(57)【要約】本開示は、抗Ｂ７Ｈ３抗体剤およびそれに関連する使用について記載するものである。とりわけ、本開示は、ある特定のそのような抗体の特定の免疫調節有効性を実証する。本開示は、特に８Ｈ９抗体のある特定のヒト化および／または親和性成熟されたバージョンを含めた、特に高い親和性または別途有用な抗体およびそれに基づく抗体剤をさらに記載するものである。いくつかの実施形態において、提供される抗体剤は、例えば、癌の処置において有用である。いくつかの実施形態において、提供される抗体剤は、例えばＢ７Ｈ３陽性細胞によって媒介される免疫抑制を緩和する際に有用である。
2017532952.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合し、配列番号１、２、３、４、５、６、７および８からなる群より選択される配列番号に記載の免疫グロブリン軽鎖を含み、かつ配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、１５および１６からなる群より選択される配列番号に記載の免疫グロブリン重鎖を含む、抗体剤。
【請求項２】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号１に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号９に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項３】
前記抗体剤が、配列番号１に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号９に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項２に記載の抗体剤。
【請求項４】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１０に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項５】
前記抗体剤が、配列番号２に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号１０に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項４に記載の抗体剤。
【請求項６】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号３に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１１に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項７】
前記抗体剤が、配列番号３に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号１１に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項６に記載の抗体剤。
【請求項８】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号４に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１２に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項９】
前記抗体剤が、配列番号４に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号１２に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項８に記載の抗体剤。
【請求項１０】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号２に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１１に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項１１】
前記抗体剤が、配列番号２に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号１１に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項１０に記載の抗体剤。
【請求項１２】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号３に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１０に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項１３】
前記抗体剤が、配列番号３に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号１０に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項１２に記載の抗体剤。
【請求項１４】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号５に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１３に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項１５】
前記抗体剤が、配列番号５に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号１３に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項１４に記載の抗体剤。
【請求項１６】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号６に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１４に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項１７】
前記抗体剤が、配列番号６に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号１４に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項１６に記載の抗体剤。
【請求項１８】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号７に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１５に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項１９】
前記抗体剤が、配列番号７に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号１５に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項１８に記載の抗体剤。
【請求項２０】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号８に記載されており、前記免疫グロブリン重鎖が、配列番号１６に記載されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項２１】
前記抗体剤が、配列番号８に記載されている免疫グロブリン軽鎖および配列番号１６に記載されている免疫グロブリン重鎖を有する抗体である、請求項２０に記載の抗体剤。
【請求項２２】
前記免疫グロブリン軽鎖が、２０位におけるトレオニン残基および３４位におけるチロシン残基を含み、前記免疫グロブリン重鎖が、２４位におけるトレオニン残基、４２位におけるグリシン残基、５６位におけるアスパラギン酸残基、および１０２位におけるグリシン残基を含む、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項２３】
タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合する抗体剤であって、前記抗体剤は、重鎖および軽鎖で構成され、前記軽鎖が２０位におけるトレオニン残基および３４位におけるチロシン残基を含み、かつ前記重鎖が２４位におけるトレオニン残基、４２位におけるグリシン残基、５６位におけるアスパラギン酸残基、および１０２位におけるグリシン残基を含む以外は、前記重鎖および前記軽鎖の各々がマウス８Ｈ９抗体の対応する鎖のアミノ酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を有する、抗体剤。
【請求項２４】
前記免疫グロブリン軽鎖の２０位におけるトレオニン残基および３４位におけるチロシン残基、ならびに前記免疫グロブリン重鎖の２４位におけるトレオニン残基、４２位におけるグリシン残基、５６位におけるアスパラギン酸残基、および１０２位におけるグリシン残基のうちの１つ以上が、相同なアミノ酸置換を有する、前記請求項のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２５】
前記免疫グロブリン軽鎖が、配列番号３０または配列番号３１に記載されているポリペプチドと融合されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項２６】
治療剤または検出剤に結合体化されている、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項２７】
抗体が、放射性同位体、薬物結合体、ナノ粒子、免疫毒素、または任意の他のペイロードに結合体化されている、請求項２６に記載の抗体剤。
【請求項２８】
抗体が、診断剤もしくはイメージング剤、またはその両方に結合体化されている、請求項２６に記載の抗体剤。
【請求項２９】
二重特異性抗体である、請求項１に記載の抗体剤。
【請求項３０】
第１の特異性および第２の特異性を有し、前記第１の特異性がタンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に結合するものであり、前記第２の特異性がＴ細胞上のＣＤ３またはＤＯＴＡに結合するものである、請求項２９に記載の抗体剤。
【請求項３１】
タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合し、かつ配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６および２７からなる群より選択される配列番号に記載のポリペプチドを含む、ｓｃＦｖ。
【請求項３２】
前記ポリペプチドが、２４位におけるトレオニン、４２位におけるグリシン、５６位におけるアスパラギン酸残基、１０２位におけるグリシン残基、１５３位におけるトレオニン残基および１６７位におけるチロシン残基を含む、請求項３１に記載のｓｃＦｖ。
【請求項３３】
２４位におけるトレオニン、４２位におけるグリシン、５６位におけるアスパラギン酸残基、１０２位におけるグリシン残基、１５３位におけるトレオニン残基および１６７位におけるチロシン残基のうちの１つ以上が、相同なアミノ酸置換を有する、請求項３１に記載のｓｃＦｖ。
【請求項３４】
前記ポリペプチドが、配列番号２８または配列番号２９に記載されている第２のポリペプチドと融合されている、請求項３１に記載のｓｃＦｖ。
【請求項３５】
治療剤または検出剤に結合体化されている、請求項３１に記載のｓｃＦｖ。
【請求項３６】
キメラ抗原レセプターの一部である、請求項３１から３５のいずれか一項に記載のｓｃＦｖ。
【請求項３７】
タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ−ドメイン内ならびにタンパク質４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ１およびＶ２ドメイン内のＦＧループに位置する配列番号３２に記載のエピトープに特異的に結合する抗体剤であって、前記抗体剤は、ｍ８Ｈ９ではない、抗体剤。
【請求項３８】
タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ−ドメイン内ならびにタンパク質４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ１およびＶ２ドメイン内のＦＧループに２ｎＭ未満のＫＤで特異的に結合する抗体剤であって、前記抗体剤は、ｍ８Ｈ９ではない、抗体剤。
【請求項３９】
Ｔ細胞の増殖および機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制する、請求項３７または３８に記載の抗体剤。
【請求項４０】
ＮＫ細胞の活性および／または機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制する、請求項３７または３８に記載の抗体剤。
【請求項４１】
前記ＦＧループが、配列番号３２に記載されている配列（ＩＲＤＦ）を含む、請求項３７から４０のいずれか一項に記載の抗体剤。
【請求項４２】
請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体剤、ｓｃＦｖ、またはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメント、および薬学的に許容され得るキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項４３】
癌を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体剤、ｓｃＦｖ、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを投与する工程を含む、方法。
【請求項４４】
免疫系を調節する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体剤、ｓｃＦｖ、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを投与する工程を含む、方法。
【請求項４５】
前記患者が、ヒト、イヌ、ネコ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、マカク、マーモセット、ブタ、ウマ、パンダ、およびゾウの群より選択される、請求項４３または４４に記載の方法。
【請求項４６】
癌を処置する方法であって、Ｂ７Ｈ３のＦＧループに結合する抗Ｂ７Ｈ３抗体剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項４７】
前記癌が、神経芽細胞腫であるかまたはそれを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記癌が、子宮頸癌であるかまたはそれを含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記癌が、Ｂ７Ｈ３陽性腫瘍細胞を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記被験体が、ヒト、イヌ、ネコ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、マカク、マーモセット、ブタ、ウマ、パンダ、およびゾウの群より選択される、請求項４６から４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
被験体におけるＴ細胞媒介性細胞傷害を増強する方法であって、Ｂ７Ｈ３のＦＧループに結合する抗Ｂ７Ｈ３抗体剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含む、方法。
【請求項５２】
前記抗体剤が、８Ｈ９抗体剤であるかまたはそれを含む、請求項４６または請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記８Ｈ９抗体剤が、配列番号３３、３４、３９、４０、４５、４６、５１および５２からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ１配列を含むポリペプチドを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記８Ｈ９抗体剤が、配列番号３５、３６、４１、４２、４７、４８、５３および５４からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ２配列を含むポリペプチドを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記８Ｈ９抗体剤が、配列番号３７、３８、４３、４４、４９、５０、５５および５６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ３配列を含むポリペプチドを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
前記８Ｈ９抗体剤が、配列番号５７、５８、６３、６４、６９、７０、７５および７６からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ１配列を含むポリペプチドを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
前記８Ｈ９抗体剤が、配列番号５９、６０、６５、６６、７１、７２、７７および７８からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ２配列を含むポリペプチドを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５８】
前記８Ｈ９抗体剤が、配列番号６１、６２、６７、６８、７３、７４、７９および８０からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含むポリペプチドを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５９】
前記８Ｈ９抗体剤が、以下：
配列番号３３、３４、３９、４０、４５、４６、５１および５２からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号３５、３６、４１、４２、４７、４８、５３および５４からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ２配列；ならびに
配列番号３７、３８、４３、４４、４９、５０、５５および５６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ３配列
を含むポリペプチドを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項６０】
前記８Ｈ９抗体剤が、以下：
配列番号５７、５８、６３、６４、６９、７０、７５および７６からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号５９、６０、６５、６６、７１、７２、７７および７８からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ２配列；ならびに
配列番号６１、６２、６７、６８、７３、７４、７９および８０からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ３配列
を含むポリペプチドを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項６１】
前記８Ｈ９抗体剤が、以下：
配列番号３３、３４、３９、４０、４５、４６、５１および５２からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号３５、３６、４１、４２、４７、４８、５３および５４からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ２配列；および
配列番号３７、３８、４３、４４、４９、５０、５５および５６からなる群より選択される軽鎖ＣＤＲ３配列；ならびに
配列番号５７、５８、６３、６４、６９、７０、７５および７６からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号５９、６０、６５、６６、７１、７２、７７および７８からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ２配列；および
配列番号６１、６２、６７、６８、７３、７４、７９および８０からなる群より選択される重鎖ＣＤＲ３配列
を含むポリペプチドを含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗体剤が、８Ｈ９抗体またはその抗原結合フラグメントを含むかまたはそれからなる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記８Ｈ９抗体が、ｍ８Ｈ９、ｈ８Ｈ９、またはｈａｍ８Ｈ９であるかまたはそれを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記８Ｈ９抗体が、配列番号９〜１６のうちの１つに記載の重鎖および配列番号１〜８のうちの１つに記載の軽鎖を含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記抗体剤が、Ｂ７Ｈ３への結合について８Ｈ９抗体と競合する、請求項５２に記載の方法。
【請求項６６】
請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体剤またはそのフラグメントをコードするＤＮＡまたはＲＮＡ。
【請求項６７】
請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体剤またはそのフラグメントを発現する細胞。
【請求項６８】
抗体剤またはそのフラグメントを発現する細胞を調製する方法であって、細胞に、請求項６６に記載のＤＮＡまたはＲＮＡをトランスフェクションするかまたはウイルスにより形質導入する工程を含む、方法。
【請求項６９】
前記細胞を、患者内にウイルスにより形質導入する、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
前記細胞が免疫細胞である、請求項６７または６８に記載の方法。
【請求項７１】
前記細胞が抗原提示細胞である、請求項６７または７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記細胞がＴ細胞である、請求項６７または７０に記載の方法。
【請求項７３】
請求項６６に記載のＤＮＡまたはＲＮＡを含むワクチン。
【請求項７４】
患者にワクチン接種する方法であって、それを必要とする患者に請求項７３に記載のワクチンを投与する工程を含む、方法。
【請求項７５】
前記患者がイヌである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記患者が、ヒト、ネコ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、マカク、マーモセット、ブタ、ウマ、パンダ、およびゾウの群より選択される、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体剤またはそのフラグメントを含むキメラ抗原レセプター。
【請求項７８】
請求項７７に記載のキメラ抗原レセプターをコードするＤＮＡまたはＲＮＡ。
【請求項７９】
請求項７７に記載のキメラ抗原レセプターを発現する細胞。
【請求項８０】
請求項７９に記載の細胞を調製する方法であって、細胞に、請求項７８に記載のＤＮＡまたはＲＮＡをトランスフェクションするかまたはウイルスにより形質導入する工程を含む、方法。
【請求項８１】
養子細胞療法の方法であって、それを必要とする患者に治療有効量の請求項７９に記載の細胞を投与する工程を含む、方法。
【請求項８２】
配列番号３２に記載されているペプチドエピトープを標的化することによって患者を処置する方法であって、それを必要とする患者に請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体剤またはそのフラグメントを投与する工程を含む、方法。
【請求項８３】
前記患者が、ヒト、イヌ、ネコ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、マカク、マーモセット、ブタ、ウマ、パンダ、およびゾウの群より選択される、請求項８２に記載の患者を処置する方法。
【請求項８４】
患者を処置する方法であって、それを必要とする患者に請求項６７または７９に記載の細胞を投与する工程を含む、方法。
【請求項８５】
患者を処置する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体剤またはそのフラグメントをコードするＤＮＡまたはＲＮＡを含むウイルスを投与する工程を含む、方法。
【請求項８６】
コンパートメント放射免疫療法（ｃＲＩＴ）によって患者を処置する方法であって、それを必要とする患者に、請求項１から４１のいずれか一項に記載の抗体剤またはそのフラグメントを投与する工程を含む、方法。
【請求項８７】
抗体を、髄腔内に、腹腔内に、または対流増強送達によって投与する、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記患者が、ヒト、イヌ、ネコ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、マカク、マーモセット、ブタ、ウマ、パンダ、およびゾウの群より選択される、請求項８４から８７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本明細書は、配列表（「２００３０８０−０９３７＿ＳＬ．ｔｘｔ」という名称の．ｔｘｔファイルとして２０１５年８月２６日に電子的に提出された）について言及する。この．ｔｘｔファイルは、２０１５年７月３１日に作成され、１２９，８９６バイトのサイズである。この配列表の全内容が、参照により本明細書中に援用される。以下の配列についての記載は、配列表中の配列の正体を列挙するものである。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍は、免疫系を抑制する微小環境を創出することが多い。この免疫学的遮断を取り除くことが、有効な療法を開発するための多くの試みの焦点になっている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、Ｂ７Ｈ３に結合する新規の抗体を提供する。いくつかの実施形態において、そのような抗体は、８Ｈ９と有意な配列同一性を共有する。いくつかの実施形態において、提供される抗体は、８Ｈ９の親和性成熟されたヒト化改変体を示す。
【０００４】
いくつかの実施形態において、提供される抗体は、８Ｈ９によって認識されるＢ７Ｈ３内のエピトープに結合する。とりわけ、本発明は、ｍ８Ｈ９およびそのヒト化改変体が、Ｂ７Ｈ３に対するある特定の他の抗体によって認識されないＢ７Ｈ３上の異なるエピトープに結合するという驚くべき洞察を提供する。したがって、本発明は、ｍ８Ｈ９ではないが、同じエピトープに結合する新しい抗体の有用なセットを定義する。
【０００５】
本発明は、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合し、配列番号１、２、３、４、５、６、７および８からなる群より選択される配列番号に記載の免疫グロブリン軽鎖を含み、配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、１５および１６からなる群より選択される配列番号に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体剤を提供する。
【０００６】
いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号１に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号９に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号１に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号９に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。  いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号２に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号１０に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号２に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号１０に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号３に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号１１に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号３に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号１１に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号４に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号１２に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号４に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号１２に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号２に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号１１に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号２に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号１１に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号３に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号１０に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号３に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号１０に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号５に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号１３に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号５に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号１３に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号６に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号１４に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号６に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号１４に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号７に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号１５に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号７に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号１５に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は配列番号８に記載され、免疫グロブリン重鎖は配列番号１６に記載される。いくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号８に記載の免疫グロブリン軽鎖および配列番号１６に記載の免疫グロブリン重鎖を有する抗体である。いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は、２０位におけるトレオニン残基および３４位におけるチロシン残基を含み、免疫グロブリン重鎖は、２４位におけるトレオニン残基、４２位におけるグリシン���基、５６位におけるアスパラギン酸残基、および１０２位におけるグリシン残基を含む。
【０００７】
本発明は、マウス８Ｈ９抗体であって、免疫グロブリン軽鎖が、２０位におけるトレオニン残基および３４位におけるチロシン残基を含み、免疫グロブリン重鎖が、２４位におけるトレオニン残基、４２位におけるグリシン残基、５６位におけるアスパラギン酸残基、および１０２位におけるグリシン残基を含むマウス８Ｈ９抗体を提供する。
【０００８】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている任意の抗体は、免疫グロブリン軽鎖の２０位におけるトレオニン残基および３４位におけるチロシン残基、ならびに免疫グロブリン重鎖の２４位におけるトレオニン残基、４２位におけるグリシン残基、５６位におけるアスパラギン酸残基、および１０２位におけるグリシン残基のうちの１つ以上を含む、または、これらの位置のいずれかにおけるその相同なアミノ酸置換を含む。
【０００９】
いくつかの実施形態において、免疫グロブリン軽鎖は、配列番号３０または配列番号３１に記載されているポリペプチドと融合されている。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている抗体剤のうちの任意のものは、治療剤または検出剤に結合体化されている。
【００１１】
いくつかの実施形態において、抗体を含めた本明細書に開示されている抗体剤のうちの任意のものは、放射性同位体、薬物結合体、ナノ粒子、免疫毒素、または任意の他のペイロード（ｐａｙｌｏａｄ）に結合体化されている。
【００１２】
いくつかの実施形態において、抗体を含めた本明細書に開示されている抗体剤のうちの任意のものは、診断剤もしくはイメージング剤、またはその両方に結合体化されている。
【００１３】
いくつかの実施形態において、抗体剤は、二重特異性抗体である。
【００１４】
いくつかの実施形態において、抗体剤は、第１の特異性および第２の特異性を有し、第１の特異性は、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に結合するものであり、第２の特異性は、Ｔ細胞上のＣＤ３またはＤＯＴＡに結合するものである。
【００１５】
本発明は、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合し、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６および２７からなる群より選択される配列番号に記載のポリペプチドを含むｓｃＦｖを提供する。
【００１６】
いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖのポリペプチドは、２４位におけるトレオニン、４２位におけるグリシン、５６位におけるアスパラギン酸残基、１０２位におけるグリシン残基、１５３位におけるトレオニン残基および１６７位におけるチロシン残基を含む。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、２４位におけるトレオニン、４２位におけるグリシン、５６位におけるアスパラギン酸残基、１０２位におけるグリシン残基、１５３位におけるトレオニン残基および１６７位におけるチロシン残基のうちの１つ以上を含む、または、これらの位置のいずれかにおけるその相同なアミノ酸置換を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖのポリペプチドは、配列番号２８または配列番号２９に記載されている第２のポリペプチドと融合されている。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、治療剤または検出剤に結合体化されている。
【００２０】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されているｓｃＦｖのうちの任意のものは、キメラ抗原レセプターの一部である。
【００２１】
本発明は、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ−ドメイン内ならびにタンパク質４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ１およびＶ２ドメイン内のＦＧループに位置する配列番号３２に記載のエピトープに特異的に結合し、ｍ８Ｈ９ではない抗体剤を提供する。
【００２２】
本発明は、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ−ドメイン内ならびにタンパク質４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ１およびＶ２ドメイン内のＦＧループに２ｎＭ未満のＫＤで特異的に結合し、ｍ８Ｈ９ではない抗体剤を提供する。
【００２３】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている抗体剤のうちの任意のものは、Ｔ細胞の増殖および機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制する。
【００２４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている抗体剤のうちの任意のものは、ＮＫ細胞の活性および機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制する。
【００２５】
本発明は、本明細書に開示されている抗体剤、ｓｃＦｖ、またはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの任意のもの、および薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物を提供する。
【００２６】
本発明は、癌を処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の本明細書に開示されている抗体剤、ｓｃＦｖ、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントの任意の１つ以上を投与する工程を含む方法を提供する。
【００２７】
本発明は、免疫系を調節する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の本明細書に開示されている抗体剤、ｓｃＦｖ、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントの任意の１つ以上を投与する工程を含む方法を提供する。
【００２８】
本発明は、癌を処置する方法であって、被験体に、Ｂ７Ｈ３のＦＧループに結合する抗Ｂ７Ｈ３抗体剤を含む組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【００２９】
いくつかの実施形態において、癌は、神経芽細胞腫であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、癌は、子宮頸癌（ｃｅｒｖｉｃａｌ  ｃａｎｃｅｒ）であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、癌は、Ｂ７Ｈ３陽性腫瘍細胞を含む。
【００３０】
本発明は、被験体におけるＴ細胞媒介性細胞傷害を増強する方法であって、被験体に、Ｂ７Ｈ３のＦＧループに結合する抗Ｂ７Ｈ３抗体剤を含む組成物を投与する工程を含む方法を提供する。
【００３１】
いくつかの実施形態において、抗体剤は、８Ｈ９抗体剤であるかまたはそれを含む。
【００３２】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体剤は、配列番号３３、３４、３９、４０、４５、４６、５１および５２からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列を含むポリペプチドを含む。
【００３３】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体剤は、配列番号３５、３６、４１、４２、４７、４８、５３および５４からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２配列を含むポリペプチドを含む。
【００３４】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体剤は、配列番号３７、３８、４３、４４、４９、５０、５５および５６からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列を含むポリペプチドを含む。
【００３５】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体剤は、配列番号５７、５８、６３、６４、６９、７０、７５および７６からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１配列を含むポリペプチドを含む。
【００３６】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体剤は、配列番号５９、６０、６５、６６、７１、７２、７７および７８からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２配列を含むポリペプチドを含む。
【００３７】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体剤は、配列番号６１、６２、６７、６８、７３、７４、７９および８０からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含むポリペプチドを含む。
【００３８】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体剤は、配列番号３３、３４、３９、４０、４５、４６、５１および５２からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号３５、３６、４１、４２、４７、４８、５３および５４からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２配列；および配列番号３７、３８、４３、４４、４９、５０、５５および５６からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列を含むポリペプチドを含む。
【００３９】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体剤は、配列番号５７、５８、６３、６４、６９、７０、７５および７６からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号５９、６０、６５、６６、７１、７２、７７および７８からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２配列；および配列番号６１、６２、６７、６８、７３、７４、７９および８０からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含むポリペプチドを含む。
【００４０】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体剤は、配列番号３３、３４、３９、４０、４５、４６、５１および５２からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号３５、３６、４１、４２、４７、４８、５３および５４からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ２配列；および配列番号３７、３８、４３、４４、４９、５０、５５および５６からなる群から選択される軽鎖ＣＤＲ３配列；ならびに配列番号５７、５８、６３、６４、６９、７０、７５および７６からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号５９、６０、６５、６６、７１、７２、７７および７８からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ２配列；および配列番号６１、６２、６７、６８、７３、７４、７９および８０からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含むポリペプチドを含む。
【００４１】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている抗体剤のうちの任意のものは、８Ｈ９抗体またはその抗原結合フラグメントを含むかまたはそれからなる。
【００４２】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体は、ｍ８Ｈ９、ｈ８Ｈ９、またはｈａｍ８Ｈ９であるかまたはそれを含む。
【００４３】
いくつかの実施形態において、８Ｈ９抗体は、配列番号９〜１６のうちの１つに記載の重鎖および配列番号１〜８のうちの１つに記載の軽鎖を含む。
【００４４】
いくつかの実施形態において、本明細書に開示されている抗体剤のうちの任意のものは、８Ｈ９抗体とＢ７Ｈ３への結合について競合する。
【００４５】
本発明は、本明細書に開示されている抗体剤またはそのフラグメントのうちの任意のものをコードするＤＮＡまたはＲＮＡを提供する。
【００４６】
本発明は、本明細書に開示されている抗体剤またはそのフラグメントのうちの任意のものを発現する細胞を提供する。
