(57)【要約】（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドの新規な結晶形、前記結晶形を含有する医薬組成物、および疼痛、がん、炎症、神経変性疾患またはＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ感染症の処置における前記結晶形の使用が開示される。一部の実施形態では、新規な結晶形は、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩の安定な多形を含む。本発明はさらに、新規な結晶形を調製する方法を対象とする。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１３】
2017535550.tif 000049
を有する、結晶形（Ｉ−ＨＳ）。
【請求項２】
１８．４±０．２、２０．７±０．２、２３．１±０．２、および２４．０±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる、請求項１に記載の結晶形。
【請求項３】
１０．７±０．２、１８．４±０．２、２０．７±０．２、２３．１±０．２、および２４．０±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる、請求項１に記載の結晶形。
【請求項４】
１０．７±０．２、１８．４±０．２、１９．２±０．２、２０．２±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２３．１±０．２、および２４．０±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる、請求項１に記載の結晶形。
【請求項５】
１０．７±０．２、１５．３±０．２、１６．５±０．２、１８．４±０．２、１９．２±０．２、１９．９±０．２、２０．２±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２２．１±０．２、２３．１±０．２、２４．０±０．２、２４．４±０．２、２５．６±０．２、２６．５±０．２、２７．６±０．２、２８．２±０．２、２８．７±０．２、３０．８±０．２、および３８．５±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる、請求項１に記載の結晶形。
【請求項６】
図２９に実質的に示されているＸＲＰＤパターンを有する、請求項１に記載の結晶形。
【請求項７】
示差走査熱量測定によって測定して、約１９３〜約２０５℃の最大値への開始を示す、請求項１に記載の結晶形。
【請求項８】
示差走査熱量測定によって測定して、約２．４１５ｍＷの融解熱を示す、請求項１に記載の結晶形。
【請求項９】
図２６に実質的に示されているＤＳＣサーモグラムを有する、請求項１に記載の結晶形。
【請求項１０】
非吸湿性である、請求項１に記載の結晶形。
【請求項１１】
薬学的に許容される担体および請求項１〜１０のいずれか一項に記載の結晶形を含む医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の結晶形および薬学的に許容される担体を混合することによって作製された医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の結晶形および薬学的に許容される担体を混合することを含む、医薬組成物を作製するための方法。
【請求項１４】
がん、疼痛、炎症、神経変性疾患またはＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ感染症からなる群より選択される障害を処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜１０のいずれか一項に記載の結晶形を、それを必要とする被験体に投与することを含む、方法。
【請求項１５】
Ｔｒｋキナーゼによって媒介されるがんの処置を必要とする被験体において前記がんを処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜１０のいずれか一項に記載の結晶形を、前記被験体に投与することを含む、方法。
【請求項１６】
前記がんが、ＴｒｋＡによって媒介される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記がんが、ＴｒｋＢによって媒介される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記がんが、ＴｒｋＡおよびＴｒｋＢによって媒介される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
Ｔｒｋ関連がんを有すると診断または同定された患者を処置する方法であって、治療有効量の請求項１〜１０のいずれか一項に記載の結晶形を前記被験体に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
がんの処置を必要とする被験体において前記がんを処置するための方法であって、
（ａ）前記がんが、Ｔｒｋキナーゼの過剰発現、活性化、増幅および変異の１つまたは複数と関連するかどうかを決定することと、
（ｂ）前記がんが、Ｔｒｋキナーゼの過剰発現、活性化、増幅および変異の１つまたは複数と関連することが決定される場合、治療有効量の請求項１〜１０のいずれか一項に記載の結晶形を、前記被験体に投与することと
を含む、方法。
【請求項２１】
がんの処置を必要とする被験体において前記がんを処置するための方法であって、
（ａ）前記がんが、Ｔｒｋキナーゼによって媒介されるかどうかを決定することと、
（ｂ）前記がんが、Ｔｒｋキナーゼによって媒介されることが決定される場合、治療有効量の請求項１〜１０のいずれか一項に記載の結晶形を前記被験体に投与することと
を含む、方法。
【請求項２２】
被験体を処置する方法であって、
（ａ）前記被験体が、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくはレベルの調節不全を有するかどうかを決定するために、前記被験体から得られた試料でアッセイを実施することと、
（ｂ）ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有すると決定された被験体に、治療有効量の請求項１〜１０のいずれか一項に記載の結晶形を投与することと
を含む、方法。
【請求項２３】
ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくはレベルの前記調節不全が、Ｔｒｋ融合タンパク質の翻訳をもたらす染色体翻訳である、請求項１９または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記Ｔｒｋ融合タンパク質が、ＴＰ５３−ＴｒｋＡ、ＬＭＮＡ−ＴｒｋＡ、ＣＤ７４−ＴｒｋＡ、ＴＦＧ−ＴｒｋＡ、ＴＰＭ３−ＴｒｋＡ、ＮＦＡＳＣ−ＴｒｋＡ、ＢＣＡＮ−ＴｒｋＡ、ＭＰＲＩＰ−ＴｒｋＡ、ＴＰＲ−ＴｒｋＡ、ＲＦＷＤ２−ＴｒｋＡ、ＩＲＦ２ＢＰ２−ＴｒｋＡ、ＳＱＳＴＭ１−ＴｒｋＡ、ＳＳＢＰ２−ＴｒｋＡ、ＲＡＢＧＡＰ１Ｌ−ＴｒｋＡ、Ｃ１８ＯＲＦ８−ＴｒｋＡ、ＲＮＦ２１３−ＴｒｋＡ、ＴＢＣ１Ｄ２２Ａ−ＴｒｋＡ、Ｃ２０ＯＲＦ１１２−ＴｒｋＡ、ＤＮＥＲ−ＴｒｋＡ、ＡＲＨＧＥＦ２−ＴｒｋＡ、ＣＨＴＯＰ−ＴｒｋＡ、ＰＰＬ−ＴｒｋＡ、ＰＬＥＫＨＡ６−ＴｒｋＡ、ＰＥＡＲ１−ＴｒｋＡ、ＭＲＰＬ２４−ＴｒｋＡ、ＭＤＭ４−ＴｒｋＡ、ＬＲＲＣ７１−ＴｒｋＡ、ＧＲＩＰＡＰ１−ＴｒｋＡ、ＥＰＳ１５−ＴｒｋＡ、ＤＹＮＣ２Ｈ１−ＴｒｋＡ、ＣＥＬ−ＴｒｋＡ、ＥＰＨＢ２−ＴｒｋＡ、ＴＧＦ−ＴｒｋＡ、ＮＡＣＣ２−ＴｒｋＢ、ＱＫＩ−ＴｒｋＢ、ＡＦＡＰ１−ＴｒｋＢ、ＰＡＮ３−ＴｒｋＢ、ＳＱＳＴＭ１−ＴｒｋＢ、ＴＲＩＭ２４−ＴｒｋＢ、ＶＣＬ−ＴｒｋＢ、ＡＧＢＬ４−ＴｒｋＢ、ＤＡＢ２ＩＰ−ＴｒｋＢ、ＥＴＶ６−ＴｒｋＣ、ＢＴＢＤ１−ＴｒｋＣ、ＬＹＮ−ＴｒｋＣ、ＲＢＰＭＳ−ＴｒｋＣ、ＥＭＬ４−ＴｒｋＣ、ＨＯＭＥＲ２−ＴｒｋＣ、ＴＦＧ−ＴｒｋＣ、ＦＡＴ１−ＴｒｋＣ、およびＴＥＬ−ＴｒｋＣからなる群より選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性の前記調節不全が、前記遺伝子の１つまたは複数の点変異である、請求項１９または２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＮＴＲＫ遺伝子が、ＮＴＲＫ１遺伝子であり、前記ＮＴＲＫ１遺伝子の前記１つまたは複数の点変異によって、アミノ酸位置：３３、３３６、３３７、３２４、４２０、４４４、５１７、５３８、６４９、６８２、６８３、７０２、および１８７９の１つまたは複数において置換を有するＴｒｋＡタンパク質の翻訳がもたらされる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ＮＴＲＫ１遺伝子の前記１つまたは複数の点変異によって、アミノ酸置換：Ｒ３３Ｗ、Ａ３３６Ｅ、Ａ３３７Ｔ、Ｒ３２４Ｑ、Ｒ３２４Ｗ、Ｖ４２０Ｍ、Ｒ４４４Ｑ、Ｒ４４４Ｗ、Ｇ５１７Ｒ、Ｇ５１７Ｖ、Ｋ５３８Ａ、Ｒ６４９Ｗ、Ｒ６４９Ｌ、Ｒ６８２Ｓ、Ｖ６８３Ｇ、Ｒ７０２Ｃ、およびＣ１８７９Ｔの１つまたは複数を有するＴｒｋＡタンパク質の翻訳がもたらされる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）濃硫酸を、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドのＥｔＯＨ溶液に添加して、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドの硫酸水素塩を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の溶液にヘプタンを添加して、スラリーを形成するステップと、
（ｃ）前記スラリーを濾過して、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩を単離するステップと、
（ｄ）前記（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩を、水／２−ブタノンの５：９５ｗ／ｗ溶液と混合するステップと、
（ｅ）エタノールの重量パーセントが約０．５％になるまで、ステップ（ｄ）の混合物を撹拌しながら約６５〜７０℃で加熱して、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩の結晶形のスラリーを形成するステップと、
（ｆ）（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩の前記結晶形を、濾過によって単離するステップと
を含む、請求項１に記載の結晶形（Ｉ−ＨＳ）を調製するための方法。
【請求項２９】
（ｂ１）ステップ（ａ）の溶液に、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩を室温でシード添加し、前記溶液を、スラリーが形成されるまで撹拌するステップをさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
この出願は、２０１４年１１月１６日に出願された米国仮出願第６２／０８０，３７４号および２０１５年６月１日に出願された同第６２／１６９，５４５号（これらの両方は、それらの全体が本明細書に援用される）への優先権を主張する。
【０００２】
背景
１．発明の分野
本開示は、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（式Ｉ）および薬学的に許容されるその塩、例えば硫酸水素塩、ならびにＴｒｋファミリータンパク質チロシンキナーゼ阻害を示す上記硫酸水素塩の新規な結晶形、それらを含有する医薬組成物、結晶形を作製する方法、ならびに疼痛、炎症、がん、およびある特定の感染性疾患の処置における化合物および結晶形の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
２．関連技術の説明
Ｔｒｋは、ニューロトロフィン（ＮＴ）と呼ばれる可溶性増殖因子の一群によって活性化される、高親和性受容体チロシンキナーゼである。Ｔｒｋ受容体ファミリーは、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよびＴｒｋＣの３つのメンバーを有する。ニューロトロフィンには、（ｉ）ＴｒｋＡを活性化する神経増殖因子（ＮＧＦ）、（ｉｉ）ＴｒｋＢを活性化する脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）およびＮＴ−４／５、ならびに（ｉｉｉ）ＴｒｋＣを活性化するＮＴ３が含まれる。Ｔｒｋは、ニューロン組織において広く発現し、ニューロン細胞の維持、シグナル伝達および生存に関与する（Ｐａｔａｐｏｕｔｉａｎ，Ａ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、２００１年、１１巻、２７２〜２８０頁）。
【０００４】
近年の文献では、Ｔｒｋの過剰発現、活性化、増幅および／または変異が、神経芽細胞腫（Ｂｒｏｄｅｕｒ，Ｇ．Ｍ．、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００３年、３巻、２０３〜２１６頁）、卵巣がん（Ｄａｖｉｄｓｏｎ．，Ｂ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３年、９巻、２２４８〜２２５９頁）、乳がん（Ｋｒｕｅｔｔｇｅｎら、Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２００６年、１６巻：３０４〜３１０頁）、前立腺がん（Ｄｉｏｎｎｅら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９８年、４巻（８号）：１８８７〜１８９８頁）、膵臓がん（Ｄａｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００６年、２１巻（５号）：８５０〜８５８頁）、多発性骨髄腫（Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２００７年、１７８巻：１〜１０頁）、星状細胞腫および髄芽腫（Ｋｒｕｅｔｔｇｅｎら、Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２００６年、１６巻：３０４〜３１０頁）、神経膠腫（Ｈａｎｓｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７年、１０３巻：２５９〜２７５頁）、メラノーマ２５、甲状腺癌（Ｂｒｚｅｚｉａｎｓｋａら、Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００７年、２８巻（３号）、２２１〜２２９頁）、肺腺癌（Ｐｅｒｅｚ−Ｐｉｎｅｒａら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７年、２９５巻（１＆２号）、１９〜２６頁）、大細胞型神経内分泌腫瘍１９（Ｍａｒｃｈｅｔｔｉら、Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ２００８年、２９巻（５号）、６０９〜６１６頁）、ならびに結腸直腸がん（Ｂａｒｄｅｌｌｉ，Ａ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００３年、３００巻、９４９頁）を含む多くのがんと関連することが示されている。がんの前臨床モデルでは、Ｔｒｋ阻害剤は、腫瘍成長を阻害し、かつ腫瘍転移を停止させるのに有効である。特に、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、ＴｒｋＣおよびＴｒｋ／Ｆｃキメラの非選択的な小分子阻害剤は、腫瘍成長を阻害し、かつ腫瘍転移を停止させるのに有効であった２５（Ｎａｋａｇａｗａｒａ，Ａ．（２００１年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６９巻：１０７〜１１４頁；Ｍｅｙｅｒ，Ｊ．ら（２００７年）Ｌｅｕｋｅｍｉａ、１〜１０頁；Ｐｉｅｒｏｔｔｉａ，Ｍ．Ａ．およびＧｒｅｃｏ  Ａ．、（２００６年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２３２巻：９０〜９８頁；Ｅｒｉｃ  Ａｄｒｉａｅｎｓｓｅｎｓ，Ｅ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（２００８年）６８巻：（２号）３４６〜３５１頁）。したがって、Ｔｒｋキナーゼファミリーの阻害剤は、がんの処置に実用性があると期待される。
【０００５】
さらに、Ｔｒｋ／ニューロトロフィン経路の阻害剤は、疼痛の数々の前臨床動物モデルにおいて有効であることが実証されている。例えば、拮抗性ＮＧＦおよびＴｒｋＡ抗体（例えば、ＲＮ−６２４）は、炎症性および神経障害性疼痛の動物モデル、ならびにヒト臨床治験において有効であることが示されている（Ｗｏｏｌｆ，Ｃ．Ｊ．ら（１９９４年）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ６２巻、３２７〜３３１頁；Ｚａｈｎ，Ｐ．Ｋ．ら（２００４年）Ｊ．Ｐａｉｎ  ５巻、１５７〜１６３頁；ＭｃＭａｈｏｎ，Ｓ．Ｂ．ら（１９９５年）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１巻、７７４〜７８０頁；Ｍａ，Ｑ．Ｐ．およびＷｏｏｌｆ，Ｃ．Ｊ．（１９９７年）Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  ８巻、８０７〜８１０頁；Ｓｈｅｌｔｏｎ，Ｄ．Ｌ．ら（２００５年）Ｐａｉｎ  １１６巻、８〜１６頁；Ｄｅｌａｆｏｙ，Ｌ．ら（２００３年）Ｐａｉｎ  １０５巻、４８９〜４９７頁；Ｌａｍｂ，Ｋ．ら（２００３年）Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｍｏｔｉｌ．１５巻、３５５〜３６１頁；Ｊａｇｇａｒ，Ｓ．Ｉ．ら（１９９９年）Ｂｒ．Ｊ．Ａｎａｅｓｔｈ．８３巻、４４２〜４４８頁）。さらに、近年の文献では、炎症後、後根神経節においてＢＤＮＦレベルおよびＴｒｋＢシグナル伝達が増大することが示されており（Ｃｈｏ，Ｌ．ら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９７年、７４９巻、３５８頁）、いくつかの研究では、ＢＤＮＦ／ＴｒｋＢ経路を介してシグナル伝達を低減する抗体が、ニューロン過剰感作および関連疼痛を阻害することが示されている（Ｃｈａｎｇ−Ｑｉ，Ｌら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｉｎ  ２００８年、４巻：２７頁）。
【０００６】
腫瘍細胞および腫瘍浸潤マクロファージによって分泌されたＮＧＦは、末梢疼痛線維上に位置するＴｒｋＡを直接的に刺激することが示されている。マウスおよびラットの両方における様々な腫瘍モデルを使用して、モノクローナル抗体でＮＧＦを中和すると、モルヒネの最高耐量と類似のまたはそれより高い度合いまで、がん関連疼痛が阻害されることが実証された。さらに、ＢＤＮＦ／ＴｒｋＢ経路の活性化は、炎症性疼痛（Ｍａｔａｙｏｓｈｉ，Ｓ．、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００５年、５６９巻：６８５〜９５頁）、神経障害性疼痛（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｓ．Ｗ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９９年、９６巻：７７１４〜１８頁）および外科的疼痛（ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｐａｉｎ）（Ｌｉ，Ｃ．−Ｑ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｉｎ、２００８年、４巻（２８号）、１〜１１頁）を含む様々なタイプの疼痛のモジュレーターとして、数々の研究に関与している。ＴｒｋＡおよびＴｒｋＢキナーゼは、ＮＧＦによって駆動される生物学的応答のメディエーターとして働くことができるので、ＴｒｋＡおよび／または他のＴｒｋキナーゼ阻害剤は、慢性疼痛状態の有効な処置を提供することができる。
【０００７】
疼痛状態のための現在の処置レジメンは、いくつかのクラスの化合物を利用する。オピオイド（モルヒネなど）には、催吐作用、便秘作用、および負の呼吸作用（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔ）、ならびに嗜癖の潜在可能性を含むいくつもの欠点がある。また、非ステロイド系抗炎症鎮痛薬（ＮＳＡＩＤ、例えばＣＯＸ−１またはＣＯＸ−２タイプ）には、重度疼痛の処置において有効性が不十分であることを含む欠点がある。さらに、ＣＯＸ−１阻害剤は、粘膜の潰瘍を引き起こすおそれがある。したがって、疼痛、特に慢性疼痛を軽減するための、新しくより有効な処置が継続して必要である。
【０００８】
さらに、ニューロトロフィン／Ｔｒｋ経路の阻害は、炎症性疾患の前臨床モデルの処置において有効であることが示されている。例えば、ニューロトロフィン／Ｔｒｋ経路の阻害は、喘息（Ｆｒｅｕｎｄ−Ｍｉｃｈｅｌ，Ｖ；Ｆｒｏｓｓａｒｄ，Ｎ．；Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００８年）、１１７巻（１号）、５２〜７６頁）、間質性膀胱炎（Ｈｕ  Ｖｉｖｉａｎ  Ｙら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ（２００５年）、１７３巻（３号）、１０１６〜２１頁）、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患（Ｄｉ  Ｍｏｌａ，Ｆ．Ｆら、Ｇｕｔ（２０００年）、４６巻（５号）、６７０〜６７８頁）ならびにアトピー性皮膚炎などの炎症性皮膚疾患（Ｄｏｕ，Ｙ．−Ｃ．ら、Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００６年）、２９８巻（１号）、３１〜３７頁）、湿疹および乾癬（Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ，Ｓ．Ｐ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ（２００４年）、１２２巻（３号）、８１２〜８１９頁）を含む炎症性肺疾患の前臨床モデルに関与するとされている。
【０００９】
また、ニューロトロフィン／Ｔｒｋ経路、特にＢＤＮＦ／ＴｒｋＢは、多発性硬化症、パーキンソン病およびアルツハイマー病を含む神経変性疾患の病因に関与するとされている（Ｓｏｈｒａｂｊｉ，Ｆａｒｉｄａ；Ｌｅｗｉｓ，Ｄａｎｉｅｌｌｅ  Ｋ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（２００６年）、２７巻（４号）、４０４〜４１４頁）。ニューロトロフィン（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｎ）／Ｔｒｋ経路のモジュレーションは、これらの疾患および関連疾患の処置において実用性を有することができる。
【００１０】
また、ＴｒｋＡ受容体は、ヒト宿主におけるＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉの寄生生物感染の感染症（シャーガス病）における疾患過程にとって非常に重要であると考えられる（ｄｅ  Ｍｅｌｏ−Ｊｏｒｇｅ，Ｍ．ら、Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  ＆  Ｍｉｃｒｏｂｅ（２００７年）、１巻（４号）、２５１〜２６１頁）。したがって、ＴｒｋＡの阻害は、シャーガス病および関連原虫感染症の処置において実用性を有することができる。
【００１１】
Ｔｒｋ阻害剤は、骨粗鬆症、関節リウマチ、および骨転移などの骨再構築の調節の不均衡に関係する疾患の処置に使用することもできる。骨転移は、頻繁に見られるがんの合併症であり、進行した乳がんまたは前立腺がん（１）の患者の最大７０パーセントに生じ、肺、結腸、胃、膀胱、子宮、直腸、甲状腺、または腎臓の癌腫の患者のおよそ１５〜３０パーセントに生じる。骨溶解性転移は、重度疼痛、病的骨折、致命的な高カルシウム血症、脊髄圧迫、および他の神経圧迫症候群を引き起こすおそれがある。これらの理由により、骨転移は、重篤で費用を要するがんの合併症となっている。したがって、増殖骨芽細胞のアポトーシスを誘導し得る薬剤は、非常に有利となるはずである。ＴｒｋＡおよびＴｒｋＣ受容体の発現は、骨折のマウスモデルにおける骨形成領域に観測されている（Ｋ．Ａｓａｕｍｉら、Ｂｏｎｅ（２０００年）２６巻（６号）６２５〜６３３頁）。さらに、ＮＧＦの局在化が、ほぼすべての骨形成細胞に観測された（Ｋ．Ａｓａｕｍｉら）。近年、ｐａｎ−Ｔｒｋ阻害剤は、ヒトｈＦＯＢ骨芽細胞におけるＴｒｋ受容体の３つすべてに結合するニューロトロフィンによって活性化されたチロシンシグナル伝達を阻害することが実証された（Ｊ．Ｐｉｎｓｋｉら、（２００２年）６２巻、９８６〜９８９頁）。これらのデータは、がん患者の骨転移などの骨再構築疾患を処置するためにＴｒｋ阻害剤を使用する理論的根拠を裏付けている。
【００１２】
疼痛またはがんの処置に有用であるとされるＴｒｋキナーゼのいくつかのクラスの小分子阻害剤が、公知である（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００９年）１９巻（３号））。
【００１３】
国際公開第２００６／１１５４５２号および同第２００６／０８７５３８号は、疼痛またはがんの処置に有用となり得るＴｒｋキナーゼ阻害剤であるとされるいくつかのクラスの小分子を記載している。
【００１４】
ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン化合物が、公知である。例えば、国際公開第２００８／０３７４７７号は、３位にアルキル、アリールまたは複素環式基を担持しているピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン化合物を開示している。これらの化合物は、ＰＩ３Ｋおよび／またはｍＴＯＲ脂質キナーゼ阻害剤であると断定されている。
【００１５】
国際公開第２００８／０５８１２６号は、３位にフェニル基を担持しているピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン化合物を開示している。これらの化合物は、Ｐｉｍ−キナーゼ阻害剤であると断定されている。
【００１６】
米国特許出願公開第２００６／００９４６９９号は、グルココルチコイド受容体アゴニストとの併用治療において使用するための、３位に−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−フェニル、−Ｃ（＝Ｏ）（４−メチルピペリジニル）または−Ｃ（＝Ｏ）ＮＭｅ（ＣＨ２−トリメチルピラゾリル）基を担持しているピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン化合物を開示している。
【００１７】
国際公開第２０１０／０３３９４１号、同第２０１０／０４８３１４号、同第２０１１／００６０７４号、および同第２０１１／１４６３３６号は、Ｔｒｋファミリータンパク質チロシンキナーゼの阻害を示し、疼痛、がん、炎症、神経変性疾患およびある特定の感染性疾患の処置に有用な化合物を開示している。
【００１８】
国際公開第２０１０／０４８３１４号は、実施例１４Ａで、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドの硫酸水素塩を開示している。国際公開第２０１０／０４８３１４号は、その文書の実施例１４Ａの方法に従って調製した場合の、本明細書に記載の特定形態の硫酸水素塩を開示していない。特に、国際公開第２０１０／０４８３１４号は、下記の結晶形（Ｉ−ＨＳ）を開示していない。
【００１９】
本開示に参照されている科学論文、特許公開および出願等を含むすべての文書は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２０】
【特許文献１】国際公開第２００６／１１５４５２号
【特許文献２】国際公開第２００６／０８７５３８号
【特許文献３】国際公開第２００８／０３７４７７号
【特許文献４】国際公開第２００８／０５８１２６号
【特許文献５】米国特許出願公開第２００６／００９４６９９号明細書
【特許文献６】国際公開第２０１０／０３３９４１号
【特許文献７】国際公開第２０１０／０４８３１４号
【特許文献８】国際公開第２０１１／００６０７４号
【特許文献９】国際公開第２０１１／１４６３３６号
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｐａｔａｐｏｕｔｉａｎ，Ａ．ら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、２００１年、１１巻、２７２〜２８０頁
【非特許文献２】Ｂｒｏｄｅｕｒ，Ｇ．Ｍ．、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ  ２００３年、３巻、２０３〜２１６頁
【非特許文献３】Ｄａｖｉｄｓｏｎ．，Ｂ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３年、９巻、２２４８〜２２５９頁
【非特許文献４】Ｋｒｕｅｔｔｇｅｎら、Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２００６年、１６巻：３０４〜３１０頁
【非特許文献５】Ｄｉｏｎｎｅら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９８年、４巻（８号）：１８８７〜１８９８頁
【非特許文献６】Ｄａｎｇら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２００６年、２１巻（５号）：８５０〜８５８頁
【非特許文献７】Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ２００７年、１７８巻：１〜１０頁
【非特許文献８】Ｋｒｕｅｔｔｇｅｎら、Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２００６年、１６巻：３０４〜３１０頁
【非特許文献９】Ｈａｎｓｅｎら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７年、１０３巻：２５９〜２７５頁
【非特許文献１０】Ｂｒｚｅｚｉａｎｓｋａら、Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２００７年、２８巻（３号）、２２１〜２２９頁
【非特許文献１１】Ｐｅｒｅｚ−Ｐｉｎｅｒａら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２００７年、２９５巻（１＆２号）、１９〜２６頁
【非特許文献１２】Ｍａｒｃｈｅｔｔｉら、Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ２００８年、２９巻（５号）、６０９〜６１６頁
【非特許文献１３】Ｂａｒｄｅｌｌｉ，Ａ．、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００３年、３００巻、９４９頁
【非特許文献１４】Ｎａｋａｇａｗａｒａ，Ａ．（２００１年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６９巻：１０７〜１１４頁
【非特許文献１５】Ｍｅｙｅｒ，Ｊ．ら（２００７年）Ｌｅｕｋｅｍｉａ、１〜１０頁
【非特許文献１６】Ｐｉｅｒｏｔｔｉａ，Ｍ．Ａ．およびＧｒｅｃｏ  Ａ．、（２００６年）Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２３２巻：９０〜９８頁
【非特許文献１７】Ｅｒｉｃ  Ａｄｒｉａｅｎｓｓｅｎｓ，Ｅ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ（２００８年）６８巻：（２号）３４６〜３５１頁
【非特許文献１８】Ｗｏｏｌｆ，Ｃ．Ｊ．ら（１９９４年）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ６２巻、３２７〜３３１頁
【非特許文献１９】Ｚａｈｎ，Ｐ．Ｋ．ら（２００４年）Ｊ．Ｐａｉｎ  ５巻、１５７〜１６３頁
【非特許文献２０】ＭｃＭａｈｏｎ，Ｓ．Ｂ．ら（１９９５年）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１巻、７７４〜７８０頁
【非特許文献２１】Ｍａ，Ｑ．Ｐ．およびＷｏｏｌｆ，Ｃ．Ｊ．（１９９７年）Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  ８巻、８０７〜８１０頁
