(57)【要約】  クロルヘキシジンまたはその塩および少なくとも１種のペプチドを含む組成物であって、特に獣医学分野における細菌、真菌および／または酵母菌によって生じる感染症治療用の組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
クロルヘキシジンまたはその塩および少なくとも１種のペプチドを含む組成物であって、前記少なくとも１種のペプチドは１０〜５０個のアミノ酸から成り、少なくとも２つのアミノ酸はＬｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたはそれらの組合せから選択される塩基性アミノ酸であり、前記アミノ酸の少なくとも５０％は疎水性アミノ酸であることを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記クロルヘキシジンの塩が二塩化水素化物ジヒドロクロリド、ジアセテート、ジグルコン酸塩またはその混合物であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記クロルヘキシジンまたはその塩の濃度が０．０５ｇ／ｍｌ以下、好ましくは０．０３ｇ／ｍｌ以下であり、前記少なくとも１種のペプチドの濃度が１２．５μｇ／ｍｌ、好ましくは６μｇ／ｍｌ以下であることを特徴とする、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記少なくとも１種のペプチドが配列Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｃ’−Ｂ’−Ａ’を有するカチオン性ペプチドであり、
−単位Ａはそれぞれ１〜３個のアミノ酸から成り；
−単位Ｂはそれぞれ含硫アミノ酸から成り；
−単位Ｃはそれぞれ、疎水性アミノ酸群（ａ）および塩基性アミノ酸または水素結合形成アミノ酸群（ｂ）の双方から選択される５個のアミノ酸から成り；
−単位Ｄはグリシンおよび塩基性アミノ酸から成り、
（ｉ）前記疎水性アミノ酸は以下から選択される：Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、ＴｒｐおよびＶａｌ；
（ｉｉ）前記塩基性アミノ酸は以下から選択される：Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ；
（ｉｉｉ）前記水素結合形成アミノ酸は、Ａｓｎ、Ｇｉｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒから選択される；
下部構造Ｃ−Ｄ−Ｃは（ａ）群のアミノ酸と（ｂ）群のアミノ酸（逆の順もまた同様）との間に合計５〜９個の交換点を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記ペプチドが２個の単位Ｂとの間におけるジスルフィド架橋の形成により環化された形であることを特徴とする、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ペプチドの単位ＡおよびＡ’はそれぞれ１つまたは２つのアミノ酸から成り、単位ＣおよびＣ’のうちの少なくとも１つはＬｙｓを含むことを特徴とする、請求項４または５に記載の組成物。 
【請求項７】
前記ペプチドの単位ＣおよびＣ’はいずれもＬｙｓを含むことを特徴とする、請求項４〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記ペプチドの単位Ｄは−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−であることを特徴とする、請求項４〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
前記ペプチドの単位ＤのＧｌｙに隣接したアミノ酸が疎水性アミノ酸であり、好ましくは芳香族疎水性アミノ酸であることを特徴とする、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ペプチドが１７個のアミノ酸配列から成り、前記単位ＡおよびＡ’はそれぞれ１つまたは２つのアミノ酸から成り、前記単位ＢおよびＢ’はいずれもＣｙｓであり、前記単位ＣおよびＣ’のうち少なくとも１つはＬｙｓ含み、位置６、８、１３（付番はＡからＡ’の方向）のアミノ酸はすべて疎水性アミノ酸の前記（ｉ）群に属し、位置９および１０のアミノ酸はＡｒｇおよびＧｌｙであることを特徴とする、請求項４〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
以下を更に含むことを特徴とする、請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物：
ＴＲＩＳ（またはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ＰＩＰＥＳ（またはピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸塩酸））、ＨＥＰＥＳ（または４−２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジニル−エタンスルホン酸）、リン酸−ナトリウム一塩基酸塩および二塩基酸塩、またはクエン酸塩から選択される緩衝化合物から成る緩衝液；
ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）もしくはその無水物形もしくは塩水和物形、ＥＤＴＡカルシウム二ナトリウムもしくはその水和物形、ＥＤＴＡ二アンモニウムもしくはその水和物形、ＥＤＴＡ二カリウムもしくはその水和物形、ＥＤＴＡ二ナトリウムまたはその水和物形もしくは二水和物形、ＴＥＡ−ＥＤＴＡ（モノ（トリエタノールアミン）のＥＤＴＡ塩）、ＥＤＴＡ四ナトリウム、ＥＤＴＡ三カリウム、ＥＤＴＡ三ナトリウム、ＨＥＤＴＡ（ヒドロキシエチル−エチレンジアミノ三酢酸）およびＨＥＤＴＡ−ＥＤＴＡから選択される金属イオン封鎖剤、ならびにこれらの混合物。
【請求項１２】
前記緩衝化合物が１ｇ／ｍｌ以下の濃度であり、前記金属イオン封鎖剤が０．５ｇ／ｍｌ以下の濃度であることを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
０．００２５ｇ／ｍｌ以下の前記クロルヘキシジンまたはその塩と、１０．０μｇ／ｍｌ以下の前記少なくとも１種のペプチドと、０．５ｇ／ｍｌ以下の前記緩衝化合物と、０．２ｇ／ｍｌ以下の金属イオン封鎖剤とを含むことを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
０．００２ｇ／ｍｌ以下の前記クロルヘキシジンまたはその塩、５．０μｇ／ｍｌ以下の配列番号１〜５４から選択される前記少なくとも１種のペプチド、０．１ｇ／ｍｌ以下の前記緩衝化合物、および０．０１ｇ／ｍｌ以下の前記金属イオン封鎖剤を含むことを特徴とする、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記少なくとも１種のペプチドが配列番号１、配列番号２および配列番号３から選択されることを特徴とする、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記緩衝液がＴＲＩＳおよびＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物を含むことを特徴とする、請求項１１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記少なくとも１種のペプチドが、ヒトβ−ディフェンシン１（ｈＢＤ１）、ヒトβ−ディフェンシン２（ｈＢＤ２）、ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）、ヒトβ−ディフェンシン４（ｈＢＤ４）、ＬＬ−３７、ラクトフェリシンＢ、ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）、テンポリンＡ、テンポリンＢ、テンポリンＬ、インドリシン、メリチン、プロテグリン−１、プロテグリン−２、プロテグリン−３、プロテグリン−４、プロテグリン−５、マガイニン２、ＲＴＤ−１、ＲＴＤ−２、ＲＴＤ−３、ＲＴＤ−４、ＲＴＤ−５、アレニシン−１、アレニシン−２、アレニシン−３、ダームシジン、セクロピン、アンドロピン、モリシン、セラトトキシン、デルマセプチン、ボンビニン、好ましくはマキシミンＨ１、マキシミンＨ２、マキシミンＨ３、マキシミンＨ４またはマキシミンＨ５、エスクレンチン、ラナレキシン、ブフォリンＩＩ、ヒトＣＡＰ１８、アバエシン、アピダエシン、プロフェニン、バクテネシン、ブレビニン−１、ブレビニン−２、タキプレシン、またはドロソマイシンであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記少なくとも１種のペプチドが、ヒトβ−ディフェンシン１（ｈＢＤ１）、ヒトβ−ディフェンシン２（ｈＢＤ２）、ヒトβ−ディフェンシン４（ｈＢＤ４）、ＬＬ−３７、ラクトフェリシンＢ、ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）、テンポリンＡ、テンポリンＢ、テンポリンＬ、インドリシン、メリチン、プロテグリン−１、プロテグリン−２、プロテグリン−３、プロテグリン−４、プロテグリン−５、マガイニン２、ＲＴＤ−１、ＲＴＤ−２、ＲＴＤ−３、ＲＴＤ−４、ＲＴＤ−５、アレニシン−１、アレニシン−２  アレニシン−３、ダームシジン、セクロピン、アンドロピン、モリシン、セラトトキシン、デルマセプチン、ボンビニン、好ましくはマキシミンＨ１、マキシミンＨ２、マキシミンＨ３、マキシミンＨ４またはマキシミンＨ５、エスクレンチン、ラナレキシン、ブフォリンＩＩ、ヒトＣＡＰ１８、アバエシン、アピダエシン、プロフェニン、バクテネシン、ブレビニン−１、ブレビニン−２、タキプレシン、またはドロソマイシンであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
前記クロルヘキシジンまたはその塩の濃度が０．８μｇ／ｍｌ〜０．０５ｇ／ｍｌの範囲であり、好ましくは０．８μｇ／ｍｌ〜０．０３ｇ／ｍｌの範囲であることを特徴とする、請求項１７または１８に記載の組成物。
【請求項２０】
以下を更に含むことを特徴とする、請求項１７〜１９のいずれかに記載の組成物：
ＴＲＩＳ（またはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ＰＩＰＥＳ（またはピペラジン−１，４−ビス（２−エタンスルホン酸塩酸））、ＨＥＰＥＳ（または４−２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジニル−エタンスルホン酸）、およびリン酸−ナトリウム一塩基酸塩および二塩基酸塩、またはクエン酸塩から選択される緩衝化合物から成る緩衝液；ならびに
ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）もしくはその無水物形もしくは塩水和物形、ＥＤＴＡカルシウム二ナトリウムもしくはその水和物形、ＥＤＴＡ二アンモニウムもしくはその水和物形、ＥＤＴＡ二カリウムもしくはその水和物形、ＥＤＴＡ二ナトリウムまたはその水和物形もしくは二水和物形、ＴＥＡ−ＥＤＴＡ（モノ（トリエタノールアミン）のＥＤＴＡ塩）、ＥＤＴＡ四ナトリウム、ＥＤＴＡ三カリウム、ＥＤＴＡ三ナトリウム、ＨＥＤＴＡ（ヒドロキシエチル−エチレンジアミノ三酢酸）およびＨＥＤＴＡ−ＥＤＴＡから選択される金属イオン封鎖剤、ならびにこれらの混合物。
