(57)【要約】本発明は、レニン受容体、アンギオテンシンＩＩ受容体（２）及び分泌型レニン受容体を含むがこれらに限定されない、レニン−アンギオテンシン系の調節によって、腫瘍転移能を含む、腫瘍の（５）増殖及び拡大を根絶、又は緩徐化、又は予防するために、腫瘍内に存在する癌幹細胞集団の同定及び特異的標的化のための組成物及び方法を提供することによって、癌の診断及び癌の治療に対する新規なアプローチを提供する。
2017532368.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法であって、該方法は癌内の腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤（群）を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられる、該方法。
【請求項２】
前記癌幹細胞が、Ｃｒｉｐｔｏ、ＡＢＣＧ２、アルカリホスファターゼ／ＡＬＰＬ、ＣＤ９、ＦＧＦ−４、ＧＤＦ−３、インテグリンα６／ＣＤ４９ｆ、インテグリンβ１／ＣＤ２９、ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ３／４、ポドカリキシン、ＳＯＸ２、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、ＳＴＡＴ３、ＳＳＥＡ−１、ＦｏｘＤ３、ＤＰＰＡ５／ＥＳＧ１、Ｒｅｘ−１／ＺＦＰ４２、ＤＰＰＡ４、ＬＩＮ−２８Ａ、ＵＴＦ１、Ｌｅｆｔｙ−Ａ、Ｌｅｆｔｙ−１、ＴＢＸ３、ＥＳＧＰ、ＴＲＡ−１−６０（Ｒ）、ＴＲＡ−１−８１、５Ｔ４、ＴＢＸ２、ＺＩＣ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＫＬＦ５、ｃ−Ｍｙｃ、ＧＣＮＦ／ＮＲ６Ａ１、ＳＵＺ１２、Ｓｍａｄ２、ＣＤＸ２、ＴＲＯＰ−２、ＣＤ１１７／ｃ−ｋｉｔ、ＬＩＮ−４１、インテグリンα６β４、ＴＨＡＰ１１、Ｓｍａｄ２／３、ＴＢＸ５、ＴＥＸ１９、ＯＣＴ４Ａ、ＴＥＸ１９．１、ＤＰＰＡ２、アクチビンＲＩＢ／ＡＬＫ−４、アクチビンＲＩＩＢ、ＦＧＦ−５、ＧＢＸ２、Ｓｔｅｌｌａ／Ｄｐｐａ３、ＤＮＭＴ３Ｂ、Ｆ−ボックスタンパク質１５／ＦＢＸＯ１５、ＬＩＮ−２８Ｂ、インテグリンα６β１、ＫＬＦ４、ＥＲＲβ／ＮＲ３Ｂ２、ＥｐＣＡＭ／ＴＲＯＰ１、ＴＥＲＴ、ＣＨＤ１、Ｃｂｘ２、ｃ−Ｍａｆ、及びＬ１ＴＤ１からなる群より選択された１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現によって特徴付けられる、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記癌幹細胞が、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ及びＰＳＴＡＴ３からなる群より選択された１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現によって特徴付けられる、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記癌幹細胞が、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、及びＰＳＴＡＴ３からなる胚性幹細胞バイオマーカーの発現によって特徴付けられる、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記癌幹細胞が、レニン受容体、アンギオテンシンＩＩ受容体２、及び分泌型レニン受容体からなる群より選択された１つ以上のレニン−アンギオテンシン系バイオマーカーの発現によって特徴付けられる、請求項１〜４のいずれか一項記載の方法。
【請求項６】
前記癌が、頭頸部の扁平上皮細胞癌（上部気道消化管を含む）、皮膚の扁平上皮細胞癌、黒色腫、肺癌、乳癌、腎臓癌、脳癌、腸癌、甲状腺癌、前立腺癌、リンパ腫、白血病、及び肉腫からなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか一項記載の方法。
【請求項７】
前記癌が頭頸部の扁平上皮細胞癌である、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記治療剤が、直接的レニン阻害剤（ＤＲＩ）、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウム、ビタミンＤ、及びカルシウムチャネル遮断剤からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
必要とする患者における癌を予防、治療又は管理するための方法であって、該方法は癌に関連した腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）胚性幹細胞バイオマーカーのＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、及びＰＳＴＡＴ３の発現、並びに（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系バイオマーカーのレニン受容体及びアンギオテンシンＩＩ受容体２の発現によって特徴付けられ、該治療剤は、直接的レニン阻害剤（ＤＲＩ）、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウム、ビタミンＤ、及びカルシウムチャネル遮断剤からなる群より選択される、該方法。
【請求項１０】
被験者における癌の有無を決定するための方法であって、該方法は
（ｉ）バイオマーカー発現分析を使用して、被験者から得られた生物学的試料中に存在する癌幹細胞のレベルを検出及び／又は測定する工程；
（ｉｉ）対照集団の癌幹細胞レベルに対して、生物学的試料から得られた癌幹細胞レベルを比較する工程を含み、
ここで、対照集団と比較して、生物学的試料から得られた癌幹細胞の増加したレベルは、被験者が癌を有するか又は癌を発症する素因を有すると診断される、該方法。
【請求項１１】
被験者における癌の有無を決定するための方法であって、該方法は、
（ｉ）バイオマーカー発現分析を使用して、被験者から得られた生物学的試料中の癌幹細胞レベルを検出及び／又は測定する工程；
（ｉｉ）対照集団の癌幹細胞レベルに対して、生物学的試料から得られた癌幹細胞レベルを比較する工程、
ここで、対照集団と比較して、生物学的試料から得られた癌幹細胞の増加したレベルは、被験者が癌を有するか又は癌を発症する素因を有すると診断される、及び
（ｉｉｉ）癌を有するか又は癌を発症する素因を有する被験者に予防計画又は治療計画を投与する工程を含む、該方法。
【請求項１２】
癌の処置法に使用するための医薬組成物であって、該医薬組成物は、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な治療剤（群）を含み、該方法は、癌を有する患者に治療剤を投与する工程を含む、該医薬組成物。
【請求項１３】
前記治療剤が、直接的レニン阻害剤（ＤＲＩ）、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウム、ビタミンＤ、及びカルシウムチャネル遮断剤からなる群より選択される、請求項１２記載の医薬組成物。
【請求項１４】
癌の処置に使用するためのキットであって、該キットは、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な治療剤を、被験者への治療投与量の投与法に関する説明書と一緒に含む、該キット。
【請求項１５】
前記治療剤が、直接的レニン阻害剤（ＤＲＩ）、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウム、ビタミンＤ、及びカルシウムチャネル遮断剤からなる群より選択される、請求項１４記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、癌の診断及び癌の治療に対する新規なアプローチを提供する。特に、腫瘍の成長及び拡大（腫瘍転移能を含む）を根絶又は緩徐化又は予防するための腫瘍内に存在する癌幹細胞集団の同定及び特異的標的化は、本発明の範囲内であると考えられる。本発明は、特に、腫瘍の同定及び処置において有用である。
【０００２】
発明の背景
心臓血管疾患に次いで、癌は、およそ４人中１人の死亡率の原因である世界中で最も重大な健康上の容態の１つである。米国だけでも、医療費は年間数千億ドルに陥ると推定され、現在の直接支出はほぼ一千億ドルである。この支出は２０２０年までに２０７０億米ドルまで上昇すると推定されている。世界中の人口が高齢化するにつれて癌の発生率は幅広く増加すると予想され、さらにこの範囲の疾患の影響は増強される。１９７０年代及び１９８０年代に確立された現在の癌の処置計画は、劇的に変化していない。手術、放射線療法及び化学療法を含むこれらの処置、並びにより新規な標的化療法を含む他の治療法は、より進行したステージの癌で使用される場合には全生存期間に対して僅かな利点しか示していない。なぜなら、これらの治療法はとりわけ、腫瘍発生を駆り立てると考えられる癌幹細胞ではなく腫瘍塊を主に標的とするからである。
【０００３】
現在までの従来の癌の診断及び治療は、主に急速に成長している新生物細胞（すなわち、腫瘍塊を形成する細胞）を選択的に検出及び根絶することを試みている。標準的な癌処置計画は、主に、過度な毒性を伴わない最も高い用量の放射線を送達及び／又は化学療法剤（すなわち「最大耐用量」（ＭＴＤ）又は「無毒性量」（ＮＯＡＥＬ）と称されることが多い）を投与するように設計されていることが多い。癌制御を向上させるために、増加する毒性を犠牲にして、放射線療法に化学療法が加えられることが多い。多くの従来の癌化学療法（例えばアルキル化剤、例えばシクロホスファミド；代謝拮抗剤、例えば５−フルオロウラシル；植物アルカロイド、例えばビンクリスチン）及び従来の放射線療法は、主に、細胞成長及びＤＮＡ複製に関与している細胞機序に干渉することによって、癌細胞に対してその毒性作用を発揮する。化学療法プロトコールはまた、処置の効力を増加させるために化学療法剤の併用投与を含むことが多い。多種多様な化学療法剤が利用できるにも関わらず、これらの治療法は多くの限界を有する。例えば、化学療法剤は、正常であれ悪性であれ急速に成長している細胞に対する非特異的な作用に因り、毒性であることで悪名高い。例えば、化学療法剤は、骨髄抑制、免疫抑制、胃腸障害などをはじめとする重大でかつしばしば深刻な毒性を引き起こす。
【０００４】
他の種類の伝統的な癌療法としては、患者の新生物細胞を根絶させるための、手術、ホルモン療法、免疫療法、エピジェネティック療法、抗血管新生療法、標的化療法（例えば、グリベック（登録商標）及び他のチロシンキナーゼ阻害剤のベルケイド（登録商標）、スーテント（登録商標）などの薬剤を用いての癌標的に指向される療法）、及び放射線療法が挙げられる。これらの全てのアプローチは、併用されることが多いが、これは効力不足、毒性、及び生活の質の低下をはじめとする、患者にとって著しい欠点を課し得る。したがって、癌患者の生存期間及び低減された処置の副作用をはじめとする長期の展望を改善させるための新規でより有効な療法及び／又は計画が必要とされる。
【０００５】
癌幹細胞は、腫瘍の独特な亜集団（典型的には約０．１〜１０％）を含み、これは残りの９０％かそこらの腫瘍（すなわち腫瘍塊）と比較して、より腫瘍原性が高く、比較的より緩徐に成長しているか又は静止状態であり、しばしば腫瘍細胞よりも化学療法及び／又は放射線療法に対して抵抗性が高い。従来の療法及び計画は主に、急速に増殖中の細胞（すなわち腫瘍塊を含む癌細胞）を攻撃するように設計されているので、緩徐に成長していることが多い癌幹細胞は、従来の療法及び計画に対して急速に成長している腫瘍細胞よりも比較的より抵抗性が高い。さらに、癌幹細胞は、それらに多剤耐性などの化学療法剤耐性を与え、そして抗アポトーシス経路を発達及び／又は増強させる、他の特色を有し得る。これらの特色は、大半の患者、特により進行したステージの癌を有する患者において長期の利点を確実にすることに、標準的な癌処置が失敗する（すなわち、癌幹細胞を適切に標的化しかつ根絶するのに失敗する）ことに対する重要な理由を成すだろう。場合によっては、癌幹細胞（群）は、腫瘍の創設細胞である（すなわち、それは、腫瘍塊を含む癌細胞を生じる前駆細胞である）。
【０００６】
２つの癌幹細胞増殖モデルが提唱されている。確率モデルは、発癌突然変異は無作為に正常細胞内で起こり、そして腫瘍内のどの細胞も、腫瘍を再度惹起させる低いが同等な確率を有すると仮定する。これに対して、癌幹細胞モデルは、腫瘍が、腫瘍内に観察される異種細胞系統を発生する表現型的に明確に異なる癌細胞の小さな部分集合から生じると仮定する。
【０００７】
癌幹細胞は、残りの癌細胞集団とは区別されるいくつかの特性を有する。最も重要なことには、それらは非対称な細胞分裂を受け、これは１つの子孫細胞は親細胞と同じままであるが、他方は違うという独特な種類の細胞分裂である。正常な成体組織では、自己再生は、成体幹細胞によって専ら示される。胚性幹細胞と同様に、癌幹細胞は腫瘍細胞階級の上位に座し、刺激に応答して分化スペクトルに沿って異常な様式であるがさらに細胞を発生することができる。癌幹細胞はまた、化学療法及び放射線療法に対しても抵抗性であり、これはなぜ従来の処置が癌の治癒において無効であり、一般的により悪性の形態では再発が起こるのかを説明することができる。さらに、いくつかの癌幹細胞は比較的静止状態であり、これにより癌幹細胞は高度に増殖中の細胞を標的化する薬物から遮蔽される。最終的に、癌幹細胞は、癌の転移を起こし得る。
【０００８】
癌幹細胞は、多種多様な癌の種類において同定されている。例えば、ＣＤ３４＋ＣＤ３８−という特定の表現型を有する白血病細胞（所与の白血病の１％未満に含まれる）は、白血病塊の残りの９９＋％とは異なり、免疫不全マウスに導入された場合にそれが誘導された時から白血病を再現することができた（Bonnet et al. (1997) Nat Med 3:730-737）。すなわち、これらの癌幹細胞は、１０，０００個中１個未満の白血病細胞として見られるが、この低頻度出現率の集団は、元来の腫瘍と同じ組織学的表現型を有するヒト白血病を重症複合免疫不全症／非肥満糖尿病（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウスに惹起しかつ連続的に導入することができる。
【０００９】
例えばヒト乳癌（ＣＤ４４＋ＣＤ２４low lin；Al-Hajj et al. (2003) Proc Nat. Acad. Sci USA 100:3983-3988）、ヒト急性リンパ芽球性白血病（ＣＤ３４＋ＣＤ１０−、ＣＣ３４＋ＣＤ１９−；Cox et al. (2004) Blood 104(19):2919-2925）、及び多発性骨髄腫（ＣＤ１３８−；Matsui et al. (2004) Blood 103(6):2332）から単離された癌幹細胞を含む類似した研究は全て、マウスにおける再現研究において増加した腫瘍形成能を有することを示した。
【００１０】
従来の癌療法は、急速に増殖中の細胞（すなわち、腫瘍塊を形成する細胞）を標的化するので、これらの処置は、癌幹細胞を標的化し損傷するには比較的無効であると考えられている。事実、癌幹細胞（白血病幹細胞を含む）は、従来の化学療法剤（例えばＡｒａ−Ｃ、ダウノルビシン）並びにより新規な標的化療法（例えばグリベック（登録商標）、ベルケイド（登録商標））に対して比較的抵抗性であることが示されている。例えば、白血病幹細胞は、比較的緩徐に成長しているか又は静止状態であり、多剤耐性遺伝子を発現し、そして他の抗アポトーシス機序を使用し、これはその化学療法剤に対する抵抗性の原因となる特色である。さらに、その化学療法剤に対する抵抗性は、癌幹細胞は処置の失敗の原因となり得、また、処置後も残存し得るか、又は後日に見かけ上の初回の臨床的寛解後に再発し得る。
【００１１】
癌幹細胞の標的化は、癌患者に対して改善された長期の転帰を提供すると予想される。したがって、より成功裏の治療転帰を達成するために癌幹細胞を標的とするように設計された新規な治療剤及び／又は処置を提供する必要が存在する。本発明は、この問題に対処することを探究する。
【００１２】
発明の要約
本明細書に記載され特許請求されている本発明は、本発明の要約に示されるか又は記載されるか又は参照されたものを含むがこれらに限定されない、多くの特質及び実施態様を有する。それは包括的である意図はなく、本明細書に記載され特許請求された本発明は、本発明のこの要約に同定される特色又は実施態様に制限されないか又はこれによって制限されず、該特色又は実施態様は説明のためだけに含まれ制限のためではない。
【００１３】
出願人は、調べた主要な臓器系を冒す幅広い様々な腫瘍型に関連していることが示された、癌幹細胞の個別の集団を同定した。したがって、これらの癌幹細胞及び癌幹細胞集団の同定は、癌の管理、並びに、予後予測、診断、及び経過観察への適用に対して新規なアプローチを提供する。さらに、出願人は驚くべきことに、これらの癌幹細胞が、例えばレニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）、例えばプロ／レニン受容体系（ＰＲＲＳ）及び関連した迂回経路を含む、重要な調節系に関連したマーカーを発現することを実証した。この新規な洞察は、癌幹細胞集団を根絶、又はその成長、増殖、及び／若しくは分化を停止する試みにおいてこれらの調節経路を特異的に標的化する確立された薬物及び／又は新規な薬物を使用することによって、癌の管理における新規な標的及び独特な治療機会を提供する。これは、新生腫瘍及び確立された腫瘍の腫瘍形成能及び転移能の両方を低減させる能力を有する。
【００１４】
したがって、本発明の１つの態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌内の腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられる。
【００１５】
本発明の別の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられ、該癌は、固形癌又は血液の癌である。
【００１６】
さらに別の本発明の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられ、該腫瘍は、口腔の扁平上皮細胞癌、皮膚の扁平上皮細胞癌、黒色腫、肺癌、乳癌、腎臓癌、脳癌、腸癌、甲状腺癌、前立腺癌、リンパ腫、白血病、及び肉腫からなる群より選択される。
【００１７】
またさらなる本発明の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられ、該腫瘍は、扁平上皮細胞癌である。
【００１８】
本発明の別の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）Ｃｒｉｐｔｏ、ＡＢＣＧ２、アルカリホスファターゼ／ＡＬＰＬ、ＣＤ９、ＦＧＦ−４、ＧＤＦ−３、インテグリンα６／ＣＤ４９ｆ、インテグリンβ１／ＣＤ２９、ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ−３／４、ポドカリキシン、ＳＯＸ２、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、ＳＴＡＴ３、ＳＳＥＡ−１、ＦｏｘＤ３、ＤＰＰＡ５／ＥＳＧ１、Ｒｅｘ−１／ＺＦＰ４２、ＤＰＰＡ４、ＬＩＮ−２８Ａ、ＵＴＦ１、Ｌｅｆｔｙ−Ａ、Ｌｅｆｔｙ−１、ＴＢＸ３、ＥＳＧＰ、ＴＲＡ−１−６０（Ｒ）、ＴＲＡ−１−８１、５Ｔ４、ＴＢＸ２、ＺＩＣ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＫＬＦ５、ｃ−Ｍｙｃ、ＧＣＮＦ／ＮＲ６Ａ１、ＳＵＺ１２、Ｓｍａｄ２、ＣＤＸ２、ＴＲＯＰ−２、ＣＤ１１７／ｃ−ｋｉｔ、ＬＩＮ−４１、インテグリンα６β４、ＴＨＡＰ１１、Ｓｍａｄ２／３、ＴＢＸ５、ＴＥＸ１９、Ｏｃｔ−４Ａ、ＴＥＸ１９．１、ＤＰＰＡ２、アクチビンＲＩＢ／ＡＬＫ−４、アクチビンＲＩＩＢ、ＦＧＦ−５、ＧＢＸ２、Ｓｔｅｌｌａ／Ｄｐｐａ３、ＤＮＭＴ３Ｂ、Ｆ−ボックスタンパク質１５／ＦＢＸＯ１５、ＬＩＮ−２８Ｂ、インテグリンα６β１、ＫＬＦ４、ＥＲＲβ／ＮＲ３Ｂ２、ＥｐＣＡＭ／ＴＲＯＰ１、ＴＥＲＴ、ＣＨＤ１、Ｃｂｘ２、ｃ−Ｍａｆ、Ｌ１ＴＤ１からなる群より選択された１つ以上の幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられる。
【００１９】
また別の本発明の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ及びＰＳＴＡＴ３からなる群より選択された１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、並びに（ｉｉ）レニン受容体（ＲＲ）、アンギオテンシンＩＩ受容体２、及び分泌型レニン受容体（ｓＲＲ）からなる群より選択されたレニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられる。
【００２０】
