(57)【要約】IL-20アンタゴニストを用いて、炎症性疼痛を有するか、これを有することが疑われる対象において、炎症性疼痛を軽減すること；IL-20アンタゴニストは、IL-20により媒介されるシグナル伝達経路を遮断する抗体であってもよい。かかる抗体は、IL-20シグナル伝達経路を特異的に遮断する抗IL-20抗体および抗IL-20R抗体を含む。
2017514798.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
疼痛を軽減するのに有効量のIL-20アンタゴニストを、それを必要とする対象に投与することを含む、対象において疼痛を軽減するための方法。
【請求項２】
IL-20アンタゴニストがIL-20により媒介されるシグナル伝達経路を阻害する抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抗体が、ヒトIL-20に結合する抗体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
抗体が、全長抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または一本鎖抗体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
抗IL-20抗体が、モノクローナル抗体mAb7E、その抗原結合フラグメント、またはその機能的バリアントである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
機能的バリアントが、mAb7Eと同じ相補性決定領域（CDR）を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
機能的バリアントが、mAb7Eのヒト化抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ヒト化抗体が、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
抗体が、ヒトIL-20受容体に結合する抗体である、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
抗体が、ヒトIL-20受容体のサブユニットR1に結合する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
抗体が、全長抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または一本鎖抗体である、請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ヒトIL-20受容体のサブユニットR1に結合する抗体が、モノクローナル抗体mAb51DもしくはmAb7GW、またはその機能的バリアントと同じＶＨおよびＶＬ鎖を含む抗体である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
機能的バリアントが、mAb51DまたはmAb7GWと同じ相補性決定領域（CDR）を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
機能的バリアントが、mAb51DまたはmAb7GWのヒト化抗体である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
対象が、疼痛を罹患しているヒト患者である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
疼痛が、炎症性疼痛である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
炎症性疼痛が、急性炎症により誘発される神経障害性疼痛、慢性炎症により誘発される神経障害性疼痛、急性炎症により誘発される虚血性疼痛、慢性炎症により誘発される虚血性疼痛、関節炎に関連する炎症性疼痛、急性炎症により誘発される筋痛、慢性炎症により誘発される筋痛、急性炎症により誘発される神経痛、慢性炎症により誘発される神経痛、化学療法により誘発される神経痛、または神経障害に関連する疼痛である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
対象が、化学療法剤により引き起こされる末梢神経障害を罹患しているヒトがん患者である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
対象において疼痛を軽減することにおける使用のための医薬組成物であって、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体および薬学的に受容可能なキャリアを含む、前記組成物。
【請求項２２】
対象において疼痛を軽減することにおける使用のための医薬を製造するための、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本願は、2014年4月1日に出願された米国出願番号14/242,574の利益を主張し、該出願の内容は、その全体において本明細書により参考として援用される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
疼痛を引き起こす刺激は、一次感覚ニューロンの神経終末により検出される。一次感覚ニューロンの細胞体は、後根神経節（DRG）などの感覚神経節において見出される。シグナルは、活動電位の形態において、一次感覚神経線維に沿って、脊髄の後角へ、そこからより高次の脳の中枢へと伝達され、そこで疼痛として解釈される。一次感覚ニューロンは、広範な熱、機械および化学刺激により活性され得る。傷害または炎症は、有害な熱または機械刺激に対する感覚ニューロンの感受性を増大させる、広範な炎症メディエーターを放出させる。
インターロイキンIL-20（IL-20）は、IL-10、IL-19、IL-20、IL-22、IL-24およびIL-26を含むIL-10ファミリーのメンバーである（Blumberg, et al., 2001, Cell 104:9-19；Pestka et al., 2004, Annu Rev Immunol 22:929-979）。IL-20は、単球、上皮細胞および内皮細胞において発現され、IL-20R1／IL-20R2またはIL-22R1／IL-20R2のいずれかのヘテロ二量体受容体複合体を活性することにより、複数の細胞型に対して作用する（Dumoutier, et al., 2001, J Immunol 167:3545-3549）。IL-20は、乾癬（Blumberg et al., 2001；Sa et al., 2007, J Immunol 178:2229-2240；およびWei et al., 2005, Clin Immunol 117:65-72）、関節リウマチ（Hsu, et al., 2006, Arthritis Rheum 54:2722-2733）、アテローム性動脈硬化（Caligiuri, et al. 2006, Arterioscler Thromb Vasc Biol 26:1929-1930；およびChen et al., 2006, Arterioscler Thromb Vasc Biol 26:2090-2095）、虚血性脳卒中（Chen et al., 2009, J Immunol 182:5003-5012）ならびに腎不全（Li et al., 2008, Genes Immun 9:395-404）などの多様な炎症性疾患に関与することが見出されている。また、Wei et al., 2006, J Biomed Sci 13:601-612を参照。
【発明の概要】
【０００３】
本開示は、IL-20が炎症性疼痛の感作に関与し得、IL-20シグナル伝達経路を抑制する抗体が、誘発した炎症性疼痛を有するマウスにおいて機械的アロディニアを首尾よく阻害したという、予想外の知見に基づく。
したがって、本開示の一側面は、対象において炎症性疼痛などの疼痛を軽減するための方法に関し、該方法は、それを必要とする対象に、IL-20アンタゴニストを、疼痛を軽減するための有効量で投与することを含む。いくつかの態様において、IL-20アンタゴニストは、IL-20タンパク質（例えばヒトIL-20）に結合する抗体またはIL-20受容体（例えばヒトIL-20受容体）に結合する抗体などの、IL-20により媒介されるシグナル伝達経路を阻害する抗体である。本明細書において記載される方法のいずれかにおいて用いられる抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであってもよい。あるいは、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または一本鎖抗体であってもよい。
【０００４】
いくつかの態様において、本明細書において記載される方法のいずれかにおいて用いられるべき抗体は、モノクローナル抗体mAb7E、その抗原結合フラグメント、またはその機能的バリアントであってよい。一例において、mAb7Eの機能的バリアントは、mAb7Eと同じ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。別の例において、機能的バリアントは、mAb7Eのヒト化抗体である。かかるヒト化抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、および配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含んでもよい。
【０００５】
他の態様において、本明細書において記載される方法のいずれかにおける使用のためのIL-20アンタゴニストは、ヒトIL-20受容体に結合する、例えばIL-20R1サブユニット、IL-20R2サブユニット、IL-20R1／R2複合体、IL-22R1サブユニット、またはIL-22R1／IL-20R2複合体に結合する抗体であってよい。いくつかの例において、抗体は、ヒトIL-20受容体のサブユニットR1に結合する。かかる抗体は、全長抗体またはその抗原結合フラグメントであってよい。それはまた、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、または一本鎖抗体であってよい。一例において、ヒトIL-20受容体のサブユニットR1に結合する抗体は、モノクローナル抗体mAb51DもしくはmAb7GW、またはmAb51DもしくはmAb7GWの機能的バリアントと同じＶＨおよびＶＬを含む抗体である。機能的バリアントは、mAb51DまたはmAb7GWと同じ相補性決定領域（CDR）を含んでいてよい。あるいは、機能的バリアントは、mAb51DまたはmAb7GWのヒト化抗体であってもよい。
【０００６】
本明細書において記載される方法（例えば、IL-20シグナル伝達経路を阻害する抗体が用いられる方法）において処置されるべき対象は、疼痛、炎症性疼痛を罹患する患者（例えばヒト患者）であってよい。炎症性疼痛は、急性炎症（例えば、組織の傷害もしくは免疫応答に応答した即時型炎症）または慢性炎症（例えば、長期の炎症により引き起こされる疼痛）に関連していてもよい。炎症性疼痛として、限定されないが、急性または慢性炎症に関連する神経障害性疼痛（例えば、神経障害により引き起こされる疼痛）、急性または慢性炎症により誘発される虚血性疼痛、関節炎により誘発される疼痛、急性または慢性炎症により誘発される筋痛、急性、慢性炎症または化学療法により引き起こされる神経痛が挙げられる。いくつかの例において、対象は、末梢神経障害を引き起こし得る化学療法剤（例えば本明細書において記載されるもの）を共投与される、ヒトがん患者である。
【０００７】
また、本開示の範囲内にあるのは、（ａ）対象において疼痛（例えば炎症性疼痛）を軽減することにおける使用のための、本明細書において記載されるIL-20アンタゴニスト（例えば、ヒトIL-20に結合する抗体またはヒトIL-20受容体（R1、R2もしくはこれらの複合体）などのIL-20シグナル伝達経路を阻害する抗体）のうちの１または２以上を含む、医薬組成物；および（ｂ）炎症性疼痛および例えば化学療法剤により引き起こされた末梢神経障害などの疼痛を軽減するための医薬の製造における、前記の医薬組成物の使用である。
本発明の１または２以上の態様の詳細を、以下の説明において記載する。本発明の他の特徴または利点は、以下の図面およびいくつかの態様の詳細な説明から、ならびにまた添付の請求の範囲から、明らかとなるであろう。
図面をまず説明する。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】図１は、フロイント完全アジュバント（CFA）により誘発された炎症性疼痛に対する抗IL-20抗体（mAb7E）の阻害効果を示すチャートである。CFA誘発型機械的アロディニアは、抗IL-20抗体（１０μｇ）のクモ膜下腔内（ＩＴ）または足（ＰＬ）注射によって有意に阻害されたが、対照ＩｇＧ（１０μｇ）によっては阻害されなかった。*ＩｇＧ対照に対してＰ＜０．０５；＃ＩＴ群に対してＰ＜０．０５。データは、５〜６個体のマウスの平均値±ＳＥＭを表す。
【０００９】
【図２】図２は、異なる用量におけるクモ膜下腔内注射を介する抗IL-20抗体mAb7Eの鎮痛効果を示すチャートである。*基線の対照（CFA 3d）に対してＰ＜０．０５；＃１２μｇ群に対してＰ＜０．０５。データは、５〜６個体のマウスの平均値±ＳＥＭを表す。
【図３】図３は、例２において詳述される研究についての実験プロトコルの模式的概略である。パクリタキセル群：パクリタキセル誘発型神経障害は、１日おきの４回のパクリタキセル（４．５ｍｇ／ｋｇ）の注射により誘発した。抗IL-20Ab／パクリタキセル群：抗IL-20Ab（「IL-20Ab」；５ｍｇ／ｋｇ）を、パクリタキセルの各注射の６時間前に投与した。IL-20Ab群：IL-20Ab（５ｍｇ／ｋｇ）を、生理食塩水の各注射の６時間前に投与した。生理食塩水の注射容積は、パクリタキセルのものと等しかった。対照群：４回の生理食塩水の注射を１日おきに行った。全ての神経学的試験の基線の測定値を、パクリタキセルまたはビヒクル投与の前に取得し、処置の後に毎週１か月間にわたり４回のさらなる試験のセッションを記録した。
【００１０】
【図４】図４は、化学療法誘発型機械的アロディニアに対する抗IL-20抗体の神経保護効果を示すチャートである。Ｙ軸は、正規化された足引き込み時間（paw withdrawal time）を示す（各群の基底レベルで除算した）。各点は、６個体のマウスからの平均値±ＳＥを表す。
【図５】図５は、化学療法誘発型機械的アロディニア試験において、処置の４週間後に評価した足引き込み時間を示すチャートである。各データは、６個体のマウスからの平均値±ＳＥを表す。独立ｔ検定により、*ｐ＜０．０５；**Ｐ＜０．０１。
【図６】図６は、化学療法誘発型熱的アロディニア（thermal allodynia）に対する抗IL-20抗体の神経保護効果を示すチャートである。Ｙ軸は、正規化された熱反応潜時を示す（各群の基底レベルで除算した）。各点は、６個体のマウスからの平均値±ＳＥを表す。独立ｔ検定により、*ｐ＜０．０５；**Ｐ＜０．０１。
【図７】図７は、化学療法誘発型熱的アロディニア試験において、処置の４週間後に評価した熱反応潜時を示すチャートである。各データは、６個体のマウスからの平均値±ＳＥを表す。独立ｔ検定により、*ｐ＜０．０５；**Ｐ＜０．０１。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
配列の簡単な説明
配列番号１は、モノクローナル抗体mAb7Eの重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２は、モノクローナル抗体mAb7Eの重鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号３は、モノクローナル抗体mAb7Eの軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号４は、モノクローナル抗体mAb7Eの軽鎖可変領域のアミノ酸配列である。
配列番号５は、mAb7Eから誘導されたヒト化抗体HL1およびHL2の重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列（シグナルペプチドを含む前駆体形態）である。
【００１２】
配列番号６は、mAb7Eから誘導されたヒト化抗体HL1およびHL2の重鎖可変領域のアミノ酸配列（シグナルペプチドを含む前駆体形態）である。
配列番号７は、mAb7Eから誘導されたヒト化抗体HL1およびHL2の重鎖可変領域コードするヌクレオチド配列（シグナルペプチドを欠失する成熟形態）である。
