓｐ）９０毒であるゲルダナマイシン誘導体）、並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体が含まれる。
【００９５】
本明細書で使用する場合、用語「サイトカイン」とは、別の細胞に対して細胞間メディエーターとして作用する、又はそのタンパク質を産生する細胞に対して自己分泌効果を有する、１つの細胞集団によって放出されるタンパク質を一般に指す。かかるサイトカインの例には、リンホカイン、モノカイン；インターロイキン（「ＩＬ」）、例えば、ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２を含む、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ−Ｆ、ＩＬ−１８からＩＬ−２９（例えばＩＬ−２３）、ＩＬ−３１；腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ−α又はＴＮＦ−β、ＴＧＦ−β１−３；並びに白血病阻害性因子（「ＬＩＦ」）、毛様体神経栄養因子（「ＣＮＴＦ」）、ＣＮＴＦ様サイトカイン（「ＣＬＣ」）、カルジオトロフィン（「ＣＴ」）及びｋｉｔリガンド（「ＫＬ」）を含む他のポリペプチド因子が含まれる。
【００９６】
本明細書で使用する場合、用語「ケモカイン」とは、白血球の走化性及び活性化を選択的に誘導する能力を有する可溶型因子（例えば、サイトカイン）を指す。これらは、血管新生、炎症、創傷治癒及び腫瘍発生のプロセスもまた誘発する。ケモカインの例には、ＩＬ−８、マウスケラチノサイト化学誘引物質（ＫＣ）のヒトホモログが含まれる。
【００９７】
「ＣＤ２０」とは、本明細書で使用する場合、ヒトＢリンパ球抗原ＣＤ２０（ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５及びＬＦ５としても公知；その配列は、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースエントリー番号Ｐ１１８３６によって特徴付けられる）を指し、これは、プレＢ及び成熟Ｂリンパ球上に位置するおよそ３５ｋＤの分子量を有する疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine, M.A.等, J. Biol. Chem. 264(19) (1989 11282-11287；Tedder, T.F.等, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-12；Stamenkovic, I.等, J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-80；Einfeld, D.A.等, EMBO J. 7 (1988) 711-7；Tedder, T.F.等, J. Immunol. 142 (1989) 2560-8）。対応するヒト遺伝子は、ＭＳ４Ａ１としても公知の、膜貫通４−ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１である。この遺伝子は、膜貫通４Ａ遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。この新生タンパク質ファミリーのメンバーは、共通の構造的特徴及び類似のイントロン／エクソンスプライス境界によって特徴を明らかにされ、造血細胞及び非リンパ系組織間で独自の発現パターンを示す。この遺伝子は、Ｂ細胞の発生及び形質細胞への分化において役割を果たすＢリンパ球表面分子をコードする。このファミリーメンバーは、ファミリーメンバーのクラスター間で、１１ｑ１２に局在する。この遺伝子の選択的スプライシングは、同じタンパク質をコードする２つの転写変異体を生じる。
【００９８】
用語「ＣＤ２０」及び「ＣＤ２０抗原」は、本明細書で相互交換可能に使用され、これには、細胞によって天然に発現される又はＣＤ２０遺伝子でトランスフェクトされた細胞上で発現される、ヒトＣＤ２０の任意の変異体、アイソフォーム及び種ホモログが含まれる。ＣＤ２０抗原への本発明の抗体の結合は、ＣＤ２０を不活性化することによって、ＣＤ２０を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）の死滅を媒介する。ＣＤ２０を発現する細胞の死滅は、以下の機構のうち１又は複数によって生じ得る：細胞死／アポトーシス誘導、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ。
【００９９】
ＣＤ２０の同義語には、当該技術分野で認識されるように、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５及びＬＦ５が含まれる。
【０１００】
本発明に従う用語「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体である。ＣＤ２０抗原への抗ＣＤ２０抗体の結合特性及び生物活性に依存して、２つの型の抗ＣＤ２０抗体（Ｉ形及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）が、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．等、Ｂｌｏｏｄ  １０３（２００４）２７３８−２７４３；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．等、Ｂｌｏｏｄ  １０１（２００３）１０４５−１０５２に従って識別され得る、表１を参照のこと。
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【０１０１】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示されるキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示される）及びＡＴ８０  ＩｇＧ１が含まれる。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的ＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して、減少したＣＤＣ（ＩｇＧ１アイソタイプの場合）を有する。
【０１０２】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、リツキシマブ、ＨＩ４７  ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６  ＩｇＧ１（国際公開第２００５／１０３０８１号に開示される）、２Ｆ２  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号及び国際公開第２００５／１０３０８１号に開示される）及び２Ｈ７  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０５６３１２号に開示される）が含まれる。
【０１０３】
本発明に従うアフコシル化された抗ＣＤ２０抗体は、好ましくは、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、より好ましくは、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に記載されるようなアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【０１０４】
「リツキシマブ」抗体（参照抗体；Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例）は、ヒトＣＤ２０抗原に対する、遺伝子操作されたキメラヒトガンマ１マウス定常ドメイン含有モノクローナル抗体である。しかし、この抗体は、糖鎖操作もアフコシル化もされておらず、したがって、少なくとも８５％のフコースの量を有する。このキメラ抗体は、ヒトガンマ１定常ドメインを含み、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに譲渡された、１９９８年４月１７日に発行された米国特許第５７３６１３７号（Ａｎｄｅｒｓｅｎ等）において名称「Ｃ２Ｂ８」によって同定される。リツキシマブは、再発した又は難治性の低悪性度又は濾胞性の、ＣＤ２０陽性のＢ細胞非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療のために承認されている。インビトロ作用機序研究は、リツキシマブがヒト補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を示すことを示している（Reff, M.E. 等, Blood 83(2) (1994) 435-445）。さらに、リツキシマブは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイにおいて活性を示す。
【０１０５】
用語「ＧＡ１０１抗体」とは、本明細書で使用する場合、ヒトＣＤ２０を結合する以下の抗体のうちいずれか１つを指す：（１）配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体：（２）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体、（３）配列番号５８のアミノ酸配列及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む抗体；（４）オビヌツズマブとして公知の抗体、又は（５）配列番号５８のアミノ酸配列と、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号５９のアミノ酸配列と、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体。一実施態様では、このＧＡ１０１抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ抗体である。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
【０１０６】
用語「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」とは、ＩｇＧ１由来のヒト定常ドメインとのキメラ化及びその後のヒト化（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号を参照のこと）によって、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１（マウス重鎖の可変領域（ＶＨ）：配列番号３０；マウス軽鎖の可変領域（ＶＬ）：配列番号３１−Poppema, S.及びVisser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139を参照のこと）から取得された、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に開示されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体を指す。これらの「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に詳細に開示されている。
【０１０７】
一実施態様では、この「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号３２から配列番号４８（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２からＢ−ＨＨ９及びＢ−ＨＬ８からＢ−ＨＬ１７に対応する）の群から選択される重鎖の可変領域（ＶＨ）を有する。具体的な一実施態様では、かかる可変ドメインは、配列番号３２、３３、３６、３８、４０、４２及び４４（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２、ＢＨＨ−３、Ｂ−ＨＨ６、Ｂ−ＨＨ８、Ｂ−ＨＬ８、Ｂ−ＨＬ１１及びＢ−ＨＬ１３に対応する）からなる群から選択される。具体的な一実施態様では、この「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号４９の軽鎖の可変領域（ＶＬ）（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶ１に対応する）を有する。具体的な一実施態様では、この「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号３６の重鎖の可変領域（ＶＨ）（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ６に対応する）及び配列番号４９の軽鎖の可変領域（ＶＬ）（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶ１に対応する）を有する。さらに、一実施態様では、このヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、ＩｇＧ１抗体である。本発明によれば、かかるアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、国際公開第２００５／０４４８５９号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００７／０３１８７５号、Ｕｍａｎａ，Ｐ．等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６−１８０及び国際公開第９９／１５４３４２号に記載される手順に従って、Ｆｃ領域において糖鎖操作（ＧＥ）される。一実施態様では、このアフコシル化された糖鎖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１は、Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１  ＧＥである。一実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、オビヌツズマブ（推奨ＩＮＮ、WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453)である。本明細書で使用する場合、オビヌツズマブは、ＧＡ１０１又はＲＯ５０７２７５９と同義である。これは、全ての以前のバージョン（例えば、Vol. 25, No. 1, 2011, p.75-76）に取って代わり、アフツズマブとして以前に公知である（推奨ＩＮＮ、WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176;Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124）。一部の実施態様では、このヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号６１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体、又はその抗原結合断片である。一部の実施態様では、このヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、配列番号６０の３つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域及び配列番号６１の３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。
重鎖（配列番号６０）
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYAFS YSWINWVRQA PGQGLEWMGR 50
IFPGDGDTDY NGKFKGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARNV 100
FDGYWLVYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 150
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 200
ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK 250
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 300
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 350
YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 400
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG   449
軽鎖（配列番号６１）
DIVMTQTPLS LPVTPGEPAS ISCRSSKSLL HSNGITYLYW YLQKPGQSPQ 50
LLIYQMSNLV SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCAQNLELP 100
YTFGGGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK 150
VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE 200
VTHQGLSSPV TKSFNRGEC                                   219
【０１０８】
一部の実施態様では、このヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、アフコシル化された糖鎖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１である。かかる糖鎖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、Ｆｃ領域中に改変されたパターンのグリコシル化を有し、好ましくは、低減されたレベルのフコース残基を有する。好ましくは、フコースの量は、Ａｓｎ２９７におけるオリゴ糖の総量の６０％以下である（一実施態様では、フコースの量は、４０％と６０％との間であり、別の一実施態様では、フコースの量は、５０％以下であり、なお別の一実施態様では、フコースの量は、３０％以下である）。さらに、Ｆｃ領域のオリゴ糖は、好ましくは二分されている。これらの糖鎖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、増加したＡＤＣＣを有する。
【０１０９】
「リツキシマブと比較した抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比」は、実施例２に記載したように、Ｒａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）と共に、ＦＡＣＳＡｒｒａｙ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）において、Ｃｙ５にコンジュゲートされた抗ＣＤ２０抗体及びＣｙ５にコンジュゲートされたリツキシマブを使用する直接的免疫蛍光測定値（平均蛍光発光強度（ＭＦＩ）が測定される）によって決定され、以下のように計算される：
2017501157.tif 000005
【０１１０】
ＭＦＩは、平均蛍光性強度である。この「Ｃｙ５−標識比」は、本明細書で、分子抗体１つ当たりのＣｙ５−標識分子の数を意味する。
【０１１１】
典型的には、上記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、０．３から０．６の、一実施態様では０．３５から０．５５の、なお別の一実施態様では０．４から０．５の、リツキシマブと比較した上記第２の抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比を有する。
【０１１２】
一実施態様では、上記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体、例えば、ＧＡ１０１抗体は、増加した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する。
【０１１３】
「増加した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する抗体」とは、この用語が本明細書で定義される場合、当業者に公知の任意の適切な方法によって決定されるような増加したＡＤＣＣを有する抗体を意味する。１つの受容されたインビトロＡＤＣＣアッセイは、以下の通りである：
１）このアッセイは、抗体の抗原結合領域によって認識される標的抗原を発現することが公知の標的細胞を使用する；
２）このアッセイは、エフェクター細胞として、ランダムに選択された健康なドナーの血液から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する；
３）このアッセイは、以下のプロトコールに従って実施される：
ｉ）ＰＢＭＣが、標準的な密度遠心分離手順を使用して単離され、ＲＰＭＩ細胞培養培地中に５×１０６細胞／ｍｌで懸濁される；
ｉｉ）標的細胞が、標準的な組織培養方法によって増殖され、９０％よりも高い生存率で指数増殖期から回収され、ＲＰＭＩ細胞培養培地中で洗浄され、１００マイクロキュリーの５１Ｃｒで標識され、細胞培養培地で２回洗浄され、１０５細胞／ｍｌの密度で細胞培養培地中に再懸濁される；
ｉｉｉ）１００マイクロリットルの上記最終標的細胞懸濁物が、９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに移される；
ｉｖ）抗体が、細胞培養培地中で４０００ｎｇ／ｍｌから０．０４ｎｇ／ｍｌまで段階希釈され、５０マイクロリットルの得られた抗体溶液が、９６ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に添加され、上記濃度範囲全体をカバーする３重の種々の抗体濃度で試験される；
ｖ）最大放出（ＭＲ）コントロールについて、標識された標的細胞を含むプレート中の３つのさらなるウェルが、抗体溶液（上記時点ｉｖ）の代わりに、非イオン性洗剤（Ｎｏｎｉｄｅｔ、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）の２％（ＶＮ）水溶液５０マイクロリットルを受ける；
ｖｉ）自然放出（ＳＲ）コントロールについて、標識された標的細胞を含むプレート中の３つのさらなるウェルが、抗体溶液（上記時点ｉｖ）の代わりに、５０マイクロリットルのＲＰＭＩ細胞培養培地を受ける；
ｖｉｉ）次いで、この９６ウェルマイクロタイタープレートは、５０×ｇで１分間遠心分離され、４℃で１時間インキュベートされる；
ｖｉｉｉ）５０マイクロリットルのＰＢＭＣ懸濁物（上記時点ｉ）が、２５：１のエフェクター：標的細胞比を生じるように各ウェルに添加され、プレートが、３７℃で４時間にわたって５％ＣＯ２大気下でインキュベーター中に配置される；
ｉｘ）各ウェルから無細胞上清が回収され、実験的に放出された放射性（ＥＲ）が、ガンマカウンターを使用して定量化される；
ｘ）特異的溶解の百分率が、式（ＥＲ−ＭＲ）／（ＭＲ−ＳＲ）×１００に従って各抗体濃度について計算され、式中、ＥＲは、その抗体濃度について定量化された平均放射性であり（上記時点ｉｘを参照のこと）、ＭＲは、ＭＲコントロール（上記時点Ｖを参照のこと）について定量化された平均放射性であり（上記時点ｉｘを参照のこと）、ＳＲは、ＳＲコントロール（上記時点ｖｉを参照のこと）について定量化された平均放射性である（上記時点ｉｘを参照のこと）；
４）「増加したＡＤＣＣ」は、上記試験した抗体濃度範囲内で観察された特異的溶解の最大百分率における増加、及び／又は上記試験した抗体濃度範囲内で観察された特異的溶解の最大百分率の半分を達成するために必要とされる抗体の濃度における低減のいずれかとして定義される。一実施態様では、ＡＤＣＣにおける増加は、コンパレータ抗体（増加したＡＤＣＣを欠く）が、ＧｎＴＩＩＩを過剰発現するように操作された宿主細胞及び／又はフコシルトランスフェラーゼ８（ＦＵＴ８）遺伝子からの低減された発現を有するように操作された宿主細胞（例えば、ＦＵＴ８ノックアウトのために操作されたものを含む）によって産生されたのではないことを除いて、当業者に公知の同じ標準的な産生、精製、製剤化及び貯蔵方法を使用して、上記アッセイを用いて測定され、同じ抗体によって媒介され、同じ型の宿主細胞によって産生されたＡＤＣＣに対して、相対的である。
【０１１４】
上記「増加したＡＤＣＣ」は、例えば、上記抗体の突然変異及び／又は糖鎖操作によって取得され得る。一実施態様では、この抗体は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ等）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａ等）；米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ等）、Ｕｍａｎａ，Ｐ．等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６−１８０）中の、ＧｌｃＮＡｃによって二分された、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖を有するように糖鎖操作される。別の一実施態様では、この抗体は、タンパク質フコシル化が欠損している宿主細胞（例えば、Ｌｅｃ１３  ＣＨＯ細胞、又はアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）が欠失された若しくはＦＵＴ遺伝子発現がノックダウンされた細胞）において抗体を発現させることによって、Ｆｃ領域に結合された糖（炭水化物）上のフコースを欠くように糖鎖操作される（例えば、Yamane-Ohnuki等 Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)；Kanda, Y.等, Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照のこと）。なお別の一実施態様では、この抗体配列は、ＡＤＣＣを増強するように、そのＦｃ領域において操作されている（例えば、一実施態様では、かかる操作された抗体変異体は、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）において１又は複数のアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む）。
【０１１５】
用語「補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）」とは、補体の存在下での、本発明に従う抗体によるヒト腫瘍標的細胞の溶解を指す。ＣＤＣは、補体の存在下での、本発明に従う抗ＣＤ２０抗体によるＣＤ２０発現細胞の調製物の処理によって測定され得る。ＣＤＣは、抗体が、１００ｎＭの濃度において、４時間後に腫瘍細胞の２０％以上の溶解（細胞死）を誘導する場合に、見出される。一実施態様では、このアッセイは、５１Ｃｒ又はＥｕ標識された腫瘍細胞及び放出された５１Ｃｒ又はＥｕの測定値を用いて実施される。コントロールには、抗体なしの、腫瘍標的細胞と補体とのインキュベーションが含まれる。
【０１１６】
用語「ＣＤ２０」抗原「の発現」は、細胞、例えば、Ｔ細胞又はＢ細胞における顕著なレベルのＣＤ２０抗原の発現を示すことを意図する。一実施態様では、本発明の方法に従って治療される患者は、Ｂ細胞腫瘍又はがん上に顕著なレベルのＣＤ２０を発現する。「ＣＤ２０発現がん」を有する患者は、当該技術分野で公知の標準的なアッセイによって決定され得る。例えば、ＣＤ２０抗原発現は、免疫組織化学的（ＩＨＣ）検出、ＦＡＣＳを使用して、又は対応するｍＲＮＡのＰＣＲベースの検出を介して、測定される。
【０１１７】
用語「ＣＤ２０発現がん」とは、本明細書で使用する場合、がん細胞がＣＤ２０抗原の発現を示す全てのがんを指す。かかるＣＤ２０発現がんは、例えば、以下のがんのいずれかの難治性型を含む、リンパ腫、リンパ性白血病、肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞上皮細胞肺がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚又は眼内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃（stomach）がん、胃（gastric）がん、結腸がん、乳がん、子宮がん、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓又は尿管のがん、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫、又は上記がんのうち１若しくは複数の組合せであり得る。
【０１１８】
一実施態様では、ＣＤ２０発現がんとは、本明細書で使用する場合、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））及びリンパ性白血病を指す。かかるリンパ腫及びリンパ性白血病には、例えば、ａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小型非切れ込み核細胞性リンパ腫／バーキットリンパ腫（風土性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫及び非バーキットリンパ腫を含む）、ｃ）辺縁帯リンパ腫（節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫、ＭＡＬＴ）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫及び脾性辺縁帯リンパ腫を含む）、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞型リンパ腫（Ｂ細胞びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞性リンパ腫、血管中心性リンパ腫−肺性Ｂ細胞性リンパ腫を含む）、ｆ）ヘアリー細胞白血病、ｇ）リンパ球性リンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、ｈ）急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、ｉ）形質細胞腫瘍、形質細胞性骨髄腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ｊ）ホジキン病が含まれる。
【０１１９】
一実施態様では、このＣＤ２０発現がんは、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。別の一実施態様では、このＣＤ２０発現がんは、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキットリンパ腫、ヘアリー細胞白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、辺縁帯リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ＨＩＶ関連リンパ腫、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。
【０１２０】
「再発した又は難治性の」ＣＬＬには、本明細書で使用する場合、少なくとも１回の事前の化学療法を含む治療レジメンを受けたＣＬＬ患者が含まれる。再発した患者は、一般に、事前の化学療法を含む治療レジメンに対する応答の後に進行性疾患を発達させた。難治性患者は、一般に、最後の事前の化学療法を含むレジメンに応答できなかったか、又はその６ヵ月以内に再発した。
【０１２１】
「以前に治療されていない」ＣＬＬには、本明細書で使用する場合、ＣＬＬと診断されているが、一般に、事前の化学療法も免疫療法も受けていない患者が含まれる。緊急事態、局所領域的放射線療法（例えば、圧迫性の徴候又は症候の救済のため）又はコルチコステロイドの履歴を有する患者は、以前に治療されていないとなおもみなされ得る。
【０１２２】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「１つの（ａ）」、「又は（ｏｒ）」及び「この（ｔｈｅ）」は、文脈が明らかに他を示さない限り、複数の指示対象を含む。
【０１２３】
本明細書の「約」値又はパラメータに対する言及は、その値又はパラメータ自体に関する変動を含む（及び記述する）。例えば、「約Ｘ」に言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。