またさらなる本発明の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤（群）を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）Ｏｃｔ−４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ及びＰＳＴＡＴ３からなる群より選択された１つ以上の幹細胞バイオマーカーの発現、並びに（ｉｉ）レニン受容体、アンギオテンシンＩＩ受容体２及び分泌型レニン受容体からなる群より選択されたレニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられ、該治療剤は、直接的レニン阻害剤（ＤＲＩ）、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウム、ビタミンＤ、及びカルシウムチャネル遮断剤からなる群より選択される。
【００２１】
また別の本発明の態様では、被験者における癌の有無を決定するための方法が提供され、該方法は
（ｉ）バイオマーカー発現分析を使用して、被験者から得られた生物学的試料中に存在する癌幹細胞のレベルを検出及び／又は測定する工程；
（ｉｉ）対照集団の癌幹細胞レベルに対して、生物学的試料から得られた癌幹細胞レベルを比較する工程
を含み、ここで、対照集団と比較して、生物学的試料から得られた癌幹細胞の増加したレベルは、被験者が癌を有するか又は癌を発症する素因を有すると診断される。
【００２２】
別の本発明の態様では、被験者における癌の有無を決定するための方法が提供され、該方法は
（ｉ）バイオマーカー発現分析を使用して、被験者から得られた生物学的試料中の癌幹細胞のレベルを検出及び／又は測定する工程；
（ｉｉ）対照集団の癌幹細胞レベルに対して、生物学的試料から得られた癌幹細胞レベルを比較する工程、
ここで、対照集団と比較して、生物学的試料から得られた癌幹細胞の増加したレベルは、被験者が癌を有するか又は癌を発症する素因を有すると診断される、及び
（ｉｉｉ）癌を有するか又は癌を発症する素因を有する被験者に予防計画又は治療計画（群）を投与する工程を含む。
【００２３】
本発明の別の態様では、癌の処置法に使用するための医薬組成物が提供され、該医薬組成物は、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な治療剤を含み、該方法は癌を有する患者に治療剤を投与する工程を含む。
【００２４】
本発明の別の態様では、癌の処置に使用するためのキット又は製品が提供され、該キットは、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な治療剤を、被験者への治療投与量の投与法に関する説明書と一緒に含む。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】図１は、レニンアンギオテンシン系に関連した主要な経路を示す。ＡＣＥ：アンギオテンシン変換酵素；ＡＣＥＩ：アンギオテンシン変換酵素阻害剤；Ｃｏｘ２ｉ：Ｃｏｘ２阻害剤；β遮断剤：ベータ遮断剤；ＡＴＩＩＲ２：アンギオテンシンＩＩ受容体２；ＡＴＩＩＲ１：アンギオテンシンＩＩ受容体１；（プロ）−ＲＲ：プロ（レニン）受容体［レニン受容体（ＲＲ）とも呼ばれる］；ＶｉｔＤ：ビタミンＤ；ＸＸ：大きな遮断；＋＋：大きな促進工程。
【図２】図２は、レニンアンギオテンシン系に関連した複合経路を示す。ＡＣＥ：アンギオテンシン変換酵素；ＡＣＥＩ：アンギオテンシン変換酵素阻害剤；Ｃｏｘ２ｉ：Ｃｏｘ２阻害剤；β遮断剤：ベータ遮断剤；ＡＴＩＩＲ２：アンギオテンシンＩＩ受容体２；ＡＴＩＩＲ１：アンギオテンシンＩＩ受容体１；（プロ）−ＲＲ：プロ（レニン）受容体［レニン受容体（ＲＲ）とも呼ばれる］；ＶｉｔＤ：ビタミンＤ；ＸＸ：大きな遮断；ｘ：小さな遮断；＋＋：大きな促進工程；＋：小さな遮断工程。
【図３】図３は、個々の免疫組織化学的染色プロファイルによって証明されるような、口腔舌扁平上皮細胞癌（ＯＴＳＣＣ）に関連した癌幹細胞集団による、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図４】図４は、ＲＲに特異的な抗体、すなわち抗ＡＴＰ６ＩＰ２一次抗体（ａｂ４０７９０）及びヤギ抗ウサギＨＲＰ二次抗体（Ａ１６１１０）を使用したＯＴＳＣＣ癌幹細胞のウェスタンブロット分析を示す。予測される３９ｋＤａのレニン受容体タンパク質バンドは、分析した両方のＯＴＳＣＣ試料に存在していた。ヒト肝臓組織に関連した細胞又は二次抗体のみ（陰性対照）では染色は観察されなかった。
【図５】図５Ａ及び５Ｂは、ＯＴＳＣＣに関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図５Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的共染色を示す。図５Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図６】図６は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、黒色腫に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図７】図７Ａ及び７Ｂは、黒色腫に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図７Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図７Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図８】図８は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、肉腫（平滑筋肉腫）に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図９】図９Ａ及び９Ｂは、肉腫に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図９Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図９Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図１０】図１０は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、腸癌に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図１１】図１１Ａ及び１１Ｂは、腸癌に関連した癌幹細胞集団におけるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図１１Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的共染色を示す。図１１Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図１２】図１２は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、脳癌（多形神経膠芽腫）に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図１３】図１３Ａ及び１３Ｂは、脳癌（多形神経膠芽腫）に関連した癌幹細胞集団におけるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図１３Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図１３Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図１４】図１４は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、乳癌に関連した癌幹細胞集団におけるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図１５】図１５Ａ及び１５Ｂは、乳癌に関連した癌幹細胞集団におけるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図１５Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図１５Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図１６】図１６は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、肺癌（転移性肺腺癌）に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図１７】図１７Ａ及び１７Ｂは、肺癌（転移性肺腺癌）に関連した癌幹細胞集団におけるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図１７Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図１７Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図１８】図１８は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、Ｂ細胞リンパ腫に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図１９】図１９Ａ及び１９Ｂは、Ｂ細胞リンパ腫に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図１９Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図１９Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図２０】図２０は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、腎臓癌（転移性腎細胞癌）に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図２１】図２１Ａ及び２１Ｂは、腎臓癌（転移性腎細胞癌）に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図２１Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図２１Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図２２】図２２は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、甲状腺癌に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図２３】図２３Ａ及び２３Ｂは、甲状腺癌に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図２３Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図２３Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図２４】図２４は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、慢性リンパ性白血病に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図２５】図２５Ａ及び２５Ｂは、慢性リンパ性白血病に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図２５Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図２５Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図２６】図２６は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、皮膚扁平上皮細胞癌に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図２７】図２７Ａ及び２７Ｂは、皮膚扁平上皮細胞癌に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図２７Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図２７Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図２８】図２８は、免疫組織化学的染色プロファイルによって証明される、前立腺癌に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲの発現を示す。
【図２９】図２９Ａ及び２９Ｂは、前立腺癌に関連した癌幹細胞集団によるＯＣＴ４及びＲＲの共局在を示す。図２９Ａは、ＯＣＴ４及びＲＲに特異的な抗体を使用した免疫組織化学的染色を示す。図２９Ｂは、ＯＣＴ４（点）及びＲＲ（長い点線）についての相対的蛍光シグナルの定量を示す。
【図３０】図３０は、それぞれの陽性対照である、ヒトセミノーマ組織試料におけるＯＣＴ４及びＳＯＸ２、ヒト腎臓におけるＡＴＩＩＲ２、並びにヒト胎盤組織におけるＲＲの発現を示す。陰性対照は、脳癌（多形神経膠芽腫）組織切片において一次抗体の非存在下で無染色を示す。
【００２６】
選択された定義
特記しない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の技術者には一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似した又は同等なあらゆるアッセイ、方法、装置、及び材料を、本発明の実施又は試験に使用することができるが、様々なアッセイ、方法、装置及び材料をこれから記載する。
【００２７】
本明細書に開示された数字の範囲（例えば１〜１０）への言及はまた、その範囲内の全ての関連した数字（例えば１、１．１、２、３、３．９、４、５、６、６．５、７、８、９、及び１０）、及びまたその範囲内の任意の範囲の有理数（例えば２〜８、１．５〜５．５、及び３．１〜４．７）への言及も取り込み、それ故、本明細書に明示的に開示された全ての範囲の全ての部分範囲が明示的に開示されることを意図する。これらは、具体的に意図されるものの単なる例であり、列挙された最も低い数値から最も高い数値までの間の数値の全ての可能な組合せが、本出願において同じように明示的に記載されていると考えられる。
【００２８】
本明細書において使用する「含む」、「含んでいる」という語句及び類似の語句は、排他的又は網羅的な意味で解釈されるものではない。換言すれば、それらは、「を含むがこれらに限定されない」を意味することを意図する。
【００２９】
本明細書において使用する「抗体」という用語は、抗原結合部位を含有している分子、例えば免疫グロブリンを指す。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えばＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。抗体としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異的抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、ラクダ科抗体、キメラ抗体、単一ドメイン抗体、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィドで連結されたＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば本発明の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）、及び上記のいずれかのエピトープ結合断片が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３０】
本明細書において使用する「癌」という用語は、制御不能な細胞の異常増殖によって生じる新生物又は腫瘍を指す。「癌」という用語は、前悪性癌細胞及び悪性癌細胞の両方を含む疾患を包含する。いくつかの例では、癌は、被験者の他の部分には広がっていない局所的な細胞の過増殖、すなわち良性腫瘍を指す。他の例では、癌は、隣接している体内構造に浸潤しそして破壊した及び／又は遠隔部位まで広がった、悪性腫瘍を指す。
【００３１】
本明細書において使用する「癌細胞」という用語は、アポトーシス回避能、増殖シグナルを自己充足する、抗増殖シグナルに対して非感受性である、組織への浸潤／転移、著しい増殖能、及び／又は持続的な血管新生をはじめとする、その発生中に特徴的なセットの機能的能力を獲得する細胞を指す。「癌細胞」という用語は、前悪性癌細胞及び悪性癌細胞の両方を包含することを意味する。
【００３２】
本明細書において使用する「癌幹細胞（群）」という用語は、高度に増殖性の癌細胞の前駆細胞であり得る細胞を指す。癌幹細胞は、非対称的な分裂能、及び免疫不全マウスにおけるその腫瘍形成能によって実証されるような腫瘍を再増殖させる能力、及び典型的には免疫不全マウスへのその後の連続的移植時の腫瘍形成能を有する。癌幹細胞はまた典型的には、腫瘍塊と比較して緩徐に成長し；すなわち、癌幹細胞は一般的に静止状態である。特定の例においてであって全ての例においてではないが、癌幹細胞は、腫瘍の約０．１〜１０％を占め得る。
【００３３】
本明細書において使用する「癌幹細胞集団」という用語は、１つ以上の癌幹細胞、換言すれば、単一の癌幹細胞又は複数の癌幹細胞を意味することが意図され、単一の癌幹細胞又は複数の癌幹細胞は、所与の癌の腫瘍発生を駆り立てることができる。
【００３４】
本明細書において使用する「扁平上皮細胞癌」という用語は、皮膚、上部気道消化管（口腔を含む）及び副鼻腔、食道、肺、及び子宮頚部、並びに扁平上皮細胞分化を示す他の器官をはじめとする、多くの異なる器官に見られる上皮腫瘍を指す。頭頸部扁平上皮細胞癌、肺扁平上皮細胞癌、皮膚扁平上皮細胞癌、耳扁平上皮細胞癌、外陰部扁平上皮細胞癌、子宮頚部扁平上皮細胞癌、食道扁平上皮細胞癌、上部気道消化管及び副鼻腔の扁平上皮細胞癌などが含まれる。
【００３５】
本明細書において使用する「レニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）」又は「レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）」という用語は、血圧及び体液バランスを調節するホルモン系である。ＲＡＳに関連したより広い経路はまた、プロ／レニン受容体系（ＰＲＲＳ）及び関連した迂回経路も含む。例えば、図１及び２を参照されたい。以下においてより詳細に記載されているように、ＲＡＳ（ＰＲＲＳを含む）を標的とする多くの公知の薬物が存在する。
【００３６】
本明細書において使用する「有効量」という用語は、癌及びその１つ以上の症状の発生、再発、若しくは発症を予防するのに、別の療法の予防効果（群）を増強若しくは改善するのに、癌の重度、持続時間を低減させるのに、癌の１つ以上の症状を寛解するのに、癌の進行を予防するのに、癌の退縮を引き起こすのに、並びに／又は別の療法の治療効果（群）を増強若しくは改善するのに十分な療法の量を指す。本発明の一例では、療法の量は、１つ、２つ、３つ、又はそれ以上の療法の投与後に１つ、２つ、又は３つ、又はそれ以上の結果を達成するのに有効である：（１）癌幹細胞集団の安定化、低減、又は根絶；（２）癌細胞集団の安定化、低減、又は根絶；（３）腫瘍又は新生物の増殖の安定化又は低減；（４）腫瘍の形成を損なう；（５）原発性、限局性及び／又は転移性癌の根絶、除去、又は制御；（６）死亡率の低減；（７）無病生存期間、無再発生存期間、無進行生存期間、及び／若しくは全生存期間、又は無病生存率、無再発生存率、無進行生存率、及び／若しくは全生存率の増加；（８）応答率、応答持続性、又は応答若しくは寛解する患者数の増加；（９）入院率の低減、（１０）入院期間の短縮、（１１）腫瘍サイズは維持され、そして増加しないか、又は１０％未満、好ましくは５％未満、好ましくは４％未満、好ましくは２％未満増加する、（１２）寛解する患者数の増加、（１３）寛解の期間又は持続時間の増加、（１４）癌再発率の減少、（１５）癌再発までの時間の延長、並びに（１６）癌に関連した症状及び／又は生活の質の寛解。
【００３７】
本明細書において使用する被験者への療法の投与の状況における「管理する」、「管理している」及び「管理」という用語は、癌は治癒されないけれども、被験者が療法（例えば予防剤又は治療剤）又は併用療法から得られる有益な効果を指す。特定の例では、被験者は、癌を「管理して」容態の進行又は悪化を防ぐために１つ以上の療法（例えば１つ以上の予防剤又は治療剤）を投与される。
【００３８】
本明細書において使用する被験者への療法の投与の状況における「予防する」、「予防している」及び「予防」という用語は、療法（例えば予防剤又は治療剤）又は併用療法（例えば予防剤又は治療剤の併用）の投与からもたらされる、被験者における癌又はその症状の再発、発症、及び／又は発達の予防又は抑制を指す。いくつかの例では、このような用語は、１つ以上の療法の投与後の１つ、２つ、３つ、又はそれ以上の結果を指す：（１）癌幹細胞集団の安定化、低減、又は根絶、（２）癌細胞集団の安定化、低減、又は根絶、（３）応答率の増加、（４）寛解持続時間の増加、（５）癌の再発率の低下、（６）癌再発までの時間の延長、（７）患者の無病生存期間、無再発生存期間、無進行生存期間、及び／又は全生存期間の増加、並びに（８）癌に関連した症状及び／又は生活の質の寛解。具体例では、このような用語は、癌幹細胞集団の安定化、低減、又は根絶を指す。
【００３９】
