(57)【要約】  水系培地中の第１及び第２の微生物の混合培養物であって、前記第１の微生物は、ＣＯ及び／又はＣＯ２を含む炭素源を酢酸塩及び／又はエタノールに転化させることができる酢酸生成微生物であり、前記第２の微生物は、酢酸塩及び／又はエタノールを代謝することができる非酢酸生成微生物であり、前記第１及び第２の微生物は均一混合物を形成しており、前記水系培地は酸素を含むことを特徴とする混合培養物を提供する。また、前記混合培養物を使用して置換及び／又は未置換の有機化合物を製造する方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水系培地中の第１及び第２の微生物の混合培養物であって、
前記第１の微生物は、ＣＯ及び／又はＣＯ２を含む炭素源を酢酸塩及び／又はエタノールに転化させることができる酢酸生成微生物であり、
前記第２の微生物は、酢酸塩及び／又はエタノールを代謝することができる非酢酸生成微生物であり、
前記第１及び第２の微生物は均一混合物を形成しており、
前記水系培地は酸素を含むことを特徴とする混合培養物。
【請求項２】
前記第２の微生物が、耐気性微生物、通性嫌気性生物及び好気性微生物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の培養物。
【請求項３】
前記水系培地が、０．１〜１．５ｍｇ／Ｌの酸素を含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載の培養物。
【請求項４】
前記炭素源が、少なくとも５０重量％のＣＯ及び／又はＣＯ２を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の培養物。
【請求項５】
前記第１の微生物が、Ａｃｅｔｏａｎａｅｒｏｂｉｕｍ  ｎｏｔｅｒａ（ＡＴＣＣ  ３５１９９）、Ａｃｅｔｏｎｅｍａ  ｌｏｎｇｕｍ（ＤＳＭ  ６５４０）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃａｒｂｉｎｏｌｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ２９２５）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｌｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ４１３２）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｎｏ．４４６、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｗｉｅｒｉｎｇａｅ（ＤＳＭ  １９１１）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｗｏｏｄｉｉ（ＤＳＭ  １０３０）、Ａｌｋａｌｉｂａｃｕｌｕｍ  ｂａｃｃｈｉ（ＤＳＭ  ２２１１２）、Ａｒｃｈａｅｏｇｌｏｂｕｓ  ｆｕｌｇｉｄｕｓ（ＤＳＭ  ４３０４）、Ｂｌａｕｔｉａ  ｐｒｏｄｕｃｔａ（ＤＳＭ  ２９５０）、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ３４６８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｃｅｔｉｃｕｍ（ＤＳＭ  １４９６）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｕｔｏｅｔｈａｎｏｇｅｎｕｍ（ＤＳＭ  １００６１、ＤＳＭ  １９６３０及びＤＳＭ  ２３６９３）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｘｉｄｉｖｏｒａｎｓ（ＤＳＭ  １５２４３）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｏｓｋａｔｉｉ（ＡＴＣＣ  ｎｏ．ＰＴＡ−１０５２２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｒａｋｅｉ（ＡＴＣＣ  ＢＡ−６２３）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｆｏｒｍｉｃｏａｃｅｔｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ９２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｇｌｙｃｏｌｉｃｕｍ（ＤＳＭ  １２８８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ（ＤＳＭ  １３５２８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  Ｃ−０１（ＡＴＣＣ  ５５９８８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  ＥＲＩ−２（ＡＴＣＣ  ５５３８０）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  Ｏ−５２（ＡＴＣＣ  ５５９８９）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｍａｙｏｍｂｅｉ（ＤＳＭ  ６５３９）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｖｏｒａｎｓ（ＤＳＭ  １２１８２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｒａｇｓｄａｌｅｉ（ＤＳＭ  １５２４８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｃａｔｏｌｏｇｅｎｅｓ（ＤＳＭ  ７５７）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ＡＴＣＣ  ２９７９７、Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｋｕｚｎｅｔｓｏｖｉｉ（ＤＳＭ  ６１１５）、Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｂｅｚｏｉｃｕｍ  ｓｕｂｓｐ．  ｔｈｅｒｍｏｓｙｎｔｒｏｐｈｉｃｕｍ（ＤＳＭ  １４０５５）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｉｍｏｓｕｍ（ＤＳＭ  ２０５４３）、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ  ａｃｅｔｉｖｏｒａｎｓ  Ｃ２Ａ（ＤＳＭ  ２８３４）、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｓｐ．  ＨＵＣ２２−１、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｔｈｅｒｍｏａｃｅｔｉｃａ（ＤＳＭ  ５２１）、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＤＳＭ  １９７４）、Ｏｘｏｂａｃｔｅｒ  ｐｆｅｎｎｉｇｉｉ（ＤＳＭ  ３２２）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ａｅｒｉｖｏｒａｎｓ（ＤＳＭ  １３３２６）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｏｖａｔａ（ＤＳＭ  ２６６２）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｓｉｌｖａｃｅｔｉｃａ（ＤＳＭ  １０６６９）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ（ＤＳＭ  ２８７５）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｔｅｒｍｉｔｉｄａ（ＤＳＭ  ４４４０）及びＴｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｋｉｖｕｉ（ＤＳＭ  ２０３０）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の培養物。
【請求項６】
前記第２の微生物が、少なくとも酵母、微小藻類及び／又は細菌であり、前記酵母が、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｃｕｔａｎｅｕｍ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉ、Ｃｒｙｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ及びＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａからなる群から選択され、前記微小藻類が、Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ  ｃｏｈｎｉｉであり、及び／又は、前記細菌が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｎｅｃａｔｏｒ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｅｕｔｒｏｐｈａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａからなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の培養物。
【請求項７】
前記酢酸塩及び／又はエタノールが、少なくとも１種の置換又は未置換の有機化合物に代謝されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の培養物。
【請求項８】
少なくとも１種の置換又は未置換の有機化合物の製造方法であって、水系培地中において均一混合物を形成している第１及び第２の微生物の混合培養物を、酸素及び炭素源と接触させることを含み、
前記第１の微生物は、前記炭素源を酢酸塩及び／又はエタノールに転化させることができる酢酸生成微生物であり、
前記第２の微生物は、酢酸塩及び／又はエタノールを前記置換又は未置換の有機化合物に代謝することができる非酢酸生成微生物であることを特徴とする方法。
【請求項９】
前記酸素及びＣＯ及び／又はＣＯ２を含む前記炭素源を、連続ガス流によって前記水系培地に供給することを特徴とする、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記水系培地中の酸素の量が０．１〜１．５ｍｇ／Ｌであることを特徴とする、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
前記連続ガス流が、０．０１〜１０重量％の酸素濃度を有することを特徴とする、請求項９又は１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１の微生物が、Ａｃｅｔｏａｎａｅｒｏｂｉｕｍ  ｎｏｔｅｒａ（ＡＴＣＣ  ３５１９９）、Ａｃｅｔｏｎｅｍａ  ｌｏｎｇｕｍ（ＤＳＭ  ６５４０）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃａｒｂｉｎｏｌｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ２９２５）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｌｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ４１３２）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｎｏ．４４６、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｗｉｅｒｉｎｇａｅ（ＤＳＭ  １９１１）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｗｏｏｄｉｉ（ＤＳＭ  １０３０）、Ａｌｋａｌｉｂａｃｕｌｕｍ  ｂａｃｃｈｉ（ＤＳＭ  ２２１１２）、Ａｒｃｈａｅｏｇｌｏｂｕｓ  ｆｕｌｇｉｄｕｓ（ＤＳＭ  ４３０４）、Ｂｌａｕｔｉａ  ｐｒｏｄｕｃｔａ（ＤＳＭ  ２９５０）、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ３４６８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｃｅｔｉｃｕｍ（ＤＳＭ  １４９６）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｕｔｏｅｔｈａｎｏｇｅｎｕｍ（ＤＳＭ  １００６１、ＤＳＭ  １９６３０及びＤＳＭ  ２３６９３）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｘｉｄｉｖｏｒａｎｓ（ＤＳＭ  １５２４３）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｏｓｋａｔｉｉ（ＡＴＣＣ  ｎｏ．ＰＴＡ−１０５２２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｒａｋｅｉ（ＡＴＣＣ  ＢＡ−６２３）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｆｏｒｍｉｃｏａｃｅｔｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ９２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｇｌｙｃｏｌｉｃｕｍ（ＤＳＭ  １２８８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ（ＤＳＭ  １３５２８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  Ｃ−０１（ＡＴＣＣ  ５５９８８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  ＥＲＩ−２（ＡＴＣＣ  ５５３８０）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  Ｏ−５２（ＡＴＣＣ  ５５９８９）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｍａｙｏｍｂｅｉ（ＤＳＭ  ６５３９）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｖｏｒａｎｓ（ＤＳＭ  １２１８２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｒａｇｓｄａｌｅｉ（ＤＳＭ  １５２４８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｃａｔｏｌｏｇｅｎｅｓ（ＤＳＭ  ７５７）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ＡＴＣＣ  ２９７９７、Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｋｕｚｎｅｔｓｏｖｉｉ（ＤＳＭ  ６１１５）、Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｂｅｚｏｉｃｕｍ  ｓｕｂｓｐ．  ｔｈｅｒｍｏｓｙｎｔｒｏｐｈｉｃｕｍ（ＤＳＭ  １４０５５）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｉｍｏｓｕｍ（ＤＳＭ  ２０５４３）、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ  ａｃｅｔｉｖｏｒａｎｓ  Ｃ２Ａ（ＤＳＭ  ２８３４）、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｓｐ．  ＨＵＣ２２−１、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｔｈｅｒｍｏａｃｅｔｉｃａ（ＤＳＭ  ５２１）、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＤＳＭ  １９７４）、Ｏｘｏｂａｃｔｅｒ  ｐｆｅｎｎｉｇｉｉ（ＤＳＭ  ３２２）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ａｅｒｉｖｏｒａｎｓ（ＤＳＭ  １３３２６）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｏｖａｔａ（ＤＳＭ  ２６６２）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｓｉｌｖａｃｅｔｉｃａ（ＤＳＭ  １０６６９）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ（ＤＳＭ  ２８７５）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｔｅｒｍｉｔｉｄａ（ＤＳＭ  ４４４０）及びＴｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｋｉｖｕｉ（ＤＳＭ  ２０３０）からなる群から選択されることを特徴とする、請求項８〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記第２の微生物が、少なくとも酵母、微小藻類及び／又は細菌であり、前記酵母が、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｃｕｔａｎｅｕｍ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉ、Ｃｒｙｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ及びＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａからなる群から選択され、前記微小藻類が、Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ  ｃｏｈｎｉｉであり、及び／又は、前記細菌が、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｎｅｃａｔｏｒ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｅｕｔｒｏｐｈａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａからなる群から選択されることを特徴とする、請求項８〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記置換又は未置換の有機化合物が、カルボン酸、ジカルボン酸、ヒドロキシカルボン酸、カルボン酸エステル、ヒドロキシカルボン酸エステル、アルコール、アルデヒド、ケトン、アミン及びアミノ酸からなる群から選択されることを特徴とする、請求項８〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の混合培養物の、置換又は未置換の有機化合物を製造するための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物の混合培養物（ｍｉｘｅｄ  ｃｕｌｔｕｒｅ）、前記微生物の混合培養物を使用して有機化合物を製造する方法並びに前記微生物の混合培養物の使用に関する。具体的には、前記微生物の混合培養物は、少なくとも酢酸生成微生物及び非酢酸生成微生物を含む。
【背景技術】
【０００２】