【非特許文献２２】Ｓｈｅｌｔｏｎ，Ｄ．Ｌ．ら（２００５年）Ｐａｉｎ  １１６巻、８〜１６頁
【非特許文献２３】Ｄｅｌａｆｏｙ，Ｌ．ら（２００３年）Ｐａｉｎ  １０５巻、４８９〜４９７頁
【非特許文献２４】Ｌａｍｂ，Ｋ．ら（２００３年）Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｍｏｔｉｌ．１５巻、３５５〜３６１頁
【非特許文献２５】Ｊａｇｇａｒ，Ｓ．Ｉ．ら（１９９９年）Ｂｒ．Ｊ．Ａｎａｅｓｔｈ．８３巻、４４２〜４４８頁
【非特許文献２６】Ｃｈｏ，Ｌ．ら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １９９７年、７４９巻、３５８頁
【非特許文献２７】Ｃｈａｎｇ−Ｑｉ，Ｌら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｉｎ  ２００８年、４巻：２７頁
【非特許文献２８】Ｍａｔａｙｏｓｈｉ，Ｓ．、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００５年、５６９巻：６８５〜９５頁
【非特許文献２９】Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｓ．Ｗ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９９年、９６巻：７７１４〜１８頁
【非特許文献３０】Ｌｉ，Ｃ．−Ｑ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｉｎ、２００８年、４巻（２８号）、１〜１１頁
【非特許文献３１】Ｆｒｅｕｎｄ−Ｍｉｃｈｅｌ，Ｖ；Ｆｒｏｓｓａｒｄ，Ｎ．；Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（２００８年）、１１７巻（１号）、５２〜７６頁
【非特許文献３２】Ｈｕ  Ｖｉｖｉａｎ  Ｙら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ（２００５年）、１７３巻（３号）、１０１６〜２１頁
【非特許文献３３】Ｄｉ  Ｍｏｌａ，Ｆ．Ｆら、Ｇｕｔ（２０００年）、４６巻（５号）、６７０〜６７８頁
【非特許文献３４】Ｄｏｕ，Ｙ．−Ｃ．ら、Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００６年）、２９８巻（１号）、３１〜３７頁
【非特許文献３５】Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ，Ｓ．Ｐ．ら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ（２００４年）、１２２巻（３号）、８１２〜８１９頁
【非特許文献３６】Ｓｏｈｒａｂｊｉ，Ｆａｒｉｄａ；Ｌｅｗｉｓ，Ｄａｎｉｅｌｌｅ  Ｋ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ（２００６年）、２７巻（４号）、４０４〜４１４頁
【非特許文献３７】ｄｅ  Ｍｅｌｏ−Ｊｏｒｇｅ，Ｍ．ら、Ｃｅｌｌ  Ｈｏｓｔ  ＆  Ｍｉｃｒｏｂｅ（２００７年）、１巻（４号）、２５１〜２６１頁
【非特許文献３８】Ｋ．Ａｓａｕｍｉら、Ｂｏｎｅ（２０００年）２６巻（６号）６２５〜６３３頁
【非特許文献３９】Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００９年）１９巻（３号）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２２】
本開示は、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（式Ｉ）および薬学的に許容されるその塩、例えば硫酸水素塩、ならびにＴｒｋファミリータンパク質チロシンキナーゼの阻害を示す上記硫酸水素塩の新規な結晶形、それらを含有する医薬組成物、結晶形を作製する方法、ならびに疼痛、炎症、がん、およびある特定の感染性疾患の処置における化合物および結晶形の使用に関する。
【００２３】
本明細書では、式Ｉ：
【化１】
2017535550.tif 000002
の化合物の新規な結晶形が提供され、これは、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドとしても公知である。特に、新規な結晶形は、以下、結晶形（Ｉ−ＨＳ）およびＬＯＸＯ−１０１と呼ばれる、安定な多形形態の式Ｉの化合物の硫酸水素塩を含み、例えばそのＸ線回折パターンによって特徴付けることができ、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、式：
【化２】
2017535550.tif 000003
を有する。
【００２４】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１８．４±０．２、２０．７±０．２、２３．１±０．２、および２４．０±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１０．７±０．２、１８．４±０．２、２０．７±０．２、２３．１±０．２、および２４．０±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１０．７±０．２、１８．４±０．２、１９．２±０．２、２０．２±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２３．１±０．２、および２４．０±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１０．７±０．２、１５．３±０．２、１６．５±０．２、１８．４±０．２、１９．２±０．２、１９．９±０．２、２０．２±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２２．１±０．２、２３．１±０．２、２４．０±０．２、２４．４±０．２、２５．６±０．２、２６．５±０．２、２７．６±０．２、２８．２±０．２、２８．７±０．２、３０．８±０．２、および３８．５±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。
【００２５】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、図２９に実質的に示されているＸＲＰＤパターンを有する。
【００２６】
一部の実施形態では、結晶形は、示差走査熱量測定によって測定して、約１９３〜約２０５℃の最大値への開始（ｏｎｓｅｔ）を示す。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、示差走査熱量測定によって測定して、約２．４１５ｍＷの融解熱を示す。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、図２６に実質的に示されているＤＳＣサーモグラムを有する。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、非吸湿性である。
【００２７】
一部の実施形態は、薬学的に許容される担体および結晶形（Ｉ−ＨＳ）を含む医薬組成物を含む。一部の実施形態は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）および薬学的に許容される担体を混合することによって作製された医薬組成物を含む。一部の実施形態は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）および薬学的に許容される担体を混合することを含む、医薬組成物を作製する方法を含む。
【００２８】
本開示はまた、がん、疼痛、炎症、およびある特定の感染性疾患を処置するための方法であって、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）を、それを必要とする被験体に投与することを含む方法に関する。一部の実施形態は、それを必要とする被験体のがん、疼痛、炎症、およびある特定の感染性疾患を処置するための医薬の調製における結晶形（Ｉ−ＨＳ）の使用を含む。
【００２９】
また本明細書では、それを必要とする被験体のＴｒｋキナーゼによって媒介されるがんを処置する方法であって、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）を被験体に投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態では、がんは、Ｔｒｋ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＡおよびＴｒｋＢによって媒介される。一部の実施形態では、患者は、Ｔｒｋ関連がんを有すると診断または同定されている。
【００３０】
さらに本明細書では、それを必要とする被験体のがんを処置するための方法であって、（ａ）がんが、Ｔｒｋキナーゼの過剰発現、活性化、増幅および変異の１つまたは複数と関連するかどうかを決定することと、（ｂ）がんが、Ｔｒｋキナーゼの過剰発現、活性化、増幅および変異の１つまたは複数と関連することが決定される場合、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）を、被験体に投与することとを含む方法が提供される。一部の実施形態では、それを必要とする被験体のがんを処置するための方法であって、（ａ）がんが、Ｔｒｋキナーゼによって媒介されるかどうかを決定することと、（ｂ）がんが、Ｔｒｋキナーゼによって媒介されることが決定される場合、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）を被験体に投与することとを含む方法が提供される。また本明細書では、被験体を処置する方法であって、（ａ）被験体が、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくはレベルの調節不全を有するかどうかを決定するために、被験体から得られた試料でアッセイを実施することと、（ｂ）ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有すると決定された被験体に、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）を投与することとを含む方法が提供される。
【００３１】
一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくはレベルの調節不全は、Ｔｒｋ融合タンパク質の翻訳をもたらす染色体翻訳である。例えば、Ｔｒｋ融合タンパク質は、ＴＰ５３−ＴｒｋＡ、ＬＭＮＡ−ＴｒｋＡ、ＣＤ７４−ＴｒｋＡ、ＴＦＧ−ＴｒｋＡ、ＴＰＭ３−ＴｒｋＡ、ＮＦＡＳＣ−ＴｒｋＡ、ＢＣＡＮ−ＴｒｋＡ、ＭＰＲＩＰ−ＴｒｋＡ、ＴＰＲ−ＴｒｋＡ、ＲＦＷＤ２−ＴｒｋＡ、ＩＲＦ２ＢＰ２−ＴｒｋＡ、ＳＱＳＴＭ１−ＴｒｋＡ、ＳＳＢＰ２−ＴｒｋＡ、ＲＡＢＧＡＰ１Ｌ−ＴｒｋＡ、Ｃ１８ＯＲＦ８−ＴｒｋＡ、ＲＮＦ２１３−ＴｒｋＡ、ＴＢＣ１Ｄ２２Ａ−ＴｒｋＡ、Ｃ２０ＯＲＦ１１２−ＴｒｋＡ、ＤＮＥＲ−ＴｒｋＡ、ＡＲＨＧＥＦ２−ＴｒｋＡ、ＣＨＴＯＰ−ＴｒｋＡ、ＰＰＬ−ＴｒｋＡ、ＰＬＥＫＨＡ６−ＴｒｋＡ、ＰＥＡＲ１−ＴｒｋＡ、ＭＲＰＬ２４−ＴｒｋＡ、ＭＤＭ４−ＴｒｋＡ、ＬＲＲＣ７１−ＴｒｋＡ、ＧＲＩＰＡＰ１−ＴｒｋＡ、ＥＰＳ１５−ＴｒｋＡ、ＤＹＮＣ２Ｈ１−ＴｒｋＡ、ＣＥＬ−ＴｒｋＡ、ＥＰＨＢ２−ＴｒｋＡ、ＴＧＦ−ＴｒｋＡ、ＮＡＣＣ２−ＴｒｋＢ、ＱＫＩ−ＴｒｋＢ、ＡＦＡＰ１−ＴｒｋＢ、ＰＡＮ３−ＴｒｋＢ、ＳＱＳＴＭ１−ＴｒｋＢ、ＴＲＩＭ２４−ＴｒｋＢ、ＶＣＬ−ＴｒｋＢ、ＡＧＢＬ４−ＴｒｋＢ、ＤＡＢ２ＩＰ−ＴｒｋＢ、ＥＴＶ６−ＴｒｋＣ、ＢＴＢＤ１−ＴｒｋＣ、ＬＹＮ−ＴｒｋＣ、ＲＢＰＭＳ−ＴｒｋＣ、ＥＭＬ４−ＴｒｋＣ、ＨＯＭＥＲ２−ＴｒｋＣ、ＴＦＧ−ＴｒｋＣ、ＦＡＴ１−ＴｒｋＣ、およびＴＥＬ−ＴｒｋＣからなる群より選択される。
【００３２】
一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性の調節不全（ｄｙｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）は、遺伝子の１つまたは複数の点変異である。例えば、ＮＴＲＫ遺伝子は、ＮＴＲＫ１遺伝子であり、ＮＴＲＫ１遺伝子の１つまたは複数の点変異によって、アミノ酸位置：３３、３３６、３３７、３２４、４２０、４４４、５１７、５３８、６４９、６８２、６８３、７０２、および１８７９の１つまたは複数において置換を有するＴｒｋＡタンパク質の翻訳がもたらされる。一部の実施形態では、ＮＴＲＫ１遺伝子の１つまたは複数の点変異によって、アミノ酸置換：Ｒ３３Ｗ、Ａ３３６Ｅ、Ａ３３７Ｔ、Ｒ３２４Ｑ、Ｒ３２４Ｗ、Ｖ４２０Ｍ、Ｒ４４４Ｑ、Ｒ４４４Ｗ、Ｇ５１７Ｒ、Ｇ５１７Ｖ、Ｋ５３８Ａ、Ｒ６４９Ｗ、Ｒ６４９Ｌ、Ｒ６８２Ｓ、Ｖ６８３Ｇ、Ｒ７０２Ｃ、およびＣ１８７９Ｔの１つまたは複数を有するＴｒｋＡタンパク質の翻訳がもたらされる。
【００３３】
この概要および以下の詳細な説明に記載の特徴および利点は、包括的なものではない。当業者には、多くの追加の特徴および利点が、本明細書の図、明細書および特許請求の範囲を考慮して明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】図１は、一実施形態による、実施例２に従って調製された結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００３５】
【図２】図２は、一実施形態による、実施例２に従って調製された結晶形（Ｉ−ＨＳ）の同時熱重量／示差熱分析器（ＴＧ／ＤＴＡ）プロファイルを示す。
【００３６】
【図３】図３は、一実施形態による、実施例２に従って調製された結晶形（Ｉ−ＨＳ）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルを示す。
【００３７】
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、一部の実施形態による、実施例２に従って調製された結晶形（Ｉ−ＨＳ）の（Ａ）非偏光および（Ｂ）偏光の下での偏光顕微鏡（ＰＬＭ）画像を示す。
【００３８】
【図５】図５は、一実施形態による、実施例２に従って調製された結晶形（Ｉ−ＨＳ）の動的蒸気吸着（ＤＶＳ）等温線プロファイルを示す。
【００３９】
【図６】図６は、一実施形態による、実施例２に従って調製された結晶形（Ｉ−ＨＳ）の赤外（ＩＲ）分光法プロファイルを示す。
【００４０】
【図７】図７は、一実施形態による、式Ｉの化合物の非晶質遊離塩基形態のＸＲＰＤパターンを示す。
【００４１】
【図８】図８は、ＭＰＲＩＰ−ＮＴＲＫ１融合タンパク質を有するＣＵＴＯ−３Ｆ肺腺癌細胞の増殖の、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を使用する用量依存的阻害を示すグラフである。
【００４２】
【図９】図９は、ＴＰＭ３−ＮＴＲＫ１融合タンパク質を有するＫＭ１２結腸直腸がん細胞の増殖の、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を使用する用量依存的阻害を示すグラフである。
【００４３】
【図１０】図１０は、ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ３融合タンパク質を有するＭＯ−９１急性骨髄性白血病細胞の増殖の、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を使用する用量依存的阻害を示すグラフである。
【００４４】
【図１１】図１１は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）が、ＣＵＴＯ−３Ｆ細胞におけるＭＰＲＩＰ−ＴＲＫＡキナーゼ、ＥＲＫ１／２、およびＫＭ１２細胞におけるＡＫＴ活性の活性化を阻害することを示す免疫ブロットである。細胞を、指示用量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）で２時間処理した。
【００４５】
【図１２】図１２は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）が、ＫＭ１２細胞のＴＰＭ３−ＴＲＫＡキナーゼおよび下流ＥＲＫ１／２およびＡＫＴ活性の活性化を阻害することを示す免疫ブロットである。細胞を、指示用量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）で２時間処理した。
【００４６】
【図１３】図１３は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）が、ＭＯ−９１細胞のＴＥＬ−ＴＲＫＣキナーゼおよびＥＲＫ１／２およびＡＫＴ活性を阻害することを示す免疫ブロットである。細胞を、指示用量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）で２時間処理した。
【００４７】
【図１４】図１４は、患者の腫瘍試料において同定されたＬＭＮＡ−ＮＴＲＫ１遺伝子融合の模式図である。ＬＭＮＡ（ＮＭ＿１７０７０７）の最初の２つのエクソンとＮＴＲＫ１（ＮＭ＿００２５２９）のエクソン１１〜１７の連結。
【００４８】
【図１５】図１５は、ＮＴＲＫ１  ｂｒｅａｋ−ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨアッセイの蛍光顕微鏡写真である。この写真は、対になった緑色（５’ＮＴＲＫ１）および赤色（３’ＮＴＲＫ１）シグナルの両方が、正常遺伝子（黄色矢印）に対応し、腫瘍核（ＤＡＰＩで青色に染色されている）において観測された孤立赤色シグナル（赤色矢印）が、ＮＴＲＫ１遺伝子融合をもたらす染色体欠失を示すことを示している。
【００４９】
【図１６】図１６は、ＬＭＮＡ（５’）およびＮＴＲＫ１（３’）プライマーを使用するＲＴ−ＰＣＲ生成物のＤＮＡシークエンシングのクロマトグラフであり、ＬＭＮＡのエクソン２とＮＴＲＫ１のエクソン１１の間の融合区切り点を示す。
【００５０】
【図１７】図１７は、ＴＲＫ−ＳＨＣ１近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）の模式図である。この図は、腫瘍細胞において近接する（＜４０ｎＭ）ＴＲＫおよびＳＨＣ１タンパク質が検出されることを実証している。使用したＴＲＫ抗体（ウサギ）は、ＴＲＫＡ（ＮＴＲＫ１によってコードされる）、ＴＲＫＢ（ＮＴＲＫ２）、またはＴＲＫＣ（ＮＴＲＫ３）タンパク質のｃ末端を検出することができる。ＳＨＣ１は、ＳＨＣ１抗体（マウス）によって検出される。種に特異的な二次抗体と、共有結合によって付着している相補的なヌクレオチド配列が結合すると、ｉｎ  ｓｉｔｕＰＣＲ反応によってＤＮＡが産生され、そのＤＮＡは、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによって検出され、本方法では赤い点として可視化され得る。アッセイは、ＴＲＫ受容体ファミリーメンバー（ＴＲＫＡ／Ｂ／Ｃ）の活性化機序（野生型の遺伝子融合、変異、または自己分泌／パラ分泌活性化）に関わらず、活性化ＴＲＫを検出する能力を有する。
【００５１】
【図１８】図１８は、ＴＲＫ−ＳＨＣ１のＰＬＡを検証するデータ一式である。（Ａ）ＭＰＲＩＰ−ＮＴＲＫ１遺伝子融合を有する肺腺癌ステージＩＶの患者由来の悪性胸水貯留に由来するＣＵＴＯ−３細胞株に、非標的化対照（ＮＴＣ）ｓｉＲＮＡ、ＮＴＲＫ１指向性ｓｉＲＮＡをトランスフェクトし、または未処理とし（対照）、ＴＲＫＡタンパク質の発現についてアッセイした。ウエスタンブロット分析は、ＴＲＫＡタンパク質レベルが顕著に低下したことを実証しており、見かけの分子量が１７０ｋＤで移動するＭＰＲＩＰ−ＴＲＫＡ融合タンパク質に相当する。ＴＲＫ−ＳＨＣ１のＰＬＡを、（Ａ）と同様に処理した細胞で実施すると、ｓｉＲＮＡ対照（Ｂ）では強い陽性シグナルがあり、ＮＴＲＫ１  ｓｉＲＮＡ（Ｃ）では比例して低下することが実証された。ＣＵＴＯ−３細胞を、ＤＭＳＯ（Ｄ）または濃度１００ｎＭの結晶形（Ｉ−ＨＳ）（Ｅ）で２時間処理すると、対照と比較して、結晶形（Ｉ−ＨＳ）で処理した試料ではＴＲＫＡ−ＳＨＣ１複合体の崩壊が実証された。ＣＵＬＣ００１は、ＣＵＴＯ−３細胞株と同じ腫瘍に由来する患者由来の腫瘍異種移植片（ＰＤＸ）であり、ＭＰＲＩＰ−ＮＴＲＫ１遺伝子融合を有している（示さず）。ＣＵＬＣ００２は、公知の駆動因子を有していない（ＡＬＫ、ＲＯＳ１、ＥＧＦＲ、ＫＲＡＳ、およびＢＲＡＦ陰性）ＮＳＣＬＣ患者由来のＰＤＸであり、ＮＴＲＫ１  ｂｒｅａｋ−ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨではＮＴＲＫ１遺伝子融合に対して陰性である（示さず）。ＴＲＫのＰＬＡ分析は、ＣＵＬＣ００１（Ｆ）腫瘍核では強いシグナルがあるが、ＣＵＬＣ００２（Ｇ）腫瘍核ではシグナルがないことを実証している。パネル（Ｈ）および（Ｉ）は、ＣＵＬＣ００１  ＰＤＸ由来の神経束を示している。ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、またはＴＲＫＣ受容体ファミリーは、神経組織に発現し、他の点では陰性であるこのＣＵＬＣ００２腫瘍試料にとって内部陽性対照として働くので、ＴＲＫ−ＳＨＣ１のＰＬＡは、ＣＵＬＣ００２腫瘍試料のこの領域においてのみ陽性であり、ＴＲＫＡ、ＴＲＫＢ、またはＴＲＫＣ受容体における自己分泌シグナル伝達を示唆している。
【００５２】
【図１９】図１９は、ＴＲＫ  ＳＨＣ１近接ライゲーションアッセイおよび対照の画像である。（Ａ）ＴＲＫ−ＳＨＣ１近接ライゲーションアッセイは、腫瘍核において強いシグナル伝達があるが、壁が厚い血管ではシグナル伝達が弱いことを実証している。核を、ＤＡＰＩ（青色）で染色し、赤色シグナルは、ＴＲＫＡ−ＳＨＣ１タンパク質複合体を示す陽性ＰＬＡを表す。血管は、部分楕円（白色点線）内に示されている。（Ｂ）隣接する腫瘍組織切片は、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色されており、これは壁が厚い血管（白色点線によって示されている部分楕円内）および隣接腫瘍核を示している。
【００５３】
【図２０】図２０は、ＡＬＫ＋腫瘍試料におけるＴＲＫおよびＡＬＫのＰＬＡを示す一組の画像である。ＡＬＫ＋患者（剖検試料）由来のＦＦＰＥ腫瘍試料を、ＴＲＫ−ＳＨＣ１のＰＬＡ（Ａ）を使用してアッセイすると、シグナルが存在しないことが実証され、またはＡＬＫ−ＧＲＢ２のＰＬＡ（Ｂ）を使用してアッセイすると、強いＡＬＫシグナル伝達が示された。
【００５４】
【図２１】図２１は、未分化肉腫を有する被験体から得た、一組の３つのコンピューター断層撮影画像である。ＣＴ画像は、術前化学療法および原発腫瘍切除の後に得た画像（矢印は、１８ｍｍの右肺小結節の存在を示している）（Ａ）、研究で結晶形（Ｉ−ＨＳ）を投与する直前のベースライン画像（Ｂ）、および結晶形（Ｉ−ＨＳ）を１サイクル（２８日）投与した後の画像（Ｃ）である。患者は、肺だけに転移性疾患を有していることが観測され、したがって、ＣＴスキャン画像は、胸腔に焦点を合わせた軸位（上）および冠状断（下）画像を示す。画像は、初期に疾患が急速進行し（Ａ〜Ｂ、１３週間の間隔）、その後、数々の肺転移のサイズ縮小および／または消散と共に顕著な腫瘍応答があった（Ｂ〜Ｃ、４週間の間隔）ことを実証している。
【００５５】
【図２２】図２２は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）で処置した未分化肉腫を有する患者の経時的な血清ＣＡ１２５レベルを示すグラフである。血清ＣＡ１２５レベルは、この患者において上昇することが見出されており、その後、活性の潜在的指標として追跡した。血清ＣＡ１２５を、投与前のベースライン（−８日目）、および投与を開始した−３日目から５６日目の示した時点に採血すると、この腫瘍マーカーの時間依存的低下が実証された。赤色点線は、この実験室試験の正常上限（３５Ｕ／ｍＬ）を示す。
【００５６】
【図２３】図２３は、ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質を有するＨＣＣ７８細胞の増殖の、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を使用する用量依存的阻害を示すグラフである。
【００５７】
【図２４】図２４は、ＡＭ（ＨＳ）１のサーモグラフィーデータを示すグラフである。グラフの上の線は、化合物の熱重量分析（ＴＧＡ）のプロットであり、下の線は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）のプロットである。
【００５８】
【図２５】図２５は、ＡＭ（ＨＳ）２のサーモグラフィーデータを示すグラフである。グラフの上の線は、化合物の熱重量分析（ＴＧＡ）のプロットであり、下の線は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）のプロットである。
【００５９】
【図２６】図２６は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）のサーモグラフィーデータを示すグラフである。グラフの上の線は、化合物の熱重量分析（ＴＧＡ）のプロットであり、下の線は、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）のプロットである。
【００６０】
【図２７】図２７は、ＡＭ（ＨＳ）１、ＡＭ（ＨＳ）２、および結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンのオーバーレイを示す。ＡＭ（ＨＳ）１およびＡＭ（ＨＳ）２は、図のより低い部分にある太い線であり、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、シャープなピークを示している。
【００６１】
【図２８】図２８は、ＡＭ（ＨＳ）１およびＡＭ（ＨＳ）２のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００６２】
【図２９】図２９は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００６３】
【図３０】図３０は、倍率２０倍の偏光顕微鏡下での、ＡＭ（ＨＳ）１の試料の画像である。
【００６４】
【図３１】図３１は、倍率２０倍の偏光顕微鏡下での、ＡＭ（ＨＳ）２の試料の画像である。
【００６５】
【図３２】図３２は、倍率２０倍の偏光顕微鏡下での、結晶形（Ｉ−ＨＳ）の試料の画像である。
【００６６】
【図３３】図３３は、動的蒸気吸着（ＤＶＳ）を使用するＡＭ（ＨＳ）１の吸湿性プロットである。
【００６７】
【図３４】図３４は、ＤＶＳ前（上の線）およびＤＶＳ後（下の線）のＡＭ（ＨＳ）１のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００６８】
【図３５】図３５は、動的蒸気吸着（ＤＶＳ）を使用するＡＭ（ＨＳ）２の吸湿性プロットである。
【００６９】
【図３６】図３６は、ＤＶＳ前（上の線）およびＤＶＳ後（下の線）のＡＭ（ＨＳ）２のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００７０】
【図３７】図３７は、動的蒸気吸着（ＤＶＳ）を使用する結晶形（Ｉ−ＨＳ）の吸湿性プロットである。
【００７１】
【図３８】図３８は、ＤＶＳ前（上の線）およびＤＶＳ後（下の線）の結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを示す。
【００７２】
【図３９】図３９は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）またはＡＭ（ＨＳ）２を組み込んだ様々な直接圧縮ブレンドの圧縮物２００ｍｇに関する、引張り強さ対圧縮圧のプロットである。プロットでは、（１）は、ＡＭ（ＨＳ）２と２：１のＭＣＣ：ラクトースのブレンドであり、（２）は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）と２：１のＭＣＣ：ラクトースのブレンドであり、（３）は、ＡＭ（ＨＳ）２と１：１のＭＣＣ：デンプンのブレンドであり、（４）は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）と１：１のＭＣＣ：デンプンのブレンドである。
【００７３】
【図４０】図４０は、Ｔ０（下の線）および４０℃／７５％ＲＨで５週間後（上の線）におけるＡＭ（ＨＳ）１のＤＳＣサーモグラフのオーバーレイである。
【００７４】
【図４１】図４１は、Ｔ０（下の線）および４０℃／７５％ＲＨで５週間後（上の線）における結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＤＳＣサーモグラフのオーバーレイである。
【００７５】
【図４２】図４２は、Ｔ０（太い線）および４０℃／７５％ＲＨで５週間後（シャープなピーク）におけるＡＭ（ＨＳ）１のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンのオーバーレイを示す。
【００７６】
【図４３】図４３は、Ｔ０（下）および４０℃／７５％ＲＨで５週間後（上）における結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンのオーバーレイを示す。
【００７７】
【図４４】図４４は、４０℃／７５％ＲＨで５週間後における結晶形（Ｉ−ＨＳ）（下）およびＡＭ（ＨＳ）１（上）のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンのオーバーレイを示す。
【００７８】
【図４５】図４５は、マウスへの異種移植片の植込み後、ビヒクル（三角）で処置した、または１日用量６０ｍｇ／ｋｇの結晶形（Ｉ−ＨＳ）（丸）もしくは２００ｍｇ／ｋｇの結晶形（Ｉ−ＨＳ）（四角）を経口投与したマウスの肺腺癌ＣＵＴＯ−３Ｆ細胞株（ＣＵＴＯ−３．２９）に由来する異種移植（ｘｅｎｏｇｒａｐｈ）（ヒト）腫瘍の経時的な体積変化百分率を示すグラフである。
【００７９】
【図４６】図４６は、マウスへの異種移植片の植込み後、ビヒクル（三角）で処置した、または１日用量６０ｍｇ／ｋｇの結晶形（Ｉ−ＨＳ）（丸）もしくは２００ｍｇ／ｋｇの結晶形（Ｉ−ＨＳ）（四角）を経口投与したマウスの結腸直腸がんＫＭ１２細胞株に由来する異種移植（ヒト）腫瘍の経時的な体積変化百分率を示すグラフである。
【００８０】
【図４７】図４７は、マウスへの異種移植片の植込み後、ビヒクル（三角）で処置した、または１日用量６０ｍｇ／ｋｇの結晶形（Ｉ−ＨＳ）（丸）もしくは２００ｍｇ／ｋｇの結晶形（Ｉ−ＨＳ）（四角）を経口投与したマウスの急性骨髄性白血病ＭＯ−９１細胞株に由来する異種移植（ヒト）腫瘍の経時的な体積変化百分率を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００８１】
図は、単に例示目的で本発明の様々な実施形態を示す。当業者は、本明細書に例示の構造および方法の代替実施形態が、本明細書に記載の本発明の原理から逸脱することなく用いることができることを、以下の議論から容易に認識されよう。
【００８２】
詳細な説明
本開示は、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（式Ｉ）および薬学的に許容されるその塩、例えば硫酸水素塩、ならびにさらにはＴｒｋファミリータンパク質チロシンキナーゼを阻害する上記硫酸水素塩の新規な結晶形、それらを含有する医薬組成物、ならびに結晶形を作製する方法に関する。
【００８３】
本明細書では、式Ｉ：  
【化３】
2017535550.tif 000004
の化合物の新規な結晶形が提供される。
特に、新規な結晶形は、以下、結晶形（Ｉ−ＨＳ）と呼ばれる安定な多形形態の式Ｉの化合物の硫酸水素塩を含み、例えばそのＸ線回折パターンによって特徴付けることができる。
【００８４】
図１に示されている通り、一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、そのＸ線粉末回折パターン（ＸＲＰＤ）によって特徴付けることができる。ＸＲＰＤは、Ｓｉｅｍｅｎｓ製のＣｕＫα１、０．１５４０５６２ｎｍ長の高精度焦点封止管供給源を備えたＤ５０００Ｘ線回折計で、試料を３〜４０°２シータでステップサイズ０．０２００°２シータおよび１ステップあたり１秒の時間により走査することによって行った。有効な走査速度は、機器電圧４０ｋＶおよび電流設定４０ｍＡで０．０２００°／秒であった。試料を、反射モードでサイズ２ｍｍの発散スリットを使用して、以下の実験条件で分析した。
【００８５】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、表１に列挙されている通り、少なくとも２０個の特徴的なピーク（２θ度±０．３）を有するＸＲＰＤパターンを有する。
【表１】
2017535550.tif 000005
