(57)【要約】  本発明は、ＭＭＰ９に結合し、抗体の重鎖可変領域の少なくとも１つの断片および／または軽鎖可変領域の少なくとも１つの断片を含む新規タンパク質に関する。特に、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質はＭＭＰ９活性を中和することができ、炎症性疾患および／または自己免疫疾患または癌の予防および／または治療に有用である。特に、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質はＭＭＰ９関連疾患の診断に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＭＰ９に特異的な単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体またはその断片が、配列番号４１からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、配列番号４２からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、および配列番号４３からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸を含んでなるエピトープと相互作用することによってＭＭＰ９に結合し、ここで前記領域がヒトＭＭＰ９の触媒ドメイン内にある、単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項２】
（ｉ）配列番号２の重鎖ＣＤＲ１、または前記重鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号３の重鎖ＣＤＲ２、または前記重鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号４の重鎖ＣＤＲ３、または前記重鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む重鎖可変領域を含んでなる、請求項１に記載の単離抗体またはその抗原結合断片。
【請求項３】
重鎖可変領域が、配列番号１１、または重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２または３アミノ酸、および／または重鎖可変フレームワーク領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアントを含んでなる、請求項２に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項４】
前記重鎖可変領域が、
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１５のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号１６のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｖｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｖｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｉｘ）配列番号２０のアミノ酸配列
（ｘ）配列番号１１のアミノ酸配列
から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項２または３に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項５】
ａ）：
（ｉ）配列番号２１の軽鎖ＣＤＲ１、または前記軽鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号２２の軽鎖ＣＤＲ２、または前記軽鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号２３の軽鎖ＣＤＲ３、または前記軽鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む軽鎖可変領域、または
ｂ）：
（ｉ）配列番号２６の軽鎖ＣＤＲ１、または前記軽鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ２、または前記軽鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号２８の軽鎖ＣＤＲ３、または前記軽鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む軽鎖可変領域、
から選択される軽鎖可変領域をさらに含んでなる、請求項２〜４のいずれか一項に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項６】
軽鎖可変領域が、
（１）配列番号２４、または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２または３アミノ酸、および／または軽鎖可変フレームワーク領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、および
（２）配列番号２９、または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２または３アミノ酸、および／または軽鎖可変フレームワーク領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント
から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項５に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項７】
前記軽鎖可変領域が、
（ｉ）配列番号６７のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号６９のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号７０のアミノ酸配列
から選択されるアミノ酸配列を含んでなる、請求項５または６に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項８】
ＭＭＰ９の触媒活性を阻害する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項９】
ヒトモノクローナル抗体である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の単離抗体。
【請求項１０】
前記抗体が配列番号１９の重鎖可変領域および配列番号７０の軽鎖可変領域を含むものである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離抗体。
【請求項１１】
薬剤として使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の単離抗体またはその断片。
【請求項１２】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離核酸分子。
【請求項１３】
（１）配列番号３１、配列番号３２および配列番号３３、または前記配列のうちの１つと少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するそれらのバリアントを含む核酸配列、および／または
（２）
ａ）配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６、または前記配列のうちの１つと少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するそれらのバリアントを含む核酸配列、
ｂ）配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、または前記配列のうちの１つと少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するそれらのバリアントを含む核酸配列から選択される核酸配列を１つ以上含む、請求項１２に記載の単離核酸。
【請求項１４】
請求項１２または１３に記載の核酸分子を含む組換え発現ベクター。
【請求項１５】
請求項１４に記載の組換えベクターを含む宿主細胞。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその断片を産生するための方法であって、前記抗体またはその断片をコードする核酸配列を含む発現ベクターによって形質転換された宿主細胞を、前記抗体またはその断片の発現を促進するために十分な条件下で培養することを含んでなる、方法。
【請求項１７】
（ｉ）請求項１〜１０のいずれか一項に記載のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片、（ｉｉ）請求項１２または１３に記載の核酸、（ｉｉｉ）請求項１４に記載のベクターおよび／または（ｉｖ）請求項１５に記載の宿主細胞のうち１つ以上と、少なくとも１つの薬剤的に許容される担体とを含んでなる、医薬組成物。
【請求項１８】
ＭＭＰ９関連疾患の予防および／または治療に使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその断片。
【請求項１９】
ＭＭＰ９関連疾患が、炎症性および自己免疫疾患、炎症性腸疾患、癌または腫瘍、線維性疾患、循環器疾患、神経障害、眼病からからなる群より選択されるか、またはその他のいずれかのＭＭＰ９関連疾患もしくは疾患である、請求項１８に記載の使用のための抗体。
【請求項２０】
生体試料中のＭＭＰ９タンパク質の存在および／または濃度を検出するためのｅｘ  ｖｉｖｏ法であって、
（ｉ）被験体由来の生体試料を用意する工程、
（ｉｉ）前記生体試料を、少なくとも１つの請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片と、前記生体試料中に存在するＭＭＰ９タンパク質が前記少なくとも１つの抗体またはその断片へ抗原−抗体相互作用を介した結合をするのに十分な条件下で反応させる工程、そして
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）において形成された抗原−抗体複合体のレベルに比例したシグナルを検出する工程であって、
当該シグナル強度が生体試料中のＭＭＰ９タンパク質の濃度と相関するものである工程と
を少なくとも含んでなる、方法。
【請求項２１】
生体試料中の活性化ＭＭＰ９タンパク質の存在および／または濃度を検出するための、請求項２０に記載のｅｘ  ｖｉｖｏ法。
【請求項２２】
少なくとも１つの抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１９の重鎖可変領域および配列番号７０の軽鎖可変領域を含むものである、請求項２１に記載のｅｘ  ｖｉｖｏ法。
【請求項２３】
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の抗体または請求項１７に記載の医薬組成物を前記被験体に投与することを含んでなる、被験体の必要に応じてＭＭＰ９関連疾患を予防および／または治療するための方法。
【請求項２４】
ＭＭＰ９関連疾患が、炎症性および自己免疫疾患、炎症性腸疾患、癌または腫瘍、線維性疾患、循環器疾患、神経障害または眼病から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
抗体が配列番号１９の重鎖可変領域および配列番号７０の軽鎖可変領域を含む、請求項２３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特異的に結合し、前記タンパク質の活性を中和する抗体およびその断片に関し、またそれらの治療上または診断上の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）ファミリーは、構造的に関連する少なくとも２３の、可溶性または膜結合型の亜鉛依存性エンドペプチダーゼからなる。これらは、大まかには細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の再構築、および様々な生物活性分子の機能調節に関与する。
【０００３】
すべてのＭＭＰは、ＭＭＰを非活性型にとどめるプロドメインと、広範囲の細胞外マトリックス成分に作用する触媒ドメインとを含む、プロトタイプ構造を有する。
【０００４】
マトリックスメタロペプチダーゼ９（ＭＭＰ９）は、９２ｋＤａ  ＩＶ型コラゲナーゼまたはゼラチナーゼＢ（ＧＥＬＢ）としても知られる、ＭＭＰファミリー酵素のメンバーである。この酵素は、変性した基底膜コラーゲンの分解（Ａｇｒａｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００６  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０３，１００７−１０１９）、ならびにプロテアーゼ阻害物質（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８，４７５−４８２．）、ケモカイン（Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｓｔｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．２，７４７−７５６）、およびサイトカイン（Ｎｅｌｉｓｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｂｒａｉｎ  １２６，１３７１−１３８１）のような可溶性タンパク質のプロセシングによる炎症の促進に関与する。ＭＭＰ９はまた、増殖因子前駆体および受容体、チロシンキナーゼ受容体（ＴＫＲ）、細胞接着分子（Ｂａｕｖｏｉｓ，２０１２，Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ．１８２５（１）：２９−３６．）のような膜結合型分子のタンパク質分解によって、腫瘍細胞の遊走、浸潤、および転移も制御する。疾患時に、ＭＭＰ９は、多くの細胞型、例えば好中球、単球／マクロファージ、およびリンパ球のような白血球、ならびに線維芽細胞、筋線維芽細胞、上皮細胞、平滑筋細胞、内皮細胞、破骨細胞、および腫瘍細胞などから分泌される（Ｖａｎｄｏｏｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８（３）：２２２−７２）。
【０００５】
ＭＭＰ９の全体的なドメイン構造には、分泌リーダー配列、触媒の潜在期間に必要とされる抑制性のプロドメイン、共にコラーゲン結合ドメイン（ＣＢＤ）を形成する３つのフィブロネクチンＩＩ型様繰り返しループを含む「スプリット」触媒ドメイン、高度にグリコシル化されたプロリンリッチリンカー（ＯＧドメインとも称される）、およびヘモペキシン様Ｃ末端ドメイン（ＰＥＸ）が含まれる。
【０００６】
マトリックスメタロペプチダーゼ２（ＭＭＰ２）は、７２ｋＤａ  ＩＶ型コラゲナーゼまたはゼラチナーゼＡ（ＧＥＬＡ）としても知られる、ＭＭＰ９と同じファミリーに属する酵素である。ＭＭＰ２とＭＭＰ９とは、高いアミノ酸配列の同一性を示し（完全長タンパク質では４５．９％、触媒ドメインでは６３．２％）、特に触媒ドメインにおいて、非常に類似した３Ｄ構造を有する。このように高度な構造およびアミノ酸配列の相同性のため、ヒトＭＭＰ２に対して選択的な、抑制性の抗ヒトＭＭＰ９抗体を同定することは非常に難しい（Ｍｏｒｇｕｎｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８４：１６６７−１６７０）。
【０００７】
多くの急性炎症性疾患および自己免疫疾患の状態、線維性の状態、ならびに浸潤癌は、ＭＭＰ９が過剰であることに付随するため（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ，２００７，Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，６，４８０−４９８；Ｒａｍ  ｅｔ  ａｌ，２００６，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，（２６）４：２９９−３０７；Ａｉ  Ｚｈｅｎｇ，２００３，Ｃｈｉｎｅｓｅ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ，２２（２）：１７８−８４；Ｂａｕｇｈ  ｅｔ  ａｌ，１９９９，Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１１７：８１４−８２２；Ｓａｎｔｏｓ  ｅｔ  ａｌ，２０１３，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．，４３８（４）：７６０−４）；Ｈｅｒｓｚｅｎｙｉ  ｅｔ  ａｌ，２０１２，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．，１３，１３２４０−１３２６３；Ｌｉｊｎｅｎ，２００１，Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈａｅｍｏｓｔ，８６：３２４−３３；Ｒｏｓｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｓｔｒｏｋｅ  ３６：１４１５−２０；Ｗｈａｔｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．，２４：１０−１１；Ｙａｓｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ．，２５：３７２−８；Ｖａｓｓｉｌｉａｄｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，ＢＭＣ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１１：６）、この酵素は。治療的介入が期待される標的として、非常に注目されている。
【０００８】
ＭＭＰ９は、基底膜および細胞外マトリックス成分を消化することによって、腫瘍細胞の浸潤および転移に中心的役割を果たすことから、ＭＭＰ９の濃度上昇が、癌の進行、転移、および患者の生存期間の短縮に関連するという、臨床的及び実験的な強い証拠が示されている。ヒト好中球のＭＭＰ９に共有結合している好中球ゼラチナーゼ結合性リポカリン（ＮＧＡＬ）は（Ｔｒｉｅｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．，３１４，３８６−３８８）、タンパク質分解性の分解からＭＭＰ９を保護し、ＭＭＰ９の酵素活性を増大させることで、腫瘍の侵襲性および拡散を増大させる（Ｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６，３７２５８−３７２６５）。ＭＭＰ９／ＮＧＡＬ複合体の血清濃度が高いと、腎細胞癌における無進行生存期間が短く、全生存率が低い（Ｐｅｒｒｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｐｒｏｇ．Ｅｎ  Ｕｒｏｌ．Ｊ．Ａｓｓｏｃ．Ｆｒ．Ｕｒｏｌ．Ｓｏｃｉｅｔｅ  Ｆｒ．Ｕｒｏｌ．，２１，８５１−８５８）。
【０００９】
ＭＭＰ−９の役割は、特に、結腸直腸癌（Ｈｅｒｓｚｅｎｙｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｓｃｉ，．１３（１０）：１３２４０−６３）、膵臓癌（Ｇａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｍｅｄ  Ｏｎｃｏｌ．３２（１）：４１８）、乳癌（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ．１４（１）：９５９）、肺癌（Ｒｕｉｚ−Ｍｏｒａｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｕｍｏｕｒ  Ｂｉｏｌ．３６（５）：３６０１−１０）、卵巣癌（Ｎａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，５８：５０−６）、膀胱癌（Ｓｚａｒｖａｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｕｒｏｌ．，８（５）：２４１−５４）、および胃癌（Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．８（１）：５４６−５７）に関連する。
【００１０】
ＭＭＰ９の役割は、免疫病変、特に炎症性腸疾患（ＩＢＤ）において示されており、この疾患では、炎症の強い腸粘膜に発現するＭＭＰのうち、最も多いものがＭＭＰ９であること、およびその発現が疾患の活性とよく相関することが報告されている（Ｎａｉｔｏ  ａｎｄ  Ｙｏｓｈｉｋａｗａ，２００５，２６：３７９−３９０）。ＩＢＤにおいて、ＭＭＰ９は、組織の不十分な再構築と、活性化された白血球の動員を可能にする炎症誘発性サイトカインおよびケモカインの活性化とに、重要な役割を果たしていると考えられている（Ｎｕａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｂｏｗｅｌ  ０：１−１５）。さらに詳細には、クローン病（ＣＤ）患者において、肛門周囲瘻孔の瘻孔管に沿ったＭＭＰ９の発現増大および瘻孔の生検にみられるＭＭＰ９活性の増大が報告されていることは、ＭＭＰ９が、ＣＤの重度の合併症である瘻孔形成の一因となり得るという仮説を支持するものである（Ｅｆｓｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ｂａｓｉｃ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ．１０９（３）：２０８−１６）。さらに、ＮＧＡＬ／ＭＭＰ９の血清濃度の低下もまた、インフリキシマブによる治療を受けている潰瘍性大腸炎患者の粘膜治癒とも相関している（ｄｅ  Ｂｒｕｙｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓ．，２０，１１９８−１２０７）。
【００１１】
ＭＭＰ９の役割は、様々な神経障害、例えばアルツハイマー病（Ｍｒｏｃｚｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｓ  Ｄｉｓ．，３７（２）：２７３−２７８）、多発性硬化症（Ｍｉｒｓｈａｆｉｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｓｕｌｔａｎ  Ｑａｂｏｏｓ  Ｕｎｉｖ  Ｍｅｄ  Ｊ，，１４（１），１３−２５）、神経炎症または脳虚血（Ｃａｎｄｅｌａｒｉｏ−Ｊａｌｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  １５８（３）：９８３−９４）に関連している。アルツハイマー病において、戦略的に重要な脳領域でのタウオリゴマー形成における凝集促進作用は、ＭＭＰ９の潜在的な神経毒性副作用となり得る（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４  ＢｉｏＭｅｄ  Ｒｅｓ．Ｉｎｔ．，２０１４，ＩＤ９０８６３６：１−８）。ＭＭＰ９を介した分解の亢進によって細胞外の成熟型神経成長因子（ｍＮＧＦ）が分解された結果としての、ｍＮＧＦの減少は、軽度の認知機能障害およびアルツハイマー病における認知障害の部分的な病因となり得ることが示唆されてきた（Ｂｒｕｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．，６８（１２）：１３０９−１３１８）。
【００１２】
ＭＭＰ９の役割は、線維性疾患、例えば全身性硬化症、結合組織増殖症候群、骨髄移植レシピエントにみられる皮膚硬化型移植片対宿主病、腎性全身性線維症、ならびに肺線維症、肝線維症、および腎線維症のような臓器特異的疾患に関連している（Ｐｉｅｒａ−Ｖｅｌａｚｑｕｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．，１７９（３）：１０７４−８０，Ｐｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２（６）：１４０９−１４）。例えば最近の研究により、ＭＭＰ、特にＭＭＰ９が、尿細管細胞の上皮−間葉移行および常在する線維芽細胞の活性化、ならびに内皮−間葉移行および周皮細胞−筋線維芽細胞分化転換を通した腎線維症の発症および進行に関係していることが示された（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｎｅｐｈｒｏｌ．，２（３）：８４−９）。
【００１３】
ＭＭＰ９の活性は、様々な眼病の病態生理に関連している。幾つかの例として、水晶体の線維性病変（Ｎａｔｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｅｘ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．，８８（２）：３２３−３３０）、ＭＭＰ９の発現上昇に伴う角膜疾患（Ｓａｋｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｃｏｒｎｅａ  ３１，Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ５０−６）、患者の網膜および硝子体におけるＭＭＰ９の濃度が上昇している糖尿病性網膜症（Ｋｏｗｌｕｒｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ，２１（６）：７９７−８０５）、およびその病因にＭＭＰ９が関与していることが示された加齢性黄斑変性症（Ｎｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ｍｏｎｉｔ，２０：１００３−１６）が挙げられる。
【００１４】
循環器病は、細胞外マトリックスの再編成およびＭＭＰ９の活性化に付随する、炎症および組織再構築の変化に関与する。したがってＭＭＰ９は、高血圧症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全、および冠動脈疾患のような心疾患の病態生理に関連すると考えられている（Ｙａｂｌｕｃｈａｎｓｋｉｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２８（６）：３９１−４０３）。
【００１５】
さらに、ＭＭＰ９の役割は、皮膚疾患（Ｍｅｚｅｎｔｓｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｇｅｎｅ，５４０（１）：１−１０）、敗血症および急性炎症性ショック症候群（Ｌｏｒｅｎｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ  ９（４）：ｅ９４３１８；Ｑｕｉ  ｅｔ  ａｌ．２０１２，Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎ．，１５（７）：５５５−７０）、変形性関節症（Ｂｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ（Ｅｌｉｔｅ  Ｅｄ）．４：７４−１００）、化学療法により誘導された粘膜炎（Ａｌ−Ｄａｓｏｏｑｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，６４：１−９）、口腔疾患（Ａｌ−Ａｚｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｏｒａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ，１９：３４７−３５９）、骨硬化症（Ｔｅｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ  Ｒｅｓ．１４（１２）：２１０７−１７）、子宮内膜症（Ｐｉｔｓｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００９，Ｒｅｐｒｏｄ  Ｓｃｉ．，１６（８）：７１７−２６）、およびシャーガス病（Ｇｅｕｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ．，１３３（３）：２５７−７９）のような、様々な疾患群に関連している。
【００１６】
ＭＭＰ９の単量体および二量体は、どちらも様々な正常細胞および腫瘍細胞（Ｇｏｌｄｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，４５８３−４５９１）ならびに体液および組織において同定されていることから、両方の型に生理的な関係のあることが示唆される。タンパク質分解に加え、ヘモペキシンドメインを介したＭＭＰ９の二量体化は、ＭＭＰ９による細胞遊走の増強に必要であると考えられ（Ｄｕｆｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８５，３５９４４−３５９５６）、様々な癌腫、肉腫、腺肉腫、および白血病細胞株における、ＭＭＰ９の単量体と二量体の分泌パターンを調べた研究によれば、ＭＭＰ９、特に二量体の高い分泌濃度が、最も悪性度の高い癌細胞株と相関していることが明らかになった（Ｒｏｏｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．４４，９８６−９９２）。まとめると、これらの知見は、ＭＭＰ９のすべての天然型、特にＭＭＰ９二量体およびＮＧＡＬ／ＭＭＰ９複合体を効率的に阻害して、非常に悪性度の高い転移性癌を治療するために有効な、ＭＭＰ９中和薬の重要性を強調している。
【００１７】
歴史的に、ＭＭＰ阻害のための戦略は、活性化酵素の触媒部位と強く相互作用する小分子阻害物質の設計に焦点が当てられてきた。今日までこのアプローチは、部分的には用量制限毒性および筋骨格症候群のような重度の副作用のため、期待される臨床的ベネフィットへの応用ができなかった。ＭＭＰ９の触媒部位の構造は、ＭＭＰファミリーを通して高度に保存されていることから、この禁忌は、治療用量におけるＭＭＰの標的選択性が無いことに起因する可能性がある。
【００１８】
標的に対する抑制選択性がさらに高い、活性部位を標的とした小分子と比較すると、抗体または抗体断片は、はるかに大きなＭＭＰ９構造の部分と相互作用してこれを阻害すると考えられる。
【００１９】
ＭＭＰ９特異的な幾つかの抗体が先行技術に記載されており、例えば、マウスＡＢ００４１およびヒト化ＡＢ００４５（ＷＯ２０１３／１３００７８）、ならびにヒト５３９Ａ−Ｍ０２４０−Ｂ０３（ＵＳ２００９／０３１１２４５）、Ｍ０１６６−Ｆ１０（ＵＳ２００９／０３１１２４５およびＵＳ２０１１／０１３５５７３）、５３９Ａ−Ｍ０２３７−Ｄ０２（ＵＳ２００９／０２９７４４９およびＵＳ２０１１／０１３５５７３）、マウスＲＥＧＡ−３Ｇ１２（Ｍａｒｔｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００７，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １７７０，１７８−１８６）が挙げられる。これら先行技術の抗体の幾つかは、ＭＭＰ９およびＭＭＰ２の両方に結合すると記載されている。
【００２０】
したがって、ＭＭＰ９に対する高い親和性および特異性を示し、かつＭＭＰ２のようなその他のＭＭＰに対しては、弱いかまたは限定された親和性および／または特異性を示し、非ヒトＭＭＰ９相同分子種に対する交差反応性が改良されており、ヒトにおける免疫原性の減少および／または高い安定性のような、特にヒトの治療応用に適したさらなる性質を有する新規治療薬の開発が依然望まれている。
【発明の概要】
【００２１】
本発明は、ＭＭＰ９、特にヒトＭＭＰ９に結合するタンパク質に関し、本明細書に記載されるように、抗体の重鎖可変領域の少なくとも１つの断片および／または軽鎖可変領域の少なくとも１つの断片を含んでなるものである。
【００２２】
本発明の第１の態様は、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または断片が、配列番号４１からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、配列番号４２からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、および配列番号４３からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸を含んでなるエピトープと相互作用することによってＭＭＰ９に結合し、前記領域がヒトＭＭＰ９の触媒ドメイン内にある、単離抗体またはその抗原結合断片に関する。
【００２３】
本発明の第２の態様は、
（ｉ）配列番号２の重鎖ＣＤＲ１、または前記重鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号３の重鎖ＣＤＲ２、または前記重鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号４の重鎖ＣＤＲ３、または前記重鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む重鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【００２４】
