(57)【要約】  本発明は、抗ヒトＬＩＧＨＴ抗体、新規の医療用途および医療方法に関する。
2017504327.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、かつ当該ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２、１３Ｈ０４および３１Ａ１０からなる群から選択される抗体と競合する、抗体またはその断片。
【請求項２】
ｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴの両方を特異的に結合し、
ｉｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを結合することについて、０１Ｃ０２または１３Ｈ０４の可変領域を含んでいる抗体と競合し、かつ
ｉｉｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、０１Ｃ０６および１８Ｅ０４から選択される抗体の可変領域を含んでいる抗体と競合しない可変領域；または
ｉｖ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴの両方を結合し、
ｖ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを結合することについて、３１Ａ１０の可変領域を含んでいる抗体と競合し、かつ
ｖｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、０１Ｃ０６および１８Ｅ０４から選択される抗体の可変領域を含んでいる抗体と競合する可変領域を含んでおり、
（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）が、任意に、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて決定される、請求項１に記載の抗体または抗体断片。
【請求項３】
（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）が、ヒトのＩｇＧ４抗体の形態（任意にＩｇＧ４（ＰＥ））における可変領域を用いて決定される、請求項１に記載の抗体または断片。
【請求項４】
上記抗体は、ヒトのＩｇＧ４の形態（任意にＩｇＧ４（ＰＥ））にある、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体または断片。
【請求項５】
配列番号３６８と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列または配列番号３６８を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体または断片。
【請求項６】
配列番号３７０と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列または配列番号３７０を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体または断片。
【請求項７】
ラムダ軽鎖可変ドメインを含んでいる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体または断片。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体または断片であって、
以下のＨＣＤＲ１：
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２と競合する；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合する；ならびに
ｉｉｉ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
からなる群から選択されるＨＣＤＲ１配列を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、抗体または断片。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体または断片であって、
以下のＨＣＤＲ２：
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２と競合する；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合する；ならびに
ｉｉｉ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
からなる群から選択されるＨＣＤＲ２配列を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、抗体または断片。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体または断片であって、
以下のＨＣＤＲ３：
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２と競合する；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合する；ならびに
ｉｉｉ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
からなる群から選択されるＨＣＤＲ３配列を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、抗体または断片。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の抗体または断片であって、
ｉ．請求項８〜１０の（ａ）に記載されているＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２と競合する；
ｉｉ．請求項８〜１０の（ａ）に記載されているＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１３Ｈ０４と競合する；または
ｉｉｉ．請求項８〜１０の（ａ）に記載されているＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、３１Ａ１０と競合する
を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、抗体または断片。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体または断片であって、
以下のＬＣＤＲ１：
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２と競合する；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合する；ならびに
ｉｉｉ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
からなる群から選択されるＬＣＤＲ１配列を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、抗体または断片。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の抗体または断片であって、
以下のＬＣＤＲ２：
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２と競合する；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合する；ならびに
ｉｉｉ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
からなる群から選択されるＬＣＤＲ２配列を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、抗体または断片。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体または断片であって、
以下のＬＣＤＲ３：
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２と競合する；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合する；ならびに
ｉｉｉ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
からなる群から選択されるＬＣＤＲ３配列を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、抗体または断片。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の抗体または断片であって、
ｉ．請求項１２〜１４の（ａ）に記載されているＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２と競合する；
ｉｉ．請求項１２〜１４の（ａ）に記載されているＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１３Ｈ０４と競合する；または
ｉｉｉ．請求項１２〜１４の（ａ）に記載されているＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列、ここで、上記抗体または断片が、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、３１Ａ１０と競合する
を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、抗体または断片。
【請求項１６】
２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについてｍＡｂ６６４と競合する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の抗体または断片。
【請求項１７】
上記ｈＬＩＧＨＴがヒト細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の抗体または断片。
【請求項１８】
上記抗体または断片が、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに対する受容体を発現しているヒトの上皮細胞からの（例えば、インビトロにおけるヒトＨＴ−２９細胞からの）ＩＬ−８分泌を低下させ、任意に、上記抗体または断片が、ｈＬＩＧＨＴに特異的な抗体の非存在下において、ＨＴ−２９インビトロコントロールアッセイにおいて、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを発現しているＨＴ−２９細胞によるＩＬ−８産生と比べて少なくとも２０％、ＩＬ−８分泌を低下させる、インビトロ請求項１〜１７のいずれか１項に記載の抗体または断片。
【請求項１９】
上記細胞が初代細胞である、請求項１８に記載の抗体または断片。
【請求項２０】
上記抗体または断片が、ウサギＬＩＧＨＴタンパク質（配列番号４２３）およびヒトＬＩＧＨＴタンパク質（配列番号３０８）を特異的に結合し、ヒトＬＩＧＨＴの細胞外タンパク質に対する結合親和性は、ウサギＬＩＧＨＴの細胞外タンパク質に結合する親和性を下回らない、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の抗体または断片。
【請求項２１】
ヒトＨＶＥＭおよび／またはヒトリンホトキシンβ受容体に対する２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴの結合を、ＨＴＲＦアッセイにおける１×１０−８以下のＩＣ５０をともなって、阻害する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体または断片。
【請求項２２】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体または断片、ならびに希釈剤、賦形剤または担体を含んでおり、任意に抗炎症薬をさらに含んでいる、薬学的組成物。
【請求項２３】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体または断片、ならびに２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列について陽性または陰性であると、ヒトの遺伝子型を特定するための手段および／または２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドをコードについて陽性または陰性であると、ヒトの表現型を特定するための手段を備えている、キット。
【請求項２４】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体または断片、ならびに２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列について陽性または陰性であると、ヒトの遺伝子型を特定するための手段および／または２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドをコードについて陽性または陰性であると、ヒトの表現型を特定するための手段を備えている、キット。
【請求項２５】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体のＨＣＤＲ３をコードしている、核酸。
【請求項２６】
配列番号３７５、３７６、１４７、１５３、７および１３から選択される配列と少なくとも９５％同一または１００％同一であるヌクレオチド配列を含んでいる、請求項２５に記載の核酸。
【請求項２７】
請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体の（１）ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン、または（２）重鎖または軽鎖をコードしている、核酸。
【請求項２８】
配列番号３６７、１および１４１から選択される配列と少なくとも９５％同一または１００％同一であるヌクレオチド配列を含んでいる、請求項２７に記載の核酸。
【請求項２９】
配列番号３６９、１５および１５５から選択される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含んでいる、請求項２７または２８に記載の核酸。
【請求項３０】
請求項２５〜２９のいずれか１項に記載の核酸を含んでおり、任意にＣＨＯベクターまたはＨＥＫ２９３ベクターである、ベクター。
【請求項３１】
請求項２５〜２９のいずれか１項に記載の核酸または請求項３０に記載のベクターを含んでいる、宿主細胞。
【請求項３２】
以下の１つ以上：
ｉ．ヒトにおけるＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマから選択されるサイトカインの分泌；
ｉｉ．ヒトの白血球の増殖；ならびに
ｉｉｉ．ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒト上皮細胞によるｈＬＩＧＨＴの結合
を低下させることによって、ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置するためまたは予防するためのヒトに対する投与用の薬剤の製造における、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体または断片の、使用。
【請求項３３】
以下の１つ以上またはすべて：
ｉ．ヒトにおけるＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマから選択されるサイトカインの分泌；
ｉｉ．ヒトの白血球の増殖；ならびに
ｉｉｉ．ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒト上皮細胞によるｈＬＩＧＨＴの結合
を低下させることによって、ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置するか、または予防する方法であって、
ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する抗体または断片の治療的に有効な量を上記ヒトに投与することを包含しており、
上記抗体または断片は、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の抗体または断片である、方法。
【請求項３４】
上記ヒトが、２１４Ｅ  ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型が特定されているか、および／または上記ヒトが、２１４Ｅ  ポリペプチドについて陽性であると表現型が特定されている、請求項３２に記載の使用、または請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ヒトにおける炎症もしくは自己免疫性の疾患もしくは好ましくない健康状態を処置するためもしくは予防するため、またはヒトにおける血管形成を低減させるためもしくは予防するための、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の抗体、断片、組成物、キット、方法または使用。
【請求項３６】
上記疾患または好ましくない健康状態が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン氏病、リューマチ性関節炎、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植拒絶反応、同種移植拒絶反応、移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）、喘息、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤ）、敗血症性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群および気道炎症からなる群から選択される、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の抗体、断片、組成物、キット、方法または使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、抗ヒトＬＩＧＨＴ抗体、新たな医薬用途および方法に関する。
【０００２】
〔背景技術〕
ＬＩＧＨＴ（リンホトキシン様、誘導可能な発現を示し、ＨＶＥＭに対して糖タンパク質Ｄと競合する、Ｔリンパ球によって発現される受容体）は、慢性の炎症性自己免疫疾患の過程に関与している潜在的なサイトカインターゲットの１つである（Immunity. 1998 Jan; 8(l):21-30, "LIGHT, a new member of the TNF superfamily, and lymphotoxin alpha are ligands for herpesvirus entry mediator", Mauri DN et al）。リガンドのＴＮＦスーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）のメンバーとして、ＬＩＧＨＴは、ＴＮＦＳＦ１４またはＣＤ２５８としても知られている。ＬＩＧＨＴは、４時間以内に現れ、１２〜２４時間までに最高に達し、かつ４８時間までに消失する厳密に制御されている様式において、活性化によってＴ細胞の表面に発現される（J Biol Chem. 2002 Nov 8;277(45):42841-51. Epub 2002 Sep 4, "Mechanisms regulating expression of the tumor necrosis factor-related LIGHT gene. Role of calcium-signaling pathway in the transcriptional control", Castellano R et al）。しかし、ＬＩＧＨＴはまた、未成熟な樹状細胞の表面（J Immunol. 2000 Apr 15;164(8):4105-10, "LIGHT, a TNF-like molecule, costimulates T cell proliferation and is required for dendritic cell-mediated allogeneic T cell response", Tamada K et al）、および腸のＴ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞（J Immunol. 2005 Jan 15;174(2):646-53, "LIGHT is constitutively expressed on T and NK cells in the human gut and can be induced by CD2-mediated signalling", Cohavy O et al）に、検出可能なレベルにおいて恒常的に存在する。ＬＩＧＨＴは、その生物学的な作用を、３つのＴＮＦスーパーファミリー受容体（リンホトキシンβ受容体（ＬＴβＲ）（Science. 1994 Apr 29;264(5159):707-10, "A lymphotoxin-beta-specific receptor", Crowe PD et al；J Immunol. 1997 Oct 1;159(7):3288-98, "Characterization of lymphotoxin-alpha beta complexes on the surface of mouse lymphocytes", Browning JL et al）、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）（Cell. 1996 Nov l;87(3):427-36, "Herpes simplex virus-1 entry into cells mediated by a novel member of the TNF/NGF receptor family", Montgomery Rl et al）、およびデコイ受容体３（ＤｃＲ３）（J Biol Chem. 1999 May 14;274(20):13733-6, "A newly identified member of tumor necrosis factor receptor superfamily (TR6) suppresses LIGHT-mediated apoptosis", Yu KY et al）が挙げられる）を結合することによって調節する。
【０００３】
ＬＴβＲ−Ｆｃ融合タンパク質を用いて処理されたマウスは、大腸炎のＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢｈｉｇｈ  Ｔ細胞移入モデルにおける、ＣＤ４＋Ｔ細胞媒介性の病態である、炎症性の症状を抑えていた。また、遺伝子導入Ｔ細胞に特異的な恒常的な、ＬＩＧＨＴの発現は、ヒトの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）と類似する自己免疫疾患様の病態をともなって重篤な腸の炎症に導くことを示している（J Immunol. 2005 Jun 15;174(12):8173-82, "The critical role of LIGHT in promoting intestinal inflammation and Crohn's disease", Wang J et al；J Immunol. 2001 Dec l;167(ll):6330-7, "Constitutive expression of LIGHT on T cells leads to lymphocyte activation, inflammation, and tissue destruction", Shaikh RB et al；J Immunol. 2001 Nov 1;167(9):5099-105, "The critical role of LIGHT, a TNF family member, in T cell development", Wang J et al；J Clin Invest. 2004 Mar;113(6):826-35, "Dysregulated LIGHT expression on T cells mediates intestinal inflammation and contributes to IgA nephropathy", Wang J et al）。ＬＩＧＨＴを発現しているリンパ球は、ＬＩＧＨＴ遺伝子導入マウスに由来する腸間膜リンパ節細胞がＲＡＧ−／−に移入されているとき、ＩＢＤ様の症状（例えば、ヒトのクローン氏病、裂溝状潰瘍、回腸炎、ならびに結腸のＩＦＮ−γおよびＴＮＦの増加）を誘導し得る（J Immunol. 2005 Jun 15;174(12):8173-82, "The critical role of LIGHT in promoting intestinal inflammation and Crohn's disease", Wang J et al）。ヒトの疾患におけるＬＩＧＨＴ発現の向上が、活発なクローン氏病を有している患者において観察された（上述のCohavy et al 2005 supra；上述のWang et al 2005；上述のWang et al 2004；J Immunol. 2004 Jul l;173(l):251-8, "LIGHT expression by mucosal T cells may regulate IFN-gamma expression in the intestine", Cohavy O et al）。また、ＬＩＧＨＴは、ＩＢＤ患者の腸のＴ細胞において増大していると証明されている（上述のCohavy et al 2004）。また、遺伝的な証拠が、ＩＢＤにおけるＬＩＧＨＴの役割を支持している（J Immunol. 2001 Nov l;167(9):5122-8, "Genomic characterization of LIGHT reveals linkage to an immune response locus on chromosome 19pl3.3 and distinct isoforms generated by alternate splicing or proteolysis". Granger SW et al；Am J Hum Genet. 2000 Jun;66(6):1863-70. Epub 2000 Apr 21, "Genomewide search in Canadian families with inflammatory bowel disease reveals two novel susceptibility loci", Rioux JD et al；Inflamm Bowel Dis. 2004 May;10(3):173-81, "Inflammatory bowel disease is linked to 19pl3 and associated with ICAM-12, Low JH et al；Gastroenterology. 2003 Feb;124(2):521-36, "The genetics of inflammatory bowel disease", Bonen DK, Cho JH）。
【０００４】
また、ヒトＬＩＧＨＴ（ｈＬＩＧＨＴ）は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）に関与している。例えば、ＬＩＧＨＴは、Ｂ７−ＣＤ２８経路と無関係な、増殖およびＴｈ１サイトカインの産生を増強させる潜在的な共刺激活性を、Ｔ細胞にもたらすと示されている（例えば上述のTamada et al 2000）。抗ＨＶＥＭモノクローナル抗体、ＨＶＥＭ−ＩｇまたはＬＴβＲ融合タンパク質のいずれかによるＬＩＧＨＴ−ＨＶＥＭの遮断は、同種異系Ｔ細胞応答を阻害する（例えば、Tamada et al 2000 supra; J Immunol. 1998 Aug 15;161(4):1786-94, "Antibodies to TR2 (herpesvirus entry mediator), a new member of the TNF receptor superfamily, block T cell proliferation, expression of activation markers, and production of cytokines", Harrop JA et alを参照）。さらに、ＬＴβＲ−Ｉｇまたはマウス抗ＬＩＧＨＴ抗体のインビボ投与は、マウスの急性ＧｖＨＤモデルにおける抗宿主−細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を阻害する（Nat Med. 2000 Mar;6(3):283-9, "Modulation of T-cell-mediated immunity in tumor and graft-versus-host disease models through the LIGHT co-stimulatory pathway", Tamada K et al）。炎症性  炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン氏病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）によって大部分が代表される）は、持続性の炎症状態に導く腸管内容物の抗原に対する異常な免疫応答によって特徴づけられる消化管の炎症性障害の一群である。World J Gastroenterol. 2010 Sep 14;16(34):4264-71, "Intestinal epithelial cells in inflammatory bowel diseases", Roda G ei alに対する参照がなされている。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の病態は、消化管系の恒常性および経口免疫寛容の維持を担っている１つ以上の要素における原発性の異常をともなっていると思われる。最も重要な要素は、腸管上皮細胞（ＩＥＣ）によって大部分が形成されている複雑な系である、腸管の障壁によって代表される。ＩＥＣは、粘液の生成および粘液の組成の制御において能動的な役割を有しており；それらは、腸管粘膜を通過する抗原輸送を制御可能な物理的な障壁をもたらす。同時に、それらは、抗原を処理し、腸管免疫系の細胞に対して直接に抗原を提示することによって、ノンプロフェッショナル抗原提示細胞の役割を果たすことができる。一方で、免疫細胞は、上皮性の増殖および分化を制御しており、障壁内における双方向性の連続的なクロストークを生じる。粘液の特性に始まり粘液の成分に至る、上皮接合に始まりトルライク受容体、および変更された免疫応答に至る、障壁機能の種々の変化は、ＩＢＤにおいて同定されている。これらの欠陥は、上皮損傷の原発性の原因または二次的な影響であるかは、理解されるべき状態のままである。著者らは、上皮障壁の考えられる役割を再検討し、ＩＢＤの病原におけるＩＥＣの役割について特に述べている。
【０００５】
〔発明の概要〕
本発明は、抗ＬＩＧＨＴ抗体および断片、ならびにヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置するため、または予防するための新規の医療用途を提供する。この目的のために、本発明は、
２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、かつ当該ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、１Ｃ０２、１３Ｈ０４および３１Ａ１０からなる群から選択される抗体と競合する、抗体またはその断片を提供する。
【０００６】
また、本発明は、関連する薬学的組成物、キット、方法、核酸、ベクター、宿主細胞および使用を提供する。
【０００７】
本発明のさらなる構成は、以下の通りである。
【０００８】
（第１の構成）
ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する抗体またはその断片であって、
上記抗体または断片は、ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を、当該抗体または断片が当該ヒトに投与される方法において、処置すること、または予防することを目的としており、
上記抗体または断片が、ａ〜ｃの１つ以上を低下させることによって、上記ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置すること、または予防することを目的としている、抗体またはその断片。
【０００９】
ａ．ヒトにおけるＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマからなる群から選択されるサイトカインの分泌；
ｂ．ヒトの白血球の増殖；ならびに
ｃ．ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒト上皮細胞によるｈＬＩＧＨＴの結合。
【００１０】
（第２の構成）
２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに特定的に結合し、かつ当該ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、３１Ａ１０、２８Ｃ０９、１４Ｂ０９、６２Ｃ０１、１３Ｈ０４、１４４Ｆ０５、４２Ａ０２および１１７Ｃ０６からなる群から選択される抗体と競合する、抗体またはその断片。
【００１１】
（第３の構成）
ａ〜ｃの１つ以上を低下させることによって、ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置するため、または予防するためのヒトに対する投与用の薬剤の製造における、ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する、抗体またはその断片の使用。
【００１２】
ａ．ＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマからなる群から選択される、ヒトにおけるサイトカインの分泌；
ｂ．ヒトの白血球の増殖；ならびに
ｃ．ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒト上皮細胞によるｈＬＩＧＨＴの結合。
【００１３】
（第４の構成）
ａ〜ｃの１つ以上またはすべてを低下させることによってヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処理するか、または予防する方法であって、
ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する抗体または断片の治療的に有効な量を、上記ヒトに投与することを包含している、方法。
【００１４】
ａ．ＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマからなる群から選択されるサイトカインの、ヒトにおける分泌；
ｂ．ヒトの白血球の増殖；ならびに
ｃ．ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒト上皮細胞によるｈＬＩＧＨＴの結合。
【００１５】
（第５の構成）
ｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴの両方に特異的に結合し、
ｉｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを結合することについて０１Ｃ０２の可変領域を含んでいる抗体と競合し、かつ
ｉｉｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、０１Ｃ０６および１８Ｅ０４から選択される抗体の可変領域を含んでいる抗体と競合する、可変領域を含んでいる、抗体または抗体断片。
【００１６】
また、本発明は、薬学的組成物、キット、核酸、ベクターおよび宿主を提供する。
【００１７】
〔図面の簡単な説明〕
図１：
図１は、ＴＨ２９細胞によるＩＬ−８分泌を誘導するために組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅが培養物に加えられているＨＴ２９  ＩＬ−８サイトカイン放出アッセイにおける、８つすべての同定されたリードｍＡｂ候補物を示している。このＩＬ−８分泌は、ｈＬＩＧＨＴに対する抗体が、細胞表面に発現されているｈＬＩＧＨＴ受容体を介して、ＨＴ２９細胞に対する組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅの結合を阻害する場合に、なくされる。簡単に説明すると、種々の濃度の、精製された４１の抗体ヒットのそれぞれとともにあらかじめインキュベートされている、結腸直腸腺がん細胞株であるＨＴ２９細胞を、プレートにまき、ｈＬＩＧＨＴを用いて処理した。
【００１８】
図２：
図２は、検出２次抗体のみ（灰色のヒストグラムにおいて塗りつぶしとして示されている）と比べた、ＣＨＯ−Ｓ−ｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅ細胞に対する、０．６４μｇ／ｍｌにおける８つすべてのリードクローンの結合を示している。当該図面における用語「抗体なし」は、検出２次抗体の欠如ではなく、使用されている１次抗体の使用なしを指定している。図２からのデータは、１回の実験から得られている。アイソタイプコントロール（マウスＩｇＧ／カッパ、Sigma M9269）を、特異性を示すために平行して試験した（図面における最後のパネル）。
【００１９】
図３：
図３は、８つのリード抗体を、実施例２に概要の説明されているようなＨＴＲＦアッセイにおいて、組換えｈＬＩＧＨＴの、その受容体（ヒトＨＶＥＭまたはヒトＬＴβＲのいずれか）に対する結合をなくさせるそれらの能力について試験した。図３Ａは、組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対するＬＴβＲ結合をなくす抗体のリード群を示している。図３Ｂは、ｈＬＩＧＨＴに対するＨＶＥＭ結合の消失を示している。図３Ａおよび３Ｂはいずれも、少なくとも３回の独立した実験を代表する１回の実験から得られている。
【００２０】
図４：
図４Ａは、ＨＴ２９細胞によるＩＬ−８分泌を誘導するために組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅが加えられているＨＴ２９  ＩＬ−８放出アッセイにおける、さらなる２つのハイブリドーマに由来するリードｍＡｂ候補物を示している。このＩＬ−８分泌は、ｈＬＩＧＨＴに対する抗体が、細胞表面に発現されているｈＬＩＧＨＴ受容体を介して、ＨＴ２９細胞に対する組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅの結合を阻害する場合に、なくされる。簡単に説明すると、ハイブリドーマ上澄から精製された種々の濃度の抗体ヒットのそれぞれとあらかじめインキュベートされている、結腸直腸腺がん細胞株であるＨＴ２９細胞を、プレートにまき、ｈＬＩＧＨＴを用いて処理した。
【００２１】
図４Ｂは、一様なＢ細胞（ＢＣＴ）からクローン化された、同定された２つのリードｍＡｂ候補物を示している。いずれの場合にも、データは、少なくとも２回の独立した実験を代表する１回の実験から得られている。
【００２２】
図５：
図５は、検出２次抗体のみ（灰色のヒストグラムにおいて塗りつぶしとして示されている）と比べた、さらなる２つのハイブリドーマに由来する０．６４μｇ／ｍｌにおけるリード抗体の、ＣＨＯ−Ｓ−ｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅ細胞に対する結合を示している。当該図面における用語「抗体なし」は、検出２次抗体の欠如ではなく、使用されている１次抗体の使用なしを指定している。図５からのデータは、１回の実験から得られている。アイソタイプコントロール（マウスＩｇＧ／カッパ、Sigma M9269）を、特異性を示すために試験した（図面における最後のパネル）。
【００２３】
図６：
図６は、さらなる２つのハイブリドーマに由来する抗体を、実施例２に概要の説明されているようなＨＴＲＦアッセイにおいて、組換えｈＬＩＧＨＴの、その受容体（ヒトＨＶＥＭまたはヒトＬＴβＲ）に対する結合をなくさせるそれらの能力について試験した。図６Ａは、組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対するＬＴβＲ結合をなくす抗体のリード群を示している。図６Ｂは、ｈＬＩＧＨＴに対するＨＶＥＭ結合の消失を示している。図６Ａおよび６Ｂはいずれも、少なくとも２回の独立した実験を代表する１回の実験から得られている。アイソタイプコントロールのマウスＩｇＧ１抗体（Sigma M9269）を、両方のアッセイにおいて試験した（塗りつぶしの丸として示されている）。
【００２４】
図６Ｃは、ｈＬＩＧＨＴに対するＬＴβＲ結合の消失を示しており、図６Ｄは、リードＢＣＴｍＡｂによるｈＬＩＧＨＴに対するＨＶＥＭ結合の消失を示している。社内で生成された結合しないＩｇＧ４（ＰＥ）アイソタイプコントロールを、両方のアッセイにおいて試験した（塗りつぶしの丸として示されている）。
【００２５】
図７：
図７は、ＳＰＲアッセイにおけるヒトＬＩＧＨＴ−２１４ＥおよびウサギＬＩＧＨＴに対する抗体の結合を示している。ＬＩＧＨＴ抗体を、抗ヒトのＩｇＧセンサチップ表面に捕捉させ、それからヒトおよびウサギのタンパク質を、補足されているｍＡｂの全体に通した。結果は、時間に対する応答単位（ＲＵ）として表されている。ヒトＬＩＧＨＴのセンサグラムは、黒であり；ウサギＬＩＧＨＴのセンサグラムは、明るい灰色である。
【００２６】
図８：
図８は、４つの抗体の最後の群を、実施例１３に概要の説明されているＨＴＲＦアッセイにおいて、組換えヒトＬＩＧＨＴの、その受容体（ヒトＨＶＥＭまたはヒトＬＴβＲのいずれか）に対する結合を消失させるそれらの能力について試験した。図８Ａは、組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対するＨＶＥＭ結合を消失させる抗体のリード群を示している。図８Ｂは、ｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対するＬＴβＲ結合の消失を示している。図８Ａおよび８Ｂは、２回の独立した実験を代表する１回の実験から得られている。社内で生成された結合しないＩｇＧ４（ＰＥ）のアイソタイプコントロールを、両方のアッセイにおいて試験した。
【００２７】
図８Ｃは、ＨＴ２９細胞によってＩＬ−８分泌を誘導するために培養物に組換えＬＩＧＨＴ−ｈ２１４Ｅが加えられているＨＴ２９  ＩＬ−８放出アッセイにおける抗体のリード群を示している。このＩＬ−８分泌は、ｈＬＩＧＨＴに対する抗体が、細胞表面に発現されているｈＬＩＧＨＴ受容体を介して、ＨＴ２９細胞に対する組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅの結合を阻害する場合に、なくされる。簡単に説明すると、ハイブリドーマ上澄から精製された種々の濃度の抗体ヒットのそれぞれとあらかじめインキュベートされている、結腸直腸腺がん細胞株であるＨＴ２９細胞を、プレートにまき、ｈＬＩＧＨＴを用いて処理した。社内で生成された結合しないＩｇＧ４（ＰＥ）のアイソタイプコントロールも試験した。
【００２８】
〔発明の詳細な説明〕
本発明は以下の局面を提供する。
【００２９】
本発明は、炎症性腸疾患（例えばＵＤまたはＣＤ）を処置するため、もしくは予防するため、または気道の炎症性の疾患もしくは好ましくない健康状態を処置するため、もしくは予防するために有用である。
【００３０】
１．抗体またはその断片がヒトに投与される方法において、ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置するため、または予防するための、抗体またはその断片であって、
上記抗体またはその断片は、ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、上記抗体またはその断片は、ａ〜ｃの１つ以上を低下させることによって、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置すること、または予防することを目的としている、抗体またはその断片。
【００３１】
ａ．ＩＬ−２（インターロイキン−２）、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマからなる群から選択されるサイトカインの、ヒトにおける分泌；
ｂ．ヒトの白血球の増殖；ならびに
ｃ．ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒト上皮細胞によるｈＬＩＧＨＴの結合。
【００３２】
したがって、本発明者らは、ヒトにおけるＬＩＧＨＴ媒介性の疾患および好ましくない健康状態を処置する方法および／または予防する方法として（ａ）、（ｂ）および（ｃ）の低下をまず同定し、それらが、この目的のための抗体および抗体断片を提供する。
【００３３】
一例において、（ａ）、（ｂ）もしくは（ｃ）の低下、または本明細書に開示されている任意の他の低下は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患もしくは好ましくない健康状態のリスクのあるヒト、または当該疾患もしくは好ましくない健康状態になっているヒトにおけるレベルと比べて、少なくとも１０または２０％の低下である。一例において、前者は、上記抗体または断片の投与前の、局面１に述べられているヒトであり；他の一例において、前者のヒトは、異なるヒトである。一例において、上記低下は、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０または６０％である。
【００３４】
一例において、上記抗体または断片は、（以下にさらに説明されているように）インビトロアッセイにおける関連するサイトカインの分泌の低下をもたらすことができ、したがって、そのような抗体または断片のヒトに対する投与は、（ａ）の低下に導く。
【００３５】
一例において、上記抗体または断片は、（以下にさらに説明されているように）インビトロアッセイにおいて白血球（例えばＰＢＭＣ）の増殖の低下をもたらすことができ、したがって、そのような抗体または断片のヒトに対する投与は、（ｂ）の低下に導く。
【００３６】
一例において、上記抗体または断片は、（以下にさらに説明されているように）インビトロアッセイにおいてｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒトの上皮細胞によるｈＬＩＧＨＴの結合の低下をもたらすことができ、したがって、そのような抗体または断片のヒトに対する投与は、（ｃ）の低下に導く。
【００３７】
付加的または代替的に、上記疾患の評価は、処置されたヒトからのサンプルを用いて実施され得る。例えば、J Clin Immunol. 2004 Jan;24(1):74-85; “Increased expression of CCL20 in human inflammatory bowel disease”; Kaser A et alに対する参照がなされる。この刊行物は、一般的に適用可能な技術の一例を示しており、当該技術では、（１）組織生検を用い、かつ（２）インビボにおける低下したサイトカイン分泌を示す低下したサイトカインレベルを、抗体を用いた処置の後に読み取る。類似の方法は、本発明の抗体を受けているヒトにおける１つ以上のサイトカインの分泌の低下を決定するために、使用され得る。当業者は、例えば、組織生検、免疫組織化学、免疫蛍光、組織染色、サイトカインｍＲＮＡの定量化（例えば、ＰＣＲ（例えばTaqman（商標） PCR）を用いる）サイトカインタンパク質の検出および定量化（例えば、サイトカイン特異的なツールである抗体および定量化（例えば、ＥＬＩＳＡまたは他の標準的なタンパク質定量化技術）を用いる）の１つ以上の使用によって、患者および患者のサンプルにおけるサイトカインレベルを評価する技術に通じている。例えば、上記疾患または好ましくない健康状態がＧＩ管の疾患または好ましくない健康状態（例えばＩＢＤ）である場合、本発明の抗体を受けている患者からの、関連する腸組織の生検、これに続く、サイトカインｍＲＮＡおよび／またはサイトカインタンパク質の定量化（例えば、定量的ＰＣＲを用いる）を実施し得る。結果は、抗体投与前の同じ患者からの生検された関連する組織におけるサイトカインの定量化と比較され得るか、または抗ＬＩＧＨＴ処置、もしくは当該疾患もしくは好ましくない健康状態のための処置を受けていない、同じ疾患もしくは好ましくない健康状態になっている、他のヒトと比較され得る。このようにして、当業者は、本発明の抗体がヒト受容者におけるサイトカインの分泌を低下させることを決定し得る。腸組織レベルを評価する代わりに、上記疾患または好ましくない健康状態の性質および位置に依存して、ヒト患者からの異なる組織またはサンプルを代わりに使用し得る。例えば、上記疾患または好ましくない健康状態が気道（例えば肺）の疾患または好ましくない健康状態である場合、サイトカイン評価のために肺サンプルまたは他の気道組織サンプルを採取することができる。代替的に、当業者にとって明らかなように、気管支肺洗浄（ＢＡＬ）サンプルを使用し得る。他の一例において、いくつかの疾患または好ましくない健康状態について、本発明の抗体を受けているヒトから採取され、それから上記抗体を受ける前のレベルと比べるか、または上述されている通りに未処置のヒトにおけるレベルと比べた、血液サンプル、血清サンプルまたは血漿サンプルにおけるサイトカインの低下を評価し得る。
【００３８】
当該分野において知られている通り、用語「白血球」は、例えば、リンパ球、多形核の白血球および単球の１つ以上を包含している。当業者にとって容易に明らかになるように、用語「単球」は、例えば、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）または単球由来細胞（例えば樹状細胞（ＤＣ））を包含している。例えば、Immunobiology. 2013 Nov;218(11):1392-401. doi: 10.1016/j.imbio.2013.07.005. Epub 2013 Jul 25; “Leukoreduction system chambers are an efficient, valid, and economic source of functional monocyte-derived dendritic cells and lymphocytes”, Pfeiffer IA et alを参照すればよい。
【００３９】
白血球（例えば、粘膜固有層リンパ球（ＬＰＬ））の増殖は、当業者にとって明らかなように、組織生検、染色および組織学を用いて評価され得る。ヘマトキシリンおよびエオシン染色（Ｈ＆Ｅ染色またはＨＥ染色）は、例えば、リンパ球に浸透していることについて、ヒト組織の全範囲を確かめるために組織学において広く使用されており、組織学における主要な染色の１つである。それは、医療上の診断に最も広く使用されている染色であり、しばしば最も基準になり、したがって、本発明のように白血球の増殖を評価するために使用され得る。例えば、ＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態になっているヒトからのＧＩ管組織（例えば腸組織）は、ＬＰＬの増殖レベルのために、入手され得、染色され得、評価され得る。抗体の投与前の同じヒトから得られた組織における浸透の程度と比べられる本発明の抗体を受けているヒトからの組織、または上記疾患もしくは好ましくない健康状態のリスクのあるヒトもしくは当該疾患もしくは好ましくない健康状態になっているヒトからの組織の間において、比較がなされ得る。例えば、上記比較は、ＩＢＤにかかっている同じ（または異なる）ヒトから採取されたヒトの腸組織の間である。
【００４０】
例えば、本発明の抗体を受けているヒトからの生検された関連する組織のインビトロ受容体占有アッセイを用いて、ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒト上皮細胞によるｈＬＩＧＨＴの結合を評価し得る。比較は、抗体投与前のヒト、または同じ疾患もしくは好ましくない健康状態になっているか、もしくはそのリスクのある他のヒトからの、アッセイされた組織を用いて、なされ得る。受容体占有アッセイは、当業者によく知られている。
【００４１】
消化管上皮、その損傷および炎症性腸疾患に対する関連の細胞生物学は、Deuring et al, “The cell biology of the intestinal epithelium and its relation to inflammatory bowel disease”, The International Journal of Biochemistry & Cell Biology 45 (2013) 798-806に概説されている。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、明らかに増加し続けている発生率およびより重篤な臨床的表現型の傾向を有している、胃腸管に発症する、慢性の炎症性の障害である。上記疾患は、腸管フロラの障壁機能における欠失が関与し得ることを示唆している、管腔フロラに対する過度の免疫応答によって特徴づけられており、この意見は複数の研究が支持している（いずれもDeuring et alに引用されている、Cucchiara et al., 2012；Jostins et al., 2012；Manichanh et al., 2012；Salzman et al., 2007）。ＩＢＤは、２つの主要な群：クローン氏病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）を包含している。ＣＤ患者は、胃腸管全体に炎症性病変を有し得、ＵＣ患者における炎症は、結腸に限られている。
【００４２】
Hisamatsu et al（“Immune aspects of the pathogenesis of inflammatory bowel disease”, Pharmacology & Therapeutics 137 (2013) 283-297）およびそれに引用されている文献に対する参照がなされている。腸上皮細胞は、病原体による侵入および抗原の進入を防ぐための障壁としての役割を果たしている。ＩＥＣは、腸管内腔の表面を覆っている粘液層の重要な防御要素であるムチンおよびトレフォイル因子を産生する。また、ＩＥＣは、古典的な先天性免疫機序である種々の種類の抗菌ペプチド（例えばディフェンシン）を産生する。したがって、この障壁システムの崩壊は、病原性微生物だけでなく、共生的な細菌および食品抗原による進入を許し得る。また、ＩＥＣは、いくつかの先天性免疫受容体（例えばトルライク受容体（ＴＬＲ））を介した病原体に対するセンサとして作用する。ＴＬＲシグナル伝達経路な、ＩＥＣにおける炎症誘発性のサイトカインおよびケモカインの産生を誘導する。ＩＥＣおよび免疫細胞の間におけるクロストークの役割についての重要な知見が報告されている。ＩＥＣにおけるＮＦ−κＢシグナル伝達は、腸の免疫恒常性に重要な役割を果たしている（Nenci et al., 2007；Zaph et al., 2007）。Nenciet et alは、ＩＥＣにおけるＮＥＭＯ（ＩＫＫγとも呼ばれる）を欠失しているマウスが自然発生的な大腸炎を場合によって発症することを報告した。ＮＥＭＯノックアウトマウスにおいて、アポトーシスを起こすＩＥＣの数が増加し、上皮障壁の完全性の低下を生じる。さらに、それらのマウスは、ＩＥＣによって産生される抗菌性のディフェンシンペプチドの低下した産生を示した。これらの変化は、腸内フロラの移行および先天性免疫細胞の動員を導く。Gunther et al.は、ＩＥＣにおけるカスパーゼ−８が、ＴＮＦ−αに誘導される壊死性の細胞死から、それらの細胞を保護することに重要な役割を果たすことを証明した。
【００４３】
肉芽腫形成は、ヒトのクローン氏病の、最も重要な病理的な特徴の１つである。Mizoguchi et alは、Ｆ４／８０陽性の成熟ＣＤ１１ｃ＋樹状細胞（ＤＣ）が、ＩＬ−２３を産生し、マウスの大腸炎モデルにおける肉芽腫形成の原因になることを証明した（Mizoguchi et al., 2007）。Ｔｈ１免疫応答は、クローン氏病において支配的である。実際に、クローン氏病のＬＰにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞は、Ｔ−ｂｅｔを発現し、大量のインターフェロン（ＩＦＮ）−γを産生した（Matsuoka et al., 2004）。Sakuraba et alは、クローン氏病にかかっている患者の腸間膜のリンパ節におけるＤＣがＴｈ１免疫応答およびＴｈ１７免疫応答を強く誘導することを証明した（Sakuraba et al., 2009）。
【００４４】
Nat Med. 2011 May; 17(5): 596-603. doi:10.1038/nm.2356, “The tumor necrosis factor family member LIGHT is a target for asthmatic airway remodelling”, Taylor A Doherty et al、およびそれに引用されている文献に対する参照がなされている。慢性の喘息にかかっている個体は、上皮下線維症および平滑筋過形成によって特徴づけられる、気道の構造的な再構築に起因すると考えられている、肺機能における進行性の低下を示す。ＬＩＧＨＴは、アレルゲンばくろ後の、肺の炎症細胞によって発現されると示された。
【００４５】
（疾患および好ましくない健康状態におけるサイトカインの役割）
Muzes et al, World J Gastroenterol 2012 November 7; 18(41): 5848-5861 ISSN 1007-9327 (印刷物) ISSN 2219-2840 (オンライン), “Changes of the cytokine profile in inflammatory bowel Diseases”に対する参照がなされている。
【００４６】
サイトカインは、正常な腸の恒常性を維持するための、粘膜と関連する免疫系の不可欠なシグナルである。炎症の惹起を支持する、それらのプロファイルの不均衡は、炎症性の腸疾患（ＩＢＤ）（例えば、クローン氏病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ））に見られるような、疾患状態に導き得る。炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、−６、−８、−１２、−１７、−２３、ＩＦＮ−ガンマまたはＴＮＦアルファ）の、ＩＢＤにおける役割は、ＵＳおよびＣＤの惹起および進行と関連している。原発性の炎症性メディエータが、Ｔｈ１サイトカイン（例えば、インターロイキン（ＩＬ）−１２、インターフェロン（ＩＦＮ）−γおよび腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α）であるため、ＣＤは、Ｔ−ヘルパー（Ｔｈ）１−媒介性疾患としてしばしば説明されている。
【００４７】
ＴＮＦ様リガンドの、それらの受容体に対する結合は、細胞増殖、細胞分裂、および細胞生存に直接的に関与する細胞内経路の引き金になる。ＴＮＦ／ＴＮＦ−受容体タンパク質スーパーファミリーのほとんどのメンバーは、免疫細胞によって発現されており、免疫応答の多数の構成要素において重要な役割を果たしている。ＴＮＦ−αは、ＩＢＤの病態におけるマスターサイトカインである。それは、接着分子の発現、線維芽増殖、凝結促進因子ならびに細胞毒性、アポトーシス性および急性期の応答の開始を介して、多面的な作用を及ぼす。ＩＢＤにおけるＴＮＦ−αの源は、部分的に先天的な免疫細胞（例えば、マクロファージまたは単球）、および分化されたＴｈ１細胞である。ＴＮＦ−αの血清レベルは、ＵＣおよびＣＤの臨床上の活性と相関している［３１］。それは、ＩＢＤにおける慢性の炎症における、調整する役割を果たしている。ＣＤにおけるＴＮＦ−αの役割は広く調べられている。血清可溶型のＴＮＦ受容体１および２（ｓＴＮＦＲ１および２）に対するＴＮＦ−αの結合は、炎症誘発性のシグナル伝達を開始させる。ｓＴＮＦＲ１および２のレベルは、ＣＤにおいて上昇している。
【００４８】
ＴＮＦファミリーの他のメンバーである腫瘍壊死因子様因子（ＴＬ１Ａ）は、死亡受容体３（ＤＲ３）に対する結合によってＩＦＮ−γ分泌を刺激する。ＤＲ３は、ＵＣおよびＣＤの粘膜生検からの、高い割合の細胞によって発現されており、ＩＦＮ−γレベルの増加は、ＩＢＤ患者における疾患の活動とともに観察されている。ＴＬ１Ａ／ＤＲ３系は、ＣＤの病態に関与している。粘膜固有層のマクロファージは、ＣＤにおいて顕著に発現が促進されているＴＬ１Ａの主要な産生者である。ＴＬ１ＡおよびＩＬ−２３は、粘膜Ｔ細胞によるＩＦＮ−γの産生を相乗的に促進することが分かっている。ＦＮ−Ｙは：ＴＨ１  Ｔ細胞によって産生される。炎症がいったん引き起こされると、ＩＦＮ−γが、産生され、続いて免疫系の種々の分子および経路を介して作用して、炎症過程を増強させる。ＩＦＮ−γが炎症および自己免疫疾患における第１の炎症誘発性サイトカインであるという主流の見解に導いている、ＩＦＮ−γの炎症誘発性を広く実証している非常に多くの文献がある。インターフェロンガンマは、マウスにおける実験的な炎症性腸疾患に原因として関与している（Ito et al, Clinical and Experimental Immunology (2006), 146: 330-338）。その研究は、ＩＦＮ−γ−／−マウスが、体重低下、組織学的スコアおよびＭＰＯ活性の程度について、ＤＳＳを用いた刺激後に、弱められた大腸炎を示すことを証明している。ＩＦＮ−γは、重篤なＩＢＤ様の症状を示しているＤＳＳ処理されたＷＴマウスの結腸において次第に強く産生された。
【００４９】
インターロイキン−２（ＩＬ−２）は、Ｔ細胞によって産生され、エフェクターＴ細胞に分化するためにＴ細胞にとって最も重要である。また、ＩＬ−２は、Ｔ細胞増殖にとって重要である。エフェクターＴ細胞がＩＢＤにおける損傷を引き起こすための主要な細胞種と考えられているので、これは、ＩＢＤにとって重要である。
【００５０】
ＩＬ−８（インターロイキン−８；ａｋａ  ＣＸＣＬ８）は、好中球の活性化、ならびに末梢血から組織内および炎症性部位への好中球の移動を主に媒介している。ＩＬ−８の組織レベルは、正常な結腸組織と比べて、活発なＵＣにおいてより高いと分かっており、その血中濃度は、ＵＣの内視鏡的および組織学的な重篤さと関連している。ＩＬ−８は、炎症性の環境およびがんにとって重要である（例えば、“The Chemokine CXCL8 in Carcinogenesis and Drug Response”, ISRN Oncol. 2013 Oct 9;2013:859154; Gales D et al；およびFuture Oncol. 2010 Jan;6(1):111-6. doi: 10.2217/fon.09.128; “CXCL8 and its cognate receptors in melanoma progression and metastasis”, Singh S et al参照）。がんにおいて特に、ＩＬ−８は、血管新生を補助することによって寄与すると考えられている。
【００５１】
２．上記ヒトにおける上皮細胞の、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の損傷を処置するため、または予防するための、局面１の抗体または断片。
【００５２】
本明細書に説明されているように、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の病態は、消化管系の恒常性および経口免疫寛容の維持を担う要素の１つ以上における原発性の異常をともなっていると思われる。最も重要な要素は、腸管上皮細胞（ＩＥＣ）によって大部分が形成されている複雑な系である、腸管の障壁によって代表される。したがって、本発明のこの局面は、炎症性腸疾患（例えば、ＵＣまたはＣＤ）を処置するため、または予防するために有用である。また、この局面は、気道の炎症性の疾患または好ましくない健康状態を処置するため、または予防するために有用である。
【００５３】
３．ＨＶＥＭおよびＬＴβＲから選択されるｈＬＩＧＨＴ受容体に対するｈＬＩＧＨＴの結合と拮抗する、局面１または２の抗体または断片。
【００５４】
一例において、ｈＬＩＧＨＴ受容体は、上皮細胞、消化管細胞、結腸細胞、腸管細胞、肺上皮細胞、または滑膜細胞から選択されるヒト細胞によって発現されている。本発明のこの局面は、炎症性腸疾患（例えば、ＵＣまたはＣＤ）を処置するため、または予防するために有用である。また、この局面は、気道の炎症性の疾患または好ましくない健康状態を処置するため、または予防するために有用である。一例において、この局面は、喘息を処置するため、または予防するために有用である。
【００５５】
他の実施形態において、上記抗体または断片は、ＦｃβＲおよびＤｃＲ３から選択されるｈＬＩＧＨＴ受容体に対するｈＬＩＧＨＴの結合に拮抗する。
【００５６】
４．上記白血球が、多形核白血球、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、リンパ球、Ｔ細胞、樹状細胞（ＤＣ細胞）、およびナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）からなる群から選択される、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００５７】
５．上記白血球が粘膜固有層リンパ球（ＬＰＬ）であり、上記疾患または好ましくない健康状態が、胃腸管（ＧＩ管）の疾患または好ましくない健康状態である、局面４の抗体または断片。
【００５８】
６．上記上皮細胞が、胃腸細胞、結腸細胞、腸細胞および気道（例えば肺）の上皮細胞からなる群から選択される細胞を含んでいる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００５９】
７．ヒトにおけるＴ細胞の増殖を低下させることによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００６０】
