(57)【要約】本発明は炎症性疾患の処置および／または予防の使用のための式（Ｉ）の化合物に関し、ここで：式（ＩＩ）は芳香環を意味し、ここでＶは、ＣまたはＮであり、およびＶが、Ｎである場合、Ｑが、Ｎ又はＯであり、ただしＲ’’は、ＱがＯである場合に存在せず、Ｒ'は、独立して水素原子、または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、−ＣＯＯＲ１基、−ＮＯ２基、−ＮＲ１Ｒ２基、モルホリニルまたはモルホリノ基、Ｎ−メチルピペラジニル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）−（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、および−ＣＮ基の中から選択される基であり、更に(IIa),(IIIa)、又はその薬学的に許容される塩のいずれか一つの中から選択される基であり得る。【化１】2017522313.tif 000061【選択図】なし
2017522313.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性疾患の処置および／または予防における使用の為の式Ｉの化合物：
【化１】
2017522313.tif 000052
ここで、
Ｚは、ＣまたはＮであり、
Ｖは、ＣまたはＮであり、
【化２】
2017522313.tif 000053
は芳香環を意味し、ここでＶは、ＣまたはＮであり、そしてＶがＮである場合に、ＶはＺのオルト、メタ、又はパラ位にあり、すなわちそれぞれピリジン、ピリダジン、ピリミジン、またはピラジン基を形成し、
Ｒは独立して、水素原子、ハロゲン原子、または−ＣＮ基、ヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルコキシ基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、−ＮＯ２基、−ＮＲ１Ｒ２基、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、フェノキシ基、−ＮＲ１−ＳＯ２−ＮＲ１Ｒ２基、−ＮＲ１−ＳＯ２−Ｒ１基、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１基、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１Ｒ２基、−ＳＯ２−ＮＲ１Ｒ２基、−ＳＯ３Ｈ基、−Ｏ−ＳＯ２−ＯＲ３基、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＲ３基、および（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基から選択される基を表し、ここで前記アルキルはヒドロキシル基によって、任意的にモノ置換されていてもよく、
Ｑは、Ｎ又はＯであり、ただしＱがＯであるときに、Ｒ’’は存在せず、
Ｒ１およびＲ２は、独立して水素原子または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基であり、
Ｒ３およびＲ４は、独立して水素原子、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｎ＋（Ｒａ）４またはベンジル基を表し、
ｎは、１、２、または３であり、
ｎ’は、１、２、または３であり、
Ｒ'は、独立して水素原子、または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基、ハロゲン原子、−ＮＯ２基、−ＮＲ１Ｒ２基、モルホリニルまたはモルホリノ基、Ｎ−メチルピペラジニル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）−（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、および−ＣＮ基の中から選択される基を表し、更に以下の中から選択される基であることができ：
【化３】
2017522313.tif 000054
ここで、
Ａは、共有結合、酸素原子、またはＮＨであり、
Ｂは、共有結合またはＮＨであり、
ｍは、１、２、３、４、または５であり、
ｐは、１、２、または３であり、
ＲａおよびＲｂは、独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ５）アルキル基、または（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基を表し、
ＲａおよびＲｂは、それらが結合されている窒素原子と共に、任意的に更にＮ、Ｏ、およびＳの中から選ばれるヘテロ原子を有していてもよい飽和の５−または６−員環のヘテロ環を形成することができ、ここで前記ヘテロ環は任意的に１以上のRaで置換されることができ、但しＲ’が基（ＩＩａ）または（ＩＩＩａ）である時、他のＲ’基が前記基（ＩＩａ）または（ＩＩＩａ）と異なる場合だけ、ｎ’が２又は３であり得、
Ｒ''は、水素原子、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、または上記の基（ＩＩａ）である、
またはその薬学的に許容される塩のいずれか一つ。
【請求項２】
Ｒ’’は、水素原子、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、または基
【化４】
2017522313.tif 000055
であり、ここでｍは２又は３であり、及びＸ１はＯ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒは独立して、水素原子、メチル基、メトキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、ハロゲン原子および、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、およびより特別にはフッ素または塩素原子、トリフルオロメトキシ基、およびアミノ基を表す、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ’は独立して、水素原子、ハロゲン原子およびより特別にはフッ素または塩素原子、アミノ基、メチル基、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、または基
【化５】
2017522313.tif 000056
を表し、ここでＡは、ＯまたはＮＨであり、ｍは２又は３であり、およびＸ１は、Ｏ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、ただしＲ’がこのような基である場合、ｎ’は１又は２であり、そしてｎ’が２の場合、その他のＲ’基は前記基と異なり、
又はかわりにＲ’は互いに独立して水素原子、ハロゲン原子およびより特別にはフッ素または塩素原子、メチル基、または基
【化６】
2017522313.tif 000057
を表し、ここでＡは、ＯまたはＮＨであり、ｍは２であり、およびＸ１は、Ｏ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、ただしＲ’がこのような基である場合、ｎ’は１又は２であり、そしてｎ’が２の場合、その他のＲ’基は前記基と異なる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
ＱがＮである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
以下の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、および（Ｉｃ）から選ばれ、
【化７】
2017522313.tif 000058
ここでＲ、Ｒ’、Ｒ’’、ｎ、およびｎ’は、請求項１〜４のいずれかに１項において定義されている通りである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
以下の式(Ｉd)又は（Ｉｅ)の化合物であって：
【化８】
2017522313.tif 000059
2017522313.tif 000060
ここでＲ、Ｒ’、ｎ、およびｎ’は、請求項１〜４のいずれかにおいて定義されている通りである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
以下からなるリストにおいて選択される化合物：
−（８）８−クロロ−５−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（９）８−クロロ−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−2,4−ジアミン
−（１０）８−クロロ−Ｎーメチル−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１１）８−クロロ−Ｎ４−（２−モルホリノエチル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−2,4−ジアミン
−（１３）4,8−ジクロロ−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１４）８−クロロ−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１５）８−クロロ−６−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１６）８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１７）８−クロロ−６−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１８）８−クロロ−６−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１９）８−クロロ−６−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（２０）８−クロロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（２１）Ｎ−（５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−８−クロロキノリン−２−アミン
−（２２）Ｎ２−（８−クロロキノリン−２−イル）−Ｎ５−（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−2,5−ジアミン
−（２８）８−クロロ−Ｎーメチル−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（２９）８−クロロ−５−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３０）８−クロロ−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３１）８−クロロ−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３２）８−クロロ−Ｎ−（２−（ピロリジン−１−イル）エチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３３）８−クロロ−Ｎ−（４−モルホリノブチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３４）８−クロロ−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−2,4−ジアミン
−（３５）4,8−ジクロロ−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３６）８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３７）Ｎ１−（4,8−ジクロロキノリン−２−イル）−４−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン−1,2−ジアミン
−（３８）4,8−ジクロロ−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３９）８−クロロ−６−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（４０）８−クロロ−Ｎ２−（２−モルホリノエチル）−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−2,4−ジアミン
−（４１）８−クロロ−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（２−ニトロ−４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（４２）Ｎ１−（８−クロロキノリン−２−イル）−Ｎ１−（２−モルホリノエチル）−４−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン−1,2−ジアミン
−（４３）８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（４４）Ｎ１−（８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）キノリン−２−イル）−４−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン−1,2−ジアミン
−（４６）８−クロロ−２−（（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）オキシ）キノリン
−（４７）４−（２−（（８−クロロ−２−（（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）オキシ）キノリン−６−イル）オキシ）エチル）モルホリン
−（４８）８−クロロ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン
−（４９）４−（２−（（８−クロロ−２−（（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン−６−イル）オキシ）エチル）モルホリン
−（５０）４−（２−（（８−クロロ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン−５−イル）オキシ）エチル）モルホリン
−（５１）リン酸モノ［８−クロロ−２−（４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−キノリン−６−イル］エステル
−（５２）リン酸モノ［２−（８−クロロ−キノリン−２−イルアミノ）−５−トリフルオロメトキシ−フェニル］エステル
−（５３）リン酸モノ［８−クロロ−２−（４−トリフルオロメトキシ−フェニルアミノ）−キノリン−６−イル］エステル
−及びそれらの薬学的に許容される塩、およびより特別には上記の化合物（８）、（９）、（１０）、（１１）、（３０）、（４６）、（４７）、（４８）、（４９）、および（５０）から選択される化合物またはその薬学的な塩の一つ。
【請求項９】
炎症性疾患を処置すること、発症する可能性を減らすこと、又は発生を遅延させることにおいて使用する為の、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
前記炎症性疾患が、自己免疫疾患に関連づけられた炎症性疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患、関節炎疾患、炎症性消化管疾患、炎症性の皮膚疾患および上皮細胞に関連づけられた他の炎症性疾患、及び癌に関連づけられた炎症、刺激に関連づけられた炎症、および損傷に関連づけられた炎症からなるリストから選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
前記炎症性疾患が、炎症性腸疾患、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン、変形性関節症、アテローム性動脈硬化、強直性脊椎炎、乾癬、皮膚炎、シェ―グレン症候群、気管支炎、喘息、および大腸癌に関連づけられた炎症、及び特に炎症性腸疾患、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、変形性関節症、強直性脊椎炎、乾癬、シェ―グレン症候群、気管支炎、および大腸癌に関連づけられた炎症からなるリストから選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
請求項１０に記載の少なくとも一つの化合物、又は請求項８に記載の化合物(8),(9), (10), (11), (13), (14), (15), (16), (17), (18), (19), (20), (21), (22),(28), (29), (30), (31), (32), (33), (34), (35), (36), (37), (38), (39), (40),(41), (42), (43), (44), (46), (47), (48), (49), (50), (51), (52)、及び(53)、及びより特別には化合物(8), (9), (10), (11), (30),(46), (47), (48), (49)、及び(50)の一つから選ばれる化合物を含有する医薬組成物。
【請求項１３】
少なくとも一つのｍｉＲＮＡのin  vitro 又は ex  vivoでの使用方法において、前記少なくとも一つのｍｉＲＮＡが、炎症性疾患を処置するおよび／または予防することにおいて効果的であると推定される請求項１に記載のキノリン誘導体、及び特に式（Ｉ）の化合物、をスクリーニングするためのバイオマーカーとしてのｍｉＲ−１２４である前記使用方法。
【請求項１４】
炎症性疾患を処置するおよび／または予防することにおいて効果的であると推定されるキノリン誘導体、特に請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物をスクリーニングするためのin  vitro または ex  vivoでの方法であって、以下の少なくとも一工程を含む前記方法：
a) 真核細胞を用意すること、
b) 前記細胞をキノリン誘導体、特に式（Ｉ）の化合物と接触させること、
c) 前記細胞中のｍｉＲ−１２４の発現を測定すること、及び
d) 工程ｃ）において測定されたｍｉＲ−１２４の発現レベルが基準値に対して相対的に増加された場合、炎症性疾患を処置するおよび／または予防することにおいて効果的であると推定される候補を選択すること。
【請求項１５】
前記真核細胞が、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
炎症性疾患を処置するおよび／または予防するために効率的である新規キノリン誘導体の同定、並びに炎症性疾患に対するキノリン誘導体の新規な治療的使用に、本発明は関する。
【０００２】
本発明は、このような炎症性疾患に関連した生物マーカーの分野にも関する。
【背景技術】
【０００３】
炎症は、組織の損傷および感染に対する、免疫系による保護反応である。しかしながら、炎症反応は、いくつかの状況において体に害を与え得る。急性期において、炎症は、痛み、熱、発赤、腫脹、および機能の喪失によって特徴づけられる。世界的に数百万人に影響を及ぼす、広範囲にわたる炎症性の症状がある。
【０００４】
実際、炎症性疾患は、自己免疫疾患に関連づけられた炎症性疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患、関節炎疾患、炎症性消化管疾患、および炎症性皮膚を含む、広範囲にわたる症状を含む。それらの中で、炎症性腸疾患、関節リウマチ、および多発性硬化症は、特に興味深い。
【０００５】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、複合多因子疾患である（PerseおよびCerar, 2012）。それは、一般に潰瘍性大腸炎（ＵＣ）およびクローン病（ＣＤ）（腸の炎症を含む２つの慢性症状）を指す。ＩＢＤは、先進諸国において一般的であり、これらの疾患に影響を受ける北部ヨーロッパ地域の２００人に一人に及ぶ。ＩＢＤ患者は、いくつかの臨床的に困難な課題を、医師に提示する。ＤＳＳにより誘発された大腸炎は、ＴＮＦαおよびＩＦＮγを含む種々の炎症誘発性サイトカインのアップレギュレーションに伴われる。近年では、ｍｉＲ−１２４は、活動性のＵＣをもつ小児患者において特異的に脱制御され、シグナル伝達兼転写活性化因子３（ＳＴＡＴ３）の発現、及び炎症誘発性サイトカインのうちその下流の標的の転写活性化を高いレベルに導くことが示された（Koukos et al.; Gastroenterology; 145(4):842-52: 2013）。しかしながら、最近の進歩にもかかわらず、安全性、急速な発症に良い耐性の治療、および長期の寛解を維持する為の高められた能力の必要性は、残っている。
【０００６】
関節リウマチ（ＲＡ）は、世界中の人口の約０．３〜１％の有病率を持つ最も頻繁な自己免疫疾患であり、低下した運動能、高められた社会依存、および作業障害をしばしば伴う。ＲＡは、関節滑膜と呼ばれる関節表層組織に影響を及ぼす全身性炎症性疾患である。内膜表層中の繊維芽細胞様の滑膜細胞（ＦＬＳ）の過剰な増殖、およびマクロファージ、ＴおよびＢ細胞および、骨および軟骨の炎症および破壊を促進する他の炎症細胞による表層下への浸潤によって、リウマチ様滑膜組織は特徴づけられる。例えばＲＡ  ＦＬＳの過剰増殖に関与することによって、炎症誘発性サイトカイン、特に腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）および−６（ＩＬ−６）（主に滑膜マクロファージによって作られる）の関節内および全身性発現は、ＲＡの病因において、例えばＲＡ  ＦＬＳの過剰発現に寄与することによって重要な役割を果たす。疾患修飾抗リウマチ剤（ＤＭＡＲＤ）と呼ばれる一群の低分子薬物によって、ＲＡ患者は一般に治療される。ＤＭＡＲＤは何らかの様式で体の過剰免疫および／または炎症システムを抑制し、それによって、疾患進行を遅らせる。ＤＭＡＲＤに反応しないＲＡ患者は、生物学的薬剤（例えば腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アンタゴニスト）で治療される。しかしながら、ＴＮＦアンタゴニストが患者の約２／３に効果的であるが、反応する患者はしばしば５年以内に反応しなくなる。従って、他の処置が必要とされる。特に、疾患が慢性化する前に、早期のＲＡ患者のために設計された新規な治療アプローチが特に重要である。
