(57)【要約】  チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を示すがんを有する被験体を処置する方法を提供する。したがって、該被験体に、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を含む治療有効量の抗体を投与することを含む方法を提供する。また、ＴＫＩに対するがんの耐性を処置するための組成物および製造物品を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を示すがんを有する被験体の処置方法であって、前記ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が前記ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、該被験体に、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を含む治療有効量の抗体を投与することを含み、ここで：
（ｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）；
（ｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｘ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｘ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）、
それにより、該被験体におけるＥｒｂＢファミリーの構成員のチロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を処置すること
を含む方法。
【請求項２】
チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対するがんの耐性の処置のためのものと認定される製品であって、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を別々の容器内にパッケージするパッケージ材を備えており、ここで：
（ｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＨＥＲ２抗体：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメイン（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）
製品。
【請求項３】
活性成分として抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体と、薬学的に許容され得る担体または希釈剤とを含む医薬組成物であって：
（ｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＨＥＲ２抗体：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメイン（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）
医薬組成物。
【請求項４】
チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対するがんの耐性の処置における使用のための抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体であって、前記ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が前記ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、ここで：
（ｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）；
（ｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｘ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｘ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）
抗体。
【請求項５】
さらに、前記ＴＫＩを前記被験体に投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
さらに、前記ＴＫＩとは異なるさらなるＴＫＩを前記被験体に投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を示すがんを有する被験体の処置方法であって、前記ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が前記ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、該被験体に治療有効量のさらなるＴＫＩと、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に特異的に結合する治療有効量の少なくとも１種類の抗体とを投与することを含むものであり、ここで、前記さらなるＴＫＩは前記ＴＫＩと異なるものであり、前記がんは前記さらなるＴＫＩに対する耐性を示さないものである方法。
【請求項８】
ＴＫＩに対するがんの耐性を処置するための医薬の製造のための、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）とＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に特異的に結合する少なくとも１種類の抗体との使用であって、前記ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が前記ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、前記ＴＫＩが、前記がんが耐性である前記ＴＫＩと異なるさらなるＴＫＩである使用。
【請求項９】
前記少なくとも１種類の抗体が抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を含むものであり、ここで：
（ｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）；
（ｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；
（ｉｘ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含み（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｘ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）、
請求項７に記載の方法または請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記ＥｒｂＢファミリーの構成員がＥＧＦＲである、請求項１および４〜９のいずれか１項に記載の方法、抗体合剤または使用。
【請求項１１】
前記ＴＫＩが、エルロチニブ、ゲフィチニブおよびラパチニブからなる群より選択される、請求項１〜２および４〜１０のいずれか１項に記載の方法、製品、抗体合剤または使用。
【請求項１２】
前記さらなるＴＫＩが不可逆的ＴＫＩである、請求項６〜９のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項１３】
前記さらなるＴＫＩが、キナーゼドメイン内に変異を有するＥｒｂＢ受容体に結合するものである、請求項６〜９のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項１４】
前記さらなるＴＫＩが野生型ＥｒｂＢ受容体に結合しないものである、請求項１３に記載の方法または使用。
【請求項１５】
前記さらなるＴＫＩが、ペリチニブ（ＥＫＢ−５６９）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、カネルチニブ（ＣＩ−１０３３）、バンデタニブ（ＺＤ６４７４）、アファチニブ、ダコミチニブ、ＡＺＤ９２９１、ロシレチニブ（ＣＯ−１６８６）、ＨＭ６１７１３およびＷＺ４００２からなる群より選択される、請求項６〜９のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項１６】
前記さらなるＴＫＩがＡＺＤ９２９１である、請求項６〜９のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項１７】
前記さらなるＴＫＩがゴールドスタンダード投薬量未満で単独薬剤として投与される、請求項６〜９および１２〜１６のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項１８】
前記さらなるＴＫＩが、皮膚発疹、下痢、口腔内のただれ、爪周囲炎、倦怠感、高血糖症、肝毒性、腎不全、心血管系への影響、電解質異常およびＧＩ穿孔からなる群より選択される少なくとも１つの副作用を生じない用量で投与される、請求項６〜９および１２〜１７のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項１９】
前記がんが肺がんである、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法、製品、抗体合剤または使用。
【請求項２０】
前記肺がんが非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である、請求項１９に記載の方法、製品、抗体合剤または使用。
【請求項２１】
前記がんの前記細胞が、キナーゼドメイン内に変異を有するＥｒｂＢ受容体を発現している、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法、製品、抗体合剤または使用。
【請求項２２】
前記変異が、前記ＥｒｂＢのキナーゼ活性に実質的に影響を及ぼさないものである、請求項２１に記載の方法、製品、抗体合剤または使用。
【請求項２３】
前記ＥｒｂＢがＥＧＦＲである、請求項２１〜２２のいずれか１項に記載の方法、製品、抗体合剤または使用。
【請求項２４】
前記変異が７９０位におけるトレオニンのメチオニンへの置換（Ｔ７９０Ｍ）を含む、請求項２３に記載の方法、製品、抗体合剤または使用。
【請求項２５】
さらに、該被験体を、放射線療法および化学療法からなる群より選択される治療に供することを含む、請求項１および５〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記投与が反復投与を含む、請求項１および５〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記反復投与が隔週投与を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記パッケージ材が、前記抗体をパッケージするための少なくとも２つの容器を含む、請求項２および１０〜２４のいずれか１項に記載の製品。
【請求項２９】
前記活性成分が共製剤中に存在している、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記活性成分が別々の製剤中に存在している、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記抗体が組換え抗体である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法、製品、医薬組成物、抗体合剤または使用。
【請求項３２】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法、製品、医薬組成物、抗体合剤または使用。
【請求項３３】
前記抗体がヒト化抗体または部分ヒト化抗体である、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法、製品、医薬組成物、抗体合剤または使用。
【請求項３４】
前記抗体が、異種移植片マウスモデルにおいて対照と比べて腫瘍体積の少なくとも５０％の縮小を引き起こすように選択される、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法、製品、医薬組成物、抗体合剤または使用。
【請求項３５】
前記抗体が、化学療法と相乗的であるように選択される、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法、製品、医薬組成物、抗体合剤または使用。
【請求項３６】
前記耐性が獲得型耐性である、請求項１、２、４〜２８および３１〜３５のいずれか１項に記載の方法、製品、抗体合剤または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明に至った研究は、第７次欧州研究開発フレームワーク計画（Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ’ｓ  Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ  Ｐｒｏｇｒａｍ）（ＦＰ７２００７〜２０１１）により、贈与契約２５９７７０  ＬＵＮＧＴＡＲＧＥＴにおいて資金提供を受けたものである。
【背景技術】
【０００２】
発明の分野および背景
本発明は、その一部の実施形態において、チロシンキナーゼ阻害薬に耐性のがんを処置するための組成物および方法に関する。
【０００３】
受容体型チロシンキナーゼのＥｒｂＢファミリーには、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ−１、ＨＥＲ１とも称される）、ＨＥＲ２（ＥｒｂＢ−２）、ＨＥＲ３（ＥｒｂＢ−３）およびＨＥＲ４（ＥｒｂＢ−４）が含まれ、広く知られており、研究されている。ＥｒｂＢファミリーの構成員およびその多数のリガンド分子は階層化シグナル伝達ネットワークを構成しており、これは、いくつかのヒトのがんに関与している。ＥｒｂＢの活性化は、いくつかのシグナル伝達カスケード（例えば、細胞の増殖、血管新生、浸潤および転移に影響を及ぼすＭＡＰＫおよびＰＩ（３）Ｋ／Ａｋｔ）の下流刺激をもたらす［Ｃｉｔｒｉ  ａｎｄ  Ｙａｒｄｅｎ  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００６）７（７）：５０５−１６］。発癌性の可能性および利用可能性のため、ＥｒｂＢタンパク質は、薬学的介入のための魅力的な標的として登場してきた。ＥｒｂＢ機能に干渉できるストラテジー、例えば、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）およびチロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）により、ここ１０年間で相次いで、肺、乳房、結腸および他の型のがんを有する多くの患者の処置において非常に好成績が示されているいくつかの腫瘍学薬物が得られている。
例えば、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂセツキシマブ（エルビタックス（登録商標））および抗ＨＥＲ２  ｍＡｂトラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））が開発され、ヒトのがんの処置に承認されている。
【０００４】
ＴＫＩは、チロシンキナーゼドメインのＡＴＰ結合部位に結合するように設計され、ＡＴＰより先に結合してＥｒｂＢ受容体、例えばＥＧＦＲまたはＨＥＲ２のキナーゼ活性を直接阻害する小分子の治療薬である。例えば、ＥＧＦＲに対するいくつかのＴＫＩが開発されている；例えば、ゲフィチニブ（イレッサ）およびエルロチニブ（タルセバ（登録商標））は最近、腫瘍学的処置におけるＦＤＡの承認が得られた。また、複数のＥｒｂＢ種を同時に標的化するＴＫＩ、例えば、ＣＩ−１０３３（ＰＤ１８３８０５）およびラパチニブ（ＧＷ５７２０１６／タイケルブ（登録商標））も開発されている。
【０００５】
しかしながら、多くのがん患者はＥｒｂＢ標的化療法に感受性であることがわかったが、多くの他の患者は処置に対して耐性であり、さらには、最初は応答性の患者のうち、多くの割合で腫瘍の再発が起こり、治療に対して不応性となる。したがって、例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）患者はＴＫＩに対して最初は劇的に応答するにもかかわらず、すべての患者がおよそ１年以内に耐性を獲得する（６，７）。この獲得型耐性の最も一般的な（＞５０％）機構は、ＥＧＦＲキナーゼドメイン内の特定の第２の部位の変異を伴うものである。７９０位におけるトレオニン−と−メチオニンの置換は、ＴＫＩの結合を制限する立体障害をもたらすが、キナーゼ活性を保持する［Ｗａｎｇ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．（２００８）１１８（７）：２３８９−２３９２］。別の受容体型チロシンキナーゼＭＥＴをコードしている遺伝子の増幅は、獲得型耐性の症例の５〜１０％において起こっている（１１，１２）。
【０００６】
ＴＫＩ耐性を克服するために、いくつかの第２世代および第３世代のＴＫＩが開発中である（１３，１４）。あるいはまた、セツキシマブと化学療法薬（シスプラチン／ビノレルビン）を併用する臨床試験では、患者の生存率において比較的小さいが有意な増大が示された（１５）。
【０００７】
ＥｒｂＢファミリーの構成員の協働的役割は、特定のＥｒｂＢを標的化するｍＡｂおよびＴＫＩの両方に対する耐性が他のＥｒｂＢファミリーの構成員の調節不全と活性の増大と関連していることを示すインビトロ試験およびインビボ試験によってさらに裏付けられている（例えば、Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．Ｊｕｎ  ２６，２００８；２７（２８）：３９４４−３９５６；Ｔａｋｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１２）２，９２２−９３３およびＳｅｒｇｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２００７）４４５，４３７−４４１参照］。したがって、ＥｒｂＢファミリー阻害薬の合剤を使用してＥｒｂＢ経路阻害薬に対する耐性を克服するための方法は、当該技術分野において、例えば、乳がん、肺がん、頭頸部がんでも報告された。例えば、国際特許出願公開公報番号ＷＯ２０１２／１２５８６４には、ＥｒｂＢ−３阻害薬と第２のＥｒｂＢ経路阻害薬の使用が開示されており、ＥｒｂＢ−３阻害薬は、小分子ＥＧＦＲ阻害薬ゲフィチニブに対する獲得型耐性を克服するためにＥｒｂＢ−２も標的化する二重特異性抗体であり得る。
【０００８】
ＥｒｂＢ標的化療法に対するがんの耐性の処置における抗体合剤に関する他の技術文献としては：
米国特許出願公開番号：２０１０００１６２９６；
国際特許出願公開公報番号：ＷＯ２０１２／０５９８５７；
Ｓａｒｕｐ  ｅｔ  ａ１．［Ｍｏｌ．Ｃａｎｃ．Ｔｈｅｒ．（２００８）７（１０）：３２２３−３２３６］；
Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．［Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１４，１３：１０５］；
Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．［Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ  Ｐｒａｃｔ．２０１２；２０１２：８１７３０４］；
Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．［Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．（２００８）２７（２８）：３９４４−３９５６］；
Ｒｅｘｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１３）１９（１９）：５３９０−４０１］；および
Ｔａｋｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．［Ｃａｎｃｅｒ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１２）２，９２２−９３３］
が挙げられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】国際特許出願公開第２０１２／１２５８６４号
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１０００１６２９６号
【特許文献３】国際特許出願公開第２０１２／０５９８５７号
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｃｉｔｒｉ  ａｎｄ  Ｙａｒｄｅｎ  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（２００６）７（７）：５０５−１６
【非特許文献２】Ｗａｎｇ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．（２００８）１１８（７）：２３８９−２３９２
【非特許文献３】Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．Ｊｕｎ  ２６，２００８；２７（２８）：３９４４−３９５６
【非特許文献４】Ｔａｋｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１２）２，９２２−９３３
【非特許文献５】Ｓｅｒｇｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ（２００７）４４５，４３７−４４１
【非特許文献６】Ｓａｒｕｐ  ｅｔ  ａ１．［Ｍｏｌ．Ｃａｎｃ．Ｔｈｅｒ．（２００８）７（１０）：３２２３−３２３６］
【非特許文献７】Ｍａ  ｅｔ  ａｌ．［Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  ２０１４，１３：１０５］
【非特許文献８】Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．［Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ  Ｐｒａｃｔ．２０１２；２０１２：８１７３０４］
【非特許文献９】Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．［Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．（２００８）２７（２８）：３９４４−３９５６］
【非特許文献１０】Ｒｅｘｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１３）１９（１９）：５３９０−４０１］
【非特許文献１１】Ｔａｋｅｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．［Ｃａｎｃｅｒ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（２０１２）２，９２２−９３３］
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
発明の概要