【００８６】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、表２に列挙されている通り、少なくとも８個の特徴的なピーク（２θ度±０．３）を有するＸＲＰＤパターンを有しており、このパターンは、約１５％またはそれ超の相対的強度を有するピークを含む。
【表２】
2017535550.tif 000006
【００８７】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、表３に列挙されている通り、少なくとも５個の特徴的なピーク（２θ度±０．３）を有するＸＲＰＤパターンを有しており、このパターンは、約２５％またはそれ超の相対的強度を有するピークを含む。
【表３】
2017535550.tif 000007
【００８８】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、表４に列挙されている通り、少なくとも４個の特徴的なピーク（２θ度±０．３）を有するＸＲＰＤパターンを有しており、このパターンは、約３０％またはそれ超の相対的強度を有するピークを含む。
【表４】
2017535550.tif 000008
【００８９】
ある特定の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、図１に示されているものと実質的に同じＸＲＰＤパターンであるＸＲＰＤパターンを有する。
【００９０】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、約１８．４、２０．６、２３．０、および２４．０のＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、約１０．６、１８．４、２０．６、２３．０、および２４．０におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、約１０．６、１８．４、１９．１、２０．２、２０．６、２１．５、２３．０、および２４．０におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、約１０．６、１５．３、１６．４、１８．４、１９．１、１９．８、２０．２、２０．６、２１．５、２２．０、２３．０、２４．０、２４．４、２５．６、２６．５、２７．５、２８．２、２８．６、３０．８、および３８．５におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。
【００９１】
ある特定の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、図２９に示されているものと実質的に同じＸＲＰＤパターンであるＸＲＰＤパターンを有する。
【００９２】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、表１に列挙されている通り、少なくとも２０個の特徴的なピーク（２θ度±０．３）を有するＸＲＰＤパターンを有している。
【表５】
2017535550.tif 000009
【００９３】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、表６に列挙されている通り、少なくとも８個の特徴的なピーク（２θ度±０．３）を有するＸＲＰＤパターンを有しており、このパターンは、約１５％またはそれ超の相対的強度を有するピークを含む。
【表６】
2017535550.tif 000010
【００９４】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、表７に列挙されている通り、少なくとも５個の特徴的なピーク（２θ度±０．３）を有するＸＲＰＤパターンを有しており、このパターンは、約２５％またはそれ超の相対的強度を有するピークを含む。
【表７】
2017535550.tif 000011
【００９５】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、表８に列挙されている通り、少なくとも４個の特徴的なピーク（２θ度±０．３）を有するＸＲＰＤパターンを有しており、このパターンは、約３０％またはそれ超の相対的強度を有するピークを含む。
【表８】
2017535550.tif 000012
【００９６】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、約１８．５、２０．７、２３．２、および２４．１におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、約１０．８、１８．５、２０．７、２３．２、および２４．１におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、約１０．８、１８．５、１９．２、２０．３、２０．７、２１．６、２３．２、および２４．１におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、約１０．８、１５．４、１６．５、１８．５、１９．２、１９．９、２０．３、２０．７、２１．６、２２．２、２３．２、２４．１、２４．５、２５．７、２６．５、２７．６、２８．３、２８．７、３０．９、および３８．６におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。
【００９７】
一部の実施形態では、図１および２９に提示されているＸＲＰＤパターンを考慮すると、結晶形（ｆｅｏｒｍ）（Ｉ−ＨＳ）は、表９に示されているＸＲＰＤピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。
【表９】
2017535550.tif 000013
【００９８】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１８．４±０．２、２０．７±０．２、２３．１±０．２、および２４．０±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１０．７±０．２、１８．４±０．２、２０．７±０．２、２３．１±０．２、および２４．０±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）を有することによって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１０．７±０．２、１８．４±０．２、１９．２±０．２、２０．２±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２３．１±０．２、および２４．０±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）によって特徴付けられる。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１０．７±０．２、１５．３±０．２、１６．５±０．２、１８．４±０．２、１９．２±０．２、１９．９±０．２、２０．２±０．２、２０．７±０．２、２１．５±０．２、２２．１±０．２、２３．１±０．２、２４．０±０．２、２４．４±０．２、２５．６±０．２、２６．５±０．２、２７．６±０．２、２８．２±０．２、２８．７±０．２、３０．８±０．２、および３８．５±０．２におけるＸＲＰＤ回折ピーク（２θ度）によって特徴付けられる。
【００９９】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＸ線粉末回折パターンの２シータ値は、機器ごとに、また試料調製の変動およびバッチ間の変動に応じてわずかに変わる場合があり、したがって、引用された値は、絶対的なものと解釈されるべきではないことが理解されよう。ピークの相対的強度は、配向効果に応じて変わり得るので、本明細書に含まれるＸＲＰＤトレースに示されている強度は例示的であり、絶対比較で使用されるものではないことも理解されよう。したがって、「図１または図２９に示されているものと実質的に同じＸＲＰＤパターン」という句は、比較目的で、図１または図２９に示されているピークの少なくとも９０％が存在することを意味すると理解されたい。相対的ピーク位置は、図１または図２９に示されているピーク位置から±０．３度変わり得ることを理解されたい。比較目的で、図１および図２９に示されているものから、いくらかピーク強度の変動が許容されることをさらに理解されたい。
【０１００】
図２は、一実施形態による結晶形（Ｉ−ＨＳ）の同時熱重量／示差熱分析器（ＴＧ／ＤＴＡ）プロファイルを示す。分析のために、結晶形（Ｉ−ＨＳ）約５ｍｇを秤量して開口アルミニウム鍋に入れ、同時熱重量／示差熱分析器（ＴＧ／ＤＴＡ）にロードし、室温で保持した。次に、試料を、１０℃／分の速度で２５℃から３００℃まで加熱し、その間の試料重量の変化を、任意の示差熱事象と共に記録した。窒素を、パージガスとして流量１００ｃｍ３／分で使用した。結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＴＧ／ＤＡＴプロファイルは、２７．４℃〜１８２．４℃で０．８％の初期重量減少を示し、その後１８２．４℃〜２２５．０℃でＴＧ曲線の４．９％の重量減少を示したが、これはＤＴＡ曲線の吸熱としても示されている。これらの重量減少は、材料の分解であり得る。
【０１０１】
図３は、一実施形態による結晶形（Ｉ−ＨＳ）の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）プロファイルを示す。試料のＤＳＣ分析を、Ｓｅｉｋｏ  ＤＳＣ６２００示差走査熱量計（冷却器を備えている）を使用して実施した。結晶形（Ｉ−ＨＳ）約５ｍｇを秤量してアルミニウムＤＳＣ鍋に入れ、穿孔されたアルミニウムの蓋で密封せずに封止した。次に、試料鍋をＳｅｉｋｏ  ＤＳＣ６２００（冷却器を備えている）にロードし、冷却し、２５℃で保持した。安定な熱流応答が得られたら、試料および参照を、走査速度１０℃／分で２７０℃まで加熱すると同時に、生じた熱流応答をモニターした。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、図３に実質的に示されているＤＳＣサーモグラムを有する。本明細書で使用される「図３に実質的に示されている」とは、図３に示されている吸熱事象の温度が、約±５℃変わり得ることを意味する。
【０１０２】
図３に示されている通り、結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＤＳＣサーモグラムは、１２２．９℃〜１５２．８℃のベースラインの小さい吸熱変化を示し、その後、融解開始温度１９０．８℃、ピーク融解温度１９７．９℃および融解熱２．４１５ｍＷの結晶形（Ｉ−ＨＳ）の融解に相当するシャープな吸熱を示す。融解吸熱後の遷移は、融解結晶形（Ｉ−ＨＳ）の分解によって引き起こされ得る。
【０１０３】
図４Ａおよび４Ｂは、一部の実施形態による結晶形（Ｉ−ＨＳ）の、（Ａ）非偏光および（Ｂ）偏光の下での偏光顕微鏡（ＰＬＭ）画像を示す。結晶化度（複屈折）の存在を、Ｍｏｔｉｃカメラおよび画像取込みソフトウェア（Ｍｏｔｉｃ  Ｉｍａｇｅｓ  Ｐｌｕｓ  ２．０）を備えたＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＸ５０偏光顕微鏡を使用して決定した。すべての画像を、２０倍対物レンズを使用して記録した。結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、偏光の下で調査すると、明確な形態または凝集体を示すことなく複屈折を示す。
【０１０４】
図５は、一実施形態による結晶形（Ｉ−ＨＳ）の動的蒸気吸着（ＤＶＳ）等温線プロファイルを示す。ＤＶＳ測定のために、結晶形（Ｉ−ＨＳ）試料を、湿度条件を変えることによってサイクルに付して、その吸湿性を決定した。試料を、表面測定システムＤＶＳ−１の動的蒸気吸着システムを使用して分析した。結晶形（Ｉ−ＨＳ）約１０ｍｇを、メッシュ蒸気吸着平衡鍋（ｍｅｓｈ  ｖａｐｏｒ  ｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｂａｌａｎｃｅ  ｐａｎ）に入れ、表面測定システムの一部としての動的蒸気吸着天秤にロードした。データを１分間隔で収集した。窒素をキャリアガスとして使用した。試料採取した結晶形（Ｉ−ＨＳ）を、１０％増分で２０％〜９０％相対湿度（ＲＨ）の傾斜プロファイルに付し、安定な重量が達成されるまで（９９．５％でステップ完了）、各ステップで試料を維持した。吸着サイクルの完了後、試料を、０％ＲＨまで乾燥させ、最後に２０％ＲＨの出発点に戻したことを除いて、同じ手順を使用して乾燥させた。吸着／脱着サイクル中の重量変化をプロットして、試料の吸湿性質の決定を可能にした。
【０１０５】
図５に示されている通り、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、非吸湿性であるように見える。約１．７％の小さい質量増大が、吸着サイクル中、０％〜９０％ＲＨで観測された。さらに、非常に小さいヒステリシスが、吸着サイクルと脱着サイクルの間で観測された。ＤＶＳ分析後の結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＸＲＰＤパターン（示さず）は、図１または図２９に示されているそのＤＶＳ前のＸＲＰＤパターンに類似しているが、このことは、結晶形（Ｉ−ＨＳ）の変化がＤＶＳ中に生じなかったことを示している。
【０１０６】
図６は、一実施形態による式Ｉの化合物の結晶形（Ｉ−ＨＳ）の赤外（ＩＲ）分光法プロファイルを示す。ＩＲ分光法を、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＬＰＨＡ  Ｐ分光計で行った。十分な結晶形（Ｉ−ＨＳ）材料を、分光計プレートの中心上に置き、透過率スペクトルを、４ｃｍ−１の分割、１６回の走査のバックグラウンド走査時間、１６回の走査の試料走査時間を使用し、４０００ｃｍ−１〜４００ｃｍ−１のデータを収集して得た。観測された結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＩＲスペクトルを、図６に示す。
【０１０７】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、驚くべきことに、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩の非晶質形（ＡＭ（ＨＳ））よりも優れたいくつかの特性を有する。例えば、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、その製造可能性および商品の生成に寄与する特性を有する。実施例８に示されている通り、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、Ｃａｒｒ指数およびＨａｕｓｎｅｒ指数によって証明されている通り、非晶質ＡＰＩ（ＡＭ（ＨＳ））と比較してより良好な流動特性を有する。例えば、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、２０％超のＣａｒｒ指数値を有する。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１．３５未満のＨａｕｓｎｅｒ比（例えば、約１．２６〜約１．３４の値）を示す。流動特性の差異によって、固体経口剤形の開発が、結晶性ＡＰＩよりも非晶質ＡＰＩの方が困難になるおそれがある。
【０１０８】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）はまた、ＬＤＰＥバッグ内、４０℃／７５％ＲＨで５週間実施した加速安定性研究において、より良好な安定性を証明した。ＡＭ（ＨＳ）も結晶形（Ｉ−ＨＳ）も、研究過程で化学的不純物レベルの著しい変化を示さなかったが、研究では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）が安定な物理化学的特性を有することが実際に明らかになった。他方では、非晶質ＡＰＩは、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、ＴＧＡ、ＫＦおよび偏光顕微鏡によれば、結晶形（Ｉ−ＨＳ）に実質的に類似した結晶形に変換した。さらに非晶質ＡＰＩは、安定性試験過程において凝集粉末に変化し、流動特性が低下した。保存時に、非晶質粉末（ｐｏｗｅｒ）から流動が低減された結晶性材料および／または凝集粉末への変化を含むこのような変化が化合物の物理的特性に生じると、非晶質化合物に基づいて、患者に使用するための固体経口剤形を製造することは、ほぼ不可能となるはずである。しかし、結晶形（Ｉ−ＨＳ）で観測された特性は、安定な物理的構造および化学的構造の両方を有することを含めて、商品にとって望ましい特性と一致している。
【０１０９】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、前述の通り非吸湿性である。本明細書で使用される「非吸湿性」は、２５℃および８０％ＲＨで２４〜４８時間後に重量増加が２％未満の化合物を指す（例えば、実施例１０参照）。しかしＡＭ（ＨＳ）化合物は、湿度に曝露されると潮解することが見出された。この傾向を考慮すると、ＡＭ（ＨＳ）化合物を使用するには、この形態変化が生じるのを防止するために、保存および製造中に著しい取扱い上の注意が必要となり得るが、結晶形（Ｉ−ＨＳ）では、ＡＰＩの製造中にこのような注意は必要ない。この湿度に対する安定性は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を使用して調製した任意の固体経口投与生成物にも引き継がれると予測され得る。
【０１１０】
最後に、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、非晶質ＡＰＩと比較して著しく改善された不純物プロファイルをもたらす。不純物プロファイルを制御する能力は、患者の安全性、繰り返し可能な製造方法の開発にとって重要であり、ヒトにおける使用前に規制機関による要件を満たすのに重要である。
【０１１１】
本明細書で提供される（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（式Ｉ）および薬学的に許容されるその塩、例えば硫酸水素塩、ならびにさらには硫酸水素塩のさらなる新規な結晶形（結晶形（Ｉ−ＨＳ））を含む化合物は、Ｔｒｋファミリータンパク質チロシンキナーゼの阻害を示し、この化合物、硫酸水素塩、およびその結晶形は、疼痛、炎症、がん、およびある特定の感染性疾患の処置に使用することができる。
【０１１２】
一部の実施形態は、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよび／またはＴｒｋＣキナーゼを阻害することによって処置することができる障害および疾患、例えばＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよび／またはＴｒｋＣ媒介性状態、例えばＴｒｋ関連がんを含む本明細書に記載の１つまたは複数の状態を処置するための、結晶形（Ｉ−ＨＳ）の使用を含む。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、慢性疼痛および急性疼痛を含む疼痛の処置にも有用となり得る。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、炎症性疼痛、神経障害性疼痛、外科的疼痛、ならびにがん、外科手術および骨折と関連する疼痛を含む複数のタイプの疼痛の処置に有用となり得る。さらに、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、炎症、活性な慢性神経変性疾患、およびある特定の感染性疾患の処置に有用となり得る。本開示はさらに、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を含む医薬組成物を対象とする。一部の実施形態では、医薬組成物は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）および薬学的に許容される希釈剤または担体を含む。
【０１１３】
ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよび／またはＴｒｋＣ阻害剤として作用する結晶形（Ｉ−ＨＳ）の能力は、参照によって本明細書に組み込まれる２０１３年８月２０日発行の米国特許第８，５１３，２６３号に開示の実施例ＡおよびＢに記載のアッセイによって実証され得る。
【０１１４】
一部の実施形態では、本明細書において、ＴＲＫ関連がんと診断された患者を処置するための方法であって、患者に治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を投与することを含む方法が提供される。ニューロトロフィン受容体のＴｒｋファミリー、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢおよびＴｒｋＣ（それぞれＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、およびＮＴＲＫ３遺伝子によってコードされる）、ならびにそれらのニューロトロフィンリガンドは、ニューロンの成長、分化および生存を調節する。ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全、例えばＮＴＲＫキナーゼドメインを伴う転座、ＴＲＫリガンド結合部位を伴う変異、ＮＴＲＫ遺伝子の増幅、Ｔｒｋ  ｍＲＮＡスプライスバリアント、およびＴｒｋ自己分泌／パラ分泌シグナル伝達は、多様な腫瘍型において記載されており、腫瘍発生に寄与するおそれがある。近年、ＮＴＲＫ１融合は、肺腺がんの患者のサブセットにおいて記載された２。構成的に活性なＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、およびＴｒｋＣ融合タンパク質の生成をもたらすＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、およびＮＴＲＫ３の転座は、発癌性であり、肺腺癌、甲状腺、頭部および頸部がん、膠芽腫等を含む多種多様な腫瘍型によく見られる。
【０１１５】
一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、野生型ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＣの過剰発現（例えば、自己分泌活性化をもたらす）が含まれる。一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、またはＮＴＫＲ３遺伝子、またはそれらの一部を含む染色体セグメントにおける過剰発現、活性化、増幅または変異が含まれる。一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、それぞれＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、またはＮＴＲＫ３遺伝子融合をもたらす１つまたは複数の染色体転座または逆位が含まれる。一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全は、発現されたタンパク質が、非ＴｒｋＡパートナータンパク質およびＴｒｋＡ、非ＴｒｋＢパートナータンパク質およびＴｒｋＢ、または非ＴｒｋＣパートナータンパク質およびＴｒｋＣタンパク質由来の残基を含有し、それぞれ最小限の機能的ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＣキナーゼドメインを含む融合タンパク質である遺伝的転座の結果である。
【０１１６】
一部の実施形態では、ＴｒｋＡ融合タンパク質は、表１０に示されているＴｒｋＡ融合タンパク質の１つである。
【表１０−１】
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【表１０−２】
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【表１０−３】
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【０１１７】
一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、ＴｒｋＡタンパク質の１つまたは複数の欠失、挿入、または点変異が含まれる。一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、ＴｒｋＡキナーゼドメインの構成的活性をもたらすＴｒｋＡタンパク質からの１つまたは複数の残基の欠失が含まれる。一部の実施形態では、欠失には、ＴｒｋＡアイソフォーム２のアミノ酸３０３〜３７７の欠失が含まれる。
【０１１８】
一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、野生型ＴｒｋＡタンパク質と比較して１つまたは複数のアミノ酸置換を有するＴｒｋＡタンパク質の生成をもたらすＮＴＲＫ１遺伝子の少なくとも１つの点変異が含まれる（例えば、表１１に列挙されている点変異を参照。
【表１１−１】
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【０１１９】
一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、ＴｒｋＡ  ｍＲＮＡのスプライス変異が含まれ、この変異によって、ＴｒｋＡキナーゼドメインの構成的活性をもたらす少なくとも１つの残基が欠失した（野生型ＴｒｋＡタンパク質と比較して）ＴｒｋＡの代替スプライスバリアントである発現されたタンパク質がもたらされる。一部の実施形態では、構成的活性を有するＴｒｋＡの代替スプライス形態は、エクソン８、９、および１１が欠失し、ＴｒｋＡアイソフォーム２と比較して残基１９２〜２８４および３９３〜３９８が欠損している発現されたタンパク質をもたらすか、ＴｒｋＡのエクソン１０が欠失しているか、または膜貫通ドメインの７５アミノ酸が欠失しているＴｒｋＡタンパク質をコードするＮＴＲＫ１遺伝子が欠失している（Ｒｅｕｔｈｅｒら、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ２０巻：８６５５〜８６６６頁、２０００年）。
【０１２０】
ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有するとして同定されたがん（本明細書に引用されている参考文献、ならびにｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖおよびｗｗｗ．ｎｃｃｎ．ｏｒｇウェブサイト参照）には、以下が含まれる。
（Ａ）ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全が、ＴｒｋＡ融合タンパク質をもたらす１つまたは複数の染色体転座または逆位を含むがん、例えば下記のがん。
【表１１−２】
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（Ｂ）ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全が、ＴｒｋＡタンパク質の１つまたは複数の欠失、挿入、または変異を含むがん、例えば下記のがん。
【表１１−３】
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（Ｃ）ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全が、野生型ＴｒｋＡの過剰発現（自己分泌活性化）を含むがん、例えば下記のがん。
【表１１−４】
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【０１２１】
一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、ＴｒｋＢ融合タンパク質、例えば表１２に示されているＴｒｋＢ融合タンパク質の１つの発現をもたらす転座が含まれる。
【表１２】
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【０１２２】
一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、ＴｒｋＣ融合タンパク質、例えば表１３に示されているＴｒｋＣ融合タンパク質の１つの発現をもたらす転座が含まれる。
【表１３−１】
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【０１２３】
本明細書の一部の実施形態では、Ｔｒｋ関連がんと診断された患者を処置するための方法であって、患者に治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を投与することを含む方法が提供される。例えば、Ｔｒｋ関連がんは、非小細胞肺がん、甲状腺乳頭癌、多形神経膠芽腫、急性骨髄性白血病、結腸直腸癌、大細胞型神経内分泌癌、前立腺がん、神経芽細胞腫、膵臓癌、メラノーマ、頭部および頸部の扁平上皮癌、胃癌、Ｓｐｉｔｚがん、甲状腺乳頭癌、結腸がん、急性骨髄性白血病、肉腫、小児神経膠腫、肝内胆管細胞癌（ｃｈｏｌａｎｇｉｃａｒｃｉｎｏｍａ）、毛様細胞星状細胞腫、低悪性度神経膠腫、肺腺癌、唾液腺がん、分泌乳がん、線維肉腫、腎腫、ならびに乳がんの群より選択され得る。
【０１２４】
一部の実施形態では、Ｔｒｋ関連がんは、以下の群より選択される。ＴＲＫ関連がんの非限定的な例として、Ｓｐｉｔｚｏｉｄメラノーマ、Ｓｐｉｔｚ腫瘍（例えば、転移性Ｓｐｉｔｚ腫瘍）、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌（ＰＴＣ））、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、肉腫（例えば、未分化肉腫または成人軟部組織肉腫）、小児神経膠腫、結腸直腸がん（ＣＲＣ）、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）、大細胞型神経内分泌がん（ＬＣＮＥＣ）、甲状腺がん、肝内胆管細胞癌（ＩＣＣ）、毛様細胞星状細胞腫、低悪性度神経膠腫、頭部および頸部の扁平上皮癌、腺癌（例えば、肺腺癌）、唾液腺がん、分泌性乳癌、乳がん、急性骨髄性白血病、線維肉腫、腎腫、メラノーマ、気管支原性癌、Ｂ細胞がん、気管支がん、口腔または咽頭のがん、血液学的組織のがん、子宮頸がん、胃がん、腎臓がん、肝臓がん、多発性骨髄腫、卵巣がん、膵臓がん、唾液腺がん、小腸または虫垂のがん、精巣がん、膀胱がん、子宮または子宮内膜（ｅｎｄｒｏｍｅｔｒｉａｌ）のがん、炎症性筋線維芽細胞腫瘍、消化管間質腫瘍、非ホジキンリンパ腫、神経芽細胞腫、小細胞肺がん、扁平上皮癌、食道−胃がん、皮膚がん、新生物（例えば、メラノサイト性（ｍｅｌａｎｏｃｙｓｔｉｃ）新生物）、Ｓｐｉｔｚ母斑、星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、大細胞型神経内分泌腫瘍、骨がん、ならびに直腸癌が挙げられる。
【０１２５】
一部の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、小児患者のＴｒｋ関連がんの処置に有用である。例えば、本明細書で提供される化合物は、乳児性肉腫、神経芽細胞腫、先天性中胚葉腎腫、低悪性度の脳神経膠腫、および橋膠腫を処置するために使用され得る。
【０１２６】
一部の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、同じまたは異なる作用機序によって働く１つまたは複数の追加の治療剤または治療との組合せで、Ｔｒｋ関連がんの処置に有用である。
【０１２７】
一部の実施形態では、追加の治療剤は、カボザンチニブ、クリゾチニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、ペルツズマブ、レゴラフェニブ、スニチニブ、およびトラスツズマブを含む受容体チロシンキナーゼ標的化治療剤の群より選択される。
【０１２８】
一部の実施形態では、追加の治療剤は、例えばＲａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫ経路阻害剤（例えば、ソラフェニブ、トラメチニブ、またはベムラフェニブ）、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ−Ｓ６Ｋ経路阻害剤（例えば、エベロリムス、ラパマイシン、ペリフォシン、またはテムシロリムス）およびアポトーシス経路のモジュレーター（例えば、オバタクラックス（ｏｂａｔａｃｌａｘ））を含むシグナル伝達経路阻害剤から選択される。
【０１２９】
一部の実施形態では、追加の治療剤は、例えば三酸化ヒ素、ブレオマイシン、カバジタキセル、カペシタビン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、イリノテカン、ロムスチン、メトトレキセート、マイトマイシンＣ、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テモゾロミド、およびビンクリスチンを含む細胞傷害性化学療法の群より選択される。
