(57)【要約】本明細書には、標的療法のための薬物送達複合体が記載されている。特に、本明細書には、がんおよび炎症性疾患を治療するのに有用な、１以上の非天然アミノ酸を含む多価のリンカーが記載されている。いくつかの態様において、がんは、がん腫、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、メラノーマ、中皮腫、バーキットリンパ腫、鼻咽腔がん腫、白血病および骨髄腫からなる群から選ばれる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
宿主動物におけるがんを治療するための方法であって、宿主動物に、治療的有効量の少なくとも１のさらなる抗がん剤と組み合わせて、治療的有効量の式
【化１】
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の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含む方法。
【請求項２】
がんが、がん腫、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、メラノーマ、中皮腫、バーキットリンパ腫、鼻咽腔がん腫、白血病および骨髄腫からなる群から選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
がんが、口腔がん、甲状腺がん、子宮内膜がん、内分泌がん、皮膚がん、胃がん、食道がん、喉頭がん、膵臓がん、大腸がん、膀胱がん、骨がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、乳腺がん、精巣がん、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、子宮内膜がん、肝臓がんおよび肺がんからなる群から選ばれる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
がんが卵巣がんである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
がんが非小細胞肺がんである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
がんが子宮内膜がんである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
がんがトリプルネガティブ乳腺がんである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
がんが乳腺がんである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
がんが肺がんである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）、シスプラチン、ベバシズマブ（アバスチン）、トポテカン、エリブリンメシル酸、ドセタキセル、パクリタキセルおよびカルボプラチン、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
さらなる抗がん剤が、エリブリンメシル酸、ドセタキセルおよびパクリタキセル、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）またはその医薬的に許容される塩である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
さらなる抗がん剤が、シスプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
さらなる抗がん剤が、ベバシズマブ（アバスチン）またはその医薬的に許容される塩である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
さらなる抗がん剤が、エリブリンメシル酸である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
さらなる抗がん剤が、ドセタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
さらなる抗がん剤が、パクリタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
さらなる抗がん剤が、カルボプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
患者におけるがんを治療するための、治療的有効量の少なくとも１のさらなる抗がん剤と組み合わせた、式
【化２】
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の化合物またはその医薬的に許容される塩の使用。
【請求項２０】
がんが、がん腫、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、メラノーマ、中皮腫、バーキットリンパ腫、鼻咽腔がん腫、白血病および骨髄腫からなる群から選ばれる、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
がんが、口腔がん、甲状腺がん、子宮内膜がん、内分泌がん、皮膚がん、胃がん、食道がん、喉頭がん、膵臓がん、大腸がん、膀胱がん、骨がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、乳腺がん、精巣がん、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、子宮内膜がん、肝臓がんおよび肺がんからなる群から選ばれる、請求項１９または２０に記載の使用。
【請求項２２】
がんが卵巣がんである、請求項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【請求項２３】
がんが非小細胞肺がんである、請求項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【請求項２４】
がんが子宮内膜がんである、請求項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【請求項２５】
がんがトリプルネガティブ乳腺がんである、請求項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【請求項２６】
がんが乳腺がんである、請求項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【請求項２７】
がんが肺がんである、請求項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【請求項２８】
さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）、シスプラチン、ベバシズマブ（アバスチン）、トポテカン、エリブリンメシル酸、ドセタキセル、パクリタキセルおよびカルボプラチン、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる、請求項１９〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
さらなる抗がん剤が、エリブリンメシル酸、ドセタキセルおよびパクリタキセル、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
さらなる抗がん剤が、パクリタキセルおよびカルボプラチン、またはその医薬的に許容される塩の組み合わせである、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３１】
さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）またはその医薬的に許容される塩である、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３２】
さらなる抗がん剤が、シスプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３３】
さらなる抗がん剤が、ベバシズマブ（アバスチン）またはその医薬的に許容される塩である、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３４】
さらなる抗がん剤が、トポテカンまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３５】
さらなる抗がん剤が、ドセタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３６】
さらなる抗がん剤が、パクリタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３７】
さらなる抗がん剤が、カルボプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３８】
さらなる抗がん剤が、エリブリンメシル酸である、請求項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、３５  Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）の定めるところにより、２０１４年４月１４日に出願された米国仮出願第６１／９７９，３４４号、および２０１４年９月３０日に出願された米国仮出願第６２／０５７，４７３号の優先権を主張するものであり、両開示は、参照により明示的に本明細書に引用される。
【０００２】
本明細書に記載の発明は、耐性がんを治療するための薬物送達複合体に関する。さらに、本明細書に記載の発明は、他の抗がん剤の有効性を強化する薬物送達複合体に関する。
【背景技術】
【０００３】
哺乳類の免疫システムは、腫瘍細胞のような病原性細胞、および他の外来の侵入病原体を、認識および排除するための手段を提供している。免疫システムは通常、強力な防御手段を提供しているものの、がん細胞のような病原性細胞、および宿主の免疫反応を回避して増殖するか、あるいは併発する宿主病原性を持続させる他の感染性因子の例は多い。化学療法剤および放射線療法は、例えば増殖する腫瘍を排除するために開発されてきた。しかしながら、現在利用可能な化学療法剤および放射線療法レジメンの多くは、病原性細胞を選択的に破壊するのに十分な選択性を欠いていることから有害な副作用があり、従って、造血系の細胞および他の非病原性細胞のような正常な宿主細胞にも害を及ぼすことがある。これらの抗がん薬の有害な副作用は、病原性細胞集団に選択的であり、宿主毒性の低い、新しい治療法を開発する必要性を浮き彫りにしている。
【発明の詳細な説明】
【０００４】
発明の概要
本明細書において、１以上の非天然アミノ酸から形成される多価のリンカーを含む薬物送達複合体が、病原性細胞集団を治療するのに有効であり、宿主動物に低い毒性を示すことが見出された。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
概要
ある例示的態様において、本開示は、宿主動物におけるがんを治療するための方法を提供し、当該方法は、治療的有効量の少なくとも１のさらなる抗がん剤と組み合わせて、宿主動物に、治療的有効量の式
【化１】
2017516760.tif 000003
の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含む。
【０００６】
他の例示的態様において、本開示は、患者におけるがんを治療するための、治療的有効量の少なくとも１のさらなる抗がん剤と組み合わせた、式
【化２】
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の化合物またはその医薬的に許容される塩の使用を提供する。
【０００７】
いくつかの態様において、がんは、がん腫、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、メラノーマ、中皮腫、バーキットリンパ腫、鼻咽腔がん腫、白血病および骨髄腫からなる群から選ばれる。いくつかの態様において、がんは、口腔がん、甲状腺がん、子宮内膜がん、内分泌がん、皮膚がん、胃がん、食道がん、喉頭がん、膵臓がん、大腸がん、膀胱がん、骨がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、乳腺がん、精巣がん、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、子宮内膜がん、肝臓がんおよび肺がんからなる群から選ばれる。いくつかの態様において、がんは卵巣がんである。いくつかの態様において、がんは非小細胞肺がんである。いくつかの態様において、がんは子宮内膜がんである。いくつかの態様において、がんはトリプルネガティブ乳腺がんである。いくつかの態様において、がんは乳腺がんである。いくつかの態様において、がんは肺がんである。
【０００８】
いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、高分子生合成への割り込みまたは阻害、酵素トポイソメラーゼＩＩの進行の阻害、ＤＮＡ超らせんの緩和、転写の阻害、トポイソメラーゼＩＩ複合体の安定化、ＤＮＡ二重らせんが解放されることの阻止、ＤＮＡ複製の阻害、クロマチンからのヒストンの引き剥がしの誘導；ＤＮＡの架橋、順番にアポトーシスを開始させるＤＮＡ修復メカニズムの誘発；血管形成の阻害；トポイソメラーゼ−１の阻害；微小管の結合および／または安定化、アポトーシスに至る微小管の生理的な脱重合／分解の阻止、アポトーシスの解除に至るがんタンパクｂｃｌ−２のリン酸化、微小管の動的な重合および分解の抑制；紡錘体機能の阻害、微小管動態の抑制、中心体からの微小管の解離の抑制；およびＤＮＡ修復の干渉、並びにその組み合わせからなる群から選ばれる作用様式を有する。いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）、シスプラチン、ベバシズマブ（アバスチン）、トポテカン、エリブリンメシル酸、ドセタキセル、パクリタキセルおよびカルボプラチン、および上記のものの医薬的に許容される塩、並びにその組み合わせからなる群から選ばれる。いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）またはその医薬的に許容される塩である。いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、シスプラチンまたはその医薬的に許容される塩である。いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、ベバシズマブ（アバスチン）またはその医薬的に許容される塩である。いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、トポテカンまたはその医薬的に許容される塩である。いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、ドセタキセルまたはその医薬的に許容される塩である。いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、パクリタキセルまたはその医薬的に許容される塩である。いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、カルボプラチンまたはその医薬的に許容される塩である。いくつかの態様において、さらなる抗がん剤は、エリブリンメシル酸である。
【０００９】
本発明の他の例示的および非限定的態様において、式
Ｂ−Ｌ−Ｄｘ
の化合物が本明細書に記載されており、ここに、Ｂ、Ｌ、Ｄおよびｘのそれぞれは、本明細書に記載の様々な態様および局面において定義されている通りである。
【００１０】
他の態様において、１以上の化合物を含む医薬組成物も本明細書に記載されている。ある局面において、組成物は、がん、炎症等に罹患した患者を治療するための、治療的有効量の１以上の化合物を含む。これらに限定されないが、組成物が、他の治療的に活性な化合物、および／または１以上の担体、希釈剤、賦形剤等、並びにその組み合わせを含む他の成分および／または含有物を、含んでいてもよいことは、理解されるべきである。他の態様において、がん、炎症等に罹患している患者または宿主動物を治療するための化合物および医薬組成物を使用する方法も、本明細書に記載されている。ある局面において、方法は、がん、炎症等に罹患した患者に、１以上の本明細書に記載の化合物および／または組成物を投与する工程を含む。別の局面において、方法は、がん、炎症等に罹患している患者を治療するために、治療的有効量の１以上の本明細書に記載の化合物および／または組成物を投与することを含む。他の態様において、がん、炎症等に罹患している患者を治療するための薬剤の製造における、化合物および組成物の使用も本明細書に記載されている。ある局面において、薬剤は、がん、炎症等に罹患した患者を治療するための、治療的有効量の１以上の化合物および／または組成物を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１Ａは、１μｍｏｌ／ｋｇにて週３回（Ｍ／Ｗ／Ｆ）（ＴＩＷ）、連続２週間投与したｎｕ／ｎｕマウスにおける、ＥＣ１４５６（●）のＫＢ腫瘍に対するインビボ活性を示しており、１００μｍｏｌ／ｋｇにてＥＣ０９２３を共投与したＥＣ１４５６（▲）、および無治療（ＰＢＳ）対照群（■）と比べている。縦の点線は最終投与日を表している。図１Ｂは、ＥＣ１４５６が、動物の体重から決定される、丸ごとの動物に観測可能な毒性を全くもたらさなかったことを示している。
【００１２】
【図２】図２Ａは、定着した皮下ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍に対するＥＣ１４５６の活性を示している。図５Ａに示されるように、皮下ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍（９４〜１４５ｍｍ３）を有する動物を、１７日目に開始して、２μｍｏｌ／ｋｇ（パネルＡ）にて週３回（Ｍ／Ｗ／Ｆ）、２週間のＥＣ１４５６（●）で静脈治療し、無治療の動物（■）と比べた。コホート当たりＮ＝５動物。縦の点線＝最終投与日。図２Ｂは、ＥＣ１４５６が、体重の％変化から決定される、丸ごとの動物への全体的な毒性をもたらさなかったことを示している。
