(57)【要約】  本発明は、活性ポリペプチド成分と、薬学的に許容される及び／または化粧品的に許容される賦形剤、担体または希釈剤とを含む、哺乳動物の発毛抑制のための組成物を提供する。本発明は更に、哺乳動物、例えばヒトの発毛を抑制する方法を提供する。【選択図】  図１
2017513856.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の発毛抑制に使用される組成物であって、該組成物は、
（ａ）哺乳動物の発毛に対する抑制活性を保持する、配列番号１のアミノ酸配列、
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                  配列番号１
またはその断片若しくは変異体を含むか、またはそれからなるポリペプチド、ならびに
（ｂ）薬学的に許容される及び／または化粧品的に許容される賦形剤、担体、アジュバント若しくは希釈剤を含み、
該ポリペプチドが５〜５０のアミノ酸長である、前記組成物。
【請求項２】
前記組成物が人毛の成長を抑制できる、請求項１に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項３】
前記組成物が皮膚の健常化により発毛を抑制できる、請求項１または２に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４】
前記組成物が頭皮上の発毛を抑制できる、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５】
前記組成物が既存の毛包を抑制できる、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６】
先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物であって、該組成物が、
（ａ）（例えば、成長期から退行期への変化を誘発することによる）毛包の成長期の期間短縮、及び／または、
（ｂ）毛包の退行期の期間延長、及び／または、
（ｃ）毛包の休止期の期間延長のうち少なくともいずれか１つを誘発する、前記組成物。
【請求項７】
前記組成物が、硬毛の産生から軟毛の産生へと転換するように毛包を誘発できる、請求項６に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項８】
前記組成物が、新規毛包の形成を抑制できるか、または新規毛包を産生する幹細胞を抑制できる、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項９】
前記ポリペプチドが４０アミノ酸長未満、例えば３５、３０、２８、２６、２４、２２、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０以下のアミノ酸長である、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項１０】
前記ポリペプチドが５〜３０アミノ酸長、例えば５〜２０、５〜２０、８〜２０、８〜１６または１０〜１５アミノ酸長である、請求項９に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項１１】
前記ポリペプチドが１０〜１５アミノ酸長である、請求項１０に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項１２】
前記ポリペプチドが配列番号１のアミノ酸配列からなる、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項１３】
前記ポリペプチドが配列番号２のアミノ酸配列からなる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＳ                  配列番号２
【請求項１４】
前記ポリペプチドが配列番号１のアミノ酸配列の断片からなる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項１５】
前記断片が１４以下のアミノ酸長、例えば１３、１２、１１、１０、９、８、７、６または５アミノ酸長である、請求項１４に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項１６】
前記断片が配列番号３〜６５のうちいずれか１つによるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１４または１５に記載の発毛抑制に使用される組成物：
（ａ）１４アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                    配列番号３
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                  配列番号４
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                配列番号５
（ｂ）１３アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                      配列番号６
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                    配列番号７
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                  配列番号８
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                配列番号９
（ｃ）１２アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹ                        配列番号１０
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                      配列番号１１
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                    配列番号１２
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                  配列番号１３
ＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                配列番号１４
（ｄ）１１アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶ                          配列番号１５
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹ                        配列番号１６
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                      配列番号１７
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                    配列番号１８
ＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                  配列番号１９
ＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                配列番号２０
（ｅ）１０アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶ                            配列番号２１
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶ                          配列番号２２
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹ                        配列番号２３
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                      配列番号２４
ＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                    配列番号２５
ＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                  配列番号２６
ＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                配列番号２７
（ｆ）９アミノ酸ペプチド
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳ                              配列番号２８
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶ                            配列番号２９
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶ                          配列番号３０
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹ                        配列番号３１
ＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                      配列番号３２
ＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                    配列番号３３
ＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                  配列番号３４
ＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                配列番号３５
（ｇ）８アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩ                                配列番号３６
ＤＴＹＤＧＤＩＳ                              配列番号３７
ＴＹＤＧＤＩＳＶ                            配列番号３８
ＹＤＧＤＩＳＶＶ                          配列番号３９
ＤＧＤＩＳＶＶＹ                        配列番号４０
ＧＤＩＳＶＶＹＧ                      配列番号４１
ＤＩＳＶＶＹＧＬ                    配列番号４２
ＩＳＶＶＹＧＬＲ                  配列番号４３
（ｈ）７アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤ                                  配列番号４４
ＤＴＹＤＧＤＩ                                配列番号４５
ＴＹＤＧＤＩＳ                              配列番号４６
ＹＤＧＤＩＳＶ                            配列番号４７
ＤＧＤＩＳＶＶ                          配列番号４８
ＧＤＩＳＶＶＹ                        配列番号４９
ＤＩＳＶＶＹＧ                      配列番号５０
ＩＳＶＶＹＧＬ                    配列番号５１
（ｉ）６アミノ酸ペプチド：
ＤＴＹＤＧＤ                                  配列番号５２
ＴＹＤＧＤＩ                                配列番号５３
ＹＤＧＤＩＳ                              配列番号５４
ＤＧＤＩＳＶ                            配列番号５５
ＧＤＩＳＶＶ                          配列番号５６
ＤＩＳＶＶＹ                        配列番号５７
ＩＳＶＶＹＧ                      配列番号５８
（ｊ）５アミノ酸ペプチド：
ＴＹＤＧＤ                                  配列番号５９
ＹＤＧＤＩ                                配列番号６０
ＤＧＤＩＳ                              配列番号６１
ＧＤＩＳＶ                            配列番号６２
ＤＩＳＶＶ                          配列番号６３
ＩＳＶＶＹ                        配列番号６４
ＳＶＶＹＧ                      配列番号６５。
【請求項１７】
前記断片が配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１６に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項１８】
前記ポリペプチドが配列番号１のアミノ酸配列の変異体またはその断片を含むか、またはそれからなる、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項１９】
前記変異体が配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、より好ましくは前記配列と少なくとも６０％、７０％または８０％または８５％または９０％の同一性、更に最も好ましくは前記アミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を持つアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項１８に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項２０】
前記変異体が、１つ以上のアミノ酸が保存的に置換されている配列番号１のアミノ酸配列、またはその断片を含むか、またはそれからなる、請求項１８または１９に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項２１】
前記ポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列内のＮ末端及び／またはＣ末端及び／または内部に挿入された、１つ以上の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項２２】
前記ポリペプチドが、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５または２０の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項２１に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項２３】
前記追加のアミノ酸が、野生型ヒトオステオポンチン（配列番号６６）の対応する位置からのアミノ酸である、請求項２２に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項２４】
前記ポリペプチドが、配列番号６７のアミノ酸配列またはその断片若しくは変異体を含むか、またはそれからなる、請求項１８または１９のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
ＶＤＴＹＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ                    配列番号６７
【請求項２５】
前記断片が１５以下のアミノ酸長、例えば１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６または５アミノ酸長である、請求項２４に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項２６】
前記ポリペプチドが配列番号６７のアミノ酸配列の変異体またはその断片を含むか、またはそれからなる、請求項２４に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項２７】
前記変異体が、配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、より好ましくは前記配列と少なくとも６０％、７０％または８０％または８５％または９０％の同一性、更に最も好ましくは前記アミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項２６に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項２８】
前記変異体が、１つ以上のアミノ酸が保存的に置換されている配列番号６７のアミノ酸配列、またはその断片を含むか、またはそれからなる、請求項２６または２７に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項２９】
前記変異体が、ＲＧＤ配列が不活性化されている、配列番号６７のアミノ酸配列またはその断片を含むか、またはそれからなる、請求項２６または２７に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項３０】
前記ポリペプチドが、配列番号６７のアミノ酸配列内のＮ末端及び／またはＣ末端及び／または内部に挿入された、１つ以上の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項３１】
前記ポリペプチドが、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５または２０の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項３０に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項３２】
前記追加のアミノ酸が、野生型ヒトオステオポンチンの対応する位置からのアミノ酸である、請求項３１に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項３３】
