(57)【要約】  本発明は、（ｉ）６員環ヘテロアリールで置換された脂肪酸シスタミン複合体、その組成物、この化合物を用いてオートファジー機能不全が関与する疾患（嚢胞性線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、神経変性疾患、炎症性疾患、肝疾患、筋疾患、感染症、免疫性疾患等）を治療する方法、または（ｉｉ）特発性肺線維症、ミトコンドリア病、リー症候群、難聴を伴う糖尿病（ＤＡＤ）、レーベル遺伝性視神経症、神経障害性運動失調症網膜色素変性症および眼瞼下垂（ＮＡＲＰ）、筋神経胃腸管性脳症（ＭＮＧＩＥ）、赤色ぼろ線維を伴うミオクローヌスてんかん（ＭＥＲＲＦ）もしくはミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群（ＭＥＬＡＳ）の治療方法であって、患者に脂肪酸システアミン複合体である（４Ｚ，７Ｚ．１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサンアミドもしくは（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタンアミドを投与することを含む、方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体の、嚢胞性線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、神経変性疾患、炎症性疾患、肝疾患、筋疾患、感染症および免疫疾患からなる群から選択される疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、前記疾患を治療するために治療有効量の式Ｉの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含み、式Ｉが：
【化１】
2017535579.tif 000110
（式中、
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルを表し；
ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハロゲンおよびアシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールであり；
ｎ＊およびｍ＊は、独立に１、２または３であり；
Ｚ＊は：
【化２】
2017535579.tif 000111
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはハロゲンであり；
ｒは２、３または７であり；
ｓは３、５または６であり；
ｔは０または１であり；
ｖは１、２または６である）である）で表される、方法。
【請求項２】
前記疾患が嚢胞性線維症である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記疾患が特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記疾患が神経変性疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記神経変性疾患が、ハンチントン病、アルツハイマー病またはパーキンソン病である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記被験体がヒトである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
被験体のオートファジーを活性化する方法であって、それを必要とする被験体に、前記被験体のオートファジーを活性化するために有効量の式Ｉ−Ａの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含み、式Ｉ−Ａが：
【化３】
2017535579.tif 000112
（式中、
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルを表し；
ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハロゲンおよびアシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールであり；
ｎ＊およびｍ＊は、独立に２または３であり；
Ｚ＊は：
【化４】
2017535579.tif 000113
（式中、Ｒ１およびＲ２は、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはハロゲンであり；
ｒは２、３または７であり；
ｓは３、５または６であり；
ｔは０または１であり；
ｖは１、２または６である）であり；
但し、Ｚが：
【化５】
2017535579.tif 000114
である場合、ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５またはＲＩ−６のうちの少なくとも１つはＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、あるいはｎ＊またはｍ＊の少なくとも１つは１または３であるか、あるいはＹＩ−１は３−ピリジニルではない）で表される、方法。
【請求項８】
前記投与により、前記被験体の軽鎖３−Ｉ（ＬＣ３−Ｉ）に対する軽鎖３−ＩＩ（ＬＣ３−ＩＩ）の比が少なくとも１０％増加する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記投与により、前記被験体のｐ６２タンパク質の量が少なくとも１％ｗ／ｗ低下する、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
前記被験体が、嚢胞性線維症または特発性肺線維症または神経変性疾患と診断されている、請求項７〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記被験体がヒトである、請求項７〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記化合物が、式Ｉの化合物またはその医薬上許容される塩である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が、式Ｉ−Ａの化合物またはその医薬上許容される塩である、請求項７〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６が、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはメチルである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６が水素である、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ｎ＊が２である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
ｍ＊が２である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＹＩ−１が、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＹＩ−１が、それぞれ、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルまたはピリミジニルである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＹＩ−１が、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
ＹＩ−１がピリジニルである、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
ＹＩ−１が、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい：
【化６】
2017535579.tif 000115
である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＹＩ−１が：
【化７】
2017535579.tif 000116
である、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
Ｚ＊が：
【化８】
2017535579.tif 000117
（式中、Ｒ１およびＲ２は、水素またはメチルである）である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
Ｒ１およびＲ２が水素である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
Ｚ＊が、次に示す：
【化９】
2017535579.tif 000118
うちの１つである、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
同一炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３の対のうちの少なくとも１対が、独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
Ｃ１〜Ｃ３アルキルがそれぞれメチルである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
同一炭素原子に結合しているＲＩ−４およびＲＩ−５の対のうちの少なくとも１対が、独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
Ｃ１〜Ｃ３アルキルがそれぞれメチルである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
ｎ＊が２である、請求項１８〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
ｍ＊が２である、請求項１８〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記化合物が、式Ｉ−Ｂ：
【化１０】
2017535579.tif 000119
（式中、
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハロゲンおよびアシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールであり；
ｓは３、５または６であり；
ｖは１または２である）で表される化合物またはその医薬上許容される塩である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
ＲＩ−１およびＲＩ−６が水素であり、ＹＩ−１が：
【化１１】
2017535579.tif 000120
である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
被験体の、嚢胞性線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、神経変性疾患、炎症性疾患、肝疾患、筋疾患、感染症および免疫疾患からなる群から選択される疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、前記疾患を治療するために治療有効量の式ＩＩＩの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含み、式ＩＩＩが：
【化１２】
2017535579.tif 000121
（式中、
Ｗ１およびＷ２は、独立にＮＲであり；
Ｒは、それぞれ独立に、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、フェニル、ベンジル、−ＣＨ２ＣＯ２Ｒ３、−ＣＨ２ＣＯＮＲ３Ｒ３またはＯＨもしくはハロゲンで置換されていてもよい直鎖もしくは分岐Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５は、独立に、−Ｈ、−Ｄ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよび−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群から選択され；
ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立に、Ｈ、−Ｄ、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲまたはベンジルであるか、あるいは２個のａ、ｂ、ｃおよびｄが、これらが結合している１個の炭素と一緒になって、シクロアルキルまたは複素環を形成していてもよく；
ｎ、ｏ、ｐおよびｑは、それぞれ独立に、０または１であり；
Ｚは、それぞれ独立に：
【化１３】
2017535579.tif 000122
であり、
ｒは、それぞれ独立に、２、３または７であり；
ｓは、それぞれ独立に、３、５または６であり；
ｔは、それぞれ独立に、０または１であり；
ｖは、それぞれ独立に、１、２または６であり；
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｄ、−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ベンジル、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｃ２〜Ｃ３アルケニル、−Ｃ２〜Ｃ３アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｓ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｒ３は、それぞれ独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、あるいは２個のＲ３基が、これらが結合している窒素と一緒になって、複素環を形成していてもよい）で表される、方法。
【請求項３６】
前記疾患が嚢胞性線維症である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記疾患が特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記疾患が神経変性疾患である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
