(57)【要約】  がんの治療における腫瘍溶解性ウイルスとオーロラキナーゼ阻害薬との使用が開示される。
2017515847.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんを治療する方法において使用するための腫瘍溶解性ウイルスであって、前記方法が、腫瘍溶解性ウイルスとオーロラキナーゼ阻害薬との同時的または逐次的投与を含む、腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項２】
腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスである、請求項１に記載のがんを治療する方法において使用するための腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項３】
前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスのゲノム中のＩＣＰ３４．５遺伝子のすべてのコピーが、前記ＩＣＰ３４．５遺伝子が機能性のＩＣＰ３４．５遺伝子産物を発現する能力をもたないように改変されている、請求項２に記載のがんを治療する方法において使用するための腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項４】
前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが、ＨＳＶ−１  １７株の変異株である、請求項２または３に記載のがんを治療する方法において使用するための腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項５】
前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスがＨＳＶ１７１６である、請求項２または３に記載のがんを治療する方法において使用するための腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項６】
前記腫瘍溶解性ウイルスが、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性コクサッキーウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ポックスウイルス、腫瘍溶解性パラミクソウイルスのうちの１つから選択される、請求項１に記載のがんを治療する方法において使用するための腫瘍溶解性ウイルス。
【請求項７】
がんの治療の方法において使用するための医薬品の製造における腫瘍溶解性ウイルスの使用であって、前記治療の方法が、治療を必要とする患者にオーロラキナーゼ阻害薬を投与するステップを含む、使用。
【請求項８】
前記腫瘍溶解性ウイルスが腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスである、請求項７に記載の腫瘍溶解性ウイルスの使用。
【請求項９】
腫瘍溶解性ウイルスとオーロラキナーゼ阻害薬とを含む医薬組成物。
【請求項１０】
前記腫瘍溶解性ウイルスが腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスである、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスがＨＳＶ−１  １７株の変異株である、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記腫瘍溶解性ウイルスがＨＳＶ１７１６である、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
所定の量の腫瘍溶解性ウイルスと所定の量の化学療法剤とを備えるキットであって、前記化学療法剤がオーロラキナーゼ阻害薬である、キット。
【請求項１４】
医学的治療、好ましくはがんの治療の方法において同時的または逐次的に使用するための、治療有効量の
（ｉ）ＨＳＶ１７１６と、
（ｉｉ）オーロラキナーゼ阻害薬と
を含有する製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がんの治療における腫瘍溶解性ウイルス（ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ）と、オーロラキナーゼ阻害薬（ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬の一方または両方との使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
腫瘍溶解性ウイルス療法は、がん細胞を選択的に感染させ死滅させる溶解性ウイルスの使用に関係する。腫瘍溶解性ウイルスの中には有望な療法となるものがあるが、それは、このようなウイルスが、がん細胞を絶妙に選択してその中で複製するというふるまいを見せることに加え、腫瘍内で自己限定性に伝播するため有毒な副作用が少ないことによる。いくつかの腫瘍溶解性ウイルスは、臨床において高い有望性を示している（Ｂｅｌｌ，Ｊ．、Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ  Ｖｉｒｕｓｅｓ：Ａｎ  Ａｐｐｒｏｖｅｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎ？、Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．、２０１０、１８（２）：２３３〜２３４）。
【０００３】
オーロラキナーゼは、有糸分裂および細胞分裂の多様な相、例えば、中心体、複製、有糸分裂紡錘体形成、紡錘体上での染色体整列、有糸分裂チェックポイント活性化、および細胞質分裂などの調節因子として機能するセリン／トレオニンキナーゼである。哺乳動物オーロラキナーゼには３つの関連したものがあり、オーロラＡ、オーロラＢおよびオーロラＣとして知られる。これらのキナーゼは、いくつかのヒトがんにおいて過剰発現する（Ｃａｒｖａｊａｌら、Ａｕｒｏｒａ  Ｋｉｎａｓｅｓ：Ｎｅｗ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００６、１２（２３）、２００６年１２月１日）。
【０００４】
オーロラＡは、中心体複製時から有糸分裂終了時まで中心体に局在し、中心体制御および有糸分裂紡錘体形成において主に機能する。オーロラの制御異常は、腫瘍形成と関連付けられている。オーロラＡは、染色体２０ｑ１３．２上に位置する。ここは、悪性腫瘍、例えば、メラノーマ、ならびに、乳がん、大腸がん、膵臓がん、卵巣がん、膀胱がん、肝臓がんおよび胃がんなどのがんにおいて増幅されることの多い領域である。齧歯動物のＲａｔ１線維芽細胞およびＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞の細胞株にオーロラＡをトランスフェクションすると培地におけるコロニー形成およびヌードマウスにおける腫瘍が十分に誘導されることが発見され、これによりオーロラＡが正真正銘の（ｂｏｎｅ  ｆｉｄｅ）癌遺伝子として立証されて以来、オーロラへの関心は高まっている（Ｂｉｓｃｈｏｆｆ  ＪＲ、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｌ、Ｚｈｕ  Ｙら、Ａ  ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ  ｏｆ  Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｓ  ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ  ａｎｄ  ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒｓ．、ＥＭＢＯ  Ｊ、１９９８、１７：３０５２〜６５；Ｚｈｏｕ  Ｈ、Ｋｕａｎｇ  Ｊ、Ｚｈｏｎｇ  Ｌら、Ｔｕｍｏｕｒ  ａｍｐｌｉｆｉｅｄ  ｋｉｎａｓｅ  ＳＴＫ１５／ＢＴＡＫ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｃｅｎｔｒｏｓｏｍｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ  ａｎｄ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ、Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ、１９９８、２０：１８９〜９３）。ヒトオーロラキナーゼＡのアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＰ＿００３５９１．２（ＧＩ：３８３２７５６２）のもとに見出すことができる。
【０００５】
オーロラＡは、遍在的に発現し、Ｓ期後期からＭ期にかけて起こる細胞周期事象を制御する。そのような事象としては、中心体成熟（Ｂｅｒｄｎｉｋ  Ｄ、Ｋｎｏｂｌｉｃｈ  ＪＡ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ａｕｒｏｒａ−Ａ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｃｅｎｔｒｏｓｏｍｅ  ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｃｔｉｎ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｄｕｒｉｎｇ  ｍｉｔｏｓｉｓ．、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ、２００２、１２：６４０〜７）、有糸分裂開始（Ｈｉｒｏｔａ  Ｔ、Ｋｕｎｉｔｏｋｕ  Ｎ、Ｓａｓａｙａｍａ  Ｔら、Ａｕｒｏｒａ−Ａ  ａｎｄ  ａｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔｈｅ  ＬＩＭ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｊｕｂａ，ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ．、Ｃｅｌｌ、２００３、１１４：５８５〜９８；Ｄｕｔｅｒｔｒｅ  Ｓ、Ｃａｚａｌｅｓ  Ｍ、Ｑｕａｒａｎｔａ  Ｍら、Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤＣ２５Ｂ  ｂｙ  Ａｕｒｏｒａ−Ａ  ａｔ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒｏｓｏｍｅ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｇ２−Ｍ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ、２００４、１１７：２５２３〜３１）、中心体分離（Ｍａｒｕｍｏｔｏ  Ｔ、Ｈｏｎｄａ  Ｓ、Ｈａｒａ  Ｔら、Ａｕｒｏｒａ−Ａ  ｋｉｎａｓｅ  ｍａｉｎｔａｉｎｓ  ｔｈｅ  ｆｉｄｅｌｉｔｙ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ  ａｎｄ  ｌａｔｅ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  ＨｅＬａ  ｃｅｌｌｓ．、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２００３、２７８：５１７８６〜９５）、二極性紡錘体集合（ｂｉｐｏｌａｒ−ｓｐｉｎｄｌｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ）（Ｋｕｆｅｒ  ＴＡ、Ｓｉｌｌｊｅ  ＨＨ、Ｋｏｒｎｅｒ  Ｒ、Ｇｒｕｓｓ  ＯＪ、Ｍｅｒａｌｄｉ  Ｐ、Ｎｉｇｇ  ＥＡ、Ｈｕｍａｎ  ＴＰＸ２  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  Ａｕｒｏｒａ−Ａ  ｋｉｎａｓｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｓｐｉｎｄｌｅ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２００２、１５８：６１７〜２３；Ｅｙｅｒｓ  ＰＡ、Ｅｒｉｋｓｏｎ  Ｅ、Ｃｈｅｎ  ＬＧ、Ｍａｌｌｅｒ  ＪＬ、Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ａｕｒｏｒａ  Ａ．、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ、２００３、１３：６９１〜７）、中期核板上での染色体整列（Ｍａｒｕｍｏｔｏら、同前；Ｋｕｎｉｔｏｋｕ  Ｎ、Ｓａｓａｙａｍａ  Ｔ、Ｍａｒｕｍｏｔｏ  Ｔら、ＣＥＮＰ−Ａ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  Ａｕｒｏｒａ−Ａ  ｉｎ  ｐｒｏｐｈａｓｅ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｕｒｏｒａ−Ｂ  ａｔ  ｉｎｎｅｒ  ｃｅｎｔｒｏｍｅｒｅｓ  ａｎｄ  ｆｏｒ  ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ．、Ｄｅｖ  Ｃｅｌｌ、２００３、５：８５３〜６４）、細胞質分裂（Ｍａｒｕｍｏｔｏら、同前）、および有糸分裂終了が挙げられる。
【０００６】
正常な細胞生理機能および腫瘍形成におけるオーロラＡの役割については、Ｍａｒｕｍｏｔｏ  Ｔ、Ｚｈａｎｇ  Ｄ、Ｓａｙａ  Ｈ、Ａｕｒｏｒａ−Ａ：ａ  ｇｕａｒｄｉａｎ  ｏｆ  ｐｏｌｅｓ．、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ、２００５、５：４２〜５０においてさらに考察されている。
【０００７】
オーロラＡの過剰発現は、オーロラＡ誘導性の腫瘍形成の不可欠な特徴である。ただし、これには、異常な細胞局在とオーロラＡ発現のタイミングの両方が関わってもいる（Ｃａｒｖａｊａｌら、Ａｕｒｏｒａ  Ｋｉｎａｓｅｓ：Ｎｅｗ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００６、１２（２３）、２００６年１２月１日）。
【０００８】
オーロラＢは、染色体パッセンジャータンパク質複合体のサブユニットであり、正確な染色体分配および細胞質分裂を確保するように機能する。オーロラＢは、有糸分裂の際に動的局在する。まず、前期から中期にかけてはインナーセントロメア領域に、次いで、後期から細胞質分裂時にかけて紡錘体の中間帯および中央体に局在する。オーロラＢは、染色体１７ｐ１３．１上に位置する。ここは、ヒト悪性腫瘍において通常は増幅しない領域である。遺伝子レベルでの増幅がないにもかかわらず、オーロラＢのｍＲＮＡおよびタンパク質レベルは、直腸結腸がんなどの腫瘍において高頻度に増大している（Ｔａｔｓｕｋａ  Ｍ、Ｋａｔａｙａｍａ  Ｈ、Ｏｔａ  Ｔら、Ｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅａｒｉｔｙ  ａｎｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｐｌｏｉｄｙ  ｃａｕｓｅｄ  ｂｙ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｕｒｏｒａ−  ａｎｄ  Ｉｐｌ１−ｌｉｋｅ  ｍｉｄｂｏｄｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、１９９８、５８：４８１１〜６）。チャイニーズハムスター胚細胞においてオーロラＢを外因性に過剰発現させると、それに続く有糸分裂の際に染色体分離異常が生じｉｎ  ｖｉｖｏでの侵襲性が増大することから、腫瘍形成におけるオーロラＢの役割が示唆される（Ｏｔａ  Ｔ、Ｓｕｔｏ  Ｓ、Ｋａｔａｙａｍａ  Ｈら、Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３  ａｔｔｒｉｂｕｔａｂｌｅ  ｔｏ  ＡＩＭ−１／Ａｕｒｏｒａ−Ｂ  ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｎｕｍｂｅｒ  ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００２、６２：５１６８〜７７）。
【０００９】
ヒトオーロラキナーゼＢのアミノ酸配列は、Ｇｅｎｂａｎｋにおいてアクセッション番号ＮＰ＿００１２４３７６３．１（ＧＩ：３７８７８６６５８）のもとに見出すことができる。
【００１０】
オーロラＢ活性がないと、有糸分裂チェックポイントが損なわれ、異数性細胞の数の増大、遺伝的不安定性、および腫瘍形成を招く（Ｗｅａｖｅｒ  ＢＡ、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ  ＤＷ、Ｄｅｃｏｄｉｎｇ  ｔｈｅ  ｌｉｎｋｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｍｉｔｏｓｉｓ，ｃａｎｃｅｒ，ａｎｄ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ：ｔｈｅ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ，ａｄａｐｔａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ、２００５、８：７〜１２）。
【００１１】
オーロラＣは、染色体パッセンジャータンパク質であり、オーロラＢと共局在する。オーロラＣは精巣に特異的に発現して、精子形成ならびに繊毛および鞭毛の制御において機能する（Ｃａｒｖａｊａｌら、Ａｕｒｏｒａ  Ｋｉｎａｓｅｓ：Ｎｅｗ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００６、１２（２３）、２００６年１２月１日）。
【００１２】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）は、がんの発生と進行の両方に関わっている多数のタンパク質の発現および活性を制御する（Ｇｌｏｚａｋ，ＭＡおよびＳｅｔｏ，Ｅ（２００７）、Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ．、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２６：５４２０〜５４３２）。いくつかのＨＤＡＣ阻害薬は、がん細胞の成長を停止させるおよび／またはそのアポトーシスを誘導することが示されている（Ｆｏｕｌａｄｉ，Ｍ（２００６）、Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ、２４：５２１〜５２７；Ｍａｒｋｓ，Ｐ、Ｒｉｆｋｉｎｄ，ＲＡ、Ｒｉｃｈｏｎ，ＶＭ、Ｂｒｅｓｌｏｗ，Ｒ、Ｍｉｌｌｅｒ，ＴおよびＫｅｌｌｙ，ＷＫ（２００１）、Ｈｉｓｔｏｎｅ  ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ：ｃａｕｓｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ．、Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ、１：１９４〜２０２）。
