(57)【要約】  本発明は、細胞を治療有効量のＥＺＨ２阻害剤に接触させることまたは被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与することによる、それを必要とする細胞または被験体におけるＺｅｓｔｅホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）活性の異常、誤制御、または増大を特徴とする疾患、例えば、免疫回避、癌細胞誘導性免疫機能不全、免疫応答の減少、炎症の低下、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現低下、または癌の症状を治療または緩和する方法を提供する。
2017532338.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌細胞における免疫回避を阻害する方法であって、前記細胞を治療有効量のＥＺＨ２阻害剤と接触させるステップを含む方法。
【請求項２】
それを必要とする被験体における免疫機能不全を治療する方法であって、前記被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与することを含む方法。
【請求項３】
それを必要とする被験体における免疫応答を増強する方法であって、前記被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む方法。
【請求項４】
癌細胞における主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現を増加させる方法であって、前記癌細胞を治療有効量のＥＺＨ２阻害剤と接触させるステップを含む方法。
【請求項５】
それを必要とする被験体における炎症を増加させる方法であって、前記被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む方法。
【請求項６】
それを必要とする被験体における癌または細胞増殖性疾患を治療する方法であって、前記被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む方法。
【請求項７】
それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２阻害剤を含む治療の有効性の見込みを決定する方法であって、
（１）生体学的サンプルを前記被験体から得るステップ；および
（２）前記生体学的サンプルを、対照試料と比較した主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現の低下に関してアッセイするステップ
を含み、
前記生体学的サンプルが、前記対照試料と比較してＭＨＣの低下した発現を有する場合に、前記ＥＺＨ２阻害剤を含む治療が、前記被験体において有効である可能性がより高い方法。
【請求項８】
それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２阻害剤を含む治療の有効性の見込みを決定する方法であって、前記被験体から得た生体学的サンプルを、対照試料と比較して試料中の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現の低下に関してアッセイすることを含み、
前記生体学的サンプルが、前記対照試料と比較してＭＨＣの低下した発現を有する場合に、前記ＥＺＨ２阻害剤を含む治療が、前記被験体において有効である可能性がより高い方法。
【請求項９】
それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２阻害剤を含む治療の有効性をスクリーニングする方法であって、
（１）前記被験体から、第１および第２の生体学的サンプルを得ること；
（２）前記第２の生体学的サンプルをＥＺＨ２阻害剤と接触させること；
（３）前記第１および第２の生体学的サンプルを、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現に関してアッセイすること；ならびに
（４）前記第１の生体学的サンプルにおけるＭＨＣの発現を、前記第２の生体学的サンプルにおけるＭＨＣの発現と比較すること
を含み、
前記第２の生体学的サンプルが、前記第１の生体学的サンプルにおける発現と比較してＭＨＣの増加した発現を有する場合、前記ＥＺＨ２阻害剤を含む治療が、前記被験体において有効である可能性がより高い方法。
【請求項１０】
前記細胞または前記被験体が、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記細胞または前記被験体が、染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）を含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記転座がＳＳ１８−ＳＳＸ融合遺伝子をもたらす、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞または前記被験体が、ＩＮＩ１の低下した機能または発現を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞または前記被験体が、ＩＮＩ１の低下した機能および発現を有する、請求項１３の記載の方法。
【請求項１５】
前記ＥＺＨ２阻害剤が、以下の式を有する化合物Ａ：
【化１】
2017532338.tif 000048
およびその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＥＺＨ２阻害剤が、
【化２】
2017532338.tif 000049
およびその薬学的に許容できる塩からなる群から選択される、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記方法が、化学療法化合物を投与することをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記化学療法化合物が、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、およびＣＴＬＡ−４阻害剤からなる群から選択される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記癌細胞が被験体の中にある、請求項１、４、７、および１０〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記被験体がヒトである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
免疫回避、癌細胞誘導性免疫機能不全、増強を必要とする免疫応答、炎症、または癌が、非癌細胞と比較して癌細胞における、ＭＨＣ、β２ミクログロブリン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体、低分子量ポリペプチド２、（ＬＭＰ２）、低分子量ポリペプチド７、（ＬＭＰ７）、抗原プロセシング関連トランスポーター（ＴＡＰ）、およびＴＡＰ関連糖タンパク質（タパシン）の１つ以上の低下した発現を特徴とする、請求項１〜３、５、または６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＭＨＣがヒト白血球抗原（ＨＬＡ）であり、前記ＨＬＡが、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ  Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ  ＤＭα、ＨＬＡ  ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯα、ＨＬＡ  ＤＯβ１、ＨＬＡ  ＤＰα１、ＨＬＡ  ＤＰβ１、ＨＬＡ  ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲβ３．、ＨＬＡ  ＤＲβ４、ＨＬＡ  Ｅ、ＨＬＡ  Ｆ、ＨＬＡ  Ｇ、ＨＬＡ  Ｋ、およびＨＬＡ  Ｌからなる群から選択される、請求項４または２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、２０１４年１０月１６日に出願された米国特許出願第６２／０６４，９４８号明細書および２０１４年１０月１７日に出願された米国特許出願第６２／０６５，５９０号明細書の利益および優先権を主張し、これらのそれぞれの内容を引用により全体として本明細書に組み込む。
【背景技術】
【０００２】
疾患に関連するクロマチン修飾酵素（たとえば、ＥＺＨ２）は、増殖障害、代謝障害、および血液障害などの疾患に関与している。したがって、ＥＺＨ２の活性を調節することができる小分子の開発が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、それを必要とする細胞または被験体におけるＺｅｓｔｅホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）の活性および／または発現の異常、誤制御、または増大を特徴とする疾患、例えば、免疫回避、癌細胞誘導性免疫機能不全、免疫応答の減少、炎症の低下、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現低下、または癌の症状を治療または緩和する方法であって、細胞に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を接触させることまたは被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与することによる方法を提供する。
【０００４】
ある種の態様では、方法は、細胞を治療有効量のＥＺＨ２阻害剤に接触させるステップを含む、癌細胞における免疫回避を阻害することに関する。
【０００５】
ある種の態様では、方法は、被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む、それを必要とする被験体における癌細胞誘導性免疫機能不全を治療および／または修正することに関する。
【０００６】
ある種の態様では、方法は、被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む、それを必要とする被験体における免疫応答を増強、増加、または誘導することに関する。
【０００７】
ある種の態様では、方法は、癌細胞を治療有効量のＥＺＨ２阻害剤と接触させるステップを含む、癌細胞中の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現を増加させることに関する。
【０００８】
ある種の態様では、方法は、被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む、それを必要とする被験体における炎症を増加させることに関する。
【０００９】
ある種の態様では、本発明は、被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む、それを必要とする被験体における癌または細胞増殖性疾患を治療することに関する。
【００１０】
ある種の態様では、方法は、（１）被験体から生体学的サンプルを得るステップ；および（２）対照試料と比較して主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現の低下に関して生体学的サンプルをアッセイするステップを含む、それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２阻害剤を含む治療の有効性の見込みを決定することに関する。ＥＺＨ２阻害剤を含む治療は、生体学的サンプルが、対照試料と比べて低下したＭＨＣの発現を有する場合、被験体において有効である可能性がより高い。
【００１１】
ある種の態様では、方法は、被験体から得られた生体学的サンプルを、対照試料と比べた試料中の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現低下に関してアッセイすることを含む、それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２阻害剤を含む治療の有効性の見込みを決定することに関する。ＥＺＨ２阻害剤を含む治療は、生体学的サンプルが、対照試料と比べて低下したＭＨＣの発現を有する場合、被験体において有効である可能性がより高い。
【００１２】
ある種の態様では、方法は、（１）被験体から第１および第２の生体学的サンプルを得ること；（２）第２の生体学的サンプルをＥＺＨ２阻害剤と接触させること；（３）第１および第２の生体学的サンプルを、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現に関してアッセイすること；ならびに（４）第１の生体学的サンプル中のＭＨＣの発現を、第２の生体学的サンプル中のＭＨＣの発現と比較することを含む、それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２阻害剤を含む治療の有効性をスクリーニングすることに関する。ＥＺＨ２阻害剤を含む治療は、第２の生体学的サンプルが、第１の生体学的サンプルにおける発現に比べて増加したＭＨＣの発現を有する場合、被験体において有効である可能性がより高い。
【００１３】
上記態様の実施形態では、細胞または被験体は、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大を含む。
【００１４】
上記態様の実施形態では、細胞または被験体は、染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）を含む。
【００１５】
上記態様の実施形態では、転座は、ＳＳ１８−ＳＳＸ融合遺伝子をもたらす。
【００１６】
上記態様の実施形態では、細胞または被験体は、ＩＮＩ１（本明細書で、ＢＡＦ４７、ＳＮＦ５、またはＳＭＡＲＣＢ１とも呼ばれる）の低下した機能または発現を有する。
【００１７】
上記態様の実施形態では、細胞または被験体は、ＩＮＩ１の低下した機能および発現を有する。
【００１８】
上記態様の実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は、以下の式を有する化合物Ａ（本明細書において、Ｅ７４３８またはＥＰＺ−６４３８またはタゼメトスタット（ｔａｚｅｍｅｔｏｓｔａｔ）とも呼ばれる）：
【化１】
2017532338.tif 000003
およびその薬学的に許容できる塩またはその立体異性体である。
【００１９】
上記態様の実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は、
【化２】
2017532338.tif 000004
の１つ以上、およびその薬学的に許容できる塩またはその立体異性体である。
【００２０】
上記態様の実施形態では、方法は、化学療法化合物、例えば、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、またはＣＴＬＡ−４阻害剤を投与することをさらに含む。
【００２１】
上記態様の実施形態では、癌細胞は、被験体、例えば、ヒトの中にある。
【００２２】
上記態様の実施形態では、免疫回避、癌細胞誘導性免疫機能不全、増強を必要とする免疫応答、炎症、または癌は、非癌細胞と比べて癌細胞における、ＭＨＣ、β２ミクログロブリン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体、低分子量ポリペプチド２、（ＬＭＰ２）、低分子量ポリペプチド７、（ＬＭＰ７）、抗原プロセシング関連トランスポーター（ＴＡＰ）、およびＴＡＰ関連糖タンパク質（タパシン）の１つ以上の発現低下を特徴とする。ＭＨＣは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えば、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯβ１、ＨＬＡ−ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲβ３．、ＨＬＡ−ＤＲβ４、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ｋ、またはＨＬＡ−Ｌであり得る。
【００２３】
他に定義しない限り、本明細書で使用する技術用語および科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解しているのと同じ意味を持つ。本明細書では、単数形は、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合を除き、複数形をさらに含む。特別に記述されていない限りまたは文脈から明らかでない限り、本明細書で使用する場合、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」という用語は、単数または複数であると理解される。特別に記述されていない限りまたは文脈から明らかでない限り、本明細書で使用する場合、「または（ｏｒ）」という用語は、包括的であると理解される。
【００２４】
特別に記述されていない限りまたは文脈から明らかでない限り、本明細書で使用する場合、「約」という用語は、当該技術分野で通常許容される範囲内、たとえば、平均の２標準偏差以内として理解される。「約」は、記述値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．１％、０．０５％または０．０１％の範囲内と理解することができる。他に文脈から明確でない限り、本明細書に提供する数値はすべて、「約」という用語により修飾されている。
【００２５】
本発明の実施または試験において、本明細書に記載されたものと類似または同等の方法および材料を使用してもよいが、好適な方法および材料を下記に記載する。本明細書に記載した刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献はすべて援用する。本明細書に引用する参考文献は、特許請求の範囲に記載されている発明に対する従来技術と認めるものではない。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が優先する。さらに、材料、方法、および例は、単に例示のためのものであり、限定的であることを意図するものではない。
【００２６】
上記の態様および実施形態のいずれも、任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
【００２７】
本発明の他の特徴と利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】図１は、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞株におけるＳＳ１８−ＳＳＸ１の発現およびＩＮＩ１（本明細書では、ＢＡＦ４７、ＳＮＦ５、またはＳＭＡＲＣＢ１とも呼ばれる）のダウンレギュレーションを示す細胞溶解物のウェスタンブロットである。
【図２Ａ−２Ｄ】図２Ａは、様々な細胞株における、Ｈ３Ｋ２７のトリメチル化（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３）およびＨ３Ｋ２７のジメチル化（Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２）のレベルを示す、単離されたヒストンのウエスタンブロットを示す図である。図２Ｂ〜２Ｄは、様々な細胞株における、定量的なＨ３Ｋ２７ｍｅ３／全Ｈ３（Ｂ）、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２／全Ｈ３（Ｃ）またはＨ３Ｋ２７ｍｅ３／Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２（Ｄ）の比を示す一連のプロットを示す図である。これらの定量的データは、ウエスタンブロッティング解析により得られたタンパク質バンドの計算から得たものである。
【図３Ａ−３Ｄ】ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞はＥＺＨ２阻害剤に高度に感受性があるが、一方ＳＷ９８２細胞はそうではないことを示す一連のプロットを示す図である。図３Ａに示す細胞株ＨＳ−ＳＹ−ＩＩおよび図３Ｂに示す細胞株ＳＷ９８２は化合物Ｅで処理した。図３Ｃに示す細胞株ＨＳ−ＳＹ−ＩＩおよび図３Ｄに示す細胞株ＳＷ９８２は化合物Ａ（本明細書ではＥ７４３８またはＥＰＺ−６４３８とも呼ばれる）で処理した。各細胞型を表示濃度の化合物（化合物Ｅまたは化合物Ａ）で７日間、前処理し、再度蒔き、さらに７日間処理した。細胞生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）ルミネセンス細胞生存率アッセイにより決定した。
【図４Ａ−４Ｆ】軟部肉腫細胞株において、ＩＮＩ１レベルが低下すると、ＥＺＨ２阻害剤（ＥＺＨ２ｉ）に対する感受性が付与されることを示す図である。図Ａは、様々な腫瘍細胞株におけるＩＮＩ１発現を示す、細胞溶解物のウエスタンブロットである。軟骨肉腫の腫瘍細胞株は、ＩＮＩ１のダウンレギュレーションを示した（たとえば、細胞株ｂおよびｃ）。図ＢおよびＣは、細胞株ｂ（グラフＢ）および細胞株ｃ（グラフＣ）がＥＺＨ２阻害剤に感受性があることを示すグラフである。図Ｄは、様々な細胞株におけるＩＮＩ１およびＳＳ１８の発現を示す細胞溶解物のウエスタンブロットである。図Ｅは、ＳＳＸ−ＳＳ１８陽性細胞がＥＺＨ２阻害剤に感受性があることを示すグラフである。図Ｆは、ＳＳＸ−ＳＳ１８陰性細胞がＥＺＨ２阻害剤に感受性がないことを示すグラフである。
【図５Ａ−５Ｂ】ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞は化合物Ａに高度に感受性があるが（図５Ａ）、一方ＳＷ９８２細胞はそうではない（図５Ｂ）ことを示す一連のプロットを示す図である。各細胞型を表示濃度の化合物Ａで処理した。７日目に細胞を再度蒔き、さらに７日間処理した。細胞生存率をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）ルミネセンス細胞生存率アッセイにより決定した。
【図６Ａ−６Ｂ】図６Ａは、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞およびＳＷ９８２細胞において、化合物Ａの処理後、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３／全Ｈ３の比（対照に対する比）が減少することを示す図である。細胞を化合物Ａで９６時間処理し、ヒストンを抽出した。ヒストンマークの変化を酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）により分析した。ヒストンマークの変化はＨＳ−ＳＹ−ＩＩとＳＷ９８２との間で同等であり、これらの変化がＳＳ１８−ＳＳＸ融合タンパク質の存在には無関係であることが示唆された。図６Ｂは、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３／全Ｈ３の比を５０％阻害するのに必要な化合物の濃度（ＩＣ５０）を示す。
【図７Ａ−７Ｂ】ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ異種移植モデルにおける、薬物動態学（ＰＫ）の値および薬力学的な（ＰＤ）変化をそれぞれ示す図である。図７Ａは、化合物Ａの血漿中濃度を示す。ここでは、化合物Ａをマウスに１日２回、７日間経口投与した。最後の投与の約５分前および３時間後に、化合物Ａ処置マウスから末梢血サンプルを採取した。化合物Ａの血漿中濃度の分析を行った。濃度をプロットする（ｎ＝５）。各バーは、各群における血漿中濃度の平均値を表す。図７Ｂは、マウスのＨＳ−ＳＹ−ＩＩ異種移植片における、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３に対する化合物Ａの阻害効果を示す。ここでは、化合物Ａをマウスに１日２回、７日間経口投与した。腫瘍中のＨ３Ｋ２７ｍｅ３をプロットする（ｎ＝５）。各バーは、各群における、トリメチル化レベルの平均±ＳＥＭを表す。下記の表２および３は、図７Ｂに示すデータに関する統計解析を示す。統計解析の結果から用量依存的な変化が確認される。
【図８】インビトロ実験における、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩおよびＳＷ９８２の化合物Ａ処理後の推定上のＰＤマーカーの発現変化を示す図である。ここで、各細胞型は、化合物ＡまたはＥＰＺ−０１１９８９（これもＥＺＨ２阻害剤であり、本明細書で化合物Ｃとも呼ばれる）で処理した；濃度および期間（日）を示す。遺伝子発現変化をＲＴ−ＰＣＲにより分析した。遺伝子発現レベルは、ＧＡＰＤＨレベルに対して規準化した。バーは、０μＭ処理の対照に対する比として示す。下記の表４は、図８に示すデータに関する統計解析を示す。アスタリスクは、０μＭ処理群のレベルに比較して有意な変化を意味する。
【図９】インビボ実験における、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩの化合物Ａ処理後の推定上のＰＤマーカーの発現変化を示す図である。ここでは、化合物Ａをマウスに１日２回、７日間経口投与した。腫瘍サンプルを最後の投与の約３時間後に採取した。遺伝子発現変化をＲＴ−ＰＣＲにより分析した。遺伝子発現レベルは、ＧＡＰＤＨレベルに対して規準化した。バーはビヒクル群のデータに対する比として示す。
【図１０Ａ−１０Ｅ】図１０Ａ〜１０Ｃは、ビヒクル（経口もしくはｉｖ）、化合物Ａ（経口）、ドキソルビシン（ｉｖ）または化合物Ａ／ドキソルビシン併用のいずれかを、表示用量で２８日間投与した無胸腺ヌードマウスが担持するＨＳ−ＳＹ−ＩＩ異種移植片の平均腫瘍容積を示す図である。腫瘍容積は週に２回測定した。２つの独立した試験を実施した。図１０Ａおよび１０Ｂは第１の試験の結果を示し、図１０Ｃは第２の試験の結果を示す。第２の試験の動物腫瘍は２８日目（最後の投与の３時間後）に摘出し、ＥＬＩＳＡによるＨ３Ｋ２７ｍｅ３分析（図１０Ｄ）または増殖マーカーＫｉ６７に対する免疫組織化学（ＩＨＣ）（図１０Ｅ）に供した。
【図１１Ａ−１１Ｄ】滑膜肉腫腫瘍の２つの異なる患者由来異種移植片（ＰＤＸ）を担持し、ビヒクル（経口）、化合物Ａ（経口）またはドキソルビシン（ｉｖ）のいずれかを、表示濃度で３５日間投与した無胸腺ヌードマウスの平均腫瘍容積およびパーセント生存率を示す図である。図１１Ａおよび１１Ｂは、高グレードの紡錘細胞肉腫を有する５７歳男性に由来するＰＤＸを担持するマウスのデータを示す（ＣＴＧ−０７７１）。図１１Ｃおよび１１Ｄは、１６歳女性に由来するＰＤＸを担持するマウスのデータを示す（ＣＴＧ−０３３１）。腫瘍容積は週に２回測定した。３５日目に投与を中止し、週に２回腫瘍を測定しながら、６０日目まで動物を観察した。所与の動物の腫瘍容積が２０００ｍｍ３を超えたときに、マウスを安楽死させた（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｙｅｒプロットで分析した）。
【図１２Ａ−１２Ｂ】図１２Ａおよび１２Ｂは、３５日目に収集され、ＲＮＡ−ｓｅｑ解析により分析された、マウスのサブセットから得た滑膜肉腫ＰＤＸ腫瘍のアレイデータを示す。図１２Ａは、５７歳の男性からのＰＤＸを有するマウスから得たデータである。図１２Ｂは、１６歳の女性からのＰＤＸを有するマウスから得たデータである。ビヒクルか１日２回の４００ｍｇ／ｋｇの化合物（Ｃｏｍｐｕｎｄ）Ａのいずれかにより処置されたマウスからの腫瘍におけるＨＬＡ遺伝子の発現が示される。図中で、青は低発現であり、赤は高発現である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明は、それを必要とする細胞または被験体におけるＺｅｓｔｅホモログ２のエンハンサー（ＥＺＨ２）の活性または発現の異常、誤制御、または増大を特徴とする疾患、例えば、免疫回避、癌細胞誘導性免疫機能不全、免疫応答の減少、炎症の低下、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現低下、または癌の症状を治療または緩和する方法であって、細胞を治療有効量のＥＺＨ２阻害剤に接触させることまたは被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与することによる方法を提供する。ＥＺＨ２は、ポリコーム抑制複合体２（ＰＲＣ２）、ヒストン３リジン２７（Ｈ３Ｋ２７）のメチル化を触媒する複合体の酵素サブユニットである。ヒストン３リジン２７（Ｈ３Ｋ２７）メチル化は、いくつかの血液癌および固形のヒト癌と因果関係がある転写抑制的なエピジェネティックマークである。Ｈ３Ｋ２７の過剰なトリメチル化状態をもたらすいくつかの分子機構が、ヒト癌の間で報告されている。
【００３０】
本発明は、ＥＺＨ２阻害剤が、免疫回避、または癌細胞誘導性免疫機能不全、免疫応答の減少、炎症の低下、ＭＨＣの発現低下を特徴とする、もしくは誘導される疾患を効果的に治療し得るという発見に一部基づいている。
【００３１】
ある種の実施形態では、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大を有する細胞、被験体、腫瘍、または腫瘍細胞は、本発明のＥＺＨ２阻害剤に対して感受性がある。
【００３２】
ヒト滑膜肉腫は、すべての軟部組織悪性腫瘍の８％〜１０％を占めており、若年層の四肢に最も一般的に発生する。再発性染色体転座ｔ（ｘ；１８））（ｐ１１．２；ｑ１１．２）により、Ｘ染色体上の３つの密接に関連した遺伝子であるＳＳＸ１、ＳＳＸ２、およびまれにＳＳＸ４のうちの１つに、染色体１８上のＳＳ１８遺伝子が融合し、ＳＳ１８の８個のＣ末端アミノ酸がＳＳＸのＣ末端の７８アミノ酸で置き換わっているインフレーム融合タンパク質が生じる。これにより、野生型ＳＳ１８および腫瘍サプレッサーＩＮＩ１の両方を排除する（次いで、これらは分解される）ＳＷＩ／ＳＮＦ複合体に結合する腫瘍形成性ＳＳ１８−ＳＳＸ融合タンパク質の発現がもたらされる。これは異常な遺伝子発現および最終的には癌の発生をもたらす。
【００３３】
本発明は、癌細胞における免疫回避を阻害する方法であって、細胞を治療有効量のＥＺＨ２阻害剤と接触させるステップを含む方法を提供する。
【００３４】
