(57)【要約】  本開示は、リンパ球における複数のＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の阻害活性を中和する抗体を含む、複数のＳｉｇｌｅｃに結合する薬剤に関する。このような薬剤は、癌または感染性疾患の処置のために使用され得る。
2017532025.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−７ポリペプチドおよびヒトＳｉｇｌｅｃ−９ポリペプチドに特異的に結合する単離抗体。
【請求項２】
中和抗Ｓｉｇｌｅｃ７／９抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
第３のヒトＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドに実質的に結合せず、任意選択により第３のヒトＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドよりも少なくとも１００倍低いＫＤで前記Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９に結合し、任意選択により前記第３のヒトＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃが、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２からなる群から選択される、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
前記第３のヒトＣＤ３３関連ＳｉｇｌｅｃポリペプチドがＳｉｇｌｅｃ−１２である、請求項１〜３の何れか一項に記載の単離抗体。
【請求項５】
第１および第２のヒトＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃの細胞外ドメイン上に存在する共通の決定基に結合するモノクローナル抗体であって、前記第１および第２のＳｉｇｌｅｃの阻害活性を中和する、モノクローナル抗体。
【請求項６】
細胞上に存在する前記Ｓｉｇｌｅｃの天然のリガンドによる前記Ｓｉｇｌｅｃの活性化を阻害する、請求項１〜５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項７】
Ｓｉｇｌｅｃ発現リンパ球が、標的細胞表面上に前記Ｓｉｇｌｅｃのリガンドを保有する標的ヒト細胞と接触させられると、前記発現リンパ球において細胞傷害性に関連するマーカーの上昇を引き起こす、請求項１〜６の何れか一項に記載の抗体。
【請求項８】
ａ）Ｓｉｇｌｅｃ−７に特異的に結合し、かつヒト免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ−７に結合する場合に、標的細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドを保有する標的ヒト細胞が前記免疫細胞と接触すると、前記標的細胞に対する前記免疫細胞の活性化および／または細胞傷害性を増大させることと；
ｂ）Ｓｉｇｌｅｃ−９に特異的に結合し、かつヒトリンパ球上のＳｉｇｌｅｃ−９に結合する場合に、標的細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを保有する標的ヒト細胞が前記免疫細胞と接触すると、前記標的細胞に対する前記免疫細胞の活性化および／または細胞傷害性を増大させることと；
ｃ）ＣＤ１６ヒトＦｃγ受容体に実質的に結合しないことと
を特徴とする単離モノクローナル抗体。
【請求項９】
Ｓｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９の前記リガンドがシアル酸を含む、請求項１〜８の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
Ｓｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９の前記リガンドがシアログリカンを含む、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
Ｓｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９の前記リガンドが、糖タンパク質またはガングリオシド上に存在するシアル酸を含む、請求項９に記載の抗体。
【請求項１２】
Ｓｉｇｌｅｃ−７の前記リガンドが、ガングリオシドまたはムチン上に存在するシアル酸を含む、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１３】
Ｓｉｇｌｅｃ−９の前記リガンドがシアル酸不含ポリペプチドである、請求項１〜１２の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１４】
（ａ）（ｉ）配列番号３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号４の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖とを含むモノクローナル抗体；
（ｂ）（ｉ）配列番号２１の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖とを含むモノクローナル抗体；および
（ｃ）（ｉ）配列番号３９の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号４０の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖とを含むモノクローナル抗体
からなる群から選択される抗体と、Ｓｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９への結合について競合する単離抗体。
【請求項１５】
（ａ）（ｉ）配列番号３の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号４の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖とを含むモノクローナル抗体；
（ｂ）（ｉ）配列番号２１の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号２２の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖とを含むモノクローナル抗体；および
（ｃ）（ｉ）配列番号３９の重鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む重鎖と、（ｉｉ）配列番号４０の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、２および３を含む軽鎖とを含むモノクローナル抗体
からなる群から選択される、請求項１〜１４の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１６】
キメラ、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項１〜１５の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１７】
Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９に結合可能な抗原結合ドメインを含む、請求項１〜１６の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
非枯渇抗体である、請求項１〜１７の何れか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
ヒトＩｇＧ４アイソタイプ抗体、またはＦｃドメインとＦｃγ受容体との間の結合を減少させるために修飾されている前記Ｆｃドメインを有する抗体である、請求項１〜１８の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、１本鎖抗体断片から選択される抗体断片、または複数の異なる抗体断片を含む多特異性抗体である、請求項１〜１８の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２１】
検出可能部分と複合化されているかまたは共有結合されている、請求項１〜２０の何れか一項に記載の抗体。
【請求項２２】
請求項１〜２０の何れか一項に記載の抗体をキメラ化またはヒト化することによって得られる抗体。
【請求項２３】
請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体と、薬学的に許容可能な担体とを含む医薬組成物。
【請求項２４】
請求項１〜２３の何れか一項に記載の抗体を含み、任意選択により請求項１〜２３の何れか一項に記載の抗体を特異的に認識する標識化二次抗体をさらに含むキット。
【請求項２５】
請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸。
【請求項２６】
請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体を産生するハイブリドーマまたは組み換え宿主細胞。
【請求項２７】
疾患の処置または予防を、それを必要とする患者において行うための方法であって、有効量の請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体または請求項２３に記載の組成物を前記患者に投与することを含む方法。
【請求項２８】
前記疾患が癌である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
対象においてＣＤ５６ｄｉｍＮＫ細胞および／またはＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を調整するための方法であって、有効量の請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体または請求項２３に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項３０】
リンパ球、任意選択によりＣＤ５６ｄｉｍＮＫ細胞、ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性を調整するためのインビトロ方法であって、Ｓｉｇｌｅｃ７を発現するリンパ球および／またはＳｉｇｌｅｃ−９を発現するリンパ球を請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体または請求項２３に記載の組成物と接触させることを含むインビトロ方法。
【請求項３１】
疾患に罹患している対象からのリンパ球の活性を評価するためのインビトロ方法であって、細胞を含む対象からの生体試料を得ることと、前記細胞を請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体と接触させることと、前記抗体が前記リンパ球の活性を調整するか否かを評価することとを含むインビトロ方法。
【請求項３２】
リンパ球、任意選択によりＣＤ５６ｄｉｍＮＫ細胞、ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞を同定するための方法であって、細胞を含む対象からの生体試料を得ることと、前記細胞を請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体と接触させることと、前記抗体が前記細胞と結合するか否かを評価することとを含む方法。
【請求項３３】
前記リンパ球が、疾患、任意選択により癌に罹患している対象から得られた生体試料中に存在する、請求項２６〜２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３４】
請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体での処置に反応する癌に罹患している対象を選択するための方法であって、前記対象中の癌細胞がＳｉｇｌｅｃ−７またはＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを発現するか否か、任意選択により、癌細胞が、上昇したレベルのＳｉｇｌｅｃ−７またはＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを発現するか否かを判定することを含み、Ｓｉｇｌｅｃ−７もしくはＳｉｇｌｅｃ−９のシアル酸リガンドの発現またはＳｉｇｌｅｃ−７もしくはＳｉｇｌｅｃ−９のシアル酸リガンドの上昇したレベルが反応者対象を示す、方法。
【請求項３５】
請求項１〜２２の何れか一項に記載の抗体または請求項２３に記載の組成物を反応者対象に投与することをさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
複数のＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物と交差反応し、かつ前記Ｓｉｇｌｅｃの阻害活性を中和する抗体を作製する方法であって、
（ａ）ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドと結合する複数の抗体を提供するステップと、
（ｂ）少なくとも２種類の異なるＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ遺伝子産物と交差反応する抗体を選択するステップと、
（ｃ）２種類の異なるＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ遺伝子産物の阻害活性を中和する抗体を選択するステップと
を含む方法。
【請求項３７】
ステップ（ｃ）は、Ｓｉｇｌｅｃ発現リンパ球が、標的ヒト細胞表面上に前記Ｓｉｇｌｅｃのリガンドを保有する標的ヒト細胞と接触させられると、前記リンパ球において細胞傷害性と関連するマーカーの上昇を引き起こすことが可能な抗体を選択することを含む、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記少なくとも２種類の異なるＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ遺伝子産物がＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９である、請求項３６または３７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる２０１４年９月１０日提出の米国仮特許出願第６２／０４８，２９２号明細書の利益を主張する。
【０００２】
配列表の参照
本願は、電子方式の配列リストとともに提出されている。本配列リストは、２０１５年９月８日作成の「Ｓｉｇｌｅｃ７−９＿ＳＴ２５」という名称で提供されており、サイズは６０ｋＢである。本配列リストの電子方式の情報は、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる。
【０００３】
本発明は、リンパ球における複数のＳｉｇｌｅｃの阻害活性を中和する抗体を含む、複数のＳｉｇｌｅｃに結合する物質に関する。このような物質は、癌または感染性疾患の処置のために使用され得る。
【背景技術】
【０００４】
ＮＫ細胞は、リンパ球前駆細胞から骨髄で発生する単核細胞であり、形態学的特徴および生物学的特性としては、一般的に、クラスター決定基（ＣＤ）ＣＤ１６、ＣＤ５６および／またはＣＤ５７の発現；細胞表面上にアルファ／ベータまたはガンマ／デルタＴＣＲ複合体がないこと；「自己」主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）／ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）タンパク質を発現できない標的細胞に結合し、これを死滅させる能力；およびＮＫ受容体を活性化するためにリガンドを発現する腫瘍細胞または他の病的細胞を死滅させる能力が挙げられる。ＮＫ細胞は、予め免疫付与または活性化する必要なく、一部のタイプの腫瘍細胞株に結合し、これを死滅させる能力を特徴とする。ＮＫ細胞は、免疫系において制御効果を発揮する可溶性タンパク質およびサイトカインも放出し得、複数回の細胞分裂が起こり、親細胞と同様の生物学的特性を有する娘細胞を生成させ得る。正常で健康な細胞は、ＮＫ細胞による溶解から保護される。
【０００５】
それらの生物学的特性に基づいて、ＮＫ細胞の調整に依存する様々な治療およびワクチンストラテジーが当技術分野において提案されてきた。しかし、ＮＫ細胞活性は、刺激性および阻害シグナルの両方を含む複雑な機序により制御される。簡潔に述べると、ＮＫ細胞の溶解活性は、標的細胞上でのリガンドとの相互作用時に正または負の何れかの細胞内シグナルを伝達する様々な細胞表面受容体により制御される。これらの受容体を介して伝達される正および負のシグナル間のバランスは、ＮＫ細胞によって標的細胞が溶解される（死滅させられる）か否かを決定する。ＮＫ細胞刺激性シグナルには、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４およびＮＫｐ４６などの天然細胞傷害誘発受容体（ＮＣＲ）；ならびにＮＫＧ２Ｃ受容体、ＮＫＧ２Ｄ受容体、ある種の活性化キラーＩｇ様受容体（ＫＩＲ）および他の活性化ＮＫ受容体が介在し得る（非特許文献１）。ＮＫ細胞阻害シグナルには、Ｌｙ４９、ＣＤ９４／ＮＫＧ２−Ａのような受容体ならびに主要組織適合抗原複合体（ＭＨＣ）クラスＩ分子を認識するある種の阻害性ＫＩＲが介在し得る（非特許文献２；非特許文献３）。これらの阻害受容体は、他の細胞上に存在するＭＨＣクラスＩ分子の多型決定基（ＨＬＡクラスＩを含む）に結合し、ＮＫ細胞介在性の溶解を阻害する。
【０００６】
ＮＫ細胞の溶解活性はまた、ｓｉｇｌｅｃポリペプチドによっても制御され得る。Ｓｉｇｌｅｃ（シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン）は、シアログリカンに結合し、細胞型および分化依存性に造血系の細胞で主に発現される、Ｉ型レクチンのサブセットである。シアル酸が一般的には糖タンパク質および脂質の末端の位置でユビキタスに発現される一方で、非常に特異的な個別のシアログリカン構造のみが、末端近くの炭水化物部分に対する同一性および連結に依存して、個々のＳｉｇｌｅｃ受容体により認識される。Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）α２−６およびα２−３結合を含有する一般的な哺乳動物シアロシド構造に対するＳｉｇｌｅｃの一般的な親和性は低いものでしかない。
【０００７】
Ｓｉｇｌｅｃは一般に、Ｓｉｇｌｅｃ−１、−２、−４および−１５から構成される第１のサブセットと、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−７、−８、−９、−１０、−１１、−１２、−１４および−１６を含むＳｉｇｌｅｃのＣＤ３３関連群との２つの群に分けられる。ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃは、とりわけ、進化的保存性が低いことおよび複数の機序による配列の急速な進化を特徴とする。
【０００８】
ジェノバのＭｏｒｅｔｔａグループにより１９９９年に最初にクローニングされ、特徴が調べられ、ヒトＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ受容体に属する、１型膜貫通タンパク質であるＳｉｇｌｅｃ−７（ＣＤ３２８）は、シアル酸結合Ｎ末端Ｖ−セットＩｇドメイン、２個のＣ２−セットＩｇドメインおよび１個の免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）および１個のＩＴＩＭ様モチーフを含有する細胞質内領域を特徴とする。Ｓｉｇｌｅｃ−７は、ＮＫ細胞、樹状細胞、単球、好中球およびＣＤ８＋Ｔ細胞上で構成的に発現される。この受容体の細胞外ドメインは、（２，８）−結合ジシアル酸および分岐状α２，６−シアリル残基、例えばガングリオシドＧＤ３により提示されるものなどに選択的に結合する。
【０００９】
Ｓｉｇｌｅｃ−９（ＣＤ３２９）は、２０００年にＶａｒｋｉグループにより特徴が調べられ（例えば、（非特許文献４））、単球、好中球、樹状細胞、ＣＤ３４＋細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞上で発現される。Ｓｉｇｌｅｃ−９（ならびにＳｉｇｌｅｃ−８）は、シアル酸および硫酸の両方を含有するシアロシドリガンドに対して示差的な特異性を有し、硫酸の位置が特異性の重要な決定基であることが分かっている。Ｓｉｇｌｅｃ−９は、癌細胞上で過剰発現されるＭＵＣ１６に結合することが分かっている。Ｓｉｇｌｅｃ−７のように、Ｓｉｇｌｅｃ９もシアル酸結合Ｎ末端Ｖ−セットＩｇドメイン、２個のＣ２−セットＩｇドメイン、および１個の免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）および１個のＩＴＩＭ様モチーフを含有する細胞質内領域を含有する。ヒトＳｉｇｌｅｃ−９のＮ末端Ｖ−セットＩｇドメインは、ヒトＳｉｇｌｅｃ−７のＮ末端Ｖ−セットＩｇドメインと約７７％の全体的なアミノ酸配列同一性を共有し、これらの２種類のｓｉｇｌｅｃは、異なるシアル酸結合特異性を示す。
【００１０】
Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９のそれぞれに対する様々な抗体が記載されてきた。例えば、（特許文献１）（Ｍｏｒｅｔｔａら）および（非特許文献５）は、マウス抗ｓｉｇｌｅｃ−７抗体ＱＡ７９に言及している。（非特許文献６）は抗体Ｚ１７６を報告している。抗ｓｉｇｌｅｃ−９抗体も報告されており、クローンＥ１０−２８６はＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手可能である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】欧州特許第１２３８２８２Ｂ１号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｌａｎｉｅｒ，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ２００５；２３：２２５−７４
【非特許文献２】Ｋａｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９８６；３１９：６７５−８
【非特許文献３】Ｏｅｈｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８９；２４６：６６６−８
【非特許文献４】Ａｎｇａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２０００；２７５：２２１２７−２２１３５
【非特許文献５】Ｖｉｔａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．（（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９６（２６）：１５０９１−９６）
【非特許文献６】Ｆａｌｃｏ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０：７９３−８０１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
Ｓｉｇｌｅｃ−７および−９への関心にもかかわらず、これらの受容体を標的とする治療剤は開発されていない。したがって、癌などの疾患を処置することにおける使用のための、これらの受容体を標的とする薬剤が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本明細書中で示されるように、ＮＫ細胞は、阻害Ｓｉｇｌｅｃ−７および阻害Ｓｉｇｌｅｃ−９タンパク質の両方を発現し得る。同時に、腫瘍細胞がＳｉｇｌｅｃ−７に対する、およびＳｉｇｌｅｃ−９に対する天然リガンド（グリカン）を発現し得ることが示されている。結果的に、一方のＳｉｇｌｅｃを阻害するが他方を阻害しない治療剤は、Ｓｉｇｌｅｃが介在するＮＫおよび／または他の免疫細胞の活性の制限を中和するのに最大限に有効ではない可能性がある。したがって、Ｓｉｇｌｅｃ７および９の両方の阻害は有利であり得る。しかし、Ｓｉｇｌｅｃ−９がヒトＳｉｇｌｅｃ−７のＮ末端Ｖ−セットＩｇドメインと共有する全体的なアミノ酸配列同一性は僅か約７７％である。さらに、これら２種類のｓｉｇｌｅｃは、異なるシアル酸結合特異性を示す。
【００１５】
