(57)【要約】本開示は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合し、ＧＣＣを発現する癌細胞を結合することができる、放射性標識化合物を提供する。例示の化合物は、放射性原子を結合することができるキレート部分と、ＧＣＣを結合することができるペプチドと、この２つを連結するリンカー部分とを含む。本開示はまた、本明細書に記載の化合物を用いた癌の検出及び治療方法も提供する。本開示は、放射性標識を用いて該ペプチド‐リンカー‐キレート部分化合物を標識する方法も提供する。また、本開示は、ＧＣＣ標的化治療を用いて患者を治療できるかどうかを判定することを含む、腫瘍をイメージングする化合物を用いる方法を提供する。
2017503763.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物であって、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドであり、前記ペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を有するものと、（ｂ）放射性原子を結合することができるキレート部分であり、前記キレート部分は、大環状分子（例えばＯ及び／またはＮ）、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、１つ以上のアミン、１つ以上のエーテル、１つ以上のカルボン酸、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、またはデスフェリオキサミンを含むものと、（ｃ）前記ペプチドの前記アミノ酸配列のアミノ末端を前記該キレート部分に共有結合的に取り付けるリンカー部分とを含み、前記化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる、前記化合物。
【請求項２】
前記ペプチドは、前記配列番号２のアミノ酸配列のＧＣＣ結合部分を含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記ペプチドは、前記配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ジスルフィド結合は、Ｃｙｓ５〜Ｃｙｓ１０、Ｃｙｓ６〜Ｃｙｓ１４、及びＣｙｓ９〜Ｃｙｓ１７を連結し、前記アミノ酸は天然の大腸菌エンテロトキシンのその位置に従って番号付けされる、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列から構成される、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列から構成される、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記キレート部分は、大環状分子を含む、請求項１乃至６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
前記キレート部分は、大環状分子である、請求項１乃至７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
前記キレート部分は、ＤＯＴＡまたはＮＯＴＡである、請求項１乃至７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
前記キレート部分は、ＤＯＴＡまたはＮＯＴＡである、請求項１乃至６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
前記リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基を含む、請求項１乃至１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
前記リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基である請求項１乃至６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３】
前記リンカー部分は、アルキレン（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはＣ１０などのＣ１〜Ｃ１０アルキレン）を含む、請求項１乃至１１のいずれかに記載の化合物。
【請求項１４】
前記リンカー部分は、ＯまたはＳを含む、請求項１乃至１１及び請求項１３のいずれかに記載の化合物。
【請求項１５】
前記リンカー部分は、尿素、チオ尿素、及びベンジルのうちの１つ以上を含む、請求項１乃至１１、請求項１３及び請求項１４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６】
前記化合物は、２，２’，２’’，２’’’‐（（Ｓ）‐２‐（４‐（３‐（６‐（（（３Ｓ，６Ｒ，９Ｓ，１５Ｒ，２０Ｒ，２３Ｓ，２６Ｓ，２９Ｒ，３２Ｒ，３７Ｒ，４０Ｓ，４５ａＳ）‐４０‐（２‐アミノ‐２‐オキソエチル）‐１５‐（（（Ｓ）‐１‐カルボキシ‐２‐（４‐ヒドロキシフェニル）エチル）カルバモイル）‐２６‐（２‐カルボキシエチル）‐２３‐イソブチル‐３，９‐ジメチル‐１，４，７，１０，１３，２２，２５，２８，３１，３８，４１，４７‐ドデカオキソテトラコンタヒドロ‐１Ｈ‐３７，２０‐（エピミノメタノ）‐６，２９‐（メタノジチオメタノ）ピロロ［２，１‐ｓ］［１，２，２７，２８，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，３２，３５，３８，４１］テトラチアウンデカアザシクロトリテトラコンチン‐３２‐イル）アミノ）‐６‐オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）‐１，４，７，１０‐テトラアザシクロドデカン‐１，４，７，１０‐テトライル）四酢酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物は、式（ＶＩ）の構造を有する：
【化１２】
2017503763.tif 000034
請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
前記キレート部分に結合された放射性原子をさらに含む、請求項１乃至１７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１９】
前記放射性原子は、陽電子放出体である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
前記放射性原子は、ガリウム６８である請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
前記放射性原子は、アルファ粒子放出体（例えば２１３Ｂｉまたは２２５Ａｃ）である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２２】
前記放射性原子は、ベータ粒子放出体（例えば９０Ｙまたは１７７Ｌｕ）である、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
前記放射性原子は、ガンマ放出体である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２４】
前記放射性原子は、１１１Ｉｎである、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
約２０〜４０ＭＢｑ／ｎｍｏｌ（例えば２５〜３３ＭＢｑ／ｎｍｏｌ）の比放射能を有する、請求項１８乃至２４のいずれかに記載の化合物。
【請求項２６】
約２９ＭＢｑ／ｎｍｏｌの比放射能を有する、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
前記化合物は式（ＶＩａ）の構造を有する：
【化１３】
2017503763.tif 000035
請求項１８に記載の化合物。
【請求項２８】
請求項１乃至１７のいずれか一項に記載の複数の化合物を含む組成物であって、前記複数の化合物のうちの少なくとも１つの化合物は放射性原子に結合され、かつ、前記複数の化合物のうちの少なくとも１つの化合物は放射性原子に結合されていない、前記組成物。
【請求項２９】
前記放射性原子は、陽電子放出原子である、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記陽電子放出原子は、ガリウム６８である、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記複数の化合物の少なくとも１つは、式（ＶＩａ）の構造を有し、前記複数の化合物の少なくとも１つは式（ＶＩ）の構造を有する、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３２】
ガリウム６８に結合された化合物と結合されていない化合物との比が、約１：１００〜１：１０，０００である、請求項２８乃至３１のいずれかに記載の組成物。
【請求項３３】
ガリウム６８に結合された分子と結合されていない分子との比が、約１：１，０００〜１：２，０００である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
ガリウム６８に結合された分子と結合されていない分子との比が、約１：１，５００である、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドであり、前記ペプチドは、アミノ末端及び遊離カルボキシ末端を有するもの、（ｂ）陽電子放出原子を結合することができるキレート部分、（ｃ）前記ペプチドの前記アミノ酸配列のアミノ末端を前記キレート部分に共有結合的に取り付けるリンカー部分、及び（ｄ）陽電子放出原子（例えばガリウム６８）を含む、化合物であって、前記化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる、前記化合物。
【請求項３６】
前記ペプチドは、前記配列番号２のアミノ酸配列のＧＣＣ結合部分を含む、請求項３５に記載の化合物。
【請求項３７】
前記ペプチドは、前記配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項３５または３６に記載の化合物。
【請求項３８】
ジスルフィド結合は、Ｃｙｓ５〜Ｃｙｓ１０、Ｃｙｓ６〜Ｃｙｓ１４、及びＣｙｓ９〜Ｃｙｓ１７を連結し、前記アミノ酸は、天然の大腸菌エンテロトキシンのその位置に従って番号付けされる請求項３７に記載の化合物。
【請求項３９】
前記ペプチドは、前記配列番号２のアミノ酸配列から構成される、請求項３５に記載の化合物。
【請求項４０】
前記ペプチドは前記配列番号１のアミノ酸配列から構成される、請求項３５に記載の化合物。
【請求項４１】
前記キレート部分は、大環状分子を含む、請求項３５乃至４０のいずれかに記載の化合物。
【請求項４２】
前記キレート部分は、大環状分子である、請求項３５乃至４１のいずれかに記載の化合物。
【請求項４３】
前記キレート部分は、ＤＯＴＡまたはＮＯＴＡを含む、請求項３５乃至４１のいずれかに記載の化合物。
【請求項４４】
前記キレート部分は、ＤＯＴＡまたはＮＯＴＡである、請求項３５乃至４０のいずれかに記載の化合物。
【請求項４５】
前記キレート部分は、大環状分子（例えばＯ及び／またはＮ）、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、１つ以上のアミン、１つ以上のエーテル、１つ以上のカルボン酸、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、またはデスフェリオキサミンを含む、請求項３５乃至４１のいずれかに記載の化合物。
【請求項４６】
前記リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基を含む、請求項３５乃至４５のいずれかに記載の化合物。
【請求項４７】
前記リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基を含む、請求項３５乃至４０のいずれかに記載の化合物。
【請求項４８】
前記リンカー部分は、アルキレン（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはＣ１０などのＣ１〜Ｃ１０アルキレン）を含む、請求項３５乃至４６のいずれかに記載の化合物。
【請求項４９】
前記リンカー部分は、ＯまたはＳを含む、請求項３５乃至４６及び請求項４８のいずれかに記載の化合物。
【請求項５０】
前記リンカー部分は、尿素またはチオ尿素を含む、請求項３５乃至４６、請求項４８及び請求項４９のいずれかに記載の化合物。
【請求項５１】
前記リンカー部分は、ベンジル基を含む、請求項３５乃至４６及び請求項４８乃至５０のいずれかに記載の化合物。
【請求項５２】
前記化合物は、２，２’，２’’，２’’’‐（（Ｓ）‐２‐（４‐（３‐（６‐（（（３Ｓ，６Ｒ，９Ｓ，１５Ｒ，２０Ｒ，２３Ｓ，２６Ｓ，２９Ｒ，３２Ｒ，３７Ｒ，４０Ｓ，４５ａＳ）‐４０‐（２‐アミノ‐２‐オキソエチル）‐１５‐（（（Ｓ）‐１‐カルボキシ‐２‐（４‐ヒドロキシフェニル）エチル）カルバモイル）‐２６‐（２‐カルボキシエチル）‐２３‐イソブチル‐３，９‐ジメチル‐１，４，７，１０，１３，２２，２５，２８，３１，３８，４１，４７‐ドデカオキソテトラコンタヒドロ‐１Ｈ‐３７，２０‐（エピミノメタノ）‐６，２９‐（メタノジチオメタノ）ピロロ［２，１‐ｓ］［１，２，２７，２８，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，３２，３５，３８，４１］テトラチアウンデカアザシクロトリテトラコンチン‐３２‐イル）アミノ）‐６‐オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）‐１，４，７，１０‐テトラアザシクロドデカン‐１，４，７，１０‐テトライル）四酢酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５３】
前記放射性原子は、ガリウム６８である、請求項３５乃至５２のいずれかに記載の化合物。
【請求項５４】
約２０〜４０ＭＢｑ／ｎｍｏｌ（例えば２５〜３３ＭＢｑ／ｎｍｏｌ）の比放射能を有する、請求項３５乃至５３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５５】
約２９ＭＢｑ／ｎｍｏｌの比放射能を有する、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５６】
前記化合物は、式（ＶＩａ）の構造を有する：
【化１４】
2017503763.tif 000036
請求項３５に記載の化合物。
【請求項５７】
（ａ）請求項１乃至１７のいずれか一項に記載の化合物と、（ｂ）エタノールと、（ｃ）酢酸ナトリウムと、（ｄ）水とを含む、組成物であって、前記組成物は、ｐＨ約３〜６を有する。
【請求項５８】
前記化合物は、請求項６ｂの該化合物である、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
前記エタノールは、約１０〜２５％で存在する、請求項５７または５８に記載の組成物。
【請求項６０】
前記エタノールは、約２０〜２５％で存在する、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
約３．８のｐＨを有する、請求項５７乃至６０のいずれかに記載の組成物。
【請求項６２】
スクロース、氷酢酸、ポリソルベート８０、プルロニックＦ‐６８のうちの１つ以上をさらに含む、請求項５７乃至６１のいずれかに記載の組成物。
【請求項６３】
前記化合物は、約０．０１〜０．０４μｇ／ｍｌの濃度を有する、請求項５７乃至６２のいずれかに記載の組成物。
【請求項６４】
前記化合物は、水溶液中で、約０．０１〜０．０４μｇ／ｍｌの濃度を有する、請求項１乃至１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６５】
前記濃度は、約０．０２７μｇ／ｍｌである、請求項６４に記載の組成物。
【請求項６６】
請求項５７乃至６５のいずれかに記載の前記組成物を含む容器。
【請求項６７】
前記組成物は、約２ｍｌの量を有する、請求項６６に記載の容器。
【請求項６８】
請求項６６または６７に記載の前記容器と、前記化合物を放射性物質と接触させるのに適したカセットとを含む、キット。
【請求項６９】
前記放射性物質を用いて前記化合物を放射性標識するための説明書と、前記化合物を対象に投与する方法の説明書とをさらに含む、
請求項６８に記載のキット。
【請求項７０】
（ａ）請求項１８乃至５６のいずれか一項に記載の化合物と、（ｂ）エタノールと、（ｃ）塩化ナトリウムと、（ｄ）水とを含む、組成物。
【請求項７１】
前記エタノールは、約５〜２５％で存在する、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
前記エタノールは、約５〜２０％で存在する、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７３】
前記エタノールは、約５〜１５％で存在する、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７４】
前記エタノールは、約８％で存在する、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７５】
前記塩化ナトリウムは、約０．３〜１．４％で存在する、請求項７０乃至７４のいずれか一項の記載の組成物。
【請求項７６】
前記塩化ナトリウムは、約０．４〜１．０％で存在する、請求項７０乃至７４のいずれか一項の記載の組成物。
【請求項７７】
前記塩化ナトリウムは、約０．７〜１．０％で存在する、請求項７０乃至７４のいずれか一項の記載の組成物。
【請求項７８】
前記塩化ナトリウムは、約０．８〜０．９％で存在する、請求項７０乃至７４のいずれか一項の記載の組成物。
【請求項７９】
約８〜１１ｍｌの量を有する、請求項７０乃至７８のいずれか一項の記載の組成物。
【請求項８０】
約９〜１０ｍｌの量を有する、請求項７０乃至７８のいずれか一項の記載の組成物。
【請求項８１】
約９．５ｍｌの量を有する、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
約５．１〜７．６ｍＣｉの放射能を含む、請求項７０乃至８１のいずれか一項の記載の組成物。
【請求項８３】
約１２．７３ｍＣｉ以上の放射能を含む、請求項７０乃至８１のいずれか一項の記載の組成物。
【請求項８４】
約２０〜７０μｇの前記化合物を含む、請求項７０乃至８３のいずれか一項の記載の組成物。
【請求項８５】
約５５．０μｇの前記化合物を含む、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８６】
請求項１８乃至２７または請求項３５乃至５６のいずれか一項に記載の化合物と、医薬的に許容される賦形剤とを含む、組成物。
【請求項８７】
請求項５７乃至８６のいずれかに記載の前記組成物を含む容器。
【請求項８８】
バイアルである、請求項８７に記載の容器。
【請求項８９】
対象におけるＧＣＣ発現細胞を定量する方法であって、（ａ）請求項１８乃至２０、請求項２３乃至２７または請求項３５乃至５６のいずれかに記載の前記化合物、あるいは請求項７０乃至８６のいずれかに記載の前期組成物を前記対象に静注すること、及び（ｂ）前記対象における放射能分布を可視化することを含む、前記方法。
【請求項９０】
前記化合物は、ガリウム６８に結合された請求項１７に記載の化合物である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記放射能は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）によって可視化される、請求項８９または９０に記載の方法。
【請求項９２】
投与される前記化合物は、約４．０〜６．０（±１０％）ｍＣｉを有する、請求項８９乃至９１のいずれかに記載の方法。
【請求項９３】
前記化合物は、約４０〜４６uｇの用量で投与される、請求項８９乃至９２のいずれかに記載の方法。
【請求項９４】
前記化合物は、約４３．４uｇの用量で投与される、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
前記対象は、ヒトである、請求項８９乃至９４のいずれかに記載の方法。
【請求項９６】
前記対象は、ＧＣＣ発現を伴う障害に罹患している、請求項８９乃至９５のいずれかに記載の方法。
【請求項９７】
前記障害は、癌である、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記障害は、固形腫瘍、軟組織腫瘍、転移性病変、肉腫、腺癌、または癌腫から選択される、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記癌は、早期または後期ステージの癌、あるいはステージ０、１、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、及びＩＶのいずれかの癌である、請求項９７または９８の方法。
【請求項１００】
前記障害は、大腸癌、胃癌、食道癌、胃食道接合部の癌、膵癌、肺癌、小腸癌、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、及び神経内分泌腫瘍、またはそれらの転移から選択される、請求項９７乃至９９のいずれかに記載の方法。
【請求項１０１】
前記大腸癌は、大腸腺癌、大腸平滑筋肉腫、大腸リンパ腫、大腸メラノーマ、または大腸神経内分泌腫瘍である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記胃癌は、胃腺癌、胃肉腫、または胃リンパ腫である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
前記食道癌は、食道扁平上皮癌または食道腺癌である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０４】
前記肺癌（例えば非小または小細胞肺癌）は、扁平上皮癌または腺癌である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０５】
前記神経内分泌腫瘍は、消化管神経内分泌腫瘍または気管支肺神経内分泌腫瘍である、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０６】
前記投与された化合物に伴う膀胱毒性を軽減する物質を投与することをさらに含む、請求項８９乃至１０５のいずれかに記載の方法。
【請求項１０７】
膀胱毒性を軽減する前記物質は、尿排泄量を増大させる、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
膀胱毒性を軽減する前記物質は、生食水または水である、請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０９】
前記患者における放射能分布を表す画像に対して部分容積補正を行うことをさらに含む、請求項８９乃至１０８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１０】
ＧＣＣ標的化治療剤に対する癌細胞の感受性を判定する方法であって、請求項８９乃至１０９のいずれかに記載の方法に従って前記対象におけるＧＣＣ発現細胞を定量することを含み、前記癌細胞への前記放射性標識の結合が、前記ＧＣＣ標的化治療剤に対する感度を示す、前記方法。
【請求項１１１】
対象がＧＣＣ標的化療法への潜在的候補であるかどうかを評価する方法であって、請求項８９乃至１０９のいずれかに記載の方法に従って前記対象におけるＧＣＣ発現細胞を定量することを含み、前記癌細胞への前記放射性標識の結合が、前記対象がＧＣＣ標的化療法への潜在的候補であることを示す、前記方法。
【請求項１１２】
対象におけるＧＣＣ発現細胞を検出するための、請求項１８乃至２０、請求項２３乃至２７、または請求項３５乃至５６のいずれかに記載の前記化合物あるいは請求項７０乃至８６のいずれかに記載の前記組成物の使用。
【請求項１１３】
対象におけるＧＣＣ発現細胞を検出するための組成物の製造における、請求項１８乃至２０、請求項２３乃至２７、または請求項３５乃至５６のいずれかに記載の前記化合物あるいは請求項７０乃至８６のいずれかに記載の前記組成物の使用。
【請求項１１４】
１つ以上のＧＣＣ発現細胞によって特徴付けられる障害を有する対象を治療する方法であって、（ａ）請求項８９乃至１０９のいずれかに記載の方法に従って前記対象におけるＧＣＣ発現細胞を定量すること、及び（ｂ）前記対象がＧＣＣを発現する１つ以上の細胞を有する場合に、ＧＣＣ標的化治療剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項１１５】
前記ＧＣＣ標的化治療剤は、（ａ）表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）と表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）とを含む、抗ＧＣＣ抗体分子、（ｂ）表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）と表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）とを含む抗ＧＣＣ抗体との結合に競合することができる抗ＧＣＣ抗体分子、及び（ｃ）表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）と表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む抗ＧＣＣ抗体と同じエピトープに結合することができる抗ＧＣＣ抗体分子から選択される抗ＧＣＣ抗体分子を含む、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ＧＣＣ標的化治療剤は、（ａ）配列番号５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３を含む抗ＧＣＣ抗体分子、（ｂ）配列番号５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む抗ＧＣＣ抗体との結合に競合することができる抗ＧＣＣ抗体分子及び（ｃ）配列番号５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３を含む抗ＧＣＣ抗体と同じエピトープに結合することがきできる抗ＧＣＣ抗体分子から選択される抗ＧＣＣ抗体分子を含む、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１７】
前記ＧＣＣ標的化治療は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１１４乃至１１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１１８】
前記ＧＣＣ標的化治療剤は、抗体薬剤コンジュゲートである、請求項１１４乃至１１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１１９】
前記抗体分子は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）と結合される、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
前記抗体薬剤コンジュゲートは、プロテアーゼ切断可能なリンカーを含む、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２１】
前記抗体薬剤コンジュゲートは、以下の式Ｉ‐５：
【化１５】
2017503763.tif 000037
または薬学的に許容される塩を含む（式中、Ａｂは、抗ＧＣＣ抗体分子、あるいはその抗原結合断片であり、ｍは１〜８の整数（例えば３〜５、４）である）、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２２】
前記ＧＣＣ標的化治療剤は：
以下の式Ｉ‐５：
【化１６】
2017503763.tif 000038
または薬学的に許容される塩を含む（式中、Ａｂは、配列番号５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３を含む抗ＧＣＣ抗体分子、あるいはその抗原結合断片であり、ｍは１〜８の整数（例えば３〜５、４）である）、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１２３】
前記ＧＣＣ標的化治療剤は、ＭＬＮ０２６４である、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１２４】
前記障害は、癌である、請求項１１４乃至１２３のいずれかに記載の方法。
【請求項１２５】
前記障害は、胃癌、膵癌、食道癌、胃食道接合部の癌、または大腸癌である、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
請求項２１または２２のいずれか一項に記載の化合物の治療有効量を、それを必要とする患者に投与することを含む、１つ以上のＧＣＣ発現細胞によって特徴付けられる障害を治療する方法。
【請求項１２７】
前記障害は、癌である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記障害は、固形腫瘍、軟組織腫瘍、転移性病変、肉腫、腺癌、または癌腫から選択される、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
前記癌は、早期または後期ステージの癌、あるいはステージ０、１、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、及びＩＶのいずれかの癌である、請求項１２７または１２８に記載の方法。
【請求項１３０】
前記障害は、大腸癌、胃癌、食道癌、胃食道接合部の癌、小腸癌、膵癌、肺癌、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、及び神経内分泌腫瘍、またはそれらの転移から選択される、請求項１２７乃至１２９のいずれかに記載の方法。
【請求項１３１】
前記大腸癌は、大腸腺癌、大腸平滑筋肉腫、大腸リンパ腫、大腸メラノーマ、または大腸神経内分泌腫瘍である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
前記胃癌は、胃腺癌、胃肉腫、または胃リンパ腫である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３３】
前記食道癌は、食道扁平上皮癌または食道腺癌である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３４】
前記肺癌は、扁平上皮癌またはａｄｉｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａである、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３５】
前記神経内分泌腫瘍は、消化管神経内分泌腫瘍または気管支肺神経内分泌腫瘍である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３６】
前記患者に追加の治療形態を投与することをさらに含む、請求項１２６乃至１３５のいずれかに記載の方法。
【請求項１３７】
前記追加の治療形態は、放射線療法である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３８】
前記追加の治療形態は、第２の治療用分子である、請求項１３６に記載の方法。
【請求項１３９】
前記第２の治療用分子は、ＤＮＡ損傷剤である、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
前記ＤＮＡ損傷剤は、トポイソメラーゼＩ阻害薬、トポイソメラーゼＩＩ阻害薬、アルキル化剤、アルキル化様剤、アントラサイクリン、ＤＮＡ干渉物質、ＤＮＡ副溝アルキル化剤、及び代謝拮抗剤から選択される、請求項１３９に記載の方法。
【請求項１４１】
前記ＤＮＡ損傷剤は、イリノテカン、トポテカン、及びカンプトテシンから選択されるトポイソメラーゼＩ阻害薬である、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４２】
前記ＤＮＡ損傷剤は、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、サトラプラチン、及びトリプラチンから選択されるアルキル化様剤である、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４３】
前記ＤＮＡ損傷剤は、フルオロウラシル（５‐ＦＵ）、フロクスウリジン（５‐ＦＵｄＲ）、メトトレキサート、ロイコボリン、ヒドロキシウレア、チオグアニン（６‐ＴＧ）、メルカプトプリン（６‐ＭＰ）、シタラビン、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、クラドリビン（２‐ＣＤＡ）、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、ｃａｐｅｃｉｔｉｂｉｎｅ、アザチオプリン、シトシン、メトトレキサート、トリメトプリム、ピリメタミン、及びペメトレキセドから選択される代謝拮抗剤である、請求項１４０に記載の方法。
【請求項１４４】
前記患者は、約５０〜１００、１００〜２００、２００〜５００、５００〜１０００、１０００〜２０００、２０００〜５０００、または５０００〜１００００μＣｉの線量を受ける、請求項１２６乃至１４３のいずれかに記載の方法。
【請求項１４５】
前記患者に腎保護剤を投与することをさらに含む、請求項１２６乃至１４４のいずれかに記載の方法。
【請求項１４６】
前記腎保護剤は、クリニソル、リジン、リジン／アルギニン、ゲロフシン、またはアミノフォスチンのうちの１つ以上を含む、請求項１４５に記載の方法。
【請求項１４７】
ベースラインから測定して、腫瘍増殖が倍数変化で低減される、請求項１２６乃至１４６のいずれかに記載の方法。
【請求項１４８】
治療しない場合に想定される前記障害の経過と比較して、所与の時間ポイントでの生存可能性が高くなる、請求項１２６乃至１４７のいずれかに記載の方法。
【請求項１４９】
１つ以上のＧＣＣ発現細胞によって特徴付けられる障害を治療するための、請求項２１または２２の化合物の使用。
【請求項１５０】
１つ以上のＧＣＣ発現細胞によって特徴付けられる障害を治療するための薬物の調製における、請求項２１または２２の前記化合物の使用。
【請求項１５１】
（ａ）ある量のガリウム６８を提供すること、（ｂ）前記ある量のガリウム６８を精製することにより、精製ガリウム６８を精製すること、及び（ｃ）緩衝液中で、約３〜２０分のインキュベーション時間、約６０〜１００℃の温度及び約３．０〜４．５のｐＨで約４５〜６５uｇの請求項１乃至１７のいずれかに記載の前記化合物を前記精製ガリウム６８と接触させて、約２５〜３３ＭＢｑ／ｎｍｏｌの比放射能を有する放射性標識化合物を生成することを含む、請求項１乃至１７のいずれかに記載の、化合物を放射性標識する方法。