【００１３】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬は、よく特徴付けられた化合物群である。実際に、ＨＤＡＣ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ｂａｓｅ（ｗｗｗ．ｈｄａｃｉｓ．ｃｏｍ）などの機関が、既知のＨＤＡＣ阻害薬について広範な情報を提供している。ＨＤＡＣ阻害薬は、ここ数年、さまざまながんの治療において使用するために提案されている（Ｖｉｇｕｓｈｉｎら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ、２００２年１月、１３（１）：１〜１３）。
【００１４】
いくつかの腫瘍溶解性ウイルスといくつかのＨＤＡＣ阻害薬との相互作用が、いくつかの研究グループによって調査されている（Ｏｔｓｕｋｉら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、第１６巻、第９号、１５４６〜１５５５、２００８年９月；ＭａｃＴａｖｉｓｈら、（２０１０）、Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｖｉｒｕｓ  Ｂａｓｅｄ  Ｏｎｃｏｌｙｓｉｓ  ｗｉｔｈ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ、５（１２）；Ｔａ−Ｃｈｉａｎｇら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、第１６巻、第６号、１０４１〜１０４７、２００８年６月；ＷＯ２００９／０６７８０８Ａ１）。
【発明の概要】
【００１５】
本発明は、がんを治療するための腫瘍溶解性ウイルスの使用であって、対象が治療プログラムの一環として腫瘍溶解性ウイルスおよび化学療法剤の投与を受ける使用に関する。化学療法剤は、好ましくはエピジェネティックな薬剤であり、より好ましくはオーロラキナーゼ阻害薬および／またはヒストンデアセチラーゼ（ｄｅａｃｔｅｙｌａｓｅ）（ＨＤＡＣ）阻害薬である。
【００１６】
腫瘍溶解性ウイルスおよび化学療法剤は、対象におけるがんを治療する方法の一環として投与される。腫瘍溶解性ウイルスと化学療法剤とは、同時的に、例えば、組み合わされた調製物として、または、一方が他方の直後に投与される別々の調製物として、投与され得る。あるいは、腫瘍溶解性ウイルスと化学療法剤とは、別々かつ逐次的に投与され得る。この場合、一方の薬剤が投与され、次いで、所定の時間間隔が経過した後に他方が投与される。
【００１７】
本発明の一側面では、がんを治療する方法において使用するための腫瘍溶解性ウイルスであって、該方法が、腫瘍溶解性ウイルスと、オーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬との同時的または逐次的投与を含む、腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
【００１８】
本発明の別の側面では、がんの治療の方法において使用するための医薬品の製造における腫瘍溶解性ウイルスの使用であって、該治療の方法が、治療を必要とする患者にオーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬を投与するステップを含む、使用が提供される。
【００１９】
本発明の別の側面では、がんを治療する方法であって、治療を必要とする患者に腫瘍溶解性ウイルスと、オーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬とを投与し、それによりがんを治療するステップを含む方法が提供される。
【００２０】
本発明の別の側面では、がんを治療する方法において使用するための腫瘍溶解性ウイルスであって、該治療の方法が、治療を必要とする患者にオーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬を投与するステップを含む、腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
【００２１】
本発明の別の側面では、がんを治療する方法において使用するためのオーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬であって、該治療の方法が、治療を必要とする患者に腫瘍溶解性ウイルスを投与するステップを含む、オーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬が提供される。
【００２２】
本発明の別の側面では、がんの治療の方法において使用するための医薬品の製造における腫瘍溶解性ウイルスの使用であって、該治療の方法が、治療を必要とする患者にオーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬を投与するステップを含む、使用が提供される。
【００２３】
本発明の別の側面では、がんの治療の方法において使用するための医薬品の製造におけるオーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬の使用であって、該治療の方法が、治療を必要とする患者に腫瘍溶解性ウイルスを投与するステップを含む、使用が提供される。
【００２４】
本発明のさらなる側面では、腫瘍溶解性ウイルスと、オーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬とを含む医薬組成物または医薬品が提供される。
【００２５】
いくつかの態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスである。いくつかの態様において、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスのゲノム中のＩＣＰ３４．５遺伝子のすべてのコピーは、ＩＣＰ３４．５遺伝子が機能性のＩＣＰ３４．５遺伝子産物を発現する能力をもたないように改変されている。したがって、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスは、ＩＣＰ３４．５ヌル変異株（ｍｕｔａｎｔ）であり得る。
【００２６】
いくつかの態様において、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスのゲノム中のＩＣＰ３４．５遺伝子の一方または両方は、ＩＣＰ３４．５遺伝子が機能性のＩＣＰ３４．５遺伝子産物を発現する能力をもたないように改変されている。
【００２７】
いくつかの態様において、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスは、ＨＳＶ−１  １７株の変異株である。好ましい態様において、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスは、ＨＳＶ１７１６（ＥＣＡＣＣアクセッション番号：Ｖ９２０１２８０３）である。いくつかの態様において、単純ヘルペスウイルスは、ＨＳＶ−１  １７株の変異株である１７１６変異株である。
【００２８】
他の態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性コクサッキーウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ポックスウイルス、腫瘍溶解性パラミクソウイルスのうちの１つから選択される。
【００２９】
本発明の別の側面では、所定の量の腫瘍溶解性ウイルスと所定の量の化学療法剤とを備えるキットであって、該化学療法剤がオーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬である、キットが提供される。このキットは、がんの治療を行えるように、腫瘍溶解性ウイルス、オーロラキナーゼ阻害薬および／またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬を逐次的または同時的に投与するための取扱説明書と一緒に提供され得る。
【００３０】
本発明の別の側面では、医学的治療、好ましくはがんの治療の方法において同時的または逐次的に使用するための、治療有効量の
（ｉ）腫瘍溶解性ウイルス、好ましくはＨＳＶ１７１６と、
（ｉｉ）オーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬と
を含有する製品が提供される。この製品は、薬学的に許容される製剤であってもよく、場合により、共投与のための組み合わされた調製物として製剤化されてもよい。
【００３１】
［好ましい態様の説明］
腫瘍溶解性ウイルス
腫瘍溶解性ウイルスは、任意の腫瘍溶解性ウイルスであり得る。好ましくは、腫瘍溶解性ウイルスは、複製能を有するウイルスであり、少なくとも標的腫瘍細胞において複製能を有する。いくつかの態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性コクサッキーウイルス、腫瘍溶解性麻疹ウイルスのうちの１つから選択される。腫瘍溶解性ウイルスは、好ましくは選択的な形でがん細胞を溶解させ得る（腫瘍溶解）ウイルスである。非分裂細胞に比して分裂細胞において選択的に複製するウイルスは、多くの場合、腫瘍溶解性である。腫瘍溶解性ウイルスは当技術分野では周知であり、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、第１８巻、第２号、２０１０年２月、２３３〜２３４ページに総説されている。
【００３２】
いくつかの態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、単純ヘルペスウイルスである。単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ゲノムは、長（Ｌ）セグメントおよび短（Ｓ）セグメントと称される２つの共有結合的に連結されたセグメントを含む。各セグメントは、一対の逆方向末端反復配列に挟まれた固有の配列を含有する。長反復（ｌｏｎｇ  ｒｅｐｅａｔ）（ＲＬまたはＲＬ）と短反復（ｓｈｏｒｔ  ｒｅｐｅａｔ）（ＲＳまたはＲＳ）とは別個である。
【００３３】
ＨＳＶ  ＩＣＰ３４．５（別名γ３４．５）遺伝子は、広く研究されており、ＨＳＶ−１のＦ株およびｓｙｎ１７＋株ならびにＨＳＶ−２のＨＧ５２株において配列が決定されている。ＩＣＰ３４．５遺伝子のコピーが１つずつ、それぞれのＲＬ反復領域内に位置している。ＩＣＰ３４．５遺伝子のコピーの一方または両方を不活性化させる変異株は、神経病原性を欠く、すなわち非病原性／非神経病原性であり［非神経病原性とは、致死性脳炎を生じさせることなく高力価のウイルス（およそ１０６プラーク形成単位（ｐｆｕ））を動物または患者に導入することができ、そのため、マウスなどの動物またはヒト患者におけるＬＤ５０がおよそ１０６ｐｆｕ以上の範囲となることにより定義される］、かつ腫瘍溶解性であることが知られている。
【００３４】
本発明において使用し得る腫瘍溶解性ＨＳＶとしては、γ３４．５（別名ＩＣＰ３４．５）遺伝子の一方または両方が改変されており（例えば変異による。変異は、欠失、挿入、付加または置換であり得る）、それぞれの遺伝子が、機能性のＩＣＰ３４．５タンパク質を発現する能力、例えばそれをコードする能力をもたなくなっているＨＳＶが挙げられる。好ましくは、本発明によるＨＳＶにおいては、γ３４．５遺伝子の両方のコピーが改変されており、改変されたＨＳＶは、機能性のＩＣＰ３４．５タンパク質を発現する能力、例えばそれを産生する能力をもたなくなっている。
【００３５】
いくつかの態様において、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスは、単純ヘルペスウイルスゲノム中に存在するＩＣＰ３４．５遺伝子のすべてのコピー（普通は２つのコピーが存在する）が破壊されており、単純ヘルペスウイルスが機能性のＩＣＰ３４．５遺伝子産物を産生する能力をもたなくなっている、ＩＣＰ３４．５ヌル変異株であり得る。他の態様において、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスは、発現可能なＩＣＰ３４．５遺伝子を少なくとも１つ欠いていてよい。いくつかの態様において、単純ヘルペスウイルスは、発現可能なＩＣＰ３４．５遺伝子を１つだけ欠いていてよい。他の態様において、単純ヘルペスウイルスは、発現可能なＩＣＰ３４．５遺伝子を両方欠いていてよい。さらに他の態様において、単純ヘルペスウイルス中に存在する各ＩＣＰ３４．５遺伝子は、発現可能でなくてもよい。発現可能なＩＣＰ３４．５遺伝子を欠くとは、例えば、ＩＣＰ３４．５遺伝子が発現しても機能性のＩＣＰ３４．５遺伝子産物は産生されないことを意味する。
【００３６】
腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスは、ＨＳＶの任意の実験室株または臨床分離株（非実験室株（ｎｏｎ−ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｓｔｒａｉｎ））を含め、任意のＨＳＶに由来し得る。いくつかの好ましい態様において、ＨＳＶは、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２の変異株である。あるいは、ＨＳＶは、ＨＳＶ−１とＨＳＶ−２との型間組換え株であってもよい。変異株は、実験室株である、ＨＳＶ−１  １７株、ＨＳＶ−１  Ｆ株またはＨＳＶ−２  ＨＧ５２株のうちの１つであり得る。変異株は、非実験室株であるＪＳ−１株であり得る。好ましくは、変異株は、ＨＳＶ−１  １７株の変異株である。単純ヘルペスウイルスは、ＨＳＶ−１  １７株の１７１６変異株、ＨＳＶ−１  Ｆ株のＲ３６１６変異株、ＨＳＶ−１  Ｆ株のＧ２０７変異株、ＨＳＶ−１のＮＶ１０２０変異株、またはそれらのさらなる変異株であって、ＨＳＶゲノムが付加的変異および／もしくは１つもしくは複数の異種ヌクレオチド配列を有する変異株のうちの１つであり得る。付加的変異としては、ウイルスの病原性またはその複製能力に影響を及ぼし得る不能化変異（ｄｉｓａｂｌｉｎｇ  ｍｕｔａｔｉｏｎ）を挙げることができる。例えば、変異は、ＩＣＰ６、ＩＣＰ０、ＩＣＰ４、ＩＣＰ２７のうちの任意の１つまたは複数に導入し得る。好ましくは、これらの遺伝子の一方（適切な場合には、遺伝子の両方のコピーでもよい）における変異は、ＨＳＶがもつ対応する機能性ポリペプチドを発現する能力の喪失（またはその能力の低下）につながる。例として、ＨＳＶゲノムの付加的変異は、ヌクレオチドの付加、欠失、挿入または置換により遂行し得る。
【００３７】
いくつかの腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスが当技術分野において公知である。例としては、ＨＳＶ１７１６、Ｒ３６１６（例えば、Ｃｈｏｕ＆Ｒｏｉｚｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、第８９巻、３２６６〜３２７０ページ、１９９２年４月を参照のこと）、Ｇ２０７（Ｔｏｄａら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、９：２１７７〜２１８５、１９９５年１０月１０日）、ＮＶ１０２０（Ｇｅｅｖａｒｇｈｅｓｅら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、２０１０年９月、２１（９）：１１１９〜２８）、ＲＥ６（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１３１、１７１〜１７９（１９８３））、およびＯｎｃｏｖｅｘ（商標）（Ｓｉｍｐｓｏｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００６、６６：（９）、４８３５〜４８４２、２００６年５月１日；Ｌｉｕら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（２００３）、１０、２９２〜３０３）が挙げられる。
【００３８】
いくつかの好ましい態様において、単純ヘルペスウイルスは、ＨＳＶ−１  １７株の１７１６変異株（ＨＳＶ１７１６）である。ＨＳＶ１７１６は、腫瘍溶解性の非神経病原性ＨＳＶであり、ＥＰ０５７１４１０、ＷＯ９２／１３９４３、Ｂｒｏｗｎら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９４）、７５、２３６７〜２３７７）およびＭａｃＬｅａｎら（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９１）、７２、６３１〜６３９）に記載されている。ＨＳＶ１７１６は、「特許手続上の微生物の寄託の国際承認に関するブダペスト条約」（本明細書においては「ブダペスト条約」と呼ぶ）の規定により、１９９２年１月２８日付でＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ、Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、Ｐｏｒｔｏｎ  Ｄｏｗｎ、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ、ＳＰ４  ０ＪＧ、英国に、アクセッション番号Ｖ９２０１２８０３で寄託されている。
【００３９】
いくつかの態様において、単純ヘルペスウイルスは、両方のＩＣＰ３４．５遺伝子が機能性の遺伝子産物を発現しないように、例えばＩＣＰ３４．５遺伝子の変異（例：挿入、欠失、付加、置換）により改変されているがそれ以外は野生型親ウイルスＨＳＶ−１  １７株＋のゲノムと似ているまたは実質的に似ている、ＨＳＶ−１  １７株の変異株である。つまり、ウイルスは、ＨＳＶ−１  １７株＋のＩＣＰ３４．５遺伝子の両方のコピーを不活性化させるように変異されてはいるがそれ以外は他のタンパク質コード配列を挿入または欠失／改変する変化を加えられていないゲノムを有する、ＨＳＶ１７１６のバリアントであり得る。
【００４０】
