(57)【要約】  ＶＨＨ誘導体と軽鎖可変ドメインＶＬの組み合わせによって示される可変ドメインを含むモノクローナルＩｇＧ型抗体が示唆された。前記抗体は、４４位および４５位（Ｋａｂａｔ番号付け）またはその組み合わせでアミノ酸置換を含むことも可能である。本発明の抗体は、増加したアフィニティおよび改善された凝集安定性を所持する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
可変ドメインが、ＶＨＨ誘導体と軽鎖可変ドメインＶＬの組み合わせによって示される、ヒト化モノクローナルＩｇＧ抗体。
【請求項２】
ラクダ（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）科の免疫動物から単離される天然ＶＨＨ抗体に比較して、ＶＨＨ誘導体の増加した凝集安定性によって特徴付けられる、請求項１記載の抗体。
【請求項３】
ＶＨＨ誘導体が、４４Ｘ２４５Ｘ３位で以下のアミノ酸置換：
ａ）式中、４４Ｘ２＝Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｓ、Ｔ；
ｂ）式中、４５Ｘ３＝Ａ、Ｖ、Ｔ、Ｈ；
またはその組み合わせ
を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項４】
ラクダ科の免疫動物から単離される天然ＶＨＨ抗体に比較して、ＶＨＨ誘導体の増加した凝集安定性によって特徴付けられる、請求項３記載の抗体。
【請求項５】
ＶＨＨ誘導体が、ラクダ科の免疫動物から単離された重鎖の可変ドメインによって示され、そしてヒトに典型的であり、そして４４Ｘ２４５Ｘ３位での以下の置換：
ｃ）式中、４４Ｘ２＝Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｓ、Ｔ；
ｄ）式中、４５Ｘ３＝Ａ、Ｖ、Ｔ、Ｈ；
またはその組み合わせ
を除く、任意の位に位置する、さらなるアミノ酸置換を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項６】
ＶＨＨ誘導体が、ラクダ科の非免疫動物から単離された重鎖の可変ドメインであり、そしてヒトに典型的であり、そして４４Ｘ２４５Ｘ３位での以下のアミノ酸置換：
ｅ）式中、４４Ｘ２＝Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｓ、Ｔ；
ｆ）式中、４５Ｘ３＝Ａ、Ｖ、Ｔ、Ｈ；
またはその組み合わせ
を除く、任意の位に位置する、さらなるアミノ酸置換を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項７】
軽鎖可変ドメインＶＬがヒト抗体誘導体である、請求項１記載の抗体。
【請求項８】
軽鎖可変ドメインＶＬが抗体、好ましくは哺乳類のヒト化断片である、請求項１記載の抗体。
【請求項９】
ＶＨＨ誘導体がシステイン−４４（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）を含有し、そして軽鎖可変ドメインＶＬがシステイン−１００（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）を含有する、請求項１記載の抗体。
【請求項１０】
以下のアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のいずれか１つである、請求項１記載の抗体。
【請求項１１】
ＩｇＧの一部として非天然の修飾Ｆｃを含む、請求項１０記載の抗体。
【請求項１２】
１０ｍｇ／ｍｌを超える濃度で用い、そして４℃の温度で＞６ヶ月保存した際、凝集物含量が溶液中の最初の含量の５％より多く増加しない凝集安定性によって特徴付けられる、請求項１記載の抗体。
【請求項１３】
１０ｍｇ／ｍｌを超える濃度で用い、そして３７℃の温度で＞２週間保存した際、凝集物含量が溶液中の最初の含量の５％より多く増加しない凝集安定性によって特徴付けられる、請求項１記載の抗体。
【請求項１４】
１０ｍｇ／ｍｌを超える濃度で用い、そして４２℃の温度で＞４８時間保存した際、凝集物含量が溶液中の最初の含量の５％より多く増加しない凝集安定性によって特徴付けられる、請求項１記載の抗体。
【請求項１５】
１０ｍｇ／ｍｌを超える濃度で用い、そして５０℃の温度で＞６時間保存した際、凝集物含量が溶液中の最初の含量の５％より多く増加しない凝集安定性によって特徴付けられる、請求項１記載の抗体。
【請求項１６】
解離定数ＫＤが１０−９Ｍおよびそれ未満である、請求項１記載の抗体。
【請求項１７】
抗体−抗原相互作用動力学会合定数Ｋｏｎ（１／Ｍｓ）が少なくとも１０５  １／Ｍ秒およびそれより大きい、請求項１記載の抗体。
【請求項１８】
抗体−抗原相互作用動力学解離定数ｄｉｓ（１／ｃ）が１０−４  １／秒およびそれ未満である、請求項１記載の抗体。
【請求項１９】
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する、請求項１〜１８記載の抗体であって、
ａ）３つの超可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含むラクダ科重鎖可変ドメイン（ＶＨＨ）の誘導体であって：
配列番号１のアミノ酸配列：Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ａ−Ｔ−Х３２−Х３３−Х３４−Х３５を含むＨＣＤＲ１、式中
Х３２は、Ｓ、Ｎ、Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｗ、Ｑ、Ｄ、Ａ、ＶおよびＦを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х３３は、ＰまたはＳを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х３４は、ＭおよびＩを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х３５は、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｒ、ＶおよびＱを含む群より選択されるアミノ酸である；
配列番号２のアミノ酸配列：Х５０−Ｉ−Ｘ５２−Х５２ａ−Ｓ−Ｇ−Х５５−Ｄ−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇを含むＨＣＤＲ２、式中、
Х５０は、Ａ、ＧおよびＬを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х５２は、Ｓ、ＤおよびＥを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х５２ａは、ＰおよびＡを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х５５は、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、ＡおよびＷを含む群より選択されるアミノ酸である；
配列番号３のアミノ酸配列：С−А−Ｘ９４−Ｘ９５−Ｘ９６−Ｘ９７−Ｆ−Ｘ９９−Ｘ１００−Ｘ１００ａ−Ｘ１００ｂ−Ｘ１００ｃ−Ｘ１００ｄ−Ｘ１００ｅ−Ｘ１００ｆ−Ｄ−Ｙ−Ｄ−Ｓを含むＨＣＤＲ３、ここで
Ｘ９４は、Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＤおよびＧを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ９５は、ＲおよびＫを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ９６は、Ｇ、Ｒ、Ｙ、Ｈ、Ｄ、ＷおよびＫを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ９７は、Ｒ、Ａ、Ｖ、Ｓ、ＬおよびＨを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ９９は、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｒ、Ｖ、ＫおよびＱを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００は、Ｇ、ＳおよびＮを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ａは、Ｇ、Ｔ、Ｐ、Ｖ、Ｒ、ＮおよびＫを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｂは、Ｖ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、Ｙ、Ａ、Ｈ、ＧおよびＩを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｃは、Ｙ、ＷおよびＳを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｄは、Ｒ、Ｖ、Ｌ、Ｙ、Ａ、Ｗ、Ｋ、Ｇ、ＱおよびＩを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｅは、Ｔ、Ｌ、ＡおよびＳを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｆは、Ｔ、Ｌ、Ｇ、Ｐ、Ｎ、Ａ、Ｑ、Ｆ、ＩおよびＤを含む群より選択されるアミノ酸である；
を含む、前記誘導体；
ｂ）ヒト抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）またはヒト化抗体の軽鎖可変ドメイン
を含む、前記抗体。
【請求項２０】
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する、請求項１〜１８記載の抗体であって、
ａ）３つの超可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨＨ）の誘導体であって：
Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ａ−Ｔ−Ｓ−Ｐ−Ｍ−Ｇ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１
；
Ａ−Ｉ−Ｓ−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−Ｄ−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；
С−А−Ｖ−Ｒ−Ｒ−Ｒ−Ｆ−Ｄ−Ｇ−Ｔ−Ｓ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｇ−Ｄ−Ｙ−Ｄ−Ｓ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３
を含む、前記誘導体；
ｂ）ヒト抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）またはヒト化抗体の軽鎖可変ドメイン
を含む、前記抗体。
【請求項２１】
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する、請求項２０記載の抗体であって、
ａ）アミノ酸配列
【化１】
2017538656.tif 000012
を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨＨ）の誘導体；
ｂ）ヒト抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）またはヒト化抗体の軽鎖可変ドメイン
を含む、前記抗体。
【請求項２２】
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する、請求項２１記載の抗体であって、ＶＨＨ誘導体を含み、前記可変ドメインが配列番号７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、前記抗体。
【請求項２３】
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する、請求項２２記載の抗体であって、
ａ）配列番号７のアミノ酸配列を含む、ＶＨＨ誘導体；
ｂ）
【化２】
2017538656.tif 000013
のアミノ酸配列を含むヒト抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、前記抗体。
【請求項２４】
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そしてヒト抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、前記可変ドメインが配列番号８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２３記載の抗体。
【請求項２５】
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そして：
ａ）以下のアミノ酸配列：
【化３】
2017538656.tif 000014
を含む、重鎖
ｂ）以下のアミノ酸配列：
【化４】
2017538656.tif 000015
を含む、ヒト抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
を含む、請求項１〜１８記載の抗体。
【請求項２６】
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そして重鎖および軽鎖を含有する請求項２５記載の抗体であって、前記鎖が、配列番号９および／または配列番号１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、前記抗体。
【請求項２７】
１０−１０Ｍおよびそれ未満のＫＤで特徴付けられる、ヒトＩＬ−１７Ａに対する結合アフィニティを有する、請求項１９記載の抗体。
【請求項２８】
ヒトＩＬ−１７Ａに対する動力学会合定数ｋｏｎ（１／Ｍｃ）が１０５  １／Ｍ秒未満でない、請求項１９記載の抗体。
【請求項２９】
ヒトＩＬ−１７Ａに対する動力学解離定数ｄｉｓ（１／ｓ）が１０−５  １／秒より大きくない、請求項１９記載の抗体。
【請求項３０】
未満でなく、ヒトＩＬ−１７Ａの活性を阻害する、請求項１９記載の抗体。
【請求項３１】
哺乳動物、酵母または細菌細胞によって産生される、請求項１９記載の抗体。
【請求項３２】
天然Ｆｃに比較して、Ｆｃ領域に１またはそれより多いさらなるアミノ酸置換を含む、請求項１９記載の抗体であって、前記置換が、天然Ｆｃを有する抗体に比較した際、抗体の物理化学的および薬物動態学的特性を改善し、そして抗体がＩＬ−１７Ａに結合する能力の損失を生じない、前記抗体。
【請求項３３】
請求項１〜３２記載の抗体の断片。
【請求項３４】
抗体配列の一部である軽鎖、重鎖、ならびに軽鎖および／または重鎖の可変ドメインによって示され、生体分子特異的抗体変異体を含む、請求項３３記載の抗体断片。
【請求項３５】
Ｆａｂの一部である軽鎖、重鎖、ならびに軽鎖および／または重鎖の可変ドメインによって示される、請求項３４記載の抗体断片。
【請求項３６】
ｓｃＦｖの一部である軽鎖、重鎖、ならびに軽鎖および／または重鎖の可変ドメインによって示される、請求項３４記載の抗体断片。
【請求項３７】
請求項１〜３２のいずれか記載の抗体または請求項３３〜３６記載のその断片の産生法であって、以下：部位特異的突然変異誘発、ディスプレイ法、遺伝子操作、当該技術分野に周知の生化学および高性能バイオテクノロジー法であって、ラクダ科抗体のＶＨＨドメインの異なる位での部位特異的突然変異のための方法を含むことも可能な、前記方法より選択される相を伴う、前記方法。
【請求項３８】
請求項１〜３２のいずれか記載の抗体または請求項３３〜３６のいずれか記載の抗体断片をコードする、ＤＮＡ構築物。
【請求項３９】
請求項３８記載の１つまたはいくつかのＤＮＡ構築物を含む、発現ベクター。
【請求項４０】
請求項３９記載の発現ベクターまたは請求項３８記載のＤＮＡ構築物を含む、細胞株。
【請求項４１】
請求項１〜３２記載のヒト化モノクローナル抗体または請求項３３〜３６記載の抗体断片の産生法であって、請求項４０記載の細胞株を、培地中で、前記抗体またはその断片が得られるために十分な条件下でインキュベーションし、その後、得た抗体またはその活性断片を単離し、そして精製することを伴う、前記方法。
【請求項４２】
請求項３９記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４３】
請求項１〜３２のいずれか記載の抗体または請求項３３〜３６記載の抗体断片の産生法であって、請求項４２記載の細胞株を、培地中で、前記抗体またはその断片が得られるために十分な条件下でインキュベーションし、その後、得た抗体またはその活性断片を単離し、そして精製することを伴う、前記方法。
【請求項４４】
請求項１〜３２のいずれか記載の抗体または請求項３３〜３６記載のその断片を、１またはいくつかの薬学的に適切な賦形剤、希釈剤またはキャリアーと組み合わせて含む、薬学的組成物。
【請求項４５】
ＴＮＦ−α阻害剤より選択される活性薬学的成分をさらに含む、請求項４４記載の薬学的組成物。
【請求項４６】
ＩＬ−１７Ａが仲介する疾患または障害の療法において用いられるべき、請求項４４記載の薬学的組成物。
【請求項４７】
ＩＬ−１７Ａが仲介する疾患または障害が：関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎（ｔｈｙｒｏａｄｅｎｉｔｉｓ）、喘息、アレルギー性障害、乾癬、皮膚炎、全身性硬化症、移植片対宿主病、移植片拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、腎関与を伴う顕微鏡的多発血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症ショック、毒性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染、侵襲、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、多腺性自己免疫症候群Ｉ型およびＩＩ型、シュミット症候群、急性呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター症候群、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎関連関節症、腸疾患滑膜炎、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）およびサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）関連関節症、脊椎関節症、アテローム疾患／冠動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／慢性疲労症候群、慢性活動性肝炎症、頭蓋巨大動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、ＡＩＤＳ関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊、卵巣不全、未成熟卵巣不全、肺線維症、特発性線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺病変、間質性肺炎、間質性肺疾患に関連する結合組織疾患、間質性肺疾患に関連する混合結合組織疾患、間質性肺疾患に関連する全身性強皮症、間質性肺疾患に関連する関節リウマチ、肺疾患に関連する全身性エリテマトーデス、肺疾患に関連する皮膚筋炎／多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｕｏｓｉｔｉｓ）、肺疾患に関連するシェーグレン病、肺疾患に関連する強直性脊椎炎、びまん性肺血管炎、肺疾患に関連するヘモジデリン沈着症、薬剤誘導性間質性肺疾患、線維症、放射性誘導性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤を伴う肺疾患、感染後間質性肺病変、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性肝炎Ｉ型（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、自己免疫性肝炎ＩＩ型（抗ＬＫＭ抗体関連）、自己免疫性低血糖症、角質増殖症を伴うＢ型インスリン耐性、副甲状腺機能低下症、急性移植関連免疫疾患、慢性移植関連免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、Ｉ型乾癬、ＩＩ型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、ＮＯＳ腎疾患、糸球体腎炎、顕微鏡的腎多発血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性ＮＯＳ男性不妊、抗精子免疫、多発性硬化症（すべての型）、交感神経性眼炎、結合組織疾患続発性肺高血圧、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スティル病、全身性強皮症、シェーグレン症候群、高安病/関節炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺障害、甲状腺機能亢進症、自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑、急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘導性肝損傷、胆汁鬱滞、特異体質肝疾患、薬剤誘導性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌感染（ＧＢＳ）、精神障害（抑鬱および統合失調症を含む）、Ｔｈ１およびＴｈ２仲介性疾患、急性および慢性疼痛（多様な型）、悪性腫瘍、例えば肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および造血性悪性疾患（白血病およびリンパ腫）、無ベータ・リポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性感染および寄生、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房性異所性拍動（ａｔｒｉａｌ  