(57)【要約】  本発明は、グルコース及び／又はガラクトース摂取の生理学的にリンクされるか又は関連付けされることにより引起される疾患又は障害の予防又は治療への使用のための、ＱＥＰ又はそのＱＥＰ誘導体を含むか又はそれから成る（ポリ）ペプチド、前記（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含むベクターを含む、高糖条件下で投与されるべき医薬組成物に関する。さらに、本発明の医薬組成物は、インスリン感受性を高めるのに使用するためである。本発明はさらに、前記（ポリ）ペプチドを含む食品組成物に関する。本発明はまた、高糖条件下で前記疾患又は障害を予防するか又は治療するために適切な化合物をスクリーニングし、そして／又は同定するための方法に関する。本発明はさらに、ＯＤＣを発現する細胞中への（ＳＧＬＴ１−介在性）グルコース及び／又はガラクトース摂取を阻害でき、そして／又はＯＤＣを発現する細胞中へのグルコース及び／又はガラクトース摂取のインヒビターの阻害効果を高めることができる、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）を調節する化合物をスクリーニングし、そして／又は同定するための方法に関する。本発明はさらに、前記（ポリ）ペプチドに対する患者の非応答又は応答を予測するための方法、前記（ポリ）ペプチドによる予防又は治療のために患者を階級化するための方法、及び前記疾患又は障害に罹患している患者が前記ポリペプチドに対して非応答者か又は応答者であるかを決定するためのキットに関する。本発明はさらに、前記疾患又は障害を予防するか又は治療するために適切な化合物／薬物を開発し、そして／又は企画するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）（Ａ）アミノ酸配列グルタミン−グルタミン酸−プロリン（ＱＥＰ）；又は
（Ｂ）アミノ酸配列ＱＥＰの誘導体、ここで前記誘導体は、高濃度のグルコース及び／又はガラクトースの存在下で細胞中へのＳＧＬＴ１−介在性グルコース及び／又はガラクトース摂取を低めるか／阻害することができる、
を含むか又はそれから成る（ポリ）ペプチド；
（ｂ）（ａ）の（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子；又は
（ｃ）（ｂ）の核酸分子を含むベクター、
を含んで成る、グルコース及び／又はガラクトース摂取に生理学的にリンクされるか、又は関連付けられることにより引起される疾患又は障害の予防又は治療への使用のための医薬組成物であって、
患者の消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞に高濃度のグルコース及び／又はガラクトースを有するその患者に投与される、組成物。
【請求項２】
前記（ポリ）ペプチドが多くとも１００個の連続したアミノ酸から成る、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記疾患又は障害が、肥満、真性糖尿病及び高血糖症から成る群から選択される、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記疾患又は障害が、２型糖尿病及び糖尿病前症から成る群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記アミノ酸配列ＱＥＰの誘導体が、
（ａ）  ＱＳチオホスフェート−Ｐ;
（ｂ）  ＱＳＰ、ここで Ｓ残基はリン酸化されている;
（ｃ）  ＱＤＰ;
（ｄ）ＱＹＰ;
（ｅ）ＱＴＰ;
（ｆ）ＱＴＰ、ここで Ｔ残基はリン酸化されている;
（ｇ）ＱＴチオホスフェート−Ｐ;
（ｈ）ＮＥＰ;
（ｉ）ＮＳＰ、ここで Ｓ残基はリン酸化されている;
（ｊ）ＮＳチオホスフェート−Ｐ;
（ｋ）ＮＤＰ;
（ｌ）ＱＥ−ヒドロキシＰ;
（ｍ）ＱＤ−ヒドロキシＰ;
（ｎ）ＱＳ−ヒドロキシＰ、ここで Ｓ残基はリン酸化されている;
（ｏ）ＱＳチオホスフェート−ヒドロキシＰ;
（ｐ）別のＥ類似体、又は別のリン酸化されたＳ類似体により置換されたその中間／第２アミノ酸残基を有する（ａ）〜（ｏ）の何れか１つ；
（ｑ）別のＱ類似体により置換されたその第１アミノ酸残基を有する（ａ）〜（ｐ）の何れか１つ；及び
（ｒ）別のＰ類似体により置換されたその最後のアミノ酸残基を有する（ａ）〜（ｑ）の何れか１つ；
から成る群から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記ポリペプチドが、
（ａ）アミノ酸配列ＱＥＰ又は請求項１又は５に定義されるような、その誘導体により置換された、その最初の／Ｎ−末端グルタミン−セリン−プロリン（ＱＳＰ）モチーフを少なくとも有するＲＳ１の調節ドメイン（ＲＳ１−Ｒｅｇ）を含むか又はそれから成るポリペプチド；
（ｂ）ＲＳ１−Ｒｅｇに対して少なくとも２５％同一であり、そしてアミノ酸配列ＱＥＰ又は請求項１又は５に定義されるような、その誘導体により置換されたＲＳ１−Ｒｅｇの最初の／Ｎ−末端ＱＳＰモチーフを少なくとも有するポリペプチドを含むか又はそれから成るポリペプチド；
（ｃ）ＲＳ１−Ｒｅｇをコードする核酸分子の相補鎖に対してハイブリダイズする核酸分子によりコードされるポリペプチドを含むか又はそれから成るポリペプチド、前記ポリペプチドはアミノ酸配列ＱＥＰ又は請求項１又は５に定義されるような、その誘導体により置換されたＲＳ１−Ｒｅｇの最初の／Ｎ−末端ＱＳＰモチーフを少なくとも有し；
（ｄ）下記式Ｉ：
ｘｎ−Ｑ−Ｅ−Ｐ−ｘｍ      （Ｉ）
［式中、ｘは任意のアミノ酸であり、ｎは０〜３の整数であり、そしてｍは０〜７７の整数である。］
で表されるポリペプチドを含むか又はそれから成るポリペプチド；
（ｅ）請求項１又は５に定義されるような、その誘導体により置換されたＱＥＰモチーフを有する式Ｉのポリペプチドを含むか又はそれから成るポリペプチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれか１つのポリペプチドのフラグメントを含むか又はそれから成るポリペプチド、ここで前記フラグメントはアミノ酸配列Ｑ−Ｅ−Ｐ又は請求項１又は５に定義されるようなその誘導体を含む；
から成る群から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記ＲＳ１−Ｒｅｇが、配列番号６又は配列番号８に示されるようなアミノ酸配列を有する、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記グルコースが未リン酸化Ｄ−グルコースであり、そして／又は前記ガラクトースが未リン酸化Ｄ−ガラクトースである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記患者の消化管の少なくとも一部が小腸である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記患者の消化管の少なくとも一部の内腔又は上皮細胞におけるグルコース及び／又はガラクトースの高濃度は、≧１０μＭの濃度である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記医薬組成物は、エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取物と組合して投与されるべきである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取物は、≧１重量％の糖度、≧１０エネルギー％の炭水化物含有量、及び／又は≧７０の血糖指数を有する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
請求項１又は９に定義されるような患者の消化管の少なくとも一部内に、前記（ポリ）ペプチド、核酸分子又はベクターを開放できる医薬的に許容される担体と共に、経口投与されるべきである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
（ｉ）ヒドロゲルにより送達されるべきであり；
（ii）前記医薬的に許容される担体が、ヒドロゲルであり、又はそれを含み；そして／又は
（iii）前記ポリペプチド、核酸分子又はベクターがヒドロゲルにカップリングされる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
（ａ）請求項１又は９に定義されるように消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞に高濃度のグルコース及び／又はガラクトースを生ぜしめることができる、請求項１２に定義されるようにエネルギーに富んでいる食品及び／又は食物サプリメント；及び
（ｂ）請求項１、２及び５〜７のいずれか１項に定義されるようなポリペプチド、
を含む、食品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グルコース及び／又はガラクトース摂取の生理学的にリンクされるか又は関連付けされることにより引起される疾患又は障害の予防又は治療への使用のための、ＱＥＰ又はそのＱＥＰ誘導体を含むか又はそれから成る（ポリ）ペプチド、前記（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含むベクターを含む、高糖条件下で投与されるべき医薬組成物に関する。さらに、本発明の医薬組成物は、インスリン感受性を高めるのに使用するためである。本発明はさらに、前記（ポリ）ペプチドを含む食品組成物に関する。本発明はまた、高糖条件下で前記疾患又は障害を予防するか又は治療するために適切な化合物をスクリーニングし、そして／又は同定するための方法に関する。本発明はさらに、ＯＤＣを発現する細胞中への（ＳＧＬＴ１−介在性）グルコース及び／又はガラクトース摂取を阻害でき、そして／又はＯＤＣを発現する細胞中へのグルコース及び／又はガラクトース摂取のインヒビターの阻害効果を高めることができる、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）を調節する化合物をスクリーニングし、そして／又は同定するための方法に関する。本発明はさらに、前記（ポリ）ペプチドに対する患者の非応答又は応答を予測するための方法、前記（ポリ）ペプチドによる予防又は治療のために患者を階級化するための方法、及び前記疾患又は障害に罹患している患者が前記ポリペプチドに対して非応答者か又は応答者であるかを決定するためのキットに関する。本発明はさらに、前記疾患又は障害を予防するか又は治療するために適切な化合物／薬物を開発し、そして／又は企画するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
豊かな先進国においては、栄養依存性疾患（例えば、肥満／脂肪過多、高コレステロール血症、糖尿病及び高血糖症）の増加発生は、深刻な問題である。例えば、肥満は、世界的に憂慮すべき水準に上昇して来た（McLellan (2002), Lancet 359, 1412）。例えば、ドイツの徴集兵の平均体重は、一年当たりほぼ４００ｇ、増加している。類似するデータが、オーストリア、ノルウェー及び英国で得られた。
【０００３】
肥満患者のための既知治療法は、物理的活動、特別食餌及び薬物治療法を包含する。１つの特別な薬物治療アプローチは、腸におけるいくらかの脂肪の吸収を妨げるOrlistat (Xenical)に基いている。食欲抑制剤及び／又は食欲抑止剤が提案されて来た。食欲抑止剤として試験されて来た多くの薬物は、モノアミン−神経伝達物質（セロトニン、ノルアドレナリン、ドーパミン、ヒスタミン）に干渉する。５−ＨＴ（５−ヒドロキシトリプタミン）は、視床下部の種々の部位、すなわち植物摂取の調節に関与されると思われる脳の領域に放出される。Ｄ−フェンフルラミンは、肥満を治療するためにフェンテルミン（Ｆｅｎ−Ｐｈｅｎ）と組合して、ほとんど使用される５−ＨＴ放出剤及び再摂取インヒビターである。しかしながら、Ｆｅｎ−Ｐｈｅｎは、潜在的な心臓弁欠陥のために市場からは回収されている（Wadden (1999), Obes. Res. 7, 309-310）。また、人気の食欲抑制剤フェンフルラミン及びデクスフェンフルラミンは、市場から回収されている。ＦＤＡは、それらの２種の薬物が心臓弁疾患及び原発性肺高血圧症（ＰＰＨ）にリンクされていることを述べている。また、トピラメートも、肥満の治療に提案されている（The Pharmaceutical Journal (1999), Vol. 263, No 7064, page 475）。しかしながら、トピラメートは、脳領域に副作用をもたらすことが知られている。Kaminski (2004 Neuropharmacology 46(8):1097-104)は、トピラメートがＧｌｕＲ５カイニン酸受容体により介在される後シナプス応答を選択的に阻害することを示している。また、種々の特別食餌（栄養物の極端な比率を有する）、精神薬理学的薬物、及び小腸における二糖類の分解を阻害するα−グルコシダーゼインヒビター（アカルボース、Glucobay（登録商標）、バイエル・バイタル、レバークーゼン）が、肥満、糖尿病及び／又はその対応する二次障害の治療に提案されて来た。しかしながら、全ての既知の治療形は、実質的な副作用を有する主要欠点を有する。
【０００４】
栄養関連疾患の治療のためのさらなる手段として、ナトリウム−Ｄ−グルコース／ガラクトースコトランスポーターＳＧＬＴ１及びＳＧＬＴ２のインヒビターの開発が提案されている。ＳＧｌＴ１は小腸におけるＤ−グルコース（及び／又はＤ−ガラクトース）の吸収に介在し、そしてＳＧＬＴ２は腎近位尿細管におけるＤ−グルコース（及び／又はＤ−ガラクトース）の再吸収における最初の工程に介在する。栄養関連疾患の治療のためのそれらの試みは、競争インヒビターとして作用する非輸送基質類似体の開発に基づかれている（Oku (1999), Diabetes 48, 1794-1800; Dudash (2004), Bioorg. Med. Chem. Lett. 14, 5121-5125）。そのような化合物によるグルコース輸送の阻害は、高濃度で結合部位でのそれらの連続した存在を要する。この永久的存在は、影響されることが所望されない器官（例えば、ＳＧＬＴ１が発現される、重度の有害な効果をもたらす心臓）において副作用を引起すことができる（Zhou (2003) Journal Cell Biochem 90, 339-346）。
【０００５】
栄養関連疾患の治療のための薬理学的選択肢の副作用の問題の他に、また、長期にわたっての食物摂取の鋭い減少を包含する食餌はしばしば、患者により受け入れられず、そして栄養習慣の変化がしばしば、拒否される。
【０００６】
ＲＳＣ１Ａ１遺伝子によりコードされる調節タンパク質ＲＳ１のアンタゴニスト（例えば、抗体、アンチセンス分子、リボザイム）の提供による、栄養関連疾患、例えば糖尿病及び高血糖症の治療のための治療法を提供する試みがまた行われた（デンマーク特許第Ａ１  １０００６８８７号）。
【０００７】
動物モデルにおける調節タンパク質ＲＳ１（遺伝子ＲＳＣ１Ａ１）の除去は、ＳＧＬＴ１の後転写アップレギュレーション、血清コレステロールの上昇、及び肥満を導くこともまた示されている（Osswald (2005) Mol Cell Biol. 25, 78-87）。分子としての、及びＲＳ１コード遺伝子の形でのＲＳ１は、肥満症又は高コレステロール血症の治療に使用されることが提案されている；欧州特許第Ａ１１４４４８９０号を参照のこと。ＲＳ１−ノックアウト動物モデル、体重への影響におけるＲＳ１の活性の変更、及びＲＳ１の発現又は活性の試験を通して肥満を診断する可能性が、欧州特許第Ａ１１４４４８９０号及び米国特許第１０／７７１，１５１号に記載されている。
【０００８】
ｈＲＳ１のモチーフ（ＱＣＰ、ＱＳＰ、ＱＰＰ、ＱＴＰ）に対応するペプチドは、生理学的範囲での相当なグルコース濃度の不在下で、ＳＧＬＴ１発現の後転写阻害を誘発できるものとして同定されている（国際公開第２００６／１０５９１３号）。そのようなグルコース濃度の存在下で、この阻害が抑制された。それらのペプチドのＳＧＬＴ１−阻害効果のこのグルコース依存性鈍化は、低グルコース濃度で小腸グルコース吸収をダウンレギュレートするためへのそれらのペプチドのインビボ使用のための特定値であるものとして考慮されている。従って、糖尿病、肥満、等を治療するためへのそれらのペプチドの使用は、それぞれ、定炭水化物食餌及び低血糖指数を有する食餌と組合して、提案されている。Vernalekenの開示は、所見を確認している（J. Biol. Chem. (2007) 282, 28501-13; “Dissertation zur Erlangung des naturwissenschaftlichen Doktorgrades der Bayerischen Julius-Maximilians-Universitat Wurzburg” (2007), “Identification and Characterisation of the Domains of RS1 (RSC1A1) Inhibiting the Monosaccharide Dependent Exocytotic Pathway of Na+-D-Glucose Cotransporter SGLT1 with High Affinity”「高親和性を有するＮａ＋−Ｄ−グルコースコトランスポーターＳＧＬＴ１の単糖依存性エキソサイトーシス経路を阻害するＲＳ１（ＲＳＣ１Ａ１）のドメインの同定及び特徴付け」）。同様に、ヒトＲＳ１の特定モチーフに対応するオクタペプチド（ＳＤＳＤＲＩＥＰ）はまた、ＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることが提案されている（国際公開第２００６／１０５９１２号）。
【０００９】
ＲＳ１タンパク質は、ｈＳＧＬＴ１の発現を阻害するのみならず、また、小腸において発現される他のトランスポーター、例えば有機カチオントランスポーターｈＯＣＴ２（ＳＬＣ２２Ａ２）の発現も阻害することは、さらに知られている（Koepsell, Pflugers Arch-Eur J Physiol (2004), 447:666-76; Reinhardt, Biochim Biophys Acta (1999), 1417:131-43; Veyhl, Am J. Physiol Renal Physiol (2006), 291:F1213-F1223）。
【００１０】
小腸におけるグルコース吸収が決定的には、Ｎａ＋−Ｄ−グルコースコトランスポーターＳＧＬＴ１により介在される腸細胞の管腔側刷子縁膜を通してのグルコーストランスポートに依存することはさらに知られている（Gorboulev, Diabetes 61 (2012), 187-196）。グルコースに富んでいる食事の後、ＳＧＬＴ１は、刷子縁膜中に取り込まれるゴルジ体からのＳＧＬＴ１含有小胞のグルコース依存性放出のために、後転写的にアップレギュレートされる（Veyhl, Am J. Physiol Renal Physiol (2006), 291:F1213-F1223）。
【００１１】
トランスポーターの後転写ダウンレギュレーションのためのＲＳ１の役割が、主に、ＳＧＬＴ１及び他のトランスポーターがｍＲＮＡ注入により発現され、そしてＲＳ１タンパク質が注入されたアフリカツメガエルの卵母細胞を用いて研究されて来た。卵母細胞発現系を用いて、ｈＲＳ１タンパク質がｈＳＧＬＴ１、ヒトＮａ＋−ヌクレオチドコトランスポーターｈＣＮＴ１、及びいくつかの他のトランスポーターを、後翻訳的にダウンレギュレートすることが観察されている（Errasti-Murugarren, Mol Pharmacol 82 (2012), 59-67）。グルコース及び短鎖脂肪酸に応答して抗糖尿病ホルモングルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）を分泌する腸内分泌Ｌ細胞は、小腸の末端部に位置する。グルコースに富んだ食事の間、ＧＬＰ−１は膵臓島のグルコース依存性インスリン分泌を増強する。Ｌ細胞がＳＧＬＴ１を発現し、そしてＬ細胞によるＧＬＰ−１のグルコース依存性刺激についてのＳＧＬＴ１の役割が論じられていることは示されている（Gorboulev, 同上）。さらに、小腸におけるＳＧＬＴ１の阻害、又はＳＧＬＴ１の遺伝的除去が、グルコースの強制経口投与の３０分〜２時間後、ＧＬＰ−１分泌の上昇を導くことは報告されている（Powell, J Pharmacol Exp Ther 34 (2013), 250-259）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
従って、本発明の根底にある技術的問題は、糖尿病、及びグルコース及び／又はガラクトース摂取への生理学的リンク又は関連により引起される他の疾患／障害に対する、改良された、広範な医学的介入の手段及び方法の提供である。
【００１３】
技術的問題は、請求項に特徴づけられる実施形態の提供により解決される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
従って、本発明は、
（ａ）（Ａ）アミノ酸配列グルタミン−グルタミン酸−プロリン（ＱＥＰ）；又は
（Ｂ）アミノ酸配列ＱＥＰの誘導体、ここで前記誘導体は、高濃度のグルコース及び／又はガラクトースの存在下で細胞中へのＳＧＬＴ１−介在性グルコース及び／又はガラクトース摂取を低めるか／阻害することができる、を含むか又はそれから成る（ポリ）ペプチド；
（ｂ）（ａ）の（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子；又は
（ｃ）（ｂ）の核酸分子を含むベクター、
を含んで成る、グルコース及び／又はガラクトース摂取に生理学的にリンクされるか、又は関連付けられることにより引起される疾患又は障害、又は栄養関連又は栄養依存性疾患又は障害の予防又は治療への使用のための医薬組成物に関し、ここで（前記予防又は治療において）前記医薬組成物は患者（前記疾患又は障害を罹患しているか、又は罹患していると思われる）に投与され（投与されるべきか、又は投与されるよう調製される）、前記患者は、患者の消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞（及び/又はその血液、及び/又はその尿）に高濃度のグルコース及び／又はガラクトースを有するか、有しようとしているか、又は有すると思われる。
【００１５】
本発明の要旨は、特定のＲＳ１由来の（ポリ）ペプチド変異体、特にトリペプチドＱＥＰ及びその誘導体が高い糖の条件下でＳＧＬＴ１介在性グルコース摂取を低めることができる、驚くべき発見にある。そのような高い糖条件は例えば、エネルギーに富んだ食事の後に生じる。それらの（ポリ）ペプチド変異体は非常に短く、そして従って、糖尿病、及びグルコース及び／又はガラクトース摂取への生理学的リンク又は関連により引起される他の疾患／障害に対する医学的介入のための非常に単純な手段及び方法が提供され得ることは、本発明の卓越した利点である。生来の／内因性ＲＳ１は、例えば（炭水化物に富んだ）食事間（但し、食事の間ではない）、又は（直接的に）（炭水化物に富んだ）食事の後、小腸における低グルコース／マンノース濃度での存在下でのみ、小腸内でのグルコース／マンノースの摂取を阻害するので、生来の／内因性ＲＳ１、修飾されていないＲＳ１由来のポリペプチドは、（炭水化物に富んだ）食事の間、又は（直接的に）その後、小腸グルコース／ガラクトース摂取を効率的には阻害しない（Vernaleken (2007)、同上）。
【００１６】
本発明はさらに、そのような疾患又は障害の予防又は治療への使用のための、上記（ａ）〜（ｃ）に定義されるような医薬組成物に関し、ここで前記医薬組成物は、高い糖条件／状況下で（例えば、高いグルコース及び／又は高いガラクトース条件／状況下で）、それぞれの患者に投与されるか、投与されるべきであるか、又は投与されるよう調製される。
【００１７】
さらに、本発明は、上記で定義されるような医薬組成物に関し、ここで
（ｉ）投与されるか、又は投与されるべき患者は、エネルギーに富んだ食事を取るか、取るつもりであるか、又は取ると思われ；
（ii）前記医薬組成物は、そのような食事と組合して、又はエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取と組合して、投与されるか、投与されるべきか、又は投与されるよう調製され；
（iii）前記医薬組成物が投与されるか、又は投与されるべきである患者は、その消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞、その血液及び／又はその尿に、高レベルの糖（例えば、グルコース及び／又はガラクトース）を有するか、有しようとしているか、又は有すると思われ；そして／又は
（iv）前記医薬組成物は、（ａ）高い糖の条件／状況（例えば、高いグルコース及び／又は高いグルコース条件／状況）下で、投与されるか、投与されるべきか、又は投与されるよう調製され得る。
【００１８】
さらに、本発明は、上記疾患又は障害を治療するか、又は予防するための方法に関し、ここで前記方法は、上記高い糖の条件／状況下で、医薬的に有効な量の上記医薬組成物を、その必要な患者に投与する工程を含む。
本発明はさらに、次の非制限的図面及び実施例を参照して記載される。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１は、ｈＲＳ１のアミノ酸１６−９８を含むヒト（ｈＲＳ１−Ｒｅｇ）からのＲＳ１の調節ドメインのアミノ酸配列を示す。以前に同定された活性モチーフは、四角で囲まれている。予測されるリン酸化部位内のセリン残基が示されている。
【図２】図２は、アフリカツメガエルの卵母細胞において発現されるｈＳＧＬＴ１−介在性ＡＭＧ輸送又はｈＣＮＴ１−介在性ウリジン輸送に対する、＜１０μＭの細胞内ＡＭＧ濃度の存在下での異なった細胞内濃度のｈＲＳ１−Ｒｅｇの効果を示す。ｈＳＧＬＴ１又はｈＣＮＴ１は、２．５ｎｇのｈＳＧＬＴ１  ｃＲＮＡ又は０．５ｎｇのｈＣＮＴ１  ｃＲＮＡの注入及び３日間のインキュベーションにより、卵母細胞において発現された。次に、異なった量のｈＲＳ１−Ｒｅｇを含む、５０ｎlの高カリウム緩衝液（K-Ori buffer, Veyhl, (2003) J Membrane Biol. 196, 71-81）が注入された。１時間後、ｈＳＧＬＴ１発現された５０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧ摂取（Veyhl (2003) 同上）又はｈＣＮＴ１発現された５μＭの［３Ｈ］ウリジン摂取が測定された（Errasti-Murugarren 同上）。トリペプチドの細胞内濃度が、卵母細胞当たり４００ｎｌの水性体積を仮定して、計算された。３回の独立した実験からの２４−３０個の卵母細胞の平均値±ＳＥが提示されている。
【図３】図３は、アフリカツメガエルの卵母細胞において発現されるｈＳＧＬＴ１−介在性ＡＭＧ輸送又はｈＣＮＴ１−介在性ウリジン輸送に対する、２５０μＭのＡＭＧの存在下での異なった細胞内濃度のｈＲＳ１−Ｒｅｇの効果を示す。ｈＳＧＬＴ１又はｈＣＮＴ１が、図２に記載されるようにして卵母細胞において発現された。１００ｐモルのＡＭＧ及び異なった量のｈＲＳ１−Ｒｅｇを含む、５０ｎlの高カリウム緩衝液（K-Ori buffer, Veyhl, (2003) J Membrane Biol. 196, 71-81）が注入された。１時間後、ｈＳＧＬＴ１発現された５０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧ摂取又はｈＣＮＴ１発現された５μＭの［３Ｈ］ウリジン摂取が測定された。３回の独立した実験からの２４−３０個の卵母細胞の平均値±ＳＥが提示されている。図２に示されるＡＭＧの注入なしに観察された異なった濃度のｈＲＳ１−Ｒｅｇによる、ｈＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ輸送及びｈＣＮＴ１介在性ウリジン輸送の阻害についての曲線が、記号なしの線として示されている。
【図４】図４は、低細胞内グルコース濃度で、卵母細胞において発現されるｈＳＧＬ１又はｈＣＮＴ１のダウンレギュレーションのための親和性に対する、ｈＲＳ１−Ｒｅｇにおけるリン酸化を妨げるか、又は模倣する突然変異の差動効果を示す。ｈＳＧＬＴ１又はｈＣＮＴ１を発現する卵母細胞が、図２に記載されるようにＡＭＧの同時注入を行わないで、異なった量の変異体ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ａ）、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ｅ）、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ８３Ａ）又は ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ８３Ｅ）を注入された。図４Ｃに示される実験の１つにおいては、異なった濃度のｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型がＣａｍキナーゼ２（ＣＫ２）インヒビターＫＮ９３と共に注入された。ｈＲＳ１−Ｒｅｇ 又はｈＲＳ１−Ｒｅｇ変異体の注入の１時間後、ＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取（図４Ａ、Ｃ）又はｈＣＮＴ１介在性ウリジン摂取（図４Ｂ、Ｄ）が、図２に記載されるようにして、測定された。３回の独立した実験からの２４〜３０個の卵母細胞の平均値±ＳＥが提示されている。図２に示されるＡＭＧの注入なしに観察された異なった濃度のｈＲＳ１−Ｒｅｇによる、ｈＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ輸送及びｈＣＮＴ１介在性ウリジン輸送の阻害についての曲線が、破線として示されている。
【図５】図５は、セリン８３のリン酸化ではなく、ｈＲＳ１−Ｒｅｇにおけるセリン４５のリン酸化が、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのためのｈＲＳ１−Ｒｅｇの親和性のグルコース依存性変化に関与することを示す。ｈＳＧＬＴ１を発現する卵母細胞が、異なった量のｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ａ）、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ｅ）又は ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型、及びＣＫ２インヒビターＫＮ９３を含む、５０ｎｌの高カリウム緩衝液と共に注入された。変異体が、ＡＭＧなしに（破線）、又は１００ｐモルのＡＭＧと共に（実線及び記号）注入された。ｈＲＳ１−Ｒｅｇ又はｈＲＳ１−Ｒｅｇ変異体の注入の１時間後、ＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取が、図２に記載のようにして測定された。３回の独立した実験からの２４〜３０個の卵母細胞の平均値±ＳＥが提示されている。破曲線が由来する詳細なデータが、図４に提示されている。
【図６】図６は、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ及びｍＲＳ１−Ｒｅｇのアミノ酸配列比較を示す。前に同定された活性モチーフが、四角で囲まれ、そして予測されるリン酸化部位のセリン残基が示されている。保存された予測されるリン酸化部位が青で示される。
【図７】図７は、ｈＲＳ１−Ｒｅｇにおけるセリン２０のリン酸化が高細胞内グルコースの存在下でｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのためのｈＲＳ１−Ｒｅｇの親和性を劇的に高めることを示す。ｈＳＧＬＴ１を発現する卵母細胞が、ＡＭＧを伴わないで（オープン記号、破線）、又は１００ｐモルのＡＭＧを伴って（閉じられた記号）、異なった量のｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ａ）又はｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）を含む、５０ｎｌの高カリウム緩衝液と共に注入された。１時間後、ＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取を、図２に記載のようにして測定した。３回の独立した実験からの２４−３０の卵母細胞の平均値±ＳＥが提示される。ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型による阻害についての詳細なデータが図２Ａに示されている。
【図８】図８は、ＡＭＧの注入なしで、アフリカツメガエルの卵母細胞における発現されたＳＧＬＴ１介在性グルコース輸送に対する２種の異なった濃度のＱＸＰ−型トリペプチドの効果を示す。２．５ｎｇのｈＳＧＬＴ１  ｃＲＮＡを、アフリカツメガエルの卵母細胞に注入し、その卵母細胞を、３日間インキュベートした。次に、異なった量のトリペプチドを含む、５０ｎｌの高カリウム緩衝液が注入された。１時間後、ＳＧＬＴ１−発現された、５０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧ摂取が測定された。２回の独立した実験からの１６−１８個の卵母細胞の平均値±ＳＥが提示される。後ｈｏｃ Ｔｕｋｅｙ比較を保ってのＡＮＯＶＡ検定により決定された、注入されたトリペプチドの不在下でのＳＧＬＴ１の発現に対する差異についての＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１が示される。
【図９】図９は、ＲＳ１−Ｒｅｇ及びＳＤＳＤＲＩＥＰとは対照的に、ＱＳＰ及びＱＥＰは、ヌクレオシドトランスポーターｈＣＮＴ１及びｈＣＮＴ３により発現されるウリジン輸送をダウンレギュレートしないことを示す。ｈＣＮＴ１及びｈＣＮＴ３の後転写ダウンレギュレーションが、ＡＭＧの注入なしに測定された。１．２５ｎｇのｈＣＮＴ１  ｃＲＮＡ又は１０ｎｇのｈＣＮＴ３が卵母細胞当たり注入され、その卵母細胞が３日間インキュベートされ、そして５０ｎｌのＫ−Ｏｒｉ緩衝液、ＲＳ１−Ｒｅｇ、ＳＤＳＤＲＩＥＰ、ＱＳＰ又はＱＥＰの何れかを含む、５０ｎｌのＫ−Ｏｒｉ緩衝液の何れかが注入された。１時間後、５μＭの「３Ｈ」ウリジン摂取が測定された。２−４回の独立した実験（各実験に当たり８−１０個の卵母細胞）の平均値±ＳＥが提示されている。＊＊＊Ｐ＜０．０１０１とは、Ｔｕｋｅｙ比較を伴ってのＡＶＯＶＡにより決定された、対照に対する有意性を示す。
【図１０】図１０は、細胞内ＡＭＧがＱＳＰによるｈＳＧＬＴ１の後転写ダウンレギュレーションを妨げることを示す。２．５ｎｇのｈＳＧＬＴ１  ｃＲＮＡがアフリカツメガエルの卵母細胞中に注入され、その卵母細胞が３日間インキュベートされ、そして２ｍＭのＡＭＧを有さない、５０ｎｌのＫ−Ｏｒｉ緩衝液、又は１００ｐモルのＡＭＧを有さない、及びそのＡＭＧを有する、異なった量のＱＳＰを含む、５０ｎｌのＫ−Ｏｒｉ緩衝液が注入された。１時間後、５０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧ摂取が測定された。（○）ＡＭＧ（＜１０μＭの細胞内ＡＭＧ）の注入なしでの測定値、（●）ＡＭＧ（約０．２５ｍＭの細胞内ＡＭＧ）の注入を伴っての測定値。３回の独立した実験からの２４〜３０の測定値の平均値±ＳＥが提示される。
【図１１】図１１は、細胞内ＡＭＧがｈＳＧＬＴ１の発現をダウンレギュレートするためにＱＥＰの親和性を高めることを示す。ｈＳＧＬＴ１介在性輸送の発現に対するＱＥＰの効果が、＜１０μＭ（○）又は約２５０μＭ（●）の細胞内ＡＭＧ濃度の存在下で測定された。２．５ｎｇのｈＳＧＬＴ１  ｃＲＮＡがアフリカツメガエルの卵母細胞中に注入され、その卵母細胞が３日間インキュベートされ、そしてＡＭＧを有さない、５０ｎｌのＫ−Ｏｒｉ緩衝液又はＡＭＧを有さない、及びそのＡＭＧを有する、異なった量のＱＳＰを含む、５０ｎｌのＫ−Ｏｒｉ緩衝液が注入された。１時間後、５０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧ摂取が測定された。３回の独立した実験からの２４〜３０の測定値の平均値±ＳＥが提示される。
【図１２】図１２は、ＲＳ１−／−マウスにおける、ＱＥＰの経口投与の後、小腸でのｍＳＧＬＴ１及びグルコース吸収のダウンレギュレーションを示す。一晩の絶食された、標準食餌上のＲＳ１−／−マウスが、２００μｌのＰＢＳ（対照）、２０μモルのＱＥＰ又は２０μモルのＱＳＰを含む、２００μｌのＰＢＳを強制経口投与された。Ａ）２時間後、裏返しされた象徴リング中への１０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧ摂取が、２００μＭのフロリジンの不在下で及びその存在下で測定され、そしてフロリジン阻害されたＡＭＧ摂取が計算された。Ｂ）ＰＢＳ、又はＱＥＰ含有ＰＢＳを強制経口投与した２時間後、マウスは、４０％グルコースを含む、２００μｌの水を強制経口投与され、そして１５分後、全身の血液中のグルコース濃度が決定された。５匹の動物の平均値±ＳＥが提示される。各動物における摂取測定が四重反復して実施された。対照に対する差異についての＊＊Ｐ＜０．０１がｈｏｃ  Ｔａｋｅｙ比較（Ａ）又はスチューデントｔ−検定（Ｂ）を伴ってのＡＮＯＶＡにより計算された。