【０１３０】
一部の実施形態では、追加の治療剤は、例えばアフリベルセプトおよびベバシツマブを含む血管新生標的化治療の群より選択される。
【０１３１】
一部の実施形態では、追加の治療剤は、例えばアルデスロイキン、イピリムマブ、ランブロリズマブ、ニボルマブ、およびシプロイセル−Ｔを含む免疫標的化剤の群より選択される。
【０１３２】
一部の実施形態では、追加の治療剤は、例えばＮＧＦ標的化生物学的製剤、例えばＮＧＦ抗体およびｐａｎＴｒｋ阻害剤を含む、下流Ｔｒｋ経路に対して活性な薬剤から選択される。
【０１３３】
一部の実施形態では、追加の治療剤または治療は、例えば放射性ヨウ素治療、外部照射、およびラジウム２２３治療を含む放射線療法である。
【０１３４】
一部の実施形態では、追加の治療剤には、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有するがんの標準ケアである、先に列挙した治療または治療剤のいずれか１つが含まれる。
【０１３５】
ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を検出する方法には、例えば蛍光Ｉｎ  Ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）を使用する、例えばＮＴＲＫ遺伝子転座の検出が含まれる（例えば、参照によって本明細書に組み込まれる国際公開第２０１３／０６１２１１号、同第２０１３／０５７４９５号に記載されている通り）。
【０１３６】
一部の実施形態では、本明細書において、患者のがん（例えば、Ｔｒｋ関連がん）を処置する方法であって、前記患者に、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を、少なくとも１つの追加の治療または治療剤と組み合わせて投与することを含む方法が提供される。一部の実施形態では、少なくとも１つの追加の治療または治療剤は、放射線療法（例えば、放射性ヨウ素治療、外部照射、またはラジウム２２３治療）、細胞傷害性化学療法（例えば、三酸化ヒ素、ブレオマイシン、カバジタキセル、カペシタビン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、イリノテカン、ロムスチン、メトトレキセート、マイトマイシンＣ、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テモゾロミド、またはビンクリスチン）、チロシンキナーゼ標的化治療（例えば、アファチニブ、カボザンチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、レゴラフェニブ、スニチニブ、またはトラスツズマブ）、アポトーシスモジュレーターおよびシグナル伝達阻害剤（例えば、エベロリムス、ペリフォシン、ラパマイシン、ソラフェニブ、テムシロリムス、トラメチニブ、またはベムラフェニブ）、免疫標的化治療（例えば、アルデスロイキン、インターフェロンアルファ−２ｂ、イピリムマブ、ランブロリズマブ、ニボルマブ、プレドニゾン、またはシプロイセル−Ｔ）ならびに血管新生標的化治療（例えば、アフリベルセプトまたはベバシツマブ）から選択され、ここで、本明細書で提供される化合物または薬学的に許容されるその塩の量は、追加の治療または治療剤と組み合わされる場合、前記がんを処置するのに有効な量である。
【０１３７】
一部の実施形態では、追加の治療剤は、異なるＴｒｋ阻害剤である。他のＴｒｋ阻害剤の非限定的な例として、（Ｒ）−２−フェニルピロリジン置換イミダゾピリダジン、ＡＺＤ６９１８、ＧＮＦ−４２５６、ＧＴｘ−１８６、ＧＮＦ−５８３７、ＡＺ６２３、ＡＧ−８７９、アルチラチニブ（ａｌｔｉｒａｔｉｎｉｂ）、ＣＴ３２７、ＡＲ−７７２、ＡＲ−５２３、ＡＲ−７８６、ＡＲ−２５６、ＡＲ−６１８、ＡＺ−２３、ＡＺＤ７４５１、カボザンチニブ、ＣＥＰ−７０１、ＣＥＰ−７５１、ＰＨＡ−７３９３５８、ドビチニブ（ｄｏｖｉｔｉｎｉｂ）、エントレクチニブ（ｅｎｔｒｅｃｔｉｎｉｂ）、ＰＬＸ７４８６、Ｇｏｅ６９７６、ＧＷ４４１７５６、ＭＧＣＤ５１６、ＯＮＯ−５３９０５５６、ＰＨＡ−８４８１２５ＡＣ、レゴラフェニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ＴＳＲ−０１１、ＶＭ−９０２Ａ、Ｋ２５２ａ、４−アミノピラゾリルピリミジン、および置換ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン化合物が挙げられる。
【０１３８】
一部の実施形態では、追加の治療剤には、受容体チロシンキナーゼ標的化治療剤、例えばアファチニブ、カボザンチニブ、セツキシマブ、クリゾチニブ、ダブラフェニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、ラパチニブ、レスタウルチニブ、ニロチニブ、パゾパニブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、スニチニブ、トラスツズマブ、ＡＧ８７９、ＡＺ−２３、ＡＺ６２３、Ｇｏｅ６９７６、ＧＮＦ−５８３７、ＧＴｘ−１８６、ＧＷ４４１７５６、ＭＧＣＤ５１６、ＲＰＩ−１、ＲＸＤＸ１０１、およびＴＳＲ−０１１；ＲＥＴ標的化治療剤、例えばアレクチニブ、アパチニブ、カボザンチニブ、ドビチニブ、レンバチニブ、モテサニブ、ニンテダニブ、ポナチニブ、レゴラフェニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、バタラニブ、バンデタニブ、ＡＵＹ−９２２、ＢＬＵ６８６４、ＤＣＣ−２１５７、ＭＧＣＤ５１６、ＮＶＰ−ＡＳＴ４８７、ＰＺ−１、ＲＸＤＸ１０５、ＳＰＰ８６、ＴＧ１０１２０９、およびＸＬ−１８４；シグナル伝達経路阻害剤、例えばＲａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫ経路阻害剤（例えば、ビニメチニブ（ｂｉｎｉｍｅｔｉｎｉｂ）、セルメチニブ、エンコラフィニブ（ｅｎｃｏｒａｆｉｎｉｂ）、ソラフェニブ、トラメチニブ、およびベムラフェニブ）、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ−Ｓ６Ｋ経路阻害剤（例えば、エベロリムス、ラパマイシン、ペリフォシン、テムシロリムス）、他のキナーゼ阻害剤、例えばバリシチニブ、ブリガチニブ（ｂｒｉｇａｔｉｎｉｂ）、カプマチニブ（ｃａｐｍａｔｉｎｉｂ）、ダヌセルチブ（ｄａｎｕｓｅｒｔｉｂ）、イブルチニブ、ミルシクリブ（ｍｉｌｃｉｃｌｉｂ）、ケルセチン、レゴラフェニブ、ルキソリチニブ、セマクサニブ（ｓｅｍａｘａｎｉｂ）、ＡＰ３２７８８、ＢＬＵ２８５、ＢＬＵ５５４、ＩＮＣＢ３９１１０、ＩＮＣＢ４００９３、ＩＮＣＢ５０４６５、ＩＮＣＢ５２７９３、ＩＮＣＢ５４８２８、ＭＧＣＤ２６５、ＮＭＳ−０８８、ＮＭＳ−１２８６９３７、ＰＦ４７７７３６、ＰＬＸ３３９７、ＰＬＸ７４８６、ＰＬＸ８３９４、ＰＬＸ９４８６、ＰＲＮ１００８、ＰＲＮ１３７１、ＲＸＤＸ１０３、ＲＸＤＸ１０６、ＲＸＤＸ１０８、およびＴＧ１０１２０９；チェックポイント阻害剤、例えばイピリムマブ、トレメリムマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＭＰＤＬ３２０８Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ、ＢＭＳ−９３６５５９、ＢＭＳ−９５６５５９、ＢＭＳ−９３５５５９（ＭＤＸ−１１０５）、ＡＭＰ−２２４、およびペンブロリズマブ；アポトーシス経路のモジュレーター（例えば、オバタクラックス）；細胞傷害性化学療法、例えば三酸化ヒ素、ブレオマイシン、カバジタキセル、カペシタビン、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エトポシド、フルオロウラシル、ゲムシタビン、イリノテカン、ロムスチン、メトトレキセート、マイトマイシンＣ、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、テモゾロミド、およびビンクリスチン；血管新生標的化治療、例えばアフリベルセプトおよびベバシツマブ；免疫標的化剤、例えばアルデスロイキン、インターフェロンアルファ−２ｂ、イピリムマブ、ランブロリズマブ、ニボルマブ、プレドニゾン、シプロイセル−Ｔ；放射線療法、例えば放射性ヨウ素治療、外部照射、およびラジウム２２３治療が含まれる。
【０１３９】
さらに他の追加の治療剤には、ＲＥＴ阻害剤、例えば米国特許第８，２９９，０５７号、同第８，３９９，４４２号、同第８，９３７，０７１号、同第９，００６，２５６号、および同第９，０３５，０６３号；米国特許出願公開第２０１４／０１２１２３９号、同第２０１１／００５３９３４号、同第２０１１／０３０１１５７号、同第２０１０／０３２４０６５号、同第２００９／０２２７５５６号、同第２００９／０１３０２２９号、同第２００９／００９９１６７号、同第２００５／０２０９１９５号；国際公開第２０１４／１８４０６９号、同第２０１４／０７２２２０号、同第２０１２／０５３６０６号、同第２００９／０１７８３８号、同第２００８／０３１５５１号、同第２００７／１３６１０３号、同第２００７／０８７２４５号、同第２００７／０５７３９９号、同第２００５／０５１３６６号、および同第２００５／０４４８３５；ならびにＪ．  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．  ２０１２年、５５巻（１０号）、４８７２〜４８７６頁に記載のものが含まれる。
【０１４０】
これらの追加の治療剤は、本明細書で提供される１つまたは複数の化合物と共に、同じまたは別々の剤形の一部として、同じまたは異なる投与経路を介して、当業者に公知の標準的な薬学的実施に従って同じまたは異なる投与スケジュールで投与することができる。
【０１４１】
また本明細書では、（ｉ）腫瘍疾患の処置のために同時、別個または逐次的に使用するための、（ａ）結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）、（ｂ）追加の治療剤、および（ｃ）任意選択で少なくとも１つの薬学的に許容される担体（化合物またはその塩および追加の治療剤の量は、一緒になって前記がんの処置に有効となる）を含む、それを必要とする患者のがん（例えば、Ｔｒｋ関連がん）を処置するための医薬的組合せ、（ｉｉ）このような組合せを含む医薬組成物、（ｉｉｉ）がん（例えば、Ｔｒｋ関連がん）を処置する医薬を調製するためのこのような組合せの使用、ならびに（ｉｖ）このような組合せを同時、別個または逐次的に使用するために組み合わされた調製物として含む商業用パッケージまたは商品、ならびにそれを必要とする患者のがん（例えば、Ｔｒｋ関連がん）を処置する方法が提供される。
【０１４２】
また、Ｔｒｋ関連がん（例えば本明細書に記載されているか、または当技術分野で公知のＴｒｋ関連がんのいずれか）を有すると同定または診断された被験体（例えば、被験体または被験体由来の生検試料におけるＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を同定するための、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用することによってＴｒｋ関連がんを有すると同定または診断された被験体）を処置する方法であって、被験体に治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を投与することを含む方法が提供される。また、Ｔｒｋ関連がん（例えば本明細書に記載されているか、または当技術分野で公知のＴｒｋ関連がんのいずれか）を有すると同定または診断された被験体（例えば、被験体または被験体由来の生検試料におけるＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を同定するための、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用することによってＴｒｋ関連がんを有すると同定または診断された被験体）のＴｒｋ関連がんの処置に使用するための、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）が提供される。また、Ｔｒｋ関連がん（例えば本明細書に記載されているか、または当技術分野で公知のＴｒｋ関連がんのいずれか）を有すると同定または診断された被験体（例えば、被験体または被験体由来の生検試料におけるＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を同定するための、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用することによってＴｒｋ関連がんを有すると同定または診断された被験体）のＴｒｋ関連がんを処置する医薬を製造するための、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）の使用が提供される。
【０１４３】
また、被験体（例えば、Ｔｒｋ関連がんを有すると疑われる被験体、Ｔｒｋ関連がんの１つもしくは複数の症状を呈している被験体、またはＴｒｋ関連がんを発症する危険性が高い被験体）を処置する方法であって、被験体がＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有するかどうかを決定するために、被験体から得られた試料でアッセイ（例えば、次世代シークエンシング、免疫組織化学的検査、またはｂｒｅａｋ  ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨ分析を利用するアッセイ）（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用する）を実施し、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有すると決定された被験体に投与する（例えば、特異的にまたは選択的に投与する）ことを含む方法が提供される。これらの方法で使用され得る非限定的なアッセイである追加のアッセイを、本明細書に記載する。追加のアッセイはまた、当技術分野で公知である。また、被験体が、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有しているかどうかを決定するために、被験体から得られた試料でアッセイ（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ）（例えば、次世代シークエンシング、免疫組織化学的検査、またはｂｒｅａｋ  ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨ分析を利用するアッセイ）（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用する）を実施するステップによってＴｒｋ関連がんを有すると同定または診断された被験体（ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全が存在すると、被験体がＴｒｋ関連がんを有していると同定される）のＴｒｋ関連がんの処置に使用するための、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）の使用が提供される。また、被験体が、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有しているかどうかを決定するために、被験体から得られた試料でアッセイ（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ）（例えば、次世代シークエンシング、免疫組織化学的検査、またはｂｒｅａｋ  ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨ分析を利用するアッセイ）（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用する）を実施するステップによってＴｒｋ関連がんを有すると同定または診断された被験体（ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全が存在すると、被験体がＴｒｋ関連がんを有していると同定される）のＴｒｋ関連がんを処置する医薬を製造するための、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）の使用が提供される。本明細書に記載の方法または使用のいずれかの一部の実施形態は、さらに、アッセイの実施によって��ＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有していると決定された被験体が、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を投与されるべきであることを被験体の臨床記録（例えば、コンピューター可読媒体）に記録することを含む。
【０１４４】
本明細書に記載の方法または使用のいずれかの一部の実施形態では、被験体は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を伴うがんを有すると同定または診断されている（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたアッセイまたはキットを使用して決定される）。本明細書に記載の方法または使用のいずれかの一部の実施形態では、被験体は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全に対して陽性である腫瘍を有している（例えば、規制機関に認可されたアッセイまたはキットを使用して決定される）。本明細書に記載の方法または使用のいずれかの一部の実施形態では、被験体は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全に対して陽性である腫瘍を有する被験体であり得る（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたアッセイまたはキットを使用して陽性であると同定される）。本明細書に記載の方法または使用のいずれかの一部の実施形態では、被験体は、被験体の腫瘍がＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはそのレベルの調節不全を有している被験体であり得る（例えば、腫瘍はそれ自体、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットまたはアッセイを使用して同定される）。本明細書に記載の方法または使用のいずれかの一部の実施形態では、被験体は、Ｔｒｋ関連がんを有すると疑われる。本明細書に記載の方法または使用のいずれかの一部の実施形態では、被験体は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有する腫瘍を有していることを示す臨床記録を有している（および任意選択で臨床記録は、被験体が、本明細書で提供される組成物のいずれかで処置されるべきであることを示す）。
【０１４５】
また、被験体を処置する方法であって、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有していることを示す臨床記録を有する被験体に投与することを含む方法が提供される。また、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有していることを示す臨床記録を有する被験体のＴｒｋ関連がんを処置する医薬を製造するための、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）の使用が提供される。また、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有していることを示す臨床記録を有する被験体のＴｒｋ関連がんを処置する医薬を製造するための、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照の使用が提供される。これらの方法および使用の一部の実施形態は、さらに、被験体がＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有しているかどうかを決定するために、被験体から得られた試料でアッセイ（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ）（例えば、次世代シークエンシング、免疫組織化学的検査、またはｂｒｅａｋ  ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨ分析を利用するアッセイ）（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用する）を実施し、被験体の臨床ファイル（例えば、コンピューター可読媒体）に、被験体がＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有していると同定された情報を記録するステップとを含むことができる。
【０１４６】
また、Ｔｒｋ関連がん（例えば本明細書に記載されているか、または当技術分野で公知のＴｒｋ関連がんのいずれか）を有すると同定または診断された被験体（例えば、被験体または被験体由来の生検試料においてＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を同定するための、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用することによってＴｒｋ関連がんを有すると同定または診断された被験体）に対して、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）の投与を含む処置を選択することを含む、被験体のための処置を選択する方法（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ方法）が提供される。一部の実施形態はさらに、選択された処置を、Ｔｒｋ関連がんを有すると同定または診断された被験体に投与することを含むことができる。一部の実施形態はさらに、被験体がＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有しているかどうかを決定するために、被験体から得られた試料でアッセイ（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ）（例えば、次世代シークエンシング、免疫組織化学的検査、またはｂｒｅａｋ  ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨ分析を利用するアッセイ）（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用する）を実施し、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有すると決定された被験体を、Ｔｒｋ関連がんを有する被験体として同定または診断するステップを含むことができる。
【０１４７】
また、被験体のために、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を投与することを含む、処置を選択する方法が提供され、この方法は、被験体がＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有しているかどうかを決定するために、被験体から得られた試料でアッセイ（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ）（例えば、次世代シークエンシング、免疫組織化学的検査、またはｂｒｅａｋ  ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨ分析を利用するアッセイ）（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用する）を実施し、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有すると決定された被験体を、Ｔｒｋ関連がんを有する被験体として同定または診断し、Ｔｒｋ関連がんを有すると同定または診断された被験体のために、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）の投与を含む治療的な処置を選択するステップを含む。一部の実施形態はさらに、選択された処置を、Ｔｒｋ関連がんを有すると同定または診断された被験体に投与することを含む。
【０１４８】
また、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を投与することを含む処置について被験体を選択する方法が提供され、この方法は、Ｔｒｋ関連がんを有する被験体を選択、同定または診断し、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）の投与を含む処置について被験体を選択することを含む。一部の実施形態では、被験体を、Ｔｒｋ関連がんを有する被験体として同定または診断することは、被験体がＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有しているかどうかを決定するために、被験体から得られた試料でアッセイ（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ）（例えば、次世代シークエンシング、免疫組織化学的検査、またはｂｒｅａｋ  ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨ分析を利用するアッセイ）（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットを使用する）を実施し、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有すると決定された被験体を、Ｔｒｋ関連がんを有する被験体として同定または診断するステップを含むことができる。一部の実施形態では、処置の選択は、Ａｌｋ関連がんの様々な処置の投与を含む臨床研究の一部として使用することができる。
【０１４９】
本明細書に記載の方法または使用のいずれかの一部の実施形態では、被験体（例えば、Ｔｒｋ関連がんを有すると疑われる被験体、Ｔｒｋ関連がんの１つもしくは複数の症状を有している被験体、および／またはＴｒｋ関連がんを発症する危険性が高い被験体）から得た試料（例えば、生物学的試料または生検試料（例えば、パラフィン包埋生検試料）を使用して、被験体がＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有しているかどうかを決定するために使用されるアッセイには、例えば、次世代シークエンシング、免疫組織化学的検査、蛍光顕微鏡法、ｂｒｅａｋ  ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨ分析、サザンブロッティング、ウェスタンブロッティング、ＦＡＣＳ分析、ノーザンブロッティング、およびＰＣＲ系増幅（例えばＲＴ−ＰＣＲ）が含まれ得る。当技術分野で周知の通り、アッセイは、典型的に、例えば少なくとも１つの標識核酸プローブまたは少なくとも１つの標識抗体またはその抗原結合フラグメントを用いて実施される。アッセイは、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を検出するための当技術分野で公知の他の検出方法を利用することができる（例えば、本明細書に引用されている参考文献を参照）。
【０１５０】
一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）は、がん、外科手術、および骨折と関連する疼痛を含む慢性および急性疼痛の処置に有用である。結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）は、炎症性疼痛、神経障害性疼痛、ならびにがん、外科手術および骨折と関連する疼痛を含む複数のタイプの疼痛の処置に有用となり得る。結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）はまた、神経芽細胞腫、卵巣、膵臓および結腸直腸がんを含むがんの処置に有用である。結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）はまた、炎症およびある特定の感染性疾患の処置に有用である。さらに、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）はまた、間質性膀胱炎（ＩＣ）、有痛性膀胱症候群（ＰＢＳ）、尿失禁、喘息、食欲不振、アトピー性皮膚炎、および乾癬を処置するために使用され得る。結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）はまた、Ｓｐ３５−ＴｒｋＡ相互作用を妨害することによって髄鞘形成、ニューロン生存、およびオリゴデンドロサイト分化を促進することにより、脱髄および髄鞘発育不全を処置するために使用され得る。結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）は、炎症性疼痛、神経障害性疼痛、外科的疼痛およびがん関連疼痛を含む複数のタイプの疼痛の処置に有用となり得る。結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）は、骨関連疾患（例えば骨吸収を伴う疾患）の処置に有用となり得る。骨関連疾患の例として、転移性骨疾患、処置誘導性骨喪失、骨粗鬆症、関節リウマチ、強直性脊椎炎、パジェット病、および歯周疾患が挙げられる。骨粗鬆症は、（１）女性の閉経、（２）男性もしくは女性の加齢、（３）小児期および青年期におけるピーク骨質量に達しなかった最適以下の骨成長、ならびに／または（４）他の病状、摂食障害、医薬品および／もしくは医学的処置に続発する骨喪失に起因し得る。本明細書で提供される方法に従って処置され得る他の骨溶解性疾患は、より局在的である。特定の例は、転移性腫瘍誘導性の骨溶解である。この状態において、骨がんまたは骨転移は、疼痛、骨脆弱性（ｂｏｎｅ  ｗｅａｋｎｅｓｓ）および骨折を引き起こす局在的な骨溶解を誘導する。また、このような局在的な骨溶解は、骨に腫瘍のための空間をより多く作り出し、骨基質から増殖因子を放出することによって、腫瘍をより大きく成長させてしまう。腫瘍誘導性の骨溶解を引き起こすことが現在知られ���いるがんには、血液学的悪性疾患（例えば、骨髄腫およびリンパ腫）および固形腫瘍（例えば、乳房、前立腺、肺、腎臓および甲状腺）が含まれるが、すべて本開示によって処置が企図される。本明細書で使用される処置という用語は、予防、および既存の状態の処置を含む。
【０１５１】
したがって本明細書では、それを必要とする被験体のＴｒｋＡおよび／またはＴｒｋＢ（例えば、Ｔｒｋ関連がん）の阻害剤で処置できる疾患または病状を処置する方法が提供され、この方法は、前記被験体に、結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を、前記障害を処置または防止するのに有効な量で投与することを含む。本明細書の特定の一実施形態では、哺乳動物の疼痛、がん、炎症、神経変性疾患またはＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ感染症を処置する方法が提供され、この方法は、前記哺乳動物に、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を投与することを含む。別の実施形態では、本明細書において、哺乳動物の骨溶解性疾患を処置する方法が提供され、この方法は、それを必要とする前記被験体に、治療有効量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）を投与することを含む。
【０１５２】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）または式Ｉの化合物もしくはその塩、例えば硫酸水素塩（例えば、米国特許第８，５１３，２６３号の実施例１４Ａ参照）は、同じまたは異なる作用機序によって働く１つまたは複数の追加の薬物と組み合わせて使用することができる。このような併用処置は、処置の個々の構成成分を同時、逐次的または別個に投与することによって達成され得る。例として、抗炎症性化合物、ステロイド（例えば、デキサメタゾン、コルチゾンおよびフルチカゾン）、鎮痛薬、例えばＮＳＡＩＤ（例えば、アスピリン、イブプロフェン、インドメタシン、およびケトプロフェン）、およびオピオイド（例えばモルヒネ）、および化学療法剤が挙げられる。
【０１５３】