微生物学的プロセスを使用して有機化合物を合成する際に二酸化炭素を炭素源として使用することは周知である。通常、そのような方法は、酢酸塩及び／又はエタノールの生成と、生成された酢酸塩及び／又はエタノールの有機化合物への転化と、からなる２種類の補完的な代謝経路を含む。公知の方法では、異なる微生物による上記２種類の補完的な代謝経路を組み合わせて組み換え細胞において有機物質を製造することを試みている。
【０００３】
この場合、各微生物は特定の目的に使用され、適切に機能して各代謝反応を行うために所定の条件を必要とするため、いくつかの問題が生じる。すなわち、各微生物は最適な条件下と同様に効率的に機能しないため、これらの微生物を組み合わせて有機化合物を製造することは困難である。
【０００４】
そのため、現在使用されている方法では、各微生物を最適な条件下で機能させる二段階プロセスを使用して炭素源を合成して有機化合物を製造している。このような二段階プロセスでは、特定の代謝反応を行うように各微生物を最適な条件下で保持する２つのチャンバーを使用し、第１のチャンバーで得られた生成物を、第１の微生物が含まれないように第２のチャンバーに移動させる。このようなプロセスは手間がかかると共に、第１のチャンバーで得られた生成物を第２のチャンバーに移動させる際に損失が生じる場合があるため、通常はコストが増加する。また、代謝経路の完了や、第２の代謝経路を実施するために第１の生成物を第２のチャンバーに移動させるために時間や手間を要するため、上述した二段階プロセスは通常は効率が低い。特許文献１及び２は、二段階プロセスを使用して特定の炭化水素を製造する方法を開示している。
【０００５】
ＣＯ２を炭素源として使用すると共に、ＣＯ２を固定することができる微生物を使用し、特定の発酵パラメータを選択して、エタノール、ｎ−ブタノール又は２，３−ブタンジオール等の所望の単純な有機物質を合成する方法も知られている。例えば、特許文献３は、酢酸生成細菌を使用してエタノールを製造することを開示しており、特許文献４は、酢酸生成細菌を使用してブタンジオールを製造することを開示している。
【０００６】
しかしながら、これらの方法には、収率（収量）及び効率が低いという欠点がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１３／１６７６６３号
【特許文献２】国際公開第２０１３／０３６１４７号
【特許文献３】国際公開第２０００／６８４０７号
【特許文献４】国際公開第２０１２／０２４５２２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、従来技術の欠点の少なくとも１つを克服することができる方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、請求項に記載されている混合細胞培養物、方法並びに培養物の使用を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の利点としては、より好ましい原料のＣＯ２／ＣＯ混合物を使用することができることが挙げられる。原料供給源としては、天然ガス、バイオガス、石炭、石油、植物残渣等が挙げられる。
【００１１】
また、別の利点として、炭素収率が高いことが挙げられる。これは、生成したＣＯ２を使用することによって可能となる。すなわち、第一の段階においてＣＯ２を反応させて酢酸を生成することができる。
【００１２】
また、別の利点として、任意の酢酸生成微生物と非酢酸生成微生物の組み合わせを使用して不飽和又は飽和有機化合物を製造することができるため、発酵条件をより柔軟に設定することができることが挙げられる。
【００１３】
本発明のさらなる利点として、酢酸生成微生物は、酸素の存在下において機能及び／又は酸素の存在下において酢酸塩及び／又はエタノールを生成する場合があるため、炭素源から置換及び／又は未置換の有機化合物を製造する際に、酢酸生成微生物及び非酢酸生成微生物が均一混合物に存在していてもよいということが挙げられる。酢酸生成微生物を使用することにより、一段階のプロセスによって炭素源から置換及び／又は未置換の有機化合物を製造することができ、プロセスをより効率的なものとすると共に、収率を向上させることができる。予期せぬことに、酢酸生成微生物を使用することにより、有機化合物を製造する一段階のプロセスを、中間の分離工程を行うことなく、単一の発酵槽内で実施することができることが判明している。また、上記一段階のプロセスを使用して最終生成物の濃度を増加させることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の第１の態様は、水系培地中の第１及び第２の微生物の混合培養物であって、前記第１の微生物は、ＣＯ及び／又はＣＯ２を含む炭素源を酢酸塩及び／又はエタノールに転化させることができる酢酸生成微生物及び／又は独立栄養成長細胞であってもよく、前記第２の微生物は、酢酸塩及び／又はエタノールを代謝することができる非酢酸生成微生物であってもよく、前記第１及び第２の微生物は均一混合物を形成していてもよく、前記水系培地は酸素を含むことを特徴とする混合培養物を提供する。
【００１５】
本願明細書において使用する「均一混合物」という用語は、微生物が培地中に均一に分散している混合物を意味する。具体的には、混合物は、培地中に均一に分散している少なくとも２種類の微生物（酢酸生成微生物及び非酢酸生成微生物）を含むことができる。例えば、ほぼ同数の酢酸生成微生物及び非酢酸生成微生物が混合物に含まれていてもよい。あるいは、混合物には非酢酸生成微生物よりも多くの酢酸生成微生物が含まれていてもよい。あるいは、混合物には酢酸生成微生物よりも多くの非酢酸生成微生物が含まれていてもよい。いずれの場合であっても、微生物は、微生物が均一に分散している単一の均一混合物に含まれる。
【００１６】
本願明細書において使用する「酢酸塩」という用語は、酢酸及びその塩を意味する。これは、公知のように、微生物は水性環境において作用し、塩と酸とのバランスが常に存在するためである。
【００１７】
「第２の微生物」という用語は、本発明の各態様に係る「第１の微生物」とは異なる微生物を意味する。従って、本発明の各態様において、第１及び第２の微生物は異なる微生物である。
【００１８】
本発明の第２の態様は、少なくとも１種の有機化合物の製造方法であって、水系培地中において均一混合物を形成している第１及び第２の微生物の混合培養物を、炭素源及び酸素と接触させることを含み、前記第１の微生物は、炭素源を酢酸塩及び／又はエタノールに転化させることができる酢酸生成微生物であり、前記第２の微生物は、酢酸塩及び／又はエタノールを前記有機化合物に代謝することができる非酢酸生成微生物であることを特徴とする方法を提供する。
【００１９】
本発明の各態様に係る水系培地は、酸素を含む。酸素は、公知の任意の手段によって培地中に溶解させることができる。具体的には、酸素は、０．１〜３ｍｇ／Ｌの範囲で存在していてもよい。酸素は、０．１〜２．５ｍｇ／Ｌ、０．１〜２ｍｇ／Ｌ、０．１〜１．５ｍｇ／Ｌ又は０．５〜２．０ｍｇ／Ｌの範囲で存在していてもよい。
【００２０】
酸素は、連続ガス流によって水系培地に供給することができる。ガス流中の酸素濃度は、ガス流中の気体の全量の２１重量％未満であってもよい。具体的には、酸素は、０．０１〜１０重量％、０．０５〜１０重量％、０．１〜１０重量％、０．１〜９重量％、０．０５〜８重量％、特に０．０５〜６重量％の濃度で存在していてもよい。酢酸生成微生物は、気相中のＯ２の割合が０．０５〜６％である場合に特に適している。より具体的には、本発明の各態様に係る第１及び第２の微生物は、酸素濃度が気体の全量の２１重量％未満であって、０．０５〜６重量％の範囲であるガス流によって酸素を供給する場合に、水系培地中で最適に作用することができる。
【００２１】
本願明細書において使用する「酢酸生成微生物」という用語は、Ｗｏｏｄ−Ｌｊｕｎｇｄａｈｌ経路によってＣＯ、ＣＯ２及び／又は水素を酢酸塩に転化させることができる微生物を意味する。これらの微生物には、野生型ではＷｏｏｄ−Ｌｊｕｎｇｄａｈｌ経路を有していないが、遺伝子組み換えによってＷｏｏｄ−Ｌｊｕｎｇｄａｈｌ経路を有するようになる微生物も含まれる。酢酸生成微生物は、独立培養可能な任意の微生物であってもよい。酢酸生成微生物の例としては、Ａｃｅｔｏａｎａｅｒｏｂｉｕｍ  ｎｏｔｅｒａ（ＡＴＣＣ  ３５１９９）、Ａｃｅｔｏｎｅｍａ  ｌｏｎｇｕｍ（ＤＳＭ  ６５４０）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃａｒｂｉｎｏｌｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ２９２５）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｌｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ４１３２）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ｎｏ．４４６（Ｍｏｒｉｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ．、１９９０、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、Ｖｏｌ．１４、ｐ．１８７−１９４）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｗｉｅｒｉｎｇａｅ（ＤＳＭ  １９１１）、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｗｏｏｄｉｉ（ＤＳＭ  １０３０）、Ａｌｋａｌｉｂａｃｕｌｕｍ  ｂａｃｃｈｉ（ＤＳＭ  ２２１１２）、Ａｒｃｈａｅｏｇｌｏｂｕｓ  ｆｕｌｇｉｄｕｓ（ＤＳＭ  ４３０４）、Ｂｌａｕｔｉａ  ｐｒｏｄｕｃｔａ（ＤＳＭ  ２９５０、（旧称：Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｕｓ）（旧称：Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｕｓ））、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ３４６８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｃｅｔｉｃｕｍ（ＤＳＭ  １４９６）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｕｔｏｅｔｈａｎｏｇｅｎｕｍ（ＤＳＭ  １００６１、ＤＳＭ  １９６３０及びＤＳＭ  ２３６９３）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｘｉｄｉｖｏｒａｎｓ（ＤＳＭ  １５２４３）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃｏｓｋａｔｉｉ（ＡＴＣＣ  ｎｏ．ＰＴＡ−１０５２２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｄｒａｋｅｉ（ＡＴＣＣ  ＢＡ−６２３）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｆｏｒｍｉｃｏａｃｅｔｉｃｕｍ（ＤＳＭ  ９２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｇｌｙｃｏｌｉｃｕｍ（ＤＳＭ  １２８８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ（ＤＳＭ  １３５２８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  Ｃ−０１（ＡＴＣＣ  ５５９８８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  ＥＲＩ−２（ＡＴＣＣ  ５５３８０）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  Ｏ−５２（ＡＴＣＣ  ５５９８９）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｍａｙｏｍｂｅｉ（ＤＳＭ  ６５３９）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｖｏｒａｎｓ（ＤＳＭ  １２１８２）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｒａｇｓｄａｌｅｉ（ＤＳＭ  １５２４８）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｃａｔｏｌｏｇｅｎｅｓ（ＤＳＭ  ７５７）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐｅｃｉｅｓ  ＡＴＣＣ  ２９７９７（Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．、１９８６、Ｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ｃｏｍｍｕｎ．、Ｖｏｌ．４５、ｐ．６１−７３）、Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｋｕｚｎｅｔｓｏｖｉｉ（ＤＳＭ  ６１１５）��Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｂｅｚｏｉｃｕｍ  ｓｕｂｓｐ．  ｔｈｅｒｍｏｓｙｎｔｒｏｐｈｉｃｕｍ（ＤＳＭ  １４０５５）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｉｍｏｓｕｍ（ＤＳＭ  ２０５４３）、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ  ａｃｅｔｉｖｏｒａｎｓ  Ｃ２Ａ（ＤＳＭ  ２８３４）、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｓｐ．  ＨＵＣ２２−１（Ｓａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．、２００４、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｌｅｔ．、Ｖｏｌ．２９、ｐ．１６０７−１６１２）、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｔｈｅｒｍｏａｃｅｔｉｃａ（ＤＳＭ  ５２１、（旧称：Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｈｅｒｍｏａｃｅｔｉｃｕｍ））、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃａ（ＤＳＭ  １９７４）、Ｏｘｏｂａｃｔｅｒ  ｐｆｅｎｎｉｇｉｉ（ＤＳＭ  ３２２）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ａｅｒｉｖｏｒａｎｓ（ＤＳＭ  １３３２６）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｏｖａｔａ（ＤＳＭ  ２６６２）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｓｉｌｖａｃｅｔｉｃａ（ＤＳＭ  １０６６９）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ（ＤＳＭ  ２８７５）、Ｓｐｏｒｏｍｕｓａ  ｔｅｒｍｉｔｉｄａ（ＤＳＭ  ４４４０）及びＴｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｋｉｖｕｉ（ＤＳＭ  ２０３０、（旧称：Ａｃｅｔｏｇｅｎｉｕｍ  ｋｉｖｕｉ））が挙げられる。「非酢酸生成微生物」という用語は、Ｗｏｏｄ−Ｌｊｕｎｇｄａｈｌ経路を実現することができない微生物を意味する。
【００２２】
具体的には、本願明細書において使用する「非酢酸生成微生物」という用語は、公知のあらゆる非酢酸生成微生物を意味する。より具体的には、本願明細書において使用する「非酢酸生成微生物」という用語は、耐気性微生物、通性嫌気性生物、好気性微生物等に属する微生物を意味する。非酢酸生成細菌は、Ａｌｐｈａ  ｓｐ．、Ｐｅｒｌｕｃｉｄｉｂａｃａ  ｓｐ．、Ｔｈｉｏｔｈｒｉｘ  ｓｐ．、Ｊａｎｔｈｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｓｐｏｎｇｉｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．，Ｃｏｎｇｒｅｇｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｓａｌｉｐｉｇｅｒ  ｓｐ．、Ｔｈｅｒｍｏｂｉｆｉｄａ  ｓｐ．、Ａｎｏｘｙｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ａｇａｒｉｖｏｒａｎｓ  ｓｐ．、Ｄｅｓｍｏｓｐｏｒａ  ｓｐ．、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ  ｓｐ．、Ｌａｕｔｒｏｐｉａ  ｓｐ．、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｐ．、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｓｐ．、Ｌｅｕｃｏｔｈｒｉｘ  ｓｐ．、Ｔｈｉｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｐ．、Ｓｐｈｉｎｇｏｐｙｘｉｓ  ｓｐ．、Ｓｐｏｒｏｓａｒｃｉｎａ  ｓｐ．、Ｃｙｃｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｄｏｋｄｏｎｉａ  ｓｐ．、Ｂｌａｓｔｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｌｕｔｉｂａｃｕｌｕｍ  ｓｐ．、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ｂｅｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐ．、Ｈａｌｏｒｈｏｄｏｓｐｉｒａ  ｓｐ．、Ｎｏｖｏｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ｓａｎｄａｒａｋｉｎｏｒｈａｂｄｕｓ  ｓｐ．、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ｇａｍｍａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｓｐ．、Ｍａｒｉｎｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ａｆｉｐｉａ  ｓｐ．、Ｒｈｏｄｏｆｅｒａｘｓｐ．、Ｄｅｃｈｌｏｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｐｏｌａｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｆｅｒｒｉｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ａｎａｅｒｏｍｙｘｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｐｓｙｃｈｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．，Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｓｐ．、Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ  ｓｐ．  Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｏｃｅａｎｉｃａｕｌｉｓ  ｓｐ．、Ｒｕｂｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｓｏｌｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｃｈｒｏｍｏｈａｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｃｈｅｌａｔｉｖｏｒａｎｓ  ｓｐ．、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｓｐ．、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｍａｒｉｃａｕｌｉｓ  ｓｐ．、Ａｌｋａｌｉｌｉｍｎｉｃｏｌａ  ｓｐ．、Ｖｅｒｍｉｎｅｐｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｐ．、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐ．、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｒｈｏｄｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ  ｓｐ．、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｅｌｉｚａｂｅｔｈｋｉｎｇｉａ  ｓｐ．、Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔａ  ｓｐ．、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐ．、���ｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ  ｓｐ．、Ｌｏｋｔａｎｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｌｅｕｃｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｓｐ．、Ｓｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｒｕｂｅｌｌｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｖｉｂｒｉｏ  ｓｐ．、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｓｐ．、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ  ｓｐ．、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  ｓｐ．、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｎｉｔｒｉｎｃｏｌａ  ｓｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｓｐ．、Ｃａｓｔｅｌｌａｎｉｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｔｈａｌａｓｓｏｌｉｔｕｕｓ  ｓｐ．、Ｈｙｍｅｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｐｈａｇａ  ｓｐ．、Ｍｅｔｈｙｌｉｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ｇｒａｎｕｌｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｋｕｔｚｎｅｒｉａ  ｓｐ．、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｓｐ．、Ａｄｖｅｎｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｏｌｅｉｓｐｉｒａ  ｓｐ．、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｓｐ．、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．  Ａｌｃａｎｉｖｏｒａｘ  ｓｐ．、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．、Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ  ｓｐ．、Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｓｐ．、Ｓｉｍｉｄｕｉａ  ｓｐ．、Ｐｏｌａｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｐ．、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ｔｈｉｏａｌｋａｌｉｖｉｂｒｉｏ  ｓｐ．、Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ  ｓｐ．、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ｓｐ．、Ｇｏｒｄｏｎｉａ  ｓｐ．、Ｏｃｅａｎｉｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｒｕｃｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｃｏｌｌｉｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｏｌｉｇｏｔｒｏｐｈａ  ｓｐ．、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｓｔｉｇｍａｔｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｐａｎｔｏｅａ  ｓｐ．、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｐ．、Ｗａｄｄｌｉａ  ｓｐ．、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ  ｓｐ．、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ｊａｎｔｈｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ、Ｈｙｐｈｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｈａｈｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｃｏｌｗｅｌｌｉａ  ｓｐ．、Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｓｐ．、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｄｉｃｋｅｙ  ｓｐ．、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｒｏｓｅｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ  ｓｐ．、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ  ｓｐ．、Ｈｅｒｍｉｎｉｉｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｆｒａｎｋｉａ  ｓｐ．、Ａｒｏｍａｔｏｌｅｕｍ  ｓｐ．、Ｃｙｃｌｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ  ｓｐ．、Ｌａｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｂｒｅｖ��ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ｅｒｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｒｈｏｄｏｔｈｅｒｍｕｓ  ｓｐ．、Ｒｈｏｄａｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｔｈｉｏｃｙｓｔｉｓ  ｓｐ．、Ｓｕｌｆｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ｌｅｉｆｓｏｎｉａ  ｓｐ．、Ｏｃｅａｎｏｓｐｉｒｉｌｌａｌｅｓ  ｓｐ．、Ｍａｓｓｉｌｉａ  ｓｐ．、Ｒｈｅｉｎｈｅｉｍｅｒａ  ｓｐ．、Ｍｏｒｉｔｅｌｌａ  ｓｐ．、Ａｍｐｈｒｉｔｅａ  ｓｐ．、Ｔｅｒｅｄｉｎｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｏｘａｌｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ  ｓｐ．、Ｄａｓａｎｉ  ｓｐ．、Ｓａｌｉｎｉｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ａｈｒｅｎｓｉａ  ｓｐ．、Ｍｅｇａｎｅｍａ  ｓｐ．、Ｏｌｉｇｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｒｕｂｒｉｖｉｖａｘ  ｓｐ．  Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ｓｐ．、Ｌａｃｉｎｕｔｒｉｘ  ｓｐ．、Ｍｉｃｒｏｌｕｎａｔｕｓ  ｓｐ．、Ｉｓｏｐｔｅｒｉｃｏｌａ  ｓｐ．、Ｄｅｌｆｔｉａ  ｓｐ．、Ａｌｉｃｙｃｌｉｐｈｉｌｕｓ  ｓｐ．、Ｍａｒｉｎｉｔｈｅｒｍｕｓ  ｓｐ．、Ｔｈｅｒｍａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｍａｒｉｖｉｒｇａ  ｓｐ．、Ｃｒｏｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｐａｎｄｏｒａｅａ  ｓｐ．、Ｍｉｃｒｏｂｕｌｂｉｆｅｒ  ｓｐ．、Ｋｏｒｄｉｉｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｍｏｄｅｓｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｈａｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ａｚｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｐ．、Ａｌｉｉｖｉｂｒｉｏ  ｓｐ．、Ｋｏｃｕｒｉａ  ｓｐ．、Ａｚｏａｒｃｕｓ  ｓｐ．、Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ｄｅｒｍａｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ  ｓｐ．、Ｃｅｓｉｒｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｂｈａｒｇａｖａｅａ  ｓｐ．、Ａｃｉｄｏｃｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｃｅｃｅｍｂｉａ  ｓｐ．、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ  ｓｐ．、Ｂｒｅｎｎｅｒｉａ  ｓｐ．、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ  ｓｐ．、Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｓｐ．、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ａｓｔｉｃｃａｃａｕｌｉｓ  ｓｐ．、Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｓｐ．、Ｋｏｒｄｉａ  ｓｐ．、Ａｌｉｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｒｅｉｎｅｋｅａ  ｓｐ．、Ｏｃｅａｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｏｃｅａｎｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｐ．、Ｎｉｔｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｍｅｔｈｙｌａｃｉｄｉｐｈｉｌｕｍ  ｓｐ．、Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．、Ｐａｒａｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐ．、Ｔｈｉｏｒｈｏｄｏｓｐｉｒａ  ｓｐ．、Ｔｈｉｏｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．  Ｔｈｉｏｃａｐｓａ  ｓｐ．、Ｓｏｒａｎｇｉｕｍ  ｓｐ．、Ｅｒｗｉｎｉａ  ｓｐ．、Ｇｒｉｍｏｎｔｉａ  ｓｐ．、Ｖｉｂｒｉｏｎａｌｅｓ  ｓｐ．、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｌｌａ  ｓｐ．、Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｄａｌｅｓ  ｓｐ．、Ｂｅｒｍａｎｅｌｌａ  ｓｐ．及びＮｅｐｔｕｎｉｉｂａｃｔｅｒ  ｓｐ．からなる群から選択されてもよい。
【００２３】
非酢酸生成微生物の例としては、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｒｈｉｚｏｘｉｎｉｃａ、Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ  ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｏｖｉｓ、Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｃｅｎｔｅｎｕｍ、Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｒｂｏｒｉｃｏｌａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｎｏｃｅｐａｃｉａ、Ｒｈｏｄｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ  ｕｄａｉｐｕｒｅｎｓｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｆｕｌｖｉｓｓｉｍｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｅｎｔｅｒｉｃａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｂａｕｚａｎｅｎｓｉｓ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｌｕｔｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｅｕｄｏａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃａｒｉｂｅｎｓｉｓ、Ｂａｃｔｅｒｉｕｍ  Ｅｃ３２  （ＧＩ：６１０５１０２６１）、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｙｃｉｎｏｐｈｉｌｕｍ、Ｅｌｉｚａｂｅｔｈｋｉｎｇｉａ  ａｎｏｐｈｅｌｉｓ、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｈｏｌｍｅｓｉｉ、Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ  ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓ、Ｌｏｋｔａｎｅｌｌａ  ｈｏｎｇｋｏｎｇｅｎｓｉｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｈｉｎｅｌｌａ  ｚｏｏｇｌｏｅｏｉｄｅｓ、Ｒｕｂｅｌｌｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍ  ｍｅｓｏｐｈｉｌｕｍ、Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓ、Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ  ｃｒｅｓｃｅｎｔｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｆｉｓｃｈｅｒｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｍｅｇｍａｔｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｓｅｕｄｏｍａｌｌｅｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｏｅｌｉｃｏｌｏｒ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｉｔｉｄｉｓｍｕｔａｎｓ、Ｓａｌｉｎｉｓｐｈａｅｒａ  ｓｈａｂａｎｅｎｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｐｉｔｔｉｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｎｏｓｏｃｏｍｉａｌｉｓ、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｒｖａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｔｕｔｚｅｒｉ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｃｏｍｐｅｔｉｂａｃｔｅｒ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ａｃｃｕｍｕｌｉｂａｃｔｅｒ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ａｌｂｕｓ、Ｃａｓｔｅｌｌａｎｉｅｌｌａ  ｄｅｆｒａｇｒａｎｓ、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｌｉｌｏｔｉ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｈａｌａｓｓｏｌｉｔｕｕｓ  ｏｌｅｉｖｏｒａｎｓ、Ｈｙｍｅｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓｗｕｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ  ａｍｉｎｏｐｈｉｌｕｓ、Ｇｒａｎｕｌｉｂａｃｔｅｒ  ｂｅｔｈｅｓｄｅｎｓｉｓ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ、Ｋｕｔｚｎｅｒｉａ  ａｌｂｉｄａ、Ｎｏｃａｒｄｉａ  ｎｏｖａ、Ａｄｖｅｎｅｌｌａ  ｍｉｍｉｇａｒｄｅｆｏｒｄｅｎｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｉｃｈｏｒｉｉ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｓａｎｘａｎｉｇｅｎｅｎｓ、Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｆｒｅｄｉｉ、Ｏｌｅｉｓｐｉｒａ  