一例において、上記抗体または断片は、インビトロアッセイ（例えば以下にさらに説明されているような、インビトロアッセイにおけるＤＣ細胞／Ｔ細胞など）におけるＴ細胞の増殖の低下をもたらすことができ、したがって、そのような抗体または断片の、上記ヒトに対する投与は、当該ヒトにおけるＴ細胞の増殖の低下を導く。
【００６１】
８．ｈＬＩＧＨＴおよび上記ヒトの白血球の間における相互作用と拮抗することによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００６２】
一例において、上記抗体または断片は、インビトロアッセイ（例えば以下にさらに説明されているような、インビトロアッセイにおけるＭＬＲ）における白血球（例えば単核球）の増殖の低下をもたらすことができ、したがって、したがって、そのような抗体または断片の、上記ヒトに対する投与は、当該ヒトにおける白血球の増殖の低下を導く。
【００６３】
９．Ｔ細胞によって媒介されるＬＩＧＨＴ／ＬＩＧＨＴ受容体の、上記ヒトにおける相互作用と拮抗することによって上記ヒトの白血球の増殖を低下させることによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００６４】
一例において、上記抗体または断片は、インビトロアッセイにおける白血球（例えば単核球）の増殖の低下をもたらすことができ、上記抗体または断片は、当該アッセイにおいて、Ｔ細胞によって媒介されるＬＩＧＨＴ／ＬＩＧＨＴ受容体の相互作用と拮抗し、したがって、そのような抗体または断片の、上記ヒトに対する投与は、当該ヒトにおける白血球の増殖の低下を導く。
【００６５】
１０．ヒトにおけるＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターロイキンガンマから選択されるサイトカインの分泌を低下させることによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００６６】
一例において、上記抗体または断片は、（ｉ）ＩＬ−２およびインターフェロンガンマ、（ｉｉ）ＩＬ−２およびＴＮＦアルファ、または（ｉｉｉ）インターフェロンガンマおよびＴＮＦアルファの、上記ヒトにおける分泌を低下させることによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するためである。
【００６７】
一例において、上記抗体または断片は、ＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマから選択されるサイトカインの、インビトロアッセイ（例えば以下にさらに説明されているような、インビトロアッセイにおけるＭＬＲ）における分泌の低下をもたらすことができ、したがって、そのような抗体または断片の、上記ヒトに対する投与は、上記ヒトにおける選択される（複数の）サイトカインの分泌の低下を導く。
【００６８】
１１．上記ヒトにおけるＩＬ−８サイトカインの分泌を低下させることによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００６９】
一例において、上記抗体または断片は、インビトロアッセイ（例えば以下にさらに説明されているような、インビトロアッセイにおけるＭＬＲ）におけるＩＬ−８の分泌の低下をもたらすことができ、したがって、そのような抗体または断片の、上記ヒトに対する投与は、当該ヒトにおけるＩＬ−８の分泌の低下を導く。
【００７０】
１２．Ｔ細胞との樹状細胞（ＤＣ細胞）の上記ヒトにおける相互作用によって媒介される上記サイトカインの分泌を低下させることによって、上記疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、局面１１または１２の抗体または断片。
【００７１】
一例において、上記抗体または断片は、インビトロアッセイにおけるＤＣ細胞／Ｔ細胞（例えば以下にさらに説明されているような）における上記（複数の）サイトカインの分泌の低下をもたらすことができ、したがって、そのような抗体または断片の上記ヒトに対する投与は、当該ヒトにおける上記（複数の）サイトカインの分泌の低下を導く。
【００７２】
１３．上皮細胞の損傷がヒトにおける上記疾患または好ましくない健康状態の症状または原因である、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００７３】
１４．上記ヒトが、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、同種移植拒絶反応、移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）、または気道の炎症にかかっているか、またはこれらのリスクがあり、上記方法が、上記ヒトにおけるＩＢＤ、同種移植拒絶反応、ＧｖＨＤまたは気道の炎症を処置するか、または予防する、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００７４】
上述のいずれかの局面の一例において、上記ヒトは、炎症性もしくは自己免疫性の疾患もしくは好ましくない健康状態にかかっているか、もしくはこれらのリスクがあるか、またはそれらであると診断されている。
【００７５】
１５．上記ｈＬＩＧＨＴが２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴである、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００７６】
一例において、上記抗体または断片は、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを特異的に結合し、上記ヒトにおける上記疾患または好ましくない健康状態は、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴまたは２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴによって媒介されている。一実施形態において、上記疾患または好ましくない健康状態は、２１４Ｅおよび２１４Ｋの複数のサブユニットの混合物（例えば、２つの２１４Ｅサブユニットおよび１つの２１Ｋサブユニット；または２つの２１４Ｋサブユニットおよび１つの２１４Ｅサブユニット）を含んでいるｈＬＩＧＨＴによって媒介されている。これは、ヘテロ接合体（一方のＬＩＧＨＴアリールが２１４Ｅアリールであり、他方のＬＩＧＨＴアリールが２１４Ｋアリールである）のヒトを処置するために有用である。
【００７７】
１６．上記抗体または断片が２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００７８】
これは、２１４Ｋ  ヘテロ接合体のヒト、またはヘテロ接合体（２１４Ｅ＆２１４Ｋ）のヒトを処置するために有用である。
【００７９】
１７．上記ヒトは、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列について遺伝子型が決定されている、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００８０】
一例において、上記ヒトは、当該ヒトに対する上記抗体または断片の投与前に、遺伝子型が決定されている。
【００８１】
１８．上記ヒトは、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドについて表現型が決定されている、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００８２】
一例において、上記ヒトは、当該ヒトに対する上記抗体または断片の投与前に、表現型が決定されている。
【００８３】
１９．ｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴの両方を特異的に結合し、
ｉｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを結合することについて、０１Ｃ０２または１３Ｈ０４の可変領域を含んでいる抗体と競合し、かつ
ｉｉｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、０１Ｃ０６および１８Ｅ０４から選択される抗体の可変領域を含んでいる抗体と競合しない、可変領域を含んでいるか、または
ｉｖ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴの両方を特異的に結合し、
ｖ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを結合することについて、３１Ａ１０の可変領域を含んでいる抗体と競合し、かつ
ｖｉ．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、０１Ｃ０６および１８Ｅ０４から選択される抗体の可変領域を含んでいる抗体と競合する、可変領域を含んでいる、抗体または断片。
【００８４】
２０．（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて決定されている、局面１９の抗体または断片。
【００８５】
２１．（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）が、ヒトのＩｇＧ４抗体の形態（任意にＩｇＧ４（ＰＥ））における可変領域を用いて決定されている、局面１９または２０の抗体または断片。
【００８６】
２２．上記抗体が、ヒトのＩｇＧ４の形態（任意にＩｇＧ４（ＰＥ））である、局面１９、２０または２１の抗体または断片。
【００８７】
２３．配列番号３６８と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、局面１９〜２２のいずれか１つの抗体または断片。
【００８８】
２４．配列番号３７０と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、局面１９〜２３のいずれか１つの抗体または断片。
【００８９】
２５．配列番号３６８を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、局面１９〜２４のいずれか１つの抗体または断片。
【００９０】
２６．配列番号３７０を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、局面１９〜２５のいずれか１つの抗体または断片。
【００９１】
２７．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、かつ１Ｃ０２、１Ｃ０６、１８Ｅ０４、９８Ｃ０７、３１Ａ１０、２９Ｃ０９、１４Ｂ０９、６２Ｃ０１、１３Ｈ０４、１４４Ｆ０５、４２Ａ０５および１１７Ｃ０６からなる群から選択される抗体と、ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、競合する、抗体またはその断片。
【００９２】
いずれかの局面の一例において、競合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（当該技術は、当業者にとって容易に理解できる）によって決定される。ＳＰＲは、Biacore（商標）、Proteon（商標）または標準的な他のＳＰＲ技術を用いて実施され得る。そのような競合は、例えばｈＬＩＧＨＴの同一のエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体／断片に、起因し得る。
【００９３】
２８．上記抗体または断片が局面１〜１８のいずれか１に係る、局面１９〜２７のいずれか１つの抗体または断片。
【００９４】
２９．ラムダ軽鎖可変領域（任意にヒト型である）を含んでいる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【００９５】
本発明のいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片は、ヒト型であるか、またはヒト化されている。必要に応じて、さらに、上記抗体または断片は、ヒトの定常領域またはヒト化されている定常領域（例えば、ヒトのＦｃおよび／またはヒトのＣＬ）をさらに含んでいる。本発明のいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片の上記可変領域は、遺伝子導入動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ラクダおよびサメ）によって生成されている。本発明のいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片の上記可変領域は、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ、またはイーストディスプレイによって生成されているか、または同定されている。
【００９６】
本発明のいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片は組換え体である。
【００９７】
本発明のいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片は、組換えの哺乳類細胞、細菌細胞、昆虫細胞、植物細胞または酵母細胞によって産生されている。一例において、上記哺乳類細胞は、ＣＨＯ細胞ＨまたはＥＫ２９３細胞であり、上記抗体または断片は、ＣＨＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞の糖修飾を含んでいる。
【００９８】
本発明のいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片は単離されている。
【００９９】
３０．２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、かつ１Ｃ０２、１Ｃ０６、１８Ｅ０４、３１Ａ１０、２９Ｃ０９、１４Ｂ０９、１３Ｈ０４、１４４Ｆ０５および４２Ａ０２からなる群から選択される抗体と、上記２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、競合する、上述のいずれかの局面の抗体または断片。代替物において、上記群は、３１Ａ１０、２９Ｃ０９、１４Ｂ０９、１３Ｈ０４、１４４Ｆ０５および４２Ａ０２からなる。一例において、選択される抗体は３１Ａ１０である。一例において、選択される抗体は１Ｃ０２である。一例において、選択される抗体は１Ｃ０２である。一例において、選択される抗体は１３Ｈ０４である。一例おいて、選択される抗体は３１Ａ１０である。
【０１００】
３１．（ｉ）２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、かつ１Ｃ０２、１Ｃ０６、１８Ｅ０４、１３Ｈ０４および４２Ａ０２からなる群から選択される抗体と、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて競合し；（ｉｉ）２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、かつ１Ｃ０２、１Ｃ０６、１８Ｅ０４、１４Ｂ０９、１３Ｈ０４および４２Ａ０２からなる群から選択される抗体と、２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて競合する、局面１〜２９のいずれか１つの抗体または断片。これらの抗体または断片は、ＥアリールおよびＫアリールの両方に結合し、したがって、すべてのヒト（Ｅ／Ｅホモ接合体、Ｋ／Ｋホモ接合体およびＥ／Ｋヘテロ接合体）にとって普遍的に有用である。代替物において、上記群は、１４Ｂ０９、１３Ｈ０４および４２Ａ０２からなる。一例において、選択される抗体は１Ｃ０２である。一例において、選択される抗体は１３Ｈ０４である。
【０１０１】
３２．（ｉ）２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、かつ３１Ａ１０、２９Ｃ０９および１４４Ｆ０５からなる群から選択される抗体と、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて競合し、かつ（ｉｉ）２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、かつ３１Ａ１０、２９Ｃ０９および１４４Ｆ０５からなる群から選択される抗体と、２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて競合する、局面１〜２９のいずれか１つの局面の抗体または断片。これらの抗体または断片は、ＥアリールおよびＫアリールの両方と結合し、したがって、すべてのヒト（Ｅ／Ｅホモ接合体、Ｋ／Ｋホモ接合体およびＥ／Ｋヘテロ接合体）を処置するか、遺伝子決定するか、または診断するために有用である。一例において、選択される抗体は３１Ａ１０である。
【０１０２】
３３．（ｉ）２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合し、９８Ｃ０７、６２Ｃ０１または１１７Ｃ０６と、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについて競合し；かつ（ｉｉ）２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合しない、局面１〜２９のいずれか１つの抗体または断片。Ｅアリールに結合し、Ｋアリールに結合しない抗体または断片は、Ｅ／Ｅホモ接合体およびＥ／Ｋヘテロ接合体であるヒトを処置するか、診断するか、または遺伝子型を決定するために有用である。Ｋ／Ｋホモ接合体からそのようなヒトを区別するために遺伝子型を決定することは、これらの抗体または断片を用いて可能である。一例において、選択される抗体は９８Ｃ０７である。
【０１０３】
３４．上述のいずれかの局面の抗体または断片であって、
ａ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合し；
ｂ．２９Ｃ０９、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて２９Ｃ０９と競合し；
ｃ．１４Ｂ０９、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４Ｂ０９と競合し；
ｄ．６２Ｃ０１、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて６２Ｃ０１と競合し；
ｅ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；
ｆ．１４４Ｆ０５、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４４Ｆ０５と競合し；
ｇ．４２Ａ０２、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて４２Ａ０２と競合し；
ｈ．１１７Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１１７Ｃ０６と競合し；
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｊ．１Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０６と競合し；
ｋ．１８Ｅ０４、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１８Ｅ０４と競合し；および
ｌ．９８Ｃ０７、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて９８Ｃ０７と競合する
のＨＣＲＤ１からなる群から選択されるＨＣＤＲ１配列を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、抗体または断片。
【０１０４】
一例において、上記ＨＣＤＲ１配列は、
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；および
ｍ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
ＨＣＤＲ１からなる群から選択される。
【０１０５】
３５．上述のいずれかの局面の抗体または断片であって、
ａ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合し；
ｂ．２９Ｃ０９、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて２９Ｃ０９と競合し；
ｃ．１４Ｂ０９、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４Ｂ０９と競合し；
ｄ．６２Ｃ０１、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて６２Ｃ０１と競合し；
ｅ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；
ｆ．１４４Ｆ０５、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４４Ｆ０５と競合し；
ｇ．４２Ａ０２、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて４２Ａ０２と競合し；
ｈ．１１７Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１１７Ｃ０６と競合し；
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｊ．１Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０６と競合し；
ｋ．１８Ｅ０４、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１８Ｅ０４と競合し；および
ｌ．９８Ｃ０７、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて９８Ｃ０７と競合する
のＨＣＲＤ２からなる群から選択されるＨＣＤＲ２配列を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、抗体または断片。
【０１０６】
一例において、上記ＨＣＤＲ２配列は、
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；および
ｍ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
ＨＣＤＲ２からなる群から選択される。
【０１０７】
３６．上述のいずれかの局面の抗体または断片であって、
ａ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合し；
ｂ．２９Ｃ０９、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて２９Ｃ０９と競合し；
ｃ．１４Ｂ０９、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４Ｂ０９と競合し；
ｄ．６２Ｃ０１、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて６２Ｃ０１と競合し；
ｅ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；
ｆ．１４４Ｆ０５、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４４Ｆ０５と競合し；
ｇ．４２Ａ０２、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて４２Ａ０２と競合し；
ｈ．１１７Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１１７Ｃ０６と競合し；
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｊ．１Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０６と競合し；
ｋ．１８Ｅ０４、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１８Ｅ０４と競合し；および
ｌ．９８Ｃ０７、ここで、上記抗体または断片は、上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて９８Ｃ０７と競合する
のＨＣＲＤ３からなる群から選択されるＨＣＤＲ３配列を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、抗体または断片。
【０１０８】
一例において、上記ＨＣＤＲ３配列は、
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；および
ｍ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
ＨＣＤＲ３からなる群から選択される。
【０１０９】
３７．上述のいずれかの局面の抗体または断片であって、
（ｉ）ＣＤＲ１配列およびＣＤＲ２配列、（ｉｉ）ＣＤＲ１配列およびＣＤＲ３配列、（ｉｉｉ）ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列、または（ｉｖ）ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含んでいるＶＨドメインを含んでおり、
ａ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ａ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合し；
ｂ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｂ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて２９Ｃ０９と競合し；
ｃ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｃ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４Ｂ０９と競合し；
ｄ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｄ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて６２Ｃ０１と競合し；
ｅ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｅ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；
ｆ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｆ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４４Ｆ０５と競合し；
ｇ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｇ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて４２Ａ０２と競合し；
ｈ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｈ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１１７Ｃ０６と競合し；
ｉ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｉ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｊ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｊ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０６と競合し；
ｋ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｋ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１８Ｅ０４と競合し；または
ｌ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面３４〜３６の（ｌ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて９８Ｃ０７と競合する、抗体または断片。
【０１１０】
３８．配列番号２、３０、５８、８６、１１４、１４２、１７０、１９８および２２６からなる群；または３６８、３１２、３４０、３９６、２、５８、８６、１１４、１４２、１７０、１９８および２６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでいる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１１１】
一局面において、本発明は、配列番号２、３０、５８、８６、１１４、１４２、１７０、１９８、２２６からなる群；または２、５８、８６、１１４、１４２、１７０、１９８、２２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでいるＶＨドメインを含んでいる、（任意に本明細書に記載されている任意の他の局面に係る）抗ｈＬＩＧＨＴ抗体または断片を提供する。
【０１１２】
本発明の他の例において、上記抗体または断片は、後述の配列表に詳細に示されているＶＨドメインのアミノ酸配列を含んでいる。さらにまたは代替的に、上記抗体または断片は、後述の配列表に詳細に示されているＨＣＤＲ１ドメインのアミノ酸配列を含んでいる。さらにまたは代替的に、上記抗体または断片は、後述の配列表に詳細に示されているＨＣＤＲ２ドメインのアミノ酸配列を含んでいる。さらにまたは代替的に、上記抗体または断片は、後述の配列表に詳細に示されているＨＣＤＲ３ドメインのアミノ酸配列を含んでいる。
【０１１３】
本発明の一例において、上記抗体または断片は、後述の配列表に詳細に示されているＶＬドメインのアミノ酸配列を含んでいる。さらにまたは代替的に、上記抗体または断片は、後述の配列表に詳細に示されているＬＣＤＲ１ドメインのアミノ酸配列を含んでいる。さらにまたは代替的に、上記抗体または断片は、後述の配列表に詳細に示されているＬＣＤＲ２ドメインのアミノ酸配列を含んでいる。さらにまたは代替的に、上記抗体または断片は、後述の配列表に詳細に示されているＬＣＤＲ３ドメインのアミノ酸配列を含んでいる。
【０１１４】
本明細書におけるいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片は、配列番号２５４、２５６、２５８、２６０、２６４および２６６からなる群から選択される定常領域、ならびに任意に局面３０に記載されているＶＨドメインを含んでいる。一例において、上記抗体または断片は、そのような重鎖の２コピーを含んでいる。他の例において、上記重鎖は、げっ歯類、ラット、マウス、ヒト、ウサギ、トリ、ラクダ、ヒツジ、ウシ、非ヒトの霊長類またはサメの定常領域（例えばＦｃ）を含んでいる。
【０１１５】
本明細書におけるいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片は、ガンマ（例えばヒトのガンマ）定常領域（例えば、ヒトのガンマ１定常領域）を含んでいる。
【０１１６】
本明細書におけるいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片は、キメラ体（例えば、それは、ヒトの可変領域および非ヒト（例えばマウスまたはラット）の定常領域を含んでいる）である。
【０１１７】
３９．上記ＶＨドメインの第１および第２のコピーを含んでいる、局面３４〜３８のいずれか１つの抗体または断片。
【０１１８】
４０．上述のいずれかの局面の抗体または断片であって、
ａ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合し；
ｂ．２９Ｃ０９、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて２９Ｃ０９と競合し；
ｃ．１４Ｂ０９、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４Ｂ０９と競合し；
ｄ．６２Ｃ０１、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて６２Ｃ０１と競合し；
ｅ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；
ｆ．１４４Ｆ０５、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４４Ｆ０５と競合し；
ｇ．４２Ａ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて４２Ａ０２と競合し；
ｈ．１１７Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１１７Ｃ０６と競合し；
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｊ．１Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０６と競合し；
ｋ．１８Ｅ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１８Ｅ０４と競合し；および
ｌ．９８Ｃ０７、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて９８Ｃ０７と競合する
のＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＬＣＤＲ１配列を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、抗体または断片。
【０１１９】
一例において、上記ＬＣＤＲ１配列は、
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；および
ｉｉｉ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
のＬＣＤＲ１からなる群から選択される。
【０１２０】
４１．上述のいずれかの局面の抗体または断片であって、
ａ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合し；
ｂ．２９Ｃ０９、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて２９Ｃ０９と競合し；
ｃ．１４Ｂ０９、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４Ｂ０９と競合し；
ｄ．６２Ｃ０１、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて６２Ｃ０１と競合し；
ｅ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；
ｆ．１４４Ｆ０５、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４４Ｆ０５と競合し；
ｇ．４２Ａ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて４２Ａ０２と競合し；
ｈ．１１７Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１１７Ｃ０６と競合し；
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｊ．１Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０６と競合し；
ｋ．１８Ｅ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１８Ｅ０４と競合し；および
ｌ．９８Ｃ０７、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて９８Ｃ０７と競合する
のＬＣＤＲ１からなる群から選択されるＬＣＤＲ２配列を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、抗体または断片。
【０１２１】
一例において、上記ＬＣＤＲ２配列は、
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；および
ｉｉｉ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
のＬＣＤＲ２からなる群から選択される。
【０１２２】
４２．上述のいずれかの局面の抗体または断片であって、
ａ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合し；
ｂ．２９Ｃ０９、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて２９Ｃ０９と競合し；
ｃ．１４Ｂ０９、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４Ｂ０９と競合し；
ｄ．６２Ｃ０１、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて６２Ｃ０１と競合し；
ｅ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；
ｆ．１４４Ｆ０５、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４４Ｆ０５と競合し；
ｇ．４２Ａ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて４２Ａ０２と競合し；
ｈ．１１７Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１１７Ｃ０６と競合し；
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｊ．１Ｃ０６、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０６と競合し；
ｋ．１８Ｅ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１８Ｅ０４と競合し；および
ｌ．９８Ｃ０７、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて９８Ｃ０７と競合する
のＬＣＤＲ３からなる群から選択されるＬＣＤＲ３を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、抗体または断片。
【０１２３】
一例において、ＬＣＤＲ３配列は、
ｉ．１Ｃ０２、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｉｉ．１３Ｈ０４、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；および
ｉｉｉ．３１Ａ１０、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合する
のＬＣＤＲ３からなる群から選択される。
【０１２４】
（ｉｉ）の代替物において、上記ＬＣＤＲ３は、当該ＣＤＲの１位にＣｙｓ以外のアミノ酸が存在することを除いて、１３Ｈ０４（配列番号１６３または１６８）のＬＣＤＲ３である。例えば、Ｃｙｓの、他のアミノ酸による保存的置換がある。例えば、Ｃｙｓの代わりに、Ｓｅｒが１位に存在する。一例において、本発明の上記抗体または断片は、１３Ｈ０４のＶＬドメインを含んでおり、ＬＣＤＲ３の１位における上記変更を有している。
【０１２５】
４３．上述の局面のいずれかの抗体または断片であって、
（ｉ）ＣＤＲ１配列およびＣＤＲ２配列、（ｉｉ）ＣＤＲ１配列およびＣＤＲ３配列、（ｉｉｉ）ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列、または（ｉｖ）ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列を含んでいるＶＬドメインを含んでおり、
ａ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ａ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて３１Ａ１０と競合し；
ｂ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｂ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて２９Ｃ０９と競合し；
ｃ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｃ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４Ｂ０９と競合し；
ｄ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｄ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて６２Ｃ０１と競合し；
ｅ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｅ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１３Ｈ０４と競合し；
ｆ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｆ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１４４Ｆ０５と競合し；
ｇ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｇ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて４２Ａ０２と競合し；
ｈ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｈ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１１７Ｃ０６と競合し；
ｉ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｉ）に記載されて、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０２と競合し；
ｊ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｊ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１Ｃ０６と競合し；
ｋ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｋ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて１８Ｅ０４と競合し；または
ｌ．上記ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列およびＣＤＲ３配列が、局面４０〜４２の（ｌ）に記載されており、ここで、上記抗体または断片は上記ｈＬＩＧＨＴに結合することについて９８Ｃ０７と競合する、抗体または断片。
【０１２６】
４４．配列番号３７０、３１４、３４２、３９８、１６、７２、１００、１２８、１５６、１８４７、２１２および２４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、局面４９〜４３のいずれか１つの抗体または断片。代替物において、上記群は、配列番号１６、７２、１００、１２８、１５６、１８４、２１２および２４０からなる。
【０１２７】
本発明の一局面において、配列番号１６、４４、７２、１００、１２８、１５６、１８４、２１２および２４０からなる群；または配列番号１６、７２、１００、１２８、１５６１８４、２１２および２４０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含んでいるＶＬドメインを含んでいる、（任意に本明細書における任意の他の局面に係る）抗体または断片が提供される。
【０１２８】
本明細書におけるいずれかの局面の一例において、上記抗体または断片は、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７８、２８０、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６および２９８からなる群から選択される定常領域、ならびに任意に、局面３６に記載されているようなＶＬドメイン（例えばラムダＶＬ）を含んでいる軽鎖（例えばラムダ軽鎖）を含んでいる。一例において、上記抗体または断片は、そのような軽鎖の２コピー（任意に以上に記載されている重鎖の２コピーも）を含んでいる。他の例において、上記軽鎖は、げっ歯類、ラット、マウス、ヒト、ウサギ、トリ、ラクダ、ヒツジ、ウシ、非ヒトの霊長類またはサメ定常領域を含んでいる。
【０１２９】
一例において、上記抗体または断片は、配列番号２７８、２８０、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６および２９８からなる群から選択される定常領域、ならびに任意にラムダＶＬドメインを含んでいる。
【０１３０】
一例において、上記抗体または断片の上記ＶＬドメインは、ラムダ軽鎖の可変領域である。
【０１３１】
４５．上記ＶＬドメインの第１および第２のコピーを含んでいる、局面３２〜３６のいずれか１つの抗体または断片。
【０１３２】
４６．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合することについてｍＡｂ６６４と競合する、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１３３】
上記抗体ｍＡｂ６６４は、R&D Systemsから入手可能なマウスＩｇＧ−ＬＩＧＨＴ抗体（カタログ番号  ｍＡＢ６６４、クローン名  １１５５２０）である。
【０１３４】
４７．上記ＬＩＧＨＴが、ヒト細胞（例えば上皮細胞（例えば、本明細書に開示されている上皮細胞の任意の種類））に表面発現されている、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１３５】
４８．インビトロの混合リンパ球反応（ＭＬＲ）において、ｈＬＩＧＨＴの存在下におけるヒトＰＢＭＣの増殖を、インビトロのコントロールＭＬＲアッセイにおいて、ｈＬＩＧＨＴに特異的な抗体の非存在下におけるヒトＰＢＭＣの増殖と比べて、少なくとも２０、３０、４０、５０または６０％まで、低下させる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。好適なアッセイの例証は、後述の実施例に示されている。
【０１３６】
４９．上記アッセイにおけるｈＬＩＧＨＴが、ヒトの樹状細胞（ＤＣ細胞）に表面発現されている、局面４８の抗体または断片。好適なアッセイの例証は、後述の実施例に示されている。
【０１３７】
５０．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒトの上皮細胞（例えばヒトの結腸細胞）からのＩＬ−８分泌を低下させる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。一例において、上記細胞はＨＶＥＭまたはＬＴβＲを発現する。一例において、上記抗体または断片は、インビトロにおけるＨＴ−２９細胞（ＡＴＣＣ（登録商標）  ＨＴＢ−３８）によるＩＬ−８分泌を低下させる。
【０１３８】
５１．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを発現しているヒトＨＴ−２９細胞からの、インビトロにおけるＩＬ−８分泌を低下させる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１３９】
５２．インビトロのコントロールアッセイにおいて、ｈＬＩＧＨＴに特異的な抗体の非存在下におけるＨＴ−２９における２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを発現しているＨＴ−２９細胞によるＩＬ−８産生と比べて、少なくとも２０、３０、４０、５０または６０％まで、ＩＬ−８分泌を低下させる、局面５１の抗体または断片。
【０１４０】
５３．インビトロアッセイにおいて、ＨＴ−２９におけるＩＬ−８分泌を完全に阻害する、局面５２の抗体または断片。
【０１４１】
５４．上記抗体または断片が、ヒトの樹状細胞（ＤＣ細胞）の、ヒトのＴ細胞との相互作用によって媒介されるサイトカイン分泌を低下させ、当該サイトカインが、インターフェロンガンマ、ＩＬ−８、ＴＮＦアルファおよびＩＬ−２の１つ、２つ、それ以上、またはすべて（例えば、ＩＬ−２および／またはインターフェロンガンマ）から選択される。これは、例えばインビトロアッセイにおけるＭＬＲ（例えば、インビトロアッセイのＣＤ／Ｔ細胞ＭＬＲ）を用いて、評価され得る。好適なアッセイの例証は、後述の実施例に示されている。
【０１４２】
一例において、上記樹状細胞は、樹状細胞がＴ細胞のヒト源と異なるヒトに由来するときに起こり得るような、Ｔ細胞に対して不適合（例えば、ＭＨＣ不適合）である。一例において、上記樹状細胞は、ＧＭＣＳＦおよびＩＬ−４を用いたヒトの単球のインビトロ誘導によって生成される。
【０１４３】
５５．ｈＬＩＧＨＴに特異的な抗体の非存在下におけるヒトのＴ細胞との、ヒトの樹状細胞（ＣＤ細胞）の相互作用によって媒介されるインターフェロンガンマの産生と比べて、少なくとも２０、３０、４０、５０または６０％までインターフェロンガンマ分泌を低下させる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１４４】
５６．ｈＬＩＧＨＴに特異的な抗体の非存在下においてヒトのＴ細胞とのヒトの樹状細胞（ＤＣ細胞）の相互作用によって媒介されるＴＮＦアルファの産生と比べて、少なくとも２０、３０、４０、５０または６０％までＴＮＦアルファ分泌を低下させる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１４５】
５７．ｈＬＩＧＨＴに特異的な抗体の非存在下においてヒトのＴ細胞とのヒトの樹状細胞（ＤＣ細胞）の相互作用によって媒介されるＩＬ−２の産生と比べて、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０または６０％まで、ＩＬ−２分泌を低下させる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１４６】
５８．上記抗体または断片が、ヒトの末梢血単核球（ＰＢＭＣ）混合リンパ球（ＭＬＲ）アッセイにおけるサイトカイン分泌を低下させ、当該サイトカインが、インターフェロンガンマ、ＩＬ−８、ＴＮＦアルファおよびＩＬ−２の１つ、２つ、それ以上、またはすべて（例えば、ＩＬ−２および／またはインターフェロンガンマ）から選択される、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１４７】
５９．ｈＬＩＧＨＴに特異的な抗体の非存在下においてヒトのＰＢＭＣ  ＭＬＲアッセイにおけるインターフェロンガンマの産生と比べて、少なくとも２０、３０、４０、５０または６０％まで、ＴＮＦアルファ分泌を低下させる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１４８】
６０．ｈＬＩＧＨＴに特異的な抗体の非存在下においてヒトのＰＢＭＣ  ＭＬＲアッセイにおけるＴＮＦアルファの産生と比べて、少なくとも２０、３０、４０、５０または６０％まで、ＴＮＦアルファ分泌を低下させる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１４９】
６１．ｈＬＩＧＨＴに特異的な抗体の非存在下においてヒトのＰＢＭＣ  ＭＬＲアッセイにおけるＩＬ−２の産生と比べて、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０または６０％まで、ＩＬ−２分泌を低下させる、上述のいずれかの局面の抗体または断片。
【０１５０】
６２．上記細胞が初代培養細胞である、局面５４〜６１のいすれか１つの抗体または断片。
【０１５１】
「初代培養細胞」は、ヒトにおける細胞、すなわち本発明の上記抗体または断片にインビトロンにおいて結合させるために、患者から採取された細胞（例えばＬＩＧＨＴの状態またはヒトにおける疾患／好ましくない健康状態の状態の診断の方法に、有用であり得るような）を指す。本明細書に使用されるとき、初代培養細胞は、インビトロにおける複数回の培養を一般的に受けているヒトの細胞株ではない。この実施形態におけるｈＬＩＧＨＴが受容体（例えば、ＨＶＥＭまたはＬＴβＲ）に結合することを特異的に阻害する、本発明の抗体または断片の能力は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態にかかっているか、またはそのリスクのあるヒトの患者における細胞を扱うための有用性の直接的な指標をもたらすので、好都合である。
【０１５２】
６３．ＨＴＲＦ（均一時間分解蛍光）アッセイにおいて１×１０−８未満のＩＣ５０をともなって、ヒトのＨＶＥＭおよび／またはヒトのリンホトキシンβ受容体に対する２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴの結合を阻害する、上述のいずれかの局面の抗体または断片。一例において、ＩＣ５０は、１×１０−８〜１×１０−１０の範囲、または１×１０−９〜１×１０−１０の範囲にある。
【０１５３】
６４．上述のいずれかの局面の抗体または断片、ならびに希釈剤、賦形剤または担体を含んでおり；任意に抗炎症剤をさらに含んでいる、薬学的組成物。
【０１５４】
６５．局面１〜６３のいずれか１つの局面の抗体または断片、ならびに２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列について陽性もしくは陰性であるとヒトの遺伝子型を決定するための手段および／または２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列について陽性もしくは陰性であるとヒトの表現型を決定するための手段を含んでいる、キット。一例において、遺伝子型を決定する手段は、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴの連続する少なくとも１０、１５または２０のヌクレオチドに、ストリンジェントな条件のもとにハイブリダイズする核酸を含んでおり、当該核酸は、２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴの連続する少なくともそれぞれ１０、１５または２０のヌクレオチド（２１４Ｋ  ＬＩＧＨＴを含んでいる）に、同じ条件のもとにハイブリダイズしない。一例において、表現型を決定するための手段は、２１４Ｅ  ＬＩＧＨＴに特異的に結合し、２１４Ｋ  ＬＩＧＨＴに特異的に結合しない抗体または断片（例えば、本発明の１つ）を含んでいる。
【０１５５】
ストリンジェントな条件のハイブリダイゼーションは、当業者にとって明らかである（例えば、６５℃における５×ＳＳＣ、５×デンハート試薬、および０．５％のＳＤＳの条件）。一例において、ストリンジェントな条件は、約４５℃における６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）に続く、約５０〜６５℃における０．２×ＳＳＣ／０．１％のＳＤＳにおける１回以上の洗浄における、フィルタに結合されているＤＮＡへのハイブリダイゼーションを包含しているか；または極めてストリンジェントな条件（例えば、約４５℃における６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）に続く、約６８℃における０．２×ＳＳＣ／０．１％のＳＤＳにおける１回以上の洗浄における、フィルタに結合されているＤＮＡへのハイブリダイゼーション）、もしくは当業者に知られている他のストリンジェントなハイブリダイゼーション条件（例えば、Ausubel, F. M. et al., eds., 1989, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York at pages 6.3.1-6.3.6 and 2.10.3を参照）であり得る。
【０１５６】
６６．局面１〜６３のいずれか１つの局面の抗体または断片、ならびに２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列について陽性もしくは陰性であるとヒトの遺伝子型を決定するための手段および／または２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドについて陽性もしくは陰性であるとヒトの表現型を決定するための手段を含んでいる、キット。一例において、遺伝子型を決定するための手段は、２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴの連続する少なくとも１０、１５または２０のヌクレオチドに、ストリンジェントな条件のもとにハイブリダイズする核酸を含んでおり、当該ヌクレオチドは、２１４Ｋを含んでおり、当該核酸は、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴの連続する少なくともそれぞれ１０、１５または２０のヌクレオチド（２１４Ｅを含んでいる）に、同じ条件のもとにハイブリダイズしない。一例において、表現型を決定するための手段は、２１４Ｋ  ＬＩＧＨＴに特異的に結合し、２１４Ｅ  ＬＩＧＨＴに特異的に結合しない抗体または断片（例えば、本発明の１つ）を含んでいる。
【０１５７】
また、本発明は、ＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置するため、および／または予防するための、薬学的組成物またはキットを提供する。当該薬学的組成物またはキットは、本発明の抗体または断片（および任意に抗炎症剤）を、ヒトにおける上記疾患または好ましくない健康状態を処置するため、および／または予防するための使用を目的とした表示または取扱説明書と必要に応じて組み合わせて、含んでおり；必要に応じて、当該表示または取扱説明書は、製造承認番号（例えば、ＦＤＡまたはＥＭＡの承認番号）を含んでおり；必要に応じて、上記キットは、上記抗体または断片を含んでいるＩＶ手段または注入手段を含んでいる。
【０１５８】
６７．局面１〜６３のいずれか１つに記載されている抗体のＨＣＤＲ３をコードしている、核酸。
【０１５９】
６８．配列番号３７５、３７６、３１９、３２０、３４７、３４８、４０３、４０４、７、１３、６３、６９、９１、９７、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一のヌクレオチド配列；または配列番号３７５、３７６、３１９、３２０、３４７、３４８、４０３、４０４、７、１３、６３、６９、９１、９７、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７から選択されるヌクレオチド配列を含んでいる、局面６７の核酸。一例おいて、上記ヌクレオチド配列は、配列番号７、１３、３５、４１、６３、６９、９１、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一であるか；または７、１３、６３、６９、９１、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７から選択される。
【０１６０】
一局面において、本発明は、抗ｈＬＩＧＨＴ抗体のＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を含んでいる核酸を提供する。当該ヌクレオチド配列は、配列番号７、１３、３５、４１、６３、６９、９１、９７、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７から選択される配列と、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一のＨＣＤＲ３配列；または配列番号７、１３、６３、６９、９１、９７、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７から選択されるＨＣＤＲ３配列を含んでいる。必要に応じて、上記抗体は、本明細書における任意の他の局面に係る。
【０１６１】
他の実施形態において、局面５９の核酸が提供される。当該核酸は、配列番号７、１３、３５、４１、６３、６９、９１、９７、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７；または７、１３、６３、６９、９１、９７、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７から選択される配列と、１、２もしくは３のヌクレオチドの置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでおり。そのような置換は、対応するタンパク質配列においてアミノ酸変化を生じないか、または保存的なアミノ酸置換（すなわち当該ヌクレオチド置換は同義置換である）を生じる。当業者は、保存的なアミノ酸の変更に通じている。
【０１６２】
アミノ酸置換は、アミノ酸が異なる天然に存在するアミノ酸残基と置き換えられる変更を包含している。そのような置換は、ポリペプチドに含まれているアミノ酸残基が、極性、側鎖官能性、または大きさのいずれかにおいて類似の性質の、天然に存在する他のアミノ酸と置き換えられている場合に、「保存的」であると分類され得る。そのような保存的な置換は、当該分野においてよく知られている。また、本発明によって包含されている置換は、「非保存的」であり得、当該置換において、ペプチドに存在するアミノ酸残基が、異なる性質を有しているアミノ酸（例えば、異なる集団に基づく、天然に存在するアミノ酸）によって置換されている（例えば、電荷を有しているアミノ酸または疎水性アミノ酸をアラニンによって置換する）か、または代替的に天然に存在するアミノ酸が通常にはないアミノ酸によって置換されている。
【０１６３】
さらにまたは代替的に、配列番号７、１３、３５、４１、６３、６９、９１、９７、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７；または配列番号７、１３、６３、６９、９１、９７、１１９、１２５、１４７、１５３、１７５、１８１、２０３、２０９、２３１および２３７から選択される配列と、１、２、３、４、５、６もしくは７のヌクレオチドの同義置換、または対応するタンパク質配列における保存的なアミノ酸変化を生じる、０、１、２もしくは３のヌクレオチド置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面５９の核酸が提供される。
【０１６４】
６９．局面１〜６３のいずれか１つに記載されている抗体のＨＣＤＲ２をコードしている核酸。当該核酸は局面６７または６８に係る。
【０１６５】
配列番号３７３、３７４、３１７、３１８、３４５、３４６、４０１、４０２、５、１１、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５；または配列番号３７３、３７４、３１７、３１８、３４５、３４６、４０１、４０２、５、１１、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５から選択される配列と、少なくとも７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６９の核酸。一例において、上記ヌクレオチド配列は、配列番号５、１１、３３、３９、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５；または配列番号５、１１、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一である。
【０１６６】
一局面において、本発明は、抗ｈＬＩＧＨＴ抗体のＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を含んでいる核酸を提供する。当該ヌクレオチド配列は、配列番号５、１１、３３、３９、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５；または配列番号５、１１、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一のＨＣＤＲ２配列を含んでいる。任意に、上記抗体は、本明細書における任意の他の局面に係る。
【０１６７】
他の実施形態において、配列番号５、１１、３３、３９、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５；または配列番号５、１１、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５から選択される配列と、１、２もしくは３のヌクレオチド置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６１の核酸が提供される。そのような置換は、対応するタンパク質配列において、アミノ酸変化を生じないか、または保存的なアミノ酸変化を生じる（すなわちヌクレオチド置換は同義置換である）。当業者は、保存的なアミノ酸変化に通じている。
【０１６８】