【請求項２１】
前記緩衝化合物の濃度が１ｇ／ｍｌ以下であり、前記金属イオン封鎖剤の濃度が０．５ｇ／ｍｌ以下であることを特徴とする、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
０．８μｇ／ｍｌ〜０．００２５ｇ／ｍｌの範囲の前記クロルヘキシジンまたはその塩と、１０．０μｇ／ｍｌ以下の前記少なくとも１種のペプチドと、０．５ｇ／ｍｌ以下の前記緩衝化合物と、０．２ｇ／ｍｌ以下の前記金属イオン封鎖剤とを含むことを特徴とする、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記緩衝液がＴＲＩＳとＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物とを含むことを特徴とする、請求項１７〜２２のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
水溶液、無水溶液、分散液、エマルジョン、懸濁液、リニメント、クリーム、ペースト、ゲル、軟膏、シャンプー、粉、エアゾール、ソフトカプセルあるいはハードカプセル、錠剤、ミニ錠剤、マイクロ錠剤、顆粒、微粒剤、ペレット、多粒子剤、微粒子剤、ピル、シロップ、油剤、ローション剤、ドロップ、点眼剤、リポソーム、ナノ粒子、パッチ、絆創膏、および包帯の形であることを特徴とする、請求項１〜２３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２５】
細菌、真菌および／または酵母菌に起因する感染症の治療に用いられることを特徴とする、請求項１〜２４のいずれかに記載の組成物。
【請求項２６】
局所的に投与可能な形を有する、請求項２５の使用のための組成物。
【請求項２７】
請求項１〜２３のいずれかに記載の組成物の、表面または支持部の消毒および衛生化のための、抗菌剤、抗真菌薬または抗酵母剤としての非医学的な使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロルヘキシジンまたはその塩および少なくとも１種のペプチドから成る組成物に関し、特に獣医学分野における細菌、真菌および／または酵母菌によって生じる感染症治療用の組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロルヘキシジンはカチオン性ポリビグアニド（ビスビグアニド）である。またクロルヘキシジンは塩（例えば二塩化水素化物、ジアセテートおよびジグルコン酸塩）の形で主に用いられる。
【０００３】
殺生剤としては、細菌細胞壁を標的としたものとして用いられる。低濃度においては、クロルヘキシジンは負帯電の細胞壁と結合し浸透バランスを崩壊させる。より高濃度においては、クロルヘキシジンは細菌細胞質の膜を攻撃し微生物タンパク質を変性させる。クロルヘキシジンは急速に発現する殺菌作用を有し、また残効性による長時間の抗菌効果を有する。
【０００４】
剤形および濃度により、クロルヘキシジンは殺細菌剤、抗ウイルス剤および殺真菌剤としての効果を有する。
【０００５】
特に低濃度においては、クロルヘキシジンはほとんどのグラム陽性菌に対し効果的である。より高濃度においては、クロルヘキシジンはグラム陰性菌に対し効果的である。最も高い濃度においては、クロルヘキシジンは酵母菌に対し効果的である。
【０００６】
抗ウイルス活性は、「被覆」ウイルス（ＨＩＶ、サイトメガロウイルス、インフルエンザ、ＲＳウイルスおよびヘルペスウイルスなど）に対しては良好であるが、「裸の」ウイルス（ロータウイルス、アデノウイルスおよびエンテロウイルスなど）に対しては低い。
【０００７】
クロルヘキシジンは殺胞子活性を有していないため、クロストリジウムディフィシル胞子に対しては有効でなく、ミコバクテリウムに対する活性は有していない。
【０００８】
クロルヘキシジンは広い活性スペクトル、許容レベルの耐容性および良好な安全性を有しているため、消毒薬として最も頻繁に用いられているもの１つである。安全性および抗菌薬耐性の選択に対する懸念によりトリクロサン製品の入手可能性が低下したため、クロルヘキシジンへの曝露が更に増加した。また、メチシリン感受性黄色ブドウ球菌（Ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｓ．ａｕｒｅｕｓ, ＭＳＳＡ）に対する規制が更に強化されているため、クロルヘキシジン含有製品の使用が更に増加するだろう。
【０００９】
Ｈｏｒｎｅｒ Ｃ．ｅｔ  ａｌ．による最近の刊行物(“Ｒｅｄｕｃｅｄ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ  ｉｎ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ：  ｉｓ  ｉｔ  ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｏｅｓ  ｉｔ  ｍａｔｔｅｒ？”  Ｊ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，  ２０１２  Ｎｏｖ；  ６７（１１）：  ２５４７−５９）（非特許文献１）においては、クロルヘキシジンに対する感受性の低下検出のために様々な方法が用いられてきたが、標準化された方法は無くまたクロルヘキシジンに対する「耐性」の定義についても意見の一致をみていない、と指摘されている。この刊行物（非特許文献１）では特に、ブドウ球菌のクロルヘキシジンに対する感受性の低下の証拠を検討している。非特許文献１の著者は結論として、「クロルヘキシジンの臨床使用は増加し続けるだろうし、また、このことが感受性の低下した新たなクローンの発生をもたらす可能性をはらんでいることに注目すべきである。効能データのない状況でクロルヘキシジンを無分別に使用することは止めなければならない」としている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｈｏｒｎｅｒ Ｃ．ｅｔ  ａｌ．著、“Ｒｅｄｕｃｅｄ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｃｈｌｏｒｈｅｘｉｄｉｎｅ  ｉｎ  ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ：  ｉｓ  ｉｔ  ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ  ａｎｄ  ｄｏｅｓ  ｉｔ  ｍａｔｔｅｒ？”  Ｊ  Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，  ２０１２  Ｎｏｖ；  ６７（１１）：  ２５４７−５９）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
よって、本発明の目的は、当該微生物による耐性の機構を発動させることなくクロルヘキシジンの効能の利点を得ることを可能とすることにある。
【００１２】
請求項１に記載の通り、上記目的は、クロルヘキシジンまたはその塩および少なくとも１種のペプチドを含む組成物により達成された。本発明の特徴および効果は、以下の詳細な説明により、また実例による説明のための実施例により明らかとなるであろう。 
【課題を解決するための手段】
【００１３】
よって、本発明の目的は、クロルヘキシジンまたはその塩および少なくとも１種のペプチドを含む組成物であって、前記少なくとも１種のペプチドは１０〜５０のアミノ酸を含み、少なくとも２つのアミノ酸はＬｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇまたはそれらの組合せから選択される塩基性アミノ酸であり、前記アミノ酸の少なくとも５０％は疎水性アミノ酸である組成物を提供することにある。
【００１４】
本発明の組成物において、クロルヘキシジンは、遊離塩基またはその塩の形であり；「クロルヘキシジンの塩」とは二塩化水素化物、ジアセテート、ジグルコン酸塩またはその混合物を意味する。
【００１５】
本発明の組成物は、好ましくは、０．０５ｇ／ｍｌ以下のクロルヘキシジンまたはその塩および１２．５μｇ／ｍｌ以下の前記少なくとも１種のペプチドを含む。
【００１６】
好ましい実施態様によれば、本発明の組成物は、０．０３ｇ／ｍｌ以下のクロルヘキシジンまたはその塩および６μｇ／ｍｌ以下の前記少なくとも１種のペプチドを含む。
【００１７】
いくつかの態様では、前記少なくとも１種のカチオン性ペプチドは、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｃ’−Ｂ’−Ａの配列を有するペプチドであって：
−単位Ａはそれぞれ１−３のアミノ酸から成り；
−単位Ｂはそれぞれ含硫アミノ酸から成り；
−単位Ｃはそれぞれ疎水性アミノ酸群（ａ）および塩基性アミノ酸または水素結合形成アミノ酸群（ｂ）の双方から選択される５つのアミノ酸から成り；
−単位Ｄは、グリシンおよび塩基性アミノ酸から成り：
（ｉ）前記疎水性アミノ酸は以下から選択される：Ａｌａ、Ｐｈｅ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、ＴｒｐおよびＶａｌ；
（ｉｉ）前記塩基性アミノ酸は以下から選択される：Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ；
（ｉｉｉ）前記水素結合形成アミノ酸は、Ａｓｎ、Ｇｉｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒから選択される；および
前記下部構造Ｃ−Ｄ−Ｃは（ａ）群のアミノ酸と（ｂ）群のアミノ酸（逆もまた同様）との間に合計５〜９個の交換点を含む。
【００１８】
下記の実施例に示すように、驚くべきことに、前記クロルヘキシジンまたはその塩および少なくとも１種のペプチドの組合せが予想外の非常に高い相乗効果を発生させるという事実が観察された。すなわち、ごく低濃度のクロルヘキシジンとごく低濃度のペプチドを用いた場合でも十分な結果が得られ、これは各成分単体では作用が発現しないような同程度に低い濃度とした場合においても同様であることが示された。クロルヘキシジン濃度の劇的な低減が可能となることにより微生物の耐性機構発動の危険性や副作用の発生を劇的に低下させ、その結果、経済的観点および環境的観点、ならびに薬効と使用上の安全の観点における明らかな利点が得られる。
【００１９】