【０００７】
多発性硬化症（ＭＳ）は、炎症性自己免疫疾患（ミエリン、オリゴデンドロサイト、およびアクソンを破壊する中枢神経系の脱髄疾患）である。ＭＳは、炎症の複数の病巣および中枢神経系中のマクロファージおよび脳炎誘発性Ｔ細胞の浸潤によって特徴づけられる。ミクログリアは、中枢神経系の全体にわたって見つかり、ＣＮＳ炎症反応の発症および進行に関与する。ミクログリアは、活性化されると、ニューロトキシンの産生、炎症細胞（炎症性たんぱく質−１０、マクロファージ炎症性たんぱく質−１、マクロファージ炎症性たんぱく質−２、Ｃ−Ｃ  ケモカインリガンド  １９、単球走化性タンパク質-1、単球走化性タンパク質-２）および、抗体を作る免疫細胞の生産によりＣＮＳ官能性に非常に害を与える。外部からの侵入物に対する免疫細胞によってならびにミエリンタンパク質を破壊するＴ細胞によって脳および脊髄が浸潤される結果となり得る直接の炎症反応を、ミクログリアは指令する。末梢マクロファージは、炎症の間にＣＮＳ中に現れ、そしてこれらの細胞は高度に活性化された表現型を有し、効率的に脳炎誘発性Ｔ細胞の拡大を刺激して、ニューロン組織破壊に関与すると考えられる。
【０００８】
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）（最も包括的なノンコーディング群）は、標的ｍＲＮＡ転写産物の翻訳されない領域（ＵＴＲ）への結合を介した遺伝子発現を阻害する約２２ｎｔのノンコーディングＲＮＡのクラスである(Lai  et   al., Nature   Genetics, vol. 30, no. 4, pp. 363-364, 2002; Bartel   et   al., Cell, vol. 136, no. 2, pp.215-233, 2009)。ｍｉＲＮＡ遺伝子は、公知の真核ゲノムの約１〜２％を表す。各ｍｉＲＮＡが２００以上の転写産物を標的とすることができ、そして単一のｍＲＮＡが、複数のｍｉＲＮＡにより制御され得ることを、予測は示唆する（LINDOW, DNA   Cell  Biol., vol. 26(5), p. 339-351, 2007）。ｍｉＲＮＡは内在性のヘアピン形の転写産物から生成され、そして標的ｍＲＮＡとの塩基対合によって作用し、それは塩基対合の程度に応じて、メッセンジャーＲＮＡ切断または翻訳の抑制に導く。２つのプロセシングイベントは、成熟したｍｉＲＮＡの形成をもたらす：第一に、初期のｍｉＲＮＡ転写産物（ｐｒｉ−ｍｉＲＮＡ）は、７０のヌクレオチド前駆体（前ｍｉＲＮＡ）へと処理され、それは核から輸出され、そして細胞質において切断されて、短い（約２２のヌクレオチド長）成熟したｍｉＲＮＡが生成される(LEE, EMBO   J., vol. 21, p; 4663-4670, 2002)。ｍｉＲＮＡは、遺伝子内または遺伝子間に配置されることができる。遺伝子間の場合、それらの発現はクラスターとして他のｍｉＲＮＡと統合される(Altuvia   et   al.,Nucleic   Acids   Research, vol.33, no. 8, pp. 2697-2706, 2005, Ozsolak   et   al., Genes   and  Development, vol. 22, no. 22, pp. 3172-3183, 2008)。遺伝子内、すなわちタンパク質−コード遺伝子内（ほぼ専らイントロン内）に配置された場合、それらは、それらの宿主遺伝子と同じストランドから(Liu   et   al., Cell   Research, vol. 18, no. 10, pp. 985-996, 2008, Kim   et   al., EMBO  Journal, vol. 26, no. 3, pp. 775-783, 2007)、互いに関連づけられたレベルでしばしば発現する(Baskerville   et  al., RNA, vol. 11, no. 3, pp. 241-247, 2005)。
【０００９】
ｍｉＲＮＡ（すなわち、ｍｉＲ−１２４）の過剰発現が炎症性マクロファージを不活性化させ、そしてそれらをミクログリア様の細胞に変換することが今わかった。ＣＥＢＰα（骨髄性系統細胞の分化に対して責任を負う転写因子）を標的とすることによって、ｍｉＲ−１２４がマクロファージの活性化を阻害すると考えられる。ｍｉＲ−１２４を含有しているリポソームの静脈注射は、臨床上のＥＡＥ症状を著しく抑制し、ＣＮＳ中への脳炎誘発性Ｔ細胞および炎症性マクロファージの浸潤を阻害する。
【００１０】
実際、Ｐｏｎｏｍａｒｅｖら（"microRNA-124   promotes   microglia   quiescence   and   suppresses   EAE   by  deactivating   macrophages   via   the   C/EBP-α-PU.1   pathway"; Nature   Medicine (2011);17:1: 64-71）は、ｍｉＲ−１２４がミクログリア静止のキイレギュレーターとして、そして単球およびマクロファージ活性化のモジュレーターとしての役割を果たすことができることを示唆している。実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルに基づいて、ｍｉＲ−１２４発現パターンがＥＡＥをもつマウスにおいて調整される（細胞型に応じてアップレギュレート又はダウンレギュレートされる）ことを、この研究は示唆する。
【００１１】
ＷＯ２０１０／１５１７５５も、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患を処置するためのｍｉＲ−１２４の投与を教示している。
【００１２】
Ｓｕｎら（"microRNA-124 mediates   the   cholinergic  anti-inflammatory   action through   inhibiting   the   production   of   pro-inflammatory   cytokines"; Cell   Research (2013);23:1270-1283）も、ｍｉＲ−１２４がＳＴＡＴ３およびＴＡＣＥを標的とすることを通して、コリン作動性抗炎症作用を仲介できることを教示している。
【００１３】
一方、本明細書中で「キノリン誘導体」と呼ばれる新規化合物は、別記ないかぎり、同定された。
【００１４】
参考として、キノリンは、以下の式の複素環式芳香族有機化合物である：
【化１】
2017522313.tif 000003
【００１５】
つまり、「キノリン誘導体」は、置換されたキノリン（例えばモノ−または多置換されたキノリン）を含む。
【００１６】
ＷＯ２０１０／１４３１７０は、早老に伴う症状を処置する為の化合物の使用を教示する。
【００１７】
ＷＯ２０１０／１４３１６９およびＷＯ２０１２／０８０９５３は、ＡＩＤＳを処置するための化合物の使用を教示する。
【００１８】
ＷＯ２０１０／１４３１６８は、選択された癌の処置のための化合物の使用を教示する。それらの化合物は、選択的スプライシングの欠陥を修正することが可能なことが示された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
下記で式（Ｉ）に定義された化合物が、炎症性疾患の処置および／または予防に有用であることが今わかった。
【００２０】
それ故本発明は、炎症性疾患の処置および／または予防における使用の為の、下記で定義された式（Ｉ）の化合物に関する。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
特に本発明は、炎症、および／またはこのような炎症性疾患とともに発生し得る炎症の処置および／または予防における使用の為の、下記で定義された式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２２】
本発明は少なくとも一つのｍｉＲＮＡのin  vitro 又は ex  vivoの使用にも関し、ここで前記少なくとも一つのｍｉＲＮＡが、炎症性疾患を処置するおよび／または予防することにおいて効果的であると推定されるキノリン誘導体、および特に式（Ｉ）の化合物、をスクリーニングするためのバイオマーカーとしてのｍｉＲ−１２４である。
【００２３】
以下に定義されるように、本発明は式（Ｉｄ）または（Ｉｅ）の化合物に更に関する。
【００２４】
本発明は、式（Ｉｄ）または（Ｉｅ）の少なくとも一つの化合物を含有する医薬品組成物に更に関する。
【００２５】
それは、以下からなるリストにおいて選択される化合物自体にも関する：
−（８）８−クロロ−５−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（９）８−クロロ−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−2,4−ジアミン
−（１０）８−クロロ−Ｎーメチル−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１１）８−クロロ−Ｎ４−（２−モルホリノエチル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−2,4−ジアミン
−（１３）4,8−ジクロロ−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１４）８−クロロ−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１５）８−クロロ−６−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１６）８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１７）８−クロロ−６−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１８）８−クロロ−６−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１９）８−クロロ−６−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（２０）８−クロロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（２１）Ｎ−（５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−８−クロロキノリン−２−アミン
−（２２）Ｎ２−（８−クロロキノリン−２−イル）−Ｎ５−（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−2,5−ジアミン
−（２８）８−クロロ−Ｎーメチル−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（２９）８−クロロ−５−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３０）８−クロロ−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３１）８−クロロ−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３２）８−クロロ−Ｎ−（２−（ピロリジン−１−イル）エチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３３）８−クロロ−Ｎ−（４−モルホリノブチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３４）８−クロロ−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−2,4−ジアミン
−（３５）4,8−ジクロロ−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３６）８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３７）Ｎ１−（4,8−ジクロロキノリン−２−イル）−４−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン−1,2−ジアミン
−（３８）4,8−ジクロロ−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３９）８−クロロ−６−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（４０）８−クロロ−Ｎ２−（２−モルホリノエチル）−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−2,4−ジアミン
−（４１）８−クロロ−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（２−ニトロ−４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（４２）Ｎ１−（８−クロロキノリン−２−イル）−Ｎ１−（２−モルホリノエチル）−４−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン−1,2−ジアミン
−（４３）８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（４４）Ｎ１−（８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）キノリン−２−イル）−４−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン−1,2−ジアミン
−（４６）８−クロロ−２−（（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）オキシ）キノリン
−（４７）４−（２−（（８−クロロ−２−（（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）オキシ）キノリン−６−イル）オキシ）エチル）モルホリン
−（４８）８−クロロ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン
−（４９）４−（２−（（８−クロロ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン−６−イル）オキシ）エチル）モルホリン
−（５０）４−（２−（（８−クロロ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン−５−イル）オキシ）エチル）モルホリン
−（５１）リン酸モノ［８−クロロ−２−（４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−キノリン−６−イル］エステル
−（５２）リン酸モノ［２−（８−クロロ−キノリン−２−イルアミノ）−５−トリフルオロメトキシ−フェニル］エステル
−（５３）リン酸モノ［８−クロロ−２−（４−トリフルオロメトキシ−フェニルアミノ）−キノリン−６−イル］エステル
−及びそれらの薬学的に許容される塩、およびより特別には上記の化合物（８）、（９）、（１０）、（１１）、（３０）、（４６）、（４７）、（４８）、（４９）、および（５０）から選択される化合物またはその薬学的な塩の一つ。
【００２６】
本発明はまた、上記で定義した式 (Id)または (Ie)の少なくとも一つの化合物、又は上記の(8), (9), (10), (11),(13), (14), (15), (16), (17), (18), (19), (20), (21), (22), (28), (29), (30),(31), (32), (33), (34), (35), (36), (37), (38), (39), (40), (41), (42), (43),(44), (46), (47), (48), (49), (50), (51), (52)、及び (53)の化合物の内の一つ、及びより特別には(8), (9), (10), (11), (30), (46), (47), (48), (49)、及び(50)の化合物の内の一つを含有する医薬組成物に関する。
【００２７】
真核細胞におけるｍｉＲ−１２４の発現を増加させるためのin  vitro または ex  vivoでの方法に、本発明は更に関し、少なくとも以下の工程を含む：
ａ） 真核細胞を用意すること、
ｂ） 前記細胞をキノリン誘導体、特に式（Ｉ）の化合物と接触させること。
【００２８】
炎症性疾患を治療しおよび／または予防することにおいて効果的であると推定される誘導体、特に式（Ｉ）の化合物をスクリーニングするためのin  vitro または ex  vivoの方法に、本発明は更に関し、本方法は少なくとも以下の工程を含む：
ａ） 真核細胞を用意すること、
ｂ） 前記細胞を式（Ｉ）の化合物と接触させること、
ｃ） 前記細胞中のｍｉＲ−１２４の発現を測定すること、及び
ｄ） 工程ｃ）において測定されたｍｉＲ−１２４の発現レベルが基準値に対して相対的に増加された場合、炎症性疾患を処置するおよび／または予防することにおいて効果的であると推定される候補を選択すること。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ）により誘発された大腸炎モデル１ ―以下に定義されるキノリン誘導体化合物（２４）の存在下での、ＤＳＳ−マウスモデルにおける経時（経日）的な体重減少のパーセンテージ変化を示す図である。体重減少のパーセンテージ（％）は、ｙ−軸に示される。ＤＳＳ処置は、第３〜１０日にわたり行われる（ｘ−軸）。メチルセルロース（ＭＣ）中のキノリン誘導体又はＭＣのみの胃管による強制投与は、第３〜２９日に行われる。
【図２】硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ）により誘発された大腸炎モデル２ ―以下に定義されるキノリン誘導体化合物（２４）の存在下でのDSSの第２サイクル後の、ＤＳＳ−マウスモデルにおける経時（経日）的な体重減少のパーセンテージ変化を示す図である。体重減少のパーセンテージ（％）は、ｙ−軸に示される。ＤＳＳ処置は、１２日目に開始され、５日間行われた（ｘ−軸）。メチルセルロース（ＭＣ）中のキノリン誘導体又はＭＣのみの胃管による強制投与は、３〜２９日間に行われる。
【図３】硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ）により誘発された大腸炎モデル−大腸は２回目のＤＳＳ処置（５日間）の後２〜３日後に取り出され、そして大腸のサイズ（ｃｍ）の変化が測定された。（ｎｓ）は統計的に有意差がないことを示す。統計解析はＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を使用して実施され、アスタリスク１つは有意差（ｐ  ＜  ０．５）を示し、アスタリスク２つは大きな有意差（ｐ  ＜  ０．０５）を示す。
【図４】硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ）により誘発された大腸炎モデル−大腸は２回目のＤＳＳ処置のあと、３日後に取り出され、そして病変の数が測定された。病変は、顕微鏡の下で観察され、そして測定された。
【図５】硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ）により誘発された大腸炎モデル−大腸は２回目のＤＳＳ処置のあと、３日後に取り出され、そして病変面積（ｍｍ２）が測定された。
【図６】コラーゲンにより誘発された関節炎モデル ― １０個体のコホートの平均に関する経時（経週）的な関節腫脹（ｍｍ）の変化。関節の腫脹（ｍｍ）は、ｙ−軸に示される。未処置群対処置群の間の変化は、１２週間にわたって評価される。
【発明の詳細な説明】
【００３０】
炎症性疾患の処置および／または予防における使用の為の、新規な化合物の同定の必要性がある。
【００３１】
炎症性疾患に対するキノリン誘導体のような候補薬物の活性を評価するための、新規なバイオマーカーの必要性もある。
【００３２】
本発明の目的は、これらの必要性を満たすことである。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
キノリン誘導体
第１の局面に従い、本発明の主題は、炎症性疾患の処置および／または予防における式（Ｉ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩のいずれか一つの使用に関する。
【化２】
2017522313.tif 000004
ここで：
Ｚは、ＣまたはＮであり、
Ｖは、ＣまたはＮであり、
【化３】
2017522313.tif 000005
は芳香環を意味し、ここでＶはＣまたはＮであり、そしてＶがＮであるとき、ＶはＺのオルト、メタ、またはパラ位にあり、すなわちそれぞれピリジン、ピリダジン、ピリミジン、またはピラジン基を形成し、