他の種類の腫瘍溶解性ウイルスも当技術分野で公知である。このような腫瘍溶解性ウイルスとしては、腫瘍溶解性ポックスウイルス（例：オルトポックスウイルス）、例えば、ワクシニアウイルスＪＸ−９５４およびＧＬＶ−１ｈ６８（Ｐａｒｋ，ＢＨら（２００８）、Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ、９：５３３〜５４２；Ｋｅｌｌｙら、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、１９：７４４〜７８２（２００８年８月）；Ｗｅｎｎｉｅｒら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ、１３  ｅ１８、２０１１年１２月５日）、腫瘍溶解性レオウイルス、例えば、腫瘍溶解性レオウイルス３型Ｄｅａｒｉｎｇ株（Ｐａｎｄｈａ，ＨＳら（２００９）、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、１５：６１５８〜６１６６；Ｖｉｄａｌ，Ｌら（２００８）、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、１４：７１２７〜７１３７）、腫瘍溶解性アデノウイルス、例えば、Ｏｎｙｘ−０１５（ＣｏｈｅｎおよびＲｕｄｉｎ、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ、２００１年１２月、２（１２）：１７７０〜５）、腫瘍溶解性パラミクソウイルス、例えば、腫瘍溶解性麻疹ウイルスＭＶ−Ｅｄｍ（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｔら（２００５）、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２３：２０９〜２１４；Ｗｅｎｎｉｅｒら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．、１３  ｅ１８、２０１１年１２月５日）、腫瘍溶解性コクサッキーウイルス、例えば、Ａ１３、Ａ１５、Ａ１８、Ａ２１（Ａｕら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ、２０１１、８：２２）、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス（Ｍａｎｓｏｕｒら、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ、２０１１年６月、８５（１２）：６０１５〜２３）、ならびに腫瘍溶解性パルボウイルス、例えば、Ｈ−１  ＰＶおよびＭＶＭ（Ｗｅｎｎｉｅｒら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ．、１３  ｅ１８、２０１１年１２月５日）が挙げられる。
【００４１】
いくつかの態様において、本発明による腫瘍溶解性ウイルスのゲノムは、そのウイルスとは異種の（すなわち、普通は野生型ウイルスには見られない）ポリペプチドの少なくとも１つのコピーをコードする核酸を含有するようにさらに改変させることで、そのポリペプチドが核酸から発現できるようにすることもできる。したがって、腫瘍溶解性ウイルスは、ベクターからポリペプチドを発現させ得る発現ベクターでもあり得る。そのようなウイルスの例は、ＷＯ２００５／０４９８４６およびＷＯ２００５／０４９８４５に記載されている。
【００４２】
ポリペプチドの発現を実現するには、ポリペプチドをコードする核酸は、好ましくは、ポリペプチドをコードする核酸の転写を実現する能力をもつ調節配列、例えばプロモーターと操作可能に連結される。ヌクレオチド配列と操作可能に連結される調節配列（例えばプロモーター）は、その配列に隣接させてまたはごく近くに配置して、調節配列がヌクレオチド配列の産物の発現を実現および／または制御できるようにし得る。したがって、ヌクレオチド配列のコードされた産物は、その調節配列から発現可能であり得る。
【００４３】
腫瘍溶解性ウイルスは、臨床使用のための医薬品および医薬組成物として製剤化することができ、そのような製剤においては、薬学的に許容される担体、希釈剤またはアジュバントと組み合わせることができる。組成物は、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、髄腔内、眼内、腫瘍内、皮下、経口または経皮投与経路用に製剤化することができ、これには注射が含まれ得る。好適な製剤は、滅菌済または等張性の媒体中にウイルスを含み得る。医薬品および医薬組成物は、流体（ゲルも含まれる）または固体（例えば錠剤）形態で製剤化してもよい。流体製剤は、注射によりまたはカテーテル経由でヒトまたは動物の体の選択された領域に投与するためのものとして製剤化してもよい。
【００４４】
投与は、好ましくは「治療有効量」で行われる。治療有効量とは、個体にとっての利益を示すのに十分な量である。投与される実際の量、ならびに投与の速度およびタイムコースは、治療しようとする疾患の性質および重症度に応じて決まってこよう。治療薬の処方、例えば、投与量等についての決定は、総合診療医および他の医師の責任の範囲内であり、典型的には、治療する障害、個々の患者の病態、送達部位、投与方法、および専門家に公知の他の因子を考慮する。先述の技法およびプロトコールの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２０版、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ出版に見出すことができる。
【００４５】
標的化療法を用いて、腫瘍溶解性ウイルスを一定の種類の細胞に送達させてもよい。その際に使用するのは、例えば、抗体または細胞特異的なリガンドなどの標的化系である。標的化は、さまざまな理由により望ましい場合がある。例えば、ウイルスが高用量になると許容できないほど有毒である場合、または、それ以外の方法では必要となるウイルスの投与量が多くなりすぎる場合、または、それ以外の方法ではウイルスが標的細胞に入っていくことができない場合などである。
【００４６】
細胞および組織を標的化する能力をもつＨＳＶは、（ＰＣＴ／ＧＢ２００３／０００６０３；ＷＯ０３／０６８８０９）に記載されており、これらの文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００４７】
腫瘍溶解性ウイルスは、治療する病態に応じて、単独で、または他の治療と組み合わせて同時的もしくは逐次的に、投与し得る。そのような他の治療としては、化学療法［これには、化学療法剤での全身治療、または、腫瘍の発現、維持もしくは進行において鍵となる通り道を標的とする小分子もしくは生体分子（例えば抗体）ベースの薬剤を使用する標的化療法のいずれも含まれる］、または、がんの治療の標準ケアとして対象に施される放射線療法を挙げることができる。
【００４８】
化学療法
化学療法は、薬物を用いての腫瘍の治療を指す。例を挙げると、薬物は、化学実体、例えば、小分子医薬、タンパク質阻害薬（例えばキナーゼ阻害薬）、または生物剤、例えば、抗体、抗体断片、核酸もしくはペプチドアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であり得る。薬物は、医薬組成物または医薬品として製剤化してもよい。製剤は、１つまたは複数の薬物（例えば、１つまたは複数の活性剤）を１つまたは複数の薬学的に許容される希釈剤、賦形剤または担体と一緒に含むことができる。
【００４９】
治療には、２つ以上の薬物の投与が含まれていてもよい。薬物は、治療する病態に応じて、単独で、または他の治療と組み合わせて同時的もしくは逐次的に、投与し得る。例えば、化学療法は、２つの薬物／薬剤の投与が含まれている併剤療法（ｃｏ−ｔｈｅｒａｐｙ）であってもよく、２つの薬物／薬剤のうちの１つ以上は、腫瘍を治療することを意図したものであり得る。本発明において、腫瘍溶解性ウイルスと化学療法剤とは、同時的に、別々に、または逐次的に投与し得る。こうすることで、治療を必要とする腫瘍中に２つの薬剤を同じタイミングで存在させ、それにより複合的な治療効果をもたらすことができる。その効果は、相加的または相乗的であり得る。
【００５０】
化学療法薬は、１つまたは複数の投与経路により、例えば、非経口、動脈内注射もしくは注入、静脈内注射もしくは注入、腹腔内、腫瘍内、または経口経路により、投与し得る。投与は、好ましくは「治療有効量」で行われる。治療有効量とは、個体にとっての利益を示すのに十分な量である。投与される実際の量、ならびに投与の速度およびタイムコースは、治療しようとする疾患の性質および重症度に応じて決まってこよう。治療薬の処方、例えば、投与量等についての決定は、総合診療医および他の医師の責任の範囲内であり、典型的には、治療する障害、個々の患者の病態、送達部位、投与方法、および専門家に公知の他の因子を考慮する。先述の技法およびプロトコールの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２０版、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ出版に見出すことができる。
【００５１】
化学療法薬は、治療計画に従って投与し得る。治療計画は、化学療法薬投与の所定のタイムテーブル、プラン、スキーム、またはスケジュールであり得、これらは、医師または医療実務者が準備してもよく、治療を必要とする患者に合わせて調整してもよい。
【００５２】
治療計画は、患者に投与する化学療法薬のタイプ、各薬物の用量、投与間の時間間隔、各治療の長さ、休薬期間（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｈｏｌｉｄａｙ）がある場合にはその回数および性質等のうちの１つまたは複数を指示し得る。併剤療法の場合は、各薬物／薬剤の投与の仕方を指示する単一の治療計画が提供され得る。
【００５３】
オーロラキナーゼ阻害薬
オーロラキナーゼ阻害薬（ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）は、本発明によりがんを治療するために腫瘍溶解性ウイルスと一緒に使用し得る化学療法剤の例である。
【００５４】
オーロラキナーゼ阻害薬は、オーロラキナーゼ、好ましくは哺乳動物オーロラキナーゼ、より好ましくはヒトオーロラキナーゼの活性を阻害する能力をもつ薬剤である。いくつかの好ましい態様において、この薬剤は、ヒトオーロラキナーゼＡおよび／またはＢおよび／またはＣの活性を阻害する能力をもつ。
【００５５】
オーロラキナーゼ阻害薬は、典型的には、化学実体（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｅｎｔｉｔｙ）、例えば、小分子医薬、抗生物質、または生物剤、例えば、抗体、抗体断片、核酸もしくはペプチドのアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であろう。正常細胞では、オーロラＡを阻害すると、有糸分裂開始は遅延されるが遮断はされず（Ｈｉｒｏｔａ  Ｔ、Ｋｕｎｉｔｏｋｕ  Ｎ、Ｓａｓａｙａｍａ  Ｔら、Ａｕｒｏｒａ−Ａ  ａｎｄ  ａｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ，ｔｈｅ  ＬＩＭ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｊｕｂａ，ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｅｌｌｓ．、Ｃｅｌｌ、２００３、１１４：５８５〜９８；Ｍａｒｕｍｏｔｏ  Ｔ、Ｈｏｎｄａ  Ｓ、Ｈａｒａ  Ｔら、Ａｕｒｏｒａ−Ａ  ｋｉｎａｓｅ  ｍａｉｎｔａｉｎｓ  ｔｈｅ  ｆｉｄｅｌｉｔｙ  ｏｆ  ｅａｒｌｙ  ａｎｄ  ｌａｔｅ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  ＨｅＬａ  ｃｅｌｌｓ．、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２００３、２７８：５１７８６〜９５）、中心体分離異常により単極の有糸分裂紡錘体が生じ（Ｍａｒｕｍｏｔｏら、同前；Ｇｌｏｖｅｒ  ＤＭ、Ｌｅｉｂｏｗｉｔｚ  ＭＨ、ＭｃＬｅａｎ  ＤＡ、Ｐａｒｒｙ  Ｈ、Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ａｕｒｏｒａ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｃｅｎｔｒｏｓｏｍｅ  ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｌｅａｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｐｏｌａｒ  ｓｐｉｎｄｌｅｓ．、Ｃｅｌｌ、１９９５、８１：９５〜１０５）、細胞質分裂ができなくなる（Ｍａｒｕｍｏｔｏら、同前）。オーロラＡ阻害を行った場合の心強い抗腫瘍効果が３つのヒト膵臓がん細胞株（Ｐａｎｃ−１、ＭＩＡ  ＰａＣａ−２、およびＳＵ．８６．８６）において示されており、細胞培養物においては成長が抑制され、マウス異種移植片においては造腫瘍性がほぼ完全に消失した（Ｈａｔａ  Ｔ、Ｆｕｒｕｋａｗａ  Ｔ、Ｓｕｎａｍｕｒａ  Ｍら、ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅ  Ａ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｅｎｈａｎｃｅｓ  ｔｈｅ  ｔａｘａｎｅ  ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００５、６５：２８９９〜９０５）。
【００５６】
オーロラＢを阻害すると、動原体−微小管結合に異常が生じ、染色体の二極配向（ｂｉｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）が達成できず、細胞質分裂ができなくなる（Ｇｏｔｏ  Ｈ、Ｙａｓｕｉ  Ｙ、Ｋａｗａｊｉｒｉ  Ａら、Ａｕｒｏｒａ−Ｂ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｔｈｅ  ｃｌｅａｖａｇｅ  ｆｕｒｒｏｗ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｖｉｍｅｎｔｉｎ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｃｅｓｓ．、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、２００３、２７８：８５２６〜３０；Ｓｅｖｅｒｓｏｎ  ＡＦ、Ｈａｍｉｌｌ  ＤＲ、Ｃａｒｔｅｒ  ＪＣ、Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ  Ｊ、Ｂｏｗｅｒｍａｎ  Ｂ、Ｔｈｅ  ａｕｒｏｒａ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ  ＡＩＲ−２  ｒｅｃｒｕｉｔｓ  ＺＥＮ−４／ＣｅＭＫＬＰ１  ｔｏ  ｔｈｅ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｓｐｉｎｄｌｅ  ａｔ  ｍｅｔａｐｈａｓｅ  ａｎｄ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｓ．、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ、２０００、１０：１１６２〜７１）。有糸分裂チェックポイントが損なわれると、不正確な微小管−動原体結合がなされていても細胞は有糸分裂の過程を進行できてしまう（Ｈａｕｆ  Ｓ、Ｃｏｌｅ  ＲＷ、ＬａＴｅｒｒａ  Ｓら、Ｔｈｅ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｈｅｓｐｅｒａｄｉｎ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｉｎ  ｃｏｒｒｅｃｔｉｎｇ  ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅ−ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｎ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｐｉｎｄｌｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２００３、１６１：２８１〜９４；Ｋａｌｌｉｏ  ＭＪ、ＭｃＣｌｅｌａｎｄ  ＭＬ、Ｓｔｕｋｅｎｂｅｒｇ  ＰＴ、Ｇｏｒｂｓｋｙ  ＧＪ、Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｋｉｎａｓｅ  ｂｌｏｃｋｓ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ，ｏｖｅｒｒｉｄｅｓ  ｔｈｅ  ｓｐｉｎｄｌｅ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ，ａｎｄ  ｐｅｒｔｕｒｂｓ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｄｙｎａｍｉｃｓ  ｉｎ  ｍｉｔｏｓｉｓ．、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ、２００２、１２：９００〜５）。ＢｕｂＲ１およびＭａｄ２などのチェックポイントタンパク質の動原体への最初の動員は前期に正常に起こるものの、オーロラＢ機能の非存在下で有糸分裂が進行するため、その後これらのタンパク質は解離する。この解離によりチェックポイントが弱まり、細胞は、中期から後期に進行する有糸分裂の異常を起こしたままになる。細胞質分裂が生じることなく異常な有糸分裂のサイクルが繰り返されることにより、倍数性がきわめて高くなり、最終的にはアポトーシスに至る（Ｈａｕｆら、同前；Ｄｉｔｃｈｆｉｅｌｄら、同前；Ｇｉｅｔ  Ｒ、Ｇｌｏｖｅｒ  ＤＭ、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｈ３  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ  ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｏ  ｏｒｇａｎｉｚｅ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｓｐｉｎｄｌｅ  ｄｕｒｉｎｇ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓｉｓ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２００１、１５２：６６９〜８２；Ｍｕｒａｔａ−Ｈｏｒｉ  ��、Ｗａｎｇ  ＹＬ、Ｔｈｅ  ｋｉｎａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅ−ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｍｉｔｏｓｉｓ．、Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ、２００２、１２：８９４〜９；Ｋａｌｌｉｏら、同前）。