本明細書において使用する組織（例えば正常細胞又は腫瘍細胞）の状況における「マーカー」又は「バイオマーカー」という用語は、疾患又は障害、例えば癌に冒された特定の組織内又は組織上で同定されることが望まれるか又は同定される、組織内又は組織上に特にみられる、任意の抗原、分子、又は他の化学的若しくは生物学的実体を意味する。「腫瘍原性バイオマーカー」という用語はまた、癌の状況におけるこの定義に関連している。具体例では、マーカーは、特定の細胞型によって異なって又は優先的に発現される細胞表面抗原である。具体例では、マーカーは、特定の細胞型によって異なって又は優先的に発現される核内抗原である。具体例では、マーカーは、特定の細胞型によって異なって又は優先的に発現される細胞内抗原である。
【００４０】
本明細書において使用する「予防剤」という用語は、癌を予防する目的で使用される、任意の分子、化合物、及び／又は物質を指す。予防剤の例としては、タンパク質、免疫グロブリン（例えば多重特異的Ｉｇ、一本鎖Ｉｇ、Ｉｇ断片、ポリクローナル抗体及びその断片、モノクローナル抗体及びその断片）、抗体コンジュゲート又は抗体断片コンジュゲート、ペプチド（例えばペプチド受容体、セレクチン）、結合タンパク質、化学特異的薬剤、走化性薬剤（例えば抗癌剤）、増殖に基づいた療法、及び低分子薬物が挙げられるがこれらに限定されない。
【００４１】
本明細書において使用する「治療剤」という用語は、疾患又は障害を処置及び／又は管理する目的で使用される、任意の分子、化合物、及び／又は物質を指す。治療剤の例としては、タンパク質、免疫グロブリン（例えば多重特異的Ｉｇ、一本鎖Ｉｇ、Ｉｇ断片、ポリクローナル抗体及びその断片、モノクローナル抗体及びその断片）、ペプチド（例えばペプチド受容体、セレクチン）、結合タンパク質、生物学的製剤、化学特異的薬剤、走化性薬剤（例えば抗癌剤）、増殖に基づいた治療剤、ホルモン剤、放射免疫療法剤、標的化剤、エピジェネティック療法剤、分化療法剤、生物学的薬剤、放射線剤、化学療法剤、抗血管新生剤、及び低分子薬物が挙げられるがこれらに限定されない。
【００４２】
本明細書において使用する「療法群」及び「療法」という用語は、癌又はその１つ以上の症状の予防、治療、及び／又は管理に使用することのできる、任意の方法（群）、組成物（群）、及び／又は薬剤（群）を指し得る。特定の例では、「療法」及び「療法群」という用語は、癌又はその１つ以上の症状の予防、管理、及び／又は治療に有用な、化学療法、放射線療法、手術、ホルモン療法、抗血管新生療法、生物学的療法、増殖に基づいた療法、プロドラッグ活性化酵素療法、低分子療法、毒素療法、抗体療法、免疫療法、放射線免疫療法、標的化療法、エピジェネティック療法、脱メチル化療法、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤療法、分化療法、及び／又は他の療法を指す。
【００４３】
本明細書において使用する被験者への療法の投与の状況における「処置する」、「処置」及び「処置している」という用語は、１つ以上の療法の投与から生じた、癌の進行及び／又は持続時間の低減又は抑制、癌の重度の低減又は寛解、並びに／あるいは、その１つ以上の症状の寛解を指す。具体例では、このような用語は、１つ、２つ、３つ、又はそれ以上の療法の投与後の１つ、２つ、又は３つ、又はそれ以上の結果を指す：（１）癌幹細胞集団の安定化、低減、又は根絶；（２）癌細胞集団の安定化、低減、又は排除；（３）腫瘍又は新生物の増殖の安定化又は低減；（４）腫瘍の形成を損なう；（５）原発性、限局性、及び／又は転移性癌の根絶、除去、又は制御；（６）死亡率の低減；（７）無病生存期間、無再発生存期間、無進行生存期間、及び／若しくは全生存期間、又は無病生存率、無再発生存率、無進行生存率、及び／若しくは全生存率の増加；（８）応答率、応答持続性、又は応答若しくは寛解する患者数の増加；（９）入院率の低減、（１０）入院期間の短縮、（１１）腫瘍サイズは維持され、そして増加しないか、又は１０％未満、好ましくは５％未満、好ましくは４％未満、好ましくは２％未満増加する、並びに（１２）寛解する患者数の増加。特定の例では、このような用語は、癌幹細胞集団の安定化又は低減を指す。いくつかの例では、このような用語は、癌細胞の増殖の安定化又は低減を指す。いくつかの例では、このような用語は、癌幹細胞集団の安定化又は低減、及び癌細胞集団の低減を指す。いくつかの例では、このような用語は、腫瘍の成長及び／又は形成の安定化又は低減を指す。いくつかの例では、このような用語は、原発性、限局性、又は転移性癌の根絶、除去、又は制御（例えば癌の最小化又は拡大の遅延）を指す。いくつかの例では、このような用語は、死亡率の減少及び／又は患者集団の生存率の上昇を指す。さらなる例では、このような用語は、応答率、応答持続性、又は応答若しくは寛解する患者数の増加を指す。いくつかの例では、このような用語は、患者集団の入院率の低減、及び／又は患者集団の入院期間の短縮を指す。
【００４４】
本明細書において使用する「試料」又は「生物学的試料」という用語は、被験者から採取された又は得られた任意の試料を意味する。このような試料は被験者から得られても、又は、被験者に提供されることが意図される生物学的材料から得られてもよい。例えば、試料は、例えば、被験者の癌の状態を調べるために、評価される血液から得られる。正常な健康被験者及び／又は健康な被験者などの任意の被験者から採取された又は得られた試料が含まれ、それら被験者のためにその癌の状態を解明することが有用である。好ましい試料は生物学的液体試料である。本明細書において使用する「生物学的液体試料」という用語は、患者などの関心対象の被験者の、例えば診断、予後予測、分類、又は評価の目的のために得られた体液試料を指す。特定の実施態様では、このような試料は、患者の癌の状態を決定する目的のために得られる。試料は、癌幹細胞を検出することのできる当技術分野において公知の任意の試料であり得る。例えば、全血試料、血漿、血清、卵胞液体試料、精液試料、脳脊髄液、唾液、痰、尿、胸水、間質液、滑液、リンパ液、涙液などの任意の体液が含まれるが、全血試料、血漿、及び血清が本発明において使用するのに特に適している。さらに、当業者は、特定の体液試料が、分画手順又は精製手順後に、例えば全血を血清又は血漿成分へと分離した後に、より容易に分析されるだろうことを理解しているだろう。
【００４５】
本明細書において使用する「精製された」という用語は、絶対的な純度を必要としない。精製とは、１つの実施態様では、一例を挙げると、試料中のポリペプチド又は抗体の少なくとも９０％、又は９５％、又は９８％、又は９９％の均一率を指す。
【００４６】
本明細書において使用する「被験者」という用語は好ましくは哺乳動物であり、これにはヒト、及び非ヒト哺乳動物、例えばネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ヒツジ、シカ、マウス、ラット、霊長類（ゴリラ、アカゲザル、及びチンパンジーを含む）、ポッサム、及び他の家畜又は動物園の動物が挙げられる。したがって、本明細書に記載されたアッセイ、方法、及びキットは、ヒト及び非ヒト動物の両方、特に、以下に制限されることはないが、ヒト、霊長類、家畜、例えばウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、シカ、アルパカ、ラマ、バッファーロー、ペット及び／又は純血種の動物、例えばネコ、イヌ、及びウマへの適用を有する。好ましい被験者はヒト、最も好ましくは、本明細書において使用されるように、疾患又は容態のための医療又は評価を受ける可能性のある又は受けている生存しているヒトを指す「患者」である。さらに、被験者は好ましくは生存している生物であるが、本明細書に記載の本発明は、同様に死後の分析にも使用され得る。
【００４７】
本明細書において使用する「ＥＬＩＳＡ」という用語は、試料中の分析物の量を定量するのに使用される抗体と検出可能な標識とを含む、競合結合アッセイの一種である酵素結合免疫吸着アッセイを意味する。
【００４８】
本明細書において使用する「捕捉抗体」という用語は、プレート、ビーズ又はチューブなどの固相支持体上に典型的には固定された抗体を意味し、該抗体は、関心対象の分析物（群）、例えば癌幹細胞集団に関連した膜結合マーカーに結合しそして捕捉する。
【００４９】
本明細書において使用する「検出抗体」という用語は、関心対象の分析物（群）に結合する検出可能な標識を含む抗体を意味する。標識は、関心対象の分析物（群）、例えば癌幹細胞集団に関連した膜結合マーカーの定量的、半定量的、又は定性的測定のための慣用的な検出手段を使用して検出され得る。
【００５０】
本明細書において使用する分析物の「存在又は量に関連している」という用語は、アッセイシグナルが、典型的には、関心対象の既知濃度の分析物を使用して計算された標準曲線の使用を通して、分析物の存在又は量に関連していることを反映している。該用語が本明細書において使用される場合には、アッセイが生理学的に関連した濃度の分析物の存在又は量を示す検出可能なシグナルを発生することができる場合に、アッセイは分析物を「検出するように設定」されている。典型的には、試料中の分析物を測定する。
【００５１】
１つの実施態様における対照よりも「より高い」若しくは「より低い」レベル、又は対照（レベル）からの「変化」若しくは「逸脱」は、統計学的に有意である。対照レベル又は平均又は歴史的対照レベルより高いレベル、より低いレベル、それからの逸脱、又はそれからの変化は、該レベルが対照レベルと比較して、約５％以上、約１０％以上、約２０％以上、又は約５０％以上、対照レベルと異なる場合には存在すると判断され得る。統計学的有意は、代替的にはＰ≦０．０５として計算され得る。より高いレベル、より低いレベル、逸脱、及び変化はまた、アッセイリファレンス限界値又はリファレンス区間に頼ることによって決定され得る。これらは、直観的評価又はノンパラメトリック法から計算され得る。全般的に、これらの方法は、０．０２５＊（ｎ＋１）及び０．９７５（ｎ＋１）として０．０２５及び０．９７５分位点を計算し得る。このような方法は当技術分野において周知である。対照に存在しないマーカーの存在は、より高いレベル、逸脱、又は変化として認められ得る。対照に存在するマーカーの不在は、より低いレベル、逸脱、又は変化として認められ得る。
【００５２】
詳細な説明
癌幹細胞は、腫瘍の存続又は再発を駆動するという概念が出現しつつある。従来の癌療法は、腫瘍塊の根絶には成功しているが、典型的には、潜行性の癌幹細胞に対しては効果がより低い。さらに、これらの細胞によって示される選択的な薬剤耐性は、癌罹患者における著しい罹患率及び死亡率の原因である。したがって、癌幹細胞を特異的かつ選択的に標的化する治療計画が必要とされる。
【００５３】
本発明は、個別の癌幹細胞集団が、例えば、口腔の扁平上皮細胞癌、皮膚の扁平上皮細胞癌、黒色腫、肺癌、乳癌、腎臓癌、脳癌、腸癌、甲状腺癌、前立腺癌、リンパ腫、白血病、及び肉腫をはじめとする特定の腫瘍に関連しているという驚くべきかつ意外な発見に基づいている。これらの腫瘍に関連した癌幹細胞集団は、特定の癌の特異的同定及び診断を可能とする独特なバイオマーカー発現プロファイルによって特徴付けられる。
【００５４】
重要なことには、また、これらの癌幹細胞集団は、レニン受容体（ＲＲ）、アンギオテンシンＩＩ受容体２（ＡＴＩＩＲ２）並びに分泌型レニン受容体（ｓＲＲ）をはじめとする、レニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）の重要な成分を発現していることが出願人によって判明した。図３、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６及び２８を参照して、出願人は、様々な腫瘍に関連した癌幹細胞集団によるＲＲ及びＡＴＩＩＲ２の共発現を実証する。これらの癌幹細胞集団は、例えば、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＰＳＴＡＴ３及びＮＡＮＯＧの発現によって特徴付けられる。したがって、これらの癌幹細胞集団によるＲＡＳ成分の発現は、ＲＡＳを標的化する広範な薬物、例えば、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥｉ）、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）、直接的レニン阻害剤（ＤＲＩ）、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウム補充剤、ビタミンＤ、及びカルシウムチャネル遮断剤に由来する、様々な腫瘍に関連した癌幹細胞を標的化することによる新規かつ独特な治療アプローチを提供する。
【００５５】
さらに、本発明はまた、ＲＡＳの間接的阻害剤も考える（例えばカルシウムチャネル遮断剤）。
【００５６】
したがって、本発明の１つの態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌に関連した腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられる。
【００５７】
本発明の別の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌内の癌幹細胞の成長、増殖及び／又は分化を選択的に抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられ、該癌は固形腫瘍又は血液の癌である。
【００５８】
一例では、１つ以上の胚性幹細胞マーカーは、Ｃｒｉｐｔｏ、ＡＢＣＧ２、アルカリホスファターゼ／ＡＬＰＬ、ＣＤ９、ＦＧＦ−４、ＧＤＦ−３、インテグリンα６／ＣＤ４９ｆ、インテグリンβ１／ＣＤ２９、Ｎａｎｏｇ、ＯＣＴ−３／４、ポドカリキシン、ＳＯＸ２、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、ＳＴＡＴ３、ＳＳＥＡ−１、ＦｏｘＤ３、ＤＰＰＡ５／ＥＳＧ１、Ｒｅｘ−１／ＺＦＰ４２、ＤＰＰＡ４、ＬＩＮ−２８Ａ、ＵＴＦ１、Ｌｅｆｔｙ−Ａ、Ｌｅｆｔｙ−１、ＴＢＸ３、ＥＳＧＰ、ＴＲＡ−１−６０（Ｒ）、ＴＲＡ−１−８１、５Ｔ４、ＴＢＸ２、ＺＩＣ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＫＬＦ５、ｃ−Ｍｙｃ、ＧＣＮＦ／ＮＲ６Ａ１、ＳＵＺ１２、Ｓｍａｄ２、ＣＤＸ２、ＴＲＯＰ−２、ＣＤ１１７／ｃ−ｋｉｔ、ＬＩＮ−４１、インテグリンα６β４、ＴＨＡＰ１１、Ｓｍａｄ２／３、ＴＢＸ５、ＴＥＸ１９、ＯＣＴ−４Ａ、ＴＥＸ１９．１、ＤＰＰＡ２、アクチビンＲＩＢ／ＡＬＫ−４、アクチビンＲＩＩＢ、ＦＧＦ−５、ＧＢＸ２、Ｓｔｅｌｌａ／Ｄｐｐａ３、ＤＮＭＴ３Ｂ、Ｆ−ボックスタンパク質１５／ＦＢＸＯ１５、ＬＩＮ−２８Ｂ、インテグリンα６β１、ＫＬＦ４、ＥＲＲβ／ＮＲ３Ｂ２、ＥｐＣＡＭ／ＴＲＯＰ１、ＴＥＲＴ、ＣＨＤ１、Ｃｂｘ２、ｃ−Ｍａｆ、及びＬ１ＴＤ１からなる群より選択される。別の例では、１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーは、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、及びＰＳＴＡＴ３からなる。さらに別の例では、ＲＡＳに関連した１つ以上のバイオマーカーは、ＲＲ、ＡＴＩＩＲ２、及びｓＲＲからなる群より選択される。
【００５９】
本発明のさらに別の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられ、該腫瘍は、口腔の扁平上皮細胞癌、皮膚の扁平上皮細胞癌、黒色腫、肺癌、乳癌、腎臓癌、脳癌、腸癌、甲状腺癌、前立腺癌、リンパ腫、白血病、及び肉腫からなる群より選択される。
【００６０】
本発明のまたさらなる態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌に関連した腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられ、該腫瘍は扁平上皮細胞癌である。
【００６１】
本発明の別の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌に関連した腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、Ｃｒｉｐｔｏ、ＡＢＣＧ２、アルカリホスファターゼ／ＡＬＰＬ、ＣＤ９、ＦＧＦ−４、ＧＤＦ−３、インテグリンα６／ＣＤ４９ｆ、インテグリンβ１／ＣＤ２９、ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ３／４、ポドカリキシン、ＳＯＸ２、ＳＳＥＡ−３、ＳＳＥＡ−４、ＳＴＡＴ３、ＳＳＥＡ−１、ＦｏｘＤ３、ＤＰＰＡ５／ＥＳＧ１、Ｒｅｘ−１／ＺＦＰ４２、ＤＰＰＡ４、ＬＩＮ−２８Ａ、ＵＴＦ１、Ｌｅｆｔｙ−Ａ、Ｌｅｆｔｙ−１、ＴＢＸ３、ＥＳＧＰ、ＴＲＡ−１−６０（Ｒ）、ＴＲＡ−１−８１、５Ｔ４、ＴＢＸ２、ＺＩＣ３、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＫＬＦ５、ｃ−Ｍｙｃ、ＧＣＮＦ／ＮＲ６Ａ１、ＳＵＺ１２、Ｓｍａｄ２、ＣＤＸ２、ＴＲＯＰ−２、ＣＤ１１７／ｃ−ｋｉｔ、ＬＩＮ−４１、インテグリンα６β４、ＴＨＡＰ１１、Ｓｍａｄ２／３、ＴＢＸ５、ＴＥＸ１９、ＯＣＴ−４Ａ、ＴＥＸ１９．１、ＤＰＰＡ２、アクチビンＲＩＢ／ＡＬＫ−４、アクチビンＲＩＩＢ、ＦＧＦ−５、ＧＢＸ２、Ｓｔｅｌｌａ／Ｄｐｐａ３、ＤＮＭＴ３Ｂ、Ｆ−ボックスタンパク質１５／ＦＢＸＯ１５、ＬＩＮ−２８Ｂ、インテグリンα６β１、ＫＬＦ４、ＥＲＲβ／ＮＲ３Ｂ２、ＥｐＣＡＭ／ＴＲＯＰ１、ＴＥＲＴ、ＣＨＤ１、Ｃｂｘ２、ｃ−Ｍａｆ、及びＬ１ＴＤ１からなる群より選択される１つ以上の幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられる。
【００６２】
本発明のさらに別の態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌に関連した腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、及びＰＳＴＡＴ３からなる群より選択された１つ以上の幹細胞マーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン受容体、アンギオテンシンＩＩ受容体２、及び分泌型レニン受容体からなる群より選択されたレニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられる。
【００６３】
本発明のまたさらなる態様では、必要とする患者における癌を予防、治療、又は管理するための方法が提供され、該方法は、癌に関連した腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖及び／若しくは分化を抑制するのに十分な量の治療剤を患者に投与する工程を含み、該癌幹細胞は、（ｉ）ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、及びＰＳＴＡＴ３からなる群より選択された１つ以上の幹細胞バイオマーカーの発現、及び（ｉｉ）レニン受容体、アンギオテンシンＩＩ受容体２、及び／又は分泌型レニン受容体の発現によって特徴付けられ、該治療剤は、直接的レニン阻害剤（ＤＲＩ）、ＡＣＥｉ、ＡＲＢ、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウム、ビタミンＤ、及びカルシウムチャネル遮断剤からなる群より選択される。
【００６４】
一例では、癌幹細胞は、ＳＯＸ２、ＯＣＴ４、ＰＳＴＡＴ３及びＮＡＮＯＧの発現によって特徴付けられる。これらの細胞は、マーカー発現プロファイル：ＳＯＸ２＋ＯＣＴ−４＋ＰＳＴＡＴ３＋ＮＡＮＯＧ＋を有すると言われる。
【００６５】
関連した例では、癌幹細胞は、口腔舌の扁平上皮細胞癌の癌幹細胞であり、マーカー発現プロファイルＣＤ４４＋ＳＯＸ２＋ＯＣＴ４＋ＮＡＮＯＧ＋によって特徴付けられる。さらなる例では、口腔舌の扁平上皮細胞癌の癌幹細胞は、マーカー発現プロファイルＣＤ４４＋ＳＯＸ２＋ＯＣＴ４＋ＮＡＮＯＧ＋ＣＤ３４−によって特徴付けられる。またさらなる例では、癌幹細胞は口腔舌の扁平上皮細胞癌の癌幹細胞であり、マーカー発現プロファイルＣＤ４４＋ＳＯＸ２＋ＯＣＴ４＋ＮＡＮＯＧ＋ＣＤ３４−ｐ６３−ＥＭＡ−によって特徴付けられる。
【００６６】
癌幹細胞は、胚性幹細胞マーカー、リンパ細胞マーカー、上皮癌細胞マーカー、又はその任意の組合せを共に同時発現し得る。したがって、一例では、癌幹細胞は、胚性幹細胞マーカー及び上皮癌細胞マーカーを共に同時発現し得る。別の例では、癌幹細胞は、リンパ細胞マーカー及び上皮癌細胞マーカーを共に同時発現し得る。さらなる例では、癌幹細胞は、胚性幹細胞マーカー、リンパ細胞マーカー、及び上皮癌細胞マーカーを共に同時発現する。
【００６７】
本発明は、特に、固形腫瘍に関連しているが、それは血液の癌にも拡大される。例えば、出願人は、慢性リンパ性白血病は、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＡＴＩＩＲ２及びＲＲ（図２４）の発現によって特徴付けられるような癌幹細胞を含み、該癌幹細胞はまた、ＲＲ及びＡＴＩＩＲ２（図２５Ａ及び２５Ｂ）も同時発現することを実証する。したがって、本発明に記載の治療法及び治療用組成物は、同様に血液の癌にも拡大される。
【００６８】
したがって、本発明は、腫瘍成長、拡大、及び転移の原因としての、癌幹細胞の成長及び増殖を同定及び標的化することに関連した組成物及び方法を提供する。特に、該組成物及び方法は、独特な腫瘍原性バイオマーカー発現プロファイルを示す癌幹細胞に向けられる。癌幹細胞を特異的に標的化することによって、（新生又は確立された）腫瘍の腫瘍原性及び転移能はかなり減少し、これにより、増強された治療転帰がもたらされる。