さらにまたは代替的に、配列番号５、１１、３３、３９、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５；または５、１１、６１、６７、８９、９５、１１７、１２３、１４５、１５１、１７３、１７９、２０１、２０７、２２９および２３５から選択される配列と、１、２、３、４、５、６もしくは７のヌクレオチドの同義置換、および対応するタンパク質配列における保存的なアミノ酸変化を生じる０、１、２もしくは３のヌクレオチド置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６１の核酸が提供される。
【０１６９】
７１．局面１〜６３のいずれか１つに記載されている抗体のＨＣＤＲ１をコードしており、任意に、局面６７〜７０のいずれか１つに係る、核酸。
【０１７０】
７２．配列番号３７１、３７２、３１５、３１６、３４３、３４４、３９９、４００、３、９、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３；または配列番号３７１、３７２、３１５、３１６、３４３、３４４、３９９、４００、３、９、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一の、ヌクレオチド配列を含んでいる、局面６３の核酸。一例において、上記ヌクレオチド配列は、配列番号３、９、３１、３７、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３；または配列番号３、９、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一である。
【０１７１】
一局面において、本発明は、抗ｈＬＩＧＨＴ抗体のＶＨドメインをコードしているヌクレオチド配列を含んでいる核酸を提供する。当該ヌクレオチド配列は、配列番号３、９、３１、３７、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３；または配列番号３、９、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一のＨＣＤＲ１配列を含んでいる。任意に、上記抗体は本明細書における任意の他の局面に係る。
【０１７２】
他の実施形態において、配列番号３、９、３１、３７、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３；または配列番号３、９、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３から選択される配列と、１、２もしくは３のヌクレオチド置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６３の核酸が提供される。ここで、それぞれの置換は、対応するタンパク質配列において、アミノ酸変化を生じないか、または保存的なアミノ酸変化を生じる（すなわちヌクレオチド置換は同義置換である）。当業者は、保存的なアミノ酸変化に通じている。
【０１７３】
さらにまたは代替的に、配列番号３、９、３１、３７、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３；または配列番号３、９、５９、６５、８７、９３、１１５、１２１、１４３、１４９、１７１、１７７、１９９、２０５、２２７および２３３から選択される配列と、１、２、３、４、５、６もしくは７のヌクレオチドの同義置換、および対応するタンパク質配列における保存的なアミノ酸変化を生じる０、１、２もしくは３のヌクレオチド置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６３の核酸が提供される。
【０１７４】
７３．局面１〜６３のいずれか１つに記載されているＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインをコードしている、核酸。
【０１７５】
７４．配列番号３６７、３１１、３３９、３９５、１、２９、５７、８５、１１３、１４１、１６９、１９７および２２５；または配列番号３６７、３１１、３３９、３９５、１、５７、８５、１１３、１４１、１６９、１９７および２２５からなる群から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６５の核酸。一例において、上記ヌクレオチド配列は、配列番号１、２９、５７、８５、１１３、１４１、１６９、１９７および２２５；または配列番号１、５７、８５、１１３、１４１、１６９、１９７および２２５からなる群から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一である。
【０１７６】
他の実施形態において、配列番号１、２９、５７、８５、１１３、１４１、１６９、１９７および２２５；または配列番号１、５７、８５、１１３、１４１、１６９、１９７および２２５からなる群から選択される配列と、１、２もしくは３のヌクレオチド置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６５の核酸が提供される。ここで、それぞれの置換は、対応するタンパク質配列においてアミノ酸変化を生じないか、または保存的なアミノ酸変化を生じる（すなわちヌクレオチド置換は同義置換である）。当業者は、保存的なアミノ酸置換に通じている。
【０１７７】
さらにまたは代替的に、配列番号１、２９、５７、８５、１１３、１４１、１６９、１９７および２２５；または配列番号１、５７、８５、１１３、１４１、１６９、１９７および２２５からなる群から選択される配列と、１、２、３、４、５、６もしくは７のヌクレオチドの同義置換および対応するタンパク質配列における保存的なアミノ酸変化を生じる０、１、２もしくは３のヌクレオチド置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６５の核酸が提供される。
【０１７８】
７５．配列番号３６９、３１３、３４１、３９７、１５、４３、７１、９９、１２７、１５５、１８３、２１１および２３９；または配列番号３６９、３１３、３４１、３９７、１５、７１、９９、１２７、１５５、１８３、２１１および２３９からなる群から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６５または６６の核酸。一例において、上記ヌクレオチド配列は、配列番号１５、４３、７１、９９、１２７、１５５、１８３、２１１および２３９；または配列番号１５、７１、９９、１２７、１５５、１８３、２１１および２３９からなる群から選択される配列と、少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８もしくは９９％同一または１００％である。
【０１７９】
他の実施形態において、配列番号１５、４３、７１、９９、１２７、１５５、１８３、２１１および２３９；または配列番号１５、７１、９９、１２７、１５５、１８３、２１１および２３９からなる群から選択される配列と、１、２もしくは３のヌクレオチド置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６５または６６の核酸が提供される。ここで、それぞれの置換は、対応するタンパク質配列におけるアミノ酸変化を生じないか、または保存的なアミノ酸変化を生じる（すなわちヌクレオチド置換は同義置換である）。
【０１８０】
当業者は保存的なアミノ酸変化に通じている。
【０１８１】
さらにまたは代替的に、配列番号１５、４３、７１、９９、１２７、１５５、１８３、２１１および２３９；または配列番号１５、７１、９９、１２７、１５５、１８３、２１１および２３９から選択される配列と、１、２、３、４、５、６もしくは７のヌクレオチドの同義置換および対応するタンパク質配列における保存的なアミノ酸変化を生じる１、２もしくは３のヌクレオチド置換を除いて、１００％同一のヌクレオチド配列を含んでいる、局面６５または６６の核酸が提供される。
【０１８２】
７６．局面１〜６３のいずれか１つに記載されている抗体の重鎖または軽鎖をコードしている、核酸。
【０１８３】
７７．局面６７〜７５のいずれかに記載されているようなヌクレオチド配列を含んでいる、局面７６の核酸。
【０１８４】
７８．局面６７〜７７のいずれか１つの核酸を含んでいる、ベクター。ここで、必要に応じて、当該ベクターはＣＨＯベクターまたはＨＥＫ２９３ベクターである。一例において、上記ベクターはイーストベクター（例えば、SaccharomycesベクターまたはPichiaベクター）である。
【０１８５】
７９．局面６７〜７７のいずれか１つの核酸、または局面７０のベクターを含んでいる、宿主。一例において、当該宿主は、哺乳類（例えば、ヒトの、例えばＣＨＯまたはＨＥＫ２９３）細胞株、または酵母細胞株もしくは細菌細胞株である。
【０１８６】
８０．以下の１つ以上：
ｍ．ＩＬ−２、ｔＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマから選択されるサイトカインの、ヒトにおける分泌；
ｎ．ヒトの白血球の増殖；および
ｏ．ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒトの上皮細胞による、ｈＬＩＧＨＴの結合
を低下させることによって、ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置するため、または予防するためのヒトに対する投与用の薬剤の製造における、ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する抗体またはその断片の、使用。
【０１８７】
上述の局面、例または実施形態の特徴はいずれも、任意に必要な変更を加えて、この使用に適用される。
【０１８８】
８１．以下の１つ以上またはすべて：
ｐ．ＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマから選択されるサイトカインの、ヒトにおける分泌；
ｑ．ヒトの白血球の増殖；
ｒ．ｈＬＩＧＨＴにとっての受容体を発現しているヒトの上皮細胞によるｈＬＩＧＨＴの結合
を低下させることによって、ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態を処置するか、または予防する方法。ここで、上記方法は、ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する抗体または断片の治療的に有効な量を上記ヒトに投与することを包含している。
【０１８９】
上述の局面、例または実施形態のいずれかの特徴はいずれも、任意に必要な変更を加えて、この方法に適用される。
【０１９０】
本発明の方法は、上記ヒトにおける上記疾患または好ましくない健康状態を処置するか、または予防する。抗体または断片の「治療的に有効な量」は、上記処置または予防をもたらすために有効な量（一定の時間をおかれ得る、単回または数回の用量において投与（例えば、ほぼ月に１回の投与）される）である。これは、当業者にとって容易に明らかであり、特定のヒト患者、および対処される疾患もしくは好ましくない健康状態にしたがって変更され得る。
【０１９１】
８２．上記ヒトにおけるＴ細胞の増殖を低下させることによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の上記疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、局面８０または８１の方法または使用。
【０１９２】
８３．ｈＬＩＧＨＴおよび上記ヒトの白血球の間における相互作用と拮抗することによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の上記疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、局面８０〜８２のいずれか１つの方法または使用。ここで、白血球の増殖が低下される。
【０１９３】
８４．上記ヒトにおいてＴ細胞によって媒介されるＬＩＧＨＴ／ＬＩＧＨＴ受容体の相互作用と拮抗することによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の上記疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、局面８０〜８３のいずれか１つの方法または使用。
【０１９４】
８５．上記ヒトにおけるＩＬ−８の分泌を低下させることによって、上記ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の上記疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、局面８０〜８４のいずれか１つの方法または使用。
【０１９５】
８６．Ｔ細胞との樹状細胞（ＣＤ細胞）の、上記ヒトにおける相互作用によって上記ＩＬ−８分泌を低下させることによって、上記疾患、好ましくない健康状態または上皮細胞の損傷を処置するため、または予防するための、局面８５の方法。
【０１９６】
８７．上皮細胞の損傷が、ヒトにおける上記疾患または好ましくない健康状態の症状またはその原因である、局面８０〜８６のいずれか１つの方法または使用。
【０１９７】
８８．上記ヒトが、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、アレルゲン性の移植拒絶反応または移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）にかかっているか、またはそのリスクがあり、上記方法が、ＩＢＤ、アレルゲン性の移植拒絶反応またはＧｖＨＤを処置するか、または予防する、局面８０〜８７のいずれか１つの方法または使用。
【０１９８】
８９．上記ｈＬＩＧＨＴが２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴである、局面８０〜８８のいずれか１つの方法または使用。
【０１９９】
９０．上記ヒトが２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列について陽性であると遺伝子型が決定されている、局面８０〜８９のいずれか１つの方法または使用。
【０２００】
必要に応じて、上記方法は、上記患者に対する上記抗体または断片の投与前に遺伝子型の決定を実施することを包含している。
【０２０１】
９１．上記ヒトが２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドについて陽性であると表現型が決定されている、局面８０〜９０のいずれか１つの方法または使用。
【０２０２】
必要に応じて、上記方法は、上記患者に対する上記抗体または断片の投与前に表現型の決定を実施することを包含している。
【０２０３】
９２．２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴをコードしているヌクレオチド配列について陽性であると上記ヒトの遺伝子型を決定することを包含している、局面８０〜９１のいずれか１つの方法または使用。
【０２０４】
必要に応じて、上記方法は、上記患者に対する上記抗体または断片の投与前に遺伝子型の決定を実施することを包含している。
【０２０５】
９３．上記方法または使用が、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴポリペプチドについて陽性であると上記ヒトの表現型を決定することを包含している、局面８０〜９２の方法または使用。
【０２０６】
必要に応じて、上記方法は、上記患者に対する上記抗体の投与前に表現型の決定を実施することを包含している。
【０２０７】
９４．上記抗体または断片が、局面１〜６３のいずれか１つまたは本明細書に記載の任意の例、構成もしくは実施形態に係る、局面８０〜９３のいずれか１つの方法または使用。
【０２０８】
本発明の抗体または断片の一例において、上記抗体が、ウサギＬＩＧＨＴタンパク質（配列番号４２３）およびヒトＬＩＧＨＴタンパク質（配列番号３０８）を特異的に結合し、ヒトＬＩＧＨＴの細胞外タンパク質に対する結合親和性が、ウサギＬＩＧＨＴの細胞外タンパク質の結合親和性を下回らない（例えば、ウサギＬＩＧＨＴの細胞外タンパク質に対する親和性の１〜２倍）、例証的な抗体は、後述の実施例に示されている。この特徴は、ＬＩＧＨＴに関わる疾患のウサギモデルにおける薬学的な開発および試験に有用である。
【０２０９】
９５．ヒトにおける炎症性または自己免疫性の疾患または好ましくない健康状態を処置するため、もしくは予防するため、またはヒトにおける血管新生を抑制するため、または予防するための、上述のいずれかの局面の抗体、断片、組成物、キット、方法または使用。
【０２１０】
９６．上記疾患または好ましくない健康状態が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン氏病、リューマチ性関節炎、乾癬、細気管支炎、歯肉炎、移植拒絶反応、アレルゲン性の移植拒絶反応、移植片対宿主疾患（ＧｖＨＤ）、喘息、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、敗血症性ショック、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群および気道の炎症からなる群から選択される、上述のいずれかの局面の抗体、断片、組成物、キット、方法または使用。
【０２１１】
一例において、上記疾患または好ましくない健康状態は、欧州特許第１８５８６３７号および欧州特許第２０３１８３２号に開示されているＬＩＧＨＴ媒介性の疾患または好ましくない健康状態である。
【０２１２】
一例において、上記疾患または好ましくない健康状態は、炎症性または自己免疫性の疾患または好ましくない健康状態である。
【０２１３】
本明細書に使用されるとき、上記疾患または好ましくない健康状態は、例えば好中球の化学走性によって引き起こされる、炎症を生じる病理学的状態を指す。そのような障害の例としては、炎症性の皮膚疾患（乾癬が挙げられる）；炎症性腸疾患（例えば、クローン氏病および潰瘍性大腸炎）と関連する応答；虚血性再灌流；成人呼吸窮迫症候群；皮膚炎；髄膜炎；脳炎；ブドウ膜炎；自己免疫疾患（例えば、リューマチ性関節炎、シェーグレン症候群、血管炎）；白血球の血管外遊出をともなう疾患；中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性障害；敗血症または外傷に続く多臓器障害症候群；アルコール性肝炎、細菌性の肺炎、抗原抗体複合体に媒介される疾患；肺の炎症（胸膜炎、肺胞炎、血管炎、肺炎、慢性気管支炎、気管支拡張症および嚢胞性線維症などが挙げられる。好ましい徴候は、細菌性の肺炎および炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎）である。したがって、本発明は、一例において、そのような好ましくない健康状態の任意の１つ以上を処置するため、または予防するために提供される。
【０２１４】
一例において、上記疾患または好ましくない健康状態は統合失調症である。一例において、上記疾患または好ましくない健康状態はがんである。
【０２１５】
実施例に説明されているように、本発明者らは、特に本発明の抗体および断片を同定することに有用な一連の基準を案出した。これらの基準は、以下の通りである。
（ａ）ＨＴＲＦアッセイにおいて、ＣＨＯ−Ｓ細胞上の細胞表面ｈＬＩＧＨＴ、および／または組換えｈＬＩＧＨＴを結合する、上記抗体または断片の能力；
（ｂ）受容体無効化（receptor neutralisation）ＨＴＲＦアッセイおよび／またはフローサイトメトリー受容体無効化アッセイにおける、ヒトのＨＶＥＭおよび／またはＬＴβＲを無効化する、上記抗体または断片の能力；
（ｃ）ヒトおよびカニクイザルのＬＩＧＨＴの両方（上記抗体または断片のＰＫ、ＰＤ、有効性および他のパラメータがヒトにとっての代用としてのcynoモデルにおいて評価され得る）を特異的に結合する、上記抗体または断片の能力。
【０２１６】
したがって、本発明の一例において、上記抗体または断片は、基準（ａ）、（ｂ）および（ｃ）を満たしている。
【０２１７】
一例において、基準（ａ）は、上記抗体または断片が、ＣＨＯ−Ｓ  ＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対する＜７０％の受容体結合を、ＦＡＣＳによって示すように設定されている。
【０２１８】
一例において、基準（ａ）は、上記抗体または断片が、ＬＩＧＨＴに対する＜９０％の受容体結合をＨＴＲＦアッセイを示すように設定されている。
【０２１９】
一例において、基準（ａ）は、上記抗体または断片が、ＨＴＲＦアッセイにおいて少なくとも２０％の作用を示すように設定されている。
【０２２０】
一例において、ＨＶＥＭ−Ｆｃおよび／またはＬＴβＲ−Ｆｃは、基準（ｂ）に利用される。
【０２２１】
一実施形態において、本発明の抗体または断片のアッセイまたは試験は、ｐＨ７もしくは実質的にｐＨ７（例えば、インビトロの試験およびアッセイのために）、およびｒｔｐもしくは実質的にｒｔｐにおいて実施される。
【０２２２】
任意に、上記抗体または断片は、例えば本明細書に開示されているＳＰＲ条件における、ＳＰＲによって決定されるときの、１マイクロＭ未満、１０００ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１ｎＭ、１０００ｐ〜５００ｐＭ、５００ｐＭ〜２００ｐＭ、２００ｐＭ未満、２００ｐＭ〜１５０ｐＭ、２００ｐＭ〜１００ｐＭ、１００ｐＭ〜１０ｐＭ、１０ｐＭ〜１ｐＭ（例えば、１ｍＭ〜１００ｐＭ；１０ｎＭ〜１００ｐＭ；１ｎＭ〜１０ｐＭ；または１００ｐＭ〜１ｐＭの範囲）の親和性（見かけの親和性、Ｋｄ）をともなって、ｈＬＩＧＨＴ（例えば、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ）を特異的に結合する。さらにまたは代替的に、上記抗体または断片は、例えば本明細書に開示されているＳＰＲ条件における、ＳＰＲによって決定されるときの、１マイクロＭ未満、１０００ｎＭ〜１００ｎＭ、１００ｎＭ〜１０ｎＭ、１０ｎＭ〜１ｎＭ、１０００ｐ〜５００ｐＭ、５００ｐＭ〜２００ｐＭ、２００ｐＭ未満、２００ｐＭ〜１５０ｐＭ、２００ｐＭ〜１００ｐＭ、１００ｐＭ〜１０ｐＭ、１０ｐＭ〜１ｐＭ（例えば、１ｍＭ〜１００ｐＭ；１０ｎＭ〜１００ｐＭ；１ｎＭ〜１０ｐＭ；または１００ｐＭ〜１ｐＭの範囲）の親和性（見かけの親和性、Ｋｄ）をともなって、カニクイザルのＬＩＧＨＴ（例えば、２１４Ｅ  ｃｙｎｏ  ＬＩＧＨＴ）を特異的に結合する。そのような結合測定は、当該分野において知られている種々の結合アッセイを用いて（例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（例えば、Biacore（商標）、ProteOn XPR36（商標）（Bio-Rad（登録商標））またはKinExA（登録商標）（Sapidyne Instruments, Inc））を用いて）なされ得る。
【０２２３】
一例において、上記抗体または断片は、同様の見かけの親和性（例えば、互いにとって２倍以内の差である見かけの親和性（Ｋｄ））をともなって、２１４Ｅおよび２１４Ｋ  ＬＩＧＨＴの両方を結合し得る。他の例において、上記抗体または断片は、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを結合し得るが、（例えば、ＳＰＲ（例えば、本明細書に開示されているＳＰＲ条件）によって決定されるとき）２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに対する見かけの親和性の≧２０倍未満である親和性（Ｋｄ）をともなって、２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴと結合するか、または２１４Ｋ  ＬＩＧＨＴに結合しない。
【０２２４】
一例において、上記抗体または断片は、２１４Ｅおよび２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴを結合し、ここで、当該抗体または断片の２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴに対する結合は、２１Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合するＫｄの少なくとも６０、７０、８０、９０または９５％である。
【０２２５】
ＬＩＧＨＴの結合能、特異性および親和性（Ｋｄ、ＫｏｆｆおよびＫｏｎ）は、当該分野において通常の任意の方法（例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ））によって決定され得る。用語「Ｋｄ」は、本明細書に使用されるとき、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すと意図されている。
【０２２６】
一実施形態において、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）は約２５℃において実施される。他の実施形態において、ＳＰＲは３７℃において実施される。
【０２２７】
一実施形態において、ＳＰＲは、生理学的ｐＨ（例えば、約ｐＨ７またはｐＨ７．６（例えば、ｐＨ７．６のＨｅｐｅｓ緩衝化生理食塩水（ＨＢＳ−ＥＰとも呼ばれる）を用いて））実施される。
【０２２８】
一実施形態において、ＳＰＲは、生理学的塩濃度（例えば１５０ｍＭのＮａＣｌ）において実施される。
【０２２９】
一実施形態において、ＳＰＲは、体積を単位とする０．０５％以下の界面活性剤濃度において（例えば、Ｐ２０（０．０５％のポリソルベート２０；例えばTween-20（商標）および３ｍＭのＥＤＴＡ）の存在下において）実施される。
【０２３０】
一例において、ＳＰＲは、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％の界面活性剤（例えばＰ２０）および３ｍＭのＥＤＴＡの、ｐＨ７．６の緩衝液において、２５℃または３７℃において実施される。上記緩衝液は１０ｍＭのＨｅｐｅｓを含み得る。一例において、ＳＰＲは、ＨＢＳ−ＥＰにおいて、２５℃または３７℃において実施される。ＨＢＳ−ＥＰは、Teknova Inc（California；カタログ番号  H8022)から入手可能である。
【０２３１】
一例において、上記抗体または断片の親和性は、以下の１〜４によって、ＳＰＲを用いて決定される。
１．バイオセンサチップ（例えばGLMチップ）に抗マウス（または他の関連するヒト、ラットもしくは非ヒトの脊椎動物の抗体定常領域の、種に適合させた）ＩｇＧ（例えば、Biacore（商標） BR-1008-38）を結合させること（例えば、一級アミン結合による）；
２．試験ＩｇＧ抗体に上記抗マウスＩｇＧ（または他の適合された種の抗体）をばくろして、チップ上に試験抗体を捕捉すること；
３．０ｎＭ（すなわち緩衝液単独）を含めて、１０２４ｎＭ、２５６ｎＭ、６４ｎＭ、１６ｎＭ、４ｎＭにおいて、上記チップの捕捉表面の全体に試験抗原を通すこと；および
４．および表面プラズモン共鳴を用いて（例えば、上述のＳＰＲ条件（例えば、２５℃、生理学的緩衝液）のもとに）、試験抗原に対する試験抗体の結合親和性を決定すること。ＳＰＲは、標準的な任意のＳＰＲ装置（例えば、Biacore（商標）またはProteOn XPR36（商標）（Bio-Rad））を用いて実施され得る。
【０２３２】
上記捕捉表面の再生は、ｐＨ１．７における１０ｍＭのグリシンを用いて実施され得る。これは、捕捉されている抗体を取り除き、その表面が他の相互作用のために使用されることを可能にする。結合データは、標準的な技術（例えば、ProteOn XPR36（商標）分析ソフトウェア）を用いて、１：１のモデル固有値に合わせられ得る。
【０２３３】
一例において、本発明の上記抗体または断片は、医療用の容器（例えば、バイアル、シリンジ、ＩＶ容器または注入器（例えば、眼内注射器または硝子体内注射器））に収納されている。一例において、上記抗体または断片は、インビトロにある（例えば滅菌容器に入っている）。一例において、本発明は、（１）本発明の上記抗体または断片、（２）包装、ならびに（３）ＬＩＧＨＴによって媒介される疾患または好ましくない健康状態を、ヒトにおいて処置するか、予防するか、または診断することにおける使用のための取扱説明書を備えているキットを提供する。一例において、上記取扱説明書は、上記ヒトに対する上記抗体または断片の投与前に、本発明のＬＩＧＨＴバリアント配列について上記ヒトが遺伝子型を決定されるべきことを示している。一例において、上記取扱説明書は、上記ヒトに対する上記抗体または断片の投与前に、本発明のＬＩＧＨＴバリアントについて上記ヒトが表現型を決定されるべきことを示している。一例において、上記ヒトは、中華（例えば、漢またはＣＨＳ）民族であり、上記取扱説明書は中国語（例えば北京官話）において書かれている。
【０２３４】
一例において、上記抗体または断片の（複数の）結合部位は、多数（例えばライブラリ）の結合部位から選択される。例えば、多数の結合部位は、多数の４本鎖の抗体もしくはそれらの断片（例えば、ｄＡｂ、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含んでいるか、またはそれらからなる。スクリーニング用の多数の結合部位を生成するために好適な方法としては、ファージディスプレイ（複数の抗体結合部位のファージディスプレイライブラリを生成する）、リボソームディスプレイ（複数の抗体結合部位のリボソームディスプレイを生成する）、イーストディスプレイ（複数の抗体結合部位のイーストディスプレイを生成する）、または非ヒト脊椎動物（例えば、げっ歯類（例えばマウスまたはラット（例えば、Velocimouse（商標）、Kymouse（商標）、Xenomouse（商標）、Aliva Mouse（商標）、HuMab Mouse（商標）、Omnimouse（商標）、Omnirat（商標）またはMeMo Mouse（商標））））の、ＬＩＧＨＴエピトープもしくはＬＬＩＧＨＴエピトープを用いた免疫化および抗体産生細胞のレパートリおよび／または単離された抗体、断片もしくは結合部位のレパートリの単離が挙げられる。
【０２３５】
用語「エピトープ」は、抗体または断片によって結合される、抗原の領域である。エピトープは、構造的または機能的に規定され得る。機能的なエピトープは、一般的に、構造的なエピトープの部分集合であり、相互作用の親和性に直接に寄与するそれらの残基を有している。エピトープはまた、高次構造的であり（すなわち非直鎖状のアミノ酸から構成され）得る。一部の実施形態において、エピトープは、複数の分子（例えば、複数のアミノ酸、複数の糖鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基）の化学的に活性な表面配置である決定基を含み得、一部の実施形態において、特有の三次元構造特性および／または特有の電荷特性を有し得る。
【０２３６】
本発明の任意の局面に対する言及（例えば、抗体または断片）をともなった、用語「単離されている」は、主題の抗体または断片などが、（１）少なくとも一部のタンパク質から遊離していること、（２）同じ源（例えば同じ種）から得られた他のタンパク質から実質的に遊離していること、（３）異なる種から得られた細胞によって発現されていること、（４）自然界において会合しているポリヌクレオチド、脂質、炭水化物または他の物質の少なくとも約５０パーセントから分離されていること、（５）自然界において会合しないポリペプチドと機能的に会合（共有結合的または非共有結合的な相互作用によって）していないこと、または（６）自然界に存在しないことを意味する。典型的に、「単離されている」抗体、断片などは、所定のサンプルのうち、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２５％、または少なくとも約５０％を構成している。合成由来のゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡもしくは他のＲＮＡ、またはこれらの任意の組合せは、そのような単離されている抗体、断片などをコードし得る。好ましくは、単離されている抗体、断片などは、その治療用途、診断用途、予防用途、研究用途または他の用途を妨げる、その自然環境において見られるタンパク質もしくはポリペプチド、または他の混入物から実質的に遊離している。
【０２３７】
例えば、「単離されている」抗体は、その産生環境（例えば、天然または組換え）の構成要素から、同定されており、分離されており、および／または見出されている抗体である。好ましくは、単離されているポリペプチドは、当該抗体がＦＤＡによって承認され得る基準または承認されている基準まで単離されているように、その産生環境から得られるすべての他の構成要素との会合から、自由である。その産生環境の混入構成要素（例えば、形質転換された組換え細胞から生じるような）は、上記抗体にとっての研究用途、診断用途または治療用途を一般的に妨げる物質であり、酵素、ホルモン、ならびに他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を包含し得る。好ましい実施形態において、ポリペプチドは、（１）例えばLowry法、によって決定されるときに、９５重量％を超える抗体、いくつかの実施形態において９９重量％を超える抗体まで；（２）スピニングカップシークエネーターを用いることによって、少なくとも１５残基の、Ｎ末端アミノ酸配列もしくは内部アミノ酸配列を得るために十分な程度まで；または（３）非還元条件もしくは還元条件におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥによる、クーマシーブルーもしくは好ましくは銀染色を用いた均質性まで精製される。抗体の自然環境の、少なくとも１つの構成要素が存在しないので、単離されている抗体は、組換え細胞内のインシチュに当該抗体を含んでいる。しかし、通常は、単離されているポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製されている。
【０２３８】
（免疫抱合物）
本発明は、細胞毒素、化学療法薬、免疫抑制剤または放射性同位元素などの、治療的成分に結合されている抗体または断片（「免疫結合」）を含んでいる。細胞毒素剤は、細胞に対して有害である任意の物質を含んでいる。免疫結合を形成するための、適切な細胞毒素剤および化学療法剤の例は、上記技術分野において知られており、例えば、国際公開公報第ＷＯ０５／１０３０８１号を参照せよ。ＰＣＴ公開公報第ＷＯ０５／１０３０８１号は、その全体が本明細書に、言及により組み込まれる。
【０２３９】
（二重特異性）
本発明の抗体および断片は、単一特異性、二重特異性、または多特異性であってもよい。多特異性ｍＡｂｓは、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であってもよく、または２つ以上の標的ポリペプチドに対して特異的な抗原結合ドメインを含んでもよい。例えば、Tutt et al.（1991）J. Immunol. 147:60-69を参照せよ。ヒト抗ｈＬＩＧＨＴ抗体または断片は、他の機能的分子（例えば、他のペプチドまたはタンパク質）と連結されることが可能であるか、または他の機能的分子（例えば、他のペプチドまたはタンパク質）と共発現されることが可能である。例えば、抗体またはそれらの断片は、第２の結合特異性を有する二重特異性抗体または多特異性抗体をもたらすために、１つ以上の他の分子の構成要素（他の、抗体または抗体断片など）と、機能的に（例えば、化学的連結、遺伝的融合、非共有結合または他の方法によって）連結されることが可能である。
【０２４０】
本発明との関連において用いられることが可能である、代表的な二重特異性抗体の形態は、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のIｇ  ＣＨ３ドメインの使用を含んでいる。ここでは、上記第１のおよび第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸によって互いに異なっている。そしてここでは、少なくとも１つのアミノ酸の違いは、アミノ酸の違いのない二重特異性抗体と比較して、タンパク質Ａに対する二重特異性抗体の結合を低減する。一実施形態において、上記第１のＩｇ  ＣＨ３ドメインはタンパク質Ａを結合し、上記第２のＩｇ  ＣＨ３ドメインは、タンパク質Ａの結合を低減するかまたは完全に無効にする変異、Ｈ９５Ｒ修飾など（ＩＭＧＴエキソン番号付与による；ＥＵ番号付与によるＨ４３５Ｒ）、を含んでいる。上記第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＹ４３６Ｆ）をさらに含んでいてもよい。上記第２のＣＨ３の中で見出だされてもよい、さらなる修飾は、以下を含んでいる：ＩｇＧ１抗体の場合は、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２１（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合は、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ならびに、ＩｇＧ４抗体の場合は、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４５、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）。上述されている二重特異性抗体形態上の変異は、本発明の範囲内で検討される。  ある実施形態において、上記抗体またはそれらのＬＩＧＨＴ結合断片は、６未満のＣＤＲを含んでいる。いくつかの実施形態において、上記抗体またはそれらの抗原結合断片は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、もしくは５つのＣＤＲを含んでいるか、またはそれらからなる。特定の実施形態において、上記抗体またはそれらの抗原結合断片は、配列表における、上記ＨＣＤＲ１配列、ＨＣＤＲ２配列、ＨＣＤＲ３配列、ＬＣＤＲ１配列、ＬＣＤＲ２配列、およびＬＣＤＲ３配列からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのＣＤＲを含んでいるか、またはそれらからなる。
【０２４１】
特定の実施形態において、本発明の抗体は、完全ヒト抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、アンタゴニスト抗体、ｈＬＩＧＨＴ−中和抗体、もしくはそれらの任意の組み合わせである。あるいは、本発明は、当該抗体のｈＬＩＧＨＴ結合断片を提供する。例において、上記抗体は、ヒト可変ドメインおよび非ヒト（例えば、マウスもしくはラットまたはウサギ）定常ドメインを含んでいるキメラ抗体である。特定の実施形態において、上記抗体は、ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する、完全ヒト抗体（完全ヒトモノクローナル抗体など）またはそれらの抗原結合断片、である。好ましい実施形態において、上記抗体は、アンタゴニスト抗体である。好ましい実施形態において、上記抗体は、中和抗体である。
【０２４２】
例において、上記抗体または断片は、ラムダ型抗体または断片である（すなわち、その可変ドメインは、ラムダ可変ドメインである）。任意に、上記抗体または断片はまた、ラムダ定常ドメインを含んでいる。
【０２４３】
ある実施形態において、上記抗体は、ｈＬＩＧＨＴ（細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴ、または可溶性ｈＬＩＧＨＴ、など）に結合することについて、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、ＤｃＲ３またはそれらの融合タンパク質（例えば、Ｆｃ：ＨＶＥＭ、Ｆｃ：ＬＴβＲまたはＦｃ：ＤｃＲ３）と競合する（例えば、投与量依存的様式において）。代表的な競合的遮断テストは、本明細書における実施例において、提供される。
【０２４４】
他の態様において、単離された核酸が、本明細書において提供されており、当該核酸は、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド（例えば、細胞に表面発現されるかまたは可溶性の、ｈＬＩＧＨＴ）、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド断片、またはｈＬＩＧＨＴエピトープ、に特異的に結合する抗体をコードしている。ある実施形態において、上記核酸は、配列表において開示されているように、ＶＨ鎖、ＶＬ鎖、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３、をコードしている。
【０２４５】
他の態様において、本発明の抗体または断片をコードしている核酸を含んでいる、ベクターおよび宿主細胞が、本明細書において提供されている。
【０２４６】
ある実施形態において、上記抗体は、ｈＬＩＧＨＴの一塩基多形（ＳＮＰ）変異（ＳＮＰ  ２１４Ｅを含んでいるｈＬＩＧＨＴ（本明細書において「２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ」と表す）の１つ以上、および／またはＳＮＰ  ２１４Ｋを含んでいるｈＬＩＧＨＴ（本明細書において「２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴ」と表す）、など）に特異的に結合する。例において、上記２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴは、ＳＮＰ  ３２Ｓを含んでいる。例において、上記２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴは、ＳＮＰ  ３２Ｌを含んでいる。例において、上記２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴは、ＳＮＰ  ３２Ｓを含んでいる。例において、上記２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴは、ＳＮＰ  ３２Ｌを含んでいる。ＬＩＧＨＴは、３つの単量体ＬＩＧＨＴポリペプチドの三量体である。ＳＮＰ２１４Ｅについて同型接合であるヒトは、上記２１４Ｅ  ＳＮＰを有するサブユニット単量体を産生する。したがって、これらのヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ（三量体）は、その構成サブユニットの位置２１４において、ただＥを含むのみである。ＳＮＰ  ２１４Ｋおよび２１４Ｅについて異型接合であるヒトは、位置２１４において異なっているサブユニットの混合物を含んでいるｈＬＩＧＨＴ（三量体）、を産生する可能性を有している。本発明の任意の態様の例において、上記ｈＬＩＧＨＴは、単量体の三量体を含んでいる２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴであり、ここでは、各々の単量体は、２１４Ｅを含んでいる（本明細書において「２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ三量体」と表す）。本発明の任意の態様の他の例において、上記ｈＬＩＧＨＴは、単量体の三量体を含んでいる２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴであり、ここでは、各々の単量体は、２１４Ｋを含んでいる（本明細書において「２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ三量体」と表す）。
【０２４７】
態様において、対象（例えばヒトの対象）において、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよびＤｃＲ３の、１つ以上、またはすべてに対するｈＬＩＧＨＴの結合を、（例えば、少なくとも２０、３０、４０、５０または６０％まで）低下させるかまたは完全に阻害するための方法が、本明細書において提供される。この方法は、本発明の抗体またはそれらの断片の有効な量を、上記対象に対して投与することを含んでおり、当該抗体またはそれらの断片は、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび／または２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴ（例えば、細胞に表面発現されるかまたは可溶性の、ｈＬＩＧＨＴ）に特異的に結合する。
【０２４８】
ある態様において、対象（例えばヒトの対象）におけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患もしくは好ましくない健康状態を、処置または予防することの方法が、本明細書において提供されている。上記方法は、本発明の抗体またはそれらの断片の有効な量を、上記対象に対して投与することを含んでおり、当該抗体またはそれらの断片は、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび／または２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴ（例えば、細胞に表面発現されるかまたは可溶性の、ｈＬＩＧＨＴ）に特異的に結合する。ここでは、上記疾患もしくは好ましくない健康状態は、上記抗体もしくは断片によって、処置または予防される。例において、上記方法は、上記対象におけるｈＬＩＧＨＴの生物活性（ＩＬ−２、ＩＬ−８、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマの、１つ以上またはすべての分泌、など）を低下または阻害することを包含している。例において、上記生物活性は、ＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマの、１つ以上またはすべての分泌、から選択される。例において、上記生物活性は、ＩＬ−８、ＣＣＬ２０およびＲＡＮＴＥＳの、１つ以上またはすべての分泌、から選択される。
【０２４９】
ある態様において、対象（例えばヒトの対象）におけるｈＬＩＧＨＴの生物活性（ＩＬ−２、ＩＬ−８、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマの、１つ以上またはすべての分泌、など）を、低下または阻害することの方法が、本明細書において提供されている。上記方法は、本発明の抗体またはそれらの断片の有効な量を、上記対象に対して投与することを包含しており、当該抗体またはそれらの断片は、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび／または２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴ（例えば、細胞に表面発現されるかまたは可溶性の、ｈＬＩＧＨＴ）に特異的に結合する。ここでは、ｈＬＩＧＨＴの生物活性は、上記抗体または断片によって低下される。例において、上記生物活性は、ＩＬ−２、ＴＮＦアルファおよびインターフェロンガンマの、１つ以上またはすべての分泌、から選択される。例において、上記生物活性は、ＩＬ−８、ＣＣＬ２０およびＲＡＮＴＥＳの、１つ以上またはすべての分泌、から選択される。
【０２５０】
用語「約（about）」または「約（approximately）」は、所定の値または範囲の、２０％以内、好ましくは１０％以内、より好ましくは５％（または１％もしくはそれより小さい）以内、を意味する。
【０２５１】
本明細書に使用されるとき、「投与する」または「投与」とは、体の外側に存在するような物質（例えば、本明細書において提供されている抗ｈＬＩＧＨＴ抗体）を、患者の中に注射する行為か、またはそうでなければ患者の中に物理的に送達する行為を表している。これらの行為は、粘膜の、皮内の、静脈内の、筋肉内の送達、および／または本明細書において記載されているかもしくは上記技術分野において知られている、物理的送達の任意の他の方法、などによる行為である。疾患またはそれらの症状が処置されているとき、物質の投与は、通常、疾患またはそれらの症状の開始以後に発生する。疾患またはそれらの症状が予防されているとき、物質の投与は、通常、疾患またはそれらの症状の開始以前に発生する。
【０２５２】
２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の、パーセント同一性（percent identity）を決定するために、上記配列は、最適の比較目的のために整列させられる（例えば、第２アミノ酸配列または第２核酸配列との最適の整列のために、第１アミノ酸配列または第１核酸配列の配列中にギャップ（ｇａｐ）が導入されることが可能である）。その後、対応するアミノ酸位置もしくはヌクレオチド位置において、アミノ酸残基またはヌクレオチドは比較される。上記第１配列における位置が、上記第２配列において対応している位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められるとき、分子はその位置において同一である。２つの配列の間のパーセント同一性は、配列によって共有されている同一の位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一の重複している位置の数／位置の総数×１００％）。一実施形態において、上記２つの配列は同じ長さである。
【０２５３】
２つの配列（例えば、アミノ酸配列またはヌクレオチド配列）の間のパーセント同一性の決定はまた、数学的アルゴリズムを用いて達成されることが可能である。２つの配列の比較のために利用される、数学的アルゴリズムの制限されない好ましい例は、Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264 2268のアルゴリズム（Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873 5877として改良）である。そのようなアルゴリズムは、Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムの中に組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本発明の核酸分子と相同のヌクレオチド配列を得るために、ＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセット（例えば、スコア＝１００、語長(wordlength)＝１２について）と共に実行されることが可能である。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本発明のタンパク質分子と相同のアミノ酸配列を得るために、ＸＢＬＡＳＴプログラムパラメータセット（例えば、スコア５０、語長＝３に対して）と共に実行されることが可能である。比較する目的で、ギャップ整列（gapped alignments）を得るために、ギャップＢＬＡＳＴ（Gapped BLAST）は、Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389 3402、において記載されているように、利用されることが可能である。あるいは、分子間の距離関係（Ｉｄ．）を検出する反復検索、を実行するために、ＰＳＩ  ＢＬＡＳＴは、用いられることが可能である。ＢＬＡＳＴ、ギャップＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ  Ｂｌａｓｔプログラムを利用するとき、各々のプログラムの（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴの）初期設定パラメータが、用いられることが可能である（例えば、ワールドワイドウェブ上で、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）、ncbi.nlm.nih.govを参照せよ）。、配列の比較のために利用される数学的アルゴリズムの、制限されない他の好ましい例は、Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11 17のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列整列ソフトウェアパッケージ（GCG sequence alignment software package）の一部である、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）の中に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するために上記ＡＬＩＧＮプログラムを利用するとき、ＰＡＭ１２０分子量残基表（PAM120 weight residue table）、１２のギャップ長ペナルティ（gap length penalty）、および４のギャップペナルティ（gap penalty）が、用いられることが可能である。
【０２５４】
２つの配列間のパーセント同一性は、上述されているそれらと類似の技法を用いて、ギャップを許容または不許容で、決定されることが可能である。パーセント同一性を計算することにおいて、通常は、ただ正確な一致のみが勘定される。
【０２５５】
本明細書に使用されるとき、ｈＬＩＧＨＴの「アンタゴニスト」または「阻害剤」は、リガンド（例えば、抗体または断片）を表している。上記リガンドは、ｈＬＩＧＨＴを発現している細胞、またはｈＬＩＧＨＴリガンド（ｈＬＩＧＨＴ受容体など）を発現している細胞などにおいて、ｈＬＩＧＨＴの生物活性の１つ以上を阻害する能力か、またはそうでなければ低下させる能力がある。例えば、ある実施形態において、本発明の抗体は、アンタゴニスト抗体である。上記アンタゴニスト抗体が後述する細胞と接触させられたときに、当該アンタゴニスト抗体は、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３）を有している細胞からの、ＣＣＬ２０、ＩＬ−８および／またはＲＡＮＴＥＳの分泌を、阻害するか、またはそうでなければ低下させる。いくつかの実施形態において、ｈＬＩＧＨＴのアンタゴニスト（例えば、本発明のアンタゴニスト的抗体）は、例えば、ｈＬＩＧＨＴ受容体を発現している細胞の、活性化および／または細胞シグナル経路を、阻害することかまたはそうでなければ低下させることによって、したがって、アンタゴニストの非存在下におけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の生物活性に対して相対的に、上記細胞のｈＬＩＧＨＴ媒介性の生物活性を阻害することによって、作用してもよい。ある実施形態において、本明細書において提供されている抗体は、完全ヒト、アンタゴニスト的抗ｈＬＩＧＨＴ抗体であり、好ましくは、完全ヒト、モノクローナル、アンタゴニスト的抗ｈＬＩＧＨＴ抗体である。
【０２５６】
用語「抗体」、および「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」は、本明細書において、互換的に用いられてもよい。ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する、抗体またはそれらの断片は、関連している抗原と、交差反応してもよい。好ましくは、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する、抗体またはそれらの断片は、その他の抗原と、交差反応しない。ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する、抗体またはそれらの断片は、例えば、イムノアッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標登録）、または当業者に知られている他の技法によって、特定されることが可能である。実験的技法（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および酵素結合免疫吸着検査法（enzyme-linked immunosorbent assays）（ＥＬＩＳＡｓ）など）を用いて決定されるように、抗体またはそれらの断片が、任意の交差反応性抗原に対するよりも高い親和性を有して、ｈＬＩＧＨＴ抗原に結合するとき、当該抗体またはそれらの断片は、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する。通常、特異的な反応または選択的な反応は、少なくとも２倍の、バックグラウンドシグナル（background signal）またはノイズ（noise）であり、より通常は、１０倍のバックグラウンドより多い。抗体の特異性に関する議論のために、例えば、Paul, ed., 1989, Fundamental Immunology Second Edition, Raven Press, New York at pages 332-336、を参照せよ。
【０２５７】
本発明の抗体は、合成抗体、モノクローナル抗体、組換えにより産生される抗体、（二重特異性抗体を含んでいる）多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、細胞内抗体（intrabodies）、（例えば、単一特異性抗体、二重特異性抗体などを含んでいる）一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦＶ）、ラクダ化抗体（camelized antibodies）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド結合されているＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（anti-idiotypic）（抗Ｉｄ）抗体、および上述したうちの任意のエピトープ結合断片、を含んでいるが、これらに制限されない。特に、本発明の抗体は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫活性化部分（すなわち、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する抗原結合部位（例えば、抗ｈＬＩＧＨＴ抗体の１つ以上の相補性決定領域（complementarity determining regions）（ＣＤＲ））を含む、抗原結合ドメインまたは分子）、を含んでいる。本発明の抗体は、免疫グロブリン分子の、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ）であり得る。好ましい実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒトモノクローナルｈＬＩＧＨＴ抗体などの、完全ヒトである。ある実施形態において、本発明の抗体は、ＩｇＧ抗体であるか、またはそれらのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４）もしくはサブクラスである。
【０２５８】
用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合断片」、および類似の用語は、アミノ酸残基を含んでいる抗体の一部分を表しており、当該アミノ酸残基は、抗原と相互作用し、かつ、結合因子（binding agent）に、上記抗原に対するその特異性および親和性（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を与える。上記抗原結合領域は、齧歯類（例えば、ウサギ、ラットまたはハムスター）およびヒトなどの、任意の動物種に由来することが可能である。好ましくは、上記抗原結合領域は、ヒト由来である。
【０２５９】
本明細書に使用されるとき、用語「組成物」は、特定構成要素（例えば本発明の抗体）、任意に特定の量、を含む産物、および特定の構成要素、任意に特定の量、の組み合わせの結果として、直接的にまたは間接的に生じる、任意の産物を含むことを意図している。
【０２６０】
用語「定常領域」または「定常ドメイン」は、抗原に対する抗体の結合に直接的に関係していないが、種々の効果的機能（Ｆｃ受容体との相互作用など）を示している、軽鎖および重鎖のカルボキシル末端部分を表している。上記用語は、免疫グロブリン分子の一部分を表しており、当該免疫グロブリン分子の一部分は、免疫グロブリンの他の部分に対して相対的に、より保存されたアミノ酸配列を有しており、当該免疫グロブリンの他の部分は、抗原結合部位を有している可変ドメインである。上記定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメイン、ならびに、軽鎖のＣＨＬドメインを含む。
【０２６１】
ポリペプチドとの関連おいて、本明細書に使用されるとき、用語「誘導体」は、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの断片の、または抗体の、アミノ酸配列を含んでいるポリペプチドを表しており、当該抗体は、アミノ酸残基の置換、欠失もしくは挿入の導入によって変更されたｈＬＩＧＨＴポリペプチドに、特異的に結合する。本明細書に使用されるとき、用語「誘導体」はまた、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの断片、または抗体を表しており、当該抗体は、（例えば、ポリペプチドに対する、分子の任意の型の共有結合によって）化学的に修飾されたｈＬＩＧＨＴポリペプチドに、特異的に結合する。例えば、制限する目的ではないが、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの断片、またはｈＬＩＧＨＴ抗体は、（例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基（protecting groups）／保護基（blocking groups）による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞リガンドもしくは他のタンパク質に対する結合、などによって）化学的に修飾されていてもよい。上記誘導体は、取り付けられた分子の型もしくは分子の位置のどちらにおいても、自然発生的なもしくは自然開始的なペプチドまたはポリペプチドと、異なる様式において修飾される。誘導体はさらに、ペプチドまたはポリペプチド上に天然に存在する１つ以上の化学基の欠失を含んでいる。ｈＬＩＧＨＴポリペプチド、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの断片、またはｈＬＩＧＨＴ抗体、の誘導体は、当業者に知られている技法を用いる化学的修飾によって、化学的に修飾されていてもよく、アセチル化、製剤、ツニカマイシンの代謝的合成、などを含んでいるが、特定の化学的切断に制限されない。さらに、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの断片、またはｈＬＩＧＨＴ抗体の誘導体は、１つ以上の非古典的なアミノ酸を含んでいてもよい。ポリペプチド誘導体は、本明細書において記載されているｈＬＩＧＨＴポリペプチド、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの断片、もしくはｈＬＩＧＨＴ抗体と類似かまたは同一の機能を有している。
【０２６２】
本明細書に使用されるとき、用語「有効な量」とは、所定の疾患および／またはそれらに関連している症状の、重症度および／または継続期間を、低減するおよび／または回復するために十分である、治療（例えば、本明細書において提供されている抗体または薬学的組成物）の量を表している。この用語はまた、所定の病気の進展もしくは進行の、低減もしくは回復のための必要量、所定の病気の再発、発生もしくは兆候の、低減もしくは回復のための必要量、ならびに／または他の治療（例えば、本明細書において提供されている抗ｈＬＩＧＨＴ抗体以外の治療）の（複数の）予防効果もしくは（複数の）治療効果を、改良するもしくは向上するために必要量、を包含している。いくつかの実施形態において、本発明の抗体の上記有効な量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ（対象のｋｇ体重あたりの抗体のｍｇ）〜約１００ｍｇ／ｋｇである。ある実施形態において、本明細書において提供されている抗体の有効な量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇまたは約１００ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの範囲内）、である。いくつかの実施形態において、本明細書に使用されるとき、「有効な量」とはまた、特定の結果（例えば、細胞からのＣＣＬ２０、ＩＬ−８またはＲＡＮＴＥＳの分泌の阻害などの、細胞のｈＬＩＧＨＴ生物活性の阻害）を達成するための、本発明の抗体の量を表している。
【０２６３】
本明細書に使用されるとき、用語「エピトープ」は、抗原の表面上の局部的な領域（ｈＬＩＧＨＴポリペプチドまたはｈＬＩＧＨＴポリペプチド断片など）を表している。上記抗原の表面上の局部的な領域は、抗体の１つ以上の抗原結合領域に結合されることができ、動物、好ましくは哺乳類において、そして最も好ましくはヒトにおいて抗原性または免疫原性の活性を有しており、免疫応答を引き出す能力がある。免疫原性の活性を有しているエピトープは、動物において抗体反応を引き出すポリペプチドの一部分である。抗原性の活性を有しているエピトープは、任意の公知の方法によって（例えば、本明細書において記載されている免疫測定によって）決定されるような、抗体が特異的に結合するポリペプチドの一部分である。抗原性エピトープは、免疫原性である必要性は必要ない。エピトープは、通常、分子の化学的に活性な表面集団（アミノ酸または糖側鎖など）から構成されており、特定の電荷特質に加えて、特定の三次元構造の特質を有している。エピトープに寄与しているポリペプチドの領域は、ポリペプチドの隣接するアミノ酸であってもよく、または上記エピトープは、ポリペプチドの、２つ以上の隣接しない領域から一緒に生じていてもよい。上記エピトープは、抗原の三次元的な表面の特徴であってもよく、またはそうでなくてもよい。ある実施形態において、ｈＬＩＧＨＴエピトープは、（例えば、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの３量体形態における）ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの、三次元的な表面の特徴である。他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴエピトープは、（例えば、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの三量体形態または単量体形態における）ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの、線状の特徴である。本明細書において提供されている抗体は、ｈＬＩＧＨＴの単量体（変性した）形態のエピトープに特異的に結合してもよく、ｈＬＩＧＨＴの三量体（天然の）形態のエピトープに特異的に結合してもよく、またはｈＬＩＧＨＴの単量体（変性した）形態および三量体（天然の）形態、両方に特異的に結合してもよい。特定の実施形態において、本明細書において提供されている抗体は、ｈＬＩＧＨＴの三量体形態のエピトープに特異的に結合するが、ｈＬＩＧＨＴの単量体形態を特異的に結合しない。