本発明は、それを必要とする被験体における癌細胞誘導性免疫機能不全を治療または修正する方法であって、被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む方法も提供し得る。
【００３５】
本発明は、それを必要とする被験体における免疫応答を増強、増加、または誘導する方法であって、被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む方法も提供し得る。
【００３６】
本発明は、癌細胞中の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現または活性を増加させる方法であって、癌細胞を治療有効量のＥＺＨ２阻害剤と接触させるステップを含む方法も提供し得る。
【００３７】
本発明は、それを必要とする被験体における炎症を増加させる方法であって、被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む方法も提供し得る。
【００３８】
本発明は、それを必要とする被験体における癌または細胞増殖性疾患を治療する方法であって、被験体に治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を投与するステップを含む方法も提供し得る。
【００３９】
本発明は、それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２阻害剤を含む治療の有効性の見込みを決定する方法であって、（１）被験体から生体学的サンプルを得るステップ；および（２）対照試料と比較した主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現の低下に関して生体学的サンプルをアッセイするステップを含む方法も提供し得る。ＥＺＨ２阻害剤を含む治療は、生体学的サンプルが、対照試料と比較してＭＨＣの低下した発現を有する場合に、被験体において有効である可能性がより高い。
【００４０】
本発明は、それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２阻害剤を含む治療の有効性の見込みを決定する方法であって、被験体から得られた生体学的サンプルを、対照試料と比較した試料中の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現の低下に関してアッセイすることを含む方法も提供し得る。ＥＺＨ２阻害剤を含む治療は、生体学的サンプルが対照試料と比較してＭＨＣの低下した発現を有する場合に、被験体において有効である可能性がより高い。
【００４１】
本発明は、それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２阻害剤を含む治療の有効性をスクリーニングする方法であって、（１）被験体から、第１および第２の生体学的サンプルを得ること；（２）第２の生体学的サンプルをＥＺＨ２阻害剤と接触させること；（３）第１および第２の生体学的サンプルを、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現に関してアッセイすること；ならびに（４）第１の生体学的サンプルにおけるＭＨＣの発現を、第２の生体学的サンプルにおけるＭＨＣの発現と比較することを含む方法も提供し得る。ＥＺＨ２阻害剤を含む治療は、第２の生体学的サンプルが、第１の生体学的サンプルにおける発現と比較してＭＨＣの増加した発現を有する場合、被験体において有効である可能性がより高い。
【００４２】
本発明の実施形態では、細胞または被験体は、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大を含む。
【００４３】
本発明の実施形態では、細胞または被験体は、染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）を含む。
【００４４】
本発明の実施形態では、転座は、ＳＳ１８−ＳＳＸ融合遺伝子をもたらす。
【００４５】
本発明の実施形態では、細胞または被験体は、ＩＮＩ１（本明細書では、ＢＡＦ４７、ＳＮＦ５、またはＳＭＡＲＣＢ１とも呼ばれる）の低下した機能または発現を有する。本発明の実施形態では、細胞または被験体は、ＩＮＩ１の低下した機能および発現を有する。ある種の実施形態では、細胞または被験体は、ＩＮＩ１陰性またはＩＮＩ１欠乏であると考えられるか、または決定される。
【００４６】
本発明の実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は、以下の式を有する化合物Ａ：
【化３】
2017532338.tif 000005
およびその薬学的に許容できる塩である。
【００４７】
本発明の実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は
【化４】
2017532338.tif 000006
の１つ以上およびその薬学的に許容できる塩である。
【００４８】
本発明の実施形態では、方法は、化学療法化合物、例えば、ＰＤ−１阻害剤、ＰＤ−Ｌ１阻害剤、またはＣＴＬＡ−４阻害剤を投与することをさらに含む。
【００４９】
本発明の実施形態では、癌細胞は、被験体、例えば、ヒトの中にある。
【００５０】
本発明の実施形態では、免疫回避、癌細胞誘導性免疫機能不全、増強を必要とする免疫応答、炎症、または癌は、非癌細胞と比較して癌細胞における、ＭＨＣ、β２ミクログロブリン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体、低分子量ポリペプチド２、（ＬＭＰ２）、低分子量ポリペプチド７、（ＬＭＰ７）、抗原プロセシング関連トランスポーター（ＴＡＰ）、およびＴＡＰ関連糖タンパク質（タパシン）の１つ以上の低下した発現を特徴とする。ＭＨＣは、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、例えば、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＭα、ＨＬＡ−ＤＭβ、ＨＬＡ−ＤＯα、ＨＬＡ−ＤＯβ１、ＨＬＡ−ＤＰα１、ＨＬＡ−ＤＰβ１、ＨＬＡ−ＤＲα、ＨＬＡ−ＤＲβ１、ＨＬＡ−ＤＲβ３．、ＨＬＡ−ＤＲβ４、ＨＬＡ−Ｅ、ＨＬＡ−Ｆ、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−Ｋ、またはＨＬＡ−Ｌであり得る。
【００５１】
したがって、本発明は、細胞に治療有効量の本発明の化合物、もしくはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくは多形を接触させることまたは被験体に治療有効量の本発明の化合物、もしくはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくは多形を投与することによる、細胞またはそれを必要とする被験体における免疫回避、癌細胞誘導性免疫機能不全、免疫応答の減少、炎症の低下、ＭＨＣの発現低下の治療の方法を提供し得る。本発明は、免疫回避、癌細胞誘導性免疫機能不全、免疫応答の減少、炎症の低下、ＭＨＣの発現低下の治療に有用な医薬品の調製のための、本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくは多形の使用をさらに提供し得る。
【００５２】
実施形態では、疾患は、ＥＺＨ２活性または発現の異常、誤制御、または増大を特徴とする。本明細書での「異常なＥＺＨ２活性」は、細胞中のＥＺＨ２の誤った局在化またはタンパク質複合体との／タンパク質複合体内でのＥＺＨ２の誤った会合を指す。実施形態では、異常なＥＺＨ２活性は、ＩＮＩ１の制御機能の低下から生じ得るが、それは種々の遺伝子変異により起こった可能性があり、そのいくつかの例は本明細書でより詳細に議論される。ある種の実施形態では、ＥＺＨ２活性または発現の異常、誤制御、または増大は、Ｈ３Ｋ２７の増加したトリメチル化と関連するか、またはそれをもたらす。
【００５３】
実施形態では、疾患は、染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）を特徴とする。そのような転座は、ＳＳ１８−ＳＳＸ融合遺伝子をもたらす。
【００５４】
実施形態では、治療を必要とする被験体は、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大を有する。
【００５５】
実施形態では、治療を必要とする被験体は、ＩＮＩ１の低下した機能もしくは発現または両方を有する。実施形態では、被験体は、ＩＮＩ１の検出可能な機能もしくは発現または両方を有さない。
【００５６】
本発明の実施形態では、滑膜肉腫はＳＳＸ１融合を特徴とする。別の実施形態では、滑膜肉腫はＳＳＸ２融合を特徴とする。実施形態では、滑膜肉腫は、ＳＳＸ４融合を特徴とする。実施形態では、治療を必要とする被験体、治療レジメン、投与の投与量および頻度は、検出されるＳＳＸ融合の種類により選択される。実施形態では、投与すべきＥＺＨ２阻害剤も、癌と関連するＳＳＸ融合により選択される。
【００５７】
本発明はまた、治療有効量の本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を被験体に投与することにより、それを必要とする被験体において癌を治療するための方法であって、治療を必要とする被験体が染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）またはＳＳ１８−ＳＳＸ融合遺伝子を有する方法を提供することができる。本発明はさらに、癌の治療に有用な薬物の調製のために、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形の使用を提供することができる。
【００５８】
実施形態では、この方法は、投与するステップの前に、被験体由来のサンプル中の染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）またはＳＳ１８−ＳＳＸ融合遺伝子の存在を判定するステップを含む。
【００５９】
サンプル中の染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）の存在の判定は、当該技術分野で公知の任意の方法で実施することができる。たとえば、それは、核型分析およびＳＳ１８−ＳＳＸ転写物に対するＲＴ−ＰＣＲにより、またはＦＩＳＨ（蛍光インサイチューハイブリダイゼーション法）により判定することができる。ＳＳ１８−ＳＳＸ融合遺伝子は、当該技術分野で公知の任意の方法により検出することができる。たとえば、それは、ＲＴ−ＰＣＴ、免疫組織染色アッセイまたは蛍光インサイチューハイブリダイゼーション法（ＦＩＳＨ）により検出することができる。
【００６０】
治療できる癌は、ＤＮＡサイトメトリー、フローサイトメトリーまたはイメージサイトメトリーにより評価してもよい。治療できる癌は、細胞の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％が細胞分裂の合成期（たとえば、細胞分裂のＳ期）にあるものとして型別にしてもよい。治療できる癌は、Ｓ期分画が低いまたはＳ期分画が高いものとして型別にしてもよい。
【００６１】
本発明の態様では、滑膜肉腫は単相型滑膜肉腫である。本発明の他の態様では、滑膜肉腫は二相型滑膜肉腫である。
【００６２】
本発明はまた、被験体由来のサンプル中に染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）またはＳＳ１８−ＳＳＸ融合遺伝子の存在を検出するステップと、治療有効量の化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を投与することにより、被験体を治療するステップとを含む方法を提供する。
【００６３】
本発明は、候補被験体に治療有効量の化合物またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物を投与することを含む、治療レジメンを選択することを含む方法をさらに提供する。治療レジメンは、手術、化学療法、放射線療法、免疫療法、またはこれらのあらゆる組み合わせも含み得る。
【００６４】
実施形態では、本発明の方法は、治療有効量のＥＺＨ２阻害剤を被験体に投与すること、手術、化学療法、放射線療法、鍼療法、免疫療法、またはこれらのあらゆる組み合わせを含む。化学療法（典型的には、ドキソルビシンおよび／またはイホスファミド）は、滑膜肉腫、特に進行性または転移性疾患の治療において推奨されることがある。
【００６５】
本発明は、それを必要とする被験体におけるＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を治療する方法であって、被験体に、治療有効量の本発明の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくは多形を投与することによる方法をさらに提供する。例えば癌は滑膜肉腫である。例えば、癌は、類上皮肉腫、骨外性粘液型軟骨肉腫、悪性ラブドイド腫瘍、または異型脊索腫である。
【００６６】
例えば、本明細書で使用できるＥＺＨ２阻害剤には、化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、またはＥがある。化合物Ａは、本明細書でＥ７４３８またはＥＰＺ−６４３８とも呼ばれる。
【００６７】
本明細書では、「それを必要とする被験体」は、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌を有する被験体または染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）により媒介される癌を有する被験体である。例えば、それを必要とする被験体は滑膜肉腫を有する。
【００６８】
実施形態では、それを必要とする被験体は、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する疾患を治療する少なくとも１つの以前の療法を有した。
【００６９】
実施形態では、被験体は、直近の療法で不応性の癌を有する。「不応性癌」は、治療に反応しない滑膜肉腫を含む、本明細書に記載されるあらゆる癌を意味する。癌は、治療の開始時に抵抗性であることも、治療の間に抵抗性になることもある。不応性癌は抵抗性癌とも呼ばれる。実施形態では、それを必要とする被験体は、直近の療法での寛解の後に癌の再発を有する。実施形態では、被験体は、被験体が患っている滑膜肉腫の全ての公知の有効な療法を受け、奏功しなかった。
【００７０】
実施形態では、被験体は、染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）により媒介される癌、たとえば滑膜肉腫を治療するために、別の療法でも同時に治療されている。
【００７１】
「被験体」には哺乳動物が含まれる。哺乳動物は、たとえば、任意の哺乳動物、たとえばヒト、霊長類、トリ、マウス、ラット、イヌ、ネコ、雌ウシ、ウマ、ヤギ、ラクダ、ヒツジまたはブタであってもよい。好ましくは、哺乳動物はヒトである。
【００７２】
実施形態では、被験体は、ヒストンＨ３のＬｙｓ２７のトリメチル化（Ｈ３−Ｋ２７ｍｅ３）レベルが増大している。実施形態では、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御もしくは増大または染色体転座ｔ（ｘ；１８）（ｐ１１．２；ｑ１１．２）は、Ｈ３−Ｋ２７ｍｅのトリメチル化レベルの増大に関連する。
【００７３】
本明細書で使用する場合、「被験体由来のサンプル」とは、被験体から得られたかまたは被験体に由来する細胞または細胞成分を含有する任意の好適なサンプルをいう。たとえば、実施形態では、サンプルは癌細胞を含む。実施形態では、サンプルは、たとえば軟部組織（たとえば関節）から得られた生検サンプルである。実施形態では、サンプルは、軟部組織以外の組織または軟部組織に追加した組織から得られた生検サンプルである。たとえば、実施形態では、サンプルは、癌、たとえば癌細胞で構成される腫瘍からの生検である。サンプル中の細胞は、当業者が精通する方法に従ってサンプルの他の成分から単離することができる。たとえば、実施形態では、サンプルは、組織、器官、または全血、血漿、血清、尿、唾液、生殖器分泌物、脳脊髄液、汗もしくは排泄物などの体液である。
【００７４】
本明細書で使用する場合、「単独療法」とは、それを必要とする被験体に単一の活性化合物または治療用化合物を投与することをいう。好ましくは、単独療法は、治療有効量の単一の活性化合物の投与を含む。たとえば、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の１つを用いた、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御または増大に関連した癌の治療を必要とする被験体への癌単独療法である。一態様では、単一の活性化合物は、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形である。ある種の実施形態では、単一の活性化合物はタゼメトスタットである。
【００７５】
本明細書で使用する場合、「治療すること」または「治療する」は、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御または増大に関連した疾患、状態または障害の対処を目的とした患者の管理およびケアをいい、疾患、状態もしくは障害の症状または合併症を緩和するため、あるいは疾患、状態もしくは障害を除去するため本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を投与することを含む。
【００７６】
本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形はまた、ＥＺＨ２活性の異常、誤制御または増大に関連した疾患、状態または障害を予防するために使用してもよい。本明細書で使用する場合、「予防すること」または「予防する」とは、疾患、状態もしくは障害の症状、または合併症の発症を減少または除去することをいう。
【００７７】
本明細書で使用する場合、「緩和する」という用語は、障害の徴候または症状の重症度を低下させるプロセスを記載することを意図している。重要な点として、徴候または症状は、除去することなく緩和することができる。好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物を投与すると徴候または症状が除去されるが、しかしながら、除去は必須ではない。効果的な投薬量は徴候または症状の重症度を低下させると予想される。たとえば、複数の部位で起こり得る癌などの障害の徴候または症状は、複数の部位の少なくとも１つで癌の重症度が低下すると緩和される。
【００７８】
本明細書で使用する場合、「症状」という用語は、疾患、疾病、障害または体内に適切でないものがあることの兆しと定義される。症状は、症状を経験している個体が感じあるいは気付くものであるが、他人は容易に気付くことができない。他人は、非医療専門家と定義される。
【００７９】
本明細書で使用する場合、「徴候」という用語も、体内に適切でないものがあることの兆しと定義される。ただし、徴候は、医師、看護師または他の医療専門家により確認することができるものと定義される。
【００８０】
ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を、本明細書に記載される化合物により治療することは、腫瘍の大きさもしくは体積の減少または腫瘍成長もしくは再成長の減少または上記のあらゆる組み合わせをもたらし得る。腫瘍の大きさまたは体積の減少は、「腫瘍退縮」とも称され得る。好ましくは、治療後に、腫瘍の大きさは、治療前のその大きさに対して５％以上減少する。一層好ましくは、腫瘍サイズは、１０％以上減少し；一層好ましくは、２０％以上減少し；一層好ましくは、３０％以上減少し；一層好ましくは、４０％以上減少し；なお一層好ましくは、５０％以上減少し；最も好ましくは、７５％超またはそれ以上減少する。腫瘍の大きさまたは体積は、再現性のある任意の測定手段で測定できる。腫瘍の大きさまたは体積は、腫瘍の直径として測定できる。
【００８１】
ＥＺＨ２の活性または発現の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を、本明細書に記載される化合物により治療することは、腫瘍の数の減少をもたらし得る。好ましくは、治療後に、腫瘍数は、治療前の数に対して５％以上減少する。一層好ましくは、腫瘍数は１０％以上減少し；一層好ましくは、２０％以上減少し；一層好ましくは、３０％以上減少し；一層好ましくは、４０％以上減少し；なお一層好ましくは、５０％以上減少し；最も好ましくは、７５％超減少する。腫瘍の数は、再現性のある任意の測定手段で測定できる。腫瘍の数は、肉眼でまたは明示される倍率で見える腫瘍を数えることにより測定できる。
【００８２】
ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を、本明細書に記載される化合物により治療することは、治療されていない被験体またはキャリアのみを投与された被験体の集団と比べて、治療された被験体の集団の平均生存時間の増加もしくは死亡率の減少または両方をもたらし得る。ある種の実施形態では、治療された被験体の集団は、本発明の化合物でない薬物または薬物の組み合わせによる療法を受けている。好ましくは、平均生存時間は、１０、２０、または３０日超増加し；一層好ましくは、６０日超；一層好ましくは、９０日超；最も好ましくは、１２０日超増加する。集団の平均生存時間の増加は、再現性のある任意の手段により測定できる。集団の平均生存時間の増加は、例えば、ある集団に関して活性化合物による治療の開始後の平均の生存の長さを計算することにより測定できる。集団の平均生存時間の増加は、例えば、ある集団に関して活性化合物による治療の第１期の完了後の平均の生存の長さを計算することによっても測定できる。
【００８３】
ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を、本明細書に記載される化合物により治療することは、キャリアのみを投与された集団と比べて治療された被験体の集団の死亡率の減少をもたらし得る。ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を、本明細書に記載される化合物により治療することは、治療されていない集団と比べて治療された被験体の集団の死亡率の減少をもたらし得る。ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を、本明細書に記載される化合物により治療することは、本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩もしくは溶媒和物でない薬物による単独療法を受けている集団と比べて治療された被験体の集団の死亡率の減少をもたらし得る。好ましくは、死亡率は、２％超減少し；一層好ましくは、５％超；一層好ましくは、１０％超；最も好ましくは、２５％超減少する。治療された被験体の集団の死亡率の減少は、再現性のある任意の手段により測定できる。集団の死亡率の減少は、例えば、ある集団に関して活性化合物による治療の開始後の単位時間当たりの疾病関連死の平均数を計算することにより測定できる。集団の死亡率の減少は、例えば、ある集団に関して活性化合物による治療の第１期の完了後の単位時間当たりの疾病関連死の平均数を計算することによっても測定できる。
【００８４】
ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を、本明細書に記載される化合物により治療することは、腫瘍成長速度の減少をもたらし得る。好ましくは、治療後に、腫瘍成長速度は、治療前の数に対して少なくとも５％減少する。一層好ましくは、腫瘍成長速度は、少なくとも１０％減少し；一層好ましくは少なくとも２０％減少し；一層好ましくは、少なくとも３０％減少し；一層好ましくは、少なくとも４０％減少し；一層好ましくは少なくとも５０％減少し；なお一層好ましくは少なくとも５０％減少し；最も好ましくは少なくとも７５％減少する。腫瘍成長速度は、再現性のある任意の測定手段により測定できる。腫瘍成長速度は、単位時間当たりの腫瘍直径の変化により測定できる。
【００８５】
ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を、本明細書に記載される化合物により治療することは、腫瘍再成長の減少をもたらし得る。好ましくは、治療後に、腫瘍再成長は、５％未満である。一層好ましくは、腫瘍再成長は、１０％未満；一層好ましくは、２０％未満；一層好ましくは、３０％未満；一層好ましくは、４０％未満；一層好ましくは、５０％未満；なお一層好ましくは、５０％未満；最も好ましくは、７５％未満である。腫瘍再成長は、再現性のある任意の測定手段により測定できる。腫瘍再成長は、例えば、治療後の先の腫瘍縮小後の腫瘍の直径の増加を測定することにより測定される。腫瘍再成長の減少は、治療を停止した後に、腫瘍が再び発生しないことにより示される。
【００８６】
ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌を、本明細書に記載される化合物により治療または予防することは、異常な外観またはモルホロジーを有する細胞の数または比率の減少をもたらし得る。好ましくは、治療後に、異常なモルホロジーを有する細胞の数は、治療前のその大きさに対して少なくとも５％減少し；一層好ましくは少なくとも１０％減少し；一層好ましくは少なくとも２０％減少し；一層好ましくは少なくとも３０％減少し；一層好ましくは、少なくとも４０％減少し；一層好ましくは少なくとも５０％減少し；なお一層好ましくは、少なくとも５０％減少し；最も好ましくは少なくとも７５％減少する。異常な細胞の外観またはモルホロジーは、再現性のある任意の測定手段により測定できる。異常な細胞のモルホロジーは、例えば倒立組織培養顕微鏡を使用して、顕微鏡法により測定できる。異常な細胞のモルホロジーは、核多形性（ｎｕｃｌｅａｒ  ｐｌｅｉｏｍｏｒｐｈｉｓｍ）の形態をとることがある。
【００８７】
ＥＺＨ２活性の異常、誤制御、または増大と関連する癌または細胞増殖性疾患を、本明細書に記載される化合物により治療することは、細胞死をもたらすことがあり、好ましくは、細胞死は、集団中の細胞数の少なくとも１０％の減少をもたらす。一層好ましくは、細胞死は、少なくとも２０％の減少；一層好ましくは少なくとも３０％の減少；一層好ましくは少なくとも４０％の減少；一層好ましくは少なくとも５０％の減少；最も好ましくは少なくとも７５％の減少を意味する。集団における細胞数は、任意の再現可能な手段により測定することができる。集団における細胞数は、蛍光活性化セルソーター（ＦＡＣＳ）、免疫蛍光顕微鏡および光学顕微鏡により測定してもよい。細胞死を測定する方法は、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ．１００（５）：２６７４−８，２００３に示される通りである。ある種の態様では、細胞死はアポトーシスにより起こる。
【００８８】
本明細書で使用する場合、「選択的に」という用語は、ある集団において別の集団より高頻度で起こる傾向があることを意味する。比較される集団は細胞集団であってもよい。好ましくは、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形は、癌または前癌性細胞に選択的に作用するが、正常な細胞には作用しない。好ましくは、本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形は、ある分子標的（たとえば、標的タンパク質メチルトランスフェラーゼ）を調節するが、別の分子標的（たとえば、非標的タンパク質メチルトランスフェラーゼ）をあまり調節しないように選択的に作用する。本発明はまた、酵素、たとえばＥＺＨ２の活性を選択的に阻害するための方法を提供する。好ましくは、あるイベントが集団Ｂと比較して集団Ａで２倍を超える高い頻度で起こる場合、そのイベントは、集団Ｂに対して集団Ａにおいて選択的に起こる。あるイベントが集団Ａで５倍を超える高い頻度で起こる場合、そのイベントは選択的に起こる。あるイベントが集団Ｂと比較して集団Ａで１０倍を超える高い頻度で；一層好ましくは５０倍を超える；なお一層好ましくは１００倍を超える；最も好ましくは１０００倍を超える高い頻度で集団Ａで起こる場合、そのイベントは選択的に起こる。たとえば、細胞死は、正常な細胞と比較して癌細胞で２倍を超える頻度で起こる場合、癌細胞で選択的に起こるといえると考えられる。
【００８９】
本発明の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくは多形を、細胞またはそれを必要とする被験体に投与することは、ＥＺＨ２の活性の調節（すなわち阻害）をもたらし得る。
【００９０】
本発明の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくは多形を、細胞またはそれを必要とする被験体に投与することは、ＥＺＨ２の調節（すなわち阻害）をもたらす。
【００９１】
活性化することは、組成物（例えば、タンパク質または核酸）を、所望の生物学的機能を実施するのに好適な状態にすることを指す。活性化されることが可能な組成物は、不活性化された状態も有する。活性化された組成物は、阻害性もしくは刺激性の生物学的機能または両方を有し得る。
【００９２】
上昇とは、組成物（たとえば、タンパク質または核酸）の所望の生物活性の増加をいう。上昇は、組成物の濃度の増加により起きてもよい。
【００９３】
本明細書に記載の任意の方法で使用することができる化合物（すなわち、ＥＺＨ２阻害剤）は、下記式Ｉ：
【化５】
2017532338.tif 000007
（式中、
Ｒ７０１は、Ｈ、Ｆ、ＯＲ７０７、ＮＨＲ７０７、−（Ｃ≡Ｃ）−（ＣＨ２）ｎ７−Ｒ７０８、フェニル、５もしくは６員ヘテロアリール、Ｃ３〜８シクロアルキルまたは１〜３個のヘテロ原子を含有する４〜７員ヘテロシクロアルキルであり、フェニル、５もしくは６員ヘテロアリール、Ｃ３〜８シクロアルキルまたは４〜７員ヘテロシクロアルキルは各々独立に、ハロ、Ｃ１〜３アルキル、ＯＨ、Ｏ−Ｃ１〜６アルキル、ＮＨ−Ｃ１〜６アルキル、およびＣ３〜８シクロアルキルまたは１〜３個のヘテロ原子を含有する４〜７員ヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１〜３アルキルから選択される１つまたは複数の基で任意選択的に置換されており、Ｏ−Ｃ１〜６アルキルおよびＮＨ−Ｃ１〜６アルキルは各々、ヒドロキシル、Ｏ−Ｃ１〜３アルキルまたはＮＨ−Ｃ１〜３アルキルで任意選択的に置換されており、Ｏ−Ｃ１〜３アルキルおよびＮＨ−Ｃ１〜３アルキルは各々、Ｏ−Ｃ１〜３アルキルまたはＮＨ−Ｃ１〜３アルキルで任意選択的にさらに置換されており；
