(57)【要約】  化学療法薬に耐性を持つがんを患う被験者を治療する方法であって、プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の治療的有効量を、化学療法薬と併用して、前記被験者に投与する工程を含む方法が提供される。また、プロクロルペラジンと化学療法薬の併用でがん転移を防止する方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法薬と併用して、化学療法薬に耐性を持つがんを患う被験者を治療するための薬剤を製造するためのプロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項２】
前記化学療法薬が、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ペメトレキセド、シスプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、ナベルビン、イリノテカン、アバスチン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、オキサリプラチン、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム（ＴＳ−１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤とそれらの組み合わせで構成される群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記化学療法薬が、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ペメトレキセド、シスプラチン、５−フルオロウラシル、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、アバスチン、ＴＳ−１、オキサリプラチンとそれらの組み合わせで構成される群より選択されることを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記化学療法薬がゲフィチニブであることを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【請求項５】
前記がんが、肺がん、肝臓がん、 大腸がん、脳腫瘍、乳がん、すい臓がん、胃がん、腺がん、扁平上皮がん、大細胞がんで構成される群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記がんが肺がんであることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記肺がんが非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）であることを特徴とする、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
プロクロルペラジンの前記代謝物が、Ｎ−デスメチルプロクロルペラジン、プロクロルペラジンスルホキシド、プロクロルペラジンスルホキシド４’−Ｎ−オキシドで構成される群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
プロクロルペラジンの前記代謝物が、Ｎ−デスメチルプロクロルペラジンであることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
プロクロルペラジンの前記類似体が、次の構造の化合物で構成される群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【化１】
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【化２】
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【化３】
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【化４】
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【請求項１１】
プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩と前記化学療法薬の併用が、がん細胞の大きさと数の減少に相乗効果を示すことを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩と前記化学療法薬の併用が、がん細胞の増殖阻害に相乗効果を示すことを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項１３】
化学療法薬と併用してがん転移を防止するための薬剤を製造するためのプロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用。
【請求項１４】
プロクロルペラジンの前記代謝物が、Ｎ−デスメチルプロクロルペラジン、プロクロルペラジンスルホキシド、プロクロルペラジンスルホキシド４’−Ｎ−オキシドで構成される群より選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
プロクロルペラジンの前記代謝物が、Ｎ−デスメチルプロクロルペラジンであることを特徴とする、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
プロクロルペラジンの前記類似体が、次の構造の化合物で構成される群より選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【化５】
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【化６】
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【化７】
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【化８】
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【請求項１７】
前記化学療法薬が、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ペメトレキセド、シスプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、ナベルビン、イリノテカン、アバスチン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、オキサリプラチン、ＴＳ−１、ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤とそれらの組み合わせで構成される群より選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【請求項１８】