先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物であって、前記ポリペプチドが以下のアミノ酸配列：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｄ−Ｘ８−Ｉ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｙ−Ｇ−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７
配列番号６８
（式中、
Ｘ１は、Ｖ、Ｅ、ＧまたはＫであり、
Ｘ２は、Ｄ、Ｅ、Ｓ、またはＰであり、
Ｘ３は、何らかのアミノ酸であり、
Ｘ４は、Ｙ、Ｐ、ＮまたはＡであり、
Ｘ５は、Ｄ、ＮまたはＥであり、
Ｘ６は、ＧまたはＩであり、
Ｘ８は、Ｇまたは欠失しており、
Ｘ１０は、ＳまたはＥであり、
Ｘ１１は、ＶまたはＬであり、
Ｘ１２は、Ｖ、ＡまたはＴであり、
Ｘ１５は、ＬまたはＩであり、
Ｘ１６は、ＲまたはＫであり、
Ｘ１７は、Ｒ、Ｋまたは欠失している）を含むか、またはそれからなる、前記組成物。
【請求項３４】
前記ポリペプチドが、配列番号６９または７０のアミノ酸配列またはその断片若しくは変異体を含むか、またはそれからなる、請求項１８、１９、及び３３のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                          配列番号６９
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                          配列番号７０
【請求項３５】
前記断片が１４以下のアミノ酸長、例えば１３、１２、１１、１０、９、８、７、６または５アミノ酸長である、請求項３４に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項３６】
前記断片が配列番号７１〜１３３のうちいずれか１つによるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項３４または３５に記載の発毛抑制に使用される組成物：
（ａ）１４アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                    配列番号７１
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                  配列番号７２
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                配列番号７３
（ｂ）１３アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                      配列番号７４
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                    配列番号７５
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                  配列番号７６
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                配列番号７７
（ｃ）１２アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹ                        配列番号７８
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                      配列番号７９
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                    配列番号８０
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                  配列番号８１
ＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                配列番号８２
（ｄ）１１アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡ                          配列番号８３
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹ                        配列番号８４
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                      配列番号８５
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                    配列番号８６
ＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                  配列番号８７
ＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                配列番号８８
（ｅ）１０アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬ                            配列番号８９
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡ                          配列番号９１
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹ                        配列番号９１
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                      配列番号９２
ＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                    配列番号９３
ＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                  配列番号９４
ＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                配列番号９５
（ｆ）９アミノ酸ペプチド
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳ                              配列番号９６
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬ                            配列番号９７
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡ                          配列番号９８
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹ                        配列番号９９
ＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                      配列番号１００
ＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                    配列番号１０１
ＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                  配列番号１０２
ＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                配列番号１０３
（ｇ）８アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩ                                配列番号１０４
ＤＶＰＮＧＤＩＳ                              配列番号１０５
ＶＰＮＧＤＩＳＬ                            配列番号１０６
ＰＮＧＤＩＳＬＡ                          配列番号１０７
ＮＧＤＩＳＬＡＹ                        配列番号１０８
ＧＤＩＳＬＡＹＧ                      配列番号１０９
ＤＩＳＬＡＹＧＬ                    配列番号１１０
ＩＳＬＡＹＧＬＲ                  配列番号１１１
（ｈ）７アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤ                                  配列番号１１２
ＤＶＰＮＧＤＩ                                配列番号１１３
ＶＰＮＧＤＩＳ                              配列番号１１４
ＰＮＧＤＩＳＬ                            配列番号１１５
ＮＧＤＩＳＬＡ                          配列番号１１６
ＧＤＩＳＬＡＹ                        配列番号１１７
ＤＩＳＬＡＹＧ                      配列番号１１８
ＩＳＬＡＹＧＬ                    配列番号１１９
（ｉ）６アミノ酸ペプチド：
ＤＶＰＮＧＤ                                  配列番号１２０
ＶＰＮＧＤＩ                                配列番号１２１
ＰＮＧＤＩＳ                              配列番号１２２
ＮＧＤＩＳＬ                            配列番号１２３
ＧＤＩＳＬＡ                          配列番号１２４
ＤＩＳＬＡＹ                        配列番号１２５
ＩＳＬＡＹＧ                      配列番号１２６
（ｊ）５アミノ酸ペプチド：
ＶＰＮＧＤ                                  配列番号１２７
ＰＮＧＤＩ                                配列番号１２８
ＮＧＤＩＳ                              配列番号１２９
ＧＤＩＳＬ                            配列番号１３０
ＤＩＳＬＡ                          配列番号１３１
ＩＳＬＡＹ                        配列番号１３２
ＳＬＡＹＧ                      配列番号１３３
【請求項３７】
前記断片が配列番号９４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項３６に記載の発毛抑制に使用される組成物。
ＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                            配列番号９４
【請求項３８】
前記ポリペプチドが配列番号６９または７０のアミノ酸配列の変異体またはその断片を含むか、またはそれからなる、請求項３４に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項３９】
前記変異体が、配列番号６９または７０のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、より好ましくは前記配列と少なくとも６０％、７０％または８０％または８５％または９０％の同一性、更に最も好ましくは前記アミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項３８に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４０】
前記変異体が、１つ以上のアミノ酸が保存的に置換されている配列番号６９または７０のアミノ酸配列、またはその断片を含むか、またはそれからなる、請求項３８または３９に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４１】
前記ポリペプチドが、配列番号６９または７０のアミノ酸配列内のＮ末端及び／またはＣ末端及び／または内部に挿入された、１つ以上の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項３８〜４０のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４２】
前記ポリペプチドが、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５または２０の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項４１に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４３】
前記追加のアミノ酸が、野生型マウスオステオポンチンの対応する位置からのアミノ酸である、請求項４２に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４４】
前記ポリペプチドが、配列番号１３４のアミノ酸配列またはその断片若しくは変異体を含むか、またはそれからなる、請求項３８または３９のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
ＶＤＶＰＮＧＲＧＤＳＬＡＹＧＬＲ                 配列番号１３５
【請求項４５】
前記断片が１５以下のアミノ酸長、例えば１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６または５アミノ酸長である、請求項４４に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４６】
前記ポリペプチドが配列番号１３５のアミノ酸配列の変異体またはその断片を含むか、またはそれからなる、請求項４４に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４７】
前記変異体が配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、より好ましくは前記配列と少なくとも６０％、７０％または８０％または８５％または９０％の同一性、更に最も好ましくは前記アミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を持つアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項４６に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４８】
前記変異体が、１つ以上のアミノ酸が保存的に置換されている配列番号１３５のアミノ酸配列、またはその断片を含むか、またはそれからなる、請求項４６または４７に記載の発毛抑制に使用される組成物。
前記変異体が、ＲＧＤ配列が不活性化されている、配列番号１３５のアミノ酸配列またはその断片を含むか、またはそれからなる、請求項４６または４７に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項４９】
前記ポリペプチドが、配列番号１３５のアミノ酸配列内のＮ末端及び／またはＣ末端及び／または内部に挿入された、１つ以上の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項４６〜４９のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５０】
前記ポリペプチドが、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５または２０の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなる、請求項４９に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５１】
前記追加のアミノ酸が、野生型マウスオステオポンチンの対応する位置からのアミノ酸である、請求項４９または５０に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５２】
前記ポリペプチドが天然に存在する、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５３】
前記ポリペプチドが直列反復を含むか、またはそれからなる、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５４】
前記直列反復が配列番号１〜６５のいずれか１つ以上のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項５３に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５５】
前記直列反復が配列番号１または２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項５４に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５６】
前記直列反復が配列番号６９〜１３３のいずれか１つ以上のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項５３に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５７】
前記直列反復が配列番号６９及び／または９４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、請求項５５に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５８】
前記ポリペプチドが１つ以上のアミノ酸位で修飾または誘導体化されている、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項５９】
前記ポリペプチドが１つ以上のアミノ酸位でグリコシル化されている、請求項５８に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６０】
前記ポリペプチドが１つ以上のアミノ酸位でＰＥＧ化されている、請求項５８に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６１】
局所投与のための先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６２】
経皮投与のための先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６３】
