(57)【要約】タンパク質および／または他の生物活性剤を安定化し、送達するための組成物を開示する。生物活性剤は、結晶性マトリクス中に埋め込まれるかまたはカプセル化される。一般に、生物活性剤はミクロまたはナノ粒子の形態である。結晶性マトリクスは、他のミクロ微粒子またはナノ微粒子生物活性剤と比較して、その中に埋め込まれた薬剤に高い安定性を付与する。担体は、タンパク質などの生物活性高分子を安定化させるために特に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
半結晶性マトリクス、および
前記マトリクス中に取り込まれた生物活性剤
を含む組成物であって、前記マトリクスは、少なくとも１種の半結晶性の水溶性ポリマーを、前記マトリクスの全質量の少なくとも３０重量％の量で含む、組成物。
【請求項２】
前記半結晶性の水溶性ポリマーが、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレングリコールコポリマー、ポリビニルアルコール、ヒドロキシアルキルセルロース、ポリソルベート、ポリオキシエチレンステアレート  ポリ、カラギーナンおよびアルギネートならびにその混合物からなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記マトリクスが、少なくとも４０℃の融点によって特徴付けられ、かつ水溶性である、請求項１から２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
前記生物活性剤がミクロ微粒子またはナノ微粒子の形態である、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記生物活性剤が１０ｎｍ〜５μｍの粒子サイズを有する、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記生物活性剤が、前記マトリクス中への組み込みの前に、少なくとも１種の生体適合性ポリマー中にカプセル化されている、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記生体適合性ポリマーが、生体内分解性または生体接着性ポリマーである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記生物活性剤がタンパク質である、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記生物活性剤が、ＰＤＧＦ、ＳＤＦ−１、ＶＥＧＦ、インスリン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１０、ＧＬＰ−１、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β１、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ナタリズマブ、ベドリズマブ、Ｊ６９５、ゴリムマブ、ＣＤＰ−８７０、ＡＭＧ−１８１およびウステキヌマブからなる群より選択される、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
担体粒子が追加の薬剤をさらに含む、請求項２から９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記マトリクスが少なくとも１種の生体適合性ポリマーをさらに含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
少なくとも１種の希釈剤またはビヒクルをさらに含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
４℃で３２週間貯蔵後、前記粒子からの前記生物活性剤の水溶液中への放出が、新たに調製されたマトリクスから放出される生物活性剤の量の少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも６０％である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
４℃で３２週間貯蔵後、前記粒子から放出される前記活性薬剤の生物活性が、新たに調製されたマトリクスから放出される生物活性剤の生物活性の少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも６０％である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物を作製する方法であって、前記方法は、以下：
（ａ）有効量の溶媒中に少なくとも１種の半結晶性の水溶性ポリマーを溶解するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の有効量の溶媒中に生物活性剤を溶解または分散させるステップであって、ここで前記ポリマー、前記活性剤および前記溶媒が、連続相を有する混合物を形成しており、前記溶媒が前記連続相であり、ステップ（ａ）における半結晶性の水溶性材料の量が、非溶媒成分の少なくとも３０重量％である、ステップと、
（ｃ）以下：
１）ステップ（ｂ）の生成物を、有効量の非溶媒中に導入する工程、
２）ステップ（ｂ）の生成物を噴霧乾燥する工程、
３）ステップ（ｂ）の生成物をフィルムキャスティングする工程、
４）ステップ（ｂ）の生成物を流動床反応器においてパンコーティングする工程、または
５）ステップ（ｂ）の生成物を凍結乾燥する工程
の少なくとも１つを実行して結晶性マトリクスを得るステップと
を含む、方法。
【請求項１６】
ステップ（ｂ）の前に、前記生物活性剤を、溶媒蒸発、熱溶融粒子形成、溶媒除去、噴霧乾燥、相反転、コアセルベーション、低温キャスティングおよびフィルムキャスティングからなる群より選択されるプロセスによって微粒子化する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ステップ（ｂ）の前に、前記生物活性剤を噴霧乾燥によって微粒子化し；ステップ（ｃ）において、前記ステップがステップ（ｂ）の生成物を噴霧乾燥する工程である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
生物活性剤を必要とする患者に生物活性剤を投与する方法であって、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物を投与するステップを含み、生物活性剤を必要とする前記患者が、クローン病、潰瘍性結腸炎、過敏性腸症候群、胃腸がんまたはセリアック病を有する、方法。
【請求項１９】
治療を必要とする患者の胃腸管中の部位での生物活性剤の取り込みを増大させる方法であって、前記患者に請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物を経口投与するステップを含み、ここでミクロ粒子は、胃腸内の部位において選択的に吸収される、方法。
【請求項２０】
胃腸管における前記部位が、パイエル板または胃腸の腸細胞である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物が、腸において、前記生物活性剤の少なくとも３０％を放出する、請求項１９から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物の経口投与後、結腸、肝臓または脾臓内においてミクロ粒子が観察不能である、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
組成物中の生物活性剤を安定化させる方法であって、前記方法は、以下：
（ａ）少なくとも１種の半結晶性の水溶性ポリマーを有効量の溶媒に溶解するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の有効量の溶媒中に生物活性剤を溶解または分散させるステップであって、ここで前記ポリマー、前記活性剤および前記溶媒は、連続相を有する混合物を形成しており、前記溶媒が前記連続相である、ステップと、
（ｃ）以下：
１）ステップ（ｂ）の生成物を、有効量の非溶媒中に導入する工程、
２）ステップ（ｂ）の生成物を噴霧乾燥する工程、
３）ステップ（ｂ）の生成物をフィルムキャスティングする工程、
４）ステップ（ｂ）の生成物を流動床反応器においてパンコーティングする工程、または
ｖ５）ステップ（ｂ）の生成物を凍結乾燥する工程
の少なくとも１つを実行するステップと、
（ｄ）安定化された前記生物活性剤を得るステップと
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１４年８月１４日に出願された米国仮特許出願第６２／０３７，４９２号（これは、参考として本明細書に援用される）に対する優先権を主張する。
【０００２】
連邦政府によって支援を受けた研究に関する陳述
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）によって授与されたＲ２１ＡＩ０９２１３３、Ｒ０１ＣＡ１００６５６およびＲ４４ＡＩ０８０００９にもとづく政府支援によりなされたものである。政府は、本発明における一定の権利を有する。
【０００３】
本発明は、一般に、生物活性剤、特にタンパク質を安定化させるための組成物およびその送達を対象とする。
【背景技術】
【０００４】
薬物および他の生物活性剤のための担体としてのミクロ粒子およびナノ粒子の使用は、当技術分野において周知である。ミクロスフェアおよびナノスフェアをベースとしたポリマー系は、外部の溶媒および分解性物質（ｄｅｇｒａｄａｎｔ）から活性薬剤を遮断するそれらの能力のため、薬物送達系に対する大きな潜在性を有している。そうした系は、過酷な胃腸管から活性薬剤を保護する能力のため、経口薬物送達の関連で特に有用である。
【０００５】
例えば、Ｃｈｏらの米国特許第８，６７３，３５９号は、ｉｎ  ｖｉｖｏで腸への増強された取り込みを有する種々の生体接着性ポリマーを使用して作製されたナノ粒子を記載している。この粒子は、５〜２０重量パーセントの親水性ポリマー材料も含み得る。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】米国特許第８，６７３，３５９号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
臨床用途に有効な送達系の開発に対して多大な努力が注力されているが、薬物送達のための有効な系の開発において顕著な障害が存在する。薬剤を経口的に投与できるようにする、生物活性剤、特にタンパク質を安定化させるための改善された組成物および方法に対する必要性が依然として存在する。
【０００８】
したがって、本発明の目的は、その中に含まれる生物活性の活性薬剤に高度の安定性を付与する組成物を提供することである。
【０００９】
本発明の他の目的は、実質的な分解なしで胃を通過できる組成物を提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的は、生物活性剤を、従来技術の組成物より高い選択性で特定の組織系へ送達できる組成物を提供することである。
【００１１】
本発明のさらに他の目的は、そうした組成物を作製し使用する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
生物活性剤を送達するための組成物を本明細書で開示する。組成物は、従来技術において開示されている粒子に対して、生物活性剤についての高い貯蔵安定性を提供する結晶性マトリクスを含む。生物活性剤はマトリクス中に埋め込まれており、マトリクスは分解を促進する環境からそれらを有効に遮断する。マトリクスは、生物学的薬物およびワクチンなどの生物活性剤を安定化させるために使用し得る。
【００１３】
マトリクスは、経口投与後、実質的な分解なしで胃を通過できるので、それは胃にあるペプチダーゼ酵素かまたは低いｐＨによって分解され易いタンパク質および他の薬物を投与することができる。データによって示されるように、経口投与に続いて、マトリクスは、小腸中にあるパイエル板および腸間膜リンパ節によって優先的に吸収される。組成物中での他のポリマーの有無に応じて、マトリクス中に取り込まれた薬剤を、胃腸管に沿って組織に局所的にまたは全身的に送達することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、３つの貯蔵条件のそれぞれについて、０および３カ月の時間点でのブランク粒子の重ね合わせたＩＲスペクトルを表す図である。
【００１５】
【図２Ａ】図２Ａ〜Ｃは、新たに調製されたｍＴＧＦ−β１粒子を含む組成物に対して、異なる時間点（ｘ軸；週数で測定）で測定された、異なる条件（室温（バー中に斜線）、４℃（塗りつぶされたバー）および−２０℃（バー中に水平線））下で、貯蔵された粒子から放出されたｍＴＧＦ−β１の濃度（図２Ａ；ｙ軸はｎｇ／ｍｌでの［ＴＧＦβ−１］を表す）、放出されたｍＴＧＦ−β１の生物活性（図２Ｂ；ｙ軸は相対活性を表す）、および放出されたｍＴＧＦ−β１の比活性（図２Ｃ；ｙ軸はＴＧＦ  β−１の比活性を表す）を表す棒グラフである。
【図２Ｂ】図２Ａ〜Ｃは、新たに調製されたｍＴＧＦ−β１粒子を含む組成物に対して、異なる時間点（ｘ軸；週数で測定）で測定された、異なる条件（室温（バー中に斜線）、４℃（塗りつぶされたバー）および−２０℃（バー中に水平線））下で、貯蔵された粒子から放出されたｍＴＧＦ−β１の濃度（図２Ａ；ｙ軸はｎｇ／ｍｌでの［ＴＧＦβ−１］を表す）、放出されたｍＴＧＦ−β１の生物活性（図２Ｂ；ｙ軸は相対活性を表す）、および放出されたｍＴＧＦ−β１の比活性（図２Ｃ；ｙ軸はＴＧＦ  β−１の比活性を表す）を表す棒グラフである。
【図２Ｃ】図２Ａ〜Ｃは、新たに調製されたｍＴＧＦ−β１粒子を含む組成物に対して、異なる時間点（ｘ軸；週数で測定）で測定された、異なる条件（室温（バー中に斜線）、４℃（塗りつぶされたバー）および−２０℃（バー中に水平線））下で、貯蔵された粒子から放出されたｍＴＧＦ−β１の濃度（図２Ａ；ｙ軸はｎｇ／ｍｌでの［ＴＧＦβ−１］を表す）、放出されたｍＴＧＦ−β１の生物活性（図２Ｂ；ｙ軸は相対活性を表す）、および放出されたｍＴＧＦ−β１の比活性（図２Ｃ；ｙ軸はＴＧＦ  β−１の比活性を表す）を表す棒グラフである。
【００１６】
【図３】図３Ａおよび図３Ｂは、新たに調製されたＩＬ−１２粒子を含む組成物に対して、異なる時間点（ｘ軸、週数で測定）で測定された、異なる貯蔵条件（室温（左側のバー）；４℃（中央のバー）；および−２０℃（右側のバー））下で、マトリクスから、放出されたＩＬ−１２の濃度（図３Ａ  ｙ軸はｎｇ／ｍｌでの［ＩＬ−１２］を表す）および放出されたＩＬ−１２の生物活性（図３Ｂ；ｙ軸は、貯蔵されていない試料と比較した相対活性を表す）を表す棒グラフである。
【００１７】
【図４Ａ】図４Ａ〜Ｅは、低下したポリープ負荷（図４Ａ；ｙ軸はポリープの数を表す）、貧血（図４Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）、脾腫（図４Ｃ；ｙ軸は脾臓の組織学的スコアを表す）を表すグラフである。図４Ａ〜Ｃに関して、左側のデータセットは野生型マウス（ＷＴ）に対応し、中央のデータセットは対照マウス（対照）に対応し、右側のデータセットはＩＬ−１０負荷粒子（ＩＬ−１０）を施されたマウスに対応する。図４Ａに関して、数字は平均を示し；長方形は、中央値＋下位四分位点および上位四分位点での線を有し、延びているヒゲ（ｗｈｉｓｋｅｒ）は、残りのデータ（それぞれＷＴ、対照、ＩＬ−１０についてｎ＝５、９、９）を示す。図４Ｂに関して、それぞれＷＴ、対照およびＩＬ−１０についてｎ＝１０、１５、１３。図４Ｃに関して、脾臓の病理学的スコア（ｎは、パネルＡと同じである）および巨核細胞増加（ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｏｓｉｓ）（１０〜１２倍の高倍率視野にわたって、群当たりｎ＝３）を定量化した。図４Ｄは、マウスでのプラセボに対する、ＩＬ−１０負荷粒子の投与に伴う体重減少を表す（野生型（黒丸）についてｎ＝４、対照（白丸）についてｎ＝６およびＩＬ−１０（灰色丸）についてｎ＝６）（ｙ軸は出発重量に対する重量パーセントを表し、ｘ軸は週齢を表す）。対照治療群とＩＬ１０治療群との間の統計比較を行った。図４Ｅは、対照マウス（黒丸）に対して、ＩＬ−１０負荷粒子（白丸）を施されたマウスについての生存率を表す（ｙ軸は生存マウスのパーセンテージを表し、ｘ軸はマウス日齢を表す）。死亡率を、治療を受けていない（対照）または慢性ＩＬ−１０ミクロスフェア治療を受けたＡＰＣｍｉｎ／＋マウスについて決定した（それぞれｎ＝１３および１１）。図４Ａ〜Ｅにおいて、＊、＊＊、＊＊＊、＊＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、＜０．００１および＜０．０００１である。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図４Ｂ】図４Ａ〜Ｅは、低下したポリープ負荷（図４Ａ；ｙ軸はポリープの数を表す）、貧血（図４Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）、脾腫（図４Ｃ；ｙ軸は脾臓の組織学的スコアを表す）を表すグラフである。図４Ａ〜Ｃに関して、左側のデータセットは野生型マウス（ＷＴ）に対応し、中央のデータセットは対照マウス（対照）に対応し、右側のデータセットはＩＬ−１０負荷粒子（ＩＬ−１０）を施されたマウスに対応する。図４Ａに関して、数字は平均を示し；長方形は、中央値＋下位四分位点および上位四分位点での線を有し、延びているヒゲ（ｗｈｉｓｋｅｒ）は、残りのデータ（それぞれＷＴ、対照、ＩＬ−１０についてｎ＝５、９、９）を示す。