医療腫瘍学の分野では、がんを有する各患者を処置するために、異なる処置形態の組合せを使用することが通常の実施である。医療腫瘍学では、本明細書で提供される組成物に加えて、このような併用処置のその他の構成成分は、例えば、外科手術、放射線療法、化学療法、シグナル伝達阻害剤および／またはモノクローナル（ｍｏｎｏｃｌｏｎｏａｌ）抗体であり得る。
【０１５４】
したがって、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ、挿入抗生物質、増殖因子阻害剤、シグナル伝達阻害剤、細胞周期阻害剤、酵素阻害剤、レチノイド受容体モジュレーター、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、生物反応修飾物質、抗ホルモン剤、血管新生阻害剤、細胞増殖抑制剤  抗アンドロゲン剤、標的化抗体、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、およびプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤から選択される１つまたは複数の薬剤と組み合わせて投与され得る。
【０１５５】
本明細書に開示の化合物が、少なくとも１つのキラル中心を有する場合、したがって化合物は、鏡像異性体として存在し得る。化合物が２つのキラル中心を有する場合、化合物はさらに、ジアステレオマーとして存在し得る。すなわち式Ｉの化合物は、命名法「（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩」（以下（Ｓ，Ｒ）異性体と呼ぶ）によって指定される所望の立体配置を有することに加えて、異性体（Ｒ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩（以下（Ｒ，Ｒ）異性体と呼ぶ）として微量で存在することもでき、かつ／または（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩（以下（Ｓ，Ｓ）異性体と呼ぶ）として微量で存在することもでき、かつ／または異性体（Ｒ）−Ｎ−（５−（（Ｓ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩」（以下（Ｒ，Ｓ）異性体と呼ぶ）として微量で存在することができる。すべてのこのような異性体およびこれらの混合物は、本発明の範囲に包含されると理解されたい。好ましくは、化合物が（Ｓ，Ｒ）異性体として存在する場合、（Ｓ，Ｒ）異性体は、約８０％またはそれ超の過剰で、より好ましくは約９０％またはそれ超の過剰で、さらにより好ましくは約９５％またはそれ超の過剰で、さらにより好ましくは約９８％またはそれ超の過剰で、より好ましくは約９９％またはそれ超の過剰で存在する。
【０１５６】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、２つの不斉中心を含有し、したがって、ラセミもしくはジアステレオマー混合物などの異性体混合物で、または鏡像異性的に純粋な形態で調製し、単離することができることを理解されよう。立体化学が、ある特定の立体配置を表す太字くさびまたは破線によって特定される場合、その立体異性体は、そのように特定され、定義される。
【０１５７】
別段の注記がない限り、本明細書で使用される「単離された形態」という用語は、化合物が、別の化合物（複数可）を含む任意の固体混合物、溶媒系または生物学的環境から分離した形態で存在することを意味するものとする。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、単離された形態として存在する。
【０１５８】
別段の注記がない限り、本明細書で使用される「実質的に純粋な形態」という用語は、単離された化合物または結晶形における不純物のモルパーセントが、約５モルパーセント未満、好ましくは約２モルパーセント未満、より好ましくは約０．５モルパーセント未満、最も好ましくは約０．１モルパーセント未満であることを意味するものとする。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、実質的に純粋な形態として存在する。
【０１５９】
別段の注記がない限り、本明細書で使用される「他の非晶質、多形または結晶形を実質的に含まない」という用語は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を説明するために使用される場合、結晶形（Ｉ−ＨＳ）の単離された塩基の他の非晶質、多形または結晶形のモルパーセントが、約５モルパーセント未満、好ましくは約２モルパーセント未満、より好ましくは約０．５モルパーセント未満、最も好ましくは約０．１モルパーセント未満であることを意味するものとする。一部の実施形態では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、他の非晶質、多形または結晶形を実質的に含まない形態として存在する。
【０１６０】
「多形」および「多形形態」という用語は、単一化合物の異なる結晶形を指す。すなわち多形は、同じ分子式を共有する別個の固体であるが、各多形は、別個の固体状態の物理的特性を有することができる。したがって、単一化合物は、様々な多形形態を生じることができ、ここで各形態は、異なる溶解度プロファイル、溶解速度、融点温度、流動性、および／または異なるＸ線回折ピークなどの異なる別個の固体状態の物理的特性を有する。物理的特性の差異は、保存安定性、圧縮性および密度（製剤および生成物の製造において重要となり得る）、ならびに溶解速度（バイオアベイラビリティにおいて重要な因子となり得る）などの医薬パラメーターに影響を及ぼし得る。多形形態を特徴付けるための技術には、Ｘ線粉末回折法（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、単結晶Ｘ線回折法（ＸＲＤ）、振動分光法、例えば、赤外（ＩＲ）およびラマン分光法、固体および溶液核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、光学顕微鏡、ホットステージ光学顕微鏡、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）、電子線結晶学および定量的分析、粒径分析（ＰＳＡ）、表面積分析、溶解度測定、溶解測定、元素分析、ならびにカールフィッシャー分析が含まれるが、それらに限定されない。
【０１６１】
「非晶質」という用語は、非結晶状態である固体状態の固体を意味する。非晶質固体は、分子の無秩序配置であり、したがって識別可能な結晶格子または単位格子を有しておらず、したがって定義できる長距離秩序を有していない。固体の固体状態の形態は、偏光顕微鏡、Ｘ線粉末回折（「ＸＲＰＤ」）、示差走査熱量測定（「ＤＳＣ」）、または当業者に公知の他の標準技術によって決定され得る。
【０１６２】
別段の注記がない限り、本明細書で使用される「処置する」、「処置」等という用語は、疾患、状態、または障害に対抗する目的で被験体または患者（好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒト）を管理およびケアすることを含むものとし、開示の化合物を投与して、症状もしくは合併症を軽減し、または疾患、状態もしくは障害の進行速度を低減することを含む。
【０１６３】
別段の注記がない限り、本明細書で使用される「防止」という用語は、（ａ）１つもしくは複数の症状の頻度の低下、（ｂ）１つもしくは複数の症状の重症度の低下、（ｃ）追加の症状の発生の遅延もしくは回避、および／または（ｄ）障害もしくは状態の発生の遅延もしくは回避を含むものとする。
【０１６４】
本明細書で使用される「Ｔｒｋ関連がん」という用語は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全（例えば、本明細書に記載のタイプのＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全のいずれか）と関連するまたはそれを有しているがんを含むと定義するものとする。Ｔｒｋ関連がんの非限定的な例は、本明細書に記載されている。
【０１６５】
本明細書で使用される「疼痛」という用語は、糖尿病性神経障害を含む、急性、慢性、炎症性および神経障害性疼痛を含むと定義するものとする。さらに、疼痛は、中枢的に媒介され、末梢的に媒介され、構造的組織傷害によって引き起こされ、軟部組織傷害によって引き起こされ、または進行性疾患によって引き起こされ得る。中枢的に媒介され、末梢的に媒介され、構造的組織傷害、軟部組織傷害または進行性疾患と関連する任意の疼痛は、急性または慢性であり得る。
【０１６６】
別段の注記がない限り、本明細書で使用される疼痛には、炎症性疼痛、中枢媒介性疼痛、末梢媒介性疼痛、内臓痛、構造関連疼痛、がん疼痛、軟部組織傷害関連疼痛、進行性疾患関連疼痛、神経障害性疼痛、急性傷害由来の急性疼痛、外傷由来の急性疼痛、外科手術由来の急性疼痛、頭痛、歯痛、背部痛（好ましくは腰痛）、神経障害状態由来の慢性疼痛、および脳卒中後状態由来の慢性疼痛が含まれるものとする。
【０１６７】
一部の実施形態は、急性疼痛である疼痛を処置するための方法を含む。一部の実施形態は、慢性疼痛である疼痛を処置するための方法を含む。一部の実施形態は、糖尿病性神経障害を含む神経障害性疼痛である疼痛を処置するための方法を含む。一部の実施形態は、炎症性疼痛である疼痛を処置するための方法を含む。
【０１６８】
一部の実施形態では、疼痛は、変形性関節症、関節リウマチ、線維筋痛症、頭痛、歯痛、熱傷、日焼け、動物咬傷（例えばイヌ咬傷、ネコ咬傷、ヘビ咬傷、クモ咬傷、昆虫刺傷等）、神経因性膀胱、良性前立腺肥大、間質性膀胱炎、鼻炎、接触性皮膚炎／過敏症、そう痒、湿疹、咽頭炎、粘膜炎、腸炎、セルライト、カウザルギー、坐骨神経炎、顎関節神経痛、末梢性神経炎、多発性神経炎、断端痛、幻肢痛、術後イレウス、胆嚢炎、乳房切除後疼痛症候群、口腔神経障害性疼痛（ｏｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  ｐａｉｎ）、シャルコー疼痛、反射性交感神経性ジストロフィー、ギラン−バレー症候群、感覚異常性大腿神経痛、口内焼灼感症候群、ヘルペス後神経痛、三叉神経痛、末梢神経障害、両側末梢神経障害、糖尿病性神経障害、帯状疱疹後神経痛、三叉神経痛、視神経炎、発熱後神経炎、遊走性神経炎（ｍｉｇｒａｔｉｎｇ  ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、分節性神経炎、ゴンボー（Ｇｏｍｂａｕｌｔ）神経炎、ニューロン炎、頸腕神経痛、頭蓋神経痛、膝神経痛、舌咽（ｇｌｏｓｓｏｐｈａｒｙｎｇｉａｌ）神経痛、片頭痛神経痛（ｍｉｇｒａｉｎｏｕｓ  ｎｅｕｒａｌｇｉａ）、特発性神経痛、肋間神経痛、乳房神経痛、モートン神経痛、鼻毛様体神経痛、後頭部神経痛、紅神経痛（ｒｅｄ  ｎｅｕｒａｌｇｉａ）、スルーダー神経痛、翼口蓋（ｓｐｌｅｎｏｐａｌａｔｉｎｅ）神経痛、眼窩上神経痛、翼突管神経痛（ｖｉｄｉａｎ  ｎｅｕｒａｌｇｉａ）、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、分娩、出生、月経痛（ｍｅｎｓｔｒｕａｌ  ｃｒａｍｐ）、がん、背部痛、腰痛および手根管症候群疼痛からなる群より選択される。
【０１６９】
急性疼痛には、急性傷害、外傷、疾病または外科手術（例えば、開胸外科手術（心臓切開またはバイパス外科手術を含む））によって引き起こされた疼痛が含まれる。また急性疼痛には、頭痛、術後疼痛、腎結石疼痛、胆嚢疼痛、胆石疼痛、産婦人科系（ｏｂｓｔｅｔｒｉｃ）疼痛、リウマチ痛、歯痛、またはスポーツ医学的傷害、手根管症候群、熱傷、筋骨格捻挫および挫傷、筋皮（ｍｕｓｃｕｌｏｔｅｎｄｉｎｏｕｓ）挫傷、頸腕疼痛症候群、消化不良、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、月経困難症もしくは子宮内膜症によって引き起こされる疼痛が含まれるが、それらに限定されない。
【０１７０】
慢性疼痛には、炎症状態、変形性関節症、関節リウマチによって引き起こされた疼痛、または疾患、急性傷害もしくは外傷の後遺症としての疼痛が含まれる。また慢性疼痛には、頭痛、上背部痛もしくは腰痛（体系的、局所的または原発的な脊椎疾患（神経根障害から選択される）から生じた背部痛から選択される）、骨痛（変形性関節症、骨粗鬆症、骨転移または未知の理由に起因する骨痛から選択される）、骨盤痛、脊髄傷害関連疼痛、心臓性胸痛、非心臓性胸痛、中枢性脳卒中後疼痛、筋筋膜痛、がん疼痛、ＡＩＤＳ疼痛、鎌状赤血球疼痛、老人性疼痛、または頭痛、片頭痛、三叉神経痛、顎関節症候群、線維筋痛症候群、変形性関節症、関節リウマチ、痛風、結合組織炎もしくは胸郭出口症候群によって引き起こされた疼痛が含まれるが、それらに限定されない。
【０１７１】
神経障害性疼痛には、慢性のまたは消耗性の状態または障害から生じた疼痛が含まれる。神経障害性疼痛をもたらし得る慢性のまたは消耗性の状態または障害には、有痛性糖尿病性末梢神経障害、ヘルペス後神経痛、三叉神経痛、脳卒中後疼痛、多発性硬化症関連疼痛、特発性または外傷後神経障害および単発神経炎などにおける神経障害関連疼痛、ＨＩＶ関連神経障害性疼痛、がん関連神経障害性疼痛、手根管関連神経障害性疼痛、脊髄傷害関連疼痛、複合性局所疼痛症候群、線維筋痛症関連神経障害性疼痛、腰椎および子宮頸部疼痛、反射性交感神経性ジストロフィー、幻肢症候群、ならびに他の慢性のおよび消耗性の状態と関連する疼痛症候群が含まれるが、それらに限定されない。
【０１７２】
「急性神経変性障害または疾患」には、脳血管不全、限局性脳外傷、びまん性脳損傷、および脊髄傷害、すなわち塞栓性閉塞および血栓閉塞を含む脳虚血または梗塞、急性虚血後の再灌流、周産期低酸素性虚血性傷害、心停止、ならびに任意のタイプの頭蓋内出血（硬膜外、硬膜下、くも膜下および脳内を含むが、それらに限定されない）、ならびに頭蓋内および椎間（ｉｎｔｒａｖｅｒｔｅｂｒａｌ）病変（挫傷、貫通、せん断、圧迫および裂傷を含むが、それらに限定されない）、ならびに乳幼児揺さぶられ症候群を含む、ニューロン死または損傷と関連する様々なタイプの急性神経変性障害が含まれるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、急性神経変性障害は、脳卒中、急性虚血性傷害、頭部損傷または脊髄性傷害の結果である。
【０１７３】
「慢性神経変性障害または疾患」には、アルツハイマー病、ピック病、びまん性レビー小体病、進行性核上性麻痺（スティール−リチャードソン（Ｓｔｅｅｌ−Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ）症候群）、多系統変性（シャイ−ドレーガー症候群）、神経変性と関連する慢性てんかん状態、筋萎縮性側索硬化症、退行性運動失調、皮質基底変性、ＡＬＳ−パーキンソン−グアム認知症複合、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、パーキンソン病、シヌクレイン病（多系統萎縮症を含む）、原発性進行性失語症、線条体黒質系変性、マシャド−ジョセフ病／脊髄小脳失調症タイプ３およびオリーブ橋小脳変性症、ジル−ドゥ−ラ−トゥレット病、球麻痺および仮性球麻痺、脊髄性および脊髄延髄性筋萎縮（ケネディ病）、多発性硬化症、原発性側索硬化症、家族性痙性対麻痺、ウェルドニッヒ−ホフマン病、クーゲルベルク−ヴェランダー（Ｋｕｇｅｌｂｅｒｇ−Ｗｅｌａｎｄｅｒ）病、テイ−サックス病、サンドホフ病、家族性痙性疾患、ヴォールファルト−クーゲルベルク−ヴェランダー病、痙性対麻痺、進行性多巣性白質脳症、家族性自律神経障害（ライリー−デイ症候群）、ならびにプリオン病（クロイツフェルト−ヤコブ、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー病、クールー病および致命的な家族性不眠症を含むがそれに限定されない）を含む運動ニューロン疾患が含まれるが、それらに限定されない。一部の実施形態では、慢性神経変性障害は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症または脳性麻痺から選択される。
【０１７４】
本明細書で使用される「被験体」という用語は、処置、観測または実験の対象となっている動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを指す。一部の実施形態では、被験体は、処置および／または防止される疾患または状態の少なくとも１つの症状を経験しているかつ／または呈している。一部の実施形態では、患者は、小児患者（すなわち診断または処置の時点で２１歳未満の患者）である。「小児」という用語は、新生児（出生後から最初の２８日目まで）、乳児（２９日齢から２歳未満）、子ども（２歳から１２歳未満）、および青年（１２歳から２１歳（２２歳の誕生日までだが、それを含まない））を含む様々な亜集団にさらに分けることができる。
【０１７５】
一部の実施形態では、被験体は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を伴うがんを有していると同定または診断されている（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたアッセイまたはキットを使用して決定される）。一部の実施形態では、被験体は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全に対して陽性である腫瘍を有している（例えば、規制機関に認可されたアッセイまたはキットを使用して決定される）。被験体は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全に対して陽性である腫瘍を有する被験体であり得る（例えば、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたアッセイまたはキットを使用して陽性であると同定される）。被験体は、被験体の腫瘍がＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはそのレベルの調節不全を有している被験体であり得る（例えば、腫瘍はそれ自体、規制機関に認可された、例えばＦＤＡに認可されたキットまたはアッセイを使用して同定される）。一部の実施形態では、被験体は、Ｔｒｋ関連がんを有すると疑われる。一部の実施形態では、被験体は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全を有する腫瘍を有していることを示す臨床記録を有している（および任意選択で臨床記録は、被験体が、本明細書で提供される組成物のいずれかで処置されるべきであることを示す）。
【０１７６】
「Ｔｒｋ」または「Ｔｒｋタンパク質」という用語は、本明細書に記載のＴｒｋタンパク質のいずれか（例えば、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＣタンパク質）を含む。
【０１７７】
「ＮＴＲＫ遺伝子」という用語は、本明細書に記載のＮＴＲＫ遺伝子のいずれか（例えば、ＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、またはＮＴＲＫ３遺伝子）を含む。
【０１７８】
「野生型（ｗｉｌｄｔｙｐｅ）」または「野生型（ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ）」という用語は、Ｔｒｋ関連がんを有していない（および任意選択で、Ｔｒｋ関連がんもしくは状態を発症する高い危険性も有していない、かつ／またはＴｒｋ関連がんもしくは状態を有するとも疑われない）被験体に見出される、またはＴｒｋ関連がんもしくは状態を有していない（および任意選択で、Ｔｒｋ関連がんもしくは状態を発症する高い危険性も有していない、かつ／またはＴｒｋ関連がんもしくは状態を有するとも疑われない）被験体由来の細胞もしくは組織に見出される、核酸（例えば、ＮＴＲＫ遺伝子またはＴｒｋ  ｍＲＮＡ）またはタンパク質（例えば、Ｔｒｋタンパク質）を説明する。
【０１７９】
「規制機関」という用語は、医薬品の医療用途を国により承認するための国の機関である。例えば、規制機関の非限定的な例は、米国食品医薬局（ＦＤＡ）である。
【０１８０】
「ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全」という句は、遺伝的変異（例えば、融合タンパク質の発現をもたらすＮＴＲＫ遺伝子転座、野生型Ｔｒｋタンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸の欠失を含むＴｒｋタンパク質の発現をもたらすＮＴＲＫ遺伝子欠失、または１つもしくは複数の点変異を有するＴｒｋタンパク質の発現をもたらすＮＴＲＫ遺伝子変異、野生型Ｔｒｋタンパク質と比較してＴｒｋタンパク質の少なくとも１つのアミノ酸の欠失をもたらすＴｒｋタンパク質をもたらすＴｒｋ  ｍＲＮＡの代替スプライスバージョン）、またはＴｒｋタンパク質の過剰発現をもたらすＮＴＲＫ遺伝子重複）、または細胞においてＴｒｋタンパク質のキナーゼドメイン（例えば、Ｔｒｋタンパク質の構成的に活性なキナーゼドメイン）の活性の病原性増大をもたらす、細胞においてＮＴＲＫ遺伝子の過剰発現から生じた自己分泌活性である。例えば、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全は、構成的に活性であるか、または変異を含まないＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２もしくはＮＴＲＫ３遺伝子によってコードされたタンパク質と比較して高い活性を有するＴｒｋタンパク質をコードするＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、またはＮＴＲＫ３遺伝子変異であり得る。例えば、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全は、機能的キナーゼドメインを含むＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＣの第１の部分、およびパートナータンパク質（すなわち、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＣではない）の第２の部分を含有する融合タンパク質の発現をもたらす遺伝子転座の結果であり得る。融合タンパク質をコードする遺伝子は、例えば野生型ＮＴＲＫ１遺伝子の以下のエクソン：エクソン１０〜１９、エクソン１２〜１９、エクソン１２〜１９、エクソン１３〜１９、エクソン１４〜１９、またはエクソン１５〜１９を含み得る。融合タンパク質をコードする遺伝子は、例えば野生型ＮＴＲＫ２遺伝子の以下のエクソン：エクソン１２〜２１、エクソン１３〜２１、エクソン１５〜２１、エクソン１６〜２１、またはエクソン１７〜２１を含み得る。融合タンパク質をコードする遺伝子は、例えば野生型ＮＴＲＫ３遺伝子の以下のエクソン：エクソン１７〜２２またはエクソン１６〜２２を含み得る。ＮＴＲＫ遺伝子転座の結果である融合タンパク質の非限定的な例は、表１、３、および４に記載されている。
【０１８１】
ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、例えば、少なくとも１つ（例えば、２つ、３つ、４つ、または５つ）の点変異（例えば、表６に列挙されている点変異の１つまたは複数）を含有するＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＣをもたらすＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、またはＮＴＲＫ３遺伝子変異が含まれ得る。ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、例えば、Ｖ６７３Ｍの点変異を含むＴｒｋＢタンパク質をもたらすＮＴＲＫ２遺伝子変異が含まれ得る。ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、例えば、Ｈ６７７Ｙの点変異を含むＴｒｋＣタンパク質をもたらすＮＴＲＫ３遺伝子変異が含まれ得る。
【０１８２】
ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全は、ＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＣタンパク質の１つまたは複数の隣接アミノ酸（例えば、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、少なくとも２３０、少なくとも２４０、少なくとも２５０、少なくとも２６０、少なくとも２７０、少なくとも２８０、少なくとも２９０、少なくとも３００、少なくとも３１０、少なくとも３２０、少なくとも３３０、少なくとも３４０、少なくとも３５０、少なくとも３６０、少なくとも３７０、少なくとも３８０、少なくとも３９０、または少なくとも４００のアミノ酸）の欠失（キナーゼドメインの不活化をもたらすＴｒｋＡ、ＴｒｋＢ、またはＴｒｋＣのキナーゼドメインのアミノ酸の欠失を除く）をもたらすＮＴＲＫ１、ＮＴＲＫ２、またはＮＴＲＫ３遺伝子変異であり得る。一部の実施形態では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、ＮＧＦ結合部位を欠失しているまたはＮＧＦ結合部位を含むエクソン１０を欠失しているＴｒｋＡタンパク質をもたらすＮＴＲＫ１遺伝子欠失が含まれ得るが、後者は急性骨髄性白血病と関連する。
【０１８３】
いくつかの例では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、Ｔｒｋ  ｍＲＮＡの代替スプライス形態、例えばＴｒｋＡＩＩＩスプライスバリアント、またはエクソン１０によってコードされたアミノ酸を欠失しているＴｒｋＡタンパク質の生成をもたらすＴｒｋ  ｍＲＮＡの代替スプライス形態が含まれ得る。いくつかの例では、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全には、例えば、細胞におけるＮＴＲＫ遺伝子の自己分泌発現をもたらし得るＮＴＲＫ遺伝子の増幅（例えば、ＮＴＲＫ遺伝子の１つ、２つ、３つ、または４つの追加のコピー）が含まれる。
【０１８４】
「Ｔｒｋ関連がんまたは腫瘍」という用語は、ＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全と関連するがん（例えば、本明細書に記載のＮＴＲＫ遺伝子、Ｔｒｋタンパク質、またはその発現もしくは活性、またはレベルの調節不全の少なくとも１つの例（例えば、２つ、３つ、４つ、または５つの例）と関連するがん）である。
【０１８５】
本明細書で使用される「哺乳動物」という用語は、本明細書に記載の疾患を発症する危険性を有している、またはその危険性がある温血動物を指し、モルモット、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ハムスター、およびヒトを含む霊長類が含まれるが、それらに限定されない。
【０１８６】
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、処置を受ける疾患または障害の症状の軽減を含む、組織系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発する、研究者、獣医、医師または他の臨床医によって求められる活性化合物または医薬品の量を意味する。特に、治療有効量は、このような処置を必要とする被験体に投与される場合、（ｉ）ＴｒｋＡおよび／もしくはＴｒｋＢの阻害剤で処置され得る特定の疾患、状態もしくは障害を処置もしくは防止し、（ｉｉ）特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状を減弱、好転（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）させるかもしくは除去し、または（ｉｉｉ）本明細書に記載の特定の疾患、状態もしくは障害の１つもしくは複数の症状の発症を防止もしくは遅延させるのに十分な量である。このような治療有効量に相当する結晶形（Ｉ−ＨＳ）の量は、処置を必要とする哺乳動物の病状、およびその重症度、正体（例えば体重）などの因子に応じて変わるが、当業者によって日常的に決定され得る。
【０１８７】
本明細書で使用される「組成物」という用語は、特定量の特定成分を含む生成物、ならびに特定量の特定成分の組合せから直接的または間接的に得られる任意の生成物を包含することを企図する。
【０１８８】
より簡単に説明するために、本明細書に記載の定量的表現のいくつかは、「約」という用語によって限定されない。「約」という用語が明確に使用されていてもそうでなくても、本明細書に記載のすべての量は、実際の所与の値を指すことを意味し、実験条件および／または測定条件に起因するこのような所与の値の近似値を含む、当業者によって合理的に推測され得るこのような所与の値の近似値を指すことも意味すると理解される。
【０１８９】
一部の実施形態では、「約」という用語は、本明細書では概算によりおよそを意味するために使用される。「約」という用語は、数値範囲と併用される場合、その境界を、記載の数値超および数値未満に拡大することによって範囲を修正する。一般に「約」という用語は、本明細書ではある数値を１０％の分散だけ記載値超および記載値未満に修正するために使用される。
【０１９０】
Ｘ線粉末回折パターンにおける１つまたは複数のピーク位置に先行する「約」という用語は、それが先行する群のピークのすべてが、角度位置（２シータ）に関して±０．３°の許容できる変動性を伴って報告されることを意味する。±０．３°の変動性は、２つの粉末Ｘ線回折パターンを比較する場合に使用されることを企図する。実際、あるパターンの回折パターンピークが、測定されたピーク位置±０．３°である範囲の角度位置（２シータ）に割り当てられ、ピーク位置の範囲が重複する場合、２つのピークは、同じ角度位置を有するとみなされる。例えば、あるパターンのピークが１１．０°の位置を有すると決定される場合、比較目的のために、許容できる変動性によって、そのピークは１０．７°〜１１．３°の範囲内の位置に割り当てることができる。
【０１９１】
摂氏として報告される、ＤＳＣ、ＴＧＡ、ＴＧ、またはＤＴＡの値に先行する「約」という用語は、±５℃の許容できる変動性を有する。
【０１９２】
より簡単に説明するために、本明細書の定量的表現のいくつかは、約Ｘの量〜約Ｙの量の範囲として記載される。ある範囲が記載される場合、その範囲は、記載された上限および下限に限定されず、約Ｘの量から約Ｙの量までの全範囲、またはそれに含まれる任意の範囲を含むと理解される。
【０１９３】
さらに本明細書では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を薬学的に許容される担体と共に含有する医薬組成物が提供される。結晶形（Ｉ−ＨＳ）を活性成分として含有する医薬組成物は、従来の医薬調合技術に従って、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を医薬担体と十分に混合することによって調製することができる。担体は、所望の投与経路（例えば、経口、非経口）に応じて多種多様な形態をとり得る。したがって、懸濁液、エリキシルおよび溶液などの液体経口調製物では、適切な担体および添加物質には、水、グリコール、油、アルコール、矯味矯臭剤、防腐剤、安定剤、着色剤等が含まれ、散剤、カプセル剤および錠剤などの固体経口調製物では、適切な担体および添加物質には、デンプン、糖、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等が含まれる。また固体経口調製物は、糖などの物質でコーティングすることができ、または主な吸収部位を調節するために腸溶コーティングすることができる。非経口投与では、担体は、通常は滅菌水からなり、他の成分を添加して、溶解度または保存を増大することができる。また、水性担体を適切な添加物質と共に利用して、注射可能な懸濁液または溶液を調製することができる。
【０１９４】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、任意の好都合な経路によって、例えば胃腸管（例えば、直腸または経口）、鼻、肺、筋系もしくは脈管構造に投与することができ、または経皮もしくは皮膚投与することができる。結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、任意の好都合な投与形態、例えば錠剤、散剤、カプセル剤、溶液、分散液、懸濁液、シロップ、スプレー、坐剤、ゲル、エマルション、パッチ等で投与することができる。このような組成物は、医薬調製物に従来見られる構成成分、例えば希釈剤、担体、ｐＨ調整剤、甘味剤、増量剤、およびさらなる活性剤を含有することができる。非経口投与が望ましい場合、組成物は、無菌であり、注射または注入に適した溶液または懸濁液形態である。このような組成物は、本発明のさらなる一態様を形成する。
【０１９５】