本発明のさらに特定の態様は、上記の単離抗体であって、
ａ）：
（ｉ）配列番号２１の軽鎖ＣＤＲ１、または前記軽鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号２２の軽鎖ＣＤＲ２、または前記軽鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号２３の軽鎖ＣＤＲ３、または前記軽鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む軽鎖可変領域、または
ｂ）：
（ｉ）配列番号２６の軽鎖ＣＤＲ１、または前記軽鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ２、または前記軽鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号２８の軽鎖ＣＤＲ３、または前記軽鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む軽鎖可変領域、
から選択される軽鎖可変領域をさらに含む単離抗体を提供する。
【００２５】
本発明の第３の態様は、本明細書に記載する抗体またはその抗原結合断片をコードする、単離核酸分子に関する。
【００２６】
本発明の第４および第５の態様はそれぞれ、前記核酸分子を含む組換え発現ベクターおよび前記組換えベクターを含む宿主細胞に関する。
【００２７】
本発明の第６の態様は、本明細書に記載される、抗体またはその断片を産生するための方法であって、前記抗体またはその断片をコードする核酸配列を含む発現ベクターによって形質転換された宿主細胞を、前記抗体またはその断片の発現を促進するために十分な条件下で培養することを含む方法に関する。
【００２８】
本発明の第７の態様は、本明細書に記載される、（ｉ）ＭＭＰ９特異的な抗体もしくはその抗原結合断片、（ｉｉ）核酸配列、（ｉｉｉ）ベクター、および／または（ｉｖ）宿主細胞のうち１つ以上、および少なくとも１つの薬剤的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
【００２９】
本発明の第８の態様は、本明細書に記載される、１つ以上の抗ＭＭＰ９抗体またはその抗原結合断片を含むイメージング組成物または診断用組成物に関する。
【００３０】
本発明の第９の態様は、本明細書に記載される、１つ以上の抗ＭＭＰ９抗体またはその抗原結合断片を含むキットに関する。
【００３１】
本発明の第１０の態様は、炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患または癌または腫瘍または線維性疾患のようなＭＭＰ９関連疾患の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその製剤に関する。
【００３２】
第１１の態様は、炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患または癌または腫瘍または線維性疾患のようなＭＭＰ９関連疾患を予防および／または治療するための方法であって、被験体の必要に応じて治療上有効な量の前記抗体もしくはその断片または前記医薬組成物を投与することを含む方法に関する。
【００３３】
本発明のさらなる態様は、薬剤として使用するための、本発明の抗ＭＭＰ−９抗体またはその製剤に関する。
【００３４】
本発明のその他の特色および利点は、以下の詳細な説明によって明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】ヒトＭＭＰ９タンパク質の分子ドメイン構造の概略を示した図である。番号は、未熟ＭＭＰ９タンパク質のアミノ酸配列におけるアミノ酸の位置を示す。
【図２Ａ】ヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ）、ラットおよびマウスＭＭＰ９の、アミノ酸配列のアラインメントを示した図である。（＊）は、完全に保存された単一残基の位置を示し、（：）は、Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ２５０マトリックスのスコアが＞０．５であり、残基間の類似性質の保存度が高いことを示し、（．）は、Ｇｏｎｎｅｔ  ＰＡＭ２５０マトリックスのスコアが＜０．５であり、残基間の類似性質の保存度が低いことを示す。
【図２Ｂ】図２Ａの続き。
【図２Ｃ】図２Ｂの続き。
【図３】本発明の抗ＭＭＰ９抗体のヒト重鎖定常領域およびヒト重鎖可変領域を含む、代表的なヒト重鎖抗体断片の配列アラインメントを示した図である。重鎖抗体断片の配列は、重鎖可変領域の配列名によって分類し、名称の前に＊を付けた：＊Ｆ２０−ＶＨ、＊Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１、＊Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ１−Ｖ９、＊Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ１−Ｖ９−Ｖ１４、＊Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９、＊Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９−Ｖ１４。ＣＤＲは下線で示す。注釈は、図２に示したものと同じである。
【図４】本発明の抗ＭＭＰ９抗体のヒト軽鎖定常領域およびヒト軽鎖可変領域を含む、代表的なヒト軽鎖抗体断片の配列アラインメントを示した図である。軽鎖抗体断片の配列は、軽鎖可変領域の配列名によって分類し、名称の前に＊を付けた：＊Ｂ０３−ＶＬ、＊Ｂ０３−ＶＬ−ＧＬ１。ＣＤＲは下線で示す。注釈は、図２に示したものと同じである。
【図５】本発明の抗ＭＭＰ９抗体のヒト軽鎖定常領域およびヒト軽鎖可変領域を含む、代表的なヒト軽鎖抗体断片の配列アラインメントを示した図である。軽鎖抗体断片の配列は、軽鎖可変領域の配列名によって分類し、名称の前に＊を付けた：＊Ｂ０８−ＶＬ、＊Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６。ＣＤＲは下線で示す。注釈は、図２に示したものと同じである。
【図６】本発明の代表的な抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０３−ＶＬｃおよびＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント）の、ヒトプロＭＭＰ９（Ａ、Ｂ）およびヒト成熟ＭＭＰ９（Ｃ、Ｄ）に対する中和活性の用量設定を示した図である。Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０３−ＶＬｃバリアント（Ａ、Ｃ）、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｂ、Ｄ）。
【図７】本発明の代表的な抗ＭＭＰ９抗体の、様々な組換えヒトマトリックスメタロプロテイナーゼの触媒ドメインに対する中和活性を示した図である。
【図８】本発明の代表的な抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント；実線および黒記号）またはアイソタイプ対照（破線および白記号）の、好中球由来のヒト二量体ＭＭＰ９（丸）、ヒト単量体ＭＭＰ９（三角）およびヒトＮＧＡＬ−ＭＭＰ９複合体（四角）に対する中和活性の用量設定を示した図である。
【図９】本発明の代表的な抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント；実線および黒記号）または抗ＭＭＰ９比較抗体１（破線および白記号）の、ヒト好中球由来の、ＭＭＰ３により活性化されたヒト単量体ＭＭＰ９（三角）、二量体ＭＭＰ９（丸）およびＮＧＡＬ−ＭＭＰ９複合体（四角）に対する中和活性の用量設定を示した図である。
【図１０】組換えヒトＭＭＰ９抗原に対する抗ＭＭＰ９抗体の結合動態を示した図である。ＭＭＰ３により活性化されたＭＭＰ９（パネルＡおよびＢ）およびプロＭＭＰ９（パネルＣおよびＤ）の用量設定を、あらかじめ抗ＭＭＰ９抗体、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（パネルＡおよびＣ）および比較抗体１（パネルＢおよびＤ）が固定化されたＢＩＡｃｏｒｅセンサーチップ上で行った。結合動態のセンサーグラムについて報告する。レゾナンスユニット（ＲＵ）。すべてのｙ軸は応答（ＲＵ）、すべてのｘ軸は時間（秒）を表す。
【図１１】ヒトＭＭＰ９に対する抗ＭＭＰ９抗体の直接結合および競合的結合を示した図である。様々な濃度のビオチン化抗ＭＭＰ９抗体Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（黒丸）および比較抗体１（白丸）の、プロＭＭＰ９（パネルＡ）またはＭＭＰ３により活性化されたＭＭＰ９（パネルＢ）に対する直接結合能を、標準的なＥＬＩＳＡプロトコルを用いて評価した。ＭＭＰ９抗原は、２．５μｇ／ｍｌにてコートされた。対照は、ストレプトアビジン−ＨＲＰのみ（黒三角）、またはヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照とビオチン化抗ヒトＩｇＧ二次Ｆａｂ抗体（黒四角）とを用いた。  競合的結合実験（パネルＣ）のために、ＭＭＰ３により活性化され、コートされたＭＭＰ９を、緩衝液（抗体なし）または精製されたＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアントまたは比較抗体１（両方とも５０μｇ／ｍＬ）と共にプレインキュベートした後、至適用量のビオチン化比較抗体１（２．５μｇ／ｍＬ）またはＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（５０μｇ／ｍＬ）を用いて発色させた。パネルＡ、Ｂ、Ｃの結果は、各条件を二重に行い、補正吸光度（Ａ４５０−Ａ６２０）の平均±ＳＤによって表したものである。
【図１２】マトリゲルをコートされたトランズウェルを通した癌細胞株の浸潤に対する、抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント）の効果を示した図である。ＭＧＣ８０３ヒト胃癌細胞を、ホルボール−１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）、およびＭＭＰの広域化学阻害剤（ＧＭ−６００１）、抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ）、アイソタイプ対照または培地のみと共にインキュベートした。１６時間後にカルセイン−ＡＭを用いて浸潤細胞を定量化した。各条件を二重に行い、蛍光ユニットの平均およびＳＤを表す。
【図１３】ＤＳＳ誘導性のマウス大腸炎モデルにおける内視鏡スコアを示した図である。ＤＳＳ誘導後６日目に、マウスを抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント）またはアイソタイプ対照抗体によって処置した。Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアントの効果を黒い棒で、アイソタイプ対照の効果を斜線の棒で示す。両群の処置マウスに対して内視鏡スコアの平均およびＳＤを表す（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃについてはｎ＝５；アイソタイプ対照についてはｎ＝６）。群のデータの統計学的な比較（ＤＳＳ誘導後１４日目の、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ対アイソタイプ対照）を、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いた、二元配置、独立Ｔ検定によって行った。＊ｐ＝０．００５。
【図１４】抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント）またはアイソタイプ対照抗体によって処置したＤＳＳ誘導性大腸炎のマウスから得た大腸切片の、全組織学的スコア、浸潤物スコアおよび上皮損傷スコアを示した図である。（Ａ）全組織学的スコア、（Ｂ）浸潤物、（Ｃ）上皮損傷を示す。両群の処置マウスに対して、各基準の個々の値、平均およびＳＤを表す（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃについてはｎ＝５；アイソタイプ対照についてはｎ＝５）。
【図１５】ヘマトキシリン・エオシン染色を行った、マウス移植片の代表的な断面を示した図である。（Ａ）０日目−開かれた内腔と典型的な陰窩構造を有する、分離切除されたばかりの小腸。（Ｂ）アイソタイプ対照１４日目−アイソタイプ対照によって処置したマウスの１４日後の移植片では、腸管内腔が完全に閉塞している（ｎ＝５）。（Ｃ）Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント１４日目−抗ＭＭＰ９によって処置したマウスの１４日後の移植片では、腸管内腔が部分的に閉塞している（ｎ＝５）。
【図１６】シリウスレッドを用いて染色し、コラーゲン層の厚さを定量化した、マウス移植片の代表的な断面を示した図である。分離切除されたばかりの小腸（ＡおよびＢ）。マウスアイソタイプ対照によって処置したマウスの１４日後の移植片（ＣおよびＤ）。抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント）によって処置したマウスの１４日後の移植片（ＥおよびＦ）。透過光（Ａ、ＣおよびＥ）、偏光（Ｂ、ＤおよびＦ）を表す。（Ｇ）抗ＭＭＰ９−またはアイソタイプ対照によって処置したマウスから得た、異所性移植片のコラーゲン層の厚さの定量化を示す。両群の処置マウスから得た切片にみられるコラーゲン層の厚さの平均およびＳＤを表す（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃについては７２切片；アイソタイプ対照については６４切片）。群のデータの統計学的な比較（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ対アイソタイプ対照）を、Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いた、二元配置、独立Ｔ検定によって行った。＊＊＊ｐ＜０．０００１。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
定義
用語「マトリックスメタロプロテイナーゼ９」は、「ＭＭＰ９」と略称され、９２ｋＤａ  ＩＶ型コラゲナーゼ、９２ｋＤａ  ゼラチナーゼまたはゼラチナーゼＢ（ＧＥＬＢ）としても知られる酵素を指す。この酵素は、ヒトではＭＭＰ９遺伝子によってコードされ、その配列は受託番号ＥＮＳＧ０００００１００９８５としてＮＣＢＩに開示されている。ヒトＭＭＰ９の形態は、ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００４９８５．２として入手可能な、全長７０７アミノ酸の配列を含む（配列番号１）。ＭＭＰ９の全体的なドメイン構造には、分泌リーダー配列（配列番号１の残基１〜１９）、触媒の潜在期間に必要とされる抑制性のプロドメイン（配列番号１の残基２０〜１０６）、共にコラーゲン結合ドメイン（ＣＢＤ）を形成する３つのフィブロネクチンＩＩ型様繰り返しループを含む「スプリット」触媒ドメイン（配列番号１の残基１０７〜４４１）、高度にグリコシル化されたプロリンリッチリンカー（ＯＧドメインとも称される）（配列番号１の残基４４２〜５２０）、およびヘモペキシン様リピートＣ末端ドメイン（ＰＥＸ）（配列番号１の残基５２１〜７０７）（Ｒｏｗｓｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３１９：１７３−８１）が含まれる（図１）。分泌されたＭＭＰ９は、プロドメインにより、不活性な抑制型として維持される。タンパク質分解によってプロドメインが除去され、ＭＭＰ９の酵素活性が活性化されると、「活性化ＭＭＰ９」と称される。その触媒ドメインには、ゼラチン特異的な親和性を付与するゼラチン結合領域が含まれる。ゼラチンに加え、ＭＭＰ９は、コラーゲン（例えばコラーゲンＩＶおよびコラーゲンＶ）、エラスチン、ガレクチン３、エンタクチンおよびＩＣＡＭ−１（Ｒａｍ  ｅｔ  ａｌ，２００６，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６，２９９−３０７）、ならびにサイトカインおよびケモカイン（Ｏｐｄｅｎａｋｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１：２２：５２７−８１）のような、様々な基質を有する。
【００３７】
本明細書において、用語「抗体」は、抗原に結合するポリペプチドを指す。この用語には、抗体全体およびいずれかの抗原結合断片が含まれる。用語「抗体」は、本発明の特性、特に標的抗原への結合能、さらに詳細には、本発明の抗体によって認識されるものとしての、ＭＭＰ９の同じエピトープへの結合能が保持されている限りにおいて、その最も広い意味にて用いられ、この用語には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、およびさらに改変された抗体が含まれる。抗体およびその断片としては、可変ドメイン断片（「Ｆｖ」、抗体の片腕のＶＨおよびＶＬドメインからなる）、Ｆａｂ断片（ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１およびＣＬドメインからなる１価の断片）、Ｆａｂ２断片（２価）、Ｆａｂ３断片（３価）、Ｆａｂ’断片（ヒンジ領域を含むＦａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２断片（ヒンジ領域においてジスルフィド橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む、２価の断片）、Ｆｄ断片（ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる）、ｒＩｇＧ（還元型ＩｇＧまたは半ＩｇＧ）、ダイアボディ、トリボディ、テトラボディ、ミニボディ、１価の抗体、２以上の抗体の断片を含む２価または多価抗体、単鎖可変断片（ＳｃＦｖ）、ｂｉｓ−ｓｃＦｖ（二重特異性）、ならびにジスルフィド安定化Ｆｖ断片、ＣＤＲを含んだペプチド、および上記のいずれかのエピトープ結合断片のような、抗体の誘導体が挙げられる（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２３（９）：１１２６−１１３６）。抗体は、ジスルフィド結合によって相互に連結した少なくとも２本の重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖、またはその抗原結合断片を含む糖タンパク質を指す。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）と重鎖定常領域（ＣＨ）とを含む。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）と軽鎖定常領域（ＣＬ）とを含む。哺乳類では、重鎖はアルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）またはミュー（μ）であってよく、これらはそれぞれ抗体のクラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭを定義する。哺乳類では、軽鎖はラムダ（λ）またはカッパ（κ）のいずれかであってよい。哺乳類では、抗体のクラスに応じて、重鎖定常領域は、３つの免疫グロブリンドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧの場合）または４つの免疫グロブリンドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４（ＩｇＥおよびＩｇＭの場合）を含む。軽鎖定常領域は、１つの免疫グロブリンドメインであるＣＬを含む。抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤおよびＩｇＭ、ならびにそれらのいずれかのサブタイプの構造を有してよい。抗体は、特に霊長類（ヒトおよび非ヒト霊長類）を含むいずれかの源、および霊長類化された源に由来してよい。
【００３８】
本明細書で用いられる用語「可変ドメイン」または「可変領域」（軽鎖（ＶＬ）の可変ドメイン、重鎖（ＶＨ）の可変ドメイン）は、一対の軽鎖ドメインおよび重鎖ドメインの、抗体の抗原への結合に直接関与するドメインのそれぞれを指す。軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは同じ一般構造を有し、各ドメインは、その配列が広く保存されており、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と呼ばれる３つの「超可変領域」によって結合される４つのフレーム構造（「ＦＲ」）領域を含む。フレームワーク領域はβシート構造を取っており、ＣＤＲはこのβシート構造に結合するループを形成し得る。各鎖のＣＤＲは、フレームワーク領域によってその三次元構造を保ち、もう一方の鎖のＣＤＲと共に抗原結合部位を形成する。用語「抗体の抗原結合部位」が本明細書で用いられる場合、この用語は、抗原の結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。抗体の抗原結合部位は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基を含む。「フレーム構造」または「ＦＲ」領域は、本明細書で定義する超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。したがって、抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端へ向かって、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。ＣＤＲおよびＦＲ領域の残基は、Ｋａｂａｔらによる標準的な定義（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１），Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）に従って、慣習的に番号付けられる。他に表示の無い限り、本明細書ではこの方式の番号付けを用いる。Ｋａｂａｔ残基による指示は、アミノ酸残基の直鎖の番号付けに、常に直接対応しているわけではない。実際の直鎖アミノ酸配列は、基本的な可変ドメイン構造のフレーム構造または相補性決定領域（ＣＤＲ）に関わらず、構造の構成要素の短縮か、または構成要素内への挿入に対応して、厳密なＫａｂａｔの番号付けよりも少ないアミノ酸か、または追加のアミノ酸を含み得る。Ｋａｂａｔによる残基の正確な番号付けは、「標準」のＫａｂａｔによる番号付けを施された配列をもつ抗体の配列に相同的な残基のアラインメントによって、所定の抗体に対して決定され得る。Ｋａｂａｔ方式の番号付けによれば、重鎖可変ドメインのＣＤＲは、残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）および残基９５〜１０２（ＣＤＲ−Ｈ３）に位置する。Ｋａｂａｔ方式の番号付けによれば、軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）および残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）に位置する。
【００３９】
本出願では、他に指定されない限り、すべてのヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖可変ドメインの番号付けは「Ｋａｂａｔ方式の番号付け」（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１），Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２）に従っている。
【００４０】
本出願では、他に指定されない限り、すべてのヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインの番号付けは、「ＥＵ方式の番号付け」（Ｅｄｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，１９６９，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，６３（１）：７８−８５）に従っている。
【００４１】
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団、すなわち、集団を構成する個々の抗体が、わずかに存在する可能性のある天然の変異を除いて同一である集団から得られた抗体を指す。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位を標的とする。修飾語句「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体の特性を示すものであって、いずれかの特定の方法による抗体の産生が必要であると解釈されるものではない。
【００４２】
用語「キメラ抗体」は、一般に、１つの源または種に由来する可変領域および異なる源または種に由来する定常領域の少なくとも１部分を含み、通常は組換えＤＮＡ技術によって調製される抗体を指す。キメラ抗体の典型的な例として、マウス可変領域とヒト定常領域とを含む抗体が挙げられる。本明細書に定義されるように、この用語には、第１のヒト抗体のＣＤＲのうちの１つおよび第２のヒト抗体の定常領域の少なくとも１部分を含む抗体も含まれる。この用語にはまた、第１のヒト抗体の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびに第２のヒト抗体の軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む抗体も含まれる。
【００４３】
用語「ヒト化抗体」は、非ヒト種由来の抗体であって、前記非ヒト種に由来する１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する抗体を指す。ヒト化抗体は、任意に、そのＣＤＲが由来する非ヒト種由来のフレーム構造残基を１つ以上さらに含んでもよい。
【００４４】
用語「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」は、重鎖ならびに軽鎖両方の可変領域および定常領域がすべてヒト由来であるか、ヒト由来の配列と実質的に同じであるが、必ずしも同じ抗体に由来するものではない抗体を指す。
【００４５】
用語「単離抗体」は、その天然環境の構成要素から分離された抗体を指す。例えば単離抗体は、電気泳動（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えばイオン交換または逆相ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー））法を含む当該技術分野の方法（例えばＦｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ，２００７，Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｂ  Ａｎａｌｙｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ，８４８：７９−８７を参照）によって決定された、９５％または９９％を超える純度まで精製されたものである。
【００４６】
用語「ポリヌクレオチド」または「核酸分子」は、ヌクレオチドを含む高分子化合物を指す。核酸分子の例として、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ロックド核酸（ＬＮＡ）、相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）が挙げられる。
【００４７】
「ポリペプチド」は、通常の、または例えば等配電子ペプチド（ｉｓｏｓｔｅｒｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ）のような修飾されたペプチド結合によって互いに結合した少なくとも２つのアミノ酸を含む、ペプチド、オリゴペプチド、オリゴマーまたはタンパク質として理解される。ポリペプチドは、遺伝コードによって定義された２０アミノ酸以外のアミノ酸から構成されてよい。ポリペプチドは、翻訳後成熟過程のような天然の過程によって、または当業者に公知の化学的な過程によって修飾されたアミノ酸から同等に構成されてよい。このような修飾については、文献中に十分に説明されている。これらの修飾は、ポリペプチド内のいずれの箇所でも、すなわちペプチド骨格内、側鎖、またはカルボキシもしくはアミノ末端であっても出現し得る。例えばポリペプチド修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、フラビンの共有結合固定、ヘムの共有結合固定、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合固定、脂質または脂質誘導体の共有結合固定、ホスファチジルイノシトールの共有結合固定、共有結合性または非共有結合性の架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、システイン形成、ピログルタミン酸形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、ＰＥＧ化を含むグリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解過程、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セネロイル化（ｓｅｎｅｌｏｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、アルギニン化またはユビキチン化のようなアミノ酸付加を含むものとして理解される。このような修飾については、文献中に十分に説明されている（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（１９９３）２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  （１９８３）Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ；Ｓｅｉｆｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｎｏｎｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｆａｃｔｏｒｓ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６−６４６  ａｎｄ  Ｒａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ，６６３：  ４８−６２）。
【００４８】
「単離ポリヌクレオチド」または「単離ポリペプチド」は、以前に定義したように、ヒトの身体から単離されたか、そうでなければ技術的な方法によって産生されたポリヌクレオチドまたはポリペプチドとして理解される。
【００４９】