【０２６４】
本明細書に使用されるとき、用語「賦形剤」は、薬のための希釈剤、媒体、保存料、バインダー、または分解防止剤として一般的に用いられる不活性の物質を表している。上記不活性の物質は、タンパク質（例えば、血清アルブミン、など）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、グリシン、ヒスチジン、など）、脂肪酸およびリン脂質（例えば、スルホン酸アルキル、カプリル酸エステル、など）、界面活性剤（例えば、ＳＤＳ、ポリソルベート、非イオン性界面活性剤、など）、糖類（例えば、スクロース、マルトース、トレハロース、など）、およびポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトール、など）を含んでいるが、これらに制限されない。Remington's Pharmaceutical Sciences（1990）Mack Publishing Co., Easton, Pa.、をまた参照せよ。上記文献は、言及により、その全体がこの結果として組み込まれる。
【０２６５】
ペプチドまたはポリペプチドとの関連において本明細書に使用されるとき、用語「断片」は、完全長未満のアミノ酸配列を含んでいる、ペプチドまたはポリペプチドを表している。そのような断片は、例えば、アミノ末端における切断、カルボキシル末端における切断、および／またはアミノ酸配列からの（複数の）残基の内部欠失、から生じてもよい。断片は、例えば、選択的ＲＮＡスプライシング、またはインビボプロテアーゼ活性の結果として生じてもよい。ある実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ断片は、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドまたはｈＬＩＧＨＴポリペプチド特異的に結合する抗体の、アミノ酸配列の、少なくとも５つの隣接アミノ酸残基、少なくとも１０の隣接アミノ酸残基、少なくとも１５の隣接アミノ酸残基、少なくとも２０の隣接アミノ酸残基、少なくとも２５の隣接アミノ酸残基、少なくとも４０の隣接アミノ酸残基、少なくとも５０の隣接アミノ酸残基、少なくとも６０の隣接アミノ酸残基、少なくとも７０の隣接アミノ酸残基、少なくとも８０の隣接アミノ酸残基、少なくとも９０の隣接アミノ酸残基、少なくとも１００の隣接アミノ酸残基、少なくとも１２５の隣接アミノ酸残基、少なくとも１５０の隣接アミノ酸残基、少なくとも１７５の隣接アミノ酸残基、少なくとも２００の隣接アミノ酸残基、または少なくとも２５０の隣接アミノ酸残基、のアミノ酸配列を含んでいるポリペプチドを含んでいる。特定の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの、またはｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する抗体の、断片は、少なくとも１つ、少なくとも２つ、または少なくとも３つの、上記ポリペプチドまたは抗体の機能を保持している。
【０２６６】
用語「完全ヒト抗体」または「ヒト抗体」は、本明細書において互換的に用いられており、ヒト可変領域、および最も好ましくはヒト定常領域、を含んでいる抗体を表している。特定の実施形態において、上記用語は、ヒト由来の可変領域および定常領域を含んでいる抗体を表している。ある実施形態において、「完全ヒト」抗ＬＩＧＨＴ抗体はまた、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドを結合する抗体を含んでいることが可能であり、かつ、ヒト生殖系列の免疫グロブリン核酸配列の自然発生的な体細胞変異である核酸配列によってコードされることが可能である。特定の実施形態において、本明細書において提供されている抗ｈＬＩＧＨＴ抗体は、完全ヒト抗体である。用語「完全ヒト抗体」は、Ｋａｂａｔ等によって記載されているように、ヒト生殖系列の免疫グロブリン配列に対応している可変領域および定常領域を有している抗体、を含んでいる（Kabat et al.（1991）Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242、を参照せよ）。完全ヒト抗体を産生する代表的な方法は、例えば、本明細書における実施例において提供されるが、本技術分野において知られている任意の方法が用いられてもよい。
【０２６７】
慣用句「組換えヒト抗体」は、組換えの手段によって作製される、発現される、創造される、または単離される、ヒト抗体を含んでいる。上記組換えヒト抗体は、（１）宿主細胞の中にトランスフェクションされた組換え発現ベクターを用いて発現される抗体、（２）組換え体から単離される抗体、（３）組み合わせのヒト抗体ライブラリ、（４）ヒト免疫グロブリン遺伝子ついて、遺伝子移植されたおよび／または染色体移植された（例えば、Taylor, L. D. et al.（1992）Nucl. Acids Res. 20:6287-6295を参照せよ）動物（例えば、マウスまたはウシ）から単離される抗体、または（５）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを他のＤＮＡ配列へ関わらせる、任意の他の手段、によって作製された、発現された、創造された、もしくは単離された抗体、などである。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系免疫グロブリン配列に由来する、可変領域および定常領域を有していることが可能である（Kabat, E. A. et al.（(1991）Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242、を参照せよ）。しかしながら、ある実施形態において、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（またはヒトＩｇ配列について遺伝子移植である動物が用いられるとき、インビトロ体細胞突然変異誘発）されやすく、したがって、上記組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列のＶＨおよびＶＬ配列に由来し、かつ、ヒト生殖系列のＶＨおよびＶＬ配列に関連しているが、インビボにおけるヒト抗体生殖系列レパートリーの中では、自然に存在できなくてもよい。
【０２６８】
本明細書に使用されるとき、用語「融合タンパク質」は、抗体のアミノ酸配列、および異種ポリペプチドまたは異種タンパク質（すなわち、本来なら、上記抗体（例えば、非−抗ｈＬＩＧＨＴ抗原抗体）の一部分でないポリペプチドもしくはタンパク質）のアミノ酸配列、を含んでいるポリペプチドを表している。ｈＬＩＧＨＴまたは抗ｈＬＩＧＨＴ抗体との関係において用いられているとき、用語「融合」は、異種ペプチドもしくは異種ポリペプチドと、ペプチドもしくはポリペプチド、またはそれらの断片、それらの変異型および／またはそれらの誘導体、との連結を表している。好ましくは、上記融合タンパク質は上記ｈＬＩＧＨＴまたは抗ｈＬＩＧＨＴ抗体の生物活性を保持する。ある実施形態において、上記融合タンパク質は、ｈＬＩＧＨＴ抗体の、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ（１つ、２つ、もしくは３つのＶＨ  ＣＤＲ）、および／またはＶＬ  ＣＤＲ（１つ、２つ、もしくは３つのＶＬ  ＣＤＲ）、を含んでおり、ここでは、上記融合タンパク質は、ｈＬＩＧＨＴエピトープに特異的に結合する。
【０２６９】
抗体に関して用いられているとき、用語「重鎖」は、重鎖定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびミュー（μ）と呼ばれる、５つの識別可能な型を表している。これらの、重鎖の識別可能な型は、よく知られており、ＩｇＧの４つのサブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含んでいる、抗体の５つのクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭ、を、それぞれ生み出す。好ましくは、上記重鎖はヒト重鎖である。
【０２７０】
本明細書に使用されるとき、用語「宿主」は、動物、好ましくは哺乳類、そして最も好ましくはヒト、を表している。
【０２７１】
本明細書に使用されるとき、用語「宿主細胞」は、核酸分子を用いてトランスフェクションされた特定の対象細胞、および当該細胞の子孫または潜在的子孫、を表している。上記細胞の子孫は、子孫の発生に続いて、もしくは上記宿主細胞ゲノムの中への核酸分子の組み込みに続いて、生じるかもしれない変異または環境の影響の結果、核酸分子を用いてトランスフェクションされた親細胞と同一でなくてもよい。
【０２７２】
本明細書に使用されるとき、用語「免疫変調剤」および免疫変調剤（これに制限されない）を含んでいるそれらの変形物は、宿主の免疫系を変調する物質を表している。ある実施形態において、免疫変調剤は、免疫抑制剤である。ある他の実施形態において、免疫変調剤は、免疫賦活剤である。本発明に従って、本発明の組み合わせ療法において用いられる免疫変調剤は、抗ｈＬＩＧＨＴ抗体または抗原結合断片を含んでいない。免疫変調剤は、小分子、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、融合タンパク質、抗体、無機分子、模擬剤、および有機分子を含んでいるが、これらに制限されない。
【０２７３】
本明細書に使用されるとき、他の治療の施行との関連において、用語「組み合わせにおいて(in combination)」とは、１つの治療より、より多くの使用を表している。用語「組み合わせにおいて」の使用は、感染を有する対象へ治療が施される順序を限定しない。第１の治療は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を有した対象、有している対象、またはｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患に感受性のある対象に対して、第２の治療の施行の前に（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間前に）、第２の治療の施行と同時に、または第２の治療の施行の後に（例えば、１分、４５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、もしくは１２週間後に）、施されることが可能である。任意の追加の治療が、他の追加の治療と共に、任意の順番において施されることが可能である。ある実施形態において、本発明の抗体は、１つ以上の治療（例えば、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を予防、処置、管理、および／または回復するために目下施されている本発明の抗体、ではない治療）と共に、組み合わせにおいて、施されることが可能である。本発明の抗体と共に、組み合わせにおいて施されることが可能である治療の、制限されない例は、鎮痛剤、麻酔剤、抗生物質、または免疫変調剤もしくはアメリカ薬局方（U.S. Pharmacopoeia）および／または医師用添付文書集（Physician's Desk Reference）においてリストに記載されている任意の他の物質、を含む。
【０２７４】
「単離された」または「精製された」抗体は、例えば、細胞の物質が実質的に無いか、または抗体が由来する供給元細胞もしくは供給元組織からの他の汚染しているタンパク質が実質的に無いか、または化学的に合成されるときには、化学前駆物質もしくは他の化学物質が実質的に無い。術語「細胞の物質が実質的に無い」は、抗体が単離される細胞または組換えにより産生される細胞の、細胞構成要素から分離された上記抗体の、抗体の調製物を含んでいる。したがって、細胞の物質が実質的に無い抗体は、（乾燥重量にで）約３０％、２０％、１０％または５％よりすくない異種タンパク質（本明細書において、「汚染しているタンパク質」として表されもする）を有している抗体の調製物を含んでいる。上記抗体が組換えにより産生されるとき、当該抗体はまた、好ましくは、培養液が実質的に無く、すなわち、培養液は、タンパク質調製物の約２０％、１０％、または５％より少ない量に相当する。上記抗体が化学合成によって産生されるとき、当該抗体は、好ましくは、化学前駆物質または他の化学物質が実質的に無く、すなわち、抗体は、タンパク質の合成に関与している化学前駆物質または他の化学物質から分離されている。したがって、上記抗体のそのような調製物は、（乾燥重量で）約３０％、２０％、１０％、５％より少ない、当該抗体以外の化学前駆物質または化合物を有している。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、単離されているかまたは精製されている。
【０２７５】
「単離された」核酸分子は、核酸分子の自然源において存在する他の核酸分子から分離されている核酸分子である。さらに、ｃＤＮＡ分子などの、「単離された」核酸分子は、他の細胞の物質が実質的に無いことが可能であり、または組換え技法によって産生されたときには培養液が実質的に無いことが可能であり、もしくは化学的に合成されたときには化学前駆物質もしくは他の化学物質が実質的に無いことが可能である。特定の実施形態において、本発明の抗体をコードしている（複数の）核酸分子は、単離されるか、または精製される。
【０２７６】
用語「ヒトＬＩＧＨＴ」、「ｈＬＩＧＨＴ」または「ｈＬＩＧＨＴポリペプチド」および類似の用語は、配列表におけるアミノ酸配列、および関連しているポリペプチド、を含んでおり、かつ、それらのＳＮＰ変異型を含んでいる、ポリペプチド（「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、本明細書において互換的に用いられる）、を表している。関連しているポリペプチドは、対立遺伝子変異型（例えば、ＳＮＰ変異型）；スプライス変異型；断片；誘導体；置換、欠失、および挿入変異；融合ポリペプチド；ならびに、好ましくは、ｈＬＩＧＨＴ活性を保持する、および／または抗ｈＬＩＧＨＴ免疫応答を生み出すために十分である、種間ホモログ、を含んでいる。代表的な非同義ＳＮＰ変異型は、２１４Ｅ−３２Ｓ（ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの、位置２１４におけるグルタミン酸および位置３２におけるセリン（例えば、配列番号５２において叙述されているｈＬＩＧＨＴポリペプチド））、２１４Ｋ−３２Ｓ、２１４Ｅ−３２Ｌおよび２１４Ｅ−３２Ｌを含んでいるｈＬＩＧＨＴポリペプチドを含んでいるが、これらに制限されない。抗ｈＬＩＧＨＴ免疫学的応答を生み出すのに十分である、ｈＬＩＧＨＴの可溶性形態がまた、含まれている。当業者が評価するように、本発明の抗ｈＬＩＧＨＴ抗体は、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド断片、ｈＬＩＧＨＴ抗原、および／またはｈＬＩＧＨＴエピトープに、結合することが可能である。上記エピトープは、大きな抗原の一部であるから、当該エピトープは、大きなポリペプチド断片の一部であり、言い換えると、当該エピトープは、三量体（天然の）形態または単量体（変性した）形態であり得る大きなポリペプチドｈＬＩＧＨＴの一部である。
【０２７７】
用語「カバット番号付与（Kabat numbering）」および同様の用語は、本技術分野において理解され、かつ、抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域における他のアミノ酸残基よりも可変である（すなわち超可変である）アミノ酸残基、またはそれらの抗原結合部分を番号付けることの方式を表している(Kabat et al.（1971）Ann. NY Acad. Sci. 190:382-391、およびKabat et al.（1991）Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242)。上記重鎖可変領域については、超可変領域は、通常、ＣＤＲ１についてアミノ酸位置３１から３５まで、ＣＤＲ２についてアミノ酸位置５０から６５まで、およびＣＤＲ３についてアミノ酸位置９５から１０２まで、の範囲にわたる。上記軽鎖可変領域については、超可変領域は、通常、ＣＤＲ１についてアミノ酸位置２４から３４まで、ＣＤＲ２についてアミノ酸位置５０から５６まで、およびＣＤＲ３についてアミノ酸位置８９から９７まで、の範囲にわたる。
【０２７８】
抗体に関して用いられているとき、用語「軽鎖」は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、ラムダ（λ）のカッパ（κ）と呼ばれる、２つの識別可能な型を表している。軽鎖アミノ酸配列は、本技術分野においてよく知られている。好ましい実施形態において、上記軽鎖は、ヒト軽鎖である。
【０２７９】
用語「モノクローナル抗体」は、同種の、または実質的に同種の、抗体の集団から得られる表しており、各々のモノクローナル抗体は、通常、抗原上の単一のエピトープを認識する。好ましい実施形態において、本明細書に使用されるとき、「モノクローナル抗体」は、単一のハイブリドーマまたは他の単一の細胞によって産生された抗体である。ここでは、例えば、ＥＬＩＳＡ、または本技術分野において知られているもしくは本明細書において提供されている実施例における、他の抗原結合測定法もしくは結合タンパク競合測定法、によって決定されるように、上記抗体は、ただ１つのｈＬＩＧＨＴエピトープに特異的に結合する。用語「モノクローナル」は、抗体を生産するための、任意の特定の方法に制限されない。例えば、本発明のモノクローナル抗体は、Kohler et al.; Nature, 256:495（1975）において記載されているように、ハイブリドーマ法によって作られてもよく、または例えば本明細書において記載されているような技法を用いて、ファージライブラリから単離されてもよい。クローン細胞株の調製のための他の方法、およびクローン細胞株によって発現されたモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、本技術分野においてよく知られている（例えば、Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology,（2002）5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York、を参照せよ）。他のモノクローナル抗体を産生する、他の代表的な方法は、本明細書における実施例において提供されている。
【０２８０】
核酸分子、ポリペプチド、宿主、などのような生体物質、との関連において用いられるとき、用語「自然発生的な(naturally occurring)」または「天然の(native)」は、人間によって操作されていない、自然状態で見つけられる当該生体物質を表している。
【０２８１】
本明細書において用いらているとき、用語「薬学的に許容可能な」は、連邦政府もしくは州政府の監督官庁によって承認されていること、またはアメリカ薬局方、ヨーロッパ薬局方、もしくは動物における、より特別には人における使用のための他の一般的に認められている薬局方において、リストに記載されていること、を意味している。
【０２８２】
本明細書において用いらているとき、「ポリクローナル抗体」は、多くのエピトープを有しているタンパク質に対する、免疫原性の応答において生み出された抗体集団を表しており、したがって、上記タンパク質の中の同じおよび異なるエピトープに対して指向されている、異なる抗体の多種を含んでいる。ポリクローナル抗体を産生するための方法は、本技術分野において知られている（例えば、Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology,（2002）5th Ed., Ausubel et al., eds., John Wiley and Sons, New York、を参照せよ）。
【０２８３】
本明細書において用いらているとき、用語「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、「核酸」、「核酸分子」および他の類似の用語は、互換的に用いられており、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、などを含んでいる。
【０２８４】
本明細書において用いらているとき、用語「予防する（prevent）」、「予防すること（preventing）」および「予防（prevention）」は、本明細書において提供されている治療の施行または治療の組み合わせ（例えば、本発明の抗体などの、予防用または治療用の薬剤の組み合わせ）の結果として生じる、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患および／またはそれらに関連している症状の、発生、再発、兆候、または広がりの、全身的なまたは局部的な阻害、を表している。
【０２８５】
本明細書において用いらているとき、用語「予防用の薬剤」は、対象において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患および／またはそれらに関連している症状の、発生、再発、兆候、または広がりを、全身的にまたは局部的に阻害することが可能である任意の物質を表している。ある実施形態において、用語「予防用の薬剤」は、本発明の抗体を表している。ある他の実施形態において、用語「予防用の薬剤」は、本発明の抗体以外の物質を表している。好ましくは、予防用の薬剤は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患および／またはそれらに関連している症状を予防するために、またはｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患および／またはそれらに関連している症状の兆候、発生、進行、および／または重症度を妨げるために有用であると知られているか、または用いられていたか、もしくは目下用いられている、物質である。特定の実施形態において、上記予防用の薬剤は、完全ヒト抗ｈＬＩＧＨＴモノクローナル抗体などの、完全ヒト抗ｈＬＩＧＨＴ抗体である。
【０２８６】
エピトープに寄与しているｈＬＩＧＨＴの領域は、ポリペプチドの隣接するアミノ酸であってもよく、または上記エピトープは、上記ポリペプチドの、２つ以上の隣接しない領域から一緒に生じてもよい。上記エピトープは、抗原の三次元的な表面の特徴であってもよく、またはそうでなくてもよい。免疫応答を引き出す能力がある、ｈＬＩＧＨＴ抗原の表面上の局部的な領域は、ｈＬＩＧＨＴエピトープである。上記エピトープは、上記抗原の三次元的な表面の特徴であってもよく、またはそうでなくてもよい。
【０２８７】
「ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患」および「ｈＬＩＧＨＴ媒介性の好ましくない健康状態」は、互換的に用いられており、ｈＬＩＧＨＴによって完全にもしくは部分的に引き起こされるか、またはｈＬＩＧＨＴの結果である、任意の疾患または好ましくない健康状態を表している。ある実施形態において、ｈＬＩＧＨＴは、細胞の表面上に、異常に（例えば、多量に）発現される。いくつかの実施形態において、ｈＬＩＧＨＴは、特定の細胞上に、異常に上方調節される場合がある。他の実施形態において、標準的な、異常な、または過剰な細胞シグナルは、ｈＬＩＧＨＴリガンドに対するｈＬＩＧＨＴの結合によって引き起こされる。ある実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴリガンドは、ｈＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲ、またはＤＣＲ３）であり、例えば、当該ｈＬＩＧＨＴ受容体は、結腸上皮細胞などの細胞表面上に発現される。ある実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患は、クローン氏病（ＣＤ）または潰瘍性大腸炎（ＵＣ）などの、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。他の実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患は、移植片対宿主疾患（ＧＶＨＤ）である。
【０２８８】
用語「ｈＬＩＧＨＴ受容体」または「ｈＬＩＧＨＴ結合受容体」は、本明細書において互換的に用いられており、ｈＬＩＧＨＴに結合する受容体ポリペプチドを表している。特定の実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴ受容体はＨＶＥＭ、ＦｃβＲ、またはＤｃＲ３、である。いくつかの実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴ受容体は、結腸上皮細胞のような細胞の表面上に発現される。
【０２８９】
本明細書に使用されるとき、用語「対象」および「患者」は、互換的に用いられている。本明細書に使用されるとき、対象は、好ましくは、非霊長類(例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、など)、または霊長類（例えば、サルおよびヒト）、などの哺乳類であり、最も好ましくはヒトである。一実施形態において、上記対象は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を有している、哺乳類であり、好ましくはヒトである。他の実施形態において、上記対象は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の発生の危険性がある、哺乳類であり、好ましくはヒトである。
【０２９０】
本明細書に使用されるとき、「ほぼ全部の」は、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％、を表している。
【０２９１】
本明細書に使用されるとき、用語「界面活性剤が実質的に無い」は、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する抗体の製剤を表しており、上記製剤は、０．０００５％より少ない、０．０００３％より少ない、もしくは０．０００１％より少ない界面活性剤、および／または０．０００５％より少ない、０．０００３％より少ない、もしくは０．０００１％より少ない界面活性剤、を含んでいる。
【０２９２】
本明細書に使用されるとき、用語「塩が実質的に無い」は、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する抗体の製剤を表しており、上記製剤は、０．０００５％より少ない、０．０００３％より少ない、もしくは０．０００１％より少ない無機塩、を含んでいる。
【０２９３】
本明細書に使用されるとき、用語「界面活性剤」は、両親媒性の構造を有する有機物質を表している；すなわち、上記有機物質は、溶解性傾向が対立している、通常は、油溶性の炭化水素鎖および水溶性のイオン群、の群から構成される。界面活性剤は、表面活性部分の電荷に依存して、陰イオンの、陽イオンの、および非イオンの界面活性剤に分類されることが可能である。界面活性剤は、多くの場合、種々の薬学的組成物、および生体物質の調製物、のための、湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、および分散剤として、用いられる。
【０２９４】
本明細書に使用されるとき、用語「タグ」は、例えば、ポリペプチド、および／またはポリヌクレオチド、に付属されている、任意の型の部分を表している。上記ポリヌクレオチドは、ｈＬＩＧＨＴ、またはｈＬＩＧＨＴ抗体もしくはそれらの抗原結合断片、をコードしている。例えば、ｈＬＩＧＨＴ、ｈＬＩＧＨＴ抗体、またはそれらの抗原結合断片をコードしているポリヌクレオチドは、１つ以上の付加的なタグをコードしているヌクレオチド配列を含むことが可能であり、当該ヌクレオチド配列は、例えば、検出可能な部分、もしくは親和性精製を助ける部分をコードしている。翻訳されるとき、上記タグおよび上記抗体は、融合タンパク質の形態であり得る。タグに関して、用語「検出可能な」または「検出」は、可視化されることが可能である、任意のタグを表している。あるいは、当該用語においては、タグの存在は、他の方法により決定される、および／または（例えば、定量法によって）測定されることが可能である。検出可能なタグの、制限されない例は、蛍光タグである。
【０２９５】
本明細書に使用されるとき、用語「治療用の薬剤」は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患およびそれらに関連している症状の、処置、管理、または回復において用いられることが可能である、任意の物質を表している。ある実施形態において、用語「治療用の薬剤」は、本発明の抗体を表している。ある他の実施形態において、用語「治療用の薬剤」は、本発明の抗体以外の物質を表している。好ましくは、治療用の薬剤は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患もしくはそれらに関連している１つ以上の症状の、処置、管理、もしくは回復のために、有用であると知られているか、または用いられていたか、もしくは目下用いられている、物質である。特定の実施形態において、上記治療用の薬剤は、完全ヒト抗ｈＬＩＧＨＴモノクローナル抗体などの、完全ヒト抗ｈＬＩＧＨＴ抗体である。
【０２９６】
治療（例えば、予防用または治療用の薬剤の使用）の組み合わせは、任意の２つ以上の単一の治療の加法的な効果よりも、効果的である。例えば、予防用および／または治療用の薬剤の組み合わせの相乗効果は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を有する対象に対する、１つ以上の物質のより少ない投与量の使用、および／または上記物質のより少ない投与頻度、を可能にする。予防用もしくは治療用の薬剤のより少ない投与量を利用する能力、および／または上記治療をより少ない頻度で投与する能力は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置、もしくは回復における、上記治療の効果を低減することなく、対象に対する上記治療に関連付けられている毒性を、低減する。さらに、相乗効果は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防における、または管理、処置、もしくは回復における、治療の効果を改良するという結果になることが可能である。最終的に、治療（例えば、予防用または治療用の薬剤）の組み合わせの相乗効果は、任意の単一の治療の使用に関連付けられている、意に添わない、または好ましからざる副作用を、回避または低減する場合がある。
【０２９７】
本明細書に使用されるとき、用語「治療」は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患（例えば、ＩＢＤもしくはＧＶＨＤ）の、予防、管理、処置、および／または回復において用いられることが可能である、任意の、プロトコル、方法、および／または物質、を表している。ある実施形態において、用語「複数の治療（therapies）」ならびに「治療（therapy）」は、医療関係者などの当業者によって知られている、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置、および／または回復において有用な、生物学的治療、支持療法、および／または他の治療、を表している。
【０２９８】
本明細書に使用されるとき、用語「処置する（treat）」、「処置（treatment）」、ならびに「処置すること（treating）」は、１つ以上の治療（本発明の抗体などの、１つ以上の予防用または治療用の薬剤、の投与を含んでいるが、これに制限されない）の施行の結果として生じる、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患（例えば、ＩＢＤまたはＧＶＨＤ）の進行、重症度、および／または継続時間、の低減または回復を表している。特定の実施形態において、そのような用語は、（１）ＨＶＥＭに対するｈＬＩＧＨＴの結合の低減もしくは阻害、（２）ＬＴβＲに対するｈＬＩＧＨＴの結合の低減もしくは阻害、（３）ＤｃＲ３に対するｈＬＩＧＨＴの結合の低減もしくは阻害、（４）対象の、ｈＬＩＧＨＴ受容体を発現している細胞からの、ＣＣＬ２０の産生もしくは分泌の、低減もしくは阻害、（５）対象の、ｈＬＩＧＨＴ受容体を発現している細胞からの、ＩＬ−８の産生もしくは分泌の、低減もしくは阻害、（６）対象の、ｈＬＩＧＨＴ受容体を発現している細胞からの、ＲＡＮＴＥＳの産生もしくは分泌の、低減もしくは阻害、および／または（７）ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患（ＩＢＤもしくはＧＶＨＤなど）に関連している１つ以上の症状の阻害もしくは低減、を表している。特定の実施形態において、予防用の薬剤は、完全ヒト抗ｈＬＩＧＨＴモノクローナル抗体などの、完全ヒト抗ｈＬＩＧＨＴ抗体である。
【０２９９】
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、軽鎖および重鎖の一部分を表しており、通常、上記重鎖において、約アミノ末端基１２０から１３０アミノ酸、および上記軽鎖において、約１００から１１０アミノ酸である。当該アミノ酸は、抗体の間で配列において広範囲にわたって異なっており、かつ、各々の特定の抗原に対するその特定の抗体の、結合および特異性において、用いられている。配列における可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれるそれらの領域において集中しており、一方、可変ドメインにおいてより高度に保存されている領域は、フレームワーク領域と呼ばれる。上記軽鎖および重鎖の上記ＣＤＲは、抗原と抗体の相互作用について、主たる原因である。本明細書において用いられている、アミノ酸位置の番号付与は、Kabat et al.（1991）Sequences of proteins of immunological interest.（U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.）5th ed.（"Kabat et al."）において見られるように、ＥＵインデックスに基づいている。好ましい実施形態において、上記可変領域は、ヒト可変領域である。
【０３００】
（抗体）
本発明の抗体は、合成抗体、モノクローナル抗体、組換えにより産生される抗体、（二重特異性抗体を含んでいる）多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、細胞内抗体、（例えば、単一特異性抗体、二重特異性抗体などを含んでいる）一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦＶ）、ラクダ化抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド結合されているＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、および上述したうちの任意のエピトープ結合断片、を含んでいるが、これらに制限されない。
【０３０１】
特に、本明細書において提供されている抗体は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫活性化部分（すなわち、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する抗原結合部位を含んでいる、分子）、を含んでいる。本明細書において提供されている免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子の、任意の、型（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、またはサブクラスのうちであり得る。特定の実施形態において、本明細書において提供されている抗体は、ＩｇＧ抗体であり、好ましくはＩｇＧ１またはＩｇＧ４である。
【０３０２】
抗体の変異型および誘導体は、エピトープに特異的に結合する能力を保持する抗体断片を含んでいる。好ましい断片は、Ｆａｂ断片（抗原結合ドメインを含み、かつ、ジスルフィド系都合により架橋されている、軽鎖および重鎖の一部分を含んでいる、抗体断片）；Ｆａｂ’ （ヒンジ領域を介して、Ｆａｂおよび重鎖の付加的部分を含んでいる単一の抗結合ドメインを含んでいる、抗体断片）；Ｆ（ａｂ’）２（重鎖のヒンジ領域において、鎖間のジスルフィド結合により結合されている２つのＦａｂ’分子；上記Ｆａｂ’分子は、同じまたは異なるエピトープに対して指向されていてもよい）；二重特異性Ｆａｂ（２つの抗原結合ドメインを有すしているＦａｂ分子であり、上記抗原結合ドメインの各々は異なるエピトープに指向されていてもよい）；ｓＦｖとしても知られている、可変領域を含んでいる一本鎖Ｆａｂ鎖（１０〜２５アミノ酸の鎖により結合された抗体の、可変である、単一の軽鎖および重鎖の抗原結合決定領域）；ジスルフィド結合されたＦｖ，すなわちｄｓＦｖ（ジスルフィド結合により結合された抗体の、可変である、単一の軽鎖および重鎖の抗原結合決定領域）；ラクダ化ＶＨ（ＶＨ境界面におけるいくつかのアミノ酸が、自然発生的なラクダ抗体の重鎖において見出されるアミノ酸である抗体の、可変である、単一の重鎖の抗原結合決定領域）；二重特異性ｓＦｖ（２つの抗原結合ドメインを有しているｓＦｖまたはｄｓＦｖ分子であり、２つの抗原結合ドメインの各々は、異なるエピトープに指向されていてもよい）；二重特異性抗体（第１ｓＦｖのＶＨドメインが第２ｓＦｖのＶＬドメインを集め、かつ、第１ｓＦｖのＶＬドメインが第２ｓＦｖのＶＨドメインを集めるときに形成される二量体ｓＦｖ；上記二重特定性抗体の２つの抗原結合領域は、同じまたは異なるエピトープに対して指向されていてもよい）；ならびに三重特異性抗体（二重特異性抗体と類似の様式において形成されているが、３つの抗原結合ドメインは単一の複合体において作られている、三量体ｓＦｖ；３つの抗原結合ドメインは、同じまたは異なるエピトープに対して指向されていてもよい）、を含んでいる。抗体の誘導体はまた、抗体結合部位の１つ以上のＣＤＲ配列を含んでいる。２つ以上のＣＤＲ配列が存在するとき、上記ＣＤＲ配列は、足場上に共に結合されていてもよい。ある実施形態において、本発明と共に用いられるための抗体は、一本鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）を含んでいる。ｓｃＦｖは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含んでいる、抗体断片である。ここでは、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖において存在する。一般的に、ｓｃＦｖポリペプチドはさらに、上記ｓｃＦｖが抗原結合のために望ましい構造を形成することを可能にする、上記ＶＨおよびＶＬドメインの間の、ポリペプチドリンカーを含んでいる。ｓｃＦｖのレビューとしては、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315（1994）、を参照せよ。
【０３０３】
本発明の抗体は、鳥類および哺乳類（例えば、ヒト、ネズミ、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウシ、またはニワトリ）を含んでいる、任意の動物由来からであってもよい。ある実施形態において、本発明の抗体は、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体である。本明細書に使用されるとき、「ヒト」抗体は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を含んでおり、ヒト免疫グロブリンライブラリから、またはヒト遺伝子からの抗体を発現するマウスから、単離される抗体を含んでいる。
【０３０４】
好ましい実施形態において、本発明の抗体は、完全ヒト抗体であり、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド断片、またはｈＬＩＧＨＴエピトープ、を特異的に結合する完全ヒト抗体などである。そのような完全ヒト抗体は、好ましからざる、または不必要な副作用（対象に投与されたときに、非完全ヒト抗体（例えば、他の種に由来している抗ｈＬＩＧＨＴ抗体）に対して指向された免疫応答、など）の発生を最小限に抑えるために、完全マウス（または他の完全もしくは部分的、非ヒト種抗体）、ヒト化抗体、またはキメラ抗体と比較して、好都合である。
【０３０５】
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性であってもよく、またはより多くの多特異性であってもよい。多特異性抗体は、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であってもよく、またはｈＬＩＧＨＴポリペプチドおよび異種エピトープ（異種ポリペプチドもしくは固定担体物質など）の両方に対して特異的であってもよい。好ましい実施形態において、本明細書において提供されている抗体は、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの所定のエピトープに対して単一特異性であり、他のエピトープに特異的に結合しない。
【０３０６】
本明細書において記載されている抗ｈＬＩＧＨＴ抗体または断片を産生する、Ｂ細胞（例えば、不死化Ｂ細胞）またはハイブリドーマはまた、本明細書において提供されている。
【０３０７】
ある実施形態において、単離された抗体は、本明細書において提供されており、ｈＬＩＧＨＴエピトープに特異的に結合する。ここでは、上記抗体によるｈＬＩＧＨＴエピトープに対する結合は、本発明の抗体または断片によって、（例えば、投与量依存的様式において）競合的に遮断される。上記抗体は、完全ヒト抗体であってもよく、またはそうでなくてもよい。好ましい実施形態において、上記抗体は、完全ヒトモノクローナル抗ｈＬＩＧＨＴ抗体であり、なおさら好ましいことには、完全ヒト、モノクローナル、アンタゴニスト抗ｈＬＩＧＨＴ抗体である。用いられることが可能である、代表的な競合的遮断テストは、本明細書における実施例において提供される。
【０３０８】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または断片は、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴに結合することについて、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３（もしくはそれらの（複数の）融合タンパク質）と（例えば、投与量依存的様式において）競合する。他の実施形態において、本発明の抗体または断片は、可溶性ｈＬＩＧＨＴに結合することについて、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３（もしくはそれらの融合タンパク質）と（例えば、投与量依存的様式において）競合する。用いられることが可能である、代表的な競合的遮断テストは、本明細書における実施例において提供される。一実施形態において、上記抗体または断片は、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴ（ｈＬＩＧＨＴなど）に対する、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３の結合を、部分的にまたは完全に、阻害する。他の実施形態において、上記抗体は、可溶性ｈＬＩＧＨＴに対するＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３の結合を、部分的にまたは完全に阻害する。いくつかの実施形態において、上記抗体または断片は、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴリガンド（ｈＬＩＧＨＴ受容体（例えば、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３）など）を有している細胞からの、ＣＣＬ２０、ＩＬ−８および／またはＲＡＮＴＥＳの分泌を、部分的にまたは完全に阻害する。ある実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ受容体を発現している細胞は、結腸上皮細胞である。
【０３０９】
好ましくは、本発明の抗体は、完全ヒト、モノクローナルアンタゴニスト抗体、などの、完全ヒト、モノクローナル抗体、であり、ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する。
【０３１０】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供されている抗体または断片は、ｈＬＩＧＨＴエピトープに結合し、当該ｈＬＩＧＨＴエピトープは、（例えば、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの三量体形態における）ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの、三次元的な表面の特徴である。エピトープに寄与しているｈＬＩＧＨＴポリペプチドの領域は、ポリペプチドの隣接しているアミノ酸であってもよく、または上記エピトープは、上記ポリペプチドの、２つ以上の隣接しない領域から一緒に生じていてもよい。ｈＬＩＧＨＴエピトープは、（ａ）ｈＬＩＧＨＴの三量体形態（「三量体ｈＬＩＧＨＴエピトープ」）において存在してもよく、（ｂ）ｈＬＩＧＨＴの単量体形態（「単量体ｈＬＩＧＨＴエピトープ」）において存在してもよく、（ｃ）ｈＬＩＧＨＴの三量体形態および単量体形態の両方において存在してもよく、（ｄ）ｈＬＩＧＨＴの三量体形態において存在するが単量体形態において存在しなくてもよく、または（ｅ）ｈＬＩＧＨＴの単量体形態において存在するが三量体形態において存在しなくてもよい。
【０３１１】
例えば、いくつかの実施形態において、上記エピトープは、三量体（天然の）形態においてのみ存在するか、または三量体（天然の）形態においてのみ抗ｈＬＩＧＨＴ抗体によって結合可能であり、単量体（変性の）形態において存在しないか、または単量体（変性の）形態において抗ｈＬＩＧＨＴ抗体によって結合可能でない。他の実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴエピトープは、（例えば、ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの三量体形態または単量体形態における）上記ｈＬＩＧＨＴポリペプチドの線上の形態である。本明細書において提供されている抗体は、（ａ）ｈＬＩＧＨＴの単量体形態のエピトープに特異的に結合してもよく、（ｂ）ｈＬＩＧＨＴの三量体形態のエピトープに特異的に結合してもよく、（ｃ）ｈＬＩＧＨＴの単量体形態のエピトープに特異的に結合するがｈＬＩＧＨＴの三量形態のエピトープに特異的に結合しなくてもよく、（ｄ）ｈＬＩＧＨＴの三量体形態のエピトープに特異的に結合するがｈＬＩＧＨＴの単量体形態のエピトープに特異的に結合しなくてもよく、または（ｅ）ｈＬＩＧＨＴの単量体形態および三量体形態の両方に特異的に結合してもよい。好ましい実施形態において、本明細書において提供されている抗体は、ｈＬＩＧＨＴの三量体形態のエピトープに特異的に結合するが、ｈＬＩＧＨＴの単量形態のエピトープに特異的に結合しない。
【０３１２】
本発明はまた、ｈＬＩＧＨＴエピトープに特異的に結合する抗体を提供し、当該抗体は、本明細書において記載されておりｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合するＶＨドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ、ＶＬドメイン、およびＶＬ  ＣＤＲ、の誘導体、を含んでいる。本発明はまた、実施例において開示されている抗体の誘導体を含んでいる抗体を提供しており、ここでは、上記抗体はｈＬＩＧＨＴエピトープに特異的に結合する。当業者に知られている標準的な技法は、本発明の分子をコードしているヌクレオチド配列において変異を導入するために、用いられることが可能であり、当該変異は、例えば、特定部位の突然変異誘発、およびアミノ酸置換という結果を招くＰＣＲ媒介性突然変異誘発、を含んでいる。好ましくは、上記誘導体は、本来の分子と関連して、２５より少ないアミノ酸置換、２０より少ないアミノ酸置換、１５より少ないアミノ酸置換、１０より少ないアミノ酸置換、５より少ないアミノ酸置換、４より少ないアミノ酸置換、３より少ないアミノ酸置換、または２より少ないアミノ酸置換、を含んでいる。好ましい実施形態において、上記誘導体は、１つ以上の予測された重要でないアミノ酸残基においてなされる、保存的なアミノ酸置換を有している。あるいは、変異は、コード配列の全てまたは一部分に、無作為に導入されることが可能であり（飽和突然変異誘発によって、など）、結果として起こる変異は、活性を保持する変異を特定するための生物活性について、スクリーニングされることが可能である。突然変異誘発に続いて、コードされているタンパク質は、発現されることが可能であり、上記タンパク質の活性は、決定されることが可能である。
【０３１３】
他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴエピトープに特異的に結合する抗体は、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％、配列表の可変ドメインアミノ酸配列と同一である、可変ドメインアミノ酸配列を含んでいる。
【０３１４】
特定の実施形態において、上記抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体などの、完全ヒト抗ヒト抗体である。完全ヒト抗体は、本技術分野において知られている任意の方法によって産生されてもよい。代表的な方法は、トランスジェニック動物（例えば、マウス）の、ｈＬＩＧＨＴ抗原（免疫応答を引き出すことが可能である任意のｈＬＩＧＨＴポリペプチドであり、任意に担体に結合されている）を用いる免疫法を含んでおり、当該形質転換動物は、内因性の免疫グロブリン産生がない状態にて、ヒト抗体のレパートリーを産生することができる（例えば、Jakobovits et al.,（1993）Proc. Natl. Acad. Sci., 90:2551; Jakobovits et al.,（1993）Nature, 362:255 258（1993）; Bruggermann et al.,（1993）Year in Immunol., 7:33、を参照せよ）。完全ヒト抗ｈＬＩＧＨＴ抗体を産生する他の方法は、本明細書において提供されている実施例において、見出されることが可能である。
【０３１５】
あるいは、完全ヒト抗体は、ファージディスプレイ抗体ライブラリのインビトロスクリーニングを通して生み出されてもよい（例えば、本明細書に言及により組み込まれる、Hoogenboom et al., J. Mol. Biol., 227:381（1991）; Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581（1991）、を参照せよ）。種々の抗体を含んでいるファージディスプレイライブラリは、当業者によって、記載されており、かつ、容易に用意されてもよい。ライブラリは、ヒト抗体配列（ヒトＦａｂ、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ断片、など）の多様性を含んでもよく、当該ヒト抗体配列は、適切な標的に対してスクリーニングされてもよい。
【０３１６】
本発明の抗体および断片は、化学的に修飾されている（すなわち、上記抗体に対して、分子の任意の型の共有結合によって化学的に修飾されている）抗体および断片を含んでいる。例えば、制限するつもりではないが、上記抗体誘導体は、（例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、知られている保護基（protecting groups）／保護基（blocking groups）による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞リガンドもしくは他のタンパク質に対する結合、などによって）化学的に修飾された抗体を含んでいる。任意の多くの化学的修飾は、知られている技法によって、行われてもよく、当該技法は、アセチル化、製剤、ツニカマイシンの代謝的合成、などを含んでいるが、特定の化学的切断に制限されない。さらに、上記抗体は、１つ以上の非古典的なアミノ酸を含んでもよい。
【０３１７】
本発明はまた、当業者に知られているフレームワーク領域（例えば、ヒトまたは非ヒト断片）を含んでいるｈＬＩＧＨＴ抗原に、特異的に結合する抗体を提供する。例えば、上記フレームワーク領域は、自然発生的な、または共通（consensus）フレームワーク領域であってもよい。最も好ましくは、本発明の抗体のフレームワーク領域は、ヒトである（例えば、ヒトフレームワーク領域の表について、Chothia et al., 1998, J. Mol. Biol. 278:457-479を参照せよ。上記文献は、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる。）。また、Kabat et al.（1991）Sequences of Proteins of Immunological Interest（U.S. Department of Health and Human Services, Washington, D.C.）5th ed.、を参照せよ。
【０３１８】
特定の実施形態において、本発明は、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する抗体について提供している。上記抗体は、配列表における１つ以上のＣＤＲのアミノ酸配列を含んでおり、かつ、以下の残基の１つ、２つ、３つ以上において１つ以上のアミノ酸置換を有している、ヒトフレームワーク領域を含んでいる：（ａ）マウス抗体フレームワーク（すなわち、ドナー抗体フレームワーク）およびヒト抗体フレームワーク（すなわち、アクセプター抗体フレームワーク）の間で異なっている、希少フレームワーク残基；（ｂ）ドナー抗体フレームワークおよびアクセプター抗体フレームワークの間で異なっている場合の、バーニアゾーン（Vernier zone）残基；（ｃ）ドナー抗体フレームワークおよびアクセプター抗体フレームワークの間で異なっているＶＨ／ＶＬ境界面における、分子鎖間パッキング残基；（ｄ）ドナー抗体フレームワークおよびアクセプター抗体フレームワーク配列、特に、マウス抗体ＣＤＲループの標準的クラスの定義にとって決定的なフレームワーク領域、の間で異なる、標準（canonical）残基；（ｅ）ＣＤＲに隣接している残基；（ｇ）抗原と相互作用することができる残基；（ｈ）ＣＤＲと相互作用することができる残基；ならびに（ｉ）ＶＨドメインおよびＶＬドメインの間の、接触残基。ある実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合し、かつ、上記で特定されている残基の１つ、２つ、３つ以上において１つ以上のアミノ酸置換を有しているヒトフレームワーク領域を含んでいる、抗体は、アンタゴニスト的ｈＬＩＧＨＴ抗体である。
。
【０３１９】
本発明は、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する抗体を含んでおり、当該抗体は、配列表におけるＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインのアミノ酸配列を含んでいるが、フレームワーク領域における変異（例えば、１つ以上のアミノ酸置換）を有している。ある実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する抗体は、ＶＨおよび／またはＶＬドメインのフレームワーク領域において１つ以上のアミノ酸残基置換を有している、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインのアミノ酸配列、または実施例において開示されている抗体のそれ自身の抗原結合断片、を含んでいる。
【０３２０】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供されている抗体は、対象（例えば、ヒト対象）において、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３に対するｈＬＩＧＨＴの結合を低下もしくは阻害するか、ならびに／またはｈＬＩＧＨＴ生物活性（ＣＣＬ２０、ＩＬ８および／またはＲＡＮＴＥＳなど）を低下もしくは阻害する。ある実施形態において、本明細書において提供されている抗体（ヒトモノクローナル抗ｈＬＩＧＨＴ抗体など）は、対象において、ＨＶＥＭもしくはＬＴβＲに対する、可溶性もしくは細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴの結合を、低下もしくは阻害する、ならびに／または可溶性もしくは細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴとの接触の後の、ＣＣＬ２０および／またはＲＡＮＴＥＳの分泌を、低下もしくは阻害する。いくつかの実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴは、２１４Ｅ−３２Ｓ、２１４Ｋ−３２Ｓ、２１４Ｅ−３２Ｌまたは２１４Ｋ−３２Ｌなどの、ｈＬＩＧＨＴのＳＮＰ変異型である。ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤＣＲ３に対するｈＬＩＧＨＴ結合の、本明細書において提供されている抗体の遮断活性は、実施例において記載されているように、アッセイを用いて検出されることが可能である。本明細書において提供されているｈＬＩＧＨＴ抗体による、ｈＬＩＧＨＴ受容体を発現している細胞の生物活性の阻害は、実施例において記載されているように、アッセイを用いて検出されることが可能である。
【０３２１】
本発明はまた、本明細書において提供されておりｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する、抗体および異種ポリペプチド、を含んでいる融合タンパク質について、提供する。いくつかの実施形態において、上記抗体が融合される上記異種ポリペプチドは、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴを有している細胞に、上記抗体をターゲティングするために有用である。
【０３２２】
（抗体抱合物および融合タンパク質）
抱合物および融合タンパク質についての以下の議論はまた、抗体について述べている開示が、必要な変更を加えて本発明の断片に適用され得るように、断片に適用される。
【０３２３】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、診断薬、検出可能な物質もしくは治療薬、または任意の他の分子に抱合されているか、または組換え的に融合されている。抱合されている抗体または組換え的に融合されている抗体は、例えばｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の発生、進行、経過および／または重篤度を臨床的な検査手順の一部として、監視するため、または予測する（例えば、特定の療法の有効性を決定する）ために、有用であり得る。
【０３２４】
そのような診断および検出は、例えば検出可能な物質に対する抗体の結合によって、達成され得る。当該検出可能な物質としては、種々の酵素（例えば、これらに限定されないが、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼ）；補欠分子族（例えば、これらに限定されないが、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチン）；蛍光材料（例えば、これらに限定されないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、イソシアン酸フルオレセイン、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリン）；発光材料（例えば、これに限定されないが、ルミノール）；生体発光材料（例えば、これらに限定されないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およびエクオリン）；放射性物質（例えば、これらに限定されないが、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉおよび１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎおよび１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、および１１７Ｓｎ）；ならびに陽電子放射型断層撮影法に用いる陽電子放射金属、および非放射性の常磁性の金属イオンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２５】
本発明は、治療部分（therapeutic moiety）（または１つ以上の治療部分）に抱合されているか、または組換え的に融合されている、本発明の抗体の使用をさらに包含している。上記抗体は、治療部分（例えば、サイトトキシン（例えば、細胞増殖抑制剤または細胞破壊剤））、治療薬または放射性の金属イオン（例えばアルファ線放出体）に抱合され得るか、または組換え的に融合され得る。サイトトキシンまたは細胞傷害剤としては、細胞に有害な任意の作用物質が挙げられる。治療部分としては、代謝拮抗物質（例えば、メトトラキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）；アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブチル、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシスジクロロジアミンプラチナ（ＩＩ）（ＤＤＰ）、およびシスプラチン）；アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドクソルビシン）；オーリスタチン分子（例えば、オーリスタチンＰＨＥ、ブリオスタチン１およびソラスタチン；すべてが参照によって本発明に組み込まれるWoyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 46:3802-8 (2002)、Woyke et al., Antimicrob. Agents Chemother. 45:3580-4 (2001)、Mohammad et al., Anticancer Drugs 12:735-40 (2001)、Wall et al., Biochem. Biophys. Res. Commun 266:76-80 (1999)、Mohammad et al., Int. J. Oncol. 15:367-72 (1999)を参照）；ホルモン（例えば、グルココルチコイド、プロゲスチン、アンドロゲンおよびエストロゲン）、ＤＮＡ修復酵素阻害剤（例えば、エトポシドまたはトポテカン）、キナーゼ阻害剤（例えば、化合物ＳＴ１５７１、イマチニブメシレート（Kantarjian et al., Clin Cancer Res. 8(7):2167-76 (2002)））；細胞傷害剤（例えば、パクリタキセル、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、チジウムブロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルチチン、ドクソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルコルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノールおよびプロマイシン、およびこれらの類似物もしくは相同物、ならびに米国特許第６，２４５，７５９号、米国特許第６，３９９，６３３号、米国特許第６，３８３，７９０号、米国特許第６，３３５，１５６号、米国特許第６，２７１，２４２号、米国特許第６，２４２，１９６号、米国特許第６，２１８，４１０号、米国特許第６，２１８，３７２号、米国特許第６，０５７，３００号、米国特許第６，０３４，０５３号、米国特許第５，９８５，８７７号、米国特許第５，９５８，７６９号、米国特許第５，９２５，３７６号、米国特許第５，９２２，８４４号、米国特許第５，９１１，９９５号、米国特許第５，８７２，２２３号、米国特許第５，８６３，９０４号、米国特許第５，８４０，７４５号、米国特許第５,７２８，８６８号、米国特許第５，６４８，２３９号、米国特許第５，５８７，４５９号に開示されているそれらの化合物）；ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（例えば、Ｒ１１５７７７、ＢＭＳ−２１４６６２、例えば、米国特許第６，４５８，９３５号、米国特許第６，４５１，８１２号、米国特許第６，４４０，９７４号、米国特許第６，４３６，９６０号、米国特許第６，４３２，９５９号、米国特許第６，４２０，３８７号、米国特許第６，４１４，１４５号、米国特許第６，４１０，５４１号、米国特許第６，４１０，５３９号、米国特許第６，４０３，５８１号、米国特許第６，３９９，６１５号、米国特許第６，３８７，９０５号、米国特許第６，３７２，７４７号、米国特許第６，３６９，０３４号、米国特許第６，３６２，１８８号、米国特許第６，３４２，７６５号、米国特許第６，３４２，４８７号、米国特許第６，３００，５０１号、米国特許第６，２６８，３６３号、米国特許第６，２６５，４２２号、米国特許第６，２４８，７５６号、米国特許第６，２３９，１４０号、米国特許第６，２３２，３３８号、米国特許第６，２２８，８６５号、米国特許第６，２２８，８５６号、米国特許第６，２２５，３２２号、米国特許第６，２１８，４０６号、米国特許第６，２１１，１９３号、米国特許第６，１８７，７８６号、米国特許第６，１６９，０９６号、米国特許第６，１５９，９８４号、米国特許第６，１４３，７６６号、米国特許第６，１３３，３０３号、米国特許第６，１２７，３６６号、米国特許第６，１２４，４６５号、米国特許第６，１２４，２９５号、米国特許第６，１０３，７２３号、米国特許第６，０９３，７３７号、米国特許第６，０９０，９４８号、米国特許第６，０８０，８７０号、米国特許第６，０７７，８５３号、米国特許第６，０７１，９３５号、米国特許第６，０６６，７３８号、米国特許第６，０６３，９３０号、米国特許第６，０５４，４６６号、米国特許第６，０５１，５８２号、米国特許第６，０５１，５７４号および米国特許第６，０４０，３０５号によって開示されている阻害剤）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、カンプトテシン、イリノテカン；ＳＮ−３８；９−アミノカンプトテシン；ＧＧ−２１１（ＧＩ１４７２１１）；ＤＸ−８９５１ｆ；ＩＳＴ−６２２；ルビテカン；ピラゾロアクリジン；ＸＲ−５０００；セイントピン；ＵＣＥ６；ＵＣＥ１０２２；ＴＡＮ−１５１８Ａ；ＴＡＮ１５１８Ｂ；ＫＴ６００６；ＫＴ６５２８；ＥＤ−１１０；ＮＢ−５０６；ＥＤ−１１０；ＮＢ−５０６；およびレベッカマイシン）；ブルガレイン；ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、Hoescht dye 33342およびHoechst dye 33258）；ニチジン；ファガロニン；エピベルベリン；コラリン；ベータラパコン；ＢＣ−４−１；ビスホスホン酸塩（例えば、アレンドロン酸塩、シマドロン酸塩、クロドロン酸塩、ティルドン酸塩、エチドロン酸塩、イバンドロン酸塩、ネリドロン酸塩、オルパンドロン酸塩、リセドロン酸塩、パミドロン酸塩、ゾレドロン酸塩）ＨＭＧ−ＣｏＡリダクターゼ阻害剤（例えば、ロバスタチン、シムバスタチン、アトルバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、スタチン、セリバスタチン、レスコール、ルピトール、ロスバスタチンおよびアトルバスタチン）；アンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、米国特許第６，２７７，８３２号、米国特許第５，９９８，５９６号、米国��許第５，８８５，８３４号、米国特許第５，７３４，０３３号、および米国特許第５，６１８，７０９号に開示されているアンチセンスオリゴヌクレオチド）；アデノシンデアミナーゼ阻害剤（例えば、リン酸フルダラビンおよび２−クロロデオキシアデノシン）；イブリツモマブ  チウキセタン（Zevalin（登録商標））；トシツモマブ（Bexxar（登録商標））ならびに薬学的に許容可能なそれらの塩、溶媒和物、クラスレートおよびプロドラッグが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２６】