【請求項１５２】
６８Ｇｅ／６８Ｇａジェネレータを用いてある量の６８Ｇａを生成することを含む、請求項１５１に記載の方法。
【請求項１５３】
前記ガリウム６８は、塩化ガリウム６８として提供される、請求項１５１または１５２に記載の方法。
【請求項１５４】
前記ある量のガリウム６８の精製は、ＨＣｌを用いて前記ジェネレータから前記ガリウム６８を溶出させて溶出液を生成すること、前記溶出液をカチオンカラムに投入すること、及びアセトン及びＨＣｌを用いて前記カチオンカラムから前記ガリウム６８を溶出させることのうちの１つ以上を含む、請求項１５１乃至１５３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５６】
前記ジェネレータからガリウム６８を溶出させるのに用いる前記ＨＣｌは、約０．１ＭのＨＣｌである、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５７】
前記ガリウム６８は、９８％アセトン及び０．０２ＭのＨＣｌを用いて前記カチオンカラムから溶出される、請求項１５４に記載の方法。
【請求項１５８】
ステップ（ｃ）は、請求項１乃至１７のいずれか一項に記載の約２０〜７０uｇの前記該化合物を含む、請求項１５１乃至１５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５９】
ステップ（ｃ）は、請求項１乃至６及び請求項８乃至１４のいずれか一項に記載の約５５uｇの前記該化合物を含む、請求項１５８に記載の方法。
【請求項１６０】
前記緩衝液は、クエン酸、酢酸、またはリン酸塩を含む、請求項１５１乃至１５９のいずれかに記載の方法。
【請求項１６１】
前記緩衝液は、酢酸ナトリウムを含む、請求項１５１乃至１６０のいずれかに記載の方法。
【請求項１６２】
前記温度は、約１００度である、請求項１５１乃至１６１のいずれかに記載の方法。
【請求項１６３】
前記ｐＨは、約３．７５〜４である請求項１５１乃至１６２のいずれかに記載の方法。
【請求項１６４】
前記化合物は、請求項１７に記載の化合物である、請求項１５１乃至１６３のいずれかに記載の方法。
【請求項１６５】
前記インキュベーション時間は約６〜１０分である、請求項１５１乃至１６４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６６】
緩衝液交換によって前記放射性標識化合物を精製することをさらに含む、請求項１５１乃至１６５のいずれかに記載の方法。
【請求項１６７】
０．２μｍフィルタを用いて前記放射性標識化合物を滅菌濾過することをさらに含む、請求項１５１乃至１６６のいずれかに記載の方法。
【請求項１６８】
所与の投与時間で患者に投与するために、請求項１乃至１７のいずれかに記載のガリウム６８で標識された化合物の適した投与量を決定する方法であって、以下の式を含む、前記方法：
［投与量］＝［投与時の放射線量（ｍＣｉ）］／{（［較正時の放射線量（ｍＣｉ）］／［投与時の組成物量（ｍｌ）］×指数関数（−６．１４Ｅ−１時間−１）＊［較正から投与までの時間（時間）］}。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、本明細書にその全体を参照として援用した配列表を含んでいる。２０１４年１１月１４日に作成した該ＡＳＣＩＩ複写物はＭ２０５１‐７０３９ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、サイズは２３，３４４バイトである。
【背景技術】
【０００２】
大腸癌（ＣＲＣ）は世界的にみて男性では三番目に多く、女性では二番目に多い。発症率はオーストラリア／ニュージーランド、西ヨーロッパで最も高く、（南アフリカを除く）アフリカ及び中央・南アジアで最も低く、中南米がその中間であると推定されている。世界では毎年６０万８０００人余りがＣＲＣが原因で死亡していると推定されており、大腸癌は癌による死亡の第４位である。死亡率は中央及び東ヨーロッパで最も高く、中央アフリカが最低である。ＣＲＣの予後は主として、ステージ、組織学的及び分子的な分化、リンパ管浸潤、及び無腫瘍の外科的切除マージンの程度に関連する。
【０００３】
グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）は、腸液の維持、電解質の恒常性、及び細胞増殖において機能する膜貫通細胞表面受容体である。健常者では、ＧＣＣが発現するのは皮細胞の管腔側の刷子縁膜であり、解剖学的に恵まれた場所である。この場所のために静脈内（ＩＶ）投与される薬剤によって標的にすることが制限される。しかし、悪性転換すると、この恵まれた場所は原発性及び転移性腸腫瘍では失われるが、ＧＣＣ発現は維持される。多数のヒト転移性癌の主要組織の免疫組織化学検査（ＩＨＣ）による解析からは、大腸腫瘍組織の約９０％、胃腫瘍の約７５％、及び膵腫瘍組織の約６５％がＧＣＣを発現することが分かっている。
【０００４】
現在、ＧＣＣを発現する細胞に特異的に結合して死滅させるＭＬＮ０２６４など、ＧＣＣ標的化癌治療薬が開発中である。ＧＣＣ標的化療法の有効性を予測するには、まず腫瘍のＧＣＣを発現するかどうかを知ることが望ましい。これは一般にＩＨＣによって決定される。ＩＨＣは生検試料の侵襲的採取を必要とし、腫瘍または複数の腫瘍の全体ではなく生検試料のみを検査するため、技術的な制限がある。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本開示はグアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合してＧＣＣを発現する癌細胞を検出する放射性標識化合物を提供する。通常、健康な患者では、ＧＣＣが発現するのは腸上皮細胞の頂端側及び脳のドーパミンニューロンに限られる。しかし、胃腸管を起源とする癌はＧＣＣを発現し、発現は腫瘍転移に維持される。ある種の非胃腸管系の癌細胞もＧＣＣを発現する。概して、該化合物は、放射性原子を結合することができるキレート部分、ＧＣＣを結合することができるペプチド、及びこの２つを連結するリンカー部分を含む。該ＧＣＣ結合ペプチドは、天然のＧＣＣリガンドである１８アミノ酸配列（配列番号２）である大腸菌エンテロトキシンに関連する。該キレート部分は、放射性原子を安定して結合することができる部分ならどのようなものでもよく、例えば、ＮまたはＯ原子を含む大環状分子が挙げられる。
【０００６】
本開示は、放射性標識を用いて該ペプチド‐リンカー‐キレート部分化合物を標識する方法も提供する。また、本開示は、ＧＣＣ標的化治療を用いて患者を治療できるかどうかを判定することを含む、腫瘍をイメージングする化合物を用いる方法を提供する。例えば、該化合物が陽電子放出部分を含んでいる場合、その陽電子はインビボ検出法（例えばＰＥＴ）によって検出可能である。本開示は、該化合物を用いて、場合によっては他の治療法（例えばＧＣＣ標的化療法）を併用して、異常なＧＣＣ発現に伴う疾患を治療する方法も提供する。
【０００７】
本開示は、例えば、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる化合物を提供する。該化合物は、例えば、ＧＣＣに結合することができるペプチド（例えば本明細書に記載のペプチド）及びキレート部分（例えば本明細書に記載のキレート部分）を含みうる。該化合物は、該キレート部分に該アミノ酸を共有結合的に取り付けるリンカー（例えば本明細書に記載のリンカー）を含みうる。
【０００８】
いくつかの態様では、本開示は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１と少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり、該アミノ酸配列はアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を含むもの、（ｂ）陽電子放出原子を結合することができるキレート部分、及び（ｃ）該キレート部分に該ペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を共有結合的に取り付けるリンカー部分を含む化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。いくつかの態様では、本開示は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドであり、該ペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を含むもの、（ｂ）放射性原子を結合することができるキレート部分であり、該キレート部分は、大環状分子（例えば、Ｏ及び／またはＮを含む大環状分子）、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、１つ以上のアミン、１つ以上のエーテル、１つ以上のカルボン酸，ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、またはデスフェリオキサミンを含むもの、及び（ｃ）該キレート部分に該ペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を共有結合的に取り付けるリンカー部分であり、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができるものを含む、化合物を提供する。いくつかの態様では、本開示は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドであり、該ペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を有するもの、（ｂ）陽電子放出原子を結合することができるキレート部分、（ｃ）該キレート部分に該ペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を共有結合的に取り付けるリンカー部分、及び（ｄ）陽電子放出原子（例えばガリウム６８）を含む化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。
【０００９】
実施形態によっては、該ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列のＧＣＣ結合部分を含む。実施形態によっては、該ペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。実施形態によっては、ジスルフィド結合はＣｙｓ５〜Ｃｙｓ１０、Ｃｙｓ６〜Ｃｙｓ１４、及びＣｙｓ９〜Ｃｓｙ１７を連結し、該アミノ酸は天然の大腸菌エンテロトキシンのその位置に従って番号付けされる。実施形態によっては、該ペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列から構成される。実施形態によっては、該ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列から構成される。
【００１０】
いくつかの実施形態では、該キレート部分は放射性原子を結合することができる。該結合は、直接的でよい（例えば、該キレート部分は水素結合を形成しうるか、または該放射性原子と静電相互作用を形成しうる）。該結合は、間接的であってもよい（例えば、該キレート部分は、放射性原子を含む分子に結合する）。実施形態によっては、該キレート部分は、大環状分子を含むか、または大環状分子である。実施形態によっては、該キレート部分はＤＯＴＡまたはＮＯＴＡを含むか、またはＤＯＴＡまたはＮＯＴＡである。実施形態によっては、該キレート部分は、大環状分子（例えば、Ｏ及び／またはＮを含む大環状分子）、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、１つ以上のアミン、１つ以上のエーテル、１つ以上のカルボン酸、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、またはデスフェリオキサミンを含む。
【００１１】
実施形態によっては、該リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基を含むか、あるいはアミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基である。実施形態によっては、該リンカー部分は、アルキレン、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキレン（例えばＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはＣ１０アルキレン）を含む。実施形態によっては、該リンカー部分は、ＯまたはＳを含む。実施形態によっては、該リンカー部分は、尿素またはチオ尿素を含む。実施形態によっては、該リンカー部分は、ベンジル基を含む．
【００１２】
実施形態によっては、該化合物は、２，２’，２’’，２’’’‐（（Ｓ）‐２‐（４‐（３‐（６‐（（（３Ｓ，６Ｒ，９Ｓ，１５Ｒ，２０Ｒ，２３Ｓ，２６Ｓ，２９Ｒ，３２Ｒ，３７Ｒ，４０Ｓ，４５ａＳ）‐４０‐（２‐アミノ‐２‐オキソエチル）‐１５‐（（（Ｓ）‐１‐カルボキシ‐２‐（４‐ヒドロキシフェニル）エチル）カルバモイル）‐２６‐（２‐カルボキシエチル）‐２３‐イソブチル‐３，９‐ジメチル‐１，４，７，１０，１３，２２，２５，２８，３１，３８，４１，４７‐ドデカオキソテトラコンタヒドロ‐１Ｈ‐３７，２０‐（エピミノメタノ）‐６，２９‐（メタノジチオメタノ）ピロロ［２，１‐ｓ］［１，２，２７，２８，５，８，１１，１４，１７，２０，２３，３２，３５，３８，４１］テトラチアウンデカアザシクロトリテトラコンチン‐３２‐イル）アミノ）‐６‐オキソヘキシル）チオウレイド）ベンジル）‐１，４，７，１０‐テトラアザシクロドデカン‐１，４，７，１０‐テトライル）四酢酸である。
【００１３】
実施形態によっては、該化合物は、式（ＶＩ）の化合物を有する：
【化１】
2017503763.tif 000003
【００１４】
実施形態によっては、該化合物は、キレート部分に結合した放射性原子を更に含む。実施形態によっては、該放射性原子は、陽電子放出体である。実施形態によっては、該放射性原子はガリウム６８である。実施形態によっては、該放射性原子は、アルファ粒子放出体である．実施形態によっては、該放射性原子は、２１３Ｂｉ、９０Ｙ、または１７７Ｌｕである。実施形態によっては、該放射性原子は、２１３Ｂｉまたは２２５Ａｃである．実施形態によっては、該放射性原子は、ベータ放出体（例えば９０Ｙまたは１７７Ｌｕ）である。実施形態によっては、該放射性原子は、ガンマ放出体である。実施形態によっては、該放射性原子は、１１１Ｉｎである。実施形態によっては、該化合物は、約２０〜４０ＭＢｑ／ｎｍｏｌ（例えば、２５〜３３ＭＢｑ／ｎｍｏｌ）の比放射能を有する。実施形態によっては、該化合物は、約２９ＭＢｑ／ｎｍｏｌの比放射能を有する．
【００１５】
実施形態によっては、該化合物は、式（ＶＩａ）の構造を有する：
【化２】
2017503763.tif 000004
【００１６】
ある態様では、本開示は、式ＩＩ、ＩＶまたはＶに係る化合物も提供する。実施形態によっては、該ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。実施形態によっては、該ペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。
【００１７】
実施形態によっては、該キレート部分は、１つ以上のアミン、エーテルまたはカルボン酸を含む。実施形態によっては、該キレート部分、複数のアミンを含む。実施形態によっては、該キレート部分は、大環状分子（例えばＯ及び／またはＮを含む大環状分子）である。実施形態によっては、該キレート部分は、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、またはデスフェリオキサミンを含む。実施形態によっては、該キレート部分は、ＤＯＴＡである。
【００１８】
実施形態によっては、該リンカーは、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基である。実施形態によっては、該リンカーは、アミノヘキシルである。
【００１９】
実施形態によっては、該化合物は、該キレート部分に結合する放射性原子（例えば、式Ｉ、ＩＩＩ、ＩＶａまたはＶａの化合物）を更に含む。実施形態によっては、該放射性原子は、陽電子放出体である。実施形態によっては、該放射性原子はガリウム６８である。実施形態によっては、該放射性原子はアルファ粒子放出体である。実施形態によっては、該放射性原子は、２１３Ｂｉ、９０Ｙ、または１７７Ｌｕである。実施形態によっては、該化合物は、約２５〜３３ＭＢｑ／ｎｍｏｌの比放射能を有する。実施形態によっては、該化合物は、約２９．４ＭＢｑ／ｎｍｏｌの比放射能を有する。
【００２０】
本開示は、いくつかの態様では、本明細書に記載の複数の化合物を含む組成物も提供し、該複数の化合物のうちの少なくとも１つの化合物は、放射性原子（例えば、陽電子放出原子、例えばガリウム６８）に結合されており、該複数の化合物のうちの少なくとも１つの化合物は、放射性原子に結合されていない。
【００２１】
実施形態によっては、該複数の化合物の少なくとも１つは、式（Ｉ）の構造（例えば式（ＩＩＩ）の構造）を有し、該複数の化合物の少なくとも１つは式(ＩＩ)の構造を有する。実施形態によっては、該複数の化合物の少なくとも１つは、式（Ｖａ）の構造を有し、該複数の化合物の少なくとも１つは式（Ｖ）の構造を有する。実施形態によっては、該複数の化合物の少なくとも１つは式（ＶＩａ）の構造を有し、該複数の化合物の少なくとも１つは、式（ＶＩ）の構造を有する。実施形態によっては、該組成物は、ガリウム６８に結合された化合物と結合されていない化合物との比が、約１：１００〜１：１０，０００である。実施形態によっては、該組成物は、ガリウム６８に結合された化合物と結合されていない化合物との比が、約１：１，０００〜１：２，０００である。実施形態によっては、該組成物は、ガリウム６８に結合された分子と結合されていない分子との比が、約１：１，５００である。
【００２２】
ある態様では、本開示は、（ａ）本明細書に記載の化合物、例えば放射性原子を結合することができるキレート部分を含む未標識のＧＣＣ結合化合物、例えば式（ＶＩ）の化合物、及びその１つ以上（例えばその全部）、（ｂ）アルコール（例えばエタノール）、（ｃ）塩（例えばナトリウム塩、例えば酢酸ナトリウム）、及び（ｄ）水を含む組成物を含む。実施形態によっては、該組成物は、約３〜６（例えば約３〜４、４〜５、または５〜６）、例えば約３．８のｐＨを有する。
【００２３】
実施形態によっては、該アルコール（例えばエタノール）は、約１０〜２５％（例えば約１０〜１５％、１５〜２０％、または２０〜２５％）で存在する。
【００２４】
実施形態によっては、該組成物は、糖（例えばスクロース）、酢酸（例えば氷酢酸）、ポリソルベート（例えばポリソルベート８０）、及び界面活性剤（例えばイオン性界面活性剤（例えばプルロニックＦ‐６８））のうちの１つ以上（例えば全部）をさらに含む。
【００２５】
実施形態によっては、該化合物は、約０．０１〜０．０４ｍｇ／ｍｌ、または少なくとも約０．０１ｍｇ／ｍｌ、または最大で約０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。実施形態によっては、該化合物は、約０．０１〜０．０４μｇ／ｍｌ、または少なくとも約０．０１μｇ／ｍｌ，または最大で約０．０４μｇ／ｍｌの濃度を有する。
【００２６】
本開示は、ある態様では、水溶液として、本明細書に記載のＧＣＣ結合化合物を含む組成物も提供し、該化合物は約０．０１〜０．０４μｇ／ｍｌ、または少なくとも約０．０１ｍｇ／ｍｌ、または最大で約０．０４ｍｇ／ｍｌの濃度を有する。実施形態によっては、該濃度は、約０．０２７uｇ／ｍｌである。
【００２７】
本開示は、ある態様では、水溶液として、本明細書に記載の放射性標識した化合物（例えば未標識のＧＣＣ結合化合物）を含む組成物も提供し、該ＧＣＣ化合物は少なくとも約０．０２７uｇ／ｍｌの濃度を有する。
【００２８】
本開示は、ある態様では、本明細書に記載の組成物（例えば未標識のＧＣＣ結合化合物を含む組成物）、及びエタノール、水、及び酢酸ナトリウムのうちの１つ以上を含む容器も提供し、場合によってはｐＨは約３〜約６である。実施形態によっては、該組成物は約２ｍｌの量を有する。
【００２９】
本開示は、ある態様では、本明細書に記載の容器（例えば未標識のＧＣＣ結合化合物を含む容器）と該化合物を放射性物質に接触させるのに適したカセットとを含むキットも提供する。
【００３０】
該キットは、該放射性物質を用いて該化合物を標識するための説明書を更に含みうる。
【００３１】
本開示は、ある態様では、（ａ）本明細書に記載の化合物（例えば放射性原子と結合されたＧＣＣ結合化合物）、及び（ｂ）アルコール（例えばエタノール）、（ｃ）塩（例えばナトリウム塩、例えば塩化ナトリウム）、及び（ｄ）水のうちの１つ以上（例えば全部）を含む組成物も提供する。
【００３２】
いくつかの実施形態では、該組成物は、（ａ）本明細書に記載の化合物（例えば放射性原子に結合されたＧＣＣ結合化合物）、（ｂ）エタノール、（ｃ）塩化ナトリウム、及び（ｄ）水を含む。いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）の化合物である。実施形態によっては、該放射性原子はガリウム６８である。
【００３３】
実施形態によっては、該アルコール（例えばエタノール）は、約５〜２５％（例えば約１０〜１５％、１５〜２０％、または２０〜２５％）、あるいは約８％で存在する。実施形態によっては、該塩（例えば塩化ナトリウム）は、約０．３〜１．４％（例えば約０．３％〜０．５％、０．５％〜０．８％、０．８％〜０．９％、０．９％〜１．１％、あるいは１．１％〜１．４％）で存在する。
【００３４】
実施形態によっては、該組成物は、約８〜１１ｍｌ（例えば約８〜９、９〜１０、または１０〜１１ｍｌ）または約９．５ｍｌの量を有する。
【００３５】
実施形態によっては、該組成物は、約５．１〜７．６ｍＣｉの放射能、または約１２．７３ｍＣｉ以上の放射能を含む。
【００３６】
実施形態によっては、該組成物は、約２０〜７０μｇの該化合物（例えば約２０〜３０、３０〜４０、４０〜５０、５０〜６０、または６０〜７０μｇ、あるいは約５５．０μｇの該化合物を含む。
【００３７】
本開示は、ある態様では、本明細書に記載の化合物（例えば本明細書に記載の放射性標識した化合物、例えば式（ＶＩａ）の化合物）及び医薬的に許容される賦形剤を含む組成物も提供する。
【００３８】
本開示は、ある態様では、本明細書に記載の組成物（例えば上記組成物）を含む容器も提供する。実施形態によっては、該容器はバイアルである。
【００３９】
ある態様では、本開示は、本明細書に記載の組成物または容器を含むキットを提供する。実施形態によっては、該キットは、該化合物を対象に投与する方法の説明書を更に含む。
【００４０】
ある態様では、本開示は、対象おけるＧＣＣ発現細胞を定量する方法を提供し、（ａ）本明細書に記載の化合物（例えば放射性標識したＧＣＣ結合化合物、例えば式（ＶＩａ）の該化合物）を該対象に投与（例えば静注）すること、及び（ｂ）該対象における該放射能分布を可視化することを含む。
【００４１】
実施形態によっては、該化合物は、ガリウム６８に結合された式（ＶＩ）の化合物である。実施形態によっては、該放射能は陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）によって可視化される。実施形態によっては、該投与化合物は、約４．０〜６．０（±１０％）ｍＣｉ（例えば約４．０〜５．０、約５．０〜６．０、または約５．０ｍＣｉ）を有する。実施形態によっては、該化合物は、約２０〜６０μｇ、約３０〜５０μｇ、約３５〜４５μｇ、または約４０〜４６μｇの用量で投与される。実施形態によっては、該化合物は、約４３．４μｇの用量で投与される。
【００４２】
実施形態によっては、該対象はヒトである。
【００４３】
実施形態によっては、該対象は、ＧＣＣ発現を伴う障害（例えば癌）に罹患している。実施形態によっては、該障害は、固形腫瘍、軟組織腫瘍、転移性病変、肉腫、腺癌、または癌腫から選択される。実施形態によっては、該癌は、早期または後期ステージの癌、あるいはステージ０、１、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、及びＩＶのいずれかの癌である。実施形態によっては、該障害は、大腸癌、胃癌、食道癌、膵癌、肺癌、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、及び神経内分泌腫瘍、またはその転移から選択される。実施形態によっては、該大腸癌は、大腸腺癌、大腸平滑筋肉腫、大腸リンパ腫、大腸メラノーマ、または大腸神経内分泌腫瘍である。実施形態によっては、癌は胃癌、胃腺癌、胃肉腫、または胃リンパ腫である。実施形態によっては、該食道癌は、食道扁平上皮癌または食道腺癌である。実施形態によっては、該肺癌（例えば例えば非小または小細胞肺癌）は扁平上皮癌または腺癌である。実施形態によっては、該神経内分泌腫瘍は消化管神経内分泌腫瘍または気管支肺神経内分泌腫瘍である。
【００４４】
実施形態によっては、該方法は、投与された化合物に伴う膀胱毒性を軽減する物質を投与することをさらに含む。膀胱毒性を軽減する該物質は、尿排泄量を増大しうる。膀胱毒性を軽減する該物質は、例えば、生食水または水でありうる。
【００４５】
実施形態によっては、該方法は、患者の放射能分布を表す画像に対して部分容積補正を実行することを更に含む。
【００４６】
本開示は、ある態様では、ＧＣＣ標的化治療剤に対する癌細胞の感受性を判定する方法も提供し、本明細書に記載の方法に従って該対象におけるＧＣＣ発現細胞を定量すること、及び該癌細胞への該放射性標識の結合が該ＧＣＣ標的化治療剤に対する感度を示すことを含む。
【００４７】
本開示は、ある態様では、本明細書に記載の一方法に従って患者におけるＧＣＣ発現細胞を定量することを含む、対象がＧＣＣ標的化療法の潜在的候補であるかどうかを評価する方法も提供し、癌細胞へ放射性標識の結合していることが対象がＧＣＣ標的化療法の潜在的候補であることを示す。
【００４８】
本開示は、ある態様では、本明細書に記載の化合物（例えば放射性標識されたＧＣＣ結合化合物、例えば式（ＶＩａ）の化合物）を用いて対象におけるＧＣＣ発現細胞を検出することも提供する。
【００４９】
本開示は、ある態様では、対象におけるＧＣＣ発現細胞を検出するための組成物の製造に、本明細書に記載の化合物、例えば放射性標識されたＧＣＣ結合化合物、例えば式（ＶＩａ）の化合物）を使用することも提供する。
【００５０】
本開示は、ある態様では、１つ以上のＧＣＣ発現細胞によって特徴付けられる障害を有する対象を治療する方法も提供し、（ａ）本明細書に記載の方法に従って対象におけるＧＣＣ発現細胞を定量すること、及び（ｂ）対象がＧＣＣを発現する１つ以上の細胞を有している場合にＧＣＣ標的化治療剤を投与することを含む。
【００５１】
実施形態によっては、該ＧＣＣ標的化治療剤は、（ａ）表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）と表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）とを含む、抗ＧＣＣ抗体分子、（ｂ）表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）と表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）とを含む抗ＧＣＣ抗体との結合に競合することができる抗ＧＣＣ抗体分子、及び（ｃ）表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）と表３に記載のアミノ酸配列を含む３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む抗ＧＣＣ抗体と同じエピトープに結合することができる抗ＧＣＣ抗体分子から選択される抗ＧＣＣ抗体分子を含む。実施形態によっては、該ＧＣＣ標的化治療剤は、（ａ）配列番号５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３を含む抗ＧＣＣ抗体分子、（ｂ）配列番号５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む抗ＧＣＣ抗体との結合に競合することができる抗ＧＣＣ抗体分子及び（ｃ）配列番号５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３を含む抗ＧＣＣ抗体と同じエピトープに結合することがきできる抗ＧＣＣ抗体分子から選択される抗ＧＣＣ抗体分子を含む。
【００５２】
実施形態によっては、該ＧＣＣ標的化治療は、前記ＧＣＣ標的化治療は、配列番号１１のアミノ酸配列１１を含む重鎖、配列番号１２のアミノ酸配列１２を含む軽鎖、またはその両方を含む。実施形態によっては、該ＧＣＣ標的化治療剤は、抗体薬剤コンジュゲートである。実施形態によっては、該抗体分子は、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）と結合される。実施形態によっては、該抗体薬剤コンジュゲートは、プロテアーゼ切断可能なリンカーを含む。実施形態によっては、該抗体薬剤コンジュゲートは、本明細書の式Ｉ〜５、または薬学的に許容される塩を含む。実施形態によっては、該抗体薬剤コンジュゲートは、配列番号５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３を含む、本明細書の式Ｉ〜５、または薬学的に許容される塩（Ａｂは抗ＧＣＣ抗体分子）、またはその原結合断片を含む。
【００５３】
実施形態によっては、該ＧＣＣ標的化治療剤は、ＭＬＮ０２６４である。実施形態によっては、該障害は、癌（例えば胃癌、膵癌、大腸癌、食道癌、胃食道接合部の癌、または肺癌）である。
【００５４】
本開示は、ある態様では、本明細書に記載の化合物（例えば放射性標識ＧＣＣ結合化合物、例えば式（ＶＩａ）の化合物）の治療有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、１つ以上のＧＣＣ発現細胞によって特徴付けられる障害を治療する方法も提供する。
【００５５】
実施形態によっては、該障害は癌である。実施形態によっては、該障害は、固形腫瘍、軟組織腫瘍、転移性病変、肉腫、腺癌、または癌腫から選択される。実施形態によっては、該癌は早期または後期ステージの癌、あるいはステージ０、１、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、及びＩＶのいずれかの癌である。実施形態によっては、該障害は、大腸癌、胃癌、食道癌、膵癌、肺癌、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、及び神経内分泌腫瘍、またはその転移から選択される。実施形態によっては、該大腸癌は、大腸腺癌、大腸平滑筋肉腫、大腸リンパ腫、大腸メラノーマ、または大腸神経内分泌腫瘍である。実施形態によっては、該胃癌は、胃腺癌、胃肉腫、または胃リンパ腫である。実施形態によっては、該食道癌は、食道扁平上皮癌または食道腺癌である。実施形態によっては、該肺癌は扁平上皮癌または腺癌である。実施形態によっては、該神経内分泌腫瘍は消化管神経内分泌腫瘍または気管支肺神経内分泌腫瘍である。
【００５６】
実施形態によっては、該方法はさらに、追加の治療形態を該患者に投与することを含む。実施形態によっては、該追加の治療形態は放射線療法である。実施形態によっては、該追加の治療形態は第２の治療用分子である。実施形態によっては、該第２の治療用分子はＤＮＡ損傷剤である。実施形態によっては、該ＤＮＡ損傷剤は、トポイソメラーゼＩ阻害薬、トポイソメラーゼＩＩ阻害薬、アルキル化剤、アルキル化様剤、アントラサイクリン、ＤＮＡ干渉物質、ＤＮＡ副溝アルキル化剤、及び代謝拮抗剤から選択される。実施形態によっては、該ＤＮＡ損傷剤はイリノテカン、トポテカン、及びカンプトテシンから選択されるトポイソメラーゼＩ阻害薬である。実施形態によっては、該ＤＮＡ損傷剤は、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、サトラプラチン、及びトリプラチンから成る群より選択されるアルキル化様剤である。実施形態によっては、該ＤＮＡ損傷剤は、フルオロウラシル（５‐ＦＵ）、フロクスウリジン（５‐ＦＵｄＲ）、メトトレキサート、ロイコボリン、ヒドロキシウレア、チオグアニン（６‐ＴＧ）、メルカプトプリン（６‐ＭＰ）、シタラビン、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、クラドリビン（２‐ＣＤＡ）、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、カペシタビン、アザチオプリン、シトシン、メトトレキサート，トリメトプリム，ピリメタミン，及びペメトレキセドから成る群より選択される代謝拮抗剤である。
【００５７】
いくつかの実施形態では、該患者は、約５０〜１００、１００〜２００、２００〜５００、５００〜１０００、１０００〜２０００、２０００〜５０００、または５０００〜１００００μＣｉの線量を受ける。
【００５８】
いくつかの実施形態では、該方法は、患者に腎保護剤を投与することを更に含む。実施形態によっては、該腎保護剤は、クリニソル（クリニソル）、リジン、リジン／アルギニン、ゲロフシン、またはアミノフォスチンのうちの１種以上を含む。ある実施形態では、該腎保護剤は、該放射性組成物単独（例えば該放射性標識されたペプチド）が腎保護剤が存在しない場合に著しい腎毒性をきたすような用量で投与される場合に、投与される。いくつかの実施形態では、腎保護剤は、該放射性組成物単独（例えば該放射性標識ペプチド）が腎保護剤が存在しない場合に著しい腎毒性をきたさない用量で投与される場合に、投与される。
【００５９】
実施形態によって、該方法によって、ベースラインから測定して、腫瘍増殖の倍数変化の低減がもたらされる。該ベースラインは、例えば、治療を開始する前の腫瘍のサイズでありうる。実施形態によっては、該方法によって、治療しない場合に想定される障害の経過と比較して、高い生存の可能性がもたらされる。
【００６０】
ある態様では、本開示は、１つ以上のＧＣＣ発現細胞によって特徴付けられる障害を治療するために、本明細書に記載の化合物（例えば放射性標識されたＧＣＣ結合化合物、例えば、放射性原子（例えばアルファ放出体）を含む式（ＶＩ）の化合物の使用も提供する。
【００６１】
ある態様では、本開示は、１つ以上のＧＣＣ発現細胞によって特徴付けられる障害を治療するための薬物を調製するために、本明細書に記載の化合物、例えば放射性標識されたＧＣＣ結合化合物，例えば、放射性原子（例えばアルファ放出体）を含む式（ＶＩ）の化合物使用も提供する。
【００６２】