図４Ｂに関して、それぞれＷＴ、対照およびＩＬ−１０についてｎ＝１０、１５、１３。図４Ｃに関して、脾臓の病理学的スコア（ｎは、パネルＡと同じである）および巨核細胞増加（ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｏｓｉｓ）（１０〜１２倍の高倍率視野にわたって、群当たりｎ＝３）を定量化した。図４Ｄは、マウスでのプラセボに対する、ＩＬ−１０負荷粒子の投与に伴う体重減少を表す（野生型（黒丸）についてｎ＝４、対照（白丸）についてｎ＝６およびＩＬ−１０（灰色丸）についてｎ＝６）（ｙ軸は出発重量に対する重量パーセントを表し、ｘ軸は週齢を表す）。対照治療群とＩＬ１０治療群との間の統計比較を行った。図４Ｅは、対照マウス（黒丸）に対して、ＩＬ−１０負荷粒子（白丸）を施されたマウスについての生存率を表す（ｙ軸は生存マウスのパーセンテージを表し、ｘ軸はマウス日齢を表す）。死亡率を、治療を受けていない（対照）または慢性ＩＬ−１０ミクロスフェア治療を受けたＡＰＣｍｉｎ／＋マウスについて決定した（それぞれｎ＝１３および１１）。図４Ａ〜Ｅにおいて、＊、＊＊、＊＊＊、＊＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、＜０．００１および＜０．０００１である。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図４Ｃ】図４Ａ〜Ｅは、低下したポリープ負荷（図４Ａ；ｙ軸はポリープの数を表す）、貧血（図４Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）、脾腫（図４Ｃ；ｙ軸は脾臓の組織学的スコアを表す）を表すグラフである。図４Ａ〜Ｃに関して、左側のデータセットは野生型マウス（ＷＴ）に対応し、中央のデータセットは対照マウス（対照）に対応し、右側のデータセットはＩＬ−１０負荷粒子（ＩＬ−１０）を施されたマウスに対応する。図４Ａに関して、数字は平均を示し；長方形は、中央値＋下位四分位点および上位四分位点での線を有し、延びているヒゲ（ｗｈｉｓｋｅｒ）は、残りのデータ（それぞれＷＴ、対照、ＩＬ−１０についてｎ＝５、９、９）を示す。図４Ｂに関して、それぞれＷＴ、対照およびＩＬ−１０についてｎ＝１０、１５、１３。図４Ｃに関して、脾臓の病理学的スコア（ｎは、パネルＡと同じである）および巨核細胞増加（ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｏｓｉｓ）（１０〜１２倍の高倍率視野にわたって、群当たりｎ＝３）を定量化した。図４Ｄは、マウスでのプラセボに対する、ＩＬ−１０負荷粒子の投与に伴う体重減少を表す（野生型（黒丸）についてｎ＝４、対照（白丸）についてｎ＝６およびＩＬ−１０（灰色丸）についてｎ＝６）（ｙ軸は出発重量に対する重量パーセントを表し、ｘ軸は週齢を表す）。対照治療群とＩＬ１０治療群との間の統計比較を行った。図４Ｅは、対照マウス（黒丸）に対して、ＩＬ−１０負荷粒子（白丸）を施されたマウスについての生存率を表す（ｙ軸は生存マウスのパーセンテージを表し、ｘ軸はマウス日齢を表す）。死亡率を、治療を受けていない（対照）または慢性ＩＬ−１０ミクロスフェア治療を受けたＡＰＣｍｉｎ／＋マウスについて決定した（それぞれｎ＝１３および１１）。図４Ａ〜Ｅにおいて、＊、＊＊、＊＊＊、＊＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、＜０．００１および＜０．０００１である。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図４Ｄ】図４Ａ〜Ｅは、低下したポリープ負荷（図４Ａ；ｙ軸はポリープの数を表す）、貧血（図４Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）、脾腫（図４Ｃ；ｙ軸は脾臓の組織学的スコアを表す）を表すグラフである。図４Ａ〜Ｃに関して、左側のデータセットは野生型マウス（ＷＴ）に対応し、中央のデータセットは対照マウス（対照）に対応し、右側のデータセットはＩＬ−１０負荷粒子（ＩＬ−１０）を施されたマウスに対応する。図４Ａに関して、数字は平均を示し；長方形は、中央値＋下位四分位点および上位四分位点での線を有し、延びているヒゲ（ｗｈｉｓｋｅｒ）は、残りのデータ（それぞれＷＴ、対照、ＩＬ−１０についてｎ＝５、９、９）を示す。図４Ｂに関して、それぞれＷＴ、対照およびＩＬ−１０についてｎ＝１０、１５、１３。図４Ｃに関して、脾臓の病理学的スコア（ｎは、パネルＡと同じである）および巨核細胞増加（ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｏｓｉｓ）（１０〜１２倍の高倍率視野にわたって、群当たりｎ＝３）を定量化した。図４Ｄは、マウスでのプラセボに対する、ＩＬ−１０負荷粒子の投与に伴う体重減少を表す（野生型（黒丸）についてｎ＝４、対照（白丸）についてｎ＝６およびＩＬ−１０（灰色丸）についてｎ＝６）（ｙ軸は出発重量に対する重量パーセントを表し、ｘ軸は週齢を表す）。対照治療群とＩＬ１０治療群との間の統計比較を行った。図４Ｅは、対照マウス（黒丸）に対して、ＩＬ−１０負荷粒子（白丸）を施されたマウスについての生存率を表す（ｙ軸は生存マウスのパーセンテージを表し、ｘ軸はマウス日齢を表す）。死亡率を、治療を受けていない（対照）または慢性ＩＬ−１０ミクロスフェア治療を受けたＡＰＣｍｉｎ／＋マウスについて決定した（それぞれｎ＝１３および１１）。図４Ａ〜Ｅにおいて、＊、＊＊、＊＊＊、＊＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、＜０．００１および＜０．０００１である。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図４Ｅ】図４Ａ〜Ｅは、低下したポリープ負荷（図４Ａ；ｙ軸はポリープの数を表す）、貧血（図４Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）、脾腫（図４Ｃ；ｙ軸は脾臓の組織学的スコアを表す）を表すグラフである。図４Ａ〜Ｃに関して、左側のデータセットは野生型マウス（ＷＴ）に対応し、中央のデータセットは対照マウス（対照）に対応し、右側のデータセットはＩＬ−１０負荷粒子（ＩＬ−１０）を施されたマウスに対応する。図４Ａに関して、数字は平均を示し；長方形は、中央値＋下位四分位点および上位四分位点での線を有し、延びているヒゲ（ｗｈｉｓｋｅｒ）は、残りのデータ（それぞれＷＴ、対照、ＩＬ−１０についてｎ＝５、９、９）を示す。図４Ｂに関して、それぞれＷＴ、対照およびＩＬ−１０についてｎ＝１０、１５、１３。図４Ｃに関して、脾臓の病理学的スコア（ｎは、パネルＡと同じである）および巨核細胞増加（ｍｅｇａｋａｒｙｏｃｙｔｏｓｉｓ）（１０〜１２倍の高倍率視野にわたって、群当たりｎ＝３）を定量化した。図４Ｄは、マウスでのプラセボに対する、ＩＬ−１０負荷粒子の投与に伴う体重減少を表す（野生型（黒丸）についてｎ＝４、対照（白丸）についてｎ＝６およびＩＬ−１０（灰色丸）についてｎ＝６）（ｙ軸は出発重量に対する重量パーセントを表し、ｘ軸は週齢を表す）。対照治療群とＩＬ１０治療群との間の統計比較を行った。図４Ｅは、対照マウス（黒丸）に対して、ＩＬ−１０負荷粒子（白丸）を施されたマウスについての生存率を表す（ｙ軸は生存マウスのパーセンテージを表し、ｘ軸はマウス日齢を表す）。死亡率を、治療を受けていない（対照）または慢性ＩＬ−１０ミクロスフェア治療を受けたＡＰＣｍｉｎ／＋マウスについて決定した（それぞれｎ＝１３および１１）。図４Ａ〜Ｅにおいて、＊、＊＊、＊＊＊、＊＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、＜０．００１および＜０．０００１である。エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【００１８】
【図５Ａ】図５Ａ〜Ｃは、ＩＬ−１０負荷粒子を施されたＴｒｅｇ枯渇マウス（ｎ＝４〜５）における、低下したポリープ負荷（図５Ａ、ｙ軸はポリープの数を表す）、貧血（図５Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）および脾臓の病理学的スコア（図５Ｃ；ｙ軸は脾臓の組織学的スコアを表す）を表す。１０週齢のＡＰＣ  ｍｉｎ／＋−ＤＥＲＥＧマウスに、対照またはＩＬ−１０ミクロ粒子治療と併せて、モック（ＰＢＳ）かまたは部分的（ｓｕｂｔｏｔａｌ）Ｔｒｅｇ枯渇（ＤＴ）を施した。治療期間の最後に疾患マーカーを定量化した。図５Ａ〜Ｃのそれぞれにおいて、一番左のデータセットは対照マウス（対照）に対応し、２番目のデータセットは対照＋Ｔｒｅｇ枯渇マウス（対照＋ＤＴ）に対応し、３番目のデータセットはＩＬ−１０粒子を施されたマウス（ＩＬ−１０）に対応し、一番右のデータセットはＩＬ−１０粒子を施されたＴｒｅｇ枯渇マウス（ＩＬ−１０＋ＤＴ）に対応する。図５Ａ〜Ｃにおいて、ｎ＝７〜８；＊、＊＊、＊＊＊、＊＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、＜０．００１、ｐ＜０．０００１；エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図５Ｂ】図５Ａ〜Ｃは、ＩＬ−１０負荷粒子を施されたＴｒｅｇ枯渇マウス（ｎ＝４〜５）における、低下したポリープ負荷（図５Ａ、ｙ軸はポリープの数を表す）、貧血（図５Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）および脾臓の病理学的スコア（図５Ｃ；ｙ軸は脾臓の組織学的スコアを表す）を表す。１０週齢のＡＰＣ  ｍｉｎ／＋−ＤＥＲＥＧマウスに、対照またはＩＬ−１０ミクロ粒子治療と併せて、モック（ＰＢＳ）かまたは部分的（ｓｕｂｔｏｔａｌ）Ｔｒｅｇ枯渇（ＤＴ）を施した。治療期間の最後に疾患マーカーを定量化した。図５Ａ〜Ｃのそれぞれにおいて、一番左のデータセットは対照マウス（対照）に対応し、２番目のデータセットは対照＋Ｔｒｅｇ枯渇マウス（対照＋ＤＴ）に対応し、３番目のデータセットはＩＬ−１０粒子を施されたマウス（ＩＬ−１０）に対応し、一番右のデータセットはＩＬ−１０粒子を施されたＴｒｅｇ枯渇マウス（ＩＬ−１０＋ＤＴ）に対応する。図５Ａ〜Ｃにおいて、ｎ＝７〜８；＊、＊＊、＊＊＊、＊＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、＜０．００１、ｐ＜０．０００１；エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図５Ｃ】図５Ａ〜Ｃは、ＩＬ−１０負荷粒子を施されたＴｒｅｇ枯渇マウス（ｎ＝４〜５）における、低下したポリープ負荷（図５Ａ、ｙ軸はポリープの数を表す）、貧血（図５Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）および脾臓の病理学的スコア（図５Ｃ；ｙ軸は脾臓の組織学的スコアを表す）を表す。１０週齢のＡＰＣ  ｍｉｎ／＋−ＤＥＲＥＧマウスに、対照またはＩＬ−１０ミクロ粒子治療と併せて、モック（ＰＢＳ）かまたは部分的（ｓｕｂｔｏｔａｌ）Ｔｒｅｇ枯渇（ＤＴ）を施した。治療期間の最後に疾患マーカーを定量化した。図５Ａ〜Ｃのそれぞれにおいて、一番左のデータセットは対照マウス（対照）に対応し、２番目のデータセットは対照＋Ｔｒｅｇ枯渇マウス（対照＋ＤＴ）に対応し、３番目のデータセットはＩＬ−１０粒子を施されたマウス（ＩＬ−１０）に対応し、一番右のデータセットはＩＬ−１０粒子を施されたＴｒｅｇ枯渇マウス（ＩＬ−１０＋ＤＴ）に対応する。図５Ａ〜Ｃにおいて、ｎ＝７〜８；＊、＊＊、＊＊＊、＊＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、＜０．００１、ｐ＜０．０００１；エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【００１９】
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｂは、ＩＬ−１０負荷粒子でのマウスの治療による、Ｔ細胞活性化（図６Ａ；ｙ軸は、１０００ＭＬＮ細胞当たりの全ＣＤ４５．１＋ＣＤ４＋細胞を表す）および増殖（図６Ｂ；ｙ軸は、ＩＦＮγを発現するＣＤ４５．１＋ＣＤ４＋ＭＬＮ細胞のパーセントを表す）の抑制を表す。図６Ａと図６Ｂの両方において、左側のデータセットはＴｒｅｇ枯渇なしのマウス（Ｔｒｅｇなし）に対応し、中央のセットはＴｒｅｇ枯渇有りのマウス（ＡＰＣｍｉｎ／＋対照Ｔｒｅｇ）に対応し、右側のデータセットはＩＬ−１０を施されたＴｒｅｇ枯渇有りのマウス（ＡＰＣｍｉｎ／＋ＩＬ−１０Ｔｒｅｇ）に対応する。図６Ａ〜Ｂについて、ｎ＝４〜５；＊、＊＊、＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１および＜０．００１；エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図６Ｂ】図６Ａ〜Ｂは、ＩＬ−１０負荷粒子でのマウスの治療による、Ｔ細胞活性化（図６Ａ；ｙ軸は、１０００ＭＬＮ細胞当たりの全ＣＤ４５．１＋ＣＤ４＋細胞を表す）および増殖（図６Ｂ；ｙ軸は、ＩＦＮγを発現するＣＤ４５．１＋ＣＤ４＋ＭＬＮ細胞のパーセントを表す）の抑制を表す。図６Ａと図６Ｂの両方において、左側のデータセットはＴｒｅｇ枯渇なしのマウス（Ｔｒｅｇなし）に対応し、中央のセットはＴｒｅｇ枯渇有りのマウス（ＡＰＣｍｉｎ／＋対照Ｔｒｅｇ）に対応し、右側のデータセットはＩＬ−１０を施されたＴｒｅｇ枯渇有りのマウス（ＡＰＣｍｉｎ／＋ＩＬ−１０Ｔｒｅｇ）に対応する。図６Ａ〜Ｂについて、ｎ＝４〜５；＊、＊＊、＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１および＜０．００１；エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【００２０】
【図７Ａ】図７Ａ〜７Ｃは、ＩＬ−１０負荷粒子を施されたマウスからの細胞を移植されたマウスにおける、低下したポリープ症（図７Ａ；ｙ軸はポリープの数を表す）、矯正された貧血（図７Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）および低いＴｈ１７（図７Ｃ；ｙ軸は全ＣＤ４＋細胞のＴｈ１７細胞のパーセントを表す）を表す。図７Ａ〜Ｃのそれぞれにおいて、一番左のデータセットはモック移入マウス（ｎ＝４）（モック移入）に対応し、２番目のデータセットはＴｒｅｇ枯渇マウスからの細胞を施されたマウス（ｎ＝８）（ＡＰＣｍｉｎ／＋対照Ｔｒｅｇ）に対応し、３番目のデータセットはＩＬ−１０粒子で予め治療されたＴｒｅｇ枯渇マウスからの細胞を施されたマウス（ｎ＝８）（ＡＰＣｍｉｎ／＋ＩＬ−１０  Ｔｒｅｇ）に対応する。図７Ａ〜Ｃについて、＊、＊＊、＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１および＜０．００１；エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図７Ｂ】図７Ａ〜７Ｃは、ＩＬ−１０負荷粒子を施されたマウスからの細胞を移植されたマウスにおける、低下したポリープ症（図７Ａ；ｙ軸はポリープの数を表す）、矯正された貧血（図７Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）および低いＴｈ１７（図７Ｃ；ｙ軸は全ＣＤ４＋細胞のＴｈ１７細胞のパーセントを表す）を表す。図７Ａ〜Ｃのそれぞれにおいて、一番左のデータセットはモック移入マウス（ｎ＝４）（モック移入）に対応し、２番目のデータセットはＴｒｅｇ枯渇マウスからの細胞を施されたマウス（ｎ＝８）（ＡＰＣｍｉｎ／＋対照Ｔｒｅｇ）に対応し、３番目のデータセットはＩＬ−１０粒子で予め治療されたＴｒｅｇ枯渇マウスからの細胞を施されたマウス（ｎ＝８）（ＡＰＣｍｉｎ／＋ＩＬ−１０  Ｔｒｅｇ）に対応する。図７Ａ〜Ｃについて、＊、＊＊、＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１および＜０．００１；エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【図７Ｃ】図７Ａ〜７Ｃは、ＩＬ−１０負荷粒子を施されたマウスからの細胞を移植されたマウスにおける、低下したポリープ症（図７Ａ；ｙ軸はポリープの数を表す）、矯正された貧血（図７Ｂ；ｙ軸はＲＢＣカウント数（×１０１２／Ｌ）を表す）および低いＴｈ１７（図７Ｃ；ｙ軸は全ＣＤ４＋細胞のＴｈ１７細胞のパーセントを表す）を表す。図７Ａ〜Ｃのそれぞれにおいて、一番左のデータセットはモック移入マウス（ｎ＝４）（モック移入）に対応し、２番目のデータセットはＴｒｅｇ枯渇マウスからの細胞を施されたマウス（ｎ＝８）（ＡＰＣｍｉｎ／＋対照Ｔｒｅｇ）に対応し、３番目のデータセットはＩＬ−１０粒子で予め治療されたＴｒｅｇ枯渇マウスからの細胞を施されたマウス（ｎ＝８）（ＡＰＣｍｉｎ／＋ＩＬ−１０  Ｔｒｅｇ）に対応する。図７Ａ〜Ｃについて、＊、＊＊、＊＊＊＝それぞれｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１および＜０．００１；エラーバー、ｓ．ｅ．ｍ。
【００２１】
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、それぞれ、純粋なＩＬ−１２およびマトリクス粒子から抽出されたＩＬ−１２からのクロマトグラムである。
【００２２】
【図９】図９は、純粋なＰＥＧ３３５０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７およびベンチスケールプロセスによって形成されたブランクマトリクス粒子のＰＸＲＤの重ね合わせを表す。
【００２３】