Ｒは独立して、水素原子、ハロゲン原子、または−ＣＮ基、ヒドロキシル基、−ＣＯＯＲ１基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルコキシ基、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基、−ＮＯ２基、−ＮＲ１Ｒ２基、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、フェノキシ基、−ＮＲ１−ＳＯ２−ＮＲ１Ｒ２基、−ＮＲ１−ＳＯ２−Ｒ１基、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１基、−ＮＲ１−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ１Ｒ２基、−ＳＯ２−ＮＲ１Ｒ２基、−ＳＯ３Ｈ基、−Ｏ−ＳＯ２−ＯＲ３基、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯＯＲ３基、および（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基から選択される基を表し、ここで前記アルキルはヒドロキシル基によって、任意的にモノ置換されていてもよく、
Ｑは、Ｎ又はＯであり、ただしＱがＯであるときに、Ｒ’’は存在せず、
Ｒ１およびＲ２は、独立して水素原子または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基であり、
Ｒ３およびＲ４は、独立して水素原子、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｎ＋（Ｒａ）４またはベンジル基を表し、
ｎは、１、２、または３であり、
ｎ’は、１、２、または３であり、
Ｒ'は、独立して水素原子、または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基、ハロゲン原子、ヒドロキシル基、−ＣＯＯＲ１基、−ＮＯ２基、−ＮＲ１Ｒ２基、モルホリニルまたはモルホリノ基、Ｎ−メチルピペラジニル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）−（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、および−ＣＮ基の中から選択される基を表し、更に以下の中から選択される基であることができ：
【化４】
2017522313.tif 000006
ここで、
Ａは、共有結合、酸素原子、またはＮＨであり、
Ｂは、共有結合またはＮＨであり、
ｍは、１、２、３、４、または５であり、
ｐは、１、２、または３であり、
ＲａおよびＲｂは、独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ５）アルキル基、または（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル基を表し、
ＲａおよびＲｂは、それらが結合されている窒素原子と共に、任意的に更にＮ、Ｏ、およびＳの中から選ばれるヘテロ原子を有している飽和の５−または６−員環のヘテロ環をさらに形成することができ、ここで前記ヘテロ環は任意的に１以上のRaで置換されることができ、但しＲ’が基（ＩＩａ）または（ＩＩＩａ）である時、他のＲ’基が前記基（ＩＩａ）または（ＩＩＩａ）と異なる場合だけ、ｎ’が２又は３でありえ、
Ｒ''は、水素原子、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、または上記の基（ＩＩａ）である。
【００３４】
好ましい実施形態に従い、Ｑは、Ｎである。
【００３５】
他の好ましい実施形態に従い、ｎは、１又は２である。
【００３６】
他の好ましい実施形態に従い、ｎ’は、１又は２である。
【００３７】
他の好ましい実施形態に従い、Ｒ’’は、水素原子、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、基
【化５】
2017522313.tif 000007
であり、ここでｍは２又は３であり、及びＸ１はＯ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３である。
【００３８】
他の好ましい実施形態に従い、Ｒは独立して水素原子、メチル基、メトキシ基、トリフルオロメチル基、トリフルオロメトキシ基、アミノ基、ハロゲン原子および、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、より特別にはフッ素または塩素原子、トリフルオロメトキシ基、およびアミノ基を表す。
【００３９】
他の好ましい実施形態に従い、Ｒ’は独立して水素原子、ハロゲン原子および特にフッ素または塩素原子、アミノ基、メチル基、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ３）（ＯＲ４）基または基
【化６】
2017522313.tif 000008
を表し、ここでＡは、ＯまたはＮＨであり、ｍは２又は３であり、およびＸ１は、Ｏ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、ただしＲ’がこのような基である場合、ｎ’は１又は２であり、そしてｎ’が２の場合、その他のＲ’基は前記基と異なる。
【００４０】
他の好ましい実施形態に従い、Ｒ’は互いに独立して水素原子、ハロゲン原子および特にフッ素または塩素原子、メチル基、または基
【化７】
2017522313.tif 000009
を表し、ここでＡは、ＯまたはＮＨであり、ｍは２であり、およびＸ１は、Ｏ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、ただしＲ’がこのような基である場合、ｎ’は１又は２であり、そしてｎ’が２の場合、その他のＲ’基は前記基と異なる。
【００４１】
すべての前記および後記の特定の実施形態は、もちろん一緒に組み合わせられることができ、そして本発明の一部を構成できる。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物は、以下定義される式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、および（Ｉｅ）の化合物を包含する。
【００４３】
特定の実施形態に従い、本発明の他の主題は、式（Ｉａ）の化合物
【化８】
2017522313.tif 000010
（ここで、Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、ｎ、およびｎ’は上記のとおりである）を炎症性疾患の処置および／または予防において使用することである。
【００４４】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎは、１又は２である。
【００４５】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎ’は、１又は２である。
【００４６】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒは独立して水素原子、ハロゲン原子、またはヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルコキシ基、−ＮＲ１Ｒ２基、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、および（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基の中から選択される基を表す。
【００４７】
前記の好ましい実施形態に従い、Ｒ’は独立して水素原子、ハロゲン原子、または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基、ヒドロキシル基、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、−ＮＲ１Ｒ３基，または基
【化９】
2017522313.tif 000011
の中から選択される基を表し、ここでＡは、ＯまたはＮＨであり、ｍは２又は３であり、およびＸ１は、Ｏ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、ただしＲ’がこのような基である場合、ｎ’は１又は２であり、そしてｎ’が２の場合、その他のＲ’基は前記基と異なる。
【００４８】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’’は、水素原子、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、又は基
【化１０】
2017522313.tif 000012
であり、ここでｍは２又は３であり、及びＸ１はＯ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、及び好ましくはＲ’’は、水素原子又はメチル基である。
【００４９】
特定の実施形態に従い、本発明の他の主題は、式（Ｉｂ）の化合物
【化１１】
2017522313.tif 000013
（ここで、Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、ｎ、およびｎ’は上記のとおりである）を、炎症性疾患の処置および／または予防において使用することである。
【００５０】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎは、１又は２である。
【００５１】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎは、１、２、又は３である。
【００５２】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒは独立して水素原子、ハロゲン原子、またはヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルコキシ基、−ＮＲ１Ｒ２基、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、−Ｏ−Ｐ−（＝Ｏ）（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、および（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基の中から選択される基を表す。
【００５３】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’は独立して水素原子、ハロゲン原子、または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基、ヒドロキシル基、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ３）（ＯＲ４）基、−ＮＲ１Ｒ２基、または基
【化１２】
2017522313.tif 000014
の中から選択される基を表し、ここでＡは、ＯまたはＮＨであり、ｍは２又は３であり、およびＸ１は、Ｏ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、ただしＲ’がこのような基である場合、ｎ’は１又は２であり、そしてｎ’が２の場合、その他のＲ’基は前記基と異なる。
【００５４】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ'は互いに独立して水素原子、ハロゲン原子、または、（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基、ヒドロキシル基、または−ＮＲ１Ｒ２基の中から選択される基を表す。
【００５５】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’’は、水素原子、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、又は基
【化１３】
2017522313.tif 000015
であり、ここでｍは２又は３であり、及びＸ１はＯ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、及び好ましくはＲ’’は、水素原子又はメチル基である。
【００５６】
特定の実施形態に従い、本発明の他の主題は、式（Ｉｃ）の化合物
【化１４】
2017522313.tif 000016
（ここで、Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、ｎ、およびｎ’は上記の通りである）を、炎症性疾患の処置および／または予防において使用することである。
【００５７】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎは、１である。
【００５８】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎ’は、１である。
【００５９】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒは独立して水素原子、ハロゲン原子、またはヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルコキシ基、−ＮＲ１Ｒ２基、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、および（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基の中から選択される基を表す。
【００６０】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒは、互いに独立して水素原子またはハロゲン原子を表す。
【００６１】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’は独立して水素原子、ハロゲン原子、または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基、ヒドロキシル基、−ＮＲ１Ｒ２基または基
【化１５】
2017522313.tif 000017
の中から選択される基を表し、ここでＡは、ＯまたはＮＨであり、ｍは２又は３であり、およびＸ１は、Ｏ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、ただしＲ’がこのような基である場合、ｎ’は１又は２であり、そしてｎ’が２の場合、その他のＲ’基は前記基と異なる。
【００６２】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’は、互いに独立して水素原子またはハロゲン原子を表す。
【００６３】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’’は、水素原子、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、又は基
【化１６】
2017522313.tif 000018
であり、ここでｍは２又は３であり、及びＸ１はＯ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、及び好ましくはＲ’’は、水素原子又はメチル基である。
【００６４】
特定の実施形態に従い、本発明の他の主題は、式（Ｉｄ）の化合物の使用であり
【化１７】
2017522313.tif 000019
（ここで、Ｒ、Ｒ’、ｎ、およびｎ’は上記の通りである）を、炎症性疾患の処置および／または予防において使用することである。
【００６５】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎは、１である。
【００６６】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎ’は、１である。
【００６７】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒは独立して水素原子、ハロゲン原子、またはヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルコキシ基、−ＮＲ１Ｒ２基、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、および（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基の中から選択される基を表す。
【００６８】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒは互いに独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルコキシ基、またはハロゲン原子を表す。
【００６９】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’は独立して水素原子、ハロゲン原子、または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基、ヒドロキシル基、−ＮＲ１Ｒ２基または基
【化１８】
2017522313.tif 000020
の中から選択される基を表し、ここでＡは、ＯまたはＮＨであり、ｍは２又は３であり、およびＸ１は、Ｏ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、ただしＲ’がこのような基である場合、ｎ’は１又は２であり、そしてｎ’が２の場合、その他のＲ’基は前記基と異なる。
【００７０】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’は、互いに独立して水素原子またはハロゲン原子を表す。
【００７１】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’’は、水素原子、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、又は基
【化１９】
2017522313.tif 000021
であり、ここでｍは２又は３であり、及びＸ１はＯ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、及び好ましくはＲ’’は、水素原子又はメチル基である。
【００７２】
特定の実施形態に従い、本発明の他の主題は、式（Ｉｅ）の化合物
【化２０】
2017522313.tif 000022
（ここで、Ｒ、Ｒ’、ｎ、およびｎ’は上記の通りである）を、炎症性疾患の処置および／または予防において使用することである。
【００７３】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎは、１である。
【００７４】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、ｎ’は、１である。
【００７５】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒは独立して水素原子、ハロゲン原子、またはヒドロキシル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルコキシ基、−ＮＲ１Ｒ２基、（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ基、および（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基の中から選択される基を表す。
【００７６】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒは互いに独立して水素原子、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルキル基、（Ｃ１−Ｃ３）フルオロアルコキシ基、またはハロゲン原子を表す。
【００７７】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’は独立して水素原子、ハロゲン原子、または（Ｃ１−Ｃ３）アルキル基、ヒドロキシル基、−ＮＲ１Ｒ２基、または基
【化２１】
2017522313.tif 000023
の中から選択される基を表し、ここでＡは、ＯまたはＮＨであり、ｍは２又は３であり、およびＸ１は、Ｏ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、ただしＲ’がこのような基である場合、ｎ’は１又は２であり、そしてｎ’が２の場合、その他のＲ’基は前記基と異なる。
【００７８】
前記好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’は、互いに独立して水素原子またはハロゲン原子を表す。
【００７９】
前記の好ましい実施形態の一局面に従い、Ｒ’’は、水素原子、（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基、又は基
【化２２】
2017522313.tif 000024
であり、ここでｍは２又は３であり、及びＸ１はＯ、ＣＨ２、またはＮ−ＣＨ３であり、及び好ましくはＲ’’は、水素原子又はメチル基である。
【００８０】
他の特定の実施形態に従い、上記の化合物（Ｉｄ）および（Ｉｅ）は自体、本発明の一部を構成する。
【００８１】
本発明の好ましい実施形態に従い、式（Ｉ）のいくつかの化合物は、新規であり、本発明の一部を構成し、そして以下の中から選択をされる（以下の表１に番号で示される）：
−（８）８−クロロ−５−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（９）８−クロロ−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−2,4−ジアミン
−（１０）８−クロロ−Ｎーメチル−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１１）８−クロロ−Ｎ４−（２−モルホリノエチル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−2,4−ジアミン