本発明の一部の実施形態の一態様により、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を示すがんを有する被験体の処置方法であって、該ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が該ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、該被験体に、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を含む治療有効量の抗体を投与すること、ここで：
（ｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）；
（ｉｉ）該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｖ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｘ）該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｘ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）、
それにより、該被験体におけるＥｒｂＢファミリーの構成員のチロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を処置すること
を含むものである方法を提供する。
【００１２】
本発明の一部の実施形態の一態様により、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対するがんの耐性の処置のためのものと認定される製造物品であって、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を別々の容器内にパッケージするパッケージ材を備えており、ここで：
（ｉ）該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）該抗ＨＥＲ２抗体：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメイン（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｖｉｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）
製造物品を提供する。
【００１３】
本発明の一部の実施形態の一態様により、活性成分として抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体と、薬学的に許容され得る担体または希釈剤とを含む医薬組成物であって：
（ｉ）該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）該抗ＨＥＲ２抗体：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメイン（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｖｉｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）
医薬組成物を提供する。
【００１４】
本発明の一部の実施形態の一態様により、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対するがんの耐性の処置における使用のための抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体であって、該ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が該ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、ここで：
（ｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）；
（ｉｉ）該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｖ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｘ）該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｘ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）
抗体を提供する。
【００１５】
本発明の一部の実施形態によれば、該方法は、さらに、該ＴＫＩを該被験体に投与することを含む。
【００１６】
本発明の一部の実施形態によれば、該方法は、さらに、該ＴＫＩと異なるさらなるＴＫＩを該被験体に投与することを含む。
【００１７】
本発明の一部の実施形態の一態様により、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を示すがんを有する被験体の処置方法であって、該ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が該ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、該被験体に治療有効量のさらなるＴＫＩと、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に特異的に結合する治療有効量の少なくとも１種類の抗体とを投与することを含むものであり、ここで、該さらなるＴＫＩは該ＴＫＩと異なるものであり、該がんは該さらなるＴＫＩに対する耐性を示さないものである方法を提供する。
【００１８】
本発明の一部の実施形態の一態様により、ＴＫＩに対するがんの耐性を処置するための医薬の製造のための、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）とＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に特異的に結合する少なくとも１種類の抗体との使用であって、該ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が該ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、該ＴＫＩが、該がんが耐性である該ＴＫＩと異なるさらなるＴＫＩである使用を提供する。
【００１９】
本発明の一部の実施形態によれば、該少なくとも１種類の抗体が抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を含むものであり、ここで：
（ｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）；
（ｉｉ）該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｖ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、該抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉｉ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｘ）該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｘ）該抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、該抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；該抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）。
【００２０】
本発明の一部の実施形態によれば、ＥｒｂＢファミリーの構成員はＥＧＦＲである。
【００２１】
本発明の一部の実施形態によれば、ＴＫＩは、エルロチニブ、ゲフィチニブおよびラパチニブからなる群より選択される。
【００２２】
本発明の一部の実施形態によれば、該さらなるＴＫＩは不可逆的ＴＫＩである。
【００２３】
本発明の一部の実施形態によれば、該さらなるＴＫＩは、キナーゼドメイン内に変異を有するＥｒｂＢ受容体に結合するものである。
【００２４】
本発明の一部の実施形態によれば、該さらなるＴＫＩは野生型ＥｒｂＢ受容体に結合しないものである。
【００２５】
本発明の一部の実施形態によれば、該さらなるＴＫＩは、ペリチニブ（ｐｅｒｌｉｔｉｎｉｂ）（ＥＫＢ−５６９）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、カネルチニブ（ＣＩ−１０３３）、バンデタニブ（ＺＤ６４７４）、アファチニブ、ダコミチニブ、ＡＺＤ９２９１、ロシレチニブ（ＣＯ−１６８６）、ＨＭ６１７１３およびＷＺ４００２からなる群より選択される。
【００２６】
本発明の一部の実施形態によれば、該さらなるＴＫＩはＡＺＤ９２９１である。
【００２７】
本発明の一部の実施形態によれば、該さらなるＴＫＩはゴールドスタンダード投薬量未満で単独薬剤として投与される。
【００２８】
本発明の一部の実施形態によれば、該さらなるＴＫＩは、皮膚発疹、下痢、口腔内のただれ、爪周囲炎、倦怠感、高血糖症、肝毒性、腎不全、心血管系への影響、電解質異常およびＧＩ穿孔からなる群より選択される少なくとも１つの副作用を生じない用量で投与される。
【００２９】
本発明の一部の実施形態によれば、がんは肺がんである。
【００３０】
本発明の一部の実施形態によれば、肺がんは非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。
【００３１】
本発明の一部の実施形態によれば、がんの細胞は、キナーゼドメイン内に変異を有するＥｒｂＢ受容体を発現している。
【００３２】
本発明の一部の実施形態によれば、該変異は、該ＥｒｂＢのキナーゼ活性に実質的に影響を及ぼさないものである。
【００３３】
本発明の一部の実施形態によれば、該ＥｒｂＢはＥＧＦＲである。
【００３４】
本発明の一部の実施形態によれば、該変異は７９０位におけるトレオニンのメチオニンへの置換（Ｔ７９０Ｍ）を含む。
【００３５】
本発明の一部の実施形態によれば、該方法は、さらに、該被験体を、放射線療法および化学療法からなる群より選択される治療に供することを含む。
【００３６】
本発明の一部の実施形態によれば、該投与は反復投与を含む。
【００３７】
本発明の一部の実施形態によれば、該反復投与は隔週投与を含む。
【００３８】
本発明の一部の実施形態によれば、該パッケージ材は、該抗体をパッケージするための少なくとも２つの容器を含む。
【００３９】
本発明の一部の実施形態によれば、活性成分は共製剤中に存在している。
【００４０】
本発明の一部の実施形態によれば、活性成分は別々の製剤中に存在している。
【００４１】
本発明の一部の実施形態によれば、該抗体は組換え抗体である。
【００４２】
本発明の一部の実施形態によれば、該抗体はモノクローナル抗体である。
【００４３】
本発明の一部の実施形態によれば、該抗体はヒト化抗体または部分ヒト化抗体である。
【００４４】
本発明の一部の実施形態によれば、該抗体は、異種移植片マウスモデルにおいて対照と比べて腫瘍体積の少なくとも５０％の縮小を引き起こすように選択される。
【００４５】
本発明の一部の実施形態によれば、該抗体は、化学療法と相乗的であるように選択される。
【００４６】
本発明の一部の実施形態によれば、該方法は、さらに、該ＴＫＩを該被験体に投与することを含む。
【００４７】
本発明の一部の実施形態によれば、耐性は獲得型耐性である。
【００４８】
特に定義していない限り、本明細書で用いる技術用語および／または科学用語はすべて、本発明が関する技術分野の当業者に一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと同様または同等の方法および材料が、本発明の実施形態の実施または試験において使用され得るが、例示的な方法および／または材料を以下に説明する。矛盾する場合は、本特許本明細書（定義を含む）に支配される。また、材料、方法および実施例は例示にすぎず、必ずしも限定を意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
一例にすぎない本発明の一部の実施形態を、添付の図面を参照しながら本明細書において説明する。次に、図面について詳細に具体的に言及するが、示した詳細は、本発明の実施形態の例示的論考の一例であり、例示の目的のためにすぎないことを強調しておく。これに関連して、図面とともに考慮される説明により、当業者には、どのようにして本発明の実施形態が実施され得るかが自明となろう。
図面において：
【図１Ａ】図１Ａ〜Ｅは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（ｍＡｂ）での処置によりＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株においてＨＥＲ２およびＨＥＲ３の上方調節を誘導することを示す。図１Ａは、ＭＴＴアッセイによる評価時の、漸増用量のエルロチニブ（上）またはセツキシマブ（下）での７２時間の処置後の細胞生存率のパーセンテージを示す。データは平均±ＳＤ（ｎ＝３つの実験）として示している。
【図１Ｂ】図１Ａ〜Ｅは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（ｍＡｂ）での処置によりＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株においてＨＥＲ２およびＨＥＲ３の上方調節を誘導することを示す。図１Ｂは、ｍＡｂ  ５６５（上）またはセツキシマブ（下）での処置後のＥＧＦＲの発現の低減ならびにＨＥＲ２、ＨＥＲ２およびこれらの活性型リン酸化形態の発現の増大を示す代表的なウエスタンブロット写真を示す。
【図１Ｃ】図１Ａ〜Ｅは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（ｍＡｂ）での処置によりＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株においてＨＥＲ２およびＨＥＲ３の上方調節を誘導することを示す。図１Ｃは、定量的リアルタイムＰＣＲによる評価時の、１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ  ５６５での処置後のＨＥＲ２およびＨＥＲ３のｍＲＮＡレベルの棒グラフを示す。データは平均±ＳＤ（ｎ＝３つの実験）として示している，＊ｐ≦０．０５；＊＊ｐ≦０．０１。
【図１Ｄ】図１Ａ〜Ｅは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（ｍＡｂ）での処置によりＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株においてＨＥＲ２およびＨＥＲ３の上方調節を誘導することを示す。図１Ｄ〜Ｅは、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ  ５６５（上）またはセツキシマブ（下）での処置後の、ＨＥＲ２プロモーター（左）またはＨＥＲ３プロモーター（右）に対応するｐｍＣｈｅｒｒｙ−ウミシイタケおよびｐＧＭ３−ホタルルシフェラーゼレポータープラスミドでコトランスフェクションしたＰＣ９ＥＲ（図１Ｄ）およびＨ１９７５（図１Ｅ）細胞における相対ルシフェラーゼ活性の棒グラフを示す。空ｐＧＭ３プラスミド（空ベクター）およびＳＶ４０プロモーターを有するｐＧＭ３−ホタルベクター（ＳＶ４０プロモーター）でトランスフェクトした細胞を、それぞれ陰性対照および陽性対照として使用した。データは、代表的な実験の平均（ｎ＝３）として示している。
【図１Ｅ】図１Ａ〜Ｅは、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（ｍＡｂ）での処置によりＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）細胞株においてＨＥＲ２およびＨＥＲ３の上方調節を誘導することを示す。図１Ｄ〜Ｅは、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ  ５６５（上）またはセツキシマブ（下）での処置後の、ＨＥＲ２プロモーター（左）またはＨＥＲ３プロモーター（右）に対応するｐｍＣｈｅｒｒｙ−ウミシイタケおよびｐＧＭ３−ホタルルシフェラーゼレポータープラスミドでコトランスフェクションしたＰＣ９ＥＲ（図１Ｄ）およびＨ１９７５（図１Ｅ）細胞における相対ルシフェラーゼ活性の棒グラフを示す。空ｐＧＭ３プラスミド（空ベクター）およびＳＶ４０プロモーターを有するｐＧＭ３−ホタルベクター（ＳＶ４０プロモーター）でトランスフェクトした細胞を、それぞれ陰性対照および陽性対照として使用した。データは、代表的な実験の平均（ｎ＝３）として示している。
【図２】図２は、５０ｐＭのＥＧＦＲ特異的ｓｉＲＮＡでのトランスフェクションの２日後の、対照ｓｉＲＮＡと比べたときのＮＳＣＬＣ  ＰＣ９ＥＲ細胞におけるＥＧＦＲの枯渇ならびにＨＥＲ２およびＨＥＲ３のタンパク質レベルの増大を示す代表的なウエスタンブロット写真である。
【図３】図３は、ＭＴＴアッセイによる評価時の、１０μｇ／ｍｌの表示した抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２または抗ＨＥＲ３  ｍＡｂでの処置開始の４日後のＮＳＣＬＣ  Ｈ１９７５（左）およびＰＣ９ＥＲ（右）細胞の生存率パーセンテージを示す棒グラフを示す。データは平均±ＳＤ（ｎ＝３）として示している，＊ｐ≦０．０５；＊＊ｐ≦０．０１；＊＊＊ｐ≦０．００１。
【図４】図４は、１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＥＧＦＲ＋抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  ５６５＋ｍＡｂ  １２，１／２と表示）、抗ＥＧＦＲ＋抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ５６５＋ｍＡｂ  ３３，１／３と表示）または抗ＥＧＦＲ＋抗ＨＥＲ２＋抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ５６５＋ｍＡｂ  １２＋ｍＡｂ  ３３，１／２／３と表示）での処置の２４時間後の、ＮＳＣＬＣ  Ｈ１９７５細胞におけるＥＧＦＲ（赤）、ＨＥＲ３（緑，上側パネル）およびＨＥＲ２（緑，下側パネル）の発現を示す蛍光顕微鏡写真を示す。スケールバー：４μｍ．
【図５Ａ】図５Ａ〜Ｂは、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂがＨＥＲ２およびＨＥＲ３のプロモーターを活性化することを示す。ＨＥＲ２（図５Ａ）またはＨＥＲ３（図５Ｂ）に対応するｐｍＣｈｅｒｒｙ−ウミシイタケまたはｐＧＭ３−ホタルルシフェラーゼプロモーターレポータープラスミドを安定的に発現させるＮＳＣＬＣ  ＰＣ９ＥＲ細胞を、１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに考えられ得るすべての３剤合剤で処置した。対照には、バッファー（Ｃ）、陰性対照（−）として空ｐＧＭ３ベクターおよび陽性対照（＋）としてＳＶ４０プロモーターを有するｐＧＭ３−ホタルを含めた。データは代表的な実験の平均±ＳＤ（ｎ＝３）として示している。
【図５Ｂ】図５Ａ〜Ｂは、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂがＨＥＲ２およびＨＥＲ３のプロモーターを活性化することを示す。ＨＥＲ２（図５Ａ）またはＨＥＲ３（図５Ｂ）に対応するｐｍＣｈｅｒｒｙ−ウミシイタケまたはｐＧＭ３−ホタルルシフェラーゼプロモーターレポータープラスミドを安定的に発現させるＮＳＣＬＣ  ＰＣ９ＥＲ細胞を、１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに考えられ得るすべての３剤合剤で処置した。対照には、バッファー（Ｃ）、陰性対照（−）として空ｐＧＭ３ベクターおよび陽性対照（＋）としてＳＶ４０プロモーターを有するｐＧＭ３−ホタルを含めた。データは代表的な実験の平均±ＳＤ（ｎ＝３）として示している。
【図６】図６は、１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置後のＮＳＣＬＣ  ＰＣ９ＥＲ細胞におけるＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＡＫＴ、ＥＲＫおよびこれらのリン酸化形態の発現を示すウエスタンブロット写真を示す。
【図７Ａ】図７Ａ〜Ｃは、３剤ｍＡｂ合剤の方が良好にＮＳＣＬＣ細胞増殖を阻害することを示す。図７Ａ〜Ｂは、ＭＴＴアッセイによる評価時の、１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置４日後のＨ１９７５（図７Ａ）およびＰＣ９ＥＲ（図７Ｂ）細胞の生存率パーセンテージを示す棒グラフである。データは平均±ＳＤ（ｎ＝３つの実験）として示している；＊ｐ≦０．０５；＊＊ｐ≦０．０１；＊＊＊ｐ≦０．００１。
【図７Ｂ】図７Ａ〜Ｃは、３剤ｍＡｂ合剤の方が良好にＮＳＣＬＣ細胞増殖を阻害することを示す。図７Ａ〜Ｂは、ＭＴＴアッセイによる評価時の、１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置４日後のＨ１９７５（図７Ａ）およびＰＣ９ＥＲ（図７Ｂ）細胞の生存率パーセンテージを示す棒グラフである。データは平均±ＳＤ（ｎ＝３つの実験）として示している；＊ｐ≦０．０５；＊＊ｐ≦０．０１；＊＊＊ｐ≦０．００１。
【図７Ｃ】図７Ａ〜Ｃは、３剤ｍＡｂ合剤の方が良好にＮＳＣＬＣ細胞増殖を阻害することを示す。図７Ｃは、１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置４日後のＨ１９７５細胞におけるＫｉ６７染色（緑）の蛍光顕微鏡検査写真（左）およびそれぞれの定量棒グラフ（右）を示す。細胞をＤＡＰＩ（青）と対比染色した。スケールバー：１０μｍ．
【図８Ａ】図８Ａ〜Ｄは、ｍＡｂ処置はＮＳＣＬＣ細胞においてアポトーシスを誘導しないことを示す。図８Ａ〜Ｂは、フローサイトメトリーによる評価時の、ＰＢＳまたは１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置４８時間後のヨウ化プロピジウム（ＰＩ）陽性Ｈ１９７５（図８Ａ）およびＰＣ９ＥＲ（図８Ｂ）細胞のパーセンテージを示す棒グラフである。非染色細胞を陰性対照（−）として使用し、０．５μｇ／ｍｌのピューロマイシンでの処置を陽性対照（＋）として使用した。
【図８Ｂ】図８Ａ〜Ｄは、ｍＡｂ処置はＮＳＣＬＣ細胞においてアポトーシスを誘導しないことを示す。図８Ａ〜Ｂは、フローサイトメトリーによる評価時の、ＰＢＳまたは１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置４８時間後のヨウ化プロピジウム（ＰＩ）陽性Ｈ１９７５（図８Ａ）およびＰＣ９ＥＲ（図８Ｂ）細胞のパーセンテージを示す棒グラフである。非染色細胞を陰性対照（−）として使用し、０．５μｇ／ｍｌのピューロマイシンでの処置を陽性対照（＋）として使用した。
【図８Ｃ】図８Ａ〜Ｄは、ｍＡｂ処置はＮＳＣＬＣ細胞においてアポトーシスを誘導しないことを示す。図８Ｃ〜Ｄは、ＰＢＳまたは１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置の７２時間後のＨ１９７５（図８Ｃ）およびＰＣ９ＥＲ（図８Ｄ）細胞におけるカスパーゼ−３の発現を示すウエスタンブロット写真である。０．５μｇ／ｍｌのピューロマイシンでの処置を陽性対照（＋）として使用した。
【図８Ｄ】図８Ａ〜Ｄは、ｍＡｂ処置はＮＳＣＬＣ細胞においてアポトーシスを誘導しないことを示す。図８Ｃ〜Ｄは、ＰＢＳまたは１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置の７２時間後のＨ１９７５（図８Ｃ）およびＰＣ９ＥＲ（図８Ｄ）細胞におけるカスパーゼ−３の発現を示すウエスタンブロット写真である。０．５μｇ／ｍｌのピューロマイシンでの処置を陽性対照（＋）として使用した。