用語「バリアント」は、ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドに適用できる。例えば、本明細書で参照されるペプチドまたはポリペプチドのバリアントは、参照ペプチド配列と実質的に相同であるが、１つ以上のアミノ酸の欠失、挿入および／または置換のために、参照配列のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するペプチドまたはポリペプチドを意味する。実質的に相同であるとは、数個のアミノ酸、例えば１、２、３、４、５または６アミノ酸の欠失、挿入および／または置換を除いて、参照ペプチド配列と同一な変異アミノ酸配列を意味する。実質的に相同であるとは、参照アミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一な変異アミノ酸配列を意味する。変異核酸配列は、参照核酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％同一であってよい。２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性は、目視による点検および／または数学的計算、またはさらに容易には、Ｃｌｕｓｔａｌ  ｐａｃｋａｇｅバージョン１．８３のような、配列比較に用いられる公知のコンピュータプログラムを用いた配列情報の比較によって決定できる。バリアントは、少なくとも１つの保存的に置換されたアミノ酸、すなわち、同様の生理化学的特性をもつ残基によって置換された所定のアミノ酸残基を有する配列を含んでよい。一般に、元のポリペプチドに存在する１つ以上のアミノ酸の置換は、保存されていなければならない。保存された置換としては、１つの脂肪族残基と別の脂肪族残基、例えばＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、またはＡｌａとの互いの置換、または１つの極性残基と別の極性残基との互いの置換、例えばＬｙｓとＡｒｇとの置換、ＧｌｕとＡｓｐとの置換、またはＧｌｎとＡｓｎとの置換が挙げられる。その他のこのような保存された置換としては、例えば、同様な疎水特性を有する全体的な領域の置換が知られている（Ｋｙｔｅ，ｅｔ  ａｌ，１９８２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１）。例えば、「保存されたアミノ酸の置換」には、その位置のアミノ酸残基の極性または電荷への影響が少ないかまたは全く無い、非天然の残基による天然アミノ酸残基の置換も含まれてよい。所望のアミノ酸置換（保存されているか否かにかかわらず）は、このような置換が必要とされる際に、当業者によって決定できる。代表的なアミノ酸置換を、以下の第１表に示す。用語「バリアント」にはまた、参照ペプチド配列と実質的に相同であるが、１つ以上のアミノ酸が化学的に修飾されているか、またはアミノ酸類似体によって置換されているため、参照配列のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するペプチドまたはポリペプチドも含まれる。この用語にはまた、グリコシル化ポリペプチドも含まれる。
【００５０】
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【００５１】
用語「エピトープ」には、抗体またはその抗原結合断片へ特異的に結合できる、いずれかの抗原決定基が含まれる。特定の実施形態によれば、エピトープの決定因子としては、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニルのような、化学的活性のある表面分子群が挙げられ、また、特定の実施形態によれば、エピトープの決定因子は、特定の三次元構造特性およびまたは特定の電荷特性を有してよい。エピトープとは、抗体が結合する抗原の領域である。幾つかのエピトープは、隣接していないアミノ酸が抗原の空間的立体配置によって互いに近く配置されている、該抗原のアミノ酸配列の非連続的な部分（「立体構造エピトープ」）を含むか、または抗原のアミノ酸配列において隣接するアミノ酸部分（「直鎖エピトープ」）を含む。
【００５２】
本明細書で用いられる用語、抗体が標的抗原に「結合する」または「結合している」とは、前記標的抗原（例えばＭＭＰ９）と共に、もしくは前記標的抗原へ、または前記抗体によって認識されるエピトープを含む前記標的抗原の断片と共に、もしくは前記標的抗原の断片へ、前記抗体が少なくとも一時的に相互作用または会合することを意味する。
【００５３】
用語「選択的に結合する」、「特異的に結合する」、「〜に特異的な」が抗体に関して用いられる場合、これらの用語は、抗体が標的ポリペプチドまたはエピトープを優先的に認識すること、および／または、抗体が標的ポリペプチドまたはエピトープに優先的に結合すること、すなわち、他のいずれの抗原またはエピトープよりも高い親和性によって、すなわち、標的ポリペプチドへの結合が他の抗原への非特異的な結合とは区別できることを示す。抗体の結合親和性は、当該技術分野における通常の技術のいずれか１つ、例えばスキャッチャード解析（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９４９，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．１９４９．５１，６６０−６７２）によって、容易に決定できる。
【００５４】
本明細書で用いられる「結合親和性」は一般に、見かけの結合定数、すなわち「Ｋａ」を指す。Ｋａは、解離定数「Ｋｄ」の逆数である。結合親和性は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴または分光法（例えば蛍光アッセイを用いた）のような様々な方法によって決定されてよい。結合親和性を評価するための代表的な条件は、トリス緩衝液（５０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＣａＣｌ２、ｐＨ７．５）中にあることである。これらの技術は、結合状態および遊離状態の結合タンパク質の濃度を、結合タンパク質（または標的タンパク質）濃度の関数として測定するために用いることができる。結合した結合タンパク質の濃度（［結合］）は、遊離の結合タンパク質濃度（［遊離］）および標的上の結合タンパク質の結合部位の濃度に関連し、ここで（Ｎ）は標的分子あたりの結合部位の数であり、以下の方程式：［結合］＝Ｎｘ（［遊離］）／（（１／Ｋａ）＋［遊離］）によって求められる。２つの抗体の間の親和性の比較は、各抗体のＫａ値を実際に決定することなく、Ｋａに比例する親和性の定量的測定（例えばＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳ解析によって）または親和性の定性的測定もしくは親和性の推定（例えば機能的アッセイまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏもしくはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて）に基づいて行うことができる。
【００５５】
抗体の活性を「遮断する」または「中和する」との用語は、標的の活性を阻害する抗体の能力を指す。ＭＭＰ９に結合する抗体に対して用いられる場合、この用語は、例えば実施例の項に記載するように、プロＭＭＰ９の活性化を阻害することによって、および／または、その基質の１つ、例えばゼラチンにおける活性化ＭＭＰ９の触媒活性を阻害することによって、ＭＭＰ９活性を広く中和する抗体の能力を指す。抗ＭＭＰ９抗体の中和活性は、無細胞ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、またはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ、またはヒト癌細胞株浸潤アッセイのようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ機能アッセイによって決定されてよい。ヒト癌細胞株浸潤トランズウェルアッセイにおいて、癌細胞は下方へ向かい、基底膜マトリックス（マトリゲル（登録商標））を通って遊走することによって、血管近くでの腫瘍細胞の血管内への侵入、血管外遊走、および遠位組織への浸潤といった、ｉｎ  ｖｉｖｏでの過程を模倣している。
【００５６】
抗体の「効力」は、所定の抗原濃度において最大半量の効果をもたらす抗体／抗原結合断片の濃度として表現され得る。例えば、抗体の「効果」は、その標的の活性の阻害または中和であってよい。この場合、最大半量の阻害をもたらす抗体濃度は、ｍｏｌ／ｌまたはＭによって示されるＩＣ５０と呼ばれる。効力は通常、所定の抗原濃度において、さらに改善しても抗原の結合がそれ以上増強されない親和性に達するまで（いわゆる効力の上限）、親和性に影響される。ＭＭＰ９に対する抗体に関する効力は、例えば、抗体の存在下でのゼラチン基質の消化に依存した、ＭＭＰ９のＩＣ５０値を測定することによって決定されてよい。
【００５７】
中和抗体に対して用いられる用語「阻害の有効性」または「中和の有効性」とは、特定の生物学的または生化学的作用を阻害する前記抗体の有効性であり、これは生物学的または生化学的活性の潜在的な全阻害のパーセンテージを１００％に対して標準化して表したものである。ＭＭＰ９に結合する抗体に対して用いられる場合、１００％の有効性は、例えば、ゼラチン基質のＭＭＰ９に依存した消化の、抗体を介した全阻害であってよい。
【００５８】
本明細書で用いられる用語、抗体の「エフェクター機能」には、抗体のＦｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの相互作用からもたらされる生化学的現象が含まれる。エフェクター機能には、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞傷害）およびＡＤＣＰ（抗体依存性細胞食作用）のようなＦｃγＲ媒介性エフェクター機能、ならびにＣＤＣ（補体依存性細胞傷害）のような補体媒介性エフェクター機能が含まれる。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ受容体または補体成分のようなエフェクター分子に対する抗体の親和性を変化させること、すなわち増大または減少させること、好ましくは増大させることによって変化し得る。抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体またはリガンドとの結合親和性は、エフェクター分子の結合部位を修飾することによって、変化させることができる。また、抗体におけるエフェクター分子の結合部位を変化させることによって、全体的な結合親和性を著しく変化させることなく相互作用の構造を変化させ、結合を非生産的なものとすることでエフェクター機構を無効にすることも可能である。また、エフェクター分子の結合に直接関連はしないが、エフェクター機能のパフォーマンスに関わる部位を修飾することによって、エフェクター機能を変化させることも可能である。抗体のエフェクター機能を変化させることによって、診断および治療法に有益な効果をもたらす可能性のある免疫応答の様々な状況、例えば免疫系の様々な反応の増強または抑制を制御することが可能かもしれない。
【００５９】
用語「薬剤的に許容される」は、生物学的に、またはその他の点でも、望ましくないものではない材料から構成される担体を指す。
【００６０】
用語「担体」は、医薬製剤中に存在する、有効薬剤以外のいずれかの成分を指し、これらには希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、注入剤、着色料、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、保存料などが含まれる。
【００６１】
本明細書で用いられる「治療」および「治療する」などは、一般に所望の薬理学的および生理的効果を得ることを意味する。この効果は疾患、その症状もしくは状態を阻止するかまたは部分的に阻止する点から予防的であってよく、かつ／または疾患、疾患に起因する状態、症状、もしくは有害作用の部分的または完全な治癒の点から治療的であってもよい。本明細書で用いられる「治療」との用語は、哺乳類、特にヒトの疾患のいずれの治療も網羅し、かつ（ａ）例えば家族歴に基づいて、疾患にかかりやすい可能性があるが、まだそうであるとは診断されていない被験体の疾患を発生から予防すること；（ｂ）疾患を阻害すること、すなわちその進行を抑止すること；または（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち損傷の好転または改善のように、疾患および／またはその症状もしくは状態を退行させることを包含する。例えば炎症性腸疾患の治療には、疾患または疾患の症状を阻止、減少または根絶させることまでもが含まれ、例としては、下痢、腹痛および痙攣、血便、膿瘍、潰瘍ならびに瘻孔の、部分的または全体的な緩和が挙げられる。
【００６２】
本明細書で定義される「ＭＭＰ９関連疾患」は、少なくとも部分的に、ＭＭＰ９の発現および／または活性によって仲介または影響される疾患を指す。ＭＭＰ９関連疾患の例としては、炎症性疾患および自己免疫疾患、癌または腫瘍、肺疾患、線維性肺疾患のような線維性疾患、敗血症、筋ジストロフィー、アレルギー、腎線維症、強皮症、拡張型心筋症、シャーガス病、循環器病、精神神経疾患、糖尿病および眼病が挙げられる。
【００６３】
用語「炎症性疾患および自己免疫疾患」は、本明細書では一般に、免疫系に関係するかまたは関係しない炎症性の異常、および通常身体内に存在する物質および組織に対する被験体の身体の異常な免疫応答から起こる疾患または疾患であると、それぞれ定義される。炎症性疾患および自己免疫疾患の限定されない例としては、主に、クローン病（ＣＤ）（特に浸潤性および狭窄性クローン病）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、不確定大腸炎、コラーゲン形成大腸炎を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、全身性硬化症、多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症が挙げられる。
【００６４】
用語「炎症性腸疾患」（ＩＢＤ）は、本明細書では、全体的または部分的な消化管の慢性炎症に関わる疾患として定義される。ＩＢＤの限定されない例としては、クローン病、特に非浸潤性および非狭窄性クローン病、浸潤性および狭窄性クローン病、および瘻孔形成クローン病、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、不確定大腸炎、コラーゲン形成大腸炎、リンパ球性大腸炎および腸線維症が挙げられる。クローン病（ＣＤ）は、口腔から肛門までの消化管のいずれかの部位にみられ得る非連続性の病変部を有する、壁内炎症の疾患として定義される。潰瘍性大腸炎は、大腸に限定された粘膜炎症の疾患である。
【００６５】
本明細書で定義される用語「癌」または「腫瘍」は、身体の他の部分へ浸潤するかまたは拡散する可能性のある異常な細胞増殖に関わる疾患を指す。用語「癌」は、限定はされないが、造血器癌、脳腫瘍、乳癌、結腸直腸癌、頭頚部癌、膵臓癌、卵巣癌、膀胱癌、肺癌、肝臓癌、メラノーマ、前立腺癌、筋肉癌、間葉系癌、食道胃腺癌、非小細胞肺癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃腺癌、膵臓腺癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、肝細胞癌および結腸直腸癌によって例示される疾患を指す。
【００６６】
用語「肺疾患」は、限定はされないが、喘息、特発性肺線維症のような線維性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および鼻炎によって例示される疾患を指す。
【００６７】
用語「線維性疾患」は、本明細書では、炎症または損傷した組織内およびその周辺に、線維結合組織（コラーゲンおよびフィブロネクチンのような細胞外マトリックスの成分）が過剰に蓄積した患部組織を有する疾患として定義され、この疾患によって、永続的な瘢痕、臓器機能不全、および最終的には、末期の肝疾患、腎臓病、特発性肺線維症（ＩＰＦ）および心不全にみられるような死が誘導され得る。線維性疾患の限定されない例としては、全身性硬化症、結合組織増殖症候群、骨髄移植レシピエントにみられる皮膚硬化型移植片対宿主病、腎性全身性線維症、肺線維症、肝線維症、腎線維症、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、骨髄線維症および全身性エリテマトーデスが挙げられる。
【００６８】
用語「眼性状態」または「眼病」は、本明細書では、網膜色素上皮および視細胞の進行性の変性を伴い、視覚喪失を誘導する眼の疾患または／および網膜血管の損傷を伴う眼の疾患として定義される。眼性状態の限定されない例としては、水晶体の線維性病変、角膜疾患、糖尿病性網膜症、「萎縮型」または「滲出型」の加齢性黄斑変性症、増殖性硝子体網膜症、白内障形成、翼状片、円錐角膜、加齢性黄斑変性症および糖尿病性網膜症が挙げられる。
【００６９】
用語「循環器病」は、本明細書では、炎症、コラーゲンの増加を伴う組織再構築の変化および心筋梗塞における線維性瘢痕の蓄積に関わる、心血管系の疾患として定義される。循環器病の限定されない例としては、高血圧症、肺高血圧症、肺疾患または三尖弁疾患、大動脈疾患および僧帽弁疾患、大動脈縮窄、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全、虚血性心筋症、拡張型心筋症、慢性不整脈、心線維症および冠動脈疾患が挙げられる。
【００７０】
用語「神経障害」または「精神神経疾患」は、本明細書では、神経細胞の機能障害および神経細胞死によって特徴付けられ、治療不能かつ、しばしば致死的な機能的欠陥を誘導する疾患として定義される。神経障害の限定されない例としては、筋委縮性側索硬化症、アルツハイマー病、多発性硬化症、神経炎症、脳虚血および神経因性疼痛が挙げられる。
【００７１】
本明細書で用いられる用語「被験体」は、哺乳類を指す。例えば、本発明が意図する哺乳類には、ヒト、霊長類、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマのような家畜、実験用げっ歯類などが含まれる。
【００７２】
本発明の治療または方法の「有効性」との用語は、本発明の使用または方法に応答した、疾患または状態の経過における変化に基づいて測定できる。例えば、本発明の治療または方法の有効性は、病気の徴候または症状におけるその影響によって測定できる。応答は、患者が、病気の望ましくない症状の部分的もしくは全体的な緩和、または減少を経験することによって達成される。
【００７３】
本明細書で用いられる用語「有効量」は、本発明の少なくとも１つの抗体、またはその医薬製剤の量であって、前記抗体を投与された被験体の疾患の症状の、検出可能な減少を誘発する量を指す。これらの症状には、例えば、ａ）炎症性腸疾患の場合には下痢、腹痛および痙攣、血便、膿瘍、潰瘍および瘻孔、またはｂ）結腸直腸癌の場合には便秘症または下痢、鮮紅色または暗赤色の血便、体重減少、疲労、悪心および貧血が含まれる。
【００７４】
ＭＭＰ９結合タンパク質
ＭＭＰ９結合タンパク質の全般的な特性
第１の態様によれば、本発明は、ＭＭＰ９、特にヒトＭＭＰ９、またはその断片に結合するタンパク質であって、本明細書に記載される抗体の少なくとも１つの重鎖可変領域の断片および／または少なくとも１つの軽鎖可変領域の断片を含むタンパク質を提供する。
【００７５】
本発明の一実施形態によれば、本明細書に記載される少なくとも１つの重鎖可変領域の断片および少なくとも１つの軽鎖可変領域の断片、ならびに任意に少なくとも１つの定常領域の断片を含む、ＭＭＰ９、特にヒトＭＭＰ９特異的な単離抗体、またはその抗原結合断片が提供される。
【００７６】
本発明の別の実施形態によれば、本明細書に記載する、ＭＭＰ９、特にヒトＭＭＰ９特異的な単離抗体、またはその抗原結合断片が提供され、これらはＭＭＰ９上のエピトープへの結合によって特徴付けられる。
【００７７】
本発明の抗体またはその断片が結合するタンパク質は、いずれの種のＭＭＰ９タンパク質であってもよい。
【００７８】
本発明の抗体は、一般にヒトＭＭＰ９に対して高い特異性を示す。しかしながら、異なる種のＭＭＰ９ホモログとの間の配列同一性の程度に応じて（図２を参照）、所定の抗体または抗原結合断片は、少なくとも１つの別の種、例えばマウス、ラット、マーモセット、サル（例えばカニクイザル）、イヌ、および／またはウサギに由来するＭＭＰ９に対して交差反応性を示し得る。ヒトＭＭＰ９に対する抗体については、ある状況において、例えば特定の疾患の動物モデルにおいて抗体を試験する際、または毒性、安全性および投与量の試験を行う際に、ＭＭＰ９のその他の哺乳類型との、ある程度の交差反応性が望ましい場合がある。
【００７９】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片は、ヒトＭＭＰ９へ優先的に結合する。
【００８０】
別の実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片は、ヒトＭＭＰ９、カニクイザルＭＭＰ９、ラットＭＭＰ９および任意にマウスＭＭＰ９に対して交差反応性を示す。
【００８１】
幾つかの実施形態によれば、ヒトＭＭＰ９に対する本発明の抗体およびその断片の結合親和性（例えばＫｄ値に対して逆相関する）は、非ヒトＭＭＰ９に対するそれらの結合親和性より、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【００８２】
一実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片はＭＭＰ９へ優先的に結合し、その他のマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、例えばＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９に対して、任意に、補足的に弱い結合を示すか、またはほとんど結合しない（すなわち無視できるかまたは検出できない結合）。
【００８３】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片はＭＭＰ９へ優先的に結合し、ＭＭＰ２に対して、弱い結合を示すか、またはほとんど結合しない（すなわち無視できるかまたは検出できない結合）。
【００８４】
治療用のためには、本発明の抗体またはその断片は、ＭＭＰ２に結合せず、従ってこれを中和せず、ＭＭＰ２活性には実質的に影響しないことが有利であり得る。実際に、ＭＭＰ２は正常な組織の恒常性に必要とされるものであり、幾つかの疾患モデルではＭＭＰ２ノックアウトマウスが野生型マウスよりも悪化した表現型を示すという観察から示唆されるように、疾患に対する防御作用を有する可能性がある（Ｇｒａｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７７（６）：４１０３−１２）。
【００８５】
幾つかの実施形態によれば、ＭＭＰ９に対する本発明の抗体およびその断片の結合親和性（例えば平衡解離定数Ｋｄ値に対して逆相関する）は、ＭＭＰ２に対するそれらの結合親和性より、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【００８６】
結合親和性は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴または分光法（例えば蛍光アッセイを用いた）（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．ＢＭＣ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０１０，１０：１０）のような、当該技術分野において公知のいずれかの方法を用いて測定でき、例えば、オンレート、オフレート、解離定数（Ｋｄ）、平衡定数（Ｋｅｑ）または当該技術分野で用いられるその他のいずれかの用語によって表すことができる。
【００８７】
幾つかの実施形態によれば、本発明の抗体およびその断片は、１００ｎＭ以下、特に１０ｎＭ未満、さらに詳細には１ｎＭ未満、または０．５ｎＭ未満、または０．１ｎＭ未満、または０．０１ｎＭ未満、または０．００５ｎＭ未満の解離定数（Ｋｄ）によって、ヒトＭＭＰ９へ特異的に結合する。
【００８８】
本発明の抗体またはその断片が結合するタンパク質は、ＭＭＰ９のいずれかの形態、すなわち分泌リーダー配列を含む未熟タンパク質（「プレプロ酵素」）（ヒトＭＭＰ９の場合、配列番号１の残基１〜７０７に相当する）、分泌リーダー配列を含まない成熟抑制型ＭＭＰ９（「プロ酵素」）（ヒトＭＭＰ９の場合、配列番号１の残基２０〜７０７に相当する）、「活性化酵素」（ヒトＭＭＰ９の場合、配列番号１の残基１０７〜７０７に相当する）、またはＭＭＰ９のいずれかの断片である。
【００８９】
本発明の抗体またはその断片は、タンパク質のどこにでも、例えばプロドメイン内、触媒ドメイン内、特にＦｎリピート内またはＯＧドメインリンカー内に位置するアミノ酸、タンパク質内の１つ以上の部位に位置して認識されるアミノ酸、を含むエピトープとの相互作用によって、ＭＭＰ９に結合できる。
【００９０】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ＭＭＰ９、特にヒトＭＭＰ９の触媒ドメイン内に位置するアミノ酸を含むエピトープとの相互作用によって、ＭＭＰ９に結合する。
【００９１】
さらに特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＭＭＰ９の触媒ドメイン内に位置する、配列番号４１からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、配列番号４２からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、および配列番号４３からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸を含むエピトープとの相互作用によって、ＭＭＰ９に結合する。
【００９２】
なおさらなる特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＭＭＰ９の触媒ドメイン内に位置する、配列番号４１からなる領域内のアミノ酸、配列番号４２からなる領域内のアミノ酸、および配列番号４３からなる領域内のアミノ酸を含むエピトープとの相互作用によって、ＭＭＰ９に結合する。
【００９３】
さらなる特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＭＭＰ９の触媒ドメイン内に位置する、配列番号４１からなる領域内の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのアミノ酸、配列番号４２からなる領域内の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのアミノ酸、および配列番号４３からなる領域内の少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのアミノ酸を含むエピトープとの相互作用によって、ＭＭＰ９に結合する。
【００９４】
したがって一実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片は、ＭＭＰ９に結合するのみではなく、プレプロ酵素および／またはプロ酵素の、触媒活性のある酵素へのプロセシングを阻害することによって、および／または、活性化酵素のタンパク質分解活性を阻害することによって、ＭＭＰ９活性（例えばＭＭＰ９触媒活性）を中和または阻害する。
【００９５】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片は、ＭＭＰ９に結合するのみではなく、活性化ＭＭＰ９酵素のタンパク質分解活性を阻害することによって、ＭＭＰ９活性（例えばＭＭＰ９触媒活性）を中和または阻害する。
【００９６】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、ヒトＭＭＰ９に対する高い特異性および抑制活性を示し、かつカニクイザル（Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＭＭＰ９、ラットＭＭＰ９、および／またはマウスＭＭＰ９に対して交差反応性を示し得る。
【００９７】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片はＭＭＰ９活性を阻害し、その他のマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）、例えばＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ１９に対して、任意に、補足的に弱い抑制活性を示すか、または抑制活性を示さない（すなわち無視できるかまたは検出できない活性）。
【００９８】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその断片は、ＭＭＰ９に対する中和活性を示し、ＭＭＰ２に対しては、弱い中和活性を示すか、または中和活性を示さない（すなわち無視できるかまたは検出できない活性）。
【００９９】
抗体が、その標的タンパク質の活性を遮断または中和する能力は、本明細書に定義するその効力、例えばＩＣ５０値によって反映される効力によって評価できる。典型的には、抗ＭＭＰ９抗体の中和活性は、無細胞ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、またはｉｎ  ｖｉｖｏアッセイ、またはヒト癌細胞株浸潤アッセイのようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ機能アッセイによって決定されてよい。ヒト癌細胞株浸潤トランズウェルアッセイにおいて、癌細胞は下方へ向かい、基底膜マトリックス（マトリゲル（登録商標））を通って遊走することによって、血管近くでの腫瘍細胞の血管内への侵入、血管外遊走、および遠位組織への浸潤といった、ｉｎ  ｖｉｖｏでの過程を模倣している。
【０１００】
幾つかの実施形態によれば、ヒトＭＭＰ９に対する本発明の抗体およびその断片の抑制効力または中和効力（例えばＩＣ５０値に対して逆相関する）は、非ヒトＭＭＰ９に対するそれらの中和効力より、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【０１０１】
幾つかの実施形態によれば、例えばＩＣ５０値に対して逆相関する、ＭＭＰ９に対する本発明の抗体およびその断片の抑制効力または中和効力は、ＭＭＰ２に対するそれらの抑制効力または中和効力より、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、または少なくとも１０００倍高い。
【０１０２】
幾つかの実施形態によれば、本発明の抗体およびその断片は、ゼラチンにおけるＭＭＰ９の触媒活性の阻害に対して、１００ｎＭ以下、特に５０ｎＭ未満、さらに詳細には２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、８ｎＭ未満、７ｎＭ未満、６ｎＭ未満、５ｎＭ未満、４ｎＭ未満、３ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、または０．１ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。
【０１０３】
抗体が、その標的タンパク質の活性を遮断または中和する能力は、本明細書に定義するその阻害の有効性、例えば阻害のパーセンテージ（％）値によって反映される効力によっても評価できる。
【０１０４】
幾つかの実施形態によれば、本発明の抗体およびその断片は、プレプロ酵素および／またはプロ酵素のプロセシングを阻害するために、および／または、実施例の項に記載するように、ゼラチンに対するＭＭＰ９の触媒活性を測定するアッセイによって決定される、活性化ＭＭＰ９のタンパク質分解活性を阻害するために、５０％以上、特に６０％以上、特に７０％以上、特に８０％以上、特に９０％以上、特に９５％以上、特に１００％、有効である。
【０１０５】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体およびその断片は、実施例の項に記載するように、ゼラチンに対するＭＭＰ９の触媒活性を測定するアッセイによって決定される、活性化ＭＭＰ９のタンパク質分解活性を阻害するために、５０％以上、特に６０％以上、特に７０％以上、特に８０％以上、特に９０％以上、特に９５％以上、特に１００％、有効である。
【０１０６】
本明細書に記載される、本発明の抗体またはその断片のいずれかのバリアントは、ＭＭＰ９に結合して、任意にＭＭＰ９活性を中和できることを理解されたい。特定の実施形態によれば、このようなバリアントは、前記バリアントが由来する親抗体または断片と比較すると、ＭＭＰ９に対する同じかもしくは高い結合親和性、および／または同じかもしくは高い効力、および／または同じかもしくは高い種選択性、および／またはＭＭＰ９に対する同じかもしくは高い選択性、および／または同じかもしくは高い中和効率を示し得る。
【０１０７】
本発明の抗体は、本発明の特性、特に標的抗原、さらに詳細には本発明の抗体によって認識されるものと同じＭＭＰ９のエピトープへの結合能、および任意にＭＭＰ９活性の中和能が保持されている限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、およびさらに改変された抗体であってもよい。
【０１０８】
本発明の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９へ特異的に結合する、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその結合断片は、モノクローナル抗体である。
【０１０９】
本発明のさらなる特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９へ特異的に結合する、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその結合断片は、ヒト抗体である。
【０１１０】