ある態様において、本開示は、２種類以上の阻害ヒトＳｉｇｌｅｃポリペプチド（例えば細胞の表面で発現されるようなＳｉｇｌｅｃポリペプチド）に特異的に結合する抗体を提供する。ある実施形態において、本抗体はさらに、特に免疫細胞におけるこのようなＳｉｇｌｅｃポリペプチドのシアル酸リガンド誘導性阻害活性を阻止することによって、少なくとも２種類のこのようなＳｉｇｌｅｃの阻害活性を阻害することが可能である（例えば中和抗体）。本抗体は、２種類以上のＳｉｇｌｅｃ上に存在する共通の決定基に結合し得る。任意選択により、２種類以上のＳｉｇｌｅｃポリペプチドは、ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドである。ある実施形態において、２種類以上のＳｉｇｌｅｃポリペプチドは、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９である。ある実施形態において、本抗体はさらに、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２の何れにも実質的に結合しない。ある実施形態において、本抗体はさらにＳｉｇｌｅｃ−１４および−１６の何れにも実質的に結合しない。
【００１６】
本明細書中での何れかの実施形態において、本抗体は、例えば、各Ｓｉｇｌｅｃとそのシアロシド含有リガンド（例えば天然リガンド）との間の相互作用を阻止し得、および／またはそのシアロシド含有リガンドにより誘導されるＳｉｇｌｅｃ活性（阻害シグナル）を阻止し得る。本明細書中での何れかの実施形態において、本抗体は、例えば、各Ｓｉｇｌｅｃとそのシアロシド不含リガンド（例えばシアロシドを欠く天然タンパク質リガンド）との間の相互作用を阻止し得、および／またはそのシアロシド含有リガンドにより誘導されるＳｉｇｌｅｃ活性（阻害シグナル）を阻止し得る。
【００１７】
ある態様において、本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−７および／または−９ポリペプチドに特異的に結合し、シアロシド不含タンパク質リガンドにより誘導されるこのようなＳｉｇｌｅｃポリペプチドの阻害活性を阻止することによって、免疫細胞におけるこのようなＳｉｇｌｅｃの阻害活性を阻害することが可能である抗体（例えば中和抗体）を提供する。ある実施形態において、本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−７ポリペプチドに特異的に結合し（何らかの他のＳｉｇｌｅｃポリペプチドに対する結合能があるかまたはない）、Ｓｉｇｌｅｃ−７とＳｉｇｌｅｃ−７のシアロシド不含リガンドとの間の相互作用を阻止することが可能である抗体を提供する。ある実施形態において、本開示は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−９ポリペプチドに特異的に結合し（何らかの他のＳｉｇｌｅｃポリペプチドに対する結合能があるかまたはない）、Ｓｉｇｌｅｃ−９とＳｉｇｌｅｃ−９のシアロシド不含リガンドとの間の相互作用を阻止することが可能である抗体を提供する。
【００１８】
このような抗体の断片および誘導体も提供される。ある実施形態において、本抗体は、前記２種類以上のヒトＳｉｇｌｅｃに結合可能である（すなわち２種類以上のＳｉｇｌｅｃと交差反応性がある）抗原結合ドメイン（例えば、単一抗原結合ドメイン、重鎖および軽鎖可変ドメインから構成されるドメインなど）を含む。
【００１９】
ある態様において、本発明は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−７ポリペプチドおよびヒトＳｉｇｌｅｃ−９ポリペプチドに特異的に結合可能な抗原結合ドメイン（例えば単離されているかまたは単離ポリペプチド中に含まれるものおよび抗体）に関する。ある実施形態において、抗原結合ドメインは、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２の何れにも実質的に結合しない。
【００２０】
本発明はまた、とりわけ、ヒト阻害受容体Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方に特異的に結合し、その阻害活性を中和する抗原結合ドメインまたは抗体（中和抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体）にも関する。ある実施形態において、抗原結合ドメインまたは抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２の何れにも実質的に結合しない。中和抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体は、免疫細胞においてＳｉｇｌｅｃ−７および−９により発揮される阻害活性を緩和し、Ｓｉｇｌｅｃ−７のシアル酸リガンドおよび／またはＳｉｇｌｅｃ−９のシアル酸リガンドを発現する癌細胞を効果的に認識し、および／または排除するリンパ球の能力を促進する。交差反応性および中和抗体は、一方または他方のタイプのリガンドの発現のために、癌細胞が溶解から逃れる能力を低下させ、したがって、これらにより免疫系による腫瘍監視が促進される。Ｓｉｇｌｅｃ−９は、ＣＤ５６ｄｉｍＮＫ細胞で選択的に発現され、一方でｓｉｇｌｅｃ−７はＣＤ５６ｄｉｍおよびＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＮＫ細胞上で発現される。ＣＤ５６ｄｉｍＮＫ細胞（ＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋ＫＩＲ＋）は、末梢血液および脾臓ＮＫ細胞の約９０％に相当し、パーフォリンおよびグランザイムを発現し、主要な細胞傷害性サブセットであり、一方でＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＮＫ細胞（ＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＣＤ１６ｄｉｍ／−ＫＩＲ−）は、リンパ節および扁桃腺でＮＫ細胞の大多数を構成し、活性化時に主としてサイトカイン産生に反応する。
【００２１】
ある実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方に結合し得、リンパ球（例えばＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞）細胞傷害性のＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９介在性阻害の両方を中和し得る抗体が提供される。ある態様において、本抗体は、標的細胞（例えばＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドおよびＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを発現する細胞、腫瘍細胞）の存在下でリンパ球活性化を向上させる。ある実施形態において、本抗体は、ＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を向上させる。ある実施形態において、細胞傷害性の阻害の活性化または中和の向上は、細胞傷害性／細胞傷害性の可能性のマーカー、例えばＣＤ１０７および／またはＣＤ１３７発現（動員）の上昇により評価される。Ｓｉｇｌｅｃ−７は、配列番号１または５２のアミノ酸配列を含み得る。Ｓｉｇｌｅｃ−９は、配列番号２または５３のアミノ酸配列を含み得る。
【００２２】
本明細書中の実施形態の何れかのある態様において、本抗体は、２種類以上のＳｉｇｌｅｃ、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９と交差反応性があり、２種類以上のＳｉｇｌｅｃの細胞外ドメイン上に存在する共通エピトープに、すなわち２価方式で結合し得る四量体（例えば全長、Ｆ（ａｂ）’２断片）抗体である。ある実施形態において、本抗体は、２価的に２種類以上のＳｉｇｌｅｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７および−９）のそれぞれに結合し得る。本明細書中の実施形態の何れかの別の態様において、本抗体は、１価方式でＳｉｇｌｅｃに結合し、各Ｓｉｇｌｅｃ、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９でアゴニスト活性を欠く。ある実施形態において、１価方式で各Ｓｉｇｌｅｃに結合する抗体はＦａｂ断片である。本明細書中の実施形態の何れかにおいて、本抗体は、各Ｓｉｇｌｅｃに１価または２価方式で結合し、各Ｓｉｇｌｅｃ、例えばＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９でアゴニスト活性がない。治療用途の場合、抗体は、好ましくは非枯渇抗体である。任意選択により、本抗体は、ヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）により結合可能であるが、実質的にヒトＦｃγＲへのそのＦｃドメインを介した結合を欠くＦｃドメインを含む（例えばＣＤ１６）。
【００２３】
ある実施形態において、本抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方に結合する１つ以上の（例えば２つの）抗原結合ドメインを含む。ある具体的な実施形態において、本抗体は、四量体の、任意選択により、２つの同一の抗原結合ドメイン（任意選択により２つの重鎖および軽鎖可変領域対）を含み、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９に結合し、その阻害活性を中和し、ヒト新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）により結合可能なＦｃドメインを含み、実質的にヒトＦｃγＲへの結合を欠く（例えばＣＤ１６）、全長抗体である。
【００２４】
本明細書中の実施形態の何れかにおいて、ヒトリンパ球上でのＳｉｇｌｅｃへの結合時に、モノクローナル抗体は、標的細胞表面上のＳｉｇｌｅｃのシアル酸リガンドを保有する標的ヒト細胞の溶解を促進するかまたは再構成する能力を有し、および／またはこの標的細胞が前記リンパ球（例えばエフェクターリンパ球、ＮＫまたはＣＤ８＋Ｔ細胞）と接触すると、（例えば、リンパ球上のＣＤ１０７および／またはＣＤ１３７発現の上昇により決定した場合に）リンパ球活性化を向上させる能力を有する。ある実施形態において、リンパ球により発現される２種類以上のＳｉｇｌｅｃ（例えば、リンパ球の同じサブセットにより発現されるかまたはリンパ球の異なるサブセットにより発現される２種類のＳｉｇｌｅｃ）を中和する抗体が提供される。ある実施形態において、リンパ球の第１のサブセットにより発現される第１のＳｉｇｌｅｃを中和する、およびリンパ球の第２のサブセットにより発現される第２のＳｉｇｌｅｃを中和する抗体が提供される。リンパ球の第１および第２のサブセット（例えばＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞）は、例えば異なる細胞表面マーカーまたは異なる機能的特性または異なる標的細胞を溶解または認識する（例えばこれにより活性化される）能力を特徴とし得る。ある実施形態において、本抗体は、そのシアロシドリガンド（例えば腫瘍細胞上に存在するリガンド）へのＳｉｇｌｅｃの結合を減少させる（阻止する）。
【００２５】
ある態様において、本発明は、
ａ）第１のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃに特異的に結合し、かつヒトリンパ球上で第１のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃに結合する場合に、ヒト免疫細胞が、標的細胞表面上に第１のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃのリガンドを保有する標的細胞と接触すると、ＮＫまたはＴ細胞の細胞傷害性のＳｉｇｌｅｃ介在性阻害を中和することと；
ｂ）第２のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃに特異的に結合し、かつヒトリンパ球上で第２のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃに結合する場合に、ヒト免疫細胞が、標的細胞表面上に第２のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃのリガンドを保有する標的細胞と接触すると、ＮＫまたはＴ細胞の細胞傷害性のＳｉｇｌｅｃ介在性阻害を中和することと；
ｃ）ヒトＦｃγ受容体に（例えば抗体のＦｃドメイン介して）実質的に結合しない（例えばＣＤ１６）ことと
を特徴とする、モノクローナル抗体またはその断片である抗体を提供する。ある実施形態において、本抗体は、ヒトＦｃドメインを含む全長抗体である。ある実施形態において、リンパ球はＮＫ細胞である。ある実施形態において、リンパ球は細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔ細胞である。ある実施形態において、第１および／または第２のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃのリガンドは、シアル酸またはシアル酸を含む分子である。ある実施形態において、第１のＣＤ３３関連ＳｉｇｌｅｃはＳｉｇｌｅｃ−７である。ある実施形態において、第２のＣＤ３３関連ＳｉｇｌｅｃはＳｉｇｌｅｃ−９である。
【００２６】
ある態様において、本発明は、
ａ）Ｓｉｇｌｅｃ−７に特異的に結合し、かつヒトリンパ球上でＳｉｇｌｅｃ−７に結合する場合に、標的細胞がリンパ球と接触すると、リンパ球による、標的細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドを保有する標的ヒト細胞の溶解を引き起こす（例えばこのような能力を向上させる）ことと；
ｂ）Ｓｉｇｌｅｃ−９に特異的に結合し、かつヒトリンパ球上でＳｉｇｌｅｃ−９に結合する場合に、標的細胞がリンパ球と接触すると、リンパ球による、標的細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを保有する標的ヒト細胞の溶解を引き起こす（例えばこのような能力を向上させる）ことと；
ｃ）ヒトＦｃγ受容体に（例えば抗体のＦｃドメイン介して）実質的に結合しない（例えばＣＤ１６）ことと
を特徴とする、モノクローナル抗体またはその断片である抗体を提供する。ある実施形態において、本抗体は、ヒトＦｃドメインを含む全長抗体である。ある実施形態において、リンパ球はＮＫ細胞である。ある実施形態において、リンパ球はＣＤ８＋Ｔ細胞である。ある実施形態において、第１および／または第２のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃのリガンドは、シアル酸またはシアル酸を含む分子である。
【００２７】
ある態様において、本発明は、
ａ）Ｓｉｇｌｅｃ−７に特異的に結合し、かつヒトリンパ球上でＳｉｇｌｅｃ−７に結合する場合に、標的細胞がリンパ球と接触すると、標的細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドを保有する標的細胞の存在下でリンパ球活性化または細胞傷害性の向上を引き起こすことと；
ｂ）Ｓｉｇｌｅｃ−９に特異的に結合し、かつヒトリンパ球上でＳｉｇｌｅｃ−９に結合する場合に、標的細胞がリンパ球と接触すると、標的細胞表面上にＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを保有する標的細胞の存在下でリンパ球活性化または細胞傷害性の向上を引き起こすことと；
ｃ）ヒトＦｃγ受容体に（例えば抗体のＦｃドメイン介して）結合しない（例えばＣＤ１６）ことと
を特徴とする、モノクローナル抗体またはその断片である抗体を提供する。ある実施形態において、本抗体は、ヒトＦｃドメインを含む全長抗体である。ある実施形態において、リンパ球はＮＫ細胞である。ある実施形態において、リンパ球はＣＤ８＋Ｔ細胞である。ある実施形態において、第１および／または第２のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃのリガンドはシアル酸またはシアル酸を含む分子である。ある実施形態において、細胞傷害性の阻害の活性化または中和の向上は、細胞傷害性／細胞傷害性の可能性のマーカー、例えばＣＤ１０７および／またはＣＤ１３７発現（動員）の上昇により評価される。
【００２８】
本明細書中の実施形態の何れかにおいて、本抗体は、Ｓｉｇｌｅｃのシアロシドリガンドにより惹起されるＳｉｇｌｅｃによる阻害シグナル伝達を阻止する。本明細書中の実施形態の何れかにおいて、本抗体は、ＳｉｇｌｅｃのシアロシドリガンドへのＳｉｇｌｅｃの結合を阻止する。
【００２９】
本明細書中の実施形態の何れかにおいて、Ｓｉｇｌｅｃのリガンドは、天然リガンド、例えばシアル酸リガンド（シアル酸を含むリガンド）である。９個の炭素の酸性単糖のファミリーであるシアル酸は、一般的にはＮ−グリカン、Ｏ−グリカンおよび糖脂質の終端分岐であることが分かっている。Ｓｉｇｌｅｃは、２位からの酸性シアル酸結合のようなシアル酸分子の多くの態様、シアル酸の配置およびそれらの提示法を認識すると考えられる。本明細書中の実施形態の何れかにおいて、Ｓｉｇｌｅｃのリガンドは、主に５−Ｎ−アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）誘導体を含み、５−Ｎ−グリコリルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ｇｃ）誘導体のような他のシアル酸誘導体を含み得る。ある実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９および／またはＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドは、糖タンパク質（例えばムチン）または糖脂質上に存在するシアル酸である。ある実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−７のリガンドは、ｂ−シリーズガングリオシド、例えば、ＧＤ２、ＧＤ３およびＧＴ１ｂ上で提示されるα２，８−結合ジシアル酸を含む。ある実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−７のリガンドは、内部で分岐状であるα２，６−結合ジシアルガングリオシド、例えばＤＳＧｂ５を含む。ある実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９のリガンドは、ムチン、例えばＭＵＣ１上に存在するリガンドであるか、またはムチン、例えばＭＵＣ１を含む。ある実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−９のリガンドは、シアル酸および硫酸の両方を含有するシアログリカンリガンドである。
【００３０】
ある態様において、第１および第２のヒトＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃの細胞外ドメイン上に存在する共通の決定基に結合する抗体が提供される。任意選択により、本抗体は、例えばＳｉｇｌｅｃを発現する細胞（例えばＮＫ細胞）がＳｉｇｌｅｃのシアル酸リガンドを保有する標的ヒト細胞と接触すると、この第１および第２のＳｉｇｌｅｃのそれぞれの阻害活性を阻止する。ある実施形態において、第１のＣＤ３３関連ＳｉｇｌｅｃはＳｉｇｌｅｃ−７である。ある実施形態において、第２のＣＤ３３関連ＳｉｇｌｅｃはＳｉｇｌｅｃ−９である。本抗体は、それによりＮＫおよび／またはＴ細胞活性化および／または細胞傷害性を上昇させ得る。
【００３１】
本明細書中の何れかの実施形態のある態様において、Ｓｉｇｌｅｃ−７上およびＳｉｇｌｅｃ−９上に存在する共通の決定基に結合する抗体が提供される。任意選択により、この共通の決定基は、１つ以上の他のＳｉｇｌｅｃ、例えばＳｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２のうちの１つ以上（またはこれらの全て）上に存在しない。
【００３２】
本明細書中の実施形態の何れかにおいて、本抗体は、Ｓｉｇｌｅｃの細胞外ドメインに結合する。本明細書中の実施形態の何れかにおいて、本抗体は、Ｓｉｇｌｅｃのシアル酸結合ドメイン内でまたはその付近で少なくとも部分的に結合する。
【００３３】
本明細書中の実施形態の何れかにおいて、ヒトリンパ球（例えばＮＫ細胞）上のＳｉｇｌｅｃに結合すると、標的細胞がリンパ球と接触すると、モノクローナル抗体は、標的細胞表面上にＳｉｇｌｅｃのシアル酸リガンドを保有する標的ヒト細胞の溶解を再構成する能力を有する。
【００３４】
本明細書中の実施形態の何れかにおいて、本抗体は、第１および第２のＳｉｇｌｅｃポリペプチド（例えばヒトＳｉｇｌｅｃ−７およびヒトＳｉｇｌｅｃ−９）のそれぞれへの結合に対して、１０−８Ｍ未満、好ましくは１０−９Ｍ未満のＫＤを有する。大量に発現される低親和性シアル酸とのシス相互作用のために細胞表面でＳｉｇｌｅｃ−７および−９結合部位が一般的に遮蔽されると考えられる限り、トランス相互作用は、シスと競合するリガンドよりも高い親和性を発現する抗体で起こり得る。ある実施形態において、中和抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９）へのシアロシドリガンドの結合に取って代わることが可能である。
【００３５】
本発明はまた、ヒトもしくはヒト化抗体またはその抗体断片もしくは誘導体も提供し、これは、単独でまたは何らかの適切な組み合わせで、先述の特性の何れかを有する。
【００３６】
ある実施形態において、本抗体はモノクローナル抗体である。ある実施形態において、本抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４抗体である。例えば、本抗体は、ヒトＩｇＧ４アイソタイプを含む抗体、またはＦｃドメインとＦｃγ受容体との間の結合を低下させるために修飾される（例えばＣＤ１６）何らかのヒトＩｇＧアイソタイプ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃドメインを含む抗体であり得る。ある実施形態において、ＮＫまたはＴ細胞により発現される２種類以上のＳｉｇｌｅｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９）に結合する抗体は、直接または間接的に、このようなＳｉｇｌｅｃポリペプチドを発現するＮＫ細胞の枯渇につながらない（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ＋ＮＫまたはＴ細胞数の１０％、２０％、５０％、６０％またはそれを超える排除または減少につながらない）。好ましくは、抗原結合化合物は、抗体介在性の細胞の細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／またはＣＤＣを誘導することが可能なＦｃドメインを含まず、任意選択により、抗原結合化合物は、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）ポリペプチドに実質的に結合可能なＦｃドメインを含まないか、またはＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６）ポリペプチドに対して実質的に結合可能でないＦｃドメインを含み、好ましくは抗原結合化合物はＦｃドメインを欠くか（例えばＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインを欠くか）またはＩｇＧ２またはＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインを含み、任意選択により、ＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインは、Ｓ２４１Ｐ突然変異などの半抗体の形成を減少させるために安定化突然変異を含み、任意選択により、抗原結合化合物は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ダイアボディ、１本鎖抗体断片または複数の異なる抗体断片を含む多特異性抗体からなるか、またはこれらを含む。好ましくは、抗原結合化合物は毒性部分に連結されない。好ましくは、本抗体は、Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドのアゴニストとして作用せず、例えば本抗体は、任意選択により、Ｓｉｇｌｅｃによるシグナル伝達を引き起こすように、ＮＫ細胞上のＳｉｇｌｅｃポリペプチドのインビボでの十分な架橋を引き起こす能力がない。
【００３７】