前記少なくとも１種のペプチドは、好ましくは１５〜２１個のアミノ酸配列長を有し、２つの含硫アミノ酸間にジスルフィド架橋を形成することにより環化可能であり、好適には−ＮＨ２末端および−ＣＯＯＨ末端領域近傍に位置し湾曲したβシート形状を有する環化形である。更に、前記ペプチドは、特徴として、その中心部に複数の帯電アミノ酸が中性アミノ酸に一部または全部代えて存在する。すなわち、前記ペプチドはＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｃ’−Ｂ’−Ａ型配列を有し：単位ＡおよびＡ’は−ＮＨ２末端および−ＣＯＯＨ末端領域をそれぞれ示し；単位ＢおよびＢ’は含硫アミノ酸から成り；単位Ｃは、（ａ）疎水性アミノ酸および（ｂ）塩基性または水素結合形成アミノ酸から選択される５つのアミノ酸から成り；単位Ｄは、塩基性アミノ酸とグリシンとから成る。下部構造Ｃ−Ｄ−Ｃは、（ａ）群のアミノ酸および（ｂ）群のアミノ酸（逆もまた同様）との間に合計５〜９個の交換点を含むことを特徴とする。前記ペプチドのヘアピン構造においては、その配列中心部にＤ群が存在するため、２つの含硫アミノ酸Ｂが並置されており、好適な環境（大気条件または酸化条件）下ではジスルフィド架橋を形成する。この環化された構造はペプチドの安定化および細菌ペプチダーゼの活性に対する耐性に貢献するため、前記少なくとも１つのペプチドは、好ましくは２個の単位Ｂ間におけるジスルフィド架橋の形成による環化形である。
【００２０】
前記配列は真核生物細胞の細胞膜を通過せずかつこのような細胞に対する毒性が無いあるいは低くなる程度の割合で疎水性アミノ酸を含む。更に、疎水性アミノ酸の離散的領域における配列は帯電アミノ酸すなわち塩基性および／または水素結合形成アミノ酸により分離されており、これによりペプチドに対するより高い効果が得られ、またより高い塩基非感受性が得られる。最後に、このようなペプチドは水性溶媒に対する高い溶解度を示す。
【００２１】
前記少なくとも１種のペプチドは、容易に合成可能であり、タンパク質分解的に安定しており、略塩基非感受性であり、非溶血性であり、真核生物細胞に対しては非細胞障害性である。
【００２２】
本発明において「ペプチド」とはペプチド結合により結合した複数のアミノ酸残基として定義する。「ペプチド」はポリペプチドおよびタンパク質と同義であり、相互に読み替え可能である。本願において、ポリペプチド形成アミノ酸は、正式名称によると関連する公式の国際的な略称（１文字または３文字のコード）によるとの区別無く記載する。
【００２３】
「配列」とは前記少なくとも１種のペプチドのすべての可能な変異体として定義され、ペプチド配列中の複数のアミノ酸が相同アミノ酸により置換されており、これにより各ペプチドの特性が必ずしも同レベルではないが維持されるものを指す。他の変形例においては、活性のより高いあるいは低いものおよび／またはより広いスペクトル（例えばより広範囲の微生物に対する活性）を有するもの、または特定の微生物に特異的なものを含んでよい。好ましくは、これらアミノ酸の保存的置換は複数のアミノ酸残基に対し行う。
【００２４】
「βシート」とは環化ペプチドの三次元構造を指し、ここで各鎖は約３０°の時計回りの湾曲を有している；この形状は、シートを形成している２つの鎖の立体配置的エネルギーの最適化と内部鎖水素結合の形状の維持との間の妥協の産物である。前記配列において、各単位Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｃ、Ｂ’、Ａ’は、Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｃ’−Ｂ’−Ａ’の順で結合して線形配列を形成している；この配列は環化可能であり、あるいは２個の単位Ｂ間の直接結合により環化される。前記構造において、同一の文字で示す単位は必ずしも互いに等しいものではなく、異なるアミノ酸を含むことができる；すなわち、本発明においては、中心群Ｄを例に挙げると、対称ペプチドと非対称ペプチドとの両方を含む。
【００２５】
単位Ａはペプチド末端領域を示す：単位Ａは−ＮＨ２末端領域を示し、単位Ａ’は−ＣＯＯＨ末端領域を示す。単位ＡおよびＡ’はそれぞれ１つ、２つまたは、３つのアミノ酸から成る；また好ましくは、これら２つの単位ＡとＡ’とにおけるアミノ酸の合計数はそれぞれ３、２＋１または１＋２である。
【００２６】
好ましくは、単位Ａは、グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、トリプトファン、ヒスチジン、アルギニンおよびリジンから選択される少なくとも１種のアミノ酸から成る。
【００２７】
好ましくは、単位Ａ’は、グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジン、アルギニンおよびリジンから選択される少なくとも１つのアミノ酸から成る。
【００２８】
単位Ｂはシステインまたはメチオニンなどの含硫アミノ酸を示す。単位Ｂ’はペプチドの環化を引き起こすジスルフィド架橋の形成に関与している。環化はペプチドの合成時に行ってもよく、十分な環境酸素が供給されている場合には、合成後に行ってもよい。好ましくは、単位ＢおよびＢ’はいずれもシステインである。
【００２９】
単位Ｄは好ましくは、塩基性アミノ酸およびグリシンを示し：好ましくは方向Ａ→Ａ’において塩基性アミノ酸→グリシン配列を有する；本発明において、塩基性アミノ酸は好ましくはアルギニンである。単位Ｄに存在するグリシンは通常アルギニンにより支持されており、ペプチドのヘアピン構造を形成し、これに結合した単位Ｃとのと組合せにより、ジスルフィド架橋を形成する各単位Ｂとの間に十分な間隔を保っている。
【００３０】
各単位Ｃは、それぞれ個別に、以下から選択される５つのアミノ酸から成る：
（ａ）各疎水性アミノ酸群、および
（ｂ）塩基性または水素結合形成アミノ酸群。
（ａ）群の疎水性アミノ酸は以下から選択される：アラニン、フェニルアラニン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、チロシン、トリプトファンおよびバリン。前記ペプチド中におけるアミノ酸の総数の範囲は好ましくは３０〜５０％であり、より好ましくは３５〜４５％であり、例えば３９〜４３％である。
【００３１】
（ｂ）群の塩基性アミノ酸は以下から選択される：リジン、ヒスチジン、アルギニン。（ｂ）群の水素結合形成アミノ酸は、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニンから選択される。
【００３２】
好ましくは、上記ペプチドの各単位ＡおよびＡ’はそれぞれ１つまたは２つのアミノ酸から成り、単位ＣおよびＣ’のうち少なくとも１つはＬｙｓ含む。より好ましくは、ペプチドの単位ＣおよびＣ’はいずれもＬｙｓ含む。
【００３３】
好ましい態様において、各単位Ｃは、（ａ）群のアミノ酸および（ｂ）群のアミノ酸の双方を含む；
塩基性アミノ酸、水素結合形成アミノ酸またはこれらのいずれも、（ｂ）群の要素として自由に使用可能である。好ましい態様において、各単位Ｃは、（ｂ）群の要素として、５０〜１００％の塩基性アミノ酸を含む。
【００３４】
各単位Ｃの基本的特徴として、（ｂ）群の正帯電アミノ酸および（ａ）群の電気的に中性のアミノ酸間の交替が高度に発生することがある。
【００３５】
すなわち、Ｃ−Ｄ−Ｃ配列は、以下の間において５〜９個の交換点を含む：（ａ）疎水性アミノ酸および（ｂ）塩基性または水素結合形成アミノ酸性（逆もまた同様）。「交換点」の数は、配列Ｃ−Ｄ−Ｃにおいて、（ａ）群のアミノ酸とこれに直接結合する（ｂ）群のアミノ酸から分離するペプチド結合の数に等しい：例えば、Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅの配列には、この配列中の４つのペプチド結合に対応して４つの交換点が含まれ、一方、Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅの配列には交換点は３つだけ含まれる：これはＡｌａおよびＰｈｅが同じクラス（ａ）に属するためであり、よってＡｌａ−Ｐｈｅ結合は、「交換点」に含めない。本発明において、前記アミノ酸が疎水性アミノ酸である場合、「交換点」はまた、単位Ｄに存在する塩基性アミノ酸とそれに結合する単位Ｃのアミノ酸と間における結合を含む；一方、グリシンと含硫アミノ酸との間における結合は、結合するアミノ酸に関わらず「交換点」に含めない。
【００３６】
従って、各単位Ｃにおいて、アミノ酸（ａ）群と（ｂ）群とは、典型的には交換性を有する；しかしながら、この点に関わらず、配列Ｃ−Ｄ−Ｃの前記交換点数以内であれば同じ群（（ａ）群または（ｂ）群）のアミノ酸を限定的ではあるが隣接させてもよい。
【００３７】
好ましい態様において、ペプチドの単位Ｄは、−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−である。
【００３８】
別の好ましい態様においては、ペプチドの単位ＤのＧｌｙに隣接したアミノ酸は、疎水性アミノ酸（好ましくは芳香族の疎水性アミノ酸）である。
【００３９】
前記配列を有するペプチドにおける好ましい下位群は合計１７個のアミノ酸を含み、単位ＡおよびＡ’を含む下位群であり、前記単位ＡおよびＡ’はそれぞれ１つまたは２つのアミノ酸から成り、前記単位ＢおよびＢ’はいずれもＣｙｓであり、前記単位ＣおよびＣ’の少なくとも１つはＬｙｓ含み、位置６、８、１３（付番はＡからＡ’の順）のアミノ酸はすべて疎水性アミノ酸の前記（ｉ）群に属し、位置９および１０のアミノ酸はＡｒｇおよびＧｌｙである。
【００４０】
最も好ましい下位群は、上記の特徴に加え、特に位置１１（付番はすべてＡからＡ’の順）の疎水性アミノ酸を含むことを特徴とする。この特徴は、特にペプチドの塩基非感受性を増大させるために有用であり、また高濃度の塩の存在下においては、当該ペプチドの抗菌作用の維持に有用である。抗菌性ペプチドの膜溶解活性は通常、負帯電細菌または真菌の膜に対する静電的相互作用に基づくものであるため、この特性は特に重要である；通常は、遊離イオン（例えばＮａ＋、ＣＩ−（一般にアッセイ媒体または体液／疾患嚢胞液において見られる）が存在することで細菌膜に存在する負電荷がマスキングされ、これによりペプチド結合効率が低下し治療の有効性も低下する。本願のペプチドはこのような好ましくない現象の影響を受けず、これにより高濃度の環境イオンの存在下において有意な効果（特にグラム陰性菌に対する効果）を維持する。
【００４１】
前記少なくとも１種のペプチドに存在するアミノ酸はすべて、区別なくＤ−またはＬ−の形で存在して良い；好ましくは、これらは主に（すなわち５０％以上）あるいはすべてＬ形である。前記アミノ酸はすべて、天然状態でまたは合成誘導剤の形で使用可能である。
【００４２】
好ましいペプチド群は以下のようなものである：
−単位Ａ（−ＮＨ２末端）は２つのアミノ酸を含み、単位Ａ’（−ＣＯＯＨ末端）は１つのアミノ酸を含む、および
−単位ＢおよびＢ’はいずれもシステインである。
【００４３】
本発明における好ましいペプチドの具体例としては以下のものが挙げられる：ペプチド名ＡＭＰ２０４１（配列番号１）、ペプチド名ＡＭＰ７２（配列番号２）およびペプチド名ＡＭＰ１２６（配列番号３）のペプチド。本発明の目的のために有用である他のペプチドは、以下の配列を有するものである：本願に記載の配列番号４〜５４、すなわちＡＭＰ２８９（配列番号４）、ＡＭＰ９４４（配列番号５）、ＡＭＰ５７３（配列番号２２）、ＡＭＰ１３６０（配列番号８）、ＡＭＰ１１８９（配列番号７）、ＡＭＰ１１８８（配列番号６）、ＡＭＰ１６（配列番号９）、ＡＭＰ５１（配列番号１０）。
【００４４】
