(57)【要約】  本開示は、式Ｉを有する置換イソオキサゾールカルボキサミドおよびその薬学的に許容可能な塩および溶媒和物（式中、Ｒ１、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、Ｘ、ｎおよびｍは、本明細書において示されるとおりに定められる）を提供する。本開示は、ＳＭＹＤ３またはＳＭＹＤ２などのＳＭＹＤタンパク質の遮断に反応性がある障害を処置するための式Ｉの化合物の使用も対象とする。本開示の化合物は、癌を処置するために特に有用である。2017528460.tif 000046
2017528460.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
2017528460.tif 000039
を有する化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物
（式中、
Ｒ１は、エチルおよびシクロプロピルからなる群から選択され；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｘは、−Ｎ（−Ｙ−Ｚ）−および−ＣＨ［Ｎ（Ｈ）−Ｙ−Ｚ］−からなる群から選択され；
Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）−および−Ｓ（＝Ｏ）２−からなる群から選択され；
Ｚは、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２Ｂｒおよび−ＣＨ２Ｉからなる群から選択され；
ｎは０または１であり；
ｍは０または１である）。
【請求項２】
式ＩＩ：
2017528460.tif 000040
を有する請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ａおよびＲ３ｂが水素であることを特徴とする、化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項４】
2017528460.tif 000041
を有し、式中、Ｒ３ａはＣ１〜４アルキルである、請求項１または２に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項５】
式ＶＩＩ：
2017528460.tif 000042
を有する、請求項１〜３の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項６】
2017528460.tif 000043
を有する、請求項１〜３の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項７】
式Ｘ：
2017528460.tif 000044
を有する、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項８】
2017528460.tif 000045
を有する、請求項１〜７の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項９】
請求項１〜８の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物において、Ｙが−Ｃ（＝Ｏ）−であることを特徴とする、化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項１０】
請求項１〜８の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物において、Ｙが−Ｓ（＝Ｏ）２−であることを特徴とする、化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項１１】
請求項１〜１０の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物において、Ｚが、ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２および−ＣＨ２Ｃｌからなる群から選択されることを特徴とする、化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物において、Ｚが、−ＣＨ＝ＣＨ２および−ＣＨ２Ｃｌからなる群から選択されることを特徴とする、化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項１３】
請求項１〜１２の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物において、Ｒ１がエチルであることを特徴とする、化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項１４】
請求項１〜１２の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物において、Ｒ１がシクロプロピルであることを特徴とする、化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項１５】
５−シクロプロピル−Ｎ−（１−（ビニルスルホニル）アゼチジン−３−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド；
５−シクロプロピル−Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−（ビニルスルホンアミド）シクロへキシル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド；
Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−アクリルアミドシクロヘキシル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド；
Ｎ−（１−（２−クロロアセチル）ピペリジン−４−イル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド；
Ｎ−（１−アクリロイルピペリジン−４−イル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド；
５−シクロプロピル−Ｎ−（（２Ｓ）−２−メチル−１−（ビニルスルホニル）ピペリジン−４−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド；
５−シクロプロピル−Ｎ−（（２Ｒ）−２−メチル−１−（ビニルスルホニル）ピペリジン−４−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド；
５−シクロプロピル−Ｎ−（（１ｓ，４ｓ）−４−（ビニルスルホンアミド）シクロへキシル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド；
５−シクロプロピル−Ｎ−（１−（ビニルスルホニル）ピペリジン−４−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド；および
５−シクロプロピル−Ｎ−（１−（ビニルスルホニル）ピロリジン−３−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項１６】
請求項１〜１５の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物と、薬学的に許容可能な担体と、を含む医薬組成物。
【請求項１７】
治療的有効量の請求項１〜１５の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物を患者に投与することを含む、患者を処置する方法において、前記患者が癌を有することを特徴とする、方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法において、前記癌が、副腎癌、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性赤白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、腺扁平上皮癌、脂肪組織新生物、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、侵襲性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、未分化大細胞型リンパ腫、組織非形成性甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、星状細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、ブレンナー腫瘍、褐色腫、バーキットリンパ腫、乳癌、脳癌、癌腫、上皮内癌、癌肉腫、軟骨腫瘍、セメント質腫、骨髄肉腫、軟骨腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、腎臓の明細胞肉腫、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮頸癌、結直腸癌、デゴス病、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、未分化胚細胞腫、胚性癌腫、内分泌腺新生物、卵黄嚢腫瘍、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、胎児内胎児、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、神経節腫、胃腸癌、胚細胞性腫瘍、妊娠性絨毛癌、巨細胞線維芽細胞腫、骨の巨細胞腫瘍、グリア細胞腫瘍、多形膠芽細胞腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫瘍、半陰陽性卵巣細胞腫、胆嚢癌、胃癌、ヘアリー細胞白血病、血管芽細胞腫、頭頸部癌、血管外皮腫、血液悪性腫瘍、肝芽細胞腫瘍、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、浸潤性小葉癌、腸癌、腎臓癌、喉頭癌、悪性黒子、致死性正中線癌、白血病、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管腫、リンパ血管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ腫、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、ＭＡＬＴリンパ腫、悪性線維性組織球腫、悪性末梢神経鞘腫、悪性トリトン腫瘍、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、縦隔胚細胞性腫瘍、乳房の髄様癌、髄質甲状腺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、粘液性腫瘍、多発性骨髄腫、筋肉組織新生物、菌状息肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液腫、粘液肉腫、上咽頭癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節性黒色腫、眼癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、視神経腫瘍、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、パンコースト腫瘍、乳頭様甲状腺癌、傍神経節腫、松果体芽腫、松果体細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫、多胚腫、前駆Ｔリンパ芽球リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、膵臓癌、咽頭癌、腹膜偽粘液腫、腎臓細胞癌、腎臓髄質癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒタートランスフォーメーション、直腸癌、肉腫、神経鞘腫症、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、性索性腺間質腫瘍、印環細胞癌、皮膚癌、小円形青色細胞腫瘍、小細胞癌、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性いぼ、脊椎腫瘍、脾臓辺縁帯リンパ腫、扁平上皮細胞癌、滑膜肉腫、セザリー病、小腸癌、扁平上皮癌、胃癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣腫瘍、莢膜細胞腫、甲状腺癌、移行上皮癌、咽頭癌、尿膜管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、ブドウ膜黒色腫、子宮癌、疣状癌、視覚路神経膠腫、外陰癌、膣癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍およびウィルムス腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、方法。
【請求項１９】
癌を処置することにおける使用のための、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１９に記載の医薬組成物において、前記癌が、副腎癌、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性赤白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、腺扁平上皮癌、脂肪組織新生物、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、侵襲性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、未分化大細胞型リンパ腫、組織非形成性甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、星状細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、ブレンナー腫瘍、褐色腫、バーキットリンパ腫、乳癌、脳癌、癌腫、上皮内癌、癌肉腫、軟骨腫瘍、セメント質腫、骨髄肉腫、軟骨腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、腎臓の明細胞肉腫、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮頸癌、結直腸癌、デゴス病、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、未分化胚細胞腫、胚性癌腫、内分泌腺新生物、卵黄嚢腫瘍、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、胎児内胎児、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、神経節腫、胃腸癌、胚細胞性腫瘍、妊娠性絨毛癌、巨細胞線維芽細胞腫、骨の巨細胞腫瘍、グリア細胞腫瘍、多形膠芽細胞腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫瘍、半陰陽性卵巣細胞腫、胆嚢癌、胃癌、ヘアリー細胞白血病、血管芽細胞腫、頭頸部癌、血管外皮腫、血液悪性腫瘍、肝芽細胞腫瘍、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、浸潤性小葉癌、腸癌、腎臓癌、喉頭癌、悪性黒子、致死性正中線癌、白血病、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管腫、リンパ血管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ腫、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、ＭＡＬＴリンパ腫、悪性線維性組織球腫、悪性末梢神経鞘腫、悪性トリトン腫瘍、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、縦隔胚細胞性腫瘍、乳房の髄様癌、髄質甲状腺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、粘液性腫瘍、多発性骨髄腫、筋肉組織新生物、菌状息肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液腫、粘液肉腫、上咽頭癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節性黒色腫、眼癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、視神経腫瘍、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、パンコースト腫瘍、乳頭様甲状腺癌、傍神経節腫、松果体芽腫、松果体細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫、多胚腫、前駆Ｔリンパ芽球リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、膵臓癌、咽頭癌、腹膜偽粘液腫、腎臓細胞癌、腎臓髄質癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒタートランスフォーメーション、直腸癌、肉腫、神経鞘腫症、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、性索性腺間質腫瘍、印環細胞癌、皮膚癌、小円形青色細胞腫瘍、小細胞癌、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性いぼ、脊椎腫瘍、脾臓辺縁帯リンパ腫、扁平上皮細胞癌、滑膜肉腫、セザリー病、小腸癌、扁平上皮癌、胃癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣腫瘍、莢膜細胞腫、甲状腺癌、移行上皮癌、咽頭癌、尿膜管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、ブドウ膜黒色腫、子宮癌、疣状癌、視覚路神経膠腫、外陰癌、膣癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍およびウィルムス腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、医薬組成物。