【００１３】
【図３】図３Ａは、皮下ＫＢ−ＣＲ２０００（シスプラチン耐性）腫瘍（９８〜１４８ｍｍ３）を有する動物における、ＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、６日目に開始して、２μｍｏｌ／ｋｇにて、週３回（Ｍ／Ｗ／Ｆ）、２週間、ＥＣ１４５６（●）、または３ｍｇ／ｋｇにて、週２回（Ｔ／Ｔｈ）、２週間、シスプラチン（▲）を静脈投与し、無治療対照群（■）と比べており、コホート当たりＮ＝５動物である。縦の点線＝最終投与日の日である。図３Ｂは、ＥＣ１４５６が宿主動物に有意な毒性を示さなかったことを示している。対照的に、シスプラチン治療は、投与期間中に、宿主動物に相当な毒性をもたらした。
【００１４】
【図４】図４は、媒体対照群と比べたＥＣ１４５６の最大耐量（ＭＴＤ）を示している。媒体対照群（■）、０．３３μｍｏｌ／ｋｇのＥＣ１４５６（●）、０．４１μｍｏｌ／ｋｇのＥＣ１４５６（▲）、０．５１μｍｏｌ／ｋｇのＥＣ１４５６（▼）、および０．６７μｍｏｌ／ｋｇのＥＣ１４５６（◆）。
【００１５】
【図５】図５Ａは、皮下ビンカ耐性ＫＢ−ＤＲ１５０腫瘍を有する動物における、ＤＯＸＩＬと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；■は、対照群であり；▼は、２ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６であり；●は、５ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したＤＯＸＩＬであり；○は、２ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋５ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したＤＯＸＩＬである。図５Ｂは、当該実験に対する体重の％経時変化を示している。
【００１６】
【図６】図６Ａは、皮下Ｍ１０９腫瘍を有する動物における、シスプラチンと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；■は、対照群であり；▼は、２ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６であり；□は、３ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したシスプラチンであり；Δは、ＥＣ１４５６＋シスプラチンである。図６Ｂは、当該実験に対する体重の％経時変化を示している。
【００１７】
【図７】図７Ａは、皮下ＫＢ腫瘍（口腔扁平上皮がん）を有する動物における、シスプラチンと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；●は、対照群であり；▼は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６であり；■は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋３ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×３で投与したシスプラチンであり；▲は、３ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×３で投与したシスプラチンである。図７Ｂは、当該実験に対する体重の％経時変化を示している。
【００１８】
【図８】図８Ａは、皮下ＫＢ腫瘍を有する動物における、ベバシズマブと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；（ａ）は、対照群であり；（ｂ）は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６であり；（ｃ）は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋５ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したアバスチンであり；（ｄ）は、５ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したアバスチンである。図８Ｂは、当該実験に対する体重の％経時変化を示している。
【００１９】
【図９】図９Ａは、皮下Ｐ−１６０６  ＫＢ腫瘍を有する動物における、トポテカンと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；（ａ）は、対照群であり；（ｂ）は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６であり；（ｃ）は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋５ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したトポテカンであり；（ｄ）は、５ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したトポテカンである。図９Ｂは、当該実験に対する体重の％経時変化を示している。
【００２０】
【図１０】図１０Ａは、皮下Ｐ−１６０９  ＫＢ腫瘍を有する動物における、トポテカンと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；（ａ）は、対照群であり；（ｂ）は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×５で投与したＥＣ１４５６であり；（ｃ）は、５ｍｇ／ｋｇ、ＴＩＷ×５で投与したトポテカンであり；（ｄ）は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×５で投与したＥＣ１４５６＋５ｍｇ／ｋｇ、ＴＩＷ×５で投与したトポテカンである。図１０Ｂは、当該実験に対する体重の％経時変化を示している。
【００２１】
【図１１】図１１Ａは、皮下Ｐ−１６０９  ＫＢ腫瘍を有する動物における、ドセタキセルと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；（ａ）は、対照群であり；（ｂ）は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×５で投与したＥＣ１４５６であり；（ｃ）は、７ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×３で投与したドセタキセルであり；（ｄ）は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×５で投与したＥＣ１４５６＋７ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×３で投与したドセタキセルである。図１１Ｂは、当該実験に対する体重の％経時変化を示している。
【００２２】
【図１２】図１２Ａは、皮下Ｐ−１６３５  ＫＢ腫瘍を有する動物における、カルボプラチンと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；●は、対照群であり；▲は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６であり；○は、５０ｍｇ／ｋｇ  ＴＩＷで投与したカルボプラチンであり；□は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＴＩＷで投与したＥＣ１４５６＋５０ｍｇ／ｋｇ  ＴＩＷで投与したカルボプラチンである。図１２Ｂは、当該実験に対する体重の％経時変化を示している。
【００２３】
【図１３】図１３は、皮下ＫＢ腫瘍を有する動物における、カルボプラチンおよびパクリタキセルと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；■は、対照群であり；▲は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６であり；▼は、３０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したカルボプラチン＋１０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したパクリタキセルであり；●は、１ｍｍｏｌ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋３０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したカルボプラチン＋１０ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＷ×２で投与したパクリタキセルである。
【００２４】
【図１４】図１４は、皮下ＳＴ０４０腫瘍を有する動物における、パクリタキセルと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；■は、対照群であり；▼は、１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したパクリタキセルであり；（ａ）は、１．５ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したパクリタキセルであり；（ｂ）は、３ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したパクリタキセルである。
【００２５】
【図１５】図１５は、皮下ＳＴ５０２腫瘍を有する動物における、エリブリンメシル酸と併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；■は、対照群であり；▼は、１ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したエリブリンメシル酸であり；（ａ）は、２ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１ｍｇ／ｋｇで投与したエリブリンメシル酸であり；（ｂ）は、４ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１ｍｇ／ｋｇで投与したエリブリンメシル酸である。
【００２６】
【図１６】図１６は、皮下ＳＴ７３８腫瘍を有する動物における、エリブリンメシル酸と併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；■は、対照群であり；▼は、１ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したエリブリンメシル酸であり；（ａ）は、２ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１ｍｇ／ｋｇで投与したエリブリンメシル酸であり；（ｂ）は、４ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１ｍｇ／ｋｇで投与したエリブリンメシル酸である。
【００２７】
【図１７】図１７は、皮下ＳＴ０２４腫瘍を有する動物における、パクリタキセルと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；■は、対照群であり；▼は、１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したパクリタキセルであり；（ａ）は、２ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したパクリタキセルであり；（ｂ）は、４ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＳＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したパクリタキセルである。
【００２８】
【図１８】図１８は、皮下ＬＵ１１４７  ＮＳＣＬＣ腫瘍を有する動物における、パクリタキセルと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；■は、対照群であり；▼は、１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷで投与したドセタキセルであり；（ａ）は、２ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したドセタキセルであり；（ｂ）は、４ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＳＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１５ｍｇ／ｋｇで投与したドセタキセルである。
【００２９】
【図１９】図１９は、皮下ＬＵ２５０５  ＮＳＣＬＣ腫瘍を有する動物における、パクリタキセルと併用したＥＣ１４５６の活性を示しており、ここに、縦の点線＝最終投与日の日であり；■は、対照群であり；▼は、１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷで投与したドセタキセルであり；（ａ）は、２ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＢＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１５ｍｇ／ｋｇ、ＳＩＷ×２で投与したドセタキセルであり；（ｂ）は、４ｍｍｏｌ／ｋｇ  ＳＩＷ×２で投与したＥＣ１４５６＋１５ｍｇ／ｋｇで投与したドセタキセルである。
【００３０】
詳細な説明
本発明のいくつかの例示的態様は、以下に列挙された項に記載されている：
【００３１】
１．宿主動物におけるがんを治療するための方法であって、宿主動物に、治療的有効量の少なくとも１のさらなる抗がん剤と組み合わせて、治療的有効量の式
【化３】
2017516760.tif 000005
の化合物またはその医薬的に許容される塩を投与する工程を含む方法。
【００３２】
２．がんが、がん腫、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、メラノーマ、中皮腫、バーキットリンパ腫、鼻咽腔がん腫、白血病および骨髄腫からなる群から選ばれる、項１に記載の方法。
【００３３】
３．がんが、口腔がん、甲状腺がん、子宮内膜がん、内分泌がん、皮膚がん、胃がん、食道がん、喉頭がん、膵臓がん、大腸がん、膀胱がん、骨がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、乳腺がん、精巣がん、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、子宮内膜がん、肝臓がんおよび肺がんからなる群から選ばれる、項１または２に記載の方法。
【００３４】
４．がんが卵巣がんである、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【００３５】
５．がんが非小細胞肺がんである、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【００３６】
６．がんが子宮内膜がんである、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【００３７】
７．がんがトリプルネガティブ乳腺がんである、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【００３８】
８．がんが乳腺がんである、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【００３９】
９．がんが肺がんである、項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【００４０】
１０．さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）、シスプラチン、ベバシズマブ（アバスチン）、トポテカン、エリブリンメシル酸、ドセタキセル、パクリタキセルおよびカルボプラチン、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる、項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【００４１】
１１．さらなる抗がん剤が、エリブリンメシル酸、ドセタキセルおよびパクリタキセル、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる、項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【００４２】
１２．さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）またはその医薬的に許容される塩である、項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【００４３】
１３．さらなる抗がん剤が、シスプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【００４４】
１４．さらなる抗がん剤が、ベバシズマブ（アバスチン）またはその医薬的に許容される塩である、項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【００４５】