【図１３】図１３は、ＲＳ１−／−マウス（Ａ）及び野生型マウス（Ｂ）において、ＱＥＰと共にインキュベートした後の裏返しされた小腸断片中へのｍＳＧＬＴ１−介在性ＡＭＧ摂取のダウンレギュレーションを示す。反転された空腸の断片が、ｐＨ６．４で３０分間、５ｍＭのＧＥＰ（ＱＥＰ）の添加なしで（対照）、又は５ｍＭのＱＳＰ（ＱＳＰ）を有する、５ｍＭのＤ−グルコースを含む組織培養培地においてインキュベートされた。ＰＢＳにより洗浄した後、フロリジン阻害された１０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧが、図１２におけるようにして測定された。５匹の動物の平均値±ＳＥが提示される。各動物における摂取測定が、四重反復して実施された。対照に比較される差異の有意性、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１が、後ｈｏｃ  Ｔｕｋｅｙ比較を伴ってのＡＮＯＶＡにより決定された。
【図１４】図１４は、ＱＥＰが、他のＱＸＰ−型トリペプチドに比較して、５ｍＭのＤ−グルコースの存在下で５ｍＭのトリペプチドとの３０分のインキュベーションの後、ヒト小腸におけるｈＳＧＬＴ１の輸送活性をダウンレギュレートすることを示す。約５０のボディ・マス・インデックスを持つ肥満患者の肥満手術中に得られる空腸粘膜の同一の領域の測定を行った。粘膜断片を、５ｍＭのその示されたトリペプチドの不在下で及び存在下で、培養培地（ｐＨ６．４、５ｍＭのＤ−グルコースを含む）において３０分間インキュベートとした。ｐＨ７．４でのＰＢＳにより洗浄した後、１０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧのフロリジン阻害された摂取が図１２におけるようにして測定された。平均値±ＳＥが標示される。独立した実験測定の数は、括弧内に与えられる。各実験において、１６の領域が測定され、８の領域はＱＥＰなしであり（４領域はフロリジンなしで及び４領域はフロリジンを伴う）、そして８の領域はＱＥＰを伴う（４領域はフロリジンなしで、及び４領域はフロリジンを伴う）。＊＊＊Ｐ＜０．００１は、後ｈｏｃ  Ｔｕｋｅｙ比較を伴ってのＡＮＯＶＡにより決定されたトリペプチドなしでのインキュベーションの後に測定された摂取に対する有意性を示す。
【図１５】図１５は、５ｍＭのＤ−グルコースの存在下での３０分のインキュベーションの後、ヒト小腸におけるｈＳＧＬＴのＱＥＰ誘発されたダウンレギュレーションのＱＥＰ濃度依存性を示す。ヒト粘膜の同一の領域が、図１４におけるように、５ｍＭのＤ−グルコースの存在下で、異なった濃度のＱＥＰと共に３０分インキュベートされた。ＰＢＳにより洗浄した後、１０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧのフロリジン阻害された摂取が図１２におけるようにして測定された。平均値±ＳＥが標示される。独立した実験測定の数は、括弧内に与えられる。ＱＥＰなしでのインキュベーションの後に測定された摂取に対する有意性が、後ｈｏｃ  Ｔｕｋｅｙ比較を伴って、ＡＮＯＶＡにより決定された。＊Ｐ＜０．００５、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図１６】図１６は、マウスにおいて経口グルコース耐性試験の間、グルコース吸収に対する高用量のＱＥＰによる強制経口投与の効果を示す。高カロリー、高脂肪、高グルコース食餌を与えられたニュージーランド肥満（ＮＺＯ）マウスの絶食されたマウスが、１００ｍＭのＱＥＰを有さない（○）又はそれを有する（●）、２００μｌの水を、２度、強制経口投与された。３時間後、経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）が、４０％Ｄ−グルコースを含む、２００μｌの水をマウスに強制経口投与し、そして異なった間隔の後、血液におけるＤ−グルコース及びインスリン濃度を測定することにより、実施された。Ａ）ＯＧＴＴの間の血漿グルコース濃度。Ｂ）図１６Ａに示される曲線下の領域。平均値±ＳＥが標示される。
【図１７】図１７は、経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）の間、血液中のグルコース及びインスリン濃度プロフィールに対する、ＮＺＯマウスの飲料水における５ｍＭのＱＥＰの効果を示す。高カロリー、高脂肪、高グルコース食餌に基づくＮＺＯマウスが、４０％Ｄ−グルコースを含む、２００μｌの水を、強制経口投与され、そして異なった間隔の後、血中Ｄ−グルコース及びインスリン濃度が測定された。Ａ）ＯＧＴＴの間の血漿グルコース濃度。Ｂ）図１７Ａに示される曲路下の領域。Ｃ）ＯＧＴＴの間の血漿インスリン濃度。平均値±ＳＥが標示される。それぞれの時間間隔の後の２回の実験グループにおけるインスリン濃度間の差異についての＊Ｐ＜０．０５の後ｈｏｃ  Ｔｕｋｅｙ比較を伴ってのＡＮＯＶＡによる試験。
【図１８】図１８は、ｈＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ輸送に対する、低濃度（＜１０μＭ）での異なった細胞内濃度のＱＳＰ−チオホスフェート（ＱＳＰ−ｔｈｉｏＰ）、又は０．２５ｍＭの細胞内ＡＭＧの効果を示す。ｈＳＧＬＴ１は、図２におけるようにして、卵母細胞において発現された。次に、異なった量のＱＳＰ−ｔｈｉｏＰを含む、５０ｎｌの高カリウム緩衝液が注入された。１時間後、ｈＳＧＬＴ１発現の５０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧ摂取が、図２に記載されるようにして測定された。図２におけるようにして計算されたＱＳＰ−ｔｈｉｏＰ及びＡＭＧの細胞内濃度が標示されている。２回の独立した実験からの１６−２０個の卵母細胞の平均値±ＳＥが示されている。ＱＳＰ−ｔｈｉｏＰの注入を伴わない対照からの差異の有意性が、図８におけるようにして計算された。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＜０．００１。
【図１９】図１９は、５ｍＭのＤ−グルコースの存在下でＱＳＰ−ｔｈｉｏＰと共にインキュベートした後、ＲＳ１−／−（Ａ）及び野生型マウス（Ｂ）の裏返しされた小腸断片中へのｍＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取のダウンレギュレーションを示す。反転された空腸の断片が、ｐＨ６．４で、３７℃で３０分間、５ｍＭのＱＳＰ−ｔｈｉｏＰの添加なしで（対照）、又はその添加を伴って、５ｍＭのＤ−グルコースを含む培養培地においてインキュベートされた。ＰＢＳによる洗浄の後、フロリジン阻害された１０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧ摂取が、図１２におけるようにして測定された。５匹の動物の平均値±ＳＥが提示される。各動物における摂取測定が、四重反復して実施された。対照に比較しての差異の有意性がスチューデントｔ検定により決定された。
【図２０】図２０は、ＱＳＰ−ｔｈｉｏＰが、５ｍＭのＤ−グルコースの存在下でのヒト小腸におけるｈＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取をダウンレギュレートすることを示す。ヒト粘膜の同一の領域が、図１４におけるように、５ｍＭのＤ−グルコースの存在下で、異なった濃度のＱＳＰ−ｔｈｉｏＰと共に３０分間インキュベートされた。ＰＢＳによる洗浄の後、フロリジン阻害された１０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧ摂取が図１２におけるようにして測定した。平均値±ＳＥが示される。独立した実験測定の数は、括弧で与えられる。ＱＥＰなしでのインキュベーションの後に測定された摂取に対する有意性が、後ｈｏｃ  Ｔｕｋｅｙ比較を伴ってＡＮＯＶＡにより決定された。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１。
【図２１】図２１は、ナノ粒子へのカップリングによる腸細胞中へのＲＳ１−Ｒｅｇの導入を示す。一晩、絶食された、標準食餌に基づくＲＳ１−１−マウスが、２００μｌの無負荷のナノ粒子（対照）、カップリングされたｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ａ） (ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ａ))を有する、２００μｌのナノ粒子、またはｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ） (ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ))によりカップリングされた、２００μｌのナノ粒子を強制経口された。２時間後、裏返しにされた小腸リング中への、［１４Ｃ］ＡＭＧによりトレースされた１０μＭのＡＭＧ摂取、又は［１４Ｃ］ＡＭＧによりトレースされた１ｍＭのＡＭＧ摂取が、２００μＭのフロリジンの不在下で及び存在下で測定され、そしてフロリジン阻害された摂取が計算された。平均値±ＳＥが提示される。フロリジンなしで及び２００μＭのフロリジンを伴っての四重反復測定が実施された各動物の数は、括弧で示されている。対照に対する差異についての＊＊＊Ｐ＜０．００１はスチューデントｔ−検定により計算された（Ｂ）。
【図２２】図２２は、ナノ粒子にカップリングされるｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）による、マウス小腸におけるＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションを示す。一晩、絶食された、標準食餌に基づく野生型マウスが、カップリングされたｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ） (ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ))を有する、２００μｌのナノ粒子、又は野生型ｍＲＳ１−Ｒｅｇによりカップリングされた２００μｌのナノ粒子を強制経口投与された。２時間後、裏返しにされた小腸リング中への、［１４Ｃ］ＡＭＧによりトレースされた１０μＭのＡＭＧ摂取（Ａ）、又は［１４Ｃ］ＡＭＧによりトレースされた１ｍＭのＡＭＧ摂取が、２００μＭのフロリジンの不在下で及び存在下で測定された（Ｂ、Ｃ）。フロリジン阻害されたＡＭＧ摂取の平均値±ＳＥが提示される。四重反復測定が実施された各動物の数は、括弧で示されている。対照に対する差異についての＊＊＊Ｐ＜０．００１はスチューデントｔ−検定により計算された。
【図２３】図２３は、ＯＤＣがＲＳ１―Ｒｅｇ及びＱＥＰの受容体であり、そしてＯＤＣにより生成されるプトレッシンがＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションを誘発することを示す。Ａ−Ｃにおいては、ｈＳＧＬＴ１が図２におけるようにして卵母細胞において発現された。ｈＲＳ１−Ｒｅｇタンパク質又はＱＥＰが、単独で、又はＤＦＭＯ（細胞内濃度３ｍＭ）（Ａ）、又はプトレッシン（細胞内濃度１μＭ）（Ｂ、Ｃ）と共に注入された。発現された２５μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧ摂取が、１時間後、図２におけるようにして測定された。Ａ−Ｃにおいては、３回の独立した実験からの２４−３０個の卵母細胞の平均値±ＳＥが提示される。Ｄ）ＨＥＫ２９３細胞が、ＯＤＣ、ＯＤＣ＋ｈＲＳ１−Ｒｅｇ、又はＯＤＣ＋制御ベクターにより一時的にトランスフェクトされた。一晩の発現の後、細胞は溶解され、そしてＯＤＣ活性が、放出されるＣＯ２を測定することにより決定された。Ｅ）８０ｎｇの精製されたＯＤＣが、１００μＭのＱＥＰ又は１００μＭのＰＥＱを含む１ｍｌの培地において、３７℃で１時間インキュベートされ、そしてＯＤＣ活性が図２３Ｄにおけるようにして測定された。Ｄ及びＥにおいては、３−５回の独立した実験からの平均値±ＳＥが示される。対照に対する差異についての＊＊＊Ｐ＜０．００１が、後ｈｏｃ  Ｔｕｋｅｙ比較を伴ってのＡＮＯＶＡにより測定された。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明は、以下及び実施例に記載されるように、特定のＲＳ１由来の（ポリ）ペプチド変異体、例えばトリペプチドＱＥＰ、ＱＥＰ誘導体（例えば、修飾されたトリペプチドＱＳチオホスフェートＰ）、ＲＳ１の修飾されたフラグメント（例えば、修飾されたヒトＲＳ１調節ドメインｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）又は修飾されたマウスＲＳ１調節ドメインｍＲＳ１（Ｓ１９Ｅ）は、高い糖の条件、例えばエネルギーに富んだ食事の間又は後に観察される濃度に類似する高い細胞内グルコース及び／又はガラクトース濃度の存在により特徴づけられる条件下で、ＳＧＬＴ１発現細胞（例えば、小腸の上皮細胞）中へのグルコース及び／又はガラクトースのＳＧＬＴ１介在性摂取を低めることができることが、驚くべきことには見出されたので、上記に同定された技術的問題を解決する。特に、ＲＳ１由来の（ポリ）ペプチド変異体が、エネルギーに富んだ食事の後、ヒト小腸におけるｈＳＧＬＴ１を、７５％まで、ダウンレギュレートすることができることが、本明細書及び実施例に記載されている。
【００２１】
ＲＳ１由来の（ポリ）ペプチド変異体及び本明細書に記載される他の活性化合物／成分は、それらがＲＳ１の調節ドメイン（ＲＳ１−Ｒｅｇ）の修飾された内因性ペプチドモチーフを表し、すなわちそれらはペプチドモチーフＱＥＰ又はＱＥＰ誘導体を含むか又はそれから成る構造的特性を共有する。理論的に束縛されることではないが、それぞれの修飾は、ＲＳ１−Ｒｅｇ（例えば、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ又はｍＲＳ１−Ｒｅｇ）におけるＮ末端ＱＳＰモチーフ内のセリン残基のリン酸化を模倣する。本明細書に記載される化合物は、小腸における腸細胞中の細胞内グルコース及び／又はガラクトースが高い場合、例えばエネルギーに富んだ食事の間又はその後、生じるような高い糖条件下でＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることができる。内因性ＲＳ１−Ｒｅｇ又はＲＳ１−Ｒｅｇ由来の非修飾モチーフ、例えばｈＲＳ１−Ｒｅｇ中のＱＳＰ及びＳＤＳＤＲＩＥＰは、そのような条件下で効果的ではない。
【００２２】
特に、本明細書に記載される化合物は、高い糖の条件下で、ＳＧＬＴ１介在性グルコース及び／又はガラクトース摂取を低めることができる。理論的に束縛されることではないが、基本的メカニズムは、腸細胞の内腔膜におけるＳＧＬＴ１タンパク質のダウンレギュレーションである。ＳＧＬＴ１介在性グルコース／ガラクトース摂取は、小腸のグルコース及び／又はガラクトースの吸収速度を決定するので、本明細書に記載される化合物は、エネルギーに富んだ食事の間又はその後、小腸のグルコース／ガラクトース吸収を低めることができる。従って、それらの化合物は、例えばエネルギーに富んだ食事が取られたとしても、疾患又は障害、例えば肥満及び糖尿病の予防又は治療の間、グルコース／ガラクトース吸収を低めるために使用され得る。理論的に束縛されることではないが、近位小腸におけるグルコース／ガラクトース吸収の低減は、抗糖尿病腸ホルモングルカゴン、例えばペプチド１（ＧＬＰ−１）の高められた分泌を導く。従って、ＳＧＬＴ１活性を低めるか、又はＳＧＬＴ１発現をダウンレギュレートする化合物の投与はＧＬＰ−１分泌を高めることが予測される。インスリン分泌のＧＬＰ−１誘発の上昇は、疾患又は障害、例えば２型糖尿病の間、血液グルコースの乱された恒常性を改善する。
【００２３】
本発明においては、本明細書に記載される活性化合物（例えば、上記（ａ）〜（ｃ）に定義されるような化合物）はまた、特に中期又は長期（例えば、３日以上）に基いて適用される低用量で、インスリンに対する感受性を高めることができることが、驚くべきことには、見出された。本明細書に記載される疾患又は障害、例えば肥満及び２型糖尿病の関連する特性の１つは、高められたインスリン耐性であるので、本明細書に記載される化合物によりインスリン耐性の低下は、そのような疾患又は障害に対する介入の予防的及び治療的改善を提供する。
【００２４】
本明細書に記載される活性化合物は、内因性ＲＳ１が小腸に存在したとしても、及び内因性ＲＳ１の機能がブロックされると思われる場合、小腸における高グルコース／ガラクトース濃度の存在下でさえ、効果的であることが、さらに驚くべきことには見出された。
【００２５】
原則として、本明細書に記載されるトリペプチド（例えば、ＱＥＰ及びＱＳチオホスフェートＰ）は、それ自体で適用され得る。理論的に束縛されるわけではないが、経口投与の後、それらは、ペプチドトランスポーターＰＥＰＴ１を介して腸細胞に侵入する。ＲＳ１−Ｒｅｇ変異体及び他の長い（ポリ）ぺプチドは、それ自体では、腸細胞に侵入できない。しかしながら、本発明においては、それらの（長い）化合物の経口適用を可能にする手段及び方法がまた、提供される。特に、長い（ポリ）ペプチド、例えばＲＳ１−Ｒｅｇ変異体は、それらがナノ粒子にカップリングされる場合、腸細胞に侵入できることが本明細書に示されている。驚くべきことには、そのような投与される（ポリ）ペプチドは、それぞれ、低用量で、より効果的に投与され、そしてそれらの効力（ＳＧＬＴ１−阻害効果）を示すことができることが、本発明にさらに見出された。
【００２６】
さらに、ＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのための本明細書に記載される（ポリ）ペプチド（ＲＳ１−Ｒｅｇ変異体、ＱＥＰ、ＱＳチオホスフェートＰ及び同様のもの）の受容体は、同定されており、そして本明細書に記載される疾患及び障害の改善された医学的介入のための第二世代化合物を開発する機会を提供する。特にＲＳ１−Ｒｅｇは、グルコースの結合の後、ＲＳ１−Ｒｅｇ結合部位の親和性を修正するグルコース結合部位を含むと思われるオルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）に結合することが、本発明に見出された。理論的に束縛されるわけではないが、ＲＳ１−ＲｅｇのためのＯＤＣの結合部位は、ＱＳＰ／ＱＥＰ及びＳＤＳＤＲＩＥＰのための結合ドメインを、大いに含む。（ヒト）ＲＳ１−Ｒｅｇのリン酸化パターンは、（ヒト）ＲＳ１−ＲｅｇがＯＤＣに結合し、そしてＳＧＬＴ１をダウンレギュレートするか；又は他のトランスポーターを調節する他の受容体タンパク質に結合するかどうかを決定することが、本発明においてまた観察された。
【００２７】
本発明においては、本明細書に記載される活性化合物（例えば、ＱＥＰ又はＱＳチオホスフェートＰ）と、ＳＤＳＤＲＩＥＰ、又は国際公開２００６／１０５９１２号に記載されるような他の調節タンパク質ＲＳ１フラグメントとの組合せが、前記の記載される化合物単独に比較して、高細胞内グルコース／ガラクトースの存在下で、ＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのためにより効果的である示唆がまた提供されている。さらに、本明細書に記載される化合物（例えば、ＱＥＰ又はＱＳチオホスフェートＰ）と、ＱＣＰ、ＱＳＰ、ＱＰＰ及び／又はＱＴＰ、又は国際公開第２００６／１０５９１３号に記載されるような他の調節ＲＳ１フラグメントとの組合せが、前記の記載される化合物単独に比較して、より効果的である示唆が提供されている。理論的に束縛されるものではないが、これは、ｈＲＳ１−Ｒｅｇが卵母細胞においてｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションに介在できるＳＤＳＤＲＩＥＰモチーフを含み、そしてｈＲＳ１−Ｒｅｇがまた、２種のＱＳＰモチーフ、すなわち高細胞内グルコース／ガラクトースの存在下で、ＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションに関連することが示されるＮ末端モチーフ、及びＣ末端モチーフを含むためである。
【００２８】
ｈＲＳ１によるトランスポーターの後翻訳調節の本明細書に提供された／改善された理解は、「ＱＸＰ」形式（「Ｘ」は任意のアミノ酸である）での異なったペプチドが、ＳＧＬＴ１のダウレギュレーション及び／又はＯＤＣへの結合のために異なった親和性を有することを示す。それはまた、「ＱＸＰ」形式での異なったペプチドが、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーション、及び／又は結合されたグルコースを有するＯＤＣへの結合−対−結合されたグルコースを有さないＯＤＣへの結合のために異なったグルコース誘発された親和性変化を示すことも示唆する。対照的に、「ＱＸＰ」型のペプチドが高細胞内グルコース濃度（生理学的範囲で）の存在下で、ｈＳＧＬＴ１発現をダウンレギュレートできず、そしてｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型について観察されたように、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションについて非常に低い親和性を有することは当業界において考えられている（例えば、Vernaleken、同上を参照のこと）。高グルコース濃度の存在がエネルギーに富んだ食品の摂取の後、腸細胞に予測されるので、「ＱＸＰ」型ペプチドが、そのような摂取の間又は後、腸細胞の内腔膜においてＳＧＬＴ１をダウンレギュレートできないと思われる。食事又は一晩の間での小腸における炭水化物含有量が低い場合、「ＱＸＰ」型ペプチドは、活性的であると思われた。
【００２９】
しかしながら、本発明下にあるデータは、ＱＥＰ又はＱＥＰ誘導体を含むか、又はそれから成る（ポリ）ペプチドは、高い糖状況下で、例えば高細胞内濃度のグルコース／ガラクトースの存在下で、非常に高い親和性を有するｈＳＧＬＴ１の発現をダウンレギュレートするｈＳＧＬＴ１−特異的後翻訳インヒビターであることを示している。従って、「ＱＸＰ」型ペプチドＱＳＰ、及び当業界において知られている他の調節タンパク質ＲＳ１フラグメント（国際公開第２００６／１０５９１２号、国際公開第２００６／１０５９１３号、Vernaleken、同上を参照のこと）とは対照的に、特定の「ＱＸＰ」型ペプチドＧＥＰ及びその誘導体は、例えばエネルギーに富んだ食事の間又は後に生じるように、小腸グルコース／ガラクトース吸収を阻害することができる。
【００３０】
本発明の医薬組成物の１つの利点は、それぞれ、投与される化合物の低い毒性、及び／又は低いか／低められた副作用である。本発明の医薬組成物のさらなる利点は、それぞれ、投与される化合物の単純性、及びそれらの容易で且つコスト効率の高い生産の機会である。本発明の医薬組成物のさらなる他の利点は、本明細書に記載されるような疾患又は障害の予防又は治療のための他の医薬組成物（例えば、インスリン、メトホルミン、シタグリプチン）の量／投与量が低められ得、そしてそのような疾患又は障害の何れかを罹患している患者さえ、エネルギーに富んだ食事／食品／食物摂取を取ることができ、そして／又はエネルギーに富んだ食餌療法（悪影響を及ぼさない）を受けることができることである。
【００３１】
本発明に従って予防されるか又は治療される疾患又は障害は、例えば細胞、組織及び／又は器官中へのグルコース及び／又はガラクトース摂取に生理学的にリンクされるか、又は関連付けられることにより引起される。特に、予防されるか又は治療される疾患又は障害は、ＳＧＬＴ（又はその相同体）及びより特定には、ＳＧＬＴ１（又はその相同体）の機能に関連している。予防されるか又は治療される患者又は障害は、炭水化物代謝、特にグルコース及び／又はガラクトース代謝の代謝性疾患又は障害であり得る。さらに、予防されるか又は治療される疾患又は障害は、栄養依存性又は栄養関連疾患／障害であり得る。特に、本発明に従って予防されるか、又は治療される疾患又は障害は、ＳＧＬＴ（又はその相同体）及びより特定には、ＳＧＬＴ１（又はその相同体）による（異常）グルコース及び／又はガラクトース摂取に、生理学的にリンクされるか、又は関連付けられることにより、少なくとも部分的に引起される。より特定には、治療されるか／予防される疾患又は障害は、細胞、特にＳＧＬＴ（ＳＧＬＴ１及び／又は２）又はその相同体を発現する細胞中への（異常）（Ｄ）グルコース及び／又は（Ｄ）−ガラクトース摂取に関連される。そのような細胞の非制限的例は、小腸の腸細胞である。同様に、治療されるか／予防される疾患又は障害は、器官、例えばＳＧＬＴ（ＳＧＬＴ１及び／又は２）又はその相同体を発現する器官による（異常）（Ｄ）−グルコース及び／又は（Ｄ）−ガラクトース摂取に関連する。そのような器官の非制限的例は、小腸である。
【００３２】
ＳＧＬＴは、当業界において知られているＮａ＋−Ｄ−グルコース及び／又はＤ−ガラクトーストランスポーターである（例えば、ＳＧＬＴ１；ＳＬＣ５Ａ１受託番号ＮＭ＿０００３４３；Wright (2004) Plfugers Arch. Eur. J. Physiol. 447, 510; RSC1A1; DE-A1 100 06 887）。ＳＧＬＴは、細胞膜を介しての細胞の細胞質中へのＤ−グルコース及び／又はＤ−ガラクトースの輸送、すなわち摂取を触媒することが知られている。ヒトにおいては、ＳＧＬＴ１は、例えば小腸において強く発現され、ここでそれは、摂取されたＤ−グルコース及び／又はＤ−ガラクトース、又は消化管における消化の結果として、摂取された食物から開放されるＤ−グルコース及び／又はＤ−ガラクトースの摂取に主要な役割を演じる。
【００３３】
「ＳＧＬＴ相同体」は、ＳＧＬＴのように作用し／機能する任意のタンパク質、特にＳＧＬＴの本明細書に言及される特性の少なくとも１つを示す任意のタンパク質である。用語「ＳＧＬＴ相同体」とはまた、ＳＧＬＴ、例えばＳＧＬＴ１又は２に対して実質的な配列類似性を示す任意のタンパク質も言及する。そのような配列類似性は、アミノ酸レベルに基づいて、ＳＧＬＴ、例えばＳＧＬＴ２又はＳＧＬＴ１（ＳＬＣ５Ａ１受託番号ＮＭ＿０００３４４３）との６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％又は９９％以上の配列同一性であり得る。特定の実施形態によれば、「ＳＧＬＴ相同体」とは、非ヒト種に存在するように、ヒトＳＧＬＴのオルソログ（orthologue）を言及する。
【００３４】
従って、用語「ＳＧＬＴ又はその相同体の機能に関連する疾患又は障害」とは、ＳＧＬＴ又はその相同体の１つの活性／機能／特性の１つから、少なくとも部分的に、生じるか、又はそれに起因する任意の疾患又は障害を言及する。例えば、そのような活性／機能／特性は、上記に言及されるそれら、及び特に、Ｎａ＋−Ｄ−グルコース及び／又はＤ−ガラクトース輸送である。本発明においては、「〜と関連する（associated with）」とは、ＳＧＬＴ又はその相同体のグルコース及び／又はガラクトース摂取及び／又は機能、例えばＤ−グルコース及び／又はＤ−ガラクトース摂取／輸送、「による（due to）」、「に起因する（resulting from）」、「に基く（based on）」、等を意味する。
【００３５】
１つの特定の実施形態によれば、本発明に従って治療されるか又は予防される疾患又は障害は、消化管の少なくとも一部、及び従って、それぞれの上皮細胞においてＤ−グルコース及び／又はＤ−ガラクトースの余剰を導く、栄養の余剰供給、及び特に余剰の容易に消化できる炭水化物に関連する。
【００３６】
増加された体重／体質量（body mass）に導く摂食障害、又は薬物（例えば、コルチコステロイド、抗精神病薬、抗うつ薬、特に三環系抗うつ薬、経口避妊薬、等）の使用のために高いか又は生理学的に高い体重に関連する障害の予防又は治療がまた、想定される。より高い体重／体質量にリンクする代謝の障害がまた、治療されるか又は予防されると想定される。それらは、グリコーゲン蓄積症、脂質蓄積症（例えば、ゴーシェ、ニーマンピック）、内分泌疾患（例えば、クッシング、甲状腺機能低下症、インスリノーマ、成長ホルモンの欠乏、糖尿病（例えば、1型又は2型糖尿病）、副腎性器症候群、副腎皮質の疾患、腫瘍及び転移（例えば、頭蓋咽頭腫）、プラダー・ウィリー症候群、ダウン症候群及び遺伝性疾患及び症候群（例えば、高リポタンパク血症）、又は視床下部の障害を含む。
【００３７】
二次障害、連続した合併症、及び／又は上記及び本明細書の何れかに定義される疾患及び障害の何れかの症状の予防及び治療がまた想定される。例えば、そのような二次障害、連続した合併症及び／又は症状は、（病理学的に）高い体重及び／又は高血液グルコース／ガラクトース濃度の発生に関連するか、又はそれにより引起される。それらは、高血圧（高血圧症）、心血管疾患、脳卒中、癌、性機能問題、及び筋肉や骨系の障害を包含するが、但しそれらだけには限定されない。さらに、そのような連続した合併症及び／又は症状の非制限的例は、血糖値の高いピーク（例えば、エネルギーに富んだ食事の後）、臓器/器官系の二次損傷（例えば、腎臓、目、神経、血管、皮膚）、心血管疾患、血流障害、糖尿病性皮膚感染症、糖尿病性視覚障害、糖尿病性腎症、糖尿病性神経障害、糖尿病性下肢潰瘍、糖尿病性網膜症、糖尿病性動眼神経麻痺、糖尿病性糸球体硬化症、糖尿病性外陰炎、糖尿病性糸球体腎炎、等である。
【００３８】
本発明はまた、太り過ぎの対象、特に太り過ぎのヒト患者における医学的介入のための手段及び方法も提供する。また、高いか又は病理学的に高い体重に関連するか、それにより引起されるか、又はそれに導く疾患／障害の予防又は治療も想定される。
【００３９】
患者の血液における高レベルのトリグリセリド及び／又はコレステロールに関連する疾患又は障害の医学的介入もまた想定される。食事における推薦されるレベルのトリグリセリド（正常範囲内）は、４０〜１６０ｍｇ／ｄＬであり、そして女性においては、３５〜１３５ｍｇ／ｄＬである。推薦されるレベルのコレステロール（正常範囲内）は、１５０〜２２０ｍｇ／１００ｍｌである。
【００４０】
本発明に従って予防されるか又は治療される、特定の非制限的疾患又は障害は、肥満（脂肪過多）、糖尿病（１型又は２型）、高血糖症、高コレステロール血症、インスリン分泌及び/又はインスリン作用の欠陥、及び損なわれたグルコース及び/又はガラクトース耐性から成る群から選択される。
【００４１】
１つの特定の実施形態によれば、肥満は、予防されるか、又は治療されるべきである。別の特定の実施形態によれば、特に１型、又は好ましくは２型糖尿病が、予防されるか、又は治療されるべきである。
【００４２】
より特定には、本発明に従って予防されるか、又は治療されるべき疾患又は障害は、２型糖尿病及び糖尿病前症から成る群から選択され、さらにより特定には、未処理（若干／少々顕著な）２型糖尿病及び未処置（若干／少々顕著な）糖尿病前症から成る群から選択される。
【００４３】
治療されるか、又は予防される他の疾患又は障害は、本明細書の他の箇所に記載されている。当業者／主治医は、本発明の要旨に従って他の病状の治療又は予防、すなわち本明細書に記載されるような活性化合物（例えば、アミノ酸配列ＱＥＰ又はその誘導体から成るか、又は含む（ポリ）ペプチド）の医学的使用の容易な立場にある。
【００４４】
さらに、当業者／主治医は、本発明に従って予防又は治療される疾患及び障害と良く精通している。特に、当業者／主治医は、それらのそれぞれの疾患又は障害を、いかにして診断するか知っており、そして容易に診断できる。
【００４５】
例えば、肥満又は脂肪過多は、特定の生物学的因子により制御される食欲調節、及び／又はエネルギー代謝の障害として通常知られている。病気、例えば糖尿病、高血圧及び心臓病の深刻な危険性の他に、肥満に罹患している個人は社会的に隔離される。肥満は、個人の身体的、社会的及び感情的な幸福に大きな影響を及ぼす。この他に、肥満は、病気、例えば他の心血管疾患及び／又は脳卒中に、さらに導くことができる、２型糖尿病及び／又は高血圧（高血圧症）の高められた危険性を規則的に導く。肥満はまた、癌、性的機能に関する問題、筋肉及び骨障害及び脂質異常症においてその役割を定期的に果たしている。中でも、肥満は、高められた空腹時血漿インスリン、及び／又は経口グルコース摂取に対する誇張されたインスリン応答により特徴づけられ得る（Kolterman (1980), J. Clin. Invest 65, 1272-1284）。さらに、２型糖尿病における肥満の明確な関与が確認され得る（Kopelman (2000), 同上; Colditz (1995), Arch. Int. Med. 122, 481-486）。
【００４６】
通常、当業者／主治医は、患者の肥満度指数（ＢＭＩ）が３０ｋｇ／ｍ２又はそれ以上である場合、「肥満」と言及する。ＢＭＩは通常、平方メートルでの高さにより患者の体重を割ることにより計算される。「太り過ぎ（overveight）」とは通常、その対応する患者のＢＭＩが２５ｋｇ／ｍ２又はそれ以上であることを意味する。他方では、個人は、その個人が年齢、身長、性別及び骨構造に関して、２０％又はそれ以上の余分な体脂肪を有する場合、肥満として見なされる。
【００４７】
従って、１つの実施形態によれば、本発明に従って治療される患者は、２５ｋｇ／ｍ２又はそれ以上のＢＭＩ、特に３０ｋｇ／ｍ２又はそれ以上のＢＭＩを有する。特定の医学的に示される場合、２５ｋｇ／ｍ２以下のＢＭＩを有する患者は、彼らの体重を低めるために治療されるべきであることがまた、想定される。
【００４８】
また、糖尿病又は真性糖尿病は一般的に、高血糖症の共通の基本となる特徴を共有する代謝性障害グループに関連することが知られている。通常、糖尿病における高血糖は、インスリン分泌、インスリン作用、又は最も一般的には、両者の欠陥に帰因する。糖尿病又は真性糖尿病の一般的な意味は、例えばKumar (“Clinical Medicine”, 第3版, 1994, Bailliere Tindall)に記載されている。一般的に、糖尿病は、１型糖尿病、２型糖尿病及び糖尿病前症（グルコース耐性障害）、及び他のもののような疾患又は障害を包含する。
【００４９】
血糖値は通常、非常に狭い範囲、通常７０〜１２０ｍｇ／ｄＬで維持される。糖尿病の診断は通常、次の３種の基準の何れか１つにより血糖値の上昇に注目することにより確立される：
古典的徴候及び症状を伴って、２００ｍｇ／ｇＬ以上のランダムグルコース濃度。
２．１つ以上の機会での１２６ｍｇ／ｄＬ以上の空腹時グルコース濃度。
３．グルコース濃度が、標準の炭水化物負荷の２時間後、２００ｍｇ／ｄＬ以上である、異常経口ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）。
【００５０】
一般的に、（未処置の）前糖尿病を罹患している患者は、約８０〜約１２０ｍｇ／１００ｍｌ、特に約９０〜１１０ｍｇ／１００ｍｌの血中グルコース（及び／又はガラクトース）濃度（非酩酊下で）を有する。通常、そのような患者は、ＯＧＴＴの２時間後、約１４０〜約２００ｍｇ／１００ｍｌの血中グルコース（及び／又はガラクトース）濃度を有するであろう。
【００５１】
一般的に、（未処置の）若干／少々顕著な２型糖尿病を罹患している患者は、約１００ｍｇ／１００ｍｌ以上、特に約１１０ｍｇ／１００ｍｌ以上の血中グルコース（及び／又はガラクトース）濃度（非酩酊下で）を有する。通常、そのような患者は、ＯＧＴＴの約２時間後、約１８０ｍｇ／１００ｍｌ以上、特に約２００ｍｇ／１００ｍｌ以上の血中グルコース（及び／又はガラクトース）濃度を有する。典型的には、２型糖尿病及び特に（未処置の）若干／少々の顕著な２型糖尿病に罹患している患者は、インスリンに対する低められた感受性を有する。
【００５２】
特に、本明細書に開示されるような医薬組成物は、本明細書に記載されるような疾患、障害、合併症及び／又は症状の何れかを、罹患しているか、罹患しようとしているか、又は罹患していると思われる患者に投与されるか、投与されるべきであるか、又は投与されるよう調製され得る。
【００５３】
１つの側面によれば、患者は、（これまで）未処置の患者、すなわち本明細書に記載される疾患、障害、合併症及び／又は症状に関して、他の医薬組成物により処置されていないか、または処置される予定でない患者である。別の側面によれば、患者は、この疾患、障害、合併症及び／又は症状に関して、他の医薬組成物により、既に処置されたか、又は処置されるべきである。従って、本明細書に開示される医薬組成物は、共治療又は共予防（他の医薬組成物による）の場合、特に本明細書に記載されるような疾患、障害、合併症及び／又は症状の共治療又は共予防（他の医薬組成物による）の場合、患者に投与される（されるべきである）か、又は投与されるよう調製されることがまた、本発明に従って想定される。