また本明細書では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を含む医薬組成物が提供される。本明細書で提供される医薬組成物を調製するために、活性成分としての結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、従来の医薬調合技術に従って医薬担体と十分に混合され、この担体は、例えば経口投与または筋肉内などの非経口投与に望ましい調製物の形態に応じて、多種多様な形態をとり得る。経口剤形の組成物の調製では、通常の医薬媒体のいずれを用いることもできる。したがって、例えば懸濁液、エリキシルおよび溶液などの液体経口調製物では、適切な担体および添加物質には、水、グリコール、グリセロール、油、シクロデキストリン、アルコール、例えばエタノール、矯味矯臭剤、防腐剤、着色剤等が含まれ、例えば散剤、カプセル剤、カプレット、ジェルキャップおよび錠剤などの固体経口調製物では、適切な担体および添加物質には、デンプン、糖、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等が含まれる。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然の糖、例えばグルコースまたはベータ−ラクトース、トウモロコシ甘味剤、天然および合成ガム、例えばアカシア、トラガントまたはオレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が含まれるが、それらに限定されない。崩壊剤には、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等が含まれるが、それらに限定されない。
【０１９６】
錠剤およびカプセル剤は、投与し易いという理由で最も有利な経口単位剤形となっており、この場合、明らかに固体医薬担体が用いられる。所望に応じて、錠剤は、標準技術によって糖でコーティングすることができ、または腸溶コーティングすることができる。非経口では、担体は、通常は滅菌水を含むが、例えば溶解度を補助するなどの目的で、または保存のために他の成分を含むこともできる。注射可能な懸濁液を調製することもでき、その場合、適切な液体担体、懸濁化剤等を用いることができる。本明細書の医薬組成物は、投与単位、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、注射剤、スプーン１杯当たり、前述の有効用量を送達するのに必要な活性成分の量を含有する。
【０１９７】
本明細書の医薬組成物は、単位投与単位、例えば錠剤、カプセル剤、懸濁液、溶液、再構成のための小袋（ｓａｃｈｅｔ）、粉末、注射、Ｉ．Ｖ．、坐剤、舌下／頬側フィルム、スプーン１杯当たり、約０．１〜１０００ｍｇまたはそれに含まれる任意の範囲を含有し、約０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇ／日またはそれに含まれる任意の範囲、好ましくは約０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日またはそれに含まれる任意の範囲の投与量で投与することができる。一部の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、単位投与単位当たり、約２５ｍｇ〜約５００ｍｇの本明細書で提供される化合物を含有する（例えば、約２５ｍｇ〜約４００ｍｇ、約２５ｍｇ〜約３００ｍｇ、約２５ｍｇ〜約２５０ｍｇ、約２５ｍｇ〜約２００ｍｇ、約２５ｍｇ〜約１５０ｍｇ、約２５ｍｇ〜約１００ｍｇ、約２５ｍｇ〜約７５ｍｇ、約５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約１５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、約２００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約２５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、約３００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約４００ｍｇ〜約５００ｍｇ、約５０〜約２００ｍｇ、約１００〜約２５０ｍｇ、約５０〜約１５０ｍｇ）。一部の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、単位投与単位当たり、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、または約５００ｍｇの本明細書で提供される化合物を含有する。しかし、投与量は、患者の要件、処置を受ける状態の重症度、および用いられる化合物に応じて変わり得る。一部の実施形態では、投与量は、１日１回（ＱＤ）または１日２回（ＢＩＤ）投与される。
【０１９８】
好ましくはこれらの組成物は、経口、非経口、鼻腔内、舌下もしくは直腸投与のために、または吸入もしくは吹送によって投与するために、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒、無菌非経口溶液、または懸濁液、定量エアロゾルもしくは液体スプレー、ドロップ、アンプル、自動注入デバイスもしくは坐剤などの単位剤形で存在する。あるいは、組成物は、週１回または月１回投与するのに適した形態で提示することができ、例えばデカン酸塩などの活性化合物の不溶性塩は、筋肉内注射のためのデポー調製物を提供するために適合させることができる。錠剤などの固体組成物を調製するために、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を、医薬担体、例えば従来の錠剤化成分、例えばトウモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガム、および他の医薬希釈剤、例えば水と混合して、結晶形（Ｉ−ＨＳ）の均質混合物を含有する固体予備製剤組成物を形成する。これらの予備製剤組成物が均質なものとして言及される場合、活性成分が組成物中に均一に分散し、したがってその組成物が、錠剤、丸剤およびカプセル剤などの等しく有効な剤形に容易に細分され得ることを意味する。次に、この固体予備製剤組成物は、０．１〜約１０００ｍｇまたはそれに含まれる任意の量もしくは範囲の本明細書で提供される活性成分を含有する、前述のタイプの単位剤形に細分される。新規な組成物の錠剤または丸剤は、作用が長続きする利点をもたらす剤形を提供するためにコーティングすることができ、またはその他の方法で調合することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内側の投与構成成分と外側の投与構成成分を含むことができ、外側の投与構成成分は、内側の投与構成成分の上に外被の形態で存在する。２種の構成成分は、胃内での崩壊に耐え、内側構成成分を十二指腸へと無傷で通過させ、または遅延放出させることができる腸溶層によって分離され得る。このような腸溶層またはコーティングのために、様々な材料を使用することができ、このような材料には、いくつかのポリマー酸と共に、セラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースなどの材料が含まれる。
【０１９９】
本明細書で提供される新規な組成物を、経口投与または注射による投与のために組み込むことができる液体形態には、水溶液、シクロデキストリン、適切に風味付けられたシロップ、水性または油性懸濁液、および綿実油、ゴマ油、ヤシ油またはピーナッツ油などの食用油で風味付けられたエマルション、ならびにエリキシルおよび類似の医薬ビヒクルが含まれる。水性懸濁液に適した分散化剤または懸濁化剤には、合成および天然ガム、例えばトラガント、アカシア、アルギネート、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニル−ピロリドンまたはゼラチンが含まれる。非経口投与では、無菌の懸濁液および溶液が望ましい。一般に、適切な防腐剤を含有する等張調製物は、静脈内投与が望ましい場合に用いられる。
【０２００】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、適切な鼻腔内ビヒクルの局所使用によって鼻腔内形態で、または当業者に周知の経皮皮膚パッチによって投与することができる。経皮送達系の形態で投与するには、投与量の投与は、当然のことながら投与レジメンを通して間欠的ではなく連続的に行われることになる。
【０２０１】
本明細書で提供される医薬組成物を調製するために、活性成分としての結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、従来の医薬調合技術に従って医薬担体と十分に混合され、この担体は、投与（例えば経口また非経口）に望ましい調製物の形態に応じて、多種多様な形態をとり得る。薬学的に許容される適切な担体は、当技術分野で周知である。これらの薬学的に許容される担体のいくつかの説明は、ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎおよびｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ刊行、Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓに見出され得る。
【０２０２】
医薬組成物を製剤化する方法は、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．刊行、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｔａｂｌｅｔｓ、第２版、Ｒｅｖｉｓｅｄ  ａｎｄ  Ｅｘｐａｎｄｅｄ、１〜３巻、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら編集；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ、１〜２巻、Ａｖｉｓら編集；およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：  Ｄｉｓｐｅｒｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、１〜２巻、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら編集などの数々の刊行物に記載されている。
【０２０３】
本明細書で提供される化合物は、がん、疼痛、炎症、神経変性疾患またはＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ感染症の処置が必要な場合はいつでも、先の組成物のいずれかで、当技術分野で確立された投与レジメンに従って投与することができる。
【０２０４】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）の１日投与量は、成人１人当たり１日１．０〜１０，０００ｍｇの広範囲で、またはそれを超える量で、またはその範囲に含まれる任意の範囲で変わり得る。経口投与では、組成物は、好ましくは処置される患者への投与量を対症的に調整するために、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、１５０、２００、２５０および５００ミリグラムの活性成分を含有する錠剤の形態で提供される。有効量の薬物は、普通は、体重１ｋｇ当たり１日約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇまたはそれに含まれる任意の範囲の投与量レベルで供給される。好ましくは、範囲は、体重１ｋｇ当たり１日約０．５〜約５００ｍｇまたはそれに含まれる任意の範囲である。より好ましくは体重１ｋｇ当たり１日約１．０〜約２５０ｍｇまたはそれに含まれる任意の範囲である。より好ましくは体重１ｋｇ当たり１日約０．１〜約１００ｍｇまたはそれに含まれる任意の範囲である。一例では、範囲は、体重１ｋｇ当たり１日約０．１〜約５０．０ｍｇまたはそれに含まれる任意の量もしくは範囲であり得る。別の例では、範囲は、体重１ｋｇ当たり１日約０．１〜約１５．０ｍｇまたはそれに含まれる任意の範囲であり得る。さらに別の例では、範囲は、体重１ｋｇ当たり１日約０．５〜約７．５ｍｇまたはそれに含まれる任意の量もしくは範囲であり得る。結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１日１〜４回のレジメンで、または１日１回用量で投与され得る。
【０２０５】
投与される最適な投与量は、当業者によって容易に決定され、投与様式、調製物の強度、投与様式、および病状の進行度によって変わる。さらに、患者の年齢、体重、食事および投与時間を含む、処置を受ける特定の患者に関連する因子によって、投与量を調整する必要がある。
【０２０６】
当業者は、一般に許容される適切な公知の細胞および／または動物モデルを使用するｉｎ  ｖｉｖｏ治験およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ治験の両方によって、試験化合物が所与の障害を処置または防止する能力を予測できることを認識されよう。
【０２０７】
当業者はさらに、健康な患者および／または所与の障害に罹患している患者におけるヒト初回治験、用量決定治験および有効性治験を含むヒト臨床治験が、臨床分野および医療分野で周知の方法に従って完了され得ることを認識されよう。
【０２０８】
明細書に見出される頭字語は、以下の意味を有する。
【表１３−２】
2017535550.tif 000023
【０２０９】
以下の実施例は、本発明を例示し、本発明の理解の一助にするために記載されており、以下に続く特許請求の範囲に記載の本発明を、いかなる方式でも制限することを企図せず、また制限すると解釈されるべきではない。
【０２１０】
下記の実施例では、別段指定されない限り、すべての温度は摂氏で記載されている。試薬は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ＥＭＤ、ＪＴ  Ｂａｋｅｒ、またはＰｈａｒｃｏ−Ａａｐｅｒなどの商業的供給者から購入し、別段指定されない限りさらなる精製なしに使用した。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ヘプタンおよび他の有機溶媒は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、ＡＣＲＯＳ、Ａｌｆａ−Ａｅｓａｒ、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、ＴＣＩ、またはＭａｙｂｒｉｄｇｅなどの商業的供給者から購入し、そのまま使用した。
【０２１１】
当業者は、別段特定されない場合、反応ステップ（複数可）が、公知の方法に従って所望の生成物を提供するのに適した条件下で実施されることを認識されよう。当業者はまた、本明細書に開示の反応ステップが、様々な溶媒または溶媒系中で実施され得る場合、前記反応ステップは、適切な溶媒または溶媒系の混合物中でも実施され得ることを認識されよう。当業者は、本明細書に提示の明細書および特許請求の範囲において、試薬または試薬のクラス／タイプ（例えば、塩基、溶媒等）が、ある方法の２つ以上のステップに記載される場合、個々の試薬は、反応ステップごとに独立に選択され、互いに同じであっても異なっていてもよいことを認識されよう。例えば、ある方法の２つのステップに、有機または無機塩基が試薬として列挙されている場合、第１のステップで選択される有機または無機塩基は、第２のステップの有機または無機塩基と同じあっても異なっていてもよい。
【０２１２】
下記の反応は、一般に「ＡＣＳグレード」の溶媒中、窒素陽圧下で行い（別段指定されない限り）、反応フラスコには、典型的に、シリンジまたは添加漏斗を介して基質および試薬を導入するためのゴムセプタムを嵌めた。
【０２１３】
工程中のモニタリングおよび分析には、２つの逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）系を使用し、アセトニトリルおよび水／トリフルオロ酢酸を移動相として使用した。ある系では、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｘｔｅｎｄ  Ｃ１８カラムを２６４ｎｍで用い、その他の系（以下、「ＴＲＫ１ＰＭ１  ＨＰＬＣ」）では、Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｂｒｉｄｇｅ  Ｐｈｅｎｙｌ  Ｃｏｌｕｍｎを２６８ｎｍで用いた。別段の指定がない限り、前者の系を使用した。両方の系のシリカを、化合物を入れたフラスコ中で撹拌し、次にポリプロピレン布で濾過した後、分析した。
【０２１４】
式Ｉの化合物の非晶質遊離塩基形態：（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド約１グラムを、最小量の水に溶解させ、約−２６℃の温度に冷却した後、凍結乾燥機で２４時間乾燥させる。凍結乾燥機から得られた非晶質材料約２０ｍｇを秤量してバイアルに入れ、それに５体積の一定分量の適切な溶媒系を添加した。混合物を、溶解について調べ、溶解が明らかにならなかった場合には約４０℃に加熱し、再び調べた。この手順を、溶解が観測されるまで、または１００体積の溶媒が添加されるまで継続した。凍結乾燥実験から得られた非晶質材料のＸＲＰＤパターンを、図７に示す。
【０２１５】
式Ｉの化合物の非晶質硫酸水素塩を、国際公開第２０１０／０４８３１４号の実施例１４Ａに記載の通り調製した（実施例３参照）。この方法によって調製した２つの異なるロットの非晶質材料のＸＲＰＤパターンを、図２８に示す。
【０２１６】
また本明細書では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を調製する方法が提供される。一部の実施形態では、この方法は、スキーム１に示されるステップを含む。
【０２１７】
一部の実施形態では、本明細書において、
（ａ）濃硫酸を、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドのＥｔＯＨ溶液に添加して、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドの硫酸水素塩を形成するステップと、
（ｂ）ステップ（ａ）の溶液にヘプタンを添加して、スラリーを形成するステップと、
（ｃ）スラリーを濾過して、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩を単離するステップと、
（ｄ）前記（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩を、水／２−ブタノンの５：９５ｗ／ｗ溶液と混合するステップと、
（ｅ）エタノールの重量パーセントが約０．５％になるまで、ステップ（ｄ）の混合物を、撹拌しながら約６５〜７０℃で加熱して、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩の結晶形のスラリーを形成するステップと、
（ｆ）（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩の結晶形を、濾過によって単離するステップと
を含む、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を調製する方法が提供される。
【０２１８】
一部の実施形態では、先の方法はさらに、（ｂ１）ステップ（ａ）の溶液に、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩を室温でシード添加し、その溶液を、スラリーが形成されるまで撹拌するステップをさらに含む。
【０２１９】
一部の実施形態では、本明細書において、
（ａ）５−クロロ−３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンを、塩基の存在下で（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン（Ｒ）−２−ヒドロキシスクシネートと反応させて、（Ｒ）−５−（２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンを形成するステップと、
（ｂ）前記（Ｒ）−５−（２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンを、Ｚｎおよび塩酸で処理して、（Ｒ）−５−（２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−アミンを形成するステップと、
（ｃ）前記（Ｒ）−５−（２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−アミンを、塩基およびクロロギ酸フェニルで処理して、フェニル（Ｒ）−（５−（２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）カルバメートを形成するステップと、
（ｄ）前記フェニル（Ｒ）−（５−（２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）カルバメートを、（Ｓ）−ピロリジン−３−オールと反応させて、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドを形成するステップと、
（ｅ）硫酸を、前記（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドに添加して、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩を形成するステップと、
（ｆ）（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩の結晶形を単離するステップと
を含む、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を調製する方法が提供される。
【０２２０】
先のステップ（ａ）の一部の実施形態では、塩基は、アミン塩基、例えばトリエチルアミンである。
【０２２１】
先のステップ（ｃ）の一部の実施形態では、塩基は、アルカリ金属塩基、例えばアルカリ金属炭酸塩、例えば炭酸カリウムである。
【化４】
2017535550.tif 000024
【０２２２】
５−クロロ−３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンの調製
【０２２３】
ステップＡ−ナトリウムピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−オレートの調製：１Ｈ−ピラゾール−５−アミンおよび１，３−ジメチルピリミジン−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ジオン（１．０５当量）の溶液を、機械撹拌装置、蒸気ポット、還流冷却器、Ｊ−Ｋｅｍ温度プローブおよびＮ２陽圧制御のためのＮ２アダプターを備えた丸底フラスコに充填した。機械的に撹拌しながら、固体を、窒素雰囲気下で４体積（４ｍＬ／ｇ）の無水ＥｔＯＨに懸濁させ、次に２．１当量のＮａＯＥｔ（ＥｔＯＨ中２１ｗｔ％溶液）を充填し、その後１体積（１ｍＬ／ｇ）の無水ＥｔＯＨでラインによりすすいだ。スラリーを約７５℃に温め、ＴＲＫ１ＰＭ１  ＨＰＬＣによって１．５面積％未満の１Ｈ−ピラゾール−５−アミンが観測されるまで穏やかに還流させながら撹拌して、脱イオン水４ｍＬで希釈したスラリー２０μＬおよび５μＬ注入を２２０ｎｍで使用し、反応を進行させた。
【０２２４】
さらに１時間後、混合物に２．５体積（２．５ｍＬ／ｇ）のヘプタンを充填し、次に７０℃で１時間還流させた。次に、スラリーを終夜室温で冷却した。固体を、卓上漏斗およびポリプロピレン濾布で濾過によって収集した。反応器をすすぎ、濾過ケーキの上に４体積（４ｍＬ／ｇ）のヘプタンを充填し、ケーキを引き抜き、固体を、風袋引きした乾燥トレイに移し、重量が一定になるまで、４５℃において高真空下でオーブン乾燥させた。薄黄色固体のナトリウムピラゾロ［１，５−ａ］−ピリミジン−５−オレートを、収率９３〜９６％（補正済）で得、ＨＰＬＣによって９９．５面積％超が観測された（脱イオン水で１ｍｇ／ｍＬに希釈、ＴＲＫ１ＰＭ１、２２０ｎｍ）。
【０２２５】
ステップＢ−３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５（４Ｈ）−オンの調製：風袋引きした丸底フラスコに、３．０体積（３．０ｍＬ／ｇ）の脱イオン水に４０〜４５℃で溶解させたナトリウムピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−オレートを充填し、次に２．４×重量の出発材料が観測されるまで（１．４体積／１．４ｍＬ／ｇの脱イオン水含量）、ロータリーエバポレーターにより水浴中６５℃において高真空下で濃縮した。残留ＥｔＯＨ（ＭｅＯＨ約１ｍＬに溶解させた溶液３０μＬ）についてガスクロマトグラフィー（ＧＣ）を実施すると、１００ｐｐｍ未満と示され、後にＨＮＯ３を添加すると微量の硝酸エチル煙霧が下部に観測された。ある場合には、元の溶液に追加の１．５体積（１．５ｍＬ／ｇ）のＤＩ水を充填し、次に２．４×重量の出発材料が観測されるまで（１．４体積／１．４ｍＬ／ｇのＤＩ水含量）、ロータリーエバポレーターにより水浴中６５℃において高真空下で濃縮した。残留ＥｔＯＨ（ＭｅＯＨ約１ｍＬに溶解させた溶液３０μＬ）についてガスクロマトグラフを実施すると、＜＜１００ｐｐｍの残留ＥｔＯＨが示され、後にＨＮＯ３を添加しても硝酸エチル煙霧は下部に観測されなかった。
【０２２６】
機械撹拌装置、蒸気ポット、還流冷却器、Ｊ−Ｋｅｍ温度プローブおよびＮ２陽圧制御のためのＮ２アダプターを備えた丸底容器に、３体積（３ｍＬ／ｇ、１０当量）の＞９０ｗｔ％ＨＮＯ３を充填し、外部の氷水冷却浴を窒素雰囲気下で使用して、窒素雰囲気下で約１０℃まで冷却した。均圧添加漏斗を使用し、ＨＮＯ３溶液に、３５〜４０℃の内部温度を維持する速度で、１．７５〜１．９５体積のナトリウムピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−オレートの脱イオン水溶液（ＤＩ水１．１６〜１．４ｍＬ／ｇのナトリウムピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−オレート）を冷却しながら充填した。硝酸エチル煙霧なしに、２種の共沸混合物が観測された。共沸混合物のフラスコ、移送ライン（適用できる場合）および添加漏斗を、２×０．１体積（２×０．１ｍＬ／ｇ）の脱イオン水ですすぎ、反応混合物に添加した。添加が完了したら、温度を約３時間かけて約４５〜５０℃に徐々に上昇させると、ＨＰＬＣは、ナトリウムピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５−オレートから３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５（４Ｈ）−オンへの＞９９．５面積％の変換を示した。
【０２２７】
ステップＣ−５−クロロ−３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンの調製：３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５（４Ｈ）−オンを、機械撹拌装置、加熱マントル、還流冷却器、Ｊ−Ｋｅｍ温度プローブおよびＮ２陽圧制御のためのＮ２アダプターを備えた丸底フラスコに充填した。機械的に撹拌しながら、固体を、８体積（８ｍＬ／ｇ）のＣＨ３ＣＮに懸濁させ、次に２，６−ルチジン（ｌｕｔｉｔｉｎｅ）（１．０５当量）を充填した後、スラリーを約５０℃に温めた。均圧添加漏斗を使用し、混合物に０．３３当量のＰＯＣｌ３を滴下により充填した。この充填によって、粘度が高い三量体のベージュ色スラリーが得られ、それを、半流動性の塊が観測されるまで、撹拌しながらホモジナイズした。温度を安定にしながら追加の１．６７当量のＰＯＣｌ３を混合物に充填した後、反応混合物を温めて、穏やかに還流させた（７８℃）。混合物を温めるといくらか煙霧が観測されたが、後に粘度が高いスラリーが希薄になるにつれて消失した。
【０２２８】
反応混合物が、暗色溶液に完全に溶解し、ＨＰＬＣ（ＣＨ３ＣＮ５ｍＬで２０μＬに希釈、ＴＲＫ１ＰＭ１  ＨＰＬＣ、５μＬ注入、２６８ｎｍ）によって、三量体（ＲＲＴ０．９２）が存在しないことが確認されるまで還流させると、ルチジンに関する初期に溶出する任意の妨害ピークを面積積分から手動で除去することによって、０．５面積％未満の３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５（４Ｈ）−オン（ＲＲＴ０．７９）が観測された。１．９ｋｇスケールでは、１９時間穏やかに還流させた後に、ＴＲＫ１ＰＭ１  ＨＰＬＣを２６８ｎｍで使用すると、０面積％の三量体、０．２５面積％の３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−５（４Ｈ）−オン、および９９．５面積％の５−クロロ−３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンが観測された。
【化５】
2017535550.tif 000025
【０２２９】
（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン（Ｒ）−２−ヒドロキシスクシネートの調製
【０２３０】
ステップＡ−ｔｅｒｔ−ブチル（４−（２，５−ジフルオロフェニル）−４−オキソブチル）−カルバメートの調製：２−ブロモ−１，４−ジフルオロベンゼン（１．５当量）を、４体積のＴＨＦ（ｔｅｒｔ−ブチル２−オキソピロリジン−１−カルボキシレートの重量に基づく）に溶解させ、約５℃に冷却した。２．０ＭのｉＰｒＭｇＣｌのＴＨＦ（１．４当量）溶液を、反応温度を２５℃未満に維持しながら２時間かけて混合物に添加した。その溶液を約５℃に冷却し、１時間撹拌した（ＧＣ分析によって、グリニャールの形成が確認された）。ｔｅｒｔ−ブチル２−オキソピロリジン−１−カルボキシレート（１．０当量）の１体積のＴＨＦ中の溶液を、反応温度を２５℃未満に維持しながら約３０分かけて添加した。反応物を約５℃で９０分間撹拌した（ｔｅｒｔ−ブチル２−オキソピロリジン−１−カルボキシレートは、ＨＰＬＣによって０．５面積％未満であることが確認された）。反応温度を４５℃未満に維持しながら、５体積の２Ｍ  ＨＣｌ水溶液で反応をクエンチした。次に、反応物を分液漏斗に移し、１０体積のヘプタンを添加し、水性層を除去した。有機層を、４体積の飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した後、２×１体積の飽和ＮａＣｌ水溶液を添加した。有機層では、約７体積の最小蒸留体積とともに添加される２×４体積のヘプタンのために、蒸留温度３５〜５５℃および蒸留圧力１００〜２００ｍｍＨｇにおいて溶媒をヘプタンに切り替えた（＜１％ｗｔのＴＨＦがＧＣによって確認された）。次に混合物を、約５５℃に加熱しながらヘプタンで１０体積まで希釈し、混合物を終夜室温に冷却して、より粘度が高い固体を得た。スラリーを５℃未満に冷却し、ポリプロピレン濾布で濾過した。湿潤ケーキを、２×２体積のヘプタンで洗浄した。重量が一定になるまで、固体を５５℃において真空下で乾燥させると、ｔｅｒｔ−ブチル（４−（２，５−ジフルオロフェニル）−４−オキソブチル）−カルバメートが白色固体として理論的収率約７５％〜８５％で得られた。
【０２３１】
ステップＢ−５−（２，５−ジフルオロフェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールの調製：ｔｅｒｔ−ブチル（４−（２，５−ジフルオロフェニル）−４−オキソブチル）−カルバメートを、５体積のトルエンに溶解させ、２．２当量の１２Ｍ  ＨＣｌを添加すると穏やかな発熱およびガスの発生が観測された。反応物を６５℃で１２〜２４時間加熱し、ＨＰＬＣによってモニターした。完了したら、反応物を氷／水浴で１５℃未満に冷却した。ｐＨを、３当量の２Ｍ  ＮａＯＨ水溶液（４．７体積）で約１４に調整した。反応物を室温で１〜２時間撹拌した。混合物を、トルエンを入れた分液漏斗に移した。水性層を除去し、有機層を３体積の飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機層を、油状物になるまで濃縮し、１．５体積のヘプタンに再溶解させた。得られた懸濁液を、ＧＦ／Ｆ濾紙で濾過し、濃縮すると、５−（２，５−ジフルオロフェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールの淡黄色油状物が理論的収率９０％〜１００％で得られた。
【０２３２】
