(57)【要約】  本開示のいくつかの側面は、対象の癌、例えば頭頸部癌の処置のための方法および組成物を提供し、ＡＬＫ１阻害剤、例えばＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチド、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質、またはＡＬＫ１阻害抗体を用いる。いくつかの態様においては、白金化学療法剤と組み合わせたＡＬＫ１阻害剤によってある癌を処置するための方法および組成物が提供される。いくつかの態様においては、単独のまたは白金化学療法剤と組み合わせたＡＬＫ１アンタゴニストによる療法に対して対象の癌が反応するであろうかどうかを、例えば対象の癌がヒトパピローマウイルスについて陽性であるという決定に基づいて特定するための方法が提供される。
2017511314.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
方法が、その必要がある対象に、
（ａ）（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、
（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、または
（ｉｉｉ）ＢＭＰ９もしくはＢＭＰ１０に結合する抗体、
からなる群から選択される薬剤と、
（ｂ）白金化学療法剤と、
を、対象の頭頸部癌を処置するために十分な量で投与することを含む、
対象の頭頸部癌を処置する方法。
【請求項２】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基がグルタミン残基ではない、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のプロリン１１３  （Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドが免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
Ｆｃ部分がヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４の配列を含む、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１１】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１２】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％が二量体形態である、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質がグリコシル化される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が１×１０−７Ｍ未満のＫＤでＢＭＰ９またはＢＭＰ１０を結合する、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が１×１０−６Ｍ超のＫＤでＴＧＦβ−１に結合する、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が医薬調製物として投与される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
（ｉｉ）の抗体が５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
（ｉｉ）の抗体が１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
（ｉｉ）の抗体がＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する、請求項１、１７、または１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
（ｉｉ）の抗体がＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに対するＢＭＰ９またはＢＭＰ１０の結合を阻害する、請求項１または１７〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
（ｉｉｉ）の抗体が５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
（ｉｉｉ）の抗体が少なくとも１つのＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する、請求項１または２１に記載の方法。
【請求項２３】
白金化学療法剤が白金の配位複合体を含む、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
白金化学療法剤がシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、Triplatin、Lipoplatin、またはそのいずれかの組み合わせである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
白金化学療法剤が０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
白金化学療法剤が０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、７．５、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与され、白金化学療法剤が５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
頭頸部癌がヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）について陽性である、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
方法が、頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるかどうかを決定することをさらに含む、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
（ａ）の薬剤および（ｂ）の化学療法剤が頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるということに基づいて投与される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
頭頸部癌が再発性または転移性扁平上皮癌である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
方法が、その必要がある対象に、
（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、
（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、および
（ｉｉｉ）ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する抗体、
からなる群から選択される薬剤を、対象の頭頸部癌を処置するために十分な量で投与することを含む、
対象のＨＰＶ陽性の頭頸部癌を処置するための方法。
【請求項３５】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である、請求項３４または３５に記載の方法。
【請求項３７】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基がグルタミン残基ではない、請求項３４〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドが免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する、請求項３４〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
Ｆｃ部分がヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４の配列を含む、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４３】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４４】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である、請求項４０または４１に記載の方法。
【請求項４５】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％が二量体形態である、請求項４０〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質がグリコシル化される、請求項３４〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が１×１０−７Ｍ未満のＫＤでＢＭＰ９またはＢＭＰ１０を結合する、請求項３４〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が１×１０−６Ｍ超のＫＤでＴＧＦβ−１に結合する、請求項３４〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が医薬調製物として投与される、請求項３４〜４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
（ｉｉ）の抗体が５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する、請求項３４に記載の方法。
【請求項５１】
（ｉｉ）の抗体が１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する、請求項３４に記載の方法。
【請求項５２】
（ｉｉ）の抗体がＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する、請求項３４、５０、または５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
（ｉｉ）の抗体がＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに対するＢＭＰ９またはＢＭＰ１０の結合を阻害する、請求項３４または５０〜５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５４】
（ｉｉｉ）の抗体が５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する、請求項３４に記載の方法。
【請求項５５】
（ｉｉｉ）の抗体が少なくとも１つのＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する、請求項３４または５４に記載の方法。
【請求項５６】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項３４〜５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項３４〜５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
頭頸部癌が再発性または転移性扁平上皮癌である、請求項３４〜５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
方法が、頭頸部癌がヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）陽性であるということを決定することをさらに含む、請求項３４〜５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
方法が、頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるということに基づいて、頭頸部癌が薬剤による処置に対して応答性であると特定することをさらに含む、請求項３４〜５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
薬剤が、頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるということに基づいて投与される、請求項３４〜６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
方法が、対象に白金化学療法剤を投与することをさらに含む、請求項３４〜６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
白金化学療法剤が白金の配位複合体を含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
白金化学療法剤がシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、Triplatin、Lipoplatin、またはそのいずれかの組み合わせである、請求項６２〜６３に記載の方法。
【請求項６５】
白金化学療法剤が０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項６２〜６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
白金化学療法剤が０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、７．５、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項６２〜６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与され、白金化学療法剤が５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与される、請求項６２〜６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
（ａ）対象の頭頸部癌がヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）陽性であるかどうかを決定し、頭頸部癌がＨＰＶについて陽性である場合には、そこで、癌が、
（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、
（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、および
（ｉｉｉ）ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する抗体、
からなる群から選択される薬剤による処置に対して応答すると特定されることと、
（ｂ）頭頸部癌を処置するために有効な量で対象に薬剤を投与することと、
を含む方法。
【請求項６９】
方法が、対象の頭頸部癌から生検を得ることをさらに含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である、請求項６８または６９に記載の方法。
【請求項７１】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である、請求項６８〜７０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７２】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない、請求項６８〜７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基がグルタミン残基ではない、請求項６８〜７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のプロリン１１３  （Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である、請求項６８〜７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドが免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する、請求項６８〜７４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７６】
Ｆｃ部分がヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４の配列を含む、請求項７５または７６に記載の方法。
【請求項７８】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、請求項７５または７６に記載の方法。
【請求項７９】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である、請求項７５または７６に記載の方法。
【請求項８０】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％が二量体形態である、請求項７５〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質がグリコシル化される、請求項６８〜８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質がDalanterceptである、請求項６８〜８１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８３】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項６８〜８２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８４】
頭頸部癌が再発性または転移性扁平上皮癌である、請求項６８〜８３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８５】
（ａ）対象の頭頸部癌から生検を得ることと、
（ｂ）頭頸部癌がＨＰＶ陽性であるかどうかを決定することと、
（ｃ）頭頸部癌がＨＰＶについて陽性である場合には、頭頸部癌が、
（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、
（ｉｉ）配列番号1のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、および
（ｉｉｉ）ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する抗体、
からなる群から選択される薬剤による処置に対して応答性であると特定することと、
を含む方法。
【請求項８６】
方法が、頭頸部癌を処置するために有効な量で対象に薬剤を投与することをさらに含む、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号1のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である、請求項８５または８６に記載の方法。
【請求項８８】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である、請求項８５〜８７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８９】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない、請求項８５〜８８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９０】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基がグルタミン残基ではない、請求項８５〜８９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９１】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である、請求項８５〜９０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドが免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する、請求項８５〜９１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９３】