【００５４】
本発明の未処理の患者の特定例は、前糖尿病又は２型糖尿病、特に若干／少々顕著な前糖尿病又は２型糖尿病を罹患している未処置の患者である。
【００５５】
本明細書に開示される医薬組成物は、１又は２以上の他の糖尿病治療薬、特に異なった作用モードを有する１又は２以上の他の糖尿病治療薬と組合して投与され得る。そのような共治療又は共予防の１つの例は、メトホルミンと組合しての投与であり、特にこの場合、メトホルミン単独での投与が不十分である（メトホルミン単独の投与に関して共通する状況）。そのような共治療又は共予防の例は、スルホニルウレア誘導体と組合しての投与である。別の例は、メトホルミン及びインスリンの両者と組合しての投与である。そのような共治療又は共予防においては、患者に投与されるインスリン（及び／又はメトホルミン）の量／用量は低められ得る。別の例は、腎グルコース（及び／又はガラクトース）トランスポーターＳＧＬＴ２の１又は２以上のインヒビター（例えば、ダパグリフロジン又はカナグリフロジン）と組合しての投与である。そのような併用投与は、血糖レベルの改善された（長期）適応の機会を提供する。
【００５６】
本発明に記載されるような（ポリ）ペプチドはまた、（ｈ）ＲＳ１を表す他のペプチドと組合して、又は本発明に記載されるような１又は２以上の他の（ポリ）ペプチドと組合しても投与され得る。例えば、本発明に記載されるような（ポリ）ペプチド、及び国際公開第２００６／１０５９１３号及び同第２００６／１０５９１２号に記載されるようなＲＲ１フラグメントの全ての可能な組合せが使用されることが想定される。それらの他のペプチドの特定の例は、アミノ酸配列ＯＣＰ、ＯＳＰ、ＱＴＰ、ＱＰＰ、ＱＴＰ及び／又はＳＤＳＤＲＩＥＰから成るか、又はそれらを含む（又はＳＤＳＤＲＩＥＰの少なくとも３種の連続的アミノ酸残基から成るか、又はそれを含む（但し、第２Ｓ残基（Ｓ４５）を含む））ペプチド／タンパク質である。そのような組合せの何れかにおいては、本発明に記載されるような（ポリ）ペプチドの少なくとも１つが含まれることは明白である。単に、本発明に記載されるようなペプチドが使用されることが、特に想定される。
【００５７】
本明細書に開示される医薬組成物はまた、本明細書に記載の疾患又は障害の治療／予防のための別の医薬組成物の代わりに、例えばＧＬＰ１−類似体（例えば、エクセナチド）の代わりに、又はジペプチジルペプチダーゼ４−インヒビター（例えば、シタグリプチン）の代わりに、投与され得る。ＧＬＰ１−類似体及びジペプチジルペプチダーゼ４−インヒビターに比べて、本発明の医薬組成物は、ＧＬＰ１分泌の生理学的刺激（及び得られる効果）が、エネルギーに富んだ食事、エネルギーに富んだ食物の摂取の間又はその後、及び／又はエネルギーに富んだ食餌の間に発生する利点を提供する。従って、本発明の医薬組成物は、より低いか／低められた副作用がまた、この点でも生じる利点を提供する。
【００５８】
言及されたように、上記又は本明細書の他の部分に記載される（共）予防又は（共）治療においては、医薬組成物が高い糖条件下で、特に上記、例えば上記セクション（ｉ）〜（iv）に記載されるように、高い糖条件下で、投与されるか、投与されるべきか、又は投与されるよう調製されることが特に想定される。そのような条件下で、本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチド又は他の活性化合物（又はその医薬的に許容される塩）がまた、例えば糖尿病患者、特に不十分に調整された糖尿病の血清内の高いピークのグルコースを低めるか、滑らかにするか、又は妨げるためにも使用され得る。
【００５９】
体重を減少するためへの、又は体重の上昇を回避することへの、本明細書に記載される活性化合物（例えば、（ポリ）ペプチド、核酸分子又はベクター）の使用がまた想定される。また、この側面によれば、記載される活性化合物は、高い糖条件／状況下で投与されるか、投与されるべきであるか、又は投与されるよう調製される。
【００６０】
一般的に、ＱＥＰ自体、ＱＥＰの誘導体、及び１又は２以上のＱＥＰ及び／又はＱＥＰ誘導体を含む（ポリ）ペプチドが、本発明に従って使用されるべきであることが想定される。
【００６１】
原則として、「ＱＥＰ」又は「ＱＥＰ誘導体」とは、ＱＥＰの立体／化学構造に類似するか、又は同一である立体／化学構造を有する任意の化合物、特に任意のトリペプチドを言及する。ＱＥＰ誘導体はまた、それがオリジナルＱＥＰアミノ酸配列自体、又は複数のアミノ酸残基を有する長い（ポリ）ペプチドに含まれるＱＥＰに類似するか、又は同じ立体／三次構造を有することで特徴づけられる。従って、及び最も好ましくは、ＱＥＰ誘導体は、オリジナルＱＥＰモチーフに比較して、実質的に不変の立体／三次構造を有する。しかしながら、立体／三次構造におけるいくらか（わずかな）差異が、ＱＥＰ活性／機能が維持される限り、可能にされる。当業者は、対応する立体及び／又は三次構造を推定する立場にある。
【００６２】
例えば、「ＱＥＰ誘導体」とは、アミノ酸ストレッチＱＸＰを言及し、ここでＸはＥに類似するアミノ酸又はアミノ酸様化合物である（すなわち、立体（トリ）ペプチド、特にＱＸＰ内にＥの化学／立体構造及び／又は「構造挙動性」に類似するそれらを有する）。Ｘはまた、さらに、Ｅ類似体であるものとして本明細書に言及される。例えば、アミノ酸様化合物は、「アミノ酸」の当業界において知られている定義に該当しないが、しかしアミノ酸のストレッチ、すなわちペプチド／タンパク質中に組込まれ得る化合物であり得る。
【００６３】
本発明における「Ｅ類似体」とは、Ｅの構造特性（立体／化学）（又はリン酸化されたＳ）に類似する構造特性（立体／化学）を有する残基、特にアミノ酸残基を意味する。用語「Ｅ類似体」又は「リン酸化されたＳ類似体」とは特に、何れか他のアミノ酸残基、例えばリン酸化されていないＳの化学構造及び／又は「挙動性」に対してよりもＥ（又はリン酸化されたＳ）自体のそれに対して、より類似する、立体（トリ）ペプチド構造（ＱＸＰ）内のその化学構造及び／又は「挙動性」を有する（アミノ酸）残基を言及する。
【００６４】
当業者は、特定の化合物が用語「Ｅ類似体」及び「リン酸化されたＳ類似体」の意味に該当し、すなわちその化合物が何れか他のアミノ酸、特にリン酸化されていないＳに対してよりも、Ｅ又はリン酸化されたＳ自体に、構造的に及び／又は機能的に、より密接に関連することを容易に推定する立場にある。
【００６５】
本発明の特定のＥ類似体又はリン酸化されたＳ類似体は、Ｅ又はリン酸化されたＳ自体に比較して、短くされるか、ｍ他派伸長される（例えば、−ＣＨ２−残基）、それらのＣ−側鎖であり得る。Ｃ側鎖中のＣ残基は、５個まで、好ましくは３個まで、より好ましくは１又は２個であり得る。短くされるか、又は伸長されたＣ側鎖を有するそのような類似体の１つの例は、Ｅの基本構造を有するが、しかしＣ側鎖中に挿入される１つの追加−ＣＨ２−残基を有する類似体である。
【００６６】
本発明のＸ、特にＥ類似体の特定の例は、リン酸化されたＳ（好ましくは、Ｓチオホスフェート）、Ｄ（アスパラギン酸）（又はＤ類体）、Ｙ（チロシン）（又はＹ類似体）及びＴ（トレオニン）（又はＴ類似体）（例えば、Ｔチオホスフェート）である。Ｘ又はＥ類似体の好ましい例は、Ｓチオホスフェート及びリン酸化されたＳである。原則的に、本明細書に記載されるＥ及びＥ類似体はまた、リン酸化されたＳ類似体、Ｄ類似体、Ｙ類似体及びＴ類似体として見られ得る。本明細書の他の場所での「類似体」に関して、一般的に述べられることは、変更を加えて、本明細書に適用される。特にＥ類似体は、アミド化されたＥ類似体、例えばアミド化されたＤ、アミド化されたＹ及びアミド化されたＴである。特に好ましいＥ類似体は、アミド化されたＥである。
【００６７】
Ｅ類似体、及び本明細書に記載される他のアミノ酸類似体は、それぞれ、それらが開示される（ポリ）ペプチドのＱＥＰモチーフにおけるＥ残基（又はその対応する他の残基）を置換するか、又は開示される（ポリ）ペプチドのＱＸＰモチーフにおいてＸとして挿入される場合、得られる（ポリ）ペプチドは、本明細書に開示される高い糖の条件下で、特に高められた濃度のグルコース及び／又はガラクトースの存在下で、細胞中へのＳＧＬＴ１介在性グルコース及び／又はガラクトースの摂取を低めるか／阻害することができる機能的特性を共有する。
【００６８】
原則的に、上記のように、Ｅ及びＸに関して述べられたことはまた、本明細書に言及されるＱＥＰ誘導体を形成するために、ＱＥＰにおけるＱ及び／又はＰを置換できる何れか他の（アミノ酸）残基にも適用される。本明細書に記載されるＱＥＰ誘導体、例えばＱ類似体及び／又はＰ類似体におけるＱ及び／又はＰを置換するための（アミノ酸）残基の例は、Ｎ（又は別のＮ類似体）及び／又はヒドロキシＰ（又は別のＰ類似体）である。
【００６９】
本発明に従って使用されるＱＥＰ誘導体の特定の例は、下記から成る群から選択される：
（ａ）  ＱＳチオホスフェート−Ｐ;
（ｂ）  ＱＳＰ、ここで Ｓ残基はリン酸化されている;
（ｃ）  ＱＤＰ;
（ｄ）ＱＹＰ;
（ｅ）ＱＴＰ;
（ｆ）ＱＴＰ、ここで Ｔ残基はリン酸化されている;
（ｇ）ＱＴチオホスフェート−Ｐ;
（ｈ）ＮＥＰ;
（ｉ）ＮＳＰ、ここで Ｓ残基はリン酸化されている;
（ｊ）ＮＳチオホスフェート−Ｐ;
（ｋ）ＮＤＰ;
（ｌ）ＱＥ−ヒドロキシＰ;
（ｍ）ＱＤ−ヒドロキシＰ;
（ｎ）ＱＳ−ヒドロキシＰ、ここで Ｓ残基はリン酸化されている;
（ｏ）ＱＳチオホスフェート−ヒドロキシＰ;
（ｐ）別のＥ類似体、又は別のリン酸化されたＳ類似体により置換されたその中間／第２アミノ酸残基を有する（ａ）〜（ｏ）の何れか１つ；
（ｑ）別のＱ類似体により置換されたその第１アミノ酸残基を有する（ａ）〜（ｐ）の何れか１つ；及び
（ｒ）別のＰ類似体により置換されたその最後のアミノ酸残基を有する（ａ）〜（ｑ）の何れか１つ。
【００７０】
本明細書に言及されるようなＱＥＰ誘導体及びＱＥＰはまた、ＱＥＰアミノ酸配列の二次フォーム、例えば構成アミノ酸残基のＤ−及びＬ−イソ形、天然及び非天然の塩、及びアセチル化、アミド化メチル化、グリコシル化及び／又はリン酸化のような修飾を有する二次フォームを含むフォーム、及び類似するか又は同じ質量分析特性を有する物質も包含する。例えば、ＱＥＰアミノ酸配列のアセチル化された、及び特にアミド化されたフォームは、本発明の同じ、及びさらに改善された効果、例えばその対応する非アセチル化又は非アミド化フォームとして、グルコース及び／又はガラクトース摂取に対する同じか又は改善された効果を有する。従って、本明細書に定義される（ポリ）ペプチドの二次修飾／フォームもまた、本発明の一部である。原則的に、本明細書において言及されるようなＱＥＰ誘導体はまた、１又は２以上のそれらの反応性基での（少々の）修飾を任意には伴っての本明細書に記載されるトリペプチド自体（例えば、ＱＥＰ）も包含する。ＱＥＰ誘導体又はＱＥＰ、又はそれを含む（ポリ）ペプチドの特に好ましいフォームは、アミド化されたＱＥＰ誘導体又はＱＥＰ、又はそれを含む（ポリ）ペプチドである。特に、そのようなＱＥＰ誘導体、ＱＥＰ、又は（ポリ）ペプチドに含まれるようなＥ又はＥ類似体は、アミド化されることが想定される。
【００７１】
それらから成るか、又は含む、ＱＥＰ又はＱＥＰ誘導体、又は（ポリ）ペプチドは、疎水性にされ得る。そのような疎水性ペプチドは、（生物学的）膜を通過することができる。例えば、ＱＥＰは、対応する疎水形を得るために、アンテナペディアタンパク質（又はそのフラグメント）とカップリングされ得る：また、Derossi (1994), J. Biol. Chem. 269, 10444-10450を参照のこと。
【００７２】
１つの実施形態によれば、ＱＥＰ又はＱＥＰ誘導体は、（ヒト）ペプチド−プロトンシンポーター、例えば（ｈ）ＰＥＰＴ１（及び／又は（ｈ）ＰＥＰＴ２）のための基質と機能することができる全てのそのようなトリペプチド又は類似する物質を包含する。そのようなトリペプチド又は物質の分子構造は、当業者により推定され得、そして例えばDaniel (2004), Pflugers Arch. 447, 610-618に記載されている。（ｈ）ＰＥＰＴ１（及び／又は（ｈ）ＰＥＰＴ２）のための基質としてのそのようなトリペプチド又は物質の機能についての対応するスクリーニングアッセイは、例えばDaniel（2004）同上から当業者により容易に推定され得る。
【００７３】
ＱＥＰペプチドについて本明細書において特徴づけられる実施形態は、本明細書に記載されるＱＥＰ誘導体、特に本明細書に例示されるＱＥＰ誘導体にも適用されることは理解されるべきである。
【００７４】
一般的に、本発明のＱＥＰ誘導体は、特に高糖条件下での次の特徴の少なくとも１つを有することが想定される：
（ａ）その活性状態での（ｈ）ＲＳ１の機能／活性（但し、ＯＣＴ２，ＣＮＴ１及びＣＮＴ３を阻害しない）（また、セクション（Ａ）〜（Ｄ）、下記を参照のこと）；
（ｂ）ペプチドトランスポーター、例えば（ｈ）ＰＥＰＴ１により輸送できる；
（ｃ）ＯＤＣへの結合／との相互作用（インビボ又はインビトロ）；及び
（ｄ）ＯＤＣ発現／活性の阻害／低減（インビボ又はインビトロ）。
【００７５】
本発明においては、「ＲＳ１」とは特に、その活性状態で、天然に存在するＲＳ１の機能／活性を有するポリペプチドを言及する。例えば、そのような「ＲＳ１」は、例えば、配列番号２のアミノ酸配列により、又はその活性状態で、天然に存在するｈＲＳ１の機能／活性を有するそのフラグメントにより特徴づけられるように、（十分な長さ）ヒトＲＳ１（ｈＲＳ１）であり得る。
【００７６】
調節タンパク質ＲＳ１は、当業界において知られている（例えば、Veyhl (1993), J. Biol. Chem. 268, 25041-25053; Koepsell (1994), J. Membrane Biol. 138, 1-11; Lambotte (1996), DNA and Cell Biology 15, 9, 769-777; Valentin (2000), Biochimica et Biophysica 1468, 367-380; Korn (2001), J. of Biological Chemistry 276, 48, 45330-45340; Veyhl (2003), J. Membrane Biol. 196, 71-81; Osswald (2005), Mol Cell Biol. 25, 78-87を参照のこと）。次のものが特に知られている：ヒトＲＳ１ （ｈＲＳ１）、受託番号第ＮＭ＿００６５１１ 号又は第 Ｘ８２８７７号;ブタ ＲＳ１、受託番号第ＮＭ＿２１３７９３号 又は 第Ｘ６４３１５号; マウスＲＳ１、受託番号第Ｙ１１９１７号及びウサギＲＳ１、受託番号第Ｘ８２８７６号。ヒトＲＳ１（受託番号第ＮＭ＿００６５１１号、 第Ｘ８２８７７号; Lambotte (1996), DNA and Cell Biology 15, 9, 769-777）は、ブタからのＲＳ１（受託番号第ＮＭ＿２１３７９３号、第Ｘ６４３１５号、 Veyhl (1993), J. Biol. Chem. 268, 25041-25053.）に対して７５％のアミノ酸同一性を有する、６１７個のアミノ酸から成る。他の相同体ＲＳ１タンパク質は、ウサギ(受託番号第Ｘ８２８７６号) 又はマウス(受託番号第Ｙ１１９１７号)からである。ｈＲＳ１タンパク質は、配列番号１で示されるような核酸によりコードされる配列番号２で例示的に示されている。ヒトＲＳ１内に、本明細書において言及されるようなＳＤＳＤＲＩＥＰモチーフはアミノ酸位置４３−５０からであり、そして本明細書に言及されるようなＱＳＰモチーフは、ｈＲＳ１に２度、存在し、すなわちアミノ酸位置１９−２１及び９１−９３（配列番号２及び６を参照のこと）からである。ＲＳ１は、（ｉ）ヒトナトリウム−Ｄ−グルコースコトランスポーターｈＳＧＬＴ１及びいくつかの他の細胞膜トランスポーターを、後転写的に阻害し（Veyhl (2003), J. Membrane Biol. 196, 71-81）、（ii）細胞内及び核内に位置し（Osswald (2005), Mol Cell Biol. 25, 78-87）、そして（iii）ＳＧＬＴ１の転写を阻害する（Korn (2001), J. Biol. Chem. 276, 45330-45340）。
【００７７】
例えば、本発明に従っての活性状態（ｈ）ＳＲ１機能／活性は、次の機能／活性の少なくとも１つである：
（Ａ）ＳＧＬＴ１発現及び／又は活性（特に、Ｎａ＋−Ｄ−グルコース及び／又はガラクトース輸送）の（高い選択性の）低減／阻害；
（Ｂ）小腸中へのグルコース及び／又はガラクトース摂取（特に、ＳＧＬＴ１により介在されるような）の（高い選択性の）低減／阻害；
（Ｃ）ＯＤＣへの結合／ＯＤＣとの相互作用（インビトロ又はインビボ）；及び
（Ｄ）ＯＤＣ発現／活性の阻害／低減。
【００７８】
しかしながら、言及されたように、本明細書に記載される（ポリ）ペプチドは、内因性（ｈ）ＲＳ１とは、それらが高い糖の条件下でさえ、特に高／高められた（細胞内）グルコース及び／又はガラクトース濃度の存在下で上記機能／活性を示すことにおいて、異なる。
【００７９】
ＳＧＬＴ１発現及び／又は活性（（Ａ）、上記）及び／又は小腸中へのグルコース及び／又はガラクトース摂取（（Ｂ）、上記）の（高い選択性の）低減／阻害は、高い糖の条件／状況下で（例えば、生来の／内因性ＲＳ１が阻害される場合）、通常のＳＧＬＴ１発現／活性及びグルコース／ガラクトース摂取に、それぞれ比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％ 又は８０％であり得る。
【００８０】
当業者は、所定の（ポリ）ペプチド（例えば、ＱＥＰ誘導体）が、特に高い糖の条件下で、活性状態（ｈ）ＲＳ１機能／活性を有するかどうかを、当業界において知られている（例えば、国際公開第２００６／１０５９１３号及び第２００６／１０５９１２号）又は本明細書及び付随する実施例に提供される方法により、試験する容易な立場にある。
【００８１】
本発明に従って、有用なＱＥＰ誘導体を同定し、そして／又は確認するために、さらなるいくつかの公知の技法が使用され得る。それらの技法は、例えば、ゲル内消化、電気溶出方法、マイクロシークエンシング、アミノ酸分析、エドマン配列決定又は質量分析法である。また、結晶学的方法も使用され得る。いくつかの技法は直接、ゲルから開始し、他の技法は、ブロティングによる膜への移送を必要とする。中でも、最初のグループは、共電気泳動、位置のインターネット比較、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによるペプチドマッピング（Cleveland (1977), J. Biol. Chem. 252, 1102）、エドマン分解によるタンパク質溶出及びＭＡＬＤＩ−ＭＳ又はＮ末端配列決定（Edman (1950), Acta Chem. Scand. 4, 283）、酵素ゲル内消化、質量分析法による混合物中のペプチドの直接的分析、ペプチドマスフィンガープリンティング（Pappin (1993), Curr. Biol. 3, 327）、ＥＳＩ−ＭＳ（エレクトロスプレーイオン化ＭＳ）、ＭＡＬＤＩ  ＰＭＦ及び／又はＭＡＬＤＩ  ＰＤＳ（例えば、PSD-MALDI-MS (Spengler (1992), Rapid Commun. Mass Spectrom. 6, 105)）を包含する。ＭＡＬＤＩ−ＭＳのためのマトリックスとして、ニコチン酸、２，５−ジヒドロキシ安息香酸、又はα−シアノ−４−ヒドロキシ桂皮酸が使用される。
【００８２】
特定の側面によれば、本明細書に従って使用される（そして、少なくともＱＥＰ又はＱＥＰ誘導体を含む）（ポリ）ペプチドは、多くとも１００個のアミノ酸、特に連続アミノ酸、より特定には、多くとも７８又は多くとも８３個のアミノ酸、特に連続アミノ酸から成る。例えば、（ポリ）ペプチドは、多くとも３、６、１１、１４、２０、４０、６０、７５又は８０（連続）個のアミノ酸から成る。しかしながら、一般的に、より長いアミノ酸もまた、想定される。
【００８３】
本発明に従って使用される（そして、少なくともＱＥＰ及び／又はＱＥＰ誘導体を含む）特定の（ポリ）ペプチドは、下記から成る群から選択され得る：
（ａ）アミノ酸配列ＱＥＰ、又は本明細書に定義されるような、その誘導体により置換される、その最初／Ｎ末端グルタミン−セリン−プロリン（ＱＳＰ）モチーフを少なくとも有するＲＳ１の調節ドメイン（ＲＳ１−Ｒｅｇ）を含むか又はそれから成るポリペプチド；
（ｂ）ＲＳ１−Ｒｅｇに対して少なくとも約２５％、３５％、５０％、６０％、７０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％ 又は １００％同一であり、そしてアミノ酸配列ＱＥＰ、又は本明細書に定義されるようなその誘導体により置換されるＲＳ１−Ｒｅｇの最初／Ｎ末端ＱＳＰモチーフを少なくとも有するポリペプチドを含むか又はそれから成るポリペプチド；
（ｃ）ＲＳ１−Ｒｅｇをコードする核酸分子の相補鎖に対して、緊縮条件下でハイブリダイズする核酸分子によりコードされるポリペプチド（前記ポリペプチドは、アミノ酸配列ＱＥＰ、又は本明細書に定義されるようなその誘導体により置換される前記ＲＳ１−Ｒｅｇの最初／Ｎ末端ＱＳＰモチーフを少なくとも有する）を含むか、又はそれから成るポリペプチド；
（ｄ）下記式Ｉ：
ｘｎ−Ｑ−Ｅ−Ｐ−ｘｍ      （Ｉ）
［式中、ｘはアミノ酸であり、ｎは０〜３、好ましくは３の整数であり、そしてｍは０〜７７（好ましくは、７７）の整数、又は０〜７２（好ましくは、７２）の整数である］で表されるポリペプチドを含むか、又はそれから成るポリペプチド；
（ｅ）本明細書に定義されるようなＱＥＰの誘導体により置換されたＱＥＰモチーフを有する、式Ｉのポリペプチドを含むか、又はそれから成るポリペプチド；
（ｆ）（ａ）〜（ｅ）の何れか１つのポリペプチドのフラグメントを含むか、又はそれから成るポリペプチド、ここで前記ポリペプチドは、アミノ酸配列ＱＥＰ又は本明細書に定義されるようなその誘導体を含む。
【００８４】
本明細書に記載されるＲＳ１−Ｒｅｇは、マウスＲＳ１−Ｒｅｇ（ｍＲＳ１−Ｒｅｇ）、又は好ましくは、ヒトＲＳ１−Ｒｅｇ（ｈＲＳ１−Ｒｅｇ）であり得る。ｈＲＳ１−Ｒｅｇは配列番号６で示されるようなアミノ酸配列を有し、そしてｍＲＳ１−Ｒｅｇは配列番号８で示されるようなアミノ酸配列を有する。本発明に従って使用される特定のポリペプチドは、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（例えば、配列番号６で示されるような）に対して少なくとも約２４．１％、３６．２％、４８．２％、６０．３％、７２．３％、８４．４％、９０．４％、９６．４％、又はさらに１００％同一であり（より高い値が好ましい）、又はｍＲＳ１−Ｒｅｇ（例えば、配列番号８で示されるような）に対して少なくとも約２５．６、３８．５％、５１．３％、６４．１％、７６．９％、８９．７、９６．２％、又はさらに１００％同一であり（より高い値が好ましい）、そしてアミノ酸配列ＱＥＰ又は本明細書に定義されるようなその誘導体により置換された、それぞれ、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ及びｍＲＳ１−Ｒｅｇの最初の／Ｎ末端ＱＳＰモチーフを少なくとも有するポリペプチドを含むか又はそれから成るポリペプチドであり得る。ｈＲＳ１−Ｒｅｇに関しては、上記％の値は、それぞれ、少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、７５、８０及び ８３個のアミノ酸残基に対応する。ｍＲＳ１−Ｒｅｇに関しては、上記％の値は、それぞれ、少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、７５ 及び７８個のアミノ酸残基に対応する。
【００８５】
本発明に従って使用されるポリペプチドの特定の例は、ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）、及び好ましくはｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）、特に、それぞれ配列番号１０及び９で示されるようなｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）及びｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）である。
【００８６】
本発明においては、「ハイブリダイズする（hybridizing）」とは、ハイブリダイゼーションが、１つの核酸分子と別の（相補的）核酸分子との間で生じることができることを意味する。２種の核酸分子のハイブリダイゼーションは通常、従来のハイブリダイゼーション条件下で生じる。本発明においては、緊縮ハイブリダイゼーション条件が好ましい。ハイブリダイゼーションは、例えばSambrook and Russell (2001), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, CSH Press, Cold Spring Harbor, NY, USAに記載されている。特定の実施形態によれば、「ハイブリダイズする」とは、ハイブリダイゼーションが下記条件下で生じることを意味する：
ハイブリダイゼーション緩衝液：
２ ｘ ＳＳＣ、好ましくは １ ｘ ＳＳＣ; １０ ｘデンハルト液(Ｆｉｋｏｌｌ ４００ ＋ ＰＥＧ ＋ ＢＳＡ; 比 １：１：１); ０．１％ ＳＤＳ; ５ ｍＭ ＥＤＴＡ; ５０ ｍＭ のＮａ２ＨＰＯ４;
２５０ μg/mlのニシン精子ＤＮＡ; ５０ μｇ/ｍｌ の ｔＲＮＡ; 又は
０．２５ Ｍ のリン酸ナトリウム緩衝液, ｐＨ ７．２;
１ ｍＭの ＥＤＴＡ
７％ ＳＤＳ
ハイブリダイゼーション温度Ｔ＝６０℃、好ましくは６５℃
洗浄緩衝液：２ ｘ ＳＳＣ、好ましくは １ ｘ ＳＳＣ、より好ましくは０，１ ｘ ＳＳＣ; ０．１％ ＳＤＳ
洗浄温度Ｔ＝６０℃、好ましくは６５℃
【００８７】
上記に示されるような式Ｉの好ましいバージョンは、下記式Ｉａである：
ｘｎ−Ｑ−Ｅ−Ｐ−ｘｌ−Ｓ−Ｄ−Ｓ−Ｄ−Ｒ−Ｉ−Ｅ−Ｐ−ｘｋ−Ｑ−Ｓ−Ｐ−ｘｊ (Ｉａ)
式中、ｘは任意のアミノ酸であり、ｎは０〜３（好ましくは、３）の整数であり、ｌは０〜２１（好ましくは、２１）の整数であり、ｋは０〜４０（好ましくは、４０）の整数、又は０〜３５（好ましくは、３５）の整数であり、そしてｊは０〜５（好ましくは、５）の整数である。式Ｉａのポリペプチドにおいては、ＳＤＳＤＲＩＥＰ及びＱＳＰモチーフの１又は２以上のＳ残基は、本明細書に記載されるようなＥ又はＥ類似体により置換され得る。好ましいＳ→Ｅ置換は、ＳＤＳＤＲＩＥＰモチーフにおける第２のＳ（ｍＲＳ１のＳ４５）の置換である。従って、式Ｉ又はＩａの好ましいポリペプチドは、ＳＤＥＤＲＩＥＰを含む。そのようなポリペプチドの例は、本明細書及び付随する実施例に記載されるようなｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ｅ）である。
【００８８】
式Ｉ及びＩａのポリペプチドにおいては、１又は２以上のＱＥＰ（及びＱＳＰ）モチーフが、本明細書に記載されるようなＱＥＰ誘導体により置換され得る。式Ｉ及びＩａの何れかにおいては、「Ｘａ」はＸＳＧ（Ｘは任意のアミノ酸である）、好ましくはＰＳＧ、又はより好ましくはＳＳＧであり、そして／又は「Ｘｍ」はXVGXPXSLARSVSASXCXIKPXDXXXIEXXAXXAXKASAEFQXNSXKXXXXXLQXLXDXASSAX(HAPTD)QSXAMPXX（Ｘは任意のアミノ酸である）、好ましくはEVGSPTSLARSVSASVCAIKPGDPNSIESLAMEATKASAEFQTNSKKTDPPPLQVLPDLASSAEQSLAMPFH、又はより好ましくはDVGNPMSLARSVSASVCPIKPSDSDRIEPKAVKALKASAEFQLNSEKKEHLSLQDLSDHASSADHAPTDQSPAMPMQ、又は上記アミノ酸ストレッチの何れかと、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０又は７５個の同一のアミノ酸残基を共有するアミノ酸ストレッチである。「Ｘｌ」は、XVGXPXSLARSVSASXCXIKP（Ｘは任意のアミノ酸である）、好ましくはEVGSPTSLARSVSASVCAIKP、又はより好ましくは、DVGNPMSLARSVSASVCPIKP、又は上記アミノ酸ストレッチの何れかと、少なくとも５、１０、１５又は２０個の同一アミノ酸残基を共有するアミノ酸ストレッチである。「Ｘｋ」は、XAXXAXKASAEFQXNSXKXXXXXLQXLXDXASSAX(HAPTD)（Ｘは任意のアミノ酸である）、好ましくはLAMEATKASAEFQTNSKKTDPPPLQVLPDLASSAE、又はより好ましくはKAVKALKASAEFQLNSEKKEHLSLQDLSDHASSADHAPTD、又は上記アミノ酸ストレッチの何れかと、少なくとも１０、２０、３０、３５又は３８個の同一のアミノ酸残基を共有するアミノ酸ストレッチである。「Ｘｊ」は、ＡＭＰＸＸ（Ｘは任意のアミノ酸である）、好ましくはＡＭＰＦＨ、又はより好ましくはＡＭＰＭＱ、又は上記アミノ酸ストレッチの何れかと、少なくとも１、２、３又は４個のアミノ酸ストレッチを共有するアミノ酸ストレッチであり得る。「Ｘｊ」又は「Ｘｎ」は、ｈＲＳ１又はｍＲＳ１のそれぞれのアミノ酸配列ストレッチ（それぞれ、アミノ酸９４〜１０３及び８８〜９７、及びそれぞれ、アミノ酸９〜１８及び８〜１７）の少なくとも1、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のアミノ酸残基、好ましくは連続アミノ酸残基を含むことができる。
【００８９】
本明細書に言及されるポリペプチド又はポリペプチドのフラグメントは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、 ７０、７５又は８０個のアミノ酸、好ましくは連続アミノ酸から少なくとも成ることができる。何れの場合でも、ポリペプチド又はポリペプチドフラグメントは、少なくとも１つのＱＥＰモチーフ又はＱＥＰ誘導体を含む。ポリペプチド又はポリペプチドフラグメントはさらに、追加のＱＥＰ、ＱＳＰ、ＳＤＳＤＲＩＥＰ及び／又はＳＤＥＤＲＩＥＰモチーフを含むことができる。好ましくは、ポリペプチド又はポリペプチドフラグメントは、１つのＱＥＰ、１つのＳＤＳＤＲＩＥＰ又は１つのＳＤＥＤＲＩＥＰ及び１つのＱＳＰモチーフ（より好ましくは、この順序で）を含む。さらに、ポリペプチド又はポリペプチドフラグメントは、少なくとも１つのＱＥＰモチーフ、又はＱＥＰ誘導体、及びさらに、１又は２以上の「Ｘｎ」、「Ｘｌ」、ＳＤＳＤＲＩＥＰ又はＳＤＥＤＲＩＥＰ、「Ｘｋ」、ＱＳＰ、「Ｘｊ」及び「Ｘｍ」を、好ましくは前記式Ｉ又はＩａにおける順序を反映する順序で含むことができる。
【００９０】
予測されるリン酸化部位における追加のセリン残基が例えば、アラニン又はアラニン類似体（リン酸化を防ぐ）、又はグルタミン酸又はグルタミン酸類似体（リン酸化を模倣する）に突然変異されているＲＳ１−Ｒｅｇ（例えば、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）又はｍＲＳ１（Ｓ１９Ｅ））の修飾が行われることもまた、本明細書において想定される。
【００９１】
従って、１つの実施形態によれば、本明細書に記載されるようなポリペプチド又はそのフラグメントの１又は２以上の（予測される）リン酸化部位のＳ残基は、アラニン（Ａ），グルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、リン酸化されたＳ、チオリン酸化されたＳ、リン酸化されたＴ及び／又はチオリン酸化されたＴ、及び／又は別のＥ類似体、Ｄ類似体又はリン酸化されたＳ類似体に突然変異され得る。本明細書の他の場所に、それぞれの類似体に関して述べられて来たことはまた、必要な変更を加えて、本明細書に適用される。特定の（予測される）リン酸化部位は、当業界において知られている。そのような（予測される）リン酸化部位は、ＲＳ１−Ｒｅｇのそれらの部位である。ｈＲＳ１−Ｒｅｇ及びｍＲＳ１−Ｒｅｇの（予測される）リン酸化部位の特定の例が、図１及び６に列挙されている。これに関して、最も好ましいリン酸化部位は、ＳＤＳＤＲＩＥＰモチーフに存在するそれらの部位、特にこのモチーフの２番目のＳ残基を含むリン酸化部位である。
【００９２】
１つの実施形態によれば、本明細書に記載されるポリペプチドは、アミノ酸配列ＱＥＰにより、又は本明細書に定義されるようなその誘導体により置換された、その最初／Ｎ末端グルタミン−セリン−プロリン（ＱＳＰ）モチーフを少なくとも有する全体／完全長のＲＳ１を含むか、又はそれから成る。ｈＲＳＬは、配列番号２で示されるようなアミノ酸配列を有し、そしてｍＲＳ１は、配列番号４で示されるようなアミノ酸配列を有することができる。しかしながら、本明細書に記載されるポリペプチドは、全体／完全長のＲＳ１から成らず又はそれも含まないことは、本発明において好ましい。
【００９３】
特に、上記に（又は本明細書の他の場所に）定義され、そして記載される（ポリ）ペプチド及びフラグメントの何れか（及び他の活性化合物の何れか）、例えばＱＥＰ、ＱＥＰ誘導体、ＱＥＰ及び／又はＱＥＰ誘導体を含む（ポリ）ペプチド、そのフラグメント、それをコードする核酸分子、前記核酸分子を含むベクターは、
（ｉ）高い糖の条件下で、特に高められた濃度のグルコース及び／又はガラクトースの存在下で、細胞中へのグルコース及び／又はガラクトース（ＳＧＬＴ１−介在性）摂取を低め／阻害し；そして／又は
（ii）ＱＥＰ誘導体及び活性状態の（ｈ）ＲＳ１に関して、上記に記載されるような他の特徴及び／又は機能／活性の何れかを低め／阻害することができることが想定される。
【００９４】
本明細書に記載される（ポリ）ペプチド又はそのフラグメントは、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ；例えばUniProtKB下でアクセスできるＯＤＣ：P11926）に結合し、そして／又はそれと相互作用する（インビボ又はインビトロで）ことがさらに想定される。より特定には、本明細書に記載される（ポリ）ペプチドは、ＯＤＣ発現及び／又は活性を低め／阻害することができることが想定される。本発明に従って、本明細書に記載される（ポリ）ペプチド又はフラグメントの何れかにプロセッシングされ得るタンパク質又は（ポリ）ペプチド（又は他の化合物）の使用もまた、想定される。
【００９５】
「〜にプロセッシングされ得る（can be processed into）」とは、追加の（アミノ酸）残基を含むことができるタンパク質又は（ポリ）ペプチドが、切開され、切断され、短くされ、消化されるか、又は他方では、その対応する工程／反応により（化学的に）修飾され、結果的に、少なくとも１つのＱＥＰ又はＱＥＰ誘導体（又は（ポリ）ペプチド又はフラグメント）が開放され／得られることを意味する。その対応する工程は、化学的に又は酵素的に駆動され得る。酸素的に駆動される工程についての例は、タンパク質分解駆動工程、すなわち少なくとも１つのＱＥＰ又は他の（ポリ）ペプチドが開放され／得られるよう、プロテアーゼがタンパク質又は（ポリ）ペプチドを切断する工程である。
【００９６】
「プロセッシング（processing）」とは、対象の消化において生じる（例えば、胃又は小腸における（タンパク質分解性）切断による）。これは、本発明の（ポリ）ペプチド（例えば、本明細書に開示される医薬組成物又は食用物の形での）は、前駆体の形で、すなわちＱＥＰストレッチ又はその誘導体の他に（アミノ酸）残基を含むか、又はいくつかのＱＥＰストレッチ又はその誘導体を含むタンパク質又は（ポリ）ペプチドの形で投与され得る。次に、前記前駆体は、ＱＥＰストレッチ又はその誘導体に（タンパク質分解的に）プロセッシングされる。理論的に束縛されるものではないが、次に、前記ＱＥＰストレッチ又は誘導体がＰＥＰＴ１により摂取され、そして細胞内のグルコース／ガラクトース摂取に対するその効果を発揮する。
【００９７】
本明細書に提供される長いタンパク質又は（ポリ）ペプチドの特定の（アミノ酸）構造がＱＥＰ又はその誘導体中への前記ペプチドのプロセッシングを可能にすることが特に想定される。このためには、前記長いタンパク質/（ポリ）ペプチドは、交互に（タンパク質分解的に）切断でき、且つ非タンパク質分析的に切断できる（ペプチド）結合のパターンを有することができ、ここで前記切断できる結合は前記含まれるＱＥＰストレッチ又は誘導体間に／その外部に存在し、そして非切断できる結合はその内部にある。対応するペプチド及び結合の例は、本明細書の他の場所に提供される。
【００９８】