１４．さらなる抗がん剤が、エリブリンメシル酸である、項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【００４６】
１６．さらなる抗がん剤が、ドセタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【００４７】
１７．さらなる抗がん剤が、パクリタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【００４８】
１８．さらなる抗がん剤が、カルボプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【００４９】
１９．患者におけるがんを治療するための、治療的有効量の少なくとも１のさらなる抗がん剤と組み合わせた、式
【化４】
2017516760.tif 000006
の化合物またはその医薬的に許容される塩の使用。
【００５０】
２０．がんが、がん腫、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、メラノーマ、中皮腫、バーキットリンパ腫、鼻咽腔がん腫、白血病および骨髄腫からなる群から選ばれる、項１９に記載の使用。
【００５１】
２１．がんが、口腔がん、甲状腺がん、子宮内膜がん、内分泌がん、皮膚がん、胃がん、食道がん、喉頭がん、膵臓がん、大腸がん、膀胱がん、骨がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、乳腺がん、精巣がん、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、子宮内膜がん、肝臓がんおよび肺がんからなる群から選ばれる、項１９または２０に記載の使用。
【００５２】
２２．がんが卵巣がんである、項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【００５３】
２３．がんが非小細胞肺がんである、項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【００５４】
２４．がんが子宮内膜がんである、請求項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【００５５】
２５．がんがトリプルネガティブ乳腺がんである、項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【００５６】
２６．がんが乳腺がんである、項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【００５７】
２７．がんが肺がんである、項１９〜２１のいずれかの１項に記載の使用。
【００５８】
２８．さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）、シスプラチン、ベバシズマブ（アバスチン）、トポテカン、エリブリンメシル酸、ドセタキセル、パクリタキセルおよびカルボプラチン、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる、項１９〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【００５９】
２９．さらなる抗がん剤が、エリブリンメシル酸、ドセタキセルおよびパクリタキセル、またはその医薬的に許容される塩からなる群から選ばれる、項１９〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【００６０】
３０．さらなる抗がん剤が、パクリタキセルおよびカルボプラチン、またはその医薬的に許容される塩の組み合わせである、項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【００６１】
３１．さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）またはその医薬的に許容される塩である、項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【００６２】
３２．さらなる抗がん剤が、シスプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【００６３】
３３．さらなる抗がん剤が、ベバシズマブ（アバスチン）またはその医薬的に許容される塩である、項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【００６４】
３４．さらなる抗がん剤が、トポテカンまたはその医薬的に許容される塩である、項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【００６５】
３５．さらなる抗がん剤が、ドセタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【００６６】
３６．さらなる抗がん剤が、パクリタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【００６７】
３７．さらなる抗がん剤が、カルボプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【００６８】
３８．さらなる抗がん剤が、エリブリンメシル酸である、項１９〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【００６９】
本発明のいくつかの例示的態様は、以下の項に記載されている：
式
【化５】
2017516760.tif 000007
ＥＣ１４５６
Ｃ１１０Ｈ１６５Ｎ２３Ｏ４５Ｓ３
精密質量：２６２４．０５
分子量：２６２５．８１
の化合物および関連化合物、並びにその医薬的に許容される塩。
【００７０】
１以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤、またはその組み合わせと組み合わせて、上記の項の化合物を含む医薬組成物。
【００７１】
適宜、１以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤、またはその組み合わせと組み合わせて、治療的有効量の上記の項のいずれか１項の化合物を含む、単位用量または単位用量形態組成物。
【００７２】
宿主動物におけるがんを治療するための、治療的有効量の上記の項のいずれか１項の化合物を含む組成物；あるいは、治療的有効量の上記の項のいずれか１項の化合物を含み、適宜さらに、１以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤、またはその組み合わせを含む医薬組成物。
【００７３】
宿主動物におけるがんを治療するための方法であって、宿主動物に、治療的有効量の上記の項のいずれか１項の化合物を含む組成物を投与する工程を含む方法；あるいは、上記の項のいずれか１項の化合物を含み、適宜さらに、１以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤、またはその組み合わせを含む医薬組成物を投与する工程を含む方法。
【００７４】
宿主動物におけるがんを治療するための薬剤の製造における、適宜、１以上の担体、希釈剤もしくは賦形剤、またはその組み合わせと組み合わせた、上記の項のいずれか１項の化合物に記載の使用。
【００７５】
がんが、薬物耐性がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００７６】
がんが、ビンブラスチンおよび／またはデスアセチルビンブラスチンモノヒドラジド耐性がんのようなビンカ耐性がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００７７】
がんが、白金耐性がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００７８】
がんが、シスプラチン耐性がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００７９】
がんが、タキソール−ファミリー耐性がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８０】
がんが、パクリタキセル耐性がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８１】
がんが、卵巣がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８２】
がんが、薬物耐性卵巣がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８３】
がんが、シスプラチン耐性卵巣がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８４】
がんが、ＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳまたはＮＣＩ／ＡＤＲ−ＲＥＳ関連卵巣がんのような白金耐性卵巣がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８５】
がんが、ＩＧＲＯＶＣＤＤＰまたはＩＧＲＯＶＣＤＤＰ関連卵巣がんのような白金耐性卵巣がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８６】
がんが、乳腺がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８７】
がんが、薬物耐性乳腺がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８８】
がんが、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１またはＭＤＡ−ＭＢ−２３１関連乳腺がんのようなトリプルネガティブ乳腺がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００８９】
がんが、非小細胞肺がんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００９０】
がんが、肝細胞がん腫またはがんである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００９１】
宿主動物に、さらなる抗がん剤を投与する工程をさらに含む、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用であって、ここに、当該組成物と当該さらなる抗がん剤との組み合わせは、治療的有効量で投与される。
【００９２】
宿主動物に、１以上のさらなる抗がん剤を投与する工程をさらに含む、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用であって、ここに、当該組成物と１以上の当該さらなる抗がん剤との組み合わせは、治療的有効量で投与される。
【００９３】
投与工程が、組成物を他の準最適な治療用量にて投与することを含む、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００９４】
投与工程が、組成物を毒性の低い他の用量にて投与することを含む、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００９５】
投与工程が、さらなる抗がん剤を他の準最適な治療用量にて投与することを含む、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００９６】
投与工程が、１以上のさらなる抗がん剤を他の準最適な治療用量にて投与することを含む、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００９７】
投与工程が、さらなる抗がん剤を毒性の低い他の用量にて投与することを含む、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００９８】
投与工程が、１以上のさらなる抗がん剤を毒性の低い他の用量にて投与することをを含む、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【００９９】
さらなる抗がん剤が、高分子生合成への割り込みまたは阻害、酵素トポイソメラーゼＩＩの進行の阻害、ＤＮＡ超らせんの緩和、転写の阻害、トポイソメラーゼＩＩ複合体の安定化、ＤＮＡ二重らせんが解放されることの阻止、ＤＮＡ複製の阻害、クロマチンからのヒストンの引き剥がしの誘導；ＤＮＡの架橋、順番にアポトーシスを開始させるＤＮＡ修復メカニズムの誘発；血管形成の阻害；トポイソメラーゼ−１の阻害；微小管の結合および／または安定化、アポトーシスに至る微小管の生理的な脱重合／分解の阻止、アポトーシスの解除に至るがんタンパクｂｃｌ−２のリン酸化、微小管の動的な重合および分解の抑制；紡錘体機能の阻害、微小管動態の抑制、中心体からの微小管の解離の抑制；およびＤＮＡ修復の干渉、並びにその組み合わせからなる群から選ばれる作用様式を有する、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１００】
さらなる抗がん剤が、高分子生合成への割り込みまたは阻害、酵素トポイソメラーゼＩＩの進行の阻害、ＤＮＡ超らせんの緩和、転写の阻害、トポイソメラーゼＩＩ複合体の安定化、ＤＮＡ二重らせんが解放されることの阻止、ＤＮＡ複製の阻害、クロマチンからのヒストンの引き剥がしの誘導；ＤＮＡの架橋、順番にアポトーシスを開始させるＤＮＡ修復メカニズムの誘発；血管形成の阻害；トポイソメラーゼ−１の阻害；微小管の結合および／または安定化、アポトーシスに至る微小管の生理的な脱重合／分解の阻止、アポトーシスの解除に至るがんタンパクｂｃｌ−２のリン酸化、微小管の動的な重合および分解の抑制；紡錘体機能の阻害、微小管動態の抑制、中心体からの微小管の解離の抑制；およびＤＮＡ修復の干渉、並びにその組み合わせの作用様式を有する、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１０１】
１以上のさらなる抗がん剤が、高分子生合成への割り込みまたは阻害、酵素トポイソメラーゼＩＩの進行の阻害、ＤＮＡ超らせんの緩和、転写の阻害、トポイソメラーゼＩＩ複合体の安定化、ＤＮＡ二重らせんが解放されることの阻止、ＤＮＡ複製の阻害、クロマチンからのヒストンの引き剥がしの誘導；ＤＮＡの架橋、順番にアポトーシスを開始させるＤＮＡ修復メカニズムの誘発；血管形成の阻害；トポイソメラーゼ−１の阻害；微小管の結合および／または安定化、アポトーシスに至る微小管の生理的な脱重合／分解の阻止、アポトーシスの解除に至るがんタンパクｂｃｌ−２のリン酸化、微小管の動的な重合および分解の抑制；紡錘体機能の阻害、微小管動態の抑制、中心体からの微小管の解離の抑制；およびＤＮＡ修復の干渉からなる群から選ばれる作用様式を有する、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１０２】
１以上のさらなる抗がん剤が、高分子生合成への割り込みまたは阻害、酵素トポイソメラーゼＩＩの進行の阻害、ＤＮＡ超らせんの緩和、転写の阻害、トポイソメラーゼＩＩ複合体の安定化、ＤＮＡ二重らせんが解放されることの阻止、ＤＮＡ複製の阻害、クロマチンからのヒストンの引き剥がしの誘導；ＤＮＡの架橋、順番にアポトーシスを開始させるＤＮＡ修復メカニズムの誘発；血管形成の阻害；トポイソメラーゼ−１の阻害；微小管の結合および／または安定化、アポトーシスに至る微小管の生理的な脱重合／分解の阻止、アポトーシスの解除に至るがんタンパクｂｃｌ−２のリン酸化、微小管の動的な重合および分解の抑制；紡錘体機能の阻害、微小管動態の抑制、中心体からの微小管の解離の抑制；およびＤＮＡ修復の干渉、並びにその組み合わせの作用様式を有する、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１０３】
さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）、シスプラチン、ベバシズマブ（アバスチン）、トポテカン、ドセタキセル、パクリタキセルおよびカルボプラチン、および上記のものの医薬的に許容される塩、並びにその組み合わせからなる群から選ばれる、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１０４】
さらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）またはその医薬的に許容される塩である、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１０５】
さらなる抗がん剤が、シスプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１０６】
さらなる抗がん剤が、ベバシズマブ（アバスチン）またはその医薬的に許容される塩である、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１０７】
さらなる抗がん剤が、トポテカンまたはその医薬的に許容される塩である、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１０８】
さらなる抗がん剤が、ドセタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１０９】
さらなる抗がん剤が、パクリタキセルまたはその医薬的に許容される塩である、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１１０】
さらなる抗がん剤が、カルボプラチンまたはその医薬的に許容される塩である、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１１１】
１以上のさらなる抗がん剤が、ドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）、シスプラチン、ベバシズマブ（アバスチン）、トポテカン、ドセタキセル、パクリタキセルおよびカルボプラチン、および上記のものの医薬的に許容される塩、並びにその組み合わせの１つ以上である、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１１２】