Ｆｃ部分がヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４の配列を含む、請求項９２または９３に記載の方法。
【請求項９５】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、請求項９２または９３に記載の方法。
【請求項９６】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である、請求項９２または９３に記載の方法。
【請求項９７】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％が二量体形態である、請求項９２〜９６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質がグリコシル化される、請求項８５〜９７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９９】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質がDalanterceptである、請求項８５〜９８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１００】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドが０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される、請求項８５〜９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０１】
頭頸部癌が再発性または転移性扁平上皮癌である、請求項８５〜１００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０２】
組成物が、
（ａ）（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、
（ｉｉ）ＢＭＰ９もしくはＢＭＰ１０に結合する抗体、または
（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、
からなる群から選択される薬剤と、
（ｂ）白金化学療法剤と、
を含み、
（ａ）の薬剤および白金化学療法剤が、対象の頭頸部癌を処置するために十分な量である、
対象の頭頸部癌の処置のための医薬組成物。
【請求項１０３】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である、請求項１０２に記載の医薬組成物。
【請求項１０４】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である、請求項１０２または１０３に記載の医薬組成物。
【請求項１０５】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない、請求項１０２〜１０４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０６】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基がグルタミン残基ではない、請求項１０２〜１０５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０７】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基が配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である、請求項１０２〜１０６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０８】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドが免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する、請求項１０２〜１０７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１０９】
Ｆｃ部分がヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である、請求項１０８に記載の医薬組成物。
【請求項１１０】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が配列番号３または配列番号４の配列を含む、請求項１０２〜１０９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１１】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である、請求項１０９または１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列が配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である、請求項１０９または１１０に記載の方法。
【請求項１１３】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が１×１０−７Ｍ未満のＫＤでＢＭＰ９またはＢＭＰ１０を結合する、請求項１０２〜１１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１４】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質が１×１０−６Ｍ超のＫＤでＴＧＦβ−１に結合する、請求項１０２〜１１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１５】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドが医薬調製物として投与され、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％が二量体形態である、請求項１０２〜１１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１６】
（ｉｉ）の抗体が５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する、請求項１０２に記載の医薬組成物。
【請求項１１７】
（ｉｉ）の抗体が１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する、請求項１０２に記載の医薬組成物。
【請求項１１８】
（ｉｉ）の抗体がＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する、請求項１０２、１１６、または１１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１９】
（ｉｉ）の抗体がＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに対するＢＭＰ９またはＢＭＰ１０の結合を阻害する、請求項１０２または１１６５〜１１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２０】
（ｉｉｉ）の抗体が５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する、請求項１０２に記載の医薬組成物。
【請求項１２１】
（ｉｉｉ）の抗体が少なくとも１つのＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する、請求項１０２または１２０に記載の医薬組成物。
【請求項１２２】
白金化学療法剤が白金の配位複合体を含む、請求項１０２〜１２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２３】
白金化学療法剤がシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、Triplatin、Lipoplatin、またはそのいずれかの組み合わせである、請求項１０２〜１２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１２４】
頭頸部癌が再発性または転移性扁平上皮癌である、請求項１０２〜１２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、「Use of Activin Receptor-Like Kinase 1 (Alk-1) Antagonists in the Treatment of Cancer」と題する２０１４年３月２８日出願の米国仮特許出願シリアル番号ＵＳ６１／９７２，２０４の米国特許法第１１９条（ｅ）の下における出願日の利益を請求し、その内容全体は参照によって本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
癌は死亡の主な原因であり、異常細胞のコントロールされていない成長および広がりを特徴とする。腫瘍の多くの型は、満足な栄養および酸素を供給して癌細胞が成長し、近くの組織に侵入し、体の他の箇所に広がることを可能にするためには、新しい血管の成長（血管新生）に依存する。血管新生阻害は癌の処置の広く用いられるアプローチである。血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）経路をブロックすることによって働く数個の血管新生阻害剤が認可されているかまたは開発中である。それらの療法は単独でまたは化学療法および／もしくは放射線と組み合わせて与えられて、生存率を有意に改善し得る。
【０００３】
例えば、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）に結合するモノクローナル抗体アバスチン（商標）（ベバシズマブ）は種々の癌の処置に有効であると判明している。ＶＥＧＦに結合するアプタマーMacugen（商標）は血管新生型（滲出型）加齢黄斑変性の処置に有効であると判明している。ＳＤＦ／ＣＸＣＲ４シグナル伝達経路のアンタゴニストはマウスモデルにおいて腫瘍の血管新生を阻害し、癌に対して有効である（Guleng et al. Cancer Res. 2005 Jul 1;65(13):5864-71）。イソクマリン２−（８−ヒドロキシ−６−メトキシ−１−オキソ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−３−イル）プロピオン酸（ＮＭ−３）はインビトロの内皮および腫瘍細胞を両方とも直接的に殺し、マウスにおけるさまざまなヒト腫瘍異種移植の処置に有効である（Agata et al. Cancer Chemother Pharmacol. 2005 Dec;56(6):610-4.）。サリドマイドおよび関連化合物は癌の処置に有利な効果を示しており、血管新生の阻害がその抗腫瘍効果の重要な構成要素であるように見える（例えば、Dredge et al. Microvasc Res. 2005 Jan;69(1-2):56-63参照）。関節リウマチの処置におけるＴＮＦ−アルファアンタゴニストの成功は部分的には炎症関節組織に対する抗血管新生効果に帰せられる（Feldmann et al. Annu Rev Immunol. 2001;19:163-96）。
【０００４】
ＶＥＧＦ阻害剤はある腫瘍の処置においては重要な役割を果たす一方で、いくつかの腫瘍はＶＥＧＦ阻害剤単独による処置に対して全く反応しないかまたは一時的にしか反応しない。従って、癌療法の文脈において、血管新生を阻害するための追加の組成物および方法を有することが望ましい。
【発明の概要】
【０００５】
本開示のいくつかの側面は対象の癌の処置のための方法および組成物を提供する。いくつかの態様においては、ＡＬＫ１アンタゴニストによってある癌を処置するための方法および組成物が提供される。いくつかの態様においては、癌がＡＬＫ１アンタゴニストによる処置に対して反応するであろうかどうかを特定するための方法が提供される。ＡＬＫ１アンタゴニストおよび白金化学療法剤による癌の併用療法のための追加の方法および組成物が提供される。
【０００６】
本開示のいくつかの側面は、対象の頭頸部癌を処置するための方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、その必要がある対象に、（ａ）（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、または（ｉｉｉ）ＢＭＰ９もしくはＢＭＰ１０に結合する抗体からなる群から選択される薬剤と（ｂ）白金化学療法剤とを、対象の頭頸部癌を処置するために十分な量で投与することを含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。
【０００７】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％は二量体形態である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はグリコシル化される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−７Ｍ未満のＫＤ、例えば１×１０−８Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、または１×１０−１１Ｍ未満のＫＤでＢＭＰ９またはＢＭＰ１０を結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−６Ｍ超のＫＤでＴＧＦβ−１に結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は医薬調製物として投与される。
【０００８】
いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに対するＢＭＰ９またはＢＭＰ１０の結合を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は少なくとも１つのＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。
【０００９】
いくつかの態様において、白金化学療法剤は白金の配位複合体を含む。いくつかの態様において、白金化学療法剤はシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、Triplatin、Lipoplatin、またはそのいずれかの組み合わせである。
【００１０】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様においては、より高い総投薬量が企図される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、７．５、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与され、白金化学療法剤は５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与される。
【００１１】
いくつかの態様において、頭頸部癌はヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）について陽性である。いくつかの態様において、方法は頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるかどうかを決定することをさらに含む。いくつかの態様において、（ａ）の薬剤および（ｂ）の化学療法剤は、頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるということに基づいて投与される。いくつかの態様において、頭頸部癌は再発性または転移性扁平上皮癌である。
【００１２】
本開示のいくつかの側面は、対象のＨＰＶ陽性の頭頸部癌を処置するための方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、その必要がある対象に（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、および（ｉｉｉ）ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する抗体からなる群から選択される薬剤を、対象の頭頸部癌を処置するために十分な量で投与することを含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。
【００１３】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％は二量体形態である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はグリコシル化される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−７Ｍ未満のＫＤ、例えば１×１０−８Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、または１×１０−１１Ｍ未満のＫＤでＢＭＰ９またはＢＭＰ１０を結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−６Ｍ超のＫＤでＴＧＦβ−１に結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は医薬調製物として投与される。
【００１４】
いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに対するＢＭＰ９またはＢＭＰ１０の結合を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は少なくとも１つのＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。
【００１５】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。
【００１６】
いくつかの態様において、頭頸部癌は再発性または転移性扁平上皮癌である。いくつかの態様において、方法は、頭頸部癌がＨＰＶ陽性であるということを決定することをさらに含む。いくつかの態様において、方法は、頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるということに基づいて、頭頸部癌が薬剤による処置に対して応答性であると特定することをさらに含む。いくつかの態様において、薬剤は頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるということに基づいて投与される。
【００１７】
いくつかの態様において、方法は白金化学療法剤を対象に投与することをさらに含む。いくつかの態様において、白金化学療法剤は白金の配位複合体を含む。いくつかの態様において、白金化学療法剤はシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、Triplatin、Lipoplatin、またはそのいずれかの組み合わせである。
【００１８】
いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、７、７．５、８、９、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与され、白金化学療法剤は５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与される。
【００１９】