【００５７】
腫瘍細胞においてオーロラＡまたはオーロラＢ活性の阻害が生じると、染色体整列が障害され、有糸分裂チェックポイントが無効になり、倍数性、続いて細胞死が生じる。これらのｉｎ  ｖｉｔｒｏ効果は、形質転換された細胞における方が、形質転換されていない細胞または非分裂細胞のいずれにおけるより大きい（Ｄｉｔｃｈｆｉｅｌｄら、同前）。したがって、オーロラを標的化することにより、ｉｎ  ｖｉｖｏでのがんに対する選択性を獲得し得る。
【００５８】
オーロラキナーゼ活性の阻害は、当業者に公知の慣例的な手法を用いてテストできるので、所与の薬剤がオーロラキナーゼ阻害薬であるかどうかを確認することが可能である。好適な方法としては、ｉｎ  ｖｉｔｒｏキナーゼアッセイの使用が挙げられ、例えば、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ＥＡ、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  Ｄ、Ｍｏｏｒｅ  Ｊら、ＶＸ−６８０，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅｓ，ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２００４、１０：２６２〜７に記載されているものなどがある。あるいは、オーロラキナーゼ阻害薬のスクリーニングのためにデザインされた市販のキットを選択してもよく、このようなキットには例えば、ＣｙｃＬｅｘ（登録商標）Ａｕｒｏｒａ  Ａ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙ／Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｋｉｔ（ＭＢＬ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＣＹ−１１６５）またはＣｙｃＬｅｘ（登録商標）Ａｕｒｏｒａ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｋｉｎａｓｅ  Ａｓｓａｙ／Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｋｉｔ（ＭＢＬ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ＣＹ−１１７４）などがある。
【００５９】
以下に論じるように、多くのオーロラキナーゼ阻害薬が公知である。
ＭＬＮ８２３７
ＭＬＮ８２３７（９−クロロ−７−（２−フルオロ−６−メトキシフェニル）−５Ｈ−ピリミド［５，４−ｄ］［２］ベンゾアゼピン−２−イル）−アミノ］−２−メトキシ安息香酸）（Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）は、オーロラキナーゼＡ阻害薬である。ＭＬＮ８２３７は、オーロラＡキナーゼの経口的に活性な小分子阻害薬である。ＭＬＮ８２３７は、細胞ベースの試験ではＩＣ５０値が１ｎＭであり、オーロラＢと比べてオーロラＡに対し２００倍の選択性を有する、選択的なオーロラＡ阻害薬である（Ｋａｒｔｈｉｇｅｙａｎら、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、第３１巻、第５号、７５７〜７９３ページ、２０１１年９月）。
【００６０】
ＭＬＮ８２３７の構造を図１に示す。
ヘスペラジン
ヘスペラジンは、オーロラＢの免疫沈降を阻害するインドリノンであり、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）は２５０ｎｍｏｌ／Ｌである（Ｃａｒｖａｊａｌら、Ａｕｒｏｒａ  Ｋｉｎａｓｅｓ：Ｎｅｗ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００６、１２（２３）、２００６年１２月１日）。ヘスペラジンは、異常な微小管−動原体結合を誘導し、シンテリック結合の形成の有意な増加を伴う（Ｈａｕｆ  Ｓ、Ｃｏｌｅ  ＲＷ、ＬａＴｅｒｒａ  Ｓら、Ｔｈｅ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｈｅｓｐｅｒａｄｉｎ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｉｎ  ｃｏｒｒｅｃｔｉｎｇ  ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅ−ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｎ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｐｉｎｄｌｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２００３、１６１：２８１〜９４）。適正な染色体二極配向を達成することができないにもかかわらず、処置された細胞は有糸分裂チェックポイントを逃れて中期から後期に進行する（Ｈａｕｆら、同前；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ＥＡ、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  Ｄ、Ｍｏｏｒｅ  Ｊら、ＶＸ−６８０，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅｓ，ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２００４、１０：２６２〜７）。これらの細胞は、細胞質分裂ができず、四倍性となる。倍数性の増大にもかかわらず、細胞生存能の喪失は達成されない。
【００６１】
ヘスペラジンの構造を図１に示す。
ＺＭ４４７４３９
ＺＭ４４７４３９は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａにより開発されたキナゾリン誘導体であり、オーロラのＡＴＰ競合物である。ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイでは、オーロラＡとオーロラＢの両方を阻害することが示され、ＩＣ５０はｆ１００ｎｍｏｌ／Ｌである（Ｃａｒｖａｊａｌら、Ａｕｒｏｒａ  Ｋｉｎａｓｅｓ：Ｎｅｗ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００６、１２（２３）、２００６年１２月１日）。
【００６２】
ヘスペラジンと同様に、ＺＭ４４７４３９は、不正確な微小管−動原体結合、染色体二極配向の不能、有糸分裂チェックポイントの無効化、細胞質分裂の不能、および四倍性の発現を誘導する（Ｈａｕｆ  Ｓ、Ｃｏｌｅ  ＲＷ、ＬａＴｅｒｒａ  Ｓら、Ｔｈｅ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｈｅｓｐｅｒａｄｉｎ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｉｎ  ｃｏｒｒｅｃｔｉｎｇ  ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅ−ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｎ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｐｉｎｄｌｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２００３、１６１：２８１〜９４；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ＥＡ、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  Ｄ、Ｍｏｏｒｅ  Ｊら、ＶＸ−６８０，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅｓ，ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２００４、１０：２６２〜７）。処置された細胞は、次の細胞周期の際にアポトーシスを起こす。ＺＭ４４７４３９への曝露は、成長阻害とアポトーシスの両方を達成する。ＺＭ４４７４３９はｉｎ  ｖｉｔｒｏではオーロラＡとオーロラＢの両方を阻害するが、処置された細胞で観察される表現型から、オーロラＢの阻害の方が大きいことが示唆される。
【００６３】
ＺＭ４４７４３９の構造を図１に示す。
ＭＫ０４５７（別名ＶＸ−６８０）
ＭＫ０４５７は、３つのオーロラキナーゼすべてを阻害する。それぞれが、細胞ベースのアッセイにおいて類似の表現型を誘導し、Ｓｅｒ１０上のヒストンＨ３のリン酸化の阻害、細胞質分裂の阻害、および倍数性の発現を特徴とする（Ｈａｕｆ  Ｓ、Ｃｏｌｅ  ＲＷ、ＬａＴｅｒｒａ  Ｓら、Ｔｈｅ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｈｅｓｐｅｒａｄｉｎ  ｒｅｖｅａｌｓ  ａ  ｒｏｌｅ  ｆｏｒ  Ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｉｎ  ｃｏｒｒｅｃｔｉｎｇ  ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅ−ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ  ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｎ  ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓｐｉｎｄｌｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２００３、１６１：２８１〜９４；Ｄｉｔｃｈｆｉｅｌｄ  Ｃ、Ｊｏｈｎｓｏｎ  ＶＬ、Ｔｉｇｈｅ  Ａら、Ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｃｏｕｐｌｅｓ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ａｎａｐｈａｓｅ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＢｕｂＲ１，Ｍａｄ２，ａｎｄ  Ｃｅｎｐ−Ｅ  ｔｏ  ｋｉｎｅｔｏｃｈｏｒｅｓ．、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ、２００３、１６１：２６７〜８０；Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ＥＡ、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  Ｄ、Ｍｏｏｒｅ  Ｊら、ＶＸ−６８０，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ−ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅｓ，ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｖｏ、Ｎａｔ  Ｍｅｄ、２００４、１０：２６２〜７）。
【００６４】
ＭＫ０４５７は、すべてのオーロラキナーゼに共通するＡＴＰ結合部位を標的とする４，６ジアミノピリミジンである。ＭＫ０４５７は、３つのオーロラキナーゼすべての強力な阻害薬であり、阻害定数（Ｋｉ）は、オーロラＡ、オーロラＢ、およびオーロラＣについてそれぞれ０．６、１８．０、および４．６ｎｍｏｌ／Ｌである（Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎら、同前）。
【００６５】
ＭＫ０４５７で処置すると、細胞培養物においては、倍数性が生じる他、いくつかの腫瘍タイプの成長が阻害され、アポトーシスの誘導は、白血病、リンパ腫、および直腸結腸細胞株において最も顕著である。ＭＫ０４５７を白血病、大腸がん、および膵臓がんの齧歯動物異種移植モデルに用いる試験では、目覚ましい抗腫瘍活性も示される。
【００６６】
ヒト急性骨髄性白血病（ＨＬ６０）ヌードマウス異種移植片をＭＫ０４５７で処置すると、腫瘍体積は、対照と比較して９８％低減した（Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎら、同前）。ヒト大腸がん（ＨＣＴ１１６）ヌードラット異種移植モデルでは、ＭＫ０４５７で処置すると、処置したラット７匹のうちの４匹において腫瘍が縮減した。処置した異種移植片すべてにおいてＳｅｒ１０にあるヒストンＨ３のリン酸化が阻害されたことから、有効なオーロラＢ阻害が示された。
【００６７】
ＭＫ０４５７の構造を図１に示す。
ＭＬＮ８０５４
ＭＬＮ８０５４は、オーロラの経口小分子阻害薬であり、オーロラＡに対して相対的に特異性を有する（オーロラＡのＩＣ５０＝０．０３４Ａｍｏｌ／Ｌ、オーロラＢのＩＣ５０＝５．７Ａｍｏｌ／Ｌ、［Ｈｏａｒ  ＨＭ、Ｗｙｓｏｎｇ  ＤＲ、Ｅｃｓｅｄｙ  ＪＡ、ＭＬＮ８０５４  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ａｕｒｏｒａ  Ａ  ｏｖｅｒ  Ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ［要約Ｃ４０］、Ｐｒｏｃ  ＡＡＣＲ−ＮＣＩＥＯＲＴＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、２００５］）。ＭＬＮ８０５４は、選択的なオーロラＡ阻害薬である。
【００６８】
培養したヒト腫瘍細胞を低濃度のＭＬＮ８０５４（０．２５〜２Ａｍｏｌ／Ｌ）で処置すると、オーロラＡ阻害と合致する異常な有糸分裂紡錘体形成がもたらされる。より高い濃度（４Ａｍｏｌ／Ｌ）で処置すると、Ｓｅｒ１０上のヒストンＨ３のリン酸化の低下がもたらされ、オーロラＢ阻害と合致する。成長阻害は、ＨＣＴ１１６ヒト大腸がん、ＰＣ４前立腺がん、およびＣａｌｕ−６ヒト肺がん異種移植モデルにおいて多様な経口投与スケジュールを用いることで示された（Ｈｕｃｋ  Ｊ、Ｚｈａｎｇ  Ｍ、Ｂｕｒｅｎｋｏｖａ  Ｏ、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ  Ｋ、Ｍａｎｆｒｅｄｉ  Ｍ、Ｍｅｅｔｚｅ  Ｋ、Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｗｉｔｈ  ＭＬＮ８０５４，ａ  ｓｍａｌｌ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ａｕｒｏｒａ  Ａ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ［要約４６９８］、Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ａｓｓｏｃ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００６、４７：１１０４）。
【００６９】
化合物６７７
化合物６７７は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａにより開発された選択的なオーロラＢ阻害薬である。化合物６７７は、前臨床試験において、単剤での強力な抗癌活性を示している（Ｎａｉｒ  ＪＳ、Ｔｓｅ  Ａ、Ｋｅｅｎ  Ｎ、Ｓｃｈｗａｒｔｚ  ＧＫ、Ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｕｒｏｒａ  Ｂ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｅｉｔｈｅｒ  ａｓ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ａｇｅｎｔ  ｏｒ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ［要約９５６８］、Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．、２００４、２３：８４８）。
【００７０】
ＡＺＤ１１５２
ＡＺＤ１１５２は、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａにより開発された選択的なオーロラＢ阻害薬である。ＡＺＤ１１５２は、高度に可溶性のアセトアニリド置換ピラゾール−アミノキナゾロンプロドラッグであり、ヒト血漿中で完全に開裂されて活性薬物質ＡＺＤ１１５２ヒドロキシ−ＱＰＡとなる。ＡＺＤ１１５２ヒドロキシ−ＱＰＡは、オーロラＡ、オーロラＢ−ＩＮＣＥＮＰ、およびオーロラＣ−ＩＮＣＥＮＰを阻害し、それぞれの阻害係数（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ）は６８７、３．７、および１７．０ｎｍｏｌ／Ｌである。このことから、オーロラＡと比べてオーロラＢに対し１００倍の選択性を有することが示されている（Ｃａｒｖａｊａｌら、Ａｕｒｏｒａ  Ｋｉｎａｓｅｓ：Ｎｅｗ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ．、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００６、１２（２３）、２００６年１２月１日）。
【００７１】
細胞株試験では、Ｓｅｒ１０でのヒストンＨ３リン酸化が阻害され、異常な有糸分裂を通じて通常の動態での進行が行われることで倍数性および細胞死がもたらされることが明らかになっている。ＡＺＤ１１５２の異種移植片試験では、多様なヒト腫瘍を担持する無胸腺のヌード齧歯動物において、Ｓｅｒ１０上のヒストンＨ３のリン酸化の低減、倍数性の増大、およびアポトーシスの亢進が示されている。ここでいうヒト腫瘍には、直腸結腸がん（ＳＷ６２０、ＨＣＴ１１６、およびＣｏｌｏ２０５）ならびに肺がん（Ａ５４９およびＣａｌｕ−６、［Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  ＲＷ、Ｏｄｅｄｒａ  Ｒ、Ｈｅａｔｏｎ  ＳＰら、ＡＺＤ１１５２，ｈｉｇｈｌｙ  ｐｏｔｅｎｔ  Ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｗｉｔｈ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  Ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅ  Ｂ，ｉｎｄｕｃｅｓ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｎｄ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔ  ｍｏｄｅｌｓ［要約Ｂ２１４］、Ｐｒｏｃ  ＡＡＣＲ−ＮＣＩ−ＥＯＲＴＣ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、２００５（１８３）］）が含まれる。