ＭＭＰ９へ特異的に結合する、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその結合断片は、標的タンパク質と相互作用する部分によって、特に、典型的には重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む可変領域によって特徴付けることができる。
【０１１１】
重鎖可変領域に関連した、ＭＭＰ９結合タンパク質の特性
一実施形態によれば、本発明は、
（ｉ）配列番号２の重鎖ＣＤＲ１、または前記重鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号３の重鎖ＣＤＲ２、または前記重鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号４の重鎖ＣＤＲ３、または前記重鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む重鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片に関する。
【０１１２】
本発明の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ２の位置５３および６１の少なくとも１つのアミノ酸、および／または前記重鎖ＣＤＲ３の位置１００Ｊの１つのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、Ｎ５３ＱまたはＮ５３Ｒ、Ｄ６１Ｅ、Ｍ１００ＪＩのうち少なくとも１つである。
【０１１３】
本発明の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ２の位置５３、６１および６２の少なくとも１つのアミノ酸、および／または前記重鎖ＣＤＲ３の位置１００Ｌの１つのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、Ｎ５３Ｑ、Ｎ５３Ｒ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｈ、Ｄ６１Ｅ、Ｓ６２Ｔ、Ｍ１００ＬＩまたはＭ１００ＬＬのうち少なくとも１つである。
【０１１４】
本発明の別の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ２バリアントは、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９から選択されるアミノ酸配列を有する。
【０１１５】
本発明の別の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ２バリアントは、配列番号４９、配列番号５０および配列番号５１から選択されるアミノ酸配列を有する。
【０１１６】
本発明の別の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ３バリアントは、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。
【０１１７】
本発明の別の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ３バリアントは、配列番号５２のアミノ酸配列を有する。
【０１１８】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１または配列番号１２の重鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで配列番号１１または配列番号１２の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５までのアミノ酸は、配列番号１１または配列番号１２に対し、それぞれ少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する、異なるアミノ酸またはそのバリアントによって置換される。
【０１１９】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１の重鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５までのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記重鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１２０】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１の重鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで１、２、３、４アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記重鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１２１】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１の重鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで２アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記重鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１２２】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、２アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換された配列番号１１の重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は配列番号１２である。
【０１２３】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１の重鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで３アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記重鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１２４】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換された配列番号１１の重鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域は配列番号４８である。
【０１２５】
さらなる実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１または配列番号１２のバリアントを含み、ここで重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２、または３アミノ酸、および／または、重鎖可変フレームワーク領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換される。
【０１２６】
さらなる実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１または配列番号１２のバリアントを含み、ここで重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２、または３アミノ酸、および／または、重鎖可変フレームワーク領域の１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換される。
【０１２７】
特に、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその断片は、配列番号１１のバリアントを含み、ここで重鎖ＣＤＲ２の位置５３および６１の少なくとも１つのアミノ酸、重鎖ＣＤＲ３の位置１００Ｊの少なくとも１つのアミノ酸、ならびに重鎖可変フレームワーク領域の位置８４および８９は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、Ｎ５３Ｑ、Ｎ５３Ｒ、Ｄ６１Ｅ、Ｍ１００ＪＩ、Ｄ８４ＡおよびＶ８９Ｌのうち少なくとも１つである。
【０１２８】
特に、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその断片は、配列番号１１のバリアントを含み、ここで重鎖ＣＤＲ２の位置５３、６１および６２の少なくとも１つのアミノ酸、重鎖ＣＤＲ３の位置１００Ｌの少なくとも１つのアミノ酸、ならびに重鎖可変フレームワーク領域の位置８４および８９は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、Ｎ５３Ｑ、Ｎ５３Ｒ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｈ、Ｄ６１Ｅ、Ｓ６２Ｔ、Ｄ８４Ａ、Ｖ８９Ｌ、Ｍ１００ＬＬおよびＭ１００ＬＩのうち少なくとも１つである。
【０１２９】
さらに詳細には、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその断片は、配列番号１１のバリアントを含み、ここで重鎖可変フレームワーク領域の位置８４および８９のアミノ酸、重鎖ＣＤＲ２の位置５３および６１の少なくとも１つのアミノ酸、および重鎖ＣＤＲ３の位置１００Ｊは、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、Ｄ８４ＡおよびＶ８９Ｌ、ならびにＮ５３Ｑ、Ｎ５３Ｒ、Ｄ６１ＥおよびＭ１００ＪＩのうち少なくとも１つである。
【０１３０】
特に、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその断片は、配列番号１１のバリアントを含み、ここで重鎖ＣＤＲ２の位置５３、６１および６２の少なくとも１つのアミノ酸、重鎖ＣＤＲ３の位置１００Ｌの少なくとも１つのアミノ酸、ならびに重鎖可変フレームワーク領域の位置３０、８４および８９は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、Ｎ５３Ｑ、Ｎ５３Ｒ、Ｎ５３Ｋ、Ｎ５３Ｈ、Ｄ６１Ｅ、Ｓ６２Ｔ、Ｍ１００ＬＬ、Ｍ１００ＬＩ、Ｎ３０Ｄ、Ｄ８４ＡおよびＶ８９Ｌのうち少なくとも１つである。
【０１３１】
本発明の抗体またはその断片に含まれる重鎖可変領域の具体例としては、以下が挙げられる。
（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号１６のアミノ酸配列
【０１３２】
本発明の抗体またはその断片に含まれる重鎖可変領域の別の具体例としては、以下が挙げられる。
（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列
【０１３３】
本発明の抗体またはその断片に含まれる重鎖可変領域の別の具体例としては、以下が挙げられる。
（ｉ）配列番号４８のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号５５のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号５６のアミノ酸配列
【０１３４】
軽鎖可変領域に関連した、ＭＭＰ９結合タンパク質の特性
一実施形態によれば、本発明は、上記の重鎖可変領域を含み、かつ
（ｉ）配列番号２１の軽鎖ＣＤＲ１、または前記軽鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号２２の軽鎖ＣＤＲ２、または前記軽鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号２３の軽鎖ＣＤＲ３、または前記軽鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む軽鎖可変領域をさらに含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片に関する。
【０１３５】
本発明の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４または配列番号２５の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで配列番号２４または配列番号２５の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２２までまたは２５までのアミノ酸は、配列番号２４または配列番号２５に対し、それぞれ少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する、異なるアミノ酸またはそのバリアントによって置換される。
【０１３６】
本発明の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６７の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで配列番号６７の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２２までまたは２５までのアミノ酸は、配列番号６７に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する、異なるアミノ酸またはそのバリアントによって置換される。
【０１３７】
さらなる実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４または配列番号２５のバリアントを含み、ここで軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２、または３アミノ酸、および／または、軽鎖可変フレームワーク領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換される。
【０１３８】
さらなる実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６７のバリアントを含み、ここで軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２、または３アミノ酸、および／または、軽鎖可変フレームワーク領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換される。
【０１３９】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６７の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５までのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１４０】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６７の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで１、２、３、４アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１４１】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６７の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで１アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１４２】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、１アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換された配列番号６７の軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号６８である。
【０１４３】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６７の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで３アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１４４】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換された配列番号６７の軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号５７である。
【０１４５】
さらなる実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２４または配列番号２５のバリアントを含み、ここで軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２、または３アミノ酸、および／または、軽鎖可変フレームワーク領域の１１、１２、１３、１４または１５アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換される。
【０１４６】
特に、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその断片は、配列番号２４のバリアントを含み、ここで少なくとも軽鎖可変フレームワーク領域の位置１０４のアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、少なくともＶ１０４Ｌの置換である。
【０１４７】
本発明の抗体またはその断片に含まれる可変領域の具体例の１つとして、配列番号２５のアミノ酸配列が挙げられる。
【０１４８】
特に、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその断片は、配列番号６７のバリアントを含み、ここで軽鎖フレームワーク領域の位置１０４のアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、少なくともＶ１０４Ｌの置換である。
【０１４９】
本発明の抗体またはその断片に含まれる可変領域の具体例の１つとして、配列番号６８のアミノ酸配列が挙げられる。
【０１５０】
特に、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその断片は、配列番号６７のバリアントを含み、ここで軽鎖フレームワーク領域の位置４６，７１および１０４の少なくとも３つのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、少なくともＶ４６Ｌ、Ｖ７１ＡおよびＶ１０４Ｌの置換である。
【０１５１】
本発明の抗体またはその断片に含まれる可変領域の具体例の１つとして、配列番号５７のアミノ酸配列が挙げられる。
【０１５２】
別の実施形態によれば、本発明は、上記の重鎖可変領域を含み、かつ
（ｉ）配列番号２６の軽鎖ＣＤＲ１、または前記軽鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ２、または前記軽鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号２８の軽鎖ＣＤＲ３、または前記軽鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む軽鎖可変領域をさらに含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片に関する。
【０１５３】
本発明の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９または配列番号３０の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで配列番号２９または配列番号３０の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２２までまたは２５までのアミノ酸は、配列番号２９または配列番号３０に対し、それぞれ少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する、異なるアミノ酸またはそのバリアントによって置換される。
【０１５４】
本発明の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６９の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで配列番号６９の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２２までまたは２５までのアミノ酸は、配列番号６９に対し、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有する、異なるアミノ酸またはそのバリアントによって置換される。
【０１５５】
さらなる実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９または配列番号３０のバリアントを含み、ここで軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２、または３アミノ酸、および／または、軽鎖可変フレームワーク領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換される。
【０１５６】
さらなる実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９または配列番号３０のバリアントを含み、ここで軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３のうち少なくとも１つの、１、２、または３アミノ酸、および／または、軽鎖可変フレームワーク領域の１１、１２、１３、１４、または１５アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換される。
【０１５７】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６９の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５までのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１５８】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６９の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで３、４、５、６、７、８アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１５９】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６９の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで４アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１６０】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、４アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換された配列番号６９の軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号５８である。
【０１６１】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６９の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで５アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１６２】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、５アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換された配列番号６９の軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号５９、配列番号６０および配列番号６１から選択される。
【０１６３】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２９の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで６アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１６４】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、６アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換された配列番号２９の軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号３０である。
【０１６５】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６９の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで６アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１６６】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、６アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換された配列番号６９の軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号６２および配列番号７０から選択される。
【０１６７】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６９の軽鎖可変領域またはそのバリアントを含み、ここで７アミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換され、前記アミノ酸は、前記軽鎖可変領域のフレームワーク領域内に含まれる。
【０１６８】
本発明の別の特定の実施形態によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、７アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換された配列番号６９の軽鎖可変領域を含み、前記軽鎖可変領域は配列番号６３である。
【０１６９】
特に、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその断片は、配列番号２９のバリアントを含み、ここで軽鎖可変フレームワーク領域の位置８、１９、４７、６０、７９および８１の少なくとも１つのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、Ｒ８Ａ、Ｖ１９Ｉ、Ｌ４７Ｍ、Ｔ６０Ｎ、Ｌ７９ＱおよびＡ８１Ｅのうち少なくとも１つである。
【０１７０】
本発明の抗体またはその断片に含まれる可変領域の具体例の１つとして、配列番号３０のアミノ酸配列が挙げられる。
【０１７１】
特に、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその断片は、配列番号６９のバリアントを含み、ここで軽鎖可変フレームワーク領域の位置８、１９、４７、６０、７９、８１、８６の少なくとも１つのアミノ酸は、異なるアミノ酸によって置換されており、この置換は特に、Ｒ８Ａ、Ｖ１９Ｉ、Ｌ４７Ｍ、Ｔ６０Ｎ、Ｌ７９Ｑ、Ａ８１ＥおよびＦ８６Ｙのうち少なくとも１つである。
【０１７２】
本発明の抗体またはその断片に含まれる可変領域の具体例の１つとして、配列番号７０のアミノ酸配列が挙げられる。
【０１７３】
本発明の抗体またはその断片に含まれる軽鎖可変領域の具体例としては、以下が挙げられる。
（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号２９のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号３０のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号５７のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号５８のアミノ酸配列
（ｖｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列
（ｖｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列
（ｉｘ）配列番号６１のアミノ酸配列
（ｘ）配列番号６２のアミノ酸配列
（ｘｉ）配列番号６３のアミノ酸配列
（ｘｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列
（ｘｉｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列
（ｘｉｖ）配列番号６９のアミノ酸配列
（ｘｖ）配列番号７０のアミノ酸配列
【０１７４】
定常領域に関連した、ＭＭＰ９結合タンパク質の特性
抗体の定常領域に相当する部分は、本発明のＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片に任意に含まれる。
【０１７５】
抗体に計画される機能、特に必要とされ得るエフェクター機能に応じて、抗体の定常領域は本発明の抗体内に含まれ得るか、または含まれ得ない。
【０１７６】
典型的には、本発明の抗体またはその抗原結合断片に重鎖定常領域もしくはその部分が存在する場合、それはいずれの抗体アイソタイプに由来するものであってもよい。例えば、重鎖定常領域もしくはその部分は、ＩｇＧ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＡ（例えばＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ（例えばＩｇＭ１、ＩｇＭ２）から選択される抗体のものであってよい。特にＩｇＧ、さらに詳細にはＩｇＧ４の定常領域またはその部分であってよい。
【０１７７】
特に、抗体分子が治療上の使用に意図されたものであり、かつ抗体エフェクター機能が必要とされる場合には、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプのヒトＩｇＧ定常領域ドメインが用いられてよい。あるいは、抗体分子が治療目的に意図されたものであり、かつ抗体エフェクター機能が必要とされない場合、例えば単にＭＭＰ９活性を遮断する場合には、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４アイソタイプが用いられてよい。
【０１７８】
これらの定常領域ドメインの配列バリアントもまた使用され得ることを理解されたい。例えば、重鎖定常領域またはその部分は、改変されたＩｇＧ４のバリアント、例えば配列番号４０のアミノ酸配列に相当する、Ｓ２２８Ｐ、Ｒ４０９Ｋ、および末端リジンの欠失を含むＩｇＧ４バリアントであってよい。
【０１７９】
本発明の抗体またはその抗原結合断片に軽鎖定常領域もしくはその部分が存在する場合、それはいずれの軽鎖の定常領域に由来するものであってもよい。例えば、軽鎖定常領域もしくはその部分は、カッパまたはラムダ軽鎖由来であってよい。
【０１８０】
本発明の特定の態様によれば、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）本明細書に記載される可変領域、およびＩｇＧ抗体由来の定常領域またはその部分を含む少なくとも１本の重鎖、ならびに（ｉｉ）本明細書に記載される可変領域、およびラムダ（特にラムダ２）軽鎖由来の定常領域またはその部分を含む少なくとも１本の軽鎖を含む。
【０１８１】
特定の実施形態によれば、本発明の抗体に含まれる、重鎖および／または軽鎖の定常領域もしくはその部分は、当該技術分野における公知の方法に従って元のアミノ酸配列を改変したアミノ酸配列を有し、これによって抗体の化学的安定性を増大させ、抗体の凝集を減少させ、特に抗体産生細胞（例えばＨＥＫ２９３細胞、ＣＨＯ細胞）からの抗体の産生を増大させ、かつ／または、一価抗体を効率的にもたらす抗体の半分子交換能を排除する。
【０１８２】