【請求項２１】
癌の処置における使用のための、請求項１〜１５の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の化合物において、前記癌が、副腎癌、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性赤白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、腺扁平上皮癌、脂肪組織新生物、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、侵襲性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、未分化大細胞型リンパ腫、組織非形成性甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、星状細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、ブレンナー腫瘍、褐色腫、バーキットリンパ腫、乳癌、脳癌、癌腫、上皮内癌、癌肉腫、軟骨腫瘍、セメント質腫、骨髄肉腫、軟骨腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、腎臓の明細胞肉腫、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮頸癌、結直腸癌、デゴス病、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、未分化胚細胞腫、胚性癌腫、内分泌腺新生物、卵黄嚢腫瘍、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、胎児内胎児、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、神経節腫、胃腸癌、胚細胞性腫瘍、妊娠性絨毛癌、巨細胞線維芽細胞腫、骨の巨細胞腫瘍、グリア細胞腫瘍、多形膠芽細胞腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫瘍、半陰陽性卵巣細胞腫、胆嚢癌、胃癌、ヘアリー細胞白血病、血管芽細胞腫、頭頸部癌、血管外皮腫、血液悪性腫瘍、肝芽細胞腫瘍、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、浸潤性小葉癌、腸癌、腎臓癌、喉頭癌、悪性黒子、致死性正中線癌、白血病、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管腫、リンパ血管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ腫、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、ＭＡＬＴリンパ腫、悪性線維性組織球腫、悪性末梢神経鞘腫、悪性トリトン腫瘍、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、縦隔胚細胞性腫瘍、乳房の髄様癌、髄質甲状腺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、粘液性腫瘍、多発性骨髄腫、筋肉組織新生物、菌状息肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液腫、粘液肉腫、上咽頭癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節性黒色腫、眼癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、視神経腫瘍、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、パンコースト腫瘍、乳頭様甲状腺癌、傍神経節腫、松果体芽腫、松果体細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫、多胚腫、前駆Ｔリンパ芽球リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、膵臓癌、咽頭癌、腹膜偽粘液腫、腎臓細胞癌、腎臓髄質癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒタートランスフォーメーション、直腸癌、肉腫、神経鞘腫症、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、性索性腺間質腫瘍、印環細胞癌、皮膚癌、小円形青色細胞腫瘍、小細胞癌、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性いぼ、脊椎腫瘍、脾臓辺縁帯リンパ腫、扁平上皮細胞癌、滑膜肉腫、セザリー病、小腸癌、扁平上皮癌、胃癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣腫瘍、莢膜細胞腫、甲状腺癌、移行上皮癌、咽頭癌、尿膜管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、ブドウ膜黒色腫、子宮癌、疣状癌、視覚路神経膠腫、外陰癌、膣癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍およびウィルムス腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、化合物。
【請求項２３】
癌の処置用の薬剤の製造のための、請求項１〜１５の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物の使用。
【請求項２４】
請求項２３に記載の使用において、前記癌が、副腎癌、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性赤白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、腺扁平上皮癌、脂肪組織新生物、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、侵襲性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、未分化大細胞型リンパ腫、組織非形成性甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、星状細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、ブレンナー腫瘍、褐色腫、バーキットリンパ腫、乳癌、脳癌、癌腫、上皮内癌、癌肉腫、軟骨腫瘍、セメント質腫、骨髄肉腫、軟骨腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、腎臓の明細胞肉腫、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮頸癌、結直腸癌、デゴス病、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、未分化胚細胞腫、胚性癌腫、内分泌腺新生物、卵黄嚢腫瘍、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、胎児内胎児、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、神経節腫、胃腸癌、胚細胞性腫瘍、妊娠性絨毛癌、巨細胞線維芽細胞腫、骨の巨細胞腫瘍、グリア細胞腫瘍、多形膠芽細胞腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫瘍、半陰陽性卵巣細胞腫、胆嚢癌、胃癌、ヘアリー細胞白血病、血管芽細胞腫、頭頸部癌、血管外皮腫、血液悪性腫瘍、肝芽細胞腫瘍、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、浸潤性小葉癌、腸癌、腎臓癌、喉頭癌、悪性黒子、致死性正中線癌、白血病、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管腫、リンパ血管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ腫、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、ＭＡＬＴリンパ腫、悪性線維性組織球腫、悪性末梢神経鞘腫、悪性トリトン腫瘍、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、縦隔胚細胞性腫瘍、乳房の髄様癌、髄質甲状腺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、粘液性腫瘍、多発性骨髄腫、筋肉組織新生物、菌状息肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液腫、粘液肉腫、上咽頭癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節性黒色腫、眼癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、視神経腫瘍、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、パンコースト腫瘍、乳頭様甲状腺癌、傍神経節腫、松果体芽腫、松果体細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫、多胚腫、前駆Ｔリンパ芽球リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、膵臓癌、咽頭癌、腹膜偽粘液腫、腎臓細胞癌、腎臓髄質癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒタートランスフォーメーション、直腸癌、肉腫、神経鞘腫症、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、性索性腺間質腫瘍、印環細胞癌、皮膚癌、小円形青色細胞腫瘍、小細胞癌、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性いぼ、脊椎腫瘍、脾臓辺縁帯リンパ腫、扁平上皮細胞癌、滑膜肉腫、セザリー病、小腸癌、扁平上皮癌、胃癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣腫瘍、莢膜細胞腫、甲状腺癌、移行上皮癌、咽頭癌、尿膜管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、ブドウ膜黒色腫、子宮癌、疣状癌、視覚路神経膠腫、外陰癌、膣癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍およびウィルムス腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、使用。
【請求項２５】
請求項１〜１５の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物と、癌を有する患者に前記化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物を投与するための説明書と、を含むキット。
【請求項２６】
請求項２５に記載のキットにおいて、前記癌が、副腎癌、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性赤白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、腺扁平上皮癌、脂肪組織新生物、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、侵襲性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、未分化大細胞型リンパ腫、組織非形成性甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、星状細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、ブレンナー腫瘍、褐色腫、バーキットリンパ腫、乳癌、脳癌、癌腫、上皮内癌、癌肉腫、軟骨腫瘍、セメント質腫、骨髄肉腫、軟骨腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、腎臓の明細胞肉腫、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮頸癌、結直腸癌、デゴス病、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、未分化胚細胞腫、胚性癌腫、内分泌腺新生物、卵黄嚢腫瘍、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、胎児内胎児、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、神経節腫、胃腸癌、胚細胞性腫瘍、妊娠性絨毛癌、巨細胞線維芽細胞腫、骨の巨細胞腫瘍、グリア細胞腫瘍、多形膠芽細胞腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫瘍、半陰陽性卵巣細胞腫、胆嚢癌、胃癌、ヘアリー細胞白血病、血管芽細胞腫、頭頸部癌、血管外皮腫、血液悪性腫瘍、肝芽細胞腫瘍、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、浸潤性小葉癌、腸癌、腎臓癌、喉頭癌、悪性黒子、致死性正中線癌、白血病、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管腫、リンパ血管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ腫、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、ＭＡＬＴリンパ腫、悪性線維性組織球腫、悪性末梢神経鞘腫、悪性トリトン腫瘍、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、縦隔胚細胞性腫瘍、乳房の髄様癌、髄質甲状腺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、粘液性腫瘍、多発性骨髄腫、筋肉組織新生物、菌状息肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液腫、粘液肉腫、上咽頭癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節性黒色腫、眼癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、視神経腫瘍、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、パンコースト腫瘍、乳頭様甲状腺癌、傍神経節腫、松果体芽腫、松果体細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫、多胚腫、前駆Ｔリンパ芽球リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、膵臓癌、咽頭癌、腹膜偽粘液腫、腎臓細胞癌、腎臓髄質癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒタートランスフォーメーション、直腸癌、肉腫、神経鞘腫症、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、性索性腺間質腫瘍、印環細胞癌、皮膚癌、小円形青色細胞腫瘍、小細胞癌、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性いぼ、脊椎腫瘍、脾臓辺縁帯リンパ腫、扁平上皮細胞癌、滑膜肉腫、セザリー病、小腸癌、扁平上皮癌、胃癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣腫瘍、莢膜細胞腫、甲状腺癌、移行上皮癌、咽頭癌、尿膜管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、ブドウ膜黒色腫、子宮癌、疣状癌、視覚路神経膠腫、外陰癌、膣癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍およびウィルムス腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、キット。
【請求項２７】
ＳＭＹＤタンパク質介在性の障害を処置する方法において、前記ＳＭＹＤタンパク質介在性の障害の処置を必要とする対象に、前記ＳＭＹＤタンパク質介在性の障害を処置するための有効量で請求項１〜１５の何れか１項に記載の化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは水和物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示は、ＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２阻害剤などのＳＭＹＤタンパク質阻害剤としての置換イソオキサゾールカルボキサミドおよびＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などのＳＭＹＤタンパク質の阻害が利益をもたらす状態および疾患を処置する治療方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