前記神経変性疾患が、ハンチントン病、アルツハイマー病またはパーキンソン病である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
前記被験体がヒトである、請求項３５〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
同一炭素原子に結合している、ａおよびａ、ｂおよびｂ、ｃおよびｃ、ｄおよびｄの対の少なくとも１対がＣ１〜Ｃ３アルキルである、請求項３５〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記Ｃ１〜Ｃ３アルキルがメチルである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記化合物が、次に示す化合物：
【化１４】
2017535579.tif 000123
またはその医薬上許容される塩のうちの１種である、請求項１〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記化合物が、次に示す化合物：
【化１５】
2017535579.tif 000124
またはその医薬上許容される塩である、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記化合物が：
【化１６】
2017535579.tif 000125
である、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記化合物が次に示す化合物：
【化１７】
2017535579.tif 000126
またはその医薬上許容される塩である、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記化合物が：
【化１８】
2017535579.tif 000127
である、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記化合物が、次に示す化合物：
【化１９】
2017535579.tif 000128
またはその医薬上許容される塩である、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
前記化合物が：
【化２０】
2017535579.tif 000129
である、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５０】
式Ｉ−Ａ：
【化２１】
2017535579.tif 000130
（式中、
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルを表し；
ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハロゲンおよびアシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールであり；
ｎ＊およびｍ＊は、独立に２または３であり；
Ｚ＊は：
【化２２】
2017535579.tif 000131
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはハロゲンであり；
ｒは２、３または７であり；
ｓは３、５または６であり；
ｔは０または１であり；
ｖは１、２または６である）であり；
但し、Ｚが：
【化２３】
2017535579.tif 000132
である場合、ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５またはＲＩ−６の少なくとも１つはＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、あるいはｎ＊またはｍ＊の少なくとも１つは１または３であるか、あるいはＹＩ−１は３−ピリジニルではない）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項５１】
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６が、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはメチルである、請求項５０に記載の化合物。
【請求項５２】
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６が水素である、請求項５０に記載の化合物。
【請求項５３】
ｎ＊が２である、請求項５０〜５２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５４】
ｍ＊が２である、請求項５０〜５３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５５】
ＹＩ−１が、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールである、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５６】
ＹＩ−１が、それぞれ、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルまたはピリミジニルである、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５７】
ＹＩ−１が、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルである、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５８】
ＹＩ−１がピリジニルである、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５９】
ＹＩ−１が、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい：
【化２４】
2017535579.tif 000133
である、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６０】
ＹＩ−１が：
【化２５】
2017535579.tif 000134
である、請求項５０〜５４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６１】
Ｚ＊が：
【化２６】
2017535579.tif 000135
（式中、Ｒ１およびＲ２は水素またはメチルである）である、請求項５０〜６０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６２】
Ｒ１およびＲ２が水素である、請求項６１に記載の化合物。
【請求項６３】
Ｚ＊が、次に示す：
【化２７】
2017535579.tif 000136
のうちの１種である、請求項５０〜６０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６４】
同一炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３の対のうちの少なくとも１対が、独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである、請求項５０〜６３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６５】
Ｃ１〜Ｃ３アルキルがそれぞれメチルである、請求項６４に記載の化合物。
【請求項６６】
同一炭素原子に結合しているＲＩ−４およびＲＩ−５の対のうちの少なくとも１対が、独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルである、請求項５０〜６５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６７】
Ｃ１〜Ｃ３アルキルがそれぞれメチルである、請求項６６に記載の化合物。
【請求項６８】
ｎ＊が２である、請求項５５〜６７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６９】
ｍ＊が２である、請求項５５〜６８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７０】
前記化合物が：
【化２８】
2017535579.tif 000137
およびその医薬上許容される塩からなる群から選択される、請求項５０〜６９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７１】
前記化合物が、次に示す化合物：
【化２９】
2017535579.tif 000138
またはその医薬上許容される塩である、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７２】
前記化合物が：
【化３０】
2017535579.tif 000139
である、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７３】
前記化合物が、次に示す化合物：
【化３１】
2017535579.tif 000140
またはその医薬上許容される塩である、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７４】
前記化合物が：
【化３２】
2017535579.tif 000141
である、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７５】
請求項５０〜７４のいずれか一項に記載の化合物および医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項７６】
式ＩＶ：
【化３３】
2017535579.tif 000142
（式中、
Ｗ１は、独立にＮＲであり；
Ｒは、独立に、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、フェニル、ベンジル、−ＣＨ２ＣＯ２Ｒ３、−ＣＨ２ＣＯＮＲ３Ｒ３またはＯＨもしくはハロゲンで置換されていてもよい直鎖もしくは分岐Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５は、独立に、−Ｈ、−Ｄ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよび−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群から選択され；
ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルであり；
Ｚ＊は：
【化３４】
2017535579.tif 000143
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはハロゲンであり；
ｒは２、３または７であり；
ｓは３、５または６であり；
ｔは０または１であり；
ｖは１、２または６である）であり；
ｍ＊は２または３であり；
ｐ＊は１または２であり；
ｏ＊は１または２であり；
ＲＩ−７およびＲＩ−８は、それぞれ独立に、Ｈ、
【化３５】
2017535579.tif 000144
であり、但し、Ｚが：
【化３６】
2017535579.tif 000145
である場合、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５またはＲＩ−６の少なくとも１つはＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、あるいはＲＩ−７およびＲＩ−８は水素ではないか、あるいは（ｉ）ｍ＊または（ｉｉ）ｏ＊およびｐ＊の総和の少なくとも１つは１または３であるか、あるいはＮ含有複素環は３−ピリジニルではない）の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項７７】
前記化合物が、次に示す化合物：
【化３７】
2017535579.tif 000146
Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１７）および：
【化３８】
2017535579.tif 000147
Ｎ−（（Ｓ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１８）
のうちの１種またはその医薬上許容される塩である、請求項７６に記載の化合物。
【請求項７８】
請求項７６または７７に記載の化合物および医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項７９】
被験体の、嚢胞性線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、神経変性疾患、炎症性疾患、肝疾患、筋疾患、感染症および免疫疾患からなる群から選択される疾患を治療する方法であって、それを必要とする被験体に、治療有効量の請求項５０〜７８のいずれか一項に記載の化合物を投与することを含む、方法。
【請求項８０】
前記疾患が嚢胞性線維症である、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記被験体に、アイバカフトール（ＶＸ−７７０）、ルマカフトール（ＶＸ−８０９）、ＶＸ−６６１、オルカンビ（ＶＸ−７７０およびＶＸ−８０９の混合薬）ならびにＶＸ−６６１およびＶＸ−７７０の組合せからなる群から選択される第２治療薬を投与することをさらに含む、請求項１〜４９、７９または８０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８２】
患者の、特発性肺線維症、ミトコンドリア病、リー症候群、難聴を伴う糖尿病（ＤＡＤ）、レーベル遺伝性視神経症、神経障害性運動失調症網膜色素変性症および眼瞼下垂（ＮＡＲＰ）、筋神経胃腸管性脳症（ＭＮＧＩＥ）、赤色ぼろ線維を伴うミオクローヌスてんかん（ＭＥＲＲＦ）およびミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群（ＭＥＬＡＳ）からなる群から選択される疾患を治療する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の：
（ｉ）化合物：
【化３９】
2017535579.tif 000148
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（Ｉ−１）、