１以上のさらなる抗がん剤が、パクリタキセルおよびカルボプラチン、またはその医薬的に許容される塩の組み合わせである、上記の項のいずれか１項の方法または組成物または単位用量または使用。
【０１１３】
他の態様において、本明細書に記載の化合物は、対応する細胞表面受容体に結合することにより、標的病原性細胞に取り込まれ得る。特に、葉酸受容体のようなビタミン受容体は、選択的および／または特異的にビタミンを結合し、例えば、受容体仲介性エンドサイトーシスを介して、取り込みが起こり得る。いったん取り込まれると、本明細書に記載の化合物中に含まれる放出可能なリンカーは、薬物の積み荷（ｄｒｕｇ  ｃａｒｇｏ）を標的細胞の内部に送達することを可能にし、当該放出可能なリンカーは、本明細書に記載の化合物が標的細胞に送達されるまで、実質的にまたは完全に無傷のままであることから、従って非標的組織に対する毒性を減少させる。従って、本明細書に記載の化合物は、薬物を細胞内の生化学過程に送達することにより細胞内で作用し、宿主動物の正常な細胞および組織への、複合体を形成していない薬物の曝露量を減少させる。他の態様において、葉酸受容体結合リガンドを含む、本明細書に記載の化合物は、少なくとも１の非天然アミノ酸を含まない対応する化合物と比べて、葉酸受容体に対して高い特異性を示す。他の態様において、葉酸受容体結合リガンドを含む、本明細書に記載の化合物は、葉酸受容体発現細胞に対して高い活性を示す。他の態様において、本明細書に記載の化合物は、シスプラチン耐性ＫＢ細胞、ＮＣｌ／ＡＤＲ−ＲＥＳ−Ｃｌ２細胞、ＩＧＲＯＶ１細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を含むＫＢ細胞のような病原性細胞に対して、強力なインビトロおよびインビボ活性を示す。他の態様において、葉酸受容体結合リガンドを含む、本明細書に記載の化合物は、葉酸受容体陰性細胞に有意な結合を示さない。他の態様において、葉酸受容体結合リガンドを含む、本明細書に記載の化合物は、葉酸受容体アルファ（α）および／または葉酸受容体ベータ（β）のような高親和性葉酸受容体を介して、選択的にまたは独占的に細胞に入る。他の態様において、本明細書に記載の化合物は概して、還元型葉酸キャリア（ＲＦＣ）を介するもののような受動輸送を介して、実質的に細胞に入らない。他の態様において、本明細書に記載の化合物は、少なくとも１の非天然アミノ酸を含まない化合物と比べて、宿主動物に低い毒性を示す。他の態様において、本明細書に記載の化合物は、少なくとも１の非天然アミノ酸を含まない化合物と比べて、より優れた血清安定性を示す。他の態様において、本明細書に記載の化合物は、少なくとも１の非天然アミノ酸を含まない化合物と比べて、迅速に除去される。他の態様において、本明細書に記載の化合物は、肝クリアランスと比べて、主に腎クリアランスにより除去される。本明細書に記載の化合物は、ヒト臨床医学と獣医学的応用の両方に用いることができる。従って、病原性細胞の集団を有し、本明細書に記載の化合物を用いて治療される宿主動物はヒトであり得、あるいは獣医学的応用の場合、実験動物、農業用動物、家庭用動物または野生動物であり得る。本発明は、これらに限定されないが、ヒト、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター等）、ウサギ、サル、チンパンジーのような実験動物、イヌ、ネコおよびウサギのような家庭用動物、畜牛、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギのような農業用動物、およびクマ、パンダ、ライオン、トラ、ヒョウ、ゾウ、シマウマ、キリン、ゴリラ、イルカおよびクジラのような捕獲されている野生動物を含む宿主動物に適用することができる。
【０１１４】
がん細胞集団は、自然発生的に、または宿主動物の生殖細胞系列に存在する突然変異もしくは体細胞突然変異のような過程により発生し得、あるいは化学物質、ウイルスまたは放射線により誘導され得る。
【０１１５】
本発明は、がん腫、肉腫、リンパ腫、ホジキン病、メラノーマ、中皮腫、バーキットリンパ腫、鼻咽頭がん腫、白血病および骨髄腫のようながんを治療するのに利用することができる。がん細胞集団としては、これに限定されないが、口腔がん、甲状腺がん、内分泌がん、皮膚がん、胃がん、食道がん、喉頭がん、膵臓がん、大腸がん、膀胱がん、骨がん、卵巣がん、子宮頸がん、子宮がん、トリプルネガティブ乳腺がんを含む乳腺がん、精巣がん、前立腺がん、直腸がん、腎臓がん、子宮内膜がん、肝臓がん、および非小細胞肺がんを含む肺がんを挙げることができる。
【０１１６】
さらに、さらなる抗がん剤は、細胞毒性があるもの、腫瘍浸透性を強化するもの、腫瘍細胞の増殖を阻害するもの、アポトーシスを促進するもの、標的細胞において抗アポトーシス活性を減少させるものであり得、感染性因子により引き起こされる疾患を治療するのに用いられるか、病原性細胞に向けられた内因性の免疫反応を強化するか、または任意のタイプの病原性細胞により引き起こされる疾患状態を治療するのに有用である。さらなる例示的抗がん剤としては、アドレノコルチコイドおよびコルチコステロイド、アルキル化剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシン（ａｃｌａｍｙｃｉｎ）およびアクラマイシン誘導体、エストロゲン、代謝拮抗剤（例えば、シトシンアラビノシド、プリン類似体、ピリミジン類似体およびメトトレキセート）、ブスルファン、カルボプラチン、クロランブシル、シスプラチンおよび他の白金化合物、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、タキソテール（登録商標）、シクロホスファミド、ダウノマイシン、リゾキシン、Ｔ２毒素、植物性アルカロイド、プレドニゾン、ヒドロキシウレア、テニポシド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管阻害剤、エポシロン、チューブリシン、シクロプロピルベンズ［ｅ］インドロン、ｓｅｃｏ−シクロプロピルベンズ［ｅ］インドロン、Ｏ−Ａｃ−ｓｅｃｏ−シクロプロピルベンズ［ｅ］インドロン、ブレオマイシンおよび任意の他の抗生物質、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａ）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビンおよび類似体）およびその誘導体（例えば、デアセチルビンブラスチンモノヒドラジド（ＤＡＶＬＢＨ）、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、チオコルヒチン、トリチルシステイン、ハリコンドリンＢ（ｈａｌｉｃｏｎｄｒｉｎ  Ｂ））、ドラスタチン（例えばドラスタチン１０）、アマニチン（例えばα−アマニチン）、カンプトテシン、イリノテカンおよびその他のカンプトテシン誘導体、ゲルダナマイシンおよびゲルダナマイシン誘導体、エストラムスチン、ノコダゾール、ＭＡＰ４、コルセミド、炎症性および前炎症性物質、ペプチドおよびペプチド類似シグナル伝達阻害剤、並びに任意の他の薬物または毒素が挙げられる。本明細書に記載の複合体に含まれ得る他の薬物としては、ラパマイシン（例えばシロリムスまたはエベロリムス）、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、クロラムフェニコール、アミノグリコシド抗生物質、ゲンタマイシン、アンフォテリシンＢ、アシクロビル、トリフルリジン、ガンシクロビル、ジドブジン、アマンタジン、リバビリン、および任意の他の抗菌性化合物が挙げられる。
【０１１７】
さらに、１以上のさらなる抗がん剤は、細胞毒性があるもの、腫瘍浸透性を強化するもの、腫瘍細胞の増殖を阻害するもの、アポトーシスを促進するもの、標的細胞において抗アポトーシス活性を減少させるものであり得、感染性因子により引き起こされる疾患を治療するのに用いられるか、病原性細胞に向けられた内因性の免疫反応を強化するか、または任意のタイプの病原性細胞により引き起こされる疾患状態を治療するのに有用である。さらなる例示的抗がん剤としては、上述の段落に記載されたものが挙げられる。
【０１１８】
さらに、少なくとも１のさらなる抗がん剤は、細胞毒性があるもの、腫瘍浸透性を強化するもの、腫瘍細胞の増殖を阻害するもの、アポトーシスを促進するもの、標的細胞において抗アポトーシス活性を減少させるものであり得、感染性因子により引き起こされる疾患を治療するのに用いられるか、病原性細胞に向けられた内因性の免疫反応を強化するか、または任意のタイプの病原性細胞により引き起こされる疾患状態を治療するのに有用である。さらなる例示的抗がん剤としては、アドレノコルチコイドおよびコルチコステロイド、アルキル化剤、抗アンドロゲン、抗エストロゲン、アンドロゲン、アクラマイシンおよびアクラマイシン誘導体、エストロゲン、代謝拮抗剤（例えば、シトシンアラビノシド、プリン類似体、ピリミジン類似体およびメトトレキセート）、ブスルファン、カルボプラチン、クロランブシル、シスプラチンおよび他の白金化合物、タモキシフェン、タキソール、パクリタキセル、パクリタキセル誘導体、タキソテール（登録商標）、シクロホスファミド、ダウノマイシン、リゾキシン、Ｔ２毒素、植物性アルカロイド、プレドニゾン、ヒドロキシウレア、テニポシド、マイトマイシン、ディスコデルモリド、微小管阻害剤、エポシロン、チューブリシン、シクロプロピルベンズ［ｅ］インドロン、ｓｅｃｏ−シクロプロピルベンズ［ｅ］インドロン、Ｏ−Ａｃ−ｓｅｃｏ−シクロプロピルベンズ［ｅ］インドロン、ブレオマイシンおよび任意の他の抗生物質、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビンおよび類似体）およびその誘導体（例えば、デアセチルビンブラスチンモノヒドラジド（ＤＡＶＬＢＨ）、コルヒチン、コルヒチン誘導体、アロコルヒチン、チオコルヒチン、トリチルシステイン、ハリコンドリンＢ）、ドラスタチン（例えばドラスタチン１０）、アマニチン（例えばα−アマニチン）、カンプトテシン、イリノテカンおよびその他のカンプトテシン誘導体、ゲルダナマイシンおよびゲルダナマイシン誘導体、エストラムスチン、ノコダゾール、ＭＡＰ４、コルセミド、炎症性および前炎症性物質、ペプチドおよびペプチド類似シグナル伝達阻害剤、並びに任意の他の薬物または毒素が挙げられる。本明細書に記載の複合体に含まれ得る他の薬物としては、ラパマイシン（例えばシロリムスまたはエベロリムス）、ペニシリン、セファロスポリン、バンコマイシン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リファンピン、クロラムフェニコール、アミノグリコシド抗生物質、ゲンタマイシン、アンフォテリシンＢ、アシクロビル、トリフルリジン、ガンシクロビル、ジドブジン、アマンタジン、リバビリン、および任意の他の抗菌性化合物、並びにその組み合わせが挙げられる。
【０１１９】
他の態様において、抗がん剤は、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾミブ、チューブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エベロリムス、α−アマナチン（α−ａｍａｎａｔｉｎ）、ベルカリン（ｖｅｒｕｃａｒｉｎ）、ジデムニンＢ、ゲルダナマイシン、プルバラノールＡ、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポシロン、メイタンシンおよびチロシンキナーゼ阻害剤から選ばれ、上記のものの類似体および誘導体を含む。
【０１２０】
他の態様において、１以上の抗がん剤は、クリプトフィシン、ボルテゾミブ、チオボルテゾミブ、チューブリシン、アミノプテリン、ラパマイシン、パクリタキセル、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エベロリムス、α−アマナチン、ベルカリン、ジデムニンＢ、エリブリンメシル酸（Ｈａｌａｖｅｎ（登録商標））ゲルダナマイシン、プルバラノールＡ、イスピネシブ、ブデソニド、ダサチニブ、エポシロン、メイタンシンおよびチロシンキナーゼ阻害剤、並びにその組み合わせの１つ以上からなる群から選ばれる。
【０１２１】
本明細書に記載の薬物送達複合体化合物は、任意の他の既知の薬物を用いたさらなる併用療法において投与され得、さらなる薬物が標的にされているかいないかは問われない。さらなる例示的な薬物としては、これらに限定されないが、ペプチド、オリゴペプチド、レトロ−インベルソオリゴペプチド、タンパク質、少なくとも１の非ペプチド結合がペプチド結合に置き換わっているタンパク質類似体、アポタンパク質、糖タンパク質、酵素、補酵素、酵素阻害剤、アミノ酸およびその誘導体、受容体および他の膜タンパク質、抗原およびそれに対する抗体、ハプテンおよびそれに対する抗体、ホルモン、脂質、リン脂質、リポソーム、毒素、抗生物質、鎮痛剤、気管支拡張剤、ベータ遮断薬、抗菌剤、降圧剤、心血管作動薬（抗不整脈薬、強心配糖体、抗狭心症薬、血管拡張剤を含む）、中枢神経系薬（興奮剤、向精神薬、抗躁薬および抑制薬を含む）、抗ウイルス剤、抗ヒスタミン剤、抗がん薬（化学療法剤を含む）、神安定剤、抗抑制薬、Ｈ−２アンタゴニスト、抗鎮痙薬、制嘔吐剤、プロスタグランジンおよびプロスタグランジン類似体、筋弛緩薬、抗炎症性物質、興奮剤、鬱血除去剤、制吐薬、利尿薬、抗痙攣薬、抗喘息薬、抗パーキンソン薬、去痰薬、咳止め薬、粘液溶解薬、並びに鉱物および栄養添加物が挙げられる。
【０１２２】
他の態様において、１の治療的因子を含む、少なくとも１のさらなる組成物は、薬物送達複合体により仲介される病原性細胞の集団の排除を強化するために、詳細に上記した方法論に組み合わせてまたはアジュバントとして、宿主に投与され得るか、あるいは１以上のさらなる治療的因子が投与され得る。治療的因子は、内因性の免疫反応を刺激する能力がある化合物、化学療法剤、または投与された薬物送達複合体の有効性を補完する能力がある他の治療的因子から選ばれ得る。本発明の方法は、上記の複合体に加えて、内因性の免疫反応を刺激する能力がある化合物または組成物（例えばサイトカイン）を宿主に投与することにより実施することができ、当該化合物または組成物としては、これらに限定されないが、インターロイキン１〜１８、幹細胞因子、塩基性ＦＧＦ、ＥＧＦ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＬＫ−２リガンド、ＨＩＬＤＡ、ＭＩＰ−１α、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、Ｍ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、可溶性ＣＤ２３、ＬＩＦ、およびその組み合わせのようなサイトカインまたは免疫細胞増殖因子が挙げられる。
【０１２３】
これらの因子の治療的に有効な組み合わせが用いられ得る。ある態様において、例えば、病原性細胞を有する宿主動物において、病原性細胞を排除する、減少させるまたは中和するために、治療的有効量のＩＬ−２（例えば、複数回投与１日レジメンにおいて、約０．１ＭＩＵ／ｍ２／投与／日〜約１５ＭＩＵ／ｍ２／投与／日の範囲の量で）、およびＩＦＮ−α（例えば、複数回投与１日レジメンにおいて、約０．１ＭＩＵ／ｍ２／投与／日〜約７．５ＭＩＵ／ｍ２／投与／日の範囲の量で）が、薬物送達複合体と共に用いられ得る（ＭＩＵ＝百万国際単位；ｍ２＝平均的なヒトのおおよその体表面積）。他の態様において、ＩＬ−１２およびＩＦＮ−αは、インターロイキンおよびインターフェロンに対する上記の治療的有効量で用いられ、さらなる他の態様において、ＩＬ−１５およびＩＦＮ−αは、インターロイキンおよびインターフェロンに対する上述の治療的有効量で用いられる。代わりの態様において、ＩＬ−２、ＩＦＮ−αまたはＩＦＮ−γ、およびＧＭ−ＣＳＦは、上述の治療的有効量で組み合わせて用いられる。本発明は、他のインターロイキンおよびインターフェロンおよびコロニー刺激因子の組み合わせを含む、任意の他の有効なサイトカインの組み合わせの使用も考慮する。
【０１２４】
リンカーは、インビボで直面する生理的条件のような特定の条件下で、中性であることがあるか、またはイオン化することがあるものと理解される。イオン化するリンカーに関して、リンカーは、選ばれた条件下で、脱プロトン化されて陰イオンを形成するか、あるいはプロトン化されて陽イオンを形成することがある。１以上の脱プロトン化またはプロトン化事象が起こることがあるものと理解される。さらに、同一のリンカーが脱プロトン化およびプロトン化されて、内塩または双性イオン化合物を形成することがあるものと理解される。
【０１２５】
本明細書で用いられるように、用語「適宜置換されていてもよい」は、適宜置換されていてもよい基上で、水素原子が他の官能基に置換されることを含む。そのような他の官能基としては、これらに限定されないが、例示的に、アミノ、ヒドロキシル、ハロ、チオール、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体等が挙げられる。例示的に、任意のアミノ、ヒドロキシル、チオール、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキルおよび／またはスルホン酸は、適宜置換されていてもよい。
【０１２６】
本明細書で用いられるように、用語「適宜置換されていてもよいアリール」および「適宜置換されていてもよいヘテロアリール」は、適宜置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール上で、水素原子が他の官能基に置換されることを含む。そのような他の官能基としては、これらに限定されないが、例示的に、アミノ、ヒドロキシ、ハロ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキル、ニトロ、スルホン酸およびその誘導体、カルボン酸およびその誘導体等が挙げられる。例示的に、任意のアミノ、ヒドロキシ、チオ、アルキル、ハロアルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールヘテロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールヘテロアルキルおよび／またはスルホン酸は、適宜置換されていてもよい。