【図９Ａ】図９Ａ〜Ｂは、ＭＴＴアッセイによる評価時の、漸増濃度のシスプラチン（対照）またはシスプラチンと１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ＋抗ＨＥＲ２＋抗ＨＥＲ３（それぞれ、ｍＡｂ  ５６５＋ｍＡｂ  １２＋ｍＡｂ  ３３，３ＸｍＡｂと表示）の混合物での処置の３日間後のＮＳＣＬＣ  Ｈ１９７５（図９Ａ）およびＰＣ９ＥＲ（図９Ｂ）細胞の生存率パーセンテージを示す棒グラフを示す。データは平均±ＳＤ（ｎ＝２つの実験）として示している。
【図９Ｂ】図９Ａ〜Ｂは、ＭＴＴアッセイによる評価時の、漸増濃度のシスプラチン（対照）またはシスプラチンと１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ＋抗ＨＥＲ２＋抗ＨＥＲ３（それぞれ、ｍＡｂ  ５６５＋ｍＡｂ  １２＋ｍＡｂ  ３３，３ＸｍＡｂと表示）の混合物での処置の３日間後のＮＳＣＬＣ  Ｈ１９７５（図９Ａ）およびＰＣ９ＥＲ（図９Ｂ）細胞の生存率パーセンテージを示す棒グラフを示す。データは平均±ＳＤ（ｎ＝２つの実験）として示している。
【図１０】図１０は、肺由来の細胞株ＰＣ９ＥＲ、Ｈ１９７５、ＮＬ２０およびＷＩ３８におけるＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３の細胞表面発現のフローサイトメトリーのヒストグラムを示す。
【図１１】図１１は、ルシフェラーゼ活性による評価時の、漸増濃度の抗ＥＧＦＲ＋抗ＨＥＲ２＋抗ＨＥＲ３（それぞれ、ｍＡｂ  ５６５＋ｍＡｂ  １２＋ｍＡｂ  ３３，３ＸｍＡｂと表示）での処置の３日間後の、Ｃｈｅｒｒｙ−ウミシイタケ構築物で安定的にトランスフェクトしたＮＬ２０およびＷＩ３８細胞ならびにＧＦＰ−ホタル構築物に感染させたＮＳＣＬＣ  ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５細胞の生存率を示す棒グラフである。
【図１２Ａ】図１２Ａ〜Ｃは、ルシフェラーゼ活性による評価時の増殖を示し、ＮＳＣＬＣ細胞と非がん性肺線維芽細胞との共培養によりがん性細胞の増殖は増大するが、非がん性線維芽細胞の増殖は低減されることを示す棒グラフである。図１２Ａ〜Ｂは、非標識非がん性ＷＩ３８肺線維芽細胞と共培養したＧＦＰ−ホタル感染ＰＣ９ＥＲ（図１２Ａ）またはＨ１９７５（図１２Ｂ）ＮＳＣＬＣ細胞（アスタリスクを表示）を示す。同じ非感染がん細胞と共培養したＧＦＰ−ホタル感染がん細胞を対照として使用した。
【図１２Ｂ】図１２Ａ〜Ｃは、ルシフェラーゼ活性による評価時の増殖を示し、ＮＳＣＬＣ細胞と非がん性肺線維芽細胞との共培養によりがん性細胞の増殖は増大するが、非がん性線維芽細胞の増殖は低減されることを示す棒グラフである。図１２Ａ〜Ｂは、非標識非がん性ＷＩ３８肺線維芽細胞と共培養したＧＦＰ−ホタル感染ＰＣ９ＥＲ（図１２Ａ）またはＨ１９７５（図１２Ｂ）ＮＳＣＬＣ細胞（アスタリスクを表示）を示す。同じ非感染がん細胞と共培養したＧＦＰ−ホタル感染がん細胞を対照として使用した。
【図１２Ｃ】図１２Ａ〜Ｃは、ルシフェラーゼ活性による評価時の増殖を示し、ＮＳＣＬＣ細胞と非がん性肺線維芽細胞との共培養によりがん性細胞の増殖は増大するが、非がん性線維芽細胞の増殖は低減されることを示す棒グラフである。図１２Ｃは、非感染Ｈ１９７５またはＰＣ９ＥＲと共培養したｍＣｈｅｒｒｙ−ウミシイタケトランスフェクトＷＩ３８（アスタリスクを表示）を示す。非トランスフェクトＷＩ３８細胞と共培養したｍＣｈｅｒｒｙ−ウミシイタケトランスフェクトしＷＩ３８細胞を対照として使用した。
【図１３Ａ】図１３Ａ〜Ｂは、ＰＢＳ（Ｃと表示）または１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置の５日間後の、非がん性肺線維芽細胞（Ｗ１３８）と共培養したＮＳＣＬＣ細胞（Ｈ１９７５またはＰＣ９ＥＲ）のルシフェラーゼ活性による評価時の増殖を示す棒グラフである。ＧＦＰ−ホタル感染ＰＣ９ＥＲ細胞およびｍＣｈｅｒｒｙ−ウミシイタケトランスフェクトＷＩ３８細胞にアスタリスクを表示している。データは平均±ＳＤ（ｎ＝３）として示している。
【図１３Ｂ】図１３Ａ〜Ｂは、ＰＢＳ（Ｃと表示）または１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置の５日間後の、非がん性肺線維芽細胞（Ｗ１３８）と共培養したＮＳＣＬＣ細胞（Ｈ１９７５またはＰＣ９ＥＲ）のルシフェラーゼ活性による評価時の増殖を示す棒グラフである。ＧＦＰ−ホタル感染ＰＣ９ＥＲ細胞およびｍＣｈｅｒｒｙ−ウミシイタケトランスフェクトＷＩ３８細胞にアスタリスクを表示している。データは平均±ＳＤ（ｎ＝３）として示している。
【図１４】図１４Ａ〜Ｃは、Ｈ１９７５  ＮＳＣＬＣ細胞を播種したマウスにおける生存率および腫瘍の増殖に対するＰＢＳまたは抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置のインビボ効果を示す。
【図１４Ｂ】図１４Ａ〜Ｃは、Ｈ１９７５  ＮＳＣＬＣ細胞を播種したマウスにおける生存率および腫瘍の増殖に対するＰＢＳまたは抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置のインビボ効果を示す。図１４Ｂは、処置後の腫瘍体積を示すグラフである。データは平均±ＳＥとして示している。図１４Ｂは、腫瘍担持マウスのカプラン−マイヤー生存率曲線である。
【図１４Ｃ】図１４Ａ〜Ｃは、Ｈ１９７５  ＮＳＣＬＣ細胞を播種したマウスにおける生存率および腫瘍の増殖に対するＰＢＳまたは抗ＥＧＦＲ（ｍＡｂ  ５６５，１と表示）、抗ＨＥＲ２（ｍＡｂ  １２，２と表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３と表示）ならびに３剤合剤での処置のインビボ効果を示す。図１４Ｃは、Ｈ１９７５細胞の播種の３７日後の腫瘍体積の値を示す箱ひげ図である。データは平均（水平な黒線）±ＳＤとして示しており、一方、各記号は単一の動物を表す。＊ｐ≦０．０５；＊＊＊ｐ≦０．００１。
【図１５】図１５は、ＰＣ９ＥＲ  ＮＳＣＬＣ細胞を播種したマウスにおける腫瘍の増殖に対するＰＢＳまたはセツキシマブ（ＣＴＸと表示）、トラスツズマブ（ＴＲＺと表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３３と表示）ならびに３剤合剤での処置のインビボ効果を示す。グラフは処置後の腫瘍体積を示す。データは平均±ＳＥ（ｎ＝９）として示している。
【図１６Ａ】図１６Ａ〜Ｃは、ＡＺＤ−９２９１（第３世代のＴＫＩ）での処置と、セツキシマブ（ＣＴＸと表示）、トラスツズマブ（ＴＲＺと表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３３と表示）での併用処置では、エルロチニブ耐性ＮＳＣＬＣ腫瘍のインビボでの増殖が同等に抑止されることを示す。ＣＤ１−ｎｕ／ｎｕマウスにＨ１９７５  ＮＳＣＬＣ細胞を播種し、ビヒクル、エルロチニブもしくはＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ／日）または３剤抗体合剤（ＣＴＸ＋ＴＲＺ＋３３）で処置した。図１６Ａは、処置後の腫瘍体積を示すグラフである。データは平均±ＳＥ（ｎ＝８）として示している。
【図１６Ｂ】図１６Ａ〜Ｃは、ＡＺＤ−９２９１（第３世代のＴＫＩ）での処置と、セツキシマブ（ＣＴＸと表示）、トラスツズマブ（ＴＲＺと表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３３と表示）での併用処置では、エルロチニブ耐性ＮＳＣＬＣ腫瘍のインビボでの増殖が同等に抑止されることを示す。ＣＤ１−ｎｕ／ｎｕマウスにＨ１９７５  ＮＳＣＬＣ細胞を播種し、ビヒクル、エルロチニブもしくはＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ／日）または３剤抗体合剤（ＣＴＸ＋ＴＲＺ＋３３）で処置した。図１６Ｂは、腫瘍担持マウスから採取した腫瘍を示す写真を示す。画像は、エルロチニブ処置マウスから１４日目に採取した腫瘍、およびＡＺＤ９２９１または３剤抗体合剤（３ＸｍＡｂと表示）で処置したマウスから４３日目に採取した腫瘍を示す。スケールバーは１ｃｍを表す。
【図１６Ｃ】図１６Ａ〜Ｃは、ＡＺＤ−９２９１（第３世代のＴＫＩ）での処置と、セツキシマブ（ＣＴＸと表示）、トラスツズマブ（ＴＲＺと表示）および抗ＨＥＲ３（ｍＡｂ  ３３，３３と表示）での併用処置では、エルロチニブ耐性ＮＳＣＬＣ腫瘍のインビボでの増殖が同等に抑止されることを示す。ＣＤ１−ｎｕ／ｎｕマウスにＨ１９７５  ＮＳＣＬＣ細胞を播種し、ビヒクル、エルロチニブもしくはＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ／日）または３剤抗体合剤（ＣＴＸ＋ＴＲＺ＋３３）で処置した。図１６Ｃは、処置後の体重の変化を示すグラフである。
【図１７】図１７は、Ｈ１９７５細胞を播種したマウスにおける、エルロチニブ耐性ＮＳＣＬＣ腫瘍の増殖に対するＡＺＤ−９２９１と３剤抗体合剤（セツキシマブ＋トラスツズマブ＋ｍＡｂ  ３３，３ＸｍＡｂと表示）での併用処置のインビボ効果を示す。ＣＤ１−ｎｕ／ｎｕマウスをまずエルロチニブで、腫瘍が８００ｍｍ３のサイズに達するまで処置した後、エルロチニブもしくはＡＺＤ９２９１（５ｍｇ／ｋｇ／日）、３ＸｍＡｂまたはＡＺＤ９２９１（１ｍｇ／ｋｇ／日）と併用した３ＸｍＡｂで処置した。グラフは処置後の腫瘍体積を示す。データは平均±ＳＥ（ｎ＝７）として示している。
【図１８】図１８は、ＮＳＣＬＣ細胞が、ＡＺＤ−９２９１（ＡＺＤと表示）には耐性を発現するが３剤ｍＡｂ合剤（セツキシマブ＋トラスツズマブ＋ｍＡｂ３３，３ＸｍＡｂと表示）での処置には感受性を保持することを示す。グラフは、ＭＴＴアッセイによる評価時の、漸増用量のＡＺＤ−９２９１または３ＸｍＡｂでの７２時間の処置後のＰＣ９ＥＲおよびＰＣ９ＥＲ−ＡＺＤＲ細胞の代謝活性パーセンテージを示す。データは平均±ＳＤ（ｎ＝３つの独立した実験）として示している。
【図１９】図１９は、ＤＭＳＯ対照、１μＭのＣＯ−１６８６または１μＭのＡＺＤ−９２９１での処置の６時間後のＮＳＣＬＣ  ＰＣ９ＥＲおよびＰＣ９ＥＲ−ＡＺＤＲ細胞におけるＥＧＦＲ、ＡＫＴ、ＥＲＫ２およびこれらのリン酸化形態の発現を示すウエスタンブロット写真を示す。
【発明を実施するための形態】
【００５０】
発明の具体的な実施形態の説明
本発明は、その一部の実施形態において、チロシンキナーゼ阻害薬に耐性のがんを処置するための組成物および方法に関する。
【００５１】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳細に説明する前に、本発明は必ずしも、その用途が、以下の説明に示す詳細事項または本実施例に例示する詳細事項に限定されないことを理解されたい。本発明は、他の実施形態が可能であるか、または種々の様式で実施もしくは実行可能である。
【００５２】
ＥｒｂＢ標的化療法には、肺がん、乳がん、結腸がんおよび他の型のがんの処置のためのいくつかのＦＤＡ承認薬、例えば、セツキシマブ（エルビタックス（登録商標））、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））ゲフィチニブ（イレッサ）およびエルロチニブ（タルセバ（登録商標））が包含される。しかしながら、多くのがん患者はＥｒｂＢ標的化療法に感受性であることがわかったが、多くの他の患者は処置に対して耐性であり、さらには、最初は応答性の患者のうち、多くの割合で腫瘍の再発が起こり、治療に対して不応性となる。したがって、例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）患者はＴＫＩに対して最初は劇的に応答するにもかかわらず、すべての患者がおよそ１年以内に最終的に耐性を獲得する。この獲得型耐性の最も一般的な機構は、ＥＧＦＲキナーゼドメイン内のＴ７９０Ｍと表示される特定の第２の部位の変異を伴うものである。
【００５３】
本発明を実施するにあたり、本発明者らは、Ｔ７９０Ｍ変異型ＥＧＦＲを発現しているＮＳＣＬＣ細胞株をエルロチニブで処置するとＥｒｂＢファミリーの他の構成員の上方調節が誘導され、異なる受容体に指向される抗体の合剤を使用すると、ＴＫＩ耐性ＥＧＦＲを有効に標的化して分解できると同時に、細胞増殖をもたらすＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびＲＡＳ−ＥＲＫ経路を再活性化させる正のフィードバックループをブロックできることが示唆されることを見出した。さらに、本発明を実施するにあたり、本発明者らは、このような効果を奏する抗ＥＧＲＦ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３抗体の新規で傑出した合剤を見出した。したがって、これらの抗体を使用するコンビナトリアル処置薬が、ＴＫＩに耐性のがんに対処するための重要なツールとして使用され得ることが示唆される。また、本発明者らは、抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３抗体と、変異型ＥＧＦＲを阻害するが野生型ＥＧＦＲは容赦する低用量の第３世代のＴＫＩ、例えばＡＺＤ−９２９１  ＴＫＩとの合剤が、エルロチニブ耐性ＮＳＣＬＣ腫瘍に対して、この３剤ｍＡｂでの治療または高用量ＡＺＤ−９２９１療法と比べたとき改善された抗腫瘍効果を有することを見出した。したがって、これらの抗体とＴＫＩを使用するコンビナトリアル処置が、かかる化学療法薬に伴う処置の有害効果を限定的にするために使用され得ることが示唆される。
【００５４】
本明細書において以下に、および以下の実施例のセクションに実例を示しているように、本発明者らは、エルロチニブまたはセツキシマブでの処置に耐性を示す（実施例１，図１Ａ）ＥＧＦＲ  Ｔ７９０Ｍ変異を発現しているＮＳＣＬＣ細胞株（すなわち、ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５）を使用し；セツキシマブまたは別の抗ＥＧＦＲ抗体ｍＡｂ  ５６５に対するインビトロ長期曝露により、処置細胞においてＥＧＦＲの発現レベルの緩徐な低減ならびにＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびこれらの活性なチロシンリン酸化形態の上方調節がもたらされることを示した（実施例１，図１Ｂ）。この上方調節は転写レベルであることがわかった（実施例１，図１Ｃ〜Ｅおよび図２）。
【００５５】
以下において、ＥＧＦＲに対する卓越した抗体（５６５）、ＨＥＲ２に対する卓越した抗体（Ｎ１２）および抗ＨＥＲ３（ＮＧ３３）ｍＡｂを、培養ＮＳＣＬＣ細胞の生存を阻害する能力に基づいて選択した（実施例２，図３）。インビトロでの３剤ｍＡｂ合剤での処置により、３つのすべての受容体およびこれらの下流経路のタンパク質レベルが相乗的に低下したが、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３の転写を向上させる能力は保持され、最も重要なことには、細胞の増殖および生存が、アポトーシスの徴候を誘起することなく相乗的に抑止された（実施例２，図４，５Ａ〜Ｂおよび６ならびに実施例３，図７Ａ〜Ｃおよび８Ａ〜Ｄ）。さらに、３剤ｍＡｂ合剤により、ＮＳＣＬＣ細胞株において用量依存性の増殖阻害が誘導され、場合によっては間質の支持的効果により腫瘍細胞が枯渇するが、この処置が２つの非がん性細胞株に対して有する効果は最小限であり、この３剤ｍＡｂ処置は非がん性組織を容赦するようであることが示唆された（実施例３，図１０，１１，１２Ａ〜Ｃ，１３Ａ〜Ｂ）。また、前述の抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３  ｍＡｂでの処置により、両方のＮＳＣＬＣ細胞株に対する化学療法薬シスプラチン（ｃｉｓ−ｐｌａｉｎ）の増殖阻害効果が増大した（実施例３，図９Ａ〜Ｂ）。また、本発明者らは、エルロチニブでの処置に耐性を示すＥＧＦＲ  Ｔ７９０Ｍ変異を発現しているＮＳＣＬＣ細胞株（すなわち、ＰＣ９ＥＲ）および第３世代のＴＫＩであるＡＺＤ−９２９１での処置に耐性を示すＥＧＦＲ  Ｔ７９０Ｍ変異を発現しているＮＳＣＬＣ細胞株（すなわち、ＰＣ９ＥＲ−ＡＺＤＲ）を使用し；セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２）およびｍＡｂ  ＮＧ３３でのインビトロ処置が両方の細胞株の生存を最も強力に抑止することを示した（実施例６，図１８〜１９）。
【００５６】
インビトロデータにより、本発明者らは、インビボ異種移植片ＮＳＣＬＣマウスモデルにおいて、３剤ｍＡｂ合剤が腫瘍の増殖ならびに動物の生存に対して相乗的に強い持続性の阻害効果を奏することを示した（実施例４，図１４Ａ〜Ｃおよび実施例５  図１５）。腫瘍の増殖に対するセツキシマブ、トラスツズマブおよびｍＡｂ  ＮＧ３３の効果は、第３世代のＴＫＩであるＡＺＤ−９２９１での処置によって得られる効果と同等であった（実施例５，図１６Ａ〜Ｃ）。最も重要なことには、セツキシマブ、トラスツズマブおよびｍＡｂ  ＮＧ３３と低用量ＡＺＤ−９２９１とでの処置は、この３剤ｍＡｂでの治療または高用量ＡＺＤ−９２９１療法と比べたとき、エルロチニブ耐性ＮＳＣＬＣ腫瘍に対して改善された抗腫瘍効果を有した（実施例５，図１７）。
【００５７】
ＥＧＦＲ特異的ＴＫＩ療法に耐性となっているＴ７９０Ｍ変異を担持しているＮＳＣＬＣを含む腫瘍の消失または少なくとも低減における本発明の抗体合剤のこの確立された有効性により、同様の性質の腫瘍の処置におけるその有効性が示される。
【００５８】
そのため、本発明の教示により、ＴＫＩ耐性がんに対する有効な処置薬としての本明細書に開示した抗体合剤の使用が示唆される。
【００５９】
したがって、本発明の一態様により、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を示すがんを有する被験体の処置方法であって、前記ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が前記ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、該被験体に、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を含む治療有効量の抗体を投与すること、ここで：
（ｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）；
（ｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｘ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｘ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）、
それにより、該被験体におけるＥｒｂＢファミリーの構成員のチロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を処置すること
を含むものである方法を提供する。
【００６０】
本発明の別の態様により、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対するがんの耐性の処置における使用のための抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体であって、前記ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が前記ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、ここで：
（ｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）；
（ｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｘ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｘ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）
抗体を提供する。
【００６１】
本明細書で用いる場合、用語「被験体」は、病態に苦しんでいる任意の年齢の哺乳動物、好ましくはヒトをいう。
【００６２】
用語「処置する」とは、病態（疾患、障害もしくは病状、例えば、がん）を抑止すること、もしくはその進展を停止させること、および／または病態の低減、寛解もしくは消退を引き起こすことをいう。当業者には、病態の進展を評価するために種々の方法論およびアッセイを使用することができ、同様に、病態の低減、寛解または消退を評価するために種々の方法論およびアッセイが使用され得ることが理解されよう。
【００６３】
本明細書で用いる場合、用語「ＥｒｂＢファミリーの構成員」および「ＥｒｂＢ受容体」（これらは本明細書において互換的に用いている）は、受容体型チロシンキナーゼＥ．Ｃ．２．７．１０．１のＥｒｂＢファミリー、例えばＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびＨＥＲ４の受容体をいう。
【００６４】
本明細書で用いる場合、「ＥＧＦ−Ｒ」は、上皮成長因子受容体ファミリーの受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）の１つをいい、ＨＥＲ１、ｍＥＮＡおよびＥｒｂＢ−１とも称される。特定の一実施形態によれば、ＥＧＦＲはヒトＥＧＦＲ、すなわち、ＥＧＦＲ＿ＨＵＭＡＮ，Ｐ００５３３である。
【００６５】
本明細書で用いる場合、「ＨＥＲ２」は、上皮成長因子受容体ファミリーの受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）の１つをいい、ＥｒｂＢ−２、ＮＥＵおよびｐ１８５ｅｒｂＢ−２とも称される。特定の一実施形態によれば、ＨＥＲ２はヒトＨＥＲ２、すなわち、ＥＲＢＢ２＿ＨＵＭＡＮ，Ｐ０４６２６である。
【００６６】
本明細書で用いる場合、「ＨＥＲ３」は、上皮成長因子受容体ファミリーの受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）の１つをいい、ＥｒｂＢ−３とも称される。特定の実施形態によれば、ＨＥＲ３はヒトＨＥＲ３、すなわち、ＥＲＢＢ３＿ＨＵＭＡＮ，Ｐ２１８６０である。
【００６７】
特定の実施形態によれば、ＥｒｂＢファミリーの構成員はＥＧＦＲである。
【００６８】
本明細書で用いる場合、用語「チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）」は、ＥｒｂＢシグナル伝達経路を阻害し得る小分子をいう。典型的には、本明細書において想定しているＴＫＩは、４つの群に分類される：（１）ＡＴＰ競合性阻害薬、これは、キナーゼのＡＴＰ結合部位が活性なコンホメーションである場合に、この部位に優勢に結合する；（２）活性でないコンホメーションのキナーゼのＡＴＰ結合部位を認識して結合し、したがって、活性化をエネルギー的に不利な状態にする阻害薬；（３）アロステリック阻害薬、これは、ＡＴＰ結合部位外に結合し、受容体の３次元構造を修飾してＡＴＰとキナーゼポケット間の相互作用を破壊する；および（４）共有結合形成型阻害薬、これは、標的キナーゼのＡＴＰ結合部位に共有結合することにより不可逆的に結合する。ＴＫＩは、特定のＥｒｂＢファミリーの構成員に特異的なものであってもよく、または複数のＥｒｂＢファミリーの構成員を阻害するものであってもよい。ＴＫＩは、野生型ＥｒｂＢファミリーの構成員および／または変異型ＥｒｂＢファミリーの構成員を認識し得るものである。
【００６９】