前記がんが、肺がん、肝臓がん、大腸がん、脳腫瘍、乳がん、すい臓がん、胃がん、腺がん、扁平上皮がん、大細胞がんで構成される群より選択されることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【請求項１９】
前記がんが肺がんであることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【請求項２０】
前記肺がんが肺扁平上皮がんであることを特徴とする、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記化学療法薬がエルロチニブであることを特徴とする、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記がんが胃がんであることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【請求項２３】
前記胃がんが印環細胞がんであることを特徴とする、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記化学療法薬が、シスプラチン、５−フルオロウラシル、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、アバスチン、ＴＳ−１、オキサリプラチンとそれらの組み合わせで構成される群より選択されることを特徴とする、請求項２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（相互参照）
本出願は、２０１４年６月２日に出願された米国仮特許出願第６２／００６６３０号の関連出願であり、その全体が本明細書に参考として組み込まれる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、制吐薬と化学療法薬の組み合わせで薬剤耐性がんを治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
化学療法、特に抗がん剤の併用によるものは、外科手術または放射線で治療できない非局在化腫瘍の治療に選択される。しかしながら、一部の患者では再発し、中には短期間のうちに再発する場合もあり、２回目の化学療法過程が効果を示さないことがある。
【０００４】
ほとんどの悪性腫瘍は細胞障害性抗がん剤に一定の感度を示す。したがって、これら薬剤での治療によって一般的には数週間から数ヶ月持続する寛解および腫瘍の縮小が得られる。しかしながら、多くの場合腫瘍が再増殖し、この再増殖はさらなる抗がん剤治療に耐性を有する。
【０００５】
理論的には、作用の異なる薬剤を併用投与することで、この問題を解決することができるはずである。この治療方法は、２つ以上の異なる薬剤耐性が同一の細胞内で自然発生する可能性が極めて低いことに基づいている。併用化学療法によって薬剤耐性腫瘍細胞の問題を回避できると思われた。
【０００６】
これを受けて抗がん剤併用投与のプロトコルに対する研究が行われた。新たに開発された薬剤と併用化学療法は数十年前、小児白血病とホジキン病の一部に対して高い治癒率を達成した。しかしながら、肺がんや乳がん、消化管がんなどの主要な死因は化学療法に耐性を示した。併用化学療法の失敗は理解不能であった。観察結果を説明するために数多くの理論が提示されたが、これら理論のうち適切に試験できたものはほとんどなかった。
【０００７】
がん治療用医薬組成物の開発は大きな進歩を遂げているが、薬剤耐性がんを治療するための新たな方法が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明により、プロクロルペラジンと化学療法薬の併用ががん細胞の大きさ縮小と数量減少において相乗効果を示し、薬剤耐性を持つがん細胞の増殖を阻害することが予期せず発見された。
【０００９】
本発明の目的は、化学療法薬に耐性を持つがんを患う被験者を治療する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の一態様における化学療法薬に耐性を持つがんを患う被験者を治療する方法は、プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の治療的有効量を、化学療法薬と併用して、前記被験者に投与する工程を含む。
【００１１】
さらなる一態様において、本発明はがん転移を防止する方法を提供する。前記方法は、プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の治療的有効量を、化学療法薬と併用して、必要とする被験者に投与する工程を含む。
【００１２】
別の一態様において、本発明は、化学療法薬と併用して、化学療法薬に耐性を持つがんを患う被験者を治療するための、またはがん転移を防止するための、プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の治療的有効量を含む医薬組成物または併用物を提供する。
【００１３】
またさらなる一態様において、本発明は、化学療法薬との併用で、化学療法薬に耐性を持つがんを患う被験者を治療するための薬剤を製造するためのプロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００１４】
さらに別の一態様において、本発明は、化学療法薬との併用で、がん転移を防止するための薬剤を製造するためのプロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。
【００１５】
本発明の一実施形態において、前記化学療法薬は、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ペメトレキセド、シスプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、ナベルビン、イリノテカン、アバスチン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、オキサリプラチン、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム（ＴＳ−１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤とそれらの組み合わせで構成される群より選択される。
【００１６】
本発明の前述の概要、および以下の詳細な説明は、添付の図面を参照しながら読むことでより理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１Ａ】図１はＣＬ１５２スフィアにおけるプロクロルペラジン誘導アポトーシスとゲムシタビン併用で相乗的に増強された細胞毒性を示す図である。図１Ａは４８時間のプロクロルペラジンでの処理後、ＣＬ１５２スフィアを収集し、フローサイトメトリーで分析した図である。プロクロルペラジンがアポトーシスにおいて用量依存的増加をもたらした。