【０１２７】
例示的置換基としては、これらに限定されないが、基−（ＣＨ２）ｘＺＸが挙げられ、ここに、ｘは０〜６の整数であり、ＺＸは、ハロゲン、ヒドロキシ、アルカノイルオキシ（Ｃ１−Ｃ６アルカノイルオキシ、適宜置換されていてもよいアロイルオキシを含む）、アルキル（Ｃ１−Ｃ６アルキルを含む）、アルコキシ（Ｃ１−Ｃ６アルコキシを含む）、シクロアルキル（Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルを含む）、シクロアルコキシ（Ｃ３−Ｃ８シクロアルコキシを含む）、アルケニル（Ｃ２−Ｃ６アルケニルを含む）、アルキニル（Ｃ２−Ｃ６アルキニルを含む）、ハロアルキル（Ｃ１−Ｃ６ハロアルキルを含む）、ハロアルコキシ（Ｃ１−Ｃ６ハロアルコキシを含む）、ハロシクロアルキル（Ｃ３−Ｃ８ハロシクロアルキルを含む）、ハロシクロアルコキシ（Ｃ３−Ｃ８ハロシクロアルコキシを含む）、アミノ、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノ、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノ、アルキルカルボニルアミノ、Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アルキルカルボニルアミノ、アミノアルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキルアミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アミノアルキル、アルキルカルボニルアミノアルキル、Ｎ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）アルキルカルボニルアミノアルキル、シアノ、およびニトロから選ばれ；あるいはＺＸは−ＣＯ２Ｒ４および−ＣＯＮＲ５Ｒ６から選ばれ、ここに、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６はそれぞれ独立して水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリール−Ｃ１−Ｃ６アルキルおよびヘテロアリール−Ｃ１−Ｃ６アルキルから選ばれる。
【０１２８】
本明細書で用いられるように、例えば、リガンドおよび／または独立して選ばれる薬物を結合するおよび／または標的にする細胞表面受容体に関連する用語「基」は、本明細書に記載の、リガンドおよび／または独立して選ばれる薬物を結合するおよび／または標的にする細胞表面受容体を指し、ここに、水素原子またはヘテロ原子上のアルキル基等のような１以上の原子または基は除去されて、多価のリンカーＬに結合するための基をもたらす。そのようなリガンド基および薬物基はそれぞれ、本明細書では、リガンド類似体および薬物類似体とも称されることがある。
【０１２９】
本明細書で用いられるように、用語「脱離基」は反応性官能基を指し、当該反応性官能基は、それが結合している原子上に求電子性部位を生成し、求核剤が当該原子上の当該求電子性部位に付加することがある。例示的な脱離基としては、これらに限定されないが、ハロゲン、適宜置換されていてもよいフェノール、アシルオキシ基、スルホンオキシ基等が挙げられる。そのような脱離基がアルキル、アシル等であってもよいことは理解されるべきである。そのような脱離基は、例えば、脱離基がアシル上に存在する場合、本明細書では、活性化基とも称されることがある。さらに、これらに限定されないが、ＰｙＢｏｐ、ＢＯＰ−Ｃｌ、ＢＯＰ、ペンタフルオロフェノール、クロロギ酸イソブチル等の慣習のペプチド、アミドおよびエステルカップリング剤は、カルボニル基上に、本明細書で定義される脱離基を含む様々な中間体を形成する。
【０１３０】
本命書で開示されている全ての実例において、任意の変数に対する整数の範囲の記述が、記述されている範囲、範囲内にある全ての個々のメンバー、およびその変数に対する全ての可能な部分的な範囲を記載していることは理解されるべきである。例えば、ｎが０〜８の整数であるという記述は、その範囲、並びに、例えばｎが０であり、またはｎが１であり、またはｎが２である等、０、１、２、３、４、５、６、７および８の、個々のおよび選択可能な値を記載している。さらに、ｎが０〜８の整数であるという記述は、それぞれのおよび全ての部分的な範囲も記載しており、そのそれぞれは、例えば、ｎが１〜８、１〜７、１〜６、２〜８、２〜７、１〜３、２〜４の整数である等、さらなる態様の基準となることがある。
【０１３１】
本明細書で用いられるように、用語「組成物」は概して、特定の量で特定の成分を含む任意の製品、および特定の量の特定の成分の組み合わせから直接的にまたは間接的に得られる任意の製品を指す。本明細書に記載の組成物は、本明細書に記載の単離された化合物、または塩、溶液、水和物、溶媒和物および本明細書に記載の化合物の他の形態から調製されてもよいことは理解されるべきである。ヒドロキシ、アミノ等の基のような特定の官能基は、化合物の様々な物理的形態で、水および／または様々な溶媒との複合体および／または配位化合物を形成するものと理解される。組成物は、本明細書に記載の化合物の、様々なアモルファス形態、非アモルファス形態、部分的な結晶性形態、結晶性形態および／または他の形態学的形態から調製されてもよいことも理解されるべきである。組成物は、本明細書に記載の化合物の様々な水和物および／または溶媒和物から調製されてもよいことも理解されるべきである。従って、本明細書に記載の化合物を記述しているそのような医薬組成物は、本明細書に記載の化合物の、様々な形態学的形態および／または溶媒和物もしくは水和物形態の、それぞれのまたは任意の組み合わせを含むものと理解されるべきである。さらに、組成物が、本明細書に記載の化合物の様々な共結晶から調製されてもよいことは理解されるべきである。
【０１３２】
例示的に、組成物は、１以上の担体、希釈剤および／または賦形剤を含んでいてもよい。本明細書に記載の化合物またはそれらを含む組成物は、本明細書に記載の方法に適している任意の慣習の剤形において、治療的有効量で製剤化されてもよい。本明細書に記載の化合物、またはそれらを含む組成物（そのような製剤を含む）は、本明細書に記載の方法に対する幅広い慣習の経路により、幅広い投与フォーマットで、既知の手順を利用して投与されてもよい（一般的に、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (21st ed., 2005)を参照のこと）。
【０１３３】
本明細書で用いられるように、用語「治療的有効量」は、研究者、獣医、医師または他の臨床医により求められている、組織系、動物またはヒトにおける生物学的または医薬反応（治療下の疾患または障害の症状の軽減を含む）を引き起こす活性化合物または医薬品の量を指す。ある局面において、治療的有効量は、任意の治療法に適用できる妥当なリスク／ベネフィット比で、疾患または疾患の症状を治療または軽減することがあるものである。しかしながら、本明細書に記載の化合物および組成物の総１日使用量は、主治医により正しい医学的判断の範囲内で決定されてもよいことは理解されるべきである。任意の特定の患者に対する具体的な治療的有効用量レベルは、治療下の障害、および障害の重症度；具体的に用いられる化合物の活性；具体的に用いられる組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、性別および食事：投与時期、投与経路、および具体的に用いられる化合物の排せつ速度；治療期間；具体的に用いられる化合物と組み合わせてまたは同時に用いられる薬物；等の因子を含む、通常の研究者、獣医、医師または他の臨床医に周知の様々な因子によって決まるであろう。
【０１３４】
本明細書で用いられるように、用語「投与する」は、患者に、本明細書に記載の化合物および組成物を取り入れる全ての方法を含み、当該方法としては、これらに限定されるものではないが、経口投与（ｐｏ）、静脈内投与（ｉｖ）、筋肉内投与（ｉｍ）、皮下投与（ｓｃ）、経皮投与、吸入投与、バッカル投与、眼内投与、舌下投与、膣投与、直腸投与等が挙げられる。本明細書に記載の化合物および組成物は、慣習の非毒性の医薬的に許容される担体、アジュバントおよび媒体を含む単位用量形態および／または製剤で投与されてもよい。
【０１３５】
経口投与のための例示的フォーマットとしては、錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ等が挙げられる。
【０１３６】
非経口投与のための例示的経路としては、静脈内投与、動脈内、腹腔内、硬膜外、尿道内、胸骨内、筋肉内および皮下、並びに当該技術分野で認識されている任意の他の非経口投与経路が挙げられる。
【０１３７】
本明細書では、本明細書に記載の疾患、投与経路、および／または、化合物および／または組成物が局所的または全身的に投与されるかによって、約１μｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇの範囲内に入る用量を含む、幅広い範囲の許容用量が考慮される。容量は、単一であるか、または分割されてもよく、ｑ．ｄ．、ｂ．ｉ．ｄ．、ｔ．ｉ．ｄ．、またはさらには１日おき、週１回、月１回、四半期に１回等を含む、幅広いプロトコルに従って投与されてもよい。これらの各事例において、本明細書に記載の治療的有効量は、投与プロトコルから決定されるように、投与の実例、あるいは総１日用量、総週用量、総月用量または総四半期用量に対応するものと理解される。
【０１３８】
本明細書に記載の化合物は、国際特許公開第ＷＯ２００９／００２９９３号、ＷＯ２００４／０６９１５９号、ＷＯ２００７／０２２４９４号、およびＷＯ２００６／０１２５２７号、並びに米国特許出願第１３／８３７５３９号に記載されているものを含む、慣習の工程を用いて調製してもよい。上記の各開示は、その全体が参照により本明細書に引用される。本明細書で引用されている各公報は、参照により本明細書に引用される。
【０１３９】
以下の実施例は、本発明の具体的な態様をさらに例示している；しかしながら、以下の例示的実施例は、本発明を制限するものとは決して解釈されるべきではない。
【実施例】
【０１４０】
化合物実施例
本明細書に記載の化合物は、本明細書に記載の工程および合成、並びに一般的な有機合成法を用いて調製してもよい。特に、化合物を調製するための方法は、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２号に記載されており、当該開示は参照により本明細書に引用される。
【０１４１】
実施例．葉酸−ペプチドの一般生成。葉酸を含むペプチジルフラグメントＰｔｅ−Ｇｌｕ−（ＡＡ）ｎ−ＮＨ（ＣＨＲ２）ＣＯ２Ｈ（３）は、以下のスキーム：
スキーム
【化６】
2017516760.tif 000008
（ａ）２０％ピペリジン／ＤＭＦ；（ｂ）Ｆｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨ，ＰｙＢｏｐ，ＤＩＰＥＡ，ＤＭＦ；（ｃ）Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｔ−Ｂｕ）−ＯＨ，ＰｙＢｏｐ，ＤＩＰＥＡ，ＤＭＦ；（ｄ）１．Ｎ１０（ＴＦＡ）−Ｐｔｅ−ＯＨ；ＰｙＢｏｐ，ＤＩＰＥＡ，ＤＭＳＯ；（ｅ）ＴＦＡＡ，（ＣＨ２ＳＨ）２，ｉ−Ｐｒ３ＳｉＨ；（ｆ）ＮＨ４ＯＨ（ｐＨ１０．３）。
に示されるように、ポリマー支持逐次的アプローチにより、酸感受性のＦｍｏｃ−ＡＡ−Ｗａｎｇ樹脂（１）上におけるＦｍｏｃ−戦略のような標準法を用いて調製する。
【０１４２】
適切な出発物質を用いて、非天然アミノ酸が上記の工程に含まれることがあることは理解されるべきである。
【０１４３】
本明細書に記載の工程のこの例示的態様において、Ｒ１はＦｍｏｃであり、Ｒ２は適切に保護された所望のアミノ酸側鎖であり、ＤＩＰＥＡはジイソプロピルエチルアミンである。ＰｙＢＯＰのような標準的なカップリング手順、および本明細書に記載されているまたは当該技術分野で既知の他のカップリング手順を用い、ここに、カップリング剤は、例示的に、効率的なカップリングをを確保するために、活性化剤として利用した。各カップリング工程の後、Ｆｍｏｃ保護基は、標準条件下、例えば、ピペリジン、テトラブチルアンモニウムフルオライド（ＴＢＡＦ）等で処理して除去する。スキームに記載されているように、また工程（ｂ）にＦｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨにより表されているように、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ、Ｎ１０−ＴＦＡ−Ｐｔｅ−ＯＨ等のような適切に保護されたアミノ酸ビルディングブロックを用いた。従って、ＡＡは、適切に保護された任意のアミノ酸出発物質を指す。本明細書で用いられるように、用語アミノ酸は、１以上の炭素により隔てられているアミンとカルボン酸官能基の両方を有する任意の試薬ことを指すことを意図しており、天然に存在するアルファおよびベータアミノ酸と共に、アミノ酸誘導体、並びにこれらのアミノ酸の類似体を含むことは理解されるべきである。特に、保護されたセリン、スレオニン、システイン、アスパラギン酸塩等のような、保護された側鎖を有するアミノ酸も、本明細書に記載の葉酸−ペプチド合成に用いられることがある。さらに、ガンマ、デルタまたはより長い相同なアミノ酸も、本明細書に記載の葉酸−ペプチド合成に、出発物質として含まれることがある。さらに、相同な側鎖、またはノルロイシン、イソバリン、β−メチルスレオニン、β−メチルシステイン、β，β−ジメチルシステイン等のような代わりの分岐構造を有するアミノ酸類似体も、本明細書に記載の葉酸−ペプチド合成に、出発物質として含まれることがある。
【０１４４】
Ｆｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨを伴う一連のカップリング（工程（ａ）＆（ｂ））を「ｎ」回実施して固体支持ペプチド（２）を調製し、ここに、ｎは整数であり、０〜約１００に等しくてよい。最後のカップリング工程の後、残っているＦｍｏｃ基を除去し（工程（ａ））、ペプチドを順次、グルタミン酸塩誘導体にカップリングさせ（工程（ｃ））、脱保護し、ＴＦＡで保護されたプテロイン酸にカップリングさせる（工程（ｄ））。続いて、ペプチドを、トリフルオロ酢酸、エタンジチオールおよびトリイソプロピルシランで処理して、ポリマー支持体から切断する（工程（ｅ））。これらの反応条件は、適切に保護されたアミノ酸側鎖の一部を形成することがあるｔ−Ｂｕ、ｔ−ＢｏｃおよびＴｒｔ保護基を同時に除去することになる。塩基で処理してＴＦＡ保護基を除去し（工程（ｆ））、葉酸を含むペプチジルフラグメント（３）を得る。
【化７】
2017516760.tif 000009
ＥＣ１１９
ＬＣＭＳ［ＥＳＩ  ［Ｍ＋Ｈ］＋：１０４６；一部の1H NMR  (D2O, 300 MHz): δ 8.68 (s, 1H, FA H-7), 7.57 (d, 2H, J = 8.4 Hz, FA H-12 &16), 6.67 (d, 2H, J = 9 Hz, FA H-13 &15), 4.40-4.75 (series of m, 5H), 4.35 (m, 2H), 4.16 (m, 1H), 3.02 (m, 2H), 2.55-2.95 (series of m, 8H), 2.42 (m, 2H), 2.00-2.30 (m, 2H), 1.55-1.90 (m, 2H), 1.48 (m, 2H) ppm。
【０１４５】
実施例．チューブリシンヒドラジドの調製。ＥＣ０３４７（ＴｕｂＢ−Ｈ）の調製で示されている。
【化８】
2017516760.tif 000010
ＥＣ０３４７
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ，６．１μＬ）およびクロロギ酸イソブチル（３．０μＬ）を、相前後して、シリンジを介して、−１５℃で、チューブリシンＢ（０．１５ｍｇ）の無水ＥｔＯＡｃ（２．０ｍＬ）溶液に加えた。アルゴン下にて−１５℃で４５分間撹拌した後、反応混合物を−２０℃に冷却し、これに無水ヒドラジン（５．０μＬ）を加えた。反応混合物を、アルゴン下にて−２０℃で３時間撹拌し、１．０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０，１．０ｍＬ）でクエンチし、精製するために分取ＨＰＬＣに注入した。カラム：Ｗａｔｅｒｓ  ＸＴｅｒｒａ  Ｐｒｅｐ  ＭＳ  Ｃ１８  １０μｍ，１９×２５０ｍｍ；移動相Ａ：１．０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）；移動相Ｂ：アセトニトリル；方法：２０分間かけて１０％Ｂから８０％Ｂ，流速＝２５ｍｌ／分。１５．１４〜１５．５４分からのフラクションを採取し、凍結乾燥し、白色固体としてＥＣ０３４７を得た（２．７ｍｇ）。上記の方法は、他のチューブリシンヒドラジドの調製に対しても、チューブリシン出発化合物を適切に選ぶことにより同様に適用することができる。
【０１４６】
実施例．カップリング試薬ＥＣ０３１１の合成
【化９】
2017516760.tif 000011
ＤＩＰＥＡ（０．６０ｍＬ）を、０℃で、ＨＯＢｔ−ＯＣＯ２−（ＣＨ２）２−ＳＳ−２−ピリジンＨＣｌ（６８５ｍｇ，９１％）の無水ＤＣＭ（５．０ｍＬ）懸濁液に加え、アルゴン下にて２分間撹拌し、これに無水ヒドラジン（０．１０ｍＬ）を加えた。反応混合物をアルゴン下にて０℃で１０分間、室温でさらに３０分間撹拌し、ろ過し、ろ液をフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製し（シリカゲル，２％ＭｅＯＨを含むＤＣＭ）、粘度が高い透明な油状物としてＥＣ０３１１を得て（３７１ｍｇ）、当該油状物は放置すると固化した。