【００７２】
さらなるオーロラキナーゼ阻害薬としては、ＰＨＡ−６８０６３２（（Ｎｅｒｖｉａｎｏ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）；Ｓｏｎｃｉｎｉ  Ｃ、Ｃａｒｐｉｎｅｌｌｉ  Ｐ、Ｇｉａｎｅｌｌｉｎｉ  Ｌら、ＰＨＡ−６８０６３２，ａ  ｎｏｖｅｌ  Ａｕｒｏｒａ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．、Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ、２００６、１２：４０８０〜９）、ＰＨＡ−７３９３５８（Ｎｅｒｖｉａｎｏ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｒ７６３（Ｒｉｇｅｌ；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら、Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．、２０１０年１月、１３６（１）：９９〜１１３）、ＳＮＳ−３１４（Ｓｕｎｅｓｉｓ；Ａｒｂｉｔｒａｒｉｏら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２０１０年３月、６５（４）：７０７〜１７、Ｅｐｕｂ、２００９年８月１日）、ＮＣＥＤ♯１７（ＮＣＥ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｌｔｄ）、ＡＴ９２８３（Ａｓｔｅｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；Ｄａｗｓｏｎら、Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．、２０１０年７月、１５０（１）：４６〜５７、Ｅｐｕｂ、２０１０年５月７日）、ＭＰ−２３５（Ｍｏｎｔｉｇｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＭＰ−５２９（Ｍｏｎｔｉｇｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＭＬＮ８０５４（Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍ；（Ｋａｒｔｈｉｇｅｙａｎら、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、第３１巻、第５号、７５７〜７９３ページ、２０１１年９月）、ＰＨＡ−７３９３５８（Ｋａｒｔｈｉｇｅｙａｎら、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、第３１巻、第５号、７５７〜７９３ページ、２０１１年９月）、さらには、図１に示すもの、ならびにＷＯ２００７／１１３００５およびＷＯ２００７／１１５８０５に記載されているものが挙げられ、ＷＯ２００７／１１３００５に記載されている化合物ＶＩＩ、ならびにＷＯ２００７／１１５８０５に記載されている化合物ＩＶ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＩＸが含まれる（図１にも示してある）。
【００７３】
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬
ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬は、本発明によりがんを処置するために腫瘍溶解性ウイルスと一緒に使用し得る化学療法剤の例である。
【００７４】
ＨＤＡＣ阻害薬は、ヒストンデアセチラーゼの酵素活性を阻害する化合物である。ＨＤＡＣ阻害薬は、典型的には、化学実体、例えば、小分子医薬、抗生物質、または生物剤、例えば、抗体、抗体断片、核酸もしくはペプチドアプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質であろう。
【００７５】
ＨＤＡＣ阻害薬は、ｅｘ  ｖｉｖｏで、さらには担腫瘍動物モデルにおいてｉｎ  ｖｉｖｏで、がん細胞の成長停止、分化および／またはアポトーシスを誘導する能力をもつ。いくつかのクラスのＨＤＡＣ阻害薬が、抗腫瘍剤として臨床試験にかけられている。
【００７６】
ＨＤＡＣ阻害薬の活性は、当業者に公知の慣例的な手法を用いてテストできるので、所与の薬剤がＨＤＡＣ阻害薬であるかどうかを確認することが可能である。好適な方法としては、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの使用が挙げられ、例えば、Ｈｏｆｆｍａｎら（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９９、第２７巻、第９号、２０５７〜２０５８）に記載されているものなどがある。あるいは、ＨＤＡＣ阻害薬のスクリーニングのためにデザインされたいくつかの市販のキットが入手可能であり、このようなキットには例えば、Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、米国）により供給されているＨＤＡＣ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔｓ（カタログ番号５６２００および５６２１０）などがある。
【００７７】
以下に論じるように、多くのＨＤＡＣ阻害薬が公知である。
ロミデプシン
ロミデプシン［商用名Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標）（Ｃｅｌｇｅｎｅ）、コードネームはＦＫ２２８およびＦＲ９０１２２８である］は、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）の治療薬として認可されており、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療用として第２相臨床試験にかけられている。
【００７８】
ロミデプシンの構造を図２に示す。
ボリノスタット
ボリノスタット（またはスベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ））は、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）の治療用としてＺｏｌｉｎｚａ（登録商標）の名称で市販されている。ボリノスタットは、中皮腫の治療用として第３相臨床試験にかけられており、また、ＭＤＳ、ＮＨＬ、脳腫瘍およびＮＳＣＬＣの治療用として第２相試験にかけられている。ボリノスタットは、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））との組合せで、多発性骨髄腫用として第２相および第３相臨床試験にかけられている。
【００７９】
ボリノスタットの構造を図２に示す。
パノビノスタット（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ）
パノビノスタット（ＬＢＨ５８９、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、非選択的なＨＤＡＣ阻害薬であり、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の治療用として第３相臨床試験にかけられている。
【００８０】
パノビノスタチン（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔｉｎ）は、ボルテゾミブおよびデキサメタゾンとの組合せで、多発性骨髄腫の治療用として第２／３相臨床試験にかけられている。
【００８１】
パノビノスタチンの構造を図２に示す。
ベリノスタット
ベリノスタット（ＰＸＤ１０１、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＴｏｐｏＴａｒｇｅｔ、Ｃｕｒａｇｅｎ）は、ＡＭＬ、ＣＴＣＬ、ＭＤＳ、ＮＨＬおよび卵巣がんの治療用として第２相臨床試験にかけられている。
【００８２】
ベリノスタットの構造を図２に示す。
モセチノスタット
モセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３、モセチノスタットジヒドロブロミド）は、ベンズアミドヒストンデアセチラーゼ阻害薬であり、ＡＭＬ、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、ホジキンリンパ腫、ＮＨＬ、膵臓がんおよび胸腺がんの治療用として臨床試験にかけられている。
【００８３】
モセチノスタットの構造を図２に示す。
エンチノスタット
エンチノスタット（ＳＮＤＸ−２７５、Ｓｙｎｄａｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、ベンズアミドヒストンデアセチラーゼ阻害薬であり、乳がん、ホジキンリンパ腫およびＮＳＣＬＣの治療用として臨床試験にかけられている。
【００８４】
エンチノスタットの構造を図２に示す。
ＰＣＩ−２４７８１
ＰＣＩ−２４７８１（ＣＲＡ−０２４７８、Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ）は、血液がんおよび肉腫の治療用として臨床試験にかけられている。
【００８５】
その他のＨＤＡＣの例としては、バルプロ酸、トリコスタチンＡ、アピシジン、ＬＢＨ−５８９、ＣＳ−０００２８（Ｃｈｉｐｓｃｒｅｅｎ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＨＲ−２５０４（Ｃｈｒｏｍａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＦＲ−１３５３１３（Ｇｌｏｕｃｅｓｔｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＪＮＪ−１６２４１１９９（Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＭＧＣＤ０１０３（Ｍｅｔｈｙｌｇｅｎｅ）、ＬＡＱ−８２４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＬＢＨ−５８９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＣ１９９４（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＭＳ２７５（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）、および酪酸ピバロイルオキシメチル（Ｔｉｔａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる。
【００８６】
いくつかのＨＤＡＣ阻害薬は、ＡＵ  ２００１／１８７６８  Ｂ２、ＡＵ  ２００２／３２７６２７  Ｂ２、ＵＳ  ６８９７２２０、ＵＳ  ００３９８５０、ＵＳ  ６５４１６６１、ＵＳ  ７２８８５６７、ＵＳ  ７２５３２０４、ＡＵ  ２００１／２８３９２５  Ｂ２、ＵＳ  ７２８２６０８、ＵＳ  ７２５０５１４、ＵＳ  ７１６９８０１、ＵＳ  ７１５４００２、ＵＳ  ６４９５７１９、ＵＳ  ７０５７０５７、ＵＳ  ７２１４８３１、ＵＳ  ７１９１３０５、ＵＳ  ７１２６００１、ＵＳ  ７２０５３０４、ＥＰ  １２０６８０８６  Ｂ１、ＵＳ  ６５１  １９９０、ＵＳ  ７２４４７５１、ＡＵ  ２００２／２４６０５３  Ｂ２、ＡＵ  ２５  ２０００／６８４１６  Ｂ２、ＵＳ  ７０９１２２９、ＵＳ  ６６３８５３０、ＥＰ  １５０１５０８  Ｂ１、ＥＰ  １６５６３４８  Ｂ１、ＥＰ  １３５８１６８  Ｂ１、ＵＳ  ７０６７５５１、ＡＵ  ２００１／２８２１２９  Ｂ２、ＵＳ  ６５５２０６５、ＵＳ  ６８３３８４、ＥＰ  １３０１１８４  Ｂ１、ＥＰ  １３１８９８０  Ｂ１、ＵＳ  ６９６０６８５、ＵＳ  ６８８８０２７、ＥＰ  １３３５８９８  Ｂ１、ＵＳ  ７１８３２９８、ＵＳ  ７１３５４９３、ＵＳ  ６８２５３１７、およびＵＳ  ６６５６９０５にも記載されている。
【００８７】
化学療法剤の形態
所与の化学療法剤の活性化合物は、対応する塩、溶媒和物、またはプロドラッグの形態で提供し得る。本明細書においては、化学療法剤への言及には、そのような形態への言及が含まれる。
【００８８】
塩
本活性化合物の対応する塩、例えば薬学的に許容される塩を調製する、精製するおよび／または取り扱うことが好都合なまたは望ましい場合がある。薬学的に許容される塩の例は、Ｂｅｒｇｅら、１９７７、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、第６６巻、１〜１９ページにおいて論じられている。
【００８９】
例えば、化合物が、陰イオン性である、または、陰イオン性であり得る官能基を有する（例えば、−ＣＯＯＨは−ＣＯＯ−であり得る）場合には、塩は、好適な陽イオンを用いて形成することができる。
【００９０】
好適な無機陽イオンの例としては、限定されるものではないが、アルカリ金属イオン、例えばＮａ＋およびＫ＋、アルカリ土類陽イオン、例えばＣａ２＋およびＭｇ２＋、ならびにその他の陽イオン、例えばＡｌ＋３が挙げられる。好適な有機陽イオンの例としては、限定されるものではないが、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ４＋）および置換アンモニウムイオン（例えば、ＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）が挙げられる。いくつかの好適な置換アンモニウムイオンの例は、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、およびトロメタミンに由来するイオン、ならびに、アミノ酸、例えばリジンおよびアルギニンに由来するイオンである。一般的な第四級アンモニウムイオンの例は、Ｎ（ＣＨ３）４＋である。
【００９１】
化合物が、陽イオン性である、または、陽イオン性であり得る官能基を有する（例えば、−ＮＨ２は−ＮＨ３＋であり得る）場合には、塩は、好適な陰イオンを用いて形成することができる。好適な無機陰イオンの例としては、限定されるものではないが、以下の無機酸、すなわち、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、亜硫酸、硝酸、亜硝酸、リン酸、および亜リン酸に由来するイオンが挙げられる。
【００９２】
好適な有機陰イオンの例としては、限定されるものではないが、以下の有機酸、すなわち、２−アセチオキシ安息香酸（２−ａｃｅｔｙｏｘｙｂｅｎｚｏｉｃ）、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、安息香酸、カンファースルホン酸（ｃａｍｐｈｏｒｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、ケイ皮酸、クエン酸、エデト酸、エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルケプトン酸（ｇｌｕｃｈｅｐｔｏｎｉｃ）、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシマレイン酸、ヒドロキシナフタレンカルボン酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ムチン酸、オレイン酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、パントテン酸、フェニル酢酸、フェニルスルホン酸、プロピオン酸、ピルビン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、スルファニル酸、酒石酸、トルエンスルホン酸、および吉草酸に由来するイオンが挙げられる。好適なポリマー性有機陰イオンの例としては、限定されるものではないが、以下のポリマー酸、すなわち、タンニン酸、カルボキシメチルセルロースに由来するイオンが挙げられる。
【００９３】
特に明記しない限り、特定の化合物に言及した場合にはその塩形態も含まれる。
溶媒和物
本活性化合物の対応する溶媒和物を調製する、精製するおよび／または取り扱うことが好都合なまたは望ましい場合がある。用語「溶媒和物」は、本明細書においては、溶質（例えば、活性化合物、活性化合物の塩）と溶媒との複合体を指す従来の意味合いで使用される。溶媒が水である場合、溶媒和物は便宜的に、水和物、例えば一水和物、二水和物、三水和物等と呼ばれることがある。
【００９４】
特に明記しない限り、特定の化合物に言及した場合にはその溶媒和物形態も含まれる。
プロドラッグ
本活性化合物をプロドラッグの形態で調製する、精製するおよび／または取り扱うことが好都合なまたは望ましい場合がある。用語「プロドラッグ」は、本明細書で使用する場合、代謝（例えばｉｎ  ｖｉｖｏで）された際に所望の活性化合物となる化合物に関係する。典型的には、プロドラッグは不活性であるかまたは活性化合物より活性が低いが、有利な取扱い、投与または代謝特性をもたらし得る。
【００９５】
特に明記しない限り、特定の化合物に言及した場合にはそのプロドラッグも含まれる。
例えば、いくつかのプロドラッグは、活性化合物のエステル（例えば、生理学的に許容される代謝的に不安定なエステル）である。代謝の際、エステル基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ）が切断されて活性薬物となる。そのようなエステルは、エステル化により、例えば、親化合物中の任意のカルボン酸基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）のエステル化により形成し得る。このとき、適宜、親化合物中に存在する任意の他の反応性基をあらかじめ保護しておき、続いて必要に応じて脱保護する。
【００９６】