皮内投与のための先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６４】
前記哺乳動物がヒトである、先行請求項のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６５】
哺乳動物の不要な及び／または過剰な毛成長を伴う疾患または障害を処置または予防するための、請求項１〜６４のいずれか１項に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６６】
不要な及び／または過剰な毛成長を伴う疾患または障害が多毛症である、請求項６５に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６７】
不要な及び／または過剰な毛成長を伴う疾患または障害が、最も一般的な原因である多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、先天性副腎過形成、クッシング病、成長ホルモン過剰（先端巨大症）、卵巣の腫瘍、副腎癌、フォンヒッペルリンドウ病、インシュリン耐性、間質性莢膜細胞過形成（ＳＨ）、肥満、晩発性皮膚ポルフィリン症、薬物（例えばテトラハイドロゲストリノン、フェニトイン、ミノキシジル）の副作用、ホルモン治療及びホルモン障害からなる群から選択される、請求項６５または６６に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６８】
哺乳動物の内成長毛を処置または予防するための、請求項６５に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項６９】
前記内成長毛が剃毛、ワックス、及び／またはざ瘡に伴うものである、請求項６８に記載の発毛抑制に使用される組成物。
【請求項７０】
哺乳動物での不要な及び／または過剰な発毛を伴う哺乳動物の疾患または障害を処置または予防するための薬剤の調製における、請求項１〜６４のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項７１】
不要な及び／または過剰な発毛を伴う前記疾患または障害が多毛症である、請求項７０に記載の使用。
【請求項７２】
不要な及び／または過剰な発毛を伴う前記疾患または障害が、最も一般的な原因である多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、先天性副腎過形成、クッシング病、成長ホルモン過剰（先端巨大症）、卵巣の腫瘍、副腎癌、フォンヒッペルリンドウ病、インシュリン耐性、間質性莢膜細胞過形成（ＳＨ）、肥満、晩発性皮膚ポルフィリン症、薬物（例えばテトラハイドロゲストリノン、フェニトイン、ミノキシジル）の副作用、ホルモン治療及びホルモン障害からなる群から選択される、請求項７０または７１に記載の使用。
【請求項７３】
前記薬剤が哺乳動物の内成長毛を処置または予防するためのものである、請求項７０に記載の使用。
【請求項７４】
前記内成長毛が剃毛、ワックス、及び／またはざ瘡に伴うものである、請求項７３に記載の使用。
【請求項７５】
哺乳動物の不要な及び／または過剰な毛成長を伴う疾患または障害を処置または予防する方法であって、該方法が請求項１〜６４のいずれか１項に記載の組成物の有効量を哺乳動物に投与することを含む前記方法。
【請求項７６】
不要な及び／または過剰な発毛を伴う前記疾患または障害が多毛症である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
不要な及び／または過剰な発毛を伴う前記疾患または障害が、最も一般的な原因である多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、先天性副腎過形成、クッシング病、成長ホルモン過剰（先端巨大症）、卵巣の腫瘍、副腎癌、フォンヒッペルリンドウ病、インシュリン耐性、間質性莢膜細胞過形成（ＳＨ）、肥満、晩発性皮膚ポルフィリン症、薬物（例えばテトラハイドロゲストリノン、フェニトイン、ミノキシジル）の副作用、ホルモン治療及びホルモン障害からなる群から選択される、請求項７５または８６に記載の方法。
【請求項７８】
哺乳動物の内成長毛を処置または予防するための、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
前記内成長毛が剃毛、ワックス、及び／またはざ瘡に伴うものである、請求項７８に記載の方法
【請求項８０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項７５〜７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
哺乳動物が雄性である、請求項７５〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８２】
哺乳動物が雌性である、請求項７５〜８０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８３】
ヒトでの美容的な除毛のための、請求項１〜６４のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項８４】
ヒトが男性である、請求項８３に記載の使用。
【請求項８５】
顔（例えば、頬、あご及び上唇上部）、胸、肩、首、及び背中からなる群から選択される身体の領域から毛を除去する、請求項８４に記載の使用。
【請求項８６】
ヒトが女性である、請求項８３に記載の使用。
【請求項８７】
顔（例えば、頬、あご及び上唇上部）、背中、脚、腕、指、足、つま先、及び恥骨からなる群から選択される身体の領域から毛を除去する、請求項８６に記載の使用。
【請求項８８】
請求項１〜６４のいずれか１項に記載の組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトでの美容的な除毛のための方法。
【請求項８９】
ヒトが男性である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
顔（例えば、頬、あご及び上唇上部）、胸、肩、首、及び背中からなる群から選択される身体の領域から毛を除去する、請求項８８または８９に記載の方法。
【請求項９１】
ヒトが女性である、請求項８８に記載の方法。
【請求項９２】
顔（例えば、頬、あご及び上唇上部）、背中、脚、腕、指、足、つま先、及び恥骨からなる群から選択される身体の領域から毛を除去する、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
発毛を抑制するための、エキソビボまたはインビトロでの請求項１〜６４のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項９４】
哺乳動物に移植片を移植する前に皮膚移植片上での毛成長を抑制するための、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
インビトロで毛包（またはその幹細胞前駆体）の毛成長を抑制するための、請求項９３に記載の方法。
【請求項９６】
説明及び図を参照して本明細書で実質的に記載される、哺乳動物の発毛抑制に使用するための組成物。
【請求項９７】
説明を参照して本明細書で実質的に記載される使用。
【請求項９８】
説明を参照して本明細書で実質的に記載される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は哺乳動物（ヒトを含む）における発毛を抑制するための処置に関する。特に、不要なまたは過剰な毛成長の処置及び予防に使用される医療用途及び化粧品用途のポリペプチド組成物を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
不要な毛成長は、とりわけ女性に共通の問題であり、民族的な背景または遺伝の結果である場合が多い。少数の女性においては、アンドロゲン過剰産生、循環するアンドロゲンへの感受性増加、または他の代謝性及び内分泌腺の障害によって生じる場合がある。女性の約２２％が口ひげ及びあご領域への不要な毛成長の存在による悪影響を受けており、これは不安、憂鬱、及び生活の質の低下に繋がる悩みの源泉となり得る。
【０００３】
不要な毛成長の根本原因はさまざまであり得る。ほとんどは民族性または遺伝性によるものだが、体毛の増加、不規則な月経周期、ざ瘡、脱毛症及び脂漏症など、何らかのアンドロゲン過剰の徴候はこれに該当しない。
【０００４】
多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）はアンドロゲン過剰の最も一般的な原因であり、アンドロゲン過剰患者の７０％〜８０％に多毛症が認められるものの、この徴候はアジア系女性の間ではあまり一般的でない場合がある。多毛症に関して家族性の偏好が強い理由は主に、多毛症集団の持つ潜在的な内分泌腺障害、及び毛成長の発生を調節する因子に強い遺伝的要素があるためである。
【０００５】
除毛に利用可能な処置療法について患者は十分に知っておく必要がある。単一の除毛方法で身体の全部位または全患者に対応できるわけではなく、採用される方法は毛成長の特徴、領域、及び量、ならびに患者の年齢、基礎疾患または症状、及び患者の個人的な選択、ならびに選ばれた治療により起こり得る副作用に依存する。
【０００６】
無論、健常な個人が単に美容上の理由から、身体の特定の領域での毛成長を抑制したいと望む場合も考えられる。
【０００７】
過剰毛を除去するための処置の選択肢は限られており、効果、不快の程度及び費用はさまざまであり得る。こうした不要な毛を除去するための現行手法として、摘採、ワックス（糖の形態を含む）、脱毛剤、剃毛、及び家庭用電気分解法のようなＯＴＣによる方法が挙げられる。診療室で施術できる除毛法として、レーザー脱毛及び増強パルス光（ＩＰＬ）が挙げられる。補助的な療法が、発毛を抑制する局所クリーム、エフロルニチン１３．９％配合クリーム（Ｖａｎｉｑａ（登録商標）、Ｓｈｉｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）である。
【０００８】
これらの方法は、数日から数か月の範囲で再び毛成長期が到来するため一時的なものである。ＰＣＯＳと関連する多毛の場合、経口避妊薬及び／または抗アンドロゲン物質、例えばスピロノラクトン、酢酸シプロテロン、フルタミド及びフィナステリドなどの処置が挙げられる。
【０００９】
したがって、医療用途及び化粧品用途両方での使用に適した毛成長抑制のための新規治療法が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の第１の態様は、哺乳動物の発毛抑制に使用される組成物を提供するものであり、本組成物は、
（ａ）哺乳動物の発毛に対する抑制活性を保持する、配列番号１のアミノ酸配列
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ            配列番号１    ［“ＦＯＬ−００５”］
またはその断片若しくは変異体を含むか、またはそれからなるポリペプチド、ならびに
（ｂ）薬学的に許容される及び／または化粧品的に許容される賦形剤、担体、アジュバント若しくは希釈剤を含み、
該ポリペプチドは５〜５０のアミノ酸長である。
【００１１】
本発明の組成物に存在するポリペプチドは、哺乳動物の発毛を抑制できる。
【００１２】
本明細書で「発毛を抑制すること」とは、組成物が投与された哺乳動物の発毛に関して、以下の１つ以上のパラメーターを低減、減衰、予防、または排除できることを意味し、該パラメーターは、
（ａ）既存の毛包からの個々の毛成長、
（ｂ）既存の毛包からの個々の毛の厚さ、
（ｃ）既存の毛包の数及び／若しくは密度、
（ｄ）新規の毛包の産生、
（ｅ）毛包の成長期の期間、または
（ｆ）既存の毛包の色素沈着のうち少なくともいずれか１つである。
【００１３】
本発明の組成物が存在しない場合の哺乳動物における発毛と比較した、このような抑制は全体であっても一部分であってもよいことは理解されるであろう。例えば、組成物は既存の毛包からの毛成長を遅らせるだけで、完全に停止させなくても良い。
【００１４】
有利には、組成物はインビボで発毛を抑制できる。
【００１５】
一実施形態では、組成物は人毛の成長を抑制できる。
【００１６】
更に別の実施形態では、組成物は皮膚の健常化により発毛を抑制できる。
【００１７】
更に別の実施形態では、組成物は頭皮上の発毛を抑制できる。
【００１８】
上記のように、本発明の組成物による発毛抑制は、既存の毛包に対する抑制効果によって及び／または新規毛包の形成を抑制することによってもたらされ得る。
【００１９】
したがって、一実施形態では、ポリペプチドは
（ａ）（例えば、成長期から退行期への変化を誘発することによる）毛包の成長期の期間短縮、及び／または
（ｂ）毛包の退行期の期間延長、及び／または
（ｃ）毛包の休止期の期間延長のうち少なくともいずれか１つを誘発することにより、既存の毛包を抑制することができる。
【００２０】
例えば、ポリペプチドは、既存の毛包において、成長期から退行期及び／または休止期への移行を誘発して、毛包による活性な毛成長を終結することにより、既存の毛包を抑制することができる。
【００２１】
本発明の組成物のポリペプチド成分は、天然に存在するオステオポンチンタンパク質のサブ領域と類似したアミノ酸配列を有する。したがって、少なくともいくつかの実施形態では、活性ポリペプチド成分は、天然に存在するオステオポンチンタンパク質の活性断片またはこのような断片の変異体と見なし得る（即ち、本ポリペプチドは、天然に存在するオステオポンチンタンパク質の断片の修飾型、例えば変異型の配列に対応するアミノ酸配列を含む）。
【００２２】
骨シアロタンパク質Ｉ（ＢＳＰ−１またはＢＮＳＰ）、初期Ｔリンパ球活性化（ＥＴＡ−１）、分泌リンタンパク質１（ＳＰＰ１）、２ａｒ及びリケッチア耐性（Ｒｉｃ）としても既知であるオステオポンチンは、いくつかの哺乳動物種に保存されている遺伝子産物である。
【００２３】
この遺伝子は７つのエキソンを有し、５キロベース長に及び、ヒトでは４番染色体１３領域（４ｑ１３）の長腕上に位置している。本タンパク質はおよそ３００のアミノ酸残基から構成され、酸性残基が豊富であり、３０〜３６％はアスパラギン酸またはグルタミン酸のいずれかである。オステオポンチンは、ゴルジ装置での翻訳後修飾中にタンパク質に付着する、１０のシアル酸残基を含む約３０の付着糖残基を有する。
【００２４】
オステオポンチンは、石灰化骨マトリックス上へ破骨細胞を固定する骨中の新規シアロタンパク質として最初に発見された（Ｆｒａｎｚｅｎ及びＨｅｉｎｅｇａｒｄ，１９８５，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２３２（３）７１５−２４）。オステオポンチンの名前は骨中の（ｏｓｔｅｏ−）タンパク質の存在、及び骨細胞とミネラル相間に架橋（−ｐｏｎｓ）を形成する能力に由来する。配列解析とそれに続く構造研究により、オステオポンチンは、オステオポンチンのミネラル結合特性を媒介すると考えられる一部の１０種のアスパラギン酸残基の高酸性領域を構成する３２ｋＤａの糖タンパク質であることが明らかになった。更に、オステオポンチン分子の中央部分には、Ｒ−Ｇ−Ｄ配列によって媒介される細胞接着ドメインもある（その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｏｌｄｂｅｒｇら，１９８６，Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３（２３）：８８１９−２３）。
【００２５】
オステオポンチンは構成的に、骨芽細胞及びいくつかの上皮細胞型に発現され、それによってオステオポンチンが多くの体液中に分泌される。骨はオステオポンチンが付着して、そこから大量に再生できる唯一の組織型である。オステオポンチンの発現はまた、血管平滑筋細胞、種々の癌細胞型、及び炎症細胞間（具体的にはマクロファージ及びＴリンパ球）にも誘発され得る。接着、増殖、遊走、抗アポトーシス及び化学誘引などの、いくつかの重要な細胞機能がオステオポンチンに起因すると考えられてきた。これらの機能のいくつかは、種々のインテグリンと、主としてαｖβ３、それ以外にαｖβ１及びαｖβ５とも相互作用するＲＧＤ細胞接着ドメインを介して媒介されると考えられる（概説として、Ｓｃａｔｅｎａら，２００７，Ａｒｔｅｒｉｏ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．２７：２３０２−２３０９を参照のこと）。
【００２６】
近年、オステオポンチンは炎症及び免疫反応に関与するいくつかの細胞型を調節できる強力なサイトカインとして注目されている。オステオポンチンに起因する広範な機能は複雑であり、細胞を結合するＲＧＤ配列だけで全てを説明することはできない。オステオポンチン中の１１のアミノ酸ペプチドＲ１４５−Ｇ−Ｄ−Ｓ−Ｌ−Ａ−Ｙ−Ｇ−Ｌ−Ｒ−Ｓ１５５（配列番号１３５）（ＵｎｉＰｒｏｔコードＰ１０９２３のアミノ酸１４４〜１５４に相当）が同定され、後に機能的にマッピングされたとき、それが解明された。αｖβ３インテグリンへの結合を媒介する既知のＲ１４５−Ｇ−Ｄ１４７部位に加えて、オステオポンチン分子中の２つの更なる必須領域、即ち高特異的トロンビン切断部位、即ちＲ１５４−Ｓ１５５、及びα９β１インテグリンに結合する潜在的インテグリン結合部位、即ちＳ１４８−Ｌ−Ａ−Ｙ−Ｇ−Ｌ−Ｒ１５４（配列番号１３６）が発見された（Ｓｃａｔｅｎａらの上記文献を参照）。α４β１に対する別の結合部位もまた同定されている（Ｓ
ｃａｔｅｎａらの上記文献を参照）。
【００２７】
天然に存在するオステオポンチンタンパク質は通常、約３００アミノ酸長である。他方、本発明の組成物のポリペプチド成分は、これよりも大幅に短く、わずか５〜５０アミノ酸長である。
【００２８】
よって、ポリペプチドは５０アミノ酸長未満、例えば３５、３０、２８、２６、２４、２２、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１または１０アミノ酸長未満である。
【００２９】
一実施形態では、ポリペプチドは５〜３０アミノ酸長、例えば５〜２０、５〜２０、８〜２０、８〜１６または１０〜１５アミノ酸長である。
【００３０】
本明細書で使用される場合、用語「アミノ酸」は、標準の２０種類の遺伝子コード化アミノ酸及びそれに対応する「Ｄ」型の立体異性体（天然の「Ｌ」型に対して）、オメガアミノ酸及び他の天然に存在するアミノ酸、非従来型アミノ酸（例えば、α，α−ジ置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸など）、ならびに化学的誘導体化アミノ酸を含む（以下参照）。
【００３１】
アミノ酸が「アラニン」または「Ａｌａ」または「Ａ」のように具体的に列挙されるとき、別に明示しない限り、この用語はＬ−アラニン及びＤ−アラニンの両方を指す。他の非従来型アミノ酸もまた、そのポリペプチドが目的の機能特性を保持している限り、本発明のポリペプチドに好適な成分であり得る。記載したポリペプチドに関して、各コードされたアミノ酸残基は必要に応じて、従来型アミノ酸の慣用名に対応して１文字の記号表記によって表される。
【００３２】
慣例に従って、本明細書で開示されるアミノ酸配列はＮ末端からＣ末端の方向に記載される。
【００３３】
通常、本発明の組成物中で使用されるポリペプチドはＬ−アミノ酸を含むか、またはそれからなる。
【００３４】
好ましい一実施形態では、本発明の組成物のポリペプチド成分は配列番号１のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００３５】