【図１０】図１０は、ブランク噴霧乾燥粒子（ＳＤブランク１、ＳＤブランク２、ＳＤブランク３、ＳＤブランク４、ＳＤブランク５およびＳＤブランク６）の６バッチ、ＴＧＦβ１を含む噴霧乾燥粒子（ＳＤ  ＴＧＦβ１）の１つのバッチ、凍結乾燥ステップ、続く濾過および回収ステップ（沈殿）を含むベンチスケールプロセスによって形成されたブランクマトリクス粒子（ベンチスケールブランク）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７、ＰＥＧ３３５０、ポリ乳酸（ＰＬＡ）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）のＰＸＲＤの重ね合わせを表す。
【発明を実施するための形態】
【００２４】
Ｉ．定義
本明細書で使用する「マトリクス」および「マトリクスエレメント」という用語は、ポリマー化合物の３次元ネットワークを指す。ポリマー化合物は、３次元ネットワーク内部への他の化合物の包含を可能にする仕方で配置されている。
【００２５】
本明細書で使用する「マトリクス形成ポリマー」という用語は、半結晶性マトリクスを形成できるポリマーを指す。マトリクス形成ポリマーは結晶化可能である。これは、それが半結晶状態で存在できることを意味する。
【００２６】
本明細書で使用する「半結晶性ポリマー」は、非晶相と結晶相の両方を含むポリマーを指す。ここで、ポリマー鎖の２〜９９（およびその間の整数値）％は、規則的配列で配向または整列している。実際には、ポリマーの形態が、１００％の結晶化度を達成する、すなわち、そのポリマー鎖のすべてが規則的配列で整列することは決してない。むしろ、ポリマーは、ポリマー鎖の一部は非晶相として公知であるランダムかまたは無秩序な状態にあるが、他のポリマー鎖は規則的配列で整列しているセグメントを含む。ポリマー鎖が規則的配列で配向または整列している度合いは、「結晶化度パーセント」として公知である。結晶化度パーセントは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）および粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）、またはＤＳＣとＰＸＲＤの組合せなどの２つの方法の組合せなどの標準的な方法を使用して決定することができ、これは、理論的な１００％結晶性のポリマーについての融解熱値の決定を可能にする。
【００２７】
半結晶性のポリマーまたはマトリクスは、図９に示されているものなどの１つまたは複数のシャープなピークを含むＰＸＲＤによって特徴付けられる。ＤＳＣによって特徴付けられる半結晶性のポリマーおよびマトリクスは、ガラス転移温度、融点および融解熱を示す。
【００２８】
対照的に、非晶質ポリマーまたはマトリクスをＰＸＲＤによって特徴付けた場合、得られるグラフは、図１０のＰＬＧＡについて示されるように、はっきりと異なるピークを何ら含まないハンプ（ｈｕｍｐ）を含む。ＤＳＣによって特徴付けられる非晶質ポリマーおよびマトリクスは、ガラス転移温度のみを有する。ＤＣＳは、非晶質ポリマーについて融点または融解熱を一切示さない。
【００２９】
本明細書で使用される「半結晶性マトリクス」は、「半結晶性ポリマー」に関して上記したような非晶相と結晶相の両方を含むマトリクスを指す。
【００３０】
「水溶性（ｗａｔｅｒ  ｓｏｌｕｂｌｅ）」は、マトリクスを形成する１種または複数のポリマーを指すために使用することができる。この関連で、水溶性は、中性ｐＨ、室温および大気圧で、ポリマーの少なくとも０．０１％ｗ／ｖが水または水性溶媒に溶解することを意味する。
【００３１】
本明細書で使用される「生体適合性（ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）」および「生物学的に適合している（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）」は、その任意の代謝物または分解生成物とあわせて、投与された材料の分解によってもたらされる濃度で、レシピエントに対して概ね非毒性であり、レシピエントに顕著な有害作用を及ぼさない材料を指す。一般的に言えば、生体適合性材料は、患者に投与した場合、顕著な炎症または免疫応答を誘発しない材料である。
【００３２】
本明細書で使用される「生分解性ポリマー（ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ｐｏｌｙｍｅｒ）」は、一般に、生理学的条件下で酵素作用または加水分解によって分解または腐食して、被験体により代謝される、排除される、または排出され得るより小さい単位または化学種になるポリマーを指す。分解時間は、ポリマー組成、多孔度、粒子寸法などの形態、および環境の関数である。
【００３３】
本明細書で使用される「平均粒子サイズ」は一般に、組成物中の粒子の統計的平均粒子サイズ（直径）を指す。粒子の第１の集団の統計的平均粒子サイズが粒子の第２の集団の統計的平均粒子サイズの２０％以内；より好ましくは１５％以内、最も好ましくは１０％以内である場合、２つの集団は「実質的に同等の平均粒子サイズ（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  ｍｅａｎ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｉｚｅ）」ということができる。
【００３４】
本明細書で使用する「ミクロ粒子」という用語は一般に、約１ミクロン〜約１００ミクロン、好ましくは約１〜約５０ミクロン、より好ましくは約１〜約３０ミクロン、最も好ましくは約１ミクロン〜約１０ミクロンの直径を有する粒子を指す。ミクロ粒子は任意の形状を有することができる。球形を有するミクロ粒子を「ミクロスフェア」と称することができる。
【００３５】
本明細書で使用する「ナノ粒子」という用語は一般に、約１ナノメートル〜１０００ナノメートル、好ましくは約１０ナノメートル〜１０００ナノメートル、より好ましくは約１００ナノメートル〜１０００ナノメートル、最も好ましくは約２５０ナノメートル〜１０００ナノメートルの直径を有する粒子を指す。ナノ粒子は任意の形状を有することができる。球形を有するナノ粒子を「ナノスフェア」と称することができる。
【００３６】
ＩＩ．組成物
組成物は、マトリクスおよび生物活性剤を含む。マトリクスは生物活性剤を安定化させるために構成され、生物活性剤が、酵素および／または酸性のｐＨによって分解することから保護する。マトリクスは、少なくとも１種の半結晶性の水溶性ポリマーから作製される。一般に、マトリクスは、少なくとも３０％ｗｔ／ｗｔの量で存在する１種または複数の半結晶性ポリマーを含む。好ましい実施形態では、生物活性剤は、マトリクスに取り込まれている、それと同伴している（ｅｎｔｒａｉｎ）、またはその他の方法でそれと会合している。この生物活性剤は一般に、ミクロ微粒子またはナノ微粒子の形態で存在する。
【００３７】
マトリクスは、任意の形態を有することができるが、一般に、複数の粒子の形態で存在する。粒子は、所望の送達方法のために適切な任意のサイズのものであってよい。粒子の直径は、１ｎｍ〜１０００μｍ、より好ましくは１００ｎｍ〜１０００μｍ、さらにより好ましくは１〜１０００μｍであることが好ましい。
【００３８】
粒子サイズの分析は、コールターカウンター、光学顕微鏡、走査電子顕微鏡、透過型電子顕微鏡、レーザー回折方法、例えばＭａｌｖｅｒｎ  Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒを使用する方法、光散乱方法または飛行時間型方法によって実施することができる。本明細書で使用される「コールター方法」は、粉末を電解質中に分散させ、得られた懸濁物を、５０μｍアパーチャーチューブを備えたＣｏｕｌｔｅｒ  Ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ  ＩＩを使用して分析する方法を指す。この方法によって、サイズ測定値および粒子濃度が得られる。
【００３９】
組成物は、１種または複数の追加の生体適合性ポリマーも含み得る。他の生体適合性ポリマーはマトリクスの一部であっても、また、それがマトリクスと別個であってもよい。追加のポリマーは、非結晶性（非晶質）または半結晶性であってよい。追加のポリマーは、生分解性、生体内分解性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）および／または生体接着性であってよい。
【００４０】
組成物は、１種または複数の安定剤、カプセル化剤および染料またはその任意の組合せも含むことができる。
【００４１】
Ａ．マトリクス
１．半結晶性の水溶性ポリマー
マトリクスは、半結晶性の水溶性ポリマーである少なくとも１つのマトリクス形成ポリマーを含む。本明細書で使用する「マトリクス形成ポリマー」という用語は、単一のポリマー、および２種もしくはそれ超のポリマーの混合物を含む。代表的なマトリクス形成ポリマーには、これらに限定されないが、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポロクサマー、ポリビニルアルコール、ヒドロキシアルキルセルロース、カラギーナンおよびそのコポリマーが含まれる。他の半結晶性の水溶性ポリマーには、これらに限定されないが、ポリビニルアルコール、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリソルベート、ポリオキシエチレン−脂肪酸コポリマーおよびアルギネートが含まれる。代表的なポリオキシエチレン−脂肪酸コポリマーには、これらに限定されないが、ポリオキシエチレン（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｌｅｎｅ）モノおよびジステアレートが含まれる。
【００４２】
実施例において示されるように、得られるマトリクスは、異なるポリマー（例えば、ＰＬＡ、ＰＬＧＡ、Ｐ（ＦＡＳＡ）、ＰＳおよび／またはＰＣＬ）でフィルムキャスティングした後でも半結晶性である。ＰＬＡ（ポリ（乳酸））、Ｐ（ＦＡＳＡ）（ポリ（フマル酸−ｃｏ−セバシン酸無水物））およびポリスチレンなどの非晶質ポリマーをマトリクス形成ポリマーに溶解してそれと混合し、次いで、溶媒キャスティングするか、または、実施例１に記載されているような沈殿、または噴霧乾燥（実施例１３を参照されたい）などの溶媒を蒸発させるための他の任意の方法によって製作した場合、得られるマトリクスは半結晶性である。これは、マトリクス形成ポリマーの少なくとも１つの融点の存在、融解熱の存在およびＰＸＲＤ分析によって実証された。
【００４３】
本明細書で示されるように、ＰＥＧでできたマトリクスは、約６０℃のＴＭおよび約７３Ｊ／ｇの融解熱を有する半結晶性のものである。Ｆ１２７でできたマトリクスは、約４９℃のＴＭおよび約４７Ｊ／ｇの融解熱を有する半結晶性のものである。ＰＥＧ、Ｆ１２７およびこれらのポリマーを含む混合物のＴＭおよび融解熱を比較して、試料の結晶化度の差を確認することができる。ＰＸＲＤでは、各相は、特有の回折パターンを生み出す。適切なソフトウェアパッケージを使用して、回折グラフにおいて、規則的に配置された相を非晶相から分離することができる。各回折パターンの全面積を決定する。結晶化度は、規則的に配置された相の回折パターンの面積を、両方の相の面積の和で除すことによって決定される。ＰＥＧ、Ｆ１２７およびこれらのポリマーを含む混合物の回折パターンを、試料の結晶化度の差を比較して確認する、すなわち、これらのポリマーを含むマトリクスが半結晶性であるかまたは非晶質であるかを決定することができる。
【００４４】
マトリクスが非晶質であるかまたは半結晶性であるかは、ＤＳＣ、ＰＸＲＤまたはその両方を使用して決定することができる。例えば、半結晶性マトリクスは、そのマトリクスを形成する半結晶性および結晶性の材料に対応する、１つまたは複数のシャープなピークを含むＰＸＲＤによって特徴付けられる。半結晶性マトリクスは、ＤＳＣにより、ガラス転移温度、融点および融解熱によっても特徴付けることができる。
【００４５】
対照的に、非晶質マトリクスは、図１０のＰＬＧＡ試料で示されるように、はっきりと異なるピークを何ら含まずに、ハンプを含むＰＸＲＤスキャンによって特徴付けられる。また、非晶質マトリクスは、ＤＳＣにより、ガラス転移温度のみは有するが、融点も融解熱もないことによって特徴付けられる。
【００４６】
結晶化度パーセントは、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）および粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）または、ＤＳＣとＰＸＲＤの組合せなどの２つの方法の組合せなどの標準的な方法を使用して決定することもできる。これは、理論的な１００％結晶性のポリマーについての融解熱値の決定および結晶化度パーセントの計算を可能にする。マトリクスの結晶化度パーセントは、２〜９９％、５〜９０％、５〜８０％、５％〜７０％、１０〜９０％、１０〜８０％、１０〜７０％、１５〜９０％、１５〜８０％、１５〜７０％、２０〜９０％、２０〜８０％、２０〜７０％、２５〜９０％、２５〜８０％、２５〜７０％、３０〜９０％、３０〜８０％または３０〜７０％であってよい。マトリクスの結晶化度は、１０〜８０％、より好ましくは２０〜７０％の範囲であることが好ましい。
【００４７】
ある特定の好ましい実施形態では、ポリアルキレングリコールは、２００〜１０，０００ダルトン、好ましくは５００〜５，０００ダルトン、より好ましくは１，０００〜５，０００ダルトン、さらにより好ましくは２，０００〜４，５００ダルトンの範囲の平均分子量を有する。ポリアルキレングリコールはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であることが好ましい。特に好ましいＰＥＧには、ＰＥＧ３０００、３２５０、３３５０、３５００、３７５０、４０００および４５００が含まれる。
【００４８】
マトリクス形成ポリマーは、コポリマー、好ましくはブロックコポリマーであってよい。例示的なブロックコポリマーには、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールの混合物が含まれる。好ましいブロックコポリマーには、ポロクサマー（すなわち、各末端でポリエチレングリコール鎖に連結された中央のポリプロピレングリコール鎖を有するブロックコポリマー）が含まれる。これらのポリマーは、一般に、ＳＹＮＰＥＲＯＮＩＣ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）、およびＫＯＬＬＩＰＨＯＲ（登録商標）の商品名のもとで市販されている。特に好ましいポロクサマー化合物にはＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７が含まれる。
【００４９】
マトリクスは、２種またはそれ超のマトリクス形成ポリマーを含むことができる。ある特定の実施形態では、マトリクスは、少なくとも１つのポリエチレングリコールおよび少なくとも１つのポロクサマーを含む。特に好ましい実施形態では、マトリクスは、ＰＥＧ３３５０および／またはＰＥＧ４５００およびＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７を含む。
【００５０】
一般に、マトリクス形成ポリマーは、室温で固体であり、少なくとも４０℃の融点を有し、少なくとも１５Ｊ／ｇの融解熱によって特徴付けられる。他の実施形態では、融解熱は少なくとも２０Ｊ／ｇ、好ましくは２５Ｊ／ｇ、より好ましくは３０Ｊ／ｇである。
【００５１】
一般に、マトリクス形成ポリマーは、室温および基準圧力で少なくとも５０％ｗ／ｗの水溶解度によって特徴付けられる。ある特定の実施形態では、水溶解度は室温で５０〜８０％ｗ／ｗであり、他の実施形態では、マトリクス形成ポリマーは、室温および基準圧力で水に完全に可溶性（１００％ｗ／ｗ）である。
【００５２】
一般に、半結晶性ポリマーは、マトリクスの少なくとも３０重量％を構成する。ある特定の好ましい実施形態では、半結晶性ポリマーは、マトリクスの少なくとも３５％、４０％または５０重量％を構成し、さらにより好ましくはマトリクスの少なくとも６５重量％を構成する。特に好ましい実施形態では、半結晶性ポリマーは、マトリクスの少なくとも７５重量％を構成する。
【００５３】
Ｂ．生物活性剤
マトリクスは生物活性剤を含むことができる。例示的な生物活性剤のクラスには、治療剤、予防剤および診断剤が含まれる。例えば、生物活性剤は、小分子薬物、生物学的薬物、ワクチン、タンパク質、抗体または他の生体高分子であってよい。生物活性剤は、上記に挙げたものなどの２種またはそれ超の異なる化合物の混合物であってよい。
【００５４】