ある態様では、本開示は、本明細書に記載の化合物（例えばＧＣＣ結合化合物、例えば式（ＶＩ）の化合物）を放射性標識する方法も提供する。該方法は、放射性標識を調製し、該放射性標識を精製し、該放射性標識に該化合物を結合させることを可能にする条件下で、該化合物を該精製した放射性標識に接触させることを含みうる。実施形態によっては、該方法は、（ａ）ある量のガリウム６８を提供すること、（ｂ）該ある量のガリウム６８を精製することにより、精製ガリウム６８を生成すること、（ｃ）緩衝液中で、約３〜２０分のインキュベーション時間、約６０〜１００℃の温度及び約３．０〜４．５のｐＨ約４５〜６５uｇの該化合物を該精製ガリウム６８と接触させて、約２５〜３３ＭＢｑ／ｎｍｏｌの比放射能を有する放射性標識化合物を生成することのうちの１つ以上（例えば全部）を含む。実施形態によっては、該方法は、例えば衝液中で、約４５〜６５uｇの該化合物を例精製ガリウム６８と接触させることを含む。実施形態によっては、該方法は、約３〜２０分間のインキュベーション時間で該化合物及び精製した放射性標識をインキュベートすることを含む。実施形態によっては、該方法は、該化合物及び該精製した放射性標識を約６０〜１００℃の温度でインキュベートすることを含む。実施形態によっては、該方法は、該化合物及び精製した放射性標識を約３．０〜４．５のｐＨでインキュベートすることを含む。
【００６３】
実施形態によっては、該方法は、６８Ｇｅ／６８Ｇａジェネレータを用いてある量の６８Ｇａを生成することを含む。実施形態によっては、該ガリウム６８は塩化ガリウム６８として提供される。実施形態によっては、該ある量のガリウム６８の精製には、ＨＣｌを用いて該ジェネレータから該ガリウム６８を溶出させて溶出液を生成すること、該溶出液をカチオンカラムに投入すること、及びアセトン及びＨＣｌを用いて該カチオンカラムから該ガリウム６８を溶出させることのうちの１つ以上を含む。
【００６４】
実施形態によっては、ジェネレータからのガリウム６８の溶出に用いるＨＣｌは約０．１ＭＨＣｌ、例えば約０．０５〜０．１５ＭのＨＣｌまたは約０．０１〜０．０２ＭのＨＣｌである。
【００６５】
実施形態によっては、該ガリウム６８はアセトン及びＨＣｌの１つ以上を用いてカチオンカラムから溶出される。該アセトンは、例えば、約９０〜１００％、９５〜９９％、または約９８％アセトンでありうる。該ＨＣｌは、例えば、約０．０２ＭのＨＣｌ、約０．０１〜０．０３ＭのＨＣｌ、または約０．００１〜０．０５ＭのＨＣｌでありうる。
【００６６】
実施形態によっては、ステップ（ｃ）は約２０〜７０μｇの該化合物を含む。実施形態によっては、ステップ（ｃ）は約５５μｇの該化合物を含む。実施形態によっては、該緩衝液は、クエン酸、酢酸、またはリン酸塩を含む。実施形態によっては、該緩衝液は、酢酸ナトリウムを含む。実施形態によっては、該温度は約１００度である。実施形態によっては、該ｐＨは約３．７５〜４である。実施形態によっては、該化合物は、式（ＶＩ）の化合物である。実施形態によっては、該インキュベーション時間は約６〜１０分である。実施形態によっては、該方法は、緩衝液交換によって該放射性標識化合物を精製することを更に含む。実施形態によっては、該方法は、０．２μｍフィルタを用いて該放射性標識化合物を滅菌濾過することを更に含む。
【００６７】
ある態様では、本開示は、所与の投与時間で患者に投与するために、本明細書に記載の化合物（例えば射性標識されたＧＣＣ結合化合物，例えば式（ＶＩａ）の化合物）の適した投与量を決定する方法も提供し、以下の式を計算することを含む。
［投与量］＝［投与時の放射線量（ｍＣｉ）］／{（［較正時の放射線量（ｍＣｉ）］／［投与時の組成物量（ｍｌ）］×指数関数（−６．１４Ｅ−１時間−１）＊［較正から投与までの時間（時間）］}。
【００６８】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）ペプチドであり、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列、
（ｉｉ）１５位にＡｌａを含む配列番号１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列であり、該アミノ酸は天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐエンテロトキシンのその位置に従って番号付けされるもの、または
（ｉｉｉ）配列番号１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含み、該ペプチドは１８アミノ酸長以下であり、該ペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を含むものと、
（ｂ）放射性原子（例えば陽電子放出原子）を結合することができるキレート部分（例えば本明細書に記載のキレート部分）であり、該キレート部分は大環状分子（例えばＯ及び／またはＮを含む大環状分子）、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、複数のアミン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、またはデスフェリオキサミンを含むものと、
（ｃ）該キレート部分に該ぺプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を共有結合的に取り付けるリンカー部分（例えば本明細書に記載のリンカー部分）とを含む、化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。
【００６９】
いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物である。いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物ではない。
【００７０】
いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、アミノヘプチル基、フェニル基、またはＮＣＳ部分を含む。いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基、（ｉｉ）フェニル基、及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む。いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノヘキシル基（ｉｉ）フェニル基、及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む。
【００７１】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）ペプチドであり、配列番号１のアミノ酸配列、１５位にＡｌａを含む配列番号１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列であり、該アミノ酸は天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐエンテロトキシンのその位置に従って番号付けされ、該ペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を含むものと、
（ｂ）放射性原子（例えば陽電子放出原子）を結合することができるキレート部分（例えば本明細書に記載のキレート部分）であり、例えば、該キレート部分は大環状分子（例えばＯ及び／またはＮを含む）、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、複数のアミン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、デスフェリオキサミン、４個以上のＮ、または４個以上のカルボン酸基を含み、あるいは該キレート部分はＳを含まないものと、
（ｃ）該キレート部分に該ぺプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を共有結合的に取り付けるリンカー部分（例えば本明細書に記載のリンカー部分）とを含む化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。
【００７２】
いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物である。いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物ではない。
【００７３】
いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、アミノヘプチル基、フェニル基、またはＮＣＳ部分を含む。いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基、（ｉｉ）フェニル基、及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む．いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノヘキシル基（ｉｉ）フェニル基、及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む。
【００７４】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）配列番号１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含むペプチドであり、該ペプチドは１８アミノ酸長以下であり、該ペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を含むものと、
（ｂ）放射性原子（例えば陽電子放出原子）を結合することができるキレート部分（例えば本明細書に記載のキレート部分）であり、例えば、該キレート部分は大環状分子（例えばＯ及び／またはＮを含む）、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、複数のアミン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、デスフェリオキサミン、４個以上のＮ、または４個以上のカルボン酸基を含み、あるいは該キレート部分はＳを含まないものと、
（ｃ）該キレート部分に該ぺプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を共有結合的に取り付けるリンカー部分（例えば本明細書に記載のリンカー部分）とを含む化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。
【００７５】
いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物である．いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物ではない。
【００７６】
いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、アミノヘプチル基、フェニル基、またはＮＣＳ部分を含む。いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基、（ｉｉ）フェニル基、及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む。いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノヘキシル基（ｉｉ）フェニル基、及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む。
【００７７】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）ペプチドであり、
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列、
（ｉｉ）１５位にＡｌａを含む配列番号１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列であり、該アミノ酸は天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐエンテロトキシンのその位置に従って番号付けされるもの、または
（ｉｉｉ）配列番号１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列であり、該ペプチドは１８アミノ酸長以下であるものを含み、該ペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を含むものと、
（ｂ）放射性原子（例えば陽電子放出原子）を結合することができるキレート部分と、
（ｃ）該キレート部分に該ぺプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を共有結合的に取り付けるリンカー部分であり、該リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基とを含む化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。
【００７８】
いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物である。いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物ではない。
【００７９】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）１５位にＡｌａを含む配列番号１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含むペプチドであり、該アミノ酸は天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐエンテロトキシンのその位置に従って番号付けされるか、または該ペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を有するものと、
（ｂ）放射性原子（例えば陽電子放出原子）を結合することができるキレート部分と、
（ｃ）該ペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を該キレート部分に共有結合的に取り付けるリンカー部分（例えば本明細書に記載のリンカー部分）であり、例えば、該リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、アミノヘプチル基、フェニル基、またはＮＣＳ部分を含むものとを含む化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物である。いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物ではない。
【００８１】
いくつかの態様では、本開示は、
（ａ）配列番号１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を含むペプチドであり、該ペプチドは１８アミノ酸長以下であり、該ペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を有するものと、
（ｂ）放射性原子（例えば陽電子放出原子）を結合することができるキレート部分と、
（ｃ）該ペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を該キレート部分に共有結合的に取り付けるリンカー部分（例えば本明細書に記載のリンカー部分）であり、例えば、該リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、アミノヘプチル基、フェニル基、またはＮＣＳ部分を含むものとを含む化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。
【００８２】
いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物である。いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物ではない。
【００８３】
ある態様では、本開示は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドあり、該アミノ酸配列のアミノ酸配列はアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を有するものと、
（ｂ）放射性原子（例えば陽電子放出原子）を結合することができるキレート部分と、
（ｃ）ペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を該キレート部分に共有結合的に取り付けるリンカー部分と、
（ｄ）陽電子放出原子（例えばガリウム６８）
とを含む化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。
【００８４】
いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物である。いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物ではない。
【００８５】
いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、アミノヘプチル基、フェニル基、またはＮＣＳ部分を含む。いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基、（ｉｉ）フェニル基，及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む。いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノヘキシル基、（ｉｉ）フェニル基、及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む。
【００８６】
ある態様では、本開示は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列または配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一のアミノ酸配列を含むペプチドであり、該ペプチドは天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐの配列を含まず、例えば該ペプチド（または該ペプチドのＳＴｐ様部分）は１７アミノ酸長以下であり、例えば該ペプチド（該ペプチドのＳＴｐ様部分）は配列番号１または配列番号３から構成され、該アミノ酸配列のペプチドはアミノ末端及び遊離カルボキシ末端を有するものと、
（ｂ）放射性原子（例えば陽電子放出原子）を結合することができるキレート部分と、
（ｃ）該ペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端を該キレート部分に共有結合的に取り付けるリンカー部分と、
（ｄ）陽電子放出原子（例えばガリウム６８）
とを含む化合物を提供し、該化合物は、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）に結合することができる。
【００８７】
いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物である。いくつかの実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物ではない。
【００８８】
いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、アミノペンチル基、アミノヘキシル基、アミノヘプチル基、フェニル基、またはＮＣＳ部分を含む。いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基、（ｉｉ）フェニル基、及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む。いくつかの実施形態では、該リンカー部分は、（ｉ）アミノヘキシル基（ｉｉ）フェニル基、及び（ｉｉｉ）ＮＣＳ部分を含む。
【００８９】
本開示は、上記態様及び／または実施形態のいずれか１つ以上のすべての組み合わせ、及び詳細な説明及び実施例に記載の実施形態のいずれか１つ以上の組み合わせを企図している。
【００９０】
本明細書で言及した刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は全て、それらの全体を参照によって援用する。
【００９１】
本明細書において開示した本発明（複数可）の他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかとなろう。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】概念研究の非臨床的証明において抗原密度を鑑別することができる１１１Ｉｎ‐ＭＬＮ６９０７前駆物質を示す図である。左のカラムは３種の細胞方の光学顕微鏡画像を示し、上部が最大のＧＣＣ発現体であり、下部が最低のＧＣＣ発現体である。左からの第２のカラムは、ＩＨＣによって決定されたＧＣＣ発現レベルを定量したものである。次のカラムの画像は、該化合物がＧＣＣ産生細胞に付着したときにインジウム‐１１１を検出するのを示す３次元及び２次元のガンマカメラ像である。
【図２】マウスモデルにおける［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７のＰＥＴ検出を示す図であり、時間ポイントは投与の１５、４５、及び６０分後である。
【図３】条件を変えることによって得られたＤＳＰ１の可溶度の増大を示す図である。図３Ａはエタノールの割合を上げると可溶度が増大することを示す。図３ＢはｐＨを上げると可溶度が増大することを示す。図３Ｃは加熱及び混合各々により可溶度が増大することを示す。図３Ｄは種々のフィルタの効果を示す。
【図４】ＭＬＮ６９０７の標識化効率に対する異なる反応条件の影響を示す図である。図４Ａは反応時間を変えたときの標識化効率を示し、図４Ｂは反応温度を変えたときの標識化効率を示し、図４Ｃは反応ｐＨを変えたときの標識化効率を示す。図４Ｄは種々のｐＨにおける平均比放射能を示す。
【図５】図５Ａは種々のカラムに保持された放射性標識化合物の割合を示す。図５ＢはＳｅｐ‐Ｐａｋカラムからの放射性標識化合物の溶出効率に対する異なる溶出剤の影響を示す。図５ＣはＳｅｐ‐Ｐａｋカラムからの放射性標識化合物の溶出効率に対する異なるカラム及び溶出剤の影響を示す。
【図６】放射能計測値に基づいた、患者に投与する放射性イメージング剤の適した量の例示の算出例を示す。
【図７】Ｔ８４腫瘍担持マウスモデルの種々の組織における［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の分布を示す図である。Ｔ８４腫瘍異種移植片担持雌ＣＢ‐１７ＳＣＩＤマウスに、ＭＬＮ６９０７薬剤物質前駆体（薬剤物質前駆体＝ＤＳＰ）の濃度を上げながら、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰを単回静注（ＩＶ）投与した。投与１時間後、マウスを殺処分し、組織を採取し、秤量し、６８Ｇａを定量した。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの取り込みは、０．０１〜２０μｇの［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ±ＭＬＮ６９０７ＤＳＰ質量における組織１グラム当たりのパーセント投与量として決定した。図示の値は平均±標準誤差（ＳＥＭ）である。
【図８】ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン２腫瘍担持マウスモデルの種々の組織における［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の分布を示す図である。ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン２腫瘍異種移植片担持雌ＣＢ‐１７ＳＣＩＤマウスに、ＭＬＮ６９０７薬剤物質前駆体ＤＳＰの濃度を上げながら、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰを単回投与した。投与１時間後、マウスを殺処分し、組織を採取し、秤量し、６８Ｇａを定量した。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの取り込みは、投与された０．０１〜２０μｇの［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ±ＭＬＮ６９０７ＤＳＰ質量における組織１グラム当たりのパーセント投与量として決定した。図示の値は平均±標準誤差（ＳＥＭ）である。
【図９】ＰＨＴＸ‐２１Ｃ腫瘍担持マウスモデルの種々の組織における［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の分布を示す図である。ＰＨＴＸ‐２１Ｃ一次異種移植片担持雌ＣＢ‐１７ＳＣＩＤマウスに、ＭＬＮ６９０７薬剤物質前駆体（ＤＳＰ）の濃度を上げながら、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰを単回投与した。投与１時間後、マウスを殺処分し、組織を採取し、秤量し、６８Ｇａを定量した。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの取り込みは、投与された０．０１〜２０μｇの［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ±ＭＬＮ６９０７ＤＳＰ質量における組織１グラム当たりのパーセント投与量として決定した。図示の値は平均±標準誤差（ＳＥＭ）である。
【図１０】ＰＨＴＸ‐１７Ｃ腫瘍担持マウスモデルの種々の組織における［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の分布を示す図である。ＰＨＴＸ‐１７Ｃ一次異種移植片担持雌ＣＢ‐１７ＳＣＩＤマウスに、ＭＬＮ６９０７薬剤物質前駆体（ＤＳＰ）の濃度を上げながら、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰを単回投与した。投与１時間後、マウスを殺処分し、組織を採取し、秤量し、６８Ｇａを定量した。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの取り込みは、投与された０．０１〜２０μｇの［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ±ＭＬＮ６９０７ＤＳＰ質量における組織１グラム当たりのパーセント投与量として決定した。図示の値は平均±標準誤差（ＳＥＭ）である。
【図１１】［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ及びＭＬＮ６９０７ＤＳＰの腫瘍組織への生体内分布の概要を示す図である。
【図１２】ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン２腫瘍異種移植片担持雌ＣＢ‐１７ＳＣＩＤマウスに［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの質量を上げて単回投与した。投与１時間後、マウスを殺処分し、組織を採取し、秤量し、６８Ｇａを定量した。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの取り込みは、投与された０．００５〜０．５μｇの［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ質量における組織１グラム当たりのパーセント投与量（％ＩＤ／ｇ）として決定した。図示の値は平均±標準誤差（ＳＥＭ）である。
【図１３】競合的結合試験の結果を示す図であり、ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン２細胞の表面上のＧＣＣのＭＬＮ６９０７のＫＤを示す。
【図１４】１１１［Ｉｎ］ＭＬＮ６９０７の内在化率の検出試験の結果を示す図である。上側の曲線は細胞内のＭＬＮ６９０７の量を示し、下側の曲線は表面に結合したＭＬＮ６９０７の量を示す。
【図１５】上側のパネルはＴ８４腫瘍担持マウスモデルにおける［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の血中クリアランスを示し、ＨＥＫ２９３及びＨＥＫ２９３ＧＣＣクローン２細胞と比較したものである。ｙ軸線は組織１ｇ当たりの投与量（％ＩＤ）である。試験した３つの系のいずれでも、該化合物の血中クリアランスは迅速である。下側のパネルは、異なる腫瘍組織への［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の取り込み量を示す。
【図１６】マウスモデルの種々の組織における［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の分布を示す図である。このグラフは［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の血中及び肝レベルが一貫して低いことを示しており、組織にはＧＣＣがほとんど存在しないことが分かる。このレベルは未標識の競合物の量を増量すれば更には低下せず（ｘ線線上に示す）、これらの組織では［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７はＧＣＣに結合しないことが分かる。対照的に、腫瘍組織には［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７は高いレベルで蓄積する。この腫瘍への結合は未標識のペプチドの投与量を増やすことによって競合的に排除されることから、結合は特異的であることが分かる。未標識の競合物が存在している場合でも腎の［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７レベルは高いことから、腎を介して排泄され、この排泄はＧＣＣ受容体に依存するものではないことが分かる。
【図１７】ＧＣＣレベルが異なる腫瘍担持マウスへＭＬＮ６９０７を投与した結果を示す図である。Ｂｍａｘは［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７を用いた競合的結合試験によって決定された抗原表面密度である。Ｈスコアは免疫組織化学検査によりＧＣＣが検出されたときの染色強度である。概してＢｍａｘとＨスコアは相関する。
【発明を実施するための形態】
【００９３】
１．定義
本明細書で用いる場合、「ＤＳＰ」とは該薬剤物質前駆体を指し、放射性標識のない本明細書に記載の化合物である。具体的に、ＤＳＰ１とはバルクの粉末状のＤＳＰを指し、ＤＳＰ２とは溶液状のＤＳＰの剤形を指す。ＤＳＰの例として、式（ＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）及び（ＶＩ）の該化合物が挙げられる。
【００９４】
本明細書で用いる場合、「ＤＰ」とは製剤を表し、本明細書に記載の放射性標識化合物を指す。ＤＰの例には、式（Ｉ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶａ）、（Ｖａ）及び（ＶＩａ）の化合物が挙げられる。
【００９５】
本明細書で用いる「リンカー」とは、２つ以上の部分を共に連結する部分である（例えばＧＣＣとキレート部分を結合するペプチド）。リンカーは２つ以上の官能基を含みうる。例えば、リンカーは、ペプチドのような部分上の官能基と反応することができる第１の官能基及びキレート部分のような第２の部分（例えば本明細書に記載のキレート部分）上の官能基と反応することができる第２の官能基を含みうる。
【００９６】
本明細書で用いる場合、「ペプチド」とは、１つ以上のアミド結合を介して共有結合された、２つ以上のアミノ酸、限定するものではないが１００超のアミノ酸を含むペプチドを指す。実施形態によっては、該ペプチドは対象に投与されると、該ペプチドはＧＣＣに結合する。ペプチドは、例えば３、４，５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８個超のアミノ酸を含みうる。いくつかの実施形態では、ペプチドは、１５個超、例えば、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、または９０個超のアミノ酸を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該ペプチドは、アミノ酸長が９、１０、１１、１２、１３、または１４超である。
【００９７】
本明細書で用いる場合、用語「対象」は、用語「対象」は、ヒト及びヒト以外の動物を含むことが意図される。ヒト対象の例には、障害（例えば本明細書に記載の障害）を有するヒト患者あるいは正常な対象が挙げられる。用語「ヒト以外の動物」として、すべての脊椎動物、例えば非哺乳動物（例えば、ニワトリ、両生類、爬虫類）及び哺乳動物（例えばヒト以外の霊長類、家畜化した及び／または農学的に有用な動物、例えば、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ等）が挙げられる。
【００９８】
本明細書で用いる場合、用語「大腸癌」は結腸癌または腸癌としても公知であり、結腸または直腸（大腸の部分）における、または虫垂における制御されない細胞増殖由来の癌を指す。
【００９９】
本明細書では用語「胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）」及び「胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）」は区別なく使用される。
【０１００】
本明細書で用いる場合、「ＳＴＡＲ」、「ＧＵＣ２Ｃ」、「ＧＵＣＹ２Ｃ」、または「ＳＴ受容体」タンパク質としても公知である「ＧＣＣ」は、哺乳動物のＧＣＣ、好ましくはヒトＧＣＣタンパク質を指す。ヒトＧＣＣは、配列番号４において示されるタンパク質及びその天然に存在する対立遺伝子タンパク質変異体を指す。他の変異体は、当技術分野において公知である。例えば残基２８１にロイシンを有する受託番号Ｅｎｓｐ００００２６１１７０、ＥｎｓｅｍｂｌＤａｔａｂａｓｅ、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ及びＷｅｌｌｃｏｍｅ  Ｔｒｕｓｔ  Ｓａｎｇｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、米国特許出願公開第２００６００３５８５２号の配列番号１４、またはＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＢ１９９３４を参照されたい。典型的に、天然に存在する対立遺伝子変異体は、配列番号４のＧＣＣの配列と少なくとも９５％、９７％、または９９％同一であるアミノ酸配列を有する。転写物は、１０７３のアミノ酸のタンパク質産物をコードし、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００４９６３において記載される。ＧＣＣタンパク質は、膜貫通細胞表面受容体タンパク質として特徴付けられ、腸液、電解質の恒常性、及び細胞増殖の維持に重要な役割を果たすと考えられる。