【００４７】
本発明は、抗体剤またはそのフラグメントを発現する細胞を調製する方法であって、細胞に、本明細書に開示されている抗体剤のうちの任意のものをコードするＤＮＡまたはＲＮＡをトランスフェクションするかまたはウイルスにより形質導入する工程を含む方法を提供する。
【００４８】
いくつかの実施形態において、細胞を、患者内にウイルスにより形質導入する。
【００４９】
いくつかの実施形態において、細胞は、免疫細胞である。
【００５０】
いくつかの実施形態において、細胞は、抗原提示細胞である。
【００５１】
いくつかの実施形態において、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、細胞は、ＮＫ細胞である。
【００５２】
本発明は、本明細書に開示されているＤＮＡまたはＲＮＡのうちの任意のものを含むワクチンを提供する。
【００５３】
本発明は、患者にワクチン接種する方法であって、それを必要とする患者に、本明細書に開示されているワクチンのうちの任意のものを投与する工程を含む方法を提供する。
【００５４】
いくつかの実施形態において、患者は、イヌまたはネコである。
【００５５】
本発明は、本明細書に開示されている抗体剤またはそのフラグメントのうちの任意のものを含むキメラ抗原レセプターを提供する。
【００５６】
いくつかの実施形態において、ＤＮＡまたはＲＮＡは、キメラ抗原レセプターをコードする。
【００５７】
本発明は、本明細書に開示されているキメラ抗原レセプターのうちの任意のものを発現する細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）を提供する。
【００５８】
本発明は、細胞を調製する方法であって、細胞に、本明細書に開示されているＤＮＡまたはＲＮＡのうちの任意のものをトランスフェクションするかまたはウイルスにより形質導入する工程を含む方法を提供する。
【００５９】
本発明は、養子細胞療法の方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の本明細書に開示されている細胞のうちの任意のものを投与する工程を含む方法を提供する。
【００６０】
本発明は、配列番号３２に記載されているペプチドエピトープを標的化することによって患者を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本明細書に開示されている抗体剤またはそのフラグメントのうちの任意のものを投与する工程を含む方法を提供する。
【００６１】
いくつかの実施形態において、患者は、ヒト、イヌ、ネコ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、マカク、マーモセット、ブタ、ウマ、パンダ、およびゾウの群より選択される。
【００６２】
本発明は、患者を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本明細書に開示されている細胞のうちの任意のものを投与する工程を含む方法を提供する。
【００６３】
本発明は、患者を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本明細書に開示されている抗体剤またはそのフラグメントのうちの任意のものをコードするＤＮＡまたはＲＮＡを含むウイルスを投与する工程を含む方法を提供する。
【００６４】
本発明は、コンパートメント放射免疫療法（ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ  ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ）（ｃＲＩＴ）によって患者を処置する方法であって、それを必要とする患者に、本明細書に開示されている抗体剤またはそのフラグメントのうちの任意のものを投与する工程を含む方法を提供する。
【００６５】
いくつかの実施形態において、抗体を、髄腔内に、腹腔内に、または対流増強送達（ｃｏｎｖｅｃｔｉｏｎ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ）によって投与する。
【００６６】
以下の図で構成される本明細書に含まれる図面は、単に例証目的であって、限定目的ではない。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】図１は、ｃｈ８Ｈ９  Ｆａｂの結晶構造のリボン図を示している。Ａ：個々のＩｇドメインおよび相補性決定領域（ＣＤＲ）を示すＦａｂの側面図。Ｂ：６つのＣＤＲループの配向を示す、抗原結合部位を上から見た図。Ｃ：−１から＋１までにわたるｋＴ／ｅで負に荷電（赤色）〜正に荷電（青色）した抗原結合部位の表面静電ポテンシャル。
【００６８】
【図２】図２は、ヒト化および親和性成熟された８Ｈ９抗体またはその抗原結合フラグメントを開発するための提供される戦略を図示している。
【００６９】
【図３】図３は、表面プラズモン共鳴によって決定された、マウス８Ｈ９（ｍ８Ｈ９）およびマウス／ヒトキメラ８Ｈ９（ｃｈ８Ｈ９）ＩｇＧ抗体の２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−Ｆｃに対する結合動態を示している。
【００７０】
【図４】図４は、種々の濃度のｃｈ８Ｈ９ならびにヒト化８Ｈ９  ＩｇＧ改変体Ｈ１Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ１およびＨ２Ｌ２を４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に結合させたＥＬＩＳＡの結果を示している。
【００７１】
【図５】図５は、段階希釈したＨＲＰ−ストレプトアビジン（Ａ）またはｃｈ８Ｈ９  ＩｇＧ（Ｂ）による、ビオチン化Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃ抗原のＥＬＩＳＡでの検出を示している。
【００７２】
【図６】図６は、ヒト化（ｈｕ）８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３  ｓｃＦｖの親和性成熟に関連するフローサイトメトリーデータを示している。
【００７３】
【図７】図７は、ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３  ｓｃＦｖを提示する酵母細胞（左）と細胞選別の最終／第７ラウンドから得られる酵母細胞（右）の比較を示している。酵母細胞を０．１μｇ／ｍｌまたは１μｇ／ｍｌのＢ７Ｈ３−ｍＦｃで染色し、次いで、ＡＰＣ−ヤギ抗マウス抗体によって検出した。
【００７４】
【図８−１】図８は、記載されるように、細胞選別の第７ラウンドから得られるｈｕ８Ｈ９一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）改変体についてのアミノ酸配列アラインメントを示している。強力に結合したものの配列データをクラスター解析によって群分けした。以下の５種のｓｃＦｖ改変体が繰り返し選択された：Ｓ７．２、Ｓ７．１７、Ｓ７．２２、Ｓ７．２８およびＳ７．２９。Ｓ３．３は細胞選別の第３ラウンドから得られたｓｃＦｖである。８Ｈ９Ｈ３Ｌ３（配列番号８７）；８Ｈ９Ｓ３．３（配列番号８８）；８Ｈ９Ｓ７．２（配列番号８９）；８Ｈ９Ｓ７．３（配列番号９０）；８Ｈ９Ｓ７．４（配列番号９１）；８Ｈ９Ｓ７．５（配列番号９２）；８Ｈ９Ｓ７．６（配列番号９３）；８Ｈ９Ｓ７．７（配列番号９４）；８Ｈ９Ｓ７．８（配列番号９５）；８Ｈ９Ｓ７．９（配列番号９６）；８Ｈ９Ｓ７．１７（配列番号９７）；８Ｈ９Ｓ７．１８（配列番号９８）；８Ｈ９Ｓ７．１９（配列番号９９）；８Ｈ９Ｓ７．２０（配列番号１００）；８Ｈ９Ｓ７．２１（配列番号１０１）；８Ｈ９Ｓ７．２２（配列番号１０２）；８Ｈ９Ｓ７．２７（配列番号１０３）；８Ｈ９Ｓ７．２８（配列番号１０４）；８Ｈ９Ｓ７．２９（配列番号１０５）。
【図８−２】図８は、記載されるように、細胞選別の第７ラウンドから得られるｈｕ８Ｈ９一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）改変体についてのアミノ酸配列アラインメントを示している。強力に結合したものの配列データをクラスター解析によって群分けした。以下の５種のｓｃＦｖ改変体が繰り返し選択された：Ｓ７．２、Ｓ７．１７、Ｓ７．２２、Ｓ７．２８およびＳ７．２９。Ｓ３．３は細胞選別の第３ラウンドから得られたｓｃＦｖである。８Ｈ９Ｈ３Ｌ３（配列番号８７）；８Ｈ９Ｓ３．３（配列番号８８）；８Ｈ９Ｓ７．２（配列番号８９）；８Ｈ９Ｓ７．３（配列番号９０）；８Ｈ９Ｓ７．４（配列番号９１）；８Ｈ９Ｓ７．５（配列番号９２）；８Ｈ９Ｓ７．６（配列番号９３）；８Ｈ９Ｓ７．７（配列番号９４）；８Ｈ９Ｓ７．８（配列番号９５）；８Ｈ９Ｓ７．９（配列番号９６）；８Ｈ９Ｓ７．１７（配列番号９７）；８Ｈ９Ｓ７．１８（配列番号９８）；８Ｈ９Ｓ７．１９（配列番号９９）；８Ｈ９Ｓ７．２０（配列番号１００）；８Ｈ９Ｓ７．２１（配列番号１０１）；８Ｈ９Ｓ７．２２（配列番号１０２）；８Ｈ９Ｓ７．２７（配列番号１０３）；８Ｈ９Ｓ７．２８（配列番号１０４）；８Ｈ９Ｓ７．２９（配列番号１０５）。
【００７５】
【図９】図９は、ｈｕ８Ｈ９  ｓｃＦｖ改変体を４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（左）および２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３（右）に結合させたＥＬＩＳＡ実験の結果を示している。
【００７６】
【図１０】図１０は、ｈｕ８Ｈ９  ｓｃＦｖ改変体をＭ１４神経芽細胞腫細胞に結合させた実験の結果を示している。腫瘍細胞を１μｇ／ｍｌのｈｕ８Ｈ９  ｓｃＦｖ  Ｈ３Ｌ３（青色）、Ｓ３．３（オレンジ色）、Ｓ７．２２（緑色）、またはアイソタイプコントロール（赤色）および抗ｈｉｓ抗体で染色した。結合をフローサイトメトリーによって定量化した。
【００７７】
【図１１】図１１は、表面プラズモン共鳴によって決定された、ＩｇＧ抗体ｃｈ８Ｈ９ならびにｈｕ８Ｈ９  Ｈ１Ｌ２、Ｈ３Ｌ３、３．１および５．１の４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−Ｆｃに対する結合動態を示している。
【００７８】
【図１２】図１２は、表面プラズモン共鳴によって決定された、ＩｇＧ抗体ｃｈ８Ｈ９ならびにｈｕ８Ｈ９  Ｈ１Ｌ２、Ｈ３Ｌ３、３．１および５．１の２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃに対する結合動態を示している。
【００７９】
【図１３】図１３は、ｃｈ８Ｈ９およびｈｕ８Ｈ９  ＩｇＧ改変体をＭ１４神経芽細胞腫細胞に結合させた実験の結果を示している。結合をフローサイトメトリーによって定量化した。
【００８０】
【図１４】図１４は、ヒトＰＢＭＣをエフェクター細胞として使用した、Ｂ７−Ｈ３（＋）神経芽細胞腫ＬＡＮ−１細胞に対する８Ｈ９抗体構築物のインビトロ抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を示している。細胞傷害性を５１クロムの放出によって測定した。
【００８１】
【図１５】図１５は、皮下神経芽細胞腫ＬＡＮ−１腫瘍を異種移植した胸腺欠損ヌードマウスに注射された１３１Ｉ標識された８Ｈ９抗体剤の体内分布を示している。
【００８２】
【図１６】図１６は、ｃｈ８Ｈ９とｈｕＢ７Ｈ３との間のシミュレートされた結合のグラフ表示を示している。ＩＲＤＦ（配列番号３２）が矢印で示されている。
【００８３】
【図１７】図１７は、表面プラズモン共鳴によって決定された、ＩｇＧ抗Ｂ７Ｈ３抗体ｃｈ８Ｈ９、ＭＩＨ４２、６Ａ１およびクローン１８５５０４の野生型２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃおよび２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃ変異体Ｒ１２７ＡおよびＤ１２８Ａに対する結合動態を示している。
【００８４】
【図１８】図１８は、表面プラズモン共鳴によって決定された、ＩｇＧ抗Ｂ７Ｈ３抗体ｈｕ８Ｈ９  ３．１および５．１の野生型２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃおよび２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃ変異体Ｒ１２７ＡおよびＤ１２８Ａに対する結合動態を示している。
【００８５】
【図１９】図１９は、ＣＤ３／ＣＤ８活性化ビーズの存在下でおよびＢ７Ｈ３陽性神経芽細胞腫ＩＭＲ−３２細胞の存在下または非存在下でＴ細胞の増殖を測定した実験の結果を示している。
【００８６】
【図２０】図２０は、ＣＤ３／ＣＤ８活性化ビーズおよびＢ７Ｈ３陽性神経芽細胞腫ＩＭＲ−３２細胞、ならびに漸増濃度のｃｈ８Ｈ９の存在下でＴ細胞の増殖を測定した実験の結果を示している。
【００８７】
【図２１】図２１は、ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ）に関するＴ細胞媒介性細胞傷害性を測定した実験の結果を示している。癌腫細胞を、Ｈｅｒ２×ＣＤ３二重特異性抗体を単独で用いて、またはこの抗体とさらにｍ８Ｈ９  ＩｇＧとを用いて前処理した。
【発明を実施するための形態】
【００８８】
配列表の簡単な説明
配列番号１（ｃｈ８Ｈ９軽鎖）は、
DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【００８９】
配列番号２（ｈｕ８Ｈ９  Ｌ１軽鎖）は、
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGTEFTLTISSVQPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【００９０】
配列番号３（ｈｕ８Ｈ９  Ｌ２軽鎖）は、
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGTEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【００９１】
配列番号４（ｈｕ８Ｈ９  Ｌ３軽鎖）は、
EIVMTQSPATLSVSPGERVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【００９２】
配列番号５（ｈｕ８Ｈ９  ３．１軽鎖）は、
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【００９３】
配列番号６（ｈｕ８Ｈ９  ４．１軽鎖）は、
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLHWYQQKSHQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTISSLQPEDFGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【００９４】
配列番号７（ｈｕ８Ｈ９  ５．１軽鎖）は、
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTISSLQPEDFGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【００９５】
配列番号８（ｃｈ８Ｈ９  ６．１軽鎖；ｃｈ８Ｈ９＋６つの親和性成熟変異）は、
DIVMTQSPATLSVTPGDRVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
である。
【００９６】
配列番号９（ｃｈ８Ｈ９重鎖）は、
QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【００９７】
配列番号１０（ｈｕ８Ｈ９  Ｈ１重鎖）は、
QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQAPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【００９８】
配列番号１１（ｈｕ８Ｈ９  Ｈ２重鎖）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQAPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSRLTSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【００９９】
配列番号１２（ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３重鎖）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１００】
配列番号１３（ｈｕ８Ｈ９  ３．１重鎖）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１０１】
配列番号１４（ｈｕ８Ｈ９  ４．１重鎖）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGRVTMTTDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１０２】
配列番号１５（ｈｕ８Ｈ９  ５．１重鎖）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGRVTMTTDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１０３】
配列番号１６（ｃｈ８Ｈ９  ６．１重鎖；ｃｈ８Ｈ９＋６つの親和性成熟変異）は、
QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
である。
【０１０４】
配列番号１７（ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１０５】
配列番号１８（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ３．３  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１０６】
配列番号１９（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．２  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASCKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGVGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSIGDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１０７】
配列番号２０（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．１７  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWVGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTSTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQPISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGYSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１０８】
配列番号２１（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．２２  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRPEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSIPGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１０９】
配列番号２２（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．２８  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLGSEDTAVYFCTRQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSSGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSIGDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１１０】
配列番号２３（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．２９  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYLELSSLGSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１１１】
配列番号２４（ｈｕ８Ｈ９  ３．１  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１１２】
配列番号２５（ｈｕ８Ｈ９  ４．１  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGRVTMTTDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLHWYQQKSHQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTISSLQPEDFGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１１３】
配列番号２６（ｈｕ８Ｈ９  ５．１  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGRVTMTTDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTISSLQPEDFGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０１１４】
配列番号２７（ｃｈ８Ｈ９  ６．１  ｓｃＦｖ）は、
QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPATLSVTPGDRVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKR
である。
【０１１５】
配列番号２８（リンカーｈｕＯＫＴ３（抗ＣＤ３）ｓｃＦｖ）は、
GGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDRFTISRDNSKNTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR
である。
【０１１６】
配列番号２９（リンカーＣ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＦｖ）は、
GGGGSGGGGSGGGGSHVKLQESGPGLVQPSQSLSLTCTVSGFSLTDYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRLNIYRDNSKNQVFLEMNSLQAEDTAMYYCARRGSYPYNYFDAWGCGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVIQESALTTPPGETVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQEKPDHCFTGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLIGDKAALTIAGTQTEDEAIYFCALWYSDHWVIGGGTRLTVLG
である。
【０１１７】
配列番号３０（リンカーｈｕＯＫＴ３（抗ＣＤ３）ｓｃＦｖ）は、
GGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDRFTISRDNSKNTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR
である。
【０１１８】
配列番号３１（リンカーＣ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＦｖ）は、
GGGGSGGGGSGGGGSHVKLQESGPGLVQPSQSLSLTCTVSGFSLTDYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRLNIYRDNSKNQVFLEMNSLQAEDTAMYYCARRGSYPYNYFDAWGCGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVIQESALTTPPGETVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQEKPDHCFTGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLIGDKAALTIAGTQTEDEAIYFCALWYSDHWVIGGGTRLTVLG
である。
【０１１９】
配列番号３２は、ＩＲＤＦである。
【化１】
2017532952.tif 000003
【化２】
2017532952.tif 000004
【０１２０】
配列番号８１は、TCAGTTTTGGCCCAGGCGGCCである。
【０１２１】
配列番号８２は、ACCACTAGTTGGGCCGGCCTGである。
【０１２２】
配列番号８３は、
CTTCGCTGTTTTTCAATATTTTCTGTTATTGCTTCAGTTTTGGCCCAGGCGGCC
である。
【０１２３】
配列番号８４は、
GAGCCGCCACCCTCAGAACCGCCACCCTCAGAGCCACCACTAGTTGGGCCGGCCTG
である。
【０１２４】
配列番号８５は、FVSIRDFGである。
【０１２５】
配列番号８６は、IQDFである。
【０１２６】
定義
本出願では、別段文脈から明らかでない限り、（ｉ）用語「ａ」は、「少なくとも１つ」を意味すると理解され得る；（ｉｉ）用語「または」は、「および／または」を意味すると理解され得る；（ｉｉｉ）用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、それら自体で示されているかまたは１つ以上のさらなる構成要素または工程と一緒に示されているかにかかわらず、列挙された構成要素または工程を包含すると理解され得る；および（ｉｖ）「約」および「およそ」という用語は、当業者が認識するように、標準の変動が許容されると理解され得る；および（ｖ）範囲が示されている場合には、終点が含まれる。
【０１２７】
投与：本明細書中で使用されるとき、「投与」という用語は、被験体または系への組成物の投与のことを指す。動物被験体（例えば、ヒト）への投与は、任意の適切な経路によるものであり得る。例えば、いくつかの実施形態において、投与は、気管支（気管支滴注によるものを含む）、頬側、経腸、皮膚間（ｉｎｔｅｒｄｅｒｍａｌ）、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、静脈内、脳室内、粘膜、鼻、経口、直腸、皮下、舌下、局所的、気管（気管内滴注によるものを含む）、経皮的、膣および硝子体へのものであり得る。いくつかの実施形態において、投与は、断続的な投薬を含み得る。いくつかの実施形態において、投与は、少なくとも選択された期間にわたる連続した投薬（例えば、灌流）を含み得る。
【０１２８】
親和性：当該分野で公知であるように、「親和性」は、特定のリガンドがそのパートナーに結合する堅固さの尺度である。親和性は、種々の方法で測定され得る。いくつかの実施形態において、親和性は、定量的アッセイによって測定される。いくつかのそのような実施形態において、生理的条件を模倣するために、結合パートナーの濃度は、リガンドの濃度を超過するように固定され得る。代替的または付加的に、いくつかの実施形態において、結合パートナーの濃度および／またはリガンドの濃度は、変動し得る。いくつかのそのような実施形態において、親和性は、匹敵する条件（例えば、濃度）下で参照と比較され得る。
【０１２９】
作用物質：用語「作用物質」は、本明細書中で使用されるとき、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、脂質、小分子、金属、またはこれらの組み合わせを含めた任意の化学的クラスの化合物または実体を指し得る。文脈から明らかになるように、いくつかの実施形態において、作用物質は、細胞もしくは生物、またはその画分、抽出物、もしくは構成要素であり得るかまたはそれを含み得る。いくつかの実施形態において、作用物質は、天然に見出される、かつ／または、天然に得られるという点で、天然産物であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、作用物質は、人間の手によって設計された、操作された、かつ／もしくは生成された、かつ／または天然には見出されないという点で人間により作られた１つ以上の実体であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、作用物質は、単離されたまたは純粋な形態で利用され得る；いくつかの実施形態において、作用物質は、粗製形態で利用され得る。いくつかの実施形態において、潜在的な作用物質は、例えば、スクリーニングして活性な作用物質を同定または特徴付けることができるコレクションまたはライブラリーとして提供される。本発明に従って利用され得る作用物質のいくつかの特定の実施形態としては、小分子、抗体、抗体フラグメント、アプタマー、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム）、ペプチド、ペプチド模倣薬などが挙げられる。いくつかの実施形態において、作用物質は、ポリマーであるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、作用物質は、ポリマーではなく、かつ／またはいかなるポリマーも実質的に含まない。いくつかの実施形態において、作用物質は、少なくとも１つのポリマー部分を含む。いくつかの実施形態において、作用物質は、いかなるポリマー部分も欠くかまたは実質的に含まない。
【０１３０】
アミノ酸：本明細書中で使用されるとき、用語「アミノ酸」とは、その最も広い意味において、ポリペプチド鎖に組み込まれ得る任意の化合物および／または物質のことを指す。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、一般構造Ｈ２Ｎ−Ｃ（Ｈ）（Ｒ）−ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、合成アミノ酸であり；いくつかの実施形態において、アミノ酸は、ｄ−アミノ酸であり；いくつかの実施形態において、アミノ酸は、ｌ−アミノ酸である。「標準的なアミノ酸」とは、天然に存在するペプチドに通常見られる２０種の標準的なｌ−アミノ酸のうちのいずれかのことを指す。「標準的でないアミノ酸」とは、それが合成的に調製されるかまたは天然の供給源から得られるかに関係なく、標準的なアミノ酸以外の任意のアミノ酸のことを指す。本明細書中で使用されるとき、「合成アミノ酸」は、塩、アミノ酸誘導体（例えば、アミド）および／または置換を含むがこれらに限定されない、化学的に改変されたアミノ酸を包含する。ペプチドにおけるカルボキシ末端および／またはアミノ末端のアミノ酸を含むアミノ酸は、メチル化、アミド化、アセチル化、保護基、および／またはそのペプチドの活性に悪影響を及ぼさずにその循環半減期を変化させ得る他の化学基による置換によって改変され得る。アミノ酸は、ジスルフィド結合に関与し得る。アミノ酸は、１つまたは翻訳後の修飾（例えば、１つ以上の化学実体（例えば、メチル基、酢酸基、アセチル基、リン酸基、ホルミル部分、イソプレノイド基、硫酸基、ポリエチレングリコール部分、脂質部分、炭水化物部分、ビオチン部分など）との会合）を含み得る。用語「アミノ酸」は、「アミノ酸残基」と交換可能に使用され、遊離アミノ酸および／またはペプチドのアミノ酸残基のことを指し得る。この用語が遊離アミノ酸のことを指すのかまたはペプチドの残基のことを指すのかは、この用語が使用されている文脈から明らかになるだろう。
【０１３１】
アナログ：本明細書中で使用されるとき、用語「アナログ」は、参照物質と１つ以上の特定の構造的特徴、エレメント、構成要素、または部分を共有する物質のことを指す。代表的には、「アナログ」は、参照物質と有意な構造的類似性を示す、例えば、コアまたはコンセンサス構造を共有するが、ある特定の別々の様式での相違も有する。いくつかの実施形態において、アナログは、参照物質の化学的操作によって参照物質から生成され得る物質である。いくつかの実施形態において、アナログは、参照物質を生成する合成プロセスと実質的に類似した（例えば、複数の工程を共有する）合成プロセスを実施することによって生成され得る物質である。いくつかの実施形態において、アナログは、参照物質を生成するために使用される合成プロセスとは異なる合成プロセスを実施することによって生成されるかまたは生成され得る。
【０１３２】
動物：本明細書中で使用されるとき、用語「動物」とは、動物界の任意のメンバーのことを指す。いくつかの実施形態において、「動物」とは、任意の発生段階のヒトのことを指す。いくつかの実施形態において、「動物」とは、任意の発生段階の非ヒト動物のことを指す。いくつかの実施形態において、非ヒト動物は、哺乳動物（例えば、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ヒツジ、ウシ、霊長類および／またはブタ）である。いくつかの実施形態において、動物には、哺乳動物、鳥類、爬虫類、両生類、魚類および／または蠕虫が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、動物は、トランスジェニック動物、遺伝的に操作された動物および／またはクローンであり得る。
【０１３３】
アンタゴニスト：本明細書中で使用されるとき、用語「アンタゴニスト」は、ｉ）別の作用物質の効果を阻害する、減少させるまたは低下させる；かつ／またはｉｉ）１つ以上の生物学的事象を阻害する、減少させる、低下させる、または遅延させる作用物質のことを指す。アンタゴニストは、例えば、関連する阻害活性を示す小分子、ポリペプチド、核酸、炭水化物、脂質、金属、および／または任意の他の実体を含めた任意の化学的クラスの作用物質であり得るかまたはそれを含み得る。アンタゴニストは、直接的（その場合、その標的に対して直接影響を発揮する）または間接的（その場合、その標的に結合すること以外によって；例えば、標的の制御因子と相互作用し、したがって、例えば、標的のレベルまたは活性を変更させることによって影響を発揮する）であり得る。
【０１３４】
抗体：本明細書中で使用されるとき、用語「抗体」は、特定の標的抗原に対する特異的結合を付与するのに十分な正準免疫グロブリン配列エレメントを含むポリペプチドのことを指す。当該分野で公知であるように、天然に生成されるインタクトな抗体は、互いと会合して一般に「Ｙ形」構造と称される構造になった２本の同一の重鎖ポリペプチド（各々約５０ｋＤ）および２本の同一の軽鎖ポリペプチド（各々約２５ｋＤ）で構成されるおよそ１５０ｋＤの四量体作用物質である。各重鎖は、少なくとも４つのドメイン（各々約１１０アミノ酸長）−アミノ末端可変（ＶＨ）ドメイン（Ｙ構造の先端に位置する）、その後ろの３つの定常ドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２、およびカルボキシ末端ＣＨ３（Ｙのステムの基部に位置する）で構成される。「スイッチ」として公知の短い領域により、重鎖可変領域と定常領域が接続される。「ヒンジ」により、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインが抗体の残部に接続される。インタクトな抗体において、このヒンジ領域における２つのジスルフィド結合により２本の重鎖ポリペプチドが互いと接続される。各軽鎖は、２つのドメイン−アミノ末端可変（ＶＬ）ドメイン、その後ろのカルボキシ末端定常（ＣＬ）ドメインで構成され、これらは、別の「スイッチ」によって互いから分離されている。インタクトな抗体四量体は、２本の重鎖−軽鎖二量体で構成され、重鎖と軽鎖は、単一のジスルフィド結合によって互いと連結している；２つの他のジスルフィド結合により、重鎖ヒンジ領域が互いと接続され、したがって、二量体が互いと接続され、四量体が形成される。天然に生成される抗体はまた、代表的にはＣＨ２ドメインにおいてグリコシル化されている。天然の抗体の各ドメインは、互いに対して圧縮された逆平行ベータバレル状に充填された２つのベータシート（例えば、３本鎖、４本鎖、または５本鎖シート）から形成される「免疫グロブリン折り畳み」を特徴とする構造を有する。各可変ドメインは、「相補性決定領域」（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３）として公知の３つの超可変ループならびに４つの幾分不変性の「フレームワーク」領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）を含む。天然の抗体が折り畳まれた場合、ＦＲ領域により、構造的なフレームワークをドメインにもたらすベータシートが形成され、重鎖および軽鎖の両方のＣＤＲループ領域が３次元空間で一つにまとまり、したがって、Ｙ構造の先端に位置する単一の超可変抗原結合部位が創出される。抗体ポリペプチド鎖間でのアミノ酸配列比較により、２本の軽鎖（κおよびλ）クラス、いくつかの重鎖（例えば、μ、γ、α、ε、δ）クラス、およびある特定の重鎖サブクラス（α１、α２、γ１、γ２、γ３、およびγ４）が定義されている。抗体クラス（ＩｇＡ［ＩｇＡ１、ＩｇＡ２を含む］、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ［ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４を含む］、ＩｇＭ）は、利用される重鎖配列のクラスに基づいて定義される。天然に存在する抗体のＦｃ領域は、補体系のエレメントに結合し、また、例えば細胞傷害性を媒介するエフェクター細胞を含めたエフェクター細胞上のレセプターにも結合する。当該分野で公知であるように、Ｆｃレセプターに対するＦｃ領域の親和性お���び／または他の結合特質は、グリコシル化または他の修飾によって調節され得る。いくつかの実施形態において、本発明に従って生成および／または利用される抗体は、修飾または操作されたそのようなグリコシル化を有するＦｃドメインを含めたグリコシル化Ｆｃドメインを含む。本発明の目的上、ある特定の実施形態において、天然の抗体に見出されるように十分な免疫グロブリンドメイン配列を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチドの複合体は、そのようなポリペプチドが天然に産生されたもの（例えば、抗原に反応している生物から生成されたもの）であるか、または組換え操作、化学合成、もしくは他の人工的な系もしくは方法によって生成されたものであるかにかかわらず、「抗体」と称され得、かつ／またはそれとして使用され得る。いくつかの実施形態において、抗体はポリクローナルであり、いくつかの実施形態において、抗体はモノクローナルである。いくつかの実施形態において、抗体は、マウス、ウサギ、霊長類、またはヒト抗体に特徴的な定常領域配列を有する。いくつかの実施形態において、抗体配列エレメントは、当該分野で公知であるように、ヒト化されたもの、霊長類化された（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）もの、キメラなどである。さらに、用語「抗体」は、本明細書中で使用されるとき、適切な実施形態では（別段述べられていないかまたは別段文脈から明らかでない限り）、抗体の構造的および機能的特徴を代替的な提示で捉えるための当該分野で公知のまたは開発された任意の構築物または形式のことを指すと理解されるだろう。例えば、いくつかの実施形態において、この用語は、二重特異性または他の多特異性（例えば、ザイボディ（ｚｙｂｏｄｙ）など）抗体、小モジュール免疫薬剤（Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｄｕｌａｒ  ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（「ＳＭＩＰｓ（商標）」）、単鎖抗体（ｓｃＡｂ）、ラクダ科（ｃａｍｅｌｏｉｄ）抗体、および／または抗体フラグメントを指し得る。いくつかの実施形態において、抗体は、天然に産生された場合には有すると思われる共有結合性の修飾（例えば、グリカンの付着）を欠き得る。いくつかの実施形態において、抗体は、共有結合性の修飾（例えば、グリカン、ペイロード［例えば、検出可能部分、治療的部分、触媒部分など］の付着）、または他のペンダント基（例えば、ポリ−エチレングリコールなど）を含有し得る。
【０１３５】
抗体剤：本明細書中で使用されるとき、用語「抗体剤」とは、特定の抗原に特異的に結合する作用物質のことを指す。いくつかの実施形態において、この用語は、特異的結合をもたらすのに十分な免疫グロブリン構造エレメントを有する任意のポリペプチドを包含する。好適な抗体剤としては、ヒト抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、結合体化抗体（すなわち、他のタンパク質、放射標識、細胞毒に結合体化または融合された抗体）、小モジュール免疫薬剤（「ＳＭＩＰｓＴＭ」）、一本鎖抗体、ラクダ科抗体および抗体フラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中で使用されるとき、用語「抗体剤」は、インタクトなモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一ドメイン抗体（例えば、サメ単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはそのフラグメント））、少なくとも２つのインタクトな抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメント（それが所望の生物学的活性を示す限り）も含む。いくつかの実施形態において、この用語は、ステープルドペプチド（ｓｔａｐｌｅｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ）を包含する。いくつかの実施形態において、この用語は、１つ以上の抗体様で結合するペプチド模倣物を包含する。いくつかの実施形態において、この用語は、１つ以上の抗体様で結合する足場タンパク質（ｓｃａｆｆｏｌｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を包含する。いくつかの（ｃｏｍｅ）実施形態において、この用語は、モノボディ（ｍｏｎｏｂｏｄｙ）またはアドネクチン（ａｄｎｅｃｔｉｎｓ）を包含する。多くの実施形態において、抗体剤は、そのアミノ酸配列が当業者が相補性決定領域（ＣＤＲ）として認識する１つ以上の構造エレメントを含むポリペプチドであるかまたはそれを含み；いくつかの実施形態において、抗体剤は、そのアミノ酸配列が参照抗体に見られるＣＤＲと実質的に同一である少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲおよび／または少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ）を含むポリペプチドであるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、配列が同一であるかまたは参照ＣＤＲと比べて１〜５個のアミノ酸置換を含むという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含まれるＣＤＲは、それが、参照ＣＤＲと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を示すという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含められるＣＤＲは、それが、参照ＣＤＲと少なくとも９６％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を示すという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含められるＣＤＲは、その含められるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が、参照ＣＤＲと比べて欠失しているか、付加されているかまたは置換されているが、その含められるＣＤＲが、その他では参照ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有するという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実��形態において、含められるＣＤＲは、含められるＣＤＲ内の１〜５個のアミノ酸が、参照ＣＤＲと比べて欠失しているか、付加されているかまたは置換されているが、その含められるＣＤＲが、その他では参照ＣＤＲと同一であるアミノ酸配列を有するという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含められるＣＤＲは、その含められるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が、参照ＣＤＲと比べて置換されているが、その含められるＣＤＲが、その他では参照ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有するという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、含められるＣＤＲは、その含められるＣＤＲ内の１〜５個のアミノ酸が、参照ＣＤＲと比べて欠失しているか、付加されているかまたは置換されているが、その含められるＣＤＲが、その他では参照ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有するという点において、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態において、抗体剤は、そのアミノ酸配列が当業者によって免疫グロブリンの可変ドメインとして認識される構造エレメントを含むポリペプチドであるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗体剤は、免疫グロブリン結合ドメインと相同であるかまたは大部分は相同である結合ドメインを有するポリペプチドタンパク質である。抗体剤という用語は、キメラ抗原レセプターを含む。