配列番号８は、mAb7Eから誘導されたヒト化抗体HL1およびHL2の重鎖可変領域のアミノ酸配列（シグナルペプチドを欠失する成熟形態）である。
配列番号９は、ヒト化抗体HL2の軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列（シグナルペプチドを含む前駆体形態）である。
配列番号１０は、ヒト化抗体HL2の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（シグナルペプチドを含む前駆体形態）である。
【００１３】
配列番号１１は、ヒト化抗体HL2の軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列（シグナルペプチドを欠失する成熟形態）である。
配列番号１２は、ヒト化抗体HL2の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（シグナルペプチドを欠失する成熟形態）である。
配列番号１３は、ヒト化抗体HL1の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（シグナルペプチドを欠失する成熟形態）である。
配列番号１４は、モノクローナル抗体mAb7GWの重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１５は、モノクローナル抗体mAb7GWの重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
【００１４】
配列番号１６は、モノクローナル抗体mAb7GWの軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１７は、モノクローナル抗体mAb7GWの軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１８は、モノクローナル抗体mAb51Dの重鎖のアミノ酸配列である。
配列番号１９は、モノクローナル抗体mAb51Dの重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２０は、モノクローナル抗体mAb51Dの軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２１は、モノクローナル抗体mAb51Dの軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
【００１５】
発明の詳細な説明
炎症は、とりわけ疼痛感知のための神経系を刺激する、生化学的反応のカスケードを作動させる。さらに、長期（慢性）の炎症は、疼痛の感覚を強調するかまたは高め得る、神経系における適応型の変化を促進し得る。例えば、炎症組織（例えば関節炎の膝）は、過度に敏感となり得、軽い接触が疼痛を引き起こし得る。これは、機械的アロディニアとして知られる現象である。
本開示は、以下の予想外の知見を報告する（ｉ）IL-20は、炎症性疼痛の感作に関与し得、および／またはこれを引き起こし得る；ならびに（ｉｉ）IL-20シグナル伝達経路を妨害することができる抗体（例えばmAb7E）は、炎症性疼痛の動物モデルにおいて、機械的アロディニアを首尾よく阻害した。したがって、本開示は、IL-20アンタゴニスト（これはIL-20シグナル伝達経路を妨害することができる抗体であってよい）の有効量を用いて、対象において炎症性疼痛を処置する（例えば、炎症性疼痛を軽減する、または炎症性疼痛の発症を遅延させる）方法に関する。
【００１６】
一般的技術
本発明の実施は、他に示されない限り、分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の慣用的な技術を使用し、これらは当該分野における技術の範囲内である。かかる技術は、以下のような文献において完全に説明される：Molecular Cloning：A Laboratory Manual、第２版（Sambrookら、1989年）Cold Spring Harbor Press；Oligonucleotide Synthesis（M. J. Gait編、1984年）；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology：A Laboratory Notebook（J. E. Cellis編、1998年）Academic Press；Animal Cell Culture（R. I. Freshney編、1987年）；Introduction to Cell and Tissue Culture（J. P. MatherおよびP. E. Roberts、1998年）Plenum Press；Cell and Tissue Culture：Laboratory Procedures（A. Doyle、J. B. GriffithsおよびD. G. Newell編、1993-8年）J. Wiley and Sons；Methods in Enzymology（Academic Press, Inc.）；Handbook of Experimental Immunology（D. M. WeirおよびC. C. Blackwell編）；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells（J. M. MillerおよびM. P. Calos編、1987年）；Current Protocols in Molecular Biology（F. M. Ausubelら編、1987年）；PCR：The Polymerase Chain Reaction,（Mullisら編、1994年）；Current Protocols in Immunology（J. E. Coliganら編、1991年）；Short Protocols in Molecular Biology（Wiley and Sons, 1999年）；Immunobiology（C. A. JanewayおよびP. Travers、1997年）；Antibodies（P. Finch, 1997年）；Antibodies：a practical approach（D. Catty編、IRL Press、1988-1989年）；Monoclonal antibodies：a practical approach（P. ShepherdおよびC. Dean編、Oxford University Press、2000年）；Using antibodies：a laboratory manual（E. HarlowおよびD. Lane（Cold Spring Harbor Laboratory Press、1999年）；The Antibodies（M. ZanettiおよびJ. D. Capra編、Harwood Academic Publishers、1995年）。
【００１７】
IL-20アンタゴニストおよびこれを含む医薬組成物
IL-20は、IL-10サイトカインファミリーに属する炎症促進性サイトカインである。本明細書において記載されるIL-20とは、インターロイキン−20、およびIL-20の活性の少なくとも一部を保持するそれらのバリアントを指す。本明細書において用いられる場合、IL-20は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマまたはウシを含む全ての哺乳動物種のネイティブなIL-20の配列を含む。一例において、IL-20は、ヒトIL-20である（GenBank受託番号NP_061194.2）。
IL-20は、IL-20受容体への結合を介してIL-20シグナル伝達経路を活性化する。IL-20受容体は、サブユニットIL-20R1およびIL-20R2（RAおよびRBとしても知られる）を含む二量体複合体である。かかるIL-20受容体は、３つの機能的に異なるサイトカイン、すなわちIL-19、IL-20およびIL-24により共有される。このことは、この受容体が、特定のサイトカインへのその結合に依存した異なるシグナル伝達経路を媒介することを示唆している。IL-20はまた、IL-20R2およびIL-22R1を含む二量体複合体に結合することができる。本明細書において開示されるIL-20受容体は、IL-20に結合してこれにより活性化されることができる１または２以上のポリペプチドを指す。本明細書において開示されるIL-20受容体は、限定されないがヒト、イヌ、ネコ、ウマ、霊長類またはウシを含む、任意の哺乳動物種のIL-20R1、IL-20R2およびIL-22R1を含む。ヒトIL-20受容体の例として、hIL-20R1（GenBank受託番号NM_014432.2）、hIL-20R2（GenBank受託番号NM_144717.2）およびhIL-22R1（NM_181309.1）が挙げられる。ヒトIL-20受容体の配列は、例えば米国特許第6,610,286号；同第7,122,632号；同第7,393,684号；および同第7,537,761号；ならびに米国特許出願公開番号2006/0263850 A1；2006/0263851 A1；2008/0247945 A1および2009/0074661 A1において記載されている。
【００１８】
本明細書において記載される方法において用いられるべきIL-20アンタゴニストは、IL-20の生物学的活性を遮断するか、抑制するか、または低下させる（顕著なものを含む）分子である。IL-20の生物学的活性は、受容体結合および／またはIL-20に対する細胞の応答の誘発を含む、IL-20シグナル伝達により媒介される下流の経路を含む。本明細書においてその全体において参考として援用されるUS2011/0064731を参照。用語「アンタゴニスト」は、何であれ生物学的作用の特定の機構は意味せず、直接的であれ間接的であれ、全ての可能な薬理学的、生理学的および生化学的なIL-20との相互作用を含み、これを明示的に包含するものとみなされる。本開示の目的のために、用語「アンタゴニスト」は、全ての先に同定された用語、表題、ならびに機能的状態および特徴であって、それによりIL-20（例えばヒトIL-20）そのもの、IL-20の生物学的活性（限定されないが、炎症性疼痛の任意の側面を媒介するその能力を含む）、または当該生物学的活性の帰結が、任意の有意義な程度において、例えば少なくとも２０％、５０％、７０％、８５％、９０％、１００％、１５０％、２００％、３００％もしくは５００％、または１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、１０００倍もしくは１０４倍、実質的に無効になるか、低下するか、または中和されるものを包含する。
【００１９】
例示的なIL-20アンタゴニストとして、限定されないが、IL-20の活性を中和する抗体（例えばmAb7Eなどの抗IL-20抗体）またはIL-20受容体に結合してIL-20により媒介されるシグナル伝達経路を抑制する抗体（例えばmAb51DおよびmAb7GWなどの、IL-20受容体サブユニットR1に結合する抗体）、IL-20を標的とするアンチセンス核酸分子（IL-20をコードする核酸を標的とするアンチセンス核酸を含む）、IL-20核酸を標的とする低分子干渉RNA（siRNA）、IL-20核酸を標的とするマイクロRNA、IL-20阻害性化合物、抗IL-20R抗体（例えば、IL-20R1、IL-20R2、もしくはそれらにより形成される二量体複合体に特異的に結合する抗体）、IL-20受容体のサブユニットを標的とするアンチセンス核酸分子、IL-20受容体のサブユニットをコードする核酸を標的とするsiRNAもしくはマイクロRNA、またはIL-20R阻害性化合物が挙げられる。いくつかの態様において、IL-20アンタゴニストは、IL-20またはIL-20受容体に結合し、IL-20-IL-20R複合体の形成を防止し、それにより、IL-20シグナル伝達経路を阻害する。他の態様において、IL-20アンタゴニストは、IL-20の合成および／または生成（放出）を阻害するかまたは減少させる。かかるアンタゴニストとして、アンチセンス分子、siRNAおよびマイクロRNAが挙げられる。
【００２０】
IL-20シグナル伝達経路を妨害することができる抗体
抗体（複数形において交換可能に用いられる）は、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１の抗原認識部位を通して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することができる、免疫グロブリン分子である。本明細書において用いられる場合、用語「抗体」は、完全な（すなわち全長の）ポリクローナルまたはモノクローナル抗体のみならず、また、その抗原結合フラグメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、一本鎖（ｓｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体、多特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、および免疫グロブリン分子の他の改変された立体配置であって、必要とされる特異性の抗原認識部位を含むもの（抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアントおよび共有結合的に改変された抗体を含む）を包含する。抗体は、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ（またはそれらのサブクラス）などの任意のクラスの抗体を含み、抗体は、任意の特定のクラスのものである必要はない。その重鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、異なるクラスに割り当てられる。免疫グロブリンには５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けることができる。異なるクラスの免疫グロブリンに応答する重鎖定常ドメインは、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューと称される。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニットの構造および三次元立体配置は、周知である。
【００２１】
本明細書において記載される方法において用いられるべき抗体は、マウス、ラット、ヒト、および任意の他の起源（キメラまたはヒト化抗体を含む）であってよい。いくつかの例において、抗体は、免疫学的に不活性な（例えば、補体媒介性溶解を惹起しない、または抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用（ADCC）を刺激しない）定常領域などの、改変された定常領域を含む。ADCC作用は、米国特許第5,500,362号において開示される方法を用いて評価することができる。他の態様において、定常領域は、Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624；PCT出願番号PCT/GB99/01441；および／または英国特許出願番号9809951.8において記載されるように改変される。
本明細書において記載される抗体のうちの任意のものは、モノクローナルまたはポリクローナルのいずれであってもよい。「モノクローナル抗体」とは、同種抗体の集合を指し、「ポリクローナル抗体」とは、異種抗体の集合を指す。これらは２つの用語は、抗体のソースまたはそれが作製される様式を限定しない。
【００２２】
一例において、本明細書において記載される方法において用いられる抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含む、特定のキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその抗原結合フラグメントである、非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を指す。多くの部分について、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であって、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望される特異性、アフィニティーおよび能力を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基により置き換えられているものである。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）の残基が、対応する非ヒト残基により置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体においても移入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列においても見出されないが、抗体の性能をさらに洗練し最適化するために含められる残基を含んでもよい。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体は、最適にはまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含むであろう。抗体は、WO 99/58572において記載されるように改変されたＦｃ領域を含んでもよい。ヒト化抗体の他の形態は、１または２以上のＣＤＲ（１、２、３、４、５、６）を有し、これらは元の抗体と比較して改変されており、これらはまた、元の抗体からの１または２以上のＣＤＲ「に由来する」１または２以上のＣＤＲとも称される。ヒト化抗体はまた、アフィニティー成熟化を伴ってもよい。