【０１４７】
実施例．チューブリシンジスルフィドの調製（段階工程）
【化１０】
2017516760.tif 000012
ＥＣ０３１２について示されている。ＤＩＰＥＡ（３６μＬ）およびクロロギ酸イソブチル（１３μＬ）を、相前後して、シリンジにより、−１５℃で、チューブリシンＢ（８２ｍｇ）の無水ＥｔＯＡｃ（２．０ｍＬ）溶液に加えた。アルゴン下にて−１５℃で４５分間撹拌した後、反応混合物に、ＥＣ０３１１の無水ＥｔＯＡｃ（１．０ｍＬ）溶液を加えた。得られた溶液をアルゴン下にて−１５℃で１５分間、室温でさらに４５分間撹拌し、濃縮し、残渣をフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製し（シリカゲル，２〜８％ＭｅＯＨを含むＤＣＭ）、白色固体としてＥＣ０３１２を得た（９８ｍｇ）。上記の方法は、他のチューブリシン誘導体の調製に対しても、チューブリシン出発化合物を適切に選ぶことにより同様に適用することができる。
【０１４８】
実施例．チューブリシンＢピリジルジスルフィド
【化１１】
2017516760.tif 000013
同様に、チューブリシンＢピリジルジスルフィドは、本明細書に記載のように調製する。
【０１４９】
実施例．
【化１２】
2017516760.tif 000014
ＥＣ１５７７
ＭＳ（ＥＳＩ，［Ｍ＋Ｈ］＋）＝１６８１。一部の1H NMR (D2O): 8.96 (s), 7.65 (d), 6.81 (d), 4.66 (s), 4.40-4.15 (m), 3.90-3.54 (m), 3.50-3.18 (m), 2.97-2.90 (m), 2.51-1.80 (m)。
【０１５０】
実施例．ジスルフィドを含むチューブリシン複合体の一般合成
【化１３】
2017516760.tif 000015
天然に存在する特定のチューブリシンのピリジニルジスルフィド誘導体を用いて示されており、ここに、Ｒ１はＨまたはＯＨであり、Ｒ１０はアルキルまたはアルケニルである。チオール基を含む結合リガンド−リンカー中間体を脱イオン水（約２０ｍｇ／ｍＬ，使用前に１０分間アルゴンで泡立てた）に入れ、懸濁液のｐＨを、飽和ＮａＨＣＯ３（使用前に１０分間アルゴンで泡立てた）で、約６．９に調整する（ｐＨが上昇すると、懸濁液は溶液になることがある）。必要に応じて、溶液に、さらに脱イオン水を加え（約２０〜２５％）、水性溶液に、直ちにＥＣ０３１２のＴＨＦ溶液（約２０ｍｇ／ｍＬ）を加える。反応混合物はすぐに均一になる。アルゴン下にて、例えば４５分間撹拌した後、反応混合物を２．０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０，約１５０容積パーセント）で希釈し、ＴＨＦを脱気により除去する。得られた懸濁液をろ過し、ろ液を分取ＨＰＬＣにより精製してもよい（本明細書に記載のように）。フラクションを凍結乾燥し、複合体を単離する。上記の方法は、他のチューブリシン複合体の調製に対しても、チューブリシン出発化合物を適切に選ぶことにより同様に適用することができる。
【０１５１】
実施例．ＥＣ１４５６およびその調製は、ＷＯ２０１４／０６２６９７の７６〜９１頁に記載されており、当該頁は、参照により本明細書に引用される。ＥＣ１４５６は、以下の工程に従って調製する。
【０１５２】
実施例．ＥＣ１４２６は、以下の工程に従って調製する。
【化１４】
2017516760.tif 000016
【化１５】
2017516760.tif 000017
【０１５３】
実施例．さらなるチューブリシンおよびチューブリシン中間体は、ＷＯ２０１２／０１９１２３、ＷＯ２００９／０５５５６２、ＰＣＴ国際出願ＵＳ第２０１３／０３４６７２号、および米国仮出願第６１／７９３０８２号に記載されている工程に従って調製してもよく、各開示は、その全体が参照により本明細書に引用される。
【０１５４】
実施例．ＥＣ１４５４は、以下の工程に従って調製する。
【化１６】
2017516760.tif 000018
Ｎ１０−ＴＦＡ保護されたＥＣ１４５４の固相合成は、トリチル保護されたＤ−システインに結合した樹脂から始める。樹脂をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に懸濁し、ＤＭＦで２回洗浄する。ＥＣ０４７５（グルカミン修飾Ｌ−グルタミン酸）、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を、反応混合物に加える。少なくとも１時間後、カイザーテストを実施し、カップリングが完了したことを確かにする。樹脂をＤＭＦで３回、ＩＰＡで３回、ＤＭＦで３回洗浄する。樹脂を、ピペリジンを含むＤＭＦで３回、ＤＭＦで３回、ＩＰＡで３回、ゆっくりと洗浄する。カイザーテストを実施し、脱保護されたことを確認する。樹脂をＤＭＦで３回洗浄し、配列中の次のアミノ酸を、次の同一の工程でカップリングさせる。モノマーを以下の順番でカップリングさせる：１）ＥＣ０４７５、２）Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、３）ＥＣ０４７５、４）Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ、５）ＥＣ０４７５、６）Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ｇｌｕ−ＯｔＢｕ、および７）Ｎ１０−ＴＦＡ−Ｐｔｅ−ＯＨ。
【０１５５】
最後のカップリングが完了したら、樹脂をメタノールで３回洗浄し、室温で、樹脂の間にアルゴンを通過させることにより乾燥する。乾燥した樹脂を、ＴＦＡ、水、エタンジチオールおよびトリイソプロピルシランの混合物に懸濁する。１時間後、樹脂をろ過により除去し、ＴＦＡで洗浄する。冷却したエチルエーテルに加えることにより生成物を沈殿させ、ろ過し、エーテルで洗浄する。固体を真空下にて室温で乾燥し、冷凍庫内にて保存する。
【化１７】
2017516760.tif 000019
【０１５６】
Ｎ１０−ＴＦＡ  ＥＣ１４５４を、アルゴンを分散させた水に溶解する。炭酸ナトリウム（１Ｍ  水溶液，アルゴンを分散させた）を加えて、ｐＨを９．４〜１０．１にする。反応混合物を少なくとも２０分間撹拌する。ＬＣから判断して反応が完了したら、２Ｍ  ＨＣｌでｐＨを１．９〜２．３に調整することによりクエンチする。生成物を、Ｃ１８カラムクロマトグラフィーにより、溶離剤としてアセトニトリルおよび酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ５）を用いて精製する。フラクションを採取し、純度をＨＰＬＣにより確認する。集めた生成物フラクションをロータリーエバポレーターで濃縮し、次いで凍結乾燥し、黄色固体としてＥＣ１４５４を得る。ＭＳ（ＥＳＩ，［Ｍ＋２Ｈ］２＋）＝８４０．９０、［Ｍ＋Ｈ１］＋＝１６８１．３。選択された1H-NMR (DMSO, 300 MHz) δ(ppm): 8.6(s), 7.6(d), 6.6(d), 4.45(s), 4.35(t), 4.15-4.3(m), 3.3-3.6(m), 3.25(m), 3.0(m), 2.7-2.9(m), 2-2.3(m), 1.6-2(m)。生成物を−２０℃で保存する。
【０１５７】
実施例．ＥＣ１４５６は、以下の工程に従って調製する。
【化１８】
2017516760.tif 000020
【０１５８】
ＥＣ１４２８をアセトニトリルに溶解し、ＥＣ１４５４を含むリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）の溶液を加える。添加前および後に、溶液にアルゴンを分散させる。反応混合物を少なくとも１５分間撹拌し、次いで完了したことを確認する。所望の生成物を、Ｃ１８カラムクロマトグラフィーにより、溶離剤としてアセトニトリルおよびリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を用いて精製する。生成物フラクションを採取し、純度を確認し、集め、限外ろ過により濃縮し、１０〜２０ｍｇ／ｍＬ  ＥＣ１４５６である水性溶液を得る。最終生成物溶液をアッセイ用にサンプリングし、次いで冷凍庫内にて保存する。
【０１５９】
ＥＣ１４５６の陽イオンエレクトロスプレー質量スペクトル（ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｏｒｕｍ）は、ｈｉｇｈ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｗａｔｅｒｓ  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ  Ｘｅｖｏ  Ｇｓ−Ｓ  ＱＴＯＦ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで取得した。主成分をＵＰＬＣ  ｉｎｌｅｔ  ｓｙｓｔｅｍで分離した後、スペクトルを取得し、分解能は約３５，０００であった。Ｍ＋Ｈモノアイソトピックピークの正確な質量の測定値は２６２５．０５９８であったが、これは、式Ｃ１１０Ｈ１６６Ｎ２３Ｏ４５Ｓ３のイオンに対する理論値である２６２５．０５７０から１．１ｐｐｍの誤差（ｅｒｒｏｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）である。同位体分布もその式と一致する。
【０１６０】
ＥＣ１４５６に対するＥＳ＋スペクトルの質量スペクトルの特徴
【表１】
2017516760.tif 000021
【０１６１】
ＥＣ１４５６のサンプル〜３０ｍｇを、重水素化ジメチルスルホキシドと重水の９：１混合物６６５μＬに溶解した。１Ｈ  ＮＭＲスペクトルは、広帯域観測コイルとプロトン観測コイル（ｐｒｏｔｏｎ  ｏｂｓｅｒｖｅ  ｃｏｉｌ）の両方が付いている２チャネルプローブを取り付けたＡｇｉｌｅｎｔ  ｍｏｄｅｌ  ＤＤ２  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで、５００ＭＨｚにて、２６℃で取得した。１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルは、同一の機器で、１２５ＭＨｚにて、同一条件下で取得した。全てのスペクトルは、ＤＭＳＯ溶媒の残留シグナルを２．５ｐｐｍ（１Ｈ）および３９．５０ｐｐｍ（１３Ｃ）として参照した。
【０１６２】
全てのスペクトルの特徴は、以下の表において、両方のＮＭＲスペクトルについて帰属されており（１Ｈおよび１３Ｃ）、以下の図（ここに、＊記号はジスルフィド結合に関する結合を示している）中の原子番号付けを用いている。
【化１９】
2017516760.tif 000022
【０１６３】
帰属は、ＣＯＳＹおよびＴＣＳＹ  ２Ｄ実験を用いる結合を介したＨ−Ｈ結合性、２Ｄ  ＮＯＥＳＹを用いる空間を介したＨ−Ｈ近接性、１Ｄ  ＤＥＰＴ実験を用いる炭素多重度測定、並びに２Ｄ実験ＨＳＱＣおよびＨＭＢＣで検出されたプロトンを用いる結合を介しＣ−Ｈ結合性を含む、１Ｄおよび２Ｄ  ＮＭＲ実験の両方に基づいて行った。１Ｄスペクトルにおける重複（異なるプロトンまたは炭素が同一の化学シフトにおいて共鳴する）のほとんどの事例は２Ｄ  スペクトルにおいて分解することができ、これらの事例では、表は、共に共鳴する（ｃｏ−ｒｅｓｏｎａｔｉｎｇ）種の群に対する積算した積分ではなく、２Ｄスペクトルから測定された化学シフトを反映している。１Ｄの重複の一部の例（例えば、ほぼ同一のグルタミン酸およびグルカミンサブユニット）では、２Ｄ相関スペクトルにおいても重複があったが、これは、複数の原子数間の単一または複数の共鳴の曖昧な帰属を除外しており、これらの事例では、表の一行に、化学シフトおよび／または原子数の帰属に対して複数の項目がある。
【０１６４】
ＮＨおよびＯＨプロトンは、Ｄ２Ｏの重水素原子により交換され、５〜１０ｐｐｍ領域における弱い幅広いピークを除いて、スペクトルにはほとんどなかった。表中に記載されていない、スペクトル中の１Ｈピークとしては、３．７５ｐｐｍにおける幅広いＨＯＤピーク、および２．５０ｐｐｍにおけるＤＭＳＯのピークが挙げられる。ＨＯＤピークは任意の共鳴を曖昧にしていないが、幅広いベースラインの上昇に起因して、４．２および３．４〜３．７ｐｐｍにおいて、近傍の共鳴に対する積分を上昇させている。ＤＭＳＯピークはＨ１２９に対する共鳴を曖昧にしており、この理由から積分していない。表中に記載されていない、スペクトル中の１３Ｃピークとしては、３９．５０ｐｐｍにおける非常に大きなＤＭＳＯ溶媒が挙げられる。ＤＭＳＯピークは、Ｃ９１とＣ９３の両方からのシグナルを曖昧にしている。Ｃ１１６ピークは、アミド基近傍周辺の立体構造変化に起因する広範なブロード化が原因で、１３Ｃスペクトルにおいて観測することができない。３つ全ての化学シフト（Ｃ９１、Ｃ９３、Ｃ１１６）は、２Ｄ相関スペクトルで測定されたプロトンにおいて見ることができ、測定されている。
【０１６５】
ＥＣ１４５６に対するプロトンＮＭＲの帰属
【０１６６】
【表２−１】
2017516760.tif 000023
【０１６７】
【表２−２】
2017516760.tif 000024
【０１６８】
ＥＣ１４５６に対する炭素ＮＭＲの帰属
【表３−１】
2017516760.tif 000025
【０１６９】
【表３−２】
2017516760.tif 000026
【０１７０】
【表３−３】
2017516760.tif 000027
【０１７１】
ＥＣ１４５６のＩＲスペクトルは、拡張された範囲の（ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ｒａｎｇｅ）臭化カリウム（ＫＢｒ）ビームスプリッターであるＥｖｅｒ−Ｇｌｏ  ｍｉｄ／ｆａｒ  ＩＲ  ｓｏｕｒｃｅ、および重水素化硫酸トリグリシン（ＤＴＧＳ）検出器を搭載したＮｅｘｕｓ  ６７００（登録商標）  Ｆｏｕｒｉｅｒ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍ  ｉｎｆｒａｒｅｄ（ＦＴ−ＩＲ）  ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｎｉｃｏｌｅｔ）で取得した。ゲルマニウム（Ｇｅ）結晶を付けたａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  ｔｏｔａｌ  ｒｅｆｒｅｃｔａｎｃｅ（ＡＴＲ）ａｃｃｅｓｓｏｒｙ（Ｔｈｕｎｄｅｒｄｏｍｅ（登録商標），Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｐｅｃｔｒａ−Ｔｅｃｈ）をデータ取得に用いた。スペクトルは、スペクトル分解能４ｃｍ−１で収集した２５６の積算スキャン（ｃｏ−ａｄｄｅｄ  ｓｃａｎ）を表している。バックグラウンドデータセットは、透明なＧｅ結晶を用いて取得した。Ｌｏｇ  １／Ｒ（Ｒ＝反射率）スペクトルは、これら２つのデータセットのそれぞれに対する比を取ることにより取得した。波長の較正は、ポリスチレンを用いて実施した。
【０１７２】
ＥＣ１４５６基準物質に対する赤外領域の帰属
【表４】
2017516760.tif 000028
【０１７３】
ＥＣ１４５６の紫外線スペクトルは、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｌａｍｂｄａ  ２５  ＵＶ／Ｖｉｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒで取得した。スペクトルは、経路長が１ｃｍのセルで、０．１Ｍ  ＮａＯＨ溶媒中、４０．７ｕＭにて、２５℃で記録した。分子はＵＶ領域に重複する吸収を有する数十の発色団を含むものの、３６６ｎｍ、２８８ｎｍおよび２４３ｎｍにおける極大はそれぞれ、主に、プテロイン酸、ベンズアミド／フェノールおよびチアゾール−アミド部分構造に起因する。
【０１７４】
実施例．以下のさらなる化合物が記載されており、本明細書に記載の一般工程に従って調製される。
【化２０】
2017516760.tif 000029
ＥＣ１４５６
【０１７５】
比較実施例．ＥＣ０９２３
【化２１】
2017516760.tif 000030
ＥＣ０９２３（Ｃ２７Ｈ２９Ｎ９Ｏ１２；ＭＷ６７１．５７）
【０１７６】
方法および実施例
一般．以下の略語が本明細書で用いられる：部分反応（ＰＲ）；完全反応（ＣＲ）、週３回（Ｍ／Ｗ／Ｆ）（ＴＩＷ）。
【０１７７】
方法．相対的親和性アッセイ
葉酸と相対的な葉酸受容体（ＦＲ）に対する親和性は、以前に記載された方法（Westerhof, G. R., J. H. Schornagel, et al. (1995) Mol. Pharm. 48: 459-471）に少し変更を加えたものに従って測定した。簡潔には、ＦＲ陽性ＫＢ細胞を２４ウェル細胞培養プレートに高密度に播種し、プラスチックに１８時間接着させた。指定されたウェルにおいて、使用済みの（ｓｐｅｎｔ）インキュベーション培地を、濃度を増大させた被験物質または葉酸の非存在または存在下、葉酸を含まず、１００ｎＭ  ３Ｈ−葉酸を添加したＲＰＭＩ（ＦＦＲＰＭＩ）に交換した。細胞を３７℃で６０分間インキュベートし、次いでＰＢＳ（ｐＨ７．４）で３回ゆすいだ。１％ＳＤＳを含むＰＢＳ（ｐＨ７．４）を、ウェル当たり５００マイクロリットル加えた。次いで細胞溶解物を採取し、５ｍＬのシンチレーションカクテルを入れた個々のバイアルに加え、次いで放射線を計測した。陰性対照チューブには、３Ｈ−葉酸を含むＦＦＲＰＭＩ（競合物なし）のみを入れた。陽性対照チューブには、最終濃度１ｍＭ  葉酸を入れ、これらのサンプルにおいて測定されたＣＰＭ（標識の非特異的結合を表している）を全てのサンプルから差し引いた。相対的親和性は、ＫＢ細胞上のＦＲに結合した３Ｈ−葉酸の５０％を置換するのに必要な化合物のモル比の逆数として定義され、ここに、ＦＲに対する葉酸の相対的親和性を１と設定する。
【０１７８】
方法．細胞のＤＮＡ合成の阻害
本明細書に記載の化合物を、ＫＢ細胞、ＲＡＷ２６４．７マクロファージ等のような葉酸受容体陽性細胞の増殖を阻害する、薬物の能力を予測する、インビトロ細胞毒性アッセイを用いて評価した。細胞タイプは、これら選ばれた細胞の、複合体を形成する薬物への感受性に基づいて選ぶことができることは理解されるべきである。試験化合物は、本明細書に記載の工程に従って調製される、それぞれの化学療法薬と結合している葉酸から構成した。試験細胞を、様々な濃度の葉酸−薬物複合体に暴露し、葉酸受容体仲介に特異的であるとされる活性を評価するために、少なくとも１００倍過剰な葉酸の非存在または存在下でも暴露した。
