(57)【要約】本開示は、一般に、止血組成物として有用である、架橋剤と架橋した、多糖類をベースとするポリマー、例えば、アミロペクチン、アミロース、デキストリン、マルトデキストリンおよびイコデキストリンならびにその修飾された形態を含む止血組成物に関する。本明細書において開示されている止血組成物を使用して、傷害を処置し、出血を遅延または停止させる方法も提供する。上記止血組成物は、凝血カスケードを活性化し得るか、または組織への結合を増進させ得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
架橋アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリン、または架橋修飾アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリンを含む止血組成物。
【請求項２】
流動性ヒドロゲルである、請求項１に記載の止血組成物。
【請求項３】
粉末化形態である、請求項１に記載の止血組成物。
【請求項４】
噴霧可能形態である、請求項１に記載の止血組成物。
【請求項５】
凝血原、血液凝固因子、止血薬、収斂剤、および他の止血剤からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項６】
前記凝血原が、トロンビンである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
アミロペクチン、イコデキストリンまたはマルトデキストリンが、アミン基、アルデヒド基、リン酸基、ホスホン酸基、硫酸基、スルホン酸基、およびカルボン酸基からなる群から選択される官能基をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項８】
凝血カスケードを活性化するか、または組織への結合を増進させる、先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項９】
前記架橋組成物が、エピクロロヒドリン、ビス−エポキシプロピルエーテル、エチレングリコール−ビス−エポキシプロピルエーテル、トリメタリン酸ナトリウム（ＳＴＭＰ）、アジピン酸−無水酢酸、オキシ塩化リン、ホルムアルデヒド、ジエポキシド、ビニルシクロヘキセンジオキシド、ブタジエンジオキシド、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドおよびゲニピンからなる群から選択される架橋剤を含む、先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項１０】
前記マルトデキストリンが、低分子量、中間分子量または高分子量マルトデキストリンからなる群から選択される、先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項１１】
前記低分子量マルトデキストリンが、２，０００Ｄａ未満である、請求項１０に記載の止血組成物。
【請求項１２】
前記中間分子量マルトデキストリンが、２，０００〜４５，０００Ｄａである、請求項１０に記載の止血組成物。
【請求項１３】
前記高分子量マルトデキストリンが、４５，０００Ｄａ超である、請求項１０に記載の止血組成物。
【請求項１４】
多糖類、ポリビニルアルコール、ポリエチレンイミン、キトサン、アルギン酸、フコイダン、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン、コンドロイチン硫酸、アミロペクチン、アミロース、キサンタンガム、グアーガム、カラギーナン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルマルトデキストリン、カルボキシメチルイコデキストリン、カルボキシメチルデンプン、アガロース、および天然または合成ポリマーからなる群から選択される添加物または活性剤の１つまたは複数をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項１５】
前記アミロペクチン、イコデキストリンまたはマルトデキストリンが、植物材料、細菌、真菌または藻類に由来する、先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項１６】
植物材料が、トウモロコシ、ダイズ、米、タピオカ、コムギ、モチトウモロコシおよびモチ米からなる群から選択される、請求項１５に記載の止血組成物。
【請求項１７】
創傷、失血、損傷した組織および出血組織からなる群から選択される傷害を処置する方法であって、先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物が、傷害の部位に投与されることを含む、方法。
【請求項１８】
出血を遅延または停止させる方法であって、先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物が、出血領域に適用されることを含む、方法。
【請求項１９】
前記傷害または出血が、手術の間に起こる、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記組成物が、粉末形態で適用される、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物が、スポンジ、パッド、フィルムまたは繊維中で使用される、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物が、粉末化形態であり、前記組成物を、最初に液体と混合して、流動性組成物を形成させる、請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記液体が、食塩水、水、緩衝溶液、およびタンパク質溶液からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記組成物が、出血を数秒または数分以内に停止させる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
創傷、失血、損傷した組織および出血組織からなる群から選択される傷害の処置のための、または出血を遅延もしくは停止させるためのキットであって、ａ）先行する請求項のいずれかに記載の止血組成物、およびｂ）使用のための説明書を含む、キット。
【請求項２６】
前記止血組成物が乾燥形態であり、前記キットが、前記止血組成物の復元のための薬学的に許容される希釈剤をさらに含む、請求項２５に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本開示の分野）
本開示は一般に、アミロペクチン、アミロース、デキストリン、例えば、マルトデキストリン、およびその修飾された形態を含めた多糖類またはデンプンをベースとするポリマーを含む止血組成物、ならびに対象において出血を停止または低減させることにおける使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
止血剤およびシーラントは、手術の間の失血を含めた出血を停止させる補助として現在使用されている。ＦＤＡは、天然の凝固カスケードを増強させるか、または手術もしくは創傷部位における出血を機械的に停止させるために患者における使用について、止血マトリックス、例えば、ＦＬＯＳＥＡＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）を承認している。ＦＬＯＳＥＡＬ（登録商標）は、ゼラチンマトリックス内にヒトトロンビンを含む止血シーラントである。
【０００３】
ＴＡＣＨＯＳＩＬ（登録商標）（Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）は、凝血因子であるフィブリノーゲンおよびトロンビンと合わせた、コラーゲンスポンジマトリックスである。これは血液および体液によって活性化されて凝血塊を形成し、これがスポンジを組織表面へと接着させる。止血および出血の停止に数分内に至る。
止血組成物の他の形態は、植物をベースとする材料、例えば、デンプンを修飾するためにカルボキシメチル基に連結させた精製した植物デンプンを含む止血スポンジ、パッドまたは粉末を含む（Ｓｔａｒｃｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ）。ゼラチン化バレイショデンプンを含む止血組成物について開示しているＵ．Ｓ．８，６２３，８４２も参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許第８，６２３，８４２号明細書
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本開示は、改善された止血組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（本開示の要旨）