【０１０１】
ヒトＧＣＣのアミノ酸配列（ＧｅｎＰｅｐｔ受託番号ＮＰ−＿００４９５４；配列番号４）：
【化３−１】
2017503763.tif 000005
【化３−２】
2017503763.tif 000006
【０１０２】
２つの配列間の「相同性」または「同一性」の計算は、以下の通り実行することができる。配列は、最適な比較目的のために整列される（例えば、ギャップは、最適なアライメントのために、第１の及び第２のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方に導入することができ、非相同配列は、比較目的のために無視することができる）。比較目的のためにアライメントされる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、４０％、または５０％、少なくとも６０％、または少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが、比較される。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められる場合、分子は、その位置で同一となる（本明細書において使用される場合、アミノ酸または核酸「同一性」は、アミノ酸または核酸「相同性」と等価である）。２つの配列の間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要があるギャップの数及び各々のギャップの長さを考慮に入れた、配列によって共有される同一の位置の数の関数である。
【０１０３】
配列の比較及び２つの配列の間の相同性パーセントの判定は、数学的なアルゴリズムを使用して行うことができる。２つのアミノ酸配列の間の相同性パーセントは、当技術分野において公知の任意の方法を使用して判定することができる。例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３（１９７０））によれば、アルゴリズムは、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれかならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップウェイト（ｇａｐ  ｗｅｉｇｈｔ）及び１、２、３、４、５、または６の長さウェイト（ｌｅｎｇｔｈ  ｗｅｉｇｈｔ）を使用するＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムに組み込まれている。２つのヌクレオチド配列の間の相同性パーセントはまた、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスならびに４０、５０、６０、７０、または８０のギャップウェイト及び１、２、３、４、５、または６の長さウェイトを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ａｃｃｅｌｅｒｙｓ社、カリフォルニア州サンディエゴ市所在）中のＧＡＰプログラムを使用して判定することもできる。相同性の判定のためのパラメータの例示的なセットは、１２のギャップペナルティー、４のギャップ伸長ペナルティー、及び５のフレームシフトギャップペナルティーを用いるＢｌｏｓｓｕｍ６２スコアリングマトリックスである。
【０１０４】
「抗ＧＣＣ抗体分子と」は、ＧＣＣ（例えばヒトＧＣＣ）相互作用するか、またはそれを認識する、例えばそれに結合する（例えば特異的に結合する）抗体分子（つまり抗体、抗体の抗原結合断片、または抗体アナログ）を指す。例示的な抗ＧＣＣ抗体分子を表３及び表４にする。
【０１０５】
本明細書で用いる場合「アルキル」とは、直鎖アルキル基、分岐鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、及びシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基のラジカルを指す。「アルキレン」とは、二重のラジカル、すなわち、両端で置換された脂肪族基を指す。いくつかの実施形態では、直鎖または分岐鎖アルキルは、その骨格に３０個以下の炭素原子（例えば、直鎖ではＣ１〜Ｃ３０、分岐鎖ではＣ３〜Ｃ３０）を有し、他の実施形態では、２０個以下または１０個以下の炭素原子を有しうる。同様に、あるシクロアルキルは、その環構造に３〜１０個の炭素原子を有することができ、いくつかの実施形態では、その環構造に５、６または7個の炭素を有しうる。本明細書で用いる用語「アルケニル」とは、少なくとも1つの二重結合を含んでいる脂肪族基を指す。本明細書で用いる用語「アルキニル」とは、少なくとも1つの三重結合を含んでいる脂肪族基を指す。
【０１０６】
「ヘテロアルキレン」とは、炭素以外の１つ以上の原子（例えば、酸素、窒素、硫黄、リンまたはそれらの組み合わせ）から選択される骨格鎖原子を有する、場合によっては置換されたアルキレンを指す。数値範囲が与えられてもよく、例えばＣ１〜Ｃ６ヘテロアルキレンであり、鎖の炭素数を指し、この例では１個〜６個の炭素原子を含む。例えば、‐ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２‐ラジカルは「Ｃ３」ヘテロアルキレンを指す。該分子への接続は、該ヘテロアルキレンのヘテロ原子または炭素のいずれかを介しうる。
【０１０７】
２．ＧＣＣ標的化合物
本願は、ペプチド、放射性原子を結合することができるキレート部分、及びリンカーを含む、ＧＣＣ標的化合物を提供する。このセクションでは、これらの成分の各々、及びこれらの構成要素のうちの１つ以上を含む化合物について説明する。
【０１０８】
２．１ペプチド
本願は、本明細書に記載のぺプチドを含む種々のＧＣＣ標的化合物を開示する。いくつかの実施形態では、該ペプチドは配列番号１のアミノ酸配列を含む。
【０１０９】
本明細書に記載の化合物に含まれるペプチドは、ＧＣＣの天然リガンドである１８アミノ酸配列（配列番号２）である大腸菌エンテロトキシンＳＴｐに関連する。該ペプチドは、本明細書に記載の化合物に含まれている場合、リンカー（ＬまたはＬ’）に取り付けられたアミノ末端と、遊離カルボキシ末端とを有する。
【０１１０】
実施形態によっては、該は、アミノ酸配列：Ｃｙｓ２‐Ｇｌｕ‐Ｌｅｕ‐Ｃｙｓ３‐Ｃｙｓ４‐Ａｓｎ‐Ｐｒｏ‐Ａｌａ‐Ｃｙｓ５‐Ａｌａ‐Ｇｌｙ‐Ｃｙｓ６‐Ｔｙｒ（配列番号１）または配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるアミノ酸配列を含む。配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドあるいは配列番号１のアミノ酸配列とパーセント同一性を有するペプチドは、Ｃｙｓ２とＣｙｓ５との間のジスルフィド結合及びＣｙｓ３とＣｙｓ６との間のジスルフィド結合を有していることが好ましい。
【０１１１】
別の実施形態では、該ペプチドは、アミノ酸配列：Ｃｙｓ１‐Ｃｙｓ２‐Ｇｌｕ‐Ｌｅｕ‐Ｃｙｓ３‐Ｃｙｓ４‐Ａｓｎ‐Ｐｒｏ‐Ａｌａ‐Ｃｙｓ５‐Ａｌａ‐Ｇｌｙ‐Ｃｙｓ６‐Ｔｙｒ（配列番号３）または配列番号３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む。配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドまたは配列番号３のアミノ酸配列とパーセント同一性を有するペプチドは、Ｃｙｓ１とＣｙｓ４の間のジスルフィド結合、Ｃｙｓ２とＣｙｓ５との間のジスルフィド結合、及びＣｙｓ３とＣｙｓ６との間のジスルフィド結合を有していることが好ましい．
【０１１２】
別の実施形態では、該ペプチドは、ＳＴｐ１‐１８（配列番号２）のアミノ酸配列または配列番号２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む。配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドまたは配列番号２のアミノ酸配列とパーセント同一性を有するペプチドは、Ｃｙｓ５とＣｙｓ１０との間のジスルフィド結合、Ｃｙｓ６とＣｙｓ１４との間のジスルフィド結合、Ｃｙｓ９とＣｙｓ１７との間のジスルフィド結合を有することが好ましく、該アミノ酸は天然の大腸菌エンテロトキシン中のその位置に従って番号が付けられている。
【０１１３】
いくつかの実施形態では、該ペプチドは、ＳＴｈまたはその一部分を含まない。ＳＴｈは、ＳＴｐとはある配列の違いを有する大腸菌エンテロトキシンである。例えば、ＳＴｐは１５位にＡｌａ（天然のＥ．ｃｏｌｉ配列に従って番号付けされる）を含むが、ＳＴｈは同じ位置にＴｈｒを含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドは１５位にＡｌａを含み、そのアミノ酸は天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐのその位置に従って番号付けされる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドは１５位にＴｈｒを含まず、そのアミノ酸は天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐのその位置に従って番号付けされる。配列の違いの別の例を挙げると、天然のＳＴｐは１８アミノ酸長であるが、天然のＳＴｈは１９アミノ酸長である。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、１８アミノ酸長以下である。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、１８、１７、１６、１５、または１４アミノ酸長以下である。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、該ペプチドまたは該ペプチドのＳＴｐ様部分は１３〜１８、１４〜１８、１５〜１８、１６〜１８、または１７〜１８アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、該ペプチドまたは該ペプチドのＳＴｐ様部分は１３〜１７、１４〜１７、１５〜１７、または１６〜１７アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、該ペプチドまたは該ペプチドのＳＴｐ様部分は、１６〜１８または１７〜１８アミノ酸長である。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、ペプチドまたは該ペプチドのＳＴｐ様部分は、１５個超（例えば２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、または９０個超のアミノ酸を含む。例えば、いくつかの実施形態では、該ペプチドまたは該ペプチドのＳＴｐ様部分は、９、１０、１１、１２、１３、または１４超のアミノ酸長である。
【０１１６】
いくつかの実施形態では、該ペプチドは、１５位にＡｌａを含む配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるアミノ酸配列を含み、該アミノ酸は天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐエンテロトキシンのその位置に従って番号付けされる。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、１５位にＡｌａを含む配列番号２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるアミノ酸配列を含み、該アミノ酸は天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐエンテロトキシンのその位置に従って番号付けされる。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、１５位にＡｌａを含む配列番号３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるアミノ酸配を含み、該アミノ酸は天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐエンテロトキシンのその位置に従って番号付けされる。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、該ペプチドは、配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるアミノ酸配列を含み、該ペプチドは１８アミノ酸長以下である。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるアミノ酸配列を含み、該ペプチドは１７アミノ酸長以下である。いくつかの実施形態では、配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるアミノ酸配列を含み、該ペプチドは１６アミノ酸長以下である。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるアミノ酸配列を含み、該ペプチドは１５アミノ酸長以下である。いくつかの実施形態では、該ペプチドは、配列番号１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上同一であるアミノ酸配列を含み、該ペプチドは１４アミノ酸長以下である。
【０１１８】
該化合物に含まれるペプチドは、１、２または３個の修飾（例えば置換、挿入または欠失）を含む配列番号１、２または３のアミノ酸配列を有しうる。例えば、一実施形態では、該ペプチドは、該ペプチドの結合活性に実質的な影響を及ぼさない保存的アミノ酸置換または非必須アミノ酸置換を有していてもよい。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似する側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられる置換である。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該分野において定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えばリシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例えばアスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖（例えばトレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。
【０１１９】
本明細書に記載の化合物は、配列番号１のアミノ酸配列を含む（または配列番号１のアミノ酸配列から構成される）ペプチド、配列番号３のアミノ酸配列を含む（または配列番号３のアミノ酸配列から構成される）ペプチド、あるいは配列番号２のアミノ酸配列を含む（または配列番号２のアミノ酸配列から構成される）ペプチドを含みうる。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、該ペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列、Ｎ末端の第１の異種アミノ酸配列及び／またはＣ末端の第２の異種アミノ酸配列を含む。該異種アミノ酸配列は、天然のＥ．Ｃｏｌｉ  ＳＴｐに対応する配列以外の配列とすることができる。例えば、該異種アミノ酸配列は人工配列またはヒト配列とすることができる。いくつかの実施形態では、該第１及び／または第２の異種配列は１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、該第１の異種配列は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、該第１の異種配列は最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、該第２の異種配列は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、第２の異種配列は最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸長である。
【０１２１】
配列番号３に示すＳＴｐ５‐１８と呼ぶ好適なＧＣＣ結合ペプチドは、１４アミノ酸長であり、完全長のエンテロトキシンの残基５‐１８を含む。この１４アミノ酸断片は、ＧＣＣとナノモルの親和性を有する。
【０１２２】
いくつかの実施形態では、該ペプチドは以下の特性のうちの１つ以上を有する：
ａ）該ペプチドは、少なくとも野生型ＳＴｐまたはＳＴｐ５‐１８と同程度に強力にＧＣＣに結合する。
ｂ）該ペプチドは、野生型ＳＴｐよりも協力国ＧＣＣに結合する。
ｃ）末端修飾されたペプチド（例えばＮ末端が修飾され、例えばキレート部分及びリンカーをＮ末端に含む）は、少なくとも末端修飾のない対応するペプチドと同程度に強力にＧＣＣに結合する。すなわち、該ペプチドは末端修飾に十分に耐える。
ｄ）該ペプチドは、適した分布動態を有し、例えば、本明細書の表６に記載のパラメータのうちの１つ以上を有し、例えば、本明細書の表６に記載のいずれか１つ以上のパラメータの＋／１１０％、２０％、３０％、４０％、または５０％であるパラメータを有する。
ｅ）該ペプチドは、２または３個のジスルフィド結合を含み、例えば、ジスルフィド結合はＣｙｓ５〜Ｃｙｓ１０，Ｃｙｓ６〜Ｃｙｓ１４、及びＣｙｓ９〜Ｃｙｓ１７のうちの２つ以上を連結し、該アミノ酸は天然の大腸菌エンテロトキシンのその位置に従って番号付けされる。
いくつかの実施形態では、該ジスルフィド結合は、１つ以上のジスルフィド結合がない同じ配列のペプチドに関連した標識条件下で改善された安定性を該ペプチドに付与する。
ｆ）該標識されたペプチドは、高い信号対バックグラウンド比、例えば、完全長のＳＴｐの信号対バックグラウンド比と同程度に高いかまたはそれ以上の比を有する。
ｇ）該ペプチドは、診断または治療としての投与レベルで低い毒性を有し、例えば、ＴＤ５０（対象の５０％における中毒量）は、ＥＤ５０または該化合物が一般に診断として投与される用量よりも、１０、５０、１００、５００、１０００、５０００、または１００００倍高い。
【０１２３】
２．２キレート部分
一実施形態では、該キレート部分は、１個以上のアミン、エーテルまたはカルボン酸を含む。一実施形態では、該キレート部分、複数のアミンを含む。一実施形態では、該キレート部分は、４個以上のＮ、４個以上のカルボン酸基、またはそれらの組み合わせを含む。
【０１２４】
一実施形態では、該キレート部分はＳを含まない。
【０１２５】
一実施形態では、該キレート部分は環を含む。実施形態によっては、該環は、Ｏ及び／またはＮを含む。一実施形態では、該キレート部分は、３個以上のＮ、３個以上のカルボン酸基、またはそれらの組み合わせを含む環である。
【０１２６】
一実施形態では、該キレート部分は大環状分子である。いくつかの実施形態では、該大環状分子は、Ｏ及び／またはＮを含む。一実施形態では、該キレート部分は、３個以上のＮ、３個以上のカルボン酸基、またはそれらの組み合わせを含む大環状分子である。一実施形態では、該大環状分子は１２員環である。
【０１２７】
キレート部分の例として、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、及びデスフェリオキサミンが挙げられる。追加のキレート構造は、ＷＯ２０１２／１７４１３６に記載のものを含む。一実施形態では、該キレート部分はＤＯＴＡである。
【０１２８】
２．３  リンカー
概して、リンカーは、ペプチド部分にキレート部分を取り付けることを可能にして、該キレート部分が他のペプチドの機能と干渉しないような、例えば、該ペプチドがＧＣＣのような受容体に結合するのを阻害しないような大きさ及び柔軟性を有する。
【０１２９】
実施形態によっては、該リンカー（Ｌ）はアルキレンまたはヘテロアルキレンを含む。いくつかの実施形態では、Ｌは、官能基を介して別のアルキレンまたはヘテロアルキレンに取り付けられたアルキレンまたはヘテロアルキレンを含む。官能基の例としては、スルフィド、ジスルフィド、アミド、エステル、ケトン、尿素、チオ尿素、カルバメート、またはカルボネートが挙げられる。一実施形態では、Ｌは、アミド、尿素、またはチオ尿素である。一実施形態では、ＬはＷＯ２０１２／１７４１３６の、例えば、パラグラフ［００３１］〜［００３５］に記載の二価のリンカーであり、その内容を参照により本願に援用する。一実施形態では、Ｌはアミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基である。一実施形態では、Ｌはアミノヘキシル基を含む。
【０１３０】
一実施形態では、Ｌ’はアルキレンであり、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキレン（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはＣ１０アルキレン）である。
【０１３１】
一実施形態では、Ｌは、例えば少なくとも４、５、または６個の炭素を有する、アルカニル部分（非分岐アルカニル部分）を含む。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、該リンカーにＡｈｘ（アミノヘキシル）基が存在していることで、Ａｈｘ基がない同じリンカーよりも安定性が高くなる。例えば、該Ａｈｘ基はリンカーの自己切断のし易さを低減しうる。
【０１３３】
２．４放射性原子
該放射性原子は、例えば、陽電子放出体、アルファ放出体、ベータ放出体及び／またはガンマ放出体とすることができる。放射性原子の例としては、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８２Ｒｕ、６８Ｇａ、１２４Ｉ、９９Ｔｃ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、６１Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、１５３Ｇｄ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２０１Ｔｉ、３２Ｐ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、９０Ｙ及び１７７Ｌｕが挙げられる。実施形態によっては、該放射性原子は、１８Ｆ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、または６４Ｃｕである。
【０１３４】
２．５ＧＣＣ標的化合物
例えば本明細書に記載の方法に有用なＧＣＣ標的化合物は、式（Ｉ）の化合物を含む：
ペプチド‐Ｌ‐キレート部分‐放射性原子
式（Ｉ）
式中、ペプチドは、本明細書に記載のペプチドであり、Ｌは二価のリンカーであり、該キレート部分は放射性原子を結合することができるキレート部分であり、該放射性原子は、例えば本明細書に記載の放射性原子である。
【０１３５】
他の実施形態では、該ＧＣＣ標的化合物は、式(ＩＩ)の構造を有する：
ペプチド‐Ｌ‐キレート部分
式（ＩＩ）
式中、ペプチドは本明細書に記載のペプチドであり、Ｌは二価のリンカーであり、該キレート部分は放射性原子を結合することができるキレート部分である。
【０１３６】
実施形態によっては、Ｌはアルキレンまたはヘテロアルキレンを含む。いくつかの実施形態では、Ｌは、官能基を介して別のアルキレンまたはヘテロアルキレンに取り付けられたアルキレンまたはヘテロアルキレンを含む。官能基の例としては、ジスルフィド、アミド、エステル、ケトン、尿素、チオ尿素、カルバメート、またはカルボネートが挙げられる。
【０１３７】
実施形態によっては、Ｌは官能基を用いてペプチドまたはキレート部分に取り付けられている。一実施形態では、Ｌは官能基を用いてペプチド及びキレート部分の両方に取り付けられている。実施形態によっては、該官能基は、アミド、エステル、カルバメート、カルボネート、尿素、チオ尿素、スルフィド、またはジスルフィドである。一実施形態では、Ｌはアミド、尿素またはチオ尿素である。一実施形態では、Ｌはアミドを用いてペプチドに取り付けられている。一実施形態では、Ｌはアミドを用いてペプチドに取り付けられ、該アミドの窒素は該ペプチドの末端アミンである。一実施形態では、Ｌは尿素またはチオ尿素を用いてキレート部分に取り付けられている．一実施形態では、Ｌはチオ尿素を用いてキレート部分に取り付けられている。一実施形態では、Ｌは、ＷＯ２０１２／１７４１３６の、例えば、パラグラフ［００３１］〜［００３５］に記載の二価のリンカーであり、その内容を参照により本願に援用する。一実施形態では、Ｌはアミノペンチル基、アミノヘキシル基、またはアミノヘプチル基である。
【０１３８】
実施形態では、該キレート部分は、１つ以上のアミン、エーテルまたはカルボン酸を含む。一実施形態では、該キレート部分は複数のアミンを含む。一実施形態では、該キレート部分は大環状分子（例えばＯ及び／またはＮを含む大環状分子）である。キレート部分の例としては、ＤＯＴＡ、ＮＯＴＡ、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＴＥＴＡ、ＤＯ３Ａ、ＰＴＣＡ、及びデスフェリオキサミンが挙げられる。追加のキレート構造は、ＷＯ２０１２／１７４１３６に記載のものを含む。一実施形態では、該キレート部分はＤＯＴＡである。
【０１３９】
該放射性原子は、例えば、陽電子放出体、アルファ放出体、ベータ放出体及び／またはガンマ放出体とすることができる。放射性原子の例としては、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８２Ｒｕ、６８Ｇａ、１２４Ｉ、９９Ｔｃ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、６１Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、１５３Ｇｄ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２０１Ｔｉ、３２Ｐ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、９０Ｙ及び１７７Ｌｕが挙げられる。実施形態によっては、該放射性原子は１８Ｆ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、または６４Ｃｕである。
【０１４０】
例えば本明細書に記載の方法に有用な化合物は、式（ＩＩＩ）の構造を含みうる：
ペプチド‐Ｌ‐キレート部分‐ＰＥＴ
式（ＩＩＩ）
式中、ペプチドは本明細書に記載のペプチドであり、Ｌはリンカーであり、キレート部分は本明細書に記載のキレート部分であり、ＰＥＴは陽電子放出原子である。
【０１４１】
一実施形態では、該化合物は６８Ｇａ（例えば６８Ｇａによりキレート化したＤＯＴＡ）を含む。
【０１４２】
一実施形態では、該化合物は以下の式（ＩＶ）または（ＩＶａ）の化合物である。：
【０１４３】
【化４】
2017503763.tif 000007
式中、ペプチド、キレート部分及び放射性原子は上述したようなものであり、Ｌ’はアルキレンまたはヘテロアルキレンであり、Ｆは官能基（例えば上記官能基）である。実施形態によっては、放射性原子はＰＥＴ（例えば、１８Ｆ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、または６４Ｃｕ）であり、例えば６８Ｇａである。
【０１４４】
一実施形態では、Ｆは尿素またはチオ尿素である。一実施形態では、Ｆはチオ尿素である。
【０１４５】
一実施形態では、Ｌ’はアルキレン、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキレン（例えばＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはＣ１０アルキレンである。
【０１４６】
一実施形態では、該化合物は、以下の式（Ｖ）または（Ｖａ）の化合物である：
【化５】
2017503763.tif 000008
ペプチド、キレート部分、放射性原子及びＬ’は上述したようなものであり、ＸはＯまたはＳである。
【０１４７】
実施形態によっては、放射性原子はＰＥＴ（例えば、１８Ｆ、６８Ｇａ、８９Ｚｒ、または６４Ｃｕ）、例えば６８Ｇａである
【０１４８】
実施形態によっては、ＸはＳである。
【０１４９】
実施形態によっては、Ｌはアルキレン、例えばＣ１〜Ｃ１０アルキレン（例えばＣ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、またはＣ１０アルキレンである。
【０１５０】
実施形態によっては、Ｌはアルキレン（例えばＣ５）及びＸはＳである。
【０１５１】
一実施形態では、本明細書に記載の化合物（例えば式（ＩＩＩ）、（ＩＶａ）及び／または（Ｖａ）の化合物）は、以下の特性の１つ以上を有する：
標識効率が高く、キレート化６８Ｇａの取り込みは６０％超である（崩壊の補正後）。全収率が高く、最終の精製後の化合物の全収率は開始時の６８Ｇａイオンに基づき＞４０％である（崩壊の補正後）である。比放射能が高く、ＨＰＬＣにより測定すると＞５００Ｃｉ／ｍｍｏｌである。安定性が高く、調製６時間後に残存している標識化化合物は＞９０％である。ＧＣＣについて阻害能が高い（ＩＣ５ｏ＜１０ｎＭ）。ターゲットの阻害が不可逆性であるか、可逆性が遅い。生食水及びエクスビボの安定性が高く、室温にて最長３時間、生食水及び血中で＞９０％の安定性がある。
【０１５２】
２．６  ＤＳＰ標的化合物
本明細書に記載の化合物は薬剤物質前駆体（ＤＳＰ）とすることができ、放射性標識のない本明細書に記載の化合物である。例えば、該化合物は式（ＩＩ）、式（ＩＶ）、式（Ｖ）及び／または式（ＶＩ）の化合物とすることができる。係る化合物は組成物とすることができ、例えば、複数のＤＳＰを含む組成物である。いくつかの実施形態では、該組成物は溶液とすることができる。他の実施形態では、該組成物は乾燥粉末である。種々の組成物について以下で詳細に説明する。
【０１５３】
一実施形態では、該化合物は、ＭＬＮ６９０７ＤＳＰ、すなわち式（ＶＩ）のＤＳＰである：
【化６】
2017503763.tif 000009
【０１５４】
２．７  ＤＰ標的化合物
本明細書に記載の化合物は製剤（ｄｒｕｇ  ｐｒｏｄｕｃｔ＝ＤＰ）とすることができ、本明細書に記載の放射性標識化合物を指す。例えば、該化合物は、式（Ｉ）、式（ＩＩＩ）、式（ＩＶａ）、式（Ｖａ）及び式（ＶＩａ）の化合物とすることができる。一実施形態では、該化合物は、ＭＬＮ６９０７ＤＰ、すなわち式（ＶＩａ）によるＤＰである：
【化７】
2017503763.tif 000010
【０１５５】
式（ＶＩａ）のＧａが結合した化合物は、化学式Ｃ８５Ｈ１１９ＧａＮ２１Ｏ２８Ｓ７、質量２１７４．５８、分子量２１７７．１６を有する。該［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７製剤は、Ｎ’‐ベンズ‐４‐イル‐Ｎ‐（６‐ヘキサン）‐１‐オイルチオウレアリンカーを介して放射性核種ガリウム６８（６８Ｇａ）に結合されたＤＯＴＡキレートに結合させたブタ由来大腸菌熱安定性エンテロトキシンＳＴｐ（５‐１８）の化学合成された１４‐アミノ酸切断型から構成される。ＤＯＴＡは大環状多座キレート剤である。ＤＯＴＡは、その４個の窒素原子とそのＯ−原子のうちの２個を介してＧａ＋３をキレート化することができる。ガリウムは金属放射性核種であり、半減期は約６８分である。ガリウムはＥｍａｘ＝１，８９９‐ｋｅＶの消滅放射線による陽電子放出によって崩壊する。いくつかの実施形態では、該リンカーはパラベンジル基、ＮＣＳ部分、及びアミノヘキシル部分を含む。
【０１５６】
該ＤＰ化合物は組成物とすることができ、例えば、複数のＤＰを含む組成物である。いくつかの実施形態では、該組成物は、本明細書に記載の複数の化合物を含み、複数の化合物のうち少なくとも１つの化合物は放射性原子（例えば陽電子放出原子、例えばガリウム６８）に結合し、複数の化合物Ｐのうち少なくとも１つの化合物は放射性原子に結合していない。例えば、該組成物中の該複数の化合物の少なくとも１つは、式（Ｉ）の構造、例えば式（ＩＩＩ）を有し、該組成物中の該複数の化合物の少なくとも１つは式（ＩＩ）の構造を有する。別の例を挙げると、該組成物中の該複数の化合物の少なくとも１つは、式（Ｖａ）の構造を有し、該組成物中の該複数の化合物の少なくとも１つは、式（Ｖ）の構造を有する。別の例を挙げると、該複数の化合物の少なくとも１つは式（ＶＩａ）の構造を有し、該複数の化合物の少なくとも１つは式（ＶＩ）の構造を有する。
【０１５７】
実施形態によっては、該組成物は、ＤＰ化合物と結合していないＤＳＰ化合物との比が約１：１００〜１：１０，０００、例えば、ＤＰ化合物と結合していないＤＳＰ化合物との比が約１：１，０００〜１：２，０００、例えば、ＤＰ化合物とＤＳＰ化合物との比が約１：１，５００である。
【０１５８】
３．ＧＣＣ標的化化合物の生成
本明細書に記載の化合物は、固相法または液相法など当該技術では公知の方法を用いて作製することができる。
【０１５９】
一態様では、本開示は、以下の式（式ＶＩ）の化合物を調整する固相合成方法を提供する：
【化８】
2017503763.tif 000011
【０１６０】
該方法は、固相ペプチド合成（例えば、２‐クロロトリチルクロライド樹脂と共にＤＩＥＡ及びＤＭＦを用いる）を用いて該ペプチドを調製し、該ペプチドを酸化条件に供して上記のようなスルフィド結合を形成し、アミノヘキサン酸（例えば、酸塩化物のようなハロゲン化アシル、アシルアジド、アシルイミダゾール、無水物、またはｅｓｔｅｒｏｒ  ｓｕｃｃｉｎａｍｉｄｅ（スクシンアミド））の活性酸を用いて、得られたペプチドを処理してアミド結合を形成し、得られた化合物を塩化チオニルにより処理し、該アミノヘキサン酸のアミンと該塩化チオニルを反応させる時間を準備した後、保護されたＤＯＴＡ（例えばベンジル保護されたＤＯＴＡ）またはＤＯＴＡ‐ＮＨＳを添加し、該ＤＯＴＡを脱保護して式（ＶＩ）の化合物を提供し、該化合物を６８Ｇａにより処理することによって、式（ＶＩａ）の化合物を得ること含む。いくつかの実施形態では、式（ＶＩ）の化合物を６８Ｇａにより処理して式（ＶＩａ）を得るステップは、式（ＶＩ）の化合物を提供するステップとは異なる場所でかつ／または異なる第三者によって実行される。
【０１６１】