【０１７９】
実施例．本明細書に記載の、細胞毒性のある薬物の複合体は、ＫＢ細胞に対して活性がある。活性は、競合実験により共投与した葉酸を用いて示されるように、葉酸受容体により仲介される。ＫＢ細胞を、少なくとも１００倍過剰な葉酸の非存在または存在下で、示された濃度の葉酸−薬物複合体に、３７℃で７時間まで暴露した。次いで細胞を新鮮な培養培地で１回ゆすぎ、新鮮な培養培地中、３７℃で７２時間インキュベートした。細胞の生存を、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイを用いて評価した。本明細書に記載の化合物に関して、容量依存的な細胞毒性は概して測定可能であり、ほとんどの場合、ＩＣ５０値（新規に合成されたＤＮＡへの３Ｈ−チミジンの取り込みを５０％減少させるのに必要な薬物複合体の濃度）は低ナノモル範囲にある。理論に束縛されるものではないが、複合体の細胞毒性が過剰な遊離葉酸の存在下で減少した場合、本明細書では、そのような結果は、観察された細胞死が、葉酸受容体への結合により仲介されることを示すものと考えられる。
【０１８０】
方法．様々ながん細胞株に対するインビトロ活性。ＩＣ５０値を、様々な細胞株に対して生成した。細胞を、２４ウェルＦａｌｃｏｎプレートに高密度に播種し、ほぼコンフルエントな単層を一晩形成させた。試験化合物を添加する３０分前に、使用済みの培地を全てのウェルから吸引し、新鮮な葉酸欠乏ＲＰＭＩ培地（ＦＦＲＰＭＩ）に置き換えた。一部のウェルを、１００μＭ  葉酸を含む培地を入れるように指定した。指定されたウェル内の細胞を、標的特異性を測定するのに用いた。理論に束縛されるものではないが、本明細書では、過剰な葉酸の存在下、すなわちＦＲ結合に対して競合がある場合、試験化合物によりもたらされる細胞毒性は、ＦＲ特異的送達には関連のない全活性の一部に対応するものと考えられる。加熱不活性化した１０％ウシ胎仔血清を含む１ｍＬの新鮮なＦＦＲＰＭＩで１回ゆすいだ後、示されているように、１００μＭ  遊離葉酸の存在または非存在下、各ウェルに、濃度を増大させた試験化合物（サンプル当たり４ウェル）を含む１ｍＬの培地を入れた。処理した細胞を３７℃で２時間パルスし、０．５ｍＬの培地で４回ゆすぎ、次いで１ｍＬの新鮮な培地中、７０時間までチェイスした。使用済みの培地を全てのウェルから吸引し、５μＣｉ／ｍＬ  ３Ｈ−チミジンを含む新鮮な培地に置き換えた。さらに３７℃で２時間インキュベートした後、細胞を０．５ｍＬのＰＢＳで３回洗浄し、次いでウェル当たり０．５ｍＬの氷冷した５％トリクロロ酢酸で処理した。１５分後、トリクロロ酢酸を吸引し、細胞物質を、０．５ｍＬの０．２５Ｎ  水酸化ナトリウムを１５分間加えることにより可溶化した。可溶化した各サンプルの４５０μＬ量を、３ｍＬのＥｃｏｌｕｍｅシンチレーションカクテルを入れたシンチレーションバイアルに移し、次いで液体シンチレーションカウンター内で計測した。最終結果は、無治療対照群と相対的な３Ｈ−チミジン取り込みの割合として表されている。
【０１８１】
実施例．本明細書に記載の化合物は、ＫＢ細胞のような病原性細胞に対して、強力なインビトロ活性を示した。本明細書に記載の化合物は、少なくとも１の非天然アミノ酸を含まない化合物と比べて、葉酸受容体に対して高い特異性を示した。例えば、ＥＣ１４５６は、葉酸の競合から決定される、葉酸受容体に対する特異性が約１０００倍を示し（特異性＝競合群と非競合群との間のＩＣ５０の差）、非天然アミノ酸を有するリンカーＬを含まない比較化合物ＥＣ０５３１と比べて、特異性が４倍改善することを示した。
【０１８２】
実施例．葉酸受容体発現細胞に対する選択性。本明細書に記載の化合物は、葉酸受容体発現細胞に対して高い活性を示した。本明細書に記載の化合物は、葉酸受容体陰性細胞に有意な結合を示さなかった。ＥＣ１４５６は、ＦＲ低および高発現細胞（ＦＲ＋）に高度に競合可能な（ｃｏｍｐｅｔａｂｌｅ）結合を示し、ＦＲを発現していない細胞（ＦＲ−）に結合を示さなかった。
【表４】
2017516760.tif 000031
（ａ）活性は、これらの具体的に選ばれた（ＦＲ−）細胞株（Ａ５４９、Ｈ２３、ＨｅｐＧ２、ＡＮ３ＣＡ、ＬＮＣａＰ）に対して、０．１〜１００ｎＭから評価した；ＮＡ＝非適用。
【０１８３】
方法．マウスにおける腫瘍増殖の阻害。４〜７週齢のマウス（Ｂａｌｂ／ｃ株またはｎｕ／ｎｕ株）を、Ｈａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃ．（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から購入した。通常の齧歯類用の餌は高濃度の葉酸（６ｍｇ／ｋｇ餌）を含む；従って、正常なヒト血清の範囲に近い血清葉酸濃度を達成するために、試験動物を、腫瘍接種前の約１週間および当該方法の間、葉酸を含まない規定食（Ｈａｒｌａｎ規定食＃ＴＤ００４３４）で維持した。腫瘍細胞の接種に関して、Ｂａｌｂ／ｃ株においては１×１０６のＭ１０９細胞（同系肺がん腫）、あるいはｎｕ／ｎｕ株においては１×１０６のＫＢ細胞を含む１００μＬを、背内側領域（右腋窩）の皮下組織に注射した。腫瘍を、２日〜３日ごとに、直交する２方向について、キャリパーを用いて測定し、それらの体積を０．５ｘＬｘＷ２として計算しし、ここに、Ｌ＝最長軸の測定値（ｍｍ）であり、Ｗ＝Ｌに直交する軸の測定値（ｍｍ）である。その後、殺細胞数の常用対数値（ｌｏｇ  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌ，ＬＣＫ）およびコントロールに対する治療された（ｔｒｅａｔｅｄ  ｏｖｅｒ  ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｔ／Ｃ）値を、発表された手法に従って計算した（例えば、Lee et al., 「BMS-247550: a novel epothilone analog with a mode of action similar to paclitaxel but possessing superior antitumor efficacy」 Clin Cancer Res 7:1429-1437 (2001); Rose, 「Taxol-based combination chemotherapy and other in vivo preclinical antitumor studies」 J Natl Cancer Inst Monogr 47-53 (1993)を参照のこと）。
【０１８４】
投与は、皮下腫瘍の平均容積が５０〜１００ｍｍ３の間になった時（ｔ０）、典型的には、ＫＢ腫瘍に関しては腫瘍接種後（ＰＴＩ）８日目、Ｍ１０９腫瘍に関してはＰＴＩ１１日目に開始した。別段示されない限り、試験動物（５／群）に、１μｍｏｌ／ｋｇ〜５μｍｏｌ／ｋｇのような様々な用量の薬物送達複合体、または等しい投与容積のＰＢＳ（対照群）を、概して、週３回（ＴＩＷ）、３週間、静脈注射した。投与溶液は、１日おきに、ＰＢＳを用いて新たに調製し、マウスの側方尾静脈から投与した。
【０１８５】
方法．一般４Ｔ−１腫瘍アッセイ。６〜７週齢のマウス（雌のＢａｌｂ／ｃ株）は、Ｈａｒｌａｎ、Ｉｎｃ．Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮから入手した。マウスを、当該方法の開始前および当該方法の間の計３週間、葉酸を含まないＨａｒｌａｎ規定食で維持した。葉酸受容体陰性４Ｔ−１腫瘍細胞（動物当たり１×１０６細胞）を、右腋窩の皮下組織に接種した。本明細書で別段示されない限り、４Ｔ−１腫瘍の平均容積が〜１００ｍｍ３である（ｔ０）、腫瘍接種後約５日目、マウス（５／群）に、３μｍｏｌ／ｋｇのような様々な用量の薬物送達複合体、または等しい投与容積のＰＢＳ（対照群）を、週３回（ＴＩＷ）、３週間、静脈注射した。腫瘍増殖を、各治療群において、２日または３日間隔で、キャリパーを用いて測定した。腫瘍容積を、式Ｖ＝ａ×ｂ２／２を用いて算出し、ここに、「ａ」は腫瘍の長さであり、「ｂ」はミリメートルで表される幅である。
【０１８６】
方法．薬物毒性。残留薬物毒性は、血液を心臓穿刺により採取し、血清を、標準的な血液学的細胞パネルに加えて、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン、総タンパク質、ＡＳＴ−ＳＧＯＴ、ＡＬＴ−ＳＧＰＴの、Ａｎｉ−Ｌｙｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）での独立した分析に供することにより評価した。さらに、ホルマリンで固定した心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、腸、骨格筋および骨（脛骨／腓骨）の組織病理学的評価は、Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ＡＲＵＰ；Ｓａｌｔ  Ｌａｋｅ  Ｃｉｔｙ，Ｕｔａｈ）において、委員会認定の病理学者により実施した。
【０１８７】
方法．体重減少により測定される毒性。試験動物の体重のパーセント変化を、腫瘍接種後（ＰＴＩ）および投与中の選ばれた日に測定した。結果をグラフにした。
【０１８８】
実施例．腫瘍に対するインビボ活性。本明細書に記載の化合物は、ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＫＢ腫瘍に対して高い力価および有効性を示した。本明細書に記載の化合物は、葉酸受容体を発現している腫瘍に対して比活性を示し、宿主動物への毒性は低かった。例えば、ＥＣ１４５６は、１μｍｏｌ／ｋｇにて、ＴＩＷ、２週間、静脈内投与した場合、４／４の試験動物において完全反応を示した。図３Ａに示されるように、ＥＣ１４５６は、過剰な比較化合物ＥＣ０９２３（５０または１００μｍｏｌ／ｋｇ）と競合可能であることからも明らかなように、葉酸受容体により仲介される比活性も示した。図３Ｂに示されるように、ＥＣ１４５６は、丸ごとの動物に毒性があるという証拠を全く示さなかった。
【０１８９】
方法．ＴＮＢＣ腫瘍アッセイ。トリプルネガティブ乳腺がん（ＴＮＢＣ）は、エストロゲン、プロゲステロンおよびＨｅｒ２／ｎｅｕの遺伝子発現がないことを特徴とするサブタイプである。ＴＮＢＣは治療するのが難しく、報告によると、患者においてもたらされる死亡率は、乳腺がんの他のどのサブタイプよりも不釣り合いに高い。ＴＮＢＣ異種移植モデルを、本明細書に記載のＫＢおよびＭ１０９モデルと同様の方法で、ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳腺がん細胞を移植することにより作製した。投与は、皮下腫瘍の平均容積が１１０〜１５０（一般的に１３０）ｍｍ３の間である時（ｔ０）、典型的には腫瘍接種後（ＰＴＩ）１７日目に開始した。別段示されない限り、試験動物（５匹／群）に、概して、１μｍｏｌ／ｋｇ〜５μｍｏｌ／ｋｇのような様々な用量の薬物送達複合体、または等しい投与容積のＰＢＳ（対照群）を、週３回（ＴＩＷ）、２〜３週間、静脈注射した。投与溶液は、１日おきに、ＰＢＳを用いて新たに調製し、マウスの側方尾静脈から投与した。
【０１９０】
実施例．定着したトリプルネガティブＦＲ陽性皮下ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳腺がん異種移植片に対して試験した場合、ＥＣ１４５６は、週３回、２週間連続スケジュールで投与した、２μｍｏｌ／ｋｇの静脈内用量にて、高い活性があることが見いだされた。治療は４／５の完全反応（ここに、腫瘍容積はゼロに減少し、ほぼ１３５日間にわたる観察期間中、再増殖は起こらなかった。）をもたらした。理論に束縛されるものではないが、本明細書では、試験動物は、トリプルネガティブ乳腺がんが治癒したものと考えられる。ＥＣ１４５６に対する結果は図５Ａに示されている。図５Ｂに示されるように、抗腫瘍活性は、試験動物において、有意な体重減少を伴わなかった。
【０１９１】
方法．ヒトシスプラチン耐性細胞株。ヒトシスプラチン耐性細胞株は、増大させた濃度のシスプラチン（１００→２０００ｎＭ；＞１２ヶ月間にわたって）の存在下、ＦＲ陽性ＫＢ細胞を培養することにより作製した。ＫＢ−ＣＲ２０００細胞と称されるシスプラチン耐性細胞は、腫瘍形成性であり、それらのＦＲ発現状態をインビボで保持していることが見いだされた。ＫＢ−ＣＲ２０００腫瘍が、シスプラチン療法に耐性があることを確認した。図６Ａに示されるように、毒性のある（図６Ｂに示されるように体重減少の平均は１０．３％）、高用量のシスプラチンを用いた治療は、部分反応（ＰＲ）を１つすらもたらさなかった。対照的に、ＥＣ１４５６は、ＫＢ−ＣＲ腫瘍に対して非常に活性であることが見いだされ、ここに、５／５のＣＲが観察された。さらに、腫瘍の再増殖は、１／５の試験動物でのみ観察された。理論に束縛されるものではないが、本明細書では、４／５の試験動物は、シスプラチン耐性がんが治癒した（ここに、ほぼ７０日間の観察期間中、再増殖は起こらなかった）ものと考えられる。さらに、シスプラチンとは異なり、ＥＣ１４５６は、マウスのこのコホートにおいて、体重減少を全くもたらさず、従って、投与期間中に、動物への全体的な毒性があったという証拠を全く示さなかった。
【０１９２】
実施例．複合体を形成したおよび複合体を形成していない薬物の比較。ヒトＫＢ腫瘍に対する、複合体を形成していないチューブリシンＢおよび複合体を形成していないＴｕｂＢ−Ｈ（ＥＣ０３４７）薬物の治療効果を、マウスにおいて、インビボで評価した。複合体を形成していない各薬物の、抗腫瘍効果、および体重変化から決定される全体的な毒性を、ＥＣ１４５６複合体と比べた。ＥＣ１４５６は、このモデルにおいて、用量反応性の抗腫瘍活性をもたらした。皆無かそれに近い体重減少をもたらす治療条件下で、完全反応が観察された。対照的に、複合体を形成していないチューブリシンベースの薬物は、いずれも、非常に毒性のある用量をマウスに投与した場合さえ、抗腫瘍反応を全くもたらさなかった。結果は以下の表に示されている。
【表５】
2017516760.tif 000032
＊無治療対照群の体重減少の平均は２．４％であった
１毒性があったため、２回だけ投与した群。
【０１９３】
これらの結果により、チューブリシンＢおよびＴｕｂＢＨは、培養下の細胞に高い細胞毒性があるにも関わらず（典型的なＩＣ５０は〜１ｎＭ）、いずれの薬剤も、測定可能な抗腫瘍効果をもたらさないレベルにて、マウスにおいて、用量を制限する毒性をもたらすことが確認された。従って、複合体を形成していない化合物は、治療濃度域を示さなかった。対照的に、複合体を形成したＴｕｂＢＨ（ＥＣ１４５６）のような、複合体を形成した形態の薬物は、よく定着したヒト腫瘍異種移植片を有するマウスに有意な毒性なしに、抗腫瘍反応をもたらした。本明細書に記載の複合体は、高い毒性のある薬物に、治療濃度域をもたらした。
【０１９４】
実施例．本明細書に記載の化合物は、複合体を形成していない薬物と比べて、１０％血清／ＦＤＲＰＭＩに含まれる葉酸（相対的親和性＝１）と比べた高い葉酸受容体親和性、インビトロ活性における高い力価、インビボ活性における高い力価、葉酸受容体に対する高い特異性、および十分に大きい治療指数を示した。
【表６】
2017516760.tif 000033
（ａ）葉酸との比較；
（ｂ）チミジン取り込みから決定される；
（ｃ）過剰な葉酸と競合させた場合の、試験化合物に対するＩＣ５０；ＩＣ５０が高いほど葉酸仲介はより特異的である；
（ｄ）インビトロ特異性＝競合群と非競合群との間のＩＣ５０の差；
（ｅ）ｎｕ／ｎｕマウスにおける皮下ＫＢ腫瘍において測定した；ＣＲ＝完全反応（ここに、本明細書で定義される腫瘍容積は、観察期間中、群中の全ての試験動物に関してゼロであった）；
（ｆ）親チューブリシン。
【０１９５】
方法．ヒト血清における安定性。本明細書に記載の化合物を、ヒト血清における安定性について、慣習のプロトコルおよび方法を用いて試験した。試験化合物を、試験動物に皮下注射等により投与した。複合体、および適宜１以上の代謝物の血漿濃度を経時的にモニターした。結果をグラフにし、試験化合物および代謝物に対するＣｍａｘ、Ｔｍａｘ、半減期およびＡＵＣを決定した。
【０１９６】
実施例．最大耐量（ＭＴＤ）。少なくとも１の非天然アミノ酸を含むリンカーを含む、本明細書に記載の化合物複合体は、高いＭＴＤを示し、１以上の非天然アミノ酸を有するリンカーを有さない化合物よりも改善した。試験化合物を、雌のスプラーグドーリーラットにおいて、ＢＩＷで、２週間、静脈内投与した。図２０に示されるように、比較化合物ＥＣ０５３１のＭＴＤは０．３３μｍｏｌ／ｋｇであったのに対し、ＥＣ１４５６のＭＴＤは少なくとも０．５１μｍｏｌ／ｋｇであり、６５％改善した。組織病理学的変化は、ＭＴＤまたはＭＴＤ未満の用量のＥＣ１４５６では観察されなかった。
【０１９７】
実施例．宿主動物。
Ａ．動物の受け取りおよび順応期間。雌のＢａｌｂ／ｃ由来ｎｕ／ｎｕマウスを、Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）から、健康な状態で受け取った。
【０１９８】
Ｂ．動物の飼育。到着したら、マウスは、ＬＳＡにあるＰｕｒｄｕｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ内のＬｉｌｌｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｈｏｕｓｅで飼育した。マウスは、直ちに、個々に滅菌空気が通され、ｂｅｄ−ｏ−ｃｏｂ寝わらを入れたケージ（ＩＶＣ）（ポリカーボネート）に入れた。ケージを、工業用ステンレス製のＩＶＣユニットに設置した。５匹の動物を１ケージに割り当てた。滅菌したケージは、適格な技官が２週間ごとに交換した。
【０１９９】