【図１Ｂ】プロクロルペラジンのＣＬ１５２スフィアにおけるゲムシタビンとの相乗効果を示すグラフである。
【図１Ｃ】プロクロルペラジン処理後、プロクロルペラジンが細胞移動を阻害したことを示すグラフである。
【図１Ｄ】プロクロルペラジンで２４時間処理されたＡ５４９細胞で、プロクロルペラジンがβ-ガラクトシダーゼ陽性細胞数を増加し、老化を誘導したことを示すグラフである。Ａ５４９細胞は老化陽性対照として５０μＭのレスベラトロールで処理された。
【図２Ａ】図２はプロクロルペラジンががん幹細胞様細胞の割合を減少させ、化学療法薬とゲフィチニブにより誘導される細胞毒性を増強したことを示すグラフである。図２ＡはプロクロルペラジンがＣＬ１４１がん幹細胞様スフィア細胞の細胞生存を低下させ、ペメトレキセドの抗がん作用を増強したことを示すグラフである。
【図２Ｂ】プロクロルペラジンがＣＬ９７がん幹細胞様スフィア細胞の細胞生存を低下させ、ゲフィチニブの抗がん作用を増強したことを示すグラフである。
【図２Ｃ】プロクロルペラジンがＨＣＣ８２７細胞のスフィア形成活性を阻害し、シスプラチンの抗がん作用を増強したことを示すグラフである。
【図２Ｄ】プロクロルペラジンがＨ１２９９細胞のスフィア形成活性を阻害し、シスプラチンの抗がん作用を増強したことを示すグラフである。
【図３Ａ】図３はプロクロルペラジン媒介抗腫瘍効果（単独または標準的な化学療法薬との併用）の体内モニタリングを示すグラフである。図３Ａは５ｘ１０５ Ｈ４４１バルク腫瘍細胞がＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの右脇腹皮下に注入され、その後マウスはビークル（対照群）とプロクロルペラジン（５ｍｇ／ｋｇ／日、週５回）に群分けされた。キャリパーを使用して腫瘍量が測定され、腫瘍サイズの比率（フォールドチェンジ）（ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）が時間経過とともに記録された。最初の結果では、この濃度で、プロクロルペラジン単独が体内の腫瘍発生を抑制した（または遅延させた）ことが示された。続く実験では、腫瘍抑制効果のための標準化学療法薬との併用でプロクロルペラジンを使用した。
【図３Ｂ】ペメトレキセド（１ｍｇ／ｋｇ、週５回）とプロクロルペラジン（１ｍｇ／ｋｇ、週５回）の併用が、対照群、ペメトレキセド単独（１ｍｇ／ｋｇ、週５回）およびペメトレキセド（１ｍｇ／ｋｇ、週５回）とシスプラチン（１ｍｇ／ｋｇ、週２回）の併用と比較して、最も著しい腫瘍抑制効果があったことを示すグラフである。
【図３Ｃ】腺がん腫瘍モデルに対する実験結果を示すグラフである。そのうち、標準化学療法レジメンはペメトレキセド（５０ｍｇ／ｋｇ）とシスプラチン（３ｍｇ／ｋｇ）の併用である。結果は標準レジメンにプロクロルペラジン（５ｍｇ／ｋｇ）を加えることで腫瘍量が最少になることが示され、これにプロクロルペラジン単独（５ｍｇ／ｋｇ）、ペメトレキセド（５０ｍｇ／ｋｇ）とシスプラチン（３ｍｇ／ｋｇ）の併用、ビークル対照の順で続いた。
【図３Ｄ】ゲムシタビンとシスプラチン併用の標準治療での扁平上皮モデルに対する実験結果を示すグラフである。標準治療（６０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンと３ｍｇ／ｋｇのシスプラチン併用）にプロクロルペラジン（５ｍｇ／ｋｇ）を加えることで腫瘍抑制効果が最大となることが示され、これにプロクロルペラジン単独（５ｍｇ／ｋｇ）、ゲムシタビンとシスプラチンの併用、ビークル対照の順で続いた。
【図３Ｅ】ゲフィチニブ耐性ＮＳＣＬＣモデルに対するゲフィチニブにプロクロルペラジンを加えた治療の結果を示すグラフである。そのうち、ゲフィチニブ（１００ｍｇ／ｋｇ）とプロクロルペラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の併用が最大の腫瘍抑制効果を示し、これにプロクロルペラジン単独群（５ｍｇ／ｋｇ）、ゲフィチニブ単独群（１００ｍｇ／ｋｇ）、ビークル対照群の順で続き、これらは類似の腫瘍量を示した。
【図４】肺扁平上皮がん患者にプロクロルペラジンを使用した事例の結果を示す図である。そのうち、患者は肺扁平上皮がん、右下肺と右上肺腺がんを患う８１歳男性である。患者は喀血のため右下肺の原発巣に対する放射線治療を受け、その後２０１０年５月１９日よりタルセバTM（有効成分としてエルロチニブを含む）の投与を受けた。状態は安定しており、１回目のＣＴで０.５ｃｍの右上肺腺がんが示された。この病巣は２０１３年５月２０日には２ｃｍまで進行し、咳と呼吸困難が悪化した。高齢であり、全般的状態が悪いため、プロクロルペラジンのみを添加してタルセバTMを継続することを決定した。プロクロルペラジンの投与を受けた後、咳と呼吸困難が改善され、３ヵ月後のＣＴでは安定した疾患が示された。２０１４年６月１０日の最後のフォローアップＣＴで腫瘍の進行が示されるまでこのレジメンが継続された。患者は２０１４年末に死亡した。
【図５】肺腺がん患者にプロクロルペラジンを使用した事例の結果を示す図である。ＥＧＦＲ−Ｌ８５８Ｒ変異ありの肺腺がん患者（５０歳女性、ＬＵＬ）は、２０１２年に最初にゲフィチニブでの治療を受け（悪性胸水あり）、２０１３年８月２４日からペメトレキセドで治療を受けた。その後患者は２０１３年１１月１１日にペメトレキセドに併用してプロクロルペラジンの投与を受けた。このレジメンが継続され、２０１４年７月１９日の最後のフォローアップＣＴでは腫瘍と胸水が大幅に減少したことが示された。この患者は現在も生存している。
【図６】印環細胞がん患者にプロクロルペラジンを使用した事例の結果を示す図である。複数の腹腔内転移がんもある印環細胞がん患者（５８歳女性）（平均生存期間中央値が７〜８ヶ月）は、２０１２年７月１６日より数種の化学療法（シスプラチン、５−フルオロウラシル、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、アバスチン、ＴＳ−１、オキサリプラチン、パクリタキセル／５−フルオロウラシル、アバスチン／ゲムシタビン／ＴＳ−１）による治療を受けていた。患者は２０１３年２月２５日にプロクロルペラジンの投与を受けた。このレジメンが継続され、２０１４年６月１８日の最後のフォローアップＣＴでは腫瘍の安定が示された。患者は２０１４年末に死亡した。
【図７】図７Ａおよび７Ｂは、臨床経過と維持治療としてのプロクロルペラジンの追加を示すグラフである。事例はすべて臨床ガイドラインに従って治療された。全患者の平均余命は３ヶ月未満であった。薬剤耐性までの有効期間を延長するためにプロクロルペラジンがサルベージ療法に追加された。そのような維持治療の目的は、進行を抑えて疾患をコントロールし、患者がより長く生存できるようにすることである。プロクロルペラジン治療後の客観的奏効率（ＯＲＲ）、無増悪生存率（ＰＦＳ）、全生存（ＯＳ）は、維持治療の使用が実際に疾患の状態を安定させ、生存を延長したことを示した。ＯＲＲ中央値は-６.２％（-７９.８％〜４.３％）であった。プロクロルペラジン治療後のＰＦＳ中央値とＯＳ中央値はそれぞれ１２.８（７.０〜２０.１）ヶ月と１３.５（７.４〜２１.４）ヶ月であった。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