【００６９】
癌幹細胞は、上部気道消化管（口腔を含む）の扁平上皮細胞癌、皮膚の扁平上皮細胞癌、黒色腫、肺癌、乳癌、腎臓癌、脳癌、腸癌、甲状腺癌、前立腺癌、リンパ腫、白血病、及び肉腫を含むがこれらに限定されない、様々な癌に関連し得る。
【００７０】
扁平上皮細胞癌としては、頭頸部の扁平上皮細胞癌（上部気道消化管［口腔を含む］及び副鼻腔及びその他の場所の扁平上皮細胞癌を含む）、食道扁平上皮細胞癌、皮膚扁平上皮細胞癌、肺扁平上皮細胞癌、外陰部扁平上皮細胞癌、及び子宮頚部扁平上皮細胞癌が挙げられる。一例では、上部気道消化管扁平上皮細胞癌は口腔舌の扁平上皮細胞癌である。
【００７１】
本発明は、癌を予防、治療、及び／又は管理するための方法を提供し、該方法は、癌幹細胞集団を安定化、低減、又は根絶する一連の療法を、必要とする被験者に投与する工程を含む。特定の例では、癌幹細胞集団の安定化、低減、又は排除は、癌幹細胞の成長及び増殖を標的化する療法を投与することによって達成される。
【００７２】
驚くべきことに、出願人は、本発明に記載の方法で同定された癌幹細胞集団が、ＲＡＳ成分を、及び複数の異なる腫瘍型に関連した癌幹細胞集団において同時発現することを実証する。単に説明のためだけに、出願人は、ＯＴＳＣＣ（図４Ａ及び４Ｂ）、黒色腫（図７Ａ、７Ｂ）、肉腫（図９Ａ、９Ｂ）、腸癌（図１１Ａ、１１Ｂ）、脳癌（図１３Ａ、１３Ｂ）、乳癌（図１５Ａ、１５Ｂ）、肺癌（図１７Ａ、１７Ｂ）、Ｂ細胞リンパ腫（図１９Ａ、１９Ｂ）、及び腎臓癌（図２１Ａ、２１Ｂ）、甲状腺癌（２３Ａ、２３Ｂ）、慢性リンパ性癌（２５Ａ、２５Ｂ）、皮膚扁平上皮細胞癌（２７Ａ、２７Ｂ）、前立腺癌（２９Ａ、２９Ｂ）における、ＲＲ及びＡＴＩＩＲ２の同時発現を実証する。
【００７３】
したがって、癌幹細胞集団の成長及び増殖を標的とする療法は、癌幹細胞によって発現されるＲＡＳ及び／又はプロ／レニン受容体系（ＰＲＲＳ）の成分を選択的に標的とする治療剤を投与する工程を含む。図１及び２は、本発明に記載の組成物及び方法に従って有用である、これらの系を標的とする阻害剤／薬物の種類を示す。
【００７４】
レニン−アンギオテンシン系を標的とする公知の治療剤の例としては、ＡＣＥＩ、ＡＲＢ、ＤＲＩ、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウムチャネル遮断剤、カルシウム補充剤、及びビタミンＤが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７５】
ＡＣＥＩの例としては、ベナゼプリル（ロテンシン（Lotesin））、カプトプリル（カポテン）、シラザプリル（cilazipril）、エナラプリル（バソテック、レニテック）、ホシノプリル（モノプリル）、リシノプリル（リソジュール（Lisodur）、ロプリル、ノバテック、プリニビル、ゼストリル）、モエキシプリル、ペリンドプリル（コバシル（Coversay）、アセオン）、キナプリル（アキュプリル）、ラミプリル（アルタセ、トリタセ、ラマース（Ramace）、ラミウィン（Ramiwin））、トランドラプリル、デラプリル、ゾフェノプリル、及びイミダプリルが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７６】
ＡＲＢの例としては、ロサルタン、イルベサルタン、カンデサルタン、エプロサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン、ＰＤ１２３３１９、及びバルサルタンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７７】
β遮断剤の例としては、アセブトロール（セクトラール）、アテノロール（テノーミン）、ベタキソロール（ベトプティック）、ビソプロロール（カルジコール（Cardicor）、エンコール（Emcor）、ゼベータ）、カルテオロール（テオプティック（Teoptic））、カルベジロール（コレグ、ユーカルディック）、セリプロロール（セレクトール）、ラベタロール（トランデート）、レボブノロール（ベタガン）、メチプラノロール（メチプラノロールMinims）、メトプロロール（ベタロック、ロプレソール、ロプレッサー、トプロールＸＬ）、ナドロール（コルガード）、ネビボロール（バイストリック、ネビレット）、オキシプレノロール（トラシコル）、ピンドロール（ビスケン）、プロパノロール（インデラルＬＡ）、ソタロール（ベータカルドン、ソタコール）、及びチモロール（ベチン（Betim）、ニオゲル、チモプトール）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００７８】
シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤の例としては、セレコキシブ、ナパフェナク、イブプロフェン（ドルゲシック（Dolgesic））、インドメタシン、スリンダク、キサントフモール、メクロフェナム酸ナトリウム、メロキシカム、ロフェコキシブ、ブロムフェナクナトリウム、イブプロフェンリジン、ケトロラック（ケトロラックトロメタミン）、ジクロフェナクナトリウム、エトドラク、ケトプロフェン、ナプロキセンナトリウム、ピロキシカム、アセメタシン、フェナセチン、トルフェナム酸、ニメスリド、フルニキシンメグルミン、アスピリン、ブフェキサマク、ニフラム酸、リコフェロン、オキサプロジン、ロルノキシカム、ルミラコキシブ、ザルトプロフェン、アンピロキシカム、バルデコキシブ、ナブメトン、メフェナム酸、カルプロフェン、アンフェナクナトリウム一水和物、アサルアルデヒド、及びスプロフェンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００７９】
キマーゼ阻害剤の例としては、ＴＹ−５１４６９（２−［４−（５−フルオロ−３−メチルベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）スルホンアミド−３−メタンスルホニル−フェニル］チアゾール−４−カルボン酸）、エグリンＣ、ＣＩ、ＳＵＮ１３８３４、キモスタチン、ＴＪＫ００２ベンゾイミダゾール阻害剤、ＯＮＯ−ＷＨ−２３６、アンブリオンマ・アメリカヌム（Amblyomma americanum）ダニ唾液腺セリンプロテアーゼ阻害剤６（ＡａｍＳ６）、Ｎ−トシル−Ｌ−フェニルアラニルクロロメチルケトン（ＴＰＣＫ）、α−アミノアルキルホスホネートジアリールエステル、セリンプロテアーゼ阻害剤（Serine protease inhibitor）Ａ３（serpinＡ３）、扁平上皮細胞癌抗原（ＳＣＣＡ−２）、ボルテゾミブ（ベルケード）、ＲＯ５０６６８５２、及び１７β−エストラジオールが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８０】
カテプシンＢ阻害剤の例としては、シスタチンＢ、シスタチンＣ、システインペプチダーゼ阻害剤Ｅ６４、［Ｐｔ（ｄｍｂａ）（ａｚａ−Ｎ１）（ｄｍｓｏ）］複合体１（いくつかの腫瘍細胞株においてシスプラチンよりも低いＩＣ５０を有する有望な抗腫瘍薬）、２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシン（ＴＣＤＤ）、ＣＡ−０７４Ｍｅ、リポソームナノキャリア（ＬＮＣ−ＮＳ−６２９）のエンベロープに取り込まれた脂質化ＣｔｓＢ阻害剤、プロアントシアニジン（ＰＡ）、並びにアーパチニンＡｃ（１）及びアーパチニンＰｒ（２）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８１】
カテプシンＤ阻害剤の例としては、カテプシンＤの非ペプチド性アシルグアニジン阻害剤、ペプスタチンＡ、Ｂｍ−Ａｓｐｉｎ、ＳｌＰＩ、Ｖｉａ、ＲＮＡｉ−Ｒａｂ２７Ａ、及びソラナムリコペルシカムアスパラギン酸プロテアーゼ阻害剤（ＳＬＡＰＩ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８２】
カテプシンＧ阻害剤の例としては、ＷＦＤＣ１２、フェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、エコチン、セルピンＢ１、セルピンＡ３、ＣｅＥＩ、又はブラジルボク（Caesalpinia echinata）エラスターゼ阻害剤、ＳＬＰＩ（分泌型白血球プロテアーゼ阻害剤）、α１−アンチトリプシン（ＡＡＴ）、バウヒニアバウヒノイデスクルジパイン（Bauhinia bauhinoides cruzipain）阻害剤、α−アミノアルキルホスホネートジアリールエステル、グレグリン、［２−［３−［［（１−ベンゾイル−４−ピペリジニル）メチルアミノ］カルボニル］−２−ナフタレニル］−１−（１−ナフタレニル）−２−オキソエチル］−ホスホン酸（ＫＰＡ）、リンパ上皮カザール型関連阻害剤（ＬＥＫＴＩ）、トラッピン−２ Ａ６２Ｌ、ＳＶ−６６、ＳＣＧＩ、ボルテゾミブ、ヒト単球／好中球エラスターゼ阻害剤（ＭＮＥＩ）、４２ｋＤａセルピンタンパク質及び抗ロイコプロテイナーゼ（ＡＬＰ）が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８３】
カルシウムチャネル遮断剤の例としては、ジヒドロピリジンカルシウムチャネル遮断剤、フェニルアルキルアミンカルシウムチャネル遮断剤、ベンゾジアゼピンカルシウムチャネル遮断剤、非選択的カルシウムチャネル遮断剤、並びに「他の」カルシウムチャネル遮断剤が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８４】
ジヒドロピリジンカルシウムチャネル遮断剤の例としては、アムロジピン（ノルバスク）、アラニジピン（サプレスタ）、アゼルニジピン（カルブロック）、バルニジピン（ヒポカ）、ベニジピン（コニール）、米国では入手できないシルニジピン（アテレック、シナロング、シスカード）、クレビジピン（クレビプレックス）、イスラジピン（ダイナシルク、プレスカール（Prescal））、エホニジピン（ランデル）、フェロジピン（プレンジル）、ラシジピン（モテンズ、ラシピル）、レルカニジピン（ザニジップ）、マニジピン（カルスロット、マジピン（Madipine））、ニカルジピン（カルデン、カルデンＳＲ）、ニフェジピン（プロカルディア、アダラート）、ニルバジピン（ニバジル）、ニモジピン（ニモトップ）、ニソルジピン（バイミカード、スラー、シスコール）、ニトレンジピン（カルディフ（Cardif）、ニトレピン、バイロテンシン）、プラニジピン（アカラス））が挙げられるがこれらに限定されない。
【００８５】
フェニルアルキルアミンカルシウムチャネル遮断剤の例としては、ベラパミル（カラン、イソプチン）、ガロパミル、及びフェンジリンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８６】
ベンゾジアゼピンカルシウムチャネル阻害剤の例としては、ジルチアゼム（カルディゼム）及びフェンジリンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８７】
非選択的カルシウムチャネル遮断剤の例としては、ミベフラジル、ベプリジル、フルナリジン、フルスピリレン、及びフェンジリンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８８】
他のカルシウムチャネル遮断剤の例としては、ガバペンチン、プレガバリン、及びジコノチドが挙げられるがこれらに限定されない。
【００８９】
ＤＲＩの例としては、アリスキレンが挙げられるがこれらに限定されない。
【００９０】
特定の例では、癌幹細胞は、部分的に分化し得、そして特定の腫瘍に関連した特定の細胞系統に傾倒し得る。
【００９１】
一例では、部分的に分化した癌幹細胞は１つ以上の腫瘍原性バイオマーカーの発現によって特徴付けられるか、又は、上皮癌細胞マーカー、リンパ細胞マーカー、血管マーカー、骨髄細胞マーカー並びにその組合せからなる群より選択された、１つ以上の腫瘍原性バイオマーカーを共発現する。
【００９２】
上皮癌細胞マーカーの例としては、ｐ６３、上皮膜抗原（ＥＭＡ）、及びサイトケラチン、例えばＣＹＫ５、ＣＹＫ６、ＣＹＫ８、及びＣＹＰ１８が挙げられるがこれらに限定されない。
【００９３】
癌幹細胞マーカーの例としては、ＣＤ４４、ＣＤ１３３、ＣＤ２４、及びＡＬＤＨ１が挙げられるがこれらに限定されない。
【００９４】
リンパ細胞マーカーの例としては、ＬＹＶＥ−１及びＶＥＧＦＲ−３が挙げられるがこれらに限定されない。
【００９５】
血管マーカーの例としては、ＣＤ３４及びＡＣＥが挙げられるがこれらに限定されない。
【００９６】
造血幹細胞を産生する能力をもつ血管内皮細胞マーカーの例としては、ＴＡＬ−１が挙げられるがこれらに限定されない。
【００９７】
骨髄マーカーの例としては、トリプターゼ及びＣＤ１６３が挙げられるがこれらに限定されない。
【００９８】
上皮間葉転換（ＥＭＴ）マーカーの例としては、Ｔｗｉｓｔ、Ｓｌｕｇ、ＳＮＡＩＬ、Ｂｍｉ１及びＭＭＰ−９が挙げられるがこれらに限定されない。
【００９９】
増殖マーカーの例としては、Ｋｉ６７が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１００】
例えば、任意の所与の腫瘍は、癌幹細胞、部分的に分化した癌幹細胞、及び成熟腫瘍細胞などを含む、様々な細胞集団を有し得る。
【０１０１】
単に説明のために、扁平上皮細胞癌に関連した部分的に分化した幹細胞は、ＥＭＡ及びｐ６３などの特定のマーカーを発現し得る。同様に、白血病に関連した部分的に分化した癌幹細胞は、ＴＡＬ−１及びＧＡＴＡ−２などのマーカーを発現し得る。
【０１０２】
したがって、本発明はまた、癌幹細胞（例えば胚性幹細胞マーカーを発現している）の同定だけでなく、特定の腫瘍／癌又は成熟腫瘍細胞に関連した特定の細胞系統に傾倒した部分的に分化した癌幹細胞の同定も考える。したがって、本発明を使用して、前駆癌幹細胞の存在についての早期予後予測又は診断（それ故、癌を有する確率又は癌の素因を有する確率）を行ない得、その後の照合により追跡調査して、例えば部分的に分化した癌幹細胞又は成熟腫瘍細胞のプロファイルを調べることによって癌の種類を決定することができる。後者の調査は、腫瘍から得られた又は腫瘍に関連していることが知られている生物学的試料、例えば腫瘍の切除を通した組織生検材料又は血液／血清試料から得られた細胞上でのバイオマーカー発現プロファイルを使用して行なわれ得る。任意の所与の腫瘍型に関する部分的に分化した癌幹細胞及び／又は成熟腫瘍細胞に関連した特異的細胞マーカーサインは当業者にとって周知であろう。
【０１０３】
癌幹細胞、例えば固形腫瘍幹細胞に関連した遺伝子発現プロファイル及びサイン、並びに、新規な幹細胞癌マーカーは、癌幹細胞を含む腫瘍の診断、特徴付け、予後予測、及び治療に有用である。バイオマーカー発現分析を使用して、腫瘍発生に関与する癌幹細胞の集団（又は亜集団）を決定することができる。その後、癌幹細胞のこれらの亜集団／集団を有効な処置計画を使用して標的化することにより、腫瘍の成長及び拡大、並びにその起こり得る転移を防ぐことができる。
【０１０４】
したがって、本発明はまた、特に、癌幹細胞又は癌幹細胞集団の存在について生物学的液体試料をプロファイリングすることによって、癌の予後予測及び診断においても有用である。
【０１０５】
したがって、本発明の別の態様では、被験者における癌の有無を決定するための方法が提供され、該方法は、
（ｉ）バイオマーカー発現分析を使用して、被験者から得られた生物学的試料中の癌幹細胞集団のレベルを検出及び／又は測定する工程；
（ｉｉ）対照集団の癌幹細胞レベルに対して、試料から得られた癌幹細胞集団のレベルを比較する工程
を含み、
ここで、対照集団と比較して生物学的試料から得られた癌幹細胞集団の増加したレベルは、被験者が、癌を有するか、又は癌を発症する素因を有するかの診断となる。本発明の別の態様では、被験者における癌の有無を決定するための方法が提供され、該方法は
（ｉ）バイオマーカー発現分析を使用して、被験者から得られた生物学的試料中の癌幹細胞集団のレベルを検出及び／又は測定する工程；
（ｉｉ）対照集団の癌幹細胞レベルに対して、試料から得られた癌幹細胞集団のレベルを比較する工程
ここで、対照集団と比較して生物学的試料から得られた癌幹細胞集団の増加したレベルは、被験者が、癌を有するか、又は癌を発症する素因を有するかの診断となる、及び
（ｉｉｉ）癌を有するか又は癌を発症する素因を有する被験者に予防計画又は治療計画を投与する工程
を含む。
【０１０６】
本発明の予後予測法及び診断法による特定の例では、癌幹細胞は、１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーの発現、並びに、レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーの発現によって特徴付けられる。一例では、１つ以上の胚性幹細胞マーカーは、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ＣＤ４４、ＳＡＬ−４、ＳＳＥＡ４、ＰＳＴＡＴ３、及びＨ１Ｆ１からなる群より選択される。別の例では、１つ以上の胚性幹細胞バイオマーカーは、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、及びＰＳＴＡＴ３からなる。さらに別の例では、レニン−アンギオテンシン系に関連した１つ以上のバイオマーカーは、ＲＲ、ＡＴＩＩＲ２及びｓＲＲからなる群より選択される。
【０１０７】
本発明の予後予測法及び診断法による他の例では、治療剤は、ＡＣＥＩ、ＡＲＢ、直接的ＤＲＩ、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウムチャネル遮断剤、カルシウム補充剤、及びビタミンＤからなる群より選択される。
【０１０８】
本発明の別の態様では、被験者における癌の有無を決定するための方法が提供され、該方法は、
（ｉ）バイオマーカー発現分析を使用して、被験者から得られた生物学的試料中の部分的に分化した癌幹細胞集団のレベルを検出及び／又は測定する工程；
（ｉｉ）対照集団の部分的に分化した癌幹細胞レベルに対して、試料から得られた部分的に分化した癌幹細胞集団のレベルを比較する工程
を含み、
ここで、対照集団と比較して生物学的試料から得られた部分的に分化した癌幹細胞集団の増加したレベルは、被験者が、癌を有するか、又は癌を発症する素因を有するかの診断となる。
【０１０９】
本発明の別の態様では、被験者における癌の有無を決定するための方法が提供され、該方法は、
（ｉ）バイオマーカー発現分析を使用して、被験者から得られた生物学的試料中の部分的に分化した癌幹細胞集団のレベルを検出及び／又は測定する工程；
（ｉｉ）対照集団の部分的に分化した癌幹細胞レベルに対して、試料から得られた部分的に分化した癌幹細胞集団のレベルを比較する工程
ここで、対照集団と比較して生物学的試料から得られた部分的に分化した癌幹細胞集団の増加したレベルは、被験者が、癌を有するか、又は癌を発症する素因を有するかの診断となる、及び
（ｉｉｉ）癌を有するか又は癌を発症する素因を有する被験者に予防計画又は治療計画を投与する工程
を含む。
【０１１０】
本発明の予後予測法及び診断法による一例では、バイオマーカー分析は、遺伝子発現技術及び／又はタンパク質分析技術を使用して行なわれる。
【０１１１】
治療剤（群）は、癌幹細胞集団を選択的に標的化する任意の公知であるか又はまだ同定されていない治療剤を含む。公知の治療剤の例は、本明細書に列挙されている。一例では、治療剤により、癌細胞の約２５％の減少、約４０％の減少、約５０％の減少、又は約７５％の減少がもたらされる。これは、癌幹細胞と成熟細胞／腫瘍塊細胞の両方を含む。
【０１１２】
関連した例では、癌細胞の減少は、ヒト被験者の組織試料中に存在する癌細胞マーカー表現型を有する細胞の量を、より早期の時点での同じヒト被験者の組織試料中に存在する同じ癌細胞マーカー表現型を有する細胞の量と比較することによって決定される。
【０１１３】
癌幹細胞の成長、増殖及び／又は分化は、治療剤を使用して選択的に根絶又は抑制され得る。したがって、一例では、癌幹細胞の成長、増殖及び／又は分化は、細胞表面抗原に結合して癌幹細胞の成長及び増殖を停止する治療剤を使用して、選択的に抑制される。
【０１１４】
別の例では、癌幹細胞の成長、増殖及び／又は分化は、癌幹細胞を非悪性の細胞系統へと又は悪性の可能性のある細胞系統から逸脱するように分化させることのできる分化因子を含む治療剤を使用して、選択的に抑制される。分化した細胞はもはや、腫瘍原性能を保持していない。
【０１１５】
癌幹細胞の成長、増殖及び／又は分化を効果的に停止させることによって、腫瘍／塊細胞へのその分化能もまた抑制され、これにより腫瘍の拡大及び成長は低減される。
【０１１６】
本出願の本発明者らはまた驚くべきことに、癌幹細胞はリンパ細胞系統（例えば、ＬＹＶＥ−１及び／又はＶＥＧＦＲ−３を発現するリンパ細胞）を同時発現することを同定した。したがって、このことは、癌の拡大及び転移が、より受け入れられている血管（すなわち血管新生）よりもリンパ系を介してであり得ることを示唆し、第二の部位への癌の拡大（すなわち転移）を防ぐための手段としての代替的な標的を提供する。
【０１１７】