ステップＣ−（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジンの調製：クロロ−１，５−シクロオクタジエンイリジウム二量体（０．２ｍｏｌ％）および（Ｒ）−２−（２−（ジフェニルホスフィノ）フェニル）−４−イソプロピル−４，５−ジヒドロオキサゾール（０．４ｍｏｌ％）を、５体積のＭＴＢＥ（５−（２，５−ジフルオロフェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロールに基づく）に室温で懸濁させた。混合物を１時間撹拌すると、固体の大部分が溶解して、溶液が暗赤色に変化した。触媒の形成を、ＨＰＬＣ／ＰＤＡ検出器を使用してモニターした。反応物を５℃未満に冷却し、５−（２，５−ジフルオロフェニル）−３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロール（１．０当量）を、０．５体積のＭＴＢＥすすぎ液を使用して添加した。ジフェニルシラン（１．５当量）を、反応温度を１０℃未満に維持しながら約２０分かけて添加した。反応物を１０℃未満で３０分間撹拌し、次に室温に温めた。反応物を室温で終夜撹拌した。ＨＰＬＣによって反応の完了を確認し、次に５℃未満に冷却した。温度を２０℃未満に維持しながら、５体積の２Ｍ  ＨＣｌ水溶液で反応をクエンチした。１０分後に氷／水浴を除去し、２時間撹拌しながら反応温度を室温に上昇させた。混合物を、３体積のＭＴＢＥを入れた分液漏斗に移した。水性層を３．５体積のＭＴＢＥで洗浄した後、５体積のＭＴＢＥを水性層に添加すると同時に、０．７５体積の５０％ＮａＯＨ水溶液を添加することによってｐＨを約１４に調整した。有機層を、５体積の飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、次に油状物になるまで濃縮し、３体積のＭＴＢＥで希釈した。その溶液をポリプロピレン濾布で濾過し、１体積のＭＴＢＥですすいだ。濾液を濃縮すると、（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジンの油状物が理論的収率９５％〜１００％および７５〜８５％ｅｅで得られた。
【０２３３】
ステップＤ−（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン（Ｒ）−２−ヒドロキシ−スクシネートの調製：（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン（１．０当量）を、１５体積（効力について補正済）のＥｔＯＨ（２００プルーフ）を充填した丸底フラスコに移した。Ｄ−リンゴ酸（１．０５当量）を添加し、混合物を６５℃に加熱した。固体すべてが約６４℃で溶解した。その溶液をＲＴに冷却した。約５５℃で、その溶液に（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン（Ｒ）−２−ヒドロキシ−スクシネート（約５０ｍｇ、＞９７％ｅｅ）をシード添加し、終夜室温で撹拌した。次に、懸濁液をポリプロピレン濾布で濾過し、２×１体積のＥｔＯＨ（２００プルーフ）で洗浄した。固体を、５５℃において真空下で乾燥させると、（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン（Ｒ）−２−ヒドロキシ−スクシネートが理論的収率７５％〜９０％および＞９６％ｅｅで得られた。
【０２３４】
スキーム１を参照して、適切な塩基には、第三級アミン塩基、例えばトリエチルアミン、およびＫ２ＣＯ３が含まれる。適切な溶媒には、エタノール、ヘプタンおよびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）が含まれる。反応は、好都合には５℃〜５０℃の温度で実施される。反応の進行は、一般にＨＰＬＣ  ＴＲＫ１ＰＭ１によってモニターした。
【化６】
2017535550.tif 000026
【０２３５】
化合物ＩＩ（５−クロロ−３−ニトロピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン）およびＩＩＩ（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン（Ｒ）−２−ヒドロキシスクシネート、１．０５当量）を、機械撹拌装置、Ｊ−Ｋｅｍ温度プローブおよびＮ２陽圧制御のためのＮ２アダプターを備えた丸底フラスコに充填した。４：１のＥｔＯＨ：ＴＨＦ（１０ｍＬ／ｇの化合物ＩＩ）溶液を添加し、その後トリエチルアミン（ＮＥｔ３、３．５０当量）を添加漏斗で添加すると、添加中に温度が約４０℃に達した。添加が完了したら、反応混合物を５０℃に加熱し、０．５〜３時間撹拌して化合物ＩＶを得た。
【０２３６】
機械撹拌装置、Ｊ−Ｋｅｍ温度プローブおよびＮ２注入口を備えた丸底フラスコに、化合物ＩＶを添加し、その後テトラヒドロフラン（１０ｍＬ／ｇの化合物ＩＶ）を添加した。その溶液を氷浴で５℃未満に冷却し、Ｚｎ（９〜１０当量）を添加した。次に、温度を３０℃未満に維持するような速度で、６ＭのＨＣｌ（９〜１０当量）を滴下添加した（１ｋｇスケールでは、添加は約１．５時間かかった）。発熱が消失したら、反応物を室温に温め、化合物ＩＶがＨＰＬＣによって検出されなくなるまで３０〜６０分撹拌した。この時、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３、２．０当量）の水（５ｍＬ／ｇの化合物ＩＶ）溶液を一度に添加し、その後クロロギ酸フェニル（ＰｈＯＣＯＣｌ、１．２当量）を急速に滴下添加した。先の両方の添加中にガスの発生（ＣＯ２）が観測され、クロロギ酸フェニルを添加した後、温度が約３０℃に上昇した。形成されたカルバメートを、室温で３０〜９０分間撹拌した。直後にＨＰＬＣ分析を実施すると、溶液中にアミンが１面積％未満存在し、化合物ＶＩが高収率で存在することが確認された。
【０２３７】
先の溶液に、アミンＶＩＩ（（Ｓ）−ピロリジン−３−オール、化合物ＶＩの理論的収率に基づいて１．１当量）およびＥｔＯＨ（１０ｍＬ／ｇの化合物ＶＩ）を添加した。化合物ＶＩＩを、ＥｔＯＨの前にまたはＥｔＯＨと同時に添加して、エチルカルバメート不純物の形成を回避した。先のＥｔＯＨ溶液を、バッチ濃縮器を使用して減圧下で最小体積（４〜５ｍＬ／ｇ）まで濃縮し（ＴＨＦレベルは、ＧＣによって＜５％になるはずである）、ＥｔＯＨ（１０ｍＬ／ｇの化合物ＶＩ）を再び添加して、合計１０ｍＬ／ｇにした。次に、反応物を、９〜１９時間、またはＨＰＬＣによって化合物ＶＩが０．５面積％未満になるまで５０℃で加熱した。次に、反応物を室温に冷却し、硫酸（Ｈ２ＳＯ４、化合物ＶＩに対して１．０当量）を添加漏斗で添加すると、化合物Ｉ−ＨＳが得られ、温度は通常約３０℃の発熱を示した。
【実施例】
【０２３８】
（実施例１）
結晶形（Ｉ−ＨＳ）の調製（方法１）
（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（０．５００ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（２．５ｍＬ）に溶解させ、約５℃に冷却した。濃硫酸（０．０６３６ｍＬ、１．１７ｍｍｏｌ）を冷却溶液に添加し、室温に温めながら約１０分間撹拌した。メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（２ｍＬ）を、混合物にゆっくり添加すると、生成物がゴム状化して得られた。次に、ＥｔＯＨ（２．５ｍＬ）を混合物に添加し、すべての固体が溶解するまで、ほとんど還流状態で加熱した。室温に冷却し、約１時間撹拌すると、いくつかの固体が形成された。約５℃に冷却した後、固体を濾過し、ＭＴＢＥで洗浄した。濾過し、約１５分間風乾させた後、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩を固体として単離した。
【０２３９】
（実施例２）
結晶形（Ｉ−ＨＳ）の調製（方法２）
濃硫酸（３９２ｍＬ）を、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド３０３１ｇのＥｔＯＨ１８３２２ｍＬ中の溶液に添加すると、硫酸水素塩が形成された。その溶液に、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩２ｇをシード添加し、その溶液を室温で少なくとも２時間撹拌すると、硫酸水素塩のスラリーが形成された。ヘプタン（２０８８８ｇ）を添加し、スラリーを室温で少なくとも６０分間撹拌した。スラリーを濾過し、濾過ケーキを１：１ヘプタン／ＥｔＯＨで洗浄した。次に、固体を真空下で周囲温度において乾燥させた（オーブン温度を１５℃に設定した）。
【０２４０】
乾燥させた硫酸水素塩（組み合わせた４つのロットから６３８９ｇ）を、水／２−ブタノンの５：９５ｗ／ｗ溶液に添加した（総重量４１６５２ｇ）。混合物を、エタノールの重量パーセントが約０．５％になるまで撹拌しながら約６８℃で加熱すると、その間にスラリーが形成された。スラリーを濾過し、濾過ケーキを水／２−ブタノンの５：９５ｗ／ｗ溶液で洗浄した。次に、固体を、真空下で周囲温度において乾燥させると（オーブン温度を１５℃に設定した）、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩の結晶形が得られた。
【０２４１】
（実施例３）
非晶質形ＡＭ（ＨＳ）の調製
（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（９．４０ｇ、２１．９４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２２０ｍＬ）溶液に、急速に撹拌しながら、硫酸（ＭｅＯＨ中０．１Ｍ、２１９．４ｍＬ、２１．９４ｍｍｏｌ）を周囲温度でゆっくり添加した。３０分後、最初に反応物をロータリーエバポレーターによってほぼ乾燥するまで濃縮し、次に高真空状態で４８時間経過すると、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸塩の非晶質形が得られた（１１．３７ｇ、２１．５９ｍｍｏｌ、収率９８．４３％）。ＬＣＭＳ（ａｐｃｉ  ｍ／ｚ４２９．１、Ｍ＋Ｈ）。
【０２４２】
（実施例４）
式Ｉの結晶性ＨＣｌ塩の調製
ＥｔＯＨ（６ｍＬ、２００プルーフ）中（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（０．５５４ｇ、１．２９ｍｍｏｌ）およびＭＴＢＥ（１０ｍＬ）の混合物を、撹拌しながら５０℃に加熱して溶液を得、その後、塩化水素（濃）（０．１０８ｍＬ、１．２９ｍｍｏｌ）を一度に添加した。次に、反応混合物を最初に周囲温度に冷却し、次に氷水浴で撹拌しながら約５℃に冷却して、結晶化を誘導した。懸濁液を、氷水浴中で４時間撹拌した後、真空濾過し、濾過ケーキをＭＴＢＥですすぎ、真空下で５５℃において恒量まで乾燥させると、結晶性（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド塩酸塩（０．５３４ｇ、収率８９％）が得られた。ＬＣＭＳ（ａｐｃｉ  ｍ／ｚ４２９．２、Ｍ＋Ｈ）。
【０２４３】
式Ｉの結晶性ＨＢｒ塩の調製
ＥｔＯＨ（６ｍＬ、２００プルーフ）中（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（０．５０５ｇ、１．１８ｍｍｏｌ）およびＭＴＢＥ（１０ｍＬ）の混合物を、撹拌しながら５０℃に加熱して溶液を得、その後、臭化水素（３３％水溶液）（０．２１３ｍＬ、１．１８ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を加熱還流させると、ほぼ透明な溶液が得られ、反応容器のガラス壁に少量の油状残渣が得られた。周囲温度に冷却すると、沈殿が現れ、油状残渣が固化した。混合物を再び５０℃に加熱し、次に室温に冷却し、終夜撹拌した。懸濁液を真空濾過し、濾過ケーキをＭＴＢＥですすぎ、真空下で５５℃において恒量まで乾燥させると、結晶性（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド臭化水素酸塩（０．５１ｇ、収率８５％）が得られた。ＬＣＭＳ（ａｐｃｉ  ｍ／ｚ４２９．３、Ｍ＋Ｈ）。
【０２４４】
式Ｉの結晶性メシル酸塩の調製
ＥｔＯＨ（２．７ｍＬ、２００プルーフ）中（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（０．５３２ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）およびＭＴＢＥ（５．３ｍＬ）の混合物を、撹拌しながら５０℃に加熱して溶液を得、その後、メタンスルホン酸（０．０７６ｍＬ、１．２４ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を加熱還流させて、ほとんど透明な溶液を少量の微粒子と共に得た。周囲温度に冷却すると、沈殿が、いくらかの油状残渣と共に現れた。追加のＥｔＯＨ（０．５ｍＬ、２００プルーフ）およびメタンスルホン酸（０．０１０ｍＬ）を添加して、溶液を得た。反応混合物を再び５０℃に加熱し、次に室温に冷却し、１時間撹拌した。懸濁液を真空濾過し、濾過ケーキをＭＴＢＥですすぎ、真空下で５５℃において恒量まで乾燥させると、結晶性（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドメタンスルホネート（０．５１ｇ、収率７８％）が得られた。ＬＣＭＳ（ａｐｃｉ  ｍ／ｚ４２９．４、Ｍ＋Ｈ）。
【０２４５】
式Ｉの結晶性カンシル酸塩（ｃａｍｓｙｌａｔｅ  ｓａｌｔ）の調製
ＥｔＯＨ（３ｍＬ、２００プルーフ）中（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（０．５００ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）およびＳ−（＋）−カンファースルホン酸（０．２７１ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）およびＭＴＢＥ（５ｍＬ）の混合物を、撹拌しながら加熱還流させて、溶液を得た。周囲温度に冷却すると、沈殿が現れた。懸濁液を終夜室温で撹拌し、次に真空濾過し、濾過ケーキをＭＴＢＥですすぎ、真空下で５５℃において恒量まで乾燥させると、結晶性（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）ピロリジン−１−イル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド（（１Ｓ，４Ｒ）−７，７−ジメチル−２−オキソビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−イル）メタンスルホネートが得られた。
【０２４６】
（実施例５）
（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド塩の比較
（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミドの他の塩形態、例えば塩化水素、臭化水素、メシル酸塩、およびカンシル酸塩（実施例４参照）を、それらの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）融点、動的蒸気吸着（ＤＶＳ）重量増加、ならびに４０℃および７５％相対湿度（ＲＨ）におけるアルミニウムスライド上での安定性を決定することによって、結晶形（Ｉ−ＨＳ）と比較した。ＤＳＣおよびＤＶＳ測定を、前述の通り実施して、その結果を表１４にまとめた。
【表１４】
2017535550.tif 000027
【０２４７】
（実施例６）
ＴｒｋＡおよびＴｒｋＢ酵素アッセイ
Ｔｒｋキナーゼに結合する化合物の親和性を、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＬａｎｔｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）Ｅｕキナーゼ結合技術を使用して測定する。簡潔には、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから得たＨｉｓタグ付き組換え型ヒトＴｒｋ細胞質ドメイン（５ｎＭのＴＲＫＡ−カタログ番号ＰＶ３１４４または１０ｎＭのＴＲＫＢ−カタログ番号ＰＶ３６１６）を、５ｎＭのＡｌｅｘａ−Ｆｌｕｏｒ（登録商標）トレーサー２３６（ＰＲ９０７８Ａ）、２ｎＭビオチン化抗Ｈｉｓ（カタログ番号Ｍ４４０８）、および２ｎＭユーロピウム標識ストレプトアビジン（カタログ番号ＰＶ５８９９）と、２５ｍＭのＭＯＰＳ、ｐＨ７．５、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．００５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、および２％ＤＭＳＯからなる緩衝液中、試験化合物と共にインキュベートする。化合物を、典型的に、ＤＭＳＯによる３倍連続希釈で調製し、アッセイに添加して、適切な最終濃度を得る。２２℃で６０分間インキュベートした後、反応物を、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  ＥｎＶｉｓｉｏｎ多モードプレートリーダーを使用してＴＲ−ＦＲＥＴ二重波長検出によって測定し、対照のパーセント（ＰＯＣ）を、比率算出発光因子（ｒａｔｉｏｍｅｔｒｉｃ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ）を使用して算出する。１００ＰＯＣを、試験化合物を使用せずに決定し、０ＰＯＣを、酵素を完全に阻害する対照化合物の濃度を使用して決定する。ＰＯＣ値を、４パラメーターのロジスティック曲線にフィットさせ、ＩＣ５０値を、曲線が５０ＰＯＣで交差する点とする。結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、このアッセイで試験すると、ＴｒｋＡでは平均ＩＣ５０が８．４ｎＭであり、ＴｒｋＢでは、このアッセイで試験すると平均ＩＣ５０が４．２であった。
【０２４８】
（実施例７）
ＴＲＫ融合タンパク質は発癌を駆動し、結晶形（Ｉ−ＨＳ）によって阻害される
結晶形（Ｉ−ＨＳ）が、異なるＴｒｋ遺伝子融合を有する３種の異なるがん細胞株モデル：ＣＵＴＯ−３Ｆ細胞株、ＫＭ１２細胞株、およびＭＯ−９１細胞株の細胞増殖を阻害し得るかどうかを決定するために、一組の実験を実施した。ＣＵＴＯ−３Ｆ細胞は、ＭＰＲＩＰ−ＮＴＲＫ１遺伝子融合を有する肺腺癌の患者に由来する。ＫＭ１２細胞株は、ＴＰＭ３−ＮＴＲＫ１融合を有する結腸直腸がん細胞株である（Ｖａｉｓｈｎａｖｉら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．  １９巻：１４６９〜１４７２頁、２０１３年）。ＭＯ−９１細胞株は、ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ３融合を有する急性骨髄性白血病患者に由来する（Ｔａｉｐａｌｅら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ３１巻：６３０〜６３７頁、２０１３年）。結晶形（Ｉ−ＨＳ）で処理した後に細胞増殖を測定すると、３つすべての試験細胞株において細胞増殖の用量依存的阻害が実証された（図８〜１０）。ＩＣ５０は、ＣＵＴＯ−３Ｆ細胞では１００ｎｍ未満であり（図８）、ＫＭ１２細胞およびＭＯ−９１細胞では１０ｎｍ未満であった（それぞれ図９および１０）。
【０２４９】
細胞増殖の阻害と一致して、ＭＰＲＩＰ−ＴＲＫＡ腫瘍性タンパク質およびＥＲＫ１／２のリン酸化の阻害が、ＣＵＴＯ−３Ｆ細胞において低用量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）の使用で観測され（図１１）、ＫＭ１２細胞のＴＰＭ３−ＴＲＫＡ、ｐＡＫＴ、およびｐＥＲＫ１／２のリン酸化の阻害が、低用量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）の使用で観測され（図１２）、ＭＯ−９１細胞のＴＥＬ−ＴＲＫＣ腫瘍性タンパク質（ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ３によってコードされる）、ｐＡＫＴ、およびｐＥＲＫ１／２のリン酸化の阻害が、低用量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）の使用で観測された（図１３）。これらのデータをまとめると、Ｔｒｋ融合タンパク質が、構成的に活性であり、ＭＡＰＫおよびＡＫＴなどの非常に重要な下流シグナル伝達経路を調節し、結晶形（Ｉ−ＨＳ）によって阻害されることが示される。またこれらのデータは、結晶形（Ｉ−ＨＳ）が、調節不全のＴｒｋ（例えば、Ｔｒｋタンパク質の構成的に活性な形態（例えば、Ｔｒｋ融合タンパク質またはＴｒｋ点変異））を発現する異なるがんを処置するために使用できることを示している。
【０２５０】
（実施例８）
結晶形（Ｉ−ＨＳ）は未分化肉腫を有する被験体を処置することに成功した
４１歳の女性が、左鼠径部に硬い腫瘤（ｍａｓｓ）を呈した。初期画像化を使用すると、前側大腿の筋系に１０ｃｍの腫瘤の存在が確認された。直視下生検によって未分化肉腫が明らかになった。初期の病期分類走査では、転移性疾患と一致する複数の４〜１３ｍｍの両側肺小結節が実証された。女性は、化学療法、術前放射線、および肢温存外科手術（ｌｉｍｂ−ｓｐａｒｉｎｇ  ｓｕｒｇｅｒｙ）を用いる、ソラフェニブの第２相治験に登録された（臨床治験登録番号ＮＣＴ０２０５０９１９）。ソラフェニブ４００ｍｇを毎日２週間投与した後、患者にエピルビシン３０ｍｇ／ｍ２を毎日、イホスファミド２，５００ｍｇ／ｍ２を毎日、メスナと共に３日連続で投与し、毎日のソラフェニブを継続した。腫瘍は、全身治療のこの５週間でより有痛性になった。術前放射線のシミュレーション中に、腫瘍の拡大が腰筋内の頭側に見られたが、腸毒性が予測されたため、有効な放射線量の安全な投与が妨げられた。したがって、患者はプロトコルを中止し、外科的切除に進んだ。
【０２５１】
原発腫瘍の切除によって断端陰性が達成され、病理学的標本の再調査では９０％腫瘍壊死が確認された。初期スキャンの９週間後に得た再病期分類胸部ＣＴ（図２１Ａに示す）は、転移性疾患の悪化を示し、最大小結節の寸法は１８ｍｍであった。患者の術後過程では、多微生物性の創傷感染症を合併し、創傷デブリドマンの反復、および抗生物質治療の延長が必要となった。化学療法を再開する前に、胸部ＣＴを反復し、先の９週間にわたって、３ｃｍ超の複数の肺小結節、最大でほぼ７ｃｍの肺小結節、および大きい左胸水貯留を伴って劇的に進行したことを実証した。胸膜トンネルドレインを配置し、在宅酸素補給を開始した後、結晶形（Ｉ−ＨＳ）による処置に登録を待つ間、患者にドキソルビシン７５ｍｇ／ｍ２を一回投与した。
【０２５２】
患者の診断的な直視下腫瘍生検を、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅＨｅｍｅパネル（Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）を使用して試験した。数百のがんに関係する遺伝子の、ＤＮＡおよびＲＮＡシークエンシングを使用するこの複数標的の包括的ゲノムプロファイリング（ＣＧＰ）アッセイによって、ＬＭＮＡ−ＮＴＲＫ１融合遺伝子をもたらす、ラミンＡ／Ｃ遺伝子（ＬＭＮＡ）のエクソン１〜２およびＮＴＲＫ１遺伝子のエクソン１１〜１７をコードする遺伝子融合の存在が実証された（図１４）。またＣＧＰによって、腫瘍抑制因子ＣＤＫＮ２Ａ／Ｂの喪失が示されたが（示さず）、他の公知の発癌性変異は示されなかった。
【０２５３】
その後、患者の腫瘍試料で実施したｂｒｅａｋ−ａｐａｒｔ蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）アッセイでは、ＮＴＲＫ１遺伝子座が関与するゲノム変化と一致して、腫瘍核の６４％において優勢な単一の３’ＮＴＲＫ１（赤色蛍光シグナル）パターンが示されたが、このゲノム変化は、第１染色体の長腕上のＬＭＮＡとＮＴＲＫ１両方の位置および配向を考慮すると、２つの遺伝子間のゲノム欠失に続いたものである可能性が最も高い（図１５）。遺伝子融合由来の新規な融合転写物のｍＲＮＡ発現が、ＲＴ−ＰＣＲおよびシークエンシングによって確認された（図１６）。
【０２５４】
融合腫瘍性タンパク質のタンパク質の発現および機能活性の両方を評価するために、患者の腫瘍試料を使用して、新規な近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）を実施した。ＰＬＡは、キナーゼとそのアダプターの１つとの間の機能的シグナル伝達複合体をｉｎ  ｓｉｔｕで検出することができるので独特である。このアッセイでは、ＴＲＫＡキナーゼドメインのＹ４９６に結合する好ましいアダプターであるＳＨＣ１と複合体を形成したＴＲＫＡを測定した（図１７）。アッセイを、ヒト細胞株および患者由来のホルマリン固定腫瘍異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍試料の両方において検証した（図１８）。ＮＴＲＫ１のＲＮＡｉノックダウンは、ＭＰＲＩＰ−ＮＴＲＫ１融合遺伝子を有するＣＵＴＯ−３細胞株においてＴＲＫＡ−ＳＨＣ１複合体を崩壊させることが発見され（図１８Ａ〜Ｃ）、結晶形（Ｉ−ＨＳ）による阻害も発見された（図１８Ｄおよび１８Ｅ）。ＴＲＫのＰＬＡでは、ＭＰＲＩＰ−ＮＴＲＫ１遺伝子融合を有する患者由来の異種移植片（ＰＤＸ）由来のＦＦＰＥ腫瘍試料であるＣＵＬＣ００１において機能的シグナル伝達複合体が検出されるが、公知の発癌性駆動変異を有していないＰＤＸ  ＣＵＬＣ００２においては検出されない（図１８Ｆおよび１８Ｇ）。またＴＲＫ−ＳＨＣのＰＬＡでは、ＣＵＬＣ００１  ＰＤＸの末梢神経組織領域における陽性シグナルによって示される通り、非発癌性シグナル伝達複合体を検出することができるが、ＴＲＫ受容体ファミリーは、ニューロトロフィンによって媒介される活性を高度に発現する。このアッセイを患者の腫瘍試料に適用すると、腫瘍核と関連する強いシグナル伝達が実証されたが、血管ではごく弱いシグナルであった（ヒト内皮細胞は、ＬＭＮＡ−ＴＲＫＡ腫瘍性タンパク質による発癌性シグナル伝達と一致して、ＴＲＫＡを発現する（図１９ＡおよびＢ）。ＴＲＫ−ＳＨＣ１のＰＬＡでは、ＡＬＫ＋ＮＳＣＬＣ患者由来の腫瘍試料で陰性の結果が実証されたが、ＡＬＫ−ＧＲＢ２のＰＬＡでは陽性であり（図２０）、これにより、ヒト腫瘍試料における発癌性シグナル伝達を検出するこのアッセイの能力がさらに実証された。
【０２５５】
ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅＨｅｍｅアッセイによって検出され、次にＦＩＳＨおよびＲＴ−ＰＣＲによって検証されたＬＭＮＡ−ＮＴＲＫ１融合の存在と、患者の腫瘍試料におけるＴＲＫＡタンパク質発現およびＴＲＫ経路の機能活性の証拠を組み合わせると、患者が、ＴＲＫに特異的な阻害剤を用いる処置に適したＴＲＫ駆動性がんを有していることが示唆される。
【０２５６】
ＴＲＫ駆動癌遺伝子の存在を示唆する複数通りの遺伝的および機能的バイオマーカーデータに基づいて、患者に、結晶形（Ｉ−ＨＳ）の第１相治験への登録検討を進めた。１カ月後、患者は、治験に適格であることが見出され、書面でのインフォームドコンセントを提示した。ベースラインＣＴ走査では、両肺内に複数の大きい肺転移を伴う腫瘍進行の継続が示されたが、胸水貯留は、胸膜ドレインを配置した後に解消された（図２１Ｃ）。臨床所見では、患者は、著しい労作性呼吸困難を有しており、９０％の酸素飽和を維持するために酸素補給５Ｌが必要であった。ベースライン臨床検査値では、上昇したＣＡ１２５腫瘍マーカーレベルが目立っていた（図２２）。患者には、初期用量１００ｍｇの結晶形（Ｉ−ＨＳ）を投与した３日後に連続投与を開始し、その後、同日のおよそ１２時間後に同じ用量を投与し、研究プロトコルの通り、４８時間の薬物動態および安全性の評価を行った。患者は、３日後にサイクル１の１日目を開始した。患者に、薬物動態および安全性分析のために毎週面会した。薬物に関係する有害事象は記録されず、患者は、この４週間、労作性呼吸困難の改善を毎週経験した。ＣＡ１２５レベルは、サイクル１にわたり正常化された。サイクル２の１日目を開始する前にＣＴを実施すると、複数の肺転移の顕著な改善が実証され、ＲＥＣＩＳＴ  １．１によって部分的な応答があると判断された。サイクル３の１日目の前に反復ＣＴを実施すると、進行中の応答があることが実証され、したがってＲＥＣＩＳＴ  １．１によって部分的な応答があることが確認された（図２１Ｃ）。臨床的に、患者は、労作性呼吸困難が著しく改善され、室内空気で９７％の酸素飽和を有し、もはや酸素補給を必要としなかった。４カ月間の投与後、患者はいかなる有害事象も有していなかったが、これは結晶形（Ｉ−ＨＳ）に起因していた。これらのデータは、結晶形（Ｉ−ＨＳ）が、被験体の未分化肉腫、ならびに調節不全のＴｒｋタンパク質（例えば、Ｔｒｋタンパク質の構成的に活性な形態、例えばＴｒｋ融合タンパク質またはＴｒｋ点変異）を有する他のがんを処置できることを示している。
【０２５７】
ＬＭＮＡ−ＮＴＲＫ１遺伝子融合は、Ｓｐｉｔｚｏｉｄ  ｎｅｖｉにおいて既に報告されており、細胞中で発現すると構成的に活性化されて、ＥＲＫ１／２、ＡＫＴおよびＰＬＣγの活性化をもたらし、発癌能があることが実証されている（Ｔａｉｐａｌｅら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ３１巻：６３０〜６３７頁、２０１３年）。Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＦＭ）は、ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅＨｅｍｅ  ＣＧＰ試験を用いて１２７２の軟部組織肉腫試料を既に試験しており、その結果、この症例報告に記載の患者を含めた８つのＮＴＲＫ１またはＮＴＲＫ３融合が検出された（表１５）。特に、ＮＴＲＫ融合を有する８人の肉腫患者のうち６人は、２５歳未満であり（フィッシャー直接確率法、Ｐ値＝４×１０−４）、８人のうち４人は５歳未満であるが（フィッシャー直接確率法、Ｐ値＝２×１０−５）、このことは、小児患者（４．１％；９５％ＣＩ１．８％〜９．３％）、特に５歳未満の患者（１４．３％；９５％ＣＩ５．７％〜３１．５％）にＮＴＲＫ融合が検出される率が高いことを示している。また、検出された遺伝子融合の１つは、ＮＴＲＫ３遺伝子の大部分（エクソン１〜１７）がＨＯＭＥＲ２遺伝子（エクソン２〜９）の３’末端と組み合わさっており、それによって二量体化ドメイン（コイルドコイルドメイン）を含有し、したがってＥＧＦＲ、ＡＸＬ、およびＦＧＦＲ３などの複数の他のＲＴＫをコードする遺伝子について現在説明されている３’遺伝子融合事象となっていることは興味深い（Ｓｌｅｉｊｆｅｒら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ４６巻：７２〜８３頁、２０１０年；Ｌｉｎｃｈら、Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  １１巻：１８７〜２０２頁、２０１４年；Ｒｕｔｋｏｗｓｋｉら、Ｊ．  Ｅｕｒ．  Ａｃａｄ．  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．  Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．  ２５巻：２６４〜２７０頁、２０１１年）。
【表１５】
2017535550.tif 000028
【０２５８】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）が、Ｔｒｋキナーゼ活性を特異的に阻害することを示すために、さらなる実験を実施した。例えば、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、ＳＬＣ３４Ａ２−ＲＯＳ１融合タンパク質を発現する非小細胞肺がんに由来するＨＣＣ７８細胞株の細胞増殖は阻害しなかった（図２３）（Ｖａｉｓｈｎａｖｉら、Ｎａｔ  Ｍｅｄ．  １９巻：１４６９〜７２頁、２０１３年）。
【０２５９】
材料および方法
臨床治験
ＮＣＴ０２１２２９１３は、標準治療選択肢のない転移性または進行性固形腫瘍を有する任意抽出の患者における、選択的ｐａｎ−ＴＲＫである結晶形（Ｉ−ＨＳ）の安全性および薬物動態を評価する、進行中の多施設第１相用量漸増研究である。この研究は、その患者が登録するあらゆる施設において、施設内審査委員会によって承認されているものであり、適格患者は、参加するための書面でのインフォームドコンセントを提供する。結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１００ｍｇのカプセル剤で提供される。登録患者には、改変型３＋３設計に従って漸増用量の結晶形（Ｉ−ＨＳ）を投与し、耐えられない毒性、疾患の進行、または離脱の同意があるまで１日１回または１日２回、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を投与する。測定可能な疾患を有する患者において、有効性を、ＲＥＣＩＳＴ  １．１基準によって評価する。
【０２６０】
次世代シークエンシング（ＮＧＳ）