−（１３）4,8−ジクロロ−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１４）８−クロロ−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１５）８−クロロ−６−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１６）８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（３−モルホリノプロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１７）８−クロロ−６−（２−（４−メチルピペラジン−１−イル）エトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１８）８−クロロ−６−（２−（ピペリジン−１−イル）エトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（１９）８−クロロ−６−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（２０）８−クロロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−２−アミン
−（２１）Ｎ−（５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）−８−クロロキノリン−２−アミン
−（２２）Ｎ２−（８−クロロキノリン−２−イル）−Ｎ５−（３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル）−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−2,5−ジアミン
−（２８）８−クロロ−Ｎーメチル−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（２９）８−クロロ−５−（３−（ピペリジン−１−イル）プロポキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３０）８−クロロ−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３１）８−クロロ−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３２）８−クロロ−Ｎ−（２−（ピロリジン−１−イル）エチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３３）８−クロロ−Ｎ−（４−モルホリノブチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３４）８−クロロ−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−2,4−ジアミン
−（３５）4,8−ジクロロ−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３６）８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３７）Ｎ１−（4,8−ジクロロキノリン−２−イル）−４−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン−1,2−ジアミン
−（３８）4,8−ジクロロ−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（３９）８−クロロ−６−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（４０）８−クロロ−Ｎ２−（２−モルホリノエチル）−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−2,4−ジアミン
−（４１）８−クロロ−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（２−ニトロ−４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（４２）Ｎ１−（８−クロロキノリン−２−イル）−Ｎ１−（２−モルホリノエチル）−４−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン−1,2−ジアミン
−（４３）８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）−Ｎ−（２−モルホリノエチル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン
−（４４）Ｎ１−（８−クロロ−５−（２−モルホリノエトキシ）キノリン−２−イル）−４−（トリフルオロメトキシ）ベンゼン−1,2−ジアミン
−（４６）８−クロロ−２−（（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）オキシ）キノリン
−（４７）４−（２−（（８−クロロ−２−（（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）オキシ）キノリン−６−イル）オキシ）エチル）モルホリン
−（４８）８−クロロ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン
−（４９）４−（２−（（８−クロロ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン−６−イル）オキシ）エチル）モルホリン
−（５０）４−（２−（（８−クロロ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン−５−イル）オキシ）エチル）モルホリン
−（５１）リン酸モノ［８−クロロ−２−（４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イルアミノ）−キノリン−６−イル］エステル
−（５２）リン酸モノ［２−（８−クロロ−キノリン−２−イルアミノ）−５−トリフルオロメトキシ−フェニル］エステル
−（５３）リン酸モノ［８−クロロ−２−（４−トリフルオロメトキシ−フェニルアミノ）−キノリン−６−イル］エステル
−および、それらの薬学的に許容される塩。
【００８２】
本発明の目的ために、式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、および（Ｉｅ）の化合物いずれか一つ、ならびにそれらの組み合わせを含む。式（I）の化合物は、表Ｉに定義された化合物（１）〜（５３）、およびそれらの組み合わせを含む。
【００８３】
本発明の化合物は、遊離塩基又は薬学的に許容される酸との付加塩の形で存在してもよい。
【００８４】
式（Ｉ）の適切な生理学的に許容される酸付加塩は、臭化水素酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アスコルビン酸塩、塩酸塩、酒石酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、蟻酸塩、酢酸塩、およびフマル酸塩を含む。
【００８５】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩は、溶媒和物または水和物を形成することができ、そして本発明はこのようなすべての溶媒和物および水和物を含む。
【００８６】
本発明に従う化合物（Ｉ）が水和物または溶媒和物（すなわち一つ以上の水または溶媒分子と結合または会合された）の形でありえることを、語「水和物」および「溶媒和物」は単に意味する。このことは、このような化合物の化学的属性に過ぎず、このことは、このタイプのすべての有機化合物について適用されることができる。
【００８７】
式（Ｉ）の化合物は、一つ以上の不斉炭素原子を有することができる。それらは、つまりエナンチオマー又はジアステレオマーの形で存在できる。ラセミ混合物を含むこれらのエナンチオマー、ジアステレオマー、およびそれらのラセミ混合物は、本発明の範囲内に包含される。
【００８８】
本発明の文脈に置いて、以下の語：
−「ハロゲン」は、塩素、フッ素、臭素、またはヨウ素を意味すると理解され、特に塩素、フッ素、または臭素を意味し、
−本明細書で用いられる「（Ｃ１−Ｃ５）アルキル」は、夫々Ｃ１−Ｃ５の一級、二級、又は三級飽和炭化水素を指す。例は、これに限定されないが、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、ブチル、ペンチルである。
−本明細書で用いられる「（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル」は、環式の飽和炭化水素を指す。例は、これに限定されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルである。
−本明細書で用いられる「（Ｃ１−Ｃ４）アルコキシ」はＯ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル部分を指し、ここでアルキルは上記の通りである。例は、これに限定されないが、メトキシ、エトキシ、１−プロポキシ、２−プロポキシ、ブトキシである。
−「フルオロアルキル基」および「フルオロアルコキシ基」は、夫々上記のアルキル基およびアルコキシ基が少なくとも一つのフッ素原子により置換されているものを指す。例は、パーフルオロアルキル基（例えばトリフルオロメチルまたはパーフルオロプロピル）である。
−本明細書で用いられる「５−または６−員環の飽和ヘテロ環」は、それぞれ少なくとも一つのヘテロ原子を有する飽和環を指す。例は、これに限定されないが、モルホリン、ピペラジン、チオモルホリン、ピペリジン、ピロリジンである。
−「患者」は、ヒトまたは哺乳類（例えばネコまたはイヌ）まで広がることができる。
【００８９】
ＷＯ２０１０／１４３１７０、ＷＯ２０１０／１４３１６９、ＷＯ２０１２／０８０９５３、およびＷＯ２０１０／１４３１６８に記載されているようにおよび／または以下で更に記載されるように、本発明に適している式（Ｉ）の化合物を調製できる。
【００９０】
より特別には、式（Ｉ）において、Ｒ’が
【化２３】
2017522313.tif 000025
から選ばれる化合物は、ＷＯ２０１２／０８０９５３に記載された合成経路に従い調製されることができ、より特別にはＡがＯである場合である。
【００９１】
ＡがＮである場合に、以下の合成経路が行われることができる。付加クロスカップリング反応の前に、式（ＶＩＩ）のキノリン誘導体は、ビルディングブロックとして合成されることができる。
【００９２】
式（ＶＩＩ）の前記化合物を得るために、以下のスキーム１に示されているように、以下の反応系列が実施されることができる。
【化２４】
2017522313.tif 000026
【００９３】
式（ＩＩ）（ここでＲ’は、Ｈとは異なり、及び上記の通りであり、特に塩素原子でもよい）の化合物は、ピリジン中に置かれることができ、式（ＩＩＩ）の化合物は、その後式（ＩＩ）の化合物に対して１〜２（例えば１．５）のモル比で加えられることが可能である。反応混合物は１１０〜１５０℃の温度（例えば１３０℃）で、８時間〜１８時間（例えば１４時間）撹拌されることができる。室温に冷却してから、反応混合物は減圧下で濃縮されることができ、そして残渣はジクロロメタンのような有機溶媒で希釈されることができる。有機相は、その後Ｎａ２ＣＯ３のような無機塩基の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧下で濃縮されて、式（ＩＶ）の化合物を与えることができる。
【００９４】
式（ＩＶ）の化合物は、ＴＨＦ／水混合液中に置かれることができ、水酸化ナトリウムが、その後式（ＩＶ）の化合物に対して１〜１．５（例えば１．２）のモル比で加えられることができ、そして反応混合物は、室温で８時間から１８時間（例えば１４時間）撹拌されることができる。濃塩酸が、その後ｐＨ２に到達するまで加えられることができ、そして得られた溶液は、酢酸エチルのような有機溶媒により抽出されることができる。有機相は、その後ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、減圧下で濃縮されて、式（Ｖ）の化合物を与えることができる。
【００９５】
式（Ｖ）の化合物は、式（Ｖ）の化合物に対して５〜１５（例えば１０）のモル比で加えられたポリリン酸中に置かれることができ、そして反応混合物は、１１０〜１５０℃（例えば130℃）の温度で８時間〜１８時間（例えば１４時間）撹拌されることができる。室温に冷却した後、１〜５Ｍ（例えば２Ｍ）のモル濃度を有する水酸化ナトリウムの水溶液は、ゆっくり加えられることが可能である。得られた沈殿は、濾過され、水で洗われ、デシケータ中の減圧下で乾燥されて、式（ＶＩ）の化合物を与えることができる。
【００９６】
式（ＶI）の化合物は、式（ＶI）の化合物に対して５〜１５（例えば１０）のモル比で加えられたポリリン酸中に置かれることができ、そして反応混合物は、８０〜１２０℃（例えば1００℃）の温度で１時間〜５時間（例えば２時間）撹拌されることができる。室温に冷却した後、水が、ゆっくり加えられることが可能である。得られた沈殿は、濾過され、水で洗われ、デシケータ中の減圧下で乾燥されて、式（ＶＩI）の化合物を与えることができる。
【００９７】
ＷＯ２０１０／１４３１７０、ＷＯ２０１０／１４３１６９、ＷＯ２０１２／０８０９５３、およびＷＯ２０１０／１４３１６８中に記載されているように、および／または以下で更に記載されるように、式（ＶＩＩ）の前記中間化合物は、それをアニリン誘導体、アミノピリジン誘導体、ピリミジン誘導体、ヒドロキシピリジン誘導体、フェノール誘導体、またはヒドロキシピリミジン誘導体とクロスカップリングすることにより式（Ｉ）の化合物を形成するために使用されることができる。
【００９８】
式（ＶＩＩ）の中間化合物の４位の塩素は、その後アミンにより置換されて、Ａ＝ＮＨを有する式（ＩＩａ）の基を担うキノリン誘導体を形成できる。
【００９９】
Ｑ＝Ｎ、及びＲ’’がＨと異なる場合、スキーム２および３で示された以下の経路を実施できる。
【０１００】
式（IX）の化合物を得るために、以下のスキーム２に示されているように、以下の反応が実施されることができる。
【化２５】
2017522313.tif 000027
【０１０１】
式（ＶＩＩＩ）（ここでＺ、Ｖ、ｎ、ｎ’、Ｒ、及びＲ’は、上記の通りである）の化合物は、（ＶＩＩＩ）の化合物に対して１〜２（例えば１．１）のモル比のＡｌｋＨａｌ（ここでＡｌｋは（Ｃ１−Ｃ４）アルキル基を表し、そしてＨａｌはハロゲン原子を表す）の存在下で、及び１〜２（例えば１．１）のモル比のカリウムtert−ブトキシドのような無機塩基の存在下で、無水Ｎ，Ｎジメチルホルムアミドのような無水極性溶媒中に置かれることができる。反応混合物は、室温で７時間〜２４時間（例えば１６時間）撹拌されることができる。反応混合物は、水と酢酸エチルのような有機溶媒の間に分配されることができる。有機相は、その後集められ、塩の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧下で濃縮されて、式（IX）の化合物を与えることができる。
【０１０２】
式（ＸＩＩ）の化合物を得るために、以下のスキーム３に示されているように、以下の反応が実施されることができる。
【化２６】
2017522313.tif 000028
【０１０３】
式（Ｘ）（ここでＺ、Ｖ、ｎ、ｎ’、Ｒ、及びＲ’は上記の通りである）の化合物は、２〜５（例えば３）のモル比のＮａＨの存在下で無水Ｎ，Ｎジメチルホルムアミドのような無水極性溶媒中に置かれることができ、そして反応混合物は室温で１０分〜５０分（例えば３０分）の間、撹拌されることができる。式（ＸＩ）（ここでｍ、Ｂ、ＲａおよびＲｂは上記のとおりである）の化合物は、その後式（Ｘ）の化合物に対して１〜２（例えば１）のモル比のＫＩの存在下で、及び１〜２（例えば１）のモル比のＥｔ３Ｎのような有機塩基の存在下で、１〜２（例えば１）のモル比で無水Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドのような無水極性溶媒中に置かれ、そして反応混合物は、アルゴンのような不活性雰囲気の下で、室温で１０分間〜５０分間（例えば３０分）の間撹拌されることができる。その後、該活性化された化合物（Ｘ）は、化合物（ＸＩ）に加えられ、そして得られた反応混合物は、７０〜１１０℃の温度（例えば９0℃）で、２時間〜１０時間（例えば４時間）、撹拌されることができる。室温に冷却した後、反応混合物は減圧下で濃縮されることができ、そして得られた残渣は酢酸エチルのような有機溶媒で希釈されることができる。有機相は、その後塩の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧下で濃縮されて、式（XII）の化合物を与えることができる。
【０１０４】
【化２７】
2017522313.tif 000029
が式（ＩＩａ）のアミノ基（ここでＡがＮＨである）である置換基を担う場合、以下の経路がスキーム４のように実施されることができる。
【化２８】
2017522313.tif 000030
【０１０５】
式（ＸＩＩＩ）（ここでＺ、Ｖ、ｎ’、Ｒ、およびＲ’は、上記の通りであり、Ｘは、Ｂｒのようなハロゲン原子である）の化合物は、ジオキサン／Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド混合物のような極性溶媒の混合物中に置かれることができる。式（ＸＩＶ）（ここでＢ、ＲａおよびＲｂは、上記の通りのである）の化合物はその後、式（ＸＩＩＩ）の化合物に対して２から５（例えば３）のモル比のナトリウムtert−ブトキシドまたはカリウムtert−ブトキシドのような非求核有機塩基の存在下、式（ＸＩＩＩ）の化合物の総量と比較して５ｍｏｌ％〜４０ｍｏｌ％の量のＸａｎｔＰｈｏｓ（4,5−ビス（ジフェニルホスフィノ）−9,9−ジメチルキサンテン）またはＸ−ホス（２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２',４',６'−トリイソプロピルビフェニル）のようなジホスフィンの存在下、及び式（ＸＩＩＩ）の化合物の総量と比較して２ｍｏｌ％〜１５ｍｏｌ％の量のＰｄ（ＯＡｃ）２またはＰｄ２（dｂａ）３のような触媒の存在下で、式（ＸＩＩＩ）の化合物に対して１から２（例えば１．５）のモル比で、加えられる。反応混合物は、マイクロ波反応器中で、９０〜１５０℃（例えば1２０℃）の温度で、３０分〜１００分（例えば７０分）の間、加熱されることができる。反応混合物は減圧下で濃縮されることができ、そして該残渣は酢酸エチルのような有機溶媒で希釈されることができる。有機相は、水で洗浄され、デカントされ、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、減圧下で濃縮されて、式（XＶ）の化合物を与えることができる。
【０１０６】
上記の一般式（Ｉｄ）の化合物は、以下のスキーム５に従って調製されることができる。
【化２９】
2017522313.tif 000031
【０１０７】
式（ＸＶＩ）（ここでｎ´及び  Ｒ’は上記の通りのであり、そしてＸは、Ｃｌのようなハロゲン原子である）の化合物は、２〜５（例えば３）のモル比のＣｓ２ＣＯ３のような無機塩基の存在下、及び１〜２（例えば１）のモル比のＣｕＩの存在下で、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドのような極性溶媒中に置かれることができる。式（ＸＶＩＩ）（ここでＲ、Ｖおよびｎは、上記の通り）の化合物がその後、式（ＸＶＩ）の化合物に対して１〜２（例えば１）のモル比で、加えられることが可能である。反応混合物は、マイクロ波反応器中で、１３０〜１７０℃（例えば１５０℃）の温度で、３０分〜１００分（例えば５０分）の間、加熱されることができる。室温に冷却した後、水が反応混合物に加えられることができ、溶解されていない固体は、セライトを通してろ過されることができ、そして得られた濾液は、酢酸エチルのような有機溶媒により抽出されることができる。有機相はその後、水、および塩の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧下で濃縮されて、式（Iｄ）の化合物を与えることができる。
【０１０８】
上記の一般式（Ｉｅ）の化合物は、以下のスキーム６に従って調製されることができる。
【化３０】
2017522313.tif 000032
【０１０９】
式（ＸＶＩ）（ここでｎ´及び  Ｒ’は上記の通りであり、そしてＸは、Ｃｌのようなハロゲン原子である）の化合物は、２〜５（例えば３）のモル比のＣｓ２ＣＯ３のような無機塩基の存在下、及び１〜２（例えば１）のモル比のＣｕＩの存在下で、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドのような極性溶媒中に置かれることができる。式（ＸＩＸ）（ここでＲ、Ｖおよびｎは、上記の通り）の化合物は、式（ＸＶＩ）の化合物に対して１〜２（例えば１）のモル比で、その後加えられることが可能である。反応混合物は、マイクロ波反応器中で、１３０〜１７０℃（例えば１５０℃）の温度で、３０分〜１００分（例えば５０分）の間、加熱されることができる。室温に冷却した後、水が反応混合物に加えられることができ、溶解されていない固体は、セライトを通してろ過されることができ、そして得られた濾液は、酢酸エチルのような有機溶媒により抽出されることができる。有機相はその後、水、および塩の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧下で濃縮されて、式（Ｉｅ）の化合物を与えることができる。
【０１１０】
より特別には、式（Ｉ）（ここでＲ’は、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）−（ＯＲ３）（ＯＲ４）基を表す）の化合物は、ＯＨ基であるR’基を有する式（ＸＸ）の化合物から出発して、以下の経路を通って調整されることができる：
【化３１】
2017522313.tif 000033
【０１１１】