別の実施形態では、式（ＶＩ）の化合物は、ペプチド（例えば固相ペプチド合成の後に酸化を用いて、例えば上記のように調製したペプチド）を上記のようなアミノヘキサン酸の活性酸を用いて処理してアミド結合を形成することによって、該アミノヘキサン酸に該ペプチドを取り付けることによって調製することができる。得られた化合物中のアミノヘキサン酸のアミンをベンジル保護されたＤＯＴＡを用いて処理し、例えばＮＣＳを用いて活性化して、該ＤＯＴＡと該アミノヘキサン酸のアミンとの間にチオ尿素結合を形成する。得られた化合物は、例えば（Ｐｔ／Ｃと共に）該ベンジル保護基を除去することによって、脱保護して式（ＶＩ）の化合物を得る。次に、式（ＶＩ）の化合物を６８Ｇａを用いて処理して、式（ＶＩａ）の完成された化合物を得る。いくつかの実施形態では、式（ＶＩ）の化合物を６８Ｇａを用いて処理して式（ＶＩａ）の化合物を得るステップは、式（ＶＩ）の化合物を提供するステップとは異なる場所でかつ／または異なる第三者によって実行される。
【０１６２】
該化合物（例えば本明細書に記載のＤＳＰ化合物）はＬＣ‐ＭＳにより定量することができる。ＭＬＮ６９０７ＤＳＰ１に関し、１０５５．６Ｄａ（質量２１１０．２Ｄａ）のｍ／ｚピークが、該リンカーを介してＤＯＴＡに結合された未変化のペプチドから想定される。
【０１６３】
３．１  ＤＳＰ２組成物の生成方法
上記セクションのＤＳＰ化合物の可溶性製剤を生成するために、以下のプロトコル例を用いうる。該粉末状化合物は、ｐＨ約７．０〜７．５（例えば、７．３）のＮａＯＡｃに溶解させることができる。次に、スクロース、エタノール及び酢酸を添加しうる。該混合物の最終ｐＨは約３．５〜４．０（例えば３．８)になりうる。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、該可溶性製剤は、該ＧＣＣ標的化合物と、緩衝液（例えば、ＮａＯＡｃ／酢酸）、可溶化剤（例えば、エタノール）、凍結乾燥保護剤（例えば、スクロース）、ポリソルベート８０、及びプルロニックＦ‐６８のうちの１つ以上とを含む。該ＧＣＣ標的化合物は２５〜１００uｇ／ｍＬで存在しうる。該ＮａＯＡｃ及び酢酸は、０．０５Ｍ溶液及び０．２Ｍ溶液として添加されうる。エタノールは０〜２５％で存在しうる。スクロースは０〜２％で存在しうる。ポリソルベート８０は約０．０１％で存在しうる。プルロニックＦ‐６８は約０．２ｍＭで存在しうる。
【０１６５】
調製例を以下の表１に示す：
【表１−１】
2017503763.tif 000012
【表１−２】
2017503763.tif 000013
【０１６６】
３．２  ＧＣＣ標的化合物を放射性標識する方法
本明細書に記載のＧＣＣ標的化合物は、例えば以下の例示のプロトコルに従って、放射性標識することができる。まず、６８Ｇｅ／６８Ｇｅジェネレータを用いてガリウム６８を発生させ、これを精製及び濃縮しうる。次に、放射性標識の発生させることが可能な条件下で、該ガリウム６８を本明細書に記載のＤＳＰ２溶液と混合する。最後に、該反応産物を精製する。各ステップについて以下で詳述する。
【０１６７】
６８Ｇａジェネレータは、ゲルマニウム６８の断片がガリウム６８へと崩壊する前の親同位体であるゲルマニウム６８を保持し、次に、該親同位体から該ガリウム６８を精製する。適した６８Ｇａジェネレータの１つはＥｃｋｅｒｔ＆Ｚｉｅｇｌｅｒ社製である。該親６８Ｇｅは陽子加速器を用いて約２３ＭｅＶの陽子エネルギーでＧａ２Ｏ３ターゲット上の（ｐ、２ｎ）反応によって主に生成される。該反応は：Ｇａ‐６９＋ｐ‐‐＞２ｎ＋Ｇｅ‐６８である。他の部分は、より高い陽子エネルギーで６９Ｇａ（ｐ、２n）＋７１Ｇａ（ｐ、４ｎ）反応によって処理されるｎａｔＧａ（ｐ、ｘｎ)と、６６Ｚｎ(α、２ｎ)である。
【０１６８】
６８Ｇｅ／６８Ｇａジェネレータは閉システムとすることができ、石英ガラス及び熱可塑性物質などの耐放射性材料から作製され、吸着物質が充填されたクロマトグラフィカラムから構成される。６８Ｇｅが強力に吸着される吸着物質は一般に、固体支持体であり、金属酸化物（Ａｌ２Ｏ３、ＴｉＯ２またはＳｎＯ２）、有機物、及び無機支持体である。６８Ｇｅの酸性ストック溶液をカラムに入れて該吸着物質上に６８Ｇｅ親核種を固定する。その放射性の親である６８Ｇｅの崩壊によってから６８Ｇａは連続的に生成され、希塩酸により希釈されうる。
【０１６９】
ガリウム６８を精製及び濃縮するいくつかの選択肢が利用できる。例えば、アセトン法を用いることができ、この方法は、カチオン精製ステップを用いて６８Ｇｅ及び他の汚染された重金属を除去することができる。該ガリウム６８を分画して精製及び濃縮してもよい。例えばＨＣｌ（例えば０．１ＭのＨＣｌ）を用いて該ジェネレータから該ガリウム６８を溶出させることによって溶出液を生成し、ＳＣＸカラムのような陰イオンカラムに該溶出液を投入し、例えば９８％アセトン及び０．０２ＭのＨＣｌを用いて該陰イオンカラムから該ガリウム６８を溶出させることもできる。
【０１７０】
ガリウムの清浄反応は単回使用のカセットで行うことができる。例えば、単回使用の滅菌使い捨てカセットを利用し、半閉鎖自動システム（Ｅｃｋｅｒｔ＆Ｚｉｅｇｌｅｒ社のＭｏｄｕｌａｒ‐Ｌａｂ  ＰｈａｒｍＴｒａｃｅｒなど）を用いることができる。これらのカセットは、ＧＭＰに準拠したクリーンルーム条件下で組み立てられ、ガンマ線により滅菌され、二重に真空パックされる。
【０１７１】
標識化反応は、対象の身体内の標識された産物を確実に検出するのに十分に高い標識効率を実現するように選択された条件下で実行される。適切な条件例をここに示す。反応時間は３〜１０分（例えば１０分）でよい。該温度は６０〜１００℃または８０〜１００℃、例えば１００℃でよい。ｐＨは３．０〜４．５（例えば例えば３．８）でよい。該ｐＨは、（ｐＨ４超で発生することがある）６８Ｇａ酸化物及び水酸化種（コロイド）の形成を回避するのに十分に低いものであるが、ＤＯＴＡキレート剤を脱プロトン化するのに十分高いものにしておく必要がある。該反応緩衝液は所望のｐＨを達成するように選択することができる。適した反応緩衝液には、クエン酸、酢酸、及びリン酸緩衝液が挙げられ、例えば０．２ＭのＮａＯＡｃである。該反応に添加する化合物の質量は、２０〜７０uｇ、約３０〜６０uｇ、約４０〜５０uｇ、または約５５uｇでありうる。該反応バイアルからのアセトンは蒸発されうる。次いで、該混合物を冷却し、生食水を添加しうる。
【０１７２】
いくつかの実施形態では、該標識化反応は、例えばＭｏｄｕｌａｒ‐Ｌａｂ  ＰｈａｒｍＴｒａｃｅｒシステムによって自動化されている。Ｍｏｄｕｌａｒ‐Ｌａｂ  ＰｈａｒｍＴｒａｃｅｒのグラフィカルインタフェースを用いて、該合成プロセスを制御することができる。温度、活性、無線検出器の読み取り値、流量、圧力、及び弁設値などのパラメータを制御及び監視することができる。関連するデータ及び情報を含むレポートが運転毎に生成されうる。いくつかの実施形態では、該標識化プロトコルは固定されており、ユーザーが変更することはできない。
【０１７３】
該標識化反応が完了後、該反応生成物は精製されうる。該精製プロセスは、残存している可能性のあるアセトンを除去する緩衝液交換ステップを含みうる。該産物を例えばｔＣ１８ＳｅｐＰａｋカートリッジに入れて、次にエタノール及び水から成る溶液、例えば１．５ｍＬの４５％エタノール溶液を用いて溶出させることができる。次いで、それはＮａＣｌで希釈されうる。追加の精製ステップとして、１つ以上の０．２μｍフィルタ（例えばＰＶＤＦフィルタ）を通して該産物を滅菌濾過することができる。いくつかの実施形態では、２枚、３枚以上の連続したフィルタを通して該産物を濾過する。
【０１７４】
このプロセスにより得られた標識化化合物は、２６〜２３ＭＢｑ／ｎｍｏｌ（例えば約２９．５ＭＢｑ／ｎｍｏｌ）の比放射能を有しており、約９９．９４〜９９．９８％（例えば約９９．９７％）の放射化学的純度を有しうる。
【０１７５】
患者への投与に適した該放射性標識化合物は、約５．５のｐＨ（例えばｐＨ５〜６、例えばｐＨ４５．〜６．５、例えばｐＨ４〜７）を有しうる。
【０１７６】
４．ＧＣＣ標的化合物を含む医薬組成物
本明細書に記載の化合物または組成物（例えばＤＰ化合物または組成物）を含む容器も含まれる。実施形態によっては、ＤＰ組成物は、患者に投与するのに十分なＧＣＣ標的化合物に加え、アッセイ用の追加の量を有している必要がある。例えば、該容器は総容積が約９．５ｍｌのバイアルでよい。いくつかの実施形態では、該化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）は、名目上５５μｇのＤＳＰ化合物（例えばＭＬＮ６９０７  ＤＳＰ２化合物）を塩化６８Ｇａ塩化物により放射性標識することによって製造される。該バイアル内容物（最大７．５ｍＬ）の大半は患者への投与のため使用されうるが、ＤＰの約２ｍＬは解析試験に用いられうるか、余分なものである。
【０１７７】
一実施形態では、該組成物は、ＤＰ化合物及び薬学的に許容される担体（例えば溶出液及び／または希釈液）を含む。ＧＣＣ結合化合物用の製剤処方例を以下の表２に記載する：
【表２】
2017503763.tif 000014
【０１７８】
b該［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰは、６８Ｇｅ／６８Ｇａジェネレータから得られ０．２μｍフィルタを用いて濾過された塩化６８Ｇａを用いて５５μgのＭＬＮ６９０７ペプチド‐ＤＯＴＡコンジュゲートを標識することによって製造される。患者への投与量は、４．０〜６．０（＋１０％）ｍＣｉの［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰでありうる。
【０１７９】
ｃ該生成物の希釈液として生食水（０．９％塩化ナトリウム）を用いる。エタノールを添加して該生食水を希釈する。
【０１８０】
いくつかの実施形態では、患者への投与に適した該放射性標識化合物中のエタノールの割合は３．３〜３．８％である。
【０１８１】
５．ＧＣＣ標的化化合物を含むキット
本明細書に記載の化合物または組成物を含むキットも、本発明の範囲内にある。キットは、使用説明書；他の試薬、例えば標識、治療剤、またはＤＳＰ化合物を標識または治療剤にキレートするか、あるいは結合させることに有用な薬剤、または放射線防護組成物；投与のために化合物または組成物を調製するための装置または他の物質；医薬的に許容される担体；及び対象への投与のための装置または他の物質を含む１つ以上の他の要素を含みうる。使用説明書は、インビトロ（例えば試料中、例えば癌を有する患者からの生検または細胞）で、あるいはインビボでＧＣＣを検出するために、化合物または組成物を診断的に適用するための説明を含みうる。例えば、ＧＣＣ標的化化合物が医療用イメージング化合物である場合、イメージング用の説明書または検出可能な放射性標識を用いてＤＳＰを標識するための説明書を備えていてもよい。説明書は、例えば癌（例えば、結腸癌、胃癌、食道癌などの胃腸起源の癌）を有する患者における、推奨用量及び／または投与方法を含む、治療的適応用の手引きを含んでもよい。他の説明書は、該化合物（例えばＤＳＰ化合物）を放射性標識または治療剤へ結合することについての説明、または、例えば未反応の結合体化成分から、標識された化合物を精製するための説明を含んでいてもよい。上で考察したように、キットは、標識、例えば本明細書に記載の任意の標識を含みうる。上で考察したように、キットは、治療剤、例えば本明細書に記載の治療剤を含みうる。いくつかの適用例では、化合物は、他の構成要素、例えば放射性標識、または治療剤、例えば放射性同位元素、例えばイットリウムまたはルテチウムと反応する。そのような場合、キットは、反応、または出発物質または反応中間体から最終生成品を分離することに使用される分離装置、例えばクロマトグラフィカラムを実行するために、反応槽のうちの１つ以上を含みうる。ある実施形態では、該ＧＣＣ標的化合物は、被験者に投与する該化合物を調製するのに有用なカセットと共に提供される。例えば該放射性核種（例えばジェネレータから得られたガリウム６８）の精製スタップのための、あるいは該ＤＳＰを放射性核種（例えばガリウム６８）と接触させるステップのための）放射性標識化プロセスに、該カセットは使用されうる。いくつかの実施形態では、該キットは、該ＧＣＣ標的化化合物を投与する装置（例えば、場合によっては放射線シールドを備えた、事前装填されたシリンジ）を含む。いくつかの実施形態では、該キットは、該ＧＣＣ標的化化合物を定量する装置または試薬を含む。
【０１８２】
該キットは、少なくとも１つの追加的な試薬（診断用または治療用の薬剤など、例えば本明細書に記載の診断用または治療用の薬剤）及び／または、１つ以上の別個の医薬品において必要に応じて調製される１つ以上の追加の抗ＧＣＣ抗体分子または免疫複合体をさらに含みうる。
【０１８３】
該キットは、放射線防護体をさらに含みうる。同位元素の放射線分解性は公知である。この放射線分解を克服するために、放射線防護体は、そのような放射線防護体が該化合物（例えばＤＳＰ化合物）に対して無害である限り（つまり、それらが例えば同位体の標識化反応を阻害しないか、その標識化反応に悪影響を及ぼさない限り）、例えば反応緩衝液内に含まれうる。本発明の調製緩衝液は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）またはアスコルビン酸塩などの放射線防護体を含みうる。他の放射線防護体は当該分野で公知であり、調製緩衝液、すなわち遊離ラジカル捕捉剤（フェノール、亜硫酸塩、グルタチオン、システイン、ゲンチシン酸、ニコチン酸、パルミチン酸アスコルビル、ＨＯＰ（：Ｏ）Ｈ２Ｉグリセロール、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、Ｎａ２Ｓ２Ｏ、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３、及びＳＯ２など）においても使用され得る。
【０１８４】
提供されるキットは、患者へ投与するめの、放射性同位体でペプチドを放射性標識するのに有用である。該キットは、（ｉ）放射性標識化合物または組成物を含むバイアルと、（ｉｉ）放射性標識された化合物または組成物の安定化及び患者への投与のための製剤緩衝液を含むバイアルと、（ｉｉｉ）放射性標識手順を行うための説明書とを含む。該キットは、例えば説明書に推奨されるように、穏やかな条件下で十分な時間、放射性同位体またはその塩に本明細書に記載の化合物または組成物を曝露することを提供する。十分な純度、比放射能、及び結合特異性を有する放射性標識された抗体が生成される。放射性標識された化合物または組成物は、例えば製剤緩衝液で適切な濃度まで希釈され、さらに精製を行うかどうかに関係なく、患者に直接投与されうる。該化合物または組成物（例えばＤＳＰ化合物または組成物）は、例えば本明細書に記載のような乾燥粉末または溶液とし供給されうる。
【０１８５】
６．ＧＣＣ標的化イメージング化合物の投与量
本明細書に記載の化合物及び組成物は、（例えば対象において）例えばＧＣＣ発現の良好な解像度をもたらすのに十分な量で該対象に投与されうる。例えば、１００uｇ／人未満の投与量が、飽和することなく、ＧＣＣ発現レベルの良好な解像度をもたらすことが予測される。実施例において更に詳述するように、この投与量は薬物動態学的モデリングにより算出したものである。しかし、該化合物または組成物の安全性プロファイルをさらに改善しながら、もっと低い投与量で良好な解像度を得ることができる。したがって、いくつかの実施形態では、対象に投与される該質量投与量は約３０〜５５μｇ、約３５〜５０μｇ、約４０〜４５μｇ、または約４３．４μｇである。
【０１８６】
該投与量は、好な安全性プロファイルを維持しながら、良好な品質の画像を生成するのに十分な放射能量を有する必要がある。いくつかの実施形態では、対象に投与される線量は２．０〜１０．０ｍＣｉ、３．０〜７．０ｍＣｉ、３．６〜６．６ｍＣｉ、または４．０〜６．０ｍＣｉである。
【０１８７】
ガリウム６８は約６８分の半減期で崩壊するので、該ＧＣＣ結合イメージング組成物は、検出可能な陽電子放出がまだ残っているように該ガリウム６８の直後に対象に投与されるべきである。適切な時間長は標識後３時間未満（例えば、１．５時間、例えば1時間）である。
【０１８８】
いくつかの実施形態では、該対象には所望の質量投与量及び所望の陽電子放出レベルに相当する処方量で投与される。イメージングのために投与される［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの処方は、８％以下のエタノールを含む生食水中で０．００５８ｍｇ／ｍＬでありうる。対象に適した投与量は図６に示すように算出されうる。図６は以下の式を用いて、ＰＥＴイメージングのために対象に投与する標識した化合物の正確な量を決定することを示している：
［投与量］＝［投与時の放射線量（ｍＣｉ）］／{（［較正時の放射線量（ｍＣｉ）における投与時の組成物量（ｍｌ）］×指数関数（−６．１４Ｅ−１時間−１）＊［較正から投与までの時間（時間）］}
【０１８９】
７．投与経路
イメージング剤として投与する場合、本明細書に記載の化合物及び組成物は通常、静注される。該化合物の全身静注は、腸管のＧＣＣ受容体に対して全くあるいは実質的に全く影響を及ぼさず（ＧＣＣ及び上皮組織には解剖学的にアクセスできない）、遺伝子型にかかわらず、原発性または転移性大腸腫瘍、食道腫瘍、胃腫瘍、食道胃接合部腺癌腺癌、小腸の腫瘍、膵腫瘍、肺腫瘍（例えば、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、腺癌）、神経内分泌腫瘍、神経外胚葉性腫瘍、軟組織肉腫（例えば、平滑筋肉腫及び横紋筋肉腫）など、腸管外のＧＣＣ発現腫瘍細胞へのアクセスも得られる。該化合物を１つ以上の腫瘍に到達させることを可能にするものならどのような投与形態も許容できる。したがって、いくつかの実施形態では、該化合物または組成物は、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節腔内、被膜下、くも膜下、脊髄内、及び胸骨内への注射及び注入として投与される。
【０１９０】
治療剤として投与する場合、該化合物は通常、静脈内送達される。考えられる他の投与経路としては、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節腔内、被膜下、くも膜下、脊髄内、及び胸骨内への注射及び注入が挙げられる。
【０１９１】
８．診断法
本明細書に記載の化合物を含んだ化合物及び組成物は、ＧＣＣ発現細胞のインビトロ、エクスビボ及びインビボ検出に使用することができる。例えば、本明細書に記載の化合物及び組成物はＧＣＣ発現細胞（例えばＧＣＣ発現癌細胞）のインビボイメージングに適した量で患者に投与することができ、例えば、ＧＣＣ発現癌細胞と正常組織とを鑑別することができる。ＧＣＣを発現する癌性細胞には、例えば、胃腸起源の癌（例えば、大腸癌、胃癌、小腸癌、または食道癌）、膵癌、肺癌（例えば、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、腺癌）、ｌｅｉｏｓａｃｒｏｍａまたは横紋筋肉腫のような軟組織肉腫、胃腸または気管支肺神経内分泌腫瘍、または神経外胚葉性腫瘍、あるいはそれらのあらゆる転移性病変に由来する細胞を含む。
【０１９２】
本明細書に記載の化合物及び組成物を用いて、固形腫瘍、軟組織腫瘍及び転移性病変などの癌性病変に起因するＧＣＣ発現細胞を検出及び定量することができる。ＧＣＣを発現する固形腫瘍の例には、種々の器官系の悪性腫瘍（例えば肉腫、腺癌及び癌腫）が挙げられ、例えば、限定するものではないが、原発性または転移性大腸癌（例えば、大腸腺癌、大腸平滑筋肉腫、大腸リンパ腫、大腸黒色腫、または大腸神経内分泌腫瘍）、原発性または転移性胃癌（例えば、胃腺癌、リンパ腫、または肉腫）、原発性または転移性食道癌（例えば、食道扁平上皮癌または腺癌）、原発性または転移性胃食道接合部癌、及び原発性または転移性小腸癌といった胃腸起源の悪性腫瘍がある。いくつかの異なる型の非胃腸起源の癌はＧＣＣを発現することが明らかとなっており、限定するものではないが、原発性または転移性膵癌、原発性または転移性肺癌（例えば、扁平上皮細胞癌または腺癌）、原発性または転移性軟組織肉腫（例えば、平滑筋肉腫及び横紋筋肉腫）、原発性または転移性神経内分泌腫瘍（例えば、胃腸または気管支肺神経内分泌腫瘍）、及び原発性または転移性神経外胚葉性腫瘍が挙げられる。
【０１９３】
一実施形態では、本開示は、ＧＣＣ発現細胞（例えばＧＣＣ発現癌性細胞）のエクスビボまたはインビトロ検出方法を特徴とし、該方法は、試料（例えば生検試料）を本明細書に記載の化合物または組成物と接触させることを含む。
【０１９４】
別の実施形態では、本開示は、本方法が、患者におけるＧＣＣ発現細胞（例えばＧＣＣ発現癌性細胞）のインビボ検出方法を特徴とし、該方法は、本明細書に記載の化合物または組成物の有効量を該患者に投与し、該患者におけるＧＣＣ発現細胞への該化合物の結合を検出することを含む。本明細書に記載の化合物または組成物の有効量を該患者に投与し、該患者の身体における該化合物の場所を検出する方法も提供する。この検出は該化合物の一部である検出可能な標識を介して達成することができる。（ｉ）検出可能な標識またはマーカーに結合させたＧＣＣ標的化化合物（例えばＭＬＮ６９０７）を対象（例えば癌を有する者）に投与し、（ｉｉ）ＧＣＣ発現組織または細胞への該検出可能な標識またはマーカーを検出する手段に該対象を曝露する方法も提供する。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、該対象に投与される該医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤とＧＣＣ標的化部分及び活性部分を含むコンジュゲート化合物とを含み、該活性部分は放射性物質であり、該ＧＣＣ標的化部分は、大腸菌エンテロトキシン、その断片、またはその誘導体である。
【０１９６】
本明細書に記載の化合物及び組成物は、例えば、ガンマ線イメージング、磁気共鳴イメージング、磁気共鳴分光法または蛍光分光法を用いて実行される、ＧＣＣに関連する障害（例えば癌、例えば本明細書に記載の癌）のイメージング及び検出する方法において使用することができる。
【０１９７】
本明細書に記載の診断技術は、患者の身体の特定の１つ以上の部位で陽電子を放出する放射性トレーサーを使用しうる。放射性核種が陽電子を放出すると、該陽電子はすぐに電子と衝突し、両方の粒子を消滅させ、１対のガンマ線を生成する。次に、ガンマ線は、例えばＰＥＴスキャナを用いて検出されうる。簡単に言うと、該化合物が放射性標識で標識されると、その放射能を検出することが可能なものならどのような装置によっても検出することができる。これらの放射性原子は一般に、化合物に連結された短寿命の同位体である。該放射性原子は、例え注射、吸入または経口により投与されうる。ある技術では、多数の異なる角度から臓器を見ることができるガンマカメラによって、単一光子が検出される。該カメラは放射線が放出される地点からの画像を構築する。この画像はコンピュータによって強化され、モニタ上で医師によって異常な状態の兆候が観察される。方法例として、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）及び単光子放出コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）が挙げられる。
【０１９８】
ＰＥＴとは間接的に同位体を検出する技術である。該同位体はサイクロトロンまたは他の放射性核種ジェネレータを用い生成されうる。陽電子放出核種は、例えば注射により導入され、標的組織に蓄積する。陽電子放出核種は崩壊するにつれて陽電子を放出し、該陽電子は近くの電子と結合し、その結果、識別可能な２つのガンマ線が反対方向に放出される。これらはガンマカメラを用いて検出されうる。ＰＥＴイメージングに有用な放射性原子には，１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８２Ｒｕ、６８Ｇａ及び１２４Ｉが挙げられる。ＰＥＴイメージングはＣＴイメージングと併用されることが多い。ＣＴイメージングはＸ線を用いて患者身体の３次元画像を生成する。ＰＥＴ技術については以下のセクションで詳述する。
【０１９９】
ＳＰＥＣＴイメージングではガンマカメラを使用してガンマ線を検出する。ＳＰＥＣＴイメージングに有用な放射性原子としては、例えば、９９Ｔｃ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、６１Ｃｕ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ、１５３Ｇｄ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、２０１Ｔｉ及び３２Ｐが挙げられる。ＳＰＥＣＴイメージングはＣＴイメージングと併用されることが多い。
【０２００】
例えばＰＥＴ法及びＳＰＥＣＴ法に有用な他の放射性原子は当該技術では公知であり、本明細書に記載されている。
【０２０１】
本明細書に記載の方法に係る画像診断に有用な標識の例として、３２Ｐ、３Ｈ、１４Ｃ、１８８Ｒｈ、４３Ｋ、５２Ｆｅ、５７Ｃｏ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７７Ｂｒ、８１Ｒｂ／８１ＭＫｒ、８７ＭＳｒ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１３ＭＩｎ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１２７Ｃｓ、１２９Ｃｓ、１３１Ｉ、１３２Ｉ、１９７Ｈｇ、２０３Ｐｂ及び２０６Ｂｉ、及び２１３Ｂｉ；フルオレセイン及びローダミンなどの蛍光標識；核磁気共鳴活性標識；単光子放出コンピュータ断層撮影法（「ＳＰＥＣＴ」）検出器または陽電子放出断層撮影「ＰＥＴ」）スキャナにより検出可能な酸素、窒素、鉄、炭素またはガリウム（例えば、６８Ｇａ、１８Ｆ）の陽電子放出同位体；ルシフェリンなどの化学発光物質；及びペルオキシダーゼまたはホスファターゼなどの酵素マーカーが挙げられる。短距離検出用プローブにより検出可能な同位体などの短距離放射線放出体も使用することができる。イメージングは、例えば、ラジオシンチグラフィー、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）またはコンピュータ断層撮影（ＣＴスキャン）によって実施することもできる。ＣＴスキャンによるイメージングには、鉄キレートのような重金属を使用することができる。ＭＲＩスキャンには、ガドリニウムまたはマンガンのキレートを使用することができる。
【０２０２】
該ＧＣＣ標的化化合物は、任意の適したプロトコルを用いてそのような試薬により標識することができ、当該技術ではプロトコルが公知である。好適な標識の一種はガリウム６８であり、標識方法は例えば以下の実施例３に記載されている。その他の標識及び標識方法は、例えば、Ｍａｇｅｒｓｔａｄｔ，Ｍ．（１９９１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  Ａｎｄ  Ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｄｉｓｅａｓｅ，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．、及びＢａｒｃｈｅｌ，Ｓ．Ｗ．ａｎｄ  Ｒｈｏｄｅｓ，Ｂ．Ｈ．，（１９８３）Ｒａｄｉｏｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ＮＹ，Ｎ．Ｙ．に記載されており、その各々は参照により本明細書に援用され、種々の治療用または診断用の放射性核種のポリペプチドへの結合について教示している。そのような反応は、適したキレート剤及び／またはリンカーにより、放射性核種を本明細書に記載のＧＣＣ標的化に結合体化させるために適用されうる。ポリペプチドを放射性標識することに関する技術については、ＷｅｎｓｅｌとＭｅａｒｅｓ（１９８３）Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．も参照されたい。Ｄ．ＣｏｌｃｈｅｒらのＭｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２１：８０２−８１６（１９８６）も参照されたい。
【０２０３】
実施形態によっては、本明細書に記載の化合物または組成物は検出可能な量で患者に導入され、該化合物がＧＣＣ発現細胞と結び付けられるのに十分な時間が経過した後、該化合物は非侵襲的に検出される。別の実施形態では、該化合物または組成物は患者に導入され、該化合物がＧＣＣ発現細胞と結び付けられるのに十分な時間経過後、該患者からの組織試料が取り出され、該組織中の該化合物は該患者から離れて検出される。別の実施形態では、生体試料が患者から取り出され、本明細書に記載の化合物または組成物が該試料に導入される。該化合物がＧＣＣ発現細胞に結合されるのに十分な量の時間の後、該化合物が検出される。
【０２０４】
患者から生体試料を取り出す際、本明細書の化合物は該試料（例えば生検試料）の免疫組織化学検査によって検出されうる。係る実施形態では、該ペプチド及びリンカーは、可視光により検出可能なフルオロフォア、色素、または別の部分と結合されうる。
【０２０５】
本明細書に記載の方法のための例示的な生体試料は、細胞、複数の細胞、組織、または、体液（例えば炎症性滲出液、血液、血清、腸液、便試料）を含む。特定の実施形態では、生体試料は、癌細胞（複数可）または組織を含む。例えば、試料は、腫瘍生検、例えば結腸直腸腫瘍、胃腫瘍、食道腫瘍、小腸腫瘍、肺腫瘍、軟部組織肉腫、神経内分泌腫瘍、神経外胚葉性腫瘍の、または任意のそれらの転移部位からの組織試料からの生検でありうる。他の実施形態では、生体試料は、血液、またはその液体が癌細胞を含む別の液体でありうる。
【０２０６】
本明細書に記載の診断法は、例えば、診断、予後、治療の有効性の評価、または障害の病期分類を提供する、検出されたＧＣＣのレベルへの応答を含み得る。対照物質と比較したときの、試料または対象におけるＧＣＣのより高いレベルは、ＧＣＣの発現増加に関連する障害の存在を示唆する。対照物質と比較したときの、試料または対象におけるＧＣＣのより高いレベルはまた、治療の有効性の相対的欠如、相対的な予後不良、または疾患の後期を示唆しうる。ＧＣＣのレベルはまた、将来的な治療、例えばより積極的な、またはより積極的でない治療の必要性、または一方の治療異レジメンから他方へと切り替えることの必要性を評価または選択するために使用され得る。一部の実施形態では、本方法は、ＧＣＣ標的化療法、例えば、判定されるＧＣＣレベルに少なくとも一部分において基づく、本明細書に記載のＧＣＣ標的化療法、及び必要に応じて、選択されるＧＣＣ標的化療法を対象に投与することをさらに含む。
【０２０７】
ある実施形態では、本開示は、対象、例えば、ヒト対象に、放射性同位元素と結合体化させたＧＣＣ標的化化合物を投与する場合に、異なる組織に曝露する用量、例えば、放射線量を判定するための方法を提供する。本方法は、（ｉ）例えば、放射性同位元素で標識した本明細書に記載のＧＣＣ標的化化合物を対象に投与すること、（ｉｉ）異なる組織、例えば、腫瘍、または血液に位置する放射性同位元素の量を、放射性同位元素の一部または全部が対象の体から排除されるまで、さまざまな時点で測定すること、及び（ｉｉｉ）解析された各組織が受けた放射線の総線量を算出することを含みうる。測定値は、指定した時点、例えば、放射標識した分子を対象に投与した（０日目）後、１日目、２日目、３日目、５日目、７日目、及び１２日目に取得してもよい。経時的に積分され、放射性同位元素の特異的活性を掛けた所与の組織内に存在する放射性同位元素の濃度を使用して、所与の組織が受ける線量を算出することができる。１種の放射性同位元素、例えば、ガンマ放射体、例えば１１１Ｉｎで標識したＧＣＣ標的化化合物を使用して生成した薬理学的情報を使用して、同じ組織が、容易に測定することができない異なる放射性同位元素、例えば、ベータ放射体、例えば９０Ｙから受けると思われる予測線量を算出することができる。以下の実施例では想定される線量の測定に関する詳細についてさらに説明する。
【０２０８】
いくつかの実施形態では、該診断法は、本明細書に記載のＧＣＣ結合化合物（例えば式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物）を用いる第１検出ステップと、第２のＧＣＣ結合化合物を用いた第２の検出ステップとを含む。この２通りの検出ステップは、同一の試料対してあるいは同じ時間に行う必要はない。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では、２つの検出イベントの実行は、偽陽性結果または偽陰性結果の可能性を低減することによって、診断の信頼性及び再現性を向上させることができる。いくつかの実施形態では、該第２のＧＣＣ結合化合物は、第１のＧＣＣ結合化合物（例えば式（ＶＩ）または（ＶＩａ）の化合物）が結合している領域とは異なるＧＣＣ上の領域に結合する。該第２のＧＣＣ結合化合物は、例えば、ウサギ抗体でよい。該第２のＧＣＣ結合化合物は、例えば、表３に記載のＣＤＲを有する抗ＧＣＣ分子でよい。該抗ＧＣＣ抗体分子は、配列番号１５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号１７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号１８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０の軽鎖ＣＤＲ３を含みうる。該抗ＧＣＣ抗体分子は、配列番号１５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号１６の重鎖ＣＤＲ２、配列番号１７の重鎖ＣＤＲ３、配列番号１８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号１９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０の軽鎖ＣＤＲ３を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含んでいる抗ＧＣＣ抗体と同じエピトープと競合的に結合することができるか、または結合することができうる。該抗ＧＣＣ抗体分子は、配列番号２１の重鎖ＣＤＲ１、配列番号２２の重鎖ＣＤＲ２、配列番号２３の重鎖ＣＤＲ３、配列番号２４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２５の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２６の軽鎖ＣＤＲ３を含みうる。該抗ＧＣＣ抗体分子は、配列番号２１の重鎖ＣＤＲ１、配列番号２２の重鎖ＣＤＲ２、配列番号２３の重鎖ＣＤＲ３、配列番号２４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号２５の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２６の軽鎖ＣＤＲ３を含む３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含んでいる抗ＧＣＣ抗体と同じエピトープと競合的に結合することができるか、または結合することができうる。
【０２０９】
８．１  陽電子放射断層撮影
ＰＥＴ信号は定量的であり、特異性が高く、かつ高感度である。
【０２１０】