【０１２４】
本明細書に記載される本発明の態様及びバリエーションは、その態様及びバリエーション「からなる」及び／又はそれら「から本質的になる」ことを含むと理解される。
【０１２５】
ＩＩＩ．方法
一態様では、有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。
【０１２６】
本発明の方法は、増強された免疫原性が所望される状態を治療すること、例えば、がんの治療のために腫瘍免疫原性を増加させることにおいて、使用を見出し得る。非固形腫瘍であるがんが含まれるがそれに限定されない種々のがんが治療され得、又はそれらの進行が遅延され得る。一部の実施態様では、このがんは、リンパ腫又は白血病である。一部の実施態様では、この白血病は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）又は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。一部の実施態様では、このリンパ腫は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大Ｂ細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）又は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
【０１２７】
上記がんは、ＣＤ２０発現がんの治療を含め、抗ＣＤ２０抗体及びＰＤ−１軸結合アンタゴニストで治療され得る。一部の実施態様では、治療される個体は、ＣＤ２０発現がんに罹患している。
【０１２８】
一実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、０．３から０．６の、一実施態様では０．３５から０．５５の、別の一実施態様では０．４から０．５の、リツキシマブと比較した上記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体のＲａｊｉ細胞（ＡＴＣＣ−Ｎｏ．ＣＣＬ−８６）上のＣＤ２０への結合能の比を有する。
【０１２９】
一実施態様では、上記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＧＡ１０１抗体である。
【０１３０】
一実施態様では、上記ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、増加した抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する。
【０１３１】
本明細書で提供される、患者におけるがんの治療の方法の特定の実施態様では、このがんは、非固形腫瘍である。一実施態様では、この非固形腫瘍は、ＣＤ２０発現非固形腫瘍である。本明細書で提供される方法で治療され得る例示的な非固形腫瘍には、例えば、白血病又はリンパ腫が含まれる。一実施態様では、この非固形腫瘍は、Ｂ細胞リンパ腫である。
【０１３２】
一実施態様では、このＣＤ２０発現がんは、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
【０１３３】
一部の実施態様では、この個体は、がんを有する、又はがんを発達させるリスクがある。一部の実施態様では、この治療は、治療の休止後に、個体において持続性の応答をもたらす。一部の実施態様では、この個体は、早期段階又は後期段階にあり得るがんを有する。一部の実施態様では、このがんは、転移性である。一部の実施態様では、この個体はヒトである。
【０１３４】
一部の実施態様では、この個体は、哺乳動物、例えば、家畜化動物（例えば、乳牛、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えばサル）、ウサギ及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）である。一部の実施態様では、治療される個体は、ヒトである。
【０１３５】
別の一態様では、有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を投与することを含む、がんを有する個体において免疫機能を増強する方法が、本明細書で提供される。
【０１３６】
一部の実施態様では、この個体中のＣＤ８  Ｔ細胞は、ＰＤ−１経路アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体の投与の前と比較して増強されたプライミング、活性化、増殖及び／又は細胞溶解活性を有する。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞プライミングは、ＣＤ８  Ｔ細胞における上昇したＣＤ４４発現及び／又は増強された細胞溶解活性によって特徴付けられる。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞活性化は、上昇した頻度のγ−ＩＦＮ＋ＣＤ８  Ｔ細胞によって特徴付けられる。一部の実施態様では、このＣＤ８  Ｔ細胞は、抗原特異的Ｔ細胞である。一部の実施態様では、ＰＤ−Ｌ１表面発現を介したシグナル伝達による免疫回避は、阻害される。
【０１３７】
一部の実施態様では、この個体中のがん細胞は、ＰＤ−１経路アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体の投与の前と比較して、ＭＨＣクラスＩ抗原発現の上昇した発現を有する。
【０１３８】
一部の実施態様では、この個体中の抗原提示細胞は、ＰＤ−１経路アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体の投与の前と比較して増強された成熟及び活性化を有する。一部の実施態様では、ここで、この抗原提示細胞は、樹状細胞である。一部の実施態様では、この抗原提示細胞の成熟は、増加した頻度のＣＤ８３＋樹状細胞によって特徴付けられる。一部の実施態様では、この抗原提示細胞の活性化は、樹状細胞上のＣＤ８０及びＣＤ８６の上昇した発現によって特徴付けられる。
【０１３９】
一部の実施態様では、個体におけるサイトカインＩＬ−１０及び／又はケモカインＩＬ−８、マウスＫＣのヒトホモログの血清レベルは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体及び抗ＣＤ２０抗体の投与の前と比較して低減される。
【０１４０】
一部の実施態様では、このがんは、上昇したレベルのＴ細胞浸潤を有する。
【０１４１】
一部の実施態様では、本発明の併用療法は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体の投与を含む。このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体は、当該技術分野で公知の任意の適切な様式で投与され得る。例えば、このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体は、連続的に（異なる時点で）又は同時発生的に（同時に）投与され得る。
【０１４２】
一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト又は抗ＣＤ２０抗体は、持続的に投与される。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト又は抗ＣＤ２０抗体は、断続的に投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの投与の前に投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの投与と同時に投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストの投与の後に投与される。
【０１４３】
一部の実施態様では、さらなる療法を投与することをさらに含む、有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法が、提供される。このさらなる療法は、放射線療法、手術（例えば、腫瘍摘出手術及び乳房切除術）、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法（ｎａｎｏｔｈｅｒａｐｙ）、モノクローナル抗体療法、又は上述の組合せであり得る。このさらなる療法は、アジュバント又はネオアジュバント療法の形態であり得る。一部の実施態様では、このさらなる療法は、低分子酵素阻害剤又は抗転移剤の投与である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、副作用制限剤（例えば、治療の副作用の発生及び／又は重症度を低下させるための目的の薬剤、例えば、抗悪心剤など）の投与である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、放射線療法である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、手術である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、放射線療法及び手術の組合せである。一部の実施態様では、このさらなる療法は、ガンマ照射である。一部の実施態様では、このさらなる療法は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的化する療法、ＨＳＰ９０阻害剤、チューブリン阻害剤、アポトーシス阻害剤及び／又は化学防御剤である。このさらなる療法は、本明細書に上記される化学療法剤のうち１又は複数であり得る。
【０１４４】
このＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体は、同じ投与経路又は異なる投与経路によって投与され得る。一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、移植により、吸入により、髄腔内、脳室内又は鼻腔内投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、静脈内、筋肉内、皮下、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、移植により、吸入により、髄腔内、脳室内又は鼻腔内投与される。有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体が、疾患の予防又は治療のために投与され得る。ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又は抗ＣＤ２０抗体の適切な投薬量は、治療される疾患の型、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体の型、疾患の重症度及び過程、個体の臨床状態、個体の臨床歴及び治療に対する応答、並びに主治医の裁量に基づいて決定され得る。
【０１４５】
一部の実施態様では、がんを治療する方法は、成功の見込みが低くても実施されるが、これは、患者の病歴及び推定された生存予想値を考慮してもやはり、全体的な有益な行動指針を誘導すると思われる。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体及びＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、共投与される、例えば、２つの別々の製剤としての上記抗ＣＤ２０抗体及びＰＤ−１軸結合アンタゴニストの投与。この共投与は、同時に、又はいずれかの順序で連続的であり得る。さらなる一実施態様では、両方（又は全て）の活性剤がそれらの生物活性を同時に発揮する期間が存在する。上記抗ＣＤ２０抗体及びＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、同時に又は連続的にのいずれかで（例えば、連続的注入を通じた静脈内（ｉ．ｖ．）を介して）共投与される。両方の治療剤が連続的に共投与される場合、これらの薬剤は、「特定の期間」分離された２つの別々の投与で投与される。用語、特定の期間は、１時間から１５日間までのいずれかを意味する。例えば、これらの薬剤の一方は、他方の薬剤の投与から約１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２若しくは１日以内、又は２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２若しくは１時間以内に投与され得、一実施態様では、この特定の期間は、１０、９、８、７、６、５、４、３、２若しくは１日間、又は２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２若しくは１時間である。
【０１４６】
一部の実施態様では、同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）投与とは、同時に（ａｔ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ  ｔｉｍｅ）、又は通常は１時間未満の短い期間内を意味する。
【０１４７】
本明細書で使用する場合、投薬期間は、各治療剤が少なくとも１回投与された期間を意味する。投薬サイクルは、通常、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０日間であり、一実施態様では、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４日間、例えば、７又は１４日間である。
【０１４８】
一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、３週間毎に１回、１２００ｍｇの用量で個体に静脈内投与される。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、抗ＣＤ２０抗体と共に投与される。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、サイクル１の１、８及び１５日目、並びにサイクル２から８の１日目に１回、１０００ｍｇの用量で個体に静脈内投与される。
【０１４９】
当該技術分野で公知の又は以下に記載されるＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体のいずれかが、これらの方法において使用され得る。
【０１５０】
ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト
有効量のヒトＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。例えば、ＰＤ−１軸結合アンタゴニストには、ＰＤ−１結合アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニスト及びＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストが含まれる。「ＰＤ−１」の代替的名称には、ＣＤ２７９及びＳＬＥＢ２が含まれる。「ＰＤ−Ｌ１」の代替的名称には、Ｂ７−Ｈ１、Ｂ７−４、ＣＤ２７４及びＢ７−Ｈが含まれる。「ＰＤ−Ｌ２」の代替的名称には、Ｂ７−ＤＣ、Ｂｔｄｃ及びＣＤ２７３が含まれる。一部の実施態様では、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２は、ヒトのＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１及びＰＤ−Ｌ２である。
【０１５１】
一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、そのリガンド結合パートナーへのＰＤ−１の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、このＰＤ−１リガンド結合パートナーは、ＰＤ−Ｌ１及び／又はＰＤ−Ｌ２である。別の一実施態様では、ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ−Ｌ１の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤ−Ｌ１結合パートナーは、ＰＤ−１及び／又はＢ７−１である。別の一実施態様では、このＰＤ−Ｌ２結合アンタゴニストは、その結合パートナーへのＰＤ−Ｌ２の結合を阻害する分子である。具体的な一態様では、ＰＤ−Ｌ２結合パートナーは、ＰＤ−１である。このアンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質又はオリゴペプチドであり得る。
【０１５２】
一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体）である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−１抗体は、ＭＤＸ−１１０６（ニボルマブ、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８及びＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても公知）、Ｍｅｒｃｋ  ３４７５（ペンブロリズマブ、ＭＫ−３４７５、ラムブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）及びＳＣＨ−９００４７５としても公知）及びＣＴ−０１１（ピディリズマブ、ｈＢＡＴ及びｈＢＡＴ−１としても公知）からなる群から選択される。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤ−Ｌ１又はＰＤ−Ｌ２の細胞外又はＰＤ−１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。一部の実施態様では、このＰＤ−１結合アンタゴニストは、ＡＭＰ−２２４（Ｂ７−ＤＣＩｇとしても公知）である。一部の実施態様では、このＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１結合アンタゴニストは、ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＤＸ−１１０５及びＭＥＤＩ４７３６からなる群から選択される。ＢＭＳ−９３６５５９としても公知のＭＤＸ−１１０５は、国際公開第２００７／００５８７４号に記載された抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。抗体ＹＷ２４３．５５．Ｓ７０（それぞれ、配列番号２０及び２１に示される重鎖及び軽鎖可変領域配列）は、国際公開第２０１０／０７７６３４号Ａ１に記載される抗ＰＤ−Ｌ１である。ＭＥＤＩ４７３６は、国際公開第２０１１／０６６３８９号及び米国特許出願公開第２０１３／０３４５５９号に記載された抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。ＯＮＯ−４５３８又はＢＭＳ−９３６５５８としても公知のＭＤＸ−１１０６は、国際公開第２００６／１２１１６８号に記載された抗ＰＤ−１抗体である。ＭＫ−３４７５又はＳＣＨ−９００４７５としても公知のＭｅｒｃｋ  ３７４５は、国際公開第２００９／１１４３３５号に記載された抗ＰＤ−１抗体である。ｈＢＡＴ又はｈＢＡＴ−１としても公知のＣＴ−０１１は、国際公開第２００９／１０１６１１号に記載された抗ＰＤ−１抗体である。Ｂ７−ＤＣＩｇとしても公知のＡＭＰ−２２４は、国際公開第２０１０／０２７８２７号及び国際公開第２０１１／０６６３４２号に記載されたＰＤ−Ｌ２−Ｆｃ融合可溶型受容体である。
【０１５３】
一部の実施態様では、この抗ＰＤ−１抗体は、ＭＤＸ−１１０６である。「ＭＤＸ−１１０６」の代替的名称には、ＭＤＸ−１１０６−０４、ＯＮＯ−４５３８、ＢＭＳ−９３６５５８又はニボルマブが含まれる。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４）である。なおさらなる一実施態様では、配列番号２２由来の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号２３由来の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗ＰＤ−１抗体が提供される。なおさらなる一実施態様では、重鎖及び／又は軽鎖配列を含む単離された抗ＰＤ−１抗体が提供され、ここで、
（ａ）この重鎖配列は、重鎖配列：
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＤＣＫＡＳＧＩＴＦＳＮＳＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＫＲＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＮＤＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２２）、
と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の配列同一性を有し、又は
【０１５４】
（ｂ）この軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＳＮＷＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２３）
と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の配列同一性を有する。
【０１５５】
本発明の方法に有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体の例、及びそれを作製する方法は、本明細書に出典明示により援用されるＰＣＴ特許出願国際公開第２０１０／０７７６３４号Ａ１に記載されている。
【０１５６】
一部の実施態様では、このＰＤ−１軸結合アンタゴニストは、抗ＰＤ−Ｌ１抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＰＤ−Ｌ１とＰＤ−１との間及び／又はＰＤ−Ｌ１とＢ７−１との間の結合を阻害することが可能である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、モノクローナル抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ及び（Ｆａｂ’）２断片からなる群から選択される抗体断片である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト化抗体である。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ヒト抗体である。
【０１５７】
国際公開第２０１０／０７７６３４号Ａ１及び米国特許第８２１７１４９号に記載されるものなどの、本発明において有用な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、かかる抗体を含む組成物を含め、がんを治療するために抗ＣＤ２０抗体と組み合わせて使用され得る。一部の実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１５８】
一実施態様では、この抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドを含有し、ここで、
（ａ）このＨＶＲ−Ｈ１配列は、ＧＦＴＦＳＸ１ＳＷＩＨ（配列番号１）であり；
（ｂ）このＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＡＷＩＸ２ＰＹＧＧＳＸ３ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり；
（ｃ）このＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）であり；
ここでさらに、Ｘ１は、Ｄ又はＧであり；Ｘ２は、Ｓ又はＬであり；Ｘ３は、Ｔ又はＳである。
【０１５９】
具体的な一態様では、Ｘ１はＤであり；Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＴである。別の一態様では、このポリペプチドは、式：（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）に従う、ＨＶＲ間に並置された可変領域重鎖フレームワーク配列をさらに含む。なお別の一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。さらなる一態様では、これらのフレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列のうち少なくとも１つは、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号４）であり
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号５）であり
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号６）であり
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号７）である。
【０１６０】
なおさらなる一態様では、この重鎖ポリペプチドは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む可変領域軽鎖とさらに組み合わされ、ここで、
（ａ）このＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＲＡＳＱＸ４Ｘ５Ｘ６ＴＸ７Ｘ８Ａ（配列番号８）であり；
（ｂ）このＨＶＲ−Ｌ２配列は、ＳＡＳＸ９ＬＸ１０Ｓ（配列番号９）であり；
（ｃ）このＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＱＱＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＰＸ１５Ｔ（配列番号１０）であり；
ここで、さらにＸ４は、Ｄ又はＶであり；Ｘ５は、Ｖ又はＩであり；Ｘ６は、Ｓ又はＮであり；Ｘ７は、Ａ又はＦであり；Ｘ８は、Ｖ又はＬであり；Ｘ９は、Ｆ又はＴであり；Ｘ１０は、Ｙ又はＡであり；Ｘ１１は、Ｙ、Ｇ、Ｆ又はＳであり；Ｘ１２は、Ｌ、Ｙ、Ｆ又はＷであり；Ｘ１３は、Ｙ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであり；Ｘ１４は、Ｈ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであり；Ｘ１５は、Ａ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴである。
【０１６１】
なおさらなる一態様では、Ｘ４はＤであり；Ｘ５はＶであり；Ｘ６はＳであり；Ｘ７はＡであり；Ｘ８はＶであり；Ｘ９はＦであり；Ｘ１０はＹであり；Ｘ１１はＹであり；Ｘ１２はＬであり；Ｘ１３はＹであり；Ｘ１４はＨであり；Ｘ１５はＡである。なおさらなる一態様では、この軽鎖は、式：（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）に従う、ＨＶＲ間に並置された可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列のうち少なくとも１つは、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１１）であり
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１２）であり
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１３）であり
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号１４）である。
【０１６２】
別の一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗原結合断片が提供され、ここで、
（ａ）この重鎖は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、ここでさらに、
（ｉ）このＨＶＲ−Ｈ１配列は、ＧＦＴＦＳＸ１ＳＷＩＨであり；（配列番号１）
（ｉｉ）このＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＡＷＩＸ２ＰＹＧＧＳＸ３ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２）であり
（ｉｉｉ）このＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）であり、
（ｂ）この軽鎖は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、ここでさらに、
（ｉ）このＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＲＡＳＱＸ４Ｘ５Ｘ６ＴＸ７Ｘ８Ａ（配列番号８）であり
（ｉｉ）このＨＶＲ−Ｌ２配列は、ＳＡＳＸ９ＬＸ１０Ｓであり；（配列番号９）かつ
（ｉｉｉ）このＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＱＱＸ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＰＸ１５Ｔであり；（配列番号１０）
ここで、さらにＸ１は、Ｄ又はＧであり；Ｘ２は、Ｓ又はＬであり；Ｘ３は、Ｔ又はＳであり；Ｘ４は、Ｄ又はＶであり；Ｘ５は、Ｖ又はＩであり；Ｘ６は、Ｓ又はＮであり；Ｘ７は、Ａ又はＦであり；Ｘ８は、Ｖ又はＬであり；Ｘ９は、Ｆ又はＴであり；Ｘ１０は、Ｙ又はＡであり；Ｘ１１は、Ｙ、Ｇ、Ｆ又はＳであり；Ｘ１２は、Ｌ、Ｙ、Ｆ又はＷであり；Ｘ１３は、Ｙ、Ｎ、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｆ又はＩであり；Ｘ１４は、Ｈ、Ｖ、Ｐ、Ｔ又はＩであり；Ｘ１５は、Ａ、Ｗ、Ｒ、Ｐ又はＴである。
【０１６３】
具体的な一態様では、Ｘ１はＤであり；Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＴである。別の一態様では、Ｘ４はＤであり；Ｘ５はＶであり；Ｘ６はＳであり；Ｘ７はＡであり；Ｘ８はＶであり；Ｘ９はＦであり；Ｘ１０はＹであり；Ｘ１１はＹであり；Ｘ１２はＬであり；Ｘ１３はＹであり；Ｘ１４はＨであり；Ｘ１５はＡである。なお別の一態様では、Ｘ１はＤであり；Ｘ２はＳであり、Ｘ３はＴであり、Ｘ４はＤであり；Ｘ５はＶであり；Ｘ６はＳであり；Ｘ７はＡであり；Ｘ８はＶであり；Ｘ９はＦであり；Ｘ１０はＹであり；Ｘ１１はＹであり；Ｘ１２はＬであり；Ｘ１３はＹであり；Ｘ１４はＨであり、Ｘ１５はＡである。
【０１６４】
さらなる一態様では、この重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含み、この軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含む。なおさらなる一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる一態様では、この重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は以下である：
ＨＣ−ＦＲ１  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ  （配列番号４）
ＨＣ−ＦＲ２  ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ                          （配列番号５）
ＨＣ−ＦＲ３  ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ                                                                    （配列番号６）
ＨＣ−ＦＲ４  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ                            （配列番号７）。
【０１６５】
なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ    （配列番号１１）