本開示は、止血マトリックスとして使用することができる流動性ヒドロゲル中の多糖類またはデンプン、例えば、架橋アミロペクチン、マルトデキストリンまたは架橋修飾アミロペクチン、マルトデキストリンを含む止血組成物を提供する。現在、患者において使用される多くの止血組成物は、止血マトリックスを製造する動物由来の出発材料（例えば、ゼラチン）を含む。本組成物は、止血マトリックスを作製するために、非動物の植物をベースとする多糖類／デンプンポリマーを使用する。
【０００７】
様々な実施形態では、本開示は、架橋多糖類またはデンプン、例えば、アミロペクチン、アミロース、デキストリン、例えば、マルトデキストリンもしくはイコデキストリン、またはその架橋修飾形態を含む止血組成物を提供する。様々な実施形態では、本開示は、架橋アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリンまたは架橋修飾アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリンを含む止血組成物を提供する。
【０００８】
様々な実施形態では、止血組成物は、流動性ヒドロゲルである。様々な実施形態では、止血組成物は、粉末化形態、噴霧可能形態であるか、またはスポンジ、パッド、フィルムもしくは繊維中で使用される。
【０００９】
様々な実施形態では、止血組成物は、エピクロロヒドリン、ビス−エポキシプロピルエーテル、エチレングリコール−ビス−エポキシプロピルエーテル、トリメタリン酸ナトリウム（ＳＴＭＰ）、アジピン酸−無水酢酸、オキシ塩化リン、ジエポキシド、ビニルシクロヘキセンジオキシド、ブタジエンジオキシド、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドおよびゲニピンからなる群から選択される架橋剤を含む。
【００１０】
様々な実施形態では、止血組成物は、１つまたは複数の凝血原をさらに含む。例示的な凝血原には、これらに限定されないが、凝固因子、例えば、トロンビン、フィブリン、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、第ＶＩＩ因子（ＦＶＩＩ）、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）、第ＩＩ因子（ＦＩＩ）、第Ｖ因子（ＦＶ）、第Ｘ因子（ＦＸ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）、および第ＸＩＩＩ因子（ＦＸＩＩＩ）、組織因子、コラーゲン；抗失血剤および収斂剤を含めた止血薬；ならびに他の止血剤が含まれる。一実施形態では、止血組成物は、トロンビンをさらに含む。
【００１１】
様々な実施形態では、止血組成物は、アミン基、アルデヒド基、リン酸基、ホスホン酸基、硫酸基、スルホン酸基、およびカルボン酸基からなる群から選択される官能基をさらに含む。
【００１２】
様々な実施形態では、止血組成物は、凝血カスケードを活性化するか、または組織への結合を増進する。
【００１３】
様々な実施形態では、アミロペクチン、アミロースまたはデキストリン組成物は、２０００〜５００，０００Ｄａ、１０，０００〜３００，０００Ｄａ、２０，０００〜２５０，０００Ｄａ、５０，０００〜２００，０００Ｄａ、７５，０００〜１５０，０００Ｄａ、１０，０００〜１００，０００、２５，０００〜７５，０００または４０，０００〜６０，０００Ｄａである。
【００１４】
様々な実施形態では、マルトデキストリンは、低分子量、中間分子量または高分子量のマルトデキストリンからなる群から選択される。一実施形態では、低分子量マルトデキストリンは、２，０００Ｄａ未満である。一実施形態では、中間分子量マルトデキストリンは、２，０００〜４５，０００Ｄａである。一実施形態では、高分子量マルトデキストリンは、４５，０００Ｄａ超である。様々な実施形態では、イコデキストリンは、１３０００〜１９０００Ｄａである。
【００１５】
様々な実施形態では、止血組成物は、活性剤および／または添加物の１つまたは複数をさらに含む。本明細書において意図される活性剤は、薬理活性、または疾患の診断、治癒、緩和、処置、もしくは予防における他の直接の効果を実現するか、あるいは人間または動物の体の構造または任意の機能に影響を与える薬剤を指す。本明細書において意図される添加物は、活性成分の活性、または止血組成物の安定性もしくは別の特性を改善または促進するように作用する薬剤を指す。様々な実施形態では、活性剤または添加物は、多糖類、ポリビニルアルコール（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌａｌｃｈｏｈｏｌ）、ポリエチレンイミン、キトサン、アルギン酸、フコイダン、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン、コンドロイチン硫酸、アミロペクチン、アミロース、キサンタンガム、グアーガム、カラギーナン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルマルトデキストリン、カルボキシメチルイコデキストリン、カルボキシメチルデンプン、アガロース、および天然または合成ポリマー（例えば、中性、カチオン性、アニオン性、塩基性、または酸性ポリマー）からなる群から選択される。
【００１６】
様々な実施形態では、アミロペクチン、アミロース、デキストリン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリンを含めた多糖類またはデンプンポリマーは、植物材料、細菌、真菌または藻類に由来する。様々な実施形態では、植物材料は、トウモロコシ、ダイズ、米、タピオカ、コムギ、モチトウモロコシ、またはモチ米からなる群から選択される。
【００１７】
様々な実施形態では、止血組成物が粉末形態であるとき、組成物は、粒子形態であり、粒子は、１０〜１０００μｍ、５０〜８００μｍ、５０〜７００μｍ、１５０〜７００μｍ、２００〜７００μｍ、３００〜５５０μｍ、および３５０〜５５０μｍである。
【００１８】
様々な実施形態では、止血組成物の流動性形態は、それらの５０％（ｗ／ｗ）超が１００〜１０００μｍのサイズを有する粒子、またはそれらの８０％（ｗ／ｗ）超が１００〜１０００μｍのサイズを有する粒子を含有する。流動性形態は、５〜３０％（ｗ／ｗ）、１０〜２５％（ｗ／ｗ）、または１２〜２０％（ｗ／ｗ）の量で架橋生体適合性ポリマーを含有することが意図されている。
【００１９】
様々な実施形態では、止血マトリックスは、３時間超、４時間超、５時間超、６時間超、１２時間超、２４時間超、２日超、３日超、５日超、１０日超、１５日超、２０日超、２５日超、または３０日超の分解時間を有する。
【００２０】
様々な実施形態では、止血マトリックスは、４００％〜１３００％、５００％〜１１００％、または６００％〜９００％の範囲内のＥ膨潤を有する。
【００２１】
様々な実施形態では、止血マトリックスは、Ｅ膨潤に近づくＱ膨潤を有する。ある特定の実施形態では、高いＱ膨潤は有益であり得、Ｅ膨潤に近づくものは、最大の膨潤により急速に達し得ることが意図されている。
【００２２】
止血組成物の安定性および有効性を測定する他のパラメーターは、トロンビン時間（ＴＴ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、活性化された部分トロンボプラスチン（ｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｔｉｎ）時間（ＡＰＴＴ）、フィブリノーゲン（ＦＩＢ）、血小板第４因子（ＰＦ４）；アンチトロンビンＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）を含めた抗凝血パラメーター；プラスミノーゲン（ＰＬＧ）、フィブリン分解産物（ＦＤＰ）およびＤ−ダイマーを含めた線維素溶解パラメーター；血液粘度（ＢＶ）ならびに血漿粘度（ＰＶ）についてのアッセイを含む。
【００２３】
ある特定の実施形態では、患者への送達のためのシリンジまたは他のデバイス中に事前パッケージ化されたとき、組成物は安定である。様々な実施形態では、組成物は、送達デバイスの内側または外側で、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０日間安定である。ある特定の実施形態では、組成物は流動性形態で、室温にて１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３または２４時間安定である。
【００２４】
様々な実施形態では、本開示は、創傷、失血、損傷した組織および出血組織からなる群から選択される傷害を処置する方法であって、本明細書に記載されている止血組成物を傷害の部位に投与することを含む方法を提供する。