本発明に従ってプロセッシングされ得るタンパク質及び（ポリ）ペプチドは、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の追加のアミノ酸残基を含むことができる。しかしながら、本明細書に定義されるＱＥＰ又はその誘導体を含む、長いアミノ酸ストレッチもまた想定される。従って、前記タンパク質又は（ポリ）ペプチドは、少なくとも３、５、 ７、９、１１、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、又は少なくとも１００個のアミノ酸残基を含むことができる。また、多くとも１５０個のアミノ酸残基、好ましくは多くとも１２０個のアミノ酸残基が想定される。しかしながら、本発明によれば、例えば３〜１２個のアミノ酸残基のより短い（ポリ）ペプチドが好ましく、３〜１０個のアミノ酸残基の（ポリ）ペプチドがより好ましい。
【００９９】
本発明によれば、ＱＥＰ又はその誘導体中にプロセッシングされ得るタンパク質又は（ポリ）ペプチドはまた、融合コンストラクト、例えば融合タンパク質でもあり得る。  それらの融合コンストラクト／タンパク質及び対応する実施形態が下記に、より詳細に記載される。
【０１００】
本発明によれば、「ペプチド」は、反復体／タンデムの形でＱＥＰモチーフ（又はその誘導体）を含むこともまた想定される。従って、QEPQEP、QEPQEPQEP、等のようなモチーフであるか、又は含む（合成又は組換え）ペプチドもまた、想定される。前記ＱＥＰモチーフは、（ポリ）ペプチド内で２、３、４、５、６、７、８、９又はそれ以上の回数、反復され得る。反復されたストレッチは、例えば、他のアミノ酸残基のスペーサー／リンカーにより中断され得る。従って、反復された配列は、形式「QEPXQEP」、「QEPXQEPXQEP」、等のものであり得る。原則的に、「Ｘ」は任意の（アミノ酸）残基、及び任意の数の（アミノ酸）残基を表すことができる。例えば、「Ｘ」は、アミノ酸残基Ａ（アラニン）、Ｋ（リシン）又はＲ（アルギニン）から成る群から選択される。好ましくは、リンカー／スペーサーアミノ酸残基の数は少なくとも１である。より好ましくは、リンカー／スペーサーアミノ酸残基の数は、２又は３である。前記数は、１、４、５、６、７、８、９又は１０、又はそれ以上でもあり得る。Ｑ−Ｅ−Ｐ又はその誘導体の反復体／タンデムから成るか又はそれらを含むペプチドはまた、１５０個以上のアミノ酸を含むことができることが特に想定される。
【０１０１】
上記のような（ポリ）ペプチドの「Ｘ」は、切断可能部位、例えば加水分解により切断できる（例えば、ヒドロラーゼにより触媒される）部位でもあり得る。特に、「Ｘ」は、Ｓ−Ｓであり得る。さらに、「Ｘ」は、例えば、対応するエステラーゼにより切断できるエステル結合であり得る。ＱＥＰモチーフ（又はその誘導体）を中断するスペーサー／リンカー、例えば「Ｘ」は、本発明に従って、ＱＥＰモチーフ（又はその誘導体）中に、それらのスペーサー／リンカー及びモチーフを含む、その対応する（ポリ）ペプチドをアクセス可能にすることが特に想定される。「Ｘ」の１つの特定の例は、ＰＳ又はＳＰ、又は国際公開第２００８／１５５１３４号に記載されるようなスペーサー／リンカーの何れか他のもの（「第２のドメイン」）であるか、又はそれを包含する。
【０１０２】
本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチドにおいては、ＱＥＰモチーフ（又はその誘導体）、又はその反復体／タンデムが、さらなるアミノ酸、異種ペプチド及び／又は異種タンパク質に結合され得る（例えば、国際公開第２００８／１５５１３４号に開示される「第２度メイン」を参照のころ）。前記さらなるアミノ酸、ペプチド又はタンパク質はまた、１又は２以上のＲＳ１フラグメント、例えば国際公開第２００６／１０５９１３号及び第２００６／１０５９１２号に開示されるそれら、及び前記ＲＳ１フラグメントと、本明細書に記載されるＱＥＰペプチド又はその誘導体とのすべての可能な組合せを含むこともできる。さらに、前記さらなるアミノ酸、異種ペプチド及び／又は異種タンパク質は、追加の官能基を有するドメイン、例えばタンパク質精製のためのさらなる薬理学的効果又は特異的標識、例えばＨｉｓ−標識を提供するドメインを含むか、それらから誘導されるか、そして／又はそれらから成ることができる。従って、本明細書に定義されるような（ポリ）ペプチド又はＱＥＰストレッチ又はその誘導体はまた、融合ポリペプチド又は融合タンパク質の一部でもあり得る。本発明によれば、本明細書に定義されるようなペプチド又はＱＥＰモチーフ、又はその誘導体を含む前記融合ポリペプチド又は融合タンパク質はまた、１００個以上又は１５０個以上のアミノ酸も含むことができる。
【０１０３】
用語「ＱＥＰ」又は「ＱＥＰ誘導体」とはまた、（タンパク質分解的に）切断できない、例えばその対応するタンパク質又は（ポリ）ペプチドが本発明に従って前記ＱＥＰ又はその誘導体にプロセッシングされる場合、切断できない、少なくとも１つの、好ましくは両者の、（共有）結合により置換される内部ペプチド結合を有するＱＥＰ又はその誘導体に関する。そのような共有結合は例えば、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ（ＯＨ）−、‐Ｃ＝Ｏ−ＣＨ２−、−ＣＨ２−Ｃ＝Ｏ−、−ＣＨ（ＯＨ）−Ｃ＝Ｏ−、‐ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ（ＯＨ）＝ＣＨ２−、−ＣＨ＝Ｃ（ＯＨ）−、Ｃ（ＯＨ）＝Ｃ（ＯＨ）−、‐Ｎ＝ＣＨ−、‐Ｎ＝Ｃ（ＯＨ）−（ＯＨ）−から成る群から選択され得る。好ましくは、そのような共有結合は、例えばＣＨ２−Ｃ＝Ｏ−、−ＣＨ（ＯＨ）−Ｃ＝Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、‐ＣＨ＝Ｃ（ＯＨ）−、Ｃ（ＯＨ）＝Ｃ（ＯＨ）−、−Ｎ＝Ｃ（ＯＨ）−から成る群から選択され得る。そのような結合は、さらなる（タンパク質分解性）消化に対して、Ｑ−Ｅ−Ｐ又はその誘導体を不活性にし、そして従って、消化管内でのその機能性を保持する。上記で指摘されたように、本発明の（ポリ）ペプチドはまた、いくつかのＱＥＰモチーフ又はその誘導体を含むことができ、ここで前記ＱＥＰモチーフは、例えば形式「（...）ＱＥＰＱＥＰ（...）」で、お互いに直接結合されているか、又は前記ＱＥＰモチーフは、例えば形式「（...）ＱＥＰＸＱＥＰ(...)」で、リンカー／スペーサー構造及び／又は追加のアミノ酸残基により分離される（前記「Ｘ」は少なくとも１つの追加の（アミノ酸）残基を示す）。そのようなペプチドにおいては、上記に言及され、そして定義される（タンパク質分解的に）非切断可能（ペプチド／共有）結合が好ましくは、ＱＥＰモチーフの「Ｑ」と「Ｅ」との間に、及び／又は「Ｅ」と「Ｐ」との間に、又はその対応するＱＥＰ誘導体のその対応する（アミノ酸）残基間に含まれる。「Ｘ」と「Ｑ」との間の及び／又は「Ｐ」と「Ｘ」との間の結合は好ましくは、例えばその対応する「ペプチド」が本発明に従ってＱ−Ｅ−Ｐストレッチ又はその誘導体中にプロセッシングされる場合、（タンパク質分解的に）切断できる（ペプチド／共有）結合である。従って、本明細書に定義されるような長い（ポリ）ペプチドは、インビボで（例えば、胃液により胃中に投与された後、（小）腸において、又は血液において）、タンパク質分解的に切断されることが想定され、それにより、「Ｑ」と「Ｅ」との間に、及び「Ｅ」と「Ｐ」との間に含まれるタンパク質分解的に切断できない結合は切断されず、本発明の手段、方法及び使用において特に有用である「タンパク質分解的に不活性な」ＱＥＰトリペプチドを導く。上記で言及されたように、上記実施形態は、明確なＱＥＰトリペプチドにも、またその誘導体にも制限されない。
【０１０４】
前記含まれるＱＥＰペプチド又はその誘導体がそのような不活性結合を有さず、従って（タンパク質分解的に）切断できないことが、本明細書に定義される長いタンパク質又は（ポリ）ペプチド（例えば、ＰＥＰＴ１及び／又はＰＥＰＴ２により摂取され得ない）について特に想定される。次に、それらの不活性ＱＥＰペプチドは、損なわれないまま存続し（例えば、胃及び／又は（小）腸の通過の間）、ところが前記ペプチドを端に有する（アミノ酸）残基／アミノ酸ストレッチは（タンパク質分解的に）切断される。これは、消化管内に正確に３個のアミノ酸から成るＱＥＰストレッチ又はその誘導体を導く。次に、この種類のＱＥＰトリペプチドが、例えばＰＥＰＴ１及び／又はＰＥＰＴ２により、活性であることが所望されるそれらの細胞中に輸送され得る。
【０１０５】
原則的に、本発明における「糖（sugar）」の意味は、任意の多糖、二糖又は単糖を包含する。より特定には、「糖」とは、単糖類を意味する。さらにより特定には、「糖」とは、グルコース及び／又はガラクトース、好ましくはＤ−グルコース及び／又はＤ−ガラクトース、より好ましくは、（遊離）リン酸化されていないＤ−グルコース及び／又は（遊離）リン酸化されていないＤ−ガラクトースを意味する。理論的に束縛されるものではないが、単糖類及び特に、（遊離）リン酸化されていないＤ−グルコース及び／又は（遊離）リン酸化されていないＤ−ガラクトースは、ＳＧＬＴ１の好ましい基質であり、そして国際公開第２００６／１０５９１３号及び第２００６／１０５９１２号に記載されるように、ＲＳ１及び調節タンパク質ＲＳ１フラグメントのＳＧＬＴ１阻害効果の低減／遮断を担当する。この場合、最も適切な「糖」は、（遊離）リン酸化されていないＤ−グルコースである。それは、小腸の腸細胞内でＲＳ１のＳＧＬＴ１−阻害効果の低減／遮断を担当できる（遊離）リン酸化されていないＤ−グルコースである証拠が、本明細書における付随する実施例に提供されている。特に、ＡＭＧ（リン酸化されていない）がそのような低減／遮断を引起すことは、本明細書に付随する実施例に示されている。
【０１０６】
特定の側面によれば、「糖」は、ＳＧＬＴ１の基質として作用することができ、そして従って、細胞、例えば腸細胞中へのＳＧＬＴ１介在性輸送により内在化され得る。好ましい実施形態によれば、本明細書に記載される糖の何れかは、この特性を有する。
【０１０７】
しかしながら、糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースは、必ずしもそのようなものとして摂取される必要はなく、しかしむしろ、他の（より複雑な）糖及び／又は他の炭水化物、例えばサッカロース、グリコーゲン又は澱粉に由来するか／それから開放される。特に、サッカロースは、栄養（失調）において最も関連性のある「糖」であることが知られている。「糖」の意味はまた、特に、エネルギーに富んだ食事における「糖」が意味する場合、サッカロースのような糖も包含する。
【０１０８】
原則的に、患者の消化管の少なくとも一部は、それぞれ、グルコース及び／又はガラクトースのような糖を吸収することができ、そしてＳＧＬＴ１を発現する上皮細胞の一部である。特に、患者の消化管の少なくとも一部は、小腸、さらにより特定には、空腸である。本発明においては、患者の消化管の少なくとも一部の特定の上皮細胞は、腸細胞である。
【０１０９】
高い糖の条件／状況下で、より特定には、患者の消化管の少なくとも一部の上皮細胞で及び／又は好ましくは、その上皮細胞において、高い糖の条件／状況下で、本発明の活性化合物又は医薬組成物を投与することが本発明に従って、特に意図される。この場合、高い糖の条件／状況は、内因性／生来の調節タンパク質ＲＳ１（及び例えば、国際公開第２００６／１０５９１２号及び第２００６／１０５９１３号に開示されるように、内因性／生来の調節タンパク質ＲＳ１を表すペプチド）が、リン酸化されていない形で優先的に存在し、そして従って、ほとんどか又は全く活性的ではない条件／状況として見られるべきである。特に、高い糖の条件／状況は、グルコース及び／又はガラクトースの濃度が患者の消化管の少なくとも一部の内腔において、好ましくは上皮細胞で、及び／又は上皮細胞において高められる条件／状況である。
【０１１０】
原則的に、高い糖の条件／状況、及びグルコース及び／又はガラクトースのような糖の濃度が高められている条件／状況は、それぞれ、正常な糖の条件／状況に比較して、又は好ましくは、空腹条件／状況、又は非酩酊の条件／状況及び低糖条件／状況に比較して、糖が高い量又は高い濃度で存在する条件／状況である。当業者は、本発明に従って、高糖、正常糖及び低糖条件／状況間を容易に区別することができる。例えば高糖条件／状況は、エネルギーに富んだ食事の間又は後に発生する。例えば、低糖条件／状況は、エネルギーの低い食事の間又は後、又は空腹期間の間、又は非酩酊の期間、例えば（エネルギーに富んだ）食事間で、又は夜の間に生じる。例えば、正常な糖条件は、正常なエネルギー含有量の食事の間又は後で生じる。例えば、高糖条件／状況は、糖の量又は濃度が、正常又は低糖条件／状況に比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、５００％又は１０００％以上、患者の消化管の少なくとも一部の内腔において、上皮細胞で及び／又は好ましくは上皮細胞において高められる条件／状況である。
【０１１１】
消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞における（及び／又は血液及び／又は尿における）糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの高められた濃度は、高糖条件/状況を表す特定の条件／状況である。この場合、糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの高められた濃度は、生理学的範囲内にあることが特に想定される。
【０１１２】
患者の消化管の少なくとも一部の上皮細胞における糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの高められた濃度は、≧１０ μＭ、≧２０ μＭ、 ≧３０ μＭ、 ≧４０ μＭ、 ≧５０ μＭ、 ≧６０ μＭ、 ≧８０ μＭ、又は≧１００ μＭの濃度であり得る。上記上皮における、さらに高糖条件下でさえ、糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの濃度の上限は、≦２５０ μＭ、≦４５０ μＭ、 ≦１ ｍＭ、 ≦５ ｍＭ、 ≦１０ ｍＭ、 ≦５０ ｍＭ、 ≦１００ ｍＭであり得る。原則的に、上記下限の何れか及び上記上限の何れかの可能な組合せにより定義されるような、糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの高められた濃度の何れかの可能性ある範囲も想定される。特定の範囲は、約１０ μＭ − 約１００ ｍＭ、 約１０μＭ − 約１０ｍＭ、 約１０μＭ − 約５ｍＭ、 約１０μＭ−約１ｍＭ、 約５０μＭ−約２５０μＭ、 約５０μＭ−約４５０μＭ、好ましくは約５０μＭ−約１ｍＭ、 約５０μＭ−約５ｍＭ、約５０μＭ− 約１０ｍＭ 及び約５０μＭ − 約１００ｍＭである。
【０１１３】
患者の消化管の少なくとも一部の内腔における糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの高められた濃度は、≧１０ μＭ、≧５０ μＭ、≧１００ μＭ、 ≧５００ μＭ、 ≧１ ｍＭ 及び≧５ ｍＭの濃度であり得る。患者の消化管の少なくとも一部の内腔における、さらに高糖条件下でさえ、糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの濃度の上限は、≦５００ μＭ、≦１ ｍＭ、≦１０ ｍＭ、≦２５ ｍＭ 及び≦１００ｍＭであり得る。原則的に、上記下限の何れか及び上記上限の何れかの可能な組合せにより定義されるような、糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの高められた濃度の何れかの可能性ある範囲も想定される。特定の範囲は、約１０μＭ− 約１００ｍＭ、約１０μＭ − 約１０ｍＭ、約１０ μＭ− 約１ｍＭ、約５０μＭ− 約２５ｍＭ、約１０μＭ− 約２５ｍＭ及び、好ましくは、 約 ５ｍＭ −約２５ｍＭである。
【０１１４】
原則的に、患者の消化管の少なくとも一部の内腔における糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースは、この消化管の上皮細胞中に輸送され、そしてそれにより、約１０〜２０倍に蓄積される。しかしながら、輸送された糖のほとんどは、急速にリン酸化され、そして従って、蓄積された糖のほとんどはリン酸化される。しかしながら、上述のように、本発明の高糖条件／状況に関して、最も関連する、すなわち調節糖は、リン酸化されていない糖である。
【０１１５】
原則的に、例えば患者の消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞における高糖条件／状況は、患者の血液及び／又は尿における高糖条件／状況を導くか、導こうとしているか、又は導くことが予測され得る。従って、原則的には、本発明の高糖条件／状況はまた、糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの濃度が患者の血液及び／又は尿において高められるか、高められようとしているか、又は高められることが予測される。
【０１１６】
患者の血液における糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの高められた濃度は、≧７０ ｍｇ/ｄＬ、≧８０ ｍｇ/ｄＬ、 ≧９０ ｍｇ/ｄＬ、≧１００ ｍｇ/ｄＬ、≧１１０ ｍｇ/ｄＬ、≧１２０ ｍｇ/ｄＬ、≧１２６ ｍｇ/ｄＬ、≧１５０ ｍｇ/ｄＬ、≧２００ ｍｇ/ｄＬ又は ≧３００ ｍｇ/ｄＬの濃度であり得る。上記患者の血液における、さらに高糖条件下でさえ、糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの濃度の上限は、≦１２６ ｍｇ/ｄＬ、≦１４０ ｍｇ/ｄＬ又は ≦２００ ｍｇ/ｄＬであり得る。原則的に、上記下限の何れか及び上記上限の何れかの可能な組合せにより定義されるような、糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの高められた濃度の何れかの可能性ある範囲も想定される。特定の範囲は、約７０−約４００ｍｇ/ｄＬ、約７０− 約２００ｍｇ/ｄＬ、約１２０−約 ２００ｍｇ/ｄＬ、約１２０− 約４００ｍｇ/ｄＬ、約１４０−約２００ｍｇ/ｄＬ、約１２６− 約２００ｍｇ/ｄＬ 又は 約１００−約１２６ｍｇ/ｄＬである。
【０１１７】
患者の消化管の上皮細胞及び／又は内腔、又は血液における上述の高められた濃度は、エネルギーに富んだ食事／食物摂取の間又は後、又はエネルギーに富んだ食餌の間、生じることができる。
【０１１８】
例えば、低糖条件／状況は、患者の消化管の少なくとも一部の内腔（例えば、空腸）における糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの濃度が約１ｍＭ以下又は約１ｍＭである場合、存在する。そのような条件／状況は、空腹期間又は非酩酊の期間中に一般的には、生じることができる。当業者は、一日の異なった時間帯で、及び／又は（エネルギーに富んだ）食餌／食物摂取に関連して、例えばその間又は後、又は（エネルギーに富んだ）食餌に関して、例えばその間又は後、患者の消化管の少なくとも一部の内腔における糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの濃度を容易に決定し／評価することができる。それぞれの指針は本明細書中に提供され、そして当業界においては知られている（例えば、Ferraris Am. J. Physiol. 259 (Gastrointest. Liver Physiol. 22), 1990, G822-G837を参照のこと）。
【０１１９】
低糖条件／状況の別の例は、７０〜１２０ｍｇ／ｄＬでの又はそれ以下での患者の血液における糖、例えばグルコース及び／又はガラクトースの濃度である。患者の血液における糖濃度に基づいて低及び高糖条件／状況間を区別するための指針は、本明細書において提供され、そして当業界において知られている（例えば、Kumar (“Clinical Medicine”, 3rd edition (1994), Bailliere Tindallを参照のこと）。
【０１２０】
本発明の１つの側面によれば、本発明の医薬組成物は、エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事と組合して投与されるか（投与されるべきであるか）、又は投与されるよう調製される。本発明によれば、エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事は、高糖条件／状況を引起す。医薬組成物は、エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事（の摂取）の前、その間、又はその摂取と同時に、又は後、投与され、特にエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事の前（又はそれと同時に）、それぞれの患者は、その消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞において高められた糖濃度を有するか、有しようとしているか又は有することが予測され得る（又は他方では、高糖条件／状況下にあるか、その状況下にあることになるか、又は状況下にあることが予測される）。
【０１２１】
原則的に、本発明の医薬組成物は、患者に投与され（投与されるべきである）、結果的に、それぞれの医薬効果／効能（のピーク）は、高糖条件／状況（野ピーク）と、例えばエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事（の摂取）に起因するものとしての患者の消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞における高められた糖濃度（のピーク）と一致することが想定される。主治医は、投与計画を調整し、そして設定し、結果的に、これを容易に成し遂げることができる。特に、主治医は、容易に、投与計画、投与時間、医薬担体の種類（例えば、開放の時間及び／又は部位）、等を調整し／設定し、結果的にそれを成し遂げることができる。例えば（これを遂行するために）、主治医は、エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事の３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、直前、間、又はさらに（直）後（その開始の）（の摂取）、本発明の医薬組成物を投与することができる。特に、医薬組成物がそれぞれの効果／効能の所望する部位にすばやく標的化され、そして／又はその部位ですばやく開放される場合、それは、エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事の近くに、又はその（直）後に投与され得る。本発明の活性化合物及び医薬組成物の効果／効能の好ましい部位は、本明細書に記載されるような患者の消化管の少なくとも一部、及び特定には、本明細書に記載されるようなその上皮細胞である。
【０１２２】
エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事の特性（消化性）（例えば、正常消化又は消化不良）に依存して、高糖条件／状況（のピーク）は、エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事（の開始）（の摂取）の少なくとも約１０分、１５分、２０分、３０分、４０分、１時間、１．５時間、２時間又は２．５時間後、生じることが予測される。例えば、高糖条件／状況（のピーク）は、（高い）正常消化の食餌／食物／食物摂取／食事（例えば、単糖及び／又は二糖類の莫大な部分を含む）（の開始）（の摂取）の少なくとも約１０分、１５分、２０分、３０分又は４０分後に生じることが予測される。例えば、高糖条件／状況（のピーク）は、弱い正常消化又は消化不良の食餌／食物／食物摂取／食事（例えば、複合多糖類及び／又は脂肪／油の莫大な部分を含む）（の開始）（の摂取）の少なくとも４０分、１時間、１．５時間、２時間又は２．５時間後に生じることが予測される。
【０１２３】
原則的に、本発明に従ってのエネルギーに富んでいるとは、非エネルギーが低いことを意味する。従って、原則的に、本発明のエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事はまた、正常食餌／食物／食物の摂取／食餌も包含する。一般的に、正常食餌／食物／食物摂取／食事は、通常糖、炭水化物、タンパク質、繊維、等の含有物を有することが知られており、そして本発明に従って（中位の）高糖条件／状況を引起すことができる。しかしながら、特定の側面によれば、エネルギーに富んだとは、通常のエネルギー含有量に比較して、高められた、及び／又は容易に利用可能なエネルギー含有量を意味する。
【０１２４】
エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事は、糖に富んだ、炭水化物に富んだ、及び／又は脂肪に富んだ食餌／食品／食物摂取／食事、及び／又は標準又は高い血糖指数を有する食餌／食品／食物摂取／食事であり得る。糖に富んだ食餌／食品／食物摂取／食事における糖含有率は、≧1重量％ 、≧１０重量％ 、好ましくは ≧重量５％であり得る。炭水化物に富んでいる食餌／食品／食物摂取／食事中の炭水化物含有率は、≧１０エネルギー％ 、 ≧７０エネルギー％ 、又は好ましくは、≧５５エネルギー％であり得る。エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事の血糖指数は、≧７０又は好ましくは、≧９０であり得る。
【０１２５】
好ましくは、本発明の医薬組成物は、ヒト患者／ヒトに投与される（されるべきである）。しかしながら、本明細書に記載される疾患又は障害（例えば、グルコース摂取及び／又はＳＧＬＴ関連の状態、特に対応する病理学的又は非病理学的状態）がまた、ヒト動物対象／患者、例えばペット（例えば、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット及びマウス）、家畜（例えば、ウシ、ブタ、ヒツジ）、ウマ又はポニー、又は鳥（例えば、ニワトリ、七面鳥、インコ）において治療されるか、又は予防され得る。
【０１２６】
本発明の医薬組成物中の活性化合物は、医薬的に許容される賦形剤／担体と共に投与され得る。従って、本発明の医薬組成物の製剤は、上記に定義されるような活性化合物（又は医薬的に許容されるその塩）、及び医薬的に許容される担体／賦形剤を含むことができる。一般的に、医薬的に許容される担体／賦形剤は、次のものを含む：担体、ビヒクル、希釈剤、溶媒、例えば一価アルコール、例えばエタノール、イソプロパノール、多価アルコール、例えばグリコール及び食用油、例えば大豆油、ヤシ油、オリーブ油、紅花油、綿実油、油性エステル、例えばオレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル；結合剤、アジュバント、可溶化剤、増粘剤、安定剤、崩壊剤、滑剤、潤滑剤、緩衝剤、乳化剤、湿潤剤、 懸濁化剤、甘味剤、着色料、香料、コーティング剤、防腐剤、酸化防止剤、処理剤、薬物送達調節剤及びエンハンサー、例えばリン酸カルシウム、マグネシウムステート、タルク、単糖類、二糖類、澱粉、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロース、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ポリビニルピロリドン、低融点ワックス、イオン交換樹脂。他の適切な医薬的に許容される担体／賦形剤は、Remington`s Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991)に記載されている。
【０１２７】
例えば、本明細書に記載される活性化合物（（ポリ）ペプチド、核酸分子、ベクター）は、特にそれらが医薬組成物の形で（また、ダイエット製品／組成物／サプリメント又は食品サプリメントの形で）、投与される（投与されるべきである）場合、糖衣錠、錠剤又はピルに含まれ得る。好ましい実施形態によれば、前記ペプチドは、被覆された、例えばフィルム被覆された糖衣錠、錠剤又はピルに含まれる。そのような被膜は、活性化合物の時間及び／又は位置制御された放出を可能にするために特に好ましい。対応する被膜は、当業界において知られており、そして中でも、欧州特許第Ａ１０１０９３２０号、国際公開第９４／０６４１６号、欧州特許第Ａ１０６３０６４６号又は欧州特許第Ａ１０５４８４４８号に記載されている。
【０１２８】
原則的に、医薬的に許容される賦形剤／担体（及び／又は被膜）は、効果／効能の所望する部位での活性化合物（例えば、本明細書に定義されるような（ポリ）ペプチド）の放出を可能にすることが想定される。特に、本発明に従って使用される医薬的に許容される賦形剤／担体は、本明細書に記載されるような患者の消化管の少なくとも一部、及び／又はその上皮細胞中への医薬組成物（（ポリペプチド、核酸分子又はベクター）を標的化し、そして／又は放出することができることが想定される。この場合、消化管の好ましい部分は小腸、又はより特定には、空腸及びそれぞれの腸細胞である。
【０１２９】
この点における好ましい担体、賦形剤又は被膜は、胃液に対する耐性を付与し、そして従って、胃／腸、好ましくは小腸及び／又は結腸、より好ましくは空腸において活性化合物を放出できるそれらである。従って、胃液耐性担体、賦形剤又は被膜が好ましい。そのような担体、賦形剤及び被膜は、当業界において知られており、そしてセルロース誘導体、例えばカルボキシメチレンエチルセルロース(Aquateric（登録商標)）、セルロースアセテートフタレート（HP50（登録商標)）、又はヒドロキシプロピレンセルロースメチルフタレート（HP55（登録商標)）；メタクリル酸及びメタクリル酸エステル由来のポリマー化合物、例えばEutragit （登録商標)L 及びEutragit（登録商標) S（リタードフォームEutragit （登録商標)RL und Eutragit（登録商標)RS）を含む。また、ポリビニル誘導体も使用され得る。それらは、中でも、ポリビニルピロリドン（例えばKollidon（登録商標））、ポビドンアセテート又はポリビニルアセテートフタレート（例えば、Opadry（登録商標））を包含する。
【０１３０】
本発明の活性化合物（又はその塩）、又はそれを含む医薬品は、当業界において知られている対応する技法を用いることにより、細胞内投与され得る。例えば、活性化合物は、リポソーム、トランスファーソーム及びニオソーム中に封入され得、そして次に、上記のようにして投与され得る。リポソームは、水性内部を有する球状脂質二重層である。通常、リポソーム形成の時点で水溶液に存在する分子は、水性内部中に組込まれる。リポソーム内容物は、一方では、外部微小環境から保護され、そして他方では、リポソームは細胞膜と融合するので、細胞表面近くに送達された後、細胞中に効果的に組込まれ得る。
【０１３１】
医薬使用でトランスファーソーム、ニオソーム及びリポソームを含む送達システムは、十分に確立されており、そして当業者は、本明細書に定義される活性化合物、すなわち本明細書に定義される（ポリ）ペプチド、それをコードする核酸分子又は前記核酸分子を含むベクターを含む、対応するトランスファーソーム、ニオソーム及びリポソームを容易に調製する立場にある。対応する方法は、中でも、Muller/Hildebrand “Pharmazeutische Technologie: Moderne Arznei”, WVG. Wiss Verlag, Stuttgart (1998); Gupta (2005), Int. J. Pharm. 293, 73-82; Torchilin (2005), Nat. Rev. Drug Discov. 4,145-160に提供される。特に、核酸分子は、トランスファーソーム、リポソーム又はニオソームを介して、医学的介入の必要な患者に投与され得る。対応する調製方法は、当業界において知られている；中でも、Mahoto (2005), Adv. Drug Deliv. Rev. 57, 699-712 又は Kawakami (2004), Pharmazie. 59, 405-408を参照のこと。
【０１３２】
また、マイクロ粒子、ナノ粒子又はナノゲルは、本明細書に定義されるような活性化合物のための送達システムとしても使用され得る。そのような担体は、ペプチド及びより最近には、ヌクレオチド／ヌクレオチド配列を送達する重要な方法として開発されて来た。マイクロ粒子、ナノ粒子及びナノゲル及び他のコロイド状薬物送達システムは通常、関連する薬物の動態は、体内分布及び薬物放出を修正する。対応する技法は、中でも、Kayser (2005), Curr. Pharm. Biotechnol. 6(1), 3-5; Moghimi (2005), FASEB J. 19, 311-330; kettel (2012), ACS Nano 6(9), 8087-93 及び Albrecht (2010), Advances in Polyme Science 234, 65-93に記載されており、そして参照されている。
【０１３３】
さらに、特に、ポリペプチド又はタンパク質ストレッチが本発明に従って投与されるべきである場合、ヒドロゲルが使用され得る。ヒドロゲルは、マイクロゲル（ヒドロゲルマイクロ粒子）又はナノゲル（ヒドロゲルナノ粒子）として使用され得る。対応する手段及び方位方は、Pappas (2004), Expert Opin. Biol. Ther. 4,881-887; Singh (2013), Angewandte Chemie International Edition, 52(10), 3000-3; Singh (2013), Angewandte Chemie 125(10), 3074-77; Singh (2013), Macromolecular Bioscience 13(4), 470-82 及びGroll (2009) Journal of Polymer Science Part A: Polymer Chemistry 47(20), 5543-49に提案され、そして要約されている。ドロゲルは、治療用タンパク質又はポリペプチドの経粘膜（ほとんど、経口）投与／送達において有用である。
【０１３４】
特に、本発明の医薬組成物は、
（ｉ）ヒドロゲルにより送達されるか（送達されるべきであるか）、又は送達されるよう調製され；
（ii）ヒドロゲルであるか、又はヒドロゲルを含む、医薬的許容できる賦形剤／担体と共に投与されるか（投与されるべきであるか）、又は投与されるよう調製され；そして／又は
（iii）ヒドロゲルにカップリングされる、本明細書に記載される（ポリ）ペプチド、核酸分子又はベクターを含むことが想定される。
【０１３５】
使用されるヒドロゲルは、チオール官能化ポリマー、特にチオール官能化線状ポリマーを含むことができる。より特定の側面によれば、ヒドロゲルは、グリシドール、特にポリグリシドール、より特定には、チオール官能化（線状）（ポリ）グリシドールに基づかれる。本明細書に記載される（ポリ）ペプチド（核酸分子又はベクター）は、ジスルフィド結合によりヒドロゲルにカップリングされ得る。１つの特定の側面によれば、ＴＡＴ（転写のトランス活性化因子）ペプチドは、ＳＳ橋を介してヒドロゲルに連結される。これはエンドサイトーシスを高めることができ、そして従って、本明細書に記載される医薬組成物の投与計画をさらに改善することができる。本発明に従って使用されるべきヒドロゲルの特定の例は、Ｇｒｏｌｌ（２００９）（同上）に開示される。
【０１３６】
使用されるヒドロゲルの１つの利点は、その生体適合性及び分解性である。さらに、医薬的に許容される賦形剤／担体としてのヒドロゲルナノ粒子の使用は、特に経口適用の後、本明細書に記載されるような上皮細胞中に、ポリペプチド、例えばＲＳ１−Ｒｅｇを効果的に導入する、非常に効果的手段及び方法を提供することが、付随する実施例に例示されている。さらに、それぞれ医薬的に許容される賦形剤／担体としてのヒドロゲルナノ粒子の使用により、効能における異常に高い上昇性が、特に本明細書に記載されるＲＳ１−Ｒｅｇ変異体がそれぞれの活性成分として使用される場合、達成され得ることが例示されている。例えば、モルＱＥＰ（別のタイプの医薬的に許容される賦形剤／担体により投与される）に比較して、約２００００倍低いモルＲＳ１−Ｒｅｇ異変体が所望する効果（グルコース（及び／又はガラクトース）の摂取の阻害）を達成するのに必要とされることが本明細書に例示されている。これに関して使用される特定のヒドロゲルは、Groll (2009, Journal of Polymer Science 47,5543-5549)により記載されるように、星型（ポリ）エチレンオキシド−スタット−プロピレンオキシドに基づいてチオール官能化ポリマーから構成されるヒドロゲルナノ粒子であり得る。ＲＳ１−Ｒｅｇは、チオ硫酸結合により、それらのゲルに結合されている。
【０１３７】