【０１３６】
抗体フラグメント：本明細書中で使用されるとき、「抗体フラグメント」は、インタクトな抗体の一部（例えば、抗体の抗原結合領域または可変領域）を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）；テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）；線状抗体；一本鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。例えば、抗体フラグメントには、単離されたフラグメント、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」フラグメント、軽鎖可変領域および重鎖可変領域がペプチドリンカーによって接続された組換え一本鎖ポリペプチド分子（「ＳｃＦｖタンパク質」）および超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が含まれる。多くの実施形態において、抗体フラグメントは、そのフラグメントの親抗体と同じ抗原に結合する、その親抗体の十分な配列を含み；いくつかの実施形態において、フラグメントは、親抗体に匹敵する親和性で抗原に結合し、かつ／または抗原への結合について親抗体と競合する。抗体の抗原結合フラグメントの例としては、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、Ｆｖフラグメント、ｄｓＦｖダイアボディ、ｄＡｂフラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメントおよび単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）領域が挙げられるが、これらに限定されない。抗体の抗原結合フラグメントは、任意の手段によって生成され得る。例えば、抗体の抗原結合フラグメントは、インタクトな抗体の断片化によって酵素的もしくは化学的に生成され得、かつ／または部分的な抗体配列をコードする遺伝子から組換え的に生成され得る。代替的または付加的に、抗体の抗原結合フラグメントは、完全にまたは部分的に合成的に生成され得る。抗体の抗原結合フラグメントは、必要に応じて、一本鎖抗体フラグメントを含み得る。代替的または付加的に、抗体の抗原結合フラグメントは、例えばジスルフィド結合によって、共に連結された複数の鎖を含み得る。抗体の抗原結合フラグメントは、必要に応じて、多分子複合体を構成し得る。機能的な抗体フラグメントは、代表的には、少なくとも約５０個のアミノ酸を含み、より代表的には、少なくとも約２００個のアミノ酸を含む。
【０１３７】
抗体ポリペプチド：本明細書中で使用されるとき、用語「抗体ポリペプチド」もしくは「抗体」、または「その抗原結合フラグメント」は、互換的に使用され得、エピトープに結合し得るポリペプチドのことを指す。いくつかの実施形態において、抗体ポリペプチドは、完全長抗体であり、いくつかの実施形態において、完全長未満であるが、少なくとも１つの結合部位（抗体「可変領域」の構造を有する少なくとも１つ、および好ましくは少なくとも２つの配列を含む）を含む。いくつかの実施形態において、用語「抗体ポリペプチド」は、免疫グロブリン結合ドメインと相同であるかまたは大部分が相同である結合ドメインを有する任意のタンパク質を包含する。特定の実施形態において、「抗体ポリペプチド」は、免疫グロブリン結合ドメインに対して少なくとも９９％の同一性を示す結合ドメインを有するポリペプチドを包含する。いくつかの実施形態において、「抗体ポリペプチド」は、免疫グロブリン結合ドメイン、例えば参照免疫グロブリン結合ドメインに対して少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を示す結合ドメインを有する任意のタンパク質である。含まれる「抗体ポリペプチド」は、天然の供給源に見出される抗体のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を有し得る。本発明に係る抗体ポリペプチドは、例えば、天然の供給源または抗体ライブラリーからの単離、宿主系におけるまたはそれを用いた組換えによる産生、化学合成など、またはこれらの組み合わせを含めた任意の入手可能な手段によって調製され得る。抗体ポリペプチドは、モノクローナルまたはポリクローナルであり得る。抗体ポリペプチドは、ヒトクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥのいずれかを含めた任意の免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。ある特定の実施形態において、抗体は、ＩｇＧ免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。本明細書中で使用されるとき、用語「抗体ポリペプチド」または「抗体の特徴的部分」は、互換的に使用され、目的のエピトープに結合する能力を有する抗体の任意の誘導体のことを指す。ある特定の実施形態において、「抗体ポリペプチド」は、完全長抗体の特異的結合能力の少なくとも有意な部分を保持する抗体フラグメントである。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖダイアボディ、およびＦｄフラグメントが挙げられるが、これらに限定されない。代替的または付加的に、抗体フラグメントは、例えばジスルフィド結合によって、共に連結された複数の鎖を含み得る。いくつかの実施形態において、抗体ポリペプチドは、ヒト抗体であり得る。いくつかの実施形態において、抗体ポリペプチドは、ヒト化されたものであり得る。含まれるヒト化抗体ポリペプチドは、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖または抗体ポリペプチド（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分配列（ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｃｅ））であり得る。一般に、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基で置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。
【０１３８】
抗原：「抗原」は、ｉ）免疫応答を誘発し；かつ／または（ｉｉ）例えば生物に曝露または投与されるとＴ細胞レセプター（例えば、ＭＨＣ分子によって提示されたとき）または抗体（例えば、Ｂ細胞によって産生される）が特異的に結合する分子または実体である。いくつかの実施形態において、抗原により、生物内で体液性応答（例えば、抗原特異的抗体の産生を含む）が誘発される；代替的または付加的に、いくつかの実施形態において、抗原により、生物内で細胞応答（例えば、そのレセプターが抗原と特異的に相互作用するＴ細胞が関与する）が誘発される。特定の抗原は、標的生物（例えば、マウス、ウサギ、霊長類、ヒト）の１つまたはいくつかのメンバーにおいて免疫応答を誘発し得るが、標的生物種のすべてのメンバーにおいてではないことが当業者には理解されよう。いくつかの実施形態において、抗原により、標的生物種のメンバーの少なくとも約２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％において免疫応答が誘発される。いくつかの実施形態において、抗原は、抗体および／またはＴ細胞レセプターに結合し、生物内で特定の生理応答を誘導する場合もあり、誘導しない場合もある。いくつかの実施形態において、例えば、抗原は、そのような相互作用がインビボで起こるか否かにかかわらず、抗体および／またはＴ細胞レセプターにインビトロで結合し得る。一般に、抗原は、例えば、小分子、核酸、ポリペプチド、炭水化物、脂質、ポリマー［いくつかの実施形態において、生物学的ポリマー以外（例えば、核酸またはアミノ酸ポリマー以外）］などの任意の化学的実体であり得るかまたはそれを含み得る。いくつかの実施形態において、抗原は、ポリペプチドであるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原は、グリカンであるかまたはそれを含む。当業者は、一般に、抗原は、単離されたまたは純粋な形態で提供または利用され得る、あるいは、粗製形態で（例えば、他の材料と一緒に、例えば、細胞抽出物などの抽出物または抗原を含む供給源の他の比較的粗製の調製物として）提供され得ることを理解するだろう。いくつかの実施形態において、抗原は、組換え抗原であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原は、ポリペプチドまたはその一部であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、抗原は、感染因子に関連する（例えば、それによって発現される）。いくつかの実施形態において、抗原は、癌（例えば、腫瘍細胞および／または転移）に関連する。
【０１３９】
抗原結合フラグメント：用語「抗原結合フラグメント」は、本明細書中で使用されるとき、抗原に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントのことを指す。抗体の抗原結合機能はインタクトな抗体のフラグメントによってなされ得ることが示されている。抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結した２つのＦａｂフラグメントを含む二価（ｂｉｖａｌｅｎｔ）のフラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１巻：５４４〜５４６頁）；（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えば、さらなる配列（リンカー、フレームワーク領域など）を含むかまたは含まないＶＨ  ＣＤＲ３、ならびに（ｖｉｉ）さらなる配列（リンカー、フレームワーク領域など）を含むかまたは含まない２つ〜６つの単離されたＣＤＲの組み合わせが挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え方法を使用して、これらを、ＶＬ領域とＶＨ領域が対合して一価の分子（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２巻：４２３〜４２６頁；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８５巻：５８７９〜５８８３頁を参照のこと）を形成した単一のポリペプチド鎖として作出することができる合成リンカーによって接合され得る。そのような単鎖抗体も、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語に包含されることが意図されている。さらに、抗原結合フラグメントは、（ｉ）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドと融合する結合ドメインポリペプチド（例えば、重鎖可変領域、軽鎖可変領域、またはリンカーペプチドによって軽鎖可変領域に融合した重鎖可変領域など）、（ｉｉ）ヒンジ領域と融合した免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、および（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域と融合した免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域を含む結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質を含む。ヒンジ領域は、二量体化を予防するために、１つ以上のシステイン残基をセリン残基によって置換することによって修飾され得る。そのような結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＵＳ２００３／０１１８５９２およびＵＳ２００３／０１３３９３９にさらに開示されている。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技法を使用して得られ、当該フラグメントは、インタクトな抗体と同じ様式で有用性についてスクリーニングされる。さらに、抗原結合フラグメントは、二価（ｄｉｖａｌｅｎｔ）（または二価（ｂｉｖａｌｅｎｔ））単鎖可変フラグメント（ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ）、あるいは、標準の分��生物学的手段によって操作され得る、いわゆるダイアボディを含む。
【０１４０】
抗原提示細胞：句「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、本明細書中で使用されるとき、抗原をプロセシングし、Ｔ細胞に提示する細胞に関して当該分野で理解されている意味を有する。例示的な抗原細胞としては、樹状細胞、マクロファージおよびある特定の活性化上皮細胞が挙げられる。
【０１４１】
抗原同一性：本明細書中で使用されるとき、用語「抗原同一性」（ＡＩ）とは、目的のポリペプチドまたはその一部［例えば、ＨＡポリペプチド、またはそのエピトープ（例えば、免疫優性エピトープ）］における、関連する参照ポリペプチド（例えば、例えば、パンデミックＨＡであり得る親ＨＡポリペプチド）またはその一部と共有されるアミノ酸の百分率による割合のことを指す。任意の２つのポリペプチドまたは配列を比較することによって得られるＡＩ値は、０から１００の間の数字であり得、１００の値は、２つのポリペプチドまたはその一部の配列が同一であることを示す。
【０１４２】
およそ：本明細書中で使用されるとき、用語「およそ」および「約」は、各々、関連する文脈の必要に応じて当業者に適切に理解されるだろう正常な統計学的変動を包含することが意図されている。ある特定の実施形態において、用語「およそ」または「約」は、それぞれ、別段述べられていないかまたは別段文脈から明らかでない限り（例えば、そのような数が可能性のある値の１００％を超え得る場合）、述べられている値のいずれかの方向（超または未満）の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以内に入る値の範囲のことを指す。
【０１４３】
関連する：この用語が本明細書中で使用されるとき、２つの事象または実体は、一方の存在、レベルおよび／または形態が他方の存在、レベルおよび／または形態と相関する場合、互いと「関連する」。例えば、特定の実体（例えば、ポリペプチド）は、その存在、レベルおよび／または形態が、疾患、障害、または状態の発生数および／または感受性（例えば、関連する集団にわたって）と相関する場合、その特定の疾患、障害、または状態と関連するとみなされる。いくつかの実施形態において、２つ以上の実体は、それらが直接または間接的に相互作用し、その結果それらが互いと物理的に近傍になり、それが維持される場合、互いと物理的に「関連する」。いくつかの実施形態において、互いと物理的に関連する２つ以上の実体は、互いと共有結合的に連結している；いくつかの実施形態において、互いと物理的に関連する２つ以上の実体は、互いと共有結合的に連結していないが、例えば、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁性、およびそれらの組み合わせによって、非共有結合的に関連する。
【０１４４】
生物学的に活性な：本明細書中で使用されるとき、句「生物学的に活性な」は、生体系において（例えば、細胞（例えば、単離された、培養物中の、組織内の、生物内の）において、細胞培養物において、組織において、生物内において）活性を有する物質のことを指す。例えば、生物に投与されたときに、その生物に対して生物学的効果を有する物質が、生物学的に活性であるとみなされる。当業者は、活性が存在するには生物学的に活性な物質の一部分またはフラグメントのみが必要である（例えば、必要かつ十分である）ことが多いこと；そのような状況では、一部分またはフラグメントは、「生物学的に活性な」一部分またはフラグメントとみなされることを理解するだろう。
【０１４５】
結合：用語「結合」は、本明細書中で使用されるとき、代表的には、２つ以上の実体の間またはその中の非共有結合性の会合のことを指すことが理解されるだろう。「直接」結合は、実体または部分の間の物理的接触を伴う；間接的な結合は、１つ以上の中間実体との物理的接触による物理的相互作用を伴う。２つ以上の実体の間の結合は、代表的には、相互作用する実体または部分を隔離して試験する場合またはより複雑な系の状況で（例えば、同時にキャリア実体と共有結合的にまたは別途関連する、および／または生体系または細胞において）試験する場合を含めた種々の状況のいずれかで評価され得る。
【０１４６】
結合剤：一般に、用語「結合剤」は、本明細書中では、本明細書中に記載される目的の標的に結合する任意の実体を指すために使用される。多くの実施形態において、目的の結合剤は、特定の相互作用の状況においてその標的を他の潜在的な結合パートナーから識別するという点で、その標的に特異的に結合するものである。一般に、結合剤は、任意の化学的クラスの実体（例えば、ポリマー、非ポリマー、小分子、ポリペプチド、炭水化物、脂質、核酸など）であり得るかまたはそれを含み得る。いくつかの実施形態において、結合剤は、単一の化学的実体である。いくつかの実施形態において、結合剤は、関連する条件下で非共有結合性の相互作用によって互いと関連する２つ以上の別々の化学実体の複合体である。例えば、当業者は、いくつかの実施形態において、結合剤は、「一般的な」結合部分（例えば、ビオチン／アビジン／ストレプトアビジンおよび／またはクラスに特異的な抗体のうちの１つ）および一般的な結合部分のパートナーに連結した「特異的な」結合部分（例えば、特定の分子標的を有する抗体またはアプタマー）を含み得ることを理解するだろう。いくつかの実施形態において、そのような手法により、異なる特異的結合部分を同じ一般的な結合部分パートナーと連結することによる複数の結合剤のモジュラー組み立てが可能になり得る。いくつかの実施形態において、結合剤は、ポリペプチド（例えば、抗体または抗体フラグメントを含む）であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、結合剤は、小分子であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、結合剤は、核酸であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、結合剤は、アプタマーである。いくつかの実施形態において、結合剤は、ポリマーである；いくつかの実施形態において、結合剤はポリマーではない。いくつかの実施形態において、結合剤は、ポリマー部分を欠くという点で、非ポリマー性である。いくつかの実施形態において、結合剤は、炭水化物であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、結合剤は、レクチンであるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、結合剤は、ペプチド模倣薬であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、結合剤は、足場タンパク質であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、結合剤は、ミモトープ（ｍｉｍｅｏｔｏｐｅ）であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、結合剤は、ステープルドペプチドであるかまたはそれを含む。ある特定の実施形態において、結合剤は、ＤＮＡまたはＲＮＡなどの核酸であるかまたはそれを含む。
【０１４７】
特徴的な部分：本明細書中で使用されるとき、用語「特徴的な部分」は、その存在（または非存在）が、ある物質の特定の特徴、特質または活性の存在（または非存在）と相関する、その物質の部分のことを指すために、その最も広い意味において使用される。いくつかの実施形態において、ある物質の特徴的な部分は、特定の特徴、特質または活性を共有する物質および関連物質に見られるが、その特定の特徴、特質または活性を共有しないものには見られない部分である。ある特定の実施形態において、特徴的な部分は、インタクトな物質と少なくとも１つの機能的特色を共有する。例えば、いくつかの実施形態において、タンパク質またはポリペプチドの「特徴的な部分」は、一続き（ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  ｓｔｒｅｔｃｈ）のアミノ酸、または一体となってタンパク質またはポリペプチドに特徴となる一続きのアミノ酸のコレクションを含むものである。いくつかの実施形態において、そのような各一続きは、通常、少なくとも２、５、１０、１５、２０、５０個またはそれ以上のアミノ酸を含む。一般に、ある物質（例えば、タンパク質、抗体など）の特徴的な部分は、上に明記された配列同一性および／または構造的同一性に加えて、関連するインタクトな物質と少なくとも１つの機能的特色を共有するものである。いくつかの実施形態において、特徴的な部分は、生物学的に活性であり得る。
【０１４８】
特徴的な配列：「特徴的な配列」は、ポリペプチドまたは核酸のファミリーのすべてのメンバーにおいて見出され、したがって、当業者がそのファミリーのメンバーを定義するために使用され得る配列である。
【０１４９】
特徴的な配列エレメント：本明細書中で使用されるとき、「特徴的な配列エレメント」という句は、ポリマー（例えば、ポリペプチドまたは核酸）において見出される、そのポリマーの特徴的部分を代表する配列エレメントのことを指す。いくつかの実施形態において、特徴的な配列エレメントの存在は、ポリマーの特定の活性または特性の存在またはレベルと相関する。いくつかの実施形態において、特徴的な配列エレメントの存在（または非存在）により、特定のポリマーが、そのようなポリマーの特定のファミリーまたは群のメンバーである（またはメンバーでない）と定義される。特徴的な配列エレメントは、代表的には、少なくとも２つの単量体（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド）を含む。いくつかの実施形態において、特徴的な配列エレメントは、少なくとも２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、またはそれを超える単量体（例えば、連続的に連結した単量体）を含む。いくつかの実施形態において、特徴的な配列エレメントは、長さが、その配列エレメントを共有するポリマーにわたって変動してもしなくてもよい１つ以上のスペーサー領域によって間隔があいた少なくとも第１のおよび第２の一続きの単量体を含む。
【０１５０】
キメラ抗原レセプター／養子細胞療法：単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含めた本発明の抗体剤は、調製および使用が当該分野で一般に知られているキメラ抗原レセプターの調製のために使用され得る。キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）は、代表的には、Ｔ細胞シグナル伝達ドメインと連結されたｓｃＦｖ、または他の抗体剤の抗原結合ドメインを含む、人工的に構築したハイブリッドタンパク質またはポリペプチドである。ＣＡＲの特色としては、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用して、非ＭＨＣ制限的な様式で選択された標的にＴ細胞の特異性および反応性を向け直す（ｒｅｄｉｒｅｃｔ）能力が挙げられる。非ＭＨＣ制限抗原認識により、ＣＡＲを発現するＴ細胞に、抗原プロセシングとは独立して抗原を認識し、したがって、腫瘍エスケープ（ｔｕｍｏｒ  ｅｓｃａｐｅ）の主要な機序を迂回する能力が与えられる。キメラ抗原レセプターは、例えば養子細胞療法を含めた治療的処置に使用され得る。養子細胞療法は、代表的には、Ｔ細胞であることが多い免疫細胞の単離およびエクスビボにおける増大および／または操作、およびその後の、例えば癌を処置するためのこれらの細胞の患者への投与を含む治療的手法である。投与された細胞は、自己由来または同種異系であり得る。細胞は、例えば、どちらも当該分野で公知の技術であるＲＮＡおよびＤＮＡトランスフェクションを使用することによるものを含めた公知の方法のいずれか１つでキメラ抗原レセプターを発現するように操作され得る。
【０１５１】
併用療法：用語「併用療法」は、本明細書中で使用されるとき、２つ以上の異なる医薬品または治療剤が重複または逐次レジメンで投与されて、その被験体が両方の薬剤に同時または逐次的に曝露される状況のことを指す。「〜と併用して」は、作用物質が、同時に投与されなければならないことおよび／または一緒に送達されるように製剤化されなければならないことを意味すると意図されていないが、これらの送達方法は、本発明の範囲内である。本発明の組成物は、１つ以上の他の所望の治療剤または医学的手技と同時に、それらの前に、またはそれらの後に、投与され得る。併用して利用される治療的に活性な作用物質が、単一の組成物として一緒に投与され得るか、または異なる組成物として別々に投与され得ることが認識されるであろう。通常、各作用物質は、その作用物質に対して決定された用量および／または時間スケジュールで投与され得る。
【０１５２】
匹敵する：用語「匹敵する」は、本明細書中で使用されるとき、互いと同一でなくてよいが、観察された差異または類似性に基づいて結論が合理的に引き出され得るように比較が可能であるのに十分によく似た２つ以上の作用物質、実体、状況、セットの条件などのことを指す。いくつかの実施形態において、匹敵するセットの条件、状況、個体、または集団は、複数の実質的に同一の特徴および様々な特徴のうちの１つまたは少数によって特徴付けられる。当業者は、文脈において、任意の所与の状況において、２つ以上のそのような作用物質、実体、状況、セットの条件などが匹敵するとみなされるために同一性がどの程度まで必要であるかを理解するだろう。例えば、当業者は、異なるセットの状況、個体、または集団の下でまたはそれを用いて得られた結果または観察された現象の差異が、変動するそれらの特徴のバリエーションによって引き起こされるかまたはそのバリエーションを示唆するという合理的な結論を保証するのに十分な数およびタイプの実質的に同一の特徴によって特徴付けられるとき、セットの状況、個体、または集団は互いに匹敵することを認識するだろう。
【０１５３】
〜に対応する：本明細書中で使用されるとき、用語「〜に対応する」は、目的の作用物質における、ある位置（例えば、３次元空間においてまたは別のエレメントまたは部分に対して）を適切な参照作用物質に存在するものと共有する構造エレメントまたは部分を指定するために使用されることが多い。例えば、いくつかの実施形態において、この用語は、ポリペプチドにおけるアミノ酸残基または核酸におけるヌクレオチド残基などの、ポリマーにおける残基の位置／正体のことを指すために使用される。当業者は、単純にするために、そのようなポリマーにおける残基が、関連する参照ポリマーに基づいて正準のナンバリングシステムを使用して指定されることが多いことを認識するだろう。したがって、例えば、参照ポリマーの１９０位の残基「に対応する」第１のポリマーの残基は、実際に、第１のポリマーにおける１９０番目の残基である必要はなく、参照ポリマーにおいて１９０位に見られる残基に対応する；当業者は、ポリマー配列比較のために特別に設計された１つ以上の市販のアルゴリズムの使用によるものを含め、どのようにして「対応する」アミノ酸を同定するかを容易に理解する。
【０１５４】
誘導体：本明細書中で使用されるとき、「誘導体」という用語は、参照物質の構造アナログのことを指す。すなわち、「誘導体」は、参照物質に対して有意な構造的類似性を示す、例えば、コアまたはコンセンサス構造を共有するが、ある特定の別々の様式での相違も有する物質である。いくつかの実施形態において、誘導体は、参照物質から化学的操作によって生成され得る物質である。いくつかの実施形態において、誘導体は、参照物質を生成する合成プロセスと実質的に類似した（例えば、複数の工程を共有する）合成プロセスを実施することによって生成され得る物質である。
【０１５５】
検出実体／検出剤：用語「検出実体」または「検出剤」は、本明細書中で使用されるとき、検出可能な任意のエレメント、分子、官能基、化合物、フラグメントまたは部分のことを指す。いくつかの実施形態において、検出実体は、単独で提供または利用される。いくつかの実施形態において、検出実体は、別の作用物質に付随させて（例えば、接合させて）提供されかつ／または利用される。検出実体の例としては、種々のリガンド、放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１８Ｆ、１９Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、１３５Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、６４Ｃｕ、１８７Ｒｅ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒなど）、蛍光色素（特定の例示的な蛍光色素に関しては以下を参照のこと）、化学発光剤（例えば、アクリジニウム（ａｃｒｉｄｉｎｕｍ）エステル、安定化ジオキセタンなど）、生物発光剤、スペクトル分解可能な無機蛍光半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金など）ナノクラスター、常磁性金属イオン、酵素（酵素の特定の例に関しては以下を参照のこと）、比色標識（例えば、色素、コロイド金など）、ビオチン、ジゴキギゲニン（ｄｉｏｘｉｇｅｎｉｎ）、ハプテン、および抗血清またはモノクローナル抗体が利用可能であるタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５６】
決定する：本明細書中に記載される多くの方法は、「決定する工程」を含む。当業者は、本明細書を読めば、そのような「決定する工程」は、例えば本明細書中で明確に言及される特定の技法を含めた、当業者が利用可能な様々な技法のいずれかを利用し得るかまたはそれを使用することによって達成され得ることを認識するだろう。いくつかの実施形態において、決定する工程は、物理的サンプルの操作を含む。いくつかの実施形態において、決定する工程は、例えば、関連する解析を実施するために適合させたコンピュータまたは他の処理装置を利用して、データまたは情報を考察および／または操作することを含む。いくつかの実施形態において、決定する工程は、関連する情報および／または材料を供給源から得ることを含む。いくつかの実施形態において、決定する工程は、サンプルまたは実体の１つ以上の特徴を匹敵する参照と比較することを含む。
【０１５７】
剤形：本明細書中で使用されるとき、用語「剤形」は、被験体に投与するための活性な作用物質（例えば、治療剤または診断剤）の物理的に分離した単位のことを指す。各単位は、所定の量の活性な作用物質を含む。いくつかの実施形態において、そのような量は、関連する集団に投与された（すなわち、治療的投薬レジメンを用いて）とき、所望のまたは有益な転帰と相関すると決定された投薬レジメンに従って投与するのに適した単位投与量（またはその全画分）である。当業者は、特定の被験体に投与される治療組成物または治療剤の総量は、１人以上の主治医により決定され、複数の剤形の投与を伴い得ることを認識する。
【０１５８】
投薬レジメン：本明細書中で使用されるとき、用語「投薬レジメン」は、代表的には期間を隔てて、被験体に個別に投与される単位用量（代表的には１より大きい）のセットを指す。いくつかの実施形態において、所与の治療剤は、推奨される投薬レジメンを有し、それは、１回以上の投与を含み得る。いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、複数回の投与を含み、その各々は、同じ長さの期間だけ互いに隔てられており；いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、複数回の投与、および個々の投与を隔てる少なくとも２つの異なる期間を含む。いくつかの実施形態において、投薬レジメン内のすべての投与が、同じ単位用量である。いくつかの実施形態において、投薬レジメン内の異なる投与は、異なる量である。いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、第１の用量での第１の投与に続く、第１の用量とは異なる第２の用量での１回以上のさらなる投与を含む。いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、第１の用量での第１の投与に続く、第１の用量と同じ第２の用量での１回以上のさらなる投与を含む。いくつかの実施形態において、投薬レジメンは、関連する集団にわたって投与されるとき、所望のまたは有益な転帰と相関する（すなわち、治療的投薬レジメンである）。
【０１５９】
操作された：一般に、「操作された」という用語は、人間の手によって操作された態様のことを指す。例えば、ポリヌクレオチドは、天然では共にその順序で連結されていない２つ以上の配列が、操作されたポリヌクレオチドでは互いと直接連結するように人間の手で操作されている場合「操作された」と考えられる。例えば、本発明のいくつかの実施形態において、操作されたポリヌクレオチドは、天然では第１のコード配列とは作動可能に関連しているが第２のコード配列とは作動可能に連結されていない状態で見出され、第２のコード配列に作動可能に連結されるように人間の手によって連結された制御配列を含む。同程度に、細胞または生物は、その遺伝情報が変更される（例えば、以前は存在しなかった新しい遺伝物質が、例えば形質転換、接合、体細胞ハイブリダイゼーション、トランスフェクション、形質導入、または他の機序によって導入される、または以前から存在した遺伝物質が、例えば置換もしくは欠失変異によって、または接合プロトコールによって変更または除去される）ように操作されている場合、「操作された」とみなされる。一般的なことであり、当業者によって理解されるように、操作されたポリヌクレオチドまたは細胞の子孫は、代表的には、実際の操作が前の実体に対して行われたにもかかわらず、なお「操作された」と称される。
【０１６０】
エピトープ：本明細書中で使用されるとき、用語「エピトープ」は、当該分野において理解されているような意味を有する。抗原決定基としても知られるエピトープは、免疫系、具体的には、抗体、Ｂ細胞またはＴ細胞によって認識される抗原の分子領域であることが、当業者によって認識されるだろう。エピトープは、糖、脂質またはアミノ酸から構成され得ることがさらに認識されるだろう。タンパク質抗原のエピトープは、その構造およびパラトープ（エピトープを認識する抗体の一部）との相互作用に基づいて、２つのカテゴリー、すなわち、コンフォメーションエピトープおよび線状エピトープに分けられる。コンフォメーションエピトープは、抗原のアミノ酸配列の不連続な区画から構成され、これらのエピトープは、抗原の３Ｄ表面の特徴および形状または三次構造に基づいてパラトープと相互作用する。線状エピトープは、その１次構造に基づいてパラトープと相互作用し、線状エピトープは、抗原由来のアミノ酸の連続した配列によって形成される。
【０１６１】
発現：本明細書中で使用されるとき、核酸配列の「発現」とは、以下の事象のうちの１つ以上のことを指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の生成（例えば、転写によるもの）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、エディティング、５’キャップ形成および／または３’末端形成によるもの）；（３）ＲＮＡからポリペプチドもしくはタンパク質への翻訳；および／または（４）ポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾。
【０１６２】
機能的：本明細書中で使用されるとき、「機能的な」生物学的分子は、それを特徴づける特性および／または活性を示す形態の生物学的分子である。生体分子は、２つの機能（すなわち、二機能性）または多くの機能（すなわち、多機能性）を有し得る。
【０１６３】
フラグメント：本明細書中に記載される材料または実体の「フラグメント」は、全体の別個の部分を含むが、全体において見出される１つ以上の部分を欠く構造を有する。いくつかの実施形態において、フラグメントは、そのような別個の部分からなる。いくつかの実施形態において、フラグメントは、全体において見出される特徴的な構造エレメントまたは部分からなるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、ポリマーフラグメントは、ポリマー全体において見出される、少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２５個、３０個、３５個、４０個、４５個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１２０個、１３０個、１４０個、１５０個、１６０個、１７０個、１８０個、１９０個、２００個、２１０個、２２０個、２３０個、２４０個、２５０個、２７５個、３００個、３２５個、３５０個、３７５個、４００個、４２５個、４５０個、４７５個、５００個またはそれを超える単量体単位（例えば、残基）を含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、ポリマーフラグメントは、ポリマー全体において見出される単量体単位（例えば、残基）の少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、２５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超えるものを含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、材料全体または実体全体は、全体の「親」と称され得る。
【０１６４】
遺伝子：本明細書中で使用されるとき、用語「遺伝子」は、当該分野において理解されているような意味を有する。用語「遺伝子」は、遺伝子制御配列（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）および／またはイントロン配列を含み得ることが当業者によって認識されるだろう。遺伝子の定義には、タンパク質をコードせず、機能的なＲＮＡ分子（例えば、ｔＲＮＡ、ＲＮＡｉ誘発剤など）をコードする核酸への言及が含まれることがさらに認識されるだろう。明確にする目的で、本発明者らは、本願において使用されるとき、用語「遺伝子」が、通常、タンパク質をコードする核酸の一部のことを指すことを注記し；この用語は、文脈から当業者に対して明らかであるとき、必要に応じて制御配列も包含し得る。この定義は、タンパク質をコードしない発現単位に用語「遺伝子」を適用することを排除することを意図しておらず、むしろ、ほとんどの場合、この文書において使用されるこの用語は、タンパク質をコードする核酸のことを指すことを明らかにする。
【０１６５】
遺伝子産物または発現産物：本明細書中で使用されるとき、用語「遺伝子産物」または「発現産物」は、通常、遺伝子から転写されたＲＮＡ（プロセシング前および／またはプロセシング後）または遺伝子から転写されたＲＮＡによってコードされるポリペプチド（修飾前および／または修飾後）のことを指す。
【０１６６】
高親和性結合：用語「高親和性結合」は、本明細書中で使用されるとき、特定のリガンドがそのパートナーに結合する堅固さの程度が高いことを指す。親和性は、当該分野で公知の方法を含めた任意の利用可能な方法によって測定され得る。いくつかの実施形態において、結合は、結合アッセイにおいてＫｄが約５００ｐＭ以下（例えば、約４００ｐＭ未満、約３００ｐＭ未満、約２００ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約９０ｐＭ未満、約８０ｐＭ未満、約７０ｐＭ未満、約６０ｐＭ未満、約５０ｐＭ未満、約４０ｐＭ未満、約３０ｐＭ未満、約２０ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約５ｐＭ未満、約４ｐＭ未満、約３ｐＭ未満、約２ｐＭ未満など）である場合、高親和性であるとみなされる。いくつかの実施形態において、結合は、目的のポリペプチドに対する親和性が、選択された参照ポリペプチドに対する親和性よりも強い（例えば、Ｋｄが低い）場合、高親和性であるとみなされる。いくつかの実施形態において、結合は、目的のポリペプチドに対するＫｄと選択された参照ポリペプチドに対するＫｄの比が、１：１以下（例えば、０．９：１以下、０．８：１以下、０．７：１以下、０．６：１以下、０．５：１以下、０．４：１以下、０．３：１以下、０．２：１以下、０．１：１以下、０．０５：１以下、０．０１：１以下）である場合、高親和性であるとみなされる。いくつかの実施形態において、結合は、目的のポリペプチドに対するＫｄが、選択された参照ポリペプチドに対するＫｄの約１００％以下（例えば、約９９％、約９８％、約９７％、約９６％、約９５％、約９０％、約８５％、約８０％、約７５％、約７０％、約６５％、約６０％、約５５％、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約５％、約４％、約３％、約２％、約１％以下）である場合、高親和性であるとみなされる。
【０１６７】
相同性：本明細書中で使用されるとき、用語「相同性」とは、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間および／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性のことを指す。いくつかの実施形態において、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％同一である場合、互いに「相同」であるとみなされる。いくつかの実施形態において、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％類似である（例えば、対応する位置において関連する化学的特性を有する残基を含む）場合、互いに「相同」であるとみなされる。例えば、当業者に周知であるように、ある特定のアミノ酸は、代表的には、互いに類似しているとして、「疎水性」もしくは「親水性」アミノ酸として、および／または「極性」または「非極性」側鎖を有するアミノ酸として、分類される。１つのアミノ酸から同じタイプの別のアミノ酸への置換は、しばしば「相同」置換であるとみなされ得る。典型的なアミノ酸の分類を以下に要約する：
【化３】
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当業者には理解される通り、いずれの残基が異なる配列において互いに「対応する」かを考慮するときに１つの配列において別の配列に対して指定された長さのギャップを可能にすることを含めた、配列の相同性の程度を決定するためにそれらの配列の比較を可能にする種々のアルゴリズムが利用可能である。例えば、２つの核酸配列の間の相同性パーセントの計算は、その２つの配列を最適な比較目的のためにアラインメントすることによって行われ得る（例えば、最適なアラインメントのために第１および第２の核酸配列の一方または両方にギャップが導入され得、対応しない配列は、比較目的のために無視され得る）。ある特定の実施形態において、比較目的でアラインメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または実質的に１００％である。次いで、対応するヌクレオチドの位置におけるヌクレオチドが、比較される。第１の配列内の位置が、第２の配列内の対応する位置と同じヌクレオチドによって占められているとき、それらの分子は、その位置において同一である。第１の配列内の位置が、第２の配列内の対応する位置と類似したヌクレオチドによって占められているとき、それらの分子は、その位置において類似している。２つの配列の間の相同性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮したときの、それらの配列によって共有される同一である位置および類似している位置の数の関数である。２つのヌクレオチド配列間の相同性パーセントの決定において有用な代表的なアルゴリズムおよびコンピュータプログラムとしては、例えば、ＰＡＭ１２０重み付き残基表、１２というギャップ長ペナルティおよび４というギャップペナルティを使用する、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＭｅｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ、１９８９年、４巻：１１〜１７頁）のアルゴリズムが挙げられる。あるいは、２つのヌクレオチド配列間の相同性パーセントは、例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列を使用する、ＧＣＧソフトウェアパッケージにおけるＧＡＰプログラムを使用して決定され得る。
【０１６８】
ヒト：いくつかの実施形態において、ヒトとは、胚、胎児、乳児、小児、ティーンエイジャー、成人、または高齢者である。
【０１６９】
親水性：本明細書中で使用されるとき、用語「親水性」および／または「極性」は、水と混ざり合うまたは水中に容易に溶解する傾向のことを指す。
【０１７０】
疎水性：本明細書中で使用されるとき、用語「疎水性の」および／または「非極性」は、水をはじく、水と合わさらない、または水中に容易に溶解できない傾向のことを指す。
【０１７１】