そのような代謝的に不安定なエステルの例としては、式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ［式中、Ｒは、Ｃ１〜７アルキル（例えば、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｉＰｒ、−ｎＢｕ、−ｓＢｕ、−ｉＢｕ、−ｔＢｕ）；Ｃ１〜７アミノアルキル（例えば、アミノエチル；２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル；２−（４−モルホリノ）エチル）；およびアシルオキシ−Ｃ１〜７アルキル（例えば、アシルオキシメチル；アシルオキシエチル；ピバロイルオキシメチル；アセトキシメチル；１−アセトキシエチル；１−（１−メトキシ−１−メチル）エチル−カルボニルオキシメチル；１−（ベンゾイルオキシ）エチル；イソプロポキシ−カルボニルオキシメチル；１−イソプロポキシ−カルボニルオキシエチル；シクロヘキシル−カルボニルオキシメチル；１−シクロヘキシル−カルボニルオキシエチル；シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシメチル；１−シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシエチル；（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシメチル；１−（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシエチル；（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシメチル；および１−（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシエチル）である］のエステルが挙げられる。
【００９７】
また、プロドラッグの中には、酵素的に活性化されて活性化合物になるもの、または、さらに化学反応させた際に活性化合物になる化合物（例えば、ＡＤＥＰＴ、ＧＤＥＰＴ、ＬＩＤＥＰＴ等と同様のもの）もある。例えば、プロドラッグは、糖誘導体もしくは他のグリコシドコンジュゲートであってもよく、または、アミノ酸エステル誘導体であってもよい。
【００９８】
同時的または逐次的投与
組成物は、治療する病態に応じて、単独で、または他の治療と組み合わせて同時的または逐次的に、投与し得る。
【００９９】
本明細書においては、腫瘍溶解性ウイルスと化学療法剤とは、同時的または逐次的に投与し得る。
同時的投与とは、腫瘍溶解性ウイルスと化学療法剤とを一緒に投与することを指し、例としては、両方の薬剤を含有する医薬組成物として投与すること、または、互いの直後に、場合により同じ投与経路を介して、例えば同じ動脈、静脈または他の血管に投与すること、などがある。
【０１００】
逐次的投与とは、腫瘍溶解性ウイルスまたは化学療法剤のうちの一方を投与し、続いて、所与の時間間隔をおいて他方の薬剤を別に投与することを指す。２つの薬剤を同じ経路により投与することは必須ではないが、いくつかの態様においてはそのようにする場合もある。時間間隔は、任意の時間間隔であってよい。
【０１０１】
同時的または逐次的投与は、腫瘍溶解性ウイルスと化学療法剤の両方を同じ腫瘍組織に送達して治療効果をもたらすように意図されたものではあるが、両方の薬剤が、同じタイミングで活性型として腫瘍組織中に存在する必要は必ずしもない。
【０１０２】
ただし、逐次的投与のいくつかの態様においては、時間間隔は、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルスと化学療法剤とが同じタイミングで活性型として腫瘍組織中に存在すると予想され、それにより腫瘍の治療において２つの薬剤の複合的、相加的または相乗的効果を得ることが可能であるように、選択される。そのような態様においては、選択される時間間隔は、５分以下、１０分以下、１５分以下、２０分以下、２５分以下、３０分以下、４５分以下、６０分以下、９０分以下、１２０分以下、１８０分以下、２４０分以下、３００分以下、３６０分以下、または７２０分以下、または１日以下、または２日以下のうちのいずれか１つであり得る。
【０１０３】
がん
がんは、任意の望ましくない細胞増殖（もしくは、望ましくない細胞増殖により現れる任意の疾患）、新生物もしくは腫瘍であるか、または、望ましくない細胞増殖、新生物もしくは腫瘍のリスク増大もしくは素因であり得る。がんは、良性または悪性であり得、原発性もしくは続発性（転移性）であり得る。新生物または腫瘍は、細胞の任意の異常成長または増殖であり得、任意の組織内に位置し得る。組織の例としては、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含むまたは除外する）、小脳、頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば腎上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺（ｌａｃｒｉｍａｌ  ｇｌａｄ）、喉頭、肝臓、肺、リンパ液、リンパ節、リンパ芽球、上顎、縦隔、腸間膜、子宮筋層、鼻咽頭、腹膜網（ｏｍｅｎｔｕｍｅ）、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、軟部組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃、気管、子宮、外陰部、白血球が挙げられる。
【０１０４】
治療する腫瘍は、神経または非神経系腫瘍であり得る。神経系腫瘍は、中枢または末梢神経系のいずれを発生源とするものであってもよく、例えば、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワン細胞腫、神経線維肉腫、星状細胞腫、および乏突起膠腫などである。非神経系がん／腫瘍は、任意の他の非神経組織を発生源とするものであってもよく、例としては、メラノーマ、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、肝臓がん、類表皮がん、前立腺がん、乳がん、肺がん、大腸がん、卵巣がん、膵臓がん、胸腺がん、ＮＳＣＬＣ、血液がんおよび肉腫が挙げられる。
【０１０５】
腫瘍は、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、肉腫、充実性腫瘍、骨肉腫または神経芽細胞腫であり得る。
腫瘍は、小児期に、例えば、１８歳、１６歳、１４歳、１２歳または１０歳のいずれかの年齢未満の対象において発生することがある。そのような腫瘍は、本明細書においては「小児腫瘍」として記載されている。
【０１０６】
対象
治療する対象は、任意の動物またはヒトであり得る。対象は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。対象は、非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。対象は、男女、雌雄を問わない。対象は、患者であり得る。対象は、がんと診断されている場合もあり、または、がんを有すると疑われる場合もある。
【０１０７】
対象は、小児、例えば、１８歳、１６歳、１４歳、１２歳または１０歳のいずれかの年齢未満であり得る。対象は、がんを小児期に発症した成人であってもよい。
その他の化学療法剤
腫瘍溶解性ウイルスをオーロラキナーゼ阻害薬またはヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害薬と共に使用することによりがんを治療することに加え、治療を受ける対象は、他の化学療法剤での治療も受けることができる。例えば、他の化学療法剤は
（ｉ）アルキル化剤、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミド、
（ｉｉ）プリンまたはピリミジン代謝拮抗物質、例えば、アザチオプリン（ａｚａｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）またはメルカプトプリン、
（ｉｉｉ）アルカロイドおよびテルペノイド、例えばビンカアルカロイド（例：ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン）、ポドフィロトキシン、エトポシド、テニポシド、タキサン、例えばパクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（商標））、ドセタキセル、
（ｉｖ）トポイソメラーゼ阻害薬、例えば、Ｉ型トポイソメラーゼ阻害薬のカンプトテシン、イリノテカンおよびトポテカン、またはＩＩ型トポイソメラーゼ阻害薬のアムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、テニポシド、
（ｖ）抗腫瘍性抗生物質（例：アントラサイクリン（ａｎｔｈｒａｃｙｌｉｎｅ）系抗生物質）、例えば、ダクチノマイシン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（商標））、エピルビシン、ブレオマイシン、ラパマイシン、
（ｖｉ）抗体ベースの薬剤、例えば、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＮＦα、抗ＩＬ−２、抗ＧｐＩＩｂ／ＩＩＩａ、抗ＣＤ−５２、抗ＣＤ２０、抗ＲＳＶ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ２）、抗ＴＮＦ受容体、抗ＥＧＦＲ抗体、モノクローナル抗体または抗体断片、例としては、セツキシマブ、パニツムマブ、インフリキシマブ、バシリキシマブ、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、アブシキシマブ、ダクリズマブ、ゲムツズマブ、アレムツズマブ、リツキシマブ（Ｍａｂｔｈｅｒａ（登録商標））、パリビズマブ、トラスツズマブ、エタネルセプト、アダリムマブ、ニモツズマブなど、
（ｖｉｉ）ＥＧＦＲ阻害薬、例えば、エルロチニブ、セツキシマブおよびゲフィチニブ、
（ｖｉｉｉ）血管新生阻害剤、例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））
から選択され得る。
【０１０８】
投与経路
本発明の側面によるウイルス、化学療法剤、医薬品および医薬組成物は、いくつかの経路による投与のためのものとして製剤化することができ、そのような経路としては、限定されるものではないが、非経口、静脈内、動脈内、筋肉内、腫瘍内および経口経路が挙げられる。ウイルス、化学療法剤、医薬品および組成物は、流体または固体形態で製剤化し得る。流体製剤は、注射によりヒトまたは動物の体の選択された領域に投与するためのものとして製剤化してもよい。
【０１０９】
投与法
腫瘍溶解性ウイルスの反復投与を行うことは可能である。１回もしくは複数回または各回の投与は、化学療法剤の同時的または逐次的投与を伴うことができる。
【０１１０】
反復投与は、所定の時間間隔により隔てられていてよく、時間間隔は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１日、または１、２、３、４、５、もしくは６カ月のいずれかであるように選択し得る。
【０１１１】
例として、投与は、７、１４、２１、または２８日ごと（プラスまたはマイナス３、２、または１日）に１回行われ得る。各投与時に施される腫瘍溶解性ウイルスの用量は同じであり得るが、必ずしもそうでなくてもよい。例えば、第１回、第２回および／または第３回の投与時に高めの準備用量を施すことが適切な場合がある。
【０１１２】
キット
本発明のいくつかの側面では、部品のキットが提供される。いくつかの態様において、キットは、所定の量の腫瘍溶解性ウイルス、例えば、所定のウイルス用量または数／量／濃度のウイルス粒子の入った少なくとも１つの容器を有し得る。腫瘍溶解性ウイルスは、腫瘍または血液への注射または注入に好適であるように製剤化され得る。いくつかの態様において、キットは、所定の量の化学療法剤の入った少なくとも１つの容器をさらに含み得る。化学療法剤も、腫瘍または血液への注射または注入に好適であるように製剤化されてもよく、または、代わりに、経口投与用に製剤化されてもよい。いくつかの態様においては、所定の量の腫瘍溶解性ウイルスと所定の量の化学療法剤との混合物の入った容器が提供されるが、これは、場合により、腫瘍または血液への注射または注入に好適であるように製剤化されてもよい。
【０１１３】
いくつかの態様において、キットは、１回または複数回分の用量の腫瘍溶解性ウイルスおよび／または化学療法剤を投与するのに適した器具も含有することができる。そのような器具としては、カテーテルおよび／または針および／または注射器のうちの１つまたは複数を挙げることができ、そのような器具は、好ましくは、滅菌済の形態で提供される。
【０１１４】
キットは、治療有効用量の腫瘍溶解性ウイルスおよび／または化学療法剤の投与についての取扱説明書をさらに備え得る。
本発明には、記載されている側面と好ましい特徴との組合せが含まれるが、ただし、そのような組合せが明らかに許されないまたは明白に回避される場合を除く。
【０１１５】
本明細書において使用する項目見出しは、構成上の目的で用いるものにすぎず、記載されている主題を限定するものと解釈されるべきではない。
本発明の側面および態様については、添付の図面を参照しながら実施例を用いて例証する。さらなる側面および態様は、当業者には明らかであろう。本文中に挙げるすべての文献は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１６】
本発明の原理を例証する態様および実験については、添付の図面を参照しながら論考する。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１−１】選択されるオーロラキナーゼ阻害薬を例示する図である。
【図１−２】選択されるオーロラキナーゼ阻害薬を例示する図である。
【図１−３】選択されるオーロラキナーゼ阻害薬を例示する図である。
【図１−４】選択されるオーロラキナーゼ阻害薬を例示する図である。
【図１−５】選択されるオーロラキナーゼ阻害薬を例示する図である。
【図２−１】選択されるＨＤＡＣ阻害薬を例示する図である。
【図２−２】選択されるＨＤＡＣ阻害薬を例示する図である。
【図３】ＨＳＶ１７１６をＭＬＮ８２３７と組み合わせてＳ４６２ＴＹ細胞に用いた場合のＭＴＳ細胞生存率を示すグラフである。０Ｖ＝ウイルスなし、０Ｄ＝薬物なし、１Ｖ＝ｍｏｉ０．０４５、２Ｖ＝ｍｏｉ０．４５、１Ｄ＝３０ｎＭ  ＭＬＮ８２３７、２Ｄ＝５０ｎＭ  ＭＬＮ８２３７、３Ｄ＝７０ｎＭ  ＭＬＮ８２３７［右欄に上から下に向かって表示されている組合せは、左から右に読んだときのバーに対応する］。
【図４】ＨＳＶ１７１６をＭＬＮ８２３７と組み合わせた場合についての図３のデータに基づくＦａＣＩプロットを示すグラフである。
【図５】（ａ）図５ａは、ｉＴｕ  ＨＳＶ１７１６単独、ＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）単独、またはその組合せをＳ４６２ＴＹ側腹異種移植片に用いたことによる腫瘍成長阻害を示すグラフである。処置スケジュールおよび用量は、グラフの下部に表示する。（ｂ）図５ｂは、ＩＶ  ＨＳＶ１７１６単独、ＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）単独、またはその組合せをＳ４６２ＴＹ側腹異種移植片に用いたことによる腫瘍成長阻害を示すグラフである。処置スケジュールおよび用量は、グラフの下部に表示する。
【図６】ＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）がＳ４６２ＴＹ異種移植片担持マウスにおいてＩＴｕ  ＨＳＶ１７１６療法を強化することを示すグラフである。Ｓ４６２ＴＹ異種移植片腫瘍を担持するマウスをＭＬＮ８２３７およびｏＨＳＶで処置した（ｎ＝１０）。動物には、ＭＬＮ８２３７（２０ｍｇ／ｋｇ）もしくはビヒクルを経口強制投与により１日に２回（週に５日）、第０日から４２日間、および／または、ＨＳＶ１７１６の単回ＩＴｕ注射（１×１０７ｐｆｕ）もしくはＰＢＳを第７日に、投与した［この組合せのｐ値＝０．０１９４、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定により決定］。
【図７】ＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）がＳ４６２ＴＹ異種移植片担持マウスにおいてＩＶ  ＨＳＶ１７１６療法を強化することを示すグラフである。Ｓ４６２ＴＹ異種移植片腫瘍を担持するマウスをＭＬＮ８２３７およびｏＨＳＶで処置した（ｎ＝１０）。動物には、ＭＬＮ８２３７（２０ｍｇ／ｋｇ）もしくはビヒクルを経口強制投与により１日に２回（週に５日）、第０日から４２日間、および／または、ＨＳＶ１７１６の単回ＩＶ注射（９×１０７ｐｆｕ）もしくはＰＢＳを第７日に、投与した［この組合せのｐ値＝０．００３３、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定により決定］。
【図８】Ｓ４６２ＴＹ異種移植片担持ヌードマウス４群それぞれについての処置計画を示す図である。
【図９】ＨＳＶ１７１６単独、ＭＬＮ８２３７単独、またはその組合せをＳ４６２ＴＹ側腹異種移植片に用いたことによる第２８日までの腫瘍成長阻害を示すグラフである。マウス群は、図８の周期スキーマに従って、ＭＬＮ８２３７およびＨＳＶ１７１６投与により処置した。投与は、ＭＬＮ８２３７についてはブロックで、ＨＳＶ１７１６については矢印で、それぞれ表示されている。
【図１０】ＨＳＶ１７１６単独、ＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）単独、またはその組合せをＳ４６２ＴＹ側腹異種移植片に用いたことによる個々のマウスについての腫瘍成長阻害を示すグラフである。マウス群は、周期スキーマ（図８）に従って、表示されているＭＬＮ８２３７およびＨＳＶ１７１６投与により処置した。
【図１１】Ｓ４６２ＴＹ側腹異種移植片を用いた場合の処置第２８日時点において、ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せはＨＳＶ１７１６単独と比較して有意に腫瘍成長を阻害していることを示すグラフである。
【図１２】ＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）がＳ４６２ＴＹ異種移植片担持マウスにおいてＩＴｕ  ＨＳＶ１７１６療法を強化することを示すグラフである。Ｓ４６２ＴＹ側腹異種移植片を用いた場合の、対照マウス、または、ＨＳＶ１７１６単独、ＭＬＮ８２３７単独、もしくはその組合せで処置したマウスの生存率である。マウス群を周期スキーマに従って処置した結果を、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定により決定したｐ値と共に示した。
【図１３】ＳＫ−Ｎ−ＡＳ異種移植片担持ヌードマウス４群それぞれについての処置計画を示す図である。
【図１４】ＨＳＶ１７１６単独、ＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）単独、またはその組合せをＳＫ−Ｎ−ＡＳ側腹異種移植片に用いたことによる腫瘍成長阻害を示すグラフである。マウス群は、図１３のスキーマに従って、表示されている通りのＭＬＮ８２３７およびＨＳＶ１７１６投与により処置した。