マトリクス中に組み込むことができる例示的な生物活性剤には、これらに限定されないが、腫瘍抗原、ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープ、サイトカイン、化学療法剤、放射性核種、小分子シグナル伝達阻害剤、光熱アンテナ（ｐｈｏｔｏｔｈｅｒｍａｌ  ａｎｔｅｎｎａ）、モノクローナル抗体、免疫学的危険シグナル伝達分子（ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ  ｄａｎｇｅｒ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）、他の免疫治療剤、酵素、抗生物質、抗ウイルス剤（特に、単独か、またはＨＩＶまたはＢ型もしくはＣ型肝炎の治療のためのヌクレオシドとの併用でのプロテアーゼ阻害剤）、抗寄生生物剤（蠕虫、原生動物）、増殖因子（例えば、ＴＧＦβスーパーファミリーのメンバー）、成長阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、抗体およびその生物活性断片（ヒト化された一本鎖およびキメラの抗体を含む）、抗原およびワクチン処方物（アジュバントを含む）、ペプチド薬物、抗炎症剤、免疫調節物質（トール様受容体と結合して自発的免疫系を活性化するリガンド（これに限定されないが、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む）、適応免疫系を動員し最適化する分子、細胞傷害性Ｔリンパ球、ナチュラルキラー細胞およびヘルパーＴ細胞の作用を活性化または上方制御する分子、および、抑制性または制御性Ｔ細胞を非活性化または下方制御する分子を含む）、ミクロ粒子の細胞（樹状細胞および他の抗原提示細胞を含む）中への取り込みを促進する薬剤、ビタミンなどの栄養補助食品（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）、ならびにオリゴヌクレオチド薬物（ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンス、アプタマー、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、リボザイム、リボヌクレアーゼＰのための外部ガイド配列および三重鎖形成剤を含む）が含まれる。
【００５５】
例示的な診断剤には、常磁性分子、蛍光化合物、磁性分子、および放射性核種、Ｘ線イメージング剤および造影剤が含まれる。
【００５６】
生物活性剤は、１種または複数の免疫調節剤であってよい。例示的な免疫調節剤には、サイトカイン、キサンチン、インターロイキン、インターフェロン、オリゴデオキシヌクレオチド、グルカン、増殖因子（例えば、ＴＮＦ、ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＧ−ＣＳＦ）、ホルモン、例えばエストロゲン（ジエチルスチルベストロール、エストラジオール）、アンドロゲン（テストステロン、ＨＡＬＯＴＥＳＴＩＮ（登録商標）（フルオキシメステロン））、プロゲスチン（ＭＥＧＡＣＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＰＲＯＶＥＲＡ（登録商標）（酢酸メドロキシプロゲステロン））およびコルチコステロイド（プレドニゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン）が含まれる。
【００５７】
マトリクスと関連付けることができる免疫学的アジュバントの例には、これらに限定されないが、ＴＬＲリガンド、Ｃ型レクチン受容体リガンド、ＮＯＤ様受容体リガンド、ＲＬＲリガンドおよびＲＡＧＥリガンドが含まれる。ＴＬＲリガンドは、リポ多糖（ＬＰＳ）およびその誘導体、ならびにリピドＡおよびその誘導体、例えば、これに限定されないが、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、グリコピラノシルリピドＡ、ＰＥＴ−リピドＡおよび３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡを含むことができる。特定の実施形態では、免疫学的アジュバントはＭＰＬである。別の実施形態では、免疫学的アジュバントはＬＰＳである。ＴＬＲリガンドは、これらに限定されないが、ＴＬＲ３リガンド（例えば、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸（ポリ（Ｉ：Ｃ））、ＴＬＲ７リガンド（例えば、イミキモドおよびレシキモド）およびＴＬＲ９リガンドを含むこともできる。
【００５８】
マトリクスは、抗原および／またはアジュバント（すなわち免疫応答を増進させる分子）を含むこともできる。ペプチド、タンパク質およびＤＮＡをベースとするワクチンは、種々の疾患または状態に対する免疫を誘発させるために使用し得る。ＤＮＡをベースとするワクチンには、２つの主要成分、ＤＮＡ担体（または送達ビヒクル）および抗原をコードするＤＮＡが含まれる。ＤＮＡ担体は、ＤＮＡを分解から保護し、特定の組織または細胞へのＤＮＡ侵入および効率的なレベルでの発現を容易にする。
【００５９】
好ましい治療用タンパク質には、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、アレムツズマブ（いくつかの商品名のもとで販売されている）、ブロダルマブ（Ａｍｇｅｎによって開発された）、デノスマブ（ＰＲＯＬＩＡ（登録商標）およびＸＧＥＶＡ（登録商標））、ベリムマブ（ＢＥＮＬＹＳＴＡ（登録商標））、ゴリムマブ（ＳＩＭＰＯＮＩ  ＡＲＩＡ（登録商標））、アブシキシマブ（ＲＥＯＰＲＯ（登録商標））、ＢＥＸＸＡＲ（登録商標）として販売されているトシツモマブとヨウ素−１３１トシツモマブの組合せ、アレムツズマブ（ＣＡＭＰＡＴＨ（登録商標））、パリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））、パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標））、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標））、バシリキシマブ（ＳＩＭＵＬＥＣＴ（登録商標））、ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標））、ペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標））、カプロマブペンデチド（ＰＲＯＳＴＡＳＣＩＮＴ  ＫＩＴ（登録商標））、ダクリズマブ（ＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））、エクリズマブ（ＳＯＬＩＲＩＳ（登録商標））、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、ムロモナブ−ＣＤ３（ＯＲＴＨＯＣＬＯＮＥ  ＯＫＴ３（登録商標））、ラキシバクマブ、ニモツズマブ（ＴＨＥＲＡＣＩＭ（登録商標））、ブレンツキシマブベドチン（ＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標））、アスパラギナーゼ・エルウィニア・クリサンテミ（ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ  ｅｒｗｉｎｉａ  ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）（ＥＲＷＩＮＡＺＥ（登録商標））、インコボツリナムトキシンＡ（ＸＥＯＭＩＮ（登録商標））、ペグロチカーゼ（ＫＲＹＳＴＥＸＸＡ（登録商標））、アボボツリヌストキシンＡ（ＤＹＳＰＯＲＴ（登録商標））、アルグルコシダーゼアルファ（ＬＵＭＩＺＹＭＥ（登録商標））、ジブ−アフリベルセプト（ＺＡＬＴＲＡＰ（登録商標））、アルテプラーゼ（ＡＣＴＩＶＡＳＥ（登録商標））、グルカルピダーゼ（ＶＯＲＡＸＡＺＥ（登録商標））、ベドリズマブ、ラムシルマブ、オビヌツズマブ、モキセツモマブシュードトクス（ｍｏｘｅｔｕｍｏｍａｂ  ｐａｓｕｄｏｔｏｘ）、チルドラキズマブ（ｔｉｌｄｒａｋｉｚｕｍａｂ）、リロツムマブ、ＡＭＧ１４５、エロツズマブ、エプラツズマブ、ファーレツズマブ、ガンテネルマブ、ゲボキズマブ、イノツズマブオゾガマイシン、イトリズマブ、イクセキズマブ、レブリキズマブ、メポリズマブ、ナプツモマブ・エスタフェナトクス、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オクレリズマブ、オナルツズマブ、ラコツモマブ（ｒａｃｏｔｕｍｏｍａｂ）、ラムシルマブ、レスリズマブ、ロモソズマブ、サリルマブ、セクキヌマブ、シルクマブ（ｓｉｒｕｋｕｍａｂ）、ソラネズマブ、タバルマブ（ｔａｂａｌｕｍａｂ）、ベドリズマブ、トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標））、ＭＡＢｐ１、エボロクマブ、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、クラザキズマブ（Ｃｌａｚａｋｉｚｕｍａｂ）、ＣＮＴＯ−１３６（シルクマブ）、ＣＮＴＯ−１９５９、カナキヌマブ、マブリリムマブ（Ｍａｖｒｉｌｉｍｕｍａｂ）、オロキズマブ（Ｏｌｏｋｉｚｕｍａｂ）、オゾラリズマブ（Ｏｚｏｒａｌｉｚｕｍａｂ）、ロンタリズマブ（Ｒｏｎｔａｌｉｚｕｍａｂ）シファリムマブ（Ｓｉｆａｌｉｍｕｍａｂ）、フェロポーチン、ヘプシジンｍＡｂ、エナバツズマブ（ｅｎａｖａｔｕｚｕｍａｂ）、ボロシキシマブ、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）（エタネルセプト）、ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）（アダリムマブ）、ＳＩＭＰＯＮＩ（登録商標）（ゴリムマブ）、ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）（パリビズマブ）、ＥＰＯＧＥＮ（登録商標）（エポエチンアルファ）、ＰＲＯＣＲＩＴ（登録商標）（エポエチンアルファ）、ＡＲＡＮＥＳＰ（登録商標）、（ダルベポエチンアルファ）、ＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標）（アバタセプト）、ＢＡＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）（インターフェロンベータ−１ｂ）、ＸＯＬＡＩＲ（登録商標）（オマリズマブ）、ＳＴＥＬＥＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）、エボロクマブ、ブロダルマブ、ロモソズマブ、デノスマブ、シルクマブ、ダクリズマブ、アレムツズマブ、サリルマブ、アリロクマブ、ボコシズマブ、タネズマブ、チルドラキズマブ、レブリキズマブおよびガンテネルマブ、アルグルコシダーゼアルファ（ＬＵＭＩＺＹＭＥ（登録商標））、ウシ・ペグアデマーゼ（Ｐｅｇｄａｍａｓｅ  ｂｏｖｉｎｅ）（ＡＤＡＧＥＮ（登録商標））、α−ガラクトシダーゼ、アガルシダーゼアルファ（ＲＥＰＬＡＧＡＬ（登録商標））、アガルシダーゼベータ（ＦＡＢＲＡＺＹＭＥ（登録商標））、ラスブリカーゼ（ＥＬＩＴＥＫ（登録商標））、イミグルセラーゼ（ＣＥＲＥＺＹＭＥ（登録商標））、タリグルセラーゼアルファ（ＥＬＥＹＳＯ（登録商標））、ラロニダーゼ（ＡＬＤＵＲＡＺＹＭＥ（登録商標））、エロスルファーゼアルファ（Ｅｌｏｓｕｆａｓｅ  ａｌｆａ）（ＶＩＭＩＺＩＭ（登録商標））、ビブリオリシン（Ｖｉｂｒｉｏｌｙｓｉｎ）、セルトリズマブペゴル（ＣＩＭＺＩＡ（登録商標））、Ｎａｇｌａｚｕｍｅ（ガルスルファーゼ）；エラプラーゼ（イデュルスルファーゼ）；ミオザイム（アルグルコシダーゼアルファ（ａｌｇｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ａｌｆａ））；ＶＰＲＩＶ（ベラグルセラーゼ）ＢＭＮ−１９０；ＢＭＮ−２５０；ラマザイム（Ｌａｍａｚｙｍｅ）；ガラザイム（Ｇａｌａｚｙｍｅ）；ＺＡ−０１１；セベリパーゼアルファ；ＳＢＣ−１０３；ＨＧＴ−１１１０；Ｒｅｐｌａｇａｌ、ミガラスタト、Ａｌｚｕｍａｂ、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ、Ａｒｚｅｒｒａ、Ｋａｄｃｙｌａ、Ｐｅｒｊｅｔａ、ＢＩＯＭＡＢ  ＥＧＦＲ、Ａｄｃｅｔｒｉｓ、Ｇａｚｙｖａ、Ｃａｍｐａｔｈ、Ｓｉｍｕｌｅｃｔ、Ｚｅｎａｐａｘ、Ｚｅｖａｌｉｎ、Ｙｅｒｖｏｙ、Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎ��  ＯＫＴ３、ラキシバクマブ、Ｋｒｙｓｔｅｘｘａ、Ｂｅｘｘａｒ、Ｓｏｌｉｒｉｓ、ベドリズマブ、ラムシルマブ、ＸｉｌｏｎｉｘＭＡＢｐ１、エプラツズマブ、ファーレツズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オクレリズマブ、オナルツズマブ、ラムシルマブ、レスリズマブ、ソラネズマブ、ベドリズマブ、Ａｌｐｒｏｌｉｘ／ｒＦＩＸＦｃ、Ｅｌｏｃｔａｔｅ／ｒＦＶＩＩＩＦｃ、ＧＡ１０１、イノツズマブオゾガマイシン、ダラツムマブ、シルツキシマブ、エロツズマブ、ＡＬＸ−００６１、ＡＬＸ−０９６２、ＡＬＸ−０７６１、ＢＩ  １０３４０２０、ビマグルマブ（Ｂｉｍａｇｕｍａｂ）（ＢＹＭ３３８）、ＣＴ−０１１、アクトクスマブ／ベズロトクスマブ（ＭＫ−３５１５Ａ）、ＭＫ−３４７５、ダロツズマブ、ＡＭＧ１３９、ＡＭＧ５５７、ＡＭＧ７２９、ＡＭＧ１５７、ＡＭＧ７８０、ＡＭＧ８２０、ＡＭＧ８１１、ＢＩＩＢ０３３、ＡＧＳ−００９、エプラツズマブ、ＭＥＤＩ−５４６、ＭＥＤＩ−５５１、ＰＤ０３６０３２４、ＰＦ０５２８０５８６、ＳＡＲ１５６５９７、ＳＡＲ３３９６５８、デュピルマブ、ＳＡＲ２５６２１２、ＳＡＲ２７９３５６、ＳＡＲ３４１９、ＳＡＲ１５３１９２（エノチクマブ（ｅｎｏｔｉｃｕｍａｂ））、ＳＡＲ６５０９８４、ＳＡＲ５６６６５８、ＳＡＲ３０７７４６（ネスバクマブ（Ｎｅｓｖａｃｕｍａｂ））、ＳＡＲ３９１７８６、ＳＡＲ２２８８１０、ＳＡＲ２５２０６７、ＳＡＲ１１３２４４、シファリムマブ（Ｓｉｆａｌｉｍｕｍａｂ）、８Ｈ９、ｃｈ１４．１８、ＡＢＴ−８０６、エナバツズマブ（Ｅｎａｖａｔｕｚｕｍａｂ）、ボロシキシマブ（）（Ｍ２００）、アクチマブ（Ａｃｔｉｍａｂ）−Ａ（Ｍ１９５）、イオマブ（Ｉｏｍａｂ）−Ｂ、ＡＳＧ−５ＭＥ、ＡＳＧ−２２ＭＥ、ボレツズマブマホドチン（Ｖｏｒｅｔｕｚｕｍａｂ  ｍａｆｏｄｏｔｉｎ）、ＡＬＴ−８３６、ＤＥＤＮ６５２６Ａ、ＤＦＲＦ４５３９Ａ、ＭＩＮＴ１５２６Ａ、ＢＭＳ−９８２４７０、リリルマブ（Ｌｉｒｉｌｕｍａｂ）、ウレルマブ（Ｕｒｅｌｕｍａｂ）、ＡＰＮ３０１、ＡＶ−２０３、ＢＡＹ７９−４６２０、ＢＡＹ２０−１０１１２、ＢＨＱ８８０、２１２−ＰｂＴＣＭトラスツズマブ、ＡｂＧｎ−７、ＳＧＮ−ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ−ＣＤ３３Ａ、ＳＧＮ−ＬＩＶ１Ａ、ＡＳＧ１５ＭＥ、抗Ｌｉｎｇｏ、Ｂ１１Ｂ０３７、抗ＴＷＥＡＫ、ＡＬＸＮ１００７、テプロツムマブ（Ｔｅｐｒｏｔｕｍｕｍａｂ）、アンルキンズマブ（Ａｎｒｕｋｉｎｚｕｍａｂ）（ＩＭＡ−６３８）、ＰＦ−０５２８５４０１、ポネズマブ（ＰＦ−０４３６０３６５）、ＰＦ−０３４４６９６２、ＰＦ−０５２３１０２３、ＲＮ３１７（ＰＦ−０５３３５８１０）、デカビル（Ｄｅｋａｖｉｌ）、ＰＦ−０６３４２６７４、ＰＦ−０５２３６８１２（ＡＡＢ−００３）、ＰＦ−０５０８２５６６、ＰＦ−０６２６３５０７、ＰＦ−０５２３０９０７、ＰＦ０５２８０６０２、ＰＦ０６２５２６１６、ＲＧ７１１６、ＲＧ７１５５、ＲＧ７２１２、ＲＧ７２２１、ＲＧ７３５６、ＲＧ７４４６、ＲＧ７４５０、ＲＧ７４５８、ＲＧ７５９８、ＲＧ７５９９、ＲＧ７６００、ＲＧ７６３６、ＲＧ７８４２、ＲＧ７４４６、ＲＧ７５９３、ＲＧ７５９６、ＲＧ７５９７、ＲＧ��６８６、ＲＧ７６２４ｄ、ＣＨＵ、エトロリズマブ（Ｅｔｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、クイリズマブ（ｑｕｉｌｉｚｕｍａｂ）、ラニビズマブ、ランパリズマブ（ｌａｍｐａｌｉｚｕｍａｂ）、インクラクマブ（ｉｎｃｌａｃｕｍａｂ）、ＲＧ７６５２、ガンテネルマブ（Ｇｅｎｔｅｎｅｒｕｍａｂ）、クレネズマブ、ＨｕＭａｘＴＦＡＤＣ、ＭＯＲ１０３、ＢＴ０６１、ＭＯＲ２０８、ＯＭＰ５９Ｒ５、ＶＡＹ７３６、ＭＯＲ２０２、ＢＡＹ９４／９３４３、ＬＪＭ７１６、バンチクツマブ（Ｖａｎｔｉｃｔｕｍａｂ）、デムシズマブ（Ｄｅｍｃｉｚｕｍａｂ）、ＯＭＰ５２Ｍ５１、ＯＭＰ５４Ｆ２８、オザネズマブ（Ｏｚａｎｅｚｕｍａｂ）、マパツズマブ、ＧＳＫ９３３７７６、ＧＳＫ２４９３２０、ＧＳＫ１０７０８０６、ＧＳＫ１９９５０５７、ＮＮ８８２８、コンシズマブ（Ｃｏｎｃｉｚｕｍａｂ）、ＮＮ８２１０、ＮＮ８７６５、ＭＥＤＩ４８９３、ＭＥＤＩ５７３、トレメリムマブ、ＭＥＤＩ０６３９、ＭＥＤＩ３６１７、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＥＤＩ６４６９、ＭＥＤＩ０６８０、ＭＥＤＩ２０７０、ＭＥＤＩ５８７２、トラロキヌマブ（Ｔｒａｌｏｋｉｎｕｍａｂ）、ＸｍＡｂ５８７１、ＸｍＡｂ７１９５、ＢＡＹ１１７９４７０、ＣＥＰ−３７２５０／ＫＨＫ２８０４、シズツムマブ、ＩＭＣ−３Ｇ３、ＩＭＣ−１８Ｆ１；イクルクマブ、ＩＭＣ−ＲＯＮ８；ナルナツマブ（Ｎａｒｎａｔｕｍａｂ）、ＩＭＣ−３５Ｃ、ＩＭＣ−２０Ｄ７Ｓ、ＡＧＳ−１６Ｍ８Ｆ  ＡＧＳ−１６Ｃ３Ｆ、ＬＹ２５４１５４６、シズツムマブ、ＬＹ３０１６８５９、ＬＹ２４９５６５５、オララツマブ（ＬＹ３０１２２０７ＬＹ２８７５３５８、ＬＹ２８１２１７６、イルクマブ（Ｉｒｕｃｕｍａｂ）（ＩＭＣ−１８Ｆ１）、ベルツズマブ、フルラヌマブ（Ｆｕｌｒａｎｕｍａｂ）、ナミルマブ（ｎａｍｉｌｕｍａｂ）、ＶＲＳ−３１７ＧＨ−ＸＴＥＮ；第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子；ＶＥＲＳ−８５９  エクステンジン４−ＸＴＥＮ（Ｅｘｔｅｎｄｉｎ４−ＸＴＥＮ）；ＡＭＸ−２５６ＧＬＰ２−２ＧＸＴＥＮ；ＡＭＸ−１７９ゴレート（Ｇｏｌａｔｅ）−ＸＴＲＥＮ−ＤＭ１が含まれる。
【００６０】
特に好ましいタンパク質には、ＰＤＧＦ、ＳＤＦ−１、ＶＥＧＦ、インスリン、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１０、ＧＬＰ−１、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−αおよびＴＧＦ−β１が含まれる。
【００６１】