同一性：本明細書中で使用されるとき、用語「同一性」とは、ポリマー分子間、例えば、核酸分子（例えば、ＤＮＡ分子および／またはＲＮＡ分子）間および／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性のことを指す。いくつかの実施形態において、ポリマー分子は、それらの配列が、少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一である場合、互いと「実質的に同一である」とみなされる。例えば、２つの核酸またはポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、その２つの配列を最適な比較目的のためにアラインメントすることによって行われ得る（例えば、最適なアラインメントのために第１および第２の配列の一方または両方にギャップが導入され得、同一でない配列は、比較目的のために無視され得る）。ある特定の実施形態において、比較目的でアラインメントされる配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または実質的に１００％である。次いで、対応する位置におけるヌクレオチドが、比較される。第１の配列内の位置が、第２の配列内の対応する位置と同じ残基（例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸）によって占められているとき、それらの分子は、その位置において同一である。２つの配列の間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮したときの、それらの配列によって共有される同一である位置の数の関数である。２つの配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成され得る。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれた、ＭｅｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，４：１１−１７）を用いて決定され得る。いくつかの例示的実施形態において、ＡＬＩＧＮプログラムによって作製された核酸配列比較は、ＰＡＭ１２０重み付き残基表（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、１２というギャップ長ペナルティ（ｇａｐ  ｌｅｎｇｔｈ  ｐｅｎａｌｔｙ）および４というギャップペナルティ（ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｙ）を使用する。あるいは、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列を使用する、ＧＣＧソフトウェアパッケージにおけるＧＡＰプログラムを用いて決定され得る。
【０１７２】
単離された：本明細書中で使用されるとき、用語「単離された」とは、（１）最初に生成されたときに関連していた構成要素の少なくともいくつかから分離された物質および／もしくは実体（天然に存在するかおよび／または実験環境に存在するかに関係なく）、ならびに／または（２）人間の手によって設計、生成、調製および／もしくは製造された物質および／もしくは実体のことを指す。単離された物質および／または実体は、それらが最初に関連していた他の構成要素の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約９９％超から分離され得る。いくつかの実施形態において、単離された作用物質は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または約９９％超純粋である。本明細書中で使用されるとき、物質は、それが他の構成要素を実質的に含まない場合、「純粋」である。いくつかの実施形態において、当業者には理解される通り、物質は、例えば、１つ以上のキャリアまたは賦形剤（例えば、緩衝液、溶媒、水など）などのある特定の他の構成要素と組み合わされた後でもなお「単離された」またはさらには「純粋な」とみなされ得る。そのような実施形態において、物質の単離または純度のパーセントは、そのようなキャリアまたは賦形剤を含めずに算出される。いくつかの実施形態において、単離は、共有結合の妨害（例えば、ポリペプチドドメインをより長いポリペプチドから単離するためおよび／またはヌクレオチド配列エレメントをより長いオリゴヌクレオチドまたは核酸から単離するため）を含むかまたはそれを必要とする。
【０１７３】
マーカー：マーカーとは、本明細書中で使用されるとき、その存在またはレベルが特定の状態または事象に特徴的である実体または部分のことを指す。いくつかの実施形態において、特定のマーカーの存在またはレベルは、疾患、障害、または状態の存在または病期に特徴的であり得る。一例を挙げると、いくつかの実施形態において、この用語は、特定の腫瘍、腫瘍サブクラス、腫瘍の病期などに特徴的な遺伝子発現産物のことを指す。代替的または付加的に、いくつかの実施形態において、特定のマーカーの存在またはレベルは、例えば特定のクラスの腫瘍に特徴的であり得る特定のシグナル伝達経路の活性（または活性レベル）と相関する。マーカーの存在または非存在に関する統計的有意性は、特定のマーカーに応じて変動し得る。いくつかの実施形態において、マーカーの検出は、腫瘍が特定のサブクラスのものである確率が高いことを反映するものであるという点で、高度に特異的である。そのような特異性では、感度が犠牲になる（すなわち、腫瘍が当該マーカーを発現することが予測される腫瘍であるとしても陰性結果が生じる可能性がある）。逆に、感度の程度が高いマーカーは、感度が低いマーカーよりも特異的でない可能性がある。本発明に係ると、有用なマーカーは、腫瘍の特定のサブクラスを１００％の正確度で区別できるものである必要はない。
【０１７４】
変異体：本明細書中で使用されるとき、用語「変異体」とは、参照実体と有意な構造的同一性を示すが、参照実体と比べたとき１つ以上の化学部分の存在またはレベルにおいて参照実体と構造的に異なる実体のことを指す。多くの実施形態において、変異体は、その参照実体と機能的にも異なる。通常、特定の実体が、参照実体の「変異体」であると正しくみなされるか否かは、参照実体との構造的同一性の程度に基づく。当業者が認識するように、任意の生物学的または化学的な参照実体は、ある特定の特徴的な構造エレメントを有する。変異体は、定義上、１つ以上のそのような特徴的な構造エレメントを共有する異なる化学的実体である。ほんの少しの例を挙げると、小分子は、特徴的なコア構造エレメント（例えば、大環状分子コア）および／または１つ以上の特徴的なペンダント部分を有し得、その小分子の変異体は、そのコア構造エレメントおよび特徴的なペンダント部分を共有するが、他のペンダント部分および／またはそのコア内に存在する結合のタイプ（一重対二重、Ｅ対Ｚなど）が異なる変異体であり、ポリペプチドは、線状もしくは３次元空間において互いに対して指定の位置を有するおよび／または特定の生物学的機能に寄与する、複数のアミノ酸を含む特徴的な配列エレメントを有し得、核酸は、線状または３次元空間において互い（ｏｎ  ａｎｏｔｈｅｒ）に対して指定の位置を有する複数のヌクレオチド残基を含む特徴的な配列エレメントを有し得る。例えば、変異体ポリペプチドは、アミノ酸配列の１つ以上の差および／またはポリペプチド骨格に共有結合的に付着された化学部分（例えば、炭水化物、脂質など）の１つ以上の差の結果として、参照ポリペプチドと異なり得る。いくつかの実施形態において、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％または９９％である全体的な配列同一性を示す。代替的または付加的に、いくつかの実施形態において、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドと少なくとも１つの特徴的な配列エレメントを共有しない。いくつかの実施形態において、参照ポリペプチドは、１つ以上の生物学的活性を有する。いくつかの実施形態において、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物学的活性の１つ以上を共有する。いくつかの実施形態において、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物学的活性の１つ以上を欠く。いくつかの実施形態において、変異体ポリペプチドは、参照ポリペプチドと比べて低レベルの１つ以上の生物学的活性を示す。
【０１７５】
核酸：本明細書中で使用されるとき、用語「核酸」は、その最も広い意味において、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるかまたは組み込まれ得る任意の化合物および／または物質のことを指す。いくつかの実施形態において、核酸は、ホスホジエステル結合を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるかまたは組み込まれ得る化合物および／または物質である。文脈から明らかである通り、いくつかの実施形態において、「核酸」とは、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）のことを指す。いくつかの実施形態において、「核酸」とは、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖のことを指す。いくつかの実施形態において、「核酸」は、ＲＮＡであるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、「核酸」は、ＤＮＡであるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、核酸は、１つ以上の天然の核酸残基であるか、それを含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、核酸は、１つ以上の核酸アナログであるか、それを含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、核酸アナログは、ホスホジエステル骨格を利用しないという点で、核酸とは異なる。例えば、いくつかの実施形態において、核酸は、１つ以上の「ペプチド核酸」であるか、それを含むかまたはそれからなり、これは、当該分野で公知であり、骨格内にホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有し、本発明の範囲内であるとみなされる。代替的または付加的に、いくつかの実施形態において、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１つ以上のホスホロチオエートおよび／または５’−Ｎ−ホスホルアミダイト連結を有する。いくつかの実施形態において、核酸は、１つ以上の天然のヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、およびデオキシシチジン）であるか、それを含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、核酸は、１つ以上のヌクレオシドアナログ（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、２−チオシチジン、メチル化塩基、インターカレートされた塩基およびそれらの組み合わせ）であるか、それを含むかまたはそれからなる。いくつかの実施形態において、核酸は、天然の核酸におけるものと比較して１つ以上の改変された糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノース、およびヘキソース）を含む。いくつかの実施形態において、核酸は、ＲＮＡまたはタンパク質などの機能的な遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態において、核酸は、１つ以上のイントロンを含む。いくつかの実施形態において、核酸は、天然の供給源からの単離、相補的な鋳型に基づく重合による酵素的合成（インビボまたはインビトロ）、組換え細胞または系における複製、および化学合成のうちの１つ以上によって調製される。いくつかの実施形態において、核酸は、少なくとも３残基、４残基、５残基、６残基、７残基、８残基、９残基、１０残基、１５残基、２０残基、２５残基、３０残基、３５残基、４０残基、４５残基、５０残基、５５残基、６０残基、６５残基、７０残基、７５残基、８０残基、８５残基、９０残基、９５残基、１００残基、１１０残基、１２０残基、１３０残基、１４０残基、１５０残基、１６０残基、１７０残基、１８０残基、１９０残基、２０残基、２２５残基、２５０残基、２７５残基、３００残基、３２５残基、３５０残基、３７５残基、４００残基、４２５残基、４５０残基、４７５残基、５００残基、６００残基、７００残基、８００残基、９００残基、１０００残基、１５００残基、２０００残基、２５００残基、３０００残基、３５００残基、４０００残基、４５００残基、５０００残基またはそれを超える長さである。
【０１７６】
患者：本明細書中で使用されるとき、用語「患者」または「被験体」とは、例えば、実験、診断、予防、美容および／または治療の目的で、提供される組成物を投与されているまたは投与され得る任意の生物のことを指す。代表的な患者には、動物（例えば、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類および／またはヒト）が含まれる。当業者に認識されるように、いくつかの実施形態において、動物は、家畜動物（例えば、農場動物、伴侶動物など）であり得る。いくつかの実施形態において、患者は、ヒトである。いくつかの実施形態において、患者は、１つ以上の障害または状態に罹患しているかまたは感受性である。いくつかの実施形態において、患者は、障害または状態の１つ以上の症状を示す。いくつかの実施形態において、患者は、１つ以上の障害または状態と診断されている。いくつかの実施形態において、障害または状態は、癌、または１つ以上の腫瘍の存在であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、そのような癌または腫瘍は、前立腺の癌、または前立腺における腫瘍であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、障害または状態は、転移性癌である。
【０１７７】
ペプチド：「ペプチド」という用語は、ペプチド結合または改変されたペプチド結合によって互いと接合した２つ以上のアミノ酸のことを指す。特定の実施形態において、「ペプチド」とは、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、または１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドのことを指す。
【０１７８】
薬学的組成物：本明細書中で使用されるとき、用語「薬学的組成物」とは、１つ以上の薬学的に許容され得るキャリアとともに製剤化された活性な作用物質のことを指す。いくつかの実施形態において、活性な作用物質は、関連する集団に投与されたとき、所定の治療効果を達成する統計学的に有意な確率を示す治療レジメンにおける投与にとって適切な単位用量で存在する。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、以下のために適合された薬学的組成物を含む固体または液体の形態で投与するために特別に製剤化され得る：経口投与、例えば、水薬（ｄｒｅｎｃｈ）（水性または非水性の溶液または懸濁液）、錠剤、例えば、頬側、舌下および全身性の吸収を標的にした錠剤、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌に適用するためのペースト；例えば、滅菌溶液もしくは懸濁液または徐放製剤としての、例えば、皮下、筋肉内、静脈内または硬膜外注射による、非経口投与；例えば、クリーム、軟膏もしくは放出制御パッチ、または皮膚、肺もしくは口腔に適用されるスプレーとしての、局所的適用；例えば、ペッサリー、クリームまたはフォームとしての、膣内または直腸内；舌下；眼；経皮的；または経鼻的、肺および他の粘膜面。
【０１７９】
薬学的に許容され得る：用語「薬学的に許容され得る」は、本明細書中で使用されるとき、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症を伴わずに、適切な医学的判断の範囲内において、人間および／または動物の組織と接触させて使用するのに適しており、妥当なベネフィット／リスク比と釣り合った、薬剤のことを指す。
【０１８０】
薬学的に許容され得るキャリア：本明細書中で使用されるとき、用語「薬学的に許容され得るキャリア」は、薬学的に許容され得る材料、組成物またはビヒクル（例えば、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、または対象化合物を１つの臓器すなわち身体の一部から別の臓器すなわち身体の一部に運搬もしくは輸送するのに関わる溶媒封入材料）のことを意味する。各キャリアは、その製剤の他の成分と適合性でありかつ患者にとって有害でないという意味において「許容され得る」ものでなければならない。薬学的に許容され得るキャリアとして働き得る材料のいくつかの例としては：糖類（例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース）；デンプン（例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン）；セルロースおよびその誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース）；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤（例えば、カカオバターおよび坐剤ろう）；油（例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびダイズ油）；グリコール（例えば、プロピレングリコール）；ポリオール（例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール）；エステル（例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル）；寒天；緩衝剤（例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム）；アルギン酸；発熱物質非含有水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝化溶液；ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ無水物；ならびに薬学的製剤において使用される他の無毒性の適合性の物質が挙げられる。
【０１８１】
ポリペプチド：用語「ポリペプチド」は、本明細書中で使用されるとき、一般に、ペプチド結合によって互いに連結された少なくとも３つのアミノ酸のポリマーという当該分野で認められている意味を有する。いくつかの実施形態において、この用語は、特定の機能的なクラスのポリペプチドのことを指すために使用される。そのようなクラスの各々について、本明細書は、そのクラス内の公知の例示的なポリペプチドのアミノ酸配列のいくつかの例を提供する。いくつかの実施形態において、そのような公知のポリペプチドは、そのクラスについての参照ポリペプチドである。そのような実施形態において、「ポリペプチド」という用語は、関連する参照ポリペプチドに対して有意な配列相同性または同一性を示す、そのクラスの任意のメンバーのことを指す。多くの実施形態において、そのようなメンバーはまた、参照ポリペプチドと有意な活性も共有する。代替的または付加的に、多くの実施形態において、そのようなメンバーはまた、参照ポリペプチド（および／またはそのクラス内の他のポリペプチド；いくつかの実施形態において、そのクラス内のすべてのポリペプチド）と特定の特徴的な配列エレメントも共有する。例えば、いくつかの実施形態において、メンバーポリペプチドは、参照ポリペプチドに対して、少なくとも約３０〜４０％であり、しばしば約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超またはそれを超える配列相同性または同一性の全体的な程度を示し、かつ／または、しばしば９０％超またはさらには９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の非常に高い配列同一性を示す少なくとも１つの領域（すなわち、いくつかの実施形態において、特徴的な配列エレメントであり得るかまたはそれを含み得る保存された領域）を含む。そのような保存された領域は、通常、少なくとも３〜４アミノ酸およびしばしば２０アミノ酸以上までを含む。いくつかの実施形態において、保存された領域は、少なくとも２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個またはそれを超える連続したアミノ酸の一続きを少なくとも１つ含む。いくつかの実施形態において、有用なポリペプチドは、親ポリペプチドのフラグメントを含み得るかまたはそれからなり得る。いくつかの実施形態において、有用なポリペプチドは、複数のフラグメントを含み得るかまたはそれからなり得、その各々が、同じ親ポリペプチドにおいて、目的のポリペプチドにおいて見出されるものとは互いに対して異なる空間的配置で見出され（例えば、親においては直接連結しているフラグメントが目的のポリペプチドにおいては空間的に分離され得る、もしくは逆もまた同じである、および／または、フラグメントは、目的のポリペプチドにおいて親におけるものとは異なる順序で存在し得る）、したがって、目的のポリペプチドは、その親ポリペプチドの誘導体である。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはその両方を含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、天然アミノ酸だけまたは非天然アミノ酸だけを含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸、またはその両方を含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、Ｄ−アミノ酸だけを含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸だけを含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、１つ以上のペンダント基、例えば、１つ以上のアミノ酸の側鎖に対する、および／またはポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端、またはその両方における修飾または付着を含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、環状であり得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、環状ではない。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは線状である。
【０１８２】
タンパク質：本明細書中で使用されるとき、用語「タンパク質」とは、ポリペプチド（すなわち、ペプチド結合によって互いに連結された少なくとも２つのアミノ酸の鎖）のことを指す。タンパク質は、アミノ酸以外の部分を含み得（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカンなどであり得）、かつ／または別の方法でプロセシングもしくは修飾され得る。当業者は、「タンパク質」が、細胞によって産生されるような完全なポリペプチド鎖（シグナル配列を有するかまたは有しない）であり得るか、またはその特徴的な一部であり得ることを認識するだろう。当業者は、タンパク質が時折、例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって連結されたまたは他の手段によって会合された、２本以上のポリペプチド鎖を含み得ることを認識するだろう。ポリペプチドは、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸またはその両方を含み得、当該分野で公知の種々の任意のアミノ酸修飾またはアミノ酸アナログを含み得る。有用な修飾としては、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが挙げられる。いくつかの実施形態において、タンパク質は、天然のアミノ酸、非天然のアミノ酸、合成アミノ酸およびそれらの組み合わせを含み得る。用語「ペプチド」は、通常、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満または１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドのことを指すために使用される。いくつかの実施形態において、タンパク質は、抗体、抗体フラグメント、その生物学的に活性な一部および／またはその特徴的な一部である。
【０１８３】
純粋：本明細書中で使用されるとき、作用物質または実体は、他の構成要素を実質的に含まない場合、「純粋」である。例えば、代表的には、特定の作用物質または実体を約９０％超含む調製物が純粋な調製物とみなされる。いくつかの実施形態において、作用物質または実体は、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％純粋である。
【０１８４】
参照：用語「参照」とは、本明細書中において、目的の作用物質、個体、集団、サンプル、配列または値が比較される標準またはコントロール作用物質、個体、集団、サンプル、配列または値を記載するために使用されることが多い。いくつかの実施形態において、参照作用物質、個体、集団、サンプル、配列または値は、目的の作用物質、個体、集団、サンプル、配列または値の試験または決定と実質的に同時に試験および／または決定される。いくつかの実施形態において、参照作用物質、個体、集団、サンプル、配列または値は、必要に応じて有形媒体に具体化される履歴的な参照である。代表的には、当業者に理解されるように、参照作用物質、個体、集団、サンプル、配列または値は、目的の作用物質、個体、集団、サンプル、配列または値を決定するかまたは特徴付けるために利用される条件に匹敵する条件下で決定されるまたは特徴付けされる。
【０１８５】
応答：本明細書中で使用されるとき、処置に対する応答とは、処置の結果として生じるかまたはそれと相関する、被験体の状態の任意の有益な変更を指し得る。そのような変更は、状態の安定化（例えば、処置の非存在下では生じるであろう悪化の予防）、状態の症状の回復、および／または状態の治癒の見込みの改善などを含み得る。応答とは、被験体の応答または腫瘍の応答を指し得る。腫瘍または被験体の応答は、臨床的な基準および客観的基準を含めた多種多様な基準に従って測定され得る。応答を評価するための技法としては、臨床検査、陽電子放出断層撮影法、胸部Ｘ線ＣＴスキャン、ＭＲＩ、超音波、内視鏡検査、腹腔鏡検査、被験体から得られたサンプル中の腫瘍マーカーの存在またはレベル、細胞診、および／または組織学的検査が挙げられるが、これらに限定されない。これらの技法の多くは、腫瘍のサイズを決定するかまたは総腫瘍量を別途決定することを試みるものである。処置に対する応答を評価するための方法およびガイドラインは、Ｔｈｅｒａｓｓｅら、「Ｎｅｗ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｔｏ  ｅｖａｌｕａｔｅ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ」、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｎａｄａ、Ｊ．  Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．、２０００年、９２巻（３号）：２０５〜２１６頁において考察されている。正確な応答基準は、腫瘍および／または患者の群を比較したとき、比較される群が、奏効率を決定するための同じまたは匹敵する基準に基づいて評価されるのであれば任意の適切な様式で選択され得る。当業者は、適切な基準を選択することができる。
【０１８６】
特異的結合：本明細書中で使用されるとき、「特異的結合」または「〜に特異的な（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｆｏｒ）」または「〜に特異的な（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｏ）」という用語は、標的実体（例えば、標的タンパク質またはポリペプチド）と結合剤（例えば、提供される抗体などの抗体）との間の相互作用（代表的には非共有結合性の）のことを指す。当業者によって理解されるように、相互作用は、代替の相互作用の存在下で有利であれば、「特異的」であるとみなされる。多くの実施形態において、相互作用は、代表的には、抗原性決定因子または結合分子によって認識されるエピトープなどの標的分子の特定の構造的な特色の存在に依存する。例えば、抗体がエピトープＡに特異的である場合、遊離の標識されたＡとそれに対する抗体の両方を含む反応においてエピトープＡを含むポリペプチドが存在するかまたは遊離の標識されていないＡが存在すると、抗体に結合する標識されたＡの量が減少する。特異性は絶対的なものである必要はないことが理解されるべきである。例えば、多くの抗体が、標的分子に存在するものに加えて、他のエピトープと交差反応することが当該分野で周知である。そのような交差反応性は、抗体が使用される適用に応じて許容され得る。特定の実施形態において、レセプターチロシンキナーゼに特異的な抗体は、プロテアーゼ阻害剤（例えば、ＡＣＴ）と結合したレセプターチロシンキナーゼと１０％未満の交差反応性を有する。当業者は、任意の所与の適用（例えば、標的分子を検出するため、治療目的のためなど）において適切に機能するのに十分な程度の特異性を有する抗体を選択され得るだろう。特異性は、結合分子の標的分子に対する親和性  対  結合分子の他の標的（例えば、競合剤）に対する親和性などのさらなる因子に関して評価され得る。結合分子が、検出が望まれる標的分子に対して高親和性を示し、非標的分子に対して低親和性を示す場合、抗体は、免疫診断目的のために許容される試薬である可能性が高い。１つ以上の状況において結合分子の特異性が確立されたら、その結合分子は、必ずしもその特異性を再評価することなく、他の、好ましくは同様の状況においても用いられ得る。
【０１８７】
特異性：当該分野で公知であるように、「特異性」は、特定のリガンドの、その結合パートナーを他の潜在的な結合パートナーと区別する能力の尺度である。
【０１８８】
被験体：「被験体」とは、哺乳動物（例えば、いくつかの実施形態では出生前のヒト形態を含めた、ヒト）を意味する。いくつかの実施形態において、被験体は、関連する疾患、障害または状態に罹患している。いくつかの実施形態において、被験体は、疾患、障害、または状態に感受性である。いくつかの実施形態において、被験体は、疾患、障害または状態の１つ以上の症状または特色を示す。いくつかの実施形態において、被験体は、疾患、障害、または状態のいかなる症状または特色も示さない。いくつかの実施形態において、被験体は、疾患、障害、または状態の感受性またはリスクに特徴的な１つ以上の特徴を有する者である。被験体は、患者であり得、これは、疾患を診断または処置するために医療提供者に提示されているヒトのことを指す。いくつかの実施形態において、被験体は、療法が施される個体である。
【０１８９】
実質的に：本明細書中で使用されるとき、用語「実質的に」とは、目的の特色または特性の全体またはほぼ全体の範囲または程度を示す定性的な条件のことを指す。生物学の分野の当業者は、生物学的および化学的な現象が、完了まで進むことおよび／もしくは完全なところまで進むこと、または決定的な結果に到達することもしくは決定的な結果を回避することがあったとしてもごくまれであることを理解するだろう。ゆえに、用語「実質的に」は、多くの生物学的および化学的な現象に固有の完全性を潜在的に欠くことを捉えるために本明細書中で使用される。
【０１９０】
実質的な配列相同性：句「実質的な相同性」は、アミノ酸配列間または核酸配列間の比較のことを指すために本明細書中で使用される。当業者が認識するように、２つの配列は、対応する位置に相同な残基を含む場合、通常、「実質的に相同」であるとみなされる。相同な残基は、同一の残基であり得る。あるいは、相同な残基は、適度に類似の構造的特色および／または機能的特色を有する（ｗｉｌｌ）同一でない残基であり得る。例えば、当業者に周知であるように、ある特定のアミノ酸は、代表的には、「疎水性」もしくは「親水性」アミノ酸として、および／または「極性」もしくは「非極性」側鎖を有するアミノ酸として、分類される。１つのアミノ酸から同じタイプの別のアミノ酸への置換は、しばしば「相同」置換であるとみなされ得る。代表的なアミノ酸の分類を下記に要約する：
【化４】
2017532952.tif 000006
【化５】
2017532952.tif 000007
この分野において周知であるように、アミノ酸配列または核酸配列は、商業的なコンピュータプログラム（例えば、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮならびにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴおよびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ）において利用可能なものを含む種々のアルゴリズムのいずれかを用いて比較され得る。例示的なそのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０，１９９０；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、“Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴ  ａｎｄ  ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ  ｎｅｗ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄａｔａｂａｓｅ  ｓｅａｒｃｈ  ｐｒｏｇｒａｍｓ”，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７；Ｂａｘｅｖａｎｉｓら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８；およびＭｉｓｅｎｅｒら（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。上で述べられたプログラムは、相同配列の同定に加えて、代表的には、相同性の程度の指標を提供する。いくつかの実施形態において、２つの配列の対応する残基の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上が、関連する一続きの残基に対して相同である場合、その２つの配列は、実質的に相同であるとみなされる。いくつかの実施形態において、その関連する一続きは、完全な配列である。いくつかの実施形態において、その関連する一続きは、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００またはそれ以上の残基である。
【０１９１】
実質的な同一性：句「実質的な同一性」は、アミノ酸配列間または核酸配列間の比較のことを指すために本明細書中で使用される。当業者が認識するように、２つの配列は、対応する位置に同一の残基を含む場合、通常、「実質的に同一」であるとみなされる。この分野において周知であるように、アミノ酸配列または核酸配列は、商業的なコンピュータプログラム（例えば、ヌクレオチド配列用のＢＬＡＳＴＮならびにアミノ酸配列用のＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴおよびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ）において利用可能なものを含む種々のアルゴリズムのいずれかを用いて比較され得る。例示的なそのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｂａｓｉｃ  ｌｏｃａｌ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｓｅａｒｃｈ  ｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−４１０，１９９０；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２，１９９７；Ｂａｘｅｖａｎｉｓら、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８；およびＭｉｓｅｎｅｒら（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。上で述べられたプログラムは、同一の配列の同定に加えて、代表的には、同一性の程度の指標も提供する。いくつかの実施形態において、２つの配列の対応する残基の少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上が、関連する一続きの残基に対して同一である場合、その２つの配列は、実質的に同一であるとみなされる。いくつかの実施形態において、その関連する一続きは、完全な配列である。いくつかの実施形態において、その関連する一続きは、少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００またはそれ以上の残基である。
【０１９２】
実質的な構造的類似性：本明細書中で使用されるとき、「実質的な構造的類似性」という用語は、特定の位置における特定のアミノ酸の存在および／または同一性などの、共有される構造的特徴が存在することを指す（「共有される配列相同性」および「共有される配列同一性」の定義を参照のこと）。いくつかの実施形態において、「実質的な構造的類似性」という用語は、構造エレメント（例えば：ループ、シート、へリックス、水素結合ドナー、水素結合アクセプター、グリコシル化パターン、塩橋、およびジスルフィド結合）の存在および／または同一性のことを指す。いくつかの他の実施形態において、「実質的な構造的類似性」という用語は、原子または部分の、互いに対する３次元配置および／または配向（例えば：目的の作用物質と参照作用物質との間またはそれらの中での距離および／または角度）のことを指す。
【０１９３】
治療剤：本明細書中で使用されるとき、句「治療剤」とは、一般に、生物に投与されたとき、所望の薬理学的効果を誘発する任意の作用物質のことを指す。いくつかの実施形態において、ある作用物質は、それが適切な集団にわたって統計学的に有意な効果を示す場合に、治療剤であるとみなされる。いくつかの実施形態において、適切な集団は、モデル生物の集団であり得る。いくつかの実施形態において、適切な集団は、様々な基準（例えば、ある特定の年齢群、性別、遺伝的背景、既存の臨床的状態など）によって定義され得る。いくつかの実施形態において、治療剤は、ある疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状または特徴を軽減する、回復させる、緩和する、阻害する、予防する、その発生を遅延させる、その重症度を低下させる、および／またはその発生数を低下させるために使用され得る物質である。いくつかの実施形態において、「治療剤」とは、ヒトへの投与用に販売され得る前に政府機関によって承認されているまたは承認が必要な作用物質である。いくつかの実施形態において、「治療剤」とは、ヒトに投与するために医学的処方が必要な作用物質である。
【０１９４】
治療レジメン：「治療レジメン」とは、その用語が本明細書中で使用されるとき、関連する集団にわたる投与が、所望のまたは有益な治療的な転帰と相関する投薬レジメンのことを指す。
【０１９５】
治療有効量：本明細書中で使用されるとき、「治療有効量」という用語は、疾患、障害、および／または状態に罹患しているかまたは感受性である被験体に、治療的投薬レジメンに従って投与されたとき、その疾患、障害、および／または状態を処置するのに十分な量を意味する。いくつかの実施形態において、治療有効量は、疾患、障害、および／または状態の発生数および／または重症度を低下させ、かつ／または疾患、障害、および／または状態の１つ以上の症状の発生を遅延させる量である。当業者は、用語「治療有効量」には、実際、特定の個体における成功した処置が達成される必要はないことを理解するだろう。そうではなく、治療有効量は、そのような処置を必要とする患者に投与されたとき、有意な数の被験体において特定の所望の薬理学的反応がもたらされる量であり得る。特定の被験体が実際「治療有効量」に対して「不応性」であり得ることが明確に理解される。一例を挙げると、不応性の被験体は、低バイオアベイラビティを有し得、したがって、臨床的有効性は取得可能ではない。いくつかの実施形態において、治療有効量への言及は、１つ以上の特定の組織（例えば、疾患、障害もしくは状態の組織の影響を受ける組織）または流体（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙、尿など）において測定される量への言及であり得る。当業者は、いくつかの実施形態において、治療有効量は、単回用量で製剤化および／または投与され得ることを理解するだろう。いくつかの実施形態において、治療有効量は、例えば、投薬レジメンの一部として、複数の用量で製剤化および／または投与され得る。
【０１９６】
処置：本明細書中で使用されるとき、用語「処置」（また、「処置する（ｔｒｅａｔ）」または「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）とは、その最も広い意味において、特定の疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状、特徴および／または原因を部分的または完全に軽減する、回復させる、緩和する、阻害する、その発生を遅延させる、その重症度を低下させる、および／またはその発生数を低下させる物質（例えば、提供される組成物）の任意の投与のことを指す。いくつかの実施形態において、そのような処置は、関連する疾患、障害および／もしくは状態の徴候を示さない被験体ならびに／またはその疾患、障害および／もしくは状態の初期徴候だけを示す被験体に施され得る。代替的または付加的に、いくつかの実施形態において、処置は、関連する疾患、障害および／または状態の１つ以上の確立された徴候を示す被験体に施され得る。いくつかの実施形態において、処置は、関連する疾患、障害および／または状態に罹患していると診断された被験体の処置であり得る。いくつかの実施形態において、処置は、関連する疾患、障害および／または状態を発症する高リスクと統計的に相関する１つ以上の感受性因子を有すると知られている被験体の処置であり得る。
【０１９７】
抗体のインビボ発現による処置：リンパ系細胞および非リンパ系細胞（例えば、筋芽細胞、間葉系幹細胞）は、エクスビボまたはインビボにおいて完全長ＩｇＧを分泌するように遺伝子操作され得る（Ｃｏｍｐｔｅら、２０１３年、Ｂｉｏｍａｔｔｅｒ  ３巻；Ｎｏｅｌら、１９９７年、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ８巻：１２１９〜１２２９頁。ＤＮＡ配列を有する組換えアデノウイルスを使用するＩｇＧ遺伝子療法では高い血清ＩｇＧレベルを達成することができたが、ウイルス免疫原性により耐久性が限定された（Ｎｏｅｌら、２００２年、Ｈｕｍ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １３巻：１４８３〜１４９３頁；ＪｏｏｓｓおよびＣｈｉｒｍｕｌｅ、２００４年  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  １０巻：９５５〜９６３頁）。アデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）、および特に選択的な血清型は免疫原性が低く（Ｘｉａｏら、２０１２年、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ３巻：８３５〜８５６頁）、ヒト遺伝子療法に関して耐久性のあるベクターであることが証明されている（Ｎａｔｈｗａｎｉら、２０１１年、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３６５巻：２３５７〜２３６５頁；Ｐａｔｅｌら、２０１４年、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  ９９巻：３７２〜３７６頁）。ＶＥＧＦＲ−２に特異的な完全長ＩｇＧ抗体（ＤＣ１０１）について概念に関する前臨床的証拠が報告されている（Ｆａｎｇら、２００５年、Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２３巻：５８４〜５９０頁）、ＶＥＧＦ（Ｗａｔａｎａｂｅら、２００９年、Ｈｕｍ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ２０巻：５９８〜６１０頁）、ＨＥＲ−２（Ｈｏら、２００９年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １６巻：１８４〜１９４頁；Ｗａｎｇら、２０１０年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １７巻、５５９〜５７０頁）、Ｍｅｔ（Ｖｉｇｎａら、２００８年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６８巻：９１７６〜９１８３頁）、およびＨＩＶ（Ｂａｌａｚｓら、２０１２年、Ｎａｔｕｒｅ  ４８１巻：８１〜８４頁）。血管新生関連ラミニンに対する一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）（Ａｒａｆａｔら、２００２年、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ  ９巻：２５６〜２６２頁；Ｓａｎｚら、２００１年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．  ５０巻：５５７〜５６５頁；Ｓａｎｚら、２００３年、ＥＭＢＯ  Ｊ．  ２２巻：１５０８〜１５１７頁；Ｓａｎｚら、２００２年、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  ９巻：１０４９〜１０５３頁）およびその三価の形態および六価の形態（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ａｒｅｖａｌｏら、２００６年、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １１９巻：４５５〜４６２頁）、またはＶＥＧＦに対するｓｃＦｖ（Ａｆａｎａｓｉｅｖａら、２００３年、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １０巻：１８５０〜１８５９頁）およびその二価誘導体（ミニボディおよびｓｃＦｖ−Ｆｃ）、またはｓｃＦｖ抗ＨＥＲ２免疫毒素（Ｌｉｕら、２００９年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １６巻：８６１〜８７２頁）、またはＣＥＡ×ＣＤ３二重特異性ダイアボディ（Ｂｌａｎｃｏら、２００７年  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７１巻：１０７０〜１０７７頁；Ｃｏｍｐｔｅら、２００７年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １４巻：３８０〜３８８頁）に関して同様の成功が記載されている。