【００２５】
出血を遅延または停止させる方法であって、本明細書に記載されている止血組成物を出血領域に適用することを含む方法も意図される。
【００２６】
様々な実施形態では、傷害または出血は、手術の間に起こる。
【００２７】
様々な実施形態では、止血組成物は、ヒドロゲルとして、粉末形態で、またはパッド、フィルムもしくは繊維として適用される。様々な実施形態では、止血組成物は粉末化形態であり、組成物を最初に液体と混合し、流動性組成物を形成させる。様々な実施形態では、液体は、食塩水（ｓａｌｉｎ）、水、緩衝溶液、およびタンパク質溶液からなる群から選択される。タンパク質溶液は、１つもしくは複数の凝固因子、または天然もしくは合成の凝血原を含むことが意図されている。
【００２８】
様々な実施形態では、この方法において使用される止血組成物は、出血を数秒または数分以内に停止させる。止血組成物は、対象において出血を１０、２０、３０、４０、５０、もしくは６０秒以内に、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１５分以内に停止または低減させることが意図されている。
【００２９】
創傷、失血、損傷した組織および出血組織からなる群から選択される傷害の処置のための、または出血を遅延もしくは停止させるためのキットであって、ａ）本明細書に記載されている止血組成物、およびｂ）使用のための説明書を含むキットも意図される。
【００３０】
キットの様々な実施形態では、止血組成物は、乾燥形態であり、キットは、止血組成物の復元のための薬学的に許容される液体または希釈剤をさらに含む。
【００３１】
本明細書に記載のような止血組成物を作製する方法も意図される。様々な実施形態では、本開示は、ポリマーと、水性もしくは有機またはこれらの組合せの溶液、例えば、緩衝液またはタンパク質溶液中の架橋剤とを、０．０１：１〜２０：１の範囲の変動するモル当量（ポリマー：架橋剤）で、７．０〜１４．０の範囲の変動するｐＨ条件下で、少なくとも１〜２４時間の期間、０〜１００℃、例えば、４℃、２０℃、２５℃、３７℃、４２℃または５０℃にて接触させることによって、エピクロロヒドリン、ビス−エポキシプロピルエーテル、エチレングリコール−ビス−エポキシプロピルエーテル、トリメタリン酸ナトリウム（ＳＴＭＰ）、アジピン酸−無水酢酸、オキシ塩化リン、ホルムアルデヒド、ジエポキシド、ビニルシクロヘキセンジオキシド、ブタジエンジオキシド、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド（ｇｌｕａｒａｌｄｅｈｙｄｅ）およびゲニピンからなる群から選択される二官能性架橋剤による修飾の影響を受けやすいポリマー組成物（多糖類、天然もしくは合成、または非炭水化物をベースとするポリマー、天然もしくは合成）を架橋させ、架橋ポリマー組成物を単離することを含む、止血組成物を作製するための方法を提供する。
【００３２】
特徴の組合せが本明細書において同じ文またはパラグラフにおいて特に見出されなくても、本明細書に記載されている特徴の全ての組合せが意図されることを理解すべきである。これは、特に、本明細書に記載のような本発明の全ての態様における、個々にまたはハプロタイプにおける分析のための、単独でまたは組み合わせた、本明細書において開示されている全てのマーカーの使用を含む。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】図１は、シーラント適用前および後の出血を評価するために使用される視覚的出血スケールを示す。
【００３４】
【図２】図２は、ＦＬＯＳＥＡＬ  ＶＨ  Ｓ／Ｄおよび流動性マルトデキストリンの時間に対する止血の成功を示すグラフである。
【００３５】
【図３】図３は、ＦＬＯＳＥＡＬ  ＶＨ  Ｓ／Ｄおよび流動性マルトデキストリンの止血の成功（全ての時点／病変）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
（詳細な説明）
本開示は、多糖類またはデンプンをベースとするポリマーを含む止血組成物を提供し、ここではポリマーの特性は変更されて、最適化された止血プロファイルを有する最終生成物が得られる。例えば、ポリマーを架橋して、止血マトリックスとして使用するための粒子の分解のタイミングおよび膨潤／流体取込み、ならびに粒子の多孔度を変化させる。多糖類をベースとするヒドロゲルは、水和／流動性フォーマットで利用するか、または乾燥粉末として利用することができる。
【００３７】
別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者が一般に理解するのと同じ意味を有する。下記の参照文献は、当業者に本開示において使用される用語の多くの全般的な定義を提供する。Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら、ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ  ＡＮＤ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ（第２版、１９９４年）；ＴＨＥ  ＣＡＭＢＲＩＤＧＥ  ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＳＣＩＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｗａｌｋｅｒ編、１９８８年）；ＴＨＥ  ＧＬＯＳＳＡＲＹ  ＯＦ  ＧＥＮＥＴＩＣＳ、第５版、Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒら（編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９９１年）；ならびにＨａｌｅおよびＭａｒｈａｍ、ＴＨＥ  ＨＡＲＰＥＲ  ＣＯＬＬＩＮＳ  ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ  ＯＦ  ＢＩＯＬＯＧＹ（１９９１年）。
【００３８】
本開示および添付の特許請求の範囲において使用されるように、用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈によって明らかにそうではないことが指示されない限り、複数の参照事項および単数の参照事項を含む。
【００３９】
本明細書において使用する場合、下記の用語は、他に特定しない限り、それらに帰する意味を有する。
【００４０】
用語「約」または「概ね」は、当業者によって決定されるような特定の値についての許容し得る誤差を意味し、これは部分的に、どのようにこの値が測定または決定されるかに依存する。ある特定の実施形態では、用語「約」または「概ね」は、１、２、３または４標準偏差以内を意味する。ある特定の実施形態では、用語「約」または「概ね」は、所与の値または範囲の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％以内を意味する。用語「約」または「概ね」が一連の２つまたはそれ超の数値における最初の数値に先行するときはいつも、用語「約」または「概ね」は、その一連における数値のそれぞれの１つに適用されることが理解される。
【００４１】
「止血組成物」は、傷害または手術に起因する出血を停止または低減させるのに有用な組成物を指す。本開示の止血組成物は、多糖類またはデンプンをベースとするポリマー、例えば、アミロペクチン、アミロース、もしくはアミロデキストリン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、イコデキストリンを含めたデキストリン、またはその修飾されたバリアントを含むことが意図されている。
【００４２】
「流動性」組成物または「ヒドロゲル」は、シリンジもしくは他のデバイスを通して流れ、かつ対象に投与され得る特性を有する、ゼラチン状もしくはゼリー様塊、またはペースト様溶液を生じさせる水性構成要素を含有する、実質的に液体、僅かに粘稠の溶液、固体、半固体、疑似塑性または塑性構造を指す。流動性ヒドロゲルは、室温および体温にて、液体様の僅かに粘稠性の溶液、またはペースト様溶液である。様々な実施形態では、流動性組成物は、対象への投与のためにシリンジまたは他のデバイスを通して押し出されたとき、形状を保持するものである。
【００４３】
診断または処置の「対象」は、哺乳動物または霊長類を含めた、ヒトまたはヒトではない動物である。哺乳動物の例には、これらに限定されないが、哺乳動物のクラスの任意のメンバー：ヒト、ヒトではない霊長類、例えば、チンパンジー、ならびに他の類人猿およびサル種；家畜、例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ；家畜、例えば、ウサギ、イヌ、およびネコ；げっ歯類、例えば、ラット、マウスおよびモルモットを含めた実験動物などが含まれる。非哺乳動物の例には、これらに限定されないが、鳥、魚などが含まれる。この用語は、特定の年齢または性別を表さない。