遺伝子発現のエピジェネティックな制御は、タンパク質産生および細胞分化の重要な生物学的決定因子であり、多くのヒト疾患において重要な病因的役割がある。エピジェネティックな制御は、そのヌクレオチド配列の変化がない、遺伝物質の遺伝的修飾を含む。一般的には、エピジェネティックな制御には、クロマチンの転写活性状態と不活性状態との間の構造変換を調節するＤＮＡおよびタンパク質（例えばヒストン）の選択的および可逆的な修飾（例えばメチル化）が介在する。これらの共有修飾は、メチルトランスフェラーゼなどの酵素によって調節され得（例えばＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などのＳＭＹＤタンパク質）、これらの多くは、増殖性障害などのヒト疾患を引き起こし得る遺伝子変異と関連がある。したがって、ＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などのＳＭＹＤタンパク質の活性を阻害することが可能な低分子の開発が必要とされている。
【発明の概要】
【０００３】
一態様において、本開示は、まとめて本明細書中で「本開示の化合物」と呼ばれる、下記式Ｉ〜ＸＩＩにより表される置換イソオキサゾールカルボキサミド化合物およびその薬学的に許容可能な塩および溶媒和物を提供する。
【０００４】
別の態様において、本開示は、本開示の化合物および１つ以上の薬学的に許容可能な担体を提供する。
【０００５】
別の態様において、本開示は、哺乳動物に有効量の少なくとも１つの本開示の化合物を投与することを含む、哺乳動物において、ＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３もしくはＳＭＹＤ２またはその両方など、を阻害する方法を提供する。
【０００６】
別の態様において、本開示は、哺乳動物に有効量の少なくとも１つの本開示の化合物を投与することを含む、哺乳動物において、ＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３もしくはＳＭＹＤ２またはその両方など、を不可逆的に阻害する方法を提供する。
【０００７】
別の態様において、本開示は、治療的有効量の本開示の化合物を投与することを含む、ＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３もしくはＳＭＹＤ２またはその両方などの阻害に反応性がある、疾患、障害または状態、例えば、癌を処置するための方法を提供する。
【０００８】
別の態様において、本開示は、ＳＭＹＤ３の阻害剤としての本開示の化合物の使用を提供する。
【０００９】
別の態様において、本開示は、ＳＭＹＤ２の阻害剤としての本開示の化合物の使用を提供する。
【００１０】
別の態様において、本開示は、ＳＭＹＤタンパク質の阻害剤としての本開示の化合物の使用を提供する。
【００１１】
別の態様において、本開示は、ＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３もしくはＳＭＹＤ２またはその両方などの阻害に反応性がある、疾患、障害または状態を処置するための医薬組成物を提供し、本医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容可能な担体との混合物中で治療的有効量の本開示の化合物を含む。
【００１２】
別の態様において、本開示は、哺乳動物における癌、例えば、乳房、子宮頸部、結腸、腎臓、肝臓、頭頸部、皮膚、膵臓、卵巣、食道、肺および前立腺の癌を処置することにおける使用のための本開示の化合物を提供する。
【００１３】
別の態様において、本開示は、哺乳動物において癌を処置するための薬剤の製造における使用のための本開示の化合物を提供する。
【００１４】
別の態様において、本開示は、本開示の化合物を含むキットを提供する。
【００１５】
本開示のさらなる実施形態および長所は、ある程度、続く記載において説明され、記載に由来するか、または本開示の実施により知り得る。本開示の実施形態および長所は、添付の特許請求の範囲で特に指摘される要素および組み合わせにより実現され、達成される。
【００１６】
前述の要約および次の詳細な記述の両者とも、単なる代表であり説明であり、特許請求されている本発明を限定するものではないことを理解されたい。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本開示の一態様は、ＳＭＹＤタンパク質の阻害剤としての本開示の化合物の使用に基づく。この特性を考慮して、本開示の化合物は、ＳＭＹＤタンパク質の阻害に反応性がある疾患、障害または状態、例えば癌を処置するのに有用である。
【００１８】
本開示の一態様は、ＳＭＹＤ３の阻害剤としての本開示の化合物の使用に基づく。この特性を考慮して、本開示の化合物は、ＳＭＹＤ３の阻害に反応性がある疾患、障害または状態、例えば癌を処置するのに有用である。
【００１９】
本開示の一態様は、ＳＭＹＤ２の阻害剤としての本開示の化合物の使用に基づく。この特性を考慮して、本開示の化合物は、ＳＭＹＤ２の阻害に反応性がある疾患、障害または状態、例えば癌を処置するのに有用である。
【００２０】
一実施形態において、本開示の化合物は、式Ｉ：
2017528460.tif 000003
を有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、
Ｒ１は、エチルおよびシクロプロピルからなる群から選択され；
Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、水素およびＣ１〜４アルキルからなる群から選択され；
Ｘは、−Ｎ（−Ｙ−Ｚ）−および−ＣＨ［Ｎ（Ｈ）−Ｙ−Ｚ］−からなる群から選択され；
Ｙは、−Ｃ（＝Ｏ）−および−Ｓ（＝Ｏ）２−からなる群から選択され；
Ｚは、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２Ｃｌ、−ＣＨ２Ｂｒおよび−ＣＨ２Ｉからなる群から選択され；
ｎは０または１であり；
ｍは０または１である）である。
【００２１】
別の実施形態において、本開示の化合物は、式ＩＩ：
2017528460.tif 000004
を有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、
Ｒ１、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、Ｙ、Ｚ、ｍおよびｎは、式Ｉに関連して上記で定められるとおりである）である。別の実施形態において、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ａおよびＲ３ｂは、水素である。
【００２２】
別の実施形態において、本開示の化合物は、
2017528460.tif 000005
を有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｒ３ａはＣ１〜４アルキルであり；Ｒ１、ＹおよびＺは、式Ｉに関連して上記で定められるとおりである）である。
【００２３】
別の実施形態において、本開示の化合物は、式ＶＩＩ：
2017528460.tif 000006
を有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｒ１、ＹおよびＺは、式Ｉに関連して上記で定められるとおりである）である。
【００２４】
別の実施形態において、本開示の化合物は、
2017528460.tif 000007
を有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｒ１、ＹおよびＺは、式Ｉに関連して上記で定められるとおりである）である。
【００２５】
別の実施形態において、本開示の化合物は、式Ｘ：
2017528460.tif 000008
を有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｒ１、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、Ｙ、Ｚ、ｍおよびｎは、式Ｉに関連して上記で定められるとおりである）である。
【００２６】
別の実施形態において、本開示の化合物は、
2017528460.tif 000009
を有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｒ１、ＹおよびＺは、式Ｉに関連して上記で定められるとおりである）である。
【００２７】
別の実施形態において、本開示の化合物は、式Ｉ〜ＸＩＩの何れか１つを有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｙは−Ｃ（＝Ｏ）−である）である。
【００２８】
別の実施形態において、本開示の化合物は、式Ｉ〜ＸＩＩの何れか１つを有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｙは−Ｓ（＝Ｏ）２−である）である。
【００２９】
別の実施形態において、本開示の化合物は、式Ｉ〜ＸＩＩの何れか１つを有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｚは、−ＣＨ＝ＣＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、−ＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２および−ＣＨ２Ｃｌからなる群から選択される）である。別の実施形態において、Ｚは、−ＣＨ＝ＣＨ２および−ＣＨ２Ｃｌからなる群から選択される。
【００３０】
別の実施形態において、本開示の化合物は、式Ｉ〜ＸＩＩの何れか１つを有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｒ１はエチルである）である。
【００３１】
別の実施形態において、本開示の化合物は、式Ｉ〜ＸＩＩの何れか１つを有する化合物およびその薬学的に許容可能な塩または溶媒和物、例えば水和物（式中、Ｒ１はシクロプロピルである）である。
【００３２】
別の実施形態において、本開示の化合物は、表１および２の化合物および薬学的に許容可能なそれらの塩または溶媒和物、例えば水和物または異なるその薬学的に許容可能な塩である。
【００３３】
当然のことながら、本開示の化合物は、ある一定の実施形態において、遊離塩基、様々な塩および水和物形態であり、表１で列挙される特定の塩に限定されない。
2017528460.tif 000010
2017528460.tif 000011
【００３４】
定義
本開示の目的のために、「アルキル」という用語は、単独でまたは別の基の一部として使用される場合、１〜１２個の炭素原子を含有する（すなわちＣ１〜１２アルキル）かまたは炭素原子数が指定されている、直鎖状または分岐鎖状脂肪族炭化水素を指す（すなわちＣ１アルキル、例えばメチルなど、Ｃ２アルキル、例えばエチルなど、Ｃ３アルキル、例えばプロピルまたはイソプロピルなど）。一実施形態において、アルキル基は、直鎖状Ｃ１〜４アルキル基から選択される。別の実施形態において、アルキル基は、分岐鎖状Ｃ３〜４アルキル基から選択される。別の実施形態において、アルキル基は、直鎖状または分岐鎖状Ｃ３〜４アルキル基から選択される。別の実施形態において、アルキル基は部分的にまたは完全に重水素化され、すなわち、アルキル基の１つ以上の水素原子が重水素原子で置き換えられる。非限定的な代表的なＣ１〜４アルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルおよびイソ−ブチルが挙げられる。
【００３５】
本開示の目的のために、「シクロアルキル」という用語は、単独でまたは別の基の一部として使用される場合、３〜１２個の炭素原子を有する（すなわちＣ３〜１２シクロアルキル）かまたは炭素数が指定されている１〜３個の環を含有する飽和環状脂肪族炭化水素を指す。一実施形態において、シクロアルキル基はシクロプロピルである。
【００３６】
本開示は、異なる原子質量または質量数を有する原子により置き換えられる１つ以上の原子を有することにより同位体標識（すなわち放射性標識）されている本開示の化合物の何れをも包含する。開示される化合物に組み込まれ得る同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体、例えばそれぞれ、２Ｈ（または重水素（Ｄ））、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌ、例えば、３Ｈ、１１Ｃおよび１４Ｃが挙げられる。一実施形態において、本開示の化合物内の位置の原子の実質的に全てが、異なる原子質量または質量数を有する原子により置き換えられる組成物が提供される。別の実施形態において、異なる原子質量または質量数を有する原子で、本開示の化合物内の位置で原子の一部が置き換えらえる、すなわち本開示の化合物がある位置で濃縮される組成物が提供される。同位体標識された本開示の化合物は、当技術分野で公知の方法により調製され得る。
【００３７】
本開示の化合物は、１つ以上の不斉中心を含有し得、したがってエナンチオマー、ジアステレオマーおよび他の立体異性型を生じさせ得る。本開示は、全てのこのような可能な形態ならびにそれらのラセミおよび分割型およびそれらの混合物の使用を包含するものとする。個々のエナンチオマーは、本開示を考慮して、当技術分野で公知の方法に従い、分離し得る。本明細書中に記載の化合物がオレフィン性二重結合または幾何学的非対称の他の中心を含有する場合、別段の指定がない限り、これらはＥおよびＺ幾何異性体の両方を含むものとする。全ての互変異性体が本開示により同様に包含されるものとする。
【００３８】
本明細書中で使用される場合、「立体異性体」という用語は、空間でのそれらの原子の配向のみが異なる個々の分子の全ての異性体に対する一般用語である。これは、エナンチオマーおよび互いの鏡像ではない複数の不斉中心がある化合物の異性体（ジアステレオマー）を含む。
【００３９】
「不斉中心」または「非対称炭素原子」という用語は、４個の異なる基が連結される炭素原子を指す。
【００４０】
「エナンチオマー」および「エナンチオマー性」という用語は、その鏡像上に重ねることができず、ゆえに光学的に活性がある分子を指し、エナンチオマーは、一方向に偏光面を回転させ、その鏡像化合物は、反対方向に偏光面を回転させる。
【００４１】
「ラセミ」という用語は、等部のエナンチオマーの混合物を指し、この混合物は光学的に不活性である。
【００４２】
「絶対配置」という用語は、キラル分子実体（または基）の原子の空間的配置およびその立体化学の記載、例えばＲまたはＳを指す。
【００４３】
本明細書中で使用される立体化学用語および慣例は、別段の指定がない限り、Ｐｕｒｅ  ＆  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ  ６８：２１９３（１９９６）に記載のものと一致するものとする。
【００４４】
「エナンチオマー過剰」または「ｅｅ」という用語は、１つのエナンチオマーが他のものと比較してどの程度存在するかについての目安を指す。ＲおよびＳエナンチオマーの混合物について、パーセントエナンチオマー過剰は、│Ｒ−Ｓ│＊１００（式中、ＲおよびＳは、Ｒ＋Ｓ＝１になるような混合物中でのエナンチオマーの個々のモルまたは重量分率である）として定義される。キラル物質の旋光度の知識とともに、パーセントエナンチオマー過剰は、（［α］ｏｂｓ／［α］ｍａｘ）＊１００として定義され、式中、［α］ｏｂｓは、エナンチオマーの混合物の旋光度であり、［α］ｍａｘは、純粋な鏡像異性体の旋光度である。エナンチオマー過剰の決定は、ＮＭＲ分光学、キラルカラムクロマトグラフィーまたは光学偏光分析法を含む様々な分析技術を使用して可能である。
【００４５】
「エナンチオマー的に純粋」または「高光学純度の」とは、分子の全て（検出限界内）が同じキラリティーセンスを有する、キラル物質の試料を指す。
【００４６】
「エナンチオマー的に濃縮」または「エナンチオピュアな」という用語は、エナンチオマー率が５０：５０よりも大きいキラル物質の試料を指す。エナンチオマー的に濃縮された化合物はエナンチオマー的に純粋であり得る。
【００４７】
「ａ」および「ａｎ」という用語は１つ以上を指す。
【００４８】
「約」という用語は、本明細書中で使用される場合、挙げられる数±１０％を含む。したがって、「約１０」は９〜１１を意味する。
【００４９】
本開示は、無毒性の薬学的に許容可能な塩を含む、本開示の化合物の塩の調製および使用を包含する。薬学的に許容可能な付加塩の例としては、無機および有機酸付加塩および塩基性塩が挙げられる。薬学的に許容可能な塩としては、金属塩、例えばナトリウム塩、カリウム塩、セシウム塩など；アルカリ土類金属、例えばカルシウム塩、マグネシウム塩など；有機アミン塩、例えばトリエチルアミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩など；無機酸塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩など；有機酸塩、例えばクエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、マンデル酸塩、酢酸塩、ジクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、ギ酸塩など；スルホン酸塩、例えばメタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩など；およびアミノ酸塩、例えばアルギニン酸、アスパラギン酸塩（ａｓｐａｒｇｉｎａｔｅ）、グルタミン酸塩などが挙げられるが限定されない。「薬学的に許容可能な塩」という用語は、本明細書中で使用される場合、例えば、標的患者（例えば哺乳動物、例えばヒト）において生理学的に耐容性である、本開示の化合物の酸または塩基との反応により得られるあらゆる塩を指す。