【０１９８】
改変体：本明細書中で使用されるとき、「改変体」という用語は、参照実体に対して有意な構造的同一性を示すが、参照実体と比べたとき１つ以上の化学部分の存在またはレベルに関して参照実体と構造的に異なる実体のことを指す。多くの実施形態において、改変体は、その参照実体と機能的にも異なる。一般に、特定の実体が参照実体の「改変体」であると適切にみなされるか否かは、参照実体との構造的同一性の程度に基づく。当業者が認識するように、任意の生物学的または化学的な参照実体は、ある特定の特徴的な構造エレメントを有する。改変体は、定義上、１つ以上のそのような特徴的な構造エレメントを共有する異なる化学的実体である。いくつか例を挙げると、小分子は、特徴的なコア構造エレメント（例えば、大環状分子コア）および／または１つ以上の特徴的なペンダント部分を有し得、その小分子の改変体は、そのコア構造エレメントおよび特徴的なペンダント部分を共有するが、他のペンダント部分および／またはそのコア内に存在する結合のタイプ（一重対二重、Ｅ対Ｚなど）が異なる改変体であり、ポリペプチドは、線状もしくは３次元空間において互いに対して指定の位置を有するおよび／または特定の生物学的機能に寄与する、複数のアミノ酸からなる特徴的な配列エレメントを有し得、核酸は、線状または３次元空間において互いに対して指定の位置を有する複数のヌクレオチド残基からなる特徴的な配列エレメントを有し得る。例えば、改変体ポリペプチドは、アミノ酸配列の１つ以上の差異および／またはポリペプチドの骨格に共有結合的に付着された化学部分（例えば、炭水化物、脂質など）の１つ以上の差異の結果として、参照ポリペプチドと異なり得る。いくつかの実施形態において、改変体ポリペプチドは、参照ポリペプチドに対して、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、または９９％である全体的な配列同一性を示す。代替的または付加的に、いくつかの実施形態において、改変体ポリペプチドは、参照ポリペプチドと少なくとも１つの特徴的な配列エレメントを共有しない。いくつかの実施形態において、参照ポリペプチドは、１つ以上の生物学的活性を有する。いくつかの実施形態において、改変体ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物学的活性のうちの１つ以上を共有する。いくつかの実施形態において、改変体ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物学的活性のうちの１つ以上を欠く。いくつかの実施形態において、改変体ポリペプチドは、参照ポリペプチドと比較して低下したレベルの１つ以上の生物学的活性を示す。多くの実施形態において、目的のポリペプチドは、目的のポリペプチドが、親のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有するが、特定の位置における少数の配列変化を有する場合、親または参照ポリペプチドの「改変体」であるとみなされる。代表的には、親と比較して、改変体における残基の２０％未満、１５％未満、１０％未満、９％未満、８％未満、７％未満、６％未満、５％未満、４％未満、３％未満、２％未満が置換される。いくつかの実施形態において、改変体は、親と比較して、１０個、９個、８個、７個、６個、５個、４個、３個、２個、または１個の置換された残基を有する。改変体は、非常に少数（例えば、５個未満、４個未満、３個未満、２個未満、または１個未満）の置換された機能的な残基（すなわち、特定の生物学的活性に関与する残基）を有することが多い。さらに、改変体は、代表的には、親と比較して、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下、または１個以下の付加または欠失を有し、しばしば、付加または欠失を有さない。さらに、任意の付加または欠失は、代表的には、約２５残基未満、約２０残基未満、約１９残基未満、約１８残基未満、約１７残基未満、約１６残基未満、約１５残基未満、約１４残基未満、約１３残基未満、約１０残基未満、約９残基未満、約８残基未満、約７残基未満、約６残基未満、および一般に約５残基未満、約４残基未満、約３残基未満、または約２残基未満である。いくつかの実施形態において、親または参照ポリペプチドは、天然に見出されるものである。当業者によって理解されるように、特定の目的のポリペプチドの複数の改変体は、一般に、特に目的のポリペプチドが感染因子ポリペプチドである場合、天然に見出され得る。
【０１９９】
ベクター：本明細書中で使用されるとき、「ベクター」とは、会合する別の核酸を輸送することができる核酸分子のことを指す。いくつかの実施形態において、ベクターは、宿主細胞（例えば、真核細胞および／または原核細胞）において、それらが連結されている核酸を染色体外で複製および／または発現することができる。作動可能に連結された遺伝子の発現を指示することができるベクターは、本明細書中で「発現ベクター」と称される。
【０２００】
野生型：本明細書中で使用されるとき、用語「野生型」は、「正常な」（変異体、病的なもの、変化したものなどと対照をなすとき）状態または状況において天然に見られるような構造および／または活性を有する実体のことを指す、当該分野において理解されている意味を有する。当業者は、野生型の遺伝子およびポリペプチドが、しばしば、複数の異なる形態（例えば、対立遺伝子）で存在することを認識するだろう。
【０２０１】
ある特定の実施形態の詳細な説明
免疫抑制の緩和
免疫細胞を阻害する負の制御経路の除去が、癌処置において急速に重要になっている。最も早く成功したそのような治療的手法の例のうちの１つは、黒色腫の処置に関するイピリムマブについての２００１年３月のＦｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）による承認において具体化された。イピリムマブは、活性化Ｔ細胞において見出される重要な負の制御因子であるＣＴＬＡ−４を標的化するモノクローナル抗体（ＭＡｂ）である。ＣＴＬＡ−４は、樹状細胞（ＤＣ）および他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって発現されるアクセサリー分子のＢ７ファミリーのメンバーに結合する。ＣＴＬＡ−４のこれらのアクセサリー分子への結合により、さらなるＴ細胞の活性化および増大が有効に阻害され、それにより、そのような細胞が関与する免疫応答の進行が遮断される（Ｍｅｌｌｍａｎら、２０１１年Ｎａｔｕｒｅ  ４８０巻：４８０〜４８９頁）。イピリムマブは、ＣＴＬＡ−４を標的化することによってこの阻害を解除し、特に癌細胞を破壊するものを含めたＴ細胞の活性化および増大を可能にする。
【０２０２】
免疫阻害を取り除くことによって癌を処置するために追求されてきた他の手法としては、プログラム死−１（ＰＤ−１）Ｔ細胞補助レセプター、ならびにそのリガンドである、免疫抑制性腫瘍微小環境を維持する経路の一部であるＢ７−Ｈ１／ＰＤ−Ｌ１およびＢ７−ＤＣ／ＰＤ−Ｌ２を標的化することが挙げられる（Ｔｏｐａｌｉａｎら、２０１２年、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２４巻：２０７〜２１２頁）。特に、抗ＰＤ−１抗体（Ｔｏｐａｌｉａｎら、２０１２年、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３６６巻：２４４３〜２４５４頁）または抗ＰＤ−Ｌ１抗体（Ｂｒａｈｍｅｒら、２０１２年、Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．  ３６６巻：２４５５〜２４６５頁）を使用した第Ｉ相／第ＩＩ相臨床試験により、黒色腫、非小細胞肺癌、腎細胞癌および卵巣癌における腫瘍の退縮または安定化が実証された。
【０２０３】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって導かれる免疫阻害を取り除くためのさらに他の手法が設計されてきた。例えば、ヒトキラー細胞Ｉｇ様レセプター（ＫＩＲ）は、ＮＫ細胞の表面上に発現し、潜在的な標的細胞上の主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）／ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ亜型に結合する糖タンパク質である。この結合相互作用により、ＮＫ細胞の細胞傷害性が阻害される。ＫＩＲを標的化するモノクローナル抗体は、臨床試験において、そのような阻害を遮断し、それにより、ＮＫ活性の抑制を緩和することが示されている（Ｒｏｍａｇｎｅら、２００９年、Ｂｌｏｏｄ  １１４巻：２６６７〜２６７７頁）。
【０２０４】
同様に、白血球Ｉｇ様レセプター（ＬＩＲ、Ｉｇ様転写物、ＩＬＴとしても公知）もＮＫ細胞（ならびにいくつかのＴリンパ球およびＢリンパ球およびある特定のマクロファージ、肥満細胞、および樹状細胞）の表面上に発現し、同様にＭＨＣ／ＨＬＡクラスＩ亜型に結合し、その結果、ＬＩＲ発現エフェクター細胞の活性が阻害される。いくつかの試験で、ＬＩＲとＭＨＣ／ＧＬＡクラスＩ分子との間の相互作用を遮断することによってエフェクター細胞による細胞傷害性を刺激することの成功が報告されている（Ｇｏｄａｌら、２０１０年、Ｂｉｏｌ．  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  １６巻：６１２〜６２１頁）。
【０２０５】
さらに、腫瘍関連抗原を標的化することによって腫瘍関連免疫抑制を解除しようとする種々の手法が追求されてきた。例えば、ＭＡｂ（例えば、抗ＣＤ４７）の遮断が試験されており、白血病／リンパ腫モデルおよび固形腫瘍モデルにおいて、インビトロとインビボのどちらにおいても、マクロファージを刺激して腫瘍細胞を貧食させることにおいて有効であることが見出されている（Ｚｈａｏら、２０１１年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １０８巻：１８３４２〜１８２４７頁；Ｍａｊｅｔｉら、２００９年、Ｃｅｌｌ  １３８巻：２８６〜２９９頁；Ｃｈａｏら、２０１１年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ７１巻：１３７４〜１３８４頁；Ｃｈａｏら、２０１０年、Ｓｃｉ．  Ｔｒａｎｓｌ．  Ｍｅｄ．  ２巻：６３ｒａ９４頁；Ｃｈａｏら、２０１０年、Ｃｅｌｌ  １４２巻：６９９〜７１３頁；Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍら、２０１２年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １０９巻：６６６２〜６６６７頁）。
【０２０６】
他の特に興味深い腫瘍抗原標的としては、神経外胚葉由来の腫瘍および肉腫上に高度に発現するが、正常細胞上での発現は限定されたものである、ガングリオシドＧＤ２が挙げられる。ＧＤ２標的化により、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を通じたＮＫ細胞活性化が促進されることが示されている（Ｔａｒｅｋら、２０１２年、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．  １２２巻：３２６０〜３２７０頁）。
【０２０７】
ヒトＢ７Ｈ３（ＣＤ２７６としても公知）は、腫瘍サーベイランスならびに感染性疾患および自己免疫疾患の状況においてＴ細胞機能を制御する極めて重要な共刺激シグナルをもたらす、Ｂ７／ＣＤ２８免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである（Ｗｉｌｃｏｘら、２０１２年、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｈａｅｍａｔｏｌ．  ８８巻：４６５〜４７５頁）。
【０２０８】
Ｂ７Ｈ３は、前立腺癌（Ｒｏｔｈら、２００７年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６７巻：７８９３〜９００頁；Ｚａｎｇら、２００７年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １０４巻：１９４５８〜１９４６３頁）、腎細胞癌、尿路上皮細胞癌（Ｃｒｉｓｐｅｎら、２００８年、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １４巻：５１５０〜１５７頁；Ｂｏｏｒｊｉａｎら、２００８年、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １４巻：４８００〜４８０８頁）、卵巣癌（Ｚａｎｇら、２０１０年、Ｍｏｄ．  Ｐａｔｈｏｌ．  ２３巻：１１０４〜１１１２頁）、神経膠芽腫（Ｌｅｍｋｅら、２０１２年、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １８巻：１０５〜１１７頁）、骨肉腫（Ｗａｎｇら、２０１３年、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８巻：ｅ７０６８９頁）、神経芽細胞腫（Ｇｒｅｇｏｒｉｏら、２００８年、Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ５３巻：７３〜８０頁）、びまん性内在性橋グリオーマ（ｄｉｆｆｕｓｅ  ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｐｏｎｔｉｎｅ  ｇｌｉｏｍａ）（ＤＩＰＧ）（Ｚｈｏｕら、２０１３年、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ．  １１１巻：２５７〜２６４頁）、中皮腫（Ｃａｌａｂｒｏら、２０１１年、Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２２６巻：２５９５〜６００頁）、および膵癌（Ｙａｍａｔｏら、２００９年、Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １０１巻：１７０９〜１７１６頁）を含めた多くの固形腫瘍タイプにおいて広範に発現する。
【０２０９】
Ｂ７Ｈ３は、最初、他のＢ７ファミリーメンバーのすべてと同様に、ただ１つのＶ様Ｉｇドメインと１つのＣ様Ｉｇドメインとを含む細胞外領域を有する（この形態のＢ７Ｈ３は２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３と名付けられた）Ｉ型膜貫通タンパク質として同定された（Ｃｈａｐｏｖａｌら、２００１年、Ｎａｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２巻：２６９〜２７４頁）。その後、Ｖ様ＩｇドメインおよびＣ様Ｉｇドメインのタンデムな重複を含む第２の形態のヒトＢ７Ｈ３（ｈｕＢ７Ｈ３）が同定された（４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３と称される）（Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、２００４年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７２巻：２３５２〜２３５９頁；Ｓｕｎら、２００２年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６８巻：６２９４〜６２９７頁）。
【０２１０】
Ｂ７Ｈ３は、ＮＫ細胞とＴ細胞の両方に対して阻害性であると考えられる。Ｂ７Ｈ３の阻害性の役割の観念は、ヒトＢ７Ｈ３の２Ｉｇ形態と４Ｉｇ形態のどちらもＴ細胞の増殖およびサイトカイン産生を阻害し得ることを示唆する報告によって裏付けられる（Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、２００４年、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １７２巻：２３５２〜２３５９頁；Ｓｕｎら、２００２年  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １６８巻：６２９４〜６２９７頁）。Ｂ７Ｈ３欠損マウスにおける試験により、Ｂ７Ｈ３がＴＨ１媒介性免疫応答を（ＴＨ２媒介性免疫応答とは対照的に）優先的に下方制御することが示唆された（Ｓｕｈら、２００３年、Ｎａｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ４巻：８９９〜９０６頁）。また、他の調査から、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３形態が、ＮＫ細胞の表面上の推定抑制性レセプターと相互作用することによって神経芽細胞腫細胞のＮＫ媒介性溶解を阻害し得ることが示された（Ｃａｓｔｒｉｃｏｎｉら、２００４年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １０１巻：１２６４０〜１２６４５頁）。前立腺癌の患者が関与するごく最近の試験において、外科手術時の腫瘍組織におけるＢ７Ｈ３発現のレベルは、腫瘍が転移した程度、臨床的な癌再発のリスクの上昇、および癌特異的な死亡と強力に相関した（Ｒｏｔｈら、２００７年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６７巻：７８９３〜７９００頁；Ｚａｎｇら、２００７年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １０４巻：１９４５８〜１９４６３頁）。同様に、腫瘍組織における高レベルのＢ７Ｈ３発現は、明細胞腎細胞癌、尿路上皮細胞癌（Ｃｒｉｓｐｅｎら、２００８年、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １４巻：５１５０〜５１５７頁；Ｂｏｏｒｊｉａｎら、２００８年、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １４巻：４８００〜４８０８頁）、卵巣癌（Ｚａｎｇら、２０１０年、Ｍｏｄ．  Ｐａｔｈｏｌ．  ２３巻：１１０４〜１１１２頁）、神経膠芽腫（Ｌｅｍｋｅら、２０１２年、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １８巻：１０５〜１１７頁）、骨肉腫（Ｗａｎｇら、２０１３年、ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ８巻：ｅ７０６８９頁）、膵癌（Ｙａｍａｔｏら、２００９年、Ｂｒ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  １０１巻：１７０９〜１７１６頁）、および神経芽細胞腫（Ｇｒｅｇｏｒｉｏら、２００８年、Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ５３巻：７３〜８０頁）における患者の生存不良と相関した。
【０２１１】
マウスＢ７Ｈ３（ｍｕＢ７Ｈ３）についての結晶構造データに基づいて、Ｂ７Ｈ３が、少なくとも一部においてそのＩｇＶドメインのＦＧループを通じてＴ細胞の増殖を阻害することが提唱された（Ｖｉｇｄｏｒｏｖｉｃｈら、２０１３年、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２１巻：７０７〜７１７頁）。
【０２１２】
他方では、Ｂ７Ｈ３は、それが相互作用するレセプターに応じて、Ｔ細胞刺激特性も有し得る（Ｈｏｆｍｅｙｅｒら、２００８年、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  Ｕ．Ｓ．Ａ．  １０５巻：１０２７７〜１０２７８頁）。例えば、少数の以前の報告により、ヒト２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３が、活性化Ｔ細胞上の推定レセプターに結合することによってＴ細胞活性化およびＩＦＮ−γ産生を促進することが示された（Ｃｈａｐｏｖａｌら、２００１年、Ｎａｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ２巻：２６９〜２７４頁）。さらに、ある特定のマウス腫瘍モデルを使用した試験から、免疫系の抗腫瘍応答がＢ７Ｈ３発現によって増強されることを示唆するデータがもたらされた（Ｓｕｎら、２００３年、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．  １０巻：１７２８〜１７３４頁）。また、ヒトにおける試験により、Ｂ７Ｈ３の存在が、胃癌（Ｗｕら、２００６年、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  １２巻：４５７〜４５９頁）および膵癌（Ｌｏｏｓら、２００９年、ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  ９巻：４６３頁）における生存の増加と相関することが示唆された。
【０２１３】
Ｂ７Ｈ３に結合する、ｍ８Ｈ９として公知のマウス抗体は、脳腫瘍、小児期肉腫、および神経芽細胞腫、ならびにより少ない程度で腺癌を標的化することが示されている（Ｍｏｄａｋら、２００１年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６１巻：４０４８〜４０５４頁；Ｘｕら、２００９年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６９巻：６２７５〜６２８１頁）。原発性脳腫瘍の中で、試験された神経膠芽腫１７例のうち１５例、試験された混合性神経膠腫４例のうち３例、試験された乏突起神経膠腫１１例のうち４例、試験された星状細胞腫８例のうち６例、試験された髄膜腫２例のうち２例、試験されたシュワン細胞腫３例のうち３例、試験された髄芽腫２例のうち２例、試験された神経線維腫１例のうち１例、試験された神経膠腫瘍（ｎｅｕｒｏｎｏｇｌｉａｌ  ｔｕｍｏｒ）２例のうち１例、試験された上衣腫３例のうち２例、および試験された松果体芽腫１例のうち１例で８Ｈ９による結合が示された。肉腫の中で、試験されたユーイング／未分化神経外胚葉性腫瘍２１例のうち２１例、試験された横紋筋肉腫２９例のうち２８例、試験された骨肉腫２９例のうち２８例、試験された線維形成性小円形細胞腫瘍（ｄｅｓｍｏｐｌａｓｔｉｃ  ｓｍａｌｌ  ｒｏｕｎｄ  ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒ）３７例のうち３５例、試験された滑膜肉腫３例のうち２例、試験された平滑筋肉腫４例のうち４例、悪性線維性組織球腫１例のうち１例、および試験された未分化肉腫２例のうち２例が８Ｈ９結合について陽性と試験された。試験された神経芽細胞腫９０例のうち８７例、試験された黒色腫１６例のうち１２例、試験された肝芽腫４例のうち３例、試験されたウィルムス腫瘍８例のうち７例、試験された横紋筋肉腫様腫瘍（ｒｈａｂｄｏｉｄ  ｔｕｍｏｒ）３例のうち３例、および試験された腺癌２７例のうち１２例も陽性と試験された。対照的に、ｍ８Ｈ９は、骨髄、結腸、胃、心臓、肺、筋肉、甲状腺、精巣、膵臓、およびヒト脳（前頭葉、小脳、橋、および脊髄）を含めた正常なヒト組織には結合しなかった（Ｍｏｄａｋら、２００１年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６１巻：４０４８〜４０５４頁）。
【０２１４】
８Ｈ９抗体剤
上記の通り、８Ｈ９抗体は、Ｂ７Ｈ３に特異的に結合する。試験された他の抗Ｂ７Ｈ３抗体とは異なり、８Ｈ９だけが、Ｂ７Ｈ３のＦＧループに結合させるため、およびＢ７Ｈ３の免疫阻害機能を遮断するために使用され得る。
【０２１５】
免疫組織化学的試験により、ｍ８Ｈ９は、胚芽腫および癌腫を含めたヒト固形腫瘍に対して広範に反応性であることが実証された（Ｍｏｄａｋら、２００１年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６１巻：４０４８〜４０５４頁）。ｍ８Ｈ９は、肉腫と脳腫瘍の両方に関して、異種移植モデルにおいて好都合な腫瘍取り込みが示されており（Ｍｏｄａｋら、２００５年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ．  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．  ２０巻：５３４〜５４６頁；Ｌｕｔｈｅｒら、２００８年、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ６３巻：１１６６〜１１７４頁；ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ  １１７４）、抗体をコブラ毒因子に結合体化すると、効率的な補体媒介性腫瘍溶解が誘導される（Ｊｕｈｌら、１９９７年、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ  １９７巻：４４４〜４５９頁）。さらに、ｍ８Ｈ９の一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）形態により、前臨床的なモデル系において、強力な免疫毒素が肉腫および神経膠腫に標的化され得ることが示された（Ｏｎｄａら、２００４年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ６４巻：１４１９〜１４２４頁；Ｌｕｔｈｅｒら、２０１０年、Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  ９巻：１０３９〜１０４６頁）。
【０２１６】
ｍ８Ｈ９のｓｃＦｖ形態は、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）の一部として、ＮＫ細胞を、Ｂ７Ｈ３（＋）陽性腫瘍細胞を死滅させるように導くことができる（Ｃｈｅｕｎｇら、２００３年、Ｈｙｂｒｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉｃｓ  ２２巻：２０９〜２１８頁）。さらに、ある特定の初期相ヒト臨床試験により、１３１Ｉ標識された８Ｈ９を用いた放射免疫療法により、転移性中枢神経系（ＣＮＳ）癌の高リスク患者の生存が延長されることが示されている（Ｋｒａｍｅｒら、２００７年、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＬＢ−４  （プレゼンテーション）；Ｋｒａｍｅｒら、２００８年、２００８年ＩＳＰＮＯにおけるプレゼンテーション）。
【０２１７】
軟膜転移（ＮＣＴ０００８９２４５）（Ｋｒａｍｅｒら、２０１０年  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ  ９７巻：４０９〜４１８頁）およびびまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）（ＮＣＴ０１５０２９１７）（Ｚｈｏｕら、２０１３年、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ．  １１１巻：２５７〜２６４頁）のｍ８Ｈ９に基づく放射免疫療法に関していくつかの第１相臨床試験が現在進行中である。本発明者らの知見によると、臨床試験に供されている他の抗Ｂ７Ｈ３抗体は、ヒト化ＩｇＧ１  ＭＡｂであるＭＧＡ２７１（ＮＣＴ０１３９１１４３）のみである（Ｌｏｏら、２０１２年、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ．  Ｒｅｓ．  １８巻：３８３４〜３８４５頁、２０１２年）。
【０２１８】
放射標識されたｍ８Ｈ９抗体は、現在、線維形成性小円形細胞腫瘍および腹膜が関与する他の固形腫瘍の処置に関して臨床試験中である（ＮＣＩプロトコールＩＤ０９−０９０  ＮＣＴ０１０９９６４４）。
【０２１９】
マウス
マウス８Ｈ９（ｍ８Ｈ９）は、Ｂ７Ｈ３を標的化するＩｇＧ１モノクローナル抗体（ＭＡｂ）である。
【０２２０】
ヒト化および親和性成熟
ｍ８Ｈ９は、ヒトにおける癌を処置するための治療剤として有望であるが、マウス起源のものである。この場合、ヒト抗体の使用が好ましく、これは、とりわけ、投与された抗体に対する免疫反応の可能性が低下するからである。
【０２２１】
本発明は、Ｂ７Ｈ３、特にそのＦＧループに結合する抗体において見出されるある特定のヒト化抗体配列、および同様にある特定の親和性成熟された抗体配列を提供する。例えば、本明細書中に記載される配列エレメントを含むポリペプチドを含む抗体剤（例えば、本明細書中に記載されるまたは別途当該分野で公知の完全長抗体、そのフラグメント、単鎖抗体、二重特異性抗体、または他の抗体剤形式）が本明細書において特に例証されている。
【０２２２】
特に、本発明は、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合し、配列番号１、２、３、４、５、６、７および８からなる群より選択される配列番号に記載の免疫グロブリン軽鎖（下記）もしくはその関連するエピトープ結合部分を含み、かつ／または、配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、１５および１６からなる群より選択される配列番号に記載の免疫グロブリン重鎖（下記）もしくはその関連するエピトープ結合部分を含む抗体剤を提供する。
【０２２３】
配列番号１（ｃｈ８Ｈ９軽鎖）
DIVMTQSPATLSVTPGDRVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２２４】
配列番号２（ｈｕ８Ｈ９  Ｌ１軽鎖）
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLHWYQQKPGQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGTEFTLTISSVQPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２２５】
配列番号３（ｈｕ８Ｈ９  Ｌ２軽鎖）
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGTEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２２６】
配列番号４（ｈｕ８Ｈ９  Ｌ３軽鎖）
EIVMTQSPATLSVSPGERVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２２７】
配列番号５（ｈｕ８Ｈ９  ３．１軽鎖）
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２２８】
配列番号６（ｈｕ８Ｈ９  ４．１軽鎖）
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLHWYQQKSHQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTISSLQPEDFGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２２９】
配列番号７（ｈｕ８Ｈ９  ５．１軽鎖）
EIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTISSLQPEDFGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２３０】
配列番号８（ｃｈ８Ｈ９  ６．１軽鎖；ｃｈ８Ｈ９＋６つの親和性成熟変異）
DIVMTQSPATLSVTPGDRVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
【０２３１】
配列番号９（ｃｈ８Ｈ９重鎖）
QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０２３２】
配列番号１０（ｈｕ８Ｈ９  Ｈ１重鎖）
QVQLVQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQAPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０２３３】
配列番号１１（ｈｕ８Ｈ９  Ｈ２重鎖）
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQAPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSRLTSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０２３４】
配列番号１２（ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３重鎖）
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０２３５】
配列番号１３（ｈｕ８Ｈ９  ３．１重鎖）
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０２３６】
配列番号１４（ｈｕ８Ｈ９  ４．１重鎖）
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGRVTMTTDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０２３７】
配列番号１５（ｈｕ８Ｈ９  ５．１重鎖）
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGRVTMTTDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０２３８】
配列番号１６（ｃｈ８Ｈ９  ６．１重鎖；ｃｈ８Ｈ９＋６つの親和性成熟変異）
QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
【０２３９】
いくつかの実施形態において、提供される抗体剤は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはそのフラグメントからなる群より選択される抗体クラスのメンバーである抗体であるかまたはそれを含む。
【０２４０】
抗体および／もしくはその特徴的な部分を含む提供される抗体剤またはそれらをコードする核酸が、任意の利用可能な手段によって作製され得る。抗体（例えば、モノクローナル抗体および／またはポリクローナル抗体）を作製するための技術は、当該分野で周知である。ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモットまたはヤギを含む広範囲の動物種が抗血清の生成のために使用され得ることが認識されるだろう。動物の選択は、当業者に公知であり得るように、操作の容易さ、コストまたは血清の所望量によって決定され得る。抗体剤が、目的の免疫グロブリン重鎖および軽鎖配列についてトランスジェニックである哺乳動物または植物の作出を通じて、遺伝子組換え的にも作製され得ることが認識されるだろう。哺乳動物におけるトランスジェニックでの生成に関連して、抗体は、ヤギ、ウシまたは他の哺乳動物の乳汁中に産生され得、そこから回収され得る。例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号および同第５，７４１，９５７号を参照のこと（これらの全体が参考として援用される）。
【０２４１】
提供される抗体剤（抗体および／または特徴的な部分を含む）は、例えば、本発明の抗体をコードする核酸を発現するように操作された宿主細胞系を利用することによって、作製され得る。代替的または付加的に、提供される抗体剤は、化学合成によって（例えば、自動ペプチド合成装置を用いて）部分的または全体的に調製され得る。
【０２４２】
ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を作製および使用する技術は、例えば、Ｈａｒｌｏｗら、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ：Ｐｏｒｔａｂｌｅ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌ  Ｉ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｄｅｃ．１，１９９８）に記載されている。改変された抗体剤（例えば、抗体および抗体フラグメント（例えば、キメラ抗体、再形成抗体、ヒト化抗体もしくはそのフラグメント、例えば、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント））；または生合成抗体（例えば、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ）、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）など）を作製するための技術は、当該分野で公知であり、例えば、Ｚｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（Ｄｅｃ．１５，２０００；１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ）に見られる。
【０２４３】
本発明に適した抗体剤の調製に対する例示的な供給源としては、目的のタンパクを発現する組換え細胞株の培養から得られる馴化培養培地、または、例えば、抗体産生細胞、細菌、真菌細胞、昆虫細胞、トランスジェニック植物もしくはトランスジェニック植物細胞、トランスジェニック動物もしくはトランスジェニック動物細胞の細胞抽出物、あるいは動物の血清、腹水、ハイブリドーマまたはミエローマ上清が挙げられるが、これらに限定されない。好適な細菌細胞としては、大腸菌細胞が挙げられるが、これに限定されない。好適な大腸菌株の例としては：ＨＢ１０１、ＤＨ５α、ＧＭ２９２９、ＪＭ１０９、ＫＷ２５１、ＮＭ５３８、ＮＭ５３９および外来ＤＮＡを切断しない任意の大腸菌株が挙げられる。使用され得る好適な真菌宿主細胞としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。好適な昆虫細胞としては、Ｓ２  Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ細胞、Ｄ．Ｍｅｌ−２細胞、ＳＦ９、ＳＦ２１、Ｈｉｇｈ−５ＴＭ、ＭｉｍｉｃＴＭ−ＳＦ９、ＭＧ１およびＫＣ１細胞が挙げられるが、これらに限定されない。好適な例示的な組換え細胞株としては、ＢＡＬＢ／ｃマウスミエローマ株、ヒト網膜芽細胞腫（ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔ）（ＰＥＲ．Ｃ６）、サル腎臓細胞、ヒト胎児腎株（２９３）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、マウスセルトリ細胞、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌腫細胞（ＨｅＬａ）、イヌ腎臓細胞、バッファローラット（ｂｕｆｆａｌｏ  ｒａｔ）肝臓細胞、ヒト肺細胞、ヒト肝臓細胞、マウス乳腺腫瘍細胞、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞およびヒトヘパトーム株（ＨｅｐＧ２）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４４】
目的の抗体剤は、任意の適切なベクターを使用して発現され得る。種々のベクター（例えば、ウイルスベクター）が当該分野で公知である；そのようなベクターが導入される細胞（またはそのような細胞の子孫）は、当該分野で公知であるように（例えば、連続培養系または流加培養系を使用して）培養され得る。いくつかの実施形態において、細胞は、遺伝子操作され得る；細胞を、操作されたポリペプチド（例えば、本明細書中に記載される抗体剤ポリペプチド）を発現するように遺伝子操作するための技術は当該分野で周知である。例えば、Ａｕｓａｂｅｌら編（１９９０年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を参照のこと。
【０２４５】
いくつかの実施形態において、提供される抗体剤は、所望であれば、濾過、遠心分離および／またはＨＰＬＣもしくはアフィニティークロマトグラフィーなどの種々のクロマトグラフィー技術を使用して精製され得る。いくつかの実施形態において、提供される抗体剤のフラグメントは、ペプシンもしくはパパインなどの酵素消化、および／または化学的還元によるジスルフィド結合の切断を含む方法によって得られる。
【０２４６】
通常、本明細書中に記載されるように、提供される抗体剤は、例えば、ポリクローナル抗体；モノクローナル抗体もしくはその抗原結合フラグメント；改変された抗体（例えば、キメラ抗体、再形成抗体、ヒト化抗体もしくはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２））；または生合成抗体、例えば、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ）、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）などであり得るかまたはそれらを含み得る。
【０２４７】
提供される抗体剤は、抗体剤の特色および／または活性が改善されるように操作、作成、および／または精製され得ることが理解されるだろう。例えば、提供される抗体剤の特色の改善としては、とりわけ、安定性の増大、結合親和性および／またはアビディティの改善、結合特異性の増大、産生の増加、凝集の減少、非特異的結合の減少が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４８】
特定の例示的な実施形態−軽鎖と重鎖の組み合わせ
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号１に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号９に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号１に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号９に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２４９】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号２に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１０に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号２に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１０に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２５０】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号３に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１１に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号３に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１１に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２５１】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号４に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１２に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号４に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１２に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２５２】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号２に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１１に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号２に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１１に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２５３】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号３に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１０に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号３に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１０に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２５４】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号５に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１３に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号５に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１３に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２５５】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号６に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１４に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号６に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１４に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２５６】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号７に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１５に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号７に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１５に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２５７】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号８に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１６に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、配列番号８に記載の免疫グロブリン軽鎖および／または配列番号１６に記載の免疫グロブリン重鎖を含む抗体である。