ＬＣ−ＦＲ２  ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ                    （配列番号１２）
ＬＣ−ＦＲ３  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ                                                                  （配列番号１３）
ＬＣ−ＦＲ４  ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ                          （配列番号１４）。
【０１６６】
なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、ヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一実施態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１６７】
なお別の一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）この重鎖は、それぞれ、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号１５）、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６）及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）と少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３配列をさらに含む、又は
（ｂ）この軽鎖は、それぞれ、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１７）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１８）及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号１９）と少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３配列をさらに含む。
【０１６８】
具体的な一態様では、この配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。別の一態様では、この重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含み、この軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含む。なお別の一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる一態様では、この重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ  （配列番号４）
ＨＣ−ＦＲ２  ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ                          （配列番号５）
ＨＣ−ＦＲ３  ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ                                                                    （配列番号６）
ＨＣ−ＦＲ４  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ                            （配列番号７）。
【０１６９】
なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ    （配列番号１１）
ＬＣ−ＦＲ２  ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ                    （配列番号１２）
ＬＣ−ＦＲ３  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ                                                                  （配列番号１３）
ＬＣ−ＦＲ４  ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ                          （配列番号１４）。
【０１７０】
なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、ヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一実施態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１７１】
なおさらなる一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体が提供され、ここで、
（ａ）この重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号２０）、
と少なくとも８５％の配列同一性を有し、又は
（ｂ）この軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２１）
と少なくとも８５％の配列同一性を有する。
【０１７２】
具体的な一態様では、この配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。別の一態様では、この重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含み、この軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含む。なお別の一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。さらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる一態様では、この重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ  （配列番号４）
ＨＣ−ＦＲ２  ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ                          （配列番号５）
ＨＣ−ＦＲ３  ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ                                                                    （配列番号６）
ＨＣ−ＦＲ４  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ                            （配列番号７）。
【０１７３】
なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ    （配列番号１１）
ＬＣ−ＦＲ２  ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ                    （配列番号１２）
ＬＣ−ＦＲ３  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ                                                                  （配列番号１３）
ＬＣ−ＦＲ４  ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ                          （配列番号１４）。
【０１７４】
なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、ヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、原核細胞における産生から生じる。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一実施態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１７５】
別のさらなる一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体であって、
（ａ）この重鎖配列は、
重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４）
と少なくとも８５％の配列同一性を有し、又は
（ｂ）この軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ  ＳＡＳＦ  ＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２１）
と少なくとも８５％の配列同一性を有する、単離された抗ＰＤ−Ｌ１抗体が提供される。
【０１７６】
なおさらなる一実施態様では、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む単離された抗ＰＤＬ１抗体であって、
（ａ）この重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩ  ＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫ（配列番号２８）
と少なくとも８５％の配列同一性を有し、又は
（ｂ）この軽鎖配列は、軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦ  ＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号２９）
と少なくとも８５％の配列同一性を有する、単離された抗ＰＤＬ１抗体が提供される。
【０１７７】
具体的な一態様では、この配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。別の一態様では、この重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含み、この軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含む。なお別の一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。さらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる一態様では、この重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
HC-FR1    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS      （配列番号４）
HC-FR2    WVRQAPGKGLEWV                      （配列番号５）
HC-FR3    RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR    （配列番号６）
HC-FR4    WGQGTLVTVSS                         （配列番号２５）。
【０１７８】
なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
LC-FR1    DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC             （配列番号１１）
LC-FR2    WYQQKPGKAPKLLIY                     （配列番号１２）
LC-FR3    GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC    （配列番号１３）
LC-FR4    FGQGTKVEIKR                          （配列番号１４）。
【０１７９】
なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、ヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる具体的な一態様では、最小のエフェクター機能は、原核細胞における産生から生じる。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一実施態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１８０】
なお別の一実施態様では、この抗ＰＤ−１抗体は、ＭＰＤＬ３２８０Ａである。なおさらなる一実施態様では、配列番号２４由来の重鎖可変領域アミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び／又は配列番号２５由来の軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗ＰＤ−１抗体が提供される。なおさらなる一実施態様では、重鎖及び／又は軽鎖配列を含む単離された抗ＰＤＬ−１抗体であって、
（ａ）この重鎖配列は、重鎖配列：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＨＷＰＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２６）
と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の配列同一性を有し、又は
（ｂ）この軽鎖配列は、
軽鎖配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＳＡＳＦＬＹＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＬＹＨＰＡＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２７）
と、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％又は１００％の配列同一性を有する、単離された抗ＰＤＬ−１抗体が提供される。
【０１８１】
なおさらなる一実施態様では、本発明は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と組み合わせて上記抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかを含む組成物を提供する。
【０１８２】
なおさらなる一実施態様では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖又は重鎖可変領域配列をコードする単離された核酸であって、
（ａ）この重鎖は、それぞれ、ＧＦＴＦＳＤＳＷＩＨ（配列番号１５）、ＡＷＩＳＰＹＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６）及びＲＨＷＰＧＧＦＤＹ（配列番号３）と少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３配列をさらに含み、
（ｂ）この軽鎖は、それぞれ、ＲＡＳＱＤＶＳＴＡＶＡ（配列番号１７）、ＳＡＳＦＬＹＳ（配列番号１８）及びＱＱＹＬＹＨＰＡＴ（配列番号１９）と少なくとも８５％の配列同一性を有する、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３配列をさらに含む、単離された核酸が提供される。
【０１８３】
具体的な一態様では、この配列同一性は、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％である。一態様では、この重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含み、この軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）として、ＨＶＲ間に並置された１又は複数のフレームワーク配列を含む。なお別の一態様では、これらのフレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列に由来する。さらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列は、カバットサブグループＩ、ＩＩ又はＩＩＩ配列に由来する。なおさらなる一態様では、この重鎖フレームワーク配列は、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの重鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＨＣ−ＦＲ１  ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ  （配列番号４）
ＨＣ−ＦＲ２  ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ                          （配列番号５）
ＨＣ−ＦＲ３  ＲＦＴＩＳＡＤＴＳＫＮＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ                                                                    （配列番号６）
ＨＣ−ＦＲ４  ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ                            （配列番号７）。
【０１８４】
なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、カバットカッパＩ、ＩＩ、ＩＩ又はＩＶサブグループ配列に由来する。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列は、ＶＬカッパＩコンセンサスフレームワークである。なおさらなる一態様では、これらの軽鎖フレームワーク配列のうち１又は複数は、以下である：
ＬＣ−ＦＲ１  ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ    （配列番号１１）
ＬＣ−ＦＲ２  ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ                    （配列番号１２）
ＬＣ−ＦＲ３  ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ                                                                  （配列番号１３）
ＬＣ−ＦＲ４  ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ                          （配列番号１４）。
【０１８５】
なおさらなる具体的な一態様では、本明細書に記載される抗体（例えば、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ２抗体）は、ヒト又はマウスの定常領域をさらに含む。なおさらなる一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。なおさらなる具体的な一態様では、このヒト定常領域は、ＩｇＧ１である。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ、ＩｇＧ３からなる群から選択される。なおさらなる一態様では、このマウス定常領域は、ＩｇＧ２Ａである。なおさらなる具体的な一態様では、この抗体は、低減された又は最小のエフェクター機能を有する。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、原核細胞における産生から生じる。なおさらなる具体的な一態様では、この最小のエフェクター機能は、「エフェクターなしＦｃ突然変異」又は非グリコシル化から生じる。なおさらなる一態様では、このエフェクターなしＦｃ突然変異は、定常領域中のＮ２９７Ａ又はＤ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ置換である。
【０１８６】
なおさらなる一態様では、本明細書に記載される抗体のいずれかをコードする単離された核酸が本明細書で提供される。一部の実施態様では、この核酸は、以前に記載した抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−１抗体又は抗ＰＤ−Ｌ２抗体のいずれかをコードする核酸の発現に適切なベクターをさらに含む。なおさらなる具体的な一態様では、このベクターは、核酸の発現に適切な宿主細胞をさらに含む。なおさらなる具体的な一態様では、この宿主細胞は、真核細胞又は原核細胞である。なおさらなる具体的な一態様では、この真核細胞は、哺乳動物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）である。
【０１８７】
抗体又はその抗原結合断片は、当該技術分野で公知の方法を使用して、例えば、以前に記載した抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＰＤ−１抗体若しくは抗ＰＤ−Ｌ２抗体又は抗原結合断片のいずれかをコードする核酸を発現に適切な形態で含む宿主細胞を、かかる抗体又は断片を産生するのに適切な条件下で培養すること、及びこの抗体又は断片を回収することを含むプロセスによって、作製され得る。
【０１８８】
なおさらなる一実施態様では、本発明は、本明細書に提供されるような抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−１若しくは抗ＰＤ−Ｌ２抗体又はそれらの抗原結合断片及び少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む組成物を提供する。一部の実施態様では、個体に投与される抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＰＤ−１若しくは抗ＰＤ−Ｌ２抗体又はそれらの抗原結合断片は、１又は複数の薬学的に許容される担体を含む組成物である。本明細書に記載される又は当該技術分野で公知の薬学的に許容される担体のいずれかが、使用され得る。
【０１８９】
一部の実施態様では、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、約６０ｍｇ／ｍＬの量の抗体、約２０ｍＭの濃度のヒスチジンアセテート、約１２０ｍＭの濃度のショ糖、及び０．０４％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）を含む製剤中にあり、この製剤は、約５．８のｐＨを有する。一部の実施態様では、本明細書に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、約１２５ｍｇ／ｍＬの量の抗体、約２０ｍＭの濃度のヒスチジンアセテート、約２４０ｍＭの濃度のショ糖、及び０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度のポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０）を含む製剤中にあり、この製剤は、約５．５のｐＨを有する。
【０１９０】
抗ＣＤ２０抗体
有効量のＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を個体に投与することを含む、個体においてがんを治療する又はその進行を遅延させるための方法が、本明細書で提供される。当該技術分野で公知の及び本明細書に記載される任意のＣＤ２０抗体が、これらの方法において使用され得る。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、ヒトＣＤ２０に結合する。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、Ｉ型抗体又はＩＩ型抗体である。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、アフコシル化されている。
【０１９１】
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示されるキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示される）及びＡＴ８０  ＩｇＧ１が含まれる。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的ＣＤＣ特性を示す。ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して、減少したＣＤＣ（ＩｇＧ１アイソタイプの場合）を有する。
【０１９２】
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えば、リツキシマブ、ＨＩ４７  ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６  ＩｇＧ１（国際公開第２００５／１０３０８１号に開示される）、２Ｆ２  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号及び国際公開第２００５／１０３０８１号に開示される）及び２Ｈ７  ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０５６３１２号に開示される）が含まれる。
【０１９３】
一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、本明細書に記載されるＧＡ１０１抗体である。一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０は、ヒトＣＤ２０を結合する以下の抗体のうちいずれか１つである：（１）ＧＹＡＦＳＹ（配列番号５０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＦＰＧＤＧＤＴＤ（配列番号５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ＮＶＦＤＧＹＷＬＶＹ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、ＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹ（配列番号５３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＱＭＳＮＬＶＳ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２及びＡＱＮＬＥＬＰＹＴ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体；（２）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体、（３）配列番号５８のアミノ酸配列及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む抗体；（４）オビヌツズマブとして公知の抗体、又は（５）配列番号５８のアミノ酸配列と、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号５９のアミノ酸配列と、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％若しくは９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む抗体。一実施態様では、このＧＡ１０１抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプ抗体である。
【０１９４】
一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＹＳＷＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＦＰＧＤＧＤＴＤＹＮＧＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＶＦＤＧＹＷＬＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５６）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＶＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶ（配列番号５７）
【０１９５】
一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＳＹＳＷＩＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＲＩＦＰＧＤＧＤＴＤＹＮＧＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＮＶＦＤＧＹＷＬＶＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号５８）
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＫＳＬＬＨＳＮＧＩＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＱＭＳＮＬＶＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＡＱＮＬＥＬＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号５９）
【０１９６】
一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。一部の実施態様では、このヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、配列番号６０の３つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖可変領域及び配列番号６１の３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、このヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、配列番号６０の配列を含む重鎖及び配列番号６１の配列を含む軽鎖を含む。
重鎖（配列番号６０）
QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYAFS YSWINWVRQA PGQGLEWMGR 50
IFPGDGDTDY NGKFKGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARNV 100
FDGYWLVYWG QGTLVTVSSA STKGPSVFPL APSSKSTSGG TAALGCLVKD 150
YFPEPVTVSW NSGALTSGVH TFPAVLQSSG LYSLSSVVTV PSSSLGTQTY 200
ICNVNHKPSN TKVDKKVEPK SCDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK 250
DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 300
TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV 350
YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL 400
DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPG   449
軽鎖（配列番号６１）
DIVMTQTPLS LPVTPGEPAS ISCRSSKSLL HSNGITYLYW YLQKPGQSPQ 50