別途定義されている場合を除き、ここで使用されるすべての技術的および科学的用語は、当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を持つ。
【００１９】
ここで使用される単数形の「１つ」、「一」、「その」などは、文脈上明確に記載されていない限り、複数形の意味を含む。したがって、例えば、「１つの試料」には、複数のそのような試料および当業者の知るところである同等物が含まれる。
【００２０】
ここで使用される「プロクロルペラジン」という用語は、嘔吐とめまいの制吐治療に使用されるドパミン（Ｄ２）受容体アンタゴニストを指す。プロクロルペラジンは次の構造式で表される構造を有する。
【化１】
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【００２１】
ここで使用される「薬学的に許容可能な塩」という用語は、プロクロルペラジンのあらゆる薬学的に許容可能な塩を指す。薬学的に許容可能な塩には、アンモニウム塩、カリウム塩およびナトリウム（単、二、三ナトリウムを含む）（好ましい）などのアルカリ金属塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンなどの有機塩基の塩、アルギニン、リジン等のアミノ酸を有する塩などが含まれる。
【００２２】
ここで使用される「代謝物」という用語は、あらゆる代謝の中間体および産物を指す。プロクロルペラジン代謝物のいくつかの例には、Ｎ−デスメチルプロクロルペラジン、プロクロルペラジンスルホキシド、プロクロルペラジンスルホキシド４’−Ｎ−オキシドが含まれるが、これらに限らない。具体的な一実施例において、前記代謝物はＮ−デスメチルプロクロルペラジンである。
【００２３】
ここで使用される「類似体」という用語は、同一の機能または作用を有する、改変された化学構造を持つあらゆる化合物を指す。プロクロルペラジン類似体のいくつかの例には、以下の構造を有する化合物が含まれるが、これらに限らない。
【化２】
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【化３】
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【化４】
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【化５】
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【００２４】
ここで使用される「被験者」という用語は、ヒトや動物などあらゆる温血種を指す。本発明に従って治療されるヒトなどの被験者は、実際には、男性または女性のヒト個体群のあらゆる被験者とすることができ、子供、成人、高齢者に分けられる場合がある。これらどの患者群も、本発明の実施態様に関係がある。
【００２５】
本発明は、化学療法薬に耐性を持つがんを患う被験者を治療する方法を提供する。前記方法は、プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の治療的有効量を、化学療法薬と併用して、前記被験者に投与する工程を含む。
【００２６】
本発明の一部実施例において、プロクロルペラジンと化学療法薬の併用は、がん細胞の大きさと数の減少に相乗効果を示す。本発明の別の実施例において、プロクロルペラジンと化学療法薬の併用は、がん細胞の増殖阻害に相乗効果を示す。
【００２７】
ここで使用される「化学療法薬」とは、抗がん効果を提供するあらゆる薬剤を指し、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ペメトレキセド、シスプラチン、パクリタキセル、ドセタキセル、ゲムシタビン、ナベルビン、イリノテカン、アバスチン、５−フルオロウラシル、メトトレキサート、オキサリプラチン、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム（ＴＳ−１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）チロシンキナーゼ阻害剤とそれらの組み合わせを含むが、これらに限らない。好ましい実施例には、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、ペメトレキセド、シスプラチン、５−フルオロウラシル、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、アバスチン、ＴＳ−１、オキサリプラチンが含まれる。特定の一実施例において、前記化学療法薬はゲフィチニブである。
【００２８】
本発明の実施例において一部の代謝物は、表２に示すように、プロクロルペラジンと同じ細胞毒性活性を有することが分かった。
【００２９】
また、本発明の実施例において一部の類似体は、表３に示すように、プロクロルペラジンと同じコロニー形成活性を有することが分かった。
【００３０】
ここで使用される「治療的有効量」という用語は、がんの治療において効果を提供するのに充分な量を指し、投与方法および年齢、体重、症状、治療効果、投与経路、治療期間を含む治療対象の条件に依存する。
【００３１】
本発明において、本発明に基づく方法でさまざまながんを治療することができる。一部の実施態様において、前記がんは固形腫瘍などの固形がんである。別の実施態様において、前記がんは「液体」がん、または血液がんである。前記がんは、肺がん、肝臓がん、 大腸がん、脳腫瘍、乳がん、すい臓がん、胃がん、腺がん、扁平上皮がん、大細胞がんで構成される群より選択される。
【００３２】
本発明の実施例において、プロクロルペラジンは、表１に示すように、腺がん、扁平上皮がん、大細胞がん、肝臓がん、結腸直腸腺がん、脳腫瘍、乳がん、すい臓がん、骨髄腫を含むさまざまながんにおいて細胞毒性を示すことが分かった。
【００３３】
本発明は、化学療法薬に耐性を持つがんを患う被験者を治療する方法を提供する。前記方法は、プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の治療的有効量を、化学療法薬と併用して、前記被験者に投与する工程を含む。本発明の一実施例において、前記がんは非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）等の肺がんである。
【００３４】
一方で、本発明はがん転移を防止する方法を提供する。前記方法は、プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の治療的有効量を、化学療法薬と併用して、必要とする被験者に投与する工程を含む。本発明の一実施例において、前記がんは肺扁平上皮がん等の肺がんである。本発明の別の一実施例において、前記がんは印環細胞がん等の胃がんである。