ある態様において、３Ａ１１、１Ｈ９および／または２Ｂ４が結合するＳｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９上のエピトープへの結合について競合する（例えば、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４の何れかの重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を有する抗体との、Ｓｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９ポリペプチド上のエピトープへの結合について競合する）モノクローナル抗体が提供される。
【００３８】
本発明の実施形態の何れかのある態様において、同じエピトープに結合し、および／またはＳｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９ポリペプチドへの結合についてモノクローナル抗体３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４と競合する（例えば、細胞により発現されるＳｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９ポリペプチドへの結合について、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４の何れかの、重鎖および軽鎖ＣＤＲまたは可変領域を有する抗体と競合する）抗原結合化合物が提供される。ある実施形態において、同じエピトープに結合し、および／またはＳｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９ポリペプチドへの結合について：
（ａ）配列番号３および４のＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（３Ａ１１）；
（ｂ）配列番号２１および２２のＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（１Ｈ９）；および
（ｃ）配列番号３９および４０のＶＨおよびＶＬ領域をそれぞれ有する抗体（２Ｂ４）
からなる群から選択される抗体と競合する抗原結合化合物が提供される。
【００３９】
本発明の実施形態の何れかのある態様において、本抗体は、抗体３Ａ１１、１Ｈ９および２Ｂ４からなる群から選択される抗体の個々の重および／または軽鎖の１、２または３個のＣＤＲを有する重および／または軽鎖を有し得る。
【００４０】
本発明の実施形態の何れかのある態様において、Ｓｉｇｌｅｃへの結合は、細胞性Ｓｉｇｌｅｃであるものとして特定され得、このＳｉｇｌｅｃは、細胞の表面で発現され、例えばネイティブまたは修飾型細胞性Ｓｉｇｌｅｃ、組み換え宿主細胞により発現されるＳｉｇｌｅｃ、ＮＫ細胞、ＣＤ８Ｔ細胞などにより発現されるＳｉｇｌｅｃである。
【００４１】
本発明はまた、先述の特性の何れかを有する、ヒトまたはヒト化抗体または抗体断片をコードする核酸、このような核酸を含むベクター、このようなベクターを含む細胞、抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体の発現に適切な条件下でこのような細胞を培養することを含むヒト抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体を産生させる方法も提供する。本発明はまた、このようなタンパク質、核酸、ベクターおよび／または細胞および一般的には活性成分または本組成物の処方、送達、安定性もしくは他の特徴を促進する不活性成分であり得る１つ以上のさらなる成分（例えば様々な担体）を含む、組成物、例えば薬学的に許容可能な組成物およびキットにも関する。本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ介在性生物学的活性の調整などにおいて、例えばそれに関連する疾患、特に癌および感染性疾患の処置において、このような抗体、核酸、ベクター、細胞、生物および／または組成物を作製しかつ使用する、様々な新規のおよび有用な方法にさらに関する。
【００４２】
本発明はまた、２種類以上のＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物と交差反応し、かつ任意選択により２種類以上のＳｉｇｌｅｃの阻害活性をさらに中和する抗体を作製する方法も提供し、この方法は、
（ａ）ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドに結合する複数の抗体を提供するステップと、
（ｂ）少なくとも２種類の異なるＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ遺伝子産物と交差反応する抗体（例えば（ａ）のステップのもの）を選択するステップと、
（ｃ）任意選択により、少なくとも２種類の異なるＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ遺伝子産物の阻害活性を中和する抗体（例えばステップ（ｂ）のもの）を選択するステップと
を含む。
【００４３】
別の態様において、２種類以上のＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物と交差反応し、かつ２種類以上のＳｉｇｌｅｃの阻害活性をさらに中和する抗体を作製する方法は、
（ａ）ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドに結合する複数の抗体を提供するステップと、
（ｂ）少なくとも２種類の異なるＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ遺伝子産物と交差反応する抗体（例えば（ａ）のステップのもの）を選択するステップと、
（ｃ）任意選択により、２種類の異なるＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ遺伝子産物のそれぞれとその個々のシアル酸リガンドとの間の相互作用を阻止する抗体（例えばステップ（ｂ）のもの）を選択するステップと
を含む。
【００４４】
当然のことながら、上記方法の何れかにおけるステップ（ｂ）および（ｃ）はあらゆる所望の順序で行われ得る。
【００４５】
ある実施形態において、上記方法の何れかにおいて２種類の異なるＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物の阻害活性を中和する抗体（例えばステップ（ｃ）のもの）を選択することは、ＮＫ細胞を増強する抗体を選択することを含み得る。
【００４６】
ある実施形態において、２種類の異なるＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物の阻害活性を中和する抗体（例えばステップ（ｃ）のもの）を選択することは、２種類の異なるＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物のうちの少なくとも１つの阻害活性を抗体が中和するか否かを決定することを含み、ここで抗体がこの少なくとも１つのＳｉｇｌｅｃの阻害活性を中和することを決定することは、その抗体が２種類の異なるＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物の阻害活性を中和可能であることを示す。ある実施形態において、抗体が２種類の異なるＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物のうちの少なくとも１つの阻害活性を中和するか否かを決定することは、その抗体が、Ｓｉｇｌｅｃを発現するリンパ球が（例えばＳｉｇｌｅｃのリガンドを発現する）標的細胞と接触させられると、細胞傷害性のマーカーの上昇（例えばＣＤ１０７および／またはＣＤ１３７の発現の上昇）を引き起こすか否かを評価することを含む。細胞傷害性のマーカー上昇（例えばＣＤ１０７および／またはＣＤ１３７の発現の上昇）は、その抗体が２種類の異なるＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物の阻害活性を中和可能であることを示す。
【００４７】
少なくとも２種類の異なるＳｉｇｌｅｃ遺伝子産物と交差反応する抗体の選択は、２種類以上の異なる阻害Ｓｉｇｌｅｃポリペプチド（例えばＳｉｇｌｅｃ−７および−９）への結合について抗体をスクリーニングすることによって達成され得る。ある実施形態において、本方法は、結合が所望されない１つ以上のさらなるＳｉｇｌｅｃポリペプチドへの結合について抗体をスクリーニングし、このようなさらなるＳｉｇｌｅｃポリペプチドに結合しない抗体を選択することによることをさらに含み、任意選択により、さらなるＳｉｇｌｅｃポリペプチドは、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２のうちの１つ以上（またはこれらの全て）である。
【００４８】
ある実施形態において、ステップ（ｂ）で調製される抗体はモノクローナル抗体である。
【００４９】
ある実施形態において、ステップ（ａ）で複数の抗体を提供することは、ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃポリペプチド（例えばＳｉｇｌｅｃ−７および／または−９）を含む免疫原で非ヒト哺乳動物に免疫付与し、その免疫付与哺乳動物から抗体を調製することを含み、この抗体は前記Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドに結合する。「その免疫付与哺乳動物から抗体を調製する」という語は、本明細書中で使用される場合、免疫付与動物からＢ細胞を得て、抗体を発現するハイブリドーマを作製するためにＢ細胞を使用することと、免疫付与動物の血清から抗体を直接得ることとを含む。ある実施形態において、ステップ（ａ）で複数の抗体を提供することは、例えばファージディスプレイによって抗体のライブラリを作製することを含む。
【００５０】
ＣＤ３３関連ポリペプチドは、ある実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９であり得る。選択される抗体は、少なくともＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９と交差反応する。選択される抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２のうちの１つ以上（またはそれらの全て）と交差反応する。ある実施形態において、本抗体は、少なくとも２種類の異なるＣＤ３３関連受容体遺伝子産物上に存在する共通の決定基を認識し、最も好ましくは、ＳｉｇｌｅｃはＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９である。ある実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方のポリペプチドが免疫付与のために使用され、および／または同時にまたは連続しての何れかで抗体の選択において結合の評価が行われる。
【００５１】
本発明はまた、Ｓｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９発現リンパ球、任意選択により、ＮＫ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性を調整するためのインビトロ方法も提供し、この方法は、表面にＳｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９を発現するリンパ球を、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の阻害活性を中和する抗体と接触させることを含む。
【００５２】
本発明はまた、リンパ球の活性（例えば、ＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞）活性の増強および／または調整を、それを必要とする対象において行う方法、例えばＣＤ５６ｄｉｍＮＫ細胞（主要な細胞傷害性サブセット）およびＣＤ５６ｂｒｉｇｈｔＮＫ細胞（リンパ節および扁桃腺のＮＫ細胞の大部分、活性化時に主にサイトカイン産生に反応する）の両方を調整することによってＮＫ細胞活性を増強する方法も提供し、この方法は、有効量の先述の組成物の何れかを対象に投与することを含む。ある実施形態において、対象は、癌に罹患している患者である。例えば、患者は、造血系の癌、例えば急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫または非ホジキンリンパ腫の罹患者であり得る。あるいは、患者は、固形腫瘍、例えば結直腸癌、腎臓癌、卵巣癌、肺癌、乳癌または悪性メラノーマの罹患者であり得る。別の実施形態において、対象は、感染性疾患に罹患している患者である。
【００５３】
これらの態様をより詳細に記載し、本明細書中で提供される本発明の説明から、さらなる態様、特性および長所が明らかとなるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】ＮＫ細胞への抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体の結合を示す。Ｓｉｇｌｅｃ  ＭＦＩ：蛍光強度の平均。ＮＫ細胞のかなりの割合（約４４％）がＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方を発現し、このことから、例えば腫瘍細胞上に存在するグリカンリガンドの機能として、これらの受容体のそれぞれ（またはその両方）によってＮＫ細胞の大部分が阻害され得ることが示唆される。
【図２】それぞれがヒトＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９発現細胞株の両方に結合する、ｍＡｂ  ３Ａ１１、１Ｈ９および２Ｂ４に対するＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９への結合の結果を示す。
【図３】１０μｇ／ｍＬの飽和用量での、標的細胞または脱シアル化標的細胞の存在下での、および３Ａ１１抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体またはアイソタイプ対照ＣＨＳ２抗体の存在下での、ＮＫ細胞上でのＣＤ１３７  ＦＡＣＳの読み出しを示す。各点は、健常ボランティアからのＮＫに相当する。３Ａ１１抗体は、標的細胞株Ｒａｍｏｓの存在下でＮＫ細胞上でのＣＤ１３７発現の上昇を誘導した。３Ａ１１抗体は、標的細胞株の非存在下ではＮＫ細胞上でのＣＤ１３７発現に効果がなかった。
【発明を実施するための形態】
【００５５】
定義
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は１つ以上を意味し得る。請求項で使用される場合、「含む」という語と組み合わせて使用されるとき、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」という語は、１つまたは２つ以上を意味し得る。本明細書中で使用される場合、「別の」は、少なくとも第２またはそれを超えるものを意味し得る。
【００５６】
「含む」が使用される場合、これは、任意選択により、「から基本的になる」または「からなる」により置き換えられ得る。
【００５７】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−７（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＰ＿０５５２００．１で示され、この開示全体が参照により本明細書中に組み込まれる）は、ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃファミリーのメンバーである（Ａｎｇａｔａ  ａｎｄ  Ｖａｒｋｉ，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  １０（４），４３１−４３８（２０００））。ヒトＳｉｇｌｅｃ−７は、次のアミノ酸配列を有する４６７個のアミノ酸を含む。
【化１】
2017532025.tif 000003
【００５８】
ヒトＳｉｇｌｅｃ−９（Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＡＦ７１４５５で示され、この開示全体が参照により本明細書中に組み込まれる）は、ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃファミリーのメンバーである（Ａｎｇａｔａ  ａｎｄ  Ｖａｒｋｉ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５（２９），２２１２７−２２１３５（２０００））。ヒトＳｉｇｌｅｃ−９は、次のアミノ酸配列を有する４６３個のアミノ酸を含む。
【化２】
2017532025.tif 000004
【００５９】
本発明に関連して、「ＮＫ細胞の細胞傷害性のＳｉｇｌｅｃ介在性阻害を中和する」、「Ｔ細胞の細胞傷害性のＳｉｇｌｅｃ介在性阻害を中和する」または「Ｓｉｇｌｅｃの阻害活性を中和する」は、Ｓｉｇｌｅｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９）が、サイトカイン放出および細胞傷害性反応などのリンパ球反応につながる細胞内過程に負の影響を与えるその能力において阻害される過程を指す。これは、例えば標準的なＮＫまたはＴ細胞に基づく細胞傷害性アッセイにおいて測定され得、この場合、Ｓｉｇｌｅｃ陽性リンパ球によるシアル酸リガンド陽性細胞の死滅を刺激する治療用化合物の能力を測定する。ある実施形態において、抗体標品によって、Ｓｉｇｌｅｃ限定リンパ球の細胞傷害性の少なくとも１０％の増強、任意選択によりリンパ球細胞傷害性の少なくとも４０％もしくは５０％の増強、または任意選択によりＮＫ細胞傷害性の少なくとも７０％の増強が引き起こされ、これは記載される細胞傷害性アッセイに関するものである。ある実施形態において、抗体標品によって、Ｓｉｇｌｅｃ限定リンパ球によるサイトカイン放出の少なくとも１０％の増強、任意選択によりサイトカイン放出の少なくとも４０％もしくは５０％の増強、または任意選択によりサイトカイン放出の少なくとも７０％の増強が引き起こされ、これは記載される細胞傷害性アッセイに関するものである。ある実施形態において、抗体標品によって、Ｓｉｇｌｅｃ限定リンパ球による細胞傷害性のマーカー（例えばＣＤ１０７および／またはＣＤ１３７）の細胞表面発現の少なくとも１０％の増強、任意選択により少なくとも４０％もしくは５０％の増強、または任意選択により細胞傷害性のマーカー（例えばＣＤ１０７および／またはＣＤ１３７）の細胞表面発現の少なくとも７０％の増強が引き起こされる。
【００６０】
シアル酸リガンドへのＳｉｇｌｅｃ分子の結合を阻止する抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体の能力は、可溶性または細胞表面連結Ｓｉｇｌｅｃおよびシアル酸分子を用いたアッセイにおいて、本抗体が、シアル酸分子に対するＳｉｇｌｅｃ分子の結合を用量依存的に検出可能に減少させ得、このＳｉｇｌｅｃ分子が本抗体の非存在下でシアル酸分子に検出可能に結合することを意味する。
【００６１】
この明細書全体内で、「癌の処置」などが抗Ｓｉｇｌｅｃ結合物質（例えば抗体）に関して言及される場合は常に、（ａ）癌の処置の方法であって、このような治療を必要とする個体、哺乳動物、特にヒトに、癌の処置を可能にする用量で（治療的有効量）、好ましくは本明細書中で指定されるような用量（量）で（好ましくは薬学的に許容可能な担体物質中で）抗Ｓｉｇｌｅｃ結合物質を投与する（少なくとも１回の処置）ステップを含む方法；（ｂ）（特にヒトにおける）癌の処置のための抗Ｓｉｇｌｅｃ結合物質の使用またはその処置における使用のための抗Ｓｉｇｌｅｃ結合物質；（ｃ）癌の処置用の医薬品の製造のための抗Ｓｉｇｌｅｃ結合物質の使用、抗Ｓｉｇｌｅｃ結合物質を薬学的に許容可能な担体と混合することを含む、癌の処置用の医薬品または有効用量の癌の処置に適切な抗Ｓｉｇｌｅｃ結合物質を含む医薬品の製造のために抗Ｓｉｇｌｅｃ結合物質を使用する方法；または（ｄ）本願が提出される国で特許を得ることを可能とする主題に従う、ａ）、ｂ）およびｃ）の何れかの組み合わせを意味する。
【００６２】
本明細書中で使用される場合、「抗原結合ドメイン」という用語は、エピトープに免疫特異的に結合可能な三次元構造を含むドメインを指す。したがって、ある実施形態において、このドメインは、超可変領域、任意選択により抗体鎖のＶＨおよび／またはＶＬドメイン、任意選択により少なくともＶＨドメインを含み得る。別の実施形態において、結合ドメインは、抗体鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み得る。別の実施形態において、結合ドメインは、非免疫グロブリン骨格からのポリペプチドドメインを含み得る。
【００６３】
「抗体」という用語は、本明細書中で使用される場合、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を指す。重鎖における定常ドメインのタイプに依存して、抗体は５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭのうちの１つに割り当てられる。これらのうちの一部は、サブクラスまたはアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４などにさらに分類される。代表的な免疫グロブリン（抗体）構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対は１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のＮ末端は、抗原認識に主に関与する約１００〜１１０またはそれを超えるアミノ酸の可変領域を定める。可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）という用語は、これらの軽鎖および重鎖をそれぞれ指す。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、「アルファ」、「デルタ」、「イプシロン」、「ガンマ」および「ミュー」とそれぞれ呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は周知である。ＩｇＧは、生理学的状況において最も共通する抗体であるため、および実験室で最も容易に作製されるため、本明細書中で使用される抗体の代表的なクラスである。任意選択により、本抗体はモノクローナル抗体である。抗体の特定の例は、ヒト化、キメラ、ヒトまたはそうでなければヒトに適切な抗体である。「抗体」はまた、本明細書中に記載の抗体の何れかの何らかの断片または誘導体も含む。
【００６４】
「交差反応性」抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体は、特異性および／または親和性で、複数のＳｉｇｌｅｃ分子に結合する抗体である。例えば、モノクローナル抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９と交差反応性であり得る。
【００６５】
「特異的に結合する」という語は、単離標的細胞の表面上に存在するタンパク質、その中のエピトープまたはネイティブタンパク質の何れかの組み換え形態を用いて評価した場合に、抗体が好ましくは競合的結合アッセイにおいて結合パートナー、例えばＳｉｇｌｅｃ−７、Ｓｉｇｌｅｃ−９に結合し得ることを意味する。競合的結合アッセイおよび特異的な結合を決定するための他の方法を以下でさらに記載し、これらは当技術分野で周知である。
【００６６】
抗体が特定のモノクローナル抗体と「競合する」と言われる場合、これは、本抗体が、組み換えＳｉｇｌｅｃ分子または表面発現Ｓｉｇｌｅｃ分子の何れかを用いた結合アッセイにおいて、モノクローナル抗体と競合することを意味する。例えば、試験抗体が結合アッセイにおいて参照抗体のＳｉｇｌｅｃポリペプチドまたはＳｉｇｌｅｃ発現細胞への結合を減少させる場合、本抗体は、参照抗体とそれぞれ「競合する」と言われる。
【００６７】
「親和性」という用語は、本明細書中で使用される場合、エピトープへの抗体の結合の強度を意味する。抗体の親和性は、［Ａｂ］ｘ［Ａｇ］／［Ａｂ−Ａｇ］（式中、［Ａｂ−Ａｇ］は、抗体−抗原複合体のモル濃度であり、［Ａｂ］は未結合抗体のモル濃度であり、［Ａｇ］は未結合抗原のモル濃度である）として定められる解離定数Ｋｄにより与えられる。親和性定数Ｋａは、１／Ｋｄにより定義される。ｍＡｂの親和性を決定するための方法は、Ｈａｒｌｏｗ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８８），Ｃｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）およびＭｕｌｌｅｒ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：５８９−６０１（１９８３）で見出すことができ、この参考文献は、全体的に参照により本明細書中に組み込まれる。ｍＡｂの親和性を決定するための当技術分野で周知のある標準的な方法は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）スクリーニング（ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）ＳＰＲ分析装置による分析など）の使用である。