【００４４】
治療の「有効量」という用語は、対象の健康状態、病理、もしくは疾患に対する所望の結果を生じさせるために、または診断目的のために十分な投与量を意味する。所望の結果は、投与量のレシピエントにおける主観的または客観的な改善を含み得る。「治療有効量」は、健康に対する意図する有益な効果を生じさせるのに有効な薬剤のその量を指す。
【００４５】
本明細書において使用する用語「止血剤」は、対象において出血を遅延もしくは停止させるために使用され、かつ／または出血を停止させる凝血カスケードを促進することができる組成物を指す。Ｇｌｉｃｋら、（Ｉｎｄｉａｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ  Ｏｎｌｉｎｅ  Ｊ．、４巻（３号）：１７２〜１７６頁、２０１３年）およびＳｕｎｄａｒａｍら、（Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ  Ｕｒｏｌ．、２６巻（３号）：３７４〜３７８頁、２０１０年）は、様々な止血剤を記載している。例示的な止血剤には、これらに限定されないが、塩化アルミニウム、硫酸第二鉄（Ｍｏｎｓｅｌ’ｓ溶液）、硝酸銀、塩化亜鉛ペースト、トロンビン、ゼラチン（例えば、ブタゼラチンおよびゼラチン混合物）、微孔質多糖類スフェア、カリウム塩を有する親水性ポリマー（ＨＰＰＳ）、酸化再生セルロース、ミクロフィブリルコラーゲン、アミノカプロン酸、アプロチニン、トラネキサム酸、アルギネート、鉱物ゼオライト、シアノアクリレート、キトサンおよびカオリンが含まれる。
【００４６】
止血組成物
【００４７】
止血組成物は、手術および創傷ケアの分野において様々なポリマー、および異なる組成物を使用して調製されてきた。例えば、ゲニピン架橋ゼラチンを含めたゲニピン架橋生物学的材料は、従前に開示されてきた（例えば、米国特許第６，６０８，０４０号、ＥＰ２１８１７２２、ＷＯ２００８／０７６４０７、Ｂｉｇｉら、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ、２３巻（２００２年）、４８２７〜４８３２頁；Ｙａｏら、Ｍａｔ．  Ｃｈｅｍ．  Ｐｈｙｓ．、８３巻（２００４年）、２０４〜２０８頁；Ｔｕｒｏら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｍａｃｒｏｍｏｌ．（２０１１年）、ｄｏｉ：１０．１０１６；Ｃｈｉｏｎｏら、Ｊ．Ｍａｔｅｒｌ．Ｓｃｉ．：Ｍａｔｅｒ  Ｍｅｄ．（２００８年）１９巻：８８９〜８９８頁を参照されたい）。米国特許出願公開第２０１３０１２９７１０号は、止血材料中にゲニピンタイプの架橋剤を使用する流動性止血組成物を開示している。
【００４８】
Ａｔｙａｂｉｎら（Ａｒｃｈｉｖｅｓ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２９巻：１１７９〜１１８６頁、２００６年）は、架橋デンプンミクロスフィアを開示している。Ｓａｔｙａｎａｒａｙａｎａら、（Ｓｕｐｅｒｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔｓ，Ｉｎｔ．Ｊ．ＣｈｅｍＴｅｃｈ  Ｒｅｓ、３巻：１７８６〜１７９８頁、２０１０年）は、２−ヒドロキシメチレン架橋デキストリンの合成および評価について記載している。米国特許第６，４１９，９５７号は、医薬品の遅延放出のためのマトリックスとして官能基を有する架橋高アミロースデンプンについて記載している。また、米国特許出願公開第２０１００２５５１０１号、同第２００７／００８７０６１号、米国特許第６，０６０，４６１号、ＷＯ２００８／１１７３００、ＷＯ２００９／０９１５４９、およびＷＯ２００９１５３７９８を参照されたい。
【００４９】
本開示は、止血組成物における、多糖類またはデンプンをベースとするポリマー、例えば、アミロペクチン、アミロース、もしくはアミロデキストリン、シクロデキストリン、マルトデキストリン、イコデキストリンを含めたデキストリン、またはその誘導体および断片の使用を意図する。アミロペクチンは、植物において見出されるグルコースの可溶性多糖類、高度に分岐のポリマーであり、アミロースと共に、デンプンの構成要素である。デンプンは、重量で約７０％のアミロペクチンでできている。アミロペクチンのグルコース単位は、直鎖状の様式でα（１→４）グリコシド結合で連結している。２４〜３０個のグルコース単位毎に生じるα（１→６）結合を伴って分岐が発生する。アミロースは、水に不溶性である。アミロースは、α（１→４）結合グルコース分子を含むが、α（１→６）結合は殆ど含有しない。
【００５０】
デキストリンは、デンプンの加水分解によって生成される低分子量炭水化物の群である。マルトデキストリンは、短鎖デンプン糖である。シクロデキストリンは、ある特定の細菌によるデンプンの分解によって形成される環状デストリンである。アミロデキストリンは、アルファ−１，６グリコシド結合または脱分枝アミロペクチンの酵素加水分解によって生成することができる直鎖状デキストリンまたは短鎖アミロースである。
【００５１】
これらに限定されないが、エピクロロヒドリン、ビス−エポキシプロピルエーテル、エチレングリコール−ビス−エポキシプロピルエーテル、トリメタリン酸ナトリウム（ＳＴＭＰ）、アジピン酸−無水酢酸、オキシ塩化リン、ホルムアルデヒド、ジエポキシド、ビニルシクロヘキセンジオキシドまたはブタジエンジオキシド（特許ＷＯ２００９１５３７９８Ａ１に記載したような）、ホルムアルデヒド／グルタルアルデヒドおよびゲニピンを含めた架橋剤が本明細書において意図される。Ａｔｙａｂｉらによる研究は、デンプン粒子サイズ、膨潤比および粒子内に含有される小分子の放出が、架橋剤のタイプおよび濃度、ならびに架橋時間を変化させることによって制御することができることを示した。
【００５２】
ある特定の実施形態では、架橋する前または後に、アミロペクチン、マルトデキストリンまたはイコデキストリンを含めた多糖類ポリマーをさらに官能化して、基、例えば、アミン基、アルデヒド基、リン酸基、ホスホン酸基、硫酸基、スルホン酸基、カルボン酸基を含有することができ、これらは凝血カスケードを活性化する意図を伴って組織および体液と相互作用し、かつ／または組織への結合を増進することができる。これらの加えられた特性（例えば、アニオンまたはカチオン電荷）は、ヒドロゲルに止血特性を提供し、このように、止血剤、例えば、トロンビンの必要性を排除することができる。粉末化または流動性止血組成物は、トロンビンを伴ってまたは伴わずに配合することができる。
【００５３】
様々な実施形態では、架橋多糖類ポリマーは、乾燥している。乾燥した状態において、止血組成物は、高温（例えば、２０℃超、３０℃超またはさらには４０℃超）においてでさえ長期間貯蔵安定である。乾燥条件は、イコデキストリンまたはマルトデキストリンを含めた架橋多糖類ポリマーを含み、これらは乾燥されて、１５％（ｗ／ｗ）未満、１０％未満、５％未満、または１％未満の含水率を有する。乾燥した組成物について、組成物は、少なくとも２ｇ／ｇ、少なくとも３．５ｇ／ｇ、または３．７５ｇ／ｇまたはそれ超の再水和率を有することが意図されている。再水和助剤を伴わずに調製した同様の粉末の再水和率は典型的には３未満であり、再水和率における増加百分率は通常、少なくとも５％、少なくとも１０％、または少なくとも２５％またはそれ超である。
【００５４】
別の実施形態では、生成物は、水和状態または湿り状態で供給され、水和溶液は、生体適合性緩衝液または溶液であり得る。
【００５５】
一実施形態では、本開示による止血組成物は、例えば、顆粒状材料として粒子状形態の架橋多糖類ポリマーを含有する。顆粒状材料は、流体（すなわち、薬学的に許容される希釈剤）に曝露されたとき、急速に膨潤することができ、この膨潤した形態で、出血部位に適用することができる流動性ペーストをもたらすことができる。多糖類ポリマー、例えば、マルトデキストリンまたはイコデキストリンは、フィルムとして提供してもよく、これを次いで粉砕して、顆粒状材料を形成させることができる。この顆粒状材料中に含有される粒子の大部分（例えば、９０％ｗ／ｗ超）は、１０〜１０００μｍ、５０〜８００μｍ、５０〜７００μｍ、１５０〜７００μｍ、２００〜７００μｍ、３００〜５５０μｍ、および３５０〜５５０μｍの粒子サイズを有する。
【００５６】