ｅｃｔｏｐｉｃｓ）、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘導性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶、アルファ−Ｉアンチトリプシン不全、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ＣＤ３療法、抗リン脂質症候群、受容体に対する過敏性反応、大動脈および末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、冠動脈硬化症、動静脈瘻、運動失調、心房細動（一定または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植片拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓性不整脈、心筋気絶症候群、心臓腫瘍、心筋疾患、バイパスに対する炎症反応、軟骨移植片拒絶、脳皮質変性、小脳障害、無秩序または多源性心房頻拍、化学療法誘導性障害、慢性骨髄細胞白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール中毒、慢性炎症性疾患、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患、慢性サリチル酸中毒、直腸結腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺、心臓、冠動脈疾患、クロイツフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法誘導性障害、ボクサー脳症、脱ミエリン化疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的状態、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病関連アテローム性動脈硬化症血管疾患、びまん性レビー小体病、鬱血性拡張型心筋症、基底核疾患、中年ダウン症候群、ＣＮＳドーパミンブロッカーによって誘導される運動障害、薬剤感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌症、喉頭蓋炎、エプスタイン・バー・ウイルス感染、皮膚紅痛症、錐体外路および小脳症状、家族性血球貪食性リンパ組織球症、胎児胸腺移植片拒絶、フリートライヒ運動失調症、末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス・フレグモーネ、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意の臓器または組織移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物による肉芽腫、毛様細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植片拒絶、ヘモクロマト−シス、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、索枝不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶニューロパシー、ホジキン病、多動運動障害、過敏性反応、過敏性関連間質性肺炎、高血圧、運動不足による運動障害、視床下部−下垂体−副腎軸の検査、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体仲介性細胞傷害、無力症、幼児期筋萎縮症、大動脈炎症、インフルエンザウイルスＡ、電離放射線への曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血／再灌流誘導性障害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植片拒絶、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮膚脊髄損傷、脂肪性浮腫、肝移植片拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性疾患、偏頭痛、多発性全身ミトコンドリア障害、混合結合組織疾患、モノクローナルガンマ症、多発性骨髄腫、多発性全身変性症（メンセル、デジェリン・トーマス、シャイ・ドレーガーおよびマシャド・ジョセフ）、重症筋無力症、細胞内マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血性疾患、鼻咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性障害、神経原性筋萎縮症I、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹大動脈分岐部閉塞、動脈閉塞性疾患、ＯＫＴ３（登録商標）治療、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植片拒絶、膵癌、傍腫瘍性疾患／腫瘍関連高カルシウム血症、副甲状腺移植片拒絶、骨盤炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性動脈硬化（アテローム性動脈硬化）疾患、末梢血管性疾患、腹膜炎、悪性貧血、カリニ肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパシー、臓器肥大、内分泌疾患、モノクローナル形質細胞増殖障害および皮膚変化）、灌流後症候群、ポンプヘッド症候群、開心術後梗塞後症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射療法、レイノー現象および疾患、レイノー病、レフサム病、規則的ナローＱＲＳ頻拍、腎血管高血圧、再灌流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症疾患、老人性舞踏病、レビー小体認知症、血清陰性関節炎、ショック、鎌形細胞疾患、皮膚同種移植片拒絶、皮膚変化、小腸移植片拒絶、固形腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌筋炎、小脳構造損傷、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管梅毒、全身性アナフィラキシー、包括的全身性炎症反応症候群、全身型若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓症、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、過敏性反応ＩＩＩ型、過敏性反応ＩＶ型、不安定性狭心症、尿毒症、尿敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈性疾患、静脈性血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス（ｖｉｔａｌ）脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス血球貪食性症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意の臓器または組織に関する異種移植片拒絶、急性冠動脈症候群、急性特発性多発神経炎、急性炎症性脱ミエリン化神経根ニューロパシー、急性虚��、成人型スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、冠動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に関連する自己免疫性障害、自己免疫性腸疾患、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性未成熟卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心臓血管疾患、破局性抗リン脂質症候群、セリアック病、頸椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを伴う臨床単離症候群（ｃｉｓ）、結膜炎、小児期精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病網膜症、糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板逸脱、薬剤誘導性免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼球陥入（ｅｎｔｏｐｈｔｈａｌｍｉａ）、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ仲介性アレルギー、自己免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱ミエリン病、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、特発性肺線維症／通常型間質性肺炎、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病またはクスマウル・マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、大理石様皮膚、黄斑変性症、顕微鏡的多発血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン病、粘膜性類天疱瘡、多発性臓器不全、重症筋無力症、脊髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、ニューロパシー、非Ａ、非Ｂ肝炎、視神経炎、骨溶解症、卵巣癌、少数関節ＪＩＡ、末梢動脈閉塞性疾患、末梢血管疾患、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛症、白毛症、多関節型若年性特発性関節炎、多発性内分泌不全、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、ポストポンプ症候群、原発性パーキンソン症、前立腺および直腸癌および造血性悪性疾患（白血病およびリンパ腫）、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、ざ瘡、膿疱症、骨増殖症（ｈｙｐｅｒｓｔｏｓｉｓ）および骨炎）、強皮症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍｉａ）、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨症（ｉｓｃｈｉａｓ）、続発性副腎不全、シリコン関連結合組織疾患、スネドン・ウィルキンソン病、強直性脊髄炎、スティー
ブンス・ジョンソン症候群、全身性炎症反応症候群、頭蓋動脈炎、トキソプラズマ属鼻炎、中毒性表皮壊死症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体関連周期性症候群）、アレルギー反応Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、蕁麻疹、通常型間質性肺炎、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性症、創傷治癒、およびエルシニア属またはサルモネラ属関連関節症より選択される、請求項４６記載の薬学的組成物。
【請求項４８】
ＩＬ−１７Ａ仲介性疾患または障害の治療のための方法であって、請求項１〜３２記載の単離抗体または請求項３３〜３６記載のその断片の療法的有効量を、こうした治療を必要とする患者に投与することによって特徴付けられる、前記方法。
【請求項４９】
ＩＬ−１７Ａ仲介性疾患または障害が：関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎、喘息、アレルギー性障害、乾癬、皮膚炎、全身性硬化症、移植片対宿主病、移植片拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、腎関与を伴う顕微鏡的多発血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症ショック、毒性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染、侵襲、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、多腺性自己免疫症候群Ｉ型およびＩＩ型、シュミット症候群、急性呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター症候群、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎関連関節症、腸疾患滑膜炎、クラミジア属、エルシニア属およびサルモネラ属関連関節症、脊椎関節症、アテローム疾患／冠動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／慢性疲労症候群、慢性活動性肝炎症、頭蓋巨大動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、ＡＩＤＳ関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊、卵巣不全、未成熟卵巣不全、肺線維症、特発性線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺病変、間質性肺炎、間質性肺疾患に関連する結合組織疾患、間質性肺疾患に関連する混合結合組織疾患、間質性肺疾患に関連する全身性強皮症、間質性肺疾患に関連する関節リウマチ、肺疾患に関連する全身性エリテマトーデス、肺疾患に関連する皮膚筋炎／多発性筋炎、肺疾患に関連するシェーグレン病、肺疾患に関連する強直性脊椎炎、びまん性肺血管炎、肺疾患に関連するヘモジデリン沈着症、薬剤誘導性間質性肺疾患、線維症、放射性誘導性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤を伴う肺疾患、感染後間質性肺病変、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性肝炎Ｉ型（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、自己免疫性肝炎ＩＩ型（抗ＬＫＭ抗体関連）、自己免疫性低血糖症、角質増殖症を伴うＢ型インスリン耐性、副甲状腺機能低下症、急性移植関連免疫疾患、慢性移植関連免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、Ｉ型乾癬、ＩＩ型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、ＮＯＳ腎疾患、糸球体腎炎、顕微鏡的腎多発血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性ＮＯＳ男性不妊、抗精子免疫、多発性硬化症（すべての型）、交感神経性眼炎、結合組織疾患続発性肺高血圧、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スティル病、全身性強皮症、シェーグレン症候群、高安病/関節炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺障害、甲状腺機能亢進症、自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑、急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘導性肝損傷、胆汁鬱滞、特異体質肝疾患、薬剤誘導性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌感染（ＧＢＳ）、精神障害（抑鬱および統合失調症を含む）、Ｔｈ１およびＴｈ２仲介性疾患、急性および慢性疼痛（多様な型）、悪性腫瘍、例えば肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および造血性悪性疾患（白血病およびリンパ腫）、無ベータ・リポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性感染および寄生、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房性異所性拍動、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘導性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶、アルファ−Ｉアンチトリプシン不全、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ＣＤ３療法、抗リン脂質症候群、受容体に対する過敏性反応、大動脈および末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、冠動脈硬化症、動静脈瘻、運動失調、心房細動（一定または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植片拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓性不整脈、心筋気絶症候群、心臓腫瘍、心筋疾患、バイパスに対する炎症反応、軟骨移植片拒絶、脳皮質変性、小脳障害、無秩序または多源性心房頻拍、化学療法誘導性障害、慢性骨髄細胞白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール中毒、慢性炎症性疾患、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患、慢性サリチル酸中毒、直腸結腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺、心臓、冠動脈疾患、クロイツフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法誘導性障害、ボクサー脳症、脱ミエリン化疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的状態、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病関連アテローム性動脈硬化症血管疾患、びまん性レビー小体病、鬱血性拡張型心筋症、基底核疾患、中年ダウン症候群、ＣＮＳドーパミンブロッカーによって誘導される運動障害、薬剤感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌症、喉頭蓋炎、エプスタイン・バー・ウイルス感染、皮膚紅痛症、錐体外路および小脳症状、家族性血球貪食性リンパ組織球症、胎児胸腺移植片拒絶、フリートライヒ運動失調症、末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス・フレグモーネ、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意の臓器または組織移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物による肉芽腫、毛様細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植片拒絶、ヘモクロマト−シス、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