【００５０】
酸付加塩は、塩酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酢酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、リン酸、シュウ酸、ジクロロ酢酸などの薬学的に許容可能な無毒性酸の溶液との特定の本開示の化合物の溶液の混合により形成され得る。塩基性塩は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化コリン、炭酸ナトリウムなどの薬学的に許容可能な無毒性塩基の溶液との本開示の化合物の溶液の混合により形成され得る。
【００５１】
本開示は、本開示の化合物の溶媒和物の調製および使用を包含する。溶媒和物は一般的には、化合物の生理学的活性または毒性を顕著に変化させず、薬学的な同等物として機能し得るようなものである。「溶媒和物」という用語は、本明細書中で使用される場合、例えば、溶媒分子と本開示の化合物との比率がそれぞれ、約２：１、約１：１または約１：２である、二溶媒、単溶媒またはヘミ溶媒などの溶媒分子との、本開示の化合物の組み合わせ、物理的結合および／または溶媒和である。この物理的結合は、水素結合を含め、様々な度合いのイオン結合および共有結合を含む。ある一定の例において、溶媒和物は、結晶性固体の結晶格子に１つ以上の溶媒分子が組み込まれる場合など、単離され得る。したがって、「溶媒和物」は、溶液相および単離可能な溶媒和物の両方を包含する。本開示の化合物は、薬学的に許容可能な溶媒、例えば水、メタノール、エタノールなどとの溶媒和された形態として存在し得、本開示は、本開示の化合物の溶媒和化された、および非溶媒和形態の両方を含むものとする。溶媒和物のあるタイプは水和物である。「水和物」は、溶媒分子が水である溶媒和物の特定のサブグループに関する。溶媒和物は一般的には、薬学的な同等物として機能し得る。溶媒和物の調製は当技術分野で公知である。例えば、酢酸エチルと、および水とのフルコナゾールの溶媒和物の調製を記載する、Ｍ．Ｃａｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．，９３（３）：６０１−６１１（２００４）を参照。溶媒和物、ヘミ溶媒和物、水和物などの同様の調製は、Ｅ．Ｃ．ｖａｎ  Ｔｏｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＡＰＳ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．，５（１）：Ａｒｔｉｃｌｅ  １２（２００４）およびＡ．Ｌ．Ｂｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．６０３−６０４（２００１）により記載される。溶媒和物を調製する典型的な非限定過程は、約２０℃以上〜約２５℃の温度で所望の溶媒（有機、水またはその混合物）中で本開示の化合物を溶解させ、次に結晶を形成させるために十分な速度で溶液を冷却し、公知の方法、例えばろ過により結晶を単離することを含む。赤外分光法などの分析技術は、溶媒和物の結晶中の溶媒の存在を確認するために使用し得る。
【００５２】
本開示の化合物は、ＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などのＳＭＹＤタンパク質の阻害剤であるので、ＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などが介在する多くの疾患、状態または障害は、これらの化合物を使用することにより処置し得る。したがって、本開示は、一般的に、障害に罹患しているかまたは罹患するリスクがある動物においてＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などの阻害に反応性がある疾患、状態または障害を処置するための方法を対象とし、この方法は、有効量の１つ以上の本開示の化合物を動物に投与することを含む。
【００５３】
一態様において、本開示の化合物は、１つ以上のＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３またはＳＭＹＤ２などに不可逆的に結合することによる、ＳＭＹＤタンパク質の治療的に有効な阻害剤である。いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、１つ以上のＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３またはＳＭＹＤ２など、と共有結合を形成することによる、ＳＭＹＤタンパク質の治療的に有効な阻害剤である。
【００５４】
本開示は、ＳＭＹＤタンパク質の阻害を必要とする動物においてＳＭＹＤタンパク質を阻害する方法をさらに対象とし、この方法は、治療的有効量の少なくとも１つの本開示の化合物をその動物に投与することを含む。
【００５５】
本開示は、ＳＭＹＤ３の阻害を必要とする動物においてＳＭＹＤ３を阻害する方法をさらに対象とし、この方法は、治療的有効量の少なくとも１つの本開示の化合物をその動物に投与することを含む。
【００５６】
本開示は、ＳＭＹＤ２の阻害を必要とする動物においてＳＭＹＤ２を阻害する方法をさらに対象とし、この方法は、治療的有効量の少なくとも１つの本開示の化合物をその動物に投与することを含む。
【００５７】
本明細書中で使用される場合、「処置する」、「処置すること」、「処置」などの用語は、それと関連する疾患または状態および／または症状を排除するか、軽減するか、または緩和することを指す。除外しないものの、疾患または状態を処置することは、それに関連する疾患、状態または症状が完全に排除されることを必要としない。本明細書中で使用される場合、「処置する」、「処置すること」、「処置」などの用語は、疾患もしくは状態の再発現または疾患もしくは状態の再発がないが、そのリスクがあるかまたはそれが起こり易い対象において、疾患または状態を再発現するかまたは以前に制御された疾患または状態を再発する可能性を低下させることを指す「予防的処置」を含み得る。「処置する」という用語および同義語は、このような処置を必要とする個体に治療的有効量の本開示の化合物を投与することを企図する。
【００５８】
本開示の意味内で、「処置」はまた、再発予防またはフェーズ予防（ｐｈａｓｅ  ｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ）ならびに急性または慢性徴候、症状および／または機能不良の処置も含む。処置は、例えば症状を抑制するために、症状により方向付けされ得る。これは短期間行われ得るか、中期的な時間にわたり方向付けられ得るか、または、例えば維持療法の状況の中の長期処置であり得る。
【００５９】
「治療的有効量」または「有効用量」という用語は、本明細書中で使用される場合、本開示の方法により投与される場合、関心のある状態または疾患の処置を必要とする個体に、関心のある状態または疾患の処置に対する活性成分を有効に送達するのに十分である活性成分の量を指す。癌または他の増殖障害の場合、薬剤の治療的有効量は、不要な細胞増殖を減少させ得（すなわち、ある程度まで遅延させ、好ましくは停止させ得）；癌細胞数を減少させ得；腫瘍の大きさを縮小させ得；末梢臓器への癌細胞浸潤を阻害し得（すなわち、ある程度まで遅延させ、好ましくは停止させ得）；腫瘍転移を阻害し得（すなわち、ある程度まで遅延させ、好ましくは停止させ得）；ある程度まで腫瘍成長を阻害し得；標的細胞においてタンパク質メチル化を調整し得；および／または癌と関連する症状の１つ以上をある程度まで緩和し得る。投与される化合物または組成物が成長を妨げ、および／または既存の癌細胞を死滅させる程度まで、細胞分裂停止性および／または細胞毒性であり得る。
【００６０】
「容器」という用語は、したがって、医薬品を保管し、運搬し、分配し、および／または取り扱うのに適切な何らかの容器および閉鎖物を意味する。
【００６１】
「挿入文書（ｉｎｓｅｒｔ）」という用語は、その製品の使用に関する詳細な情報の上での決断を医師、薬剤師および患者が行うことを可能にするために必要とされる安全性および有効性データとともに、その製品の投与方法の説明を提供する、医薬品に付随する情報を意味する。添付文書は、一般に、医薬品のための「ラベル」とみなされる。
【００６２】
「疾患」または「状態」または「障害」という用語は、一般に、病的状態または機能であるとみなされる、および特定の徴候、症状および／または機能不良の形でそれ自身現れ得る、かく乱および／または異常を示す。以下で明らかにされるように、本開示の化合物は、ＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などを阻害し、ＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などの阻害が利益をもたらす、増殖性疾患などの疾患および状態を処置することにおいて使用し得る。
【００６３】
いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、「ＳＭＹＤタンパク質介在性障害」（例えば、ＳＭＹＤ３介在性障害またはＳＭＹＤ２介在性障害）を処置するために使用し得る。ＳＭＹＤタンパク質介在性障害は、ＳＭＹＤタンパク質が関与することが知られる何らかの病的状態である。いくつかの実施形態において、ＳＭＹＤ介在性障害は増殖性疾患である。
【００６４】
いくつかの実施形態において、ＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などを阻害することは、ＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などのＳＭＹＤタンパク質の１つ以上の活性の阻害である。いくつかの実施形態において、ＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などのＳＭＹＤタンパク質の活性は、ＳＭＹ３およびＳＭＹＤ２などのＳＭＹＤタンパク質が標的タンパク質（例えばヒストン）にメチル基を転移させる能力である。当然のことながら、ＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などの１つ以上のＳＭＹＤタンパク質の活性は、インビボまたはインビボで阻害され得る。ＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などの１つ以上のＳＭＹＤタンパク質の活性の阻害の代表的なレベルは、少なくとも１０％の阻害、少なくとも２０％の阻害、少なくとも３０％の阻害、少なくとも４０％の阻害、少なくとも５０％の阻害、少なくとも６０％の阻害、少なくとも７０％の阻害、少なくとも８０％の阻害、少なくとも９０％の阻害および最大１００％の阻害を含む。
【００６５】
リジンメチルトランスフェラーゼ（ＫＭＴ）のＳＭＹＤ（ＳＥＴおよびＭＹＮＤドメイン）ファミリーは、遺伝子発現制御およびＤＮＡ損傷応答を含め、様々な細胞過程において軸となる役割を果たす。ヒトＳＭＹＤタンパク質のファミリーは、ＳＭＹＤ１、ＳＭＹＤ２、ＳＭＹＤ３、ＳＭＹＤ４およびＳＭＹＤ５からなる。ＳＭＹＤ１、ＳＭＹＤ２およびＳＭＹＤ３は、ＳＭＹＤ５を除いて高い配列相同性を共有し、ヒトＳＭＹＤタンパク質は、少なくとも１つのＣ末端テトラトリコペプチド反復（ＴＰＲ）ドメインを抱える（例えばＡｂｕ−Ｆａｒｈａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ（２０１１）３（５）３０１−３０８を参照）。ＳＭＹＤタンパク質は、様々な癌に連結されることが分かっている（例えばＨａｍａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２００４，６：７３１−７４０を参照）、Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００９、４０６７−４０７２およびＫｏｍａｔｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  ２００９、３０１１３９−１１４６）。
【００６６】
ＳＭＹＤ３は、多くの様々な癌において高レベルで発現されることが分かっているタンパク質メチルトランスフェラーゼである（Ｈａｍａｍｏｔｏ，Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，６（８）：７３１−４０（２００４））。ＳＭＹＤ３は、同様に、乳癌、肝臓癌、前立腺癌および肺癌細胞株の生存に重要である遺伝子転写およびシグナル伝達経路の制御に関与する（Ｈａｍａｍｏｔｏ，Ｒ．ら、Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，６（８）：７３１−４０（２００４）；Ｈａｍａｍｏｔｏ，Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．，９７（２）：１１３−８（２００６）；Ｖａｎ  Ａｌｌｅｒ，Ｇ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，７（４）：３４０−３（２０１２）；Ｌｉｕ，Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，１０５（２２）：１７１９−２８（２０１３）；Ｍａｚｕｒ，Ｐ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５１０（７５０４）：２８３−７（２０１４））。
【００６７】
ＳＭＹＤ３の遺伝子ノックアウトは、様々な癌細胞株の増殖低下につながる（Ｈａｍａｍｏｔｏ，Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，６（８）：７３１−４０（２００４）；Ｈａｍａｍｏｔｏ，Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｃｉ．，９７（２）：１１３−８（２００６）；Ｖａｎ  Ａｌｌｅｒ，Ｇ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，７（４）：３４０−３（２０１２）；Ｌｉｕ，Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，１０５（２２）：１７１９−２８（２０１３）；Ｍａｚｕｒ，Ｐ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５１０（７５０４）：２８３−７（２０１４））。ＲＮＡｉに基づく技術を使用するいくつかの研究から、肝細胞癌細胞株のＳＭＹＤ３の消失により細胞生存能が大きく低下し、その生存促進性の役割がその触媒活性に依存することが分かった（Ｈａｍａｍｏｔｏ，Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，６（８）：７３１−４０（２００４）；Ｖａｎ  Ａｌｌｅｒ，Ｇ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ，７（４）：３４０−３（２０１２））。さらに、ＳＭＹＤ３も、マウスモデルでの膵臓および肺腺癌の両方に対する癌遺伝子ＫＲＡＳにおける機能突然変異の獲得の結果起こる形質転換の重要な介在物質であることが分かった。ＳＭＹＤ３に対するＫＲＡＳの依存性も、その触媒活性に依存することが分かった（Ｍａｚｕｒ，Ｐ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，５１０（７５０４）：２８３−７（２０１４））。
【００６８】
基質タンパク質上へのメチル基の部位特異的な転移を触媒するタンパク質を含有するＳＥＴドメインのサブファミリーのメンバーであるタンパク質として、ＳＭＹＤ２（ＳＥＴおよびＭＹＮＤドメイン含有タンパク質２）が最初に特性評価された。ＳＭＹＤ２は、最初に、ヒストンＨ３（Ｈ３Ｋ３６）上のリジンに対してメチルトランスフェラーゼ活性を有することが示されたが、その後、ヒストンおよび非ヒストンメチルトランスフェラーゼ活性の両方を有することが示された。
【００６９】
ＳＭＹＤ２は、多発癌の病態形成に関連付けられている。これは、対応する正常試料と比較して、乳房、子宮頸部、結腸、腎臓、肝臓、頭頸部、皮膚、膵臓、卵巣、食道および前立腺、ならびに血液悪性腫瘍、例えばＡＭＬ、Ｂ−およびＴ−ＡＬＬ、ＣＬＬおよびＭＣＬなどの腫瘍において、過剰発現されることが示されており、このことから、これらの癌の生物学におけるＳＭＹＤ２に対する役割が示唆される。より具体的には、ＳＭＹＤ２の遺伝子ノックダウンを使用した研究から、食道扁平上皮細胞癌（ＥＳＣＣ）、膀胱癌および子宮頸癌細胞株において抗増殖効果が明らかになった。さらに、ＳＭＹＤ２の高発現は、ＥＳＣＣおよび小児ＡＬＬの両方において予後因子が不良であることが示された。
【００７０】