様々な実施形態では、止血組成物は、液体を吸収するものである。例えば、液体、例えば、水溶液または懸濁液（特に、緩衝液または血液）との接触によって、ポリマーは液体を取り込み、水和の程度に依存してある程度の膨潤を示す。材料は、重量で、少なくとも３００％、約４００％〜約２０００％、約５００％〜約１３００％の水または水性緩衝液を吸収し、これはサブユニットの個々の粒子の直径または幅における、例えば、概ね５０％〜概ね５００％、または概ね５０％〜概ね２５０％の範囲の名目上の増加に対応する。例えば、（乾燥）顆粒状粒子が０．０１ｍｍ〜１．５ｍｍ、または０．０５ｍｍ〜１ｍｍの好ましいサイズ範囲を有する場合、完全に水和した組成物（例えば、創傷への投与の後または水性緩衝溶液との接触の後）は、０．０５ｍｍ〜３ｍｍ、特に、０．２５ｍｍ〜１．５ｍｍのサイズ範囲を有し得る。
【００５７】
本開示の止血組成物の平衡膨潤は一般に、その意図される使用によって、例えば、４００％〜１３００％、５００％〜１１００％、または６００％〜９００％の範囲であり得る。このような平衡膨潤は、例えば、（架橋ポリマーについて）架橋度を変化させることによって制御してもよく、架橋度は架橋条件、例えば、架橋剤への曝露の持続期間、架橋剤の濃度、架橋温度などを変化させることによって達成される。異なる平衡膨潤値を有する材料は、異なる用途において異なって動作する。架橋および平衡膨潤を制御する能力によって、本発明の組成物が種々の使用のために最適化されることが可能となる。平衡膨潤に加えて、標的部位への送達の直前に材料の水和を制御することがまた重要である。水和および平衡膨潤は、当然ながら、密接に関連している。０％水和を有する材料は、膨潤してない。１００％水和を有する材料は、その平衡含水率にある。０％〜１００％の水和は、最小量および最大量の間の膨潤に対応する。
【００５８】
架橋ポリマーを薬学的に許容される止血組成物へと仕上げるために、薬学的に許容される希釈剤を使用する。
【００５９】
様々な実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は水溶液であり、ＮａＣｌ、ＣａＣｌ２、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウムおよびマンニトールからなる群から選択される物質を含有し得る。例えば、薬学的に許容される希釈剤は、注射用水、ならびに互いに独立に、５０〜２００ｍＭのＮａＣｌ（例えば、１５０ｍＭ）、１０〜８０ｍＭのＣａＣｌ２（例えば、４０ｍＭ）、１〜５０ｍＭの酢酸ナトリウム（例えば、２０ｍＭ）および１０％ｗ／ｗまでのマンニトール（例えば、２％ｗ／ｗ）を含む。様々な実施形態では、希釈剤はまた、例えば、３．０〜１０．０のｐＨ、６．４〜７．５のｐＨ、または６．９〜７．１のｐＨで、復元された乾燥組成物のｐＨを緩衝するために、緩衝液または緩衝系を含むことができる。
【００６０】
ある特定の実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、トロンビン、１０〜１０００Ｉ．Ｕ．のトロンビン／ｍｌ、または２５０〜７００Ｉ．Ｕ．のトロンビン／ｍｌを含む。様々な実施形態では、すぐ使用できる形態の止血組成物は、１０〜１００，０００国際単位（Ｉ．Ｕ．）のトロンビン、１００〜１０，０００Ｉ．Ｕ．、または５００〜５，０００Ｉ．Ｕ．を含有する。すぐ使用できる組成物中のトロンビン濃度は、１０〜１０，０００Ｉ．Ｕ．、または５０〜５，０００Ｉ．Ｕ．；または１００〜１，０００Ｉ．Ｕ．／ｍｌの範囲である。希釈剤は、すぐ使用できる組成物中で所望の最終濃度を達成する量で使用される。トロンビン調製物は、他の有用な構成要素、例えば、イオン、緩衝液、賦形剤、安定剤などを含有し得る。トロンビン調製物は、ヒトアルブミン、マンニトールまたはこれらの混合物を含有することが意図されている。好ましい塩は、ＮａＣｌおよび／またはＣａＣｌ２であり、両方ともトロンビンについて一般に適用される量および濃度で使用される（例えば、０．５〜１．５％のＮａＣｌ（例えば、０．９％）および／または２０〜８０ｍＭのＣａＣｌ２（例えば、４０ｍＭ））。
【００６１】
トロンビン（または任意の他の凝血誘発剤、例えば、蛇毒、血小板アクチベーター、トロンビン受容体活性化ペプチドおよびフィブリノーゲン沈殿剤）は、ヒトまたは動物における使用に適した（すなわち、薬学的に許容される）任意の調製物に由来し得る。トロンビンの適切な供給源は、ヒトまたはウシの血液、血漿または血清（有害な免疫反応が予想されない場合、他の動物供給源のトロンビンを適用することができる）および組換え起源のトロンビン（例えば、ヒト組換えトロンビン）を含み、自己ヒトトロンビンは、いくつかの用途のために好ましくあり得る。
【００６２】
希釈剤は好ましくは、例えば、３．０〜１０．０のｐＨで、緩衝液または緩衝系を含む。
【００６３】
様々な実施形態では、本開示は、恒常性維持（出血の制御）において使用するのに適している粒子状形態の、本明細書において意図されるアミロペクチンまたはデキストリンを含めた多糖類ポリマーを含む止血組成物を提供し、この組成物は、５〜３０％（ｗ／ｗ）、１０〜２５％（ｗ／ｗ）、または１２〜２０％（ｗ／ｗ）の量で、架橋生体適合性ポリマーを含有するペースト形態で存在する。さらなる実施形態では、架橋ポリマー、例えば、本明細書に記載されているアミロペクチン（ａｍｙｌｏｃｐｅｃｔｉｎ）またはデキストリンは、１５．０〜１９．５％（ｗ／ｗ）（＝最終組成物の重量当たりの乾燥ゼラチンの重量）、１６．０〜１９．５％（ｗ／ｗ）、１６．５〜１９．５％（ｗ／ｗ）、１７．０〜１８．５％（ｗ／ｗ）または７．５〜１８．５％（ｗ／ｗ）、１６．５〜１９．０％（ｗ／ｗ）または１６．８〜１７．８％（ｗ／ｗ）、または１６．５〜１７．５％（ｗ／ｗ）の量で存在し、この組成物は、押出増強剤、例えば、アルブミンを任意選択で含む。例えば、押出増強剤がアルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）である場合、これは０．５〜５．０％（ｗ／ｗ）（＝最終組成物の重量当たりの押出増強剤の重量）、１．０〜５．０％（ｗ／ｗ）、２．０〜４．５％（ｗ／ｗ）、１．５〜５．０％（ｗ／ｗ）または約１．５％（ｗ／ｗ）の量で提供される。
【００６４】
様々な実施形態では、本開示は、創傷、失血、損傷した組織、出血組織および／または骨欠損からなる群から選択される傷害の処置における使用のための止血組成物に関する。
【００６５】
様々な実施形態では、本開示は、創傷、失血、損傷した組織および／または出血組織からなる群から選択される傷害を処置する方法であって、本発明による止血組成物を傷害の部位に投与することを含む方法を提供する。
【００６６】
本開示はまた、患者の体における標的部位に本発明による止血組成物を送達する方法を提供し、前記方法は、標的部位に止血組成物を送達することを含む。ある特定の実施形態では、乾燥組成物は標的部位に直接適用することができる（かつ任意選択で、必要応じて、標的部位において薬学的に許容される希釈剤と接触させることができる）が、湿った形態、特に、ヒドロゲル形態で流動性止血組成物を得るために、標的部位への投与の前に、乾燥止血組成物と薬学的に許容される希釈剤とを接触させることが意図される。
【００６７】
本明細書において意図する希釈剤は、他の成分、例えば、賦形剤をさらに含有し得る。「賦形剤」は、例えば、トロンビンが貯蔵（もしくは無菌化（例えば、照射による））によってその化学的安定性および生物活性を保持することを確実にするか、または審美的理由、例えば、色のために、溶液に加えられる不活性な物質である。賦形剤は、タンパク質、例えば、ヒトアルブミン；炭水化物、例えば、マンニトール；ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；および酢酸ナトリウムを含む。復元された生成物について意図されたヒトアルブミンの濃度は、０．１〜１００ｍｇ／ｍｌ、または１〜１０ｍｇ／ｍｌである。マンニトール濃度は、０．５〜５００ｍｇ／ｍｌ、または１０〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲であり得る。ＰＥＧ濃度は、０．５〜５００ｍｇ／ｍｌ、または１０〜５０ｍｇ／ｍｌの濃度範囲であり得る。ＰＥＧ平均分子量は、５００〜２０，０００の範囲であり得る。酢酸ナトリウム濃度は、１〜１０ｍｇ／ｍｌ、または２〜５ｍｇ／ｍｌの範囲である。
【００６８】
一実施形態では、最終容器は、殺菌照射に曝露されたとき、ポリマーの修飾を阻害するのに有効なある量の安定剤、好ましくは、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸の他の塩、または抗酸化剤をさらに含有する。
【００６９】