【００２３】
別の例において、本明細書において記載される抗体は、キメラ抗体であり、これは、ヒト抗体からの重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含んでもよい。キメラ抗体とは、第１の種からの可変領域または可変領域の部分と、第２の種からの定常領域とを有する抗体を指す。典型的には、これらのキメラ抗体において、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は、１つの哺乳動物の種（例えば、マウス、ウサギおよびラットなどの非ヒト哺乳動物）に由来する抗体の可変領域を模倣するが、一方、定常部分は、ヒトなどの別の哺乳動物に由来する抗体における配列に対して相同である。いくつかの態様において、可変領域および／または定常領域において、アミノ酸の改変を行ってもよい。
【００２４】
いくつかの例において、本明細書において開示される抗体は、ヒトIL-20またはヒトIL-20受容体の２つのサブユニットのうちの１つ（例えばIL-20R1）などの標的抗原に特異的に結合する。標的またはエピトープに対して「特異的に結合する」抗体は、当該分野においてよく理解されている用語であり、かかる特異的結合を決定する方法は、当該分野において周知である。分子が、代替的な標的と反応または会合するより、特定の標的抗原と、より高頻度に、より迅速に、より長い期間にわたり、および／またはより高いアフィニティーで反応または会合する場合に、当該分子は「特異的結合」を示すと言われる。抗体は、それが、他の物質に対してよりも、より高いアフィニティー、結合活性で、より容易に、および／またはより長い期間にわたり結合する場合に、特定の抗原に対して「特異的に結合する」。例えば、IL-20エピトープに対して特異的に（または優先的に）結合する抗体は、それが他のIL-20エピトープまたは非IL-20エピトープに結合するよりも、より高いアフィニティー、結合活性で、より容易に、および／またはより長い期間にわたりこのIL-20エピトープに結合する抗体である。また、この定義を読むことにより、第１の標的抗原に対して特異的に結合する抗体は、第２の標的抗原に対して特異的にまたは優先的に結合しても結合しなくてもよいことが理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、必ずしも排他的結合を必要としない（が、これを含んでもよい）。一般に、必ずしもではないが、結合についての言及は、優先的結合を意味する。
【００２５】
IL-20シグナル伝達経路を妨害することができる抗体は、IL-20（例えばヒトIL-20）に結合して、IL-20の生物学的活性および／またはIL-20により媒介される下流の経路を阻害する抗体であってよい。あるいは、かかる抗体は、IL-20受容体（IL-20R）に結合して、例えばIL-20受容体のサブユニットの一方または両方に結合して、IL-20により惹起される受容体により媒介される下流のシグナル伝達経路を抑制する抗体であってもよい。
【００２６】
（ｉ）抗IL-20抗体
抗IL-20抗体は、IL-20に結合して、IL-20の生物学的活性および／またはIL-20シグナル伝達により媒介される下流の経路を阻害することができる抗体である。いくつかの例において、本明細書において記載される方法において用いられる抗IL-20抗体は、IL-20シグナル伝達経路を、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、または少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍もしくは少なくとも１０００倍、抑制する。抗IL-20抗体の例として、限定されないが、米国特許第7,435,800号；同第7,115,714号；同第7,119,175号；同第7,151,166号；および同第7,393,684号；ならびにPCT公開WO 2007/081465；WO 99/27103；WO 2004/085475；およびWO 2005052000において開示されるものが挙げられる。
【００２７】
IL-20（ヒトIL-20など）に対する抗IL-20抗体の結合アフィニティーは、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれかから、約２ｐＭのいずれかまでよりも低くてもよい。結合アフィニティーは、ＫＤまたは解離定数で表すことができ、増大した結合アフィニティーは、低下したＫＤに対応する。IL-20に対する抗体の結合アフィニティーを決定する一方法は、抗体の単機能性Ｆａｂフラグメントの結合アフィニティーを測定することによる。単機能性Ｆａｂフラグメントを得るために、抗体（例えばＩｇＧ）をパパインで切断するか、または組み換え的に発現させてもよい。抗体の抗IL-20 Ｆａｂフラグメントのアフィニティーは、表面プラズモン共鳴（BIAcore3000（商標）表面プラズモン共鳴（SPR）システム、BIAcore, INC, Piscaway N.J.）により決定することができる。動力学的会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）（一般に２５℃において測定される）を得て、平衡解離定数（ＫＤ）値を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。
【００２８】
いくつかの態様において、抗体は、ヒトIL-20に結合し、別の哺乳動物種からのIL-20には顕著には結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ヒトIL-20、ならびに別の哺乳動物種からの１または２以上のIL-20に結合する。なお他の態様について、抗体は、IL-20に結合し、他のサイトカイン（関連するサイトカインIL-10、IL-17A、IL-19、IL-22、IL-24およびIL-26など）には顕著には交差反応しない。抗体が結合したエピトープは、連続的なものであっても不連続的なものであってもよい。
【００２９】
いくつかの態様において、本明細書において記載される抗IL-20抗体は、抗IL-20抗体7Eであり、これは、モノクローナル抗体mAb 7Eおよびその機能的バリアントを指す。MAb 7Eは、American Type Culture Collection（10801 University Boulevard, Manassas, Va. 20110-2209, U.S.A.）において寄託され、寄託番号PTA-8687を割り当てられたハイブリドーマ細胞株により産生された。このハイブリドーマ細胞株は、本願に対して米国特許が付与された場合に、公共に変更不可な手段で、制限／条件なしで、リリースされ、ATCCにおいて、寄託日から特許の実施可能な期間にわたり少なくとも３０年間、または直近の日付けの後５年間の期間にわたり、維持されるであろう。
【００３０】
mAb7Eの重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列およびコードヌクレオチド配列を以下に作成する：
mAb 7E重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号１）およびアミノ酸配列（配列番号２）
【表１】
2017514798.tif 000003
mAb 7E軽鎖可変領域ヌクレオチド配列（配列番号３）およびアミノ酸配列（配列番号４）
【表２】
2017514798.tif 000004
【００３１】
mAb7Eの機能的バリアント（等価物）は、mAb7Eと本質的に同じエピトープ結合特異性を有し、mAb7Eと比較して、少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはこれより高い）の、IL-20により媒介されるシグナル伝達経路を中和する活性を示す。いくつかの態様において、mAb7Eの機能的バリアントは、mAb7Eと同じ、抗原結合を担当する領域／残基（同じＣＤＲ中の特異性決定残または全ＣＤＲなど）を含む。抗原結合を担当する領域／残基は、mAb7GWまたはmAb51Dの重鎖／軽鎖配列のアミノ酸配列（上に示す）から、当該分野において公知の方法により同定することができる。例えば、www.bioinf.org.uk/abs；Almagro, J. Mol. Recognit. 17:132-143 (2004)；およびChothia et al., J. Mol. Biol. 227:799-817 (1987)を参照。
【００３２】
加えて、抗体中のＣＤＲ領域の決定は、十分に当該分野の技術の範囲内である。例えば、www.bioinf.org.uk/abs；Almagro, J. Mol. Recognit. 17:132-143 (2004)；およびChothia et al., J. Mol. Biol. 227:799-817 (1987)を参照。ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの技術が存在する：（１）異種間の配列可変性に基づくアプローチ（すなわち、Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest、第５版、1991年、National Institutes of Health, Bethesda Md.））；および（２）抗原抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Chothia et al. (1989) Nature 342:877；Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948)）。本明細書において用いられる場合、ＣＤＲは、いずれかのアプローチにより、または両方のアプローチの組み合わせにより定義されるＣＤＲを指し得る。
【００３３】
いくつかの例において、mAb7Eの機能的バリアントは、mAb7Eの対応するＶＨＣＤＲに対して少なくとも７５％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一の、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ鎖、ならびに、mAb7Eの対応するＶＨＣＤＲに対して少なくとも７５％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含むＶＬ鎖を含む。あるいは、mAb7Eの機能的バリアントは、mAb7EのＶＨ鎖（成熟または前駆体）に対して少なくとも７５％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一のＶＨ鎖、およびmAb7EのＶＬ鎖（成熟または前駆体）に対して少なくとも７５％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一のＶＬ鎖を含む。
【００３４】
２つのアミノ酸配列の「％同一性」は、Karlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-68, 1990のアルゴリズムを、Karlin and Altschul Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77, 1993におけるもののように改変したものを用いて決定する。かかるアルゴリズムは、Altschul, et al. J. Mol. Biol. 215:403-10, 1990のNBLASTおよびXBLASTプログラム（バージョン2.0）中に組み込まれる。目的のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、BLASTタンパク質検索を、XBLASTプログラムを用いて、スコア＝５０、ワード長＝３で行うことができる。２つの配列間にギャップが存在する場合、Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402, 1997において記載されるように、Gapped BLASTを利用することができる。BLASTおよびGapped BLASTプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えばXBLASTおよびNBLAST）のデフォルトのパラメーターを用いることができる。
【００３５】
他の例において、mAb7Eの機能的バリアントは、ＶＨＣＤＲ領域（ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３）においてmAb7EのＶＨＣＤＲと比較して５（例えば、１、２、３、４もしくは５）個までのアミノ酸残基のバリエーションを含むＶＨ鎖、ならびに／または、ＶＬＣＤＲ領域（ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３）においてmAb7EのＶＨＣＤＲと比較して５（例えば、１、２、３、４もしくは５）個までのアミノ酸残基のバリエーションを含むＶＬ鎖を含む。
mAb7Eの機能的バリアントはまた、米国特許第7,611,705号およびUS2011/0064731において開示され、これらはいずれも、本明細書において参考として援用される。
一例において、mAb7Eの機能的バリアントは、mAb7Eから誘導されるヒト化抗体である。以下に提供されるのは、例示的なヒト化mAb7E抗体HL1およびHL2である；また、米国特許第8,597,647号を参照。
【００３６】
ヒト化抗IL-20抗体HL1およびHL2のＶＨ鎖のアミノ酸配列およびコードヌクレオチド配列：
【表３】
2017514798.tif 000005
下線領域はシグナルペプチドを指し、太字／イタリック体の領域はＣＤＲである。配列番号８および７は、それぞれ、成熟ＶＨアミノ酸配列（シグナルペプチドを欠失したもの）およびそのコードヌクレオチド配列を表す。
【００３７】
ヒト化抗IL-20抗体HL2のＶＬ鎖（ＶＬ２）のアミノ酸配列およびコードヌクレオチド配列：
【表４】
2017514798.tif 000006
下線領域はシグナルペプチドを指し、太字／イタリック体の領域はＣＤＲである。配列番号１２および１１は、それぞれ、成熟ＶＬアミノ酸配列（シグナルペプチドを欠失したもの）およびそのコードヌクレオチド配列を表す。
ヒト化抗体HL1は、HL2と同じＶＨ鎖、および、HL2の成熟ＶＬの２位のＩ残基がＦで置き換えられていることを除く他はHL2のＶＬと同一のＶＬ鎖を含む（配列番号１３；成熟形態）。
【００３８】
また本明細書において開示されるのは、上述のヒト化抗体HL1およびHL2の機能的バリアントである。かかる機能的バリアントは、HL1およびHL2のＶＨ（前駆体または成熟形態；それぞれ配列番号６および配列番号８）に対して少なくとも８５％（例えば、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）同一のアミノ酸配列を含むＶＨ鎖、ならびに、HL2のＶＬのもの（前駆体または成熟形態；それぞれ配列番号１０および配列番号１２）に対して少なくとも８５％（例えば、９０％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％）同一のアミノ酸配列を有するＶＬ鎖を含んでもよい。これらのバリアントは、IL-20分子、特にヒトIL-20分子に結合することができる。いくつかの例において、バリアントは、上記の例示的なヒト化抗体と比較して類似の抗原結合アフィニティーを有する（例えばＫｄ＜４×１０−９を有する）。
【００３９】
（ｂ）抗IL-20R抗体