【００３５】
本発明の一実施例において、プロクロルペラジンと、エルロチニブの併用が、肺扁平上皮がん等の肺がんの転移防止において効果を示した。本発明の別の一実施例において、プロクロルペラジンと、シスプラチン、５−フルオロウラシル、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、アバスチン、ＴＳ−１、オキサリプラチン、およびそれらの組み合わせで構成される群より選択される化学療法薬の併用が、印環細胞がん等の胃がんの転移防止において効果を示した。
【００３６】
さらに、本発明は、化学療法薬に耐性を持つがんを患う被験者を治療するための薬剤を製造するためのプロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用を提供する。また、本発明は、がん転移を防止するための薬剤を製造するためのプロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩の使用も提供する。
【００３７】
本発明において、プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩（「活性化合物」）は、経口または非経口投与を含むが、これらに限らない、適切な任意の経路で投与することができる、医薬組成物または製剤に調合することができる。本発明の一実施例において、プロクロルペラジンまたはその類似体あるいは代謝物、またはその薬学的に許容可能な塩を含む組成物または製剤は、固形または液体の形式で、経口投与される。固形組成物または製剤は、丸剤、錠剤、カプセル剤、分散性粉末剤、顆粒剤などを含む。経口組成物は、口腔内に入れる口内洗浄剤および 舌下錠も含む。カプセル剤は硬カプセル剤と軟カプセル剤を含む。経口用のそのような固形組成物または製剤において、１つ以上の活性化合物が単独で、または希釈剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、溶解剤と混合されてから、従来の方法で製剤化される。必要時、そのような製剤はコーティング剤でコーティングすることができ、または２つ以上のコーティング層でコーティングしてもよい。一方、経口投与向けの液体組成物は、薬学的に許容可能な水溶液、懸濁液、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤などを含む。そのような組成物において、１つ以上の活性化合物を一般的に使用される希釈剤（精製水、エタノール、またはそれらの混合など）に溶解、懸濁、または乳化させることができる。そのような希釈剤のほか、前記組成物は湿潤剤、懸濁化剤、乳化剤、甘味剤、香味剤、香料、保存料、バッファなどを含むこともできる。
【００３８】
非経口投与向けの医薬組成物は、溶液、懸濁液、乳剤、使用する直前に溶媒中に溶解または懸濁される固形の注入可能な組成物を含む。注射液は１つ以上の有効成分を希釈剤中に溶解、懸濁または乳化させることによって調製することができる。前記希釈剤の例は、注射用蒸留水、生理食塩水、植物油、アルコール、およびそれらの組み合わせである。さらに、前記注射剤は安定剤、溶解剤、懸濁剤、乳剤、緩和剤、バッファ、保存料などを含んでもよい。前記注射剤は最終製剤工程で滅菌されるか、滅菌手順によって調製される。本発明の医薬組成物は、例えば凍結乾燥によって、固体状無菌製剤として製剤化することもでき、使用する直前に滅菌注射用水またはその他滅菌希釈剤中で滅菌または溶解された後使用することができる。
【００３９】
以下の実施例は単なる例示であって、いかなる場合も開示の残余部分を限定することはないと解釈すべきである。詳述されていなくても、当業者は、本発明の説明に基づき、最大範囲で本発明を利用できるであろう。
【実施例】
【００４０】
Ｉ．細胞培養と化学物質
【００４１】
Ａ５４９、ＣＬ１４１、Ｈ４４１はＥＧＦＲ野生型腺がん細胞株であり、ＨＣＣ８２７はＥＧＦＲエクソン１９欠損があり、ＣＬ９７はＥＧＦＲ  Ｔ７９０ＭとＧ７１９Ａの変異細胞株である。ＣＬ１５２、Ｈ２１７０、Ｈ２２６は扁平上皮がん細胞株で、Ｈ１２９９は非小細胞肺がん細胞株である。Ａ５４９-ＯＮ細胞株はＯｃｔ４およびＮａｎｏｇ過剰発現Ａ５４９細胞で、それはがん幹細胞様細胞株（２２）とみなされた。すべての細胞株がＲＰＭＩ培地で維持され、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ、インビトロゲン）、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンが添加された。細胞培養実験用に、１０ｍＭのプロクロルペラジンストック溶液がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；Ｓｉｇｍａ）中に溶解された。プロクロルペラジン、シスプラチン、ゲムシタビンがＳｉｇｍａより購入された。
【００４２】
ＩＩ．細胞毒性とスルホローダミンＢアッセイ
【００４３】
細胞が９６ウェルプレートに３連で１ウェルにつき２０００細胞の密度でプレート培養された。細胞は３日目に（適切なプレート効率と生命力を確約するため）示された薬剤に対して４８時間処理された。細胞は異なる濃度のプロクロルペラジン、シスプラチン、ゲムシタビン、または例えばプロクロルペラジンとゲムシタビンなど組み合わせで処理された。細胞毒性がスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイを使用して評価された（２３）。簡単に説明すると、培地は廃棄され、接着細胞が１００μｌの冷たい１０％トリクロロ酢酸（ｗ／ｖ）により各ウェルで１時間、４℃で固定された。固定後、細胞は１００μｌ／ウェルの０.４％（ｗ／ｖ、１％酢酸）ＳＲＢ溶液で３０分間室温において染色され、１％酢酸で５回洗浄された。空気乾燥後、１００μｌの１０ｍＭトリス塩基が各ウェルに添加され、５３０ｎｍで吸収度が読み取られた。細胞毒性は、溶媒のみの対照群の細胞数（１００％に設定）に対する、薬剤処理ウェル内の細胞の割合として示される。各実験が独立して少なくとも２回３連で実施され、細胞毒性が平均±ＳＤとして示されている。
【００４４】
ＩＩＩ.コロニー形成アッセイ
【００４５】
試験細胞が６ウェルプレートにそれぞれ１ウェル当たり１０４細胞で１４日間播種された。プロクロルペラジンとその他試験薬剤が細胞の播種の２４時間後に添加された。培地とプロクロルペラジンが４日ごとに交換された。処理後、細胞はＰＢＳで洗浄され、コロニーが固定溶液（メタノール：酢酸＝３：１）で固定され、メタノール中の０.５％クリスタルバイオレットで染色された。クリスタルバイオレットを慎重に除去し、水道水で洗浄した後、コロニーが手動でカウントされた。各実験が独立して少なくとも２回３連で実施され、細胞毒性が平均±ＳＤとして示されている。
【００４６】