、索枝不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶニューロパシー、ホジキン病、多動運動障害、過敏性反応、過敏性関��間質性肺炎、高血圧、運動不足による運動障害、視床下部−下垂体−副腎軸の検査、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体仲介性細胞傷害、無力症、幼児期筋萎縮症、大動脈炎症、インフルエンザウイルスＡ、電離放射線への曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血／再灌流誘導性障害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植片拒絶、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮膚脊髄損傷、脂肪性浮腫、肝移植片拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性疾患、偏頭痛、多発性全身ミトコンドリア障害、混合結合組織疾患、モノクローナルガンマ症、多発性骨髄腫、多発性全身変性症（メンセル、デジェリン・トーマス、シャイ・ドレーガーおよびマシャド・ジョセフ）、重症筋無力症、細胞内マイコバクテリウム・アビウム、結核菌、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血性疾患、鼻咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性障害、神経原性筋萎縮症I、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹大動脈分岐部閉塞、動脈閉塞性疾患、ＯＫＴ３（登録商標）治療、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植片拒絶、膵癌、傍腫瘍性疾患／腫瘍関連高カルシウム血症、副甲状腺移植片拒絶、骨盤炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性動脈硬化（アテローム性動脈硬化）疾患、末梢血管性疾患、腹膜炎、悪性貧血、カリニ肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパシー、臓器肥大、内分泌疾患、モノクローナル形質細胞増殖障害および皮膚変化）、灌流後症候群、ポンプヘッド症候群、開心術後梗塞後症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射療法、レイノー現象および疾患、レイノー病、レフサム病、規則的ナローＱＲＳ頻拍、腎血管高血圧、再灌流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症疾患、老人性舞踏病、レビー小体認知症、血清陰性関節炎、ショック、鎌形細胞疾患、皮膚同種移植片拒絶、皮膚変化、小腸移植片拒絶、固形腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌筋炎、小脳構造損傷、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管梅毒、全身性アナフィラキシー、包括的全身性炎症反応症候群、全身型若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓症、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、過敏性反応ＩＩＩ型、過敏性反応ＩＶ型、不安定性狭心症、尿毒症、尿敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈性疾患、静脈性血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス（ｖｉｔａｌ）脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス血球貪食性症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意の臓器または組織に関する異種移植片拒絶、急性冠動脈症候群、急性特発性多発神経炎、急性炎症性脱ミエリン化神経根ニューロパシー、急性虚血、成人型スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、冠動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に関連する自己免疫性障害、自己免疫性腸疾患、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（Ａ��ＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性未成熟卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心臓血管疾患、破局性抗リン脂質症候群、セリアック病、頸椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを伴う臨床単離症候群（ｃｉｓ）、結膜炎、小児期精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病網膜症、糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板逸脱、薬剤誘導性免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼球陥入、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ仲介性アレルギー、自己免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱ミエリン病、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、特発性肺線維症／通常型間質性肺炎、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病またはクスマウル・マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、大理石様皮膚、黄斑変性症、顕微鏡的多発血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン病、粘膜性類天疱瘡、多発性臓器不全、重症筋無力症、脊髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、ニューロパシー、非Ａ、非Ｂ肝炎、視神経炎、骨溶解症、卵巣癌、少数関節ＪＩＡ、末梢動脈閉塞性疾患、末梢血管疾患、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛症、白毛症、多関節型若年性特発性関節炎、多発性内分泌不全、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、ポストポンプ症候群、原発性パーキンソン症、前立腺および直腸癌および造血性悪性疾患（白血病およびリンパ腫）、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、ざ瘡、膿疱症、骨増殖症および骨炎）、強皮症、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨症、続発性副腎不全、シリコン関連結合組織疾患、スネドン・ウィルキンソン病、強直性脊髄炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、全身性炎症反応症候群、頭蓋動脈炎、トキソプラズマ属鼻炎、中毒性表皮壊死症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体関連周期性症候群）、アレルギー反応Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、蕁麻疹、通常型間質性肺炎、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性症、創傷治癒、およびエルシニア属またはサ
ルモネラ属関連関節症より選択される、請求項４８記載の治療法。
【請求項５０】
ＴＮＦ−α阻害剤の投与をさらに含む、請求項４９記載の治療法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
序論
免疫グロブリン（Ｉｇ）とも称される抗体は、可溶性血液または間質液糖タンパク質であり、脊椎動物亜門（Ｖｅｒｔｅｂｒａｔａ）の体液性免疫において重要な役割を演じる。抗体は、多様な構造の外来性（ｆｏｒｅｉｇｎ）生物学的および化学的物質（抗原）に反応して、Ｂ細胞によって産生される。特定の抗原に対して高い特異性および高いアフィニティがあり、そして限定されない抗原レパートリーに対して抗体を産生することが可能であるため、抗体およびその誘導体は、基礎および応用医学研究の両方において用いられる最も重要な試薬の１つである。
【０００２】
古典的な抗体［１、２］は、巨大な多量体タンパク質（ＩｇＧ  〜１５０ｋＤａ）によって代表され、これは、２つの同一の重鎖Ｈ鎖（１つの可変ＶＨドメイン、３つの定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３、ならびにＣＨ１およびＣＨ２の間のヒンジドメイン）および２つの同一の軽鎖Ｌ鎖（可変ドメインＶＬおよび定常ドメインＣＬで構成される）を含む。４鎖分子は、鎖を連結する非共有および共有（ジスルフィド）結合を有する。パパイン・プロテアーゼを用いて、抗体分子を２つの断片：Ｆａｂ（抗原結合断片）およびＦｃ（結晶化可能断片）に分解することも可能である。したがって、分子の１つの領域（Ｆａｂ）は抗原に関連する特異性を定義し、そして別の領域（Ｆｃ）は抗原排除をターゲティングするエフェクター機能を発揮する［３、４］。Ｈ鎖のＣＨ１およびＣＨ２ドメインは、ヒンジ領域によってスペースが空けられ、これはＦａｂ領域の可動性およびＩｇＧ分子と、細胞上に曝露されたＩｇエフェクター受容体の相互作用を保証する。ＣＨ２ドメインは、細胞活性化（ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ）を仲介するＦｃγ受容体、ならびに補体系分子（ＣＤＣ）と結合する領域を含有する。さらに、このドメインは、すべての免疫グロブリン・アイソタイプに関して、炭水化物の付着点である部位を含有する。ＣＨ３ドメインは、ＩｇＧ二量体の安定性をかなり決定し、そして細胞表面上のＦｃＲｎ受容体と相互作用して、抗体の薬物動態特性を確立するとともに、その代謝および体内での分布を確立する。重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）の組み合わせが抗原結合断片を形成し、一方、可変ドメインのフレームワーク領域および定常ドメインは、抗原認識に直接には関与しない。古典的抗体の最小限のＦａｂ誘導体は、一本鎖構築物であり、ここで重鎖および軽鎖の可変ドメインが、リンカー配列によって連結される（ｓｃＦｖ）。
【０００３】
ラクダ科（Ｃａｍｅｌｉｄａｅ）動物（ラクダ（ｃａｍｅｌ）、ラマ（ｌｌａｍａ）、ビクーナ（ｖｉｃｕｎａ））の血中に、単純化された構造の特異的非古典的抗体がかなりの量で見出されたことは、価値ある発見であった［５］。こうした抗体（重鎖抗体、ＨＣＡｂ）は、二量体性の単一の短縮重鎖（ＣＨ１ドメインを含まない）からなり、軽鎖をまったく含まない。ＨＣＡｂの抗原結合断片は、１つの重鎖可変ドメイン（ＶＨＨ）のみによって形成され、該ドメインはヒンジ領域を通じてＦｃドメインに連結される。かなりしばしば、ＶＨＨは単一ドメイン抗体、「ナノボディ」、「ミニ抗体」または「ナノ抗体」と呼ばれる。サイズが小さい（１２〜１５ｋＤａ）ことに加えて、こうした単離単一ドメイン構造は、古典的ＩｇＧ抗体に比較していくつかの利点、すなわち、凝集、化学的および熱的安定性を有するようであった。ＶＨＨ抗体は、細菌および酵母細胞において、成功裡にクローニングされ、そして発現されることも可能である。前記の特性を有するため、これらの抗体は、Ａｂｌｙｎｘ社によって療法に向けて開発され、そして実験および産業クロマトグラフィ（ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔアフィニティ製品）に向けて開発された。
【０００４】
単一Ｉｇ重鎖の二量体を含む重鎖は、ラクダ科の多様な代表から得られる血清中の免疫グロブリンを電気泳動分析することによって、最初に発見された［５］。ＨＣＡｂの相対分画は、ラマおよびビクーナの約１５〜２５％（すべてのＩｇＧのうち）からラクダの６０〜８０％まで多様である［６］。
【０００５】
非古典的ＨＣＡｂは、少なくともラクダ科の場合、古典的抗体の遺伝子の比較的最近の進化から生じたと仮定される。２つの重鎖定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３は、ＨＣＡｂおよび古典的抗体の場合、非常に保存されている。ＨＣＡｂには、古典的抗体の第一の定常ドメインＣＨ１に対応するドメインはない。ヒトコブラクダ（ｄｒｏｍｅｄａｒｙ）ゲノムは、約５０のＶＨおよび４０のＶＨＨ生成遺伝子のクラスターのあとに、Ｄセグメント、Ｊセグメントの複数の遺伝子、および定常領域（Ｃμ、Ｃγ、ＣεおよびＣα）をコードする遺伝子を含有する。いくつかのＣγ遺伝子が、ＨＣＡｂ（ＣＨ１ドメインの喪失を生じる突然変異）を形成するように働き、そして他のものが古典的抗体を形成するように働く（残ったＣＨ１ドメインとともに）ことが明らかである。ＤおよびＪセグメントの同じ遺伝子が、ＶＨ遺伝子の１つまたはＶＨＨ遺伝子の１つのいずれかにランダムに連結されることも可能である。これは、ＶＨおよびＶＨＨ遺伝子が同じ遺伝子座に位置することを示す［７〜１０］。
【０００６】
ＩｇＧ３サブクラスのヒトＶＨドメインが、ラクダ科ＶＨおよびＶＨＨに高い相同性を有するように、非古典的抗体の可変ドメイン（ＶＨＨ）および古典的抗体の可変ドメイン（ＶＨ）の構成は、非常に類似である。どちらの場合でも、Ｖドメインは３つの超可変相補性決定領域（ＣＤＲ）を取り巻く４つの保存的フレームワーク領域ＦＲを含む。さらに、どちらの場合でも、免疫グロブリンＶドメインに典型的な３Ｄ構造は２つのβ層で形成され、このうち１つは４つのアミノ酸配列、そしてもう１つは５つのアミノ酸配列を含む［１１、１２］。この構造において、すべての３つのＣＤＲは、Ｖドメインの片側にクラスターを形成し、ここで、これらは抗原認識に関与し、そしてβ構造を連結するループ中に位置する。しかし、単一ドメインＶＨＨの機能に関連するいくつかの重要な特徴がある。したがって、ＶＨＨのＣＤＲ１およびＣＤＲ３は有意に拡大している。ＶＨＨの相補性決定領域は、しばしば、同時に２つの断片にシステイン残基を含有する（通常、ＣＤＲ１およびＣＤＲ３において、より少なくは、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３において）。ＶＨＨ結晶構造の研究によって、これらのシステイン残基はジスルフィド結合を形成し、そしてこれらの抗体のループ構造にさらなる安定性を提供することが示されてきている［１２］。ＶＨＨを区別する、最も強いそして再現性がある特徴は、第二のフレームワーク領域における、疎水性アミノ酸残基の親水性残基による４つの置換によって代表される（Ｋａｂａｔ番号付けにしたがって、Ｖａｌ３７Ｐｈｅ、Ｇｌｙ４４Ｇｌｕ、Ｌｅｕ４５Ａｒｇ、Ｔｒｐ４７Ｇｌｙ［１３］）。ＶＨドメインのこのフレームワーク領域は、非常に保存されており、疎水性アミノ酸残基が豊富で、そして軽鎖可変ドメインＶＬへの連結に必須である。ＶＨＨドメインは、この側面で非常に異なる：疎水性アミノ酸を親水性アミノ酸で置換すると、ＶＨＨおよびＶＬの会合は不可能になる。これらの置換はまた、組換えタンパク質として得た際のＶＨＨ（ナノ抗体）の高い可溶性も説明する［１４］。
【０００７】
ＨＣＡｂおよび古典的抗体に関してありうるパラトープ（抗体の抗原結合部分）のレパートリーは、有意に異なりうるようである。これらの２つの抗体タイプは、同じ生物において同時に存在するため、これらは競合せず、互いに相補すると仮定されうる。例えば、両方の抗体タイプが、まさに同じ動物の免疫に際して、抗原物質の多様なエピトープに関して、平行して、排他的にまたは異なる比で存在可能であることが、繰り返し注目された。古典的２ドメイン抗体に比較して、単一ドメイン抗体に関しては、より低い多様性のパラトープしか可能でないと推測されるにもかかわらず、多くの刊行物は、かなり広範囲の抗原の大部分の多様なエピトープに対して、ＨＣＡｂが得られうることを明らかに立証してきている［１５］。これは、拡大されたＣＤＲ１およびＣＤＲ３領域のためであるようである。本発明者らはまた、免疫中の抗体のアフィニティ（ａｆｆｉｎｅ）成熟中に集積するようである、驚くほど多数（古典的抗体のＶドメインに比較して）のＶＨＨの体細胞高頻度変異にも注目すべきである［１６］。Ｘ線回折分析によって、ＶＨＨの抗原結合ループ領域が古典的Ｖドメインには一般的でない構造を形成可能であることが明らかになった［１２、１６］。古典的抗体のＶＨおよびＶＬドメインの場合、すべての６つのＣＤＲは、抗原結合にほぼ同じくらい寄与する；一方、ＶＨＨの場合、パラトープの形成には、通常、ＣＤＲ３が最も重要である。ＶＨＨのＣＤＲ３は、抗原構造内に進入する（ｄｅｅｐｅｎ  ｉｎｔｏ）ことが可能であり、そして特に酵素の活性部位を検出することが可能である、異常に長いフィンガー構造を形成する（が、ＶＨまたはＶＬ中のＣＤＲ３は不可能である）ことが示されてきている［１２］。ＶＨＨの抗原結合領域が小さいサイズであり、そしてこれが特異に出現するパラトープを形成可能であることは、古典的抗体ではアクセス不能であるエピトープを認識可能なＨＣＡｂがどのように得られうるかを説明する（例えば酵素を効率的に阻害する抗体の産生）［１７］。
【０００８】
古典的ＩｇＧ抗体に比較したユニークな特異性のすべての高い潜在能力のため、単一ドメインＶＨＨの療法的使用は、ときに、生物からの迅速な排除のために限定される。ＶＨＨ構造の薬物動態特性を改善するように設計されたいくつかの解決策があり、これには、ＰＥＧとの化学的コンジュゲート化、およびクリアランス減少を仲介するポリペプチド（例えば、最長３週間の半減期を所持するＨＳＡまたはＦｃ融合タンパク質）への共有結合が含まれる［１８、１９、２０］。組換え技術によってＶＨＨに付着し、そしてヒト血中の前記構成要素（ＨＳＡおよびＩｇＧ）と高アフィニティ非共有相互作用が可能である小分子ペプチドが成功裡に用いられてきている［２１］。しかし、これらのアプローチの技術的有効性および免疫原性は問題があるままであり、そして臨床的または初期研究段階のいずれかで、これらの使用の実現可能性が、現在、研究中である。
【０００９】
さらに、医学的剤として抗体を使用する最大の限界は、その凝集および化学的安定性、アフィニティ、ならびに免疫原性によるものである。モノクローナル抗体の大部分は、ネズミのものに基づいて得られるため、ヒトにおけるこうした抗体の定期的な使用は、抗体療法に対する免疫反応（例えばアレルギー性反応）の発展を引き起こす。これらのタイプの免疫反応は、最終的に、少なくとも有効性の欠如を生じ、そして最悪の場合、潜在的にアナフィラキシー反応を引き起こしうる。他方、凝集または化学的に不安定な療法抗体は、長期間で、薬剤製品の療法特性を減少させ、そしてヒト患者への投与に際して免疫原性を増加させうる。
【００１０】
前述にしたがって、改善された（以前知られる抗体に比較して）機能的および療法的特徴を持ち、特に、凝集、化学的および熱的安定性が増加し、そしてアフィニティが改善され、同時に産業スケールで容易に得られうる、ＶＨＨに基づく抗体を発展させることが重要である。
【背景技術】
【００１１】
本発明の背景は、ＶＨＨドメインを含有する多様な抗体構築物に関する情報を提供する。
ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６６３６８公報は、Ｆｃ断片に連結された別個の可変ドメインを含む抗体を記載する。ナノボディを、ＩｇＥ型抗体から得られるＦｃを含む可変ドメインとして使用可能である。前記ドメインおよびＦｃ断片を、ヒンジドメイン中に位置するリンカーを通じて連結することも可能である。
【００１２】
特許出願ＵＳ  ２００９／０２０２９７９は、ヒト抗体の定常領域に直接連結された、完全ＶＨＨ抗体またはその部分を含む抗体を開示した。
さらに、抗体の物理化学的および生物学的特性に影響を及ぼすアミノ酸置換が知られる。
【００１３】
例えば、出願ＵＳ  ２０１１００２８３４８は、得られる抗体の親水性特性を改善するため、３５、４５、４７、９３〜１００および１００ａの位で、アミノ酸置換が導入された、重鎖可変ドメインを記載する。
【００１４】
ここで、免疫原性を減少させ、そしてその凝集安定性を改善するため、単離ＶＨＨおよびＶＨ単一ドメインの構造を最適化する方法が開発されてきている。