【００６８】
本明細書に関連して、「決定基」はポリペプチド上の相互作用または結合の部位を指す。
【００６９】
「エピトープ」という用語は、抗原性決定基を指し、抗体が結合する抗原上のエリアまたは領域である。タンパク質エピトープは、直接結合に関与するアミノ酸残基ならびに特異的な抗原結合抗体またはペプチドにより効果的に阻止されるアミノ酸残基、すなわち抗体の「フットプリント」内のアミノ酸残基を含み得る。これは、例えば抗体または受容体と組み合わせ得る複合抗原分子上の最も単純な形態または最小構造領域である。エピトープは、直鎖状または立体構造／構造であり得る。「直鎖状エピトープ」という用語は、アミノ酸の直鎖状配列（一次構造）上で隣接するアミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。「立体構造または構造エピトープ」という用語は、全てが隣接しておらず、したがって分子の折り畳みにより互いに対して近接するようになるアミノ酸の直鎖状配列の分離部分を表す（二次、三次および／または四次構造）アミノ酸残基から構成されるエピトープとして定義される。立体構造エピトープは三次元構造に依存する。したがって「立体構造」という用語は、「構造」と交換可能に使用されることが多い。
【００７０】
「枯渇させる」または「枯渇させること」という用語は、Ｓｉｇｌｅｃ発現細胞（例えばＳｉｇ−ｌｅｃ−７またはＳｉｇｌｅｃ−９発現リンパ球）に関して、結果として、試料または対象中に存在するこのようなＳｉｇｌｅｃ発現細胞の数に負の影響を与えるように、死滅させる、排除する、溶解する、またはこのような死滅、排除もしくは溶解の誘導を引き起こす過程、方法または化合物を意味する。過程、方法または化合物に関して、「非枯渇」という用語は、この過程、方法または化合物が枯渇させていないことを意味する。
【００７１】
「薬剤」という用語は、本明細書中で、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生体高分子または生体物質から作製される抽出物を指すために使用される。「治療剤」という用語は、生物学的活性を有する薬剤を指す。
【００７２】
本明細書中での目的のために、「ヒト化」または「ヒト」抗体は、１つ以上のヒト免疫グロブリンの定常および可変フレームワーク領域が動物免疫グロブリンの結合領域、例えばＣＤＲと融合される抗体を指す。このような抗体は、結合領域が由来する非ヒト抗体の結合特異性を維持するが、非ヒト抗体に対する免疫反応を回避するために設計される。このような抗体は、抗原負荷に反応して特異的なヒト抗体を作製させるために「操作」されている、トランスジェニックマウスまたは他の動物から入手し得る（例えば、全体的な教示が参照により本明細書中に組み込まれる、Ｇｒｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ  ７：１３；Ｌｏｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６；Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｉｎｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６：５７９を参照）。全て当技術分野で公知である、遺伝学的または染色体導入法ならびにファージディスプレイ技術によって、完全ヒト抗体も構築し得る（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３を参照）。ヒト抗体は、インビトロ活性化Ｂ細胞によっても作製し得る（例えば、参照によりそれらの全体において組み込まれる米国特許第５，５６７，６１０号明細書および同第５，２２９，２７５号明細書を参照）。
【００７３】
「キメラ抗体」は、（ａ）抗原結合部位（可変領域）が、異なるかまたは改変されているクラス、エフェクター機能および／または種の定常領域、またはキメラ抗体に新しい特性を付与する完全に異なる分子、例えば、酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに連結されるように、定常領域またはそれらの一部が改変され、置き換えられ、または交換されているか、または（ｂ）可変領域またはそれらの一部が、改変され、置き換えられ、または異なるかもしくは改変されている抗原特異性を有する可変領域と交換されている、抗体分子である。
【００７４】
「超可変領域」という用語は、本明細書中で使用される場合、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（例えば軽鎖可変ドメイン中の、残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）および重鎖可変ドメイン中の、３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９１）および／または「超可変ループ」からの残基（例えば軽鎖可変ドメイン中の、残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）および重鎖可変ドメイン中の、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ１９８７；１９６：９０１−９１７）または抗原結合に関与する必須アミノ酸を決定するための同様の系からのアミノ酸残基を含む。一般的には、この領域中のアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．、前出に記載の方法により行われる。「Ｋａｂａｔ位置」、「Ｋａｂａｔにおけるような可変ドメイン残基付番」および「Ｋａｂａｔによる」などの句は、本明細書中で、重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに対するこの付番系を指す。Ｋａｂａｔ付番系を用いて、ペプチドの実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＣＤＲの短縮またはそれへの挿入に対応する少数のまたはさらなるアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、ＣＤＲ  Ｈ２の残基５２の後に１個のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）および重鎖ＦＲ残基８２の後に残基の挿入（例えばＫａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔ付番は、「標準的な」Ｋａｂａｔ付番配列での抗体の配列の相動性の領域でのアライメントにより、ある一定の抗体に対して決定され得る。
【００７５】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書中で使用される場合、ＣＤＲとして定められる領域を除く、抗体可変ドメインの領域を意味する。各抗体可変ドメインフレームワークは、ＣＤＲによって分離される近接領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）にさらに分けられ得る。
【００７６】
「Ｆｃドメイン」、「Ｆｃ部分」および「Ｆｃ領域」という用語は、例えば、ヒトγ（ガンマ）重鎖の約アミノ酸（ａａ）２３０〜約ａａ４５０からの、抗体重鎖のＣ末端断片、または他のタイプの抗体重鎖（例えば、ヒト抗体の場合、α、δ、εおよびμ）におけるその対応配列またはその天然のアロタイプを指す。別段の指定がない限り、免疫グロブリンに対する一般的に受容されるＫａｂａｔアミノ酸付番は、この開示を通じて使用される（Ｋａｂａｔ  ｅｔ．  ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．，Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤを参照）。
【００７７】
「単離」、「精製」または「生物学的に純粋」という用語は、実質的にまたは基本的に、そのネイティブ状態で見られるような通常それに付随する成分を含まない物質を指す。純度および均一性は、一般的にはポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーなどの分析学的化学技術を用いて決定される。標品中に存在する主要な種であるタンパク質は実質的に精製されている。
【００７８】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書中で交換可能に使用される。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然のアミノ酸の人工的な化学模倣物であるアミノ酸ポリマーならびに天然のアミノポリマーおよび非天然のアミノポリマーに適用される。
【００７９】
「組み換え」という用語は、例えば細胞または核酸、タンパク質またはベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入またはネイティブ核酸もしくはタンパク質の改変により修飾されているか、または細胞が、そのように修飾された細胞に由来することを示す。したがって、例えば、組み換え細胞は、細胞のネイティブ（非組み換え）形態内では見出されない遺伝子を発現するか、またはそうでなければ異常に発現されるか、発現が少ないかまたは全く発現されないネイティブ遺伝子を発現する。
【００８０】
本明細書に関連して、ポリペプチドまたはエピトープに「結合」する抗体という用語は、特異性および／または親和性をもって前記決定基に結合する抗体を指す。
【００８１】
「同一性」または「同一である」という用語は、２つ以上のポリペプチドの配列間の関係において使用される場合、２つ以上の一連のアミノ酸残基の間の一致数により決定される場合の、ポリペプチド間の配列関連性の度合いを指す。「同一性」は、特定の数学的モデルまたはコンピュータープログラム（すなわち「アルゴリズム」）により扱われるギャップアライメント（もしあれば）を用いた２つ以上の配列のうちのより小さいものの間の完全な一致のパーセントを評価する。関連ポリペプチドの同一性は、公知の方法により容易に計算され得る。このような方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  ＤｅｖｅｒｅｕＸ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．４８，１０７３（１９８８）に記載のものが挙げられるが限定されない。
【００８２】
同一性を決定するための方法は、試験される配列間の一致が最大となるように設計される。同一性を決定する方法は、公開されているコンピュータープログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定するためのコンピュータープログラム法としては、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１２，３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．），ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ  ａｎｄ  ＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３−４１０（１９９０））を含む、ＧＣＧプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他のソース（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．、前出）から公開されている。周知のＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも同一性を決定するために使用し得る。
【００８３】
抗体の産生
本発明に関連して、「共通の決定基」は、ヒト阻害Ｓｉｇｌｅｃ受容体、特にＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃの受容体のいくつかの遺伝子産物により共有される決定基またはエピトープを指す。抗体は、少なくともＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９により共有される共通の決定基に結合し得る。ある実施形態において、この共通決定基は、任意選択により、ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ、特にＳｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２の１つ以上またはその全てにおいて存在し得ない。ある実施形態において、この共通決定基はＳｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２上に存在しない。
【００８４】
癌の処置のために使用し得る抗Ｓｉｇｌｅｃ剤は、ヒトＳｉｇｌｅｃ受容体の細胞外部分に結合し、Ｓｉｇｌｅｃ陽性リンパ球の表面上で発現されるヒトＳｉｇｌｅｃ受容体の阻害活性を低下させる。ある実施形態において、本剤は、リンパ球、例えばＮＫ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞で、シアル酸分子がＳｉｇｌｅｃによる阻害シグナル伝達を引き起こす能力を阻害する。ある実施形態において、本剤は、Ｓｉｇｌｅｃへの結合においてシアル酸分子と競合し、すなわち本剤は、Ｓｉｇｌｅｃとそのシアル酸リガンドとの間の相互作用を阻止する。
【００８５】
本発明のある態様において、本剤は、全長抗体、抗体断片および合成または半合成抗体由来分子から選択される抗体である。
【００８６】
本発明のある態様において、本剤は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体およびキメラ抗体から選択される抗体である。
【００８７】
本発明のある態様において、本剤は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥおよびＩｇＭ抗体から選択される抗体の断片である。
【００８８】
本発明のある態様において、本剤は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４から選択される定常ドメインを含む抗体の断片である。
【００８９】
本発明のある態様において、本剤は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、重鎖Ｉｇ（ラマまたはラクダＩｇ）、ＶＨＨ断片、シングルドメインＦＶおよび１本鎖抗体断片から選択される抗体断片である。
【００９０】
本発明のある態様において、本剤は、ｓｃＦＶ、ｄｓＦＶ、ミニボディー、ダイアボディ、トリアボディー、カッパボディー、ＩｇＮＡＲから選択される、合成または半合成抗体由来分子、および多特異性抗体である。
【００９１】
したがって、本発明は、Ｓｉｇｌｅｃに結合する抗体および抗原結合ドメイン（および前述のものを含むポリペプチド）に関する。ある態様において、本抗体または抗原結合ドメインは、さらなるヒトＳｉｇｌｅｃ、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および／または−１２よりも少なくとも１００倍低い結合親和性（例えばＫＤ）でＳｉｇｌｅｃ−７および／または−９に結合する。
【００９２】
本発明のある態様において、本抗体は、少なくとも部分的に精製された形態である。
【００９３】
本発明のある態様において、本抗体は、基本的に単離形態である。
【００９４】
本抗体は、当技術分野で公知の様々な技術により作製し得る。一般的には、これらは、Ｓｉｇｌｅｃポリペプチド、好ましくはヒトＳｉｇｌｅｃポリペプチドを含む免疫原での非ヒト動物、好ましくはマウスの免疫付与によって作製される。Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドは、ヒトＳｉｇｌｅｃポリペプチドの全長配列またはその断片もしくは誘導体、一般的には免疫原性断片、すなわち、Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドを発現する細胞の表面に露出したエピトープを含むポリペプチドの部分を含み得る。このような断片は、一般的には、成熟ポリペプチド配列の少なくとも約７連続アミノ酸、さらにより好ましくはその少なくとも約１０連続アミノ酸を含有する。断片は、一般的には、基本的に受容体の細胞外ドメイン由来である。ある実施形態において、免疫原は、脂質膜中、一般的には細胞の表面の、野生型ヒトＳｉｇｌｅｃポリペプチドを含む。具体的な実施形態において、免疫原は、任意選択により処理されるかまたは溶解されるインタクトな細胞、特にインタクトなヒト細胞を含む。他の実施形態において、本ポリペプチドは組み換えＳｉｇｌｅｃポリペプチドである。
【００９５】
非ヒト哺乳動物に抗原で免疫付与するステップは、マウスにおいて抗体の産生を刺激するための当技術分野で周知の何らかの方式で行われ得る（例えば、その開示全体が参照により本明細書中に組み込まれる、Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８８）を参照）。任意選択により完全または不完全フロインドアジュバントなどのアジュバントとともに、免疫原を緩衝液中で懸濁するかまたは溶解させる。免疫原の量、緩衝液のタイプおよびアジュバントの量を決定するための方法は、当業者にとって周知であり、何ら限定していない。これらのパラメーターは、異なる免疫原に対して異なり得るが、容易に明らかとなり得る。
【００９６】
同様に、抗体の産生を刺激するのに十分な免疫付与の位置および頻度も当技術分野で周知である。典型的な免疫付与プロトコールにおいて、第１日に非ヒト動物に抗原を腹腔内注射し、約１週間後に再び注射する。この後、第２０日前後に、任意選択により不完全フロインドアジュバントなどのアジュバントとともに抗原のリコール注射を行う。リコール注射は、静脈内で行い、数日連続して反復し得る。この後、第４０日に、静脈内または腹腔内の何れかで、一般的にはアジュバントなしで、ブースター注射を行う。このプロトコールの結果、約４０日後、抗原特異的な抗体産生Ｂ細胞が生成する。結果として免疫付与で使用した抗原に対する抗体を発現するＢ細胞の生成が起こる限り、他のプロトコールも使用し得る。
【００９７】
代替的な実施形態において、非免疫付与非ヒト哺乳動物からのリンパ球を単離し、インビトロで増殖させ、次いで細胞培養中で免疫原に曝露する。次いで、リンパ球を回収し、下記の融合ステップを行う。
【００９８】
モノクローナル抗体の場合、次のステップは、免疫付与した非ヒト哺乳動物から脾臓細胞を分離し、続いて、抗体産生ハイブリドーマを形成させるために、不死化細胞とこれらの脾臓細胞を融合させることである。非ヒト哺乳動物からの脾臓細胞の分離は当技術分野で周知であり、一般的には、麻酔下の非ヒト哺乳動物から脾臓を摘出し、それを切って小片にし、単一の細胞懸濁液を生成させるために、細胞ストレイナーのナイロンメッシュを通じて脾膜から脾臓細胞を適切な緩衝液中に圧搾することを含む。この細胞を洗浄し、遠心し、あらゆる赤血球細胞を溶解する緩衝液中で再懸濁する。溶液を再び遠心し、ペレット中の残留リンパ球を新鮮な緩衝液中で最終的に再懸濁する。
【００９９】
分離し、単一細胞懸濁液中に入れたら、リンパ球を不死細胞株に融合させ得る。これは、一般的にはマウス骨髄腫細胞株であるが、ハイブリドーマを作製するのに有用な多くの他の不死細胞株が当技術分野で公知である。マウス骨髄腫株としては、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｕ．Ｓ．Ａ．から入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来のもの、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ  Ｕ．Ｓ．Ａから入手可能なＸ６３  Ａｇ８６５３およびＳＰ−２細胞が挙げられるが限定されない。融合はポリエチレングリコールなどを使用して達成される。次いで、未融合の親骨髄腫細胞の増殖または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する選択培地中で、得られたハイブリドーマを増殖させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培地は、一般的にはヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を妨害する。
【０１００】
ハイブリドーマは、一般的にはマクロファージのフィーダー層上で増殖させる。マクロファージは、脾臓細胞を分離するために使用される、好ましくは非ヒト哺乳動物の同腹仔からのものであり、一般的にはハイブリドーマを播種する数日前に不完全フロインドアジュバントなどで刺激する。融合方法は、その開示が参照により本明細書中に組み込まれる、Ｇｏｄｉｎｇ、“Ｍｏｎｏｃｏｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ”，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）に記載されている。
【０１０１】
コロニー形成および抗体産生のために十分な時間にわたり選択培地中で細胞を増殖させる。これは通常、約７〜約１４日間である。
【０１０２】
次いで、Ｓｉｇｌｅｃポリペプチド遺伝子産物に特異的に結合する抗体産生についてハイブリドーマコロニーをアッセイする。このアッセイは、一般的には、比色分析ＥＬＩＳＡ型アッセイであるが、ハイブリドーマを増殖させるウェルに適合させ得るあらゆるアッセイを使用し得る。他のアッセイとしては、ラジオイムノアッセイまたは蛍光励起細胞分取が挙げられる。１つ以上の別個のコロニーが存在するか否かを決定するために、所望の抗体産生について陽性であるウェルを調べる。複数のコロニーが存在する場合、単一細胞のみが所望の抗体を産生するコロニーを生じさせていることを確実にするために、細胞を再クローニングし、増殖させ得る。一般的には、抗体はまた、Ｓｉｇｌｅｃポリペプチド、例えばＳｉｇｌｅｃ発現細胞に結合する能力についても試験され得る。
【０１０３】
モノクローナル抗体を産生することが確認されるハイブリドーマを、ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩ−１６４０などの適切な培地中でより大量に増殖させ得る。あるいは、ハイブリドーマ細胞を動物における腹水癌としてインビボで増殖させ得る。
【０１０４】
所望のモノクローナル抗体を産生させるのに十分な増殖後、モノクローナル抗体を含有する増殖培地（または腹水）を細胞から分離して除き、その中に存在するモノクローナル抗体を精製する。精製は一般的には、ゲル電気泳動、透析、プロテインＡもしくはプロテインＧ−セファロースを使用したクロマトグラフィーまたはアガロースもしくはセファロースビーズなどの固体支持体に連結される抗マウスＩｇによって達成される（例えば、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．１８−１０３７−４６，Ｅｄｉｔｉｏｎ  ＡＣに全て記載されている）。結合される抗体は、一般的には、抗体含有分画の即時の中和とともに低ｐＨ緩衝液（ｐＨ３．０以下のグリシンまたは酢酸緩衝液）を使用することによって、プロテインＡ／プロテインＧカラムから溶出される。これらの分画をプールし、透析し、必要に応じて濃縮する。
【０１０５】
単一の明らかなコロニーがある陽性ウェルを一般的には再クローニングし、再アッセイして、１つのモノクローナル抗体のみが検出され、産生されていることを保証する。
【０１０６】
抗体は、例えば（その開示全体が参照により本明細書中に組み込まれる、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，３４１（１９８９）ｐ．５４４）に開示されるような免疫グロブリンのコンビナトリアルライブラリの選択によっても作製され得る。
【０１０７】