特定の例では、治療剤により、一定期間の後に癌幹細胞集団は安定化する（例えば、２、５、１０、２０、３０、若しくはそれ以上の用量の治療の後、又は、２週間後、１か月後、２か月後、１年後、２年後、３年後、４年度、又はそれ以上の後に）。他の例では、治療剤は、癌幹細胞集団の５％〜４０％、１０％〜６０％、２０％〜９９％、又はそれ以上の減少を達成する。他の例では、癌幹細胞集団の減少は、１つ以上の療法を投与してから２週間後、１か月後、２か月後、３か月後、４か月後、６か月後、９か月後、１年後、２年後、３年後、又は４年後に達成される。さらなる例では、療法に従って、癌幹細胞集団の減少は周期的にモニタリングされる（例えば、２、５、１０、２０、３０、若しくはそれ以上の用量の１つ以上の療法の後、又は、１つ以上の療法を受けてから２週間後、１か月後、２か月後、１年後、２年後、３年後、４年後、若しくはそれ以上の後に）。癌幹細胞集団の安定化、低減、又は排除は、癌幹細胞集団によって産生される癌細胞集団を安定化、低減、又は排除し、したがって、腫瘍の成長、腫瘍の塊サイズ、腫瘍の形成、及び／又は転移の形成を安定化、低減、又は排除する。換言すれば、癌幹細胞集団の安定化、低減、又は排除は、癌細胞による腫瘍の形成、再形成、若しくは成長、及び／又は転移を防ぐ。
【０１１８】
本発明に記載の治療剤又は治療剤群は、インビトロ及びインビボで癌幹細胞の成長を抑制することができる。様々な治療剤の例を、以下にさらに詳細に列挙する。
【０１１９】
化学療法を含む従来の癌療法は、癌を制御又は処置する試みで成熟腫瘍細胞を標的とする。例えば、従来の化学療法剤は、正常な細胞周期を妨害することを探究する。結果として、標準的な化学療法は、細胞周期の進行が急速である細胞のみを効果的に標的とする。成熟腫瘍細胞は細胞周期が急速であるが、癌幹細胞は細胞周期の進行が緩徐である。したがって、従来の化学療法は、成熟腫瘍細胞、並びに、他の存在する腫瘍ではない細胞周期の進行が急速である細胞の標的化及び死滅を含むが、癌幹細胞に対して強化する作用を有する。なぜなら、癌幹細胞は標的化されず、よって増殖し続けるからである。
【０１２０】
その後、これは癌幹細胞に腫瘍塊細胞を再増殖させる機会を与え、その結果、腫瘍の再発又は転移が起こり、生体内のどこか他の場所で二次性腫瘍が形成される。
【０１２１】
癌幹細胞生体機能は依然としてあまり解明されておらず、多くの研究が、これらの細胞の独立した予後予測指標及び識別因子として使用することのできる単一のマーカーの同定に焦点を当てている。
【０１２２】
本発明者らは、癌幹細胞の全タンパク質発現プロファイル、及び最終的には腫瘍発生を制御する分子系を調べた。例えば、ＲＡＳはこれにおいて役割を果たしている可能性があるが（これらの細胞によるＡＣＥの発現によって支持される；実施例２／表５を参照）、他の重要な分子トリガー及びシグナル伝達経路も関与している可能性がある。
【０１２３】
癌幹細胞集団の役割に重点を置いて、腫瘍発生に関与している分子トリガー及びシグナル伝達経路を解明することによって、本発明者らは、癌幹細胞を選択的に標的化し、これにより癌の背後にある駆動力を排除することを可能とする、新規な処置標的を同定した。さらに、これらの細胞から成熟細胞型、例えば脂肪組織への分化を誘導することによって、これは、これらの細胞の悪性の可能性を根絶するだろう。
【０１２４】
本明細書に記載の方法の他に、本発明はまた、癌の治療又は予防に有用な医薬組成物も提供する。本発明の医薬組成物は、癌に関連した腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖、及び／若しくは分化を抑制するのに十分な治療剤を含む。
【０１２５】
したがって本発明の別の態様では、癌の処置法に使用するための医薬組成物が提供され、該医薬組成物は、癌に関連した腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖、及び／若しくは分化を抑制するのに十分な治療剤（群）を含み、該方法は癌を有する患者に治療剤を投与する工程を含む。
【０１２６】
本発明のさらに別の態様では、癌の処置に使用するためのキット又は製品が提供され、該キットは、癌に関連した腫瘍内の癌幹細胞を選択的に根絶するのに、又はその成長、増殖、及び／若しくは分化を抑制するのに十分な治療剤（群）を、被験者への治療投与量の投与法に関する説明書と一緒に含む。
【０１２７】
本発明に記載の癌幹細胞は、（例えば）レニン−アンギオテンシン系及び／又はプロ／レニン系の重要な調節成分を発現することが示されているので、特定の腫瘍に関連した癌幹細胞集団は、これらの系を標的化することも知られる薬物の治療量を投与することによって、効果的に標的化され得る。例としては、上記のような、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）、直接的レニン阻害剤（ＤＲＩ）、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシン阻害剤、例えばカテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウムチャネル遮断剤、カルシウム補充剤、及びビタミンＤが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１２８】
特定の例では、癌の処置法は、該治療剤の投与前に、該治療剤が、癌幹細胞を含む試料中の癌幹細胞の量を減少させることができることをインビトロで決定する工程を含む。
【０１２９】
本発明に関するさらなる詳細は、以下の副題の下に提示される。
【０１３０】
レニン−アンギオテンシン系
レニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）は伝統的に、食事中の塩が制限されている期間中に体液量を保存することが知られ、そしてまた急性的な体液減少中の虚血を防ぐ。ＲＡＳの主なエフェクターペプチドはアンギオテンシンＩＩ（ＡＴＩＩ）である。それは血管収縮及び交感神経活性化を誘発し、アルドステロン値を上昇させ、そしてアンギオテンシンＩＩ受容体１（ＡＴＩＩＲ１）を介して腎内の塩分及び水分の保持を促進する。過去数十年間にわたり、ＲＡＳは、心臓血管疾患（ＣＶＤ）及び腎血管疾患へのその関与のために、特に関心の高い薬物標的であった。ＣＶＤ及び腎血管疾患は、一連の危険因子、標的臓器の損傷、イベント、及び死亡率として理解され得る。危険因子（例えば高血圧、脂質異常症、糖尿病、及び喫煙）により、アテローム性動脈硬化症、左心室肥大（ＬＶＨ）、及び腎障害をはじめとする標的臓器損傷が発生する。標的臓器損傷は進行的に悪化し、最終的には心筋梗塞（ＭＩ）、心不全（ＨＦ）、末期の腎疾患（ＥＳＲＤ）、脳卒中、又は死亡に至る。
【０１３１】
ＲＡＳの主なエフェクターペプチドであるＡＴＩＩは、この連続的な全段階の最中に活発な役割を果たす。ＲＡＳカスケードの最初の工程は、レニンの作用下における前駆体のアンギオテンシノーゲンからのアンギオテンシンＩ（ＡＴＩ）の形成であり；ＣＶＤにおけるＲＡＳの重要性の初期の証拠は、レニン活性が、心臓血管（ＣＶ）イベントのリスクを予測するという一貫した所見からもたらされた。その後、ＡＴＩはアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によって、ＲＡＳの主なエフェクターペプチドであるＡＴＩＩに変換される。さらに、ＡＴＩＩはキマーゼなどの酵素によって組織内で産生され得る。この局所的に産生されたＡＴＩＩは、パラ分泌及び自己分泌機能を媒介すると考えられている。ＡＴＩＩはＡＴＩＩＲ１及びＡＴＩＩＲ２を介して作用する。ＡＴＩＩＲ１の活性化により、血管収縮、アルドステロン及びバソプレッシンの分泌、ナトリウム保持、及び腎灌流量の減少がもたらされる。したがって、これらの受容体は、血圧（ＢＰ）上昇並びに心臓及び血管の再構築をはじめとする、ＡＴＩＩの有害な作用を媒介する。ＡＴＩＩ受容体の作用は、成人においてこれらの受容体の発現が少ないために、その特殊なシグナル伝達経路のために、そして多くのＡＴＩＩにより媒介される作用が、ＡＴＩにより媒介される作用と拮抗することによって遮蔽されるために、あまり明瞭に規定されていない。しかしながら、現在、ＡＴＩＩＲ２は一般的にＡＴＩＩＲ１の作用に拮抗し、様々な抗増殖作用及び抗炎症作用を媒介し、そして組織の分化及び再生並びにアポトーシスを促進することが認められている。
【０１３２】
生理活性アンギオテンシンペプチド、例えばアンギオテンシンＩＩＩ、アンギオテンシンＩＶ、及びアンギオテンシン−（１−７）をはじめとする、ＲＡＳの他の成分は、過去１０年間に同定され、ＣＶ及び腎系に対するその作用はまだ完全に解明されていない。
【０１３３】
レニン受容体の発見は、ＲＡＳの生体機能に対してさらなる光を当てた。レニンはまた、最近まで単にＲＡＳ活性化の律速酵素として考えられていたが、その生物学的活性に関係なく、レニン及びプロレニンにほぼ同等に結合するレニン／プロレニン受容体として知られるタンパク質に対するリガンドであることが判明した。循環中の全レニンの７０％から９０％を占めるプロレニンは、受容体に結合すると、アンギオテンシノーゲンからＡＴＩへの触媒による変換効率の増加を誘導し、ＡＴＩＩの局所的生成及びその全身レベル、並びに、レニン／プロレニンのレニン／プロレニン受容体への結合に寄与して、ＡＴＩＩとは独立した生理学的作用、例えば細胞内シグナル経路の活性化、ＤＮＡの増強された合成、及びプラスミノーゲンアクチベーター阻害剤１、コラーゲン１、フィブロネクチン、及び形質転換増殖因子β−１，６の遊離の刺激を奏功する。
【０１３４】
ＲＡＳを標的化する多くの公知の薬物が存在する。ＲＡＳを標的とする２つの主要なクラスの薬物はアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤及び選択的ＡＴＩ受容体遮断剤（ＡＲＢ）である。これらのどちらの薬物クラスもＡＴＩＩを標的とするが、その作用機序の違いは、治療的意義を有し得る他の経路及び受容体に対するその作用のために意義を有する。ＡＣＥ及びＡＲＢのどちらも、心臓血管及び腎のイベントのリスクを低減させることが示された有効な降圧剤である。
【０１３５】
ＲＡＳの最も中心に近い態様である、レニンの直接的阻害は、アリスキレンの導入により２００７年より臨床的に実行可能となった。この後者の薬物は高血圧の管理において有効であることが示されている。直接的レニン阻害剤とＡＣＥ又はＡＲＢの併用療法は、うっ血性心不全及びタンパク尿のようないくつかの臨床状況において試験され、多様な結果が得られている。
【０１３６】
ＲＡＳ薬物としては、上記のような、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥＩ）、アンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）、直接的レニン阻害剤（ＤＲＩ）、β遮断剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、キマーゼ阻害剤、カテプシン阻害剤、例えばカテプシンＢ阻害剤、カテプシンＤ阻害剤、及びカテプシンＧ阻害剤、カルシウムチャネル遮断剤、カルシウム補充剤、及びビタミンＤが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１３７】
扁平上皮細胞癌
扁平上皮細胞は、上皮の表層を形成する平坦な細胞である。それらは、それらが顕微鏡下で平坦かつ薄く見えるという事実によって組織学的に同定され得る。扁平上皮細胞によって裏打ちされた上皮は、単層扁平上皮又は重曹扁平上皮のいずれかとして分類され得る。
【０１３８】
扁平上皮細胞癌は、扁平上皮細胞分化を示す、皮膚、上部気道消化管（口腔を含む）、鼻腔、食道、肺、子宮頚部、及び消化管をはじめとする、多くの異なる器官に見られる上皮腫瘍を指す。頭頸部扁平上皮細胞癌、肺扁平上皮細胞癌、皮膚扁平上皮細胞癌、耳扁平上皮細胞癌、外陰部扁平上皮細胞癌、子宮頚部扁平上皮細胞癌、食道扁平上皮細胞癌などが含まれる。それは、扁平上皮細胞分化を示す上皮の悪性腫瘍である。扁平上皮細胞癌は通常、皮膚の上皮層に、時には身体の様々な粘膜に発症する。この種類の癌は、皮膚、唇、口内、喉頭、又は食道上に見られ得る。
【０１３９】
最も一般的な頭頸部の非皮膚性腫瘍は、上部気道消化管（咽頭、中咽頭、口腔［口腔舌及び口腔底を含む］を含む）の扁平上皮細胞癌である。幾分頻度が低いのは、唾液腺、顎、鼻、及び副鼻腔、及び耳の腫瘍である。
【０１４０】
大半の頭頸部癌はまず、無症候性のしこり、潰瘍、又は可視的な粘膜病変（例えば白板症、紅板症）として顕現する。その後の症状は、腫瘍の位置及び程度に依存し、これには、疼痛、知覚異常、神経麻痺、開口障害、及び口臭が挙げられる。頭頸部癌は、数か月間から数年間局在し続け得る。局所組織浸潤に続いて最終的に所属リンパ節への転移が起こる。遠隔リンパ節転移は後期に起こる傾向がある。血行性転移は、通常、大型又は持続性の腫瘍を伴い、免疫不全の患者においてより頻繁に起こる。遠隔転移の一般的な部位は、肺、肝臓、骨、及び脳である。
【０１４１】
毎年約３０，０００人の米国人が、口腔及び中咽頭扁平上皮細胞癌に罹患している。口腔扁平上皮細胞癌は最も一般的な口腔及び中咽頭癌である。口腔扁平上皮細胞癌の主な危険因子は、喫煙及び／又はアルコールの使用である。口腔舌の扁平上皮細胞癌はまた、プランマー・ヴィンソン症候群、梅毒、又は慢性外傷から生じ得る。口腔扁平上皮細胞癌の約４０％が口腔舌を冒し、２０％が口腔底を冒し、残りは口唇頬粘膜、臼歯後三角、歯槽、及び硬口蓋を冒す。中咽頭扁平上皮細胞癌は、舌底及び軟口蓋及びへんとう部分を冒し、これはヒトパピローマウイルス感染に関連し、アルコール及び喫煙はより少ない役割を果たしている。
【０１４２】
口腔病変は初期には無症候性である。それらは紅板症又は白板症の領域に出現し得、そして外方増殖性であり得るか、又は潰瘍化し得る。どちらの変種も硬化し堅く、回転した境界を有する。中咽頭癌は通常、非対称な膨潤及び咽頭痛として呈し；疼痛はしばしば同側の耳へと放散する。首の転移性塊が最初の症状であり得る。
【０１４３】
舌の扁平上皮細胞癌が局在化する場合（リンパ節への併発はない）、５年間生存率は約５０％である。舌底の限局性扁平上皮細胞癌では、５年間生存率は６５％であるが、リンパ節転移を伴う場合、５年間生存率は２０％である。下唇病変では、５年間生存率は９０％であり、転移は稀である。下唇の扁平上皮細胞癌は、より悪性で転移性である傾向がある。中咽頭扁平上皮細胞癌では、患者がリンパ節への併発前に処置される場合には５年間生存率は６８％であるが、併発後では僅か１７％である。転移は所属リンパ節にまず到達するが、後に肺に達する。手術及び放射線療法は、口腔癌のために選択される処置である。放射線療法及びしばしば化学療法は、中咽頭癌のために選択される処置である。
【０１４４】
扁平上皮癌幹細胞の特徴付け
扁平上皮細胞癌における癌幹細胞の特徴付けは、この重要な細胞集団に対して、特にその自己再生能に対して特異的に標的化される新規な処置の開発を可能とし、これにより、より効果的な療法が得られる。
【０１４５】
ヒト扁平上皮細胞癌では、自己再生能及び分化能の両方を有する腫瘍原性癌細胞の亜集団が存在することが本明細書において示される。これらの腫瘍原性細胞は腫瘍の維持に関与し、また、腫瘍原性ではない異常に分化している数多くの子孫も生じ、したがって、癌幹細胞の基準を満たす。
【０１４６】
扁平上皮癌の癌幹細胞は、特定のマーカーに関するその表現型、及び／又はその機能的表現型によって同定される。いくつかの例では、これらの癌幹細胞は、関心対象のマーカーに特異的な試薬を用いて細胞に結合させることによって同定及び／又は単離される。分析しようとする細胞は生細胞であっても、又は、固定若しくは包埋された細胞でもよい。
【０１４７】
いくつかの例では、関心対象のマーカーに特異的な試薬は、直接的又は間接的に標識されていてもよい抗体である。このような抗体は、通常、ＣＤ４４に特異的な抗体、及び系統パネルに特異的な抗体を含む。系統パネルは、通常、正常な白血球、線維芽細胞、内皮細胞、中皮細胞などのマーカーに特異的な試薬を含む。このようなマーカーは、以下のマーカーの１つ以上、２つ以上、３つ以上に特異的な試薬を含み得る：ＣＤ４４、ＳＯＸ２、ＯＣＴ４、ＮＡＮＯＧ、並びに、ｐ６３、ＣＤ３４及びＥＭＡの発現の欠如。
【０１４８】
癌療法−全般
癌の予防、治療、及び／又は管理のために有用であるか、使用されていたか、又は現在使用されている任意の療法（例えば治療剤又は予防剤）を、本発明の組成物及び方法に使用することができる。療法（例えば治療剤又は予防剤）としては、ペプチド、ポリペプチド、抗体、コンジュゲート、核酸分子、低分子、模倣剤、合成薬物、無機分子、及び有機分子が挙げられるがこれらに限定されない。癌療法の非限定的な例としては、化学療法、放射線療法、放射免疫療法、ホルモン療法、標的化療法、エピジェネティック療法、分化療法、抗血管新生療法、低分子療法、エピジェネティック療法、毒素療法、分化療法、プロドラッグ活性化酵素療法、抗体療法、タンパク質療法、及び／又は生物学的療法、例えば免疫療法、及び手術が挙げられるがこれらに限定されない。特定の例では、本発明の予防的に及び／又は治療的に有効な計画は、併用療法の投与を含む。
【０１４９】
癌療法の例としては、アシビシン；アクラルビシン；塩酸アコダゾール；アクロニン；アドゼレシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン；酢酸アメタントロン；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラサイクリン；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン（ビダーザ）；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；塩酸ビサントレン；ジメシル酸ビスナフィド；ビスホスホネート（例えばパミドロネート（アレドリア）、クロドロン酸ナトリウム（ボネフォス）、ゾレドロン酸（ゾメタ）、アレンドロネート（フォサマック）、エチドロネート、イバンドロネート、シマドロネート、リセドロナート、及びチルドロネート）；ビゼレシン；硫酸ブレオマイシン；ブレキナルナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン（carrnustine）；塩酸カルビシン；カルゼレシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド；シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）；ダカルバジン；ダクチノマイシン；塩酸ダウノルビシン；デシタビン（ダコゲン）；脱メチル化剤；デキソルマプラチン；デザグアニン；メシル酸デザグアニン；ジアジクオン；ドセタキセル；ドキソルビシン；塩酸ドキソルビシン；ドロロキシフェン；クエン酸ドロロキシフェン；プロピオン酸ドロモスタノロン；ズアゾマイシン；エダトレキサート；塩酸エフロルニチン；ＥｐｈＡ２阻害剤；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロメート；エピプロピジン；塩酸エピルビシン；エルブロゾール：塩酸エソルビシン；エストラムスチン；エストラムスチンリン酸エステルナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；塩酸ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フロキシウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；フルオロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；塩酸ゲムシタビン；ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤（ＨＤＡＣ−Ｉ）；ヒドロキシ尿素；塩酸イダルビシン；イホスファミド；イルモフォシン（ilmofosine）；メシル酸イマチニブ（グリーベック（Gleevec）、グリベック（glivec））；インターロイキンＩＩ（組換えインターロイキンＩＩすなわちｒＩＬ２を含む）、インターフェロンα−２ａ；インターフェロンα−２ｂ；インターフェロンα−ｎ１；インターフェロンα−ｎ３；インターフェロンβ−Ｉａ；インターフェロンγ−Ｉｂ；イプロプラチン；塩酸イリノテカン；酢酸ランレオチド；レナリドミド（レブリミド）；レトロゾール；酢酸ロイプロリド；塩酸リアロゾール；ロメテレキソールナトリウム；ロムスチン；塩酸ロソキサントロン；マソプロコール；マイタンシン；塩酸メクロレタミン；抗ＣＤ２抗体（例えばシプリズマブ（Medlmmune Inc.；国際公開公報第０２／０９８３７０号、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる））；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストール；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；メツレデパ；ミチンドミド；ミトカルシン；ミトクロミン；ミトギリン；ミトマルシン；マイトマイシン；ミトスペル；ミトタン；塩酸ミトキサントロン；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキサリプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペグアスパラガーゼ；ペリオマイシン；ペンタムスチン（pentamustine）；硫酸ペプロマイシン；ペルホスファミド；ピポブロマン；ピポスルファン；塩酸ピロキサントロン；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；塩酸プロカルバジン；ピューロマイシン；塩酸ピューロマイシン；ピラゾフリン；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；塩酸サフィンゴール；セムスチン；シムトラゼン；スパルホサートナトリウム；スパルソマイシン；塩酸スピロゲルマニウム；スピロムスチン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スロフェヌル；タリソマイシン；テコガランナトリウム；テガフール；塩酸テロキサントロン；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；クエン酸トレミフェン；酢酸トレストロン；リン酸トリシリビン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；塩酸ツブロゾール；ウラシルマスタード；ウレデパ；バプレオチド；ベルテポルフィン；硫酸ビンブラスチン；硫酸ビンクリスチン；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン；硫酸ビングリシナート；硫酸ビンロイロシン；酒石酸ビノレルビン；硫酸ビンロシジン；硫酸ビンゾリジン；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；塩酸ゾルビシンが挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５０】