【０２５８】
本発明は、とりわけ、以下に列挙されている、示されている配列番号に記載の免疫グロブリン軽鎖またはそのエピトープ結合部分、および示されている配列番号に記載の免疫グロブリン重鎖またはそのエピトープ結合部分を含む抗体を意図している。
【表１−１】
2017532952.tif 000008
【表１−２】
2017532952.tif 000009
【表１−３】
2017532952.tif 000010
【０２５９】
特定の例示的な実施形態−特異的なアミノ酸残基
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、２０位におけるトレオニン残基および３４位におけるチロシン残基を含む免疫グロブリン軽鎖、ならびに／または２４位におけるトレオニン残基、４２位におけるグリシン残基、５６位におけるアスパラギン酸残基、および１０２位におけるグリシン残基を含む免疫グロブリン重鎖を含む。
【０２６０】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、軽鎖２０位におけるトレオニン、軽鎖３４位におけるチロシン、重鎖２４位におけるトレオニン、重鎖４２位におけるグリシン、重鎖５６位におけるアスパラギン酸、および重鎖１０２位におけるグリシンに関して、相同なアミノ酸置換を有する。
【０２６１】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、２０位におけるトレオニン残基および３４位におけるチロシン残基を含む、配列番号１、２、３、４、５、６、７および８からなる群より選択される配列番号に記載の免疫グロブリン軽鎖、ならびに／または、２４位におけるトレオニン残基、４２位におけるグリシン残基、５６位におけるアスパラギン酸残基、および１０２位におけるグリシン残基を含む、配列番号９、１０、１１、１２、１３、１４、１５および１６からなる群より選択される配列番号に記載の免疫グロブリン重鎖を含む。
【０２６２】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、マウス８Ｈ９抗体であり、免疫グロブリン軽鎖は、２０位におけるトレオニン残基および３４位におけるチロシン残基を含み、免疫グロブリン重鎖は、２４位におけるトレオニン残基、４２位におけるグリシン残基、５６位におけるアスパラギン酸残基、および１０２位におけるグリシン残基を含む。
【０２６３】
とりわけ、本開示は、８Ｈ９抗体剤にこれらのアミノ酸残基が存在することにより、抗体剤のＢ７Ｈ３に対する結合親和性が、ｍ８Ｈ９を用いて観察されるＢ７Ｈ３に対する結合親和性と比較して増大することを実証する。すなわち、ｍ８Ｈ９にこれらの残基を導入することにより、Ｂ７Ｈ３、特にそのＶ−ドメインのＦＧループに対するその結合親和性が改善される。
【０２６４】
当業者は、そのような導入を達成するため、またはそのような配列を含むポリペプチドを別途調製する、提供するため、もしくは製造するための、当該分野において十分に確立された種々の技術を知っている。この点について有用な例示的な技術は、例えば、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  ２０１２年において提供される。
【０２６５】
特定の例示的な実施形態−特異的な親和性
本開示は、Ｂ７Ｈ３のＦＧループを標的化する８Ｈ９抗体剤を含めた抗体剤が、Ｂ７Ｈ３の免疫阻害機能を遮断するために使用され得ることの最初の実証を提供する。
【０２６６】
本発明は、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ−ドメイン内ならびにタンパク質４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ１およびＶ２ドメイン内のＦＧループに位置する配列番号３２に記載のエピトープ（下記）に特異的に結合する抗体剤、および同じエピトープに２ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で特異的に結合する抗体剤を提供する。本明細書において実施例に開示されているように、記載されるヒト化および親和性成熟された８Ｈ９抗体ならびにその結合フラグメントは、これらの特色を有する。いくつかの実施形態において、これらの抗体剤は、ｍ８Ｈ９ではない。
【０２６７】
ＩＲＤＦエピトープは、種の間で保存されたものであり、例えば、ヒト、イヌ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、マカク、マーモセット、ブタ、ウマ、パンダ、およびゾウにおいて見出される。本発明は、イヌ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル、マカク、マーモセット、ブタ、ウマ、パンダ、およびゾウを含めたヒトおよび非ヒト動物において存在する、配列番号３２に記載のエピトープに特異的に結合する抗体剤を提供する。
【０２６８】
配列番号３２は、ＩＲＤＦである。
【０２６９】
本発明のある特定の実施形態において、抗体剤は、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ−ドメイン内ならびにタンパク質４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ１およびＶ２ドメイン内のＦＧループに、１００ｎＭ未満、８０ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満および２ｎＭ未満のＫＤ（ｎＭ）で結合する。
【０２７０】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、Ｔ細胞の増殖および機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制する。
【０２７１】
本発明のいくつかの実施形態において、抗体剤は、Ｔ細胞の増殖および機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制し、かつ／または、Ｔ細胞媒介性細胞傷害を増強する。
【０２７２】
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書中に記載される抗体剤は、ＮＫ細胞の活性および／または機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制する。
【０２７３】
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書中に記載される抗体剤は、ＮＫ細胞の活性および／または機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制し、かつ／またはＮＫ細胞の活性および／または機能を増強する。
【０２７４】
そのような効果を決定するためのアッセイは、広範に当該分野で公知である。いくつかの例示的な限定的ではないアッセイが本明細書の実施例において提供される。
【０２７５】
いくつかの実施形態において、抗体剤は、抗体、抗体フラグメントおよび／またはｓｃＦｖを含む、および／または、抗体、抗体フラグメントおよび／またはｓｃＦｖである。
【０２７６】
特定の例示的な実施形態−特異的なＣＤＲ
当該分野で一般に公知のように、ヒト抗体およびマウス抗体は、通常、２本の軽鎖および２本の重鎖で構成され、それぞれが可変領域および定常領域を含む。軽鎖可変領域は、通常、フレームワーク領域に挟まれた、本明細書中ではＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３と識別される３つのＣＤＲ（相補性決定領域）を含む。重鎖可変領域は、通常、フレームワーク領域で挟まれた、本明細書中ではＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３と識別される３つのＣＤＲを含む（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｅ．  Ｐａｕｌ、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第７版）、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ  ２０１３年を参照のこと）。
【０２７７】
本発明のいくつかの実施形態において、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合する抗体剤は、配列番号３３、３４、３９、４０、４５、４６、５１および５２（以下に記載される）からなる群から選択される配列番号に記載のＣＤＲＬ１を含む免疫グロブリン軽鎖またはその関連するエピトープ結合部分を含む。いくつかの実施形態において、抗体剤は、抗体、ｓｃＦｖおよび／またはその関連するエピトープ結合部分である。
【０２７８】
本発明のいくつかの実施形態において、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合する抗体剤は、配列番号３５、３６、４１、４２、４７、４８、５３および５４（以下に記載される）からなる群から選択される配列番号に記載のＣＤＲＬ２を含む免疫グロブリン軽鎖またはその関連するエピトープ結合部分を含む。いくつかの実施形態において、抗体剤は、抗体、ｓｃＦｖおよび／またはその関連するエピトープ結合部分である。
【０２７９】
本発明のいくつかの実施形態において、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合する抗体剤は、配列番号３７、３８、４３、４４、４９、５０、５５および５６（以下に記載される）からなる群から選択される配列番号に記載のＣＤＲＬ３を含む免疫グロブリン軽鎖またはその関連するエピトープ結合部分を含む。いくつかの実施形態において、抗体剤は、抗体、ｓｃＦｖおよび／またはその関連するエピトープ結合部分である。
【０２８０】
本発明のいくつかの実施形態において、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合する抗体剤は、配列番号５７、５８、６３、６４、６９、７０、７５および７６（以下に記載される）からなる群から選択される配列番号に記載のＣＤＲＨ１を含む免疫グロブリン重鎖またはその関連するエピトープ結合部分を含む。いくつかの実施形態において、抗体剤は、抗体、ｓｃＦｖおよび／またはその関連するエピトープ結合部分である。
【０２８１】
本発明のいくつかの実施形態において、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合する抗体剤は、配列番号５９、６０、６５、６６、７１、７２、７７および７８（以下に記載される）からなる群から選択される配列番号に記載のＣＤＲＨ２を含む免疫グロブリン重鎖またはその関連するエピトープ結合部分を含む。いくつかの実施形態において、抗体剤は、抗体、ｓｃＦｖおよび／またはその関連するエピトープ結合部分である。
【０２８２】
本発明のいくつかの実施形態において、タンパク質２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３または４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に特異的に結合する抗体剤は、配列番号６１、６２、６７、６８、７３、７４、７９および８０（以下に記載される）からなる群から選択される配列番号に記載のＣＤＲＨ３を含む免疫グロブリン重鎖またはその関連するエピトープ結合部分を含む。いくつかの実施形態において、抗体剤は、抗体、ｓｃＦｖおよび／またはその関連するエピトープ結合部分である。
【０２８３】
本発明は、下記のＣＤＲを任意の可能性のある組み合わせで含む抗体剤を意図している。限定的なものではない例として、本発明は、それぞれ配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号５８、配列番号６０および配列番号６２であるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３を含む抗体剤を包含する。
【０２８４】
所望のＣＤＲおよび／またはフレームワーク領域を有する抗体の製造は、当該分野で一般に知られており、例えばＳｔｒｏｈｌおよびＳｔｒｏｈｌ、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｗｏｏｄｈｅａｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｌｉｍｉｔｅｄ  ２０１２年に記載されている。
【化６】
2017532952.tif 000011
【化７】
2017532952.tif 000012
【０２８５】
抗体剤の形式
当業者は、本開示を読んで、提供される抗体配列、またはそのエピトープ結合部分が、任意の種々の免疫グロブリンに基づくまたは他のポリペプチド形式に有用に組み込まれ得、したがって、本発明の実施形態は、本明細書中に記載される配列エレメント、またはそのエピトープ結合部分を含む種々のポリペプチドおよびポリペプチド形式を含むことを理解するだろう。そのような提供されるポリペプチドおよびポリペプチド形式には、Ｂ７Ｈ３、特にそのＦＧループに特異的に結合するものが含まれる。いくつかの特定の実施形態において、提供されるポリペプチドおよび／またはポリペプチド形式は、ｍ８Ｈ９と、Ｂ７Ｈ３、例えばそのＦＧループへの結合について競合する。
【０２８６】
一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）
一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、広く知られており、当該分野において使用されている。一本鎖Ｆｖは、短いリンカーペプチドによって接続されていることが多い、免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）可変領域と軽鎖（ＶＬ）可変領域の融合タンパク質である（例えば、Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．  Ｃ．  Ｌｏ（編）、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ−Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  ２００４年、およびそこに引用されている参考文献を参照のこと）。
【０２８７】
本発明は、タンパク質Ｂ７Ｈ３に特異的に結合し、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６および２７（下記）からなる群より選択される配列番号に記載のポリペプチドを含む一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）も提供する。配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６および２７に記載のポリペプチドは、本明細書の実施例にさらに記載される。
【０２８８】
本発明のいくつかの実施形態において、ｓｃＦｖポリペプチドは、治療剤もしくは検出剤に結合体化されている、または、２４位におけるトレオニン、４２位におけるグリシン、５６位におけるアスパラギン酸残基、１０２位におけるグリシン残基、１５３位におけるトレオニン残基および１６７位におけるチロシン残基を含む。これらの６つの特定の位置における６つの特異的なアミノ酸残基は、実施例においてさらに記載される。
【０２８９】
本発明のいくつかの実施形態において、これらのアミノ酸残基は、相同なアミノ酸（すなわち、同様の特色を有するもの）で置換される。
【０２９０】
当業者に公知であるように、ｓｃＦｖの生成および本発明に係るそれらの改変は、当該分野において通例のものである（例えば、Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．  Ｃ．  Ｌｏ（編）、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ−Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  ２００４年、およびそこに引用されている参考文献を参照のこと）。
【０２９１】
本発明のいくつかの実施形態において、ｓｃＦｖポリペプチドは、第２のポリペプチドと融合される。
【０２９２】
本発明のいくつかの実施形態において、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６および２７からなる群より選択される配列番号に記載のｓｃＦｖポリペプチドは、配列番号２８または配列番号２９（下記）に記載の第２のポリペプチドと融合されて二重特異性タンデムｓｃＦｖが創出される。配列番号２８は、ペプチドリンカー配列、および、Ｔ細胞レセプター複合体の一部であるｓｃＦｖ結合ｈｕＯｋｔ３（抗ＣＤ３）のペプチド配列を含む。同様に、配列番号２９は、ペプチドリンカー配列、および抗ＤＯＴＡ  Ｃ８２５  ｓｃＦｖ抗体フラグメントのペプチド配列を含む。
【０２９３】
二重特異性タンデムｓｃＦｖの有用性は、広く知られており、当該分野において許容されており、また、本明細書の他の箇所に記載されている二重特異性抗体の有用性と同様である。当業者に公知であるように、ｓｃＦｖの生成およびそれらの改変（これだけに限定されないが、本発明に係る二重特異性タンデムｓｃＦｖの製造を含む）は、当該分野において通例のものである（例えば、Ｂｅｎｎｙ  Ｋ．  Ｃ．  Ｌｏ（編）、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ−Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  ２００４年、およびそこに引用されている参考文献を参照のこと）。
【０２９４】
いくつかの実施形態において、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６および２７からなる群より選択される配列番号に記載のポリペプチドを含むｓｃＦｖは、そのＣ末端が、配列番号２８または配列番号２９に記載のポリペプチドのＮ末端と融合される。いくつかの実施形態において、配列番号１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６および２７からなる群より選択される配列番号に記載のポリペプチドを含むｓｃＦｖは、そのＮ末端が、配列番号２８または配列番号２９に記載のポリペプチドのＣ末端と融合される。
【０２９５】
配列番号１７（ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVSLSCRASQSISDYLHWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０２９６】
配列番号１８（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ３．３  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０２９７】
配列番号１９（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．２  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASCKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGVGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSIGDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０２９８】
配列番号２０（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．１７  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWVGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTSTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQPISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGYSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０２９９】
配列番号２１（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．２２  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRPEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSIPGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０３００】
配列番号２２（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．２８  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLGSEDTAVYFCTRQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSSGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSIGDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０３０１】
配列番号２３（ｈｕ８Ｈ９クローンＳ７．２９  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYLELSSLGSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０３０２】
配列番号２４（ｈｕ８Ｈ９  ３．１  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０３０３】
配列番号２５（ｈｕ８Ｈ９  ４．１  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYTFTNYDINWVRQRPEQGLEWIGWIFPGDGSTQYNEKFKGRVTMTTDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTATWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLHWYQQKSHQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTISSLQPEDFGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０３０４】
配列番号２６（ｈｕ８Ｈ９  ５．１  ｓｃＦｖ）は、
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGRVTMTTDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSVSPGERVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHQAPRLLIKYASQSISGIPARFSGSGSGSEFTLTISSLQPEDFGVYYCQNGHSFPLTFGQGTKLELKR
である。
【０３０５】
配列番号２７（ｃｈ８Ｈ９  ６．１  ｓｃＦｖ）は、
QVQLQQSGAELVKPGASVKLSCKTSGYTFTNYDINWVRQRPGQGLEWIGWIFPGDDSTQYNEKFKGKATLTTDTSSSTAYMQLSRLTSEDSAVYFCARQTTGTWFAYWGQGTLVTVSAGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPATLSVTPGDRVTLSCRASQSISDYLYWYQQKSHESPRLLIKYASQSISGIPSRFSGSGSGSDFTLSINSVEPEDVGVYYCQNGHSFPLTFGAGTKLELKR
である。
【０３０６】
配列番号２８（リンカーｈｕＯＫＴ３（抗ＣＤ３）ｓｃＦｖ）は、
GGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDRFTISRDNSKNTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR
である。
【０３０７】
配列番号２９（リンカーＣ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＦｖ）は、
GGGGSGGGGSGGGGSHVKLQESGPGLVQPSQSLSLTCTVSGFSLTDYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRLNIYRDNSKNQVFLEMNSLQAEDTAMYYCARRGSYPYNYFDAWGCGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVIQESALTTPPGETVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQEKPDHCFTGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLIGDKAALTIAGTQTEDEAIYFCALWYSDHWVIGGGTRLTVLG
である。
【０３０８】
二重特異性抗体
二重特異性抗体は、広く知られており、当該分野において使用されている。二重特異性抗体は、２つ以上の異なる抗体に由来するフラグメントを含む人工タンパク質であり、したがって、２つ以上の異なるタイプの抗原に結合する。
【０３０９】
本発明のいくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、２本の異なる重鎖および２本の異なる軽鎖を含む。
【０３１０】
本発明のいくつかの実施形態において、二重特異性抗体剤、例えば二重特異性抗体は、２つの特異性を有し、そのうちの一方はＢ７Ｈ３に結合し、他方はＴ細胞上のＣＤ３またはＤＯＴＡに結合する。
【０３１１】
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書中に記載される免疫グロブリン軽鎖は、配列番号３０または配列番号３１（下記）に記載のポリペプチドと融合される。配列番号３０は、ペプチドリンカー配列、および、Ｔ細胞レセプター複合体の一部であるｓｃＦｖ結合ｈｕＯＫＴ３（抗ＣＤ３）のペプチド配列を含む。同様に、配列番号３１は、ペプチドリンカー配列、および、抗ＤＯＴＡ  Ｃ８２５  ｓｃＦｖ抗体フラグメントのペプチド配列を含む。得られた軽鎖−ｓｃＦｖ融合タンパク質は、次いで、本明細書中に記載される重鎖のいずれかと組み合わせられる。
【０３１２】
配列番号３０（リンカーｈｕＯＫＴ３（抗ＣＤ３）ｓｃＦｖ）
GGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCKASGYTFTRYTMHWVRQAPGKGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDRFTISRDNSKNTAFLQMDSLRPEDTGVYFCARYYDDHYCLDYWGQGTPVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASSSVSYMNWYQQTPGKAPKRWIYDTSKLASGVPSRFSGSGSGTDYTFTISSLQPEDIATYYCQQWSSNPFTFGQGTKLQITR
【０３１３】
配列番号３１（リンカーＣ８２５（抗ＤＯＴＡ）ｓｃＦｖ）
GGGGSGGGGSGGGGSHVKLQESGPGLVQPSQSLSLTCTVSGFSLTDYGVHWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGGTAYNTALISRLNIYRDNSKNQVFLEMNSLQAEDTAMYYCARRGSYPYNYFDAWGCGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQAVVIQESALTTPPGETVTLTCGSSTGAVTASNYANWVQEKPDHCFTGLIGGHNNRPPGVPARFSGSLIGDKAALTIAGTQTEDEAIYFCALWYSDHWVIGGGTRLTVLG
【０３１４】
免疫グロブリン軽鎖と配列番号３０または配列番号３１の融合、およびその後の免疫グロブリン重鎖との対形成により、異なるタイプの抗原に結合する二重特異性抗体が創出される。抗体融合タンパク質の生成は、当該分野において標準であり、広く知られており使用されている分子生物学的技法を使用して通例的に行われることが理解される。二重特異性抗体は、例えば、腫瘍細胞と免疫細胞を互いと繋ぐため（結合した抗原のうちの一方は腫瘍細胞上に位置し、他方の抗原は免疫細胞に位置する）に使用され得る。
【０３１５】
結合体
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される抗体剤は、ペイロード実体に関連する。いくつかの実施形態において、ペイロード実体は、治療剤であるかまたはそれを含む。いくつかの実施形態において、ペイロード実体は、検出剤であるかまたはそれを含む。
【０３１６】
治療剤
治療剤は、任意のクラスの化学的実体（例えば、タンパク質、炭水化物、脂質、核酸、有機小分子、非生物学的ポリマー、金属、イオン、放射性同位体などを含むが、これらに限定されない）であり得るかまたはそれらを含み得る。いくつかの実施形態において、本発明に従って使用するための治療剤は、癌の１つ以上の症状または原因の処置に関連する生物学的活性を有し得る。いくつかの実施形態において、本発明に係る使用のための治療剤は、免疫系の調節ならびに／またはＴ細胞媒介性細胞傷害の増強ならびに／またはＴ細胞の増殖および機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果の抑制に関連する生物学的活性を有し得る。いくつかの実施形態において、本発明に係る使用のための治療剤は、１つ以上の他の活性を有する。
【０３１７】
本発明のいくつかの実施形態において、結合体化された治療剤は、放射性同位体、薬物結合体、ナノ粒子、免疫毒素、または任意の他の治療用ペイロードである。
【０３１８】
検出剤
検出剤は、例えば、その特異的な機能特性および／または化学的特色に起因して、アッセイを用いて検出され得る任意の部分を含む。そのような作用物質の非限定的な例としては、酵素、放射標識、ハプテン、蛍光標識、リン光分子、化学発光分子、発色団、発光分子、光親和性分子、有色粒子、またはビオチンなどのリガンドが挙げられる。
【０３１９】
多くの検出剤は、当該分野で公知であり、抗体に付着するための系も当該分野で公知である（例えば、米国特許第５，０２１，２３６号；同第４，９３８，９４８号；および同第４，４７２，５０９号（各々が参照により本明細書中に援用される）を参照のこと）。そのような検出剤の例としては、とりわけ、常磁性イオン、放射性同位体、蛍光色素、ＮＭＲ検出可能物質、Ｘ線イメージング剤が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態において、常磁性イオンは、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）および／またはビスマス（ＩＩＩ）のうちの１つ以上である。
【０３２０】
放射性同位体は、アクチニウム２２５、アスタチン２１１、ビスマス２１２、炭素１４、クロム５１、塩素３６、コバルト５７、コバルト５８、銅６７、ユウロピウム１５２、ガリウム６７、水素３、ヨウ素１２３、ヨウ素１２４、ヨウ素１２５、ヨウ素１３１、インジウム１１１、鉄５９、鉛２１２、ルテチウム１７７、リン３２、ラジウム２２３、ラジウム２２４、レニウム１８６、レニウム１８８、セレン７５、硫黄３５、テクネシウム９９ｍ、トリウム２２７、イットリウム９０、およびジルコニウム８９のうちの１つ以上であり得る。放射標識された抗体剤は、当該分野において周知の技術に従って生成され得る。例えば、モノクローナル抗体は、ヨウ化ナトリウムおよび／もしくはヨウ化カリウム、ならびに化学的酸化剤（例えば、次亜塩素酸ナトリウム）または酵素的酸化剤（例えば、ラクトペルオキシダーゼ）との接触によって、ヨウ素化され得る。提供される抗体剤は、配位子交換プロセスによって、例えば、ペルテクネテート（ｐｅｒｔｅｃｈｎａｔｅ）を第一スズ溶液で還元し、還元されたテクネチウムをＳｅｐｈａｄｅｘカラム上にキレート化し、このカラムに抗体を適用することによって、テクネチウム９９ｍで標識され得る。いくつかの実施形態において、提供される抗体剤は、直接標識法を用いて、例えば、ペルテクネテート、ＳＮＣｌ２などの還元剤、フタル酸ナトリウム−カリウム溶液などの緩衝液、および抗体をインキュベートすることによって、標識される。金属イオンとして存在する放射性同位体を抗体に結合させるためにしばしば使用される中間官能基は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、または１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）、またはｐ−アミノベンジル−ＤＯＴＡ（ＤＯＴＡ−Ｂｎ）である。放射性同位体は、例えば、線量測定によって検出され得る。
【０３２１】
蛍光標識は、とりわけ、Ａｌｅｘａ３５０、Ａｌｅｘａ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ−Ｒ６Ｇ、ＢＯＤＩＰＹ−ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ−ＴＲＸ、カスケードブルー（Ｃａｓｃａｄｅ  Ｂｌｕｅ）、Ｃｙ３、Ｃｙ５、６−ＦＡＭ、フルオレセインイソチオシアネート（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  Ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）、ＨＥＸ、６−ＪＯＥ、オレゴングリーン（Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ）４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４、パシフィックブルー（Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ）、ＲＥＧ、ローダミングリーン（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｇｒｅｅｎ）、ローダミンレッド（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ  Ｒｅｄ）、レノグラフィン（Ｒｅｎｏｇｒａｐｈｉｎ）、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン（Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｒｈｏｄａｍｉｎｅ）および／またはテキサスレッド（Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ）のうちの１つ以上であってもよいしそれらを含んでもよい。
【０３２２】
本発明のいくつかの実施形態において、結合体化された検出剤は、診断剤またはイメージング剤である。
【０３２３】
結合体の調製
抗体剤を治療剤または検出剤に付着または結合体化するためのいくつかの技術が、当該分野で公知である。いくつかの付着技術は、例えば、抗体に付着された、有機キレート剤、例えば（ｓｕｃｈ  ａ）、ジエチレントリアミン五酢酸無水物（ＤＴＰＡ）；エチレントリアミン四酢酸；Ｎ−クロロ−ｐ−トルエンスルホンアミド；および／またはテトラクロロ−３α−６α−ジフェニルグリコウリル−３を使用する、金属キレート錯体の使用を含む（米国特許第４，４７２，５０９号および同第４，９３８，９４８号、各々が参照により本明細書中に援用される）。提供される抗体剤は、グルタルアルデヒドまたはペルヨーデートなどのカップリング剤の存在下において酵素とも反応し得る。フルオレセインマーカーとの結合体は、例えば、これらのカップリング剤の存在下において、またはイソチオシアネートとの反応によって、調製される。
【０３２４】
有用な抗Ｂ７Ｈ３抗体剤の同定および／または特徴付け
本開示は、Ｂ７Ｈ３のＦＧループを標的化する８Ｈ９抗体剤を含めた抗体剤が、Ｂ７Ｈ３の免疫阻害機能を遮断するために使用され得るという最初の実証を提供する。したがって、本開示は、そのような活性を有する抗体剤を同定および／または特徴付けることの望ましさを実証する。本開示は、そのような同定および／または特徴付けを実施するための種々の系も提供する。いくつかの実施形態において、例えば、結合は、直接評価される。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞の増殖、活性化および／または機能に対する効果が評価される。いくつかの実施形態において、免疫調節が評価される。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害および／または遮断が評価される。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞死、腫瘍細胞標的化および／またはエフェクター細胞の死滅が評価される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される８Ｈ９抗体剤との競合が評価される。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される８Ｈ９抗体剤と比較した治療有効性が評価される。
【０３２５】
組成物
本発明は、抗体剤、ｓｃＦｖ、またはヒト化抗体もしくはその抗原結合フラグメント、および、薬学的に許容され得るキャリアを含む薬学的組成物も提供する。
【０３２６】
本明細書中に提供される薬学的組成物は、滅菌された注射可能な形態（例えば、皮下注射または静脈内注入に適した形態）で提供され得る。例えば、いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、注射に適した液体の剤形で提供される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、注射の前に水性希釈剤（例えば、水、緩衝液、塩溶液など）で再構成される、粉末（例えば、凍結乾燥されたおよび／または滅菌された粉末）として必要に応じて真空下において提供される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、水、塩化ナトリウム溶液、酢酸ナトリウム溶液、ベンジルアルコール溶液、リン酸緩衝食塩水などに希釈および／または再構成される。いくつかの実施形態において、粉末は、水性希釈剤と静かに混合されるべきである（例えば、振盪されない）。
【０３２７】
本発明の一部として企図される薬学的組成物は、注射可能な薬学的組成物に限定されず、一般に知られており、当該分野において使用されているすべてのタイプの薬学的組成物を含む。
【０３２８】
いくつかの実施形態において、提供される薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に許容され得る賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、１つ以上の防腐剤を含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、防腐剤を含まない。本明細書中で使用されるときの賦形剤は、所望の特定の剤形に適しているような、溶媒、分散媒、希釈剤または他の液体ビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤などであり得るかまたはそれらを含み得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６）には、薬学的組成物を製剤化する際に使用される種々の賦形剤およびそれらの調製のための公知の手法が開示されている。任意の従来の賦形剤の媒質が、任意の望ましくない生物学的作用をもたらすこと、または別途、その薬学的組成物の他の任意の構成要素（単数または複数）と有害な様式で相互作用することなどによって、物質またはその誘導体と不適合である場合を除いては、その使用は、本発明の範囲内であると企図される。
【０３２９】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、冷蔵され得るおよび／または冷凍され得る形態で提供される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、冷蔵され得ないおよび／または冷凍され得ない形態で提供される。いくつかの実施形態において、再構成された溶液および／または液体剤形は、再構成後、ある特定の期間（例えば、２時間、１２時間、２４時間、２日間、５日間、７日間、１０日間、２週間、１ヶ月、２ヶ月またはそれ以上）にわたって保管され得る。
【０３３０】
液体の剤形および／または再構成された溶液は、投与前に粒子状物質および／または変色を含み得る。いくつかの実施形態において、溶液は、変色しているかもしくは濁っている場合および／または濾過後に粒子状物質が残留している場合、使用されるべきでない。
【０３３１】
本明細書中に記載される薬学的組成物の製剤は、薬理学の分野において公知のまたは今後開発される任意の方法によって調製され得る。いくつかの実施形態において、そのような調製方法は、活性成分を１つ以上の賦形剤および／または１つ以上の他の副成分と合わせる工程、ならびに次いで、必要であるおよび／または望ましい場合、生成物を所望の単一用量または複数回用量の単位に成形するおよび／または包装する工程を含む。
【０３３２】
本発明に係る薬学的組成物は、バルクで、単一単位用量として、および／または複数の単一単位用量として、調製され得、包装され得、かつ／または販売され得る。本明細書中で使用されるとき、「単位用量」は、所定の量の活性成分を含む薬学的組成物の分離した量である。活性成分の量は、通常、被験体に投与され得る用量および／またはそのような用量の好都合な一部分、例えば、そのような用量の２分の１または３分の１に等しい。
【０３３３】
本発明に係る薬学的組成物中の活性成分、薬学的に許容され得る賦形剤および／または任意のさらなる成分の相対量は、処置される被験体の正体、サイズおよび／もしくは状態に応じて、ならびに／または組成物が投与される経路に応じて、変動し得る。例としては、組成物は、０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
【０３３４】
使用
癌の処置および免疫抑制の緩和
本発明は、それを必要とする患者に、治療有効量の抗体剤、ｓｃＦｖ、またはヒト化抗体もしくはその抗原結合フラグメントを投与することによって癌を処置する方法も提供する。抗体剤の投与によって癌が処置されるかどうかは、本明細書の実施例に記載されているものを含めた公知の方法によって決定され得る。
【０３３５】
本発明は、それを必要とする患者に、治療有効量の抗体剤、ｓｃＦｖ、またはヒト化抗体もしくはその抗原結合フラグメントを投与することによって被験体における免疫系を調節し、かつ／またはＴ細胞媒介性細胞傷害を増強し、かつ／またはＴ細胞の増殖および機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制する方法も提供する。抗体剤の投与によって免疫系が調節され、かつ／またはＴ細胞媒介性細胞傷害が増強されるかどうかは、本明細書の実施例に記載されているものを含めた公知の方法によって決定され得る。
【０３３６】
いくつかの実施形態において、本発明は、例えば、それを必要とする患者に、治療有効量の抗体剤、ｓｃＦｖ、またはヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することによって被験体における免疫系を調節し、かつ／またはＮＫ細胞媒介性機能を増強し、かつ／またはＮＫ細胞の活性および／もしくは機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を抑制する方法を提供する。抗体剤の投与により、免疫系が調節され、かつ／またはＮＫ細胞の活性および／もしくは機能が増強されるかどうかは、本明細書中に記載されるものを含めた公知の方法によって決定され得る。
【０３３７】
いくつかの実施形態において、投与される正確な量は、医学分野において周知であるような１つ以上の要因に応じて被験体ごとに変動し得る。そのような要因としては、例えば、被験体の種、年齢、全般的な状態、感染の重症度、具体的な組成、その投与様式、活性の様式、処置される障害およびその障害の重症度；使用される特定の抗体剤の活性；投与される特定の薬学的組成物；投与後の組成物の半減期；被験体の年齢、体重、全般的な健康状態、性別および食事；使用される特定の化合物の投与時間、投与経路および排出速度；処置期間；使用される特定の化合物と併用されるまたは同時に使用される薬物などのうちの１つ以上が挙げられ得る。薬学的組成物は、投与を容易にするためおよび投与量を均一にするために投薬単位形態（ｄｏｓａｇｅ  ｕｎｉｔ  ｆｏｒｍ）で製剤化され得る。しかしながら、本発明の組成物の総１日使用量は、適切な医学的判断の範囲内で主治医によって決定され得ることが理解されるだろう。
【０３３８】