さらに、本発明の抗体は、所定の生物学的応答を修飾する治療部分または薬物部分に抱合され得るか、または組換え的に融合され得る。治療部分または薬物部分は、古典的な化学療法剤に限定されるとみなされるべきではない。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を保有しているタンパク質、ペプチドまたはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質としては、例えば、毒素（例えば、アブリン、リシン、シュードモナス外毒素、コレラ毒素またはジフテリア毒素）；タンパク質（例えば、腫瘍壊死因子、γ−インターフェロン、α−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノーゲン活性化因子、アポトーシス作用物質（例えば、ＴＮＦ−γ、ＴＮＦ−γ、ＡＩＭ  Ｉ（国際公開第９７／３３８９９号を参照）、ＡＩＭ  ＩＩ（国際公開第９７／３４９１１号を参照））、Ｆａｓリガンド（Takahashi et al., 1994, J. Immunol., 6:1567-1574）、ＶＥＧＦ（国際公開第９９／２３１０５号）、抗血管新生剤（例えば、アンジオスタチン、エンドスタチン、または凝集経路の構成要素（例えば組織因子）））；または生物学的応答の修飾因子（例えば、リンホカイン（例えば、インターフェロンガンマ、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」））、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−５（「ＩＬ−５」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、インターロイキン−７（「ＩＬ−７」）、インターロイキン−９（「ＩＬ−９」）、インターロイキン−１０（「ＩＬ−１０」）、インターロイキン−１２（「ＩＬ−１２」）、インターロイキン−１５（「ＩＬ−１５」）、インターロイキン−２３（「ＩＬ−２３」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、または成長因子（例えば、成長ホルモン（「ＧＨ」））、凝集因子（例えば、カルシウム、ビタミンＫ、組織因子（例えば、ハーゲマン因子（因子ＸＩＩ）、高分子量キニノーゲン（ＨＭＷＫ）、プレカリクレイン（ＰＫ）、凝集タンパク質因子ＩＩ（プロトロンビン）、因子Ｖ、ＸＩＩａ、ＶＩＩＩ、ＸＩＩＩａ、ＸＩ、ＸＩａ、ＩＸ、ＩＸａ、Ｘ、リン脂質およびフィブリン単量体））など）が挙げられ得る。
【０３２７】
本発明は、異種タンパク質または異種ポリペプチド（またはその断片、好ましくは約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０もしくは約１００アミノ酸）組換え的に融合して、または化学的に抱合（共有結合的または非共有結合的な抱合物）して、融タンパク質を生成している、本発明の抗体を包含している。特に、本発明は、本発明の抗体の抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、ＶＨドメイン、ＶＨ  ＣＤＲ、ＶＬドメインまたはＶＬ  ＣＤＲ）と、異種タンパク質、異種ポリペプチドまたは異種ペプチドとを含んでいる融合タンパク質を提供する。一実施形態において、上記抗体が融合されている異種タンパク質、異種ポリペプチドまたは異種ペプチドは、当該抗体を、特定の細胞種（例えば、ｈＬＩＧＨＴまたはｈＬＩＧＨＴ受容体を発現している細胞）に標的化することに有用である。例えば、特定の細胞種（例えば免疫細胞）によって発現されている細胞表面受容体に特異的に結合する抗体は、本発明の修飾されている抗体に融合され得るか、または抱合され得る。
【０３２８】
本発明の、抱合されているタンパク質または融合タンパク質は、本明細書に記載されている本発明の任意の抗体、および異種ポリペプチドを含んでいる。一実施形態において、本発明の、抱合されているタンパク質または融合タンパク質は、実施例に記載されている抗体の可変領域、および異種ポリペプチドを含んでいる。
【０３２９】
さらに、本発明の抗体は、治療部分（例えば、放射性の金属イオン（例えばアルファ線放射体（例えば２１３Ｂｉ）））、または放射性金属イオン（これらに限定されないが、１３１Ｉｎ、１３１ＬＵ、１３１Ｙ、１３１Ｈｏ、１３１Ｓｍ）の、ポリペプチドに対する抱合に有用な大環状キレータに抱合され得る。一部の実施形態において、大環状キレータは、リンカー分子を介して上記抗体に結合され得る１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラ酢酸（ＤＯＴＡ）である。そのようなリンカー分子は、当該分野において一般的に知られており、それらの全体が参照によって組み込まれるDenardo et al., 1998, Clin Cancer Res. 4(10):2483-90；Peterson et al., 1999, Bioconjug. Chem. 10(4):553-7；およびZimmerman et al., 1999, Nucl. Med. Biol. 26(8):943-50に記載されている。
【０３３０】
さらに、本発明の抗体は、マーカー配列（例えば、精製を容易にするためのペプチド）に融合され得る。好ましい実施形態において、マーカーアミノ酸配列は、なかでもヘキサヒスチジンペプチド（例えば、ｐＱＥベクター（QIAGEN, Inc.）に付与されているタグ）であり、それらの多くは市販されている。例えばGentz et al., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:821-824に記載されているように、ヘキサヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製をもたらす。精製に有用な他のペプチドタグとしては、インフルエンザのヘマグルチニンタンパク質から得られるエピトープに対応するヘマグルチニン（「ＨＡ」）タグ、および「ＦＬＡＧ」タグが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３１】
治療部分（ポリペプチドが挙げられる）を抗体に融合するため、または抱合するための方法は、よく知られており、それらの全体が参照によって本明細書に組み込まれる、例えばArnon et al., “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”, in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985)；Hellstrom et al., “Antibodies For Drug Delivery”, in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987)；Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review”, in Monoclonal Antibodies 84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985)；“Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”, in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), Thorpe et al., 1982, Immunol. Rev. 62:119-58；米国特許第５，３３６，６０３号、米国特許第５，６２２，９２９号、米国特許第５，３５９，０４６号、米国特許第５，３４９，０５３号、米国特許第５，４４７，８５１号、米国特許第５，７２３，１２５号、米国特許第５，７８３，１８１号、米国特許第５，９０８，６２６号、米国特許第５，８４４，０９５号、および米国特許第５，１１２，９４６号；欧州特許３０７，４３４号；欧州特許３６７，１６６号；欧州特許３９４，８２７号；国際公開第９１／０６５７０号、国際公開第９６／０４３８８号、国際公開第９６／２２０２４号、国際公開第９７／３４６３１号、国際公開第９９／０４８１３号；Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-10539, 1991；Traunecker et al., Nature, 331:84-86, 1988；Zheng et al., J. Immunol., 154:5590-5600, 1995; Vil et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:11337-11341, 1992を参照すればよい。
【０３３２】
融合タンパク質は、例えば、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、および／またはコドンシャッフリング（ひとまとめにして「ＤＮＡシャッフリング」と呼ばれる）の技術を介して生成され得る。ＤＮＡシャッフリングは、本発明の抗体の活性を変更する（例えば、より高い親和性およびより低い解離速度を有している抗体）ために採用され得る。一般的に、米国特許第５，６０５，７９３号、米国特許第５，８１１，２３８号、米国特許第５，８３０，７２１号、米国特許第５，８３４，２５２号、および米国特許第５，８３７，４５８号；Patten et al., 1997, Curr. Opinion Biotechnol. 8:724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2):76-82；Hansson et al., 1999, J. Mol. Biol. 287:265-76；およびLorenzo and Blasco, 1998, Biotechniques 24(2):308-313を参照すればよい（これらの特許および刊行物はその全体が参照によって本明細書に組み込まれる）。抗体またはコードされている抗体は、組換え前におけるエラープローンＰＣＲ、ランダムなヌクレオチド挿入または他の方法によるランダム変異生成に供されることによって、変更され得る。本発明の抗体をコードしているポリヌクレオチドは、１つ以上の異種ポリペプチドのうちの、１つ以上のコンポネント、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、断片などを用いて、組み換えられ得る。
【０３３３】
また、本発明の抗体は、参照によってその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第４，６７６，９８０号に記載されているような、抗体異種抱合物を形成するために、第２の抗体に抱合され得る。
【０３３４】
ｈＬＩＧＨＴに特異的に結合する本発明の抗体に、抱合されているか、または組換え的に融合されている治療部分または薬物は、（複数の）所望の予防効果または治療効果を達成するために選択される。一部の実施形態において、上記抗体は修飾されている抗体である。臨床医または他の医療職員は、本発明の抗体に抱合するため、または組換え的に融合するための治療部分または薬物を決定するときに、疾患の性質、疾患の重篤度、および対象の状態を考慮する。
【０３３５】
また、本発明の抗体は、標的抗体の免疫アッセイまたは精製に特に有用な固体支持体に結合され得る。そのような固体支持体としては、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、塩化ポリビニルまたはポリプロピレンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３６】
（薬学的組成物）
組成物についての以下の議論はまた、抗体について述べている開示がまた、必要な変更を加えて本発明の断片に適用されるように、断片に適用される。
【０３３７】
本明細書に示されている本発明の抗体の１つ以上を含んでいる治療製剤は、所望の度合の純度を有している抗体を、生理学的に許容可能な担体、賦形剤または安定化剤（Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, Pa.）と混合することによって、凍結乾燥製剤または水性溶液剤において、保存のために調製され得る。許容可能な担体、賦形剤または安定化剤は、採用される用量および濃度において、受容者に対して無毒であり、これらとしては、緩衝化剤（例えば、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸）；酸化防止剤（アスコルビン酸およびメチオニンが挙げられる）；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；ヘキサメトニウムクロライド；ベンザルコニウムクロライド；ベンズエトニウムクロライド；フェノールアルコール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えばメチルパラベンまたはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性重合体（例えばポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジン）；単糖、二糖および他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）；キレート化剤（例えばＥＤＴＡ）；糖（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール）；塩を形成する対イオン（例えばナトリウム）；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；および／または非イオン界面活性剤（例えば、TWEEN（商標）、PLURONICS（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））が挙げられる。
【０３３８】
本明細書に示されている本発明の抗体はまた、例えば、リポソームにおいて製剤化されている。所定の分子を含んでいるリポソームは、当該分野において知られている方法（例えば、Epstein et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688；Hwang et al. (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030;ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および米国特許第４，５４４，５４５に記載されている）によって調製される。向上された循環時間を有しているリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６に開示されている。
【０３３９】
特に有用なイムノリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含んでいる脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生成され得る。リポソームは、所望の直径を有しているリポソームを生じさせるために、明確に決められている孔径のフィルタを通して、押し出される。本明細書に示されている抗体のＦａｂ断片は、Martin et al. (1982) J. Biol. Chem. 257:286-288に記載のようなリポソームに対して、ジスフィルド交換反応によって抱合され得る。化学療法剤（例えばドキソルビシン）は、リポソーム内に任意に含まれている；Gabizon et al., (1989) J. National Cancer Inst. 81(19):1484を参照。
【０３４０】
製剤（例えば、本明細書に記載されている製剤）はまた、処置される特定の徴候に必要なときに、２つ以上の活性な化合物を含み得る。一部の実施形態において、製剤は、本発明の抗体、および互いに悪影響を与えない、相補的な活性を有している１つ以上の活性な化合物を含んでいる。そのような複数の分子は、意図されている目的のために有効な量における組合せにおいて、好適に存在する。例えば、本発明の抗体は、１つ以上の他の治療剤と組み合わせられ得る。そのような組合せ療法は、連続的、同時または順次に、患者に施され得る。
【０３４１】
本発明の抗体はまた、それぞれコロイド状の薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルションとして、例えばコアセルベーション技術または界面重合によって、調製されている微小カプセル（例えば、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチン−微小カプセル、およびポリ（メチルメタクリル酸）微小カプセル）に閉じ込められ得る。そのような技術は、Remington's Pharmaceutical Science (1990) Mack Publishing Co., Easton, Paに開示されている。
【０３４２】
インビボ投与のために用いられる製剤は、無菌であり得る。これは、例えば無菌ろ過膜を通した、ろ過によって容易に達成される。
【０３４３】
また、除放性製剤が調製され得る。除放性製剤の好適な例としては、アンタゴニストを含んでいる、固体の疎水性重合体の半透性マトリクスが挙げられ、当該マトリクスは、成形されている物品（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル）である。除放性マトリクスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸およびＬ−グルタミン酸エチルの共重合体、非分解性の酢酸エチレンビニル、分解性の乳酸−グリコール酸共重合体（例えば、LUPRON DEPOT（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドから構成されている注入可能なマイクロスフェア））、ならびにポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。重合体（例えば、酢酸エチレンビニルおよび乳酸−グリコール酸）は、１００日を超えて分子の放出を可能にし、一部のハイドロゲルは、より短い期間にわたってタンパク質を放出する。封入されている抗体が長期にわたって体内に留まっていると、それらは、３７℃における湿度に対するばくろの結果として変性し得るか、または凝集し得、生物活性の損失および予想される免疫原性の変化をもたらす。合理的な方法が、関連する機序に依存して、安定化のために工夫され得る。例えば、凝集機序が、チオジスルフィド交換を介した分子間のＳ−Ｓ結合の形成であるとわかった場合、安定化は、スルフィドリル残基を修飾すること、酸性溶液から凍結乾燥すること、含水量を制御すること、適切な添加剤を使用すること、および特定の重合体マトリックス組成物を開発することによって、達成され得る。
【０３４４】
本明細書に示されている薬学的組成物は、薬学的に許容可能な担体において、本明細書に示されている本発明の抗体の１つ以上の治療的に有効な量、および任意に予防的なさらなる治療薬の１つ以上を含んでいる。そのような薬学的組成物は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患（例えば炎症性腸疾患）、またはその症状の１つ以上の予防、処置、管理または寛解に有用である。
【０３４５】
本明細書に示されている化合物の投与に好適な薬学的担体としては、投与の特定の様式に好適な、当業者に知られているような任意の担体が挙げられる。
【０３４６】
さらに、本発明の抗体は、上記組成物における単独の、薬学的に活性な成分として調剤され得るか、または他の活性な成分（例えば、１つ以上の他の予防薬または治療薬など）と組み合わせられ得る。
【０３４７】
上記組成物は、本発明の１つ以上の抗体を含み得る。一実施形態において、上記抗体は、好適な薬学的製剤（例えば、経口投与用の溶液剤、懸濁剤、錠剤、分散性錠剤、ピル、カプセル剤、粉剤、徐放性製剤、もしくはエリキシル剤、または非経口投与用の滅菌した溶液剤もしくは懸濁剤、ならびに経皮貼付剤および乾燥粉末吸入剤）に調製される。一実施形態において、以上に記載されている抗体は、当該分野においてよく知られている技術および手順を用いて、薬学的組成物に調製される（例えばAnsel (1985) Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4th Ed.,p.126を参照）。
【０３４８】
上記組成物において、有効濃度の１つ以上の抗体またはその誘導体は、好適な薬学的担体と混合されている。上記組成物における化合物の濃度は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患またはその症状を処置、予防または寛解する量の、投与による送達に有効である。
【０３４９】
一実施形態において、上記組成物は、単回用量の投与用に調製される。組成物を調製するために、処置される好ましくない健康状態が、緩和されるか、予防されるか、１つ以上の症状が寛解される有効濃度において、重量分率（weight fraction）の化合物は、選択される担体に溶解させられるか、懸濁させられる、分散させられるか、またはそうでなければ混合される。
【０３５０】
本発明の抗体は、処置される患者に対する所望されない副作用なしに治療的に有効な作用を発揮するために十分な有効量において、薬学的に共用可能な担体に含まれている治療的に有効な濃度は、定法を用いたインビトロおよびインビボの系において化合物を試験することによって経験的に決定され得、それから、それに基づいてヒトにとっての用量について推定され得る。
【０３５１】
上記薬学的組成物における抗体の濃度は、例えば当該抗体の物理化学的特性、投与予定、および投与される量、ならびに当業者に知られている他の要素に、依存する。
【０３５２】
一実施形態において、治療的に有効な用量は、約０．１ｎｇ／ｍｌから約５０〜１００μｇ／ｍｌまでの抗体の血清濃度を生じさせる。上記薬学的組成物は、他の実施形態において、約０．００１ｍｇ〜約２０００ｍｇの抗体／ｋｇ体重／日の用量をもたらす。薬学的な複数の用量単位形態は、用量単位形態につき、約０．０１ｍｇ、０．１ｍｇもしくは１ｍｇ〜約５００ｍｇ、１０００ｍｇもしくは２０００ｍｇ、および一実施形態において約１０ｍｇ〜約５００ｍｇの抗体、および／または任意の他の重要な複数の成分の組合せをもたらすために、調製され得る。
【０３５３】
上記抗体は、一度に投与され得るか、または時間をおいて投与されるいくつかのより少ない用量に分けられ得る。正確な用量および処置の期間は、処理される疾患に応じており、知られている試験プロトコルを用いてか、またはインビトロもしくはインビボの試験データからの推測によって、経験的に決定され得ることが、理解される。なお、濃度および用量の値はまた、軽減される好ましくない健康状態の重篤度によって変化し得る。あらゆる特定の対象のための特別な投与計画は、個々の必要性、および組成物の投与を管理するか、または指導する人間の専門的な判断にしたがって長期にわたって調整され得ること、ならびに本明細書に上述されている濃度範囲は、単なる例示であること、および請求されている組成物の範囲もしくは実施を限定することを目的としていないことが、さらに理解される。
【０３５４】
抗体の混合または追加によって生じた混合物は、溶液、懸濁液または乳剤などであり得る。生じた混合物の形態は、多くの要素（投与の目的とされる様式、および選択される担体もしくはビヒクルにおける化合物の可溶性が挙げられる）に依存する。有効な濃度は、処置される疾患、障害または好ましくない健康状態の症状を寛解させるために十分であり、経験的に決定され得る。
【０３５５】
薬学的組成物は、単位用量形態（例えば、錠剤、カプセル剤、ピル、粉剤、粒剤、無菌の非経口溶液剤もしくは無菌の非経口懸濁剤、および経口溶液剤もしくは経口懸濁剤、ならびに上記化合物または薬学的に許容可能なその誘導体の好適な量を含んでいる油水乳剤）においてヒトおよび動物に対する投与に供される。上記抗体は、一実施形態において、単回用量または複数回用量の形態において調製され、投与される。本明細書に使用されるとき、単回用量の形態は、当該分野において知られているように個別に包装されている、ヒトおよび動物の対象にとって好適な、物理的に分けられている単位を指す。各単回用量は、必要とされる薬学的担体、ビヒクルまたは希釈液と共同して、所望の治療効果をもたらすために十分な所定の量の抗体を含んでいる。単位用量の形態の例としては、アンプルおよびシリンジ、ならびに個別に包装されている錠剤およびカプセル剤が挙げられる。単位用量の形態は、小部分または複数の小部分において投与され得る。複数回用量の形態は、分離された単位用量の形態において投与されるために単一容器に包装されている、複数の、同一の単位用量の形態である。複数回用量の形態の例としては、バイアル、錠剤もしくはカプセルのボトル、またはパイントもしくはガロンのボトルが挙げられる。したがって、複数回用量の形態は、包装物において分けられていない、複数の単位用量である。
【０３５６】
好ましい実施形態において、本発明の１つ以上の抗ｈＬＩＧＨＴ抗体は、液体の薬学的製剤にある。液体の薬学的に投与可能な組成物は、以上に規定されているような活性な化合物および任意の薬学的アジュバントを、担体（例えば、水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、グリセロール、グリコールおよびエタノールなど）に溶解させること、分散させること、またはそうでなければ当該担体において混合することによって調製されて、それによって溶液剤または懸濁剤を形成し得る。所望される場合に、投与される薬学的組成物はまた、少量の無毒の補助的な物質（例えば、湿潤剤、乳化剤、可溶化剤およびｐＨ緩衝化剤など（例えば、酢酸塩、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミン酢酸ナトリウム、トリエタノールアミンオレイン酸塩およびそのような他の剤））を含み得る。
【０３５７】
そのような剤形を調製する実際の方法は、当業者に知られているか、または当業者にとって明らかであり；例えばRemington's Pharmaceutical Science (1990) Mack Publishing Co., Easton, Paを参照すればよい。
【０３５８】
無毒の担体から構成されている差引分に対して、０．００５％〜１００％の範囲において抗体を含んでいる剤形または組成物が調製され得る。これらの組成物の調製のための方法は、当業者に知られている。
【０３５９】
経口の薬学的な剤形は、固体、ゲルまたは液体のいずれかである。固体の剤形は、錠剤、カプセル剤、粒剤および原体粉末である。経口錠剤の種類は、圧縮されているチュアブルトローチ、および腸陽性コート、糖コートもしくはフィルムコートされ得る錠剤が挙げられる。カプセル剤は、ゼラチンの硬カプセル剤または軟カプセル剤であり得、粒剤および粉剤は、当業者に知られている他の成分と組み合わせた、非発泡性または発泡性の形態において提供され得る。
【０３６０】
一部の実施形態において、製剤は固体の剤形である。一部の実施形態において、製剤はカプセル剤または錠剤である。錠剤、ピル、カプセル剤およびトローチ剤などは、以下の成分または類似の性質の化合物：結合剤；滑沢剤；希釈剤；流動化剤；崩壊剤；着色剤；甘味剤；香味剤；湿潤剤；催吐コーティング；およびフィルムコーティングの１つ以上を含み得る。結合剤の例としては、微結晶性セルロース、トラガントガム、グルコース溶液、アラビアゴム粘液、ゼラチン溶液、糖蜜、ポリイニルピロリジン、ポビドン、クロスポビドン、スクロースおよびデンプンのりが挙げられる。滑沢剤としては、タルク、デンプン、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、石松子およびステアリン酸が挙げられる。希釈剤としては、例えば、ラクトース、スクロース、デンプン、カオリン、塩、マンニトールおよびリン酸二カルシウムが挙げられる。流動化剤としては、コロイド状の二酸化ケイ素が挙げられるが、これに限定されない。崩壊剤としては、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、アルギン酸、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、ベントナイト、メチルセルロース、寒天およびカルボキシメチルセルロースが挙げられる。着色剤としては、例えば、承認されている法定の（approved certified）水溶性のＦＤ色素およびＣ色素、それらの混合物；ならびにアルミナ水和物に懸濁されている非水溶性のＦＤ色素およびＣ色素のいずれかが挙げられる。甘味剤としては、スクロース、ラクトース、マンニトールおよび人工甘味剤（例えば、サッカリンおよび多数の噴霧乾燥された香料）が挙げられる。香味剤としては、植物（例えば果実）から抽出された天然の香料、および心地よい感覚をもたらす化合物（例えば、これらに限定されないが、ペパーミントおよびサリチル酸メチル）の合成ブレンドが挙げられる。湿潤剤としては、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ジエチレングリコール、およびポリオキシエチレンラウリルエーテルが挙げられる。催吐コーティングとしては、脂肪酸、脂肪、ワックス、セラック、アンモニアセラック、および酢酸フタル酸セルロースが挙げられる。酢酸フタル酸セルロースを含む。フィルムコーティングとしては、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリエチレングリコール４０００および酢酸フタル酸セルロースが挙げられる。
【０３６１】
本発明の抗体は、胃の酸性環境から当該抗体を保護する組成物において提供され得る。例えば、上記組成物は、胃においてその完全性を維持し、腸管において活性な化合物を放出する腸陽性コーティングに調製され得る。上記組成物はまた、制酸剤またはそのような他の成分と組み合わせて調製され得る。
【０３６２】
製剤単位の形態がカプセル剤であるとき、カプセル剤は、以上の種類の材料に加えて、液体の担体（例えば脂肪油）を含み得る。さらに、製剤単位の形態は、製剤単位の物理的な形状を変更する種々の他の材料（例えば、糖のコーティングおよび他の腸陽性の物質）を含み得る。上記化合物はまた、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、オブラート剤、スプリンクル（sprinkle）またはチューンガムなどの構成要素として、投与され得る。シロップ剤は、活性な化合物に加えて、甘味剤としてのスクロース、ならびに一部の防腐剤、色素、着色料および香料を含み得る。
【０３６３】
上記抗体は、所望の作用を損なわない他の活性な材料、または所望の作用を補う材料（例えば、制酸剤、Ｈ２ブロッカーおよび利尿剤）と混合され得る。活性な成分は、抗体または本明細書に記載されているような薬学的に許容可能なその誘導体である。約９８重量％以下の高い濃度の当該活性な成分が、含められ得る。
【０３６４】
すべての実施形態において、錠剤およびカプセル剤の製剤は、活性な成分の溶解を変更するため、または持続させるために、当業者によって知られているように、コードされ得る。したがて、例えば、それらは、従来の、腸において消化可能なコーティング（例えば、サリチル酸フェニル、ワックスおよび酢酸フタル酸セルロース）を用いてコートされ得る。
【０３６５】
好ましい実施形態において、製剤は液体の剤形である。液体の経口剤形としては、水性の溶液剤、乳剤、懸濁剤、溶液剤、および／または非発泡性の粒剤から再構成された懸濁剤、および発泡性の粒剤から再構成された発泡性の製剤が挙げられる。水性の溶液剤としては、例えばエリキシル剤およびシロップ剤が挙げられる。乳剤は水中油型または油中水型のいずれかである。
【０３６６】
エリキシル剤は、甘味のある透明な水性アルコール製剤である。エリキシル剤に使用される薬学的に許容可能な担体としては、溶媒が挙げられる。シロップ剤は、糖（例えばスクロース）の濃縮された水溶液であり、防腐剤を含み得る。乳剤は、１つの液体が、小球の形態において、他の液体の全体に分散されている、２相の系である。乳剤に使用される薬学的に許容可能な担体は、非水性の液体、乳化剤および防腐剤である。懸濁剤は、薬学的に許容可能な懸濁化剤および防腐剤を使用する。液体の経口剤形に再構成される、非発泡性の粒剤に使用される薬学的に許容可能な物質としては、希釈剤、甘味料、および湿潤剤が挙げられる。液体の経口剤形に再構成される、発泡性の粒剤に使用される薬学的に許容可能な物質としては、有機酸、および二酸化炭素源が挙げられる。着色剤および香味剤は、以上の剤形のすべてに使用される。
【０３６７】
溶媒としては、グリセリン、ソルビトール、エチルアルコールおよびシロップが挙げられる。防腐剤の例としては、グリセリン、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、安息香酸ナトリウムおよびアルコールが挙げられる。乳化剤の例としては、ゼラチン、アラビアゴム、トラガカント、ベントナイトおよび界面活性剤（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）が挙げられる。懸濁化剤としては、スクロース、シロップ、グリセリン、および人工甘味剤（例えばサッカリン）が挙げられる。湿潤剤としては、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ジエチレングリコール、およびポリオキシエチレンラウリンエーテルが挙げられる。有機酸としては、クエン酸および酒石酸が挙げられる。二酸化炭素源としては、重炭酸ナトリウムおよび炭酸ナトリウムが挙げられる。着色剤としては、承認されている法定の水溶性のＦＤ色素およびＣ色素、ならびにそれらの混合物が挙げられる。香味剤としては、植物（例えば果実）から抽出された天然の香料、および心地よい味覚をもたらす化合物の合成ブレンドが挙げられる。
【０３６８】
固体の剤形のための、例えば炭酸プロピレン、食用油またはトリグリセリドにおける、溶液剤または懸濁剤は、一実施形態において、ゼラチンカプセルに封入されている。そのような溶液剤、ならびにその調製および封入は、米国特許第４、３２８、２４５号；米国特許第４、４０９、２３９号；および米国特許第４、４１０、５４５号に開示されている。液体の剤形のための、例えばプロピレングリコールにおける、溶液剤は、投与のために容易に測定される、十分な量の薬学的に許容可能な液体の担体（例えば水）を用いて希釈され得る。
【０３６９】
代替的に、液体または半固体の製剤は、食用油、グリコール、トリグリセリド、プロピレングリコールエステル（例えば炭酸プロピレン）およびそのような他の担体に、活性な成分または塩を溶解させることまたは分散させること、ならびにゼラチンの硬カプセルまたは軟カプセルのシェルにこれらの溶液剤または懸濁剤を封入することによって、調製され得る。有用な他の製剤としては、本明細書に示されている化合物、ジアルキル化されている、モノアルキレングリコールまたはポリアルキレングリコール（１，２−ジメトキシメタン、ジグリム、トリグリム、テトラグリム、ポリエチレングルコール−３５０−ジメチルエーテル、ポリエチレングルコール−５５０−ジメチルエーテル、ポリエチレングルコール−７５０−ジメチルエーテルが挙げられるが、これらに限定されない（ここで、３５０、５５０および７５０は、ポリエチレングリコールのおよその平均分子量を指している））、ならびに１つ以上の酸化防止剤（例えば、ブチル化されているヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化されているヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、没食子酸プロピル、ビタミンＥ、ヒドロキノン、ヒドロキシクマリン、エタノールアミン、セファリン、レクチン、アスコルビン酸、リンゴ酸、ソルビトール、リン酸およびそのエステル、ならびにジチオカルバミン酸塩）を含んでいる製剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３７０】
他の製剤としては、水性のアルコール溶液（例えば、薬学的に許容可能なアセタール）が挙げられる。これらの製剤に使用されるアルコールは、１つ以上のヒドロキシル基を有している、薬学的に許容可能な、水と混和する任意の溶媒（例えば、プロピレングリコールおよびエタノール）である。アセタールとしては、低級アルキルアルデヒドのジ（低級アルキル）アセタール（例えばアセトアルデヒドジエチルアセタール）が挙げられるが、これに限定されない。
【０３７１】
一実施形態において、非経口投与は注射によって特徴づけられており、皮下、筋肉内または血管内のいずれかが本明細書において意図されている。注射剤は、液体の溶液剤もしくは懸濁剤、注射前における溶液もしくは懸濁液にとって好適な固体の形態、または乳剤のいずれかとして、従来の形態において調製され得る。注射剤、溶液剤および乳剤はまた、１つ以上の賦形剤を含んでいる。好適な賦形剤は、水、生理食塩水、ブドウ糖、グリセロールまたはエタノールである。さらに、所望される場合に、投与される薬学的組成物はまた、少量の無毒の補助的な物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化剤、安定化剤、可溶性向上剤、そのような他の剤（例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンおよびシクロデキストリンなど））を含み得る。
【０３７２】
また、一定の度合の用量が維持されるような持続放出系または徐放系の埋め込み（例えば米国特許第３，７１０，７９５号）は、本明細書において意図されている。簡単に説明すると、本明細書に示されている化合物は、体液に不溶な外部の重合体膜によって取り囲まれている固体の内部マトリクスに分散されている。当該固体の内部マトリクスは、例えば、ポリメタクリル酸メチル、ポリメタクリル酸ブチル、可塑化されているポリ塩化ビニルもしくは可塑化されていないポリ塩化ビニル、可塑化されているナイロン、可塑化されているポリエチレンテレフタレート、天然ゴム、ポリイソプレン、ポリイソブチレン、ポリブタジエン、ポリエチレン、エチレン−酢酸ビニル共重合体、シリコーンゴム、ポリジメチルシロキサン、シリコーン炭酸塩共重合体、親水性重合体（例えば、アクリル酸およびメタクリル酸のエステルのヒドロゲル）、コラーゲン、架橋されているポリビニルアルコール、および部分的に加水分解されている架橋されている酢酸ポリビニルである。当該体液に不溶な重合体膜は、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン／プロプレン共重合体、エチレン／アクリル酸エチル共重合体、エチレン／酢酸ビニル共重合体、シリコーンゴム、ポリジメチルシロキサン、ネオプレンゴム、塩素化ポリエチレン、ポリ塩化ビニル、酢酸ビニルをともなっている塩化ビニル共重合体、塩化ビニリデン、エチレンおよびプロピレン、ポリエチレンテレフタレートのイオノマー、ブチルゴムエピクロロヒドリンゴム、エチレン／ビニルアルコール共重合体、エチレン／酢酸ビニル／ビニルアルコール三元重合体、ならびにエチレン／ビニロキシエタノール共重合体である。抗体は、放出速度を制御する段階において、外部の重合体膜を通って拡散する。そのような非経口の組成物に含まれている抗体の量は、抗体の固有の性質、ならびに化合物の活性および対象の必要性に強く依存する。
【０３７３】
非経口投与用の製剤としては、注射できる状態の滅菌溶液剤、使用の直前に溶媒と混合される状態にある、可溶性の滅菌乾燥生成物（例えば凍結乾燥粉末）（皮下注射用の錠剤が挙げられる）、注射できる状態の滅菌懸濁物、使用の直前にビヒクルと混合される状態にある、可溶性の滅菌乾燥生成物、および滅菌乳剤が挙げられる。溶液剤は水性または非水性の何れかであり得る。
【０３７４】
血管内に投与される場合に好適な担体としては、生理学的食塩水もしくはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、および増粘剤および安定化剤（例えば、グルコース、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコール）を含んでいる溶液剤、ならびにそれらの混合物が挙げられる。
【０３７５】
非経口製剤に使用される薬学的に許容可能な担体としては、水性のビヒクル、非水性のビヒクル、抗菌剤、等張性物質、緩衝液、抗酸化剤、局部麻酔剤、懸濁化分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖剤もしくはキレート化剤、および薬学的に許容可能な他の物質が挙げられる。
【０３７６】
水性ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、等張性ブドウ糖注射液、滅菌水注射液、ブドウ糖および乳酸リンガー液の注射液が挙げられる。非水性の非経口ビヒクルとしては、植物由来の不揮発油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油およびラッカセイ油が挙げられる。静細菌性および静真菌性の濃度における抗菌剤は、複数回投与の容器に入れられている非経口製剤に加えられ得、当該抗菌剤としては、フェノールもしくはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルエステルおよびｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピルエステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、および塩化ベンズエトニウムが挙げられる。等張性剤としては、塩化ナトリウムおよびブドウ糖が挙げられる。緩衝液としては、リン酸塩およびクエン酸塩が挙げられる。抗酸化剤としては重硫酸塩が挙げられる。局部麻酔剤としては塩酸プロカインが挙げられる。懸濁化分散剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびポリビニルピロリドンが挙げられる。乳化剤としては、Polysorbate 80（TWEEN（登録商標） 80）が挙げられる。金属イオン封鎖剤、または金属イオンのキレート化剤としてはＥＤＴＡが挙げられる。薬学的な担体としてはまた、水と混和性のビヒクルについて、エチルアルコール、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコール；ならびにｐＨ調整剤について、水酸化ナトリウム、クエン酸および乳酸が挙げられる。
【０３７７】
薬学的に活性な化合物の濃度は、注射液が所望の薬理作用を生じるために有効な量を供給するように調整される。厳密な用量は、当該分野に知られている通り、患者または動物の年齢、体重および状態に依存する。
【０３７８】
単回用量の非経口製剤は、アンプル、バイアル、または針つきのシリンジに入れられている。非経口投与用のすべての製剤は、当該分野に知られており、かつ実践されている通り、無菌であり得る。
【０３７９】
例示的に、活性な化合物を含んでいる無菌の水性溶液剤の静脈内注入または動脈内注入は、投与の有効な様式である。他の実施形態は、所望の薬理作用を生じるために必要とされるときに注射される、活性な材料を含んでいる、無菌の水性または油性の溶液または懸濁液である。
【０３８０】
注射剤は、局所投与または全身性投与のために設計されている。一実施形態において、薬学的に有効な製剤は、処置される（複数の）組織に対する、少なくとも約０．１％ｗ／ｗ〜約９０％ｗ／ｗ以上、一部の実施形態において、１％ｗ／ｗを超える濃度の活性な化合物を含むように調製されている。
【０３８１】
上記抗体は、微粉化された形態または好適な他の形態において懸濁され得る。生じた混合物の形態は、多数の要素（目的とする投与の様式、および選択される担体もしくはビヒクルにおける化合物の可溶性が挙げられる）に依存する。有効濃度は、好ましくない健康状態の症状を寛解させるために十分であり、経験的に決定され得る。
【０３８２】
他の実施形態において、薬学的製剤は、溶液剤、乳剤および他の混合物としての投与用に再構成され得る凍結乾燥粉末である。それらはまた、再構成され得、固体またはゲルとして調製され得る。
【０３８３】
凍結乾燥粉末は、本明細書に示されている抗体または薬学的に許容可能なその誘導体を、好適な溶媒に溶解させることによって、下処理される。いくつかの実施形態において、凍結乾燥粉末は無菌である。上記溶媒は、安定性を向上させる賦形剤、または上記粉末もしくは当該粉末から調製されている再構成された溶液の薬理的な他の構成要素を含み得る。使用され得る賦形剤としては、ブドウ糖、ソルビトール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、他の好適な剤が挙げられるが、これらに限定されない。溶媒はまた、緩衝液（例えば、クエン酸塩、リン酸ナトリウムもしくはリン酸カリウム、または当業者に知られているそのような他の緩衝液）、一実施形態においておよそ中性のｐＨを含み得る。上記溶媒の後の滅菌ろ過は、当業者に知られている標準的な条件における凍結乾燥に続いて、所望の製剤をもたらす。一実施形態において、生じた溶液は、凍結乾燥用のバイアルに分配される。それぞれのバイアルは、化合物の単回投与量または複数回投与量を含んでいる。凍結乾燥粉末は、好適な条件（例えば、約４℃〜室温）において保存され得る。
【０３８４】
この凍結乾燥粉末の、水を用いた再構成は、非経口投与における使用のための製剤をもたらす。再構成のために、凍結乾燥粉末は、滅菌水または好適な他の担体に加えられる。正確な量は、選択される化合物に依存する。そのような量は経験的に決定され得る。
【０３８５】
局所（local）投与および全身投与について説明されているような、局所（topical）混合物が調製される。生じた混合物は、溶液、懸濁液または乳液などであり得、クリーム剤、ゲル剤、軟膏剤、乳濁剤、エリキシル剤、ローション剤、懸濁剤、チンキ剤、ペースト剤、フォーム剤、エアロゾル剤、洗浄剤、噴霧剤、坐剤、絆創膏、皮膚パッチまたは局所（topical）投与に適した他の製剤として、調製され得る。
【０３８６】
本発明の抗体は、（例えば吸入による）局所に使用するためのエアロゾル剤として調製され得る（例えば、炎症性疾患、特に喘息の処置に有用なステロイドの送達用のエアロゾル剤について説明している米国特許第４，０４４，１２６号、米国特許第４４１４２０９号、および米国特許第４，３６４，９２３号を参照）。気道への投与のためのこれらの製剤は、単独または不活性な担体（例えばラクトース）との組合せにおける、噴霧器用のエアロゾル剤もしくは溶液剤の形態、または吸入用の微細粉末としての形態であり得る。そのような場合に、製剤の粒子は、一実施形態において５０ミクロン未満、一実施形態において１０ミクロン未満の直径を有している。
【０３８７】
上記化合物は、局所（local）使用または局所（topical）使用（例えば、ゲル剤、クリーム剤およびローション剤の形態における皮膚および粘膜（例えば眼における）に対する局所（topical）使用、ならびに眼への使用または嚢内もしくは脊髄内の使用）のために調製され得る。局所（topical）投与は、経皮送達、ならびに眼もしくは粘膜への投与または吸入療法について意図されている。また、単独または薬学的に許容可能な他の賦形剤の組合せにおける、活性な化合物の経鼻溶液が、投与される。
【０３８８】
これらの溶液（特に眼への使用を意図されている溶液）は、適切な塩をともなった、約５〜７のｐＨの、０．０１％〜１０％の等張性溶液として調製され得る。
【０３８９】
用途の他の経路（例えば経皮パッチ（イオン泳動装置および電気泳動装置が挙げられる）、および直腸投与）がまた、本明細書において意図されている。
【０３９０】
経皮パッチ（イオン泳動装置および電気泳動装置が挙げられる）は、当業者によく知られている。例えば、そのようなパッチは、米国特許第６，２６７，９８３号、米国特許第６，２６１，５９５号、米国特許第６，２５６，５３３号、米国特許第６，１６７，３０１号、米国特許第６，０２４，９７５号、米国特許第６，０１０７１５号、米国特許第５，９８５，３１７号、米国特許第５，９８３，１３４号、米国特許第５，９４８，４３３号、および米国特許第５，８６０，９５７号に開示されている。
【０３９１】
例えば、直腸投与のための薬学的な投与形態は、全身作用のための、直腸坐剤、カプセル剤および錠剤である。本明細書に使用されている直腸坐剤は、薬学的に活性な成分の１つ以上を放出しながら、体温において溶けるか、または軟化する、直腸への挿入用の固形物を意味する。直腸坐剤に利用される薬学的に許容可能な物質は、融点を上昇させるための基剤（すなわちビヒクルおよび剤）である。基剤の例としては、ココアバター（テオブローマオイル）、グリシン−ゼラチン、カーボワックス（ポリオキシエチレングリコール）、ならびに脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドの適切な混合物が挙げられる。種々の基剤の組合せが使用され得る。坐剤の融点を上昇させるための剤としては、鯨蝋および蜜蝋が挙げられる。直腸坐剤は、圧縮法または成形によって調製され得る。一実施形態において、直腸坐剤の重量は約２〜３ｇｍである。
【０３９２】
直腸投与用の錠剤およびカプセル剤は、経口投与用の製剤と同じ薬学的に許容可能な物質を用いて、当該製剤と同じ方法によって製造され得る。
【０３９３】
本明細書に示されている抗体および他の化合物は、処置される患者の身体の、特定の組織、受容体または他の領域に標的化されるように調製され得る。そのような多くの標的化方法は、当業者によく知られている。そのような標的化方法は、組成物における使用について本明細書において意図されている。標的化方法の非限定的な例について、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、米国特許第６，２７４，５５２号、米国特許第６，２７１，３５９号、米国特許第６，２５３，８７２号、米国特許第６，１３９，８６５号、米国特許第６，１３１，５７０号、米国特許第６，１２０，７５１号、米国特許第６，０７１，４９５号、米国特許第６，０６０，０８２号、米国特許第６，０４８，７３６号、米国特許第６，０３９，９７５号、米国特許第６，００４，５３４号、米国特許第５，９８５，３０７号、米国特許第５，９７２，３６６号、米国特許第５，９００，２５２号、米国特許第５，８４０，６７４号、米国特許第５，７５９，５４２号、および米国特許第５，７０９，８７４号を参照すればよい。いくつかの実施形態において、本発明の抗ｈＬＩＧＨＴ抗体は、結腸（例えば、ＩＢＤにかかっているか、またはＩＢＤにかかっているリスクのある患者における）に標的化（またはそうでなければ投与）される。
【０３９４】
一実施形態において、リポソーム懸濁物（組織に標的化されているリポソーム（例えば、腫瘍に標的化されているリポソーム））はまた、薬学的に許容可能な担体として好適であり得る。これらは、当業者によく知られている方法にしたがって調製され得る。例えば、リポソーム製剤は米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているように調製され得る。簡単に説明すると、リポソーム（例えば、多重膜小胞（ＭＬＶ））は、卵のホスファチジルコリンおよび脳のホスファチジルセリン（７：３のモル比）を、フラスコの内部において乾燥させることによって形成され得る。二価のカチオンを欠いているリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）における、本明細書に示されている化合物の溶液を加え、フラスコを、脂質膜が分散されている状態まで振とうさせる。生じた小胞を、未封入の化合物を除去するために洗浄し、遠心分離によってペレットにし、それからＰＢＳに再懸濁する。
【０３９５】
（投与および投薬の方法）
本発明は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患（またはその症状）の予防、管理、処置および／または寛解における使用のための、本発明の抗体または断片の１つ以上を含んでいる組成物を、さらに提供する。抗体に関する議論はまた、必要な変更を加えて、本発明の断片に適用される。
【０３９６】
一部の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患（例えば、ＩＢＤ（例えば、潰瘍性大腸炎またはクローン氏病））またはその症状の予防、管理、処置および／または回復における使用のための、本発明の抗体の１つ以上を含んでいる組成物が、ここに提供されている。ＩＢＤの症状は、軽度から重度の範囲にわたり得、関与する腸管の部分に一般的に依存し得る。ＩＢＤの例示的な症状としては、腹部の痙攣および痛み、血性下痢、排便につながる激しい切迫、発熱、食欲の減退、体重減少、貧血、疲労、および／または下腿、足首、ふくらはぎ、大腿および腕における糜爛が挙げられる。ＩＢＤの例示的な腸管の合併症としては、潰瘍からの大量出血、腸管の穿孔または裂傷、狭窄および閉塞、瘻孔（異常な通路）および肛門周囲疾患、中毒性巨大結腸（例えば、結腸の急性非閉塞性拡張）、および／または悪性腫瘍（例えば、結腸または小腸のがん）が挙げられる。ＩＢＤの例示的な腸管外の合併症としては、関節炎、皮膚の好ましくない健康状態、眼の炎症、肝障害および腎障害、および／または骨量減少が挙げられる。
【０３９７】
一部の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患（例えばＧＶＨＤ）またはその症状の予防、管理、処置および／または寛解における使用のための、本発明の抗体の１つ以上を含んでいる組成物が、本明細書に示されている。ＧＶＨＤは、同種間または適合非血縁者間の骨髄移植（ＢＭＴ）の後に、生じる。
【０３９８】
いくつかの実施形態において、上記ＧＶＨＤは、急性ＧＶＨＤである。急性ＧＶＨＤの症状は、突然に起こり得、軽度または重度であり得る。一部の例において、急性ＧＶＨＤは、移植後の約３か月以内（例えば、移植後に血球数が回復するとき）に発症する。一部の例において、急性ＧＶＨＤは、皮膚、胃腸（ＧＩ）管および／または肝臓を冒す。例えば、いくらかの患者において、急性皮膚ＧＶＨＤは、例えば当該患者の手の掌、足の足底、または肩における、発疹に始まる。しかし、上記発疹は、広汎性になり得、かゆみおよび痛みをともない得るか、および／または水疱および皮の剥離を生じ得る。痒くなりかつ痛くなり得、および／または水膨れになりかつ皮膚が剥がれ得る。急性肝臓ＧＶＨＤは、肝臓の通常の機能（肝酵素など）を冒し得、次には黄疸の原因となり得る。上記肝臓が肥大化する場合、急性肝臓ＧＶＨＤはまた、上記患者の腹を腫脹させ痛ませる原因となり得る。最後に、急性消化管ＧＶＨＤ（または消化器系のＧＶＨＤ）の症状は、（１）下痢、（２）便中における粘液または血液、（３）痙攣または腹部の疼痛、（４）消化不良、（５）悪心、および／または（６）食欲の減衰を含み得る。他の急性ＧＶＨＤの一般的な症状は、貧血、微熱および／またはより感染しやすくなることを包含し得る。急性ＧＶＨＤのこれらの症状の任意の組み合わせが、ここに提供されている上記組成物および方法を用いて予防、管理、処置および／または回復され得る。
【０３９９】
他の実施形態において、上記ＧＶＨＤは慢性ＧＶＨＤである。慢性ＧＶＨＤは、移植後約３箇月から約１年またはそれ以上までに発生し得る。慢性ＧＶＨＤは、軽症または重症であり得、一般的に急性ＧＶＨＤの症状と類似している症状を含んでいる。慢性ＧＶＨＤは、（１）皮膚および消化器系（肝臓を含んでいるが、他の臓器および免疫系（例えば、患者をより感染しやすくすること）をもまた巻き込み得る）および／または（２）結合組織を冒し得る。慢性皮膚ＧＶＨＤの症状は、（１）発疹、皮膚乾燥、タイトスキン(tight skin)、皮膚の痒み、皮膚色の暗化、皮膚の肥厚を含んでおり、および／または（２）髪（例えば、脱毛、灰色化）または爪（例えば、固い爪または脆い爪）を冒し得る。慢性消化管ＧＶＨＤは、消化器系、口、食道、胃の表層および／または結腸の表層を冒し得る。そして、症状は、下痢、乾燥または糜爛した口、痛みを伴う嚥下、胃による低い栄養分の吸収率、膨脹、胃痙攣を含み得る。慢性肝臓ＧＶＨＤは、肝臓の損傷および肝臓の瘢痕（硬変）の原因となり得る。眼の慢性ＧＶＨＤは、涙を産生している腺を冒し得、眼が乾燥するようになり、眼がヒリヒリと痛み、または眼が明るい光に耐えることが難しい原因となる。慢性肺ＧＶＨＤは、呼吸の短さ、喘鳴、持続する咳、および／またはより胸部が感染しやすくなることの原因となり得る。慢性ＧＶＨＤは、筋肉を骨に接続している腱を冒し（例えば、炎症）、腕および脚を伸ばすことまたは曲げることの困難の原因となる。慢性ＧＶＨＤのこれらの症状の任意の組み合わせが、ここに提供されている上記組成物および方法を用いて予防、管理、処置および／または回復され得る。
【０４００】
特定の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、本発明の抗体（例えば、実施例において開示されている抗体）のＬＩＧＨＴ結合部位を含んでいる。
【０４０１】
他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、ＶＨドメインの１つ以上を含んでいる抗体の１つ以上を含んでいる。当該ＶＨドメインは、いずれか１つの上記ＶＨドメインのアミノ酸配列を、上記配列中に有している。他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、ＶＨ  ＣＤＲ１の１つ以上を含んでいる抗体の１つ以上を含んでいる。当該ＶＨ  ＣＤＲ１は、いずれか１つの上記ＶＨ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列を、上記配列表中に有している。他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、ＶＨ  ＣＤＲ２の１つ以上を含んでいる抗体の１つ以上を含んでいる。当該ＶＨ  ＣＤＲ２は、いずれか１つの上記ＶＨ  ＣＤＲ２のアミノ酸配列を、上記配列表中に有している。好ましい実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、ＶＨ  ＣＤＲ３の１つ以上を含んでいる抗体の１つ以上を含んでいる。当該ＶＨ  ＣＤＲ３は、いずれか１つの上記ＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を、上記配列表中に有している。
【０４０２】
他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、ＶＬドメインの１つ以上を含んでいる抗体の１つ以上を含んでいる。当該ＶＬドメインは、いずれか１つの上記ＶＬドメインのアミノ酸配列を、上記配列表中に有している。他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、ＶＬ  ＣＤＲ１の１つ以上を含んでいる抗体の１つ以上を含んでいる。当該ＶＬ  ＣＤＲ１は、いずれか１つの上記ＶＬ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列を、上記配列表中に有している。他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、ＶＬＣＤＲ２の１つ以上を含んでいる抗体の１つ以上を含んでいる。当該ＶＬＣＤＲ２は、いずれか１つの上記ＶＬＣＤＲ２のアミノ酸配列を、上記配列表中に有している。好ましい実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、ＶＬＣＤＲ３の１つ以上を含んでいる抗体の１つ以上を含んでいる。当該ＶＬＣＤＲ３は、いずれか１つの上記ＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を、上記配列表中に有している。
【０４０３】
他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、１つ以上の抗体を含んでいる。当該抗体は、（１）１つ以上のＶＨドメインを含んでおり、当該ＶＨドメインは、いずれか１つの上記ＶＨドメインのアミノ酸配列を上記配列表中に有しており、かつ（２）１つ以上のＶＬドメインを含んでおり、当該ＶＬドメインは、いずれか１つの上記ＶＬドメインのアミノ酸配列を上記配列表中に有している。
【０４０４】
他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、１つ以上の抗体を含んでいる。当該抗体は、（１）１つ以上のＶＨ  ＣＤＲ１を含んでおり、当該ＶＨ  ＣＤＲ１は、いずれか１つの上記ＶＨ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列を上記配列表中に有しており、かつ（２）１つ以上のＶＬ  ＣＤＲ１を含んでおり、当該ＶＬ  ＣＤＲ１は、いずれか１つの上記ＶＬ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列を上記配列表中に有している。他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、１つ以上の抗体を含んでいる。当該抗体は、（１）１つ以上のＶＨ  ＣＤＲ１を含んでおり、当該ＶＨ  ＣＤＲ１は、いずれか１つの上記ＶＨ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列を上記配列表中に有しており、かつ（２）１つ以上のＶＬＣＤＲ２を含んでおり、当該ＶＬＣＤＲ２は、いずれか１つの上記ＶＬＣＤＲ２のアミノ酸配列を上記配列表中に有している。他の実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復における使用のための組成物は、１つ以上の抗体を含んでいる。当該抗体は、（１）１つ以上のＶＨ  ＣＤＲ１を含んでおり、当該ＶＨ  ＣＤＲ１は、いずれか１つの上記ＶＨ  ＣＤＲ１のアミノ酸配列を上記配列表中に有しており、かつ（２）１つ以上のＶＬＣＤＲ３を含んでおり、当該ＶＬＣＤＲ３は、いずれか１つの上記ＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を有しているいずれか１つの上記ＶＬＣＤＲ３のアミノ酸配列を、上記配列表中に有している。
【０４０５】
本明細書の他の箇所においてより詳細に論じられているように、本発明の組成物は、単独でまたは他の化合物もしくは組成物との組み合わせにおいての、いずれかで用いられてよい。さらに、上記抗体は、Ｎ末端またはＣ末端において異種ポリペプチドにさらに組換え融合されていてよく、またはポリペプチドもしくは他の組成物にさらに化学結合（共有結合および非共有結合を含んでいる）されていてよい。例えば、本発明の抗体は、検出アッセイにおける標識として有用な分子およびエフェクター分子（異種ポリペプチド、薬物、放射性ヌクレオチドまたは毒素など）に組換え融合または結合されていてよい（例えば、ＰＣＴ公開公報第ＷＯ９２／０８４９５号、第ＷＯ９１／１４４３８号、第ＷＯ８９／１２６２４号、合衆国特許第５，３１４，９９５号および欧州特許第ＥＰ３９６，３８７号を参照せよ）。
【０４０６】