一態様において、本開示は、治療的有効量の本開示の化合物を投与することを含む、患者において癌を処置する方法を提供する。具体的な機序に限定されるものではないが、いくつかの実施形態において、本開示の化合物は、ＳＭＹＤタンパク質、例えばＳＭＹＤ３およびＳＭＹＤ２などを阻害することによって、癌を処置し得る。処置可能な癌の例としては、副腎癌、腺房細胞癌、聴神経腫、末端黒子型黒色腫、先端汗腺腫、急性好酸球性白血病、急性赤白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性巨核芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺様歯原性腫瘍、腺扁平上皮癌、脂肪組織新生物、副腎皮質癌、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、侵襲性ＮＫ細胞白血病、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、胞巣状横紋筋肉腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維腫、未分化大細胞型リンパ腫、組織非形成性甲状腺癌、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管筋脂肪腫、血管肉腫、星状細胞腫、非定型奇形腫様ラブドイド腫瘍、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、芽細胞腫、骨癌、ブレンナー腫瘍、褐色腫、バーキットリンパ腫、乳癌、脳癌、癌腫、上皮内癌、癌肉腫、軟骨腫瘍、セメント質腫、骨髄肉腫、軟骨腫、脊索腫、絨毛癌、脈絡叢乳頭腫、腎臓の明細胞肉腫、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、子宮頸癌、結直腸癌、デゴス病、線維形成性小円形細胞腫瘍、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、胚芽異形成性神経上皮腫瘍、未分化胚細胞腫、胚性癌腫、内分泌腺新生物、卵黄嚢腫瘍、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、食道癌、胎児内胎児、線維腫、線維肉腫、濾胞性リンパ腫、濾胞性甲状腺癌、神経節腫、胃腸癌、胚細胞性腫瘍、妊娠性絨毛癌、巨細胞線維芽細胞腫、骨の巨細胞腫瘍、グリア細胞腫瘍、多形膠芽細胞腫、神経膠腫、大脳神経膠腫症、グルカゴン産生腫瘍、性腺芽細胞腫、顆粒膜細胞腫瘍、半陰陽性卵巣細胞腫、胆嚢癌、胃癌、ヘアリー細胞白血病、血管芽細胞腫、頭頸部癌、血管外皮腫、血液悪性腫瘍、肝芽細胞腫瘍、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、浸潤性小葉癌、腸癌、腎臓癌、喉頭癌、悪性黒子、致死性正中線癌、白血病、ライディッヒ細胞腫瘍、脂肪肉腫、肺癌、リンパ管腫、リンパ血管肉腫、リンパ上皮腫、リンパ腫、急性リンパ球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、肝臓癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、ＭＡＬＴリンパ腫、悪性線維性組織球腫、悪性末梢神経鞘腫、悪性トリトン腫瘍、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、肥満細胞白血病、縦隔胚細胞性腫瘍、乳房の髄様癌、髄質甲状腺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、メルケル細胞癌、中皮腫、転移性尿路上皮癌、ミュラー管混合腫瘍、粘液性腫瘍、多発性骨髄腫、筋肉組織新生物、菌状息肉腫、粘液性脂肪肉腫、粘液腫、粘液肉腫、上咽頭癌、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経線維腫、神経腫、結節性黒色腫、眼癌、乏突起星細胞腫、乏突起膠腫、オンコサイトーマ、視神経鞘髄膜腫、視神経腫瘍、口腔癌、骨肉腫、卵巣癌、パンコースト腫瘍、乳頭様甲状腺癌、傍神経節腫、松果体芽腫、松果体細胞腫、下垂体細胞腫、下垂体腺腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫、多胚腫、前駆Ｔリンパ芽球リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性体液性リンパ腫、原発性腹膜癌、前立腺癌、膵臓癌、咽頭癌、腹膜偽粘液腫、腎臓細胞癌、腎臓髄質癌、網膜芽細胞腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、リヒタートランスフォーメーション、直腸癌、肉腫、神経鞘腫症、セミノーマ、セルトリ細胞腫瘍、性索性腺間質腫瘍、印環細胞癌、皮膚癌、小円形青色細胞腫瘍、小細胞癌、軟組織肉腫、ソマトスタチン産生腫瘍、煤煙性いぼ、脊椎腫瘍、脾臓辺縁帯リンパ腫、扁平上皮細胞癌、滑膜肉腫、セザリー病、小腸癌、扁平上皮癌、胃癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣腫瘍、莢膜細胞腫、甲状腺癌、移行上皮癌、咽頭癌、尿膜管癌、泌尿生殖器癌、尿路上皮癌、ブドウ膜黒色腫、子宮癌、疣状癌、視覚路神経膠腫、外陰癌、膣癌、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ワルチン腫瘍およびウィルムス腫瘍が挙げられるが限定されない。
【００７１】
別の実施形態において、癌は、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、腎臓癌、肝臓癌、頭頸部癌、皮膚癌、膵臓癌、卵巣癌、食道癌または前立腺癌である。
【００７２】
別の実施形態において、癌は、血液悪性腫瘍、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ＢおよびＴ急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）またはマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）などである。
【００７３】
別の実施形態において、癌は、食道扁平上皮細胞癌（ＥＳＣＣ）、膀胱癌または子宮頸癌である。
【００７４】
別の実施形態において、癌は、白血病、例えば急性単球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病および混合系統型白血病（ＭＬＬ）から選択される白血病である。別の実施形態において、癌は、ＮＵＴ正中線癌である。別の実施形態において、癌は多発性骨髄腫である。別の実施形態において、癌は、肺癌、例えば小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）などである。別の実施形態において、癌は神経芽細胞腫である。別の実施形態において、癌はバーキットリンパ腫である。別の実施形態において、癌は子宮頸癌である。別の実施形態において、癌は食道癌である。別の実施形態において、癌は卵巣癌である。別の実施形態において、癌は結直腸癌である。別の実施形態において、癌は前立腺癌である。別の実施形態において、癌は乳癌である。
【００７５】
別の実施形態において、本開示は、このような治療を必要とする対象に治療的有効量の本開示の化合物を投与することによる、上述の癌における、インビボでの、タンパク質メチル化、遺伝子発現、細胞増殖、細胞分化および／またはアポトーシスを調整する、治療方法を提供する。
【００７６】
本開示の化合物は、何ら他の成分の存在なく化学原料の形態で哺乳動物に投与され得る。本開示の化合物はまた、適切な薬学的に許容可能な担体と合わせた本化合物を含有する医薬組成物の一部としても哺乳動物に投与され得る。このような担体は、薬学的に許容可能な賦形剤および助剤から選択され得る。「薬学的に許容可能な担体」または「薬学的に許容可能なビヒクル」という用語は、標準的な医薬担体、溶媒、界面活性剤またはビヒクルの何れかを包含する。適切な薬学的に許容可能なビヒクルとしては、水性ビヒクルおよび非水性ビヒクルが挙げられる。標準的な医薬担体およびそれらの処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９ｔｈ  ｅｄ．１９９５に記載される。
【００７７】
本開示の範囲内の医薬組成物は、本開示の化合物が１つ以上の薬学的に許容可能な担体と合わせられる全ての組成物を含む。一実施形態において、本開示の化合物は、その意図する治療目的を達成するために有効である量で本組成物中に存在する。個体のニーズが変動し得る一方で、各化合物の有効量の最適範囲の決定は当技術分野の技術の範囲内である。一般的には、本開示の化合物は、特定の障害を処置するために、１日当たり、約０．００２５〜約１５００ｍｇ／ｋｇ哺乳動物体重の用量またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の同等量で、哺乳動物、例えばヒトに経口投与され得る。哺乳動物に投与される本開示の化合物の有用な経口用量は、約０．００２５〜約５０ｍｇ／ｋｇ哺乳動物体重またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の同等量である。筋肉内注射の場合、用量は一般的には経口用量の約半分である。
【００７８】
単位経口用量は、約０．０１ｍｇ〜約１ｇの本開示の化合物、例えば、約０．０１ｍｇ〜約５００ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇ、０．０１ｍｇ〜約５０ｍｇ、例えば、約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇの本化合物を含み得る。単位用量は、１日１回以上、例えば、それぞれが約０．０１ｍｇ〜約１ｇの化合物またはその薬学的に許容可能な塩もしくは溶媒和物の同等量を含有する１つ以上の錠剤またはカプセルとして投与され得る。
【００７９】
本開示の医薬組成物は、本開示の化合物の有益な効果を経験し得るあらゆる患者に投与され得る。このような患者の中で最初に挙げられるのは哺乳動物、例えばヒトおよびペットであるが、本開示は、そのように限定されるものではない。一実施形態において、患者はヒトである。
【００８０】
本開示の医薬組成物は、その意図する目的を達成する何れかの手段によって投与され得る。例えば、投与は、経口、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、経皮的、鼻腔内、経粘膜的、直腸、膣内または口腔内経路による、または吸入によるものであり得る。投与される投与量および投与経路は、特定の対象の環境に依存して、受容者の年齢、性別、健康および体重、処置しようとする状態または障害、同時処置の種類、必要に応じて処置頻度および所望の効果の性質のような因子を考慮して、変動しよう。
【００８１】
一実施形態において、本開示の医薬組成物は経口投与され得る。別の実施形態において、本開示の医薬組成物は、経口投与され得、錠剤、糖衣錠、カプセルまたは経口液体製剤に処方される。一実施形態において、経口処方物は、本開示の化合物を含む押し出し多粒子（ｍｕｌｔｉｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ）を含む。
【００８２】
あるいは、本開示の医薬組成物は、直腸投与され得、坐剤中で処方される。
【００８３】
あるいは、本開示の医薬組成物は、注射により投与され得る。
【００８４】
あるいは、本開示の医薬組成物は、経皮投与され得る。
【００８５】
あるいは、本開示の医薬組成物は、吸入により、または鼻腔内もしくは経粘膜的投与により投与され得る。
【００８６】
あるいは、本開示の医薬組成物は、膣内経路により投与され得る。
【００８７】
本開示の医薬組成物は、約０．０１〜９９重量パーセント、例えば約０．２５〜７５重量パーセントの本開示の化合物を含有し得る。
【００８８】
本開示の医薬組成物は、それ自身が本開示を考慮して知られるように、例えば従来型の混合、顆粒化、糖衣錠作製、溶解、押し出しまたは凍結乾燥工程によって、製造される。したがって、経口使用のための医薬組成物は、活性化合物を固形賦形剤と組み合わせ、任意選択により、得られた混合物を粉砕し、必要に応じて、錠剤または糖衣錠コアを得るために適切な助剤の添加後に顆粒剤の混合物を加工することによって得られ得る。
【００８９】
適切な賦形剤としては、充填剤、例えば糖類（例えば、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトール）、セルロース調製物、リン酸カルシウム（例えば、リン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム）、ならびに結合剤、例えばデンプン糊（例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプンまたはジャガイモデンプンを使用）、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドンが挙げられる。必要に応じて、上述のデンプンおよびまたカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムなど、１つ以上の崩壊剤が添加され得る。
【００９０】
助剤は、一般的には流動性調整剤（ｆｌｏｗ−ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）および潤滑剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸またはその塩（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはステアリン酸カルシウム）およびポリエチレングリコールなどである。糖衣錠コアは、胃液に耐性がある適切なコーティングとともに提供される。この目的のために、任意選択によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒または溶媒混合液を含有し得る、濃縮糖類溶液を使用し得る。胃液に耐性があるコーティングを作製するために、アセチルセルロースフタレートまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの適切なセルロース調製物の溶液を使用し得る。例えば識別のために、または活性化合物用量の組み合わせを特色づけるために、染料または顔料を錠剤または糖衣錠コーティングに添加し得る。
【００９１】
経口で使用され得る他の医薬品の例としては、ゼラチン製の押し込み型カプセルまたはゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールで作製される軟密封カプセルが挙げられる。押し込み型カプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤および、任意選択により安定化剤と混合され得る顆粒剤の形態で、または押し出し多粒子（ｍｕｌｔｉｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ）の形態で、化合物を含有し得る。軟カプセルにおいて、活性化合物は、好ましくは、脂肪油または流動パラフィンなどの適切な液中で溶解されるか、または懸濁される。さらに安定化剤を添加し得る。
【００９２】
直腸投与のための可能な医薬品としては、例えば、１つ以上の活性化合物と坐剤の基剤の組み合わせからなる坐剤が挙げられる。適切な坐剤の基剤としては、とりわけ、天然および合成トリグリセリドおよびパラフィン炭化水素が挙げられる。活性化合物と基剤材料、例えば液体トリグリセリド、ポリエチレングリコールまたはパラフィン炭化水素などの組み合わせからなるゼラチン直腸カプセルを使用することも可能である。
【００９３】
非経口投与のための適切な処方物としては、例えば水溶性の塩などの水溶性形態の活性化合物の水溶液、アルカリ溶液または酸性溶液が挙げられる。あるいは、活性化合物の懸濁液は、油性懸濁液として調製され得る。懸濁液などのための適切な脂溶性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油（例えばゴマ油）、合成脂肪酸エステル（例えばオレイン酸エチル）、トリグリセリドまたはポリエチレングリコール、例えばポリエチレングリコール−４００（ＰＥＧ−４００）などが挙げられる。水性懸濁液は、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールおよび／またはデキストランを含む、懸濁液の粘性を向上させるための１つ以上の物質を含有し得る。懸濁液は、任意選択により安定化剤を含有し得る。
【００９４】
別の実施形態において、本開示は、本開示の方法実施するためのそれらの使用を促進するように包装される本開示の化合物（または本開示の化合物を含む組成物）を含むキットを提供する。一実施形態において、本キットは、本開示の方法を実施するための本化合物または組成物の使用を記載する、入れ物に固定されるか、または本キット中に含まれるラベルとともに、密封された瓶または容器など、入れ物中で包装される本開示の化合物（または本開示の化合物を含む組成物）を含む。一実施形態において、本化合物または組成物は、単位剤型で包装される。本キットは、意図される投与経路に従い本組成物を投与するのに適切な装置をさらに含み得る。
【００９５】
化合物の一般的合成
本開示の化合物は、本開示を考慮して、当業者にとって公知の方法を使用して、または以下の一般的スキームで示される例示的方法により、調製される。一般的スキームにおいて、式Ａ〜ＣのＲ１、Ｒ２ａ、Ｒ２ｂ、Ｒ３ａ、Ｒ３ｂ、ｍ、ｎおよびＺは、別段の指定がない限り、式Ｉと関連して定められるとおりである。一般的スキームの何れかにおいて、合成において、例えばＺがＣＨ＝Ｃ（Ｈ）ＣＨ２ＮＨ２であるか、または保護を必要とし得る基であり得る何らかの他の基である場合、適切な保護基を使用し得る（Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．；Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，“Ｇｒｅｅｎｅ’ｓ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，２００７を参照）。
【００９６】
2017528460.tif 000012
化合物Ａは、ジクロロメタン、アセトニトリルまたはＤＭＦなどの適切な溶媒中でＴＥＡまたはＤＩＰＥＡなどの適切な塩基の存在下で適切な塩化スルホニル（Ｚ−ＳＯ２Ｃｌ）とカップリングすることによって、化合物Ｂ（すなわち式Ｉを有する化合物（式中、Ｙは−Ｓ（＝Ｏ）２−である）に変換される。
【００９７】
2017528460.tif 000013
化合物Ａは、ジクロロメタン、アセトニトリルまたはＤＭＦなどの適切な溶媒中でＴＥＡまたはＤＩＰＥＡなどの適切な塩基の存在下で適切な酸塩化物（Ｚ−ＣＯＣｌ）とカップリングすることによって、またはジクロロメタン、アセトニトリルまたはＤＭＦなどの適切な溶媒中でＨＡＴＵなどの適切なカップリング試薬およびＴＥＡまたはＤＩＰＥＡなどの適切な塩基の存在下で適切なカルボン酸（Ｚ−ＣＯ２Ｈ）とカップリングすることによって、化合物Ｃ（すなわち、式Ｉ（式中、Ｙは−Ｃ（＝Ｏ）−である）を有する化合物）に変換される。