ＴＫＩの非限定的な例としては、エルロチニブＨＣＬ（ＯＳＩ−７７４；タルセバ（登録商標）；ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａ）、ゲフィチニブ（イレッサ（登録商標），ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  ａｎｄ  Ｔｅｖａ）、ラパチニブ（タイケルブ（登録商標），ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カネルチニブ（ＣＩ−１０３３，ＰＤ１８３８０５；Ｐｆｉｚｅｒ）、ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＰＤ１５８７８０；ペリチニブ；ＡＧ  １４７８（４−（３−クロロアニリノ（ａｎｉｌｌｉｎｏ））−６，７−ジメトキシキナゾリン）、カネルチニブ（ＣＩ−１０３３，ＰＤ  １８３８０５；Ｐｆｉｚｅｒ）ならびにＺａｃｔｉｍａ（ＺＤ６４７４）、ペリチニブ（ＥＫＢ−５６９）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、バンデタニブ（ＺＤ６４７４）、アファチニブ、ダコミチニブ、ＡＺＤ９２９１、ロシレチニブ（ＣＯ−１６８６）、ＨＭ６１７１３およびＷＺ４００２が挙げられる。
【００７０】
特定の一実施形態によれば、ＴＫＩはｐａｎ−ＥｒｂＢ阻害薬、すなわち、１種類より多くのＥｒｂＢファミリーの構成員に結合し、そのキナーゼ活性を阻害し得るもの、例えばラパチニブである。
【００７１】
特定の実施形態によれば、ＴＫＩは、１種類のＥｒｂＢファミリーの構成員に特異的なもの、すなわち、ＥｒｂＢファミリーの他の構成員には影響を及ぼさないもの、例えばＥＧＦＲ特異的ＴＫＩである。
【００７２】
特定の実施形態によれば、ＴＫＩは、エルロチニブ、ゲフィチニブおよびラパチニブからなる群より選択される。
【００７３】
特定の一実施形態によれば、ＴＫＩはエルロチニブである。
【００７４】
特定の実施形態によれば、ＴＫＩは不可逆的ＴＫＩである。不可逆的ＴＫＩの非限定的な例としては、ペリチニブ（ＥＫＢ−５６９）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、カネルチニブ（ＣＩ−１０３３）、バンデタニブ（ＺＤ６４７４）、アファチニブおよびダコミチニブが挙げられる。
【００７５】
特定の実施形態によれば、不可逆的ＴＫＩは典型的には、がんが第１世代の可逆的ＴＫＩ、例えばエルロチニブ、ゲフィチニブおよびラパチニブに対して耐性を示す場合に使用される。
【００７６】
特定の実施形態によれば、ＴＫＩは、キナーゼドメイン内に変異を有するＥｒｂＢ受容体に結合するものである。Ｔ７９０ＭなどのＥｒｂＢ受容体の変異の例は、本明細書において以下にさらに開示する。変異型ＥｒｂＢ受容体に結合して阻害するＴＫＩの非限定的な例としては、ＷＺ４００２、ＡＺＤ９２９１、ロシレチニブ（ＣＯ−１６８６）、および変異型ＥＧＦ−Ｒに結合して阻害するＨＭ６１７１３が挙げられる。特定の実施形態によれば、ＴＫＩが野生型ＥｒｂＢ受容体に結合しないものである（例えば、ＥＧＦ−Ｒ）。
【００７７】
特定の実施形態によれば、ＴＫＩは、ペリチニブ（ＥＫＢ−５６９）、ネラチニブ（ＨＫＩ−２７２）、カネルチニブ（ＣＩ−１０３３）、バンデタニブ（ＺＤ６４７４）、アファチニブ、ダコミチニブ、ＡＺＤ９２９１、ロシレチニブ（ＣＯ−１６８６）、ＨＭ６１７１３およびＷＺ４００２からなる群より選択される。
【００７８】
特定の実施形態によれば、ＴＫＩはＡＺＤ９２９１である。
【００７９】
特定の実施形態によれば、該方法は、さらに、ＴＫＩを被験体に投与することを含む。特定の実施形態によれば、ＴＫＩは、がんが耐性を示すものと同じＴＫＩである。
【００８０】
他の特定の実施形態によれば、ＴＫＩは、がんが感受性を示すＴＫＩ（すなわち、がんが耐性を示すＴＫＩと異なるさらなるＴＫＩ）である。該さらなるＴＫＩは、同じＥｒｂＢファミリーの構成員（１種類または複数種）を阻害するものであってもよく、がんが耐性を示すＴＫＩによって標的化される別のＥｒｂＢファミリーの構成員（１種類または複数種）を阻害するものであってもよい。
【００８１】
この投与は、抗体の投与と併存的に行なってもよく、抗体の投与後に行なってもよい。
【００８２】
ＴＫＩは、ゴールドスタンダード投薬量で単独薬剤として投与してもよく、ゴールドスタンダード投薬量未満で単独薬剤として投与してもよく、ゴールドスタンダード投薬量より上で単独薬剤として投与してもよい。
【００８３】
特定の実施形態によれば、ＴＫＩはゴールドスタンダード投薬量未満で単独薬剤として投与される。
【００８４】
本明細書で用いる場合、用語「ゴールドスタンダード投薬量」は、規制機関（例えば、ＦＤＡ）によって推奨された所与の進行度の所与の腫瘍に対する投薬量をいう。
【００８５】
他の特定の実施形態によれば、ＴＫＩは、ゴールドスタンダード投薬量と関連している少なくとも１つの副作用を生じない用量で投与される。ＴＫＩ処置の副作用の非限定的な例としては、皮膚発疹、下痢、口腔内のただれ、爪周囲炎、倦怠感、高血糖症、肝毒性、腎不全、心血管系への影響、電解質異常およびＧＩ穿孔が挙げられる。以下の実施例のセクションに示すように、本発明者らにより、抗ＥＧＦ−Ｒ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３抗体と低用量のＡＺＤ−９２９１  ＴＫＩとの併用での処置が、エルロチニブ耐性ＮＳＣＬＣ腫瘍に対して、この３剤ｍＡｂでの治療または高用量ＡＺＤ−９２９１療法と比べて改善された抗腫瘍効果を有したことが示された。したがって、本発明では、さらに、抗ＥＧＦ−Ｒ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３抗体とＴＫＩとを含む併用処置を想定している。
【００８６】
本発明の一態様により、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性を示すがんを有する被験体の処置方法であって、前記ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が前記ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、該被験体に治療有効量のさらなるＴＫＩと、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に特異的に結合する治療有効量の少なくとも１種類の抗体とを投与することを含むものであり、ここで、前記さらなるＴＫＩは前記ＴＫＩと異なるものであり、前記がんは前記さらなるＴＫＩに対する耐性を示さないものである方法を提供する。
【００８７】
本発明の別の態様により、ＴＫＩに対するがんの耐性の処置における使用のためのチロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）ならびにＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に特異的に結合する少なくとも１種類の抗体であって、前記ＴＫＩがＥｒｂＢファミリーの構成員に指向されるものであり、該がんの細胞が前記ＥｒｂＢファミリーの構成員を発現しており、前記ＴＫＩが、前記がんが耐性である前記ＴＫＩと異なるものである、チロシンキナーゼ阻害薬ならびに抗体を提供する。
【００８８】
本明細書で用いる場合、用語「少なくとも１種類の抗体」は、少なくとも１種類、少なくとも２種類または少なくとも３種類の抗体をいう。該抗体は、本明細書において以下にさらに開示するように、単一特異性抗体を含むもの、および／または多特異性抗体を含むものであり得る。該少なくとも１種類の抗体は、単一の標的に対するものであってもよく、複数の標的に対するものであってもよい。
【００８９】
したがって、本発明のこのような態様によれば、「抗体組成物」は、本質的に、第１の抗体がＥＧＦＲに特異的に結合し、第２の抗体がＨＥＲ２に特異的に結合し、第３の抗体がＨＥＲ３に特異的に結合する３種類の相違する抗体；ならびに１種類の抗体が複数の標的（例えば、ＥＧＦＲ＋ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ＋ＨＥＲ３、ＨＥＲ２＋ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ＋ＨＥＲ２＋ＨＥＲ３）に結合する多特異性抗体をいう。
【００９０】
特定の実施形態によれば、該少なくとも１種類の抗体が抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を含むものであり、ここで：
（ｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）；
（ｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｘ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｘ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）。
【００９１】
本明細書で用いる場合、用語「がん」は、発生および／または進行がＥｒｂＢ（活性および／または発現）に依存する腫瘍性疾患をいう。したがって、このがんの細胞は、疾患の進行を助長するＥｒｂＢポリペプチドを発現している。
【００９２】
本発明の教示に従って処置され得るがんの例としては、限定されないが、浸潤性乳癌、腺癌、肺がん（非小細胞、扁平上皮癌、腺癌、および大細胞肺がん）、肝臓がん、結腸直腸がん、脳、頭頸部のがん（例えば、神経芽細胞腫／膠芽細胞腫）、乳がん、卵巣がん、膀胱の移行上皮癌、前立腺がん、口腔扁平上皮癌、骨肉腫、副腎皮質がん、胃腸の腫瘍、例えば、結腸直腸がん、胆道がん（胆嚢癌（ＧＢＣ）など）、膀胱がん、食道がん、胃がん、子宮頸がん、唾液腺がん、下痢良性新生物、非浸潤性乳管癌、爪周囲炎、胆管癌、腎臓がん、膵がん、髄芽細胞腫、膠芽細胞腫、ルミナール、ＨＥＲ２陽性およびトリプルネガティブ乳腺腫瘍ならびにウイルス性白血病が挙げられる。
【００９３】
特定の一実施形態によれば、がんは肺がんである。
【００９４】
特定の実施形態によれば、肺がんは非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。
【００９５】
本明細書で用いる場合、語句「チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対する耐性」は、腫瘍サイズ、インビトロ活性アッセイおよび／または患者の生存率によって顕性となり得るＴＫＩ処置に対する不応答性をいう。
【００９６】
特定の一実施形態によれば、耐性は、使用される具体的なＴＫＩに対する規制機関のガイドライン（例えば、ＦＤＡ）に従う疾患の症状または進行の改善がないことをいう。処置に対する耐性は、初回耐性であっても獲得型耐性であってもよい。
【００９７】
特定の実施形態によれば、耐性は獲得型耐性である。
【００９８】
本明細書で用いる場合、用語「獲得型耐性」は、最初は治療にプラスに応答した後の耐性の進行をいう。
【００９９】
特定の実施形態によれば、患者は、さらに、抗ＥｒｂＢモノクローナル、例えば限定されないが、抗ＥＧＦＲ（例えば、セツキシマブ）に耐性を示す患者である。
【０１００】
ＴＫＩに対する獲得型耐性の既知の主な分子機構としては、例えばＥＧＦＲキナーゼドメイン内の変異、例えば、Ｔ７９０Ｍ；ＴＫの過剰産生をもたらす遺伝子増幅、例えば、ＭＥＴ；制御不能な腫瘍細胞の活性化を媒介するＲＴＫリガンドの過剰発現；シグナル伝達経路の修飾、例えば、構成的Ａｋｔの活性化を媒介するＰＴＥＮ不安定；および膜輸送体（ＭＤＲ１またはｈＯＣＴ１など）によって媒介されるがん細胞からのＴＫＩの流出の増大または流入の低減が挙げられる［例えば、Ｃｈｅｎ  ａｎｄ  Ｆｕ，Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ  Ｓｉｎｉｃａ  Ｂ，（２０１１）１（４）：１９７−２０７参照］。
【０１０１】
したがって、特定の一実施形態によれば、がん細胞は、キナーゼドメイン内に変異を有するＥｒｂＢ受容体を発現しているものである。
【０１０２】
ＥｒｂＢのキナーゼドメインなどにおける配列の改変の解析方法は当該技術分野でよく知られており、基本的には、耐性を示す被験体から採取した生物学的試料（例えば、生検材料）を用いる、ゲノムＤＮＡ、またはＥｒｂＢをコードしているｃＤＮＡの解析（例えば、ＰＣＲおよびシーケンシングによる）を含むものである。また、例えば、変異型形態の該タンパク質を特異的に認識し、野生型形態は認識しない抗体を用いるポリペプチドレベルでの解析を行なってもよい。また、タンパク質レベルでの解析は、本明細書において以下にさらに記載するような活性アッセイによっても行なうことができる。
【０１０３】
かかる生物学的試料としては、限定されないが、体液、例えば、全血、血清、血漿、脳脊髄液、尿、リンパ液ならびに気道、腸管および尿生殖路の種々の外分泌物、涙、唾液、乳汁、ならびに白血球、悪性組織、羊水および絨毛膜絨毛が挙げられる。
【０１０４】
一実施形態によれば、試料は、例えば、血液、血漿、唾液などの体液を含むものである。
【０１０５】
試料は、細胞、例えば限定されないが、血液細胞、骨髄細胞、膵細胞、肺細胞、肝細胞、脾臓細胞、腎臓細胞、心臓の細胞、卵巣細胞、乳房組織の細胞、皮膚細胞（例えば、上皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイト）、リンパ節の細胞を含むものであってもよい。
【０１０６】
具体的な一実施形態によれば、細胞はがん細胞を含むものである。かかる細胞は、当該技術分野で知られた方法を用いて採取され得、限定されないが、細針生検材料、針生検材料、コアニードル生検材料および外科生検材料（例えば、肺生検材料）、頬側塗抹標本および洗浄物が挙げられる。
【０１０７】
該受容体のキナーゼドメイン内の変異は、キナーゼ活性を改変し得るものである。
【０１０８】
特定の実施形態によれば、変異は、前記ＥｒｂＢのキナーゼ活性に実質的に影響を及ぼさないものである。
【０１０９】
本明細書で用いる場合、用語「実質的に影響を及ぼす」とは、変異の非存在の存在下における未改変のキナーゼ活性（＋／−１０％または２０％）をいう。
【０１１０】
キナーゼ活性の測定は、当該技術分野でよく知られた方法、例えば、ウエスタンブロットおよびインビトロキナーゼアッセイを用いて行なわれ得る。
【０１１１】
ＥｒｂＢのキナーゼドメイン内における変異の非限定的な例としては、以下のＥＧＦＲ変異：Ｇ７１９Ｃ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８６１Ｑ、Ｔ７９０Ｍおよびエキソン２０挿入；ならびにＨＥＲ２におけるＴ７９８Ｍ変異が挙げられる。
【０１１２】
特定の実施形態によれば、変異はＴ７９０Ｍ変異を含む。
【０１１３】
本明細書で用いる場合、用語「Ｔ７９０Ｍ」は、ＥＧＦＲキナーゼドメインの７９０位におけるトレオニンのメチオニンへの置換（Ｔ７９０Ｍ）をいう。この置換は、該受容体のキナーゼ活性を保存する（すなわち、実質的に影響を及ぼさない）ことが示された。
【０１１４】
本明細書で用いる場合、「抗体組成物」は、相違する受容体、すなわちＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に指向される抗体を含み、本質的に第１の抗体がＥＧＦＲに特異的に結合し、第２の抗体がＨＥＲ２に特異的に結合し、第３の抗体がＨＥＲ３に特異的に結合する、異なるＣＤＲ配列を有する相違する３種類の抗体をいう。
【０１１５】
特定の実施形態によれば、抗ＥＧＦＲ抗体はＨＥＲ２およびＨＥＲ３に、臨床的に重要な親和性、すなわち５０ｎＭ未満のＫDで結合しない。
【０１１６】
特定の実施形態によれば、抗（ａｎｉ−）ＨＥＲ２抗体はＥＧＦＲおよびＨＥＲ３に、臨床的に重要な親和性、すなわち５０ｎＭ未満のＫDで結合しない。
【０１１７】
特定の実施形態によれば、抗ＨＥＲ３抗体はＥＧＦＲおよびＨＥＲ２に、臨床的に重要な親和性、すなわち５０ｎＭ未満のＫDで結合しない。
【０１１８】
抗体の特異性をアッセイする方法は当該技術分野でよく知られており、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、ＢＩＡｃｏｒｅおよび交差競合などである。
【０１１９】
本発明の抗体は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３に、同様の親和性で結合するものであっても異なる親和性で結合するものであってもよい。特定の実施形態によれば、該抗体は標的のＥＧＦＲ、ＨＥＲ２および／またはＨＥＲ３に、少なくとも１００ｎＭ、５０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭまたはそれより高い最小の親和性で結合するものである。
【０１２０】
該抗体は、既存の抗体（例えば、本明細書において以下にさらに記載する公に入手可能なハイブリドーマまたは組換え抗体ライブラリー）から選択してもよく、当該技術分野でよく知られており本明細書において以下にさらに記載する方法に従って作製される新しく生成させた抗体から選択してもよい。
【０１２１】
抗体およびその生成方法は、以下のセクションに詳細に記載する。
【０１２２】
抗ＥＧＦＲ  ５６５、抗ＨＥＲ２  Ｎ１２は、Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎａｔｉｏｎａｌｅ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｄｅ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔ  Ｐａｓｔｅｕｒ  ２５，Ｒｕｅ  ｄｕ  Ｄｏｃｔｅｕｒ  Ｒｏｕｘ  Ｆ−７５７２４  Ｐａｒｉｓ  ＣＥＤＥＸ  １５に寄託した。抗体はブダペスト条約に基づいて寄託した。
【０１２３】
登録番号は以下のとおり：
５６５  ＣＮＣＭ  Ｉ−４２６２，２００９年１１月２６日に寄託受領；および
Ｎ１２  ＣＮＣＭ  Ｉ−４１１２，２００９年１月１３日に寄託受領
である。
【０１２４】
ＶＨアミノ酸配列  ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＷＩＨＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＥＩＧＰＩＮＧＲＳＮＹＩＥＫＦＫＴＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＴＹＬＨＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＥＤＤＹＤＧＫＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：１）；およびＶκアミノ酸配列ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＸＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＴＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＴＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＮＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＧＹＳＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫＲ（配列番号：２）から抽出した抗ＥＧＦＲ  ５６５のＣＤＲは、ＣＤＲ１（配列番号：１５）、ＣＤＲ２（配列番号：１６）およびＣＤＲ３（配列番号：１７）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびにＣＤＲ１（配列番号：１８）、ＣＤＲ２（配列番号：１９）およびＣＤＲ３（配列番号：２０）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）を含む。
【０１２５】
ＶＨアミノ酸配列ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＥＬＶＲＰＧＤＳＶＮＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＹＷＩＫＱＲＰＤＱＧＬＥＳＩＧＮＩＨＰＮＮＧＧＴＮＹＳＧＫＦＫＮＫＡＳＬＴＶＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＬＴＧＩＧＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＩＶＳＳ（配列番号：３）；およびＶκアミノ酸配列ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＴＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＴＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＮＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＹＳＧＹＳＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＬ（配列番号：４）から抽出した抗ＨＥＲ２  Ｎ１２（本明細書において１２とも称する）のＣＤＲは、ＣＤＲ１（配列番号：２１）、ＣＤＲ２（配列番号：２２）およびＣＤＲ３（配列番号：２３）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびにＣＤＲ１（配列番号：２４）、ＣＤＲ２（配列番号：２５）およびＣＤＲ３（配列番号：２６）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）を含む。
【０１２６】
ＶＨアミノ酸配列ＤＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＳＬＳＬＴＣＳＶＴＧＹＳＩＴＳＧＦＹＷＳＷＩＲＱＦＰＧＮＫＬＥＷＭＧＹＩＡＹＤＧＴＳＮＹＮＰＳＬＫＮＲＩＳＩＴＲＤＴＳＫＮＱＦＦＬＫＬＫＳＶＴＮＥＤＴＰＴＹＹＣＡＲＧＧＧＹＹＧＱＬＬＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳ（配列番号：５）；およびＶκアミノ酸配列ＤＡＲＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＶＫＶＬＩＹＮＴＡＫＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＮＬＥＱＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＧＫＴＬＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号：６）から抽出した抗ＨＥＲ３  ＮＧ３３（本明細書において３３とも称する）のＣＤＲは、ＣＤＲ１（配列番号：２７）、ＣＤＲ２（配列番号：２８）およびＣＤＲ３（配列番号：２９）（該ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびにＣＤＲ１（配列番号：３０）、ＣＤＲ２（配列番号：３１）およびＣＤＲ３（配列番号：３２）（該ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）を含む。
【０１２７】
本明細書で用いる場合、用語「セツキシマブ」、商標名エルビタックス（登録商標）は、抗ＥＧＦ−Ｒモノクローナル抗体である活性成分セツキシマブを含む免疫療法薬をいう。
【０１２８】
本明細書で用いる場合、用語（ｔｅｍ）「トラスツズマブ」、商標名ハークロン（Ｈｅｒｃｅｌｏｎ）またはハーセプチン（登録商標）は、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体である活性成分トラスツズマブを含む免疫療法薬をいう。