本明細書に記載の化合物及び組成物を用いたＰＥＴイメージングには、例えば免疫組織化学（ＩＨＣ）に基づいた方法を上回る技術的利点がある。例えば、ＰＥＴイメージングは全身の同時イメージングを可能にする包括的なものであるのに対し、ＩＨＣは１つまたは少数の生検試料に限定されている。このため、ＰＥＴイメージングはこれまで不明であった病変を検出することができるが、ＩＨＣは医師が既に知っている病変に限定される。また、ＰＥＴイメージングは生検試料に採取を必要とせず、生検が不可能な病変を撮像することができる。さらに、ＰＥＴイメージングは１つ以上の時間ポイントで実行可能であるのに対し、ＩＨＣは試料を採取した時間ポイントでしか所与の生検試料を定量することができない。ＰＥＴイメージングはまたリアルタイムでデータを収集し、生検試料を処理するためのタイムラグがない。したがって、いくつかの実施形態では、ＰＥＴイメージングではＧＣＣ標的化治療を用いた治療に対する患者の治療反応の良好な予測が得られる。いくつかの実施形態では、６８Ｇａで標識された化合物のＰＥＴイメージングによって、他のＧＣＣ標的化診断よりも大きな信号対バックグラウンド比が得られる。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、２通りの診断法が該患者に実施される。例えば、該第１の診断法は本明細書に記載の化合物のＰＥＴ検出であり、該第２の診断法はＩＨＣに基づいたものである。
【０２１２】
ＰＥＴデータは時間放射能曲線を用いて複数の時間ポイントに亘って定量化されうる。例えば、ユーザーは、例えば腫瘍のような組織上に対象領域（ＲＯＩ）を描画し、各ＲＯＩについて時間放射能曲線を生成しうる。該時間放射能曲線ではｙ軸上に放射能（信号）がプロットされ、ｘ軸上に時間がプロットされる。この情報は、異なる腫瘍または単一の腫瘍であっても異なる領域が、同じ特性または異なる特性を有しているかどうかを示すことができる。
【０２１３】
９．ＧＣＣ標的化化合物を用いて治療または撮像される疾患
本明細書に記載の化合物及び組成物は、ＧＣＣが発現されるあらゆる疾患及び医師が該ＧＣＣを発現する組織に治療を提供しようとするあらゆる疾患を撮像するのに使用されうる及び／または該疾患のために治療の一部として使用されうる。このタイプの疾患の例は癌である。ＧＣＣは、例えば、大腸癌、胃癌、膵癌、食道癌、胃食道接合部の癌、小腸癌、肺癌、平滑筋肉腫及び横紋筋肉腫のような軟組織肉腫、胃腸及び気管支肺神経内分泌腫瘍、及び神経外胚葉性腫瘍、及びＧＣＣを発現する原発腫瘍由来の転移において発現する。ＧＣＣを発現する原発腫瘍由来の転移の一例は、原発性大腸腫瘍由来の肝転移である。ＧＣＣを発現する障害の例を以下に詳述する。
【０２１４】
大腸癌は一般に、結腸または直腸の上皮細胞の制御不能な増殖に起因するものである。大腸癌はＳ状結腸鏡検査または大腸内視鏡検査によって診断することができる。結腸癌を促進する最も頻度の高い突然変異はＡＰＣ遺伝子の突然変異であるが、Ｗｎｔ経路の他の場所の遺伝子もこの疾患の原因となる。大腸癌に最もよくみられる細胞型は腺癌であり、リンパ腫及び扁平上皮癌はまれである。ＣＲＣは外科的切除、化学療法、及び放射線によって治療することができる。一般的な化学療法剤には、カペシタビン、フルオロウラシル、イリノテカン、ロイコボリン、オキサリプラチン及びＵＦＴがある。好適なＣＲＣ治療は、抗ＧＣＣ抗体（例えば抗ＧＣＣ抗体を含む免疫複合体、例えば本明細書に記載の免疫複合体）である。
【０２１５】
膵癌は膵細胞から生じる悪性新生物である。初期診断は多くの場合、患者自身が報告した症状に基づいてなされ、その診断は内視鏡針生検または該組織の外科的切除を用いて確定される。最も一般的な細胞型は腺癌である。治療の択肢には、手術、放射線、及び化学療法（例えば、ゲムシタビン、エルロチニブ、またはｏｘｉｐｌａｔｉｎ（オキサリプラチン））が挙げられる。好適な治療は、抗ＧＣＣ抗体（例えば、抗ＧＣＣ抗体を含む免疫複合体、例えば本明細書に記載の免疫複合体）である。
【０２１６】
食道癌は食道の悪性腫瘍である。生検が主な診断方法である。これに関与する主要な細胞型は扁平上皮細胞及び腺癌である。治療の択肢には、外科的切除、放射線、レーザー治療、及び化学療法（例えばシスプラチン、カルボプラチン、またはオキサリプラチン、５‐ＦＵ、エピルビシン、またはカペシタビンを用いる）が挙げられる。好適な治療は、抗ＧＣＣ抗体（例えば、抗ＧＣＣ抗体を含む免疫複合体、例えば本明細書に記載の免疫複合体）である。
【０２１７】
肺癌の形態には主に２種あり、小細胞肺癌及び非小細胞肺癌である。ＮＳＣＬＣには少なくとも４種（腺癌、扁平上皮細胞、大細胞、及び気管支癌）の異なるタイプがある。肺扁平上皮（類表皮）癌は微視的なタイプで、喫煙に関連する頻度が最も高い。米国では肺腺癌は全癌症例の５０％以上を占めている。この癌が女性に多くみられ、依然として非喫煙者に最も高頻度にみられる。大細胞癌は特に神経内分泌に特長があり、脳への腫瘍の拡散を伴うことが多い。ＮＳＣＬＣが血流に入ると、肝、骨、脳、及び肺の他の場所など、遠隔部位に拡散する場合がある。肺癌は通常、Ｘ線またはＣＴスキャンによって診断され、生検により確定される。肺癌は手術、放射線、または化学療法（例えば、ｉｔａｂｉｎｅ（イタビン）、カルボプラチン、ゲムシタビン、パクリタキセル、ビノレルビン、トポテカン、イリノテカン、ドセタキセル、ペメトレキセド、またはエトポシドを用いる）で治療することができる。好適な治療理は、抗ＧＣＣ抗体（例えば抗ＧＣＣ抗体を含む免疫複合体抗、例えば本明細書に記載の免疫複合体）である。
【０２１８】
１０．ＧＣＣ標的化療法のコンパニオン診断
本明細書に記載の化合物及び組成物は、ＧＣＣ発現腫瘍と非ＧＣＣ発現腫瘍とを鑑別することができるため、該化合物は、ＧＣＣ標的化療法（例えば抗ＧＣＣ抗体、例えば抗ＧＣＣ抗体を含む免疫複合体、例えばＭＬＮ０２６４）に反応し易い患者を同定することができる。
【０２１９】
本明細書に記載のインビトロ及びインビボ診断方法は、患者の細胞または組織の表面上またはその内のＧＣＣ発現の存在または非存在それぞれに基づいて、患者が、癌などの増殖性疾患、または炎症性腸症候群、クローン病または便秘などの胃腸障害に罹患しているかどうか、またはＧＣＣ標的化療法により治療されるべきか否かを知らせるために有用である。細胞表面上または細胞内にＧＣＣを発現する１つ以上の細胞を有する患者は、ＧＣＣ標的化療法による治療の候補者である。
【０２２０】
本明細書に記載のコンパニオン診断法を用いて評価（例えば診断）及び治療されうる疾患／障害の例には、限定するものではないが、大腸癌、胃癌、小腸癌、胃食道接合部癌、膵癌、肺癌（例えば、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、腺癌）、平滑筋肉腫及び横紋筋肉腫のような軟組織肉腫、胃腸及び気管支肺神経内分泌腫瘍、及び神経外胚葉性腫瘍といった増殖性疾患が挙げられる。
【０２２１】
本発明の方法は、医師がＧＣＣ標的化療法により患者を治療するかどうかの判定を決断する際の助けとなる。本明細書で提供される方法は、個別の治療レポート、例えば本明細書に記載のＧＣＣ標的化療法をともなう、例えば個別の癌治療レポートの作成も可能にする。
【０２２２】
一実施形態では、ＧＣＣ標的化療法は、プロテアーゼ切断可能なリンカーを介して強力な微小管阻害剤モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）と結合させた抗ＧＣＣ抗体を含む免疫複合体である。一実施形態では、該免疫複合体は次式Ｉ‐５を有する：
【化９】
2017503763.tif 000015
または薬学的に許容される塩（式中、Ａｂは抗ＧＣＣ抗体分子または抗原結合断片であり、ｍは１〜８の整数（例えば、３〜５、４）である）。
【０２２３】
ある実施形態では、式（Ｉ‐５）の免疫複合体は抗ＧＣＣ抗体分子を含む（表３の３種の軽鎖ＣＤＲＳ及び表３の３種の重鎖ＣＤＲを含む）。実施形態によっては、抗ＧＣＣ抗体分子は、以下の表３に記載の３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）及び３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を有する抗ＧＣＣヒトＩｇＧ１モノクローナル抗体である。実施形態によっては、該ＣＤＲは配列番号５〜１０によって示されるものである。実施形態によっては、該ＣＤＲは配列番号１５〜２０によって示されるものである。実施形態によっては、該ＣＤＲは配列番号２１〜２６により示すものである。一実施形態では、該抗ＧＣＣ抗体分子は、以下の表４に示す重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
【表３−１】
2017503763.tif 000016
【表３−２】
2017503763.tif 000017
【０２２４】
簡単に言えば、ウサギモノクローナル抗体ＭＩＬ−４４−１４８−２及びＭＩＬ−４４−６７−４は、ウサギにおける従来の免疫化技術によって生成された。本物のウサギ−ウサギハイブリドーマは、Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ所有の融合パートナー細胞系を用いて、免疫化されたウサギからの単離Ｂ細胞を融合することで、Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）で生成された（Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔｓ  ７，４０２，４０９；７，４２９，４８７；７，４６２，６９７；７，５７５，８９６；７，７３２，１６８；及び８，０６２，８６７を参照されたい）。ＧＣＣに対する抗体の特異性は、ＥＬＩＳＡ及びフローサイトメトリー（ＦＣＭ）によって試験した。抗体ＭＩＬ‐４４‐１４８‐２及びＭＩＬ‐４４‐６７‐４はＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３８５４２に詳細に記載されており、その内容の全体を参照により本明細書に援用する。
【表４−１】
2017503763.tif 000018
【表４−２】
2017503763.tif 000019
【０２２５】
実施形態によっては、該抗ＧＣＣ抗体分子は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖、あるいはその両方を含む。
【０２２６】
実施形態によっては、該抗ＧＣＣ抗体分子は、例えば下記のアミノ酸配列を有する、重鎖定常領域及び軽鎖定常領域を含む。
【０２２７】
重鎖定常領域アミノ酸配列：
【化１０】
2017503763.tif 000020
（配列番号１３）
【０２２８】
カッパ軽鎖定常領域アミノ酸配列：
【０２２９】
【化１１】
2017503763.tif 000021
（配列番号１４）
【０２３０】
ＧＣＣ標的化療法の一実施例は、式Ｉ‐５を特徴とするＭＬＮ０２６４である。ＭＬＮ０２６４は癌の治療に有用な抗体‐薬剤コンジュゲートである。抗体は、ＧＣＣを認識する完全ヒトモノクローナル抗体である。その可変領域及びＣＤＲは上記表３及び４に記載されている。該薬剤は小分子の微小管阻害剤であるモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、細胞周期停止及びアポトーシスを生じる。
【０２３１】
こういったＧＣＣ標的化療法の更に詳細な説明については国際出願ＷＯ２０１３／１６３６３３に記載があり、その内容を参照により本明細書に援用する。
【０２３２】
１１．治療方法
ＧＣＣ標的化薬は治療する医師によって選択された用量及び頻度で投与することができる。該標的化薬を用いて、ＧＣＣを発現する望ましくない細胞を特徴とするあらゆる疾患を治療することができる。これらの疾患の例には、大腸癌、胃癌、膵癌、食道癌、肺癌、及びＧＣＣを発現する原発性腫瘍に由来する転移が挙げられる。
【０２３３】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物または組成物を用いて、腫瘍細胞に治療用放射性核種を送達することができる。いくつかの実施形態では、該放射性核種はアルファ放出体である。アルファ粒子は吸収される前に短い距離しか移動しないので、アルファ放出体健康な組織を照射することなく、腫瘍へ限られた放射線量を送達する。
【０２３４】
標的化アルファ粒子線治療（ＴＡＴ）は癌治療における新しいアプローチである。アルファ粒子は高い線形エネルギー伝達速度（４〜９ＭｅＶ）を有しており、組織内の短距離（＜０．１ｍｍ）で高い細胞毒性を引き起こすため、正常組織における副作用を軽減することができる。この高いエネルギー伝達により、二本鎖ＤＮＡの切断及び致死が生じる。２２５Ａｃは１０日の半減期を有し、総エネルギーが２７ＭｅＶの４個のアルファ放出体を生成し、その後、娘が迅速に連続的に崩壊して、安定した形態である２０９Ｂｉを形成する。しかし、崩壊後、該娘の同位体は、反跳エネルギーまたは最初の娘核種２２１Ｆｒの異なる化学的性質のいずれかに起因するＤＯＴＡキレート剤から放出させられる。ａ放出娘核である２２１Ｆｒ（ｔ１／２＝４．８ｍ）、２１７Ａｔ（ｔ１／２＝３２ｍｓ)及び２１３Ｂｉ（ｔ１／２＝４５．６分）は半減期が非常に短いものの、身体内に分布して、正常組織に蓄積する。例を挙げると、２１３Ｂｉは腎に移動することが公知である。図１を含む、ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ＭＲらの（２００２年）、Ｃｅｌｌ  Ｄｅａｔｈ＆Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎを参照されたい。治療に適したアルファ放射体の例には、２１３Ｂｉ及び２２５Ａｃが挙げられる。
【０２３５】
いくつかの実施形態では、放射性核種は９０Ｙまたは１７７Ｌｕのようなベータ放出体である。ベータ放射体は多くの場合、０．１〜１ＭｅＶの総エネルギーを有し、対象に投与されると１〜１０ｍｍの範囲内で移動することができる。
【０２３６】
他の実施形態では、本明細書に記載の化合物または組成物を用いて腫瘍細胞に検出可能な放射性核種を送達することができ、次に、検出されたＧＣＣ発現腫瘍がある対象に、例えばＧＣＣ標的化剤（例えば本明細書に記載のＧＣＣ標的化療法）を投与することができる。
【０２３７】
いくつかの実施形態では、該患者は少なくとも１種、２種、３種以上の癌の標準治療を受けた転移性患者である。他の実施形態では、該患者は癌の他の標準的ケア治療を受けていない。いくつかの実施形態では、該患者は、オキサリプラチン、イリノテカン、またはフルオロピリミジンなどのある標準的なケア治療に耐性がない。好適な実施形態では、該患者はＧＣＣを発現する１つ以上の癌細胞を有している。
【０２３８】
一実施形態では、本発明は、抗ＧＣＣ抗体分子、または（例えば本明細書に記載の）抗ＧＣＣ抗体分子を含む免疫複合体を、そのような処置を必要とする患者に投与することによって癌を治療する方法を提供する。この方法は、（例えば、本明細書に記載の化合物または組成物を用いて決定されるような）ＧＣＣ抗原を発現する少なくともいくつかの細胞を含む任意の癌性障害を治療するために使用することができる。本明細書で使用される場合、用語「癌」は、その組織病理学的な種類または侵襲性の段階に関係なく、全種類の癌性成長または発癌性工程、転移性組織または悪性に形質転換した細胞、組織または器官を含むことが意図される。用語「癌」及び「腫瘍」は、互換的に使用することができる（例えば、治療法の文脈で用いられる場合、「癌の治療」及び「腫瘍の治療」は同義である）。
【０２３９】
実施形態によっては、該治療は、該対象の腫瘍の増殖を減少または阻害し、転移性病変の数またはサイズを抑え、腫瘍負荷を低減し、原発腫瘍負荷を低減し、侵襲性を低減し、生存時間を延長するか、生活の品質を維持または改善するのに十分なものである。
【０２４０】
癌性病変の例には、限定するものではないが、固形腫瘍、軟組織腫瘍、及び転移性病変が挙げられる。固形腫瘍の例には、結腸に影響を及ぼす腫瘍など、種々の器官系の悪性腫瘍、例えば、肉腫、腺癌、及び癌腫が挙げられる。腺癌には、肺の非小細胞癌などの悪性腫瘍が挙げられる。上記の癌の転移性病変も本発明の方法及び組成物を使用して治療または予防することができる。
【０２４１】
いくつかの実施形態では、治療されるＧＣＣを発現する癌は、大腸癌、胃癌、小腸癌、または食道癌など、胃腸系由来の原発性または転移性の癌である。いくつかの実施形態では、治療されるＧＣＣを発現する癌は、原発性または転移性の膵癌である。いくつかの実施形態では、治療されるＧＣＣを発現する癌は、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、または腺癌など、原発性または転移性の肺癌である。いくつかの実施形態では、治療されるＧＣＣを発現する癌は、平滑筋肉腫または横紋筋肉腫などの肉腫である。いくつかの実施形態では、治療されるＧＣＣを発現する癌は、クローム親和細胞腫または傍神経節腫のような原発性または転移神経外胚葉性腫瘍である。いくつかの実施形態では、該ＧＣＣ発現癌は、原発性または転移した気管支肺または胃腸神経内分泌腫瘍である。
【０２４２】
該方法は、どのようなステージまたは細分類の関連障害を治療するのに有用でありうる。例えば、該方法を用いてステージ０、Ｉ、ＩＩＡ、ＩＩＢ、ＩＩＩＡ、ＩＩＩＢ、ＩＩＩＣ、及びＩＶのいずれかの早期ステージまたは後期ステージの結腸癌または結腸癌を治療することができる。
【０２４３】
１２．併用療法
本明細書に記載の治療法には、例えばＧＣＣ標的化療法（例えば本明細書に記載のＧＣＣ標的化療法、例えばＭＬＮ０２６４）を他の療法と併用する使用も含みうる。例えば、併用療法には、１つ以上の追加の治療剤（例えば１つ以上の抗癌剤、例えば細胞毒性剤または細胞増殖抑制剤、ホルモン療法、ワクチン、及び／または他の免疫療法）と同時処方及び／または同時投与される、本明細書に記載のＧＣＣ標的化療法を含む組成物を含みうる。他の実施形態では、ＧＣＣ標的化療法は、手術、放射線、凍結手術、及び／または温熱療法といった他の治療法と併用して実施される。このような併用療法は、投与される治療剤をより少ない投与量で利用することができるため、種々の単独療法に伴う毒性または合併症の可能性が回避されるので有益である。
【０２４４】
本明細書で用いる場合「併用」投与とは、障害がある対象の苦痛の過程の間、２つの（またはそれ以上の）異なる治療を対象に送達すること、例えば、２つ以上の治療を、対象が障害に罹患していると診断された後、及び障害が治癒する、または排除される前に送達することを意味する。一部の実施形態では、１種の治療の送達が、第２の送達が始まる際にまだ起こっている、したがって、重複している。このことは、時には、本明細書で「同時に起こる」または「同時発生的な送達」と呼ばれる。他の実施形態では、１種の治療の送達は、他の治療の送達が始まる前に終わる。いずれかの事例の一部の実施形態では、治療は、組み合わせて投与したゆえに、より有効である。例えば、第２の処置は、より有効であり、例えば、第１の治療なしに第２の治療を投与した場合に見られると思われるよりも少ない第２の治療で、相当する効果が見られるか、または第２の治療により症状が大きく低下する、または同様の状況が第１の治療で見られる。一部の実施形態では、送達は、症状、または障害に関連する他のパラメータの低下が、他の治療なしに１種の治療を送達すると観察される低下を超えるものである。２種の治療の効果は、部分的に相加的、完全に相加的、または相加的を超えるものであってよい。送達は、送達された第１の治療の効果が、第２の治療が送達されるときになお検出可能なようなものであってよい。
【０２４５】
いくつかの実施形態では、ＧＣＣ標的化療法（例えばＭＬＮ０２６４）は、化学療法剤（例えばＤＮＡ損傷化学療法剤）と併用して使用される。ＤＮＡ損傷性化学療法剤の非限定的な例としては、トポイソメラーゼＩ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、カンプトテシン及びそれらの類似体または代謝産物、及びドキソルビシン）；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤（例えば、エトポシド、テニポシド、及びダウノルビシン）；アルキル化剤（例えば、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、チオテパ、イホスファミド、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、デカルバジン、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、及びシクロホスファミド）；ＤＮＡインターカレーター（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、及びカルボプラチン）；ブレオマイシンなどのＤＮＡインターカレーター及び遊離ラジカル生成剤；ならびにヌクレオシド模倣物（例えば、５−フルオロウラシル、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔｉｂｉｎｅ）、ゲムシタビン、フルダラビン、シタラビン、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、及びヒドロキシウレア）が挙げられる。
【０２４６】
いくつかの実施形態では、該放射性標識されたペプチド及び／または該射性標識は腎による取り込みが高い。腎の取り込みを低減するために考えられるアプローチとして、例えば、尿細管の負荷を変化させ、ペプチド及び遊離放射性標識の吸収を低下させる保護剤（例えば２１３Ｂｉ）の同時投与がある。一実施形態では、同時投与には、該保護剤の投与の前に該保護剤と同時に及び／または該保護剤の投与後に該放射性標識されたペプチドを投与することを含む。腎保護剤を使用することによって、最大許容用量（ＭＴＤ）を増量することができ、腎症を低減させられる。いくつかの実施形態では、該腎保護はクリニソル、リジン、リジン／アルギニン、ゲロフシン及びアミノフォスチン、あるいはそれらの任意の組み合わせから選択される。実施形態によっては、クリニソルはリジン、ロイシン、フェニルアラニン、バリン、ヒスチジン、イソロイシン、メチオニン、スレオニン、トリプトファン、アラニン、アルギニン、グリシン、プロリン、グルタミン酸、セリン、アスパラギン酸、及びチロシンを含み、約１３５７ｍＯｓｍｏｌ／Ｌのオスモル濃度を有する。実施形態によっては、リシン／アルギニンは実質的に等しい割合のリジン及びアルギニンを含む。実施形態によっては、ゲロフシンはスクシニル化ゼラチン溶液（例えば４％ｗ／ｖ）であり、静注用コロイドとして使用することができる。実施形態によっては、アミノフォスチンは２‐（３‐アミノプロピルアミノ）エチルスルファニルホスホン酸である。
【０２４７】
いくつかの実施形態では、該ＧＣＣ標的化合物または組成物は、尿中排泄量を増大させる治療と併用して投与される。一実施形態では、尿中排泄量を増大させる該薬剤は、該放射性標識されたペプチドとの投与の前に該放射性標識されたペプチドと同時に及び／または該放射性標識されたペプチドとの投与の後に投与される。一実施形態では、治療に伴う膀胱毒性を軽減する薬剤は、生食水（例えば静注用生食水、Ｄ５ハーフノーマル生食水またはＤ５ウォーター）である。
【実施例】
【０２４８】
実施例１：放射性標識用の可溶性製剤の生成
バルクＤＳＰ１は約０．１ｍｇの／ｍｌの低溶解度を有し、水溶液製剤を開発した。この水性製剤をＤＳＰ２と呼ぶ。溶解性はいくつかの方法で上げることができる。まず、エタノール（例えば５〜２５％の範囲）を添加することで１０倍まで溶解度を増加させる。これを図３Ａに示しており、エタノール濃度を上げることでＤＳＰ１の溶解度が上がる。エタノールはまた標識効率も上げることができる。次に、図３Ｂに示すように、溶媒のｐＨを３．５から５に上げることによって、溶解度は約１９倍（１ｍｇ／ｍｌ超）増大した。しかし、以下のセクションで示すように、この溶解度の利点はより高いｐＨでは標識効率の低下により相殺される。第三に、熱及び機械的混合により溶解度は上昇した。特に、図３Ｃは６０℃で１０分間の加熱あるいは室温にて４５分間の振盪により溶解度は約５〜７倍に増大することを示す。図３Ｄは種々のフィルタ上に化合物が保持されていることを示す。
【０２４９】
以下のプロトコルに従って、ＤＳＰ１を可溶性ＤＳＰ２に転換することができる。凍結したＭＬＮ６９０７ＤＳＰ１を制御された室温（ＲＴ）で平衡化させる。ＤＳＰ１の必要量を秤量し、０．０２Ｍ酢酸ナトリウム溶液に溶解する。この溶液に１％スクロース、１０％エタノール及び０．１８Ｍ氷酢酸を順番に加える。次いで、十分な水（金属含有量が低い）を加え、均一な溶液が形成されるまで混合する。ｐＨ、密度、ＵＶによる濃度、及び滅菌濾過前のバイオバーデン試験を含むインプロセス試験のために試料を採取する。
【０２５０】
次に、調製した溶液を滅菌濾過する。０．２μｍのＰＶＤＦ滅菌フィルタを直列で使用し、調製したＭＬＮ６９０７  ＤＳＰ１を滅菌バッグで濾過する。該バッグを無菌充填するまで２〜８℃で保管する。使用前後にフィルタの完全性を試験する。次いで、濾過した溶液をバイアルに分注する（２ｍＬ／本）。
【０２５１】
実施例２：ガリウム６８の調製
ジェネレータを用いて、電子捕獲によるゲルマニウム６８の崩壊を介してガリウム６８を連続して生成し、希塩酸（ＨＣｌ）を用いて６８Ｇｅ／６８Ｇａジェネレータから溶出する。簡単に言うと、シリンジを用いて該ジェネレータのカラムに接続された入口ラインに希塩酸溶液を圧送する。カラム上に存在する６８Ｇａは、最後の溶出以降の時間の間に６８Ｇｅの崩壊により生成されたものであり、ＨＣｌに溶解して、溶出される。
【０２５２】
実施例３：化合物の標識
種々のパラメータを試験して、ガリウム６８を用いてＤＳＰ２化合物を標識するのに適した条件を同定した。まず、図４Ａに示すように、６〜１０分の反応時間で最大の収率が得られた。次に、図４Ｂに示すように、１００℃の反応温度で標識レベルの変動は最低になった。ｐＨ値の最適化について図４Ｃに示す。３．７５〜４．０のｐＨ範囲では高い標識レベルが得られる。図４Ｄは反応に適したｐＨ値を示している。標識効率に基づいて反応ｐＨを決定した。適した緩衝液は０．２Ｍ酢酸ナトリウムであり、これによりｐＨ３．８の溶液を得た。特に指定しない限り、図４Ａ〜Ｄの試験の反応は１００℃、ｐＨ４で１０分間行った。
【０２５３】
一般に、遊離放射性標識の量を最小化するために、未標識のＤＳＰが化学量論的に過剰に放射性標識に提供される。この方法では画像収集中の遊離放射性標識に起因するバックグラウンドを最小限に抑える必要がある。
【０２５４】
臨床現場では、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＳは単回使用の滅菌使い捨てカセットを利用して［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＳは半閉鎖自動システム（Ｅｃｋｅｒｔ＆Ｚｉｅｇｌｅｒ社のＭｏｄｕｌａｒ‐Ｌａｂ  ＰｈａｒｍＴｒａｃｅｒ）を用いて製造される。カセットはＧＭＰ準拠のクリーンルーム条件下で組み立て、ガンマ線により滅菌し、二重真空パックする。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＳを滅菌濾過（０．２μｍフィルタ）して滅菌バイアルに入れて、該薬剤製品を生成する。
【０２５５】
化合物ＭＬＮ６９０７はＭＬＮ６９０７と同じペプチ及びとキレート基を有するが、異なるリンカーを有する関連化合物よりも高い標識効率を達成したことが観察された。
【０２５６】
実施例４：放射性標識化合物の精製
Ｓｅｐ‐Ｐａｋカラムを用いて放射性標識化合物を精製した。４７．５％ＥｔＯＨによる溶離及び生食水洗浄後、標識物質の平均２８％がＳｅｐ‐Ｐａｋカラムに残った。精製効率を向上させるために、異なるカラムを試験し、溶出量を上げた。具体的には、図５Ａは種々のカラム上に保持された放射性標識化合物の割合を示す。ｔＣ１８カラムを使用すると、カラムから回収することができる放射性標識化合物の量が改善した。図５Ａも、エタノールの溶出量を４７．５％エタノール１ｍＬから４５％エタノール１．５ｍＬに上げると、カラムから回収することができる放射性標識化合物の量が増大したことを示す。図５Ｂは溶出量を０．５ｍＬから１ｍＬに上げると、カラムから溶出させることができる化合物の割合が上がることを示す。図５Ｃは異なるカラム及びエタノール濃度を用いてカラムから溶出させることができる化合物の量を示す。
【０２５７】
実施例５：腫瘍のＧＣＣ状態の同定
ＧＣＣ標的化イメージング剤及び治療剤は、対象の細胞型がＧＣＣを発現する場合に限り有効である。したがって、転写媒介増幅（ＴＭＡ）を用いて６種の癌のＧＣＣ発現状態を決定した。ＴＭＡは転写に基づいた増幅システムであり、逆転写を用いてＲＮＡテンプレートから二本鎖ＤＮＡを生成し、ＲＮＡポリメラーゼを用いてより多くのＲＮＡを生成する。
【表５−１】
2017503763.tif 000022
【表５−２】
2017503763.tif 000023
【０２５８】
実施例６：インビトロ薬理作用
インビトロ競合結合アッセイでは、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ（薬剤）ＧＣＣ親和性に対する６８ＧａＣｌ３キレート反応標識条件（アセトン：塩酸［９８：２］と混合し、約１００℃で１０分加熱）の影響を評価する。アッセイを行うには長いインキュベーション時間（１１１Ｉｎ半減期＝２．８日、６８Ｇａ半減期＝６８分）を要するため、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの代用として［１１１Ｉｎ］ＭＬＮ６９０７を用いた。ガンマカウンタを用いて細胞内の最後の放射能を測定することによって、濃度を上げながら（８．５×１０−６〜５００ｎＭ）冷温のペプチド（未処理または処理済みのＭＬＮ６９０７ＤＳＰ）を添加後の放射性標識［１１１Ｉｎ］ＭＬＮ６９０７のリガンド（ＧＣＣ）への結合及び付随する割合の変位の競合を算出した。ヒト胚性腎（ＨＥＫ）‐２９３ＧＣＣクローンの２細胞（ＧＣＣ発現ＨＥＫ‐２９３細胞）では、それぞれ４．７５及び４．５９ｎＭの５0％阻害（ＩＣ５０）を生成する濃度で、処理済み及び未処理（それぞれキレート化反応条件がある場合及び無い場合）ＭＬＮ６９０７ＤＳＰは、インジウム‐１１１［１１１Ｉｎ］ＭＬＮ６９０７の結合を阻害した。未処理ＭＬＮ６９０７ＤＳＰと処理済みＭＬＮ６９０７ＤＳＰとの親和性に有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。これらの結果から、製造プロセス（熱及びアセトン）にＤＳＰを曝露しても、この標識条件下では処理済みのＭＬＮ６９０７ＤＳＰ（偽の放射性標識ＭＬＮ６９０７ＤＰ）のＧＣＣへの結合親和性には影響がなかったことが分かる。
【０２５９】
実施例７：インビボ薬理学
細胞株または原発腫瘍由来異種移植片担持する雌ＣＢ‐１７重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスを用いて、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの競合的結合及び生体内分布をインビボで評価した。異なるレベルのＧＣＣを発現する４つの異種移植片モデルを使用した。２つのモデルは細胞株：ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン２（ヒト胚性腎）及びＴ８４（大腸癌）由来であり、２つのモデルは原発性結腸腺癌ヒト腫瘍モデル（ＰＨＴＸ‐２１Ｃ及びＰＨＴＸ‐１７Ｃ）であった。マウスでは、２００〜７００ｍｍ３の体積になるまで腫瘍細胞またはその断片及び腫瘍を増殖させた。０〜３００のスコアリングシステム（Ｈ‐スコア［頂端及び細胞質］Ｈスコア）を用いたＩＨＣによりＧＣＣ発現レベルを予め決定し、Ｔ８４、ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン２、及びＰＨＴＸ‐１７Ｃについて腫瘍試料の別個のセットをそれぞれ３００と２７０、０と３００、及び４０と５０として示す。次いで、マウスにはＭＬＮ６９０７ＤＳＰ（０、１．８、１．８５、または２０μｇ）の濃度を上げながら［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ（０．０１、０．０２、０．１５、または０．２μｇ）を単回静注投与した。投与後１時間後に腫瘍、血液、肝、及び腎を採取し、ガンマカウンタを用いて６８Ｇａ活性を評価し、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの取り込み及び生体内分布を％ＩＤ／ｇとして判定した。腫瘍対各組織の割合を決定して、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの信号対バックグラウンドを明らかにした。
【０２６０】
これらの競合的結合試験から、ＭＬＮ６９０７ＤＳＰの濃度を上げながら加えると［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ比放射能（ＳＡ）が低下し、その結果、試験した全モデルのマウスにおいて［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの腫瘍の取り込み（組織１ｇ当たりのパーセント投与量［％ＩＤ］［％ＩＤ／g］）が低下することが分かった（図７、８、９、１０、及び１１）。非ＧＣＣ発現組織（血液、肝、及び腎）では、ＭＬＮ６９０７ＤＳＰを加えても［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ取り込みに大きな影響はなかった。したがって、１．８、１．８５または２０μｇとＭＬＮ６９０７ＤＳＰの濃度を上げれば、ＧＣＣ発現腫瘍組織に特異的な［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの結合を置換することができるので、［特異的ＧＣＣ結合を示す６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ取り込み低下をインビボで測定（％ＩＤ／ｇで測定）することが可能となる。これらのインビボ試験においてインビボ競合結合アッセイの半最大応答（ＥＣ５０）を生じる濃度は、ＧＣＣ発現レベルが異なるマウスでは９７．１〜５６５９．５ｎＭであった（免疫組織化学検査によって事前に決定）。インビボでのＥＣ５０算出は、半機構（ｓｅｍｉ‐ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ）モデルに基づいており、ペプチドの血管外遊出、結合親和性、及び内在化率による影響を受ける。薬物導体（ＰＫ）／薬力学モデルから、臨床的イメージング試験に最適な［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ質量用量は１００μｇ未満であることが分かった。
【０２６１】