ＩＶ．腫瘍スフェロイドアッセイ
【００４７】
簡単に説明すると、単一細胞が６ウェル超低接着プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．）を使用し、２,０００細胞／ｍＬの密度で腫瘍スフェロイド培地、１％のＮ２サプリメント（インビトロゲン（Ｉｎｎｉｔｒｏｇｅｎ））、１０ｎｇ／ｍＬの塩基性線維芽細胞増殖因子（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、１０ｎｇ／ｍＬの上皮成長因子（インビトロゲン）と１％ペニシリン／ストレプトマイシン（インビトロゲン）が添加されたＤＭＥＭ／Ｆ１２に、３７℃、９５％空気と５％ＣＯ２の加湿空気環境でプレート培養された。細胞は週２回培養された。継代時、腫瘍様スフィア（ｔｕｍｏｒ  ｓｐｈｅｒｅｓ）がハーベストされた。スフェロイドがＴｒｙｐＬＥ（登録商標）（インビトロゲン）で解離された。トリパンブルー色素排除法を使用してスフェロイド細胞数がカウントされた。
【００４８】
Ｖ.フローサイトメトリーを使用したＳＰ（Ｓｉｄｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）解析と精製
【００４９】
細胞の単一細胞懸濁がトリプシン−ＥＤＴＡ（インビトロゲン）で皿から解離され、１×１０６細胞／ｍＬで、３％のウシ胎児血清と１０ｍＭのＨｅｐｅｓを添加した生理的等張緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ）中で懸濁された。これらの細胞は３７℃で９０分間、２０μｇ／ｍＬのＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、ミズーリ州セントルイス）で培養された。ＡＢＣトランスポーター阻害剤ベラパミル（Ｓｉｇｍａ）が最終濃度５０μＭで添加され、フローサイトメトリーのゲーティングエリアが確定された。示された薬剤での９０分間の培養後、細胞はすぐに３００ｇ、４℃で５分間遠心分離され、よく冷えたＨＢＳＳで再懸濁された。細胞はＨｏｅｃｈｓｔ色素流出を防ぐため氷上に維持され、死細胞を識別するために１μｇ／ｍＬのヨウ化プロピジウム（ＰＩ、ＢＤ）が添加された。最後に、これらの細胞が４０μｍセルストレーナー（ＢＤ）で濾過され、シングルサスペンション細胞（ｓｉｎｇｌｅ−ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ  ｃｅｌｌｓ）が取得された。デュアルレーザーＦＡＣＳ  Ｖａｎｔａｇｅ  ＳＥ（ＢＤ）で細胞の２波長解析と精製が行われた。Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２は３５５ｎｍのＵＶ光で励起でき、４５０／２０バンドパス（ＢＰ）フィルターで青い蛍光を発し、６７５ｎｍのエッジフィルターロングパス（ＥＦＬＰ）で赤い蛍光を発した。６１０ｎｍダイクロイックミラーショートパス（ＤＭＳＰ）を使用して発光波長が分離された。ＰＩ陽性（死）細胞が分析から除外された。
【００５０】
ＶＩ．Ａｌｄｅｆｌｕｏｒアッセイ
【００５１】
高アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）酵素活性が肺がん幹細胞集団の検出に使用された。Ａｌｄｅｆｌｕｏｒアッセイがメーカーのガイドライン（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従って実施された。簡単に説明すると、細胞培養から取得された単一細胞がＡＬＤＨ基質（ｂｏｄｉｐｙ−ａｍｉｎｏａｃｅｔａｌｄｅｈｙｄｅ、ＢＡＡＡ）を含有するＡｌｄｅｆｌｕｏｒアッセイバッファで５０分間、３７℃で培養された。陰性対象として、各試料からの細胞の一部がＡＬＤＨ阻害剤（ジエチルアミノベンズアルデヒド、ＤＥＡＢ）の存在下で同一条件によって培養された。フローサイトメトリーを使用してＡＬＤＨ−陽性細胞集団が測定された。
【００５２】
ＶＩＩ.プロクロルペラジンに媒介される抗肺がん効果の生体内検査
【００５３】
最初の試験で、ヒト肺がん細胞株ＮＣＩ−Ｈ４４１（ＡＴＣＣより購入、１００万細胞／注射）細胞がＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（メス、４〜６週齢）の右脇腹皮下に注入された。腫瘍が触知可能になったとき、キャリパーを使用してサイズが記録され、マウスは無作為に対照群（ＤＭＳＯビークル）とプロクロルペラジン治療群（５ｍｇ／ｋｇ、５日／週、腹腔内注射）に分けられた。４週間の期間にわたり、両群の腫瘍形成が毎週キャリパーを使用して測定された。腫瘍サイズの変化がフォールドチェンジとして表され、時間経過とともに記録された。プロクロルペラジン治療は、ビークル対照と比較して、腫瘍の成長を抑制および（または）遅らせるようであった（**ｐ＜０.０１）。
【００５４】
最初の薬剤併用試験において、腫瘍確立のためホタルルシフェラーゼ（６ｘ１０５細胞／注射）を発現しているＮＣＩ−Ｈ４４１細胞が外側尾静脈からＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（４〜６週齢）に注射された。腫瘍注射の１週間後、マウスは次の異なる群：ビークル治療群、プロクロルペラジン（１ｍｇ／ｋｇ）とペメトレキセド（１ｍｇ／ｋｇ）（ＮＳＣＬＣ向けの標準化学療法薬剤）併用治療群、ペメトレキセド（１ｍｇ／ｋｇ）＋シスプラチン（１ｍｇ／ｋｇ）治療群、ペメトレキセド（１ｍｇ／ｋｇ）＋プロクロルペラジン（１ｍｇ／ｋｇ）治療群に無作為に分けられた。異なる群からの腫瘍量がキャリパーにより記録された。腫瘍サイズの変化がフォールドチェンジとして表され、時間経過とともに記録された。その後、別の薬剤併用試験が実施された。プロクロルペラジンと組み合わせて２つの主要な標準化学療法レジメンが使用された。肺腺がんには、標準の薬剤併用がペメトレキセドとシスプラチンであり、肺扁平上皮がんはゲムシタビンとシスプラチンが使用される。ＣＬ９７（腺がん）担がんマウスにおいて、ペメトレキセド＋シスプラチン＋プロクロルペラジンの併用が、ペメトレキセド＋シスプラチンおよびプロクロルペラジン単独の群と比較して最大の腫瘍抑制効果を示した。ＣＬ１５２（扁平上皮）担がんマウスにおいては、標準レジメン（ゲムシタビン＋シスプラチン）にプロクロルペラジンを追加したものがやはりプロクロルペラジン単独群とゲムシタビン＋シスプラチン群よりも高い腫瘍発生抑制効果を示した。次に、生体内におけるプロクロルペラジンがゲフィチニブ耐性ＣＬ９７肺がん細胞を感作したことを示す。ＣＬ９７がん細胞（１.５ｘ１０６細胞／注射）がＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの皮下に注射され、生体内腫瘍モデルが確立された。マウスは無作為に、対照、ゲフィチニブ単独（１００ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、５回／週）、プロクロルペラジン単独（５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ、５回／週）、ゲフィチニブ＋プロクロルペラジンの４つの群に分けられた。プロクロルペラジン単独およびゲフィチニブ＋プロクロルペラジン治療群により有意な腫瘍抑制効果が腫瘍注入の５週間後に観察された。腫瘍注入６週間後までに、ゲフィチニブ＋プロクロルペラジン治療群が最大の腫瘍抑制効果を示し、これにプロクロルペラジン単独治療群が続いた。対照群とゲフィチニブ単独治療群は類似の腫瘍量を示した。