ある特定の実施形態では、生物活性剤は、クローン病の治療のための薬剤である。例示的な薬剤には、これらに限定されないが、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ、ナタリズマブ、ベドリズマブ、Ｊ６９５、ゴリムマブ、ＣＤＰ−８７０、ＡＭＧ−１８１およびウステキヌマブが含まれる。
【００６２】
他の実施形態では、治療剤は小分子である。例示的な小分子には、これらに限定されないが、ステロイド、アントラサイクリン、例えばドキソルビシンおよびダウノルビシン、スルファサラジン、グリセオフルビンおよび関連化合物、例えばグリセオビリジン（ｇｒｉｓｅｏｖｅｒｄｉｎ）；いくつかの抗マラリア薬（例えば、アトバクオン）；免疫系修飾因子（例えば、シクロスポリン）；および心臓血管薬（例えば、ジゴキシンおよびスピロノラクトン）；およびイブプロフェン（鎮痛薬）；リトナビル、ネビラピン、ロピナビル（抗ウイルス剤）；クロファジミン（ｃｌｏｆａｚｉｎｉｎｅ）（抗らい菌薬）；ジロキサニドフロエート（抗アメーバ剤）；グリベンクラミド（抗糖尿病剤）；ニフェジピン（抗狭心症剤）；スピロノラクトン（利尿剤）；ステロイド系薬物、例えばダナゾール；カルバマゼピンおよび抗ウイルス剤、例えばアシクロビルが含まれる。他の小分子には、アセタゾラミド、アロプリノール、ダプソン、ドキシサイクリン、パラセタモール、ナリジクス酸、クロロチアジド（ｃｌｏｒｏｔｈｉａｚｉｄｅ）、トブラマイシン、シクロスポリン、タクロリムスおよびパクリタキセルが含まれる。
【００６３】
１．生物活性剤粒子のサイズ
生物活性剤粒子は一般に、１０ｎｍ〜５μｍの平均粒子サイズを有する。一般に、生物活性剤粒子は、１０ｎｍ〜１ミクロン、好ましくは約１００ｎｍ〜約１ミクロン、より好ましくは約２００ｎｍ〜約１ミクロンの平均粒子サイズを有する。ある特定の実施形態では、生物活性剤粒子は、５００〜７００ｎｍの直径を有するナノ粒子である。
【００６４】
組成物中の生物活性剤粒子は、粒子の単分散または多分散系の集団であってよい。「単分散」は、粒子のすべてが同じサイズかまたはほぼ同じサイズであるナノ粒子またはミクロ粒子の集団を表す。本明細書で使用されるように、単分散分布は、その分布の少なくとも９０％が中央値粒子サイズの５％以内にある粒子分布を指す。多分散系集団は、単分散集団に比べて、粒子のサイズ分布により大きい多様性（ｖａｒｉｅｔｙ）を有する。
【００６５】
Ｃ．他の薬剤
追加の薬剤を、マトリクス中に組み込むこともできる。そうした薬剤には、発色団、染料、着色剤、レーキおよびその組合せが含まれる。
【００６６】
「発色団」は、ある条件下、例えば、常に、または特定の波長（蛍光物質の場合など）に曝露した後、色を有する、またはナノ粒子に色を付与する（その物質自体、色はついていない（例えば透明気体）が、電磁波を散乱し（例えば光）、したがって、その散乱特性に応じて、例えば白色、青色、緑色または黄色に色づいて見える場合を含む）物質（固体、液体または気体）と本明細書では広く定義される。例えば、発色団は、通常実質的に不可視である可能性があるが、電磁スペクトルの特定の領域からの波長へ曝露している間かつ／またはその後、紫外、可視または赤外波長を発する、蛍光性、リン光性、波長アップコンバージョン（ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ  ｕｐ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ）物質または他の物質であってよい。発色団は、特定の光エネルギーに曝露された場合、自発的にまたは任意の刺激に応答して可逆的または不可逆的に色を変化するか、または光退色する物質であってもよい。例えば、発色団は、多光子の同時吸収（例えば２つの光子吸収）によって、外観を変える、または光退色する物質であってよい。
【００６７】
本明細書で使用されるように、その物質の環境（皮膚または他の組織など）の通常の呈色は別として、通常の照明条件、例えば散乱太陽光（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｓｕｎｌｉｇｈｔ）または標準的な人工照明の下で、肉眼によって、基本的に色を検出できない（組織マーキング部位においてなどで）場合、物質（発色団など）は「不可視」である。通常の照明条件下で肉眼に不可視であり、また、他の任意の照明条件（蛍光性、ＵＶまたは近赤外など）下でも肉眼またはデバイスによって不可視である場合、物質は「検出不可能」である。
【００６８】
染料は、非晶質、結晶性、球形または反射性粒子の形態で、蛍光性、化学発光性、反射性であってよいか、または活性化されるまで無色であってよい。発色団は、リファンピン、ベータ−カロチン、テトラサイクリン、インドシアニングリーン、エバンスブルー、メチレンブルー、ＦＤ＆Ｃ青色１号（ブリリアントブルーＦＣＦ）、ＦＤ＆Ｃ緑色３号（ファストグリーンＦＣＦ）、ＦＤ＆Ｃ赤色３号（エリスロシン）、ＦＤ＆Ｃ赤色４０号、ＦＤ＆Ｃ黄色５号（タルトラジン）、ＦＤ＆Ｃ黄色６号（サンセットイエローＦＣＦ）または他のＦＤ＆ＣおよびＤ＆Ｃ染料ならびにレーキであってよい、またはそれらを含むことができる。レーキは、吸着、共沈、または簡単な混合過程によって作られる構成要素の任意の組合せを含まない化学的組合せによって、基層（ｓｕｂｓｔｒａｔｕｍ）上に延ばされたストレートカラー（ｓｔｒａｉｇｈｔ  ｃｏｌｏｒ）である。その基層は、アルミナ、永久白、グロスホワイト、粘土、二酸化チタン、酸化亜鉛、タルク、ロジン、安息香酸アルミニウム、炭酸カルシウムまたはこれらの２つもしくはそれ超の任意の組合せであってよい。レーキは、その色を、塩基性基のナトリウム、カリウム、アルミニウム、バリウム、カルシウム、ストロンチウムまたはジルコニウムと一緒にすることによって、ストレートカラーの１つから調製される塩でもある。さらに、発色団は、天然顔料、金属酸化物（合成の酸化鉄および二酸化チタンなど）および炭素を含む。発色団は、ヒトでの使用のために、米国食品医薬品局（Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認されている任意の着色物質であってよい。ある特定の実施形態では、発色団は、通常の照明条件下で、または紫外、近紫外、赤外または近赤外線に曝露された場合に、肉眼で検出することができる。
【００６９】
ポリマーに組み込むことができる他の染料には、酸性フクシン、アルシアンブルー、アリザリンレッドｓ、オーラミンｏ、アズールａおよびｂ、ビスマルクブラウンｙ、ブリリアントクレシルブルーａｌｄ、ブリリアントグリーン、カルミン、シバクロンブルー３ＧＡ、コンゴレッド、クレジルバイオレット酢酸塩、クリスタルバイオレット、エオシンｂ、エオシンｙ、エリトロシンｂ、ファストグリーンｆｃｆ、ギムザ、ヘマトキシリン（ｈｅｍａｔｏｙｌｉｎ）、インジゴカルミン、ヤヌスグリーンｂ、ジェンナー染料、マラカイトグリーンシュウ酸塩、メチルブルー、メチレンブルー、メチルグリーン、メチルバイオレット２ｂ、ニュートラルレッド、ナイルブルーａ、オレンジＩＩ、オレンジＧ、オルセイン、パラローズアニリン塩酸塩（ｐａｒａｏｓａｎｉｌｉｎｅ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、フロキシンｂ、ピロニンｂおよびｙ、リアクティブブルー４および７２、リアクティブブラウン１０、リアクティブグリーン５および１９、リアクティブレッド１２０、リアクティブイエロー２、３、１３および８６、ローズベンガル、サフラニンｏ、スーダンＩＩＩおよびＩＶ、スーダンブラックＢおよびトルイジンブルーが含まれる。実施例は、水溶性染料インジゴ、インドシアニングリーン、ブリリアントブルーＧおよびベータ−カロチンならびに水溶性染料、銅フタロシアニンの組み込みを実証している。
【００７０】
Ｄ．追加のポリマー
組成物は、１種または複数の追加のポリマーを含むこともできる。１種または複数の追加のポリマーは、マトリクス中に組み込む前に、生物活性剤をカプセル化する、コーティングする、またはその他の方法でそれと会合させるために使用し得る。代替的にまたは追加的に、１種または複数の追加のポリマーは、生物活性薬物がその中に取り込まれた後に、マトリクスをカプセル化する、コーティングする、またはその他の方法でそれと会合させるために使用し得る。特定の場合、生物活性剤を、１種または複数のポリマーでカプセル化する、コーティングする、またはその他の方法でそれと会合させ、マトリクスで取り込み、次いで、取り込んだマトリクスを、生物活性剤と会合しているポリマーと同じであっても異なっていてもよい１種または複数のポリマーでカプセル化する、コーティングする、またはその他の方法でそれと会合させることができる。
【００７１】
１種または複数の追加のポリマーは非晶質ポリマーであってよい。
【００７２】
追加の１種または複数のポリマーは、生分解性または非生分解性であってよく、それらは任意選択で生体接着性である。追加のポリマーは、生分解性かつ生体接着性であってよい。
【００７３】
ある特定の実施形態では、組成物は、少なくとも１種の追加のポリマーを含む。追加のポリマーは、治療剤の全身投与を可能にする。追加のポリマーは、生体接着性ポリマー、より好ましくはポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（フマル酸−ｃｏ−セバシン酸無水物）、そのブレンドまたはコポリマーであることが好ましい。
【００７４】
１．生体接着性ポリマー
適切な生体接着性ポリマーは、例えばＭａｔｈｉｏｗｉｔｚらの米国特許第６，２３５，３１３号（その教示を参照により本明細書に組み込む）に記載されており、それらには、ポリヒドロキシ酸、例えばポリ（乳酸）、ポリスチレン、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ酸無水物、ポリアクリル酸、アルギネート、キトサン；ポリアクリレート、例えばポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）（ｐｏｌｙ（ｈｅｘｌｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ））、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）およびポリ（オクタデシルアクリレート）；ポリアクリルアミド；ポリ（フマル酸−ｃｏ−セバシン酸）、ポリ（ビスカルボキシフェノキシプロパン−ｃｏ−セバシン酸無水物）、ポリオルトエステル、およびそのコポリマー、ブレンドおよび混合物が含まれる。
【００７５】
２．生体内分解性および生体接着性ポリマー
生体接着性ポリマー、生体内分解性ポリマーおよび生体接着性、生体内分解性ポリマーの使用は、薬剤送達の精密化をさらに可能にする。適切なポリマーには、ＳａｗｈｎｅｙらのＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ、１９９３年、２６巻：５８１〜５８７頁（その教示を参照により本明細書に組み込む）に記載されているものなどの生体内分解性ヒドロゲルが含まれる。代表的な生体接着性ポリマーには、これらに限定されないが、ポリ（エチレン−ｃｏ−無水マレイン酸）、ポリ（エチレン無水マレイン酸−ｃｏ−Ｌ−ドパミン）、ポリ（エチレン無水マレイン酸−ｃｏ−フェニルアラニン）、ポリ（エチレン無水マレイン酸−ｃｏ−チロシン）、ポリ（ブタジエン−ｃｏ−無水マレイン酸）、ポリ（ブタジエン無水マレイン酸−ｃｏ−Ｌ−ドパミン）（ｐＢＭＡＤ）、ポリ（ブタジエン無水マレイン酸−ｃｏ−フェニルアラニン）およびポリ（ブタジエン無水マレイン酸−ｃｏ−チロシン）が含まれる。代表的な生体内分解性ポリマーには、これらに限定されないが、ポリヒドロキシ酸などの合成ポリマー、例えば乳酸とグリコール酸のポリマー、ポリ酸無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリエステル、ポリウレタン、ポリ（酪酸）（ｐｏｌｙ（ｂｕｔｉｃ  ａｃｉｄ））、ポリ（吉草酸）、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−カプロラクトン）、ポリ（エチレン−ｃｏ−無水マレイン酸）、ポリ（エチレン無水マレイン酸−ｃｏ−Ｌ−ドパミン）、ポリ（エチレン無水マレイン酸−ｃｏ−フェニルアラニン）、ポリ（エチレン無水マレイン酸−ｃｏ−チロシン）、ポリ（ブタジエン−ｃｏ−無水マレイン酸）、ポリ（ブタジエン無水マレイン酸−ｃｏ−Ｌ−ドパミン）（ｐＢＭＡＤ）、ポリ（ブタジエン無水マレイン酸−ｃｏ−フェニルアラニン）、ポリ（ブタジエン無水マレイン酸−ｃｏ−チロシン）ならびにこれらのポリマーを含むブレンド；およびこれらのポリマーのモノマーを含むコポリマー、天然ポリマー、例えばアルギネートおよび他の多糖、コラーゲン、その化学的誘導体（置換、化学基、例えばアルキル、アルキレンの付加、ヒドロキシル化、酸化および当業者によって慣行的に行われる他の修飾）、アルブミンおよび他の親水性タンパク質、ゼインおよび他のプロラミンならびに疎水性タンパク質、そのコポリマー、ブレンドおよび混合物が含まれる。一般に、これらの材料は、酵素的加水分解、ｉｎ  ｖｉｖｏでの水への曝露によって、または表面またはバルクの侵食によって分解する。代表的な生体内分解性の生体接着性ポリマーには、これらに限定されないが、ポリ（フマル酸−ｃｏ−セバシン酸）無水物（Ｐ（ＦＡ：ＳＡ））およびポリ（ビスカルボキシフェノキシプロパン−ｃｏ−無水物）（２０：８０）（ポリ（ＣＣＰ：ＳＡ））が含まれる。
【００７６】
Ｅ．薬学的に許容される担体
組成物は、１種または複数の薬学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤を含むこともできる。医薬処方物は、標準的な手順を使用して生産することができる。異なる剤形のための薬学的な担体、賦形剤または希釈剤は、当技術分野において公知であり、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍ  ｔａｂｌｅｔｓ」、Ｌｉｂｅｒｍａｎら編（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．、１９８９年）、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ  −  Ｔｈｅ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｙ」、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、２０００年および「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ」、第６版、Ａｎｓｅｌら（Ｍｅｄｉａ、ＰＡ：  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、１９９５年）などの標準的な文献に記載されている。
【００７７】
１．様々な種類の賦形剤
担体、賦形剤および／または希釈剤の一般的なクラスには、これらに限定されないが、緩衝液、界面活性剤、防腐剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、膨張剤、充填剤、安定剤およびその組合せが含まれる。「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、可塑剤、顔料、着色剤、安定剤および流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）を含み得る、マトリクスおよび／または生物活性剤粒子の周りに形成させる任意のコーティングのすべての成分も含む。
【００７８】
賦形剤は、その多孔度および浸透性を変えるために組成物中に含めることもできる。適切な賦形剤は、スクロース、ヒドロキシプロピルセルロース、塩化ナトリウム、塩化ナトリウム、キシリトール、ソルビトール、ラクトース、デキストロース、マルトデキストリンおよびデキストレート（ｄｅｘｔｒａｔｅ）などの無機および有機材料を含むことができる。
【００７９】
賦形剤は、その水和および崩壊特性を変えるために、組成物中に含めることもできる。適切なｐＨ依存性の腸溶性賦形剤は、セルロースアセテートフタレートを含むことができる。
【００８０】
賦形剤は、組成物の水和を制御するための「ウィッキング剤（ｗｉｃｋｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）」として添加することもできる。適切な賦形剤は、アクジソル（ａｃｄｉｓｏｌ）、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、セルロースアセテートフタレートを含むことができる。
【００８１】
ｐ（ＡＡ）は、噴霧乾燥産物内での薬物ドメインの合体を防止し、溶解に利用できる薬物表面積の増大をもたらす。さらに、ポリマーの分解の際に生成したアジピン酸モノマーは、噴霧乾燥薬物粒子の微環境における酸性度を増大させる。ｐＨを変えることによって、薬物の一部はより可溶性になり得る。
【００８２】
ａ．コーティング材料
組成物を、ポリマーでさらにコーティングして、経口投与を容易にし、胃などでみられる酸性環境から生物活性剤を保護することができる。適切なコーティング材料の例には、これらに限定されないが、セルロースポリマー、例えばセルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート；ポリビニルアセテートフタレート、アクリル酸ポリマーおよびコポリマー、メタクリル樹脂、ゼイン、セラックおよび多糖が含まれる。
【００８３】
さらに、コーティング材料は、可塑剤、顔料、着色剤、流動促進剤、安定剤、細孔形成剤（ｐｏｒｅ  ｆｏｒｍｅｒ）および界面活性剤などの慣用的な担体を含むことができる。
【００８４】
ｂ．界面活性剤