LLIYQMSNLV SGVPDRFSGS GSGTDFTLKI SRVEAEDVGV YYCAQNLELP 100
YTFGGGTKVE IKRTVAAPSV FIFPPSDEQL KSGTASVVCL LNNFYPREAK 150
VQWKVDNALQ SGNSQESVTE QDSKDSTYSL SSTLTLSKAD YEKHKVYACE 200
VTHQGLSSPV TKSFNRGEC                                   219
【０１９７】
一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、アフコシル化された糖鎖操作抗体である。かかる糖鎖操作抗体は、Ｆｃ領域中に改変されたパターンのグリコシル化を有し、好ましくは、低減されたレベルのフコース残基を有する。好ましくは、フコースの量は、Ａｓｎ２９７におけるオリゴ糖の総量の６０％以下である（一実施態様では、フコースの量は、４０％と６０％との間であり、別の一実施態様では、フコースの量は、５０％以下であり、なお別の一実施態様では、フコースの量は、３０％以下である）。さらに、Ｆｃ領域のオリゴ糖は、好ましくは二分されている。これらの糖鎖操作ヒト化抗ＣＤ２０（例えば、Ｂ−Ｌｙ１）抗体は、増加したＡＤＣＣを有する。
【０１９８】
このオリゴ糖成分は、物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する耐性、免疫系との相互作用、薬物動態及び特異的生物活性を含む、治療的糖タンパク質の有効性に関連する特性に顕著に影響を与え得る。かかる特性は、オリゴ糖の存在又は非存在だけでなく、その特定の構造にも依存し得る。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能との間の幾分かの一般化がなされ得る。例えば、特定のオリゴ糖構造は、特定の糖（炭水化物）結合タンパク質との相互作用を介して血流からの糖タンパク質の迅速なクリアランスを媒介するが、その他は、抗体によって結合され得、望ましくない免疫反応を誘発する（Jenkins, N.等, Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-81）。
【０１９９】
哺乳動物細胞は、ヒト適用のために最も適合性の形態でタンパク質をグリコシル化するそれらの能力に起因して、治療的糖タンパク質の産生のために好ましい宿主である（Cumming, D.A.等, Glycobiology 1 (1991) 115-30; Jenkins, N.等, Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-81）。細菌は、タンパク質を非常に稀にしかグリコシル化せず、酵母、糸状菌、昆虫及び植物細胞などの他の型の一般的宿主と同様、血流からの迅速なクリアランス、望ましくない免疫相互作用、及び一部の特定の場合には低減された生物活性と関連する、グリコシル化パターンを生じる。哺乳動物細胞の中で、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、過去２０年間の間に最も一般的に使用されてきた。適切なグリコシル化パターンを与えることに加えて、これらの細胞は、遺伝的に安定な、高度に増殖性の（ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ）クローン性細胞株の一貫した生成を可能にする。これらは、無血清培地を使用して単純なバイオリアクター中で高密度になるまで培養され得、安全かつ再現性の高いバイオプロセスの開発を可能にする。他の一般に使用される動物細胞には、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＮＳＯ−及びＳＰ２／０−マウス骨髄腫細胞が含まれる。より最近、トランスジェニック動物からの産生もまた試験された（Jenkins, N.等, Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。
【０２００】
全ての抗体は、重鎖定常領域中の保存された位置に糖鎖（炭水化物）構造を含み、各アイソタイプは、タンパク質アセンブリ、分泌又は機能的活性に可変的に影響を与える異なるアレイのＮ結合型糖鎖（炭水化物）構造を有する（Wright, A.及びMorrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。結合したＮ結合型糖鎖（炭水化物）の構造は、プロセシングの程度に依存してかなり変動し、高マンノース、多重分枝状及び二分岐の複合オリゴ糖を含み得る（Wright, A.及びMorrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。典型的には、同等なモノクローナル抗体が複数のグリコフォームとして存在するように、特定のグリコシル化部位において結合したコアオリゴ糖構造の不均一なプロセシングが存在する。同様に、抗体のグリコシル化における大きな差異が細胞株間で生じ、軽微な差異さえもが、異なる培養条件下で増殖した所与の細胞株について見られることが示されている（Lifely, M.R.等, Glycobiology 5(8) (1995) 813-22）。
【０２０１】
単純な産生プロセスを維持し、顕著な望ましくない副作用を潜在的に回避しつつ、力価における大きな増加を得るための１つの方法は、Ｕｍａｎａ，Ｐ．等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６−１８０及び米国特許第６６０２６８４号に記載されるように、それらのオリゴ糖成分を操作することによって、モノクローナル抗体の天然の細胞媒介性エフェクター機能を増強することである。がん免疫療法において最も一般的に使用される抗体、ＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメイン中のＡｓｎ２９７において保存されたＮ結合グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合二分岐オリゴ糖は、ＣＨ２ドメイン間に埋め込まれ、ポリペプチド骨格との広範な接触を形成し、それらの存在は、抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能を媒介するために必須である（Lifely, M.R.等, Glycobiology 5 (1995) 813-822；Jefferis, R.等, Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76；Wright, A.及びMorrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32）。
【０２０２】
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における、二分されたオリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼ、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩ１１（’’ＧｎＴＩＩ１７ｙ）の過剰発現は、操作されたＣＨＯ細胞によって産生された抗神経芽腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＥ７）のインビトロＡＤＣＣ活性を顕著に増加させることが、以前に示されている（その全内容が本明細書に出典明示により援用される、Ｕｍａｎａ，Ｐ．等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７（１９９９）１７６−１８０；及び国際公開第９９／１５４３４２号を参照のこと）。抗体ｃｈＣＥ７は、高い腫瘍親和性及び特異性を有するが、ＧｎＴＩＩＩ酵素を欠く標準的な工業的細胞株において産生された場合には臨床的に有用であるには小さすぎる力価を有する、非コンジュゲートモノクローナル抗体の大きいクラスに属する（Umana, P.等, Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180）。この研究は、ＡＤＣＣ活性の大きな増加が、天然に存在する抗体において見出されるレベルを上回った、二分された非フコシル化オリゴ糖を含む定常領域（Ｆｃ）関連の二分されたオリゴ糖の割合における増加もまたもたらすＧｎＴＩＩＩを発現するように抗体産生細胞を操作することによって得られ得ることを示した最初のものである。
【０２０３】
一部の実施態様では、この抗ＣＤ２０抗体は、多重特異性抗体又は二重特異性抗体である。
【０２０４】
ＩＶ．抗体調製
本明細書に記載される抗体は、抗体を生成するために当該技術分野で利用可能な技術を使用して調製され、その例示的な方法は、以下のセクションに、より詳細に記載されている。
【０２０５】
この抗体は、目的の抗原（即ち、ＰＤ−Ｌ１（例えばヒトＰＤ−Ｌ１）、又はＣＤ２０（例えばヒトＣＤ２０））に対するものである。好ましくは、この抗原は、生物学的に重要なポリペプチドであり、障害に罹患している哺乳動物へのこの抗体の投与は、その哺乳動物において治療的利益を生じ得る。
【０２０６】
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、≦１μＭ、≦１５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の目的の具体的な抗原への解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０２０７】
一実施態様では、Ｋｄは、以下のアッセイによって記載されるように、Ｆａｂバージョンの目的の抗体及びその抗原を用いて実施される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、標識されていない抗原の滴定系列の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識された抗原によってＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体でコートされたプレートを用いて結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Chen等, J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)を参照のこと）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が、５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コートされ、引き続いて、室温（およそ２３℃）で２から５時間にわたってＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンでブロッキングされる。非吸着剤プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］−抗原が、目的のＦａｂの段階希釈と混合される。次いで、目的のＦａｂは、一晩インキュベートされる；しかし、このインキュベーションは、平衡化が達成されることを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）にわたって継続し得る。その後、この混合物は、室温でのインキュベーション（例えば１時間にわたる）のために、捕捉プレートに移される。次いで、溶液が除去され、プレートが、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄される。プレートが乾燥したら、１５０μｌウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）が添加され、プレートは、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計数される。最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度は、競合的結合アッセイにおける使用のために選択される。
【０２０８】
別の実施態様によれば、Ｋｄは、〜１０反応単位（ＲＵ）で、固定化されている抗原ＣＭ５チップと共に２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用する表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）は、供給業者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化される。抗原は、およそ１０反応単位（ＲＵ）のカップリングされたタンパク質を達成するために、５μｌ／分の流速での注入前に、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈される。抗原の注入後、１Ｍエタノールアミンが、未反応の基をブロッキングするために注入される。反応速度論的な測定のため、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を有するＰＢＳ（ＰＢＳＴ）中２倍段階希釈のＦａｂ（０．７８ｎＭ−５００ｎＭ）が、およそ２５μｌ／分の流速で２５℃で注入される。会合速度（association rate）（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、会合及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることによって、単純な一対一Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算される。例えば、Ｃｈｅｎ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと。会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）が、上記表面プラズモン共鳴アッセイによって１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、この会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）は、ストップフロー装備分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定した場合、漸増濃度の抗原の存在下で、ＰＢＳ、ｐＨ７．２中の２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の、２５℃における蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）における増加又は減少を測定する蛍光消光技術を使用することによって、決定され得る。
【０２０９】
（ｉ）抗原調製
他の分子に任意選択的にコンジュゲートされた可溶型抗原又はその断片は、抗体を生成するための免疫原として使用され得る。膜貫通分子、例えば、受容体について、これらの断片（例えば、受容体の細胞外ドメイン）は、免疫原として使用され得る。あるいは、膜貫通分子を発現する細胞が、免疫原として使用され得る。かかる細胞は、天然供給源（例えば、がん細胞株）から誘導され得るか、又は膜貫通分子を発現するように組換え技術によって形質転換された細胞であり得る。抗体を調製するために有用な他の抗原及びその形態は、当業者に明らかである。
【０２１０】
（ｉｉ）特定の抗体ベースの方法
ポリクローナル抗体は、好ましくは、適切な抗原及びアジュバントの複数回の皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物において惹起される。二官能性又は誘導体化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介したコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２又はＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ、式中、Ｒ及びＲ１は、異なるアルキル基である、を使用して、免疫化される種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン又はダイズトリプシン阻害因子に、適切な抗原をコンジュゲートさせることが有用であり得る。
【０２１１】
動物は、例えば、１００μｇ又は５μｇのタンパク質又はコンジュゲート（それぞれ、ウサギ又はマウスについて）を、３容積の完全フロイントアジュバントと組み合わせ、この溶液を複数の部位に皮内注射することによって、抗原、免疫原性コンジュゲート又は誘導体に対して免疫化される。１カ月後、動物は、完全フロイントアジュバント中で、元の量の１／５から１／１０のペプチド又はコンジュゲートにより、複数の部位における皮下注射によって追加免疫される。７から１４日間後、動物は出血させられ、血清が、抗体価についてアッセイされる。動物は、力価がプラトーになるまで追加免疫される。好ましくは、この動物は、同じ抗原のコンジュゲートではあるが、異なるタンパク質に及び／又は異なる架橋試薬を介してコンジュゲートされたコンジュゲートで、追加免疫される。コンジュゲートは、タンパク質融合物として組換え細胞培養物中でも作製され得る。また、凝集剤、例えばミョウバンが、免疫応答を増強するために適切に使用される。
【０２１２】
本発明のモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ等、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって最初に記載され、例えば、Ｈｏｎｇｏ等、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１４（３）：２５３−２６０（１９９５）、Ｈａｒｌｏｗ等、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ等、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８１）、及びヒト−ヒトハイブリドーマに関するＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５−２６８（２００６）中にさらに記載されたハイブリドーマ法を使用して作製され得る。さらなる方法には、例えば、ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒト天然ＩｇＭ抗体に関する米国特許第７１８９８２６号に記載される方法が含まれる。ヒトハイブリドーマテクノロジー（トリオーマテクノロジー）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７−９３７（２００５）並びにＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０２１３】
種々の他のハイブリドーマ技術については、例えば、米国特許出願公開第２００６／２５８８４１号；米国特許出願公開第２００６／１８３８８７号（完全ヒト抗体）、米国特許出願公開第２００６／０５９５７５号；米国特許出願公開第２００５／２８７１４９号；米国特許出願公開第２００５／１００５４６号；米国特許出願公開第２００５／０２６２２９号；並びに米国特許第７０７８４９２号及び米国特許第７１５３５０７号を参照のこと。ハイブリドーマ法を使用してモノクローナル抗体を産生するための例示的なプロトコールは、以下に記載される。一実施態様では、マウス又は他の適切な宿主動物、例えば、ハムスターは、免疫化のために使用されるタンパク質に特異的に結合する抗体を産生する又は産生することが可能なリンパ球を惹起するために免疫化される。抗体は、本発明のポリペプチド又はその断片、及びアジュバント、例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）／トレハロースジコリノミコラート（ＴＤＭ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｍｏｎｔ．）の複数回の皮下（ｓｃ）又は腹腔内（ｉｐ）注射によって、動物において惹起される。本発明のポリペプチド（例えば、抗原）又はその断片は、当該技術分野で周知の方法、例えば組換え方法を使用して調製され得、そのうちいくつかは、本明細書にさらに記載される。免疫化した動物由来の血清が、抗抗原抗体についてアッセイされ、追加免疫免疫化が、任意選択的に投与される。抗抗原抗体を産生する動物からリンパ球が単離される。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫化され得る。
【０２１４】
次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、適切な融剤、例えばポリエチレングリコールを使用して、骨髄腫細胞と融合される。例えば、Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６）を参照のこと。効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル産生を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に対して感受性である骨髄腫細胞が、使用され得る。例示的な骨髄腫細胞には、マウス骨髄腫株、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来のもの、及びアメリカンタイプカルチャーコレクション、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍｄ．ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２又はＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞が含まれるが、これらに限定されない。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫（heteromyeloma）細胞株もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生のために記載されている（Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur 等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)）。
【０２１５】
こうして調製されたハイブリドーマ細胞は、適切な培地、例えば、未融合の親骨髄腫細胞の増殖又は生存を阻害する１又は複数の物質を含む培地中で、播種及び増殖される。例えば、親骨髄腫細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培地は、典型的には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を防止する物質、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む（ＨＡＴ培地）。好ましくは、無血清ハイブリドーマ細胞培養法は、例えば、Ｅｖｅｎ等、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２４（３）、１０５−１０８（２００６）に記載されるように、動物由来の血清、例えば、ウシ胎児血清の使用を低減させるために使用される。
【０２１６】
ハイブリドーマ細胞培養物の生産性を改善するためのツールとしてのオリゴペプチドが、Ｆｒａｎｅｋ、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１１１−１２２（２００５）に記載されている。具体的には、標準的な培地は、特定のアミノ酸（アラニン、セリン、アスパラギン、プロリン）が、又はタンパク質加水分解物画分が富化されており、アポトーシスは、３から６アミノ酸残基から構成される合成オリゴペプチドによって顕著に抑制され得る。これらのペプチドは、ミリモル又はそれより高い濃度で存在する。
【０２１７】
ハイブリドーマ細胞が増殖している培地は、本発明の抗体に結合するモノクローナル抗体の産生についてアッセイされ得る。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法によって、又はインビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素結合性免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって、決定され得る。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、スキャッチャード解析によって決定され得る。例えば、Ｍｕｎｓｏｎ等、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７：２２０（１９８０）を参照のこと。
【０２１８】
所望の特異性、親和性及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞が同定された後、それらのクローンは、限界希釈手順によってサブクローニングされ得、標準的な方法によって増殖され得る。例えば、Ｇｏｄｉｎｇ、上記を参照のこと。この目的のために適切な培地には、例えば、Ｄ−ＭＥＭ又はＲＰＭＩ−１６４０培地が含まれる。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍としてインビボで増殖され得る。これらのサブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又はアフィニティークロマトグラフィーなどの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培地、腹水又は血清から適切に分離される。ハイブリドーマ細胞からのタンパク質の単離のための１つの手順は、米国特許出願公開第２００５／１７６１２２号及び米国特許第６９１９４３６号に記載されている。この方法は、結合プロセスにおいて、最小の塩、例えば、リオトロピックな塩を使用すること、及び好ましくは、溶出プロセスにおいて少量の有機溶媒もまた使用することを含む。
【０２１９】
（ｉｉｉ）ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（単数又は複数）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、種々の方法が、実施例３に記載される方法など、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてかかるライブラリーをスクリーニングするために、当該技術分野で公知である。さらなる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ等編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００１）に概説され、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）；Ｓｉｄｈｕ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；並びにＬｅｅ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）にさらに記載されている。
【０２２０】
特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、Ｗｉｎｔｅｒ等、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについて次いでスクリーニングされ得るファージライブラリーにおいてランダムに組換えられる。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片のいずれかとして、抗体断片をディスプレイする。免疫化された供給源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、ナイーブなレパートリーが、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ等、ＥＭＢＯ  Ｊ、１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、いずれの免疫化もなしに、広範な非自己及びまた自己抗原に対する抗体の単一供給源を提供するために、（例えば、ヒトから）クローニングされ得る。最後に、ナイーブなライブラリーは、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１−３８８（１９９２）によって記載されるように、再編成されていないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、再編成をインビトロで達成するためにランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することによって、合成的にも作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許公開には、例えば、以下が含まれる：米国特許第５７５０３７３号並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、米国特許出願公開第２００５／０１１９４５５号、米国特許出願公開第２００５／０２６６０００号、米国特許出願公開第２００７／０１１７１２６号、米国特許出願公開第２００７／０１６０５９８号、米国特許出願公開第２００７／０２３７７６４号、米国特許出願公開第２００７／０２９２９３６号及び米国特許出願公開第２００９／０００２３６０号。
【０２２１】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書で、ヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。
【０２２２】
（ｉｖ）キメラ、ヒト化及びヒト抗体
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許４８１６５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。１つの例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又は非ヒト霊長類、例えばサル由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる一例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変化している「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
【０２２３】
特定の実施態様では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持したまま、ヒトに対する免疫原性を低減させるためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部分もまた含む。一部の実施態様では、ヒト化抗体中の一部のＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性又は親和性を回復させる又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基がそこから誘導される抗体）由来の対応する残基で置換される。
【０２２４】
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説され、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５８２１３３７号、米国特許第７５２７７９１号、米国特許第６９８２３２１号及び米国特許第７０８７４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植を記載している）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェイシング」を記載している）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載している）；並びにＯｓｂｏｕｒｎ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ等、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングのための「ガイドされた選択」手法を記載している）にさらに記載されている。