本開示のいくつかの側面は、癌がＡＬＫ１アンタゴニストによる処置に対して応答するかどうかを特定するための方法を提供する。いくつかの態様において、方法は（ａ）対象の頭頸部癌がＨＰＶ陽性であるかどうかを決定することを含み、頭頸部癌がＨＰＶについて陽性である場合には、そこで、癌はＡＬＫ１アンタゴニストによる処置に対して応答すると特定される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１アンタゴニストは、（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、および（ｉｉｉ）ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する抗体からなる群から選択される薬剤である。いくつかの態様において、方法は、（ｂ）頭頸部癌を処置するために有効な量で対象にＡＬＫ１アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの態様において、方法は対象の頭頸部癌から生検を得ることをさらに含む。
【００２０】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％は二量体形態である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はグリコシル化される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はDalanterceptである。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、頭頸部癌は再発性または転移性扁平上皮癌である。
【００２１】
本開示のいくつかの側面は、（ａ）対象の頭頸部癌から生検を得ることと、（ｂ）頭頸部癌がＨＰＶ陽性であるかどうかを決定することと、（ｃ）頭頸部癌がＨＰＶについて陽性である場合には、頭頸部癌が（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、および（ｉｉｉ）ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する抗体からなる群から選択される薬剤による処置に対して応答性であると特定することと、を含む方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、頭頸部癌を処置するために有効な量で対象に薬剤を投与することをさらに含む。
【００２２】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％は二量体形態である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はグリコシル化される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はDalanterceptである。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、頭頸部癌は再発性または転移性扁平上皮癌である。
【００２３】
本開示のいくつかの側面は対象の頭頸部癌の処置のための医薬組成物を提供する。いくつかの態様において、組成物は（ａ）（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、（ｉｉ）ＢＭＰ９もしくはＢＭＰ１０に結合する抗体、または（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体からなる群から選択される薬剤と（ｂ）白金化学療法剤とを含み、（ａ）の薬剤および白金化学療法剤は対象の頭頸部癌を処置するために十分な量である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−７Ｍ未満のＫＤ、例えば１×１０−８Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、または１×１０−１１Ｍ未満のＫＤでＢＭＰ９またはＢＭＰ１０を結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−６Ｍ超のＫＤでＴＧＦβ−１に結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは医薬調製物として投与され、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％は二量体形態である。
【００２４】
いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに対するＢＭＰ９またはＢＭＰ１０の結合を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は少なくとも１つのＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。
【００２５】
いくつかの態様において、白金化学療法剤は白金の配位複合体を含む。いくつかの態様において、白金化学療法剤はシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、Triplatin、Lipoplatin、またはそのいずれかの組み合わせである。いくつかの態様において、頭頸部癌は再発性または転移性扁平上皮癌である。
【００２６】
上の概要は、本明細書において開示されるテクノロジーの態様、利点、特徴、および使用のいくつかを限定しない様式で例示することを意味されている。本明細書において開示されるテクノロジーの他の態様、利点、特徴、および使用は、発明を実施するための形態、図面、実施例、および特許請求の範囲から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】腫瘍成長。コントロール、ＡＣＥ−０４１処置、シスプラチン処置、および併用処置の比較。
【００２８】
【図２】動物の体重の変化。コントロール、ＡＣＥ−０４１処置、シスプラチン処置、および併用処置の比較。
【００２９】
【図３】研究の終わりの個々の体重の変化。コントロール、ＡＣＥ−０４１処置、シスプラチン処置、および併用処置の比較。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
本開示のいくつかの側面は、癌の処置におけるＡＬＫ１阻害剤の有効性が、かかる阻害剤を白金化学療法剤と組み合わせて用いることによってさらに改善され得るという驚くべき発見に関し、一方、いくつかの他の化学療法剤はＡＬＫ１阻害剤と組み合わせて用いられたときにかかる相乗的な効果を示さなかった。本開示のいくつかの側面は、癌のいくつかの型、例えばヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）陽性の癌がＡＬＫ１阻害剤による処置に対して特に感受性であるという驚くべき発見に関する。それゆえに、本明細書において提供される組成物および方法は、ＡＬＫ１阻害剤による癌の診断、処置のためのセレクション、予後、および処置はもちろん、ＡＬＫ１阻害剤および白金化学療法剤の併用療法による癌の処置に特に有用である。
序論
【００３１】
ＡＬＫ１はリガンドのＴＧＦ−βスーパーファミリーに対するＩ型細胞表面受容体であり、ＡＣＶＲＬ１およびＡＣＶＲＬＫ１としてもまた公知である。ＡＬＫ１はＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β３、およびＢＭＰ−９に対する受容体とされている（Marchuk et al., Hum Mol Genet. 2003; Brown et al., J Biol Chem. 2005 Jul1 ;280(26):25111-8）。マウスにおいて、ＡＬＫ１の機能喪失変異は、発生する血管構造の種々の異常につながる（Oh et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 2000, 97, 2626-2631; Urness et al., Nat. Genet. 2000, 26, 328-331）。
【００３２】
ヒトにおいて、ＡＬＫ１の機能喪失変異は遺伝性出血性末梢血管拡張症（ＨＨＴまたはオスラー・ランデュ・ウェーバー病）と関連しており、患者は動静脈奇形を生じ、これは介在する毛細血管床なしに動脈から静脈への直接的な流れ（連通）を作り出す（動静脈瘻）。ＨＨＴの患者の典型的な症状は反復性鼻出血、消化管出血、皮膚および皮膚・粘膜の毛細血管拡張症、ならびに肺、脳、または肝臓血管構造の動静脈奇形（ＡＶＭ）を包含する。
【００３３】
本開示のいくつかの側面は、ＡＬＫ１阻害剤が癌を有効に処置するために用いられ得るという発見に関する。本開示のいくつかの側面は、ＡＬＫ１阻害剤が頭頸部癌の処置に特に有効であるという発見に関する。本開示のいくつかの側面は、白金化学療法剤などの他の化学療法剤と組み合わせて用いられるときに、ＡＬＫ１阻害剤が種々の癌を処置するために用いられ得るという発見に関する。
【００３４】
ＡＬＫ１の作用機序は以前に描出されている。例えば、ＡＬＫ１に対する生理学的な高アフィニティーリガンド（例えばＢＭＰ９およびＢＭＰ１０）のアイデンティティが記載されており、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドがインビトロおよびインビボの血管新生を阻害するということが証明されている（例えば、その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれるＵＳ特許８，４５５，４２８参照）。ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドがＴＧＦ−β１に対する意味のあるまたは実質的な結合を見せない場合であっても（例えば、それらがＫＤ＞１０−６でＴＧＦ−β１を結合する場合）、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは抗血管新生効果を発揮し得る。その上、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは、ＶＥＧＦ、ＦＧＦ、およびＧＤＦ７を包含する多くの異なる血管新生促進因子によって刺激される血管新生を阻害する。それゆえに、ＡＬＫ１の細胞外ドメインの一部分を含むポリペプチド（「ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチド」）は、ＶＥＧＦ非依存性の血管新生とＶＥＧＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦを包含する複数の血管新生因子によって媒介される血管新生とを包含するインビボの血管新生を阻害するために用いられ得、それゆえに、血管新生のかかる型と関連するかまたはそれに依存する癌を処置するために用いられ得る。
【００３５】
自然に存在するＡＬＫ１蛋白質は膜貫通蛋白質であり、蛋白質の一部分は細胞の外側に位置し（細胞外部分）、蛋白質の一部分は細胞の内側に位置する（細胞内部分）。本開示の側面はＡＬＫ１の細胞外ドメインの一部分を含むポリペプチドを包含する。
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよびＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質
【００３６】
本明細書において用いられる用語「ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチド」は、自然に存在するＡＬＫ１ポリペプチドの細胞外ドメインのアミノ酸配列からなるかもしくはそれを含み、いずれかのシグナル配列およびシグナル配列にとってＮ末端の配列を包含しているかもしくは除外しているかどちらかのポリペプチド、または、自然に存在するＡＬＫ１ポリペプチドの細胞外ドメインと少なくとも３３パーセント同一であり、配列番号１のアミノ酸３４〜９５のシステインノット領域もしくは配列番号１のアミノ酸２２〜１１８などのシステインノットプラス細胞外ドメインのＮおよびＣ末端の追加のアミノ酸によって例示される自然に存在するＡＬＫ１ポリペプチドの細胞外ドメインの配列と任意に少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を言う。同様に、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは、配列番号２のヌクレオチド１００〜２８５もしくはそのサイレントなバリアント、または厳しいハイブリダイゼーション条件下でその相補物にハイブリダイゼーションする核酸によってコードされるポリペプチドを含み得る（一般的にかかる条件は当分野において公知であるが、例えば５０％ｖ／ｖホルムアミド、５×ＳＳＣ、２％ｗ／ｖブロッキング剤、０．１％のＮ−ラウロイルサルコシン、０．３％ＳＤＳ中での６５℃における一晩のハイブリダイゼーションと、例えば５×ＳＳＣ中での約６５℃における洗浄とを包摂し得る）。加えて、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは、配列番号２のヌクレオチド６４〜３８４もしくはそのサイレントなバリアントまたは厳しいハイブリダイゼーション条件下でその相補物にハイブリダイゼーションする核酸によってコードされるポリペプチドを含み得る（一般的にかかる条件は当分野において公知であるが、例えば５０％ｖ／ｖホルムアミド、５×ＳＳＣ、２％ｗ／ｖブロッキング剤、０．１％Ｎ−ラウロイルサルコシン、０．３％ＳＤＳ中での６５℃における一晩のハイブリダイゼーションと、例えば５×ＳＳＣ中での約６５℃における洗浄とを包摂し得る）。
【００３７】
従って、用語「ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチド」は、ＡＬＫ１ポリペプチドの単離された細胞外部分、そのバリアント（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以下のアミノ酸置換、追加、または欠失を配列番号１のアミノ酸２２〜１１８に対応する配列中に含むバリアントを包含し、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以下のアミノ酸置換、追加、または欠失を配列番号１のアミノ酸３４〜９５に対応する配列中に含むバリアントを包含する）、その断片、および前述のいずれかを含む融合蛋白質を包含する。好ましくは、先述のＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのいずれかはＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に対する実質的なアフィニティーを保持するであろう。用語「ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチド」は、いずれかの全長の自然に存在するＡＬＫ１ポリペプチドを除外することが明確に意図される。一般的に、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは生物学的に 妥当な温度、ｐＨレベル、およびオスモラリティにおいて水溶液に可溶性であるように設計されるであろう。
【００３８】
上に記載されているように、本開示は自然に存在するＡＬＫ１ポリペプチドとの配列同一性または類似性の定められた程度を共有するＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドを提供する。配列同一性を決定するための方法は当業者に周知であり、かかる方法は、典型的には、２つ以上の配列をアラインメントすることと、アラインメントされた配列中の同一であるアミノ酸残基のパーセンテージを定量することとを包含する。最適な比較目的のためには、ギャップが第１および第２のアミノ酸または核酸配列の１つまたは両方に導入され得、非相同的な配列は無視され得る。配列同一性を決定および定量するための例示的な好適な方法および戦略はＵＳ特許８，４５５，４２８に記載されており、その内容全体は参照によって本明細書に組み込まれる。追加の好適な方法は当業者には明らかであろう。
【００３９】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは配列番号１の配列などの自然に存在するＡＬＫ１蛋白質の細胞外部分、好ましくはＡＬＫ１細胞外ドメインのリガンド結合部分を含む。ある態様において、可溶性のＡＬＫ１ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸２２〜１１８のアミノ酸配列と少なくとも６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある態様において、切詰め型の細胞外ＡＬＫ１ポリペプチドは、配列番号１の細胞外部分のアミノ酸配列の少なくとも３０、４０、または５０個の連続したアミノ酸を含む。
【００４０】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドはＢＭＰ９およびＢＭＰ１０の１つまたは両方に結合する。任意に、例えばＡＬＫ１ポリペプチドがＫＤ＞１０−６でＴＧＦ−β１またはＴＧＦ−β３を結合するという点で、ＡＬＫ１ポリペプチドはＴＧＦ−β１またはＴＧＦ−β３に対する実質的な結合を示さない。結合は精製された蛋白質を用いて溶液中またはBiacore（商標）システムなどの表面プラズモン共鳴システムにおいて判定され得る。
【００４１】
好ましい可溶性のＡＬＫ１ポリペプチドは抗血管新生活性を見せるであろう。血管新生 阻害活性のバイオアッセイは鶏漿尿膜（ＣＡＭ）アッセイ、マウス角膜マイクロポケットアッセイ、埋植された腫瘍に単離または合成された蛋白質を投与する効果を測定するためのアッセイを包含する。ＣＡＭアッセイはO'Reilly, et al. in "Angiogenic Regulation of Metastatic Growth" Cell, vol. 79 (2), Oct. 1, 1994, pp. 315-328によって記載されている。簡潔には、そのままの卵黄を持つ３日齢の鶏胚が卵から分離され、ペトリ皿中に置かれる。インキュベーションの３日の後に、試験されるべき蛋白質を含有するメチルセルロースディスクが個々の胚のＣＡＭに付着される。インキュベーションの４８時間の後に胚およびＣＡＭが観察されて、内皮成長が阻害されたかどうかを決定する。マウス角膜マイクロポケットアッセイは、成長因子含有ペレットを、疑われる内皮成長阻害剤を含有する別のペレットと共にマウスの角膜中に埋植することと、角膜中に出来上がる毛細血管のパターンを観察することとを包摂する。他の好適なアッセイがＵＳ特許８，４５５，４２８に記載されており、その内容全体は参照によって本明細書に組み込まれる。追加の好適なアッセイは当業者には明らかであろう。
【００４２】
ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドはＡＬＫ１ポリペプチドの細胞質側尾部および膜貫通領域を除去することによって産生され得る。代替的に、膜貫通ドメインは、膜貫通ドメインを構成する正常では疎水性のアミノ酸残基の欠失または親水性のものによる置換によって不活性化され得る。どちらのケースでも、実質的に親水性のハイドロパシープロファイルが作り出され、これは脂質アフィニティーを低減し、水溶性を改善するであろう。膜貫通ドメインの欠失が親水性アミノ酸残基による置換よりも好ましい。なぜなら、これは潜在的に免疫原性のエピトープを導入することを回避するからである。
【００４３】
加えて、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは種々のリーダー配列のいずれかをＮ末端に包含し得る。かかる配列は、ペプチドが真核生物システムにおいて発現され、分泌経路へとターゲティングされることを可能にするであろう。例えばErnst et al., U.S. Pat. No. 5,082,783 (1992)参照。代替的に、天然のＡＬＫ１シグナル配列が細胞からの押出を実現するために用いられ得る。あり得るリーダー配列は天然、ｔＰａ、およびミツバチメリチンリーダーを包含する（それぞれ配列番号７〜９）。シグナルペプチドのプロセシングは、他の変数のなかでも、選ばれるリーダー配列、用いられる細胞型、および培養条件に依存して異なり得、したがって配列番号１のものを包含する成熟したＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドの実際のＮ末端開始部位はＮ末端またはＣ末端方向どちらかに１〜５アミノ酸シフトし得る。
【００４４】