ＤＮＡおよびＲＮＡを抽出し、アダプターがライゲーションされたシークエンシングライブラリーを、溶液ハイブリダイゼーションによって、４０５のがんに関係する遺伝子およびＤＮＡ−ｓｅｑによって高頻度で再編成された３１の遺伝子、ならびにＲＮＡ−ｓｅｑによって高頻度で再編成された２６５の遺伝子（ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎＯｎｅ  Ｈｅｍｅ）を標的化する特別注文のベイトの組を使用して捕捉した。捕捉したすべてのライブラリーを、ＣＬＩＡに認定されたＣＡＰ公認の実験室（Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）において高い深度までシークエンシングし（Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨｉＳｅｑ）、ＤＮＡについては＞５００×およびＲＮＡについては＞６Ｍの独特な対を平均した。ｇＤＮＡおよびｃＤＮＡの配列データを、参照ヒトゲノム（ｈｇ１９）に対してマッピングし、計算的分析パイプラインによって分析して、置換、短い挿入、ならびに欠失、再編成およびコピー数の変異を含む、試料中に存在するゲノム変化を呼び出した（ｃａｌｌ）。
【０２６１】
蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）
ＮＴＲＫ１  ｂｒｅａｋ−ａｐａｒｔ  ＦＩＳＨを、既に説明されている通り、Ｖｙｓｉｓ  ＬＳＩ  ＮＴＲＫ１（Ｃｅｎ）ＳｐｅｃｔｒｕｍＧｒｅｅｎ（カタログ番号０８Ｎ４３−０３０）およびＶｙｓｉｓ  ＬＳＩ  ＮＴＲＫ１（Ｔｅｌ）ＳｐｅｃｔｒｕｍＲｅｄ（Ａｂｂｏｔｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ、それぞれ番号０８Ｎ４３−０３０および０８Ｎ４３−０２０）を使用して、ホルマリン固定しパラフィン包埋した（ＦＦＰＥ）腫瘍試料の４ミクロンスライドで実施した（Ｖａｉｓｈｎａｖｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ５巻：２５〜３４頁、２０１５年）。
【０２６２】
ＲＴ−ＰＣＲおよびＤＮＡシークエンシング
逆転写酵素（ｔｒａｎｃｒｉｐｔａｓｅ）ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を、既に説明されている通り、ＬＭＮＡに対するフォワードプライマー（ＬＭＮＡ  Ｆ１、５’ｇａｇｇｇｃｇａｇｃｔｇｃａｔｇａｔ３’；配列番号１）（Ｗｅｉｓｎｅｒら、Ｎａｔ．  Ｃｏｍｍ．  ５巻：３１１６頁、２０１４年）、およびＮＴＲＫ１に対するリバースプライマー（ＮＴＲＫ１  Ｙ４９０ｒｅｖ、５’ｃｇｇｃｇｃｔｔｇａｔｇｔｇｇｔｇａａｃ３’；配列番号２）を使用して実施した。ＲＴ−ＰＣＲ生成物のＤＮＡシークエンシングを、コロラド大学のＰａｔｈｏｌｏｇｙ  ＣｏｒｅでＳａｎｇｅｒ  ＤＮＡシークエンシングを使用して実施した。
【０２６３】
細胞株
インフォームドコンセントを得て、患者から不死細胞株を派生させた。ＣＵＴＯ−３細胞株およびその誘導体を、既に説明されている通り、ＭＰＲＩＰ−ＮＴＲＫ１遺伝子融合を有するステージＩＶの肺腺癌患者の悪性胸水貯留から惹起した（Ｖａｉｓｈｎａｖｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃｏｖ．  ５巻：２５〜３４頁、２０１５年；Ｄａｖｉｅｓら、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８巻：ｅ８２２３６頁、２０１３年）。ＫＭ１２およびＭＯ−９１は、既に説明されている（Ｖａｉｓｈｎａｖｉら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．  １９巻：１４６９〜１４７２頁、２０１３年；Ｔａｉｐａｌｅら、Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ３１巻：６３０〜６３７頁、２０１３年）。
【０２６４】
患者由来の異種移植産生
患者からインフォームドコンセントを得て、患者由来のマウス異種移植を産生した。癌遺伝子陰性肺腺癌患者由来の腫瘍組織（ＣＵＬＣ００１）を、３×３×３ｍｍの小片に切り、それらを、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および２００単位／ｍＬのペニシリン、ならびに２００ｕｇ／ｍＬのストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭに移した。腫瘍小片を、マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に浸漬し、５匹のヌードマウスの各側腹部の切開部に挿入した。ＭＲＰＩＰ−ＮＴＲＫ１遺伝子融合を有する肺腺癌患者の胸水（ＣＵＬＣ００２）を、遠心分離し、得られた細胞ペレットを、ＡＣＫ緩衝液（Ｌｏｎｚａ）５ｍｌに２分間懸濁させて、赤血球を完全に溶解させた。ＰＢＳ２０ｍＬを添加することによって溶解を停止させ、試料を遠心分離した。ペレットをＰＢＳで２回洗浄した後、前述の通りＤＭＥＭ補充培地に懸濁させた。ＤＭＥＭおよびマトリゲル（ＢＤ）の１：１ミックスに懸濁させた細胞（側腹部当たり１×１０６個）１００μｌを、５匹のヌードマウスの側腹部に皮下注射した。得られた異種移植を、既に説明されている通り増殖させ、維持した（Ｋｅｙｓａｒら、Ｍｏｌ．  Ｏｎｃｏｌ．  ７巻：７７６〜７９０頁、２０１３年）。
【０２６５】
近接ライゲーションアッセイ
細胞を、カバーガラス（４８ウェルプレート中）またはチャンバースライドに、２５〜７５ｋの細胞／ウェルで播種した。細胞を、指示用量および指示時間に処理し、次に４％パラホルムアルデヒド中室温で振盪することによって１５分間固定した。細胞を、ＰＢＳで２回すすぎ、次にマウス／ウサギ（Ｒｅｄ）においてＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ製のＤｕｏｌｉｎｋ（登録商標）ｉｎ  ｓｉｔｕ  ＰＬＡ（登録商標）キットを、製造者のプロトコル（カタログ番号ＤＵＯ９２１０１）に従って使用した。抗体濃度を、免疫蛍光を使用して最適化した後、ＰＬＡ実験を行った。マウスまたは患者由来のＦＦＰＥ組織ＰＬＡを、組織学で説明されている通り調製した。さらに、試料を、３００ｍＭグリシンで１５分間処理した後、ブロッキングステップを実施し、それ以外は製造者のプロトコルに従ってアッセイを実施した。細胞を、Ｐｒｏｌｏｎｇ（登録商標）ｇｏｌｄ退色防止試薬（ＤＡＰＩ含有）を使用してマウントし、終夜硬化させた後に画像化した。画像は、Ｎｉｋｏｎ標準倒立蛍光顕微鏡により４０倍で、またはコロラド大学Ａｎｓｃｈｕｔｚ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃａｍｐｕｓ  Ａｄｖａｎｃｅ  Ｌｉｇｈｔ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｃｏｒｅの３Ｉ  Ｍａｒｉａｎａｓ回転円板共焦点（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｄｉｓｃ  ｃｏｎｆｏｃａｌ）により４０倍もしくは１００倍で撮影した。以下の抗体を使用した。Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ製のＴＲＫ（Ｃ１７Ｆ１）およびＡＬＫ（Ｄ５Ｆ３）、Ｎｏｖｕｓ製のＳＨＣ１、ならびにＢＤ製のＧｒｂ２（６１０１１１）。
【０２６６】
増殖アッセイ
すべての増殖アッセイを、５％ＦＢＳを補充した培地中、既に説明されている通り、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  ９６ＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して実施した（Ｂｏｕｈａｎａら、ＥＯＲＴＣ−ＮＣＩ−ＡＡＣＲ  ２６ｔｈ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、スペイン、バルセロナ、２０１４年）。細胞を、５００〜２０００個の細胞／ウェルで播種し、各グラフに記載されている薬物濃度で７２時間処理した。各アッセイを、少なくとも３つの独立した生物学的複製物で三連に実施した。データをプロットし、ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して算出した。
【０２６７】
免疫ブロット
免疫ブロットを、既に説明されている通り実施した（Ｖａｉｓｈｎａｖｉら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．  １９巻：１４６９〜１４７２頁、２０１３年）。簡潔には、細胞を、Ｈａｌｔプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含有するＲＩＰＡ緩衝液で溶解させ、ローディングバッファー（ＬＩ−ＣＯＲ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で希釈した。膜を、Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍおよびソフトウェア（ＬＩ−ＣＯＲ）を使用して走査および分析した。以下のＣｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ製の抗体：ｐＴＲＫ  Ｙ４９０（ウサギポリクローナル、番号９１４１）、ｐＥＲＫ１／２  ＸＰ  Ｔ２０２／Ｙ２０４（番号９１０１）、全ＥＲＫ１／２、ｐＡＫＴ  Ｓ４７３（ウサギｍＡｂ、番号４０６０）、および全ＡＫＴマウスクローンＤ３Ａ７（番号２９２０）を使用した。ＴＲＫ（Ｃ−１４）ウサギポリクローナル抗体は、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入した。ＧＡＰＤＨ（ＭＡＢ３７４）およびｐＴＹＲ（４Ｇ１０）は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから得た。
【０２６８】
統計的分析
肉腫患者由来の試料におけるＮＴＲＫ融合の検出率の信頼区間を、１サンプル割合試験（１−ｓａｍｐｌｅ  ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ  ｔｅｓｔ）を使用して算出した。疾患の組織学的分類は、Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ疾患概念体系に基づいて行った。より若年の患者群におけるＮＴＲＫ融合の富化を、フィッシャー直接確率法を使用して試験した。すべての統計試験を、Ｒｖ３．１．３で実施した。
【０２６９】
（実施例９）
ＮＴＲＫ遺伝子融合を有する固形腫瘍患者における選択的ＴＲＫＡ／Ｂ／Ｃ阻害剤である結晶形（Ｉ−ＨＳ）の第１相研究の臨床的安全性および活性
方法
結晶形（Ｉ−ＨＳ）の、多施設での非盲検による３＋３用量漸増のこの進行中の第Ｉ相研究では、標準治療に難治性の固形腫瘍を有するが、造血機能および主要器官機能は正常な患者２３人が登録された。結晶形（Ｉ−ＨＳ）を、単回用量として経口投与した後、連続的な２８日サイクルの間、ＱＤまたはＢＩＤ用量を投与した。応答は、ＲＥＣＩＳＴ基準、バージョン１．１によって測定する。血清を、サイクル１の１日目および８日目に、薬物動態分析のために収集する。安全性情報を、すべての患者から収集し、用量制限毒性の定義を、調査生成物との関係に関わらず有害事象に適用する。
【０２７０】
結果
現在まで、患者２３人を、５０ｍｇＱＤ〜１５０ｍｇＢＩＤの第１の５種の用量レベルのそれぞれで処置した。結晶形（Ｉ−ＨＳ）は認容性が高く、ＭＴＤには達しなかった。最も一般的な有害事象は、グレード１および２の疲労（３５％）、めまい感（２６％）ならびに貧血（２２％）である。患者２人に、用量制限毒性があった（ＡＳＴの上昇、グレード３（用量レベル１５０ｍｇＢＩＤ）および無関係のせん妄、グレード３（用量レベル１００ｍｇＢＩＤ））。
【０２７１】
ＰＫ分析では、投与の３０〜６０分後に結晶形（Ｉ−ＨＳ）の最大血漿濃度に到達し、用量とほぼ比例して曝露が増大したことが示された。結晶形（Ｉ−ＨＳ）の非結合薬物レベルは、すべての用量レベルでピーク濃度においてＴＲＫＡ／Ｂ／Ｃのおよそ９８％阻害に対して十分であると思われる。
【０２７２】
患者２３人のうち３人は、ＮＴＲＫ融合を有しており、１００ｍｇまたは１５０ｍｇＢＩＤのいずれかで処置した。これらの患者では、以下の部分的な応答が達成された。ＬＭＮＡ−ＮＴＲＫ１融合を有する未分化肉腫（５９％低下；７サイクル＋）、ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ３融合を有するｃ−ｋｉｔ−陰性ＧＩ間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）（３０％低下；２サイクル＋）、およびＥＴＶ６−ＮＴＲＫ３融合を有する乳腺相似分泌癌（６４％低下；２サイクル＋）。これらのデータは、ＴＲＫ融合の異種移植マウスモデルにおけるｉｎ  ｖｉｖｏ腫瘍成長の阻害および退縮を裏付けるものである。
【０２７３】
結論
結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、認容性が高く、薬物動態による薬物レベルによって証明されている通り、ＮＴＲＫ融合を強力に阻害するのに十分な全身曝露を有しており、進行中の臨床的応答が、この研究に登録されたＮＴＲＫ融合を有する患者３人において観測された。これらのデータによって、この分子標的が、多様な腫瘍組織学にわたる発癌性駆動因子であることがさらに立証される。
【０２７４】
（実施例１０）
結晶形（Ｉ−ＨＳ）および非晶質硫酸塩の比較
非晶質（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩および結晶形（Ｉ−ＨＳ）の特性を比較するために、様々な実験を実施した。これらの研究には、不純物プロファイル、安定性、流動特性および吸湿性が含まれる。以下の研究では、非晶質材料（ＡＭ（ＨＳ）１およびＡＭ（ＨＳ）２）の２つのロットを、結晶形（Ｉ−ＨＳ）の単一のロットと比較した。ＡＭ（ＨＳ）１およびＡＭ（ＨＳ）２を、実施例３に記載の通り調製した。結晶形（Ｉ−ＨＳ）を、実施例２に記載の通り調製した。
【０２７５】
方法
残留溶媒
ＡＭ（ＨＳ）１、ＡＭ（ＨＳ）２、および結晶形（Ｉ−ＨＳ）の溶液を、ＧＣ−ＭＳヘッドスペース分析を使用して分析した。
【０２７６】
熱重量分析（ＴＧＡ）
試料を白金鍋に入れ、１０℃／分で３００℃に供した。
【０２７７】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
試料を、蓋にピンホールが空いた圧着アルミニウムるつぼに入れ、窒素中において１０℃／分で２５０℃に供した。
【０２７８】
Ｘ線回折（ＸＲＤ）
Ｃｕ  Ｋα放射、４４ｋＶ、４０ｍＡ、２／３°の発散スリット、１０ｍｍの発散Ｈ．Ｌ．スリット、「自動」に設定した散乱スリット（散乱スリットは、コンピューター／機器によって決定される）、受容スリット０．３ｍｍを有するＮｉフィルターを通す。２°／分で３°〜４０°２θまで連続的走査；サンプリング幅（ステップサイズ）０．０２°／秒、ステップ時間０．４点／秒。試料を、試料表面に平行な平面上で、６０ｒｐｍで回転させた。
【０２７９】
偏光顕微鏡（ＰＬＭ）
試料を、ガラス顕微鏡スライド上に置き、低粘性油で浸し、カバーガラスでカバーした。交差偏光レンズを備えた２０倍の対物レンズおよび５３０ｎｍカットオフフィルターで調査した。ＰＡＸ−Ｉｔカメラで画像化し、ＰＡＸ−Ｉｔソフトウェアによって処理した。
【０２８０】
動的蒸気吸着（ＤＶＳ）
１．吸湿性を、ＩＧＡｓｏｒｐ分析器を使用して２５℃で研究した。
２．試料約１５ｍｇを、初期の周囲室内湿度を約３５％に設定して、風袋引きしたメッシュ試料ホルダーに入れた。
３．研究を通して総湿潤／乾燥窒素流量２５０ｃｃ／分を使用する。
４．固体を、以下のプログラムの完全な１サイクルを実施することによって研究した。乾燥Ｎ２下で４０℃において６０分間乾燥させた後、０、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０および９５％ＲＨに設定し、曝露時間はＦ１フィットモデルにおける９９．５％信頼に依存して決まる各湿度設定点または６０分とした。任意の１つの湿度設定点において可能な最大時間は、１２０分とした。サイクルが完了した後、試料を乾燥Ｎ２下で維持した。
【０２８１】
重量増加パーセントを、乾燥重量ベースで算出した。
【０２８２】
パート１：結晶形（Ｉ−ＨＳ）の物理的特徴付け
ＡＭ（ＨＳ）１、ＡＭ（ＨＳ）２、および結晶形（Ｉ−ＨＳ）を、外観、残留溶媒、熱重量分析（ＴＧＡ）、カールフィッシャー含水量（ＫＦ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、Ｘ線回折（ＸＲＤ）、偏光顕微鏡（ＰＬＭ）および動的蒸気吸着（ＤＶＳ）による吸湿性によって特徴付けた。３つのロットの物理的特徴付けデータは、表１６〜１９および図２４〜３８に見出すことができる。
【表１６】
2017535550.tif 000029
【表１７】
2017535550.tif 000030
【表１８】
2017535550.tif 000031
【表１９】
2017535550.tif 000032
【０２８３】
物理的特徴付けの結論
ＡＰＩ形態のＡＭ（ＨＳ）１およびＡＭ（ＨＳ）２は、偏光顕微鏡によって複屈折がなく非晶質であり、ＸＲＰＤパターンも、両方のロットについて識別可能なＸ線回折ピークがなく、明らかに非晶質である。非晶質化合物のＴＧＡは、示差走査熱量測定で観測された吸熱事象に対応する、段階的な重量減少を示している。最初の２つの吸熱事象は、非常にブロードであり、蒸発および／または脱溶媒和を示し得る。最後の吸熱事象は、結晶性材料において観測された融解温度に近い温度で生じる。両方の非晶質ロットは、脱着時に著しいヒステリシスを伴って、かなり吸湿性である。ＡＭ（ＨＳ）１は、８０％ＲＨでその元の質量の１３％超増大した。同様に、ＡＭ（ＨＳ）２は、８０％ＲＨでその出発質量のほぼ１２％増大した。ＤＶＳ後のＸＲＰＤは、動的蒸気吸着中には形態変化がなかったことを示しているが、粉末は試料ホルダー内で潮解し、潮解した粉末を試料ホルダーから取り出しにくくなることが観測された。
【０２８４】
結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、その凝集体様形態では、Ｘ線回折による多くの回折ピークおよび偏光顕微鏡による純粋な（ｓｉｎｃｅｒｅ）複屈折を伴う性質の結晶性である。結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、１９３．７℃で生じる吸熱融解の開始に対応して、６％の熱重量減少を示す。結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、吸湿性ではなく、８０％ＲＨではその出発質量の１％しか増大しなかった。
【０２８５】
パート２：結晶形（Ｉ−ＨＳ）の粉末特性
錠剤またはカプセル剤などの固体経口剤形の製造にとって重要な、各形態の流動特性の研究を含む以下の研究では、結晶性硫酸水素塩を非晶質硫酸塩粉末と比較した。実施した作業には、バルク密度、タップ密度、安息角、および圧縮プロファイルが含まれる。
【０２８６】
ブレンド
表２０および２１に提示の配合に従って、ブレンドを作製した。これらのブレンドは、錠剤製剤に典型的なものであり、直接圧縮もしくはローラー圧縮に基づく錠剤、または製剤化カプセル剤として製造することができる。第１のＡＰＩ（すなわちＡＭ（ＨＳ）または結晶形（Ｉ−ＨＳ）のいずれか）、微結晶性セルロース（ＭＣＣ）、およびデンプンまたはラクトースのいずれかを、３０ｃｃのアンバーガラス瓶に添加し、ＴＵＲＢＵＬＡ（登録商標）Ｓｈａｋｅｒ−ミキサーで２５ｒｐｍにおいて３分間ブレンドした。次に、残りの賦形剤を瓶に添加し、ＴＵＲＢＵＬＡ（登録商標）で２５ｒｐｍにおいてさらに３分間ブレンドした。
【表２０】
2017535550.tif 000033
【表２１】
2017535550.tif 000034
【０２８７】
安息角
安息角は、表面の水平基線と、顆粒の円錐状の堆積の縁とによって形成された角度である。安息角は、以下の等式から算出される。
【化７】
2017535550.tif 000035
【０２８８】
安息角は、３／１６’’内径の出口を有する漏斗に試料およそ１ｇをゆっくり注ぐことによって測定した。次に、粉末は、１  １１／１６’’落下してひっくり返した結晶化皿の表面上に着地し、その上に粉末の堆積が形成された。材料すべてを添加した後に、堆積の写真を撮影した。皿表面と堆積の表面との角度を、その写真から分度器を用いて測定した。異なる試料間の設定で、同じ位置および同じ落下距離で再現できるように注意した。
【０２８９】
バルク密度およびタップ密度
粉末を、予め秤量した１０ｍＬメスシリンダーに、振動が伝播するのを回避するためにメスシリンダーに直接接触しないようにした漏斗を介して添加した。粉末を、体積１０ｍＬに達するまで添加し、次に粉末を入れたメスシリンダーを秤量した。バルク密度は、
【化８】
2017535550.tif 000036
によって算出した。メスシリンダー中の同じ試料を、以下の順序でタップした：１００、１５０、２５０、２５０回のタップ。体積を、それぞれの間隔後に測定した。タップ密度は、
【化９】
2017535550.tif 000037
によって算出した。
【０２９０】
Ｃａｒｒ指数は、以下の等式に従って算出した。
【化１０】
2017535550.tif 000038
【０２９１】
Ｈａｕｓｎｅｒ比は、以下の等式に従って算出した。
【化１１】
2017535550.tif 000039
【０２９２】
圧縮プロファイル
圧縮プロファイルは、ブレンドごとに５種の異なる圧縮圧で５／１６’’直径の丸形錠剤を作製することによって得た。プレスの設定は、滞留時間１秒およびポンプ速度１５％とした。錠剤を、圧縮力７００ｋｇ、１０００ｋｇ、１５００ｋｇ、および２０００ｋｇを使用して、４種すべての粉末ブレンドについて作製した。最高圧縮力は、先の錠剤の結果に基づいて選択した。次に、錠剤の質量、寸法および破断力を測定した。これらのデータを、テンプレートを使用してプロットして、圧縮圧対引張り強さのプロットを得た（図３９）。
【０２９３】
結果
【表２２】
2017535550.tif 000040
【０２９４】
結果は、表２３および２４、ならびに図３９に提示されている。米国薬局方（ＵＳＰ）によれば、すべての試料は、安息角によって測定される通り、流動について可または良くない分類に該当する。角度が大きいほど、流動の悪さを示す。Ｃａｒｒ指数（圧縮性指数）およびＨａｕｓｎｅｒ比は、ＵＳＰに従って、可と非常に良くないの間に該当する。結晶性ＡＰＩは、非晶質ＡＰＩとは著しく異なり、これらの差異は、非晶質または結晶性ＡＰＩの含量に関わらず、すべての配合ブレンド中に存在する。結晶性ＡＰＩでは、Ｈａｕｓｎｅｒ比およびＣａｒｒ指数は、流動特性が「可」であると示される。非晶質ＡＰＩは、流動特性がかなり悪く、Ｈａｕｓｎｅｒ比およびＣａｒｒ指数の両方について「非常に良くない」に分類される。関連するＵＳＰ表については表２２を参照されたい。
【０２９５】
圧縮プロファイルのために錠剤を作製する際、結晶性ＡＰＩブレンドによって複数の錠剤を生成したが、工具から排出するときに破損した。非晶質ＡＰＩブレンドでは、視覚的により良好な錠剤が生成され、すなわちほとんど破損がないように見えた。
【表２３】
2017535550.tif 000041
【表２４】
2017535550.tif 000042
【０２９６】
粉末特性の結論
安息角によって、試験した結晶形（Ｉ−ＨＳ）配合ブレンド、非晶質ＡＰＩおよび非晶質ＡＰＩ配合ブレンドは、「非常に良くない」流動特徴を有している。しかし、Ｃａｒｒ指数およびＨａｕｓｎｅｒ比では、結晶性ＡＰＩ、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、「可」の流動特徴を有する。ここで、著しく良好な流動特性は、固体経口剤形の開発および製造にとって利点がある。両方の粉末ロットを含む両方のブレンドの圧縮プロファイルにも、大きな差異はなかった。このことは、（Ｓ）−Ｎ−（５−（（Ｒ）−２−（２，５−ジフルオロフェニル）−ピロリジン−１−イル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル）−３−ヒドロキシピロリジン−１−カルボキサミド硫酸水素塩が、非晶質であろうと結晶性であろうと、５０％薬物負荷のブレンドの流動に良い影響も悪い影響も及ぼさなかったことを示している。
【０２９７】
パート３：ＡＭ（ＨＳ）１および結晶形（Ｉ−ＨＳ）の安定性
一定分量のＡＭ（ＨＳ）１および結晶形（Ｉ−ＨＳ）の粉末を、キャップのない（開いた）２０ｍＬのシンチレーションバイアルに入れ、バイアルをＬＤＰＥバッグに入れて安定性チャンバーに置き、４０℃／７５％ＲＨで５週間維持した。チャンバーから取り出したら、試料を、外観、ＫＦ、ＴＧＡ、ＤＳＣ、ＸＲＤおよびＰＬＭによって物理的に特徴付けた。また試料を、クロマトグラフィー純度、キラル完全性および効力について、ＨＰＬＣによって分析した。適用できる場合、安定性部分で提示されたデータは、比較目的で元のＴ＝０データも含む。データは、表２５〜２９および図４０〜４４に見ることができる。
【表２５】
2017535550.tif 000043
【表２６】
2017535550.tif 000044
【表２７】
2017535550.tif 000045
【表２８】
2017535550.tif 000046
【表２９】
2017535550.tif 000047
【０２９８】
安定性の結論
非晶質化合物ＡＭ（ＨＳ）１は、加湿条件で安定ではなく、ある一定期間かけて結晶化する傾向があった。このことは、湿度チャンバーに静置した試料の潮解、ならびに目および偏光顕微鏡の両方による外観変化によって証明された（データ示さず）。非晶質材料は、自由流動性の黄色粉末から、自由流動性でない橙色の凝集粉末に変わる。また、非晶質ＡＰＩの偏光顕微鏡、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、ＴＧＡおよびＫＦでは、加速安定性研究の過程で著しく変化して、結晶形（Ｉ−ＨＳ）と同じ多形形態になった。非晶質化合物ＡＭ（ＨＳ）１のＸＲＰＤパターンは、加速安定性研究の過程で結晶形（Ｉ−ＨＳ）のＸＲＰＤパターンに変換する。偏光顕微鏡は、交差偏光の下で非複屈折から複屈折を示し、これは非晶質から結晶性ＡＰＩへの変化を示している。ＤＳＣは、ｔ＝０で６８．３℃および１５２．８℃に最大融解を有する２つの吸熱事象を有しているが、ｔ＝５週の時点で消失する。非晶質材料では、２０６℃に最大融解を有する単一吸熱事象だけが残る。この最大融解は、結晶性ＡＰＩのサーモグラフィープロファイルと一致している。ｔ＝５週における非晶質材料のＴＧＡプロファイルも変化して、結晶性ＡＰＩのプロファイルおよび重量減少と一致した。結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、加速条件下で保存した後も吸湿性を示さず、色、形態または結晶化度にいかなる変化も示さなかった。
【０２９９】
ＡＰＩ化学的純度は、安定性研究の過程で、ＡＭ（ＨＳ）１または結晶形（Ｉ−ＨＳ）のいずれかについても著しく変化しなかった。しかし、非晶質および結晶形（Ｉ−ＨＳ）の不純物プロファイルは、著しく異なる。非晶質材料は、結晶形（Ｉ−ＨＳ）と比較して著しく高いレベルの不純物を含有している（表２２および２３）。相対的保持時間（ＲＲＴ）における結晶形（Ｉ−ＨＳ）対非晶質ＡＭ（ＨＳ）１の不純物の低下、０．８６３（０．００％対０．９８％）および１．５３５（０．００％対０．１２％）は、これらの不純物を排除する、非晶質ＡＭ（ＨＳ）１の単離方法よりも優れた結晶化方法によって、結晶形（Ｉ−ＨＳ）が単離されたことに起因すると思われる。非晶質ＡＭ（ＨＳ）１の単離方法は、これらの不純物を効率的に排除しないと思われる。
【０３００】
研究の全体的概要
１．結晶形（１−ＨＳ）は、非晶質形ＡＭ（ＨＳ）よりも良好な流動特性を有する。流動特性の差異によって、ＡＭ（ＨＳ）と比較して結晶形（Ｉ−ＨＳ）の固体経口剤形の開発が改善される。
２．４０℃／７５％ＲＨにおけるＬＤＰＥバッグ中の５週間の安定性研究では、化合物のいずれの形態についても、化学的不純物レベルの著しい変化が示されなかった。しかし実際、結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、研究過程でその物理化学的特性に著しい変化がなかったことが明らかである。それとは対照的に、ＡＭ（ＨＳ）は、ＸＲＰＤ、ＤＳＣ、ＴＧＡ、ＫＦおよび偏光顕微鏡によって、結晶形（Ｉ−ＨＳ）に実質的に類似の結晶形に変換した。さらにＡＭ（ＨＳ）は、安定性試験の過程で流動特性が低い凝集粉末に変化した。非晶質ＡＭ（ＨＳ）特性が、そのＡＭ（ＨＳ）の保存時に、流動能が低い結晶性材料および／または凝集粉末に変化すると、非晶質化合物に基づいて、患者に使用するための固体経口剤形を製造することは、ほぼ不可能となるはずである。
３．ＡＭ（ＨＳ）は、湿度に曝露すると潮解した。これにより、保存および製造中に潮解が発生するのを防止するために著しい取扱い上の注意が必要となるはずであるが、結晶形（Ｉ−ＨＳ）では、結晶形（Ｉ−ＨＳ）の製造中、および結晶形（Ｉ−ＨＳ）を使用して調製される任意の固体経口投与生成物の製造中に、このような注意が必要ない。
４．結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、ＡＭ（ＨＳ）と比較して著しく改善された不純物プロファイルを提供する。不純物プロファイルを制御する能力は、患者の安定性にとって重要であり、規制機関によって必要とされる。
【０３０１】
（実施例１１）
結晶形（Ｉ−ＨＳ）は、Ｔｒｋ融合タンパク質を発現すると特徴付けられた腫瘍成長を低減する
結晶形（Ｉ−ＨＳ）が、マウスにおいて、それぞれがん細胞株に由来する３種の異なる異種移植（ヒト）腫瘍の成長を阻害し得るかどうかを決定するために、一組の実験を実施した。３種の異なるがん細胞株、ＣＵＴＯ−３Ｆ細胞株、ＫＭ１２細胞株、およびＭＯ−９１細胞株は、それぞれ異なるＴｒｋ遺伝子融合を発現する。実施例７に記載の通り、ＣＵＴＯ−３Ｆ細胞株は、ＭＰＲＩＰ−ＮＴＲＫ１遺伝子融合を有する肺腺癌の患者に由来し、ＫＭ１２細胞株は、ＴＰＭ３−ＮＴＲＫ１融合を有する結腸直腸がん細胞株であり（Ｖａｉｓｈｎａｖｉら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．  １９巻：１４６９〜１４７２頁、２０１３年）、ＭＯ−９１細胞株は、ＥＴＶ６−ＮＴＲＫ３融合を有する急性骨髄性白血病患者に由来する（Ｔａｉｐａｌｅら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  ３１巻：６３０〜６３７頁、２０１３年）。マウスへのこれらの３種の異なる異種移植（ヒト）腫瘍の１つの植込み後、各腫瘍の体積変化をモニターした。得られたマウスを、異種移植の植込み後にビヒクルで処置するか、または１日用量６０ｍｇ／ｋｇもしくは２００ｍｇ／ｋｇの結晶形（Ｉ−ＨＳ）を経口投与した（それぞれ図４５〜４７）。
【０３０２】
これらのデータは、結晶形（Ｉ−ＨＳ）を投与すると、哺乳動物における発癌性Ｔｒｋ融合タンパク質の発現によって特徴付けられたヒトの腫瘍の成長を有効に停止させ、または成長速度を低下させることができることを示している。
【０３０３】
先の明細書は、本発明の原理を教示するものであり、実施例は例示目的で提示されており、本発明の実施は、通常の変更、適応および／または改変のすべてを、以下の特許請求の範囲およびそれらの等価物に含まれるものとして包含することを理解されよう。
【化１２】
2017535550.tif 000048
【図１】
2017535550.tif 000050
【図２】
2017535550.tif 000051
【図３】
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【図４】
2017535550.tif 000053
【図５】
2017535550.tif 000054
【図６】
2017535550.tif 000055
【図７】
2017535550.tif 000056
【図８】
2017535550.tif 000057
【図９】
2017535550.tif 000058
【図１０】
2017535550.tif 000059
【図１１】
2017535550.tif 000060
【図１２】
2017535550.tif 000061
【図１３】
2017535550.tif 000062
【図１４】
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【図１５】
2017535550.tif 000064
【図１６】
2017535550.tif 000065
【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
2017535550.tif 000081
【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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