抗IL-20R抗体は、IL-20Rに結合して（例えば、その２つのサブユニットのうちのいずれかに結合するか、または二量体複合体に結合して）IL-20Rの生物学的活性および／またはIL-20により媒介されるその下流の経路を特異的に阻害することができる抗体である。いくつかの例において、本明細書において記載される方法において用いられる抗IL-20抗体は、IL-20シグナル伝達経路を、少なくとも２０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、または少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍もしくは少なくとも１０００倍、抑制する。いくつかの例において、抗IL-20R抗体は、ヒトIL-20R1などのIL-20R1に特異的に結合する。かかる抗体は、IL-20R2またはIL-20R1／IL-20R2複合体に対して低いアフィニティーを有していてもよく、あるいはIL-20R2またはIL-20R1／IL-20R2複合体に結合しない。他の例において、抗IL-20R抗体は、ヒトIL-20R2などのIL-20R2に特異的に結合する。かかる抗体は、IL-20R1またはIL-20R1／IL-20R2複合体に対して低いアフィニティーを有していてもよく、あるいはIL-20R1またはIL-20R1／IL-20R2複合体に結合しない。さらに別の例において、抗IL-20R本明細書において記載される抗体は、IL-20R1／IL-20R2複合体に特異的に結合する。
【００４０】
IL-20Rまたはそのサブユニット（ヒトIL-20RまたはヒトIL-20R1など）に対する抗IL-20R抗体の結合アフィニティーは、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれかから約２ｐＭまでのいずれかより低くてもよい。結合アフィニティーは、ＫＤまたは解離定数で表すことができ、増大した結合アフィニティーは、低下したＫＤに対応する。IL-20Rに対する抗体の結合アフィニティーを決定する一方法は、抗体の単機能性Ｆａｂフラグメントの結合アフィニティーを測定することによる。単機能性Ｆａｂフラグメントを得るために、抗体（例えばＩｇＧ）をパパインで切断するか、または組み換え的に発現させてもよい。抗体の抗IL-20R Ｆａｂフラグメントのアフィニティーは、表面プラズモン共鳴（BIAcore3000（商標）表面プラズモン共鳴（SPR）システム、BIAcore, INC, Piscaway N.J.）により決定することができる。動力学的会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）（一般に２５℃において測定される）を得て、平衡解離定数（ＫＤ）値を、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。
【００４１】
いくつかの態様において、抗体は、ヒトIL-20Rまたはそのサブユニット（例えばヒトIL-20R1）に結合し、別の哺乳動物種からのIL-20Rには顕著には結合しない。いくつかの態様において、抗体は、ヒトIL-20R、ならびに別の哺乳動物種からの１または２以上のIL-20Rに結合する。なお他の態様について、抗体は、IL-20Rに結合し、他のサイトカイン受容体とは顕著には交差反応しない。抗体が結合したエピトープは、連続的なものであっても不連続的なものであってもよい。
いくつかの態様において、本明細書において記載される方法において用いられる抗体は、モノクローナル抗体mAb7GWまたはmAb51Dのものと同じ重鎖および軽鎖可変領域（ＶＨおよびＶＬ）を有する抗体、mAb7GWもしくはmAb51Dのいずれかのモノクローナル抗体、その抗原結合フラグメントまたは機能的等価物である（その全体において参考として援用されるUS2011/0256093）。以下に示すのは、mAb7GWおよびmAb51Dの重鎖および軽鎖のアミノ酸配列、ならびにそれらのコードヌクレオチド配列である。
【００４２】
mAb7GWの重鎖：
アミノ酸配列（配列番号１４）
【表５】
2017514798.tif 000007
（イタリック体の領域は、重鎖定常領域を指す。）
ヌクレオチド配列（配列番号１５）
【表６】
2017514798.tif 000008
（イタリック体の領域は、重鎖定常領域をコードする。）
【００４３】
mAb7GWの軽鎖：
アミノ酸配列（配列番号１６）
【表７】
2017514798.tif 000009
（イタリック体の領域は、軽鎖定常領域を指す。）
ヌクレオチド配列（配列番号１７）
【表８】
2017514798.tif 000010
（イタリック体の領域は、軽鎖定常領域をコードする。）
【００４４】
mAb51Dの重鎖：
アミノ酸配列（配列番号１８）
【表９】
2017514798.tif 000011
（イタリック体の領域は、重鎖定常領域を指す。）
ヌクレオチド配列（配列番号１９）
【表１０】
2017514798.tif 000012
（イタリック体の領域は、重鎖定常領域をコードする。）
【００４５】
mAb51Dの軽鎖：
アミノ酸配列（配列番号２０）
【表１１】
2017514798.tif 000013
（イタリック体の領域は、軽鎖定常領域を指す。）
ヌクレオチド配列（配列番号２１）
【表１２】
2017514798.tif 000014
（イタリック体の領域は、軽鎖定常領域をコードする。）
【００４６】
mAb7GWまたはmAb51Dの機能的等価物は、mAb7GWまたはmAb51Dと同じエピトープ結合特異性を有し、mAb7GWまたはmAb51Dと比較して、少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれより多く）の、IL-20R1により媒介されるシグナル伝達経路を中和する活性を示す。いくつかの態様において、mAb7GWまたはmAb51Dの機能的等価物は、mAb7GWまたはmAb51Dと同じ抗原結合を担当する領域／残基（同じCDR中の特異性決定残基または全CDRなど）を含む。抗原結合を担当する領域／残基は、mAb7GWまたはmAb51Dの重鎖／軽鎖配列のアミノ酸（上に示す）から、当該分野において公知の方法により同定することができる。例えば、www.bioinf.org.uk/abs；Almagro, J. Mol. Recognit. 17:132-143 (2004)；およびChothia et al., J. Mol. Biol. 227:799-817 (1987)を参照。
【００４７】
いくつかの例において、mAb7GWまたはmAb51Dの機能的等価物（バリアント）は、mAb7GWまたはmAb51Dの対応するＶＨＣＤＲに対して少なくとも７５％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一のＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２およびＶＨＣＤＲ３を含むＶＨ鎖、ならびにmAb7GWまたはmAb51Dの対応するＶＨＣＤＲに対して少なくとも７５％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一のＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２およびＶＬＣＤＲ３を含むＶＬ鎖を含む。
あるいは、mAb7GWまたはmAb51Dの機能的等価物は、mAb7GWまたはmAb51DのＶＨ鎖（成熟または前駆体）に対して少なくとも７５％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一のＶＨ鎖、およびmAb7GWまたはmAb51DのＶＬ鎖（成熟または前駆体）に対して少なくとも７５％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％）同一のＶＬ鎖を含む。
【００４８】
他の例において、mAb7GWまたはmAb51Dの機能的等価物は、ＶＨＣＤＲ領域（ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３）において、mAb7GWまたはmAb51DのＶＨＣＤＲと比較して、５（例えば、１、２、３、４もしくは５）個までのアミノ酸残基のバリエーションを含むＶＨ鎖、ならびに／または、ＶＬＣＤＲ領域（ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３）において、mAb7GWまたはmAb51DのＶＨＣＤＲと比較して、５（例えば、１、２、３、４もしくは５）個までのアミノ酸残基のバリエーションを含むＶＬ鎖を含む。
【００４９】
（ｃ）抗体調製
本明細書において記載されるIL-20シグナル伝達経路を妨害することができる抗体は、当該分野において公知の任意の方法により作製することができる。例えば、Harlow and Lane, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New Yorkを参照。
いくつかの態様において、標的抗原（例えばヒトIL-20またはIL-20R1）に特異的な抗体は、慣用的なハイブリドーマ技術により作製することができる。任意にKLHなどのキャリアタンパク質にカップリングされた全長標的抗原またはそのフラグメントは、その抗原に結合する抗体を生成するために宿主動物を免疫するために用いることができる。宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは、本明細書においてさらに記載されるように、一般に抗体の刺激および生成のための確立された慣用的な技術を踏まえる。ヒト化されたマウスおよびヒト抗体の作製のための一般的技術は、当該分野において公知であり、本明細書において記載される。ヒトまたはヒト由来の抗体産生細胞を含む任意の哺乳動物対象は、ヒトを含む哺乳動物のハイブリドーマ細胞株の作製のための基礎として役立つように操作することができることが企図される。典型的には、宿主動物は、腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内（intraplantar）および／または皮内で、本明細書において記載されるものを含む一定量の免疫源を接種される。
【００５０】
ハイブリドーマは、Kohler, B. and Milstein, C. (1975) Nature 256:495-497の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技術またはBuck, D. W., et al., In Vitro, 18:377-381 (1982)により改変されたものを用いて、リンパ球および不死化骨髄腫細胞から調製することができる。限定されないがX63-Ag8.653およびソーク研究所、細胞流通センター（San Diego, Calif., USA）からのものを含む、利用可能な骨髄腫株を、ハイブリダイゼーションにおいて用いることができる。一般に、技術は、ポリエチレングリコールなどのフソゲン（fusogen）を用いて、または当業者に周知の電気的手段により、骨髄腫細胞およびリンパ系細胞を融合することを含む。融合の後で、細胞を融合培地から分離し、ハイブリダイズされなかった親細胞を取り除くために、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（HAT）培地などの選択性増殖培地中で増殖させる。本明細書において記載される培地のうちの任意のものに、血清を添加して、または添加しないで、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために用いることができる。細胞融合技術に対する別の代替として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を用いて、対象発明の抗IL-20モノクローナル抗体を産生させてもよい。必要に応じて、ハイブリドーマを増殖させてサブクローニングし、上清を、慣用的なイムノアッセイ手法（例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、または蛍光イムノアッセイ）により、免疫源抑制活性についてアッセイする。
【００５１】
抗体のソースとして用いることができるハイブリドーマは、IL-20シグナル伝達経路を妨害することができるモノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマの全ての誘導体、子孫細胞を包含する。かかる抗体を産生するハイブリドーマは、公知の手法を用いてin vitroまたはin vivoで増殖させることができる。必要に応じて、モノクローナル抗体は、培養培地または体液から、硫酸アンモニウム沈殿法、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィーおよび限外濾過などの、慣用的な免疫グロブリン精製手法により単離することができる。望ましくない活性が存在する場合、これは例えば、沈殿を、固相に結合した免疫源からなる吸着媒上に流して、所望される抗体を免疫源から溶離または遊離させることにより、取り除くことができる。免疫化されるべき種において免疫原性であるタンパク質（例えばキーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、またはダイズトリプシン阻害剤）に抱合した標的抗原または標的のアミノ酸配列を含むフラグメントによる、二機能性の剤または誘導体化剤（例えばマレイミドベンゾイルスルホコハク酸イミドエステル（システイン残基を通した抱合））、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（リジン残基を通して）、グルタルアルデヒド、コハク酸無水物、ＳＯＣｌ、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ここでＲおよびＲ１は、異なるアルキル基である）用いた、宿主動物の免疫化により、抗体（例えばモノクローナル抗体）の集合を得ることができる。
【００５２】
必要に応じて、目的の抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）（例えばハイブリドーマにより産生されるもの）を、シーケンシングして、次いでポリヌクレオチド配列を、発現または増殖のためのベクター中にクローニングしてもよい。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞中のベクターにおいて維持され得、宿主細胞は、次いで増殖させて、将来の使用のために凍結することができる。代替的に、アフィニティー（アフィニティー成熟化）または抗体の他の特徴を改善するために、抗体を遺伝子操作して「ヒト化」するために、ポリヌクレオチド配列を用いることができる。例えば、抗体が臨床試験およびヒトにおける処置において用いられる場合に免疫応答を回避するために、定常領域をヒト定常領域とより近くなるように操作することができる。標的抗原に対するより高いアフィニティー、およびIL-20により媒介されるシグナル伝達経路を阻害することにおける、より高い効率を得るために、抗体配列を遺伝子操作することが望ましい場合がある。抗体に対して１または２以上のポリヌクレオチドの変更を行ってもよいこと、ならびに、標的抗原に対するその結合特異性をなお維持することは、当業者には明らかであろう。
【００５３】
他の態様において、完全ヒト抗体は、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作されている市販のマウスを用いて得ることができる。より望ましい（例えば完全ヒト抗体）またはより強力な免疫応答を生じるように設計されたトランスジェニック動物もまた、ヒト化抗体またはヒト抗体の作製のために用いることができる。かかる技術の例は、Amgen, Inc.（Fremont, Calif.）製のXenomouse（登録商標）、ならびにMedarex, Inc.（Princeton, N.J.）製のHuMAb-Mouse（登録商標）およびTC Mouse（商標）である。別の選択肢において、抗体は、ファージディスプレイ技術により組み換え的に作成してもよい。例えば、米国特許第5,565,332号；同第5,580,717号；同第5,733,743号；および同第6,265,150号；ならびにWinter et al., (1994) Annu. Rev. Immunol. 12:433-455を参照。あるいは、ファージディスプレイ技術（McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-553）を用いて、免疫していないドナーからの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメインの遺伝子レパートリーから、ヒト抗体および抗体フラグメントをin vitroで作製してもよい。完全抗体（全長抗体）の抗原結合フラグメントは、慣用的な方法を介して調製することができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、抗体分子のペプシン消化により生成することができ、Ｆａｂフラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することにより生成することができる。