癌療法の他の例としては、２０−エピ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン；アミドックス；アミフォスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；/-/；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリックス；抗背側形成タンパク質−１；抗アンドロゲン剤、前立腺癌；抗エストロゲン剤；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリン・グリシン塩；アポトーシス遺伝子モジュレーター；アポトーシス制御因子；アプリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−Ｄ Ｌ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン類；ベンゾイルスタウロスポリン；β−ラクタム誘導体；β−アレチン；ベタクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビスアジリジニルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビゼレシン；ブレフラート；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトテシン誘導体；カナリポックスＩＬ−２；カペシタビン；カルボキシアミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ Ｍ３；ＣＡＲＮ ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼレシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリクス；クロリン類；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェンアナログ；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コムブレタスタチンＡ４；コムブレタスタチンアナログ；コナゲニン；クランベシジン８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；キュラシンＡ；シクロペンタアントラキノン類；シクロプラタム（cycloplatam）；シペマイシン；シタラビンオクホスファート；細胞溶解因子；シトスタチン；ダクリキシマブ（dacliximab）；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ；デスロレリン；デキサメタゾン；デキシホスファミド；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ダイドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタキソール；ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ドセタキセル；ドコサノール；ドラセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルホシン；エドレコロマブ；エフロルニチン；エレメン；エミテフル；エピルビシン；エプリステリド；エストラムスチンアナログ；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；エトポシドリン酸塩；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン��フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；フルオロダウノルビシン（fluorodaunorunicin）塩酸塩；ホルフェニメクス；ホルメスタン；ホストリエシン；ホテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリクス；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤（例えばアトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、レスコール、リピトール（lupitor）、ロバスタチン、ロスバスタチン、及びシンバスタチン）；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモホシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン類；イミキモド；免疫刺激ペプチド；インスリン様増殖因子−１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン類；インターロイキン類；イオベングアン；ヨードドキソルビシン；イポメアノール、４−イロプラクト（iroplact）；イルソグラジン；イソベンガゾール（isobengazole）；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；ラメラリン−Ｎトリアセタート；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；レンチナン硫酸塩；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病抑制因子；白血球αインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；ロイプロレリン；レバミソール；ＬＦＡ−３ＴＩＰ（Biogen, Cambridge, MA；国際公開公報第９３／０６８６号及び米国特許第６，１６２，４３２号）；リアロゾール；鎖状ポリアミンアナログ；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物；リッソクリナミド７；ロバプラチン；ロムブリシン；ロメトレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ルルトテカン；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；溶解性ペプチド；マイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリリシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミルテホシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシンアナログ；ミトナフィド；マイトトキシン線維芽細胞増殖因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチン；ヒト絨毛性ゴナドトロピンに対するモノクローナル抗体；モノホスホリルリピドＡ＋ミオバクテリウム細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；多腫瘍抑制因子１に基づく治療；マスタード系抗癌剤；ミカペロキシドＢ；マイコバクテリア細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ（nagrestip）；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン（napavin）；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素モジュレーター；ニトロキシド抗酸化剤；ニトルリン；Ｏ６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌク���オチド；オナプリストン；オラシン；経口サイトカイン誘導物質；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキサウノマイシン；パクリタキセル；パクリタキセルアナログ；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペグアスパルガーゼ；ペルデシン；ポリ硫酸ペントサンナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール（pentrozole）；ペルフルブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニルアセタート；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；ピロカルピン塩酸塩；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲン活性化因子阻害剤；白金錯体；白金化合物；白金−トリアミン錯体；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニゾン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡに基づく免疫モジュレーター；プロテインキナーゼＣ阻害剤；微細藻類のプロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン類；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質転移酵素阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；レニウムＲｅ１８６エチドロネート；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチナミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメクス；ルビギノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ１模倣体；セムスチン；老化由来阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達モジュレーター；γセクレターゼ阻害剤、一本鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラム；ソブゾキサン；ボロカプテイトナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルホス酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンギスタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害剤；幹細胞分裂阻害剤；スチピアミド；ストロメライシン阻害剤；スルフィノシン；超活性な血管作用性腸管ペプチドアンタゴニスト；スラジスタ；スラミン；スワインソニン；合成グリコサミノグリカン；タリムスチン；５−フルオロウラシル；ロイコボリン；タモキシフェンメチオジド；タウロムスチン；タザロテン；テコガランナトリウム；テガフール；テルラピリリウム；テロメラーゼ阻害剤；テモポルフィン；テモゾロミド；テニポシド；テトラクロロデカオキシド；テトラゾミン；タリブラスチン；チオコラリン；トロンボポイエチン；トロンボポイエチン模倣体；チマルファシン；チモポイエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；エチルエチオプルプリンすず；チラパザミン；チタノセンジクロリド；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセト���ン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；チルホスチン類；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来増殖阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリンＢ；ベクター系、赤血球遺伝子療法；サリドマイド；ベラレソール；ベラミン；ベルジン類；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン（vinxaltine）；抗インテグリン抗体（例えば抗インテグリンαｖｐ３抗体）；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；及びジノスタチンスチマラマーが挙げられるがこれらに限定されない。癌幹細胞を標的とするのに使用することのできる化合物の非制限的なリストとしては、インターロイキン−３受容体（ＩＬ−３Ｒ）及びＣＤ１２３の阻害剤（ＩＬ−３Ｒ又はＣＤ１２３を標的とするペプチド、ペプチド−コンジュゲート、抗体、抗体−コンジュゲート、抗体断片、及び抗体断片−コンジュゲート）；カンタリジン；ノルカンタリジン、並びにその類似体及び誘導体；ノッチ経路阻害剤、例えばγセクレターゼ阻害剤；ソニックヘッジホッグ／スムーズンド経路阻害剤、例えばシクロパミン及びその類似体；ＣＤ９６に対する抗体；特定のＮＦ−κＢ／プロテアーゼ阻害剤、例えばパルテノライド及びその類似体；特定のトリテルペン、例えばセラストロール；特定のｍＴＯＲ阻害剤；ウロキナーゼ受容体を標的とする化合物及び抗体；シネフンギン；特定のイノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）阻害剤；ＰＰＡＲ−α及びＰＰＡＲ−γアゴニスト及びアンタゴニスト（例えば、ピオグリタゾン、テサグリタザル（tesaslitazar）、ムラグリタザル、ペリグリタザル、ロベグリタゾン、バラグリダゾン、ラガグリタザル、ロシグリタゾン、ファルグリタザル、ソデルグリタザル、レグリタザル、ナベグリタザル、オキセグリタザル、メタグリダセン、ネトグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、チアゾリジンジオン、アレグリタザル、エダグリタゾン、リボグリタゾン、トログリタゾン、イミグリタザル、及びシポグリタザル）；テロメラーゼ阻害剤；ＥｐＣＡＭ抗体（ＥＳＡ）；ＧＳＫ−３βアゴニスト及びアンタゴニスト（例えば、リチウム、６−ブロモイニルビン−３’−オキシム（ＢＩＯ）、ＴＤＺＤ８）；Ｗｎｔ経路阻害剤、例えばディシェベルド／フリズルド又はβカテニンを阻害するフリズルド又は低分子に対
する抗体；多発性骨髄腫又は黒色腫における新規使用のための抗ＣＤ２０抗体及びコンジュゲート（例えばリツキサン、ベキサール、ゼヴァリン）；抗ＣＤ１３３抗体；抗ＣＤ４４抗体；ＩＬ−４抗体；ベスナリノンなどの特定の分化剤；抗体又はベツリン酸などのＣＤ３３を標的とする化合物；抗体などのラクトアドヘリンを標的とする化合物；ＣＸＣＲ４又はＳＤＦ−１を標的とする低分子又は抗体；多剤耐性ポンプを標的とする低分子又は抗体；サバイビン阻害剤；ＸＩＡＰ阻害剤；ＢｃＩ−２を標的とする低分子；ＣＬＬ−Ｉ抗体；及びフリン阻害剤（例えばククルビタシン）が挙げられる。癌幹細胞を標的とするために使用することもできる化合物のさらなる非制限的なリストとしては、ｉ）裸であるか又は癌幹細胞上の特定の細胞表面標的を標的とする治療用部分にコンジュゲートされているかのいずれかである、抗体、抗体断片、及びタンパク質、又はｉｉ）癌幹細胞に基づいた選別を介してさらに最適化（例えば化学反応を介して）又は同定することのできる低分子をはじめとする当技術分野において公知である低分子（例えば、化合物が、標準的な方法を通して癌幹細胞の増殖又は生存を損なうかどうかを決定するであろう低分子）が挙げられ、含まれる（網羅を意味するものではない）細胞表面及び細胞内標的は、Ｒｅｘｌ（Ｚｆｐ４２）、ＣＴＧＦ、アクチビンＡ、Ｗｎｔ、ＦＧＦ−２、ＨＩＦ−Ｉ、ＡＰ−２γ、Ｂｍｉ−１、ヌクレオステミン、ｈｉｗｉ、Ｍｏｚ−ＴＩＦ２、Ｎａｎｏｇ、β−アレスチン−２、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ｓｔｅｌｌａ、ＧＤＦ３、ＲＵＮＸ３、ＥＢＡＦ、ＴＤＧＦ−１、ｎｏｄａｌ、ＺＦＰＹ、ＰＴＮＥ、ＥｖＭ５Ｐａｘ３、ＭｃＩ−Ｉ、ｃ−ｋｉｔ、Ｌｅｘ−１、Ｚｆｘ、ラクタヘドリン、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、ＢＣＲＰ、テロメラーゼ、ＣＤ１３３、Ｂｃｌ−２、ＣＤ２６、グレムリン、及びＦｏｘＣ２である。
【０１５１】
いくつかの例では、使用される療法（群）は免疫調節剤である。免疫調節剤の非制限的な例としては、タンパク質性薬剤、例えばサイトカイン、ペプチド模倣体、及び抗体（例えばヒト、ヒト化、キメラ、モノクローナル、ポリクローナル、Ｆｖｓ、ＳｃＦｖｓ、Ｆａｂ、又はＦ（ａｂ）２断片又はエピトープ結合断片）、核酸分子（例えばアンチセンス核酸分子及び三重らせん）、低分子、有機化合物、及び無機化合物が挙げられる。特に、免疫調節剤としては、メトトレキサート、レフルノミド、シクロホスファミド、シトキサン、イムラン、シクロスポリンＡ、ミノサイクリン、アザチオプリン、抗生物質（例えばＦＫ５０６（タクロリムス））、メチルプレドニゾロン（ＭＰ）、副腎皮質ステロイド、ステロイド、ミコフェノール酸モフェチル、ラパマイシン（シロリムス）、ミゾリビン、デオキシスペルグアリン、ブレキナル、マロノニトリロアミド（例えばレフルノミド）、Ｔ細胞受容体モジュレーター、サイトカイン受容体モジュレーター、及び肥満細胞モジュレーターが挙げられるがこれらに限定されない。免疫調節剤の他の例は、例えば、米国特許公開公報第２００５／０００２９３４Ａｌ号の２５９〜２７５段落に見られ、これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。一例では、免疫調節剤は、化学療法剤である。代表的な例では、免疫調節剤は、化学療法剤以外の免疫調節剤である。いくつかの例では、本発明に従って使用される療法（群）は免疫調節剤ではない。
【０１５２】
いくつかの例では、使用される療法（群）は抗血管新生剤である。抗血管新生剤の非制限的な例としては、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、融合タンパク質、抗体（例えば、ヒト、ヒト化、キメラ、モノクローナル、ポリクローナル、Ｆｖｓ、ＳｃＦｖ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）２断片、及びその抗原結合断片）、例えばＴＮＦ−αに特異的に結合する抗体、核酸分子（例えばアンチセンス分子又は三重らせん）、有機分子、無機分子、及び血管新生を低減又は抑制する低分子が挙げられる。抗血管新生剤の他の例は、例えば、米国特許公開公報第２００５／０００２９３４Ａ１号の２７７〜２８２段落に見られ、これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。他の例では、本発明に従って使用される療法（群）は抗血管新生剤ではない。
【０１５３】
特定の例では、使用される療法は、アルキル化剤、ニトロソ尿素、代謝拮抗剤、及びアントラサイクリン、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、又は有糸分裂阻害剤である。アルキル化剤としては、ブスルファン、シスプラチン、カルボプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、デカルバジン、メクロレタミン、メルファラン（mephalen）、及びテモゾロミドが挙げられるがこれらに限定されない。ニトロソ尿素としては、カルムスチン（ＢＣＮＵ）及びロムスチン（ＣＣＮＵ）が挙げられるがこれらに限定されない。代謝拮抗剤としては、５−フルオロウラシル、カペシタビン、メトトレキサート、ゲムシタビン、シタラビン、及びフルダラビンが挙げられるがこれらに限定されない。アントラサイクリンとしては、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、及びミトキサントロンが挙げられるがこれらに限定されない。トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としては、トポテカン、イリノテカン、エトポシド（ＶＰ−１６）、及びテニポシドが挙げられるがこれらに限定されない。有糸分裂阻害剤としては、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、及びビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、及びビノレルビン）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５４】