Ｓｉｇｌｅｃに結合可能であり、および／または他の所望の特性を有することが可能な抗体が同定されたら、一般的には、他のＳｉｇｌｅｃポリペプチドおよび／または無関係なポリペプチドを含む他のポリペプチドへのこれらの結合能について、本明細書中に記載のものを含む標準的な方法を使用してこれらも評価する。理想的には、抗体はかなりの親和性でＳｉｇｌｅｃ、例えば、ヒトＳｉｇｌｅｃ−７およびヒトＳｉｇｌｅｃ−９にのみ結合し、無関係のポリペプチド、とりわけＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃ以外のポリペプチドまたは所望のＳｉｇｌｅｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９）以外のＳｉｇｌｅｃに対して顕著なレベルで結合しない。しかし、当然のことながら、Ｓｉｇｌｅｃに対する親和性が実質的に他のＳｉｇｌｅｃｔおよび／または他の無関係なポリペプチドに対する親和性よりも大きい限り（例えば、５×、１０×、５０×、１００×、５００×、１０００×、１０，０００×またはそれを超える）、抗体は、本方法での使用に適切である。
【０１０８】
脊椎動物または細胞での免疫付与および抗体産生時に、特許請求されるような抗体を単離するために特定の選択ステップを行い得る。この点において、本開示はまた、このような抗体を作製する方法にも関し、この方法は、（ａ）Ｓｉｇｌｅｃに結合する複数の抗体を提供することと、（ｃ）２種類以上のＳｉｇｌｅｃに結合可能である、例えばヒトＳｉｇｌｅｃ−７およびヒトＳｉｇｌｅｃ−９の両方に結合する、ステップ（ａ）からの抗体を選択することとを含む。ある実施形態において、抗体を作製するために、げっ歯類、ウシ、ブタ、家禽、ウマ、ウサギ、ヤギまたはヒツジなど、非ヒト動物を使用する。この点において、本開示はまた、このような抗体を作製する方法にも関し、この方法は、（ａ）Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドを含む免疫原で非ヒト哺乳動物に免疫付与することと、（ｂ）前記免疫付与動物から抗体を調製することと、（ｃ）２種類以上のＳｉｇｌｅｃに結合可能である、例えばヒトＳｉｇｌｅｃ−７およびヒトＳｉｇｌｅｃ−９の両方に結合する抗体をステップ（ｂ）から選択することとを含む。
【０１０９】
抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体は、これらがヒトＦｃγ受容体への特異的な結合を減少させるかまたは実質的に欠くように、非枯渇抗体として調製され得る。このような抗体は、Ｆｃγ受容体に対して結合しないことまたはこれに対する結合親和性が低いことが知られている様々な重鎖の定常領域を含み得る。あるこのような例は、ヒトＩｇＧ４定常領域である。あるいは、Ｆｃ受容体結合を回避するために、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２断片など、定常領域を含まない抗体断片を使用し得る。Ｆｃ受容体結合は、例えばＢＩＡＣＯＲＥアッセイにおけるＦｃ受容体タンパク質への抗体の結合を試験することを含め、当技術分野で公知の方法に従い評価し得る。また、Ｆｃ受容体への結合を最小化するかまたは除外するためにＦｃ部分が修飾される何らかの抗体アイソタイプを使用し得る（例えば、その開示が参照により本明細書中に組み込まれる国際公開第０３１０１４８５号パンフレットを参照）。例えばＦｃ受容体結合を評価するための細胞に基づくアッセイなどのアッセイは当技術分野で周知であり、例えば、国際公開第０３１０１４８５号パンフレットに記載されている。
【０１１０】
Ｓｉｇｌｅｃポリペプチド上に存在するエピトープに結合する抗体をコードするＤＮＡをハイブリドーマから単離し、適切な宿主への遺伝子移入のために適切な発現ベクターに入れる。次いで、抗体またはそれらの変異体、例えばそのモノクローナル抗体のヒト化バージョン、抗体の活性断片、抗体の抗原認識部分を含むキメラ抗体または検出可能部分を含むバージョンの組み換え産生のために宿主を使用する。
【０１１１】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して、容易に単離し、配列決定し得る（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能なオリゴヌクレオチドプローブを用いることによる）。単離したら、ＤＮＡを発現ベクターに入れ得、次いで、組み換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を得るために、これを、そのままでは免疫グロブリンタンパク質を産生しない、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞などの宿主細胞に遺伝子移入する。本明細書中の他の箇所に記載されるように、多数の目的の何れかのために、例えば抗体をヒト化する断片もしくは誘導体を作製するために、または例えば抗体の結合特異性を最適化するために抗原結合部位において抗体の配列を修飾するために、このようなＤＮＡ配列を修飾し得る。抗体をコードするＤＮＡの細菌中の組み換え発現は、当技術分野で周知である（例えば、Ｓｋｅｒｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，ｐｐ．２５６（１９９３）；およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３０，ｐ．１５１（１９９２）を参照）。
【０１１２】
ｓｉｇｌｅｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９、特に実質的にまたは基本的にモノクローナル抗体３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４と同じエピトープに結合する１つ以上の抗体の同定は、抗体競合が評価され得る様々な免疫学的スクリーニングアッセイの何れか１つを用いて容易に決定し得る。多くのこのようなアッセイは、日常的に実施され、当技術分野で周知である（例えば参照により本明細書中に組み込まれる米国特許第５，６６０，８２７号明細書を参照）。本明細書中に記載の抗体が結合するエピトープを実際に決定することは、本明細書中に記載のモノクローナル抗体と同じまたは実質的に同じエピトープに結合する抗体を同定するのに何ら必要とされないことを理解されたい。
【０１１３】
例えば、調べようとする試験抗体は、異なるソースの動物から得られるか、または異なるＩｇアイソタイプのものでもあり、対照（例えば３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４）および試験抗体を混合し（または予め吸着させ）、Ｓｉｇｌｅｃポリペプチドを含有する試料に適用する、単純な競合アッセイを使用し得る。ウエスタンブロッティングおよびＢＩＡＣＯＲＥ分析の使用に基づくプロトコールは、このような競合実験での使用に適切である。
【０１１４】
ある一定の実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ抗原試料に適用する前のある時間、対照抗体（例えば３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４）を様々な量の試験抗体（例えば、約１：１０または約１：１００）と予め混合する。他の実施形態において、対照および様々な量の試験抗体をＳｉｇｌｅｃ抗原試料への曝露中に単純に混合し得る。（例えば未結合抗体を排除するための分離または洗浄技術を使用することによって）遊離抗体から結合抗体を、（例えば種特異的なまたはアイソタイプ特異的な二次抗体を使用することにより、または検出可能標識で３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４を特異的に標識することにより）試験抗体から３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４を区別し得る限り、試験抗体が３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４の抗原への結合を減少させるか否かを判定し得、これは、試験抗体が３Ａ１１、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４と実質的に同じエピトープを認識することを示す。完全に無関係な抗体の非存在下での（標識化）対照抗体の結合は、対照高値となり得る。対照低値は、標識化（３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４）抗体を完全に同じタイプの（３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４）非標識抗体と温置することによって得られ得、ここで競合が起こり、標識抗体の結合を減少させる。試験アッセイにおいて、試験抗体の存在下での標識化抗体の反応性の顕著な減少は、実質的に同じエピトープ、すなわち標識化（３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４）抗体と「交差反応する」かまたは競合するエピトープを認識する試験抗体を示す。約１：１０と約１：１００との間の３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４：試験抗体の何れかの比率でＳｉｇｌｅｃ抗原への３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４の結合を少なくとも約５０％、例えば少なくとも約６０％またはより好ましくは少なくとも約８０％または９０％（例えば約６５〜１００％）減少させる何らかの試験抗体は、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４と実質的に同じエピトープまたは決定基と結合する抗体であるとみなされる。好ましくは、このような試験抗体は、少なくとも約９０％（例えば約９５％）、Ｓｉｇｌｅｃ抗原への３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４の結合を減少させる。
【０１１５】
例えばフローサイトメトリー試験により競合を評価することもできる。このような試験において、１種類以上のある種のＳｉｇｌｅｃポリペプチドを保有する細胞を最初に例えば３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４と温置し、次いで蛍光色素またはビオチンで標識される試験抗体と温置し得る。本抗体は、飽和量の３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４との予備温置時に得られる結合が、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４との予備温置を行わずに抗体により得られる結合の約８０％、好ましくは約５０％、約４０％以下（例えば、約３０％、２０％または１０％）（蛍光手段により測定される場合）である場合、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４と競合すると言われる。あるいは、抗体は、飽和量の試験抗体と予備温置される細胞上で（蛍光色素またはビオチンにより）標識化３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４抗体とともに得られる結合が、試験抗体との予備温置を行わずに得られる結合の約８０％、好ましくは約５０％、約４０％またはそれ未満（例えば約３０％、２０％または１０％）である場合、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４と競合すると言われる。
【０１１６】
試験抗体が予め吸着され、Ｓｉｇｌｅｃ抗原が固定化される表面に飽和濃度で適用される単純な競合アッセイも使用し得る。単純競合アッセイにおける表面は、好ましくはＢＩＡＣＯＲＥチップ（または表面プラズモン共鳴分析に適切な他の媒体）である。次いで、対照抗体（例えば、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４）をＳｉｇｌｅｃ飽和濃度で表面と接触させ、Ｓｉｇｌｅｃおよび対照抗体の表面結合を測定する。対照抗体のこの結合を試験抗体の非存在下でのＳｉｇｌｅｃ含有面への対照抗体の結合と比較する。試験アッセイにおいて、試験抗体の存在下での対照抗体によるＳｉｇｌｅｃ含有面の結合の顕著な減少は、試験抗体が対照抗体と実質的に同じエピトープを認識し、試験抗体が対照抗体と「交差反応」するようになることを示す。少なくとも約３０％またはそれを超える、好ましくは約４０％、Ｓｉｇｌｅｃ抗原への、対照（３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４など）抗体の結合を減少させる何らかの試験抗体は、対照（例えば、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４）と実質的に同じエピトープまたは決定基に結合する抗体であるとみなされ得る。好ましくは、このような試験抗体は、少なくとも約５０％（例えば少なくとも約６０％、少なくとも約７０％またはそれを超える）だけＳｉｇｌｅｃ抗原への対照抗体（例えば、３Ａ１１、１Ｈ９または２Ｂ４）の結合を減少させる。当然のことながら、対照および試験抗体の順序は逆転し得、すなわち、対照抗体を最初に表面に結合させ得、試験抗体をその後に競合アッセイにおいて表面と接触させる。好ましくは、Ｓｉｇｌｅｃ抗原に対してより高い親和性を有する抗体は、（抗体が交差反応することが推測される）第２の抗体に対して見られる結合の減少がより大きい規模であると予想されるため、最初に表面と結合させる。このようなアッセイのさらなる例は、例えば、その開示が参照により本明細書中に組み込まれるＳａｕｎａｌ（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８３：３３−４１で提供される。
【０１１７】
抗体がエピトープ領域内で結合するか否かの判定は、当業者にとって公知のように行い得る。このようなマッピング／特徴評価方法の一例として、抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体に対するエピトープ領域は、Ｓｉｇｌｅｃタンパク質における露出アミン／カルボキシルの化学修飾を用いて、エピトープ「フットプリンティング」により決定され得る。このようなフットプリンティング技術のある具体例は、ＨＸＭＳ（質量分析により検出される水素−重水素交換）の使用であり、ここで受容体およびリガンドタンパク質アミドプロトンの水素／重水素交換、結合および逆交換が起こり、タンパク質結合に加わる骨格アミド基は、逆交換から保護され、したがって重水素化されたままとなる。関連領域は、この点でペプシンのタンパク質分解、ファストマイクロボア高速液体クロマトグラフィー分離および／またはエレクトロスプレーイオン化質量分析により同定され得る。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ  Ｈ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２６７（２）ｐｐ．２５２−２５９（１９９９）Ｅｎｇｅｎ，Ｊ．Ｒ．ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｌ．（２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３，２５６Ａ−２６５Ａを参照。適切なエピトープ同定技術の別の例は核磁気共鳴エピトープマッピング（ＮＭＲ）であり、一般的には遊離抗原および抗体などの抗原結合ペプチドと複合体形成する抗原の二次元ＮＭＲスペクトルにおけるシグナルの位置を比較する。抗原は、一般的には、１５Ｎで選択的に同位体標識され、抗原に対応するシグナルのみがＮＭＲ−スペクトルで見られ、抗原結合ペプチドからのシグナルが見られないようになる。抗原結合ペプチドとの相互作用に関与するアミノ酸由来の抗原シグナルは一般的に、遊離抗原のスペクトルと比較して、複合体のスペクトルにおいて位置をシフトさせ、結合に関与するアミノ酸はそのように同定され得る。例えばＥｒｎｓｔ  Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｒｅｓ  Ｆｏｕｎｄ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ．２００４；（４４）：１４９−６７；Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２８１（１）ｐｐ．６１−６７（１９９８）；およびＳａｉｔｏ  ａｎｄ  Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９６  Ｊｕｎ；９（３）：５１６−２４を参照。
【０１１８】
エピトープマッピング／特徴評価は質量分析方法を用いて行うこともできる。例えば、Ｄｏｗｎａｒｄ，Ｊ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．２０００  Ａｐｒ；３５（４）：４９３−５０３およびＫｉｓｅｌａｒ  ａｎｄ  Ｄｏｗｎａｒｄ，Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ．１９９９  Ｍａｙ  １；７１（９）：１７９２−１８０１を参照。プロテアーゼ消化技術もエピトープマッピングおよび同定との関連で有用であり得る。抗原性決定基関連領域／配列は、プロテアーゼ消化によって、例えばＳｉｇｌｅｃに対して約１：５０の比率でトリプシンを使用することによって、ｐＨ７〜８でｏ／ｎ消化を使用することによって、続いてペプチド同定のために質量分析（ＭＳ）を行うことによって決定し得る。続いて、抗Ｓｉｇｌｅｃ結合物によりトリプシン切断から保護されるペプチドは、トリプシン消化に供した試料および抗体と温置し、続いて例えばトリプシン（それにより結合物に対するフットプリントが明らかになる）による消化に供した試料の比較により同定し得る。キモトリプシン、ペプシンなどの他の酵素もまたはあるいは同様のエピトープ特徴評価方法で使用し得る。さらに、酵素性消化によって、可能性のある抗原性決定基配列が表面に露出していない、したがっておそらく免疫原性／抗原性について関連がないと思われるＳｉｇｌｅｃポリペプチドの領域内にあるか否かを分析するための迅速な方法が提供され得る。
【０１１９】
部位特異的突然変異誘発は、結合エピトープを明らかにするのに有用な別の技術である。例えば、「アラニンスキャニング」において、タンパク質セグメント内の各残基をアラニン残基で置き換え、結合親和性に対する結果を測定する。突然変異が結合親和性の顕著な低下につながる場合、結合に関与する可能性が高い。構造エピトープに特異的なモノクローナル抗体（すなわち、折り畳まれていないタンパク質に結合しない抗体）を使用して、アラニン置換がタンパク質の全体的な折り畳みに影響しないことを確認し得る。例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９５；２６７：３８３−３８６；およびＷｅｌｌｓ，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  １９９６；９３：１−６を参照。
【０１２０】
エピトープ「フットプリンティング」のために電子顕微鏡も使用し得る。例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  １９９２；３５５：２７５−２７８は、低温電子顕微鏡、三次元画像再構成およびＸ結晶学の同時適用を使用して、ネイティブササゲモザイクウイルスのキャプシド表面上のＦａｂ断片の物理学的フットプリントを決定した。
【０１２１】
エピトープ評価のための「標識不含」アッセイの他の形態としては、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、ＢＩＡＣＯＲＥ）および反射型干渉分光法（ＲｉｆＳ）が挙げられる。例えば、Ｆａｅｇｅｒｓｔａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  １９９０；３：２０８−１４；Ｎｉｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．１９９３；６４６：１５９−１６８；Ｌｅｉｐｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９８；３７：３３０８−３３１１；Ｋｒｏｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  ２００２；１７：９３７−９４４を参照。
【０１２２】
本発明の抗体と同じであるかまたは実質的に同じであるエピトープへの抗体結合が本明細書中に記載の代表的な競合アッセイのうちの１つ以上で同定され得ることも注意すべきである。
【０１２３】
試験（ヒト化）抗体がヒトＳｉｇｌｅｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９）に対する天然または非天然シアル酸リガンドの結合に影響を及ぼすか否かを評価するために、交差ブロッキングアッセイも使用し得る。例えば、ヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体標品がシアル酸とのＳｉｇｌｅｃ−７相互作用を減少させるかまたは阻止するか否かを判定するために、次の試験を行い得る。ヒトＳｉｇｌｅｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９）に対するシアル酸リガンドを発現する細胞株を標識したＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７ＦｃおよびＳｉｇｌｅｃ−９Ｆｃ）と氷上で１時間温置し、洗浄し、標準的方法によりフローサイトメーター上で結合を分析する。試験抗体の非存在下で、Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆｃは細胞に結合する。シアル酸へのＳｉｇｌｅｃ結合を阻止するＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７ＦｃおよびＳｉｇｌｅｃ−９Ｆｃ）と予め温置した抗体標品の存在下で、細胞へのＳｉｇｌｅｃ−Ｆｃの結合が減少する。しかし、当然のことながら、シアル酸リガンド発現標的細胞に対するＮＫ細胞溶解活性の再構成は、Ｓｉｇｌｅｃ−シアル酸リガンド相互作用の阻止を評価する必要なく直接評価し得る。
【０１２４】
Ｓｉｇｌｅｃに対する所望の結合を有する抗原結合化合物が得られたら、そのＳｉｇｌｅｃ（例えばＳｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９）阻害能についてこれを評価し得る。複数のＳｉｇｌｅｃの阻害能は、１つのＳｉｇｌｅｃの阻害が、他のＳｉｇｌｅｃも交差反応性抗体により阻害されることを示すため、Ｓｉｇｌｅｃのうちの１つの阻害について試験することにより評価し得るか、または各Ｓｉｇｌｅｃの阻害について試験し得る。例えば、抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体が（例えば細胞上に存在するような）シアル酸リガンドにより誘導されるＳｉｇｌｅｃ活性化を低下させるかまたは阻止する場合、Ｓｉｇｌｅｃ限定リンパ球の細胞傷害性を向上させ得る。これは典型的な細胞傷害性アッセイにより評価し得、その例を以下に記載する。
【０１２５】
抗体がＳｉｇｌｅｃ介在性シグナル伝達を低下させる能力は、例えばＳｉｇｌｅｃ−７またはＳｉｇ−ｌｅｃ−９を発現するＮＫ細胞および個々のＳｉｇｌｅｃのシアル酸リガンドを発現する標的細胞を使用して、標準的な４時間インビトロ細胞傷害性アッセイにおいて試験し得る。Ｓｉｇｌｅｃ−７または−９がシアル酸リガンドを認識するため、このようなＮＫ細胞はシアル酸リガンドを発現する標的を効果的に死滅させず、リンパ球介在性の細胞溶解を妨害する阻害シグナル伝達の開始および拡大につながる。このようなインビトロ細胞傷害性アッセイは、例えばＣｏｌｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃ．およびＷｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒ−ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，（１９９２，１９９３）に記載のように、当技術分野で周知である標準的方法により行われ得る。標的細胞をＮＫ細胞の添加前に５１Ｃｒで標識し、次いで死滅は、死滅の結果としての細胞から培地への５１Ｃｒの放出に比例するものとして推定する。Ｓｉｇｌｅｃ−７および／または−９がシアル酸リガンドに結合するのを妨害する抗体の添加の結果、Ｓｉｇｌｅｃを介した阻害シグナル伝達の開始および拡大が妨げられる。したがって、このような薬剤の添加の結果、標的細胞のリンパ球介在性の死滅が増加する。それにより、このステップは、例えばリガンド結合を阻止することによりＳｉｇｌｅｃ−７または−９誘導性の負のシグナル伝達を妨げる薬剤を同定する。特定の５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ−７または−９−発現ＮＫエフェクター細胞は、シアル酸リガンド陰性標的細胞（例えば、シアリダーゼで処理した細胞）を死滅させ得るが、シアル酸リガンド発現対照細胞はあまり死滅させない。このように、ＮＫエフェクター細胞は、特定のＳｉｇｌｅｃを介したシアル酸誘導性の阻害シグナル伝達のために、シアル酸リガンド陽性細胞をあまり効率的に死滅させない。このような５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイにおいてＮＫ細胞をブロッキング抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体と予め温置する場合、抗体濃度依存的にシアル酸リガンド発現細胞がより効率的に死滅させられる。本アッセイは、各Ｓｉｇｌｅｃ、例えばＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９に対して個別に行い得る。