様々な実施形態では、本止血組成物のすぐ使用できる形態は、希釈剤と共に提供してもよく、これは次いで、患者に直接適用することができる。患者に止血組成物のすぐ使用できる形態を投与するか、または患者と止血組成物のすぐ使用できる形態とを接触させる方法も意図され、止血組成物は、第１のシリンジ中で提供され、復元のための希釈剤は、第２のシリンジ中で提供され、第１および第２のシリンジは、互いに接続して、流体を第１のシリンジ中に入れ、止血組成物の流動性形態を生じさせ；任意選択で止血組成物の流動性形態を第２のシリンジへと少なくとも１回戻す。このプロセス（また、「噴射（ｓｗｏｏｓｈｉｎｇ）」と称される）は、本開示による組成物の適切なすぐ使用できる形態を提供し、これはまた短時間内に、例えば、手術の間の緊急事態において容易におよび効率的に作製することができる。本明細書において提供する止血組成物のこの流動性形態は、創傷、失血、損傷した組織、出血組織および／または骨欠損からなる群から選択される傷害の処置における使用のために特に適切である。様々な実施形態では、すぐ使用できる調製物は、ヒドロゲルとして存在するかまたは提供される。
【００７０】
安定性の理由のために、このような生成物（および本開示による生成物）は、一部の実施形態では、最終容器中にて乾燥形態で提供され、使用の直前に、湿潤剤または溶媒和（懸濁）剤の添加を必要とする、すぐ使用できる形態（通常、ヒドロゲル、懸濁液または溶液の形態である）にする。
【００７１】
様々な実施形態では、止血組成物の流動性形態は、それらの５０％（ｗ／ｗ）超が１００〜１０００μｍのサイズを有する粒子、またはそれらの８０％（ｗ／ｗ）超が１００〜１０００μｍのサイズを有する粒子を含有する。流動性形態は、５〜３０％（ｗ／ｗ）、１０〜２５％（ｗ／ｗ）、または１２〜２０％（ｗ／ｗ）の量で架橋アミロペクチンまたはデキストリンを含有することが意図されている。
【００７２】
本開示による本明細書においてアミロペクチンまたはデキストリンを含めた止血架橋多糖類ポリマーは、一旦創傷に適用されると、効率的なマトリックスを形成し、これは血流に対するバリヤーを形成することができる。特に、止血ポリマーの膨潤特性は、これを出血および再出血プロセスに対する有効な機械的なバリヤーとすることができる。
【００７３】
さらなる構成要素が、本発明による止血組成物中に存在し得る。様々な実施形態では、本発明による止血組成物は、抗線維素溶解薬、凝血原、血小板アクチベーター、抗生物質、血管収縮薬、色素、成長因子、骨形成タンパク質および鎮痛剤からなる群から選択される物質の１つまたは複数をさらに含み得る。
【００７４】
本開示はまた、ブラシ研磨された最終容器を提供する。この完成した容器は、無菌で貯蔵安定性があり市場性の高い形態の本発明による止血組成物を含有する。最終容器は、薬学的に投与可能な化合物を収容（および貯蔵）するのに適した任意の容器であり得る。シリンジ、バイアル、チューブなどを使用することができる。しかし、シリンジ中で本発明による止血組成物を提供することが好ましい。シリンジは、また医療行為におけるシリンジの取扱いの利点のために、先行技術において開示したように止血組成物のための好ましい投与手段である。次いで、組成物は好ましくは、シリンジの特定の針によって、または適切なカテーテルによって適用し得る（必要に応じて復元後）。復元された止血組成物（復元されて、ヒドロゲルを形成する）はまた、様々な他の手段によって、例えば、スパチュラ、ブラシ、スプレーによって、圧力によって手動で、または任意の他の通常の技術によって適用し得る。内視鏡的（腹腔鏡的）手段による患者への流動性止血組成物の投与が意図される。様々な実施形態では、止血組成物は、復元された組成物をオリフィス、開口部、針、チューブ、または他の通路を通して押し出して、材料のビーズ、層、または同様の部分を形成させることができるシリンジまたは同様のアプリケーターを使用して適用する。組成物の機械的破壊は、シリンジまたは他のアプリケーターにおける、典型的には０．０１ｍｍ〜５．０ｍｍ、好ましくは、０．５ｍｍ〜２．５ｍｍの範囲のサイズを有するオリフィスを通す押出によって行うことができる。
【００７５】
本発明の別の態様は、すぐ使用できる止血組成物を提供する方法であって、本発明による方法によって生成された止血組成物と薬学的に許容される希釈剤とを接触させることを含む方法に関する。
【００７６】
キット
【００７７】
この方法を行うのに有用な止血組成物を含むキットもここで意図される。キットは、本開示による止血組成物および使用のための説明書を含む。
【００７８】
キットは、特に、止血組成物が乾燥形態で含有されている場合、止血組成物の復元のための薬学的に許容される希釈剤をさらに含むことが意図されている。キットのさらなる構成要素、例えば、シリンジ、カテーテル、ブラシなど（組成物がまだデバイス中に用意されていない場合）、または医療（外科的）行為において使用するために必要な他の構成要素、例えば、置換針もしくはカテーテル、さらなるバイアルもしくはさらなる創傷カバー手段は、投与のための１つまたは複数のデバイスであり得る。様々な実施形態では、キットは、本明細書において、乾燥し、かつ安定な止血組成物を収容するシリンジ、および希釈剤を含有するシリンジを含む（または別の希釈剤容器から希釈剤を取り込んで提供される）。キットは、組成物を混合または「噴射（ｓｗｏｏｓｈｉｎｇ）」させるのに有用なインターロックシリンジを含むことがさらに意図される。
【００７９】
本発明のさらなる態様および詳細は、限定的であるよりむしろ例示的であることを意図する下記の実施例から明らかである。
【実施例】
【００８０】
（実施例１）
流動性止血マトリックスの調製
【００８１】
低分子量（＜２，０００Ｄａ）、中間分子量（２０ｋＤａ）、および高分子量（＞４５，０００Ｄａ）のマルトデキストリン（イコデキストリン）出発材料を利用した一連の架橋マルトデキストリンを調製した。調製は、マルトデキストリン（ｍａｌｏｔｄｅｘｔｒｉｎ）に対する架橋剤（エピクロロヒドリン）および塩基の比、反応温度、界面活性剤の添加を伴うかまたは伴わないか、水性媒体中かまたは非水性媒体中か、撹拌条件下かまたは静的条件下か、および合成後の処理（洗浄、粉砕、乾燥）において異なった。ヒドロゲルの親水性（膨潤）を０．９％食塩水中で２４時間インキュベートした後、これらの水取込み（平衡膨潤）を測定することによって評価し、その膨潤重量を決定する。次いで、試料を１２０℃にて２時間乾燥させ、その乾燥重量を決定する。重量の差異を使用して、平衡膨潤％（Ｅ膨潤）を計算する。イコデキストリンと共に調製したヒドロゲルは、１２０〜９００％の範囲のＥ膨潤、および３０秒において１２０〜３５０の範囲のＱ膨潤を有していた。反応時間は、概ね２２〜２３分であった。高分子量イコデキストリンと共に作製したヒドロゲルは、４５０〜１２００％の範囲のＥ膨潤を示した。反応時間は、概ね１６分であった。
【００８２】
架橋マルトデキストリン００９２−１２０Ａを乳鉢および乳棒で粉砕し、次いで、０．５ｍｍのふるいを通してふるい分けた。ふるい分けられた材料を、流動性止血マトリックスとして評価した。５ｍＬのシリンジを０．８グラムの粉砕した材料で充填し、次いで、３．８ｍＬの水を含有する別のシリンジに接続した。シリンジを前後に約２０回噴射させ、粉末を水和し、次いで、約３０秒間静置し、その後、水和した材料を押し出した。押出によって、Ｆｌｏｓｅａｌ  ＶＨ／ＳＤ止血マトリックスに匹敵する一貫性とともに粘稠性を有するヒドロゲルを観察した。
【００８３】
（実施例２）
止血組成物を使用した止血を評価する方法
【００８４】
本明細書において止血組成物の止血能力は、当技術分野において公知のいくつかのアッセイを使用して測定することができる。
【００８５】
トロンボエラストグラフィー（ＴＥＧ）を、当技術分野で記載されているように行う。例えば、ＴＥＧ（登録商標）５０００  Ｔｈｒｏｍｂｏｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ（登録商標）止血システムは、ソフトウェアＴＥＧ分析ソフトウェア（ＴＡＳ）を用いて使用する。手短に述べると、０．１２５ｇの試験物品を、５００ＩＵ／ｍｌのトロンビンおよび４０ｍＭのＣａＣｌ２を含有する６２５μｌのトロンビンストック溶液で復元し、次いで、これを５分間静置する。概ね１５０μｌまたは１５０ｍｇの復元した試験物品をＴＥＧカップに移し、これを機器に入れる。直ちに、５Ｕ／ｍｌのヘパリンで抗凝血処理された２１０μｌの血液をカップに加え、すばやく混合する。次いで、ＴＥＧを開始し、典型的には２０分間データを集める。振幅（Ａ）および最大振幅（ＭＡ）値を使用して、生成物の性能をスコアリングし、参照標準と比較する。ＡおよびＭＡ値＞５０ｍｍならびにＡ／ＭＡ値＞１は、良好な止血活性およびロバストな凝血塊形成の予測因子である。
【００８６】