ある態様において、本開示はポリペプチドのグリコシル化を変改するためにＡＬＫ１ポリペプチドの特異的な変異を企図する。かかる変異は、Ｏ結合型またはＮ結合型グリコシル化部位などの１つ以上のグリコシル化部位を導入または削除するように選択され得る。アスパラギン結合型グリコシル化認識部位は一般的に３ペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−トレオニン（またはアスパラギン（複数）−Ｘ−セリン）を含み（式中、「Ｘ」はいずれかのアミノ酸である）、これは細胞の適切なグリコシル化酵素によって特異的に認識される。変改は野生型ＡＬＫ１ポリペプチドの配列への１つ以上のセリンまたはトレオニン残基による追加または置換によってもまたなされ得る（Ｏ結合型グリコシル化部位について）。グリコシル化認識部位の第１または第３のアミノ酸位置の１つまたは両方における種々のアミノ酸置換または欠失（および／または第２の位置におけるアミノ酸欠失）は、改変された３ペプチド配列における非グリコシル化をもたらす。ＡＬＫ１ポリペプチド上の炭水化物部分の数を増大させる別の手段は、ＡＬＫ１ポリペプチドへのグリコシドの化学的または酵素的カップリングによる。用いられるカップリングモードに依存して、糖（単数または複数）は（ａ）アルギニンおよびヒスチジン、（ｂ）自由なカルボキシル基、（ｃ）システインのものなどの自由なスルフヒドリル基、（ｄ）セリン、トレオニン、もしくはヒドロキシプロリンのものなどの自由なヒドロキシル基、（ｅ）フェニルアラニン、チロシン、もしくはトリプトファンのものなどの芳香族残基、または（ｆ）グルタミンのアミド基に取り付けられ得る。これらの方法はＳｅｐ．１１，１９８７公開のＷＯ８７／０５３３０およびAplin and Wriston (1981) CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306に記載されており、参照によって本明細書に組み込まれる。ＡＬＫ１ポリペプチド上に存在する１つ以上の炭水化物部分の除去は化学的および／または酵素的に達成され得る。化学的な脱グリコシル化は、例えば、化合物トリフルオロメタンスルホン酸または同等の化合物に対するＡＬＫ１ポリペプチドの曝露を包摂し得る。この処置は連結糖（Ｎ−アセチルグルコサミンまたはＮ−アセチルガラクトサミン）を除くほとんどのまたは全ての糖の切断をもたらし、一方ではアミノ酸配列をそのままに残す。化学的な脱グリコシル化はさらにHakimuddin et al. (1987) Arch. Biochem. Biophys. 259:52およびEdge et al. (1981) Anal. Biochem. 118:131によって記載されている。ＡＬＫ１ポリペプチド上の炭水化物部分の酵素的切断はThotakura et al. (1987) Meth. Enzymol. 138:350によって記載されている種々のエンドおよびエキソグリコシダーゼの使用によって達成され得る。ＡＬＫ１ポリペプチドの配列は用いられる発現システムの型に依存して適宜調整され得る。なぜなら、哺乳類、酵母、昆虫、および植物細胞は、全て、ペプチドのアミノ酸配列によって影響され得る異なるグリコシル化パターンを導入し得るからである。一般的に、ヒトにおける使用のためのＡＬＫ１蛋白質は、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞株などのしかるべきグリコシル化を提供する哺乳類細胞株によって発現されるであろうが、他の哺乳類発現細胞株、操作したグリコシル化酵素を持つ酵母細胞株、および昆虫細胞も同じく有用である���予想される。
【００４５】
本開示は、ＡＬＫ１ポリペプチドの変異体、特に、切詰め型変異体はもちろんコンビナトリアル変異体のセットを作出する方法をさらに企図する。コンビナトリアル変異体のプールは、機能バリアント配列を特定することにとってとりわけ有用である。かかるコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする目的は、例えば、アゴニストもしくはアンタゴニストどちらかとして作用し得るかまたは代替的に全くの新規活性を備えるＡＬＫ１ポリペプチドバリアントを作出することであり得る。種々のスクリーニングアッセイが下で提供され、かかるアッセイはバリアントを評価するために用いられ得る。例えば、ＡＬＫ１ポリペプチドバリアントは、ＡＬＫ１リガンドに結合する、ＡＬＫ１ポリペプチドに対するＡＬＫ１リガンドの結合を防ぐ、またはＡＬＫ１リガンドによって引き起こされるシグナル伝達を妨げる能力についてスクリーニングされ得る。ＡＬＫ１ポリペプチドまたはそのバリアントの活性は細胞系またはインビボアッセイ、特に実施例において開示されるアッセイのいずれかによってもまた試験され得る。
【００４６】
ある態様において、本開示のＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは、ＡＬＫ１ポリペプチド中に自然に存在するいずれかに加えて翻訳後修飾をさらに含み得る。かかる修飾はアセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアシル化を包含するが、これに限定されない。結果として、修飾されたＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドはポリエチレングリコール、脂質、多または単糖、およびリン酸などの非アミノ酸要素を含有し得る。ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドの機能性に対するかかる非アミノ酸要素の効果は、他のＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドバリアントについて本明細書に記載されているように試験され得る。ＡＬＫ１ポリペプチドの新生形態を切断することによってＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドが細胞によって産生されるときには、翻訳後プロセシングもまた蛋白質の正しいフォールディングおよび／または機能にとって重要であり得る。（ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ＭＤＣＫ、２９３、ＷＩ３８、ＮＩＨ−３Ｔ３、またはＨＥＫ２９３などの）異なる細胞はかかる翻訳後活性のための細胞の特異的な機構および特徴的な機序を有しており、 ＡＬＫ１ポリペプチドの正しい修飾およびプロセシングを保証するように選ばれ得る。
【００４７】
ある側面において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドの機能バリアントまたは改変された形態は、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドの少なくとも一部分と１つ以上の融合ドメインとを有する融合蛋白質を包含する。かかる融合ドメインの周知の例はポリヒスチジン、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、プロテインＡ、プロテインＧ、免疫グロブリン重鎖定常領域（Ｆｃ）、マルトース結合蛋白質（ＭＢＰ）、またはヒト血清アルブミンを包含するが、これに限定されない。融合ドメインは所望の特性を付与するように選択され得る。例えば、いくつかの融合ドメインはアフィニティークロマトグラフィーによる融合蛋白質の単離にとって特に有用である。アフィニティー精製の目的のためには、グルタチオン、アミラーゼ、およびニッケルまたはコバルトコンジュゲーション樹脂などのアフィニティークロマトグラフィーのための妥当なマトリックスが用いられる。かかるマトリックスの多くは、ファルマシアＧＳＴ精製システムおよび（ΗＩＳ６）融合パートナーに有用なQIAexpress（商標）システム（キアゲン）などの「キット」形態で入手可能である。別の例として、融合ドメインはＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドの検出を容易にするように選択され得る。かかる検出ドメインの例は「エピトープタグ」はもちろん種々の蛍光蛋白質（例えばＧＦＰ）を包含し、通常は、それに対する特異的な抗体が入手可能である短いペプチド配列である。それに対する特異的なモノクローナル抗体がすぐに入手可能である周知のエピトープタグは、ＦＬＡＧ、インフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＨＡ）、およびｃ−ｍｙｃタグを包含する。いくつかのケースでは、融合ドメインは第Ｘａ因子またはトロンビンなどのプロテアーゼ切断部位を有し、これは妥当なプロテアーゼが融合蛋白質を部分的に消化し、それによって組み換え蛋白質をそれから遊離させることを可能にする。そこで、遊離した蛋白質は爾後のクロマトグラフィー分離によって融合ドメインから単離され得る。ある好ましい態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドはインビボのＡＬＫ１ポリペプチドを安定化するドメイン（「安定化」ドメイン）と融合される。「安定化すること」によって、血清中半減期を増大させるいずれかのものが意味され、これが減少した分解、腎臓による減少したクリアランス、または他の薬物動態効果のせいであるかどうかにかかわらない。免疫グロブリンのＦｃ部分との融合は望ましい薬物動態特性を広範な蛋白質に付与することが公知である。同様に、ヒト血清アルブミンへの融合は望ましい特性を付与し得る。選択され得る融合ドメインの他の型は多量体化（例えば、二量体化、四量体化）ドメインおよび機能ドメインを包含する。
【００４８】
例えば、本開示は、Ｆｃドメインに融合されたＡＬＫ１の可溶性の細胞外ドメインを含む融合蛋白質を提供する。かかるドメインの例示的なアミノ酸配列は配列番号５で提供されている。
【００４９】
いくつかの態様において、Ｆｃドメインは１つ以上の変異をＡｓｐ−２６５、リジン３２２、およびＡｓｎ−４３４などの残基に有する。あるケースでは、これらの変異の１つ以上（例えばＡｓｐ−２６５変異）を有する変異体Ｆｃドメインは、野生型Ｆｃドメインと比べてＦｃ受容体に対する結合の低減された能力を有する。他のケースにおいて、これらの変異の１つ以上（例えばＡｓｎ−４３４変異）を有する変異体Ｆｃドメインは、野生型Ｆｃドメインと比べてＭＨＣクラスＩ関連Ｆｃ受容体（ＦｃＲＮ）に対する結合の増大した能力を有する。
【００５０】
融合蛋白質の異なる要素が所望の機能性と一致するいずれかの様式で配列され得るということは理解される。例えば、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは異種ドメインに対してＣ末端に置かれ得るか、または、代替的に、異種ドメインはＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに対してＣ末端に置かれ得る。ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドドメインおよび異種ドメインは融合蛋白質に隣接する必要はなく、追加のドメインまたはアミノ酸配列がどちらかのドメインのＣもしくはＮ末端またはドメイン間に包含され得る。
【００５１】
本明細書において用いられる用語「免疫グロブリンＦｃ領域」または単に「Ｆｃ」は、免疫グロブリン鎖定常領域のカルボキシル末端部分、好ましくは免疫グロブリン重鎖定常領域、またはその一部分を意味すると理解される。例えば、免疫グロブリンＦｃ領域は１）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、２）ＣＨ１ドメインおよびＣＨ２ドメイン、３）ＣＨ１ドメインおよびＣＨ３ドメイン、４）ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメイン、または５）２つ以上のドメインおよび免疫グロブリンヒンジ領域の組み合わせを含み得る。好ましい態様において、免疫グロブリンＦｃ領域は少なくとも免疫グロブリンヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含み、好ましくはＣＨ１ドメインを欠く。
【００５２】
いくつかの態様において、重鎖定常領域が由来する免疫グロブリンのクラスはＩｇＧ（Ｉｇγ）（γサブクラス１、２、３、または４）である。免疫グロブリンの他のクラスＩｇＡ（Ｉｇα）、ＩｇＤ（Ｉｇδ）、ＩｇＥ（Ｉｇε）、およびＩｇＭ（Ｉｇμ）が用いられ得る。適切な免疫グロブリン重鎖定常領域の選び方はＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，５４１，０８７および５，７２６，０４４において詳細に論じられている。特定の結果を達成するためのある免疫グロブリンクラスおよびサブクラスからの特定の免疫グロブリン重鎖定常領域配列の選び方は当分野における技術レベルの範囲内であると考えられる。免疫グロブリンＦｃ領域をコードするＤＮＡコンストラクトの部分は、好ましくは、ヒンジドメインの少なくとも一部分、好ましくはＦｃγのＣＨ３ドメインまたはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、もしくはＩｇＭのいずれかの相同的なドメインの少なくとも一部分を含む。
【００５３】
尚その上に、免疫グロブリン重鎖定常領域内のアミノ酸の置換または欠失は本明細書において開示される方法および組成物の実施に有用であり得るということが企図される。１つの例は、アミノ酸置換を上部ＣＨ２領域中に導入して、Ｆｃ受容体に対する低減されたアフィニティーを持つＦｃバリアントを作り出すことであろう（Cole et al. (1997) J. Immunol. 159:3613）。
【００５４】
ある態様において、本開示は、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドの単離および／または精製された形態を入手可能にし、これらは他の蛋白質および／または他のＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチド種から単離されているかまたはそれを別様に実質的に不含（例えば、少なくとも８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％不含）である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１ポリペプチドは一般的には好適なホスト細胞内の組み換え核酸からの発現によって産生されるであろう。ホスト細胞はいずれかの原核または真核細胞であり得る。例えば、本開示のポリペプチドはＥ．ｃｏｌｉなどの細菌細胞、昆虫細胞（例えば、バキュロウイルス発現システムを用いる）、酵母、または哺乳類細胞によって発現され得る。他の好適なホスト細胞は当業者に公知である。従って、本開示のいくつかの態様はさらにＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドを産生する方法に関する。ＣＨＯ細胞によって発現される配列番号３または配列番号４で提示されるＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は、強力な抗血管新生活性を有するということが確立されている。
【００５５】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは、ヒトＦｃドメインに融合されたアクチビン受容体様キナーゼ−１（ＡＬＫ１）の細胞外ドメインを含有する可溶性の融合蛋白質である（ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質）。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４で提供される配列を含むか、またはそれからなる。特定の態様において、ＡＬＫ１阻害抗体（例えば、ＡＬＫ１シグナル伝達を、例えばＡＬＫ１またはＡＬＫ１リガンドに結合してＡＬＫ１とＡＬＫ１リガンドとの間の相互作用を阻害することによって阻害する抗体）またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を増強するかまたは阻害するかどちらかであるように改変され得る。調節されたＣＤＣ活性は１つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失をＦｃ領域中に導入することによって達成され得る（例えばＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，１９４，５５１参照）。代替的にまたは加えて、システイン残基（単数または複数）がＦｃ領域中に導入され、それによってこの領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能にし得る。このようにして作出されたホモ二量体ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質またはＡＬＫ１阻害抗体は、改善もしくは低減された内在化能および／または増大もしくは減少した補体媒介性殺細胞を有し得る。Caron et al., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992)およびShopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)、ＷＯ９９／５１６４２、Duncan & Winter Nature 322: 738-40 (1988)、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，６４８，２６０、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，６２４，８２１、およびＷＯ９４／２９３５１参照。
【００５６】
いくつかの態様においては、次の分子内または分子間ジスルフィド架橋の１つ以上が二量体形態の２つのＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質モノマー間に存在する。１３−３０、１３’−３０’、１５−２０、１５’−２０’、２５−４８、２５’−４８’、５６−６８、５６’−６８’、６９−７４、６９’−７４’、１０７−１０７’、１１０−１１０’、１４２−２０２、１４２’−２０２’、２４８−３０６、および２４８’−３０６’。第１のモノマーのアミノ酸はプライム記号（’）なしで表示されており、一方で第２のモノマーのアミノ酸残基はプライム記号ありで表示されている。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はDalanterceptであり、これは場合によってはＡＣＥ−０４１ともまた言われる。例示的なアミノ酸配列は配列番号３参照。
抗体
【００５７】
本開示の別の側面は、ＡＬＫ１ポリペプチドの細胞外部分に対して反応性の抗体、好ましくはＡＬＫ１ポリペプチドに対して特異的に反応性である抗体に関する。好ましい態様において、かかる抗体はＡＬＫ１がＢＭＰ−９および／またはＢＭＰ−１０リガンドに結合することを妨げる。ＡＬＫ１のリガンドに対する抗体が妥当な蛋白質の成熟したプロセシングされた形態に結合するべきであるということは理解されるであろう。本開示はＡＬＫ１リガンドに結合する抗体をもまた提供し、ＧＤＦ５、ＧＤＦ６、ＧＤＦ７、ＢＭＰ９、および／またはＢＭＰ１０に結合して、ＡＬＫ１がかかるリガンドに結合することを阻害する抗体を包含するが、これに限定されない。好ましい抗体はＣＡＭアッセイまたは角膜マイクロポケットアッセイなどのバイオアッセイにおいて抗血管新生活性を見せるであろう。
【００５８】
本明細書において用いられる用語「抗体」は例えばいずれかのアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥなど）の完全抗体を包含することが意図され、選択された抗原に対して反応性である免疫グロブリンの断片またはドメインを包含する。抗体は従来の技術を用いて断片化され得、断片は有用性および／または問題の特異的なエピトープとの相互作用についてスクリーニングされ得る。それゆえに、用語は、ある蛋白質と選択的に反応することができる抗体分子の蛋白質分解的に切断されたまたは組み換え調製された部分のセグメントを包含する。かかる蛋白質分解および／または組み換え断片の限定しない例は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ、ならびにペプチドリンカーによって繋がれたＶ［Ｌ］および／またはＶ［Ｈ］ドメインを含有する一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）を包含する。ｓｃＦｖは共有結合的または非共有結合的に連結されて、２つ以上の結合部位を有する抗体を形成し得る。用語抗体は抗体のポリクローナル、モノクローナル、または他の精製された調製物および組み換え抗体をもまた包含する。用語「組み換え抗体」は、一本鎖抗体から生じたヒト化抗体または完全ヒト抗体などの分子生物学の技術を用いて構築された核酸から発現される、抗体または免疫グロブリンの抗原結合ドメインを意味する。単一ドメインおよび一本鎖抗体もまた用語「組み換え抗体」に包含される。