界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、両性または非イオン性の表面活性薬剤であってよい。適切なアニオン性界面活性剤には、これらに限定されないが、カルボン酸イオン、スルホン酸イオンおよび硫酸イオンを含むものが含まれる。アニオン性界面活性剤の例には、長鎖アルキルスルホネートおよびアルキルアリールスルホネートのナトリウム、カリウム、アンモニウム、例えばドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム；ジアルキルスルホコハク酸ナトリウム、例えばドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム；ジアルキルスルホコハク酸ナトリウム、例えばビス−（２−エチルチオキシル（ｅｔｈｙｌｔｈｉｏｘｙｌ））−スルホコハク酸ナトリウム；およびアルキルスルフェート、例えばラウリル硫酸ナトリウムが含まれる。カチオン性界面活性剤には、これらに限定されないが、四級アンモニウム化合物、例えば塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、臭化セトリモニウム、ステアリルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ポリオキシエチレンおよびココナッツアミンが含まれる。非イオン性界面活性剤の例には、エチレングリコールモノステアレート、プロピレングリコールミリステート、グリセリルモノステアレート、グリセリルステアレート、ポリグリセリル−４−オレエート、ソルビタンアシレート、スクロースアシレート、ＰＥＧ−１５０ラウレート、ＰＥＧ−４００モノラウレート、ポリオキシエチレンモノラウレート、ポリソルベート、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ＰＥＧ−１０００セチルエーテル、ポリオキシエチレントリデシルエーテル、ポリプロピレングリコールブチルエーテル、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ（登録商標）４０１、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、ステアロイルモノイソプロパノールアミドおよびポリオキシエチレン水素化獣脂アミドが含まれる。両性界面活性剤の例には、ナトリウムＮ−ドデシル−ベータ−アラニン、ナトリウムＮ−ラウリル−β−イミノジプロピオネート、ミリストアンホアセテート、ラウリルベタイン  ラウリルスルホベタインおよびレシチンが含まれる。
【００８５】
２．液状または注射可能な薬物送達剤形
マトリクスは、希釈剤などの薬学的に許容される担体中に分散または懸濁された複数の粒子の形態であることが好ましい。一般に、その複数の粒子は、投与される直前に担体中に分散または懸濁される。適切な希釈剤には、適切な緩衝液、例えばリン酸緩衝生理食塩水または他の生理学的に適合する溶液が含まれる。ＴＷＥＥＮ（商標）またはポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ、Ｓｐａｎ８０およびレシチンなどの界面活性剤を、必要に応じて、懸濁物または分散物中に組み込むことができる。
【００８６】
３．固体薬物送達剤形
任意選択で、マトリクスは、さらに、錠剤、カプセル剤、マルチ微粒子剤（ｍｕｌｔｉｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ）、ビーズまたは顆粒剤などの固体薬物送達剤形に処方される。固体剤形は、結合剤（例えば、アカシア、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、スクロース、デンプンおよびエチルセルロース）；充填剤（例えば、コーンスターチ、ゼラチン、ラクトース、アカシア、スクロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸二カルシウム、炭酸カルシウム、塩化ナトリウムまたはアルギン酸）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、シリコーン溶液（ｓｉｌｉｃｏｎｅ  ｆｌｕｉｄ）、タルク、ワックス、油およびコロイド状シリカ）；および崩壊剤（例えば、微結晶性セルロース、コーンスターチ、デンプングリコール酸ナトリウムおよびアルギン酸）などの薬学的に許容される賦形剤を用いた慣用的手段によって調製し得る。錠剤、マルチ微粒子処方物、ビーズ、顆粒剤または粒子中に存在する任意選択の薬学的に許容される賦形剤には、これらに限定されないが、希釈剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、安定剤および界面活性剤が含まれる。
【００８７】
「充填剤」とも称される希釈剤は、一般に、錠剤の圧縮またはビーズおよび顆粒剤の形成のために実際的なサイズが提供されるように、固体剤形のかさを増大させるために必要である。適切な希釈剤には、これらに限定されないが、リン酸二カルシウム二水和物、硫酸カルシウム、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、塩化ナトリウム、乾燥デンプン、加水分解デンプン、アルファー化デンプン、二酸化ケイ素（ｓｉｌｉｃｏｎｅ  ｄｉｏｘｉｄｅ）、酸化チタン、ケイ酸アルミニウムマグネシウムおよび粉砂糖が含まれる。
【００８８】
結合剤は、固体投薬処方物に粘着特性を付与し、それによって、錠剤、マルチ微粒子剤、ビーズまたは顆粒剤が、貯蔵の間および投与のときまでインタクトなままであることを確実にするために使用される。適切な結合剤材料には、これらに限定されないが、デンプン、アルファー化デンプン、ゼラチン、糖（スクロース、グルコース、デキストロース、ラクトースおよびソルビトールを含む）、ポリエチレングリコール、ワックス、天然および合成ゴム、例えばアカシア、トラガカント、アルギン酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロースを含むセルロースおよびビーガム（ｖｅｅｇｕｍ）、ならびに合成ポリマー、例えばアクリル酸およびメタクリル酸コポリマー、メタクリル酸コポリマー、メチルメタクリレートコポリマー、アミノアルキルメタクリレートコポリマー、ポリアクリル酸／ポリメタクリル酸およびポリビニルピロリドンが含まれる。
【００８９】
滑沢剤は、錠剤製造を容易にするために使用される。適切な滑沢剤には、これらに限定されないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、ベヘン酸グリセロール、ポリエチレングリコール、タルクおよび鉱油が含まれる。
【００９０】
崩壊剤は、投与後、剤形の崩壊または「分裂（ｂｒｅａｋｕｐ）」を容易にするために使用され、一般に、これらに限定されないが、デンプン、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルデンプンナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、アルファー化デンプン、粘土、セルロース、アルギニン（ａｌｇｉｎｉｎｅ）、ゴムまたは架橋ポリマー、例えば架橋ＰＶＰ（ＧＡＦ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＣｏｒｐからのＰｏｌｙｐｌａｓｄｏｎｅ  ＸＬ）が含まれる。
【００９１】
安定剤は、例えば酸化反応を含む薬物の分解反応を阻害するまたは遅延させるために使用される。
【００９２】
望むなら、錠剤、ビーズ、顆粒剤または粒子は、湿潤剤または乳化剤、染料、ｐＨ緩衝剤および／または防腐剤などの非毒性の補助物質を少量含むこともできる。
【００９３】
生物活性剤は、マトリクス中に組み込まれた場合、増大された貯蔵安定性を示す。４℃で３２週間貯蔵後、粒子からの生物活性剤の水溶液中への放出は、新たに調製されたマトリクスから放出される生物活性剤の量の少なくとも３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％である。同様に、４℃で３２週間貯蔵後、粒子から放出される活性薬剤の生物活性は、新たに調製されたマトリクスから放出される生物活性剤の生物活性の少なくとも３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５％である。
【００９４】
ＩＩＩ．作製方法
Ａ．生物活性剤を微粒子化する方法
マトリクス中に組み込む前に、生物活性剤を微粒子化して薬剤のミクロ粒子またはナノ粒子を形成させることができる。
【００９５】
任意選択で、生物活性剤を含むミクロまたはナノ粒子は、上記した生体適合性ポリマーなどの１種または複数の生体適合性ポリマーを含む。１種または複数の追加のポリマーの正体および量は、例えば、粒子安定性、すなわち、送達が望まれる部位への分配に要する時間、および送達に望ましい時間に影響を及ぼすように選択することができる。ｐＨ調整剤、崩壊剤、防腐剤および酸化防止剤を含む薬学的に許容される賦形剤は、ミクロおよびナノ粒子形成の間に組み込むことができる。
【００９６】
一般的なマイクロカプセル化技術には、これらに限定されないが、噴霧乾燥、界面重合、熱溶融カプセル化、相分離カプセル化（自発的乳化マイクロカプセル化、溶媒蒸発マイクロカプセル化および溶媒除去マイクロカプセル化）、コアセルベーション、低温ミクロスフェア形成および相反転ナノカプセル化（ＰＩＮ）が含まれる。
【００９７】
ミクロおよびナノ粒子処方の例示的な方法を、以下に手短に記載する。
【００９８】
１．噴霧乾燥
噴霧乾燥は、微粒子化されたタンパク質ならびに微粒子化後にカプセル化されたタンパク質を作製するために使用することができる。噴霧乾燥技術を使用して、カプセル化されたミクロスフェア／ナノスフェアを形成させる方法は、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚらの米国特許第６，６２０，６１７号に記載されている。この方法では、ポリマーを、任意選択で１種または複数の賦形剤と一緒に、塩化メチレンなどの有機溶媒または水に溶解させる。代替的な溶媒系は公知であり、それには水とｔｅｒｔ−ブチルアルコール（ＴＢＡ）の混合物が含まれる。粒子中に組み込まれることになる、既知の量の１種または複数の活性薬剤を、そのポリマー溶液中に懸濁（不溶性活性薬剤の場合）または共溶解（ｃｏ−ｄｉｓｓｏｌｖｅ）（可溶性活性薬剤の場合）させる。活性薬剤およびポリマーは、溶媒系に溶解することが好ましい。
【００９９】
溶液または分散物を、圧縮ガス流によって駆動される微粒子化ノズルを通してポンプ輸送し、得られたエアゾールを加熱された空気サイクロン（ｃｙｃｌｏｎｅ  ｏｆ  ａｉｒ）中で懸濁し、溶媒を微小液滴から蒸発し、粒子を形成させる。この方法を使用して、０．１〜１０ミクロンの範囲のミクロスフェア／ナノスフェアを得ることができる。この噴霧乾燥ステップで形成された粒子は、約１〜約１０μｍのサイズの範囲にあることが好ましい。
【０１００】
２．熱溶融マイクロカプセル化
ミクロスフェアは、ＭａｔｈｉｏｗｉｔｚらのＲｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、６巻：２７５頁（１９８７年）に記載されているような熱溶融マイクロカプセル化法を使用して、ポリエステルおよびポリ酸無水物などのポリマーから形成させることができる。この方法では、３〜７５，０００ダルトンの分子量を有するポリマーを使用することが好ましい。この方法では、最初にポリマーを溶融し、次いで、これを、５０ミクロン未満にまで篩別された、組み込まれる１種または複数の活性薬剤の固体粒子と混合する。混合物を非混和性溶媒（シリコン油など）に懸濁させ、連続的に撹拌しながら、ポリマーの融点より５℃高く加熱する。乳濁液が安定したら、これを、ポリマー粒子が固化するまで冷却する。得られたミクロスフェアを、石油エーテルでデカントして洗浄し、自由流動性粉末を得る。
【０１０１】
３．相分離マイクロカプセル化
相分離マイクロカプセル化技術では、ポリマー溶液を、任意選択で、カプセル化される１種または複数の活性薬剤の存在下で、撹拌する。材料を撹拌により均一に懸濁し続けながら、ポリマーのための非溶媒を溶液にゆっくり加えて、ポリマーの溶解度を低下させる。溶媒および非溶媒の中におけるポリマーの溶解度に応じて、ポリマーを、沈殿させるか、またはポリマーの豊富な相とポリマーの乏しい相に相分離する。適切な条件下で、ポリマーの豊富な相中のポリマーは、連続相との界面へ移動し、活性薬剤は外側のポリマーシェルで液滴中にカプセル化される。
【０１０２】
ａ．自発的乳化マイクロカプセル化
自発的乳化は、温度を変えるか、溶媒を蒸発させるか、または化学架橋剤を加えることによって、上記で形成された、乳化した液体ポリマー液滴を固化させるステップを含む。カプセル化剤（ｅｎｃａｐｓｕｌａｎｔ）の物理的および化学的な特性、ならびに新しく生じた粒子中に任意選択で組み込まれる１種または複数の活性薬剤の特性は、適切なカプセル化方法を決定づける。疎水性、分子量、化学的安定性および熱安定性などの要因は、カプセル化に影響を及ぼす。
【０１０３】
ｂ．溶媒蒸発マイクロカプセル化
溶媒蒸発技術を使用してミクロスフェアを形成させる方法は、Ｅ．  ＭａｔｈｉｏｗｉｔｚらのＪ．  Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ、４巻：３２９頁（１９９０年）；Ｌ．Ｒ．  ＢｅｃｋらのＦｅｒｔｉｌ．  Ｓｔｅｒｉｌ．、３１巻：５４５頁（１９７９年）；Ｌ．Ｒ．  ＢｅｃｋらのＡｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １３５巻（３号）（１９７９年）；Ｓ．  ＢｅｎｉｔａらのＪ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｓｃｉ．、７３巻：１７２１頁（１９８４）；およびＭｏｒｉｓｈｉｔａらの米国特許第３，９６０，７５７号に記載されている。ポリマーを、塩化メチレンなどの揮発性有機溶媒に溶解させる。組み込もうとする１種または複数の活性薬剤を任意選択でその溶液に加え、混合物を、ポリ（ビニルアルコール）などの表面活性薬剤を含む水溶液に懸濁する。得られた乳濁液を、有機溶媒の大部分が蒸発して固体ミクロスフェア／ナノスフェアを残すまで撹拌する。この方法は、ポリエステルやポリスチレンのような比較的安定なポリマーに有用である。しかし、ポリ酸無水物などの不安定なポリマーは、水の存在のため、製作過程の間に分解する可能性がある。これらのポリマーについては、完全に無水の有機溶媒中で行われる以下の方法のいくつかが、より有用である。
【０１０４】
ｃ．溶媒除去マイクロカプセル化
溶媒除去マイクロカプセル化技術は、主に、ポリ酸無水物のために設計されており、例えばブラウン大学研究財団（Ｂｒｏｗｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ）のＷＯ９３／２１９０６に記載されている。この方法では、組み込もうとする物質を、塩化メチレンなどの揮発性有機溶媒中の選択されたポリマーの溶液に分散または懸濁させる。この混合物を、シリコン油などの有機油中で撹拌することによって懸濁して、乳濁液を形成させる。この手順によって、１〜３００ミクロンの範囲のミクロスフェアを得ることができる。ミクロスフェア中に組み込むことができる物質には、医薬品、殺虫剤（ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ）、栄養物、イメージング剤および金属化合物が含まれる。
【０１０５】
４．コアセルベーション
コアセルベーション技術を使用する種々の物質のためのカプセル化手順は、例えば英国特許Ｂ−９２９４０６号；同Ｂ−９２９４０１号；および米国特許第３，２６６，９８７号、同第４，７９４，０００号および同第４，４６０，５６３号においてなど、当技術分野において公知である。コアセルベーションは、２つの非混和性液相中への高分子溶液の分離を含む。１つの相は、高濃度のポリマーカプセル化剤（および任意選択の１種または複数の活性薬剤）を含む濃厚なコアセルベート相であり、一方第２の相は低濃度のポリマーを含む。濃厚なコアセルベート相中で、ポリマーカプセル化剤は、ナノスケールまたはミクロスケールの液滴を形成する。コアセルベーションは、温度変化、非溶媒の添加またはマイクロ塩（ｍｉｃｒｏ−ｓａｌｔ）の添加（簡単なコアセルベーション）、あるいは、別のポリマーの添加、それによるインターポリマー複合体の形成（複合コアセルベーション）によって誘発させることができる。
【０１０６】
５．ミクロスフェアの低温キャスティング
制御放出ミクロスフェアの非常に低い温度でのキャスティングの方法は、Ｇｏｍｂｏｔｚらの米国特許第５，０１９，４００号に記載されている。この方法では、任意選択で、１種もしくは複数の溶解または分散された活性薬剤と一緒に、ポリマーを溶媒に溶解する。次いで、混合物を、ポリマー液滴を凍結させるポリマー物質の溶液の凝固点より低い温度で、液体非溶媒を含有する容器中に霧化する。液滴およびポリマー用の非溶媒が温まると、液滴中の溶媒が解け、非溶媒中に抽出され、ミクロスフェアの硬化がもたらされる。
【０１０７】
６．相反転ナノカプセル化（ＰＩＮ）
ナノ粒子は、そこでポリマーが「良好な（ｇｏｏｄ）」溶媒に溶解される相反転ナノカプセル化（ＰＩＮ）方法を使用して形成させることもでき、組み込まれることになる薬物などの物質の微細粒子を、ポリマー溶液中で混合するかまたはそれに溶解し、混合物をポリマー用の強力な非溶媒に注ぎ入れて、好ましい条件下で、ポリマーミクロスフェアを自発的に生成させる。そこで、ポリマーは、粒子でコーティングされるかまたは、粒子はポリマーに分散される。例えば、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚらの米国特許第６，１４３，２１１号を参照されたい。方法は、例えば約１００ナノメートル〜約１０ミクロンを含む広範な範囲のサイズで、ナノ粒子およびミクロ粒子の単分散集団を生成させるために使用することができる。