別の実施形態では、本発明の組成物のポリペプチド成分は配列番号２のアミノ酸配列からなる。
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＳ                   配列番号２
【００３６】
更に別の実施形態では、ポリペプチドは、発毛に対する抑制活性を（少なくとも部分的に）保持する配列番号１のアミノ酸配列断片を含むか、またはそれからなり得る。
【００３７】
本明細書で「断片」は、配列番号１のアミノ酸配列のうち少なくとも５個の連続するアミノ酸、例えば配列番号１の少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４個の連続するアミノ酸を含む。したがって、断片は１４以下のアミノ酸長、例えば１３、１２、１１、１０、９、８、７、６または５アミノ酸長であり得る。
【００３８】
例示的実施形態では、断片は以下の配列番号３〜６５のいずれか１つに従ったアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる。
【００３９】
（ａ）１４アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                     配列番号３
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                   配列番号４
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                 配列番号５
（ｂ）１３アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                       配列番号６
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                     配列番号７
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                   配列番号８
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                 配列番号９
（ｃ）１２アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹ                         配列番号１０
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                       配列番号１１
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                     配列番号１２
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                   配列番号１３
ＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                 配列番号１４
（ｄ）１１アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶ                           配列番号１５
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹ                         配列番号１６
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                       配列番号１７
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                     配列番号１８
ＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                   配列番号１９
ＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                 配列番号２０
（ｅ）１０アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳＶ                             配列番号２１
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶＶ                           配列番号２２
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶＹ                         配列番号２３
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                       配列番号２４
ＤＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                     配列番号２５
ＧＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                   配列番号２６
ＤＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                 配列番号２７
（ｆ）９アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩＳ                               配列番号２８
ＤＴＹＤＧＤＩＳＶ                             配列番号２９
ＴＹＤＧＤＩＳＶＶ                           配列番号３０
ＹＤＧＤＩＳＶＶＹ                         配列番号３１
ＤＧＤＩＳＶＶＹＧ                       配列番号３２
ＧＤＩＳＶＶＹＧＬ                     配列番号３３
ＤＩＳＶＶＹＧＬＲ                   配列番号３４
ＩＳＶＶＹＧＬＲＳ                 配列番号３５
（ｇ）８アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤＩ                                 配列番号３６
ＤＴＹＤＧＤＩＳ                               配列番号３７
ＴＹＤＧＤＩＳＶ                             配列番号３８
ＹＤＧＤＩＳＶＶ                           配列番号３９
ＤＧＤＩＳＶＶＹ                         配列番号４０
ＧＤＩＳＶＶＹＧ                       配列番号４１
ＤＩＳＶＶＹＧＬ                     配列番号４２
ＩＳＶＶＹＧＬＲ                   配列番号４３
（ｈ）７アミノ酸ペプチド：
ＶＤＴＹＤＧＤ                                   配列番号４４
ＤＴＹＤＧＤＩ                                 配列番号４５
ＴＹＤＧＤＩＳ                               配列番号４６
ＹＤＧＤＩＳＶ                             配列番号４７
ＤＧＤＩＳＶＶ                           配列番号４８
ＧＤＩＳＶＶＹ                         配列番号４９
ＤＩＳＶＶＹＧ                       配列番号５０
ＩＳＶＶＹＧＬ                     配列番号５１
（ｉ）６アミノ酸ペプチド：
ＤＴＹＤＧＤ                                   配列番号５２
ＴＹＤＧＤＩ                                 配列番号５３
ＹＤＧＤＩＳ                               配列番号５４
ＤＧＤＩＳＶ                             配列番号５５
ＧＤＩＳＶＶ                           配列番号５６
ＤＩＳＶＶＹ                         配列番号５７
ＩＳＶＶＹＧ                       配列番号５８
（ｊ）５アミノ酸ペプチド：
ＴＹＤＧＤ                                   配列番号５９
ＹＤＧＤＩ                                 配列番号６０
ＤＧＤＩＳ                               配列番号６１
ＧＤＩＳＶ                             配列番号６２
ＤＩＳＶＶ                           配列番号６３
ＩＳＶＶＹ                         配列番号６４
ＳＶＶＹＧ                       配列番号６５。
【００４０】
例えば、断片は配列番号２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり得る。
【００４１】
あるいは本発明の組成物は、発毛に対する抑制活性を（少なくとも部分的に）保持する、配列番号１のアミノ酸配列の変異体またはその断片を含むか、またはそれからなるポリペプチドを含み得る。
【００４２】
本明細書で「変異体」は、ポリペプチドが配列番号１と１００％のアミノ酸配列同一性を共有しない、即ち配列番号１の１つ以上のアミノ酸が変異されていることを意味する。例えば、ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、より好ましくは該配列と少なくとも６０％、７０％または８０％または８５％または９０％の同一性、更に最も好ましくは該アミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を持つアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり得る。
【００４３】
同一性百分率は、当業者に周知の方法、例えばＬＡＬＩＧＮプログラム（Ｈｕａｎｇ及びＭｉｌｌｅｒ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ  Ｍａｔｈ．（１９９１）１２：３３７−３５７）を使用して、Ｅｘｐａｓｙファシリティサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｈ．ｅｍｂｎｅｔ．ｏｒｇ／ｓｏｆｔｗａｒｅ／ＬＡＬＩＧＮ＿ｆｏｒｍ．ｈｔｍｌ）で、グローバルアライメントオプション、ＢＬＯＳＵＭ６２スコア行列、ギャップ開始ペナルティ−１４、ギャップ伸長ペナルティ−４をパラメーターとして用いることにより決定できる。
【００４４】
あるいは、２つのポリペプチド間の配列同一性百分率は、好適なコンピュータープログラム、例えばＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ  ＧｒｏｕｐのＧＡＰプログラムを使用して決定しても良く、また同一性百分率はその配列が最適に整列されたポリペプチドとの相関から算出されるものと理解されるであろう。
【００４５】
本明細書で「変異された」とは、特定位置のアミノ酸が、配列番号１によるポリペプチド中のアミノ酸と比較して変更されていることを意味する。例えば、特定位置のアミノ酸が欠失、置換されていても良く、１つ以上のアミノ酸の挿入／付加部位であっても良い。この置換は保存的であっても非保存的であっても良いことを当業者は理解されるであろう。
【００４６】
あるいはまたは加えて、特定位置のアミノ酸は化学的に修飾（誘導体化）されていても良い（以下参照）。
【００４７】
一実施態様では、変異体ポリペプチドは、１つ以上のアミノ酸が保存的に置換される配列番号１のアミノ酸配列、またはその断片を含むか、またはそれからなる。本明細書で「保存的に置換された」とは、ポリペプチドの機能が有意に変化しないように、あるアミノ酸を特性（サイズ、疎水性など）の類似する別のアミノ酸と置換することを意味する。したがって、「保存的置換」とは、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；及びＰｈｅ、Ｔｙｒなどの組み合わせを意図する。
【００４８】
変異体ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列内のＮ末端及び／またはＣ末端及び／または内部に挿入される、１つ以上の追加のアミノ酸を含んで良いことを当業者は理解されるであろう。例えば、ポリペプチドは、Ｎ末端及び／またはＣ末端及び／または内部に少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５または２０の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。変異体ポリペプチドは天然型であっても非天然型であっても良い。
【００４９】
好ましい一実施形態では、追加のアミノ酸は野生型ヒトオステオポンチン、即ちＧｅｎＢａｎｋ：ＡＡＡ５９９７４．１［配列番号６６］の対応する位置からのアミノ酸である（表中、配列番号１と最も配列類似性が高い領域は斜体で下線が引かれている）：
【化１】
2017513856.tif 000003
【００５０】
本明細書で野生型ヒトオステオポンチンの「対応する位置」とは、追加のアミノ酸が上記の野生型ヒトオステオポンチンでの相当する位置に存在するものと同様であることを意味する（配列番号１のアミノ酸配列が配列番号６６の斜体で下線が引かれた配列を置換すると仮定した場合）。例えば、ポリペプチドは、配列番号１のアミノ末端に３つのアミノ酸ＶＰＴ−、及び／または配列番号１のカルボキシ末端に５つのアミノ酸−ＳＫＳＫＫを含み得る。
【００５１】
更に別の実施形態では、変異体ポリペプチド配列は、配列番号６７のアミノ酸配列またはその断片若しくは変異体を含むか、またはそれからなり得る：
ＶＤＴＹＤＧＲＧＤＳＶＶＹＧＬＲ                 配列番号６７
【００５２】
好適な断片は、配列番号６７の１５個以下の連続するアミノ酸、例えば、配列番号６７の１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６または５個の連続するアミノ酸からなり得る。
【００５３】
同様に、（上記のような）好適な変異体は、配列番号６７のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、より好ましくは該配列と少なくとも６０％、７０％または８０％または８５％または９０％の同一性、更に最も好ましくは該アミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。
【００５４】
一実施形態では、変異体は、ＲＧＤ配列が不活性化されている、配列番号６７のアミノ酸配列またはその断片を含むか、またはそれからなる。
【００５５】
天然に存在するオステオポンチンタンパク質に通常見られる活性トリペプチド配列「アルギニン−グリシン−アスパラギン酸」は、多数の異なる方法で不活性化させることができる。一実施形態では、ＲＧＤドメインは、天然に存在するオステオポンチンタンパク質と比較して、ポリペプチド中の１つ以上のアミノ酸位置で１つ以上の欠失、置換及び／若しくは付加、またはその組み合わせを含有するように変異される。例えば、ＲＧＤドメインは、アルギニン及び／またはグリシン及び／またはアスパラギン酸残基が不存在であるように、少なくとも部分的に欠失され得る。
【００５６】
あるいは、または加えて、ＲＧＤドメインは１つ以上のアミノ酸で置換され得る。例えば、アルギニン及び／またはグリシン及び／またはアスパラギン酸残基は別のアミノ酸で置換され得る。このような置換は保存的または非保存的であって良い。
【００５７】
同様に、ＲＧＤドメインは、
（ａ）アルギニン残基の置換ならびにグリシン及びアスパラギン酸残基の欠失、
（ｂ）アルギニン及びグリシン残基の置換ならびにアスパラギン酸残基の欠失（例えば、−ＲＧＤ−トリペプチドをジペプチド配列−ＤＩ−と置換できる）、
（ｃ）アルギニン及びアスパラギン酸残基の置換ならびにグリシン残基の欠失、または
（ｄ）アルギニン及びアスパラギン酸残基の欠失ならびにグリシン残基の置換を含む、置換及び欠失の組み合わせによって不活性化され得る。
【００５８】
一実施形態では、トリペプチド−ＲＧＤ−配列はジペプチド−ＤＩ−配列によって置換される。
【００５９】
理論に束縛されるものではないが、ＲＧＤ配列の不活性化は、オステオポンチンポリペプチドの立体配座の変化（対応する天然に存在するオステオポンチンタンパク質と比較して）をもたらし得、これが周囲の環境に対する新たな部位の生成／露出を促すと考えられる。
【００６０】
本発明の組成物の上記に定義したポリペプチド成分は、ヒトオステオポンチンのアミノ酸配列、及びその変異された変異体から誘導される。しかしながら、ポリペプチドは、代わりに配列番号１のアミノ酸配列の種同族体（例えば、マウス、ウシ、ブタ、ウサギ、ネズミなどからの同族体）でもよいことを当業者は理解されるであろう。
【００６１】
配列番号１のこのような種同族体のアミノ酸配列は、以下の式によって表すことができる：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−Ｘ６−Ｄ−Ｘ８−Ｉ−Ｘ１０−Ｘ１１−Ｘ１２−Ｙ−Ｇ−Ｘ１５−Ｘ１６−Ｘ１７
配列番号６８
（式中、
Ｘ１は、Ｖ、Ｅ、ＧまたはＫであり、
Ｘ２は、Ｄ、Ｅ、ＳまたはＰであり、
Ｘ３は、何らかのアミノ酸（例えば、Ｔ、Ｖ、Ｐ、ＡまたはＬ）であり、
Ｘ４は、Ｙ、Ｐ、ＮまたはＡであり、
Ｘ５は、Ｄ、ＮまたはＥであり、
Ｘ６は、ＧまたはＩであり、
Ｘ８は、Ｇまたは欠失しており、
Ｘ１０は、ＳまたはＥであり、
Ｘ１１は、ＶまたはＬであり、
Ｘ１２は、Ｖ、ＡまたはＴであり、
Ｘ１５は、ＬまたはＩであり、
Ｘ１６は、ＲまたはＫであり、
Ｘ１７は、Ｒ、Ｋまたは欠失している）。
【００６２】
変異体ポリペプチドは、配列番号６８のアミノ酸配列内のＮ末端及び／またはＣ末端及び／または内部に付加される、１つ以上の追加のアミノ酸を含んで良いことを当業者は理解されるであろう。例えば、ポリペプチドは、Ｎ末端及び／またはＣ末端及び／または内部に少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５または２０の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。好ましい一実施形態では、追加のアミノ酸は、野生型オステオポンチン（即ちヒト、マウス、ウシ、ブタ、ウサギ、ネズミなどからのもの）の対応する位置からのアミノ酸である。
【００６３】
したがって一実施形態では、ポリペプチドは、配列番号６９または７０のアミノ酸配列またはその断片若しくは変異体を含むか、またはそれからなるマウス同族体である。