抗体の定常領域のアミノ酸配列内の、抗体の安定性に影響を与えるアミノ酸の例としては、ヒトＩｇＧ４重鎖のＳ２２８Ｐアミノ酸変異（ＥＵ方式の番号付け）により、抗体のヒンジドメインを安定化させ（Ａｎｇａｌ  ｅｔ  ａｌ，１９９３，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５−１０８）、かつＦｃ−Ｆｃ相互作用を回避すること（Ｒｉｓｐｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５３：３５−４２）、およびアロタイプの位置４０９（ＥＵ方式の番号付け）をＡｒｇ（Ｒ）ではなくＬｙｓ（Ｋ）とすることで、ＩｇＧ４におけるＣＨ３−ＣＨ３相互作用の強度を高めること（Ａｌｌｂｅｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０５：９−１９）が挙げられ、これらの例は参照によって本明細書に取り込まれる。加えて、モノクローナル抗体の電荷の不均一性のモニターを簡便にするため、ヒトＩｇＧ４重鎖のＣ末端のリジンは除去されてもよい。
【０１８３】
さらなる実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載する可変領域を含む少なくとも１つの重鎖と、ＩｇＧ４抗体に由来する定常領域またはその部分とを含み、ここでＩｇＧ４定常領域のアミノ酸配列は、以下のアミノ酸修飾：Ｓ２２８Ｐ（ＥＵ方式の番号付け）、Ｒ４０９Ｋ（ＥＵ方式の番号付け）、末端Ｌｙｓ（Ｋ）の欠失を含み、前記修飾された定常領域は、配列番号４０によって表される。
【０１８４】
さらなる実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載する可変領域を含む少なくとも１つの軽鎖と、ＩｇＧ４抗体に由来する定常領域またはその部分とを含み、前記定常領域は、配列番号６６によって表される。
【０１８５】
上記に基づき、本発明は特に、
（１）
（ｉ）配列番号２の重鎖ＣＤＲ１、または前記重鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号３の重鎖ＣＤＲ２、または前記重鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号４の重鎖ＣＤＲ３、または前記重鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む重鎖可変領域、および
（２）
（ｉ）配列番号２１の軽鎖ＣＤＲ１、または前記軽鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号２２の軽鎖ＣＤＲ２、または前記軽鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号２３の軽鎖ＣＤＲ３、または前記軽鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む軽鎖可変領域、
を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０１８６】
別の実施形態によれば、本発明は、
（１）
（ｉ）配列番号２の重鎖ＣＤＲ１、または前記重鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号３の重鎖ＣＤＲ２、または前記重鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号４の重鎖ＣＤＲ３、または前記重鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む重鎖可変領域、および
（２）
（ｉ）配列番号２６の軽鎖ＣＤＲ１、または前記軽鎖ＣＤＲ１の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉ）配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ２、または前記軽鎖ＣＤＲ２の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
（ｉｉｉ）配列番号２８の軽鎖ＣＤＲ３、または前記軽鎖ＣＤＲ３の１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されてなるそのバリアント、
を含む軽鎖可変領域、
を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【０１８７】
本発明の別の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ２バリアントは、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８および配列番号９から選択されるアミノ酸配列を有する。
【０１８８】
本発明の別の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ２バリアントは、配列番号４９、配列番号５０および配列番号５１から選択されるアミノ酸配列を有する。
【０１８９】
本発明の別の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ３バリアントは、配列番号１０のアミノ酸配列を有する。
【０１９０】
本発明の別の特定の実施形態によれば、前記重鎖ＣＤＲ３バリアントは、配列番号５２のアミノ酸配列を有する。
【０１９１】
本発明の抗体は少なくとも１つの抗原結合部位、例えば１つまたは２つの抗原結合部位を有する。特定の実施形態によれば、例えばＣＤＲを含むペプチドの場合、可変ドメインは、完全なフレームワーク領域の代わりに、短いリンカーペプチドを介して結合したＣＤＲのみを含み得る。
【０１９２】
幾つかの実施形態によれば、本発明の単離抗体およびその抗原結合断片はグリコシル化されている。典型的には、Ｎ−アセチルグルコサミン、マンノース、グルコース、ガラクトース、フコース、シアル酸などのような単糖が、抗体上の個々のグリコシル化部位に集合してオリゴ糖となる。
【０１９３】
当業者に理解されるように、本発明の一態様はＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片に関し、これらは本明細書に記載される幾つかの特色によって特徴付けられるが、前記特色のすべてを含む必要はない。
【０１９４】
例えば一態様によれば、可変領域および／または定常領域の配列に関する、本明細書に記載される特色のいずれかによって特徴付けられる、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が提供される。
【０１９５】
前記態様の特定の実施形態によれば、前記抗体またはその断片は、本明細書に記載するＭＭＰ９上のエピトープ、特にヒトＭＭＰ９の触媒ドメイン内に位置する、配列番号４１からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、配列番号４２からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、および配列番号４３からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸を含むエピトープとの相互作用による、ＭＭＰ９への結合によってさらに特徴付けられる。
【０１９６】
別の態様によれば、本明細書に記載するＭＭＰ９上のエピトープ、特にヒトＭＭＰ９の触媒ドメイン内に位置する、配列番号４１からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、配列番号４２からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸、および配列番号４３からなる領域内の少なくとも１つのアミノ酸を含むエピトープとの相互作用による、ＭＭＰ９への結合によって特徴付けられる、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が提供される。
【０１９７】
前記別の態様の特定の実施形態によれば、前記抗体またはその断片は、可変領域および／または定常領域の配列に関する、本明細書に記載される特色のいずれかによってさらに特徴付けられる。
【０１９８】
ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の例
本発明の抗体およびその断片の例としては、第２表（図３、４、５も参照されたい）に示す可変ドメインを含むものが挙げられる。
【０１９９】
第２表
2017532005.tif 000003
2017532005.tif 000004
2017532005.tif 000005
2017532005.tif 000006
2017532005.tif 000007
2017532005.tif 000008
2017532005.tif 000009
2017532005.tif 000010
2017532005.tif 000011
2017532005.tif 000012
2017532005.tif 000013
【０２００】
したがって特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質としては、
（１）
（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号１６のアミノ酸配列
（ｖｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｖｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｘ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｘ）配列番号２０のアミノ酸配列
（ｘｉ）配列番号４８のアミノ酸配列
（ｘｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列
（ｘｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列
（ｘｉｖ）配列番号５５のアミノ酸配列
（ｘｖ）配列番号５６のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）
（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号２９のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号３０のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号５７のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号５８のアミノ酸配列
（ｖｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列
（ｖｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列
（ｉｘ）配列番号６１のアミノ酸配列
（ｘ）配列番号６２のアミノ酸配列
（ｘｉ）配列番号６３のアミノ酸配列
（ｘｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列
（ｘｉｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列
（ｘｉｖ）配列番号６９のアミノ酸配列
（ｘｖ）配列番号７０のアミノ酸配列
から選択される軽鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【０２０１】
したがって特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質としては、
（１）
（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号１６のアミノ酸配列
（ｖｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｖｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｘ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｘ）配列番号２０のアミノ酸配列
（ｘｉ）配列番号４８のアミノ酸配列
（ｘｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列
（ｘｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列
（ｘｉｖ）配列番号５５のアミノ酸配列
（ｘｖ）配列番号５６のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）
（ｉ）配列番号５７のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号５８のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号６０のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号６１のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号６２のアミノ酸配列
（ｖｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列
（ｖｉｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列
（ｉｘ）配列番号６８のアミノ酸配列
（ｘ）配列番号６９のアミノ酸配列
（ｘｉ）配列番号７０のアミノ酸配列
から選択される軽鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【０２０２】
したがって特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質としては、
（１）
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）
（ｉ）配列番号６８のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号７０のアミノ酸配列
から選択される軽鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【０２０３】
したがって特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質としては、
（１）
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）配列番号６８のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【０２０４】
したがって特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質としては、
（１）
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）配列番号７０のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【０２０５】
したがって特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質としては、
（１）
（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号１６のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）
（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列
から選択される軽鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【０２０６】
別の特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質としては、
（１）
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）
（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列
から選択される軽鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【０２０７】
さらに詳細には、本発明のＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片は、
（１）
（ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）配列番号２５のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を含んでよい。
【０２０８】
別の特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質としては、
（１）
（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号１６のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）
（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列
から選択される軽鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【０２０９】
別の特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９結合タンパク質としては、
（１）
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）
（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列
から選択される軽鎖可変領域を含む、ＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片が挙げられる。
【０２１０】
さらに詳細には、本発明のＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片は、
（１）
（ｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号２０のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域、および
（２）配列番号３０のアミノ酸配列の軽鎖可変領域を含んでよい。
【０２１１】
さらに詳細には、本発明のＭＭＰ９特異的な単離抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９の重鎖可変領域および配列番号７０の軽鎖可変領域を含んでよい。
【０２１２】
補助分子を含む抱合体
本発明の別の態様によれば、本発明の単離抗体またはその抗原結合断片は、任意にアクセサリー分子を抱合しており、本明細書ではこれを「抱合抗体」または「抱合抗体断片」と称する。
【０２１３】
アクセサリー分子は、抗体または抗体断片に直接抱合させてよいか、または例えばＫｅｌｌｏｇｇら（２０１１，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ，２２：７１７−２７）によって記載されるように、適切な長さのスペーサーを介して抱合させてもよい。
【０２１４】
一実施形態によれば、特に治療目的に適用させたアクセサリー分子は、治療用のエフェクターグループ、例えば放射性グループ（すなわち放射性核種または放射性同位元素を含むグループ）または小分子を含む、細胞傷害性（例えば酵素活性のある細菌、真菌、植物もしくは動物由来の毒素、またはその断片）、細胞増殖抑制性、または免疫調節性薬剤であってよい。
【０２１５】
別の実施形態によれば、アクセサリー分子は、本発明の抗体または抗体断片に抱合される際、抗体の抗原結合断片を含み、二重特異性抗体を形成する。特に前記二重特異性抗体は、２つの異なるＭＭＰ、または１つのＭＭＰの２つの異なるエピトープ、例えばＭＭＰ９の２つの異なるエピトープに向けられてよい。
【０２１６】
特定の実施形態によれば、アクセサリー分子は、例えば、疾患の治療、例えばクローン病の治療に有効な薬剤であってよい。すなわち、抗ＴＮＦα抗体の可変領域が、本発明の抗体または抗原結合断片に抱合される際、中程度から重度のクローン病患者を治療するための、二重特異性抗ＴＮＦα／ＭＭＰ９抗体が形成され得る。
【０２１７】
本発明の抱合抗体および抱合抗体断片は、抱合された補助分子が、疾患の場にて治療効果を有し得るように、ｉｎ  ｖｉｖｏにて薬物を疾患の場（例えば炎症または腫瘍の場）へ標的化させることができる。
【０２１８】
別の実施形態によれば、特に診断目的に適用させたアクセサリー分子は、例えば、放射性同位元素（例えば３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２５Ｉ）、発色性標識、例えば基質を検出可能な色に変換できる酵素（例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ）または蛍光化合物（例えば緑色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質）、分光学的標識（例えばフルオレセインおよびＦＩＴＣのようなその誘導体、テキサスレッド、シアニン色素、フォトシアン、ローダミンのような蛍光標識、または可視色を呈する標識）、ルシフェリンを含む発光標識、標識に特異的なさらなる化合物によって発色させ、検出および定量化が容易になる親和性標識、または標準的なＥＬＩＳＡで用いられるその他のいずれかの標識を含む、標識グループであってよい。
【０２１９】
本発明によるポリペプチドをコードする核酸
別の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離核酸分子が提供される。
【０２２０】
本発明の単離核酸は、例えば、天然ＤＮＡもしくはＲＮＡ、または組換えもしくは合成ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＬＮＡ、または本発明のいずれかの核酸分子を含む組換え核酸分子を、単独で、または組み合わせたものであってよい。特定の実施形態によれば、本発明の核酸分子はｃＤＮＡである。
【０２２１】
特定の実施形態によれば、
（１）配列番号２の重鎖ＣＤＲ１、配列番号３の重鎖ＣＤＲ２、配列番号４の重鎖ＣＤＲ３、またはそれらのバリアントをコードする核酸配列であって、前記重鎖ＣＤＲの１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されている核酸配列、および
（２）（ｉ）配列番号２１の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２２の軽鎖ＣＤＲ２、配列番号２３の軽鎖ＣＤＲ３、またはそれらのバリアントをコードする核酸であって、前記軽鎖ＣＤＲの１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されている核酸、または
（２）（ｉｉ）配列番号２６の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２７の軽鎖ＣＤＲ２、配列番号２８の軽鎖ＣＤＲ３、またはそれらのバリアントをコードする核酸であって、前記軽鎖ＣＤＲの１、２、または３アミノ酸が異なるアミノ酸によって置換されている核酸、
を１つ以上含む単離核酸が提供される。
【０２２２】
特定の実施形態によれば、
（１）
（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号１６のアミノ酸配列
（ｖｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｖｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｘ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｘ）配列番号２０のアミノ酸配列
（ｘｉ）配列番号４８のアミノ酸配列
（ｘｉｉ）配列番号５３のアミノ酸配列
（ｘｉｉｉ）配列番号５４のアミノ酸配列
（ｘｉｖ）配列番号５５のアミノ酸配列
（ｘｖ）配列番号５６のアミノ酸配列
から選択される重鎖の可変領域をコードする核酸配列、および
（２）
（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号２９のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号３０のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号５７のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号５８のアミノ酸配列
（ｖｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列
（ｖｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列
（ｉｘ）配列番号６１のアミノ酸配列
（ｘ）配列番号６２のアミノ酸配列
（ｘｉ）配列番号６３のアミノ酸配列
（ｘｉｉ）配列番号６７のアミノ酸配列
（ｘｉｉｉ）配列番号６８のアミノ酸配列
（ｘｉｖ）配列番号６９のアミノ酸配列
（ｘｖ）配列番号７０のアミノ酸配列
から選択される軽鎖の可変領域をコードする核酸配列、
を１つ以上含む単離核酸が提供される。
【０２２３】
特定の実施形態によれば、
（１）
（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号１６のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域をコードする核酸配列、および
（２）
（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列
から選択される軽鎖可変領域をコードする核酸配列、
を１つ以上含む単離核酸が提供される。
【０２２４】
別の特定の実施形態によれば、本発明は、
（１）
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域をコードする核酸配列、および
（２）配列番号２５のアミノ酸配列の軽鎖可変領域をコードする核酸配列
を１つ以上含む単離核酸を提供する。
【０２２５】
別の特定の実施形態によれば、
（１）
（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１４のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号１５のアミノ酸配列
（ｖｉ）配列番号１６のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域をコードする核酸配列、および
（２）
（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列
から選択される軽鎖可変領域をコードする核酸配列、
を１つ以上含む単離核酸が提供される。
【０２２６】
別の特定の実施形態によれば、
（１）
（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列
（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列
（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列
（ｉｖ）配列番号１９のアミノ酸配列
（ｖ）配列番号２０のアミノ酸配列
から選択される重鎖可変領域をコードする核酸配列、および
（２）配列番号３０のアミノ酸配列の軽鎖可変領域をコードする核酸配列
を１つ以上含む単離核酸が提供される。
【０２２７】
別の特定の実施形態によれば、
（１）配列番号３１、配列番号３２および配列番号３３、または前記配列のうちの１つと少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するそれらのバリアントを含む核酸配列、および／または
（２）
ａ）配列番号３４、配列番号３５および配列番号３６、または前記配列のうちの１つと少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するそれらのバリアントを含む核酸配列、
ｂ）配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、または前記配列のうちの１つと少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するそれらのバリアントを含む核酸配列、
から選択される核酸配列、を１つ以上含む単離核酸が提供される。
【０２２８】
本発明のポリペプチドを産生および精製するための、ベクターおよび宿主細胞
一実施形態によれば、本発明は、本発明の核酸分子を含む組換え発現ベクターを提供し、ここで、該ベクターは任意に、発現制御配列を含み、この発現制御配列によって、原核生物または真核生物の宿主細胞における、前記核酸分子へ機能的に連結する、コードされたポリペプチドの発現が可能になる。
【０２２９】
限定はされないが、染色体、エピソーム、およびウイルスに由来する多くの発現系が用いられ得る。さらに詳細には、使用される組換えベクターは、細菌プラスミド、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入エレメント、酵母染色体エレメント、ウイルス、例えばバキュロウイルス、ＳＶ４０のようなパピローマウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、フォックスポックスウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レトロウイルス由来であってよい。これらの組換えベクターは、コスミドまたはファージミド誘導体と同等であってよい。
【０２３０】
核酸配列は、例えば、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１に記載されるような、当業者に公知の方法によって、組換え発現ベクター内に挿入できる。
【０２３１】
組換えベクターは、本発明のポリヌクレオチドの発現および転写ならびに本発明のポリペプチドの翻訳を可能にするか、制御するか、または調節するヌクレオチド配列を含んでもよい。これらの配列は、使用する宿主細胞に従って選択される。
【０２３２】
したがって、例えば、本発明の核酸分子によってコードされたポリペプチドが、小胞体の内腔へ、細胞膜のペリプラズムへ、または細胞外環境へ方向付けられるように、組換えベクターには適切な分泌シグナルを組み込むことができる。適切な分泌シグナルの選択は、続くタンパク質精製を容易にし得る。
【０２３３】
さらなる実施形態によれば、本発明の組換えベクターを含む宿主細胞が提供される。
【０２３４】
宿主細胞内への組換えベクターの導入は、ＢＡＳＩＣ  ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｄａｖｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２ｎｄ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９５および上記のＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬに記載されるような、当業者に公知の方法、例えばリン酸カルシウムによるトランスフェクション、ＤＥＡＥデキストランによるトランスフェクション、トランスフェクション、微量注入法、陽イオン脂質によるトランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入または感染に従って行われてよい。
【０２３５】
宿主細胞は、例えば、大腸菌またはストレプトマイセスのような細菌細胞、アスペルギルスのような真菌およびサッカロミセスのような酵母、昆虫細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）、Ｃ１２７マウス細胞株、シリアンハムスター細胞のＢＨＫ細胞株、ヒト胎児腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）細胞であってよい。特定の実施形態によれば、宿主細胞はＣＨＯ細胞またはＨＥＫ２９３細胞である。
【０２３６】
宿主細胞は、例えば本発明のポリペプチドを発現させるために用いることができる。標準法による精製後、本発明のポリペプチドは、以下に記載する方法に用いることができる。
【０２３７】
例えば、組換えタンパク質を分泌する発現系を用いる場合、培地は最初に、市販のタンパク質濃縮用フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを用いて濃縮されてよい。濃縮工程のあと、濃縮物は、ゲル濾過マトリックスのような精製用マトリックスに加えてよい。あるいは、陰イオン交換および／またはアフィニティ樹脂を用いてもよい。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、またはタンパク質精製に通常用いられるその他の形であってよい。あるいは、陽イオン交換工程を用いてもよい。最後に、疎水性のＲＰ−ＨＰＬＣ用溶媒を用いた逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）工程を１回以上行って、抗体またはその断片をさらに精製してもよい。様々に組み合わせた、前述の精製工程の幾つかまたは全ては公知であり、実質的に均質な組換えタンパク質を提供するために用いることができる。