いくつかの実施形態において、対象（例えば、ヒトの対象）におけるＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３にｈＬＩＧＨＴの結合することを、低下させるためまたは阻害するための方法が、ここに提供されている。当該方法は、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド（例えば、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴまたは可溶性のｈＬＩＧＨＴ）に特異的に結合する抗体の有効な量を、上記対象に対して投与することを包含している。一実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴは、ｈＬＩＧＨＴのＳＮＰ変異型（２１４Ｅ−３２Ｓ、２１４Ｋ−３２Ｓ、２１４Ｅ−３２Ｌまたは２１４Ｋ−３２Ｌなど）である。いくつかの実施形態において、ｈＬＩＧＨＴの生物活性（ＣＣＬ２０、ＩＬ８および／またはＲＡＮＴＥＳ、または本明細書に開示されている他のサイトカインの分泌など）はまた、上記対象において低下する。
【０４０７】
一部の実施形態において、対象（例えば、ヒトの対象）におけるｈＬＩＧＨＴの生物活性（ＣＣＬ２０、ＩＬ８および／またはＲＡＮＴＥＳ、または他のサイトカインの分泌など）を、低下させるためまたは阻害するための方法が、ここに提供されている。当該方法は、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド（例えば、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴ）に特異的に結合する抗体の有効な量を、上記対象に対して投与することを包含している。ここで、ｈＬＩＧＨＴの生物活性は、上記抗体によって低下させられる。いくつかの実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴは、ｈＬＩＧＨＴのＳＮＰ変異型（２１４Ｅ−３２Ｓ、２１４Ｋ−３２Ｓ、２１４Ｅ−３２Ｌまたは２１４Ｋ−３２Ｌなど）である。
【０４０８】
他の実施形態において、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴを有している細胞における、ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃＲ３にｈＬＩＧＨＴの結合することを、低下させるためまたは阻害するための方法が、ここに提供されている。当該方法は、上記細胞を、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド断片、またはｈＬＩＧＨＴエピトープなどのｈＬＩＧＨＴポリペプチド（例えば、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴまたは可溶性ｈＬＩＧＨＴ）に特異的に結合する抗体の有効な量と接触させる。一部の実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴは、ｈＬＩＧＨＴのＳＮＰ変異型（２１４Ｅ−３２Ｓ、２１４Ｋ−３２Ｓ、２１４Ｅ−３２Ｌまたは２１４Ｋ−３２Ｌなど）である。いくつかの実施形態において、ｈＬＩＧＨＴの生物活性（ＣＣＬ２０、ＩＬ８および／またはＲＡＮＴＥＳ、または本明細書に開示されている他のサイトカインの分泌など）はまた、上記細胞において低下する。
【０４０９】
一部の実施形態において、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴ受容体（ＨＶＥＭ、ＬＴβＲおよび／またはＤｃ３Ｒなど）を有している細胞における、ｈＬＩＧＨＴの生物活性（ＣＣＬ２０、ＩＬ８および／またはＲＡＮＴＥＳ、または本明細書に開示されている他のサイトカインの分泌など）を、低下させるためまたは阻害するための方法が、ここに提供されている。当該方法は、上記細胞を、ｈＬＩＧＨＴポリペプチド（例えば、細胞に表面発現されるｈＬＩＧＨＴまたは可溶性ｈＬＩＧＨＴ）に特異的に結合する抗体の有効な量と接触させる。ここで、ｈＬＩＧＨＴの生物活性は、上記抗体によって低下させられる。いくつかの実施形態において、上記ｈＬＩＧＨＴは、ｈＬＩＧＨＴのＳＮＰ変異型（２１４Ｅ−３２Ｓ、２１４Ｋ−３２Ｓ、２１４Ｅ−３２Ｌまたは２１４Ｋ−３２Ｌなど）である。
【０４１０】
本発明の抗体は、例えば、インビトロおよびインビボの、診断的方法および治療的方法の両方において、ｈＬＩＧＨＴ抗原を精製すること、検出すること、および標的とすることに用いられてよい。例えば、修飾されている抗体が、生体サンプルにおけるｈＬＩＧＨＴのレベルを定性的および定量的に測定するために、イムノアッセイにおいて用いられた。例えば、Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)を参照せよ（ここでの言及によって、その全体が組み込まれる）。
【０４１１】
本発明はまた、抗体または本発明の抗体を含んでいる薬学的組成物の有効な量を対象に対して投与することによって、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を予防、管理、処置および／または回復することの方法を提供している。一態様において、抗体は実質的に精製されている（すなわち、その効果を制限する物質および望ましくない副作用をもたらす物質が、実質的に含まれていない）。好ましい実施形態において、上記抗体は、完全ヒトモノクローナル抗体（完全ヒトモノクローナルアンタゴニスト抗体など）である。治療を施されている上記対象は、好ましくは、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラットなど）または霊長類（例えば、カニクイザルなどのサルまたはヒト）などの哺乳類である。好ましい実施形態において、上記対象はヒトである。他の好ましい実施形態において、上記対象は、ヒトの乳児または早産で生まれたヒトの乳児である。他の実施形態において、上記対象は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を有するヒトである。
【０４１２】
種々の送達システムが知られており、予防用または治療用の薬剤（例えば、本発明の抗体）を投与することに用いられ得る。当該送達システムは、リポソーム内でのカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、上記抗体を発現することが可能な組換え細胞、受容体媒介型エンドサイトーシス（例えば、Wu and Wu, J. Biol. Chem. 262:4429-4432 (1987)を参照せよ）、レトロウイルスまたは他のベクターの一部としての核酸の構築などを含んでいるが、制限されない。予防用もしくは治療用の薬剤（例えば、本発明の抗体）または薬学的組成物を投与することの方法は、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内および皮下）、硬膜外投与および粘膜投与（例えば、鼻腔内経路および経口経路）を含んでいるが、制限されない。特定の実施形態において、予防用もしくは治療用の薬剤（例えば、本発明の抗体）または薬学的組成物は、鼻腔内、筋肉内、静脈内、または皮下に投与される。上記予防用もしくは治療用の薬剤または薬学的組成物は、任意の簡便な経路（例えば、輸液またはボーラス注入による、上皮表層または粘膜表層（例えば、口内粘膜、鼻腔内粘膜、直腸内または腸管内粘膜など）を介した吸収による）によって投与され得、他の生物活性のある物質と共に投与され得る。投与は、系統的または局所的であり得る。さらに、肺への投与（例えば、吸入器または噴霧器の使用による、およびエアロゾル化剤の製剤による）もまた、採用され得る。例えば、合衆国特許第６，０１９，９６８号、第５，９８５，３２０号、第５，９８５，３０９号、第５，９３４，２７２号、第５，８７４，０６４号、第５，８５５，９１３号、第５，２９０，５４０号および第４，８８０，０７８号、ならびにＰＣＴ公開公報第ＷＯ９２／１９２４４号、第ＷＯ９７／３２５７２号、第ＷＯ９７／４４０１３号、第ＷＯ９８／３１３４６号およびＷＯ９９／６６９０３号を参照せよ（上記文献のそれぞれは、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４１３】
特定の実施形態において、本発明の予防用もしくは治療用の薬剤または薬学的組成物を、処置を必要としている領域に対して局所的に投与することは、望ましくあり得る。これは、例えば、局所注入によって、局所投与（例えば、鼻腔内への噴霧による）によって、注射によって、またはインプラント（当該インプラントは、シアラスティック(sialastic)膜などの膜または繊維を含んでいる、多孔質、非多孔質またはゲル状の物質製である）を用いて達成され得るが、制限されない。好ましくは、本発明の抗体を投与する場合、上記抗体を吸収しない器具を用いることに注意が払われねばならない。
【０４１４】
他の実施形態において、本発明の予防用もしくは治療用の薬剤または薬学的組成物は、小胞内（特にリポソーム）に送達され得る（Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327を参照せよ。また、前書を一般に参照せよ）。
【０４１５】
他の実施形態において、本発明の予防用もしくは治療用の薬剤または薬学的組成物は、放出制御システムまたは持続放出システム内に送達され得る。一実施形態において、放出制御または持続放出を達成するために、ポンプが用いられてよい（Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574を参照せよ）。他の実施形態において、本発明の予防用もしくは治療用の薬剤（例えば、本発明の抗体）または薬学的組成物の放出制御または持続放出を達成するために、高分子材料が用いられ得る（例えば、Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J.,Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61を参照せよ。Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105; 合衆国特許第５，６７９，３７７号；合衆国特許第５，９１６，５９７号；合衆国特許第５，９１２，０１５号；合衆国特許第５，９８９，４６３号；合衆国特許第５，１２８，３２６号；ＰＣＴ公開公報第ＷＯ９９／１５１５４号；およびＰＣＴ公開公報第ＷＯ９９／２０２５３号をもまた参照せよ）。持続放出製剤において用いられている重合体の例は、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−ｃｏ−ビニルアセテート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリアンヒドリド、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、およびポリオルトエステルを含んでいるが、制限されない。好ましい実施形態において、持続放出製剤において用いられている上記重合体は、不活性で、不純物の浸出がなく、保存に関して安定しており、無菌であり、かつ生物分解性である。さらに他の実施形態において、放出制御システムまたは持続放出システムは、治療標的の近傍（すなわち、鼻道または肺）に設置され得るので、僅かな全身投与量しか必要としない（例えば、Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)を参照せよ）。放出制御システムは、Ｌａｎｇｅｒによるレビュー論文(1990, Science 249:1527-1533)において論じられている。当業者に知られている任意の技法が、本発明の抗体の１つ以上を含んでいる持続放出製剤を製造するために用いられ得る。例えば、合衆国特許第４，５２６，９３８号、ＰＣＴ公開公報第ＷＯ９１／０５５４８号、ＰＣＴ公開公報第ＷＯ９６／２０６９８号、Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy & Oncology 39:179-189; Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397; Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854; およびLam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760を参照せよ（上記文献のそれぞ���は、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４１６】
特定の実施形態において、本発明の上記組成物が予防用または治療用の薬剤（例えば、本発明の抗体）をコードしている核酸である場合、上記核酸は、当該核酸を適切な核酸発現ベクターの一部として構築すること、および当該核酸が細胞内に生じるように当該核酸を投与することによって、そのコードされている予防用または治療用の薬剤の発現を促進するためにインビボで投与され得る。例えば、（１）レトロウイルスベクターの使用によって（合衆国特許第４，９８０，２８６号を参照せよ）、または（２）直接注射によって、または（３）微粒子衝撃の使用によって（例えば、遺伝子銃、Biolistic, Dupont）、または（４）脂質もしくは細胞表面の受容体もしくは導入剤で表面を覆うこと、または（５）細胞核に入ることが知られているホメオボックス類似ペプチドと連鎖させた状態で、当該核酸を投与することによって（例えば、Joliot et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:1864-1868を参照せよ）、など。あるいは、核酸は、細胞内に導入され、相同組換えによって宿主細胞のＤＮＡ中における発現のために組み込まれ得る。
【０４１７】
特定の実施形態において、本発明の組成物は、本発明の抗体または断片の１つ、２つまたはそれ以上を含んでいる。他の実施形態において、本発明の組成物は、本発明の抗体または断片の１つ、２つまたはそれ以上、ならびに本発明の抗体以外の予防用または治療用の薬剤を含んでいる。好ましくは、上記薬剤は、（１）ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復に有用であることが知られている、または（２）ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復のために過去に用いられていた、もしくは現在用いられている。予防用または治療用の薬剤に加えて、本発明の組成物はまた、担体を含んでいてよい。
【０４１８】
本発明の組成物は、単位剤型の調合において用いられ得る薬学的組成物（例えば、対象または患者に対する投与に適切な組成物）の製造において有用な、原薬組成物を含んでいる。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、薬学的組成物である。このような組成物は、１つ以上の予防用または治療用の薬剤（例えば、本発明の抗体または他の予防用または治療用の薬剤）の予防的または治療的に有効な量、および薬学的に許容可能な担体を含んでいる。好ましくは、上記薬学的組成物は、対象に対する投与経路のために、適切に製剤されている。
【０４１９】
特定の実施形態において、用語「担体」は、希釈剤、アジュバント（例えば、（完全および不完全）フロイントアジュバント）、賦形剤、または治療に役立つ物質と共に投与される媒体を表している。このような薬学的担体は、水および油（ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などの、石油、動物、植物または化学合成物由来の油を含んでいる）などの無菌の液体であり得る。上記薬学的組成物が静脈内に投与される場合、水が好ましい担体である。生理食塩水およびＤ型グルコース水溶液およびグリセロール溶液はまた、特に注射液のために、液体担体として採用され得る。適切な薬学的賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアラート、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどを含んでいる。もしも望まれるならば、上記組成物は、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤をまた含み得る。これらの組成物は、溶液、懸濁剤、乳剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、持続放出製剤などの形を取り得る。経口的製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの標準的な担体を含み得る。適切な薬学的担体の例は、Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, Paにおいて記載されている。このような組成物は、患者に対する適切な投与のための形状を与えられるように、上記抗体（好ましくは精製された状態で）の予防的または治療的に有効な量を、担体の適切な量と共に含む。上記製剤は、投与の形態に合わせるべきである。
【０４２０】
好ましい実施形態において、ヒトに対する静脈内投与用に適合されている薬学席組成物と同様の通常の手段に従って、上記組成物は製剤される。通常、静脈内投与のための組成物は、無菌で等張な水性緩衝液の状態である溶液である。必要な場合、上記組成物は、可溶化剤および、注射箇所における痛みを和らげるための局所麻酔薬（リグノカインなど）をもまた含んでいてよい。しかし、このような組成物は、静脈内以外の経路によって投与されてよい。
【０４２１】
一般的に、本発明の組成物の複数の成分は、個別に、または一緒に混合されてのいずれかで、例えば、凍結乾燥されている乾燥粉末として、または密封されている容器（有効成分の量を示しているアンプルまたは小袋など）内における水分を含まない濃縮物として、単位剤型に供される。上記組成物が輸液によって投与される場合、当該組成物は、医薬品グレードの滅菌水または生理食塩水が入っている輸液ボトルと共に調剤され得る。上記組成物が注射によって投与される場合、注射用の滅菌水または生理食塩水のアンプルが、投与に先立って複数の成分が混合され得るように、用意され得る。
【０４２２】
本発明はまた、本発明の抗体が、密封されている容器（抗体の量を示しているアンプルまたは小袋など）内に梱包されていることを提供している。一実施形態において、上記抗体は、無菌化されており凍結乾燥されている乾燥粉末として、または密封されている容器内における水分を含まない濃縮物として供され、かつ液状に戻され得る（例えば、水または生理食塩水により、対象に対する投与のために適切な濃度に）。好ましくは、上記抗体は、密封されている容器内における無菌化されており凍結乾燥されている乾燥粉末として、０．１ｍｇ以上、０．５ｍｇ以上、１ｍｇ以上、２ｍｇ以上、または３ｍｇ以上の単位投与量にて供され、より好ましくは、５ｍｇ以上、１０ｍｇ以上、１５ｍｇ以上、２５ｍｇ以上、３０ｍｇ以上、３５ｍｇ以上、４５ｍｇ以上、５０ｍｇ以上、６０ｍｇ以上、７５ｍｇ以上、８０ｍｇ以上、８５ｍｇ以上、９０ｍｇ以上、９５ｍｇ以上または１００ｍｇ以上の単位投与量にて供される。凍結乾燥されている抗体は、元の容器内において２〜８℃にて保存され得、上記抗体は、液状に戻された後１２時間以内に、好ましくは６時間以内、５時間以内、３時間以内、または１時間以内に投与され得る。代わりの実施形態において、抗体は、上記抗体の量および濃度を示している密封されている容器内において、液体の状態で供される。好ましくは、上記抗体の上記液体の状態は、密封されている容器中において、０．１ｍｇ／ｍＬ以上、０．５ｍｇ／ｍＬ以上、または１ｍｇ／ｍＬ以上にて供され、より好ましくは、５ｍｇ／ｍＬ以上、１０ｍｇ／ｍＬ以上、１５ｍｇ／ｍＬ以上、２５ｍｇ／ｍＬ以上、３０ｍｇ／ｍＬ以上、４０ｍｇ／ｍＬ以上、５０ｍｇ／ｍＬ以上、６０ｍｇ／ｍＬ以上、７０ｍｇ／ｍＬ以上、８０ｍｇ／ｍＬ以上、９０ｍｇ／ｍＬ以上または１００ｍｇ／ｍＬ以上にて供される。
【０４２３】
本発明の組成物は、中性の状態または塩の状態として製剤され得る。薬学的に許容可能な塩は、陰イオン（塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来している陰イオンなど）と形成される塩、および陽イオン（ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来している陽イオンなど）と形成される塩を含んでいる。
【０４２４】
ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復において効果的である、本発明の予防用もしくは治療用の薬剤（例えば、本発明の抗体）または組成物の量は、標準的な臨床技法により決定される。
【０４２５】
したがって、約０．１μｇ／ｍＬ〜約４５０μｇ／ｍＬの血清中の力価となる、そしていくつかの実施形態において、０．１μｇ／ｍＬ以上、０．２μｇ／ｍＬ以上、０．４μｇ／ｍＬ以上、０．５μｇ／ｍＬ以上、０．６μｇ／ｍＬ以上、０．８μｇ／ｍＬ以上、１μｇ／ｍＬ以上、１．５μｇ／ｍＬ以上、好ましくは、２μｇ／ｍＬ以上、５μｇ／ｍＬ以上、１０μｇ／ｍＬ以上、１５μｇ／ｍＬ以上、２０μｇ／ｍＬ以上、２５μｇ／ｍＬ以上、３０μｇ／ｍＬ以上、３５μｇ／ｍＬ以上、４０μｇ／ｍＬ以上、５０μｇ／ｍＬ以上、７５μｇ／ｍＬ以上、１００μｇ／ｍＬ以上、１２５μｇ／ｍＬ以上、１５０μｇ／ｍＬ以上、２００μｇ／ｍＬ以上、２５０μｇ／ｍＬ以上、３００μｇ／ｍＬ以上、３５０μｇ／ｍＬ以上、４００μｇ／ｍＬ以上または４５０μｇ／ｍＬ以上となる、抗体または組成物の投与量が、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の予防、管理、処置および／または回復のために、ヒトに対して投与され得る。さらに、最適な投与量の範囲を特定することを補助するために、インビトロアッセイが任意に採用されてよい。製剤において採用されるべきである正確な投与量はまた、投与経路およびｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の重症度に依存しており、専門家の判断およびそれぞれの患者の環境に従って決定されるべきである。
【０４２６】
効果的な投与量は、インビトロまたは動物モデル試験システムに由来している投与量−反応曲線から推定され得る。
【０４２７】
本発明の抗体に関しては、患者に対して投与される上記投与量は、通常、上記患者の体重に対して０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、上記患者に対して投与される上記投与量は、上記患者の体重に対して約１ｍｇ／ｋｇ〜約７５ｍｇ／ｋｇである。好ましくは、患者に対して投与される上記投与量は、上記患者の体重に対して１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの間であり、より好ましくは、上記患者の体重に対して１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇである。異種ポリペプチドに対する免疫応答のため、一般的に、ヒト抗体は、ヒトの体内において他の生物種からの抗体よりも長い半減期を有している。したがって、ヒト抗体のより少ない投与量および、より少ない頻度での投与が可能である。さらに、本発明の抗体の上記投与量および投与の頻度は、修飾（例えば脂質付加など）により、上記抗体の摂取および組織への浸透を高めることによって低減させ得る。
【０４２８】
一実施形態において、本発明の抗体または断片の約１００ｍｇ／ｋｇ以下、約７５ｍｇ／ｋｇ以下、約５０ｍｇ／ｋｇ以下、約２５ｍｇ／ｋｇ以下、約１０ｍｇ／ｋｇ以下、約５ｍｇ／ｋｇ以下、約１ｍｇ／ｋｇ以下、約０．５ｍｇ／ｋｇ以下、または約０．１ｍｇ／ｋｇ以下は、５回、４回、３回、２回、または好ましくは１回、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を管理するために投与される。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、約１〜１２回投与され、このとき、上記投与量は、医師により決定された必要に応じて（例えば、１週間ごと、２週間ごと、１箇月ごと、２箇月ごと、３箇月ごとなど）投与され得る。いくつかの実施形態において、より少ない投与量（例えば、１〜１５ｍｇ／ｋｇ）は、より高い頻度（例えば、３〜６回）にて投与され得る。他の実施形態において、より多い投与量（例えば、２５〜１００ｍｇ／ｋｇ）は、より低い頻度（例えば、１〜３回）にて投与され得る。しかし、当業者にとって明白であるように、他の投薬量および投与計画は容易に決定でき、これらは本発明の範囲内にある。
【０４２９】
特定の実施形態において、持続放出製剤における本発明の抗体または断片の約１００ｍｇ／ｋｇ以下、約７５ｍｇ／ｋｇ以下、約５０ｍｇ／ｋｇ以下、約２５ｍｇ／ｋｇ以下、約１０ｍｇ／ｋｇ以下、約５ｍｇ／ｋｇ以下、約１ｍｇ／ｋｇ以下、約０．５ｍｇ／ｋｇ以下、約０．１ｍｇ／ｋｇ以下は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を予防、管理、処置および／または回復するために、対象（好ましくはヒト）に対して投与される。他の特定の実施形態において、持続放出製剤以外における本発明の抗体の約１００ｍｇ／ｋｇ以下、約７５ｍｇ／ｋｇ以下、約５０ｍｇ／ｋｇ以下、約２５ｍｇ／ｋｇ以下、約１０ｍｇ／ｋｇ以下、約５ｍｇ／ｋｇ以下、約１ｍｇ／ｋｇ以下、約０．５ｍｇ／ｋｇ以下または約０．１ｍｇ／ｋｇ以下のボーラスは、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を予防、管理、処置および／または回復するために、対象（好ましくはヒト）に対して投与される。そして特定の期間後、持続放出状態にある本発明の抗体の約１００ｍｇ／ｋｇ以下、約７５ｍｇ／ｋｇ以下、約５０ｍｇ／ｋｇ以下、約２５ｍｇ／ｋｇ以下、約１０ｍｇ／ｋｇ以下、約５ｍｇ／ｋｇ以下、約１ｍｇ／ｋｇ以下、約０．５ｍｇ／ｋｇ以下または約５ｍｇ／ｋｇ以下が、上記対象に対して（例えば、鼻腔内または筋肉内に）、２回、３回、４回（好ましくは１回）投与される。この実施形態によると、特定の期間とは１〜５日間、１週間、２週間または１箇月間であり得る。
【０４３０】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または断片の一回量は、１年間のうちに２週間ごと（例えば、約１４日間）の間隔を空けて、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、１６回、１７回、１８回、１９回、２０回、２１回、２２回、２３回、２４回、２５回または２６回、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を予防、管理、処置および／または回復するために、患者に対して投与される。ここで、上記投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、またはこれらの組み合わせ（すなわち、それぞれの投与量月間投与量(each dose monthly dose)は、同一であってよく、または同一でなくともよい）からなる群から選択される。
【０４３１】
他の実施形態において、本発明の抗体の一回量は、１年間のうちに約１箇月間ごと（例えば、約３０日間）の間隔を空けて、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回または１２回、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を予防、管理、処置および／または回復するために、患者に対して投与される。ここで、上記投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、またはこれらの組み合わせ（すなわち、それぞれの投与量月間投与量(each dose monthly dose)は、同一であってよく、または同一でなくともよい）からなる群から選択される。
【０４３２】
一実施形態において、本発明の抗体または断片の一回量は、１年間のうちに約２箇月間ごと（例えば、約６０日間）の間隔を空けて、２回、３回、４回、５回または６回、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を予防、管理、処置および／または回復するために、患者に対して投与される。ここで、上記投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、またはこれらの組み合わせ（すなわち、それぞれの２箇月間ごとの投与量は、同一であってよく、または同一でなくともよい）からなる群から選択される。
【０４３３】
いくつかの実施形態において、本発明の抗体または断片の一回量は、１年間のうちに約３箇月間ごと（例えば、約１２０日間）の間隔を空けて、２回、３回または４回、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を予防、管理、処置および／または回復するために、患者に対して投与される。ここで、上記投与量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、またはこれらの組み合わせ（すなわち、それぞれの３箇月間ごとの投与量は、同一であってよく、または同一でなくともよい）からなる群から選択される。
【０４３４】
一部の実施形態において、本発明の抗体または断片の投与のための、患者に対する投与経路は、鼻腔内、筋肉内、静脈内またはこれらの組み合わせである。しかし、本明細書において記載されている他の経路もまた、許容可能である。それぞれの投与量は、同一の投与経路によって投与されてよく、または同一の投与経路によって投与されなくともよい。いくつかの実施形態において、本発明の抗体または断片は、他の本発明の同じもしくは異なる抗体もしくは断片の投与と同時に、または当該投与に引き続いて、複数の投与経路を介して投与されてよい。
【０４３５】
一部の実施形態において、本発明の抗体または断片は、対象に対して予防的または治療的に投与される。本発明の抗体または断片は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患及びその症状を予防、軽減または回復するために、対象に対して予防的または治療的に投与され得る。
【０４３６】
（遺伝子治療）
特定の実施形態において、本発明の核酸またはヌクレオチド配列は、遺伝子治療として、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を予防、管理、処置および／または回復するために投与される。遺伝子治療とは、発現している核酸または発現し得る核酸の、対象に対する投与によって施される治療を表している。本発明の実施形態において、上記核酸は、それにコードされている抗体を産生し、上記抗体は、予防的または治療的効果をもたらす。
【０４３７】
遺伝子治療のための、当該技術において利用できる任意の方法が、本発明によれば用いられ得る。
【０４３８】
（抗体の診断用途）
診断用途について抗体が言及されているが、本開示は、必要な変更を加えて、本発明の断片に対してもまた適用されることとして、読まれるべきである。
【０４３９】
ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する、標識されている抗体または本発明の(Labeled antibodies or of the invention)、並びにそれらの派生体および類似体は、ｈＬＩＨＧＴ媒介性の疾患を検出、診断または監視するための、診断上の目的のために用いられ得る。本発明は、ｈＬＩＨＧＴ媒介性の疾患の検出のための、以下の(ａ)および(ｂ)を含んでいる方法を提供している。（ａ)ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する本発明の抗体の１つ以上を用いて、対象の細胞サンプルまたは組織サンプルにおける上記ｈＬＩＧＨＴ抗原の発現を評価すること。（ｂ）上記ｈＬＩＨＧＴ抗原のレベルを、対照レベル、（例えば、正常な組織サンプル（例えば、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患に罹患していない患者からの、または疾患が始まる前における同じ患者からの）におけるレベル）と比較すること。ここで、評価されるｈＬＩＧＨＴ抗原のレベルにおける、ｈＬＩＧＨＴ抗原の対照レベルと比較した増加は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を示している。
【０４４０】
本発明は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を診断するための、以下の(ａ)および(ｂ)を含んでいる診断用アッセイを提供している。(ａ)ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する本発明の抗体の１つ以上を用いて、個体の細胞サンプルまたは組織サンプルにおけるｈＬＩＧＨＴ抗原のレベルに関して評価すること。および、（ｂ）上記ｈＬＩＨＧＴ抗原のレベルを、対照レベル、（例えば、正常な組織サンプルにおけるレベル）と比較すること。ここで、評価されるｈＬＩＧＨＴ抗原のレベルにおける、ｈＬＩＧＨＴ抗原の対照レベルと比較した増加は、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を示している。ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患のより決定的な診断によって、保健療専門家は、より早く予防措置または積極的処置を採用することができ、それゆえ、上記ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の発生、またはさらなる進行を予防することができる。
【０４４１】
本発明の抗体は、本明細書に記載されているような、または当業者に知られているような（例えば、Jalkanen et al.; 1985, J. Cell. Biol. 101:976-985; および Jalkanen et al., 1987, J. Cell. Biol. 105:3087-3096を参照せよ）古典的な免疫組織学的方法を用いて、生体サンプルにおけるｈＬＩＧＨＴ抗原のレベルを評価することに用いられ得る。イムノアッセイ（酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）および放射線免疫測定（ＲＩＡ）など）を含んでいる、タンパク質遺伝子(protein gene)の発現を検出することに有用な、他の抗体に基づく方法。適切な抗体評価標識は、当業者に知られており、酵素標識（グルコースオキシダーゼなど）、放射性同位元素（ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、三重水素（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）およびテクネチウム（９９Ｔｃ））、発光標識（ルミノールなど）、および蛍光標識（フルオレセインおよびローダミンなど）、およびビオチンを含んでいる。
【０４４２】
本発明の一態様は、ヒトにおけるｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の検出および診断である。一実施形態において、診断は以下のａ）〜ｄ）を含んでいる。ａ）ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する、標識されている抗体の効果的な量を対象に対して投与すること（例えば、非経口的に、皮下に、または腹腔内に）。ｂ）上記標識されている抗体が、上記対象におけるｈＬＩＧＨＴ抗原が発現されている部位に優先的に集中できるように（そして結合していない標識されている分子が、背景レベルまで明瞭になるように）、上記投与することに引き続いて、ある時間間隔を待つこと。ｃ）背景レベルを決定すること。および、ｄ）上記対象において、上記標識されている抗体を検出すること。その結果、標識されている抗体の、上記背景レベルを超えた検出は、上記対象がｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患に罹患していることを示す。背景レベルは、種々の方法（検出される標識されている分子の量を、特定のシステム用の所定の基準値と比較することを含んでいる）によって決定され得る。
【０４４３】
上記対象の大きさおよび用いられる画像化システムにより、診断画像を生成するために必要な画像化部分(imaging moiety)の量が決定されることが、本技術分野において理解される。放射性同位体部分(radioisotope moiety)の場合、ヒトの対象について、注射される放射能の量は、通常、９９Ｔｃの約５〜２０ミリキュリーの範囲である。その後、上記標識された抗体は、特定のタンパク質を含んでいる細胞の場所に、優先的に蓄積する。インビボでのがんの画像化が、S. W. Burchiel et al., "Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their Fragments." (Chapter 13 in Tumor Imaging: The Radiochemical Detection of Cancer, S. W. Burchiel and B. A. Rhodes, eds., Masson Publishing Inc. (1982)において記載されている。
【０４４４】
上記標識されている抗体が上記対象における部位に優先的に集中できるための、および結合していない標識されている抗体が背景レベルまで明瞭になるための、上記投与に引き続く上記時間間隔は、いくつかの変数（用いられている標識の種類および投与の方式を含んでいる）に依存し、６〜４８時間または６〜２４時間または６〜１２時間となる。他の実施形態において、投与に引き続く上記時間間隔は、５〜２０日間または５〜１０日間である。
【０４４５】
一実施形態において、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患の監視することは、ｈＬＩＧＨＴ媒介性の疾患を診断するための上記方法を繰り返すこと（例えば、最初の診断から１箇月後、最初の診断から６箇月後、最初の診断から１年後など）によって行われる。
【０４４６】
上記標識されている分子の存在は、インビボスキャニングの技術分野において知られている方法を用いて、上記対象において検出され得る。これらの方法は、用いられている標識の種類に依存する。当業者は、特定の標識を検出するための適切な方法を決定することができる。本発明の診断の方法において用いられ得る方法および装置は、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）などの全身スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）および超音波検査法を含んでいるが、制限されない。
【０４４７】
特定の実施形態において、上記分子は、放射性同位体によって標識されており、放射線反応性外科機械（Thurston et al., 米国特許第５，４４１，０５０号）を用いて上記患者において検出される。他の実施形態において、上記分子は、蛍光化合物によって標識されており、蛍光反応性スキャニング機械を用いて上記患者において検出される。他の実施形態において、上記分子は、陽子を放出している金属によって標識されており、陽子放出断層撮影法を用いて上記患者において検出される。さらに他の実施形態において、上記分子は、常磁性の標識によって標識されており、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を用いて上記患者において検出される。
【０４４８】
（抗体の製造方法）
抗原（ＬＩＧＨＴ）に特異的に結合する本発明の抗体および断片は、抗体の合成についての技術（特に、化学合成による、または、好ましくは、組換え発現技術による）において知られている任意の方法によって産生され得る。本発明の実施には、当業者の技能の範囲内にある、分子生物学、微生物学、遺伝分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチドの合成および修飾、核酸ハイブリダイゼーション、ならびに関連している分野における常法を、他に示されない限り採用する。これらの技法は、ここに挙げられている文献に記載されており、論文に充分に説明されている。例えば、Maniatis et al. (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren et al. (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Pressを参照せよ。
【０４４９】
抗体に特異的に結合するポリクローナル抗体は、種々の常法によって産生され得る。例えば、ヒト抗原に特異的なポリクローナル抗体を含んでいる血清の産生を誘導するために、上記ヒト抗原は、種々の宿主動物（ウサギ、マウス、ラットなどを含んでいるが、制限されない）に対して投与され得る。種々のアジュバントが、上記宿主の種類に依存している免疫応答を増加させるために用いられ得る。上記アジュバントは、（完全および不完全）フロイントアジュバント、鉱物ゲル（水酸化アルミニウムなど）、界面活性物質（リゾレシチン、プルロニックポリオールなど）、ポリアニオン、ペプチド、油乳濁液、キーホールリンペット・ヘモシアニン、ジニトロフェノール、ならびに有用な可能性があるヒト用アジュバント（ＢＣＧ（カルメット・ゲラン結核菌）およびざ瘡菌など）を含んでいるが、制限されない。このようなアジュバントはまた、上記技術分野においてよく知られている。
【０４５０】
モノクローナル抗体は、多種多様の常法（ハイブリドーマ、組換え、およびファージディスプレイ技術の使用、またはそれらの組合せを含んでいる）を用いて調合され得る。例えば、モノクローナル抗体は、上記技術分野および教示（例えば、Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)における）において知られている技術を含んでいる、ハイブリドーマ技術を用いて産生され得る（上記文献は、言及によってその全体が組み込まれる）。本明細書に使用されるとき、用語「モノクローナル抗体」とは、ハイブリドーマ技術を通じて産生される抗体に制限されない。モノクローナル抗体を産生することの他の代表的な方法は、本明細書の他の箇所に記載されている（例えば、ＫＭマウス（商標）の使用など）。さらなるモノクローナル抗体を産生することの代表的な方法は、本明細書の実施例において提供されている。
【０４５１】
ハイブリドーマ技術を用いて特定の抗体を産生および選別するための方法は、定型的で、上記技術分野においてよく知られている。手短に述べると、マウスは、ｈＬＩＧＨＴ抗原に対して免疫を与えられ得る。そして、免疫応答が検出される（例えば、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的な抗体が、上記マウスの血清において検出される）とすぐに、上記マウスの脾臓を採取し、脾細胞を分離する。次に、上記脾細胞を、よく知られた技法によって、任意の適切な骨髄腫細胞（例えば、ＡＴＣＣが提供しているＳＰ２０細胞株からの細胞が利用できる）と融合させる。ハイブリドーマを選択し、限界希釈法によりクローニングする。
【０４５２】
さらに、ＲＩＭＭＳ（repetitive immunization multiple sites）の技法が、動物に免疫を与えるために用いられ得る（Kilptrack et al., 1997 Hybridoma 16:381-9、言及により、その全体が組み込まれる）。次に、上記ハイブリドーマのクローンを、本発明のポリペプチドを結合することのできる抗体を分泌する細胞について、常法により評価する。陽性のハイブリドーマのクローンでマウスに免疫を与えることによって、腹水（一般的に、高いレベルの抗体を含んでいる）が生み出され得る。
【０４５３】
したがって、本発明は、本発明の修飾された抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を培養することによって、抗体を産生することの方法を提供している。ここで、好ましくは、上記ハイブリドーマは、ｈＬＩＧＨＴ抗原で免疫を与えられているマウスから分離される脾細胞を、骨髄腫細胞と融合し、次に、融合の結果、ｈＬＩＧＨＴ抗原に結合することのできる抗体を分泌するハイブリドーマのクローンについて、上記ハイブリドーマを選別することによって生み出される。
【０４５４】
特定のｈＬＩＧＨＴ抗原を認識する抗体断片は、当業者に知られている任意の技法によって生み出され得る。例えば、本発明のＦａｂ断片およびＦ（ａｂ’）２断片は、酵素（パパイン（Ｆａｂ断片を産生するための）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生するための）など）を用いる免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって産生され得る。Ｆ（ａｂ’）２断片は、可変領域、軽鎖の定常領域および重鎖のＣＨ１ドメインを含んでいる。さらに、本発明の抗体はまた、上記技術分野において知られている種々のファージディスプレイ法を用いて生み出され得る。
【０４５５】
例えば、抗体はまた、種々のファージディスプレイ法を用いて生み出され得る。ファージディスプレイ法においては、機能的抗体のドメインを、ファージ粒子（当該粒子をコードしているポリヌクレオチド配列を有している）の表面に提示する。特に、ＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードしているＤＮＡ配列を、動物のｃＤＮＡライブラリ（例えば、ヒトまたはネズミの、冒されている組織のｃＤＮＡライブラリ）から増幅させる。上記ＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードしている上記ＤＮＡを、ＰＣＲによりｓｃＦｖリンカーと共に組換え、ファージミドベクター内にてクローニングする。上記ベクターを、大腸菌に電気穿孔し、上記大腸菌をヘルパーファージに感染させる。これらの方法において用いられているファージは、通常、繊維状ファージ（ｆｄおよびＭ１３を含んでいる）であり、上記ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、通例、上記ファージのＩＩＩ遺伝子またはＶＩＩＩ遺伝子のいずれか一方に組換え融合される。特定の抗原に結合するドメインを結合している抗原を発現しているファージは、例えば、標識されている抗原、または固体表面もしくは数珠状に結合もしくは捕捉されている抗原を用いて、抗原として選択または特定され得る。本発明の抗体を作製することに用いられ得るファージディスプレイ法の例は、Brinkman et al., 1995, J. Immunol. Methods 182:41-50; Ames et al., 1995, J. Immunol. Methods 184:177-186; Kettleborough et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:952-958; Persic et al., 1997, Gene 187:9-18; Burton et al., 1994, Advances in Immunology 57:191-280; ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号、国際公開公報第ＷＯ９０／０２８０９号、第ＷＯ９１／１０７３７号、第ＷＯ９２／０１０４７号、第ＷＯ９２／１８６１９号、第ＷＯ９３／１１２３６号、第ＷＯ９５／１５９８２号、第ＷＯ９５／２０４０１号および第ＷＯ９７／１３８４４号、ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、第５，２２３，４０９号、第５，４０３，４８４号、第５，５８０，７１７号、第５，４２７，９０８号、第５，７５０，７５３号、第５，８２１，０４７号、第５，５７１，６９８号、第５，４２７，９０８号、第５，５１６，６３７号、第５，７８０，２２５号、第５，６５８，７２７号、第５，７３３，７４３号および第５，９６９，１０８号に開示されている方法を含んでいる（上記文献のそれぞれは、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４５６】
以上の文献において記載されているように、ファージの選択の後、上記ファージからの領域をコードしている抗体は、単離されることができ、完全な抗体（ヒト抗体を含んでいる）または他の任意の望ましい抗原を結合する断片を生み出すために用いられることができ、任意の望ましい宿主（哺乳類の細胞、昆虫の細胞、植物の細胞、酵母および細菌を含んでいる）において発現されることができる（例えば、以下に記載されているように）。Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片およびＦ（ａｂ’）２断片を組換えにより産生するための技法はまた、国際公開第ＷＯ９２／２２３２４号、Mullinax et al., 1992, BioTechniques 12(6):864-869; Sawai et al., 1995, AJRI 34:26-34; and Better et al., 1988, Science 240:1041-1043（上記文献は、言及により、その全体が組み込まれる）において開示されている方法などの常法を用いることを採用し得る。
【０４５７】
完全な抗体を生み出すために、ＶＨまたはＶＬのヌクレオチド配列、制限部位ならびに制限部位を保護するためのフランキング配列を含んでいるＰＣＲプライマーが、ｓｃＦｖクローンにおける上記ＶＨ配列または上記ＶＬ配列を増幅するために用いられ得る。当業者に知られているクローニングの技法を利用することにより、ＰＣＲにより増幅されたＶＨドメインは、ＶＨの定常領域（例えば、ヒトガンマ４定常領域）を発現しているベクター内にてクローニングされ得、ＰＣＲによって増幅されたＶＬドメインは、ＶＬの定常領域（例えば、ヒトカッパ定常領域またはヒトラムダ定常領域）を発現しているベクター内にてクローニングされ得る。上記ＶＨドメインおよびＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現している１つのベクター内にてクローニングされてよい。次に、重鎖を組換えられているベクターおよび軽鎖を組換えられているベクターを、細胞株内に共にトランスフェクションし、当業者に知られている技法を用いて、全長の抗体（例えば、ＩｇＧ）を発現している安定的細胞株または一過性細胞株を生み出す。
【０４５８】
いくつかの使用(ヒトにおける抗体のインビボでの使用およびインビトロでの検出アッセイを含んでいる)のために、ヒト抗体またはキメラ抗体を使用することが好ましくあり得る。完全ヒト抗体は、ヒト対象の治療的処置のために特に望ましい。ヒト抗体は、上記技術分野において知られている種々の方法（上述されている、ヒト免疫グロブリンの配列に由来する抗体ライブラリを用いるファージディスプレイ法を含んでいる）によって作製され得る。米国特許第４，４４４，８８７号および第４，７１６，１１１号、ならびに国際公開公報第ＷＯ９８／４６６４５号、第ＷＯ９８／５０４３３号、第ＷＯ９８／２４８９３号、第ＷＯ９８／１６６５４号、第ＷＯ９６／３４０９６号、第ＷＯ９６／３３７３５号および第ＷＯ９１／１０７４１号をもまた参照せよ（上記文献のそれぞれは、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４５９】
好ましい実施形態において、ヒト抗体が産生される。ヒト抗体および／または完全ヒト抗体は、上記技術分野において知られている任意の方法（本明細書において提供されている実施例を含んでいる）を用いて産生され得る。例えば、機能的内因性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現できるトランスジェニックマウス。例えば、ヒト免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の遺伝子複合体を、無作為に、または相同組換えによって、マウスの胚性幹細胞の中に導入し得る。あるいは、ヒトの可変領域、定常領域および多様性領域(diversity region)を、ヒトの重鎖および軽鎖の遺伝子に加えて、マウスの胚性幹細胞の中に導入し得る。相同組換えによるヒト免疫グロブリン座の導入に伴い、マウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の遺伝子は、個別または同時に機能を失わされ得る。特に、ＪＨ領域の同型接合型欠失は、内因性の抗体産生を防止する。改変されている胚性幹細胞を増殖、胞胚内にマイクロインジェクションして、キメラマウスを生み出す。次に、上記キメラマウスを交配して、ヒト抗体を発現している均質な子孫を生み出す。トランスジェニックマウスに、常法により、選択された抗原（例えば、本発明のポリペプチドの全部または一部）で免疫を与える。上記抗原に対して指向されているモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を用いて免疫を与えられているトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスが有しているヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化の間に再配列され、続いてクラス変換および体細胞変異を受ける。したがって、このような技法を用いることにより、治療的に有用なＩｇＧ抗体、ＩｇＡ抗体、ＩｇＭ抗体およびＩｇＥ抗体を産生することができる。ヒト抗体を産生するための当該技術の概要については、Lonberg and Huszar (1995, Int. Rev. Immunol. 13:65-93)を参照せよ。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するための当該技術の詳細な議論、ならびに当該抗体を産生するためのプロトコルについては、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、第ＷＯ９６／３４０９６号および第ＷＯ９６／３３７３５号、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、第５，５６９，８２５号、第５，６６１，０１６号、第５，５４５，８０６号、第５，８１４，３１８号および第５，９３９，５９８号を参照せよ（上記文献は、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる）。他の方法は、本明細書の実施例において詳述されている。さらに、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Freemont, Calif.）およびＧｅｎｐｈａｒｍ（San Jose, Calif.）などの企業は、上述した技術に類似している技術を用いて、選択された抗原に対して指向されているヒト抗体を産生することに携わることができる。
【０４６０】
キメラ抗体とは、上記抗体の相異なる部分が、異なる免疫グロブリン分子に由来している分子である。キメラ抗体を産生するための方法は、公知技術である。例えば、Morrison, 1985, Science 229:1202; Oi et al., 1986, BioTechniques 4:214; Gillies et al., 1989, J. Immunol. Methods 125:191-202、ならびに米国特許第５，８０７，７１５号、第４，８１６，５６７号、第４，８１６，３９７号および第６，３３１，４１５号を参照せよ（上記文献は、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４６１】
ヒト化抗体とは、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有しているフレームワーク領域および非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有しているＣＤＲを含んでおり、所定の抗原に結合することができる抗体もしくはその変異型、またはそれらの断片である。ヒト化抗体は、少なくとも１つ（通常は２つ）の可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、Ｆｖ）のほぼすべてを含んでいる。当該可変ドメインの、全部またはほぼ全部の上記ＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域と対応しており、全部またはほぼ全部の上記フレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン共通配列のフレームワーク領域である。好ましくは、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含んでいる。当該定常領域は、通常は、ヒト免疫グロブリンの定常領域である。通常、上記抗体は、軽鎖および少なくとも重鎖の可変ドメインの両方を有する。上記抗体はまた、上記重鎖のＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域およびＣＨ４領域を含んでいてよい。上記ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＥ、ならびに任意のアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含んでいる）を含んでいる免疫グロブリンの任意のクラスから選択され得る。上記ヒト化抗体が細胞障害活性を示すことが望ましい場合、定常ドメインは、通常、補体結合定常ドメインであり、上記クラスは、通常、ＩｇＧ１である。このような細胞障害活性が望ましくない場合、上記定常ドメインは、上記ＩｇＧ２クラスのものであり得る。本発明のある実施形態において用いられ得るＶＬ定常ドメインおよびＶＨ定常ドメインの例は、Johnson et al. (1997) J. Infect. Dis. 176, 1215-1224に記載されているＣ−カッパおよびＣ−ガンマ−１（ｎＧ１ｍ）、ならびに米国特許第５，８２４，３０７号に記載されているそれらを含んでいるが、制限されない。上記ヒト化抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプからの配列を含んでいてよく、特定の定常ドメインを選択して望ましいエフェクター効果を最適化することは、上記技術分野における通常の技能の範囲内にある。ヒト化抗体の上記フレームワーク領域およびＣＤＲ領域は、親配列と正確に一致している必要はない。例えば、ドナーのＣＤＲまたは共通フレームワークは、少なくとも１つの残基の置換、挿入または欠失により突然変異を起こされ、その結果、当該部位における上記ＣＤＲまたはフレームワークの残基が、共通している抗体または移入されている抗体のいずれとも一致していなくてもよい。しかし、このような突然変異は多くない。通常、上記ヒト化抗体の残基の少なくとも７５％は、親ＦＲ配列および親ＣＤＲ配列の残基と一致し、より多くの場合は９０％、最も好ましくは９５％以上である。ヒト化抗体は、上記技術分野において知られている種々の技法を用いて産生され得る。当該技法は、ＣＤＲ移植（欧州特許第ＥＰ２３９，４００号、国際公開公報第ＷＯ９１／０９９６７号、ならびに米国特許第５，２２５，５３９号、第５，５３０，１０１号および第５，５８５，０８９号）、上張り(veneering)または表面の付け替え(resurfacing)（欧州特許第ＥＰ５９２，１０６��および第ＥＰ５１９，５９６号、Padlan, 1991, Molecular Immunology 28(4/5):489-498; Studnicka et al., 1994, Protein Engineering 7(6):805-814;およびRoguska et al., 1994, PNAS 91:969-973）、チェーンシャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）ならびに、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、ＷＯ９３１７１０５、Tan et al., J. Immunol. 169:1119 25 (2002); Caldas et al., Protein Eng. 13(5):353-60 (2000); Morea et al., Methods 20(3):267 79 (2000); Baca et al., J. Biol. Chem. 272(16):10678-84 (1997); Roguska et al., Protein Eng. 9(10):895 904 (1996); Couto et al., Cancer Res. 55 (23 Supp):5973s-5977s (1995); Couto et al., Cancer Res. 55(8):1717-22 (1995); Sandhu J S, Gene 150(2):409-10 (1994);およびPedersen et al., J. Mol. Biol. 235(3):959-73 (1994)に開示されている技法を含んでいるが、制限されない。米国公開公報第ＵＳ２００５／００４２６６４  Ａ１（２００５年２月２４日）をもまた参照せよ（上記文献は、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる）。多くの場合、上記フレームワーク領域におけるフレームワークの残基は、上記ＣＤＲのドナー抗体からの対応している残基と置換され、抗原を結合することが変換（好ましくは改良）されている。これらのフレームワークの置換は、常法により（例えば、抗原を結合するために重要なフレームワークの残基を特定するためのＣＤＲおよびフレームワークの残基の相互作用を設計、および特定の位置における通常でないフレームワークの残基を特定するための配列の比較により）特定される（例えば、Queen et al., 米国特許第５，５８５，０８９号およびReichmann et al., 1988, Nature 332:32を参照せよ。上記文献は、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４６２】
単一ドメイン抗体（例えば、軽鎖を欠いている抗体）は、常法により産生され得る。Riechmann et al., 1999, J. Immunol. 231:25-38; Nuttall et al., 2000, Curr. Pharm. Biotechnol. 1(3):253-263; Muylderman, 2001, J. Biotechnol. 74(4):277302、米国特許第６，００５，０７９号、ならびに国際公開公報第ＷＯ９４／０４６７８号、第ＷＯ９４／２５５９１号およびＷＯ０１／４４３０１号を参照せよ（上記文献のそれぞれは、言及により、その全体が本明細書に組み込まれる）。
【０４６３】
さらに、ｈＬＩＧＨＴ抗原に特異的に結合する抗体は、当業者によく知られている技法を用いて、抗原に「擬態する」抗イディオタイプ抗体を生み出すために、今度は利用され得る（例えば、Greenspan & Bona, 1989, FASEB J. 7(5):437-444およびNissinoff, 1991, J. Immunol. 147(8):2429-2438を参照せよ）。
【０４６４】
（キット）
本発明はまた、本発明の薬学的組成物の成分の１つ以上（本明細書において提供されている抗体または断片の１つ以上など）で満たされている容器の１つ以上を備えている、薬学上または診断上のパックまたはキットを提供する。薬学的製品または生物学的製品の製造、使用または販売を規制している政府機関による指示の形態における警告（当該警告は、ヒトへの投与のための製造、使用または販売の機関による認定（例えば、承認番号）を反映している）は、このような（複数の）容器と、任意に関連付けられ得る。
【０４６５】
本発明は、上述の方法において用いられ得るキットを提供する。一実施形態において、キットは、本発明の抗体（好ましくは精製されている抗体）を、１つ以上の容器の中に含んでいる。特定の実施形態において、本発明のキットは、実質的に単離されているｈＬＩＧＨＴ抗原を、対照として含んでいる。好ましくは、本発明のキットは、上記ｈＬＩＧＨＴ抗原と反応しないコントロール抗体を、さらに含んでいる。他の特定の実施形態において、本発明のキットは、修飾されている抗体のｈＬＩＧＨＴ抗原に結合することを検出するための手段を含んでいる（例えば、上記抗体が、検出できる基質（蛍光化合物、酵素の基質、放射性の化合物もしくは発光化合物など）と結合されていてよく、または一次抗体を認識する二次抗体が、検出できる基質と結合されていてよい）。特定の実施形態において、上記キットは、組換えにより産生されているｈＬＩＧＨＴ抗原または化学的に合成されているｈＬＩＧＨＴ抗原を含んでいてよい。上記キットにおいて提供されている上記ｈＬＩＧＨＴ抗原はまた、固体担体に付属されていてよい。さらに特定の実施形態において、上述されているキットの上記検出する手段は、ｈＬＩＧＨＴ抗原が付属されている固定担体を含んでいる。このようなキットはまた、付属されていない、受容体が標識されている、非ヒト抗体を含んでいてよい。当該実施形態において、上記抗体の上記ｈＬＩＧＨＴ抗原に結合することは、上記受容体が標識されている抗体の結合することによって検出され得る。
【０４６６】
「保存的なアミノ酸置換」は、１つのアミノ酸を、類似している構造的特性および／または化学的特性を有している他のアミノ酸と置換すること（ロイシンのイソロイシンもしくはバリンとの置換、アスパラギン酸塩のグルタミン酸塩との置換、またはトレオニンのセリンとの置換など）に起因している。したがって、特定のアミノ酸配列の「保存的な置換」とは、ポリペプチドの活性にとって重要でないアミノ酸の置換、または重要なアミノ酸の置換であってもペプチドの活性（すなわち、上記ペプチドの血液脳関門（ＢＢＢ）を突破するための能力）を低減させないような、類似している特性（例えば、酸性、塩基性、正電荷または負電荷を帯びている、極性または非極性など）を有している他のアミノ酸とのアミノ酸の置換を表している。機能的に類似しているアミノ酸を規定している、保存的な置換の表は、上記技術分野においてよく知られている。例えば、以下の６つの群は、それぞれ互いに保存的な置換であるアミノ酸を含んでいる。（１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；（２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；（３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；（４）アルギニン（Ｒ）、リシン（Ｋ）；（５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；および（６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）（Creighton, Proteins, W. H. Freeman and Company (1984)をもまた参照せよ。言及により、その全体が組み込まれる）。いくつかの実施形態において、単一のアミノ酸またはアミノ酸の少ない割合を変換、追加または除去する、個々の置換、欠失または付加はまた、変化がペプチドの活性を低減しないならば、「保存的な置換」と見做され得る。挿入または欠失は、通常、約１〜５アミノ酸の範囲にある。保存的なアミノ酸の選択は、ペプチドにおける置換されるべきアミノ酸の位置に基づいて選択され得る（例えば、上記アミノ酸がペプチドの外側にあり溶媒に対して露出しているか、または内側にあり溶媒に対して露出していないか）。