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                   配列番号６９
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                   配列番号７０
【００６４】
好適な断片は、配列番号６９または７０の１４個以下の連続するアミノ酸、例えば配列番号６９または７０の１３、１２、１１、１０、９、８、７、６または５個の連続するアミノ酸からなり得る。
【００６５】
例えば、断片は配列番号７１〜１３３のいずれか１つによるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり得る。
【００６６】
（ａ）１４アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                     配列番号７１
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                   配列番号７２
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                 配列番号７３
（ｂ）１３アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                       配列番号７４
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                     配列番号７５
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                   配列番号７６
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                 配列番号７７
（ｃ）１２アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹ                         配列番号７８
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                       配列番号７９
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                     配列番号８０
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                   配列番号８１
ＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                 配列番号８２
（ｄ）１１アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡ                           配列番号８３
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹ                         配列番号８４
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                       配列番号８５
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                     配列番号８６
ＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                   配列番号８７
ＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                 配列番号８８
（ｅ）１０アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳＬ                             配列番号８９
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬＡ                           配列番号９０
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡＹ                         配列番号９１
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                       配列番号９２
ＮＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                     配列番号９３
ＧＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                   配列番号９４
ＤＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                 配列番号９５
（ｆ）９アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩＳ                               配列番号９６
ＤＶＰＮＧＤＩＳＬ                             配列番号９７
ＶＰＮＧＤＩＳＬＡ                           配列番号９８
ＰＮＧＤＩＳＬＡＹ                         配列番号９９
ＮＧＤＩＳＬＡＹＧ                       配列番号１００
ＧＤＩＳＬＡＹＧＬ                     配列番号１０１
ＤＩＳＬＡＹＧＬＲ                   配列番号１０２
ＩＳＬＡＹＧＬＲＳ                 配列番号１０３
（ｇ）８アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤＩ                                 配列番号１０４
ＤＶＰＮＧＤＩＳ                               配列番号１０５
ＶＰＮＧＤＩＳＬ                             配列番号１０６
ＰＮＧＤＩＳＬＡ                           配列番号１０７
ＮＧＤＩＳＬＡＹ                         配列番号１０８
ＧＤＩＳＬＡＹＧ                       配列番号１０９
ＤＩＳＬＡＹＧＬ                     配列番号１１０
ＩＳＬＡＹＧＬＲ                   配列番号１１１
（ｈ）７アミノ酸ペプチド：
ＶＤＶＰＮＧＤ                                   配列番号１１２
ＤＶＰＮＧＤＩ                                 配列番号１１３
ＶＰＮＧＤＩＳ                               配列番号１１４
ＰＮＧＤＩＳＬ                             配列番号１１５
ＮＧＤＩＳＬＡ                           配列番号１１６
ＧＤＩＳＬＡＹ                         配列番号１１７
ＤＩＳＬＡＹＧ                       配列番号１１８
ＩＳＬＡＹＧＬ                     配列番号１１９
（ｉ）６アミノ酸ペプチド：
ＤＶＰＮＧＤ                                   配列番号１２０
ＶＰＮＧＤＩ                                 配列番号１２１
ＰＮＧＤＩＳ                               配列番号１２２
ＮＧＤＩＳＬ                             配列番号１２３
ＧＤＩＳＬＡ                           配列番号１２４
ＤＩＳＬＡＹ                         配列番号１２５
ＩＳＬＡＹＧ                       配列番号１２６
（ｊ）５アミノ酸ペプチド：
ＶＰＮＧＤ                                   配列番号１２７
ＰＮＧＤＩ                                 配列番号１２８
ＮＧＤＩＳ                               配列番号１２９
ＧＤＩＳＬ                             配列番号１３０
ＤＩＳＬＡ                           配列番号１３１
ＩＳＬＡＹ                         配列番号１３２
ＳＬＡＹＧ                       配列番号１３３
【００６７】
実施形態では、断片は配列番号９４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり得る。
【００６８】
同様に、ポリペプチドは配列番号６９または７０のアミノ酸配列の変異体、またはその断片を含むか、またはそれからなり得る。
【００６９】
（上記のような）好適な変異体は、配列番号６９または７０のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、より好ましくは該配列と少なくとも６０％、７０％または８０％または８５％または９０％の同一性、更に最も好ましくは該アミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。
【００７０】
変異体は、１つ以上のアミノ酸が保存的に置換される配列番号６９または７０のアミノ酸配列、またはその断片を含むか、またはそれからなり得る。
【００７１】
場合によって、ポリペプチドは、配列番号６９または７０のアミノ酸配列内のＮ末端及び／またはＣ末端及び／または内部に挿入された、１つ以上の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。例えば、ポリペプチドは少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５または２０の追加のアミノ酸を含むか、またはそれからなり得、このアミノ酸は野生型マウスオステオポンチン、即ちＮＣＢＩ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ：ＮＰ＿００１１９１１６２．１［配列番号１３４］の対応する位置からのものであり得る（表中、配列番号６８と最も配列類似性が高い領域は斜体で下線が引かれている）：
【化２】
2017513856.tif 000004
【００７２】
一実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１３５のアミノ酸配列またはその断片若しくは変異体を含むか、またはそれからなる。
ＶＤＶＰＮＧＲＧＤＳＬＡＹＧＬＲ                 配列番号１３５
【００７３】
好適な断片は、配列番号１３５の１５個以下の連続するアミノ酸、例えば、配列番号１３５の１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６または５個の連続するアミノ酸からなり得る。
【００７４】
同様に、（上記のような）好適な変異体は、配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも５０％の同一性、より好ましくは該配列と少なくとも６０％、７０％または８０％または８５％または９０％の同一性、更に最も好ましくは該アミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸を含むか、またはそれからなり得る。
【００７５】
一実施形態では、変異体は、ＲＧＤ配列が不活性化されている、配列番号１３５のアミノ酸配列またはその断片を含むか、またはそれからなる。
【００７６】
本発明の組成物の更に別の実施形態では、ポリペプチドは、直列反復を含むか、またはそれからなる。
【００７７】
したがって、直列反復は、配列番号１〜６５のいずれか１つ以上のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり得る（例えば、直列反復は配列番号１または２６のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり得る）。
【００７８】
あるいは、直列反復は、配列番号６９〜１３３のいずれか１つ以上のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり得る（例えば、直列反復は配列番号６９及び／または９４のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり得る）。
【００７９】
本発明の組成物のポリペプチド成分が１つ以上のアミノ酸位で修飾または誘導体化され得ることを当業者は理解されるであろう。
【００８０】
１つ以上のアミノ酸の化学的誘導体を官能側基との反応によって得ることができる。このような誘導体化分子としては、例えば遊離アミノ基が誘導体化されてアミン塩酸塩、ｐ−トルエンスルホニル基、カルボキシベンゾキシ基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、クロロアセチル基またはホルミル基を形成している分子を含む。遊離カルボキシル基は誘導体化されて、塩、メチル及びエチルエステルまたは他の種類のエステル及びヒドラジドを形成し得る。遊離ヒドロキシル基は誘導体化されて、Ｏ−アシルまたはＯ−アルキル誘導体を形成し得る。２０の標準アミノ酸の天然型アミノ酸誘導体を含有するペプチドも化学的誘導体に含まれる。例えば、４−ヒドロキシプロリンがプロリンの代わりであっても良く、５−ヒドロキシリジンがリジンの代わりであっても良く、３−メチルヒスチジンがヒスチジンの代わりであっても良く、ホモセリンがセリンの代わりであっても良く、オルニチンがリジンの代わりであっても良い。必要な活性が維持される限り、誘導体には１つ以上の付加または欠失を含有するペプチドも含まれる。それ以外に含まれる修飾は、アミド化、アミノ末端アシル化（例えば、アセチル化またはチオグリコール酸アミド化）、末端カルボキシルアミド化（例えばアンモニアまたはメチルアミンによる）、及びこれらに類する末端修飾である。
【００８１】
更に、上記に詳述したポリペプチドの立体配座及び望ましい機能を模倣するペプチド模倣化合物もまた有用であり得ることを当業者は理解されるであろう。したがって、本明細書で「ポリペプチド」は、配列番号１のポリペプチドの発毛抑制活性を有するペプチド模倣化合物を含む。
【００８２】
例えば、本発明のポリペプチドは、アミノ酸残基がペプチド（−ＣＯ−ＮＨ−）結合によって連結される分子だけではなく、ペプチド結合が反転された分子も含む。このような逆反転ペプチド模倣体は、当技術分野で既知の方法、例えば参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｅｚｉｅｒｅらの（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９，３２３０−３２３７に記載の方法などを使用して作成することができる。この方法は、側鎖の配向ではなく骨格に関与する変化を包含する擬似ペプチドを作成することを含む。ＣＯ−ＮＨペプチド結合の代わりにＮＨ−ＣＯ結合を含有する逆反転ペプチドは、タンパク質分解に対する耐性がはるかに高い。あるいは、本発明のポリペプチドは、１つ以上のアミノ酸残基が通常のアミド結合の代わりに−ｙ（ＣＨ２ＮＨ）−結合によって連結されているペプチド模倣化合物であり得る。
【００８３】
更に別の選択肢では、アミノ酸残基の炭素原子間に間隔を保持する適切なリンカー部分が使用されている場合、ペプチド結合は全て不要となり得る。これは、リンカー部分がペプチド結合と実質的に同じ電荷分布及び実質的に同じ平面性を有する場合に有利となり得る。
【００８４】
エキソタンパク質分解消化に対する感受性の低下に役立つように、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端を好都合にブロックできることを理解されるであろう。
【００８５】
Ｄ−アミノ酸及びＮ−メチルアミノ酸などの種々の非コードアミノ酸または修飾アミノ酸もまた、哺乳動物ペプチドの修飾に使用されている。加えて、推定される生物活性立体配座は、共有結合性修飾、例えば環化またはラクタム若しくは他の種類の架橋の組み込みによって安定化され得る（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｖｅｂｅｒら，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７５：２６３６及びＴｈｕｒｓｅｌｌら，１９８３，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１１１：１６６を参照のこと）。
【００８６】
多くの合成戦略に共通するテーマは、何らかの環状部分をペプチドベースの骨格に導入することであった。環状部分は、ペプチド構造の立体配座空間を制限しており、これはしばしば、特定の生物学的受容体に対するペプチドの特異性の増大をもたらす。この戦略の更なる利点は、ペプチドに環状部分を導入すると、細胞性ペプチダーゼに対する感受性が低下したペプチドももたらし得ることである。
【００８７】
したがって本発明のポリペプチドは、末端にシステインアミノ酸を含み得る。このようなポリペプチドは、末端のシステインアミノ酸のメルカプチド基のジスルフィド結合形成によりヘテロデチック環状形態で存在し得るか、または末端アミノ酸間のアミドペプチド結合形成によりホモデチック形態で存在し得る。上記に示すように、Ｎ末端領域とＣ末端領域のシステイン間のジスルフィド結合またはアミド結合によって低分子ペプチドを環化させると、タンパク質分解を減少させ、更にまた構造の剛性が増大されることによって、線状ペプチドで時折観察される特異性及び半減期に関する問題を回避し得るため、より特異性の高い化合物を得ることができる。ジスルフィド結合によって環化されたポリペプチドは遊離アミノ末端及びカルボキシ末端を有しており、これら末端が尚もタンパク質分解を受けやすい状態であり得るが、一方のＮ末端アミンとＣ末端カルボキシルとの間のアミド結合の形成によって環化されたペプチドは、もはや遊離アミノ末端またはカルボキシ末端を含有しない。このように、本発明のペプチドは、Ｃ−Ｎ結合またはジスルフィド結合のいずれによって連結されていても良い。
【００８８】