【０１２６】
抗体の阻害活性（すなわち細胞傷害性促進能）は、多くの他の方法の何れかでも、例えばその開示が参照により本明細書中に組み込まれるＳｉｖｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９−１１３６に記載されるような細胞内遊離カルシウムにおけるその効果により、または脱顆粒マーカーＣＤ１０７もしくはＣＤ１３７発現などのＮＫ細胞の細胞傷害性活性化のマーカーにおけるその影響により、評価し得る。何らかの細胞に基づく細胞傷害性アッセイを使用して、例えば、それぞれの開示全体が参照により本明細書中に組み込まれる、Ｓｉｖｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９７；１８６：１１２９−１１３６；Ｖｉｔａｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８７：２０６５−２０７２；Ｐｅｓｓｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８；１８８：９５３−９６０；Ｎｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎ．２００１；８：１１３１−１１３５；Ｐｅｎｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９９；１９０：１５０５−１５１６において開示されるように、Ｐ８１５、Ｋ５６２細胞などの標的細胞または適切な腫瘍細胞を死滅させるためにＮＫ細胞を刺激する抗体の能力を評価するために何らかの他のパラメーターを測定することによって、ＮＫ、ＴまたはＮＫＴ細胞活性を評価することもできる。
【０１２７】
ある実施形態において、抗体標品は、Ｓｉｇｌｅｃ限定リンパ球の細胞傷害性の少なくとも１０％の増強、好ましくはＮＫ細胞傷害性の少なくとも４０％もしくは５０％の増強またはより好ましくはＮＫ細胞傷害性の少なくとも７０％の増強を引き起こす。
【０１２８】
ＮＫ細胞のサイトカイン産生（例えばＩＦＮ−ｙおよびＴＮＦ−α産生）を刺激するために抗体とＮＫ細胞を温置するサイトカイン放出アッセイを使用して、細胞傷害性リンパ球の活性にも対処し得る。代表的なプロトコールにおいて、ＰＢＭＣからのＩＦＮ−ｙ産生は、培養４日後の、細胞表面および細胞質内染色およびフローサイトメトリーによる分析によって評価する。簡潔に述べると、ブレフェルジンＡ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）を培養の最後の４時間の間、５μｇ／ｍＬの最終濃度で添加する。次いで細胞を透過処理（ＩｎｔｒａＰｒｅｐ（商標）；Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）およびＰＥ−抗ＩＦＮ−ｙまたはＰＥ−ＩｇＧ１（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）での染色前に、抗ＣＤ３および抗ＣＤ５６ｍＡｂと温置する。ＥＬＩＳＡ（ＧＭ−ＣＳＦ：ＤｕｏＳｅｔ  Ｅｌｉｓａ，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＩＦＮ−ｙ：ＯｐｔＥＩＡ  ｓｅｔ，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用して、ポリクローナル活性化ＮＫ細胞からのＧＭ−ＣＳＦおよびＩＦＮ−ｙ産生を上清中で測定する。
【０１２９】
抗体の断片および誘導体（別段の指定がない限り、または文脈と明らかに矛盾しない限り、本願で使用される場合の１つまたは複数の「抗体」という用語に包含される）は、当技術分野で公知の技術により作製し得る。「断片」は、インタクト抗体の一部分、一般的には抗原結合部位または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；（１）１本鎖Ｆｖ分子、（２）会合する重鎖部分がなく、軽鎖可変ドメインを１個のみ含有する１本鎖ポリペプチドまたは軽鎖可変ドメインの３個のＣＤＲを含有するそれらの断片、および（３）会合する軽鎖部分がなく、重鎖可変領域を１個のみ含有する１本鎖ポリペプチドまたは重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含有するその断片を含むが限定されない、近接アミノ酸残基の１つの連続した配列からなる一次構造を有するポリペプチド（本明細書中で「１本鎖抗体断片」または「１本鎖ポリペプチド」と呼ぶ）である何らかの抗体断片；および抗体断片から形成される多特異性（例えば二特異性）抗体が挙げられる。とりわけ、ナノボディ、ドメイン抗体、単ドメイン抗体または「ｄＡｂ」が挙げられる。
【０１３０】
ある一定の実施形態において、抗体を産生するハイブリドーマのＤＮＡは、例えば相同非ヒト配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインに対するコード配列を置換することによって（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ｐｐ．６８５１（１９８４））、または免疫グロブリンコード配列に非免疫グロブリンポリペプチドに対するコード配列の全てまたは一部を共有結合により連結することによって、発現ベクターに挿入する前に修飾し得る。このようにして、オリジナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体を調製する。一般的には、このような非免疫グロブリンポリペプチドが抗体の定常ドメインに対して置換される。
【０１３１】
任意選択により、抗体はヒト化される。抗体の「ヒト化」型は、マウス免疫グロブリン由来の最小配列を含有する特異的なキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合サブ配列など）である。殆どの部分に対して、ヒト化抗体は、オリジナル抗体の所望の特異性、親和性および能力を維持しながら、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基がオリジナル抗体（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基により置換されるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。
【０１３２】
一部の例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基を対応する非ヒト残基により置換し得る。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体または移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列の何れでも見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体性能をさらに高め、最適化するために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、一般的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てがオリジナル抗体のものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は、最適には、通常はヒト免疫グロブリンのものである免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分も含む。さらなる詳細については、その開示全体が参照により本明細書中に組み込まれる、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１，ｐｐ．５２２（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２，ｐｐ．３２３（１９８８）；Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２，ｐｐ．５９３（１９９２）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９，ｐｐ．１５３４；および米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照）。抗体をヒト化するための方法は当技術分野で周知である。
【０１３３】
ヒト化抗体を作製することにおいて使用しようとするヒト可変ドメイン、軽鎖および重鎖の両方の選択は、抗原性を低下させるために非常に重要である。いわゆる「最良適合」方法に従い、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対して抗体の可変ドメインの配列をスクリーニングする。次に、マウスのものに最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として受容される（Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１，ｐｐ．２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．１９６，１９８７，ｐｐ．９０１）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全ヒト抗体のコンセンサス配列からの特定のフレームワークを使用する。いくつかの異なるヒト化抗体のために同じフレームワークを使用し得る（Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＮＡＳ  ８９，ｐｐ．４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１，ｐ．２６２３（１９９３））。
【０１３４】
抗体がＳｉｇｌｅｃ受容体に対する高親和性および他の有利な生物学的特性を保有してヒト化されることはさらに重要である。この目的を達成するために、ある方法に従い、親およびヒト化配列の三次元モデルを用いた、親配列および様々な概念的ヒト化産物の分析の過程によってヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の可能性が高い三次元構造を例示し、表示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらの表示を調べることにより、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性のある役割の分析、すなわち候補免疫グロブリンのその抗原への結合能に影響を及ぼす残基の分析が可能になる。このようにして、ＦＲ残基を選択し、コンセンサスおよび輸入配列から組み合わせ得、標的抗原に対する親和性向上などの所望の抗体特性が達成されるようになる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすことに直接的に、および最も実質的に関与する。
【０１３５】
「ヒト化」モノクローナル抗体を作製する別の方法は、免疫付与のために使用されるマウスとして、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）を使用することである。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅは、その免疫グロブリン遺伝子が機能的ヒト免疫グロブリン遺伝子により置換されているマウス宿主である。したがって、このマウスにより、またはこのマウスのＢ細胞から作製されるハイブリドーマにおいて産生される抗体は既にヒト化されている。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅは、参照によりその全体において本明細書中に組み込まれる、米国特許第６，１６２，９６３号明細書に記載されている。
【０１３６】
ヒト抗体は、免疫付与のためにヒト抗体レパートリーを発現するように操作されている他のトランスジェニック動物を使用することによる（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２（１９９３）２５５）かまたはファージディスプレイ法を用いた抗体レパートリーの選択によるなど、様々な他の技術によっても作製され得る。このような技術は、当業者にとって公知であり、本願で開示されるようにモノクローナル抗体から出発して実行され得る。
【０１３７】
抗体ＣＤＲ配列
抗体３Ａ１１
抗体３Ａ１１の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号３として記載し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号４として記載する。具体的な実施形態において、本発明は、モノクローナル抗体３Ａ１１と同じエピトープまたは決定基と基本的に結合する抗体を提供し、任意選択により、本抗体は、抗体３Ａ１１の超可変領域を含む。本明細書中の実施形態の何れかにおいて、抗体３Ａ１１は、アミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列を特徴とし得る。ある実施形態において、本モノクローナル抗体は、３Ａ１１のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２部分を含む。３Ａ１１の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。ある実施形態によれば、本モノクローナル抗体は、３Ａ１１の重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含む。３Ａ１１の可変軽鎖可変領域または３Ａ１１の軽鎖可変領域のＣＤＲのうちの１、２または３個をさらに含むモノクローナル抗体も提供される。任意選択により、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲの何れか１つ以上は、１、２、３、４もしくは５個またはそれを超えるアミノ酸修飾（例えば置換、挿入または欠失）を含有し得る。任意選択により、抗体３Ａ１１の抗原結合領域の一部または全てを含む軽鎖および／または重鎖可変領域の何れかが、ヒトＩｇＧ型の免疫グロブリン定常領域、任意選択によりヒト定常領域、任意選択によりヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプと融合され、任意選択により、エフェクター機能（ヒトＦｃγ受容体への結合）を低下させるためにアミノ酸置換をさらに含む抗体が提供される。
【０１３８】
別の態様において、本発明は、表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む３Ａ１１のＨＣＤＲ１領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む３Ａ１１のＨＣＤＲ２領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む３Ａ１１のＨＣＤＲ３領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む３Ａ１１のＬＣＤＲ１領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む３Ａ１１のＬＣＤＲ２領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む３Ａ１１のＬＣＤＲ３領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が欠失し得るかまたは異なるアミノ酸により置換され得るものを含む抗体を提供する。ＨＣＤＲ１、２、３およびＬＣＤＲ１、２、３配列は任意選択により、全てが（またはそれぞれ、独立に）Ｋａｂａｔ付番系（各ＣＤＲに対して表Ａで示されるとおり）のもの、Ｃｈｏｔｉａ付番系（各ＣＤＲに対して表Ａで示されるとおり）のもの、ＩＭＧＴ付番系（ＣＤＲに対して表Ａで示されるとおり）のものまたは何らかの他の適切な付番系のものとして特定され得る。
【０１３９】
抗体１Ｈ９
抗体１Ｈ９の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号２１として記載し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号２２として記載する。具体的な実施形態において、本発明は、モノクローナル抗体１Ｈ９と同じエピトープまたは決定基と基本的に結合する抗体を提供し、任意選択により、本抗体は、抗体１Ｈ９の超可変領域を含む。本明細書中の実施形態の何れかにおいて、抗体１Ｈ９は、アミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列を特徴とし得る。ある実施形態において、本モノクローナル抗体は、１Ｈ９のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２部分を含む。１Ｈ９の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。ある実施形態によれば、本モノクローナル抗体は、１Ｈ９の重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含む。１Ｈ９の可変軽鎖可変領域または１Ｈ９の軽鎖可変領域のＣＤＲのうちの１、２または３個をさらに含むモノクローナル抗体も提供される。任意選択により、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲの何れか１つ以上は、１、２、３、４もしくは５個またはそれを超えるアミノ酸修飾（例えば置換、挿入または欠失）を含有し得る。任意選択により、抗体１Ｈ９の抗原結合領域の一部または全てを含む軽鎖および／または重鎖可変領域の何れかが、ヒトＩｇＧ型の免疫グロブリン定常領域、任意選択によりヒト定常領域、任意選択によりヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプと融合され、任意選択により、エフェクター機能（ヒトＦｃγ受容体への結合）を低下させるためにアミノ酸置換をさらに含む抗体が提供される。
【０１４０】
別の態様において、本発明は、表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む１Ｈ９のＨＣＤＲ１領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む１Ｈ９のＨＣＤＲ２領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む１Ｈ９のＨＣＤＲ３領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む１Ｈ９のＬＣＤＲ１領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む１Ｈ９のＬＣＤＲ２領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む１Ｈ９のＬＣＤＲ３領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が欠失し得るかまたは異なるアミノ酸により置換され得るものを含む抗体を提供する。ＨＣＤＲ１、２、３およびＬＣＤＲ１、２、３配列は任意選択により、全てが（またはそれぞれ、独立に）Ｋａｂａｔ付番系（各ＣＤＲに対して表Ａで示されるとおり）のもの、Ｃｈｏｔｉａ付番系（各ＣＤＲに対して表Ａで示されるとおり）のもの、ＩＭＧＴ付番系（各ＣＤＲに対して表Ａで示されるとおり）のものまたは何らかの他の適切な付番系のものとして特定され得る。
【０１４１】
抗体２Ｂ４
抗体２Ｂ４の重鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号３９として記載し、軽鎖可変領域のアミノ酸配列を配列番号４０として記載する。具体的な実施形態において、本発明は、モノクローナル抗体２Ｂ４と同じエピトープまたは決定基と基本的に結合する抗体を提供し、任意選択により本抗体は、抗体２Ｂ４の超可変領域を含む。本明細書中の実施形態の何れかにおいて、抗体２Ｂ４は、アミノ酸配列および／またはそれをコードする核酸配列を特徴とし得る。ある実施形態において、本モノクローナル抗体は、２Ｂ４のＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２部分を含む。２Ｂ４の重鎖可変領域を含むモノクローナル抗体も提供される。ある実施形態によれば、本モノクローナル抗体は、２Ｂ４の重鎖可変領域の３個のＣＤＲを含む。２Ｂ４の可変軽鎖可変領域または２Ｂ４の軽鎖可変領域のＣＤＲのうちの１、２または３個をさらに含むモノクローナル抗体も提供される。任意選択により、前記軽鎖または重鎖ＣＤＲの何れか１つ以上は、１、２、３、４もしくは５個またはそれを超えるアミノ酸修飾（例えば置換、挿入または欠失）を含有し得る。任意選択により、抗体２Ｂ４の抗原結合領域の一部または全てを含む軽鎖および／または重鎖可変領域の何れかが、ヒトＩｇＧ型の免疫グロブリン定常領域、任意選択によりヒト定常領域、任意選択によりヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプと融合され、任意選択により、エフェクター機能（ヒトＦｃγ受容体への結合）を低下させるためにアミノ酸置換をさらに含む抗体が提供される。
【０１４２】
別の態様において、本発明は、表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む２Ｂ４のＨＣＤＲ１領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む２Ｂ４のＨＣＤＲ２領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む２Ｂ４のＨＣＤＲ３領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む２Ｂ４のＬＣＤＲ１領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む２Ｂ４のＬＣＤＲ２領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が異なるアミノ酸により置換され得るもの；表Ａに規定のアミノ酸配列またはその少なくとも４、５、６、７、８、９もしくは１０個の近接アミノ酸の配列を含む２Ｂ４のＬＣＤＲ３領域であって、任意選択によりこれらのアミノ酸のうちの１つ以上が欠失し得るかまたは異なるアミノ酸により置換され得るものを含む抗体を提供する。ＨＣＤＲ１、２、３およびＬＣＤＲ１、２、３配列は任意選択により、全てが（またはそれぞれ、独立に）Ｋａｂａｔ付番系（各ＣＤＲに対して表Ａで示されるとおり）のもの、Ｃｈｏｔｉａ付番系（各ＣＤＲに対して表Ａで示されるとおり）のもの、ＩＭＧＴ付番系（各ＣＤＲに対して表Ａで示されるとおり）のものまたは何らかの他の適切な付番系のものとして特定され得る。
【０１４３】
本明細書中の実施形態の何れかの別の態様において、３Ａ１１、２Ｂ４または１Ｈ９の重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および３の何れも、その少なくとも４、５、６、７、８、９または１０個の近接アミノ酸の配列を、および／または対応する配列番号で挙げられる特定のＣＤＲまたは一連のＣＤＲと少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％または９５％の配列同一性を共有するアミノ酸配列を有することを特徴とし得る。
【０１４４】