（ｉｉ）化合物：
【化４０】
2017535579.tif 000149
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド（Ｉ−２）または
（ｉｉｉ）化合物（ｉ）および（ｉｉ）の組合せ
を投与し、それによって前記疾患を治療することを含む、方法。
【請求項８３】
前記疾患が特発性肺線維症である、請求項８２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願出願は２０１４年１１月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／０８４，７５４号明細書の優先権を主張するものであり、当該明細書の全開示内容を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
【０００２】
本発明は、脂肪酸システアミン複合体、脂肪酸システアミン複合体を含む組成物ならびにオートファジー機能不全に起因する疾患等の疾患を治療するための、この種の複合体および組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
オートファジーは細胞成分の一部を基本的に自己消化するための進化的に保存されたリソソーム分解経路である（Ｌｅｖｉｎｅ  ａｎｄ  Ｋｒｏｅｍｅｒ（２００８）ＣＥＬＬ，１３２，ｐ．２７−４２参照）。この自己消化過程は、外来性または損傷した細胞小器官、不良なタンパク質または折り畳み異常のタンパク質に加えて、侵入微生物さえも細胞から排除するのに役立っている。オートファジーは幾つかの疾患、例えば、嚢胞性線維症においてダウンレギュレートされると考えられている（Ｌｕｃｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＡＵＴＯＰＨＡＧＹ，７，ｐ．１０４−１０６）。
【０００４】
嚢胞性線維症（ＣＦ）は、白人の寿命を短くする常染色体劣性遺伝性疾患の中で最も一般的な疾患の１つと言われている。これは米国において約３０，０００人（全世界で７０，０００人）の小児および成人が罹患している希少疾患であり、毎年約１，０００人の患者が新たに嚢胞性線維症と診断される。この疾患は嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）の突然変異を特徴とし、この突然変異の結果として、肺、膵臓、肝臓および腸における様々な分泌上皮細胞および吸収上皮細胞のＣｌ−イオンを内外へ輸送する能力が失われるかまたは損なわれる（例えば、Ｄｅｒｉｃｈｓ（２０１３）ＥＵＲ．ＲＥＳＰ．ＲＥＶ，２２，ｐ．５８−６５参照）。その結果として、輸送される陰イオンの量が低下し、体液の恒常性が維持できなくなり、肺気道を閉塞し得る濃厚で粘稠な粘液が分泌され、慢性的な炎症および感染症を引き起こす。その結果として肺機能の低下が進行し、疾患が一層重症化すると、患者の平均余命が短くなる。
【０００５】
ＣＦＴＲはｃＡＭＰによって活性化されるＡＴＰ作動性イオンチャネル（ＡＴＰ−ｇａｔｅｄ  ｉｏｎ  ｃｈａｎｎｅｌ）であり、約１，４８０個のアミノ酸から構成されている。このタンパク質は５つの領域から成り立っており、２組の膜貫通領域はそれぞれ６個のαへリックスのスパンを含む。膜貫通領域はそれぞれヌクレオチド結合ドメイン（ＮＢＤ）に結合しており、第１番目のＮＢＤが調節（「Ｒ」）ドメインを介して第２番目の膜貫通領域に結合している。ＣＦＴＲをコードする遺伝子は１９８９年に報告されている（Ｒｏｍｍｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）ＳＣＩＥＮＣＥ，２４５，ｐ．１０５９−１０６５参照）。それ以降、１９００種を超えるＣＦＴＲ遺伝子の配列変異が確認されており、その大部分は次の６クラスのいずれかに分類される：クラスＩ変異はナンセンス突然変異およびフレームシフト突然変異に起因する変異であり、その結果としてＣＦＴＲ量が減少する；クラスＩＩ変異が起こると折り畳みに異常をきたすため、早期に分解されてしまう；クラスＩＩＩ変異が起こるとチャネルゲート開閉が不十分になる；クラスＩＶ変異が起こるとコンダクタンスが変化する；クラスＶ変異が起こると転写がうまくいかず、その結果としてＣＦＴＲの産生量が低下する；クラスＶＩ変異が起こるとチャネル表面におけるＣＦＴＲの代謝回転が速くなる（例えば、Ｒｏｗｎｔｒｅｅ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ（２００３）ＡＮＮ．ＨＵＭ．ＧＥＮＥＴ．，６７，ｐ．４７１−４８５；Ｚｉｅｌｅｎｓｋｉ（２０００）ＲＥＳＰＩＲＡＴＩＯＮ，６７，ｐ．１１７−１３３；およびＭａｃＤｏｎａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．（２００７）ＰＡＥＤＩＡＴＲＩＣ  ＤＲＵＧＳ，９，ｐ．１−１０参照）。
【０００６】
衰弱性のＣＦ症は、当人が欠陥のあるＣＦＴＲの対立遺伝子を２つ（両親から１つずつ）受け継いだ場合に発症する。ＣＦＴＲに関し確認されている１９００種の配列変異の中でも世界的に多く見られるのが次に示す４種の突然変異：Ｇ５５１Ｄ、Ｗ１２８２Ｘ、Ｇ５４２ＸおよびＮ１３０３Ｋであり、それぞれ約１〜３％の頻度で発生する。最も一般的なＣＦＴＲ突然変異はΔＦ５０８突然変異であり（これはクラスＩＩ変異に属し、フェニルアラニンが欠失し、それによってタンパク質が正しく折り畳まれずに、早期に分解されてしまう）、世界の対立遺伝子頻度は約９０％である。ΔＦ５０８欠失突然変異はホモ接合体またはヘテロ接合体のどちらでも発症し得る。
【０００７】
ＣＦの特定の衰弱性症状を抑制するのに有用な幾つかの抗炎症治療および抗感染治療が治療介入研究によって見出されている（例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＣＬＩＮＩＣ  ＲＥＶ．ＡＬＬＥＲＧ．ＩＭＭＵＮＯＬ．，３５，ｐ．１３５−１５３参照）。さらに最近では、欠陥を持つＣＦＴＲに対処するための病態修飾治療が導入されるようになった。ＣＦＴＲ「賦活薬（ｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒ）」は、ＣＦＴＲのチャネルの開確率を上昇させるように設計されたものであり、ゲート開閉異常（クラスＩＩＩ変異）およびコンダクタンス異常（クラスＩＶ変異）を有する膜にのみ利用可能である。アイバカフトール（Ｉｖａｃａｆｔｏｒ）（ＶＸ−７７０）は、ゲート開閉に影響するＧ５５１Ｄ、Ｇ１７８Ｒ、Ｓ５４９Ｎ、Ｓ５４９Ｒ、Ｇ５５１Ｓ、Ｇ１２４Ｅ、Ｓ１２５１Ｎ、Ｓ１２５５Ｐ、Ｇ１３４９Ｄ等の変異を有するＣＦ患者の治療用としてＦＤＡに承認されたＣＦＴＲ賦活薬である（例えば、Ｖａｎ  Ｇｏｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）ＰＮＡＳ，１０６，ｐ．１８８２５−１８８３０参照）。しかし、このようなゲート開閉に影響を及ぼす変異を持つ患者が世界中のＣＦ患者に占める割合はごくわずかである。
【０００８】
ＣＦＴＲ賦活薬以外にも、細胞膜に輸送されるＣＦＴＲの量を増加させるためのＣＦＴＲ「矯正薬」があり、その効力を評価した臨床試験が報告されている。ＶＸ−８０９（ルマカフトール（Ｌｕｍａｃａｆｔｏｒ））はＣＦＴＲ矯正薬であり、ΔＦ５０８変異ホモ接合型のＣＦ患者にアイバカフトールと併用することが最近になってＦＤＡに認可された（例えば、Ｖａｎ  Ｇｏｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＰＮＡＳ，１０８，ｐ．１８８４３−１８８４８およびＲｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．ＣＥＬＬ，２４，ｐ．３０１６−３０２４参照）。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
これまでの努力にも拘わらず、オートファジー機能不全に付随する疾患、例えばＣＦ、特に、既存の療法では治療が困難な突然変異に付随する特定のＣＦを治療するためのさらなる組成物および方法が依然として求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、オートファジーを活性化し、オートファジー機能不全に伴う様々な内科疾患、特に、その障害を持たない者と比較してオートファジーレベルが低下する障害を治療するための方法および組成物を提供する。本発明は、脂肪酸システアミン複合体がオートファジーの活性化に有用であり、脂肪酸システアミン複合体がＣＦ等の様々なヒト疾患の治療に使用できる可能性を見出したことに一部基づいている。本明細書に記載する脂肪酸システアミン複合体は、システアミンまたは脂肪酸を別々に投与するか、または個々の成分の組合せを投与することでは達成できない治療効果を示す。システアミンおよび脂肪酸、例えばオメガ−３脂肪酸を共有結合させることにより、両成分を細胞内の特定の位置に同時に送達することができ、そこで切断（例えば、酵素的切断）されることにより個々の成分がその位置で同時に放出される。
【００１１】
本発明の利点の１つは、脂肪酸システアミン複合体を投与することによって、オートファジーの活性化が、その成分を個々に投与した場合よりも高度に亢進されることにある。さらに、本発明の脂肪酸システアミン複合体は、システアミンを単独で投与する場合または共役していない脂肪酸と組み合わせて投与する場合よりもはるかに低い濃度で投与しても、炎症を相乗的に抑えることができる。したがって、本発明の脂肪酸システアミン複合体は、脂肪酸システアミン複合体を生成するために共役結合される個々の成分を別々に投与（異時投与または同時投与）することでは達成できない複数の利点を提供する。
【００１２】
例示的な脂肪酸システアミン複合体を一般的および具体的な化学式を用いて本明細書に記載する。例えば、本発明は、式Ｉ：
【化１】
2017535579.tif 000002
（式中の置換基記号および変数（ｖａｒｉａｂｌｅ）は以下の詳細な説明において定義する）に包含される脂肪酸システアミン複合体の一群またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１３】
同じく本発明は、式ＩＡ：
【化２】
2017535579.tif 000003
（式中、置換基記号および変数は以下の詳細な説明において定義する）に包含される脂肪酸システアミン複合体の一群またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１４】
同じく本発明は、式ＩＢ：
【化３】
2017535579.tif 000004
（式中、置換基記号および変数は以下の詳細な説明において定義する）に包含される脂肪酸システアミン複合体の一群またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１５】
同じく本発明は、式ＩＩＩ：
【化４】
2017535579.tif 000005
（式中、置換基記号および変数は以下の詳細な説明において定義する）に包含される脂肪酸システアミン複合体の一群またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１６】
同じく本発明は、式ＩＶ：
【化５】
2017535579.tif 000006
（式中、置換基記号および変数は以下の詳細な説明において定義する）に包含される脂肪酸システアミン複合体の一群またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供する。
【００１７】
さらなる一般式および具体的な脂肪酸シスタミン複合体を、詳細な説明および実施例において説明する。
【００１８】
本発明の他の態様は、本明細書に記載する、ＣＦ、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、神経変性疾患、炎症性疾患、肝疾患、筋疾患、感染症、ミトコンドリア病、免疫疾患等の疾患を治療する方法を提供する。この方法は、その疾患の治療を必要とする被験体に、治療有効量の本明細書に記載する式Ｉの化合物等の脂肪酸システアミン複合体を投与することを含む。神経変性疾患としては、例えば、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病および伝達性海綿状脳症が挙げられる。特定の実施形態において、治療すべき疾患はＣＦである。特定の実施形態において、治療すべき疾患はＩＰＦである。
【００１９】
本発明の他の態様は、被験体のオートファジーを活性化させる方法を提供する。この方法は、それを必要とする被験体に、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶの各化合物等の本明細書に記載する脂肪酸システアミン複合体を、被験体のオートファジーを活性化するのに有効な量で投与することを含む。特定の実施形態において、被験体は、ＣＦ、神経変性疾患または炎症性疾患に罹患している。
【００２０】
脂肪酸システアミン複合体（例えば、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＶの複合体）および医薬上許容される担体を含む医薬組成物が提供される。本発明の組成物はオートファジーを活性化することによって疾患を治療するのに有用である。
【００２１】
以下に本発明の様々な態様および実施形態をより詳細に説明する。本明細書に記載する方法および材料に類似するかまたは均等な方法および材料を本発明の実施または試験に使用することができるが、例示的な方法および材料をここに記載する。本発明の他の特徴、目的および利点は記載内容および特許請求の範囲から明らかになるであろう。本明細書および添付の特許請求の範囲において、文脈上明確に指示されていない限り、単数形は複数形も包含する。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１Ａ】化合物ＩＩ−２で処理したＨｕｈ−７細胞のイムノブロットである。
【図１Ｂ】化合物ＩＩ−２（濃度２５μＭ）で処理したＨｕｈ−７細胞のＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比を表す棒グラフである。
【図２Ａ】シスタミン、エイコサペンタエン酸（「ＥＰＡ」）、シスタミンおよびＥＰＡの組合せまたは化合物ＩＩ−２に２時間曝露した後のＨｕｈ−７細胞のイムノブロットである。
【図２Ｂ】シスタミン、ＥＰＡ、シスタミンおよびＥＰＡの組合せまたは化合物ＩＩ−２で処理したＨｕｈ−７細胞のＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比を表す棒グラフである。