本発明は、いかなる方法によってもペプチドの環化方法によって限定されるものではなく、環状構造が任意の好適な合成方法によって達成され得るペプチドを包含する。したがって、ヘテロデチック結合としては、ジスルフィド架橋、アルキレン架橋またはスルフィド架橋を介した形成が挙げられ得るがこれらに限定されない。ジスルフィド架橋、スルフィド架橋及びアルキレン架橋を含む、環状ホモデチックペプチド及び環状ヘテロデチックペプチドの合成方法は、参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ  ５，６４３，８７２に開示されている。環化方法の他の例として、クリックケミストリー、エポキシド、アルデヒド−アミン反応、ならびに参照により本明細書に組み込まれる、ＵＳ  ６，００８，０５８に開示された方法による環化が挙げられる。
【００８９】
このような末端修飾は、周知のようにプロテイナーゼ消化による感受性を減少させ、それにより溶液中の、特にプロテアーゼが存在し得る体液中でのペプチドの半減期を延長するのに有用である。ポリペプチド環化はまた、環化によって形成される安定構造のため、及び環状ペプチドで認められる生物活性の観点からも有用な修飾である。
【００９０】
このような理由から、一実施形態では、本発明の第１の態様のポリペプチドは環状である。
【００９１】
しかしながら、別の実施態様では、ポリペプチドは線形である。
【００９２】
好ましい一実施形態では、しかしながら、ポリペプチドは、ＰＥＧ化、アミド化、エステル化、アシル化、アセチル化及び／またはアルキル化によって修飾または誘導体化される１つ以上のアミノ酸を含む。
【００９３】
ポリペプチドは１つ以上のアミノ酸においてグリコシル化され得ることを当業者は理解されるであろう。例えば、ポリペプチドは、糖質基を結合し得る、対応する（「親」）オステオポンチンタンパク質の１つ以上のグリコシル化部位を保持し得る。
【００９４】
更なる実施態様では、ポリペプチドは、配列番号１、２６、６９若しくは９４のアミノ酸配列、またはその断片若しくは変異体などの融合物を含むか、またはそれからなる。
【００９５】
例えば、ポリペプチドは、配列番号１または２６のアミノ酸配列の融合物を含んで良い。
【００９６】
本明細書でポリペプチドの「融合物」は、例えば、他の任意のポリペプチドに融合される配列番号１または２６（またはその断片若しくは変異体）に対応するアミノ酸配列を含む。例えば、前記ポリペプチドは、該ポリペプチドの精製を容易にするために、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）またはプロテインＡのようなポリペプチドと融合されていて良い。このような融合物の例は当業者に周知である。同様に、前記ポリペプチドは、Ｈｉｓ６のようなオリゴ−ヒスチジンタグ、または周知のＭｙｃタグエピトープのような抗体によって認識されるエピトープと融合され得る。前記ポリペプチドのいずれの変異体または誘導体との融合物も本発明の範囲に含まれる。
【００９７】
融合物は、本発明の前記ポリペプチドに望ましい機能を与える更なる部分を含んで良く、例えばその部分は毛成長抑制効果を増強または延長するのに有用であって良い。例えば、一実施形態では、融合物はヒト血清アルブミンまたは類似のタンパク質を含む（その開示内容が参照により本明細書に組み込まれるＵＳ２００９／０００５３１２に開示）。
【００９８】
あるいは、融合部分は、当業者に既知のように、ポリペプチドの細胞内取り込みを促進できる親油性分子またはポリペプチドドメインであって良い。
【００９９】
本発明の組成物で用いるのに好適なポリペプチドは、当業者に周知のインビトロでの細胞による発現方法（例えば、文献の関連する開示が参照により本明細書に組み込まれる、Ｇｒｅｅｎ＆Ｓａｍｂｒｏｏｋ，２０１２，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｆｏｕｒｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）によって作成され得る。使用すべき発現ベクター及び宿主細胞の選択は多数の要素に依存し得る。例えば、ポリペプチドをグリコシル化しようとする場合、哺乳動物の発現系が必要になる。
【０１００】
好適な発現ベクター及び宿主細胞は多くの供給元から市販されている。
【０１０１】
あるいは、ポリペプチドは、液相及び固相合成などの既知の手段によって合成することができる（例えば、ｔ−Ｂｏｃ固相ペプチド合成及びＢＯＰ−ＳＰＰＳ）。
【０１０２】
本発明はまた、上記のポリペプチドの薬学的に及び／または化粧品的に許容される酸または塩基付加塩の使用を含むことを当業者は理解されるであろう。本発明に有用な前述の塩基化合物の薬学的に及び／または化粧品的に許容される酸付加塩を調製するのに使用される酸は、非毒性酸付加塩、即ち塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、酸性酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、及び特にはパモエート［即ち１，１′−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３ナフトエ酸塩）］塩などの、薬学的に及び／または化粧品的に許容されるアニオンを含有する塩を形成する酸である。
【０１０３】
薬学的に及び／または化粧品的に許容される塩基付加塩はまた、ポリペプチドの薬学的に及び／または化粧品的に許容される塩形態を産生するのに使用され得る。本質的に酸性である本化合物の薬学的に及び／または化粧品的に許容される塩基塩を調製するために試薬として使用され得る化学的塩基は、このような化合物と非毒性塩基塩を形成する塩基である。このような非毒性塩基塩は、限定されるものではないが、アルカリ金属カチオン（例えばカリウム及びナトリウム）及びアルカリ土類金属カチオン（例えばカルシウム及びマグネシウム）のような薬学的に及び／または化粧品的に許容されるカチオン、アンモニウムまたはＮ−メチルグルカミン（メグルミン）のような水溶性アミン付加塩、及び低級アルカノールアンモニウム、及び特には薬学的に許容される有機アミンの他の塩基塩から由来する塩基塩を含む。
【０１０４】
更にポリペプチドを凍結乾燥して貯蔵し、使用前に好適な担体中で復元しても良いことが理解されるであろう。いずれの好適な凍結乾燥方法（例えば噴霧乾燥、ケーク乾燥）及び／または復元技術も用いることができる。凍結乾燥及び復元により、程度の異なる活性ロスが生じる可能性があり、補填するために使用量の上方調整が必要な場合があることを当業者は理解されるであろう。好ましくは、凍結乾燥（フリーズドライ）ポリペプチドは、再水和されるとき、（凍結乾燥前の）活性の約２０％以下、または約２５％以下、または約３０％以下、または約３５％以下、または約４０％以下、または約４５％以下、または約５０％以下を失う。
【０１０５】
ポリペプチドは、ポリペプチド及び目的の投与経路及び標準の薬学的または化粧品的手法と関連して選択された、薬学的に許容される及び／または化粧品的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む組成物の形態で提供される（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｇｅｎｎａｒｏ編，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡを参照のこと）。
【０１０６】
「薬学的に許容される」は、製剤が無菌かつパイロジェンフリーであることを包含する。好適な医薬品担体は薬学分野で周知である。１つまたは複数の担体は本発明の化合物と適合性があり、かつそのレシピエントに有害でないという意味で「許容される」必要がある。通常、担体は無菌かつパイロジェンフリーである水または生理食塩水であるが、他の許容される担体を使用しても良い。したがって、「薬学的に許容される担体」及び「薬学的に許容される賦形剤」は、単に担体として作用することを目的とする、即ちそれ自体生物活性を有することは目的としない製剤の一部を形成するのに使用される何らかの化合物（複数可）を含む。薬学的に許容される担体または賦形剤は、一般に安全、非毒性であり、生物学的にもそれ以外の点でも有害でないものである。本明細書で使用される薬学的に許容される担体または賦形剤は、１つ以上のこのような担体または賦形剤を含む。
【０１０７】
同様に、用語「化粧品的に許容される」は化粧品としての使用に好適な製剤を意味するのに使用される。シャンプー、ローション、クリーム及び他のこのような製品に一般的に使用されるものなど、好適な化粧品担体は当技術分野で周知である。
【０１０８】
賦形剤は、１つ以上の糖質類、ポリマー、脂質及びミネラルであって良い。糖質類の例は、例えば、凍結乾燥を容易にするために組成物に添加されるラクトース、スクロース、マンニトール、及びシクロデキストリンを含む。ポリマーの例は、デンプン、セルロースエーテル、セルロースカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、カラギーナン、ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリアクリル酸、ポリスルホネート、ポリエチレングリコール／ポリエチレンオキシド、ポリエチレンオキシド／ポリプロピレンオキシドのコポリマー、異なる加水分解度のポリビニルアルコール／ポリビニルアセテート、及びポリビニルピロリドン、これらの異なる分子量の全てであり、例えば、粘度調整のため、生体接着を実現するため、または化学的及びタンパク質分解から脂質を保護するために組成物に添加される。脂質の例は、脂肪酸、リン脂質、モノ、ジ、及びトリグリセリド、セラミド、スフィンゴ脂質及び糖脂質、異なるアシル鎖長及び飽和度の全て、卵レシチン、大豆レシチン、卵及び大豆水添レシチンであり、これらはポリマーの場合と同様の理由で組成物に添加される。ミネラルの例は、タルク、酸化マグネシウム、酸化亜鉛及び酸化チタンであり、これらは脂質蓄積の減少または有利な色素特性などの利点を得るために組成物に添加される。
【０１０９】
用語「希釈剤」は、医薬製剤中のペプチドを希釈することを目的とした水溶液または非水溶液を意味することを意図する。希釈剤は、１種以上の生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、または油（ベニバナ油、コーン油、ピーナッツ油、綿実油若しくはゴマ油など）であって良い。
【０１１０】
希釈剤は緩衝剤としての役割も果たす。用語「緩衝剤」は、ｐＨの安定化を目的とした酸−塩基混合物を含有する水溶液を意味することを意図する。緩衝剤の例は、Ｔｒｉｚｍａ、Ｂｉｃｉｎｅ、Ｔｒｉｃｉｎｅ、ＭＯＰＳ、ＭＯＰＳＯ、ＭＯＢＳ、Ｔｒｉｓ、Ｈｅｐｅｓ、ＨＥＰＢＳ、ＭＥＳ、リン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、ホウ酸塩、ＡＣＥＳ、ＡＤＡ、酒石酸塩、ＡＭＰ、ＡＭＰＤ、ＡＭＰＳＯ、ＢＥＳ、ＣＡＢＳ、カコジル酸塩、ＣＨＥＳ、ＤＩＰＳＯ、ＥＰＰＳ、エタノールアミン、グリシン、ＨＥＰＰＳＯ、イミダゾール、イミダゾール酢酸、ＰＩＰＥＳ、ＳＳＣ、ＳＳＰＥ、ＰＯＰＳＯ、ＴＡＰＳ、ＴＡＢＳ、ＴＡＰＳＯ及びＴＥＳである。
【０１１１】
場合により、組成物はアジュバントを含んで良い。用語「アジュバント」は、ペプチドの生物学的作用を増加させるために製剤に添加される何らかの化合物を意味することを意図する。アジュバントは、異なるアニオン、例えば限定されるものではないが、フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物、チオシアン酸塩、亜硫酸塩、水酸化物、リン酸塩、炭酸塩、乳酸塩、グリコール酸塩、クエン酸塩、ホウ酸塩、酒石酸塩、及び種々のアシル組成の酢酸塩との１種以上の亜鉛塩、銅塩または銀塩であって良い。
【０１１２】
本発明の医薬組成物はまた、生分解性ミクロスフェアの形態であっても良い。ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ＰＬＡとＰＧＡのコポリマー（ＰＬＧＡ）、またはポリ（カルプロラクトン）（poly(carprolactone)）（ＰＣＬ）などの脂肪族ポリエステル、及びポリ無水物は、ミクロスフェアの製造において生分解性ポリマーとして幅広く使用されてきた。このようなミクロスフェアの調製については、ＵＳ５，８５１，４５１及びＥＰ０２１３３０３に記載されている。
【０１１３】
本発明の医薬組成物は、ポリマーゲルの形態であっても良く、ここでのポリマーは、デンプン、セルロースエーテル、セルロースカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、カラギーナン、ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリアクリル酸、ポリスルホン酸塩などである。
【０１１４】
ポリペプチドは、使用されている特定のポリペプチドの有効性／毒性に応じて、種々の濃度で製剤化され得る。好ましくは、組成物は１ｎＭ〜１Ｍ、例えば０．１μＭ〜１ｍＭ、１μＭ〜１００μＭ、５μＭ〜５０μＭ、１０μＭ〜５０μＭ、２０μＭ〜４０μＭ、及び場合により約３０μＭの濃度でポリペプチドを含む。エキソビボ及びインビトロ用途では、組成物は、例えば０．００２５μＭ〜１μＭ、１０ｎＭ〜３００ｎＭ、または１５ｎＭ〜１５０ｎＭなどの低濃度でポリペプチドを含んで良い。
【０１１５】
本発明の組成物は、種々の経路、例えば局所、経皮、非経口または経口投与によって投与され得ることを当業者は理解されるであろう。
【０１１６】
有利には、本発明の組成物は局所投与または皮内投与に好適である。
【０１１７】
よって本発明の組成物は、皮膚（例えば、顔、脚など）に局所投与され得る。例えば組成物は、鉱油、流動ワセリン、白色ワセリン、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン／ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス及び水などのうち１種以上の混合物に懸濁または溶解された活性ポリペプチドを含有する軟膏の形態で提供され得る。あるいはポリペプチドは、例えば、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリエチレングリコール、流動パラフィン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２−オクチルドデカノール、ベンジルアルコール及び水のうち１種以上の混合物に懸濁または溶解された好適なローション剤またはクリーム剤として製剤化できる。
【０１１８】
場合により、局所投与のための組成物は、透過促進剤を含んで良い（例えば、その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｏｓｂｏｒｎｅ＆Ｈｅｎｋｅ，１９９７，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ：５８−８２及びＰａｔｈａｎ＆Ｓｅｔｔｙ，２００９，Ｔｒｏｐｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ８（２）：１７３−１７９の記載）。
【０１１９】
あるいは、本発明の組成物は非経口投与、例えば皮内投与され得る。このような組成物は、他の物質、例えば血液と等張の溶液を作製するのに十分な塩またはグルコースを含有し得る滅菌水溶液の形態で最適に使用される。水溶液は、必要に応じて好適に緩衝剤で処理されなければならない（好ましくはｐＨ３〜９）。無菌状態下での好適な非経口製剤の調製は、当業者に周知の標準調剤技術によって容易に達成される。
【０１２０】
非経口投与に好適な組成物は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び対象レシピエントの血液と製剤を等張にする溶質、ならびに懸濁剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性滅菌懸濁剤を含有し得る水性及び非水性滅菌注射液を含む。製剤は、単位用量または複数回用量の容器、例えば密封アンプル及びバイアル中に存在していても良く、使用直前に無菌液状担体、例えば注射用水の添加だけを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存されていても良い。即時注射液及び懸濁液は前述のような無菌散剤、顆粒剤及び錠剤から調製され得る。
【０１２１】
ポリペプチドの送達には、ミクロスフェア製剤のような持続放出系の使用が有益であり得る。
【０１２２】
また、ポリペプチドの送達には微小針及びその他装置の使用も有用であり得る。好適な微小針の例としては、Ｈｏｌｌｏｗ  Ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（３Ｍ製）及びＭｉｃｒｏ−Ｔｒａｎｓ  Ｍｉｃｒｏｎｅｅｄｌｅ  Ａｒｒａｙ  Ｐａｔｃｈ（Ｖａｌｅｒｉｓ製）が挙げられる。ポリペプチドを送達する用具の他の形態としては、経皮パッチ及び経皮ゲルが挙げられる。好適な経皮パッチの例としては、Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇから入手可能な接着剤が挙げられる。経皮ゲルの例としては、ホルモンの経皮投与に使用されるものが挙げられる。Ｐｒａｕｓｎｉｔｚ＆Ｌａｎｇｅｒ，２００８，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２６：１２６１−１２６８、Ｊａｉｎら，２０１４，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．３１（３）：２１９−７２、及びＷｕら，２０１２，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３（７）：１２９２−８も参照されたい（その開示内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
【０１２３】
あるいは、組成物は、活性ポリペプチドを必要な部位（即ち表皮）に直接放出する外科的埋込装置によって投与できる。
【０１２４】
本発明の組成物はまた、経皮的方法によって送達されても良い。
【０１２５】
例えば、エレクトロポレーション療法（ＥＰＴ）及び／またはイオン泳動投与システムをタンパク質及びポリペプチドの投与に用いることができる。このような方法では、装置を使用してパルス電界を細胞に送達し、その結果、薬物に対する細胞膜の透過性を増加させ、細胞内薬物送達に有意な増強をもたらす。
【０１２６】
別の経皮的方法であるエレクトロインコーポレーション（electroincorporation）では、最大直径３０ミクロンの小粒子を利用して、エレクトロポレーションで使用されるものと同一または類似する電気パルスを皮膚表面上に与える。粒子は角質層を通り抜けて、皮膚の深層へと向かう。粒子は薬物または遺伝子を装填できるか、若しくは薬物または遺伝子でコーティングすることができ、あるいは単に薬物が進入できる孔を皮膚に生成する「弾丸」として作用し得る。
【０１２７】
別の経皮的方法も、ＰｏｗｄｅｒＪｅｃｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  ＡＧ所有）によって開発された。
【０１２８】
本発明のポリペプチド及び組成物の好適な投与方法は当技術分野で周知であり、例えば、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｚａｈｒａ  Ｓｈａｈｒｏｋｈら（編），１９９７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，ＩＳＢＮ１３：  ９７８０８４１２３５２８１を参照されたい。