【０２３８】
細菌培養によって産生された組換えタンパク質は、最初に宿主細胞の破壊、遠心分離、不溶性ポリペプチドの場合には細胞ペレットからの抽出、または可溶性ポリペプチドの場合には上清液からの抽出を行い、次に１回以上の濃縮、塩析、イオン交換、アフィニティ精製またはサイズ排除クロマトグラフィー工程を行うことによって単離できる。細菌細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を含む、いずれかの便利な方法を用いて破壊できる。
【０２３９】
別の実施形態によれば、本発明は、本発明のポリペプチドを発現できる細胞を産生するための方法を提供し、該方法は、細胞を、本発明のベクターまたは核酸によって遺伝的に操作することを含む。
【０２４０】
別の実施形態によれば、本発明は、本発明の抗体またはその断片を産生するための方法を提供し、該方法は、前記抗体またはその断片をコードする核酸配列を含む発現ベクターによって形質転換された宿主細胞を、前記ポリペプチドの発現を十分に促進する条件下で培養することを含む。次に、本発明の抗体またはその断片は、使用する発現系に応じて、培地または細胞抽出物から回収される。当業者に周知であるように、組換えタンパク質の精製手順は、使用する宿主細胞の種類、および上記のように組換えタンパク質培地中に分泌されるか否かといった因子に従って変動し得る。
【０２４１】
組成物
本発明は、内科的疾患、特に炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患または癌を患う患者、好ましくは哺乳類の患者、最も好ましくはヒト患者を治療するための、組成物としての医薬品または治療薬および方法を提供する。あるいは、本発明は、内科的疾患、特に炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患または癌を予防するための方法を提供する。
【０２４２】
一実施形態によれば、（ｉ）本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片、（ｉｉ）本発明の核酸、（ｉｉｉ）本発明のベクター、および／または（ｉｖ）本発明の宿主細胞、のうち１つ以上、ならびに少なくとも１つの薬剤的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
【０２４３】
本発明の医薬組成物は、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の１つ以上を、本明細書に記載するいずれかの形態において含んでよい。
【０２４４】
本発明の組成物は、薬剤的に許容される追加成分、例えばミョウバン、安定剤、抗菌剤、緩衝液、着色料、香味料、補助剤などを１つ以上さらに含んでもよい。
【０２４５】
本発明の化合物は、従来から用いられている補助剤、担体、希釈剤または賦形剤と共に、医薬組成物の形態およびその単位剤形へと調製してよく、そのような形態としては、経口用として錠剤もしくは充填したカプセルのような固形剤、凍結乾燥の形態、または溶液、懸濁液、エマルション、エリキシル剤のような液剤、もしくはそれらを充填したカプセルが用いられてよく、または非経口（皮下を含む）用として注射用無菌溶液の形態が用いられてよい。このような医薬組成物およびその単位剤形は、成分を従来の比率で、追加の有効化合物または成分と共に、またはそれらなしで含んでよく、このような単位剤形は、使用が意図された一日投与量に相応の範囲内にあるいずれかの適切な有効量の有効成分を含有してよい。
【０２４６】
本発明の組成物は、限定はされないが、水性または油性懸濁液、溶液、エマルション、シロップ、およびエリキシル剤のような液体製剤であってよい。経口投与に適した液体剤形には、緩衝液、懸濁剤および調剤、着色剤、香味料などを含む適切な水性または非水性ビヒクルが含まれてよい。組成物はまた、使用前に水またはその他の適切なビヒクルで再構成する乾燥製剤として処方されてもよい。このような液体製剤は、限定はされないが、懸濁剤、乳化剤、非水性ビヒクル、および保存料のような添加物を含有してもよい。懸濁剤としては、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース／糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、および食用水素化油脂が挙げられるが、これらに限定されない。乳化剤としては、レシチン、ソルビタンモノオレエート、およびアカシアが挙げられるが、これらに限定されない。非水性ビヒクルとしては、食用油、アーモンド油、分留ココナッツ油、油状エステル、プロピレングリコール、およびエチルアルコールが挙げられるが、これらに限定されない。保存料としては、ｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピル、およびソルビン酸が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる材料および加工技術などについては、参照により本明細書に取り込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙの第５部に記載されている。
【０２４７】
本発明の固形組成物は、従来の方法で処方された錠剤または舐剤の形態であってよい。例えば経口投与のための錠剤およびカプセルは、限定はされないが、結合剤、注入剤、潤滑剤、崩壊剤、および湿潤剤のような従来の賦形剤を含有してよい。結合剤としては、シロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、デンプンの粘液、およびポリビニルピロリドンが挙げられるが、これらに限定されない。注入剤としては、ラクトース、糖、結晶セルロース、トウモロコシでんぷん、リン酸カルシウム、およびソルビトールが挙げられるが、これらに限定されない。潤滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコール、およびシリカが挙げられるが、これらに限定されない。崩壊剤としては、ジャガイモデンプンおよびデンプングリコール酸ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない。湿潤剤としてはラウリル硫酸ナトリウムが挙げられるが、これに限定されない。錠剤は、当該技術分野において公知の方法によってコートされてよい。
【０２４８】
注射用組成物は、典型的には注射用の無菌生理食塩水もしくはリン酸緩衝食塩水、または当該技術分野において公知であるその他の注射用担体に基づくものである。
【０２４９】
本発明の組成物はまた、限定はされないがクリーム、軟膏、ローション、ペースト、薬用硬膏、パッチ、または膜のような、水性もしくは非水性のビヒクルを含む経皮製剤として処方されてもよい。
【０２５０】
本発明の組成物は、限定はされないが、注射または持続点滴のような非経口投与用に処方されてもよい。注射用製剤は、油性もしくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルションの形態であってよく、限定はされないが、懸濁剤、安定剤、および分散剤のような製剤用の薬剤を含有してよい。組成物は、限定はされないが、発熱物質を含まない無菌水のような適切なビヒクルによって再構成される散剤の形態で提供されてもよい。
【０２５１】
本発明の組成物は、移植または筋肉内注射によって投与され得るデポ製剤としても処方されてよい。組成物は、適切な高分子材料もしくは疎水性材料（例えば許容される油中のエマルションとして）、イオン交換樹脂、または難溶性の誘導体（例えば難溶性の塩として）によって処方されてよい。
【０２５２】
本発明の化合物は、持続放出剤形として、または持続放出薬物送達系から投与されてよい。代表的な持続放出材料についての記載は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓに収載されている材料についても見出すことができる。
【０２５３】
薬学
本発明の組成物の投与には、注射用製剤が特に適している。
【０２５４】
別の実施形態によれば、本発明は、本明細書に記載される、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片を含むイメージング組成物または診断用組成物を提供する。
【０２５５】
別の実施形態によれば、本発明は、本明細書に記載される、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片を含む、被験体における活性化ＭＭＰ９を検出するための診断用組成物を提供する。
【０２５６】
別の実施形態によれば、本発明は、本明細書に記載される、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片を含む、被験体における活性化ＭＭＰ９を検出するための診断用組成物を提供し、ここで前記抗体は、配列番号１９の重鎖可変領域および配列番号７０の軽鎖可変領域を含む。
【０２５７】
一実施形態によれば、本発明の診断用組成物は、放射性同位元素、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、クロモフォア、フルオロフォア、化学発光成分、ハプテンおよび酵素からなる群より選択される成分を結合させた、本明細書に記載される、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片を含む。
【０２５８】
本発明のイメージング組成物または診断用組成物は、炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患または癌に付随する、ＭＭＰ９の濃度上昇を検出するために有用である。
【０２５９】
併用
本発明によれば、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、単独で投与してよいか、または、炎症性疾患ならびに／または自己免疫疾患の予防および／もしくは治療に有用な共薬剤、例えば生物製剤、小分子およびワクチンのような免疫調節性薬剤と併用して投与してもよい。
【０２６０】
あるいは、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、単独で投与してよいか、または癌の治療に有用な共薬剤、例えば細胞傷害性薬剤（フォルフォックス、ゼロックス、フォルフィリノックス、フォルフォックス６、カペシタビン、ドセタキセル（タキソテール）、パクリタキセル（タキソール）、Ｎａｂ／パクリタキセル、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）、カペシタビン（ゼローダ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン（ジェムザール）、ゲムシタビン−シスプラチン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ペメトレキセド（アリムタ）、イクサベピロン（イグゼンプラ）、ビンブラスチン（ベルバン）、ビンクリスチン（オンコビン）、およびビノレルビン（ナベルビン）、エストラムスチン（エムシット））、チロシンキナーゼ阻害剤（イマチニブ（グリベック（Ｇｌｅｅｖｅｃ／Ｇｌｉｖｅｃ））、またはゲフィチニブ（イレッサ）、またはエルロチニブ（タルセバ）、アファチニブ（ジオトリフ）、アキシチニブ（インリタ）、ボスチニブ（ボシュリフ）、クリゾチニブ（ザーコリ）、ダサチニブ（スプリセル）、ラパチニブ（タイバーブ）、ニロチニブ（タシグナ）、パゾパニブ（ボトリエント）、ソラフェニブ（ネクサバール）、スニチニブ（スーテント））のような抗癌剤、およびトラスツズマブ（ハーセプチン）、ベバシズマブ（アバスチン）、セツキシマブ（アービタックス）、パニツムマブ（ベクチビックス）、ペルツズマブ（パージェタ）、イピリムマブ（ヤーボイ）、ニボルマブ（オプジーボ）およびペンブロリズマブ（キイトルーダ）または抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ（リツキサン）のような治療用抗体と併用して投与してもよい。
【０２６１】
本発明は、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の投与を包含し、ここで治療上有効な量の抗体またはその断片は、炎症性疾患および自己免疫疾患、炎症性腸疾患、癌または腫瘍、線維性疾患、循環器疾患、神経障害、眼病からなる群より選択されるＭＭＰ９関連疾患、またはその他のいずれかのＭＭＰ９関連疾患もしくは疾患の予防および／または治療に有用なその他の治療レジメンもしくは共薬剤に先立ち、それらと同時に、またはそれらと連続的に個体へ投与される。前記共薬剤と同時に投与される、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、同一かまたは異なる組成物として、同一かまたは異なる投与経路によって投与できる。
【０２６２】
特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、中程度から重度のクローン病患者を治療するための抗ＴＮＦα抗体と併用して投与できる。
【０２６３】
投与方法
本発明の組成物は、限定はされないが、経口、非経口、舌下、経皮、直腸内、経粘膜、局所、吸入、経頬もしくは鼻腔内投与または膀胱内投与、またはそれらの組み合わせのような、いずれかの方法によって投与されてよい。
【０２６４】
非経口投与としては、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、包膜内、および関節内投与が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の組成物は、組成物の徐放を可能にする植込錠の形態、および速度を遅く調節した静脈内点滴によって投与されてもよい。
【０２６５】
特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、全身性または局所性に投与される。
【０２６６】
特定の実施形態によれば、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片は、皮下または静脈内経路によって投与される。
【０２６７】
単回または複数回用量として個体に投与される投与量は、薬物動態特性、患者の状態および特性（性、年齢、体重、健康状態、および大きさ）、症状の程度、併用の治療法、治療頻度、および所望の効果のような様々な因子によって異なり得る。
【０２６８】
典型的には、薬剤的に有効な抗体の治療上有効な量は、１ｍｇ／ｋｇから１５０ｍｇ／ｋｇ体重までの用量の範囲である。投与計画が持続点滴である場合には、ｋｇ体重あたり０．２５０ｍｇから２０ｍｇまでの範囲であってよい。
【０２６９】
特に、薬剤的に有効な抗体の治療上有効な量は、１ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇ体重までの用量の範囲である。投与計画が持続点滴である場合には、ｋｇ体重あたり０．２５０ｍｇから１３ｍｇまでの範囲であってよい。
【０２７０】
患者
典型的には、本発明による患者は、ＭＭＰ９関連疾患、特に炎症性および自己免疫疾患、癌または腫瘍、肺疾患、線維性肺疾患、敗血症、筋ジストロフィー、アレルギー、腎線維症、強皮症、拡張型心筋症、シャーガス病、循環器疾患、精神神経疾患、糖尿病、および眼病からなる群より選択されるＭＭＰ９関連疾患、またはその他のいずれかのＭＭＰ９関連疾患もしくは疾患を患う患者である。
【０２７１】
一実施形態によれば、本発明による患者は、例えば、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、不確定大腸炎、コラーゲン形成大腸炎を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、全身性硬化症、多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症のような、炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患を患う患者である。
【０２７２】
特定の実施形態によれば、本発明による患者は、炎症性腸疾患、さらに詳細には浸潤性および狭窄性クローン病ならびに潰瘍性大腸炎を患う患者である。
【０２７３】
別の実施形態によれば、本発明による患者は、喘息、特発性肺線維症のような線維性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む肺疾患、または敗血症、筋ジストロフィー、アレルギー、腎線維症、強皮症、拡張型心筋症、シャーガス病、循環器疾患、精神神経疾患、糖尿病、および眼病から選択される疾患を患う患者である。
【０２７４】
別の実施形態によれば、本発明による患者は、例えば、造血器腫瘍、脳腫瘍、乳癌、結腸直腸癌、頭頚部癌、膵臓癌、肺癌、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌、メラノーマ、前立腺癌、筋肉癌、間葉系癌、食道胃腺癌、非小細胞肺癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃腺癌、膵臓腺癌および肝細胞癌を含む、癌または腫瘍を患う患者である。
【０２７５】
特定の実施形態によれば、本発明による患者は、結腸直腸癌または腺癌を患う患者である。
【０２７６】
別の実施形態によれば、本発明による患者は、炎症性および自己免疫疾患、炎症性腸疾患、癌または腫瘍、線維性疾患、循環器疾患、精神神経疾患または眼病からなる群より選択される疾患を患う患者である。
【０２７７】
別の実施形態によれば、本発明による患者は、線維性疾患、例えば、全身性硬化症、結合組織増殖症候群、骨髄移植レシピエントにみられる皮膚硬化型移植片対宿主病、腎性全身性線維症、肺線維症、肝線維症、腎線維症、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、骨髄線維症および全身性エリテマトーデスを患う患者である。
【０２７８】
別の実施形態によれば、本発明による患者は、眼病、例えば、水晶体の線維性病変、角膜疾患、糖尿病性網膜症、「萎縮型」または「滲出型」の加齢性黄斑変性症、増殖性硝子体網膜症、白内障形成、翼状片、円錐角膜、加齢性黄斑変性症および糖尿病性網膜症を患う患者である。
【０２７９】
別の実施形態によれば、本発明による患者は、循環器疾患、例えば、高血圧症、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全または冠動脈疾患、高血圧症、肺高血圧症、肺疾患または三尖弁疾患、大動脈疾患および僧帽弁疾患、大動脈縮窄、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全、虚血性心筋症、拡張型心筋症、慢性不整脈、心線維症および冠動脈疾患を患う患者である。
【０２８０】
別の実施形態によれば、本発明による患者は、神経障害、例えば、筋委縮性側索硬化症、アルツハイマー病、多発性硬化症、神経炎症、脳虚血および神経因性疼痛を患う患者である。
【０２８１】
本発明による使用および方法
本発明による、ＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片、核酸、ベクター、宿主細胞、組成物は、ＭＭＰ９濃度の上昇および／またはＭＭＰ９活性の上昇に付随する、それらによって引き起こされる、またはそれらを伴う疾患の診断、予防または治療のために使用される。
【０２８２】
一実施形態によれば、薬剤として使用するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片が提供される。
【０２８３】
別の実施形態は、炎症性および自己免疫疾患、癌または腫瘍、肺疾患、線維性肺疾患、敗血症、筋ジストロフィー、アレルギー、腎線維症、強皮症、拡張型心筋症、シャーガス病、循環器疾患、精神神経疾患、糖尿病および眼病からなる群より選択されるＭＭＰ９関連疾患、またはその他のいずれかのＭＭＰ９関連疾患もしくは疾患の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０２８４】
別の実施形態は、炎症性および自己免疫疾患、炎症性腸疾患、癌または腫瘍、線維性疾患、循環器疾患、精神神経疾患または眼病からなる群より選択されるＭＭＰ９関連疾患の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０２８５】
別の特定の実施形態は、炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患、特にクローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、不確定大腸炎、コラーゲン形成大腸炎を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、全身性硬化症、多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０２８６】
別の特定の実施形態は、喘息、特発性肺線維症のような線維性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む肺疾患、または敗血症、筋ジストロフィー、アレルギー、腎線維症、強皮症、拡張型心筋症、シャーガス病、循環器疾患、精神神経疾患、糖尿病および眼病から選択される疾患の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０２８７】
さらに別の特定の実施形態は、癌または腫瘍、特に造血器腫瘍、脳腫瘍、乳癌、頭頚部癌、膵臓癌、卵巣癌、膀胱癌、肺癌、肝臓癌、メラノーマ、前立腺癌、筋肉癌、間葉系癌、食道胃腺癌、非小細胞肺癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃腺癌、膵臓腺癌、肝細胞癌からなる群より選択される癌、さらに詳細には結腸直腸癌または腺癌の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０２８８】
さらに別の特定の実施形態は、線維性疾患、特に全身性硬化症、結合組織増殖症候群、骨髄移植レシピエントにみられる皮膚硬化型移植片対宿主病、腎性全身性線維症、肺線維症、肝線維症、腎線維症、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、骨髄線維症および全身性エリテマトーデスの予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０２８９】
さらに別の特定の実施形態は、眼病、特に水晶体の線維性病変、角膜疾患、糖尿病性網膜症、「萎縮型」または「滲出型」の加齢性黄斑変性症、増殖性硝子体網膜症、白内障形成、翼状片、円錐角膜、加齢性黄斑変性症および糖尿病性網膜症の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０２９０】
さらに別の特定の実施形態は、循環器疾患、特に高血圧症、肺高血圧症、肺疾患または三尖弁疾患、大動脈疾患および僧帽弁疾患、大動脈縮窄、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全、虚血性心筋症、拡張型心筋症、慢性不整脈、心線維症および冠動脈疾患の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０２９１】
さらに別の特定の実施形態は、神経障害、特に筋委縮性側索硬化症、アルツハイマー病、多発性硬化症、神経炎症、脳虚血および神経因性疼痛の予防および／または治療に使用するための、本発明の抗体またはその断片を提供する。
【０２９２】
別の実施形態によれば、炎症性および自己免疫疾患、癌または腫瘍、肺疾患、線維性肺疾患、敗血症、筋ジストロフィー、アレルギー、腎線維症、強皮症、拡張型心筋症、シャーガス病、循環器疾患、精神神経疾患、糖尿病および眼病からなる群より選択されるＭＭＰ９関連疾患、またはその他のいずれかのＭＭＰ９関連疾患もしくは疾患を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０２９３】
特定の実施形態によれば、炎症性および自己免疫疾患、炎症性腸疾患、癌または腫瘍、線維性疾患、循環器疾患、精神神経疾患または眼病を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０２９４】
特定の一実施形態によれば、被験体の炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患を予防および／または治療する医薬組成物、特にクローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、不確定大腸炎、コラーゲン形成大腸炎を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、全身性硬化症、多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０２９５】
特定の実施形態によれば、炎症性腸疾患、特に浸潤性および狭窄性クローン病ならびに潰瘍性大腸炎を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０２９６】
特定の一実施形態によれば、喘息、特発性肺線維症のような線維性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む肺疾患、または敗血症、筋ジストロフィー、アレルギー、腎線維症、強皮症、拡張型心筋症、シャーガス病、循環器疾患、精神神経疾患、糖尿病および眼病から選択される疾患を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０２９７】
別の実施形態によれば、癌または腫瘍を予防および／または治療する医薬組成物、特に造血器腫瘍、脳腫瘍、乳癌、頭頚部癌、膵臓癌、卵巣癌、膀胱癌、肺癌、肝臓癌、メラノーマ、前立腺癌、筋肉癌、間葉系癌、食道胃腺癌、非小細胞肺癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃腺癌、膵臓腺癌、肝細胞癌からなる群より選択される癌、さらに詳細には結腸直腸癌または腺癌を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０２９８】
特定の実施形態によれば、結腸直腸癌または腺癌を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０２９９】
特定の実施形態によれば、線維性疾患、特に全身性硬化症、結合組織増殖症候群、骨髄移植レシピエントにみられる皮膚硬化型移植片対宿主病、腎性全身性線維症、肺線維症、肝線維症、腎線維症、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、骨髄線維症および全身性エリテマトーデスを予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０３００】
特定の実施形態によれば、眼病、特に水晶体の線維性病変、角膜疾患、糖尿病性網膜症、「萎縮型」または「滲出型」の加齢性黄斑変性症、増殖性硝子体網膜症、白内障形成、翼状片、円錐角膜、加齢性黄斑変性症および糖尿病性網膜症を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０３０１】
特定の実施形態によれば、循環器疾患、特に高血圧症、肺高血圧症、肺疾患または三尖弁疾患、大動脈疾患および僧帽弁疾患、大動脈縮窄、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全、虚血性心筋症、拡張型心筋症、慢性不整脈、心線維症および冠動脈疾患を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０３０２】
特定の実施形態によれば、神経障害、特に筋委縮性側索硬化症、アルツハイマー病、多発性硬化症、神経炎症、脳虚血および神経因性疼痛を予防および／または治療する医薬組成物を調製するための、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の使用が提供される。
【０３０３】
別の実施形態によれば、炎症性および自己免疫疾患、癌または腫瘍、肺疾患、線維性肺疾患、敗血症、筋ジストロフィー、アレルギー、腎線維症、強皮症、拡張型心筋症、シャーガス病、循環器疾患、精神神経疾患、糖尿病、および眼病からなる群より選択されるＭＭＰ９関連疾患、またはその他のいずれかのＭＭＰ９関連疾患もしくは疾患を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３０４】
特定の実施形態によれば、炎症性および自己免疫疾患、炎症性腸疾患、癌または腫瘍、線維性疾患、循環器疾患、精神神経疾患または眼病を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３０５】
特定の実施形態によれば、炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患を予防および／または治療するための方法、特にクローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、不確定大腸炎、コラーゲン形成大腸炎を含む炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、シェーグレン症候群、全身性硬化症、多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症を予防または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３０６】
特定の実施形態によれば、炎症性腸疾患を予防および／または治療するための方法、特に浸潤性および狭窄性クローン病ならびに潰瘍性大腸炎を予防または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３０７】
別の特定の実施形態によれば、喘息を含む肺疾患、特発性肺線維症のような線維性肺疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む肺疾患、または敗血症、筋ジストロフィー、アレルギー、腎線維症、強皮症、拡張型心筋症、シャーガス病、循環器疾患、精神神経疾患、糖尿病および眼病から選択される疾患を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３０８】
別の実施形態によれば、癌または腫瘍を予防および／または治療するための方法、特に造血器腫瘍、脳腫瘍、乳癌、結腸直腸癌、頭頚部癌、膵臓癌、肺癌、肝臓癌、メラノーマ、前立腺癌、筋肉癌、間葉系癌、食道胃腺癌、非小細胞肺癌、肺扁平上皮癌、肺腺癌、胃腺癌、膵臓腺癌、肝細胞癌、結腸直腸癌および肝細胞癌からなる群より選択される癌を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３０９】
特定の実施形態によれば、結腸直腸癌または腺癌を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３１０】
特定の実施形態によれば、線維性疾患、特に全身性硬化症、結合組織増殖症候群、骨髄移植レシピエントにみられる皮膚硬化型移植片対宿主病、腎性全身性線維症、肺線維症、肝線維症、腎線維症、関節リウマチ、クローン病、潰瘍性大腸炎、骨髄線維症および全身性エリテマトーデスを予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３１１】
特定の実施形態によれば、眼病、特に水晶体の線維性病変、角膜疾患、糖尿病性網膜症、「萎縮型」または「滲出型」の加齢性黄斑変性症、増殖性硝子体網膜症、白内障形成、翼状片、円錐角膜、加齢性黄斑変性症および糖尿病性網膜症を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３１２】
特定の実施形態によれば、循環器疾患、特に高血圧症、肺高血圧症、肺疾患または三尖弁疾患、大動脈疾患および僧帽弁疾患、大動脈縮窄、アテローム性動脈硬化症、心筋梗塞、心不全、虚血性心筋症、拡張型心筋症、慢性不整脈、心線維症および冠動脈疾患を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３１３】
特定の実施形態によれば、神経障害、特に筋委縮性側索硬化症、アルツハイマー病、多発性硬化症、神経炎症、脳虚血および神経因性疼痛を予防および／または治療するための方法が提供され、該方法は、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、必要に応じて被験体に投与することを含む。