【図２Ｃ】溶媒または化合物ＩＩ−３のいずれかと一緒に２４時間インキュベートしたＨＴ−２９細胞のＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比に基づきオートファジーの亢進を示す棒グラフである。
【図２Ｄ】溶媒または化合物ＩＩ−３のいずれかと一緒に２４時間インキュベートしたＨＴ−２９細胞における細胞膜上（ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ）ＣＦＴＲの対応する増加を示す棒グラフである。
【図２Ｅ】溶媒、ＩＶ−１またはＩＶ−１と一緒に２４時間インキュベートしたＨＴ−２９細胞における細胞膜上ＣＦＴＲの対応する増加を表す棒グラフである。
【図３Ａ】シスタミン（２５０μＭ）、ＥＰＡ（２５０μＭ）、シスタミンおよびＥＰＡ（各２５０μＭ）または化合物ＩＩ−２（５０μＭ）で処理したＨｕｈ−７細胞のイムノブロットである。
【図３Ｂ】ＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比を表す棒グラフである。
【図４】（１）溶媒対照群；（２）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）；（３）シスタミン（２５μＭ）；（４）ＤＨＡ（２５μＭ）；（５）シスタミン（２５μＭ）およびＤＨＡの組合せ；（６）シスタミン（２５０μＭ）；（７）ＤＨＡ（２５０μＭ）；ならびに（８）シスタミン（２５０μＭ）およびＤＨＡ（２５０μＭ）の組合せで２４時間処理したＨＴ−２９のＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比を表す棒グラフである。
【図５Ａ】１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；２）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）の組合せ；３）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）の組合せ；４）化合物ＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）の組合せと一緒に２４時間インキュベートした初代ＣＦ細胞の（ΔＦ５０８のホモ接合体）のＣＦＴＲのバンドＣのデータを示す棒グラフである。
【図５Ｂ】（１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（２）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）の組合せ；（３）化合物Ｉ−１（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）の組合せ；および（４）化合物Ｉ−１（１０μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）の組合せと一緒に２４時間インキュベートした初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体）のＣＦＴＲのバンドＣのデータを示す棒グラフである。
【図５Ｃ】（１）溶媒対照群；（２）シスタミン（２５μＭ）；（３）ＤＨＡ（２５μＭ）；（４）シスタミン（２５μＭ）およびＤＨＡ（２５μＭ）の組合せ；（５）シスタミン（２５０μＭ）；（６）ＤＨＡ（２５０μＭ）；（７）シスタミン（２５０μＭ）およびＤＨＡ（２５０μＭ）の組合せ；ならびに（８）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）と一緒に２４時間インキュベートした初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体）のＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比を表す棒グラフである。
【図５Ｄ】（１）溶媒対照群；（２）シスタミン（２５μＭ）；（３）ＤＨＡ（２５μＭ）；（４）シスタミン（２５μＭ）およびＤＨＡ（２５μＭ）の組合せ；（５）シスタミン（２５０μＭ）；（６）ＤＨＡ（２５０μＭ）；（７）シスタミン（２５０μＭ）およびＤＨＡ（２５０μＭ）の組合せ；ならびに（８）化合物Ｉ−１（２５μＭ）と一緒に２４時間インキュベートした初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体）のＣＦＴＲのバンドＣ／アクチン比を表す棒グラフである。
【図５Ｅ】（１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（２）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（３）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；および（４）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）で処理した初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体）のＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比を表す棒グラフである。
【図５Ｆ】（１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（２）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（３）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；および（４）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）で処理した初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体）のＢｅｃｌｉｎ−１／アクチン比を表す棒グラフである。
【図５Ｇ】（１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（２）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（３）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；および（４）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）で処理した初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体）のｐ６２／アクチン比を表す棒グラフである。
【図５Ｈ】（１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（２）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（３）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；および（４）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）で処理した初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体）のＣＦＴＲのバンドＣのデータを表す棒グラフである。
【図６】化合物ＩＩ−２（１０μＭ）で、４時間で処理したフィッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ）ラット甲状腺細胞（ＦＲＴ）／ΔＦ５０８  ＣＦＴＲ上皮の反応を示すグラフである（陽性対照としてＶＸ−８０９（３μＭ）を使用）。
【図７Ａ】（１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（２）化合物ＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（３）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）（陽性対照群）；および（４）化合物ＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）で２４時間処理したＦＲＴ細胞に発生した短絡電流（ＩＩＳＣ）の波形を示すグラフである。短絡電流はウッシング・チャンバ・アッセイ（Ｕｓｓｉｎｇ  ｃｈａｍｂｅｒ  ａｓｓａｙ）にて発生させた。
【図７Ｂ】図７Ａに示す波形におけるフォルスコリン添加後の定常状態の反応をΔＩＳＣ（μＡ／ｃｍ２）として定量化した棒グラフである。
【図７Ｃ】図７Ａに示す波形におけるフォルスコリン添加後の定常状態の反応を対照に対する％として定量化した棒グラフである。
【図７Ｄ】図７Ａに示す波形におけるＣＦＴＲｉｎｈ−１７２添加後の定常状態の反応をΔＩＳＣ（μＡ／ｃｍ２）として定量化した棒グラフである。
【図７Ｅ】図７Ａに示す波形におけるＣＦＴＲｉｎｈ−１７２添加後の定常状態の反応を対照に対する％として定量化した棒グラフである。
【図８Ａ】（１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（２）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）（陽性対照群）；および（３）化合物ＩＩ−３（１μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）と一緒に２４時間インキュベートした初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８ホモ接合体）に発生した短絡電流（ＩＩＳＣ）の波形を示すグラフである。短絡電流はウッシング・チャンバ・アッセイにて発生させた。
【図８Ｂ】図８Ａに示す波形におけるフォルスコリン添加後の定常状態の反応をΔＩＳＣ（μＡ／ｃｍ２）として定量化した棒グラフである。
【図８Ｃ】図８Ａに示す反応全体の波形の曲線下面積（ＡＵＣ）を測定し、対照に対する％として定量化した棒グラフである。
【図９Ａ】（１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；（２）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）（陽性対照群）；（３）化合物Ｉ−１（１μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）と一緒に２４時間インキュベートした初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８ホモ接合体）に発生した短絡電流（ＩＩＳＣ）の波形を示すグラフである。短絡電流はウッシング・チャンバ・アッセイにて発生させた。
【図９Ｂ】図９Ａに示す波形のフォルスコリン添加後の定常状態の反応を、ΔＩＳＣ（μＡ／ｃｍ２）を測定することにより定量化した棒グラフである。
【図９Ｃ】図９Ａに示す反応全体の波形の曲線下面積（ＡＵＣ）を測定し、対照に対する％として表すことにより定量化した棒グラフである。
【図１０】シュードモナ・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に感染させる前に化合物ＩＩ−３（２５μＭ）で前処理したヒト気管支上皮細胞における細菌の細胞内濃度（単位：コロニー形成単位（「ＣＦＵ」）／ｍＬ）の低下を示す棒グラフである。陽性対照には、細胞膜透過性の抗生物質（ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ）であるサイトカラシン−Ｄを用いた。
【図１１Ａ】ラット血漿またはマウス血漿のいずれかと一緒に０、０．５、１および２時間インキュベートした後に残存している親化合物ＩＩ−２の％を示す棒グラフである。
【図１１Ｂ】ラット血漿またはマウス血漿のいずれかと一緒に０、０．５、１および２時間インキュベートした後に残存している親化合物ＩＩ−３の％を示す棒グラフである。
【図１２】化合物ＩＩ−３で、３．５日間（１００ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＤ、ｐｏ）で処理したナイーブＢＡＬＢ／ｃマウスの肺組織のオートファジー活性化レベル（２２％上昇）を示す棒グラフである。
【図１３Ａ】化合物ＩＩ−３（２５μＭ）または化合物Ｉ−１（２５μＭ）で処理した正常ヒト肺線維芽細胞（ＮＬＦ）または特発性肺線維症の細胞（ＬＬ２９およびＬＬ７９Ａ）の、ＰＢＳ処理またはＴＧＦβ刺激下のいずれかにおける、コラーゲン１ａ１（ＣＯＬ１ａ１）のｍＲＮＡ発現量を示す棒グラフである。
【図１３Ｂ】化合物ＩＩ−３（２５μＭ）または化合物Ｉ−１（２５μＭ）で処理した正常ヒト肺線維芽細胞（ＮＬＦ）または特発性肺線維症の細胞（ＬＬ２９およびＬＬ７９Ａ）の、ＰＢＳ処理またはＴＧＦβ刺激下のいずれかにおける、フィブロネクチン１（ＦＮ１）のｍＲＮＡ発現量を示す棒グラフである。
【図１３Ｃ】化合物ＩＩ−３（２５μＭ）または化合物Ｉ−１（２５μＭ）で処理した正常ヒト肺線維芽細胞（ＮＬＦ）または特発性肺線維症の細胞（ＬＬ２９およびＬＬ７９Ａ）の、ＰＢＳ処理またはＴＧＦβ刺激下のいずれかにおける、ＴＩＭＰ−２のｍＲＮＡ発現量を示す棒グラフである。
【図１４Ａ】溶媒または化合物ＩＩ−３（２５μＭ）のいずれかで処理したＮＬＦ、ＬＬ２９またはＬＬ９７Ａ細胞のＴＩＭＰ−２の基底レベル（ＰＢＳ処理）を示す棒グラフである。
【図１４Ｂ】溶媒または化合物ＩＩ−３（２５μＭ）のいずれかで処理したＮＬＦ、ＬＬ２９またはＬＬ９７Ａ細胞の、ＴＧＦβ刺激下におけるＴＩＭＰ−２の発現量を示す棒グラフである。
【図１５Ａ】溶媒または化合物ＩＩ−３（２５μＭ）のいずれかで処理したＮＬＦ、ＬＬ２９またはＬＬ９７Ａ細胞のＭＭＰ−２の基底レベル（ＰＢＳ処理）を示す棒グラフである。
【図１５Ｂ】溶媒または化合物ＩＩ−３（２５μＭ）のいずれかで処理したＮＬＦ、ＬＬ２９またはＬＬ９７Ａ細胞の、ＴＧＦβ刺激下における、ＭＭＰ−２の発現量を示す棒グラフである。
【図１６Ａ】溶媒または化合物ＩＩ−３（２５μＭ）のいずれかで処理したＴＨＰ−１細胞におけるＴＮＦ−αのｍＲＮＡ発現量を示す棒グラフである。
【図１６Ｂ】溶媒または化合物ＩＩ−３（２５μＭ）のいずれかで処理したＴＨＰ−１細胞におけるＩＬ−１βのｍＲＮＡ発現量を示す棒グラフである。