本発明に従って使用される（ポリ）ペプチド又は他の活性化合物は、医薬的に許容される塩の形で投与され得る。患者、特にヒト患者に使用される最も一般的な医薬的に許容される塩は、塩酸塩形、すなわち本明細書に定義されるような（ポリ）ペプチドの塩酸塩である。そのような塩もまた、本発明において、好ましい塩である。しかしながら、また他の塩も知られており、そして想定される。それらは次のものを包含するが、但しそれらだけには限定されない：酸付加塩、例えば酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩（特に好ましい）、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルスルホン酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、酒石酸塩、ウンデカン酸塩、又は同様のもの。
【０１３８】
経口投与（また、本明細書に記載されるような、栄養製品、食品組成物、食品、飼料、食事又は食品添加物の形で）がまた好ましい。しかしながら、特定の患者及び特定の医療用途においては、他の投与経路（例えば、浣腸の座薬の形で）が示され得る。
【０１３９】
経口投与のための特定の投与形は、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、トローチ剤、ピル剤、カシェ剤、顆粒剤、経口液剤、例えば、シロップ、懸濁液、溶液、エマルジョン、再構成のための粉末を包含する。非水性担体／溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、例えばオリーブオイル、及び注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体／溶媒は、水、アルコール性/水性溶液、エマルジョン又は懸濁液、例えば生理食塩水及び緩衝媒体を包含する。
【０１４０】
本発明に従ってのペプチド、核酸分子又はベクターを含む医薬組成物（例えば、経口使用のための）は、活性化合物と、（固体）賦形剤／担体とを組合し／混合し、任意には、得られる組合せ／混合物を粉砕し、そして／又は所望により、錠剤又は糖衣錠コア及び同様のものを得るために、適切な補助剤の添加の後、前記顆粒の組合せ／混合物を加工することにより得られる。言及されたように、それらは胃液耐性被膜、例えばセルロース誘導体、メタクリル酸のポリマー及びメタクリル酸エステル、又はポリビニル誘導体を有することができる。
【０１４１】
本明細書に記載され、そして本明細書に詳細されるような疾患又は障害を予防するか、又は治療するための医薬組成物の調製方法もまた、本明細書に提供され、ここで前記方法は、本発明において開示されるような（ポリ）ペプチド、核酸分子又はベクターを、医薬的に許容される担体に添加し、そして任意には、それらを混合する工程を包含する。
【０１４２】
本発明の医薬組成物は、当業界において知られているようにして、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publishing Co., New Jersey (1991)に記載されるようにして、生成され得る。特に、医薬組成物に含まれるような（ポリ）ペプチドは、合成的に、又は組換え的に生成され得る。例えば、（ポリ）ペプチドは、実施例１に記載されるようにして生成され得る。
【０１４３】
（単一）投与形を製剤化するために、医薬的に許容される担体／賦形剤と、実際的には、組合わされ得る、本明細書に定義されるような活性化合物（又は医薬的に許容されるその塩）の量は、治療される宿主、及び特定の投与形式に依存して変化するであろう（本明細書の他の場所を参照のこと）。
【０１４４】
本明細書に記載される、（ポリ）ペプチド、核酸分子、ベクター又は医薬組成物は、適切な用量で投与されるか（されるべきであるか）又は投与されるよう調製される。対応する投与単位製剤は、医薬的に許容される賦形剤／担体を含むことができる。本明細書に記載される活性化合物、及び任意には、追加の治療剤が、単一の投与形で製剤化され得るか、又は別々の投与形で存在することができ、そして付随して（すなわち、同時に）、又は連続的に投与され得る。一般的に、本明細書に定義され得る活性化合物を含む医薬組成物は、意図される投与方法のために適切な任意の形で存在することができる。
【０１４５】
本明細書に定義されるような活性化合物／医薬組成物の投与計画は、主治医及び臨床的要因により決定されるであろう。医学分野においては知られているように、何れか１人の患者のための用量は、多くの要因、例えば大きさ、体重、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与の時間及び経路、一般的健康、及び同時に投与され得る他の薬剤に依存する。しかしながら、当業者／主治医は、例えばインビボ又はエクスビボでの（治療的）有効濃度を容易に推定できる立場にある。対応するサンプルが、十二指腸プローブにより、小腸から採取され、そして活性化合物が検出され、そしてそれらの対応する濃度が、例えばＨＰＬＣにより、前記サンプルにおいて決定され得る。
【０１４６】
活性化合物の濃度の決定は、ヒト患者、健康（ヒト）個人及び動物、例えば実験用動物、非ヒトトランスジェニック動物（例えば、トランスジェニックマウス、ラット、ブタ及び同様のもの）において得られる。消化管、例えば腸十二指腸又は小腸における活性化合物濃度の決定は例えば、（健康）ボランティアにおいて推定され、そしてヒト患者のための対応する投与スケジュールが確立され得ることが想定される。例えば、腸通過時間、消化管における活性化合物の通過、投与量依存性（例えば、消化官の種々の領域において検出される用量に対する、経口投与される用量）が、当業界において知られている標準方法により決定され得る。さらなる方法は、インビボでの標識ペプチドの検出（例えば、対応する標識技法、例えば放射性標識、蛍光標識、等による）、又は生理学的／生化学的アッセイを包含するが、但しそれらだけには制限されない。従って、消化管、例えば腸十二指腸の一定部分における活性化合物の所望する濃度を得るために、例えば経口投与される活性化合物の用量が推定され得る。そのような濃度を推定するそれらの及び他の方法はまた、当業界において知られている。
【０１４７】
本発明のためには、活性化合物、特に本明細書に定義されるような（ポリ）ペプチド（又は医薬的に許容されるその塩）の（治療的）有効用量は、１×１０−９Ｍ〜１Ｍ、好ましくは１×１０−７Ｍ〜０．５Ｍ、より好ましくは１×１０−５Ｍ〜０．１Ｍ、より好ましくは１×１０−４Ｍ〜０．１Ｍ、より好ましくは１×１０−３Ｍ〜０．０５Ｍ、より好ましくは２０〜３０ｍＭ、より好ましくは２〜１０ｍＭ及びより好ましくは５〜１０ｍＭの範囲での濃度（細胞外及び／又は細胞内）をもたらす用量であり得る。しかしながら、また、２−３ｍＭの範囲の濃度もまた、本発明において想定される。例えば、小腸においては、本明細書において定義されるようなポリペプチド（又は医薬的に許容されるその塩）の（治療的）有効用量は、５−１０ｍＭの濃度であり得るが、しかしまた前述の他の濃度が小腸において発生することができる。
【０１４８】
活性化合物、特に本明細書に定義されるような（ポリ）ペプチド（又は医薬的に許容されるその塩）の細胞外濃度は、０．０５、０．１、０．５又は１Ｍまで上昇することができる。特に腸（ここで、例えば、非常に高い糖濃度（例えば、スイーツの消費の後）が発生する）においては、前記濃度はそれらの高レベルに達することができる。しかしながら、理論的に束縛されるものではないが、本明細書に記載されるペプチドトランスポーターの輸送能力が、約１００ｍＭの（ポリ）ペプチド（又は医薬的に許容されるその塩）の濃度で飽和され得る。従って、前記ペプチドの細胞外濃度は、約１００ｍＭまでであることが、特に想定される。しかしながら、記載されているように、本明細書に定義されるペプチドの明白な生理学的効果が、細胞外媒体において、約０．１ｍＭの濃度、又はそれ以下の濃度で、既に推定され得る。従って、対応する組成物、例えば本明細書に記載される製品、組成物、食品、食物、食物サプリメント、食事、医薬組成物（例えば、錠剤の形）、及び同様のものは、少なくとも０．０５ｍＭ、０．０１ｍＭ、０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ又は４ｍＭの範囲での活性化合物／ペプチドの細胞外濃度がインビボ（例えば、ヒトにおいて）で達する量で、活性化合物／ペプチドを含むことができる。投与される手段／担体／賦形剤におけるその対応する濃度は、０．１〜４Ｍの範囲で存在することができる。
【０１４９】
１つの側面によれば、本明細書に記載されるような活性化合物／成分、例えば（ポリ）ペプチドは、１日及び患者当たり、８ｇまで、５ｇまで、３ｇまで、２ｇまで、１ｇまで、０．５ｇまで、又は０．１ｇまでの用量で投与され得る。これは、おおよそ、１日当たり、約１１５〜１６０、７１〜１００、４３〜６０、 ２９〜４０、１５〜２０、７〜１０ 又は １．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重（ｂｗ）の用量に対応する。活性成分が自由に、又は例えば胃液耐性（被覆された）錠剤又はピルにおいて、投与されるか（投与されるべきであるか）、又は投与されるよう調製される場合、そのような（比較的高い）用量が好ましい。
【０１５０】
別の側面によれば、本明細書に記載されるような活性化合物／成分、例えば（ポリ）ペプチドは、１日及び患者当たり、２０ｍｇまで、１５ｍｇまで、１０ｍｇまで、５ｍｇまで、３ｍｇまで、２ｍｇまで、１ｍｇまで、又は０．１ｍｇまでの用量で投与され得る。これは、おおよそ、１日当たり、約０．３〜０．４、０．２〜０．３、０．１５〜０．２、０．０７５〜０．１、０．０４〜０．０６、 ０.０３〜０．０４、０．０１５〜０．０１又は０．００１５〜０．００１ｍｇ／ｋｇ体重（ｂｗ）の用量に対応する。活性成分が、本明細書に記載されるようなヒドロゲルとして／ヒドロゲルと共に、投与されるが（投与されるべきであるか）、又は投与されるよう調製される場合、そのような（比較的低い）用量が好ましい。
【０１５１】
本明細書に記載される用量の何れか、又は主治医により適切であると見出された何れか他の用量が、食事当たり１度、及び従って、１日１〜５回、1日２〜４回、又は１日３回、投与され得る。食事は、本明細書に記載されるようなエネルギーに富んだ食事であることが好ましい。
【０１５２】
一般的に、典型的な患者は、約５０−７０ｋｇの体重を有することが予測される。通常、より重い患者ほど、用量はより高い。しかしながら、この関係は、例えば肥満患者が処理される場合、必ずしも線状でないかも知れない。この場合、投与量は、患者の体重が上昇するのと同じ程度に上昇することはできない。従って、本発明に従って治療される１人の典型的患者が、例えば８０ｋｇ以上、１００ｋｇ以上、１２０ｋｇ以上、１４０ｋｇ以上、１６０ｋｇ以上、及び１８０ｋｇ以上の体重（ｂｗ）を有する肥満患者であったなら、一般的に適用される投与量計画が適合されるべきである。肥満患者が、通常の体重を有する患者と同じ用量で治療された事例も存在する。
【０１５３】
さらに、本発明は、インスリン感受性（血中グルコースを低めるための所定のインスリン濃度の効果）を高めることへの使用のための、及び／又は血清グルコース及び／又はガラクトースレベルを低めるための医薬組成物に関する。本発明のこの医薬組成物は、活性成分（調節タンパク質ＲＳ１由来の、及び／又は調節タンパク質ＲＳ１の機能／活性、及び特にＳＧＬＴ１駆動のグルコース及び／又はガラクトース吸収を阻害するその能力及び／又はＯＤＣ（発現／活性）に結合する／調節するその能力を模倣する（ポリ）ペプチドを含むことが想定される。この活性成分（（ポリ）ペプチド）をコードする核酸分子、及びそれらの核酸分子を含むベクターもまた、この目的のために使用されることが想定される。そのような（ポリ）ペプチドの特定の例は、調節タンパク質ＲＳ１フラグメント、ＳＤＳＤＲＩＥＰ、ＱＳＰ、ＱＰＰ、ＱＴＰ又はＱＣＰ、又は国際公開第２００６／１０５９１２号又は第２００６／１０５９１３号に開示されるような他の調節タンパク質ＲＳ１フラグメントの何れかである。そのような（ポリ）ペプチド（及びそれらの対応する核酸分子及びベクター）のさらなる（好ましい）例は、本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチドである。特定の側面によれば、本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチド（又はその対応する核酸分子又はベクター）と、上記に記載される他の調節タンパク質ＲＳ１フラグメントとの組合せが、連続的に又は同時に投与され得る。
【０１５４】
特に、インスリン感受性とは、それぞれ、血中グルコースを低める所定のインスリン濃度の効果、及び血中グルコースの低減に対するインスリン効果を意味する。
【０１５５】
インスリン感受性の上昇が、例えば少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％又は少なくとも８０％の血中インスリンの濃度の低減を伴うか、又はその濃度の低減に対応することができる。一般的に、インスリンの基本的濃度は、糖尿病の発症の間、高められる。その後、糖尿病の過程で、その濃度は低められ得る。一般の絶食の後の血中インスリン濃度は、健康な個人において、血液１Ｌ当たり約０．１〜０．５μｇのインスリンである。前糖尿病の個人においては、又は開始している２型糖尿病を有する個人においては、一晩の絶食の後、血中インスリン濃度は、血液１Ｌ当たり１〜２μｇのインスリンである。それらの個人は、低められたインスリン感受性を有する。従って、特定の側面によれば、インスリン感受性の上昇は、例えば血液１Ｌ当たり１〜２μｇのインスリンの少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％又は少なくとも８０％、血中インスリン濃度の低下を伴うか、又はその濃度の低下に対応することできる。
【０１５６】
高められたインスリン感受性は、インスリン濃度のこの上昇を有さない患者（例えば、ＯＧＴＴ、又は本明細書に記載されるようなエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事に起因する）に比較して、血中インスリンのより低い上昇性により得られる血中グルコースの低減を伴うか、又はその低減に対応することができる。例えば、そのようなインスリンの低められた／減速された上昇性は、≦４、 ≦３、≦２ 又は≦１μｇ／Ｌ／時であり得る（より低い値が好ましい）。
【０１５７】
例えば、本発明における高められたインスリン感受性は、対象、例えば未治療の患者／本発明の医薬組成物が投与されていない患者の（低められた）インスリン感受性よりも高いインスリン感受性である。特に、高められた／高いインスリン感受性とは、より低いか、低いか又は低められた量のインスリンが、例えばＯＧＴＴ又はエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事の後、正常グルコースレベルを回復するために、血清又は血液に存在する／必要とされることを意味する。例えば、高められたインスリン感受性（血中グルコースを低めるための所定のインスリン濃度の効果）は、対照のインスリン感受性よりも、１．１、１．３、１．５、１．７５、２、２．５、５、 ７．５ 又は１０倍、高いインスリン感受性である。例えば、低められた／低いインスリン感受性（例えば、対照／対照患者の）は、約２〜６、２〜５、２〜４、３〜４、３〜５又は４〜５μｇ／Ｌ／時のグルコース及び／又はガラクトースの適用の後（例えば、ＯＧＴＴ、又は本明細書に記載されるようなエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事に起因する）、血清中のインスリンの上昇を伴うか、又はその上昇に対応することができる。
【０１５８】
特に、本明細書に他の場所に定義される投与量計画及び投与様式がまた、必要な変更を加えて、インスリン感受性の増加の側面にも適用される。しかしながら、本明細書及び付随する実施例に示されるように、インスリン感受性を高めるために投与される活性成分の量／用量は、グルコース及び／又はガラクトース摂取が低められるか／阻害される状況に比較して、低くあり得る。例えば、その量／用量は、グルコース及び／又はガラクトース摂取が低められるか／阻害される状況について、本明細書の他の場所に記載されるような用量（その範囲）に比較して、１．１、１．２、１．３、１．５、１．７５、２、２．５、５、７．５、１０、又は少なくとも約２０倍、低くあり得る。
【０１５９】
例えば、本明細書に記載される医薬組成物が、患者のインスリン感受性を高めるために、投与されるか（投与されるべきであるか）又は投与されるよう調製される場合、それは、自由に、又は本明細書の他の場所に定義されるような医薬的に許容される担体と共に投与される場合、≦５ｇ、≦３ｇ、≦２ｇ、≦１ｇ、≦０．５ｇ、≦０.３ ｇ、≦０.２ ｇ又は≦０.１ ｇの毎日の用量で、及び本明細書に定義されるようなヒドロゲルを介して、特に投与される場合、≦１０ ｍｇ、 ≦５ ｍｇ、 ≦３ ｍｇ、≦２ ｍｇ、≦１ｍｇ、≦０.５ ｍｇ 又は≦０.３ ｍｇの毎日の用量で、投与される（投与されるべきであるか）、又は投与されるよう調製される。
【０１６０】
高められたインスリン感受性を得るためには、それぞれの医薬組成物は、長時間にわたって投与されるか（投与されるべきであるか）、又は投与されるよう調製されることが好ましく；そして本明細書に記載されるようなエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事と必ずしも組合す必要はない。例えば、長時間とは、少なくとも２、３、４、５、６又は７日、少なくとも１、２、３又は４週間、少なくとも２、３、５又は６ヶ月、又は少なくとも１、２、３、４又は５年であり得る。
【０１６１】
インスリン感受性の上昇に関する１つの側面によれば、それぞれの医薬組成物は、本明細書に記載されるようなエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事と組合して投与されるか（投与されるべきであるか）、又は投与されるよう調製される。これの非制限的例は、高脂肪食餌／食品／食物摂取／食事と組合して投与されるよう調製される。これの非制限的例は、高脂肪食餌／食品／食物摂取／食事と組合しての投与である。
【０１６２】
原則的に、本明細書の他の場所に記載されるような疾患又は障害の治療又は予防のための医薬組成物（の特性）に関して言われて来たことは、必要な変更を加えて、インスリン感受性の上昇の側面にも適用される。
【０１６３】
本発明の医薬組成物の何れかは、取扱い説明書又は指示リーフレットと一緒に提供され得る。その取扱い説明書／リーフレットは、本発明に従って、本明細書に記載されるような疾患又は障害をいかにして治療するか、又は予防するかの、当業者／主治医のための指針を包含することができる。特に、その取扱い説明書／リーフレットは、投与／投与計画（例えば、投与経路、投与計画、投与の時間、投与の頻度）の本明細書に記載されるモードの指針を包含する。特に、治療されるべき疾患又は障害がグルコース及び／又はガラクトース摂取により引起されるか、それに生理学的にリンクされているか、又はそれに関連している場合、その取扱い説明書／リーフレットは、医薬組成物が糖に富んだ状況下で、すなわち患者の消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞において高められた濃度のグルコース及び／又はガラクトースが存在する場合、投与されるべきである指針を包含することができる。そのような指針は、医薬組成物が（エネルギーに富んだ）食事と組合して、例えば（エネルギーに富んだ）食事の前（直前）、その間、又はその後（直後）、１日当たり３、４、又は５度、投与されるべきである指針を包含する。特に、インスリン感受性が高められるべきである場合、その取扱い説明書／リーフレットは、医薬組成物が、１日３度（朝、昼、夜）、投与されるべき指針を包含することができる。原則的に、投与／投与計画モードに関して、本明細書の他の場所に言及されて来たことは、その取り扱い説明書／リーフレットに包含される。
【０１６４】
本発明の医薬組成物はさらに、その対応する治療又は予防介入のために適切な、及び患者の消化管を介してグルコース及び／又はガラクトース摂取を低めるためのプロトコルのために有用である物質／化学物質及び／又は装置を包含することができる。
【０１６５】
本発明はまた、本明細書に記載され、そして定義されるような、（ポリ）ペプチド、フラグメント、核酸分子又はベクターにも関する。
【０１６６】
本発明はさらに、下記を含む食品組成物に関する：
（ａ）本明細書に記載されるような消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞（及び/又は血液、及び/又は尿）に、本明細書に記載され、そして定義されるような高濃度の糖、特にグルコース及び／又はガラクトースを生ぜしめることができる、食品及び／又は食物サプリメント；及び
（ｂ）本明細書に記載され、そして定義されるような（ポリ）ペプチド。
【０１６７】
本発明はまた、対応する食餌製品／組成物／サプリメント、食品（例えば、機能的食品又は「ライフスタイル食品」）、飼料及び食品サプリメント添加物（それらのすべては、本発明によれば、包括的用語「食料品」として本明細書において言及される）、及び対応するそれらの使用、及びそれらの調製方法にも関する。本発明の食料品はまた、健康食料品、機能的食料品又はライフスタイル食料品としても使用され得る。本発明によれば、すべてのそれらの「食料品」は、本明細書に記載されるような消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞（及び／又は血液及び／又は尿）において、本明細書に定義されるような糖、特にグルコース及び／又はガラクトースの高められた濃度を引起すことができる。従って、本発明は医学的又は医薬的使用、手段、及び方法に制限されない。本明細書の他の場所に提供される、その対応する活性化合物、すなわち（ポリ）ペプチド、核酸分子、ベクター及び特に、ＱＥＰペプチド又はその誘導体の記載及び定義はまた、必要な変更を加えて、その食品にも適用される。また、その食料品は、それらが本明細書に記載される活性化合物、特に本明細書に記載される（ポリ）ペプチド含有ＱＥＰ又はその誘導体を含むことにおいて特徴づけられる。それらの食料品は、それらの食料品により提供される糖の吸収／摂取がその含まれる活性化合物により低められ／阻害されるか、又はダウンレギュレートされるので、特に有用である。
【０１６８】
本発明の食品組成物に含まれるような食品及び／又は食品サプリメント、又は本明細書に記載されるような他の食料品の何れかは、本明細書に記載されるようにエネルギーに富むことができるか、又は本明細書に記載されるようなエネルギーに富んでいる食品／食物摂取／食餌であり得る。
【０１６９】
記載されるエネルギーに富んだ食品／食物摂取／食餌のように、また本発明の食料品は、糖に富んだ、すなわち炭水化物に富むことができ、そして／又は高い血糖指数を有することができる。また脂肪に富んだ食料品も想定される。
【０１７０】
本明細書に及び付随する実施例に記載されるように、本発明に開示される活性化合物は、高糖条件下で、細胞中への糖摂取（例えば、単糖類、例えばガラクトース及び特に、グルコースの摂取）の予防において特に有用である。従って、本発明の活性化合物は、食料品において特に有用であり、ここで一方では、糖又は他の炭水化物（高い量）の存在が所望されるが（例えば、味覚のために）、しかし他方では、糖（ダルコース及び／又はガラクトース）の吸収は回避されるべきである（所望には）（例えば、医学的兆候、例えば本明書に記載される障害又は疾患のために、又はカロリーの（高められた摂取）が所望されないために）。本発明の食料品はエネルギーに富んでいるが（糖に富み、炭水化物に富み、そして／又は高い血糖指数を有する）、しかしそれにもかかわらず、糖（グルコース及び／又はガラクトース）の吸収が回避されるべきである（所望には）場合でさえ、投与され得ることが、その食料品の１つの主要な利点である。一般的に、用語、例えば「食品」、「飼料」、「食品／栄養補助食品／添加剤」、「食品基材」及び「食品前駆体」の意味は、当業界において良く知られている（例えば、Belitz, Grosch, Scheiberle, Lehrbuch der Lebensmittelchemie, 5. Auflage, Springer）。原則的に、記載される食料品とは、すべての食用及び飲用可能な化合物/組成物、特に固体並びに液体食物を言及する。
【０１７１】
原則的に、本発明の医薬組成物に関して、本明細書の他の場所に提供されるすべての関連する定義は、必要な変更を加えて、本発明の食料品に適用される。
【０１７２】
本発明の食料品、又は本発明に従って調製される食料品の非制限的例は、次のものである：ベーカリー製品、例えばケーキ、クッキー、ビスケット、ドーナツ、ビート；肉製品、例えば、ソーセージ、ミートボール、ハンバーガー、ミートパイ；穀物製品、例えばケーキ混合物、マフィン混合物、グラノーラ；乳製品、例えばヨーグルト、豆腐チーズ混合物、ジャンケット、アイスクリーム、チーズ、ミルクシェーク、バター；ココア及びチョコレート製品、例えばチョコレートバー、チョコレートコーティング；アルコール飲料、例えば酒、ビール、ワイン；ノンアルコール飲料、例えばソフトドリンク、レモネード、コカコーラ；フルーツ製品、例えばジャム、ゼリー、フルーツクマ；デザート・菓子及びスイーツ、例えばゼリークマ、マジパン、チューインガム、糖シロップ、詰め物に使用される砂糖の塊、キャンディー、デザートパウダー；ジャガイモ製品、例えばフライドポテト、チップ；油脂含有製品、例えばマヨネーズ、オレオマーガリン。
【０１７３】
ファーストフード、例えば冷凍食品、缶詰製品、フライド又は乾燥製品への本明細書に定義される活性化合物（例えば、（ポリ）ペプチド）の使用もまた、想定される。
【０１７４】
本発明は、本明細書に定義される活性化合物、特に（ポリ）ペプチドを含む、食料品、例えば食品組成物／製品／サプリメント、「新規食品」、［機能的食品］（ポジティブ効果が生理学的又はさらに健康的として見なされ得る成分を含む食品）、「ライフスタイル食品」及び健康製品（有益な効果を有する製品）を提供する。例えば、そのような食品組成物／製品／サプリメント、「新規食品」、［機能的食品］、「ライフスタイル食品」及び健康製品は、ドリンク、バー、粉末、（発泡性）錠剤、糖衣錠、アンプル、シェイク、同様のもの、例えばタンパク質シェイク、及び同様のものの形で存在する。また、食品組成物／製品／サプリメント、「新規食品」、［機能的食品］、「ライフスタイル食品」及び健康製品は、特に、炭水化物に富んでおり、そして／又は高い血糖指数を有し、そして任意には、脂肪に富んでいる。前記製品はまた、例えば筋肉形成のために、高含有量のタンパク質も有することができる。
【０１７５】
本明細書に記載される食料品のさらなる例は、ガム、スプレー、キャンディー、乳児用ミルク、アイスクリーム、冷菓、甘いサラダドレッシング、ミルク調製物、例えばチーズ、クォーク、（無乳糖）ヨーグルト、酸乳、コーヒークリーム又はホイップクリーム、及び同様のものである。
【０１７６】
活性成分が添加され得る、さらなる特定の食料品は、ジュース、リフレッシュドリンク、シェイク、例えばタンパク質シェイク、スープ、茶、サワーミルク飲料、乳製品、例えば発酵乳、アイス、バター、チーズ、加工乳及びスキムミルク、肉製品、例えばハム、ソーセージ、及びハンバーグ、魚肉、ケーキ製品、卵製品、例えばシーズニングエッグロール及び卵豆腐、菓子、例えばクッキー、ゼリー、スナック、及びチューインガム、パン、麺類、漬物、燻製品、乾燥魚及び調味料を包含する。食料品の形は、例えば粉末、シート状の形、ボトル形、缶詰の形、レトルト形、カプセル形、錠剤形及び流体形を包含する。
【０１７７】
本発明の飼料は、活性成分を含む任意の飼料であり得る。飼料は、例えばペット飼料（例えば、イヌ、ネコ及びラット用）、牛や豚用の家畜飼料、鶏及び七面鳥のための鶏様飼料、及び魚の養殖飼料（例えば、鯛及びブリ用）を包含する。
【０１７８】
本明細書において言及され、そして提供される食料品は、活性成分／化合物を、食料品の生又は（前）調理材料及び／又は前駆体に添加するか／投与することを包含する、その食料品を生成するための一般的方法により生成され得る。この場合、コンパートメントがブレンドされるか／混合され得る。本発明の食料品は、食品、飲料又は飼料、等に一般的に適用されるのと同じ態様で、成形され、そして造粒化され得る。成形及び造粒化方法は、例えば、造粒化方法、例えば流体層造粒、攪拌造粒、押し出し造粒、ローリング造粒、ガス流造粒、圧縮成形造粒、クラッキング造粒、噴霧造粒、及び噴射造粒、コーティング方法、例えばパンコーティング、流動層コーティング、及びドライコーティング、パフ乾燥、過剰水蒸気法、フォームマット方法、拡張方法、例えばマイクロ波インキュベーション法、及び、押出造粒機及び押出機を備えた押出法を包含する。
【０１７９】
生食品／飼料材料又は食品／飼料前駆体は、例えばコーンフレーク、ブランド、脂肪種子ミール、動物由来の供給原料、他の供給原料、及び精製された製品を包含する。
【０１８０】
本発明はまた、食料品、例えば栄養添加物及び食品、飲料及び飼料のための添加物にも関し、ここでそれらは、本明細書に定義されるような活性化合物の存在のために、本発明に従って、グルコース及び／又はガラクトース輸送を特異的に修飾することができる。添加物は、一般的な当業界で知られている添加物の製造方法により製造され得る。本発明の活性化合物とブレンドされるか／混合される公知添加物の例は、Food Additive Handbook (The Japan Food Additives Association; issued on January 6, 1997)に記載されている。添加物の特定の例は、甘味料、着色料、防腐剤、増粘剤及び安定剤、酸化防止剤、色止め剤、漂白剤、防腐剤、ガムベース、ビターズ、酵素、蛍光増白剤、酸性化剤、調味料、乳化剤、エンハンサー、製造のための剤、フレーバー、及び香辛料抽出物、並びにさらに、従来の糖類、澱粉、無機材料、植物粉末、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、及び可塑剤も包含する。
【０１８１】
食料品（又は医薬組成物）に含まれるような活性化合物、特に本明細書に定義されるような（ポリ）ペプチドの濃度は、それぞれの食料品（又は医薬組成物）の０．００１〜１００重量％、０．０１〜５０重量％、 ０．１〜２５重量％、１〜２５重量％、２〜１０重量％ 、３〜７重量％、又は約５重量％又は１０重量％である。例えば、約５ｇの活性成分を含む、１００ｍｌの飲料が、本発明に従って使用され得る。
【０１８２】
摂取される本発明の食料品の量は、特別には制限されない。摂取される量は、例えば活性成分の合計に基づいて、一般的に１日当たり０．１ｇ〜５００ｇ、０．１〜２００ｇ、０．１ｇ〜１００ｇ、０．１〜５０ｇ又は０．１ｇ〜２０ｇであり得る。食料品は、１日−５年、又はさらに、例えば２週〜1年の期間、連続的に摂取され得る（この量で）。ここで、摂取される量は、食料品を摂取する個人の症状の必要性、要求、重症度、年齢及び体重、及び同様のものに依存し、おおよその範囲に調節され得る。
【０１８３】
本発明の食餌／食料品において高められる炭水化物／糖は、グルコース、ガラクトース、サッカロース、ラクトース、マルトース、グリコーゲン及び／又は澱粉であり得る。
【０１８４】
炭水化物に富んだ、糖に富んだ、澱粉に富んだ、及び脂肪に富んだ食餌／食料品、及び
高血糖指数を有する食餌／食料品は当業界において知られている。例えば、そのような組成物は、Bjorck and Elmstahl (2003) Proceedings of Nutrition Society 62,201-206及びKennedy (2001) J. Am. Diet. Assoc. 101(4):411-420に記載されている。
【０１８５】
血糖指数（ＧＩ）は、血中グルコース（血中糖）レベルに対するそれらの即効性に基づいての炭水化物の評価である。それは、ｇタンパク質に対してのｇ食品を比較する。消化の間、すばやく分解する炭水化物は、最も高いＧＩを有する。次に、血中グルコース応答は、速く且つ高い。ゆっくり分解し、血流中に徐々にグルコースを放出する炭水化物は、低いＧＩを有する。炭水化物が、食後、血中糖レベルを高める程度に従って、０〜１００のスケールでそれらの炭水化物を評価する。高いＧＩを有する食品は、急速に消化され、そして吸収され、そして血中糖レベルにおいて著しい変動をもたらす食品である。食品の遅い消化及び吸収による低ＧＩ食品は、血中糖及びインスリンレベルの徐々の上昇をもたらし、そして健康のための実証済みの利点を有する。低ＧＩ食餌は、糖尿病（１型及び２型）を有する人々においてグルコース及び脂質の両レベルを改善することが示されている。それらは、食欲の制御を助け、そして空腹を遅延するので、体重管理のための利点を有する。低ＧＩ食餌はまた、インスリンレベル及びインスリン耐性も低める。ハーバード大学公衆衛生学部からの最近の研究は、疾患、例えば２型糖尿病及び冠状動脈性心疾患の危険性が強く全体的な食餌のＧＩに関連していることを示唆している。１９９９年、世界保健機関（ＷＨＯ）及び食糧農業機関（ＦＡＯ）は、先進国の人々が、最も一般的な豊かさの疾患、例えば冠状動脈性心疾患、糖尿病及び肥満を予防するために、低ＧＩ食品に彼らの食生活を確立することを推薦している。
【０１８６】
しかしながら、言及されたように、低ＧＩ食品の上述の利点はまた、本発明の正常又は高ＧＩ食品（本明細書に記載される活性成分を含む）により達成され得る。
【０１８７】
食品のＧＩ評価を決定するために、１０〜５０ｇの炭水化物を含む食品の測定された部分が、一晩の絶食の後、例えば１０人の健康な人々に供給された。指刺し血液サンプルが、次の２時間にわたって、１５〜３０分間隔で採取される。それらの血液サンプルが、２時間の血糖応答曲線を構成するために使用される。その曲線下の面積（ＡＵＣ）が、試験食品を取った後、血中グルコースレベルの全体的上昇を反映するために計算される。ＧＩ評価（％）が、参照食品（同じ量のグルコース）についてのＡＵＣにより、試験食品についてのＡＵＣを割算し、そして１００を掛けることにより計算される。標準食品の使用は、対象の物理的特性における差異の交絡影響を低めるために必須である。すべての１０人の対象からのＧＩ評価の平均は、その食品のＧＩとして公開されている。上記の観点から、血糖指数は、何れか所定の食料品について当業者により容易に決定され得ることは明白である。例えば、Brand-Miller, “The new glucose revolution” or in Brand-Miller, “The Glucose Revolution Top 100 Low Glycemic Foods”, 両者とも2003年に公開されている, Marlow and Company, New York, USにおける、血糖指数の値を含むリスト及び表もまたは、利用できる。
【０１８８】
例えば、「炭水化物に富んでいる（Carbohydrate-rich）」とは、食料品内の５５％以上のエネルギーが炭水化物に起因していることを意味する。「脂肪に富んでいる（Fat-rich）」とは、食料品内の３５％以上のエネルギーが脂肪に起因していることを意味する。例えば、「糖に富んでいる（Sugar -rich）」とは、食料品が５重量％以上の単糖類及び二糖類を含むことを意味する。本発明に関しては、例えば、高血糖指数は、７０以上又は９０以上の血糖指数である。
【０１８９】
本発明によれば、例えば、「糖」とは、すべての栄養関連の糖及び糖誘導体を意味する。それらの糖及び糖誘導体は、当業界において良く知られている。前に言及されたように、グルコース、ガラクトース、サッカロース、ラクトース及び／又はマルトースが本発明に従って使用されるべきであることが、典型的には想定される。フルクトース及び／又はマンノースもまた、使用され得る。
【０１９０】