【０１２９】
用語「抗体」は、本明細書で用いる場合、マクロファージに結合し得るインタクトな分子ならびにその機能性断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖを包含している。このような機能性抗体断片は以下のとおり：（１）Ｆａｂ，抗体分子の一価の抗原結合断片を含むものであり、インタクトな軽鎖と１つの重鎖の一部分とが得られるような酵素パパインによる完全抗体の消化によって作製され得る断片；（２）Ｆａｂ’，完全抗体をペプシンで処理した後、還元して、インタクトな軽鎖と重鎖の一部分とをもたらすことにより得られ得る抗体分子の断片；抗体分子１つあたり２つのＦａｂ’断片が得られる；（３）（Ｆａｂ’）２，完全抗体を酵素ペプシンで処理し、その後、還元は行なわずに得られ得る抗体の断片；Ｆ（ａｂ’）２は、２つのＦａｂ’断片が２つのジスルフィド結合によって一体に保持された二量体である；（４）Ｆｖ，２つの鎖として発現させた軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域を含むように遺伝子操作された断片と定義される；および（５）一本鎖抗体（「ＳＣＡ」），適当なポリペプチドリンカーによって遺伝子工学的に融合された一本鎖分子として連結された軽鎖の可変領域と重鎖の可変領域を含むように遺伝子操作された分子と定義される。
【０１３０】
本明細書で用いる場合、用語「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」は、重鎖および軽鎖のポリペプチドの可変領域内に見られる抗原結合領域をいうために互換的に用いている。一般的に、抗体は各ＶＨに３つ（ＣＤＲ  ＨＩまたはＨＩ；ＣＤＲ  Ｈ２またはＨ２；およびＣＤＲ  Ｈ３またはＨ３）ならびに各ＶＬに３つ（ＣＤＲ  ＬＩまたはＬＩ；ＣＤＲ  Ｌ２またはＬ２；およびＣＤＲ  Ｌ３またはＬ３）のＣＤＲを含む。
【０１３１】
ある特定の抗体の可変領域またはＣＤＲを構成するアミノ酸残基の実体は、当該技術分野でよく知られた方法を用いて決定され得、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌによって定義されたシーケンスバリアビリティ（ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ）（例えば，Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．参照）、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．によって定義された構造的ループ領域の位置特定（例えば，Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７−８８３，１９８９．参照）、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ社のＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（現在、アクセルリス（登録商標），Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．８６：９２６８；およびワールドワイドウェブサイトｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ−ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ参照）を使用するＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの折衷法、コンタクトデフィニション（ｃｏｎｔａｃｔ  ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）によって定義される入手可能な複雑な結晶構造（ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２−７４５，１９９６参照）ならびに「コンホメーショナルデフィニション（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ）」（例えば，Ｍａｋａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８３：１１５６−１１６６，２００８参照）などの方法が挙げられる。
【０１３２】
本明細書で用いる場合、「可変領域」および「ＣＤＲ」は、当該技術分野で知られた任意のアプローチ（アプローチの組合せを含む）によって定義される可変領域およびＣＤＲを示し得る。
【０１３３】
特定の一実施形態によれば、「可変領域」および「ＣＤＲ」は、ＩＭＧＴアプローチによって定義される可変領域およびＣＤＲをいう。
【０１３４】
ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体ならびにその断片の作製方法は当該技術分野でよく知られている（例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８（引用により本明細書に組み込まれる）参照）。
【０１３５】
特定の実施形態によれば、抗体は組換え抗体である。
【０１３６】
本明細書で用いる場合、用語「組換え抗体」は、組換えＤＮＡ技術によって作製される抗体、すなわち、該抗体をコードしている外来性ＤＮＡ構築物によって形質転換した細胞により産生される抗体をいう。
【０１３７】
特定の実施形態によれば、抗体はモノクローナル抗体である。
【０１３８】
抗体をインビボで生成させる際に標的抗原が小さすぎて充分な免疫原性応答を誘起できない場合、かかる抗原（「ハプテン」と称する）を抗原的に中性の担体、例えば、スカシガイヘモシアニン（ＫＬＨ）または血清アルブミン（例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））担体とカップリングさせるのがよい（例えば、米国特許第５，１８９，１７８号および同第５，２３９，０７８号参照）。ハプテンと担体とのカップリングは、当該技術分野でよく知られた方法を用いて行なわれ得る。例えば、アミノ基との直接カップリングが行なわれ得、続いて任意選択で、形成されたイミノ結合の還元が行なわれ得る。あるいはまた、担体を、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの縮合剤または他のカルボジイミド脱水剤を用いてカップリングさせてもよい。また、リンカー化合物を用いてカップリングを行なってもよく；ホモ二官能性リンカーおよびヘテロ二官能性リンカーはどちらも、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ，ＵＳＡから入手可能である。得られた免疫原性複合体は次いで、適当な哺乳動物被験体、例えば、マウス、ウサギなどに注射され得る。好適なプロトコルは、佐剤の存在下で、血清中の抗体産生をブーストするように設計されたスケジュールに従った免疫原の反復注射を伴うものである。免疫血清の力価は、当該技術分野でよく知られたイムノアッセイ手順を用いて容易に測定され得る。
【０１３９】
得られた抗血清を直接使用してもよく、本明細書において上記のようにしてモノクローナル抗体を得てもよい。本発明の一部の実施形態による抗体断片は、抗体のタンパク質分解性加水分解によって、または該断片をコードしているＤＮＡの大腸菌もしくは哺乳動物細胞（例えば、培養チャイニーズハムスター卵巣細胞もしくは他のタンパク質発現系）内での発現によって調製され得る。
【０１４０】
抗体断片を、慣用的な方法による完全抗体のペプシンまたはパパインでの消化によって得てもよい。例えば、抗体断片は、ペプシンでの抗体の酵素的切断により、Ｆ（ａｂ’）２と表示される５Ｓ断片を得ることによって作製され得る。この断片を、チオール還元剤と、任意選択で、ジスルフィド結合の切断によって生じるスルフヒドリル基のためのブロック基とを用いてさらに切断すると、一価の３．５Ｓ  Ｆａｂ’断片が生成され得る。あるいはまた、ペプシンを用いた酵素的切断により、２つの一価のＦａｂ’断片とＦｃ断片が直接生成する。このような方法は、例えば、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ，米国特許第４，０３６，９４５号および同第４，３３１，６４７号ならびにそれらに含まれた参考文献（これらの特許は引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。また、Ｐｏｒｔｅｒ，Ｒ．Ｒ．［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．７３：１１９−１２６（１９５９）］も参照のこと。また、抗体の他の切断方法、例えば、重鎖の分離による一価の軽鎖−重鎖断片の形成、断片のさらなる切断、または他の酵素的、化学的もしくは遺伝学的技術も、断片が、インタクトな抗体によって認識される抗原に結合するものである限り、使用され得る。
【０１４１】
Ｆｖ断片は、ＶＨ鎖とＶＬ鎖の会合体を含むものである。この会合は、Ｉｎｂａｒ  ｅｔ  ａｌ．［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ６９：２６５９−６２（１９７２０］に記載のように非共有結合性であり得る。あるいはまた、可変鎖同士が分子間ジスルフィド結合によって連結されていてもよく、グルタルアルデヒドなどの化学薬品によって架橋されていてもよい。好ましくは、Ｆｖ断片は、ペプチドリンカーによって連結されたＶＨ鎖とＶＬ鎖を含むものである。このような単鎖の抗原結合タンパク質（ｓＦｖ）は、オリゴヌクレオチドによって連結したＶＨドメインとＶＬドメインをコードしているＤＮＡ配列を含む構造遺伝子を構築することにより調製される。この構造遺伝子を発現ベクター内に挿入し、続いて、これを大腸菌などの宿主細胞に導入する。組換え宿主細胞により、２つのＶドメインを橋架けしているリンカーペプチドを有する単一のポリペプチド鎖が合成される。ｓＦｖの作製方法は、例えば［Ｗｈｉｔｌｏｗ  ａｎｄ  Ｆｉｌｐｕｌａ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２：９７−１０５（１９９１）；Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６（１９８８）；Ｐａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １１：１２７１−７７（１９９３）；および米国特許第４，９４６，７７８号（これは引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
【０１４２】
抗体断片の別の形態は、単一の相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードしているペプチドである。ＣＤＲペプチド（「最小認識単位」）は、抗体の目的のＣＤＲをコードしている遺伝子を構築することにより得られ得る。かかる遺伝子は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を使用して抗体産生細胞のＲＮＡにより可変領域を合成させることによって調製される。例えば、Ｌａｒｒｉｃｋ  ａｎｄ  Ｆｒｙ  ［Ｍｅｔｈｏｄｓ，２：１０６−１０（１９９１）］を参照のこと。
【０１４３】
したがって、本発明の抗体は好ましくは、少なくとも二価（例えば、ＩｇＧサブタイプの）またはそれ以上（例えば、ＩｇＭサブタイプの）である。一価の抗体を使用してもよいが、例えば、二次抗体を使用すること（または当該技術分野でよく知られた他の橋かけ剤を使用すること）により、この抗体をより大きな複合体にアセンブルするための対策を講じるべきであることは認識されよう。特定の実施形態によれば、抗体はＩｇＧ１サブタイプのものである。
【０１４４】
特定の実施形態によれば、抗体はヒト化抗体または部分ヒト化抗体である。
【０１４５】
非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、含まれた非ヒト免疫グロブリンに由来する配列が最小限である、免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２もしくは抗体の他の抗原結合性の部分配列）のキメラ分子である。ヒト化抗体としては、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）においてレシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）を構成している（ｆｏｒｍ）残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）（マウス、ラットまたはウサギなど）のＣＤＲ由来の残基で置き換えられているものが挙げられる。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が対応する非ヒト残基で置き換えられている。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移植するＣＤＲまたはフレームワーク配列にもみられない残基を含むものであってもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含むものであり、ここで、ＣＤＲ領域の全部または実質的に全部が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全部または実質的に全部がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものに対応する。また、ヒト化抗体は最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部分を含むものである［Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２）］。
【０１４６】
非ヒト抗体をヒト化するための方法は当該技術分野でよく知られている。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１個以上のアミノ酸残基を有する。このような非ヒトアミノ酸残基はしばしば移植（ｉｍｐｏｒｔ）残基と称され、これは、典型的には移植可変ドメインから採取される。ヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法［Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８）］に従って、齧歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列に置き換えることにより行なわれ得る。したがって、かかるヒト化抗体は、ヒト可変ドメインのインタクトなものと比べてかなり少ない部分が非ヒト種由来の対応する配列で置き換えられているキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際には、ヒト化抗体は典型的には、一部のＣＤＲ残基および場合によっては一部のＦＲ残基が齧歯類抗体の同様の部位の残基で置き換えられたヒト抗体である。
【０１４７】
また、ヒト抗体も、当該技術分野で知られた種々の技術、例えば、ファージディスプレイライブラリーを用いて作製され得る［Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）］。また、Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．およびＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．の技術も、ヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）およびＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）］。同様に、ヒト抗体は、内在性免疫グロブリン遺伝子が一部または完全に不活性化されているトランスジェニック動物（例えば、マウス）へのヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入によって作製され得る。刺激するとヒト抗体産生が観察され、これは、ヒトにおいてみられるものと、すべての点、例えば遺伝子の再編成、アセンブリおよび抗体レパートリーの点でよく似ている。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号、ならびに以下の科学系刊行物：Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０，：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８  ８１２−１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４，８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４：８２６（１９９６）；およびＬｏｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）に記載されている。
【０１４８】
抗体は、単一特異性（すなわち、相違する抗原に結合する）であっても多特異性（すなわち、少なくとも２つの異なるエピトープに結合する、例えば、二重特異性または三重特異性）であってもよい。
【０１４９】
特定の実施形態によれば、抗体は単一特異性抗体である。
【０１５０】
特定の実施形態によれば、抗体は二重特異性抗体である。
【０１５１】
特定の実施形態によれば、抗体は三重特異性抗体である。
【０１５２】
他の特定の実施形態によれば、抗体は多特異性抗体である。
【０１５３】
したがって、該少なくとも１種類の抗体は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に特異的に結合する１種類の三重特異性分子；３つのＥｒｂＢファミリー構成員のうちの２つ、例えば、ＥＧＦＲ＋ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ＋ＨＥＲ３、ＨＥＲ２＋ＨＥＲ３に特異的に結合する二重特異性分子；および／または単一特異性抗体、すなわち、抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２、抗ＨＥＲ３を含むものであり得る。
【０１５４】
したがって、該抗体合剤は、Ｎ１２、５６５およびＮＧ３３またはセツキシマブ、トラスツズマブおよびＮＧ３３のＣＤＲを含む１種類の三重特異性分子；二重特異性構成体と単一特異性抗体、例えば、Ｎ１２＋５６５とＮＧ３３；Ｎ１２＋ＮＧ３３と５６５、ＮＧ３３＋５６５とＮ１２；または３種類の単一特異性抗体、すなわち、ＮＧ３３、Ｎ１２および５６５またはセツキシマブ、トラスツズマブおよびＮＧ３３の投与を含むものであり得る。
【０１５５】
多重特異性抗体は、当該技術分野で知られた多くの方法によって、例えば、米国特許番号４，４７４，８９３、５，９５９，０８４、ＵＳおよび７，２３５，６４１、７，１８３，０７６、米国特許出願公開公報番号２００８０２１９９８０ならびに国際特許出願公開公報番号ＷＯ２０１０／１１５５８９、ＷＯ２０１３１５００４３およびＷＯ２０１２１１８９０３（すべて、その全体が本明細書に組み込まれる）に開示されたものによって作製され得；例えば、化学的架橋（Ｂｒｅｎｎａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９，８１（１９８５）；Ｒａｓｏ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２７６２３（１９９７））、ジスルフィド交換、ハイブリッド−ハイブリドーマ（クアドローマ）の作製、二重特異性抗体をもたらす単一のポリペプチド鎖の転写および翻訳による作製、または共有結合して二重特異性抗体を生成し得る１種類より多くのポリペプチド鎖の転写および翻訳による作製が挙げられる。
【０１５６】
抗体は、得られた後、活性について、例えば、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）によって試験され得る。
【０１５７】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体合剤は、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、これらの活性なチロシンリン酸化形態およびこれらの下流経路（例えば、ＥＲＫ）のタンパク質発現レベルを、これらを発現する細胞（例えば、哺乳動物細胞）において下方調節し得ると認められるものである。
【０１５８】
タンパク質発現レベルの下方調節は、例えば、ウエスタンブロット、免疫細胞化学検査およびフローサイトメトリーによって検出したとき、処置前の同じ細胞；同じ起源だが処置していないかまたは無関連の対照、例えばビヒクル、ＰＢＳで処置した細胞におけるタンパク質発現と比べて、例えば少なくとも１０％、２０％、５０％、８０％、９０％または１００％であり得る。
【０１５９】
本明細書で用いる場合、語句「抗腫瘍活性」は、腫瘍形成の予防および／または腫瘍サイズ（例えば、体積）および／または転移の可能性の低減をいう。
【０１６０】
本明細書に記載の抗体合剤およびＴＫＩと抗体（１種類または複数種）の合剤は、改善された総合的抗腫瘍活性を有する。本明細書で用いる場合、語句「改善された総合的抗腫瘍活性」は、本明細書において上記に説明したような、少なくとも相加的だが好ましくは相乗的に改善された抗腫瘍活性をいう。
【０１６１】
理論に拘束されないが、本発明の抗体合剤の相乗効果は、細胞表面で形成される抗体−受容体格子のサイズに依存しており、これによってエンドサイトーシス性クリアランス（ｅｎｄｏｃｙｔｉｃ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ）の速度およびシグナル伝達のブロックの程度が決定されていることが示唆される。
【０１６２】
特定の実施形態によれば、抗体は、同じ起源の腫瘍細胞で、処置しなかったかまたは無関連の対照、例えばＰＢＳ、ビヒクルで処置した腫瘍細胞と比べて、インビトロ腫瘍細胞増殖および／または生存率の少なくとも４０％または５０％（例えば、６０％または７０％またはそれより大きい）低減を引き起こすように選択される。
【０１６３】
特定の実施形態によれば、抗体は、異種移植片マウスモデルにおいて対照と比べて腫瘍体積の少なくとも５０％の縮小を引き起こすように選択される。
【０１６４】
本明細書で用いる場合、対照は、処置しなかったかまたは無関連の対照、例えばＰＢＳ、ビヒクルで処置した同じ型の異種移植片マウスモデルであり得る。
【０１６５】
異種移植片マウスモデルにおける腫瘍体積の測定は、処置開始の１ヶ月後、２ヶ月後、３ヶ月後、４ヶ月後、６ヶ月後、１年後または２年後に行なわれ得る。
【０１６６】
特定の実施形態によれば、抗体は、化学療法と相乗的であるように選択される。
【０１６７】
本発明の抗体および／またはＴＫＩは生物体にそのまま投与してもよく、これらを適当な担体または賦形剤と混合した医薬組成物（個々の製剤または共製剤のいずれか）で投与してもよい。
【０１６８】
したがって、本発明の別の態様により、活性成分として抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体と、薬学的に許容され得る担体または希釈剤とを含む医薬組成物であって：
（ｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＨＥＲ２抗体：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメイン（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）