【図１６Ｃ】溶媒または化合物ＩＩ−３（２５μＭ）のいずれかで処理したＴＨＰ−１細胞におけるＣＣＬ２のｍＲＮＡ発現量を示す棒グラフである。
【図１７】溶媒または化合物ＩＩ−２およびＩＩ−３（各２５μＭ）のいずれかで処理した初代ＣＦ細胞のＣＦＴＲのバンドＣ／アクチン比を示す棒グラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明は、オートファジーを活性化し、様々な内科疾患、特にオートファジー機能不全に伴う疾患を治療するための方法および組成物を提供する。本発明は、脂肪酸システアミン複合体がオートファジーの活性化に有用であり、様々なヒト疾患、例えばＣＦの治療または予防に使用できる可能性を見出したことに一部基づいている。本明細書に記載する脂肪酸システアミン複合体は、システアミンもしくは脂肪酸を別々に投与するかまたは個々の成分の組合せとして投与することでは達成できない治療効果を示す。システアミンおよびオメガ−３脂肪酸を共有結合させることにより、両成分を所定の位置に同時に送達することが可能になり、そこで切断（例えば、酵素的切断）されることにより、個々の成分がその位置で同時に放出される。本発明の利点は、脂肪酸システアミン複合体を投与することにより、成分を個々に投与することによって達成できるレベルよりも高度にオートファジーが活性化されることにある。さらに、脂肪酸システアミン複合体を投与すると、システアミンを単独で投与するかまたは共役していない脂肪酸を組み合わせて投与するよりもはるかに低い濃度で、炎症を相乗的に低下させることができる。その結果として、脂肪酸システアミン複合体は、脂肪酸システアミン複合体を生成させるために共役される個々の成分を別々に投与（異時投与または同時投与のいずれか）することでは達成できない複数の利点をもたらす。本明細書に記載する脂肪酸システアミン複合体および治療方法はＣＦの治療に特に有利であると考えられている。
【００２４】
ＣＦは、米国において約３０，０００人が罹患している希少疾患である。これは、欠陥を持つＣＦＴＲ（上皮細胞膜を介してＣｌ−イオンを輸送するイオンチャネル）を発現させる遺伝子変異に伴う衰弱性の疾患である。ＣＦ患者はオートファジーレベルに不具合があるかまたは低下することが示されている。オートファジーは進化的に保存されたリソソーム分解経路であり、外来性または損傷した細胞小器官、不良なタンパク質または折り畳み異常のタンパク質に加えて、侵入微生物さえも細胞から排除することを助けている。オートファジーの活性化が欠陥ＣＦＴＲの機能回復に有用である可能性が示されている。
【００２５】
オートファジーを活性化することは、ＣＦ以外の様々な疾患、例えば、細胞、組織、細胞小器官、器官のオートファジーが低下することに伴う疾患の治療にも有用であると考えられている。この種の疾患としては、例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、肺高血圧症（ＰＨ）、神経変性疾患、肝疾患、筋疾患、心疾患、代謝疾患、感染症、免疫疾患および炎症性疾患が挙げられる。肺高血圧症としては、肺動脈性肺高血圧症（ＷＨＯ分類第Ｉ群、特発性ＰＨ、遺伝性ＰＨおよび薬物／毒物誘発性ＰＨ）、収縮機能障害または拡張機能障害、心臓弁膜症に起因する肺高血圧症（ＷＨＯ分類第ＩＩ群）およびＷＨＯ分類第ＩＩＩ〜Ｖ群を含む他に分類される肺高血圧症が挙げられる。肝疾患としては、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、ＮＡＳＨ肝硬変および肝細胞癌（ＨＣＣ）が挙げられる。脂肪酸システアミン複合体を用いて治療することができる代謝疾患の例としては、ＣＦ患者に頻発する２型糖尿病が挙げられる。神経変性疾患としては、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病および伝達性海綿状脳症が挙げられる。オートファジー回復療法は、Ｖｉｃｉ症候群、サルコペニア、筋ジストロフィー等の疾患にも有用な可能性がある。筋ジストロフィーには複数の病型があり、その中で最も多く見られるデュシェンヌ型筋ジストロフィー等がある。筋ジストロフィーの他の病型としては、ベッカー型、肢帯型、先天性、顔面肩甲上腕型、筋強直性、眼咽頭型、遠位型およびエメリ・ドレフュス型筋ジストロフィーがある。オートファジーに不具合がある他の疾患としては、加齢黄斑変性、ダノン病、Ｘ連鎖性ミオパチー、乳児型自己貪食空胞性ミオパチー、成人発症型空胞性ミオパチー（ａｄｕｌｔ  ｏｎｓｅｔ  ｖａｃｕｏｌａｒ  ｍｙｏｐａｔｈｙ）、ポンペ病、封入体筋炎、肢帯型筋ジストロフィー２Ｂ型および三好型ミオパチーが挙げられる。脂肪酸システアミン複合体はまた、ミトコンドリア病、例えば、リー症候群、難聴を伴う糖尿病（Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ  ａｎｄ  Ｄｅａｆｎｅｓｓ）（ＤＡＤ）、レーベル遺伝性視神経症、神経障害性運動失調症網膜色素変性症および眼瞼下垂（Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ−ａｔａｘｉａ−ｒｅｔｉｎｉｓ  ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ  ａｎｄ  ｐｔｏｓｉｓ（ＮＡＲＰ）、筋神経胃腸管性脳症（ｍｙｏｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ）（ＭＮＧＩＥ）、赤色ぼろ線維を伴うミオクローヌスてんかん（ＭＥＲＲＦ）およびミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群（ＭＥＬＡＳ）の治療にも有用な可能性がある。システアミンは細胞内で放出されるので、本発明の化合物は、リソソーム代謝異常症、腎性シスチン症の治療に使用することもできる。
【００２６】
特に断りのない限り、本発明の実施には、有機化学、細胞生物学、生化学、薬理学、配合および薬物送達の従来技術を用いる。明瞭化のために、本発明の様々な態様を以下に示す複数の項において説明するが、ある特定の項に記載する本発明の態様が他の任意の特定の項を限定するものではないことを理解されたい。
【００２７】
Ｉ．定義
本発明の理解を促すために、幾つかの用語および語句を以下に定義する。
【００２８】
本開示において使用する「１の（ａ、ａｎ）」という冠詞は、文脈上不適切でない限り、その冠詞を伴う文法上の対象語（ｇｒａｍｍａｔｉｃａｌ  ｏｂｊｅｃｔ）が１または１を超える（すなわち少なくとも１である）ことを指す。一例として、「１つの構成要素（ａｎ  ｅｌｅｍｅｎｔ）」は１つの構成要素または１つを超える構成要素を意味する。
【００２９】
本開示において使用する「および／または」という語は、特に断りのない限り「および」または「または」のいずれかを意味する。
【００３０】
本明細書において使用する「アルキル」という語は、１〜１２、１〜１０、または１〜６個の炭素原子を有する直鎖基または分岐基（本明細書において、それぞれＣ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０アルキルおよびＣ１〜Ｃ６アルキルと称する）等の飽和の直鎖または分岐の炭化水素を指す。アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、２−メチル−１−プロピル、２−メチル−２−プロピル、２−メチル−１−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−３−ブチル、２，２−ジメチル−１−プロピル、２−メチル−１−ペンチル、３−メチル−１−ペンチル、４−メチル−１−ペンチル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、２，２−ジメチル−１−ブチル、３，３−ジメチル−１−ブチル、２−エチル−１−ブチル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル等が挙げられる。
【００３１】
「Ｃ１〜Ｃ３アルキル」という語は、１〜３個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ３アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピルおよびイソプロピルが挙げられる。「Ｃ１〜Ｃ４アルキル」という語は、１〜４個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ４アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチルが挙げられる。「Ｃ１〜Ｃ５アルキル」という語は、１〜５個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ５アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルおよびネオペンチルが挙げられる。「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」という語は１〜６個の炭素原子を含む直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素を指す。Ｃ１〜Ｃ６アルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルおよびネオペンチルが挙げられる。
【００３２】
「シクロアルキル」という語は、３〜６個の炭素原子を有するもの等の環状飽和炭化水素を指す。シクロアルキルは、３〜１２個、３〜８個、４〜８個または４〜６個の環員炭素原子を有する（本明細書においては、例えば、「Ｃ４〜８シクロアルキル」と称する）。シクロアルキル基の例としては、これらに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。特に指定のない限り、シクロアルキル上の置換可能な水素はいずれもハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基、ヒドロキシル基、アルコキシ基およびシアノ基で置換できることが理解されよう。特定の実施形態において、シクロアルキルは無置換である。
【００３３】
特に断りのない限り、「アリール」という語は、１〜２個の単環式または二環式基（フェニル、ビフェニル、ナフチル等）等の芳香環を有する芳香族炭素環式炭化水素基を指す。アリール基が２個の芳香環を含む場合（二環式等）、これらの芳香環は１箇所で結合していても（例えば、ビフェニル）、あるいは縮合していても（例えば、ナフチル）よい。アリール基は、任意の結合可能部位が、１個または２個以上の置換基、例えば、１〜５個の置換基で置換されていてもよく、そのような置換基としては、例えば、ハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、カルボン酸、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−ＣＯ２アルキル、カルボニル、カルボキシル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、アリール部分またはヘテロアリール部分、ＣＦ３、−ＣＮ等が挙げられる。他の特定の実施形態において、芳香環は置換されていない、すなわち無置換である。特定の実施形態において、アリール基は６〜１０員環構造を有する。特定の実施形態において、アリール基は６〜１０員環の炭素環構造を有する。
【００３４】
「アラルキル」という語はアリール基で置換されたアルキル基を指す。
【００３５】
「ヘテロシクリル」および「複素環式基」という語は当該技術分野において承認されており、環構造が１〜４個の窒素、酸素、硫黄等のヘテロ原子を含む、飽和、一部不飽和または芳香族の３〜１０員環構造、あるいは３〜７員環を指す。ヘテロシクリル基の環員原子の数は、Ｃｘ〜Ｃｘ命名法（ｘは環員原子の数を規定する整数である）を用いて規定することができる。例えば、Ｃ３〜Ｃ７ヘテロシクリル基は、１〜４個の窒素、酸素、硫黄等のヘテロ原子を含む飽和または一部不飽和の３〜７員環構造を指す。「Ｃ３〜Ｃ７」という呼称は、複素環が全体で３〜７個の環員原子を含む（環員原子の位置に位置する任意のヘテロ原子を含む）ことを表す。Ｃ３ヘテロシクリルの一例がアジリジニルである。複素環はまた、単環、二環または多環系とすることができる。複素環は、１個または２個以上のアリール、一部不飽和環または飽和環と縮合することができる。ヘテロシクリル基としては、例えば、ビオチニル、クロメニル、ジヒドロフリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジチアゾリル、ホモピペリジニル、イミダゾリジニル、イソキノリル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オキソラニル、オキサゾリジニル、フェノキサンテニル（ｐｈｅｎｏｘａｎｔｈｅｎｙｌ）、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリジン−２−オニル、ピロリニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロイソキノリル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリル、チアゾリジニル、チオラニル、チオモルホリニル、チオピラニル、キサンテニル、ラクトン、ラクタム（アゼチジノン、ピロリジノン等）、スルタム、スルトン等が挙げられる。特に指定のない限り、複素環は、１または２以上の位置が、アルカノイル、アルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミジノ、アミノ、アリール、アリールアルキル、アジド、カルバメート、カーボネート、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、イミノ、ケトン、ニトロ、オキソ、ホスフェート、ホスホナト、ホスフィナト、サルフェート、スルフィド、スルホンアミド、スルホニル、チオカルボニル等の置換基で置換されていてもよい。特定の実施形態においては、ヘテロシクリル基は置換されていない、すなわち無置換である。
【００３６】