【００５４】
ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体および二特異性抗体などの遺伝子操作された抗体は、例えば慣用的な組み換え技術を介して、作製することができる。一例において、標的抗原に対して特異的なモノクローナル抗体をコードするDNAは、慣用的な手法を用いて（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に対して特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることにより）、容易に単離し、シーケンシングすることができる。ハイブリドーマ細胞は、かかるDNAの好ましいソースとして役立つ。単離された後、DNAを１または２以上の発現ベクター中に入れてもよく、これを次いで、他では免疫グロブリンタンパク質を産生しない、E. coli細胞、サルCOS細胞、チャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞、または骨髄腫細胞などの宿主細胞中にトランスフェクトして、組み換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を得る。例えば、PCT公開番号WO 87/04462を参照。次いで、例えば、ヒト重鎖または軽鎖定常ドメインについてのコード配列で相同なマウスの配列を置換することにより（Morrison et al., (1984) Proc. Nat. Acad. Sci. 81:6851）、または免疫グロブリンコード配列に、非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列の全てまたは一部を共有結合させることにより、DNAを改変してもよい。この様式において、標的抗原の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体などの遺伝子操作された抗体を調製することができる。
【００５５】
「キメラ抗体」の作製のために開発された技術は、当該分野において周知である。例えば、Morrison et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 6851；Neuberger et al. (1984) Nature 312, 604；およびTakeda et al. (1984) Nature 314:452を参照。
ヒト化抗体を構築する方法もまた、当該分野において周知である。例えば、Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86:10029-10033 (1989)を参照。一例において、親非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬの可変領域を、当該分野において公知の方法に従って、三次元分子モデリング分析に供する。次に、正確なＤＣＲ構造の形成のために重要であると予測されるフレームワークアミノ酸残基を、同じ分子モデリング分析を用いて同定する。並行して、任意の抗体遺伝子データベースから、検索クエリーとして親ＶＨおよびＶＬ配列を用いて、親非ヒト抗体のアミノ酸配列と相同なアミノ酸配列を有するヒトＶＨおよびＶＬ鎖を同定する。次いで、ヒトＶＨおよびＶＬアクセプター遺伝子を選択する。
【００５６】
選択されたヒトアクセプター遺伝子内のＣＤＲ領域を、親非ヒト抗体またはその機能的バリアントからのＣＤＲ領域で置き換えることができる。必要である場合は、親鎖のフレームワーク領域内の、ＣＤＲ領域と相互作用する上で重要であると予測される残基（上の説明を参照）を用いて、ヒトアクセプター遺伝子中の対応する残基を置換してもよい。
【００５７】
一本鎖抗体は、組み換え技術を介して、重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列とを連結させることにより、調製することができる。好ましくは、フレキシブルなリンカーを２つの可変領域の間に組み込む。あるいは、一本鎖抗体の作製のために記載される技術（米国特許第4,946,778号および同第4,704,692号）を、ファージｓｃＦｖライブラリーを作製するために適応させてもよく、当該ライブラリーから、慣用的な手法に従って、IL-20R1またはIL-20R2に特異的なｓｃＦｖクローンを同定することができる。陽性のクローンを、IL-20受容体の活性を抑制するものを同定するためのさらなるスクリーニングに供することができる。
【００５８】
当該分野において公知であり本明細書において記載される方法に従って得られた抗体は、当該分野において周知の方法を用いて特徴づけることができる。例えば、一方法は、抗原が結合するエピトープを同定すること、または「エピトープマッピング」である。タンパク質上のエピトープの位置をマッピングして特徴づけるための多くの方法が当該分野において知られており、これは、例えばHarlowおよびLane、「Using Antibodies, a Laboratory Manual」（Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1999年）の第11章において記載されるような、抗体−抗原複合体の結晶構造を解析すること、競合アッセイ、遺伝子フラグメント発現アッセイ、および合成ペプチドに基づくアッセイを含む。さらなる例において、エピトープマッピングを用いて、抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープは直鎖状のエピトープ、すなわちアミノ酸の単一のストレッチを含むものであっても、単一のストレッチ（一次構造直鎖状配列）中には必ずしも含まれなくともよいアミノ酸の三次元相互作用により形成される立体構造のエピトープであってもよい。異なる長さ（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸長）のペプチドを、単離するか、または合成して（例えば組み換え的に）、抗体との結合アッセイのために用いてもよい。別の例において、抗体が結合するエピトープは、標的抗原配列から誘導された重複するペプチドを用いて抗体による結合を決定することによる体系的スクリーニングにおいて決定することができる。遺伝子フラグメント発現アッセイにより、標的抗原をコードするオープンリーディングフレームは、無作為にまたは特定の遺伝子構造により断片化され、発現された抗原のフラグメントと試験されるべき抗体との反応を決定する。遺伝子フラグメントは、例えば、PCRにより生成して、次いで、放射活性アミノ酸の存在下においてin vitroで転写またはタンパク質に翻訳させてもよい。次いで、放射活性標識された抗原フラグメントに対する抗体の結合を、免疫沈降またはゲル電気泳動により決定する。特定のエピトープはまた、ランダムなペプチド配列がファージ粒子の表面上に提示された大規模なライブラリーを用いて同定することができる（ファージライブラリー）。あるいは、重複するペプチドフラグメントの定義されたライブラリーを、簡単な結合アッセイにおいて、試験抗体に対する結合について試験してもよい。さらなる例において、抗原結合ドメインの変異誘発、ドメインスワッピング実験およびアラニンスキャニング変異誘発を行って、エピトープ結合のために要求されるか、十分であるかおよび／または必要な残基を同定してもよい。例えば、IL-20ポリペプチドの多様なフラグメントが、緊密に関係するが抗原性に関して区別し得るタンパク質（ニューロトロフィンタンパク質ファミリーの別のメンバーなど）からの配列で置き換えられている（スワップされている）標的抗原の変異体を用いて、ドメインスワッピング実験を行ってもよい。変異体IL-20への抗体の結合を評価することにより、抗体結合に対する特定の抗原フラグメントの重要性を評価することができる。
あるいは、同じ抗原に結合することが知られている他の抗体を用いて、抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するか否かを決定するために、競合アッセイを行ってもよい。競合アッセイは、当業者に周知である。
【００５９】
他のIL-20アンタゴニスト
上記のIL-20シグナル伝達経路を妨害することができる抗体以外のIL-20アンタゴニストを、本明細書において記載される方法において用いてもよい。
本発明のいくつかの態様において、IL-20アンタゴニストは、機能的IL-20（例えばヒトIL-20）またはIL-20受容体のサブユニット（例えばIL-20R1）の発現を遮断または低下させることができる少なくとも１つのアンチセンス核酸分子を含む。IL-20およびIL-20受容体サブユニットのヌクレオチド配列は公知であり、公共で利用可能なデータベースから容易に入手可能である。上の開示を参照。他のポリヌクレオチドと交差反応することなく標的mRNAに特異的に結合するであろうアンチセンスオリゴヌクレオチド分子を調製することは、ルーチンである。例示的なターゲティングの部位として、限定されないが、開始コドン、５’制御領域、コード配列および３’非翻訳領域が挙げられる。いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、約１０〜１００ヌクレオチドの長さ、約１５〜５０ヌクレオチドの長さ、約１８〜２５ヌクレオチドの長さであるか、またはそれより長い。オリゴヌクレオチドは、例えば、当該分野において周知のホスホロチオエート架橋、および２’−０糖修飾などの骨格の修飾を含んでもよい。
【００６０】
あるいは、IL-20/IL-20Rの発現および／または放出は、当該分野において周知である、遺伝子ノックダウン、モルホリノオリゴヌクレオチド、低分子干渉RNA（siRNAまたはRNAi）、マイクロRNAまたはリボザイム法を用いて低下させることができる。RNA干渉（RNAi）は、dsRNAが相同配列特異的なメッセンジャーRNAの分解を指揮するプロセスである。哺乳動物細胞において、RNAiは、低分子干渉RNA（siRNA）の２１ヌクレオチドの二本鎖により、宿主のインターフェロン応答を活性することなく、惹起することができる。本明細書において開示される方法において用いられるdsRNAは、siRNA（２本の別個かつ相補的なRNA鎖を含む）またはショートヘアピンRNA（すなわち堅固なヘアピン構造を形成するRNA鎖）であってよく、これらはいずれも、標的遺伝子の配列に基づいて設計することができる。あるいは、それは、マイクロRNAであってよい。
【００６１】
任意に、上記のような本明細書において記載される方法において用いられるべき核酸分子（例えば、アンチセンス核酸、低分子干渉RNAまたはマイクロRNA）は、天然に存在しない核酸塩基、糖または共有結合的なヌクレオシド間架橋（骨格）を含む。かかる修飾オリゴヌクレオチドは、細胞取り込みの増強、標的核酸に対するアフィニティーの改善、およびin vivoでの安定性の増大などの望ましい特性を付与する。
【００６２】
一例において、核酸は、リン原子を保持するもの（例えば、米国特許第3,687,808号；同第4,469,863号；同第5,321,131号；同第5,399,676号；および同第5,625,050号を参照）、ならびにリン原子を有しないもの（例えば、米国特許第5,034,506号；同第5,166,315号；および同第5,792,608号を参照）を含む、修飾された骨格を有する。リン含有修飾骨格の例として、限定されないが、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキル−ホスホトリエステル、メチルおよび他のアルキルのホスホナート（３’−アルキレンホスホナート、５’−アルキレンホスホナートおよびキラルホスホナートを含む）、ホスフィナート、ホスホルアミデート（３’−アミノホスホルアミデートおよびアミノアルキルホスホルアミデートを含む）、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、セレノホスファート、および３’−５’架橋または２’−５’架橋を有するボラノホスファートが挙げられる。かかる骨格はまた、逆転した極性、すなわち、３’から３’、５’から５’、または２’から２’への架橋を有するものを含む。リン原子を含まない修飾された骨格は、短鎖アルキルまたはシクロアルキルのヌクレオシド間架橋、ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルのヌクレオシド間架橋が混合されたもの、または１もしくは２以上の短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環式ヌクレオシド間架橋により形成される。かかる骨格は、以下を含むもの：モルホリノ架橋（部分的にヌクレオシドの糖部分から形成される）；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシド、およびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；リボアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファミン酸骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホン酸およびスルホンアミド骨格；アミド骨格；ならびにＮ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２成分の部分が混合されたものを有する他のものを含む。
【００６３】
別の例において、開示される方法において用いられる核酸は、１または２以上の置換された糖部分を含む。かかる置換された糖部分は、それらの２’位において以下の基のうちの１つを含んでもよい：ＯＨ；Ｆ；Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｎ−アルキル、Ｏ−アルケニル、Ｓ−アルケニル、Ｎ−アルケニル；Ｏ−アルキニル、Ｓ−アルキニル、Ｎ−アルキニルおよびＯ−アルキル−Ｏ−アルキル。これらの基において、アルキル、アルケニルおよびアルキニルは、置換または未置換のＣ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであってよい。それらはまた、それらの２’位においてヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリール、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、RNA切断基、レポーター基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改善するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改善するための基を含んでもよい。好ましい置換糖部分は、２’−メトキシエトキシ、２’−ジメチルアミノオキシエトキシ、および２’−ジメチルアミノエトキシエトキシを有するものを含む。Martin et al., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504を参照。
【００６４】
さらに別の例において、核酸は、１または２以上の修飾されたネイティブな核酸塩基（すなわち、アデニン、グアニン、チミン、シトシンおよびウラシル）を含む。修飾された核酸塩基は、米国特許第3,687,808号、The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering、858〜859頁、（Kroschwitz, J. I.編、John Wiley & Sons, 1990年）、Englischら、Angewandte Chemie、インターナショナル版、1991年、30、613、ならびにSanghvi, Y. S.、第15章、Antisense Research and Applications、289〜302頁（CRC Press、1993年）において記載されるものを含む。これらの核酸塩基のうちの特定のものは、アンチセンスオリゴヌクレオチドのその標的核酸に対する結合アフィニティーを増大させるために、特に有用である。これらは、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、およびＮ−２、Ｎ−６およびＯ−６置換プリン（例えば、２−アミノプロピル−アデニン、５−プロピニルウラシルおよび５−プロピニルシトシン）を含む。See Sanghviら編、Antisense Research and Applications（CRC Press, Boca Raton、1993年、pp.276-278）を参照。