ａｎｔａｒｃｔｉｃａ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｔｈａｉｌａｎｄｅｎｓｉｓ、Ｄｉｃｋｅｙａ  ｄａｄａｎｔｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  ｃｏｎｔｅｎｄｏｂａｃｔｅｒ、Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍａｃｌｅｏｄｉｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｔｅｒｃｏｒａｒｉｕｍ、Ｖａｒｉｏｖｏｒａｘ  ｐａｒａｄｏｘｕｓ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｅｔｌｉ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｐｌｙｍｕｔｈｉｃａ、Ｓｉｍｉｄｕｉａ  ａｇａｒｉｖｏｒａｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｒｏｔｅｇｅｎｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｉｆｌａｎｄｉｉ、Ｔｈｉｏａｌｋａｌｉｖｉｂｒｉｏ  ｎｉｔｒａｔｉｒｅｄｕｃｅｎｓ、Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ  ｉｃｔａｌｕｒｉ、Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ  ａｌｂａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｃｅｐａｃｉａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍａｓｓｉｌｉｅｎｓｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ、Ｇｏｒｄｏｎｉａ  ｐｏｌｙｉｓｏｐｒｅｎｉｖｏｒａｎｓ、Ｒｕｃｅｌｌａ  ｐｉｎｎｉｐｅｄｉａｌｉｓ、Ｃｏｌｌｉｍｏｎａｓ  ｆｕｎｇｉｖｏｒａｎｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｎｅｃａｔｏｒ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｒｅｓｉｓｔｅｎｓ、Ｏｌｉｇｏｔｒｏｐｈａ  ｃａｒｂｏｘｉｄｏｖｏｒａｎｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌｏｓｏｘｉｄａｎｓ、Ｓｔｉｇｍａｔｅｌｌａ  ａｕｒａｎｔｉａｃａ、Ｐａｎｔｏｅａ  ｖａｇａｎｓ、Ｈｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｏｌｅｉｖｏｒａｎｓ、Ｗａｄｄｌｉａ  ｃｈｏｎｄｒｏｐｈｉｌａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ、Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｐｕｎｉｃｅｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋｒｏｐｐｅｎｓｔｅｄｔｉｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｐｉｅｚｏｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｂｏｙｄｉｉ、Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ、Ｒｅｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓａｌｍｏｎｉｎａｒｕｍ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｏｖｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍａｌｌｅｉ、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｕｒｅｓｃｅｎｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕ��  ａｖｉｕｍ、Ｈｙｐｈｏｍｏｎａｓ  ｎｅｐｔｕｎｉｕｍ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｊｏｓｔｉｉ、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ  ｘａｎｔｈｕｓ、Ｈａｈｅｌｌａ  ｃｈｅｊｕｅｎｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｒｉｎｇａｅ、Ｃｏｌｗｅｌｌｉａ  ｐｓｙｃｈｒｅｒｙｔｈｒａｅａ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｐｅｌａｇｉｂａｃｔｅｒ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｅｓ、Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖｉｏｌａｃｅｕｍ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｌｃｅｒａｎｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｂｓｃｅｓｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃｈｅｌｏｎａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｘｅｎｏｐｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｋａｎｓａｓｉｉ、Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ  ｃａｂａｎｉｌｌａｓｉｉ、Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ  ｓｚｅｎｔｉｒｍａｉｉ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｎｉｇｒｉｐｕｌｃｈｒｉｔｕｄｏ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｍｅｔａｌｌｉｄｕｒａｎｓ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｗｉｔｔｉｃｈｉｉ、Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ  ｃｒｙｐｔｕｍ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｊｏｈｎｓｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｍｅｎｄｏｃｉｎａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｉｌｖｕｍ、Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｂａｃｔｅｒ  ｎｅｃｅｓｓａｒｉｅｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｖｉｅｔｎａｍｉｅｎｓｉｓ、Ｍｅｔｈｙｌｉｂｉｕｍ  ｐｅｔｒｏｌｅｉｐｈｉｌｕｍ、Ｖｅｒｍｉｎｅｐｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｅｉｓｅｎｉａｅ、Ｐｏｌａｒｏｍｏｎａｓ  ｎａｐｈｔｈａｌｅｎｉｖｏｒａｎｓ、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ｃｉｔｒｕｌｌｉ、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ａｑｕａｅｏｌｅｉ、Ｐｓｙｃｈｒｏｍｏｎａｓ  ｉｎｇｒａｈａｍｉｉ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ａｍａｚｏｎｅｎｓｉｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｒｕｔｈｉａ、Ｓｏｌｉｂａｃｔｅｒ  ｕｓｉｔａｔｕｓ、Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐａｌｕｓｔｒｉｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ａｍｂｉｆａｒｉａ、Ｍａｒｉｃａｕｌｉｓ  ｍａｒｉｓ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｆｒｉｇｉｄｉｍａｒｉｎａ、Ａｌｋａｌｉｌｉｍｎｉｃｏｌａ  ｅｈｒｌｉｃｈｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ａｔｌａｎｔｉｃａ、Ｒｕｂｒｏｂａｃｔｅｒ  ｘｙｌａｎｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓｐｈｉｎｇｏｐｙｘｉｓ  ａｌａｓｋｅｎｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｋｏｒｉｂａｃｔｅｒ、Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｒｙｏｈａｌｏｌｅｎｔｉｓ、Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｈａｍｂｕｒｇｅｎｓｉｓ、Ｃｈｒｏｍｏｈａｌｏｂａｃｔｅｒ  ｓａｌｅｘｉｇｅｎｓ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｘｅｎｏｖｏｒａｎｓ、Ｒｈｏｄｏｆｅｒａｘ  ｆｅｒｒｉｒｅｄｕｃｅｎｓ、Ｎｏｖｏｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ａｒｏｍａｔｉｃｉｖｏｒａｎｓ、Ａｎａｅｒｏｍｙｘｏｂａｃｔｅｒ  ｄｅｈａｌｏｇｅｎａｎｓ、Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｗｉｎｏｇｒａｄｓｋｙｉ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｅｕｔｒｏｐｈａ、Ｔｈｅｒｍｏｂｉｆｉｄａ  ｆｕｓｃａ、Ｄｅｃｈｌｏｒｏｍｏｎａｓ  ａｒｏ���ａｔｉｃ、Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｒｃｔｉｃｕｓ、Ｍａｒｉｎｏｍｏｎａｓ  ｕｓｈｕａｉｅｎｓｉｓ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓ、Ａｃｉｄｏｖｏｒａｘ  ａｖｅｎａｅ、Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ  ｔｅｍｐｅｒａｔｅ、Ｊａｎｔｈｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｇａｒｉｃｉｄａｍｎｏｓｕｍ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃｌｏａｃａｅ、Ｆｅｒｒｉｍｏｎａｓ  ｂａｌｅａｒｉｃａ、Ｇａｍｍａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｕｌｔｕｎｅｎｓｅ、Ａｌｐｈａ  ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｌｏｉｈｉｃａ、Ｈａｌｏｒｈｏｄｏｓｐｉｒａ  ｈａｌｏｐｈｉｌｅ、Ｃｏｎｇｒｅｇｉｂａｃｔｅｒ  ｌｉｔｏｒａｌｉｓ、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｌｏｔｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃａｅｎｉ、Ｓｐｏｎｇｉｉｂａｃｔｅｒ  ｔｒｏｐｉｃｕｓ、Ｐｅｒｌｕｃｉｄｉｂａｃａ  ｐｉｓｃｉｎａｅ、Ｌｅｕｃｏｔｈｒｉｘ  ｍｕｃｏｒ、Ｓａｎｄａｒａｋｉｎｏｒｈａｂｄｕｓ  ｌｉｍｎｏｐｈｉｌａ、Ｓｐｈｉｎｇｏｐｙｘｉｓ  ｂａｅｋｒｙｕｎｇｅｎｓｉｓ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ａｎｔｉｃａｒｉｅｎｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｅｌａｇｉａ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｒｕｔｈｅｎｉｃａ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｈａｕｓｅｒｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｂｅｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌｕｔｉｂａｃｕｌｕｍ  ｂａｒａｔａｎｇｅｎｓｅ、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｔｊｅｒｎｂｅｒｇｉａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｙｃｌｉｔｒｏｐｈｉｃｕｓ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｐｉｃｋｅｔｔｉｉ、Ｄｏｋｄｏｎｉａ  ｄｏｎｇｈａｅｎｓｉｓ、Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｑｕａｔｉｃｕｓ、Ｃｙｃｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｑａｓｉｍｉｉ、Ｓｐｏｒｏｓａｒｃｉｎａ  ｎｅｗｙｏｒｋｅｎｓｉｓ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｈｏｒｍａｅｃｈｅｉ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｂａｃｉｌｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｅｑｕｉ、Ｌａｕ
ｔｒｏｐｉａ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｅｎｉｔａｌｉｕｍ、Ｃｈｒｙｓｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｅｕｍ、Ｒｏｓｅｏｍｏｎａｓ  ｃｅｒｖｉｃａｌｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒａｓｃｒｏｆｕｌａｃｅｕｍ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ａｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ  ｐｉｅｃｈａｕｄｉｉ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｏｄｏｒｉｆｅｒａ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｊｅｉｋｅｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｅｆｆｉｃｉｅｎｓ、Ｐｒｏｔｅｕｓ  ｍｉｒａｂｉｌｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｏｆｌａｖｕｍ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ  ｓｔｕａｒｔｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｕｎｄｉｎａ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｓｐｏｎｇｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｒｕｂｒａ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｐｉｓｃｉｃｉｄａ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｍａｒｉｎａ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｃｉｔｒｅａ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ａｒｃｔｉｃａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｃａｎｅｔｔｉｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｖｅｎｅｚｕｅｌａｅ、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃｉｔｒｉ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｌｏｎｇａｔｅ、Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ  ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ、Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ  ｂｏｖｉｅｎｉｉ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｒｏｄｅｎｔｉｕｍ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｆｅｒｇｕｓｏｎｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ  ｅｒｙｔｈｒａｅａ、Ｈｅｒｍｉｎｉｉｍｏｎａｓ  ａｒｓｅｎｉｃｏｘｙｄａｎｓ、Ｆｒａｎｋｉａ  ａｌｎｉ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈａｌｏｐｌａｎｋｔｉｓ、Ａｒｏｍａｔｏｌｅｕｍ  ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ、Ｐａｎｔｏｅａ  ａｎａｎａｔｉｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｗａｄｓｗｏｒｔｈｉｉ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｕｍｍａｒｉｅｎｓｅ、Ｎｏｖｏｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｌｉｎｄａｎｉｃｌａｓｔｉｃｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｌａｃｔｏｓｕｔｅｎｓ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｑｕｉｓｑｕｉｌｉａｒｕｍ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｂａｄｅｒｉ、Ａｇａｒｉｖｏｒａｎｓ  ａｌｂｕｓ、Ｔｈｉｏｔｈｒｉｘ  ｎｉｖｅａ、Ｓａｌｉｐｉｇｅｒ  ｍｕｃｏｓｕｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｙｏｎｇｏｎｅｎｓｅ、Ｌａｒｉｂａｃｔｅｒ  