【０１０８】
有利なことに、沈殿の前に乳濁液を形成させる必要はない。このプロセスは、熱可塑性ポリマーからミクロスフェアを形成させるために使用することができる。
【０１０９】
７．逐次的相反転ナノカプセル化（ｓＰＩＮ）
多層型（ｍｕｌｔｉ−ｗａｌｌｅｄ）ナノ粒子は、Ｃｈｏらの米国特許第８，６７３，３５９号に記載されている「逐次的相反転ナノカプセル化」（ｓＰＩＮ）と称されるプロセスによって形成させることもできる。ｓＰＩＮは、ナノ粒子の単分散集団を達成するための追加的な分離ステップの必要性を回避しながら、ナノ粒子の単分散集団を形成させるのに特に適している。
【０１１０】
Ｂ．マトリクスの調製方法
マトリクスは、半結晶性の水溶性ポリマーを適切な溶媒に溶解させることによって調製される。追加的な生体適合性ポリマーを溶液に加えることもできる。適切な溶媒は、極性有機溶媒であり、ジクロロメタン、エタノール、ＴＨＦ、プロパノール、ＤＭＳＯ、アセトン、アセトニトリル、酢酸エチル、ニトロメタン、メタノールおよびその混合物が含まれる。好ましい溶媒は、単独か、またはエタノールもしくはメタノールなどの脂肪族アルコールと組み合わせたジクロロメタンである。ジクロロメタンとエタノールの組合せが特に好ましい。次いで、この溶液を、好ましくは上記の技術の１つに従って、微粒子化またはカプセル化されていてよい治療剤と一緒にする。
【０１１１】
治療剤が溶解しないように、ポリマー溶液を十分に濃縮する。
【０１１２】
次いで、結晶性マトリクスを形成させるのに十分な仕方で、溶媒を混濁混合物から除去する。溶媒は、微粒子化に関して上記したものなどの粒子を形成させるのに適した任意の方法で除去することができる。一般に、溶媒をゆっくり除去する方法が、粒子およびポリマーの粒子の急速な沈殿を引き起こす方法より好ましい。そうした方法には、これらに限定されないが、噴霧乾燥、フィルムキャスティング、流動床反応器中でのパンコーティング（ｐａｎ  ｃｏａｔｉｎｇ）、凍結乾燥、回転蒸発および溶媒キャスティングが含まれる。
【０１１３】
さらに、急速な沈殿をもたらす混濁混合物とアンチソルベントの組合せも、粒子をマトリクス中に埋め込むのに適している。好ましいアンチソルベントには、これらに限定されないが、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、石油エーテルおよびリグロインなどの炭化水素が含まれる。
【０１１４】
好ましい実施形態では、治療剤を、噴霧乾燥プロセスを使用して微粒子化する。例えば、ＴＧＦβ１などのタンパク質およびＰＥＧ３３５０および／またはＰＥＧ４５００などの少なくとも１つのポリエチレングリコール、およびＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７などの少なくとも１つのポロクサマーを、賦形剤を用いるか用いないで、適切な溶媒系中で混合して、薬剤、ポリマーおよび水中のｔｅｒｔ−ブチルアルコールなどの賦形剤を溶解することができる。次いで、混合物を、適切な液体供給速度、圧力、入口および出口温度、および乾燥ガス流量で霧化して、薬剤の微粒子化された粒子を形成させることができる。
【０１１５】
他の好ましい実施形態では、噴霧乾燥プロセスを使用して微粒子化された薬剤をマトリクス中に組み込む。例えば、治療剤を、好ましくはミクロ粒子またはナノ粒子の形態で、１種または複数の半結晶性の水溶性マトリクス形成ポリマーと混合する。マトリクス形成ポリマーは少なくとも１種の半結晶性ポリマーを含む。２種またはそれ超の半結晶性のマトリクス形成ポリマーの組合せが存在することが好ましい（ＰＥＧ３３５０および／またはＰＥＧ４５００などのポリエチレングリコールとＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７などの少なくとも１つのポロクサマーなど）。さらに、原料（ｆｅｅｄｓｔｏｃｋ）は、ＰＬＡおよび／またはＰＬＧＡなどの非晶質ポリマーを含むことができる。原料は、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０およびＴｗｅｅｎ８０）、スクロース、グリシンおよびＰＶＰなどの追加の賦形剤を含むことができる。薬剤および水溶性の半結晶性マトリクス形成ポリマーを、ポリマーおよび賦形剤を溶解する、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、エタノールおよび水などの適切な溶媒中で、任意選択で追加のポリマーおよび賦形剤と一緒に混合する。薬剤は一般に、ポリマー溶液（原料）中に分散される。
【０１１６】
原料を、適切な噴霧器により、適切な液体供給速度、圧力、入口および出口温度、および乾燥ガス流量で噴霧して、薬剤を含むマトリクスを形成させる。半結晶性ポリマーは、マトリクスの少なくとも３０重量％、好ましくはマトリクスの少なくとも３５％、４０％または５０重量％を構成し、さらにより好ましくはマトリクスの少なくとも６５重量％を構成する。
【０１１７】
ＩＶ．使用方法
組成物は、様々な異なった薬物送達剤形に処方し、経口、注射（皮下、筋肉内、静脈内）、舌下、吸入および経皮送達を含む適切な任意の方法で患者に投与することができる。
【０１１８】
組成物は、デポーとして患者に投与することができる。例えば、デポーを、皮下に注射または埋め込み、１カ月もしくはそれ超、または最大で１年もしくはそれ超の期間にわたる薬物の制御送達を可能にすることができる。好ましい実施形態では、薬物は１種または複数の抗体である。
【０１１９】
一実施形態では、ミクロ粒子は、活性薬剤を、胃腸管に沿った特定の領域に送達するために使用できる。実施例における結果は、ミクロ粒子の取り込みおよび放出が、胃腸管関連のリンパ系組織（ＧＡＬＴ）および腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）に有効に局在化されていたことを実証している。
【０１２０】
マトリクス中に組み込む前にカプセル化されている治療剤の投与は、薬剤の経口送達による、薬剤の全身投与を可能にする。薬剤がカプセル化されていない場合、薬剤は、胃腸管の局所部位に送達される。
【０１２１】
一部の実施形態では、ミクロ粒子は、生物活性剤の少なくとも３０％を腸内で放出する。他の実施形態では、生物活性剤の少なくとも３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５または８０％は腸内で放出される。
【０１２２】
好ましい実施形態では、ミクロ粒子は、タンパク質および他の生物活性剤を、パイエル板および他のリンパ系組織、例えば胃腸の腸細胞に送達するために使用される。これらの実施形態では、生物活性剤は、パイエル板および他のリンパ系組織に関連する状態を治療するために使用することができる。処方物は、様々な疾患、障害および／または状態、例えばクローン病、潰瘍性結腸炎、過敏性腸症候群、胃腸がんまたはセリアック病を治療するのに有効な仕方および量で投与することができる。例示的な胃腸がんには、胃がん、間質性腫瘍、脂肪腫  過誤腫およびカルチノイド症候群が含まれる。
【実施例】
【０１２３】
（実施例１：カプセル化されたＴＧＦ−β１の調製）
ステップ１
それぞれ２５ｍｇのＴｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、ＰＥＧ４５００およびＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７を、１ｍｌの二重に蒸留した水（溶液Ａ）に加えた。それぞれ５０ｍｇのスクロース、グリシンおよびＰＶＰ  Ｋ１５を、１ｍｌの二重に蒸留した水（溶液Ｂ）に加えた。各溶液を、０．２μｍシリンジを使用して、滅菌フィルターで新しいクライオチューブバイアル中に濾過した。７．２μｌの溶液Ａおよび７１．７μｌの溶液Ｂを、ピペットで、５．０ｍｌの９９％ｔｅｒｔ−ブチルアルコールを含む凍結乾燥バイアルに加えた。５００μｌのｍＴＧＦ−β１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）の１．００ｍｇ／ｍｌストック溶液を加え、続いて凍結乾燥した。混合物は−４０℃で１２０分間にわたって凍結乾燥した。
【０１２４】
ステップ２
２５０ｍｇの低ＭＷ  ＰＬＡ約９ＫＤａおよび２５０ｍｇの中程度ＭＷ  ＰＬＡ約３６ＫＤａポリマーを、６ｍｌジクロロメタンに溶解した。２．２５ｇのＰＥＧ３３５０および０．７５ｇのＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７をＰＬＡ溶液に加え、１０秒間ボルテックスして溶解させた。１．６７ｍｌの９７％ＥｔＯＨをＰＬＡ、ＰＥＧ３３５０およびＦ１２７を含む溶液に加え、十分に混合した。約２．０ｍｌのＰＬＡ、ＰＥＧ３３５０およびＦ１２７溶液を、凍結乾燥されたｍＴＧＦ−β１を含むバイアルに加え、バイアルを連続的に旋回させながら、３０秒間超音波浴で処理した。ｍＴＧＦ−β１含有混合物をＰＬＡ、ＰＥＧ３３５０およびＦ１２７溶液の残りに加えた。
【０１２５】
ステップ３
１リットルのヘプタンおよび０．１ｍｌのＳｐａｎ８０を、ガラスインペラーを備えた反応器中で合わせた。ヘプタン溶液を撹拌しながら、ポリマー溶液を、自動ピペットを使用して上から添加した。溶液を３０〜４５分間撹拌した。次いで、０．２μｍテフロン（登録商標）フィルターを使用して、１０〜１５ｐｓｉ  Ａｒガスのアルゴンガス下で、溶液を撹拌セル中へ濾過した。反応器を３００ｍｌのヘプタンで洗浄して、その材料を確実に完全回収した。すべての溶液を濾過した後、フィルター上でのアルゴン圧を１０〜１５分間維持してｍＴＧＦ−β１処方物を乾燥した。ミクロスフェアを、濾紙から粉末を掻き取って収集し、５０ｍｌ  Ｆａｌｃｏｎチューブに入れた。この粉末を真空下で終夜乾燥した。
【０１２６】
上記したプロトコールを使用して、以下のタンパク質：ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１２、ＩＬ−１０、ＧＬＰ−１、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−１７、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦおよびＴＧＦ−β１もカプセル化した。
【０１２７】
（実施例２．ブランク粒子の調製）
実施例１に記載したプロセスを、ｍＴＧＦ−β１溶液の代わりに５００μｌの二重に蒸留した水で置き換えることによってブランクマトリクスを調製するために使用した。マトリクスが、５００ｍｌヘプタンおよび０．０５ｍｌのＳｐａｎ８０の溶液から沈殿した。
【０１２８】
（実施例３．ポリマーマトリクスの溶解試験）
種々のポリマー賦形剤ブレンドの安定性を判定するために、以下に記載するポリマーを使用してフィルムをキャストした。ポリマーをジクロロメタンに溶解し、透明な溶液をガラスペトリ皿にキャストした。周囲条件下でジクロロメタンを蒸発させてフィルムを得た。
【表１】
2017524743.tif 000002
【０１２９】
約３７．７ｍｇの重量の試料を、上記フィルムのそれぞれから掻き取った。各試料から正確な質量を得、次いで、各試料を、予め秤量された微小遠心チューブに入れた。水性緩衝液の１ｍｌ溶液（ｐＨ２．０かまたは７．４）を各チューブに加えた。１時間または２４時間後、チューブを遠心分離にかけ、残渣を、急速冷凍し凍結乾燥した。
【０１３０】
結果
表２〜５は、異なる緩衝溶液に浸漬させた後のポリマーの残留質量を報告する。
【表２】
2017524743.tif 000003
【表３】
2017524743.tif 000004
【表４】
2017524743.tif 000005
【表５】
2017524743.tif 000006
【０１３１】
顕著なことに、処方物１〜６はすべて≦１６．７重量％の疎水性ポリマーを含んだが、水溶液中へのフィルムの浸漬後、より高いパーセンテージの質量が残留した。疎水性ポリマーの量は、一般に、１時間後と２４時間後の両方の時点で残留すると予期される。しかし、溶解試験による結果は、ｐＨ２とｐＨ７．４の両方で１時間後、すべてのポリマーブレンドが、ＰＥＧまたはＰＥＧとＦ１２７のブレンドを過剰に残していることを示している。同じ結果が、溶解２４時間後で得られたが、残留賦形剤はより少なかった。表３および表５を参照されたい。
【０１３２】
理論に拘束されるわけではないが、これらの結果は、賦形剤が凝集した状態にあり、これが、全体としてのマトリクスの溶解を遅延させることを実証していると考えられる。
【０１３３】
（実施例４．ポリマー熱安定性）
フィルムを、上記と同様にして、ポリマーおよびＰＥＧ３３５０を使用してキャストした。追加的に、ＰＥＧ３３５０を含まないポリマーのフィルムをキャストした。ＰＥＧ３３５０およびＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７フィルムを個々にキャストした。Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（登録商標）ＤＳＣ７を使用して、各処方物についての融解熱を測定した。機器を、溶融およびエンタルピーについて、超高純度インジウム標準品（ΔＨ＝２８．４５Ｊ／ｇ）を使用して較正した。微量天秤（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（登録商標）ＡＤ−４オートバランス）を使用して、ミクロスフェア試料（５±２ｍｇ）を秤量して、蓋を備えたアルミニウムパンに入れ、機器に配置した。試料を、−２０℃で１分間保持し、次いで−２０℃から２００℃へ１０℃／ｍｉｎの速度で加熱した。次いで、試料を−１０℃／ｍｉｎで−２０℃に冷却し、続いて、１０℃／ｍｉｎで−２０℃から２００℃へ再加熱した。次いで、最初の加熱と２回目の加熱の融解熱を、各試料のサーモグラムから計算した。
【０１３４】
ＰＥＧでできた処方物は、６０℃のＴＭおよび７２．８Ｊ／ｇの融解熱を有する半結晶性のものであった。同様に、Ｆ１２７でできた処方物は、ＴＭ４８．６℃で溶融し、４６．６Ｊ／ｇの融解熱を有する半結晶性のものであった。
【０１３５】
以下の表６に示すように、ＰＥＧまたはＦ１２７の混合物でキャストされたフィルムが半結晶性の特徴を示しているのに対して、ＰＬＡ、ＰＬＧＡまたはＦＡＳＡだけで調製されたフィルムは半結晶性の特徴を示していない。したがって、ＰＬＡ、ＰＬＧＡおよびｐＦＡＳＡポリマーは非晶質である。
【表６】
2017524743.tif 000007
【０１３６】
（実施例５．安定性試験）
ｍＴＧＦ−β１またはブランクのいずれかを含むミクロ粒子を、上記の実施例１および２に従って製作し、室温、４℃および−２０℃で３カ月貯蔵した。以下に挙げた時間点で試料を得、ＤＳＣでアッセイした。
【表７】
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【０１３７】
図１は、３つの貯蔵条件のそれぞれについて、０および３カ月の時間点でのブランク粒子の重ね合わせたＩＲスペクトルを表す。ＰＬＡに帰属する約１７５０ｃｍ−１でのピークは、時間をわたって減少しなかった。これは、ＰＬＡが分解しなかったことを実証している。
【０１３８】
（実施例６．ｍＴＧＦ−β１放出および活性についての貯蔵安定性ミクロ粒子）
実施例１のｍＴＧＦ−β１粒子を、室温（ＲＴ）、４℃および−２０℃で貯蔵した。試料を、２、４、６、８、１２、１６、２４および３２週間の時間点で得た。粒子のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの放出特性を、以下のプロトコールに従って評価した。粒子の１０ｍｇ試料を、０．２ｍｌ培養培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１０％ＦＣＳ）に懸濁し、３連で、９６ウェルプレートのウェルに移した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに移した。翌日、放出された試料上清を回収し、遠心分離にかけて残留するあらゆる粒子を除去し、次いで−２０℃で貯蔵した。上清試料の生物学的活性を、ＴＧＦβ−１感受性マウスリンパ芽球細胞株ＨＴ−２を使用してテストした。細胞を、ｍＩＬ−４の１５ｎｇ／ｍｌ溶液を含む培地中、１．５×１０４細胞／ウェルで播種した。標準品および試料をウェルに加えて、示されたような７．５ｎｇ／ｍｌ  ｍ−ＩＬ−４およびＴＧＦβ−１標準品または試料を含む２００ｕｌ／ウェルの最終体積を得た。９６ウェルプレートを、３７℃、５％ＣＯ２で６７時間インキュベートした。２０μｌのＰｒｏｍｅｇａ  Ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔをウェルに加え、３７℃で４時間インキュベートし、ウェルを、４９０ｎｍで光学密度（ＯＤ）を読み取ることによってアッセイした。
【０１３９】
図２Ａは、新たに調製された粒子から放出された量に対する、貯蔵後の粒子から放出されたｍＴＧＦ−βの濃度を表す。図２Ｂは、新たに調製された粒子の生物活性に対する、貯蔵後のＴＧＦ−β粒子の生物活性を表す。
【０１４０】
（実施例７．マトリクス中に埋め込まれたＩＬ−１２の貯蔵安定性）