したがって、Ｖｉｎｃｋｅら［２２］は、特徴的なアミノ酸におけるＧｌｕ−４９→ＧｌｙおよびＡｒｇ−５０→Ｌｅｕ置換が、より安定であるがより可溶性でない新規ドメインの獲得を生じることを見出してきている。フレームワーク領域ＦＲ−２における他の置換、Ｐｈｅ−４２→ＶａｌおよびＧｌｙ／Ａｌａ−５２→Ｔｒｐは、Ｈ３ループの再配向のため、抗原に対する抗体アフィニティに非常に重要であり、解離定数は６〜１０倍増加する（６．８５・１０−３  １／秒）。Ｐｈｅ−４２→Ｖａｌ置換は、得られる抗体の安定性減少を引き起こした。ＶＨ配列中のＧｌｙ−４９およびＬｅｕ−５０の置換は、ドメインのより低い安定性を生じる一方、ＶＨＨにおけるＧｌｕ−４９およびＡｒｇ−５０のヒト化は、安定可変ドメインの獲得を可能にする。
【００１５】
文献から、古典的ＶＨＨのコンホメーションのシェイディング効果を中和する短いＨＣＤＲ３領域の存在下で、そしてＶＨに特徴的なＴｒｐ−４７→Ｇｌｙ−４７置換、ならびにＴｙｒ−３７→Ｖａｌ−３７、Ｇｌｕ−４→Ｇｌｙ−４４およびＡｒｇ−４５→Ｌｅｕ−４５の導入に際して、単離されたＶＨＨドメインは、ＶＪドメインに結合する能力を再生することが知られる［２４］。
【００１６】
古典的ＩｇＧ構造の療法抗体の凝集安定性増加およびその免疫原性減少の間の関係は、多くの研究において立証され、そしてＨｅｒｍｅｌｉｎｇら、２００４［２５］による概説に要約された。にもかかわらず、ＶＨＨドメインを含むが、全長ヒトＩｇＧ内の軽鎖可変ドメインに連結されたことがわかった抗体はなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０６６３６８
【特許文献２】ＵＳ  ２００９／０２０２９７９
【特許文献３】ＵＳ  ２０１１００２８３４８
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Vincke C1, Loris R, Saerens D, Martinez-Rodriguez S, Muyldermans S, Conrath K. 2009 General strategy to humanize a camelid single-domain antibody and identification of a universal humanized nanobody scaffold. J Biol Chem. Jan 30; 284(5): 3273-84..
【非特許文献２】Conrath K, Vincke C, Stijlemans B, Schymkowitz J, Decanniere K, Wyns L, Muyldermans S, Loris R. Antigen binding and solubility effects upon the veneering of a camel VHH in framework-2 to mimic a VH. J Mol Biol. 2005 Jul 1; 350 (1): 112-25.
【非特許文献３】Hermeling S, Crommelin DJ, Schellekens H, Jiskoot W (2004) Structure-immunogenicity relationships of therapeutic proteins. Pharm Res 21:897-903
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
したがって、改善された安定性およびアフィニティ、優れた発現および低い免疫原性を有する抗体の新規形式の開発が必要である。
さらに、得るのが容易であり、改善された凝集安定性、増加したアフィニティおよび哺乳動物細胞培養中での高発現レベルを有する分子の開発に関して、以前記載されたアプローチはなかった。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
先の言及にしたがって、本発明は、天然のものに類似である（そしてしたがって低い免疫原性を有する）が、改善された凝集安定性、増加したアフィニティ、および療法モノクローナル抗体の構造を有する構築物の形成を生じる、全長ヒトＩｇＧの軽鎖の可変ドメインに結合可能なＶＨＨ誘導体を含む抗体を記載する最初のものである。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】ＶＨＨに基づく凝集耐性抗体の発展および最適化に関するフローチャート。
【図２−１】多様なアミノ酸置換を含むＶＨＨＩｇＧ１を用いたＳＤＳ−ＰＡＧＥ。
【図２−２】多様なアミノ酸置換を含むＶＨＨＩｇＧ１を用いたＳＤＳ−ＰＡＧＥ。
【図２−３】多様なアミノ酸置換を含むＶＨＨＩｇＧ１を用いたＳＤＳ−ＰＡＧＥ。
【図３】ラマ・コンビナトリアルＦａｂライブラリー合成のフローチャート。
【図４】ファージディスプレイＦａｂライブラリーのクローニングのためのファージミド。
【図５−１】図５Ａ〜Ｃ。ＩＬ−１７Ａとの結合に関するＶＨＨ  Ｆａｂクローンの比較動力学的パラメータを試験するために得たセンソグラム。
【００２２】
図５Ａ。ヒトＩＬ−１７Ａに対して特異的なＦａｂ内のラマ可変ＶＨＨドメインの配列。
図５Ｂ。ヒトＩＬ−１７Ａに対して特異的な３ＶＨＨＦａｂ内のラマ軽鎖可変ドメインの配列。
【００２３】
図５Ｃ。ＩＬ−１７Ａとの結合に関して、ＶＨＨ  Ｆａｂクローンの比較動力学パラメータを試験するために得たセンソグラム。
【図５−２】図５Ａ〜Ｃ。ＩＬ−１７Ａとの結合に関するＶＨＨ  Ｆａｂクローンの比較動力学的パラメータを試験するために得たセンソグラム。
【００２４】
図５Ａ。ヒトＩＬ−１７Ａに対して特異的なＦａｂ内のラマ可変ＶＨＨドメインの配列。
図５Ｂ。ヒトＩＬ−１７Ａに対して特異的な３ＶＨＨＦａｂ内のラマ軽鎖可変ドメインの配列。
【００２５】
図５Ｃ。ＩＬ−１７Ａとの結合に関して、ＶＨＨ  Ｆａｂクローンの比較動力学パラメータを試験するために得たセンソグラム。
【図６−１】図６Ａ。３つの異なるＶＨＨ突然変異体に関するアミノ酸配列。
【００２６】
図６Ｂ。３つのＶＨＨ突然変異体の凝集安定性。
図６Ｃ。３つのＶＨＨ突然変異体のアフィニティ。
【図６−２】図６Ａ。３つの異なるＶＨＨ突然変異体に関するアミノ酸配列。
【００２７】
図６Ｂ。３つのＶＨＨ突然変異体の凝集安定性。
図６Ｃ。３つのＶＨＨ突然変異体のアフィニティ。
【図６−３】図６Ａ。３つの異なるＶＨＨ突然変異体に関するアミノ酸配列。
【００２８】
図６Ｂ。３つのＶＨＨ突然変異体の凝集安定性。
図６Ｃ。３つのＶＨＨ突然変異体のアフィニティ。
【図６−４】図６Ａ。３つの異なるＶＨＨ突然変異体に関するアミノ酸配列。
【００２９】
図６Ｂ。３つのＶＨＨ突然変異体の凝集安定性。
図６Ｃ。３つのＶＨＨ突然変異体のアフィニティ。
【図６−５】図６Ａ。３つの異なるＶＨＨ突然変異体に関するアミノ酸配列。
【００３０】
図６Ｂ。３つのＶＨＨ突然変異体の凝集安定性。
図６Ｃ。３つのＶＨＨ突然変異体のアフィニティ。
【図７】ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ４Ｂ１１、ｍｕｔ１ＶＨＨＩｇＧ１およびｍｕｔ４ＶＨＨＩｇＧ１アンタゴニストでＩＬ−１７Ａを阻害することによる、ＩＬ−６産生抑制のための細胞試験。
【図８−１】ヒト軽鎖を含むｍｕｔ４ＶＨＨＦａｂのキメラ変異体の単離。
【図８−２】ヒト軽鎖を含むｍｕｔ４ＶＨＨＦａｂのキメラ変異体の単離。
【図９】ｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ３ｃ８、ｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ１Ａ７およびｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ４Ｅ１２アンタゴニストでＩＬ−１７Ａを阻害することによる、ＩＬ−６産生抑制のための細胞試験。
【図１０−１】ｍ４  ＶＨＨｃ８の４４位および４５位に突然変異を有する抗体を含む産物に関して行った、変性条件下でのタンパク質電気泳動。
【図１０−２】ｍ４  ＶＨＨｃ８の４４位および４５位に突然変異を有する抗体を含む産物に関して行った、変性条件下でのタンパク質電気泳動。
【図１１】４４位および４５位でＦＲ２中に突然変異を含むｍ４ＶＨＨｃ８でＩＬ−１７Ａを阻害することによる、ＩＬ−６産生抑制に関する比較細胞試験。
【図１２】軽鎖および重鎖可変ドメインの相互作用を決定する、ｍ４ＶＨＨｃ８のＦＲ２中の４４位および４５位での異なる突然変異の安定性および機能特性を示す図。
【図１３−１】図１３Ａ。多様な起源のＩＬ−１７ＡとのＢＣＤ１０９相互作用の動力学的パラメータの決定（Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６装置を用いて試験を行った）。
【００３１】
図１３Ｂ。多様な起源のＩＬ１７ＡとのＢＣＤ１０９相互作用の動力学的パラメータに関して得た結果（Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６装置を用いて試験を行った）。
【図１３−２】図１３Ａ。多様な起源のＩＬ−１７ＡとのＢＣＤ１０９相互作用の動力学的パラメータの決定（Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６装置を用いて試験を行った）。
【００３２】
図１３Ｂ。多様な起源のＩＬ１７ＡとのＢＣＤ１０９相互作用の動力学的パラメータに関して得た結果（Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６装置を用いて試験を行った）。
【図１４】熱ストレス前および後のＢＣＤ１０９抗体で得たクロマトグラム。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
定義
「モノクローナル抗体」は、本明細書において、本出願に別に言及しない限り、ラマから得られる抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト抗体に関する。例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術あるいはこれらまたは先行技術から周知の他の技術の組み合わせを用いて、本発明記載のモノクローナル抗体を産生することも可能である。
【００３４】
「モノクローナル抗体」は、その産生法自体よりも、例えば、任意の真核、原核またはファージクローンを含む単一コピーまたはクローンから得られる抗体を指す。「モノクローナル抗体」は、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）抗体（完全または全長Ｆｃ領域）、実質上損なわれていない抗体、抗原結合領域を含む抗体部分または断片、例えばラマ、あるいはキメラ、ヒト化またはヒト抗体由来のＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片またはＦ（ａｂ’）２断片であってもよい。「Ｆａｂ」断片は、可変軽鎖ドメインおよび定常軽鎖ドメイン、ならびに可変重鎖ドメインおよび第一の定常重鎖ドメイン（ＣＨ１）を含む。「Ｆ（ａｂ’）２」抗体断片は、大部分、Ｃ末端領域でヒンジシステイン残基によって共有結合される、Ｆａｂ断片対を含有する。抗体断片間の他の化学結合もまた、最新技術から周知である。
【００３５】
さらに、「モノクローナル抗体」は、本明細書において、リンカー配列を伴って、ＶＨＨおよびＶＬをコードするＤＮＡを結合させることによって得られうる、一本鎖Ｆｖであることも可能である。タンパク質は、ターゲット（例えばエピトープまたは抗原）に特異的であるかまたは好ましい結合の能力を維持する限り、用語「抗体」に含まれる。抗体は、グリコシル化されていてもまたはされていなくてもよく、そして本発明の枠内にある。
【００３６】
用語「誘導体」または抗体「変異体」は、本明細書において、親抗体の配列における、１またはそれより多いアミノ酸残基の付加、欠失および／または置換によって、親配列と異なるアミノ酸配列の分子を指す。好ましい態様において、抗体は、親抗体のＦＲまたはＣＤＲ領域中に、少なくとも１つ（例えば、１〜約１０、好ましくは２、３、４、５、６、７または８）のアミノ酸置換を含有する。本出願は、変異体抗体の配列に関する同一性または相同性を、配列を整列させ、そして必要な場合、最大の割合の同一配列を達成するために、切断した後、親抗体中の残基に同一である、アミノ酸残基の割合と定義する。
【００３７】
抗体誘導体（親のもの由来）は、親抗体が結合するのと同じ抗原、または好ましくはエピトープに結合する能力を維持するか、あるいは好ましくは親抗体のものを超える少なくとも１つの特性または生物学的活性を示す。例えば、抗体は、好ましくは、親抗体に比較して、より優れた凝集安定性、より強いアフィニティ、改善された薬物動態または抗原生物学的活性を阻害する増加した能力を有する。
【００３８】
用語「ＶＨＨ誘導体」は、本明細書において、そのアミノ酸配列が、親抗体の配列中の１またはそれより多いアミノ酸残基の置換によって、親ＶＨＨ抗体の配列と異なる、ＶＨＨ抗体の誘導体を指す。好ましい態様において、ＶＨＨ抗体は、親抗体のＦＲまたはＣＤＲ領域において、少なくとも１つ（例えば、１〜約１０、好ましくは２、３、４、５、６、７または８）のアミノ酸置換を含有する。
【００３９】
抗体誘導体は、親抗体が結合するのと同じ抗原、または好ましくは同じエピトープに結合する能力を維持するか、あるいは好ましくは、親抗体のものを超える少なくとも１つの特性または生物学的活性を示す。例えば、抗体は、好ましくは、親抗体に比較して、より優れた凝集安定性、より強いアフィニティ、改善された薬物動態または抗原生物学的活性を阻害する増加した能力を有する。
【００４０】
「親ＶＨＨ抗体」または「最初のＶＨＨ抗体」または「野生型ＶＨＨ抗体」は、本明細書において、ＶＨＨ変異体を産生するために用いたアミノ酸配列でコードされる、免疫または非免疫ラクダ科動物から単離されたＶＨＨ抗体を指す。親抗体は、ラクダ科から生じるフレームワーク配列（ＶＨＨ可変ドメインに関して）を有してもよいが、好ましくは軽鎖可変ドメインのフレーム配列は、完全にまたは実質的にヒト起源のものである。
【００４１】
「親」、「最初の」または「野生型」抗体は、本明細書において、変異体を産生するために用いた、アミノ酸配列でコードされる抗体を指す。親抗体は、ラクダ科から生じるフレームワーク配列（ＶＨＨ可変ドメインに関して）を有してもよいが、好ましくは軽鎖可変ドメインのフレーム配列は、完全にまたは実質的にヒト起源のものである。
【００４２】
本明細書において、用語「特異的に結合する」は、特異的結合プロセスに関与する１つのパーティが、特異的結合パートナー（単数または複数）以外の分子に有意に結合しない状況を指す。この用語はまた、例えば本発明記載の抗体の抗原結合部位が、いくつかの抗原によって所持される特定のエピトープに特異的である場合にも当てはまる；この場合、抗原結合部位を有する特異的抗体は、多様なエピトープ所持抗原と特異的に結合可能であろう。したがって、本発明記載のモノクローナル抗体は、ヒトＩＬ−１７（ＩＬ−１７Ａ）に特異的に結合する一方、ヒトＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７ＤまたはＩＬ−１７Ｅには特異的に結合しない。さらに、本発明のモノクローナル抗体は、ヒトＩＬ−１７およびカニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）由来のＩＬ−１７に特異的に結合するが、ラットＩＬ−１７またはネズミＩＬ−１７のいずれにも特異的に結合しない。
【００４３】
本明細書において、用語「好ましく結合する」は、先行技術から知られる方法（例えば競合的ＥＬＩＳＡまたはＯｃｔｅｔ装置を用いて得られるＫＤ測定）にしたがって測定した際、抗体が、任意の他の抗原に結合するよりも、少なくとも２０％多く、好ましくは約５０％、あるいは２倍、２０倍、５０倍または１００倍多く、特異的抗原に結合する状況を指す。抗体は、好ましくは、抗原内の１つのエピトープに結合可能であるが、同じ抗原の別のエピトープに結合しない。したがって、本発明の抗体は、好ましくはヒトＩＬ−１７に結合するがウサギＩＬ−１７に結合しない。
【００４４】
本明細書において、用語「エピトープ」は、抗体の１つまたはいくつかの抗原結合部位を通じて、抗体によって認識され、そして抗体に結合することが可能な分子部分を指す。エピトープは、しばしば、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的表面活性基を含み、そして特定の３Ｄ構造特性を有する。「阻害エピトープ」および／または「中和エピトープ」は、損なわれていない抗原分子の背景におけるように、そして前記エピトープに特異的な抗体に結合して、該分子または該分子を含有する生物の活性のｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ喪失または減少を引き起こす、エピトープを意味する。
【００４５】
本明細書において、用語「エピトープ」はまた、動物において、好ましくは哺乳動物において、例えばマウスおよびヒトにおいて、抗原性および／または免疫原性活性を有する、ポリペプチド断片を指す。用語「抗原性エピトープ」は、本明細書において、抗体に特異的に結合可能であり、そして先行技術から周知の任意の技術によって（例えば標準的イムノアッセイによって）検出可能である、ポリペプチド断片である。抗原エピトープは、免疫原性である必要はないが、免疫原性を所持しうる。「免疫原性エピトープ」は、本明細書において、先行技術の任意の方法によって決定されるように、動物において抗体反応を誘発するポリペプチド断片と定義される。「非直鎖エピトープ」または「コンホメーションエピトープ」は、エピトープ特異的抗体と結合する、抗原タンパク質内の非隣接ポリペプチド（アミノ酸）を含有する。
【００４６】
本発明記載の抗体を指して表現される「機能的活性」または「機能的特性」あるいは用語「生物学的活性」または「活性」は、本明細書において交換可能に用いられ、そして限定されるわけではないが：エピトープ／抗原アフィニティおよび特異性；ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏでＩＬ−１７を中和するかまたはＩＬ−１７に対するアンタゴニストである能力；ＩＣ５０；抗体安定性ならびに抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ免疫原性を含む。先行技術から同定された、他の生物学的特性または抗体特性には、例えば、交差反応性（すなわちターゲットペプチドの非ヒト相同体と、あるいは他のタンパク質またはターゲットとの反応）および哺乳動物細胞における高レベルのタンパク質発現を保持する能力が含まれる。先行技術において認識される方法を用いて、前述の特性または特徴を観察するか、測定するか、または評価することも可能であり、これには、限定されるわけではないが、ＥＬＩＳＡ、競合的ＥＬＩＳＡ、Ｏｃｔｅｔ分析、限定なしにｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏの中和アッセイ、受容体結合、サイトカインまたは増殖因子の産生および／または放出、シグナル伝達、ならびにヒト、霊長類または任意の他の供給源を含む多様な供給源から得られた組織切片の免疫組織化学的研究が含まれる。
【００４７】
「モノクローナル抗体」集団は、本明細書において、均質なまたは本質的に均質な抗体集団を指す（すなわち、集団中の抗体の少なくとも９６％、だがより好ましくは約９７または９８％以上、またはさらに好ましくは少なくとも９９％が、ＥＬＩＳＡにおいて、同じ抗原／エピトープに関して競合するであろうし、あるいはさらに好ましくは、抗体はそのアミノ酸配列に関して同一である）。
【００４８】
天然全長抗体は、ジスルフィド結合を通じて連結される、４つのポリペプチド鎖（全長に関しては、約５０〜７０ｋＤａの２つの重鎖Ｈ鎖、および全長に関しては約２５ｋＤａの２つの軽鎖Ｌ鎖）を含む免疫グロブリン分子によって示される。各鎖のアミノ末端部分は、抗原結合に関与する約１００〜１１０またはそれより多いアミノ酸の可変ドメインを含む。各鎖のカルボキシル末端ドメインは、エフェクター機能に最も関与する定常領域を決定する。軽鎖は、カッパおよびラムダと分類され、そして特異的定常領域を有する。各軽鎖は、可変Ｎ末端軽鎖領域（以後、ＶＬまたはＶＫと称される）および単一ドメインからなる定常軽鎖領域（ＣＬまたはＣＫ）を含むことで特徴付けられる。重鎖は、γ、δ、α、μおよびεと分類され、そして免疫グロブリンのクラス：それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥを定義し；このうちいくつかはサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分割可能である。各重鎖タイプは、特異的定常領域Ｆｃによって特徴付けられる。各重鎖は、可変Ｎ末端領域（以後、ＶＨと称する）および定常領域ＣＨを含む。定常重鎖領域は、ＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＡに関して、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）、そしてＩｇＭおよびＩｇＥに関して、４つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４）からなる。ＶＨ、ＶＨＨおよびＶＬはまた、より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）が散在する、いわゆる超可変領域（相補性決定領域、ＣＤＲ）に分割可能である。各可変ドメインは、Ｎ末端からＣ末端に以下の順で配置されている３つのＣＤＲおよびＦＲを含む：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４。