【０４６７】
代わりの実施形態において、存在しているアミノ酸の位置、すなわち当該アミノ酸の溶媒に対する露出（すなわち、内部に局在しており溶媒に対して露出していないアミノ酸と比較するとき、上記アミノ酸が溶媒に対して露出されているかどうか、またはペプチドもしくはポリペプチドの外表面にあるかどうか）に基づいて、上記存在しているアミノ酸を置換するアミノ酸を選択することができる。このような保存的なアミノ酸置換の選択は、上記技術分野においてよく知られている。例えば、Dordo et al, J. Mol Biol, 1999, 217, 721-739およびTaylor et al, J. Theor. Biol. 119(1986);205-218およびS. French and B. Robson, J. Mol. Evol. 19(1983)171に開示されているように。したがって、タンパク質またはペプチドの外側のアミノ酸（すなわち、溶媒に対して露出されているアミノ酸）にとって適切な、保存的なアミノ酸置換を選択し得る。例えば、以下の置換が用いられ得るが、制限されない。すなわち、ＹのＦとの置換、ＴのＳまたはＫとの置換、ＰのＡとの置換、ＥのＤまたはＱとの置換、ＮのＤまたはＧとの置換、ＲのＫとの置換、ＧのＮまたはＡとの置換、ＴのＳまたはＫとの置換、ＰのＡとの置換、ＥのＤまたはＱとの置換、ＮのＤまたはＧとの置換、ＲのＫとの置換、ＧのＮまたはＡとの置換、ＴのＳまたはＫとの置換、ＤのＮまたはＥとの置換、ＩのＬまたはＶとの置換、ＦのＹとの置換、ＳのＴまたはＡとの置換、ＲのＫとの置換、ＧのＮまたはＡとの置換、ＫのＲとの置換、ＡのＳ、ＫまたはＰとの置換。
【０４６８】
代わりの実施形態において、タンパク質またはペプチドの内側のアミノ酸にとって適切な、取り囲まれている保存的なアミノ酸置換をまた選択し得る。例えば、アミノ酸がタンパク質またはペプチドの内側（すなわち、上記アミノ酸は溶媒に対して露出されていない）にあるため、適切な保存的な置換を用い得る。例えば、以下の保存的な置換を用い得るが、制限されない。すなわち、ＹがＦと置換される、ＴがＡまたはＳと置換される、ＩがＬまたはＶと置換される、ＷがＹと置換される、ＭがＬと置換される、ＮがＤと置換される、ＧがＡと置換される、ＴがＡまたはＳと置換される、ＤがＮと置換される、ＩがＬまたはＶと置換される、ＦがＹまたはＬと置換される、ＳがＡまたはＴと置換される、およびＡがＳ、Ｇ、ＴまたはＶと置換される。いくつかの実施形態において、非保存的なアミノ酸置換はまた、変異型の用語の中に含まれている。
【０４６９】
本明細書に使用されるとき、「抗体」とは、ＩｇＧ分子、ＩｇＭ分子、ＩｇＡ分子、ＩｇＤ分子もしくはＩｇＥ分子、またはそれらの抗原体特異的な抗体断片（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合されているＦｖ、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体、閉構造を取っている多特異性抗体(closed conformation multispecific antibody)、ジスルフィド結合されているｓｃｆｖ、二重特異性抗体を含んでいるが、制限されない）を表している。当該抗体は、自然に抗体を産生する任意の種に由来しているもの、または組換えＤＮＡ技術によって創作されたもののいずれでもよい。また、当該抗体は、血清、Ｂ細胞、ハイブリドーマ、トランスフェクトーマ、酵母または細菌のいずれから単離されるものでもよい。抗体は、通常の技術を用いてヒト化され得る。
【０４７０】
本明細書において記載されているとき、「抗原」とは、抗体上の結合部位によって結合される分子である。通常、抗原は抗体リガンドによって結合され、インビボでの抗体応答を上昇させることができる。抗原は、ポリペプチド、タンパク質、核酸もしくは他の分子、またはそれらの部分であり得る。用語「抗原決定基」とは、抗原結合性の分子によって（より詳しくは、当該分子の抗原結合部位によって）認識される、抗原上のエピトープを表している。
【０４７１】
本明細書に使用されるとき、用語「抗体断片」とは、免疫グロブリンの可変ドメインまたは免疫グロブリンの可変ドメイン配列の少なくとも１つを含んでおり、所定の抗原を特異的に結合するポリペプチドを表している。抗体断片は、抗体または抗体の抗原結合ドメインを含んでいるポリペプチドを含み得る。いくつかの実施形態において、抗体断片は、モノクローナル抗体またはモノクローナル抗体の抗原結合部位を含んでいるポリペプチドを含み得る。例えば、抗体は、重鎖（Ｈ鎖）の可変領域（本明細書においてＶＨと省略されている）、および軽鎖（Ｌ鎖）の可変領域（本明細書においてＶＬと省略されている）を含み得る。他の例において、抗体は、２つの重鎖（Ｈ鎖）の可変領域および２つの軽鎖（Ｌ鎖）の可変領域を含んでいる。用語「抗体断片」は、抗体の抗原結合断片（例えば、一本鎖抗体、ＦａｂおよびｓＦｓｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ならびにドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（例えば、de Wildt et al., Eur J. Immunol. 1996; 26(3):629-39を参照せよ。上記文献は、言及により、本明細書にその全体が組み込まれる））および完全な抗体を包含している。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（ならびに、それらのサブタイプおよび組合せ）の構造上の特徴を有し得る。抗体は、任意の出所（マウス、ウサギ、ブタ、ラットおよび霊長類（ヒトおよび非ヒト霊長類）ならびに霊長類化抗体を含んでいる）に由来し得る。抗体はまた、ミディボディ(midibodies)、ヒト化抗体、キメラ抗体などを含んでいる。
【０４７２】
本明細書に使用されるとき、「抗体の可変ドメイン」とは、相補性決定領域（ＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）およびフレームワーク領域（ＦＲ）のアミノ酸配列を含んでいる、抗体分子の軽鎖および重鎖の部分を表している。ＶＨとは、重鎖の可変ドメインを表している。ＶＬとは、軽鎖の可変ドメインを表している。本発明において用いられている方法によると、ＣＤＲおよびＦＲに割り当てられているアミノ酸の位置は、Ｋａｂａｔ（Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991)）によって、またはＩＭＧＴ命名法によって定義され得る。
【０４７３】
本明細書に使用されるとき、用語「抗体結合部位」とは、抗体のＣＤＲの１つ以上を含んでおり、抗原を結合することのできるポリペプチドまたはドメインを表している。例えば、上記ポリペプチドは、ＣＤＲ３（例えば、ＨＣＤＲ３）を含んでいる。例えば、上記ポリペプチドは、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２（例えば、ＨＣＤＲ１およびＨＣＤＲ２）、または抗体の可変ドメインのＣＤＲ１〜３（例えば、ＨＣＤＲ１〜３）を含んでいる。例において、上記抗体結合部位は、単一の可変ドメイン（例えば、ＶＨドメインまたはＶＬドメイン）によって与えられる。他の例において、上記結合部位は、ＶＨ／ＶＬ対、または２つ以上の当該対を含んでいる。
【０４７４】
本明細書に使用されるとき、「遺伝子型を特定すること」とは、ゲノム中の１つ以上の位置における、細胞および／または対象の特定の対立遺伝子の構成を決定すること（例えば、当該位置における核酸配列を決定することによって）の工程を表している。遺伝子型を決定することは、核酸の分析および／または核酸レベルにおける分析を表している。本明細書に使用されるとき、「表現型を特定すること」とは、細胞および／または対象の、発現産物の識別情報および／または構成を決定すること（例えば、発現産物のポリペプチド配列を決定することによって）の工程を表している。表現型を特定することは、タンパク質の分析および／またはタンパク質レベルにおける分析を表している。
【０４７５】
本明細書に使用されるとき、用語「処置する」「処置」「処置すること」または「回復」とは、治療的な処置を表している。当該処置の目的は、疾患または障害に関連付けられている好ましくない健康状態の進行または重症度を、逆転すること、緩和すること、回復すること、抑制すること、速度を遅くすること、または停止させることである。用語「処置すること」は、好ましくない健康状態、疾患または障害の悪影響または症状の少なくとも１つを、低減することまたは緩和することを包含している。１つ以上の症状または臨床上の指標が低減されるならば、一般的に処置は「効果的」である。あるいは、疾患の進行が低減または中断されるならば、処置は「効果的」である。すなわち、「処置」は症状または指標の改善だけでなく、処置がない場合において予想される状態と比較した、症状の進行または悪化の停止（または少なくとも速度を遅くすること）をも包含している。検出できるにしろ検出できないにしろ、有益な臨床上の効果または望ましい臨床上の効果は、１つ以上の症状の緩和、疾患の拡大の減退、安定化されている（すなわち、悪化していない）疾患の状態、疾患の進行の遅延もしくは鈍化、疾患の状態の回復もしくは緩和、（局所的にせよ全身的にせよ）寛解、および／または低下される死亡率を包含しているが、制限されない。用語「疾患の『処置』」はまた、上記疾患の症状または副作用からの救済を与えること（緩和的療法を含んでいる）を包含している。処置については、有効で完全な治癒であることは、考えられていない。方法は、特定の態様において、治癒をも含み得る。
【０４７６】
本明細書に使用されるとき、用語「薬学的組成物」とは、有効成分と薬学的に許容可能な担体（例えば、製薬産業において常用されている担体）との組み合わせを表している。用語「薬学的に許容可能」は、正常な医学的判断の範囲内において、ヒトおよび動物の組織と接触する使用にとって適切であり、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答または他の問題もしくは合併症がなく、妥当な便益／リスク比に相応しい化合物、物質、組成物および／または剤型を表すために、本明細書において採用されている。
【０４７７】
本明細書に使用されるとき、用語「投与すること」とは、薬剤の送達の少なくとも一部が望ましい部位にある結果となる方法または経路による、本明細書に開示されているような化合物の対象内部への配置を表している。本明細書に開示されている化合物を含んでいる薬学的組成物は、結果的に上記対象における有効な処置となる、任意の適切な経路によって投与され得る。
【０４７８】
多元的な組成物は、個別または同時に投与され得る。個別投与とは、２つの組成物が異なる時刻において（例えば、少なくとも１０分、２０分、３０分もしくは１０〜６０分の間隔を空けて、または１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間の間隔を空けて）投与されることを表している。組成物を、２４時間の間隔を空けて、またはそれ以上の間隔を空けて投与することもできる。あるいは、２つ以上の組成物は、同時に（例えば、１０分未満または５分未満の間隔を空けて）投与され得る。いくつかの態様において、同時に投与される組成物は、混合物（それぞれの成分について、類似しているまたは異なっている持続性機構を伴っている、または伴っていない）として投与され得る。
【０４７９】
本明細書に使用されるとき、「承認番号」または「製造承認番号」とは、規制機関によって発行される番号を表している。当該番号に関して、機関は、特定の医学的製品および／または医学的組成物が、上記機関の管轄下にある地域において市場に流通されてよいことおよび／または売りに出されてよいことを決定する。本明細書に使用されるとき、「規制機関」とは、例えば医学的製品および／または医学的組成物の安全性および有効性評価すること、ならびに所定の地域における上記製品および／または組成物の販売／市場流通を支配することに責任のある機関の１つを表している。米国における食品医薬品局（ＦＤＡ）および欧州における欧州薬品庁（ＥＰＡ）は、このような規制機関のほんの２例である。他の制限されない例は、ＳＤＡ、ＭＰＡ、ＭＨＰＲＡ、ＩＭＡ、ＡＮＭＡＴ、香港衛生署薬物弁公室、ＣＤＳＣＯ、ＭｅｄｓａｆｅおよびＫＦＤＡを含み得る。
【０４８０】
本明細書に使用されるとき、「注射装置」とは、注射を執り行うために設計されている装置を表している。当該注射は、上記注射装置をヒトの組織（通常は、皮下組織）に対して一時的に流体的に連結することの工程を含んでいる。注射は、ある量の液体薬物を上記組織内に投与すること、ならびに上記注射装置を上記組織から分離させることまたは取り除くことをさらに包含している。いくつかの実施形態において、注射装置は、静脈内装置またはＩＶ装置（標的組織が循環器系内部にある血液（例えば、静脈内の血液）である場合に用いられる注射装置の種類）であり得る。一般的であるが制限されない注射装置の例は、注射針と注射器である。
【０４８１】
本明細書に使用されるとき、「緩衝液」とは、ｐＨの激しい変化を受けることなく、特定の量の酸または塩基を吸収することのできる化学薬品を表している。
【０４８２】
本明細書に使用されるとき、「梱包すること」とは、流通および／または使用向きの単位の中において、構成要素がどのように整理および／または拘束されているかを表している。梱包することは、無菌、標識化などを保つための、例えば、箱、袋、注射器、アンプル、ガラス瓶、チューブ、クラムシェル包装、バリアおよび／または容器を含み得る。
【０４８３】
本明細書に使用されるとき、「指示」とは、物品の直接の容器上にある、書かれている、印刷されている、または図式的な事柄の表示を表している（例えば、薬学的に活性な薬剤が入っているガラス瓶上に表示されている、書かれているもの、または組成物を含んでいるキットに備えられている、当該組成物および当該製品の使用に関する詳細）。指示は、投与または実行されることが予期されるときの処置の方法を示している。
【０４８４】
本明細書に使用されるとき、用語「含んでいる（備えている、包含している）」("comprising" or "comprises")とは、抗体、断片、使用、組成物、方法ならびに、上記方法および組成物にとって必須であるそれらのそれぞれの（複数の）構成要素に関して用いられている。ただし、明示されていない要素（必須にせよ必須でないにせよ）の包含関係に対しては、未決である。
【０４８５】
用語「からなる("consisting of")とは、本明細書に記載されているときの抗体、断片、使用、組成物、方法およびそれらのそれぞれの構成要素が、本明細書の当該記載において挙げられていない任意の要素を排除していることを表している。
【０４８６】
本明細書に使用されるとき、用語「本質的に（…）からなる("consisting essentially of")」とは、これらの要素が、所定の実施形態のために必要とされていることを表している。上記用語は、当該実施形態の、基本的かつ新規もしくは機能上の（複数の）特質に実質的に影響を与えない要素の存在を許容する。
【０４８７】
単数の用語「a」、「an」および「the」は、そうではないと文脈により明白に示されない限り、複数の指示物を包含している。同様に単語「または（もしくは）(or)」は、そうではないと文脈により明白に示されない限り、「および（ならびに）(and)」を包含していることが意図されている。本明細書に記載されているものに類似しているまたは均等である方法および物が、本開示の実施または試験において用いられ得るが、しかし、適切な方法および物は、以下に開示されている。略語「例えば("e.g.")」は、ラテン語の「exempli gratia」に由来し、本明細書では、制限されていない例を示すために用いられている。したがって、上記略語「e.g.」は、用語「例えば("for example")」の類語である。
【０４８８】
細胞生物学および分子生物学における一般的な用語の定義は、"The Merck Manual of Diagnosis and Therapy", 19th Edition, Merck Research Laboratories刊, 2006 (ISBN 0-911910-19-0); Robert S. Porter et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, Blackwell Science Ltd.刊, 1994 (ISBN 0-632-02182-9); Benjamin Lewin, Genes X, Jones & Bartlett Publishing刊, 2009 (ISBN-10: 0763766321); Kendrew et al. (eds.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, VCH Publishers, Inc.刊, 1995 (ISBN 1-56081-569-8)およびCurrent Protocols in Protein Sciences 2009, Wiley Intersciences, Coligan et al., eds.に見出され得る。
【０４８９】
そうではないと言明されていない限り、本発明は、標準的な手法（例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4 ed.), ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., USA (2012); Davis et al., Basic Methods in Molecular Biology, Elsevier Science Publishing, Inc., New York, USA (1995); またはMethods in Enzymology: Guide to Molecular Cloning Techniques Vol.152, S. L. Berger and A. R. Kimmel Eds., Academic Press Inc., San Diego, USA (1987); Current Protocols in Protein Science (CPPS) (John E. Coligan, et. al., ed., John Wiley and Sons, Inc.); Current Protocols in Cell Biology (CPCB) (Juan S. Bonifacino et. al. ed., John Wiley and Sons, Inc.); およびCulture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique by R. Ian Freshney, Publisher: Wiley-Liss; 5th edition (2005); Animal Cell Culture Methods (Methods in Cell Biology, Vol. 57, Jennie P. Mather and David Barnes editors, Academic Press, 1st edition, 1998)に記載されているような）を用いて実行された（上記文献は、言及により、その全体が本明細書にすべて組み込まれる）。
【０４９０】
他の用語は、本明細書における本発明の種々の態様の記載の範囲内において定義されている。
【０４９１】
本出願の全体にわたって挙げられている、すべての特許文献および他の文献（参照文献、発行されている特許、公開されている特許出願および同時係属中の特許出願を含んでいる）は、記載および開示することの目的のための言及により、本明細書に明確に組み込まれている（例えば、本明細書に記載されている技術と関連して用いられ得る、このような刊行物に記載されている方法論）。当該刊行物は、単に、それらの開示が本出願の出願日に先立っていることを理由に与えられている。この点について、先願の発明によって、または他の任意の理由のために、本発明者に上記開示の日をより早めることの権利がないことの承認として、何事も解釈されるべきでない。これらの文書の、日付に関するすべての言明または内容に関するすべての表示は、本出願人にとって利用可能な情報に基づいており、当該文書の日付または内容の正確さに関する何らの承認を構成していない。
【０４９２】
本開示の実施形態の記載は、網羅的であること、または開示されている特定の形態に本開示を制限することを意図されていない。本開示の特定の実施形態および本発明の例は、本明細書において説明の目的のために記載されているのに対し、当業者が認識するとき、種々の均等な修正は、本開示の範囲内にあり得る。例えば、方法の工程または機能が所定の順序で提示されているのに対し、他の実施形態では、異なる順序で機能を果たし得、または実質的に同時に機能を果たし得る。本明細書において提供されている開示の教示は、必要に応じて、他の手法または方法に適用され得る。本明細書に記載されている種々の実施形態は、さらなる実施形態を提供するために組み合わされ得る。本開示の態様は、必要ならば、以上の文献および出願の構成、機能および概念を採用して、本開示のよりさらなる実施形態を提供するために修正され得る。さらに、生物学的機能の均等性を考慮した結果、生物学的または化学的反応の種類または量に影響することなく、タンパク質の構造においていくつかの変更が成され得る。その詳細な記載を踏まえ、本開示は、これらの変更および他の変更を成され得る。すべてのこのような修正は、添付されている請求項の範囲内に含まれていると意図されている。
【０４９３】
上述の任意の実施形態の特定の要素は、他の実施形態における要素と組み合わされ得、または置換され得る。さらに、本開示のある実施形態に関連付けられている利点が、当該実施形態の文脈において記載されたのに対し、他の実施形態はまた、当該利点を発揮していてよい。そして、すべての実施形態が、本開示の範囲内に入るために、当該利点を発揮している必要があるわけではない。
【０４９４】
本明細書に記載されている特定の構成、態様、例、条項および実施形態は、説明の目的で示されており、本発明の制限として示されていないことが理解される。本発明の主要な特徴は、本発明の範囲から離れることなく、種々の実施形態において採用され得る。本明細書に記載されている特定の手法に対する多数の均等物を、当業者は認識するか、または単なる定型的な研究を用いて確かめることができる。このような均等物は、本発明の範囲内にあり、請求項により保護されていると考えられる。本明細書において言及されているすべての刊行物および特許出願は、本発明が属している当業者の技能の水準を示している。個々の刊行物または特許出願が明確かつ個別に示されて、言及により組み込まれるのと同じ程度に、すべての刊行物および特許出願は、言及により、本明細書に組み込まれる。請求項および／または本明細書において、用語「備えている（含んでいる、包含している）("comprising")」と共に使用されているときの、単語「ａ」または「ａｎ」の使用は、「１つの(one)」を意味し得るが、「１つ以上の("one or more")」、「少なくとも１つの("at least one")」および「１つまたは１つ以上の("one or more than one")」の意味ともまた両立している。本開示は、単なる選択肢および「および／または("and/or")」を表す定義を裏付けているが、しかし、請求項における用語「または（もしくは）("or")」の使用は、単なる選択肢を表すと明示的に示されていない限り、または選択肢が互いに背反でない限り、「および／または」を意味するために用いられている。本出願の全体にわたって、用語「約("about")」は、装置、値を決定するために採用されている方法、または研究対象に存在している変異に関して、内在的な誤差の変異を上記値が含んでいることを示すために用いられている。
【０４９５】
本明細書および（複数の）請求項において用いられているとき、単語「備えている（含んでいる、包含している）("comprising")」（ならびに「comprise」および「comprises」などの「備えている」の任意の形）、「有している("having")」（ならびに「have」および「has」などの「有している」の任意の形）、「備えている（含んでいる、包含している）("including")」（ならびに「includes」および「include」などの「備えている」の任意の形）または「含んでいる（有している）("containing")」（ならびに「contains」および「contain」などの「含んでいる」の任意の形）は、包含的または無制限的であり、列挙されていない追加の要素または方法の工程を排除していない。
【０４９６】
本開示の任意の箇所は、文脈からそうではないと明白である場合を除いて、本開示の他の任意の箇所と組み合わせて解釈され得る。
【０４９７】
本出願において開示または請求されている、すべての構成および／または方法は、本開示を踏まえて、過度の実験なしに成され、かつ実行され得る。本発明の構成および方法は、好ましい実施形態の観点から開示されてきた。しかし、本発明の概念、精神および範囲から離れることなく、本明細書に記載されている構成および／または方法、ならびに上記方法の工程もしくは工程の順序に変更が適用され得ることは、当業者にとって明白である。当業者にとって明白である、そのような類似している置換および修正は、添付されている請求項によって定義されている本発明の精神、範囲および概念の内にあると見做される。
【０４９８】
〔実施例〕
［実施例１］
（抗原の調合、免疫を与える手法、およびハイブリドーマの生成）
以下の実施例は、Ｋｙｏｕｓｅ（商標）システム（例えば、ＷＯ２０１１００４１９２を参照せよ）を用いた抗ヒトＬＩＧＨＴモノクローナル抗体のパネルの、精製および特定の詳細な説明を提供する。本目的のため、多数のヒト免疫グロブリン遺伝子を含んでいる遺伝子改変マウスに、可溶性組換えヒトＬＩＧＨＴまたは、マウスの胎児線維芽（ＭＥＦ）細胞に提示された表面発現されるヒトＬＩＧＨＴで免疫を与えた。複数部位における急速な免疫化（Rapid Immunisation at Multiple Sites）の処理計画と同様に、従来の腹腔内注射を含んでいる種々の免疫を与える処理計画が設定され、数週間にわたって動物を追加免疫した（詳細な方法は以下を参照せよ）。各処理計画の最後には、二次的なリンパ系組織（脾臓、場合によっては、リンパ節など）を除去した。安定的ハイブリドーマ細胞株を生み出すため、単一の細胞の懸濁液中へと組織を調合し、ＳＰ２／０細胞と組織を融合させた。
【０４９９】
（材料および方法）
組換えカニクイザルＬＩＧＨＴおよび組換えヒトＬＩＧＨＴ（２１４Ｅアリルおよび２１４Ｋアリル）の、クローニングの発現および精製：
ヒトＬＩＧＨＴ（２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ  この中で、すべてのサブユニットは２１４Ｅを有した）の細胞外ドメイン、およびカニクイザル（Macaca fascicularis）ＬＩＧＨＴの細胞外ドメインをコードしているｃＤＮＡを、標準的な制限酵素による消化および連結を用いて、ｐＲＥＰ４発現プラスミド（Invitrogen）へとクローニングした。２１４Ｅ  ＬＩＧＨＴのｐＲＥＰ４ベクターをテンプレートとして用いて、代わりのヒトの形態（２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴ  この中で、すべてのサブユニットは２１４Ｋを有した）を作製し、２１４Ｋの変異型を、部位を指定されている突然変異誘発によって導入した。コンストラクトは、精製を助けるため、ＦＬＡＧペプチドのモチーフも含んでいた。正確な配列構成を裏付けるため、コンストラクトを配列決定した。
【０５００】
組換えタンパク質を生成するため、細胞株を適合させたInvitrogen社のFreestyle（商標）のＣＨＯ−Ｓの懸濁液を用いて、ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅ（すなわち、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ）、ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｋ（すなわち、２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴ）およびカニクイザルＬＩＧＨＴを一過的に発現させた。ＰＥＩ（ポリエチレンイミンＭＷ  ４００００）を用いて、上記細胞にプラスミドをトランスフェクションし、精製のために上澄を収集する前に１３日の期間、過剰増殖させた。細胞の追加免疫の生産性を助けるため、および細胞の寿命を伸ばすため、過剰増殖の工程の間、GE Healthcare社のActiCHO（商標）フィードＡおよびActiCHO（商標）フィードＢで細胞に栄養を与えた。上記過剰増殖の工程の間、細胞の成長および細胞の生存率を監視するため、サンプルを定期的に採取した。
【０５０１】
ＦＬＡＧ標識されたＬＩＧＨＴタンパク質は、２段階の工程において、精製された；まず、ＣＨＯ−Ｓの発現から、清澄化した組織培養の上澄を、Ｍ２  抗ＦＬＡＧのアフィニティー・クロマトグラフィーを用いて、精製した。その後、ＬＩＧＨＴタンパク質を含んでいる溶出された分画を、サイズ排除クロマトグラフィーにかけ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析によって純度を評価し、ＯＤ２８０ｎｍにおいて読み取っている分光光度計によって定量化した。
【０５０２】
２１４Ｅ  ヒトＬＩＧＨＴおよび２１４Ｋ  ヒトＬＩＧＨＴを発現している、安定してトランスフェクションされた、ＭＥＦ細胞およびＣＨＯ−Ｓ細胞の生成：
完全な長さの２１４Ｅ  ヒトＬＩＧＨＴの配列および完全な長さの２１４Ｋ  ヒトＬＩＧＨＴの配列は、哺乳類での発現のために最適化され、細胞のゲノムへの安定した組み込みを促進している、３´のｐｉｇｇｙＢａｃの特異的な末端反復配列および５´のｐｉｇｇｙＢａｃの特異的な末端反復配列によって挟まれたＣＭＶプロモーターの下流の発現ベクターへとクローニングされたコドンであった（"A hyperactive piggyBac transposase for mammalian applications"; Yusa K, Zhou L, Li MA, Bradley A, Craig NL. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Jan 25を参照せよ）。さらに、安定的細胞株の生成を促進するため、上記発現ベクターは、ピューロマイシンの選択カセットまたはネオマイシンの選択カセットのいずれかを含んでいた。製造業者の取扱説明書に従ってFreeStyle Maxのトランスフェクション試薬（Invitrogen）を用いて、マウス胎児線維芽（ＭＥＦ）細胞株（本株を生み出すために用いられた胚は、Ｃ５７ＢＬ６のメスのマウスと交配させた１２９Ｓ５から得た）に由来したインハウス（in-house）、およびＣＨＯ−Ｓ細胞へと、ｐｉｇｇｙＢａｃのトランスポゼースをコードしているプラスミドと共に、ｈＬＩＧＨＴの発現プラスミドをトランスフェクションした。トランスフェクションの２４時間後、安定的細胞株を選択するため、Ｇ４１８またはネオマイシンを培地に追加し、培地を３〜４日ごとに変えながら、少なくとも２週間生長させた。抗ヒトＬＩＧＨＴ−ＰＥに結合されている抗体（eBioscience, 12-2589-42）を用いて、ｈＬＩＧＨＴの発現を、フローサイトメトリーによって評価した。ＭＥＦの完全培地は、１０％ｖ／ｖのウシ胎児血清（Gibco）を追加した、ダルベッコ改変イーグル培地（Gibco）で構成された。ＣＨＯ−Ｓの完全培地は、８ｍＭのＧｌｕｔａｍａｘ（Gibco）を追加した、ＣＤ−ＣＨＯ培地で構成された。
【０５０３】
マウスに免疫を与えるためのＭＥＦ細胞の調合：
細胞培養培地を除去し、細胞を１×ＰＢＳで一度洗浄した。組織培養の表面から細胞をバラバラにするため、細胞を５分間トリプシンで処理した。細胞を回収し、１０％ｖ／ｖのウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含んでいる、完全培地の添加によって、トリプシンを中和した。その後、細胞を、３００×ｇで１０分間遠心し、２５ｍｌの１×ＰＢＳで洗浄した。細胞を数え、１×ＰＢＳ中、適切な濃度で再懸濁した。
【０５０４】
免疫を与える手法：
ＣＨＯ−Ｓ細胞によって発現されている可溶性の形態の２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴまたは、安定してトランスフェクションされたＭＥＦ細胞によって発現されている膜結合の形態の２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴで、トランスジェニックＫｙｍｉｃｅ（商標）に免疫を与えた。免疫を与える手法に従ってマウスを４つの群に分け、以下のように免疫を与えた：第１群には、１×１０Ｅ０７  ＭＥＦ−２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ細胞のみ（アジュバントを含まない１×ＰＢＳで再懸濁した）を与えた；第２群には、シグマアジュバントシステム（Sigma Adjuvant System）（Sigma S6322）で乳化させた、１×１０Ｅ０７  ＭＥＦ−２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ細胞を与えた；第３群は、シグマアジュバントで乳化させた、１×１０Ｅ０７  ＭＥＦ−２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ細胞および２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴタンパク質の交互の処理計画を受けた。当該処理計画中、タンパク質の交互の処理計画（１５μｇのタンパク質で開始し、続いて５μｇのタンパク質を低下させていく）およびＭＥＦ細胞の交互の処理計画に先立って、一次抗原の初回刺激（priming）を、ＭＥＦ細胞として腹腔内に与えた。最後の追加免疫のため、タンパク質と同様に、細胞を腹腔内に注射し、当該タンパク質は、静脈内に与えられた。第４群には、シグマアジュバントシステムで乳化させた、１×１０Ｅ０７  ＭＥＦ−２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴタンパク質を与えた（初回刺激として２５μｇを使用し、続く追加免疫のため、１５μｇ，１０μｇおよび５μｇを使用した）。
【０５０５】
細胞で免疫を与える際、上記アジュバントを１：１のｖ／ｖ割合で細胞と混合し、腹腔内に注射する前に、ピペッティングによって穏やかに混合した。タンパク質で免疫を与える際、上記アジュバントを１：１のｖ／ｖ割合でタンパク質と混合し、素早くボルテックスした。初回刺激する前にすべてのマウスを採血させ、その後３週間ごとに追加免疫した。少なくとも２週間の間隔をあけて、少なくとも３回連続して血液を集め、ＥＬＩＳＡまたはフローサイトメトリーに基づいたアッセイを用いて、ｈＬＩＧＨＴに特異的なＩｇＧの滴定量を解析した。融合およびハイブリドーマの生成のためのマウスを選択するため、滴定量のデータを使用した。最後の追加免疫は、組織の収集に先立つ３日前に投与した。脾臓組織を摘出し、ハイブリドーマ融合させた。ＭＥＦ−２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ細胞および組換えタンパク質（２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ）の組み合わせで免疫を与えられた第３群のマウスから、抗体のクローン３１Ａ１０および抗体のクローン６２Ｃ０１を単離した。
【０５０６】
複数部位における急速な免疫化：
シグマアジュバントシステム （Sigma S6322）で乳化させた、組換えによって発現されている２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび組換えによって発現されているｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｋの等量の混合物で免疫を与える前に、トランスジェニックＫｙｍｉｃｅ（商標）を、事前に採血した。すべての免疫化のため、イソフルランを用いてマウスを麻酔し、マウスの腹側の６か所において皮下にすべての注射を投与した（参考文献："Rapid Development of Affinity Matured Monoclonal Antibodies Using RIMMS"; Kilpatrick et al. Hybridoma, 1997）。マウスをホームケージ（home cage）に返し、回復を観察した。合計２５日にわたり、３日から４日ごとに、マウスを７回追加免疫した。膵臓組織およびリンパ節組織を、最後の追加免疫から２日後に摘出し、ハイブリドーマの融合のために使用した。末端の血液を回収し、標準的なＥＬＩＳＡのプロトコールを用いて、ｈＬＩＧＨＴに特異的なＩｇＧの滴定量を解析した。ＲＩＭＭＳ免疫化の処理計画を用いて、抗体のクローン４２Ａ０２，２９Ｃ０９，１４Ｂ０９，１３Ｈ０４，１１７Ｃ０６および１４４Ｆ０５を、本実験からすべて単離した。
【０５０７】
ｈＬＩＧＨＴを発現されているＣＨＯ−Ｓを用いた、ＦＡＣＳによる血清の滴定量の決定：
ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ｗ／ｖのＢＳＡ＋０．１％ｗ／ｖのＮａＮ３）で希釈された、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴもしくは２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴを発現しているＣＨＯ−Ｓ細胞、または未トランスフェクションのＣＨＯ−Ｓ細胞を、１ウェルにつきｌ×ｌ０Ｅ０５の密度で９６ウェルのＶ底プレート（Greiner）へと分注した。１５０μｌのＰＢＳで細胞を洗浄し、３００×ｇで３分間遠心した。上澄を吸引し、１５０μｌのＰＢＳを加えた。この洗浄工程を繰り返した。ＦＡＣＳ緩衝液でサンプルを希釈し、マウスの血清の滴定液を調合した。その後、この滴定液を５０μｌ／ウェル、細胞のプレートに加えた。免疫化による活性のレベルの変化を決定するため、免疫化の前の各動物からの血清を、ＦＡＣＳ緩衝液で１００分の１に希釈し、５０μｌ／ウェルを細胞に加えた。適切な参照抗体（抗ＬＩＧＨＴ抗体、R&D system、MAB６６４）またはマウスＩｇＧ１のコントロール抗体（Sigma）をＦＡＣＳ緩衝液で（１〜９μｇ／ｍｌの間に）希釈し、５０μｌを細胞に加えた。細胞を４℃で３０分間インキュベートした。１５０μｌのＰＢＳで２度細胞を洗浄し、各洗浄工程後に遠心し、（３００×ｇで３分間遠心した）上澄を吸引した。抗体結合を検出するため、ＡＰＣヤギ抗マウスＩｇＧ（Jackson ImmunoResearch）をＦＡＣＳ緩衝液で５００分の１に希釈し、５０μｌを上記細胞に加えた。細胞を４℃の暗闇で３０分間インキュベートした。１５０μｌのＰＢＳで２度細胞を洗浄し、各洗浄工程後に遠心し、（３００×ｇで３分間遠心した）上澄を吸引した。細胞を固定するため、１００μｌの２％ｖ／ｖのパラホルムアルデヒドを加え、細胞を４℃で３０分間インキュベートし、３００×ｇでの遠心によって細胞をペレット化し、５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液でプレートを再懸濁した。ＢＤ  ＦＡＣＳのアレイ機械を用いて、フローサイトメトリーによって、ＡＰＣのシグナル強度（相乗平均（geomean））を測定した。
【０５０８】
組換えｈＬＩＧＨＴを用いた、ＥＬＩＳＡによる血清の滴定量の決定：
マウスの血清のサンプルにおける滴定量を、リバースＬＩＧＨＴ  ＥＬＩＳＡのプロトコールを用いて決定した。抗マウスＩｇＧの捕捉抗体（Southern Biotech）（ＰＢＳで希釈された４μｇ／ｍｌ、５０μｌ／ウェル）を、９６ウェルの低い自家蛍光で高いタンパク質結合のプレート（Corstar）に、４℃で一晩吸収させた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することで過剰なＩｇＧを除去し、ＰＢＳ中で１％ｗ／ｖのウシ血清アルブミンと共に室温で１時間、上記ウェルをブロッキングし、その後、上記に記載されているように、プレートを洗浄した。試薬希釈剤（０．１％ｗ／ｖのＢＳＡ／ＰＢＳ）でサンプルを希釈し、マウスの血清の滴定液を調合した。その後、この滴定液の５０μｌ／ウェルをＥＬＩＳＡプレートに加えた。免疫化による活性のレベルの変化を決定するため、免疫化の前の各動物からの血清を、試薬希釈剤で１００分の１に希釈し、５０μｌ／ウェルをＥＬＩＳＡプレートに加えた。ビオチン化されたＬＩＧＨＴの結合のためのポジティブコントロールとして、１μｇ／ｍｌに希釈された抗ＬＩＧＨＴ抗体（R&D systems）を５０μｌ、プレートに加えた。マウスＩｇＧ１のアイソタイプコントロール（Sigma）は、ネガティブコントロールとして含まれており、試薬希釈剤で１μｇ／ｍｌに希釈され、ＥＬＩＳＡプレートに５０μｌ／ウェルを加えた。いくつかの事例において、関連のない抗原で免疫を与えられたマウスからの血清のサンプルを、１０００分の１に希釈し、上記ＥＬＩＳＡプレートに５０μｌ／ウェルを加えた。上記プレートを室温で少なくとも１時間インキュベートした。インキュベートに続いて、結合していないタンパク質を除去するため、上記のようにプレートを洗浄した。その後、ビオチン化されたＬＩＧＨＴ（試薬希釈剤中１００ｎｇ／ｍｌ；５０μｌ／ウェル）を上記プレートに加え、室温で１時間インキュベートした。結合していないビオチン化されたＬＩＧＨＴを、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で洗浄することによって除去し、残っているビオチン化されたＬＩＧＨＴを、DELFIA（登録商標）のアッセイ緩衝液（Perkin Elmer）で希釈されたストレプトアビジン−ユーロピウム３＋共役剤（streptavidin-Europium3+conjugate）（DELFIA（登録商標） detection, PerkinElmer）、または試薬希釈剤で希釈されたストレプトアビジン−ＨＲＰによって検出した。
【０５０９】
ストレプトアビジン−ＨＲＰの場合、上記で記載されているように上記プレートを洗浄し、５０μＬのＴＭＢ（Sigma）を上記プレートに加えた。その後、５０μＬの１Ｍの硫酸（Fluka analytical）を加えることによって、反応を停止させた。４５０ｎｍでのＯＤを、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー （PerkinElmer）で測定した。
【０５１０】
ストレプトアビジン−ユーロピウム３の場合、ＴＢＳ（トリス緩衝生理食塩水）−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）で上記プレートを洗浄し、２００μＬ／ウェルのＤＥＬＦＩＡ増強試薬（PerkinElmer）を上記プレートに加えた。時間分解蛍光を、６１５ｎｍにおいてＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー （PerkinElmer）で測定した。蛍光のデータを、ユーロピウムのカウントとしてプロットした。
【０５１１】
マウスの組織の単離および調合：
免疫を与えられたマウスから膵臓を摘出し、１×ＰＢＳで洗浄し、さらなる処理までの間、氷上に置いた。使用される場合、腋窩、鼠径部および腸間膜のリンパ節を除去し、さらなる処理までの間、氷上の、無菌の１×ＰＢＳ中に置いた。１×ＰＢＳ（Invitrogen）および３％の熱不活化されたＦＢＳ（Invitrogen）を含んでいる緩衝液中で、組織を調合した。４℃で１０分間、７００ｇでの遠心の前に、４５μｍの濾し器（BD Falcon）を通して組織をつぶし、３０ｍｌの３％のＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液ですすぐことによって、脾臓細胞を分散させた。赤血球を除去するため、４ｍｌの赤血球細胞溶解緩衝液（Red Blood Cell Lysis Buffer）（Sigma）中で、ペレット化された脾臓細胞を再懸濁した。４分のインキュベートの後、３％のＦＢＳ／１×ＰＢＳ緩衝液の添加によって、溶解反応を停止した。細胞の塊を４５μｍの濾し器で濾過した。さらなる手法のため、残っている脾臓細胞をペレット化した。ＫＭ０５０の実験のため、４℃で１０分間、７００ｇでの遠心の前に、４５μｍの濾し器（BD Falcon）を通して組織をつぶし、３０ｍｌの３％のＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液ですすぐことによって、上記リンパ節を分散させた。リンパ節は赤血球の溶解を受けなかった。さらなる手法のため、残っているリンパ節の細胞をペレット化した。
【０５１２】
ハイブリドーマの融合：
最後の追加免疫に続いて、脾臓またはリンパ節を摘出し、ＭＡＣＳ（登録商標）分離システム（MACS Separation system）を用いて、Ｂ細胞をポジティブセレクションの方法の対象とした。簡潔には、リンパ節を使用した場合、赤血球の溶解の後に、対応するマウスから上記脾臓細胞と共にこれらの細胞を溜め、合計の細胞数を決定した。抗マウスＩｇＧ１および抗マウスＩｇＧ２ａ＋ｂのマイクロビーズ（Miltenyi Biotec）を加える前に、１×１０Ｅ７の細胞につき８０μｌの３％のＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液中で細胞を再懸濁し、４℃で１５分間インキュベートした。その後、細胞／マイクロビーズの混合物を、磁気ＭＡＣＳセパレーター（magnetic MACS Separator）に置かれた、事前に湿らせたＬＳカラムに注ぎ、３％のＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液で洗浄した。ＩｇＧ陽性の細胞を、３％のＦＢＳ／ＰＢＳ緩衝液中で、標識された、カラムに結合した分画において回収した。
【０５１３】
濃縮されたＢ細胞を一晩ＣｐＧで処理し（最終濃度２５μＭ）、次の日に、ＢＳＡの融合緩衝液（ｐＨ７．２に調製された、０．３ＭのＤ−ソルビトール、０．ｌｌｍＭの酢酸カルシウム一水和物、０．５ｍＭの酢酸マグネシウム四水和物および０．１％のＢＳＡ（ｖ／ｗ））で一度洗浄した。洗浄された細胞を２００μｌのＢＳＡの融合緩衝液中に再懸濁し、細胞のカウントを決定した。ＳＰ２／０細胞は、同様に処理したが、一度ではなく二度、ＢＳＡの融合緩衝液で洗浄した。Ｂ細胞は、ＢＴＸ  ＥＣＭ  ２００１電子細胞マニピュレーター（Harvard Apparatus）を用いて、エレクロトロヒュージョンによって、ＳＰ２／０の骨髄腫細胞と３：１の割合で融合した。各融合を、リカバリー培地（ダルベッコ改変イーグル培地−ＯＰＩ（Sigma）、Ｌ−Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）、２０％のＦＢＳ（Gibco、ハイブリドーマのためのバッチテスト済）および２−メルカプトエタノールを含んでいる、高グルコース（フェノールレッドなし、Ｌ−Ｇなし））中で一晩放置し、１部のリカバリー培地および９部の半固体の培地（ClonaCell-HY ハイブリドーマ選択培地Ｄ、Stemcell Technologies）中で再懸濁し、その後、１０ｃｍのペトリ皿に播種した。１２日後に、確認できたコロニーを９６ウェルプレートに採取し、スクリーニングに先立って、さらに２〜３日間、培養した。
【０５１４】
ハイブリドーマのウェルのモノクローン化：
ポリクローナルとして見つかったハイブリドーマを、以下の手法を用いて、モノクローン化した。２４ウェルプレートの１つのウェルで成長している生コロニーから採取した細胞を、Ｔｒｙｐａｎ  Ｂｌｕｅ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎを用いてＣｅｄｅｘセルカウンター（Cedex cell counter）で数え、９部の半固体培地（ClonaCell-HY ハイブリドーマ選択培地Ｄ, Cat# 0.804, Stemcell Technologies）に対して１部のハイブリドーマ維持培地（Advanced DMEM（Gibco, cat#12491）Ｌ−Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco, cat# 35050）, ２０％のＦＢＳ（Gibco, ハイブリドーマのためのバッチテスト済）、ＨＴサプリメント（Gibco, cat#41065）、ペニシリン−ストレプトマイシンおよび２−メルカプトエタノール）中、４００生細胞／ｍｌの最終濃度で、１０ｃｍのペトリ皿に播種した。１２日後に、確認できたコロニーを９６ウェルプレートに採取し、スクリーニングに先立って、さらに２〜３日間、培養した。親コロニーにつき、最大で４×９６ウェルプレートを採取し、ｈＬＩＧＨＴの結合および受容体中和のため、スクリーニングした。最良のモノクローン化されたハイブリドーマのクローンを、上記のように採取した。この手法を用いて、抗体３１Ａ１０および抗体１４４Ｆ０５をモノクローン化した。
【０５１５】
［実施例２］
（ハイブリドーマの上澄のスクリーニング）
ハイブリドーマのクローンの生成の後、上記ハイブリドーマの上澄を、連続した第１のスクリーニングおよび第２のスクリーニングにおいて評価し、ｈＬＩＧＨＴに結合している抗体の基準および受容体中和の活性の基準に基づいて、適切なハイブリドーマのクローンを選択した。このスクリーニングのカスケードを用いて、２５１６３のハイブリドーマのクローンを試験し、第１のヒットとして５４０を特定した。その後、第２のスクリーニングの基準を用いて、４１のハイブリドーマのクローンを確認した（詳細は、材料および方法を参照せよ）（表１）。
【０５１６】
【表１】
2017504327.tif 000003
【０５１７】
第２のスクリーニングによって特定された４１のクローンの中から、発明者らによって考案された、望ましい選択の基準に依存している、抗体の主要なパネルの一部として、発明者らによって８つのクローンが選択された（詳細は実施例３を参照せよ）。
【０５１８】
第１のスクリーニングのため、発明者らは以下の選択の基準を考案した：上澄中に存在する抗体が、天然に提示された、細胞の表面に発現される２１４Ｅ  ＬＩＧＨＴに結合できる場合、ハイブリドーマのクローンを含んでいるウェルを選択した。細胞表面にｈＬＩＧＨＴを発現しているＣＨＯ−Ｓ細胞をプレートに入れることによって、このアッセイを設定した後、ハイブリドーマの上澄でインキュベートし、その後、蛍光の検出抗体でインキュベートした。上記上澄中の抗ＬＩＧＨＴ抗体の存在は、適切な蛍光を読み取ることができるプレートリーダーを用いて読み取られた。さらに、組換えによって発現されたヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅへの結合のため、ＨＴＲＦ（ホモジニアス時間分解蛍光）アッセイを用いて、発明者らはハイブリドーマの上澄を評価した。その後、上記の２つの第１のスクリーニングアッセイからのデータを用いて、特定の選択の基準（さらなる詳細な説明は以下を参照せよ）を満足しているクローンをより分け、ＬＴβＲおよびＨＶＥＭの両方の受容体に結合している２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを中和するための、各抗体の能力を決定する、第２のスクリーニングに移った。発明者らは、受容体中和ＨＴＲＦアッセイおよびフローサイトメトリーに基づいた受容体中和アッセイを用いて、これを評価することを決定した。最後に、発明者らは、カニクイザルＬＩＧＨＴの交差反応性と同様に、組換え三量体ヒトＬＩＧＨＴ（すなわち、組換え２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴおよび組換え２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴ）に対する、抗体の見かけの親和性を評価するため、ハイブリドーマの上澄をＳＰＲによって解析することを決定した。
【０５１９】
ハイブリドーマの上澄中の抗体がｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに結合するが、必ずしも２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴには結合せず、組換えカニクイザルＬＩＧＨＴとの交差反応性と同様の高い見かけの親和性を有している場合、抗体を第２のヒットとして定義した。加えて、上澄中の抗体は、試験された２つのアッセイ（すなわち、ＨＴＲＦアッセイまたはフローサイトメトリーに基づいたアッセイ）のうち少なくとも１つにおいて、ＬＩＧＨＴの受容体、すなわち、ＬＴβＲまたはＨＶＥＭ、の１つを少なくとも中和しなくてはならなかった。
【０５２０】
（材料および方法）
第１のスクリーニング  ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅを発現されている細胞に対する結合：
ＣＨＯ−Ｓ細胞の表面に発現されている２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合するための、分泌された抗体の能力を評価するため、ハイブリドーマ細胞から回収された上澄を調べた。ＣＨＯ−Ｓの２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴの結合を決定するため、１０％ｖ／ｖのＦＢＳ（GIBCO）を追加されたＦ１２培地（GIBCO）中、２×Ｅ０４／ウェルの濃度で、黒い壁面で透明底の組織培養処理された３８４ウェルプレート（Costar）中に細胞を植え付け、一晩培養した。３８４ウェルのアッセイプレートから、培養培地を除去した。少なくとも４０μｌのハイブリドーマの上澄、または、ハイブリドーマ維持培地（ＨＭＭ）で希釈されたポジティブコントロールの抗ヒトＬＩＧＨＴの参照抗体（最終濃度１μｇ）もしくはアイソタイプのＩｇＧ１のコントロール抗体（いくつかの事例において、Ｃｍ７、Sigma M9269として参照される。最終濃度１μｇ）を、各ウェルに加えた。ＨＭＭは、１×Ｇｌｕｔａｍａｘ（Gibco）を追加されたＡｄｖａｎｃｅｄ  ＤＭＥＭ（Gibco）、２０％ｖ／ｖのＦＢＳ（Gibco）、０．０５ｍＭのβ−メルカプトエタノール、１×ＨＴサプリメント（Gibco）および１×ペニシリン／ストレプトマイシン（Gibco）で構成された。プレートを４℃で１時間インキュベートした。培養培地を吸引し、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ｗ／ｖのＢＳＡ＋０．１％ｖ／ｖのＮａＮ３）で希釈された０．２μＭのＤＲＡＱ５（Biostatus）を追加された、ヤギ抗マウスのＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７９０（Jackson ImmunoResearch 115-655-071）５０μｌを１０００ｎｇ／ｍｌの濃度で加えた。再度、プレートを４℃で１時間インキュベートした。上澄を吸引し、２５μｌの４％ｖ／ｖのパラホルムアルデヒドを加え、プレートを室温で１５分間インキュベートした。１００μｌのＰＢＳで二度プレートを洗浄し、その後、洗浄緩衝液を完全に除去した。Ｏｄｙｓｓｅｙ赤外線イメージングシステム（Odyssey Infrared Imaging System）（ＬＩ−ＣＯＲ（登録商標））を用いるスキャニングプレートによって、蛍光強度を読み取った。ＬＩ−ＣＯＲ（登録商標）推奨のアルゴリズムに従って、抗マウスの結合（８００ｎｍのチャンネル）を細胞の数（７００ｎｍのチャンネル）へと標準化した。以下に詳細を示すように、効果の割合を計算した（方程式１）。結合の合計は、最終のアッセイ濃度が１μｇ／ｍｌの参照抗体を用いて、定義された。非特異的な結合は、最終のアッセイ濃度が１μｇ／ｍｌのマウスＩｇＧ１のアイソタイプコントロール（Sigma）を用いて、定義された。ＫＭ０４４−２に由来したクローンについては、あるウェルをヒットとして定義するため、３．０パーセント以上の反応という選択の基準を適用した。代わりに、ＫＭ０５０に由来したクローンについては、あるウェルをヒットとして定義するため、５．０パーセント以上の反応という選択の基準を適用した（表１を参照せよ）。
【０５２１】
方程式１：第１のスクリーニング（ＬＩ−ＣＯＲ）およびＨＴＲＦによる効果の割合の計算（８００％のＲｅｓｐ値（ＬＩ−ＣＯＲ）または６６５／６２０ｎｍの比率（方程式２を参照せよ）（ＨＴＲＦ）を用いている）
効果の割合＝（サンプルのウェル−非特異的な結合）×１００／（結合の合計−非特異的な結合）
非特異的な結合＝アイソタイプコントロールのマウスＩｇＧ１を含んでいるウェルの値
結合の合計＝参照抗体を含んでいるウェルの値。
【０５２２】
第１のスクリーニング：組換えヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対する結合：
ＬＩＧＨＴ−２１４Ｅを発現されているＣＨＯ−Ｓに対する結合のためのスクリーニングと並行して、組換えタンパク質として発現されている２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合するための、分泌された抗体の能力を評価するために、ハイブリドーマのウェルから回収された上澄もまた調べた（インハウスで産生された、詳細は実施例１を参照せよ）。ビオチン化した２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを用いて、ＨＴＲＦ（登録商標）（ホモジニアス時間分解蛍光, Cisbio）アッセイフォーマットによって、組換え２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに対する分泌された抗体の結合を特定した。５μｌのハイブリドーマの上澄を、白い３８４ウェルの低容量非結合表面ポリスチレンプレート（Greiner）に移した。ＨＴＲＦ緩衝液（ＰＢＳ（Sigma）＋０．５３ＭのＫＦ（Sigma）＋０．１％ｗ／ｖのＢＳＡ（Sigma））で希釈された、２０ｎＭのビオチン化された２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ、５μｌを、５μｌのハイブリドーマの上澄または、５ｎＭの作用濃度に希釈された５μｌの参照抗体もしくはマウスＩｇＧ１のアイソタイプコントロールと共に、室温で１時間、プレインキュベートした。ＨＴＲＦアッセイ緩衝液中、１：２００に希釈された併用検出試薬ストレプタビジンＤ２（Cisbio）を１０μｌ、最終濃度が１：４００となるように加え、ＨＴＲＦアッセイ緩衝液中、１：２００に希釈された、ユーロピウムのクリプテート（europium cryptate）（Cisbio）で標識されたヤギ抗マウスＩｇＧ（Southern Biotech）を最終濃度が１：４００となるように加えた。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー （Perkin Elmer）を用いて、６２０ｎｍおよび６６５ｎｍの発光波長における時間分解蛍光を読み取るのに先立って、プレートを２時間暗闇でインキュベートしたままにした。ＨＴＲＦ（登録商標）アッセイの技術のさらなる詳細は、Mathis （1995）Clinical Chemistry 41（9）, 1391-1397において見出され得る。各サンプルについて、各々方程式２および方程式１に従って、６６５／６２０の比率および効果の割合を計算することによって、データを解析した。
【０５２３】
方程式２：６６５／６２０の比率の計算
６６５／６２０の比率＝（サンプルの６６５／６２０ｎｍの値）×１００００。
【０５２４】
表１に記載されているように、組換え２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴの結合から、あるウェルをヒットとして定義するため、ＫＭ００４−２およびＫＭ０５０に由来するクローンについては、発明者らは、２０パーセント以上の効果という選択の基準を適用した。
【０５２５】
（第２のスクリーニング：発現される細胞および組換えヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対する結合）
第１のスクリーニングの選択の基準を用いて選択されたウェルが、発明者らによって設定された、必要とする特質を有しているかどうかを決定するため、いくつかのアッセイを実行した。第１のスクリーニングからヒットとして選択されたハイブリドーマのクローンを３日間培養し、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴを発現されているＣＨＯ−Ｓに結合する分泌された抗体が、２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴを発現されているＣＨＯ−Ｓにもまた結合するかどうか（ａ）、場合によっては、未トランスフェクションのＣＨＯ−Ｓに結合するかどうか（ｂ）、また、ＣＨＯ−Ｓ  ２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合している、組換えＬＴβＲ−Ｆｃまたは組換えＨＶＥＭ−Ｆｃを中和するかどうか（ｃ）、ビオチン化された組換え２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合している、ＬＴβＲ  ＦｃまたはＨＶＥＭ  Ｆｃを中和するための能力（ｄ）を評価するため、ハイブリドーマ細胞から回収された上澄を調べた。
【０５２６】
ｈＬＩＧＨＴを発現されているＣＨＯ−Ｓに対する結合および受容体中和（アッセイａ、アッセイｂおよびアッセイｃ）：
ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋１％ｗ／ｖのＢＳＡ＋０．１％ｗ／ｖのＮａＮ３）で希釈された、２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴもしくは２１４Ｋ  ｈＬＩＧＨＴを発現しているＣＨＯ−Ｓ細胞、または未トランスフェクションのＣＨＯ−Ｓ細胞を、１ウェルあたり１×１０Ｅ０５細胞の密度で、９６ウェルのＶ底プレート（Greiner）に分注した。１５０μｌのＰＢＳで細胞を洗浄し、３００×ｇで３分間遠心した。上澄を吸引し、１５０μｌのＰＢＳを加えた。この洗浄工程をくりかえした。ハイブリドーマの上澄、またはＦＡＣＳ緩衝液で希釈されたハイブリドーマの上澄から精製された抗体を２５μｌ、洗浄された細胞に加え、１０〜１５分間インキュベートした。参照抗体またはマウスＩｇＧ１のコントロール抗体（Sigma, M9269）を、ＦＡＣＳ緩衝液で５０μｇ／ｍｌに希釈し、細胞に２５μｌを加えた。その後、７２０ｎｇ／ｍＬに希釈されたヒトＨＶＥＭ  ｈｕＦｃ（R&D Systems, 356-HV-lOO/CF）、またはＦＡＣＳ緩衝液で１３００ｎｇ／ｍＬに希釈されたヒトＬＴβＲ  ｈｕＦｃ（R&D Systems, 629-LR-lOO/CF）を２５μｌ、ウェルに加えた。細胞を４℃で３０分間、インキュベートした。
【０５２７】
細胞を１５０μｌのＰＢＳで二度洗浄し、各洗浄工程後に遠心し（３００×ｇで３分間遠心した）、上澄を吸引した。
【０５２８】
抗体および受容体の結合を検出するため、ＦＡＣＳ緩衝液で５００分の１に希釈されたヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＰＥ（Jackson ImmunoResearch）およびＡＰＣ抗マウスＩｇＧ（Jackson ImmunoResearch）を５０μｌ、上記細胞に加えた。暗闇で４℃で３０分間、細胞をインキュベートした。
【０５２９】
細胞を１５０μｌのＰＢＳで二度洗浄し、各洗浄工程後に遠心し（３００×ｇで３分間遠心した）、上澄を吸引した。
【０５３０】
細胞を固定するため、１００μｌの２％ｖ／ｖのパラホルムアルデヒトを加え、４℃で３０分間、細胞をインキュベートし、３００×ｇの遠心によって細胞をペレット化し、５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液でプレートを再懸濁した。ＰＥおよびＡＰＣのシグナル強度（相乗平均）を、ＢＤ  ＦＡＣＳのアレイの器具を用いてフローサイトメトリーによって測定した。
【０５３１】
受容体の結合の％を、方程式３を用いて計算した。ＬＩＧＨＴを発現されているＣＨＯに対する結合を、非特異的な結合の相乗平均（ＩｇＧ１のアイソタイプコントロール＋受容体コントロールのウェルの平均）の２倍以上の相乗平均として定義した。
【０５３２】
方程式３：受容体の結合の割合（ＦＡＣＳ）
相乗平均の蛍光に基づいて、
受容体の結合の％＝
サンプルの値  −  非特異的な結合  ×１００／結合の合計  −  非特異的な結合
非特異的な結合＝抗体なし、受容体なし
結合の合計＝受容体（ＬＴβＲまたはＨＶＥＭ）だけの結合（阻害剤なし）＋１μｇ／ｍｌにおけるアイソタイプコントロール。
【０５３３】
第２のスクリーニング  ＨＴＲＦのリガンド／受容体の中和（アッセイｄ）：
以下の方法を行った。ＨＴＲＦ緩衝液で希釈された、２．５ｎＭの最終濃度（１０ｎＭの作用濃度）の、５μＬのＦｌａｇ標識されたＬＩＧＨＴ（インハウス）を、ハイブリドーマのウェルから回収された５μｌの上澄と共に、室温で１時間、プレインキュベートした。結合の合計を定義するために用いられたウェルに対して、５μｌのＬＩＧＨＴ（１０ｎＭの作用、２．５ｎＭの最終）および５μｌのハイブリドーマ維持培地（ＨＭＭ）を加えた。非特異的な結合（受容体のみ）を定義するために用いられたウェルに対して、１０μｌのＨＭＭを加えた。あるいは、場合によっては、非特異的な結合を、ＨＭＭで１２００ｎＭに希釈された５μｌの参照抗体、および５μｌのＬＩＧＨＴ（１０ｎＭの作用、２．５ｎＭの最終）として定義した。ハイブリドーマのウェルから回収された上澄を含んでいるウェルと同じプレートにおいて、結合の合計のウェルおよび非特異的な結合のウェルを、室温で１時間、プレインキュベートした。