【００６５】
核酸のうちの任意のものは、当該分野において公知の方法により合成することができる。例えば、Caruthers et al., 1992, Methods in Enzymology 211, 3-19、Wincott et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23, 2677-2684、Wincott et al., 1997, Methods Mol. Bio. 74, 59、Brennan et al., 1998, Biotechnol Bioeng., 61, 33-45、およびBrennan、米国特許第6,001,311を参照。それはまた、発現ベクターから転写させて、標準的な技術を用いて単離することができる。
【００６６】
他の態様において、IL-20アンタゴニストは、少なくとも１つのIL-20またはIL-20R阻害性化合物を含む。本明細書において用いられる場合、「IL-20阻害性化合物」または「IL-20R阻害性化合物」とは、抗IL-20または抗IL-20R抗体以外の化合物であって、IL-20／IL-20Rの生物学的活性を、直接的または間接的に、低下させるか、阻害するか、中和するか、または消失させるものを指す。IL-20／IL-20R阻害性化合物は、以下の特徴のうちの任意の１または２以上を示すべきである：（ａ）IL-20またはIL-20Rに結合して、その生物学的活性および／またはIL-20シグナル伝達により媒介される下流の経路の機能を阻害する；（ｂ）炎症性疼痛の任意の側面を予防するか、寛解させるか、または処置する；（ｃ）IL-20受容体活性化を遮断するかまたは低下させる；（ｄ）IL-20またはIL-20Rのクリアランスを増大する；（ｅ）IL-20またはIL-20Rの合成、産生または放出を阻害する（低下させる）。当業者は、他の低分子阻害性化合物を調製することができる。
【００６７】
いくつかの態様において、IL-20またはIL-20R阻害性化合物は、IL-20変異体、IL-19変異体、またはIL-24変異体であり、これらは、IL-20受容体に結合することができるが、シグナル伝達を引き起こすことはできない。かかる変異体は、IL-20受容体への野生型IL-20の結合を遮断し、それによりIL-20シグナル伝達を防止することができる。
他の態様において、本明細書において記載されるIL-20またはIL-20R阻害性化合物は、低分子であり、これは、約１００〜２０，０００ダルトン、５００〜１５，０００ダルトンまたは１０００〜１０，０００ダルトンのうちの任意の分子量を有し得る。低分子のライブラリーは、市販されている。低分子は、吸入、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、クモ膜下腔内、脳室内、経口、経腸、非経口、鼻内または経皮を含む当該分野において公知の任意の手段を用いて投与することができる。一般的に、本発明によるIL-20アンタゴニストが低分子である場合、それは、患者の体重１ｋｇあたり０．１〜３００ｍｇ／ｋｇの割合で、１〜３回、またはそれより多くの用量に分けて、投与される。通常の体重の成人患者について、１用量あたり１ｍｇ〜５ｇの範囲の用量を投与することができる。
【００６８】
上述の低分子は、化合物ライブラリーから得ることができる。ライブラリーは、空間的にアドレス可能な平行な固相または液相ライブラリーであってよい。例えば、Zuckermann et al. J. Med .Chem. 37, 2678-2685, 1994；およびLam Anticancer Drug Des. 12:145, 1997を参照。化合物ライブラリーの合成のための方法は、当該分野において周知であり、例えば、DeWitt et al. PNAS USA 90:6909, 1993；Erb et al. PNAS USA 91:11422, 1994；Zuckermann et al. J. Med. Chem. 37:2678, 1994；Cho et al. Science 261:1303, 1993；Carrell et al. Angew Chem. Int. Ed. Engl. 33:2059, 1994；Carell et al. Angew Chem. Int. Ed. Engl. 33:2061, 1994；およびGallopら、J. Med. Chem. 37:1233, 1994を参照。化合物のライブラリーは、溶液（例えばHoughten Biotechniques 13:412-421, 1992）、またはビーズ（Lam Nature 354:82-84, 1991）、チップ（Fodor Nature 364:555-556, 1993）、細菌（米国特許第5,223,409号）、胞子（米国特許第5,223,409号）、プラスミド（Cull et al. PNAS USA 89:1865-1869, 1992）またはファージ（Scott and Smith Science 249:386-390, 1990；Devlin Science 249:404-406, 1990；Cwirla et al. PNAS USA 87:6378-6382, 1990；Felici J. Mol. Biol. 222:301-310, 1991；および米国特許第5,223,409号）中で提示することができる。
【００６９】
他の態様において、IL-20アンタゴニストは、IL-20受容体（IL-20R1、IL-20R2またはIL-22R1など）の細胞外部分を含むポリペプチドであってよく、ここで当該ポリペプチドは、IL-20に結合して、１または２以上のIL-20受容体とのその相互作用を遮断する。いくつかの態様において、IL-20受容体の細胞外部分を、抗体のＦｃドメインに融合させる。可溶性の受容体の例は、PCT WO 01/46232において記載される。
【００７０】
IL-20アンタゴニストの同定
IL-20アンタゴニストは、IL-20の生物学的活性の低下、寛解または中和を検出および／または測定する、当該分野において公知の方法を用いて同定するかまたは特徴づけることができる。例えば、ELISA型アッセイは、IL-20カスケードを通して活性化されるタンパク質のリン酸化を測定することによる、IL-20媒介性のキナーゼ活性化の定性的または定量的測定のために、好適であり得る。例として、JNK、ERK、AKT、p38、STAT3およびTRAF6が挙げられる。
【００７１】
IL-20アンタゴニストはまた、候補の剤をIL-20またはIL-20Rと共にインキュベートして、以下の特徴のうちの任意の１または２以上をモニタリングすることにより同定することができる：（ａ）IL-20またはIL-20Rに結合して、その生物学的活性および／またはIL-20シグナル伝達により媒介される下流の経路の機能を阻害すること；（ｂ）炎症性疼痛の任意の側面を予防するか、寛解させるか、または処置すること；（ｃ）IL-20受容体活性化を遮断するかまたは低下させること；（ｄ）IL-20またはIL-20Rのクリアランスを増大すること；（ｅ）IL-20またはIL-20Rの合成、産生または放出を阻害する（低下させる）こと。いくつかの態様において、IL-20アンタゴニストは、候補の剤をIL-20またはIL-20Rと共にインキュベートして、結合およびそれに伴うIL-20またはIL-20Rの生物学的活性の低下または中和をモニタリングすることにより、同定する。結合アッセイは、精製されたIL-20もしくはIL-20Rポリペプチドを用いて、またはIL-20もしくはIL-20Rポリペプチドを天然に発現するか、またはこれ（ら）を発現するように形質移入された細胞を用いて行う。一態様において、結合アッセイは、候補抗体が既知のIL-20アンタゴニストとIL-20またはIL-20R結合について競合する能力を評価する、競合的結合アッセイである。アッセイは、ELISAフォーマットを含む多様なフォーマットにおいて行うことができる。他の態様において、IL-20アンタゴニストは、候補の剤をIL-20またはIL-20R（例えばIL-20R1）と共にインキュベートして、それに伴うIL-20R1／IL-20R2複合体形成またはIL-20R2／IL-22R1複合体形成の阻害をモニタリングすることにより、同定する。初期の同定の後に、候補IL-20アンタゴニストの活性を、ターゲティングされた生物学的活性を試験するために知られるバイオアッセイによりさらに確認し、精査する。あるいは、バイオアッセイを用いて、候補を直接的にスクリーニングしてもよい。
【００７２】
以下に提供される例は、候補IL-20アンタゴニストをスクリーニングするために用いることができる多数のアッセイを提供する。バイオアッセイとして、限定されないが、候補IL-20アンタゴニストの存在下における細胞へのIL-20の競合的結合を決定するフローサイトメトリー；および腎上皮細胞におけるIL-20誘発型アポトーシスの阻害が挙げられる。加えて、RT-PCRまたはリアルタイムPCRは、IL-20発現を直接的に測定するか、またはTNFα、MCP-1、IL-1β、IL-6およびVEGFなどのIL-20により上方調節される遺伝子の発現を測定するために用いることができる。
【００７３】
医薬組成物
上記のIL-20アンタゴニストのうちの１または２以上は、炎症性疼痛を軽減することにおける使用のための医薬組成物を形成するために、バッファーを含む薬学的に受容可能なキャリア（賦形剤）と混合することができる。「受容可能」とは、当該キャリアが、組成物の活性成分に適合性でなければならない（および好ましくは活性成分を安定化することができる）こと、および処置される対象に対して有害であってはならないことを意味する。バッファーを含む薬学的に受容可能な賦形剤（キャリア）は、当該分野において周知である。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy、第20版（2000年）、Lippincott Williams and Wilkins（K. E. Hoover編）を参照。一例において、本明細書において記載される医薬組成物は、標的抗原の異なるエピトープを認識する、１つより多くの抗IL-20または抗IL-20R抗体を含む。別の例において、医薬組成物は、少なくとも２つの異なる型のIL-20アンタゴニスト（例えば、１つの抗体および１つの低分子）を含む。
【００７４】
本発明の方法において用いられるべき医薬組成物は、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤を、当該分野において公知の凍結乾燥処方物または水溶液の形態において含んでもよい。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy、第20版（2000年）、Lippincott Williams and Wilkins（K. E. Hoover編）を参照。受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、用いられる投与量および濃度において、レシピエントに対して非毒性であり、以下を含んでもよい：リン酸、クエン酸および他の有機酸などの緩衝化剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジンなどのアミノ酸；単糖、二糖、および他の炭水化物（グルコース、マンノースもしくはデキストランを含む）；EDTAなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはTWEEN（商標）、PLURONICS（商標）もしくはポリエチレングリコール（PEG）などの非イオン性界面活性剤。薬学的に受容可能な賦形剤は、本明細書においてさらに記載される。
【００７５】
いくつかの例において、本明細書において記載される医薬組成物は、IL-20アンタゴニスト（抗体など）を含むリポソームを含み、これは、Epstein, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688 (1985)；Hwang, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030 (1980)；および米国特許第4,485,045号および同第4,544,545号において記載されるものなどの、当該分野において公知の方法により調製することができる。循環時間が延長されたリポソームは、米国特許第5,013,556号において開示される。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびPEG誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（PEG-PE）を含む脂質組成物を用いる、逆相蒸発（reverse phase evaporation）法により生成することができる。既定の孔サイズのフィルターを通してリポソームを押し出すことにより、所望の直径を有するリポソームを得る。
【００７６】
活性成分（例えば、本明細書において記載される抗IL-20抗体または抗IL20R抗体などのIL-20アンタゴニスト）はまた、例えばコアセルベーション技術により、または界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリラート）マイクロカプセル中に、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中で、またはマクロエマルジョン中で、封入してもよい。かかる技術は、当該分野において公知であり、例えば、Remington、The Science and Practice of Pharmacy、第20版、Mack Publishing（2000年）を参照。
【００７７】
他の例において、本明細書において記載される医薬組成物は、持続放出フォーマットにおいて処方してもよい。持続放出調製物の好適な例として、抗体を含む固体の疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、成形された物品（例えばフィルム）またはマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスの例として、ポリエステル、ハイドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリラート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第3,773,919号）、Ｌ−グルタミン酸と７−エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、LUPRON DEPOT（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸リュープロリドからなる注射可能なマイクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、酢酸イソ酪酸スクロース、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【００７８】
in vivoでの投与のために用いられるべき医薬組成物は、無菌でなければならない。これは、例えば無菌濾過膜を通しての濾過により、容易に達成することができる。治療用の抗体組成物は、一般に、無菌のアクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針により穿通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアル中に入れられる。
本明細書において記載される医薬組成物は、経口、非経口もしくは直腸投与、または吸入もしくは吹送（insufflation）による投与のための、錠剤、丸剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液もしくは懸濁液、または坐剤などの単位投与形態であってよい。
【００７９】