押出力（ＥＦ）を、当技術分野で記載されているように測定する（例えば、ＵＳ２０１３０１２９７１０を参照されたい）。ＥＦ分析を行って、そこに取り付けられた標準的な６．３５ｃｍの送達チップを有する雄ルアーロックシステム（０．４８２インチの内径を有する円筒体を伴う）を有する５ｃｃシリンジについての力の値を決定する。手短に述べると、０．８０ｇの試験物品を、５．０ｍｌのマトリックス（上記のような）シリンジ中に移す。４．０ｍｌのトロンビン／ＣａＣｌ２ストック溶液（５００ＩＵ／ｍｌのトロンビンおよび４０ｍＭのＣａＣｌ２および概ね５０ｍｇ／ｍｌのアルブミンを含有する）を、雌ルアーロックシステムを有する５．０ｍｌの標準的なシリンジ中に取り込む。２つのシリンジを接続し、試験物品を２０回急速に復元し、次いで、分析の前に３０±３分間静置させる。次いで、相互接続されたシリンジを、さらに２回「噴射」させ、復元された試料を含有する雄ルアーロックシステムを有するシリンジにアプリケーターチップをフィットさせ、ＭＴＳ  ＩＮＳＩＧＨＴ（商標）電気機械力ゲージ中に挿入する。試料を２５０ｍｍ／分の指定された圧縮速でで押し出し、総試料押出に亘って決定したその平均の力を記録する。
【００８７】
コラゲナーゼアッセイは、ｉｎ  ｖｉｖｏでの滞留時間の指標である細胞溶解までの時間を測定するのに有用である。アッセイのために、０．０８ｇの試験試料および対照試料を、転倒型ミキサー（ｅｎｄ  ｏｖｅｒ  ｅｎｄ  ｍｉｘｅｒ）において２ｍｌのＰＢＳ緩衝液と共に３０分間３７℃にてインキュベートする。その後、試料を、エッペンドルフ遠心分離機において１４０００ｒｐｍで室温にて５分間遠心分離に供する。上清を廃棄し、沈殿物を０．１１１Ｕ／ｍｌのコラゲナーゼを含有する１．２ｍｌのＰＢＳ緩衝液に再懸濁させる。参照試料を、１．２ｍｌのＰＢＳ緩衝液（コラゲナーゼを添加していない）と共にインキュベートする。試料を、転倒型ミキサーにおいて３７℃にてインキュベートし、規定された静置時間後に、タンパク質決定（ＢＣＡ試験）のために、上清を吸引し、秤量し、集め、試料を、コラゲナーゼを含有する１．２ｍｌのＰＢＳ緩衝液で再び満たす。溶解までの時間は、時間と共に上清中に放出された分解されたタンパク質の含量を測定することによって決定することができる。このアッセイにおいて試験物品の推定９０％溶解時間を測定すると、ヒドロゲルの可能なｉｎ  ｖｉｖｏでの滞留時間の間接的な推定が得られる。
【００８８】
（実施例３）
流動性止血剤のｉｎ  ｖｉｖｏでの評価
【００８９】
材料および方法：この研究のために、正中開腹術、それに続いて、電気焼灼を行い、外科的切開からの出血を停止させる。肝臓を曝露させ、葉を単離する。１０ｍｍ直径のパンチ生検を使用して、コア組織を除去した一連の２つの概ね５ｍｍ厚さの非全層病変を生じさせる。処置前の出血評価を病変上で行い、これは、各病変から流れる血液を事前に秤量したガーゼで６秒間集めることを含む。
【００９０】
試験物品（すなわち、流動性止血組成物）を無作為化し、病変生成の前に処置に対して盲検的である外科医に提示した。概ね１．０ｍｌの割り当てられた止血試験物品を、病変に局所的に適用した。食塩水で湿らせたガーゼを使用して、試験物品を、指定されたそれらの病変に近接させることを助け、タイマーを開始する。食塩水で湿らせた近接ガーゼを２分後に除去する。
【００９１】
各病変からの出血の程度を、ガーゼ除去の直後（０時点）ならびにその後、２、３、５、７および１０分において評価するが、これは適用の２、４、５、７、９、および１２分後と等しい。
【００９２】
定性的処置後出血評価を、事前に定義されたスコアリングシステムを使用して行った（図１）が、ここで成功した止血は、１以下の出血スコアとして定義する。血液で飽和しているが、活動性出血を伴わない試験アイテムは、０の出血スコアを受ける。５分の評価の後、食塩水を使用して、過剰な試験物品を洗浄して病変から除去した。手順を繰り返し、複数の肝葉において行う。１人の外科医が、観察評価を作成し、処理し、実施する。
【００９３】
試験物品粉末を、５ｍＬのシリンジ中に分割し、（０．８ｇ／シリンジ）流動性マルトデキストリンとして再指定し、ブタ肝臓パンチモデルにおいて評価した。使用した対照組成物は、１０ｍＬのキットサイズのＦＬＯＳＥＡＬ  ＶＨ  Ｓ／Ｄであった。０．９％食塩水中の５００Ｉ．Ｕ．／ｍｌのトロンビンを含有する溶液を調製し、各試験物品（３ｍＬ／シリンジ）を復元するために使用した。
【００９４】
各試験物品試料を、２０回のシリンジの間を通過させること（「噴射」）によって急速に混合し、調製後５分〜６０分に病変に適用した。１ミリリットル分量の復元された試験物品を、個々の３ｍＬ容量のシリンジ中に分注した。次いで、これらの個々の３ｍＬのシリンジを使用して、試験物品を肝臓パンチ病変に適用した。
【００９５】
比較として、ブタ肝臓パンチ生検モデルを使用して、ＦＬＯＳＥＡＬ  ＶＨ  Ｓ／Ｄのｉｎ  ｖｉｖｏでの評価も行った。使用説明書（ＩＦＵ）に従って圧縮物（ｃｏｍｐａｃｔｏｒ）を調製し、調製の５〜６０分後に病変に適用した。１ミリリットル分量の復元されたＦＬＯＳＥＡＬマトリックスを、個々の３ｍＬ容量のシリンジ中に分注した。次いで、これらの個々の３ｍＬのシリンジを使用して、試験物品を様々な時点において肝臓パンチ病変に適用した。
【００９６】
結果：流動性マルトデキストリンおよびＦｌｏｓｅａｌ  ＶＨ  Ｓ／Ｄのｉｎ  ｖｉｖｏでの評価を、４匹の動物において、１日当たり１匹の動物でブタ肝臓パンチ生検モデルを使用して行った。結果を表１ならびに図２および３において提示する。２つの試料群（流動性マルトデキストリンおよびＦＬＯＳＥＡＬ  ＶＨ  Ｓ／Ｄ）についての適用前の出血速度を、表１において提示する。処置前の出血速度は、処置群に亘って同様であり、ＦＬＯＳＥＡＬおよびＳｉｅｒｒａ  Ｆｌｏｗａｂｌｅを、比較し得る肝臓病変に投与したことを示す。
【００９７】
【表１】
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【００９８】
図２において提示したデータは、流動性マルトデキストリンで処置された病変の７８．１〜９０．６％（Ｆｌｏｓｅａｌ  ＶＨ  Ｓ／Ｄについては７４．２〜９６．８％）における止血評価の間の様々な時点における止血の成功を示す。全ての病変に亘り、流動性マルトデキストリン処置は、Ｆｌｏｓｅａｌ  ＶＨ  Ｓ／Ｄで処置された１８６時点のうち１６１時点（８６．６±８．０％）と比較して、１９２時点のうち１５７時点（８１．８±４．６％）において止血の成功をもたらした（図３）。実施例１に従って調製した流動性マルトデキストリンは、ＦＬＯＳＥＡＬ  ＶＨ  Ｓ／Ｄのそれと全体的に同等の止血の成功および出血の低減をもたらした。
【００９９】
上記の例示的な実施例に記載の本発明の多数の改変および変形を、当業者が思い付くことが予想される。したがって、添付の特許請求の範囲において記載されるような制限のみが本発明に課されるべきである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年8月17日(2017.8.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
架橋アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリン、または架橋修飾アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリンを含む止血組成物であって、該組成物は、流動性ヒドロゲルであり、該止血組成物は、凝血原をさらに含む、止血組成物。
【請求項２】
血液凝固因子、止血薬、収斂剤、および他の止血剤からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤をさらに含む、請求項１に記載の止血組成物。
【請求項３】
前記凝血原が、トロンビンである、請求項１に記載の止血組成物。
【請求項４】
アミロペクチン、イコデキストリンまたはマルトデキストリンが、アミン基、アルデヒド基、リン酸基、ホスホン酸基、硫酸基、スルホン酸基、およびカルボン酸基からなる群から選択される官能基をさらに含む、請求項１〜３のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項５】
凝血カスケードを活性化するか、または組織への結合を増進させる、請求項１〜４のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項６】
前記架橋アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリン、または架橋修飾アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリンが、エピクロロヒドリン、ビス−エポキシプロピルエーテル、エチレングリコール−ビス−エポキシプロピルエーテル、トリメタリン酸ナトリウム（ＳＴＭＰ）、アジピン酸−無水酢酸、オキシ塩化リン、ホルムアルデヒド、ジエポキシド、ビニルシクロヘキセンジオキシド、ブタジエンジオキシド、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドおよびゲニピンからなる群から選択される架橋剤を含む、請求項１〜５のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項７】