いくつかの実施形態において、投与される正確な量は、少なくともいくつかの実施形態において、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞の活性および／または機能のＢ７Ｈ３による抑制、阻害または遮断の調節を含む、本明細書中に記載される１つ以上の調節効果を有効に達成するための、本明細書中に記載される抗体剤の量であり得る。
【０３３９】
本発明に係る抗体剤および本発明に係るその薬学的組成物は、任意の適切な経路およびレジメンに従って投与され得る。いくつかの実施形態において、経路またはレジメンは、正の治療的利益と相関したものである。いくつかの実施形態において、経路またはレジメンは、ＦＤＡおよび／またはＥＰによって承認されたものである。
【０３４０】
本発明の薬学的組成物は、当業者によって認識されるように、任意の経路によって投与され得る。いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、経口（ＰＯ）、静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、動脈内、髄内（ｉｎｔｒａｍｅｄｕｌｌａｒｙ）、髄腔内、皮下（ＳＱ）、脳室内／心室内（ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ）、経皮的、皮膚間（ｉｎｔｅｒｄｅｒｍａｌ）、皮内、直腸（ＰＲ）、膣、腹腔内（ＩＰ）、胃内（ＩＧ）、局所的（例えば、粉末、軟膏、クリーム、ゲル、ローションおよび／または液滴によって）、粘膜、鼻腔内、頬側、経腸的、硝子体、舌下によって；気管内滴注、気管支滴注および／または吸入によって；経口スプレー、点鼻薬および／もしくはエアロゾルとして、ならびに／または門脈カテーテルを通じて、投与される。
【０３４１】
いくつかの実施形態において、本発明に係る抗体剤および／またはその薬学的組成物は、静脈内に、例えば、静脈内注入によって、投与され得る。特定の実施形態において、本発明に係る抗体剤および／またはその薬学的組成物は、筋肉内注射によって投与され得る。特定の実施形態において、本発明に係る抗体剤および／またはその薬学的組成物は、皮下注射によって投与され得る。特定の実施形態において、本発明に係る抗体剤および／またはその薬学的組成物は、門脈カテーテルを介して投与され得る。しかしながら、本発明は、薬物送達科学のありうる進歩を考慮して、任意の適切な経路による本発明に係る抗体剤および／またはその薬学的組成物の送達を包含する。
【０３４２】
いくつかの実施形態において、本発明に係る抗体剤および／または本発明に係るその薬学的組成物は、所望の治療効果を得るために、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇまたは約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ被験体体重／日を送達するのに十分な投与量レベルで投与され得る。所望の投与量は、１日あたり３回より多く、１日あたり３回、１日あたり２回、１日あたり１回、１日おき、２日おき、毎週、２週間毎、３週間毎、４週間毎、２ヶ月毎、６ヶ月毎または１２ヶ月毎に送達され得る。ある特定の実施形態において、所望の投与量は、複数回の投与（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４回またはそれ以上の投与）を用いて送達され得る。
【０３４３】
併用療法
本発明に係る抗体剤および／またはその薬学的組成物は、併用療法において用いられ得ることが、当業者によって認識されるだろう。
【０３４４】
併用レジメンにおいて使用される治療（例えば、治療薬または手技）の特定の組み合わせは、所望の治療薬および／または手技の適合性ならびに達成されるべき所望の治療効果を考慮し得る。本発明の薬学的組成物は、併用療法（例えば、併用抗体療法）において使用され得、つまり、その薬学的組成物は、１つ以上の他の所望の治療手順と同時、それらの前、またはそれらの後に、投与され得ることも認識されるだろう。
【０３４５】
治療有効量の本発明に係る抗体剤が、提供される薬学的組成物において少なくとも１つの他の活性成分と組み合わされ得る。いくつかの実施形態において、他の活性成分は、抗がん剤、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ＲＮＡポリメラーゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ヘリカーゼ阻害剤、免疫調節物質、アンチセンス化合物、低分子干渉ＲＮＡ、短ヘアピンＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ＲＮＡアプタマー、リボザイムおよびそれらの組み合わせである。併用レジメンにおいて使用する治療の特定の組み合わせは、通常、所望の治療薬および／または手技の適合性ならびに達成されるべき所望の治療効果を考慮し得る。使用される治療が、同じ障害に対して所望の効果を達成し得るか、またはそれらが、異なる効果を達成し得ることも認識されるだろう。
【０３４６】
使用される治療は、同じ目的のために所望の効果を達成し得るか、または異なる効果（例えば、任意の有害作用の制御）を達成し得ることが認識されるだろう。本発明は、薬学的組成物のバイオアベイラビリティを改善し得、その代謝を低下および／もしくは改変し得、その排出を阻害し得、ならびに／またはその体内分布を改変し得る作用物質と併用される薬学的組成物の送達を包含する。
【０３４７】
いくつかの実施形態において、併用して使用される作用物質は、それらが個々に使用されるレベルを超えないレベルで利用されるだろう。いくつかの実施形態において、併用して使用されるレベルは、個々に使用されるレベルより低いだろう。
【０３４８】
いくつかの実施形態において、併用療法は、単一のエピトープ（例えば、単一のコンフォメーションエピトープ）を対象とする複数の抗体剤の投与を含み得る。いくつかの実施形態において、併用療法は、異なるエピトープを認識する複数の抗体剤を含むことにより、例えば、腫瘍形成のプロセスにおける複数の機序が同時に干渉され得る。
【０３４９】
本発明に係る抗体剤の任意の順列または組み合わせが、任意の他の抗体剤と組み合わされることにより、複数の異なる抗体剤を含む組成物および／または併用療法レジメンが製剤化され得ることが、当業者によって認識されるだろう。
【０３５０】
核酸
ある特定の実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される抗体剤をコードする核酸（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む）を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書中に記載される抗体剤をコードする核酸に相補的な核酸を提供する。
【０３５１】
いくつかの実施形態において、本発明は、抗体剤をコードする核酸にハイブリダイズする核酸分子を提供する。そのような核酸は、例えば、プライマーまたはプローブとして使用され得る。ほんの少しの例を挙げると、そのような核酸は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）におけるプライマー、ハイブリダイゼーション（インサイチュハイブリダイゼーションを含む）のためのプローブおよび／または逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）のためのプライマーとして使用され得る。
【０３５２】
ある特定の実施形態において、核酸はＤＮＡまたはＲＮＡであり得、一本鎖または二本鎖であり得る。いくつかの実施形態において、核酸は、１つ以上の非天然ヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態において、核酸は、天然のヌクレオチドだけを含む。
【０３５３】
抗体剤、特に抗体およびそのエピトープ結合フラグメントをコードする核酸の生成および操作は当該分野で公知であり、例えば、これだけに限定されないが、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  ２０１２年に記載されている。
【０３５４】
本明細書中に記載される核酸は、広範に当該分野で公知の技術を使用して、当該分野で公知の多くの発現ベクターおよび発現系のいずれか１つにクローニングされ、次いで、選択された細胞にトランスフェクションされることにより、組織培養物中で核酸が発現され得る。この点について本発明の範囲内である細胞の非限定的な例は、概して免疫細胞、より具体的にはＴ細胞および他の抗原提示細胞である。例えば、ＧｒｅｅｎおよびＳａｍｂｒｏｏｋ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ  ２０１２年を参照のこと。
【０３５５】
以下の実施例は、本発明をさらに例証するものであるが、本発明の範囲をいかなる形でも限定するものと解釈されるべきではない。
【０３５６】
本明細書において引用される特許参考文献および非特許参考文献はすべて、その全体が参照により本明細書中に援用される。
【実施例】
【０３５７】
結果
ｃｈ８Ｈ９の結晶化
ｃｈ８Ｈ９  Ｆａｂフラグメントの結晶構造を、ＰＤＢエントリー（３Ｄ８５）を使用して分子置換によって決定し、２．５Å解像度に洗練させた。収集および洗練の統計値が表２に記載されている（解像度が最も高いシェルについての統計値が括弧内に示されている）。最終的なモデルはＰｒｏｔｅｉｎ  Ｄａｔａ  Ｂａｎｋ（アクセスコード５ＣＭＡ）に寄託された。
【０３５８】
ｃｈ８Ｈ９  Ｆａｂ構造は、すべてのＦａｂ構造に共通する免疫グロブリン折り畳みドメインを有し、そして抗原認識部位を形成する６つのＣＤＲループ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）は、明確に規定された電子密度を有した（図１を参照のこと）。ＤｅｌＰｈｉを使用して抗原結合部位の表面静電ポテンシャルを計算した（図１Ｃ；Ｒｏｃｃｈｉａ，  Ｗ．ら、２００２年、Ｊ．  Ｃｏｍｐｕｔ．  Ｃｈｅｍ．  ２３巻：１２８〜１３７頁）。結合部位の中心は、Ｌ３ループおよびＨ３ループが優位を占める正に荷電した表面領域の大きな領域を有する。負に荷電した表面領域の２つのポケット（Ｈ２ループ領域およびＬ１ループ領域における）が中心領域を挟むことから、８Ｈ９によって認識される抗原が、混合した表面電荷分布を有することが示される。
【表２】
2017532952.tif 000013
【０３５９】
ｍ８Ｈ９のヒト化
ｍ８Ｈ９の重鎖および軽鎖のＣＤＲを、重鎖についてはヒト生殖細胞系列配列ＩＧＨＶ１−４６および軽鎖についてはＩＧＫＶ−７に対するそれらの相同性に基づいてＩｇＧ１フレームワークに移植した。ヒト化重鎖の２つのバージョン、Ｈ１およびＨ２を生成し、Ｈ１の方がヒト鋳型配列をより多く含むものであった。ヒト化軽鎖の２つのバージョン、Ｌ１（配列番号２）およびＬ２（配列番号３）も生成し、Ｌ１の方がヒト鋳型配列をより多く含むものであった。次いで、ヒト化８Ｈ９  ＩｇＧ１抗体の４つのバージョンを、キメラ（ｃｈ）８Ｈ９  ＩｇＧ１とともに、クローニングし、発現させ、精製した（Ｈ１Ｌ１［配列番号１０、配列番号２］、Ｈ１Ｌ２［配列番号１０、配列番号３］、Ｈ２Ｌ１［配列番号１１、配列番号２］、およびＨ２Ｌ２［配列番号１１、配列番号３］）。
【０３６０】
図３および以下の表３は、表面プラズモン共鳴によって決定された、ｍ８Ｈ９およびｃｈ８Ｈ９のＢ７Ｈ３に対する結合特性を示す。どちらの抗体も非常に類似した結合動態を有した（それぞれ０．２８ｎＭのＫＤおよび０．７４ｎＭ）。
【０３６１】
図４および以下の表４は、４つのヒト化８Ｈ９（ｈｕ８Ｈ９）ＩｇＧ１の結合特性を示す。最も多くのヒト内容物を含む改変体Ｈ１Ｌ１（配列番号１０、配列番号２）は、他の３つの改変体よりも弱く（１１２ｎＭのＫＤ）Ｂ７Ｈ３に結合したが、他の３つの改変体も同様に最適以下の結合能しか示さなかった（３４．８〜３８．６ｎＭのＫＤ）。
【表３】
2017532952.tif 000014
【表４】
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【０３６２】
ｈｕ８Ｈ９のＢ７Ｈ３への結合を改善するために、ＣＨＡＲＭｍ力場を使用してｍ８Ｈ９の構造モデルを生成し、シミュレートした。インシリコ変異誘発を実施してあらゆる単一の可能性のあるヒト化変異の影響を分析した。以下の表５は、ｍ８Ｈ９の固有の構造の不安定化を導き得るフレームワーク領域の６つの変異（軽鎖：Ｓ２０Ｔ、Ｓ６９Ｔ、Ｌ１０６Ｉ；重鎖：Ｖ１２Ｋ、Ｒ４０Ａ、Ｅ４２Ｇ）を示す。これらの６つの変異の逆（軽鎖：Ｔ２０Ｓ、Ｔ６９Ｓ、Ｉ１０６Ｌ；重鎖：Ｋ１２Ｖ、Ａ４０Ｒ、Ｇ４２Ｅ）をｈｕ８Ｈ９  Ｈ１Ｌ２に導入して、ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３（配列番号１２、配列番号４）を創出した。変異は、抗体のヒト化および最適化の非標準的な方法であるインシリコエネルギー計算に基づいて生成した。抗体ヒト化の標準的な方法は、ＣＤＲ移植ならびにＣＤＲ残基に対する配列相同性および近傍に基づく復帰変異の生成を含む。構築物Ｈ１Ｌ１、Ｈ１Ｌ２、Ｈ２Ｌ１、およびＨ２Ｌ２は、標準のＣＤＲ移植方法によって生成した。
【表５】
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【０３６３】
ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３（配列番号１２、配列番号４）を相同性モデリングに基づいて設計した後、ｃｈ８Ｈ９  Ｆａｂフラグメントの結晶構造を２．５Åで分解した。ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３のヒト含量を増加させる取り組みにおいて、ＣＨＡＲＭｍ力場を用いてｃｈ８Ｈ９  Ｆａｂフラグメントの結晶構造をシミュレートし、インシリコ変異誘発を実施してあらゆる単一の可能性のあるヒト化変異の影響を再度分析した。以下の表６および表７は両方とも、８Ｈ９構造を安定化することが予測された軽鎖の７つの変異（Ｓ２０Ｔ、Ｅ４２Ｑ、Ｓ４３Ａ、Ｎ７６Ｓ、Ｖ７８Ｌ、Ｅ７９Ｑ、Ｖ８３Ｆ）および重鎖の５つの変異（Ｌ２０Ｖ、Ｋ６７Ｒ、Ａ６８Ｖ、Ｌ７０Ｍ、およびＡ７９Ｖ）を示す。これらの１２個のヒト化変異をｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３に組み込んで、ｈｕ８Ｈ９  ４．１（配列番号１４、配列番号６）を生成した。これらの変異は、抗体のヒト化および最適化の非標準的な方法であるインシリコエネルギー計算に基づいて生成した。
【表６】
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【表７】
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【０３６４】
酵母ディスプレイによる親和性成熟
特に望ましい親和性成熟されたヒト化８Ｈ９抗体の選択を助けるためにビオチン化Ｂ７Ｈ３構築物を使用した。この手法のために、マウスＦｃに融合された４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３をＤＧ４４  ＣＨＯ細胞において発現させた。ビオチン化に関しては、リシン（Ｋ）残基の側鎖およびポリペプチドのＮ末端の第一級アミノ基（−ＮＨ２）と効率的に反応させるために、ＮＨＳにより活性化されたビオチンを使用した。反応をしなかった過剰なビオチンを、限外濾過カラムを使用してサイズ排除によって除去した。Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃ抗原の成功したビオチン化を、ＥＬＩＳＡにおいて、ＨＲＰと結合体化されたストレプトアビジンで染色することによって検証した（図５Ａ）。マウス／ヒトキメラ８Ｈ９  ＩｇＧによるビオチン化Ｂ７Ｈ３−Ｆｃの検出から、ビオチン部分により８Ｈ９抗体によるＢ７Ｈ３−Ｆｃへの特異的結合は妨害されないことが確認された（図５Ｂ）。
【０３６５】
ヒト化ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３の親和性を増大させるために、これをｓｃＦｖに変換し、エラープローンＰＣＲによってランダムに変異誘発した。フローサイトメトリーによる変異体間の細かい識別を可能にするので、本発明者らは以前に、抗体のさらなる成熟化のための酵母ディスプレイの使用に成功した。したがって、ｃ−ｍｙｃタグを含むベクターを用いた相同組換えによって変異体ライブラリーを酵母細胞上に提示させた。比較的大きな（最大１０８）サイズの変異体酵母ライブラリーを生成し、まず、ビオチン化Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃが結合体化した磁気ビーズを使用することによって予備選択に供し、それにより、抗体を発現しないかまたは抗原に弱く結合した酵母細胞の排除を可能にした。次いで、ストリンジェントな条件下で変異体ライブラリーをＦＡＣＳによって数回選別してＢ７Ｈ３への結合を選択した（図６）。選別されたｓｃＦｖ改変体を、遺伝子全体のエラープローンＰＣＲによってさらに変異させて新しいサブライブラリーを得た。次いで、選別および変異誘発のプロセスを周期的に繰り返した。Ｂ７Ｈ３に最も強力に結合するクローンを成熟化の最終ラウンドから得た（図６）。Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃ抗原で染色したとき、選別の最終の（第７）ラウンドから得られた酵母は、親ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３（配列番号１２、配列番号４）を提示する酵母よりも有意に強力な結合を示した（図７）。これらの結果により、富化された酵母変異体では、変異誘発させていない親と比較して結合親和性が有意に増大したことが示された。成熟化の最終ラウンドから親和性が最も高いクローンを同定した。強力に結合したものの配列データをクラスター解析によって群分けした。以下のｓｃＦｖ改変体が繰り返し選択された：Ｓ７．２（配列番号１９）、Ｓ７．１７（配列番号２０）、Ｓ７．２２（配列番号２１）、Ｓ７．２８（配列番号２２）およびＳ７．２９（配列番号２３）（図８）。
【０３６６】
選択されたｓｃＦｖ変異体の結合特性
ＥＬＩＳＡにおいて、ＦＡＣＳにより選択されたｓｃＦｖ改変体は、Ｂ７Ｈ３の４Ｉｇ形態または２Ｉｇ形態のいずれかに対して、親ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３またはＳ３．３（選別３）を用いて観察されたものよりも良好な結合を示した（図９）。種々の８Ｈ９改変体の、ＣＭ５チップにコーティングされた４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３抗原への結合を、Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ−１００を使用して表面プラズモン共鳴によって比較した。ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３およびＳ３．３を含めたすべての選択された改変体の得られたＫＤ値を以下の表８に列挙する。
【表８】
2017532952.tif 000019
【０３６７】
親ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３およびＳ３．３に関して観察された、それぞれ１４４ｎＭおよび１０ｎＭの解離定数（ＫＤ）と比較して、第７の選別からのｓｃＦｖ改変体は、抗原に約６ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、２７７ｎＭおよび３ｎＭの解離定数（ＫＤ）で結合した。第７の選別からのｓｃＦｖ改変体の中で、ｓｃＦｖ  Ｓ７．１７、Ｓ７．２２およびＳ７．２９が最も高い結合親和性を示し、５０倍を超える親和性の改善を達成した。特に、ｓｃＦｖ  Ｓ７．２２（配列番号２１）では、親ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３  ｓｃＦｖ（配列番号１７）と比較して１００倍を超える結合の改善がもたらされた。
【０３６８】
親和性成熟されたｓｃＦｖ改変体による腫瘍細胞の免疫染色
本発明者らは、ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３  ｓｃＦｖ改変体（配列番号１７）、ｈｕ８Ｈ９  Ｓ３．３  ｓｃＦｖ改変体（配列番号１８）およびｈｕ８Ｈ９  Ｓ７．２２  ｓｃＦｖ改変体（配列番号２１）の神経芽細胞腫Ｍ１４細胞への結合を比較した（図１０）。本発明者らは、ｓｃＦｖ  Ｓ７．２２がｓｃＦｖ改変体Ｈｕ８Ｈ９およびＳ３．３よりも良好な結合を示すことを見出した。
【０３６９】
親和性を増強する重要な変異の決定
以下の表９は、親和性成熟選別された配列からの同定された６つの変異を列挙する（ＬＣ：Ｓ２０Ｔ、ＬＣ：Ｈ３４Ｙ、ＨＣ：Ａ２４Ｔ、ＨＣ：Ｅ４２Ｇ、ＨＣ：Ｇ５６Ｄ、ＨＣ：Ａ１０２Ｇ）。これらの変異のうち４つ（ＬＣ：Ｓ２０Ｔ、ＬＣ：Ｈ３４Ｙ、ＨＣ：Ａ２４Ｔ、ＨＣ：Ｅ４２Ｇ）は、第３ラウンドの選別から得られ（クローンＳ３．３［配列番号１８］）、その後、第７ラウンドの選別からのクローンの大部分に存在した。
【表９】
2017532952.tif 000020
【０３７０】
親和性が最も高いクローン、Ｓ７．２２は、さらなる変異を２つ有するものであった（ＨＣ：Ｇ５６Ｄ、ＨＣ：Ａ１０２Ｇ）。同定された変異のうち３つは、直接ＣＤＲ領域におけるものであった（ＬＣ：Ｈ３４Ｙ、ＨＣ：Ｇ５６Ｄ、ＨＣ：Ａ１０２Ｇ）。変異のうちの２つ（ＬＣ：Ｓ２０Ｔ、ＨＣ：Ｅ４２Ｇ）は、ヒト化のために使用されたヒト生殖細胞系列鋳型と同じ配列であった。
【０３７１】
親和性が増強されたヒト化された改変体
６つの親和性成熟変異（ＬＣ：Ｓ２０Ｔ、ＬＣ：Ｈ３４Ｙ、ＨＣ：Ａ２４Ｔ、ＨＣ：Ｅ４２Ｇ、ＨＣ：Ｇ５６Ｄ、ＨＣ：Ａ１０２Ｇ）をｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３配列（配列番号１２、配列番号４）に組み込んでｈｕ８Ｈ９  ３．１（配列番号２４）ｓｃＦｖおよびＩｇＧ１改変体を生成した。ｈｕ８Ｈ９  ４．１の配列（配列番号２５）には、親和性成熟から同定された変異のうちの１つ（ＬＣ：Ｓ２０Ｔ）がすでに含有されており、さらなる５つの変異（ＬＣ：Ｈ３４Ｙ、ＨＣ：Ａ２４Ｔ、ＨＣ：Ｅ４２Ｇ、ＨＣ：Ｇ５６Ｄ、ＨＣ：Ａ１０２Ｇ）を組み込んでｈｕ８Ｈ９  ５．１  ｓｃＦｖ（配列番号２６）およびＩｇＧ１改変体を生成した。
【０３７２】
ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３  ｓｃＦｖ改変体（配列番号１７）、ｈｕ８Ｈ９  ３．１  ｓｃＦｖ改変体（配列番号２４）、ｈｕ８Ｈ９  ４．１  ｓｃＦｖ改変体（配列番号２５）、およびｈｕ８Ｈ９  ５．１  ｓｃＦｖ改変体（配列番号２６）の結合動態を以下の表１０に示す。
【表１０】
2017532952.tif 000021
【０３７３】
見ることができるように、親和性成熟されていない配列の結合親和性と比較することにより、親和性増強性変異の付加によって実質的により高い結合親和性がもたらされた（ｈｕ８Ｈ９  ３．１について０．９ｎＭのＫＤおよびｈｕ８Ｈ９  ５．１について１．７ｎＭのＫＤ）。
【０３７４】
ＩｇＧ１抗体ｃｈ８Ｈ９（配列番号９、配列番号１）、Ｈ１Ｌ２（配列番号１０、配列番号３）、Ｈ３Ｌ３（配列番号１２、配列番号４）、３．１（配列番号１３、配列番号５）および５．１（配列番号１５、配列番号７）による４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−Ｆｃに対する結合動態を図１１および以下の表１１に示す。
【表１１】
2017532952.tif 000022
【０３７５】
標準のＣＤＲ移植技術によって設計されたヒト化改変体Ｈ１Ｌ２（配列番号１０、配列番号３）の結合は、ｃｈ８Ｈ９（配列番号９、配列番号１）よりも実質的に弱いものであった（ｈｕ８Ｈ９  Ｈ１Ｌ２について４２．７ｎＭのＫＤおよびｃｈ８Ｈ９について１．２ｎＭのＫＤ）。本明細書中に記載されるように、エネルギー計算および分子ダイナミクスシミュレーションに基づくコンピュータモデリングの新規の方法を本発明に従って利用してｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３を生成し、それにより親和性の実質的な改善がもたらされた（６．６ｎＭ）。親和性増強性変異を組み込むことにより、さらなる改善がもたらされ、ｃｈ８Ｈ９のものに匹敵する結合特性を有するｈｕ８Ｈ９  ３．１（配列番号１３、配列番号５）および５．１（配列番号１５、配列番号７）（それぞれ２．０および１．３ｎＭのＫＤ）がもたらされた。２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−Ｆｃへの結合に関して同様の増強が観察された（図１２および以下の表１２）。
【表１２】
2017532952.tif 000023
【０３７６】
ｃｈ８Ｈ９（配列番号９、配列番号１）ならびにｈｕ８Ｈ９  Ｈ１Ｌ２（配列番号１０、配列番号３）、ｈｕ８Ｈ９  ３．１（配列番号１３、配列番号５）、およびｈｕ８Ｈ９  ５．１（配列番号１５、配列番号７）のＢ７Ｈ３陽性黒色腫Ｍ１４腫瘍細胞への結合を試験し、得られたデータを図１３に示す。Ｈｕ８Ｈ９  ３．１およびＨｕ８Ｈ９  ５．１の結合は、ｃｈ８Ｈ９の結合に匹敵し、ｈｕ８Ｈ９  Ｈ１Ｌ２の結合よりも実質的に強力であった。
【０３７７】
ＩｇＧ構築物（ｍ８Ｈ９、ｃｈ８Ｈ９、ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３、およびｈｕ８Ｈ９  ３．１）のＦｃ融合を伴わない４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３および２Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３の両方に対する結合動態を決定した（表１３）。ｍ８Ｈ９抗体とｃｈ８Ｈ９抗体の両方が、２Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３に４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３よりも高い親和性で結合したことから、２Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３形式において結合性エピトープがより十分に露出している可能性が示唆される。ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３  ＩｇＧ（４Ｉｇ−Ｂ７３Ｈ３に対して３３ｎＭのＫＤおよび２Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３に対して４５ｎＭのＫＤ）は、ｃｈ８Ｈ９（４Ｉｇ−Ｂ７３Ｈ３に対して７．７ｎＭのＫＤおよび２Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３に対して２．７ｎＭのＫＤ）と比較して親和性が部分的に喪失した。親和性成熟されたｈｕ８Ｈ９  ３．１の親和性（４Ｉｇ−Ｂ７３Ｈ３に対して１３ｎＭのＫＤおよび２Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３に対して５．０ｎＭのＫＤ）は親ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３と比較して２．５〜９倍に増強した。ｈｕ８Ｈ９  ３．１はｃｈ８Ｈ９よりも高い親和性を有さなかったので、６つの親和性成熟変異（ＬＣ：Ｓ２０Ｔ、ＬＣ：Ｈ３４Ｙ、ＨＣ：Ａ２４Ｔ、ＨＣ：Ｅ４２Ｇ、ＨＣ：Ｇ５６Ｄ、ＨＣ：Ａ１０２Ｇ）をｃｈ８Ｈ９  ＩｇＧに組み込んでｃｈ８Ｈ９  ６．１を生成した。ｃｈ８Ｈ９  ６．１の結合動態は、４Ｉｇ−Ｂ７３Ｈ３に対して３．７ｎＭのＫＤおよび２Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３に対して０．６ｎＭのＫＤであり、ｃｈ８Ｈ９と比較して２〜４倍の結合の増強が実証された。
【表１３】
2017532952.tif 000024
【０３７８】
８Ｈ９抗体のインビトロ腫瘍死滅特性
次に、本発明者らは５つのＩｇＧ抗体構築物（ｍ８Ｈ９、ｃｈ８Ｈ９、ｃｈ８Ｈ９  ６．１、ｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３、およびｈｕ８Ｈ９  ３．１）のインビトロ腫瘍死滅ＡＤＣＣ特性を、神経芽細胞腫ＬＡＮ−１腫瘍細胞を標的として使用し、ヒトＰＢＭＣをエフェクター細胞として使用して試験した。細胞傷害性を５１クロム放出によって測定した（図１４および表１４）。ｍ８Ｈ９は、ヒトＰＢＭＣを用いてはＡＤＣＣ機能を有さず、これは、マウスＩｇＧ１アイソタイプであるためと予測される。ｃｈ８Ｈ９およびｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３構築物は、強力なＡＤＣＣを示した（それぞれ１．４μｇ／ｍＬおよび０．７μｇ／ｍＬのＥＣ５０）。ｃｈ８Ｈ９  ６．１（０．１μｇ／ｍＬのＥＣ５０）の細胞傷害性はｃｈ８Ｈ９の１４倍に改善され、ｈｕ８Ｈ９  ３．１（０．３μｇ／ｍＬのＥＣ５０）による死滅はｈｕ８Ｈ９  Ｈ３Ｌ３の２倍に増強され、ｃｈ８Ｈ９の５倍に増強された。
【表１４】
2017532952.tif 000025
【０３７９】
ヒト神経芽細胞腫異種移植片のインビボ標的化
８Ｈ９抗体構築物（ｍ８Ｈ９およびｃｈ８Ｈ９と比較してｈｕ８Ｈ９  ３．１およびｃｈ８Ｈ９  ６．１）のインビボ体内分布を、マウス異種移植片を使用して決定した。簡単に述べると、すべての抗体を、１３１Ｉで放射標識し、ＬＡＮ−１細胞に対するそれらのインビトロ免疫反応性を決定した（ｍ８Ｈ９：６９％、ｃｈ８Ｈ９：７５％、ｃｈ８Ｈ９  ６．１：７３％、およびｈｕ８Ｈ９  ３．１：５４％）。注入後４８時間の時点での各抗体のインビボ体内分布を、皮下神経芽細胞腫ＬＡＮ−１異種移植片を有するマウスを使用して分析した（図１５および表１５［Ａｖｇ：平均］）。１グラム当たりのパーセント注射用量（％ＩＤ／ｇｍ）によって測定される腫瘍取り込みは、ｍ８Ｈ９について８．９％、ｃｈ８Ｈ９について６．１％、ｃｈ８Ｈ９  ６．１について６．８％、およびｈｕ８Ｈ９  ３．１について１０．６％であった。腫瘍と正常な組織の比を表１６に示す（Ａｖｇ：平均）。試験されたすべての抗体が、ほとんどの組織について匹敵する腫瘍対非腫瘍比を有した。最も高い腫瘍取り込みはｈｕ８Ｈ９  ３．１で観察され、これは、ｃｈ８Ｈ９よりも統計学的に高く（ｐ＜０．０５）、腫瘍−血液比がｃｈ８Ｈ９よりも高かった（０．７２と比較して１．２６、ｐ＜０．０５）。ｃｈ８Ｈ９  ６．１ではわずかに低い腫瘍取り込みが観察されたが、腫瘍−血液比は匹敵するものであった。
【表１５】
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【表１６】
2017532952.tif 000027
【０３８０】
エピトープ決定
分子ドッキング技術を使用して、８Ｈ９の結合に関与するＢ７Ｈ３上の正確な分子エピトープを予測した。詳細には、ヒト２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３の相同性モデルを生成し、次いで、ＺＤＯＣＫを使用して、ｃｈ８Ｈ９  Ｆａｂの結晶構造を用いてドッキング実験を行った。図１６は、ドッキング計算から得られた予測モデルを示す。このモデルにより、８Ｈ９が２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＶ−ドメイン内のＦＧループのＩＲＤＦ配列（残基１２６〜１２９、配列番号３２）を特異的に結合することが示される。４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３では、この配列は２回存在する（Ｖ１ドメインの残基１２６〜１２９およびＶ２ドメインの残基３４４〜３４７）。ドッキングされた複合体の２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３相互作用残基の各々について予測される相互作用エネルギーを以下の表１７に示す。Ａｒｇ１２７およびＡｓｐ１２８は最も高い相互作用エネルギーを有する（それぞれ−５５．２ｋｃａｌ／ｍｏｌおよび−４６．３ｋｃａｌ／ｍｏｌ）。
【表１７】
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【０３８１】
分子モデリングに基づいて、２つの別々の２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃ構築物においてＲ１２７ＡおよびＤ１２８Ａ点変異を生じさせ、組換えによって発現させた。図１７は、ｃｈ８Ｈ９（配列番号９、配列番号１）の、２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３のＲ１２７Ａ変異体およびＤ１２８Ａ変異体に対する結合動態を、３つの市販の抗Ｂ７Ｈ３  ＭＡｂ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｉｅｒｃｅ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）のＭＩＨ４２および６Ａ１、およびＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）のクローン１８５５０４）の結合動態とともに示す。ＷＴ  ２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−Ｆｃへの結合、ならびに変異体Ｒ１２７ＡおよびＤ１２８Ａの相対的な結合の最大ＲＵを表１８に示す。ｃｈ８Ｈ９は、野生型構築物と比較して、Ｒ１２７Ａ変異に関しては結合のほぼ完全な喪失（９９．９％）を示し、Ｄ１２８Ａ変異に関しては結合の部分的な喪失（４０％）を示す。３つの他の抗Ｂ７Ｈ３抗体はいずれも、変異体Ｂ７Ｈ３タンパク質のいずれに対しても結合の実質的な喪失を示さなかった（すなわち、抗体ＭＩＨ４２およびクローン１８５５０４は、Ｒ１２７Ａ変異体およびＤ１２８Ａ変異体のどちらに対してもそれらのそれぞれの結合を約７０〜７５％を保持した；抗体６Ａ１はＷＴ  ２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３に対して弱い全体的な結合を有し、Ｒ１２７Ａ変異体に対して同じ結合またはＤ１２８Ａ変異体に対して上昇した結合のいずれかを有した）。ｃｈ８Ｈ９（配列番号９、配列番号１）と同様に、ｈｕ８Ｈ９  ３．１改変体（配列番号１３、配列番号５）およびｈｕ８Ｈ９  ５．１改変体（配列番号１５、配列番号７）も、結合の完全な喪失および部分的な喪失を示した（図１８）。これらの結合試験により、ｃｈ８Ｈ９がＢ７Ｈ３のＩＲＤＦ配列に対して一意的に特異的であることが実証された。ＳＰＲにより、ヒト化８Ｈ９構築物についてＲ１２７Ａ  Ｂ７−Ｈ３変異体およびＤ１２８Ａ  Ｂ７−Ｈ３変異体への結合の喪失も確認された。
【表１８】
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【０３８２】
免疫調節のためのＭＡｂ  ８Ｈ９の使用
Ｂ７Ｈ３のＩｇＶドメインのＦＧループが、当該タンパク質のマウスにおけるＴ細胞阻害機能において決定的な役割を果たすことが以前示されている。マウスＢ７Ｈ３は、２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３形態のみで存在し、阻害機能に関与する重大な配列はＩＱＤＦ（残基１２６〜１２９、配列番号８６）である。ｍ８Ｈ９およびクローン３．１および５．１がすべてヒトＢ７Ｈ３（配列番号３２）の相同なＩＲＤＦ配列（残基１２６〜１２９）に結合し、Ａｒｇ１２７に特異的に結合することを実証した。さらに、ｍ８Ｈ９およびそのヒト化形態は、Ｇｌｎ１２７を含むマウスＢ７Ｈ３には結合しない。試験された他の抗Ｂ７Ｈ３抗体とは異なり、８Ｈ９のみが、Ｂ７Ｈ３のＦＧループに結合させるために使用され得、Ｂ７Ｈ３の免疫阻害機能を遮断するために使用され得る。
【０３８３】
図１９は、Ｂ７Ｈ３陽性神経芽細胞腫ＩＭＲ−３２細胞がＴ細胞の増殖を阻害し得ることを示すデータを提示する。このアッセイでは、ＩＭＲ−３２細胞が存在する場合、Ｔ細胞の増殖の６０％の低下が観察された。キメラ８Ｈ９は、このＴ細胞の増殖に対する阻害効果を用量依存的に抑制し、さらには、腫瘍細胞の存在下でＴ細胞の増殖を増強する（図２０）。
【０３８４】
ｍ８Ｈ９がＴ細胞の機能に対するＢ７Ｈ３の阻害効果を克服し得るかどうかも試験した。抗Ｈｅｒ２×抗ＣＤ３二重特異性抗体（ｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖと融合したトラスツズマブ）を使用して、ｍ８Ｈ９がＨｅｒ２陽性、Ｂ７Ｈ３陽性ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ）のＴ細胞媒介性細胞傷害を増強し得るかどうかを試験した（図２１）。腫瘍細胞を８Ｈ９とともにプレインキュベートした場合、最大死滅が５８％（前処理なし）から７１％（８Ｈ９による前処理あり）まで増強されることが観察された。
【０３８５】
これらの実験のセットは、ｍ８Ｈ９およびその誘導体が免疫調節療法のために使用され得ることの最初の実証である。
【０３８６】
方法
相同性モデリング
８Ｈ９の可変領域の相同性モデルを、ＲＯＳＥＴＴＡ抗体モデリングサーバーおよびＤｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｔｕｄｉｏ  ３．０（Ａｃｃｅｒｌｙｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して生成した。
【０３８７】
Ｘ線結晶学
ｃｈ８Ｈ９のＦａｂフラグメントを、標準のＦａｂ調製キット（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使用してパパイン消化によって生成した。精製されたＦａｂフラグメントを２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ６．５中１０ｍｇ／ｍｌまで濃縮し、次いで、１６℃で、０．２Ｍの硫酸リチウム一水和物、０．１ＭのＢＩＳ−ＴＲＩＳ、ｐＨ６．５、および２５％ｗ／ｖポリエチレングリコール３，３５０（Ｈａｍｐｔｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ａｌｉｓｏ  Ｖｉｅｊｏ、ＣＡ）を含むＨａｍｐｔｏｎ  Ｉｎｄｅｘ試薬のレザバーに対する蒸気拡散によってハンギングドロップで結晶化した。タンパク質溶液１μｌとレザバー溶液１μｌを混合することによって小滴を形成させた。データをＡｒｇｏｎｎｅ  Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐｈｏｔｏｎ  Ｓｏｕｒｃｅ  ｂｅａｍｌｉｎｅ  ２４ＩＤＥで収集した。Ｆａｂ構造を、ＭｏｌＲｅｐ（ＣＣＰ４  ｓｕｉｔｅ）（Ｍｃｃｏｙ，  Ａ．  Ｊ．ら、２００７年、Ｊ．  Ａｐｐｌ．  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．  ４０巻：６５８〜６７４頁）を使用して分子置換によって解析した。最も良好な分子置換モデルを、Ｐｈｅｎｉｘ（Ａｄａｍｓ，  Ｐ．  Ｄ．ら、２０１０年、Ａｃｔａ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ  Ｓｅｃｔｉｏｎ  Ｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ  ６６巻：２１３〜２２１頁）を使用して洗練させ、マニュアルフィッティングを、Ｏ（Ｂａｉｌｅｙ，  Ｓ．、１９９４年、Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．  Ｄ  ５０巻：７６０〜７６３頁）を用いて行った。結晶構造を２．５Åで分解した。
【０３８８】
ｃｈ８Ｈ９構造の分子シミュレーション
ｃｈ８Ｈ９の結晶構造をＣＨＡＲＭｍ（ＣＨｅｍｉｓｔｒｙ  ａｔ  Ｈａｒｖａｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｃｓ）力場を使用してシミュレートし、変異タンパク質の折り畳み自由エネルギーと野生型タンパク質の折り畳み自由エネルギーとの間の差異から各点変異の影響を計算した。一般化されたＢｏｒｎ近似を使用して溶媒の影響を説明し、すべての静電項（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｔｅｒｍ）を、溶媒和エネルギーに寄与するクーロン相互作用および極性の合計として計算した。各点変異について、ファンデルワールス項、静電項、エントロピー項および非極性項の重み付けされた合計を計算した。すべての計算を、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｓｔｕｄｉｏ  ３．０（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して行った。正方向変異（ｆｏｒｗａｒｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）および逆方向変異（ｂａｃｋｗａｒｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）を、次世代ｈｕ８Ｈ９の安定性に対するそれらの影響について試験した。ＺＤＯＣＫソフトウェア（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡを通じて入手可能）を使用してドッキングシミュレーションを生成した。ＺＤＯＣＫ（Ｃｈｅｎ，  Ｒ．ら、２００３年、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ５２巻：８０〜８７頁）を使用してドッキングシミュレーションを生成し、ＭＯＤＥＬＬＥＲ（Ｓａｎｃｈｅｚ，  Ｒ．、およびＳａｌｉ，  Ａ．、１９９７年、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ補遺．  １巻：５０〜５８頁）を使用してＢ７Ｈ３の相同性モデリングを行った。ＤｅｌＰｈｉ（Ｒｏｃｃｈｉａ，  Ｗ．ら、２００２年、Ｊ．  Ｃｏｍｐｕｔ．  Ｃｈｅｍ．  ２３巻：１２８〜１３７頁）を使用して表面静電ポテンシャルを生成した。
【０３８９】
Ｂ７Ｈ３抗原のビオチン化
ヒトＢ７Ｈ３−マウス−Ｆｃ（ｍＦｃ）融合タンパク質の遺伝子を、ＣＨＯ細胞（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）における発現のために最適化した。ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）を使用して、当該遺伝子をＤＧ４４  ＣＨＯ細胞にトランスフェクションし、以前に記載されている通り発現させた（Ｃｈｅｕｎｇら、２０１２年、ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １巻：４７７〜４８６頁）。ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＢｉｏｔｉｎおよびＢｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｔｅｗｋｓｂｕｒｙ、ＭＡ）を製造者の説明書に従って使用してＢ７Ｈ３−ｍＦｃ融合タンパク質のビオチン化を行った。その後、ビオチン化タンパク質を、５０，０００ＭＷＣＯのＶｉｖａｓｐｉｎ遠心管（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  Ｓｔｅｄｉｍ、Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して濃縮し、ストレプトアビジン結合ＥＬＩＳＡにおいてそのビオチン化について試験した。
【０３９０】
エラープローンＰＣＲによる変異誘発
ｈｕ８Ｈ９  ｓｃＦｖ（Ｖ３）遺伝子全体のエラープローンＰＣＲを、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＧｅｎｅＭｏｒｐｈ（登録商標）ＩＩ  Ｒａｎｄｏｍ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔを製造者の説明書に従って使用して行った。簡単に述べると、１×Ｍｕｔａｚｙｍｅ  ＩＩ反応緩衝液、０．５μＭの、プライマーＥＲＲＯＲＦ（５’ＴＣＡＧＴＴＴＴＧＧＣＣＣＡＧＧＣＧＧＣＣ３’；配列番号８１）およびＥＲＲＯＲＲ（５’ＡＣＣＡＣＴＡＧＴＴＧＧＧＣＣＧＧＣＣＴＧ３’；配列番号８２）の各々、０．２ｍＭの（各々）ｄＮＴＰ、ＤＮＡ鋳型１ｎｇ、２μＭの８−オキソ−デオキシグアノシン三リン酸、２μＭの２’−デオキシ−ｐ−ヌクレオシド−５’−三リン酸、および２．５ＵのＭｕｔａｚｙｍｅ  ＩＩ  ＤＮＡポリメラーゼを含む５０μＬの反応でＰＣＲを行った。反応混合物を、９５℃で２分にわたって変性させ、９５℃で１分、６０℃で１分、および７２℃で１分のサイクルを３５回行い、最終的に７２℃で１０分にわたって伸長させた。ＰＣＲ産物を１％アガロースゲル電気泳動によって精製し、各々、１×ＮＥＢ  ＰＣＲ反応ミックス、１μＭのプライマーＹＤＲＤＦ（５’ＣＴＴＣＧＣＴＧＴＴ  ＴＴＴＣＡＡＴＡＴＴ  ＴＴＣＴＧＴＴＡＴＴ  ＧＣＴＴＣＡＧＴＴＴ  ＴＧＧＣＣＣＡＧＧＣ  ＧＧＣＣ３’；配列番号８３）およびＹＤＲＤＲ（５’ＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣ  ＣＣＴＣＡＧＡＡＣＣ  ＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡ  ＧＡＧＣＣＡＣＣＡＣ  ＴＡＧＴＴＧＧＧＣＣ  ＧＧＣＣＴＧ３’；配列番号８４）、エラープローンＰＣＲ産物１２０ｎｇ、および２．５ＵのＤＮＡポリメラーゼを含む４つの１００μＬのＰＣＲ反応で増幅した。反応を、３０サイクルを使用し、他は上記のように熱サイクルを行った。反応産物を１％アガロースゲル電気泳動によって精製し、水を用いた限外濾過によって濃縮した。
【０３９１】
酵母ライブラリーからのｈｕ８Ｈ９変異体の選択