式（ＸＸ）（ここでＺ、Ｖ、ｎ、ｎ’、Ｒ、およびＲ’は、上記に定義された通り）の化合物は、式（ＸＸ）の化合物に対して１のモル比のジエチルクロロホスフェートの存在下、及び１〜２（例えば１．２）のモル比のトリエチルアミンのような有機塩基の存在下、不活性ガス（例えばアルゴン）の雰囲気下０℃で、無水ジクロロメタンのような無水クロロアルカン溶媒中に置かれることができる。反応混合物は、室温で７時間〜２４時間（例えば１４時間）撹拌されることができる。その後、反応混合物は減圧下で濃縮されることができ、そして得られた残渣は、１〜２Ｍ（例えば１Ｍ）のモル濃度を有する塩酸水溶液と、酢酸エチルのような有機溶媒の間に、分配されることができる。有機相はその後、集められ、Ｎａ２ＣＯ３のような無機塩基の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧下で濃縮されて、式（XXI）の化合物を与えることができる。
【０１１２】
式（ＸＸＩ）の化合物に対して１〜５（例えば４）のモル比のトリメチルシリルブロミドの存在下で、式（ＸＸＩ）の化合物は、アセトニトリルのような非プロトン性極性溶媒中に置かれることができる。反応混合物は、マイクロ波照射の下で、５０〜７０℃（例えば６0℃）の温度で、１５分〜６０分（例えば３０分）の間、撹拌されることができる。室温に冷却した後、ＭｅＯＨ／水（９５／５）混合物は、ゆっくり加えられることが可能である。得られた沈殿は、濾過され、水で洗われ、そしてデシケータ中の減圧下で乾燥されて、式（XXＩI）の化合物を与えることができる。
【０１１３】
式（Ｉ）（ここでＲは、−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）−（ＯＲ３）（ＯＲ４）基を表す）の化合物を得る為に、ＯＨ基であるR基を有する式（I）の化合物から出発して、同じ手順が適用されることができる。
【０１１４】
炎症性疾患
このように、本発明は、炎症性疾患の処置および／または予防における使用の為の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、および（Ｉｅ）の化合物にも関する。
【０１１５】
驚くべきことに、式（Ｉ）の化合物が、in  vivoの２つのマウスモデルに基づいて、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び関節リウマチ炎症性疾患（ＲＡ）のような炎症性疾患に伴う徴候の劇的な改善を導いたことを、発明者らは示すことができた。
【０１１６】
式（Ｉ）の化合物の炎症を調整する能力は、２つの炎症性疾患（炎症性腸疾患（ＩＢＤ）及び関節リウマチ炎症性疾患（ＲＡ））、のための２つの確立したマウスモデルにおいて、今や評価された。硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ）により誘発された大腸炎モデルが、炎症性腸疾患を研究するために用いられた( Perse & Cerar; "Dextran Sodium Sulphate Colitis MouseModel: Traps and Tricks"; Journal of Biomedicine and Biotechnology (2012);718617参照)。Ｂｒａｎｄら ("Collagen-inducedarthritis"; Nature Protocols; (2007); 2(5):1269-75) に示されているように、コラーゲンにより誘発された関節炎モデルが、関節リウマチを研究するために使われた。
【０１１７】
実際、式（Ｉ）に属する化合物の投与が、in  vivoで、（ＤＳＳ）により誘発された大腸炎マウスモデル上において大腸の長さの改善、およびパイエル板のようなリンパ様器官の変質の減少を導くことを、発明者は示した。式（Ｉ）の化合物の投与が、コラーゲンにより誘発された関節炎マウスモデルに基づいて、腫脹の有意な減少、及び炎症の徴候の減少を導くことを、発明者は更に示した。
【０１１８】
本発明に従い、「炎症」は、痛み、熱、発赤、および腫脹によって特徴づけられ、感染、刺激、または損傷から生じることがあり得る。
【０１１９】
つまり、「炎症性疾患」は、過剰なまたは調節されない炎症によって引き起こされる一群の疾患および／または障害を指す。
【０１２０】
本発明に従い、「炎症性疾患を処置するおよび／または予防する」は、炎症性疾患または炎症そのもの（それは個体における前記炎症性疾患とともに発生し得る）の処置および／または予防の両方を言う。
【０１２１】
このように、炎症性疾患の処置および／または予防は、炎症自体の処置および／または予防も含む。
【０１２２】
本発明に従い、炎症性疾患を「処置するおよび／または予防する」は、前記炎症性疾患を処置すること、発症する可能性を減らすこと、又は疾患の発生を遅延させることを含む。
【０１２３】
本発明に従い、「個体」は、ヒトまたはヒト以外の哺乳類、及び好ましくはヒトに関することができる。
【０１２４】
非制限的な意味において、炎症性疾患は以下を含む：自己免疫疾患に関連づけられた炎症性疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患、関節炎疾患、炎症性消化管疾患、炎症性の皮膚疾患および気管支炎のような上皮細胞に関連づけられた他の炎症性疾患、大腸癌のような癌に関連づけられた炎症、刺激に関連づけられた炎症、および損傷に関連づけられた炎症。
【０１２５】
このように、炎症性疾患は、以下からなるリストにおいて選択されることができる：自己免疫疾患に関連づけられた炎症性疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症性疾患、関節炎疾患、炎症性消化管疾患、炎症性の皮膚疾患および上皮細胞に関連づけられた他の炎症性疾患、癌に関連づけられた炎症、刺激に関連づけられた炎症、および損傷に関連づけられた炎症。
【０１２６】
特に、炎症性疾患は、以下からなるリストにおいて選択されることができる：炎症性腸疾患、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン、変形性関節症、アテローム性動脈硬化、強直性脊椎炎、乾癬、皮膚炎、シェ―グレン症候群、気管支炎、喘息、および大腸癌に関連づけられた炎症。
【０１２７】
より特別には、炎症性疾患は、以下からなるリストにおいて選択されることができる：炎症性腸疾患、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、変形性関節症、強直性脊椎炎、乾癬、シェ―グレン症候群、気管支炎、および大腸癌に関連づけられた炎症。
【０１２８】
より特別には、炎症性疾患は、以下からなるリストにおいて選択されることができる：炎症性腸疾患、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、変形性関節症、強直性脊椎炎、及び乾癬。
【０１２９】
好ましくは、本発明に従う炎症性疾患は、以下を含む：炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、及び多発性硬化症。
【０１３０】
さらに好ましくは、本発明に従う炎症性疾患は、以下を含む：炎症性腸疾患、関節リウマチ、および多発性硬化症。
【０１３１】
炎症性疾患は、アルツハイマー病、パーキンソン、喘息、アテローム性動脈硬化、および皮膚炎も包含できる。
【０１３２】
皮膚炎として、湿疹があげられ得る。
【０１３３】
上記からみて、炎症性疾患（炎症自体を包含する）、および炎症性疾患に伴う炎症の処置および／または予防の為の式（Ｉ）の化合物に、本発明は関する。
【０１３４】
このように、炎症性疾患（炎症自体を包含する）、および炎症性疾患に伴う炎症の処置および／または予防の為の式（Ｉ）の化合物にも、本発明は関する。
【０１３５】
他の局面に従って、本発明の主題は、薬物としての使用の為の、単独でまたは組み合わせでの、化合物（Ｉｅ）（Ｉｄ）（８）、（９）、（１０）、（１１）、（４４）、（４６）、（４７）、（４８）、（４９）、（５０）、（５１）、（５２）、（５３）、又はその薬学的に許容される塩に関する。
【０１３６】
他の目的に従って、本発明は、単独でまたは組み合わせでの、化合物（Ｉｅ）（Ｉｄ）（８）、（９）、（１０）、（１１）、（４４）、（４６）、（４７）、（４８）、（４９）、（５０）、（５１）、（５２）、（５３）、又はその薬学的に許容される塩に関する。
【０１３７】
炎症性（炎症自体を包含する）、および炎症性疾患に伴う炎症を処置するおよび／または予防することの為の組成物、たとえば医薬、の調製の為に式（Ｉ）の化合物を使用することにも、本発明は関する。
【０１３８】
炎症性疾患（炎症自体を含む）、および前記炎症性疾患に関連づけられた炎症を処置するおよび／または予防する為の方法であって、それを必要とする患者に式（Ｉ）の化合物を投与する工程を含む方法にも本発明は関する。
【０１３９】
ｍｉＲＮＡ−１２４
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、それらのコグネートな標的メッセンジャーＲＮＡの発現またはメッセンジャーＲＮＡのタンパク質生成物の翻訳の減少を引き起こすために、細胞の細胞質において作用できる、小さい、一本鎖のノンコーディングＲＮＡである。成熟したｍｉＲＮＡは、典型的には長さが約１９〜２３ヌクレオチドである。それらの標的タンパク質の産生を阻害するｍｉＲＮＡのこの能力は、多くのタイプの細胞活性（例えば細胞運命決定、アポトーシス、分化、および発癌）の制御をもたらす。
【０１４０】
ｍｉＲ−１２４は、マウスにおいてまずクローン化された。ヒトｍｉＲ−１２４前駆体（すなわちｍｉＲＮ−１２４すなわちｍｉＲＮＡ−１２４すなわちミクロＲＮＡ  １２４）は、胚幹細胞からクローン化された。ｍｉＲ−１２４前駆体の９つのハプロタイプが今までに確認され（Guo   et   al., PLoS   ONE, 2009, 4(11):e7944）、そのうち３つは、ヒトｈｓａ−ｍｉＲ−１２４−１、ｈｓａ−ｍｉＲ−１２４−２、およびｈｓａ−ｍｉＲ−１２４−３に存在する。（それぞれSEQ ID NO:1、 SEQ ID NO:2、及び SEQ ID NO:3）。
【０１４１】
ｍｉＲ−１２４マイクロＲＮＡ前駆体は、小さい、ノンコーディングＲＮＡ分子である。成熟した〜21ヌクレオチドのマイクロＲＮＡは、ダイサー酵素によって、ヘアピン前駆体配列から処理される。成熟した配列は、ｍｉＲ−１２４−３ｐに関してSEQ ID NO: 4、およびｍｉＲ−１２４−５ｐに関してSEQ ID NO: 5である。
【０１４２】
本発明に従い、ｍｉＲ−１２４の発現レベルを測定することは、前駆体の、または成熟したｍｉＲ−１２４の両方の発現レベルを測定することを包含する。
【０１４３】
生物学的試料中のｍｉＲ−１２４中での発現を増加させるための式（Ｉ）の化合物にも、本発明は関する。
【０１４４】
このように、他の目的に従い本発明は、真核細胞におけるｍｉＲ−１２４の発現を増加させるためのin  vitro または ex  vivoの方法であって、少なくとも以下の工程を含む方法に関する：
ａ） 真核細胞を用意すること、
ｂ） 前記細胞を誘導体化合物、特に式（Ｉ）の化合物と接触させること。
【０１４５】
候補化合物をスクリーニングする方法。
所定の薬物またはワクチンの開発の成功のための１つの鍵となる要因は、効率的に且つ迅速にその有効性を評価することの可能性である。それ故、薬物またはワクチンの効能を評価するために頼る、特定のバイオマーカーのような適切なツールを有することが重要である。
【０１４６】
驚くべきことに、ｍｉＲ−１２４は炎症の間に重要な役割を演ずることが見出された。実際、式（Ｉ）の化合物がｍｉＲ−１２４の発現を制御できることを、発明者は今、示した。特に、ＦＩＣＯＬＬ(商標）勾配による遠心分離により分離された、ドナー由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）上のｍｉＲ−１２４の発現を、本発明の化合物がアップレギュレート（１００倍の増加まで）することができることを、今、発明者は示した。
【０１４７】
式（Ｉ）の化合物がｍｉＲ−１２４の発現を制御できることを、発明者が今立証したので、炎症性疾患を治療しおよび／または予防することにおいて効果的であると推定されるキノリン誘導体、特に式（Ｉ）の化合物をスクリーニングするためのin  vitro または ex  vivoの方法にも、本発明は関する。
【０１４８】
このように、他の目的に従い、本発明は少なくとも一つのｍｉＲＮＡのin  vitro 又は ex  vivoの使用において、前記少なくとも一つのｍｉＲＮＡが、炎症性疾患を処置するおよび／または予防することにおいて効果的であると推定されるキノリン誘導体、特に式（Ｉ）の化合物をスクリーニングするためのバイオマーカーとしてのｍｉＲ−１２４である方法に関する。
【０１４９】
本発明は、炎症性疾患を処置しおよび／または予防することにおいて効果的であると推定されるキノリン誘導体、特に式（Ｉ）の化合物をスクリーニングするためのin  vitro または ex  vivoの方法であって少なくとも以下の工程：
ａ） 真核細胞を用意すること、
ｂ） 前記細胞を式（Ｉ）の化合物と接触させること、
ｃ） 前記細胞中のｍｉＲ−１２４の発現を測定すること、及び
ｄ） 工程ｃ）において測定されたｍｉＲ−１２４の発現レベルが基準値に対して相対的に制御された場合、炎症性疾患を処置するおよび／または予防することに効果的であると推定される候補を選択すること
を含む方法に関する。
【０１５０】
本発明に従い、発現レベルの「制御」は、発現レベルのアップレギュレーションおよびダウンレギュレーションを含む。本発明の意味において、ｍｉＲ−１２４の発現レベルの「制御」は、好ましくはアップレギュレーションを指す。
【０１５１】
本発明は特に、炎症性疾患を処置するおよび／または予防することにおいて効果的であると推定されるキノリン誘導体、特に式（Ｉ）の化合物をスクリーニングするためのin  vitro または ex  vivoの方法であって、少なくとも以下の工程：
ａ）真核細胞を用意すること、
ｂ） 前記細胞を式（Ｉ）の化合物と接触させること、
ｃ） 前記細胞中のｍｉＲ−１２４の発現を測定すること、及び
ｄ） 工程ｃ）において測定されたｍｉＲ−１２４の発現レベルが基準値に対して相対的に増加された場合、炎症性疾患を処置するおよび／または予防することにおいて効果的であると推定される候補を選択すること
を含む方法に関する。
【０１５２】
一の実施態様に従い、ｍｉＲ−１２４の存在または発現レベルは、生物学的試料由来の真核細胞から測定され、そして対照基準値と比較される。
【０１５３】
特に、本発明に適している「生物学的試料」は、生物学的流体（例えば血液の血漿、または血清、唾液、間質液、または尿試料）、細胞試料（例えば細胞培養物、細胞株、幹細胞株、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を含有する試料）、組織生検（例えば口腔組織、胃腸組織、皮膚、口腔粘膜試料、または臨床治験からの複数の試料）である。試料は、未精製試料でありうるか、または貯蔵、加工または測定の前に種々の程度に精製されることができる。
【０１５４】
特に、本発明に適している生物学的試料は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）またはＰＢＭＣ含有試料である。このように、本発明の生物学的試料は、当技術分野にける通常の技術、例えば密度勾配遠心法、及びより特別にはＦＩＣＯＬＬ（商標）勾配を用いて、末梢全血液から処理され得る。
【０１５５】
ＰＢＭＣ試料、特にＦＩＣＯＬＬ(商標）勾配を利用して処理されたものは、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞およびＮＫ細胞）、単球、および樹状細胞を含むことに、影響を受けやすい。ヒトにおいて、これらの母集団の頻度は、各個人間で異なる。
【０１５６】
このように、そして非制限的であるが、真核細胞は、上記の細胞型（例えばリンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、およびＮＫ細胞）、単球、および樹状細胞）のいずれか一つを含む。
【０１５７】
本発明の使用及び方法のために生物学的試料を集める工程は、本発明を実施する前に実施され、そして本発明に従う使用又は方法の工程ではない。
【０１５８】
ｍｉＲＮＡ評価のための試料は、いかなる所望の間隔でも採取されることができる。例えば、試料は、１時間毎、1日につき２回、毎日、毎週、毎月、一か月おき、毎年等で採取されることができる。試料は、直ちにテストされることができるか、または後のテストのために保管されることができる。
【０１５９】
試料は、試験の前に精製されることができる。いくつかの実施形態においては、ｍｉＲ−１２４は、試験の前に残留する細胞含有物から単離されることができる。更に、必要に応じて、ｍｉＲ−１２４分子は、試料中のｍＲＮＡの残部から分離されることができる。例えば、ｍｉＲ−１２４は、試験の前にサイズの違いに基づいてｍＲＮＡから分離されることができる。
【０１６０】
試験された生物学的試料中のｍｉＲ−１２４の測定された発現レベルを比較するために使われる対照基準値は、対照試料から得られる。
【０１６１】
対照試料は、種々の源から採取されることができる。いくつかの実施形態においては、対照試料は、処置の前に、または疾患の存在の前に患者から採取される（例えば保管された血液試料）。他の実施形態に従い、対照試料は、母集団の、一組の正常な、罹患していないメンバーから採取される。他の実施形態においては、細胞アッセイは対照の細胞培養物について実施されることができ、例えばそれは試験化合物で処理されていないか、又はＤＭＳＯ、メチルセルロース（ＭＣ）、または水のような対照化合物で処理された培養物である。
【０１６２】
一の実施形態に従い、患者における炎症性疾患の決定またはモニタリングのために、このような状態を患っていないことが知られている個人又は個人の群において得られた単離された生物学的試料から、対照基準値は得られることが可能である。
【０１６３】
他の実施形態に従い、患者における炎症性疾患の処置の有効性の決定またはモニタリングのために、このような状態を患っていないことが知られている、及び/またはその効果が決定されまたはモニタリングされるところの処置を受けていない個人又は個人の群から得られた単離された生物学的試料から、対照基準値は得られることが可能である。あるいは、炎症性疾患を患いかつその有効性が決定またはモニタリングされることになっているところの処置を受ける患者から得られた単離された生物学的試料から、対照基準値は得られることができ、ただし該単離された生物学的試料は、処置の投与の前に患者から採取される。
【０１６４】
ｍｉＲ−１２４バイオマーカーの存在または発現レベルを測定する為に、当業者は多くの方法を入手できる。
【０１６５】
例えば、核酸アッセイまたはアレイは、試料中のｍｉＲ−１２４の存在および／または発現レベルを評価するために用いらることができる。
【０１６６】
これに限定されないが、ノーザンブロットおよびＰＣＲを基礎とした方法（例えば、リアルタイム逆転写−ＰＣＲすなわちｑＲＴ−ＰＣＲ）のような、試料中のｍｉＲ−１２４バイオマ−カ−の発現または存在を検出するための種々の核酸アッセイにおいて用いられる相補型プローブまたはプライマーとして作用する、対応するヌクレオチドを調製するために、ｍｉＲ−１２４の配列は用いることができる。ｑＲＴ−ＰＣＲのような方法は、試料中のｍｉＲＮＡの量を正確に定量するために用いることができる。
【０１６７】
本発明に従うセンスおよびアンチセンスのプロ−ブ又はプライマ−は、当業者、特にSａｍｂｒｏｏｋら(Molecular   Cloning: A   Laboratory   Manual, 3rd   ED., 2001, Cold Spring   Harbour, N. Y.)に記載さ入れた者らに知られたあらゆる方法を使用して、得られることが可能である。
【０１６８】
ＲＮＡまたはＤＮＡの検出および定量に関連する方法は、当技術分野で周知技術である。当業者は、例えばWangら（1989, Proc  Natl   Acad   Sci   USA, Vol. 86 : 917-921）、 Wong ら(2005, Bio   Techniques, Vol. 39 (1): 75-85)、Nolanら(2006, Nat Protoc, Vol. 1(3) :1559-1582)、Klinckら(2008, Cancer  Research, Vol. 68 : 657-663)、またはBustin (2000, Journal   of   Molecular   Endocrinology, Vol. 25 :169-193)により刊行された一般的なレビューをも参照できる。
【０１６９】
ｍｉＲ−１２４の存在または発現レベルを測定するのに適している単離された核酸プローブは、特にｍｉＲ−１２４（例えば前駆体または成熟したｍｉＲ−１２４）にハイブリダイズすることができる核酸プローブである。
【０１７０】
このような核酸プローブは、１８〜３０核酸、特に２０〜２７、好ましくは２０〜２５、好ましくは２０、２２、または２５、及びより好ましくは約２５核酸である。前述のように、このような核酸プローブは、従来技術において、公知の任意の方法に従って調製されることができる。
【０１７１】
所定のプローブおよび所定の標的のための最適なハイブリダイゼーション温度を予測するための方法および公式は、周知である。
【０１７２】
このように、当業者は、1組のプローブ、所定の標的配列に基づいて、及びハイブリダイゼーションの特定の条件において、最適なハイブリダイゼーション温度を容易に算出できる。
【０１７３】
有利には、前記プローブの最適なハイブリダイゼーション温度は４０℃〜６０℃、及びより特別に４５℃〜５５℃、及び好ましくは約４８℃である。
【０１７４】
本発明のバイオマーカーに本発明の核酸プローブをハイブリダイズさせることに役立つバッファーの例として、ハイブリダイゼーションバッファーとして、１００ｍＭのＭＥＳ、１Ｍ［Ｎａ＋］、２０ｍＭのＥＤＴＡ、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するバッファー、ノンストリンジェント洗浄バッファーとして、６ＸＳＳＰＥ、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するバッファー、及びストリンジェント洗浄バッファーとして、１００ｍＭのＭＥＳ、０．１Ｍ［Ｎａ＋］、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するバッファーを挙げることができる。