錠剤などの固体組成物を調整するために、主要な活性成分を、医薬用のキャリア、例えば慣用的な錠剤成型用成分（コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガムなど）、および他の医薬用希釈剤（例えば水）と混合して、本発明の化合物の均一な混合物またはその非毒性の薬学的に受容可能な塩を含む、固体の予備処方組成物を形成してもよい。これらの予備処方組成物を均一として言及する場合、それは、活性成分が、組成物全体に一様に分散し、したがって組成物を、同等に有効な単位投与形態（錠剤、丸剤およびカプセルなど）に容易に細分することができることを意味する。この固体の予備処方組成物を、次いで、０．１〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含む上記の型の単位投与形態に細分する。新規組成物の錠剤または丸剤は、長期作用の利益を提供する投与形態を提供するために、コーティングするか、または他の方法で配合することができる。例えば、錠剤または丸剤は、内部投与成分および外部投与成分を含んでもよく、後者は、前者を覆うエンベロープの形態である。２つの成分は、腸溶層により分離することができ、これは、胃中での崩壊に耐えるために役立ち、内部成分を完全な状態で十二指腸へと通過させるか、または放出を遅延させることを可能にする。かかる腸溶層またはコーティングのために多様な材料を用いることができ、かかる材料として、多数のポリマー性の酸、およびポリマー性の酸と、シェラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースなどの材料との混合物が挙げられる。
【００８０】
好適な界面活性剤として、特に、ポリオキシエチレンソルビタン（例えばTween（商標）20、40、60、80または85）および他のソルビタン（例えばSpan（商標）20、40、60、80または85）などの非イオン性の剤が挙げられる。界面活性剤を用いる組成物は、便宜上、０．０５〜５％の界面活性剤を含み、これは０．１〜２．５％であってもよい。必要である場合、他の成分、例えばマンニトールまたは他の薬学的に受容可能なビヒクルを添加してもよいことが理解されるであろう。
【００８１】
好適な乳液は、市販の脂肪乳液、例えばIntralipid（商標）、Liposyn（商標）、Infonutrol（商標）、Lipofundin（商標）およびLipiphysan（商標）を用いて調製することができる。活性成分は、予め混合された乳液組成物中に溶解しても、あるいは油（例えばダイズ油、ベニバナ油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油またはアーモンド油）中に溶解して、リン脂質（例えば卵リン脂質、ダイズリン脂質またはダイズレシチン）および水と混合することにより乳液を形成してもよい。乳液の浸透圧を調整するために、例えばグリセロールまたはグルコースなどの他の成分を添加してもよいことが理解されるであろう。好適な乳液は、典型的には２０％まで、例えば５〜２０％の油を含むであろう。脂肪乳液は、０．１〜１．０．ｉｍ、特に０．１〜０．５．ｉｍの、脂肪の液滴を含んでもよく、５．５〜８．０の範囲のｐＨを有してもよい。
乳液組成物は、IL-20アンタゴニストをIntralipid（商標）またはその成分（ダイズ油、卵リン脂質、グリセロールおよび水）と混合することにより調製されるものであってもよい。
【００８２】
吸入または吹送のための医薬組成物として、薬学的に受容可能な水性もしくは有機性の溶媒またはこれらの混合物中の溶液および懸濁液、または粉末が挙げられる。液体または固体の組成物は、上記のとおり、好適な薬学的に受容可能な賦形剤を含んでもよい。いくつかの態様において、組成物は、経口または鼻呼吸経路により、局所または全身性の効果のために投与される。
【００８３】
好ましくは無菌の薬学的に受容可能な溶媒中の組成物は、気体の使用により噴霧することができる。噴霧デバイスから噴霧された溶液を直接的に呼吸しても、噴霧デバイスをフェイスマスク、テントまたは間欠的陽圧呼吸器に取り付けてもよい。溶液、懸濁液または粉末組成物は、処方物を適切な様式において送達するデバイスから、好ましくは経口でまたは鼻から投与することができる。
【００８４】
疼痛を軽減するためのIL-20アンタゴニストの使用
本明細書において開示される方法を実施するために、上記の医薬組成物の有効量を、処置を必要とする対象（例えばヒト）に、好適な経路を介して、例えば静脈内投与（例えばボーラスとして、または一定期間にわたる持続注入により）、筋肉内、腹腔内、脳脊髄液内、皮下、関節内、滑液内、クモ膜下腔内、経口、吸入または局所経路により、投与することができる。液体処方物のための市販のネブライザー（ジェット式ネブライザーおよび超音波式ネブライザーを含む）は、投与のために有用である。液体処方物を直接的に噴霧しても、凍結乾燥粉末を再構成の後に噴霧してもよい。あるいは、IL-20アンタゴニストを、フッ化炭素処方物および定量噴霧式吸入器を用いてエアロゾル化するか、または凍結乾燥され製粉された粉末として吸入してもよい。
【００８５】
本明細書において記載される方法により処置されるべき対象は、哺乳動物、より好ましくはヒトであってよい。哺乳動物として、限定されないが、家畜動物、狩猟動物、ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットが挙げられる。処置を必要とするヒト対象は、疼痛を罹患しているヒト患者であってよい。疼痛は、実際のまたは潜在的な組織損傷に関連する、不快な知覚性および情動性の体験である。疼痛は、多くの医学的状態における主要な症状であり、個人の生活の質に対して著しく影響を及ぼす。疼痛は、物理的な害による末梢神経線維の刺激により引き起こされる急性または侵害受容性の疼痛および病理学的疼痛を含む慢性疼痛を含む。
【００８６】
いくつかの態様において、本明細書において記載される方法のいずれかにおいて処置されるべき対象は、炎症性疼痛、別名炎症性侵害受容性疼痛を罹患しているヒト患者である。炎症性疼痛は、免疫細胞の浸潤により引き起こされる組織の損傷に関連する。炎症性疼痛として、限定されないが、急性炎症もしくは慢性炎症により誘発される神経障害性疼痛、急性炎症もしくは慢性炎症により誘発される虚血性疼痛、関節炎に関連する炎症性疼痛、急性炎症もしくは慢性炎症により誘発される筋痛、または急性炎症、慢性炎症もしくは化学療法により誘発される神経痛が挙げられる。
【００８７】
他の態様において、本明細書において記載される方法のいずれかにおいて処置されるべき対象は、神経系（末梢および中枢神経系を含む）におけるニューロンに対する損傷によりもたらされる神経障害性疼痛を罹患しているヒト患者である。いくつかの場合において、神経障害性疼痛もまた、慢性または急性の炎症により誘発され得る。あるいは、対象は、病理学的疼痛を罹患していてもよく、これは、神経系に対する損傷、またはその異常な機能により引き起こされる疾患状態（例えば線維筋痛症、過敏性腸症候群、緊張型頭痛、神経障害関連疼痛などにおける機能障害性疼痛など）である。
【００８８】
「有効量」とは、本明細書において用いられる場合、対象に対して治療効果を与えるために必要とされる各々の活性剤（単独で、または１または２以上の他の活性剤と組み合わせて）の量を指す。有効量は、当業者により理解されるとおり、処置されている特定の状態、状態の重篤度、個々の患者のパラメーター（年齢、身体条件、サイズ、性別および体重を含む）、処置の期間、（あれば）併用治療の性質、特定の投与の経路、および健康管理者の知識および専門的知識の範囲内における同様の要因に依存して、変化する。これらの要因は、当業者に周知であり、慣用的な実験のみを用いて取り組むことができる。一般に、個々の成分またはその組み合わせの最大用量、すなわち健全な医学的判断に従った最も高い安全な用量が用いられる。しかし、患者は、医学的理由、心理学的理由、または実質的にあらゆる他の理由のために、より低い用量または耐容可能な用量を主張する場合があることが、当業者により理解されるであろう。
【００８９】
半減期などの経験的考慮条件は、一般に、投与量の決定に寄与するであろう。例えば、ヒト化抗体または完全ヒト抗体などのヒト免疫系に適合可能な抗体は、抗体の半減期を延長するために、および抗体が宿主の免疫系により攻撃されることを防ぐために、用いることができる。投与の頻度は、治療の経過にわたり決定し、調整することができ、一般に、必ずしもではないが、炎症性疼痛の処置および／または抑制および／または寛解および／または遅延に基づく。あるいは、IL-20アンタゴニストの持続的な連続放出処方物が適切であり得る。持続放出を達成するための多様な処方物およびデバイスが、当該分野において公知である。
【００９０】
一例において、本明細書において記載されるIL-20アンタゴニストのための投与量は、IL-20アンタゴニストの１または２以上の投与を与えられた個体において経験的に決定され得る。個体は、徐々に増加する投与量のアンタゴニストを投与される。アンタゴニストの効力を評価するために、炎症性疼痛（アロディニアなど）の指標を追跡することができる。
【００９１】
一般に、本明細書において記載される抗体のいずれかの投与について、最初の候補投与量は、約２ｍｇ／ｋｇであってよい。本開示の目的のために、典型的な１日の投与量は、上述の要因に依存して、約０．１μｇ／ｋｇ〜３μｇ／ｋｇ〜３０μｇ／ｋｇ〜３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたはそれより多くのいずれかの範囲であってよい。数日またはそれより長くにわたる繰り返し投与のために、状態に依存して、処置は、所望される症状の抑制が起こるまで、または炎症性疼痛またはその症状を軽減するために十分な治療レベルが達成されるまで、続けられる。例示的な投与レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの初期用量を投与することと、その後の毎週の約１ｍｇ／ｋｇの抗体の用量の維持、またはその後の隔週の約１ｍｇ／ｋｇの用量の維持とを含む。しかし、医師が達成を望む薬物動態の減衰のパターンに依存して、他の投与レジメンが有用である場合もある。例えば、１週間に１〜４回の投与が企図される。いくつかの態様において、約３μｇ／ｍｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ（約３μｇ／ｍｇ、約１０μｇ／ｍｇ、約３０μｇ／ｍｇ、約１００μｇ／ｍｇ、約３００μｇ／ｍｇ、約１ｍｇ／ｋｇおよび約２ｍｇ／ｋｇなど）の範囲の投与量を用いてもよい。いくつかの態様において、投与頻度は、１日、１週間毎、２週間毎、４週間毎、８週間毎、２か月毎、または３か月毎、またはそれより長い期間毎に１回である。この治療の進行は、慣用的な技術およびアッセイにより容易にモニタリングされる。投与レジメン（用いられる抗体を含む）は、経時的に変化し得る。
【００９２】
IL-20アンタゴニストが抗体でない場合、それは、患者の体重１ｋｇあたり約０．１〜３００ｍｇの割合で、１〜３回の用量に分けて、または本明細書において開示されるように投与することができる。いくつかの態様において、通常の体重の成人患者について、約０．３〜５．００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を投与することができる。特定の投与レジメン、すなわち、用量、タイミングおよび反復は、特定の個体、およびその個体の病歴、ならびに個々の剤の特性（剤の半減期および当該分野において周知の他の考慮条件）に依存するであろう。
【００９３】
本開示の目的のために、IL-20アンタゴニストの適切な投与量は、使用される特定のIL-20アンタゴニスト（またはその組み合わせ）、炎症性疼痛の型および重篤度、アンタゴニストが予防的目的のために投与されるか治療的目的のために投与されるか、先の治療、患者の病歴およびアンタゴニストに対する応答、ならびに担当医の慎重さに依存するであろう。典型的には、医師は、抗IL-20または抗IL-20R抗体などのIL-20アンタゴニストを、所望される結果を達成する投与量に達するまで、投与するであろう。IL-20アンタゴニストの投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的であるか予防的であるか、および技術を有する医師に公知の他の要因に依存して、連続的であっても間欠的であってもよい。IL-20アンタゴニストの投与は（例えばIL-20アンタゴニストが抗IL-20抗体である場合は）、予め選択された期間にわたって本質的に連続的であっても、一連の間隔を空けた用量（例えば炎症性疼痛が発症する前、発症中、および発症した後）であってもよい。
【００９４】
本明細書において用いられる場合、用語「処置すること」とは、炎症性疼痛、炎症性疼痛の症状、または炎症性疼痛への素因を有する対象への、炎症性疼痛、炎症性疼痛の症状、または炎症性疼痛への素因を治癒（cure）、治癒（heal）、軽減、緩和、変更、治療（remedy）、寛解、改善、またはこれに影響を及ぼすことを目的とした、１または２以上の活性剤を含む組成物の適用または投与を指す。
いくつかの態様において、本明細書において記載されるIL-20アンタゴニスト（例えば、抗IL-20抗体、または抗IL-20R1抗体などの抗IL-20R抗体）を、処置を必要とする対象に、疼痛を軽減するために十分な量で投与する。
【００９５】
処置されるべき疾患／状態の型、または疾患／状態の部位に依存して、医学の分野における当業者に公知の慣用的な方法を用いて、医薬組成物を対象に投与することができる。この組成物はまた、他の慣用的な経路を介して投与することができ、例えば、経口で、非経口で、吸入スプレーにより、局所的に、直腸で、鼻で、頬側で、膣で、または移植されたリザーバを介して投与する。用語「非経口」とは、本明細書において用いられる場合、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液内、胸骨内、クモ膜下腔内、病巣内、および頭蓋内注射または注入技術を含む。加えて、それは、注射可能なデポーの投与経路を介して、例えば、１、３または６か月のデポー型の注射可能なまたは生分解性の材料および方法を用いて、対象に投与することができる。
【００９６】
注射可能な組成物は、植物油、ジメチルアセタミド、ジメチルホルムアミド、乳酸エチル、炭酸エチル、ミリスチル酸イソプロピル、エタノール、およびポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）などの、多様なキャリアを含んでもよい。静脈内注射のために、抗体および生理学的に受容可能な賦形剤を含む医薬処方物を注入する点滴法により、水溶性抗体を投与することができる。生理学的に受容可能な賦形剤は、例えば、５％デキストロース、０．９％食塩水、リンガー溶液または他の好適な賦形剤を含んでもよい。筋肉内用製剤、例えば、好適な塩の形態の抗体の無菌処方物は、注射用水、０．９％食塩水または５％グルコース溶液などの医薬用賦形剤中に溶解して投与することができる。
【００９７】
一態様において、IL-20アンタゴニストは、部位特異的なまたはターゲティングされた局所送達技術を介して投与される。部位特異的なまたはターゲティングされた局所送達技術の例として、多様な移植可能なデポー型のIL-20アンタゴニストのソース、または局所送達カテーテル、例えば注入カテーテル、留置カテーテルもしくはニードル型カテーテル、合成のグラフト、外膜ラップ、シャントおよびステント、または他の移植可能デバイス、部位特異的キャリア、直接注射、または直接適用が挙げられる。例えば、PCT公開番号WO 00/53211および米国特許第5,981,568号を参照。
【００９８】
アンチセンスポリヌクレオチド、発現ベクターまたはサブゲノムのポリヌクレオチドを含む治療用組成物のターゲティングされた送達を用いることができる。受容体により媒介されるDNA送達技術は、例えば以下において記載される：Findeis et al., Trends Biotechnol. (1993) 11:202；Chiou et al., Gene Therapeutics：Methods And Applications Of Direct Gene Transfer（J. A. Wolff編）（1994年）；Wu et al., J. Biol. Chem. (1988) 263:621；Wu et al., J. Biol. Chem. (1994) 269:542；Zenke et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1990) 87:3655；Wu et al., J. Biol. Chem. (1991) 266:338。ポリヌクレオチドを含む治療用組成物は、遺伝子治療プロトコルにおいて、局所投与のための約１００ｎｇ〜約２００ｍｇの範囲のDNAを投与する。いくつかの態様において、遺伝子治療プロトコルの間に、約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、および約２０μｇ〜約１００μｇまたはそれより高い濃度範囲のDNAをまた用いることができる。
【００９９】