【０５３４】
ＬＩＧＨＴの受容体をＨＴＲＦアッセイ緩衝液で希釈し、すべてのウェルに加え、５μｌ／ウェルのＨＶＥＭ−ＦｃまたはＬＴβＲ−Ｆｃ（R&D systems）を、ＨＶＥＭ（０．３ｎＭ最終）には１．２ｎＭで加え、ＬＴβＲ（０．１ｎＭ最終）には０．４ｎＭで加えた。
【０５３５】
結合を検出するため、５μｌの併用検出試薬をすべてのウェルに加えた。抗ｆｌａｇ  Ｄ２（Cisbio）をＨＴＲＦアッセイ緩衝液で２０ｎＭに（５ｎＭの最終）希釈し、抗ヒト  Ｆｃ  Ｋ（Cisbio）をＨＴＲＦアッセイ緩衝液で１：１００に（最終希釈１：４００へと）希釈した。
【０５３６】
ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Perkin Elmer）を用いて、６２０ｎｍおよび６６５ｎｍの発光波長における時間分解蛍光を読み取るのに先立って、プレートを３時間暗闇でインキュベートしたままにした。ＨＴＲＦ（登録商標）アッセイの技術のさらなる詳細は、Mathis (1995) Clinical Chemistry 41(9), 1391-1397において見出され得る。各サンプルについて、各々方程式４および方程式５に従って、６６５／６２０の比率（２）および受容体の割合を計算することによって、データを解析した。
【０５３７】
方程式４
６６５／６２０の比率（２）＝サンプルの６６５／６２０ｎｍの値。
【０５３８】
方程式５：受容体の結合の割合（ＨＴＲＦ）
６６５／６２０の比率（２）の計算（方程式４）に基づいて、
受容体の結合の％＝
サンプルの値  −  非特異的な結合  ×１００／結合の合計  −  非特異的な結合
非特異的な結合＝３００ｎＭの最終濃度における、受容体および参照抗体
結合の合計＝受容体（ＨＶＥＭまたはＬＴβＲ）およびＬＩＧＨＴ（阻害剤なし）。
【０５３９】
第２のスクリーニングからのヒットの基準の選択：
結合アッセイおよび中和アッセイに基づいてヒットのパネルを選択した。ＣＨＯ−ＳのＬＩＧＨＴ−２１４Ｅのアッセイにおけるヒットを、ＦＡＣＳによるＣＨＯ−ＳのＬＩＧＨＴ−２１４Ｅの細胞に対する受容体の、７０％未満の結合として、発明者らは定義した。ｆｌａｇ  ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ−ＦｃのＨＴＲＦ中和アッセイまたはｆｌａｇ  ＬＩＧＨＴ／ＬＴβＲ  ＦｃのＨＴＲＦ中和アッセイにおけるヒットを、ＬＩＧＨＴに結合している受容体が９０％未満であるクローンとして定義した。ＣＨＯ−ＳのＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対する結合、および場合によってはＣＨＯ−ＳのＬＩＧＨＴ−２１４Ｋに対する結合を、バックグラウンド（マウスＩｇＧ１の結合）の相乗平均の２倍を超える、として定義した。データを表１に要約する。また、ＳＰＲによる見かけの親和性の測定もまた考慮した。
【０５４０】
［実施例３］
（抗体主要物の特性評価）
上記第２のスクリーニングにおける４１のハイブリドーマのクローンの特定の後、選択されたウェルを拡張し、標準的な、タンパク質Ｇに基づいたアフィニティー・クロマトグラフィーの精製を用いて、マウス／ヒトのキメラ抗体を精製した（方法は以下を参照せよ）。ｈＬＩＧＨＴの受容体ＨＶＥＭおよびｈＬＩＧＨＴの受容体ＬＴβＲに対する、ｈＬＩＧＨＴの結合を阻害するための上記抗体の能力、および高い見かけの親和性でカニクイザルＬＩＧＨＴおよびヒトＬＩＧＨＴに結合するための各抗体の能力を評価するため、上記抗体を種々のアッセイの対象とした。選択された４１の中で、どの抗体が最もよいか、を解読するため、インビトロサイトカイン放出アッセイを用いて、すべてのクローンを調べた。当該アッセイでは、ＨＴ２９細胞によるＩＬ−８放出を誘導するため、組換えヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅを培地に加えた。より具体的には、このアッセイ中、ヒト直腸腺癌の細胞株であるＨＴ２９細胞を播き、４１の精製された抗体のヒットのそれぞれの種々の濃度でプレインキュベートされたｈＬＩＧＨＴで処理した。最もよい８つの中和剤を選択し、これらの選択された抗体の滴定量を図１に描いた。図１のデータは、少なくとも２つの独立した実験の代表である単一の実験に由来している。さらに、フローサイトメトリーによって決定されたように、すべて８つの選択された主要物について、ＣＨＯ−Ｓ細胞の細胞表面に発現されているｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅと同様に、天然に発現されているｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに結合することを調べた。図２は、二次の検出抗体のみと比較した、ＣＨＯ−Ｓ−ｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅの細胞に対する、０．６４μｇ／ｍｌにおけるすべての主要なクローンの結合を示す。図２において、用語「抗体なし」は、使用した一次抗体がないことを明記しており、二次の検出抗体の不使用を明記するのではない。図２のデータは、単一の実験に由来している。特異性を明らかにするため、アイソタイプコントロール（マウスＩｇＧｌ／カッパ, Sigma M9269）を並行して読み取った。さらに、実施例２に概要を説明したように、ＨＴＲＦアッセイにおいて、ヒトＨＶＥＭまたはヒトＬＴβＲのいずれかの受容体に対する、組換えｈＬＩＧＨＴの結合を中和するための能力のため、上記８つの主要な抗体を調べた。図３Ａは、組換え２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴに結合しているＬＴβＲを中和している抗体の主要なパネルを示す。図３Ｂは、ｈＬＩＧＨＴに対するＨＶＥＭの結合の中和を示す。図３Ａおよび図３Ｂの両方は、少なくとも３つの独立した実験の代表である単一の実験に由来している。両方のアッセイにおいて、アイソタイプコントロールのマウスＩｇＧｌの抗体（Sigma M9269）を読み取った。再度、すべての８つの主要な抗体を、カニクイザルＬＩＧＨＴに対する交差反応性のレベルおよび、ｈＬＩＧＨＴに対する見かけの親和性を評価しているＳＰＲ解析の対象とした。加えて、マウスＬＩＧＨＴに対する交差反応性を決定したが、ここで提供した抗体の主要なパネルについて、非常に弱いか完全にないことを示した。８つの特定された主要な候補抗体の概要は、表２に見ることができる。
【０５４１】
【表２】
2017504327.tif 000004
【０５４２】
（材料および方法）
ハイブリドーマの上澄からの抗体の精製：
タンパク質Ｇのアフィニティー・クロマトグラフィーを用いて、抗体を精製した。ＩｇＧの溶出試薬（Pierce）を用いて、タンパク質Ｇの培地から抗体を溶出し、溶出された抗体は、使用に先立ってＰＢＳと交換された緩衝液であった。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析によって抗体の純度を評価し、ＯＤ２８０ｎｍで読み取っている分光光度計によって定量化した。
【０５４３】
ＨＴ２９細胞からの、ＬＩＧＨＴに誘導されたＩＬ８放出の阻害：
ＨＴ２９細胞（American Type Culture Collection, ATCC #HTB-38）の直腸腺癌の上皮の形態（Fogh J. and Trempe G Human tumor cells in vitro. New York: Plenum Press; 1975）を、ＭｃＣｏｙｓ  ５ａの培地（GIBCO）＋１０％ｖ／ｖのＦＢＳ（GIBCO）中で維持した。通常の培養のため、１００％コンフルエントから、１：４と１：１２との間で細胞を分けた。９６ウェルの透明なプレート（Costar）に、培養培地中に１００μｌのＨＴ２９細胞を１×１０Ｅ０６／ｍｌの濃度で分注した（１×１０Ｅ０５細胞／ウェル）。アッセイにおいて、ＩＣ５０の値によって測定されたように、クローンの有効性を確立するため、阻害剤の滴定液を使用した。５０ｎＭの最終から培養培地中で、抗体を滴定した（２００ｎＭの作用濃度）。培養培地で希釈された、１５０μｌの（インハウス発現される）組換え２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴ（１０ｎｇ／ｍＬの最終濃度、従って、４０ｎｇ／ｍＬの作用濃度）に、１５０μｌの阻害剤の滴定液を加えた。９６ウェルの無菌化されたＵ底の透明なプレート（Costar）で、上記阻害剤の滴定液およびｈＬＩＧＨＴを、３７℃で３０分間、共にプレインキュベートした。１００μｌのｈＬＩＧＨＴ＋阻害剤の滴定液を、分裂中の上記細胞、または１００μｌのコントロール（培養培地、または０．５μｇ／ｍｌの最終におけるＬΤα１β２（R&D Systems, 678-LY-OlO/CF）、または最１０ｎｇ／ｍＬの最終におけるＬＩＧＨＴのみ、または培地のみ）に加えた。その後、３７℃で５％ＣＯ２の湿った雰囲気にて、細胞を一晩（１６〜１８時間）培養した。インキュベートの期間に続いて、ＨＴ２９細胞からの調合された上澄を除去し、ＩＬ−８のＥＬＩＳＡ（R&D systems）によってＩＬ８のレベルを決定した。
【０５４４】
ヒトＩＬ−８  Ｄｕｏｓｅｔ  ＥＬＩＳＡキット（R & D）Systems）を用いて、上澄中のＩＬ−８のレベルを決定した。ＩＬ−８の捕捉抗体（ＰＢＳで希釈された４μｇ／ｍｌ，５０μｌ／ウェル）を、９６ウェルの低い自家蛍光および高いタンパク質の結合のプレート（Costar）に一晩４℃で吸収させた。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄することにより過剰なＩｇＧを除去し、ＰＢＳ中１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でウェルを室温で１時間ブロッキングし、その後、上記で記載されているように、プレートを洗浄した。その後、５０μｌ／ウェルの調合された培養培地を加え、さらにＥＬＩＳＡコントロールとしてＩＬ−８の標準液（２０００ｐｇ／ｍｌから、１：２の希釈率）をＥＬＩＳＡプレートに加え、室温で少なくとも１時間、上記プレートをインキュベートした。
【０５４５】
インキュベートに続いて、未結合のタンパク質を除去するため、上記に記載されているように、プレートを洗浄した。その後、ビオチン化されたＩＬ−８の検出Ａｂ（試薬希釈剤（０．１％のＢＳＡ／ＰＢＳ）中２０ｎｇ／ｍｌ；５０μｌ／ウェル）を上記プレートに加え、１時間室温でインキュベートした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（０．１％ｖ／ｖ）によって洗浄することで未結合の検出抗体を除去し、残っているビオチン化された抗体をストレプトアビジン−ユーロピウム３＋共役剤（DELFIA（登録商標） detection, PerkinElmer）によって検出した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（PerkinElmer）において、６１５ｎｍで時間分解蛍光を測定した。蛍光のデータを、ユーロピウムのカウントとしてプロットした。阻害剤のコントロールの非存在下におけるＬＩＧＨＴの刺激からの上記ユーロピウムのカウント（最大のコントロール）、およびＬＩＧＨＴのコントロールなし（培地のコントロール）を用いて、方程式６のように、阻害剤のデータを最大のＩＬ−８放出の割合へと標準化した。４つのパラメーターのロジスティック方程式（方程式７）を用いている曲線の当てはめによって、グラフパッドプリズムソフトウェア（GraphPad Prism software）を用いて、ＩＣ５０の値を決定した。
【０５４６】
方程式６：ＬＩＧＨＴに誘導されたＩＬ８放出の％
ＬＩＧＨＴに誘導されたＩＬ８放出の％＝（サンプル−培地）×１００／（最大−培地）
最大＝ＬＩＧＨＴのみ（阻害剤なし）
培地＝培養培地のみ（ＬＩＧＨＴなし）。
【０５４７】
方程式７：４つのパラメーターのロジスティックの計算
Ｙ＝ボトム＋（トップ−ボトム）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊HillSlope））
Ｘ＝濃度の対数
Ｙ＝特異的な結合（方程式６）
トップおよびボトム＝Ｙと同じ単位におけるプラトー（特異的な結合）
ＬｏｇＩＣ５０はＸと同じ単位である。シグモイドの形を取って、Ｙはボトムにおいて始まり、トップへと進む。Ｘが増加するにつれて、特異的な結合は低下する。
【０５４８】
（ｈＬＩＧＨＴを発現されているＣＨＯ−Ｓに対する、ハイブリドーマの上澄から精製された抗体の結合）
本明細書中に記載されているように、ハイブリドーマの上澄から精製された抗体の結合を行った。
【０５４９】
ＨＴＲＦのリガンド／受容体中和：
本アッセイにおいて、ＩＣ５０の値によって測定されるように、クローンの有効性を確立するため、阻害剤の滴定液を用いて、以下の方法を行った。ＨＴＲＦ緩衝液で、２．５ｎＭの最終濃度（１０ｎＭの作用濃度）に希釈された５μｌのＦｌａｇ標識されたｈＬＩＧＨＴ（インハウス）を、３００ｎＭの最終濃度（１２００ｎＭの作用濃度）からＨＴＲＦアッセイ緩衝液で希釈されたハイブリドーマの上澄から精製された、５μｌの抗体の滴定液と共に、１時間室温でプレインキュベートした。結合の合計を定義するために用いたウェルに、５μｌのＬＩＧＨＴ（１００ｎＭの作用、２．５ｎＭの最終）および５μｌのハイブリドーマ維持培地（ＨＭＭ）を加えた。非特異的な結合（受容体のみ）を定義するために用いたウェルに、１０μｌのＨＭＭを加えた。阻害剤の滴定液を含んでいるウェルと同じプレートにおいて、結合の合計のウェルおよび非特異的な結合のウェルを、１時間室温でプレインキュベートした。
【０５５０】
ＬＩＧＨＴ受容体をＨＴＲＦアッセイ緩衝液で希釈し、すべてのウェルに加え、ＨＶＥＭには５μｌ／ウェルのＨＶＥＭ−ＦｃまたはＬＴ  Ｒ−Ｆｃ（R&D systems）を１．２ｎＭ加え（０．３ｎＭの最終）、ＬＴβＲには０．４ｎＭを加えた（０．１ｎＭの最終）。
【０５５１】
結合を検出するため、５μｌの併用検出試薬をすべてのウェルに加えた。抗ｆｌａｇ  Ｄ２（Cisbio）をＨＴＲＦアッセイ緩衝液で２０ｎＭ（５ｎＭの最終）に希釈し、抗ヒト  Ｆｃ  Ｋ（Cisbio）をＨＴＲＦアッセイ緩衝液で１：１００に（最終希釈１：４００へと）希釈した。
【０５５２】
ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Perkin Elmer）を用いて、６２０ｎｍおよび６６５ｎｍの発光波長における時間分解蛍光を読み取るのに先立って、プレートを３時間暗闇でインキュベートしたままにした。ＨＴＲＦ（登録商標）アッセイの技術のさらなる詳細は、Mathis (1995) Clinical Chemistry 41(9), 1391-1397において見出され得る。各サンプルについて、各々方程式８および方程式９に従って、デルタＦ値の％および受容体の％を計算することによって、データを解析した。
【０５５３】
方程式８：デルタＦの％の計算
デルタＦの％＝（サンプルの６６５／６２０ｎｍの比率の値）−（非特異的なコントロールの６６５／６２０ｎｍの比率の値）／（非特異的なコントロールの６６５／６２０ｎｍの比率の値）
非特異的なコントロール＝受容体のみ、
方程式９：受容体の結合の割合（ＨＴＲＦ）
デルタＦの％の計算（方程式８）に基づいて、
受容体の結合の％＝サンプルの値×１００／結合の合計
結合の合計＝受容体（ＨＶＥＭまたはＬＴβＲ）およびＬＩＧＨＴ（阻害剤なし）。
【０５５４】
表面プラズモン共鳴解析：
ＰｒｏｔｅＯｎ（商標）  ＸＰＲ３６アレイシステム（BioRad）を用いて、ＳＰＲ解析を行った。アミンカップリングを用いて、抗マウスＩｇＧ（GE Healthcare BR-1008-38）をＧＬＣのバイオセンサーの表面に固定し、その後、１Ｍのエタノールアミンを用いて、当該表面をブロッキングした。テスト抗体をこの表面に捕捉し、２５６ｎＭの単一の濃度で組換えｈＬＩＧＨＴ（２１４Ｅ，２１４Ｋおよびカニクイザルの変異型）を用いた。基線のドリフトおよび注入の作為を除去するため、緩衝液の注入（すなわち、０ｍＭ）を用いて、結合のセンサーグラムを二重参照した。ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６解析ソフトウェアに元来備わっている１：１のモデルを用いて、ＬＩＧＨＴ抗体の相互作用に関する見かけの親和性を決定した。ランニング緩衝液としてＨＢＳ−ＥＰ（Teknova）を用いて、このアッセイを実行し、２５℃で実行した。
【０５５５】
［実施例４］
（抗体の結合の特性評価試験）
ＳＰＲを用いている抗体の交差ブロッキングの実験は、単離された抗体が３つの異なるエピトープ分類に分かれることを明らかにした。抗体のクローン３１Ａ１０，抗体のクローン２９Ｃ０９および抗体のクローン１４４Ｆ０５は、エピトープ分類１に結合し、同様の高い見かけの親和性で、ｈＬＩＧＨＴのアリルの変異型（２１４Ｅ＆２１４Ｋ）を両方認識することができる。抗体のクローン６２Ｃ０１および抗体のクローン１１７Ｃ０６は、エピトープ分類２に分類され、当該分類は、優性のヒトＬＩＧＨＴのアリルの変異型２１４Ｅに対する高い親和性の結合を可能とするが、劣性のアリルの変異型２１４Ｋに対する結合を、２０倍以上低減させるか、完全に無効にする。最後に、抗体のクローン１４Ｂ０９，抗体のクローン１３Ｈ０４および抗体のクローン４２Ａ０２は、エピトープ分類３のバインダーであると特定され、当該分類においては、抗体は、同様の高い見かけの親和性で、両方のヒトＬＩＧＨＴのアリルの変異型（２１４Ｅおよび２１４Ｋ）を認識する。興味深いことに、エピトープ分類２の抗体およびエピトープ分類３の抗体は、ｈＬＩＧＨＴの結合について、互いと競合する。しかし、エピトープ分類２の抗体はＬＩＧＨＴの劣性のアリルの変異型を認識できないが、エピトープ分類３は認識できる、という異なる結合の特徴のため、（如何なる理論によっても拘束されることを望まないが）エピトープ分類２の抗体およびエピトープ分類３の抗体は、ＬＩＧＨＴの分子の表面の異なるエピトープを結合するに違いない、と結論付ける。エピトープ分類１の抗体およびエピトープ分類３の抗体は互いと競合せず、（如何なる理論によっても拘束されることを望まないが）したがって、異なるエピトープを結合するに違いない、と結論付ける。また、エピトープ分類１の抗体およびエピトープ分類２の抗体も互いと競合せず、（如何なる理論によっても拘束されることを望まないが）したがって、異なるエピトープを結合するに違いない、と結論付ける。
【０５５６】
この交差結合の試験のデータを表３に要約する。
【０５５７】
【表３】
2017504327.tif 000005
【０５５８】
（材料および方法）
抗体の競合ＳＰＲ：
競合ＳＰＲにおいて調べられたすべての抗体は、ヒトＩｇＧ４（ＰＥ）の形態であった（再編成の方法は実施例５を参照せよ）。ＬＩＧＨＴにおける同じ結合領域を共有し得る抗体を調べるため、ＰｒｏｔｅＯｎ（商標）ＸＰＲ３６アレイシステムにおいて、ＳＰＲに基づいたアッセイを行った。抗ヒトＩｇＧ抗体（Jackson Immunoresearch, 109-005-008,109-006-008および309-006-008）をＧＬＣバイオセンサーの表面に固定し、上記のように実行されたアッセイによって、標準的なアミンのカップリングを用いてＧＬＣバイオセンサーチップを固定した。解析のための「リガンド」としてテスト抗体を捕捉するため、捕捉の表面として、抗ヒトＩｇＧの表面を使用した。垂直方向および水平方向のいずれかにおいて、捕捉の表面を対処するための、ＰｒｏｔｅＯｎ（商標）ＸＰＲ３６アレイシステムの能力を用いて、以下のように本アッセイを行った。垂直方向において上記「リガンド」の抗体を捕捉し、その後、水平方向における捕捉の表面を阻害するため、マウス血清の１０００分の１希釈を使用した。その後、水平方向において、ＬＩＧＨＴに捕捉の表面を通過させ、捕捉されたリガンドの抗体に結合させた。その後、同じリガンドの抗体を、「抗体−ＬＩＧＨＴ」複合体を通過させ（ＬＩＧＨＴは三量体であり、したがってって、すべての利用可能なＬＩＧＨＴの分子は、リガンドの抗体によって結合されることが確実になる）、再度、リガンドの抗体の第２の適用は、垂直方向であった。その後、検体の抗体を、水平方向において、上記「抗体−ＬＩＧＨＴのリガンド複合体」を通過させ、結合が観察されない場合は、複数のＡｂは類似しているエピトープを共有し、結合が起きる場合は、複数のＡｂは類似しているエピトープを共有しない。結合／非結合は、センサーグラムを監視することによって決定され、当該センサーグラムは、コントロールのサンプルとして非ＬＩＧＨＴ結合抗体を用いて二重参照され、すべてのセットのリガンドの抗体の実施が含まれていた。相互作用が終わった後、１０ｍＭ、ｐＨ１．７のグリシンを用いて抗マウスＩｇＧの捕捉の表面を再生成し、捕捉の表面を解析の他のラウンドのために利用できるようにした。本アッセイは、ＨＢＳ−ＥＰをランニング緩衝液として用いて、２５℃で実行した。
【０５５９】
［実施例５］
（主要な抗体の候補の配列のリカバリー）
主要な候補の選択および特性評価の後、フォワードプライマーおよびリバースプライマーの混合物を用いているＲＴ−ＰＣＲを用いて、完全なヒトの可変ドメインをリカバリーした。ヒトＩｇＧ４のバックボーンへと抗体を再編成し、ＣＨＯ−Ｓ細胞において一過的な発現のシステムを用いて、発現された。すべての配列の概要が、配列表および表４に提示される。
【０５６０】
【表４】
2017504327.tif 000006
【０５６１】
（材料および方法）
ハイブリドーマ細胞からのＲＮＡの単離：
ＴＲＩｚｏｌ（商標）試薬（Invitrogen）を用いて、ハイブリドーマ細胞から全体のＲＮＡを抽出した。抽出されたＲＮＡの、量および質を分光光度法で解析した。
【０５６２】
ＲＴ−ＰＣＲによる、抗体の可変ドメインのリカバリー：
選択されたクローンを、全体のＲＮＡを調合するために使用し、当該全体のＲＮＡを、重鎖のＶの領域をリカバリーするため、ＲＴ−ＰＣＲの反応において用いた。ＩｇＧに特異的なリバースプライマーとＩｇリーダー配列に特異的なフォワードプライマーとのセット、または代わりに、ＩｇＧに特異的なリバースプライマーとＩｇ５´の非翻訳領域（ＵＴＲ）の配列に特異的なフォワードプライマーとのセットを、上記重鎖のために使用した。カッパ定常領域に特異的なリバースプライマーとカッパのリーダー配列に特異的なフォワードプライマーとのセット、または代わりに、カッパ定常領域に特異的なリバースプライマーとカッパの５´ＵＴＲの配列に特異的なフォワードプライマーとのセットを、カッパ軽鎖のために使用した。ラムダに特異的な３´のＵＴＲのリバースプライマーとラムダのリーダー配列に特異的なフォワードプライマーとのセット、または代わりに、ラムダに特異的な３´のＵＴＲのリバースプライマーとラムダの５´のＵＴＲの配列に特異的なフォワードプライマーとのセット、または代わりに、ラムダ定常領域に特異的なリバースプライマーとラムダのリーダー配列に特異的なフォワードプライマーとのセット、または代わりに、ラムダ定常領域に特異的なリバースプライマーとラムダの５´のＵＴＲの配列に特異的なフォワードプライマーとのセットを、ラムダ軽鎖のために使用した。アガロースゲルの電気泳動によって、フォワード方向およびリバース方向において配列決定された予想されたサイズのＤＮＡと共に、上記ＲＴ−ＰＣＲの生成物を分離した。あるいは、上記ＲＴ−ＰＣＲの生成物を、クローニングベクターおよび配列決定した個々のコロニーのＤＮＡへとサブクローニングした。
【０５６３】
（ＩｇＧ４のバックボーンを有している抗体の再編成）
配列をコードしている重鎖の定常領域は、哺乳類での発現のために最適化されたコドンであり、オーバーラップエクステンションＰＣＲによって、ヒトＩｇＧ４−ＰＥ定常領域を最適化されたコドンと共にフレームに融合され、その後、標準的な制限酵素の、消化および連結を用いてｐＸＣ−１８．４発現プラスミド（Lonza）へとクローニングされた。ヒトカッパ定常領域または完全な長さのラムダの可変領域をコードしている配列と共に、フレームにおいてカッパ軽鎖の可変領域をコードしている配列は、哺乳類での発現のために最適化されたコドンであり、標準的な制限酵素の消化および連結を用いて、ｐＸＣ−１７．４発現プラスミド（Lonza）へとクローニングされた。重鎖および軽鎖の同時発現のため、ベクターｐＸＣ−１７．４およびベクターｐＸＣ−１８．４を、標準的な制限酵素の消化および連結を用いて、１つの単一のベクターへと融合させた。
【０５６４】
正確な配列構成を裏付けるため、すべてのコンストラクトを配列決定した。
【０５６５】
［実施例６］
（樹状細胞−Ｔ細胞混合リンパ球反応に対するＴ細胞の活性化における、抗ＬＩＧＨＴ抗体の影響の決定）
樹状細胞は、単核の前駆体から生み出される。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ｐｌｕｓ（GE Healthcare）の密度勾配遠心沈殿法を用いて、白血球除去システムのチャンバー（NHSBT）から単離された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣｓ）から、単核の前駆体は単離される。ネガティブセレクション磁気分離ビース（Miltenyi）を用いてＰＢＭＣから、単核白血球は単離される。１００ｎｇ／ｍｌのサイトカインＧＭ−ＣＳＦ（Peprotech）および１００ｎｇ／ｍｌのサイトカインＩＬ−４（Peprotech）と共に、７日間、培養培地（１０％ｖ／ｖのＦＢＳを追加されたＲＰＭＩ（Gibco））にて、単核白血球を培養する。７日後、細胞分離培地（Gibco）および細胞スクレイパーを用いて、細胞を除去し、すぐに使用するか、または今後の使用のために低温保存する。ネガティブセレクション磁気分離ビース（Miltenyi）を用いて、同種ＰＢＭＣから、Ｔ細胞を単離する。
【０５６６】
樹状細胞を、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌのマイトマイシンＣ（Sigma）で、３７℃で１時間プレインキュベートする。その後、ＰＢＳ中で３００×ｇで３分間遠心しながら３回洗浄し、各洗浄後に上澄を吸引する。異質遺伝子型のＴ細胞を、１０％ｖ／ｖのＦＢＳを追加されているＲＰＭＩ中、９６ウェルプレートに加え、その後、細胞／ウェルの数に基づいて１：１から４：１の値を取っている、樹状細胞／Ｔ細胞の定義された割合で樹状細胞を加える。上記細胞を３７℃で５日間インキュベートする。５日後、製造業者の推奨に従って、デュオセットＥＬＩＳＡ（R&D Systems）によって、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２を測定する。製造業者の推奨に従って、ＣＦＳＥ希釈液によって、増殖を測定する。
【０５６７】
（同種異系のＰＢＭＣの混合リンパ球反応における、抗ＬＩＧＨＴ抗体の影響の決定）
Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ｐｌｕｓ（GE Healthcare）の密度勾配遠心法を用いて、白血球除去システムのチャンバー（NHSBT）からＰＢＭＣを単離する。ＰＢＭＣを、３７℃で１時間、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌのマイトマイシンＣ（Sigma）で、プレインキュベートする。その後、ＰＢＳ中で３００×ｇで３分間遠心しながら３回洗浄し、各洗浄後に上澄を吸引する。（マイトマイシンＣで処理されていない）異種遺伝型のＰＢＭＣを、１０％ｖ／ｖのＦＢＳを追加されたＲＰＭＩ中、１×１０Ｅ０６／ｍｌの濃度で、１００μｌ／ウェルを９６ウェルプレートへと加えた。その後、マイトマイシンＣなしに対してマイトマイシンＣ処理が、細胞／ウェルの数に基づいて１：１から４：１の範囲の最終の細胞の割合となるように、ＰＢＭＣ処理したマイトマイシンＣを、９６ウェルプレート中の同種異系のＰＢＭＣ（マイトマイシンＣで処理されていない）へと加える。上記細胞を３７℃／５％のＣＯ２において５日間インキュベートする。５日後、製造業者の推奨に従って、デュオセットＥＬＩＳＡ（R&D Systems）によって、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２を測定する。製造業者の推奨に従って、ＣＦＳＥ希釈液によって、増殖を測定する。
【０５６８】
［実施例７］
（抗原の調合、免疫を与える手法、およびハイブリドーマの生成）
以下の実施例は、上記で議論されているように、ＫｙＭｏｕｓｅ（商標）システムを用いた、抗ヒトＬＩＧＨＴのモノクローナル抗体のさらなるパネルの、生成および特定に関する詳細な記載を提供する。詳細な説明は、実施例１において見出され得る。実施例１に記載されているように、ＲＩＭＭＳの処理計画を用いて免疫を与えられたマウスからの脾臓細胞を用いて生成されたハイブリドーマから、抗体１８Ｅ０４および抗体９８Ｃ０７を単離した。
【０５６９】
（一様なＢ細胞（ＢＣＴ）からの抗体のクローニング）
ここでは、第４群（免疫を与える手順）のトランスジェニックマウスを使用した。マウスの組織の単離および調合、ならびにＢ細胞の濃縮を、上記の実施例１の方法のように実行した。加えて、抗原特異的なＢ細胞は、溶解緩衝液を含んでいる９６ウェルプレートにソートされた単一の細胞であった。溶解物をＲＴ−ＰＣＲの対象とし、結果として生じた重鎖の生成物および軽鎖の生成物に、配列決定を実行した。
【０５７０】
発現のために、配列をＣＨＯ細胞へとトランスフェクションした。実施例８に記載されているように、トランスフェクションの５日後に、上澄を回収し、ハイブリドーマの上澄のようにスクリーニングした。
【０５７１】
［実施例８］
（ハイブリドーマの上澄のスクリーニング）
ハイブリドーマのクローンの生成後、上記ハイブリドーマの上澄を、連続した第１のスクリーニングおよび第２のスクリーニングにおいて評価し、ｈＬＩＧＨＴに対する抗体の結合の基準および受容体中和の活性の基準に基づいて、適切なハイブリドーマのクローンを選択した。スクリーニングの詳細な記載、ならびに第１のスクリーニングおよび第２のスクリーニングによるヒットの選択は、実施例２において見出され得る。この方法で、抗体のクローン１８Ｅ０４および、抗体のクローン９８Ｃ０７を選択した。
【０５７２】
ハイブリドーマの上澄中の抗体が、組換えカニクイザルＬＩＧＨＴとの交差反応性と同様に、高い見かけの親和性でｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに結合するが、必ずしもｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｋには結合しない場合、抗体を第２のヒットとして定義した。加えて、上記上澄中の抗体は、調べられた２つのアッセイ（すなわち、ＨＴＲＦアッセイまたはフローサイトメトリーに基づいたアッセイ）のうち少なくとも１つにおいて、ＬＩＧＨＴの受容体、すなわち、ＬＴβＲまたはＨＶＥＭ、の１つを少なくとも中和しなくてはならない。
【０５７３】
ＢＣＴを用いて生成された抗体については、スクリーニングのカスケードは、実施例２に記載されている通りのものに、以下に記載されている修正を伴うものであった。第１のスクリーニングおよび第２のスクリーニングを基準とした主要なパネル、ならびにＳＰＲ解析のため、２つのＢＣＴクローンがまた選択された。ＢＣＴクローンのための望ましい選択の基準は、発明者らによって考案された（詳細は実施例９を参照せよ）。この方法で、抗体０１Ｃ０２および抗体０１Ｃ０６を選択した。
【０５７４】
上澄中に存在している抗体が、ＣＨＯ−Ｓ細胞の細胞表面に発現されている天然に提示されたｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅ、または組換えによって発現されているヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅを結合し得る場合、ＢＣＴクローンを含んでいるウェルを選択した。加えて発明者らは、組換え三量体ヒトＬＩＧＨＴに対する抗体の見かけの親和性を評価するため、ＳＰＲによって上澄を解析することを決定した。最後に発明者らは、受容体中和ＨＴＲＦアッセイを用いて、ＨＶＥＭに結合している組換えによって発現されているｈＬＩＧＨＴ−２１４を中和するための、各抗体の能力を評価することを決定した。その後、前述のアッセイのデータを用いている特定の選択の基準（さらなる詳細は以下を参照せよ）を満たしているクローンを、ヒト定常領域で再編成した。当該ヒト定常領域は、さらなる特性評価を可能とするため、ＦｃＲ結合ではなく、ヒンジ領域安定化（ＩｇＧ４（ＰＥ））であった。
【０５７５】
（材料および方法）
第１のスクリーニング  ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅを発現される細胞に対する結合：
抗体のクローン１８Ｅ０４および抗体のクローン９８Ｃ０７については、実施例２のようにスクリーニングを実施した。あるウェルをヒットとして定義するため、５．０パーセント以上の反応という選択の基準を適用した。
【０５７６】
方程式１：第１のスクリーニング（ＬＩ−ＣＯＲ）およびＨＴＲＦの効果の割合の計算
（８００％のＲｅｓｐ値（ＬＩ−ＣＯＲ）または６６５／６２０ｎｍの比率（方程式２を参照せよ）（ＨＴＲＦ）を用いている）
効果の割合＝（サンプルのウェル−非特異的な結合）×１００／（結合の合計−非特異的な結合）
非特異的な結合＝アイソタイプコントロールのマウスＩｇＧ１を含んでいるウェルの値
結合の合計＝参照抗体を含んでいるウェルの値。
【０５７７】
ＢＣＴを用いて生成されている抗体については、以下の変更を伴う同じの方法を使用した：抗体を生成している細胞をＣＨＯ培地で培養し、ポジティブコントロールの参照抗体およびアイソタイプコントロール抗体をＣＨＯ培地（ＣＤ  ＣＨＯ培地（Gibco）および８ｍＭのＬ−グルタミン）で希釈した。
【０５７８】
第１のスクリーニング：組換えヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対する結合：
ハイブリドーマ（１８Ｅ０９および９８Ｃ０７）からスクリーニングされたクローンについては、実施例２に記載されているような方法であった。
【０５７９】
ＢＣＴからスクリーニングされたクローンについては、実施例２の方法における変更されたバージョンを用いた。ＨＴＲＦ緩衝液（ＰＢＳ（Sigma）＋０．５３ＭのＫＦ（Sigma）＋０．１％ｗ／ｖのＢＳＡ（Sigma）で希釈された、２０ｎＭのビオチン化されたｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅの５μｌを、ＨＴＲＦアッセイ緩衝液で１：１００に希釈された５μｌのストレプタビジンＤ２（Cisbio）で、室温で１時間プレインキュベートした。５μｌのＣＨＯの上澄、または５μｌの参照抗体、またはＣＨＯ培地で５ｎＭの作用濃度に希釈されたマウスＩｇＧ１のアイソタイプコントロールを、白い３８４ウェルの低容量非結合表面ポリスチレンプレート（Greiner）に移した。ＨＴＲＦアッセイ緩衝液で、１：１０００に希釈されたユーロピウムのクリプテート（Cisbio）で標識された、ヤギ抗マウスＩｇＧ（Southern Biotech）を５μｌ、最終希釈が１：４００となるように加えた。ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（Perkin Elmer）を用いて、６２０ｎｍおよび６６５ｎｍの発光波長における時間分解蛍光を読み取るのに先立って、上記プレートを２時間暗闇でインキュベートしたままにした。ハイブリドーマに関して記載されているように、解析を実行した。
【０５８０】
各サンプルについて、各々方程式２および方程式１に従って、６６５／６２０の比率および効果の割合を計算することによって、データを解析した。
【０５８１】
方程式２：６６５／６２０の比率の計算
６６５／６２０の比率＝（サンプルの６６５／６２０ｎｍの値）×１００００。
【０５８２】
ハイブリドーマに由来したクローンについては、組換え２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴの結合から、あるウェルをヒットとして定義するために、２０以上の効果の割合という選択の基準を、発明者らは適用した。ＢＣＴに由来したクローンについては、組換え２１４Ｅ  ｈＬＩＧＨＴの結合から、あるウェルをヒットとして定義するため、１０以上の効果の割合という選択の基準を、発明者らは適用した。
【０５８３】
第２のスクリーニング：発現されている細胞および組換えヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対する結合：
上記に記載されているように、ｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅを発現されているＣＨＯ−Ｓに結合する分泌された抗体が、ｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｋを発現されているＣＨＯ−Ｓにも結合するかどうか（ａ）、場合によっては、未トランスフェクションのＣＨＯ−Ｓにも結合するかどうか（ｂ）、ＣＨＯ−Ｓ  ｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに結合している、組換えＬＴβＲ−Ｆｃまたは組換えＨＶＥＭ−Ｆｃを中和するかどうか（ｃ）、およびビオチン化された組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに結合している、ＬＴβＲ−ＦｃまたはＨＶＥＭ−Ｆｃを中和するための能力（ｄ）を評価するため、上澄をスクリーニングした。
【０５８４】
ｈＬＩＧＨＴを発現されているＣＨＯ−Ｓに対する結合および受容体中和（アッセイａ、アッセイｂおよびアッセイｃ）：
実施例２のように、クローンに由来するハイブリドーマをスクリーニングした。
【０５８５】
方程式３：受容体の結合の割合（ＦＡＣＳ）
相乗平均の蛍光に基づいて、
受容体の結合の％＝
サンプルの値  −  非特異的な結合  ×１００／結合の合計  −  非特異的な結合
非特異的な結合＝抗体なし、受容体なし
結合の合計＝受容体（ＬＴβＲまたはＨＶＥＭ）だけの結合（阻害剤なし）＋１μｇ／ｍｌのアイソタイプコントロール。
【０５８６】
第２のスクリーニング  ＨＴＲＦのリガンド／受容体の中和（アッセイｄ）：
実施例２に記載されているように、ハイブリドーマのクローンをスクリーニングした。
【０５８７】
ＢＣＴに由来したクローンについては、ＨＶＥＭに結合している、組換えによって発現されているｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅを中和するための能力のため、受容体中和ＨＴＲＦアッセイを用いて、ＣＨＯ細胞からの上澄を調べた。以下の変更と共に、実施例２に記載されているように、上記アッセイを実行した。結合の合計を定義するために使用したウェルに対して、５μｌのＬＩＧＨＴ（１０ｎＭの作用、２．５ｎＭの最終）および５μｌのＣＨＯ培地を加えた。非特異的な結合（受容体のみ）を定義するために使用したウェルに対して、１０μｌのＣＨＯ培地を加えた。ハイブリドーマのクローンのように、データを解析した。
【０５８８】
方程式４
６６５／６２０の比率（２）＝サンプルの６６５／６２０ｎｍの値。
【０５８９】
方程式５：受容体の結合の割合（ＨＴＲＦ）
６６５／６２０の比率（２）の計算（方程式４）に基づいて、
受容体の結合の％＝
サンプルの値  −  非特異的な結合  ×１００／結合の合計  −  非特異的な結合
非特異的な結合＝３００ｎＭにおける、受容体および参照抗体
結合の合計＝受容体（ＨＶＥＭまたはＬＴβＲ）およびＬＩＧＨＴ（阻害剤なし）。
【０５９０】
第２のスクリーニングからのヒットの基準の選択：
結合アッセイおよび中和アッセイに基づいてヒットを選択した。ＣＨＯ−ＳのＬＩＧＨＴ−２１４Ｅ／ＨＶＥＭ−ＦｃまたはＬＴβＲ−Ｆｃにおけるヒットを、ＦＡＣＳによって、７０％未満の、ＣＨＯ−ＳのＬＩＧＨＴ−２１４Ｅの細胞に結合している受容体として、発明者らは定義した。ｆｌａｇ−ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭ−ＦｃのＨＴＲＦ中和アッセイまたはｆｌａｇ−ＬＩＧＨＴ／ＬＴβＲ−ＦｃのＨＴＲＦ中和アッセイにおけるヒットを、９０％未満の、受容体の結合を有しているクローンとして定義した。ＣＨＯ−ＳのＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに対する結合、および場合によってはＣＨＯ−ＳのＬＩＧＨＴ  ２１４Ｋに対する結合を、バックグラウンド（マウスＩｇＧ１の結合）の相乗平均の２倍を超える、として定義した。ＢＣＴについては、ＨＴＲＦ中和アッセイによる、ｆｌａｇ−ＬＩＧＨＴ／ＨＶＥＭに結合している受容体の４０％未満を、ヒットであると考えた。カニクイザルＬＩＧＨＴとの交差反応性、および天然のｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅおよび／または組換えｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅに対する結合も、ＢＣＴのヒットの行程に必要とされた。また、ＳＰＲによる見かけの親和性の測定も考慮された。
【０５９１】
［実施例９］
（抗体主要物の性質決定）
選択されたウェルを拡張し、標準的な、タンパク質Ｇに基づいたアフィニティー・クロマトグラフィーの精製を用いて、マウスＣ／ヒトＶのキメラ抗体を精製した（実施例３を参照せよ）。受容体ＨＶＥＭおよび受容ＬＴβＲに対するｈＬＩＧＨＴの結合を阻害するための能力、ならびに高い見かけの親和性でカニクイザルＬＩＧＨＴおよびヒトＬＩＧＨＴに結合するための各抗体の能力を評価するため、ハイブリドーマ由来の２つのクローンおよびＢＣＴの２つのクローンを、種々のアッセイの対象とした。図４Ａは、ＨＴ２９細胞によるｈＬＩＧＨＴに誘導されたＩＬ−８放出を阻害するための、追加のハイブリドーマのクローンの能力を示す。図４Ｂは、ＢＣＴによって生成されたクローンの結果を示す。図４のデータは、少なくとも２つの独立した実験の代表である単一の実験に由来している。図５は、二次の検出抗体のみと比較した、ＣＨＯ−Ｓ−ｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅの細胞に対する、０．６４μｇ／ｍｌにおける主要なハイブリドーマのクローンの結合を示す。図５において、用語「抗体なし」は、使用した一次抗体がないことを明記しており、二次の検出抗体の不使用を明記するのではない。図５のデータは、単一の実験に由来している。特異性を明らかにするため、アイソタイプコントロール（マウスＩｇＧｌ／カッパ、Sigma M9269）を並行して実行した。
【０５９２】
加えて、ヒトＨＶＥＭまたはヒトＬＴβＲのいずれかの受容体に対する、組換えｈＬＩＧＨＴに対する結合を中和するための能力のため、説明したようにＨＴＲＦアッセイにおいて抗体を調べた。
【０５９３】
図６Ａは、追加のハイブリドーマのクローンによる、組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅに結合しているＬＴβＲの中和を示す。図６Ｂは、ｈＬＩＧＨＴに結合しているＨＶＥＭの中和を示す。図６Ａおよび図６Ｂの両方は、少なくとも２つの独立した実験の代表である単一の実験に由来している。両方のアッセイにおいて、アイソタイプコントロールのマウスＩｇＧ１の抗体（Sigma M9269）を実行した。カニクイザルＬＩＧＨＴに対する交差反応性のレベルおよびｈＬＩＧＨＴに対する見かけの親和性を評価しているＳＰＲ解析に関して、主要な抗体を再度対象とした。マウスＬＩＧＨＴに対する交差反応性はなかった。図６Ｃは、ＢＣＴ由来のクローンによってｈＬＩＧＨＴに結合しているＬＴβＲの中和を示し、図６Ｄは、ＨＶＥＭの結合の中和を示す。追加の主要な候補抗体の概要は、表５に見ることができる。
【０５９４】
【表５】
2017504327.tif 000007
【０５９５】
（材料および方法）
ハイブリドーマの上澄からの抗体の精製：
実施例３のように、抗体を精製した。
【０５９６】
ＢＣＴ由来の抗体の再編成
実施例１０のように、抗体０１Ｃ０２および抗体０１Ｃ０６を、ヒンジ領域安定化、非ＦｃＲ結合のヒト定常領域（ＩｇＧ４（ＰＥ））で再編成した。この実施例におけるすべてのアッセイを、これらの再編成された抗体で実行した。
【０５９７】
ＨＴ２９細胞からのＬＩＧＨＴに誘導されたＩＬ８放出の阻害：
実施例３のように、このアッセイを行った。
【０５９８】
ＣＨＯ−Ｓに発現されているｈＬＩＧＨＴに対する、ハイブリドーマの上澄から精製された抗体の結合
本明細書に記載されているように、ハイブリドーマの上澄から精製された抗体の結合を実行した。
【０５９９】
ＨＴＲＦのリガンド／受容体中和：
実施例３のように、抗体１８Ｅ０４および抗体９８Ｃ０７の解析を実行した。
【０６００】
ヒトＩｇＧ４（ＰＥ）定常領域で再編成された、ＢＣＴ由来のクローンの解析のため、以下の変更と共に、実施例３のようにアッセイを実行した：ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ６４７でＨＶＥＭ−ＦｃおよびＬＴβＲ−Ｆｃを標識し、検出のために抗Ｆｌａｇ  Ｋ抗体（Cisbio）を使用した。
【０６０１】
表面プラズモン共鳴解析：
ハイブリドーマ由来のクローンについては、実施例３のようにこれを実行した。ＢＣＴ由来のクローンについては、バイオセンサーの表面に抗ヒトＩｇＧ（Jackson Immunoresearch, 109-005-008,109-006-008 および 309-006-008）を固定した。上記のように、本アッセイのリマインダーを実行した。
【０６０２】
［実施例１０］
（主要な抗体の候補の配列復元）
主要な候補の選択および特性評価の後、フォワードプライマーおよびリバースプライマーの混合物を用いているＲＴ−ＰＣＲを用いて、完全なヒト可変ドメインを復元した。ヒトＩｇＧ４のバックボーンへと抗体を再編成し、ＣＨＯ−Ｓ細胞において一過的な発現のシステムを用いて、発現させた。すべての配列の概要が、配列表（表６）に提示される。
【０６０３】
【表６】
2017504327.tif 000008
【０６０４】
（材料および方法）
ハイブリドーマ細胞からのＲＮＡの単離：
実施例５に記載されているような方法である。
【０６０５】
ＲＴ−ＰＣＲによる、抗体の可変ドメインのリカバリー：
実施例５に記載されているような方法である。
【０６０６】
ヒトＩｇＧ４のバックボーンを有している抗体の再編成
実施例５に記載されているような方法である。
【０６０７】
［実施例１１］
（抗体の結合の特性評価試験）
ＳＰＲを用いている抗体の交差ブロッキングの実験は、単離された抗体は３つの異なるエピトープ分類に分かれることを明らかにした。抗体のクローン０１Ｃ０６および抗体のクローン１８Ｅ０４は、エピトープ分類１に結合し、同様の高い見かけの親和性で、ＬＩＧＨＴのアリルの変異型（２１４Ｅ＆２１４Ｋ）を両方認識することができる。抗体のクローン９８Ｃ０７は、エピトープ分類２に分類され、当該分類は、優性のヒトＬＩＧＨＴのアリルの変異型２１４Ｅに対する高い親和性の結合を可能とするが、劣性のアリルの変異型２１４Ｋに対する結合を、２０倍以上低減させるか、完全に無効にする。最後に、抗体０１Ｃ０２は、エピトープ分類３のバインダーであると特定され、当該分類は、同様の高い見かけの親和性で、両方のヒトＬＩＧＨＴのアリルの変異型（２１４Ｅおよび２１４Ｋ）を認識する。興味深いことに、エピトープ分類２の抗体およびエピトープ分類３の抗体は、ｈＬＩＧＨＴの結合について、互いと競合する。しかし、エピトープ分類２の抗体はＬＩＧＨＴの劣性のアリルの変異型を認識できないが、エピトープ分類３は認識できる、という異なる結合の特徴のため、エピトープ分類２の抗体およびエピトープ分類３の抗体は、ＬＩＧＨＴの分子の表面の異なるエピトープに結合するに違いない。エピトープ分類１の抗体およびエピトープ分類３の抗体は互いと競合せず、従って、異なるエピトープを結合するに違いない。
【０６０８】
【表７】
2017504327.tif 000009
【０６０９】
（材料および方法）
抗体の競合ＳＰＲ：
実施例４に記載されているように、競合ＳＰＲアッセイを実行した。実施例５に記載されているように、ヒトＩｇＧ４（ＰＥ）のバックボーンですべての抗体を再編成した。
【０６１０】
［実施例１２］
（ウサギＬＩＧＨＴに対する、主要な抗体の結合の評価）
ＩＣ５０の値に基づいて、上位８つの抗体を、ウサギＬＩＧＨＴに対する結合について評価した。主要なｍＡｂはマウスＬＩＧＨＴを結合しないため、ウサギＬＩＧＨＴに対する結合は、動物モデルの観点でさらなる選択の余地を提供し得る。３つのツールｍＡｂと並行して、主要な抗体をＳＰＲによって解析した。結果を図７に示す。８つの主要な抗体のうち４つに、だいたい同様の反応速度で、ヒトＬＩＧＨＴタンパク質およびウサギＬＩＧＨＴタンパク質（各々、配列番号３０８および配列番号４２３）を結合することが示された。興味深いことに、ツール抗体はウサギＬＩＧＨＴを結合しない。最後の主要なパネルとして、４つのバインダーを選択した；１Ｃ０２、１３Ｈ０４、９８Ｃ０７および３１Ａ１０である。これら４つの抗体はまた、実施例４および実施例１１に記載されているように、３つのエピトープ分類に分配される。
【０６１１】
（材料および方法）
ヒトＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅタンパク質およびウサギＬＩＧＨＴタンパク質の結合を、ＰｒｏｔｅＯｎ  ＸＰＲ３６アレイシステム（BioRad）を用いている表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて行った。３つの抗ヒト抗体（Jackson Labs,109-005-008,109-006-008および309-006-008）の混合物を、１０ｍＭ、ｐＨ４．５の酢酸塩中２５？ｇ／ｍｌの濃度で、一次アミンカップリングによって、ＧＬＣチップ上に固定した。これによって、ヒト抗体を捕捉するのに適切な捕捉の表面を作製した。この抗ヒトＩｇＧの表面にＬＩＧＨＴ抗体を捕捉し、その後、ヒトＬＩＧＨＴタンパク質およびウサギＬＩＧＨＴタンパク質を２００ｎＭの濃度で、捕捉されたＬＩＧＨＴの複数のＡｂ上を通過させた。ＬＩＧＨＴの結合のセンサーグラムを二重参照するため、緩衝液の注入を使用した。ランニング緩衝液としてＨＢＳ−ＥＰを用いて、２５℃でアッセイを実行した。
【０６１２】
［実施例１３］
（最終的なリード群パネルの特性）
最終的なＩｇＧ４（ＰＥ）形態のリード群パネルを、実施例３の場合のように、無効化（neutralization）活性について分析した。抗体を、ＬＩＧＨＴがその受容体であるＨＶＥＭおよびＬＴβＲに結合しなくさせるそれらの能力について、ＨＴＲＦアッセイにおいて試験した。また、抗体を、ＴＨ２９結腸がん細胞による、ＬＩＧＨＴに誘導されるＩＬ−８放出をなくさせる、それらの能力について試験した。リードｍＡｂ特性の結果およびまとめを、表８および図８に示している。
【０６１３】
【表８】
2017504327.tif 000010
【０６１４】
最終的なリード群は、優れた結合特性および無効化特性を有している。すべてのリードが、ＬＩＧＨＴに湯堂されるＩＬ−８放出を、４つのうち３つのリードについてｎＭ以下のＩＣ５０値を有して、なくさせた。４つのリードすべてが、５ｎＭ未満のＩＣ５０値を有して、可溶性のＨＶＥＭおよびＬＴβＲに対するＬＩＧＨＴの結合をなくさせた。４つのリードは、ｎＭ以下の親和性を有して、ヒトおよびカニクイザルのＬＩＧＨＴの両方を結合し、すべてのリードは、９８Ｃ０７を除いて、ヒトＬＩＧＨＴのメジャーバリアントおよびマイナーバリアントの両方を結合する。
【０６１５】
（材料および方法）
ＨＴＲＦアッセイを、以下の変更を加えて、実施例３のように実施した。
ＨＶＥＭ−ＦｃおよびＬＴβＲ−Ｆｃを、AlexaFluor 647を用いて標識し、抗ＦＬＡＧ  Ｋ抗体（Cisbio）を検出に使用した。
【０６１６】
ＴＨ２９  ＩＬ−８放出アッセイを実施例３のように実施した。ＳＰＲを実施例９に記載されているような、ＢＣＴによって誘導されたクローンのように実施した。
【０６１７】
〔ＬＩＧＨＴ配列〕
［ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅ（陰性、コドン最適化なしの配列）］
（ヌクレオチド配列）
【０６１８】
【化１】
2017504327.tif 000011
【０６１９】
［配列番号２９９］。
【０６２０】
（アミノ酸配列）
【０６２１】
【化２】
2017504327.tif 000012
【０６２２】
［配列番号３００］
二重下線：アリールバリアント。
【０６２３】
［ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｋ（陰性、コドン最適化なしの配列）］
（ヌクレオチド配列）
【０６２４】
【化３】
2017504327.tif 000013
【０６２５】
［配列番号３０１］。
【０６２６】
（アミノ酸配列）
【０６２７】
【化４】
2017504327.tif 000014
【０６２８】
［配列番号３０２］
二重下線：アリールバリアント。
【０６２９】
［ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅ（コドン最適化配列−バージョン１）］
安定な細胞株（免疫化に使用されるＭＥＦ細胞、スクリーニング用のＣＨＯ細胞）を作製するために使用されるようなヒトＬＩＧＨＴのコドンを最適化した。このＬＩＧＨＴは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質テイルを有している十分な長さである。
【０６３０】
（ヌクレオチド配列）
【０６３１】
【化５】
2017504327.tif 000015
【０６３２】
［配列番号３０３］。
【０６３３】
（アミノ酸配列）
【０６３４】
【化６】
2017504327.tif 000016
【０６３５】
［配列番号３０４］
二重下線：アリールバリアント。
【０６３６】
［ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｋ（コドン最適化配列−バージョン１）］
安定な細胞株（免疫化に使用されるＭＥＦ細胞、スクリーニング用のＣＨＯ細胞）を作製するために使用されるようなヒトＬＩＧＨＴのコドンを最適化した。このＬＩＧＨＴは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質テイルを有している十分な長さである。
【０６３７】
（ヌクレオチド配列）
【０６３８】
【化７】
2017504327.tif 000017
【０６３９】
［配列番号３０５］。
【０６４０】
（アミノ酸配列）
【０６４１】
【化８】
2017504327.tif 000018
【０６４２】
［配列番号３０６］。
二重下線：アリールバリアント。
【０６４３】
［ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｅ（コドン最適化配列−バージョン２；ＦＬＡＧタグを含んでいる）］
［ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｋ（コドン最適化配列−バージョン１）］
また、ＣＨＯ細胞において組換えＬＩＧＨＴを発現させるために使用されるようなヒトＬＩＧＨＴ（切断可能なＦＬＡＧタグを含んでいる）のコドンを最適化した。
【０６４４】
（ヌクレオチド配列）
【０６４５】
【化９】
2017504327.tif 000019
【０６４６】
［配列番号３０７］
二重下線：アリールバリアント。
【０６４７】
（アミノ酸配列）
【０６４８】
【化１０】
2017504327.tif 000020
【０６４９】
［配列番号３０８］
下線：ＩｇＫリーダーペプチド
イタリック：ＦＬＡＧタグ
下線ありのイタリック：リンカー
下線ありの太字：ＸＦａ切断部位
太字：ｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅ細胞外ドメイン（Ａｓｐ〜Ｖａｌ２４０）
二重下線：アリールバリアント。
【０６５０】
［ヒトＬＩＧＨＴ−２１４Ｋ（コドン最適化配列−バージョン２；ＦＬＡＧタグ）］
また、ＣＨＯ細胞において組換えＬＩＧＨＴを発現させるために使用されるようなヒトＬＩＧＨＴ（切断可能なＦＬＡＧタグを含んでいる）のコドンを最適化した。
【０６５１】
（ヌクレオチド配列）
【０６５２】
【化１１】
2017504327.tif 000021
【０６５３】
［配列番号３０９］。
【０６５４】
（アミノ酸配列）
【０６５５】
【化１２】
2017504327.tif 000022
【０６５６】
［配列番号３１０］
下線：ＩｇＫリーダーペプチド
イタリック：ＦＬＡＧタグ
下線ありのイタリック：リンカー
下線ありの太字：ＦＸａ切断部位
二重下線：アリールバリアント
［ウサギＬＩＧＨＴタンパク質のアミノ酸配列］
DYKDDDDKGGGSGGGSGGGSIEGRDQDTGSWEQLVQARRSHKASPAAHLTGANSSSMGTGGPLLWETQLGLAFLRGLGYHDGALVTTQAGYYYIYSKVQLGGVGCPQGLATDLPVTHGLYKRTTRYPEELELLVSRRSPCGRAASSRVWWDSSFLGGVVHLEAGEEVVVRVLEEQLVRLRDGTRSYFGAFMV
ここで、
DYKDDDDK＝ＦＬＡＧタグ；
GGGSGGGSGGGS＝ＧＳリンカー；
IEGR＝因子Ｘａ切断部位；
残りの配列はＬＩＧＨＴタンパク質配列である。
【０６５７】
【表９】
2017504327.tif 000023
【０６５８】
【表１０】
2017504327.tif 000024
【０６５９】
【表１１】
2017504327.tif 000025
【０６６０】
【表１２】
2017504327.tif 000026
【０６６１】
【表１３】
2017504327.tif 000027
【０６６２】
【表１４】
2017504327.tif 000028
【０６６３】
【表１５】
2017504327.tif 000029
【０６６４】
【表１６】
2017504327.tif 000030
【０６６５】
【表１７】
2017504327.tif 000031
【０６６６】
【表１８】
2017504327.tif 000032
【０６６７】
【表１９】
2017504327.tif 000033
【０６６８】
【表２０】
2017504327.tif 000034
【０６６９】
【表２１】
2017504327.tif 000035
【０６７０】
【表２２】
2017504327.tif 000036
【０６７１】
【表２３】
2017504327.tif 000037
【０６７２】
【表２４】
2017504327.tif 000038
【０６７３】
【表２５】
2017504327.tif 000039
【０６７４】
【表２６】
2017504327.tif 000040
【０６７５】
【表２７】
2017504327.tif 000041
【０６７６】
【表２８】
2017504327.tif 000042
【０６７７】
【表２９】
2017504327.tif 000043
【０６７８】
【表３０】
2017504327.tif 000044
【０６７９】
【表３１】
2017504327.tif 000045
【０６８０】
【表３２】
2017504327.tif 000046
【０６８１】
【表３３】
2017504327.tif 000047
【０６８２】
【表３４】
2017504327.tif 000048
【０６８３】
【表３５】
2017504327.tif 000049
【０６８４】
【表３６】
2017504327.tif 000050
【０６８５】
【表３７】
2017504327.tif 000051
【０６８６】
【表３８】
2017504327.tif 000052
【０６８７】
【表３９】
2017504327.tif 000053
【０６８８】
【表４０】
2017504327.tif 000054
【０６８９】
【表４１】
2017504327.tif 000055
【０６９０】
【表４２】
2017504327.tif 000056
【０６９１】
【表４３】
2017504327.tif 000057
【０６９２】
【表４４】
2017504327.tif 000058
【０６９３】
【表４５】
2017504327.tif 000059
【０６９４】
【表４６】
2017504327.tif 000060
【０６９５】
【表４７】
2017504327.tif 000061
【０６９６】
【表４８】
2017504327.tif 000062
【０６９７】
【表４９】
2017504327.tif 000063
【０６９８】
【表５０】
2017504327.tif 000064
【０６９９】
【表５１】
2017504327.tif 000065
【０７００】
【表５２】
2017504327.tif 000066
【０７０１】
【表５３】
2017504327.tif 000067
【０７０２】
【表５４】
2017504327.tif 000068
【０７０３】
【表５５】
2017504327.tif 000069
【０７０４】
【表５６】
2017504327.tif 000070
【０７０５】
【表５７】
2017504327.tif 000071
【０７０６】
【表５８】
2017504327.tif 000072
【０７０７】
【表５９】
2017504327.tif 000073
【０７０８】
【表６０】
2017504327.tif 000074
【０７０９】
【表６１】
2017504327.tif 000075
【０７１０】
【表６２】
2017504327.tif 000076
【図面の簡単な説明】
【０７１１】
【図１】ＴＨ２９細胞によるＩＬ−８分泌を誘導するために組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅが培養物に加えられているＨＴ２９  ＩＬ−８サイトカイン放出アッセイにおける、８つすべての同定されたリードｍＡｂ候補物を示している。
【図２−１】検出２次抗体のみと比べた、ＣＨＯ−Ｓ−ｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅ細胞に対するリードクローンの結合を示している。
【図２−２】検出２次抗体のみと比べた、ＣＨＯ−Ｓ−ｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅ細胞に対するリードクローンの結合を示している。
【図２−３】検出２次抗体のみと比べた、ＣＨＯ−Ｓ−ｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅ細胞に対するリードクローンの結合を示している。
【図２−４】検出２次抗体のみと比べた、ＣＨＯ−Ｓ−ｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅ細胞に対するリードクローンの結合を示している。
【図２−５】検出２次抗体のみと比べた、アイソタイプコントロールの結合を示している。
【図３】８つのリード抗体を、実施例２に概要の説明されているようなＨＴＲＦアッセイにおいて、組換えｈＬＩＧＨＴの、その受容体に対する結合をなくさせるそれらの能力について試験した結果を示している。
【図４】ＨＴ２９細胞によるＩＬ−８分泌を誘導するために組換えｈＬＩＧＨＴ−２１４Ｅが加えられているＨＴ２９  ＩＬ−８放出アッセイにおける、さらなる２つのハイブリドーマに由来するリードｍＡｂ候補物、および一様なＢ細胞からクローン化された、同定された２つの主要なｍＡｂを示している。
【図５】検出２次抗体のみと比べた、さらなる２つのハイブリドーマに由来するリード抗体の、ＣＨＯ−Ｓ−ｈＬＩＧＨＴ  ２１４Ｅ細胞に対する結合を示している。
【図６】さらなる２つのハイブリドーマに由来する抗体を、実施例２に概要の説明されているようなＨＴＲＦアッセイにおいて、組換えｈＬＩＧＨＴの、その受容体に対する結合をなくさせるそれらの能力について試験した結果を示している。
【図７−１】ＳＰＲアッセイにおけるヒトＬＩＧＨＴ−２１４ＥおよびウサギＬＩＧＨＴに対する抗体の結合を示している。
【図７−２】ＳＰＲアッセイにおけるヒトＬＩＧＨＴ−２１４ＥおよびウサギＬＩＧＨＴに対する抗体の結合を示している。
【図７−３】ＳＰＲアッセイにおけるヒトＬＩＧＨＴ−２１４ＥおよびウサギＬＩＧＨＴに対する抗体の結合を示している。
【図７−４】ＳＰＲアッセイにおけるヒトＬＩＧＨＴ−２１４ＥおよびウサギＬＩＧＨＴに対する抗体の結合を示している。
【図７−５】ＳＰＲアッセイにおけるヒトＬＩＧＨＴ−２１４ＥおよびウサギＬＩＧＨＴに対する抗体の結合を示している。
【図７−６】ＳＰＲアッセイにおけるヒトＬＩＧＨＴ−２１４ＥおよびウサギＬＩＧＨＴに対する抗体の結合を示している。
【図８】４つの抗体の最後の群を、実施例１３に概要の説明されているＨＴＲＦアッセイにおいて、組換えヒトＬＩＧＨＴの、その受容体に対する結合を消失させるそれらの能力について試験した結果を示している。
【図１】
2017504327.tif 000077
【図２−１】
2017504327.tif 000078
【図２−２】
2017504327.tif 000079
【図２−３】
2017504327.tif 000080
【図２−４】
2017504327.tif 000081
【図２−５】
2017504327.tif 000082
【図３】
2017504327.tif 000083
【図４】
2017504327.tif 000084
【図５】
2017504327.tif 000085
【図６】
2017504327.tif 000086
【図７−１】
2017504327.tif 000087
【図７−２】
2017504327.tif 000088
【図７−３】
2017504327.tif 000089
【図７−４】
2017504327.tif 000090
【図７−５】
2017504327.tif 000091
【図７−６】
2017504327.tif 000092
【図８】
2017504327.tif 000093
【配列表】
2017504327000001.app
【国際調査報告】
2017504327.tif 000094
2017504327.tif 000095
2017504327.tif 000096
2017504327.tif 000097
2017504327.tif 000098
2017504327.tif 000099