前記配列番号４〜５４の各々に近い相同物であって、単一のアミノ酸が配列位置１〜１７のいずれかにおいて修飾されており、前記修飾が配列位置３、９、１０、１６のアミノ酸に影響を及ぼさないことを特徴とするものも好ましい；前記置換は前記アミノ酸を２０個の天然アミノ酸から選択される他のアミノ酸により置換することによるものであり；好ましくは、前記アミノ酸は、上記に定義した同一の群（ａ）または（ｂ）に属する他のアミノ酸により置換されており：例えば、ＡｌａがＬｅｕにより置換されているもの；あるいはＳｅｒがＬｙｓまたはＴｈｒなどにより置換されているものが好ましい。
【００４５】
前記少なくとも１種のペプチドは、通常、公知技術の化学的方法を用いて生体外で合成される合成ペプチドである。これは例えば、固相、液相、ペプチド凝結または上記技術のいかなる組合せによる合成方法を用いて調製されるものである。前記少なくとも１種のペプチドを形成するアミノ酸は、天然物でも合成物でもよい。ペプチド合成のために使用するアミノ酸は、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄの論文（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８５：２１４９−２１５４，１９６３）に従いαアミノ末端が酸不安定基Ｎ−α−ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはＣａｒｐｉｎｏおよびＨａｎの論文（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，３７：３４０３−３４０９，１９７２）に記載の塩基不安定基９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）により保護されているアミノ酸としてもよい。Ｂｏｃ保護アミノ酸およびＦｍｏｃ保護アミノ酸はいずれも、商業的な供給元（Ｆｌｕｋａ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｂａｃｈｅｍ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃｈｅｍｔｅｃｈ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈなど）から入手可能である。
【００４６】
Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｋｙによる‘Ｐｒｉｎｃｉｐｉ  ｄｉ  ｓｉｎｔｅｓｉ  ｐｅｐｔｉｄｉｃａ’（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ  １９８４）またはＪＭ  ＳｔｅｗａｒｔとＪＤ  Ｙｏｕｎｇとによる‘Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，  Ｉｌｌｉｎｏｉｓ  １９８４）によると、固相による化学的合成方法は一般に１つ以上のアミノ酸を成長ペプチド鎖へ連続的に追加することを含む。第１のアミノ酸のアミノ基またはカルボキシル基は通常、最適な保護基により保護する。第１の保護アミノ酸を固体の不活性担体（例えば樹脂）に付加する。次いで樹脂結合残基から保護基を除去し、（好適に保護された）後列のアミノ酸を順次付加する。上記アミノ酸数が得られた後、残りの保護基すべて（および固体担体すべて）を順次あるいは同時に除去して最終ペプチドを得る。
【００４７】
例えばＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄがＧ．Ｂａｒａｎｙ  ａｎｄ  ＲＢ  Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，‘Ｉ  ｐｅｐｔｉｄｉ：Ａｎａｌｉｓｉ，Ｓｉｎｔｅｓｉ，Ｂｉｏｌｏｇｉａ’，Ｅｄ．Ｅ．ａｎｄ  Ｊ．Ｇｒｏｓｓ  Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，ｖｏｌ．２，（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８０，ｐｐ３−２５４）において述べているように、例えば、脱保護の後にペンタペプチドを形成するため、好適に保護されたジペプチドを用いて保護したトリペプチドを（キラル中心の存在によりラセミ体の形成を阻害する好適な実験条件下において）結合することにより成長鎖に対し一度に複数のアミノ酸を付加してもよい。
【００４８】
前記ペプチドは、非限定的な例として、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（米国ミシガン州セントルイス）、ＳｅｌｌｅｃｋＣｈｅｍ（米国テキサス州ヒューストン）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（米国ニューヨーク州グランドアイランド）、Ａｂｇｅｎｔ、ＯＸ１４４ＲＹ、Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ（それぞれ英国）などのペプチドのカスタムメイド合成サービスを提供している会社により合成可能である。
【００４９】
ペプチド合成物の純度は、ＨＰＬＣピークの識別を含む種々の方法により測定することができる。好ましくは、ＨＰＬＣカラム投入材料の７５％以上の高さおよび幅の単一ピークを有するペプチドが好ましい。ＨＰＬＣカラム投入材料の８７％以上、９０％以上、９９％以上または９９．５％以上の単一ピークを有するペプチドが更に好ましい。
【００５０】
本発明で後述する使用または製剤に望ましいペプチドを上記合成技術のうちの１つを用いて確実に得るため、ペプチド組成物の分析は公知技術による異なる分析法を用いて行う。組成物の分析は例えば、ペプチドの分子量を測定する高精度質量分析法を用いて行うことができる。あるいは、ペプチドのアミノ酸含有量は、ＨＰＬＣまたはアミノ酸分析計を用いてペプチドを加水分解し、混合物の成分を同定および定量化することにより測定することができる。所望のペプチドにおける複数の構成基または残基を同定するために用いられる薄層クロマトグラフィ法も同様に有用である。
【００５１】
前記少なくとも１種のペプチドの他の好ましい態様は、９０°〜１８０°、好ましくは９１°〜１７９°、より好ましくは１０４°〜１１５°の範囲の極角に関する。本願において「極角」とは両親媒性構造を有するペプチドの極性側と無極性側との間に形成される角度の基準を意味する。
【００５２】
前記少なくとも１種のペプチドの他の好ましい態様は、−１〜＋４の範囲のコンピュータ上の予測活性指数（Ｂｏｍａｎ  Ｉｎｄｅｘ）に関する。この指数の範囲は好ましくは−０．５〜＋３、より好ましくは＋１〜＋２．５、例えば＋１．１〜＋２．０である。本願において、「ボーマンインデックス」とはＲａｄｚｅｋａ  ａｎｄ  Ｗｏｌｆｅｎｄｅｎ  （１９８８）による‘‘Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｏｌａｒｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ：ｓｉｄｅ−ｃｈａｉｎ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｖａｐｏｒ  ｐｈａｓｅ，  ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ，  １−ｏｃｔａｎｏｌ  ａｎｄ  ｎｅｕｔｒａｌ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ’’（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７：  １６６４−１６７０）における記載に従い、ペプチドを形成する各単一のアミノ酸の側鎖に含まれるシクロヘキサンへの水からの伝達エネルギーの合計を残基の合計数で除したものを指す。算出値は負の値であるが記号（＋または−）は逆になる。
【００５３】
他の好ましい態様は前記少なくとも１種のペプチドの水に対する溶解度の割合に関し、この割合は４０％〜９０％、好ましくは９１％〜９７％、より好ましくは９７．５％〜１００％（例えば９８％）の範囲である。溶解度の割合は、Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ＤＬ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ  ＲＧ  （１９９１）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９，４４３−４４８に記載の、Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ−Ｈａｒｒｉｓによる２つのパラメータを用いた溶解度パラメータモデルにより推算する。
【００５４】
他の態様において、前記少なくとも１種のペプチドは、ヒトβ−ディフェンシン１（ｈＢＤ１）、ヒトβ−ディフェンシン２（ｈＢＤ２）、ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）、ヒトβ−ディフェンシン４（ｈＢＤ４）、ＬＬ−３７、ラクトフェリシンＢ、ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）、テンポリンＡ、テンポリンＢ、テンポリンＬ、インドリシン、メリチン、プロテグリン−１、プロテグリン−２、プロテグリン−３、プロテグリン−４、プロテグリン−５、マガイニン２、ＲＴＤ−１、ＲＴＤ−２、ＲＴＤ−３、ＲＴＤ−４、ＲＴＤ−５、アレニシン−１、アレニシン−２アレニシン−３、ダームシジン、セクロピン、アンドロピン、モリシン、セラトトキシン、デルマセプチン、ボンビニンであり、好ましくはマキシミンＨ１、マキシミンＨ２、マキシミンＨ３、マキシミンＨ４もしくはマキシミンＨ５、エスクレンチン、ラナレキシン、ブフォリンＩＩ、ヒトＣＡＰ１８、アバエシン、アピダエシン、プロフェニン、バクテネシン、ブレビニン−１、ブレビニン−２、タキプレシン、またはドロソマイシンである。「ＲＴＤ」（Ｒｈｅｓｕｓ  Ｔｈｅｔａ−Ｄｅｆｅｎｓｉｎ）は、アカゲザルθ−ディフェンシンを指す。
【００５５】
好ましくは、前記少なくとも１つのペプチドは、ヒトβ−ディフェンシン１（ｈＢＤ１）、ヒトβ−ディフェンシン２（ｈＢＤ２）、ヒトβ−ディフェンシン４（ｈＢＤ４）、ＬＬ−３７、ラクトフェリシンＢ、ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）、テンポリンＡ、テンポリンＢ、テンポリンＬ、インドリシン、メリチン、プロテグリン−１、プロテグリン−２、プロテグリン−３、プロテグリン−４、プロテグリン−５、マガイニン２、ＲＴＤ−１、ＲＴＤ−２、ＲＴＤ−３、ＲＴＤ−４、ＲＴＤ−５、アレニシン−１、アレニシン−２  アレニシン−３、ダームシジン、セクロピン、アンドロピン、モリシン、セラトトキシン、デルマセプチン、ボンビニンであり、好ましくはマキシミンＨ１、マキシミンＨ２、マキシミンＨ３、マキシミンＨ４もしくはマキシミンＨ５、エスクレンチン、ラナレキシン、ブフォリンＩＩ、ヒトＣＡＰ１８、アバエシン、アピダエシン、プロフェニン、バクテネシン、ブレビニン−１、ブレビニン−２、タキプレシン、またはドロソマイシンである。
【００５６】