雌ＣＢ‐１７ＳＣＩＤマウスを対象にしてＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン２ヒト胚性腎腫瘍異種移植片を用いて追加のインビボ試験を実施して、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの質量用量を上げることに対する腫瘍の取り込みの影響を評価した。ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン２ＨＥＫ腫瘍異種移植片担持雌ＣＢ‐１７ＳＣＩＤマウスに［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰを０．００５〜０．５０μｇの質量で投与した（図１２）。０．０１μｇ（ＳＡ＝０．０９１ｍＣｉ／μｇ）で［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰを投与したところ、血液、肝、及び腎のそれぞれ０．９８％ＩＤ／ｇ、０．７０％ＩＤ／ｇ、及び７．６８％ＩＤ／ｇと比較して、腫瘍では最大取り込み量が７．４３％ＩＤ／ｇとなり、その結果、腫瘍対組織比はそれぞれ７．７０、１０．８０、及び０．９８となった。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ質量が上がると、高質量用量（０．５０μｇ）で腫瘍内取り込みが低下することから、ＳＡが維持されている場合でも、高い質量投与量で競合的結合があることが分かる。これらの結果に加え、競合的結合試験の結果を併せると、高ＳＡの［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰは最終薬剤において６８Ｇａ標識ペプチドと競合しうる非標識ペプチドの濃度を低下させたことから、ＰＥＴによる腫瘍の取り込みの堅牢なイメージングを容易にするには質量を増大させるよりも有効であることが分かる。
【０２６２】
実施例８：薬物動態モデル化試験
腫瘍動態及びＧＣＣ結合化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）のクリアランスは機構的モデルを用いてモデリングすることができる。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７を用いてこのモデリングを行った。このモデリングは以下の表６に記載の６種のパラメータに重点を置いたものである。
【表６−１】
2017503763.tif 000024
【表６−２】
2017503763.tif 000025
【０２６３】
パラメータの一部は研究の開始時には既知であり、その他のパラメータは実験的に決定した。いくつかの長い持続時間のアッセイを行うには半減期が長いインジウムが有用であるので、これらの試験では、ガリウム６８の代用としてインジウム‐１１１を用いた。
【０２６４】
ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン２細胞を用いたインビトロ競合結合アッセイにより細胞表面のＧＣＣのＭＬＮ６９０７のＫＤを算出した（図１３）。２個のＨＥＫ‐２９３ＧＣＣクローン細胞上のＧＣＣの抗原表面密度をウエスタンブロット法によりインビトロで推定し、マウスモデルを用いてインビボで推定した（図１６）。腫瘍において［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７取り込みが低下するのは、追加した非標識ペプチドからのＧＣＣ受容体の競合によるものである。化合物のインターナリゼーションの半減期５６分であると決定された（図１４）。マウスモデルの血中薬物動態を図１５に示す。ＭＬＮ６９０７は腎排泄を介して血中から迅速に消失し（ｔ１／２＝２６分）、ＧＣＣ抗原レベルに従って腫瘍組織に保持される。腎及び膀胱では［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７への放射線曝露が最大であったことから、腎排泄が主な排出経路であることが分かる。図１７は、異なるＧＣＣレベルの腫瘍担持マウスにＭＬＮ６９０７を投与した結果を示す。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の腫瘍取り込みは、種々のレベルのＧＣＣの発現及び表現型を有する腫瘍では異なっており、最初のインビボで算出したＢｍａｘ値に反映されている。
【０２６５】
ＯＬＩＮＤＡ／ＥＸＭソフトウェアを用いて、有効投与量はヒト成人男性では０．０１３１ｍＳｖ／ＭＢｑ（１ｍＣｉ＝３７ＭＢｑ）、ヒト成人女性では０．０１３９ｍＳｖ／Ｍｂｑであると推定された。
【０２６６】
実施例９：安全性試験
ＭＬＮ６９０７ＤＳＰは、Ｓｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙラット及びカニクイザルを対象としたＧＬＰに準拠した２週間の反復投与毒性試験により評価した中枢神経系（ＣＮＳ）、循環器系（ＣＶ）、または呼吸器系の安全性の薬理学的エンドポイントに対して影響を及ぼさなかった。
【０２６７】
ＭＬＮ６９０７ＤＳＰを用いた本毒性試験は、毒性、用量制限毒性、臨床的に関連する毒性をモニタリングするための非侵襲的方法、及び有害作用の可逆性のための標的組織に対処するためにデザインされたものである。ラットもカニクイザルもＭＬＮ６９０７のＳＴｐ（５‐１８）ペプチド部分の作用に薬理学的に応答する。
【０２６８】
Ｓｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙラット及びカニクイザルを対象としたＧＬＰに準拠した２週間の反復投与毒性試験では、１、４、８、１１及び１４日目にＭＬＮ６９０７ＤＳＰを最大０．２５ｍｇ／ｋｇで静注したところ（回復期間は１４日間）、毒性を示す所見は見られなかった。これらの試験から、解剖学的にみて、正常な腸は［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの標的にはならないことが裏付けられる。両試験では、無作用量（ｎｏ‐ｏｂｓｅｒｖｅｄ‐ｅｆｆｅｃｔ  ｌｅｖｅｌ＝ＮＯＥＬ）は０．２５ｍｇ／ｋｇであった。
【０２６９】
ＧＬＰに準拠した２週間の反復投与毒性試験の一部として、ＭＬＮ６９０７ＤＳＰのトキシコキネティクス（ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ＝ＴＫ）及び免疫原性を評価した。Ｓｐｒａｇｕｅ‐ＤａｗｌｅｙラットまたはカニクイザルではＭＬＮ６９０７ＤＳＰへの曝露による性別に関連する顕著な差は認められなかった。０〜２４時間の最高濃度（Ｃｍａｘ）及び濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ、０〜２４時間）は、ほぼ用量依存的に増大し、血漿中にはＭＬＮ６９０７ＤＳＰの顕著な蓄積は見られなかった。ラット及びサル抗ペプチド抗体（げっ歯類抗ペプチド抗体［ＲＡＰＡ］及び霊長類抗ペプチド抗体［ＰＡＰＡ］）を測定することによって、ＭＬＮ６９０７のペプチド成分の免疫原性を定量した。簡単に説明すると、抗ペプチド抗体の検出は、抗ＳＴａ抗体するように結合させたＦＩＴＣ‐ＳＴａ及びビオチン化ＳＴａを用い、インキュベート及び洗浄後、ストレプトアビジン‐スルホＴＡＧと結合した抗体を検出することにより行った。どの投与量でも免疫原性応答を認めなかった。
【０２７０】
インビトロ溶血アッセイとＧＬＰに準拠した２週間の反復投与毒性試験の一部とを用いて、崩壊した非放射性［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ及びＭＬＮ６９０７ＤＳＰの局所耐性をそれぞれ評価した。崩壊した［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの濃度３．５μｇ／ｍＬでは赤血球溶血はなく、ラット及びサルを対象にした最大０．１０ｍｇ／ｍＬの用量処方を用いた２週間の毒性試験でも、投与部位に何らかの所見を認めなかった。
【０２７１】
許容されるＭＬＮ６９０７ＤＳＰの第１相臨床開始質量用量は２８２μｇであり、Ｓｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙラットを対象にしたＧＬＰに準拠した２週間の反復投与毒性試験で定められたＮＯＥＬ（０．２５ｍｇ／ｋｇ）の１／１０のヒト等価用量を用いて算出したものである。この用量は、ｍｇ／ｋｇに基づいて提唱された最大４３．４μｇのヒト質量用量範囲の６７倍を超えるものであり（表４〜１３）、ラット及びサルを対象とした用量０．２５ｍｇ／ｋｇの複数回投与後に毒性がないことに基づいて安全であるとみなされる。
【０２７２】
実施例１０：ヒト薬物動態モデル
ＰＫ／薬物動態モデル及びシミュレーション解析を用いて、患者の腫瘍の可変ＧＣＣ発現レベルを区別するのに必要な［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの好ましい用量範囲を推定した。この解析は静注後の複数の異種移植片モデルを対象に［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの血中及び腫瘍の取り込みを用いて行った。この解析は、Ｔ８４（ヒト大腸癌）、ヒト胎児由来腎（ＨＥＫ）‐２９３ＧＣＣクローン２、ＰＨＴＸ‐１７Ｃ（結腸腺癌）、及びＰＨＴＸ‐２１Ｃ（結腸腺癌）異種移植片など複数の腫瘍モデルのＰＫ及び腫瘍取り込みデータを用いて行った。モデル解析用のパラメータ値は上記実施例８に記載している。
【０２７３】
［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰ線量の増加に伴うＧＣＣ抗原の飽和を示すために、ミカエリス・メンテンの飽和効果コンパートメントを用いて腫瘍の曝露動態を記載した。次に、投影されたヒトＰＫとＰＫ／薬物動態曝露モデルを併せて、このヒトＰＫ／薬力学的数学モデルを用いて刺激を行って［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの線量レベルと予測した腫瘍曝露との関係を同定した。結果をフィットさせたところ、マウスＰＫ／薬力学的関係を飽和効果コンパートメントモデルとして学的に十分に説明することができることが分かった。この結果から、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７ＤＰの一回の臨床用量が１００μｇ／人未満では、ＧＣＣ受容体を飽和させなくてもＧＣＣ抗原発現レベルの優れた解像度が得られることが示唆される。
【０２７４】
実施例１１：臨床試験デザイン
以下のプロトコルを用いて、本明細書の放射性標識化合物のイメージングにおける安全性及び有効性を試験することができる。
【０２７５】
本試験は、単回静注（ＩＶ）投与後の化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の安全性、ＰＫ、分布、及び照射線量測定を評価するようにデザインされた、第Ｉ相ファースト・イン・ヒューマン（ｆｉｒｓｔ‐ｉｎ‐ｈｕｍａｎ＝ＦＩＨ）単回投与非盲検試験である。追加の探索の目的には、該化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の肝腫瘍局在化を定性評価すること、及び腫瘍対正常肝臓のバックグランド比及びＣＲＣ肝転移における［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７取り込み、保持、及びクリアランスに関連する動態パラメータを決定することを含む・
【０２７６】
患者の治療計画の一環として肝転移の切除が予定されているＣＲＣ患者は登録の資格があるものとする。臨床管理（すなわち試験変数ではない）が予定された計画された手術は、撮像日から１４日以降に行う必要がある。該イメージング試験には、１）安全性評価、２）臓器及び全身線量を測定して放射線曝露及び安全性を評価するための全身イメージング、及び３）専用の肝及び肝転移を撮像して該化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の腫瘍の取り込み、保持，及びクリアランスを詳細に測定することを含む。
【０２７７】
本試験は該化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）を単回静注投与後、ＰＥＴイメージングを行い、このＰＥＴ画像を定性及び定量解析することから構成される。本試験は、外科的に切除した転移の組織標本を用いて行い、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７により可視化されるＧＣＣと分析的に検証されたＧＣＣ  ＩＨＣアッセイにより評価されたＧＣＣとの関係も検討する。本試験には最大２０例の患者が参加する。利用可能な場合、患者は）以前に切除された腫瘍標本（例えば原発性結腸癌由来）の保管腫瘍組織を提供することに同意し、ＩＨＣによってＧＣＣを評価する。約６例〜８例の患者が増える場合、曝露及び動態を評価して投与条件及びイメージング条件を調整して試験を継続すべきかどうかを決定する。
【０２７８】
非臨床実験及びシミュレーションデータにより裏付けられているように、該化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の放射能は、４．０〜６．０（＋１０％）ミリキュリー（ｍＣｉ）の６８Ｇａ（最大４３．４μｇのペプチド）である。患者にはＰＥＴ／コンピュータ断層撮影（ＣＴ）を施行する。［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７などの化合物の静注（１０〜２０秒の単回ボーラス投与）後、最初の６例の患者には投与後に最大１２０分間の動的全身スキャンを施行する。全身イメージングはプロトコル（１分間、２分間、３分間、４分間、及び５分間のスキャン）に従って頭頂から開始して大腿上方で終了する。スキャンフレームセットは５ｍｍオーバーラップさせる。排尿なしに確実にスキャンを完了できるように、患者には水を経口補給した状態を維持させて、スキャン装置上に位置決めされる前に膀胱を空にするように促す。次の患者では、ダイナミックスキャンが肝の肝転移領域上で最長１２０分間実行されてもよい。スキャンに関し、単回静注の開始時にはスキャンは以下のプロトコルに従って開始される（１０秒の画像を３分間；２０秒の画像を３〜５分間；１分の画像を５〜１０分間；２分の画像を１０〜２０分間；５分の画像を２０〜６０分間；及び１０分の画像を６０〜１２０分間あるいは患者の拘束や他の理由で撮像が停止するまで）。
【０２７９】
化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の投与後、バイタルサインを最長８時間モニターする。７日目の対面による安全性評価など、重篤な有害事象（ＡＥ）及び非重篤な有害事象のモニタリングを行う。予定されている手術に先立って、化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）投与の約１４日後に最終安全性評価のフォローアップアセスメントを電話で行う。毒性は米国国立癌研究所有害事象共通用語基準（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｏｍｍｏｎ  Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ａｄｖｅｒｓｅ  Ｅｖｅｎｔｓ＝ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ）、バージョン４．０３（発効日２０１０年６月１４日）に準拠して評価する。
【０２８０】
臨床ＰＥＴ／ＣＴシステムの画像データを収集後、該システムのワークステーションを用いて各スキャンのデータを再構築して全身の断層画像及び動的画像を生成する。画像データは、ＡＣＲイメージメトリックスＴＲＩＡＤプラットフォームを使用して転送する。このプラットフォームは該イメージングセンターに局所的に設置される。撮像データを処理して評価する。次に、品質及び腫瘍可視性が適した画像を定量解析に供する。肝画像の一回目の定性的・視覚的解析が、読影の専門家により１〜５のスケールの少なくとも３（１＝確実に同定可能な腫瘍の取り込み；２＝ほぼ同定可能な腫瘍の取り込み；３＝不明瞭；４＝同定困難；５＝同定不能な腫瘍の取り込み；Ｎ／Ａ＝画像なし）であると判定される肝腫瘍を示す場合、画像を定量解析し、試験を進める。画像はＰＥＴにより前処理されてもよい。原画像の固有の計数密度及びノイズならびに時間放射能曲線に応じて、次の解析の前に５〜２０ｍｍのガウスカーネルを用いて画像を空間的に平滑化してもよい。次の解析に必要なノイズ特性に応じて、ローガン、カーブフィッティング、及び他の解析を用いて時間放射能曲線を一時的に平滑化してもよい。異なる時間ポイントからの画像を経時的加算して、静的画像取得をシミュレートし、定性解析用の画像を生成してもよい。空間的及び時間的平滑化及び画像加算の時間間隔の正確な適用は、最初の画像結果に基づいてなされる。定量解析にはＲＯＩ解析、ＳＵＶ決定、時間放射能曲線（ＴＡＣ）生成、ローガンプロット、及びトレーサーの動的モデリングを含む。
【０２８１】
外科的切除後、切除した手術標本の検証済みのＩＨＣ解析によって評価されるように、化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の取り込みを肝転移のＧＣＣ発現と比較する。
【０２８２】
本試験により、転移性病変で化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の取り込みが最も高くなる投与後の時間ポイント及び最良の腫瘍対正常肝バックグラウンド比を視覚的解析及び定量解析よって決定することもできる。さらに、本試験は化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７及びＭＬＮ６９０７ＤＳＰ）のＰＫプロファイルを直接決定することによって、これまで収集した薬物動態データを構築し、トレーサーの動的モデリングを用いてＧＣＣに結合する化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）を定量する。
【０２８３】
また、本試験にはＰＥＴにより検出したＧＣＣとＩＨＣにより検出したＧＣＣとの相関の評価も含む。
【０２８４】
患者はＣＲＣの診断及び切除可能肝転移のエビデンスを有する１８歳以上の男性または女性とする。患者は米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）の０〜１のパフォーマンスステータスを有し、［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７投与１４日以降に治療計画の一環として肝転移の切除が計画されている者とする。
【０２８５】
実施例１２：画像データ解析
限定するものではないが、眼の放射能、血中放射能、骨の放射、赤色骨髄の放射能、及び排泄される放射能などの全放射能濃度を、画像上に見られる可視的臓器による投与量及び投与時間の割合と共に患者ごとに一覧表に示し、投与後の経過時間と共に描画されている。放射線量算出からの全パラメータは別個に患者ごとの一覧表に含める。
【０２８６】
５段階を用いた視覚的評価の数及び割合を表にし、各肝腫瘍の腫瘍対バックグラウンド比の定量測定値を記述的に要約する。各主要病変について最大の比が得られるまでの信号対バックグラウンド比及び最適な撮像時間ポイントを決定するまでの時間に関し患者ごとの一覧表により示す。
【０２８７】
まず、モーションアーチファクト、減衰によるアーチファクト、及びノイズなど、画像品質全体に関して全画像を評価する。視野（ＦＯＶ）内にある場合、放射線の浸潤のエビデンスについて投与部位の放射能を評価する。次に、高品質画像を放射線量算出の解析に供し、肝画像を解釈して腫瘍取り込みを評価する。全身画像取得プロトコルは肝及び肝腫瘍を含み、５つの時間ポイントとする。頭頂から大腿上部までの８つの像面セットについて、肝画像の中間取得時間ポイントは投与後約４、１６、３６、６４、及び１００とする。肝の像遺影時間を長くするために最初の数名の患者後にプロトコルを修正する場合、肝画像の中間時間ポイントを僅かに変更する。例えば、化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の取り込み動態及びクリアランス動態が腫瘍／正常肝コントラストが、１６分後及び３６分後の画像で最大になっているような場合、該２つの画像を併せて解釈及び評価する。同時に登録されたＣＴ、ＭＲＩ、またはＦＤＧ‐ＰＥＴ画像が有る場合とない場合とで画像を読影の専門家に提示して検討する。画像を標準的なコントラスト及び輝度で呈示して、適切なイメージワークステーションで検討する。ＰＥＴ画像上の個々の腫瘍病巣を化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）取り込みの有無に関して５段階（１＝確実に同定可能な腫瘍の取り込み、２＝ほぼ同定可能な腫瘍の取り込み、３＝不明瞭、４＝同定困難、５＝同定不能な腫瘍の取り込み、及びＮ／Ａ＝画像なし）で評価する。腫瘍取り込みの不均一性についても以下のスケール（４＝著しく不均一、３＝中程度に不均一、２＝僅かに不均一、１＝均一、Ｎ／Ａ＝画像なし）に従って評価する。ＰＥＴ結果とＩＨＣ結果を相関させる場合、ＰＥＴスキャンの腫瘍不均一性を用いる。
【０２８８】
専用の動力学的に取得した肝画像は定性的かつ定量的に評価する。時間ポイントの数及び画像の数は肝腫瘍及び肝腫瘍について動力学的に取得されるため、所定の時間間隔にわたって該動的画像を合計することによって静止画像を生成する。時間間隔は定量的ＲＯＩ肝腫瘍及び正常肝臓（または筋あるいは血液）から選択される。ＴＡＣ及び肝腫瘍／正常な肝臓（または筋肉あるいは血液）の比は時間の関数とする。定量解析から２つの時間間隔を同定し、定性的視覚的解析にこれを用いて比較する。同時に登録されたＣＴ、ＭＲＩ、またはＦＤＧ‐ＰＥＴ画像が有る場合とない場合とで、信号（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）画像を表示して解釈し、肝腫瘍の数、サイズ及び場所に関する推測上の解剖学的情報が有る場合とない場合とで肝腫瘍検出を比較する。化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）取り込みの有無に基づいてＰＥＴ画像上の個々の腫瘍病巣を５段階（１＝確実に同定可能な腫瘍の取り込み、２＝ほぼ同定可能な腫瘍の取り込み、３＝不明瞭、４＝同定困難、５＝同定不能な腫瘍の取り込み、及びＮ／Ａ＝画像なし）で分類する。腫瘍取り込みの不均一性についてもスケール（４＝著しく不均一、３＝中程度に不均一、２＝僅かに不均一、１＝均一、Ｎ／Ａ＝画像なし）に従って評価する。
【０２８９】
全身イメージングから原発性器官上で対象領域（ＲＯＩ）を同定し、時間放射能曲線を（放射性崩壊補正せずに）算出する。各器官及び残留放射能について曲線下面積を算出する。最終時間ポイント後に放射能は、放射性崩壊によってのみらに失われる想定される。これらのデータをＯＬＩＮＤＡ／ＥＣＭソフトウェアに入力して、男性患者及び女性患者の器官及び全身の実効線量当量を算出する。
【０２９０】
正常肝及び肝転移の取り込み及び動態の動的解析について、ＲＯＩは各肝転移の中心、ならびに肝転移及び肝縁部から離れた肝組織の適切な領域で同定する。ＲＯＩは全身画像の他の異常病巣上でも同定される。腹部大動脈のＲＯＩも同定して血液動態を生成する。このために、肝病変がコントラストなしに見える場合にはＣＴ画像と共に、より良い解剖学的解像度を得るために加算画像を用いる。ＲＯＩを各イメージング時間ポイントに転送し、動力学的曲線を生成する。
【０２９１】
また、データをエクスポートして、機構的モデリングを介して決定されうるパラメータ（例えば、化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の送達及び取り込みに関連する抗原密度、血管分布、及び他のエンドポイント）を推定する。
【０２９２】
外部のバイオイメージングの専門家によって画像を評価する。全体的な画質を十分または不十分として分類する。不十分であると評価された全画像について、その原因を特定する。適した化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）存在の有無に基づいてＰＥＴ及び／またはＣＴ上の個々の腫瘍病巣を５段階（１＝確実に同定可能な腫瘍の取り込み、２＝ほぼ同定可能な腫瘍の取り込み、３＝不明瞭、４＝同定困難、５＝同定不能な腫瘍の取り込み、及びＮ／Ａ＝画像なし）で分類する。読影だけでグレード３以下と解釈された全病巣（識別される場合、原発性及び転移）について、ＳＵＶ算出（または腫瘍／正常肝、腫瘍／筋等）を行う。これらのパラメータを時間の関数として評価し、信号対バックグラウンド比及び最適な造営時間時間を決定する。
【０２９３】
肝転移の大きさの差及びＰＥＴ‐ＩＨＣの相関を説明するために、ファントムデータと各転移の測定サイズとを使用してＰＶＣを適用する。ホットスポットの回復及びコールドスポットのｓｐｉｌｌ‐ｉｎを算出し、補正値を次の解析に用いる。腹部大動脈にも同じ算出を行う。
【０２９４】
腫瘍／正常肝比及びモデルフィットデータを含む結果を全患者についてまとめ、平均値を表にする。腫瘍／正常比をイメージングするための最適な時間を決定する。フルモデルアプローチに対して腫瘍／正常肝比を描画し、その関係を評価して補正する。放射性標識した薬剤の腫瘍における輸送及び動態を試験するための機構モデルを使用する。
【０２９５】
この機構モデルは試験デザイン用の予測ツール及びインビボ腫瘍パラメータ（例えばＢｍａｘ及び血管分布）を推定する新規手段として用いたものである。視覚的評価の測定値も別個の解析に使用する。
【０２９６】
肝の定量解析には球体のファントムデータを含む。ファントムを埋めるために用いる放射性溶液（μＣｉ／ｍｌ）の較正時からの減衰及び放射性崩壊のためにファントムデータを補正する。完全な復元を確実にするために、ＰＥＴスキャナの半値全幅（ＦＷＨＭ）の少なくとも５倍の均一なファントムで同じ溶液をイメージングする。１）各球の中心に置いた３×３ＲＯＩ及び２）ＰＥＴ  ＣＴスキャンから球の境界に画定された等高のＲＯＩを用いてＲＯＩ解析を行う。最大ピクセル及び該最大ピクセル上の中心にある３×３ピクセルＲＯＩ（以下に記載する）は腫瘍上に偏心的に位置する可能性があるので、それに応じた位置決めが必要となる。したがって、このアプローチは腫瘍イメージングの結果に応じて二次的な解析用とする。最初の結果及び使用した特定のＰＥＴスキャナの性能特性に応じて、使用するＲＯＩは大きくても小さくてもよい。ＲＯＩはホット球及びコールド球上に位置決めする。同じＲＯＩを対応する均一なファントム上に位置決めする。均一なホット／コールド球ファントムは、定量解析のために同じ時間に崩壊が補正される。均一なファントム（ＨＳＲＣ＝ＲＯＩｈｔｓｐ／ＲＯＩｕｎｉ）及びコールドｓｐｉｌｌ‐ｉｎフラクション（ＣＳＲＣ＝ＲＯＩｃｄｓｐ／ＲＯＩｕｎｉ)で得られたものに対する各球の測定ＲＯＩ放射能によって定められるホットスポットリカバリー係数（ＨＳＲＣ）も同様に各球について算出する。このデータを異なるサイズの球について描画し、ＨＳＲＣ値及びＣＳＲＣ値に曲線をフィットさせる。次に、これらの曲線を用いて任意の腫瘍体積についてＰＶＣ肝腫瘍値を算出することができる。腫瘍が非常に不規則で不均一な場合、ピクセル・バイ・ピクセルＰＶＣのような追加の方法を用いてもよいし、そういった腫瘍を解析から省いてもよい。
【０２９７】
ＲＯＩ解析のいくつかのアプローチが、ＩＨＣ  ＧＣＣ結果との比較及び回帰解析のために行われる。ＩＨＣデータは、各肝腫瘍全体の平均ＧＣＣの代表であってもよいし、サンプリングした各肝腫瘍の特定のサブ領域をさらに表していてもよい。したがって、ＲＯＩ解析には種々の可能性を包含している必要がある。したがって、ＲＯＩ解析には、１）腫瘍の最大ピクセル、２）最大ピクセルの中心にある３×３個のピクセル、３）腫瘍中心に位置する３×３個のピクセル、及び４）同時登録されたＣＴまたはＭＲＩによって画定される等高線を含む。最初の結果に応じて他のサイズのＲＯＩを用いてもよい。該ＲＯＩは体重ＳＵＶ（ＳＵＶｂｍ）及び除脂肪体重ＳＵＶ（ＳＵＶｌｂｍ）に変換される。ＰＶＣ解析では、各腫瘍の周囲に円周領域を描画して、ＣＳＲＣ算出用の平均バックグラウンドを決定する、その領域は２ピクセル厚の環状領域となり、ＣＴまたはＭＲＩスキャンに示すように、その内側境界は外部腫瘍の境界から約１ＦＷＨＭ（最終イメージング分解能）に位置する。隣接する３つのスライス上では３×３ＲＯＩを肝の後ろの腹部大動脈に位置決めし、環状ＲＯＩは大動脈の周囲に位置決めする。任意の腫瘍、肝縁部、または任意の大きな血管構造から少なくとも２ｃｍにある正常肝の３領域に３つの３×３ＲＯＩを位置決めする。ＣＴ画像上に示されるように、３つの３×３ＲＯＩは、肝に隣接する腹壁筋あるいは別の適した筋に位置決めされ、次の解析のために該３つのＲＯＩを平均化する。最初の結果に応じて、他のサイズのＲＯＩを用いてもよい。
【０２９８】
利用可能な最良の解剖学的画像（ＣＴまたはＭＲＩ）を使用して個々の肝腫瘍の直径をｘ、ｙ、及びｚ次元で測定して、エッジを検出して腫瘍を画定する。サイズを対応させるために、解剖学的画像はＰＥＴの１カ月以内に取得しなければならない。球の体積を求める公式（Ｖ＝４／３πｒ３）を用いて各腫瘍の体積を算出し、ＰＶＣ及び腫瘍のサイズの関数である視覚的評価の結果の解析に用いる。
【０２９９】
定量的ＲＯＩ解析から決定される）腫瘍／正常肝（または筋／血液）が最大となる時間ポイントにて、専用の肝イメージングプロトコル（例えば、２０〜３０分間のデータ）からの加算画像に対して部分体積補正（ＰＶＣ）を行う。動的ＰＶＣは最初のデータ結果に基づいて行うことができるが、これはより複雑な解析である。画像品質から判断されるような全身イメージングからの肝の静止画像についてＰＶＣを行なってもよい。他の箇所で説明されるように、加算画像を用いてもよい。肝腫瘍化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）取り込みのＰＶＣは、個々の腫瘍ＲＯＩ値、ＣＴスキャンまたはＭＲＩスキャンから算出した腫瘍体積、及び球のファントムデータからのＨＳＲＣ値及びＣＳＲＣ値を用いて達成される。まず、各腫瘍の環状バックグラウンドを使用して、腫瘍取り込みに影響する腫瘍サイズが適したｓｐｉｌｌ‐  ｉｎを（ピクセル単位で）差し引く。次に、ＨＳＲＣを割ることによって最終的に補正された腫瘍取り込み値を算出する。ｉｔｈ腫瘍の式は以下の通りである。
【数１】
2017503763.tif 000026
（式中、Ｂｋｇｉはｉｔｈ腫瘍の周囲のバックグラウンドである。動脈の放射能も加算画像のＰＶＣに供する。腫瘍が非常に不規則で不均一な場合、ピクセル・バイ・ピクセルＰＶＣのような追加の方法を用いてもよいし、そういった腫瘍を解析から省いてもよい。
【０３００】
時間放射能解析を行う。個々の腫瘍崩壊補正ＲＯＩの結果を時間の関数として描画することによって、時間放射能曲線（ＴＡＣ）を生成する。上記の異なるＲＯＩ位置決め方法のために別個の曲線を生成する。同様に大動脈の血液及び筋のＴＡＣを生成する。サンプリングされた静脈血の曲線を生成する。肝腫瘍／正常肝、肝腫瘍／筋、及び肝腫瘍／血液について時間の関数として比曲線を生成する。この情報が利用可能である場合、大動脈ＲＯＩ値及び静脈血試料を血液値に使用する。時間の関数である放射性標識代謝物の割合の補正を用いる場合と用いない場合とで、血液の値を用いる。
【０３０１】
動力学モデリングを行う。まず、放射能濃度（μＣｉ／ｍｌ）及び投与時へ較正した比放射能を用いてＰＥＴ及び血中放射能をｎＭに変換する。放射性標識代謝物及び結合タンパク質についてＰＶＣ大動脈からの血漿の入力データを補正し、血漿中の遊離化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）入力関数を生成する。ローガンのグラフを用いて、１組織モデル及び２組織モデルを用いたコンパートメントモデリングによってモデリング解析を行う。固定した２５％の肝の血液量及び利用可能な最良のデータからの腫瘍体積を全モデル評価に用いる。固定された血液量の値が利用できないか、または信頼できない場合、腫瘍血液量を推定パラメータとして浮動化させてもよい。必要な血液量補正の大きさは血液及び腫瘍活性を比較することによって決定される。１組織モデルは２つの速度定数（Ｋ１、ｋ２）を有し、この定数をフィットさせて分布容積（ｖｏｌｕｍｅ  ｏｆ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ＝ＶＴ）を決定する（ＶＴ＝Ｋ１／ｋ２）。２組織モデルは４つの速度定数（Ｋ１、ｋ２、ｋ３、ｋ４）を有し、これをフィットさせてＶＴ＝Ｋ１／Ｋ２（１＋ｋ３／ｋ４）を決定する。ローガン法を用いて、双線型形式の式を用い、約３０〜１２０分あるいは本試験の終了までの変換データを用いてＶＴを算出する。比較及び最良の線形性の決定のために３０〜６０分及び３０〜９０分の時間間隔も用いる。コンパートメントモデリングを６０分及び９０分の停止時間で行う。この結果を比較して試験期間の影響を評価する。モデルフィット評価モデルフィット評価にＦ検定及びアカイケ情報量基準を用いる。入力として筋にはローガン解析も用い、その結果を入力として血液を用いた結果と比較する。同様に、筋について１組織及び２組織のフィットを行い、Ｋ１値及びｋ２値ならびにＫ１／ｋ２比を腫瘍のものと比較する。定性解析により判断されるように化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）の取り込みが有意である各腫瘍に対し、モデリングを個別に実行する。撮像ＰＶＣ動脈入力からの血漿入力関数を用いて解析を行う。その結果を表にし、ローガン勾配の値の変動及びＫ１、ｋ２、ｋ３、及びｋ４について全腫瘍を比較する。腫瘍に対してＫ１／ｋ２の相対的普遍性が認められる場合、固定されたＫ１／ｋ２値を用いてモデルフィットが行われ、全浮遊パラメータを用いてｋ３値、ｋ４値、及びｋ３値／ｋ４値がフィットと比較される。ｋ３／ｋ４比及びローガン勾配を所与の患者の腫瘍間及び全腫瘍間で種々の時間間隔にわたる腫瘍／正常肝、腫瘍／血液、腫瘍／筋比と比較して、より複雑なモデリング解析に対して相関度及び単純な比値を決定する。モデリング解析に最もよく対応する組織比の時間間隔に注目する。
【０３０２】
品質管理試験及びファントム試験を行う。以下の例では、６８Ｇａを使用するが、意図するイメージング剤が別の放射性原子を使用している場合には別の放射性原子に代えてもよいことを理解されたい。各撮像日の朝には、直径２０ｃｍ及び長さ２０ｃｍの均一な円筒形ファントムを撮像して、均一性を判定し、血液試料用のウェルキャリブレータを較正する。均一なファントムからのボリュームを較正済みの試料はウェルカウンタで計測する。均一なファントム撮像及びウェルカウンタで計測した試料のための開始／停止時間を崩壊補正のために記録する。化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）撮像の前には、追加の毎月、毎週、及び毎日のＰＥＴスキャナ品質管理手順を完了し、見直して、合格させる。試験開始前及び患者５人毎の後に、直径５〜３０ｍｍの範囲の６つの中空球を含むファントムを撮像する。該球形ファントムの撮像前に、６８Ｇａ溶液を充填した２０ｃｍの均一なファントムを撮像する。撮像直後、個々の中空球には均一なファントムに使用したのと同じ６８Ｇａ溶液を充填する。中空球の外側の空間には非放射性の水を充填する。ファントムはＰＥＴスキャナのＦＯＶの中心に置いて撮像する。撮影後、中空球を空にして洗浄し、非放射性の水で充填する。次に、球体周囲の空間には、均一なファントムで使用した６８Ｇａ溶液を充填してからファントムを撮像する。均一なファントム、ホット球ファントム及びコールド球ファントムための開始／停止時間を崩壊補正のために記録する。これらのデータによって、異なるサイズの肝腫瘍のＰＶＣのためのホットスポット及びコールドスポットリカバリー係数を算出することが可能となる。