Ｒ７０２およびＲ７０３は各々独立に、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜６アルコキシルまたはＣ６〜Ｃ１０アリールオキシであり、各々は１つまたは複数のハロで任意選択的に置換されており；
Ｒ７０４およびＲ７０５は各々独立にＣ１〜４アルキルであり；
Ｒ７０６はＮ（Ｃ１〜４アルキル）２で置換されたシクロヘキシルであり、Ｃ１〜４アルキルの一方または両方はＣ１〜６アルコキシで置換されており；あるいはＲ７０６はテトラヒドロピラニルであり；
Ｒ７０７は、ヒドロキシル、Ｃ１〜４アルコキシ、アミノ、モノもしくはジＣ１〜４アルキルアミノ、Ｃ３〜８シクロアルキル、および１〜３個のヘテロ原子を含有する４〜７員ヘテロシクロアルキルから選択される１つまたは複数の基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキルであり、Ｃ３〜８シクロアルキルまたは４〜７員ヘテロシクロアルキルは各々独立に、Ｃ１〜３アルキルでさらに任意選択的に置換されており；
Ｒ７０８は、ＯＨ、ハロおよびＣ１〜４アルコキシから選択される１つもしくは複数の基で任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル、１〜３個のヘテロ原子を含有する４〜７員ヘテロシクロアルキルまたはＯ−Ｃ１〜６アルキルであり、４〜７員ヘテロシクロアルキルは、ＯＨまたはＣ１〜６アルキルで任意選択的にさらに置換することができ；かつ
ｎ７は、０、１または２である）
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を有することができる。
【００９４】
たとえば、Ｒ７０６は、Ｎ（Ｃ１〜４アルキル）２で置換されたシクロヘキシルであり、Ｃ１〜４アルキルの一方は置換されておらず、他方はメトキシで置換されている。
【００９５】
たとえば、Ｒ７０６は、
【化６】
2017532338.tif 000008
である。
【００９６】
たとえば、化合物は、式ＩＩ：
【化７】
2017532338.tif 000009
である。
【００９７】
たとえば、Ｒ７０２はメチルまたはイソプロピルであり、Ｒ７０３はメチルまたはメトキシルである。
【００９８】
たとえば、Ｒ７０４はメチルである。
【００９９】
たとえば、Ｒ７０１はＯＲ７０７であり、Ｒ７０７はＯＣＨ３またはモルホリンで任意選択的に置換されたＣ１〜３アルキルである。
【０１００】
たとえば、Ｒ７０１はＨまたはＦである。
【０１０１】
たとえば、Ｒ７０１は、テトラヒドロピラニル、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリルまたはピラゾリルであり、その各々は、メチル、メトキシ、モルホリンで置換されたエチル、または−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３で任意選択的に置換されている。
【０１０２】
たとえば、Ｒ７０８は、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、ジアゼパンまたはアゼチジンであり、その各々はＯＨまたはＣ１〜６アルキルで任意選択的に置換されている。
【０１０３】
たとえば、Ｒ７０８はモルホリンである。
【０１０４】
たとえば、Ｒ７０８はＣ１〜６アルキルで置換されたピペラジンである。
【０１０５】
たとえば、Ｒ７０８はメチル、ｔ−ブチルまたはＣ（ＣＨ３）２ＯＨである。
【０１０６】
本明細書に記載の任意の方法で使用することができる化合物（すなわち、ＥＺＨ２阻害剤）は、下記式ＩＩＩ：
【化８】
2017532338.tif 000010
またはその薬学的に許容される塩を有することができる。
【０１０７】
この式では：
Ｒ８０１は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ３〜８シクロアルキル、１〜３個のヘテロ原子を含有する４〜７員ヘテロシクロアルキル、フェニルまたは５または６員ヘテロアリールであり、その各々は、Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−ＲｘまたはＮＨ−Ｃ１〜６アルキル−Ｒｘで置換されており、Ｒｘは、ヒドロキシル、Ｏ−Ｃ１〜３アルキルまたはＮＨ−Ｃ１〜３アルキルであり、Ｒｘは、Ｒｘがヒドロキシルである場合以外は、Ｏ−Ｃ１〜３アルキルまたはＮＨ−Ｃ１〜３アルキルで任意選択的にさらに置換されており；あるいはＲ８０１は、−Ｑ２−Ｔ２で置換されたフェニルであり、Ｑ２は、結合またはハロ、シアノ、ヒドロキシルもしくはＣ１〜Ｃ６アルコキシで任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｔ２は、任意選択的に置換された４〜１２員ヘテロシクロアルキルであり；かつＲ８０１は任意選択的にさらに置換されており；
Ｒ８０２およびＲ８０３は各々独立に、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜４アルキル、Ｃ１〜６アルコキシルまたはＣ６〜Ｃ１０アリールオキシであり、各々は１つまたは複数のハロで任意選択的に置換されており；
Ｒ８０４およびＲ８０５は各々独立に、Ｃ１〜４アルキルであり；かつ
Ｒ８０６は、−Ｑｘ−Ｔｘであり、Ｑｘは、結合またはＣ１〜４アルキルリンカーであり、Ｔｘは、Ｈ、任意選択的に置換されたＣ１〜４アルキル、任意選択的に置換されたＣ３〜Ｃ８シクロアルキルまたは任意選択的に置換された４〜１４員ヘテロシクロアルキルである。
【０１０８】
たとえば、ＱｘおよびＱ２は各々独立に、結合またはメチルリンカーであり、ＴｘおよびＴ２は各々独立に、テトラヒドロピラニル、１、２もしくは３個のＣ１〜４アルキル基により置換されたピペリジニルまたはＮ（Ｃ１〜４アルキル）２（Ｃ１〜４アルキルの一方または両方がＣ１〜６アルコキシで任意選択的に置換されている）により置換されたシクロヘキシルである。
【０１０９】
たとえば、Ｒ８０６はＮ（Ｃ１〜４アルキル）２により置換されたシクロヘキシルであるか、またはＲ８０６はテトラヒドロピラニルである。
【０１１０】
たとえば、Ｒ８０６は、
【化９】
2017532338.tif 000011
である。
【０１１１】
たとえば、Ｒ８０１は、Ｏ−Ｃ１〜６アルキル−Ｒｘで置換されたフェニルまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、あるいはＲ８０１は、ＣＨ２−テトラヒドロピラニルで置換されたフェニルである。
【０１１２】
たとえば、本発明の化合物は、式ＩＶａまたはＩＶｂ：
【化１０】
2017532338.tif 000012
であり、式中、Ｚ’はＣＨまたはＮであり、Ｒ８０７はＣ２〜３アルキル−Ｒｘである。
【０１１３】
たとえば、Ｒ８０７は、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３である。
【０１１４】
たとえば、Ｒ８０２はメチルまたはイソプロピルであり、Ｒ８０３はメチルまたはメトキシルである。
【０１１５】
たとえば、Ｒ８０４はメチルである。
【０１１６】
本発明の化合物は、下記式（Ｖ）：
【化１１】
2017532338.tif 000013
またはその薬学的に許容される塩もしくはエステルを有することができる。
【０１１７】
この式では：
Ｒ２、Ｒ４およびＲ１２は各々独立に、Ｃ１〜６アルキルであり；
Ｒ６は、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、その各々は、１つまたは複数の−Ｑ２−Ｔ２で任意選択的に置換されており、Ｑ２は、結合またはハロ、シアノ、ヒドロキシルもしくはＣ１〜Ｃ６アルコキシで任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｔ２は、Ｈ、ハロ、シアノ、−ＯＲａ、−ＮＲａＲｂ、−（ＮＲａＲｂＲｃ）＋Ａ−、−Ｃ（Ｏ）Ｒａ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）ＯＲａ，−Ｓ（Ｏ）２Ｒａ、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲａＲｂまたはＲＳ２であり、Ｒａ、ＲｂおよびＲｃは各々独立にＨまたはＲＳ３であり、Ａ−は薬学的に許容されるアニオンであり、ＲＳ２およびＲＳ３は各々独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、あるいはＲａおよびＲｂは、それらが結合するＮ原子と共に互いに結合して、０または１個の追加のヘテロ原子を有する４〜１２員ヘテロシクロアルキル環を形成し、ＲＳ２、ＲＳ３の各々、ならびにＲａおよびＲｂにより形成された４〜１２員ヘテロシクロアルキル環は、１つまたは複数の−Ｑ３−Ｔ３で任意選択的に置換されており、Ｑ３は、結合または各々がハロ、シアノ、ヒドロキシルもしくはＣ１〜Ｃ６アルコキシで任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｔ３は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、５または６員ヘテロアリール、ＯＲｄ、ＣＯＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＮＲｄＲｅおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲｄＲｅからなる群から選択され、ＲｄおよびＲｅは各々独立にＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、あるいは−Ｑ３−Ｔ３はオキソであり；あるいは任意の２つの隣接する−Ｑ２−Ｔ２は、それらが結合する原子と共に互いに結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を任意選択的に含有し、かつハロ、ヒドロキシル、ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルおよび５または６員ヘテロアリールからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換された５または６員環を形成し；
Ｒ７は、−Ｑ４−Ｔ４であり、Ｑ４は、結合、Ｃ１〜Ｃ４アルキルリンカーまたはＣ２〜Ｃ４アルケニルリンカーであり、各リンカーは、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ６アルコキシで任意選択的に置換されており、Ｔ４は、Ｈ、ハロ、シアノ、ＮＲｆＲｇ、−ＯＲｆ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｆＯＲｇ、−ＮＲｆＣ（Ｏ）Ｒｇ、−Ｓ（Ｏ）２ＲｆまたはＲＳ４であり、ＲｆおよびＲｇは各々独立に、ＨまたはＲＳ５であり、ＲＳ４およびＲＳ５は各々独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、かつＲＳ４およびＲＳ５は各々、１つまたは複数の−Ｑ５−Ｔ５で任意選択的に置換されており、Ｑ５は、結合、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲｋ、ＮＲｋＣ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２またはＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｒｋは、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｔ５は、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、５もしくは６員ヘテロアリールまたはＳ（Ｏ）ｑＲｑであり、ｑは、０、１または２であり、Ｒｑは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、Ｔ５は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシルまたはシアノである場合以外では、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルおよび５もしくは６員ヘテロアリールからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されており；あるいは−Ｑ５−Ｔ５はオキソであり；かつ
Ｒ８は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、ＣＯＯＨ、シアノ、ＲＳ６、ＯＲＳ６またはＣＯＯＲＳ６であり、ＲＳ６は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノまたはジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノであり、かつＲＳ６は、ハロ、ヒドロキシル、ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノおよびジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されており；あるいはＲ７およびＲ８は、それらが結合するＮ原子と共に互いに結合して、０〜２個の追加のヘテロ原子を有する４〜１１員ヘテロシクロアルキル環を形成し、かつＲ７およびＲ８により形成された４〜１１員ヘテロシクロアルキル環は、１つまたは複数の−Ｑ６−Ｔ６で任意選択的に置換されており、Ｑ６は、結合、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲｍ、ＮＲｍＣ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２またはＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｒｍは、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｔ６は、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、５もしくは６員ヘテロアリールまたはＳ（Ｏ）ｐＲｐであり、ｐは、０、１または２であり、Ｒｐは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、かつＴ６は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシルまたはシアノである場合以外では、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルおよび５もしくは６員ヘテロアリールからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されており；あるいは−Ｑ６−Ｔ６はオキソである。
【０１１８】
たとえば、Ｒ６は、Ｃ６〜Ｃ１０アリールまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、その各々は独立に、１つまたは複数の−Ｑ２−Ｔ２で任意選択的に置換されており、Ｑ２は、結合またはＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｔ２は、Ｈ、ハロ、シアノ、−ＯＲａ、−ＮＲａＲｂ、−（ＮＲａＲｂＲｃ）＋Ａ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲｂＣ（Ｏ）Ｒａ、−Ｓ（Ｏ）２ＲａまたはＲＳ２であり、ＲａおよびＲｂは各々独立に、ＨまたはＲＳ３であり、ＲＳ２およびＲＳ３は各々独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、あるいはＲａおよびＲｂは、それらが結合するＮ原子と共に互いに結合して、０または１個の追加のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成し、かつＲＳ２、ＲＳ３、ならびにＲａおよびＲｂにより形成された４〜７員ヘテロシクロアルキル環は各々独立に、１つまたは複数の−Ｑ３−Ｔ３で任意選択的に置換されており、Ｑ３は、結合またはＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｔ３は、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、４〜７員ヘテロシクロアルキル、ＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄおよび−ＮＲｄＲｅからなる群から選択され、ＲｄおよびＲｅは各々独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、あるいは−Ｑ３−Ｔ３はオキソであり；あるいは任意の２つの隣接する−Ｑ２−Ｔ２は、それらが結合する原子と共に互いに結合して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１〜４個のヘテロ原子を任意選択的に含有する５もしくは６員環を形成する。
【０１１９】
たとえば、本発明の化合物は、式（ＶＩ）：
【化１２】
2017532338.tif 000014
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｑ２は、結合またはメチルリンカーであり、Ｔ２は、Ｈ、ハロ、−ＯＲａ、−ＮＲａＲｂ、−（ＮＲａＲｂＲｃ）＋Ａ−または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲａＲｂであり、Ｒ７は、ピペリジニル、テトラヒドロピラン、シクロペンチルまたはシクロヘキシルであり、各々は、１つの−Ｑ５−Ｔ５で任意選択的に置換されており、かつＲ８は、エチルである。
【０１２０】
本発明の化合物は、下記式（ＶＩａ）：
【化１３】
2017532338.tif 000015
（式中、
ＲａおよびＲｂは各々独立に、ＨまたはＲＳ３であり、ＲＳ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキルまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、あるいはＲａおよびＲｂは、それらが結合するＮ原子と共に互いに結合して、０または１個の追加のヘテロ原子を有する４〜１２員ヘテロシクロアルキル環を形成し、かつＲＳ３ならびにＲａおよびＲｂにより形成された４〜１２員ヘテロシクロアルキル環は各々、１つまたは複数の−Ｑ３−Ｔ３で任意選択的に置換されており、Ｑ３は、結合、または各々がハロ、シアノ、ヒドロキシルもしくはＣ１〜Ｃ６アルコキシで任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｔ３は、ハロ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜１２員ヘテロシクロアルキル、５もしくは６員ヘテロアリール、ＯＲｄ、ＣＯＯＲｄ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒｄ、−ＮＲｄＲｅおよび−Ｃ（Ｏ）ＮＲｄＲｅからなる群から選択され、ＲｄおよびＲｅは各々独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、あるいは−Ｑ３−Ｔ３は、オキソであり；
Ｒ７は、−Ｑ４−Ｔ４であり、Ｑ４は、結合、Ｃ１〜Ｃ４アルキルリンカーまたはＣ２〜Ｃ４アルケニルリンカーであり、各リンカーは、ハロ、シアノ、ヒドロキシルまたはＣ１〜Ｃ６アルコキシで任意選択的に置換されており、Ｔ４は、Ｈ、ハロ、シアノ、ＮＲｆＲｇ、−ＯＲｆ、−Ｃ（Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｆＲｇ、−Ｃ（Ｏ）ＮＲｆＯＲｇ、−ＮＲｆＣ（Ｏ）Ｒｇ、−Ｓ（Ｏ）２ＲｆまたはＲＳ４であり、ＲｆおよびＲｇは各々独立に、ＨまたはＲＳ５であり、ＲＳ４およびＲＳ５は各々独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜７員ヘテロシクロアルキルまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、かつＲＳ４およびＲＳ５は各々、１つまたは複数の−Ｑ５−Ｔ５で任意選択的に置換されており、Ｑ５は、結合、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲｋ、ＮＲｋＣ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２またはＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｒｋは、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｔ５は、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜７員ヘテロシクロアルキル、５もしくは６員ヘテロアリールまたはＳ（Ｏ）ｑＲｑであり、ｑは、０、１または２であり、Ｒｑは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜７員ヘテロシクロアルキルまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、Ｔ５は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシルまたはシアノである場合以外では、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜７員ヘテロシクロアルキルおよび５もしくは６員ヘテロアリールからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されており；あるいは−Ｑ５−Ｔ５はオキソであり；ただし、Ｒ７はＨではなく；かつ
Ｒ８は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシル、ＣＯＯＨ、シアノ、ＲＳ６、ＯＲＳ６またはＣＯＯＲＳ６であり、ＲＳ６は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノまたはジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノであり、かつＲＳ６は、ハロ、ヒドロキシル、ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノおよびジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されており；あるいはＲ７およびＲ８は、それらが結合するＮ原子と共に互いに結合して、０〜２個の追加のヘテロ原子を有し、かつ１つまたは複数の−Ｑ６−Ｔ６で任意選択的に置換された４〜１１員ヘテロシクロアルキル環を形成し、Ｑ６は、結合、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＲｍ、ＮＲｍＣ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２またはＣ１〜Ｃ３アルキルリンカーであり、Ｒｍは、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｔ６は、Ｈ、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜７員ヘテロシクロアルキル、５もしくは６員ヘテロアリールまたはＳ（Ｏ）ｐＲｐであり、ｐは、０、１または２であり、Ｒｐは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜７員ヘテロシクロアルキルまたは５もしくは６員ヘテロアリールであり、かつＴ６は、Ｈ、ハロ、ヒドロキシルまたはシアノである場合以外では、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ヒドロキシル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、ジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノ、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ６〜Ｃ１０アリール、４〜７員ヘテロシクロアルキルおよび５もしくは６員ヘテロアリールからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されており；あるいは−Ｑ６−Ｔ６はオキソである）
を有することができる。
【０１２１】
たとえば、ＲａおよびＲｂは、それらが結合するＮ原子と共に互いに結合して、Ｎ原子に加えて０または１個のヘテロ原子を有する４〜７員ヘテロシクロアルキル環を形成し、この環は、１つまたは複数の−Ｑ３−Ｔ３で任意選択的に置換されており、ヘテロシクロアルキルは、アゼチジニル、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、トリアゾリジニル、ピペリジニル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジニル、ピペラジニルまたはモルホリニルである。
【０１２２】
たとえば、Ｒ７は、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルまたは４〜７員ヘテロシクロアルキルであり、各々は、１つまたは複数の−Ｑ５−Ｔ５で任意選択的に置換されている。
【０１２３】
たとえば、Ｒ７は、ピペリジニル、テトラヒドロピラン、テトラヒドロ−２Ｈ−チオピラニル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ピロリジニルまたはシクロヘプチルであり、各々は、１つまたは複数の−Ｑ５−Ｔ５で任意選択的に置換されている。
【０１２４】
たとえば、Ｒ８は、Ｈ、またはハロ、ヒドロキシル、ＣＯＯＨ、Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、シアノ、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシル、アミノ、モノＣ１〜Ｃ６アルキルアミノおよびジＣ１〜Ｃ６アルキルアミノからなる群から選択される１つまたは複数の置換基で任意選択的に置換されたＣ１〜Ｃ６アルキルである。
【０１２５】
実施形態では、本明細書に示す任意の方法で使用することができる化合物は、
【化１４】
2017532338.tif 000016
（化合物Ａ、Ｅ７４３８またはＥＰＺ−６４３８とも呼ばれる）またはその薬学的に許容される塩である。
【０１２６】
実施形態では、本明細書に示す任意の方法で使用することができる化合物は、
【化１５】
2017532338.tif 000017
およびその薬学的に許容される塩である。
【０１２７】
あるいは、ＥＺＨ２阻害剤は、化合物ＢおよびＣ、それらの立体異性体、ならびにそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される。
【０１２８】
実施形態では、本明細書に示す任意の方法で使用することができる化合物は、化合物Ｆ：
【化１６】
2017532338.tif 000018
またはその薬学的に許容される塩である。
【０１２９】
実施形態では、本発明の方法で使用するのに適した化合物は、式（ＶＩＩ）の化合物：
【化１７】
2017532338.tif 000019
（式中、
Ｖ１は、ＮまたはＣＲ７であり、
Ｖ２は、ＮまたはＣＲ２であるが、Ｖ１がＮである場合、Ｖ２はＮであり、
ＸおよびＺは独立に、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、非置換または置換（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、非置換または置換（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルまたは−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、非置換または置換（Ｃ５−Ｃ８）シクロアルケニル、非置換または置換（Ｃ５−Ｃ８）シクロアルケニル−アルキル（Ｃ１〜Ｃ８）または−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ６〜Ｃ１０）ビシクロアルキル、非置換または置換ヘテロシクロアルキル、非置換または置換ヘテロシクロアルキル−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルまたは−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、非置換または置換アリール、非置換または置換アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルまたは−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、非置換または置換ヘテロアリール、非置換または置換ヘテロアリール−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルまたは−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、ハロ、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＣＯＮＲａＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａおよび−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂからなる群から選択され；
ＹはＨまたはハロであり；