【０２２５】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、以下が含まれるがこれらに限定されない：「ベストフィット」方法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Sims等 J. Immunol. 151:2296 (1993)を参照のこと）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（例えば、Carter等 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta等 J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照のこと）；ヒト成熟（体細胞性に突然変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Almagro及びFransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照のこと）；並びにＦＲライブラリーをスクリーニングすることから誘導されたフレームワーク領域（例えば、Baca等, J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及びRosok等, J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照のこと）。
【０２２６】
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の種々の技術を使用して産生され得る。ヒト抗体は、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ及びｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）並びにＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に、一般に記載されている。
【０２２７】
ヒト抗体は、抗原性曝露に応答して、インタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって、調製され得る。かかる動物は、典型的には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部分を含み、これが、内因性の免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、又は染色体外に存在する若しくは動物の染色体中にランダムに組み込まれる。かかるトランスジェニックマウスでは、内因性の免疫グロブリン遺伝子座は、一般に、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を取得するための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）テクノロジーを記載している米国特許第６０７５１８１号及び米国特許第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）テクノロジーを記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）テクノロジーを記載している米国特許第７０４１８７０号、及びＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）テクノロジーを記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号もまた参照のこと。かかる動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾され得る。
【０２２８】
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によっても作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株は、記載されている（例えば、Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur等, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)；及びBoerner等, J. Immunol., 147: 86 (1991)を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマテクノロジーを介して生成されたヒト抗体は、Ｌｉ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７−３５６２（２００６）にも記載されている。さらなる方法には、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載された方法が含まれる。ヒトハイブリドーマテクノロジー（トリオーマテクノロジー）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７−９３７（２００５）並びにＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５−９１（２００５）にも記載されている。
【０２２９】
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。次いで、かかる可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わされ得る。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術は、以下に記載される。
【０２３０】
（ｖ）抗体断片
抗体断片は、伝統的手段、例えば酵素的消化によって、又は組換え技術によって、生成され得る。特定の情況では、抗体全体ではなく抗体断片を使用することに利点がある。より小さいサイズの断片は、迅速なクリアランスを可能にし、固形腫瘍への改善されたアクセスをもたらし得る。特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ等（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４を参照のこと。
【０２３１】
種々の技術が、抗体断片の産生のために開発されてきた。伝統的には、これらの断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解消化を介して誘導された（例えば、Morimoto等, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992)；及びBrennan等, Science, 229:81 (1985)を参照のこと）。しかし、これらの断片は、現在、組換え宿主細胞によって直接産生され得る。Ｆａｂ、Ｆｖ及びＳｃＦｖ抗体断片は全て、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で発現され得、大腸菌から分泌され得、したがって、大量のこれらの断片の容易な産生を可能にする。抗体断片は、上で議論した抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、大腸菌から直接回収され得、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成するために化学カップリングされ得る（Carter等, Bio/Technology 10:163-167 (1992)）。別の手法によれば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、米国特許第５８６９０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技術は、熟練の施術者に明らかである。特定の実施態様では、抗体は、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。国際公開第９３／１６１８５号；米国特許第５５７１８９４号；及び米国特許第５５８７４５８号を参照のこと。Ｆｖ及びｓｃＦｖは、定常領域を欠く、インタクトな結合部位を有する唯一の種である；したがって、これらは、インビボでの使用の間の低減された非特異的結合に適切であり得る。ｓｃＦｖ融合タンパク質は、ｓｃＦｖのアミノ末端又はカルボキシ末端のいずれかにおいて、エフェクタータンパク質の融合を生じるように、構築され得る。Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、編Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ、上記を参照のこと。この抗体断片は、例えば、米国特許第５６４１８７０号などに記載される、「直鎖状抗体」でもあり得る。かかる直鎖状抗体は、単一特異性又は二重特異性であり得る。
【０２３２】
（ｖｉ）多重特異性抗体
多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有し、ここで、これらのエピトープは、通常、異なる抗原に由来する。かかる分子は通常、２つの異なるエピトープにのみ結合するが（即ち、二重特異性抗体、ＢｓＡｂ）、さらなる特異性を有する抗体、例えば、三重特異性抗体が、本明細書で使用する場合、この表現によって包含される。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製され得る。
【０２３３】
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野で公知である。全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の共発現に基づき、ここで、これら２つの鎖は、異なる特異性を有する（Millstein等, Nature, 305:537-539 (1983)）。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖のランダムな仕分けに起因して、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０の異なる抗体分子の潜在的混合物を産生し、このうち１つだけが、正確な二重特異性構造を有する。通常はアフィニティークロマトグラフィー工程によって実施される正確な分子の精製は、かなり厄介であり、産物収量は低い。類似の手順が、国際公開第９３／０８８２９号及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ等、ＥＭＢＯＪ．、１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０２３４】
二重特異性抗体を作製するための当該技術分野で公知の１つの手法は、「ノブ・イントゥー・ホール」又は「突出・イントゥー・空洞」手法である（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照のこと）。この手法では、２つの免疫グロブリンポリペプチド（例えば、重鎖ポリペプチド）は、各々、接触面を含む。一方の免疫グロブリンポリペプチドの接触面は、他方の免疫グロブリンポリペプチド上の対応する接触面と相互作用し、それによって、２つの免疫グロブリンポリペプチドを会合させる。これらの接触面は、一方の免疫グロブリンポリペプチドの接触面中に位置する「ノブ」又は「突出」（これらの用語は、本明細書で相互交換可能に使用され得る）が、他方の免疫グロブリンポリペプチドの接触面中に位置する「ホール」又は「空洞」（これらの用語は、本明細書で相互交換可能に使用され得る）と対応するように、操作され得る。一部の実施態様では、このホールは、ノブと同一又は類似のサイズのものであり、２つの接触面が相互作用する場合に、一方の接触面のノブが他方の接触面の対応するホールにおいて位置付け可能であるように、適切に位置付けられる。理論に束縛されることは望まないが、これは、ヘテロ多量体を安定化し、ホモ多量体などの他の種よりも、ヘテロ多量体の形成を好むと考えられる。一部の実施態様では、この手法は、２つの異なる免疫グロブリンポリペプチドのヘテロ多量体化を促進して、異なるエピトープに対する結合特異性を有する２つの免疫グロブリンポリペプチドを含む二重特異性抗体を創出するために使用され得る。
【０２３５】
一部の実施態様では、ノブは、小さいアミノ酸側鎖を、より大きい側鎖で置き換えることによって、構築され得る。一部の実施態様では、ホールは、大きいアミノ酸側鎖を、より小さい側鎖で置き換えることによって、構築され得る。ノブ若しくはホールは、元の接触面中に存在し得るか、又はこれらは、合成により導入され得る。例えば、ノブ又はホールは、少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基を少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基で置き換えるように、接触面をコードする核酸配列を改変することによって、合成により導入され得る。核酸配列を改変するための方法には、当該技術分野で周知の標準的な分子生物学技術が含まれ得る。種々のアミノ酸残基の側鎖容積は、以下の表に示される。一部の実施態様では、元の残基は、小さい側鎖容積を有し（例えば、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン又はバリン）、ノブを形成するための移入残基は、天然に存在するアミノ酸であり、これには、アルギニン、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファンが含まれ得る。一部の実施態様では、元の残基は、大きい側鎖容積を有し（例えば、アルギニン、フェニルアラニン、チロシン及びトリプトファン）、ホールを形成するための移入残基は、天然に存在するアミノ酸であり、これには、アラニン、セリン、スレオニン及びバリンが含まれる。
2017501157.tif 000006
【０２３６】
一部の実施態様では、ノブ又はホールを形成するための元の残基は、ヘテロ多量体の３次元構造に基づいて同定される。３次元構造を取得するための当該技術分野で公知の技術には、Ｘ線結晶学及びＮＭＲが含まれ得る。一部の実施態様では、この接触面は、免疫グロブリン定常ドメインのＣＨ３ドメインである。これらの実施態様では、ヒトＩｇＧ１のＣＨ３／ＣＨ３接触面には、４つのアンチパラレルβ鎖上に位置する各ドメイン上の１６の残基が関与する。理論に束縛されることは望まないが、突然変異した残基は、好ましくは、ノブが、パートナーＣＨ３ドメイン中の補償的ホールではなく、周囲の溶媒によって収容され得るというリスクを最小化するために、２つの中心的アンチパラレルβ鎖上に位置する。一部の実施態様では、２つの免疫グロブリンポリペプチド中の対応するノブ及びホールを形成する突然変異は、以下の表中に提供される１又は複数の対に対応する。
2017501157.tif 000007
【０２３７】
突然変異は、元の残基、次にカバット番号付け系を使用した位置、次いで移入残基によって示される（全ての残基は、一文字アミノ酸コードで与えられる）。複数の突然変異は、コロンによって分離される。
【０２３８】
一部の実施態様では、免疫グロブリンポリペプチドは、上記表３に列挙された１又は複数のアミノ酸置換を含むＣＨ３ドメインを含む。一部の実施態様では、二重特異性抗体は、表３の左の列に列挙された１又は複数のアミノ酸置換を含むＣＨ３ドメインを含む第１の免疫グロブリンポリペプチド、及び表３の右の列に列挙された１又は複数の対応するアミノ酸置換を含むＣＨ３ドメインを含む第２の免疫グロブリンポリペプチドを含む。
【０２３９】
上に議論したようなＤＮＡの突然変異の後、１又は複数の対応するノブ形成又はホール形成突然変異を有する修飾された免疫グロブリンポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で公知の標準的な組換え技術及び細胞系を使用して発現及び精製され得る。例えば、米国特許第５７３１１６８号；米国特許第５８０７７０６号；米国特許第５８２１３３３号；米国特許第７６４２２２８号；米国特許第７６９５９３６号；米国特許第８２１６８０５号；米国特許出願公開第２０１３／００８９５５３号；及びＳｐｉｅｓｓ等、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ３１：７５３−７５８、２０１３を参照のこと。修飾された免疫グロブリンポリペプチドは、原核宿主細胞、例えば大腸菌、又は真核宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞を使用して産生され得る。対応するノブ保有及びホール保有免疫グロブリンポリペプチドは、共培養物中の宿主細胞において発現され得、ヘテロ多量体として一緒に精製され得るか、又はそれらは、単一培養物中で発現され得、別々に精製され得、インビトロでアセンブルされ得る。一部の実施態様では、細菌宿主細胞の２つの株（一方は、ノブを有する免疫グロブリンポリペプチドを発現し、他方は、ホールを有する免疫グロブリンポリペプチドを発現する）が、当該技術分野で公知の標準的な細菌培養技術を使用して共培養される。一部の実施態様では、これら２つの株は、例えば、培養物中で等しい発現レベルを達成するために、特定の比で混合され得る。一部の実施態様では、これら２つの株は、５０：５０、６０：４０又は７０：３０の比で混合され得る。ポリペプチド発現後、これらの細胞は、一緒に溶解され得、タンパク質が抽出され得る。ホモ多量体種対ヘテロ多量体種の存在比を測定することを可能にする当該技術分野で公知の標準的な技術には、サイズ排除クロマトグラフィーが含まれ得る。一部の実施態様では、各修飾された免疫グロブリンポリペプチドは、標準的な組換え技術を使用して別々に発現され、インビトロで一緒にアセンブルされ得る。アセンブリは、例えば、各修飾された免疫グロブリンポリペプチドを精製し、混合し、等質量でそれらを一緒にインキュベートし、ジスルフィドを還元し（例えば、ジチオスレイトールを用いて処理することによって）、濃縮し、ポリペプチドを再酸化することによって、達成され得る。形成された二重特異性抗体は、陽イオン交換クロマトグラフィーを含む標準的な技術を使用して精製され得、サイズ排除クロマトグラフィーを含む標準的な技術を使用して測定され得る。これらの方法のより詳細な説明については、Ｓｐｅｉｓｓ等、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３１：７５３−８、２０１３を参照のこと。一部の実施態様では、修飾された免疫グロブリンポリペプチドは、ＣＨＯ細胞中で別々に発現され得、上記方法を使用してインビトロでアセンブルされ得る。
【０２４０】
異なる手法によれば、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。この融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。融合物のうちの少なくとも１つ中に存在する軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが典型的である。免疫グロブリン重鎖融合物、及び所望の場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクター中に挿入され、適切な宿主生物中に共トランスフェクトされる。これは、構築において使用される３つのポリペプチド鎖の不等な比が最適な収量を提供する実施態様において、３つのポリペプチド断片の相互の割合を調整することにおいて、大きな柔軟性を提供する。しかし、等しい比での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高い収量を生じる場合、又はそのような比が特に重要なものでない場合、１つの発現ベクター中に２つ又は３つ全てのポリペプチド鎖についてのコード配列を挿入することが可能である。
【０２４１】
この手法の一実施態様では、二重特異性抗体は、一方のアーム中の第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、及び他方のアーム中のハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性を提供する）から構成される。二重特異性分子の半分のみにおける免疫グロブリン軽鎖の存在は、分離の容易な方法を提供するので、この非対称構造は、望ましくない免疫グロブリン鎖組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を促進することが見出された。この手法は、国際公開第９４／０４６９０号に開示されている。二重特異性抗体を生成することのさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０２４２】
国際公開第９６／２７０１１号に記載された別の手法によれば、抗体分子の対間の接触面は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーの百分率を最小化するために操作され得る。１つの接触面は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を構成する。この方法では、第１の抗体分子の接触面由来の１又は複数の小さいアミノ酸側鎖は、より大きい側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）で置き換えられる。大きい側鎖（複数可）と同一又は類似のサイズの補償的「空洞」は、大きいアミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば、アラニン又はスレオニン）で置き換えることによって、第２の抗体分子の接触面上に創出される。これは、ホモダイマーなどの他の望ましくない最終産物を越えて、ヘテロダイマーの収量を増加させるための機構を提供する。
【０２４３】
二重特異性抗体には、架橋又は「ヘテロコンジュゲート」抗体が含まれる。例えば、このヘテロコンジュゲート中の抗体の一方は、アビジンにカップリングされ得、他方は、ビオチンにカップリングされ得る。かかる抗体は、例えば、望ましくない細胞へと免疫系細胞を標的化するため（米国特許第４６７６９８０号）、及びＨＩＶ感染の治療のため（国際公開第９１／００３６０号、国際公開第９２／２００３７３号及びＥＰ０３０８９）に提唱されている。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋法を使用して作製され得る。適切な架橋剤は、当該技術分野で周知であり、いくつかの架橋技術と一緒に、米国特許第４６７６９８０号に開示されている。
【０２４４】
抗体断片から二重特異性抗体を生成するための技術もまた、文献中に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を使用して調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体が、Ｆ（ａｂ’）２断片を生成するためにタンパク質分解性に切断される手順を記載している。これらの断片は、隣接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を防止するために、ジチオール錯化剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元される。次いで、生成されたＦａｂ’断片は、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の一方は、メルカプトエチルアミンによる還元によってＦａｂ’−チオールに再変換され、二重特異性抗体を形成するために、等モル量の他方のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合される。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用され得る。
【０２４５】
近年の進歩により、二重特異性抗体を形成するために化学カップリングされ得るＦａｂ’−ＳＨ断片の、大腸菌からの直接的回収が促進されている。Ｓｈａｌａｂｙ等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生を記載している。各Ｆａｂ’断片は、大腸菌から別々に分泌され、二重特異性抗体を形成するために、インビトロの定方向化学カップリングに供される。
【０２４６】
二重特異性抗体断片を組換え細胞培養物から直接作製及び単離するための種々の技術もまた、記載されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドが、遺伝子融合によって、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。抗体ホモダイマーは、モノマーを形成するためにヒンジ領域において還元され、次いで、抗体ヘテロダイマーを形成するために再酸化された。この方法は、抗体ホモダイマーの産生のためにも利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ディアボディ」テクノロジーは、二重特異性抗体断片を作製するための代替的機構を提供している。これらの断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間のペアリングを可能にするには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、一方の断片のＶＨ及びＶＬドメインは、他方の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインとペアリングするようにされ、それによって、２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用によって二重特異性抗体断片を作製するための別の戦略もまた、報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【０２４７】
二重特異性抗体断片を作製するための別の技術は、「二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー」又はＢｉＴＥ（登録商標）手法である（例えば、国際公開第２００４／１０６３８１号、国際公開第２００５／０６１５４７号、国際公開第２００７／０４２２６１号及び国際公開第２００８／１１９５６７号を参照のこと）。この手法は、単一ポリペプチド上に配置された２つの抗体可変ドメインを利用する。例えば、単一ポリペプチド鎖は、２つのドメイン間の分子内会合を可能にするのに十分な長さのポリペプチドリンカーによって分離された可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを各々が有する、２つの単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片を含む。この単一ポリペプチドは、２つのｓｃＦｖ断片間にポリペプチドスペーサー配列をさらに含む。各ｓｃＦｖは、異なるエピトープを認識し、これらのエピトープは、異なる細胞型に対して特異的であり得、その結果、２つの異なる細胞型の細胞は、各ｓｃＦｖがその同族エピトープとエンゲージされる場合に、近位になる又は係留される。この手法の１つの特定の実施態様は、悪性又は腫瘍細胞などの標的細胞によって発現された細胞表面抗原を認識する別のｓｃＦｖに連結された、免疫細胞によって発現された細胞表面抗原、例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３ポリペプチドを認識するｓｃＦｖを含む。
【０２４８】
これは単一ポリペプチドであるので、この二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、当該技術分野で公知の任意の原核又は真核細胞発現系、例えば、ＣＨＯ細胞株を使用して発現され得る。しかし、特異的精製技術（例えば、ＥＰ１６９１８３３を参照のこと）が、モノマーの目的の活性以外の生物活性を有し得る他の多量体種から、モノマー二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーを分離するために、必要であり得る。１つの例示的精製スキームでは、分泌されたポリペプチドを含む溶液は、金属アフィニティークロマトグラフィーに最初に供され、ポリペプチドは、イミダゾール濃度の勾配で溶出される。この溶出液は、陰イオン交換クロマトグラフィーを使用してさらに精製され、ポリペプチドは、塩化ナトリウム濃度の勾配を使用して溶出される。最後に、この溶出液は、多量体種からモノマーを分離するために、サイズ排除クロマトグラフィーに供される。
【０２４９】
２つよりも多い結合価を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体が調製され得る。Ｔｕｆｔ等  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０２５０】
（ｖｉｉ）単一ドメイン抗体
一部の実施態様では、本発明の抗体は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部分又は軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部分を含む単一ポリペプチド鎖である。特定の実施態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６２４８５１６号Ｂ１を参照のこと）。一実施態様では、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部分からなる。
【０２５１】
（ｖｉｉｉ）抗体変異体
一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物特性を改善することが望まれ得る。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な変化を導入することによって、又はペプチド合成によって、調製され得る。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／又はかかるアミノ酸配列中への残基の挿入、及び／又はかかるアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入及び置換の任意の組合せが、最終コンストラクトが所望の特性を有することを条件として、最終コンストラクトに到達するために行われ得る。アミノ酸改変は、配列が作製された時点で、対象抗体アミノ酸配列中に導入され得る。
【０２５２】
（ｉｘ）置換、挿入及び欠失変異体
特定の実施態様では、１又は複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異誘発のための目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１中に、「保存的置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１中に、「例示的置換」の見出しの下に提供され、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される。アミノ酸置換は、目的の抗体中に導入され得、産物が、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングされ得る。
2017501157.tif 000008
【０２５３】
アミノ酸は、共通する側鎖特性に従ってグループ分けされ得る：
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ．鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０２５４】
非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴う。
【０２５５】
１つの型の置換変異体には、親抗体（例えば、ヒト化又はヒト抗体）の１又は複数の超可変領域残基を置換することが関与する。一般に、さらなる研究のために選択される得られた変異体（複数可）は、親抗体と比較して、特定の生物特性における修飾（例えば、改善）（例えば、増加した親和性、低減された免疫原性）を有し、及び／又は親抗体の特定の生物特性を実質的に保持している。例示的な置換変異体は、例えば、本明細書に記載されるものなどのファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して簡便に生成され得る、親和性成熟抗体である。簡潔に述べると、１又は複数のＨＶＲ残基が突然変異され、変異体抗体がファージ上にディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