本発明の抗体の何れかにおいて、例えば、３Ａ１１、２Ｂ４または１Ｈ９において、特定される可変領域およびＣＤＲ配列は、配列修飾、例えば置換（１、２、３、４、５、６、７、８個またはそれを超える配列修飾）を含み得る。ある実施形態において、重鎖および軽鎖のＣＤＲ１、２および／または３は、置換される残基が、ヒト起源の配列中に存在する残基である、１、２、３またはそれを超えるアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、置換は保存的修飾である。保存的配列修飾は、そのアミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に顕著に影響しないかまたはこれを変化させないアミノ酸修飾を指す。このような保存的修飾としては、アミノ酸置換、付加および欠失が挙げられる。部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ介在性突然変異誘発など、当技術分野で公知の標準的技術によって、本発明の抗体に修飾を導入し得る。保存的アミノ酸置換は、一般的には、アミノ酸残基が同様の物理化学的特性の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。特定される可変領域およびＣＤＲ配列は、１、２、３、４またはそれを超えるアミノ挿入、欠失または置換を含み得る。置換が行われる場合、好ましい置換は保存的修飾である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当技術分野で定められている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分岐状側鎖（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）があるアミノ酸を含む。したがって、本発明の抗体のＣＤＲ領域内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置換され得、改変された抗体は、本明細書中に記載のアッセイを用いて、保有される機能（すなわち本明細書中に記載の特性）について試験し得る。
【０１４５】
ＡｂＭ（Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア定義）、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ定義系に従うＣＤＲの配列を以下の表Ａでまとめた。本発明による抗体の可変領域の配列を以下の表Ｂに挙げ（リーダー配列が存在する場合、リーダー配列の終わりの直後のアミノ位置で開始するように何らかの抗体鎖が指定され得る）、各ＣＤＲに下線を付す。本明細書中の何れかの実施形態において、シグナルペプチドまたはその何らかの部分を含有するかまたは欠くように、ＶＬまたはＶＨ配列を指定し、付番し得る。
【０１４６】
ある実施形態において、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプのものである。ある実施形態において、本発明の抗体は、それらの結合および／または機能的特性を保有する抗体断片である。
【０１４７】
【表１】
2017532025.tif 000005
【０１４８】
【表２】
2017532025.tif 000006
【０１４９】
抗体処方物
１ｍｇ／ｍＬ〜５００ｍｇ／ｍＬの濃度で含む医薬処方物中に抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体が組み込まれ得、前記処方物のｐＨは２．０〜１０．０である。本処方物は、緩衝液系、保存剤、等張化剤、キレート剤、安定化剤および界面活性剤をさらに含み得る。ある実施形態において、医薬処方物は、水性処方物、すなわち水を含む処方物である。このような処方物は一般的に溶液または懸濁液である。さらなる実施形態において、本医薬処方物は水性溶液である。「水性処方物」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む処方物として定義される。同様に「水溶液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む溶液として定義され、「水性懸濁液」という用語は、少なくとも５０％ｗ／ｗの水を含む懸濁液として定義される。
【０１５０】
別の実施形態において、本医薬処方物は、凍結乾燥処方物であり、医師または患者が使用前にそれに溶媒および／または希釈剤を添加する。
【０１５１】
別の実施形態において、本医薬処方物は、事前に溶解する必要がない使用準備済みの乾燥処方物（例えば凍結乾燥または噴霧乾燥）である。
【０１５２】
さらなる態様において、本医薬処方物は、このような抗体の水溶液および緩衝液を含み、この抗体は１ｍｇ／ｍＬまたはそれを超える濃度で存在し、前記処方物のｐＨは約２．０〜約１０．０である。
【０１５３】
別の実施形態において、本処方物のｐＨは、約２．０〜約１０．０、約３．０〜約９．０、約４．０〜約８．５、約５．０〜約８．０および約５．５〜約７．５からなる一覧から選択される範囲である。
【０１５４】
さらなる実施形態において、緩衝液は、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、クエン酸塩、グリシルグリシン、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナトリウムおよびトリス（ヒドロキシメチル）−アミノメタン、ビシン、トリシン、リンゴ酸、コハク酸塩、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、アスパラギン酸またはこれらの混合物からなる群から選択される。これらの具体的な各緩衝液は、本発明の代替的な実施形態を構成する。
【０１５５】
さらなる実施形態において、本処方物は、薬学的に許容可能な保存剤をさらに含む。さらなる実施形態において、本処方物は等張剤をさらに含む。さらなる実施形態において、本処方物はキレート剤も含む。本発明のさらなる実施形態において、本処方物は安定化剤をさらに含む。さらなる実施形態において、本処方物は界面活性剤をさらに含む。便宜上、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５を参照する。
【０１５６】
本発明のペプチド医薬処方物中に他の成分が存在し得る可能性がある。このようなさらなる成分としては、湿潤剤、乳化剤、抗酸化剤、充填剤、等張性調節剤、キレート剤、金属イオン、油性ビヒクル、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ゼラチンまたはタンパク質）および双性イオン（例えば、ベタイン、タウリン、アルギニン、グリシン、リジンおよびヒスチジンなどのアミノ酸）が挙げられ得る。このようなさらなる成分は、当然ではあるが本発明の医薬処方物の全体的な安定性に悪影響を与えるべきではない。
【０１５７】
本発明による抗体を含有する医薬組成物は、いくつかの部位、例えば局所部位、例えば皮膚および粘膜部位、吸収を迂回する部位、例えば動脈における、静脈における、心臓における投与、および吸収を含む部位、例えば皮膚、皮下における、筋肉における、または腹部における投与において、このような処置を必要とする患者に投与し得る。本発明による医薬組成物の投与は、このような処置を必要とする患者への、いくつかの投与経路を通じて、例えば、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、舌、舌下、頬側、口腔における投与、経口、胃腸における投与、鼻腔、肺、例えば細気管支および肺胞またはそれらの組み合わせを通じた投与、上皮、真皮、経皮、膣、直腸、眼、例えば結膜を通じた投与、ウレタル（ｕｒｅｔａｌ）および非経口投与であり得る。
【０１５８】
適切な抗体処方物は、他の既に開発されている治療用モノクローナル抗体での経験を調べることによっても決定し得る。いくつかのモノクローナル抗体は、リツキサン（リツキシマブ）、ハーセプチン（トラスツズマブ）ゾーレア（オマリズマブ）、ベクザー（トシツモマブ）、キャンパス（アレムツズマブ）、ゼバリン、オンコリム（Ｏｎｃｏｌｙｍ）など、臨床的状況で有効であることが示されており、本発明の抗体とともに同様の処方物を使用し得る。例えば、モノクローナル抗体は、１００ｍｇ（１０ｍＬ）または５００ｍｇ（５０ｍＬ）の何れかの単回使用バイアルで、９．０ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウム、７．３５ｍｇ／ｍＬクエン酸ナトリウム二水和物、０．７ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０および注射用の滅菌水中でＩＶ投与用に処方された１０ｍｇ／ｍＬの濃度で供給され得る。ｐＨは６．５に調整する。別の実施形態において、本抗体は、ｐＨが６．０の約２０ｍＭクエン酸Ｎａ、約１５０ｍＭ  ＮａＣｌを含む処方物中で供給される。
【０１５９】
悪性腫瘍の診断および処置
本明細書中に記載のような抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体を使用して、個体、とりわけヒト患者を処置する方法も提供される。ある実施形態において、本発明は、ヒト患者への投与のための医薬組成物の調製における本明細書中で記載のような抗体の使用を提供する。一般的には、患者は、癌または感染性疾患、例えば細菌性またはウイルス性疾患に罹患しているか、またはそのリスクがある。
【０１６０】
例えば、ある態様において、本発明は、Ｓｉｇｌｅｃ−７および／または−９限定リンパ球の活性の増強を、それを必要とする患者において行う方法を提供し、この方法は、中和抗Ｓｉｇｌｅｃ７／９抗体を前記患者に投与するステップを含む。本抗体は、例えばヒトまたはヒト化抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体であり得、この抗体は、Ｓｉｇｌｅｃ−７および−９受容体のシアル酸介在性活性化を低下させるかまたは妨害する。ある実施形態において、本方法は、リンパ球（例えばＮＫおよび／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）活性の向上が有益である疾患を有する患者においてこのようなリンパ球の活性を向上させることを対象とし、この疾患は、ＮＫもしくはＣＤ８＋Ｔ細胞による溶解の影響を受け易い細胞を含むか、このような細胞に影響を与えるか、またはこのような細胞により引き起こされ、または不十分なＮＫもしくはＣＤ８＋Ｔ細胞活性により引き起こされるかまたは不十分なＮＫもしくはＣＤ８＋Ｔ細胞活性を特徴としており、例えば癌または感染性疾患である。
【０１６１】
より具体的に、本発明の方法および組成物は、様々な癌および他の増殖性疾患の処置のために利用される。これらの方法は、リンパ球上の阻害受容体の阻止を介して免疫反応を促進することにより効果を発揮するため、これらは癌の非常に広い範囲に適用可能である。ある実施形態において、本発明の抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体で処置されるヒト患者は、肝臓癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭頸部の癌、乳癌、肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ）、メラノーマ、子宮癌、結腸癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、非ホジキンリンパ腫、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児期の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓または尿管の癌、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍の血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹グリオーマ、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、アスベストにより誘導されるものを含む環境誘導性の癌、例えば多発性骨髄腫、Ｂ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫／縦隔原発性Ｂ細胞性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病、菌状息肉腫、未分化大細胞型リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫および前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫を含む血液系悪性腫瘍および前記癌の何れかの組み合わせを有する。本発明は転移性癌の処置にも適用可能である。患者は、処置前、処置中または処置後に、上記臨床特性のうちの１つ以上に対して試験または選択され得る。
【０１６２】
抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体に基づく処置は、好ましくはウイルス、細菌、原生動物、カビまたは真菌による感染によって引き起こされる何らかの感染を含む感染性疾患を処置または予防するためにも使用され得る。このようなウイルス感染性生物としては、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、水痘、アデノウイルス、Ｉ型単純ヘルペス（ＨＳＶ−１）、２型単純ヘルペス（ＨＳＶ−２）、牛疫、ライノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、呼吸器多核体ウイルス、パピローマウイルス、パピローマウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス（ｈｕｎｔａｖｉｒｕｓ）、コクサッキーウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルスおよびＩ型または２型ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２）が挙げられるが限定されない。細菌は、次のものを含むが限定されない感染生物の別の好ましいクラスを構成する：ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）；Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）を含む連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）；エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｌ）；バチルス・アンスラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）を含むバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）およびラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）；リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）；コリネバクテリウム・ジフテリエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）；Ｇ．バジナリス（Ｇ．ｖａｇｉｎａｌｉｓ）を含むガルドネレラ（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ）；ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）；ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）；サーモアクチノマイセス・ブルガリス（Ｔｈｅｒｍｏａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）；トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｒｎａ）；カンピロバクター（Ｃａｍｐｌｙｏｂａｃｔｅｒ）、Ｐ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を含むシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）；レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）；Ｎ．ゴノローエ（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）およびＮ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）を含むナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）；Ｆ．メニンゴセプチクム（Ｆ．ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）およびＦ．オドラツルン（Ｆ．ｏｄｏｒａｔｕｒｎ）を含むフラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）；ブルセラ（Ｂｒｕｃｅｌｌａ）；Ｂ．ペルツッシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）およびＢ．ブロンキセプチカ（Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を含むボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ）；大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を含むエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）；エンテロバクター（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、Ｓ．マルセッセンス（Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）およびＳ．リケファシエンス（Ｓ．ｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）を含むセラチア（Ｓｅｒｒａｔｉａ）；エドワージエラ（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ）；Ｐ．ミラビリス（Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）およびＰ．ブルガリス（Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ）を含むプロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ）；ストレプトバチルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）；Ｒ．フィケツフィ（Ｒ．ｆｉｃｋｅｔｔｓｆｉ）を含むリケッチア科（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｃｅａｅ）、Ｃ．シタッシ（Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）およびＣ．トラコルナチス（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｒｎａｔｉｓ）を含むクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）；Ｍ．ツベルクローシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．ホルイツルン（Ｍ．ｆｏｌｌｕｉｔｕｒｎ）、Ｍ．ラプレ（Ｍ．ｌａｐｒａｅ）、Ｍ．アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、Ｍ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）、Ｍ．アフリカヌム（Ｍ．ａｆｒｉｃａｎｕｍ）、Ｍ．カンサッシ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）およびＭ．レプラエルヌリウム（Ｍ．ｌｅｐｒａｅｒｎｕｒｉｕｍ）を含むマイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）；およびノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）。原生動物としては、リーシュマニア（ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）、コクジディオア（ｋｏｋｚｉｄｉｏａ）およびトリパノソーマ（ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ）が挙げられ得るが限定されない。寄生虫としては、クラミジア（ｃｈｌａｍｙｄｉａ）およびリケッチア（ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）が挙げられるが限定されない。
【０１６３】
別の実施形態によれば、本抗体組成物は、その抗体が投与されている特定の治療目的のために通常利用される薬剤を含む１つ以上の他の治療剤との併用処置において使用され得る。さらなる治療剤は通常、処置されている特定の疾患または状態に対する単剤療法においてその薬剤に対して一般的に使用される量および治療計画で投与される。このような治療剤としては、抗癌剤、化学療法剤、抗生物質、抗ウイルス剤が挙げられるが限定されない。
【０１６４】
処置方法において、Ｓｉｇｌｅｃ結合化合物および第２の治療剤は、個別に、一緒に、または連続して、またはカクテルにして投与し得る。いくつかの実施形態において、本抗原結合化合物は、第２の治療剤の投与前に投与される。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ結合化合物は、第２の治療剤の投与のおよそ０〜３０日前に投与し得る。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ結合化合物は、第２の治療剤の投与の、約３０分〜約２週間、約３０分〜約１週間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間、約８時間〜１日または約１〜５日前に投与する。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ結合化合物は、治療剤の投与と同時に投与する。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ結合化合物は、第２の治療剤の投与後に投与する。例えば、Ｓｉｇｌｅｃ結合化合物は、第２の治療剤の投与からおよそ０〜３０日後に投与し得る。いくつかの実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ結合化合物は、第２の治療剤の投与から、約３０分〜約２週間、約３０分〜約１週間、約１時間〜約２時間、約２時間〜約４時間、約４時間〜約６時間、約６時間〜約８時間，約８時間〜１日または約１〜５日後に投与する。
【０１６５】
他の態様において、Ｓｉｇｌｅｃ−７＋Ｓｉｇｌｅｃ−９＋ＮＫ細胞および／またはＴ細胞、例えばＣＤ８Ｔ細胞を同定するための方法が提供される。ＮＫ細胞および／またはＴ細胞上でのＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の同時発現を評価することは、診断または予測法において使用し得る。例えば、生体試料は、個体から（例えば血液試料から、癌患者から得られる癌または癌隣接組織から）得ることができ、Ｓｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９＋ＮＫおよび／またはＴ細胞の存在について分析し得る。このような細胞上でのＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方の発現は、例えばＮＫおよび／またはＴ細胞、例えばＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方のポリペプチドにより阻害される腫瘍浸潤性ＮＫおよび／またはＴ細胞を有する個体を同定するために使用し得る。本方法は、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９を中和する薬剤での処置に対する反応についての予測として有用であり得る。
【０１６６】
ある一定の選択的な態様において、Ｓｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９に対する天然リガンドの腫瘍試料（例えば腫瘍組織および／または腫瘍隣接組織）中での存在を評価することによって、抗Ｓｉｇ−ｌｅｃ−７／９抗体での処置について患者を同定し得る。本明細書中での治療用途または癌治療または予防方法の何れかのある実施形態において、個体における癌の処置または予防は、