【００４９】
本出願において、３つの重鎖ＣＤＲは、「ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３」と称され、一方、３つの軽鎖ＣＤＲは、「ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３」と称される。ＣＤＲは、抗原と特異的に相互作用するアミノ酸残基の大部分を含有する。ＣＤＲ残基は、Ｋａｂａｔ番号付けスキームにしたがって番号付けされ、そして位置づけられる。
【００５０】
用語「抗原」は、抗体が反応性でありうる抗原ターゲットを指し；本明細書において、この技術分野において、専門家が使用するのと同じように用いられ、そして限定されるわけではないが、ポリペプチド、ペプチド、多糖、糖タンパク質、ポリヌクレオチド（例えばＤＮＡ）、または化学抗原、受容体またはインターロイキンを含む。インターロイキンには、多様な群のインターロイキンが含まれることも可能であり、例えばインターロイキン１（アルファおよびベータ）、インターロイキン２、インターロイキン３、インターロイキン４、インターロイキン５、インターロイキン６、インターロイキン７、インターロイキン８、インターロイキン９、インターロイキン１０、インターロイキン１１、インターロイキン１７、インターロイキン１８およびインターロイキン３３が含まれる。
【００５１】
用語「抗原」はまた、本発明の抗体を産生する目的で、動物（例えばラマ）の免疫のために用いられる物質を記載するよう用いられることも可能である。この背景において、「抗原」は、より広い意味を有することも可能であり、そして抗原の精製型、ならびに未精製であるか、または完全に単離されていない、または精製されていない抗原産物、例えば細胞、細胞溶解物、または上清、細胞分画、例えば細胞膜等を、タンパク質キャリアーとコンジュゲート化された添加ハプテンとともに、含むことも可能である。免疫に用いる抗原は、必ずしも本発明の抗体が最終的に結合可能である抗原ターゲットと構造的に同一の抗原を意味しない。通常、免疫に用いる抗原は、抗原ターゲットの小型化されたバージョンであり、例えば免疫原性エピトープを含む断片である。免疫に用いる抗原に関するさらなる詳細は、文献に記載され、そしてこの技術分野の専門家によく知られている可能性もある。
【００５２】
各軽鎖／重鎖対の可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。したがって、損なわれていないＩｇＧ抗体は、２つの結合部位を有する。二重官能性または二重特異性抗体を除いて、２つの結合部位は同一である。本出願にしたがって、「抗原結合領域」または「抗原結合部位」、または「抗原結合ドメイン」は、交換可能であり、本明細書において、抗原と相互作用し、そして抗体に、抗原に対する特異性およびアフィニティを与えるアミノ酸残基を含む、抗体領域を指す。この抗体断片には、抗原結合残基の適切なコンホメーションを維持するために必要なフレームアミノ酸残基が含まれる。
【００５３】
好ましくは、本発明の抗体のＶＨＨ抗原結合領域のＣＤＲまたは全抗原結合領域は、完全にラクダ科から生じるか、または実質的にラクダ科起源のものであり、そして抗体の特定の特性（例えばＫＤ、ＫｏｆｆまたはＩＣ５０）を改善するために変更された、例えば多様なアミノ酸残基（例えば表６を参照されたい）で置換された特定のアミノ酸残基を含む。好ましくは、本発明にしたがった抗体フレームワーク領域は、ラクダ科起源またはヒト起源のもの、あるいは実質的にヒト起源のもの（少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％ヒト起源のもの）であり、そしてＫａｂａｔ番号付けにしたがう。
【００５４】
「抗体断片」は、抗体断片または全長抗体の活性を有する抗体断片によって示されうる。前記抗体断片は、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ  ＦｖおよびｓｃＦｖによって示されうる。
【００５５】
「インターロイキン１７」はまた、「ＩＬ−１７」または「ＩＬ−１７Ａ」とも称され、２０〜３０ｋＤホモ二量体糖タンパク質である。ヒトＩＬ−１７の遺伝子は、１５５アミノ酸からなり、そして１９アミノ酸シグナル配列および１３６アミノ酸成熟セグメントを有するタンパク質をコードする。ヒトＩＬ−１７Ａのアミノ酸配列は、ウサギ、マウスおよびラットのアミノ酸配列に、それぞれ、８０％、６３％および５８％類似である。ヒトＩＬ−１７Ａのアミノ酸配列は、カニクイザルＩＬ−１７Ａに９７％同一である。
【００５６】
用語「抗体」は、本発明の抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体（以後、「本発明の抗体」と称される）に関して適用された際、本明細書において、モノクローナル抗体を意味する。
【００５７】
本明細書において、用語「阻害する」または「中和する」は、本発明の抗体の活性に関して、限定されるわけではないが、生物学的活性（例えばＩＬ−１７の活性）または特性、疾患または状態を含む、例えば、阻害対象の発展または重症度を、有意にブロックするか、防止するか、制限するか、遅延させるか、停止するか、減少させるかまたは逆転させる能力を意味するものとする。本発明記載の抗体とＩＬ−１７の結合は、ＩＬ−１７活性の、好ましくは、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５％またはそれより高い阻害または中和を生じる。
【００５８】
用語「分離」または「単離」は、核酸またはタンパク質産物（例えば抗体）に関して、天然供給源において、通常は組み合わされている混入物質の少なくとも１つから同定され、そして分離されている核酸分子またはタンパク質分子を指す。好ましくは、「単離抗体」は、特定の抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含有しない抗体である（例えば、本発明の薬学的組成物は、ＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離抗体を含有し、そしてＩＬ−１７Ａ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含有しない）。
【００５９】
用語「Ｋａｂａｔ番号付けスキーム」または「Ｋａｂａｔにしたがった番号付け」は、本明細書において、抗体の重鎖および軽鎖の可変領域における他のアミノ酸残基よりもより可変性である（すなわち超可変性である）アミノ酸残基の番号付けのための系を指す（Ｋａｂａｔら  Ａｎｎ．  ＮＹ  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．，  １９０：３８２−９３（１９７１）；  Ｋａｂａｔら  Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健社会福祉省、ＮＩＨ刊行物、第９１−３２４２（１９９１））。
【００６０】
ポリヌクレオチドは、他のポリヌクレオチドに対する機能的連結を有する場合、「機能的に結合している」。例えば、プロモーターまたはエンハンサーは、コード配列転写に影響を及ぼすならば、該コード配列に機能的に結合している。ポリペプチドは、該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが機能的に結合している場合、好ましくは、同じオープンリーディングフレームに位置する場合、別のポリペプチドに「機能的に結合している」。
【００６１】
用語「ＤＮＡ構築物」は、本明細書において、本発明の抗体をコードするＤＮＡまたはその断片を指す。一般的に、抗体（例えば、本発明の抗体）をコードするＤＮＡまたはその断片は、オープンリーディングフレーム内で、さらなるポリペプチド（例えば別のサイトカインの受容体、例えばＩＬ−２受容体のドメインまたは領域）をコードする少なくとも１つの他のＤＮＡ断片に、機能的に（機能可能であるように）結合しており、そして次いで、適切な発現ベクター内に挿入されている。通常、ＤＮＡ構築物は、特定の抗体部位をコードするいくつかのＤＮＡ断片が、リーディングフレーム内で、機能的に関連して、全抗体またはその機能性断片のいずれかをコードする確実な構築物が得られるような方式で形成される。例えば、ＤＮＡ構築物は、Ｎ末端からＣ末端に抗体をコードする。こうした抗体を発現させ、単離し、そしてその活性に関して評価することも可能である。
【００６２】
用語「ベクター」は、合成で、そしてバイオテクノロジーを通じて得られ、そして特定のそして本分野に知られる配列機能要素のセットを含有する核酸を指す。特定のベクターは、導入された宿主細胞中で自立的に複製可能であり、一方、他のベクターは、宿主細胞ゲノム内に組み込まれ、そして宿主ゲノムと共に複製されることが可能である。さらに、いくつかのベクターは、機能的に結合した遺伝子の発現を仲介することも可能である。本出願において、こうしたベクターは、「組換え発現ベクター」（または「発現ベクター」）と称され；例示的なベクターは先行技術から周知である。
【００６３】
本明細書において、用語「細胞」、「宿主細胞」、「細胞株」および「細胞培養物」は、交換可能であり、そして本発明記載の任意の単離ポリヌクレオチドまたは本発明の抗体の配列を含有する任意の組換えベクター（単数または複数）のレシピエントである、個々の細胞または細胞培養物を指す。宿主細胞は、個々の宿主細胞から得られる世代を含む；世代は、天然、偶発的または意図される突然変異および／または変異のため、元来の宿主細胞に必ずしも完全に同一でなくてもよい（形態または全長ＤＮＡ補体に関して）。宿主細胞には、組換えベクター、あるいは本発明記載のポリヌクレオチドを発現するモノクローナル抗体、またはその重鎖もしくは軽鎖で形質転換されるか、形質導入されるか、または感染した細胞が含まれる。本発明記載の組換えベクターを含有する（宿主染色体に取り込まれていてもまたはいなくてもいずれでも）宿主細胞はまた、「組換え宿主細胞」と呼ばれることも可能である。本発明で用いるべき好ましい宿主細胞は、ＣＨＯ細胞（例えばＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９０９６）、ＮＳ０細胞、ＳＰ２／０細胞、ＣＯＳ細胞（ＡＴＣＣ、例えばＣＲＬ−１６５０、ＣＲＬ−１６５１）およびＨｅＬａ（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）である。本発明で用いるべきさらなる宿主細胞には、植物細胞、酵母細胞、他の哺乳動物細胞および原核細胞が含まれる。
【００６４】
用語、抗体および抗原ターゲット（抗原）の間の「特異的結合」は、免疫学的特異性を指す。抗体は、他の抗原エピトープよりも強く抗原エピトープに結合する場合、抗原ターゲットに特異的に結合可能である。特異的結合は、類似の抗原エピトープを所持する他の抗原との交差反応性を排除しない。
【００６５】
本発明の抗体のＶＬドメインは、ＶＬラムダ型またはＶＬカッパ型のいずれであってもよい。用語「ＶＬドメイン」は、１またはそれより多いアミノ酸置換、挿入または欠失を含有する、ＶＬラムダおよびＶＬカッパ・アイソタイプの両方を含む。
【００６６】
用語「薬学的組成物」は、本発明の抗体の療法的有効量に加えて、賦形剤（キャリアー、希釈剤、ビヒクル、溶媒および他の賦形剤）を含有する配合物および／または組成物を含む。
【００６７】
用語「使用」または「治療」は、本発明の抗体または該抗体を含有する薬学的組成物を用いて、本発明の抗体が結合可能である受容体によって仲介される疾患または障害に関して、疾患を治療するか、その経過を軽減するか、寛解を促進するか、または再発率を減少させる能力を指す。
【００６８】
発明の説明
本発明は、好ましくはＩｇＧ型の、ヒト化モノクローナル抗体であって、増加したアフィニティおよび改善された凝集安定性を有し、可変ドメインが、ＶＨＨ誘導体と軽鎖可変ドメインＶＬの組み合わせによって示される、前記抗体を提唱する。
【００６９】
１つの態様において、本発明の抗体のＶＨＨ誘導体は、４４Ｘ２４５Ｘ３位でアミノ酸置換を含んでもよく、式中、Ｘ２＝Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｓ、Ｔ；Ｘ３＝Ａ、Ｖ、Ｔ、Ｈ；またはその組み合わせである（４４および４５は、アミノ酸置換位を示す）。以後、アミノ酸置換位は、Ｋａｂａｔ番号付けスキームを用いて示される（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／）。
【００７０】
別の態様は、ラクダ科であってもよい免疫動物から単離されたＶＨＨを含む最初のＩｇＧ抗体に比較して、改善された凝集安定性のＶＨＨ誘導体を有する、本発明の抗体を伴う。
【００７１】
本発明の別の態様は、ラクダ科の免疫動物から単離された抗体の重鎖可変ドメインであるＶＨＨ誘導体を含む抗体を伴う。本明細書において、ＶＨＨ誘導体は、４４および４５位での以下の置換：
ａ）４４Ｘ２、式中、Ｘ２＝Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｓ、Ｔ；
ｂ）４５Ｘ３、式中、Ｘ３＝Ａ、Ｖ、Ｔ、Ｈ；
またはその組み合わせ
を除いて、任意の位で、ヒトに典型的なさらなるアミノ酸置換を有してもよい。
【００７２】
別の態様は、ラクダ科の非免疫動物から単離された重鎖可変ドメインによって示されうるＶＨＨ誘導体を含む本発明の抗体を伴う。本明細書において、ＶＨＨ誘導体は、４４および４５位での以下の置換：
ａ）４４Ｘ２、式中、Ｘ２＝Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｓ、Ｔ；
ｂ）４５Ｘ３、式中、Ｘ３＝Ａ、Ｖ、Ｔ、Ｈ；
またはその組み合わせ
を除いて、任意の位で、ヒトに典型的なさらなるアミノ酸置換を有してもよい。
【００７３】
別の態様は、ヒト抗体誘導体である軽鎖可変ドメインＶＬを含む、本発明の抗体を伴う。本発明のさらなる態様において、軽鎖可変ドメインＶＬは、動物抗体のヒト化断片である。
【００７４】
別の態様は、システイン−４４（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）を含有するＶＨＨ誘導体、およびシステイン−１００（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）を含有する軽鎖可変ドメインＶＬを含む、本発明の抗体を伴う。
【００７５】
本発明の別の態様は、以下のアイソタイプ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のいずれかの抗体を伴う。
別の態様は、ＩｇＧの一部として非天然の修飾Ｆｃを含む、本発明の抗体を伴う。
【００７６】
別の態様は、１０ｍｇ／ｍｌを超える濃度で用い、そして４℃の温度で＞６ヶ月保存した際、凝集物含量が溶液中の最初の含量の５％より多く増加しない凝集安定性を有する、本発明の抗体を伴う。本発明のさらなる態様において、抗体は、１０ｍｇ／ｍｌを超える濃度で用い、そして３７℃の温度で＞２週間保存した際、凝集物含量が溶液中の最初の含量の５％より多く増加しない凝集安定性を有する。本発明の別のさらなる態様は、１０ｍｇ／ｍｌを超える濃度で用い、そして４２℃の温度で＞４８時間保存した際、凝集物含量が溶液中の最初の含量の５％より多く増加しない凝集安定性を有する抗体を伴う。本発明の１つのさらにさらなる態様は、１０ｍｇ／ｍｌを超える濃度で用い、そして５０℃の温度で＞６時間保存した際、凝集物含量が溶液中の最初の含量の５％より多く増加しない凝集安定性を有する抗体を伴う。
【００７７】
１つの態様は、解離定数ＫＤ≦１０−９Ｍを有する抗体を伴う。別の態様は、抗体−抗原相互作用会合定数ｋｏｎ（１／Ｍｓ）≧１０５  １／Ｍｓを有する、本発明の抗体を伴う。本発明の１つのさらなる態様は、抗原−抗体解離定数ｄｉｓ（１／ｓ）≦１０−４  １／ｓを有する抗体を伴う。
【００７８】
さらに、本発明は、抗体断片を示唆する。この抗体断片は、抗体配列の一部である、軽鎖、重鎖、軽鎖および／または重鎖の可変ドメインによって示されてもよく、これには生体分子特異的抗体変異体が含まれる。本発明の別の態様は、Ｆａｂの一部である軽鎖、重鎖、軽鎖および／または重鎖の可変ドメインによって示される、抗体断片を伴う。本発明の抗体断片は、ｓｃＦｖの一部である軽鎖、重鎖、軽鎖および／または重鎖の可変ドメインによって示されることも可能である。
【００７９】
さらに、本発明は、本発明の抗体の産生法を示唆する。抗体産生の前記方法は、以下：部位特異的突然変異誘発、ディスプレイ法、遺伝子操作、当該技術分野に周知の生化学および高性能バイオテクノロジー法であって、ラクダ科抗体のＶＨＨドメインの異なる位での部位特異的突然変異のための方法を含むことも可能な、前記方法より選択される相を伴うことも可能である。
【００８０】
さらに、本発明は、請求する抗体またはその断片をコードするＤＮＡ構築物、ならびに本発明の１またはいくつかのＤＮＡ構築物を含む発現ベクターを提供する。
さらに、本発明は、前記発現ベクターまたはＤＮＡ構築物を含む細胞株を示唆する。
【００８１】
さらに、本発明は、ヒト化モノクローナル抗体またはその断片の産生法であって、細胞株を、培地中で、前記抗体またはその断片が得られるために十分な条件下で培養し、その後、得た抗体またはその活性断片を単離し、そして精製することを伴う、前記方法を示唆する。
【００８２】
さらに、本発明は、抗体またはその断片を、１またはいくつかの薬学的に適切な賦形剤、希釈剤またはキャリアーと組み合わせて含有する、薬学的組成物を示唆する。組成物を得るための技術の詳細は、特別なバイオテクノロジー指針、例えば［２５］に記載される。
【００８３】
本発明の別の態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する活性分子内の抗体またはその断片であって、前記抗体またはその断片が、３つの超可変領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を含むラクダ科重鎖可変ドメイン（ＶＨＨ）の誘導体を含み、ここで：
配列番号１のアミノ酸配列：Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ａ−Ｔ−Х３２−Х３３−Х３４−Х３５を含むＨＣＤＲ１（番号付けはＫａｂａｔインデックスにしたがう）、式中
Х３２は、Ｓ、Ｎ、Ｋ、Ｒ、Ｅ、Ｗ、Ｑ、Ｄ、Ａ、ＶおよびＦを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х３３は、ＰおよびＳを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х３４は、ＭおよびＩを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х３５は、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｒ、ＶおよびＱを含む群より選択されるアミノ酸である；
配列番号２のアミノ酸配列：Х５０−Ｉ−Ｘ５２−Х５２ａ−Ｓ−Ｇ−Х５５−Ｄ−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇを含むＨＣＤＲ２、式中、
Х５０は、Ａ、ＧおよびＬを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х５２は、Ｓ、ＤおよびＥを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х５２ａは、ＰおよびＡを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Х５５は、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、ＡおよびＷを含む群より選択されるアミノ酸である；
配列番号３のアミノ酸配列：С−А−Ｘ９４−Ｘ９５−Ｘ９６−Ｘ９７−Ｆ−Ｘ９９−Ｘ１００−Ｘ１００ａ−Ｘ１００ｂ−Ｘ１００ｃ−Ｘ１００ｄ−Ｘ１００ｅ−Ｘ１００ｆ−Ｄ−Ｙ−Ｄ−Ｓを含むＨＣＤＲ３、ここで