本発明は、癌幹細胞を標的とする薬剤の使用を含む。特定の例では、該薬剤は、治療部分に直接的に又は化学的技術若しくは組換え技術を介して間接的に付着している低分子、生物学的製剤、あるいは、ペプチド又は抗体又は抗体断片をはじめとする薬剤である。治療用部分の非制限的な例としては、治療用酵素、化学療法剤、サイトカイン、細菌毒素、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素、放射性核種、ＲＮアーゼ、及び代謝拮抗剤が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの例では、使用される薬剤は、マーカー、例えば癌幹細胞上の抗原に結合する薬剤である。具体例では、該薬剤は、正常な幹細胞よりも癌幹細胞上により高いレベルで発現されている抗原に結合する。別の具体例では、該薬剤は、正常な幹細胞と同じレベルで癌幹細胞上に発現されている抗原に結合する。
【０１５５】
具体例では、該薬剤は、正常な幹細胞上に存在しないか又は存在する癌幹細胞抗原に特異的に結合する。別の例では、本発明に従って使用される療法（群）は、癌幹細胞上のマーカーに結合する薬剤である。一例では、癌幹細胞上のマーカーに結合する薬剤は、抗体又は抗体断片であり、そのいずれかは裸であっても、又は治療用酵素、化学療法剤、サイトカイン、細菌毒素、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素、放射性核種、ＲＮアーゼ、及び代謝拮抗剤などの治療用部分にコンジュゲートされていてもよい。
【０１５６】
例えば、具体例では、該薬剤は、ＩＬ−３受容体（ＩＬ−３Ｒ）又はそのα−サブユニット（すなわちＣＤ１２３抗原）に特異的に結合する。いくつかの例では、ＩＬ−３Ｒに結合する薬剤は、ＩＬ−３Ｒ又はそのα−サブユニットに特異的である抗体である。該抗体は、連結剤を使用して、治療用部分（例えば化学療法剤、植物由来、真菌由来、若しくは細菌由来の毒素、又は放射性核種、ＲＮアーゼ）に化学的に又は組換え的にのいずれかでコンジュゲートされていてもよく、これにより細胞殺滅応答が奏功される。特定の例では、該抗体又は抗体−コンジュゲートは、ＩＬ−３Ｒのα−サブユニット（すなわちＣＤ１２３抗原）に結合する。換言すれば、該抗体又は抗体コンジュゲートは、ＩＬ−３Ｒのα−サブユニットに結合するが、ＩＬ−３Ｒのβ−サブユニットには結合しない。他の例では、該抗体又は抗体コンジュゲートは、免疫特異的に、αサブユニット及びβサブユニットの両方を含有しているＩＬ−３Ｒに結合する。ＩＬ−３Ｒ抗体又はＩＬ−３Ｒ抗体の模倣体の調製法は、例えば、米国特許第６，７３３，７４３Ｂ２号に記載され、これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる。
【０１５７】
他の例では、癌幹細胞上のマーカーに結合する薬剤はリガンドである。いくつかの例では、該リガンドは、癌幹細胞上のサイトカイン受容体に結合するサイトカインである。特定の例では、該リガンドは、毒素をはじめとする治療用部分にコンジュゲートされていてもよいインターロイキン−３（ＩＬ−３）である。ＩＬ−３−毒素コンジュゲートは、毒素がタンパク質、例えばジフテリア毒素である例では、融合タンパク質の形態であり得る。ＩＬ−３−ジフテリア毒素融合タンパク質（「ＩＬ３ＤＴ」）を調製し単離する方法は、Frankel et al., "Diphtheria toxin fused to human interleukin-3 is toxic to blasts from patients with myeloid leukemias," Leukemia 14:576（2000）及びUrieto et al., "Expression and purification of the recombinant diphtheria fusion toxin DT388IL3 for phase I clinical trials," Protein Expression and Purification 33: 123-133（2004）に記載され、その開示はその全体が参照により本明細書に組み入れられる。他の例では、療法はＩＬ３ＤＴではない。
【０１５８】
特定の例では、癌幹細胞上のマーカーに結合する抗体は、処置される被験者において実質的に免疫原性ではない。非免疫原性抗体を得るための方法は、抗体のキメラ化、抗体のヒト化、抗体断片の作製、及び療法を受けている被験者と同じ種からの抗体の作製を含むがこれらに限定されない。例えば、米国特許公開公報第２００５／０００２９３４Ａ１の５３９〜５７３段落を参照されたい（これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる）。癌幹細胞内のマーカーに結合する抗体は、当技術分野において公知の技術を使用して作製され得る。
【０１５９】
いくつかの例では、使用される療法は、癌幹細胞及び／又は癌細胞を破壊するためのＸ線、γ線、及び他の放射線源の使用を含む。具体例では、放射線療法は外部ビーム照射又は遠隔放射線療法として投与され、放射線は遠隔の発生源から向けられる。他の例では、放射線療法は、内部療法又は近距離照射療法として投与され、放射能の発生源は、癌幹細胞、癌細胞及び／又は腫瘍塊に近い生体内に配置される。
【０１６０】
いくつかの例では、使用される療法は、増殖に基づいた療法である。このような療法の非制限的な例としては、上記のような化学療法及び放射線療法が挙げられる。
【０１６１】
現在利用可能な療法及びその用量、投与経路、及び推奨される用法は、当技術分野において公知であり、米国医師用卓上参考書（第６０版、２００６年）などの文献に記載されている。当技術分野において公知である投与経路としては、経口、局所、非経口、舌下、直腸、膣内、眼内、皮内、腫瘍内、脳内、くも膜下腔内、及び鼻腔内が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの例では、療法は、薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む組成物の一部として投与される。
【０１６２】
インビトロでのアッセイ
本明細書に記載の療法を、インビトロ及び／又はインビボで、癌細胞及び／若しくは癌細胞の量を低減、又はその増殖を抑制するその能力について試験することができる。療法が、癌幹細胞、癌細胞及び／若しくは免疫細胞（例えばリンパ球）の量を安定化若しくは低減する能力、又はその増殖を抑制する能力は、癌幹細胞、癌細胞、及び免疫細胞上の抗原の発現の検出；癌幹細胞、癌細胞、及び免疫細胞の増殖の検出；機能的アッセイを使用した癌幹細胞及び癌細胞の検出によって評価され得る。当業者に公知である技術を、これらの活性を測定するために使用することができる。例えば、細胞増殖を、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイ及びトリパンブルー細胞計数によってアッセイすることができる。抗原発現を、例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学放射免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降素反応、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫放射定量アッセイ、蛍光イムノアッセイ、プロテインＡイムノアッセイ、免疫蛍光法、フローサイトメトリー、及びＦＡＣＳ分析などの技術を使用して、競合的及び非競合的アッセイ系を含むがこれらに限定されない、イムノアッセイによってアッセイすることができる。
【０１６３】
本発明の化合物、医薬組成物、治療剤又は予防剤を、ヒトへの使用前に、インビトロで、その後、インビボで、所望の治療活性又は予防活性について試験し得る。例えば、特定の化合物の投与が有効であるかどうかを決定するために使用することのできるアッセイとしては、細胞及び組織培養アッセイが挙げられ、ここでは患者の組織試料（例えば癌細胞又は癌幹細胞）を培養液中で増殖させ、化合物に曝すか又は別様に接触させ、組織試料に対するこのような化合物の作用を観察する。組織試料は、患者から生検によって得ることができる。この試験は、各々の個々の患者について治療的に最も有効な療法（例えば予防剤又は治療剤）の同定を可能とする。
【０１６４】
療法を、好ましくは、ヒトへの使用前に、インビトロで、その後、インビボで、所望の治療活性又は予防活性について試験する。例えば、特定の化合物の投与が有効であるかどうかを決定するために使用することのできるアッセイとしては、細胞及び組織培養アッセイが挙げられ、ここでは患者の組織試料（例えば癌細胞又は癌細胞）を培養液中で増殖させ、予防用化合物又は治療用化合物に曝すか又は別様に接触させ、組織試料に対するこのような化合物の作用を観察する。組織試料は、患者から生検によって得ることができる。この試験は、各々の個々の患者について治療的に最も有効な療法（例えば予防剤又は治療剤）の同定を可能とする。特定の例では、療法の効果は、例えばＸＴＴアッセイなどの当技術分野において公知である標準的なアッセイを使用して細胞生存度アッセイにおいて評価される。
【０１６５】
毒性アッセイ
本明細書に記載の療法の毒性及び／又は効力は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効な用量）を決定するための、細胞若しくは組織培養液中の又は実験動物における標準的な薬学的手順によって決定され得る。毒性作用と治療作用との間の用量比は治療指数であり、それは、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表現され得、大きな治療指数を示す計画が好ましい。毒性副作用を示す計画を使用してもよいが、未感染の細胞への傷害の可能性を最小限とし、これにより副作用を低減させるために、罹患組織部位にこのような薬剤を標的化する送達システムを設計する際には注意を払うべきである。
【０１６６】
細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデータを、ヒトへの使用のための一連の用量の療法を製剤化する際に使用することができる。このような薬剤の用量は好ましくは、正常組織に対して殆ど又は全く毒性を及ぼさない、ＥＤ５０を含む一連の循環濃度内に存する。用量は、使用される剤形及び使用される投与経路に依存して、この範囲内で変更されてもよい。本発明の方法に使用される任意の療法について、予防有効量及び／又は治療有効量は、細胞培養アッセイから最初に推定することができる。動物モデルにおいて、細胞培養液中で決定されたようなＩＣ５０（すなわち、症状の半数阻害を達成する試験化合物の濃度）を含む循環中血漿中濃度範囲を達成するように、用量を調合し得る。このような情報を使用して、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中の化合物のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィーによって測定され得る。
【０１６７】
製品
本発明はまた、梱包が完了しラベルの貼付された医薬品（群）も包含する。製品は、ガラスバイアルなどの適切な器若しくは容器、又は密封された他の容器に、適切な単位投与剤形を含む。医薬品は、例えば、第一の容器に単位投与剤形の予防剤又は治療剤、及び第二の容器に注射用滅菌水を含有し得る。あるいは、単位投与剤形は、経口、経皮、鼻腔内、又は局所送達に適した固体であり得る。
【０１６８】
具体例では、単位投与剤形は、静脈内、筋肉内、鼻腔内、経口、局所、又は皮下送達に適している。したがって、本発明は、各々の送達経路に適した、液剤、好ましくは滅菌された液剤を包含する。
【０１６９】
いくつかの例では、医薬品は、本明細書に開示された予防剤及び／又は治療剤である。いくつかの例では、医薬品は、予防剤及び／又は治療剤と薬学的に許容される担体又は賦形剤とを含む組成物である。具体例では、医薬組成物は、適切な投与経路のための剤形である。このような経路としては、経口、局所、非経口、舌下、直腸、膣内、眼内、皮内、腫瘍内、脳内、くも膜下腔内、及び鼻腔内経路が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１７０】
あらゆる医薬品と同様に、梱包材料及び容器は保存及び出荷中の製品の安定性を保護するように設計されている。さらに、本発明の製品は、問題の疾患又は障害を適切に予防又は治療する方法に関して医師、技術者、又は患者に助言する使用説明書又は他の情報資料を含む。換言すれば、該製品は、実際の用量、投与頻度、投与期間、癌細胞数、癌幹細胞数、リンパ球数、好中球数に関するモニタリング手順、及び他のモニタリング情報を含むがこれらに限定されない投与計画を示す又は示唆する取扱説明手段を含む。
【０１７１】
具体的には、本発明は、箱、瓶、チューブ、バイアル、容器、スプレー、吸入器、静注用（i.v.）バッグ、包装材料などの梱包材料；及び、該梱包材料内に含有される少なくとも１単位投与剤形の医薬を含む、製品を提供し、ここで該医薬は予防剤又は治療剤を含み、ここで該梱包材料は、特定の用量を投与し本明細書に記載のような特定の投与計画を使用することによって癌又はその１つ以上の症状に関連した１つ以上の症状を予防、管理、治療、及び／又は寛解するために該薬剤を使用することができることを示す、取扱説明手段を含む。
【０１７２】
特定の例では、製品は、癌幹細胞に選択的に又は特異的に結合し、そして癌細胞に選択的に又は特異的に結合する、標識抗体を含む。したがって、製品は、処置計画に使用される用量を調整し、計画の効力をモニタリングするための方法を含有している。
【０１７３】
本発明は、本発明の方法によって低減又は回避され得る有害作用が、癌を予防、治療及び／又は管理するのに使用するための製品に封入された情報資料に示されていることを提供する。本発明の方法によって低減又は回避され得る有害作用としては、バイタルサインの異常（発熱、頻脈、徐脈、高血圧、低血圧）、血液学的イベント（貧血、リンパ球減少症、白血球減少症、血小板減少症）、頭痛、悪寒、眩暈、嘔気、無力症、背部痛、胸痛（胸部圧迫感）、下痢、筋肉痛、疼痛、そう痒、乾癬、鼻炎、発汗、注射部位反応、及び血管拡張が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１７４】
さらに、癌を予防、治療及び／又は管理するのに使用するための製品に封入される情報資料は、外来タンパク質もまたアナフィラキシーをはじめとするアレルギー反応又はシトシン遊離症候群を生じる可能性があることを示し得る。情報資料は、アレルギー反応が軽度なそう痒性皮疹としてのみ呈する場合もあるが、又はそれらは紅皮症、スティーブン・ジョンソン症候群、血管炎、若しくはアナフィラキシーのように重度である場合もあることを示すべきである。情報資料はまた、アナフィラキシー反応（アナフィラキシー）は重篤で時に致命的な過敏症反応であることも示すべきである。アナフィラキシーをはじめとするアレルギー反応は、任意の外来タンパク質が体内に注入された場合に起こり得る。それらは蕁麻疹又は発疹などの軽度な徴候から致命的な全身性の反応まであり得る。アナフィラキシー反応は、曝露後すぐに、通常１０分以内に起こる。患者は、知覚異常、低血圧、咽頭浮腫、精神状態変化、顔面又は咽頭の血管浮腫、気道閉塞、気管支痙攣、蕁麻疹、及びそう痒、血清病、関節炎、アレルギー性腎炎、糸球体腎炎、一過性関節炎、又は好酸球増加症を引き起こす場合もある。
【０１７５】
キット
本発明はまた、癌幹細胞を検出、モニタリング、及び／又は測定するための試薬で充填された１つ以上の容器を含む、医薬パック又はキットを提供する。一例では、医薬パック又はキットは場合により、癌幹細胞を検出及び／又は測定するために提供された試薬の使用説明書を含む。別の例では、医薬パック又はキットは場合により、医薬品又は生物学的製剤の製造、使用又は販売を規制する政府当局によって規定された形式の通知を含み、該通知は、当局によるヒトへの投与のための製造、使用、又は販売の承認を反映する。
【０１７６】
一例では、医薬パック又はキットは、１つ以上の容器に、癌幹細胞表面マーカー結合剤を含む。特定の例では、該薬剤は、癌幹細胞表面マーカーに選択的に又は特異的に結合する抗体である。該薬剤は、任意の癌幹細胞表面マーカーと交差反応する、抗体（例えば、ヒト、ヒト化、キメラ、モノクローナル、ポリクローナル、Ｆｖｓ、ＳｃＦｖｓ、Ｆａｂ、又はＦ（ａｂ）２断片又はエピトープ結合断片を含む）であり得る。別の例では、該抗体は、米国特許第６，００４，５２８号の表１、又は米国特許出願番号第０９／４６８，２８６号の表１、２若しくは３、並びに米国特許出願公開公報第２００６／００８３６８２号、第２００７／００３６８００号、第２００７／００３６８０１号、第２００７／００３６８０２号、第２００７／００４１９８４号、第２００７／００３６８０３号、及び第２００７／００３６８０４号に列挙された癌幹細胞表面マーカーのいずれか１つと反応し、その各々は本明細書に参照により組み入れられる。この例に従って、医薬パック又はキットは、癌幹細胞表面マーカーに結合する１つ以上の抗体を含み、ここで各抗体は、癌幹細胞表面マーカーの異なるエピトープに結合する及び／又は異なる親和性で癌幹細胞表面マーカーに結合する。
【０１７７】
抗体に基づいたキットについて、該キットは、例えば、（１）癌幹細胞表面マーカータンパク質に結合する第一抗体（これは固相支持体に付着していても付着していなくてもよい）；及び場合により、（２）第一の抗体に結合した癌幹細胞表面マーカータンパク質又は第一の抗体のいずれかに結合し、かつ検出可能な標識（例えば蛍光標識、放射性同位体、又は酵素）にコンジュゲートしている第二の異なる抗体を含み得る。抗体に基づいたキットはまた、免疫沈降を行なうためのビーズを含み得る。抗体に基づいたキットの各成分は一般的に、それ自体の適切な容器内にある。したがって、これらのキットは一般的に、各抗体に適した個別の容器を含む。さらに、抗体に基づいたキットは、アッセイを実施するための説明書、並びに、アッセイの実施から得られたデータを解釈及び分析するための方法を含み得る。一例として、キットは、白血病癌幹細胞（これはＣＤ３４＋／ＣＤ３８−／ＣＤ１２３＋）の量の決定のために単離及び／又は定量及び／又は支援するための、ポジティブ選択のための抗ＣＤ３４抗体、ネガティブ選択のための抗ＣＤ３８抗体、及びポジティブ選択のための抗ＣＤ１２３抗体を含み得る。
【０１７８】
核酸マイクロアレイキットについては、該キットは一般的に、固相支持体表面に付着する特定の遺伝子に特異的なプローブを含む（がこれらに限定されない）。他の例では、プローブは可溶性である。１つのこのような例では、プローブは、オリゴヌクレオチド又はより長いプローブのいずれか、例えば、１５０ヌクレオチド長から８００ヌクレオチド長の範囲のプローブであり得る。プローブは検出可能な標識で標識されていてもよい。マイクロアレイキットは、アッセイを実施するための説明書、並びに、アッセイの実施から得られたデータを解釈及び分析するための方法を含み得る。該キットはまた、ハイブリダイゼーション試薬及び／又は癌幹細胞表面マーカー核酸配列にプローブがハイブリダイズした場合に発生するシグナルを検出するのに必要とされる試薬を含み得る。一般的に、マイクロアレイキットのための材料及び試薬は、１つ以上の容器内にある。キットの各成分は一般的に、それ自体の適切な容器内にある。
【０１７９】
定量ＰＣＲについては、該キットは一般的に、特定の癌幹細胞表面マーカー核酸配列に特異的な予め選択されたプライマーを含む。定量ＰＣＲキットはまた、核酸（例えばポリメラーゼ、例えばＴａｑ）及びデオキシリボヌクレオチドの増幅に適した酵素、並びに、増幅のための反応混合物に必要とされる緩衝液を含み得る。定量ＰＣＲキットはまた、容態に関連した又は容態を示唆する、核酸配列に特異的なプローブを含み得る。プローブはフルオロフォアで標識されていても標識されていなくてもよい。プローブは、クエンチャー分子で標識されていても標識されていなくてもよい。いくつかの例では、定量ＰＣＲキットはまた、ＲＮＡを逆転写するのに適した成分、例えば酵素（例えば逆転写酵素、例えばＡＭＶ、ＭＭＬＶなど）及び逆転写用のプライマーを、逆転写反応に必要とされるデオキシヌクレオチド及び緩衝液と共に含む。定量ＰＣＲキットの各成分は、一般的に、それ自体の適切な容器内にある。したがって、これらのキットは一般的に、各々の個々の試薬、酵素、プライマー、及びプローブに適した別個の容器を含む。さらに、定量ＰＣＲキットは、アッセイを実施するための説明書、並びに、アッセイの実施から得られたデータを解釈及び分析するための方法を含み得る。
【０１８０】
キットは場合によりさらに、例えば標準物質又は対照として使用するための、癌幹細胞表面マーカーをコードしている、予め決定された量の単離された癌幹細胞表面マーカーポリペプチド又は核酸を含み得る。本発明の診断法は、臨床試験の実施又はモニタリングを支援し得る。本発明に従って、被験者から得られた適切な試験試料、例えば血清又は組織試料を、診断のために使用することができる。