【０１７５】
一の実施形態において、核酸の検出および定量のための方法は、蛍光染料を基礎とする方法でもよく、ここで、核酸に結合する染料のようなリガンドの蛍光強度を測定することによって、前記核酸の濃度は評価される。蛍光染料は、周知である。
【０１７６】
あるいは、前記核酸は、分光光度法を使用して定量されることができる。
【０１７７】
他の実施形態において、核酸の検出および定量のための方法は、ハイブリダイゼーションを基礎とする方法でもよい。前記ハイブリダイゼーションを基礎とする方法は、ＰＣＲ及び定量的ＰＣＲ（ｑＲＴ−ＰＣＲすなわちｑ−ＰＣＲ）技術または逆転写酵素／ポリメラーゼを基礎とした技術を含むことができる。有利には、前記方法は、更にシークエンシング工程を含むかまたは更にそれと結合されることができる。
【０１７８】
（ｉ）細胞ｍＲＮＡの抽出工程、（ｉｉ）逆転写酵素を使用する、ｍＲＮＡのＤＮＡへの逆転写の工程、および（ｉｉｉ）前の工程で得られたＤＮＡからのＤＮＡ増幅工程を、それらの方法は含むことができる。通常、同じ試料から出発して、以下の核酸が増幅される：（ａ）標的ｍＲＮＡの逆転写工程の後に得られたＤＮＡおよび（ｂ）細胞によって、構成的に、そして常に発現されるｍＲＮＡ（「ハウスキーピング遺伝子」）、例えば遺伝子ＭＲＰＬ１９、ＰＵＭ１、およびＧＡＤＰＨ、によってコードされたＲＮＡの逆転写の後に得られる１つのＤＮＡまたは複数のＤＮＡ。
【０１７９】
電気泳動による分離およびＤＮＡバンドの測定の後に、増幅されたＤＮＡを定量できる。「ハウスキーピング」遺伝子によってコードされるｍＲＮＡと比較した相対的な単位として、標的ｍＲＮＡに関連した結果は表される。いくつかの実施形態において、デンシトメトリーによる泳動バンド中に含有されているＤＮＡの定量の前に、アガロースゲル電気泳動、そしてその後の臭化エチジウムによるＤＮＡバンドの呈色の後に、増幅されたＤＮＡの分離工程は達成される。他の実施態様において、レーザー光線を使用した放出された信号の定量の前に、増幅されたＤＮＡがキャピラリー電気泳動により分離されるマイクロチャンネル装置を、人は使用できる。このような装置は、例えばキャリパーライフサイエンス社（Ｈｏｐｋｉｎｔｏｎ、ＭＡ、米国）によって商品化された「ＧＸ」シリーズからのＬａｂＣｈｉｐ(商標）装置でもよい。
【０１８０】
ｑＲＴ−ＰＣＲによって得られた定量的結果は、時々、定性的なデータより有益であり得、そしてアッセイの標準化および品質管理を単純化できる。このように、いくつかの実施形態において、ｑＲＴ−ＰＣＲを基礎としたアッセイは、細胞を基礎としたアッセイの間のｍｉＲＮＡレベルを測定するために有用であり得る。ｑＲＴ−ＰＣＲ法は、患者治療をモニターすることにも役立ち得る。商業的に入手可能なｑＲＴ−ＰＣＲを基礎とする方法（例えば、ＴａｑｍａｎＲ  Ａｒｒａｙ(商標））
【０１８１】
任意の適切なアッセイプラットフォームが、試料中のｍｉＲＮＡの発現または存在を決定するために用いられることが可能である。例えばアッセイは、ディップスティック、膜、チップ、ディスク、試験片、フィルター、マイクロスフェア、スライド、マルチウェルプレート、または光ファイバの形であり得る。ｍｉＲＮＡに対応するオリゴヌクレオチドが取り付けられる固形の支持体を、アッセイシステムは有することができる。固形の支持体は、例えば、プラスチック、ケイ素、金属、樹脂、ガラス、膜、粒子、沈殿物、ゲル、ポリマー、シート、球体、多糖、キャピラリー、フィルム、プレート、またはスライドグラスを包含できる。アッセイ成分は、ｍｉＲＮＡを検出するためのキットとして調製され一緒に包装されることができる。
【０１８２】
いくつかの実施形態において、生物学的試料中のキノリン誘導体または薬物候補の活性試験のためのオリゴヌクレオチドアレイは、調製されることができ、または購入できる。アレイは典型的には、固形の支持体及び該支持体に接触する少なくとも一つのオリゴヌクレオチドを有し、該オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−１２４バイオマーカーの少なくとも一部に対応する。いくつかの実施形態において、ｍｉＲ−１２４バイオマーカーの一部は、少なくとも５、１０、１５、２０以上の塩基を有する。
【０１８３】
一の実施形態に従い、ｍｉＲ−１２４の存在または発現は、バイオマーカーとしても用いられる他のｍｉＲＮＡと組み合わせてアッセイされ得る。そのような実施形態では、アレイは、試料中のｍｉＲＮＡ−１２４を含む複数のｍｉＲＮＡの発現または存在を評価するために、用いられることが可能である。一般に、該方法は、次の工程を含む：ａ）特異的バインディングが起こる為に充分な条件の下で、プローブセットを含むアレイを試料に接触させること、及び、ｂ）何らかの検出可能ラベルの存在を検出する為に該アレイを検査し、それにより試料中のそれぞれの標的ｍｉＲＮＡの量を評価すること。発現アレイの使用は、所定の試料のためのｍｉＲＮＡ発現プロフィールを得ることを許す。
【０１８４】
ｍｉＲＮＡをアッセイするためのアッセイまたはアレイを調製する方法は、周知技術であり、そしてここで更に詳述される必要はない。
【０１８５】
核酸アレイは、生物学的試料中のｍｉＲＮＡの存在または示差的発現を検出するために用いられることが可能である。ポリヌクレオチドアレイ（例えばＤＮＡまたはＲＮＡアレイ）は、支持体上の予め定められた位置に置かれた、通常異なる配列のポリヌクレオチド（捕捉剤）の領域を典型的に含む。これらの領域（時々アレイフィーチャー「array features」と呼ばれる）が、アレイの支持体上の種々の予め定められた位置（アドレス「addresses」）を有するという点で、アレイはアドレッサブル「addressable」である。アレイ上の特定の予め定められた位置（すなわちアドレス「address」）の領域（すなわち、アレイのフィーチャー「feature」またはスポット「spot」）は、特定のｍｉＲＮＡ標的を検出するだろう。あらかじめ得られたポリヌクレオチドを位置特異的な様式で支持体上へ置くことにより、または支持体上での位置特的なポリヌクレオチドのin  situ合成により、ポリヌクレオチドアレイは、平面支持体上で典型的に作成される。前駆体ユニット（例えばヌクレオチドまたはアミノ酸モノマー）またはあらかじめ合成された捕捉剤を置くことによって（例えば、接触またはジェットを基礎とした方法または写真平版法によって）、ｍｉＲＮＡ発現を検出する為のアレイを作成できる。支持体上へポリヌクレオチド捕捉剤を置いた後に、該支持体は、使用の前に典型的には処理され（例えば洗浄され、そして例えばブロックされ）、保存される。
【０１８６】
ｍｉＲＮＡ発現を検出する為のアレイは、少なくとも２、３、４、または５の異なる対象プローブを有する。しかしながら、ある実施形態において、対象アレイは、対応する数のｍｉＲＮＡを検出できる、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも５００、または少なくとも１，０００又はそれ以上のプローブを有するプローブセットを含むことができる。いくつかの実施形態では、対象アレイは、生物の特定されたｍｉＲＮＡの少なくとも一部または全てを検出するためのプローブを含むことができ、または複数の生物からオルソロガスプローブを含むことができる。
【０１８７】
アレイ上に存在する捕捉剤の一つ以上への試料中のｍｉＲＮＡの特異的バインディングを促進する条件の下で、ｍｉＲＮＡ検体を含有している試料または標識された試料と核酸アレイを接触させて、観察されたバインディングパターンを呈示することができる。このバインディングパターンは、アレイをインテロゲートすると検出されることができる。例えば、試料中の標的ｍｉＲＮＡは、適切なラベル（例えば蛍光化合物）によってラベルされることができ、そしてラベルはその後、アレイの試料への暴露の後でアレイ上で正確に観察されることができる（例えば蛍光パターンを観察することによって、）。観察されたバインディングパターンは、該試料の一つ以上のｍｉＲＮＡ成分の存在および／または濃度を示すことができる。
【０１８８】
ｍｉＲＮＡのラベリングは、周知技術、例えばＤＮＡリガーゼ、ターミナルトランスフェラーゼを使用して、またはＲＮＡ骨格構造等をラべルすることによって実施できる。
いくつかの実施形態において、ｍｉＲＮＡは、蛍光標識でラベルされ得る。例示的な蛍光染料は、これに限定されないが、キサンテン染料、フルオレセイン染料、ローダミン染料、フルオレッセイン  イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、６カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、６カルボキシ−２ｌ ,4 ｌ ,7',4,7−６塩化フルオレセイン（ＨＥＸ）、６カルボキシ４’、５’ジクロロ２’、７’ジメトキシフルオレセイン（ＪＯＥ又はＪ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’テトラメチル６カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ又はＴ）、６カルボキシＸローダミン（ＲＯＸ又はＲ）、５カルボキシローダミン６Ｇ（Ｒ６Ｇ５又はＧ５）、６カルボキシローダミン６Ｇ（Ｒ６Ｇ６又はＧ６）およびローダミン１１０、シアニン染料（例えばＣｙ３、Ｃｙ５、およびＣｙ７染料）；Ａｌｅｘａ染料（例えばAlexa-fluor−５５５）；クマリン、ジエチルアミノクマリン、ウンベリフェロン；ベンズイミド染料（例えばヘキスト３３２５８）；フェナントリジン染料（例えばＴｅｘａｓ  Ｒｅｄ）；エチジウム染料；アクリジン染料；カルバゾール染料；フェノキサジン染料；ポルフィリン染料；ポリメチン染料、ボディピィ染料、キノリン染料、ピレン、フルオレセイン  クロロトリアジニル、Ｒｌ１０、Ｅｏｓｉｎ、ＪＯＥ、Ｒ６Ｇ、テトラメチルローダミン、リサミン、ＲＯＸ、ナフトフルオレセインなどを包含する。
【０１８９】
いくつかの実施形態において、免疫調節活性を評価するためのオリゴヌクレオチドアレイは、調製されまたは例えばアフィメトリクスから購入されることができる。アレイは、固形の支持体、及び該支持体に接触している複数のオリゴヌクレオチドを含むことができる。オリゴヌクレオチドは、固形の支持体上の特定の、アドレッサブルな位置に存在してもよく、各位置は、細胞または患者中のキノリン誘導体または薬物候補の処置の後に、示差的発現され得るｍｉＲＮＡ配列の少なくとも一部に対応する。ｍｉＲＮＡ配列は、少なくとも一つのｍｉＲ−１２４配列を有する。
【０１９０】
アレイがｍｉＲＮＡを評価するために用いられる場合、典型的方法は、以下の工程を含むことができる：１）表面にバインドされた対象プローブを有しているアレイを得ること；２）特異的バインディングを提供するために十分な条件のもとで、該表面にバインドされたプローブへｍｉＲＮＡの母集団をハイブリダイゼーションすること；３）ハイブリダイゼーションにおいて、バインドされなかった核酸を除去するために、ポストハイブリダイゼーション洗浄を行うこと；及び４）ハイブリダイズされたｍｉＲＮＡを検出すること。これらの工程の各々で使用される試薬およびそれらの使用条件は、個々の適用に依存して変化し得る。
【０１９１】
ハイブリダイゼーションは、適切なハイブリダイゼーション条件の下で実施されることができ、後者は望まれるストリンジェンシーにおいて変化できる。典型的条件は、相補的なバインディングメンバーの間（すなわち表面にバインドされた対象プローブと試料中の相補的ｍｉＲＮＡの間）で、アレイ表面上でプローブ／標的複合体を作成するのに十分である。ある実施形態において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件が使用されることができる。ハイブリダイゼーションは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の下で典型的には実行される。周知である標準的なハイブリダイゼーション技術（例えばアレイ上のプローブに試料中の標的ｍｉＲＮＡの特異的バインディングを与えるのに十分な条件の下で）は、核酸アレイに試料をハイブリダイズさせるために用いられる。温度、塩濃度、ポリヌクレオチド濃度、ハイブリダイゼーション時間、ストリンジェンシー洗浄条件等を含む適切な条件の選択は、試料の由来、捕捉剤の種類、予想される相補性の程度等を含む実験計画に依存し、そして当業者にとってルーチンな実験の問題として決定されることができる。一般に、核酸ハイブリダイゼーションの文脈において、「ストリンジェントなハイブリダイゼーション」および「ストリンジェントなハイブリダイゼーション洗浄条件」は、典型的には配列に依存し、異なる実験条件の下で異なる。ハイブリダイゼーションは、約１２〜約２４時間にわたってなされ得る。ストリンジェンシー洗浄条件は、ｍｉＲＮＡ配列が相補的な捕捉剤にハイブリダイズされる度合いに影響を及ぼすことができる。代替であるが同等のハイブリダイゼーションおよび洗浄条件が、類似のストリンジェンシーの条件を準備する為に利用できることを、当業者は容易に認識するであろう。
【０１９２】
例示としての一の実施形態において、アフィメトリクスのＧｅｎｅｃｈｉｐ  ｍｉＲＮＡ  Ａｒｒａｙ  ２．０を使用して、取扱説明書に記載されているプロトコールに従って、ｍｉＲＮＡ発現プロファイリング実験を、行うことができる。
【０１９３】
一の特定の実施例において、前記ハイブリダイゼーションは、ＧｅｎｅＣｈｉｐ(商標）ハイブリダイゼーション、洗浄、および染色キット（アフィメトリクスＲｅｆ．＃900720）を使用して実施されることができる。有利には、前記ハイブリダイゼーションは、製造業者のプロトコールに従うことにより実施される。
【０１９４】
ｍｉＲＮＡハイブリダイゼーション手順の後、アレイ表面にバインドされたポリヌクレオチドは、バインドしていない核酸を除去するために、典型的には洗浄される。洗浄は、任意の手ごろな洗浄プロトコールも使用して実施されることができ、洗浄条件は、上記のように典型的にはストリンジェントである。例えば、アフィメトリクス社より販売されている洗浄バッファー（ｒｅｆ．＃900721および＃900722）を使用して、洗浄工程を、実施できる。プローブに対する標的ｍｉＲＮＡのハイブリダイゼーションは、その後アレイを読み取る標準的な技術を使用して検出される。ｍｉＲＮＡ／プローブバインディング複合体を検出する為に例えば、アレイを照らし、該アレイの各フィーチャーで、得られた蛍光の位置および強度を読み取ることによって得られたハイブリダイズされたアレイを読み取ることは達成されることができる。
【０１９５】
対照基準、例えば健康なドナーからの対照基準値に比較してのｍｉＲ−１２４の存在または発現レベルの調節は、炎症性疾患の表示であることができる。特に、対照基準値（即ち健康なドナーからの対照基準値）に比較して、前記ｍｉＲ−１２４の減少されたまた抑制された存在、または低下された発現レベルは、炎症性疾患の表示であることができる。
【０１９６】
このように、一の実施形態において、本発明の使用は、単離された生物学的試料中へのｍｉＲ−１２４の発現レベルを得る又は測定し、及び前記測定された発現レベルを対照基準値と比較することを包含できる。前記対照基準値と比較した前記測定されたレベルの変化の観察は、炎症性疾患、又は前記炎症性疾患の処置の表示であることができる。
【０１９７】
対照基準値（すなわちキノリン誘導体のような薬物候補による処置なし）と比較して、薬物候補存在下でのｍｉＲ−１２４の高められたまたはアップレギュレートされた発現レベルは、炎症性疾患を処置するおよび／または予防することにおいて効果的であると推定される薬物候補の表示である。
【０１９８】
したがって、対照基準値と比較して、試料由来のｍｉＲ−１２４が生物学的試料中で「増加され」または「アップレギュレートされる」場合、この増加は比較対照基準値（すなわち、キノリン誘導体による処置なし）の、約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、９０％、１００％、２００％、３００％、５００％、１，０００％、又は５，０００％以上であり得る。
【０１９９】
特にｍｉＲ−１２４の測定された発現レベルは、前記対照基準値に比較して少なくとも２倍、好ましくは少なくとも４倍、好ましくは少なくとも６倍、好ましくは少なくとも８倍、及び好ましくは少なくとも１０倍の増加であり得る。
【０２００】
好ましい実施形態に従い、ｍｉＲ−１２４の測定された発現レベルは、前記対照基準値と比較して、少なくとも１００倍の増加であり得る。
【０２０１】
一の実施形態に従い、本発明に従う使用または方法は、患者の投与計画を最適化するために行われることができる。年齢、健康、遺伝的背景、他の合併症の存在、疾患進行度、及び他の薬物の同時投与などの因子に依存して、患者は、所与のキノリン誘導体、特に式（Ｉ）の化合物に対して様々な反応をし得る。患者におけるキノリン誘導体の投与計画、例えば用量および／または投与スケジュールを評価し、そして最適化するために、ｍｉＲ−１２４バイオマーカーを利用することは、役立ち得る。この点に関して、経時的に個々の患者の処置効果を追跡し、調整するためにも、ｍｉＲ−１２４を基礎とするバイオマーカーは、用いられることが可能である。該バイオマーカーは、必要に応じて剤の用量を増加または減少して、患者の処置の調整をするために必要な情報を集めるために用いることができる。投与量が有効になりつつあるか、またはより積極的処置計画が実施される必要があるかをみるために、キノリン誘導体を投与されている患者は、ｍｉＲ−１２４を基礎としたバイオマーカーを用いて検査をされることができる。投与される薬物の量、投与のタイミング、投与頻度、投与の期間は、ｍｉＲ−１２４バイオマーカー測定に応じて、その後調整されることができる。
【０２０２】
ｍｉＲ−１２４バイオマーカーは、個人の処置計画の間、または臨床試験の間、患者の遵守を追跡する為に用いられることもできる。これは、試験に入れられた患者が指示どおり薬物を服用していることを確認にするために、設定された間隔で追跡されることができる。よりさらに、患者が処置計画の投与計画を順守するかどうか決定するために、キノリン誘導体を投与されている患者は、ｍｉＲ−１２４バイオマーカーを使用して検査をされることができる。無治療対照試料のそれと比較したバイオマーカーの高められた発現レベルは、プロトコールの遵守を表す。
【０２０３】
このように、そして本発明の範囲を逸脱することなく、対照基準値は、以下に由来する真核細胞から得られることが可能である：健康なドナー及び/または所定の候補薬物（例えば所定のキノリン誘導体）であらかじめ処理されなかったドナーからの生物学的試料。
【０２０４】
キノリン誘導体、特に式（Ｉ）の化合物の有効性を評価し、追跡するために、本発明のバイオマーカーを、実施できる。したがって、キノリン誘導体、例えば式（Ｉ）の化合物によりあらかじめ処理された患者から得られた単離された生物学的試料において、ｍｉＲ−１２４の存在または発現レベルを測定できる。
【０２０５】
そして、単離された生物学的試料におけるｍｉＲ−１２４の測定された存在または発現レベルは、対照基準値と比較されることができる。
【０２０６】
対照基準値と比較して、ｍｉＲ−１２４の測定された発現レベルの増加が観察される場合、該測定はキノリン誘導体、及び特に式（Ｉ）の化合物の活性を表す。
【０２０７】
他の実施形態において、対照基準値と比較して、ｍｉＲ−１２４の測定された発現レベルの増加が観察される場合、該測定は前記キノリン誘導体、特に式（Ｉ）の前記化合物での処置に対する患者の反応性を表し得る。
【０２０８】
他の実施形態において、対照基準値と比較して、測定されたレベルの増加が観察される場合、該測定は前記キノリン誘導体、特に式（Ｉ）の前記化合物での処置の有効性を表す。
【０２０９】
他の実施形態において、対照基準値と比較して、測定されたレベルの増加が観察される場合、該測定は、炎症性疾患を予防し、および／または処置するための治療剤としての前記キノリン誘導体、特に式（Ｉ）の前記化合物の治療有効性を表す。
【０２１０】
他の実施形態において、対照基準値と比較して、ｍｉＲ−１２４の測定された発現レベルの増加が観察される場合、もしも他の投与計画により治療される患者から取り出された生物学的試料から対照基準値が測定されたならば、該測定は、炎症性疾患を予防するおよび／または処置するための治療剤としての前記キノリン誘導体、特に式（Ｉ）の前記化合物の特定の投与計画の治療有効性を表す。
【０２１１】
本発明の式（Ｉ）のいくつかの化合物の化学構造および分光学的データは、以下の表Ｉおよび表ＩＩにおいて、それぞれ示される（実施例参照）。
【表１】
2017522313.tif 000034
2017522313.tif 000035
2017522313.tif 000036
2017522313.tif 000037
2017522313.tif 000038
2017522313.tif 000039
2017522313.tif 000040
2017522313.tif 000041
【０２１２】
本明細書において提示された実施例は、単に例示である事を意図され、そして当業者はルーチンの実験を越えるものは使用せずに、特定の化合物の多数の等価の物質、および手順を認識し、または確認できるであろう。このような等価物のすべては、本発明の範囲内であると考えられ、添付の特許請求の範囲により包含される。
【実施例】
【０２１３】
【実施例１】
【０２１４】
８−クロロ−Ｎ４−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ２−（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）キノリン−2,4−ジアミン；化合物（９）