Ｃ．餌および飲用水。到着したら、マウスにＨａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにより提供されている放射線照射した試験餌＃０１０１４を与えた。研究を通して、飲用水として、採水器により、オートクレーブしたＲＯ水を用いた。餌および飲用水は、研究期間を通して、不断提供した。投与１週間後、マウスは、Ｈａｒｌａｎ  Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにより製造されているＴｅｋｌａｄ  Ｇｌｏｂａｌ  １８％Ｒｏｄｅｎｔ  Ｄｉｅｔ（＃２０１８Ｓ）に切り替えた。
【０２００】
Ｄ．環境条件。全ての動物は、研究期間を通して、環境が制御された室内にて飼育した。室温設定は、６７ｏＦ〜７７ｏＦの範囲であった。部屋の相対湿度は、３０％〜７０％の範囲であった。照明タイマーは、１２時間明期／１２時間暗期の光周期をもたらすように設定した。
【０２０１】
Ｅ．観察。動物の健康状態は毎日観察した。
【０２０２】
実施例．試験化合物のインビボ評価。
【０２０３】
腫瘍の移植。ＫＢ腫瘍細胞を、５％ＣＯ２加湿雰囲気にて、５％ＦＢＳを含む葉酸欠乏ＲＰＭＩ１６４０中、３７℃で生育させた。葉酸欠乏餌の開始後３日目に、ＫＢ（動物当たり１×１０６細胞）腫瘍細胞を皮下に接種した。腫瘍が１００〜１５０ｍｍ３の間に達した後、マウスに投与した。
【０２０４】
投与薬物溶液の調製。投与を開始したら、投与溶液を、適切な量の各化合物を量り取り、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中にもどし、薬物溶液を０．２２□ｍ  ＰＶＤＦシリンジフィルターに通してフィルター滅菌し、各日の投与用に小分けしたものを−２０℃で凍結することにより調製した。
【０２０５】
評価。腫瘍サイズをモニターし、体重を３回／週測定した。全体的な動物の形態および行動に注意した。マウスが体重の＞２０％を失った場合、あるいは腫瘍のサイズが１５００ｍｍ３に達した場合、安楽死を実施した。マウスが短期間に大幅に体重を失った場合、あるいはマウスが瀕死状態に近づいた場合にも、研究者の裁量で安楽死を実施した。血液サンプルは、選ばれたコホートからの全ての生存動物から、心臓穿刺により採取した。心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓、腸、骨、脳および筋肉は、安楽死後直ちに得た。組織を取り出し、１０％中性緩衝ホルマリン中で保存した。
【０２０６】
本明細書で用いられるように、用語「部分反応（ＰＲ）」は、宿主動物において有効性が観察されることを指し、ここに、試験化合物は、所定の観察期間中、腫瘍容積で評価すると、対照群よりも改善を示す。例えば、腫瘍容積が初期の測定値から５０％減少することは、部分反応を表している。
【０２０７】
本明細書で用いられるように、用語「完全反応（ＣＲ）」は、宿主動物において有効性が観察されることを指し、ここに、試験化合物は、所定の観察期間中、腫瘍容積を定量限界に減少させることにより、対照群よりも改善を示す。例えば、腫瘍容積の減少（ここに、直交する２方向についての測定値はそれぞれ約２ｍｍ以下である）は、完全反応を表している。
【０２０８】
本明細書で用いられるように、用語「治癒する（ｃ）」は、宿主動物において有効性が観察されることを指し、ここに、試験化合物は、腫瘍容積を定量限界に減少させることにより、対照群よりも改善を示し、また腫瘍は、所定の観察期間中、有意な再増殖を示さない。例えば、腫瘍容積の減少（ここに、直交する２方向についての測定値はそれぞれ約２ｍｍ以下であり、また腫瘍は再増殖を示さない）は、治癒を表している。
【０２０９】
実施例．図５Ａおよび５Ｂに示されるように、ビンカ耐性ＫＢ−ＤＲ１５０腫瘍へのドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）の有効性を、ＮＫ細胞を欠損している免疫不全（ＸＩＤ）ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＥＣ１４５６単独、およびドキソルビシンと組み合わせたＥＣ１４５６と比べた。ＥＣ１４５６は、ドキソルビシンよりも改善された有効性を示した。ＥＣ１４５６とドキソルビシンとの共投与は、いずれの単独療法よりも強化された技術的効果を示した。
【０２１０】
ＥＣ１４５６を単独で投与した場合、動物への全体的な毒性は観察されなかった。ドキソルビシンを単独およびＥＣ１４５６と組み合わせて投与した場合、軽度の毒性が観察された。理論に束縛されるものではないが、本明細書では、併用療法を用いて観察された軽度の毒性は、ドキソルビシンに起因するものと考えられる。
【０２１１】
実施例．図６Ａおよび６Ｂに示されるように、Ｍ１０９（肺がん腫）腫瘍へのシスプラチンの有効性を、ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＥＣ１４５６単独、およびシスプラチン組み合わせたＥＣ１４５６と比べた。ＥＣ１４５６は、シスプラチンよりも改善された有効性を示した。ＥＣ１４５６とシスプラチンとの共投与は、いずれの単独療法よりも強化された技術的効果を示した。
【０２１２】
ＥＣ１４５６を単独で投与した場合、動物への全体的な毒性は観察されなかった。シスプラチンを単独およびＥＣ１４５６と組み合わせて投与した場合、軽度の毒性が観察された。理論に束縛されるものではないが、本明細書では、併用療法を用いて観察された軽度の毒性は、シスプラチンに起因するものと考えられる。
【０２１３】
実施例．図７Ａおよび７Ｂに示されるように、ＫＢ腫瘍（口腔扁平上皮がん）へのシスプラチンの有効性を、ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＥＣ１４５６単独、およびシスプラチン組み合わせたＥＣ１４５６と比べた。ＥＣ１４５６は、シスプラチンよりも改善された有効性を示した。ＥＣ１４５６とシスプラチンとの共投与は、いずれの単独療法よりも強化された技術的効果を示した。
【０２１４】
ＥＣ１４５６を単独で投与した場合、動物への全体的な毒性は観察されなかった。シスプラチンを単独およびＥＣ１４５６と組み合わせて投与した場合、軽度の毒性が観察された。理論に束縛されるものではないが、本明細書では、併用療法を用いて観察された軽度の毒性は、シスプラチンに起因するものと考えられる。
【０２１５】
実施例．図８Ａおよび８Ｂに示されるように、ＫＢ腫瘍へのベバシズマブの有効性を、
ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＥＣ１４５６単独、およびベバシズマブと組み合わせたＥＣ１４５６と比べた。ＥＣ１４５６は、ベバシズマブよりも改善された有効性を示した。ＥＣ１４５６とベバシズマブとの共投与は、いずれの単独療法よりも強化された技術的効果を示した。
【０２１６】
動物への全体的な毒性は、単独または併用療法のいずれでも観察されなかった。
【０２１７】
実施例．図９Ａおよび９Ｂに示されるように、ＫＢ腫瘍へのトポテカンの有効性を、ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＥＣ１４５６単独、およびトポテカンと組み合わせたＥＣ１４５６と比べた。ＥＣ１４５６は、トポテカンよりも改善された有効性を示した。ＥＣ１４５６とトポテカンとの共投与は、いずれの単独療法よりも強化された技術的効果を示した。
【０２１８】
動物への全体的な毒性は、単独または併用療法のいずれでも観察されなかった。
【０２１９】
実施例．図１０Ａおよび１０Ｂに示されるように、ＫＢ腫瘍へのトポテカンの有効性を、ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＥＣ１４５６単独、およびトポテカンと組み合わせたＥＣ１４５６と比べた。ＥＣ１４５６は、トポテカンよりも改善された有効性を示した。ＥＣ１４５６とトポテカンとの共投与は、いずれの単独療法よりも強化された技術的効果を示した。
【０２２０】
動物への全体的な毒性は、単独または併用療法のいずれでも観察されなかった。
【０２２１】
実施例．図１１Ａおよび１１Ｂに示されるように、ＫＢ腫瘍へのドセタキセルの有効性を、ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＥＣ１４５６単独、およびドセタキセルと組み合わせたＥＣ１４５６と比べた。ＥＣ１４５６は、ドセタキセルよりも改善された有効性を示した。ＥＣ１４５６とドセタキセルとの共投与は、いずれの単独療法よりも強化された技術的効果を示した。
【０２２２】
ＥＣ１４５６を単独で投与した場合、動物への全体的な毒性は観察されなかった。ドセタキセルを単独およびＥＣ１４５６と組み合わせて投与した場合、軽度の毒性が観察された。理論に束縛されるものではないが、本明細書では、併用療法を用いて観察された軽度の毒性は、ドセタキセルに起因するものと考えられる。
【０２２３】
実施例．図１２Ａおよび１２Ｂに示されるように、ＫＢ腫瘍へのカルボプラチンの有効性を、ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＥＣ１４５６単独、およびカルボプラチンと組み合わせたＥＣ１４５６と比べた。ＥＣ１４５６は、カルボプラチンよりも改善された有効性を示した。ＥＣ１４５６とカルボプラチンとの共投与は、いずれの単独療法よりも強化された技術的効果を示した。
【０２２４】
ＥＣ１４５６を単独で投与した場合、動物への全体的な毒性は観察されなかった。カルボプラチンを単独およびＥＣ１４５６と組み合わせて投与した場合、軽度の毒性が観察された。理論に束縛されるものではないが、本明細書では、併用療法を用いて観察された軽度の毒性は、カルボプラチンに起因するものと考えられる。
【０２２５】
実施例．ＫＢ腫瘍への、カルボプラチン／パクリタキセルと組み合わせたＥＣ１４５６の抗腫瘍効果。ＫＢ腫瘍細胞（１×１０６）をｎｕ／ｎｕマウスの皮下に接種し、無作為化されたマウスに治療を開始した。図１３に示されるように、各曲線は、５つの腫瘍の平均容積を示している。ＫＢ腫瘍へのカルボプラチンとパクリタキセルの組み合わせの有効性を、ｎｕ／ｎｕマウスにおいて、ＥＣ１４５６単独、およびカルボプラチンとパクリタキセルとの組み合わせと組み合わせたＥＣ１４５６と比べた。ＥＣ１４５６と、カルボプラチンとパクリタキセルとの共投与は、ＥＣ１４５６単独、およびカルボプラチンとパクリタキセルとの組み合わせよりも強化された技術的効果を示した。
【０２２６】
ＥＣ１４５６を単独で投与した場合、動物への全体的な毒性は観察されなかった。カルボプラチンを単独およびＥＣ１４５６と組み合わせて投与した場合、軽度の毒性が観察された。理論に束縛されるものではないが、本明細書では、併用療法を用いて観察された軽度の毒性は、カルボプラチンに起因するものと考えられる。
【０２２７】
１μｍｏｌ／ｋｇにて、週２回、２週間のスケジュールのＥＣ１４５６は、最小の抗腫瘍を示し、ＰＲは２０％であった。パクリタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ，ＢＩＷ×２）と組み合わせた場合、カルボプラチン（３０ｍｇ／ｋｇ，ＢＩＷ×２）は、良好な抗腫瘍活性をもたらし、ＣＲは８０％であり、治癒は２０％であった。しかしながら、カルボプラチン／パクリタキセルの組み合わせに加えた場合、ＥＣ１４５６は、はるかに良い抗腫瘍活性をもたらし、１００％のマウスで治癒した。
【０２２８】
実施例．ＰＤＸ腫瘍モデルにおける抗腫瘍活性
本明細書で用いられるように、用語「安定した疾患（ＳＤ）」は、治療過程にわたって、患者または動物において、疾患の物質的な進行がないことを指す。
【０２２９】
雌のＢａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウスに、実験期間中、葉酸欠乏餌（Ｈａｒｌａｎ規定食＃ＴＤ０１０１３）を不断給餌した。ヒト初代子宮内膜モデルであるＳＴ０４０、ＴＮＢＣモデルであるＳＴ５０２およびＳＴ７３８、並びに卵巣モデルであるＳＴ０２４のフラグメント（直径２〜４ｍｍ）を、各マウスの右脇腹の皮下に接種した。マウスを、各５匹または３匹のマウスからなる６つの実験群に無作為化し、滅菌条件下で、被験物質を含む体積２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を、側方尾静脈から注射した。これらのがん細胞は、Ｓｏｕｔｈ  Ｔｅｘａｓ  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，４３８３  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｒｉｖｅ，Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸ７８２２９から得て、研究は当該地で実施した。
【０２３０】
各皮下腫瘍を増殖させ、続いて、腫瘍を、容積が１２００ｍｍ３に達するまで、週２回測定した。腫瘍を、直交する２方向について、Ｖｅｒｎｉｅｒキャリパーを用いて測定し、それらの容積を０．５×Ｌ×Ｗ２として算出し、ここに、Ｌ＝最長軸の測定値（ｍｍ）であり、Ｗ＝Ｌに直交する軸の測定値（ｍｍ）である。
【０２３１】
Ａ．子宮内膜ＰＤＸ腫瘍モデル
図１４に示されるように、１５ｍｇ／ｋｇのパクリタキセルを用いた治療（週１回，２週間）は最小の抗腫瘍活性をもたらし、安定した疾患を示している動物はゼロであった。パクリタキセルと組み合わせた場合、１．５μｍｏｌ／ｋｇ（週２回，２週間）のＥＣ１４５６は良好な抗腫瘍活性をもたらし、ＰＲを示している動物は３匹であり、治癒を示している動物は１匹であったのに対し、３μｍｏｌ／ｋｇ（週１回，２週間）のＥＣ１４５６は、安定した疾患を示している動物を３匹、およびＰＲを示している動物を２匹もたらした。
【０２３２】
Ｂ．ＴＮＢＣ  ＰＤＸ腫瘍モデル
図１５に示されるように、１ｍｇ／ｋｇのエリブリンメシル酸を用いた治療（週１回，２週間）は最小の抗腫瘍活性をもたらし、安定した疾患を示している動物は１匹／ＰＲを示している動物は１匹であった。エリブリンメシル酸と組み合わせた場合、ＥＣ１４５６は、２μｍｏｌ／ｋｇ（週２回，２週間）にて、相乗的な抗腫瘍活性をもたらし、ＣＲを示している動物を５匹、および治癒を示している動物を２匹もたらし、４μｍｏｌ／ｋｇ（週１回，２週間）にて、ＰＲを示している動物を４匹、およびＣＲを示している動物を３匹もたらした。
【０２３３】
図１６に示されるように、１ｍｇ／ｋｇのエリブリンメシル酸を用いた治療（週１回，２週間）は、いくらか抗腫瘍活性をもたらし、安定した疾患を示している動物は５匹／ＰＲは２匹であった。エリブリンメシル酸と組み合わせた場合、ＥＣ１４５６は治癒的な抗腫瘍活性をもたらし、２μｍｏｌ／ｋｇ（週２回，２週間）にて、治癒を示している動物を７匹もたらし、４μｍｏｌ／ｋｇ（週１回，２週間）にて、ＰＲを示している動物を２匹、および治癒を示している動物を４匹もたらした。
【０２３４】
Ｃ．卵巣ＰＤＸ腫瘍モデル図１７に示されるように、１５ｍｇ／ｋｇのパクリタキセルを用いた治療（週１回，２週間）は抗腫瘍活性をもたらさなかった。パクリタキセルと組み合わせた場合、ＥＣ１４５６は、２μｍｏｌ／ｋｇ（週２回，２週間）、および４μｍｏｌ／ｋｇ（週１回，２週間）にて、治癒的な（治癒を示している動物が１００％）抗腫瘍活性をもたらした。
【０２３５】
実施例．ＨＵＰＲＩＭＥ（登録商標）  ＮＳＣＬＣ  ＰＤＸ腫瘍モデルにおける抗腫瘍活性
雌のＢａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕマウスに、実験期間中、葉酸欠乏餌（Ｈａｒｌａｎ規定食＃ＴＤ０１０１３）を不断給餌した。ヒト初代ＮＳＣＬＣモデルであるＬＵ１１４７またはＬＵ２５０５のフラグメント（直径２〜４ｍｍ）を、各マウスの右脇腹の皮下に接種した。マウスを、７匹のマウスからなる実験群に無作為化し、滅菌条件下で、被験物質を含む体積２００μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を、側方尾静脈から注射した。これらの研究は、Ｃｒｏｗｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｂｅｉｊｉｎｇ）Ｉｎｃ．，Ｇｒｏｕｎｄ  Ｆｌｏｏｒ，Ｌｉｇｈｔ  Ｍｕｌｌｅｒ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ，Ｃｈａｎｇｐｉｎｇ  Ｓｅｃｔｏｒ  ｏｆ  Ｚｈｏｎｇｇｕａｎｃｕｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐａｒｋ，Ｎｏ．２１  Ｈｕｏｊｕ  Ｒｏａｄ，Ｃｈａｎｇｐｉｎｇ  Ｄｉｓｔｒｉｃｔ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａにて実施した。
【０２３６】
各皮下腫瘍を増殖させ、続いて、腫瘍を、容積が１２００ｍｍ３に達するまで、週２回測定した。腫瘍を、直交する２方向について、Ｖｅｒｎｉｅｒキャリパーを用いて測定し、それらの容積を０．５×Ｌ×Ｗ２として算出し、ここに、Ｌ＝最長軸の測定値（ｍｍ）であり、Ｗ＝Ｌに直交する軸の測定値（ｍｍ）である。
【０２３７】
図１８に示されるように、
１５ｍｇ／ｋｇのドセタキセルを用いた治療（１回投与）は最小の抗腫瘍活性をもたらし、安定した疾患を示している動物は２匹であった。ドセタキセル（１５ｍｇ／ｋｇを１回投与）と組み合わせた場合、ＥＣ１４５６は、２μｍｏｌ／ｋｇ（週２回，２週間）、および４μｍｏｌ／ｋｇ（週１回，２週間）にて、安定した疾患を示している動物において、良好な抗腫瘍活性をもたらし、両群において、ＰＲは５匹であり、治癒は２匹であった。
【０２３８】
図１９に示されるように、１５ｍｇ／ｋｇのドセタキセルを用いた治療（１回投与）は安定した疾患を示している動物において、いくらか抗腫瘍活性をもたらし、ＰＲは２匹であり、ＣＲは２匹であり、治癒は２匹であった。しかしながら、ドセタキセルと組み合わせたＥＣ１４５６は、２μｍｏｌ／ｋｇ（週２回，２週間）、および４μｍｏｌ／ｋｇ（週１回，２週間）にて、両群の安定した疾患を示している動物において、１００％の治癒をもたらした。
【図１】
2017516760.tif 000036
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【国際調査報告】
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