【０２５６】
改変（例えば、置換）は、例えば、抗体親和性を改善するために、ＨＶＲ中に作製され得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、即ち、体細胞成熟プロセスの間に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照のこと）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において作製され得、得られた変異体のＶＨ又はＶＬは、結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築しそこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ等編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、（２００１））中に記載されている。親和性成熟の一部の実施態様では、多様性が、種々の方法のいずれか（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング又はオリゴヌクレオチド指定突然変異）によって、成熟のために選択された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリーが創出される。次いで、このライブラリーは、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定するためにスクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法には、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４−６残基）がランダム化される、ＨＶＲ指定手法が関与する。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発又はモデル化を使用して、具体的に同定され得る。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的化される場合が多い。
【０２５７】
特定の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、かかる改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１又は複数のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的改変（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）が、ＨＶＲ中に作製され得る。かかる改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であり得る。上に提供される変異体ＶＨ及びＶＬ配列の特定の実施態様では、各ＨＶＲのいずれかは未改変であるか、又は１、２若しくは３以下のアミノ酸置換を含む。
【０２５８】
突然変異誘発のために標的化され得る抗体の残基又は領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５に記載されるように、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、抗体と抗原との相互作用が影響されるかどうかを決定するために、標的残基（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕ）の残基又は群が同定され、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）によって置き換えられる。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置において導入され得る。あるいは、又はさらに、抗体と抗原との間の接触点を同定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接残基は、置換のための候補として、標的化又は排除され得る。変異体は、それらが所望の特性を含むかどうかを決定するために、スクリーニングされ得る。
【０２５９】
アミノ酸配列挿入には、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体には、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴについて）又は抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドへの、抗体のＮ末端又はＣ末端への融合が含まれる。
【０２６０】
（ｘ）グリコシル化変異体
特定の実施態様では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、１又は複数のグリコシル化部位が創出又は除去されるように、アミノ酸配列を改変することによって、簡便に達成され得る。
【０２６１】
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した糖（炭水化物）が改変され得る。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ−結合によって一般に結合された、分枝状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ等  ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。このオリゴ糖には、種々の糖（炭水化物）、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸、並びに二分岐オリゴ糖構造の「幹」中のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれ得る。一部の実施態様では、本発明の抗体中のオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体変異体を創出するために、行われ得る。
【０２６２】
一実施態様では、Ｆｃ領域を含む抗体変異体が提供され、ここで、Ｆｃ領域に結合した糖（炭水化物）構造は、ＡＤＣＣ機能を改善し得るフコースが低減されている、又はフコースを欠く。具体的には、野生型ＣＨＯ細胞において産生された同じ抗体上のフコースの量と比較して低減されたフコースを有する抗体が、本明細書で企図される。即ち、これらは、天然ＣＨＯ細胞（例えば、天然グリコシル化パターンを生じるＣＨＯ細胞、例えば、天然ＦＵＴ８遺伝子を含むＣＨＯ細胞）によって産生される場合に別のやり方で有するフコースよりも低い量のフコースを有することによって特徴付けられる。特定の実施態様では、この抗体は、その上のＮ−結合グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％又は５％未満がフコースを含む抗体である。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％から８０％まで、１％から６５％まで、５％から６５％まで、又は２０％から４０％までであり得る。特定の実施態様では、この抗体は、その上のＮ−結合グリカンのいずれもがフコースを含まない抗体であり、即ち、ここで、この抗体は、完全にフコースがない、又はフコースを有さない、又はアフコシル化されている。フコースの量は、例えば国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される場合、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造体（例えば、複合体、ハイブリッド及び高マンノース構造）の合計に対するＡｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって、決定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域中の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指す；しかし、Ａｓｎ２９７は、抗体における軽微な配列差異に起因して、２９７位の約±３アミノ酸上流又は下流、即ち、２９４位と３００位との間も位置し得る。かかるフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関する刊行物の例には、以下が含まれる：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉ等Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ等  Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）。脱フコシル化抗体を産生することが可能な細胞株の例には、以下が含まれる：タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ripka等 Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号Ａ１、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２号Ａ１、Ａｄａｍｓ等、特に、実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えば、アルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki等 Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y.等, Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006)；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照のこと）。
【０２６３】
抗体変異体には、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分された、二分されたオリゴ糖が、さらに提供される。かかる抗体変異体は、低減されたフコシル化及び／又は改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ等）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａ等）；米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ等）、及びＦｅｒｒａｒａ等、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、９３（５）：８５１−８６１（２００６）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体もまた、提供される。かかる抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌ等）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０２６４】
特定の実施態様では、本明細書に記載されるＦｃ領域を含む抗体変異体は、ＦｃγＲＩＩＩに結合することが可能である。特定の実施態様では、本明細書に記載されるＦｃ領域を含む抗体変異体は、ヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ活性を有する、又はヒト野生型ＩｇＧ１Ｆｃ領域を含む他の点では同じ抗体と比較して、ヒトエフェクター細胞の存在下で増加したＡＤＣＣ活性を有する。
【０２６５】
（ｘｉ）Ｆｃ領域変異体
特定の実施態様では、１又は複数のアミノ酸修飾が、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域中に導入され得、それによって、Ｆｃ領域変異体を生成する。このＦｃ領域変異体は、１又は複数のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含み得る。
【０２６６】
特定の実施態様では、本発明は、一部ではあるが全てではないエフェクター機能を有する抗体変異体を企図し、これにより、かかる抗体変異体は、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）が不要又は有害である適用のための、望ましい候補になる。インビトロ及び／又はインビボの細胞傷害性アッセイが、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認するために実施され得る。例えば、抗体が、ＦｃγＲ結合を欠く（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確実にするために、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイが実施され得る。ＡＤＣＣを媒介するための初代細胞、ＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）のｐ４６４の表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号（例えば、Hellstrom, I.等 Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)を参照のこと）及びHellstrom, I等, Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)；米国特許第５８２１３３７号（Bruggemann, M.等, J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)を参照のこと）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法が使用され得る（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ；及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照のこと）。かかるアッセイのために有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、又はさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ等  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されるものなどの動物モデルにおいて、インビボで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイもまた、抗体がＣ１ｑを結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠くことを確認するために、実施され得る。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイが実施され得る（例えば、Gazzano-Santoro等, J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S.等, Blood 101:1045-1052 (2003);並びにCragg, M.S.及びM.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)を参照のこと）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定もまた、当該技術分野で公知の方法を使用して実施され得る（例えば、Petkova, S.B.等, Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)を参照のこと）。
【０２６７】
低減されたエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうち１又は複数の置換を有するものが含まれる（米国特許第６７３７０５６号）。かかるＦｃ突然変異体には、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうち２つ以上において置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる（米国特許第７３３２５８１号）。
【０２６８】
ＦｃＲへの改善又は減退された結合を有する特定の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号及びShields等, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照のこと）。
【０２６９】
特定の実施態様では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位及び／又は３３４位（残基のＥＵ番号付け）における置換を有するＦｃ領域を含む。例示的な一実施態様では、そのＦｃ領域中に以下のアミノ酸置換を含む抗体：Ｓ２９８Ａ、Ｅ３３３Ａ及びＫ３３４Ａ。
【０２７０】
一部の実施態様では、改変された（即ち、改善又は減退されたのいずれかの）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を生じる改変が、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号及びＩｄｕｓｏｇｉｅ等  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、Ｆｃ領域中に作製される。
【０２７１】
増加した半減期、及び胎児への母体ＩｇＧの移行を担う新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）（Guyer等, J. Immunol. 117:587 (1976)及びKim等, J. Immunol. 24:249 (1994)）に対する改善された結合を有する抗体は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎ等）に記載されている。これらの抗体は、その中にＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１又は複数の置換を有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうち１又は複数における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが含まれる（米国特許第７３７１８２６号）。Ｆｃ領域変異体の他の例については、Ｄｕｎｃａｎ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許５６４８２６０号；米国特許５６２４８２１号；並びに国際公開第９４／２９３５１号もまた参照のこと。
【０２７２】
（ｘｉｉ）抗体誘導体
本発明の抗体は、当該技術分野で公知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含むように、さらに修飾され得る。特定の実施態様では、抗体の誘導体化に適切な部分は、水溶性ポリマーである。水溶性ポリマーの非限定的な例には、以下が含まれるがこれらに限定されない：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダム共重合体のいずれか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコール（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ）ホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。このポリマーは、任意の分子量のものであり得、分枝状又は非分枝状であり得る。抗体に結合したポリマーの数は、変動し得、１つよりも多いポリマーが結合している場合、それらは、同じ又は異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又は型は、改善すべき抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が規定された条件下で療法に使用されるかどうかなどが含まれるがこれらに限定されない考慮に基づいて、決定され得る。
【０２７３】
（ｘｉｉｉ）ベクター、宿主細胞及び組換え方法
抗体は、組換え方法を使用しても産生され得る。抗抗原抗体の組換え産生のために、抗体をコードする核酸が単離され、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）又は発現のために、複製可能なベクター中に挿入される。抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離及び配列決定され得る。多くのベクターが利用可能である。ベクター成分には、一般に、以下のうち１又は複数が含まれるがこれらに限定されない：シグナル配列、複製開始点、１又は複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター及び転写終結配列。
【０２７４】
（ａ）シグナル配列成分
本発明の抗体は、直接組換え産生され得るだけでなく、好ましくはシグナル配列又は成熟タンパク質若しくはポリペプチドのＮ末端において特異的切断部位を有する他のポリペプチドである、異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとしても、産生され得る。選択された異種シグナル配列は、好ましくは、宿主細胞によって認識及びプロセシングされる（例えば、シグナルペプチターゼによって切断される）シグナル配列である。天然抗体シグナル配列を認識及びプロセシングしない原核宿主細胞のために、このシグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、ｌｐｐ又は熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーの群から選択される原核生物シグナル配列によって置換される。酵母分泌のために、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、ａ因子リーダー（サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）及びクルイベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）のα−因子リーダーを含む）、若しくは酸性ホスファターゼリーダー、カンジダ・アルビカンス（Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓ）グルコアミラーゼリーダー、又は国際公開第９０／１３６４６号に記載されるシグナルによって、置換され得る。哺乳動物細胞発現では、哺乳動物シグナル配列並びにウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが、利用可能である。
【０２７５】
（ｂ）複製開始点
発現及びクローニングベクターの両方が、１又は複数の選択された宿主細胞においてベクターが複製するのを可能にする核酸配列を含む。一般に、クローニングベクターでは、この配列は、宿主染色体ＤＮＡとは独立してベクターが複製するのを可能にするものであり、複製開始点又は自律的に複製する配列が含まれる。かかる配列は、種々の細菌、酵母及びウイルスについて周知である。プラスミドｐＢＲ３２２由来の複製開始点は、ほとんどのグラム陰性細菌に適切であり、２μプラスミド開始点は、酵母に適切であり、種々のウイルス開始点（ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、ＶＳＶ又はＢＰＶ）が、哺乳動物細胞においてクローニングベクターとして有用である。一般に、複製開始点成分は、哺乳動物発現ベクターには必要でない（ＳＶ４０開始点は、それが早期プロモーターを含むことのみに起因して、典型的に使用され得る）。
【０２７６】
（ｃ）選択遺伝子成分
発現及びクローニングベクターは、選択マーカーとも呼ばれる選択遺伝子を含み得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質若しくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサート若しくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）栄養要求性欠損を補完するタンパク質、又は（ｃ）複合培地からは利用可能でない必須栄養素を供給するタンパク質をコードする、例えば、桿菌（Ｂａｃｉｌｌｉ）のためのＤ−アラニンラセマーゼをコードする遺伝子。
【０２７７】
選択スキームの一例は、宿主細胞の増殖を停止させる薬物を利用する。異種遺伝子で首尾よく形質転換された細胞は、薬物耐性を付与するタンパク質を産生し、したがって、選択レジメンを生き残る。かかる優性選択の例は、薬物ネオマイシン、ミコフェノール酸及びハイグロマイシンを使用する。
【０２７８】
哺乳動物細胞に適切な選択マーカーの別の例は、抗体コード核酸を取り込む能力がある細胞の同定を可能にするもの、例えば、ＤＨＦＲ、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉ及び−ＩＩ、好ましくは霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼなどである。
【０２７９】
例えば、ＤＨＦＲ遺伝子で形質転換された細胞は、メトトレキサート（Ｍｔｘ）、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストを含む培地中で形質転換体を培養することによって同定される。これらの条件下で、ＤＨＦＲ遺伝子は、任意の他の共形質転換された核酸と一緒に増幅される。内因性のＤＨＦＲ活性が欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９０９６）が使用され得る。
【０２８０】
あるいは、ＧＳ遺伝子で形質転換された細胞は、Ｌ−メチオニンスルホキシイミン（Ｍｓｘ）、ＧＳの阻害剤を含む培地中で形質転換体を培養することによって同定される。これらの条件下で、ＧＳ遺伝子は、任意の他の共形質転換された核酸と一緒に増幅される。ＧＳ選択／増幅系は、上記ＤＨＦＲ選択／増幅系と組み合わせて使用され得る。
【０２８１】
あるいは、目的の抗体、野生型ＤＨＦＲ遺伝子及び別の選択マーカー、例えば、アミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）をコードするＤＮＡ配列で形質転換又は共形質転換された宿主細胞（特に、内因性のＤＨＦＲを含む野生型宿主）は、その選択マーカーのための選択剤、例えば、アミノグリコシド抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシン又はＧ４１８を含む培地中での細胞増殖によって選択され得る。米国特許第４９６５１９９号を参照のこと。
【０２８２】
酵母での使用に適切な選択遺伝子は、酵母プラスミドＹＲｐ７中に存在するｔｒｐ１遺伝子である（Stinchcomb等, Nature, 282:39 (1979)）。このｔｒｐ１遺伝子は、トリプトファン中で増殖する能力を欠く酵母の突然変異体株、例えば、ＡＴＣＣ番号４４０７６又はＰＥＰ４−１に選択マーカーを提供する。Ｊｏｎｅｓ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、８５：１２（１９７７）。次いで、酵母宿主細胞ゲノム中のｔｒｐ１病変の存在が、トリプトファンの非存在下での増殖によって形質転換を検出するための有効な環境を提供する。同様に、Ｌｅｕ２欠損酵母株（ＡＴＣＣ  ２０，６２２又は３８，６２６）は、Ｌｅｕ２遺伝子を有する公知のプラスミドによって補完される。
【０２８３】
さらに、１．６μｍ環状プラスミドｐＫＤ１由来のベクターは、クルイベロミセス酵母の形質転換に使用され得る。あるいは、組換え仔ウシキモシンの大規模産生のための発現系が、クルイベロミセス・ラクチス（Ｋ．ｌａｃｔｉｓ）について報告された。Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｅｒｇ、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、８：１３５（１９９０）。クルイベロミセスの工業株による成熟組換えヒト血清アルブミンの分泌のための安定な多コピー発現ベクターもまた、開示されている。Ｆｌｅｅｒ等、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、９：９６８−９７５（１９９１）。
【０２８４】
（ｄ）プロモーター成分
発現及びクローニングベクターは、一般に、宿主生物によって認識され、抗体をコードする核酸に動作可能に連結された、プロモーターを含む。原核生物宿主との使用に適切なプロモーターには、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼプロモーター、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、並びにハイブリッドプロモーター、例えば、ｔａｃプロモーターが含まれる。しかし、他の公知の細菌プロモーターが適切である。細菌系における使用のためのプロモーターは、抗体をコードするＤＮＡに動作可能に連結されたシャインダルガノ（Ｓ．Ｄ．）配列もまた含む。
【０２８５】
プロモーター配列は、真核生物について公知である。事実上全ての真核生物遺伝子が、転写が開始される部位からおよそ２５から３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写の開始から７０から８０塩基上流に見出される別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、ここで、Ｎは任意のヌクレオチドであり得る。ほとんどの真核生物遺伝子の３’末端には、コード配列の３’末端へのポリＡテイルの付加のためのシグナルであり得るＡＡＴＡＡＡ配列がある。これらの配列は全て、真核生物発現ベクター中に適切に挿入される。
【０２８６】
酵母宿主との使用に適切なプロモーター配列の例には、３−ホスホグリセリン酸キナーゼ又は他の解糖酵素、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ及びグルコキナーゼについてのプロモーターが含まれる。
【０２８７】
増殖条件によって制御される転写のさらなる利点を有する誘導性プロモーターである他の酵母プロモーターは、アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロムＣ（ｉｓｏｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  Ｃ）、酸性ホスファターゼ、窒素代謝と関連する分解性酵素、メタロチオネイン、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、並びにマルトース及びガラクトース利用を担う酵素についてのプロモーター領域である。酵母発現での使用に適切なベクター及びプロモーターは、ＥＰ７３６５７にさらに記載されている。酵母エンハンサーもまた、酵母プロモーターと共に有利に使用される。
【０２８８】
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの抗体転写は、例えば、ウイルス、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）のゲノムから、又は異種哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーター若しくは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから取得されたプロモーターによって制御され得るが、かかるプロモーターが宿主細胞系と適合性であることを条件とする。
【０２８９】
ＳＶ４０ウイルスの早期及び後期プロモーターは、簡便には、ＳＶ４０ウイルス複製開始点もまた含むＳＶ４０制限断片として取得される。ヒトサイトメガロウイルスの最早期プロモーターは、簡便には、ＨｉｎｄＩＩＩ  Ｅ制限断片として取得される。ウシパピローマウイルスをベクターとして使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現させるための系は、米国特許第４４１９４４６号に開示されている。この系の修飾は、米国特許第４６０１９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ−インターフェロンｃＤＮＡの発現については、Ｒｅｙｅｓ等、Ｎａｔｕｒｅ  ２９７：５９８−６０１（１９８２）もまた参照のこと。あるいは、ラウス肉腫ウイルス長末端反復が、プロモーターとして使用され得る。