Ｘ９４は、Ｋ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、ＤおよびＧを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ９５は、ＲおよびＫを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ９６は、Ｇ、Ｒ、Ｙ、Ｈ、Ｄ、ＷおよびＫを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ９７は、Ｒ、Ａ、Ｖ、Ｓ、ＬおよびＨを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ９９は、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｒ、Ｖ、ＫおよびＱを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００は、Ｇ、ＳおよびＮを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ａは、Ｇ、Ｔ、Ｐ、Ｖ、Ｒ、ＮおよびＫを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｂは、Ｖ、Ｓ、Ｔ、Ｌ、Ｙ、Ａ、Ｈ、ＧおよびＩを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｃは、Ｙ、ＷおよびＳを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｄは、Ｒ、Ｖ、Ｌ、Ｙ、Ａ、Ｗ、Ｋ、Ｇ、ＱおよびＩを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｅは、Ｔ、Ｌ、ＡおよびＳを含む群より選択されるアミノ酸であり；
Ｘ１００ｆは、Ｔ、Ｌ、Ｇ、Ｐ、Ｎ、Ａ、Ｑ、Ｆ、ＩおよびＤを含む群より選択されるアミノ酸である；
ｂ）ヒト抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）またはヒト化抗体の軽鎖可変ドメイン
を含む、前記抗体または断片を伴う。
【００８４】
別の態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そして３つの超可変領域を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨＨ）の誘導体であって：
Ｇ−Ｔ−Ｆ−Ａ−Ｔ−Ｓ−Ｐ−Ｍ−Ｇ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１
；
Ａ−Ｉ−Ｓ−Ｐ−Ｓ−Ｇ−Ｇ−Ｄ−Ｒ−Ｉ−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２；
С−А−Ｖ−Ｒ−Ｒ−Ｒ−Ｆ−Ｄ−Ｇ−Ｔ−Ｓ−Ｙ−Ｙ−Ｔ−Ｇ−Ｄ−Ｙ−Ｄ−Ｓ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３
を含む、前記誘導体；
ｂ）ヒト抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）またはヒト化抗体の軽鎖可変ドメイン
を含む、抗体またはその断片を伴う。
【００８５】
代替態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そして配列番号７のアミノ酸配列を含む、重鎖可変ドメイン（ＶＨＨ）の誘導体、および
ヒト抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）またはヒト化抗体の軽鎖可変ドメイン
を含む、抗体を伴う。
【００８６】
代替態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そしてＶＨＨ誘導体を含む抗体またはその断片であって、前記可変ドメインが配列番号７に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその断片を伴う。
【００８７】
代替態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そして配列番号７のアミノ酸配列を含む、ＶＨＨ誘導体；および配列番号８のアミノ酸配列を含むヒト抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含有する、抗体を伴う。
【００８８】
代替態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そしてＶＨＨ誘導体およびヒト抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗体またはその断片であって、前記可変ドメインが配列番号８に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、前記抗体またはその断片を伴う。
【００８９】
代替態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そして配列番号９のアミノ酸配列を
を含む、重鎖、および配列番号１０の配列を含む、ヒト抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含有する、抗体を伴う。別の態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そして重鎖および軽鎖を含有する抗体であって、前記鎖が、配列番号９および／または配列番号１０に少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、前記抗体を伴う。
【００９０】
代替態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する本発明の抗体であって、≦１０−１０ＭのＫＤで特徴付けられる、ヒトＩＬ−１７Ａに対する結合アフィニティを有する、前記抗体を伴う。別の態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体であって、ヒトＩＬ−１７Ａに対する動力学会合定数ｋｏｎ（１／Ｍｓ）が少なくとも１０５  １／Ｍ秒である、前記抗体を伴う。別の態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体であって、ヒトＩＬ−１７Ａに対する動力学解離定数ｄｉｓ（１／ｃ）が１０−５  １／秒より大きくない、前記抗体を伴う。別の態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そして任意の比活性試験によって調べられる任意のパラメータに関して、５０％未満でなく、ヒトＩＬ−１７Ａの活性を阻害する、抗体を伴う。
【００９１】
代替態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体であって、哺乳動物、酵母または細菌細胞によって産生される、前記抗体を伴う。
代替態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、そして天然Ｆｃに比較して、Ｆｃ領域に１またはそれより多いさらなるアミノ酸置換を含有する、抗体であって、前記置換が、天然Ｆｃを有する抗体に比較した際、抗体の物理化学的および薬物動態学的特性を改善し、そして抗体がＩＬ−１７Ａに結合する能力の損失を生じない、前記抗体を伴う。
【００９２】
代替態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体をコードする、ＤＮＡ構築物を示唆する。さらに、本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体をコードする１つまたはそれより多いＤＮＡ構築物を含む発現ベクターを示唆する。さらに、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体を得るためのベクターを含む宿主細胞が示唆された。
【００９３】
さらに、本発明は、ＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体の産生法であって、ＤＮＡ構築物を含む宿主細胞を、培地中で、前記抗体またはその断片を得るために十分な条件下でインキュベーションし、そしてさらに前記抗体またはその活性断片を単離し、そして精製することによって特徴付けられる、前記方法を示唆する。
【００９４】
さらに、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体、および１またはそれより多い薬学的に適切な賦形剤、希釈剤またはキャリアーを含む薬学的組成物が示唆された。前記組成物は、ＴＮＦ−α阻害剤より選択されるさらなる活性薬学的成分を含むことも可能である。前記組成物は、ＩＬ−１７Ａが仲介する疾患または障害の治療において使用可能である。ＩＬ−１７Ａが仲介する疾患または障害は：関節リウマチ、変形性関節症、若年性慢性関節炎、敗血症性関節炎、ライム関節炎、乾癬性関節炎、反応性関節炎、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸疾患、インスリン依存性糖尿病、甲状腺炎（ｔｈｙｒｏａｄｅｎｉｔｉｓ）、喘息、アレルギー性障害、乾癬、皮膚炎、全身性硬化症、移植片対宿主病、移植片拒絶、臓器移植に関連する急性または慢性免疫疾患、サルコイドーシス、アテローム性動脈硬化症、播種性血管内凝固、川崎病、グレーブス病、ネフローゼ症候群、慢性疲労症候群、ウェゲナー病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、腎関与を伴う顕微鏡的多発血管炎、慢性活動性肝炎、ブドウ膜炎、敗血症ショック、毒性ショック症候群、敗血症症候群、悪液質、感染、侵襲、後天性免疫不全症候群、急性横断性脊髄炎、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、アルツハイマー病、脳卒中、原発性胆汁性肝硬変、溶血性貧血、悪性腫瘍、心不全、心筋梗塞、アジソン病、多腺性自己免疫症候群Ｉ型およびＩＩ型、シュミット症候群、急性呼吸促迫症候群、脱毛症、円形脱毛症、血清陰性関節症、関節症、ライター症候群、乾癬性関節症、潰瘍性大腸炎関連関節症、腸疾患滑膜炎、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）およびサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）関連関節症、脊椎関節症、アテローム疾患／冠動脈硬化症、アトピー性アレルギー、自己免疫性水疱症、天疱瘡、落葉状天疱瘡、類天疱瘡、線状ＩｇＡ病、自己免疫溶血性貧血、クームス陽性溶血性貧血、後天性悪性貧血、若年性悪性貧血、筋痛性脳脊髄炎／慢性疲労症候群、慢性活動性肝炎症、頭蓋巨大動脈炎、原発性硬化性肝炎、特発性自己免疫性肝炎、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、ＡＩＤＳ関連疾患、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、分類不能型免疫不全症（分類不能型低ガンマグロブリン血症）、拡張型心筋症、女性不妊、卵巣不全、未成熟卵巣不全、肺線維症、特発性線維化性肺胞炎、炎症後間質性肺病変、間質性肺炎、間質性肺疾患に関連する結合組織疾患、間質性肺疾患に関連する混合結合組織疾患、間質性肺疾患に関連する全身性強皮症、間質性肺疾患に関連する関節リウマチ、肺疾患に関連する全身性エリテマトーデス、肺疾患に関連する皮膚筋炎／多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｕｏｓｉｔｉｓ）、肺疾患に関連するシェーグレン病、肺疾患に関連する強直性脊椎炎、びまん性肺血管炎、肺疾患に関連するヘモジデリン沈着症、薬剤誘導性間質性肺疾患、線維症、放射性誘導性線維症、閉塞性細気管支炎、慢性好酸球性肺炎、リンパ球浸潤を伴う肺疾患、感染後間質性肺病変、痛風性関節炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性肝炎Ｉ型（古典的自己免疫性またはルポイド肝炎）、自己免疫性肝炎ＩＩ型（抗ＬＫＭ抗体関連）、自己免疫性低血糖症、角質増殖症を伴うＢ型���ンスリン耐性、副甲状腺機能低下症、急性移植関連免疫疾患、慢性移植関連免疫疾患、変形性関節症、原発性硬化性胆管炎、Ｉ型乾癬、ＩＩ型乾癬、特発性白血球減少症、自己免疫性好中球減少症、ＮＯＳ腎疾患、糸球体腎炎、顕微鏡的腎多発血管炎、ライム病、円板状エリテマトーデス、特発性ＮＯＳ男性不妊、抗精子免疫、多発性硬化症（すべての型）、交感神経性眼炎、結合組織疾患続発性肺高血圧、グッドパスチャー症候群、結節性多発動脈炎の肺症状、急性リウマチ熱、リウマチ性脊椎炎、スティル病、全身性強皮症、シェーグレン症候群、高安病/関節炎、自己免疫性血小板減少症、特発性血小板減少症、自己免疫性甲状腺障害、甲状腺機能亢進症、自己免疫性甲状腺機能低下症（橋本病）、萎縮性自己免疫性甲状腺機能低下症、原発性粘液水腫、水晶体起因性ブドウ膜炎、原発性血管炎、白斑、急性肝疾患、慢性肝疾患、アルコール性肝硬変、アルコール誘導性肝損傷、胆汁鬱滞、特異体質肝疾患、薬剤誘導性肝炎、非アルコール性脂肪性肝炎、アレルギーおよび喘息、Ｂ群連鎖球菌感染（ＧＢＳ）、精神障害（抑鬱および統合失調症を含む）、Ｔｈ１およびＴｈ２仲介性疾患、急性および慢性疼痛（多様な型）、悪性腫瘍、例えば肺癌、乳癌、胃癌、膀胱癌、結腸直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌および造血性悪性疾患（白血病およびリンパ腫）、無ベータ・リポタンパク質血症、先端チアノーゼ、急性および慢性感染および寄生、急性白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、急性または慢性細菌感染、急性膵炎、急性腎不全、腺癌、心房性異所性拍動（ａｔｒｉａｌ  ｅｃｔｏｐｉｃｓ）、ＡＩＤＳ認知症複合、アルコール誘導性肝炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性接触皮膚炎、アレルギー性鼻炎、同種移植片拒絶、アルファ−Ｉアンチトリプシン不全、筋萎縮性側索硬化症、貧血、狭心症、前角細胞変性、抗ＣＤ３療法、抗リン脂質症候群、受容体に対する過敏性反応、大動脈および末梢動脈瘤、大動脈解離、動脈性高血圧、冠動脈硬化症、動静脈瘻、運動失調、心房細動（一定または発作性）、心房粗動、房室ブロック、Ｂ細胞リンパ腫、骨移植片拒絶、骨髄移植（ＢＭＴ）拒絶、脚ブロック、バーキットリンパ腫、火傷、心臓性不整脈、心筋気絶症候群、心臓腫瘍、心筋疾患、バイパスに対する炎症反応、軟骨移植片拒絶、脳皮質変性、小脳障害、無秩序または多源性心房頻拍、化学療法誘導性障害、慢性骨髄細胞白血病（ＣＭＬ）、慢性アルコール中毒、慢性炎症性疾患、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性閉塞性肺疾患、慢性サリチル酸中毒、直腸結腸癌、鬱血性心不全、結膜炎、接触性皮膚炎、肺、心臓、冠動脈疾患、クロイツフェルト・ヤコブ病、培養陰性敗血症、嚢胞性線維症、サイトカイン療法誘導性障害、ボクサー脳症、脱ミエリン化疾患、デング出血熱、皮膚炎、皮膚科学的状態、糖尿病、真性糖尿病、糖尿病関連アテローム性動脈硬化症血管疾患、びまん性レビー小体病、鬱血性拡張型心筋症、基底核疾患、中年ダウン症候群、ＣＮＳドーパミンブロッカーによって誘導される運動障害、薬剤感受性、湿疹、脳脊髄炎、心内膜炎、内分泌症、喉頭蓋炎、エプスタイン・バー・ウイルス感染、皮膚紅痛症、錐体外路および小脳症状、家族性血球貪食性リンパ組織���症、胎児胸腺移植片拒絶、フリートライヒ運動失調症、末梢動脈疾患、真菌性敗血症、ガス・フレグモーネ、胃潰瘍、糸球体腎炎、任意の臓器または組織移植片拒絶、グラム陰性敗血症、グラム陽性敗血症、細胞内生物による肉芽腫、毛様細胞白血病、ハラーホルデン・スパッツ病、橋本甲状腺炎、枯草熱、心臓移植片拒絶、ヘモクロマト−シス、血液透析、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、出血、肝炎（Ａ）、索枝不整脈、ＨＩＶ感染／ＨＩＶニューロパシー、ホジキン病、多動運動障害、過敏性反応、過敏性関連間質性肺炎、高血圧、運動不足による運動障害、視床下部−下垂体−副腎軸の検査、特発性アジソン病、特発性肺線維症、抗体仲介性細胞傷害、無力症、幼児期筋萎縮症、大動脈炎症、インフルエンザウイルスＡ、電離放射線への曝露、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、虚血／再灌流誘導性障害、虚血性脳卒中、若年性関節リウマチ、若年性脊髄筋萎縮症、カポジ肉腫、腎移植片拒絶、レジオネラ症、リーシュマニア症、ハンセン病、皮膚脊髄損傷、脂肪性浮腫、肝移植片拒絶、リンパ浮腫、マラリア、悪性リンパ腫、悪性組織球増殖症、悪性黒色腫、髄膜炎、髄膜炎菌血症、代謝性／特発性疾患、偏頭痛、多発性全身ミトコンドリア障害、混合結合組織疾患、モノクローナルガンマ症、多発性骨髄腫、多発性全身変性症（メンセル、デジェリン・トーマス、シャイ・ドレーガーおよびマシャド・ジョセフ）、重症筋無力症、細胞内マイコバクテリウム・アビウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｖｉｕｍ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、骨髄異形成症候群、心筋梗塞、心筋虚血性疾患、鼻咽頭癌、新生児慢性肺疾患、腎炎、ネフローゼ、神経変性障害、神経原性筋萎縮症I、好中球減少性発熱、非ホジキンリンパ腫、腹大動脈分岐部閉塞、動脈閉塞性疾患、ＯＫＴ３（登録商標）治療、精巣炎／精巣上体炎、精巣炎／精管復元術、臓器肥大、骨粗鬆症、膵臓移植片拒絶、膵癌、傍腫瘍性疾患／腫瘍関連高カルシウム血症、副甲状腺移植片拒絶、骨盤炎症性疾患、通年性鼻炎、心膜疾患、末梢アテローム性動脈硬化（アテローム性動脈硬化）疾患、末梢血管性疾患、腹膜炎、悪性貧血、カリニ肺炎、ＰＯＥＭＳ症候群（多発ニューロパシー、臓器肥大、内分泌疾患、モノクローナル形質細胞増殖障害および皮膚変化）、灌流後症候群、ポンプヘッド症候群、開心術後梗塞後症候群、子癇前症、進行性核上性麻痺、原発性肺高血圧、放射療法、レイノー現象および疾患、レイノー病、レフサム病、規則的ナローＱＲＳ頻拍、腎血管高血圧、再灌流傷害、拘束型心筋症、肉腫、強皮症疾患、老人性舞踏病、レビー小体認知症、血清陰性関節炎、ショック、鎌形細胞疾患、皮膚同種移植片拒絶、皮膚変化、小腸移植片拒絶、固形腫瘍、特異的不整脈、脊髄性運動失調、脊髄小脳変性、連鎖球菌筋炎、小脳構造損傷、亜急性硬化性全脳炎、失神、心血管梅毒、全身性アナフィラキシー、包括的全身性炎症反応症候群、全身型若年性関節リウマチ、Ｔ細胞またはＦＡＢ  ＡＬＬ、毛細血管拡張症、閉塞性血栓症、血小板減少症、毒性、移植、外傷／出血、過敏性反応ＩＩＩ型、過敏性反応ＩＶ型、不安定性狭心症、尿毒症、尿敗血症、蕁麻疹、心臓弁膜症、静脈瘤、血管炎、静脈性疾患、静脈性血栓症、心室細動、ウイルスおよび真菌感染、ウイルス（ｖｉｔａｌ）脳炎／無菌性髄膜炎、ウイルス血球貪食性症候群、ウェルニッケ・コルサコフ症候群、ウィルソン病、任意の臓器または組織に関する異種移植片拒絶、急性冠動脈症候群、急性特発性多発神経炎、急性炎症性脱ミエリン化神経根ニューロパシー、急性虚血、成人型スティル病、円形脱毛症、アナフィラキシー、抗リン脂質抗体症候群、再生不良性貧血、冠動脈硬化症、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、自己免疫性皮膚炎、連鎖球菌感染に関連する自己免疫性障害、自己免疫性腸疾患、自己免疫性難聴、自己免疫性リンパ増殖症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性心筋炎、自己免疫性未成熟卵巣不全、眼瞼炎、気管支拡張症、水疱性類天疱瘡、心臓血管疾患、破局性抗リン脂質症候群、セリアック病、頸椎症、慢性虚血、瘢痕性類天疱瘡、多発性硬化症のリスクを伴う臨床単離症候群（ｃｉｓ）、結膜炎、小児期精神障害、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、涙嚢炎、皮膚筋炎、糖尿病網膜症、糖尿病、椎間板ヘルニア、椎間板逸脱、薬剤誘導性免疫溶血性貧血、心内膜炎、子宮内膜症、眼球陥入（ｅｎｔｏｐｈｔｈａｌｍｉａ）、上強膜炎、多形性紅斑、重症多形性紅斑、妊娠性類天疱瘡、ギラン・バレー症候群（ＧＢＳ）、枯草熱、ヒューズ症候群、特発性パーキンソン病、特発性間質性肺炎、ＩｇＥ仲介性アレルギー、自己免疫性溶血性貧血、封入体筋炎、感染性眼炎症性疾患、炎症性脱ミエリン病、炎症性心疾患、炎症性腎疾患、特発性肺線維症／通常型間質性肺炎、虹彩炎、角膜炎、乾性角結膜炎、クスマウル病またはクスマウル・マイヤー病、ランドリー麻痺、ランゲルハンス細胞組織球症、大理石様皮膚、黄斑変性症、顕微鏡的多発血管炎、ベヒテレフ病、運動ニューロン病、粘膜性類天疱瘡、多発性臓器不全、重症筋無力症、脊髄異形成症候群、心筋炎、神経根障害、ニューロパシー、非Ａ、非Ｂ肝炎、視神経炎、骨溶解症、卵巣癌、少数関節ＪＩＡ、末梢動脈閉塞性疾患、末梢血管疾患、末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、静脈炎、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、リウマチ性多発筋痛症、白毛症、多関節型若年性特発性関節炎、多発性内分泌不全、多発性筋炎、リウマチ性多発筋痛症（ＰＭＲ）、ポストポンプ症候群、原発性パーキンソン症、前立腺および直腸癌および造血性悪性疾患（白血病およびリンパ腫）、前立腺炎、赤芽球癆、原発性副腎不全、再発性