【図１５】（ａ）図１５ａは、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ側腹異種移植片を用いた場合の個々の対照マウスにおける腫瘍成長を示すグラフである。（ｂ）図１５ｂは、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ側腹異種移植片を用いた場合のＨＳＶ１７１６単独で処置したマウスにおける腫瘍成長を示すグラフである。（ｃ）図１５ｃは、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ側腹異種移植片を用いた場合のＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）単独で処置したマウスにおける腫瘍成長を示すグラフである。（ｄ）図１５ｄは、ＳＫ−Ｎ−ＡＳ側腹異種移植片を用いた場合のＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）との組合せで処置したマウスにおける腫瘍成長を示すグラフである。
【図１６】ＳＫ−Ｎ−ＡＳ側腹異種移植片を用いた場合の処置第２１日時点において、ＨＳＶ１７１６またはＭＬＮ８２３７単独では対照マウスと比較して有意に腫瘍成長が阻害されており、ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せではＨＳＶ１７１６またはＭＬＮ８２３７単独と比較して有意に腫瘍成長が阻害されていることを示すグラフである。
【図１７】ＭＬＮ８２３７がＳＫ−Ｎ−ＡＳ異種移植片担持マウスにおいてＩＴｕ  ＨＳＶ１７１６療法を強化することを示すグラフである。ＳＫ−Ｎ−ＡＳ側腹異種移植片を用いた場合の、対照マウス、または、ＨＳＶ１７１６単独、ＭＬＮ８２３７単独、もしくはその組合せで処置したマウスの生存率である。マウス群を図１３のスキーマに従って処置した結果を、ログランク（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）検定により決定したｐ値と共に示した。
【図１８】１×１０７ｐｆｕのＨＳＶ１７１６をＳ４６２ＴＹ異種移植片担持マウスの対照群またはＭＬＮ８２３７処置群にＩＴｕ注射した２時間後および４８時間後時点でのＨＳＶ１７１６力価を示すグラフである。
【図１９】１×１０ｅ７ｐｆｕのＨＳＶ１７１６をＩＴｕ注射した３日後にＳ４６２ＴＹ異種移植片から採取した細胞のＦＡＣＳ解析を行ってＣＤ４５．２＋およびＣＤ１１ｂ＋白血球、好中球（Ｎｅｕ）、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、骨髄由来免疫抑制細胞（ＭＤＳＣ）ならびにＢ細胞を同定した結果を示すグラフである。マウスは、ＰＢＳ、ＭＬＮ８２３７（ＭＬＮ）単独、またはＩＴｕ  ＨＳＶ１７１６単独、またはＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せ（ＭＬＮ＋ＨＳＶ１７１６）のいずれかで処置した。
【図２０】Ｓ４６２ＴＹ細胞の感染３０分後にＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）が細胞内のＨＳＶ１７１６ゲノムを有意に増大させることを示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０１１８】
本発明の１つまたは複数の態様の詳細については、本発明を実施するための本発明者らが企図する最良の形態の具体的な詳細を含めて、実施例により、以下の説明に記載する。本発明がこれらの具体的な詳細に限定されずに実施し得ることは、当業者には明らかであろう。
【０１１９】
オーロラキナーゼ阻害薬およびＨＤＡＣ阻害薬は腫瘍成長を停止させることが報告されている。本発明者らは、腫瘍成長の減衰をもたらすことにより、腫瘍溶解性（ｏｎｃｏｙｔｉｃ）ウイルスにとっては腫瘍細胞を溶解させ腫瘍を首尾よく破壊する機会が増えるのであろうと理解している。
【実施例１】
【０１２０】
目的：腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス（ｏＨＳＶ）および化学療法薬を用いるヒト腫瘍細胞株に対する新規の併用療法の治療効果を、ＭＴＳ細胞生存アッセイを用いて評価すること。
【０１２１】
方法
細胞株
ヒト腫瘍細胞株は、完全培地［１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）］中で生育および培養し、３７℃、５％ＣＯ２にてインキュベートする。
【０１２２】
ＭＴＳ細胞生存アッセイ
細胞は、血球計算盤を使用して計数し、完全培地５０μＬ中、５００細胞／ウェルの濃度で９６ウェルプレートに加える。２４時間のインキュベーションに続いて、細胞を単剤ウイルス（ｓｉｎｇｌｅ  ａｇｅｎｔ  ｖｉｒｕｓ）、小分子シグナル伝達阻害薬、またはその組合せのいずれかで処置した。
【０１２３】
ウイルス試験
単剤ウイルスＭＴＳアッセイを、細胞株において、ある範囲の感染多重度（ＭＯＩ）（０．００１、０．０１、０．１０、１．０）で実施する。細胞をＨＳＶ１７１６に感染させ、感染後０、１、２、４、および６日時点で測定値を読む。ウイルスＭＴＳアッセイは、２０μＬのＭＴＳ色素を各ウェルに加え、続いて、４時間のインキュベーション期間を経てから２５μＬのドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を加えることにより完了する。各プレートは、９６ウェルプレート分光光度計により波長４９０ｎｍでの測定値を読む。
【０１２４】
ＭＴＳ組合せ試験
ウイルス組合せ試験は、単一時点（感染４日後）で腫瘍細胞株においてＨＳＶ１７１６を使用して行う。化学療法剤は、単剤として細胞生存能を２５、５０、および７５％低減させることが過去の実験において確立された阻害濃度（ＩＣ）で、ウイルスと組み合わせて加える。データは、Ｃｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ解析によって解析し相乗作用を決定する。ＭＴＳアッセイおよびＣｈｏｕ−Ｔａｌａｌａｙ解析は、当技術分野で周知の技法である。
【０１２５】
結果
ＨＳＶ１７１６は、単独療法としてもオーロラキナーゼ阻害薬および／またはＨＤＡＣ阻害薬との組合せでもｉｎ  ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞成長の生存能を低減させる。
【実施例２】
【０１２６】
ＨＳＶ１７１６およびオーロラキナーゼＡ阻害薬ＭＬＮ８２３７を悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）および神経芽細胞腫細胞株に用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでの組合せ試験。
【０１２７】
ＭＬＮ８２３７（アリセルチブ）
ＭＬＮ８２３７（Ｔａｋｅｄａ／Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ）は、第二世代のオーロラキナーゼＡ阻害薬である。ＭＬＮ８２３７は、生化学的アッセイにおいてはＩＣ５０値１ｎＭでオーロラキナーゼＡを阻害し、細胞アッセイにおいては、オーロラキナーゼＢと比べてオーロラキナーゼＡに対し２００倍の選択性を有する。受容体およびイオンチャネルの広範なスクリーニングでは、顕著な交差反応性は示されなかった。本化合物は、多種の腫瘍細胞株の成長を１６ｎＭもの低いＧＩ５０値で遮断する。成長阻害は、有糸分裂紡錘体の異常、有糸分裂期にある細胞の蓄積、倍数性、およびアポトーシスに関連する。ＭＬＮ８２３７は経口的に利用可能であり、速やかに吸収される。有効用量では、ヒストンＨ３リン酸化の一時的な阻害（オーロラキナーゼＢ阻害が優勢な場合と合致する）、続いて、ヒストンＨ３リン酸化の著しい亢進（オーロラキナーゼＡ阻害が優勢な場合と合致する）が観察される。ｉｎ  ｖｉｖｏ有効性の最大値は、２０ｍｇ／ｋｇの経口用量を１日２回、連続２１日間与えた場合に多種の異種移植片において達成されているが、他の用法も有効である（Ｄａｒら、Ａｕｒｏｒａ  Ｋｉｎａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ−Ｒｉｓｉｎｇ  Ｓｔａｒｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ？、Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．（２０１０）、９、２６８）。
【０１２８】
悪性末梢神経鞘腫瘍
悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）は、末梢神経、または、神経鞘に関連する細胞、例えばシュワン細胞、神経周囲細胞もしくは線維芽細胞などを発生源とする肉腫である。診断および分類は難しい場合がある。一般には、末梢神経から生じる肉腫または神経線維腫はＭＰＮＳＴであると考えられる。ＭＰＮＳＴという用語は、悪性シュワン細胞腫、神経線維肉腫、および神経原性肉腫を含め、以前使用されていたいくつかの名称に代わるものである。ＭＰＮＳＴは、すべての軟部組織肉腫のおよそ５〜１０％を占め、自発的に起きることもあれば、神経線維腫症１型（ＮＦ１）に伴って起きることもある。
【０１２９】
ＭＰＮＳＴの局所再発と遠隔転移のいずれに関しても、外科的切除が最善の転帰をもたらす。放射線療法は、大半の軟部組織肉腫における局所疾患制御の一貫として不可欠である。広範囲の外科的切除術と共に放射線療法を行うことで、切断術を行った場合と同等の局所生存率および全生存率が得られる。アジュバント放射線療法を用いた軟部組織肉腫の治療では、局所疾患再発率は統計学的に有意に低減しているが、遠隔転移率および全生存率のいずれにおいても、意味のある低減は得られていない（Ｖｒａａら、（１９９８）、Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｓｏｆｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓａｒｃｏｍａｓ：ｔｈｅ  Ａａｒｈｕｓ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ．、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ、３４（（１２））：１８７６〜８２；Ｙａｎｇら、（１９９８）、Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｅｎｅｆｉｔ  ｏｆ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｓｏｆｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｓａｒｃｏｍａｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｘｔｒｅｍｉｔｙ．、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ、１６（（１））：１９７〜２０３）。
【０１３０】
ＭＰＮＳＴでの全生存率は低く、軟部組織肉腫に用いられる通常の化学療法では転帰が改善されない（Ｐｅｒｖａｉｚら、（２００８）、Ａ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｍｅｔａａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｔｒｉａｌｓ  ｏｆ  ａｄｊｕｖａｎｔ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｌｏｃａｌｉｚｅｄ  ｒｅｓｅｃｔａｂｌｅ  ｓｏｆｔ−ｔｉｓｓｕｅ  ｓａｒｃｏｍａ．、Ｃａｎｃｅｒ、１１３（３）：５７３〜５８１）。ＭＰＮＳＴが希少であるということは、化学療法感受性に関して合致するデータが不足していること、ＭＰＮＳＴを用いた第ＩＩ相試験も第ＩＩＩ相試験も特に行われていないことを意味する。
【０１３１】
小児期の軟部組織肉腫
軟部組織肉腫は、２０歳未満の小児に見られる、脳腫瘍、リンパ腫、および癌（主に甲状腺癌およびメラノーマ）に次いで一般的な充実性腫瘍である。成人患者の場合と同様、小児患者にも多種多様な肉腫が発現する。小児において最もよく見られる軟部組織肉腫は、横紋筋肉腫である。過去数十年にわたり、化学療法、外科手術および放射線の併用における進歩により、限局性軟部組織肉腫患者の生存率は、２５％未満からほぼ７０％へと著しく改善されている［Ｐａｐｐｏら（１９９５）、Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１３：２１２３〜２１３９］。しかし、横紋筋肉腫患者の治療においては、いくつかの難題が残っている。転移性疾患は、転帰不良の主要な予測因子であり、併用療法では顕著な打撃を与えられずにいる。
【０１３２】
骨肉腫は、思春期において３番目に多いがんであり、これより発生頻度が高いのは、リンパ腫および脳腫瘍のみである［Ｒｉｅｓら（１９９９）、Ｃａｎｃｅｒ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｍｏｎｇ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ａｎｄ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｓ：Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ＳＥＥＲ  Ｐｒｏｇｒａｍ、１９７５〜１９９５、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＳＥＥＲ  Ｐｒｏｇｒａｍ、ＮＩＨ出版物番号９９−４６４９、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ］。小児および若年成人における２つの最も一般的なタイプは、骨肉腫およびユーイング肉腫である。両タイプについての療法の主流は、外科手術、および患肢温存法であり、大抵はこれらを用いて機能を維持することができる。しかし、これらの手法は、回復および究極的機能という点で重大な病的状態を伴うことがある。診断時に大半の患者において存在するが検出不可能である微小転移疾患を治療するためには、化学療法も必要とされる。ユーイング肉腫の場合の重要な治療として、放射線療法も用いられる。放射線療法は、本質的には骨肉腫患者の選択肢ではなく、その理由は、骨肉腫は一様に放射線に抵抗性だからである。どちらの腫瘍タイプについても、限局性疾患に併用療法を用いた場合の治癒率は、６０〜７０％の範囲である［Ｒｉｅｓら（１９９９）、Ｃａｎｃｅｒ  ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｍｏｎｇ  ｃｈｉｌｄｒｅｎ  ａｎｄ  ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｓ：Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ＳＥＥＲ  Ｐｒｏｇｒａｍ、１９７５〜１９９５、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＳＥＥＲ  Ｐｒｏｇｒａｍ、ＮＩＨ出版物番号９９−４６４９、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ］。ただし、転移または多巣性疾患が生じている患者の予後はきわめて不良であり、長期生存率は３０％未満である。
【０１３３】
神経芽細胞種（Ｎｂ）は、１０歳未満の小児における頭蓋外の充実性腫瘍では最も一般的である。診断年齢の中央値は１７．３カ月であり、患者の４０％は乳幼児の段階で、うち９０％は５歳に満たない年齢で、９７．８％は１０歳までに、診断が確定されている［Ｏｌｓｈａｎ，Ａ．およびＢｕｎｉｎ，Ｇ．（２０００）、Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ．、収録先：Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ（Ｇ．Ｂｒｏｄｅｕｒ、Ｔ．Ｓａｗａｄａ、Ｙ．ＴｓｕｃｈｉｄａおよびＰ．Ｖｏｕｔｅ編）、３３〜３９ページ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ；Ｂｒｏｄｅｕｒ，Ｇ．およびＭａｒｉｓ，Ｊ．（２００１）、Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ．、収録先：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｐ．ＰｉｚｚｏおよびＤ．Ｐｏｐｌａｃｋ編）、８９６〜９３７ページ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ］。残念ながら、高リスクの神経芽細胞腫患者の長期生存率はきわめて不良である。予後不良を特徴付けるリスク因子としては、年齢が１歳を超えていること、疾患のステージが高いこと、ＭＹＣＮ増幅および組織学的に不利であることが挙げられる。心強いことに、高リスクの神経芽細胞腫患者の生存率は、高用量の化学療法、自家幹細胞救済、およびレチノイン酸の使用を通して改善されている［Ｍａｔｔｈａｙら（１９９９）、Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｉｇｈ−ｒｉｓｋ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ，ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ａｎｄ  １３−ｃｉｓ−ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ．、Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’ｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｒｏｕｐ．、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３４１：１１６５〜１１７３］。それにもかかわらず、生存率は５０％未満に留まっている。特に、腫瘍にＭＹＣＮ増幅が見られる場合、ＭＹＣＮ増幅は進行の早さと相関する［Ｓｅｅｇｅｒら（１９８５）、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｃｏｐｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎ−ｍｙｃ  ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ｗｉｔｈ  ｒａｐｉｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａｓ．、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、３１３：１１１１〜１１１６］。