ｈｏｎｇｋｏｎｇｅｎｓｉｓ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｏｐａｃｕｓ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ、Ｅｒｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｌｉｔｏｒａｌｉｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ、Ｄｅｃｈｌｏｒｏｍｏｎａｓ  ａｒｏｍａｔｉｃ、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｋａｕｓｔｏｐｈｉｌｕｓ、Ｔｈｉｏｃｙｓｔｉｓ  ｖｉｏｌａｓｃｅｎｓ、Ｓｕｌｆｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｉｕｓ、Ｌｅｉｆｓｏ���ｉａ  ｒｕｂｒａ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｃｈｉｎｈａｔｅｎｓｅ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｓｐｌｅｎｄｉｄｕｓ、Ｃｙｃｌｏｃｌａｓｔｉｃｕｓ  ｐｕｇｅｔｉｉ、Ｏｃｅａｎｏｓｐｉｒｉｌｌａｌｅｓ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｇａｍｍａ  ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍａｓｓｉｌｉａ  ｎｉａｓｔｅｎｓｉｓ、Ｒｈｅｉｎｈｅｉｍｅｒａ  ｐｅｒｌｕｃｉｄａ、Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｌｕｔｉｐｈｏｃａｅ、Ｏｃｅａｎｉｍｏｎａｓ  ｓｍｉｒｎｏｖｉｉ、Ｍｏｒｉｔｅｌｌａ  ｍａｒｉｎａ、Ａｍｐｈｒｉｔｅａ  ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｔｅｒｅｄｉｎｉｂａｃｔｅｒ  ｔｕｒｎｅｒａｅ、Ｏｘａｌｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｄａｓａｎｉａ  ｍａｒｉｎａ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｂｏｅｖｒｅｉ、Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ  ｍｅｌｏｎｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｃｏｌｗｅｌｌｉａ  ｐｉｅｚｏｐｈｉｌａ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｌｕｔｅａ、Ｓａｌｉｎｉｍｏｎａｓ  ｃｈｕｎｇｗｈｅｎｓｉｓ、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｒｈｉｚｏｐｈｉｌｕｍ、Ｐｏｌａｒｉｂａｃｔｅｒ  ｆｒａｎｚｍａｎｎｉｉ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｚｈａｎｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｌｃａｌｉｐｈｉｌａ、Ａｈｒｅｎｓｉａ  ｋｉｅｌｅｎｓｉｓ、Ｍｅｇａｎｅｍａ  ｐｅｒｉｄｅｒｏｅｄｅｓ、Ｏｌｉｇｅｌｌａ  ｕｒｅｏｌｙｔｉｃａ、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｘｅｎｏｐｈａｇｕｍ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｈａｓｓｉａｃｕｍ、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｅｌｋａｎｉｉ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｐｙｒｒｏｃｉｎｉａ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｂｒｅｏｇａｎｉｉ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｔａｓｍａｎｉｅｎｓｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｒａｓｓｏｓｔｒｅａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｋａｎａｌｏａｅ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｓｍｙｒｎｅｎｓｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｂｏｎｇｏｒｉ、Ｍａｒｉｎｏｍｏｎａｓ  ｐｏｓｉｄｏｎｉｃａ、Ｍａｒｉｎｏｍｏｎａｓ  ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａ、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｍａｒｉｃｏｐｅｎｓｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｒｕｂｒｉｖｉｖａｘ  ｇｅｌａｔｉｎｏｓｕｓ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ｎｉｔｒａｔｉｒｅｄｕｃｅｎｓ、Ｍｉｃｒｏｌｕｎａｔｕｓ  ｐｈｏｓｐｈｏｖｏｒｕｓ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｏｌｉｃｕｍ、Ｉｓｏｐｔｅｒｉｃｏｌａ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｆｕｌｖａ、Ａｌｉｃｙｃｌｉｐｈｉｌｕｓ  ｄｅｎｉｔｒｉｆｉｃａｎｓ、Ｍａｒｉｎｉｔｈｅｒｍｕｓ  ｈｙｄｒｏｔｈｅｒｍａｌｉｓ、Ａｃｉｄｉｐｈｉｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｖｏｒｕｍ、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎｉｖｏｒａｎｓ、Ｔｈｅｒｍｕｓ  ｓｃｏｔｏｄｕｃｔｕｓ、Ｔｈｅｒｍａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｍａｒｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｍａｒｉｖｉｒｇａ  ｔｒａｃｔｕｏｓａ、Ｃｒｏｎｏｂａｃｔｅｒ  ｔｕｒｉｃｅｎｓｉｓ、Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｒｉｌａｉｔｅｎｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｌｕｔｅｏｌａ、Ｍｉｃｒｏｂｕｌｂｉｆｅｒ  ｖａｒｉａｂｉｌｉｓ、Ｈａ��ｅｌｌａ  ｇａｎｇｈｗｅｎｓｉｓ、Ｋｏｒｄｉｉｍｏｎａｓ  ｇｗａｎｇｙａｎｇｅｎｓｉｓ、Ｏｌｉｇｅｌｌａ  ｕｒｅｔｈｒａｌｉｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｔａｉｗａｎｅｎｓｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｇｅｎｏｍｏｓｐ．、Ｖｉｂｒｉｏ  ｒｕｍｏｉｅｎｓｉｓ、Ｌｅｕｃｏｂａｃｔｅｒ  ｓａｌｓｉｃｉｕｓ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｓｔｅｖｅｎｓｉｉ、Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｙａｎｎｉｃｉｉ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｊｅｏｔｇａｌｉ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｒａｄｉｃｉｎｃｉｔａｎｓ、Ｍｏｄｅｓｔｏｂａｃｔｅｒ  ｍａｒｉｎｕｓ、Ｈａｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈａｌｏｐｈｉｌｕｓ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｂａｌｔｉｃａ、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ａｄｈａｅｒｅｎｓ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒａｎｃｈｉｏｐｈｉｌｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｖａｒｉａｂｉｌｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｆｒｉｃａｎｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｄａｖａｗｅｎｓｉｓ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｐｈｏｔｏｒｈａｂｄｕｓ  ａｓｙｍｂｉｏｔｉｃａ、Ａｌｉｉｖｉｂｒｉｏ  ｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｍｕｌｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｋｏｃｕｒｉａ  ｒｈｉｚｏｐｈｉｌａ、Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ  Ｓｏｌｉｂａｃｔｅｒ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｒｕｍ、Ａｌｃａｎｉｖｏｒａｘ  ｂｏｒｋｕｍｅｎｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｅｎｔｏｍｏｐｈｉｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｌａｕｓｉｉ、Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｏｃｅａｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｈｅｙｅｎｓｉｓ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｃｂｒｅｌｌｎｅｒｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｒａｄｉｏｒｅｓｉｓｔｅｎｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｏｆｌａｖｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｍｙｃｏｌａｔｕｍ、Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ  ｙｏｕｎｇａｅ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ  ｒｅｔｔｇｅｒｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｃａｎｃｅｒｏｇｅｎｕｓ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ  ｒｕｓｔｉｇｉａｎｉｉ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｉａ  ａｌｃａｌｉｆａｃｉｅｎｓ、Ｃｒｏｎｏｂａｃｔｅｒ  ｍａｌｏｎａｔｉｃｕｓ、Ｃｒｏｎｏｂａｃｔｅｒ  ｄｕｂｌｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃｒｏｎｏｂａｃｔｅｒ  ｕｎｉｖｅｒｓａｌｉｓ、Ｃｒｏｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓａｋａｚａｋｉｉ、Ｃｒｏｎｏｂａｃｔｅｒ  ｃｏｎｄｉｍｅｎｔ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｔｒｏｐｈａｅｕｓ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｍａｃａｃａｅ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｆｌａｖｉｐｕｌｃｈｒａ、Ｃｅｓｉｒｉｂａｃｔｅｒ  ａｎｄａｍａｎｅｎｓｉｓ、Ｍｅｓｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｔａｌｌｉｄｕｒａｎｓ、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｓａｎｔｏｒｉｎｉｅｎｓｉｓ、Ｂｈａｒｇａｖａｅａ  ｃｅｃｅｍｂｅｎｓｉｓ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ａｇａｒｉｌｙｔｉｃａ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ｃｈａｔｈａｍｅｎｓｉｓ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ａｌｃａｎｉｖｏｒａｘ  ｈ���ｎｇｄｅｎｇｅｎｓｉｓ、Ａｌｃａｎｉｖｏｒａｘ  ｐａｃｉｆｉｃｕｓ、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ  ｍｅｓｏａｍｅｒｉｃａｎｕｍ、Ｔｈｅｒｍａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｓｕｂｔｅｒｒａｎｅｕｓ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ａｒｃｔｉｃａ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ｍｅｓｏｐｈｉｌａ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ｐｏｌａｒｉｓ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌａ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｌｕｔｅｏｖｉｏｌａｃｅａ、Ａｎｏｘｙｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｉｔｈｅｒｍｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｒｈｏｄｅｓｉａｅ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ｐａｌｌｉｄｕｌａ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ａｇａｒｉｖｏｒａｎｓ、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｎａｎｈａｉｔｉｃｕｓ、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｇｌｕｃｏｓｉｄａｎｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓａｖａｓｔａｎｏｉ、Ｒｈｅｉｎｈｅｉｍｅｒａ  ｎａｎｈａｉｅｎｓｉｓ、Ｌｙｓｉｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｅｌｏｎｇａｔｅ、Ｃｅｃｅｍｂｉａ  ｌｏｎａｒｅｎｓｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｉｓｒｏｎｅｎｓｉｓ、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｌｖｅｉ、Ｋｉｎｇｅｌｌａ  ｋｉｎｇａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｃｈｌｏｒｏｒａｐｈｉｓ、Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｂｒｅｖｕｎｄｉｍｏｎａｓ  ｄｉｍｉｎｕｔａ、Ａｓｔｉｃｃａｃａｕｌｉｓ  ｂｉｐｒｏｓｔｈｅｃｕｍ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｃｌａｖｕｌｉｇｅｒｕｓ、Ｋｏｓａｋｏｎｉａ  ｒａｄｉｃｉｎｃｉｔａｎｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ａｌｂｅｒｔｉｉ、Ｋｏｒｄｉａ  ａｌｇｉｃｉｄａ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｈａｒｖｅｙｉ、ｍａｒｉｎｅ  ｇａｍｍａ  ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｇｌａｃｉｅｃｏｌａ  ｐｕｎｉｃｅａ、Ａｌｉｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ａｇｒｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｓｙｎｘａｎｔｈａ、Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ  ｔｅｒｒａｅ、Ｓｐｈｉｎｇｏｂｉｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｖｉｂｒｉｏ  ａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉ
ｏ  ａｎｇｕｓｔｕｍ、Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐｒｏｆｕｎｄｕｍ、Ｎｉｔｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｍｏｂｉｌｉｓ、Ｏｃｅａｎｉｃａｕｌｉｓ  ａｌｅｘａｎｄｒｉｉ、Ｍｅｔｈｙｌａｃｉｄｉｐｈｉｌｕｍ  ｆｕｍａｒｉｏｌｉｃｕｍ、Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ  ｖｉｎｅｌａｎｄｉｉ、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｆｒｉｇｏｒｉｓ、Ｐａｎｔｏｅａ  ｓｔｅｗａｒｔｉｉ、Ｐａｒａｃｈｌａｍｙｄｉａ  ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａｅ、Ａｌｉｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｊｅｏｔｇａｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｓｙｃｈｒｏｔｏｌｅｒａｎｓ、Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｇｕｓｔｕｍ、Ｍａｒｉｎｏｂａｃｔｅｒ  ｍａｎｇａｎｏｘｙｄａｎｓ、Ｔｈｉｏｒｈｏｄｏｓｐｉｒａ  ｓｉｂｉｒｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｈａｙｅｇａｎｉｉ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｙｚｙｇｉｉ、ｂｌｏｏｄ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｔｈｉｏｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｒｅｗｓｉｉ、Ｔｈｉｏｃａｐｓａ  ｍａｒｉｎａ、Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｇａｒｄｎｅｒｉ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｐｅｒｆｏｒａｎｓ、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ  ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｔｒｉｉ、Ｓｏｒａｎｇｉｕｍ  ｃｅｌｌｕｌｏｓｕｍ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｉｎｏｐｉｎａｔａ、Ｅｒｗｉｎｉａ  ｂｉｌｌｉｎｇｉａｅ、Ｐｈｏｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄａｍｓｅｌａｅ、Ｇｒｉｍｏｎｔｉａ  ｈｏｌｌｉｓａｅ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｍｉｍｉｃｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｆｕｒｎｉｓｓｉｉ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｍｅｔｓｃｈｎｉｋｏｖｉｉ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｏｒａｌｌｉｉｌｙｔｉｃｕｓ、Ａｚｏａｒｃｕｓ  ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ、Ｅｒｗｉｎｉａ  ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ、Ｖｉｂｒｉｏ  ａｌｂｅｎｓｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｂｅｎｔｈｉｃａ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃａｍｐｂｅｌｌｉｉ、Ｖｉｂｒｉｏｎａｌｅｓ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｃｉｌｌａ  ｍａｒｉｎａ、Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｄａｌｅｓ  ｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｓｃｉａｎｓ、Ｂｅｒｍａｎｅｌｌａ  ｍａｒｉｓｒｕｂｒｉ、Ｎｅｐｔｕｎｉｉｂａｃｔｅｒ  ｃａｅｓａｒｉｅｎｓｉｓ、Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｔｕｎｉｃａｔｅ、Ｒｅｉｎｅｋｅａ  ｂｌａｎｄｅｎｓｉｓ、Ｒｕｂｅｌｌｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ等が挙げられる。なお、非酢酸生成微生物はこれらの例に限定されるものではない。
【００２４】
具体的には、非酢酸生成細菌は、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｎｅｃａｔｏｒ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａからなる群から選択されてもよい。
【００２５】
本願明細書において使用する「好気性微生物」という用語は、生存及び成長に好気性条件（すなわち、酸素の存在）を必要とする微生物を意味する。「好気性条件」とは、好気性微生物を最終電子受容体（ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ａｃｃｅｐｔｏｒ）として使用するために十分な培地中の酸素濃度を意味する。そのような微生物としては、例えば、Ｅ．  ｃｏｌｉ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ細胞が挙げられる。
【００２６】
本願明細書において使用する「耐気性微生物」という用語は、代謝の発酵型によって特徴付けられる特殊な嫌気性細菌である耐気性嫌気性細菌を意味する。これらの細菌は、環境中における酸素の存在にかかわらず、発酵のみによって生存する。具体的には、耐気性微生物又は嫌気性細菌は、成長のために酸素を使用することはできないが、酸素の存在には耐えることができる。耐気性嫌気性細菌の例としては、Ｄｅｓｕｌｆｏｍｏｎａｓ、Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｎｅｃａｔｏｒ及びＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍが挙げられる。なお、耐気性嫌気性細菌はこれらの例に限定されない。
【００２７】
本願明細書において使用する「通性嫌気性生物」という用語は、酸素が存在する場合には好気性呼吸によってＡＴＰを産生するが、酸素が存在しない場合には発酵又は無気呼吸を行うことができる生物を意味する。通性嫌気性細菌の例としては、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｓｐ．及びＳｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓが挙げられる。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ等の菌類及び多毛類（Ｎｅｒｅｉｄ（ｗｏｒｍ）  ｐｏｌｙｃｈａｅｔｅ）等の多くの水生無脊椎動物を含むある種の真核生物も通性嫌気性生物である。
【００２８】
本発明の各態様に係る均一混合物は、培養物の混合物を含むことができる。例えば、均一混合物は、少なくとも１種の酢酸生成微生物と、少なくとも好気性微生物と、を含むことができる。あるいは、混合物は、少なくとも１種の酢酸生成微生物及び耐気性微生物又は酢酸生成微生物、好気性微生物及び耐気性微生物等を含むことができる。当業者は、均一混合物における細胞の種類を変更して収率を最大とすることができる。
【００２９】
特記しない限り、「％」は「質量％」を意味する。
【００３０】
二酸化炭素及び／又は一酸化炭素を含む基材の供給源に関しては、ＣＯ及び／又はＣＯ２を供給する様々な炭素源を使用することができる。本発明の炭素源としては、ＣＯ及び／又はＣＯ２の供給源から酢酸塩及び／又はエタノールを生成することができるように微生物に十分な量の炭素を供給することができるあらゆる気体又は気体混合物を使用することができる。
【００３１】
通常、本発明の混合培養物に使用する場合には、炭素源は、混合培養物中の第１の微生物に利用可能な全炭素源に対して、少なくとも５０重量％、少なくとも７０重量％、好ましくは少なくとも９０重量％のＣＯ２及び／又はＣＯを含む。
【００３２】
本発明の各態様に係る混合培養物には、炭素材料供給源を使用することができる。気体状の炭素源の例としては、合成ガス、煙道ガス、製油所ガス、酵母発酵又はクロストリジウム発酵によって生成するガス等の排出ガスが挙げられる。これらの排出ガスは、セルロース含有材料のガス化又は石炭のガス化によって形成される。
【００３３】
例えば、これらの排出ガスは、必ずしも他の処理の副生成物として生成されるガスではなくともよく、本発明の混合培養物に使用するために生成されたガスであってもよい。
【００３４】
本発明の各態様では、炭素源は合成ガスであってもよい。例えば、合成ガスは、石炭のガス化の副生成物として生成することができる。従って、本発明の各態様に係る混合培養物の微生物は、廃棄物である物質を価値のあるリソースに転化させることができるものであってもよい。
【００３５】
あるいは、合成ガスは、本発明の混合培養物と共に使用して置換及び未置換の有機化合物を製造するための、広範に入手可能で安価な農業原料のガス化の副生成物であってもよい。
【００３６】
ほぼ全ての植物を合成ガスに転化するために使用することができるため、数多くの材料を合成ガスに転化することができる原料として使用することができる。具体的には、原料は、ススキ等の多年生草、トウモロコシ残渣、おがくず等の加工廃棄物等からなる群から選択される。
【００３７】
通常、合成ガスは、主に熱分解、部分酸化及び水蒸気改質により、ガス化装置を使用した乾燥バイオマスのガス化によって得ることができ、合成ガスの一次生成物はＣＯ、Ｈ２及びＣＯ２である。
【００３８】
通常、生成物の収率を最適化すると共にタールの生成を回避するために、ガス化プロセスによって得られた合成ガスの一部を最初に処理する。合成ガス中の望ましくないタール及びＣＯの分解は、石灰及び／又はドロマイトを使用して行うことができる。このようなプロセスは、例えば、Ｒｅｅｄ，１９８１に詳細に記載されている。
【００３９】
炭素源の混合物を供給源を炭素源としてすることができる。
【００４０】
本発明の各態様では、水素等の還元剤を炭素源と共に供給することができる。具体的には、Ｃ及び／又はＣＯ２を供給及び／又は使用する際に水素を供給することができる。例えば、本発明の各態様において、水素ガスを合成ガスの一部として使用する。あるいは、合成ガス中の水素ガスが本発明の方法には不十分である場合には、水素ガスをさらに供給することができる。
【００４１】
当業者には、本発明の方法を実施するためのその他の条件は明らかであると思われる。具体的には、容器（発酵槽等）内における条件は、使用する第１及び第２の微生物に応じて変更することができる。当業者であれば、微生物が最適に機能するように条件を適宜変更することができると思われる。
【００４２】
例えば、本発明の方法は、水系培地内において５〜８又は５．５〜７のｐＨで実施することができる。圧力は、１〜１０バールとすることができる。
【００４３】
水系培地は、酸素と、ＣＯ及び／又はＣＯ２を含む炭素供給源と、を含むことができる。より具体的には、酸素と、ＣＯ及び／又はＣＯ２を含む炭素源とを、連続ガス流によって水系培地に供給する。さらに具体的には、連続ガス流は、合成ガス及び酸素を含む。例えば、合成ガス及び酸素は、同一のガス流／ストリームの一部である。あるいは、合成ガス及び酸素は、別々のガス流／ストリームとして水系培地に供給する。合成ガス及び酸素は、例えば、水系培地に開口する別々のノズル、フリット、ガスを水系培地に供給するパイプ内の膜等を使用して分離することができる。
【００４４】
本発明の各態様において、例えば、合成ガスは、水系培地に供給する前に酸素ガスと混合することができる。このような混合工程により、効率並びに反応による有機化合物の生成を向上させることができる。本発明の方法の総合的な効率、アルコール生産性及び／又は総合的な炭素捕捉性は、連続ガス流中のＣＯ２、ＣＯ、Ｈ２及びＯ２の化学量論に依存する。連続ガス流は、Ｏ２、ＣＯ２及びＨ２からなる組成を有することができる。具体的には、連続ガス流中におけるＯ２濃度は０．０５〜６重量％であってもよく、連続ガス流中におけるＣＯ２濃度は約１０〜５０重量％（特に３３重量％）であってもよく、連続ガス流中におけるＨ２濃度は約４４〜８４重量％（特に６４〜６６．０４重量％）であってもよい。より具体的には、連続ガス流中におけるＯ２ガス濃度は４重量％であってもよく、連続ガス流中におけるＣＯ２ガス濃度は３２重量％であってもよく、連続ガス流中におけるＨ２ガス濃度は６４重量％であってもよい。連続ガスは、Ｎ２等の不活性ガスを５０重量％以下の濃度で含んでいてもよい。
【００４５】
混合前のストリームの組成及び流量を監視する必要がある場合がある。混合ストリームの組成の制御は、目標又は所望の組成となるように構成ストリームの割合を変更することによって行うことができる。混合ストリームの組成及び流量は、公知の手段によって監視することができる。例えば、少なくとも２種類のストリームの流量及び組成を連続的に監視し、それらを混合して最適な組成の連続ガス流において単一の混合ストリームを生成する装置や、最適化されたストリームを本発明の混合培養物に通過させる手段を使用することができる。
【００４６】
特に、第１の微生物、酢酸生成微生物、第２の微生物及び酢酸又はエタノールを好気的に代謝する微生物、酸素及び一酸化炭素又は二酸化炭素と水素の混合物の気体混合物の混合物と、公知のバイオリアクター又は発酵槽を使用して本発明を実施することができる。
【００４７】
ＣＯ２及び／又はＣＯを酢酸塩及び／又はエタノール（特に酢酸塩）に転化させる微生物並びにこの代謝反応を行うための適切な処理及びプロセス条件は周知である。そのようなプロセスは、例えば、国際公開第９８／００５５８号、国際公開第２０００／０１４０５２号、国際公開第２０１０１１５０５４号、Ｄｅｍｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｙｏｕｎｅｓｉａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｍｏｒｉｎａｇａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｌｉ、Ｓｃｈｍｉｄｔ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓｉｍ  ｅｔ  ａｌ．、Ｖｅｇａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｏｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．及びＡｎｄｒｅｅｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．に記載されている。
【００４８】
本発明の各態様に係る混合培養物に含まれる第１の微生物は、少なくとも１種の酢酸生成細菌であってもよい。酢酸生成細菌は、ＣＯ２の最終電子受容体として使用することができ、酢酸塩又はエタノールを生成する酢酸生成嫌気性原核生物である。現在、２１種類の酢酸生成細菌が知られており（Ｄｒａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）、クロストリジウム属細菌も含まれる場合がある（Ｄｒａｋｅ  ＆  Ｋｕｓｅｌ，２００５）。これらの細菌は、炭素として二酸化炭素又は一酸化炭素を使用し、エネルギー源として水素を使用することができる（Ｗｏｏｄ，１９９１）。また、アルコール、アルデヒド、カルボン酸及び多くのヘキソースも炭素源として使用することができる（Ｄｒａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。酢酸塩を生成する還元経路は、アセチル−ＣｏＡ又はＷｏｏｄ−Ｌｊｕｎｇｄａｈｌ経路と呼ばれる。
【００４９】
本発明の各態様において、第１の微生物は、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｕｔｏｔｈｅｎｏｇｅｎｕｍ  ＤＳＭＺ  １９６３０、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｒａｇｓｄａｈｌｅｉ  ＡＴＣＣ  ｎｏ．ＢＡＡ−６２２、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｕｔｏｅｔｈａｎｏｇｅｎｕｍ、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｓｐ．  ＨＵＣ２２−１、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｔｈｅｒｍｏａｃｅｔｉｃｕｍ、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｔｈｅｒｍｏａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃａ、Ｒｕｍｉｃｏｃｃｕｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｕｓ、Ａｃｅｔｏａｎａｅｒｏｂｕｍ、Ｏｘｏｂａｃｔｅｒ  ｐｆｅｎｎｉｇｉｉ、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ  ｂａｒｋｅｒｉ、Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａ  ａｃｅｔｉｖｏｒａｎｓ、Ｃａｒｂｏｘｙｄｏｔｈｅｒｍｕｓ、Ｄｅｓｕｌｆｏｔｏｍａｃｕｌｕｍ  ｋｕｔｚｎｅｔｓｏｖｉｉ、Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ  ＡＴＣＣ  ３３２６６、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｆｏｒｍｉｃｏａｃｅｔｉｃｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ、Ｌａｋｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｄｅｌｂｒｕｋｉｉ、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｉｄｏｐｒｐｒｉｏｎｉｃｉ、Ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｓｐｅｒａ  ａｒｂｏｒｉｓ、Ａｎａｅｒｏｂｉｅｒｓｐｉｒｉｌｌｕｍ  ｓｕｃｃｉｎｉｐｒｏｄｕｃｅｎｓ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ  ａｍｙｌｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂｅｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ  ｒｕｍｉｎｉｃｏｌａ、Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ｋｉｖｕｉ、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｗｏｏｄｉｉ、Ａｃｅｔｏａｎａｅｒｏｂｉｕｍ  ｎｏｔｅｒａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｃｅｔｉｃｕｍ、Ｂｕｔｙｒｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｍｅｔｈｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃｕｍ、Ｍｏｏｒｅｌｌａ  ｔｈｅｒｍｏａｃｅｔｉｃａ、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｉｍｏｓｕｍ、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ＡＴＣＣ  ２９７９７及びＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｘｉｄｉｖｏｒａｎｓからなる群から選択される酢酸生成微生物であってもよい。特に、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｘｉｄｉｖｏｒａｎｓのＡＴＣＣ  ＢＡＡ−６２４株を使用することができる。より具体的には、例えば、米国特許出願公開第２００７／０２７５４４７号及び米国特許出願公開第２００８／００５７５５４号に記載されている、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｃａｒｂｏｘｉｄｉｖｏｒａｎｓの「Ｐ７」及び「Ｐ１１」株を使用することができる。
【００５０】
また、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉも特に好適な微生物である。より具体的には、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  ＰＥＴＣ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  ＥＲＩ２、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  ＣＯＬ及びＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  Ｏ−５２からなる群から選択される株を、本発明の混合培養物に含まれる第１の微生物として選択することができる。これらの株は、例えば、国際公開第９８／００５５８号、国際公開第００／６８４０７号、ＡＴＣＣ  ４９５８７、ＡＴＣＣ  ５５９８８及びＡＴＣＣ  ５５９８９に記載されている。