視神経脊髄炎、再狭窄、リウマチ性心疾患、ＳＡＰＨＯ（滑膜炎、ざ瘡、膿疱症、骨増殖症（ｈｙｐｅｒｓｔｏｓｉｓ）および骨炎）、強皮症（ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍｉａ）、続発性アミロイドーシス、ショック肺、強膜炎、坐骨症（ｉｓｃｈｉａｓ）、続発性副腎不全、シリコン関連結合組織疾患、スネドン・ウィルキンソン病、強直性脊髄炎、スティーブンス・ジョンソン症候群、全身性炎症反応症候群、頭蓋動脈炎、トキソプラズマ属鼻炎、中毒性表皮壊死症、横断性脊髄炎、ＴＲＡＰＳ（腫瘍壊死因子受容体関連周期性症候群）、アレルギー反応Ｉ型、糖尿病ＩＩ型、蕁麻疹、通常型間質性肺炎、血管炎、春季カタル、ウイルス性網膜炎、フォークト・小柳・原田症候群（ＶＫＨ症候群）、滲出型黄斑変性症、創傷治癒、およびエルシニア属またはサルモネラ属関連関節症より選択される。
【００９５】
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体を含む薬学的組成物を、療法的有効量で投与して、ＩＬ−１７Ａ仲介性疾患または障害を治療することも可能である。
本発明は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体を用いて、ＩＬ−１７Ａ仲介性疾患または障害を治療する方法を示唆する。治療法は、ＴＮＦ−α阻害剤のさらなる投与を伴うことも可能である。
【００９６】
さらなる実施例は、本発明を立証するが、これらは本発明を実施例自体に限定することを意図しない。
本出願の説明には、すべての情報供給源に対する参照が含まれる。
【実施例】
【００９７】
実施例１
ＶＨＨに基づく抗体を得るためのフローチャート
図１は、ＶＨＨに基づく抗体を得て、そして最適化するためのフローチャートを示す。
【００９８】
実施例２
懸濁哺乳動物細胞培養における、組換え抗原および抗体の産生
公表されるプロトコル［２６；２７］にしたがって、チャイニーズハムスター卵巣細胞から得られた樹立細胞株（ＣＨＯ−Ｋ１）において、抗体および抗原を生成した。ＥＢＮＡ１タンパク質（エプスタイン・バー・ウイルス核抗原１）の遺伝子を恒常的に発現する細胞を用いた。Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社の血清不含培地を用いて、そして製造者の指針にしたがって、軌道振盪装置上のフラスコ中で、懸濁培養を行った。一過性発現のため、２＊１０６／ｍｌの濃度の細胞を、直鎖ポリエチレンイミン（ＰＥＩ  ＭＡＸ、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）によってトランスフェクションした。ＤＮＡ／ＰＥＩ比は、１：３〜１：１０であった。トランスフェクション後、５〜７日で、細胞培養を２０００ｇで２０分間遠心分離し、そして０．２２μｍフィルターを通じて濾過した。アフィニティ（ａｆｆｉｎｅ）ＨＰＬＣによって、培養液からターゲットタンパク質を単離した。
【００９９】
Ｐｒｏｆｉｎｉｔｙ  ＩＭＡＣ  Ｎｉ荷電樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）上、培養液から、Ｃ末端領域中の６つのＨｉｓアミノ酸を含有する組換えＩＬ−１７Ａタンパク質を単離し、そして精製した。精製法の前に、ＮｉＣｌ２を１ｍＭの濃度まで培養液に添加した。次いで、５ｍｌのＰｒｏｆｉｎｉｔｙ  ＩＭＡＣ  Ｎｉ荷電樹脂を培養液に添加し、そして振盪装置上、室温で１時間混合した。吸着物を５ｍｌのＴｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃポリプロピレンカラムに移し、そして５カラム体積のＰＢＳで洗浄して、非特異的結合構成要素を除去した。結合した抗原を０．３Ｍイミダゾール（ｐＨ  ８）および１５０ｍＭ  ＮａＣｌで溶出した。次いで、Ｓｎａｋｅ  Ｓｋｉｎ透析チュービング技術によってＰＢＳ（ｐＨ  ７．４）にタンパク質を透析し、濾過し（０．２２μｍ）、試験管内に移し、そして−７０℃で保存した。得たタンパク質の純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって評価した（図２）。
【０１００】
試験および対照ＩｇＧ１抗体を、ＩＬ−１７Ａ−Ｆｃに関して前述する方法にしたがって、１ｍｌ  Ｈｉ  Ｔｒａｐ  ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ  ＦＦカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で精製した。得たタンパク質の純度をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって評価した（図２）。
【０１０１】
実施例３
ヒトＩＬ−１７Ａでのラマ免疫およびファージディスプレイ・ラマ抗体のＦａｂライブラリーの生成
ラマ（Ｌａｍａ  ｇｌａｍａ）を、等体積の完全（最初の注射）または不完全フロイントアジュバント（最初のもの以外のすべての注射）と混合した抗原材料を皮下投与することによって、連続５回免疫した。うち１つがヒトＩＬ−１７Ａである組換えタンパク質の混合物（注射あたり各タンパク質０．２ｍｇ）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓのキット）を抗原として用いた。第二の注射（免疫段階）を、第一の注射の３週間後に行った；２週間間隔で、さらに３回の免疫を行った。血液試料（５０ｍｌ）を、第三の注射から開始して、各注射後に収集した。
【０１０２】
抜き取った血液を、１ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳで２倍希釈した。次いで、３５ｍｌの希釈血液を１５ｍｌのＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ（登録商標）−１０７７培地（Ｓｉｇｍａ、１．０７７ｇ/ｍｌの密度）上に層にし、そして８００ｇで２０分間遠心分離した。単核細胞（リンパ球および単球）を血漿/Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ培地中間相領域から選択し、そして１ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳで洗浄した。
【０１０３】
プロトコル（ＱＩＡＧＥＮ）にしたがって、ＲＮｅａｓｙミニキットを用いて、単核ラマ細胞から、総ＲＮＡを単離した。Ｎａｎｏｖｕｅ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、ＲＮＡ濃度アッセイを行った；１．５％アガロースゲル電気泳動によって、単離ＲＮＡの品質を試験した。
【０１０４】
ＭＭｕＬＶ逆転写酵素およびランダム六量体プライマーを用いた推奨されるプロトコルにしたがって、ＭＭＬＶ  ＲＴキット（Ｅｖｒｏｇｅｎ）を用いて、逆転写反応を行った。
【０１０５】
２段階ポリメラーゼ連鎖反応において、マトリックスとして逆転写産物を用いて、制限部位が隣接した変異体ドメインの遺伝子を得た；オリゴヌクレオチドキットおよび［２７；２８；２９］によるプロトコルを用いて、反応を行った。さらに、図３に示すような制限、連結および増幅の連続反応によって、軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードする遺伝子を１つの断片に組み立てた。重鎖遺伝子を別個に、カッパおよびラムダ軽鎖遺伝子に付着させた。この場合、すべての反応において、マトリックス分子の概算されるカウントは、１０１１以上であった。得たＤＮＡ産物（ＶＬ−ＣＫ−ＶＨ）を、ＮｈｅＩ／Ｅｃｏ９１Ｉ制限酵素で処理し、そして元来のファージミドｐＨ  ５に連結した。ファージミド構造を図４に示す。プロトコル［３０］にしたがって調製したＳＳ３２０エレクトロコンピテント細胞に連結産物を形質転換した。構築されたカッパおよびラムダＦａｂライブラリーのレパートリーは、それぞれ、５．１＊１０８および３．７＊１０８であった。先に記載される方法［３１］にしたがって、未処理（ｎａｉｖｅ）ファージディスプレイライブラリーの産物を調製した。
【０１０６】
実施例４
ファージディスプレイ抗体のＦａｂライブラリーの選択
組換えヒトＩＬ−１７Ａを用いて、ファージＦａｂディスプレイライブラリーから、特異的抗ＩＬ−１７ＡファージディスプレイＦａｂ抗体を選択した（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓのキット）；上述のように、一連の選択サイクルを行った［２７；３１；３２］。パニング法による選択プロセスを実行するため、５０ｍＭ炭酸緩衝液（ｐＨ９．５）中のヒトＩＬ−１７ＡをＨｉｇｈＳｏｒｂ試験管（Ｎｕｎｃ）の表面上に４℃で一晩吸着させた。さらに、試験管をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄し、そして次いで、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）−脱脂乳（０．５％重量／体積）を含有する溶液で１時間ブロッキングした。次いで、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）−脱脂乳（０．５％重量／体積）中の２〜４ｍｌのファージ溶液（ｍｌあたり１０１２ファージ粒子）を、抗原を含む試験管に移し、そして攪拌しながら、系を１時間インキュベーションした。ＰＢＳ（ｐＨ７．４）−Ｔｗｅｅｎ２０（０．１％体積／体積）の一連の洗浄周期で、未結合ファージを取り除いた。洗浄周期の数を最初のラウンドから第三のラウンドまで、それぞれ、２０−３０−４０回に増加した。結合したままのファージ粒子を、攪拌しながら１５分間、１００ｍＭ  Ｇｌｙ−ＨＣｌ溶液（ｐＨ２．５）で溶出し、そして次いで、１Ｍ  ＴＲＩＳ−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）で中和した。大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）ＴＧ１細菌を、得たファージに感染させ；さらに、ファージを単離し、そして次の周期で用いた。
【０１０７】
選択の第二および第三の周期の後、ポリクローナルファージ産物に関して行ったＥＬＩＳＡは、有意な濃縮を示した。ヒトＦａｂが濃縮されたプール・クローンを、ｍｙｃタグおよびＨｉｓ６タグを重鎖ＣＨ１遺伝子のＣ末端上に含む発現プラスミドＬＬに再クローニングした。
【０１０８】
実施例５
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合するＦａｂの分析
ＥＬＩＳＡを用いて、ヒトＩＬ−１７Ａと、研究するＦａｂ断片の結合を測定した。公表されるＡＩＮ４５７配列を持つＦａｂ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を陽性対照として用いた。ＥＬＩＳＡプレートウェル（Ｎｕｎｃ  ＩｍｍｕｎｏＭａｘｉｓｏｒｐ）を５０μｌ（１ｘコーティング炭酸緩衝液中、０．５μｇ／ｍｌ）ＩＬ−１７Ａ−Ｆｃでコーティングし、密封して、そして４℃で一晩インキュベーションした。高性能系、例えばＧｅｎｅｔｉｘＱ−ｐｉｘ２ｘｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）およびＴｅｃａｎ  Ｆｒｅｅｄｏｍ  ＥＶＯ  ２００（Ｔｅｃａｎ）を用い、標準的ＥＬＩＳＡプロトコルにしたがって、すべてのさらなる段階を行った。ブロッキング緩衝液ＢＢ（２００μｌのＰＢＳ中、０．５％脱脂乳）を添加することによって、非特異的結合をブロッキングした。プレートを、振盪装置上、室温で１時間インキュベーションした。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで洗浄した後、各細胞を、等体積のＢＢと混合した、５０μｌの試験Ｆａｂ含有細胞上清でコーティングした。プレートを、振盪装置上、室温で１時間インキュベーションした；さらに、各プレートウェルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ緩衝液で洗浄した。洗浄後、各ウェルを、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中の抗ヒトＦａｂ  ＨＲＰコンジュゲート化二次抗体（Ｐｉｅｒｃｅ−ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（１：５０００）でコーティングした。プレートを回転振盪装置に移し（室温で５０分）、そして次いで、上述のように、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ緩衝液で５回洗浄した。飽和するまで（平均３〜５分）、ＴＭＢ（１００μｌ／ウェル）を添加することによって、比色シグナルを得た；停止溶液（１００μｌ／ウェル、１０％硫酸）を添加することによって、さらなる発色をブロッキングした。適切なＴｅｃａｎ−Ｓｕｎｒｉｓｅプレート読み取り装置（Ｔｅｃａｎ）を用いて、４５０ｎｍで吸光度を測定した。抗体結合は、産生されるシグナルに比例した。ＩＬ−１７Ａリガンドおよび受容体の間の相互作用をブロッキングする、アンタゴニスト性Ｆａｂを明らかにするため、色シグナルが５倍より高くベースラインシグナルを超えるクローンを、競合ＥＬＩＳＡで試験した。
【０１０９】
実施例６
ＩＬ１７ＡリガンドおよびＩＬ１７Ｒ受容体の相互作用をブロッキングする競合的ＥＬＩＳＡ
競合的ＥＬＩＳＡ技術を用いて、ヒトＩＬ−１７Ａに対して特異的な、先に選択したＦａｂのアンタゴニスト能を試験した。公表されたＡＩＮ４５７配列を有するＦａｂ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）を陽性アンタゴニスト対照として用いた。ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ）のウェルを、５０μｌ／ウェルのＩＬ−１７ＲＡ−Ｆｃ受容体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ；１ｘコーティング炭酸緩衝液中の１μｇ／ｍｌ溶液）で覆い、そして４℃で一晩インキュベーションした。高性能系、例えばＧｅｎｅｔｉｘＱ−ｐｉｘ２ｘｔ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）およびＴｅｃａｎ  Ｆｒｅｅｄｏｍ  ＥＶＯ  ２００（Ｔｅｃａｎ）を用いた標準的ＥＬＩＳＡプロトコルにしたがって、すべてのさらなる段階を行った。ブロッキング緩衝液ＢＢ（２００μｌのＰＢＳ中、０．５％脱脂乳）を添加することによって、非特異的結合をブロッキングした。プレートを、振盪装置上、室温で１時間インキュベーションした。
【０１１０】
平行して、５０μｌのＩＬ−１７Ａ−Ｈｉｓ６−Ｆｌａｇ（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで希釈した１％ミルク中、０．４μｇ／ｍｌ）と、非結合性９６ウェルプレート中の試験Ｆａｂ含有細胞上清５０μｌを混合した。プレートを、振盪装置上、５００ｒｐｍで、３７℃で１時間インキュベーションした。
【０１１１】
ＩＬ−１７ＲＡ−Ｆｃ受容体を含有するプレートをＢＢ溶液で洗浄した後、ウェルあたり９０μｌの量で、ＦａｂおよびＩＬ−１７Ａ−Ｈｉｓ６−Ｆｌａｇの反応混合物でプレートをコーティングした。振盪しながら、プレートを室温で４５分間インキュベーションし、そして各ウェルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ緩衝液で５回洗浄した。さらに、１μｇ／ｍｌの抗ＦＬＡＧネズミＭ２抗体（Ｓｉｇｍａ）を５０μｌ／ウェル、添加し、そしてプレートを室温で４５分間インキュベーションした。インキュベーション後、各プレートウェルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで５回洗浄し、次いで、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで１：５０００希釈した５０μｌ／ウェルの抗ネズミＩｇＧ  ＨＲＰコンジュゲート化二次抗体（Ｐｉｅｒｃｅ−ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）でコーティングした。上に言及するように、プレートを回転振盪装置上、室温で４５分間インキュベーションし、そしてＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで５回洗浄した。飽和するまで（平均３〜５分）、ＴＭＢ（１００μｌ／ウェル）を添加することによって、比色シグナルを得た；停止溶液（１００μｌ／ウェル、１０％硫酸）を添加することによって、さらなる発色をブロッキングした。適切なＴｅｃａｎ−Ｓｕｎｒｉｓｅプレート読み取り装置（Ｔｅｃａｎ）を用いて、４５０ｎｍで吸光度を測定した。抗体結合は、産生されるシグナルに比例した。
【０１１２】
対照Ｆａｂ抗体ＡＩＮ４５７のものと対応するレベルでブロッキングを示したクローンを陽性とマーキングし、そしてさらなる試験に用いた。陽性クローンの可変ドメインの遺伝子を、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ３１３０遺伝子分析装置（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の標準プロトコルにしたがって配列決定に供した後、適切な分析を行った。３ＶＨＨＦａｂ可変ドメインを含むクローンを、さらなる研究のために選択した（図５Ｂ）。さらに、３ＶＨＨＦａｂクローンは、多様な配列の２３の軽鎖ドメインと組み合わせて提示されることが見出され、このうち３つを図５Ｂに示す。これは、相対的構造耐性を示し、そしてＶＨＨドメインは、特に、軽鎖よりもＩＬ−１７Ａ結合に寄与するという事実を示す。
【０１１３】
実施例７
抗ＩＬ−１７Ａ  ＶＨＨＦａｂ候補の比較ｋｏｆｆ（ｋｄｉｓｓ）スクリーニング
Ｐａｌｌ  Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ９６系を用いて、抗ＩＬ−１７Ａ  Ｆａｂ候補に関する比較ｋｏｆｆスクリーニングを行った。１０ｍＭ  ＰＢＳ（ｐＨ７．２〜７．４）、０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０および０．１％ＢＳＡを含む作業緩衝液中、抗ＦＡＢＣＨ１バイオセンサーを３０分間再水和した。１０ｘ作業緩衝液を、１ｘ最終濃度まで、大腸菌上清の試験試料に添加した。次いで、抗ＦＡＢＣＨ１バイオセンサーを、候補抗体のＦａｂ断片を含有する大腸菌上清内に染み込ませ、そして４℃で１２時間インキュベーションした。Ｆａｂ断片でコーティングしたセンサーを、作業緩衝液を含むウェルに移し、そしてベースラインを登録した（６０秒）。次いで、センサーを、分析溶液（ＩＬ−１７Ａ、３０μｇ／ｍｌ）を含むウェルに移し、抗原−抗体会合を達成した（３００秒）。その後、さらに解離のため、作業緩衝液を含むウェルにセンサーを戻した。用いたセンサーを、各試験後、再生に供した：これらを３回再生緩衝液（Ｇｌｙ−ＨＣｌ、ｐＨ１．７）に入れ、そして次いで、さらなる実験での使用に適用可能とした。１：１相互作用モデルを含む標準法にしたがって、Ｏｃｔｅｔデータ分析（バージョン７．０）を用いて、得た曲線を分析した。
【０１１４】
抗ＩＬ−１７Ａ  Ｆａｂ候補のｋｏｆｆスクリーニングに関して得た結果を、図５Ｃおよび表１に示す。すべてのユニークなＶＨＨＦａｂとヒトＩＬ−１７Ａの特異的および高アフィニティ結合が立証され、ここで３ＶＨＨＦａｂは装置の検出限界を超えた非常に迅速なｋｏｎおよび非常に緩慢なｋｄｉｓ（１／ｃ）を示した。
【０１１５】
表１．  ヒトＩＬ−１７Ａに対するＶＨＨＦａｂアフィニティ
【０１１６】
【表１】
2017538656.tif 000002
【０１１７】
したがって、得た分析結果に基づいて、３ＶＨＨＶＫ４Ｂ１１候補をさらなる研究のために選択した。
実施例８
ＶＨＨ可変ドメインのＦＲ１およびＦＲ２に突然変異を含むＶＨＨＩｇＧ１抗体の生成
実施例３に記載するように、ＣＨＯ−ＥＢＮＡ細胞におけるジョイント一過性発現のため、３ＶＨＨＶＫ４Ｂ１１候補の軽鎖および重鎖ＶＨＨ鎖の可変ドメインの遺伝子を、ｐＥＥ−ＨｃиｐＥＥ−Ｌｃプラスミドにクローニングした。さらに、プロトコル［Ｑ５（登録商標）部位特異的突然変異誘発キット（ＮＥＢ）］および［３４］に記載される方法にしたがって、ＰｆｕＵｌｔｒａＨＳポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いたオリゴヌクレオチド指示突然変異誘発によって、４４位および４５位（Ｋａｂａｔ番号付けスキーム）での置換を導入した。プラスミドｐＥＥ−３ＶＨＨをマトリックスとして用いた。ＰＣＲ産物を低融点アガロース上で分画し、そして適切なカラム上で精製した。連結後、ＤＮＡを大腸菌に形質転換した。正しい配列を持つ突然変異体クローンを選択する際、３ＶＨＨ中に突然変異を持つプラスミドを、ｐＥＥ−ＬｃＶＫ４Ｂ１１と同時トランスフェクションした（図６Ａおよび表２を参照されたい）。