より好ましくは、前記少なくとも１種のペプチドは、ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）、ＬＬ−３７、ラクトフェリシンＢ、ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）、テンポリンＡ、インドリシン、メリチン、プロテグリン−１、マガイニン２、アレニシン−１、アレニシン−２、アレニシン−３またはＲＴＤ−５である。
【００５７】
これらの他の態様において、好ましくは、クロルヘキシジンまたはその塩の濃度範囲は０．８μｇ／ｍｌ〜０．０５ｇ／ｍｌである。
【００５８】
他の態様において、本発明の組成物は、上記の通り、クロルヘキシジンまたはその塩および以下から選択される少なくとも１種のペプチド：ヒトβ−ディフェンシン、ＬＬ−３７、ラクトフェリシンＢ、ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）、テンポリンＡ、テンポリンＢ、テンポリンＬ、インドリシン、メリチン、プロテグリン−１、プロテグリン−２、プロテグリン−３、プロテグリン−４、プロテグリン−５、マガイニン２、ＲＴＤ−１、ＲＴＤ−２、ＲＴＤ−３、ＲＴＤ−４、ＲＴＤ−５、アレニシン−１、アレニシン−２、アレニシン−３、ダームシジン、セクロピン、アンドロピン、モリシン、セラトトキシン、デルマセプチン、ボンビニン、好ましくはマキシミンＨ１、マキシミンＨ２、マキシミンＨ３、マキシミンＨ４もしくはマキシミンＨ５、エスクレンチン、ラナレキシン、ブフォリンＩＩ、ヒトＣＡＰ１８、アバエシン、アピダエシン、プロフェニン、バクテネシン、ブレビニン−１、ブレビニン−２、タキプレシン、もしくはドロソマイシン、ならびにＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｃ’−Ｂ’−Ａ’の配列を有する少なくとも１種のカチオン性ペプチドから成る。
【００５９】
他の好ましい態様では、本発明の組成物は更に、以下から選択される緩衝化合物から成る緩衝液：ＴＲＩＳ（またはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ＰＩＰＥＳ（またはピペラジン−ｌ，４−ビス（２−エタンスルホン酸塩酸））、ＴＲＩＳ＊ＨＣｌ、ＨＥＰＥＳ（または４−２−ヒドロキシエチル−１−ピペラジニル−エタンスルホン酸）、リン酸−ナトリウム一水和物および二水和物、もしくはクエン酸、ならびに以下から選択される金属イオン封鎖剤：ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）もしくはその無水物形もしくは塩水和物形、ＥＤＴＡカルシウム二ナトリウムもしくはその水和物形、ＥＤＴＡ二アンモニウムもしくはその水和物形、ＥＤＴＡ二カリウムもしくはその水和物形、ＥＤＴＡ二ナトリウムまたはその水和物形もしくは無水物形、ＴＥＡ−ＥＤＴＡ（モノ（トリエタノールアミン）のＥＤＴＡ塩）、ＥＤＴＡ四ナトリウム、ＥＤＴＡ三カリウム、ＥＤＴＡ三ナトリウム、ＨＥＤＴＡ（ヒドロキシエチル−エチレンジアミノ三酢酸）およびＨＥＤＴＡ−ＥＤＴＡ、ならびにこれらの混合物から成る。
【００６０】
前記緩衝化合物の好適な濃度は１ｇ／ｍｌ以下であり、前記金属イオン封鎖剤の好適な濃度は０．５ｇ／ｍｌ以下である。
【００６１】
前記少なくとも１種のペプチドがＡ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｃ’−Ｂ’−Ａ’の配列を有するカチオン性ペプチドである場合において、本発明の組成物は好ましくは、０．００２５ｇ／ｍｌ以下のクロルヘキシジンまたはその塩を含み、１０．０μｇ／ｍｌ以下の少なくとも１種のペプチド、０．５ｇ／ｍｌ以下の緩衝化合物および０．２ｇ／ｍｌ以下の金属イオン封鎖剤を含む。本発明の組成物は、より好ましくは、０．００２ｇ／ｍｌ以下のクロルヘキシジンまたはその塩、５．０μｇ／ｍｌ以下の配列番号１〜５４から選択される少なくとも１種のペプチド、０．１ｇ／ｍｌ以下の緩衝化合物、ならびに０．０１ｇ／ｍｌ以下の金属イオン封鎖剤を含む。前記少なくとも１種のペプチドが前記他のペプチドのうちの１種から選択される場合において、本発明の組成物は好ましくは０．８μｇ／ｍｌ〜０．００２５ｇ／ｍｌ以下のクロルヘキシジンまたは塩、１０．０μｇ／ｍｌの少なくとも１種のペプチド、０．５ｇ／ｍｌ以下の緩衝化合物、ならびに０．２ｇ／ｍｌ以下の金属イオン封鎖剤を含む。
【００６２】
特に好ましい態様では、前記緩衝液はＴＲＩＳおよびＥＤＴＡ二ナトリウム二水和物を含む。
【００６３】
以下の実施例において後述するように、、驚くべきことに、緩衝液の存在量を更に増やすと、組成物自体の効能および活性が更に上昇する。
【００６４】
本発明のその他の態様は、本発明の組成物の、細細菌、真菌および／または酵母菌に起因する感染症の患者の治療用薬剤の製造のための使用に関する；本発明はまた、本発明の組成物の、細菌、真菌および／または酵母菌に起因する感染症の治療のための使用にも関する。第１の変形例においては、前記治療は特にグラム陰性菌群を対象としており；第２の変形例においては、前記治療はグラム陽性菌群を対象としており；第３の変形例においては、前記治療は真菌群および酵母菌群を対象としており；第４の変形例においては、前記治療は前記群の１つ以上に属する微生物を対象としている。「治療」とは本発明の組成物の効果を指し、感染症患者に利点（例えば患者の状態を改善するまたは疾患の進行を遅らせるなど）をもたらすことが可能なものである。本願において、「感染症」とは「伝染病」と同義であり、これらは、微生物の他のホスト有機体に対する侵入、コロニー形成および／または繁殖を意味する。「微生物感染症」とは、細菌、寄生虫、原生動物、ウイルスまたは酵母菌を含む真菌などの上記に定義する病原体により生じる感染症を指す。本願において、「患者」とはあらゆる多細胞有機体を指すものと定義され、これは微生物感染症に罹患しうる人間、動物、昆虫または植物を指す。好ましくは、患者とは、抗菌性ペプチドまたはその変異体が活動している微生物の感染症に罹患し得るあらゆる動物生命体（例えば人間または動物）を指す。
【００６５】
上記の通り定義される病原性細菌は、以下のような細菌種のうちの１つから生じ得る：黄色ブドウ球菌（黄色ブドウ球菌ＡＴＣＣ２５９２３など）などのブドウ球菌属種、エンテロコッカスフェカリスＡＴＣＣ２９２１２などの腸球菌属種；緑膿菌ＡＴＣＣ２７８５３などのシュードモナス属種；ヒト型結核菌などのマイコバクテリウム属種；エンテロバクタ；
連鎖球菌群ＡまたはＢなどの連鎖球菌属種、肺炎球菌、ヘリコバクターピロリなどのヘリコバクター属種；淋菌などのナイセリア属種、髄膜炎菌；ボレリア・ブルグドルフェリ、フレクスナー赤痢菌などの赤痢菌属種；大腸菌（ＡＴＣＣ２５９２２）；インフルエンザ菌などのヘモフィルス属種；野兎病菌、炭疽菌などのバチルス属種；クロストリジウム属種、ボツリヌス菌、ペスト菌などのエルシニア属種；トレポネーマ属種；バークホルデリアセパシアＡＴＣＣ１７７５９などのバークホルデリア属種；バークホルデリアマレイおよびバークホルデリアシュードマレイ；ステノトロフォモナスマルトフィリアＡＴＣＣ１３６３７などのステノトロフォモナス種。
【００６６】
グラム陰性菌などの微生物に対する本発明の組成物の生物学的活性は、緑膿菌などの細菌について定量した。緑膿菌は、その侵入性と抗菌化学療法に対する耐性が不均一であることにより特に問題となるグラム陰性菌である。この微生物は、重度の感染症の原因となり、ＨＩＶなどのウイルスへの感染、癌の化学療法または免疫抑制療法などから免疫不全となった患者に重篤な病状を引き起こす。更にこの細菌は、しばしば、下気道、尿路、嚢胞性線維症を含む皮膚病変（ただれ、潰瘍）の若年患者および老年の入院患者における重度の感染症の原因物質となる。近年、嚢胞性線維症であるュードモナス感染症の発病率が著しく増加している。
【００６７】
真菌の病原体は、以下から成る群に属する真菌（酵母菌を含む）のうちの１つに由来しうる：カンジダアルビカンスなどのカンジダ属種、表皮菌属種、エキソフィアラ属種、小胞子菌属種、猩紅色白癬菌および指間白癬菌などの白癬菌属種、白癬属種、アスペルギルス属種、ブラストミセス属種、ブラストシゾミセス属種、コクシジオイデス属種、クリプトコッカスネオフォルマンス）などのクリプトコックス属種、ヒストプラスマ属種、パラコクシジオイデス属種、スポロトリックス属種、アブシディア属種、クラドフィアロフォラ属種、フォンセセア属種、フィアロフォラ属種、ラカジア属種、アルトログラフィス属種、アクレモニウム属種、アクチノマズラ属種、アポフィソミセス属種、エモンシア属種、バシディオボールス属種、白きょう病属種、クリソスポリウム属種、コニディオボルス属種、クスダマカビ属種、フザリウム属種、ゲオトリクム属種、グラフィウム属種、レプトスフェリア属種、マラセジア属種などの癜風菌）、ケカビ属種、ネオテスツジナ属種、ノカルジア属種、ノカルジオプシス属種、ペシロミセス属種、フォーマ属種、ピエドライア属種、ニューモシスティス属種、シュードアレシェリア属種、ピレノケータ属種、リゾムコル属種、クモノスカビ属種、ロドトルラ属種、サッカロミセス属種、セドスポリウム属種、スコプラリオプシス属種、スポロボロミセス属種、シンセファラストルム属種、トリコデルマ属種、毛芽胞菌属種、ウロクラディウム属種、担糸真菌属種、バーティシリウム属種、ワンギエラ属種。
【００６８】
好ましい変形例は、シュードモナス属種、エシェリヒア属種、ステノトロフォモナス属種、バークホルデリア属種、カンジダ属種およびマラセジア属種から選択される微生物を治療対象とする。
【００６９】
本発明の組成物はまた、潰瘍および病変および皮膚損傷、切り傷または火傷など通常は皮膚に生じる感染症の治療に有用である。
【００７０】
本発明の更なる他の好ましい態様は、前記組成物が細菌皮膚感染または膿皮症の処理に有用であることを示す。
【００７１】
他の態様は、本発明の組成物の使用を粘膜感染症、胃腸や尿生殖管の感染症、腎盂腎炎、膀胱炎、尿道炎といった尿路の感染症または嚢胞性線維症といった呼吸感染症などの細菌重感染により複雑化する（臨床的または外科的な）疾患の治療に関する。哺乳類、鳥類および広くその他の動物は、本発明に係るペプチドにより治療することができる。哺乳類および鳥類は、非限定的な例として、人間、イヌ、ネコおよび飼育鳥類ならびにウマ、牛、ヒツジ、ヤギ、ブタ、鶏およびシチメンチョウおよび家禽などの生産的家畜を含む。
【００７２】
第２の好ましい態様は、本発明の組成物の、以下の感染症治療における使用に関する：愛がん動物および生産的家畜のクレブシエラ属種からの感染症、サルモネラ属種からの感染症、エルシニア属種からの感染症、プロテウス属種からの感染症、およびコリバシロシス属種からの感染症。
【００７３】
他の好ましい態様は、ウマ科の鼻疽および肉食動物の類鼻疽ならびに愛がん動物および生産的家畜の緑膿菌感染症の治療に関する。
【００７４】
他の態様は、愛がん動物および生産的家畜のボルデテラ属感染症の治療ならびに愛がん動物および生産的家畜の、以下の感染症に関する；モラクセラ属感染症；フランキセラ属感染症、ブルセラ属感染症、カンピロバクター属感染症、パスツレラ属感染症；アクチノバチルス属感染症（類放線菌症）；ヘモフィルス属感染症；連鎖球菌感染症（牛乳腺炎、窒息を含む）；ブドウ球菌感染症（乳腺炎、膿皮症、子宮内膜炎を含む）；炭疽菌を含むバチルス属感染症；破傷風、ボツリヌス菌中毒および症候性炭疽を含むクロストリジウム属感染症；リステリア属感染症（リステリア症）；腸丹毒菌を含むエリジペロスリックス属感染症；レプトスピラ菌感染症、セルプリナ属感染症（表層壊疽性腸炎）、トレポネーマ属感染症（ウサギ梅毒）、ボレリア属感染症。