親和性成熟のための酵母ライブラリーの構築および生育を、以前公開されたプロトコール（Ｚｈａｏら、２０１１年  Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  １０巻：１６７７〜１６８５頁）から改変した。蛍光細胞選別（ＦＡＣＳ）の前に、酵母ライブラリー（１×１０９細胞）を、マウス３Ｆ８  ＩｇＧとともに室温で１時間プレインキュベートし、逐次的に、ＰＢＳＡ緩衝液（ＰＢＳ中０．１％ＢＳＡ）中、Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃが結合体化した磁気ビーズ１０μｇに対して室温で１時間パニング（ｐａｎ）し、その後、磁気スタンドを用いて分離した。単離されたビーズをＰＢＳＡ緩衝液で３回洗浄し、ＳＤＣＡＡ培地１０ｍｌに再懸濁させ、３０℃の振とう機中、２５０ｒｐｍで終夜生育した。磁気ビーズから回収された酵母細胞をＳＧ／ＲＣＡＡ培地中、２５０ｒｐｍで振とうしながら２０℃で１８時間インキュベートした。第１のＦＡＣＳ選択のために、およそ１×１０８個の酵母細胞をペレット化し、ＰＢＳＡ緩衝液で２回洗浄し、１０μｇ／ｍｌのビオチン化Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃおよびマウス抗ｃ−ｍｙｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ）を含むＰＢＳＡ緩衝液１ｍｌに再懸濁させた。インキュベート後、酵母細胞を３回洗浄し、次いで、ＰＢＳＡ緩衝液１ｍｌに再懸濁させた。１：１００希釈のＲ−フィコエリトリンが結合体化したストレプトアビジン（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とＦＩＴＣが結合体化したヤギ抗マウス（Ｆａｂ）２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）の両方を選別される酵母細胞に添加し、その後、細胞を４℃で３０分間インキュベートし、ＰＢＳＡ緩衝液を用いて３回洗浄し、次いで、選別のためにＰＢＳＡ緩衝液に再懸濁させた。より高い抗原結合シグナルを選択するために選別ゲートを決定した。回収した細胞をＳＤＣＡＡ培地中３０℃で終夜生育し、次いで、次のラウンドの選別のためにＳＧ／ＲＣＡＡ中でインキュベートした。次の２回の選択のために、およそ１〜２×１０７個の酵母細胞を、それぞれ３μｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌのビオチン化Ｂ７Ｈ３を用いた染色のために使用した。酵母プラスミドを、Ｚｙｍｏｐｒｅｐ  ｙｅａｓｔ  Ｐｌａｓｍｉｄ  Ｍｉｍｉｐｒｅｐ  ＩＩ  Ｋｉｔ（Ｚｙｍｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｉｒｖｉｎｅ、ＣＡ）を製造者の説明書に従って使用して単離し、第２のライブラリー構築のための鋳型として使用した。第２のライブラリーの構築および選択を第１の酵母ライブラリーについてと同様に行った。しかし、第２の酵母ライブラリーは、それぞれ１μｇ／ｍｌ、０．２μｇ／ｍｌ、０．０５μｇ／ｍｌおよび０．０１μｇ／ｍｌのビオチン化Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃを用いた４回のＦＡＣＳ選択に供した。最後の選択からの細胞をＳＤＣＡＡプレートに広げた。モノクローナル酵母細胞を特徴付け、親和性が改善されたｓｃＦｖをコードする単離されたプラスミドについて配列決定した。
【０３９２】
可溶性ｓｃＦｖの発現および精製
ＳｃＦｖを以前に記載されている通り発現させ、精製した（Ｚｈａｏら、２０１１年、Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．  １０巻：１６７７〜１６８５頁）。ＨＢ２１５１細菌細胞を、ｓｃＦｖ配列を含むｐＣｏｍｂ３×プラスミドを用いて形質転換した。単一の新鮮なコロニーを、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび０．２％グルコースを含む２ＹＴ培地に接種した。培養物をイソプロピル−Ｌ−チオ−ｈ−Ｄ−ガラクトピラノシド（最終濃度０．５ｍＭ）によって誘導した。３０℃で終夜生育した後、細菌を５，０００×ｇで１５分間遠心分離した。細菌を３０℃で３０分間インキュベートすることによって可溶性ｓｃＦｖを細菌ペリプラズムから放出させた。透明な上清を回収し、Ｎｉ−ＮＴＡカラム上で精製した。すべての組換えｓｃＦｖがＦＬＡＧタグおよびＨｉｓタグを有した。
【０３９３】
ＩｇＧ構築物の発現および精製
８Ｈ９の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子構築物（ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）に基づく）をＣＨＯ−Ｓ細胞にトランスフェクションし、Ｇ４１８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用いて選択した。抗体産生株をＯｐｔｉＣＨＯ無血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）で培養し、次いで、上清を採取した。プロテインＡ−アフィニティーカラムを２５ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液／０．１５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．２を用いて予め平衡化した。結合した８Ｈ９を、０．１Ｍのクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ３．９を用いて溶出し、２５ｍＭのクエン酸ナトリウムおよび１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．２を用いて透析した。
【０３９４】
ＥＬＩＳＡ
Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃ（１００ｎｇ／ウェル）または２ＩｇＢ７Ｈ３（Ｒ＆Ｄ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）（２５ｎｇ／ウェル）を、ＰＢＳ中で終夜、ポリビニルマイクロタイタープレート上にコーティングした。次いで、プレートを、ＰＢＳ中０．５％ＢＳＡをウェル当たり１５０μｌで用いて室温で１時間ブロッキングした。抗体を、０．５％ＢＳＡ中段階希釈物を用いて３連で添加した。室温で１時間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄した後、ＨＲＰ−マウス抗ヒトＦｃ抗体、ＨＲＰ−ストレプトアビジン、またはＨＲＰ−マウス抗Ｆｌａｇ抗体を添加した。室温で１時間インキュベートし、さらに洗浄した後、呈色させ、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを使用して４９０ｎｍにおいて定量化した。
【０３９５】
フローサイトメトリー分析
表面上にｓｃＦｖを提示する酵母細胞を染色するために、細胞を、ＰＢＳＡ中異なる濃度（０．１μｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌ）のＢ７Ｈ３−ｍＦｃ抗原とともに氷上で３０分間インキュベートし、その後、二次抗体としてＡＰＣが結合体化した抗マウス抗体（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）とともにインキュベートした。腫瘍細胞を染色するために、細胞を培養培地中で採取し、１μｇ／ｍｌの精製されたｓｃＦｖとともにインキュベートし、その後、逐次的にマウス抗ｈｉｓ抗体およびＰＥ−抗マウス抗体とともにインキュベートした。ＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒ（商標）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ）を使用してフローサイトメトリーを行った。
【０３９６】
表面プラズモン共鳴による親和性の決定
簡単に述べると、Ｂ７Ｈ３抗原（２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３、２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃ、４Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３−ｍＦｃのいずれか）をＣＭ５センサーチップ上に疎水性相互作用によって直接固定化した。非特異的結合および屈折率の変化に関して参照表面を設定した。相互作用の動態を分析するために、種々の濃度のｓｃＦｖを、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、および０．０５％界面活性剤Ｐ−２０（ｐＨ７．４）を含むランニングバッファーを使用して３０μｌ／分の流量で注入した。会合段階と解離段階のデータを、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ３．２を使用することによって１：１モデルに同時に当てはめた。実験はすべて２５℃で行った。エピトープ決定のために、ＷＴ  ２Ｉｇ−Ｂ７Ｈ３、Ｒ１２７ＡおよびＤ１２８Ａをチップ上に固定化し、４００ｎＭのｃｈ８Ｈ９、ＭＩＨ４２、６Ａ１およびクローン１８５５０４を上記の通り注入した（接触時間１８０秒、解離時間６００秒）。
【０３９７】
Ｔ細胞増殖アッセイ
Ｔ細胞を、Ｐａｎ  Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）を使用してヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から精製した。神経芽細胞腫ＩＭＲ−３２細胞を８０Ｇｙで照射し、ＲＰＭＩ（ＧＩＢＣＯ）に１００，０００個／ｍｌで再懸濁させた。ＩＭＲ−３２細胞１×１０４個／ウェル（１００μｌ）を異なる濃度のｃｈ８Ｈ９（５０μｌ）とともに９６ウェル細胞培養プレートに添加し、室温で２時間インキュベートした。その後、２×１０５／ウェルの精製Ｔ細胞を、ＣＤ３／ＣＤ２８  ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）１．５μｌと混合し、ＩＭＲ−３２細胞とともにウェルに添加した。細胞を培養し、ＦＢＳおよび３０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２を補充したＲＰＭＩ中、３７℃で６日間維持した。Ｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ＣＣＫ−８）アッセイ（Ｄｏｊｉｎｄｏ  Ｍｏｌ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を製造者のプロトコールに従って使用してＴ細胞増殖を定量化した。
【０３９８】
Ｔ細胞媒介性細胞傷害性アッセイ
ＨＥＲ２（＋）およびＢ７Ｈ３（＋）ヒト子宮頸癌細胞（ＨｅＬａ）をＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ、２％Ｌ−グルタミン、および１％Ｐ／Ｓとともに３７℃で培養した。トリプシン／ＥＤＴＡを用いて細胞を採取し、１×１０６個の細胞を１００ｍＣｉの５１Ｃｒとともに、１００ｍｇ／ｍＬのＢ７Ｈ３特異的マウス抗体８Ｈ９を伴ってまたは伴わずに３７℃で６０分間インキュベートした。インキュベート後、細胞を２回洗浄し、標的細胞５，０００個を、９６ウェル丸底プレートの各ウェルに、Ｔ細胞とともに、それぞれ１：１０の比でプレーティングした。次いで、異なる濃度（１〜１×１０−６１ｍｇ／ｍＬ）の抗ＨＥＲ２×抗ＣＤ３二重特異性抗体（ｈｕＯＫＴ３  ｓｃＦｖと融合したトラスツズマブ）、そして１０ｍｇ／ｍＬのマウス８Ｈ９抗体を添加した（後者は、８Ｈ９抗体とともにプレインキュベートした細胞だけに添加した）。４時間インキュベートした後、上清を採取し、それらの放射能をシンチレーション計数器で測定した。腫瘍細胞の比溶解（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｌｙｓｉｓ）を次式に基づいて計算した：％比溶解＝（サンプルｃｐｍ−自発ｃｐｍ）／（最大ｃｐｍ−自発ｃｐｍ）×１００％。
【０３９９】
腫瘍細胞培養および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）アッセイ
神経芽細胞腫ＬＡＮ−１腫瘍細胞は、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｏｆ  Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓから入手した。細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）を補充したＲＰＭＩ１６４０（Ｃｅｌｌｇｒｏ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）中、３７℃、５％ＣＯ２加湿インキュベーターで培養した。ＡＤＣＣアッセイを以前に記載されている通り行った（Ｃｈｅｕｎｇ，  Ｎ．Ｋ．ら、２０１２年、Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １巻：４７７〜４８６５２頁）。簡単に述べると、ＬＡＮ−１神経芽細胞腫腫瘍細胞を５１Ｃｒで放射標識し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をエフェクターとして２５：１のエフェクター対標的比で使用した。細胞傷害性を５１Ｃｒ放出によって測定した。
【０４００】
異種移植マウスにおける抗体の体内分布
雌胸腺欠損ヌードマウス（６〜８週齢）をＨａｒｌａｎ  Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ，Ｉｎｃから購入した。すべての手順をＭｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ−Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコールおよび研究における適切かつ人道的な動物の使用に関する施設のガイドラインに従って行った。腫瘍細胞（ＬＡＮ−１）を採取し、マウスの側腹部の皮下に（ｓ．ｃ）移植した（各マウス当たり５×１０６個の細胞）。腫瘍体積がおよそ２００ｍｍ３になったとき、マウスのランダム化した群（ｎ＝４〜５／群、１種の放射標識された抗体調製物／群）に、５０μＣｉの１３１Ｉ放射ヨウ素標識された抗体（ＩＯＤＯ−ＧＥＮ法（Ｓａｌａｃｉｎｓｋｉ，  Ｐ．Ｒ．ら、１９８１年、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１７巻：１３６〜１４６頁；Ｈａｒｌｏｗ，  Ｅ．およびＤ．  Ｌａｎｅ、１９９９年、Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ：  ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ）に従って調製し、その後、商業的な予め充填されたＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５カラムを使用してＰＢＳ＋１％ＢＳＡにゲル濾過精製した；比放射能：１．６７〜３．８１ｍＣｉ／ｍｇ；抗体１３〜３０μｇ／用量）を静脈内注射した。新しく採取したＬＡＮ−１を用いたインビトロ細胞結合アッセイを使用して各トレーサーの免疫反応性を評価した。注射後（ｐ．ｉ．）、４８時間以内にマウスを屠殺し、臓器を取り出し、ガンマカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｗａｌｌａｃ  Ｗｉｚａｒｄ  ３）で計数した。これらの臓器には、皮膚、肝臓、脾臓、腎臓、副腎、胃、小腸、大腸、大腿、筋肉、腫瘍、心臓、肺、脊椎、および脳が含まれた。計数率をバックグラウンド補正および減衰補正し、同位体に特異的なシステム較正因子を使用して活性に変換し、投与された活性に対して正規化し、１グラム当たりのパーセント注射用量（％ＩＤ／ｇ）として表した。％ＩＤ／ｇｍの腫瘍対非腫瘍比も計算した。
【０４０１】
コンパートメント放射免疫療法における８Ｈ９の臨床使用
中枢神経系（ＣＮＳ）への転移
脳転移は、大きな被害を及ぼす合併症であり、ほとんどの固形腫瘍に関する癌治癒の主要な障害である。脳転移の生物学は十分に理解されておらず、管理が不十分であり、治癒は希少である（Ｍａｈｅｒ  ＥＡら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ６９巻：６０１５〜２０頁、２００９年）。血液または脳転移由来の腫瘍細胞は、ＣＳＦに浸潤し得、脳室から脊柱管までのＣＳＦの一定の流れによって神経軸索全体を通して、および皮質性凸にわたって散在し得、この状態は軟膜（ＬＭ）癌腫症と称される（Ｇｒｏｓｓｍａｎ，  Ｓ．Ａ．ら、１９９９年、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １３巻：１４４〜１５２頁；Ｂｒｕｎｏ，  Ｍ．Ｋ．ら、２００５年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ．  Ｒｅｓ．  １２５巻：３１〜５２頁；Ｇｌｅｉｓｓｎｅｒ，  Ｂ．ら、２００６年、Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．  ５巻：４４３〜５２頁）。
【０４０２】
ＬＭ癌腫症は、播種性全身転移を有する患者において最も一般的である（Ｗａｓｓｅｒｓｔｒｏｍ，  Ｗ．Ｒ．ら，１９８２年、Ｃａｎｃｅｒ  ４９巻：７５９〜７２頁；Ｂａｌｍ，  Ｍ．ら、１９９６年、Ａｒｃｈ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ５３巻：６２６〜３２頁；Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ，  Ｍ．Ｃ．ら、２００５年、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２３巻：３６０５〜１３頁）。同時実質性脳転移は珍しくない（患者の１１％〜３１％）（Ｗａｓｓｅｒｓｔｒｏｍ，  Ｗ．Ｒ．ら、１９８２年、Ｃａｎｃｅｒ  ４９巻：７５９〜７２頁；Ｆｒｅｉｌｉｃｈ，  Ｒ．Ｊら、１９９５年、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３８巻：５１〜５７頁；Ｐｏｓｎｅｒ，  Ｊ．Ｂ．、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ  Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ、Ｃｏｍｔｅｍｐｏｒａｒｙ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  Ｓｅｒｉｅｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｆ．Ａ．  Ｄａｖｉｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５年）。ＬＭ転移が髄腔内化学療法によってよく制御される白血病とは対照的に（Ｌｉｔｔｍａｎ，  Ｐ．ら、１９８７年、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｒａｄｉａｔ．  Ｏｎｃｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｐｈｙｓ．  １３巻：１４４３〜９頁）、固形腫瘍に関する予後は、化学療法および放射線療法の使用にもかかわらず非常に警戒される（Ｗａｓｓｅｒｓｔｒｏｍ，  Ｗ．Ｒ．ら、１９８２年、Ｃａｎｃｅｒ  ４９巻：７５９〜７２頁；Ｇｒｏｓｓｍａｎ，  Ｓ．Ａ．ら、１９９１年、Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｃｌｉｎ．  ９巻：８４３〜５６頁）。
【０４０３】
悪性腹水
悪性腹水（腹膜癌症）には広範な腹部および腹部外の腫瘍が伴う。リンパ性閉塞症および血管透過性がその病因の主要な因子である（Ｈｏｌｍ−Ｎｉｅｌｓｅｎ，  Ｐ．、１９５３年、Ａｃｔａ  Ｐａｔｈｏｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．  Ｓｃａｎｄ．  ３３巻：１０〜２１頁；Ｓａｎｇｉｓｅｔｔｙ，  Ｓ．Ｌ．ら、２０１２年、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．  Ｓｕｒｇ．  ４巻：８７〜９５頁）。悪性腹水により、タンパク質減少、電解質不均衡、びまん性浮腫および腹部敗血症が生じるので、患者の生活の質が有意に低下する。腹部腫瘍の中で、卵巣、子宮内膜、結腸直腸、胃、膵臓および腹膜の悪性疾患が悪性腹水に関連する。一部の試験では、胃腸癌の全患者の１５％に至るまでで、それらの疾患の一部の病期において悪性腹水が発症する（Ｓｍｉｔｈ，  Ｅ．Ｍ．ら、２００３年、Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．（Ｒ．  Ｃｏｌｌ．  Ｒａｄｉｏｌ）１５巻：５９〜７２頁；Ｋｏｐｐｅ，  Ｍ．Ｊ．ら、２００６年、Ａｎｎ．  Ｓｕｒｇ．  ２４３巻：２１２〜２２頁）。上皮性卵巣癌は、すべての女性生殖路癌の２５％を占めるが（米国において１年当たり新規の症例２２，２４０件、死亡１４，０３０件）、これらの患者の３分の２で悪性腹水が発症する（Ｅｓｋａｎｄｅｒ，  Ｒ．Ｎ．ら、２０１２年、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｗｏｍｅｎｓ  Ｈｅａｌｔｈ  ４巻：３９５〜４０４頁）。
【０４０４】
腹部外の腫瘍、例えば、乳癌、肺癌およびリンパ腫も、悪性腹水を引き起こすことが公知である。悪性腹水を有する全患者の２０％に至るまでで、原発腫瘍部位は不明である（Ｓａｉｆ，  Ｍ．Ｗ．ら、２００９年、Ａｎｎ．  Ｓａｕｄｉ  Ｍｅｄ．  ２９巻：３６９〜７７頁）。
【０４０５】
ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｏｓｉｓ（ＥＶＯＣＡＰＥ）試験によると、悪性腹水は、数ヶ月の生存期間中央値をもたらす有害な予後因子である（Ｓａｄｅｇｈｉ，  Ｂ．ら、２０００年、Ｃａｎｃｅｒ  ８８巻：３５８〜６３頁）。治癒的療法は存在しないが、待機的処置では不十分であり、有痛性死亡をもたらすことが多い（Ｓａｎｇｉｓｅｔｔｙ，  Ｓ．Ｌ．ら、２０１２年、Ｗｏｒｌｄ  Ｊ．  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ．  Ｓｕｒｇ．  ４巻：８７〜９５頁；Ｓｕｇａｒｂａｋｅｒ，  Ｐ．Ｈ．ら、２００６年、Ａｎｎ．  Ｓｕｒｇ．  Ｏｎｃｏｌ．  １３巻：６３５〜４４頁）。
【０４０６】
コンパートメント放射免疫療法（ｃＲＩＴ）を用いた以前の経験
悪性腹水およびＬＭ癌腫症に対する１つの手法は、コンパートメント放射免疫療法（ｃＲＩＴ）であり、その場合、放射標識された抗体をコンパートメント（腹膜腔またはＣＳＦ腔）に直接注射して放射線を腫瘍に標的化する。抗体９０Ｙ−ＣＣ４９（マウス抗ＴＡＧ−７２、≦２４ｍＣｉ／ｍ２）（Ａｌｖａｒｅｚ，  Ｒ．Ｄ．ら、２００２年、Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ８巻：２８０６〜１１頁）および抗体９０Ｙ−ＨＭＦＧ１（マウス抗ＭＵＣ１、６６６ＭＢｑ／ｍ２）（Ｖｅｒｈｅｉｊｅｎ，  Ｒ．Ｈ．ら、２００６年、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２４巻：５７１〜８頁）の腹腔内投与には、再発性卵巣癌の患者による耐容性があったが、この試験では、生存増加の証拠は示されなかった。抗体１３１Ｉ−８１Ｃ６（抗テネイシンＭＡｂ）を使用したＬＭ癌腫症を処置するための髄腔内投与および脳室内投与ならびに悪性脳腫瘍の腫瘍内療法により、患者の生存が延長された（Ｒｅａｒｄｏｎら、２００６年、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２４巻：１１５〜２２頁；Ｒｅａｒｄｏｎ，  Ｄ．Ａ．ら、２００８年、Ｎｅｕｒｏ．  Ｏｎｃｏｌ．  １０巻：１８２〜９頁）。抗体Ａｔ−８１Ｃ６の使用は、悪性神経膠腫における微小残存病変に対するα−粒子療法の１つの例である（Ｚａｌｕｔｓｋｙ，  Ｍ．Ｒ．ら、２００８年、Ｊ．  Ｎｕｃｌ．  Ｍｅｄ．  ４９巻：３０〜８頁）。
【０４０７】
ＣＳＦコンパートメントは、理想的には、高度に好都合な治療指数を達成するためのｃＲＩＴに適する
ＣＳＦ（包膜嚢（ｔｈｅｃａｌ  ｓａｃ））腔は、ｃＲＩＴに適した独特の特色を有する：（１）血液脳関門（ＢＢＢ）によりＭＡｂ再循環が予防される；（２）血液と比較してＣＳＦには白血球が少なく、したがって、ＦｃＲ（Ｎ）が存在せず、ＩｇＧが約１０００分の１である（Ｄａｖｓｏｎ，  Ｈ．、Ｓｅｇａｌ  ＭＢ：  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＳＦ  ａｎｄ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒｓ．  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、ＦＬ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９９６年、４８９〜５２３頁）。（３）ＣＳＦコンパートメントに注射されたＭＡｂは宿主免疫からより良好に遮蔽され、Ｆｃレセプターによる隔離または酵素による分解が少ない；（４）ＣＳＦのタンパク質含量が２００分の１（血清に対して）であることにより、ＭＡｂがその意図された標的に結合することが容易になる；（５）ＣＳＦ体積は小さい（１４０ｍｌ）ので、ＭＡｂにより非常に高いコンパートメント濃度が達成される；（６）ＣＳＦコンパートメントは７〜８時間毎に再生され、それにより、備え付けの（ｂｕｉｌｄ  ｉｎ）洗浄工程がもたらされる；（７）ＣＳＦの流れは薬理学的に減少され得、それにより、より長いＭＡｂ反応時間が可能になる；（８）特に、髄膜に腫瘍または外科手術による損傷がある場合、解剖学的関門の明らかな非存在により、ＣＳＦと脳の細胞外空間との間のＭＡｂの移動が容易になる（Ｄａｖｓｏｎ  Ｈ、Ｓｅｇａｌ  ＭＢ：  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＳＦ  ａｎｄ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒｓ．  Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、ＦＬ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、１９９６年、４８９〜５２３頁；Ｓｐｅｃｔｏｒ，  Ｒ．、Ｍｏｃｋ  Ｄ．Ｍ．、１９８８年、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．  Ｒｅｓ．  １３巻：２１３〜９頁）。
【０４０８】
ＣＮＳへの神経芽細胞腫転移
ＣＮＳへの神経芽細胞腫転移は、以前は稀であると考えられていた。過去１０年間のＭｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ＣｅｎｔｅｒにおけるＣＮＳへの転移性の神経芽細胞腫の患者６１名の遡及的分析において、ＣＮＳ  ＮＢを有する（頭蓋骨の骨性疾患の証拠がない）３４名の患者がＭＹＣＮ増幅疾患を有し、一方、９名が最初の診断時に腰椎穿刺を受け、これはどちらも公知の危険因子である（Ｋｒａｍｅｒ，  Ｋ．ら、２００１年、Ｃａｎｃｅｒ  ９１巻：１５１０〜９頁）。２名の患者が最初にＮＢが示された際にＣＮＳ疾患を有し、２名とも頭痛およびシャントを要する高頭蓋内圧を伴った。５７名の患者が診断から５〜６１ヶ月（中央値２１．７）の時点でＣＮＳ  ＮＢを有し、ＭＹＣＮ増幅コホート内の中央値は１８．５ヶ月であった。４０名の患者（６８％）が孤立性ＣＮＳ再発を有し、その中には単一の実質性病巣を伴う２６名（４４％）が含まれた。１９名（３２％）の患者において軟膜拡散が起こり、残りの患者は多巣性疾患を有した。ＮＢの自然歴は変化するので、孤立性ＣＮＳ再発により治癒が定義しにくくなり、現在ＭＳＫＣＣにおいて全身性疾患が「根絶された」患者の２０％超が苦しめられている（Ｃｈｅｕｎｇ，  Ｎ．Ｋ．ら、２０１２年、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ３０巻：３２６４〜７０頁）。外科的切除、化学療法および放射線を含めた従来の処置モダリティでは、患者の転帰が改善されていない（Ｃａｕｓｓａ，  Ｌ．ら、２０１０年、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｒａｄｉａｔ．  Ｏｎｃｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｐｈｙｓ．  ７９巻（１号）：２１４〜９頁；Ｃｒｏｏｇ，  Ｖ．Ｊ．ら、２０１０年、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｒａｄｉａｔ．  Ｏｎｃｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  Ｐｈｙｓ．  ７８巻（３号）：８４９〜５４頁）。
【０４０９】
Ｉｎｔｒａ−Ｏｍｍａｙａ１３１Ｉ−８Ｈ９を使用した第Ｉ相／第ＩＩ相試験における中枢神経系への転移性癌のｃＲＩＴ
髄腔内１３１Ｉ−モノクローナル抗体のファースト・イン・ヒューマンの使用は、第Ｉ相臨床試験において、好都合な毒性プロファイルおよび患者の転帰を伴って首尾よく試験された（Ｋｒａｍｅｒ，  Ｋ．ら、２００７年、Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ２５巻：５４６５〜７０頁）。このプラットフォームを使用して、１３１Ｉ−８Ｈ９を第Ｉ相／第ＩＩ相試験において試験した。患者は、２ｍＣｉの１３１Ｉ−８Ｈ９を受けた後にＳＰＥＣＴ（単一光子放射型コンピュータ断層撮影法）を用いて検査されたか、または１２４Ｉ−８Ｈ９のＯｍｍａｙａレザバーを通じた注射を受けた後にＰＥＴ（陽電子放出断層撮影法）を用いて検査された。線量測定計算のために、４８時間にわたって逐次的なＣＳＦおよび血液サンプルを取得した。およそ４時間、２４時間、および４８時間の時点でＳＰＥＣＴまたはＰＥＴスキャンを得た。注射前および注射４週間後にＭＲ脳および脊椎ならびにＣＳＦ細胞診を得た。患者が進行性疾患を発症していない限り１３１Ｉ−８Ｈ９の第２の注射を行った。急性副作用には、グレード１または２の発熱、頭痛または嘔吐、および時々の一過性のグレード３  ＡＬＴ上昇が含まれた。計算されたＣＳＦへの平均放射線量は３６．３（範囲１２．８〜１０６）ｃＧｙ／ｍＣｉであり；平均血液線量は２．５ｃＧｙ／ｍＣｉであった。１２４Ｉ−８Ｈ９／ＰＥＴにより、ＣＳＦ腔内の薬物分布に関する高解像度の画像がもたらされ、これは、１３１Ｉ−８Ｈ９療法によって送達された予測された線量とよく相関した。ＬＭ疾患のＸ線検査応答が見られた；急性副作用は限られていた。Ｏｍｍａｙａ内１３１Ｉ−８Ｈ９は比較的安全だと思われ、好都合な治療薬比を有し、髄質毒性以外、ＭＴＤにはまだ到達していない（線量当たり８０ｍＣｉ）。
【０４１０】
ＣＮＳ神経芽細胞腫を有する患者の生存の延長（Ｋｒａｍｅｒ  Ｋら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ  ９７巻：４０９〜１８頁、２０１０年；Ｋｒａｍｅｒ  Ｋら、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａ−０２４１、２０１４年）
Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｓｌｏａｎ  Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒにおける患者に、１３１Ｉ−８Ｈ９（ｎ＝３７）および１３１Ｉ−３Ｆ８（ｎ＝５）を使用したｃＲＩＴ、それに加えて３Ｆ８＋ＧＭＣＳＦ（顆粒球マクロファージコロニー刺激因子）（Ｇｐ１）を使用した全身免疫療法が組み込まれたテモゾロミド（ｔｅｍｏｚｏｌａｍｉｄｅ）／イリノテカンに基づくＣＮＳサルベージレジメンを行った。非レジメン処置では他の療法＋／−ｃＲＩＴ（Ｇｐ２、すべて１３１Ｉ−８Ｈ９）を使用した。疾患評価には、逐次的なＭＲ脳／脊椎、ＭＩＢＧ、ＣＴ、および骨髄が含まれた。ＣＮＳ  ＮＢを有する患者８３名のうち、ｃＲＩＴは、５６名（６７％）、サルベージレジメン後の４２名（５１％）（Ｇｐ１）において可能であり、３３％が複数の実質性腫瘤＋／−軟膜疾患を示した。Ｇｐ１において、２６名／４２名（６２％）の患者が健在し、平均全生存（ＯＳ）は８２．６ヶ月であり、これには軟膜疾患または複数の実質性腫瘤を有する５名／１４名（３５％）が含まれた。３名／４２名（７％）の死亡は、非ＮＢ合併症に起因するものであった。Ｇｐ２患者についてのＯＳは、１５％（平均２１ヶ月）であった。Ｇｐ２患者の中での唯一の長期間生存者には、ｃＲＩＴを受けた７名が含まれた（平均ＯＳ  ４２．８ヶ月）。全体的に見て、４７の患者（５６％）が、ＣＮＳだけが関与するＮＢ（ｎ＝１２、２５％）、全身だけが関与するＮＢ（ｎ＝１４、３０％）、ＣＮＳおよび全身が関与するＮＢ（ｎ＝１６、３４％）または毒性（ｎ＝５、１１％）により死亡した。処置に関連する毒性には、ＣＮＳ出血（１）および化学療法中の肺動脈弁閉鎖不全症（１）が含まれた。長期間生存者の死亡には、感染（１）、肺線維症（１）、およびＡＭＬ（１）が含まれた。放射線壊死は稀であった（Ｋｒａｍｅｒ，  Ｋ．ら、２０１４年、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａ−０２４６）。これは、ＣＮＳにおける最初の再発時にｃＲＩＴを用いた処置を受けた患者についての生存の有意な改善である。ｃＲＩＴレジメンは、以前の集中的な細胞傷害性の療法歴にもかかわらず、若年の患者による耐容性がよかった。ｃＲＩＴレジメンは、予測された生活の質よりも良好に生存を増大させる潜在性を有した。
【０４１１】
１３１Ｉ−８Ｈ９を用いた腹腔内（ＩＰ）ｃＲＩＴ（Ｍｏｄａｋ，  ＭＪら、ＡＳＣＯ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２０１３年）
線維形成性小円形細胞腫瘍（ＤＳＲＣＴ）および腹膜が関与する他の固形腫瘍を有する患者に対する１３１Ｉ−８Ｈ９を用いた腹腔内（ＩＰ）ｃＲＩＴの第Ｉ相試験は、小児および若年成人においてほぼ完了した（ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  ＮＣＴ０１０９９６４４）。青年期および若年成人の稀な肉腫であるＤＳＲＣＴは、通常、腹膜から生じ、侵攻性の多様式療法にもかかわらず、患者の８０％超で致死的である。再発は多巣性腹膜移植として示されることが多く、それにより、ＩＰ標的化に一意的に適するものになる。ＩＰ  ｃＲＩＴは、滞留時間の延長、および循環への遅い／不完全な移動により、ＩＰ疾患を選択的に標的化しながら、臓器毒性を最小化することができる。この試験では、患者３〜６名のコホートを、１３１Ｉ−８Ｈ９を３０ｍＣｉ／ｍ２〜６０ｍＣｉ／ｍ２の漸増線量で単回ＩＰ注射として用いて処置した。１３１Ｉ−８Ｈ９の前に２ｍＣｉのトレーサー線量の１２４Ｉ−８Ｈ９をＩＰで与えてＰＥＴ画像および体内分布データを取得した。逐次的な採血を使用して薬物動態学（ＰＫ）を試験した。重度に以前に処置された患者１５名（そのうち１３名はＤＳＲＣＴを有し、２名は横紋筋肉腫を有した）に処置を行い、３０ｍＣｉ／ｍ２、４０ｍＣｉ／ｍ２、５０ｍＣｉ／ｍ２の１３１Ｉ−８Ｈ９（各線量レベル３名）または６０ｍＣｉ／ｍ２（ｎ＝６）を受けさせた。線量制限毒性は見られなかった。３名の患者で、３つの別々の一過性であり、自己限定性であり、おそらく療法に関連するグレード３の毒性、それぞれ、好中球減少、肝臓トランスアミナーゼの上昇および血小板減少症が認められた。造血幹細胞レスキューが必要な患者はいなかった。血中半減期は、３２．５±１１．５時間（ｎ＝１２）であり、平均腹膜滞留時間は１４．６時間（ｎ＝３）であった。血液サンプル採取に基づく血液への平均吸収線量は０．５６±０．２１ｒａｄ／ｍＣｉ（ｎ＝１４）であった。腎臓、肝臓、肺および脾臓への平均吸収線量（ｒａｄ／ｍＣｉ）は、それぞれ１．７２、１．９２、０．６４および１．０３（ｎ＝３）であった。脱ハロゲン化は、些細であった：血液中でヨウ素の８０％超がタンパク質に結合したままであった（ｎ＝１０）。評価可能な疾患を有さない処置を受けたＤＳＲＣＴ患者７名のうち６名が寛解のままであり、中央値は１３１Ｉ−８Ｈ９後１１．１ヶ月であった。ＩＰ１３１Ｉ−８Ｈ９を使用したｃＲＩＴは安全であり、また、１２４Ｉ−８Ｈ９により有益なＰＫおよび線量測定データがもたらされた。最大許容線量には到達しなかったので、患者自然増加は９０ｍＣｉ／ｍ２までの処置まで増大した。
【０４１２】
以前に外照射放射線療法を用いた処置を受けた（Ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ  ＮＣＴ０１５０２９１７）非進行性びまん性橋グリオーマの患者に対する１２４Ｉ−８Ｈ９の対流増強送達（ＣＥＤ）
小児期のびまん性橋グリオーマ（ＤＰＧ）は、一様に致死的な状態であり、平均余命の中央値は診断からたった８〜１０ヶ月である。（Ｄｕｎｋｅｌ，  Ｉ．Ｊ．ら、１９９８年、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ．  ３７巻：６７〜７３頁；Ｋａｐｌａｎ，  Ａ．Ｍら、１９９６年、Ｐｅｄｉａｔｒ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ２４巻：１８５〜９２頁）。多分割照射療法および高用量化学療法を含めた革新的な臨床試験にもかかわらず、ＤＰＧの患者の生存は変化していない。組織内注入とも称されるＣＥＤは、均一な注入剤分散および分布容積を増強する、圧力依存性勾配に依拠する局部的な薬物送達の様式である。（Ｌａｓｋｅ，  Ｄ．Ｗ．ら、１９９７年、Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  ８７巻：５８６〜９４頁；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，  Ｐ．Ｆ．ら、１９９４年、Ａｍ．  Ｊ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ２６６巻：Ｒ２９２〜３０５頁）。小ゲージカニューレを実質または腫瘍内に定位的に設置し、注入剤を遅い一定速度で送達する。これは、全身投与された治療薬の脳内での高い局部的濃度および分布に対する天然の障害物を課すＢＢＢを迂回する。ＢＢＢがほとんどインタクトであるＤＰＧの場合では、経口的にまたは全身的に投与された抗癌療法はＣＮＳ浸透度が限られている。前臨床試験により、齧歯類脳幹における８Ｈ９のＣＥＤが安全であることが示されている（Ｌｕｔｈｅｒ，  Ｎ．ら、２００８年、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ６３巻：１１６６〜７４頁；Ｏｃｃｈｉｏｇｒｏｓｓｏ，  Ｇ．ら、２００３年、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ５２巻：３８８〜９４頁；Ｌｕｔｈｅｒ，  Ｎ．ら、２０１４年、Ｎｅｕｒｏ．  Ｏｎｃｏｌ．、印刷中）。さらに、ラット脳における免疫反応性Ｕ８７異種移植片における８Ｈ９の腫瘍内ＣＥＤ（Ｌｕｔｈｅｒ，  Ｎ．ら、２００８年、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ６３巻：１１６６〜７４頁）またはその免疫毒素（８Ｈ９−ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ外毒素）（Ｌｕｔｈｅｒ，  Ｎ．ら、２０１０年、Ｍｏｌ．  Ｃａｎｃｅｒ．  Ｔｈｅｒ．  ９巻：１０３９〜４６頁）も安全であることが見出されており、ナイーブな脳において同様の分布が見出されている。最後に、１２４Ｉ−８Ｈ９は、齧歯類ならびに霊長類の脳幹において組織内注入後の耐容性が良好であった（Ｌｕｔｈｅｒ，  Ｎ．ら、２０１４年、Ｎｅｕｒｏ．  Ｏｎｃｏｌ．：印刷中）。抗体注入の用量または体積いずれかを増大させることにより、８Ｈ９分布の体積を増加させることができる。１２４Ｉ−８Ｈ９は、線量測定および療法のための理想的なセラノスティック作用物質である。第Ｉ相臨床試験において、標準治療の一部として外照射放射線療法を受けたＤＩＰＧの患者は、各群の患者３〜６名で、１２４Ｉ−８Ｈ９のＣＥＤを４つの線量レベル（０．２５ｍＣｉ／注射、０．５ｍＣｉ／注射、０．７５ｍＣｉ／注射、および１ｍＣｉ／注射）で受けた。１ｍＣｉ／注射でＭＴＤに到達しなかった。ＰＥＴにより、１２４Ｉ−８Ｈ９は優れた腫瘍局在化を示した。ＣＥＤに由来する合併症はなく、また、有意な毒性（＞グレード２）は認められなかった。より高い１２４Ｉ−８Ｈ９線量レベルでの処置を受けた患者は履歴的な死亡までの時間の中央値を超えて生存した。３つのさらなる線量レベル（２．５ｍＣｉ、３．５ｍＣｉ、および４ｍＣｉ）を用いて線量漸増を継続するように試験を修正した。放射標識された８Ｈ９のＣＥＤは、他の孤立した浸潤性原発性または転移性脳腫瘍に適用され得る。
【０４１３】
等価物および範囲
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態の多くの等価物を、認識し得るか、またはただの通例のものにすぎない実験法を使用して確かめることができるだろう。本発明の範囲は、上記の明細書に限定されると意図されておらず、むしろ、添付の請求項に示されるとおりである。
【０４１４】
請求項において、「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」などの冠詞は、反対のことが示されていないかまたは別途文脈から明らかでない限り、１つまたは１つより多いことを意味し得る。反対のことが示されていないかまたは別段文脈から明らかでない限り、ある群の１つ以上のメンバーの間に「または」を含む請求項または明細書は、１つの、１つより多いまたはすべての群メンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、使用されているか、または別途関連していることを満たすとみなされる。本発明は、その群の厳密に１つのメンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、使用されているか、または別途関連している実施形態を含む。本発明は、１つより多いまたはすべての群メンバーが、所与の生成物またはプロセスに存在するか、使用されているか、または別途関連している実施形態を含む。さらに、本発明は、列挙される請求項の１つ以上からの１つ以上の制限、エレメント、節および記述用語などが別の請求項に導入されているすべてのバリエーション、組み合わせおよび順列を包含すると理解されるべきである。例えば、別の請求項に従属している任意の請求項は、同じ基本請求項に従属している他の任意の請求項に見られる１つ以上の制限を含むように改変され得る。さらに、請求項が、組成物を述べる場合、別段示されないか、または矛盾もしくは不一致が生じ得ることが当業者に明らかでない限り、本明細書中に開示される任意の目的のためにその組成物を使用する方法が含まれ、本明細書中に開示される任意の生成方法または当該分野で公知の他の方法に従ってその組成物を生成する方法が含まれる。
【０４１５】
エレメントが、リストとして、例えば、マーカッシュ群の形式で提示される場合、それらのエレメントの各部分群もまた開示され、任意のエレメント（単数または複数）がその群から除かれ得ることが、理解されるべきである。通常、本発明または本発明の態様が、特定のエレメント、特徴などを含むと言及される場合、本発明のある特定の実施形態または本発明の態様は、そのようなエレメント、特徴などからなるか、またはそれらから本質的になることが理解されるべきである。単純化するために、それらの実施形態は、本明細書中においてこの通りの言葉で具体的に示されてこなかった。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、オープンであると意図されており、さらなるエレメントまたは工程の包含を許容することに注意する。
【０４１６】
範囲が与えられる場合、終点は含まれる。さらに、別段示されないかまたは別段文脈および当業者の理解から明らかでない限り、範囲として表現された値は、文脈が明らかに他のことを指示しない限り、本発明の種々の実施形態において述べられた範囲内の任意の特定の値または部分範囲をその範囲の下限の単位の１０分の１まで想定し得る。
【０４１７】
さらに、従来技術の範囲内に含まれる本発明の任意の特定の実施形態は、請求項の任意の１つ以上から明白に除外され得ると理解されるべきである。そのような実施形態は、当業者に公知であるとみなされるので、それらは、その除外が本明細書中に明示的に示されなかったとしても、除外され得る。
【０４１８】
上でおよび本文全体を通して述べられた刊行物は、単に、本願の出願日より前にそれらの開示のために提供されただけである。先行開示を理由に本発明者らがそのような開示に先行する権利がないことを自認するものとして、本明細書中のいかなる記載も解釈されるべきでない。
【０４１９】
当業者は、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態の多くの等価物を、認識し得るか、またはただの通例のものにすぎない実験法を使用して確かめることができるだろう。本発明の範囲は、上記の明細書に限定されると意図されておらず、むしろ、以下の請求項に示されるとおりである。
【化８】
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【化９】
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【化１０】
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【化１１】
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【化１２】
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【化１３】
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【化１４】
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【化１５】
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【化１６】
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【化１７】
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【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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