「ヘテロアリール」という語は当該技術分野において承認されており、少なくとも１個の環員ヘテロ原子を含む芳香族基を指す。特定の実施形態において、ヘテロアリール基は、１、２、３または４個の環員ヘテロ原子を含む。代表的なヘテロアリール基の例としては、ピロリル、フラニル、チオフェニル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、トリアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル等が挙げられる。特に指定のない限り、ヘテロアリール環は、環上の１または２以上の位置が、例えば、ハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、カルボン酸、−Ｃ（Ｏ）アルキル、−ＣＯ２アルキル、カルボニル、カルボキシル、アルキルチオ、スルホニル、スルホンアミド、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロシクリル、アリール部分またはヘテロアリール部分、−ＣＦ３、−ＣＮ等で置換されていてもよい。「ヘテロアリール」という語は、２個以上の炭素を２個の隣接する環で共有しており（この環は「縮合環」である）、環の少なくとも１個が複素芳香族であり、例えば、他の環が、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニルおよび／またはアリールであってもよい、２個以上の環を有する多環系も包含する。特定の実施形態において、ヘテロアリール環は、環上の１または２以上の位置がハロゲン、アルキル、ヒドロキシルまたはアルコキシルで置換されている。他の特定の実施形態において、ヘテロアリール環は置換されていない、すなわち無置換である。特定の実施形態において、ヘテロアリール基は５〜１０員環構造を有するか、あるいは５〜６員環構造を有し、これらの環構造は１、２、３または４個の窒素、酸素、硫黄等のヘテロ原子を含む。
【００３７】
本明細書において使用される「アルケニル」という語は、２〜１２個、２〜１０個または２〜６個の炭素原子を有する直鎖基または分岐基（本明細書においては、それぞれＣ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１０アルケニルおよびＣ２〜Ｃ６アルケニルと称する）等の、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する不飽和の直鎖または分岐炭化水素を指す。アルケニル基の例としては、ビニル、アリル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ブタジエニル、ペンタジエニル、ヘキサジエニル、２−エチルヘキセニル、２−プロピル−２−ブテニル、４−（２−メチル−３−ブテン)−ペンテニル等が挙げられる。
【００３８】
本明細書において使用される「アルキニル」という語は、２〜１２個、２〜１０個または２〜６個の炭素原子を有する直鎖基または分岐基（本明細書においてはそれぞれＣ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ２〜Ｃ１０アルキニルおよびＣ２〜Ｃ６アルキニルと称する）等の、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を有する不飽和の直鎖または分岐炭化水素を指す。アルキニル基の例としては、エチニル、プロプ−１−イン−１−イルおよびブト−１−イン−１−イルが挙げられる。
【００３９】
「アミン」および「アミノ」という語は当該技術分野において承認されており、無置換アミンおよび置換アミンの両方、例えば、一般式−Ｎ（Ｒ５０）（Ｒ５１）（式中、Ｒ５０およびＲ５１は、それぞれ独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アルケニル、アリール、アラルキルまたは（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表すか；あるいはＲ５０およびＲ５１は、これらが結合しているＮ原子と一緒になって、環構造内に４〜８個の原子を有する複素環を形成し；Ｒ６１は、アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、複素環または多環を表し；ｍはゼロまたは１〜８の範囲の整数である）で表される部分を指す。特定の実施形態において、Ｒ５０およびＲ５１は、それぞれ独立に、水素、アルキル、アルケニルまたは−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１を表す。
【００４０】
「アルコキシル」または「アルコキシ」という語は当該技術分野において承認されており、上に定義したアルキル基に酸素基が結合したものを指す。代表的なアルコキシル基としては、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ等が挙げられる。「エーテル」は、２つの炭化水素が酸素により共有結合したものである。したがって、アルキルをエーテルにする該アルキルの置換基は、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルケニル、Ｏ−アルキニル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ６１（式中、ｍおよびＲ６１は上記と同義である）のうちの１つで表すことができるものなどのアルコキシルまたはこれに類するものである。
【００４１】
本明細書において使用される「カルバメート」という語は、−ＲｇＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｈ）−、−ＲｇＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒｈ）Ｒｉ−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲｈＲｉ−（式中、Ｒｇ、ＲｈおよびＲｉは、それぞれ独立に、アルコキシ、アリールオキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アミド、アミノ、アリール、アリールアルキル、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ハロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、ケトン、ニトロ、スルフィド、スルホニルまたはスルホンアミドである）の形態の基を指す。カルバメートの例としては、アリールカルバメートおよびヘテロアリールカルバメート、例えば、Ｒｇ、ＲｈおよびＲｉの少なくとも１つが独立にアリールまたはヘテロアリール（フェニル、ピリジニル等）であるものが挙げられる。
【００４２】
記号：
【化６】
2017535579.tif 000007
は結合部位を表す。
【００４３】
本開示化合物は、１または２以上のキラル中心および／または二重結合を含むことができ、したがって、幾何異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー等の立体異性体として存在することができる。本明細書において使用する「立体異性体」という語は、あらゆる幾何異性体、エナンチオマーまたはジアステレオマーから構成される。これらの化合物は、立体中心炭素原子を取り囲む置換基の配置に応じて「Ｒ」または「Ｓ」という記号で表すことができる。本発明は、これらの化合物の様々な立体異性体およびその混合物を包含する。立体異性体にはエナンチオマーおよびジアステレオマーが含まれる。エナンチオマーの混合物またはジアステレオマーの混合物は、命名法において記号「（±）」で表すことができるが、当業者は、構造にキラル中心が存在することが含意されていることを理解するであろう。化学構造、例えば一般的な化学構造を図に表した場合、特に断りのない限り、特定した化合物のあらゆる立体異性体が包含されることを理解されたい。
【００４４】
本発明の化合物の個々の立体異性体は、不斉中心または立体中心を含む市販の出発物質から合成することによるか、あるいは、ラセミ混合物を調製した後に当業者に知られている分割方法を用いることにより調製することができる。これらの分割方法の例として、（１）エナンチオマーをキラル補助剤に結合させ、結果として得られたジアステレオマーの混合物を再結晶またはクロマトグラフィーにより分離し、光学的に純粋な生成物を補助剤から遊離させること、（２）光学活性な分割剤を用いて塩を形成すること、または（３）光学対掌体の混合物をキラルクロマトグラフィーカラムで直接分離することが挙げられる。立体異性体混合物はまた、キラルガスクロマトグラフィー、キラル高速液体クロマトグラフィー、化合物のキラル塩錯体としての結晶化、キラル溶媒中における化合物の結晶化等の公知の方法により、その構成成分である立体異性体に分割することもできる。さらに立体異性体は、立体異性的に純粋な（ｓｔｅｒｅｏｍｅｒｉｃａｌｌｙ−ｐｕｒｅ）中間体、試薬および触媒から、公知の不斉合成法により得ることができる。
【００４５】
本発明の化合物には幾何異性体も存在することができる。記号：
【化７】
2017535579.tif 000008
は本明細書に記載した単結合、二重結合または三重結合となり得る結合を意味する。本発明は、炭素−炭素二重結合の周囲の置換基の配置または炭素環周囲の置換基の配置に応じて生じる様々な幾何異性体およびその混合物を包含する。炭素−炭素二重結合周囲の置換基は「Ｚ」配置または「Ｅ」配置で表され、「Ｚ」および「Ｅ」という語の使用はＩＵＰＡＣ標準に準ずる。別段の定めがない限り、二重結合で表される構造は「Ｅ」体および「Ｚ」体の両方を包含する。
【００４６】
別法として、炭素−炭素二重結合周囲の置換基は「シス」または「トランス」で表すことができ、「シス」は二重結合に関し同じ側に置換基があることを表し、「トランス」は二重結合に関し置換基が反対側にあることを表す。炭素環周囲の置換基の配置は「シス」または「トランス」で表される。「シス」という語は、置換基が環平面に関し同じ側にあることを表し、「トランス」という語は、置換基が環平面に関し反対側にあることを表す。置換基が環平面に関し同じ側に向いている化合物および反対側に向いている化合物の両方を含む混合物は「シス／トランス」と表される。
【００４７】
さらに本発明は、１個または２個以上の原子を自然界において通常見出される原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子に置き換えたことを除いて、本発明に記載したものと同一である、同位体標識された本発明の化合物も包含する。本発明の化合物に組み込むことのできる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体、例えば、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆおよび３６Ｃｌが挙げられる。
【００４８】
特定の同位体で標識された開示化合物（例えば、３Ｈおよび１４Ｃで標識されたもの）は、化合物および／または基質の組織内分布評価に有用である。トリチウム化した（すなわち３Ｈ）同位体および炭素−１４（すなわち１４Ｃ）同位体が、調製の容易さおよび検出性の観点から特に好ましい。さらに、より質量数の高い重水素（すなわち２Ｈ）等の同位体は、代謝安定性により優れる（例えば、生体内半減期が長くなるかまたは投与必要量が低減される）ため、特定の治療上の利点をもたらすことができ、したがって、一部の状況下では好ましい場合もある。同位体標識された本発明の化合物は、通常、例えば、本明細書の実施例に開示する手順と類似の手順により、同位体標識されていない試薬を同位体標識された試薬に置き換えることにより調製することができる。
【００４９】
「脂肪酸システアミン誘導体」および「脂肪酸システアミン複合体」という語には、本明細書に記載する脂肪酸シスタミン誘導体および脂肪酸システアミン複合体のあらゆる可能な異性体、立体異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、互変異性体、医薬上許容される塩、水和物および溶媒和物が含まれる。
【００５０】
「天然アミノ酸の任意の側鎖」という語は次に示すアミノ酸：イソロイシン、アラニン、ロイシン、アスパラギン、リジン、アスパラギン酸塩、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、グルタミン酸塩、トレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、アルギニン、セリン、ヒスチジンおよびチロシンの任意の１種の側鎖を指す。
【００５１】
本明細書において使用される「脂肪酸」という語は、オメガ−３脂肪酸および生体内で代謝されることによりオメガ−３脂肪酸となる脂肪酸を意味する。脂肪酸の非限定的な例としては、ａｌｌ−ｃｉｓ−７，１０，１３−ヘキサデカトリエン酸、α−リノレン酸（ＡＬＡまたはａｌｌ−ｃｉｓ−９，１２，１５−オクタデカトリエン酸）、ステアリドン酸（ＳＴＤまたはａｌｌ−ｃｉｓ−６，９，１２，１５−オクタデカテトラエン酸）、エイコサトリエン酸（ＥＴＥまたはａｌｌ−ｃｉｓ−１１，１４，１７−エイコサトリエン酸）、エイコサテトラエン酸（ＥＴＡまたはａｌｌ−ｃｉｓ−８，１１，１４，１７−エイコサテトラエン酸）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡまたはａｌｌ−ｃｉｓ−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ、クルパノドン酸またはａｌｌ−ｃｉｓ−７，１０，１３，１６，１９−ドコサペンタエン酸）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡまたはａｌｌ−ｃｉｓ−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸）、テトラコサペンタエン酸（ａｌｌ−ｃｉｓ−９，１２，１５，１８，２１−ドコサヘキサエン酸）またはテトラコサヘキサエン酸（ニシン酸またはａｌｌ−ｃｉｓ−６，９，１２，１５，１８，２１−テトラコスエン酸（ｔｅｔｒａｃｏｓｅｎｏｉｃ  ａｃｉｄ））が挙げられる。
【００５２】
「システアミン」という語は、シスタミンから誘導することができる式：
【化８】
2017535579.tif 000009