【００７５】
最後に、植物もまた本発明の組成物により治療することができる。
【００７６】
本発明の組成物は、背景技術に記載の方法および容易に利用可能な公知の賦形剤を用いて調製することができる。このような組成物は本発明の一部を構成する。
【００７７】
本願において、「賦形剤」とは、特定の感染症またはこれに付随する状態の治療のために調製する製剤に用いる化合物もしくはその最適混合物を指す。例えば、医薬製剤に用いられる賦形剤は、通常、患者の逆反応を引き起こしてはならない。上記のように、賦形剤は、活性化合物の関連する生物学的活性を著しく阻害してはならない。例えば、賦形剤は、本発明の組成物またはその変形例の抗菌活性を著しく阻害しない。
【００７８】
好適な賦形剤は、甘味料、希釈剤、崩壊剤、流動促進剤、着色剤、結合剤、潤滑油、安定化剤、吸着剤、防腐剤、界面活性剤、湿潤剤、香料、皮脂低減剤、角質溶解剤、軟化剤、再構築剤、皮膜形成物質、乳化剤、湿潤剤、脱離抑制剤またはこれらの混合物である。
【００７９】
好ましくは、前記界面活性剤は、１５％（０．１５ｇ／ｍｌ）以下の濃度の両性界面活性剤、１５％（０．１５ｇ／ｍｌ）以下の濃度の非イオン性活性剤または１５％（０．１５ｇ／ｍｌ）以下の濃度のカチオン性界面活性剤である。
【００８０】
前記乳化剤、湿潤剤、皮脂低減剤、角質溶解剤、軟化剤、再構築剤は１５％（０．１５ｇ／ｍｌ）以下の濃度とすることが好ましい。
【００８１】
前記潤滑油および被膜剤は、３％（０．０３ｇ／ｍｌ）以下の濃度とすることが好ましい。
【００８２】
前記防腐剤は、１％（０．０１ｇ／ｍｌ）以下の濃度とすることが好ましい。
【００８３】
前記着色剤は、２％（０．０２ｇ／ｍｌ）以下の濃度とすることが好ましい。
【００８４】
前記香料は、５％（０．０５ｇ／ｍｌ）以下の濃度とすることが好ましい。
【００８５】
前記賦形剤は、上記に代えてまたは上記に加えて、前記少なくとも１種のペプチドの活性または半減期を増加させるプロテアーゼ阻害剤などの化合物を含んでいてよい。他の例において、前記賦形剤は追加の抗菌性分子および／または抗炎症性分子を含んでいてよく、あるいは前記賦形剤はそれ自体が抗菌性および／または抗炎症性のものであってよい。
【００８６】
本発明の組成物は、水溶液、無水物形もしくは分散液またはエマルジョン、懸濁液、軟膏、クリーム、ペースト、ゲルまたは蝋膏の形としてもよい。
【００８７】
本発明の組成物は、人間ならびに動物の洗浄および汚れ除去用のゲル、スプレー、水溶液、シャンプーまたは耳用もしくは皮膚用溶液局所製品などの形としてもよい。
【００８８】
本発明の組成物の前記少なくとも１種のペプチドは、無菌固体の無菌隔離によりまたは使用の前に水などの好適な担体を用いて溶液の形で再構成される溶液の凍結乾燥により得られる粉末形として剤形化することができる。
【００８９】
前記組成物は錠剤、ミニ錠剤、マイクロ錠剤、顆粒、微粒剤、ペレット、多粒子剤、マイクロ粒子剤などの固体形としてよく、あるいは溶液、クリーム、軟膏、塗剤、ペースト、油、エマルジョン、ゲル、バイアルもしくはドロップの形としてよい。
【００９０】
錠剤などの固体形の場合、標準的な湿式技術または乾式技術によって錠剤をコーティングしてよい。このような治療に効果的な組成物の活性化合物の量は、例えば、治療に効果的な投与量に基づき求めることができる。前記活性化合物は、液滴またはスプレーなどにより耳介から投与してもよい。
【００９１】
前記固体形はまた、以下を含んでいてよい：トラガカントゴムゴム、アカシア、穀物澱粉もしくはゼラチンなどの結合剤；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；穀物澱粉、ポテトデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；およびステアリン酸マグネシウムなどの潤滑油。
【００９２】
前記固体形は徐放性製剤または緩効性製剤の形としてよい。
【００９３】
液体形とする場合、前記活性化合物に加えて、防腐剤、染料および香味物質としてメチルパラベンおよびプロピルパラベンを含んでいてよい。
【００９４】
局所投与用組成物は、軟膏、クリーム、ローション、溶液、ペースト、ゲル、リポソーム、ナノ粒子、パッチ、絆創膏および包帯の形を含む。ある態様では、局所製剤は、少なくとも１種の皮膚浸透促進剤から成る。
【００９５】
前記組成物は、患者に対し望ましい治療効果を発揮するのに十分な投与量に基づき管理される。
【００９６】
いくつかの態様では、局所製剤の有効量は、患者個人の疾患、障害または状態の深刻さ、過去の治療、健康状態および組成物に対する反応に基づくものである。
【００９７】
本発明の組成物は、表面または支持部の消毒および衛生化のために、抗菌剤、抗真菌薬または反酵母菌薬品として更に有利に使用可能である。
【００９８】
事実、驚くべきことに、本発明の組成物により、特に獣医学分野において使用する器具やその環境における表面および支持部の消毒および衛生化につき、これらを損傷することなく、また接触による感染症や疾患の発現予防につき、当該器具や環境を使用する動物についても非常に良好な結果が得られることが判明している。
【００９９】
好ましくは、これら表面および環境は酪農場における搾乳バケツ、搾乳ビン、搾乳フィルタ、搾乳機、搾乳タンク、搾乳パイプ、充填機、ガラス製品、クリーム分離機、タンク、ボイラー、冷蔵タンクおよび貯蔵器、ミルク加工ライン、表面および床面などの器材および環境である。
【０１００】
前記表面および支持部は、鋼、金属、ポリエチレンおよびＰＶＣなどのポリマー、エラストマーまたはこれらの組合せとしてよい。
【０１０１】
この目的のため、本発明の組成物は、上述のように、対応する液体形とした場合に比して保存時間を極めて有意に延長することを達成するにあたり、固体形として有利であり、また保存量の低減の便においても有利である。
【０１０２】
好ましくは、表面または支持部の消毒および衛生化のための本発明の組成物は、ＬＬ−３７、テンポリンＡ、テンポリンＢ、テンポリンＬ、メリチンおよびマガイニン２から選択される少なくとも１種のペプチドから成る。
【０１０３】
前記組成物の構成要素の好ましい態様として考えうるあらゆる組合せについては、上記と同様に説明されるものであり、よって好ましいものと理解されるべきである。
【０１０４】
また前記組成物およびその構成要素の好ましく有利なものとして説明した態様はすべて、それらの調製ならびに使用に関し同様に好ましく有利なものであることもまた理解されるべきである。
【実施例】
【０１０５】
以下に、より良い説明のため、本発明の実施例を記載する。
【０１０６】
実施例１
ペプチド
本実験計画において使用するペプチドは、ＡＭＰ２０４１、ＡＭＰ１２６およびＡＭＰ７２である。これらはＳｅｌｌｅｃｋＣｈｅｍ社（米国テキサス州ヒューストン）の合成によるもので、特徴として少なくとも９０％の純度を有する。凍結乾燥ペプチドをリン酸塩緩衝液（ＰＢ、１０ｍＭ、０．８７０９ｇ／ＬのＫ２ＨＰＯ４、０．６８０４ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４）中に濃度１ｍｇ／ｍｌで溶解した。
【０１０７】
細菌懸濁液の調製
各参照株について、形態学的に類似した３〜５つのコロニーを血液寒天板から選び、６ｍｌのブレインハートインフュージョン培地（ＤＩＦＣＯ社、米国）を含む試験管に播種した。マクファーランド濁度標準液番号で０．５以上という要求濁度値に達するまで、３７℃、２２５ｒｐｍの撹拌速度で３〜４時間ほどこの試験管に回転培養を行った。その後、細菌懸濁液を１０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。得られた細菌ペレットを１０mM  PBで再懸濁させた。濁度は同様の緩衝液により調整し、分光光度計で懸濁液の吸光度を測定することにより確認した。６００ｎｍにおける吸光度が０：０８〜０：１３の範囲にあるとき、吸光度はマクファーランド濁度標準液番号で０．５に等しいとみなすものとした。この値のとき、細菌懸濁液の菌量は約１０８ＵＦＣ／ｍｌであった。評価後に調整した細菌懸濁液２００μＬを、１：１００の最終希釈倍率を得るため、１９．８ｍｌの１０ｍＭ  ＰＢに加えた。次いで、３０分以内に、この懸濁液０：０５ｍｌ（１０６ＵＦＣ／ｍｌ）をＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに播種し、５×１０５ＵＦＣ／ｍｌの最終細菌濃度を得た。
（ＣＳＬＩ．  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ｄｉｓｋｓ  ａｎｄ  ｄｉｌｕｔｉｏｎ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒｍ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ａｎｉｍａｌｓ．；  ＣＬＳＩ：  Ｗａｙｎｅ，  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，  ＵＳＡ，  ２００８．）
【０１０８】
プレートの調製と最小殺菌濃度（ＭＢＣ）の評価
５０μＬのペプチド（４００μｇ／ｍｌ）を、５０μＬの緩衝液（ＰＢ）を収容したマイクロタイタープレートの１列目の各ウェルに投入した。次いで１列目から１０列目まで連続希釈を行い、２００μｇ／ｍｌ〜０．４μｇ／ｍｌの範囲のペプチド濃度を得た。成長対照群および無菌対照群をそれぞれ１１列目と１２列目に投入した。５０μＬの被処理細菌懸濁液を、１００μｇ／ｍｌ〜０．２μｇ／ｍｌの範囲のペプチド最終濃度を得るために、無菌対照群を除く各ウェルに投入した。プレートは、大気中３７℃において２時間培養した。その後、各希釈液２０μｌを好適な固体媒体上に移し、これを３７℃で２４時間培養し、ＣＦＵを計数した。最小殺菌濃度（ＭＢＣ）は、少なくとも９９．９％の細菌を殺すことが可能な濃度の最も低い値とした。実験はすべて三回繰り返した。
【０１０９】
各ペプチドにおける殺菌活性の経時変化
指数関数的増殖期の細菌懸濁液（１×１０６ＣＦＵ）を１００μｌの１０ｍＭ  ＰＢ中に再懸濁させ、ＭＢＣに近い濃度値にしたペプチドＡＭＰ７２、ＡＭＰ１２６およびＡＭＰ２０４１と接触させ、３７℃で培養した。その後、２０μｌを異なる種類の細菌についての実験に用いたるための、個別の媒体上に異なる時間間隔（５〜３０分毎、次いで１０〜６０分毎、次いで３０〜１２０分毎）で播種した。成長対照群は、ペプチドを含有しないＰＢ中に投入して調製し、ＣＦＵ計数のための各時間間隔を置いて固体媒体上に播種した。最後に、３７℃で一晩培養した後、コロニーを計数した。実験はすべて三回繰り返した。
【０１１０】
新たに得た製剤の殺菌活性の評価：タイムキリングアッセイ
欧州規格ＥＮ１０４０およびＥＮ１２７６を修正した定量試験を用いて、新たに得た製剤の殺菌活性を評価するため、タイムキリングアッセイを行った。細菌懸濁液１００μｌを新たに得た製剤９００μｌ加え、得られた混合物の５０μｌのアリコートを０．５分、１分、２．５分、５分、１０分、２０分、３０分、６０分、９０分および１２０分のそれぞれの時点で分析した。各サンプルを４５０μｌの中和液に加え、室温で３分間放置した。次いで、各サンプルをＰＢＳ（ｐＨ７．４）中に順次希釈し、５０μｌをＬＢ寒天培地上に移し、これを３７℃で２４時間加熱してＣＦＵを計数した。無菌対照群（細菌懸濁液に代えて１００μｌのＰＢＳ）および新たに得た製剤を含まない対照群を調製した。また、擬似生理学的環境をシミュレートするため、０．３％および３．０％（ｗ／ｖ）のＢＳＡ存在下で試験を行った。実験はすべて三回繰り返した。