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、非置換または置換（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、非置換または置換（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルまたは−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、非置換または置換（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、非置換または置換（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルまたは−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、非置換または置換（Ｃ６〜Ｃ１０）ビシクロアルキル、非置換または置換ヘテロシクロアルキルまたは−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、非置換または置換ヘテロシクロアルキル−アルキル（Ｃ１〜Ｃ８）、非置換または置換アリール、非置換または置換アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルまたは−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、非置換または置換ヘテロアリール、非置換または置換ヘテロアリール−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルまたは−（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＣＯＮＲａＮＲａＲｂ；
Ｒ２は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、トリフルオロメチル、アルコキシ、またはハロであり、前記（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルは、アミノおよび（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノから選択される１〜２個の基で任意選択的に置換されており；
Ｒ７は、水素、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたはアルコキシであり；
Ｒ３は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、シアノ、トリフルオロメチル、−ＮＲａＲｂまたはハロであり；
Ｒ６は、水素、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、非置換または置換（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、非置換または置換（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、非置換または置換（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、非置換または置換（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ６〜Ｃ１０）ビシクロアルキル、非置換または置換ヘテロシクロアルキル、非置換または置換ヘテロシクロアルキル−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、非置換または置換アリール、非置換または置換アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、非置換または置換ヘテロアリール、非置換または置換ヘテロアリール−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＣＯＮＲａＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂからなる群から選択され；
任意の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基は、−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｒｃ）１〜２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｒｃ）１〜２、−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｒｃ）１〜２、−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル−ヘテロシクロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル−ヘテロシクロアルキル、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ  −ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよびヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルからなる群から独立に選択される１つ、２つまたは３つの基により任意選択的に置換されており；
前記アリール、ヘテロアリール、アリール（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルまたはヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルの任意のアリールまたはヘテロアリール部分は独立に、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａおよび−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂからなる群から選択され；
ＲａおよびＲｂは各々独立に、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ６〜Ｃ１０）ビシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、前記（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基は、ハロ、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ、（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）アミノ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＣＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよびＳＯ２Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）から独立に選択される１つ、２つまたは３つの基により任意選択的に置換されており；
あるいはそれらが結合する窒素と共に互いに結合したＲａおよびＲｂは、酸素、窒素およびイオウから選択される追加のヘテロ原子を任意選択的に含有する５〜８員の飽和または不飽和環を表し、前記環は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ、（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）アミノ、ヒドロキシル、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシおよび（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから独立に選択される１つ、２つまたは３つの基により任意選択的に置換されており、前記環は、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール環に任意選択的に融合されており；
あるいはそれらが結合する窒素と共に互いに結合したＲａおよびＲｂは、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール環に任意選択的に融合した６〜１０員の架橋二環式環系を表し；
Ｒｃは各々独立に、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＲｂまたは−ＣＯ２Ｒａである）
またはその塩を含む。
【０１３０】
式（Ｉ）の一般構造により包含される化合物のサブグループは、以下のように表される：
式（ＶＩＩ）のサブグループＡ
ＸおよびＺは、（Ｃ３〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、−ＮＲａＲｂおよび−ＯＲａからなる群から選択され；
ＹはＨまたはＦであり；
Ｒ１は、（Ｃ３〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ２は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、トリフルオロメチル、アルコキシまたはハロであり、前記（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルは、アミノおよび（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノから選択される１〜２個の基で任意選択的に置換されており；
Ｒ７は、水素、アルキル（Ｃ１〜Ｃ３）またはアルコキシであり；
Ｒ３は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、シアノ、トリフルオロメチル，−ＮＲａＲｂおよびハロからなる群から選択され；
Ｒ６は、水素、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；アリール、ヘテロアリール、アシルアミノ；（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキニル；−ＳＯ２Ｒａ；−ＳＯ２ＮＲａＲｂおよび−ＮＲａＳＯ２Ｒｂからなる群から選択され；
任意の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキニル基は、−Ｏ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｒｃ）１〜２、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｒｃ）１〜２、−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（Ｒｃ）１〜２、−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル−ヘテロシクロアルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル−ヘテロシクロアルキル、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよびヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから独立に選択される１つ、２つまたは３つの基により任意選択的に置換されており；
ＲａおよびＲｂは各々独立に、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ６〜Ｃ１０）ビシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、前記（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基は、ハロ、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ、（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）アミノ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＣＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−ＳＯ２Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）から独立に選択される１つ、２つまたは３つの基により任意選択的に置換されており；
あるいはそれらが結合する窒素と共に互いに結合したＲａおよびＲｂは、酸素、窒素およびイオウから選択される追加のヘテロ原子を任意選択的に含有する５〜８員の飽和または不飽和環を表し、前記環は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ、（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）アミノ、ヒドロキシル、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシおよび（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから独立に選択される１つ、２つまたは３つの基により任意選択的に選択され、前記環は、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール環に任意選択的に融合しており；
あるいはそれらが結合する窒素と共に互いに結合したＲａおよびＲｂは、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール環に任意選択的に融合した６〜１０員の架橋二環式環系を表す。この特定のサブグループＡのアリールまたはヘテロアリール基は、フラン、チオフェン、ピロール、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、ピラゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、テトラゾール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンゾキサゾール、ベンゾチアゾール、フェニル、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン、テトラジン、キノリン、シンノリン、キナゾリン、キノキサリン、およびナフチリジン、または下記のような別のアリールもしくはヘテロアリール基からなる群から独立に選択される：
【化１８】
2017532338.tif 000020
（１）では、
ＡはＯ、ＮＨもしくはＳであり；ＢはＣＨもしくはＮであり、Ｃは水素もしくはＣ１〜Ｃ８アルキルであり；または
【化１９】
2017532338.tif 000021
（２）では、
Ｄは水素もしくはＣ１〜Ｃ８アルキルにより任意選択的に置換されたＮもしくはＣであり；または
【化２０】
2017532338.tif 000022
（３）では、
ＥはＮＨもしくはＣＨ２であり；ＦはＯもしくはＣＯであり；ＧはＮＨもしくはＣＨ２であり；または
【化２１】
2017532338.tif 000023
（４）では、
ＪはＯ、ＳもしくはＣＯであり；または
【化２２】
2017532338.tif 000024
（５）では、
ＱはＣＨもしくはＮであり；
ＭはＣＨもしくはＮであり；かつ
Ｌ／（５）は、水素、ハロ、アミノ、シアノ、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＣＯＮＲａＮＲａＲｂ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂもしくは−ＯＲａであり、
任意の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルもしくは（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａおよび−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂから独立に選択される１つ、２つもしくは３つの基により任意選択的に置換されており；ＲａおよびＲｂは上記のように定義され；または
【化２３】
2017532338.tif 000025
（６）では、
Ｌ／（６）はＮＨもしくはＣＨ２であり；または
【化２４】
2017532338.tif 000026
（７）では、
Ｍ／（７）は、水素、ハロ、アミノ、シアノ、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＣＯＮＲａＮＲａＲｂ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂもしくは−ＯＲａであり、
任意の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルもしくヘテロシクロアルキル基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａおよび−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂから独立に選択される１つ、２つもしくは３つの基により任意選択的に置換されており；ＲａおよびＲｂは上記のように定義され；または
【化２５】
2017532338.tif 000027
（８）では、
ＰはＣＨ２、ＮＨ、ＯもしくはＳであり；Ｑ／（８）はＣＨもしくはＮであり；ｎは０〜２であり；または
【化２６】
2017532338.tif 000028
（９）では、
Ｓ／（９）およびＴ／（９）はＣであるか、もしくはＳ／（９）はＣでありかつＴ／（９）はＮであるか、もしくはＳ／（９）はＮでありかつＴ／（９）はＣであり；
Ｒは、水素、アミノ、メチル、トリフルオロメチルもしくはハロであり；
Ｕは、水素、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＯＲａもしくは４−（１Ｈ−ピラゾール−４−ｙ１）であり、
任意の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルもしくは（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａおよび−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂから独立に選択される１つ、２つもしくは３つの基により任意選択的に置換されており；ＲａおよびＲｂは上記のように定義される。
【０１３１】
式（ＶＩＩ）のサブグループＢ
ＸおよびＺは、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、−ＮＲａＲｂおよび−ＯＲａからなる群から独立に選択され；
ＹはＨであり；
Ｒ１は、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルであり；
Ｒ２は、水素、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたはハロであり、前記（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルは、アミノおよび（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルアミノから選択される１〜２個の基により任意選択的に置換されており；
Ｒ７は、水素、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたはアルコキシであり；
Ｒ３は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルまたはハロであり；
Ｒ６は、水素、ハロ、シアノ、トリフルオロメチル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アシルアミノ；（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、アリールアルキニル、ヘテロアリールアルキニル、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂまたは−ＮＲａＳＯ２Ｒｂであり；
任意の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、アリールアルキニルまたはヘテロアリールアルキニル基は、ハロ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリール（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよびヘテロアリール（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから独立に選択される１つ、２つまたは３つの基により任意選択的に置換されており；
ＲａおよびＲｂは各々独立に、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ６〜Ｃ１０）ビシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、前記（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ８）アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、ビシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール基は、ハロ、ヒドロキシル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ、（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）アミノ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＣＯＮ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）、−ＳＯ２（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルおよび−ＳＯ２Ｎ（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）から独立に選択される１つ、２つまたは３つの基により任意選択的に置換されており；
あるいはそれらが結合する窒素と共に互いに結合したＲａおよびＲｂは、酸素、窒素およびイオウから選択される追加のヘテロ原子を任意選択的に含有する５〜８員の飽和または不飽和環を表し、前記環は、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）ハロアルキル、アミノ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミノ、（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）（（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル）アミノ、ヒドロキシル、オキソ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシおよび（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから独立に選択される１つ、２つまたは３つの基により任意選択的に選択されており、前記環は、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール環に任意選択的に融合しており；
あるいはそれらが結合する窒素と共に互いに結合したＲａおよびＲｂは、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール環に任意選択的に融合した６〜１０員の架橋二環式環系を表す。この定義におけるアリールおよびヘテロアリールは、フラン、チオフェン、ピロール、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、ピラゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、トリアゾール、テトラゾール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンゾキサゾール、ベンゾチアゾール、フェニル、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン、テトラジン、キノリン、シンノリン、キナゾリン、キノキサリンおよびナフチリジン、または以下のような別のアリールもしくはヘテロアリール基の化合物からなる群から選択される：
【化２７】
2017532338.tif 000029
（１）では、
ＡはＯ、ＮＨもしくはＳであり；ＢはＣＨもしくはＮであり、Ｃは水素もしくはＣ１〜Ｃ８アルキルであり；または
【化２８】
2017532338.tif 000030
（２）では、
Ｄは、水素もしくはＣ１〜Ｃ８アルキルにより任意選択的に置換されたＮもしくはＣであり；または
【化２９】
2017532338.tif 000031
（３）では、
ＥはＮＨもしくはＣＨ２であり；ＦはＯもしくはＣＯであり；ＧはＮＨもしくはＣＨ２であり；または
【化３０】
2017532338.tif 000032
（４）では、
ＪはＯ、ＳもしくはＣＯであり；または
【化３１】
2017532338.tif 000033
（５）では、
ＱはＣＨもしくはＮであり；
ＭはＣＨもしくはＮであり；かつ
Ｌ／（５）は、水素、ハロ、アミノ、シアノ、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＣＯＮＲａＮＲａＲｂ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂもしくは−ＯＲａであり、
任意の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａおよび−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂから独立に選択される１つ、２つもしくは３つの基により任意選択的に置換されており、
ＲａおよびＲｂは上記のように定義され；または
【化３２】
2017532338.tif 000034
（６）では、
Ｌ／（６）はＮＨもしくはＣＨ２であり；または
【化３３】
2017532338.tif 000035
（７）では、
Ｍ／（７）は、水素、ハロ、アミノ、シアノ、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＣＯＮＲａＮＲａＲｂ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂもしくは−ＯＲａであり、
任意の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＲａ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａ、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂから独立に選択される１つ、２つもしくは３つの基により任意選択的に置換されており；ＲａおよびＲｂは上記のように定義され；または
【化３４】
2017532338.tif 000036
（８）では、
ＰはＣＨ２、ＮＨ、ＯもしくはＳであり；Ｑ／（８）はＣＨもしくはＮであり；ｎは０〜２であり；または
【化３５】
2017532338.tif 000037
（９）では、
Ｓ／（９）およびＴ／（９）はＣであるか、もしくはＳ／（９）はＣでありかつＴ／（９）はＮであるか、もしくはＳ／（９）はＮでありかつＴ／（９）はＣであり；
Ｒは、水素、アミノ、メチル、トリフルオロメチル、ハロであり；
Ｕは、水素、ハロ、アミノ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＲｂ、−ＮＲａＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＯＲａもしくは４−（１Ｈ−ピラゾール−４−イル）であり、
任意の（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルもしくは（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル基は、（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ８）シクロアルケニル、（Ｃ１〜Ｃ６）ハロアルキル、シアノ、−ＣＯＲａ、−ＣＯ２Ｒａ、−ＣＯＮＲａＲｂ、−ＳＯＲａ、−ＳＯ２Ｒａ、−ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ニトロ、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（Ｏ）ＯＲａ、−ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＮＲａＳＯ２ＮＲａＲｂ、−ＯＲａ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒａおよび−ＯＣ（Ｏ）ＮＲａＲｂから独立に選択される１つ、２つもしくは３つの基により任意選択的に置換されており、ＲａおよびＲｂは上記のように定義される。
【０１３２】
実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は、化合物ＧまたはＧＳＫ−１２６：
【化３６】
2017532338.tif 000038
またはその立体異性体、もしくはその薬学的に許容できる塩、もしくは溶媒和物である。
【０１３３】
ある種の実施形態では、本明細書に示されるいずれの方法にも使用できるＥＺＨ２阻害剤は、化合物Ｈ：
【化３７】
2017532338.tif 000039
またはその立体異性体、もしくはその薬学的に許容できる塩、もしくは溶媒和物である。
【０１３４】
ある種の実施形態では、本明細書に示されるいずれの方法にも使用できるＥＺＨ２阻害剤は、化合物Ｇａ〜Ｇｃのいずれか：
【化３８】
2017532338.tif 000040
またはその立体異性体、薬学的に許容できる塩、もしくは溶媒和物である。
【０１３５】