【００５９】
抗体は当分野において公知の種々の方法のいずれかによって作出され得、動物への抗原の投与、ヒト免疫グロブリン遺伝子を保有する動物への抗原の投与、または抗原による抗体のライブラリー（多くの場合には一本鎖抗体または抗体ドメイン）のスクリーニングを包含する。ひとたび抗原結合活性が検出されたら、蛋白質の妥当な部分が全長ＩｇＧフレームワークを包含する他の抗体フレームワーク中に移植され得る。例えばＡＬＫ１ポリペプチドまたはＡＬＫ１リガンドに由来する免疫原を用いることによって、抗蛋白質／抗ペプチド抗血清またはモノクローナル抗体が標準的なプロトコールによって作られ得る（例えば、Antibodies: A Laboratory Manual ed. by Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press: 1988)参照）。マウス、ハムスター、またはウサギなどの哺乳動物がペプチドの免疫原性形態（例えば、抗体応答を誘起できるＡＬＫ１ポリペプチドもしくは抗原断片、または融合蛋白質）によって免疫化され得る。蛋白質またはペプチドに免疫原性を付与するための技術は、担体へのコンジュゲーションまたは当分野において周知の他の技術を包含する。ＡＬＫ１ポリペプチドの免疫原性部分（好ましくは細胞外部分）はアジュバントの存在下において投与され得る。免疫化の進行は血漿または血清中の抗体力価の検出によってモニタリングされ得る。免疫原を抗原として、標準的なＥＬＩＳＡまたは他のイムノアッセイが抗体のレベルを判定するために用いられ得る。
【００６０】
ＡＬＫ１ポリペプチドの抗原調製物による動物の免疫化の後で抗ＡＬＫ１抗血清が得られ、所望の場合にはポリクローナル抗ＡＬＫ１抗体が血清から単離され得る。モノクローナル抗体を産生するためには、抗体産生細胞（リンパ球）が免疫化された動物から回収され、標準的な体細胞融合手順によって骨髄腫細胞などの不死化細胞と融合されて、ハイブリドーマ細胞を産出し得る。かかる技術は当分野において周知であり、例えばハイブリドーマ技術（元はKohler and Milstein, (1975) Nature, 256: 495-497によって開発された）、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Kozbar et al., (1983) Immunology Today, 4: 72）、およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Cole et al., (1985) Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. pp. 77-96）を包含する。ハイブリドーマ細胞は本開示の哺乳類ＡＬＫ１ポリペプチドに対して特異的に反応性の抗体の産生について免疫化学的にスクリーニングされ得、モノクローナル抗体がかかるハイブリドーマ細胞を含む培養物から単離され得る。
【００６１】
本明細書において用いられる用語抗体は、対象のＡＬＫ１ポリペプチドの１つに対してまた特異的に反応性であるその断片を包含することを意図される。抗体は従来の技術を用いて断片化され得、断片は完全抗体について上に記載されている同じ様式で有用性についてスクリーニングされ得る。例えば、Ｆ（ａｂ）２断片はペプシンによって抗体を処置することによって作出され得る。もたらされるＦ（ａｂ）２断片はジスルフィド架橋を還元してＦａｂ断片を産生するように処置され得る。本開示の抗体は、抗体の少なくとも１つのＣＤＲ領域によって付与されるＡＬＫ１ポリペプチドに対するアフィニティーを有する二重特異性、一本鎖、ならびにキメラおよびヒト化分子を包含することがさらに意図される。好ましい態様において、抗体はそれに取り付けられた標識をさらに含み、検出されることができる（例えば、標識は放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子であり得る）。
【００６２】
ある好ましい態様において、本開示の抗体は組み換え抗体、特にヒト化モノクローナル抗体または完全ヒト組み換え抗体である。
【００６３】
抗体を参照して用いられる用語「に対して特異的に反応性」は、当分野において一般的に理解されるように、抗体が問題の抗原（例えば、ＡＬＫ１ポリペプチドまたはＡＬＫ１リガンド）と無関係な他の抗原との間で十分に選択的であるので、抗体が最低でも生体サンプルの特定の型から問題の抗原の存在を検出するために有用であるということを意味することが意図される。抗体を利用するある方法においては、結合の特異性のより高い程度が望ましくあり得る。例えば、無関係な１つ以上の極高存在量蛋白質の存在下において問題の低存在量蛋白質を検出することへの使用のための抗体は、それが問題の抗原と他の交差反応物との間の選択性のより高い程度を有する場合に、より良く機能し得る。モノクローナル抗体は、（ポリクローナル抗体と比較して）所望の抗原と交差反応ポリペプチドとを有効に識別するより大きい傾向を一般的に有する。加えて、生体サンプルの１つの型（例えば糞便サンプル）から問題の抗原を選択的に特定することに有効である抗体は、生体サンプルの異なる型（例えば血液サンプル）から同じ抗原を選択的に特定することにとっては同じくらい有効ではなくあり得る。同様に、他の生体混入物を欠く精製された蛋白質調製物から問題の抗原を特定することに有効である抗体は、血液または尿サンプルなどの粗製生体サンプルから問題の抗原を特定することには同じくらい有効ではなくあり得る。従って、好ましい態様において、本願は、抗体の使用のために選ばれるサンプル型である可能性が高いサンプル型において問題の抗原に対する特異性を証明した抗体を提供する。
【００６４】
抗体：抗原相互作用の特異性に影響する１つの特質は抗原に対する抗体のアフィニティーである。所望の特異性は幅広い異なるアフィニティーによって達され得るが、一般的に好ましい抗体は約１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、またはより少しのアフィニティー（解離定数）を有するであろう。ＡＬＫ１に対するＴＧＦβの明らかに低い結合アフィニティーを考慮すると、多くの抗ＡＬＫ１抗体はＴＧＦβ結合を阻害するであろうということが予想される。しかしながら、リガンドのＧＤＦ５、６、７群はおよそ５×１０−８ＭのＫＤで結合し、ＢＭＰ９、１０リガンドはおよそ１×１０−１０ＭのＫＤで結合する。それゆえに、これらのリガンドのシグナル伝達活性を妨げるために適切なアフィニティーの抗体が選択され得る。
【００６５】
抗体：抗原相互作用を試験して特に望ましい抗体を特定するための種々の異なる技術が入手可能である。かかる技術はＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴結合アッセイ（例えば Biacore結合アッセイ、Bia-core AB、スウェーデン・ウプサラ）、サンドイッチアッセイ（例えば、メリーランド州ゲイザースバーグIGEN International, Inc.の常磁性ビーズシステム）、ウエスタンブロット、免疫沈降アッセイ、および免疫組織化学を包含する。
【００６６】
本願は、操作したまたはバリアントＦｃ領域を持つ抗体およびＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質をさらに提供する。かかる抗体およびＦｃ融合蛋白質は、例えば抗原依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）などのエフェクター機能を調節することに有用であり得る。加えて、改変は抗体およびＦｃ融合蛋白質の安定性を改善し得る。抗体およびＦｃ融合蛋白質のアミノ酸配列バリアントは適切なヌクレオチド変化をＤＮＡ中に導入することまたはペプチド合成によって調製される。かかるバリアントは、例えば、本明細書において開示される抗体およびＦｃ融合蛋白質のアミノ酸配列内の残基の欠失および／または挿入および／または置換を包含する。最終コンストラクトが所望の特質を備える限り、欠失、挿入、および置換のいずれかの組み合わせが最終コンストラクトに至るためになされる。アミノ酸の変化は、グリコシル化部位の数または位置を変化させるなど、抗体およびＦｃ融合蛋白質の翻訳後プロセスをもまた変改し得る。
【００６７】
低減されたエフェクター機能を持つ抗体およびＦｃ融合蛋白質はアミノ酸配列の変化を導入することによって産生され得、Bluestone et al.によって記載されているＡｌａ−Ａｌａ変異を包含するが、これに限定されない（ＷＯ９４／２８０２７およびＷＯ９８／４７５３１参照。Xu et al. 2000 Cell Immunol 200; 16-26もまた参照）。それゆえに、ある態様において、Ａｌａ−Ａｌａ変異を包含する変異を定常領域内に持つ本開示の抗体およびＦｃ融合蛋白質はエフェクター機能を低減または廃絶するために用いられ得る。これらの態様に従って、抗体およびＦｃ融合蛋白質は位置２３４におけるアラニンへの変異もしくは位置２３５におけるアラニンへの変異またはその組み合わせを含み得る。１つの態様において、抗体またはＦｃ融合蛋白質はＩｇＧ４フレームワークを含み、Ａｌａ−Ａｌａ変異は位置２３４のフェニルアラニンからアラニンへの変異（単数または複数）および／または位置２３５のロイシンからアラニンへの変異を表すであろう。別の態様において、抗体またはＦｃ融合蛋白質はＩｇＧ１フレームワークを含み、Ａｌａ−Ａｌａ変異は位置２３４におけるロイシンからアラニンへの変異（単数または複数）および／または位置２３５におけるロイシンからアラニンへの変異を表すであろう。代替的にまたは加えて、抗体またはＦｃ融合蛋白質はＣＨ２ドメイン中の点変異Ｋ３２２Ａを包含する他の変異を保有し得る（Hezareh et al. 2001 J Virol. 75: 12161-8）。
【００６８】
特定の態様において、抗体またはＦｃ融合蛋白質は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を増強するかまたは阻害するかどちらかであるように改変され得る。調節されたＣＤＣ活性は１つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失をＦｃ領域中に導入することによって達成され得る（例えばＵ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，１９４，５５１参照）。代替的にまたは加えて、システイン残基（単数または複数）がＦｃ領域中に導入され、それによってこの領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能にし得る。このようにして作出されたホモ二量体抗体は、改善もしくは低減された内在化能および／または増大もしくは減少した補体媒介性殺細胞を有し得る。Caron et al., J. Exp Med. 176:1191-1195 (1992) およびShopes, B. J. Immunol. 148:2918-2922 (1992)、ＷＯ９９／５１６４２、Duncan & Winter Nature 322: 738-40 (1988)、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，６４８，２６０、Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．５，６２４，８２１、およびＷＯ９４／２９３５１参照。
処置の方法
【００６９】
本開示のいくつかの側面は、対象の癌、例えば頭頸部癌を処置するための方法を提供する。典型的には、かかる方法は、その必要がある対象、例えば頭頸部癌を有する対象に、ＡＬＫ１アンタゴニストまたは阻害剤を含む治療組成物の有効量を投与することを包含する。いくつかの態様において、組成物は第２の治療剤、例えば白金化学療法剤を包含する。例えば、いくつかの態様においては、頭頸部癌を処置するための有効量で対象にＡＬＫ１アンタゴニストおよび白金化学療法剤を投与することを包含する、対象の頭頸部癌を処置するための方法が提供される。
【００７０】
本明細書において用いられる用語「処置」、「処置する」、および「処置すること」は、本明細書に記載されるような疾患もしくは障害、例えば頭頸部癌、またはその１つ以上の症状を逆転させるか、緩和するか、その始まりを遅延させるか、またはその進行を阻害することを狙った臨床的介入を言う。例えば、処置は、頭頸部腫瘍の完全なもしくは部分的な退行、腫瘍成長もしくは進行の遅延、または頭頸部癌に関連するかもしくはそれによって引き起こされる１つ以上の症状の緩和をもたらし得る。いくつかの態様において、処置は１つ以上の症状が生じた後および／または疾患が診断された後に投与され得る。他の態様において、処置は症状の非存在下において投与され得る。例えば、処置は症状の始まりに先行して（例えば、症状の既往に照らしておよび／または遺伝学的もしくは他の易罹患性因子に照らして）対象に投与され得る。処置は、症状が消散した後、例えば頭頸部癌腫瘍の外科的除去後にもまた継続されて、例えば疾患または関連症状の再発、例えば腫瘍の再発生を防ぐかまたは遅延させ得る。いくつかの態様において、処置されようとする疾患または障害は異常な血管新生、例えば癌または腫瘍と関連する病的な血管新生と関連する。いくつかの態様において、疾患は頭頸部癌である。いくつかの態様において、癌はＨＰＶについて陽性である。
【００７１】
本明細書において用いられる用語「有効量」および「治療有効量」は、対象に投与されるときに、対象が患っている状態を少なくとも部分的に処置するために有効である本発明の化合物の量または濃度を言う。いくつかの態様において、ＡＬＫ１阻害剤の有効量は、その投与がＡＬＫ１活性、血管新生、または腫瘍成長もしくは進行の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、少なくとも約９９．５％、または約１００％の阻害を、ベースラインレベル、例えば阻害剤の非存在下におけるＡＬＫ１活性、血管新生、または腫瘍成長もしくは進行のレベルと比較してもたらす量である。
【００７２】
いくつかの態様において、方法は、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドを含むＡＬＫ１阻害剤を投与することを含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも３３％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１の残基１１０〜１３０のいずれかである。
【００７３】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％は二量体形態である。いくつかの態様においては、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の１００％が二量体形態である。
【００７４】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はグリコシル化される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−７Ｍ未満、１×１０−８Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、または１×１０−１２Ｍ未満のＫＤでＢＭＰ９またはＢＭＰ１０を結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は、それが１×１０−６Ｍ超のＫＤでＴＧＦβ−１に結合するという点で、ＴＧＦβ−１に対する有意なまたは実質的な結合を示さない。
【００７５】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１アンタゴニストは、ＡＬＫ１がＢＭＰ９および／またはＢＭＰ１０を結合することを妨げる抗体である。いくつかの態様において、抗体は５×１０−８Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、または１×１０−１２Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。他の態様において、抗体は５×１０−８Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、１×１０−１１Ｍ未満、または１×１０−１２Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１リガンド、例えばＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する。いくつかの態様において、処置の方法は、２つ以上のＡＬＫ１リガンドに対する複数の抗体、例えばＢＭＰ９に対する抗体およびＢＭＰ１０に対する抗体を投与することを包含する。抗体（単数または複数）は対象のＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害するために有効な量で投与される。
【００７６】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１アンタゴニストは白金化学療法剤と一緒に投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は白金の配位複合体を含む。いくつかの態様において、白金化学療法剤はシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、Triplatin、Lipoplatin、またはそのいずれかの組み合わせである。追加の好適な白金化学療法剤は本開示に基づいて当業者には明らかであろう。
【００７７】
ＡＬＫ１阻害剤および白金化学療法剤の組み合わせを用いる１つの利点は、どちらかの構成要素の最大忍容投薬量または最大有効投薬量単独を用いることによって達成され得る効果と比較して、組み合わせの治療効果が典型的には改善されるということである。例えば、白金化学療法剤は典型的には最大投薬量まで忍容され、それを上回るとそれぞれの薬物の毒性は重篤な副作用をもたらし得る。１つの例を与えると、普通に用いられる白金化学療法剤シスプラチンの最大忍容薬物は、ほとんどの患者について典型的には約５ｍｇ／ｋｇ／日である。最大忍容投薬量が各対象について変動し、総体的な健康、年齢、性別、ならびに具体的な代謝状態および不耐性などの因子に依存するであろうということは理解されるであろう。最大忍容投薬量を上回る白金化学療法剤の投薬量による処置は、患者の健康への関連する深刻なリスクのせいで典型的には実行可能でない。しかしながら、白金化学療法剤、例えばシスプラチンとのＡＬＫ１阻害剤、例えばDalanterceptなどのＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の組み合わせは、増大した毒性の問題なしに改善された治療効果を達成するために利用され得る。
【００７８】