微生物が本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチドを発現し、そしてそれらの微生物が食料品として／食料品に、又は医薬組成物として／医薬組成物に使用されることもまた、想定される。プロバイオテック効果の他に、本明細書に記載されるペプチドを発現するプロバイオテック微生物は、本明細書に言及される障害又は疾患を治療するか、又は予防するために、又は本明細書に記載されるような非医学的状態に介入するために有用である。前記プロバイオテック微生物の量は、治療されるべき状態、好ましくは肥満、糖尿病及び同様のものを有為に前向きに変更するのに十分に高いが、しかし健全な医学的判断の範囲内で、重大な副作用を回避するのに十分に低い（合理的な利益／リスク割合で）。前記プロバイオテック微生物の有効量は、達成される特定の目的、治療される患者の年齢及び物理的状態、根本的疾患の重症度、治療の期間、併用療法の性質、使用される特定の微生物、等により変化するであろう。決定される実際の利点は、プロバイオテック生物が便利な手段で、例えば経口路により投与され得ることである。投与の経路に依存して、活性成分を含むプロバイオテック生物は、酵素、酸、及び前記生物を不活性化する他の天然の状態の作用から前記生物を保護する材料により被覆されることが必要とされ得る。非経口投与以外によりプロバイオテック生物を投与するために、それらは不活性化を防ぐ材料により被覆されるか、又はその材料により投与されるべきである。例えば、プロバイオテック生物は、酵素インヒビターと共に、又はリポソームにおいて、同時投与され得る。酵素インヒビターは、膵臓トリプシンインヒビター及びトラシロールを包含する。リポソームは、水中油中水Ｐ４０エマルジョン、及び泌尿生殖器表面に乳酸菌又はそれらの副産物を輸送する、特異的に企画されたリポソームを包含する。分散液はまた、例えば、グリセロール、液体ポリエチレングリコール及びそれらの混合液において、及び油においても調製され得る。一般的に、分散液は、基本液は、基本的分散媒体、及び上記により列挙されるそれらからの必要とされる他の成分を含む減菌ビークル中に、種々の減菌プロバイオテック生物を組込むことにより調製される。減菌注射溶液の調製のための減菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分、及び前もって減菌濾過された溶液からの任意の追加の所望する成分の粉末を生成する真空乾燥及び凍結乾燥技法である。追加の好ましい調製方法は、凍結乾燥及び加熱乾燥を包含するが、但しそれらだけには限定されない。
【０１９１】
プロバイオテック生物が上記のように適切に保護される場合、活性成分は、例えば不活性希釈剤、又は同化可能な食用担体と共に経口投与されるか、又はそれは、ハード又はソフトシェルカプセルに封入され得るか、又はそれは胃を通過するよう企画された錠剤（すなわち、腸溶性コーチング）に圧縮され得るか、又はそれは本明細書に記載される、食品、飲料又は食餌又は食料品と共に直接的に組込まれ得る。経口治療投与に関しては、プロバイオテック生物は、賦形剤と共に組込まれ、そして摂取可能な錠剤、口腔錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウエハ、及び同様のものの形で使用され得る。プロバイオテック生物は、本明細書に記載されるような投与単位形で、適切な医薬的に又は食品許容の担体と共に有効量で、便利且つ効果的投与のために配合される。
【０１９２】
本発明によれば、他の生物が本明細書に記載されるようなペプチドを発現し、そしてそれらの生物又はその一部が食料品又は医薬組成物として使用される（又はそれらの調製のためである）こともまた想定される。例えば、本明細書に記載されるようなペプチドを発現するそのような生物は、植物、動物、藻類又は菌類である。
【０１９３】
また、本明細書に記載される（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子、又は前記核酸分子を含むベクターが、本発明に従って使用され得る。
【０１９４】
本明細書において定義される（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子は、核酸、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ又はＰＮＡ（ペプチド核酸）の何れかのタイプであり得る。アデニン、グアニン、チミン及びシトシンについてのモノマー単位は、市販されている（Perceptive Biosystems）。ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、ＤＮＡ類似体のポリアミド型である。ＤＮＡは、例えばｃＤＮＡであり得る。１つの実施形態によれば、それは、ゲノムＤＮＡコードのＲＳ１のフラグメントである。ＲＮＡはｍＲＮＡであり得る。核酸分子は、天然、合成又は半合成であり得るか、又はそれは、誘導体、例えばペプチド核酸（Nielsen (1991), Science 254, 1497-1500）又はホスホロチオエートであり得る。さらに、核酸分子は、前述の核酸分子の何れかを、単独で、又は組合して含む、組換え生成された（キメラ性）核酸分子であり得る。
【０１９５】
核酸分子は、ベクター、例えば遺伝子発現ベクターの一部であり得る。ベクターは、プラスミド、コスミド、ウィルス、バクテリオファージ、又は従来、遺伝子工学に使用される別の当核分野で公知のベクターであり得、そしてさらに、遺伝子、例えば適切な宿主細胞において、及び適切な条件下で前記ベクターの選択を可能にするマーカー遺伝子、又は標識コード遺伝子を含むことができる。
【０１９６】
特に、本明細書において定義されるような（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子は、市販のベクター中に挿入され得る。そのようなベクターの非制限的例は、哺乳類細胞と適合できるプラスミドベクター、例えばｐＵＣ、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ (Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ)、ｐＥＴ （Ｎｏｖａｇｅｎ）、ｐＲＥＰ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＣＲＴｏｐｏ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐｃＤＮＡ３ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＣＥＰ４ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＭＣ１ｎｅｏ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ)、ｐＸＴ１（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＳＧ５（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ＥＢＯ−ｐＳＶ２ｎｅｏ、ｐＢＰＶ−１、ｐｄＢＰＶＭＭＴｎｅｏ、ｐＲＳＶｇｐｔ、ｐＲＳＶｎｅｏ、ｐＳＶ２−ｄｈｆｒ、ｐＵＣＴａｇ、ｐＩＺＤ３５、ｐＬＸＩＮ 及びｐＳＩＲ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）及びｐｌＲＥＳ−ＥＧＦＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を包含する。バキュロウィルスベクター、例えばｐＢｌｕｅＢａｃ、ＢａｃＰａｃｚ バキュロウィルス発現システム(ＣＬＯＮＴＥＣＨ)及び ＭａｘＢａｃＴＭ バキュロウィルス発現システム、昆虫細胞及びプロトコル(Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ)は、市販されており、そしてまた、高収率の生物学的活性を生成するためにも使用され得る（また、Miller (1993), Curr. Op. Genet. Dev. 3, 9 ; O'Reilly, Baculovirus Expression Vectors: A Laboratory Manual, p. 127を参照のこと）。さらに、原核生物ベクター、例えばｐｃＤＮＡ２；及び酵母ベクター、例えばｐＹｅｓ２は、本発明に従って使用され得る他のベクターの非制限的例である。ベクター修飾技法については、Sambrook and Russel (2001),同上を参照のこと。
【０１９７】
ベクターは、クローニング又は発現のための１又は２以上の複製及び継承システム、宿主における選択のための１又は２以上のマーカー、例えば抗生物質耐性マーカー、及び１又は２以上の発現カセットを含むことができる。
【０１９８】
ベクターに挿入されるコード配列は、標準方法により合成されるか、天然源から単離されるか、又はハイブリッドとして調製され得る。転写調節エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー及び／又はインスレーター）への、及び／又は他のアミノ酸コード配列へのコード配列の連結は、確立された方法を用いて実施され得る。さらに、ベクターは、本明細書に定義される（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子の他に、適切な宿主においてコード領域の適切な発現を可能にする発現制御エレメントを含む。そのような制御エレメントは、当業者に知られており、そしてベクター中への挿入体の導入のためのプロモーター、翻訳開始コドン、翻訳及び挿入部位又は内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）（Owens (2001), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 1471-1476）を含むことができる。好ましくは、本明細書に定義される（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子は、真核又は原核細胞における発現を可能にする前記発現制御に操作可能的に連結される。真核及び原核細胞における発現を確かにする制御エレメントは、当業者に良く知られている。上述のように、それらは通常、転写の開始を確保する調節配列、及び任意には、転写の終結及び転写体の安定化を確保するポリ−Ａシグナルを含む。追加の調節エレメントは、転写及び翻訳エンハンサー及び／又は天然において関連するか、又は異種プロモーター領域を含むことができる。例えば、哺乳類宿主細胞において発現する可能性ある調節エレメントは、ＣＭＶ−ＨＳＶチミジンキナーゼプロモーター、ＳＶ４０、ＲＳＶ−プロモーター（ラウス肉腫ウィルス）、ヒト伸長因子１α−プロモーター、ＣＭＶエンハンサー、ＣａＭ−キナーゼプロモーター又はＳＶ４０−エンハンサーを含む。原核細胞における発現に関しては、例えばｔａｃ−ｌａｃ−プロモーター、ｌａｃＵＶ５又はｔｒｐプロモーターを含む多数のプロモーターは、記載されて来た。原核細胞における、本明細書に定義される（ポリ）ペプチドの発現は、本明細書に定義される医薬組成物又は食料品の調製において特に有用である。例えば、本明細書に定義されるような（ポリ）ペプチドを発現できる細菌宿主が使用されることが想定される。それらの細菌は、医薬組成物又は食料品の形で、例えば「プロバイオテック食品添加物」として、ヒトに投与され、そして／又は与えられることもまた、想定される。
【０１９９】
転写時間の開始を担当するエレメントの他に、調節エレメントはまた、ポリヌクレオチドの下流に、転写終結シグナル、例えばＳＶ４０−ポリ−Ａ部位又はｔｋ−ポリ−Ａ部位も含むことができる。この場合、適切な発現ベクター、例えばＯｋａｙａｍａ−Ｂｅｒｇ ｃＤＮＡ発現ベクターpcDV1 (Pharmacia)、 ｐＲｃ/ＣＭＶ、 ｐｃＤＮＡ１、 ｐｃＤＮＡ３ (In-Vitrogene、なかでも 、付随する実施例に使用されるような)、ｐＳＰＯＲＴ１ (GIBCO BRL) 又は ｐＧＥＭＨＥ (Promega)、 又は原核生物発現ベクター、 例えばλｇｔ１１は、当業界において知られている。
【０２００】
本発明の発現ベクターは、本発明の核酸及びタンパク質の複製及び好ましくは、発現を少なくとも方向付けすることができる。複製の適切な起点は、複製のＣａｌ  Ｅ１、ＳＶ４０ウィルス及びＭ１３起点を含む。適切なプロモーターは例えば、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）プロモーター、ｌａｃＺプロモーター、ｇａｌ１０プロモーター、及びオートグラファ・カリフォルニカ（Autographa californica）複数核多角体病ウィルス（ＡｃＭＮＰＶ）多面体プロモーターを含む。適切な終結配列は、例えば、ウシ成長ホルモン、ＳＶ４０、ｌａｃＺ及びＡｃＭＮＰＶ多面体ポリアデニル化シグナルを含む。特異的に企画されたベクターは、異なった宿主細胞、例えば細菌−酵母又は細菌−動物細胞、又は細菌−菌類細胞、又は菌又は無脊椎動物細胞間のＤＮＡのシャトリングを可能にする。
【０２０１】
本明細書に定義されるような（ポリ）ペプチドをコードする核酸分子の他に、ベクターはさらに、分泌シグナルをコードする核酸配列を含むことができる。そのような配列は、当業界において知られている。さらに、使用される発現システムに依存して、細胞コンパートメントに、発現されたポリペプチドを方向付けることができるリーダー配列が、本発明の核酸分子のコード配列に追加され得、そしてまた、当業界において知られている。リーダー配列は、翻訳、開始及び終結配列を伴って適切な相でアセンブルされ、そして好ましくは、翻訳されたタンパク質、又はその一部の、中でも細胞外膜又は細胞質ゾル中への分泌を方向付けることができるリーダー配列にアセンブルされる。任意には、異種配列は、所望する特性、例えば発現された組換え生成物の安定化又は単純化された精製を付与するＣ−又はＮ−末端同定ペプチドを含む融合タンパク質をコードすることができる。ベクターが適切な宿主中に組込まれると、その宿主は、ヌクレオチド配列の高レベル発現のために適切な条件下で維持され、そして所望される場合、本発明のペプチド、抗原性フラグメント又は融合タンパク質の収集及び精製が続くことができる。もちろん、ベクターはまた、病原性生物からの調節領域も含むことができる。
【０２０２】
１つの実施形態によれば、本発明の核酸分子を含むベクターは遺伝子療法のために適切であり、すなわち本発明のベクターはまた、遺伝子トランスファー及び／又は遺伝子標的化ベクターでもあり得る。エクスビボ又はインビボ技法により、細胞中に治療遺伝子又は核酸コンストラクトを導入することに基づかれる遺伝子療法は、遺伝子トランスファーの最も重要な適用の１つのである。インビトロ又はインビボ療法のための適切なベクター、ベクターシステム及び方法は、文献に記載されており、そして当業者に知られている；例えばGiordano, Nature Medicine 2 (1996), 534-539; Schaper, Circ. Res. 79 (1996), 911-919; Anderson, Science 256 (1992), 808-813, Isner, Lancet 348 (1996), 370-374; Muhlhauser, Circ. Res. 77 (1995), 1077-1086; Wang, Nature Medicine 2 (1996), 714-716; WO 94/29469; 国際公開第97/00957号; Schaper, Current Opinion in Biotechnology 7 (1996), 635-640 or Verma, Nature 389 (1997), 239-242、及びそこに引用される参考文献を参照のこと。本明細書に記載されるペプチドをコードする核酸分子、及び本明細書に開示されるベクターが、遺伝子療法アプローチのために、特に企画され得る。前記化合物はまた、細胞中への直接的な導入のために、又はリポソーム又はウィルスベクター（例えば、アデノウィルス、レトロウィルス）を介しての導入のために、特に企画され得る。さらに、バキュロウィルスシステム、又はワクシニアウィルス又はセムリキ森林（Semliki Forest）ウィルスに基づくシステムが前記化合物のための真核生物発現システムとして使用され得る。遺伝子療法のために適切な種々のウィルスベクターは、例えばアデノウィルス、ヘルペスウィルス、ワクシニア、又は好ましくはＲＮＡウィルス、例えばレトロウィルスである。単一の外来性遺伝子が挿入され得るレトロウィルスベクターの例は、次のものを包含するが、但しそれらだけには限定されない：モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）。多くの追加のレトロウィルスベクターがまた、複数の遺伝子を組込むことができる。それらのベクターのすべては、選択マーカーのための遺伝子をトランスファーするか、又は組込むことができ、結果的に、形質導入された細胞が同定され、そして生成され得る。
【０２０３】
レトロウィルスは、例えば糖、糖脂質又はタンパク質をコードするポリヌクレオチドを挿入することにより、標的物を特異的にすることができる。当業者は、挿入されたポリヌクレオチド配列を含むレトロウィルスベクターの標的特異的送達を可能にするために、レトロウィルスゲノム中に挿入され得る特異的ポリヌクレオチド配列を、知っているか、又は過度の実験なしに容易に確認することができる。
【０２０４】
本発明はさらに、高糖条件（上記本明細書に記載される）下で、及び／又はエネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事（上記本明細書に記載されるような）と組合しての条件下で、患者に投与される場合、上記本明細書に記載されるような疾患又は障害を予防するか、又は治療するのに適切な化合物をスクリーニングし、そして／又は同定するための方法を提供し、ここで前記方法は、
ｉ）高められた（細胞内）濃度のグルコース及び／又はガラクトース（本明細書に記載されるような）の存在下で、化合物とＳＧＬＴ１−発現細胞とを接触するか、又は化合物をＳＧＬＴ１−発現細胞中に導入し、そして前記細胞のグルコース及び／又はガラクトース摂取活性を決定する工程、ここで対照に比較しての、抑制されたか、又は低められたグルコース及び／又はガラクトース摂取が、前記疾患又は障害を予防するか又は治療するための前記化合物の適合性の指標であり；又は
ii）動物モデルの消化管の少なくとも一部の内腔及び／又は上皮細胞において、高められた濃度のグルコース及び／又はガラクトース（本明細書に記載されるような）の存在下で、化合物を動物モデルに投与し、そして前記消化管の少なくとも一部の上皮細胞中へのグルコース及び／又はガラクトース摂取、又は前記疾患又は障害の症状及び／又は臨床学的徴候／存在を決定する工程、ここで対照に比較しての、抑制されたか又は低められたグルコース及び／又はガラクトース摂取、又は対照に比較しての、前記疾患又は障害の症状及び／又は臨床学的徴候の低下／改善性が、前記疾患又は障害を予防するか又は治療するための前記化合物の適合性の指標である、を含んで成る。
【０２０５】
原則的に、本発明の医薬及び食品組成物に関して、上記本明細書に行われた関連する定義及び記載はまた、必要な変更を伴って、本明細書及び他の本明細書に開示される方法及びキットにも適用される。特に、予防されるか、又は治療される疾患又は障害、糖及び高糖条件、エネルギーに富んだ食餌／食品／食物摂取／食事、グルコース及び／又はガラクトースの高められた（細胞内）濃度、ＳＧＬＴ１及びＳＧＬＴ１−活性／機能、及び消化管の少なくとも一部の内腔及び上皮細胞に関連する、本明細書の他の場所で行われた定義及び記載もまた、必要な変更を伴って、ここに及び他の本明細書に開示される方法及びキットにも適用される。
【０２０６】
ＳＧＬＴ１−発現細胞は、本明細書及び付随する実施例に記載されるような細胞であり得る。例えば、細胞は、アフリアツメガエル（Xenopus laevis）の卵母細胞であり得る。そのような細胞を生成するための手段及び方法は、当業界において知られており、そして本明細書及び付随する実施例に記載されている。同じことが、そのような細胞のグルコース及び／又はガラクトース摂取活性を決定するための手段及び方法に適用される。ＳＧＬＴ１発現細胞はさらに、ＯＤＣを発現することができる。適切な動物モデルは、本明細書及び付随する実施例に記載されるような動物モデルであり得る。例えば、適切な動物モデルは、例えばOssward（２００５同上）により記載されるようなＲＳ１−／−マウス、又は例えば、実施例６及び１１に記載されるような野生型マウスであり得る。
【０２０７】
ＳＧＬＴ１−発現細胞はまた、動物、好ましくは哺乳類の組織サンプルにも含まれ得る。そのような組織（サンプル）の特定例は、消化管（例えば、小腸）の少なくとも一部である。好ましい組織は、ヒトの小腸のサンプルである。また、そのような組織（サンプル）は、本明細書及び付随する実施例に記載される。
【０２０８】
上記セクション（ｉ）に関連して、対照は、スクリーンされ、そして／又は同定される化合物と接触されていないか（又はこの化合物が導入されていない）、又は高められた（細胞内）濃度のグルコース及び／又はガラクトースの存在下でグルコース及び／又はガラクトース摂取を抑制するか又は低めることができないことが知られている化合物と接触された（又はこの化合物が導入されている）、高められた（細胞内）濃度のグルコース及び／又はガラクトースの存在下でＳＧＬＴ１−発現細胞（又はそれを含む組織）であり得る。高められた（細胞内）濃度のグルコース及び／又はガラクトースの存在下でグルコース及び／又はガラクトース摂取を抑制するか又は低めることができないことが知られている化合物の例は、ＱＣＰ, ＱＳＰ, ＱＴＰ及びＱＰＰ 、及びｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ８３Ｅ）  又はｈＲＳ−１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ａ）である。別の例は、ＱＥＰ、すなわちＰＥＱの相互アミノ酸ストレッチである。本明細書及び付随する実施例に記載されるような別の適切な対照もまた使用され得る。
【０２０９】
上記セクション（ii）に関連して、スクリーンされ、そして／又は同定される化合物が投与されていなか、又はグルコース及び／又はガラクトース摂取を抑制するか又は低めるか、又は前記疾患又は障害の症状／臨床学的徴候の１つを低めるか／改善することができない化合物が投与されている、上記に記載されるような動物モデルであり得る。上記セクション（ｉ）に関するそのような（対照）化合物に関して言われて来たことはまた、必要な変更を伴って、ここに適用される。
【０２１０】
グルコース及び／又はガラクトース摂取の抑制又は低減、又は前記疾患又は障害の症状／臨床学的徴候の低減／改善は、それが、それぞれの対照に比較して、少なくとも５％、１０％、２０％、５０％、１００％又は２００％（より高い値が好ましい）である場合、前記疾患又は障害を予防するか又は治療するための前記化合物の適合性の指標である。症状及び／又は臨床学的兆候は、上記本明細書に記載されるような症状及び／又は臨床学的徴候であり得る。特定の例は、エネルギーに富んだ食事の後、又はＯＧＴＴの後、低められた血中グルコース／ガラクトース、低められた血中グルコース／ガラクトースピーク（特に、高糖条件下で）、及び／又は低められた／遅められた、インスリンレベルの上昇である。
【０２１１】
本発明はさらに、本明細書に記載されるような疾患又は障害を予防するか又は治療するために適切な、及び／又は細胞中への（ＳＧＬＴ１−介在性）グルコース及び／又はガラクトース摂取を阻害できる化合物をスクリーニングし、そして／又は同定するための方法を提供し、ここで前記方法は、
（ｉ）化合物と、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）又はＯＤＣ発現細胞を接触する工程；そして
（ii）ＯＤＣ活性及び／又は発現（前記細胞の）を決定する工程、
ここで、対照に比較しての抑制されたか又は低められたＯＤＣ活性及び／又は発現が、前記疾患又は障害を予防するか又は治療するための前記化合物の適合性、及び／又は（ＳＧＬＴ１−介在性グルコース及び／又はガラクトース摂取）を阻害する前記化合物の能力についての標識である、を含んで成る。
【０２１２】
この場合、対照は、スクリーンされるべき化合物と接触されていないか、又はＯＤＣ活性及び／又は発現を抑制するか又は低めることができない化合物と接触されている、ＯＤＣ又はＯＤＣ−発現細胞であり得る。そのような（対照）化合物は、本明細書及び付随する実施例に記載され、そして例えば、上記（対照）化合物、例えば相互アミノ酸ストレッチ（例えば、ＱＥＰの代わりにＰＥＱ）である。例えば、抑制されたか又は低められたＯＤＣ活性及び／又は発現は、対照に比較して、ＯＤＣ活性及び／又は発現が、少なくとも約５％、１０％、２０％、５０％、１００％又は２００％、抑制されるか又は低められる場合、生じる。
【０２１３】
本発明はさらに、本明細書に記載されるような疾患又は障害を予防するか又は治療するために適切な、及び／又はＯＤＣを発現する細胞中への（ＳＧＬＴ１−介在性）グルコース及び／又はガラクトース摂取を阻害できる化合物をスクリーニングし、そして／又は同定するための方法を提供し、ここで前記方法は、
（ｉ）化合物と、ＯＤＣ発現細胞とを接触する工程；そして
（ii）前記細胞中へのグルコース及び／又はガラクトース摂取を決定する工程、
ここで、対照に比較しての抑制されたか又は低められたグルコース及び／又はガラクトース摂取が、本明細書に記載されるような前記疾患又は障害を予防するか又は治療するための前記化合物の適合性、及び／又はＯＤＣ発現を発現する細胞中への、（ＳＧＬＴ１−介在性）グルコース及び／又はガラクトース摂取を阻害する前記化合物の能力についての標識である、を含んで成る。
【０２１４】
原則的に、対照に関して上記に言われて来たことは、必要な変更を伴って、ここに適用される。しかしながら、特定の対照は、ＯＤＣを発現しない細胞であり得る。そのような対照についての例は、ＯＤＣノックアウト細胞／細胞系、ＯＤＣの発現がｓｉ−ＲＮＡ方法により抑制され／低められている細胞／細胞系、又はＯＤＣノックアウト動物であり得る。
【０２１５】
上記抑制されたか又は低められたグルコース及び／又はガラクトース摂取に関して言われて来たことはまた、必要な変更を伴って、ここに適用される。
【０２１６】
本発明はさらに、ＯＤＣを発現する細胞中への（ＳＧＬＴ１−介在性）グルコース及び／又はガラクトース摂取のインヒビターの阻害効果を高めることができる化合物をスクリーニングし、そして／又は同定するための方法を提供し、ここで前記方法は、
（ｉ）化合物及び前記インヒビターと、ＯＤＣ発現細胞とを接触する工程；そして
（ii）前記細胞中へのグルコース及び／又はガラクトース摂取を決定する工程、
ここで、対照に比較しての抑制されたか又は低められたグルコース及び／又はガラクトース摂取が、ＯＤＣ発現を発現する細胞中への、（ＳＧＬＴ１−介在性）グルコース及び／又はガラクトース摂取の前記インヒビターの阻害効果を高める前記化合物の能力についての標識である、を含んで成る。
【０２１７】
原則的に、上記ＯＤＣ−発現細胞及び対照に関して言及されて来たことはまた、必要な変更を伴って、ここに適用される。特定の対照は、グルコース及び／又はガラクトース摂取（ＳＧＬＴ１−介在性）のインヒビター、又はその阻害効果を高めることができない化合物（例えば、相互アミノ酸ストレッチ）とのみ接触されたＯＤＣ−発現細胞であり得る。この側面においてスクリーンされた特定の化合物は、上記スクリーニング及び／又は同定方法の何れかにより肯定的にスクリーンした化合物である。上記抑制されたか、又は低められたグルコース及び／又はガラクトース摂取に関して言われて来たことは、必要な変更を伴って、本明細書に適用される。
【０２１８】
本発明に使用されるようなＯＤＣ−発現細胞はさらに、ＳＧＬＴ１を発現することができる。ＯＤＣ−（及びＳＧＬＴ１−）発現細胞が調製され、そしてＯＤＣ（及びＳＧＬＴ１）活性及び発現（そのような細胞の）が、当業界において知られており、そして本明細書に及び付随する実施例に記載されるような手段及び方法に従って決定され得る。例えば、ＯＤＣ−（及びＳＧＬＴ１−）発現細胞は、アフリカツメガエルの卵母細胞、又はＨＥＫ２９３細胞であり得る。
【０２１９】
ＯＤＣの活性及び／又は発現を使用する、上記スクリーニング及び／又は同定方法の何れかは、さらに、化合物のそれぞれの能力／適合性が高グルコース条件下で、及び特に、高められた（細胞内）濃度のグルコース及び／又はガラクトース（本明細書に記載されるような）の存在下で、存在するかどうかを決定する工程を包含することができる。
【０２２０】
変更されたＯＤＣ活性を有する患者が存在することは、当業界において知られており、そしてＯＤＣが、そのような変更されたＯＤＣ活性に導くことができる突然変更（例えば、点突然変異）を有することができることは知られている（例えば、Tamori (1995), Cancer Research 55, 3500-3 and Maekawa (1998), Jpn J Clin Oncol 28, 383-7を参照のこと）。従って、そのような患者は、本明細書に記載される（ポリ）ペプチドの投与に必ずしも応答する必要はない。従って、本明細書に記載されるような疾患又は障害の何れかに罹患している患者が（ポリ）ペプチドの投与に対して実際応答するかどうかが、本発明においてまた試験され、そしてそれらの患者の何人かは、（ポリ）ペプチドによる彼らの治療について賢明であろう。
【０２２１】
従って、本発明はさらに、本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチドにより治療されるべきであり、そして／又は本明細書に記載されるような疾患に罹患している患者の前記（ポリ）ペプチド（又は別の活性化合物）に対して応答しないか、又は応答するかを予測する方法も提供し、ここで前記方法は、
（ｉ）発現されたＯＤＣが前記（ポリ）ペプチドに結合するかどうか、及び／又はＯＤＣ活性及び／又は発現が変更されていないか、又は前記（ポリ）ペプチドにより阻害されるか／低められるかどうかを、前記患者のＯＤＣ発現サンプルにおいて決定し；
（ii）非結合の及び／又は変更されていないＯＤＣ活性及び／又は発現を、前記（ポリ）ペプチドに対する前記患者の非応答として判断し；そして
（iii）結合し、及び／又は阻害され／低められたＯＤＣ活性及び／又は発現を、前記（ポリ）ペプチドに対する前記患者の応答として判断する工程を含んで成る。
【０２２２】
ＯＤＣ−発現サンプルは、患者の消化管の少なくとも一部の組織サンプル（例えば、小腸からの組織サンプル）であり得る。当業者は、前記（ポリ）ペプチドがＯＤＣに結合するかどうか、ＯＤＣ活性及び／又は発現が変更されていないか、又は前記（ポリ）ペプチド（の結合）により阻害されたか／低められたかどうか、ＯＤＣ発現サンプルにおいて容易に決定することができる。例えば、（ＳＧＬＴ１−介在性）グルコース及び／又はガラクトース摂取又は輸送（サンプル／細胞中への）が、それぞれのインジケーターとして使用され得る。それぞれの対照は、（ポリ）ペプチドと、又はＯＤＣ活性及び／又は発現、及び／又はＳＧＬＴ１活性及び/又は発現を調節できない別の（ポリ）ペプチド（例えば、上記対照化合物）と接触されていないＯＤＣ−発現サンプルであり得る。対照はまた、本明細書及び付随する実施例にも記載されている。
【０２２３】
本発明はさらに、本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチド（又は別の活性化合物）による予防又は治療について患者を階級化する（stratifying）方法を提供し、ここで前記方法は、上記工程（ｉ）―（iii）を含んで成り；ここで非結合及び／又は変更されていないＯＤＣ活性及び／又は発現が、患者が前記（ポリ）ペプチドによる治療に対して適切でなく、そして患者が前記（ポリ）ペプチドよりも別の治療により治療されるべきであることを示唆し；そして結合する、及び／又は阻害されたか／低められたＯＤＣ活性及び／又は発現が、患者が前記（ポリ）ペプチドにより治療されるべきであることを示唆する。
【０２２４】
本明細書に他の場所で行われた関連する定義及び記載もまた、ここに適応される。特に、上記の予測方法に関して行われた関連する定義及び記載もまた、必要な変更を伴って、ここに適用される。
【０２２５】
本発明はさらに、本明細書に記載されるような疾患又は障害に罹患している患者が、本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチドに対して非応答体であるか又は応答体であるかを決定するための、ＯＤＣ活性及び／又は発現を決定するための手段、及び本明細書に記載されるような少なくとも１つの（ポリ）ペプチド（又は別の活性化合物）を含んで成るキットを提供する。ＯＤＣ活性及び／又は発現を決定するための手段の例は、本明細書及び付随する実施例に提供され、そして当業界において知られている（例えば、Milovic (2001, Biochem Pharmacol. 61, 199-206)を参照のこと）。本発明のキットは、ＯＤＣの活性及び／又は発現を使用する、上記スクリーニング又は階級化する方法の何れかに使用され得る。
【０２２６】
本発明はさらに、本明細書に記載されるような疾患又は障害を予防するか、又は治療するのに適切な化合物／薬物を開発し、そして／又は企画するための方法を提供し、ここで前記方法は、
（ｉ）本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチドが結合するＯＤＣの部位を同定し；そして
（ii）化合物／薬物がＯＤＣの前記部位に適合し、そして／又は結合する程度を決定し；
（iii）高い程度の適合及び／又は結合が、前記疾患又は障害を予防するか又は治療する化合物／薬物の適合性として判断する、工程を含んで成る。
【０２２７】
上記開発及び／又は企画する方法はさらに、前記ＯＤＣ部位に、より密接して／強く、又は高い程度に適合し、そして／又は結合するために、前記化合物／薬物を調節する工程を含むことができる。
【０２２８】
本明細書に提供される一般常識及び開示に基づいて、当業者は、本明細書に記載されるような（ポリ）ペプチドが結合するＯＤＣの部位を容易に同定し、そしてさらに、上記セクション（ｉ）及び（ii）に記載されるような決定及び判断の工程を容易に実施することができる。さらに、当業者は、前記ＯＤＣ部位に、より密接して／強く／高い程度に適合し／結合するために、開発され、そして／又は企画される化合物／薬物を調節することができる。この場合、当業者はAlmrud (2000, J. Mol. Biol. 259, 7-16)に開示されるようなＯＤＣの結晶構造に依存している。
【実施例】
【０２２９】
実施例１：材料及び方法
ペプチドの合成。ペプチドを、Vernaleken (2007) J Biol Chem. 282, 28501-28513に記載のようなＦｍｏｃ（Ｎ−（９−フルオレニン）メトキシカルボニル）方法を用いて、合成した。
【０２３０】
ヒト小腸。高度肥満患者の肥満症治療操作中に、日常的に解剖された空腸断片を、５ｍＭのＤ−グルコースを含むダルベッコ変性イーグル培地におて、氷上で１−３時間、貯蔵した。粘膜を単離し、そしてその粘膜の円形領域を、パンチング装置を用いて切開した。粘膜片を、摂取測定の実施の前、５ｍＭのＤ−グルコースを含むクレブス・リンガー緩衝液（２５ ｍＭ のＨＥＰＥＳ、１０８ｍＭ のＮａＣｌ、４．８ ｍＭ のＫＣｌ、１．２ｍＭ のＫＨ２ＰＯ４、１．２ｍＭ のＣａＣｌ２、ｐＨ ７．４）により、３７℃で３度、洗浄した。
【０２３１】
ＲＳ１−Ｒｅｇ及びＲＳ１−Ｒｅｇ変異体の発現及び精製。Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）細菌（株ＢＬ２１  ＳＴＡＲ）を、Ｈｉｓ−標識されたＲＳ１−Ｒｅｇ又はＲＳ１−Ｒｅｇを含むｐＥＴ２１ａプラスミドによりトランスフェクトし、そして中期対数相まで増殖した。タンパク質発現を、イソプロピル−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドにより誘発し、そして細菌を、３０℃で３時間、増殖した。６，０００ｘｇでの１５分間の遠心分離の後、細菌を洗浄し、５００ｍＭのＮａＣｌ及び５０ｍＭのイミダゾールを含む、２０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）に懸濁し、４℃での音波処理により溶解し、そして細胞残骸を、１００，０００ｘｇでの６０分間の遠心分離により除去した。タンパク質精製のために、上清液を、Ｎｉ２＋−ＮＴＡ−アガロース（Qiagen, Hilden, Germany）と共に混合し、回転下で１時間、インキュベートし、そして空の重力流カラムに注いだ。５００ｍＭのＮａＣｌ及び５０ｍＭのイミダゾールを含む、２０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）による十分な洗浄の後、タンパク質を、５００ｍＭのイミダゾールを含む同じ緩衝液により溶出した。精製されたタンパク質を含む画分をプールし、そして１５０ｍＭのＮａＣｌ又はＫ−Ｏｒｉ緩衝液（５ ｍＭ のＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．６、１００ ｍＭ  のＫＣｌ、３ ｍＭ のＮａＣｌ、２ ｍＭ のＣａＣｌ２、１ ｍＭのＭｇＣｌ２）を含む、２０ｍＭのＨｅｐｓ（ｐＨ７．５）に対して透析した。
【０２３２】