本明細書において記載される治療用ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルを用いて送達してもよい。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルスまたは非ウイルス起源のものであってよい（一般的には、Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1:51；Kimura, Human Gene Therapy (1994) 5:845；Connelly, Human Gene Therapy (1995) 1:185；およびKaplitt, Nature Genetics (1994) 6:148を参照）。かかるコード配列の発現は、内在性の哺乳動物または異種性のプロモーターおよび／またはエンハンサーを用いて誘導することができる。コード配列の発現は、構成的であっても、制御されていてもよい。
【０１００】
所望されるポリヌクレオチドの送達および所望される細胞における発現のためのウイルスに基づくベクターは、当該分野において周知である。例示的なウイルスに基づくビヒクルとして、限定されないが、以下が挙げられる：組み換えレトロウイルス（例えば、PCT公開番号WO 90/07936；WO 94/03622；WO 93/25698；WO 93/25234；WO 93/11230；WO 93/10218；WO 91/02805；米国特許第5,219,740号および同第4,777,127号；ドイツ特許第2,200,651号；ならびに欧州特許第0 345 242号を参照）、アルファウイルスに基づくベクター（例えば、シンビドスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ATCC VR-67；ATCC VR-1247）、ロスリバーウイルス（ATCC VR-373；ATCC VR-1246）およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ATCC VR-923；ATCC VR-1250；ATCC VR 1249；ATCC VR-532））、ならびにアデノ随伴ウイルス（AAV）ベクター（例えば、PCT公開番号WO 94/12649, WO 93/03769；WO 93/19191；WO 94/28938；WO 95/11984およびWO 95/00655を参照）。Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147において記載されるような不活化されたアデノウィルスに連結させたDNAの投与もまた、使用することができる。
【０１０１】
非ウイルス性の送達ビヒクルおよび方法もまた、使用することができ、これは、限定されないが、以下を含む：不活化アデノウィルス単独に連結させた、または連結させない、ポリカチオン性の縮合DNA（例えば、Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147を参照）；リガンドに連結させたDNA（例えば、Wu, J. Biol. Chem. (1989) 264:16985を参照）；真核細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第5,814,482；PCT公開番号WO 95/07994；WO 96/17072；WO 95/30763；およびWO 97/42338を参照）ならびに核電荷中和または細胞膜との融合。ネイキッドDNAもまた使用することができる。例示的なネイキッドDNA導入法は、PCT公開番号WO 90/11092および米国特許第5,580,859号において記載される。遺伝子送達ビヒクルとして作用するリポソームは、米国特許第5,422,120；PCT公開番号WO 95/13796；WO 94/23697；WO 91/14445；および欧州特許第0524968号において記載される。さらなるアプローチは、Philip, Mol. Cell. Biol. (1994) 14:2411において、およびWoffendin, Proc. Natl. Acad. Sci. (1994) 91:1581において記載される。
また、本明細書において記載されるタンパク質に基づくIL-20アンタゴニストのいずれか（例えば、抗IL-20抗体または抗IL-20R抗体）の発現を指揮するために、発現ベクターを用いることができることは、明らかである。例えば、IL-20および／またはIL-20の生物学的活性を遮断（部分的〜完全に遮断）することができる他のIL-20受容体フラグメントは、当該分野において公知である。
【０１０２】
本明細書において記載される方法において用いられる特定の投与レジメン、すなわち、用量、タイミングおよび反復は、特定の対象および対象の病歴に依存するであろう。
いくつかの態様において、抗体および低分子IL-20阻害性化合物などの１つより多くのIL-20アンタゴニストを、処置を必要とする対象に投与することができる。アンタゴニストは、同じ型であっても、互いに異なっていてもよい。少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５の異なるIL-20アンタゴニストを共投与することができる。一般に、それらのIL-20アンタゴニストは、互いに有害には影響を及ぼさない補完的な活性を有する。IL-20アンタゴニストはまた、その剤の有効性を増強するかおよび／または補完するために役立つ他の剤と組み合わせて用いてもよい。
【０１０３】
いくつかの態様において、抗IL-20抗体または抗IL20R1抗体などのIL-20アンタゴニストは、治療剤（例えば化学療法剤）と共に、その治療剤により誘発された疼痛（例えば、化学療法により引き起こされた末梢神経障害）を軽減するために使用することができる。IL-20アンタゴニストの有効量と、治療剤の有効量と、を処置を必要とするヒトがん患者に共投与することができる。末梢神経障害を引き起こし得る化学療法剤として、限定されないが、以下が挙げられる：シスプラチン、カルボプラチンおよびオキサリプラチンなどの白金薬；パクリタキセル、ドセタキセルおよびカバジタキセルを含むタキサン、イクサベピロンなどのエポチロン、ビンブラスチン、ビノレルビンおよびエトポシド（VP-16）などの植物アルカロイド；サリドマイド、レナリドミドおよびポマリドミド；ボルテゾミブおよびカーフィルゾミブ；ならびにエリブリン。したがって、本明細書において記載されるIL-20アンタゴニストのいずれか（例えば、抗IL-20抗体または抗IL-20R1抗体）は、それらの化学療法剤と共に、それにより引き起こされる末梢神経障害を軽減するために用いることができる。
【０１０４】
「共投与される」または「共投与」とは、２または３以上の薬物を、対象に、時間的に相関する様式において投与することを意味する。共投与は、同じ投与形態における２または３以上の薬物の投与を通して起きてもよい。あるいは、共投与は、異なる投与形態であるが、特定された時間内での、例えば１か月以内、１週間以内、１日以内、または１時間以内での、２または３以上の薬物の投与を通して起きてもよい。いくつかの態様において、IL-20アンタゴニストは、ヒトがん患者が化学療法剤により誘発される神経障害を発症していることを観察された後で、当該患者に投与してもよい。
処置の効力は、当該分野において周知の方法、例えば、処置に供された患者により経験される疼痛のレベル、および／または処置に供された患者における炎症性サイトカインのレベルをモニタリングすることにより、評価することができる。
【０１０５】
疼痛を軽減することにおける使用のためのキット
本開示はまた、炎症性疼痛などの疼痛を軽減することにおける使用のためのキットを提供する。かかるキットは、IL-20アンタゴニスト（例えばmAb7Eもしくはその機能的バリアント、mAb7GWもしくはその機能的バリアント、またはmAb51Dもしくはその機能的バリアントなどの抗体）を含む、１または２以上の容器を含んでもよい。いくつかの態様において、IL-20アンタゴニストは、本明細書において記載されるような任意のIL-20シグナル伝達経路を妨害することができる抗体である。他の態様において、キットは、前記の抗体以外のIL-20アンタゴニストを含む。
【０１０６】
いくつかの態様において、キットは、本明細書において記載される方法のいずれかによる使用のための指示を含んでもよい。含まれる指示は、本明細書において記載される方法のいずれかにより疼痛を処置するか、その発症を遅延させるか、またはそれを軽減するための、IL-20アンタゴニストの投与の説明を含んでもよい。キットはさらに、その個体が炎症性疼痛などの疼痛を罹患するか否かを同定することに基づいて、処置のために好適な個体を選択することの説明を含んでもよい。
【０１０７】
IL-20アンタゴニストの使用に関する指示は、一般に、意図される処置のための投与量、投与スケジュールおよび投与の経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装（例えば複数用量包装）または部分単位用量であってよい。本発明のキット中に供給される指示は、典型的には、ラベルまたは添付文書上の文書による指示（例えばキット中に含まれる紙シート）であるが、機械可読の指示（例えば、磁気または光学記憶ディスク上に運搬される指示）もまた、受容可能である。
ラベルまたは添付文書は、組成物が、炎症性疼痛を処置するか、その発症を遅延させるか、および／またはそれを軽減するために用いられることを示す。指示は、本明細書において記載される方法のいずれかを実施するために提供されてもよい。
【０１０８】
本発明のキットは、好適な包装中にある。好適な包装として、限定されないが、バイアル、ボトル、広口瓶（jar）、柔軟な包装（例えば、密封されたMylarまたはプラスチックのバッグ）などが挙げられる。また企図されるのは、吸入器、鼻投与用デバイス（例えばアトマイザー）、またはミニポンプなどの注入デバイスなどの、特定のデバイスと組み合わせた使用のための包装である。キットは、無菌のアクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、皮下注射針により穿通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。容器もまた、無菌のアクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、皮下注射針により穿通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１の活性剤は、抗IL-20抗体などのIL-20アンタゴニストである。
【０１０９】
キットは、任意に、バッファーおよび解釈可能な情報などのさらなる成分を提供してもよい。通常は、キットは、容器、および容器上のまたは容器に付随するラベルまたは添付書類を含む。いくつかの態様において、本発明は、上記のキットの内容を含む製品を提供する。
さらなる詳細がなくとも、当業者は、上記に基づいて、本発明をその最大限まで利用することができると考えられる。したがって、以下の具体的な態様は、単に説明的なものとして解釈されるべきであり、決して本開示の残りを限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書において引用されるすべての刊行物は、本明細書において言及される目的または主題について、参考として援用される。
【０１１０】
例１：CFA誘発型炎症性疼痛マウスモデルにおける抗IL-20抗体による炎症性疼痛の阻害
IRCマウス（７〜１０週齢）を、本研究において用いた。これらのマウスにおいて、１０μｌのフロイント完全アジュバント（CFA）の左足注射により、炎症性疼痛を誘発させた。Von Freyマイクロフィラメントを用いて機械的アロディニアを試験した。足底に対して垂直に提示される対数的に増大する（０．０２〜２．５６ｇ；Stoelting）硬度を有する一連のVon Freyマイクロフィラメントのうちの１つで、足に圧力をかける。各マイクロフィラメントを、マウスに対して１秒間にわたり適用した。Dixonのアップダウン法を用いて、５０％引き込み閾値を決定した。
【０１１１】
抗IL-20抗体mAb7E（１０μｇ）または対照ＩｇＧ抗体（１０μｇ）を、CFAで処置されたマウスに、クモ膜下腔内（ＩＴ）または足（ＰＬ）注射を介して注射した。図１において示すように、mAb7Eは、CFA処置マウスにおける足引き込み閾値を著しく増大したが、ＩｇＧ対照は増大しなかった。このことは、CFA誘発型機械的アロディニアが、抗IL-20抗体mAb7Eにより著しく阻害されたことを示している。加えて、図２において示すように、クモ膜下腔内注射（１２μｇ〜２４μｇ）を介した抗IL-20抗体mAb7Eの用量依存的な効果が観察された。
まとめると、本研究から得られた結果は、抗IL-20抗体の鎮痛効果を実証し、このことは、IL-20シグナル伝達経路の阻害が、炎症性疼痛などの疼痛を軽減することにおいて有効であり得ることを示している。
【０１１２】
例２：化学療法誘発型神経障害マウスモデルにおける抗IL-20抗体の神経保護効果
C57BL/6マウス（６週齢、１４〜１５ｇ）を、本研究において用いた。研究プロトコルは、図３において模式的に概略される。１日おきの４回のパクリタキセル（４．５ｍｇ／ｋｇ）の注射を与えることにより、化学療法誘発型神経障害を誘発させた。in vivoでの抗IL-20抗体（IL-20Ab）の神経保護効果を試験するために、パクリタキセルの各注射の６時間前に、抗IL-20Ab（mAb7E；５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内注射により投与した。各神経学的試験の基線の測定値を、パクリタキセルまたはビヒクル投与の前に取得し、処置の後で毎週１か月間にわたり４回のさらなる試験のセッションを記録した。電気的von Freyヘア（ALMEMO、Germany）により、機械的アロディニアを評価した。マウスを、ワイヤメッシュのプラットフォームを有する個別のプレキシガラス容器に入れ、各試験の前に、３０分間の順化を必要とした。平滑末端のvon Freyフィラメントを用いて、後足の足底表面中央に対して上向きに、５秒間、または引き込み応答が起こるまで圧力をかけて、左および右の後足についてそれぞれ４回、最大圧力応答を記録した。１個体のマウスについての時間ごとの引き込み力を平均し、各処置に対する後足の機械的閾値を表した。尾の浸漬アッセイにより、尾の熱過敏性を測定した。各マウスを手で保持し、尾の先のほぼ１ｃｍを４８℃に維持された水槽中に浸漬し、マウスがその尾を引き込むまでの潜時をスコアづけした（応答についてのカットオフは０秒である）。
【０１１３】
４回の注射の経過を完了した後、パクリタキセル処置されたマウスは、劇的な機械的閾値の低下、すなわちアロディニアの発症を示した（図４）。このパクリタキセル誘発型の機械的アロディニアの過敏は、抗IL-20Abの予備処置により軽減されることが見出された（図４）。第４週において得られたデータの分析は、アロディニアを軽減することに対する抗IL-20Ab処置の顕著な効果を示した（図５）。
【０１１４】
尾浸漬試験に関して、マウスは、学習効果のために、経時的に熱刺激に対してより感受性となった。しかし、パクリタキセル処置されたマウスは、対照群のものと比較して、より長い熱応答潜時を示した。このことは、パクリタキセル処置が、熱閾値の上昇を誘導したことを示している（図６）。抗IL-20Abで予備処置されたマウスは、熱刺激に対して対照群と類似の応答を示し、このことは、抗IL-20Abが、パクリタキセルにより誘発される熱不感作を回復させたことを示している（図６）。第４週において得られたデータの分析もまた、この概念を支持する（図７）。
まとめると、本研究から得られた結果は、抗IL-20抗体が、パクリタキセルなどの化学療法剤により引き起こされる神経障害に対して保護的であることを示す。
【０１１５】
他の態様
本明細書において開示される特徴の全ては、任意の組み合わせにおいて組み合わせることができる。本明細書において開示される各々の特徴は、同じ、同等の、または類似の目的に役立つ代替的特徴により置き換えることができる。したがって、他に明示的に述べられない限り、開示される各々の特徴は、一般的な一連の同等または類似の特徴のほんの一例である。
上の説明から、当業者は、本発明の本質的な特徴を容易に確認することができ、その精神および範囲から逸脱することなく、本発明を多様な用途および条件に適応させるために、本発明の多様な変更および改変を行うことができる。したがって、他の態様もまた、請求の範囲内である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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