【０１２９】
本発明の組成物は、哺乳動物の発毛抑制に使用するためのものである。このような使用は本質的に医療用／または化粧品用であって良いことを当業者は理解されるであろう（以下、詳細に記述する）。例えば、抑制される毛成長は、疾患または障害に伴うものでも良く、あるいはその代わりに、美容上の理由から望ましくない、（健常な個人での）通常の毛成長であっても良い。
【０１３０】
したがって、一実施形態では、上記で定義された組成物は、多毛症などの不要な及び／または過剰な毛成長を伴う哺乳動物の疾患または障害を処置または予防するために使用されるものである。
【０１３１】
例えば、不要な及び／または過剰な発毛を伴う疾患または障害は、最も一般的な原因である多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、先天性副腎過形成、クッシング病、成長ホルモン過剰（先端巨大症）、卵巣の腫瘍、副腎癌、フォンヒッペルリンドウ病、インシュリン耐性、間質性莢膜細胞過形成（ＳＨ）、肥満、晩発性皮膚ポルフィリン症、薬物（例えばテトラハイドロゲストリノン、フェニトイン、ミノキシジル）の副作用、ホルモン治療及びホルモン障害からなる群から選択され得る。
【０１３２】
更に別の実施形態では、組成物は、（例えば剃毛、ワックス、及び／またはざ瘡に伴う）哺乳動物の内成長毛を処置または予防するためのものである。
【０１３３】
更なる関連した本発明の態様は、哺乳動物での多毛症などの不要な及び／または過剰な発毛を伴う哺乳動物の疾患または障害を処置または予防するための薬剤の調製に関して、上記に定義された組成物を提供する。
【０１３４】
例えば、不要な及び／または過剰な発毛を伴う疾患または障害は、最も一般的な原因である多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、先天性副腎過形成、クッシング病、成長ホルモン過剰（先端巨大症）、卵巣の腫瘍、副腎癌、フォンヒッペルリンドウ病、インシュリン耐性、間質性莢膜細胞過形成（ＳＨ）、肥満、晩発性皮膚ポルフィリン症、薬物（例えばテトラハイドロゲストリノン、フェニトイン、ミノキシジル）の副作用、ホルモン治療及びホルモン障害からなる群から選択され得る。
【０１３５】
更に別の実施形態では、薬剤は、（例えば剃毛、ワックス、及び／またはざ瘡に伴う）哺乳動物の内成長毛を処置または予防するためのものである。
【０１３６】
有利には、哺乳動物はヒトである。
【０１３７】
哺乳動物、例えばヒトは雄であっても雌であっても良い。
【０１３８】
更なる関連した本発明の態様は、多毛症などの不要な及び／または過剰な発毛を伴う哺乳動物の疾患または障害を処置または予防する方法を提供し、該方法は上記に定義されたように組成物の有効量を哺乳動物に与えることを含む。
【０１３９】
例えば、不要な及び／または過剰な発毛を伴う疾患または障害は、最も一般的な原因である多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）、先天性副腎過形成、クッシング病、成長ホルモン過剰（先端巨大症）、卵巣の腫瘍、副腎癌、フォンヒッペルリンドウ病、インシュリン耐性、間質性莢膜細胞過形成（ＳＨ）、肥満、晩発性皮膚ポルフィリン症、薬物（例えばテトラハイドロゲストリノン、フェニトイン、ミノキシジル）の副作用、ホルモン治療及びホルモン障害からなる群から選択され得る。
【０１４０】
更に別の実施形態では、方法は、（例えば剃毛、ワックス、及び／またはざ瘡に伴う）哺乳動物の内成長毛を処置または予防するためのものである。
【０１４１】
本発明のポリペプチド組成物は、有効量で患者に投与される。本明細書で使用される場合、「治療的有効量」、または「有効量」、または「治療に有効な」は、毛成長の抑制効果をもたらす量を指す。これは、所望の治療効果を生じさせるように計算された活性物質の所定量である。当業者が認識されているように、化合物の量はその特異活性に応じて変動し得る。好適な投与量には、必要とされる希釈剤と共同して所望の治療効果を生じさせるように計算された活性組成物の所定量を含有し得る。本発明の組成物の製造時の方法及び使用において、治療的有効量の活性成分が提供される。治療的有効量は、当該分野で周知のように、患者の特性、例えば年齢、体重、性別、状態、合併症、他の疾患などに基づいて、通常の技量を持つ医療従事者または獣医学従事者によって決定され得る。
【０１４２】
本発明の第１の態様の組成物は医療用途に限定されるものではなく、（単に美容上の利点を哺乳動物へ与える以外に、それ自体では、いかなる物理的な健康改善も提供しないという意味で）化粧剤として使用しても良いことを当業者は理解されるであろう。
【０１４３】
したがって、本発明の第４の態様は、上記で定義された組成物の使用をヒトでの美容上の除毛のために提供する。
【０１４４】
一実施形態では、ヒトは男性である。例えば、顔（例えば、頬、あご及び上唇上部）、胸、肩、首、及び背中からなる群から選択される身体の領域から毛を除去することができる。
【０１４５】
別の実施形態では、ヒトは女性である。例えば、顔（例えば、頬、あご及び上唇上部）、背中、脚、腕、指、足、つま先、及び恥骨からなる群から選択される身体の領域から毛を除去することができる。
【０１４６】
更なる本発明の関連した態様は、上記で定義された組成物の有効量をヒトに投与することを含む、ヒトでの美容上の除毛方法を提供する。
【０１４７】
一実施形態では、ヒトは男性である。例えば、顔（例えば、頬、あご及び上唇上部）、胸、肩、首、及び背中からなる群から選択される身体の領域から毛を除去することができる。
【０１４８】
別の実施形態では、ヒトは女性である。例えば、顔（例えば、頬、あご及び上唇上部）、背中、脚、腕、指、足、つま先、及び恥骨からなる群から選択される身体の領域から毛を除去することができる。
【０１４９】
本発明の組成物は、単独で、または他の治療的な若しくは美容上の処置と組み合わせて使用しても良い。例えば、本発明の組成物は、以下の除毛／発毛予防処置のうち１つ以上との併用療法で使用しても良い：
−剃毛、摘採、脱毛、ホットワックス、レーザー脱毛、電気分解（ガルバーニ電気または熱溶解）、局所クリーム（エフロルニチンなど）、及び／または経口薬（女性用経口避妊薬、抗アンドロゲン物質、フィナステリド、及び性腺刺激ホルモン放出ホルモンなど）。
【０１５０】
更に本発明の組成物はインビボ、エキソビボ、またはインビトロで使用して良いことを当業者は理解されるであろう。
【０１５１】
したがって、哺乳動物への直接塗布または投与に加えて、エキソビボで、例えば哺乳動物に皮膚の移植をする前に皮膚移植片に、発毛を抑制するために組成物を使用しても良い。
【０１５２】
あるいは、ポリペプチドをインビトロで毛包（またはその幹細胞前駆体）の増殖を抑制するために使用しても良い。
【０１５３】
本発明のある一定の態様を例示する好ましい非限定的な例を以下の図を参照して説明する。
【０１５４】
本発明の所与の態様、特徴またはパラメーターの優先度及び選択肢は、別途文脈で指示しない限り、本発明の他の全ての態様、特徴及びパラメーターの一部及び全ての優先度及び選択肢と組み合わせて開示されているものと見なされる。例えば、一実施形態では、本発明は配列番号１のポリペプチドを含む局所組成物を薬物の副作用に伴う不要な毛成長を処置するために提供する。
【０１５５】
本明細書中の明らかに先行公開済みの文献の一覧または説明は、必ずしも現況技術の一部または共通の一般的な知見であることの承認と見なされるわけではない。
【０１５６】
特許請求の範囲及び／または明細書中で、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」と関連して使用されるとき、単語「ａ」または「ａｎ」の使用は「ｏｎｅ」を意味し得るが、「ｏｎｅ  ｏｒ  ｍｏｒｅ」、「ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ」、及び「ｏｎｅ  ｏｒ  ｍｏｒｅ  ｔｈａｎ  ｏｎｅ」の意味でも使用される。
【０１５７】
本発明のこれら及びその他の実施形態は、上記の記述及び添付図面と関連して考察すると十分に認識及び理解されるであろう。ただし、上記の記述は、本発明の種々の実施形態及びその多数の具体的な詳細を示しているが、例示であって限定として示されていないことを理解されるべきである。本発明の範囲内でその趣旨を逸脱することなく、多数の置換、改変、付加及び／または転位を行って良く、また本発明はこのような全ての置換、改変、付加及び／または転位を含む。
【０１５８】
以下の図面は本明細書の一部を形成し、本発明のある一定の態様を詳細に説明するために含まれる。本明細書で提示される特定の実施形態の詳細な説明と合わせて、１つ以上のこれらの図面を参照することにより、本発明を十分に理解することができる。
【図面の簡単な説明】
【０１５９】
【図１】本発明の例示的なポリペプチド「ＦＯＬ−００５」による、培養して単離したヒト毛包での成長期から退行期への移行の誘発（配列番号１、プールされた３人の患者からのデータ）。分析された毛包数は、１群当たり３２〜４５である。
【図２】ＦＯＬ−００５が成長期から退行期への移行を誘発することを示す代表的な凍結切片写真。Ａ：代表的な毛幹の写真Ｂ：毛球領域の拡大像Ｃ：真皮乳頭に対する強い効果を示す毛球領域の染色
【図３】培養して単離したヒト毛包でのメラトニン含有量に対するＦＯＬ−００５の効果。マッソンフォンタナ染色による組織化学評価及び形態測定評価を使用して各組織切片の分析を実施した。結果は平均±ＳＥＭで表し、評価した毛包は群当たりｎ＝２６〜４７であった。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びボンフェローニの事後検定を用い、＊はｐ＜０．０５である。
【図４】培養して単離したヒト毛包でのメラニン色素沈着に対するＦＯＬ−００５の効果を示す代表的な凍結切片写真（倍率ｘ２００で撮影）。左側パネルの黒い正方形で形態計測の参照領域を示した。この形態計測データは図３に示されている。
【図５】ＦＯＬ−００５による、無傷なヒト頭皮の皮膚での成長期から退行期への移行の誘発。
【図６】高濃度のＦＯＬ−００５が、無傷なヒト頭皮の皮膚で退行期を誘発することの確認（２人の患者の平均）。
【図７】無傷なヒト頭皮の皮膚でのＫｉ６７陽性細胞の増殖に対するＦＯＬ−００５の効果。ＦＯＬ−００５の濃度は６０ｎＭであり、平均±ＳＥＭ、ｎ＝６〜１７写真／パンチを評価した。「Ｄ３」は処置後３日である。
【図８】無傷なヒト頭皮の皮膚でのメラトニン含有量に対するＦＯＬ−００５の効果。マッソンフォンタナ染色による組織化学評価及び形態測定評価を使用して各組織切片の分析を実施した。結果は平均±ＳＥＭで表した。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びボンフェローニの事後検定を用い、＊＊はｐ＜０．０１、＊はｐ＜０．０５である。「Ｄ３」は処置後３日である。
【図９】個々の代表的な患者のメラニン色素沈着に対するＦＯＬ−００５の効果。＊＊＊はｐ＜０．００１である。
【図１０】無傷なヒト頭皮の皮膚でのメラニン色素沈着に対するＦＯＬ−００５の効果を示す代表的な凍結切片写真（倍率ｘ２００で撮影）。写真は真皮乳頭中を撮影し、２〜５写真／パンチを評価した。
【図１１】真皮乳頭（ＤＰ）細胞の遊出に対するＦＯＬ−００５の効果。成長期の毛包（ＨＦ）のみを分析した。結果は６人の患者からのプールされたデータに基づく。ＦＯＬ−００５で処置されたＨＦ中では、ＤＰ細胞の遊出数に有意な変化は見られなかった。平均±ＳＥＭ、ｎ＝１８〜２２のＨＦ評価、マンホイットニー検定、有意差なし（ｎｓ）である。
【図１２】真皮乳頭（ＤＰ）細胞の遊出に対するＦＯＬ−００５の効果。成長期の毛包（ＨＦ）のみを分析した。結果は６人の患者からのプールされたデータに基づく。ＦＯＬ−００５で処置されたＨＦ中では、ＤＰ細胞の遊出数に有意な変化は見られなかった。平均±ＳＥＭ、ｎ＝１８〜２２のＨＦ評価、マンホイットニー検定、有意差なし（ｎｓ）である。
【図１３】毛周期の段階比較。試験された６人の患者全てで、ＦＯＬ−００５によるＨＦの処置が、ヒト頭皮の皮膚内の成長期のＨＦを早期に退行期へと移行することを一貫して誘発している（各垂直バーにおいて、上部領域は中期退行期、中間領域は初期退行期、及び下部領域は成長期に対応する）。データは６人の患者からプールされた。
【図１４】毛周期の段階比較。試験された６人の患者全てで、ＦＯＬ−００５によるＨＦの処置が、ヒト頭皮の皮膚内の成長期のＨＦを早期に退行期へと移行することを一貫して誘発している。データは６人の患者からプールされた。
【図１５】マッソンフォンタナ染色。ＦＯＬ−００５で処置したＨＦでは、ＨＦの色素沈着に有意な変化は見られなかった。成長期及び退行期の毛包を分析した。データは６人の患者からプールされた。平均±ＳＥＭ、ｎ＝４１〜５１のＨＦ評価、対応のないスチューデントｔ検定、有意差なし（ｎｓ）である。
【図１６】マッソンフォンタナ染色。ＦＯＬ−００５で処置したＨＦでは、ＨＦの色素沈着に有意な変化は見られなかった。成長期及び退行期の毛包を分析した。データは６人の患者からプールされた。平均±ＳＥＭ、ｎ＝４１〜５１のＨＦ評価、対応のないスチューデントｔ検定、有意差なし（ｎｓ）である。
【図１７】マッソンフォンタナ染色。ＦＯＬ−００５で処置したＨＦでは、ＨＦの色素沈着に有意な変化は見られなかった。成長期のＨＦを分析した。データは６人の患者からプールされた。平均±ＳＥＭ、ｎ＝１３〜２２のＨＦ評価、対応のないスチューデントｔ検定、有意差なし（ｎｓ）である。
【図１８】マッソンフォンタナ染色。ＦＯＬ−００５で処置したＨＦでは、ＨＦの色素沈着に有意な変化は見られなかった。成長期のＨＦを分析した。データは６人の患者からプールされた。平均±ＳＥＭ、ｎ＝１３〜２２のＨＦ評価、対応のないスチューデントｔ検定、有意差なし（ｎｓ）である。
【図１９】ＦＯＬ−００５で処置した毛包の基底膜の形態に差は認められなかった（ＰＡＳ染色法）。
【図２０】Ｋｉ６７／ＴＵＮＥＬ。１５ｎＭのＦＯＬ−００５で処置したＨＦにアポトーシス細胞数の有意な増加がある（中央の対の右側バーを参照）。ＦＯＬ−００５で処置したＨＦには、増殖細胞数に有意な変化は判定されなかった（各対の左側カラムを参照）。成長期及び退行期のＨＦを分析した。データは６人の患者からプールされた。平均±ＳＥＭ、評価したＨＦはｎ＝４８〜５９、マンホイットニー検定、＊はｐ＜０．０２であった。異常値によるデータ歪度を低減するために、グラブス検定を実施して、異常値を分析から排除した。
【図２１】Ｋｉ６７／ＴＵＮＥＬ。１５ｎＭのＦＯＬ−００５で処置したＨＦに、アポトーシス細胞数の有意な増加がある。ＦＯＬ−００５で処置したＨＦには、増殖細胞数に有意な変化は判定されなかった。成長期及び退行期のＨＦを分析した。データは６人の患者からプールされた。平均±ＳＥＭ、評価したＨＦはｎ＝４８〜５９、マンホイットニー検定、＊はｐ＜０．０２であった。異常値によるデータ歪度を低減するために、グラブス検定を実施して、異常値を分析から排除した。
【図２２】マスト細胞を検出するためのトルイジン青染色。組織化学的に検出可能な毛包周囲のマスト細胞数に顕著な差は見られなかった。
【図２３】ＭＨＣＩＩ染色ＨＳ１４−０６１（間接免疫蛍光法、ＤＡＫＯ製マウス抗ヒトＡｂ  ＨＬＡ−ＤＰ−ＤＱ−ＤＲ）。免疫組織学的に検出可能な毛包周囲のＭＨＣクラスＩＩ＋細胞数に顕著な差は見られなかった。これらのＭＨＣＩＩ＋細胞は、マクロファージである可能性が最も高い。
【図２４】ＣＤ３１染色ＨＳ１４−０６１（間接免疫蛍光法、ＤＡＫＯ製マウス抗ヒトＣＤ３１  Ａｂ）。ＣＤ３１＋細胞（内皮細胞）数に顕著な差は見られなかった。
【図２５】Ｋ１５染色ＨＳ１４−０８７（間接免疫蛍光法、Ｃｈｅｍｉｋｏｎ製マウス抗ヒトＣＫ１５  Ａｂ）。Ｋ１５＋細胞数に顕著な差は見られなかった。ヒト毛包（ＨＦ）上皮幹細胞は、陰性の影響を受けていない。ＨＦ幹細胞プールが保存されており、ＦＯＬ−００５により再生の可能性がある。
【図２６】ヒト毛包の移植後３日目に撮影された代表的な移植片の写真。（Ａ）ビヒクルで処置された動物、（Ｂ）ＦＯＬ−００５で処置された動物、（Ｃ）Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌで処置された動物、及び（Ｄ）ＦＯＬ−００５とＭｉｎｏｘｉｄｉｌで処置された動物。
【図２７】移植後のヒト毛包の平均数に対する効果。（Ａ）ビヒクルで処置された群、（Ｂ）ＦＯＬ−００５で処置された群、（Ｃ）Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌで処置された群、及び（Ｄ）ＦＯＬ−００５とＭｉｎｏｘｉｄｉｌで処置された群。
【実施例】
【０１６０】
実施例Ａ：単離したヒト毛包に対する例示的なペプチドＦＯＬ−００５［配列番号１］の効果
（ｉ）ＦＯＬ−００５は成長期から退行期への変化を誘発する
材料及び方法
成長期ＶＩの毛包（その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｌｏｅｐｐｅｒら，２０１０を参照のこと）を、定期的にフェイスリフト美容整形術を受けている３人の健常な成人女性から症例報告の患者同意を得て通常のヒト頭皮の皮膚から微小解剖した。
【０１６１】
Ｐｈｉｌｐｏｔｔらの方法に従って、インシュリン及びヒドロコルチゾンを補充したウィリアムＥ培地中で、単離した毛包を６〜１０日間、組織培養した（その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｈｉｌｐｏｔｔら，１９９０、Ｂｏｄoら，２００９、Ｇaｓｐaｒら，２０１０を参照のこと）。
【０１６２】
例示的なポリペプチドＦＯＬ−００５による処置を毛包を培養した直後に開始し、７〜１０日間、継続した。
【０１６３】
組織培養終了後、毛包を埋め込み、長期凍結切片処理した（Ｂｏｄoら，２００９、Ｇaｓｐaｒら，２０１０）。
【０１６４】
結果
本発明のＦＯＬ−００５（配列番号１、１５ｎＭ、６０ｎＭ、及び３００ｎＭ）の例示的なペプチドは、単離したヒト毛包において成長期から退行期への用量依存的な移行を誘発した（図１を参照）。
【０１６５】
凍結切片の分析から、ＦＯＬ−００５が毛包退行を促進することが明らかになった。これは、ＦＯＬ−００５がインビトロでのヒト毛成長の強力な阻害因子であることを示す（図２を参照）。
【０１６６】
（ｉｉ）ＦＯＬ−００５は色素沈着の変化を誘発する
材料及び方法
マッソンフォンタナ染色：凍結切片を空気乾燥後、エタノール／酢酸で固定した。トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）及び蒸留水で切片を数回、洗浄した。凍結切片を暗所にて５６℃で４０分間、アンモニア性銀溶液（Ｆｌｕｋａ、Ｓｅｅｌｚｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で処理した。蒸留水で洗浄後、５％のチオ硫酸ナトリウム水溶液（Ｍｅｒｃｋ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で１分間、切片を処理した。次に、水道水を３分間流して切片を洗浄し、０．５％のニュートラルレッド溶液（Ｓｉｇｍａ）にてカウンター染色した。蒸留水で洗浄後、切片を脱水して、Ｅｕｋｉｔｔ（Ｏ．Ｋｉｎｄｌｅｒ、Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に封入した。
【０１６７】