ある種の実施形態では、本明細書に示されるいずれの方法にも使用できるＥＺＨ２阻害剤はＣＰＩ−１２０５またはＧＳＫ３４３である。
【０１３６】
一実施形態では、本明細書に開示される化合物（例えば、ＥＺＨ２阻害剤）は、化合物自体、すなわち遊離塩基または「裸の」分子である。別の実施形態では、化合物は、その塩、例えば、裸の分子の一ＨＣｌ塩または三ＨＣｌ塩、一ＨＢｒ塩または三ＨＢｒ塩である。
【０１３７】
本明細書に記載の化合物は、当該技術分野で周知の任意の方法に従って合成することができる。たとえば、式（ＶＩＩ）を有する化合物は、国際公開第２０１１／１４０３２５号パンフレット；国際公開第２０１１／１４０３２４号パンフレット；および国際公開第２０１２／００５８０５号パンフレットに記載された方法に従って合成することができ；その内容全体を各々参照により援用する。
【０１３８】
本明細書で使用する場合、「アルキル」、「Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６アルキル」または「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６直鎖（線状）飽和脂肪族炭化水素基、およびＣ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６分岐飽和脂肪族炭化水素基を含むことを意図している。たとえば、Ｃ１〜Ｃ６アルキルは、Ｃ１アルキル基、Ｃ２アルキル基、Ｃ３アルキル基、Ｃ４アルキル基、Ｃ５アルキル基およびＣ６アルキル基を含むことを意図している。アルキルの例として、以下に限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｓ−ペンチルまたはｎ−ヘキシルなど１〜６個の炭素原子を有する部分が挙げられる。
【０１３９】
実施形態では、直鎖または分岐アルキルは６個以下の炭素原子（たとえば、直鎖のＣ１〜Ｃ６、分岐鎖のＣ３−Ｃ６）を有し、別の実施形態では、直鎖または分岐アルキルは４個以下の炭素原子を有する。
【０１４０】
本明細書で使用する場合、「シクロアルキル」という用語は、３〜３０個の炭素原子（たとえば、Ｃ３〜Ｃ１０）を有する単環または多環系の飽和もしくは不飽和非芳香族炭化水素（たとえば、縮合環、架橋環またはスピロ環）系をいう。シクロアルキルの例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニルおよびアダマンチルがあるが、これに限定されるものではない。「ヘテロシクロアルキル」という用語は、特に明記されない限り、１つまたは複数のヘテロ原子（たとえばＯ、Ｎ、ＳまたはＳｅ）を有する３〜８員の単環式飽和もしくは不飽和非芳香族環系、７〜１２員の二環式飽和もしくは不飽和非芳香族環系（縮合環、架橋環またはスピロ環）、または１１〜１４員の三環式飽和もしくは不飽和非芳香族環系（縮合環、架橋環またはスピロ環）をいう。ヘテロシクロアルキル基の例として、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリジニル、ジオキサニル、テトラヒドロフラニル、イソインドリニル、インドリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、トリアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、ピラニル、モルホリニル、１，４−ジアゼパニル、１、４−オキサゼパニル、２−オキサ−５−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、２，５−ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、２−オキサ−６−アザスピロ［３．３］ヘプタニル、２，６−ジアザスピロ［３．３］ヘプタニル、１，４−ジオキサ−８−アザスピロ［４．５］デカニル等があるが、これに限定されるものではない。
【０１４１】
「任意選択的に置換されたアルキル」という用語は、非置換アルキル、または炭化水素骨格の１つまたは複数の炭素上の１つまたは複数の水素原子に置き換わる所定の置換基を有するアルキルをいう。こうした置換基として、たとえば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィナート、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノおよびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、スルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリール、または芳香族部分もしくは芳香族複素環部分を挙げることができる。
【０１４２】
「アリールアルキル」または「アラルキル」部分とは、アリールで置換されたアルキル（たとえば、フェニルメチル（ベンジル））である。「アルキルアリール」部分は、アルキルで置換されたアリール（たとえば、メチルフェニル）である。
【０１４３】
本明細書で使用する場合、「アルキルリンカー」は、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６直鎖（線状）飽和二価脂肪族炭化水素基、およびＣ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６分岐飽和脂肪族炭化水素基を含むことを意図している。たとえば、Ｃ１〜Ｃ６アルキルリンカーは、Ｃ１アルキルリンカー基、Ｃ２アルキルリンカー基、Ｃ３アルキルリンカー基、Ｃ４アルキルリンカー基、Ｃ５アルキルリンカー基およびＣ６アルキルリンカー基を含むことを意図している。アルキルリンカーの例として、以下に限定されるものではないが、メチル（−ＣＨ２−）、エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｉ−プロピル（−ＣＨＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｓ−ブチル（−ＣＨＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、ｉ−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−）、ｎ−ペンチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、ｓ−ペンチル（−ＣＨＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）またはｎ−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）など１〜６個の炭素原子を有する部分が挙げられる。
【０１４４】
「アルケニル」は、上述のアルキルと長さが類似し、上述のアルキルへの置換が可能であるが、少なくとも１つの二重結合を含む不飽和脂肪族基を含む。たとえば、「アルケニル」という用語は、直鎖アルケニル基（たとえば、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ノネニル、デセニル）、および分岐アルケニル基を含む。実施形態では、直鎖または分岐アルケニル基はその骨格に６個以下の炭素原子（たとえば、直鎖に対してＣ２〜Ｃ６、分岐鎖に対してＣ３〜Ｃ６）を有する。「Ｃ２〜Ｃ６」という用語は、２〜６個の炭素原子を含むアルケニル基を含む。「Ｃ３〜Ｃ６」という用語は、３〜６個の炭素原子を含むアルケニル基を含む。
【０１４５】
「任意選択的に置換されたアルケニル」という用語は、非置換アルケニル、または１つまたは複数の炭化水素骨格の炭素原子上の１つまたは複数の水素原子に置き換わる所定の置換基を有するアルケニルをいう。こうした置換基として、たとえば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィナート、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノおよびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、スルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、ヘテロシクリル、アルキルアリールまたは芳香族部分もしくは芳香族複素環部分を挙げることができる。
【０１４６】
「アルキニル」は、上述のアルキルと長さが類似し、上述のアルキルへの置換が可能であるが、少なくとも１つの三重結合を含む不飽和脂肪族基を含む。たとえば、「アルキニル」は、直鎖アルキニル基（たとえば、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニル、ヘキシニル、ヘプチニル、オクチニル、ノニニル、デシニル）、および分岐アルキニル基を含む。実施形態では、直鎖または分岐アルキニル基はその骨格に６個以下の炭素原子（たとえば、直鎖に対してＣ２〜Ｃ６、分岐鎖に対してＣ３〜Ｃ６）を有する。「Ｃ２〜Ｃ６」という用語は、２〜６個の炭素原子を含むアルキニル基を含む。「Ｃ３〜Ｃ６」という用語は、３〜６個の炭素原子を含むアルキニル基を含む。
【０１４７】
「任意選択的に置換されたアルキニル」という用語は、非置換アルキニル、または１つまたは複数の炭化水素骨格の炭素原子上の１つまたは複数の水素原子に置き換わる所定の置換基を有するアルキニルをいう。こうした置換基として、たとえば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィナート、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノおよびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、スルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリールまたは芳香族部分もしくは芳香族複素環部分を挙げることができる。
【０１４８】
他の任意選択的に置換された部分（たとえば任意選択的に置換されたシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール）は、非置換部分、および１つまたは複数の所定の置換基を有する部分の両方を含む。たとえば、置換されたヘテロシクロアルキルとして、１つまたは複数のアルキル基、たとえば２，２，６，６−テトラメチル−ピペリジニルおよび２，２，６，６−テトラメチル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジニルで置換されたものが挙げられる。
【０１４９】
「アリール」は、少なくとも１つの芳香環を有するが、環構造に任意のヘテロ原子を有さない「結合された」環系、または多環系を含む、芳香族性を有する基を含む。例として、フェニル、ベンジル、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレニル等が挙げられる。
【０１５０】
「ヘテロアリール」基は、環構造に１〜４個のヘテロ原子を有すること以外は上記で定義したようなアリール基であり、「複素環アリール」または「複素芳香族化合物」ということもある。本明細書で使用する場合、「ヘテロアリール」という用語は、炭素原子と、窒素、酸素および硫黄からなる群から独立に選択される１つまたは複数のヘテロ原子、たとえば１個もしくは１〜２個もしくは１〜３個もしくは１〜４個もしくは１〜５個もしくは１〜６個のヘテロ原子、または、たとえば１個、２個、３個、４個、５個もしくは６個のヘテロ原子とからなる安定な５員、６員もしくは７員単環式または７員、８員、９員、１０員、１１員もしくは１２員二環式芳香族複素環式環を含むことを意図している。窒素原子は置換されていても、あるいは置換されていなくてもよい（すなわち、Ｎ、あるいは、ＲがＨまたは定義された他の置換基であるＮＲ）。窒素ヘテロ原子および硫黄ヘテロ原子は、任意選択的に酸化されていてもよい（すなわち、Ｎ→ＯおよびＳ（Ｏ）ｐ、式中、ｐ＝１または２）。芳香族複素環のＳ原子およびＯ原子の総数は、１以下である点に留意されたい。
【０１５１】
ヘテロアリール基の例として、ピロール、フラン、チオフェン、チアゾール、イソチアゾール、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、ピリミジンおよび同種のものが挙げられる。
【０１５２】
さらに、「アリール」および「ヘテロアリール」という用語は、多環式、たとえば、三環式、二環式アリール基およびヘテロアリール基、たとえば、ナフタレン、ベンゾキサゾール、ベンゾジキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾチオフェン、メチレンジオキシフェニル、キノリン、イソキノリン、ナフトリジン、インドール、ベンゾフラン、プリン、ベンゾフラン、デアザプリン、インドリジンを含む。
【０１５３】
多環式芳香環の場合、すべての環が芳香族（たとえば、キノリン）であってもよいが、環の１つのみが芳香族（たとえば、２，３−ジヒドロインドール）であってもよい。また第２の環は縮合していても、あるいは架橋していてもよい。
【０１５４】
シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール環は、１つまたは複数の環位置（たとえば、環形成炭素またはＮなどのヘテロ原子）において上記のような置換基、たとえば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アルキルアミノカルボニル、アラルキルアミノカルボニル、アルケニルアミノカルボニル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アラルキルカルボニル、アルケニルカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィナート、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノおよびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、スルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリールまたは芳香族部分もしくは芳香族複素環部分で置換されていてもよい。アリールおよびヘテロアリール基はさらに、多環式系（たとえば、テトラリン、メチレンジオキシフェニル）を形成するように、芳香族でない脂環式環または複素環式環と縮合していても、あるいは架橋していてもよい。
【０１５５】
本明細書で使用する場合、「炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｅ）」または「炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｉｃ  ｒｉｎｇ）」は、そのいずれもが飽和でも、不飽和でも、あるいは芳香族でもよい、特定の数の炭素を有する任意の安定な単環式、二環式または三環式環を含むことを意図している。炭素環は、シクロアルキルおよびアリールを含む。たとえば、Ｃ３〜Ｃ１４炭素環は、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個または１４個の炭素原子を有する単環式、二環式または三環式環を含むことを意図している。炭素環の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロブテニル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘプテニル、シクロヘプチル、シクロヘプテニル、アダマンチル、シクロオクチル、シクロオクテニル、シクロオクタジエニル、フルオレニル、フェニル、ナフチル、インダニル、アダマンチルおよびテトラヒドロナフチルがあるが、これに限定されるものではない。炭素環の定義には、架橋環も含まれ、たとえば、［３．３．０］ビシクロオクタン、［４．３．０］ビシクロノナン、［４．４．０］ビシクロデカンおよび［２．２．２］ビシクロオクタンがある。架橋環は、１個または複数個の炭素原子が２個の隣接しない炭素原子を連結すると生じる。一実施形態では、架橋環は、１個または２個の炭素原子である。架橋は常に単環式環を三環式環に変換する点に注意されたい。環が架橋されると、当該環について記載された置換基も架橋上に存在してもよい。さらに縮合環（たとえば、ナフチル、テトラヒドロナフチル）およびスピロ環も含まれる。
【０１５６】
本明細書で使用する場合、「複素環」または「複素環基」は、少なくとも１つの環ヘテロ原子（たとえば、Ｎ、ＯまたはＳ）を含む任意の環構造（飽和、不飽和、または芳香族）を含む。複素環は、ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリールを含む。複素環の例として、モルホリン、ピロリジン、テトラヒドロチオフェン、ピペリジン、ピペラジンオキセタン、ピラン、テトラヒドロピラン、アゼチジン、およびテトラヒドロフランがあるが、これに限定されるものではない。
【０１５７】
複素環式基の例として、アクリジニル、アゾシニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフラニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサゾリニル、ベンズチアゾリル、ベンズトリアゾリル、ベンズテトラゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンズイミダゾリニル、カルバゾリル、４ａＨ−カルバゾリル、カルボリニル、クロマニル、クロメニル、シンノリニル、デカヒドロキノリニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、ジヒドロフロ［２，３−ｂ］テトラヒドロフラン、フラニル、フラザニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、１Ｈ−インダゾリル、インドレニル、インドリニル、インドリジニル、インドリル、３Ｈ−インドリル、イサチノイル、イソベンゾフラニル、イソクロマニル、イソインダゾリル、イソインドリニル、イソインドリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、メチレンジオキシフェニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オクタヒドロイソキノリニル、オキサジアゾリル、１，２，３−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾリル、１，２，５−オキサジアゾリル、１，３，４−オキサジアゾリル、１，２，４−オキサジアゾール５（４Ｈ）−オン、オキサゾリジニル、オキサゾリル、オキシンドリル、ピリミジニル、フェナントリジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサチニル、フェノキサジニル、フタラジニル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピペリドニル、４−ピペリドニル、ピペロニル、プテリジニル、プリニル、ピラニル、ピラジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリドオキサゾール、ピリドイミダゾール、ピリドチアゾール、ピリジニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、４Ｈ−キノリジニル、キノキサリニル、キヌクリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラゾリル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、１，２，３−チアジアゾリル、１，２，４−チアジアゾリル、１，２，５−チアジアゾリル、１，３，４−チアジアゾリル、チアントレニル、チアゾリル、チエニル、チエノチアゾリル、チエノオキサゾリル、チエノイミダゾリル、チオフェニル、トリアジニル、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル、１，２，５−トリアゾリル、１，３，４−トリアゾリルおよびキサンテニルがあるが、これに限定されるものではない。
【０１５８】
「置換された」という用語は、本明細書で使用する場合、指定された原子上の任意の１つまたは複数の水素原子が、表記された基から選択された基で置き換えられていることを意味する。ただし、指定された原子の通常の原子価を超えず、かつ置換の結果、安定な化合物が得られるものとする。置換基がオキソまたはケト（すなわち、＝Ｏ）である場合、原子上の２個の水素原子が置き換えられる。ケト置換基は芳香族部分には存在しない。環二重結合は、本明細書で使用する場合、隣接する２つの環原子間に形成される二重結合（たとえば、Ｃ＝Ｃ、Ｃ＝ＮまたはＮ＝Ｎ）である。「安定な化合物」および「安定な構造」とは、ある化合物が、反応混合物から有用な程度の純度に単離されること、および有効な治療薬として製剤化することに耐えるのに十分に強いことを示すことを意図する。
【０１５９】
置換基との結合が、環内の２つの原子を連結する結合を横切るように示される場合、そうした置換基は、環内のどの原子に結合してもよい。ある置換基について、そうした置換基が所定の式の化合物の残部に結合している原子を示さずに記載される場合、そうした置換基は当該式のどの原子を介して結合してもよい。置換基または可変基の組み合わせも許容される（または両方）が、そうした組み合わせの結果、安定な化合物が得られる場合に限られる。
【０１６０】
任意の可変基（たとえば、Ｒ１）が、ある化合物の任意の構成要素または式に２回以上存在する場合、その各存在時の定義は、その他のすべての存在時の定義と無関係である。したがって、たとえば、ある基が０〜２のＲ１部分で置換されているように示される場合、その基は、最大２つのＲ１部分で任意選択的に置換されていてもよく、各存在時のＲ１は、Ｒ１の定義から独立に選択される。さらに、置換基または可変基の組み合わせも許容される（または両方）が、そうした組み合わせの結果、安定な化合物が得られる場合に限られる。
【０１６１】
「ヒドロキシ」または「ヒドロキシル」という用語は、−ＯＨまたは−Ｏ−を有する基を含む。
【０１６２】
本明細書で使用する場合、「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードをいう。「過ハロゲン化」という用語は一般に、ある部分においてすべての水素原子がハロゲン原子で置き換えられていることをいう。「ハロアルキル」または「ハロアルコキシル」という用語は、１つまたは複数のハロゲン原子で置換されたアルキルまたはアルコキシルをいう。
【０１６３】
「カルボニル」という用語は、酸素原子に二重結合で連結された炭素を含む化合物および部分を含む。カルボニルを含む部分の例として、アルデヒド、ケトン、カルボン酸、アミド、エステル、無水物等があるが、これに限定されるものではない。
【０１６４】
「カルボキシル」という用語は、−ＣＯＯＨまたはそのＣ１〜Ｃ６アルキルエステルをいう。
【０１６５】
「アシル」は、アシルラジカル（Ｒ−Ｃ（Ｏ）−）またはカルボニル基を含む部分を含む。「置換アシル」は、１つまたは複数の水素原子が、たとえば、アルキル基、アルキニル基、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィナート、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノおよびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、スルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリールまたは芳香族部分もしくは芳香族複素環部分で置き換えられているアシル基を含む。
【０１６６】
「アロイル」は、カルボニル基に結合したアリールまたは芳香族複素環部分を有する部分を含む。アロイル基の例として、フェニルカルボキシ、ナフチルカルボキシ等が挙げられる。
【０１６７】
「アルコキシアルキル」、「アルキルアミノアルキル」および「チオアルコキシアルキル」は、１つまたは複数の炭化水素骨格の炭素原子が酸素原子、窒素原子または硫黄原子で置き換えられている上記のようなアルキル基を含む。
【０１６８】
「アルコキシ」または「アルコキシル」という用語は、酸素原子に共有結合した置換および非置換アルキル基、アルケニル基およびアルキニル基を含む。アルコキシ基またはアルコキシルラジカルの例として、メトキシ基、エトキシ基、イソプロピルオキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基およびペントキシ基があるが、これに限定されるものではない。置換アルコキシ基の例として、ハロゲン化アルコキシ基が挙げられる。アルコキシ基は、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィナート、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノおよびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、スルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリール、または芳香族部分または芳香族複素環部分などの基で置換されていてもよい。ハロゲン置換アルコキシ基の例として、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、トリフルオロメトキシ、クロロメトキシ、ジクロロメトキシおよびトリクロロメトキシがあるが、これに限定されるものではない。
【０１６９】
「エーテル」または「アルコキシ」という用語は、２個の炭素原子またはヘテロ原子に結合した酸素を含む化合物または部分を含む。たとえば、この用語は、アルキル基に共有結合している酸素原子に共有結合したアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基をいう「アルコキシアルキル」を含む。
【０１７０】
「エステル」という用語は、カルボニル基の炭素に結合している酸素原子に結合した炭素またはヘテロ原子を含む化合物または部分を含む。「エステル」という用語は、アルコキシカルボキシ基、たとえばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、ペントキシカルボニル等を含む。
【０１７１】
「チオアルキル」という用語は、硫黄原子と連結したアルキル基を含む化合物または部分を含む。チオアルキル基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルキルカルボニルオキシ、アリールカルボニルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アリールオキシカルボニルオキシ、カルボキシレート、カルボキシ酸、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アルキルチオカルボニル、アルコキシル、アミノ（アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールアミノ、ジアリールアミノおよびアルキルアリールアミノを含む）、アシルアミノ（アルキルカルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、カルバモイルおよびウレイドを含む）、アミジノ、イミノ、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、チオカルボキシレート、スルフェート、アルキルスルフィニル、スルホナト、スルファモイル、スルホンアミド、ニトロ、トリフルオロメチル、シアノ、アジド、ヘテロシクリル、アルキルアリール、または芳香族部分もしくは芳香族複素環部分などの基で置換されていてもよい。
【０１７２】
「チオカルボニル」または「チオカルボキシ」という用語は、硫黄原子に二重結合で連結された炭素を含む化合物および部分を含む。
【０１７３】
「チオエーテル」という用語は、２個の炭素原子またはヘテロ原子に結合した硫黄原子を含む部分を含む。チオエーテルの例として、アルクチオアルキル、アルクチオアルケニルおよびアルクチオアルキニルがあるが、これに限定されるものではない。「アルクチオアルキル」という用語は、アルキル基に結合している硫黄原子に結合したアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基を有する部分を含む。同様に、「アルクチオアルケニル」という用語は、アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基が、アルケニル基に共有結合している硫黄原子に結合している部分をいう。アルクチオアルキニル」は、アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基が、アルキニル基に共有結合している硫黄原子に結合している部分をいう。
【０１７４】
本明細書で使用する場合、「アミン」または「アミノ」は、非置換または置換ＮＨ２をいう。「アルキルアミノ」は、−ＮＨ２の窒素が少なくとも１つのアルキル基に結合している化合物の基を含む。アルキルアミノ基の例として、ベンジルアミノ、メチルアミノ、エチルアミノ、フェネチルアミノ等が挙げられる。「ジアルキルアミノ」は、−ＮＨ２の窒素が少なくとも２つの別のアルキル基に結合している基を含む。ジアルキルアミノ基の例として、ジメチルアミノおよびジエチルアミノがあるが、これに限定されるものではない。「アリールアミノ」および「ジアリールアミノ」はそれぞれ、窒素が少なくとも１つまたは２つのアリール基に結合している基を含む。「アミノアリール」および「アミノアリールオキシ」は、アミノで置換されたアリールおよびアリールオキシをいう。「アルキルアリールアミノ」、「アルキルアミノアリール」または「アリールアミノアルキル」は、少なくとも１つのアルキル基および少なくとも１つのアリール基に結合しているアミノ基をいう。「アルカミノアルキル」は、アルキル基にも結合している窒素原子に結合したアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基をいう。「アシルアミノ」は、窒素がアシル基に結合している基を含む。アシルアミノの例として、アルキルカルボニルアミノ基、アリールカルボニルアミノ基、カルバモイル基およびウレイド基があるが、これに限定されるものではない。