【実施例】
【００９８】
一般的な合成方法
表１の化合物を調製し、特性評価するための一般的方法および実験手順は、上記の一般的スキームおよび以下の実施例で示す。必要とされるときは常に、従来型のホットプレート装置または加熱マントルまたはマイクロ波放射装置を使用して反応系を加熱した。撹拌しながら、または撹拌せずに、開放または閉鎖容器中の何れかで、大気圧または高圧下で反応を行った。反応の進行は、下記の器具類および方法を使用して、ＴＬＣ、ＨＰＬＣ、ＵＰＬＣまたはＬＣＭＳなどの従来技術を用いて監視した。反応を停止させ、提供される具体例に記載のような従来の方法を用いて粗製化合物を単離した。溶媒除去は、ロータリーまたは遠心エバポレーターの何れかを用いて、大気圧または減圧下で、加熱して、または加熱せずに行った。
【００９９】
順相または逆相の何れかのＨＰＬＣまたはフラッシュカラムまたはＰｒｅｐ−ＴＬＣプレートの何れかを使用して、酸性、中性または塩基性条件下で、分取クロマトグラフィーを含むが限定されない様々な従来からの方法を用いて、必要に応じて化合物精製を行った。化合物純度および質量確認は、標準的なＨＰＬＣおよび／またはＵＰＬＣおよび／またはＭＳスペクトロメーターおよび／またはＬＣＭＳおよび／またはＧＣ装置（すなわち、次の機器：ＺＱ検出器およびＥＳＩ源と連結された２９９６ＰＤＡ検出器付きのＷａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５；Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＤＭＳ−２０２０；ＳＱ検出器およびＥＳＩ源と連結されたＰＤＡ検出器付きのＷａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  Ｈ  Ｃｌａｓｓ；ＰＤＡ検出器付きのＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ；２９９８ＰＤＡ検出器付きのＷａｔｅｒｓ  Ａｌｌｉａｎｃｅ  ２６９５；ＥＳＩ源付きのＡＢ  ＳＣＩＥＸ  ＡＰＩ  ２０００；Ａｇｉｌｅｎｔ  ７８９０ＧＣを含むが限定されない）を使用して行った。代表的化合物をおよそ１ｍｇ／ｍＬの濃度になるようにＭｅＯＨまたはＭｅＣＮの何れかの中で溶解させ、次の表で提供される方法を用いた適切なＬＣＭＳ系への０．５〜１０μＬの注入によって分析した：
2017528460.tif 000014
【０１００】
化合物構造確認は、必要な場合は常にｎＯｅ’ｓを実施して、標準的な３００または４００ＭＨｚ  ＮＭＲスペクトロメーターを用いて行った。
【０１０１】
次の略語を本明細書中で使用し得る。
2017528460.tif 000015
【０１０２】
実施例１
５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボン酸の合成
2017528460.tif 000016
段階１：エチル４−シクロプロピル−２，４−ジオキソブタノエートの合成
2017528460.tif 000017
窒素Ｎａ（１６４ｇ、１．２０当量）の不活性雰囲気でパージ処理し、維持した１０Ｌ三口丸底フラスコに分けてエタノール（５Ｌ）を添加した。０〜２０℃で撹拌しながら、（ＣＯ２Ｅｔ）２の溶液（８６９ｇ、１．００当量）および１−シクロプロピルエタン−１−オン（５００ｇ、５．９４ｍｏｌ、１．００当量）を滴下して添加した。得られた溶液を２０〜３０℃で１時間、続いて８０℃でさらに１時間撹拌した。得られた溶液を１５ＬのＨ２Ｏで希釈した。塩酸（１２Ｎ）でｐＨを２に調整した。得られた溶液を酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせ、ＮａＨＣＯ３（飽和水溶液）で洗浄した。抽出物を真空下で濃縮し、黄色油状物質として８２０ｇ（粗製）のエチル４−シクロプロピル−２，４−ジオキソブタノエートを得た。ＴＬＣ（酢酸エチル／石油エーテル＝１／５）：Ｒｆ＝０．５。
【０１０３】
段階２：エチル５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキシレートの合成
2017528460.tif 000018
１０Ｌ丸底フラスコにエタノール（１．１Ｌ）中のエチル４−シクロプロピル−２，４−ジオキソブタノエート（１７７ｇ）の溶液およびＮＨ２ＯＨ−ＨＣｌ（２００ｇ）を入れた。得られた溶液を２０〜３０℃で１時間撹拌した。撹拌しながら、８０℃でさらに１時間、得られた溶液を反応させた。得られた混合物を真空下で濃縮した。酢酸エチル／石油エーテル（１／１０）を用いてシリカゲルカラム上で残渣を精製した。この結果、黄色油状物質として１４３ｇ（２段階の収率は６６．３％であった）のエチル５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキシレートを得た。ＴＬＣ（酢酸エチル／石油エーテル＝１／５）：Ｒｆ＝０．２。
【０１０４】
段階３：５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボン酸の合成
2017528460.tif 000019
１０Ｌ丸底フラスコにエチル５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキシレート（２８０ｇ、１．５５ｍｏｌ、１．００当量）および水（４Ｌ）中の水酸化ナトリウム（７４．３ｇ、１．２０当量）の溶液を入れた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。得られた混合物をエーテルで洗浄した。塩酸（１２Ｎ）で水溶液のｐＨ値を２〜３に調整した。得られた溶液を酢酸エチルで抽出し、有機層を合わせ、真空下で濃縮した。この結果、灰白色固形物として２２０ｇ（９３％）の５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボン酸を得た。ＬＣＭＳ（方法Ａ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝１．９９ｍｉｎ，ｍ／ｚ＝１５３．９［Ｍ＋Ｈ］＋．１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ  ＣＤＣｌ３）：８．４２（ｂｒｓ，１Ｈ），６．３７（ｓ，１Ｈ），２．１６−２．０５（ｍ，１Ｈ），１．２９−１．１２（ｍ，２Ｈ），１．１２−０．９９（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ．
【０１０５】
実施例２
Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−アミノシクロヘキシル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩の合成
2017528460.tif 000020
段階１：ｔｅｒｔ−ブチル（１ｒ，４ｒ）−４−（５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド）シクロヘキシルカルバメートの合成
2017528460.tif 000021
１００ｍＬ丸底フラスコで、５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボン酸（１００ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ、１．００当量）、ｔｅｒｔ−ブチルＮ−［（１ｒ，４ｒ）−４−アミノシクロヘキシル］カルバメート（１５４ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ、１．１０当量）およびＴＥＡ（１９８ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ、３．００当量）を１０ｍＬジクロロメタン中で溶解させ、次いでＨＡＴＵ（４９６ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ、２．００当量）を溶液に添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。次いで混合物を真空下で濃縮した。酢酸エチル／石油エーテル（４：１）を用いてシリカゲルカラム上で残渣を精製した。この結果、白色固形物として２１０ｍｇ（９２％）ｔｅｒｔ−ブチル（１ｒ，４ｒ）−４−（５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド）シクロヘキシルカルバメートを得た。ＬＣＭＳ（方法Ａ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝１．４８ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝２９４．０［Ｍ−５６］＋．
【０１０６】
段階２：Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−アミノシクロヘキシル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩の合成
2017528460.tif 000022
２５０ｍＬ丸底フラスコにｔｅｒｔ−ブチル（１ｒ，４ｒ）−４−（５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド）シクロヘキシルカルバメート（２１０ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ、１．００当量）および１，４−ジオキサン（２０ｍＬ）を入れた。これに続いて、塩化水素（ジオキサン中２Ｍ、２０ｍＬ）を添加した。得られた溶液を室温で一晩撹拌した。固形物をろ過により回収した。この結果、白色固形物として１４０ｍｇ（９３％）のＮ−（（１ｒ，４ｒ）−４−アミノシクロヘキシル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）：δ  ６．６２（ｓ，１Ｈ），３．８２−３．６９（ｍ，１Ｈ），３．２１−３．１７（ｍ，１Ｈ），２．１３−１．９２（ｍ，５Ｈ），１．５７−１．３３（ｍ，４Ｈ），１．１０−１．００（ｍ，２Ｈ），０．９３−０．８４（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ．ＬＣＭＳ（方法Ｄ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．９９ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝２９１．０［Ｍ＋４１］＋．
【０１０７】
実施例３
Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−アクリルアミドシクロヘキシル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミドの合成
2017528460.tif 000023
５０ｍＬ丸底フラスコにプロプ−２−エン酸（１０８ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ、１．５０当量）、Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−アミノシクロヘキシル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩（２８５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、１．００当量）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）、ＴＥＡ（３００ｍｇ、２．９７ｍｍｏｌ、２．９８当量）およびＨＡＴＵ（７６０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ、２．０１当量）を入れた。得られた溶液を室温で６時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（３：２）を用いてＣ１８ゲルカラム上で残渣を精製した。この結果、白色固形物として５７．５ｍｇ（１９％）のＮ−（（１ｒ，４ｒ）−４−アクリルアミドシクロヘキシル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミドを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．４９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｓ，１Ｈ），６．２８−６．００（ｍ，２Ｈ），５．６３−５．５０（ｍ，１Ｈ），３．８１−３．６４（ｍ，１Ｈ），３．６４−３．４６（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１２（ｍ，１Ｈ），１．９１−１．７０（ｍ，４Ｈ），１．６５−１．１５（ｍ，４Ｈ），１．１３−１．０２（ｍ，２Ｈ），０．９８−０．８５（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ．ＬＣＭＳ（方法Ｄ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝１．５５ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝３０４．１［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１０８】
実施例４
５−シクロプロピル−Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−（ビニルスルホンアミド）シクロヘキシル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（化合物番号２）の合成
2017528460.tif 000024
２５０ｍＬ丸底フラスコにＮ−（（１ｒ，４ｒ）−４−アミノシクロヘキシル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩（３００ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ、１．００当量）を入れた。これに続いて、ジクロロメタン（４０ｍＬ）およびＴＥＡ（３１６ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ、３．００当量）を添加した。次いで、室温で５分間にわたりエテンスルホニルクロリド（２６３ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ、２．００当量）を滴下して添加した。得られた溶液を室温で４８時間撹拌した。得られた混合物を真空下で濃縮し、酢酸エチル／石油エーテル（１３：７）を用いてシリカゲルカラム上で残渣を精製した。次の条件（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ−０２５）：カラム、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤカラム、５ｕｍ、１９ｘ１５０ｍｍ、移動相、０．０５％ＴＦＡおよびＭｅＣＮ入りの水（１０分間で５．０％ＭｅＣＮから２１．０％まで）；検出器、ＵＶ２５４／２２０ｎｍを用いて、Ｆｌａｓｈ−Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣによって生成物をさらに精製した。この結果、白色固形物として２５．１ｍｇ（６％）の５−シクロプロピル−Ｎ−（（１ｒ，４ｒ）−４−（ビニルスルホンアミド）シクロへキシル）イソオキサゾール−３−カルボキサミドを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ  ６．７３−６．４４（ｍ，１Ｈ），６．３５（ｓ，１Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），５．９２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．９０−３．７５（ｍ，１Ｈ），３．１８−３．０２（ｍ，１Ｈ），２．２０−２．０９（ｍ，１Ｈ），２．０９−１．９０（ｍ，４Ｈ），１．５５−１．３４（ｍ，４Ｈ），１．０８−１．１８（ｍ，２Ｈ），１．０１−０．９１（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ（方法Ａ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝１．７７ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝３６２．１［Ｍ＋Ｎａ］＋．
【０１０９】
実施例５
Ｎ−（１−アクリロイルピペリジン−４−イル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（化合物番号５）の合成
2017528460.tif 000025