アフリカツメガエル卵母細胞におけるトランスポーターの発現。ヒトＳＧＬＴ１ （ｈＳＧＬＴ１） (Vernaleken (2007) J Biol Chem. 282, 28501-13) 及びヒトＣＮＴ１ （ｈＣＮＴ１） (Errasti-Murugarren, Mol Pharmacol 82 (2012), 59-67)を、記載されるような、それぞれの線状化されたｍ７Ｇ（５′）Ｇ−キャップされたセンスｃＲＮＡの注入により、卵母細胞において発現した。第Ｖ又はVI期の卵母細胞を、麻酔された動物から入手し、コラゲナーゼによる処理により嚢胞除去し、洗浄し、そして１２．５μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを含む変性Ｂａｒｔｈ溶液（１５ｍＭ のＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．６、８８ｍＭ のＮａＣｌ、１ｍＭのＫＣｌ、０．３ｍＭ のＣａ（ＮＯ３）、０．４ｍＭ のＣａＣｌ２、０．８ｍＭ のＭｇＳＯ４）において維持した（Vernaleken (2007) J Biol Chem. 282, 28501-13）。選択された卵母細胞に、５０ｎｌのｃＲＮＡ含有水（２．５ｎｇのｈＳＧＬＴ１又は０．５ｎｇのｈＣＮＴ１）を注入した。発現のために、卵母細胞を、ゲンタマイシンを含む変性Ｂａｒｔｈ溶液において、１６℃で２−３日間インキュベートした。注入されなかった対照卵母細胞は、平行してインキュベートされた。
【０２３３】
卵母細胞中へのポリペプチド及び他の化合物の注入及び摂取測定。摂取測定が開始される前、ペプチド、ポリペプチド、１ｐＭのカルモジュリン刺激されたキナーゼ２（ＣＫ２）インヒビターＫＮ９３（Calbiochem San Diego.CA）、３ｍＭのオルニチンデカルボキシラーゼインヒビタージフルオロメチルオルニチンＤＦＭＯ及び／又は１００ｐモルのα−メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド（ＡＭＧ）を含む、５０ｎｌのＫ−Ｏｒｉ緩衝液を注入し、そして卵母細胞を室温で１時間インキュベートした。摂取を室温で、Ｏｒｉ緩衝液において測定した。トランスポーター発現卵母細胞における測定値を、注入されなかった卵母細胞における測定値に対して補正した。５０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧ摂取を、１５分のインキュベーション及び１ｍＭのフロリジンを含む、氷冷却Ｏｒｉ緩衝液での洗浄の後、測定した。５μＭの「３Ｈ」ウリジン摂取を、１５分のインキュベーション／及び氷冷却Ｏｒｉ緩衝液による洗浄の後、測定した。卵母細胞を、５％（ｗ／ｖ）ＳＤＳに溶解し、そしてシンチレーション計数により放射能について分析した。
【０２３４】
カップリングされたペプチドを有するナノヒドロゲルの調製。逆ミニエマルジョンを、５０．３ｍｇのＳｐａｎ８０（Sigma, Taufkirchen, Germany）及び１６．７ｍｇのＴｗｅｅｎ８０（sigma）を含む、２．５ｍｌのヘキサン、及び１０ｍｇのチオール−官能化された線状ポリ（グリシドール）ポリマー（(Groll (2009) Journal of Polymer Science 47,5543-5549）、０．５ｍｇのＣＧＲＬＬＲＲＱＲＲＲ (ＴＡＴ−ペプチド、 Peptides International, Louisville, Kentucky, USA)及び０．２８ｍｇのシステイン末端化されたＲＳ１−Ｒｅｇペプチドを含む２０ｍＭのＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）０．４ｍｌから調製した。対照ナノヒドロゲルにおいては、ＲＳ１−Ｒｅｇペプチドが省かれた。ナノゲルを、記載のようにして調製した（Groll (2009) Journal of Polymer Science 47,5543-5549）。簡単に言うと、有機及び水性相を組合し、攪拌し、そしてミニエマルジョンを、０℃での超音波処理により調製した。ジスルフィド架橋の形成のために、水中、０．１ＭのＨ２Ｏ２（６０μｌ）を添加した。その混合物を、６０秒間、音波処理し、そして室温で２５分間インキュベートした。酸化を、酸性化により止め、そしてナノゲルを遠心分離により分離した。ナノゲルを含む水性層を分離し、そしてテトラヒドロフラン／水（２０％／８０％）の混合物により４度、洗浄し、界面活性剤及び未反応ポリマーを除去した。残存する有機溶媒及び酸を、水に対する透析により除去した。ナノヒドロゲル懸濁液を、４℃で２週間まで貯蔵した。
【０２３５】
ナノゲルのマウスへの強制経口投与。標準食餌下で維持された雄のＲｓ１−／−マウス又は野生型マウス（Osswald (2005) Mol Cell Biol. 25, 78-87）を、一晩、絶食し、そして４５μｇのｍＲＳ１−Ｒｅｇ変異体を負荷された、１０ｍｇのナノヒドロゲルを含む、２００μｌの水（ＨＣｌによりｐＨ５．５に調節された）を強制経口投与した。対照として、負荷されていないナノヒドロゲルを用いた。３時間後、マウスを殺し、そして小腸を取り出し、クレブス・リンガー緩衝液（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０８ｍＭ のＮａＣｌ、４．８ｍＭのＫＣｌ、１．２ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、１．２ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）により０℃で灌流し、そしてスチール棒を用いて裏返しした。空腸を、１ｃｍの長さの断片に切断した。
【０２３６】
トリペプチドと共に小腸粘膜のインキュベーション。ヒト小腸粘膜の標準化されたｔ領域（図１３、１９）、又は裏返しにされたマウス小腸の１ｃｍ断片（図１４、１５、２０）を、５ｍＭのＤ−グルコースを含むクレブス・リンガー緩衝液により、３７℃で３度、洗浄し、そして３７℃で３０分間、５ｍＭのＤ−グルコース及び異なった濃度のトリペプチドを含むクレブス・リンガー緩衝液においてインキュベートした。その後、組織を、グルコースを有さないクレブス・リンガー緩衝液により、０℃で３度、洗浄し、そして摂取測定を実施した。
【０２３７】
小腸におけるＡＭＧの測定。ＳＧＬＴ１介在性グルコース摂取の測定のために、マウス小腸の裏返しにされた断片、又はヒト粘膜の特定領域を、０．２ｍＭのフロリジンを有するか又は有さない１０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧを含むクレブス・リンガー緩衝液において、３７℃で２分間インキュベートした。０．２ｍＭのフロリジンを含む氷冷却クレブス・リンガー緩衝液中に断片を移すことにより、摂取を停止した。氷冷却クレブス・リンガー・緩衝液による洗浄の後、ヒト粘膜の小腸断片又は切片を、０．５ｍｌのSoluence−３５０（登録商標）（Perkin Elmer Inc. Waltham MA, USA）に溶解した。放射能を、液体シンチレーション計数により分析した。フロリジン阻害されたＡＭＧ摂取／長さ（ｃｍ）／粘膜の標準領域を計算した。
【０２３８】
経口グルコース耐性試験。血中グルコース及びインスリンを、午前１０時（時間０）で、絶食の１８時間後、及び次に、３ｇのＤ−グルコース／ｋｇ体重の強制経口投与による投与の２０、３０、６０及び１２０分後、測定した。
【０２３９】
血中グルコース及びインスリンの測定。血液（２μｌ）を、尾静脈から採取し、そしてアンペロメトリック（amperometric）グルコースオキシダーゼ方法（グルコースメーター、ACCU-CHEK Aviva）を用いて、分析した。血中インスリン−インスリンを、Ｃ−ペプチド上の２種の異なった抗原決定因子に対して向けられた２種のモノクローナル抗体を用いるサンドイッチ技法に基づく、Mercodia (Uppsala, Sweden)からのラットＣ−ペプチドＥＬＩＳＡを用いて決定した。
【０２４０】
計算及び統計学。卵母細胞中に注入される化合物の細胞内濃度を、０．４μｌの内部分布体積を想定することにより推定した（(Vernaleken (2007) J Biol Chem. 282, 28501-28513）。値は、平均±ＳＥとして与えられる。卵母細胞による実験においては、トランスポーター発現卵母細胞に関する少なくとも２４個の個々の測定を、３種の異なった卵母細胞バッチを用いて実施した。曲線が、データにＨｉｌｌ等式を当てはめることにより得られた。そのＨｉｌｌ等式は、濃度阻害曲線に適合され、そしてＩＣ５０値が計算された。３又はそれ以上のグループからの平均値の比較のために、ＡＨＯＶＡ検定及び後ｈｏｃ Ｔｕｋｅｙ比較が実施された。２グループからの平均値の比較のために、不対サンプルについてのスチューデントｔ−検定が使用された。
【０２４１】
実施例２：グルコースに富んだ食事の後、小腸グルコース吸収をダウンレギュレートする化合物の開発のための基礎を提供したＲＳ１の機能の発見
ｈＲＳ１及びペプチドによるｈＳＧＬＴ１の後翻訳調節は、ＱＳＰ及びＳＤＳＤＲＩＥＰとの相互作用を可能にする複雑な高親和性結合部位へのｈＲＳ１−の結合を必要とする。ｈＲＳ１のアミノ酸１６−９８は、２種のＧＳＰモチーフ及びＳＤＳＤＲＩＥＰモチーフを含む（図１）。ｈＲＳ１フラグメント１６−９８（ｈＲＳ１−Ｒｅｇ）は、ＳＧＬＴ１（及びｈＣＮＴ１）の後翻訳ダウンレギュレーションを担当するｈＲＳ１ドメインを含む。ｈＳＧＬＴ１又はｈＣＮＴ１を、それぞれのトランスポーターｃＲＮＡの注入、及びその卵母細胞を２−３日間インキュベートすることにより、アフリカツメガエルの卵母細胞において発現した。次に、異なった濃度のｈＲＳ１−Ｒｅｇを注入し、そしてｈＳＧＬＴ１により発現されるα−メチルグルコシドのフロリジン（２００μＭ）の阻害された摂取（図２Ａ）、又はｈＣＮＴ１により発現されるウリジンのナトリウム依存性摂取（図２Ｂ）を測定した。このデータは、ｈＲＳ１−ＲｅｇがｈＳＧＬＴ１及びｈＣＮＴ１の両者を、類似する親和性を伴って、約５０％、ダウンレギュレートすることを示す（ＩＣ５０値：７１±２ｎＭ（ｈＳＧＬＴ１）、１２６±６ｎＭ（ｈＣＮＴ１））。
【０２４２】
ｈＲＳ１−Ｒｅｇが異なったトランスポーターを、並行してダウンレギュレートするか、又は個々のトランスポーターを別々にダウンレギュレートできるかどうかを区別するために、ｈＲＳ１−ＲｅｇによるｈＳＧＬＴ１及びｈＣＮＴ１のダウンレギュレーションが、ＡＭＧの細胞内濃度が０．１ｍＭの濃度以上に高められる場合、阻止されるかどうかが調査された。これまで、トリペプチドＱＳＰ及びＱＣＰによるｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションが、細胞内ＡＭＧ濃度が０．１ｍＭよりも高い場合、平滑化されたことが観察されている（Vernaleken, J Biol Chem 282 (2007), 28501-28513, 図 ５Ｃ）。我々のこれまでの研究は、このグルコース効果がＲＳ１の下流でのグルコース結合に起因し、なぜならば、それは、グルコース結合部位を含むことができないｈＲＳ１のトリペプチドモチーフに関して観察されるからであったことを示した。グルコースの効果が、ＲＳ１−Ｒｅｇ受容体の親和性に対する効果に起因するか、又は調節の下流工程に対するグルコースの効果的に起因するかどうかは不明のままであった。それらの可能性間を区別するためにｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションに対するｈＲＳ１−Ｒｅｇの親和性を、卵母細胞中への親和性を、卵母細胞中へのＡＭＧの注入なしで（細胞内ＡＭＧ＜１０μＭ）、又は２５０μＭのＡＭＧの注入の後、卵母細胞発現システムを用いて測定した。ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションに対するｈＲＳ１−Ｒｅｇの親和性が、ＡＭＧの細胞内濃度が２５０μＭまで高められる場合、８倍、低められ（図３Ａ）、ところがｈＣＮＴ１のダウンレギュレーションに対するｈＲＳ１−Ｒｅｇの親和性は変更されなかった（図３Ｂ）ことが観察された。
【０２４３】
データは、グルコースがＳＧＬＴ１ダウンレギュレートする受容体に対するｈＲＳ１−Ｒｅｇの結合についての親和性を低めるが、しかしｈＣＮＴ１のダウンレギュレーションを担当する受容体への親和性を変更しないことを示唆する。ツーハイブリッドスクリーニング、免疫沈澱及び機能的研究を用いて、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）がＳＧＬＴ１のグルコース依存性調節を担当するＲＳ１−Ｒｅｇ受容体であり、そしてＯＤＣがグルコース結合部位を含むことが検出された（例えば、図２３を参照のこと）。データは、ｈＲＳ１−ＲｅｇがｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのためのグルコース依存性機構、及びｈＣＮＴ１のダウンレギュレーションのためのグルコース依存性機構を活性化することを示唆する。それらは、ｈＲＳ１−Ｒｅｇが、異なったトランスポーターを含む異なった小胞集団の放出を仲介するゴルジ体で異なった受容体に対処することにより、異なったトランスポーターを調節することができることを示唆している。
【０２４４】
ｈＲＳ１−Ｒｅｇは、リン酸化のための多くの保存されたコンセンサス配列を含む（図１）。ｈＲＳ１−Ｒｅｇのリン酸化パターンが、トランスポーターが調節されることを決定できるかどうかを調べるために、それぞれ、タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）及びカルボジュリン刺激されたキナーゼ２（ＣＫ２）のための予測されるリン酸化部位内に位置する、位置４５及び８３におけるセリン残基が、リン酸化を防ぐために、アラニンにより、又はリン酸化を模倣するために、グルタミン酸により置換され（図１）、そしてｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーション、又はｈＣＮＴ１のダウンレギュレーションのための親和性に対する突然変異の効果が測定された（図４）。ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのためのｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型の親和性は、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ａ）に類似し（図４Ａ）、そしてｈＣＮＴ１のダウンレギュレーションのためのｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型の親和性は、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ｅ）に類似する（図４Ｂ）。位置４５でのリン酸化の模倣は、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのための親和性を高め（図４Ａ）、そしてｈＣＮＴ１のダウンレギュレーションのための親和性を低める（図４Ｂ）。ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのためのｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生の親和性は、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ８３Ｅ）の親和性に類似し、これは、位置８３でのセリンがｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型においてリン酸化されることを示唆する（図４Ｃ）。セリン８３のリン酸化が、グルタミン酸との交換（ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ８３Ｅ））により、又は特異的ＣＫ２インヒビターＫＮ９３によるＣＫ２活性のブロッキングにより、阻止される場合、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのための親和性は非常に高められる（図４Ｃ）。ｈＳＧＬＴ１の調節とは対照的に、ｈＣＮＴ１のダウンレギュレーションのためのｈＲＳ１−Ｒｅｇの親和性は、セリン８３のリン酸化が阻止されるか、又は模倣される場合、影響されない（図４Ｄ）。データは、ｈＲＳ１−Ｒｅｇのリン酸化パターンが、トランスポーターがｈＲＳ１−Ｒｅｇの重大な細胞内濃度によりダウンレギュレートされることを決定することを示唆する。
【０２４５】
ｈＲＳ１−Ｒｅｇのリン酸化パターンがｈＣＮＴ１のグルコース非依存性ダウンレギュレーションのための親和性に対する、ｈＳＧＬＴ１のグルコース依存性ダウンレギュレーションのための親和性に影響を及ぼすので、ｈＲＳ１−Ｒｅｇのリン酸化パターンがｈＳＧＬＴ１の調節のグルコース依存性のために重要であるかどうかを試験した。ＯＤＣに結合するグルコースは、ｈＲＳ１−Ｒｅｇのための結合部位の構造を変えることができ、そして示差的にリン酸化されたｈＲＳ１−ＲｅｇはＯＤＣのグルコース変性されたｈＲＳ１−Ｒｅｇ結合部位への異なった親和性を有することができる。変異体ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ｅ）又は ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ａ）の親和性が、細胞内ＡＭＧの存在下で低められるかどうかを決定するために、ｈＲＳ１−ＲＳ１野生型については観察されたので（図３Ａ）、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ｅ）又は ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ４５Ａ）の親和性が、ＡＭＧの注入を伴わないで、及びその注入を伴って測定された（図５Ａ）。セリン４５のアラニン又はグルタミン酸への交換の後、親和性に対するＡＭＧの効果が廃止された。これは、ｈＲＳ１−Ｒｅｇにおけるセリン４５が、結合されたグルコースを有さないＯＤＣと、結合されたグルコースを有するＯＤＣ（ＯＤＣ−グルコース）との間のｈＲＳ１−Ｒｅｇ結合の差別化のために重要であることを示唆する。
【０２４６】
ＣＫ２リン酸化部位におけるセリン８３のリン酸化がｈＳＧＬＴ１のグルコース依存性ダウンレギュレーションに関与するかどうかを試験するために、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型の親和性が、位置８３において脱リン酸化されたセリン及び高められた親和性を導く（図５Ｂ）インヒビターＫＮ９３によるＣＫ２の阻害の後、低められるかどうかが調べられた。データは、セリン８３が、結合されたグルコース（ＯＤＣ−グルコース）を有さないＯＤＣのＲＳ１−Ｒｅｇ結合部位間の構造的差異の認識のために重要ではないことを示唆している。
【０２４７】
ヒトｈＲＳ１−Ｒｅｇの位置１９−２１におけるトリペプチドモチーフＱＳＰのみが、マウスに保存されるので（図６）、セリン２０のリン酸化が、ｈＳＧＬＴ１をダウンレギュレートするためにｈＲＳ１−Ｒｅｇの親和性に対する効果、及びこのダウンレギュレーションのグルコース依存性に対する効果を有することができるかどうか試験された。
【０２４８】
図７は、これが事実であることを示す。ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ａ）における位置２０におけるセリンでのリン酸化の防止は、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのための親和性を変更せず（図７Ａ）、これは、ｈＲＳＬ−Ｒｅｇ野生型が低細胞内グルコースでリン酸化されないことを示唆する。高細胞内グルコースで、ダウンレギュレーションのｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ａ）の親和性が、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型に類似して、７−８倍、低められる（図７Ｂ及び図３Ａに比較して）。
【０２４９】
ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）変異体における模倣リン酸化は、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型又はｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ａ）に比較して、親和性を４０００−６０００倍、高めた。高細胞内グルコースの存在下で、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ａ）の親和性が、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型に関して観察されるような低細胞内グルコースに比較して、３００倍、低められた。従って、細胞内グルコースの存在下で、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）の親和性は、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型に比較して、１５万倍、高かった。データはｈＲＳ１−Ｒｅｇにおけるセリン２０が結合されたグルコースなしのＯＤＣと、結合されたグルコースを有するＯＤＣ（ＯＤＣ−グルコース）との間のｈＲＳ１−Ｒｅｇ結合の差別化のために重要であることを示唆する。
【０２５０】
実施例３：卵母細胞発現システムにおいて、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）は、高細胞内グルコースの存在下で、発現されたｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのためにｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型及びｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ａ）よりも高い親和性を有する。
【０２５１】
ｈＳＧＬＴ１発現卵母細胞において、ｈＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取に対する、異なった濃度のｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型及びｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）の注入の効果を、低（＜１μＭ）及び高細胞内濃度のＡＭＧ（約２５０μＭ）で測定した（図７）。低細胞内ＡＭＧでのｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのためのｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）のＩＣ５０は、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型に比較して、６３００倍、低い。高細胞内ＡＭＧの存在下で、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型によるｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションについてのＩＣ５０値は、８倍、高められ、ところがｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）によるｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションについてのＩＣ５０値は、３００倍、低められ、結果的に、高細胞内グルコースでのｈＲＳ１−Ｒｅｇ（２０Ｅ）によるｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションについての親和性が、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型に比較して、１５００万倍、高かった。データは、ｈＲＳ１−Ｒｅｇにおけるセリン２０が、ＯＤＣ（結合されたグルコースを有さないＯＤＣ）と、ＯＤＣ−グルコース（結合されたグルコースを有するＯＤＣ）との間のｈＲＳ１−Ｒｅｇ結合の差別化のために重要であることを示唆する。それらは、ｈＳＧＬＴ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）が、グルコースに富んだ食事の後、ヒトにおけるグルコース吸収をダウンレギュレートすることを示す。
【０２５２】
実施例４：ＱＥＰは、卵母細胞発現システムを用いるトリペプチドＱＳＰに比較して、高細胞内グルコースの存在下でｈＳＧＬＴ１をダウンレギュレートする。
【０２５３】
ｈＲＳ１によるトランスポーターの後翻訳調節の向上された理解は、異なったＱＸＰペプチドがＳＧＬＴ１のダウンレギュレーション、例えばＯＤＣへの結合のために異なった親和性を有することを意味した。異なったＱＸＰペプチドが、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーション、例えば結合されたグルコースを有するＯＤＣへの結合に対する、結合されたグルコースを有さないＯＤＣへの結合のために異なったグルコース−誘発された親和性変化を示すことができることもまた関与された。すべてのＱＸＰ型トリペプチドが高細胞内グルコース濃度の存在下でｈＳＧＬＴ１発現をダウンレギュレートできず、又はｈＲＳ１−Ｒｅｇ野生型については観察されているので、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのために非常に低い親和性を有する可能性が存在した。高グルコースの濃度は、グルコースに富んだ食品の摂取の後、腸細胞に予測されるので、すべてのＱＸＰペプチドは、グルコースに富んだ食事の後、腸細胞の管腔膜におけるＳＧＬＴ１をダウンレギュレートできない可能性があるように見えた。食事間又は一晩間での小腸における炭水化物含有量が低い場合、ＱＸＰペプチドは活性的であると思われた。しかしながら、この状況においては、内因性ＲＳ１がまた、活性的であるべきであり、結果的に、ＱＸＰ型トリペプチドは追加のダウンレギュレーションを誘発できない可能性が考慮される。
【０２５４】
内因性ＲＳ１の不在下で、低細胞内グルコース濃度でのｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションについて異なったＱＸＰ型トリペプチドの可能性を調べるために、卵母細胞発現システムを用いて、１μＭ及び５０ｎＭの異なったＱＸＰトリペプチドの注入の後に観察されるｈＳＧＬＴ１介在性［１４Ｃ］ＡＭＧ摂取の阻害を測定した（図８）。すべての試験されたトリペプチドはＳＧＬＴ１介在性輸送を１μＭで阻害したが、５０ｎＭでの阻害がトリペプチドＱＳＰ、ＱＥＰ及びＱＡＰにより単に観察された。データは、低細胞内グルコース濃度で、ＱＤＰ、ＱＴＰ、ＱＭＰ、ＱＩＰ及びＱＶＰに比較して、ＱＳＰ、ＱＥＰ及びＱＡＰのより高い親和性を示唆する。
【０２５５】
ｈＲＳ１−ＲｅｇはｈＳＧＬＴ１の発現を後転写的に阻害しないのみならず、またＮａ＋−ヌクレオシドトランスポーターＣＮＴ１及びＣＮＴ３の発現も阻害するので（Errasti-Murugarren、同上）、卵母細胞発現システム（図９）を用いて、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ及びＳＤＳＤＲＩＥＰに比較して、内因性ＲＳ１の不在下で低細胞内グルコース濃度でのＱＥＰ及びＱＳＰのトランスポーター選択性を決定した。ヌクレオシドトランスポーターｈＣＮＴ１又はｈＣＮＴ３により発現される５μＭの［３Ｈ］ウリジン摂取は、ｈＲＳ１−Ｒｅｇ及びＳＤＳＤＲＩＥＰが注入される場合、低められ、ところがＱＳＰ又はＱＥＰは、ｈＣＮＴ１又はｈＣＮＴ３により発現される輸送を阻害することはできなかった。データは、ＱＳＰ及びＱＥＰが、ＣＮＴ１及びＣＮＴ３に対するＳＧＬＴ１について選択的であることを示し、そしてＱＸＰトリペプチドがＲＳ１−Ｒｅｇにより調節された他のトランスポーターに対するＳＧＬＴ１について選択的であることを示唆する。
【０２５６】
これまで、卵母細胞におけるｈＳＧＬＴ１発現が、注入された細胞内ＡＭＧ（細胞内ＡＭＧ＜１０μＭ）の不在下で、２００ｎＭのＱＳＰの注入の後、４０−５０％、阻害され、そしてこの阻害が、ＡＭＧの注入の後、廃止され、２５０μＭよりも高いＡＭＧの細胞内濃度を導くことが示された（Vernaleken、同上）。ＡＭＧの注入なしでのＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションについての細胞内ＱＳＰの濃度依存性を測定すると、０．２ｎＭのＣ５０値（図１０）が決定された。しかしながら、２５０μＭの細胞内ＡＭＧの存在下で、ｈＳＧＬＴ１発現に対するＱＳＰの効果が廃止された。ＱＳＰ効果のＡＭＧ依存性鈍化は、ＱＳＰが、グルコースに富んだ食事の後、小腸におけるグルコース吸収を低めなかったことを示唆する。
【０２５７】
ＡＭＧの注入なしで、ＱＥＰは、７．９＋０．８ｎＭのＩＣ５０値を伴って、約４０％、ＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取を阻害した（図１１）。この値は、ＡＭＧの注入なしで観察されるＱＳＰに比較して、約４０倍、高い。ＡＭＧ注入によれば（約０．２５ｍＭの細胞内ＡＭＧ）、ＱＥＰは、約５０％、ＳＧＬＴ１発現を阻害し、そして低細胞内ＡＭＧに比較して、１５０００倍以上、高められた親和性を示した。約０．２５ｍＭの細胞内ＡＭＧの存在下でのＱＥＰのＩＣ５０値は、０．２＋０．３ｐＭであった。従って、ＱＥＰは、低細胞内グルコース濃度の存在下でのＱＳＰの親和性よりも約１０００倍、高い親和性を伴って、高細胞内グルコースの存在下でのｈＳＧＬＴ発現のインヒビターである。
【０２５８】
まとめると、データは、ＱＥＰが、高細胞内濃度のグルコースの存在下で非常に高い親和性を伴って、ｈＳＧＬＴ１の発現をダウンレギュレートするｈＳＧＬＴ１特異的後翻訳インヒビターであることを示唆する。ＱＳＰとは対照的に、ＱＥＰは、グルコースに富んだ食事の後、小腸グルコース吸収を阻害できると思われる。
【０２５９】
実施例５：ＱＥＰは、内因性マウスＲＳ１が除去されているマウスを用いて、小腸におけるｍＳＧＬＴ１をダウンレギュレートし、そしてグルコース吸収を低めることができる。
【０２６０】
インビボでＳＧＬＴ１の発現をダウンレギュレートするＱＥＰ対ＱＳＰの可能性を比較するために、内因性ＲＳ１との相互作用を回避するために、内因性ｍＲＳ１が遺伝的に除去されている（Osswald, Mol Cell Biol 25 (2005), 78-87）Ｂａｌｂｃマウスを使用した。一晩、絶食されたＲＳ１−／−マウスに、２００μｌのＰＢＳ、又は１００ｍＭのＱＥＰ又は１００ｍＭのＱＳＰを含む、２００μｌのＰＢＳを強制経口投与した。これは、マウス当たり２０μモルのＱＥＰ又はＱＳＰの適用を表す。２時間後、動物を殺し、それらの小腸を裏返し、そしてその裏返しされた空腸の断片へのフロリジン阻害された１０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧ摂取を測定した（図１２Ａ）。ＱＥＰの強制経口投与の後、ＡＭＧ摂取は、約３０％、低められ、ところがＱＳＰは有意な効果を示さなかった。ＱＥＰによるＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションがグルコース吸収に対して効果を有するかどうかを決定するために、ＲＳ１−／−マウスに、２００μｌのＰＢＳ緩衝液、又は２０μモルのＱＥＰを含む、２００μｌのＰＢＳを強制経口投与し、３時間後、４０％（ｗ／ｖ）のＤ−グルコースを含む、４００μｌの水を強制経口投与し、そして１５分後、血漿Ｄ−グルコースを測定した（図１２Ｂ）。血漿濃度を有意に低めた。データは、ＱＥＰがマウス小腸におけるｍＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることができ、そしてそれにより、グルコースの小腸吸収を低めることを示す。
【０２６１】
実施例６：ＱＥＰは、高細胞内グルコースの存在下で野生型マウスにおけるｍＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることができる。
【０２６２】
ＱＥＰが野生型マウスの小腸においてｍＳＧＬＴ１をダウンレギュレートするかどうかを決定するために、ＱＥＰを伴わないで及びＱＥＰを伴って、５ｍＭのＤ−グルコースの不在下で又は存在下で裏返しにされた小腸断片をインキュベートし、そしてｍＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションを検出するためにｍＳＧＬＴ１介在性輸送活性を測定するエクスビボ実験を実施した。最初の一連の実験においては、野生型マウスの空腸の断片を、５ｍＭのＤ−グルコースを含む培養培地（ｐＨ６．４）、又は５ｍＭのＤ−グルコース及び５ｍＭのＱＥＰを含む培養培地と共に、３７℃で３０分間インキュベートした。その後、断片を、ＰＢＳ緩衝液により洗浄し、そしてフロリジン阻害された１０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧ摂取を測定した。それらの条件下で、ＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取に対するＱＥＰの効果は観察されなかった（データは示されていない）。ＲＳ１関連機構を通してのｍＳＧＬＴ１の後翻訳ダウンレギュレーションが内因性ｍＲＳ１により最大に活性化され得るので、ＱＥＰは効果的でないことを推論するために、ＱＥＰが高細胞内グルコース濃度を導く細胞外グルコースの存在下でＳＧＬＴ１をダウンレギュレートするかどうかが調べられた。空腸断片が５ｍＭのＤ−グルコースの存在下で、５ｍＭのＱＥＰを伴わないで、及びそれを伴って、３７℃で３０分間インキュベートされた場合、１０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧのＳＧＬＴ１介在性摂取が、ＱＥＰとのインキュベーションの後、３０％、低められ、ところが５ｍＭのＱＳＰとのインキュベーションは有意な効果はなかった（図１３Ａ）。類似する結果が、実験がＲＳ１−／−マウスにより実施された場合に得られた（図１３Ｂ）。データは、ＱＳＰとは対照的に、ＱＥＰは、グルコースに富んだ食事の後、マウス小腸におけるＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることができることを示唆する。それらは、内因性ｍＲＳ１が高細胞グルコース濃度の存在下で効果的でないことを示唆する。
【０２６３】
実施例７：ＱＥＰは高細胞内グルコースの存在下でヒト腸におけるｈＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることができる。
【０２６４】
次に、ＱＸＰ型トリペプチドが高グルコースの存在下でヒト小腸におけるｈＳＧＬＴ１発現をダウンレギュレートできるかどうかが調査された。肥満患者（５０の平均ボディマス指数を有する５０歳の平均年齢の男性及び女性）の肥満手術の間に得られる空腸サンプルを使用した。類似するトリペプチド効果が男性及び女性で観察された。肥満手術の間に日常的に除去される空腸の一部を、５ｍＭのＤ−グルコースを含む氷冷却培養培地を用いて研究室に運んだ。粘膜の一部を切開し、そして粘膜の同一領域を、パンチング装置を用いて単離した。粘膜片を、グルコースを含まない緩衝液により洗浄し、そして５ｍＭのＤ−グルコース及び異なったＱＸＰ型トリペプチドを含む組織培養培地において、３７℃で３０分間インキュベートした。その後、サンプルを、ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４、３７℃）により２度、洗浄し、そして１００ｍＭのナトリウム及び１０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧを含むＰＢＳ（ＰＨ７．４）において、３７℃で２分間インキュベートした。インキュベーションを、２００μＭのＳＧＬＴ１インヒビターフロリジンの不在下で実施した。その後、サンプルを、氷冷却ＰＢＳにより洗浄し、組織を溶解し、そして放射能を、液体シンチレーション計数により決定した。フロリジン阻害されたＡＭＧ摂取を計算した。図１４は、ＱＥＰが、ＨＳＧＬＴ１の輸送活性を表す粘膜中へのフロリジン阻害されたＡＭＧ摂取を低めた唯一のトリペプチドであったことを示す。
【０２６５】
ＱＥＰが低細胞内グルコース濃度でヒト小腸におけるｈＳＧＬＴ１をダウンレギュレートするかどうかを決定するために、肥満手術から得られたヒト空腸をＰＢＳにより洗浄し、そして粘膜片を、ＰＢＳ、又は５ｍｍのｑｅｐを含むｐｂｓ下で３７℃で３０分間インキュベートした。洗浄の後、１０μＭの［１４Ｃ］ＡＭＧのフロリジン阻害された摂取を測定した。それらの条件下で、ＱＥＰはＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取を低めず（データは示されていない）、このことは、内因性ＲＳ１がＲＳ１依存性経路を介して、低濃度でｈＳＧＬＴ１の最大ダウンレギュレーションを仲介することを示唆する。
【０２６６】