【０１８１】
医薬パック又はキットの使用によって得られた結果に基づいて（すなわち癌幹細胞量が安定化しているか又は低減されているかどうか）、癌療法又は計画を投与している医療従事者は、療法又は計画の継続を選択し得る。あるいは、癌幹細胞量が増加しているという結果に基づいて、医療従事者は、療法又は計画を継続、変更、又は中止することを選択し得る。
【０１８２】
本明細書における先行技術の文書へのあらゆる言及は、このような先行技術が広く知られているか又は当技術分野の一般知識の一部を形成しているということを承認するものと捉えられるべきではない。
【０１８３】
本明細書において使用する「含む」、「含んでいる」という単語、及び同様な単語は、排他的又は網羅的な意味で解釈されるべきではない。換言すれば、それらは「含むがこれらに限定されない」を意味することを意図する。
【０１８４】
本発明はさらに、以下の実施例を参照して記載される。特許請求されている本発明は、いずれにしてもこれらの実施例によって制限されるものではないことが理解されるだろう。
【０１８５】
実施例
実施例１：材料及び方法
材料
抗体
免疫組織化学法のために使用される抗体、その最適化された希釈率、及び入手源を、アルファベット順に表１に列挙する。
【０１８６】
【表１】
2017532368.tif 000003
2017532368.tif 000004
2017532368.tif 000005
【０１８７】
化学物質及び試薬
本研究に使用される化学物質及び試薬、並びにその入手源を表２に列挙する。
【０１８８】
【表２】
2017532368.tif 000006
【０１８９】
緩衝液、溶液、及び染色液
本研究に使用した緩衝液、溶液、及び染色液を表３に列挙する。
【表３】
2017532368.tif 000007
2017532368.tif 000008
【０１９０】
自動染色装置の免疫組織化学法のために使用されたキット及びその入手源を表４に列挙する。
【０１９１】
【表４】
2017532368.tif 000009
【０１９２】
方法
ホルマリンで固定されパラフィンに包埋された切片の調製
ホルマリンで固定されパラフィンに包埋されたＳＣＣＯＴ切片の４μm切片を、ミクロトームを使用して切断し、４０℃の水浴中で伸展させ、スライドガラス上に移し、室温で一晩乾燥させた。
【０１９３】
ヘマトキシリン及びエオシン染色
ヘマトキシリン及びエオシン染色を、患者１人あたり１つのホルマリンで固定されパラフィンに包埋されたスライド上で行なった。
【０１９４】
ヘマトキシリン及びエオシン染色分析
ヘマトキシリン及びエオシンで染色されたスライドを、病理学コンサルタントによって高分化した群、中程度に分化した群、及び低分化した群への、病変の初回の類別のために使用した。それらをその後、標本内の免疫組織化学染色パターンの組織の形態及び配向性の基準として使用した。
【０１９５】
自動化蛍光免疫組織化学手順
２つの染色液、３つの染色液、又は４つの染色液のいずれかを用いての自動蛍光免疫染色を、ライカ社のBond RX 免疫組織化学自動染色装置（ヌスロッホ、独国）を使用して、製造業者によって提供されたプロトコールに従って実施した。
【０１９６】
自動化ＤＡＢ免疫組織化学染色手順
１つの染色液を用いての自動化ＤＡＢ免疫染色を、ライカ社のBond RX 免疫組織化学自動染色装置（ヌスロッホ、独国）を使用して、製造業者によって提供されたプロトコールに従って実施した。
【０１９７】
可視化、写真撮影、及び画像分析
ＤＡＢで染色されたスライドを、オリンパスＢＸ５３顕微鏡、及びオリンパスＳＣ１００顕微鏡カメラを用いて見た。
【０１９８】
ＤＡＢで免疫染色されたスライドを、オリンパスＢＸ５３顕微鏡及びオリンパスＳＣ１００顕微鏡カメラを使用して見て撮影した。画像の定量分析を、染色されていない、弱く陽性に染色されている、強く陽性に染色されているのいずれかとして記載した。組織内の陽性染色の位置、陽性細胞の形態、及び陽性染色細胞内の染色の明確な位置に関する観察も注記した。
【０１９９】
蛍光免疫染色されたスライドを、オリンパスＦＶ１２００生体共焦点レーザー走査顕微鏡（東京、日本）を使用して見て撮影した。
【０２００】
画像の定量分析を、染色されていない、染色されている、又は共染色されているとして記載した。
【０２０１】
細胞内のマーカー発現の局在を、ＦＶ−１０ソフトウェアを使用して、１つの細胞の直径を横切る複数のマーカーの発現の相対強度を算出して分析した。発現は、核領域、細胞質領域、及び膜領域へと分離された。患者１人あたり９個の個々の細胞において、これらの各々の部分内の平均染色強度を計算した。これにより、その患者の細胞内の染色の正確な位置に関する一般化が可能となった。例えば、７０％が核に、３０％が細胞質に、０％が膜に。
【０２０２】
ウェスタンブロット
試料の取扱い及び調製
外科標本を、手術室からＧＭＲＩ研究室へと直接移し、その研究室でそれらを凍結保存バイアルに入れ、液体窒素を用いて瞬間凍結させ、そして−８０℃で保存した。
【０２０３】
瞬間凍結させた組織を冷凍庫から取り出し、適切なサイズ（４０〜８０mg）に解体した。使用しようとする試料の質量を記録し、全ての残りの組織を直ちに元来の凍結保存バイアルに戻し、さらなる研究のために−８０℃で保存した。試料をできるだけ多く氷上で保持した。
【０２０４】
試料を、ＲＩＰＡ緩衝液及びプロテアーゼ阻害剤１０mg/５００μL/５μLを含有している個々のエッペンドルフチューブに加え、その後、ガラス製の乳鉢に移し、ホモジナイズするまで、乳棒を用いて氷上で粉砕した。その後、組織懸濁液をエッペンドルフチューブに戻し、氷上で５分間インキュベートし、その後、１３３００rpmで４℃で２０分間遠心分離にかけた。その後、上清を新しいエッペンドルフチューブに移し、氷上で保存した。ペレットは廃棄した。
【０２０５】
タンパク質アッセイ
Qubit（商標）試薬 １μlをQubit（商標）緩衝液 １９９μlで希釈して、Qubit（商標）作業溶液を調製することにより、標準物質及び試料の各々のために２００μlを作製した。その後、３つのタンパク質標準物質を、Qubit（商標）作業溶液 １９０〜１９９μlに添加された１０μl（タンパク質標準物質）を使用して調製した。その後、標準物質を２〜３秒間ボルテックスにかけ、室温で２分間インキュベートした。その後、各標準物質を順次Qubit（商標）２．０蛍光光度計に入れて、標準曲線を導き出した。
【０２０６】
Qubit（商標）作業溶液 １９０μlに添加された溶解液 １０μLを使用して実験タンパク質試料を調製し、これにより２００μlとした。その後、試料を、Qubit（商標）２．０蛍光光度計を使用して読み取り、元来のストック試料中のタンパク質濃度を希釈計算機機能を使用して計算した。
【０２０７】
試料中に過剰なタンパク質が存在していたために試料中のタンパク質濃度を読み取ることができなかった場合、溶解液を希釈し、満足な読み取りが得られるまでプロセスを繰り返した。
【０２０８】
その後、組織溶解液試料をエッペンドルフチューブに分注し、反復される凍結／解凍サイクルによって引き起こされる混入リスク及び損傷を低減し、その後、後で使用するまで−８０℃で保存した。
【０２０９】
溶解液試料を冷凍庫から取り出し、氷上で保持した。各試料の容量を、タンパク質濃度に基づいて計算し（ゲル上に１ウェルあたり等量のタンパク質のローディングを可能とするために）、その後、各試料が等容量（１０μL）となるように、抽出緩衝液をこれらに加えた。
【０２１０】
作業溶液（Laemmli緩衝液 ９．５μL、及びβ−メルカプトエタノール ０．５μL）を調製して、１試料あたり１０μLとした。その後、試料 １０μL及び作業溶液 １０μLを、１０分間、加熱ブロック上で煮沸した。
【０２１１】
ゲル電気泳動
ｄｄＨ２Ｏ ９００mLに１０×ストック液 １００mLを添加することによって、Laemmli ＳＤＳ−ＰＡＧＥランニング緩衝液を調製した。
【０２１２】
コーム及びテープをミニ−ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルから取り外し、ミニプロティアンｔｅｔｒａセルを組み立て、内部及び外部チャンバーを１×ランニング緩衝液で充填した。
【０２１３】
タンパク質標準物質（分子量マーカー）２．５μLをゲルウェル１にローディングし、タンパク質試料 ２０μLを残りのウェルにローディングした。
【０２１４】
その後、試料がゲルに入るまでゲルを１１０Ｖで５分間泳動させ、その後、電圧を２００Ｖまで３０分間かけて上昇させた。その後、ゲルを取り出し、ゲルのウェル及び底（ローディング色素を含有している）をスカルペルを用いて切り出した。
【０２１５】
膜へのゲルの半乾燥転写
転写サンドイッチを、正しい順で、バイオラッド社のTrans-Blot Turbo（商標）転写システムで組み立てた：ろ紙、ＰＶＤＦ膜、ゲル、ろ紙。少量の１×ランニング緩衝液を適用して膜を湿らせ、ローラーを使用して全ての捕捉された気泡を除去した。その後、チャンバーを閉め、転写を正しい設定で開始し（TURBO、１ミニゲル（１．３Ａ、２５Ｖ、７分間）Ａ：泳動）、７分間泳動させた。その後、ブロットをサンドイッチから取り出し、作業溶液中に瞬時に入れた。
【０２１６】
免疫検出
１×iBind（商標）溶液を、ｄｄＨ２Ｏ ２３．７mL及び添加剤 ３００μL及びiBind（商標）緩衝液 ６mLを用いて調製した。ブロットした膜を、１０分間、振とう器上のiBind（商標）溶液 １０mL中に浸漬させた。iBind（商標）カードを、iBind（商標）ウェスタン装置のステージに置き、１×iBind（商標）溶液 ５mLを流域間に均一にピペッティングし、さらなる１mLのiBind（商標）溶液をカードの中心にプールした。その後、ブロットした膜を、タンパク質側を下にして、低分子量領域をスタックに近づけて、iBind（商標）カード上に置いた。その後、ブロッティングローラーを使用して全ての気泡を除去し、蓋を閉めた。その後、抗体及び１×iBind（商標）溶液を以下の順序で（１：作業溶液 ２mL中の一次抗体（５×濃度）、２：iBind（商標）溶液 ２mL、３：作業溶液 ２mL中のＨＲＰ二次抗体（５×濃度）、４：iBind（商標）溶液 ６mL）ウェルに加え、２．５時間又は一晩室温でインキュベートした。
【０２１７】
画像撮影及びデータ分析
ブロットした膜を、振とう器上で５分間水道水で濯いだ。化学発光基質キット（Clarity（商標）ウェスタンＥＣＬ基質キット）を１：１の比で調製し（ルミノールエンハンサー溶液 ７mL及び過酸化物溶液 ７mL）、振とう器上で１５分間インキュベートした。その後、化学発光シグナルをバイオラッド社のChemiDoc（商標）MP画像撮影システム及びバイオラッド社のImage Lab（商標）ソフトウェアバージョン５．０を使用して撮影した。
【０２１８】
リプロービング
ブロットした膜を、４℃のＴＢＳＴ中で保存した。必要であれば、ブロットした膜をさらなるマーカーのためにリプロービングした。ブロットした膜を振とう器上で１０分間水道水で洗浄し、その後、iBind（商標）溶液 １０mL中で１０分間振とう器上でインキュベートした。iBind（商標）カード、iBind（商標）作業溶液、及び抗体は、ＨＲＰ二次抗体ではなく蛍光二次抗体を使用した以外は以前に記載されている通りに調製した。その後、膜を３．５時間インキュベートした。
【０２１９】
タンパク質定量
タンパク質を、低分化した舌ＳＣＣ試料の最初の試料から抽出した。タンパク質定量を、２次元Quantキットを使用して行なった。０μL、１０μL、２０μL、３０μL、４０μL、５０μLのＢＳＡ溶液をエッペンドルフチューブに入れることによってタンパク質標準物質を調製した。エッペンドルフチューブに、一連のタンパク質溶解液（２μL、５μL、１５μL、３０μL）を網羅する、ＯＴＳＣＣ及び対照組織（胎盤）試料を調製した。沈降溶液 ５００μLを各々に加え、各チューブを５秒間ボルテックスにかけた。その後、共沈降剤 ５００μLを各チューブに加え、再度５秒間ボルテックスにかけた。その後、全てのタンパク質標準物質及び溶液を１３，３００rpmで１５分間遠心分離にかけた。上清を取り出して廃棄し、チューブの底から残り全ての溶液を移動させるために、チューブを再度簡潔に遠心分離にかけた。その後、この溶液を、ペレットを攪乱しないように注意を払いながらピペットで取り出した。
【０２２０】
銅溶液 ５００μLを、各々のタンパク質標準物質及び試料のために調製した、１：５の銅溶液：ｄｄＨ２Ｏ。その後、銅溶液 ５００μLを各チューブに加え、５秒間ボルテックスにかけ、沈降タンパク質を再度溶解した。
【０２２１】
呈色試薬溶液 １０００μLを、各々のタンパク質標準物質及び試料のために調製し、１：２００の呈色試薬Ａ：呈色試薬Ｂ。呈色試薬溶液 １０００μLを各チューブに加え、５分間放置して展開した。
【０２２２】
各２００μLのｄｄＨ２Ｏ、標準物質溶液、及び試料を順次ウェルプレートにローディングした。
【０２２３】
ウェルプレートをプレート解読器に入れた。標準曲線を標準溶液から作成し、４８０nmにおける試料の吸光度を解読した。
【０２２４】
その後、標準曲線を作成し、試料をそれに対して解読して、ストック試料タンパク質溶解液中の全タンパク質濃度（mg/mL）を得た。
【０２２５】
実施例２：口腔の扁平上皮細胞癌の発現分析
口腔舌の扁平上皮細胞癌（ＳＣＣＯＴ）を有する患者から得られた組織試料において以下のマーカーを分析した。
【０２２６】
１．胚性幹細胞マーカー
ＯＣＴ４：多能性及び自己再生の維持に関連し、正常な成体組織には発現されていない、胚性幹細胞マーカー。転写因子の発現は通常は核に限局されるが、癌細胞内のいくつかの細胞質内での発現が文献において注記されていた（本発明者らの結果にも注記）。
【０２２７】
ＮＡＮＯＧ：多能性の維持及び自己再生に関連し、発現がＳＯＸ２及びＯＣＴ４によって制御される、胚性幹細胞マーカー。転写因子の発現は通常は核に限局されるが、ここでも、癌細胞内のいくつかの細胞質内での発現が文献において注記されていた（本発明者らの結果にも注記）。
【０２２８】
ＳＯＸ２：多能性の維持及び自己再生に関連した、胚性幹細胞マーカー。転写因子の発現は主に核に限局されるが、ここでも、癌細胞内のいくつかの細胞質内での発現が文献において注記されていた（本発明者らの結果にも注記）。
【０２２９】
ｐＳＴＡＴ３：活性化シグナル伝達性転写因子。多能性の維持、自己再生に関連した、公知の幹細胞マーカー。ｐＳＴＡＴ３の構成的活性化は癌において認識され、細胞周期進行及び抗アポトーシス及び血管新生の制御において重要な役割を果たしている。
【０２３０】
口腔舌の扁平上皮細胞癌（ＳＣＣＯＴ）試料に対して行なわれたマーカー発現及びマーカー共局在分析の結果を以下の表５に要約する。
【０２３１】
【表５】
2017532368.tif 000010
【０２３２】
８．陽性対照
陽性対照組織（標的タンパク質特異的）を同定し、試験し、その後、自動免疫染色装置で実験組織を用いて同時に染色した。
【０２３３】
９．結果
これらのデータの結果は以下を示す：
１．舌癌内の癌幹細胞マーカーの確定的な共局在。現在までにこの癌幹細胞集団内に共局在しているタンパク質は、ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、ＣＤ４４、ＬＹＶＥ−１、ＶＥＧＦＲ−３、及びＡＣＥである。
【０２３４】
２．癌幹細胞は、上皮癌マーカーＥＭＡ、ｐ６３又はサイトケラチン５、６、８、１８を共発現しない。このことは、これらの細胞が、これらのマーカーを発現する癌細胞塊よりも原始的（上流）であることを示唆する。
【０２３５】
３．始めて、リンパマーカー（ＬＹＶＥ−１及びＶＥＧＦＲ−３）及び癌幹細胞マーカー（ＣＤ４４）及び胚性幹細胞マーカー（ＮＡＮＯＧ、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２）が共発現することが示された。これは、この細胞集団の生体機能を解明する際に興味深い意味を有し、これらの細胞が、血管とは明確に異なるリンパ管を介して転移を駆動するのに活発に関与し得ることを示唆し、また、これらの癌幹細胞が真に多能性であり、新規なリンパ脈管新生（自己再生及び腫瘍細胞塊の形成に加えて）を行なうことができるという本発明者らの仮説を支持する。
【０２３６】
４．癌幹細胞集団によるＡＣＥの発現も新規であり、レニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）が、癌幹細胞の調節にある程度関与するという仮説を支持する。
【０２３７】
実施例３：他の癌の発現分析
胚性幹細胞マーカーＯＣＴ４及びレニン受容体の発現についての共発現研究を実施するために、パラフィン切片を順次、２つのタンパク質の存在について染色した。画像をオリンパスＦＶ−１２００共焦点顕微鏡を使用して撮影し、オリンパスFluoview FV1000ソフトウェアを使用して分析した。調べた各々の癌系に由来する代表的な癌幹細胞を選択し、その中央から描かれた横断線が、ＯＣＴ４の相対的発現レベル、細胞核と比較したレニン受容体と共に、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）の発現によって示された。これは、添付図面のデータから、癌の種類（すなわち、ＯＴＳＣＣ（図４Ａ、４Ｂ）、黒色腫（図７Ａ、７Ｂ）、肉腫（図９Ａ、９Ｂ）、腸癌（図１１Ａ、１１Ｂ）、脳癌（図１３Ａ、１３Ｂ）、乳癌（図１５Ａ、１５Ｂ）、肺癌（図１７Ａ、１７Ｂ）、Ｂ細胞リンパ腫（図１９Ａ、１９Ｂ）、及び腎臓癌（図２１Ａ、２１Ｂ）、甲状腺癌（２３Ａ、２３Ｂ）、慢性リンパ性癌（２５Ａ、２５Ｂ）、皮膚扁平上皮細胞癌（２７Ａ、２７Ｂ）、前立腺癌（２９Ａ、２９Ｂ）によって明白である。
【０２３８】
プロ／レニン受容体は、約３９ＫＤａで検出される細胞表面かつ細胞質内の細胞性タンパク質であり、その後、このタンパク質は細胞内で多くのタンパク質（例えばフリン及びカテプシンＢなどであるがこれらに限定されない）によって切断されることができる（例えば、Wang et al. (1991) J. Biol. Chem. 266(19): 12633-12638）。切断された産物は、元来のタンパク質の切断短縮形であり、これは約２５ＫＤａのサイズである。完全長及び切断されたプロ／レニン形の両方が、図５に示されている。後者の切断形は細胞外液中に能動的に分泌され、最終的には血液、リンパなどの体液中に入る。したがって、このマーカーは、癌、特に、関連した癌幹細胞集団（群）を有する癌のバイオマーカーとして使用され得る。
【０２３９】
本発明は例として記載されているが、特許請求の範囲で定義されているような本発明の範囲から逸脱することなく、変更及び改変を行なってもよいことが理解されるべきである。さらに、特定の特色に対する公知の均等物が存在する場合には、このような均等物が本明細書に具体的に言及されているかのように同様に組み入れられる。
【図１】
2017532368.tif 000011
【図２】
2017532368.tif 000012
【図３】
2017532368.tif 000013
【図４Ａ】
2017532368.tif 000014
【図４Ｂ】
2017532368.tif 000015
【図５】
2017532368.tif 000016
【図６】
2017532368.tif 000017
【図７Ａ】
2017532368.tif 000018
【図７Ｂ】
2017532368.tif 000019
【図８】
2017532368.tif 000020
【図９Ａ】
2017532368.tif 000021
【図９Ｂ】
2017532368.tif 000022
【図１０】
2017532368.tif 000023
【図１１Ａ】
2017532368.tif 000024
【図１１Ｂ】
2017532368.tif 000025
【図１２】
2017532368.tif 000026
【図１３Ａ】
2017532368.tif 000027
【図１３Ｂ】
2017532368.tif 000028
【図１４】
2017532368.tif 000029
【図１５Ａ】
2017532368.tif 000030
【図１５Ｂ】
2017532368.tif 000031
【図１６】
2017532368.tif 000032
【図１７Ａ】
2017532368.tif 000033
【図１７Ｂ】
2017532368.tif 000034
【図１８】
2017532368.tif 000035
【図１９Ａ】
2017532368.tif 000036
【図１９Ｂ】
2017532368.tif 000037
【図２０】
2017532368.tif 000038
【図２１Ａ】
2017532368.tif 000039
【図２１Ｂ】
2017532368.tif 000040
【図２２】
2017532368.tif 000041
2017532368.tif 000042
【図２３Ｂ】
2017532368.tif 000043
【図２４】
2017532368.tif 000044
【図２５Ａ】
2017532368.tif 000045
【図２５Ｂ】
2017532368.tif 000046
【図２６】
2017532368.tif 000047
【図２７Ａ】
2017532368.tif 000048
【図２７Ｂ】
2017532368.tif 000049
【図２８】
2017532368.tif 000050
【図２９Ａ】
2017532368.tif 000051
【図２９Ｂ】
2017532368.tif 000052
【図３０】
2017532368.tif 000053
【国際調査報告】
2017532368.tif 000054
2017532368.tif 000055
2017532368.tif 000056