医薬組成物を提供する。
【０１６９】
抗体は、各々が異なる製剤に製剤化され得るか、２種類を１つの製剤に、その他の１種類を別個の製剤に製剤化され得るか、またはすべてを同じ製剤に製剤化され得る、すなわち：抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３；抗ＥＧＦＲ＋抗ＨＥＲ２と抗ＨＥＲ３；抗ＥＧＦＲ＋抗ＨＥＲ３と抗ＨＥＲ２；抗ＨＥＲ２＋抗ＨＥＲ３と抗ＥＧＦＲまたは抗ＥＧＦＲ＋抗ＨＥＲ２＋抗ＨＥＲ３に製剤化され得る。
【０１７０】
特定の実施形態によれば、医薬組成物は、活性成分としてさらにＴＫＩを含むものである。
【０１７１】
特定の実施形態によれば、活性成分は共製剤中に存在している。
【０１７２】
他の特定の実施形態によれば、活性成分は別々の製剤中に存在している。
【０１７３】
また、本発明の抗体および／またはＴＫＩを細胞毒性剤に結合させてもよく、細胞毒性剤と一緒に提供してもよい。
【０１７４】
したがって、例えば、本発明の抗体および／またはＴＫＩは、鎮痛薬、化学療法剤（例えば、アントラサイクリン系）、放射線療法剤、ホルモン療法薬および当該技術分野でよく知られた他の処置レジメン（例えば、手術）とともに投与され得る。
【０１７５】
本明細書で用いる場合、「医薬組成物」は、１種類以上の本明細書に記載の活性成分と他の化学成分、例えば、生理学的に適当な担体および賦形剤との調製物をいう。医薬組成物の目的は、生物体への化合物の投与を助長することである。
【０１７６】
本明細書で用いる場合、用語「活性成分」は、意図される生物学的効果を担う抗体をいう。
【０１７７】
以下、本明細書において、語句「生理学的に許容され得る担体」および「薬学的に許容され得る担体」（これらは互換的に用いている場合があり得る）は、生物体に有意な刺激を引き起こさず、投与される化合物の生物学的活性および特性を消去しない担体または希釈剤をいう。佐剤は、これらの語句に包含される。
【０１７８】
本明細書において、用語「賦形剤」は、活性成分の投与をさらに助長するために医薬組成物に添加される不活性物質をいう。賦形剤の例としては、限定されないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、種々の糖類および種々の型のデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油ならびにポリエチレングリコールが挙げられる。
【０１７９】
薬物の製剤化および投与のための技術は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，”Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡの最新版（これは、引用により本明細書に完全に組み込まれる）をみるとよい。
【０１８０】
好適な投与経路としては、例えば、経口、経直腸、経粘膜、特に経鼻、腸内または非経口送達、例えば、筋肉内、皮下および髄内注射、ならびに髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻腔内または眼内注射が挙げられ得る。
【０１８１】
あるいはまた、医薬組成物を全身性様式ではなく局所様式で、例えば、直接、患者の組織領域内への医薬組成物の注射によって投与してもよい。
【０１８２】
本発明の医薬組成物は、当該技術分野でよく知られた方法により、例えば、慣用的な混合、溶解、造粒、糖衣作製、研和、乳化、カプセル封入、閉じ込めまたは凍結乾燥の方法によって製造され得る。
【０１８３】
したがって、本発明による使用のための医薬組成物は慣用的な様式で、活性成分を薬学的に使用され得る調製物に加工するのを容易にする賦形剤および助剤を含む１種類以上の生理学的に許容され得る担体を用いて製剤化され得る。適正な製剤は、選択される投与経路に依存する。
【０１８４】
注射用には、医薬組成物の活性成分は、水溶液中、好ましくは生理学的に適合性のバッファー（例えば、ハンクス液、リンゲル液または生理学的塩バッファー）中に製剤化され得る。経粘膜投与のためには、関門を透過するのに適切な浸透剤が製剤中に使用される。かかる浸透剤は一般的に当該技術分野で知られている。
【０１８５】
経口投与のためには、医薬組成物は、活性化合物を当該技術分野でよく知られた薬学的に許容され得る担体と合わせることにより容易に製剤化され得る。かかる担体は、医薬組成物が、患者による経口摂取のための錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液状剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤などとして製剤化されることを可能にするものである。経口使用のための薬理学的調製物は、固形賦形剤を使用し、任意選択で、得られた混合物を摩砕し、所望により適当な助剤を添加した後、この顆粒混合物を加工して錠剤または糖衣錠コアを得ることで作製され得る。好適な賦形剤は、特に、増量剤、例えば糖類、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトールもしくはソルビトール；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、イモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびカルボメチルセルロースナトリウムなど；および／または生理学的に許容され得るポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。所望により、崩壊剤、例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムが添加され得る。
【０１８６】
糖衣錠コアには適当なコーティングが施される。この目的のためには濃縮糖溶液が使用され得、濃縮糖溶液には任意選択で、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー液、および適当な有機溶媒または溶媒混合物が含有され得る。錠剤または糖衣錠コーティングに識別のため、または活性化合物用量の異なる組合せの特徴付けのために色素または顔料を添加してもよい。
【０１８７】
経口使用され得る医薬組成物としては、ゼラチン製のプッシュフィット型のカプセル剤、ならびにゼラチンおよび可塑剤（グリセロールまたはソルビトールなど）で作製された密封型の軟カプセル剤が挙げられる。プッシュフィット型のカプセル剤には、活性成分が、ラクトースなどの増量剤、デンプンなどの結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、および任意選択で安定剤との混合状態で含有され得る。軟カプセル剤では、活性成分が適当な液体中に、例えば、脂肪油、液状パラフィンまたは液状ポリエチレングリコール中に溶解または懸濁され得る。また、安定剤を添加してもよい。経口投与のための製剤はすべて、選択される投与経路に適した投薬量であるのがよい。
【０１８８】
口腔内投与のためには、該組成物は、慣用的な様式で製剤化された錠剤またはロゼンジ剤の形態であり得る。
【０１８９】
鼻からの吸入による投与のためには、本発明による使用のための活性成分は、エーロゾル剤の噴霧による提示の形態で加圧パックまたはネブライザーから、適当な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素の使用を伴って簡便に送達される。加圧エーロゾル剤の場合、投薬量は、定量を送達するためのバルブを設けることにより決定され得る。ディスペンサーにおける使用のための例えばゼラチン製のカプセル剤およびカートリッジは、活性化合物の粉末ミックスと適当な粉末基剤（ラクトースまたはデンプンなど）を含有するように製剤化され得る。
【０１９０】
本明細書に記載の医薬組成物は、例えばボーラス注射または連続輸注による非経口投与のために製剤化してもよい。注射用製剤は単位投薬形態で、例えば、任意選択で保存料を添加したアンプルまたは反復用量容器内に提示され得る。該組成物は、油性または水性のビヒクル中の懸濁剤、液剤または乳剤であり得、懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤などの製剤化剤が含有され得る。
【０１９１】
非経口投与のための医薬組成物としては、水溶性形態の活性調製物の水性液剤が挙げられる。さらに、活性成分の懸濁剤を、適切な油性または水系の注射用懸濁剤として調製してもよい。好適な親油性の溶媒またはビヒクルとしては、ゴマ油などの脂肪油、または合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチル、トリグリセリドもしくはリポソームが挙げられる。
【０１９２】
水性の注射用懸濁剤には、該懸濁剤の粘度を増大させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランが含有され得る。任意選択で、懸濁剤にはまた、適当な安定剤または活性成分の溶解度を高める薬剤を含有させて、高濃縮液剤の調製を可能にしてもよい。
【０１９３】
あるいはまた、活性成分を、使用前に適当なビヒクル、例えば、滅菌されたパイロジェンフリーの水系溶液で構成するための粉末形態にしてもよい。
【０１９４】
また、本発明の医薬組成物を、例えば、慣用的な坐剤用基剤（ココアバターまたは他のグリセリドなど）を用いて経直腸組成物（坐剤または停留注腸剤など）に製剤化してもよい。
【０１９５】
本発明の状況における使用に適した医薬組成物としては、活性成分が、意図される目的が達成されるのに有効な量で含有された組成物が挙げられる。より具体的には、「治療有効量」は、障害（例えば、虚血）の症状を抑制、緩和もしくは改善するのに有効な、または処置対象の被験体の生存期間を長くするのに有効な活性成分（例えば、核酸構築物）の量を意味する。
【０１９６】
治療有効量の決定は、特に、本明細書において提供した詳細な開示内容に鑑みると、充分に当業者の能力の範囲内である。
【０１９７】
本発明の方法で使用される任意の調製物について、投薬量または治療有効量は、最初に、インビトロでの細胞培養物アッセイから推定され得る。例えば、所望の濃度または力価が得られる用量が動物モデルにおいて設定され得る。かかる情報が、ヒトにおいて有用な用量をより厳密に決定するために使用され得る。
【０１９８】
抗体合剤の投与により、１種類の抗体の投与と比べて改善された成果がもたらされることが予測されるため、この併用処置における各抗体の治療有効用量は、例えば、ＦＤＡ承認用量の５０％、４０％、３０％、２０％未満、またはさらには１０％未満であり得る。
【０１９９】
抗体とＴＫＩの合剤の投与により、単独療法薬としてのＴＫＩの投与と比べて改善された成果がもたらされることが予測されるため、この併用処置におけるＴＫＩの治療有効用量は、例えば、ＦＤＡ承認用量の５０％、４０％、３０％、２０％未満、またはさらには１０％未満であり得る。
【０２００】
本明細書に記載の活性成分の毒性および治療有効性は、標準的な製薬手順によってインビトロで、細胞培養物または実験動物において測定され得る。このようなインビトロでの細胞培養物アッセイおよび動物試験から得られたデータが、ヒトにおける使用のための一連の投薬量の設定に使用され得る。投薬量は、使用される投薬形態および使用される投与経路に応じて異なり得る。厳密な製剤、投与経路および投薬量は、個々の医師により患者の体調に鑑みて選択され得る（例えば、Ｆｉｎｇｌ  Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（１９７５），“Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，”第１章，第１頁参照）。
【０２０１】
投薬量および投与間隔は、生物学的効果が誘導または抑制されるのに充分な血漿レベルまたは脳内レベル（すなわち、最小有効濃度，ＭＥＣ）の活性成分がもたらされるように個々に調整され得る。ＭＥＣは、各調製物で異なるが、インビトロデータから推定され得る。ＭＥＣを得るのに必要な投薬量は、個体の特徴および投与経路に依存する。血漿濃度は、検出アッセイを用いて測定され得る。
【０２０２】
処置対象の病状の重症度および応答性に応じて、投薬は１回の投与であっても複数回の投与（例えば、毎週の投与または隔週投与）であってもよく、処置過程は、数日間から数週間、または治癒するまで、もしくは疾患状態の軽減が得られるまで持続され得る。
【０２０３】
特定の実施形態によれば、投与は反復投与を含む。
【０２０４】
特定の実施形態によれば、反復投与は隔週投与を含む。
【０２０５】
投与される組成物の量は、もちろん、処置対象の被験体、苦しみの重症度、投与様式、処方する医師の判断などに依存する。
【０２０６】
腫瘍に対する本明細書に記載の薬剤の効果を解析するために典型的に使用されるモデルは、後で示す。
【０２０７】
Ｔ７９０Ｍ変異型ＥＧＦＲを発現する肺腫瘍動物モデルが、例えば、Ｒｅｇａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．ＰＬｏＳ  ＯＮＥ（２００７）２：ｅ８１０およびＰｏｌｉｔｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．（２００６）２０：１４９６−１５１０に記載されている。
【０２０８】
動物モデルおよびインビトロ解析における使用に好適な細胞としては、限定されないが、Ｈ１９７５、ＰＣ９ＥＲ、Ｈ８２０、ＨＣＣ８２７およびＨ１６５０が挙げられる。
【０２０９】
本発明の組成物は、所望により、活性成分を含有している１つ以上の単位投薬形態を含むものであり得るパックまたはディスペンサーデバイス（ＦＤＡ承認キットなど）で提示され得る。パックは、例えば、金属箔またはプラスチックホイルを含むもの、例えば、ブリスターパックであり得る。パックまたはディスペンサーデバイスに、投与のための使用説明書を付随させてもよい。また、パックまたはディスペンサーデバイスに、医薬品の製造、使用または販売に関する処方形態の政府機関による通知書を付随させてもよく、この通知書は、当該機関による組成物の該形態のヒトへの投与または獣医学的投与の承認を反映している。かかる通知書としては、例えば、処方薬物について米食品医薬品局によって承認されたラベル表示または承認された製品パンフレットのものが挙げられ得る。また、薬学的に許容され得る担体中に製剤化された本発明の調製物を含む組成物を、上記にさらに詳述したようにして調製し、適切な容器内に入れ、適応症の病状の処置についてラベル表示してもよい。
【０２１０】
別の態様により、チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）に対するがんの耐性の処置のためのものと認定される製造物品またはキットであって、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体を別々の容器内にパッケージするパッケージ材を備えており、ここで：
（ｉ）前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）；
（ｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｉｖ）前記抗ＨＥＲ２抗体：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメイン（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖ）前記抗ＥＧＦＲ抗体は：配列番号：１５（ＣＤＲ１）、１６（ＣＤＲ２）および１７（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに１８（ＣＤＲ１）、１９（ＣＤＲ２）および２０（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローン５６５，ＣＮＣＭ−４２６２）、前記抗ＨＥＲ２抗体は：配列番号：２１（ＣＤＲ１）、２２（ＣＤＲ２）および２３（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに２４（ＣＤＲ１）、２５（ＣＤＲ２）および２６（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものであり（クローンＮ１２，ＣＮＣＭ−Ｉ−４１１２）、前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；
（ｖｉｉ）前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）；および／または
（ｖｉｉｉ）前記抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブを含むものであり、前記抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含むものであり；前記抗ＨＥＲ３抗体は：配列番号：２７（ＣＤＲ１）、２８（ＣＤＲ２）および２９（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの軽鎖にＮからＣに順に並んでいる）ならびに３０（ＣＤＲ１）、３１（ＣＤＲ２）および３２（ＣＤＲ３）（前記ポリペプチドの重鎖にＮからＣに順に並んでいる）に示す相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を有する抗原認識ドメインを含むものである（クローンＮＧ３３）
製造物品またはキットを提供する。
【０２１１】
特定の実施形態によれば、製造物品またはキットは、さらにＴＫＩを備えている。
【０２１２】
本明細書で用いる場合、用語「別々の容器」は少なくとも２つの容器をいう。
【０２１３】
パッケージ材は、抗体をパッケージするための少なくとも１つ、少なくとも２つまたは少なくとも３つの容器を含むものであり得る。特定の実施形態によれば、パッケージ材は、該抗体および任意選択でＴＫＩをパッケージするための少なくとも２つの容器を含む。
【０２１４】
製造物品またはキットに、使用のための使用説明書を付随させてもよい。
【０２１５】
本発明の抗体および／またはＴＫＩを個体に、抗体単独または抗体とＴＫＩの併用処置での処置と比べて改善された治療効果を得るために、さらなる活性薬剤とともに提供してもよいことは認識されよう。かかる治療では、併用療法に伴い得る有害な副作用に対する措置（例えば、相補的薬剤の投与および選択）を講じる。
【０２１６】
かかる併用療法の投与は同時、例えば、固定比率のこれらの活性薬剤を有する単一のカプセル剤でのものであってもよく、各薬剤の複数のカプセル剤でのものであってもよい。
【０２１７】
肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ）の処置において、本発明の抗体処置と併用され得る標準治療法としては、手術、化学療法、放射線療法、レーザー療法および光線力学療法が挙げられる。
【０２１８】
本出願の完成による特許の存続期間中、多くの関連する治療法が開発されることが予測される。ＴＫＩ、化学療法および放射線療法という用語の範囲は、かかるあらゆる新しい技術を先験的に包含していることを意図する。
【０２１９】
本明細書で用いる場合、用語「約」は±１０％をいう。
【０２２０】
用語“ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ（〜を含む）”、“ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（〜を含む）”、“ｉｎｃｌｕｄｅｓ（〜を含む）”、“ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（〜を含む）”、“ｈａｖｉｎｇ（〜を有する）”およびその活用形は“ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ（〜を含むが限定されない）”を意味する。
【０２２１】
用語“ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ（〜からなる）”は“ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｔｏ（〜を含み、限定される）”を意味する。
【０２２２】
用語“ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ（本質的に〜からなる）”は、組成物、方法または構造がさらなる成分、工程および／または部分を含んでいてもよいが、該さらなる成分、工程および／または部分が請求項に記載の組成物、方法または構造の基本的な新規な特徴を実質的に改変しないものである場合に限ることを意味する。
【０２２３】
本明細書で用いる場合、単数形“ａ”、“ａｎ”および“ｔｈｅ”は、本文中にそうでないことを明示していない限り、複数の指示対象物を包含している。例えば、用語“ａ  ｃｏｍｏｕｎｄ（化合物）”または“ａｔ  ｌｅａｓｔ  ｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ（少なくとも１種類の化合物）”には複数の化合物（その混合物を含む）が包含され得る。
【０２２４】
本出願書類全体を通して、本発明の種々の実施形態を範囲の形式で示している場合があり得る。範囲の形式での記載は、便宜上、略したものにすぎないことを理解されたく、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定と解釈されるべきでない。したがって、範囲の記載は、該範囲に含まれる考えられ得る下位範囲ならびに個々の数値すべてが具体的に開示されているとみなされたい。例えば、１〜６などの範囲の記載は、例えば１〜３、１〜４、１〜５、２〜４、２〜６、３〜６などの下位範囲ならびに該範囲内の個々の数値、例えば、１、２、３、４、５および６が具体的に開示されているとみなされたい。これは、範囲の幅に関係なく適用される。
【０２２５】
本明細書において数値範囲を示している場合はいつでも、表示した範囲内の記載の任意の数字（分数値または整数値（ｉｎｔｅｇｒａｌ））を包含していることを意図する。第１表示番号と第２表示番号の間の範囲である語句“ｒａｎｇｉｎｇ／ｒａｎｇｅｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ（〜ａｎｄ）”と、第１表示番号から第２表示番号の範囲である語句“ｒａｎｇｉｎｇ／ｒａｎｇｅｓ  ｆｒｏｍ（〜ｔｏ）”は、本明細書において互換的に用いており、この第１および第２の表示番号ならびにこれらの間のあらゆる分数値および整数値を包含していることを意図する。
【０２２６】
本明細書で用いる場合、用語「方法」は、所与の作業を行なうための様式、手段、技術および手順、例えば、限定されないが、化学、薬理学、生物学、生化学および医学の技術分野の実務者に既知のもの、または該実務者によって既知の様式、手段、技術および手順から容易に開発されるもののいずれかの様式、手段、技術および手順をいう。
【０２２７】
特定の配列表に言及している場合、かかる言及は、その相補配列に実質的に対応する配列も、例えば、シーケンシングエラー、クローニングエラー、または塩基置換、塩基欠失もしくは塩基付加をもたらす他の改変により生じる軽微な配列の差異を含むものとして包含していると理解されたい。ただし、かかる差異の頻度は５０個のヌクレオチドに１個未満、あるいはまた、１００個のヌクレオチドに１個未満、あるいはまた、２００個のヌクレオチドに１個未満、あるいはまた、５００個のヌクレオチドに１個未満、あるいはまた、１０００個のヌクレオチドに１個未満、あるいはまた、５，０００個のヌクレオチドに１個未満、あるいはまた、１０，０００個のヌクレオチドに１個未満であるものとする。
【０２２８】