【０１７５】
「アミド」または「アミノカルボキシ」という用語は、カルボニル基またはチオカルボニル基の炭素に結合している窒素原子を含む化合物または部分を含む。この用語は、カルボニル基またはチオカルボニル基の炭素に結合しているアミノ基に結合したアルキル基、アルケニル基またはアルキニル基を含む「アルカミノカルボキシ」基を含む。この用語はさらに、カルボニル基またはチオカルボニル基の炭素に結合しているアミノ基に結合したアリール部分またはヘテロアリール部分を含む「アリールアミノカルボキシ」基を含む。「アルキルアミノカルボキシ」、「アルケニルアミノカルボキシ」、「アルキニルアミノカルボキシ」および「アリールアミノカルボキシ」という用語はそれぞれ、アルキル部分、アルケニル部分、アルキニル部分およびアリール部分が窒素原子に結合し、その窒素原子がカルボニル基の炭素に結合している部分を含む。アミドは、直鎖アルキル、分岐アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたは複素環などの置換基で置換されていてもよい。アミド基上の置換基はさらに置換されていてもよい。
【０１７６】
本明細書では、化合物の構造式は、場合によっては便宜上、特定の異性体を表しているが、本発明は、すべての異性体、たとえば幾何異性体、不斉炭素に基づく光学異性体、立体異性体、互変異性体および同種のものを含み、すべての異性体が必ずしも同レベルの活性を有し得るものではないことを理解されたい。さらに、式で表される化合物の結晶多形が存在してもよい。任意の結晶形、結晶形混合物またはその無水物もしくは水和物が本発明の範囲に含まれる点に注意されたい。
【０１７７】
「異性」は、化合物が同一の分子式を有するものの、その原子の結合順序またはその原子の空間配置が異なることを意味する。原子の空間配置が異なる異性体は「立体異性体」と呼ばれる。互いに鏡像でない立体異性体は「ジアステレオ異性体」と呼ばれ、互いに重ね合わせることができない鏡像である立体異性体は「エナンチオマー」と呼ばれ、光学異性体と呼ばれることもある。逆のキラリティーの各エナンチオマー型を等量含む混合物は「ラセミ混合物」と呼ばれる。
【０１７８】
同一でない４つの置換基に結合した炭素原子は「キラル中心」と呼ばれる。
【０１７９】
「キラル異性体」は、少なくとも１つのキラル中心を有する化合物を意味する。２つ以上のキラル中心を有する化合物は、個々のジアステレオマーとして存在しても、あるいは「ジアステレオマー混合物」と呼ばれるジアステレオマーの混合物として存在してもよい。１つのキラル中心が存在する場合、立体異性体は、そのキラル中心の絶対配置（ＲまたはＳ）により特徴付けてもよい。絶対配置とは、キラル中心に結合した置換基の空間配置をいう。検討対象のキラル中心に結合した置換基は、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｒｕｌｅ  ｏｆ  Ｃａｈｎ，Ｉｎｇｏｌｄ  ａｎｄ  Ｐｒｅｌｏｇに従いランク付けされる。（Ｃａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｅｒ．Ｅｄｉｔ．１９６６，５，３８５；ｅｒｒａｔａ  ５１１；Ｃａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．１９６６，７８，４１３；Ｃａｈｎ  ａｎｄ  Ｉｎｇｏｌｄ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９５１（Ｌｏｎｄｏｎ），６１２；Ｃａｈｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ  １９５６，１２，８１；Ｃａｈｎ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｅｄｕｃ．１９６４，４１，１１６）。
【０１８０】
「幾何異性体」は、存在する原因が二重結合またはシクロアルキルリンカー（たとえば、１，３−シルコブチル）の周りの回転障壁であるジアステレオマーを意味する。これら配置は、接頭辞シスおよびトランス、またはカーン−インゴルド−プレローグ順位則に従い各基が分子の二重結合に関して同じ側または反対側にあることを示すＺおよびＥにより、その名称により区別される。
【０１８１】
本発明の化合物は、異なるキラル異性体または幾何異性体として図示し得ることが理解されよう。さらに、化合物がキラル異性体型または幾何異性体型を有する場合、すべての異性体型が本発明の範囲に含まれることを意図しており、化合物の名称は任意の異性体型を除外するものではないことも理解されるべきであり、すべての異性体が必ずしも同レベルの活性を有し得るものではないことを理解されたい。
【０１８２】
さらに、こうした構造および本発明で考察された他の化合物は、そのすべてのアトロピック（ａｔｒｏｐｉｃ）異性体を含み、すべてのアトロピック異性体が必ずしも同レベルの活性を有し得るものではないことを理解されたい。「アトロピック異性体」は、２つの異性体の原子が空間で異なって配置されている立体異性体の１種である。アトロピック異性体が存在する原因は、中心結合の周りの大きな基の回転障壁により引き起こされる回転の束縛である。こうしたアトロピック異性体は典型的には混合物として存在するが、クロマトグラフィー技術の最近の進歩の結果、特定の場合、２つのアトロピック異性体の混合物を分離することが可能になっている。
【０１８３】
「互変異性体」は、２つ以上の構造異性体が平衡状態で存在し、ある異性体型から別の異性体型に容易に変換される、それらの構造異性体の１つである。この変換の結果、水素原子が、隣接する共役二重結合の変化を伴って形式的に移動する。互変異性体は、溶液中で互変異性体のセットの混合物として存在する。互変異性が可能である溶液においては、互変異性体の化学平衡に達する。互変異性体の正確な比率は、温度、溶媒およびｐＨを含むいくつかの要因によって異なる。互変異性化により相互変換可能な互変異性体の概念は、互変異性と呼ばれる。
【０１８４】
考えられる様々なタイプの互変異性のうち、２つが一般に観察される。ケト−エノール互変異性では、電子および水素原子の同時移動が起こる。環鎖互変異性は、糖鎖分子のアルデヒド基（−ＣＨＯ）が同じ分子のヒドロキシ基（−ＯＨ）の１つと反応して、分子にグルコースに見られるような環式（環状）形態が生じた結果として起こる。
【０１８５】
一般的な互変異性のペアとして、ケトン−エノール、アミド−ニトリル、ラクタム−ラクチム、複素環式環における（たとえば、核酸塩基、たとえばグアニン、チミンおよびシトシンにおける）アミド−イミド酸互変異性、イミン−エナミンおよびエナミン−エナミンがある。ケト−エノール平衡の一例として、下記に示すようなピリジン−２（１Ｈ）−オンと対応するピリジン−２−オールとの間がある。
【化３９】
2017532338.tif 000041
【０１８６】
本明細書に記載の化合物では、
【化４０】
2017532338.tif 000042
の各存在は、
【化４１】
2017532338.tif 000043
として解釈されるべきである。
【０１８７】
本発明の化合物は、様々な互変異性体として図示し得ることが理解されよう。さらに、化合物が互変異性形を有する場合、すべての互異性形が本発明の範囲に含まれることを意図しており、化合物の名称は任意の互変異性体形を除外するものではないことも理解されるべきである。特定の互変異性体は、他のものよりも高い活性レベルを有し得ることを理解されよう。
【０１８８】
「結晶多形」、「多形」または「結晶形」という用語は、化合物（またはその塩または溶媒和物）が様々な結晶のパッキング構造で結晶化することができ、そのすべてが同じ元素組成を有する結晶構造を意味する。異なる結晶形は通常、Ｘ線回折パターン、赤外スペクトル、融点、密度  硬度、結晶形状、光学的特性および電気的特性、安定性ならびに溶解性が異なる。再結晶溶媒、結晶化の速度、保存温度および他の要因により、１つの結晶形が多くを占めるようにすることができる。化合物の結晶多形は、様々な条件下、結晶化により調製することができる。
【０１８９】
本明細書に開示された式のいずれの化合物も、化合物自体のほか、妥当な場合、その塩または溶媒和物を含む。塩は、たとえば、アニオンとアリールまたはヘテロアリール置換ベンゼン化合物の正電荷を帯びた基（たとえば、アミノ）との間で形成することができる。好適なアニオンとして、クロリド、ブロミド、ヨージド、スルフェート、ビスルフェート、スルファメート、ニトレート、ホスフェート、シトレート、メタンスルホネート、トリフルオロアセテート、グルタメート、グルクロネート、グルタレート、マレート、マレエート、スクシネート、フマレート、タルトレート、トシレート、サリチレート、ラクテート、ナフタレンスルホネート、およびアセテート（たとえば、トリフルオロアセテート）が挙げられる。「薬学的に許容されるアニオン」という用語は、薬学的に許容される塩の形成に好適なアニオンをいう。同様に、塩は、カチオンとアリールまたはヘテロアリール置換ベンゼン化合物の負電荷を帯びた基（たとえば、カルボキシレート）との間でも形成することができる。好適なカチオンとして、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオンおよびアンモニウムカチオン、たとえばテトラメチルアンモニウムイオンが挙げられる。アリールまたはヘテロアリール置換ベンゼン化合物は、第四級窒素原子を含む塩をさらに含む。
【０１９０】
加えて、本発明の化合物、たとえば、化合物の塩は、水和もしくは非水和（無水）形態で存在しても、あるいは他の溶媒分子との溶媒和物として存在してもよい。水和物の非限定的な例として、一水和物、二水和物等が挙げられる。溶媒和物の非限定的な例として、エタノール溶媒和物、アセトン溶媒和物等が挙げられる。
【０１９１】
「溶媒和物」は、化学量論量あるいは非化学量論量の溶媒を含む溶媒付加形態を意味する。一部の化合物は、結晶性固体状態で一定のモル比の溶媒分子を捕捉する傾向があり、したがって溶媒和物を形成する。溶媒が水の場合、形成される溶媒和物は水和物であり、溶媒がアルコールの場合、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は１つの物質分子と１つまたは複数の水分子の組み合わせにより形成され、水はその分子状態をＨ２Ｏとして維持する。半水和物は、２つ以上の物質分子と１つの水分子の組み合わせにより形成され、水はその分子状態をＨ２Ｏとして維持する。
【０１９２】
「生物学的等価体」という用語は、ある原子または原子団と、別の概ね類似した原子または原子団との交換により生じる化合物をいう。生物学的等価性置換の目的は、親化合物に類似した生物学的特性を有する新しい化合物を作ることにある。生物学的等価性置換は、物理化学をベースにしても、あるいは位相幾何学をベースにしてもよい。カルボン酸の生物学的等価体の例として、アシルスルホンイミド、テトラゾール、スルホネートおよびホスホネートがあるが、これに限定されるものではない。たとえば、Ｐａｔａｎｉ  ａｎｄ  ＬａＶｏｉｅ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９６，３１４７−３１７６，１９９６を参照されたい。
【０１９３】
本発明は、本化合物に生じる原子の同位体をすべて含むことを意図している。同位体は、同じ原子番号を有するが、異なる質量数を有する原子を含む。一般的な例として、限定するものではないが、水素の同位体としてトリチウムおよびジュウテリウムがあり、炭素の同位体としてＣ−１３およびＣ−１４がある。
【０１９４】
本発明は、本明細書に開示された任意の式の化合物の合成方法を提供する。本発明はまた、実施例に示すような下記のスキームに従って、本発明の様々な開示化合物を合成するための詳細な方法も提供する。
【０１９５】
組成物が特定の成分を有する、それを含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）またはそれを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）ものとして記載される説明において、組成物はさらに、記載された成分から本質的になる、またはそれからなることも意図している。同様に、方法またはプロセスが特定のプロセスステップを有する、それを含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）またはそれを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）ものとして記載される場合、当該プロセスはさらに、記載されたプロセスステップから本質的になる、またはそれからなる。さらに、ステップの順序またはある行為を行う順序は、本発明が実施可能な状態である限り、重要でないことを理解すべきである。さらに、２つ以上のステップまたは行為を同時に行ってもよい。
【０１９６】
本発明の合成プロセスは、多種多様な官能基に対応することができ、したがって様々な置換出発材料を使用することができる。本プロセスは一般に、プロセス全体の終了時または終了時近くで所望の最終化合物を与えるが、場合によっては化合物をさらにその薬学的に許容される塩、溶媒和物または多形体に変換することが望ましい場合がある。
【０１９７】
本発明の化合物は、当業者に公知のまたは本明細書の教示内容によって当業者に明らかになる標準的な合成方法および手順を利用して、市販されている出発材料、文献で公知の化合物を用いてまたは容易に調製される中間体から、種々の方法で調製することができる。有機分子の調製と、官能基の変換および操作とのための標準的な合成方法および手順は、当該分野に関連した科学文献または標準的な指導書から得ることができる。任意の１つまたは複数の資料に限定するものではないが、古典的な指導書、たとえば、本明細書に援用するＳｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｍａｒｃｈ’ｓ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１；Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９；Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｌ．Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｆｉｅｓｅｒ，Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９４）；ａｎｄ  Ｌ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ（１９９５）は、当業者に公知の、有機合成に関する有用かつ認められた標準指導書である。合成方法に関する以下の記載は、本発明の化合物の調製の一般的な手順の説明を目的とするものであり、限定を目的とするものではない。
【０１９８】
本発明の化合物は、当業者が精通した様々な方法により好都合に調製することができる。本明細書で開示された任意の式を有する本発明の化合物は、市販の出発物質または文献の手順を使用して調製することができる出発物質から、下記のスキーム１〜１０に図示された手順に従って調製することができる。スキーム１〜１０におけるＺおよびＲの基（たとえば、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＲ１２）は、特に明記されない限り、本明細書に開示された式のいずれかで定義された通りである。
【０１９９】
当業者であれば、本明細書に記載の反応順序および合成スキームにおいて、保護基の導入および除去など特定のステップの順序が変わってもよいことに気付くであろう。
【０２００】
当業者であれば、特定の基が、保護基の使用により反応条件からの保護を必要とし得ること認識するであろう。保護基はさらに、分子内の類似の官能基を区別するために使用してもよい。保護基のリストと、そうした基をどのように導入および除去するかとについては、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９で確認することができる。
【０２０１】
好ましい保護基として、下記があるが、これに限定されるものではない。
ヒドロキシル部分には：ＴＢＳ、ベンジル、ＴＨＰ、Ａｃ
カルボン酸には：ベンジルエステル、メチルエステル、エチルエステル、アリルエステル
アミンには：Ｃｂｚ、ＢＯＣ、ＤＭＢ
ジオールには：Ａｃ（×２）ＴＢＳ（×２）、あるいは同時に行う場合はアセトニド
チオールには：Ａｃ
ベンゾイミダゾールには：ＳＥＭ、ベンジル、ＰＭＢ、ＤＭＢ
アルデヒドには：ジ−アルキルアセタール、たとえばジメトキシアセタールまたはジエチルアセチル。
【０２０２】
本明細書に記載の反応スキームでは、複数の立体異性体を得られることがある。特定の立体異性体が記載されていない場合、反応から生成され得るあらゆる可能な立体異性体を意味することが理解されよう。当業者であれば、ある異性体を優先的に得るため反応を最適化できること、または単一の異性体を得るため新しいスキームを考案できることを認識するであろう。混合物が生成される場合、分取薄層クロマトグラフィー、分取ＨＰＬＣ、分取キラルＨＰＬＣ、または分取ＳＦＣなどの技術を用いて異性体を分離することができる。
【０２０３】
本明細書を通じて以下の略語を使用し、下記に定義する。
Ａｃ        アセチル
ＡｃＯＨ    酢酸
ａｑ．      水性
ＢＩＤまたはｂ．ｉ．ｄ．  ｂｉｓ  ｉｎ  ｄｉｅ（１日２回）
ＢＯＣ      ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
Ｃｂｚ      ベンジルオキシカルボニル
ＣＤＣｌ３  重水素化クロロホルム
ＣＨ２Ｃｌ２  ジクロロメタン
ＤＣＭ      ジクロロメタン
ＤＭＢ      ２，４ジメトキシベンジル
ＤＭＦ      Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ    ジメチルスルホキシド
ＥＡまたはＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＥＤＣまたはＥＤＣＩ  Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド
ＥＳＩ−    エレクトロスプレーネガティブモード
ＥＳＩ＋    エレクトロスプレーポジティブモード
ＥｔＯＨ    エタノール
ｈ          時間
Ｈ２Ｏ      水
ＨＯＢｔ    １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＣｌ      塩化水素または塩酸
ＨＰＬＣ    高速液体クロマトグラフィー
Ｋ２ＣＯ３  炭酸カリウム
ＬＣ／ＭＳまたはＬＣ−ＭＳ  液体クロマトグラフィー質量スペクトル
Ｍ          モル
ＭｅＣＮ    アセトニトリル
ｍｉｎ      分
Ｎａ２ＣＯ３  炭酸ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４  硫酸ナトリウム
ＮａＨＣＯ３  炭酸水素ナトリウム
ＮａＨＭＤｓ  ナトリウムヘキサメチルジシラジド
ＮａＯＨ    水酸化ナトリウム
ＮａＨＣＯ３  炭酸水素ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４  硫酸ナトリウム
ＮＭＲ      核磁気共鳴
Ｐｄ（ＯＨ）２  二水酸化パラジウム
ＰＭＢ      パラ−メトキシベンジル
ｐ．ｏ．    ｐｅｒ  ｏｓ（経口投与）
ｐｐｍ      百万分率
ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣ  分取高速液体クロマトグラフィー
ＰＹＢＯＰ  （ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート
ｒｔまたはＲＴ  室温
ＴＢＭＥ    ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル
ＴＦＡ      トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ      テトラヒドロフラン
ＴＨＰ      テトラヒドロピラン
【０２０４】
本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形の有効量は、正常な細胞に対してあまり細胞毒性を示さない。治療有効量の化合物の投与により細胞死が正常な細胞の１０％より多く誘導されない場合、治療有効量の化合物は正常な細胞に対してあまり細胞毒性を示さない。治療有効量の化合物の投与により細胞死が正常な細胞の１０％より多く誘導されない場合、治療有効量の化合物は正常な細胞の生存率にあまり影響を与えない。ある種の態様では、細胞死はアポトーシスにより起こる。
【０２０５】
本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形と細胞を接触させると、癌細胞の細胞死を選択的に誘導または活性化することがある。それを必要とする被験体に本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を投与すると、癌細胞の細胞死を選択的に誘導または活性化することがある。本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形と細胞を接触させると、細胞増殖性障害に冒された１つまたは複数の細胞の細胞死を選択的に誘導することがある。好ましくは、それを必要とする被験体に本発明の化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形を投与すると、細胞増殖性障害に冒された１つまたは複数の細胞の細胞死が選択的に誘導される。
【０２０６】
当業者は、本明細書で考察した公知の技術または等価な技術の詳細な説明に関する一般的な参考図書を参照してもよい。そうした図書として、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．（２００５）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ），Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２０００）；Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．；Ｅｎｎａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．；Ｆｉｎｇｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（１９７５），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９０）が挙げられる。さらにこれらの図書は、本発明の態様の製造または使用の際に参照してもよいことは、言うまでもない。
【０２０７】
本発明はまた、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤またはキャリアと組み合わせて、本発明の化合物（たとえば、化合物Ａ、Ｂ、ＣまたはＤ）を含む医薬組成物も提供することができる。
【０２０８】
「医薬組成物」は、被験体への投与に好適な形態で本発明の化合物を含む製剤である。一実施形態では、医薬組成物はバルクまたは単位剤形である。単位剤形は、たとえば、カプセル、ＩＶバッグ、錠剤、エアロゾル吸入器の単一ポンプまたはバイアルなど種々の形態のいずれかである。単位用量の組成物における活性成分の量は有効量であり、関連する個々の治療に応じて変化する。当業者であれば、患者の年齢および状態によって投薬量を日常的に変える必要があることもあることを理解するであろう。投薬量はまた投与経路によって異なる。経口、経肺、直腸、非経口、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、吸入、口腔内、舌下、胸膜内、髄腔内、鼻腔内および同種のものなど種々の経路を意図している。本発明の化合物の局所投与または経皮投与用の剤形として、散剤、スプレー剤、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、溶液剤、パッチ剤および吸入薬が挙げられる。一実施形態では、活性化合物は、滅菌条件下で薬学的に許容されるキャリアと、必要とされる任意の防腐剤、バッファーまたは噴霧剤と混合される。
【０２０９】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という語句とは、化合物、材料、組成物、キャリアまたは剤形が、適切な医学的判断の範囲内において、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を回避しつつ、合理的なベネフィット／リスク比に見合ってヒトおよび動物の組織と接触させて使用するのに好適であることをいう。
【０２１０】
「薬学的に許容される賦形剤」は、医薬組成物の調製に有用であり、かつ一般に安全で無毒性であり、生物学的にもあるいは他の点でも望ましい賦形剤を意味し、動物用途のほか、ヒトの医薬用途に許容可能な賦形剤を含む。本明細書および特許請求の範囲に使用される「薬学的に許容される賦形剤」は、そうした賦形剤の１種および２種以上の両方を含む。
【０２１１】
本発明の医薬組成物は、その目的の投与経路に適合するように製剤化される。投与経路の例として、非経口投与、たとえば、静脈内投与、皮内投与、皮下投与、経口投与（たとえば、吸入）、経皮投与（局所）、および経粘膜投与が挙げられる。非経口用途、皮内用途または皮下用途に使用される溶液または懸濁液として、以下の成分：無菌希釈液、たとえば食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒；抗菌薬、たとえばベンジルアルコールまたはメチルパラベン；酸化防止剤、たとえばアスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム；キレート化剤、たとえばエチレンジアミン四酢酸；バッファー、たとえばアセテート、シトレートまたはホスフェート、および張度調整剤、たとえば塩化ナトリウムまたはブドウ糖を挙げることができる。ｐＨは、酸または塩基、たとえば塩酸または水酸化ナトリウムで調整することができる。非経口調製物は、ガラスもしくはプラスチック製のアンプル、ディスポーザブルシリンジまたはマルチドーズバイアルに封入してもよい。
【０２１２】
本発明の化合物または医薬組成物は、化学療法治療に現在使用されるよく知られた方法の多くで被験体に投与することができる。たとえば、癌の治療では、本発明の化合物を腫瘍に直接注射しても、血流中もしくは体腔に注射しても、あるいは経口投与しても、あるいはパッチを用いて経皮適用してもよい。選択される用量は効果的な治療となるのに十分であるが、許容できない副作用を引き起こすほど高くないようにすべきである。病状の状況（たとえば、癌、前癌および同種のもの）および患者の健康については好ましくは、治療中および治療後相当期間、詳細にモニターすべきである。
【０２１３】
「治療有効量」という用語は、本明細書で使用する場合、特定された疾患または状態を治療、軽減または予防する、あるいは検出可能な治療効果または阻害効果を示す医薬剤の量をいう。効果は、当該技術分野において公知の任意のアッセイ方法により検出することができる。被験体の正確な有効量は、被験体の体重、大きさおよび健康；その状態の性質および程度；ならびに投与のために選択した治療法によって異なる。ある状況に対する治療有効量は、臨床医の技能および判断の範囲内にある通常の実験により決定することができる。好ましい態様では、治療対象の疾患または状態は癌である。別の態様では、治療対象の疾患または状態は細胞増殖性障害である。
【０２１４】
いずれの化合物でも、治療有効量は、たとえば、腫瘍性細胞の細胞培養アッセイ、または動物モデル、通常ラット、マウス、ウサギ、イヌもしくはブタを用いて最初に推定することができる。動物モデルはさらに、適切な濃度範囲および投与経路を判定するのに使用してもよい。次いでこうした情報を使用して、ヒトの投与に有用な用量および経路を判定することができる。
【０２１５】
本発明の実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は、１００〜１６００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。実施形態では、用量は、１００ｍｇ／ｋｇまたは２００ｍｇ／ｋｇまたは４００ｍｇ／ｋｇまたは８００ｍｇ／ｋｇまたは１６００ｍｇ／ｋｇである。ある種の実施形態では、用量は１日１回または１日２回投与される。実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は化合物Ａであり、用量は、１日２回、１００ｍｇ／ｋｇまたは２００ｍｇ／ｋｇまたは４００ｍｇ／ｋｇまたは８００ｍｇ／ｋｇまたは１６００ｍｇ／ｋｇである。好ましい実施形態では、ＥＺＨ２阻害剤は化合物Ａであり、用量は１日２回、８００ｍｇ／ｋｇである。
【０２１６】
投薬量および投与は、十分なレベルの活性剤（単数または複数）を与えるか、または所望の効果を維持するように調整される。考慮に入れてもよい因子として、病状の重症度、被験体の一般的な健康状態、被験体の年齢、体重および性別、食事、投与の時間および頻度、薬剤相互作用（単数または複数）、反応感受性、ならびに治療に対する忍容性／反応が挙げられる。長時間作用性医薬組成物は、特定の製剤の半減期およびクリアランス速度によって３〜４日毎、毎週あるいは２週に１回投与してもよい。
【０２１７】
本発明の活性化合物を含む医薬組成物は、一般に知られた方法で、たとえば、従来の混合プロセス、溶解プロセス、造粒プロセス、糖衣錠製造プロセス、研和プロセス、乳化プロセス、カプセル化プロセス、封入プロセスまたは凍結乾燥プロセスによって製造することができる。医薬組成物は、活性化合物を薬学的に使用することができる調製物に加工しやすくする賦形剤もしくは助剤（または両方）を含む、１種もしくは複数種の薬学的に許容されるキャリアを用いて従来の方法で製剤化してもよい。言うまでもなく、適切な製剤は選択された投与経路によって異なる。
【０２１８】