例えば、いくつかの態様において、ＡＬＫ１阻害剤（例えば、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質）は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与され、一方で白金化学療法剤は０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は最大忍容投薬量、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、０．４ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．６ｍｇ／ｋｇ／日、０．７ｍｇ／ｋｇ／日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日、０．９ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、２ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日、３．５ｍｇ／ｋｇ／日、４ｍｇ／ｋｇ／日、４．５ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、５．５ｍｇ／ｋｇ／日、６ｍｇ／ｋｇ／日、６．５ｍｇ／ｋｇ／日、７ｍｇ／ｋｇ／日、７．５ｍｇ／ｋｇ／日、８ｍｇ／ｋｇ／日、８．５ｍｇ／ｋｇ／日、９ｍｇ／ｋｇ／日、９．５ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日で投与され、ＡＬＫ１阻害剤は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で投与される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１阻害剤は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、０．４ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．６ｍｇ／ｋｇ／日、０．７ｍｇ／ｋｇ／日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日、０．９ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、２ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日、４ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、６ｍｇ／ｋｇ／日、７ｍｇ／ｋｇ／日、８ｍｇ／ｋｇ／日、９ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１１ｍｇ／ｋｇ／日、１２ｍｇ／ｋｇ／日、１２．５ｍｇ／ｋｇ／日、１３ｍｇ／ｋｇ／日、１４ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日、１６ｍｇ／ｋｇ／日、１７ｍｇ／ｋｇ／日、１７．５ｍｇ／ｋｇ／日、１８ｍｇ／ｋｇ／日、１９ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日、２１ｍｇ／ｋｇ／日、２２ｍｇ／ｋｇ／日、２３ｍｇ／ｋｇ／日、２４ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日、２６ｍｇ／ｋｇ／日、２７ｍｇ／ｋｇ／日、２８ｍｇ／ｋｇ／日、２９ｍｇ／ｋｇ／日、または３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１〜５ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、０．４ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．６ｍｇ／ｋｇ／日、０．７ｍｇ／ｋｇ／日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日、０．９ｍｇ／ｋｇ／日、１．０ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、２．０ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、３．０ｍｇ／ｋｇ／日、３．５ｍｇ／ｋｇ／日、４．０ｍｇ／ｋｇ／日、４．５ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、５．５ｍｇ／ｋｇ／日、６ｍｇ／ｋｇ／日、６．５ｍｇ／ｋｇ／日、７ｍｇ／ｋｇ／日、７．５ｍｇ／ｋｇ／日、８ｍｇ／ｋｇ／日、８．５ｍｇ／ｋｇ／日、９ｍｇ／ｋｇ／日、９．５ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１阻害剤および白金化学療法剤の比は１０：１〜１：１０（重量：重量）、例えば１：２、２：１、１：２．５、２：５：１、１：３、３：１、１：４、４：１、１：５、５：１、１：６、６：１、１：７、７：１、１：８、８：１、１：９、９：１、１：１０、または１０：１である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与され、白金化学療法剤は５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与される。
【００７９】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１阻害剤および／または白金化学療法剤の１日総投薬量は１回の投与で対象に投与され、一方、他の態様においては、１日総投薬量は２回以上の投与で（例えば、朝および夜、朝、昼、および夜、１時間毎、２、３、４、５、６、７、８、もしくは１２時間毎、または他の間隔で）対象に投与される。いくつかの態様において、複数日の総投薬量は１回の投与で、例えば放出制御型製剤として対象に投与される。
【００８０】
本明細書において提供される総投薬量は例示的であり、限定することは意味されない。例えば、いくつかの態様においては、白金化学療法剤の５〜１０ｍｇ／ｋｇ／日を上回る総投薬量および／またはＡＬＫ１阻害剤の１０〜３０ｍｇ／ｋｇ／日を上回る総投薬量が企図される。いくつかの態様において、それぞれの薬物または化合物は最大忍容投薬量でまたはそれを下回って投与され、これは、いくつかの態様において、深刻な副作用または薬物もしくは化合物を投与する臨床的利益を超える副作用の過度のリスクなしに患者に投与され得る最大投薬量であり得る。最大忍容投薬量は、なかでも、用いられる具体的な化合物および患者の健康状態に依存するであろう。典型的な最大忍容投薬量は当業者に公知である。例えば、典型的な最大忍容投薬量は、いくつかの態様において、シスプラチンについては６０〜１００ｍｇ／ｍ２体表、Triplatinについては０．９〜１．１ｍｇ／ｍ２、カルボプラチンについては６００〜８００ｍｇ／ｍ２であり得る。当業者は、所与の患者について、例えば当分野において周知の方法に従って、ｍｇ／ｍ２で提供される総投薬量をｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量に変換するための好適な方法を知っているであろう。それらは例えばDuBois et al., A formula to estimate the approximate surface area if height and weight be known. Arch Int Med 1916;17:863-71、Gehan et al., Estimation of human body surface area from height and weight. Cancer Chemother Rep 1970;54:225-35、Haycock et al., Geometric method for measuring body surface area: A height-weight formula validated in infants, children and adults. J Pediatr 1978;93:62-6、およびMosteller et al., Simplified calculation of body-surface area. N Engl J Med 1987;317:1098に記載されているものを包含する。これらのそれぞれの内容全体は参照によって本明細書に組み込まれる。
【００８１】
いくつかの態様において、方法は対象の癌を処置することを含み、例えば、ＡＬＫ１阻害剤を単独でまたは別の治療剤と組み合わせてどちらかで、癌、例えば頭頸部癌、多発性骨髄腫、メラノーマ、肺癌、膵臓癌（例えば、膵臓内分泌組織の腫瘍）、または乳癌（例えば、原発性乳癌または転移性乳癌、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）またはエストロゲン受容体陰性（ＥＲ−））を有する対象に投与することによる。いくつかの態様において、癌は頭頸部癌である。
【００８２】
本明細書において用いられる用語「頭頸部癌」は、頭頸部の腫瘍、例えば、口唇、口腔（口）、鼻腔（鼻の内側）、副鼻腔、咽頭、および喉頭の腫瘍を特徴とする生物学的に類似の悪性の増殖性疾患の一群を言う。大多数のケースでは、頭頸部癌は扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）であり、これらの領域の粘膜の裏打ち（上皮）を起源とする。頭頸部癌は多くの場合には頸部のリンパ節に広がり、これは多くの場合には診断時における疾患の第１の（場合によっては唯一の）徴候である。頭頸部癌は、喫煙、アルコール摂取、ＵＶ光、特定の化学物質、およびウイルス、例えばＨＰＶのある株を包含する環境および生活様式リスク因子と関連している。頭頸部癌は多くの場合には不良な予後を有し、それらの生物学的挙動においては高頻度に攻撃性であり、頭頸部癌の患者は最初の腫瘍が外科的に除去されたかまたは別様に処置された後でさえも再発性腫瘍を生ずる高いリスクがある。
【００８３】
本開示のいくつかの側面は、癌が単独のまたは別の治療剤、例えば白金化学療法剤もしくはＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせたＡＬＫ１阻害剤どちらかによる処置に対して応答性であると特定するための方法を提供する。いくつかの態様において、この特定は癌がＨＰＶについて陽性であるということに基づく。本開示のいくつかの側面は、癌がＨＰＶ陽性であるということに基づいて、単独のまたは別の治療剤、例えば白金化学療法剤もしくはＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせたＡＬＫ１阻害剤どちらかによる処置のために、癌を有する対象をセレクションし、処置のために癌をセレクションするための方法を提供する。本開示のいくつかの側面は、癌がＨＰＶ陽性であるということに基づいて、単独のまたは別の治療剤、例えば白金化学療法剤もしくはＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせたＡＬＫ１阻害剤どちらかを、癌、例えば頭頸部癌を有する患者に投与するための方法を提供する。
【００８４】
対象からのＨＰＶの検出のための好適な方法は、良く確立された方法に従ってウイルスＤＮＡまたは蛋白質を検出することを包含する。例えば、ＨＰＶのＤＮＡは、頭頸部癌腫瘍から取られた生検から適切なプライマーを用いてＰＣＲ法によって検出され得る。
【００８５】
ＨＰＶ試験は2013 NCCN guidelines for cancers of the oropharynxに従ってもまたなされ得る。例えば、ｐ１６発現の分析のための免疫組織化学または腫瘍細胞核からのＨＰＶのＤＮＡの検出のためのＨＰＶインサイチュハイブリダイゼーションのどちらかによる。その内容全体が参照によって本明細書に組み込まれるNCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology (NCCN Guidelines) - Head and Neck Cancers, Version 2.2013, May 29, 2013, Natural Comprehensive Cancer Network, Inc.参照。
【００８６】
ＨＰＶのＤＮＡは対象の血清からもまた検出され得、これはいくつかの態様において好ましくあり得る。なぜなら、これは腫瘍生検の必要を回避するからである。対象からのＨＰＶの検出のための好適な検出方法および試薬（例えばＰＣＲプライマー）は、Molijn et al., Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections, Journal of Clinical Virology 32S (2005) S43-S51およびCapone et al., Detection and Quantitation of Human Papillomavirus (HPV) DNA in the Sera of Patients with HPV-associated Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Clin Cancer Res November 2000 6; 417に記載されているものを包含するが、これに限定されない。これらのそれぞれの内容全体は参照によって本明細書に組み込まれる。追加の好適な方法および試薬は本開示に基づいて当業者には明らかであろう。
【００８７】
本開示のいくつかの側面は、対象のＨＰＶ陽性の頭頸部癌を処置するための方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、その必要がある対象に（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、および（ｉｉｉ）ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する抗体からなる群から選択される薬剤を、対象の頭頸部癌を処置するために十分な量で投与することを含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも３３％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。
【００８８】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも３３％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも３３％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％は二量体形態である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はグリコシル化される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−７Ｍ未満のＫＤ、例えば１×１０−８Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、または１×１０−１１Ｍ未満のＫＤでＢＭＰ９またはＢＭＰ１０を結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は、例えばそれが１×１０−６Ｍ超のＫＤでＴＧＦβ−１に結合するという点で、ＴＧＦβ−１に対する実質的な結合を見せない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は医薬調製物として投与される。
【００８９】
いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに対するＢＭＰ９またはＢＭＰ１０の結合を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は少なくとも１つのＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。
【００９０】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、または３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。
【００９１】
いくつかの態様において、方法は対象に白金化学療法剤を投与することをさらに含む。いくつかの態様において、白金化学療法剤は白金の配位複合体を含む。いくつかの態様において、白金化学療法剤はシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、Triplatin、Lipoplatin、またはそのいずれかの組み合わせである。
【００９２】
いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与され、白金化学療法剤は５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与される。
【００９３】
例えば、いくつかの態様において、ＡＬＫ１阻害剤（例えば、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質）は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与され、一方で白金化学療法剤は０．５〜５ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は最大忍容投薬量、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、０．４ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．６ｍｇ／ｋｇ／日、０．７ｍｇ／ｋｇ／日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日、０．９ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、２ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日、３．５ｍｇ／ｋｇ／日、４ｍｇ／ｋｇ／日、４．５ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、５．５ｍｇ／ｋｇ／日、６ｍｇ／ｋｇ／日、６．５ｍｇ／ｋｇ／日、７ｍｇ／ｋｇ／日、７．５ｍｇ／ｋｇ／日、８ｍｇ／ｋｇ／日、８．５ｍｇ／ｋｇ／日、９ｍｇ／ｋｇ／日、９．５ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日で投与され、ＡＬＫ１阻害剤は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で投与される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１阻害剤は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、０．４ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．６ｍｇ／ｋｇ／日、０．７ｍｇ／ｋｇ／日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日、０．９ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、２ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日、４ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、６ｍｇ／ｋｇ／日、７ｍｇ／ｋｇ／日、８ｍｇ／ｋｇ／日、９ｍｇ／ｋｇ／日、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１１ｍｇ／ｋｇ／日、１２ｍｇ／ｋｇ／日、１２．５ｍｇ／ｋｇ／日、１３ｍｇ／ｋｇ／日、１４ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日、１６ｍｇ／ｋｇ／日、１７ｍｇ／ｋｇ／日、１７．５ｍｇ／ｋｇ／日、１８ｍｇ／ｋｇ／日、１９ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日、２１ｍｇ／ｋｇ／日、２２ｍｇ／ｋｇ／日、２３ｍｇ／ｋｇ／日、２４ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日、２６ｍｇ／ｋｇ／日、２７ｍｇ／ｋｇ／日、２８ｍｇ／ｋｇ／日、２９ｍｇ／ｋｇ／日、または３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１〜５ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、白金化学療法剤は０．１ｍｇ／ｋｇ／日、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、０．４ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．６ｍｇ／ｋｇ／日、０．７ｍｇ／ｋｇ／日、０．８ｍｇ／ｋｇ／日、０．９ｍｇ／ｋｇ／日、１ｍｇ／ｋｇ／日、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、２ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日、３．５ｍｇ／ｋｇ／日、４ｍｇ／ｋｇ／日、４．５ｍｇ／ｋｇ／日、５ｍｇ／ｋｇ／日、５．５ｍｇ／ｋｇ／日、６ｍｇ／ｋｇ／日、６．５ｍｇ／ｋｇ／日、７ｍｇ／ｋｇ／日、７．５ｍｇ／ｋｇ／日、８ｍｇ／ｋｇ／日、８．５ｍｇ／ｋｇ／日、９ｍｇ／ｋｇ／日、９．５ｍｇ／ｋｇ／日、または１０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１阻害剤および白金化学療法剤の比は１０：１〜１：１０（重量：重量）、例えば１：２、２：１、１：２．５、２：５：１、１：３、３：１、１：４、４：１、１：５、５：１、１：６、６：１、１：７、７：１、１：８、８：１、１：９、９：１、１：１０、または１０：１である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１０ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与され、白金化学療法剤は５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量で対象に投与される。