免疫組織化学：異なる毛周期の段階にあるＨＦの増殖及びアポトーシスを比較するために、前述のように、Ｋｉ−６７マウス抗Ｋｉ−６７抗血清（ＤＡＫＯ、Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｄｅｎｍａｒｋ）とＴＵＮＥＬ（ＡｐｏｐＴａｇ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  Ｉｎ  Ｓｉｔｕ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ検出キット、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）との二重免疫標識を実施した（その関連する開示が参照により本明細書に組み込まれる、Ｋｌｏｅｐｐｅｒら，２０１０，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １９：３０５−１２）。
【０１６８】
結果
メラニン色素沈着の分析結果を図３に示す。
【０１６９】
用量６０ｎＭのＦＯＬ−００５では、色素沈着の有意な減少を検出できたため、単離した毛包で成長期から退行期への移行が誘発されたことを確認した。
【０１７０】
１人の被検者でのメラニン色素沈着に対するＦＯＬ−００５の効果を示す代表的な凍結切片の写真を図４に示す。ビヒクルで処置した対照群では、真皮乳頭近傍により強い色素沈着が観察されたのに対して、以降のコマに示された１５ｎＭ、特に６０ｎＭのＦＯＬ−００５では、図の右側でより多くの色素沈着が見られる（真皮乳頭近傍でメラニンが合成されなくなるときの毛幹の移動と一致する）。
【０１７１】
実施例Ｂ：ヒト皮膚片に対する例示的なペプチドＦＯＬ−００５［配列番号１］の効果（ｉ）ＦＯＬ−００５は成長期から退行期への変化を誘発する
材料及び方法
Ｌｕら，２００７（その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる）に記載のように、全層ヒト頭皮皮膚の組織培養を６日間、無血清条件下で実施した。
【０１７２】
簡潔に言えば、女性患者の頭皮の皮膚を、症例報告の同意後に定期的なフェイスリフト術から得た。１００ＩＵ／ｍＬのペニシリンＧ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）、１０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）、０．２５μｇ／ｍＬのアンフォテリシンＢ（Ｇｉｂｃｏ、Ｋａｒｌｓｒｕｈｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で補充したウィリアムＥ培地（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）中で、ヒト頭皮の皮膚を５分間、洗浄した。伸びた毛幹を表皮と均一になるように剃毛した。次に、無傷な頭皮の皮膚の２ｍｍ生検を、Ａｃｕ−ｐｕｎｃｈｅｒ（ＳＴＩＥＦＥＬ、Ｏｆｆｅｎｂａｃｈ  ａｍ  Ｍａｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して（毛成長の方向と平行、即ち斜角に）打ち抜いた。
【０１７３】
ヒト頭皮組織のパンチを、注意深くウィリアムＥ培地［１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン／１０μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１０μｇ／ｍＬのインシュリン（Ｓｉｇｍａ）、１０ｎｇ／ｍＬのヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ）、及び２ｍｍｏｌ／Ｌのｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐａｉｓｌｅｙ，ＵＫ）で補充した］に置いた。表皮を気液境界の上側に、真皮／皮下組織を下側にして、皮膚断片を培地に浮かせたままにした。９５％の空気及び５％のＣＯ２を有するガスを供給したインキュベーター内で培養液を３７℃に維持した。培地を１日おきに変えた。
【０１７４】
培養の開始直後に、（用量１５ｎＭ〜３μＭの）例示的なポリペプチドＦＯＬ−００５に皮膚断片を暴露し、これを培養期間にわたり継続した。
【０１７５】
別々の時点で、液体窒素で凍らせたＯ．Ｃ．Ｔ．（商標）Ｔｉｓｓｕｅ−ＴＥＫ（Ｓａｋｕｒａ、Ｚｏｅｔｅｒｗｏｕｄｅ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）に皮膚試料を埋め込み、６μｍの凍結切片を切り出した。次に、切片をアセトン中で事後固定し、空気乾燥させ、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ、Ｓｉｇｍａ）、ギムザ、またはマッソンフォンタナ組織化学用に処理した。記載（Ｗｈｉｔｉｎｇらの１９９９）のように周期の各段階について、個々の毛包を分析し、一方で毛包のメラニン沈着を標準の硝酸銀組織化学（マッソンフォンタナ染色）によって評価した。Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェア（ＮＩＨ）を使用して、毛母近位の適切に規定された参照領域の定量化を実施した。
【０１７６】
細胞のアポトーシス及び増殖を評価するために、二重免疫蛍光法を適用した。前述したように（Ｆｏｉｔｚｉｋらの２００６）、アポトーシスのマーカーとして、ｄＵＴＰニック末端標識（ＡｐｏｐＴａｇ（登録商標）Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ、Ｔｅｎｅｃｕｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用し、細胞増殖の指標としてＫｉ６７免疫反応性（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ、Ｇｌｏｓｔｒｕｐ，Ｄｅｎｍａｒｋ）を使用した。
【０１７７】
結果
ＦＯＬ−００５は、無傷のヒト頭皮の皮膚での成長期から退行期への急速な移行を誘発した（図５及び６を参照）。
【０１７８】
培地にＦＯＬ−００５が添加されて以降、ほとんど全ての毛包が初期退行期であることが認められる。
【０１７９】
退行期は、頭皮の皮膚組織にＦＯＬ−００５を注射しても誘発された。
【０１８０】
凍結切片の分析から、ＦＯＬ−００５が毛包退行を促進することが明らかになった。これは、ＦＯＬ−００５がインビトロでのヒト毛成長の強力な阻害因子であることを示す（図２を参照）。
【０１８１】
（ｉｉ）ＦＯＬ−００５は、Ｋｉ６７陽性細胞の増殖を阻害し、アポトーシスを増加させる
材料及び方法
マッソンフォンタナ染色及び免疫組織化学染色を上記のように実施した。
【０１８２】
Ｋｉ６７陽性細胞の増殖及びそのアポトーシスを、Ｗｈｉｔｉｎｇら，１９９９，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ  ４：２８２−２８４（関連した開示内容が参照により組み込まれる）の記載のように判定した。
【０１８３】
用量６０ｎＭの例示的なポリペプチドＦＯＬ−００５に細胞を暴露した。
【０１８４】
結果
Ｋｉ６７陽性細胞の減少比率によって示されるように、ＦＯＬ−００５で処置した皮膚では増殖が減少する傾向が強く見られた（図７の白いバーを参照）。
【０１８５】
毛成長の抑制と合わせて、ＦＯＬ−０５処置以降は、ＴＵＮＥＬ陽性細胞の比率によって示されるアポトーシスレベルの増加も見られた（図７の影付きバーを参照）。
【０１８６】
（ｉｉｉ）ＦＯＬ−００５は色素沈着の変化を誘発する
材料及び方法
例示的なポリペプチドＦＯＬ−００５で処置された、単離した毛包での色素沈着の変化を、マッソンフォンタナ組織化学染色によって評価した（その関連した開示内容が参照により組み込まれる、Ｗｈｉｔｉｎｇら，１９９９，Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ  ４：２８２−２８４を参照のこと）。
【０１８７】
結果
メラニン色素沈着の分析結果を図８及び９に示す。
【０１８８】
注射または培地への添加のいずれかによって、無傷なヒト頭皮の皮膚をＦＯＬ−００５に暴露すると、色素沈着の有意な減少を誘発し、毛包の成長期から退行期への移行が確認された。
【０１８９】
１人の被検者でのメラニン色素沈着に対するＦＯＬ−００５の効果を示す代表的な凍結切片の写真を図１０に示す。ＦＯＬ−００５で処置された毛包が低い色素沈着の強度を示しているのとは対照的に（中間及び右パネル）、ビヒクルで処置された対照群（左パネル）は強い色素沈着を示している。
【０１９０】
実施例Ｃ：頭皮の毛包（ＨＦ）上でのＦＯＬ−００５［配列番号１］のエキソビボ評価
観察された毛成長の抑制に関する確実性を示すために、頭皮の毛包（ＨＦ）上での例示的なペプチドＦＯＬ−００５の効果について、上記のエキソビボ評価を再度、実施した。
【０１９１】
組織培養された、全層ヒト頭皮の皮膚断片（４ｍｍ、６人の女性患者、４２〜６５歳）のヒトＨＦを使用して、以下の実験を実施した。
【０１９２】
ａ） ＤＰ細胞の遊出
ＨＦでの真皮乳頭（ＤＰ）遊出数に関して、ＦＯＬ−００５処置の有意な効果は認められなかった（６人の患者からプールされたデータ、平均±ＳＥＭ、ｎ＝１８〜２２  ＨＦ、マンホイットニー検定）。
【０１９３】
結果を図１１及び１２に示す。
【０１９４】
ｂ） ＨＦ周期の分析
試験された６人の患者全てで、ＦＯＬ−００５によるＨＦの処置は、ヒト頭皮の皮膚内の成長期のＨＦを早期に退行期へと移行することを一貫して誘発した（６人の患者からのプールされたデータ）。
【０１９５】
結果を図１３及び１４に示す。
【０１９６】
ｃ） 毛の色素沈着
試験用量のＦＯＬ−００５で処置されたＨＦでは、ＨＦの色素沈着に有意な変化は認められなかった（平均±ＳＥＭ、対応のないスチューデントｔ検定）。
【０１９７】
結果を図１５及び１６に示す（成長期及び退行期のＨＦの分析）。
【０１９８】
更に別の結果を図１７及び１８  ９に示す（成長期のＨＦのみ分析）
【０１９９】
ｄ） 毛包の形態（ＰＡＳ）
ＦＯＬ−００５で処置したＨＦでは、ＢＭの形態について観察可能な差は認められなかった（何らかの有毒作用の不在を表す）。
【０２００】
結果を図１９に示す。
【０２０１】
ｅ） 増殖／アポトーシス
１５ｎＭのＦＯＬ−００５で処置したＨＦのアポトーシス細胞数に、有意な増加が認められた（成長期及び退行期のＨＦを分析）。
【０２０２】
この用量のＦＯＬ−００５で処置したＨＦには、増殖細胞数に有意な変化は判定されなかった。
【０２０３】
平均±ＳＥＭ、評価したＨＦはｎ＝４８〜５９、マンホイットニー検定、＊はｐ＜０．０２であった。異常値によるデータ歪度を低減するために、グラブス検定を実施して、異常値を分析から排除した。
【０２０４】
結果を図２０及び２１に示す。
【０２０５】
ｆ） ＭＣ（マスト細胞）、ＭＨＣＩＩ＋、ＣＤ３１＋細胞の染色
組織化学的に検出可能な毛包周囲のマスト細胞数に顕著な差は認められなかった（図２２を参照。マスト細胞を検出するためのトルイジン青染色）。
【０２０６】
免疫組織学的に検出可能な毛包周囲のＭＨＣクラスＩＩ＋細胞数に顕著な差は見られなかった（図２３を参照）。
【０２０７】
ＣＤ３１＋細胞（内皮細胞）数に顕著な差は見られなかった（図２４を参照）。
【０２０８】
ｇ） Ｋ１５＋細胞の染色
Ｋ１５＋細胞数に顕著な差は認められなかった。
ＨＳ１４−０８７（間接免疫蛍光法、Ｃｈｅｍｉｋｏｎ製マウス抗ヒトＣＫ１５  Ａｂ）を使用して、Ｋ１５の染色を実施した。
【０２０９】
ヒトＨＦ上皮幹細胞は、陰性の影響を受けなかった。
【０２１０】
ＨＦ幹細胞プールの保存が達成されことから、ＦＯＬ−００５による再生の可能性を示した（図２５を参照）。
【０２１１】
要約
上記の発見は、実施例Ｂの結果を確認及び補強するものであり、例示的なペプチドＦＯＬ−００５が、以下の効果を誘発することにより、ヒト頭皮ＨＦの退行期形成を強固に促進することを示している。
（ａ）ＦＯＬ−００５で処置後の退行期ＨＦの増加率；
（ｂ）プールされたデータにおける処置したＨＦの毛母でのアポトーシス細胞の増加；及び
（ｃ）処置後の成長期ＨＦからＤＰの遊出が増加する傾向
【０２１２】
例示的なペプチドＦＯＬ−００５は、以下の観測によって実証されたように、十分な許容性を示している。
（ａ）ＦＯＬ−００５で処置後、ＨＦのメラニン含有量に有意な変化は見られなかった；（ｂ）ＦＯＬ−００５で処置した試料での、基底膜の形態、または毛包周囲のマクロファージ及びマスト細胞の数ならびにＣＤ３１＋細胞数に顕著な差は見られなかった；
（ｃ）Ｋ１５＋細胞数に顕著な差は見られなかった。
【０２１３】
結論
ＦＯＬ−００５はＨＦ退行期を明らかに促進しており、ヒトの毛成長の抑制剤としての活性を裏付ける一方、十分な許容性と有効性を示している。いかなる有毒作用の徴候もなかった。
【０２１４】
実施例Ｄ：ヒト皮膚片に対する例示的なペプチドＦＯＬ−００５［配列番号１］の効果ＳＣＩＤマウスに移植されたヒト男性の頭皮の皮膚での毛成長に対するＦＯＬ−００５の効果を調査した。
【０２１５】
調査の目的は、男性型脱毛症の傾向を有するヒト男性の頭皮の皮膚の毛成長に対するＦＯＬ−００５の効果を検査することであった。この課題に対処するために、６週齢のメスＳＣＩＤ／ベージュマウス４２匹を調査に必要とした。一般的な脱毛症を発症傾向にあるヒト志願者の頭皮の皮膚から得た、３ｍｍ２のパンチ移植片を、ＳＣＩＤ／ベージュマウスに移植した（１マウス当たり３移植片）。
【０２１６】
移植後１週間で、マウスを以下のように４つの処置群にランダムに分類した。
１．ビヒクル（マウス１０匹）に週２回皮内注射し、陰性対照として供給した。
２．Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ（５％）（マウス１１匹）に１日２回局所塗布し、陽性対照として供給した。
３．ＦＯＬ−００５（移植片当たり３００ｎＭ）（マウス１１匹）を週２回皮内注射した。
４．Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ５％＋ＦＯＬ−００５：Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ（５％）（マウス１１匹）を１日２回局所塗布した。ＦＯＬ−００５（移植片当たり３００ｎＭ）を週２回皮内注射した。最初の４週間は、動物をＭｉｎｏｘｉｄｉｌのみで処置し（毛成長を開始させるため）、以降の期間（２か月）、ＦＯＬ−００５の処置を注射剤として追加する一方で、Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌの処置は局所塗布として継続した。
【０２１７】
２名の中立的な観察者により、週２回、毛／移植片の数を計数した。皮膚移植後３か月で、移植片をマウスから得て、液体窒素中で急速凍結して、更なる分析のため−８０℃で保存した。
【０２１８】
１のビヒクル（それぞれ３．７±０．６、ｐ＜０．０５）と比較して、ＦＯＬ−００５処置群（２．１±０．４）では毛／移植片数に有意な減少が認められた（図２６及び図２７を参照）。
【０２１９】
更に、Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ単独での処置群（８．１±０．１、ｐ＜０．００１）と比較して、ＦＯＬ−００５＋Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ処置群（３．４±０．７）では、毛／移植片数に有意な減少が検出された。
【０２２０】
ビヒクル群とＦＯＬ−００５＋Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ群では、平均の毛／移植片数に近似性が認められた（３．７±０．６及び３．４±０．７、ｐ＝ＮＳ）。
【０２２１】
この調査の結果は、ＦＯＬ−００５が毛成長に対する抑制効果を所有することを裏付けるものである。また、Ｍｉｎｏｘｉｄｉｌ（臨床医薬で最も認められた多毛症誘発剤の一つ）の毛成長促進効果を強力に中和したという事実によって、インビボでのヒト頭皮の皮膚におけるＦＯＬ−００５の完全な毛成長抑制可能性も明示している。
【０２２２】
参考文献
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Ｗｈｉｔｉｎｇ  Ｄ  Ａ，Ｗａｌｄｓｔｒｅｉｃｈｅｒ  Ｊ，Ｓａｎｃｈｅｚ  Ｍ，Ｋａｕｆｍａｎ  Ｋ  Ｄ．Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｈａｉｒ  ｍｉｎｉａｔｕｒｉｚａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ  ａｌｏｐｅｃｉａ  ｂｙ  ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ  ｃｏｕｎｔｓ  ｉｎ  ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ  ｓｅｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｓｅｒｉａｌ  ｓｃａｌｐ  ｂｉｏｐｓｉｅｓ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ｆｉ−  ｎａｓｔｅｒｉｄｅ  １  ｍｇ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｅｎ  ａｎｄ  ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  ｗｏｍｅｎ．Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｓｙｍｐ  Ｐｒｏｃ  １９９９：４：  ２８２−２８４。
【図１】
2017513856.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2017513856.tif 000010
【図７】
2017513856.tif 000011
【図８】
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【図９】
2017513856.tif 000013
【図１０】
2017513856.tif 000014
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
2017513856.tif 000017
【図１４】
2017513856.tif 000018
【図１５】
2017513856.tif 000019
【図１６】
2017513856.tif 000020
【図１７】
2017513856.tif 000021
【図１８】
2017513856.tif 000022
【図１９】
2017513856.tif 000023
【図２０】
2017513856.tif 000024
【図２１】
2017513856.tif 000025
【図２２】
2017513856.tif 000026
【図２３】
2017513856.tif 000027
【図２４】
2017513856.tif 000028
【図２５】
2017513856.tif 000029
【図２６】
2017513856.tif 000030
【図２７】
2017513856.tif 000031
【配列表】
2017513856000001.app
【国際調査報告】
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2017513856.tif 000033
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