ｏ−クロロアニリン（５．３ｍＬ、５０ｍｍｏｌ、１当量）は、ピリジン（８ｍＬ）中に置かれた。マロン酸ジエチル（１１．４ｍＬ、７５ｍｍｏｌ、１．５当量）はその後加えられ、そして該反応混合物は、130℃で１４時間撹拌された。室温に冷却した後、該反応混合物は減圧の下で濃縮され、そして得られた残渣は、ジクロロメタンで希釈された。有機相は、その後Ｎａ２ＣＯ３の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、減圧の下で濃縮された。得られた残渣は、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィにより精製されて、エチル２−［（２−クロロフェニル）カルバモイル］アセテート（２．７ｇ、２２％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.74 (br s, 1H), 8.38(dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.28 (td, J = 8.1,1.5 Hz, 1H), 7.07 (td, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 4.30 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.54 (s,2H), 1.34 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。
【０２１５】
エチル２−［（２−クロロフェニル）カルバモイル］アセテート（２．４ｇ、９．９３ｍｍｏｌ、１当量）が、ＴＨＦ（９．９ｍＬ）／水（３．８ｍＬ）混合物中に置かれた。水酸化ナトリウム（４７７ｍｇ、１１．９２ｍｍｏｌ、１．２当量）が加えられ、そして該反応混合物は室温で１４時間撹拌された。その後濃塩酸は、ｐＨ２に到達するまで加えられ、そして得られた溶液は、酢酸エチルにより抽出された。有機相は、その後ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧下で濃縮されて、２−［（２−クロロフェニル）カルバモイル］酢酸（２ｇ、９４％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, MeOD) δ 7.98 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H),7.45 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.30 (td, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.16 (td, J =8.1, 1.5 Hz, 1H), 3.54 (s, 2H)。
【０２１６】
ポリリン酸（１７ｇ、１７３．２のｍｍｏｌｅｓ、１０当量）中の２−［（２−クロロフェニル）カルバモイル］酢酸（３．７ｇ、１７．３２ｍｍｏｌ、１当量）の反応混合物は、130℃で１４時間撹拌された。該反応混合物は室温に冷やされ、その後２Ｍの水酸化ナトリウム水溶液が、ゆっくり加えられた。得られた沈殿は、濾過され、水で洗われ、そしてデシケータ中で減圧下で乾燥されて、８−クロロキノリン−2,4−ジオール（３ｇ、８９％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, DMSO) δ 11.66 (br s, 1H), 10.40 (br s,1H), 7.78 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 7.8 Hz,1H), 5.81 (s, 1H)。
MS (ESI) [M-H]- = 194.1
【０２１７】
ＰＯＣｌ３（７．１ｍＬ、７６．７ｍｍｏｌ、１０当量）中の８−クロロキノリン−2,4−ジオール（１．５ｇ、７．６７ｍｍｏｌ、１当量）の反応混合物は、100℃で２時間撹拌された。該反応混合物は室温まで冷やされ、その後水がゆっくり加えられた。得られた沈殿は、濾過され、水で洗われ、そしてデシケータ中で減圧下で乾燥されて、2,4,8−トリクロロキノリン（１．６ｇ、９０％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, DMSO) δ 8.21 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.14(d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.78 (t, J = 8.4 Hz, 1H)。
【０２１８】
ｔ−ＢｕＯＨ（１７．２ｍＬ）中の2,4,8−トリクロロキノリン（１ｇ、４．３０ｍｍｏｌ、１当量）、２−アミノ−４−トリフリオロメチルピリジン（７６８ｍｇ、４．７３ｍｍｏｌ、１．１当量）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（１９ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、２ｍｏｌ％）、ＸａｎｔＰｈｏｓ（５０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、２ｍｏｌ％）、およびＣｓ２ＣＯ３（３．９ｇ、１２．０４ｍｍｏｌ、２．８当量）の反応混合物は、９０℃で２日間加熱された。室温に冷却した後、該反応混合物は減圧の下で濃縮され、そして得られた残渣は、酢酸エチルで希釈された。該有機相は、その後水で洗浄され、硫酸マグネシウムで乾燥され、濾過され、減圧下で濃縮された。得られた残渣はシリカゲル上のカラムクロマトグラフィにより精製されて、（4,8−ジクロロ−キノリン−２−イル）−（４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−アミン（１３）（５８８ｍｇ、３８％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.40 (s, 1H), 8.46(d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 8.1, 1.5 Hz,1H), 7.81 (s, 1H), 7.40 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.22 (d, J = 5.4 Hz,1H)。
MS (ESI) [M+H]+ = 358.1
【０２１９】
ＤＭＳＯ（１．４ｍＬ）中の（4,8−ジクロロ−キノリン−２−イル）−（４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−アミン（２００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、１当量）、３−（ピペリジン−１−イル）プロパン−１−アミン（９４μＬ、０．５９ｍｍｏｌ、１．１当量）、ＣｕＩ（１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ、０．１等量）、Ｌプロリン（９ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、０．２当量）、炭酸カリウム（１４８ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ、２当量）の反応混合物は、アルゴンの不活性雰囲気の下で、90℃で２４時間撹拌された。反応混合物は、酢酸エチルと水の間にその後分配された。デカンテーションした後、水相はジクロロメタンによって、さらに抽出された。該有機相は集められ、硫酸マグネシウムで乾燥され、濾過され、そして減圧下で濃縮された。得られた残渣はシリカゲル上のカラムクロマトグラフィにより精製されて、８−クロロ−Ｎ４−（３−ピペリジン−１−イル−プロピル）−Ｎ２−（４−トリフルオロメチル−ピリジン−２−イル）−キノリン−2,4−ジアミン（９）（４８ｍｇ、７％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.55 (s, 1H), 8.40(d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.77 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 7.8Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.18 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 5.88(s, 1H), 3.41 - 3.31 (m, 2H), 2.59 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 2.57 - 2.43 (m, 4H),2.01 - 1.92 (m, 2H), 1.79 - 1.70 (m, 4H), 1.65 - 1.54 (m, 2H)。
13CNMR (75 MHz, CDCl3) δ 154.9, 154.0, 152.3,148.5, 144.2, 132.2, 129.7, 121.7, 119.7, 118.4, 112.4, 109.8, 88.0, 59.6,55.1, 44.9, 26.1, 24.4, 23.4。
MS (ESI) [M+H]+ = ４６４．２
【実施例２】
【０２２０】
２−Ｎ−（８−クロロキノリン−２−イル）−５−Ｎ−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル］−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−2,5−ジアミン；化合物（２２）
ｔ−ＢｕＯＨ（４ｍＬ）中の2,8−ジクロロキノリン（１９８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１当量）、５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−アミン（２４１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ、１当量）、Ｐｄ（ＯＡｃ）２（４．５ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、２ｍｏｌ％）、ＸａｎｔＰｈｏｓ（１１．６ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ、２ｍｏｌ％）、およびＣｓ２ＣＯ３（７８２ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ、２．４当量）の反応混合物は、120℃で７０分間、マイクロ波反応器中で加熱された。室温に冷却した後、該反応混合物は減圧の下で濃縮され、そして得られた残渣は、酢酸エチルで希釈された。該有機相は、その後水で洗浄され、硫酸マグネシウムで乾燥され、濾過され、減圧下で濃縮された。得られた残渣は、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィにより精製されて、Ｎ−［５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］−８−クロロキノリン−２−アミン（２１）（３００ｍｇ、７５％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.71 (s, 1H), 8.51(s, 1H), 8.06 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.81 (m, 2H), 7.65 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.33(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 9.0 Hz, 1H)。
MS (ESI) [M+H]+ = 403.7
【０２２１】
ジオキサン（１ｍＬ）／DMF（０．１ｍＬ）混合物中のＮ−［５−ブロモ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］−８−クロロキノリン−２−アミン（１０１ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ、１当量）、３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロパン−１−アミン（６４μＬ、０．３７５ｍｍｏｌ、１．５当量）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（２８ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ、１２ｍｏｌ％）、ＸａｎｔＰｈｏｓ（４３．４ｍｇ、０．０７５ｍｍｏｌ、３０ｍｏｌ％）、およびナトリウム３級−ブトキシド（７２ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、３当量）の反応混合物は、120℃で７０分間、マイクロ波反応器中で加熱された。室温に冷却した後、該反応混合物は減圧の下で濃縮され、そして得られた残渣は、酢酸エチルで希釈された。該有機相は、その後水で洗浄され、硫酸マグネシウムで乾燥され、濾過され、減圧下で濃縮された。得られた残渣は、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィにより精製されて、２−Ｎ−（８−クロロキノリン−２−イル）−５−Ｎ−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロピル］−４−（トリフルオロメチル）ピリジン−2,5−ジアミン（２２）（５２ｍｇ、４３％）を得た。
1HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 9.39 (s, 1H), 7.97 -7.86 (m, 2H), 7.82 (br s, 1H), 7.73 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 7.5 Hz,1H), 7.23 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 3.34 - 3.22 (m, 2H),2.80 - 2.44 (m, 10H), 2.37 (s, 3H), 1.87 (t, J = 6.0 Hz, 2H)。
MS (ESI) [M+H]+ = 479.0
【実施例３】
【０２２２】
８−クロロ−Ｎメチル−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン；化合物（２８）
実施例５において、８−クロロ−Ｎ−［４−（トリフルオロメトキシ）フェニル］キノリン−２−アミン、すなわち化合物（２４）は、ＷＯ２０１０／１４３１６９におけるように合成された。
【０２２３】
DMF（２ｍＬ）中の８−クロロ−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン（２４）（３４０ｍｇ、１．０のｍｍｏｌ、１当量）、カリウム３級−ブトキシド（１２４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ、１．１当量）、およびヨードメタン（６９μＬ、１．１ｍｍｏｌ、１．１当量）の反応混合物は、室温で４時間撹拌された。反応混合物は、酢酸エチルと水の間にその後分配された。該有機相は集められ、硫酸マグネシウムで乾燥され、濾過され、そして減圧下で濃縮された。得られた残渣は、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィにより精製されて、８−クロロ−Ｎメチル−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン（２８）（２４７ｍｇ、７０％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.69 (d, J = 9.0 Hz,2H), 7.49 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 4H), 7.14 (t, J = 7.8 Hz, 1H),6.75 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H)
MS (ESI) [M+H]+ = 353.1
【実施例４】
【０２２４】
８−クロロ−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン；化合物（３０）
実施例５において、８−クロロ−Ｎ−［４−（トリフルオロメトキシ）フェニル］キノリン−２−アミン、すなわち化合物（２４）は、ＷＯ２０１０／１４３１６９におけるように合成された。
【０２２５】
無水DMF（２ｍＬ）中の８−クロロ−Ｎ−［４−（トリフルオロメトキシ）フェニル］キノリン−２−アミン（２４）（５００ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ、１当量）およびＮａＨ（１７７ｍｇ、４．４３ｍｍｏｌ、３当量）の反応混合物は、室温で３０分間撹拌された。無水DMF（５ｍＬ）中の１−（３−クロロプロピル）ピペリジン塩酸（２９２ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ、１当量）、ＫＩ（２４５ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ、１当量）、およびＥｔ３Ｎ（２０５μＬ、１．４７ｍｍｏｌ、１当量）の反応混合物は、アルゴンの不活性雰囲気の下で、室温で３０分間撹拌された。該活性化されたキノリンはその後、ピペリジン鎖に付加され、そして得られた反応混合物は、90℃で４時間撹拌された。該反応混合物は減圧の下で濃縮され、そして得られた残渣は、酢酸エチルで希釈された。有機相は、塩の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧の下で濃縮された。得られた残渣は、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィにより精製されて、８−クロロ−Ｎ−（３−（ピペリジン−１−イル）プロピル）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）キノリン−２−アミン（３０）（４７２ｍｇ、６９％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.73 - 7.63 (m, 2H),7.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.39 - 7.26 (m, 4H), 7.13 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.67(d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.26 - 4.14 (m, 2H), 2.52 - 2.33 (m, 6H), 2.11 - 1.97 (m,2H), 1.64 - 1.52 (m, 4H), 1.45 (s, 2H)。
13CNMR (75 MHz, CDCl3) δ 156.5, 147.3, 144.1,143.5, 137.1, 130.8, 129.7, 129.1, 126.4, 124.7, 122.7, 122.4, 118.9 (t, J =222 Hz), 112.5, 56.9, 54.5, 49.6, 25.6, 24.6, 24.3。
MS (ESI) [M+H]+ = 464.4
【実施例５】
【０２２６】
８−クロロ−２−（（４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル）オキシ）キノリン；化合物（４６）
DMF（６ｍＬ）中の2,8−ジクロロキノリン（７９ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、１当量）、２−ヒドロキシ−４−（トリフルオロメチル）ピリジン（６５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、１当量）、ＣｕＩ（７６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、１当量）、およびＣｓ２ＣＯ３（３９１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、３当量）の反応混合物は、150℃で５０分間、マイクロ波反応器中で加熱された。室温に冷却した後、水が反応混合物に加えられた。溶解されていない固体はセライトを通してろ過され、そして得られた濾過物は酢酸エチルによって二回抽出された。有機相は、水そして塩の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧の下で濃縮された。得られた残渣は、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィにより精製されて、８−クロロ−２−｛［４−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イル］オキシ｝キノリン（４６）（６８ｍｇ、５２％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.40 (d, J = 7.2 Hz,1H), 8.34 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.2 Hz,1H), 7.85 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.53 (d,J = 7.9 Hz, 1H)。
13CNMR (75 MHz, CDCl3) δ 161.6, 151.2, 143.4,142.3, 138.7, 138.2, 137.4, 133.4, 130.6, 129.1, 127.6, 126.7, 120.2, 119.7,102.3.