【００９４】
いくつかの態様において、頭頸部癌は再発性または転移性扁平上皮癌である。いくつかの態様において、方法は、頭頸部癌がＨＰＶ陽性であるということを決定することをさらに含む。いくつかの態様において、方法は、頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるということに基づいて、頭頸部癌が薬剤による処置に対して応答性であると特定することをさらに含む。いくつかの態様において、薬剤は頭頸部癌がＨＰＶについて陽性であるということに基づいて投与される。
【００９５】
本開示のいくつかの側面は、癌がＡＬＫ１アンタゴニストによる処置に対して応答するかどうかを特定するための方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、（ａ）対象の頭頸部癌がＨＰＶ陽性であるかどうかを決定することを含み、頭頸部癌がＨＰＶについて陽性である場合には、そこで、癌はＡＬＫ１アンタゴニストによる処置に対して応答すると特定される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１アンタゴニストは（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、および（ｉｉｉ）ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する抗体からなる群から選択される薬剤である。いくつかの態様において、方法は、（ｂ）頭頸部癌を処置するために有効な量で対象にＡＬＫ１アンタゴニストを投与することをさらに含む。いくつかの態様において、方法は対象の頭頸部癌から生検を得ることをさらに含む。
【００９６】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％は二量体形態である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はグリコシル化される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はDalanterceptである。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、頭頸部癌は再発性または転移性扁平上皮癌である。
【００９７】
本開示のいくつかの側面は、（ａ）対象の頭頸部癌から生検を得ることと、（ｂ）頭頸部癌がＨＰＶ陽性であるかどうかを決定することと、（ｃ）頭頸部癌がＨＰＶについて陽性である場合には、頭頸部癌が（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体、および（ｉｉｉ）ＢＭＰ９またはＢＭＰ１０に結合する抗体からなる群から選択される薬剤による処置に対して応答性であると特定することと、を含む方法を提供する。いくつかの態様において、方法は、頭頸部癌を処置するために有効な量で対象に薬剤を投与することをさらに含む。
【００９８】
いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％は二量体形態である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はグリコシル化される。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質はDalanterceptである。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量で対象に投与される。いくつかの態様において、頭頸部癌は再発性または転移性扁平上皮癌である。
【００９９】
一般的に、１つ以上の治療剤が本明細書において提供される治療方法のいずれかによって投与され得る。本開示の方法は、それぞれの状態、例えば頭頸部癌などの癌を処置するために用いられる他の医薬との共投与をもまた包含する。１つよりも多くの薬剤または薬剤および医薬の組み合わせ、例えばＡＬＫ１阻害剤と白金化学療法剤との組み合わせを投与するときには、投与は同時にまたは時間的に続けて起こり得る。治療剤および／または医薬は異なる投与経路または同じ投与経路によって投与され得る。同じ経路によって投与される場合には、薬剤は同じ入口、例えば同じ静脈ポートから、または異なる入口から投与され得る。
医薬組成物
【０１００】
本開示のいくつかの側面は、対象の頭頸部癌の処置のための医薬組成物を提供する。いくつかの態様において、組成物は、（ａ）（ｉ）ＡＬＫ１細胞外ドメイン（ＡＬＫ１−ＥＣＤ）ポリペプチド、（ｉｉ）ＢＭＰ９もしくはＢＭＰ１０に結合する抗体、または（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸２２〜１１８を含むＡＬＫ１ポリペプチドに結合する抗体からなる群から選択される薬剤と（ｂ）白金化学療法剤とを含み、（ａ）の薬剤および白金化学療法剤は対象の頭頸部癌を処置するために十分な量である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのアミノ酸配列は配列番号１のアミノ酸２２〜１１８の配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のグルタミン１１８（Ｑ１１８）ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基はグルタミン残基ではない。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドのＣ末端アミノ酸残基は配列番号１のプロリン１１３（Ｐ１１３）、グリシン１１４（Ｇ１１４）、トレオニン１１５（Ｔ１１５）、アスパラギン酸１１６（Ｄ１１６）、グリシン１１７（Ｇ１１７）、ロイシン１１９（Ｌ１１９）、アラニン１２０（Ａ１２０）、ロイシン１２１（Ｌ１２１）、イソロイシン１２２（Ｉ１２２）、またはロイシン１２３（Ｌ１２３）である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは免疫グロブリンのＦｃ部分に融合され、それゆえにＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質を形成する。いくつかの態様において、Ｆｃ部分はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は配列番号３または配列番号４の配列を含む。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列は配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一である。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−７Ｍ未満のＫＤでＢＭＰ９またはＢＭＰ１０を結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドおよび／またはＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質は１×１０−６Ｍ超のＫＤでＴＧＦβ−１に結合する。いくつかの態様において、ＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドは医薬調製物として投与され、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質の少なくとも９０％は二量体形態である。
【０１０１】
いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体は１×１０−１０Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉ）の抗体はＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに対するＢＭＰ９またはＢＭＰ１０の結合を阻害する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は５×１０−８Ｍ未満のＫＤでＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドに結合する。いくつかの態様において、（ｉｉｉ）の抗体は少なくとも１つのＡＬＫ１リガンドによって刺激される血管新生を阻害する。
【０１０２】
いくつかの態様において、白金化学療法剤は白金の配位複合体を含む。いくつかの態様において、白金化学療法剤はシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、Triplatin、Lipoplatin、またはそのいずれかの組み合わせである。いくつかの例示的な好適な白金剤が本明細書において提供され、追加の好適な白金剤は、Donzelli et al., (2004) Neurotoxicity of platinum compounds: Comparison of the effects of cisplatin and oxaliplatin on the human neuroblastoma cell line SH-SY5Y. Journal of neuro-oncology 67 (1-2): 65-73、Poklar et al., (1996) Influence of cisplatin intrastrand crosslinking on the conformation, thermal stability, and energetics of a 20-mer DNA duplex. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93 (15): 7606-11、Rudd et al., (1995) Persistence of cisplatin-induced DNA interstrand crosslinking in peripheral blood mononuclear cells from elderly and young individuals. Cancer Chemother. Pharmacol. 35 (4): 323-6、Cruet-Hennequart et al., (2008) Enhanced DNA-PK-mediated RPA2 hyperphosphorylation in DNA polymerase eta-deficient human cells treated with cisplatin and oxaliplatin. DNA Repair (Amst.) 7 (4): 582-96、Kelland (2007) The resurgence of platinum-based cancer chemotherapy. Nature Reviews Cancer 7 (8): 573-584、およびEinhorn (1990) Treatment of testicular cancer: a new and improved model. J. Clin. Oncol. 8 (11): 1777-81に報告されているものを包含する。これらのそれぞれの内容全体は参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１０３】
本明細書に記載される治療剤は医薬組成物に製剤化され得る。本開示に従う使用のための医薬組成物は１つ以上の生理学的に許容される担体または賦形剤を用いる従来の様式で製剤化され得る。かかる製剤はほとんどの規則上の要件に応じて一般的には実質的にパイロジェン不含であろう。
【０１０４】
ある態様において、本開示の治療方法は組成物を埋植物またはデバイスとして全身または局所投与することを包含する。投与されるときに、本開示への使用のための治療組成物はパイロジェン不含の生理学的に許容される形態である。上に記載されている組成物中に任意にまた包含され得るＡＬＫ１アンタゴニスト以外の治療上有用な薬剤、例えば白金化学療法剤は、対象化合物、例えばＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドまたは本明細書において開示される抗体のいずれかと同時にまたは続けて、本明細書において開示される方法によって投与され得る。
【０１０５】
典型的には、本明細書において開示される蛋白質治療剤は非経口的に、例えば静脈内または皮下投与されるであろう。非経口投与にとって好適な医薬組成物は、１つ以上のＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチドまたは他の抗体を１つ以上の医薬的に許容される無菌の等張な水もしくは非水溶液、分散液、懸濁液もしくはエマルション、または使用の直前に無菌の注射用溶液もしくは分散液に戻され得る無菌の粉末と組み合わせて含み得、これは抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、意図されるレシピエントの血液に対して製剤を等張にする溶質、または懸濁もしくは増粘剤を含有し得る。
【０１０６】
本開示の医薬組成物に利用され得る好適な水性および非水性担体の例は水、エタノール、（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールおよび同類などの）ポリオール、およびその好適な混合物、オリーブ油などの植物油、ならびにオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルを包含する。しかるべき流動性は、例えばレシチンなどのコーティング材料の使用、分散液のケースでは要求される粒径の維持、および界面活性剤の使用によって維持され得る。
【０１０７】
いくつかの態様において、本明細書において開示される抗体およびＡＬＫ１−ＥＣＤ蛋白質は医薬製剤として投与される。いくつかの態様において、医薬製剤は無菌の水溶液であり、好ましくは注射にとって好適な濃度である。かかる製剤は、典型的には、緩衝生理食塩水溶液などの無菌の医薬的に許容される基剤中に溶解または懸濁された本明細書において開示される１つ以上の抗体またはＡＬＫ１−ＥＣＤ蛋白質を含む。チメロサール、クロロブタノール、または他の抗微生物剤もまた包含され得る。
【０１０８】
本開示は、ｐＨを調整するための酸および塩基とｐＨを狭い範囲内に保つための緩衝剤とを包含するように変更され得る製剤を提供する。追加の医薬が製剤に追加され得る。それらは白金化学療法剤、ペガプタニブ、ヘパリナーゼ、ラニビズマブ、またはグルココルチコイドを包含するが、これに限定されない。
【０１０９】
組成物および製剤は、所望の場合には、有効成分を含有する１つ以上の単位剤形を含有し得るパックまたはディスペンサーデバイスとして提供され得る。パックは例えばブリスターパックなどの金属またはプラスチックホイルを含み得る。いくつかの態様において、パックは、医薬組成物の粉末化、フリーズドライ、または凍結乾燥された製剤を含有する１つ以上のバイアル、例えば、例えばＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチド、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質、ＡＬＫ１阻害抗体などの凍結乾燥されたＡＬＫ１阻害剤、または１つ以上のＡＬＫ１アンタゴニストの組み合わせを含有するバイアルと、白金化学療法剤とを異なるバイアルまたは同じバイアルどちらかとして含有し得る。パックまたはディスペンサーデバイスには投与のための説明書が付属し得る。
【０１１０】
いくつかの態様において、それぞれの化合物、例えばＡＬＫ１阻害剤または白金化学療法剤の単一の剤形、例えば単一の丸薬、容器、バイアル、ディスペンサーユニット、またはパックは化合物の０．１〜５００ｍｇを含有する。例えば、本開示のいくつかの態様は、０．１ｍｇ、０．２ｍｇ、０．３ｍｇ、０．４ｍｇ、０．５ｍｇ、０．６ｍｇ、０．７ｍｇ、０．８ｍｇ、０．９ｍｇ、１ｍｇ、１．５ｍｇ、２ｍｇ、２．５ｍｇ、３ｍｇ、３．５ｍｇ、４ｍｇ、４．５ｍｇ、５ｍｇ、５．５ｍｇ、６ｍｇ、６．５ｍｇ、７ｍｇ、７．５ｍｇ、８ｍｇ、８．５ｍｇ、９ｍｇ、９．５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、または５００ｍｇのＡＬＫ１阻害剤、例えばＡＬＫ１−ＥＣＤポリペプチド、ＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質、もしくはＡＬＫ１阻害抗体、および／または白金化学療法剤を含む剤形、例えば丸薬、容器、バイアル、ディスペンサーユニット、またはパックを提供する。
【０１１１】
総投薬量が本開示においてｍｇ／ｋｇ／日で提供されているところでは、総投薬量は処置レジメンの１日当りの個々の体重ｋｇ当りのｍｇで、個々に与えられる投薬量を言うということは理解されるであろう。当業者は、かかる計算に用いられる体重がいくつかの態様においては完全なｋｇ値に、または最も近いｋｇ、２ｋｇ、２．５ｋｇ、５ｋｇ、もしくは１０ｋｇ値に丸められるということを理解するであろう。ｍｇ／ｋｇ値の開示は、オンス、ポンド、英国法定単位、メートル法単位、自然単位、または非標準単位などの他の単位システムで表現されるかかる値の開示を包含する。ｍｇ／ｋｇ／日の総投薬量が、それぞれの量を１日１回投与すること、それぞれの画分を１日複数回投与すること（例えば、１日投薬量の５０％を１日２回、３３％を１日３回、２５％を１日４回、２０％を１日５回投与することなど）、またはより大きい投薬量を１日未満の間隔で投与すること（例えば、投薬量の２倍を１日おき、投薬量の３倍を３日毎、投薬量の４倍を４日毎に投与することなど）によって実現され得るということもまた理解されるであろう。例示すると、５ｍｇ／ｋｇ／日の投薬量は、例えば処置期間に５ｍｇ／ｋｇの１日１回の単回投与、処置期間に１．２５ｍｇ／ｋｇの１日４回の投与、１０ｍｇ／ｋｇの２日毎の投与、または３５ｍｇ／ｋｇの週１回の投与によって達成され得る。特定の投薬スケジュールはなかでも投与される薬物の薬物動態および毒性特質に依存するであろう。
【０１１２】
ｍｇ／ｋｇ／日で提供される総投薬量は、例えばDuBois et al., A formula to estimate the approximate surface area if height and weight be known. Arch Int Med 1916;17:863-71、Gehan et al., Estimation of human body surface area from height and weight. Cancer Chemother Rep 1970;54:225-35、Haycock et al., Geometric method for measuring body surface area: A height-weight formula validated in infants, children and adults. J Pediatr 1978;93:62-6、およびMosteller et al., Simplified calculation of body-surface area. N Engl J Med 1987;317:1098に記載されているものを包含する当分野において周知の方法に従って個々の患者についてｍｇ／ｍ２の総投薬量に変換され得るということが理解されるであろう。これらのそれぞれの内容全体は参照によって本明細書に組み込まれる。