【０１１８】
表２．  ３ＶＨＨＦａｂＶＫ４Ｂ１１突然変異体クローンの試料
【０１１９】
【表２】
2017538656.tif 000003
【０１２０】
実施例９
ＶＨＨ可変ドメインのＦＲ１およびＦＲ２において突然変異を含むＶＨＨＦａｂ抗体の動力学パラメータの比較分析
Ｐａｌｌ  Ｆｏｒｔｅ  Ｂｉｏ  Ｏｃｔｅｄ  Ｒｅｄ  ９６系（実施例８を参照されたい）を用いた標準プロトコルにしたがって、抗ＩＬ−１７Ａ  ＶＨＨＦａｂ候補に関する比較ｋｏｆｆスクリーニングを行った。天然３ＶＨＨＦａｂに比較した際、ｍｕｔ１、ｍｕｔ２およびｍｕｔ４に関して、ｋｏｆｆの有意な減少が見られ、そしてｍｕｔ３に関しては、より有意でない減少が見られた（図６Ｂ）。
【０１２１】
実施例１０
ＶＨＨ可変ドメインのＦＲ１およびＦＲ２において突然変異を含む全長３ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ４Ｂ１１抗体の熱凝集特性の比較分析
以下の方法を用いて、抗ＩＬ−１７Ａ  ＶＨＨＩｇＧ１候補に関する凝集特性の比較分析を行った。ＰＢＳ緩衝液中、ＶＨＨＩｇＧ１抗体（１０ｍｇ／ｍｌ）の調製物を、５０℃で６時間加熱した。熱ストレスによって誘導された凝集を、サイズ排除ＨＰＬＣによって評価した。Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫ−Ｇｅｌ  Ｇ３０００ＳＷＸＬカラム、７．８ｍｍｘ３０ｃｍ、カタログ番号０８５４１と、Ｔｏｓｏｈ  ＴＳＫｇｅｌ  Ｇｕａｒｄ  ＳＷＸＬプレカラム、６．０ｍｍｘ４．０ｃｍ、ｃｍ（７μｍ粒子、カタログ番号０８５４３）を用いて、１１００  ＨＰＬＣ系（Ａｇｉｌｅｎｔ）上で、試験を行った。０．５ｍｌ／分の流速で、５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液および０．３Ｍ  ＮａＣｌ（ｐＨ７．０）を含有する可動相を用いた均一濃度溶出を行い、２１４ｎｍおよび２８０ｎｍ波長で検出した。抗体試料をＰＢＳ（ｐＨ７．５）で、〜１ｍｇ／ｍｌの濃度まで希釈した。注射体積は１０μｌであった。ゲル濾過標準混合物（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、カタログ番号１５１−１９０１）を用いて、試験前にカラムを較正した。
【０１２２】
図６Ｃおよび要約表３に示すクロマトグラムは、熱ストレス下で、すべての突然変異体が多様な度合いに凝集し、ここで、天然変異体に関しては最低限の安定性が観察され、そして古典的ＶＨ構造に典型的なＥ４４Ｇ＋Ｒ４５Ｌ置換を含むｍｕｔ１に関しては最大安定性が明らかになった。
【０１２３】
さらに、アンフォールディングしたタンパク質の疎水性表面に結合する特異的色素ＳＹＰＲＯＯｒａｎｇｅの蛍光変化を測定して、タンパク質融点を決定する熱蛍光（Ｔｈｅｒｍｏｆｌｕｏｒ）法（熱シフトアッセイとも称する）を用いて、得た調製物の熱安定性比較研究を行った［３５］。ＳｔｅｐＯｎｅリアルタイムＰＣＲ系（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）装置および推奨されるプロトコルを用いて、突然変異体産物を研究した。研究結果を表３に示す。これらは、熱ストレス試験で得られる結果に相関し、この試験は、野生型３ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ４Ｂ１１に比較して、ｍｕｔ１およびｍｕｔ４の安定性を確証する。
【０１２４】
表  突然変異体の熱安定性研究
【０１２５】
【表３】
2017538656.tif 000004
【０１２６】
実施例１１
ＩＬ−１７ＡがＩＬ−６産生を誘導する能力をブロッキングする抗ＩＬ−１７Ａ  ３ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ４Ｂ１１突然変異体の細胞試験
ＩＬ−１７がヒトＨＴ１０８０細胞（ＡＴＣＣ：ＣＣＬ−１２１）によるＩＬ−６の産生を誘導する能力を用いて、ヒト組換えＩＬ−１７Ａに関する、ＶＨＨＩｇＧ１候補ｍｕｔ１およびｍｕｔ４の中和活性を分析した。１０％不活化胎児血清、ゲンタマイシンおよびグルタミンを添加したＤＭＥＭ培地上で、細胞を増殖させた。５＊１０４細胞／ウェルのアリコットを９６ウェル培養プレート中に植え付けた。細胞を５時間接着させた。４０ｎｇ／ｍｌ組換えＩＬ−１７および２０ｎｇ／ｍｌ  ＴＮＦ−αの混合物を、ＶＨＨＩｇＧ１希釈物とともに３７℃で１時間インキュベーションした。次いで、サイトカイン／抗体混合物を細胞に添加し、そして一晩放置した。ＨＴ１０８０細胞培養によるＩＬ−６の産生は、添加したＩＬ−１７の量に比例した。ＤｕｏＳｅｔ  ＥＬＩＳＡ発展系ヒトＩＬ６（ＲＤ  Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号ＤＹ２０６）を用いて、細胞上清試料中に放出されるＩＬ−６の量を、ＥＬＩＳＡ技術によって評価した。ＶＨＨＩｇＧ１候補のアンタゴニスト特性の評価から得られる結果を、ＡＩＮ４５７（Ｎｏｖａｒｔｉｓによる抗ＩＬ−１７Ａ抗体）との比較で、図７に提示する。ｍｕｔ１のＩＣ５０値は、天然変異体に関するものよりほぼ３０倍高く、一方、ｍｕｔ４変異体は、その阻害能をほぼ完全に維持した。ｍｕｔ４候補のＩＣ５０値は、３０±１０ｐＭであった。本研究で得た結果、ならびに全体の物理化学的および生物学的特性に基づいて、前記候補をさらなる発展および最適化のために選択した。
【０１２７】
実施例１２
ヒト軽鎖を含むｍｕｔ４ＶＨＨＦａｂ抗体のエンジニアリング
適切なプロトコル（ＱＩＡＧＥＮ）にしたがって、ＲＮｅａｓｙミニキットを用いて、５５人のヒトドナーから収集したＢリンパ球の総ＲＮＡを単離した。Ｎａｎｏｖｕｅキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてＲＮＡ濃度を測定し、そして単離ＲＮＡの品質を１．５％アガロースゲル電気泳動によって試験した。
【０１２８】
ＭＭｕＬＶ逆転写酵素およびランダム六量体プライマーを用いた推奨されるプロトコルにしたがって、ＭＭＬＶ  ＲＴキット（Ｅｖｒｏｇｅｎ）を用いて、逆転写反応を行った。
【０１２９】
２段階ポリメラーゼ連鎖反応において、マトリックスとして逆転写産物を用いて、制限部位が隣接した変異体ドメインの遺伝子を得た；オリゴヌクレオチドキットおよび［２７］に記載されるプロトコルを用いて、反応を行った。上に特定するような、ファージミドｐＨ５に基づいて、ＷＯ９３／０６２１３に記載される方法にしたがって、ＩＬ−１７Ａに対して特異的なキメラＦａｂを生成した。図８に示すような制限、連結および増幅の連続反応によって、ヒト軽鎖の可変ドメインをコードする遺伝子、およびｍｕｔ４ＶＨＨの可変ドメインをコードする遺伝子を１つの断片に組み立てた。この場合、すべての反応において、マトリックス分子の概算されるカウントは、１０１２以上であった。得たＤＮＡ産物（ＶＬ−ＣＫ−ＶＨ）を、ＮｈｅＩ／Ｅｃｏ９１Ｉ制限酵素で処理し、そして元来のファージミドｐＨ  ５に連結した。［３０］に記載されるプロトコルにしたがって調製したＳＳ３２０エレクトロコンピテント細胞に連結産物を形質転換した。混合カッパおよびラムダ・ヒト鎖に基づくキメラｍｕｔ４  ＶＨＨ  Ｆａｂライブラリーのレパートリーは、２．８＊１０９形質転換体であった。上に記載される方法［２７］にしたがって、キメラファージディスプレイＦａｂライブラリーを調製した。
【０１３０】
２０μｇ／ｍｌの溶解ＩＬ−１７Ａの存在下で、ＩＬ−１７Ａ結合ファージ抗体を３７℃の温度で１２時間、さらにインキュベーションすることを除いて、上記条件下（実施例５を参照されたい）で、ファージディスプレイキメラＦａｂライブラリーの選択を行った。
【０１３１】
ＩＬ−１７Ａに対する第二周期の選択後、ライブラリーの有意な濃縮が観察された。濃縮されたキメラｍｕｔ４  ＶＨＨ  Ｆａｂライブラリーの、得たプール・クローンを、標準プロトコル（実施例６を参照されたい）にしたがって、ＩＬ−１７Ａに関するスクリーニングに用いた。最終陽性クローンを配列決定に供した。図８Ｂは、高アフィニティｍｕｔ４  ＶＨＨＦａｂ由来の、ヒト軽鎖可変ドメインの４つの配列ＶＫ１Ａ７、ＶＫ３ｃ１８、ＶＫ３ｃ１１８およびＶＫ４ｃｌＥ１２を示す。これらの配列は、最少数の体細胞突然変異を含む、異なるカッパ・ヒト生殖系列ＶＫ１、ＶＫ３およびＶＫ４に属する。ヒト配列ＶＫ４ｃｌＥ１２が、以前選択されたラマ軽鎖ＶＫ４Ｂ１に高い相同性を示すが、なお特徴的な差異を有することに注目すべきである。
【０１３２】
実施例１３
多様な軽鎖変異体を含む全長ｍｕｔ４ＶＨＨＩｇＧ１抗体の熱凝集特性の比較分析
実施例３に記載するように、ＣＨＯ−ＥＢＮＡ細胞におけるジョイント一過性発現のため、ｍｕｔ４  ＶＨＨ候補の重鎖ＶＨＨ鎖の可変ドメイン遺伝子を、ｐＥＥ−Ｈｃプラスミドにクローニングし、そしてヒト軽鎖ＶＫ１Ａ７、ＶＫ３ｃ１８、ＶＫ３ｃ１１８、ＶＫ３Ａ４およびＶＫ４Ｅ１２の可変ドメイン遺伝子を、ｐＥＥ−Ｌｃプラスミドにクローニングした。さらに、実施例９に示すように、得た抗体を熱ストレスに曝露し、そして凝集プロファイルを調べた。得た結果を要約表に提示する（表４）。
【０１３３】
表４．  ｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１全長抗体の熱安定性
【０１３４】
【表４】
2017538656.tif 000005
【０１３５】
さらに、実施例１１に記載するものと同様の熱蛍光法を用いて、得た産物の比較熱安定性研究を行った。得たデータに基づくと、ヒト軽鎖を含む、選択したｍｕｔ４ＶＨＨ対は、ＶＶＫ４Ｂ１１ラマ軽鎖を含む天然変異体よりもより安定であった。したがって、比較研究において、最高の凝集安定性パラメータは、ｍｕｔ４ＶＨＨＩｇＧＧ１ＶＫ１Ａ７およびｍｕｔ４ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ３ｃ１８の組み合わせに関して示された。
【０１３６】
実施例１４
ｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ３ｃ８およびｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ１Ａ７を用いて、ＩＬ−１７ＡがＩＬ−６産生を誘導する能力をブロッキングする細胞試験
ＩＬ−１７がヒトＨＴ１０８０細胞（ＡＴＣＣ：ＣＣＬ−１２１）によるＩＬ−６産生を誘導する能力を用いて、ヒト組換えＩＬ−１７に関するＶＨＨＩｇＧ１候補ｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ３ｃ８およびｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ１Ａ７の中和能を分析した（実施例１２を参照されたい）。図９は、ブロッキング試験に関して得られる結果を示す。ｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ１Ａ７変異体（最大安定性によって特徴付けられる）は、ＩＣ５０値の有意な低下を示す一方、ｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ３ｃ８変異体（中程度の安定性）はより安定なｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ１Ａ７変異体に関して観察されるものを数倍超えた阻害を示している。
【０１３７】
実施例１５
ＶＨＨ可変ドメインのＦＲ２中の４４位および４５位に多様な突然変異を含むｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１全長抗体のエンジニアリング、ならびにその凝集および機能特性の比較分析
凝集安定性のさらなる改善の目的のため、オリゴヌクレオチド指示突然変異誘発の方法を用いて、ｍｕｔ４  ＶＨＨＩｇＧ１ＶＫ３ｃ８候補（以後、ｍ４ＶＨＨｃ８と称する）に関して、ＶＨＨのＦＲ２領域中の４４位および４５位に置換を導入した。研究には、４４位に芳香族、脂肪族または陽性アミノ酸を含む変異体は含まれず、これはこれらが潜在的に免疫原性であり、そして構造的に禁じられているためである。実施例３に記載するように、突然変異体を一過性に発現させた（図８）。異なる突然変異体に関する産物の量は、１つの実験と別の実験では多様であるが、同じ実験内の収量は、すべての置換に関して匹敵するサイズのものであることに注目すべきである。得た突然変異体を熱ストレスに曝露した。表５は、異なる突然変異体に関して得た結果を立証する。より安定でない突然変異体は４４Ｇ４５Ｇおよび４４Ｇ４５Ｄであり、その安定性はｍ４ＶＨＨｃ８内の最初の４４Ｇ４５Ｒの組み合わせに関するものよりも低い。４４Ｇ４５Ｎ、４４Ｖ４５Ｔ、４４Ｄ４５Ｔ、４４Ｔ４５Ｔおよび４４Ｄ４５Ｖのような変異体は、その安定性を有意に留めた。すべての他の組み合わせは、ｍ４ＶＨＨｃ８の増加した凝集安定性を生じる、付加された効果を立証し、そして最も安定なものは、４５位で芳香族または脂肪族基を含む変異体であった。しかし、両方の位で、小分子親水性および疎水性アミノ酸を含む変異体、例えば４４Ｇ４５Ｖ、４４Ｇ４５Ｔ、４４Ｖ４５Ｖ、４４Ａ４５Ｖ、４４Ｔ４５Ｖ、４４Ａ４５Ｔおよび４４Ｓ４５Ｔもまた、有意な安定性を示した。
【０１３８】
表５．  ｍ４ＶＨＨｃ８のＦＲ領域の４４位および４５位で置換を含む突然変異体の一過性発現および熱ストレス研究に関して得られた結果
【０１３９】
【表５】
2017538656.tif 000006
【０１４０】
＊異なるバッチにおける誤差は最大５％である
＊＊実験に応じて有意に異なる；同じバッチ内の産物に関しては、より正確な比較が提供される
＊＊＊異なるバッチにおける誤差は最大５０％である
実施例１２に記載するような細胞試験における中和活性を評価するため、多様な突然変異体を用いて実験を行った（図１１）。試験結果を表５に示す。ＶＨＨ  ＦＲ２の４４位および４５位での小分子アミノ酸は、高いアンタゴニスト活性を示し、一方、４５位に導入された巨大分子（脂肪族および芳香族）は、ＩＣ５０の１０倍の減少を生じた。図１２は、重鎖および軽鎖の可変ドメインの相互作用を決定する、多様なアミノ酸置換を含む突然変異体に関する安定性および機能特性の図を示す。
【０１４１】
実施例１６
抗ＩＬ１７Ａ  ３ＶＨＨドメインのスキャニング突然変異誘発
Ｑ５（登録商標）部位特異的突然変異誘発キット（ＮＥＢ）を、プロトコルにしたがって用いて、ＮＮＫランダム化技術［２６］によって、候補のＣＤＲの個々の位に突然変異を挿入した。プラスミドｐＬＬ−Ｆａｂをマトリックスとして用いた。低融点アガロース上でＰＣＲ産物を分画し、そして適切なカラム上で精製した。連結後、ＤＮＡを大腸菌発現株ＢＬ２１ゴールド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に形質転換した。次いで、得た個々のクローンを、上述のように、９６ウェルプレート中のＦａｂ発現によって得た。上述の条件下で、そして高性能Ｇｅｎｅｔｉｘ  Ｑ−ｐｉｘ２ｘｔおよびＴｅｃａｎ  Ｆｒｅｅｄｏｍ  ＥＶＯ２００系を用いたＥＬＩＳＡによって、突然変異体Ｆａｂアームを含有する上清を分析した。固定ＩＬ−１７Ａの濃度は０．２μｇ／ｍｌであった。結合したＦａｂアームを１：５０００希釈のヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ’）２（ＨＲＰ）コンジュゲート（Ｐｉｅｒｃｅ）およびＴＭＢ＋Ｈ２Ｏ２／Ｈ２ＳＯ４色素で染色した；４５０ｎｍ波長で吸収を測定した。
【０１４２】
スキャニング突然変異誘発によって得た結果を表６に示す。表は、ＣＤＲ内置換を示し、これらは、野生型配列に比較した際、突然変異体Ｆａｂ／ヒトＩＬ−１７Ａ結合シグナルの≦３０％減少に対応する。したがって、こうした個々の突然変異体またはその任意の組み合わせは、本発明の分野である。
【０１４３】
表６．  スキャニング突然変異誘発
【０１４４】
【表６】
2017538656.tif 000007
【０１４５】
したがって、アミノ酸置換に寛容性であるＢＣＤ１０９抗体ＣＤＲアミノ酸位に関して、スクリーニングを行った。アミノ酸置換の本パネルは、ヒトＩＬ−１７Ａに対する抗体アフィニティを有意に変化させないことが立証された。前記置換パネルを用いて、候補の多様な特性を改善することも可能である。
【０１４６】
実施例１７
ＢＣＤ１０９候補のエンジニアリング、および多様な起源のＩＬ−１７Ａに対するアフィニティの評価
抗体薬物動態学を改善する意図で、安定性またはＩＣ５０のいずれもを変化させない（データ未提供）ヒト化突然変異Ｑ５ＶおよびＲ８９ＶをＶＨＨに、そしてＣＨ２ドメインＦｃＩｇＧ１中に３つのさらなる突然変異２３２Ｙ／２３４Ｔ／２３６Ｅを導入することによって、４４Ｇ４５Ｔ置換を含むｍ４ＶＨＨｃ８変異体（実施例１６に記載）から、ＢＣＤ１０９抗体を得た。抗体を一過性に発現させた。
【０１４７】
ヒト、サルおよびラットＩＬ−１７ＡへのＢＣＤ１０９結合のアフィニティを、ＯｃｔｅｔＲｅｄ９６系（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）上で調べた。製造者のマニュアルに記載される標準プロトコルにしたがって、アミン反応性第二世代センサー（ＡＲ２Ｇ）表面上に、ＢＣＤ１０９を非特異的に固定した。３０℃で、そして作業緩衝液として０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０および０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳを用いて、試験を行った。
【０１４８】
ヒト、サルおよびラットＩＬ−１７Ａを２の増分で１２６ｎＭの濃度から２ｎＭの作業緩衝液で滴定した。
標準法にしたがって、そして１：１相互作用モデルを用いて、Ｏｃｔｅｔ  Ｄａｔａ分析ソフトウェア（バージョン７．０）結合曲線（参照シグナルを減じた後）を分析した。結果を図１３Ａに提示する。
【０１４９】
ＢＣＤ１０９が、ピコモルアフィニティで、ヒトおよびサルＩＬ−１７Ａに結合することがわかった（図１３Ｂ）。さらに、候補はラットＩＬ−１７Ａと相互作用しない（曲線を提示しない）。
【０１５０】
実施例１８
熱ストレス下でのＢＣＤ１０９凝集安定性の決定
ＰＢＳ中の１０ｍｇ／ｍｌのＢＣＤ１０９調製物を、実施例９に記載するプロトコルにしたがって、５０℃の温度で６時間加熱した。
【０１５１】
図１４に提示する結果は、熱ストレス下でＢＣＤ１０９抗体が安定なままであることを示す：凝集含量は５％未満であった。
実施例１９
本発明の抗体を含む、薬学的組成物の獲得
５０ｍｇ／ｍｌの濃度のＢＣＤ１０９抗体を、注射のために適量の水に溶解し、そしてクエン酸を用いてｐＨを５．５にした。溶液を濾過し（濾過滅菌）、そしてアンプル内に密封した。
【０１５２】
得た産物は、６ヶ月間、沈降を伴わず安定であった。
あるいは、ＢＣＤ１０９を、凍結保護剤としてマンニトールを含有する水に溶解し、濾過し（濾過滅菌）、そして次いで凍結乾燥に供した。得た粉末を無菌バイアルに分配した。バイアルにゴム栓をし、そしてアルミキャップで密封した。抗体産物を、注射用水で、凍結乾燥物から回復させることも可能である。
【０１５３】
参考文献
【０１５４】
【化１−１】
2017538656.tif 000008
【０１５５】
【化１−２】
2017538656.tif 000009
【０１５６】
【化１−３】
2017538656.tif 000010
【０１５７】
【化１−４】
2017538656.tif 000011
【図１】
2017538656.tif 000016
【図２−１】
2017538656.tif 000017
【図２−２】
2017538656.tif 000018
【図２−３】
2017538656.tif 000019
【図３】
2017538656.tif 000020
【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６−１】
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【図６−２】
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【図６−３】
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【図６−４】
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【図６−５】
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【図７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図９】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４】
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【国際調査報告】
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