を有する分子（２−アミノエタン−１−チオールとしても知られる）を指す。シスタミンは、２−アミノエタン−１−チオールとしても知られるチオール含有化合物であるシステアミンのジスルフィド形態である。このジスルフィド形態であるシスタミンが細胞内に取り込まれるとチオール還元酵素の作用によりチオール化合物であるシステアミンに還元される（Ａｒｕｎａｃｈａｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）ＰＮＡＳ，９７，ｐ．７４５−７５０参照）。このチオール化合物であるシステアミンは細胞内におけるシスタミンの活性成分であると考えられている。活性を有するチオール化合物であるシステアミンを細胞内に送達することができるシスタミン分子の非限定的な例を次のスキームＡに示す。
【化９】
2017535579.tif 000010
【００５３】
「嚢胞性線維症」または「ＣＦ」という語は、欠陥を持つＣＦＴＲが関与する障害、疾患および症候群を指す。ＣＦの原因となり得る変異は１９００種を超える。これらの変異はさらに６つのクラス（クラスＩ〜ＶＩ）に分けられる。ＣＦは、この６つのクラスのいずれかに分類される可能性のある、起こり得る変異のいずれかを指すことができる。
【００５４】
本明細書において使用される「被験体」および「患者」とは、本発明の方法により治療される生物を指す。この種の生物は、好ましくは、哺乳類（例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、イヌ、ネコ、ウマ、雌ウシ、ブタまたは非ヒト霊長類（サル、チンパンジー、ヒヒ、アカゲザル等））であり、より好ましくはヒトである。
【００５５】
本明細書において使用される「有効量」とは、被験体に有利な結果または所望の結果をもたらすのに十分な化合物（例えば、本発明の化合物）の量を指す。有効量は、１または２以上の投与回数（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、適用部位（ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ）、用量（ｄｏｓａｇｅ）で投与することができ、特定の処方または投与経路に限定されることを意図しない。
【００５６】
本明細書において使用される「医薬組成物」という語は、活性薬剤と、この組成物をｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏでの診断用途または治療用途に特に適したものにする不活性担体または活性担体との組合せを指す。
【００５７】
本明細書において使用される「医薬上許容される担体」という語は、リン酸緩衝生理飽和食塩水、水、エマルジョン（例えば、油／水型エマルジョン、水／油型エマルジョン等）、様々な種類の湿潤剤等の標準的な医薬担体いずれかを指す。本発明の組成物は、安定剤および防腐剤も含むことができる。担体、安定剤およびアジュバントの例に関しては、Ｍａｒｔｉｎ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ［１９７５］を参照されたい。
【００５８】
本明細書において使用される「医薬上許容される塩」という語は、被験体に投与することにより、本発明の化合物またはその活性代謝物または活性残留物を供与することができる、本発明の化合物の任意の医薬上許容される塩（例えば、酸または塩基）を指す。当業者に知られているように、本発明の化合物の「塩」は無機または有機酸または塩基から誘導することができる。酸の例としては、これらに限定されるものではないが、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸等が挙げられる。シュウ酸等の他の酸は、それ自体は医薬上許容されなくても、本発明の化合物およびその医薬上許容される酸付加塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に使用することができる。
【００５９】
塩基の例としては、これらに限定されるものではないが、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）水酸化物、アンモニア、および式ＮＷ４＋（式中、ＷはＣ１〜４アルキル）の化合物等が挙げられる。
【００６０】
塩の例としては、これらに限定されるものではないが：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタノエート（ｆｌｕｃｏｈｅｐｔａｎｏａｔｅ）、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パルモエート（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチネート（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩等が挙げられる。塩の他の例としては、本発明化合物の陰イオンとＮａ＋、ＮＨ４＋、ＮＷ４＋（式中、ＷはＣ１〜４アルキル基である）等の好適な陽イオンとを化合させたものが挙げられる。治療用途に用いる場合、本発明化合物の塩は医薬上許容されるものが想定されている。しかしながら、医薬上許容されない酸および塩基の塩は、例えば、医薬上許容される化合物の調製または精製において用途が見出される可能性もある。
【００６１】
「担体」という語は、賦形剤および希釈剤を指し、被験体に薬剤を投与する際または薬剤を被験体のある器官もしくは体の一部から他の器官もしくは体の一部へ運搬もしくは輸送する際に関与する、液体または固体の増量剤、希釈剤、賦形剤、溶剤（ｓｏｌｖｅｎｔ）、カプセル化材料等の材料、組成物または溶媒（ｖｅｈｉｃｌｅ）を意味する。
【００６２】
本明細書において使用される「治療（ｔｒｅａｔ、ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という語には、その結果として状態、疾患、障害等を改善（ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ）させるかまたはこれらの症状を軽快（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ）させる任意の効果、例えば、軽減（ｌｅｓｓｅｎｉｎｇ）、低減（ｒｅｄｕｃｉｎｇ）、調整（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）、緩和（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ）または消去（ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ）が含まれる。治療は、障害を治癒（ｃｕｒｉｎｇ）、改善または少なくともある程度軽快させることができる。特定の実施形態において、治療は疾患を治癒させることである。
【００６３】
「障害」という語は、疾患、状態または病気を指し、これらの語と互換的に使用される。
【００６４】
「プロドラッグ」という語は、生体内で代謝手段（例えば、加水分解）により脂肪酸システアミン複合体に変換されることができる化合物を指す。
【００６５】
本明細書においては次の略称を使用する。その定義を以下に示す：ＢｏｃおよびＢＯＣはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、Ｂｏｃ２Ｏはジカルボン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル、ＢＳＡはウシ血清アルブミン、ＣＤＩは１，１’−カルボニルジイミダゾール、ＤＣＣはＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、ＤＩＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジン、ＤＭＥＭはダルベッコ変法イーグル培地、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、ＤＯＳＳはジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、ＥＤＣおよびＥＤＣＩは１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩、ＥＬＩＳＡは酵素結合免疫吸着検定法、ＥｔＯＡｃは酢酸エチル、ＦＢＳはウシ胎児血清、ｈｒは時間、ＨＡＴＵはヘキサフルオロリン酸２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム、ＨＩＶはヒト免疫不全ウイルス、ＨＰＭＣはヒドロキシプロピルメチルセルロース、ｏｘｏｎｅはペルオキシ一硫酸カリウム、Ｐｄ／Ｃは炭素上パラジウム、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸、ＴＧＰＳはコハク酸トコフェロールプロピレングリコール、ＴＨＦはテトラヒドロフランである。
【００６６】
他に定義しない限り、本明細書において使用する全ての技術用語および科学用語は本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されている意味と同義である。
【００６７】
本記載全体を通して、組成物およびキットが特定の構成要素を有する（ｈａｖｉｎｇ）か、もしくは含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）と説明されている場合、またはプロセスおよび方法が特定のステップを有するかもしくは含むと説明されている場合は、記載された構成要素から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）本発明の組成物およびキット、または記載された構成要素からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ  ｏｆ）本発明の組成物およびキットがさらに存在することと、記載された処理ステップから本質的になる本発明によるプロセスおよび方法、または記載された処理ステップからなる本発明によるプロセスおよび方法がさらに存在することとが想定されている。
【００６８】
一般に、百分率を規定する組成は、特段の指定がない限り、重量による。さらに、定義を伴わない変数を用いる場合は、その変数は先の定義により規定される。
【００６９】
ＩＩ．脂肪酸システアミン複合体
以下に、治療応用および医薬組成物に使用される脂肪酸システアミン複合体の例を示す。
【００７０】
式Ｉ
本発明の一態様は：
【化１０】
2017535579.tif 000011
で表される式Ｉの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供し、
式中、
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルを表し；
ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハロゲンおよびアシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールであり；
ｎ＊およびｍ＊は、独立に、１、２または３であり；
Ｚ＊は：
【化１１】
2017535579.tif 000012
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはハロゲンであり；
ｒは２、３または７であり；
ｓは３、５または６であり；
ｔは０または１であり；
ｖは１、２または６である）である。
【００７１】
上の式Ｉ中の置換基記号および変数の定義は複数の化学基を包含する。本出願は、例えば、ｉ）置換基記号および変数の定義が上に説明した化学基から選択される単一種の化学基である実施形態、ｉｉ）この定義が、上に説明した化学基から選択される２種以上の化学基の集合である実施形態、ならびにｉｉｉ）本発明の化合物が、置換基記号および変数が（ｉ）または（ｉｉ）で定義される置換基記号および変数の組合せにより定義される実施形態を想定している。
【００７２】
特定の実施形態において、本発明の化合物は式Ｉの化合物またはその医薬上許容される塩である。
【００７３】
特定の実施形態において、ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはメチルを表す。特定の実施形態において、ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は水素である。
【００７４】
特定の実施形態において、ＲＩ−２およびＲＩ−３は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、例えば、メチルである。特定の実施形態において、ＲＩ−４およびＲＩ−５は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。
【００７５】
特定の実施形態において、ｎ＊は２である。特定の実施形態において、ｍ＊は２である。特定の実施形態において、ｎ＊は２であり、ｍ＊は２である。特定の実施形態において、ｎ＊およびｍ＊は、独立に２または３である。
【００７６】
特定の実施形態において、両方共同じ炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。特定の実施形態において、ｎ＊は２であり、同じ炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３の対の少なくとも１対は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。
【００７７】
特定の実施形態において、両方共同じ炭素原子に結合しているＲＩ−４およびＲＩ−５は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。特定の実施形態において、ｍ＊は２であり、同じ炭素原子に結合しているＲＩ−４およびＲＩ−５の対の少なくとも１対は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。
【００７８】
特定の実施形態において、ＹＩ−１は、独立に、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環のヘテロアリールである。特定の実施形態において、ＹＩ−１は、それぞれ、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルまたはピリミジニルである。特定の実施形態において、ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルである。特定の実施形態において、ＹＩ−１はピリジニルである。特定の実施形態において、ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい：