【０３１４】
別の実施形態によれば、生体試料中のＭＭＰ９を検出するための方法が提供され、該方法は、被験体由来の生体試料を、本発明のＭＭＰ９特異的な抗体またはその抗原結合断片に接触させることを含む。
【０３１５】
本明細書で用いられる「生体試料」は、被験体、特に炎症性疾患もしくは自己免疫疾患および／または癌もしくは腫瘍が疑われるかもしくはこれらを患っている被験体、またはこのような疾患にかかるリスクの高い被験体から得た、細胞、組織サンプルまたは細胞成分（例えば細胞膜または細胞成分）を指す。
【０３１６】
生体試料としては、血液、血清、血漿、脳脊髄液、滑液、尿、糞便、および前記組織から単離された細胞を含む組織サンプルが挙げられる。組織サンプルには、ホルマリン固定されたかまたは凍結された組織切片が含まれる。
【０３１７】
ＭＭＰ９の検出および分析には、当該技術分野において公知の診断用アッセイ技術、例えば、不均一相または均一相のいずれかによって行われる、競合的結合アッセイ、直接または間接サンドイッチアッセイおよび免疫沈降アッセイのような、いずれかの適切な方法を用いることができる。
【０３１８】
特定の実施形態によれば、本発明は、生体試料中のＭＭＰ９タンパク質の存在および／または濃度を検出するためのｅｘ  ｖｉｖｏ法を提供し、該方法は以下の工程、
（ｉ）被験体由来の生体試料を提供する工程、
（ｉｉ）前記生体試料を、少なくとも１つの本発明の抗体またはその抗原結合断片と、前記生体試料中に存在するＭＭＰ９タンパク質の、前記少なくとも１つの抗体またはその断片への、抗原−抗体相互作用を介した結合に十分な条件下で、反応させる工程、および
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）において形成された抗原−抗体複合体のレベルに比例したシグナルを検出する工程であって、
シグナル強度が、生体試料中のＭＭＰ９タンパク質の濃度と相関する工程
を含む。
【０３１９】
特定の実施形態によれば、本発明は、生体試料中の活性化ＭＭＰ９タンパク質の存在および／または濃度を検出するためのｅｘ  ｖｉｖｏ法を提供し、該方法は以下の工程、
（ｉ）被験体由来の生体試料を提供する工程、
（ｉｉ）前記生体試料を、少なくとも１つの本発明の抗体またはその抗原結合断片と、前記生体試料中に存在する活性化ＭＭＰ９タンパク質の、前記少なくとも１つの抗体またはその断片への、抗原−抗体相互作用を介した結合に十分な条件下で、反応させる工程、および
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）において形成された抗原−抗体複合体のレベルに比例したシグナルを検出する工程であって、
シグナル強度が、生体試料中の活性化ＭＭＰ９タンパク質の濃度と相関する工程
を含む。
【０３２０】
特定の実施形態によれば、本発明は、生体試料中の活性化ＭＭＰ９タンパク質の存在および／または濃度を検出するためのｅｘ  ｖｉｖｏ法を提供し、ここで本発明の少なくとも１つの抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１９の重鎖可変領域と、配列番号７０の軽鎖可変領域とを含む。
【０３２１】
さらに詳細には、被験体の生体試料に由来するＭＭＰ９の濃度上昇に付随する、炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患または癌を予想または診断するためのｅｘ  ｖｉｖｏ法が提供され、該方法は以下の工程、
（ａ）被験体由来の生体試料を提供する工程、
（ｂ）前記生体試料を、少なくとも１つの本発明の抗体またはその断片が結合した固体基質と接触させる工程であって、接触が、前記生体液体試料中に存在するＭＭＰ９タンパク質の、前記少なくとも１つの抗体またはその断片への、抗原−抗体相互作用を介した結合に十分な条件下で行われる工程、
（ｃ）未結合のＭＭＰ９タンパク質を、前記固体基質の表面から除去する工程、
（ｄ）前記固体基質に結合した抗原−抗体複合体のレベルに比例したシグナルを検出する工程、
（ｅ）工程（ｄ）において検出されたシグナルレベルを、同じ条件下で陰性対照を用いて検出されたシグナルレベルと比較する工程であって、
被験体のサンプルにおいて検出されたシグナルレベルが、陰性対照において検出されたシグナルレベルよりも高い場合、炎症性疾患および／もしくは自己免疫疾患または癌に付随するＭＭＰ９の濃度上昇を示している工程
を含む。
【０３２２】
キット
本発明の一態様は、少なくとも１つの本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、および／または少なくとも１つの、前記抗体もしくはその断片をコードする核酸、および／または少なくとも１つの、前記核酸を含むベクター、および／または少なくとも１つの本発明の宿主細胞、および任意に使用説明書を含むキットに関する。
【０３２３】
特定の実施形態によれば、本発明のキットは、固体基質に結合させるための、または既に結合している、少なくとも１つの本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を含む。
【０３２４】
本発明に適した固体基質としては、免疫アッセイまたは本発明の方法の実行に適したいずれかの固相担体、例えば、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ニトロセルロース、石英、セラミック、デキストランまたはその他の材料から形成されたか、またはそれらによってコートされた、ビーズ、微粒子、ナノ粒子、チューブ、布またはプレート、フィルム、スライド、ウェルが挙げられる。例えば、固体基質は、９６ウェルマイクロタイタープレートのような、マイクロタイターウェルの形態である。
【０３２５】
本発明のキットに含まれる固体基質への、本発明の抗体またはその断片の固定は、固相担体への吸着または化学結合によって行われてよい。タンパク質またはペプチドを固相支持体に固定化するための、当該技術分野において公知のいずれかの手段を用いることができる。本発明の抗体またはその断片は、アミドもしくはエステル結合または吸着を通した共有結合のような技術によって、共有結合性または非共有結合性に、固体基質へ結合させることができる。ペプチドは、ビオチンとアビジン、または抗体と抗原のような結合ペアを用いて結合させることができる。ペプチドを固体基質に付着させた後、固体基質は、ブロッキング液（ウシ血清アルブミンのようなブロッキングタンパク質を含んでいる）と共にインキュベートさせて、試験サンプル中の抗体の、担体表面への非特異的吸着を減少させることができる。一態様によれば、本発明の抗体またはその断片は、本発明のキットの固体基質上に直接合成することができる。
【０３２６】
一実施形態によれば、該キットが、固相担体としての固体基質へ結合させるための、少なくとも１つの本発明の抗体もしくはその断片またはそれらの組み合わせを含む場合、該キットはさらに、免疫アッセイを行うためのカップリング試薬および／または固体基質を任意に含んでもよい。
【０３２７】
別のさらなる実施形態によれば、本発明のキットは、検出のバックグラウンドノイズを回避するように、検出前に未結合物質を洗浄するための、少なくとも１つの洗浄試薬をさらに含んでもよい。典型的には、洗浄試薬は、当該技術分野において公知の標準的な緩衝液を含む。
【０３２８】
本明細書に引用される参考文献は、その全体が参照により本明細書に取り込まれる。本明細書に記載した特定の実施形態は本発明の個別の態様に関する単一の例証を意図したものであり、本発明はこれらの実施形態の範囲に限定されるものではなく、機能的に等価な方法および構成要素も本発明の範囲内にある。実際に本明細書の提示および記載に加え、本発明の様々な改変が、前述の記述および添付の図面から当業者には明らかとなるであろう。このような改変は、添付の請求項の範囲内にあることが意図されたものである。
【０３２９】
本発明について記載してきたが、以下の実施例の目的は例示のみであって、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【０３３０】
実施例１：本発明の抗ＭＭＰ９抗体の産生と単離
本発明の抗ＭＭＰ９抗体は、以下の工程を実行することによって得た。
１／ファージディスプレイヒットディスカバリー（ＨＤ）
ＳｃＦｖ断片の源としてＳｃＦｖライブラリーを用いた。このライブラリーは、ナイーブ由来（すなわち免疫していない健常ヒトドナーのＰＢＭＣを用いて構築した）の、中程度サイズ（約２．５．１０９の、ＶＨ／ＶＬの組み合わせ）であり、クローン選択もクラススイッチもされていないＩｇＭレパトア由来のＶＨドメインを含む。このライブラリーを用いて、最初に、ヒトまたはマウスＭＭＰ９（完全長、プロ、および活性化型）への結合に基づいたファージディスプレイによってＳｃＦｖの候補を選択し、これらのＳｃＦｖをＩｇＧ１に再フォーマットした後、ＭＭＰ９活性の機能的な中和について（特にＩＣ５０、種選択性、中和の様式（プロＭＭＰ９またはＭＭＰ９）を決定することによって）スクリーニングした。
【０３３１】
この工程によって候補となる１０抗体が同定され、これらは機構的に２つのクラス、すなわち抑制型プロＭＭＰ９の活性化への干渉によってＭＭＰ９活性を遮断する抗体（プロドメインが、抗体によって認識されるエピトープの一部であることが示唆される）と、活性化ＭＭＰ９の触媒活性に直接的に干渉する抗体（ＣＡＴ＿ｆｎドメインが、抗体によって認識されるエピトープの一部であることが示唆される）とに分類され得る。
【０３３２】
２／親和性成熟のためのＶＬ鎖シャッフリングによるヒット最適化（ＨＯ）：
以前の工程において得られたＨＤ候補のうちの４つを、ラムダ軽鎖シャッフリングを介したヒット最適化に供することで、それらの効力を改善させた。基本的には、親となるＨＤクローンのＶＨ鎖を、元のライブラリーに含まれる全部のＶＬラムダに対して並び替え、幾つかの新規クローンに特異的なライブラリーを作製した。
【０３３３】
３／リード最適化：
２つのＨＯ候補（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０３−ＶＬｃおよびＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ）を、それらの作用機序、すなわちＭＭＰ９酵素活性の阻害に基づいて、特に（ｉ）最も近いヒト生殖系列からの配列の逸脱を最小限にして、潜在的に生物物理学的特性を改善させ、かつ免疫原性リスクを減少させるために、フレーム構造残基（Ｋａｂａｔにより定義される）を生殖系列化することによる最適化、および（ｉｉ）抗体の化学的不安定性または凝集を導き得る、ＣＤＲ内の幾つかのアミノ酸またはアミノ酸モチーフの変更、を介したリード最適化および特徴付けのために選択した。この戦略によって、上記の表２に示す、ＶＨ／ＶＬ領域を含む抗体の産生が可能となった。
【０３３４】
次に以下の実施例において、第３表に示した特定のＶＨ／ＶＬ領域を、さらなる特徴付けのためヒトＩｇＧ４に再フォーマットした。この目的のため、関心のあるＶＨおよびＶＬ鎖をコードする核酸をｐＴＴベクター（元の鎖とのクローニングの適合性のために改変された）内にクローン化して、ＩｇＧ４をＨＥＫ２９３細胞内に一過性に共発現させた。
【０３３５】
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【０３３６】
実施例２：ヒトＭＭＰ３／ＭＭＰ９およびヒトＭＭＰ９活性のアッセイにおける、幾つかの本発明の抗ＭＭＰ９抗体の効力および有効性
本発明の幾つかの抗体による、蛍光ポリマー基質ＤＱ−ゼラチンに対するＭＭＰ９の触媒活性の機能的中和を評価した。
【０３３７】
ＭＭＰ９（およびＭＭＰ２）の特徴的な活性はゼラチンの分解である。ゼラチンは、基本的には様々なコラーゲンに由来する非可逆的な変性型であり、それらのうちの幾つかは、ＭＭＰ９の重要な生理的基質であるとみなされる。小ペプチドの基質とは異なり、ＭＭＰ９によるゼラチンの結合および認識（コラーゲンの結合および認識も同様）は複雑であり、フィブロネクチンドメインおよびＰＥＸドメインのような、活性部位以外の分子領域を介することが知られている。これらの生理的関連性のある「エキソサイト」の相互作用を保持し、かつ潜在的な「非古典的」アロステリック中和物質の類の単離を容易にするため、プレートを用いたスクリーニングおよびランキングには、蛍光をクエンチされた可溶性ゼラチンポリマー（ＤＱ−ゼラチン）を主要な基質として選択した。基質の加水分解は、ＭＭＰ９の切断型の断片（すなわちプロドメインが除去されたもの）によって仲介された。このアッセイは、２つの様式によって行った。
【０３３８】
第１の様式は、「ＭＭＰ９アッセイ」と称され、予め活性化されたＭＭＰ９（未変性の切断接合部にＬＥＴＤカスパーゼ８認識モチーフを含む、改変ＭＭＰ９に由来する）を用いたものであり、プロドメインは、カスパーゼ８による切断を介して最初に除去された。第２の様式は、「ＭＭＰ３／ＭＭＰ９アッセイ」と称され、プロドメインの除去（すなわち活性化工程）を、アッセイ内に追加の関連過程として組み入れるように工夫されたものである。これは、アッセイカクテル中のヒトＭＭＰ３触媒ドメイン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、４４４２１７−５）および完全長（抑制型）プロＭＭＰ９と、ＤＱ−ゼラチン基質（Ｌｕｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｄ１２０５４）および試験抗体とを組み合わせることによって達成された。ＭＭＰ９に生理的な関連のある活性化因子とみなされるＭＭＰ３は、連続的な２工程の機構を介してプロドメインを除去することが示されており（Ｏｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（６）：３５８１−４）、ＭＭＰ３は患部組織においてしばしばＭＭＰ９と共発現している。重要なことは、活性化ＭＭＰ３それ自体がＤＱ−ゼラチン基質を著しく切断するとは考えられないということである。このように、このアッセイにおけるＤＱ−ゼラチンの加水分解（蛍光の発光）は、ＭＭＰ３を介したＭＭＰ９の活性とＭＭＰ９に固有の触媒活性とに依存したものであり、いずれかの過程に干渉する中和物質を特徴付けるための可能性を示すものである。
【０３３９】
このように「ＭＭＰ３／ＭＭＰ９アッセイ」は、プロＭＭＰ９の活性化およびその下流の触媒活性を中和する抗ＭＭＰ９抗体の能力を決定するために用いた。簡単に述べると、組換えヒトプロＭＭＰ９の一定分量を、様々に希釈した試験抗体と共に１時間プレインキュベートした。ヒトＭＭＰ３の組換え触媒ドメインを、ＭＭＰ９特異的な蛍光基質ＤＱ−ゼラチンと共に加えることによって、消化を開始させた。放射された蛍光シグナル（４８５ｎｍにおける励起、５２０ｎｍにおける発光）は、ゼラチン基質の消化、すなわち成熟ＭＭＰ９酵素の触媒活性に比例する。蛍光シグナルを抗体濃度に対してプロットし、非線形回帰曲線から半数阻害値（ＩＣ５０値）を推定した。
【０３４０】
「ＭＭＰ９アッセイ」は、成熟ＭＭＰ９の触媒活性を直接中和する抗ＭＭＰ９抗体の能力を決定するために用いた。簡単に述べると、このアッセイは「ＭＭＰ３／ＭＭＰ９アッセイ」と同様であるが、プロＭＭＰ９の代わりに、触媒活性のあるカスパーゼによって切断された組換えＭＭＰ９を用いる。したがって、ヒトＭＭＰ３の組換え触媒ドメインは添加しなくてもよい。
【０３４１】
両方の酵素アッセイにおいて試験を行った本発明の抗体のすべては、ＤＱ−ゼラチンの消化を効率的に低下させた。この結果により、本発明の抗体のすべては、プロＭＭＰ９の、触媒活性のある酵素への活性化を遮断すること、および／または、ＭＭＰ９の触媒活性を遮断することが示される（第４表、図６）。
【０３４２】
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【０３４３】
「ＭＭＰ９アッセイ」を、高度に精製された活性化ＭＭＰ９と共に用いて、本発明の抗体Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃと、比較抗体１（ＡＢ００４１として知られる抗体であり、配列番号４４の重鎖および配列番号４５の軽鎖のアミノ酸配列を有する）とを比較した。本発明の抗体Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃのみが、２．６ｎＭのＩＣ５０によってＤＱ−ゼラチンの消化を効率的に低下させたが、比較抗体１は不活性であった。この結果により、本発明の抗体Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃはＭＭＰ９の酵素活性に対する阻害物質であるが、比較抗体１はそうでないことが示された。
【０３４４】
「ＭＭＰ３／ＭＭＰ９アッセイ」において、本発明の抗体Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃおよび比較抗体１は、それぞれ９．５２ｎＭおよび０．２０ｎＭのＩＣ５０によってＤＱ−ゼラチンの消化を効率的に低下させた。まとめると、これら２つの酵素アッセイの結果により、比較抗体１はＭＭＰ９活性化の阻害物質であり、一方で抗体Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃはＭＭＰ９の触媒活性の阻害物質であると共に、ＭＭＰ９活性化の阻害物質でもある可能性が示された。
【０３４５】
実施例３：ＭＭＰ３／ＭＭＰ９アッセイにおける、幾つかの本発明の抗ＭＭＰ９抗体の種特異性
実施例２に記載した「ＭＭＰ３／ＭＭＰ９アッセイ」を用いて、抗ＭＭＰ９抗体による酵素抑制活性の種特異性を評価した。用いた酵素は、カニクイザル（ｃｙｎｏ）、ラット、またはマウスプロＭＭＰ９のいずれかであった。
【０３４６】
試験を行った本発明の幾つかの抗体は、カニクイザル（ｃｙｎｏ）、ラット、およびマウスプロＭＭＰ９の活性化および／または下流の触媒活性を効率的に遮断することができた（それぞれ第５表、第６表、および第７表）。
【０３４７】
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【０３４８】
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【０３４９】
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【０３５０】
実施例４：ヒトＭＭＰの触媒活性アッセイにおける、幾つかの本発明の抗ＭＭＰ９抗体のＭＭＰ選択性
抗ＭＭＰ９抗体の選択性を、蛍光ペプチド基質であるＯｍｎｉＭＭＰ（商標）ＲＥＤ（Ｅｎｚｏ、ＢＭＬ−Ｐ２７７−９０９０）の、ＭＭＰを介した切断を評価する、ＭＭＰ阻害物質プロファイリングキット（Ｅｎｚｏ、ＢＭＬ−ＡＫ３０８）を用いたアッセイによって評価した。簡単に述べると、様々なヒトＭＭＰ（ＭＭＰ１、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４およびＭＭＰ１９）の組換え触媒ドメインの一定分量を、固定された濃度（１００ｎＭ）の試験抗体と共に１時間プレインキュベートした。試験には、ＭＭＰ阻害剤であるＮＮＧＨ（Ｅｎｚｏ、ＢＭＬ−ＰＩ１１５−９０９０）、ならびに陽性および陰性対照としての抗ＭＭＰ２／９（５３９Ａ−Ｍ０２３７−Ｄ０２、配列番号６４の重鎖および配列番号６５の軽鎖のアミノ酸配列を有する比較抗体３）、抗ＭＭＰ９（５３９Ａ−Ｍ０２４０−Ｂ０３、配列番号４６の重鎖および配列番号４７の軽鎖のアミノ酸配列を有する比較抗体２）、およびアイソタイプ対照（抗ＨＥＬ  ＩｇＧ１）抗体が含まれた。次に蛍光ペプチド基質を加え、蛍光を測定した。放射された蛍光シグナルは、ペプチド基質の消化、すなわちＭＭＰ触媒ドメインの活性に比例する。阻害物質の非存在下での蛍光シグナルを、１００％活性として標準化した。各阻害物質の存在下で得られたシグナルの、この値に対する相対値を求め、残存活性のパーセンテージとした。
【０３５１】
試験した本発明の抗体のすべては、ヒトＭＭＰ９の触媒活性を効率的に遮断することができたが、試験したその他の８種のヒトＭＭＰの触媒活性に対しては、有意な効果を示さなかった（図７）。本発明の抗体のすべては、ヒトＭＭＰ７、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１６およびＭＭＰ１７の触媒活性に対しても、有意な効果を示さなかった（データ未提示）。
【０３５２】
実施例５：好中球から分泌された天然型のヒトＭＭＰ９を用いた活性アッセイにおける、本発明の抗ＭＭＰ９抗体の効力
ヒトＭＭＰ９については幾つかの天然型が報告されており（単量体ＭＭＰ９、二量体ＭＭＰ９、および好中球ゼラチナーゼＢ関連リポカリンＮＧＡＬ結合型のＭＭＰ９（リポカリン２とも呼ばれる）、この後者の型はＮＧＡＬ／ＭＭＰ９とも称される（Ｒｕｄｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３８，１３９３７−１３９５０））、疾患状態と関連することが示されている。
【０３５３】
本発明の抗ＭＭＰ９抗体のさらなる特徴付けには、好中球由来の天然型ＭＭＰ９の中和が含まれる。この目的のため、蛍光基質であるＯｍｎｉＭＭＰ（商標）ＲＥＤ（ＥＮＺＯから入手）に対する好中球由来ＭＭＰ９の触媒活性の、本発明の抗体による機能的中和を評価した。
【０３５４】
好中球由来ＭＭＰ９調製物中のプロＭＭＰ９画分を、ＡＰＭＡ（ｐ−アミノフェニル水銀アセテート）を用いた前処理によって活性化させた。これによって、本発明のＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ抗ＭＭＰ９抗体バリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）による機能的中和アッセイの前に、ＭＭＰ９の触媒部位が利用可能となる。簡単に述べると、様々なＡＰＭＡ活性化好中球由来のヒト型プロＭＭＰ９（単量体、二量体およびＮＧＡＬ／ＭＭＰ９）の一定分量を、試験抗体と共に１時間プレインキュベートした。試験には、陰性対照としてアイソタイプ対照（抗ＨＥＬ  ＩｇＧ４）抗体が含まれた。次に蛍光ペプチド基質を加え、蛍光を測定した。放射された蛍光シグナル（５４０ｎｍにおける励起、５９０ｎｍにおける発光）は、ペプチド基質の消化、すなわちＭＭＰ触媒ドメインの活性に比例する。
【０３５５】
図８に示すように、本発明のＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ抗体バリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）は、ヒトＭＭＰ９の複数の生理的な型、すなわち単量体ＭＭＰ９、二量体ＭＭＰ９およびＮＧＡＬ／ＭＭＰ９の活性を、１００％の有効性によって中和する。
【０３５６】
実施例２に記載した「ＭＭＰ３／ＭＭＰ９アッセイ」を用いて、本発明の抗体を比較抗体１と比較した。本発明のＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ抗体バリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）は、ヒト好中球由来ＭＭＰ９の酵素活性を、単量体もしくは二量体またはＮＧＡＬ結合型にかかわらず、１００％の有効性によって阻害するが（図９）、比較抗体１は、好中球由来ＭＭＰ９の全ての型に対して、部分的な阻害（２５％の有効性）のみを示した（図９）。本発明の抗体バリアントＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）により、すべての天然活性化型ＭＭＰ９が完全に中和されることは、単量体、二量体ＭＭＰ９および／またはＮＧＡＬ／ＭＭＰ９複合体の血清濃度が高い患者に対する優れた有効性への橋渡しとなるはずである。
【０３５７】
実施例６：プロ型および活性化型ヒトＭＭＰ９に対する、本発明の抗ＭＭＰ９抗体の結合動態および親和性
組換えヒトＭＭＰ９抗原への抗ＭＭＰ９抗体の結合を、標準的な表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを用いて特徴付けた。第１工程では、ＢＩＡｃｏｒｅセンサーチップ上に固定化された抗ヒトＦｃ抗体によって、抗ＭＭＰ９抗体を捕捉した。第２工程では、プロＭＭＰ９またはＭＭＰ３により活性化されたＭＭＰ９を、２倍希釈によって４．７から１５０ｎＭまで用量設定した。センサーグラムにより、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）および比較抗体１の両方が、ＭＭＰ３により活性化されたＭＭＰ９へ良好に結合することが示された（図１０）。比較抗体１はまた、プロＭＭＰ９へも良好に結合するが、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）抗体によって観察されたシグナルは最小であった（図１０）。第８表に、本発明のＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ抗体バリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）および比較抗体１の、組換えヒトプロＭＭＰ９およびＭＭＰ３により活性化されたＭＭＰ９への結合親和性（ＫＤ）を示す。１５０ｎＭの抗体濃度で観察される結合は１％未満であったことから、プロＭＭＰ９に対するＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ抗体バリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）のＫＤは１５μＭを超えると推定された。
【０３５８】
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【０３５９】
実施例７：本発明の抗ＭＭＰ９抗体のエピトープマッピング
本発明の抗ＭＭＰ９抗体のさらなる特徴付けには、抗体の結合に重要であり、それによってエピトープを定義する、ヒトＭＭＰ９の領域の同定が含まれた。この特徴付けは、Ｆ２０／Ｂ０８およびＦ２０／Ｂ０３抗体それぞれから１つのメンバー、すなわちＦ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ１−Ｖ９−Ｖ１４／Ｂ０３−ＶＬ−ＧＬ１ｃおよびＦ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃについて行った。
【０３６０】
本発明の抗ＭＭＰ９抗体へ特異的に結合するＭＭＰ９エピトープを決定するために用いられる技術は、化学架橋およびマススペクトロメトリーである（Ｐｅｔｅｒ  ａｎｄ  Ｔｏｍｅｒ，２００１，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，７３，４０１２−４０１９；Ｐｉｍｅｎｏｖａ  ｅｔ  ａｌ，２００８，Ｊ．Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．ＪＭＳ，４３，１８５−１９５；Ｈｅｒｚｏｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３３７，１３４８−１３５２）。最初に、本発明の抗体とプロＭＭＰ９とを溶液中で混合し、特別に考案された重水素化架橋剤を用いた化学架橋に供した。次に、ＭＭＰ９配列の全体を網羅する多数の重複ペプチドを産生させるために、ＭＭＰ９と共有結合したＭＭＰ９抗体との複合体を、３種の異なるタンパク質分解酵素を用いたタンパク質分解に供した。ＭＭＰ９単独由来のペプチドおよび架橋結合したＭＭＰ９−抗体複合体由来のペプチドを、高解像度マススペクトロメトリー（ｎＬＣ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ  ＭＳ）によって分析した後、免疫複合体において相互作用しているペプチドを決定するために比較した。
【０３６１】
この分析によって、ヒトＭＭＰ９（配列番号１）と本発明の抗体とが相互作用する接触面は、３つの非連続的なＭＭＰ９エピトープに位置することが示され、これらには以下のＭＭＰ９アミノ酸配列が含まれる。
配列番号４１：１５０ＡＶＴＰＬＴＦＴＲＶＹＳＲＤＡＤＩＶＩＱＦ１７０（ヒトＭＭＰ９のアミノ酸位置１５０から１７０に相当する）（本明細書では領域１と称される）、
配列番号４２：１９８ＩＱＧＤＡＨＦＤＤＤＥＬＷＳＬＧＫＧＶＶＶＰＴＲＦＧ２２３（ヒトＭＭＰ９のアミノ酸位置１９８から２２３に相当する）（本明細書では領域２と称される）、および
配列番号４３：４１９ＭＹＰＭＹＲＦＴＥＧＰＰＬＨＫＤＤＶＮＧＩＲ４４０（ヒトＭＭＰ９のアミノ酸位置４１９から４４０に相当する）（本明細書では領域３と称される）。
【０３６２】
比較抗体１のＭＭＰ９への結合に重要なアミノ酸を決定するために、ヒトＭＭＰ９の様々な組換え変異体を用いた（マウスモノクローナルＡＢ００４１、国際公開第２０１３／１３００７８号）。この分析により、残基Ｅ１１１、Ｄ１１３、Ｒ１６２およびＩ１９８が、比較抗体１のヒトＭＭＰ９への結合に重要であるとして同定された。これらのアミノ酸のうちの２つ、Ｒ１６２およびＩ１９８は、本発明の抗ＭＭＰ９抗体によって認識されるエピトープ領域内に存在する（領域１および領域２）。しかしながら、領域３は本発明の抗ＭＭＰ９抗体にとって、特に重要な新規エピトープ領域を定義する。領域３はＭＭＰ９の触媒ドメイン内にある。本発明の抗ＭＭＰ９抗体は比較抗体１とは異なり、完全な成熟型ＭＭＰ９の酵素活性を阻害できるが、比較抗体１は完全な成熟型ＭＭＰ９に結合するため、領域３への結合によって、完全な成熟型ＭＭＰ９の酵素活性に対する中和能が、本発明の抗ＭＭＰ９抗体に付与される可能性がある。
【０３６３】
さらに、結合アッセイおよび競合アッセイを用いて、マウスモノクローナル抗体ＲＥＧＡ−３Ｇ１２（Ｍａｒｔｅｎｓら、上記）が、ヒトＭＭＰ９のペプチドＧ１７１からＬ１８７に結合することが示された。ＲＥＧＡ−３Ｇ１２抗体が結合するＭＭＰ９の領域（Ｇ１７１〜Ｌ１８７）は、本発明の抗ＭＭＰ９抗体によって認識される３つのＭＭＰ９領域の外にある。
【０３６４】
実施例８：ヒトＭＭＰ９のプロ型および活性化型に対する抗ＭＭＰ９抗体の直接結合および競合的結合
標準的なＥＬＩＳＡプロトコルを用いて、ヒトプロＭＭＰ９およびＭＭＰ３により活性化されたヒトＭＭＰ９それぞれに対する、抗ＭＭＰ９抗体の直接結合能を評価した。簡単に述べると、９６ウェルプレートに、いずれかの型のＭＭＰ９を、室温にて１６時間コーティングした（２．５μｇ／ｍｌ）。ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ中の２％ヤギ血清）を加えて２時間インキュベートした後、洗浄用緩衝液（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ  ０．０５％ｖ／ｖ）によって４回洗浄した。様々な濃度のビオチン化抗ＭＭＰ９抗体（比較抗体１またはＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ））を二重に加え、１時間インキュベートした。次にウェルを４回洗浄して、結合したビオチン化抗体を、ＨＲＰを結合させたストレプトアビジンとＴＭＢ基質とを用いて明らかにした。それぞれの吸光度を４５０ｎｍおよび６２０ｎｍにて二重に読み取り、データを補正吸光度（Ａ４５０−Ａ６２０）として表した。図１１に示した結果は、比較抗体１およびＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）抗ＭＭＰ９抗体の両方が、ＭＭＰ３により活性化されたＭＭＰ９（図１１Ｂ）に、用量依存性に強く結合することを表している。これとは反対に、比較抗体１はプロＭＭＰ９に対して用量依存性に良く結合するが（図１１Ａ）、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）抗ＭＭＰ９抗体は、試験したうちの最も高い濃度（５μｇ／ｍＬ）においてのみ、プロＭＭＰ９に対して有意な結合を示した（図１１Ａ）。
【０３６５】
ＭＭＰ９への結合に対して、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）抗体が比較抗体１と競合するか否かについて試験するため、同じＥＬＩＳＡアッセイを用いて、ＭＭＰ３により活性化されたＭＭＰ９をコーティングしたが、ビオチン化抗ＭＭＰ９抗体は、精製抗体Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアントまたは比較抗体１を加えてから２時間後に加えた。洗浄用緩衝液を用いて４回洗浄した後、予め決定した至適用量のビオチン化比較抗体１またはＦ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃを加え、１時間インキュベートした。図１１のパネルＣに示した結果は、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）抗ＭＭＰ９抗体の添加は、比較抗体１のＭＭＰ９への結合を阻止しないが、同じ濃度の精製比較抗体１は、ＭＭＰ９へのビオチン化比較抗体１のさらなる結合を完全に阻止することを表している。
【０３６６】
まとめると、これらの結合実験により、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）抗ＭＭＰ９抗体は、比較抗体１とは異なり、プロＭＭＰ９よりも活性型ＭＭＰ９へ優先的に結合すること、およびＭＭＰ９への結合に関して比較抗体１とは競合しないことが示された。
【０３６７】