前記マルトデキストリンが、低分子量、中間分子量または高分子量マルトデキストリンからなる群から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項８】
前記低分子量マルトデキストリンが、２，０００Ｄａ未満である、請求項７に記載の止血組成物。
【請求項９】
前記中間分子量マルトデキストリンが、２，０００〜４５，０００Ｄａである、請求項７に記載の止血組成物。
【請求項１０】
前記高分子量マルトデキストリンが、４５，０００Ｄａ超である、請求項７に記載の止血組成物。
【請求項１１】
多糖類、ポリビニルアルコール、ポリエチレンイミン、キトサン、アルギン酸、フコイダン、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン、コンドロイチン硫酸、アミロペクチン、アミロース、キサンタンガム、グアーガム、カラギーナン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルマルトデキストリン、カルボキシメチルイコデキストリン、カルボキシメチルデンプン、アガロース、および天然または合成ポリマーからなる群から選択される添加物または活性剤の１つまたは複数をさらに含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項１２】
前記アミロペクチン、イコデキストリンまたはマルトデキストリンが、植物材料、細菌、真菌または藻類に由来する、請求項１〜１１のいずれかに記載の止血組成物。
【請求項１３】
植物材料が、トウモロコシ、ダイズ、米、タピオカ、コムギ、モチトウモロコシおよびモチ米からなる群から選択される、請求項１２に記載の止血組成物。
【請求項１４】
創傷、失血、損傷した組織および出血組織からなる群から選択される傷害を処置するための請求項１〜１３のいずれか一項に記載の止血組成物であって、該止血組成物が、傷害の部位に投与されることを特徴とする、止血組成物。
【請求項１５】
出血を遅延または停止させるための請求項１〜１３のいずれか一項に記載の止血組成物であって、該止血組成物が、出血領域に適用されること特徴とする、止血組成物。
【請求項１６】
前記傷害または出血が、手術の間に起こる、請求項１４または１５に記載の止血組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、スポンジ、パッド、フィルムまたは繊維中で使用される、請求項１４または１５に記載の止血組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、出血を数秒または数分以内に停止させる、請求項１５に記載の止血組成物。
【請求項１９】
創傷、失血、損傷した組織および出血組織からなる群から選択される傷害の処置のための、または出血を遅延もしくは停止させるためのキットであって、ａ）請求項１〜１３のいずれかに記載の止血組成物、およびｂ）使用のための説明書を含む、キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
特徴の組合せが本明細書において同じ文またはパラグラフにおいて特に見出されなくても、本明細書に記載されている特徴の全ての組合せが意図されることを理解すべきである。これは、特に、本明細書に記載のような本発明の全ての態様における、個々にまたはハプロタイプにおける分析のための、単独でまたは組み合わせた、本明細書において開示されている全てのマーカーの使用を含む。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
架橋アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリン、または架橋修飾アミロペクチン、イコデキストリンもしくはマルトデキストリンを含む止血組成物。
（項目２）
流動性ヒドロゲルである、項目１に記載の止血組成物。
（項目３）
粉末化形態である、項目１に記載の止血組成物。
（項目４）
噴霧可能形態である、項目１に記載の止血組成物。
（項目５）
凝血原、血液凝固因子、止血薬、収斂剤、および他の止血剤からなる群から選択される１つまたは複数の薬剤をさらに含む、先行する項目のいずれかに記載の止血組成物。
（項目６）
前記凝血原が、トロンビンである、項目５に記載の方法。
（項目７）
アミロペクチン、イコデキストリンまたはマルトデキストリンが、アミン基、アルデヒド基、リン酸基、ホスホン酸基、硫酸基、スルホン酸基、およびカルボン酸基からなる群から選択される官能基をさらに含む、先行する項目のいずれかに記載の止血組成物。
（項目８）
凝血カスケードを活性化するか、または組織への結合を増進させる、先行する項目のいずれかに記載の止血組成物。
（項目９）
前記架橋組成物が、エピクロロヒドリン、ビス−エポキシプロピルエーテル、エチレングリコール−ビス−エポキシプロピルエーテル、トリメタリン酸ナトリウム（ＳＴＭＰ）、アジピン酸−無水酢酸、オキシ塩化リン、ホルムアルデヒド、ジエポキシド、ビニルシクロヘキセンジオキシド、ブタジエンジオキシド、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドおよびゲニピンからなる群から選択される架橋剤を含む、先行する項目のいずれかに記載の止血組成物。
（項目１０）
前記マルトデキストリンが、低分子量、中間分子量または高分子量マルトデキストリンからなる群から選択される、先行する項目のいずれかに記載の止血組成物。
（項目１１）
前記低分子量マルトデキストリンが、２，０００Ｄａ未満である、項目１０に記載の止血組成物。
（項目１２）
前記中間分子量マルトデキストリンが、２，０００〜４５，０００Ｄａである、項目１０に記載の止血組成物。
（項目１３）
前記高分子量マルトデキストリンが、４５，０００Ｄａ超である、項目１０に記載の止血組成物。
（項目１４）
多糖類、ポリビニルアルコール、ポリエチレンイミン、キトサン、アルギン酸、フコイダン、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン、コンドロイチン硫酸、アミロペクチン、アミロース、キサンタンガム、グアーガム、カラギーナン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルマルトデキストリン、カルボキシメチルイコデキストリン、カルボキシメチルデンプン、アガロース、および天然または合成ポリマーからなる群から選択される添加物または活性剤の１つまたは複数をさらに含む、先行する項目のいずれかに記載の止血組成物。
（項目１５）
前記アミロペクチン、イコデキストリンまたはマルトデキストリンが、植物材料、細菌、真菌または藻類に由来する、先行する項目のいずれかに記載の止血組成物。
（項目１６）
植物材料が、トウモロコシ、ダイズ、米、タピオカ、コムギ、モチトウモロコシおよびモチ米からなる群から選択される、項目１５に記載の止血組成物。
（項目１７）
創傷、失血、損傷した組織および出血組織からなる群から選択される傷害を処置する方法であって、先行する項目のいずれかに記載の止血組成物が、傷害の部位に投与されることを含む、方法。
（項目１８）
出血を遅延または停止させる方法であって、先行する項目のいずれかに記載の止血組成物が、出血領域に適用されることを含む、方法。
（項目１９）
前記傷害または出血が、手術の間に起こる、項目１７または１８に記載の方法。
（項目２０）
前記組成物が、粉末形態で適用される、項目１７または１８に記載の方法。
（項目２１）
前記組成物が、スポンジ、パッド、フィルムまたは繊維中で使用される、項目１７または１８に記載の方法。
（項目２２）
前記組成物が、粉末化形態であり、前記組成物を、最初に液体と混合して、流動性組成物を形成させる、項目１７または１８に記載の方法。
（項目２３）
前記液体が、食塩水、水、緩衝溶液、およびタンパク質溶液からなる群から選択される、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記組成物が、出血を数秒または数分以内に停止させる、項目１８に記載の方法。
（項目２５）
創傷、失血、損傷した組織および出血組織からなる群から選択される傷害の処置のための、または出血を遅延もしくは停止させるためのキットであって、ａ）先行する項目のいずれかに記載の止血組成物、およびｂ）使用のための説明書を含む、キット。
（項目２６）
前記止血組成物が乾燥形態であり、前記キットが、前記止血組成物の復元のための薬学的に許容される希釈剤をさらに含む、項目２５に記載のキット。
【国際調査報告】
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