【０１１３】
本明細書において開示されるテクノロジーの態様、利点、特徴、および使用のいくつかは下の例からより詳しく理解されるであろう。例は本開示の利益のいくつかを例示し特定の態様を記載することを意図されているが、開示の完全な範囲を例示することを意図されてはなく、従って本開示の範囲を限定しない。
【実施例】
【０１１４】
例１：シスプラチンと組み合わせた血管新生のＡＬＫ１／ＢＭＰ９阻害剤Dalanterceptは、頭頸部の扁平上皮癌の異種移植モデルにおいて腫瘍成長阻害を増強する。
アクチビン受容体様キナーゼ１（ＡＬＫ１）は血管新生および血管形態形成の主要な制御因子である。ＡＬＫ１およびその共受容体エンドグリンは活発な血管新生の間に内皮細胞の表面上に発現される。骨形成蛋白質（ＢＭＰ）９および１０は、ＡＬＫ１に結合してヘテロマー受容体複合体の活性化、ＳＭＡＤ１／５／８のリン酸化、ならびにＩｄ−１およびＴＭＥＭ１００などの血管新生に包摂される特異的な遺伝子の上方制御を誘導するリガンドである。ＢＭＰ９は大多数の頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）において過剰発現される。Dalanterceptは  ＡＬＫ１細胞外ドメイン−Ｆｃ融合蛋白質であり、これは高いアフィニティーでＢＭＰ９およびＢＭＰ１０を選択的に結合し、インビボのＡＬＫ１シグナル伝達にアンタゴナイズし、これは前臨床モデルにおいて不全な血管成熟および腫瘍成長の阻害をもたらす。
【０１１５】
進行した難治性固形腫瘍の患者における完了した第１相研究において、dalanterceptは、客観的反応または長期安定を達成したＳＣＣＨＮの患者の患者を包含する種々の患者において臨床活性の徴候を証明した。ＳＣＣＨＮにおけるdalanterceptによる第２相研究が現在進行中である。ＳＣＣＨＮにおけるdalanterceptおよびシスプラチン両方の単剤活性に基づいて、我々はシスプラチンをdalanterceptと組み合わせることの実行可能性をＳＣＣＨＮのマウスモデルにおいて試験した。シスプラチンとのdalanterceptの併用処置は、ＲＰＭＩ２６５０異種移植モデルにおいて腫瘍成長の有意な阻害を示し（第３０日に５９％ＴＧＩ）、これはシスプラチン（３５％ＴＧＩ、ｐ＝０．００７７）またはdalantercept（３２％ＴＧＩ、ｐ＝０．０００２）単独療法どちらかよりも有意に良好であった。シスプラチン単独療法群と比較して、併用処置群において追加の毒性は観察されなかった。このデータは、シスプラチンとのdalanterceptの組み合わせが増強された臨床活性をもたらし得るということを示唆しており、ＳＣＣＨＮの患者における前向き評価を正当化する。
【表１】
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【０１１６】
dalanterceptによる第１相治験において、頭頸部の扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）の数人の患者は安定を示した。シスプラチンはこの患者集団にとって最も普通に用いられる標準治療処置の１つである。我々は、シスプラチンとのdalanterceptの組み合わせが頭頸部癌腫のマウス腫瘍モデルにおいて忍容されるかどうか、および併用処置が相加的または相乗的な抗腫瘍効果をもたらすかどうかを試験しようとした。
【０１１７】
試験動物。動物の情報は表２に提供されている。
【表２】
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【０１１８】
動物は初回投薬の前に最低４８時間、実験室条件に順化させた。この期間に、全ての動物は、それらを研究から除外するであろう臨床的な異常のいずれかの徴候について観察された。動物にはそれらのケージカード上の研究番号を割り当て、耳刻によって唯一的に特定した。
【０１１９】
アクセルロンファーマの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）はこの研究設計に関する全ての手順を承認し、それがＵＳＤＡ動物福祉法、実験動物の人道的取扱いと使用に関するＰＨＳ方針、およびUS Interagency Research Animal Committee Principles for the Utilization and Care of Research Animalsの規定に従っているということを見いだした。
【０１２０】
試験動物のハウジングおよび世話。動物管理は表３に記載されているように提供した。
【表３】
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【０１２１】
別様に注記しない限り、飼料および水は自由に提供した。敷き藁は保証前に重金属、アフラトキシン、細菌、酵母、カビ、および有機リン酸エステルの許容されるレベルについて製造者が日常的に分析している。混入物が本研究の目的を達成することを妨げ得るレベルで飼料、水、または敷き藁中に存在することは公知でない。
【０１２２】
環境のコントロールは表３に示されている動物飼育室の条件を維持するように設定した。動物飼育室の実際の温度および相対湿度はコンピュータ化システムによって継続的にモニタリングした。全ての環境パラメータは注記する場合を除きプロトコール要件に維持した。
【０１２３】
ビヒクルコントロール。無菌の濾過済み改変ＴＢＳ（１０ｍＭのＴｒｉｓ、１３７ｍＭのＮａＣｌ、２．７ｍＭのＫＣｌ、ｐＨ＝７．２１）。保管：使用まで室温で保管した。改変ＴＢＳをｉ．ｐ．注射によって５ｍｌ／ｋｇで投与した。
【０１２４】
ＡＣＥ−０４１、Dalantercept（ＡＬＫ１−ＩｇＧ１）。Lot#:PO7041-006xA。無菌の改変ＴＢＳを用いて２．０ｍｇ／ｍｌの濃度に希釈。保管：−６５℃±１５℃で保管し、材料は室温においてまたは一晩４℃において解凍した。解凍した蛋白質は４℃において７日よりも長くは保管しなかった。２ｍｇ／ｍｌ蛋白質溶液を５ｍｌ／ｋｇでｉ．ｐ．注射によって投与した。
【０１２５】
シスプラチン注射（APP Pharmaceuticals LLC、シャンバーグ、ＩＬ、ＵＳＡ）．製品No.100365、Lot.No.6103635。保管：室温において光から保護。１ｍｇ／ｍｌ溶液をｉ．ｖ．注射によって５ｍｌ／ｋｇで投与した。
実験手順
【０１２６】
鼻中隔癌腫細胞（ＲＰＭＩ２６５０、ATCC#CCL-30）を８週齢雌マウスの右腹側部に皮下注射した（ＳＦＭの０．１ｍｌ中５×１０Ｅ６）。埋植の９日後で、動物は腫瘍体積に基づいて４つの群にランダム化された。動物投薬および腫瘍測定は週３回なされた。
【表４】
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【０１２７】
腫瘍埋植。ＲＰＭＩ２６５０（ATCC#CCL-30）を、ウシ胎児血清（Gibco、Cat.No26140）を１０％の最終濃度に補ったイーグル最小必須培地（ATCC Cat.No 30-2003）で培養した。細胞を穏やかなトリプシン消化によって回収し、ＳＦＭで洗浄し、５０×１０Ｅ６／ｍｌの濃度でＳＦＭ中に再懸濁した。細胞懸濁液の０．１ｍｌ（５×１０Ｅ６細胞）をヌードマウスの右腹側部に皮下注射した。
【０１２８】
腫瘍測定。腫瘍サイズはデジタルノギスを用いてマニュアル測定した。腫瘍体積は修正楕円の式を用いて計算した（（長さ＊幅２）／２）。
【０１２９】
データ分析。腫瘍体積および体重データのグラフ化および統計分析はGraphPad Prism 5ソフトウェア（GraphPad Software Inc.、ラホーヤ、ＣＡ）を用いてなされた。対応のない両側ｔ検定（またはウェルチ補正ありまたはなし）を用いて統計的有意性を決定した。ＴＧＩは式
ＴＧＩ＝（ＧＭＤＶ（Ｃ）−ＧＭＤＶ（Ｔ））＊１００／（ＧＭＤＶ（Ｃ）−１）、式中ＧＭＤＶ＝Ｇｅｏｍｅａｎ（最終体積）／Ｇｅｏｍｅａｎ（最初の体積）
に従って計算した。
結果
【０１３０】
腫瘍成長データ。ＡＣＥ−０４１による処置はＲＰＭＩ２６５０異種移植モデルにおいて軽度の抗腫瘍活性を示した（３２％ＴＧＩ）。最大忍容投薬量で与えられたシスプラチンもまた軽度の腫瘍成長阻害を示した（３５％ＴＧＩ）。シスプラチンと組み合わせたDalanterceptはどちらかの薬剤単独よりも腫瘍成長の大きい阻害を示した（５９％ＴＧＩ、ｐ＝０．００７７ｖｓ．シスプラチン、ｐ＝０．０００２ｖｓ．ＡＣＥ−０４１単独療法）。
【表５】
2017511314.tif 000007
【表６】
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【表７】
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【０１３１】
動物体重データ。ＡＣＥ−０４１による処置は、動物の体重の変化によってモニタリングされるような急性毒性のいずれかの徴候を示さなかった。対照的に、シスプラチンによる処置は投薬期間に有意な体重低下をもたらした。動物は投薬間に完全に回復することができず、第３０日には平均で〜１３％の累積的な体重低下を引き起こした。いくつかの動物は体重の２０％をも失い、ＩＡＣＵＣ規則によって研究の終了を誘発した。シスプラチンによって媒介される体重減少は併用処置群においてもまた明らかであった。興味深いことに、シスプラチンの３ｒｄ投薬は、シスプラチン単独療法群と比較してこの群の動物によってより良く忍容されたようであった（しかし、体重の違いは統計的有意性に達しなかった）。
【表８】
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結論
【０１３２】
１０ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．で週３回投薬したＡＣＥ−０４１はＲＰＭＩ２６５０Ｈ＆Ｎ異種移植モデルにおいて軽度の抗腫瘍活性を示し、投薬の３週間の後に３２％ＴＧＩであった。コントロール群と比較してＡＣＥ−０４１群では体重の増大の傾向があった。しかしながら、違いは統計的に有意ではなかった。
【０１３３】
週１回のスケジュールによって５ｍｇ／ｋｇのｉ．ｖ．で投薬したシスプラチンもまた投薬の３週間の後に３５％の軽い腫瘍成長阻害を示した。シスプラチンによる処置は投薬期間に有意な体重低下をもたらした。動物は各投薬後に完全に回復することができず、第３０日には平均で〜１３％の累積的な体重低下を引き起こした。
【０１３４】
シスプラチンとのＡＣＥ−０４１の併用処置は相加的な抗腫瘍効果を示した。第３０日に５９％ＴＧＩであり、これはシスプラチン（ｐ＝０．００７７）またはＡＣＥ−０４１（ｐ＝０．０００２）単独療法どちらかよりも有意に良好であった。シスプラチンによって媒介される体重低下もまた併用処置群において明らかであった。シスプラチンの３ｒｄ投薬は、シスプラチン単独療法群と比較してこの群に動物によってより良く忍容されたようであった（しかし、体重の違いは統計的有意性に達しなかった）。このデータは、シスプラチンとのdalanterceptの組み合わせが頭頸部の扁平上皮癌の患者にとって有利であるということを示唆している。
例２：頭頸部の再発性または転移性扁平上皮癌におけるdalanterceptの第２相研究。
【０１３５】
白金療法後の頭頸部の再発性または転移性扁平上皮癌（ＳＣＣＨＮ）の患者にとっては限定された処置が存在し、予後は不良のままである。アクチビン受容体様キナーゼ１（ＡＬＫ１）はＴＧＦ−βスーパーファミリーのメンバーであり、活性化した内皮細胞上に選択的に発現し、血管成熟に包摂される。ＡＬＫ１はリガンドの骨形成蛋白質（ＢＭＰ）９および１０に結合し、Ｓｍａｄ１／５／８のリン酸化をもたらす。DalanterceptはＡＬＫ１受容体融合蛋白質であり、ＢＭＰ９および１０に対するリガンド・トラップとして作用する。完了した第１相研究において、DalanterceptはＳＣＣＨＮの患者の部分集合において活性を証明した。この現在の第２相研究は、進行したまたは転移性ＳＣＣＨＮの患者における単剤Dalanterceptの活性を決定することを目指した。
【０１３６】
方法：４６人の患者が登録され、疾患の進行または許容されない毒性まで、８０ｍｇ（ｎ＝２）、０．６ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１３）、および１．２ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝３１）のDalanterceptのＳＣのＱ３Ｗを受けた。アーカイブおよび任意の生検および血清をＰＤ（薬力学）研究のために集めた。一次エンドポイントはＲＥＣＩＳＴ１．１による奏功率（ＲＲ）であり、二次エンドポイントは進行なしの生存率および総体的な生存率を包含した。主要な適格基準：粘膜起源の再発性または転移性ＳＣＣＨＮ、＞１の１つの先行の白金レジメン、ＥＣＯＧ全身状態≦１、且つ先行の抗血管新生療法なし。結果：４１人の患者が評価可能であった（８０ｍｇで１人、０．６ｍｇ／ｋｇで１３人、１．２ｍｇ／ｋｇで２７人）。中央値年齢は６０．５歳、８５％Ｍ／１５％Ｆ、ＥＣＯＧ：０（３５％）／１（６５％）、ＨＰＶ４１％陽性／３３％陰性／２６％不明であった。先行の療法の中央値＃＝４、６１％の患者は先行のセツキシマブを有した。１．２ｍｇ／ｋｇの１人の患者（２．４％）は部分奏功（ＰＲ）を達成した。安定（ＳＤ）＞３サイクルの患者の割合は０．６ｍｇ／ｋｇで２３％（ｎ＝３）、１．２ｍｇ／ｋｇで３７％であった（ｎ＝１０）。ＳＤのまたはより良好なこれらの患者のうち（ｎ＝１６）、６２％がＨＰＶ＋であることが既知であった。最も普通の薬物関連有害事象（ＡＥ）はグレード１〜２であり、貧血、疲労感、末梢浮腫、頭痛、低ナトリウム血症、および胸水からなった。グレード＞３の関連ＡＥの頻度は１３％であり、最も普通なのは低ナトリウム血症（ｎ＝３）および胸水（ｎ＝２）であった。
結論
【０１３７】
DalanterceptはＡＬＫ１シグナル伝達を阻害する抗血管新生剤であり、血管成熟のプロセスを遮断する。この重度に先行処置されたＳＣＣＨＮ集団においては、Dalanterceptは、投薬量依存性の単独療法活性と総体的な許容される安全性プロファイルとを証明した。
参照
【０１３８】
本明細書、例えば背景技術、発明の概要、発明を実施するための形態、実施例、および／または参照の項において挙げられる全ての公刊物、特許、特許出願、公開、およびデータベース項目（例えば配列データベース項目）は、各個々の公刊物、特許、特許出願、公開、およびデータベース項目が具体的且つ個々に参照によって本明細書に組み込まれたかのように、それらの全体が参照によってここに組み込まれる。相反のケースでは、本明細書のいずれかの定義を包含して本願がコントロールするものとする。
配列
配列番号１−ヒトアクチビン受容体様キナーゼ１のアミノ酸配列（ＡＬＫ−１、gi:3915750）
【化１】
2017511314.tif 000011
一重下線は細胞外ドメインを示す。二重下線は細胞内ドメインを示す。シグナルペプチドおよび膜貫通ドメインは下線を引かれていない。
配列番号２−ヒトアクチビン受容体様キナーゼ１（ＡＬＫ−１）の核酸配列
【化２】
2017511314.tif 000012
コード配列は下線を引かれている。細胞外ドメインをコードする部分は二重下線を引かれている。
配列番号３−ｈＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列
【化３】
2017511314.tif 000013
ｈＡＬＫ１−Ｆｃ蛋白質は、Ｃ末端においてリンカー（下線を引かれている）およびＩｇＧ１のＦｃ領域に融合されたヒトＡＬＫ１蛋白質のアミノ酸２２〜１２０を包含する。
配列番号４−例示的なＡＬＫ１−Ｆｃ融合蛋白質のアミノ酸配列
【化４】
2017511314.tif 000014
配列番号５−Ｆｃドメインの例示的なアミノ酸配列
【化５】
2017511314.tif 000015
いくつかの態様においては、野生型Ｆｃドメインと比べてＦｃ受容体に対する結合を調節するために、下線を引かれている残基の１つ以上が例えばアラニン（Ａ）に変異し得る。
均等物および範囲
【０１３９】
当業者は本明細書に記載される態様の多くの均等物を認識するか、または日常的以下の実験法を用いて確かめることができるであろう。本開示の範囲は上の記載に限定されることを意図されず、むしろ添付の請求項において提示される通りである。
【０１４０】
「a」、「an」、および「the」などの冠詞は、逆に指示されないかまたは文脈から別様に明白でない限り、１つまたは１つよりも多くを意味し得る。「または」を群の２つ以上のメンバー間に包含する請求項または記載は、逆に指示されないかまたは文脈から別様に明白でない限り、群のメンバーの１つ、1つよりも多く、または全てが存在する場合に満たされると考えられる。２つ以上の群のメンバー間に「または」を包含する群の開示は、群の厳密に１つのメンバーが存在する態様、群の１つよりも多くのメンバーが存在する態様、および群のメンバーの全てが存在する態様を提供する。簡潔の目的のために、それらの態様は本明細書において個々に書き出されてはいないが、それらの態様のそれぞれは本明細書において提供され、具体的に請求または放棄され得るということは理解されるであろう。
【０１４１】
本開示が、１つ以上の限定、要素、条項、または説明用語が請求項の１つ以上からまたは明細書の１つ以上の妥当な部分から別の請求項中に導入される、全ての変形、組み合わせ、および入れ替えを包含すると理解されるべきである。例えば、別の請求項に従属する請求項が改変されて、同じ基本請求項に従属するいずれかの他の請求項に見いだされる限定の１つ以上を包含し得る。尚その上に、請求項が組成物を記述しているところでは、別様に指示されない限りまたは矛盾もしくは不一致が発生するであろうということが当業者にとって明白でない限り、本明細書において開示される作るもしくは用いる方法のいずれかに従って、または当分野において公知の方法がある場合にはそれに従って、組成物を作るまたは用いる方法が包含されると理解されるべきである。
【０１４２】
要素がリストとして例えばマーカッシュ群フォーマットで提供されるところでは、要素のあり得る各下位群もまた開示されるということ、およびいずれかの要素または要素の下位群が群から除去され得ると理解されるべきである。用語「含むこと」は開放的であることを意図されており、追加の要素またはステップの包含を許すということもまた注記される。一般的に、態様、製品、または方法が特定の要素、特徴、またはステップを含むと言うところでは、かかる要素、特徴、またはステップからなるかまたは本質的になる態様、製品、または方法も同じく提供されると理解されるべきである。簡潔の目的のために、それらの態様は本明細書において個々に書き出されてはいないが、それらの態様のそれぞれが本明細書において提供され、具体的に請求または放棄され得るということは理解されるであろう。
【０１４３】
範囲が与えられているところでは、エンドポイントが包含される。尚その上に、別様に指示されないかまたは文脈および／もしくは当業者の理解から別様に明白でない限り、文脈が明瞭に別様に命じない限り、範囲として表現される値は述べられた範囲内のいずれかの具体的な値をいくつかの態様においては範囲の下限の単位の１０分の１までとり得ると理解されるべきである。簡潔の目的のために、各範囲内の値は本明細書において個々に書き出されてはいないが、それらの値のそれぞれが本明細書において提供され、具体的に請求または放棄され得るということは理解されるであろう。別様に指示されないかまたは文脈および／もしくは当業者の理解から別様に明白でない限り、範囲として表現される値は所与の範囲内のいずれかの部分範囲をとり得、部分範囲のエンドポイントは範囲の下限の単位の１０分の１と同じ程度の精度で表現されるということもまた理解されるべきである。
【０１４４】
加えて、本明細書において開示されるいずれかの特定の態様が請求項のいずれか１つ以上から明確に除外され得ると理解されるべきである。範囲が与えられているところでは、範囲内のいずれかの値が請求項のいずれか１つ以上から明確に除外され得る。本明細書において開示される組成物および／または方法のいずれかの態様、要素、特徴、応用、または側面はいずれかの１つ以上の請求項から除外され得る。簡潔の目的のために、１つ以上の要素、特徴、目的、または側面が除外される態様の全てが本明細書において明確に提示されてはいない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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