【０２９０】
（ｅ）エンハンサーエレメント成分
高等真核生物による本発明の抗体をコードするＤＮＡの転写は、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによってしばしば増加される。多くのエンハンサー配列が、現在、哺乳動物遺伝子から公知である（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン及びインスリン）。しかし、典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーを使用する。例には、複製開始点（ｂｐ１００−２７０）の後ろ側のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイルス早期プロモーターエンハンサー、複製開始点の後ろ側のポリオーマエンハンサー、及びアデノウイルスエンハンサーが含まれる。真核性プロモーターの活性化のための増強エレメントについては、Ｙａｎｉｖ、Ｎａｔｕｒｅ  ２９７：１７−１８（１９８２）もまた参照のこと。エンハンサーは、抗体コード配列に対して５’側又は３’側の位置においてベクター中にスプライスされ得るが、好ましくは、プロモーターの５’側の部位に位置する。
【０２９１】
（ｆ）転写終結成分
真核宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒト、又は他の多細胞生物由来の有核細胞）において使用される発現ベクターは、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列もまた含む。かかる配列は、真核生物又はウイルスのＤＮＡ又はｃＤＮＡの５’非翻訳領域及び時折３’非翻訳領域から、一般に入手可能である。これらの領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分においてポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含む。１つの有用な転写終結成分は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。国際公開第９４／１１０２６号及びそこに開示された発現ベクターを参照のこと。
【０２９２】
（ｇ）宿主細胞の選択及び形質転換
本明細書のベクター中のＤＮＡをクローニング又は発現するために適切な宿主細胞は、上記原核生物、酵母又は高等真核生物細胞である。この目的のために適切な原核生物には、真正細菌、例えば、グラム陰性又はグラム陽性生物、例えば、腸内細菌科、例えば、大腸菌属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば、大腸菌、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、エルウイニア属（Ｅｒｗｉｎｉａ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えば、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、セラチア属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、例えば、セラチア・マルセサンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ）、及びシゲラ属（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、並びに桿菌、例えば、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）及びバチルス・リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）（例えば、１９８９年４月１２日に公開されたＤＤ２６６７１０中に開示されたバチルス・リケニフォルミス（Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）４１Ｐ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、例えば、緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、及びストレプトミセス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）が含まれる。１つの好ましい大腸菌クローニング宿主は、大腸菌２９４（ＡＴＣＣ  ３１，４４６）であるが、他の株、例えば、大腸菌Ｂ、大腸菌Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ  ３１，５３７）及び大腸菌Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ  ２７，３２５）が適切である。これらの例は、限定ではなく例示である。
【０２９３】
全長抗体、抗体融合タンパク質及び抗体断片は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ない場合、例えば、治療抗体が、腫瘍細胞破壊においてそれ自体有効性を示す細胞傷害性剤（例えば、毒素）にコンジュゲートされる場合、細菌において産生され得る。全長抗体は、循環におけるより長い半減期を有する。大腸菌における産生は、より速く、よりコスト効率が高い。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号（Ｃａｒｔｅｒ等）、米国特許第５７８９１９９号（Ｊｏｌｙ等）、発現及び分泌を最適化するための翻訳開始領域（ＴＩＲ）及びシグナル配列を記載する米国特許第５８４０５２３号（Ｓｉｍｍｏｎｓ等）を参照のこと。大腸菌における抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００３）、ｐｐ．２４５−２５４もまた参照のこと。発現後、抗体は、可溶型画分中の大腸菌細胞ペーストから単離され得、例えば、アイソタイプに依存して、プロテインＡ又はＧカラムを介して精製され得る。例えばＣＨＯ細胞において発現された抗体を精製するためのプロセスと類似の最終精製が、実施され得る。
【０２９４】
原核生物に加えて、真核微生物、例えば、糸状菌又は酵母は、抗体コードベクターに適切なクローニング又は発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）又は一般的なパン酵母は、下等真核宿主微生物のなかで最も一般的に使用される。しかし、いくつかの他の属、種及び株が、一般に入手可能であり、本明細書で有用である、例えば、分裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）；クルイベロミセス宿主、例えば、クルイベロミセス・ラクチス、クルイベロミセス・フラジリス（Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ）（ＡＴＣＣ  １２，４２４）、クルイベロミセス・ブルガリカス（Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）（ＡＴＣＣ  １６，０４５）、クルイベロミセス・ウィッカーハミー（Ｋ．ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉｉ）（ＡＴＣＣ  ２４，１７８）、クルイベロミセス・ワルティ（Ｋ．ｗａｌｔｉｉ）（ＡＴＣＣ  ５６，５００）、クルイベロミセス・ドロソフィラルム（Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ）（ＡＴＣＣ  ３６，９０６）、クルイベロミセス・サーモトレランス（Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ）及びクルイベロミセス・マルシアヌス（Ｋ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ）など；ヤロウィア属（ｙａｒｒｏｗｉａ）（ＥＰ４０２２２６）；ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）（ＥＰ１８３０７０）；カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）；トリコデルマ・リージア（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｉａ）（ＥＰ２４４２３４）；アカパンカビ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ）；シュワンニオミセス属（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ）、例えば、シュワンニオミセス・オクシデンタリス（Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ  ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）；並びに糸状菌、例えば、アカパンカビ属（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ）、アオカビ属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）、トリポクラディウム属（Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ）など、及びアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）宿主、例えば、アスペルギルス・ニデュランス（Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ）及びアスペルギルス・ニガー（Ａ．ｎｉｇｅｒ）。治療タンパク質の産生のための酵母及び糸状菌の使用を議論する概説については、例えば、Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）を参照のこと。
【０２９５】
グリコシル化経路が「ヒト化」され、部分的に又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の産生を生じる、特定の真菌及び酵母株が選択され得る。例えば、Ｌｉ等、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）（ピキア・パストリスにおけるグリコシル化経路のヒト化を記載している）；及びＧｅｒｎｇｒｏｓｓ等、上記を参照のこと。
【０２９６】
グリコシル化された抗体の発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも誘導される。無脊椎動物細胞の例には、植物及び昆虫細胞が含まれる。多数のバキュロウイルス株及び変異体、並びにヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）（イモムシ）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ  ａｅｇｙｐｔｉ）（蚊）、ヒトスジシマカ（Ａｅｄｅｓ  ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）（蚊）、キイロショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ）（ショウジョウバエ）及びカイコガ（Ｂｏｍｂｙｘ  ｍｏｒｉ）などの宿主由来の対応する許容昆虫宿主細胞が、同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、例えば、アウトグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）ＮＰＶのＬ−１変異体及びカイコガＮＰＶのＢｍ−５株が、公に入手可能であり、かかるウイルスは、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために、本発明に従って本明細書でウイルスとして使用され得る。
【０２９７】
ワタ、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト、ウキクサ（アマ科（Ｌｉｎａｃｅａｅ））、アルファルファ（タルウマゴヤシ（Ｍ．ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ））及びタバコの植物細胞培養物もまた、宿主として利用され得る。例えば、米国特許第５９５９１７７号、米国特許第６０４０４９８号、米国特許第６４２０５４８号、米国特許第７１２５９７８号及び米国特許第６４１７４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）テクノロジーを記載している）を参照のこと。
【０２９８】
脊椎動物細胞が宿主として使用され得、培養物（組織培養物）中での脊椎動物細胞の繁殖は、常套的手順になっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胚腎臓株（懸濁培養での増殖のためにサブクローニングされた２９３又は２９３細胞、Graham等, J. Gen Virol. 36:59 (1977)）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)）；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；ｂｕｆｆａｌｏラット肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Mather等, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)）；ＭＲＣ  ５細胞；ＦＳ４細胞；及びヒト肝がん株（Ｈｅｐ  Ｇ２）である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaub等, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；並びに骨髄腫細胞株、例えば、ＮＳ０及びＳｐ２／０が含まれる。抗体産生に適切な特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ及びＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２００３）、ｐｐ．２５５−２６８を参照のこと。
【０２９９】
宿主細胞は、抗体産生のために上記発現又はクローニングベクターで形質転換され、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために必要に応じて修飾された従来の栄養培地中で培養される。
【０３００】
（ｈ）宿主細胞を培養する
本発明の抗体を産生するために使用される宿主細胞は、種々の培地中で培養され得る。市販の培地、例えば、Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）及びダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）が、宿主細胞を培養するために適切である。さらに、Ｈａｍ等、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ等、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４７６７７０４号；米国特許第４６５７８６６号；米国特許第４９２７７６２号；米国特許第４５６０６５５号；若しくは米国特許第５１２２４６９号；国際公開第９０／０３４３０号；国際公開第８７／００１９５号；又は米国再特許第３０９８５号に記載された培地のいずれかが、宿主細胞のための培地として使用され得る。これらの培地のいずれかには、必要に応じて、ホルモン及び／又は他の増殖因子（例えば、インスリン、トランスフェリン又は上皮増殖因子）、塩（例えば、塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸塩）、バッファー（例えば、ＨＥＰＥＳ）、ヌクレオチド（例えば、アデノシン及びチミジン）、抗生物質（例えば、ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物）、微量元素（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として規定される）、並びにグルコース又は等価なエネルギー供給源が補充され得る。任意の他の必要なサプリメントもまた、当業者に公知の適切な濃度で含まれ得る。培養条件、例えば、温度、ｐＨなどは、発現のために選択された宿主細胞と共に以前に使用されたものであり、当業者に明らかである。
【０３０１】
（ｘｉｖ）抗体の精製
組換え技術を使用する場合、抗体は、細胞内で産生され得、細胞周辺腔中に、又は培地に直接分泌され得る。抗体が細胞内で産生される場合、第１の工程として、宿主細胞又は溶解された断片のいずれかの特定のデブリが、例えば、遠心分離又は限外濾過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒ等、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２）は、大腸菌の細胞周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順を記載している。簡潔に述べると、細胞ペーストが、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ及びフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で、約３０分にわたって解凍される。細胞破片は、遠心分離によって除去され得る。抗体が培地中に分泌される場合、かかる発現系からの上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、Ａｍｉｃｏｎ又はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して、最初に濃縮される。プロテアーゼ阻害剤、例えば、ＰＭＳＦが、タンパク質分解を阻害するために、上述の工程のいずれか中に含まれ得、抗生物質が、偶発的な夾雑物の増殖を防止するために含まれ得る。
【０３０２】
細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析及びアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製され得、アフィニティークロマトグラフィーが、典型的に好ましい精製工程の１つの中にある。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適切性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種及びアイソタイプに依存する。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２又はγ４重鎖に基づく抗体を精製するために使用され得る（Lindmark等, J. Immunol. Meth. 62:1-13 (1983)）。プロテインＧは、全てのマウスアイソタイプ及びヒトγ３に推奨される（Guss等, EMBO J. 5:15671575 (1986)）。親和性リガンドが結合されるマトリックスは、アガロースである場合が最も多いが、他のマトリックスが利用可能である。機械的に安定なマトリックス、例えば、孔制御ガラス又はポリ（スチレンジビニル）ベンゼンは、アガロースを用いて達成できるものよりも、速い流速及び短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が、精製に有用である。タンパク質精製のための他の技術、例えば、イオン交換カラム上での分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上でのクロマトグラフィー、陰イオン又は陽イオン交換樹脂（例えば、ポリアスパラギン酸カラム）上のヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー上でのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、及び硫酸アンモニウム沈殿もまた、回収される抗体に依存して利用可能である。
【０３０３】
一般に、研究、試験及び臨床における使用のための抗体を調製するための種々の方法は、上記方法と一致して、及び／又は目的の特定の抗体のために当業者に適切と思われるように、当該技術分野で十分に確立されている。
【０３０４】
生物学的に活性な抗体を選択する
上記のように産生された抗体は、治療展望から有益な特性を有する抗体を選択するため、又は抗体の生物活性を保持する製剤若しくは条件を選択するために、１又は複数の「生物活性」アッセイに供され得る。抗体は、その抗体が惹起された抗原に結合するその能力について選択され得る。例えば、当該技術分野で公知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなど）が使用され得る。
【０３０５】
例えば、抗ＰＤＬ１抗体について、抗体の抗原結合特性は、ＰＤＬ１に結合する能力を検出するアッセイにおいて評価され得る。一部の実施態様では、抗体の結合は、例えば、飽和結合；ＥＬＩＳＡ；及び／又は競合アッセイ（例えば、ＲＩＡ）によって決定され得る。また、抗体は、例えば、治療剤としてのその効率を評価するために、他の生物活性アッセイに供され得る。かかるアッセイは、当該技術分野で公知であり、標的抗原及び抗体についての目的の使用に依存する。例えば、抗体によるＰＤ−Ｌ１遮断の生物学的効果は、例えば、米国特許第８２１７１４９号に記載されるように、ＣＤ８＋Ｔ細胞、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）マウスモデル及び／又は同系腫瘍モデルにおいて評価され得る。
【０３０６】
目的の抗原上の特定のエピトープに結合する抗体（例えば、ＰＤ−Ｌ１への実施例の抗ＰＤＬ１抗体の結合をブロックするもの）についてスクリーニングするために、常套的クロスブロッキングアッセイ、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されるものが、実施され得る。あるいは、例えば、Ｃｈａｍｐｅ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１３８８−１３９４（１９９５）に記載されるようなエピトープマッピングが、目的のエピトープに抗体が結合するかどうかを決定するために実施され得る。
【０３０７】
薬学的組成物及び製剤
ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又は本明細書に記載される抗体（例えば、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗ＣＤ２０抗体）及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物及び製剤もまた、本明細書で提供される。
【０３０８】
本明細書に記載されるような薬学的組成物及び製剤は、所望の程度の純度を有する活性成分（例えば、抗体又はポリペプチド）及び／又は抗ＨＥＲ２抗体を、１又は複数の任意選択の薬学的に許容される担体（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. 編 (1980)）と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、調製され得る。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される投薬量及び濃度においてレシピエントにとって非毒性であり、これには、以下が含まれるがこれらに限定されない：バッファー、例えば、ホスフェート、シトレート及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロライド；ベンザルコニウムクロライド；ベンゼトニウムクロライド；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；グルコース、マンノース又はデキストリンを含む、単糖類、二糖類及び他の糖（炭水化物）；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖類、例えば、ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）。本明細書の例示的な薬学的に許容される担体には、間質薬物分散剤、例えば、可溶型中性−活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶型ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、特定の例示的ｓＨＡＳＥＧＰ及び使用の方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び米国特許出願公開第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、１又は複数のさらなるグリコサミノグリカナーゼ（ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎａｓｅ）、例えばコンドロイチナーゼと組み合わされる。
【０３０９】
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されるものが含まれ、後者の製剤は、ヒスチジンアセテートバッファーを含む。
【０３１０】
本明細書の組成物及び製剤は、治療されている特定の適応症にとって必要な場合には１つよりも多い活性成分、好ましくは、互いに有害な影響を与えない相補的活性を有するもの、もまた含み得る。かかる活性成分は、意図した目的のために有効な量で組合せ中に適切に存在する。
【０３１１】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース若しくはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）中に、又はマクロエマルジョン中に、封入され得る。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０）に開示されている。
【０３１２】
徐放性調製物が調製され得る。徐放性調製物の例には、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、このマトリックスは、造形品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態である。インビボ投与に使用される製剤は、一般に滅菌である。無菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を介した濾過によって、容易に達成され得る。
【０３１３】
Ｖ．キット
別の一態様では、個体においてがんを治療する若しくはその進行を遅延させるため又はがんを有する個体の免疫機能を増強するための、ＰＤ−Ｌ１軸結合アンタゴニスト及び／又は抗ＣＤ２０抗体を含むキットが提供される。一部の実施態様では、このキットは、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト、及び個体においてがんを治療する若しくはその進行を遅延させるため又はがんを有する個体の免疫機能を増強するために抗ＣＤ２０抗体と組み合わせてＰＤ−１軸結合アンタゴニストを使用するための説明書を含む添付文書を含む。一部の実施態様では、このキットは、抗ＣＤ２０抗体、及び個体においてがんを治療する若しくはその進行を遅延させるため又はがんを有する個体の免疫機能を増強するためにＰＤ−１軸結合アンタゴニストと組み合わせて抗ＣＤ２０抗体を使用するための説明書を含む添付文書を含む。一部の実施態様では、このキットは、ＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体、並びに個体においてがんを治療する若しくはその進行を遅延させるため又はがんを有する個体の免疫機能を増強するためにＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体を使用するための説明書を含む添付文書を含む。本明細書に記載されるＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び／又は抗ＣＤ２０抗体のいずれかが、キット中に含まれ得る。
【０３１４】
一部の実施態様では、このキットは、本明細書に記載されるＰＤ−１軸結合アンタゴニスト及び抗ＣＤ２０抗体のうち１又は複数を含む容器を含む。適切な容器には、例えば、ビン、バイアル（例えば、二重チャンバーバイアル）、シリンジ（例えば、単一又は二重チャンバーシリンジ）及び試験管が含まれる。この容器は、種々の材料、例えば、ガラス又はプラスチックから形成され得る。一部の実施態様では、このキットは、ラベル（例えば、この容器上の又はこの容器に関連した）又は添付文書を含み得る。このラベル又は添付文書は、その中に含まれる化合物が、個体においてがんを治療する若しくはその進行を遅延させるため又はがんを有する個体の免疫機能を増強するために有用であり得る又は意図され得ることを示し得る。このキットは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を、さらに含み得る。
【０３１５】
抗ＣＤ２０抗体の配列
<210>  30
<211>  112
<212>  PRT
<213>  Mus sp.
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<223>  amino acid sequence of variable region of the heavy chain (VH) of
murine monoclonal anti-CD20 antibody B-Ly1
<400>  30
Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys 
1               5                   10                  15      
Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser Trp Met Asn Trp Val Lys Leu 
20                  25                  30          
Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp 
35                  40                  45              
Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr 
50                  55                  60                  
Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr Met Gln Leu Thr Ser Leu Thr 
65                  70                  75                  80  
Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Leu Cys Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly 
85                  90                  95      
Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 
100                 105                 110         
<210>  31
<211>  103
<212>  PRT
<213>  Mus sp.