５０ｍＬ丸底フラスコに５−シクロプロピル−Ｎ−（ピペリジン−４−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩（２７０ｍｇ、０．９９ｍｍｏｌ、１．００当量）、プロプ−２−エン酸（８６ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ、１．２０当量）、ジクロロメタン（１５ｍＬ）、ＨＡＴＵ（７６０ｍｇ、２．００ｍｍｏｌ、２．０１当量）を入れた。次いで、ＴＥＡ（３００ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ、２．９８当量）を滴下して添加した。得られた溶液を室温で１５時間撹拌した。混合物を真空下で濃縮し、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ（１：１）を用いてＣ１８ゲルカラム上で残渣を精製した。この結果、白色固形物として５８．９ｍｇ（２０％）のＮ−（１−アクリロイルピペリジン−４−イル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミドを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．６１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８３（ｄｄ，Ｊ＝１５．８および１０．５，１Ｈ），６．４９（ｓ，１Ｈ），６．０９（ｄｄ，Ｊ＝１５．８および２．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６７（ｄｄ，Ｊ＝１０．５および２．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５０−４．２８（ｍ，１Ｈ），４．１５−３．９０（ｍ，２Ｈ），３．２４−３．０５（ｍ，１Ｈ），２．８５−２．６５（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．１１（ｍ，１Ｈ），１．８８−１．７１（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．３０（ｍ，２Ｈ），１．０６−１．０１（ｍ，２Ｈ），０．９７−０．８５（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ．ＬＣＭＳ（方法Ｄ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝１．５０ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝２９０．０［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１０】
実施例６
５−シクロプロピル−Ｎ−（１−（ビニルスルホニル）アゼチジン−３−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド（化合物番号１）の合成
2017528460.tif 000026
段階１：ｔｅｒｔ−ブチル３−（５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド）アゼチジン−１−カルボキシレートの合成
2017528460.tif 000027
１００ｍＬ丸底フラスコにｔｅｒｔ−ブチル３−アミノアゼチジン−１−カルボキシレート（５００ｍｇ、２．９０ｍｍｏｌ、１．００当量）、５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボン酸（４８９ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ、１．１０当量）、ジクロロメタン（５０ｍＬ）およびＨＡＴＵ（２．２ｇ、５．７９ｍｍｏｌ、１．９９当量）を入れた。次いで、ＴＥＡ（８８１ｍｇ、８．７１ｍｍｏｌ、３．００当量）を滴下して添加した。得られた溶液を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を４０ｍＬのＤＣＭで希釈し、５０ｍＬの水で洗浄した。次いで、有機相を回収し、真空下で濃縮した。シリカゲルカラム上で残渣を精製し（ＥＡ：ＰＥ＝２：３）、無色油状物質として７２０ｍｇ（８１％）のｔｅｒｔ−ブチル３−（５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド）アゼチジン−１−カルボキシレートを得た。ＬＣＭＳ（方法Ａ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝１．５７ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝２５２．０［Ｍ−５６］＋．
【０１１１】
段階２：Ｎ−（アゼチジン−３−イル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩の合成
2017528460.tif 000028
１００ｍＬ丸底フラスコにｔｅｒｔ−ブチル３−（５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド）アゼチジン−１−カルボキシレート（７２０ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ、１．００当量）およびジクロロメタン（５０ｍＬ）を入れた。次いで塩化水素を混合物に導入した。得られた溶液を室温で５時間撹拌した。反応混合物を濃縮した。この結果、灰白色固形物として５６０ｍｇ（９８％）のＮ−（アゼチジン−３−イル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩を得た。ＬＣＭＳ（方法Ａ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝０．５０ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝２０８．０［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１１２】
段階３：５−シクロプロピル−Ｎ−（１−（ビニルスルホニル）アゼチジン−３−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミドの合成
2017528460.tif 000029
５０ｍＬ丸底フラスコにＮ−（アゼチジン−３−イル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ、１．００当量）、ジクロロメタン（２０ｍＬ）およびＴＥＡ（１４６ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ、３．５２当量）を入れた。次いで、室温でエテンスルホニルクロリド（１２２ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ、２．３５当量）を添加した。得られた溶液を室温で２時間撹拌した。反応混合物を２５ｍＬの水により洗浄した。有機相を回収し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。乾燥抽出物を真空下で濃縮し、シリカゲルカラム上で残渣を精製して（ＰＥ：ＥＡ＝３：２）、粗製生成物を得た。次に、次の条件（Ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣ−０２５）：カラム、ＸＢｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｃ１８  ＯＢＤカラム、５ｕｍ、１９＊１５０ｍｍ；移動相、０．０５％ＴＦＡおよびＭｅＣＮ入りの水（１０分間で５．０％ＭｅＣＮから２１．０％まで）；検出器、ＵＶ２５４／２２０ｎｍを用いて、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣによって、得られた生成物をさらに精製した。この結果、白色固形物として３５．５ｍｇ（２９％）の５−シクロプロピル−Ｎ−（１−（ビニルスルホニル）アゼチジン−３−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミドを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ９．３８（ｄ，Ｊ＝１２Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｑ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５０（ｓ，１Ｈ），６．３２（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６９−４．５９（ｍ，１Ｈ），４．０４（ｔ，Ｊ＝１２Ｈｚ，２Ｈ），３．９０（ｔ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，２Ｈ），２．２５−２．１６（ｍ，１Ｈ），１．１７−１．０４（ｍ，２Ｈ），０．９８−０．８９（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ．ＬＣＭＳ（方法Ｄ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝１．６１ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝２９８．０［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１１３】
実施例７
Ｎ−（１−（２−クロロアセチル）ピペリジン−４−イル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミド（化合物番号４）の合成
2017528460.tif 000030
１００ｍＬ丸底フラスコに５−シクロプロピル−Ｎ−（ピペリジン−４−イル）イソオキサゾール−３−カルボキサミド塩酸塩（２７２ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ、１．００当量）、ジクロロメタン（３０ｍＬ）およびＴＥＡ（３０３ｍｇ、２．９９ｍｍｏｌ、２．９９当量）を入れた。次いで、０℃で２−クロロアセチルクロリド（１７０ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ、１．５０当量）を滴下して添加した。得られた溶液を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮し、ジクロロメタン／メタノール（１０：１）を用いてシリカゲルカラム上で残渣を精製して、灰白色固形物として６１ｍｇ（２０％）のＮ−（１−（２−クロロアセチル）ピペリジン−４−イル）−５−シクロプロピルイソオキサゾール−３−カルボキサミドを得た。１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ  ８．６４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｓ，１Ｈ），４．４９−４．２０（ｍ，３Ｈ），４．１３−３．９３（ｍ，１Ｈ），３．９３−３．７５（ｍ，１Ｈ），３．２４−３．０５（ｍ，１Ｈ），２．８５−２．６５（ｍ，１Ｈ），２．２５−２．０５（ｍ，１Ｈ），１．８８−１．７０（ｍ，２Ｈ），１．６４−１．３４（ｍ，２Ｈ），１．１６−１．０２（ｍ，２Ｈ），０．９７−０．８５（ｍ，２Ｈ）ｐｐｍ．ＬＣＭＳ（方法Ｄ、ＥＳＩ）：ＲＴ＝１．５８ｍｉｎ、ｍ／ｚ＝３１２．０［Ｍ＋Ｈ］＋．
【０１１４】
実施例８
ＳＭＹＤ３生化学アッセイ
一般的材料
Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）、Ｓ−アデノシルホモシステイン（ＳＡＨ）、Ｔｒｉｓ、Ｔｗｅｅｎ２０、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ウシ皮膚ゼラチン（ＢＳＧ）およびＴｒｉｓ（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩溶液（ＴＣＥＰ）を可能な最高レベル純度でＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。３Ｈ−ＳＡＭは、８０Ｃｉ／ｍｍｏｌの比活性でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入した。３８４ウェル不透明白色ＯｐｔｉＰｌａｔｅおよびＳＰＡビーズ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号ＲＰＮＱ００１３）はＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから購入した。
【０１１５】
基質
参照配列ＡＡＦ６３４９６．３に対応する、Ｎ末端にＧＳＴタグ付加したＭＥＫＫ２（ＭＡＰ３Ｋ２）タンパク質は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（カタログ番号ＰＶ４０１０）から購入した。このタンパク質をＨｉｇｈ  Ｆｉｖｅ昆虫細胞において発現させ、＞８５％純度に精製した。タンパク質同一性は、タンパク質分解消化後のＭＳ／ＭＳ分析によって確認した。使用したタンパク質配列は次のとおりであった：
2017528460.tif 000031
【０１１６】
分子生物学
Ｈｉｓ６タグおよびＴＥＶおよびＳＵＭＯ切断部位を含有する修飾ｐＥＴ２１ｂプラスミドに全長ヒトＳＭＹＤ３アイソフォーム１（ＢＡＢ８６３３３）を挿入した。ＳＭＹＤ３の２つの一般的な変異体が集団中に存在するので、続いて部位特異的突然変異誘発を行って、アミノ酸１３をアスパラギンからリジンに変化させ、その結果、プラスミドｐＥＰＺ５３３が得られた。位置１３のリジンはより一般的に生じる配列（ＮＰ＿００１１６１２１２）と一致する。
【０１１７】
タンパク質発現
コンピーテント細胞およびプラスミドＤＮＡを混合し、氷上で３０分間温置し、続いて４２℃で１分間ヒートショックを行い、氷上で２分間冷却することによって、プラスミドｐＥＰＺ５５３を用いてＥ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）（ＢＬ２１  ｃｏｄｏｎｐｌｕｓ  ＲＩＬ株、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を形質転換した。形質転換細胞を増殖させ、１００μｇ／ｍＬアンピシリンおよび１７μｇ／ｍＬクロラムフェニコール入りのＬＢ寒天上で３７℃にて一晩選択した。１００μｇ／ｍＬアンピシリンおよび１７μｇ／ｍＬクロラムフェニコール入りの２００ｍＬのＬＢ培地に接種するために単一クローンを使用し、１８０ｒｐｍでオービタル振盪器上で３７℃にて温置した。対数増殖期になったら、培養物を２ＬのＬＢ培地に入れて１：１００希釈し、ＯＤ６００が約０．３になるまで増殖させ、その後、培養物を１５℃および１６０ｒｐｍで温置した。ＯＤ６００が約０．４に到達したら、ＩＰＴＧを添加して０．１ｍＭの最終濃度にし、細胞を１５℃および１６０ｒｐｍで一晩増殖させた。４℃で４分間、８０００ｒｐｍで遠心することによって細胞を回収し、精製のために−８０℃で保存した。
【０１１８】
タンパク質精製
ニッケルアフィニティークロマトグラフィーによって、緩衝液Ａ（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、５％グリセロール、５ｍＭβ−メルカプトエタノール、ｐＨ７．８）でレジンを平衡化した後、発現された全長ヒトＨｉｓタグ付加ＳＭＹＤ３タンパク質を細胞ペーストから精製した。緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ＋２０ｍＭイミダゾール）でカラムを洗浄し、緩衝液Ｃ（緩衝液Ａ＋３００ｍＭイミダゾール）でＨｉｓタグ付加ＳＭＹＤ３を溶出させた。Ｈｉｓタグ、ＴＥＶおよびＳＵＭＯ切断部位を除去し、１：２００（ＵＬＰ１：ＳＭＹＤ３）の比率でのＵＬＰ１タンパク質の添加によって、ネイティブＳＭＹＤ３を生成させた。緩衝液Ａ中で一晩透析することによってイミダゾールを除去した。透析した溶液を第二のニッケルカラムに載せ、カラムフロースルーからネイティブＳＭＹＤ３タンパク質を回収した。緩衝液Ｄ（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、５％グリセロール、５ｍＭ  β−メルカプトエタノール、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．８）中でフロースルーを透析し、Ｑセファロースファストフローカラムを使用して、ＵＬＰ１を除去した。緩衝液Ａ中でＳＭＹＤ３を溶出させ、緩衝液Ａで平衡化したＳ２００サイズ排除カラムを使用してさらに精製した。８９％の最終純度でＳＭＹＤ３を２ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
【０１１９】
予想翻訳：
2017528460.tif 000032
【０１２０】
ＭＥＫＫ２タンパク質基質におけるＳＭＹＤ３酵素アッセイのための一般的手順
アッセイは全て、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ  ｐＨ８．０、１ｍＭ  ＴＣＥＰ、０．００５％ＢＳＧおよび０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０からなる緩衝液中で行い、使用日に調製した。３８４チャネルヘッドが装備されたＢｒａｖｏ自動液体操作プラットフォーム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、１００％ＤＭＳＯ（１μＬ）中の化合物を３８４ウェルの白色不透明ＯｐｔｉＰｌａｔｅにスポットした。最大シグナル対照のために１１、１２、２３、２４列、Ａ〜Ｈ行にＤＭＳＯ（１μＬ）を添加し、最小シグナル対照のために１１、１２、２３、２４列、Ｉ〜Ｐ行に１μＬのＳＡＨ、既知の生成物およびＳＭＹＤ３の阻害剤を添加した。ＳＭＹＤ３酵素を含有するカクテル（４０μＬ）をＭｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）により添加した。化合物をＳＭＹＤ３とともに室温で３０分間温置し、次いでＳＡＭおよびＭＥＫＫ２を含有するカクテル（１０μＬ）を添加して、反応を開始させた（最終体積＝５１μＬ）。成分の最終濃度は次のとおりであった：ＳＭＹＤ３は０．４ｎＭ、３Ｈ−ＳＡＭは８ｎＭ、ＭＥＫＫ２は１２ｎＭ、最小シグナル対照ウェル中のＳＡＨは１ｍＭおよびＤＭＳＯ濃度は２％であった。１００μＭの最終濃度への非放射性標識ＳＡＭ（１０μＬ）の添加によって、アッセイを停止させたが、これにより、ＭＥＫＫ２へのその組み込みがもはや検出可能ではないレベルまで３Ｈ−ＳＡＭが希釈される。シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を用いて放射性標識ＭＥＫＫ２を検出した。１０μＬの０．５Ｍクエン酸中のＳＰＡビーズの１０ｍｇ／ｍＬ溶液を添加し、６００ｒｐｍで１分間プレートを遠心し、ＳＰＡビーズ上に放射性標識ＭＥＫＫ２を沈降させた。次いでＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＴｏｐＣｏｕｎｔプレートリーダーでプレートを読み取って、壊変毎分（ｄｐｍ）として、またはあるいはカウント／分（ｃｐｍ）と呼ばれるものとして、３Ｈ−標識ＭＥＫＫ２の量を測定した。