MS (ESI) [M+H]+ = ３２５．１
【実施例６】
【０２２７】
８−クロロ−２−（４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ）キノリン；化合物（４８）
DMF（２×６ｍＬ）中の2,8−ジクロロキノリン（２×７９  ｍｇ、２×０．４ｍｍｏｌ、１当量）、４−（トリフルオロメトキシ）フェノール（２×５２μＬ、２×０．４ｍｍｏｌ（１当量）、ＣｕＩ（２×７６  ｍｇ、２×０．４ｍｍｏｌ（１当量）およびＣｓ２ＣＯ３（２×３９１  ｍｇ、２×１．２ｍｍｏｌ、３当量）の反応混合物は、150℃で５０分間、マイクロ波反応器中で加熱された。室温に冷却した後、水が反応混合物に加えられた。溶解されていない固体はセライトを通してろ過され、そして得られた濾過物は酢酸エチルによって二回抽出された。有機相は、水および塩水の飽和水溶液で洗浄され、ＭｇＳＯ４で乾燥され、濾過され、そして減圧の下で濃縮された。得られた残渣は、シリカゲル上のカラムクロマトグラフィにより精製されて、８−クロロ−２−［４−（トリフルオロメトキシ）フェノキシ］キノリン（４８）（２１２ｍｇ、７８％）を与えた。
1HNMR (300 MHz, CDCl3) δ 8.12 (d, J = 8.8 Hz,1H), 7.73 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 9.1 Hz,2H), 7.38 - 7.22 (m, 3H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 1H)。
13CNMR (75 MHz, CDCl3) δ 161.5, 151.9, 145.9,142.7, 140.5, 132.0, 130.3, 127.0, 126.4, 125.1, 122.8, 122.2, 119.0 (t, J =255 Hz), 113.6。
MS (ESI) [M+H]+ = 340.1
【０２２８】
本発明の他の化合物の構造は、ＮＭＲスペクトルにより確認された。
【表２】
2017522313.tif 000042
2017522313.tif 000043
2017522313.tif 000044
2017522313.tif 000045
2017522313.tif 000046
【０２２９】
薬理データ
本発明の化合物は、治療において、特に炎症性疾患を予防するための活性物質として、それらの適性を示した薬理学的試験の対象物である。
【実施例７】
【０２３０】
Ｉn   vivoモデルにおける炎症性腸炎に対するキノリン誘導体のmiR-124発現の調節
【０２３１】
Ａ．材料及び方法
Ex   vivo研究
ＦＩＣＯＬＬ(商標）勾配を用いたＰＢＭＣの抽出
このために、健康なドナーの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、標準プロトコールに従い、ＦＩＣＯＬＬ（商標）勾配での遠心分離により単離された。
【０２３２】
簡潔には、６０〜７０ｍＬのバフィーコートが、１７５ｃｍ２のフラスコに注がれ、そしてＰＢＳを使用して体積を３００ｍＬに調整して、バフィーコートの約５倍の希釈液を得た。希釈されたバフィー３８ｍＬが、環境温度でFICOLL(商標）(Histopack-1077)１２ｍＬを含有する５０ｍＬのFalcon（商標）試験管にその後加えられる。調製物は、環境温度で５１５ｒｃｆで３０分間遠心分離される。リンパ球環は、転送ピペット（Pastette、商標）でFalcon(商標）試験管から回収され、上澄みが澄明になるまで、２９０ｒｃｆで、かつ環境温度で１０分間の遠心分離を使用し、ＰＢＳで洗浄された。
【０２３３】
１０％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ）（Thermo Fischer RefSV30160.03）を補われ、かつ活性化なしのＲＰＭＩ  Ｇｌｕｔａｍａｘ培地（LifeTechnologies Ref 61870-010）中で１，５ｘ１０６  細胞／ｍＬの密度に、細胞はその後３７℃で再懸濁される。細胞は、５％のＣＯ２の下で37℃で４８時間インキュベートされる。
【０２３４】
スクリーニングされた分子による細胞の処置
６ウェルプレートは、スクリーニングの為に使用される。３．１０６細胞／（１０％ウシ胎仔血清を補充されたＲＰＭＩ４ｍｌ）、および  ＩＬ−２(Peprotech Ref 200-02)４０Ｕ／ｍＬを含有するそれぞれのウェル中に、スクリーニングされた分子が添加される。１００％のＤＭＳＯ（４μＬ）がウェルに加えられ、そしてネガティブコントロールとしてテストされる。
【０２３５】
本明細書中で以下に記載されるように、夫々テストされる条件が準備され、そして最終な対応する容量が、従って該ウェル中で調整される：
１） １００％ＤＭＳＯ 中のキノリン誘導体― （５μＭおよび最終的な容量４μＬ）
2) 抗レトロウイルス薬物：マラビロク（Maraviroc)、エファビレンツ（Efavirenz）、ダッルナビル（Darunavir）、ＡＺＴ（全てについてで１０μＭ−最終的な容量４μＬ）。
【０２３６】
該ウェルは、５％ＣＯ２の下で、37℃で３日間インキュベートされた。培地は、標準プロトコールに従って変えられる（３日目）。簡潔には、プレートは２９０ｒｃｆで５分間遠心分離され、そして３ｍＬの上澄みが取り除かれる。１０％のウシ胎仔血清およびＩＬ−２の４０Ｕ／ｍＬを補充されたＲＰＭＩ３ｍＬは、１００％ＤＭＳＯ中のスクリーニングされた分子５ｍＭの保存溶液３μＬ又はネガティブ対照としての１００％ＤＭＳＯ３μＬを、その後加えられる。
【０２３７】
ｍｉＲＮＡの抽出（６日目）
細胞は、１５ｍＬのFalcon(商標）試験管中で回収され、２９０ｒｃｆで５分間遠心分離され、そしてその後ＰＢＳ１０ｍＬで洗われ、そして２９０ｒｃｆで５分間、更に遠心分離される。細胞は、その後ＰＢＳ１ｍＬ中に再懸濁され、計数される。
【０２３８】
６ｘ１０６細胞が回収され、２９０ｒｃｆで５分間遠心分離される。細胞ペレットは、  Macherey   Nagel  Nucleospin（商標）ｍｉＲＮＡ抽出キット（Macherey   Nagel   Ref 740971）からのＭＬ溶解緩衝液３００μＬ中で溶解され、そしてさ−20℃で更に保存される。
【０２３９】
スパイク・イン対照（ QIAGEN（著作権）からのCe_miR-39 ー SEQ ID N°6のreference 219610）の２ｘ１０８コピー／μＬの５μＬが、試料ごとに加えられる。ＲＮＡ５０μＬおよびｍｉＲＮＡ３０μＬのための溶出量を用いたMacherey   Nagel  Nucleospin(商標）miRNA抽出キットからのプロトコールを使用して、５０μｌのＲＮＡ及び３０μｌのｍｉＲＮＡの溶解体積を用いてｍｉＲＮＡ抽出は達成され、そして−20℃で更に保存される。
【０２４０】
ｍｉＲＮＡの逆転写（６日目）
逆転写工程は、miScript HiSpec緩衝液を使用する、QIAGEN（著作権）からのmiScript RT II逆転写（ＲＴ）キットを使用して、ｍｉＲＮＡ１２μＬについて行われ、−20℃で更に保存される。
【０２４１】
ｍｉＲＮＡの定量的ＰＣＲ（６日目）
定量的ＰＣＲ工程は、製造業者のプロトコールに従って、QIAGEN（著作権） miScript SYBR(商標） Green PCRキットおよびmiScript プライマーアッセイを使用して達成される。
【０２４２】
2017522313.tif 000047
【０２４３】
反応は、LightCycler(商標）380 Roche Real-Time PCR システムに関する製造業者のプロトコールに従って、３８４−ウェルプレート中で３回繰り返される。サイクリング条件も、製造業者のプロトコールに従って準備される：
2017522313.tif 000048
【０２４４】
ｑＰＣＲの相対的な定量は、当技術分野において公知であり、以下で更に詳述される。
【０２４５】
相対的な定量
miR-124 qPCR (Hs_miR-124a)についてＨ２Ｏ中１／１０への希釈、またはレファレンス／ハウスキーピング遺伝子ｑＰＣＲ（Hs_miR-26aおよびHs_miR-191）について１／１００への希釈から、miScript Primer アッセイ（Hs_miR-124a, Hs_miR-26a、及び Hs_miR-191、又は QIAGEN（著作権） - レファレンス ms00006622, ms00029239 及び ms00003682））を用いる。
【０２４６】
ｍｉＲ−１２４の３回繰り返しからの交点（Ｃｐ）の値の平均、およびｍｉＲ−２６ａおよびｍｉＲ−１９１の３回繰り返しの平均を使用する、効率修正（２ーＣｐ）のない相対的定量モデルを使用して、分析は達成される。
【０２４７】
Ｂ．結果
１セットのドナー（各化合物のために検査を受ける１〜７のドナー）は、式（Ｉ）の種々の化合物の存在下で評価された。
【０２４８】
上記のプロトコールを使用して、ｍｉＲ−１２４発現における平均変化倍数（ＤＭＳＯと比較して）は、種々のドナー（１〜７のいずれか）を用いて相対的な定量により評価され、そして以下の表ＩＩＩにおいて示される：
【表３】
2017522313.tif 000049
2017522313.tif 000050
【０２４９】
このように、未処置のＰＢＭＣについて確立された基準値と比較された場合、上記の式（Ｉ）のキノリン誘導体が、ＰＢＭＣにおいてｍｉＲ−１２４の発現レベルをアップレギュレートすることを、実験的証拠は示す。
【０２５０】
対照的に、公知の抗レトロウイルス剤（マラビロク、エファビレンツ、ダルナビル、またはＡＺＴ）のいずれも、４のドナーからのＰＢＭＣにおけるｍｉＲ−１２４の過剰発現に有意な影響を及ぼさない。
【実施例８】
【０２５１】
（ＤＳＳ−）で誘発された大腸炎モデルに対するキノリン誘導体の効果
Ａ．材料及び方法
マウスモデル
ＤＳＳモデル
炎症性大腸疾患の一般的に用いられるマウスモデルは、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ−）により誘発された大腸炎モデルである。急性ＤＳＳ−大腸炎の典型的な組織学的変化は、ムチン減少、上皮退化、及び炎症および大腸炎へ導く粘膜障壁の最終的な破壊である。
【０２５２】
６週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの３つの群（各々８匹のマウス）は、９日間の飲料水中のＤＳＳ（２．５％）の投与を受けた（図１及び２）。体重減少および水の消費量は、毎日測定された。それぞれの装置中の飲料水の容量減少を測定することによって、後者は決定された。２００μｌの０．５ＭＣ単独で（ＤＳＳ＋ＭＣ群）、または４０ｍｇ／ｋｇの化合物２４と共に（ＤＳＳ＋ＭＣ＋２４群）、マウスは処置された。対照マウス（ＤＳＳ）がそれらの体重の２０％までを失った時点で、ＤＳＳによる処置は止められ、飲料水で置き換えられる。その他の処置は、２１日間続けられた。
【０２５３】
１６週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの３群（各々７匹のマウス）は、飲料水中２．５％のＤＳＳを受けた（図３）。２００μｌの０．５ＭＣ単独で（ＤＳＳ＋ＭＣ群）、または４０ｍｇ／ｋｇの化合物２４と共に（ＤＳＳ＋ＭＣ＋２４群）、マウスは処置された。マウスは６日間のＤＳＳで処置され、そして対照マウス（ＤＳＳ）がそれらの体重の１５％までを失った時点で、すべてのマウスは安楽死され、そして大腸は更なる分析のためにとり出された。
【０２５４】
大腸は定規を用いて測定され、そして大腸全体が、組織学的分析のためにスイスロール法（Whittem et al.; "Murine Colitis Modeling using Dextran SulfateSodium (DSS)", J Vis Exp 2010 (35) 1652）に従って、ホルムアルデヒドで固定され、パラフィン中に埋め込まれて準備された。４μｍの切片が、脱パラフィン処理され、そしてヘマトキシリン及びエオジンにより染色され、病変のサイズおよび他の変化に関して分析された（図４−６）。メチルセルロース中に懸濁されたキノリン誘導体またはメチルセルロース（ＭＣ）単独でのＤＳＳサイクルの間、処置されていない及び処置さえたマウスを我々は比較した。統計解析はＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を使用して実施され、星印一つは有意差（ｐ  ＜  ０．５）を示し、星印二つは重大な有意差（ｐ  ＜  ０．０５）を示す。
【０２５５】
Ｂ．結果
示された結果は、キノリン誘導体化合物（２４）を使用して確定されたものであり、該化合物の構造は参照のため以下に示される：
【化３２】
2017522313.tif 000051
【０２５６】
１０％〜２０％の体重減少を示したＭＣ群又は処理されていないマウスとは対照的に、ＤＳＳ−投与の５日後にキノリン誘導体で処理されたマウスは、平均で１％未満の体重減少を示した（図１および２）。
【０２５７】
特に、我々は、薬物処置をうけているマウスのより多い水の消費が、キノリン誘導体の疾患減弱効果を又映しているのに気がついた。ＤＳＳの第２の投与の間に、キノリン誘導体の処置は、マウスの体重減少を著しく抑制した。このことは、マウスが感受性が鈍くならず、そしてキノリン誘導体が反復投与に適していることを示す。１サイクルのＤＳＳの後、キノリン誘導体で処理されたマウスの大腸の長さ（６．４ｃｍ＋／−０．６ｃｍ）が、ＭＣ単独で処理された（５．９ｃｍ＋／−０．８ｃｍ）及び処理されなかった（５．８ｃｍ＋／−０．８ｃｍ）マウスに比較して、有意に長かった（図３）。この差異は、２サイクルのＤＳＳを受けたマウスにおいてより大きく、キノリン誘導体で処理されたマウスの大腸の長さ（５．７ｃｍ＋／−０．９ｃｍ）が、ＭＣ単独で処理された（４．３ｃｍ＋／−０．５ｃｍ）及び処理されなかった（４．４ｃｍ＋／−０．４ｃｍ）マウスに比較して、有意に長かった（図３）。異なるコホートのマウスが、同等の数の病変を発症し（図４）、しかし病変領域の平均サイズは、キノリン−誘導体処置されたマウスにおいて著しく低く、すなわち２．１  ｍｍ２対ＭＣ単独処置されたマウスにおける８．４  ｍｍ２であった（図５）。ＤＳＳ−２サイクルにさらされたマウスにおいて、この違いは維持された（３．８ｍｍ２対１２．２ｍｍ２）。
【０２５８】
最終的に、ＤＳＳ−２サイクル後に、パイエル板のようなリンパ様器官における病変の減少を、我々は観察した。このことは、キノリン誘導体処置が免疫応答を調整することを示唆している。
【実施例９】
【０２５９】
コラーゲンにより誘発された関節炎モデルに対するキノリン誘導体の効果
Ａ．材料及び方法
マウスモデル
コラーゲンにより誘発された関節炎モデル：
９〜−１０週齢のＤＢＡ／１マウスの群は、完全フロイントアジュバントで１：１の割合で乳化されたウシＩＩ型コラーゲンの皮内投与によって、免疫された。マウスは第１の免疫感作後２１日間チャレンジされ、そして一日おきに各後足の厚さをモニターすることによって、関節炎の表現型の出現が評価された。厚み計を使用し、ダイヤルカリパス（０〜１０ｍｍ）試験ゲージを使用して、足関節の厚さが測定された。マウスは、メチルセルロース中に懸濁されたキノリン誘導体候補化合物又はメチルセルロース（ＭＣ）単独で２週間毎日処理され、そして該疾患の発症がモニターされた。統計解析はＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ検定を使用して実施され、星印一つは有意差（ｐ  ＜  ０．５）を示す。
【０２６０】
Ｂ．結果
テストされたキノリン誘導体化合物（２４）で処理された１０匹のマウス中１匹だけが、炎症の徴候を示した（これに対して、ＭＣで処理された１０匹のマウス中８匹が疾患を発症した）。キノリン誘導体で処理されたマウスは、ＭＣ単独で処理されたマウスと比較して腫脹の有意な減少を示した（１．９ｍｍ対約２．２ｍｍ）（図６）。
【０２６１】
従って、上で更に記載されているように、本発明で開示された化合物に実施された該試験の結果は、炎症性疾患を処置するおよび／または予防するために前記化合物が有用であり得ることを示す。
【０２６２】
このために、該化合物の有効量が、炎症性疾患を患っている個体に与えられることが可能である。
【０２６３】
このように、前記化合物の有効量および一つ以上の医薬補剤を含むことができる医薬品組成物の範囲内で、本発明に従う化合物を実施できる。
【０２６４】
前述の補剤は、剤形および所望の投与様式に従って選択される。
【０２６５】
この文脈において、活性物質０．１〜１０００ｍｇの毎日投与を可能にする用量において、適切な賦形剤と共に腸内又は非経口投与に適しているいかなる剤型、例えば裸錠または被覆錠、硬質ゼラチン、ソフトシェルカプセルおよび他のカプセル、坐薬、例えば懸濁液、シロップのような飲めるもの、又は注射可能な溶液または懸濁液の形において、補剤は存在できる。
【０２６６】
任意の投与経路が用いられることが可能である。例えば、式（Ｉ）の化合物は、経口、非経口、静脈、経皮、筋肉内、直腸、舌下、粘膜、鼻、又は他の手段により投与されることができる。加えて、公式（Ｉ）の化合物は、医薬品組成物の型式および／または単位用量形態の型式において投与されることができる。
【０２６７】
特に、本発明の医薬品組成物は、経口的におよび／または非経口的に投与されることができる。
【０２６８】
適切な剤形は、これに限定されないが、カプセル、錠剤（急速溶解錠および徐放錠を含む）、粉末、シロップ、口腔懸濁液、および非経口投与用の溶液を含む。
【０２６９】
医薬品組成物は、本発明の化合物と組みあわされた、当業者に周知の他の抗炎症剤を含むこともできる。
【図１】
2017522313.tif 000062
【図２】
2017522313.tif 000063
【図３】
2017522313.tif 000064
【図４】
2017522313.tif 000065
【図５】
2017522313.tif 000066
【図６】
2017522313.tif 000067
【配列表】
2017522313000001.app
【国際調査報告】
2017522313.tif 000068
2017522313.tif 000069
2017522313.tif 000070
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