【０１１１】
結果  以下の表に当該試験の実施結果を示す。特に、各単一の構成要素、すなわちクロルヘキシジン（ＣＬＸ）とペプチドＡＭＰ２０４１それぞれの活性および本発明に係るこれらの組合せの活性、ならびにＴＲＩＳ−ＥＤＴＡをも含む好ましい組合せの活性とを比較した。これらの試験から、クロルヘキシジンとペプチドの組合せが、最小濃度において緑膿菌（シュードモナス  アエルギノサ，Pseudomonas aeruginosa）ＡＴＣＣ２７８５３に対する相乗効果を有することが明らかとなった。
【０１１２】
【表１】
2017522280.tif 000002
【０１１３】
上記表から明らかな様に、「クロルヘキシジン＋ペプチド」の組合せにおいて観察される緑膿菌ＡＴＣＣ２７８５３に対する驚くべき相乗効果は、ＴＲＩＳ−ＥＤＴＡの存在下において有利に更に増加した。
【０１１４】
また、同じプロトコルを、ブドウ球菌（スタフィロコッカス（Staphylococcus）属）ＡＴＣＣ２５９２３に対する抗菌活性の試験に適用した。以下の表は、当該試験の実施結果を示す。上記と同様に、各単一の構成要素、すなわちクロルヘキシジン（ＣＬＸ）とペプチドＡＭＰ２０４１それぞれの活性および本発明に係る組合せの活性とを比較した。
【０１１５】
【表２】
2017522280.tif 000003
【０１１６】
この様に、驚くべきことに、本発明に係る組合せにおいて、試験開始１分経過以降、グラム陰性菌とグラム陽性菌のいずれに関してもＣＦＵの著しい低減（５０〜６０％の低減）が観察された。特に開始５分経過以降はこの低減はほぼ完了している（９９．３３％）ことが観察された。
【０１１７】
実施例２〜１７
以下は、本発明に基づき製造する製品の製法である。以下の各実施例において、「パーセント濃度」とは「ｇ／１００ｍｌ」を意味する。
【０１１８】
実施例２Ａ〜２Ｌ  獣医耳科製品の調製
以下の組成を有する、耳洗浄用および消毒用製品（ｐＨ８またはｐＨ７〜７．５）を調製した：
【０１１９】
【表３】
2017522280.tif 000004
【０１２０】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例２Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例２Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例２Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例２Ｄ：ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）
−実施例２Ｅ：ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）
−実施例２Ｆ：アレニシン−１
−実施例２Ｇ：ＲＴＤ−５
−実施例２Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）（１：１）
−実施例２Ｉ：ＡＭＰ７２＋ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）（１：１）
−実施例２Ｌ：ＡＭＰ２８９
【０１２１】
実施例３Ａ〜３Ｌ  獣医科用液体シャンプーの調製
以下の組成を有する液体シャンプー（ｐＨ５．５〜６．５）を調製した：
【０１２２】
【表４】
2017522280.tif 000005
【０１２３】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例３Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例３Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例３Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例３Ｄ：ラクトフェリシンＢ
−実施例３Ｅ：プロテグリン−１
−実施例３Ｆ：インドリシン
−実施例３Ｇ：ＲＴＤ−５
−実施例３Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋インドリシン（２：１）
−実施例３Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−１（１：２）
−実施例３Ｌ：ＡＭＰ９４４
【０１２４】
実施例４Ａ〜４Ｌ  獣医科用液体シャンプーの調製
以下の組成を有する液体シャンプー（ｐＨ５．５〜６．５）を調製した：
【０１２５】
【表５】
2017522280.tif 000006
【０１２６】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例４Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例４Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例４Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例４Ｄ：ラクトフェリシンＢ
−実施例４Ｅ：プロテグリン−１
−実施例４Ｆ：インドリシン
−実施例４Ｇ：ＲＴＤ−５
−実施例４Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋インドリシン（２：１）
−実施例４Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−１（１：２）
−実施例４Ｌ：ＡＭＰ９４４
【０１２７】
実施例５Ａ〜５Ｌ  獣医科用液体シャンプーの調製
以下の組成を有する液体シャンプー（ｐＨ５．５〜６．５）を調製した：
【０１２８】
【表６】
2017522280.tif 000007
【０１２９】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例５Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例５Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例５Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例５Ｄ：ラクトフェリシンＢ
−実施例５Ｅ：プロテグリン−１
−実施例５Ｆ：インドリシン
−実施例５Ｇ：ＲＴＤ−５
−実施例５Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋インドリシン（２：１）
−実施例５Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−１（１：２）
−実施例５Ｌ：ＡＭＰ９４４
【０１３０】
実施例６Ａ〜６Ｌ  獣医科用粘性シャンプーの調製
以下の組成を有する液体シャンプー（ｐＨ７〜９）を調製した：
【０１３１】
【表７】
2017522280.tif 000008
【０１３２】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例６Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例６Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例６Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例６Ｄ：ラクトフェリシンＢ
−実施例６Ｅ：プロテグリン−１
−実施例６Ｆ：インドリシン
−実施例６Ｇ：ＲＴＤ−５
−実施例６Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋インドリシン（２：１）
−実施例６Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−１（１：２）
−実施例６Ｌ：ＡＭＰ９４４
【０１３３】
実施例７Ａ〜７Ｌ  消毒液の調製
以下の組成を有する消毒液（ｐＨ５．５〜６．５）を調製した：
【０１３４】
【表８】
2017522280.tif 000009
【０１３５】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例７Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例７Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例７Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例７Ｄ：ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）
−実施例７Ｅ：アレニシン−２
−実施例７Ｆ：エスクレンチン
−実施例７Ｇ：ＡＭＰ５７３
−実施例７Ｈ：ＡＭＰ１２６＋ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）（１：１）
−実施例７Ｉ：ＡＭＰ７２＋アレニシン−２（１：１）
−実施例７Ｌ：ＡＭＰ１３６０
【０１３６】
実施例８Ａ〜８Ｌ  消毒液の調製
以下の組成を有する消毒液（ｐＨ５．５〜６．５）を調製した：
【０１３７】
【表９】
2017522280.tif 000010
【０１３８】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例８Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例８Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例８Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例８Ｄ：ＡＭＰ１６
−実施例８Ｅ：プロテグリン−２
−実施例８Ｆ：ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）
−実施例８Ｇ：ＡＭＰ１１８９
−実施例８Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）（３：１）
−実施例８Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−２（１：３）
−実施例８Ｌ：ＡＭＰ１１８８
【０１３９】
実施例９Ａ〜９Ｌ  消毒液の調製
以下の組成を有する消毒液（ｐＨ５．５〜６．５）を調製した：
【０１４０】
【表１０】
2017522280.tif 000011