【００５１】
例えば、混合培養物に含まれる第１の微生物は、ＡＴＣＣ  ＢＡＡ−１７７２  Ａｌｋａｌｉｂａｃｕｌｕｍ  Ｂａｃｃｈｉ、Ｍｏｏｒ  Ｅｌｌａ  ｓｐ．  ＨＵＣ２２−１、ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ  Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｒａｇｓｄａｈｌｅｉ及びＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ａｕｔｏｅｔｈａｎｏｇｅｎｕｍからなる群から選択することができる。上記微生物を使用してエタノール及び／又は酢酸塩を製造する方法は、例えば、Ｓａｘｅｎａ  ｅｔ  ａｌ．、Ｙｏｕｎｅｓｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｓａｋａｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ａｂｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．等に開示されている。
【００５２】
第１の微生物は、第２の非酢酸生成微生物の存在下において好気性条件下で機能する微生物であってもよい。
【００５３】
本発明の各態様によれば、酢酸塩及び／又はエタノール、特に酢酸塩を混合培養物中において第２の微生物と反応させて少なくとも１種の置換及び／又は未置換の有機化合物を製造する。第２の微生物は、酢酸塩及び／又はエタノール、特に酢酸塩を利用するグリオキシル酸サイクルが生じる微生物であってもよい。
【００５４】
具体的には、第２の微生物は、非酢酸生成微生物であってもよく、酵母、微小藻類及び／又は細菌であってもよい。より具体的には、第２の微生物は、微生物の野生型と比較して、微生物の遺伝子に関して置換及び／又は未置換の有機化合物の収率が特に最適化された遺伝子組み換え株であってもよい。この場合、第２の微生物は、野生型と比較して少なくともチオエステラーゼの活性が高い。「野生型と比較して活性が高い」とは、高い活性を有するように微生物が遺伝子組み換えされていることを意味する。当業者であれば、第２の微生物におけるチオエステラーゼの過剰発現又は外因性チオエステラーゼの発現を適用することができることを理解されるだろう。具体的には、チオエステラーゼは、アシルＡＣＰチオエステラーゼ、ＥＣ３．１．２．１４又はＥＣ３．１．２．２２及びアシルＣｏＡチオエステラーゼ、特にＥＣ３．１．２．２、ＥＣ３．１．２．１８、ＥＣ３．１．２．１９、ＥＣ３．１．２．２０又はＥＣ３．１．２．２２から選択されてもよい。本発明の各態様に係る別の例において使用することができる第２の微生物の例は、国際公開第２０１０／１１８４１０号、国際公開第２０１０／０７５４８３号、国際公開第２００８／１１９０８２号及び国際公開第２００７／１３６７６２号に記載されている。これらの文献は、上記チオエステラーゼに関連して上記微生物を開示している。
【００５５】
第２の微生物に適した標的分子及びプロセスを実施するための条件は当業者には明らかであると思われる。
【００５６】
より具体的には、第２の微生物は酵母であってもよく、酵母は、油性の酵母及び／又はＣａｎｄｉｄａ、Ｌｉｐｏｍｙｃｅｓ、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｈｔｍ、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎａｃｅａｅ、Ｙａｒｒｏｗｉａ及びＣｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓからなる群から選択される酵母であってもよい。特に、酵母は、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｃｕｔａｎｅｕｍ、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ  ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉ、Ｃｒｙｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ及びＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａからなる群から選択されてもよい。
【００５７】
第２の微生物は微小藻類であってもよく、微小藻類はＣｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ  ｃｏｈｎｉｉであってもよい。
【００５８】
例えば、第２の微生物は細菌であってもよく、細菌は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐ．、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｓｐ．、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｓｐ．、Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ  ｓｐ．、Ｄｅｓｕｌｆｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．、Ｂｕｔｙｒｉｖｉｂｒｉｏ  ｓｐ．、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｓｐ．及びＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．からなる群から選択されてもよい。具体的には、細菌は、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｎｅｃａｔｏｒ、Ｒａｌｓｔｏｎｉａ  ｅｕｔｒｏｐｈａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａからなる群から選択されてもよい。
【００５９】
より具体的には、第２の微生物は、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ、Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｕｍ  ｃｏｈｎｉｉ、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ  ｖａｒｉｏｔｉ、Ｈａｌｏｍｏｎａｓ  ｂｏｌｉｖｉｅｎｓｉｓ、Ｃｒｙｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｕｒｖａｔｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｃｕｐｒｉａｖｉｄｕｓ  ｎｅｃａｔｏｒ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｋｌｕｙｖｅｒｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ｐｕｔｉｄａ及びＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａからなる群から選択されてもよい。
【００６０】
本発明の各態様に係る方法は、発酵のために第２の微生物と反応させる中間生成物（エタノール及び／又は酢酸塩）を除去する工程が必要ではないため、特に有利な場合がある。全ての反応は単一の容器内において生じるため、プロセスをより効率的に実施すると共に、除去工程による中間生成物の損失を減少させることができる。
【００６１】
本発明の各態様によれば、酢酸塩及び／又はエタノール、特に酢酸塩を混合培養物中において少なくとも１種の第２の微生物と反応させて少なくとも１種の置換及び／又は未置換の有機化合物を製造することができる。
【００６２】
置換及び／又は未置換の有機化合物は、カルボン酸、ジカルボン酸、ヒドロキシカルボン酸、カルボン酸エステル、ヒドロキシカルボン酸エステル、アルコール、アルデヒド、ケトン、アミン、アミノ酸等からなる群から選択されてもよい。これらの有機化合物は、４〜３２個、６〜２０個又は８〜１２個の炭素原子を含む。具体的には、有機化合物は、３−ヒドロキシイソ酪酸、酢酸塩、メタン酸塩、脂肪酸（Ｃ８〜Ｃ１２）、コハク酸塩等であってもよい。
【００６３】
より具体的には、本発明の混合培養物によって製造する有機化合物は、カルボン酸、ヒドロキシカルボン酸及び／又はカルボン酸エステルである。本発明の方法を使用して製造する最終生成物の濃度は、本発明の方法の実施時における中間生成物である酢酸塩又はエタノールの濃度を超える場合がある。
【００６４】
本発明に係る方法は、置換又は未置換の有機化合物を分離及び／又は精製する工程をさらに含むことができる。分離及び／又は精製に使用する方法としては、公知の任意の方法を使用することができる。具体的には、有機化合物を分離する工程は、沈殿、遠心分離又は培地の濾過による微生物の除去を含む。
【００６５】
本発明の別の態様は、本発明に係る混合培養物の、置換又は未置換の有機化合物の製造のための使用を提供する。
【実施例】
【００６６】
好適な実施形態について説明したが、好適な実施形態には、請求項の範囲から逸脱することなく、設計、構成又は操作に関して様々な変更又は変形を行うことができる。これらの変更又は変形も請求項の範囲に含まれる。
【００６７】
実施例１
混合製造法を使用した合成ガスからの３−ヒドロキシイソ酪酸（３ＨＩＢ）の製造
【００６８】
欧州特許出願公開第２６０２３２９Ａ１号の実施例１の工程１〜３を実施して３−ヒドロキシイソ酪酸デヒドロゲナーゼ活性が弱められたＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞Ｈ２２２−４１を得た。得られた細胞を「Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ  Ｈ２２−４１Δ３ＨＩＢＤＨ（ｕｒａ）−８」と呼ぶ。
【００６９】
合成ガス（０．６％Ｏ２、３３％ＣＯ２、６６．４％Ｈ２）を生体内変化させて３ＨＩＢを形成するために、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ（ＤＳＭＺ１３５２８）及びＹａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ  Ｈ２２−４１Δ３ＨＩＢＤＨ（ｕｒａ）−８を使用した。これらの株は別々に培養した。Ｃ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉの場合には、特記しない限り、アッセイ及び実験は嫌気的条件下で実施した。
【００７０】
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉは、酸素を含む環境下で成長させた。５ｍＬのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ培養物を、５００ｍＬのＡＴＣＣ１７５４培地（ｐＨ：６．０、２０ｇ／ＬのＭＥＳ、１ｇ／Ｌの酵母抽出物、０．８ｇ／ＬのＮａＣｌ、１ｇ／ＬのＮＨ４Ｃｌ、０．１ｇ／ＬのＫＣｌ、０．１ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、０．２ｇ／ＬのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．０２ｇ／ＬのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、２０ｍｇ／Ｌのニトリロ三酢酸、１０ｍｇ／ＬのＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ、８ｍｇ／Ｌの（ＮＨ４）２Ｆｅ（ＳＯ４）２・６Ｈ２Ｏ、ＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、２ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＳｅＯ４、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＷＯ４・２Ｈ２Ｏ、２０μｇ／Ｌのｄ−ビオチン、２０μｇ／Ｌの葉酸、１００μｇ／Ｌのピリドキシン−ＨＣｌ、５０μｇ／Ｌのチアミン−ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ、５０μｇ／Ｌのリボフラビン、５０μｇ／Ｌのニコチン酸、５０μｇ／ＬのＣａ−パントテン酸、１μｇ／ＬのビタミンＢ１２、５０μｇ／Ｌのｐ−アミノ安息香酸、５０μｇ／Ｌのリポ酸、約６７．５ｍｇ／ＬのＮａＯＨ（ｐＨ調整用）、４００ｍｇ／ＬのＬ−システイン−ＨＣｌ）と混合した。ガス（６６．８５％のＨ２、３３％のＣＯ２、０．１５％のＯ２）を培養物に供給（１Ｌ／ｈ、３７℃、１００ｒｐｍ、１４０時間）し、ブチルゴム製のストッパーを使用して密封した耐圧ガラス瓶内において培養した。
【００７１】
次に、培養物を２００ｍＬのＡＴＣＣ１７５４培地（ＯＤ：０．２）に播種し、気体混合物（６６．４％のＨ２、３３％のＣＯ２、０．６％のＯ２）を１Ｌ／ｈで供給しながら２〜３日間培養した。第１の培養物から、Ｏ２適応（Ｏ２−ａｄａｐｔｅｄ）Ｃ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉの低温培養物を形成した。４ｍＬの培養液を１ｍＬの２５％ＤＭＳＯ溶液と混合し、後に使用するために−８０℃で冷凍した。
【００７２】
５ｍＬのＯ２適応Ｃ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉの低温培養物を２００ｍＬのＡＴＣＣ１７５４培地に添加し、合成ガス（６６．１％のＨ２、３３．３％のＣＯ２、０．６％のＯ２）を１Ｌ／ｈで供給しながら３７℃及び１００ｒｐｍで３〜６日間培養した。
【００７３】
Ｙａｒｒｏｗｉａ  ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ細胞Ｈ２２２−４１Δ３ＨＩＢＤＨ（ｕｒａ）−８を、ＹＰＤ培地（１０ｇ／Ｌのグルコース、１０ｇ／Ｌの酵母抽出物、２０ｇ／Ｌのペプトン、１５ｇ／Ｌの寒天、ｐＨ：５．４）に２８℃で２０時間塗抹・播種した。次に、１００ｍＬのＹＰＤ培地（１０ｇ／Ｌのグルコース、１０ｇ／Ｌの酵母抽出物、２０ｇ／Ｌのペプトン、３滴の消泡剤（Ｄｅｌａｍｅｘ））を振盪フラスコ（１０００ｍＬ、バッフルなし）に入れ、ＹＰＤプレートの細胞材料を白金耳で播種した。２８℃及び２００ｒｐｍで２０時間にわたって好気的に培養を行った。
【００７４】
製造の混合段階では、各培養物から細胞を採取し、２種類の緩衝液（ｇｒｏｗｔｈ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ）（ｐＨ：７．０、０．５ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム、４００ｍｇ／ＬのＬ−システイン塩酸塩）で別々に洗浄した。次に、細胞を別々のＦａｌｃｏｎチューブに移し、５１００ｒｐｍで１０分間にわたって遠心分離を行った。上清は捨て、各チューブ内の細胞を１０ｍＬの緩衝液（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ）で洗浄した。５１００ｒｐｍで１０分間にわたって遠心分離を行った後、細胞を５ｍＬの緩衝液（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ）に再懸濁させた。
【００７５】
２種類の株の細胞集団を２００ｍＬの緩衝液（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ）を入れた耐圧無菌ガラス瓶（容量；５００ｍＬ）内で混合し、混合製造段階を開始した。混合製造は、合成ガス（６６．４％のＨ２、３３％のＣＯ２、０．６％のＯ２）で燻蒸（１Ｌ／ｈ）しながら実施し、培養は３０℃で行った。製造段階では、５ｍＬのサンプルを毎日採取して光学濃度、ｐＨ及びＮＭＲ分析物を測定した。これにより、エタノール及び３ＨＩＢの生成が確認された。測定は、混合製造による無菌濾過上清の準定量式１Ｈ−ＮＭＲ分光法を使用して行った。サンプルはリン酸緩衝液で希釈し（Ｄ２Ｏ）、水を抑制した状態で測定した。内部定量化標準としては、トリメチルシリルプロピオン酸ナトリウム（ＴＳＰ）を使用した。
【００７６】
実施例２
Ｏ２（０．１５％）及び合成ガスの存在下でのＣ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉの培養
【００７７】
野生株であるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ（ＤＳＭＺ１３５２８）を、複合培地（１ｇ／ＬのＮＨ４Ｃｌ、０．１ｇ／ＬのＫＣｌ、０．２ｇ／ＬのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．８ｇ／ＬのＮａＣｌ、０．１ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、２０ｍｇ／ＬのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、２０ｇ／ＬのＭＥＳ、１ｇ／Ｌの酵母抽出物、０．４ｇ／ＬのＬ−システイン−ＨＣｌ、２０ｍｇ／Ｌのニトリロ三酢酸、１０ｍｇ／ＬのＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ、８ｍｇ／Ｌの（ＮＨ４）２Ｆｅ（ＳＯ４）２・６Ｈ２Ｏ、２ｍｇ／ＬのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、２ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＳｅＯ４、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＷＯ４・２  Ｈ２Ｏ、２０μｇ／Ｌのｄ−ビオチン、２０μｇ／Ｌの葉酸、１００μｇ／Ｌのピリドキシン−ＨＣｌ、５０μｇ／Ｌのチアミン−ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ、５０μｇ／Ｌのリボフラビン、５０μｇ／Ｌのニコチン酸、５０μｇ／ＬのＣａ−パントテン酸、１μｇ／ＬのビタミンＢ１２、５０μｇ／Ｌのｐ−アミノベンゾエート、５０μｇ／Ｌのリポ酸）内で独立栄養培養した。
【００７８】
同一の独立栄養培養を、５００ｍＬの複合培地を入れた１Ｌのセプタム付き瓶内で実施した（Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製の開放水浴振盪機「Ｉｎｎｏｖａ  ３１００」を使用、振盪速度：１５０ｍｉｎ−１）。培地にトラップされた気体を１０μｍの細孔径を有するフリット（反応器の中央に配置）によって除去した。培養は、ｐＨを制御せずに３７℃で行った。反応器は、大気圧において、６６．７５％のＨ２、３３％のＣＯ２及び０．１５％のＯ２からなる非爆発性気体混合物でパージした（通気速度：１ｂ／ｈ（０．０３３ｖｖｍ））。
【００７９】
５ｍＬのＤＭＳＯ（５％）を反応器に添加して凍結培養物を得た。細菌の凍結培養物を、上記複合培地内において、Ｏ２が存在しない状態で、６７％のＨ２及び３３％のＣＯ２からなる合成気体混合物の存在下で独立栄養培養した。
【００８０】
５ｍＬのサンプルを採取してサンプルのＯＤ６００、ｐＨ及びスペクトルを測定した。生成物の濃度は、定量１Ｈ−ＮＭＲ分光法を使用して測定した。内部定量化標準としては、トリメチルシリルプロピオン酸ナトリウム（ＴＳＰ）を使用した。
【００８１】