注射用途に好適な医薬組成物は、無菌水溶液（水溶性の場合）または分散液、および必要に応じて調製される無菌注射用溶液または分散液用の無菌粉末を含む。静脈内投与では、好適なキャリアとして、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。すべての場合において、組成物は無菌でなければならず、シリンジ操作が容易である程度の流動性があるべきである。組成物は、製造および保存条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの混入微生物の作用を防止しなければならない。キャリアは、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールならびに同種のもの）およびこれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒であってもよい。適切な流動性は、たとえば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合には、必要とされる粒度の維持により、および界面活性剤の使用により維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールおよび同種のものの使用により達成することができる。多くの場合、組成物中に等張剤、たとえば、糖、多価アルコール、たとえばマニトールおよびソルビトール、ならびに塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の吸収の持続化は、組成物に吸収を遅らせる薬、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含ませることにより行うことができる。
【０２１９】
無菌注射溶液は、必要量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙した１つの成分または成分の組み合わせと共に適切な溶媒に加え、続いて濾過滅菌を行うことにより調製することができる。一般に、分散液は、基本的な分散媒および上記に列挙したものから必要とされる他の成分を含む無菌ビヒクルに活性化合物を加えることにより調製される。無菌注射溶液の調製用の無菌粉末の場合、調製方法は真空乾燥およびフリーズドライであり、これにより活性成分と任意の所望の追加成分との、前もって滅菌濾過した溶液から、活性成分と任意の所望の追加成分との粉末が得られる。
【０２２０】
経口組成物は一般に、不活性希釈剤または食用の薬学的に許容されるキャリアを含む。経口組成物はゼラチンカプセルに封入しても、あるいは錠剤に圧縮してもよい。経口治療投与の目的上、活性化合物を賦形剤と混合し、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態で使用してもよい。経口組成物はさらに、洗口剤として使用される液体キャリアを用いて調製してもよく、液体キャリア中の化合物は経口適用し、すすいで吐き出すかまたは飲み込む。薬学的に適合する結合剤もしくは補助剤、または両方を組成物の一部として含めてもよい。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤および同種のものは、性質の類似した以下の成分または化合物：バインダー、たとえば微結晶性セルロース、トラガントゴムまたはゼラチン；賦形剤、たとえばデンプンまたはラクトース、崩壊剤、たとえばアルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはコーンスターチ；滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ；流動促進剤、たとえばコロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、たとえばスクロースまたはサッカリン；または着香剤、たとえばペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香味料のいずれかを含んでもよい。
【０２２１】
吸入による投与では、化合物は、好適な噴射剤、たとえば、二酸化炭素などのガスを含む加圧容器もしくはディスペンサー、またはネブライザーからエアロゾルスプレーの形態で送達される。
【０２２２】
全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によるものでもよい。経粘膜または経皮投与では、透過対象のバリアに適した浸透剤を製剤に使用する。こうした浸透剤は一般に当該技術分野において公知であり、たとえば、経粘膜投与の場合、界面活性剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用により達成することができる。経皮投与では、活性化合物を一般に当該技術分野において公知の軟膏、膏薬、ゲルまたはクリームに製剤する。
【０２２３】
活性化合物は、化合物の身体からの急速な排除を防ぐ薬学的に許容されるキャリア、たとえばインプラントおよびマイクロカプセル化送達系などの放出制御製剤と共に調製してもよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性生体適合性ポリマーを使用してもよい。こうした製剤を調製するための方法は、当業者に明らかであろう。こうした材料はさらに、Ａｌｚａ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販品として入手することができる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を用いて感染細胞を標的としたリポソームを含む）も、薬学的に許容されるキャリアとして使用することができる。これらは、たとえば米国特許第４，５２２，８１１号明細書に記載されているような当業者に公知の方法に従い調製することができる。
【０２２４】
投与のしやすさおよび投薬量の均一性のため、経口または非経口組成物を投薬単位剤形で製剤化すると特に有利である。投薬単位剤形とは、本明細書で使用する場合、単位投薬量として治療対象の被験体に適した物理的に分離した単位をいい、各単位は、必要とされる薬学的キャリアと共に、所望の治療効果を発揮するように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位剤形の規格は、活性化合物の特有の特徴および達成されるべき個々の治療効果により決定され、それらに直接左右される。
【０２２５】
治療用途では、本発明に従い使用される医薬組成物の投薬量は、選択した投薬量に影響を与える数ある要因の中でも、薬、レシピエント患者の年齢、体重および臨床状態、ならびに治療を行う臨床医または開業医の経験および判断によって異なる。一般に、用量は、腫瘍の増殖を遅延させる、そして好ましくは退縮させる、さらに好ましくは癌を完全に退縮させるのに十分であるべきである。投薬量は、単回投与、分割投与または連続投与で約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。好ましい態様では、投薬量は約１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲であってもよい。ある種の態様では、用量は約０．１ｍｇ／日〜約５０ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約２５ｇ／日；約０．１ｍｇ／日〜約１０ｇ／日；約０．１ｍｇ〜約３ｇ／日；または約０．１ｍｇ〜約１ｇ／日の範囲であってもよい（投与はｋｇ単位の患者の体重、ｍ２単位の体表面積および年齢に応じて調整してもよい）。医薬剤の有効量は、臨床医または他の適格な観察者により認められる改善が客観的に特定できる量である。たとえば、患者の腫瘍の退縮は、腫瘍の直径を基準に測定してもよい。腫瘍の直径の減少は退縮を示す。退縮はさらに、治療を中止した後に再発する腫瘍がないことによっても示される。本明細書で使用する場合、「投薬量効果的方法」という用語は、活性化合物の量が被験体または細胞で所望の生物学的作用を発揮することをいう。
【０２２６】
医薬組成物は、投与説明書と共に容器、パックまたはディスペンサーに含めてもよい。
【０２２７】
本発明の化合物はさらに塩を形成することができる。
【０２２８】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物がその酸性塩または塩基性塩を作ることにより修飾された本発明の化合物の塩をいう。薬学的に許容される塩の例として、アミンなどの塩基性残基の鉱酸塩または有機酸塩、カルボン酸などの酸性残基のアルカリ塩または有機塩、および同種のものがあるが、これに限定されるものではない。薬学的に許容される塩は、たとえば、無毒性無機酸または有機酸から形成された親化合物の従来の無毒性塩または第四級アンモニウム塩を含む。たとえば、そうした従来の無毒性塩として、２−アセトキシ安息香酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、酢酸、アスコルビン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、重炭酸、炭酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、１，２−エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、グリコリアルサニル酸、ヘキシルレゾルシン酸、ヒドラバム酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフトエ酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリルスルホン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ナプシル酸、硝酸、シュウ酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、リン酸、ポリガラクツロン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、サブ酢酸（ｓｕｂａｃｅｔｉｃ）、コハク酸、スルファミン酸、スルファニル酸、硫酸、タンニン酸、酒石酸、トルエンスルホン酸および一般に存在するアミン酸、たとえば、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、アルギニン等から選択される無機酸および有機酸から得られるものがあるが、これに限定されるものではない。
【０２２９】
薬学的に許容される塩の他の例として、ヘキサン酸、シクロペンタンプロピオン酸、ピルビン酸、マロン酸、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、桂皮酸、４−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、４−トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、４−メチルビシクロ−［２．２．２］−オクト−２−エン−１−カルボン酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル酢酸、第三級ブチル酢酸、ムコン酸および同種のものが挙げられる。本発明はさらに、親化合物に存在する酸性プロトンが金属イオン、たとえば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、またはアルミニウムイオンに置き換えられている場合、あるいは有機塩基、たとえばエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ−メチルグルカミンおよび同種のものと配位している場合に形成される塩を包含する。
【０２３０】
化合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物もしくは多形は、経口投与、経鼻投与、経皮投与、経肺投与、吸入投与、口腔内投与、舌下投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、直腸内投与、胸膜内投与、髄腔内投与および非経口投与される。一実施形態では、化合物は経口投与される。当業者であれば、特定の投与経路の利点を認識するであろう。
【０２３１】
化合物を利用する投与レジメンは、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および医学的状態；治療対象の状態の重症度；投与経路；患者の腎機能および肝機能；ならびに利用される個々の化合物またはその塩など種々の因子に従い選択される。通常の知識を有する医師または獣医師であれば、当該状態の進行を予防、防止または停止するのに必要な薬剤の有効量を容易に判定し、処方することができる。
【０２３２】
開示した本発明の化合物の製剤および投与のための技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９９５）で確認することができる。一実施形態では、本明細書に記載の化合物およびその薬学的に許容される塩は、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈薬と組み合わせて医薬調製物に使用される。好適な薬学的に許容されるキャリアとして、不活性な固体充填剤または希釈薬、および無菌水溶液または有機溶液が挙げられる。本化合物は、本明細書に記載の範囲の所望の投薬量を与えるのに十分な量でそうした医薬組成物中に存在する。
【０２３３】
本明細書に使用されるパーセンテージおよび比率はすべて、他に記載がない限り、重量による。本発明の他の特徴と利点は様々な例から明らかである。提示した例は、本発明を実施する際に有用な様々な要素および方法を説明するものである。こうした例は、特許請求の範囲に記載されている発明を限定するものではない。本開示に基づき、当業者であれば、本発明を実施するのに有用な他の要素および方法を特定し、利用することができる。
【０２３４】
本明細書に記載の合成スキームでは、簡潔にするため１つの特定の構造で化合物を描いていることがある。こうした特定の構造は、本発明を異性体、互変異性体、位置異性体または立体異性体のいずれかに限定するものと解釈してはならず、異性体、互変異性体、位置異性体または立体異性体は、異性体、互変異性体、位置異性体または立体異性体の混合物を排除するものでもない。
【０２３５】
本発明の方法に好適な追加の化合物、ならびに医薬組成物およびその使用について、国際公開第１２／１４２５０４号パンフレットおよび国際公開第１２／１４２５１３号パンフレットに記載されており、その内容全体を各々参照により本明細書に援用する。
【０２３６】
ヒストンタンパク質の翻訳後修飾およびＡＴＰ依存性クロマチンリモデリングは、正常な遺伝子発現の正確さを制御する重要なプロセスである。ＰＲＣ２およびＳＷＩ／ＳＮＦ複合体など、これらのプロセスに関与するタンパク質は、癌において遺伝子変異していることが多い。重要なことだが、これらの２つの複合体は、通常、クロマチンへの結合およびクロマチンに対する影響において互いに競合しており、遺伝子変異が、この拮抗作用に不均衡を起こし得る。例えば、ＩＮＩ１はＳＷＩ／ＳＮＦ複合体のサブユニットであるが、ほぼ全てのラブドイド腫瘍において失われており、それは、ＰＲＣ２−ＥＺＨ２メチルトランスフェラーゼへの発癌性の依存性（ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｙ）をつくり、ラブドイド腫瘍モデルはＥＺＨ２小分子阻害剤に感受性がある。別のＩＮＩ１欠乏腫瘍タイプである滑膜肉腫において、再発性の染色体転座は、染色体１８上のＳＳ１８遺伝子（ＳＷＩ／ＳＮＦクロマチンリモデリング複合体のサブユニット）を、Ｘ染色体上の３つの関連する遺伝子、ＳＳＸ１、ＳＳＸ２、および稀にはＳＳＸ４の１つに融合する。これは、発癌性のＳＳ１８−ＳＳＸ融合タンパク質の発現をもたらすが、それはＳＷＩ／ＳＮＦ複合体に結合して、野生型ＳＳ１８と腫瘍抑制因子ＩＮＩ１の両方を追い出し、これらはその後に分解する。これは、異常な遺伝子発現をもたらし、最終的に癌が発生する。
【０２３７】
化合物Ａ（本明細書において、Ｅ７４３８またはＥＰＺ−６４３８とも呼ばれる）、臨床早期の選択的かつ経口的に生物学的利用可能な、ＥＺＨ２酵素活性の小分子阻害剤が、単剤としても化学療法との組み合わせでも滑膜肉腫の前臨床モデルにおいて抗増殖活性を誘導することを示すデータが本明細書に記載される。化合物は、具体的には滑膜肉腫細胞株（ＳＳ１８−ＳＳＸ１融合陽性である）において、インビトロで用量依存性の細胞成長阻害および細胞死を誘導する。細胞株異種移植片か２つの患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルのいずれかを有するマウスの処置は、ＥＺＨ２特異的基質、ヒストンＨ３上のリジン２７のトリメチル化レベルの相関的阻害と共に、用量依存性腫瘍成長阻害をもたらす。これらのデータは、異種移植片モデル中のＥＺＨ２酵素活性に対するＳＳ１８−ＳＳＸ１陽性滑膜肉腫の依存性を示し、適切なバイオマーカーを有するこれらの遺伝子により規定された癌におけるＥＺＨ２標的薬の潜在的な有用性を示唆する。
【０２３８】
本明細書に引用された全刊行物および特許文書は、そのような刊行物または文書のそれぞれが、具体的かつ個別に引用により本明細書に組み込まれると示されたかのように、引用により本明細書に組み込まれる。刊行物および特許文書の引用は、いずれもが関係する従来技術であることの承認として意図されず、その内容または日付に関する何らかの承認を構成するものでもない。本発明は、書面での説明により説明されてきたので、当業者は、本発明が種々の実施形態で実施でき、前記説明および以下の実施例が説明のためのものであり、以下の特許請求の範囲を限定するものでないことを認識するだろう。
【実施例】
【０２３９】
実施例１：様々な細胞株におけるＥＺＨ２、ＩＮＩ１、ＳＳ１８−ＳＳＸ１およびローディング対照β−アクチンのタンパク質レベル
ＨＳ−ＳＹ−ＩＩおよびＳＷ９８２ヒト滑膜肉腫細胞、ＲＤヒト横紋筋肉腫細胞、Ｇ４０１ヒトラブドイド腫瘍細胞ならびにＨＥＫ２９３ヒト胎児由来腎臓細胞を、１×プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を含有する１×細胞溶解バッファー（＃９８０３，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）で溶解した。サンプルを超音波処理し、４℃で１０分間、１０，０００×ｇの遠心分離により清澄化した。溶解物のタンパク質含量を、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して測定した。２×ローディングバッファー（トリスＳＤＳ  β−ＭＥサンプル処理液，Ｃｏｓｍｏ  ｂｉｏ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）および水を細胞溶解物と混合することによりサンプル溶液を調製し、９５℃で５分間インキュベートした。ウエスタンブロット分析を以下のように行った。サンプル溶液を還元条件下で、ＳＳ１８およびＥＺＨ２について２〜１５％勾配ポリアクリルアミドゲルにて、またはＩＮＩ１およびβ−アクチンについて４〜２０％勾配ポリアクリルアミドゲルにて分離し、ニトロセルロース膜（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｗａｕｋｅｓｈａ，ＷＩ）に転写した。ブロットを以下のブロッキング溶液を用いて室温で１時間ブロッキングした：ＥＺＨ２、ＩＮＩ１およびＳＳ１８については１×Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ溶液（Ｙｕｋｉｊｉｒｕｓｈｉ，Ｓａｐｐｏｒｏ，Ｊａｐａｎ）、またβ−アクチンについては０．５％ツイーン２０および５％スキムミルクを含有するＴＢＳ。ブロットを、以下の希釈条件を用いて、一次抗体と４℃で一晩インキュベートした：０．５％ツイーン２０および０．１×Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ溶液を含有するＴＢＳ中で１：１０００希釈のＥＺＨ２抗体（０７−６８９，Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）、０．５％ツイーン２０および０．１×Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ溶液を含有するＴＢＳ中で１：１０００希釈のＩＮＩ１抗体（＃８７４５，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、０．５％ツイーン２０および０．１×Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ溶液を含有するＴＢＳ中で１：５００希釈のＳＳ１８抗体（ｓｃ−３６５１７０，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ）、および０．５％ツイーン２０および５％スキムミルクを含有するＴＢＳ中で１：２０００希釈のβ−アクチン抗体（Ａ５４４１，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。０．５％ツイーン２０を含有するＴＢＳで洗浄後、ブロットを、西洋ワサビペルオキシダーゼをコンジュゲートした抗ラビットＩｇＧ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）または抗マウスＩｇＧ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と以下の希釈条件を用いて、室温で６０分間さらにインキュベートした：ＥＺＨ２、ＩＮＩ１およびＳＳ１８については、０．５％ツイーン２０および０．１×Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ溶液を含有するＴＢＳ中で１：１０００希釈の抗ラビットＩｇＧ、またβ−アクチンについては、０．５％ツイーン２０および５％スキムミルクを含有するＴＢＳ中で１：２０００希釈の抗マウスＩｇＧ。０．５％ツイーン２���を含有するＴＢＳによる広範な洗浄後、ブロットをＩｍｍｏｂｉｌｏｎ  Ｗｅｓｔｅｒｎ化学発光ＨＲＰ基質（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で発色させた。免疫反応性のバンドを、発光イメージアナライザーＬＡＳ−３０００（Ｆｕｊｉ  Ｆｉｌｍ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用い、化学発光により可視化した。ウエスタンブロットの代表的な画像を図１に示す。ＳＳ１８−ＳＳＸ１の発現がＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞で確認された。ＩＮＩ１のダウンレギュレーションもこの細胞株で観察された。一方、別の滑膜肉腫株ＳＷ９８２は融合タンパク質を発現せず、ＲＤ細胞およびＨＥＫ２９３細胞と同等のＩＮＩ１の発現を示した。
【０２４０】
実施例２：様々な細胞株におけるＨ３Ｋ２７のトリメチル化およびジメチル化のレベル
ヒトＨＳ−ＳＹ−ＩＩおよびＳＷ９８２ヒト滑膜肉腫細胞、ＲＤヒト横紋筋肉腫細胞、Ｇ４０１ヒトラブドイド腫瘍細胞、ＷＳＵ−ＤＬＣＬ２およびＯＣＩ−ＬＹ１９ヒトびまん性大型Ｂ細胞リンパ腫細胞、ならびにＨＥＫ２９３ヒト胎児由来腎臓細胞を、５００μＬの溶解バッファー（１０ｍｍｏｌ／ＬのＭｇＣｌ２、１０ｍｍｏｌ／Ｌのトリス−ＨＣｌ、２５ｍｍｏｌ／ＬのＫＣｌ、１％トリトンＸ−１００、８．６％ショ糖および１×プロテアーゼ阻害剤カクテル）中に懸濁させた。氷上で５分間インキュベートした後、４℃で５分間、６００×ｇの遠心分離により核を集め、氷冷ＰＢＳで１回洗浄した。４℃で５分間、６００×ｇで遠心分離した後、ペレットを、０．２ｍｏｌ／Ｌの氷冷硫酸１００μＬ中に１時間再懸濁し、インキュベーション中に数回、ボルテックスした。上清を４℃で１０分間、１０，０００×ｇの遠心分離により清澄化し、回収した上清に１ｍＬの氷冷アセトンを加えた。ヒストンを−２０℃で１時間沈殿させ、４℃で１０分間、１０，０００×ｇの遠心分離によりペレットにし、１００μＬの水に再懸濁した。抽出したヒストンを、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して定量した。２×ローディングバッファー（トリスＳＤＳ  β−ＭＥサンプル処理液，Ｃｏｓｍｏ  ｂｉｏ）および水を細胞溶解物と混合することによりサンプル溶液を調製し、９５℃で５分間インキュベートした。ウエスタンブロット分析を以下のように行った。サンプル溶液を還元条件下で、１５〜２５％勾配ポリアクリルアミドゲルにて分離し、ニトロセルロース膜（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｗａｕｋｅｓｈａ，ＷＩ）に転写した。ブロットを、以下のブロッキング溶液を用いて、室温で１時間ブロッキングした：Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３およびＨ３Ｋ２７ｍｅ２については、１×Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ溶液、また全ヒストンＨ３については、０．５％ツイーン２０および５％スキムミルクを含有するＴＢＳ。ブロットを、以下の希釈条件を用いて、一次抗体と４℃で一晩インキュベートした：０．５％ツイーン２０および０．１×Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ溶液を含有するＴＢＳ中で１：１０００希釈のＨ３Ｋ２７ｍｅ３抗体（＃９７３３，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）およびＨ３Ｋ２７ｍｅ２抗体（＃９７２８，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、ならびに０．５％ツイーン２０および５％スキムミルクを含有するＴＢＳ中で１：２０００希釈の全ヒストンＨ３抗体（ａｂ１７９１，Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）。０．５％ツイーン２０を含有するＴＢＳで洗浄後、ブロットを、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３およびＨ３Ｋ２７ｍｅ２について、０．５％ツイーン２０および０．１×Ｂｌｏｃｋ  Ａｃｅ溶液を含有するＴＢＳ中で１：１０００希釈した、または全ヒストンＨ３について、０．５％ツイーン２０および５％スキムミルクを含有するＴＢＳ中で１：２０００希釈した、西洋ワサビペルオキシダーゼをコンジュゲートした抗ラビットＩｇＧ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と室温で６０分間さらにインキュベートした。０．５％ツイーン２０を含有するＴＢＳによる広範な洗浄後、ブロットをＩｍｍｏｂｉｌｏｎ  Ｗｅｓｔｅｒｎ化��発光ＨＲＰ基質（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で発色させた。免疫反応性のバンドを、発光イメージアナライザーＬＡＳ−３０００（Ｆｕｊｉ  Ｆｉｌｍ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用い、化学発光により可視化した。ウエスタンブロットの代表的な画像を図２Ａに示す。タンパク質バンドのシグナルを、Ｍｕｌｔｉ  Ｇａｕｇｅバージョン３．０ソフトウェア（Ｆｕｊｉ  Ｆｉｌｍ）を使用して定量した。様々な細胞株における定量的なＨ３Ｋ２７ｍｅ３／全Ｈ３（図２Ｂ）、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２／全Ｈ３（図２Ｃ）またはＨ３Ｋ２７ｍｅ３／Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２（図２Ｄ）の比を示す一連のプロットを示す。Ｙ６４６  ＥＺＨ２突然変異を保持するＷＳＵ−ＤＬＣＬ２における高いＨ３Ｋ２７ｍｅ３／Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２状態とは対照的に、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩは高いＨ３Ｋ２７ｍｅ３／Ｈ３Ｋ２７ｍｅ２状態を示さなかった。
【０２４１】
実施例３：付着細胞株の長期間増殖アッセイ
プロトコール：
７日間アッセイのための９６ウェルプレーティング：各付着細胞株について、化合物処理の前に細胞をプレートに付着させるために、夜（翌日化合物で処理するように）または朝（夜に化合物で処理するように）のいずれかに、三つ組で処理するように、９６ウェルプレート中に１００μＬの容量で細胞を蒔いた。
【０２４２】
７〜１４日間アッセイ用に分けられる６ウェルプレート：６ウェルプレートの各ウェル中に正確な密度で２ｍＬの細胞を蒔いた。９６ウェルの密度を３０倍することにより、９６ウェルプレートの増殖曲線から正確な密度を計算した。係数３０は、６ウェルプレートの増殖面積を９６ウェルプレートの増殖面積で除することから得られ（９．５ｃｍ２／０．３２ｃｍ２＝２９．７、切り上げて３０にする）、これは、９６ウェルプレートに対して６ウェルプレートの表面積が３０倍大きいことに対応する。
【０２４３】
０日目：培地を除去し、正確に希釈した化合物／ＤＭＳＯを含む、１００μＬ（９６ウェルプレートに対して）または２ｍＬ（６ウェルプレートに対して）の培地を加えることによって、化合物またはＤＭＳＯで処理した。表１に９６ウェルプレートのマップの一例を挙げる。プレートを９６時間インキュベートした。
【０２４４】
【表１】
2017532338.tif 000044
【０２４５】
０日目の読み取りのためにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を用いて９６ウェルプレートを読み取った（培地交換はこのプレートついて必要ない）。
【０２４６】
４日目：４日目の読み取りのためにＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を用いて９６ウェルプレートを読み取った（読み取り前の培地交換はこのプレートついて必要ない）。９６ウェルプレートおよび６ウェルプレートにおいて、４日目に化合物を含有する新鮮培地に培地を置き換えた。
【０２４７】
７日目：ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）を用いて９６ウェルプレートを読み取った。