【０１４１】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例９Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例９Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例９Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例９Ｄ：ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）
−実施例９Ｅ：マキシミンＨ１
−実施例９Ｆ：デルマセプチン
−実施例９Ｇ：ＲＴＤ−５
−実施例９Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）（１：２）
−実施例９Ｉ：ＡＭＰ７２＋マキシミンＨ１（２：１）
−実施例９Ｌ：ＡＭＰ５１
【０１４２】
実施例１０Ａ〜１０Ｌ  ゲルの調製
以下の組成を有するゲル（ｐＨ６．５〜７．５）を調製した：
【０１４３】
【表１１】
2017522280.tif 000012
【０１４４】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例１０Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例１０Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例１０Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例１０Ｄ：ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）
−実施例１０Ｅ：ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）
−実施例１０Ｆ：アレニシン−３
−実施例１０Ｇ：ＲＴＤ−５
−実施例１０Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）（１：１）
−実施例１０Ｉ：ＡＭＰ７２＋ラクトフェリン（ｆ  １７−４１）（１：１）
−実施例１０Ｌ：ＡＭＰ２８９
【０１４５】
実施例１１Ａ〜１１Ｌ  抗脂漏性シャンプーの調製
以下の組成を有する液体シャンプー（ｐＨ４．０〜５．５）を調製した：
【０１４６】
【表１２】
2017522280.tif 000013
【０１４７】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例１１Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例１１Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例１１Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例１１Ｄ：ＡＭＰ１６
−実施例１１Ｅ：プロテグリン−２
−実施例１１Ｆ：ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）
−実施例１１Ｇ：ＡＭＰ１１８９
−実施例１１Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）（２：１）
−実施例１１Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−２（１：２）
−実施例１１Ｌ：ＡＭＰ１１８８
【０１４８】
実施例１２Ａ〜１２Ｌ  抗脂漏性シャンプーの調製
以下の組成を有する液体シャンプー（ｐＨ４．０〜５．５）を調製した：
【０１４９】
【表１３】
2017522280.tif 000014
【０１５０】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例１２Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例１２Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例１２Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例１２Ｄ：ＡＭＰ１６
−実施例１２Ｅ：プロテグリン−２
−実施例１２Ｆ：ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）
−実施例１２Ｇ：ＡＭＰ１１８９
−実施例１２Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）（２：１）
−実施例１２Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−２（１：２）
−実施例１２Ｌ：ＡＭＰ１１８８
【０１５１】
実施例１３Ａ〜１３Ｌ  抗脂漏性溶液の調製
以下の組成を有する消毒液（ｐＨ５．５〜６．５）を調製した：
【０１５２】
【表１４】
2017522280.tif 000015
【０１５３】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例１３Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例１３Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例１３Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例１３Ｄ：ＡＭＰ１６
−実施例１３Ｅ：プロテグリン−２
−実施例１３Ｆ：ヒトβディフェンシン３（ｈＢＤ３）
−実施例１３Ｇ：ＡＭＰ１１８９
−実施例１３Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）（２：１）
−実施例１３Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−２（１：２）
−実施例１３Ｌ：ＡＭＰ１１８８
【０１５４】
実施例１４Ａ〜１４Ｌ  表面および支持部のための消毒薬の調製
以下の組成を有する、乳業設備の表面および支持部の洗浄および消毒用製品（ｐＨ８）を調製した：
【０１５５】
【表１５】
2017522280.tif 000016
【０１５６】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例１４Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例１４Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例１４Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例１４Ｄ：テンポリンＡ
−実施例１４Ｅ：メリチン
−実施例１４Ｆ：マガイニン２
−実施例１４Ｇ：ＬＬ−３７
−実施例１４Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ＬＬ−３７（１：１）
−実施例１４１：ＡＭＰ７２＋メリチン（１：１）
−実施例１４Ｌ：ＡＭＰ９４４
【０１５７】
実施例１５Ａ〜１５Ｌ  表面および支持部用消毒薬の調製
以下の組成を有する、乳業設備の表面および支持部の洗浄および消毒用製品（ｐＨ８）を調製した：
【０１５８】
【表１６】
2017522280.tif 000017
【０１５９】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例１５Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例１５Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例１５Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例１５Ｄ：テンポリンＡ
−実施例１５Ｅ：メリチン
−実施例１５Ｆ：マガイニン２
−実施例１５Ｇ：ＬＬ−３７
−実施例１５Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ＬＬ−３７（１：１）
−実施例１５Ｉ：ＡＭＰ７２＋メリチン（１：１）
−実施例１５Ｌ：ＡＭＰ９４４
【０１６０】
実施例１６Ａ〜１６Ｌ  獣医科用滋養クリームの調製
以下の組成物を含むクリーム（ｐＨ４．５−８により）を調製した：
【０１６１】
【表１７】
2017522280.tif 000018
【０１６２】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例１６Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例１６Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例１６Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例１６Ｄ：ラクトフェリシンＢ
−実施例１６Ｅ：プロテグリン−１
−実施例１６Ｆ：インドリシン
−実施例１６Ｇ：ＲＴＤ−５
−実施例１６Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋インドリシン（２：１）
−実施例１６Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−１（１：２）
−実施例１６Ｌ：ＡＭＰ９４４
【０１６３】
実施例１７Ａ〜１７Ｌ  抗脂漏性シャンプー／クリームの調製
以下の組成物を含む粘性シャンプー（ｐＨ４．０−７．５）を調製した：
【０１６４】
【表１８】
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【０１６５】
ここで、「ペプチド」とは以下のものである：
−実施例１７Ａ：ＡＭＰ２０４１
−実施例１７Ｂ：ＡＭＰ７２
−実施例１７Ｃ：ＡＭＰ１２６
−実施例１７Ｄ：ＡＭＰ１６
−実施例１７Ｅ：プロテグリン−２
−実施例１７Ｆ：ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）
−実施例１７Ｇ：ＡＭＰ１１８９
−実施例１７Ｈ：ＡＭＰ２０４１＋ヒトβ−ディフェンシン３（ｈＢＤ３）（２：１）
−実施例１７Ｉ：ＡＭＰ１２６＋プロテグリン−２（１：２）
−実施例１７Ｌ：ＡＭＰ１１８８
【０１６６】
本発明による組成物により達成される効果は、詳細な説明および上記実施例から明らかである。特に、前記組成物により少なくとも１種のペプチドの存在から生じている驚くべき相乗効果が得られ、その結果、対象微生物の耐性を生じさせる危険を最小化すると共に、クロルヘキシジンの効能から利益を得ることが有利に可能となる。事実、本発明の組成物はＣＦＵ数をごく短時間の内に低減させかつクロルヘキシジンの量を大幅に低減させるという定量的に非常に良好な結果をもたらすことが示された。また、ペプチドは対象微生物の耐性機構を発動させ得るが、クロルヘキシジンとの組み合わせた場合、ペプチドの使用量が大幅に有利に低減されることにも注目すべきである。
【配列表】
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【国際調査報告】
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