<220>
<221>  MISC_FEATURE
<223>  amino acid sequence of variable region of the light chain (VL) of
murine monoclonal anti-CD20 antibody B-Ly1
<400>  31
Asn Pro Val Thr Leu Gly Thr Ser Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser 
1               5                   10                  15      
Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu 
20                  25                  30          
Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn 
35                  40                  45              
Leu Val Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr 
50                  55                  60                  
Asp Phe Thr Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val 
65                  70                  75                  80  
Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly 
85                  90                  95      
Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 
100             
<210>  32
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HH2)
<400>  32
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  33
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HH3)
<400>  33
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  34
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HH4)
<400>  34
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  35
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HH5)
<400>  35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  36
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HH6)
<400>  36
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  37
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HH7)
<400>  37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  38
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HH8)
<400>  38
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  39
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HH9)
<400>  39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  40
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HL8)
<400>  40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  41
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HL10)
<400>  41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  42
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HL11)
<400>  42
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  43
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HL12)
<400>  43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  44
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HL13)
<400>  44
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  45
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HL14)
<400>  45
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Lys Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  46
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HL15)
<400>  46
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Ser 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  47
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HL16)
<400>  47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Val Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  48
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the heavy chain (VH) 
of humanized B-Ly1 antibody (B-HL17)
<400>  48
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 
1               5                   10                  15      
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  49
<211>  115
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  amino acid sequences of variable region of the light chain (VL) 
of humanized B-Ly1 antibody B-KV1
<400>  49
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 
20                  25                  30          
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
35                  40                  45              
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro 
50                  55                  60                  
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
65                  70                  75                  80  
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 
85                  90                  95      
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105                 110         
Arg Thr Val 
115
<210>  50
<211>  6
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of HVR-H1 of GA101 Antibody
<400>  50
Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr 
1               5       
<210>  51
<211>  8
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of HVR-H2 of GA101 Antibody
<400>  51
Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp 
1               5               
<210>  52
<211>  10
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of HVR-H3 of GA101 Antibody
<400>  52
Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr 
1               5                   10  
<210>  53
<211>  16
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of HVR-L1 of GA101 Antibody
<400>  53
Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr 
1               5                   10                  15      
<210>  54
<211>  7
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of HVR-L2 of GA101 Antibody
<400>  54
Gln Met Ser Asn Leu Val Ser 
1               5           
<210>  55
<211>  9
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of HVR-L3 of GA101 Antibody
<400>  55
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr 
1               5                   
<210>  56
<211>  119
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of VH of GA101 Antibody
<400>  56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
115                 
<210>  57
<211>  115
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of VL of GA101 Antibody
<400>  57
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 
20                  25                  30          
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
35                  40                  45              
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro 
50                  55                  60                  
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
65                  70                  75                  80  
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 
85                  90                  95      
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105                 110         
Arg Thr Val 
115 
<210>  58
<211>  448
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of Heavy Chain Full Sequence of GA101 Antibody
<400>  58
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 
1               5                   10                  15      
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 
20                  25                  30          
Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
35                  40                  45              
Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 
50                  55                  60                  
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
65                  70                  75                  80  
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
85                  90                  95      
Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 
100                 105                 110         
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
115                 120                 125             
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
130                 135                 140                 
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
145                 150                 155                 160 
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
165                 170                 175     
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
180                 185                 190         
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
195                 200                 205             
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 
210                 215                 220                 
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 
225                 230                 235                 240 
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
245                 250                 255     
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
260                 265                 270         
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
275                 280                 285             
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 
290                 295                 300                 
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
305                 310                 315                 320 
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 
325                 330                 335     
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 
340                 345                 350         
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 
355                 360                 365             
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
370                 375                 380                 
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
385                 390                 395                 400 
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
405                 410                 415     
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
420                 425                 430         
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
435                 440                 445             
<210>  59
<211>  219
<212>  PRT
<213>  Artificial
<220>
<223>  Sequence of Light Chain Full Sequence of GA101 Antibody
<400>  59
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 
1               5                   10                  15      
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 
20                  25                  30          
Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 
35                  40                  45              
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro 
50                  55                  60                  
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 
65                  70                  75                  80  
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 
85                  90                  95      
Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
100                 105                 110         
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
115                 120                 125             
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
130                 135                 140                 
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
145                 150                 155                 160 
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
165                 170                 175     
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
180                 185                 190         
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
195                 200                 205             
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
210                 215                 
【実施例】
【０３１６】
本発明は、例示として提供され、限定を意味しない以下の実施例を参照して、さらに理解され得る。
【０３１７】
実施例１：  再発した／難治性の濾胞性リンパ腫及びびまん性大Ｂ細胞型リンパ腫を有する患者においてオビヌツズマブと共に投与されたＭＰＤＬ３２８０Ａの安全性及び薬理学研究
この第１相介入的非盲検多施設グローバル研究は、難治性の又は再発した濾胞性リンパ腫（ＦＬ）又はびまん性大Ｂ細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を有する患者に組み合わせて投与された静脈内ＭＰＤＬ３２８０Ａ（即ち、抗ＰＤ−Ｌ１抗体）及びオビヌツズマブ（即ち、抗ＣＤ２０抗体）の安全性、忍容性及び薬物動態を評価するために設計される。この研究の期待される持続期間は、およそ４４ヶ月である。この研究設計は、治療、単一群割り当て、非盲検、非ランダム化安全性研究である。
【０３１８】
ステージ１の主要評価項目は、（ａ）最大２１日間の時間枠内での用量制限毒性（ＤＬＴ）の発生率及び（ｂ）最大２１日間の時間枠内で観察されたＤＬＴの性質、である。
【０３１９】
副次評価項目は、以下である：（ａ）最大４４ヶ月の時間枠における、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ（ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ）ｖ４．０に従ってグレート分けされた有害事象（ＡＥ）の発生率、（ｂ）最大４４ヶ月の時間枠における抗治療抗体応答の発生率；（ｃ）サイクル２の１日目におけるＭＰＤＬ３２８０Ａの最大血清濃度（Ｃｍａｘ）；（ｄ）サイクル１、３、４及び９の１日目並びに研究終結時におけるＭＰＤＬ３２８０Ａの最小血清濃度（Ｃｍｉｎ）；並びに（ｅ）サイクル１−４の１日目及びサイクル１の８日目における、オビヌツズマブの事前用量及び注入血清濃度の端（Ｃｍａｘ、Ｃｍｉｎ）。
【０３２０】
この研究の推定登録数は、５２個体である。この研究には２つのアームが存在する。第１のアームは、実験的安全性評価ステージ（ステージ１）である。第１のアーム中に割り当てられた介入は、（ａ）ＭＰＤＬ３２８０Ａ：２１日のオビヌツズマブ導入期間後の、３週間毎にＩＶ投与される１２００ｍｇのＭＰＤＬ３２８０Ａ、及び（ｂ）オビヌツズマブ：１日目（第１の用量は分割され、２日間にわたって投与される）、サイクル１の８及び１５日目、並びにサイクル２から８の１日目にＩＶ投与される、１０００ｍｇのオビヌツズマブ、である。第２のアームは、展開ステージ（ステージ２）である。第２のアーム中に割り当てられた介入は、（ａ）ＭＰＤＬ３２８０Ａ：２１日のオビヌツズマブ導入期間後の、３週間毎にＩＶ投与される１２００ｍｇのＭＰＤＬ３２８０Ａ、及び（ｂ）オビヌツズマブ：１日目（第１の用量は分割され、２日間にわたって投与される）、サイクル１の８及び１５日目、並びにサイクル２から８の１日目にＩＶ投与される、１０００ｍｇのオビヌツズマブ、である。
【０３２１】
１８歳以上の両方の性別の個体が、この研究に適格である。組み入れ基準は以下である：（ａ）組織学的に報告された、ＣＤ２０陽性の再発した又は難治性（以前の治療の６ヵ月以内に再発したと定義される）の濾胞性リンパ腫（ＦＬ）又は縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫（ＰＭＬＢＣＬ）を含むびまん性大Ｂ細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣ）；（ｂ）スクリーニングの時点での骨髄生検（スクリーニング前の３ヶ月以内にそれを実施した場合を除く）；（ｃ）０又は１のＥａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＥＣＯＧ）活動指標、（ｄ）平均余命≧１２週間；（ｅ）Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｌｙｍｐｈｏｍａによって定義されるような、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン又はＭＲＩによる、その最も大きい寸法における少なくとも１つの二次元的に測定可能な病変≧２ｃｍ；（ｆ）適切な血液学的及び終末器官機能；（ｇ）出産可能性のある女性患者及び出産可能性のあるパートナーを有する男性患者について、高度に有効な形態（複数可）の避妊を使用することへの同意（患者及び／又はパートナーによる）；並びに（ｈ）保存腫瘍組織。
【０３２２】
除外基準は以下である：（ａ）中枢神経系リンパ腫、軟髄膜リンパ腫又は高悪性度若しくはＤＬＢＣＬへの形質転換の組織学的証拠；（ｂ）グレード３ｂのＦＬ、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）又はワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症（ＷＭ）；（ｃ）制御されない胸水貯留、心膜液貯留、又は反復性のドレナージ手順（１ヵ月に１回又はより頻繁に）を必要とする腹水症＊；（ｄ）ビスホスホネート療法又はデノスマブの継続的な使用を必要とする、制御されない高カルシウム血症又は症候性高カルシウム血症；（ｅ）モノクローナル抗体療法に対する重症のアレルギー又はアナフィラキシー反応の履歴；（ｆ）＜３０ｍｇ／日のプレドニゾン／プレドニゾロンと等価な用量で非ホジキンリンパ腫以外の適応症のために投与される場合を除き、サイクル１の開始前の４週間以内のコルチコステロイドによる定期的な治療；（ｇ）妊娠中及び授乳中の女性；（ｈ）自己免疫疾患の履歴；（ｉ）確認された進行性多巣性白質脳症（ＰＭＬ）の履歴を有する患者；（ｊ）事前の同種異系骨髄移植又は事前の実質臓器移植を有する患者；（ｋ）特発性肺線維症、器質化肺炎（例えば、閉塞性細気管支炎）、薬物誘導性間質性肺炎、特発性間質性肺炎、又はスクリーニング時の胸部ＣＴスキャン毎の活動性間質性肺炎の証拠の履歴＊＊；（ｌ）ＨＩＶについての陽性試験；（ｍ）慢性Ｂ型肝炎感染の履歴、又は活動性若しくは慢性のＢ型肝炎若しくはＣ型肝炎についての陽性試験結果；（ｍ）顕著な心血管疾患、例えば、心疾患（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｃｌａｓｓ  ＩＩ以上）、直近３ヶ月以内の心筋梗塞、不安定な不整脈又は不安定狭心症；（ｎ）過敏症又はオビヌツズマブによる事前治療；（ｏ）研究登録前の１２ヶ月以内のフルダラビン又はＣａｍｐａｔｈ（登録商標）；（ｐ）ＣＤ１３７アゴニスト、又は抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１及び抗ＰＤ−Ｌ１治療抗体を含む免疫チェックポイント遮断療法による事前治療；（ｑ）サイクル１、１日目の前の、６週間又は薬物の５半減期以内のいずれか短い方の、全身性免疫賦活剤（インターフェロン、インターロイキン−２が含まれるがこれらに限定されない）による治療；並びに（ｒ）サイクル１、１日目の前の２週間以内の、プレドニゾン、シクロホスファミド、アザチオプリン、メトトレキサート、サリドマイド及び抗腫瘍壊死因子（抗ＴＮＦ）剤が含まれるがこれらに限定されない全身性免疫抑制薬物療法による治療＊＊＊。
＊留置カテーテルを有する患者は、適格である。
＊＊照射野中の放射線間質性肺炎（線維症）の履歴は許容される。
＊＊＊吸入されたコルチコステロイド及びミネラルコルチコイドは許容される。
【０３２３】
実施例２：  マウスにおける腫瘍容積及びリンパ球集団に対する、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせた抗ＣＤ２０抗体の効果
マウスに、１００μｌと２００μｌとの間の容積中の、ＨＢＳＳ＋マトリゲル中２５０万のＡ２０細胞を、右片側性胸郭領域中に皮下接種した。これらのマウスに、腫瘍を増殖させた。腫瘍が、およそ８０−１５０ｍｍ３（０日目、接種のおよそ６日後）の平均腫瘍容積に達したときに、これらのマウスを、以下に概説する治療群中に採用した。治療を０日目に開始した。これらの治療群中に採用されなかったマウス（即ち、異なる腫瘍容積に起因する）は、安楽死させた。
【０３２４】
治療群：
１．０日目、３日目の抗Ｒａｇｗｅｅｄ（ｍＩｇＧ２ａ）１０ｍｇ／ｋｇ用量、１０日目及び１７日目の５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ＋Ｍｕ  ＩｇＧ１  抗ｇｐ１２０  ９３３８、１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ、ＴＩＷ×３  ｎ＝１０
２．０日目、３日目の抗Ｒａｇｗｅｅｄ（ｍＩｇＧ２ａ）１０ｍｇ／ｋｇ用量、１０日目及び１７日目の５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ＋Ｍｕ  ＩｇＧ１  抗ＰＤ−Ｌ１  ６Ｅ１１．１．９、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＴＩＷ×３  ｎ＝１０
３．０日目、３日目のＭｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ＣＤ２０  Ｒａｇｗｅｅｄ／５Ｄ２  １０ｍｇ／ｋｇ用量、１０日目及び１７日目の５ｍｇ／ｋｇ＋Ｍｕ  ＩｇＧ１  ｇｐ１２０  ９３３８、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＴＩＷ×３  ｎ＝１０
４．０日目、３日目のＭｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ＣＤ２０  Ｒａｇｗｅｅｄ／５Ｄ２  １０ｍｇ／ｋｇ用量、１０日目及び１７日目の５ｍｇ／ｋｇ＋Ｍｕ  ＩｇＧ１  抗ＰＤ−Ｌ１  ６Ｅ１１．１．９、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ＴＩＷ×３  ｎ＝１０
【０３２５】
Ｍｕ  ＩｇＧ１  抗ｇｐ１２０、Ｍｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ＰＤ−Ｌ１を、３、５、７、１０、１２、１４、１７、１９及び２１日目に投与した。組合せ群中の抗体を、次々に投薬した。組み合わせた用量容積は、マウス１匹当たり３００μＬを超えた。抗ＰＤ−Ｌ１抗体を、ＰＢＳ又は２０ｍＭヒスチジンアセテート、２４０ｍＭショ糖、０．０２％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ−２０）、ｐＨ＝５．５中に希釈した。
【０３２６】
全てのマウスを、４日目又は５日目に出血させて、Ｂ細胞枯渇の効率を決定した。血液を、イソフルラン誘導性麻酔（効果のために吸入）下で眼窩出血によって収集した（収集容積は２００μｌを超えた）。眼窩を交互に入れ替えた。各治療群について、％ＣＤ１９＋Ｂリンパ球、％ＣＤ４＋Ｔリンパ球及び％ＣＤ８＋Ｔリンパ球を決定するための４日目の血液ＦＡＣＳ解析が、それぞれ、図１Ａ、図１Ｂ及び図１Ｃに示される。
【０３２７】
測定値及び体重を、１週間当たり少なくとも２回収集した。＞１５％の体重減少を示すマウスを、毎日計量し、＞２０％の体重を喪失した場合、安楽死させた。研究全体を通じて、全てのマウスの臨床観察を、１週間に２回実施した。有害な臨床的問題を示すマウスを、重症度に依存して、例えば最大で１日１回、より頻繁に観察した。瀕死の場合、マウスを安楽死させた。腫瘍容積が３，０００ｍｍ３を超えたとき、又は３ヶ月後に腫瘍が形成しなかった場合に、マウスを安楽死させた。以前の研究により、８週間後に、残留腫瘍は、低減された増殖速度を有し、有意に悪性度が低いことが示されている。これらの残留腫瘍を、１週間に１回測定し、計量した。８週間後に存在する任意の大きい又は積極的に増殖している腫瘍について、これらの特定のマウスについての測定値及び体重を、１週間に２回収集した。各治療群についての腫瘍容積対時間（０日目と３０日目との間）のプロットを、図２に示す。混合モデル化手法を使用して、同じ動物からの腫瘍容積の反復された測定値を経時的に解析した。Ｐｉｎｈｅｉｒｏ等、Ｓｔａｔ  Ｍｅｄ．２０１４  Ｍａｙ  １０；３３（１０）：１６４６−６１（Ｅｐｕｂ  ２０１３  Ｄｅｃ  ３）。この手法は、研究の終了前の反復された測定値及び中程度の離脱の両方を扱う。３次回帰スプラインを使用して、異なる治療におけるｌｏｇ２（腫瘍容積）の経時変化に非線形プロファイルをフィットさせた。フィッティングを、ｎｌｍｅパッケージ、バージョン３．１  １０８（Ｒ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ；Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ）を使用して、Ｒ、バージョン２．１５．２内の線形混合効果モデル（ｌｉｎｅａｒ  ｍｉｘｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｍｏｄｅｌ）を介して実施した。抗ＣＤ２０抗体と組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１抗体による治療は、いずれかの単一薬剤による治療よりも、腫瘍増殖を阻害し、腫瘍増殖を遅延させるにあたって、より有効であった。
【０３２８】
上記実験を、Ａ２０ｐＲＫ−ＣＤ２０−ＧＦＰを用いてマウスにおいて反復した。１００匹のマウスに、上記のように２５０万のＡ２０ｐＲＫ−ＣＤ２０−ＧＦＰ細胞を接種し、これらのマウスに、腫瘍を増殖させた。腫瘍が、およそ１００−２００ｍｍ３（０日目、接種のおよそ７日後）の平均腫瘍容積に達したときに、動物を、以下に概説する治療群中に採用した。治療を０日目に開始した（例えば、異なる腫瘍容積に起因して以下の治療群中に採用されなかったマウスは、安楽死させた）。
【０３２９】
治療群：
１．−２日目、１日目の抗Ｒａｇｗｅｅｄ（ｍＩｇＧ２ａ）１０ｍｇ／ｋｇ用量、８日目及び１５日目の５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ＋Ｍｕ  ＩｇＧ１  抗ｇｐ１２０  ９３３８、１０ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ、ｔｉｗ×３  ｎ＝１０
２．−２日目、１日目の抗Ｒａｇｗｅｅｄ（ｍＩｇＧ２ａ）１０ｍｇ／ｋｇ用量、８日目及び１５日目の５ｍｇ／ｋｇ  ＩＰ＋Ｍｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ＰＤＬ１  ２５Ａ１  ＤＡＮＡ、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ｔｉｗ×３  ｎ＝１０
３．−２日目、１日目のＭｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ＣＤ２０  Ｒａｇｗｅｅｄ／５Ｄ２  １０ｍｇ／ｋｇ用量、８日目及び１５日目の５ｍｇ／ｋｇ＋Ｍｕ  ＩｇＧ１  ｇｐ１２０  ９３３８、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ｔｉｗ×３  ｎ＝１０
４．−２日目、１日目のＭｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ＣＤ２０  Ｒａｇｗｅｅｄ／５Ｄ２  １０ｍｇ／ｋｇ用量、８日目及び１５日目の５ｍｇ／ｋｇ＋Ｍｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ＰＤＬ１  ２５Ａ１  ＤＡＮＡ、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ｔｉｗ×３  ｎ＝１０
５．１日目のＭｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ｈＣＤ２０  ２Ｈ７−ｍＩｇＧ２ａ／５Ｄ２  １０ｍｇ／ｋｇ並びに８日目及び１５日目の５ｍｇ／ｋｇ＋Ｍｕ  ＩｇＧ１  ｇｐ１２０  ９３３８、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ｔｉｗ×３  ｎ＝１０
６．１日目のＭｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ｈＣＤ２０  ２Ｈ７−ｍＩｇＧ２ａ／５Ｄ２  １０ｍｇ／ｋｇ並びに８日目及び１５日目の５ｍｇ／ｋｇ＋Ｍｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ＰＤＬ１  ２５Ａ１  ＤＡＮＡ、１０ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、ｔｉｗ×３  ｎ＝１０
【０３３０】
Ｍｕ  ＩｇＧ１  抗ｇｐ１２０、Ｍｕ  ＩｇＧ２ａ  抗ＰＤ−Ｌ１を、３、５、７、１０、１２、１４、１７、１９及び２１日目に投与した。組合せ群中の抗体を、次々に投薬した。組み合わせた用量容積は、マウス１匹当たり３００μＬを超えた。抗ＰＤ−Ｌ１抗体を、ＰＢＳ又は２０ｍＭヒスチジンアセテート、２４０ｍＭショ糖、０．０２％ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ−２０）、ｐＨ＝５．５中に希釈した。
【０３３１】
全ての動物を、２日目又は３日目に出血させて、Ｂ細胞枯渇の効率を決定した。血液を、イソフルラン誘導性麻酔（効果のために吸入）下で眼窩出血によって収集した（収集容積は２００μｌを超えなかった）。眼窩を交互に入れ替えた。
【０３３２】
測定値及び体重を、１週間当たり少なくとも２回収集した。＞１５％の体重減少を示すマウスを、毎日計量し、＞２０％の体重を喪失した場合、安楽死させた。研究全体を通じて、全てのマウスの臨床観察を、１週間に２回実施した。有害な臨床的問題を示すマウスを、重症度に依存して、例えば最大で１日１回、より頻繁に観察した。瀕死の場合、マウスを安楽死させた。腫瘍容積が３，０００ｍｍ３を超えたとき、又は３ヶ月後に腫瘍が形成しなかった場合に、マウスを安楽死させた。以前の研究により、８週間後に、残留腫瘍は、低減された増殖速度を有し、有意に悪性度が低いことが示されている。これらの残留腫瘍を、１週間に１回測定し、計量した。８週間後に存在する任意の大きい又は積極的に増殖している腫瘍について、これらの特定のマウスについての測定値及び体重を、１週間に２回収集した。各治療群についての腫瘍容積対時間（０日目と３０日目との間）のプロットを、図３に示す。図２に利用したのと同じ混合モデル化手法を使用して、同じ動物からの腫瘍容積の反復された測定値を経時的に解析した。抗ＣＤ２０抗体と組み合わせた抗ＰＤ−Ｌ１抗体による治療は、いずれかの単一薬剤による治療よりも、腫瘍増殖を阻害し、腫瘍増殖を遅延させるにあたって、より有効であった。
【０３３３】
本明細書に引用される全ての特許、特許出願、文書及び論文は、その全内容が本明細書に出典明示により援用される。
【図１】
2017501157.tif 000009
【図２−１】
2017501157.tif 000010
【図２−２】
2017501157.tif 000011
【図３−１】
2017501157.tif 000012
【図３−２】
2017501157.tif 000013
【図３−３】
2017501157.tif 000014
【配列表】
2017501157000001.app
【国際調査報告】
2017501157.tif 000015
2017501157.tif 000016
2017501157.tif 000017
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