予期せぬことに、低温酢酸生成細菌細胞であるＣ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉを０．１５％のＯ２の存在下で成長させることができ、合成ガスからＣ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉの典型的な生成物（酢酸塩及びエタノール）を生成することができることが判明した。表１に示すように、上記結果を再現することはできなかった（実験２〜６）。実験２〜６では、細菌細胞は、０．１５％のＯ２の存在下（合成ガス中のＯ２濃度が０．１５％）では低温培養物からは成長しなかった。Ｏ２含有合成ガスの意義について調べるために、実験１で得られた細胞材料を使用してさらなる実験を行った。
【００８２】
すなわち、実験１で得られた細胞材料をサンプルとして使用して細菌ゲノムの配列解析を行い、Ｏ２の存在下におけるＣ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉのゲノムの変化について調べた。その結果、Ｏ２の存在によるＣ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉのゲノムの変化は観察されなかった。ただし、皮膚細菌であるＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓによる細菌培養物（配列解析結果に基づいてゲノムＤＮＡの７０％以下）の汚染が見られた。配列解析及びＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ特異的遺伝子プローブを使用して、実験１で使用した凍結培養物の細胞材料を、実験２〜６で使用した凍結培養物の細胞材料と比較した。その結果、実験２〜６で使用した凍結培養物にはＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅは存在していなかった（検出限界：０．１％）。実験１で使用した凍結培養物には、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅと１〜２％のＣ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉが存在していた。
【００８３】
Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅは、代謝時に培養物においてＯ２を消費することができる酸素耐性嫌気性微生物である。Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅによるＣ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉの培養物の汚染により、液相中のＯ２含有量が減少し、嫌気性微生物であるＣ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉの成長のためのＯ２を含まない環境が形成された。
【００８４】
【表１】
2017515478.tif 000002
【００８５】
実施例３
酢酸塩、メタン酸塩及び脂肪酸を製造するためのＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ及びＥ．ｃｏｌｉの共発酵
【００８６】
合成ガスを生体内変化させて脂肪酸（Ｃ８−Ｃ１２）を製造するために、以下に記載するＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉとプラスミド含有Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉによる共製造段階を使用した。
【００８７】
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉはホモ酢酸生成細菌（すなわち、厳密に耐気性の細菌）であり、Ｈ２とＣＯ２のフィードスルー気相から酢酸塩とメタン酸塩を形成した。酢酸塩及びメタン酸塩をＥ．ｃｏｌｉによって水相から取り出し、脂肪酸に転化させた。
【００８８】
これらの細胞を培養するために、ブチルゴム製栓によって気密的に密閉可能な耐圧ガラス瓶を使用した。Ｃ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ細胞を使用する培養工程は、嫌気的条件下で実施した。プラスミド含有Ｅ．ｃｏｌｉ株としては、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＪＷ５０２０−１  ΔｆａｄＥ  ｐＪ２９４［Ｐｔａｃ−ＣｈＦＡＴＢ２＿ｏｐｔＥＣ］を使用した。原株であるＥ．ｃｏｌｉ  ＪＷ５０２０−１は、Ｋｅｉｏ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｂａｂａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）から入手したものである。挿入したプラスミドｐＪ２９４［Ｐｔａｃ−ＣｈＦＡＴＢ２＿ｏｐｔＥＣ］の構築についてはドイツ特許出願公開第１０２０１１１１０９４５Ａ１号の実施例２に記載されており、ΔｆａｄＥ欠失及びＥ．ｃｏｌｉ株の形質転換は、ドイツ特許出願公開第１０２０１１１１０９４５Ａ１号の実施例４と同様にして実施した。
【００８９】
Ｃ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉの細胞培養を行うために、５ｍＬの凍結培養物を、５０ｍｌのＡＴＣＣ１７５４培地（ｐＨ：６．０、２０ｇ／ＬのＭＥＳ、１ｇ／Ｌの酵母抽出物、０．８ｇ／ＬのＮａＣｌ、１ｇ／ＬのＮＨ４Ｃｌ、０．１ｇ／ＬのＫＣｌ、０．１ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、０．２ｇ／ＬのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．０２ｇ／ＬのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、２０ｍｇ／Ｌのニトリロ三酢酸、１０ｍｇ／ＬのＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ、８ｍｇ／Ｌの（ＮＨ４）２Ｆｅ（ＳＯ４）２・６Ｈ２Ｏ、２ｍｇ／ＬのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、２ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＳｅＯ４、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＷＯ４・２Ｈ２Ｏ、２０μｇ／Ｌのｄ−ビオチン、２０μｇ／Ｌの葉酸、１００μｇ／Ｌのピリドキシン−ＨＣｌ、５０μｇ／Ｌのチアミン−ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ、５０μｇ／Ｌのリボフラビン、５０μｇ／Ｌのニコチン酸、５０μｇ／ＬのＣａ−パントテン酸、１μｇ／ＬのビタミンＢ１２、５０μｇ／Ｌのｐ−アミノ安息香酸、５０μｇ／Ｌのリポ酸、約６７．５ｍｇ／ＬのＮａＯＨ、４００ｍｇ／ＬのＬ−システイン塩酸塩）内で嫌気的に成長させた。培養は、２５０ｍＬのガラス瓶内において、１バールの圧力下で、６７％のＨ２及び３３％のＣＯ２からなる予め混合した気体混合物を使用し、開放水浴振盪機内において３７℃及び１５０ｒｐｍで７４時間実施した。培養物を遠心分離した後、細胞を２００ｍＬの嫌気性ＡＴＣＣ１７５４培地に播種した。培養は、化学独立栄養成長により、５００ｍＬの耐圧ガラス瓶内において、６７％のＨ２及び３３％のＣＯ２からなる予め混合した気体混合物を使用し、開放水浴振盪機内において３７℃及び１５０ｒｐｍで６６時間実施した（通気速度：３Ｌ／ｈ）。培地への気体の導入は、１０μｍの細孔径を有するフリット（スパージャーの反応器の中央に配置）によって実施した。細胞を遠心分離し、１０ｍＬの洗浄緩衝液（０．７ｇ／ＬのＫＯＨ、２時間、６７％のＨ２及び３３％のＣＯ２からなる予め混合した気体混合物を使用）で洗浄し、再び遠心分離した。
【００９０】
Ｅ．  ｃｏｌｉの細胞培養では、寒天培地から採取した単一のコロニーを２００ｍＬの培地（ｐＨ：７．０、６．７９ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４、２．６ｇ／Ｌの（ＮＨ４）２ＳＯ４、３ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、０．５ｇ／ＬのＮａＣｌ、２ｇ／ＬのＮＨ４Ｃｌ、２ｍｌ／Ｌの１Ｍ  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、３９．８４ｍｌ／ＬのＮａ酢酸塩（１２３ｇ／Ｌ、ｐＨ：７．０）、０．１３ｍｌ／Ｌの２５％  ＨＣｌ、１．９１ｍｇ／ＬのＭｎＣｌ２・７Ｈ２Ｏ、１．８７ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．８４ｍｇ／ＬのＮａ−ＥＤＴＡ・２Ｈ２Ｏ、０．３ｍｇ／ＬのＨ３ＢＯ３、０．２５ｍｇ／ＬのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、４．７ｍｇ／ＬのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、１７．８ｍｇ／ＬのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．１５ｍｇ／ＬのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、１００ｍｇ／Ｌのアンピシリン）に播種した。培養は、５００ｍＬの耐圧ガラス瓶内において、９０％のＨ２、６％のＣＯ２及び４％のＯ２からなる予め混合した気体混合物を使用し、開放水浴振盪機内において３７℃及び１５０ｒｐｍで１１５時間実施し（通気速度：１Ｌ／ｈ）、培地にトラップされた気体を１０μｍの細孔径を有するフリットを使用して除去した。フリットは、スパージャーの反応器の中央に配置した。７２時間後、２００μＬのＩＰＴＧ溶液（１Ｍ）を添加した。細胞を遠心分離し、１０ｍＬの洗浄緩衝液（０．５ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム、ｐＨ：７．０）で洗浄し、再び遠心分離した。
【００９１】
共製造段階では、各培養物から採取した洗浄後の細胞（Ｅ．ｃｏｌｉのＯＤ６００：１．０、Ｃ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉのＯＤ６００：０．２）を２００ｍＬの緩衝液（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ）（ｐＨ：７．０、０．５ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム、４００ｍｇ／ＬのＬ−システイン塩酸塩）内で成長させた。培養は、５００ｍＬの耐圧ガラス瓶内において、６５％のＨ２、３３％のＣＯ２及び２％のＯ２からなる予め混合した気体混合物を使用し、開放水浴振盪機内において３７℃及び１５０ｒｐｍで１８時間実施した（通気速度：１Ｌ／ｈ）。培地にトラップされた気体を１０μｍの細孔径を有するフリット（スパージャーの反応器の中央に配置）によって除去した。
【００９２】
５ｍＬの各サンプルを採取してＯＤ６００、ｐＨ及び生成物のスペクトルを測定した。生成物の濃度は、準定量式１Ｈ−ＮＭＲ分光法を使用して測定した。内部定量化標準としては、トリメチルシリルプロピオン酸ナトリウム（Ｔ（Ｍ）ＳＰ）を使用した。
【００９３】
その結果、酢酸塩の量は３３０ｍｇ／Ｌから３７８ｍｇ／Ｌに増加し、メタン酸塩の量は１４ｇ／Ｌから３６ｇ／Ｌに増加した。また、脂肪酸（Ｃ８〜Ｃ１２）の濃度は０ｍｇ／Ｌから７ｍｇ／Ｌに増加した。
【００９４】
実施例４
合成ガスからのコハク酸塩の製造
【００９５】
合成ガスを生体内変化させてコハク酸塩を製造するために、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉとプラスミド含有Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉによる共製造段階を使用した。ホモ酢酸生成細菌であるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉによって気相中のＨ２及びＣＯ２を酢酸塩及びメタン酸塩に転化させ、酢酸塩及びメタン酸塩をＥ．ｃｏｌｉによって水相から取り出し、コハク酸塩に転化させた。
【００９６】
細胞を培養するために、ブチルゴム製栓によって気密的に密閉可能な耐圧ガラス瓶を使用した。Ｃ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉ細胞を使用する培養工程は、嫌気的条件下で実施した。プラスミド含有Ｅ．ｃｏｌｉ株としては、Ｅ．ｃｏｌｉ株ＪＷ５０２０−１  ΔｆａｄＥ  ｐＪ２９４［Ｐｔａｃ−ＣｈＦＡＴＢ２＿ｏｐｔＥＣ］を使用した。原株であるＥ．ｃｏｌｉ  ＪＷ５０２０−１は、Ｋｅｉｏ  ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｂａｂａ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）から入手したものである。挿入したプラスミドｐＪ２９４［Ｐｔａｃ−ＣｈＦＡＴＢ２＿ｏｐｔＥＣ］の構築についてはドイツ特許出願公開第１０２０１１１１０９４５Ａ１号の実施例２に記載されており、ΔｆａｄＥ欠失及びＥ．ｃｏｌｉ株の形質転換は、ドイツ特許出願公開第１０２０１１１１０９４５Ａ１号の実施例４と同様にして実施した。
【００９７】
Ｃ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉの細胞培養を行うために、２ｍＬの凍結培養物を、２００ｍｌのＡＴＣＣ１７５４培地（ｐＨ：６．０、２０ｇ／ＬのＭＥＳ、１ｇ／Ｌの酵母抽出物、０．８ｇ／ＬのＮａＣｌ、１ｇ／ＬのＮＨ４Ｃｌ、０．１ｇ／ＬのＫＣｌ、０．１ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、０．２ｇ／ＬのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．０２ｇ／ＬのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、２０ｍｇ／Ｌのニトリロ三酢酸、１０ｍｇ／ＬのＭｎＳＯ４・Ｈ２Ｏ、８ｍｇ／Ｌの（ＮＨ４）２Ｆｅ（ＳＯ４）２・６Ｈ２Ｏ、２ｍｇ／ＬのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、２ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＳｅＯ４、０．２ｍｇ／ＬのＮａ２ＷＯ４・２Ｈ２Ｏ、２０μｇ／Ｌのｄ−ビオチン、２０μｇ／Ｌの葉酸、１００μｇ／Ｌのピリドキシン−ＨＣｌ、５０μｇ／Ｌのチアミン−ＨＣｌ・Ｈ２Ｏ、５０μｇ／Ｌのリボフラビン、５０μｇ／Ｌのニコチン酸、５０μｇ／ＬのＣａ−パントテン酸、１μｇ／ＬのビタミンＢ１２、５０μｇ／Ｌのｐ−アミノ安息香酸、５０μｇ／Ｌのリポ酸、約６７．５ｍｇ／ＬのＮａＯＨ、４００ｍｇ／ＬのＬ−システイン塩酸塩）内で嫌気的に成長させた。培養は、５００ｍＬのガラス瓶内において、１バールの圧力下で、６７％のＨ２及び３３％のＣＯ２からなる予め混合した気体混合物を使用し、開放水浴振盪機内において３７℃及び１５０ｒｐｍで１１１時間実施した。細胞を遠心分離し、１０ｍＬの洗浄緩衝液（ｐＨ：６．２、０．１ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム、１００ｍｇ／ＬのＬ−システイン塩酸塩）で洗浄した。
【００９８】
Ｅ．  ｃｏｌｉの細胞培養では、寒天培地から採取した単一のコロニーを２００のｍＬの培地（ｐＨ：７．０、６．７９ｇ／ＬのＮａ２ＨＰＯ４、２．６ｇ／Ｌの（ＮＨ４）２ＳＯ４、３ｇ／ＬのＫＨ２ＰＯ４、０．５ｇ／ＬのＮａＣｌ、２ｇ／ＬのＮＨ４Ｃｌ、２ｍｌ／Ｌの１Ｍ  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、３９．８４ｍｌ／ＬのＮａ酢酸塩（１２３ｇ／Ｌ、ｐＨ：７．０）、０．１３ｍｌ／Ｌの２５％  ＨＣｌ、１．９１ｍｇ／ＬのＭｎＣｌ２・７Ｈ２Ｏ、１．８７ｍｇ／ＬのＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．８４ｍｇ／ＬのＮａ−ＥＤＴＡ・２Ｈ２Ｏ、０．３ｍｇ／ＬのＨ３ＢＯ３、０．２５ｍｇ／ＬのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、４．７ｍｇ／ＬのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、１７．８ｍｇ／ＬのＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．１５ｍｇ／ＬのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、１００ｍｇ／Ｌのアンピシリン）に播種した。培養は、５００ｍＬの耐圧ガラス瓶内において、８０％のＮ２、１０％のＨ２、６％のＣＯ２及び４％のＯ２からなる予め混合した気体混合物を使用し、開放水浴振盪機内において３７℃及び１５０ｒｐｍで１６０時間実施し（通気速度：０．７Ｌ／ｈ）、培地にトラップされた気体を１０μｍの細孔径を有するフリットを使用して除去した。フリットは、スパージャーの反応器の中央に配置した。１１５時間後、２００μＬのＩＰＴＧ溶液（１Ｍ）を添加した。細胞を遠心分離し、１０ｍＬの洗浄緩衝液（ｐＨ：７．１、０．１ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム、１００ｍｇ／ＬのＬ−システイン塩酸塩）で洗浄し、再び遠心分離した。
【００９９】
共製造段階では、各培養物からの洗浄後の細胞（Ｅ．ｃｏｌｉのＯＤ６００：０．６、Ｃ．ｌｊｕｎｇｄａｈｌｉｉのＯＤ６００：０．２）を２００ｍＬの緩衝液（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｕｆｆｅｒ）（ｐＨ：６．５、０．１ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム、１００ｍｇ／ＬのＬ−システイン塩酸塩）内で成長させた。培養は、５００ｍＬの耐圧ガラス瓶内において、６５％のＨ２、３３％のＣＯ２及び２％のＯ２からなる予め混合した気体混合物を使用し、開放水浴振盪機内において３７℃及び１５０ｒｐｍで１１３時間実施した。気相は、２４時間ごとに同一の組成を有する未使用の気体と交換した。１４時間後に４０ｐｐｍのＬ−システイン塩酸塩を添加し、３８時間後に１００ｐｐｍのＬ−システイン塩酸塩を添加した。
【０１００】
５ｍＬの各サンプルを採取してＯＤ６００、ｐＨ及び生成物のスペクトルを測定した。生成物の濃度は、準定量式１Ｈ−ＮＭＲ分光法を使用して測定した。内部定量化標準としては、トリメチルシリルプロピオン酸ナトリウム（Ｔ（Ｍ）ＳＰ）を使用した。
【０１０１】
その結果、酢酸塩の量は７７ｍｇ／Ｌから１０１ｍｇ／Ｌに増加し、メタン酸塩の量は０ｇ／Ｌから１７４ｇ／Ｌに増加した。また、コハク酸塩の濃度は０ｍｇ／Ｌから４０ｍｇ／Ｌに増加した。
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１９．ＷＯ２０１３１６７６６３，  ＷＯ２０１３０３６１４７，  ＷＯ２０００６８４０７，  ＷＯ２０１２０２４５２２，  ＷＯ９８００５５８，  ＷＯ２００００１４０５２，  ＷＯ２０１０１１５０５４，  ＷＯ  ９８／００５５８，  ＷＯ  ００／６８４０７，  ＷＯ２０１０１１８４１０，  ＷＯ２０１００７５４８３，  ＷＯ２００８１１９０８２, ＷＯ２００７１３６７６２, Ｕ.Ｓ. ２００７/０２７５４４７, ＤＥ１０２０１１１１０９４５Ａ１  ａｎｄ  Ｕ．Ｓ．  ２００８／００５７５５４。
【国際調査報告】
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