【０１３４】
外科手術、化学療法および放射線を用いた複合的なアプローチの使用により、先述した腫瘍のすべてについて、患者の生存率は、程度の差はあっても改善されている。しかしこれらのモダリティーで得られる最大利益のレベルに本質的にはすでに達してしまっている。
【０１３５】
Ａ：  ＨＳＶ１７１６とオーロラキナーゼ阻害薬ＭＬＮ８２３７との組合せを悪性末梢神経鞘腫瘍細胞株Ｓ４６２ＴＹおよび神経芽細胞腫細胞株ＳＫ−Ｎ−ＡＳに用いる。
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの組合せ  −  Ｃｈｏｕ／Ｔａｌａｌａｙ解析。
【０１３６】
ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せを悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）細胞株Ｓ４６２ＴＹにおいてアセスメントした。毒性は、ＭＴＳ細胞生存アッセイを用い、０、３０、５０、または７０ｎＭのＭＬＮ８２３７とｍｏｉ値０、０．０４５または０．４５のＨＳＶ１７１６とを組み合わせて測定し、その結果を、相乗的相互作用についてＣｈｏｕ／Ｔａｌａｌａｙ法により解析した。ＭＴＳ細胞生存プロファイルを図３に示し、このデータについてＣｈｏｕ／Ｔａｌａｌａｙ解析を行った結果得られたＦａＣＩプロットを図４に示す。ＨＳＶ１７１６をＭＬＮ８２３７と組み合わせると、５／６の組合せでＣＩが１未満となったことから、細胞殺傷性が相乗的に高まる（表２）。
【０１３７】
【表１】
2017515847.tif 000003
【０１３８】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せ
ａ）ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７とをＳ４６２ＴＹヌードマウス異種移植モデルに用いる
Ｓ４６２ＴＹ細胞株によりヌードマウスにおいて側腹異種移植片が容易に形成され、６群のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性試験（ｎ＝１０／群）を、ＨＳＶ１７１６の単回静脈内または腫瘍内注射とＭＬＮ８２３７の経口投与との組合せで実施した。２０ｍｇ／ｋｇのＭＬＮ８２３７またはその担体ビヒクルを、経口強制投与により１日２回、週に５日間の条件で、第０日から４２日間にわたって投与した。１．０×１０７ｐｆｕのＨＳＶ１７１６もしくはＰＢＳの単回腫瘍内（ＩＴｕ）注射、または９．０×１０７ｐｆｕのＨＳＶ１７１６もしくはＰＢＳの単回静脈内（ＩＶ）注射を第７日に施し、腫瘍成長および生存をモニタリングした。
【０１３９】
６つのマウス群は、
・対照（ビヒクル＋ＩＴｕ  ＰＢＳ）
・ＭＬＮ８２３７（＋ＩＴｕ  ＰＢＳ）
・ＨＳＶ１７１６（ＩＴｕ）＋ビヒクル
・ＨＳＶ１７１６（ＩＶ）＋ビヒクル
・ＨＳＶ１７１６（ＩＴｕ）＋ＭＬＮ８２３７
・ＨＳＶ１７１６（ＩＶ）＋ＭＬＮ８２３７
であった。
【０１４０】
ＨＳＶ１７１６の単回腫瘍内投与（図５ａ）は、ヌードマウスにおけるＳ４６２ＴＹ異種移植片の成長を対照処置マウス（ビヒクル＋ＩＴｕ  ＰＢＳ）に比して低減させたが、ＨＳＶ１７１６の単回ＩＶ投与は、腫瘍成長に対して効果がなかった（図５ｂ）。ＭＬＮ８２３７の１日２回投与は、当初は異種移植片の成長の防止に効果的であったが、第３０日以降は腫瘍成長が観察され、ＭＬＮ８２３７処置を第４２日に中止したところ腫瘍成長は増大した（図５ａおよびｂ）。ＨＳＶ１７１６のＩＴｕ（図５ａ）またはＩＶ（図５ｂ）のいずれかによる単回投与とＭＬＮ８２３７の１日２回投与との組合せは、第５０日までは腫瘍成長の防止に高度に効果的であったが、その後、いくらか腫瘍成長の証拠が認められた。評価可能なマウスにおいては、ＩＴｕ  ＨＳＶ１７１６＋ＭＬＮ８２３７の組合せを用いた場合の「臨床」転帰は、１例が疾患進行、４例が部分奏効、および３例が完全奏効であった（表３）。
【０１４１】
ＩＶ  ＨＳＶ１７１６の単回投与をＭＬＮ８２３７と組み合わせた効果は、ＩＶ  ＨＳＶ１７１６単独では腫瘍成長阻害を示さなかったことから特に目立つ（図５ｂ）。評価可能なマウスにおいては、ＩＶ  ＨＳＶ１７１６＋ＭＬＮ８２３７の組合せを用いた場合の「臨床」転帰は、２例が疾患進行、２例が疾患安定、および３例が部分奏効であった（表３）。
【０１４２】
【表２】
2017515847.tif 000004
【０１４３】
ＨＳＶ１７１６の単回ＩＴｕ注射またはＭＬＮ８２３７の１日２回投与でもビヒクル／ＰＢＳ処置対照に比して生存率を改善させたが、組合せでは、劇的かつ高度に有意に生存率を改善させた（図６）。対照または単独処置マウスの大半は第６０日までに犠牲死させた。組合せ処置マウスの大半はこの時点でも生きており、その後も生き続けた。ＨＳＶ１７１６の単回ＩＶ投与は対照処置マウスに比して生存率を改善させなかったが、やはり、単回ＩＶ  ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せでは、劇的かつ高度に有意に生存率を改善させた（図７）。ＩＶ  ＨＳＶ１７１６の投与を受けたマウスの大半は第５０日までに犠牲死されており、ＭＬＮ８２３７の１日２回投与を受けたマウスの大半は第６０日までに犠牲死されていたが、この時点でも組合せ処置マウスの大多数は生きていた。よって、ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せは、ヌードマウスＭＰＮＳＴ異種移植モデルにおいては高度に有効であり、腫瘍成長を効果的に阻害し、生存を有意に延長する。
【０１４４】
Ｂ：ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７とをＳ４６２ＴＹヌードマウス異種移植モデルに用いるが、ここでは、より低用量のＭＬＮ８２３７プラスＨＳＶ１７１６の反復サイクルを用いる。
【０１４５】
Ｓ４６２ＴＹ異種移植片をヌードマウスにおいて形成し、４群のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性試験（ｎ＝１０／群）を、ＨＳＶ１７１６の腫瘍内注射とＭＬＮ８２３７の経口投与との組合せで実施した。１０ｍｇ／ｋｇのＭＬＮ８２３７またはその担体ビヒクルを経口強制投与により１日１回、２日間の無薬期間（ｎｏｎ−ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎｔｅｒｖａｌ）を挟んで５日間ずつ５回別々に投与し、無薬期間には、１×１０７ｐｆｕのＨＳＶ１７１６またはＰＢＳの単回腫瘍内（ＩＴｕ）注射を施した。４群それぞれに用いたスキーマは図８に示すものであり、腫瘍成長および生存率は実験を通じてモニタリングした。
【０１４６】
１週間間隔でのＨＳＶ１７１６の反復腫瘍内投与は、ヌードマウスにおけるＳ４６２ＴＹ異種移植片の成長を対照処置マウス（ビヒクル＋ＩＴｕ  ＰＢＳ）に比して低減させた（図９）。１０ｍｇ／ｋｇのＭＬＮ８２３７を１日１回、各回の間に２日間の無薬期間を挟んで５日間ずつ複数回投与した場合にもＳ４６２ＴＹ異種移植片の成長は低減したが、第１２日以降、ＭＬＮ８２３７単独群およびＨＳＶ１７１６単独群の両方において腫瘍成長が観察された（図９）。ＨＳＶ１７１６の反復ＩＴｕ投与と１０ｍｇ／ｋｇのＭＬＮ８２３７の５日間、単独、１日１回の反復投与との組合せは、個々のマウスについて示す通り、腫瘍成長の防止には高度に効果的であり（図１０）、第２８日時点で行った４群間比較では、組合せ処置の場合に、高度に有意な腫瘍成長の低減が示された（図１１）。ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せの反復投与は、ビヒクル／ＰＢＳ処置対照および単剤のみで処置した群に比して、生存率を有意に改善した（図１２）。対照または単独処置マウスの大半は第３０日までに犠牲死させた。組合せ処置マウスの大多数はこの時点でも生きており、その後も生き続けた。よって、ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せは、ヌードマウスＭＰＮＳＴ異種移植モデルにおいては高度に有効であり、腫瘍成長を効果的に阻害し、生存を有意に延長する。
【０１４７】
ｂ）ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７とをＳＫ−Ｎ−ＡＳヌードマウス異種移植モデルに用いる
ＳＫ−Ｎ−ＡＳ細胞は、低分化の胎児性神経芽細胞腫（ｅｍｂｒｙｏｎａｌ  ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ）を有する小児の脳内に位置している骨髄転移に由来し、この細胞株は、ヌードマウスにおいて側腹異種移植片を容易に形成した。４群のｉｎ  ｖｉｖｏ有効性試験（ｎ＝１０／群）を、ＨＳＶ１７１６の腫瘍内注射とＭＬＮ８２３７の経口投与との組合せで実施した。１０ｍｇ／ｋｇのＭＬＮ８２３７またはその担体ビヒクルを経口強制投与により１日１回、２日間の無薬期間を介在させて５日間ずつ５回別々に投与し、無薬期間には、１×１０７ｐｆｕのＨＳＶ１７１６またはＰＢＳの腫瘍内（ＩＴｕ）注射を施した。４群それぞれに用いたスキーマは図１３に示すものであり、腫瘍成長および生存率は実験を通じてモニタリングした。
【０１４８】
５回行った一週間間隔でのＨＳＶ１７１６の腫瘍内投与は、ヌードマウスにおけるＳＫ−Ｎ−ＡＳ異種移植片の成長を対照処置マウス（ビヒクル＋ＩＴｕ  ＰＢＳ）に比して低減させた（図１４）。１０ｍｇ／ｋｇのＭＬＮ８２３７を１日１回、各回の間に２日間の無薬期間を挟んで５日間ずつ５回投与した場合にもＳＫ−Ｎ−ＡＳ異種移植片の成長は低減したが、第１０日以降、ＭＬＮ８２３７単独群およびＨＳＶ１７１６単独群の両方において腫瘍成長が観察された（図１４）。ＨＳＶ１７１６の反復ＩＴｕ投与と１０ｍｇ／ｋｇのＭＬＮ８２３７の５日間、単独、１日１回の反復投与との組合せは、腫瘍成長の防止には高度に効果的であり（図１４）、腫瘍退縮の証拠が認められる。ＨＳＶ１７１６をＭＬＮ８２３７と組み合わせることによるこの高度に強力な腫瘍成長阻害は、対照群（図１５ａ）について、および、ｉＴｕ  ＨＳＶ１７１６（図１５ｂ）、ＭＬＮ８２３７（図１５ｃ）、またはその組合せ（図１５ｄ）で処置したマウスについて、個々のマウスにおける腫瘍成長に及ぶ効果を比較することによって明らかに認められる。第２１日時点で行った４群間比較では、ＨＳＶ１７１６単独とＭＬＮ８２３７単独の両方について、また、組合せ処置について、いずれかの薬剤単独の場合に比して高度に有意な腫瘍成長の低減が示された（図１６）。
【０１４９】
ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せは、ビヒクル／ＰＢＳ処置対照および単剤のみで処置した群に比して、生存率を有意に改善した（図１７）。対照マウスの大半は第１４日までに犠牲死されており、ＨＳＶ１７１６またはＭＬＮ８２３７単独の投与を受けたマウスはおよそ５０％が第２５日時点で生きていたが、これに対し組合せ処置マウスは第３６日時点で１００％生きていた。この実験は今も継続中である。処置したマウスについての現時点での「臨床」評価は、２例が疾患進行、４例が疾患安定、２例が部分奏効、および２例が完全奏効である。よって、ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せは、ヌードマウス神経芽細胞腫ＳＫ−Ｎ−ＡＳ異種移植モデルにおいては高度に有効であり、腫瘍成長を効果的に阻害し、退縮させ、治癒する。
【０１５０】
ｃ）作用機序試験。
ＭＬＮ８２３７／ＨＳＶ１７１６の組合せがもつ強力に高められた有効性の作用機序を、一連の実験において調査した。この組合せは、いずれかの薬剤を単独で用いた場合に比して、腫瘍細胞の広範な壊死を誘導する。このことは、Ｋｉ６７染色を用いた免疫組織化学試験により示される通りである（データは示していない）。
【０１５１】
この一連の実験は、２つの薬剤を組み合わせた場合の優れた有効性の潜在的な機序に迫るべく、次のようにデザインされた：
１．ＭＬＮ８２３７により誘導される腫瘍静止状態は、ＨＳＶ１７１６をより効率的に伝播させることで、ウイルスが拡散できるより速く腫瘍が成長することがないようにすることが可能である
２．ＭＬＮ８２３７＋ＨＳＶ１７１６は、細胞死の機序を変化させる
３．ＭＬＮ８２３７は、細胞老化により誘導される分泌現象を引き起こし、それにより、死滅していく細胞を貪食するマクロファージの動員が増大する
４．ＭＬＮ８２３７は、ＨＳＶ１７１６により誘導される先天性免疫細胞浸潤を調節する
５．ＭＬＮ８２３７は、ウイルス感受性、寛容性および／または持続性を増大させる
１）最初の実験は、ＭＬＮ８２３７はＨＳＶ１７１６複製を改善しなかったことを示唆する。Ｓ４６２ＴＹ異種移植片を担持するＭＬＮ８２３７処置マウスまたは対照マウス、無処置マウスにＩＴｕ  ＨＳＶ１７１６の投与を受けさせ、ウイルス投与の２時間後および４８時間後に腫瘍を取り出して滴定した（図１８）。ＭＬＮ８２３７処置群におけるウイルス力価は、無処置の対照腫瘍に比して４８時間時点では明らかな増加は認められなかった。興味深いことに、２時間時点で検出されたフリーインプットウイルス（ｆｒｅｅ  ｉｎｐｕｔ  ｖｉｒｕｓ）は、ＭＬＮ８２３７で処置した腫瘍における方が少なかった。
【０１５２】
２）対照マウス、無処置マウスおよびＨＳＶ１７１６処置マウス、ＭＬＮ８２３７処置マウス、およびＨＳＶ１７１６／ＭＬＮ８２３７処置マウスに由来するＳ４６２ＴＹ異種移植片における開裂されたカスパーゼ３についての免疫組織化学的試験により、組合せ処置においては、ＨＳＶ１７１６処置単独またはＭＬＮ８２３７処置単独のいずれに比しても、アポトーシスレベルに明らかな変化は認められなかったことが示唆される。ＨＳＶ１７１６投与の２４時間後、７２時間後、または１週間後時点で切片を調製した。
【０１５３】
３）ＭＬＮ８２３７は、メラノーマにおいてＮＦ−κＢ介在性の細胞老化関連分泌現象を誘導することが示されており（Ｌｉｕら、２０１３、ＥＭＢＯ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ、５：１４９）、潜在的に、ＨＳＶ１７１６と組み合わされると、死細胞および死滅していく細胞を貪食するマクロファージの浸潤数が増大する。老化は、老化関連β−ガラクトシダーゼ（ＳＡ−β−ｇａｌまたはＳＡＢＧ）の基質であるＸ−ｇａｌを用いて検出した。しかし、Ｓ４６２ＴＹ異種移植片において、ＭＬＮ８２３７誘導性の老化の証拠はほとんど認められず、インキュベーション後にＸ−ｇａｌ染色した１８切片中わずか１切片という結果であり（図示せず）、組合せ処置マウス由来の異種移植片中での活性化されたマクロファージ（ＩＢａ１＋）の浸潤の明らかな増加は認められなかった。
【０１５４】
４）ＨＳＶ１７１６単独、ＭＬＮ８２３７単独、またはＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せでの処置に続いて、先天性免疫細胞浸潤を同定するために、Ｓ４６２ＴＹ異種移植片から採取した細胞についてＦＡＣＳ解析を実施した。細胞は、１×１０ｅ７ｐｆｕのＨＳＶ１７１６のＩＴｕ注射の３日後に採取し、ＦＡＣＳ解析を実施して、ＣＤ４５．２＋およびＣＤ１１ｂ＋白血球、好中球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）、骨髄由来抑制因子細胞（ＭＤＳＣ）、およびＢ細胞を同定した（図１９）。ＨＳＶ１７１６単独では、ＣＤ４５．２＋およびＣＤ１１ｂ＋白血球、好中球、およびＭＤＳＣの浸潤の増加をもたらしたが、ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せは、これらのまたは任意の他の先天性免疫細胞の動員において何ら有意な変化をもたらさなかった。
【０１５５】
５）抗ＨＳＶ抗血清を用いた免疫組織化学的試験により、ＭＬＮ８２３７は、ＨＳＶ１７１６の初期の取込み／感染率を大いに強化することが示唆される。ＨＳＶ１７１６＋ビヒクルまたはＨＳＶ１７１６＋ＭＬＮ８２３７で処置したマウス由来のＳ４６２ＴＹ異種移植片切片は、最初の２４時間時点でのウイルス遺伝子発現量において大きな差を示した。ビヒクルで前処理したマウスのみにおいて１×１０ｅ７ｐｆｕのＨＳＶ１７１６のＩＴｕ注射の２４時間後には、ＨＳＶ１７１６タンパク質の小規模な焦点がいくつか産生されただけであったが、その一方、マウスをＭＬＮ８２３７で前処理した場合には、少なくとも５０％の細胞が、ＩＴｕ注射の２４時間後にウイルス抗原を発現する。早期におけるこの大きな取込み／感染率の増加により、７２時間時点では拡散および増殖がはるかに改善され、それによりはるかに高い腫瘍細胞死滅率、ひいては、組合せによる腫瘍成長制御の強化がもたらされる。
【０１５６】
ＭＬＮ８２３７は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＳ４６２ＴＹ細胞によるＨＳＶ１７１６の取込みを改善した。このことは、ウイルスゲノムについての定量ＰＣＲによりアセスメントされた通りである。Ｓ４６２ＴＹ細胞はＨＳＶ１７１６に感染させ、３０分後に酸洗浄を用いて、細胞内に浸透せずにいた残存する遊離ウイルスを除去した。ＨＳＶゲノムについて行ったＱ−ＰＣＲを、ＧＡＰＤＨコピー数を用いて正規化したところ、ＭＬＮ８２３７の存在下で有意に高い取込み／感染率を示した（図２０）。
【０１５７】
興味深いことに、このことは、図１８に提示した結果を説明し得る。図１８は、ＭＬＮ８２３７処置マウスにおいては、ＨＳＶ１７１６のＩＴｕ注射の２時間後に検出された遊離ウイルスがかなり少ないことを示している。しかし、同じ実験において、滴定可能なＨＳＶ１７１６のレベルは＋／−ＭＬＮ８２３７と同等であり、ＭＬＮ８２３７は溶解放出ではなく細胞間での拡散（滴定では検出されない）を促進する可能性がある。
【０１５８】
結論
ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７とは、組み合わせるとＭＰＮＳＴ細胞株Ｓ４６２ＴＹにおいて相乗効果がある。
【０１５９】
ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せは、ヌードマウスＭＰＮＳＴ異種移植モデルにおいて高度に有効であり、腫瘍成長を効果的に阻害し、生存を有意に延長する。
作用機序試験により、ＭＬＮ８２３７は、ＨＳＶ１７１６の初期の取込み／感染率を改善することが示唆される。
【０１６０】
ＨＳＶ１７１６とＭＬＮ８２３７との組合せは、ヌードマウス神経芽細胞腫異種移植モデルにおいて高度に有効であり、腫瘍成長を効果的に阻害し、腫瘍を退縮させ、治癒する。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【国際調査報告】
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