【００５５】
結果
【００５６】
ＮＳＣＬＣ細胞株におけるプロクロルペラジンの細胞毒性
【００５７】
最初にさまざまなＮＳＣＬＣ細胞株におけるプロクロルペラジンの細胞毒性が調査された。Ａ５４９、Ａ５４９−ＯＮ、ＣＬ９７、ＣＬ１４１、ＨＣＣ８２７、Ｈ４４１は肺腺がん細胞株であった。ＣＬ１５２、Ｈ２１７０、Ｈ２２６は扁平上皮がん細胞株であった。ＳＲＢアッセイにより細胞生存率が判定された。異なる濃度のプロクロルペラジンによる４８時間の処理後、すべてのがん細胞株のＩＣ５０値は約２０μＭであった（表１参照）。コロニー形成アッセイを使用してプロクロルペラジンの抗腫瘍活性を判定するための実験が行われた。ＮＳＣＬＣ細胞株のコロニー形成能は、プロクロルペラジンの異なる濃度に暴露された後、濃度依存的に低下した。がん幹細胞（ＣＳＣ）は、自己複製能と治療耐性が特異的に付与された腫瘍細胞集団の存在を前提とする。プロクロルペラジンは肺ＣＳＣを選択的に阻害すると予測されたため、続いて、プロクロルペラジン治療によってＮＳＣＬＣ（野生型ＥＧＦＲを有する肺扁平上皮がん細胞）スフィアの大きさが縮小されるかが調べられた。ＣＳＣ特性を有する細胞集団を表すＳＰ（Ｓｉｄｅ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）細胞が、ＮＳＣＬＣ細胞株に存在するか否かを判定するため、細胞を蛍光染料Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３３４２で染色し、フローサイトメトリーで細胞を分析した。死細胞と細胞残屑を散乱信号に基づき除外した後、ＮＳＣＬＣ細胞にはSP細胞特性を有する小さい細胞集団が含まれた。プロクロルペラジン２.５、５、１０μＭでの４８時間の培養後、ＳＰ細胞集団は用量依存的に死んだ（表１参照）。
【００５８】
プロクロルペラジンがSP細胞集団とＡＬＤＨ+細胞を減少する
【００５９】
プロクロルペラジン処理がＡＬＤＨ発現を有する細胞の割合を減少できるか否かも調べられた（ＡＬＤＨは造血およびＮＳＣＬＣ ＣＳＣ両方の確立されたマーカーである）。表１に示すように、プロクロルペラジン処理はＡＬＤＨ＋ＣＬ１５２集団も用量依存的に減少させた。まとめると、プロクロルペラジンはＮＳＣＬＣ細胞において低い、または最小限の細胞毒性効果を示した。
【００６０】
【表１】
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【００６１】
さらに、ＮＳＣＬＣ親細胞とスフィア細胞でのプロクロルペラジン代謝物の細胞毒性がＳＲＢアッセイとトリパン ブルー色素排除法により調べられた。Ｎ−デスメチルプロクロルペラジンはＮＳＣＬＣ細胞株において他の試験された代謝物よりも高い細胞毒性を示したことが分かった（表２参照）。
【００６２】
【表２】
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【００６３】
また、ＣＬ１４１におけるプロクロルペラジンの類似体のコロニー形成能に対する効果も調べられた。約１,０００の細胞が６ウェルプレートに播種され、異なる類似体で処理された。１４日後、コロニーがクリスタルバイオレットにより染色され、写真撮影とカウントが行われた。表３に結果を示す。この結果によるとプロクロルペラジンの４つの類似体がＮＳＣＬＣ細胞におけるコロニー形成能を低下させたことが示された。
【００６４】
【表３】
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【００６５】
プロクロルペラジンがＣＬ１５２スフィアにおいてアポトーシスを誘発し、ゲムシタビンとの併用で細胞毒性が相乗的に高まる。
【００６６】
４８時間のプロクロルペラジンでの処理後、ＣＬ１５２スフィアが収集され、フローサイトメトリーにより分析された。プロクロルペラジンがアポトーシスにおいて用量依存的増加をもたらした（図１Ａ）。ゲムシタビンはＮＳＣＬＣの治療においてよく使用される化学療法薬剤である。
【００６７】
次に、プロクロルペラジンとゲムシタビンの併用効果がスフィア形成アッセイによって調べられた。結果は、プロクロルペラジンがＣＬ１５２スフィアにおいてゲムシタビンとの相乗効果を示した（図１Ｂ）。
【００６８】
プロクロルペラジンの肺がん細胞移動についての阻害および老化の誘導
【００６９】
上皮間葉転換（ＥＭＴ）下のがん細胞は、アポトーシスと特定の化学療法薬に対する耐性の増加を示すことがわかった。ＥＭＴはがん幹細胞形質（ｃａｎｃｅｒ  ｓｔｅｍｎｅｓｓ）の制御においても重要な役割を果たす。ＥＭＴは細胞移動と浸潤の増進で特徴付けられる。トランスウェル遊走アッセイを使用して、プロクロルペラジンの亜細胞毒性（ｓｕｂ−ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ）濃度が生体外でＡ５４９細胞の細胞運動性を阻害するか否かを判定した。２４時間後、１０μＭのプロクロルペラジン処理は、ＤＭＳＯ対照群を比較して、Ａ５４９細胞の細胞移動を大幅に阻害した（図１Ｃ）。さらに、Ａ５４９細胞で老化に対するプロクロルペラジンの効果を調べた。β−ガラクトシダーゼ（ＳＡ−β−Ｇａｌ）活性が老化検出キット（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ  Ｉｎｃ．）により検出された。１μＭのプロクロルペラジンと、陽性対照として５０μのレスベラトロールで２４時間処理した後、Ａ５４９細胞はβ−ガラクトシダーゼ活性が高まり、誘導されたβ−ガラクトシダーゼ活性陽性細胞数が顕微鏡を用いて２００ｘ視野でカウントされた（図１Ｄ）。これらのデータは、プロクロルペラジンがＮＳＣＬＣ細胞において低濃度で老化を誘導することができることを示した。
【００７０】
プロクロルペラジンのＮＳＣＬＣがんスフィアの自己複製能の大幅な阻害
【００７１】