ａ）癌を有する個体内の悪性細胞（例えば腫瘍細胞）がＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドおよび／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを発現するか否かを決定し、
ｂ）悪性細胞（例えば腫瘍細胞）（の例えば表面上）によりＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドおよび／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドが顕著に発現されると判定されたら、抗Ｓｉｇｌｅｃ７／９抗体、例えば本開示の何れかの態様に従う抗体をその個体に投与することを含む。
【０１６７】
ある実施形態において、生体試料（例えば、腫瘍細胞、腫瘍組織および／または腫瘍隣接組織を含む試料）が主にＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドおよび／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを発現するという判定から、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９ポリペプチドを阻害する抗体でその個体を処置し得る、および／またはそれにより利益を受け得る癌をその個体が有することが示される。
【０１６８】
ある実施形態において、Ｓｉｇｌｅｃ−７のリガンドおよび／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドの顕著な発現は、ある一定の個体から採取される相当な数の腫瘍細胞において前記リガンドが発現されることを意味する。正確なパーセンテージ値により拘束されない一方で、一部の例において、患者から採取される腫瘍細胞（試料中）の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％またはそれを超えて存在する場合、リガンドが「顕著に発現される」と言われ得る。
【０１６９】
本方法の何れかのある実施形態において、癌を有する個体内の悪性細胞（例えば腫瘍細胞）がＳｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを発現するか否かを判定することは、生体試料中の悪性細胞上でのＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドおよび／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドの発現レベルを決定することおよびそのレベルを参照レベル（例えば値、弱いかまたは強い細胞表面染色など）と比較することを含む。参照レベルは、例えば、健常個体、抗Ｓｉｇｌｅｃでの処置から引き出せる臨床的便益がないかもしくは低い個体または抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体での処置から引き出せる臨床的便益がかなり大きい個体に対応し得る。生体試料が、上昇しているレベル（例えば高値、強い表面染色、抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体での処置から引き出せる臨床的利益が相当なものである個体のものに対応するレベル、抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体での処置から引き出せる臨床的便益がないか／低い個体のものに対応するものより高いレベルなど）でＳｉｇｌｅｃ−７のリガンドおよび／またはＳｉｇｌｅｃ−９のリガンドを発現するという判定は、その個体が抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体で処置し得る癌を有することを示す。
【実施例】
【０１７０】
実施例１：Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方を同時発現するヒトＮＫ細胞サブセット
ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃの中でも、Ｓｉｇｌｅｃ−７（ＣＤ３２８）およびＳｉｇｌｅｃ−９（ＣＤ３２９）は、癌細胞により過剰発現されるグリカンを含め、シアル酸に対する結合の特性を共有し、それらが発現される免疫細胞において阻害受容体として機能すると考えられる。リンパ球上でのＳｉｇｌｅｃの発現を調べるために、ヒトＮＫ細胞上でのＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の分布を調べた。
【０１７１】
ヒトドナーから精製した新鮮なＮＫ細胞上でのフローサイトメトリーによって、ＮＫ細胞上でのＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９発現を判定した。ＮＫ集団は、ＣＤ３−ＣＤ５６＋細胞と判定した（抗ＣＤ３  Ｐａｃｉｆｉｃ  ｂｌｕｅ−ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ＃５５８１２４；抗ＣＤ５６−ＰＥ−Ｖｉｏ７７０−Ｍｉｌｔｅｎｙ  ＃１３０１００６７６）。抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体（クローン１９４２１１−ＩｇＧ１  ＡＰＣ−Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ＃ＦＡＢ１１３８１Ａ）、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体（クローン  １９１２４０−ＩｇＧ２Ａ  ＰＥ−Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃ＦＡＢ１１３９Ｐ）およびアイソタイプ対照ＩｇＧ１  ＡＰＣおよびＩｇＧ２Ａ  ＡＰＣを使用した。５０μＬの染色Ａｂ混合液とともにＮＫ細胞を３０分間温置し、染色緩衝液で２回洗浄し、Ｃａｎｔｏ  ＩＩ（ＨＴＳ）で蛍光を明らかにした。
【０１７２】
結果を図１で示す。代表的な結果を示す。ＭＦＩ：蛍光強度の平均。ＮＫ細胞のかなりの割合（約４４％）がＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方を発現し、このことから、ＮＫ細胞の大部分が、例えば腫瘍細胞上に存在するグリカンリガンドの機能として、これらの受容体のそれぞれ（または両方）によって阻害され得ることが示唆される。
【０１７３】
実施例２：抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体の作製
Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９は、シアル酸結合Ｎ末端Ｖ−セットＩｇドメインを有する特徴的なドメイン、２つのＣ２−セットＩｇドメイン、および１つの免疫受容体チロシンに基づく阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）および１つのＩＴＩＭ様モチーフを含有する細胞質内領域を共有し、両者とも、癌細胞により過剰発現されるシアル酸に結合し、それらが発現される免疫細胞における阻害受容体としてのそれらの機能により腫瘍監視に関与すると考えられる。しかし、ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃは、とりわけ進化的保存が低いことおよび多数の機序により急速に進化する配列を特徴とする。Ｓｉｇｌｅｃ−９は、ヒトＳｉｇｌｅｃ−７のＮ末端Ｖ−セットＩｇドメインと僅か約７７％の全体的なアミノ酸配列同一性を共有する。さらに、これらの２つのｓｉｇｌｅｃは、異なるシアル酸結合特異性を呈する。
【０１７４】
さらに、一般に２つの群、Ｓｉｇｌｅｃ−１、−２、−４および−１５から構成される第１のサブセットと、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−７、−８、−９、−１０、−１１、−１２、−１４および−１６を含むＳｉｇｌｅｃのＣＤ３３関連群とに分けられる、Ｓｉｇｌｅｃ−７および−９と配列類似性を共有する多くのｓｉｇｌｅｃもある。
【０１７５】
Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方に結合する抗体を得ることができるか否かを調べるために、マウスの免疫付与を行い、続いて細胞性Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９（細胞表面で発現されるタンパク質）への結合についてスクリーニングした。さらに、他のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃは異なる生物学的機能を有するため、他のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃに結合しない交差反応性Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体を得ることが可能か否かを評価するために、抗体をさらにスクリーニングした。
【０１７６】
Ａ．免疫付与＃１
抗ヒトＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９抗体を得るために、ヒトＳｉｇｌｅｃ−７  ＦｃおよびヒトＳｉｇｌｅｃ−９  Ｆｃ細胞外ドメイン組み換えタンパク質を用いてＢａｌｂ／ｃマウスに免疫付与を行った。マウスに対して、３０μｇのＳｉｇｌｅｃ−７  Ｆｃタンパク質、３０μｇのヒトＳｉｇｌｅｃ−９  Ｆｃタンパク質および完全フロインドアジュバントの乳液での初回免疫付与を腹腔内に１回行った。マウスに対して、３０μｇのＳｉｇｌｅｃ−７  Ｆｃタンパク質、３０μｇのヒトＳｉｇｌｅｃ−９  Ｆｃタンパク質および完全フロインドアジュバントの乳液で２回目の免疫付与を腹腔内に行った。および最後にマウスに対して、７．５μｇのＳｉｇｌｅｃ−７  Ｆｃタンパク質および７．５μｇのヒトＳｉｇｌｅｃ−９  Ｆｃタンパク質で静脈内に免疫促進注射を行った。免疫促進注射から３日後に免疫脾臓細胞をＸ６３．Ａｇ８．６５３不死化Ｂ細胞と融合させ、照射した脾臓細胞の存在下で培養した。ハイブリドーマを半固体メチルセルロース含有培地に播種し、ｃｌｏｎｅｐｉｘ２装置（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いて増殖クローンを採取した。
【０１７７】
一次スクリーニング：一次スクリーニング：親およびｈｕＳｉｇｌｅｃ−７およびｈｕＳｉｇｌｅｃ−９−発現ＣＨＯ細胞株を用いて、フローサイトメトリーによって一次スクリーニングにおいて増殖クローンの上清（ＳＮ）を試験した。０．５μＭ  ＣＦＳＥを用いてＨｕＳｉｇｌｅｃ−７−発現ＣＨＯ細胞を染色した。フローサイトメトリースクリーニングのために、全細胞を等しく混合し、ａｌｅｘａ  ｆｌｕｏｒ６４７で標識されたヤギ抗マウスポリクローナル抗体（ｐＡｂ）によって上清中の反応抗体の存在を明らかにした。２０種類の抗体が、ヒトＳｉｇｌｅｃ−７および／またはＳｉｇｌｅｃ−９に結合することが分かった。１３種類がキメラヒトＩｇＧ１抗体として産生され、それらのうちの５種類がＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方に結合することが分かった。重鎖Ｎ２９７Ｑ（Ｋａｂａｔ  ＥＵ付番）突然変異があり、その結果Ｎ結合グリコシル化を欠き、Ｆｃγ受容体への結合が減少した抗体も産生され、さらなる実験で使用した。
【０１７８】
使用されるＳｉｇｌｅｃポリペプチドに対するアミノ酸配列およびＧｅｎｂａｎｋ参照番号を以下の表１で示す。
【０１７９】
図２は、Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９発現細胞株上に存在するような、ヒトＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方にそれぞれが結合する、ｍＡｂ  ３Ａ１１、１Ｈ９および２Ｂ４についてのＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９への結合の代表的な結果を示す。
【０１８０】
Ｂ．免疫付与＃２および＃３
さらなるＳｉｇｌｅｃ７／９交差反応抗体を見出し得るか否かを評価するために、さらなる一連の免疫付与を行った。一次および二次スクリーニングは次のとおりである。半固体メチルセルロース含有培地のかわりにＰ９６において培地中にハイブリドーマを播種したことを除き、第１回目の免疫付与に記載のものと同じプロトコールに従い、２回のさらなる免疫付与を行った。３０種類を超える抗体がヒトＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９の両方と結合することが分かった。
【０１８１】
【表３】
2017532025.tif 000007
【０１８２】
【表４】
2017532025.tif 000008
【０１８３】
実施例３：ＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃへの結合
Ｓｉｇｌｅｃ−７および−９と配列類似性を共有するＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃはまた一般に、２つの群、Ｓｉｇｌｅｃ−１、−２、−４および−１５から構成される第１のサブセットと、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−７、−８、−９、−１０、−１１、−１２、−１４および−１６を含むＳｉｇｌｅｃのＣＤ３３関連群とに分けられる。他のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃは異なる生物学的機能を有し、および／または腫瘍監視に関与しないと考えられるため、他のＣＤ３３関連Ｓｉｇｌｅｃに結合しない交差反応性Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体を得ることが可能か否かを評価するために抗体をさらにスクリーニングした。
【０１８４】
Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１および−１２を発現する細胞を作製し、細胞への結合についてフローサイトメトリーによって、交差反応性Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体の代表的なサブセットを試験した。使用されるＳｉｇｌｅｃポリペプチドに対するアミノ酸配列およびＧｅｎｂａｎｋ参照番号を以下の表１で示す。
【０１８５】
簡潔に述べると、（Ｓｉｇｌｅｃのうちの１つを発現する）ＨｕＳｉｇｌｅｃ発現ＣＨＯ細胞株を使用した。フローサイトメトリースクリーニングのために、各ＨｕＳｉｇｌｅｃ発現ＣＨＯ細胞株（ＣＨＯ  ＨｕＳｉｇｌｅｃ−３細胞株、ＣＨＯ  ＨｕＳｉｇｌｅｃ−５細胞株、ＣＨＯ  ＨｕＳｉｇｌｅｃ−６細胞株、ＣＨＯ  ＨｕＳｉｇｌｅｃ−８細胞株、ＣＨＯ  ＨｕＳｉｇｌｅｃ−１０細胞株、ＣＨＯ  ＨｕＳｉｇｌｅｃ−１１細胞株、ＣＨＯ  ＨｕＳｉｇｌｅｃ−１２細胞株）とともに抗体を１時間温置し、染色緩衝液中で２回洗浄し、ＰＥで標識したヤギ抗マウスポリクローナル抗体（ｐＡｂ）により明らかにし、染色緩衝液で２回洗浄し、ＨＴＦＣサイトメーター上で染色を得て、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析した。
【０１８６】
結果から、交差反応性Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体の殆どがＳｉｇｌｅｃの何れにも、すなわちＳｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１または−１２に結合しなかったことが示された。しかし、交差反応性Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体のうちの少数がＳｉｇｌｅｃ−７および−９に加えてＳｉｇｌｅｃ−１２またはＳｉｇｌｅｃ−６に結合した。代表的なｍＡｂ  ３Ａ１１、２Ｂ４および１Ｈ９のうち、Ｓｉｇｌｅｃ−３、−５、−６、−８、−１０、−１１または−１２の何れかに結合したものはなかった。
【０１８７】
実施例４：Ｓｉｇｌｅｃ−７／９のＳｉｇｌｅｃ活性中和能の評価
ＮＫ細胞活性化アッセイにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ活性の阻止について、第１および第２の免疫付与において試験した抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体を試験した。２４時間でのＣＤ１３７発現上昇は、ＮＫ細胞を含む一部のリンパ球の活性化と相関する（Ｋｏｈｒｔら（２０１１）Ｂｌｏｏｄ  １１７（８）：２４２３−２４３２）。フローサイトメトリーによるＮＫ細胞上でのＣＤ１３７発現の分析によって、ＮＫ細胞活性化における抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体の効果および標的細胞の脱シアル化を判定した。
【０１８８】
エフェクター細胞は、ドナーから精製した新鮮ＮＫ細胞であった。標的細胞は、Ｅ：Ｔ比１／１としてのＲａｍｏｓ細胞株（野生型またはノイラミニダーゼ処理）またはＫ５６２であった。読み出しは２４時間でＣＤ１３７であった。馴化ＮＫ細胞対Ｒａｍｏｓ（Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９リガンド＋）において、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体３Ａ１１（ＣＨＳ２−Ｍ−Ｓ９７Ａ−３Ａ１１とも呼ばれる、上記で論じられるようなＳ２９７Ｑ突然変異を有するヒトＩｇＧ１アイソタイプ）抗体またはＳ２９７Ｑ突然変異を有するアイソタイプ対照ヒトＩｇＧ１（ＣＨＳ２と呼ばれる）の存在下で、８名のドナーを試験した。馴化ＮＫ細胞対脱シアル化Ｒａｍｏｓ（Ｓｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９リガンド−）において４名のドナーを試験した。対照は、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９  ３Ａ１１抗体またはアイソタイプ対照ＣＨＳ２存在下でＮＫ細胞のみ、およびＮＫ細胞対ＮＫ活性化陽性対照細胞株としてのＫ５６２であった。重鎖可変ドメインアミノ酸配列が配列番号３で示され、軽鎖可変ドメインアミノ酸配列が配列番号４で示される抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９  ３Ａ１１抗体を１０μｇ／ｍＬの最終濃度で使用した。２５ｍＵノイラミニダーゼ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ−＃１１０８０７２５００１）を用いて標的細胞を２時間脱シアル化した。ノイラミニダーゼ処理前後に脱シアル化を調節した。１０μｇ／ｍＬでヒトＳｉｇｌｅｃ−７  Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ＃１１３８−ＳＬ−０５０）およびヒトＳｉｇｌｅｃ−９  Ｆｃ組み換えタンパク質（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ＃１１３９−ＳＬ−０５０）とともに染色緩衝液（ＳＢ）中で標的細胞を１時間温置し、ＳＢで２回洗浄し、ヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）ＰＥ（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ＃ＩＭ０５５１）とともに３０分間温置し、ＳＢで２回洗浄し、Ｃａｎｔｏ  ＩＩ（ＨＴＳ）で蛍光を明らかにした。完全ＲＰＭＩ中、２００μＬ最終／ウェルで９６ＵウェルプレートでＣＤ１３７アッセイを行った。抗体、標的細胞およびエフェクター細胞を混合し、３００ｇで１分間回転させ、３７℃で２４時間温置し、５００ｇで３分間回転させ、染色緩衝液（ＳＢ）で２回洗浄し、５０μＬの染色Ａｂ  ｍｉｘ（抗ＣＤ３  Ｐａｃｉｆｉｃ  ｂｌｕｅ−ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ＃５５８１２４；抗ＣＤ５６−ＰＥ−Ｖｉｏ７７０−Ｍｉｌｔｅｎｙｉ＃１３０１００６７６；抗ＣＤ１３７−ＡＰＣ−Ｍｉｌｔｅｎｙｉ＃１３００９４８２１）を添加し、３００ｇで３０分間温置し、ＳＢで２回洗浄し、ＳＢでペレットを再懸濁し、Ｃａｎｔｏ  ＩＩ（ＨＴＳ）で蛍光を明らかにした。
【０１８９】
図３は、標的細胞または脱シアル化標的細胞の存在下、および１０μｇ／ｍＬの飽和用量の、３Ａ１１抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９抗体またはアイソタイプ対照ＣＨＳ２抗体の存在下での、ＮＫ細胞上のＣＤ１３７  ＦＡＣＳ読み出しを示す。各点は、健常ボランティアからのＮＫを表す。３Ａ１１抗体は、標的細胞株Ｒａｍｏｓ存在下でＮＫ細胞上でのＣＤ１３７発現の上昇を誘導した。３Ａ１１抗体は、標的細胞株の非存在下でＮＫ細胞上でのＣＤ１３７発現に対して効果がなかった。同様に、３Ａ１１抗体は、細胞傷害性アッセイにおいてＲａｍｏｓ標的細胞株の溶解増加を誘導した。２名のドナー（Ｄ２およびＤ３）で、脱シアル化Ｒａｍｏｓ標的細胞を用いて、ＮＫ細胞上でのＣＤ１３７発現の誘導も観察された。２名の他のドナー（Ｄ１およびＤ４）に対して、３Ａ１１はＣＤ１３７発現の上昇を誘導したが、脱シアル化標的細胞では誘導せず、このことから、３Ａ１１はＳｉｇｌｅｃ−７およびＳｉｇｌｅｃ−９とシアル酸リガンドとの間の相互作用を阻止するが、シアル酸不含リガンド、すなわち他の未知のリガンド（シアル酸と独立）との相互作用も阻止することが示唆される。３種類のさらなる抗体（１種類の交差反応性抗Ｓｉｇｌｅｃ−７／９および２種類の抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体）は、ＣＤ１３７アッセイにおいてＣＤ１３７発現の弱い上昇も誘導した。これらの結果から、本発明者らは、３Ａ１１がＳｉｇｌｅｃ−７／−９阻害シグナルを阻止し、ＮＫ活性化および細胞傷害性を向上させると結論付けることができる。
【０１９０】
本明細書中で引用される、刊行物、特許出願および特許を含む全ての参考文献は、本明細書中の他の箇所でなされる特定の文献の何れかの個別に提供される組み込みにかかわらず、（法律によって許される最大の限度で）各参考文献が個々におよび具体的に参照により組み込まれることが示され、本明細書中でその全体において記載されているかのように、同定度に参照により全体的に本明細書に組み込まれる。
【０１９１】
「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」という語および本発明を記載する文脈中の同様の指示対象の使用は、本明細書中で別段の指示がない限り、または文脈に明らかに矛盾しない限り、単数および複数の両方を包含するものと解釈すべきである。
【０１９２】
別段の指定がない限り、本明細書中で提供される全ての厳密値は、対応する近似値の代表である（例えば、特定の要因に関して提供される全ての代表的厳密値または測定値は、必要に応じて、「約」により修飾される対応する近似測定値も提供するとみなされ得る）。
【０１９３】
１つまたは複数の要素に関する「含む」、「有する」、「包含する」または「含有する」などの語を使用した本発明の何らかの態様または実施形態の本明細書中での記述は、別段の指定がない限り、または内容に明らかに矛盾しない限り、その特定の１つまたは複数の要素「からなる」、「から基本的になる」またはそれを「実質的に含む」本発明の同様の態様または実施形態に対する支持を提供するものとする（例えば、特定の要素を含む場合の本明細書中に記載の組成物は、別段の指定がない限り、または内容に明らかに矛盾しない限り、その要素からなる組成物も記載するものとしても理解されるべきである）。
【０１９４】
本明細書中で提供されるあらゆる実施例または代表的な語（例えば「など」）の使用は、本発明を単により良好に明らかにするものとして意図され、別段の主張がない限り、本発明の範囲において限定を提起しない。本明細書中のいかなる語も、何らかの請求項に記載されていない要素を本発明の実施に必須であるものとして示すものと解釈すべきではない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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