【０１２１】
％阻害計算
2017528460.tif 000033
ここで、ｄｐｍ＝壊変毎分、ｃｍｐｄ＝アッセイウェル中のシグナル、ｍｉｎおよびｍａｘは、個々の最小および最大シグナル対照である。
【０１２２】
４パラメーターＩＣ５０フィット
2017528460.tif 000034
ここで、最高値および最低値は通常変動可能であるが、３−パラメーターフィットにおいてそれぞれ１００または０に固定され得る。Ｈｉｌｌ係数は通常、変動可能であるが、３−パラメーターフィットで固定可能でもあり得る。Ｙは、％阻害であり、Ｘは化合物濃度である。
【０１２３】
代表的な本開示の化合物に対するＳＭＹＤ３生化学アッセイデータを表１の「ＳＭＹＤ３  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ＩＣ５０（μＭ）」のタイトルの欄で与える。
【０１２４】
実施例９
ＳＭＹＤ３細胞アッセイ
細胞ウエスタンアッセイにおけるトリメチル−ＭＥＫＫ２
２９３Ｔ／１７接着細胞は、ＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ），Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡから購入した。ＭＥＭ／Ｇｌｕｔａｍａｘ培地、Ｏｐｔｉｍｅｍ  Ｒｅｄｕｃｅｄ  Ｓｅｒｕｍ培地、ペニシリン−ストレプトマイシン、０．０５％トリプシンおよび１×Ｄ−ＰＢＳは、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，ＵＳＡから購入した。ＰＢＳ−１０Ｘは、Ａｍｂｉｏｎ，Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＵＳＡから購入した。Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＴ（１０×））入りＰＢＳは、ＫＰＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡから購入した。Ｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＦＢＳ承認のＦＢＳ  ＵＳ  Ｓｏｕｒｃｅは、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡから購入した。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液、８００ＣＷヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体、６８０ＣＷヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）およびＬｉｃｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙ赤外線走査装置は、Ｌｉｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｉｎｃｏｌｎ，ＮＥ，ＵＳＡから購入した。トリ−メチル−リジン［Ａ２６０］−ＭＥＫＫ２抗体、ＭＥＫＫ２およびＳＭＹＤ３プラスミドは、Ｅｐｉｚｙｍｅで作製された。抗フラッグモノクローナルマウス抗体は、Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡから購入した。メタノールは、ＶＷＲ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ，ＭＡ，ＵＳＡから購入した。１０％Ｔｗｅｅｎ２０は、ＫＰＬ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡから購入した。Ｆｕｇｅｎｅは、Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡから購入した。Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬｘ４０５は、ＢｉｏＴｅｋ，Ｗｉｎｏｏｓｋｉ，Ｖｅｒｍｏｎｔ，ＵＳＡから購入した。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ｃｏｍｂｉは、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡから購入した。
【０１２５】
２９３Ｔ／１７接着細胞は、１０％ｖ／ｖ  Ｔｅｔ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＦＢＳを補給した増殖培地（ＭＥＭ／Ｇｌｕｔａｍａｘ培地中で維持し、５％ＣＯ２下で３７℃にて培養した。
【０１２６】
トリメチル−リジン−ＭＥＫＫ２およびＭＥＫＫ２の検出のための、細胞処置、細胞内ウエスタン（ＩＣＷ）
３０ｍＬ培地／Ｔ１５０フラスコ中細胞３３，３３３個／ｃｍ２の濃度でアッセイ培地中で２９３Ｔ／１７細胞を播種し、５％ＣＯ２下で３７℃にて温置した。細胞への送達のために、滅菌エッペンドルフチューブ中で１３５０μＬのＯｐｔｉ−ＭＥＭをＦｕｇｅｎｅ（８１μＬ）と最初に混合することによってプラスミドを調製し、室温（ＲＴ）で５分間温置した。Ｃ−３ＸＦｌａｇ付きのＭＥＫＫ２−ｆｌａｇ（１３．６μｇ／Ｔ１５０）ＭＥＫＫ２  ｐ３ＸＦｌａｇ−ＣＭＶ−１４およびＣ−３ＸＦｌａｇプラスミドなしのＳＭＹＤ３（０．１５１μｇ／Ｔ１５０）ＳＭＹＤ３  ｐ３ＸＦｌａｇ−ＣＭＶ−１４を１．７ｍＬの滅菌微量遠心チューブに分注した。ＭＥＫＫ２およびＳＭＹＤ３に対する遺伝子ＩＤは、それぞれＮＭ＿００６６０９．３およびＱ９Ｈ７Ｂ４である。次いで、ＤＮＡプラスミドを含有する微量遠心チューブにＯｐｔｉ−ＭＥＭ／Ｆｕｇｅｎｅ混合物の全体積を添加し、混合し、次いでＲＴで×１５分間温置した。２９３Ｔ／１７細胞上の培地を新しいものに交換し、ＤＮＡ／Ｆｕｇｅｎｅ複合体を無菌的に各フラスコに添加し、穏やかに揺らし、３７℃で５時間温置した。次いで、培地を除去し、細胞をフラスコ中でＰＢＳで１回洗浄した。トリプシン０．０５％（３ｍＬ）を添加し、細胞を３分間温置した。室温ＭＥＭ＋１０％Ｔｅｔ系ＦＢＳを添加し、細胞を穏やかに混合し、Ｖｉ細胞を使用してカウントした。５０μＬ  ＭＥＭ／１０％Ｔｅｔ  ＦＢＳ／Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ中、ＤＭＳＯ中で希釈した試験薬剤を含有する３８４ウェル黒色／透明ポリＤ−リジンコーティングプレートに細胞１００，０００個／ｍＬで細胞を播種した。試験化合物の最終最高濃度は４０μＭであった。ＤＭＳＯの総濃度は、０．２％（ｖ／ｖ）を超えなかった。低気流領域でプレートをＲＴで×３０分間温置し、続いて２４時間にわたり３７℃にて５％ＣＯ２下で温置した。氷冷（−２０℃）メタノール（９０μＬ／ウェル）での１０分間の固定および透過処理前にアッセイプレートの全てのウェルから培地を吸引した。ＢｉｏＴｅｋ  ＥＬｘ４０５上でＰＢＳで３回、プレートをすすいだ。最終吸引でＰＢＳを除去し、Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液（５０μＬ／ウェル）を各ウェルに添加し、ＲＴで１時間温置した。一次抗体溶液を調製し（希釈剤（Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）中、１：６００希釈の抗トリメチル−ＭＥＫＫ２＋１：１０，０００希釈のマウス抗フラッグ抗体）および、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉを使用して２０μＬ／ウェルを分注した。次いで、アッセイプレートをホイルで密封し、４℃で一晩温置した。Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬｘ４０５上にてＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ（１Ｘ）でプレートを５回洗浄し、ペーパータオル上で吸い取らせて過剰な試薬を除去した。検出抗体溶液（希釈剤（Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ緩衝液＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）中で１：４００希釈したＩＲＤｙｅ  ８００  ＣＷヤギ抗ウサギＩｇＧ＋希釈剤（Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｂｌｏｃｋｉｎｇ緩衝液＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）中１：５００のＩＲＤｙｅ６８０ＣＷヤギ抗マウスＩｇＧを添加し（２０μＬ／ウェル）、暗所にてＲＴで１時間にわたり温置した。次いでＥＬｘ４０５��でＰＢＳ−Ｔ（１Ｘ）でプレートを４回洗浄した。水で最後のすすぎを行った（ＥＬｘ４０５上で１１５μＬ／ウェル×３回洗浄）。次いでプレートを上下逆にしてペーパータオル上で２００ｘｇで遠心して、過剰な試薬を除去した。プレートを暗所で１時間にわたり乾燥させた。Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｍａｇｅｒを使用して、８４μｍの分解能、中等度の画像、フォーカスオフセット４．０、ＭＥＫＫ２−フラッグシグナルを測定するために７００チャネル強度＝３．５で、各ウェルのトリメチル−ＭＥＫＫ２シグナルを測定するために８００チャネル強度＝５で、７００および８００波長の積分強度を測定した。
【０１２７】
計算：
最初に、各ウェルに対する比を次の式により決定した：
2017528460.tif 000035
【０１２８】
各プレートには、ＤＭＳＯ単独処理の１４個の対照ウェル（最小阻害）ならびに最大阻害に対する１４個の対照ウェル（バックグラウンド）が含まれた。各対照タイプに対する比の値の平均を計算し、プレート中の各試験ウェルに対するパーセント阻害を決定するために使用した。４０μＭから始まる全部で９種類の試験濃度に対して参照化合物をＤＭＳＯ中で２倍連続希釈した。パーセント阻害を計算した（以下）。
2017528460.tif 000036
【０１２９】
非線形回帰曲線を作成し、化合物の濃度あたり３つ組のウェルを使用して、ＩＣ５０および用量依存性の関係を計算した。
【０１３０】
代表的な本開示の化合物に対するＳＭＹＤ３細胞アッセイデータを表１の「ＳＭＹＤ３細胞ＩＣ５０（μＭ）」のタイトルの欄で与える。
【０１３１】
実施例１０
ＳＭＹＤ２生化学的アッセイ
一般的材料
Ｓ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）、Ｓ−アデノシルホモシステイン（ＳＡＨ）、ビシン、Ｔｗｅｅｎ２０、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ウシ皮膚ゼラチン（ＢＳＧ）およびＴｒｉｓ（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（ＴＣＥＰ）を可能な最大レベルの純度でＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。３Ｈ−ＳＡＭは、８０Ｃｉ／ｍｍｏｌの比活性でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから購入した。３８４ウェルのストレプトアビジンＦｌａｓｈｐｌａｔｅはＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから購入した。
【０１３２】
基質
ペプチドは、２１ｓｔＣｅｎｔｕｒｙ  ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓによってＮ末端リンカー親和性タグモチーフおよびＣ末端アミドキャップを用いて合成された。ペプチドは、高い高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で９５％を超える純度まで精製し、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によって確認した。配列はＡＲＴＫＱＴＡＲＫＳＴＧＧＫＡＰＲＫＱＬＡＴＫＡＡＲＫＳＡ（Ｋ−Ｂｉｏｔ）−アミド（配列番号３）であった。
【０１３３】
生化学的酵素活性アッセイのための組み換えＳＭＹＤ２酵素の産生
Ｎ末端Ｈｉｓ６タグおよびＦＬＡＧタグを用いてｐＦａｓｔｂａｃ−Ｈｔｂ−ｌｉｃベクターに全長ＳＭＹＤ２（ＮＰ＿０６４５８２．２）をクローニングし、これの前にＴＥＶプロテアーゼ切断部位を置いた。Ｓｆ９昆虫細胞においてタンパク質を発現させた。溶解緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ、ｐＨ７．５、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、５％グリセロールおよび５ｍＭ  β−ＭＥ）中で細胞を再懸濁し、超音波により溶解させた。タンパク質をＮｉ−ＮＴＡ（Ｑｉａｇｅｎ）によって精製し、続いて、Ｈｉｓ６タグを除去するためのＴＥＶ切断、サブトラクティブＮｉ−ＮＴＡ（Ｑｉａｇｅｎ）およびＳ２００カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いたゲルろ過クロマトグラフィーを行った。精製タンパク質は、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１００ｍＭ  ＮａＣｌおよび１ｍＭ  ＴＣＥＰ中で保存した。
【０１３４】
ペプチド基質におけるＳＭＹＤ２酵素アッセイのための一般的手順
アッセイは全て、使用日に調製した２０ｍＭビシン（ｐＨ＝７．６）、１ｍＭ  ＴＣＥＰ、０．００５％ウシ皮膚ゼラチンおよび０．００２％Ｔｗｅｅｎ２０からなる緩衝液中で行った。３８４チャネルヘッドが装備されたＰｌａｔｅｍａｔｅ  Ｐｌｕｓ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、１００％ＤＭＳＯ（１μＬ）中の化合物をポリプロピレン３８４ウェルＶ底プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ）にスポットした。最大シグナル対照および１μＬのＳＡＨに対して、１１、１２、２３、２４列、Ａ〜Ｈ行にＤＭＳＯ（１μＬ）を添加し、最小シグナル対照に対して、１１、１２、２３、２４列、Ｉ〜Ｐ行に既知の生成物およびＳＭＹＤ２の阻害剤を添加した。Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  Ｃｏｍｂｉ（Ｔｈｅｒｍｏ−Ｆｉｓｈｅｒ）によってＳＭＹＤ２酵素を含有するカクテル（４０μＬ）を添加した。本化合物をＳＭＹＤ２とともに室温で３０分間温置し、次いで３Ｈ−ＳＡＭおよびペプチドを含有するカクテル（１０μＬ）を添加して、反応を開始させた（最終体積＝５１μＬ）。成分の最終濃度は次のとおりであった：ＳＭＹＤ２は、１．５ｎＭ、３Ｈ−ＳＡＭは１０ｎＭ、ペプチドは６０ｎＭ、最小シグナル対照ウェル中のＳＡＨは１０００μＭおよびＤＭＳＯ濃度は２％であった。６００μＭの最終濃度までの非放射性ＳＡＭ（１０μＬ）の添加によって、アッセイを停止させたが、これによりペプチド基質へのその組み込みがもはや検出可能でないレベルに３Ｈ−ＳＡＭが希釈される。次いで、３８４ウェルポリプロピレンプレート中の５０μＬの反応系を３８４ウェルＦｌａｓｈｐｌａｔｅに移し、Ｂｉｏｔｅｋ  ＥＬｘ４０５プレートウォッシャー中で０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄する前に、ビオチン化ペプチドを少なくとも１時間、ストレプトアビジン面に結合させた。次いで、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＴｏｐＣｏｕｎｔプレートリーダーにおいてプレートを読んで、Ｆｌａｓｈｐｌａｔｅ面に結合される３Ｈ−標識ペプチドの量を測定し、壊変毎分（ｄｐｍ）として、またはあるいはカウント／分（ｃｐｍ）と呼ばれるものとして測定した。
【０１３５】
％阻害計算
2017528460.tif 000037
ここで、ｄｐｍ＝壊変毎分、ｃｍｐｄ＝アッセイウェル中のシグナル、ｍｉｎおよびｍａｘは、個々の最小および最大シグナル対照である。
【０１３６】
４パラメーターＩＣ５０フィット
2017528460.tif 000038
ここで、最高値および最低値は通常変動可能であるが、３−パラメーターフィットにおいてそれぞれ１００または０に固定され得る。Ｈｉｌｌ係数は通常、変動可能であるが、３−パラメーターフィットで固定可能でもあり得る。Ｉは化合物濃度である。
【０１３７】
今回本発明を詳細に説明してきたが、本発明またはその何らかの実施形態の範囲に影響を及ぼすことなく、条件、処方物および他のパラメーターの広く、同等な範囲内で同上のものが行われ得ることが当業者により理解されよう。
【０１３８】
本発明の他の実施形態は、本明細書中で開示される本発明の明細および実施の考察から、当業者にとって明らかである。特定化および実施例が単に代表的なものとしてみなされ、本発明の真の範囲および精神は、続く特許請求の範囲により示されるものとする。
【０１３９】
本明細書中で引用される全ての特許および刊行物は、それらの全体において本明細書中で参照により完全に組み込まれる。
【配列表】
2017528460000001.app
【国際調査報告】
2017528460.tif 000047
2017528460.tif 000048
2017528460.tif 000049