ＱＳＰと同様に、他のＱＸＰ型トリペプチドＱＥＰは、ペプチドトランスポーターＰＥＰＴ１により腸細胞中に摂取され、そしてゴルジ体で作用する。この効果は、摂取速度、細胞内分解、及び可能性ある細胞放出により影響される。使用される実験条件下でｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーション及びＱＥＰの最大効果についてのＱＥＰの濃度依存性を決定するために、ヒト小腸片を、異なった濃度のＱＥＰと共に、３７℃で３０分間、５ｍＭのＤ−グルコースの存在下でインキュベートし、そしてｈＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取を測定した（図１５）。低いが、但し統計学的に有意ではない効果が、０．１及び０．５ｍＭのＱＥＰにより観察された。１ｍＭのＱＥＰに関して、４０％のＳＧＬＴ１の有意なダウンレギュレーション、５ｍＭのＱＥＰに関して、５５％のｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーション、及び１５ｍＭのＱＥＰに関して、７５％のＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションが観察された。データは、ＱＥＰが、グルコースに富んだ食事の後、ヒト小腸におけるｈＳＧＬＴ１を、７５％、ダウンレギュレートすることができることを示唆する。
【０２６７】
実施例８：ＱＥＰは血清グルコースを低めるためにインスリン感受性を高める。
小腸におけるＳＧＬＴ１の阻害、又はＳＧＬＴ１の遺伝的除去は、グルコースの強制経口投与の３０分−２時間後、ＧＬＰ−１分泌の上昇を導くことが報告されている（Powell、同上）。血清におけるＧＬＰ−１を高める抗糖尿病薬が、２型糖尿病の治療のために使用されるので、グルコースに富んだ食事の間、ＳＧＬＴ１インヒビター、又はＱＥＰによるＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションによる、ＳＧＬＴ１介在性グルコース吸収の阻害が、糖尿病の治療のために有益であり得る。近位小腸の腸細胞、及び遠位小腸のＬ−細胞におけるＳＧＬＴ１の発現を考慮して、ＳＧＬＴ１の阻害又はダウンレギュレーションがＧＬＰ−１分泌を何にして高めるかの機構が次の通りに説明される。腸細胞におけるＳＧＬＴ１の阻害又はダウンレギュレーションが、小腸におけるグルコースの吸収を低め、そしてそれにより、遠位小腸におけるグルコース濃度を高める。Ｌ−細胞におけるＳＧＬＴ１は腸細胞におけるＳＧＬＴ１と並行して、阻害されるか、又はダウンレギュレートされるので、ＧＬＰ−１の高められた分泌は、遠位小腸に入る高められた量のグルコースを代謝する細菌により細菌により形成される、遠位小腸における、高められた濃度の短鎖脂肪酸のためであると思われる。
【０２６８】
ＳＧＬＴ１が遺伝的に除去されたマウス（ＳＧＬＴ−／−マウス）において、血清におけるインスリンの基本的濃度が低められ、そしてインスリン感受性が高められることが観察されているので（データは示されていない）、ＱＥＰの長期経口適用が、経口グルコース耐性試験（ＯＧＴＴ）の間、基本的血清インスリン及びインスリン分泌に影響を及ぼすかどうかが調べられた。５ｍＭのＱＥＰを、２型糖尿病についての遺伝子素因を有するニュージーランド肥満（ＮＺＯ）マウスの飲料水に添加した（Vogel, Horm Metab Res 45 (2013), 430-435）。小腸の除去又はＯＧＴＴの実施の２時間前、１００ｍＭのＱＥＰの強制経口投与とは対照的に（図１２、図１３、図１６Ａ、Ｂ）、ＯＧＴＴの間、腸細胞中へのＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ輸送及びグルコース吸収が、５ｍＭのＱＥＰがマウスの飲料水に３日間、添加される場合、低められなかった。（図１７Ａ，Ｂ）。飲料水における５ｍＭのＱＥＰは、グルコースの強制経口投与の後、血清グルコースの上昇及び低下に対して効果を示さなかったが（図１７Ａ，Ｂ）、それは、血清中のインスリンの基本的濃度を、５０％低め、そしてまた、グルコースの強制経口投与の後に観察される血清インスリンの上昇を低めた（図１７Ｃ）。ＱＥＰにより治療された動物において観察される、グルコースの強制経口投与の後、血液中インスリン濃度の不良な上昇にかかわらず、グルコースの強制経口投与の後の高められた血中グルコースは、対照動物におけるほど早く、低下した。ＯＧＴＴにおける血中グルコースの低下は、インスリン受容体により介入される末梢組織におけるインスリン効果のためであるので、インスリン感受性は、ＱＥＰによる治療の後、高められた。
【０２６９】
実施例９：グルタミン−セリンチオホスフェート−プロリン（ＱＳチオホスフェートＰ）は、卵母細胞発現システムを用いて、高細胞内グルコースの存在下でｈＳＧＬＴ１をダウンレギュレートする。
ＱＳＰにおけるセリンのリン酸化がグルタミンによるセリンの交換により模倣されるＱＥＰは高細胞内グルコースの存在下で活性的であるので、ＡＭＧ（細胞内ＡＭＧ＜１０μＭ）の注入を伴わない、及びＡＭＧ（細胞内ＡＭＧ、約０．２５ｍＭ）の注入を伴っての卵母細胞におけるｈＳＧＬＴ１の発現に対するグルタミン−セリンチオホスフェート−プロリン（ＱＳチオホスフェートＰ）の効果を試験した。ＡＭＧの注入を伴わない場合、ｈＳＧＬＴ１は、５００ｐＭのＱＳチオホスフェートＰの注入の後、ダウンレギュレートされたが、しかし５ｐＭのＱＳチオホスフェートＰの注入の後では、ダウンレギュレートされず（図１８）、このことは、ＱＳＰに類似する親和性を示す（図１１を参照のこと）。ＡＭＧの細胞内濃度が、ＡＭＧの注入により、約０．２５ｍＭに高められる場合、ｈＳＧＬＴ１の発現は、５００ｐＭ及び５ｐＭのＱＳチオホスフェートＰによりダウンレギュレートされた（図１８）。注目すべきは、５ｐＭのＱＳチオホスフェートＰにより得られるダウンレギュレーションの程度（約７５％）は、５ｐＭのＱＥＰ（約４５％、図１１を参照のこと）に比較して、高かった。
【０２７０】
ＱＳチオホスフェートＰは、高細胞内グルコースの存在下で、ｍＲＳ１−／−マウス及び野生型マウスにおいてｍＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることができる：
高細胞内グルコースの存在下でマウスの小腸におけるＱＳチオホスフェートＰの活性を示すために、ｍＲＳ１−／−マウス及び野生型の反転された小腸断片を、５ｍＭのＱＥＰの不在又は存在下で、５ｍＭのＤ−グルコースを含むＰＢＳと共に、３７℃で３０分間インキュベートした（図１９）。ＰＢＳによる洗浄の後、１０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧの摂取を、２００μＭのフロリジンの不在及び存在下で測定した。ＳＧＬＴ１により介在される、フロリジン阻害された摂取が、ＳＧＬＴ−／−及び野生型マウスにおいて有意に阻害された。データは、ＱＳチオホスフェートＰが、グルコースに富んだ食事の後、マウス小腸においてＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることができることを示唆する。
【０２７１】
ＱＳチオホスフェートＰは、高細胞内グルコースの存在下でヒト小腸におけるｈＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることができる：
ＱＳチオホスフェートＰがまた、ヒトにおいて活性的であるかどうかを決定するために、肥満手術から得られた空腸の等サイズの断片を、ＱＳチオホスフェートＰを伴わないで、又は種々の濃度のＱＳチオホスフェートＰを伴って、５ｍＭのＤ−グルコースを含む培養培地と共に３７℃で３０分間インキュベートした。ＰＢＳによる洗浄の後、ｈＳＧＬＴ１により介在される、１０μＭの「１４Ｃ」ＡＭＧのフロリジン阻害された摂取を測定した。ｈＳＧＬＴ１介在性ＡＭＧ摂取を、５ｍＭのＱＳチオホスフェートＰにより、約３０％、及び１５ｍＭのＱＳチオホスフェートＰにより、約４０％、阻害した（図２０）。
【０２７２】
実施例１０：ヒドロゲルナノ粒子へのカップリングにより腸細胞中への、経口投与されるＲＳ１−Ｒｅｇを導入した後、ＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることは可能である。
上記のように、ｈＲＳ１−Ｒｅｇの特異的リン酸化パターンを模倣するｈＲＳ１−Ｒｅｇ誘導体は、ｈＳＧＬＴ１の選択的対処のための、及びグルコースに富んだ食事の後、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのための卓越した可能性を提供する。経口適用のためのそのようなｈＲＳ１−Ｒｅｇを使用するために、細胞中にｈＲＳ１−Ｒｅｇ変異体を効果的に導入する方法が見出された。このために、ｍＲＳ１からのｈＲＳ１−Ｒｅｇからの変異体を、線状（ポリ）グリシドール又は星形の（ポリ）エチレンオキシド−スタット−プロピレンオキシドに基いてチオール官能化ポリマーから構成される生物適合性及び分解性ヒドロゲルナノ粒子（ＮＰ）に、ジスルフィド結合によりカップリングした（Groll, Jorrnal of Polymer Science 47 (2009), 5543-5549）。経口適用の後、ナノ粒子にカップリングされるＲＳ１−Ｒｅｇによる、小腸におけるＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのための可能性を検証するために、内因性ＲＳ１が遺伝的に除去されるマウス（ＲＳ１−／−マウス）を、動物モデルとして使用した。ＲＡ１−／−マウスを用いて、内因性ＲＳ１が導入されたＲＳ１−Ｒｅｇの効果をカバーする可能性は回避された。種差に関連する問題を実行しないよう、実験は、マウス（ｍＲＳ１−Ｒｅｇ）を用いて実施された。無負荷のナノ粒子（ＮＰ）のために非特異的効果を排除するために、無負荷のＮＰによる対照実験を実施した。一般的細胞機能に対する効果に起因するＳＧＬＴ１発現に対する、組込まれたｍＲＳ１−Ｒｅｇの非特異的効果を排除するために、ｍＲＳ１−Ｒｅｇにおける個々のアミノ酸に依存するＳＧＬＴ１発現に対する効果を検出した。従って、ｍＲＳ１−Ｒｅｇにおいて単一のＱＳＰモチーフに位置するｍＲＳ１−Ｒｅｇにおけるセリン１９の変異体と相関する効果が調べられた。
【０２７３】
一晩、絶食されたＲＳ１−／−マウスに、２００μｌの空ＮＰ（対照）又は１ｎモルのｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ａ）又は１ｎモルのｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）を負荷された、２００μｌのＮＰを強制経口投与した。これは、強制経口投与のために使用されたモルＱＥＰに比較して、２００００倍、低いモルＲＳ１−Ｒｅｇ変異体を表す。ＮＰにカップリングされたｍＲＳ１−Ｒｅｇ変異体を強制経口投与した２時間後、３７℃での２分間のインキュベーションの後、トレーサー「１４Ｃ」ＡＭＧにより標識された、フロリジン（２００μＭ）阻害された１０μＭのＡＭＧ摂取（図２１Ａ，Ｃ）、又は３７℃での２分間インキュベーションの後、トレーサー［１４Ｃ］ＡＭＧにより標識された１ｍＭのＡＭＧの摂取（図２１Ｂ、Ｄ）を測定した。これまでの実験は、ＲＳ１−Ｒｅｇが原形質膜におけるＳＧＬＴ１の濃度をダウンレギュレートし、そしてＳＧＬＴ１の基質親和性を変更しないことを示したので、１０μＭ及び１ｍＭのＡＭＧによる輸送活性測定は、腸細胞の管腔膜内のＳＧＬＴ１の量を表す。ＡＭＧは腸細胞中に、ｍＳＧＬＴ１により急速に輸送されるので、細胞内濃度は、細胞が１ｍＭのＡＭＧと共にインキュベートされる場合、０．２５ｍＭ以上の高い値に、数秒以内で上昇する。ＮＰにカップリングされたｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ａ）の強制経口投与は、フロリジン阻害された１０μＭ及び１ｍＭのＡＭＧ摂取の不明効果により示されるように、ＳＧＬＴ１の発現を変更しなかった。対照的に、フロリジン阻害された、１０μＭのＡＭＧ又は１ｍＭのＡＭＧ摂取はそれぞれ、２６及び３０％、阻害された。データは、ＮＰへのＲＳ１−Ｒｅｇのカップリングが、経口適用の後、腸細胞中へＲＳ１−Ｒｅｇを効果的に導入する方法を提供することを示唆する。データは、グルタミンによる交換の後、ｍＲＳ１−Ｒｅｇにおけるセリン１９のリン酸化の模倣が、受容体ＯＤＣへの接合のための親和性の上昇のためであると思われるｍＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションの能力を高めることを示唆する。データはさらに、１ｎモルのｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）のマウスへの強制経口投与が、低及び高細胞内グルコースの存在下でＳＧＬＴ１をダウンレギュレートするのに十分であることを示唆する。
【０２７４】
実施例１１：ＲＳ１−ＲｅｇのＮ−末端ＱＳＰモチーフにおけるリン酸化の模倣が、グルコースに富んだ食事の後、小腸におけるＳＧＬＴ１をダウンレギュレートするＲＳ１−Ｒｅｇの能力を導く。
【０２７５】
グルタミン酸による交換によるｍＲＳ１−Ｒｅｇにおけるセリン１９のリン酸化の模倣が、グルコースに富んだ食事に観察される高細胞内グルコース濃度の存在下で野生型マウスの小腸におけるｍＳＧＬＴ１のｍＲＳ１−Ｒｅｇによるダウンレギュレーションを可能にするかどうかが調べられた。野生型マウスは、グルコースの細胞内濃度が、夜に、又は食事間に観察されるように低い場合、ＳＧＬＴ１をダウンレギュレートする内因性ｍＲＳ１を含む。低細胞内グルコースで、ｍＲＳ１における内因性ｍＲＳ１−Ｒｅｇは、ｍＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションを介入するＯＤＣへの高い親和性結合を可能にするリン酸化パターンを示すと思われる。それらの条件下で、ｍＲＳ１−Ｒｅｇの活性モチーフ、例えばＱＥＰ、又は活性ｍＲＳ１−Ｒｅｇドメイン、例えばｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）は、内因性ｍＲＳ１−Ｒｅｇの上部のｍＳＧＬＴ１のさらなるダウンレギュレーションを誘発することはできない。対照的に、内因性ＲＳ１−Ｒｅｇは、ＯＤＣのｍＲＳ１−Ｒｅｇ結合部位は、ＯＤＣに結合するグルコース（ＯＤＣ−グルコース）により修飾されており、そして／又は細胞内グルコースはｍＲＳ１−Ｒｅｇのリン酸化パターンを変更することができたので、細胞内グルコース濃度が、グルコースに富んだ食事の後、観察されるほど高い場合、活性的ではない。この条件下で、ＯＤＣ−グルコースに結合する、ＱＥＰ又は修飾されたｍＲＳ１−Ｒｅｇドメインは、ｍＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションを誘発することができる。
【０２７６】
ＳＧＬＴ１発現のＲＳ１−Ｒｅｇ誘発された阻害のグルコース依存性鈍化のためである、マウス小腸におけるＳＧＬＴ１のグルコース誘発されたアップレギュレーションが数秒以内で生じることが観察された（未公開データ）。このために、１０μＭのＡＭＧ（低細胞内ＡＭＧ）又は１ｍＭのＡＭＧ（高細胞内ＡＭＧ）との２分間のインキュベーションの後、摂取を測定することによる、細胞内ＡＭＧの低又は高細胞内濃度での腸細胞の管腔膜における輸送活性ｍＳＧＬＴ１に対する、ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）変異体の強制経口投与の後に観察される効果が試験された。摂取測定の間、ＡＭＧの細胞内濃度は、インキュベーション培地における値の５−１０倍に高まる。
【０２７７】
一晩、絶食された野生型マウスに、２００μｌの空ＮＰ（対照）、又は１ｍモルのｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）（図２２Ａ、Ｂ）又は１ｎモルの野生型ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（図２２Ｃ）により負荷された、２００μｌのＮＰを強制経口投与した。２時間後、フロリジン（２００μＭ）阻害された、１０μＭのＡＭＧ（図２２Ａ）又は１ｍＭのＡＭＧ（図２２Ｂ，Ｃ）摂取を、２分のインキュベーション時間を用いて、３７℃で測定した。１０μＭのＡＭＧの摂取（低細胞内グルコースでの摂取を表す）は、ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）により負荷ＮＰの強制経口投与の後、変更されなかったが、１ｍＭのＡＭＧの摂取（高細胞内グルコースでの摂取を表す）は、４０％、低められた（図２２Ａ、Ｂ）。ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）とは対照的に、１ｍＭのＡＭＧの摂取は、野生型ｍＲＳ１−Ｒｅｇにより負荷されたＮＰの経口投与の後、変更されなかった（図２２Ｃ）。データは、マウス腸細胞の刷子縁膜におけるｍＳＧＬＴの量が、高細胞内グルコースの存在下で、ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）によりダウンレギュレートされ得ることを示す。
【０２７８】
実施例１２：オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）は、ＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのためのＲＳ１−Ｒｅｇ受容体であり、そしてＯＤＣへのＱＥＰの結合がＯＤＣ活性を阻害する。
【０２７９】
プトレッシンを包含するポリアミンは、種々の細胞調節、例えば転写、細胞分裂及び後転写調節に関与している（Wallace, Biochem J 376 (2003), 1-14）。種々の細胞内コンパートメントにおけるプトレッシンの濃度は、オルニチンの脱カルボキシル化によりプトレッシンを生成する異なった細胞内位置でのＯＤＣの酵素活性により決定される。プトレッシンは急速に分解するので、ＯＤＣの細胞内位置が、プトレッシンの局部濃度を決定する。その局部プトレッシン濃度が、原形質膜タンパク質及び膀胱内トラフィッキングの活性を包含する種々の異なった調節機構を誘発する（Kanerva, Exper Cell Research 316 (2010), 1896-1906）。
【０２８０】
ツー−ハイブリッドスクリーニング及び免疫沈澱実験を用いて、ｈＲＳ１−ＲｅｇがＯＤＣに結合する証拠が提供された（データは示されていない）。ゴルジ体からのＳＧＬＴ１含有小胞の放出が特異的ＯＤＣインヒビタージフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）により阻止され、そしてＤＦＭＯ効果が、プトレッシンが添加される場合、鈍化されたことが示された（図２３Ａ）。ｈＲＳ１−Ｒｅｇ及びＤＦＭＯはｈＳＧＬＴ１を類似する程度、ダウンレギュレートし、そしてそのダウンレギュレーションは加算的ではないので、ＲＳ１−Ｒｅｇ及びＯＤＣは、ｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションのための同じ経路を用いる。図２３Ｂは、ｈＲＳ１−Ｒｅｇを介しての卵母細胞におけるｈＳＧＬＴ１発現のダウンレギュレーションが、プトレッシンが添加される場合、鈍化されることを示しており、このことは、ｈＲＳ１−ＲｅｇがＯＤＣ活性の遮断を介してｈＳＧＬＴ１をダウンレギュレートすることを示唆する。ｈＲＳ１−Ｒｅｇに類似して、またＱＥＰによるｈＳＧＬＴ１のダウンレギュレーションは、プトレッシンが添加される場合、鈍化された（図２３Ｃ）。図２３Ｄは、ＯＤＣを安定してトランスフェクトされたヒト胚腎細胞におけるＯＤＣ活性が、ｈＲＳ１−Ｒｅｇが同時発現される場合、低められたことを示す。これは、ｈＲＳ１−ＲｅｇがＯＤＣ活性を阻害することを示唆する。図２３Ｅにおいては、ＱＥＰがＯＤＣ活性を阻害する明白な証拠が提供される。精製されたＯＤＣを、反応管において、ＱＥＰ又は対照としての逆トリペプチドＰＥＱと共にインキュベートし、そしてＯＤＣ活性を測定した。ＰＥＱではなくＱＥＰがＯＤＣ活性を、約４０％、阻害することが示されている。
【０２８１】
ｈＲＳ１−Ｒｅｇのための受容体としてのＯＤＣ、及びｈＳＧＬＴ１のＱＥＰ依存性ダウンレギュレーションの同定が、第二世代薬物を開発するために、モデル化の実施を可能にする、ＯＤＣにおけるｈＲＳ１−Ｒｅｇ及びＱＥＰ結合部位を同定する可能性を提供する。さらに、ＱＥＰ及びＲＳ１−Ｒｅｇ変異体の親和性及び／又は機能を低めるＯＤＣ変異体が患者に同定され得、このことは、ＱＥＰ及び／又はＲＳ１−Ｒｅｇ関連薬物に対する非応答体を予測する。
【０２８２】
本発明は、以下のヌクレオチド及びアミノ酸配列を言及する：
配列番号１：
ヒトＲＳ１（ｈＲＳ１）（調節溶質キャリアタンパク質、ファミリー１、メンバー１（ホモ・サピエンス））をコードするヌクレオチド配列。
atgagcagcctgccgaccagcgatggctttaaccatccggcgcgcagcagcggccagagcccggatgtgggcaacccgatgagcctggcgcgcagcgtgagcgcgagcgtgtgcccgattaaaccgagcgatagcgatcgcattgaaccgaaagcggtgaaagcgctgaaagcgagcgcggaatttcagctgaacagcgaaaaaaaagaacatctgagcctgcaggatctgagcgatcatgcgagcagcgcggatcatgcgccgaccgatcagagcccggcgatgccgatgcagaacagcagcgaagaaattaccgtggcgggcaacctggaaaaaagcgcggaacgcagcacccagggcctgaaatttcatctgcatacccgccaggaagcgagcctgagcgtgaccagcacccgcatgcatgaaccgcagatgtttctgggcgaaaaagattggcatccggaaaaccagaacctgagccaggtgagcgatccgcagcagcatgaagaaccgggcaacgaacagtatgaagtggcgcagcagaaagcgagccatgatcaggaatatctgtgcaacattggcgatctggaactgccggaagaacgccagcagaaccagcataaaattgtggatctggaagcgaccatgaaaggcaacggcctgccgcagaacgtggatccgccgagcgcgaaaaaaagcattccgagcagcgaatgcagcggctgcagcaacagcgaaacctttatggaaattgataccgcgcagcagagcctggtgaccctgctgaacagcaccggccgccagaacgcgaacgtgaaaaacattggcgcgctggatctgaccctggataacccgctgatggaagtggaaaccagcaaatgcaacccgagcagcgaaattctgaacgatagcattagcacccaggatctgcagccgccggaaaccaacgtggaaattccgggcaccaacaaagaatatggccattatagcagcccgagcctgtgcggcagctgccagccgagcgtggaaagcgcggaagaaagctgcccgagcattaccgcggcgctgaaagaactgcatgaactgctggtggtgagcagcaaaccggcgagcgaaaacaccagcgaagaagtgatttgccagagcgaaaccattgcggaaggccagaccagcattaaagatctgagcgaacgctggacccagaacgaacatctgacccagaacgaacagtgcccgcaggtgagctttcatcaggcgattagcgtgagcgtggaaaccgaaaaactgaccggcaccagcagcgataccggccgcgaagcggtggaaaacgtgaactttcgcagcctgggcgatggcctgagcaccgataaagaaggcgtgccgaaaagccgcgaaagcattaacaaaaaccgcagcgtgaccgtgaccagcgcgaaaaccagcaaccagctgcattgcaccctgggcgtggaaattagcccgaaactgctggcgggcgaagaagatgcgctgaaccagaccagcgaacagaccaaaagcctgagcagcaactttattctggtgaaagatctgggccagggcattcagaacagcgtgaccgatcgcccggaaacccgcgaaaacgtgtgcccggatgcgagccgcccgctgctggaatatgaaccgccgaccagccatccgagcagcagcccggcgattctgccgccgctgatttttccggcgaccgatattgatcgcattctgcgcgcgggctttaccctgcaggaagcgctgggcgcgctgcatcgcgtgggcggcaacgcggatctggcgctgctggtgctgctggcgaaaaacattgtggtgccgacc
【０２８３】
配列番号２：
ヒトＲＳ１（ｈＲＳ１）（調節溶質キャリアタンパク質、ファミリー１、メンバー１（ホモ・サピエンス））のアミノ酸配列。調節ドメインｈＲＳ１−Ｒｅｇは太字であり、そして下線付きである。
MSSLPTSDGFNHPARSSGQSPDVGNPMSLARSVSASVCPIKPSDSDRIEPKAVKALKASAEFQLNSEKKEHLSLQDLSDHASSADHAPTDQSPAMPMQNSSEEITVAGNLEKSAERSTQGLKFHLHTRQEASLSVTSTRMHEPQMFLGEKDWHPENQNLSQVSDPQQHEEPGNEQYEVAQQKASHDQEYLCNIGDLELPEERQQNQHKIVDLEATMKGNGLPQNVDPPSAKKSIPSSECSGCSNSETFMEIDTAQQSLVTLLNSTGRQNANVKNIGALDLTLDNPLMEVETSKCNPSSEILNDSISTQDLQPPETNVEIPGTNKEYGHYSSPSLCGSCQPSVESAEESCPSITAALKELHELLVVSSKPASENTSEEVICQSETIAEGQTSIKDLSERWTQNEHLTQNEQCPQVSFHQAISVSVETEKLTGTSSDTGREAVENVNFRSLGDGLSTDKEGVPKSRESINKNRSVTVTSAKTSNQLHCTLGVEISPKLLAGEEDALNQTSEQTKSLSSNFILVKDLGQGIQNSVTDRPETRENVCPDASRPLLEYEPPTSHPSSSPAILPPLIFPATDIDRILRAGFTLQEALGALHRVGGNADLALLVLLAKNIVVPT
【０２８４】
配列番号３：
マウスＲＳ１（ｍＲＳ１）（調節溶質キャリアタンパク質、ファミリー１、メンバー１（ハツカネズミ）；遺伝子銀行ＮＭ＿０２３５４４．５）をコードするヌクレオチド配列。
atg tcatcattgc cgacttcaga tgggtttgac catccagctc cttcagggca
gagtcctgag gttggtagcc cgacgagtct cgctcgctct gtttctgctt ccgtctgcgc
catcaagccc ggtgacccca atagcattga atctctagct atggaggcta cgaaggcttc
agctgaattc cagacaaact ctaagaaaac agaccctcct cctctgcagg ttcttcctga
ccttgcttcc tcagcagagc agagtctagc catgcctttc cataagtcat caaaagaagc
cgttgttgca ggtaatctgg agaaatctgt tgagaaagga acccagggcc tcagagtgta
tctccacaca agacaggacg ctagtttaac tctcacaact actgggatgc gggagccaca
gatatttgcg gaggaaaaga gttggcatcc agaaaatcag accccaagtc ccgtgaacgg
ccttcagcag cacagagaaa cagggagtgt acagcgagag gctggacagc agagtgttcc
acaggaccag ggctgtcttt gtgacgcaga agaccttgag cttcatgaag aagttgtcag
tttggaagct ctgaggaaag gtgagctaca aagacacgct catcttccca gtgcagagaa
gggtcttcca gcttcaggac tctgtagctg tccatgctca gaagccctga tggaagtaga
tacagctgaa cagtctctgg ttgctatgtg cagctcaaca ggcaggcagg atgccgtcat
caagagccct agtgtagcac atctcgcttc agataatccc actatggaag tggagacatt
acagtctaac ccgtcctgtg agcctgtgga acattccatc ttgactcggg aattgcagct
cccagaagat aatgttgaca tgtctacaat ggataacaaa gatgacaatt cctcttccct
tctaagtggc cacggtcagc cctctgtgga atcagcagaa gaattttgtt catctgtcac
agtggccttg aaagaactcc atgagctttt ggtcattagc tgtaagccag cttcagaaga
gtcacctgag catgttacct gtcagtcaga gataggagct gagagccaac caagtgtttc
agacctttca ggaagaaggg tccaaagtgt gcatttgacc cctagtgacc agtactcaca
aggctcctgt caccaggcca cctctgaatc aggaaagaca gaaatcgtag gaactgcccc
ttgtgctgcg gtagaagatg aagcatccac tagctttgaa ggtctgggtg atggcttgtc
acctgaccga gaagatgtcc gcagatcaac agagtcagcc aggaagagct gttctgtcgc
cataacctcg gctaaactgt ctgagcagtt gccctgcacc tcaggggtag aaatagcacc
tgaacttgca gcaagtgagg gtgcccacag tcagccttca gagcatgtgc ataatccagg
cccagacagg ccggagacca gcagtgtctg ccctggagct gggttgcccc gtagtggatt
ggaccaacct cccacacagt ccttgtccac cccctccgtt cttccaccgt tcatctttcc
tgctgcagat gttgacagga ttcttggtgc cggcttcact ctgcaggaag cgctcggggc
tctgcatcga gttggtggga atgcagacct tgcccttctt gttttgttag caaagaacat
tgtagtccca acataa
【０２８５】
配列番号４：
マウスＲＳ１（ｍＲＳ１）（調節溶質キャリアタンパク質、ファミリー１、メンバー１（ハツカネズミ））のアミノ酸配列。調節ドメインｍＲＳ１−Ｒｅｇは太字であり、そして下線付きである。
MSSLPTSDGFDHPAPSGQSPEVGSPTSLARSVSASVCAIKPGDPNSIESLAMEATKASAEFQTNSKKTDPPPLQVLPDLASSAEQSLAMPFHKSSKEAVVAGNLEKSVEKGTQGLRVYLHTRQDASLTLTTTGMREPQIFAEEKSWHPENQTPSPVNGLQHRETGSVQREAGQQSVPQDQGCLCDAEDLELHEEVVSLEALRKGELQRHAHLPSAEKGLPASGLCSCPCSEALMEVDTAEQSLVAMCSSTGRQDAVIKSPSVAHLASDNPTMEVETLQSNPSCEPVEHSILTRELQLPEDNVDMSTMDNKDDNSSSLLSGHGQPSVESAEEFCSSVTVALKELHELLVISCKPASEESPEHVTCQSEIGAESQPSVSDLSGRRVQSVHLTPSDQYSQGSCHQATSESGKTEIVGTAPCAAVEDEASTSFEGLGDGLSPDREDVRRSTESARKSCSVAITSAKLSEQLPCTSGVEIAPELAASEGAHSQPSEHVHNPGPDRPETSSVCPGAGLPRSGLDQPPTQSLSTPSVLPPFIFPAADVDRILGAGFTLQEALGALHRVGGNA
【０２８６】
配列番号５：
ｈＲＳ１−Ｒｅｇをコードするヌクレオチド配列。
Tcttcaggacagagtcctgatgttggtaatcctatgagtcttgctcgctctgtctctgcttcagtctgccctatcaagcccagtgactcagatcgcattgaacctaaagctgtgaaggctttgaaggcttcagctgaattccagctaaactctgaaaagaaagaacatctttctttacaagatctttctgatcatgcttcctcagcagaccatgctccaacagaccagagtccagctatgcctatgcag
【０２８７】
配列番号６：
ｈＲＳ１−Ｒｅｇのアミノ酸配列。
SSGQSPDVGNPMSLARSVSASVCPIKPSDSDRIEPKAVKALKASAEFQLNSEKKEHLSLQDLSDHASSADHAPTDQSPAMPMQ
【０２８８】
配列番号７：
ｍＲＳ１−Ｒｅｇをコードするヌクレオチド配列。
ccttcagggcagagtcctgaggttggtagcccgacgagtctcgctcgctctgtttctgcttccgtctgcgccatc aagcccggtgaccccaatagcattgaatctctagctatggaggctacgaaggcttcagctgaattccagacaaac  tctaagaaaacagaccctcctcctctgcaggttcttcctgaccttgcttcctcagcagagcagagtctagccatg 
cctttccat
【０２８９】
配列番号８：
ｍＲＳ１−Ｒｅｇのアミノ酸配列。
PSGQSPEVGSPTSLARSVSASVCAIKPGDPNSIESLAMEATKASAEFQTNSKKTDPPPLQVLPDLASSAEQSLAMPFH
【０２９０】
配列番号９：
ｈＲＳ１−Ｒｅｇのアミノ酸配列−最初/Ｎ−末端ＱＳＰモチーフがＱＥＰ(ｈＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ２０Ｅ）)により置換される。
SSGQEPDVGNPMSLARSVSASVCPIKPSDSDRIEPKAVKALKASAEFQLNSEKKEHLSLQDLSDHASSADHAPTDQSPAMPMQ
【０２９１】
配列番号１０：
ｍＲＳ１−Ｒｅｇのアミノ酸配列−最初/Ｎ−末端ＱＳＰモチーフがＱＥＰ(ｍＲＳ１−Ｒｅｇ（Ｓ１９Ｅ）)により置換される。
PSGQEPEVGSPTSLARSVSASVCAIKPGDPNSIESLAMEATKASAEFQTNSKKTDPPPLQVLPDLASSAEQSLAMPFH
【０２９２】
配列番号１１：
ｈＲＳ１−Ｒｅｇの「ｘｍ」の典型的なアミノ酸配列。
DVGNPMSLARSVSASVCPIKPSDSDRIEPKAVKALKASAEFQLNSEKKEHLSLQDLSDHASSADHAPTDQSPAMPMQ
【０２９３】
配列番号１２：
ｈＲＳ１−Ｒｅｇの「ｘｌ」の典型的なアミノ酸配列。
DVGNPMSLARSVSASVCPIKP
【０２９４】
配列番号１３：
ｈＲＳ１−Ｒｅｇの「ｘｋ」の典型的なアミノ酸配列。
KAVKALKASAEFQLNSEKKEHLSLQDLSDHASSADHAPTD
【０２９５】
配列番号１４：
ｈＲＳ１−Ｒｅｇの「ｘｊ」の典型的なアミノ酸配列。
AMPMQ
【０２９６】
配列番号１５：
ｈＲＳ１−Ｒｅｇの「ｘｍ」の典型的なアミノ酸配列。
EVGSPTSLARSVSASVCAIKPGDPNSIESLAMEATKASAEFQTNSKKTDPPPLQVLPDLASSAEQSLAMPFH
【図１】
2017513865.tif 000002
【図２】
2017513865.tif 000003
【図３】
2017513865.tif 000004
【図４】
2017513865.tif 000005
【図５】
2017513865.tif 000006
【図６】
2017513865.tif 000007
【図７】
2017513865.tif 000008
【図８】
2017513865.tif 000009
【図９】
2017513865.tif 000010
【図１０】
2017513865.tif 000011
【図１１】
2017513865.tif 000012
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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