プロクロルペラジン単独、または臨床薬剤、化学療法薬およびＥＧＦＲ-チロシンキナーゼ阻害剤ゲフィチニブとの併用治療が、ＮＳＣＬＣがん幹細胞様スフィア細胞を生体外で抑制できるか否かを評価した。ＣＬ１４１スフィア細胞（図２ａ）とＣＬ９７スフィア細胞（図２Ｂ）がプロクロルペラジン単独、ペメトレキセド（ＣＬ１４１スフィア）またはゲフィチニブ（ＣＬ９７スフィア）単独あるいは併用で４８時間処理された。プロクロルペラジン（１、２.５、５、１０μＭ）は、ＣＬ１４１とＣＬ９７細胞から濃度依存的にスフィアの数を減少させた（図２Ａと図２Ｂ）。併用、プロクロルペラジンと臨床薬剤の併用処理も、ペメトレキセドまたはゲフィチニブ単独と比較してスフィア細胞の数を大幅に減少させた（図２Aと図２Ｂ）。ＣＳＣにおけるプロクロルペラジンとシスプラチンの併用の効果をさらに調べるため、ＨＣＣ８２７とＨ１２９９を含む２つのＮＳＣＬＣ細胞株のスフィア形成アッセイを実施した。プロクロルペラジンはスフィア形成能を抑制した（図２Ｃと図２Ｄ）。興味深いことに、シスプラチンとの併用では、ＮＳＣＬＣ細胞により形成されたスフィア数が、プロクロルペラジンまたはシスプラチン単独で処理された細胞のそれよりも少ないようであった。総合して、これらのデータは、プロクロルペラジンがこれらの試験されたスフィアに対して抗ＣＳＣ能力を有し、プロクロルペラジンと化学療法薬またはＥＧＦＲ-チロシンキナーゼ阻害剤の併用はがん治療に有用である可能性があることを示唆している。
【００７２】
プロクロルペラジンの生体内における腫瘍抑制効果の検査
【００７３】
最初の試験（図３Ａ）では、ＮＣＩ−Ｈ４４１（１×１０６細胞／注射）細胞がＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（メス、４〜６週齢）の右脇腹皮下に注入された。腫瘍が触知可能になったとき、キャリパーを使用してサイズが記録され、マウスは無作為に対照群（ＤＭＳＯビークル）とプロクロルペラジン治療群（５ｍｇ／ｋｇ、５日／週、腹腔内注射）に分けられた。治療の４週間後、プロクロルペラジンは、５ｍｇ／ｋｇで、ビークル対照群と比較して、腫瘍の成長を抑制する効果があることが明白になった（**ｐ＜０.０１）。
【００７４】
薬剤併用試験（図３Ｂ）において、腫瘍確立のためホタルルシフェラーゼ（６ｘ１０５細胞／注射）を発現しているＮＣＩ−Ｈ４４１細胞が外側尾静脈からＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（４〜６週齢）に注射された。腫瘍注射の１週間後、マウスは次の異なる群：対照群、プロクロルペラジン（１ｍｇ／ｋｇ）とペメトレキセド（１ｍｇ／ｋｇ）（ＮＳＣＬＣ向けの標準化学療法薬剤）併用群、ペメトレキセド（１ｍｇ／ｋｇ）とシスプラチン（１ｍｇ／ｋｇ）併用群、ペメトレキセド（１ｍｇ／ｋｇ）とプロクロルペラジン（１ｍｇ／ｋｇ）併用群に無作為に分けられた。興味深いことに、我々の投与量レジメンを使用して、シスプラチン（１ｍｇ／ｋｇで）とペメトレキセドの併用による腫瘍成長に対する抑制効果は、ペメトレキセド単独（１ｍｇ／ｋｇ）群のそれと有意な差はないことが分かった（図３Ｂ参照）。しかしながら、プロクロルペラジンとペメトレキセドの併用は他のどの群よりも有意に高い腫瘍抑制効果を示した（*ｐ＜０.０５）。
【００７５】
他の薬剤併用試験では、ＣＬ９７（図３Ｃ）とＣＬ１５２（図３Ｄ）細胞がＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（メス、４〜６週齢）の右脇腹皮下に注入された。腫瘍注入の１週間後マウスは、対照群（ＤＭＳＯビークル）とプロクロルペラジン治療群（５ｍｇ／ｋｇ）、標準治療群（５０ｍｇ／ｋｇ ペメトレキセドまたは６０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンと３ｍｇ／ｋｇのシスプラチンの併用）、併用群（標準治療と５ｍｇ／ｋｇ プロクロルペラジンの併用）に無作為に群分けされた。動物データから、プロクロルペラジン単独で腫瘍成長を抑制でき（*ｐ＜０.０５、***ｐ＜０.００１）、標準治療とプロクロルペラジンの併用は、他の治療よりも有意な腫瘍成長の抑制効果を示した（**ｐ＜０.０１、***ｐ＜０.００１）。
【００７６】
プロクロルペラジンが薬剤耐性を克服できるか否かを調べるために、ＣＬ９７（ＥＧＦＲ Ｔ７９０ＭとＧ７１９Ａ変異）細胞がＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（メス、４〜６週齢）の右脇腹皮下に注入された。腫瘍注入の１週間後マウスは、対照群（ＤＭＳＯビークル）とプロクロルペラジン治療群（５ｍｇ／ｋｇ）、標的治療群（１００ｍｇ／ｋｇゲフィチニブ）、併用群（１００ｍｇ／ｋｇのゲフィチニブと、５ｍｇ／ｋｇのプロクロルペラジン併用）に無作為に群分けされた。図３Eに示すように、ゲフィチニブ単独では腫瘍成長の抑制効果がなかった。しかしながら、プロクロルペラジン単独またはゲフィチニブとの併用は、腫瘍成長の抑制に有意な効果を示した（***ｐ＜０.００１）。証拠に基づき、プロクロルペラジンは化学療法または標的治療の感作を通じて薬剤耐性を克服できる可能性がある。この発見は、プロクロルペラジンを将来的に化学療法または標的治療の臨床的アジュバント治療薬剤として検討できる可能性を示唆している。
【００７７】
プロクロルペラジン治療後の臨床事例
【００７８】
本発明の概念を実証するために、プロクロルペラジン（図では薬剤Ｐと表示）の臨床的観察研究が行われた（図４から図６を参照）。患者には、タルセバTM（有効成分としてエルロチニブを含む）で治療を受けた肺扁平上皮がん患者（図４に示す）、ペメトレキセドで治療を受けた肺腺がん患者（図５に示す）、シスプラチン、５−フルオロウラシル、イリノテカン、パクリタキセル、ゲムシタビン、アバスチン、ＴＳ−１、オキサリプラチン、パクリタキセル／５−フルオロウラシル、アバスチン／ゲムシタビン／ＴＳ−１を含む複数の種類の化学療法の併用で治療を受け、プロクロルペラジンの投与も受けた印環細胞がん患者（図６に示す）が含まれる。患者は安定または腫瘍減少条件下にあったことが観察された。観察では、現行の治療へのプロクロルペラジン追加が患者にメリットを提供することが示唆された。他の事例では、複数の患者がプロクロルペラジンを１年以上使用し、現在の用量が最小限の副作用で許容可能であることが示唆された。さらに、プロクロルペラジンの追加は患者ががんを進行させることなく疾病をコントロールし、患者がより長く生きることを可能にするために役立つ維持治療とみなすことができる。プロクロルペラジン治療後の客観的奏効率（ＯＲＲ）、無増悪生存率（ＰＦＳ）、全生存（ＯＳ）の中央値を含むデータに照らすと、患者の疾病の状態は効果的に安定が維持され、患者の生存延長が観察された（図７Ａと図７Ｂ）。
【００７９】
プロクロルペラジンと化学療法の併用がさまざまながん患者に対し、特に薬剤耐性の克服とがん転移の防止をはじめとする、治療のメリットを提供できる可能性があると結論付けることができる。
【００８０】
本発明の属する技術分野において通常の知識を有する者であれば、さらなる例示の必要なく、前述の説明に基づいて本発明を最大の範囲で利用することが可能であろう。したがって、前述の説明および請求項は、本発明の範囲をいかなる方法でも限定するためではなく、例示を目的としたものと理解されるべきである。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【国際調査報告】
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