本発明の特定の特色（これは、明瞭性重視のため、別々の実施形態の状況において記載している）はまた、単一の実施形態において組み合わせて提供してもよいことは認識されよう。逆に、本発明の種々の特色（これは、簡潔性重視のため、単一の実施形態の状況において記載している）はまた、別々に、または任意の適当な下位の組合せで、または本発明の記載の任意の他の実施形態ににおいて適するものとして提供してもよい。種々の実施形態の状況において記載の特定の特色は、該要素なしでは該実施形態が有効でない場合を除き、該実施形態の必須の特色であるとみなされるべきでない。
【０２２９】
本明細書において上記に詳述し、以下の特許請求の範囲のセクションの請求項に記載の本発明の種々の実施形態および態様は、以下の実施例において実験による裏付けが見出されよう。
【０２３０】
実施例
次に、以下の実施例に言及する。本実施例は、上記の説明と一緒に、本発明の一部の実施形態を非限定的な様式で例示するものである。
【０２３１】
一般的に、本明細書で用いる専門用語および本発明において使用される検査手順は、分子的技術、生化学、微生物学および組換えＤＮＡの技術を含むものである。かかる技術は文献に充分説明されている。例えば、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ”Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”第Ｉ〜ＩＩＩ巻  Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ，“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ”，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（編）“Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ”，第１〜４巻，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号；および同第５，２７２，０５７号に示された方法論；“Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ”，第Ｉ〜ＩＩＩ巻  Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．編（１９９４）；“Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ  −  Ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ”，Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），第３版；“Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”第Ｉ〜ＩＩＩ巻  Ｃｏｌｉｇａｎ  Ｊ．Ｅ．編（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓ  ｅｔ  ａｌ．（編），“Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”（第８版），Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓｈｉｉｇｉ（編），“Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ”，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８０）を参照のこと；利用可能なイムノアッセイは特許および科学文献に広く記載されており、例えば、米国特許第３，７９１，９３２号；同第３，８３９，１５３号；同第３，８５０，７５２号；同第３，８５０，５７８号；同第３，８５３，９８７号；同第３，８６７，５１７号；同第３，８７９，２６２号；同第３，９０１，６５４号；同第３，９３５，０７４号；同第３，９８４，５３３号；同第３，９９６，３４５号；同第４，０３４，０７４号；同第４，０９８，８７６号；同第４，８７９，２１９号；同第５，０１１，７７１号および同第５，２８１，５２１号；“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編（１９８４）；“Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂ���ｉｄｉｚａｔｉｏｎ”Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編（１９８５）；“Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ”Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．，ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編（１９８４）；“Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ”Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．編（１９８６）；“Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ”ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）；“Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ”Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．，（１９８４）および“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”第１〜３１７巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；“ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  −  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ”ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照のこと；これらはすべて、引用により、あたかも本明細書に完全に示されているかのごとく組み込まれる。他の一般的な参考文献も本文書中の至る箇所に示している。これらに示された手順は、当該技術分野でよく知られていると考えられているものであり、読み手の便宜のために示している。これらに含まれた情報はすべて、引用により本明細書に組み込まれる。
【０２３２】
材料および方法
抗体および試薬−抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（ｍＡｂ）５６５および１１１の作製は報告されている（Ｆｒｉｅｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ（２００５）１０２：１９１５−１９２０）。抗ＨＥＲ２  ｍＡｂ  １２（Ｎ１２）および２６（Ｌ２６）は、報告されているとおりに作製した（Ｋｌａｐｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（１９９７）１４：２０９９−２１０９）。抗ＨＥＲ３  ２５２（ＸＣ２５２）は、以前に報告されている（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９６）２７１，７６２０−７６２９）。セツキシマブおよびトラスツズマブは、それぞれ、ＭｅｒｃｋおよびＲｏｃｈｅから購入した。抗ＨＥＲ２抗体および抗ＨＥＲ３抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、抗チューブリン抗体および抗ホスホ−ＥＲＫ抗体（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）、抗ＥＧＦＲ抗体（Ａｌｅｘｉｓ）、抗ホスホ（ｐｈｏｓｈｏ）−ＥＧＦＲ抗体（Ｙ１０６８）、抗ＨＥＲ２抗体、抗ホスホ（ｐｈｏｓｈｏ）−ＨＥＲ２抗体（Ｙ１２２１／２）、抗ホスホ−ＨＥＲ３抗体（Ｙ１２８９）、抗ホスホ−ＡＫＴ抗体（Ｓ４７３）および抗ＡＫＴ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）をウエスタンブロット解析に使用した。抗Ｋｉ−６７抗体  Ｃｅｌｌ  Ｍａｒｑｕｅカタログ番号２７５Ｒ。エルロチニブはＬＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから取得した；ストック溶液（２３ｍｍｏｌ／Ｌ）をＤＭＳＯ中で調製し、−２０℃で保存した。ＡＺＤ−９２９１およびＣＯ−１６８６は、それぞれ、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍのカタログ番号Ｓ７２９７およびカタログ番号Ｓ７２８４で取得した。
【０２３３】
ｍＡｂ  抗ＨＥＲ３  ＮＧ３３の作製（本明細書において３３とも称する）−Ｂａｌｂ／ｃマウスのＩｇＢ３での免疫処置、ＮＳＯ骨髄腫細胞とＩｇＢ３免疫処置マウスの脾細胞との融合、およびその後のハイブリドーマのサブクローニングを既報のとおりに行なった（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９６）２７１（１３）：７６２０−７６２．）。ハイブリドーマの上清みのスクリーニング（ＥＬＩＳＡを使用）を、ＩｇＢ３（１μｇ／ｍｌ）またはパニツムマブ（１μｇ／ｍｌ）をコートした９６ウェルプレートで行ない、ヒトＩｇＧ  Ｆｃドメインに指向される非特異性抗体を検出して差し引いた。スクリーニングの第２工程は免疫沈降によって行なった。抗マウスＩｇＧアガロースビーズを、まず１００μｌのハイブリドーマ上清みとともに、続いて、ＨＥＲ３発現Ｔ４７Ｄ細胞の全細胞ライセートとともにインキュベートした。次いで、ＨＥＲ３に指向されるｍＡｂのアイソタイプ分類を、ＳＢＡ  Ｃｌｏｎｏｔｙｐｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ／ＨＲＰキット（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）を用いて行なった。１％ＦＣＳを補給したＤＣＣＭ−２培地中に維持したハイブリドーマの上清みからの精製およびアガロース−プロテインＧカラムへの負荷によって大量のｍＡｂを生成させた。
【０２３４】
細胞培養物−Ｈ１９７５（ＡＴＣＣ；ＮＣＩ−Ｈ１９７５＿ＣＲＬ−５９０８）肺がん細胞株（ＥＧＦＲ変異：Ｌ８５８ＲおよびＴ７９０Ｍ，ＡＴＣＣ；Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、ＰＣ９およびエルロチニブ耐性ＰＣ９ＥＲ肺がん細胞（ｄｅｌ７４６−７５０＋Ｔ７９０Ｍ）（１６に記載）を、１０％ＦＣＳ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）および抗生物質を補給したＲＰＭＩ−１６４０中に維持した。ＡＺＤ−９２９１に耐性のＰＣ９ＥＲ細胞（ＰＣ９ＥＲ−ＡＺＤＲ細胞と表示する）を、ＰＣ９ＥＲ細胞をＡＺＤ−９２９１とともに３ヵ月間インキュベートすることにより作製した。用量（最初は０．５ｎＭにする）を４日毎に１．５倍ずつ２．５μＭまで上げた。ＮＬ２０（ＡＴＣＣ；ＮＬ２０＿ＣＲＬ−２５０３）（不死化ヒト気管支上皮細胞株（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ））をＦ１２Ｋ培地中に、ＡＴＣＣに推奨されているとおりに維持した。ＷＩ３８（ＡＴＣＣ；ＣＣＬ−７５）とＰＣ９ＥＲまたはＨ１９７５細胞との１：１の比の共培養物を、ピルビン酸ナトリウムおよびウシ胎仔血清（ＦＣＳ  ５％；Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を補給したＤＭＥ培地中に維持した。
【０２３５】
細胞の増殖および生存率−細胞の生存率を、３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イル）−２，５ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイ（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｍ２００３）を用いて評価した。細胞を９６ウェルプレート上に（２，０００細胞／ウェル）三連でプレーティングした。翌日、培地を交換し、細胞を表示のとおりに処置した。３〜４日間のインキュベーション後、ＭＴＴ試薬を細胞に１時間添加した後、ホルマザン結晶をＳＤＳ−ＤＭＦ溶液に溶解させた。吸光度を、マイクロプレートリーダーＢｉｏｒａｄ  Ｍｏｄｅｌ  ６８０を用いて５７０ｎｍで測定した。
【０２３６】
ウエスタンブロット解析−細胞を、指定の条件下で培養するか、または表示のとおりに処置した。細胞を冷ＰＢＳで２回洗浄した後、溶解バッファー［５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５），１０％グリセロール，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００，１ｍＭ  ＥＤＴＡ，１ｍＭ  ＥＧＴＡ，１０ｍＭ  ＮａＦ，０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、および完全プロテアーゼ阻害薬カクテル］中に剥がし入れた。その後、ライセートを１４，０００ｇで１５分間、４℃にて遠心分離した。上清みを後続の手順に使用した。ゲル電気泳動を用いたタンパク質の分離およびニトロセルロース膜への転写後、ウエスタンブロット解析を行なった。イムノブロッティングを、抗体の製造業者の推奨に従って行なった。ブロッキングを、５％乳汁含有ＰＢＳＴ（０．５％Ｔｗｅｅｎ２０  Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ９４１６）を用いて行なった。膜ブロットへの抗体結合を、ホースラディッシュペルオキシダーゼ−二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いて検出した後、ＥＣＬウエスタンブロッティング検出試薬（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で処理した。
【０２３７】
リアルタイムＰＣＲ（ｑＰＣＲ）−全ＲＮＡを、ＰｅｒｆｅｃｔＰｕｒｅ  ＲＮＡ  Ｃｕｌｔｕｒｅｄ  Ｃｅｌｌ  Ｋｉｔ（５−プライム，Ｈａｍｂｕｒｇ）を用いて単離した。相補ＤＮＡを、ｍｉＳｃｒｉｐｔキット（ＱＩＡＧＥＮ）を用いて合成した。ＨＥＲ２、ＨＥＲ３ならびにハウスキーピング遺伝子ＧＡＰＤＨに対する特異的プライマーを、Ｐｒｉｍｅｒ３ソフトウェアを用いて設計した：
ＨＥＲ２−フォワード  ５’−ｇａｇｇｔｇｇｔａｃｔｔｃａａｔｔｇｃｇａｃｔｃａ−３’（配列番号：７）；
ＨＥＲ２−リバース  ５’−ａｇｇｇａａｇｇｃｇｇａｃｇｃｃｔｇａｔ−３’（配列番号：８；
ＨＥＲ３−フォワード  ５’−ｔｇｃａｇｔｇｇａｔｔｃｇａｇａａｇｃ−３’（配列番号：９）；
ＨＥＲ３−リバース  ５’−ａｇｔｔｃａａｃａｔｇａｃｇａａｇａｔｇ−３’（配列番号：１０）；
ＧＡＰＤＨ−フォワード  ５’−ａｃａｇｔｔｇｃｃａｔｇｔａｇａｃｃ−３’（配列番号：１１）；
ＧＡＰＤＨ−リバース  ５’−ｔｔｔｔｔｇｇｔｔｇａｇｃａｃａｇｇ−３’（配列番号：１２）。
【０２３８】
リアルタイム定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）解析を、ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎキット（Ｑｉａｇｅｎ  ｏｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびＳｔｅｐ  Ｏｎｅ  Ｐｌｕｓ  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）を用いて行なった。ｑＰＣＲシグナル（ｃＴ）をＧＡＰＤＨに対して正規化した。
【０２３９】
免疫細胞化学検査−細胞を、２４ウェルプレート内のガラスカバースリップ上で培養し、１０μｇ／ｍｌの総濃度の表示した抗体合剤で処置した。Ｋｉ６７染色のため、Ｈ１９７５細胞を室温にて３．７％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で２０分間固定した後、０．３％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００中で５分間、透過処理し、次いで、０．１％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）（ＰＢＳ−Ｔ）を含有する生理食塩水中で３回、すすぎ洗浄した。次いで細胞を、３％アルブミン（ＰＢＳ−Ｔ中）とともに１時間インキュベートした後、一次抗体（アルブミン（１％）を含有するＰＢＳ−Ｔ中）とともに４℃で一晩インキュベーションした。インキュベーション後、細胞をＰＢＳ−Ｔ中で洗浄し、蛍光標識した二次抗体（４８８  Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ）およびＤＡＰＩで室温にて１時間染色した。さらに３回洗浄後、カバースリップを、細胞を下にして、１０μｌのＰｒｏＬｏｎｇ  Ｇｏｌｄ退色防止試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を滴下した上に置き、光から保護して一晩維持した。試料を、Ｄｅｌｔａ  Ｖｉｓｉｏｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ）顕微鏡を用いて検査した。ＨＥＲ２およびＨＥＲ３の上方調節解析のため、細胞を表示のとおりに処置し、４℃で３０分間酸洗浄し、生理食塩水中ですすぎ洗浄し、３．７％ＰＦＡで２０分間固定した。酸洗浄は、酸性溶液（１５０ｍｍｏｌ／ＬのＮａＣｌ，０．１ｍｍｏｌ／Ｌのグリシン，ｐＨ＝２．１）を用いて行なった。一次抗体とのインキュベーション後のみにＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００またはＴｗｅｅｎ（登録商標）を使用したこと以外は既報のとおりに試料を加工処理した。一次抗体：抗ＥＧＦＲ（細胞シグナル伝達  カタログ番号４２６７），製造業者の使用説明書に従って使用；０．２５μｇ／ｍｌの濃度の抗ＨＥＲ２（Ｌ２６）および抗ＨＥＲ３（２５２）を本発明者らのラボラトリーで調製した。
【０２４０】
ｓｉＲＮＡトランスフェクション−特異的オンターゲット（Ｏｎ−ｔａｒｇｅｔ）ＥＧＦＲおよびスクランブルｓｉＲＮＡ（ｓｉＣＴＲＬ）ならびにオンターゲットＨＥＲ２およびＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡを、Ｄｈａｒｍａｃｏｎから購入した（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ：ＨＥＲ３  ｓｉＲＮＡ  カタログ番号Ｌ−００３１２７，ＥＧＦＲ  ｓｉＲＮＡ  カタログ番号Ｌ−００３１１４，ＨＥＲ２  ｓｉＲＮＡ  カタログ番号Ｌ−００３１２６，ＣＴＲＬ  ｓｉＲＮＡ  カタログ番号Ｄ−００１８１０−１０−０５。ｓｉＲＮＡオリゴヌクレオチドトランスフェクションを、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行なった。
【０２４１】
ルシフェラーゼプロモーターレポーターアッセイ−ＨＥＲ２（ｐＮｅｕＬｉｔｅ）またはＨＥＲ３（ＨＰＲＭ２３８８３）プロモーター領域を含むプラスミドを、それぞれ、ＡｄｄｇｅｎｅおよびＧｅｎｅｃｏｐｅｉａから購入した。ＨＥＲ２プロモーター領域をＰＣＲにより、Ｐｆｕ−Ｔｕｒｂｏ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用し、プライマー配列：フォワード：５’−ｇｇｃｇｔｃｃｃｇｇｃｇｃｔａｇｇａａｇｇｃｃｔｇｃｇｃａｇａｇａｇ−３’（配列番号：１３）およびリバース：５’−ｃｔｃｔｃｔｔｃｇｃｇｃａｇｇｃｃｔｔｃｃｔａｇｃｇｃｃｇｇｇａｃｇｃｃ−３’（配列番号：１４）を用いて増幅させ、ｐＧＭ３−Ｂａｓｉｃ−Ｖｅｃｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）内にクローニングした（ｐＨＥＲ２−ｐｒｏｍ−ＬｕｃＦＦ）。ＨＥＲ３プロモーター領域は、ｐＧＭ３−Ｂａｓｉｃ−Ｖｅｃｔｏｒ内に、ＢｇｌＩＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素を用いてクローニングした（ｐＨＥＲ３−ｐｒｏｍ−ＬｕｃＦＦ）。ｐｍＣｈｅｒｒｙ−Ｃ１ベクター（ｐｍＣｈｅＲＮＬ）のｍＣｈｅｒｒｙコード領域の３’側にクローニングしたｐＲＬプラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ）由来のウミシイタケルシフェラーゼコード領域は、Ａｎｄｒｅａ  Ｌｅｖｉ博士の厚意によりご提供頂いた。ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５細胞株を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、ｐＨＥＲ２−ｐｒｏｍ−ＬｕｃＦＦとｐｍＣｈｅＲＮＬまたはｐＨＥＲ３−ｐｒｏｍ−ＬｕｃＲＮＬとｐｍＣｈｅＲＮＬでコトランスフェクションした。ｐｍＣｈｅＲＮＬとｐＧＬ３−Ｃｏｎｔｒｏｌ−Ｖｅｃｔｏｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）またはｐＧＬ３−Ｂａｓｉｃ−Ｖｅｃｔｏｒとでコトランスフェクションした細胞を、それぞれ、陽性対照および陰性対照として使用した。次いで細胞を３週間、ピューロマイシン（１μｇ／ｍｌ）を用いて選択した。次いで、安定的にコトランスフェクションされた誘導体細胞株をｍＡｂ  ５６５またはセツキシマブで処置した。具体的には、３００００個の細胞を２４ウェルプレート上にプレーティングし、４８時間後、細胞を、１０ｍｇ／ｍｌの表示した抗体で８〜２４時間、表示のとおりに処置した。ルシフェラーゼ活性を、ＶｉｃｔｏｒＸ  Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＤｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔｅｒ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて測定した。
【０２４２】
ルシフェラーゼアッセイによって測定された細胞の生存率−ＷＩ３８およびＮＬ２０細胞を、ｐｍＣｈｅＲＮＬ構築物で安定的にトランスフェクトした。同様に、ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５を、ｅＧＦＰ−ホタルルシフェラーゼレンチウイルス粒子に感染させた。３週間の薬物選択後、誘導体標識細胞をｍＡｂで処置し、ホタルルシフェラーゼまたはウミシイタケルシフェラーゼの相対シグナルを、Ｒｅｎｉｌｌａ−ＧｌｏまたはＳｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて測定した。
【０２４３】