【０２４８】
６ウェルプレートの個々のウェルをカウントし、上記に記載のように、開始プレーティング密度になるように９６ウェルプレートに細胞を再度蒔いた。
【０２４９】
増殖アッセイの７〜１４日目のために、０〜７日目のステップを繰り返した。
【０２５０】
具体的には、化合物処理の約１２時間前に、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞またはＳＷ９８２細胞をそれぞれ、２４，０００細胞／ウェルおよび７，５００細胞／ウェルの密度で６ウェルプレートに蒔いた。０日目に、ＤＭＳＯまたは１０μｍｏｌ／Ｌから４倍希釈で希釈した化合物で細胞を処理した。７日目に、６ウェルプレートの細胞をトリプシン処理し、ＴＣ１０自動細胞カウンター（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）によりカウントし、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩおよびＳＷ９８２についてそれぞれ、８００細胞／ウェルおよび２５０細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに三つ組で再度蒔いた。細胞をプレートに一晩付着させ、０日目のように、ＤＭＳＯまたは化合物のいずれかで処理した。０、７、１１および１４日目に、ＥｎＶｉｓｉｏｎ  ２１０３  Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，ＭＡ）を用いて、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）ルミネセンス細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）により細胞生存率を決定した。４および１１日目に化合物／培地を新しいものと交換した。７日目に対する７、１１および１４日目の測定値の比を用いて、７日目から１４日目までの増殖をプロットし、１４日目のＩＣ５０値を計算した。化合物Ｅおよび化合物Ａ（本明細書ではＥ７４３８およびＥＰＺ−６４３８とも呼ばれる）を使用する実験の代表的なグラフをそれぞれ、図３Ａ、３Ｂおよび３Ｃ、３Ｄに示す。ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞は、１４日間の長期間増殖アッセイにおいて化合物Ｅおよび化合物Ａに高感受性を示したが、一方ＳＷ９８２細胞は高感受性を示さなかった。
【０２５１】
実施例４：インビトロおよびインビボにおける化合物Ａ処理
インビトロにおいて、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞は、化合物Ａに高感受性であり、用量依存的に細胞増殖の阻害を示す。一方、ＳＷ９８２細胞は化合物Ａに感受性ではない（図５Ａおよび５Ｂ）。
【０２５２】
Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３の減少がＥＺＨ２阻害剤による処理により両方の細胞株で観察され（図６Ａ）、そのＩＣ５０値は互いに同等であった（図６Ｂ）。これから、ＥＺＨ２阻害剤を用いる処理によるヒストンマークの変化は、ＳＳ１８−ＳＳＸ融合タンパク質の存在とは無関係であることが示唆される。
【０２５３】
ＰＫ値およびＰＤ変化をＨＳ−ＳＹ−ＩＩ異種移植マウスモデルで分析した。最後の投与の５分前および３時間後の化合物Ａの血漿中濃度を測定した。用量依存的な暴露量が観察された（図７Ａ）。同時に、腫瘍組織中のＨ３Ｋ２７ｍｅ３レベルの用量依存的な低下も観察された（図７Ｂ）。表２および３に、図７Ｂに示すデータに関する統計解析を示す。
【０２５４】
【表２】
2017532338.tif 000045
【０２５５】
【表３】
2017532338.tif 000046
【０２５６】
化合物ＡまたはＥＰＺ−０１１９８９（すなわち、化合物Ｃ）を用いる処理による遺伝子発現変化を、インビトロ培養のＨＳ−ＳＹ−ＩＩおよびＳＷ９８２で分析した。ＰＲＣ２複合体がＴＬＥ１によりＳＳ１８−ＳＳＸ融合タンパク質に動員され、ＡＴＦ２標的遺伝子（ＥＧＲ１、ＡＴＦ３、ＭＥＩＳ２およびＣＤＫＮ２Ａ）を抑制することが報告されている（Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ２１，３３３−３４７，２０１２）。そこで、ＥＧＲ１、ＡＴＦ３およびＣＤＫＮ２Ａの発現レベルを検査した。用量および時間依存的なＣＤＫＮ２ＡのアップレギュレーションがＨＳ−ＳＹ−ＩＩで観察されたが、一方ＳＷ９８２では、ＣＤＫＮ２Ａ遺伝子座がホモ接合性に欠失していることが知られている（図８）。ＡＴＦ３およびＥＧＲ１は、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩでは、化合物ＡおよびＥＰＺ−０１１９８９を用いる処理によりアップレギュレートされたが、ＳＷ９８２ではアップレギュレートされなかった。したがって、化合物Ａは、滑膜肉腫病態形成に関与する遺伝子の発現変化を誘導する。
【０２５７】
表４に、図８に示すデータに関する統計解析を示す。
【０２５８】
【表４】
2017532338.tif 000047
【０２５９】
化合物Ａを用いる処理による遺伝子発現変化はまたＨＳ−ＳＹ−ＩＩ異種移植モデルでも分析した。ＣＤＫＮ２Ａは、５００ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを投与したマウスで顕著にアップレギュレートされた（図９）。ここでも、化合物Ａは、滑膜肉腫病態形成に関与する遺伝子の発現変化を誘導する。
【０２６０】
図１０Ａ〜１０Ｃに、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ異種移植片を担持する無胸腺ヌードマウスの平均インビボ腫瘍容積を示す。第１の試験では、ビヒクル（２８日間経口もしくは１日目および２２日目にｉｖ）、化合物Ａ（経口：２８日間１２５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇもしくは５００ｍｇ／ｋｇ）またはドキソルビシン（ｉｖ：１０ｍｇ／ｋｇ、１日目および２２日目）のいずれかをマウスに投与し、腫瘍容積を週に２回測定した（図１０Ａおよび１０Ｂ）。第２の試験では、ビヒクル（２８日間経口）、化合物Ａ（経口：２８日間２５０ｍｇ／ｋｇまたは５００ｍｇ／ｋｇ）、ドキソルビシン（ｉｖ：１日目および２２日目に１０ｍｇ／ｋｇ）またはドキソルビシン（ｉｖ：１日目および２２日目に１０ｍｇ／ｋｇ）と化合物Ａ（経口：２８日間２５０ｍｇ／ｋｇ）の併用のいずれかをマウスに投与した（図１０Ｃ）。第２の試験の動物腫瘍は２８日目（最後の投与の３時間後）に摘出し、ＥＬＩＳＡによるＨ３Ｋ２７ｍｅ３分析（図１０Ｄ）または増殖マーカーＫｉ６７に対するＩＨＣ（図１０Ｅ）に供した。
【０２６１】
２Ｄ細胞培養では、化合物Ａに感受性であるが、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞株異種移植では、マウス異種移植モデルは用量相関的な腫瘍容積の増加を示した；この観察の基礎となる機構は検討中である。
【０２６２】
図１１Ａおよび１１Ｃは、滑膜肉腫腫瘍の２つの異なるＰＤＸの１つを担持する無胸腺ヌードマウスの平均インビボ腫瘍容積を示す。図１１Ｂおよび１１Ｄは、ＰＤＸを担持するマウスのパーセント生存率を示す。ビヒクル（３５日間経口）、化合物Ａ（経口：３５日間１２５ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇもしくは５００／４００ｍｇ／ｋｇ）またはドキソルビシン（ｉｖ：３ｍｇ／ｋｇ、３週間週に１回）のいずれかをマウスに投与した。図１１Ａおよび１１Ｂは、高グレードの紡錘細胞肉腫を有する５７歳男性に由来するＰＤＸを担持するマウスのデータを示す。図１１Ｃおよび１１Ｄは、１６歳女性に由来するＰＤＸを担持するマウスのデータを示す。ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞株異種移植とは対照的に、ＰＤＸマウスはインビボで用量相関的な腫瘍容積の減少を示した。
【０２６３】
図１２Ａおよび１２Ｂは、３５日目に収集しＲＮＡ−ｓｅｑ解析により分析した、マウスのサブセットから得た滑膜肉腫ＰＤＸ腫瘍のアレイデータを示す。図１２Ａは、５７歳の男性からのＰＤＸを有するマウスから得たデータであり；図２Ｂは、１６歳の女性からのＰＤＸを有するマウスから得たデータである。ＨＬＡ遺伝子、Ｆａｓ、およびＫＬＲＤ１の発現は、ビヒクルにより処置されたマウスに対して４００ｍｇ／ｋｇ化合物Ａにより処置されたマウスで増加した。図中で、青は低発現であり、赤は高発現である。
【０２６４】
材料および方法
細胞培養
ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ（ＲＣＢ２２３１，ＲＩＫＥＮ  ＢｉｏＲｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ）およびＳＷ９８２（ＨＴＢ−９３、ＡＴＣＣ）を、３７℃、５％ＣＯ２の条件下、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０中で増殖させた。ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞はＳＳ１８−ＳＳＸ１融合体を有することを特徴とするが、ＳＷ９８２細胞は野生型ＳＳ１８を有する。
【０２６５】
化合物Ａにより誘導される、Ｈ３Ｋ２７メチル化の変化
ＨＳ−ＳＹ−ＩＩおよびＳＷ９８２細胞を、ＤＭＳＯまたは４０ｎｍｏｌ／Ｌから４倍希釈で希釈した化合物Ａのいずれかで、９６時間処理した。細胞を氷冷ＰＢＳにより洗浄し、細胞スクレーパーにより回収し、１００μｌの核抽出バッファー（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２５ｍＭのＫＣｌ、１％トリトンＸ−１００、８．６％スクロース＋１×Ｈａｌｔ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ阻害剤カクテル（１８６１２８１，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））で溶解した。４℃で５分間、６００ｇの遠心分離により核を集め、氷冷ＰＢＳで１回洗浄した。上清を除去し、ヒストンを１００μｌの０．４Ｎ冷硫酸で１時間抽出した。抽出物を４℃で１０分間、１０，０００ｇの遠心分離により清澄化し、１ｍＬの氷冷アセトンを含有する新しい微小遠心管に移した。ヒストンを−２０℃で一晩沈殿させ、１０，０００×ｇで１０分間の遠心分離によりペレットにし、１００μｌの水に再懸濁した。ヒストンを、ＢＣＡタンパク質アッセイ（２３２２５，Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して定量した。希釈したヒストンを、Ｉｍｍｕｌｏｎ  ４ＨＢＸプレート（３８５５，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上に一晩コーティングして、ＥＬＩＳＡを行った。手短に言えば、０．０５％ツイーン２０および２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳでブロッキングした後、プレートを、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３抗体（＃９７３３，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）または全ヒストンＨ３抗体（ＡＢ１７９１，Ａｂｃａｍ）とインキュベートした。プレートをさらに、西洋ワサビペルオキシダーゼをコンジュゲートした抗ラビットＩｇＧ（＃７０７４，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）とインキュベートした後、ＴＭＢ基質（ＴＭＢＳ−０１００−０１，ＢｉｏＦｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）とインキュベートした。次いで、ウェル中で発色した色を、プレート分光光度計（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ２５０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して、４５０ｎｍ（基準波長６５０ｎｍ）で測定した。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３レベルを全ヒストンＨ３に合わせて、ＤＭＳＯ対照に対する比（ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）として表現した。
【０２６６】
図６Ａに代表的なプロットを示す。図６Ｂに示すＩＣ５０値（２つの独立した実験）の範囲は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ）により決定した。ヒストンマークの変化は、ＨＳ−ＳＹ−ＩＩとＳＷ９８２との間で同等であり、この変化はＳＳ１８−ＳＳＸ融合タンパク質に無関係であった。
【０２６７】
ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ異種移植モデルにおけるＰＫ値およびＰＤ変化
ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞を対数期増殖の中間時点で回収し、５０％マトリゲル（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）含有ハンク平衡塩類溶液中に再懸濁した。Ｂａｌｂ／Ｃ−ｎｕマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｊａｐａｎ）の右側腹部に１×１０７細胞（０．１ｍＬの細胞浮遊液）を皮下投与した。約２００ｍｍ３（注入後３１日目）の腫瘍を担持するマウスを、同様の平均腫瘍容積を有する処置群に選別した。化合物Ａまたはビヒクル（０．５％ＭＣ＋０．１％ツイーン８０の水溶液）を、経口の胃管栄養法により７日間１日２回、指示用量で投与した。各用量を、０．２ｍＬ／２０ｇマウス（１０ｍＬ／ｋｇ）の容量で送達し、個々の動物の最後に記録された体重に対して調整した。最後の投与の約５分前および３時間後に、化合物Ａ処置マウスから末梢血サンプルを採取した。遠心分離により血漿サンプルを得た後、化合物Ａの血漿中濃度分析を、液体クロマトグラフィー・タンデム型質量分析（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）法により行った。質量分析計（Ｑｕａｔｔｒｏ  ｐｒｅｍｉｅｒ，ＭＩＣＲＯＭＡＳＳ）を装備したＵＰＬＣシステム（Ａｃｑｕｉｔｙ，Ｗａｔｅｒｓ）を使用して、化合物Ａを定量した。濃度のプロットを図７Ａに示す（ｎ＝５）。各バーは、各群における血漿中濃度の平均値を表す。
【０２６８】
腫瘍サンプルを、ＰＫ値およびＰＤ変化の分析に使用したマウスから、最後の投与の約３時間後に採取した。腫瘍サンプルを、ＲＮＡｌａｔｅｒ（ＡＭ７０２０，Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して保存した。全ＲＮＡの単離および逆転写を、製造業者の指示に従って、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（７４１０４，Ｑｉａｇｅｎ）および高容量ｃＤＮＡ逆転写キット（４３６８８１４，Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により行った。このｃＤＮＡサンプルを、上記のようにリアルタイムＰＣＲに使用した。発現レベルは、ＧＡＰＤＨに合わせて、ビヒクル対照に対する比（ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）として表現した（図９）。
【０２６９】
図１０Ｄの場合、腫瘍を液体窒素で瞬間凍結させた。凍結した腫瘍サンプルを２０ｍｇの小片に切断し、５００μｌの氷冷核抽出バッファー（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、２５ｍＭのＫＣｌ、１％トリトンＸ−１００、８．６％スクロース＋１×Ｈａｌｔ  Ｐｒｏｔｅａｓｅ阻害剤カクテル（１８６１２８１，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ））に入れ、簡便なミクロホモジナイザーでホモジナイズした。４℃で５分間、６００ｇの遠心分離により核を集め、氷冷ＰＢＳで１回洗浄した。上清を除去し、ヒストンを１００μｌの０．４Ｎ冷硫酸で１時間抽出した。抽出物を４℃で１０分間、１０，０００ｇの遠心分離により清澄化し、１ｍＬの氷冷アセトンを含有する新しい微小遠心管に移した。ヒストンを−２０℃で一晩沈殿させ、１０，０００×ｇで１０分間の遠心分離によりペレットにし、１００μｌの水に再懸濁した。ヒストンを、ＢＣＡタンパク質アッセイ（２３２２５，Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して定量した。希釈したヒストンを、Ｉｍｍｕｌｏｎ  ４ＨＢＸプレート（３８５５，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上に一晩コーティングして、ＥＬＩＳＡを行った。手短に言えば、０．０５％ツイーン２０および２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳでブロッキングした後、プレートを、Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３抗体（＃９７３３，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）または全ヒストンＨ３抗体（ＡＢ１７９１，Ａｂｃａｍ）とインキュベートした。プレートをさらに、西洋ワサビペルオキシダーゼをコンジュゲートした抗ラビットＩｇＧ（＃７０７４，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）とインキュベートした後、ＴＭＢ基質（ＴＭＢＳ−０１００−０１，ＢｉｏＦｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）とインキュベートした。次いで、ウェル中で発色した色を、４５０ｎｍ（基準波長６５０ｎｍ）でプレート分光光度計（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ２５０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を使用して測定した。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３レベルを全ヒストンＨ３に合わせて、ビヒクル対照に対する比（ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）として表現した。これらの値のプロットを図１０Ｄに示す（ｎ＝６）。各バーは、各群における値の平均値を表す。Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３レベルの顕著な低下が化合物Ａ投与マウス由来の腫瘍で観察された。ヒストンを抽出および定量し、上記のようにＨ３Ｋ２７ｍｅ３レベルを分析した。腫瘍中のＨ３Ｋ２７のトリメチル化レベルのプロットを図７Ｂに示す（ｎ＝５）。各バーは、各群における、トリメチル化レベルの平均±ＳＥＭを表す。
【０２７０】
化合物Ａ処理後のインビトロにおける遺伝子発現変化
ＨＳ−ＳＹ−ＩＩ細胞およびＳＷ９８２細胞をＥＺＨ２阻害剤（化合物ＡまたはＥＰＺ−０１１９８９）で処理し、指示時点で回収した。全ＲＮＡの単離およびｃＤＮＡ合成を、製造業者のプロトコールに従い、ＴａｑＭａｎＧｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌｓ−ｔｏ−ＣＴキット（４３９９００２，Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して行った。ＡＴＦ３、ＥＧＲ１、ＣＤＫＮ２ＡおよびＧＡＰＤＨの発現を、ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，４３３１１８２）およびＴａｑＭａｎ  Ｐｒｏｂｅｓ（それぞれＨｓ００２３１０６９＿ｍ１、Ｈｓ００１５２９２８＿ｍ１、Ｈｓ００２３３３６５＿ｍ１およびＨｓ９９９９９９０５＿ｍ１）の使用により分析した。発現レベルは、ＧＡＰＤＨに合わせて、ＤＭＳＯ対照に対する比（ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）として表現した（図８）。
【０２７１】
化合物Ａ処理後のインビボにおける遺伝子発現変化
腫瘍サンプルを、ＰＫ値およびＰＤ変化の分析に使用したマウスから、最後の投与の約３時間後に採取した。腫瘍サンプルを、ＲＮＡｌａｔｅｒ（ＡＭ７０２０，Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して保存した。全ＲＮＡの単離および逆転写を、製造業者の指示に従って、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキット（７４１０４，Ｑｉａｇｅｎ）および高容量ｃＤＮＡ逆転写キット（４３６８８１４，Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により行った。このｃＤＮＡサンプルを、上記のようにリアルタイムＰＣＲに使用した。発現レベルは、ＧＡＰＤＨに合わせて、ビヒクル対照に対する比（ｆｏｌｄ  ｃｈａｎｇｅ）として表現した（図９）。追加的または代替的に、全ＲＮＡを凍結した腫瘍サンプルから単離した。ＴｒｕＳｅｑ（商標）ＲＮＡ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨｉＳｅｑ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＴｒｕＳｅｑ  ＲＮＡ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｇｕｉｄｅに詳述されている）上でペアエンドシーケンシング（ｐａｉｒｅｄ−ｅｎｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）用のｃＤＮＡライブラリーを構築した。Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｃｌｕｓｔｅｒ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  ｖ５は、ｃＤＮＡライブラリーをフローセル表面に結合させる。１サンプル当たり約５０Ｍクラスターからのペアエンドリードを、Ｉｌｌｕｍｉｎａ  ＨｉＳｅｑ上でＴｒｕＳｅｑ  ＳＢＳキットを使用して生成させた。
【０２７２】
ＲＮＡｓｅｑデータ処理
ＦＡＳＴＱ形式での生シーケンシングリードを、ヒトゲノムｈｇ１９およびマウスゲノムｍｍ１０に対してアライメントした。トランスクリプトームの定量を、参照としてＵＳＣＳ  ＫｎｏｗｎＧｅｎｅトランスクリプトームを使用して、ＲＳＥＭ  ｖ１．１．１３プログラムで行った。ＲＳＥＭ発現計算は、Ｉｌｌｕｍｉｎａ５０×５０ペアエンドシーケンシング用に最適化されたパラメーターを用いて実行した。
【０２７３】
生物学的解釈のためのＲＮＡｓｅｑトランスクリプトームデータの分析
両方のＰＤＸモデル（各モデルについて５つのレプリケートによる処理）について、化合物Ａ対ＤＭＳＯ処理の２つのサンプル比較に関する遺伝子セット濃縮分析（Ｇｅｎｅ  Ｓｅｔ  Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）（ＧＳＥＡ）を、ＧＳＥＡ  Ｊａｖａ（登録商標）対応のデスクトップソフトウェア（バージョン２．０．１３、ワールドワイドウェブ（ｗｗｗ）ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｇｓｅａ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ）を使用して行った。規準化後のＲＳＥＭ生成遺伝子レベルのカウントをＧＳＥＡ入力に使用した。表現型ではなく遺伝子セットに対して並び替えを行って、小サンプルサイズを処理した。キュレーションされたＫＥＧＧ経路およびワールドワイドウェブ（ｗｗｗ）ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｇｓｅａ／ｍｓｉｇｄｂ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐのＭＳｉｇＤＢバージョン４．０からの転写因子結合モチーフ遺伝子セットを、すべてのＧＳＥＡデータ分析に使用した。
【０２７４】
図１０Ｅの場合、集めた腫瘍をホルマリン固定に供し、パラフィン包埋した。パラフィン切片を調製し、脱パラフィンし、ポリマーベースの方法（ＥｎＶｉｓｉｏｎ，ＤＡＫＯ，Ｊａｐａｎ）に準拠した一般的な工程の後にＩＨＣ用に処理した。脱パラフィンした切片を、標的検索溶液（ＤＡＫＯ、１０％の最終濃度に希釈）中で、１２１℃で２０分間、２気圧下でオートクレーブ滅菌することにより抗原検索用に処理し、３％過酸化水素水で５分間処理して内因性ペルオキシダーゼ活性を遮断した。市販の一次抗体を室温で約１時間、Ｋｉ−６７と反応させた（抗ヒトＫｉ−６７マウスモノクローナル抗体、ＤＡＫＯ，Ｊａｐａｎ、１：５０稀釈）。ＥｎＶｉｓｉｏｎシステムを使用する次のステップは、室温で３０分間の二次抗体による処理を含めて、製造業者の指示に従った；３，３’−ジアミノベンジジンをクロモゲンとして、またヘマトキシリンを対比染色として使用した。図１０Ｅでは、Ａｐｅｒｉｏ  ＸＴ（商標）スキャナーを使用して、スライドをデジタル化した。デジタル化されたスライドをＡｐｅｒｉｏ  Ｉｍａｇｅ  Ｓｃｏｐｅ（商標）ソフトウェアを使用して分析し、陽性細胞のパーセントを定量化した。Ｋｉ６７のＩＨＣ染色の定量化は、処置群における細胞増殖の変化を示さなかった。各バーは、各群の値の平均を表す。（Ｋｉ６７陽性細胞のパーセントの有意な差は、全投与群で観察されなかった）
【０２７５】
滑膜肉腫ＲＮＡ−ｓｅｑ方法
患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルＣＴＧ−０３３１およびＣＴＧ−０７７１は、ヒト滑膜肉腫を表す低継代のＣｈａｍｐｉｏｎｓ  ＴｕｍｏｒＧｒａｆｔ（商標）モデルである。免疫不全の雌のマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ；ＮＣｒヌード）の一方の脇腹領域に、ドナー動物から収集した腫瘍断片（５ｍｍ×５ｍｍ×５ｍｍ）を移植したが、それぞれは、特定の継代ロット（ＣＴＧ−０３３１およびＣＴＧ−０７７１でＰ４）から移植した。腫瘍がおよそ１００〜３００ｍｍ３に達すると、動物を腫瘍体積により調整して処置群と対照群にして、投薬を開始した。ビヒクル（０．５％ＮａＣＭＣプラス水中０．１％ツイーン８０）または化合物Ａ（ＣＴＧ−０３３１には５００ｍｇ／ｋｇおよびＣＴＧ−０７７１には５００ｍｇ／ｋｇを１７日に４００ｍｇ／ｋｇに減らした）を、１０μＬ／ｇの投与体積で、３５日間、１日２回経口投与した。腫瘍サイズを週に２回測定した。３５日目に、最大腫瘍量を有する５匹までのマウスを、最後の投与の３時間後に腫瘍収集のために安楽死させ、急速冷凍した。ビヒクル群および最高の化合物Ａ投与量群から得た冷凍された腫瘍試料（３０ｍｇ）を、ＲＮＡプロセシングおよびＲＮＡ−ｓｅｑ解析のためにＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓに発送した。
【０２７６】
参照による援用
本明細書に言及した特許文書および科学論文の各々の開示内容全体は、あらゆる目的において援用する。
【０２７７】
均等物
本発明は、その精神または本質的な特徴を逸脱することなく他の特定の形態で実施することができる。したがって、前述の実施形態は、あらゆる点で本明細書に記載の本発明に関する限定ではなく、例示と見なすべきである。このため、本発明の範囲は、明細書本文ではなく添付の特許請求の範囲により示され、特許請求の範囲の均等範囲に属するすべての変更をすべてその範囲内に包含することを意図している。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ−２Ｃ】
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【図３Ａ−３Ｂ】
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【図３Ｃ−３Ｄ】
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【図４Ａ−４Ｃ】
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【図４Ｄ−４Ｆ】
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【図５Ａ−５Ｂ】
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【図６Ａ−６Ｂ】
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【図７Ａ−７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ−１０Ｃ】
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【図１０Ｄ−１０Ｅ】
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【図１１Ａ−１１Ｂ】
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【図１１Ｃ−１１Ｄ】
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【図１２Ａ−１２Ｂ】
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【国際調査報告】
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