【０３０３】
さらに、機構的モデリングを介して決定することができるパラメータ推定（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７の送達及び取り込みに関連する抗原密度、血管分布、及び他のエンドポイント[６８Ｇａ]ＭＬＮ６９０７）のためにデータをエクスポートしてもよい。
【０３０４】
別個の解析では視覚的評価の測定値も使用される。
【０３０５】
ＰＥＴデータ出力はＩＨＣデータと相関させることができる。肝転移の大きさの差及びＰＥＴ‐ＩＨＣ相関の差を説明するために、ＰＶＣは、ファントムデータと各転移の測定サイズとを使用して適用する。ホットスポットリカバリー及びコールドスポットｓｐｉｌｌ‐ｉｎを算出し、補正された値を次の解析で使用する。同様の算出を腹部大動脈について行う。
【０３０６】
全患者について腫瘍／正常肝比及びモデルフィットデータを含む結果をまとめ、平均値を表にする。腫瘍／正常比を撮像するのに最適な時間を決定する。フルモデルアプローチに対して腫瘍／正常肝比を描画し、その関係について相関を評価する腫瘍内の放射性標識した薬剤の輸送及び動態を試験するための機構モデルを用いる。この機構モデルは試験デザイン用の予測ツール及びインビボ腫瘍パラメータ（例えばＢｍａｘ及び血管分布）を推定する新規手段として用いたものである。
【０３０７】
１．適した早期及び後期の時間間隔でＴＡＣ及び比曲線から両方の時間間隔でその比が高くなるように決定した腫瘍／正常肝、腫瘍／筋、及び腫瘍／血液の比。部分容積効果補正（ＰＶＣ）済みの３×３ＲＯＩ及び輪郭のＲＯＩを共に用いる。
２．ＰＶＣ３×３及び輪郭ＲＯＩを用いた３０〜１２０分（または試験終了）間隔及び３０〜６０分間隔のローガン勾配。
３．必要に応じて、この２つの組織のコンパートメントｋ３／ｋ４値ＰＶＣは、４つのパラメータフロート結果から、筋データからの固定Ｋ１／ｋ２比による結果から、及び平均腫瘍Ｋ１／ｋ２からのものである。
４．機構モデルによって決定された抗原密度（Ｂｍａｘ）及び血管分布。
【０３０８】
実施例１３：前臨床イメージング試験
エクスビボ前臨床試験とインビボ前臨床試験の組み合わせならびにシミュレーションしたＰＥＴデータからの腫瘍パラメータのモデルを用いた評価に基づいた放射性標識化合物（例えば［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７）のＰＥＴ／ＣＴ試験デザインの方法について記載する。腫瘍微小環境の表現型が異なる患者由来のＣＲＣ異種移植片を対象にして一連の試験では、該ペプチドの親和性、内在化率及びクリアランスを決定した。該イメージング剤の臨床開発を支援することに加え、このデータをシミュレーションした臨床的リストモードのＰＥＴデータと併用して臨床的に実行可能ないくつかの取得条件及び再構築条件の下で腫瘍パラメータの推定を評価した。具体的には、部分容積補正を用いる場合と用いない場合とで、腫瘍径、抗原密度及び血管分布が異なる肝ＣＲＣ転移をＰＥＴイメージング取得期間及び再構築を併用してシミュレートした。既知の抗原密度及び血管分布を推定するために、分散型の腫瘍モデルを用いて、再構築データから腫瘍、肝及びバックグラウンドの時間放射能曲線（ＴＡＣ）を生成して解析した。該シミュレーション試験の解析から次のことが明らかとなった。
１）部分容積効果補正法は優れた抗原密度及び血管分布推定を実現するのに有用である。
２）腫瘍のサイズ範囲が１〜５ｃｍ内でパラメータ推定は最も正確であった。
３）パラメータ推定は試験した全ＴＡＣ再構築期間（例えば２、３、５、及び１０分）に対して堅牢であった。
４）パラメータ推定は一般的な３０〜９０分の取得時間で最適であった。
５）血管分布が悪い腫瘍の抗原密度推定の精度は低かった。
【０３０９】
低空間分解能及びサンプリングエラー（すなわち、直線的ボクセルを用いて丸い対象物を空間的に推定する）から生じる定量精度を改善するために、ＰＥＴイメージングでは部分容積効果（ｐａｒｔｉａｌ  ｖｏｌｕｍｅ  ｅｆｆｅｃｔ＝ＰＶＥ）補正法がよく用いられる。精度が得られるＰＶＥ法の適用は通常、入手可能なデータ及びソフトウェアに左右され、最初の読み出しとしてＳＵＶ及び／またはボリュームと共に１８Ｆ‐ＦＤＧ腫瘍イメージングについて最も大規模に試験されている。本［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７試験では、測定した時間放射能曲線（ＴＡＣ）に機構的薬物動態（ＰＫ）モデルを適用することによって、腫瘍抗原密度及び腫瘍血管分布の推定を改善する能力に関してＰＶＥ補正を評価した。具体的には、腫瘍体積、抗原密度、及び血管分布が異なる肝・大腸癌転移のＴＡＣを生成した。これらのＴＡＣは［６８Ｇａ］ＭＬＮ６９０７について事前に測定された親和性、内在化率、及びクリアランスの値を組み入れた機構的ＰＫモデルを用いて生成された。ラットを対象にした前臨床イメージング評価に基づき、ＸＣＡＴのヒトのデジタルファントムから肝及びバックグラウンドのＴＡＣを生成した。シミュレートした複数の病変を肝内に置いてデジタルファントムを完成させた。シミュレートしたＴＡＣと病変を担持するファントムを臨床用ＰＥＴスキャナ（ＡｎｙＳｃａｎ  ＰＥＴ／ＣＴ、Ｍｅｄｉｓｏ  Ｋｆｔ社）に組み入れて４時間のシミュレートしたリストモードデータを生成した。複数の取得ウィンドウ（例えば０〜６０分、３０〜９０分等）及び時間フレームインターバル（例えば２分、３分等）に対してリストモードデータを再構築した。既知の病変部位を用いて、再構築したものから病変ＴＡＣを抽出した（ＣＴデータは臨床試験のこの目的のためのものである）。ＰＶＥ補正の幾何学的変換マトリクス（ＧＭＴ）法を適用して肝からのスピルオーバーを補正した（病変があれば、バックグラウンドＲＯＩからのスピルオーバーは無視できることが分かった）。３〜３０ｍｍの半値全幅（ＦＷＨＭ）値を有する３次元ガウスカーネルを用いてシステムの点広がり関数を表した。上記ＰＫモデルを用いて、得られた補正済み及び未補正のＴＡＣを解析して腫瘍抗原密度及び血管分布を推定した。特に早期の時間ポイントでは肝の高い信号強度を補正する必要があるため、腫瘍血管分布及び腫瘍抗原密度を正確に推定するにはＰＶＥ補正が必要であることが明らかとなった。最適なパフォーマンスは、１５〜１８ｍｍのＦＷＨＭ範囲で観察され、この範囲内にあるより低い値では血管分布の良好な推定値が得られ易く、この範囲内のより高い値では抗原密度の良好な推値が得られ易い。
【０３１０】
実施例１４：ナイーブマウス及び腫瘍担持マウスを用いたビスマス２１３標識ＳＴｐ（５‐１８）ペプチドの生体内分布及び耐用性の評価
まず雌マウス２４匹を用いて生体内分布試験を行い２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）のエクスビボ分布を観察した．全腫瘍担持（ＧＣＣ）マウスを４匹×３グループに無作為割付し、全ナイーブマウスを４匹×３グループに無作為割付した。ガンマカウンタ装置による問題のために、一部のデータが失われ、試験は合計２０匹に現象した（腫瘍担持マウス１２匹、ナイーブマウス８匹）。全マウスに２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）を静注し、投与後以下の時間ポイントで殺処分した（１５分、１時間、３時間）。組織（腫瘍、血液、心、腎、肝、肺、脾、膵、膀胱、小腸、大腸、胃、骨、及び筋）を切除してガンマ線を計測し、組織毎に該トレーサー由来の放射能を判定した。
【０３１１】
標識プロトコル
最初に、３ｍＬの０．０１ＭのＨＣｌによりＡｃ‐２２５ジェネレータを洗浄した。洗浄後、０．８ｍＬのＮａＩ／ＨＣｌ０．１Ｍ／０．１Ｍで２１３Ｂｉを溶離した。次に３ｍＬの０．０１ＭのＨＣｌにより該ジェネレータ２回目の洗浄を行い、０．０１ＭのＨＣｌを用いて保管して次の２１３Ｂｉ溶離に備えた。この溶出プロセスはＣｏｌｅ  Ｐａｒｍｅｒ社製ポンプセットを速度４．０で用いて、流速０．１５ｍＬ／分で開始した。同時に、ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）化合物（０．１μｇ／μＬ６／２３／１４及び１．０uｇ／uＬ、６／２５／１４及び６／２７／１４）を６０℃で１０分間暖めた。インキュベート期間後、成分（２１３Ｂｉ、２Ｍトリス緩衝液、２０％アスコルビン酸）を反応混合物に加えて約１ｍＬの量とした（ｐＨ８．５〜８．８）。次いで、該反応を１００℃で５分間加熱した。０．１Ｍクエン酸緩衝液を用いたＳＧ‐ＩＴＬＣにより標識効率を確認した。取り込みは９６〜９８％の範囲であった。投与前に、合計で１００μＬ／回／匹になるように５μＬのＤＴＰＡを反応バイアル及び滅菌ＰＢＳに加えた。
【０３１２】
試験デザイン    
雌マウス２４匹を用いて２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）のエクスビボ分布を観察した。全腫瘍担持（ＧＣＣ）マウスをｎ＝４匹×３群に無作為割付し、全ナイーブマウスをｎ＝４匹×３群に無作為割付した。ガンマカウンタ装置に問題があったため、一部のデータが失われ、試験は合計２０匹に減少した（ｎ＝腫瘍担持１２匹、ｎ＝ナイーブ８匹）。試験開始時、群１（腫瘍担持）の動物は１９．８±１．９１ｇ、群２（対照）の動物は１８．７±１．６１ｇであった。２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）を全マウスに静注した。投与１５分後、１時間後、及び３時間後の時間ポイントで各群の動物のサブセットを殺処分した。死体からガンマ線を計測するために、組織（腫瘍、血液、心、腎、肝、肺、脾、膵、膀胱、小腸、大腸、胃、骨、及び筋）を切除した。
【表７】
2017503763.tif 000027
【０３１３】
生体内分布試験の終了後、腫瘍担持ＧＣＣ‐２９３雌マウスを用いてインビボ耐用性試験を実施した。まず、腫瘍サイズに基づいて腫瘍担持マウス６０匹を４軍のうちの１つに無作為割付けした。各群（ｎ＝８匹／群）はその薬剤介入及び／または投与量により特徴付けられた。群１の動物には１４０μＣｉの線量の２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）を１日おきに（０日目、２日目、４日目）３回静注した。群２の動物には５０μＣｉの線量の２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）を１日おきに（０日目、２日目、４日目）３回静注した。群３の動物にはビヒクル（正確な比率で０．１ＭのＨＣｌ／０．１ＮａＩ、Ｔｒｉｓ、アスコルビン酸、超純水、エタノール，及びＤＴＰＡをＰＢＳ中で標識した薬剤に；１００μＬ）を１日おきに（０日目、２日目、４日目）静注し、陰性対照とした。最後に、群４の動物には用量７．５ｍｇ／ｋｇのＧＣＣ標的抗体薬剤コンジュゲートを週に一度（合計３）（０日目、７日目、１４日目）３回投与し、陽性対照とした。投与後、２１日間または動物を殺処分するまで腫瘍径測定値及び体重を１週間に３回記録した（腫瘍のサイズが２０００ｍｍ３を超えるか、体重が２０％を超えて減った場合には動物を殺処分した）。殺処分時、選択した組織を各動物から採取し、後にＩＨＣ解析で使用する可能性があるためホルマリン固定した。
【表８−１】
2017503763.tif 000028
【表８−２】
2017503763.tif 000029
【０３１４】
解析
ＥＧ＆Ｇ  Ｗａｌｌａｃ社の１４８０Ｗｉｚａｒｄ（３インチ）ガンマカウンタにより生体内分布試験から切除した全組織を解析して、２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）由来の放射能を同定した。組織（腫瘍、血液、心、腎、肝、肺、脾、膵、膀胱、小腸、大腸、胃、骨、及び筋）を解析した。データは１分当たりのカウント数単位（ＣＰＭ）で記録し、後で、１グラム当たりのパーセント投与量の放射能濃度の単位（％ＩＤ／ｇ）で表すためにμＣｉ単位に変換した。
μＣｉ＝（ＣＰＭ／効率）／２．２２＊１０６
【０３１５】
各日及び／またはアッセイ時間について３回計数した１０倍及び１００倍または５０倍及び５００倍のストック希釈液から効率値を算出し、平均化した。
【０３１６】
耐用性試験の動物では、投与後に腫瘍のキャピラリー測定値を１週間に２回記録し、腫瘍体積変化を推定した。腫瘍径測定値をｍｍ単位で記録し、次に体積単位（ｍｍ３）に変換し、次式を用いて倍数変化を算出した：
腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ＊幅２）／２
倍数変化＝Ｖｔｉ／Ｖｔ０
【０３１７】
試験１では、ガンマカウンタの不具合のためにナイーブ動物の一部ではデータが失われた。このため、試験の動物総数は（２４匹とは対照的に）２０匹に減った。      
【０３１８】
試験２では、腫瘍が２０００ｍｍ３超増殖したか体重が２０％超減少した動物は最終的に殺処分した。
【０３１９】
生体内分布試験の成績
２１３ＢｉによりＳＴｐ（５‐１８）ペプチドを標識することに奏功したが、ペプチドの一部には経時的に加水分解が観察された。このタイプの放射線分解は安定化剤（エタノール等）を加えることにより軽減することができる。
【０３２０】
ナイーブマウス及び腫瘍担持マウスは３時間の時間間隔に亘って２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の同様の組織取り込みがあることが分かった。想定したように、腎排泄量が高いことから、最高の取り込みは腫瘍、腎及び膀胱で認められた。これらの値は６８Ｇａ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）で見られる取り込み及びクリアランスと似ている。
【０３２１】
２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）は腎排泄により血液から迅速に消失し（ｔ１／２＝３６〜５１分）、腫瘍組織に保持される。
【０３２２】
腫瘍と比較した特定の組織の２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の倍数取り込も６８Ｇａ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）と同等である。
【０３２３】
マウスモデルでは６８Ｇａからキレート化放射性金属である２１３Ｂｉへの切り換えは生体内分布を変化させなかった。腎の高い取り込みによる腎症は腎保護剤を同時投与することにより軽減することができる。
【０３２４】
耐用性試験の成績
１４０μＣｉ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の３回投与で治療した高投与量群は耐性が十分でなく、体重が２０％以上減少したために１４日後の終わりに全マウスを殺処分が必要であった。
【０３２５】
５０μＣｉ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の３回投与で治療した低投与量群では耐用性は改善した。陽性対照として用いたＧＣＣ標的抗体‐薬剤コンジュゲートでは問題は観察されなかった。
【０３２６】
平均すると、高投与量群及び低投与量群では１５日目まで腫瘍増殖が観察された。このアプローチを用いたところ、高投与量では１１日目に統計学的有意差が認められた。陽性対照はＴ／Ｃ＝０．１６で有効であった（２２日目）。
【表９】
2017503763.tif 000030
【０３２７】
ベースラインからの腫瘍増殖の倍数変化として腫瘍体積も算出し、上記のような腫瘍体積の変動を抑えた。対照と比較して全治療群に統計学的有意差が認められた。また、Ｔ／Ｃ算出値から全治療群では腫瘍増殖動態が有意に低下したことが分かる。
【表１０】
2017503763.tif 000031
【０３２８】
陰性対照と比較して、低投与量の陽性対照では生存確率は高かった（生存確率のカプラン・マイヤープロット）。
【０３２９】
高投与量治療（３回×１４０uＣｉ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８））では十分な耐性がなく、これは用量制限腎毒性による可能性が高い。電離放射線に腎を暴露後、放射線による腎症による壊死、萎縮症及び硬化症が生じる。
【表１１】
2017503763.tif 000032
【０３３０】
腎毒性及び血液毒性を解析するために、更なるＭＴＤ試験には血液及び尿のサンプリングを含んでよい。腎取り込みを低減させる意図されるアプローチは、腎保護剤（例えばクリニソル、Ｌ‐またはＤ‐リジン、リジン／アルギニン、ゲロフシン及びアミノフォスチン）の同時投与であり、腎保護剤は尿細管の負荷を変化させ、ペプチド及び遊離２１３Ｂｉの吸収を低下させる。腎保護剤を用いれば、最大耐量（ＭＴＤ）を上げ、腎症を抑えることができる。
【０３３１】
治療群及び対象群と比較して、ベースラインからの腫瘍増殖の倍数変化を見ると、統計学的に有意な腫瘍増殖動態の減少が観察された。これは算出したＴ／Ｃ値にも反映された。２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の投与量を上げると、Ｔ／Ｃは低下した。陰性群と比較して、低投与量群でも高い生存確率が認められた。
【０３３２】
実施例１５：２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）ＰＫ及び生体内分布に対する腎保護剤の効果の評価
本試験はナイーブＳＣＩＤマウスを対象にした薬物動態／生体内分布試験である。本試験では２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の薬物動態及び生体内分布に対する腎保護剤（例えばクリニソル、リジン、リジン／アルギニン、ゲロフシン及び／またはアミノフォスチン）の効果を定量する。
投与レジメン：２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）
１．２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）対照、腎保護剤（尾静注）なし（ｎ＝３×４）。
２．２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）及びリジン／アルギニンを同時投与（尾静注）（ｎ＝３×４）。
３．２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）及びアミノフォスチンを同時投与（尾静注）（ｎ＝３×４）。
４．２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）及びリジン／アルギニン及びアミノフォスチンを同時投与（尾静注）（ｎ＝３×４）。
【０３３３】
上記と同様の用量レジメンを用い、他の腎保護剤（例えばクリニソル、リジン、及びＧｅｌｆｕｓｉｎｅ）を単独で試験してもよいし、併用で試験してもよい。
データ収集：
１．組織を切除し、秤量し、各用量レジメンにつき３つの時間ポイントで計数する。
ｉ.１５分（ｎ＝４）
ｉｉ.１時間（ｎ＝４）
ｉｉｉ.３時間（ｎ＝４）
２．殺処分時、組織（血液、心、腎、肝、肺、脾、膵、膀胱、小腸、大腸、胃、及び骨）を切除し、秤量し、計数する。
【０３３４】
実施例１６：ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣ腫瘍担持マウスにおける２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の耐用性
本試験では、腎保護剤（例えばクリニソル、リジン、リジン／アルギニン、ゲロフシン及び／またはアミノフォスチン）の併用の有無による２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の最大耐量（ＭＴＤ）を試験する。ＭＴＤは、有意な体重減少（＞２０％）で１００％の生存を可能にする最大投与活性として決定される。腫瘍、血液、心、腎、肝、脾、肺、大腿、及び小腸を切除し、固定してＨＥ染色し、放射線曝露レベル及び正常組織及び腫瘍組織に対する放射線の影響を検討する。血中尿素窒素及び血清クレアチニンレベルも測定して、腎への放射線損傷の可能性を調べる。
投与レジメン：
１．陰性対照：未標識ＳＴｐ（５‐１８）（尾静注）ペプチド対照（ｎ＝４）．
２．１０ｋＢｑ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋腎保護剤（尾静注）（ｎ＝４）。
３．２０ｋＢｑ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋腎保護剤（尾静注）（ｎ＝４）。
４．４０ｋＢｑ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋腎保護剤（尾静注）（ｎ＝４）。
５．６０ｋＢｑ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋腎保護剤（尾静注）（ｎ＝４）。
６．１２０ｋＢｑ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋腎保護剤（尾静注）（ｎ＝４）。
７．６０ｋＢｑ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）（尾静注）（ｎ＝４）。
８．１２０ｋＢｑ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）（ＩＶ）（ｎ＝４）。
【０３３５】
上記と同様の用量レジメンを用い、他の腎保護剤（例えばクリニソル、リジン／アルギニン、リジン、ａｍｏｆｉｓｔｉｎｅ及びゲロフシン）を単独で試験してもよいし、併用で試験してもよい。
データ収集：
１．腫瘍の体積及びマウスの体重測定を３回／週、２１日間行う。
２．殺処分時（腫瘍のサイズが＞２０００ｍｍ３または体重減少＞２０％になれば、動物を殺処分する）、組織（腫瘍、血液、心、腎、肝、脾、肺、大腿、小腸）を切除し、秤量し、ＩＨＣ（Ｈ＆Ｅ染色）用にホルマリン固定する。
ａ．ＩＨＣ解析用に腎及び腫瘍を固定する。
３．血中尿素窒素及び血清クレアチニンレベルを測定する。
【０３３６】
実施例１７：ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣ＃２腫瘍担持マウスを対象にした２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）有効性試験
本試験では、異なる投与スケジュールを用いてＭＴＤにおける２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の有効性を試験する。試験終了時、組織を切除して、放射線曝露レベル及び正常組織及び腫瘍組織に対する放射線の影響を検討する。血中尿素窒素及び血清クレアチニンレベルも測定して、腎への放射線損傷の可能性を調べる。
用量レジメン：
１．陰性対照：未標識ＳＴｐ（５‐１８）＋腎保護剤（尾静注）  ペプチド対照（ｎ＝８）。
２．ＭＴＤ  ｕＣｉ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋腎保護剤（尾静注）  ペプチド対照（ｎ＝８）。
３．１／２ＭＴＤ  ｕＣｉ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋腎保護剤、１回／週を２週間（尾静注）（ｎ＝８）。
４．１／３ＭＴＤ  ｕＣｉ  ２１３Ｂｉ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋腎保護剤、１回／週を３週間（尾静注）（ｎ＝８）。
データ収集：
１．動物を殺処分するまで（腫瘍のサイズが＞２０００ｍｍ３または体重減少＞２０％になれば、動物を殺処分する）（有害作用がないかを常に監視しながら）腫瘍径測定及び体重測定を２回／週行う。
２．殺処分時、組織（腫瘍、心、腎、肝、脾、肺）を採取し、後のＩＨＣ解析に備えてホルマリン固定する。
【０３３７】
実施例１８：ナイーブＣＢ‐１７ＳＣＩＤマウスにおけるアクチニウム‐２２５標識ＳＴｐ（５‐１８）ペプチドの薬物動態及びエクスビボ生体内分布の評価
本試験では、ナイーブＣＢ‐１７ＳＣＩＤマウスにおけるアクチニウム‐２２５標識ＳＴｐ（５‐１８）ペプチドの薬物動態及びエクスビボ生体内分布を娘核と共に試験する。
【０３３８】
オークリッジ国立研究所から無担体の固体硝酸アクチニウム形態で１ｍＣｉの２２５Ａｃを入手した。ｐＨ５．６の２０％エタノールを含む５００uＬの０．２Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液に５０uｇＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）を溶解した。２００uＬの０．２ＭＨＣｌを用いて１ｍＣｉの２２５Ａｃ硝酸を再構成した。２０μＬ（１００uＣｉ）の２２５Ａｃを反応バイアルに移し、該バイアルを１００Ｃで１０分間加熱した。ｐＨ５．５の５０ｍＭクエン酸ナトリウム移動相でｉＴＬＣにより放射化学的純度は＞９６％であった。
【０３３９】
ＳｅｐＰａｋＣ１８カートリッジを用いて２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）で放射性標識されたペプチドを生成し、１：１の等張食塩水／無水エタノール５００μｌを用いて溶出させた。
【０３４０】
１２匹のナイーブＣＢ‐１７ＳＣＩＤ雌マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ社）を対象に２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）のエクスビボ体内分布を観察した。全ナイーブマウスを４匹×３群に無作為割付した。全マウスには１００uＬの処方した２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）を精製４５分以内に静注した（ガンマカウンタの２２５Ａｃウィンドウで計数して１００uＬ＝４４４５９８ＣＰＭ）。投与０．５時間後、1時間後、4時間後、及び２４時間後の時間ポイントの各々で各群の動物のサブセットを殺処分した。死体からガンマ線を計測するために、組織（血液、心、腎、肝、肺、脾、小腸、大腸、胃）を切除した。２１３Ｂｉ／２２５Ａｃ平衡を考慮して、採取の少なくとも４時間後に２２５Ａｃ含有量を同定して、娘の放射能を解析するために、カウンタを較正し、アクチニウム定量用の２２１Ｆｒ（ｇ、２１８ｋｅＶ）及び２１３Ｂｉ（ｇ、４４０ｋｅＶ）からガンマ線イベントを収集するようにウィンドウを設定し、殺処分後２０〜５０分以内及び２１３Ｂｉ／２２５Ａｃが再び平衡に達した後（＞４時間）、試料を計数した。
【表１２】
2017503763.tif 000033
【０３４１】
Ｓｏｎｇらが記載した手順に従ってガンマ線計測を行った。具体的には、殺処分直後（約３０、４５、６０分以内）に２２１Ｆｒ及び２１３Ｂｉウィンドウ内試料を３回測定し、平衡時（殺処分の２４時間後）に再度測定した。
【０３４２】
アクチニウム解析
平衡２２５Ａｃスプレッドシートからデータ（体重、時間ポイント、投与回数、殺処分回数、被検体ＩＤ、組織、ＣＰＭなど）を自動的に読み込んだ。測定された標準は投与した用量と同量の放射能であったことから、測定された標準ＣＰＭを投与量として用いた。１グラム当たりのパーセント投与量は次式のように算出した。
％ＩＤ／組織１グラム＝ＣＰＭ組織／ＣＭＰ標準＊１００／重量組織
１グラム当たりのパーセント投与量をスプレッドシートに書き込み、時間ポイントに対してグラフにした。
【０３４３】
フランシウム‐２２１／ビスマス２１３解析
２１３Ｂｉ及び２２１Ｆｒのスプレッドシートから、殺処分直後（投与後約３０、４５、６０分以内）の３つの時間ポイントのＣＰＭ測定値を含むデータ（体重、時間ポイント、投与回数、殺処分回数、被検体ＩＤ、組織、ＣＰＭなど）を自動的に読み込んだ。一般的な最小二乗を用いてＣＰＭデータの対数にフィットさせることによって、殺処分直後の３つの時間ポイントからのＣＰＭ推定値を単一指数関数にフィットさせた。投与時間及び時間ポイントの情報を基準として用いて、各ＣＰＭについて殺処分後の正確な時間を算出した。フィットさせたものに基づき、殺処分時の推定ＣＰＭ（ＣＰＭ＿０）を推定した。殺処分時刻に補正した平衡崩壊時に測定されたＣＰＭ（ＣＰＭ＿ｅｑ）とこのＣＰＭ＿０を絶対差及び比に関して比較した。差（ＣＰＭ＿０−ＣＰＭ＿ｅｑ）が０より大きい場合、２２１Ｆｒまたは２１３Ｂｉが組織に蓄積していることを示す。
【０３４４】
結果の要約
本試験に記載の方法を用いて、比放射能４．２ｍＣｉ／ｎｍｏｌで２２５Ａｃを用いてＳＴｐ（５‐１８）ペプチドを標識することに成功した
【０３４５】
血中の２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の半減期は、３１８分であった。比較例として、６８Ｇａ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の半減期は２６分であった。
【０３４６】
想定したように、腎では２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の取り込みが高く、測定した他の組織には蓄積は実質的にみられなかった。同様に、２２１Ｆｒまたは２１３Ｂｉの娘の崩壊産物の蓄積は、腎を除いてはどの組織にも実質的にみられなかった。
【０３４７】
実施例１９：ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣ腫瘍担持マウスを対象にしたアクチニウム‐２２５標識ＳＴｐ（５‐１８）ペプチドの耐用性試験
本試験では、腎保護剤（例えばクリニソル、リジン、リジン／アルギニン、ゲロフシン及び／またはアミノフォスチン）の併用の有無による２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の最大耐量（ＭＴＤ）を試験する。ＭＴＤは、有意な体重減少（＞２０％）で１００％の生存を可能にする最大投与活性として決定される。腫瘍、血液、心、腎、肝、脾、肺、大腿、及び小腸を切除し、固定してＨＥ染色し、放射線曝露レベル及び正常組織及び腫瘍組織に対する放射線の影響を検討する。血中尿素窒素及び血清クレアチニンレベルも測定して、腎への放射線損傷の可能性を調べる。
用量レジメン：
１．陰性対照：未標識ＳＴｐ（５‐１８）（尾静注）ペプチド対照（ｎ＝４）。
２．１０ｋＢｑ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）（尾静注）（ｎ＝４）。
３．２０ｋＢｑ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）（尾静注）（ｎ＝４）。
４．４０ｋＢｑ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）（尾静注）（ｎ＝４）。
５．６０ｋＢｑ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）（尾静注）（ｎ＝４）。
６．１００ｋＢｑ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）（尾静注）（ｎ＝４）。
７．４０ｋＢｑ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋リジン／アルギニン（ＩＶ）事前処理（ｎ＝４）。
８．４０ｋＢｑ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）＋１００ｍｇ／ｋｇアミノフォスチン（ＩＶ）事前処理（ｎ＝４）。
【０３４８】
上記と同様の用量レジメンを用い、他の腎保護剤（例えばクリニソル、及びゲロフシン）を単独で試験してもよいし、併用で試験してもよい。
データ収集：
１．腫瘍の体積及びマウスの体重測定を３回／週、２１日間行う。
２．殺処分時（腫瘍のサイズが＞２０００ｍｍ３または体重減少＞２０％になれば、動物を殺処分する）、組織（腫瘍、血液、心、腎、肝、脾、肺、大腿、小腸）を切除し、秤量し、ＩＨＣ（Ｈ＆Ｅ染色）用にホルマリン固定する。
ａ．ＩＨＣ解析用に腎及び腫瘍を固定する。
３．血中尿素窒素及び血清クレアチニンレベルを測定する。
【０３４９】
実施例２０：ＨＥＫ‐２９３ＧＣＣ＃２腫瘍担持マウスを対象にした２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）有効性試験
本試験では、腎保護剤（例えばクリニソル、リジン、リジン／アルギニン、Ｇｅｌｆｕｓｉｎｅ及び／またはアミノフォスチン）の有無により、異なる投与スケジュールを用いて２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）の有効性を試験する。試験終了時、組織を切除して、放射線曝露レベル及び正常組織及び腫瘍組織に対する放射線の影響を検討する。血中尿素窒素及び血清クレアチニンレベルも測定して、腎への放射線損傷の可能性を調べる。
用量レジメン：
１．陰性対照：未標識ＳＴｐ（５‐１８）（尾静注）ペプチド対照（ｎ＝８）。
２．ＭＴＤｎＣｉ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）単回投与（尾静注）（ｎ＝８）。
３．ＭＴＤｎＣｉ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）単回投与、腎保護剤併用（尾静注）（ｎ＝８）。
４．１／２ＭＴＤｘ２ｎＣｉ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）、１回／週を２週間（尾静注）（ｎ＝８）。
５．１／３ＭＴＤｎＣｉ  ２２５Ａｃ‐ＤＯＴＡ‐Ａｈｘ‐ＳＴｐ（５‐１８）、１回／週を３週間（尾静注）（ｎ＝８）。
データ収集：
１．腫瘍の体積及びマウスの体重測定を３回／週、２１日間行う。
２．殺処分時（腫瘍のサイズが＞２０００ｍｍ３または体重減少＞２０％になれば、動物を殺処分する）、組織（腫瘍、血液、心、腎、肝、脾、肺、大腿、小腸）を切除し、秤量し、ＩＨＣ（Ｈ＆Ｅ染色）用にホルマリン固定する。
３．血中尿素窒素及び血清クレアチニンレベルを測定する。
【図１】
2017503763.tif 000039
【図２】
2017503763.tif 000040
【図３】
2017503763.tif 000041
【図４】
2017503763.tif 000042
【図５】
2017503763.tif 000043
【図６】
2017503763.tif 000044
【図７】
2017503763.tif 000045
【図８】
2017503763.tif 000046
【図９】
2017503763.tif 000047
【図１０】
2017503763.tif 000048
【図１１】
2017503763.tif 000049
【図１２】
2017503763.tif 000050
【図１３】
2017503763.tif 000051
【図１４】
2017503763.tif 000052
【図１５】
2017503763.tif 000053
【図１６】
2017503763.tif 000054
【図１７】
2017503763.tif 000055
【配列表】
2017503763000001.app
【国際調査報告】
2017503763.tif 000056
2017503763.tif 000057
2017503763.tif 000058