フローサイトメトリー解析−ＮＬ２０、ＷＩ３８、Ｈ１９７５およびＰＣ９ＥＲ細胞をトリプシン処理し、１％アルブミン（重量／体積）を含有する生理食塩水中で２回洗浄した。次いで、細胞を、１０μｇ／ｍｌの抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２または抗ＨＥＲ３  ｍＡｂ（それぞれ、ｍＡｂ  ５６５、ｍＡｂ  Ｌ２６またはｍＡｂ  ２５２）とともに４℃で１〜２時間インキュベートした。非染色細胞を対照として使用した。２回の洗浄後、細胞を、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ４８８にカップリングさせた抗マウス抗体とともに４℃で１時間インキュベートした。染色後、細胞を１回洗浄し、ＢＤ  ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）によって解析した。データを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて解析した。ＰＩ染色のため、図８Ａ〜Ｂに表示したとおりの４８時間の処置後、細胞をＰＢＳで１回洗浄した後、トリプシン処理した。次いで細胞をＰＢＳ中に再懸濁させ、ヨウ化プロピジウム溶液（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ４８６４）を、製造業者の使用説明書に従って添加した。染色後、細胞を１回洗浄し、ＢＤ  ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）によって解析した。データを、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて解析した。
【０２４４】
インビボ腫瘍形成性増殖−動物試験は、Ｗｅｉｚｍａｎｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ’ｓ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄ（ＩＲＢ）によって承認されたものであった。ＣＤ１／ヌードマウス（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を１０匹のマウスの群に無作為化し、右脇腹にＨ１９７５肺がん細胞（３×１０６６／マウス）またはＰＣ９ＥＲ肺がん細胞（４×１０６／マウス）を皮下注射した。ＰＢＳまたはｍＡｂを３日に１回、２００μｇ／マウス／注射の総用量で、細胞注射の１１日後から開始して、腫瘍が１，５００ｍｍ３のサイズに達するまで腹腔内注射した。ＴＫＩ  ＡＺＤ−９２９１の効果を評価する実験では、ビヒクル（ビヒクル製剤：ＨＰＭＣ  ０．５％（ｓｉｇｍａカタログ番号５６３４０）、Ｔｗｅｅｎ８０  ０．１％（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｐ８０７４，水中）、５０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量のエルロチニブ、または１もしくは５ｍｇ／ｋｇ／注射の用量のＡＺＤ９２９１を毎日、腹腔内注射した。実験の１つ（図１７）では、マウスを毎日、５０ｍｇ／ｋｇ／注射の用量のエルロチニブで、腫瘍が８００ｍｍ３のサイズに達するまで処置し、そのときのみ、表示のとおりに処置した。腫瘍体積を週に２回評価し、体重を週に１回評価した。腫瘍サイズが１，５００ｍｍ３に達したらマウスを安楽死させた。いくつかの腫瘍を、表示した時間点でマウスから採取し、さらなる評価で考慮した。腫瘍担持マウスの生存率を記録し、カプラン−マイヤー解析によって示した。
【０２４５】
統計解析およびデータ解析−データは、Ｐｒｉｓｍ  ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを用いて示した。統計解析は、一元配置ＡＮＯＶＡをボンフェローニの比較検定とともに用いて行なった（＊ｐ≦０．０５；＊＊ｐ≦０．０１；＊＊＊ｐ≦０．００１）。
【０２４６】
（実施例１）
実施例１
抗ＥＧＦＲ処置によりインビトロでＨＥＲ２およびＨＥＲ３の発現の上方調節が誘導される
ＥＧＦＲ特異的チロシンキナーゼ阻害薬（ＴＫＩ）で処置されたほとんどの非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）患者は、およそ１年以内に耐性を獲得し、最も一般的な機構は、Ｔ７９０Ｍと表示されるＥＧＦＲ内の特定の第２の部位の変異を伴うものである（６〜１０）。
【０２４７】
抗ＥＧＦＲがＥＧＦＲ  ＴＫＩ耐性を克服する能力を解明するため、３種類のＮＳＣＬＣ細胞株：二重変異型ＥＧＦＲ（Ｌ８５８ＲとＴ７９０Ｍ）を発現している患者由来のＨ１９７５細胞、ＰＣ９細胞株、およびインビトロでＴ７９０Ｍ二次変異を獲得させたＰＣ９誘導体であるＰＣ９ＥＲ細胞株（ｄｅｌ７４６−７５０  ＥＧＦＲ，ＬＲＥＡ欠失とも称される）を選択した（１６）。
【０２４８】
漸増用量のＥＧＦＲ  ＴＫＩ阻害薬エルロチニブまたは抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体（ｍＡｂ）セツキシマブのいずれかでの３日間の処置後の細胞の生存率をモニタリングした（図１Ａ）。予測どおり、親ＰＣ９細胞はエルロチニブによって強く阻害され、セツキシマブによって弱く阻害された。しかしながら、先の研究（１７）によれば、ＥＧＦＲ  Ｔ７９０Ｍ変異を発現しているＮＳＣＬＣ細胞（すなわち、ＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５）はどちらの処置に対しても耐性を示した。
【０２４９】
耐性細胞株に注目すると、図１Ｂに示されるように、セツキシマブまたは別の抗ＥＧＦＲ抗体ｍＡｂ  ５６５への長期曝露により、処置細胞においてＥＧＦＲの発現レベルの緩徐な低減がもたらされた。興味深いことに、これには、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３ならびにこれらの活性なチロシンリン酸化形態の上方調節が付随し、正のフィードバックの出現が示唆される。
【０２５０】
ＨＥＲ２およびＨＥＲ３の上方調節における遅延型応答により、この調節が転写レベルであり、図１Ｃ〜Ｅおよび図２に示された結果によって裏付けられるシナリオが示唆される：
（１）Ｈ１９７５およびＰＣ９ＥＲ細胞抽出物に対して行なった定量的ＰＣＲ解析では、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３転写物の時間依存性の中程度の上方調節が示された（図１Ｃ）。
（２）発光性レポーターがＨＥＲ２またはＨＥＲ３のプロモーターによって駆動されるプロモーター−レポータープラスミドでトランスフェクトしたＰＣ９ＥＲおよびＨ１９７５細胞により、セツキシマブ処置ではＨＥＲ２プロモーター活性が強く高められ、ＨＥＲ３プロモーター活性は弱く高められることが実証された（図１Ｄ〜Ｅ）。
（３）ｍＡｂ処置と同様、低分子干渉ＲＮＡオリゴヌクレオチド（ｓｉＲＮＡ）を用いたＥＧＦＲ発現の枯渇の後、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３  タンパク質が上方調節された（図２）。
【０２５１】
総合すると、このデータにより、変異型ＥＧＦＲの下方調節によって、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３を上方調節する代償的フィードバックループが誘導されることが示された。
【０２５２】
（実施例２）
実施例２
抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３での併用処置により、インビトロで３つのすべての受容体のタンパク質発現が相乗的に下方調節される
本発明者らは、ＨＥＲ２／ＨＥＲ３の上方調節を抑制するとＴＫＩ耐性腫瘍に対する抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂの効果が増大するかもしれないと仮定した。第１工程として、それぞれＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３に対するｍＡｂ  ５６５、１２および３３を、培養ＮＳＣＬＣ細胞の生存を阻害する卓越した能力に基づいて選択した（図３）。蛍光顕微鏡検査により、３種類のｍＡｂまたはこれらの２剤合剤ではいずれも、３つのすべての受容体のタンパク質発現は有意に下方調節され得ないことが明らかになった。しかしながら、図４に示されるように、３剤合剤では、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３のタンパク質発現がほぼ完全に枯渇した。３剤合剤では、抗ＥＧＦＲ抗体に帰属する活性であるＨＥＲ２およびＨＥＲ３の転写を向上させる能力が保持された（図５Ａ〜Ｂ）。
【０２５３】
ＨＥＲ２およびＨＥＲ３が関与している遅延型の正のフィードバックループは、ＥＧＦＲおよび下流経路、例えばＥＲＫまたはＡＫＴを活性化させると予測される。この目的のため、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＡＫＴ、ＥＲＫおよびこれらのリン酸化形態の発現を、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂ、抗ＨＥＲ２、抗ＨＥＲ３およびこの３剤合剤で処置したＰＣ９ＥＲ細胞におけるウエスタンブロット解析によって評価した。図６に示されるように、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂでのＰＣ９ＥＲ細胞の処置では、最初は、構成的に活性な変異型受容体のリン酸化が低減された。並行して、ＥＧＦＲは徐々に分解を受け、処置の１２時間後、ほぼ消失した。それでもなお、この遅い時間点で、残留ＥＧＦＲの著しく強い再リン酸化が観察された。この過剰活性化は、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３ならびにこれらの活性なリン酸化形態の並存的上方調節に関連しているのかもしれない。予測どおり、ＥＧＦＲリン酸化の時間的推移は、ＥＲＫ活性化の速度論、例えば、過剰リン酸化の後の方でのピーク（約２４時間目）を反映していた（図６）。しかしながら、驚くべきことに、ＡＫＴは同様の効果を示さず、抗ＥＧＦＲと同様、抗ＨＥＲ２抗体はＥＲＫ過剰リン酸化を誘導した（図６）。重要なことに、図６に示されるように、２剤ｍＡｂ合剤ではＥＲＫの再活性化は完全に抑制されなかったが、これは、３剤ｍＡｂ合剤では完全に抑制された。また、図６は、免疫蛍光解析により、３剤ｍＡｂ合剤での処置によってＥＧＦＲの完全な枯渇がもたらされたことを明白に示す（図４）。
【０２５４】
総合すると、このデータにより、抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３での併用処置により、３つのすべての受容体およびこれらの下流経路のタンパク質レベルが相乗的に低減されることが示された。
【０２５５】
（実施例３）
実施例３
抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３での併用処置は、インビトロで腫瘍細胞の増殖に相乗的に影響を及ぼす
細胞増殖の阻害に対する３剤ｍＡｂ合剤の効果をＮＳＣＬＣ細胞株（Ｈ１９７５およびＰＣ９ＥＲ）において評価した。図７Ａ〜Ｂにおいてわかるように、比色ＭＴＴアッセイにより、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３  ｍＡｂと比べて抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂが両方の細胞株の生存を最も強力に阻害する（およそ４日間のインキュベーション後４０％）ことが示された。しかしながら、この３種類のｍＡｂの３剤合剤では両方の細胞株の生存が、各ｍＡｂ単独またはこれらの３種類の任意の２剤合剤よりも有効に阻害された（Ｈ１９７５では約８０％およびＰＣ９ＥＲでは約６０％）。
【０２５６】
Ｋｉ６７発現（増殖している細胞のマーカー）に関する細胞の免疫細胞化学解析により、細胞の増殖および生存に対する３剤ｍＡｂ処置の相乗効果が確認された：２日間の３剤ｍＡｂ合剤での処置後、未処置Ｈ１９７５細胞の９３％がＫｉ６７について陽性に染色されたが、陽性のままであったのは該細胞のわずか１９％であった（図７Ｃ）。
【０２５７】
この強い阻害にもかかわらず、３剤ｍＡｂ合剤での処置では、色素排除アッセイまたはカスパーゼ−３切断のいずれかによって測定されるように、アポトーシスの徴候は誘起されなかった（図８Ａ〜Ｄ）。
【０２５８】
３剤ｍＡｂ合剤での処置によって慣用的な治療薬の毒性効果が高まり得るかどうかを試験するため、この３剤ｍＡｂと、ＮＳＣＬＣ患者を処置するために使用される化学療法薬であるシスプラチンとの総合効果を調べた。図９Ａ〜Ｂに示されるように、３種類の抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３  ｍＡｂでの処置により、両方のＮＳＣＬＣ細胞株（Ｈ１９７５およびＰＣ９ＥＲ）に対するシスプラチンの増殖阻害効果が増大した。
【０２５９】
薬物の併用に伴う懸念の１つは、主に非がん性細胞に対する毒性による相加的有害効果である。これを試験するため、また、腫瘍−間質相互作用に対する薬物の効果に取り組むため、肺起源の２つのヒト非がん性細胞株：ＮＬ２０上皮細胞およびＷＩ３８線維芽細胞を選択した。フローサイトメトリー解析により、選択した細胞株におけるＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３の内因性発現を確認した（図１０）。次の工程では、非がん性細胞株（ＮＬ２０およびＷＩ３８）の蛍光性誘導体を、ｍＣｈｅｒｒｙ−ウミシイタケ（本明細書において−ＣｈｅｒｒｙＲＮＬと表示する）を安定的に発現させることにより確立し；がん性細胞株（Ｈ１９７５およびＰＣ９ＥＲ）の同様の誘導体を、該細胞をＧＦＰ−ホタル（本明細書において−ＧＦＰＦＦと表示する）に感染させることにより確立した。図１１に明白に示されているように、標識ＮＳＣＬＣ細胞株を３剤ｍＡｂ合剤で処置すると、用量依存性の増殖阻害が誘導された。これに対して、３剤ｍＡｂ処置が２つの標識非がん性細胞株に対して有する効果は最小限であり、３剤ｍＡｂ処置は非がん性組織を容赦するようであることが示唆された。この帰属を、がん性細胞と非がん性細胞からなる組織様共培養物を用いてさらに調べた。まず、ＮＳＣＬＣ細胞（Ｈ１９７５およびＰＣ９ＥＲ）の増殖に対する非がん性線維芽細胞（Ｗ１３８）の効果を評価した。図１２Ａ〜Ｂにおいてわかるように、標識ＮＳＣＬＣ細胞を、非標識ＮＳＣＬＣ細胞（対照）または非標識非がん性線維芽細胞のいずれかと共培養すると、非がん性線維芽細胞はこの２つのＮＳＣＬＣ細胞株の増殖を向上させることが例示された。対照的に、相互実験により、がん性細胞は非がん性線維芽細胞の増殖を抑止している可能性があることが示された（図１２Ｃ）。
【０２６０】
この効果は、一方において、間質細胞によって分泌される成長因子によって媒介され得、他方において、腫瘍細胞によって分泌される増殖阻害性のサイトカインによって媒介され得る。したがって、この双方向性クロストークに対する抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ２  ｍＡｂの影響を試験した。図１３Ａ〜Ｂに示されるように、共培養物を各ｍＡｂで処置すると、間質細胞がＮＳＣＬＣ細胞増殖を向上させる能力は低下したが、３剤ｍＡｂ合剤では、この低下がさらに増大した。また、ＮＳＣＬＣ細胞が間質細胞に奏する抑制効果に対してｍＡｂ単独療法が有する効果は最小限であった（データ示さず）、３剤ｍＡｂ合剤では、ＮＳＣＬＣ細胞が間質細胞に奏する抑制効果が有意に低減された。
【０２６１】
総合すると、データにより、３剤ｍＡｂ合剤はインビトロでがん性細胞の増殖を強く抑止するが非がん性細胞は容赦し、場合によっては間質の支持的効果により腫瘍細胞を枯渇させるという能力が示された。
【０２６２】
（実施例４）
実施例４
抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３での併用処置は、インビボで腫瘍の増殖に相乗的に影響を及ぼす
次の工程では、腫瘍担持マウスモデルにおいて、インビボでの腫瘍の増殖に対する３剤ｍＡｂ合剤の効果を評価した。この目的のため、Ｈ１９７５  ＮＳＣＬＣ細胞（３×１０６６）をＣＤ１−ｎｕ／ｎｕマウスの皮下に播種した。播種の１１日後、マウスを３日に１回、抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２  抗ＨＥＲ３（それぞれｍＡｂ  ５６５＋ｍＡｂ  １２＋ｍＡｂ  ３３）、ならびに考えられ得るすべての３剤合剤で処置した。インビトロデータによると、図１４Ａ〜Ｃに示された結果は、抗ＥＧＦＲ  ｍＡｂを用いた単独療法では腫瘍の増殖が一部阻害されたが、抗ＨＥＲ２、抗ＨＥＲ３でも抗ＨＥＲ２と抗ＨＥＲ３の併用処置でも腫瘍の増殖は抑制されなかったことを示す。抗ＥＧＦＲと抗ＨＥＲ２または抗ＨＥＲ３のいずれかとからなる併用処置では、腫瘍の増殖が一部阻害されたが、３剤ｍＡｂ合剤のみが、腫瘍の増殖ならびに動物の生存に対して強い持続性の阻害効果を奏した。観察されたこのほぼ完全な腫瘍根絶は、３剤ｍＡｂ合剤が、ＴＫＩ耐性ＥＧＦＲを標的化して分解すると同時に、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２およびＨＥＲ３だけでなくＲＡＳ−ＥＲＫ経路も再活性化させる正のフィードバックループをブロックするという能力によるものであり得る（図６）。
【０２６３】
（実施例５）
実施例５
セツキシマブ、トラスツズマブおよび抗ＨＥＲ３での併用処置は、インビボで腫瘍の増殖に相乗的に影響を及ぼす
インビボでの腫瘍の増殖に対する抗体併用処置の効果を、市販の抗体セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２）および抗ＨＥＲ３  ｍＡｂ  ３３で構成された３剤ｍＡｂ合剤を用いて試験し、腫瘍担持マウスモデルにおいて評価した。この目的のため、ＰＣ９ＥＲ  ＮＳＣＬＣ細胞（４×１０６）をＣＤ１−ｎｕ／ｎｕマウスの皮下に播種した。播種の１１日後、マウスを３日に１回、セツキシマブ、トラスツズマブおよび抗ＨＥＲ３  ｍＡｂ  ３３ならびに考えられ得るすべての３剤合剤で処置した。図１５に示された結果は、２種類の抗体からなる併用処置が、各抗体単独と比べて腫瘍増殖阻害に対する効果の増大を有したことを示す。さらに、３剤ｍＡｂ合剤は腫瘍の増殖に対して強い持続性の阻害効果を奏し、腫瘍の増殖をほぼ完全に無効にした。
【０２６４】
第２世代および第３世代のＴＫＩが開発されている（Ｌｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１５）；例えば、市販のＡＺＤ−９２９１、ＣＯ−１６８６およびＨＭ−６１７１３は、ＥＧＦＲ活性化変異およびＥＧＦＲ耐性変異の両方を阻害するが野生型ＥＧＦＲは容赦する。かかる第３世代のＴＫＩの効果を３剤抗体合剤と比較するため、ＣＤ１−ｎｕ／ｎｕマウスの皮下にＨ１９７５  ＮＳＣＬＣ細胞（３×１０６６）を播種し、不可逆的ＴＫＩ  ＡＺＤ−９２９１または３剤ｍＡｂ合剤のセツキシマブ、トラスツズマブおよび抗ＨＥＲ３  ｍＡｂ  ３３で処置した。図１６Ａ〜Ｂに示された結果は、この２つの処置薬は、非常に異なる作用機序を用いるが、エルロチニブ耐性ヒトＮＳＣＬＣの増殖を同等に阻害したことを示す。重要なことに、ＡＺＤ−９２９１では、３剤ｍＡｂ合剤と比べて体重増加がわずかに抑止され（図１６Ｃ）、これにより動物において毒性が高いことが示唆され得る。
【０２６５】
次の工程では、ｍＡｂの３剤混合物（セツキシマブ＋トラスツズマブ＋ｍＡｂ３３）とＡＺＤ９２９１の合剤を、Ｈ１９７５  ＮＳＣＬＣ細胞（３×１０６６）を皮下に播種したＣＤ１−ｎｕ／ｎｕマウスにおいて評価した。図１７に示されるように、３剤ｍＡｂと低用量ＡＺＤ−９２９１の合剤は、この３剤ｍＡｂでの治療または高用量ＡＺＤ−９２９１療法と比べて改善された抗腫瘍効果を有した。このような結果により、有害効果を限定的にするための、ＴＫＩの補助投薬を用いたこの２つの処置モダリティ（すなわち、３剤ｍＡｂ療法とＴＫＩ）の併用の可能性が高まる。
【０２６６】
（実施例６）
実施例６
ＮＳＣＬＣは、ＡＺＤ−９２９１療法に対する耐性を発現するが、セツキシマブ、トラスツズマブおよび抗ＨＥＲ３での併用処置に対する感受性は維持する
第３世代のＴＫＩに耐性の細胞に対する３剤抗体合剤療法の効果を評価するため、ＰＣ９ＥＲ  ＮＳＣＬＣ細胞を、ＡＺＤ−９２９１とともに３ヵ月間インキュベートした。生存細胞（本明細書においてＰＣ９ＥＲ−ＡＺＤＲと表示する）は、ＭＴＴアッセイによる評価時、ＡＺＤ−９２９１に対する感受性を失っており（図１８）；そのＥＧＦＲは、ＡＺＤ−９２９１および別の第３世代のＴＫＩであるＣＯ−１６８６の両方に曝露したとき、リン酸化状態のままであった（図１９）。
【０２６７】
これに対して、比色ＭＴＴアッセイにより、セツキシマブ、トラスツズマブおよび抗ＨＥＲ３  ｍＡＢ３３での処置では、ＰＣ９ＥＲ細胞およびＰＣ９ＥＲ−ＡＺＤＲ細胞の両方の生存が最も強力に阻害されることが示された（図１８）。
【０２６８】
総合すると、このような結果は、第３世代のＴＫＩによって新たな耐性機構が生じるかもしれないが、３種類のｍＡｂを使用する処置の提供によりこの耐性の出現は克服され得ることを示す。
【０２６９】
総合すると、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３およびこれらの下流の標的は、ＥＧＦＲ標的化抗体に応答して上方調節される。抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２および抗ＨＥＲ３  ｍＡｂでの併用処置により３つのすべての受容体が相乗的に枯渇され、ＥＧＦＲ  Ｔ７９０Ｍ変異を発現しているＴＫＩ耐性ＮＳＣＬＣ細胞の増殖がインビトロおよびインビボの両方において阻害される。
【０２７０】
本発明を、その特定の実施形態に関して説明したが、多くの択一例、修正例および変形例が当業者に自明であることは明白であろう。したがって、添付の特許請求の範囲の趣旨および広い範囲に含まれるかかる択一例、修正例および変形例はすべて、包含されていることを意図する。
【０２７１】
本明細書において言及した刊行物、特許および特許出願はすべて、引用によりその全体が、あたかも個々の各刊行物、特許または特許出願が具体的に個々に引用により本明細書に組み込まれて示されているのと同程度に、本明細書に組み込まれる。また、本出願書類における任意の参考文献の引用および特定は、かかる参考文献が本発明の先行技術として利用可能であるという是認と解釈されるべきでない。セクションの見出しを使用している点において、これは、必ずしも限定していると解釈されるべきでない。
【０２７２】
参考文献
（他の参考文献は本出願書類中の至る箇所に記載している）
【図１Ａ−１Ｅ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ−５Ｂ】
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【図６】
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【図７Ａ−７Ｃ】
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【図８Ａ−８Ｄ】
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【図９Ａ−９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ−１２Ｃ】
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【図１３Ａ−１３Ｂ】
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【図１４Ａ−１４Ｃ】
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【図１５】
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【図１６Ａ−１６Ｃ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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