実施例９：癌細胞浸潤アッセイにおける本発明の抗ＭＭＰ９抗体の効果
マトリゲルをコートされたトランズウェルを用いて癌細胞株の浸潤を評価した。トランズウェルのインサート膜（Ｃｕｌｔｒｅｘより市販されるキット−３４５５−０２４に含まれる）に、基底膜抽出物（ＢＭＥ×０．５；Ｃｕｌｔｒｅｘのキットに含まれる）をコーティングした後、３７℃にて２４時間インキュベートした。一方で、ＭＧＣ８０３（ヒト胃癌細胞株−Ｅａｓｙ−Ｂｉｏ、中国）を、血清飢餓させたＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ−５２４０００２５）（欠乏培地）中で欠乏させた。次に細胞を回収し、１００ｎｇ／ｍｌのＰＭＡ（Ｓｉｇｍａより市販されるホルボール−１２−ミリステート１３−アセテート−Ｐ８１３９）、および２５μＭのＭＭＰ阻害剤（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅより市販されるＧＭ−６００１−ＣＣ１０００）、１０μｇ／ｍｌの抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアントＦ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）、１０μｇ／ｍｌの抗ＩｇＧ４抗体（アイソタイプ対照）または何も無し（培地）、のいずれかを含む欠乏培地中に、０．５×１０６細胞／ｍｌにて再懸濁させた。処理した細胞の１００μｌを、マトリゲルをコートされたトランズウェルにまいた後、トランズウェルの下部に、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ培地５００μｌを加えた。プレートを３７℃にて１６時間インキュベートした。トランズウェル膜の下部をカルセイン−ＡＭと共にインキュベートすると、カルセイン−ＡＭの切断によって生じた蛍光カルセインが細胞数と比例することによって、浸潤細胞を定量した。放射された蛍光シグナル（４８５ｎｍにおける励起、５２０ｎｍにおける発光）は、マトリゲルを通した細胞浸潤の効率を反映する。
【０３６８】
この結果により、抗ＭＭＰ−９抗体Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃバリアント（Ｆ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）は、マトリゲルを通したＭＧＣ８０３癌細胞の遊走を、ＭＭＰ阻害剤ＧＭ−６００１と同様の有効性で、効率的に阻害することが示された（図１２）。転移性細胞は、基底膜を含む周辺組織へ浸潤することによって元の場所から出て行くことから、この結果は、本発明の抗ＭＭＰ９が、転移性の癌に対する効果的な抗遊走性および抗浸潤性の薬物である可能性を示している。
【０３６９】
実施例１０：大腸炎のマウスモデルにおける本発明の抗ＭＭＰ９抗体の活性
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）のデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）誘導性大腸炎マウスモデルは、前臨床試験において広く用いられているモデルである。潰瘍性大腸炎の治療に用いることが承認されている薬物、例えばステロイド、メトロニダゾール、５’−アミノサリチル酸、シクロスポリン、および抗ＴＮＦαによる免疫療法は、ＤＳＳモデルにおける疾患の重症度の低下に対する有効性を示しており、このことは、このモデルが、マウスのデータからヒトの疾患への応用に関連するモデルであることを表している（Ｐｅｒｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０１２：７１８６１７）。マウス大腸炎は、ＤＳＳを添加した飲用水が結腸粘膜に損傷をもたらすことによって誘導される。急性期のＤＳＳ大腸炎の臨床症状には、体重減少および下痢が含まれ得る。急性ＤＳＳ大腸炎の典型的な組織変化はヒトＩＢＤに観察されるものと同様であり、ムチンの減少、上皮の変性、および上皮細胞の消失をもたらす壊死が含まれる。後者は、固有層および粘膜下層内への好中球の浸潤、陰窩炎、陰窩膿瘍、ならびに結腸粘膜および粘膜下層の炎症を伴う。
【０３７０】
本発明の抗ＭＭＰ９抗体の治療上の有効性を、ＢＡＬＢ／ｃマウスのＤＳＳ誘導性大腸炎モデルにおいて評価した。４％（ｗ／ｖ）ＤＳＳを含む飲用水を５日間用いることによって、大腸炎を誘導した。Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ（バリアントＦ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）またはアイソタイプ対照（ＩｇＧ４）抗体を、用量３０ｍｇ／ｋｇにて、１０匹のマウスの群へ６、９および１２日目に腹腔内注射した後、１４日目に動物を屠殺した。
【０３７１】
６、１０および１４日目に大腸下部のビデオ内視鏡検査を行い、疾患の経過を盲検的に評価した。大腸炎は、組織および大腸の範囲に存在する潰瘍、血管新生、および肉芽組織の程度に基づき、以下のように０〜１４のスケールにて視覚的にスコア化した：潰瘍（０、１、２または３）、血管新生のマスキング（０、１、２または３）、肉芽組織（０、１、２または３）、紅斑（０、１、２または３）、関係範囲（０、１：限局性、２：びまん性）。各マウスには、試験した大腸の全範囲を通して観察された損傷に対応する、１つの内視鏡検査スコアを割り当てた。抗体による処置の開始前、６日目の内視鏡スコアが＜５であった動物は、疾患の重症度が十分ではないとみなし、それ以上の分析からは除外した。図１３に示すように、６日目には、両群とも平均内視鏡スコアは同様であったが、試験の終わりの１４日目には、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃによって処置された動物は、アイソタイプ対照抗体によって処置された群に比較して、平均内視鏡スコアの有意な改善（ｐ＝０．００５）を示した。
【０３７２】
試験の終わりに（１４日目）、各マウスから遠位の大腸を切除し、組織検査のためにホルマリン固定、パラフィン包埋、および切片作製を行った。すべての切片をヘマトキシリンとエオジンによって染色した後、処置群に対して盲検的に検査を行った。上皮損傷および炎症性細胞浸潤について、各パラメータ１〜４のスコア化スケールに従って、組織をスコア化した。組織学的スコアは、上皮損傷スコアおよび炎症性細胞浸潤スコアの合計を表すため、０ないし８の範囲となる。結果を図１４に示す。
【０３７３】
ＤＳＳによって処置されたマウスは、上皮の過形成および杯細胞の減少、粘膜および粘膜下層への炎症性細胞の浸潤によって特徴付けられる大腸炎を発生した。幾つかの大腸断面には、陰窩膿瘍、粘膜の浸食、および潰瘍も観察された。図１３に示すように、組織学的スコアの分析は、アイソタイプ抗体処置対照群に比較して、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃによる抗ＭＭＰ９抗体処置が、平均大腸炎重症度スコアを減少させたことを表している。同様に、炎症性細胞浸潤および上皮損傷の平均スコアも、アイソタイプ抗体処置対照群に比較した際、抗ＭＭＰ９抗体処置によって減少した。
【０３７４】
実施例１１：腸管線維症の異所性移植片マウスモデルにおける本発明の抗ＭＭＰ９抗体の活性
重度の粘膜組織の損傷は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の主な特色である。組織の傷害は、周囲の細胞による修復活性の引き金となる。創傷の迅速な閉鎖は、腸壁のバリア機能が損なわれる時間を短縮するために重要であるが、組織の過剰な修復は、主にクローン病（ＣＤ）にみられる線維症を促進することになる。線維症は、１０〜４０％の患者に狭窄の形成をもたらし（Ｃｏｓｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｂｏｗｅｌ  Ｄｉｓ．，８（４）：２４４−５０；Ｆｒｅｅｍａｎ，２００３，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｅｒｏｌ．，３７（３）：２１６−９）、狭窄患者のおおよそ８０％には外科手術が指示される（Ｃｏｓｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２、上記）。
【０３７５】
マウスの腸を切除して異所性移植を行うと、腸上皮は消失し、腸管内腔の線維性閉塞は最高に達し、ヒト腸管線維症の組織学的および分子的特色、例えば管腔壁の肥厚、過剰なコラーゲン沈着、および線維化進行メディエーターの発現が再現される。
【０３７６】
ドナー（緑色蛍光タンパク質によって標識したＣ５７ＢＬ／６−Ｔｇ  ＵＢＣ−ＧＦＰマウス）の小腸切除片を、レシピエントＣ５７ＢＬ／６マウスの首の皮下に移植した。５、８および１０日目に、３０ｍｇ／ｋｇの本発明の抗ＭＭＰ９抗体（Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ、バリアントＦ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃ）またはアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）を、１群あたり５匹のマウスに腹腔内注射した。移植後１４日目に、小腸移植片を外植した。外植後、各移植片を同等な３つの部分に分けた。中央部分を４％ホルマリン中で固定し、組織病理学的評価の準備を行った。外側の２つの部分は、液体窒素中で急速凍結した後、ＲＮＡまたはタンパク質の抽出を行うまで−７０℃にて保管した。
【０３７７】
組織断面をシリウスレッドにより染色することで、コラーゲンを強調した（赤色の染色）。実験の種類を伏せた盲検法により、独立した研究者がコラーゲン層の厚さを決定した。Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｐｈｏｔ顕微鏡に取り付けたＡｘｉｏＣａｍ  ＭＲｃ５を用いて、顕微評価を行った。コラーゲン層の厚さを、ＡｘｉｏＶｉｓｉｏｎ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ４．７．２ソフトウェア（Ｚｅｉｓｓ）によって測定した。代表的な範囲内の８か所から（各時点について８サンプルを調べた）、１００倍の拡大率にて厚さを算出した。統計学的解析はＰＲＩＳＭ６ソフトウェアを用いて行った。群の間の比較には独立Ｔ検定を用いた。
【０３７８】
図１５に示すように、対照アイソタイプと比較して、Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃによる抗ＭＭＰ９処置は、異所性腸移植片における上皮構造の減少を有意に防御し、また図１６に示すように、異所性腸移植片におけるコラーゲン層の厚さを有意に（ｐ＜０．０００１）減少させた。この結果により、本発明の抗ＭＭＰ９抗体は、線維性疾患および瘻孔形成したクローン病に対して有効である可能性が示された。
【０３７９】
実施例１２：皮下にＨＣＴ−１１６ヒト大腸腫瘍細胞を有するスイスヌードマウスにおける抗ＭＭＰ９抗体の効果
ヒト大腸癌細胞株ＨＣＴ−１１６（１×１０７細胞）を、ヌードマウスの右側腹部に皮下注射して、処置を開始する前に〜１００ｍｍ３まで成長させた。本発明の抗ＭＭＰ９抗体Ｆ２０−ＶＨ／Ｂ０８−ＶＬｃ、バリアントＦ２０−ＶＨ−ＧＬ１−Ｖ４−Ｖ９／Ｂ０８−ＶＬ−ＧＬ６ｃまたはアイソタイプ対照抗体ＩｇＧ４を、３週間腹腔内注射した。マウスには、処置の初日に５０ｍｇ／ｋｇ用量の抗体を投与し、それ以降は１週間に２回、３０ｍｇ／ｋｇ用量を投与した。処置開始後２１日目にマウスを屠殺し、分析のために原発腫瘍および転移した臓器を回収した。原発腫瘍の重量および大きさを測定し、リンパ節、肝臓、肺および腹膜の転移病巣の数を視覚的に計数した。
【０３８０】
配列表
ヒトMMP9のアミノ酸配列 (NCBI参照配列: NP_004985.2)
配列番号1
mslwqplvlv llvlgccfaa prqrqstlvl fpgdlrtnlt drqlaeeyly rygytrvaem
rgeskslgpa llllqkqlsl petgeldsat lkamrtprcg vpdlgrfqtf egdlkwhhhn
itywiqnyse dlpravidda farafalwsa vtpltftrvy srdadiviqf gvaehgdgyp
fdgkdgllah afppgpgiqg dahfdddelw slgkgvvvpt rfgnadgaac hfpfifegrs
ysacttdgrs dglpwcstta nydtddrfgf cpserlytqd gnadgkpcqf pfifqgqsys
acttdgrsdg yrwcattany drdklfgfcp tradstvmgg nsagelcvfp ftflgkeyst
ctsegrgdgr lwcattsnfd sdkkwgfcpd qgyslflvaa hefghalgld hssvpealmy
pmyrftegpp lhkddvngir hlygprpepe prppttttpq ptapptvcpt gpptvhpser
ptagptgpps agptgpptag pstattvpls pvddacnvni fdaiaeignq lylfkdgkyw
rfsegrgsrp qgpfliadkw palprkldsv feerlskklf ffsgrqvwvy tgasvlgprr
ldklglgadv aqvtgalrsg rgkmllfsgr rlwrfdvkaq mvdprsasev drmfpgvpld
thdvfqyrek ayfcqdrfyw rvssrselnq vdqvgyvtyd ilqcped
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR1
配列番号2: DYPMH
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR2 
配列番号3: GISSNSGSVGYADSVKG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR3 
配列番号4: DKIYYGSGSYDFYYYYGMDV
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR2-V1 
配列番号5: GISSQSGSVGYADSVKG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR2-V4 
配列番号6: GISSRSGSVGYADSVKG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR2-V9 
配列番号7: GISSNSGSVGYAESVKG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR2-V1-V9  
配列番号8: GISSQSGSVGYAESVKG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR2-V4-V9  
配列番号9: GISSRSGSVGYAESVKG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR3-V14 
配列番号10: DKIYYGSGSYDFYYYYGIDV
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH 
配列番号11: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
アミノ酸配列 F20-VH-GL1 
配列番号12: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V1 
配列番号13: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSQSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V4 
配列番号14: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSRSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V9 
配列番号15: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V14 
配列番号16: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGIDVWGQGTTVTVSS
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V1-V9
配列番号17: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSQSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V1-V9-V14 
配列番号18: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSQSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGIDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V4-V9  
配列番号19: EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSRSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V4-V9-V14 
配列番号20:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSRSGSVGYAESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGIDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
軽鎖のアミノ酸配列 B03-VL-CDR1
配列番号21: QGDSLRSYYAS
軽鎖のアミノ酸配列 B03-VL-CDR2 
配列番号22: GKNNRPS
軽鎖のアミノ酸配列 B03-VL-CDR3 
配列番号23: QSRDNIGNHRVVL
軽鎖のアミノ酸配列 B03-VL 
配列番号24: SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVVVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTVSLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKVTVLG
軽鎖のアミノ酸配列 B03-VL-GL1 
配列番号25:  SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVVVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTVSLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKLTVLG
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-CDR1 
配列番号26: TGTSNDVGAYNRVS
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-CDR2 
配列番号27: GVSNRPS
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-CDR3 
配列番号28: TSYSSSTTSYVV
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL 
配列番号29: QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSTRFSGSKSGNTASLTISGLLAADEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVLG
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-GL6 
配列番号30: QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLMIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVLG
重鎖の核酸配列 F20-VH-CDR1 
配列番号31: gactaccccatgcac
重鎖の核酸配列 F20-VH-CDR2
配列番号32: ggcatctcctccaactccggctccgtgggctacgccgactccgtgaagggc
重鎖の核酸配列 F20-VH-CDR3
配列番号33: gacaagatctactacggctccggctcctacgacttctactactactacggcatggacgtg
軽鎖の核酸配列 B03-VL-CDR1
配列番号34: caaggcgattctctgcgctcatattatgcttct
軽鎖の核酸配列 B03-VL-CDR2
配列番号35: ggaaaaaacaaccgaccatct
軽鎖の核酸配列 B03-VL-CDR3 
配列番号36: caatctcgagacaatatagggaaccatagagttgttctg
軽鎖の核酸配列 B08-VL-CDR1 
配列番号37: acaggaacgtctaatgatgtgggggcttacaatcgcgtcagt
軽鎖の核酸配列 B08-VL-CDR2
配列番号38: ggcgtgtctaacaggcctagc
軽鎖の核酸配列 B08-VL-CDR3 
配列番号39: acaagctacagtagcagtaccacatcatatgtcgtc
改変ヒトIgG4重鎖定常領域のアミノ酸配列      
配列番号40: 
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
MMP9エピトープに含まれる領域1のアミノ酸配列
配列番号41: AVTPLTFTRVYSRDADIVIQF
MMP9エピトープに含まれる領域2のアミノ酸配列
配列番号42: IQGDAHFDDDELWSLGKGVVVPTRFG
MMP9エピトープに含まれる領域3のアミノ酸配列
配列番号43: MYPMYRFTEGPPLHKDDVNGIR
比較抗体1の重鎖のアミノ酸配列 (AB0041として知られる)
配列番号44:
QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLLSYGVHWVRQPPGKGLEWLGVIWTGGTTNYNSALMSRLSISKDDSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCARYYYGMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
比較抗体1の軽鎖のアミノ酸配列 (AB0041として知られる)
配列番号45:
DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVRNTVAWYQQKTGQSPKLLIYSSSYRNTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYFCQQHYITPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
比較抗体2の重鎖のアミノ酸配列 (539A-M0240-B03として知られる)
配列番号46:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYQMVWVRQAPGKGLEWVSVIYPSGGPTVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGEDYYDSSGPGAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
比較抗体2の軽鎖のアミノ酸配列 (539A-M0240-B03として知られる)
配列番号47:
QYELTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCCSYAGSYTLVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL2 
配列番号48:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFDDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR2-V2 
配列番号49: GISSHSGSVGYADSVKG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR2-V3 
配列番号50: GISSKSGSVGYADSVKG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR2-V11 
配列番号51: GISSNSGSVGYADTVKG
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-CDR3-V13 
配列番号52: DKIYYGSGSYDFYYYYGLDV 
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V2 
配列番号53: 
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSHSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V3
配列番号54: 
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSKSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS 
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V11
配列番号55: 
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
重鎖のアミノ酸配列 F20-VH-GL1-V13
配列番号56: 
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFNDYPMHWVRQAPGKGLEWVSGISSNSGSVGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTALYYCARDKIYYGSGSYDFYYYYGLDVWGQGTTVTVSS
軽鎖のアミノ酸配列 B03-VL-GL2
配列番号57: 
SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKLTVL 
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-GL1 
配列番号58: 
QSALTQPRSVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-GL2 
配列番号59: 
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-GL3 
配列番号60: 
QSALTQPRSVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-GL4 
配列番号61:
QSALTQPRSVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLMIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL 
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-GL5
配列番号62:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-GL7
配列番号63:
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLMIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL 
比較抗体3の重鎖のアミノ酸配列 (539A-M0237-D02として知られる)
配列番号64:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSQYPMWWVRQAPGKGLEWVSYIVPSGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDRAYGDYVGWNGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
比較抗体3の軽鎖のアミノ酸配列 (539A-M0237-D02として知られる)
配列番号65:
DIQMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSISSFLAWYQQKPGQAPRLLIYDASYRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRGNWPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
改変ヒトIgG4軽鎖定常領域のアミノ酸配列
配列番号66:
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
軽鎖のアミノ酸配列 B03-VLc 
配列番号67: SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVVVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTVSLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKVTVL
軽鎖のアミノ酸配列 B03-VL-GL1c
配列番号68:  SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVVVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTVSLTITGAQAEDEADYYCQSRDNIGNHRVVLFGGGTKLTVL
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VLc 
配列番号69: QSALTQPRSVSGSPGQSVTISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLLIYGVSNRPSGVSTRFSGSKSGNTASLTISGLLAADEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
軽鎖のアミノ酸配列 B08-VL-GL6c 
配列番号70: QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSNDVGAYNRVSWYQQHPGKAPKLMIYGVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADFYCTSYSSSTTSYVVFGGGTKVTVL
【図１】
2017532005.tif 000020
【図２Ａ】
2017532005.tif 000021
【図２Ｂ】
2017532005.tif 000022
【図２Ｃ】
2017532005.tif 000023
【図３−１】
2017532005.tif 000024
【図３−２】
2017532005.tif 000025
【図３−３】
2017532005.tif 000026
【図４】
2017532005.tif 000027
【図５】
2017532005.tif 000028
【図６】
2017532005.tif 000029
【図７】
2017532005.tif 000030
【図８】
2017532005.tif 000031
【図９】
2017532005.tif 000032
【図１０】
2017532005.tif 000033
【図１１】
2017532005.tif 000034
【図１２】
2017532005.tif 000035
【図１３】
2017532005.tif 000036
【図１４】
2017532005.tif 000037
【図１５Ａ】
2017532005.tif 000038
【図１５Ｂ】
2017532005.tif 000039
【図１５Ｃ】
2017532005.tif 000040
【図１６】
2017532005.tif 000041
【配列表】
2017532005000001.xml
【国際調査報告】
2017532005.tif 000050
2017532005.tif 000051
2017532005.tif 000052