実施例１に記載したプロセスに従ってＩＬ−１２を含むミクロ粒子を調製し、室温、４℃および−２０℃で貯蔵した。試料を、２、８、１２、１６、２０、２８および３６週の時間点で回収し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの放出アッセイで使用した。粒子の１０ｍｇ試料を、０．２ｍｌ培養培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１０％ＦＣＳ）に懸濁し、３連で、９６ウェルプレートのウェルに移した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターに移した。翌日、放出された試料上清を回収し、遠心分離にかけて残留するあらゆる粒子を除去し、次いで、貯蔵、およびバイオアッセイにおける将来での使用のために凍結させた。上清試料の生物学的活性を、ヒト末梢血リンパ球を使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏでのアッセイでテストした。
【０１４１】
簡潔に言えば、ヘパリン添加血液を、健常な成体ボランティアから得た。末梢血リンパ球を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  ＰＬＵＳ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）での遠心分離を使用して単離した。単離し洗浄した後、細胞を１０μｇ／ｍｌ  ＰＨＡＰ（フィトヘマグルチニン）中で３日間拡大増殖（ｅｘｐａｎｄ）させ、続いてＤＭＳＯで凍結させ、液体窒素中に貯蔵した。
【０１４２】
ＩＬ−１２ミクロ粒子放出試料を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２組織培養培地＋１０％ＦＣＳおよびペニシリン／ストレプトマイシン＋Ｌ−グルタミンおよび組換え型ヒトＩＬ−２（５０単位／ｍｌ）に希釈した。培養プレートを３７℃、５％ＣＯ２で３日間インキュベートした。１００μｌの上清／ウェルを取り出した。２０μｌ  Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔをウェルに加え、３７℃で４時間インキュベートし、ウェルを、４９０ｎｍでＯＤを読み取ることによってアッセイした。
【０１４３】
図３Ａ〜Ｂは、異なる期間貯蔵した後でのＩＬ−１２の放出および生物活性を表す。
【０１４４】
結果
このテストにおいて、試料から放出されたＩＬ−１２は濃度および生物学的活性に関して３６週間にわたって高度に安定であった。唯一の例外は、２および３６週で取った室温放出試料であり、これは観察された比活性が対照試料と大幅に異なっていた（ｐ＜０．００８）。観察された変動は、これらの試料における実験誤差に起因していると考えられた。
【０１４５】
（実施例８．部位選択的ミクロ粒子送達）
１０週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに、０．１ｍｌ水中に３０ｍｇのＦＩＴＣ標識されたウシ血清アルブミン負荷（０．０２５％負荷、ｗ／ｗ）ミクロスフェア（ＴＧＦ−βの実施例と同様に調製した）（単一用量）を給餌した。腸、腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）、脾臓および肝臓臓器を、胃管栄養法後１５分、１時間、２．５時間、６時間および２４時間で収集し、共焦点顕微鏡法により、粒子の存在（緑色蛍光、アローヘッド）について分析した。パイエル板樹状細胞を抗ＣＤ１１ｃ抗体（マゼンタ）で染色した。リンパ節または脾臓を、Ｂ細胞（抗ＣＤ２２０、青色）または樹状細胞（抗ＣＤ１１ｃ、赤色）について染色した。
【０１４６】
結果
粒子は、パイエル板および腸間膜リンパ節において、分析したすべての時間点で観察された。結腸、肝臓または脾臓においては、胃管栄養法後１５分、１時間、２．５時間、６時間および２４時間で粒子は観察できなかった。ＦＩＴＣ−ＢＳＡを負荷された経口処方物ミクロ粒子は吸収され、マウスのパイエル板および腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）中に保持された。結腸、肝臓または脾臓において、給餌後どの時点でもミクロ粒子は検出されなかった。さらに、ＩＬ−１０負荷ミクロ粒子を、経口胃管栄養法によりボーラス用量でマウスに送達した場合、血清中でＩＬ−１０を検出することはできなかった。
【０１４７】
（実施例９．ミクロ粒子の抗炎症活性）
慢性炎症の結果として腸ポリープを発生しやすい１０週齢のＡＰＣｍｉｎ／＋マウスに、ブランク対照粒子またはＩＬ−１０負荷粒子（ＴＧＦ−βの実施例と同様に調製された１ｍｇの粒子中に０．５μｇのＩＬ−１０）のいずれかにより、週３回４週間にわたり胃管栄養法を行った。次いで、腸を、ポリープ負荷について分析した。
【０１４８】
結果
経口胃管栄養法の６時間後、ＦＩＴＣ−ＢＳＡミクロ粒子は、治療されたＡＰＣｍｉｎ／＋マウスのＰＰおよびＭＬＮから局在化していた（データは示されていない）。
【０１４９】
ＩＬ−１０を施されたマウスは、ポリープ負荷において２倍超の減少を示した（図４Ａ）。さらに、経口治療の経過にわたって、ＩＬ−１０で治療されたマウスは、腸疾患に関係した貧血（図４Ｂ）、脾腫（図４Ｃ）および体重減少（図４Ｄ）を含む全身性異常を、より少なく示した。図４Ｃには、代表的なＨ＆Ｅおよび抗ｖＷＦ染色した切片が示されている。巨核球を直接可視化した（挿入パネル）。脾臓の病理学的スコア（ｎは、パネルＡと同じである）および巨核細胞増加（１０〜１２高倍率視野にわたって、群当たりｎ＝３）を定量化した。
【０１５０】
ＩＬ−１０を施されたマウスも、対照マウスに対して延長された生存率を示した（図４Ｅ）。治療は７０日目に開始した。
【０１５１】
ＩＬ−１０用量を増大させても、治療効能は改善されなかった（データは示されていない）。
【０１５２】
（実施例１０．腸Ｔ細胞におけるＩＬ−１７発現プロファイル）
ＡＰＣｍｉｎ／＋マウスを、誘導Ｔｒｅｇ枯渇のＤＥＲＥＧマウスモデルと交差させた（ｃｒｏｓｓｅｄ）。１０週齢のＡＰＣｍｉｎ／＋−ＤＥＲＥＧマウスに、対照またはＩＬ−１０ミクロ粒子治療のいずれかと併用して、モック（ＰＢＳ）または部分的Ｔｒｅｇ枯渇（ＤＴ）のいずれかを施した。治療期間の最後に、疾患マーカーを定量化した。
【０１５３】
部分的Ｔｒｅｇ枯渇は、２８日間でＦｏｘＰ３＋細胞の７０％超の減少をもたらしたが、それでも全Ｔｒｅｇ消失を施されたマウスにおいて一般的にみられる破局的な骨髄増殖性およびリンパ増殖性障害は回避された。部分的Ｔｒｅｇ枯渇は、ポリープ負荷、無月経（ａｍｅｎｉａ）および脾臓の病理を低下させ、ＩＬ−１０負荷粒子の投与は、枯渇誘発効果をさらに増進させた（図５Ａ〜Ｃを参照されたい）。
【０１５４】
単離されたＣＤ４５．２＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＴｒｅｇをＣＦＳＥ標識ＣＤ４５．１＋レスポンダー細胞と混合し、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＴｒｅｇ抑制アッセイにかけた。レスポンダー細胞を、世代数、ＣＤ４４の発現および総数について評価した。レシピエントリンパ節におけるＩＦＮγ＋ＣＤ４５．１＋ＣＤ４＋細胞の有病率（ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ）も決定した。対照ＡＰＣｍｉｎ／＋マウスから採取された細胞と比較して、ＩＬ−１０粒子で治療されたマウスから採取された細胞は、ナイーブＴ細胞増殖および活性化を有効に抑制した（図６Ａ〜６Ｂを参照されたい）。
【０１５５】
ＭＬＮ  ＣＤ４５．２＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞を、１０週齢未治療ＣＤ４５．２＋ＡＰＣｍｉｎ／＋マウスに養子移入した。ポリープ負荷、ＲＢＣレベルおよびＭＬＮ  Ｔｈ１７細胞の有病率を、移入後４週間でレシピエントにおいて評価した。ＩＬ−１０粒子治療マウスからＡＰＣｍｉｎ／＋マウスへの細胞の移植は、ポリープ症を低下させ、貧血を矯正し、Ｔｈ１７細胞の有病率を低下させた（図７Ａ〜７Ｃを参照されたい）。
【０１５６】
（実施例１１．ＨＰＬＣで測定された化学的完全性）
ポリマーミクロスフェア内に含まれるタンパク質の負荷を決定するために、２つの異なる高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）アッセイを開発し、検証した。１つ目のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）アッセイでは、１．０ｍｌ／ｍｉｎの流量、１０ｕｌの注射体積および２０分間の泳動（ｒｕｎ）時間を用いる。タンパク質を２８０ｎｍでの紫外吸光度により検出し、参照基準と比較した。２つ目のアッセイである逆相（ＲＰ）ＨＰＬＣアッセイも、タンパク質カプセル化を定量化するために使用した。この方法は、０．４ｍｌ／ｍｉｎの流量、１０ｕｌの注射体積および４０分間の泳動時間を用いる。
【０１５７】
タンパク質を２８０ｎｍでの紫外吸光度により検出し、参照基準と比較した。図８Ａおよび図８Ｂは、それぞれマトリクス粒子およびＩＬ−１２参照基準から抽出されたＩＬ−１２からのクロマトグラムを表す。重なりにより、化学的完全性に変化がないことが示されている。
【０１５８】
（実施例１２．ＰＸＲＤで測定された結晶の完全性）
複屈折の誘発が、ポリマーの非晶質または結晶のアラインメントおよび構造に対して影響を及ぼすかどうかを定量的に確認するために、ベース材料の初期Ｘ線回折（ＸＲＤ）プロファイルを確立した。これを、ＤａＶｉｎｃｉソフトウェアを備えたＢｒｕｋｅｒ  Ｄ−８  Ａｄｖａｎｃｅ  Ｘ線粉末回折システム（Ｂｒｕｋｅｒ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を使用して達成した。ＸＲＤは、４０ｋＶおよび４０ｍＡで動作するＣｕ  Ｘ線管を備えた。ユニットは、ゴニオメーターの中心から２０ｃｍに１３．５ｃｍ直径のウィンドウセットを有するＢｒｕｋｅｒ  Ｖａｎｔｅｃ−５００Ｘｅ−ＣＯ２ガス充填検出器も備えている。システムの光学系は、Ｃｕについて０．２５°の出力ビーム広がりおよび４．０ｍｍ未満のスポット直径を有するポリキャップ、および入射ビーム経路上の７９ｍｍの長さの０．３ｍｍコリメーターからなる。スキャンを以下の様式で実施した。
【０１５９】
最初に、ポリマー試料を、高さについてマイクロメーターを使用して測定した。このことの目的は、試料が、アルミニウム試料ステージと同一平面上にあることを確実にするためであった。同一平面上にあるためには、これが試料ステージのＺ平面から引くことができる高さの限界なので、試料は、１ｍｍより高い高さを有していてはならない。試料の高さが、ＸＲＤ制約の許容範囲であることが検証されたら、アクリル円板を使用して、その試料を、Ｂｒｕｋｅｒ粉末ＸＲＤ試料プラットフォーム上に置いた。試料を所定の位置に固定し、そのそれぞれの高さをＤａＶｉｎｃｉ  ＸＲＤソフトウェアに入力した。必要データがソフトウェアに入力されたら、ＸＲＤスキャンを、０．０２°のバーチャルステップサイズおよびステップ当たり３０ｓのカウンティング時間で、１５°〜７０°２θから実行した。
【０１６０】
図９により実証されるように、ポリマーを単独か、または粒子マトリクスの一部として使用した場合、半結晶形態のＦ１２７およびＰＥＧ３３５０は実質的に変化しなかった。
【０１６１】
（実施例１３．噴霧乾燥を使用したベンチスケールプロセスのスケールアップ）
凍結乾燥ステップ（ステップ１）によりＴＧＦｂ１などの微粒子化タンパク質を形成させる第１ステップ、続いてＴＧＦｂ１を含む半結晶性マトリクスを形成させるステップを含む本明細書で説明するベンチスケールプロセスを、凍結乾燥および沈殿プロセスの代わりに２つの噴霧乾燥プロセスを使用してスケールアップした。
【０１６２】
スケールアッププロセスにおいて、ベンチスケールプロセスと同じ材料を使用した。半結晶性ポリマーは、ＰＥＧ４５００、ＰＥＧ３３５０およびＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７であった。ＴＧＦβ１はタンパク質であった。しかし、コストが高いため、標準的なベンチスケールプロセスにおいてカプセル化されたＴＧＦβ１の１／１０だけの濃度を使用した。
【０１６３】
第１の噴霧乾燥プロセス、すなわち微粒子化プロセスにおいて、ｍＴＧＦβ１、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０、ＰＥＧ４５００、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７、スクロース、グリシンおよびＰＶＰを、水およびｔｅｒｔ−ブチルアルコールの溶媒と混合した。この処方物を、適切な液体供給速度、圧力、入口および出口温度ならびに乾燥ガス流量で噴霧器に供給して、薬剤の微粒子化された粒子を形成させた。
【０１６４】
第２のステップで、第１のステップからの微粒子化された粒子を、非晶質ポリマー、ＰＬＧＡおよびＰＬＡと一緒に、半結晶性ポリマー、ＰＥＧ３３５０およびＰＥＧ４５００と混合した。ポリマーおよび賦形剤を、微粒子化されたＴＧＦβ１をその中に分散させながら、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、エタノールおよび水に溶解した。第２の噴霧器に供給された生成処方物は：ＤＣＭ、エタノールおよび水の中のＴＧＦβ１、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｅｗｗｎ８０、ＰＥＧ４５００、スクロース、グリシン、ＰＶＰ、ＰＬＧＡ、ＰＬＡ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ−１２７およびＰＥＧ３３５０を含んだ。この処方物を、適切な液体供給速度、圧力、入口および出口温度ならびに乾燥ガス流量で噴霧器に供給して、ＴＧＦβ１の粒子を含むマトリクスを形成させた。
【０１６５】
第２の噴霧乾燥ステップを使用して、ブランク粒子も調製した。
【０１６６】
得られたマトリクスの結晶化度を、ＤＳＣおよびＰＸＲＤを使用して評価した。
【０１６７】
図１０は、６バッチのブランク噴霧乾燥粒子（ＳＤブランク１、ＳＤブランク２、ＳＤブランク３、ＳＤブランク４、ＳＤブランク５およびＳＤブランク６）、１つのバッチのＴＧＦβ１を含む噴霧乾燥粒子（ＳＤ  ＴＧＦβ１）、凍結乾燥ステップ、続く濾過および回収ステップ（沈殿）を含むベンチスケールプロセスによって形成されたブランクマトリクス粒子（ベンチスケールブランク）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ１２７、ＰＥＧ３３５０、ポリ乳酸（ＰＬＡ）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）についてのＰＸＲＤスキャンの重ね合わせである。図１０に示すように、ＰＬＡおよびＰＬＧＡの試料は非晶質である。噴霧乾燥ブランク粒子およびＴＧＦβ１を含む噴霧乾燥粒子は、ベンチスケールブランク粒子と類似した結晶プロファイルを有しており、これは、ベンチスケール方法およびスケールアップ方法において類似した生成物が調製されたことを実証している。
【０１６８】
単一のＴｍが、ＤＳＣによって分析された試料において約５９℃で観察された。これは、ベンチスケール方法およびスケールアップ方法において類似の生成物が調製されたことをさらに実証している。
【０１６９】
（実施例１４．スケールアップバッチ試料からの放出プロファイル）
タンパク質放出を検証するために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの放出アッセイを実施した。簡潔に言えば、１０ｍｇのＴＧＦβ１粒子を０．２ｍＬ放出緩衝液（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１０％ＦＣＳ）に懸濁し、３連で、９６ウェルプレートのウェルに移した。プレートを３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートし、上清を毎日取り換え、ＴＧＦβ  ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ−Ｅｎｄｏｇｅｎ、Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）またはバイオアッセイ（以下）での使用のために−２０℃で貯蔵した。
【０１７０】
スケールアップバッチ対ベンチスケールバッチ試料の生物活性（２４ｈ）。
ＴＧＦβの生物学的活性を、ＴＧＦβ感受性マウスリンパ芽球細胞系ＨＴ−２を使用してテストした。細胞を、１５ｎｇ／ｍＬのｍ−ＩＬ−４を含む完全培地中に１．５×１０４細胞／ウェルで播種した。標準品および試料をウェルに加えて、２００μＬ／ウェルの最終体積を得た。９６ウェルプレートを３７℃、５％ＣＯ２で６７時間インキュベートした。細胞数を、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｅｌｌ  ｔｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用して、指示に従って決定した。
【０１７１】
スケールアップバッチ試料により２４時間上清中に放出された生物活性は、ベンチスケール調製物について典型的に観察されたものの１／５〜１／６であった。しかし、これは、スケールアップ調製物において使用された１／５の負荷比と一致していた。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図４Ｄ】
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【図４Ｅ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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