【化１２】
2017535579.tif 000013
である。特定の実施形態において、ＹＩ−１は：
【化１３】
2017535579.tif 000014
である。
【００７９】
特定の実施形態において、Ｚ＊は：
【化１４】
2017535579.tif 000015
（式中、Ｒ１およびＲ２は水素またはメチルである）である。特定の実施形態において、Ｒ１およびＲ２は水素である。特定の実施形態において、Ｚ＊は：
【化１５】
2017535579.tif 000016
のうちの１種である。
【００８０】
上述の記載はの式Ｉの化合物に関する複数の実施形態を説明するものである。本出願は、この複数の実施形態のあらゆる組合せも具体的に想定している。
【００８１】
式Ｉ−Ａ
本発明の一態様は：
【化１６】
2017535579.tif 000017
で表される式Ｉ−Ａの化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供し、
式中、
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルを表し；
ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハロゲンおよびアシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールであり；
ｎ＊およびｍ＊は、独立に、２または３であり；
Ｚ＊は：
【化１７】
2017535579.tif 000018
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはハロゲンであり；
ｒは２、３または７であり；
ｓは３、５または６であり；
ｔは０または１であり；
ｖは１、２または６である）であり；
但し、Ｚが：
【化１８】
2017535579.tif 000019
である場合、ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５またはＲＩ−６の少なくとも１つはＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、あるいはｎ＊またはｍ＊の少なくとも１つは１または３であるか、あるいはＹＩ−１は３−ピリジニルではない。
【００８２】
上の式Ｉ−Ａの置換基記号および変数の定義は複数の化学基を包含する。本出願は、例えば、ｉ）置換基記号および変数の定義が上に説明した化学基から選択される単一種の化学基である実施形態、ｉｉ）この定義が上に説明した化学基から選択される２種以上の化学基の集合である実施形態、ならびにｉｉｉ）本発明の化合物が（ｉ）または（ｉｉ）により定義される置換基記号および変数の組合せによって定義される実施形態、を想定している。
【００８３】
特定の実施形態において、本発明の化合物は式Ｉ−Ａの化合物またはその医薬上許容される塩である。
【００８４】
特定の実施形態において、ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはメチルを表す。特定の実施形態において、ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は水素である。
【００８５】
特定の実施形態において、ＲＩ−２およびＲＩ−３は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。特定の実施形態において、ＲＩ−４およびＲＩ−５は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。
【００８６】
特定の実施形態において、ｎ＊は２である。特定の実施形態において、ｍ＊は２である。特定の実施形態において、ｎ＊は２であり、ｍ＊は２である。
【００８７】
特定の実施形態において、両方共同じ炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。特定の実施形態において、ｎ＊は２であり、同じ炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３の対のうちの少なくとも１対は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。
【００８８】
特定の実施形態において、両方共同じ炭素原子に結合しているＲＩ−４およびＲＩ−５は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。特定の実施形態において、ｍ＊は２であり、同一の炭素原子に結合しているＲＩ−４およびＲＩ−５の対のうちの少なくとも１対は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。
【００８９】
特定の実施形態において、ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールである。特定の実施形態において、ＹＩ−１は、それぞれ、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルまたはピリミジニルである。特定の実施形態において、ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルである。特定の実施形態において、ＹＩ−１はピリジニルである。特定の実施形態において、ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい：
【化１９】
2017535579.tif 000020
である。特定の実施形態において、ＹＩ−１は：
【化２０】
2017535579.tif 000021
である。
【００９０】
特定の実施形態において、Ｚ＊は：
【化２１】
2017535579.tif 000022
（式中、Ｒ１およびＲ２は水素またはメチルである）である。特定の実施形態において、Ｒ１およびＲ２は水素である。特定の実施形態において、Ｚ＊は：
【化２２】
2017535579.tif 000023
のうちの１種である。
【００９１】
上の説明は式Ｉ−Ａの化合物に関する複数の実施形態を説明するものである。本特許出願は、上述の実施形態のあらゆる組合せを具体的に想定している。
【００９２】
式Ｉ−Ｂ
本発明の他の態様は：
【化２３】
2017535579.tif 000024
で表される式Ｉ−Ｂの化合物またはその医薬上許容される塩を提供し、
式中、
ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルを表し；
ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、ハロゲンおよびアシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールであり；
ｓは３、５、または６であり、
ｖは１または２である。
【００９３】
上の式Ｉ−Ｂの置換基記号および変数の定義は複数の化学基を包含する。本出願は、例えば、ｉ）置換基記号および変数の定義が、上に説明した化学基から選択される単一種の化学基である実施形態、ｉｉ）この定義が、上に説明した化学基から選択される２種以上の化学基の集合である実施形態、ならびにｉｉｉ）本発明の化合物が（ｉ）または（ｉｉ）で定義される置換基記号および変数の組合せにより定義される実施形態、を想定している。特定の実施形態において、本発明の化合物は式Ｉ−Ｂの化合物またはその医薬上許容される塩である。
【００９４】
特定の実施形態において、ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはメチルである。特定の実施形態において、ＲＩ−１、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は水素である。
【００９５】
特定の実施形態において、両方共同じ炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。特定の実施形態において、ｎ＊は２であり、同一の炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３の対のうちの少なくとも１対はそれぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。
【００９６】
特定の実施形態において、両方共同じ炭素原子に結合しているＲＩ−４およびＲＩ−５は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。特定の実施形態において、ｍ＊は２であり、同一の炭素原子に結合しているＲＩ−４およびＲＩ−５の対のうちの少なくとも１対はそれぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。
【００９７】
特定の実施形態において、ＹＩ−１はアルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい６員環ヘテロアリールである。特定の実施形態において、ＹＩ−１は、それぞれ、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルまたはピリミジニルである。特定の実施形態において、ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよいピリジニルである。特定の実施形態において、ＹＩ−１はピリジニルである。特定の実施形態において、ＹＩ−１は、アルキル、ヒドロキシルおよびアルコキシルからなる群から独立に選択される１、２または３個の置換基で置換されていてもよい：
【化２４】
2017535579.tif 000025
である。特定の実施形態において、ＹＩ−１は：
【化２５】
2017535579.tif 000026
である。
【００９８】
上の説明は式Ｉ−Ｂの化合物に関する複数の実施形態を説明するものである。本出願は、上述の実施形態のあらゆる組合せを具体的に想定している。
【００９９】
他の脂肪酸システアミン複合体
本発明の他の態様は、結合基を介して脂肪性に共有結合したシステアミンを含む分子複合体であって、この脂肪酸が、オメガ−３脂肪酸および生体内で代謝されてオメガ−３脂肪酸となる脂肪酸からなる群から選択される、複合体を提供する。この複合体は、細胞内で加水分解されることにより遊離システアミンおよび遊離脂肪酸を生成することができる。
【０１００】
特定の実施形態において、脂肪酸は、ａｌｌ−ｃｉｓ−７，１０，１３−ヘキサデカトリエン酸、α−リノレン酸、ステアリドン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、テトラコサペンタエン酸およびテトラコサヘキサエン酸からなる群から選択される。他の実施形態において、脂肪酸はエイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸から選択される。他の実施形態において、脂肪酸はエイコサペンタエン酸およびドコサヘキサエン酸から選択される。幾つかの実施形態において、脂肪酸はエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）である。他の実施形態において、脂肪酸はドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である。幾つかの実施形態において、加水分解は酵素的である。
【０１０１】
式ＩＩ
本発明の他の態様は、式ＩＩ：
【化２６】
2017535579.tif 000027
の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供し、式中、
Ｚは：
【化２７】
2017535579.tif 000028
（式中、
ｔは、それぞれ独立に、０または１であり；
ｒは、それぞれ独立に、２、３または７であり；
ｓは、それぞれ独立に、３、５または６であり；
ｖは、それぞれ独立に、１、２または６であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立に、−Ｈ、−Ｄ、−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ベンジル、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｃ２〜Ｃ３アルケニル、−Ｃ２〜Ｃ３アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３
アルキル）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｓ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＳ（Ｏ）２Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群から選択される）であり；
Ｒ３およびＲ４は、独立に、Ｈまたは
【化２８】
2017535579.tif 000029
であり、但し、Ｒ３およびＲ４のうちの少なくとも１種は：
【化２９】
2017535579.tif 000030
（Ｒは、それぞれ独立に、ＯＨ、ＣＮ、ハロゲン、−ＣＯ２Ｒ６、−ＣＯＮＨＲ６、−ＣＯＮＲ６Ｒ６、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ６Ｒ６、−ＮＲ６Ｒ６、−ＮＲ６ＣＯＲ６または−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｍ−ＯＣＨ３から選択される１、２、３、４または５個の基で置換されていてもよいヘテロアリールであり；
Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＯＨもしくはハロゲンで置換されていてもよい直鎖もしくは分岐Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
ｍは、１または２である）である。
【０１０２】
式ＩＩのメチル置換基をＣ１〜Ｃ６アルキルに置き換えることができることも理解されたい。
【０１０３】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化３０】
2017535579.tif 000031
であり、式中、ｒは２であり、ｓは６である。
【０１０４】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化３１】
2017535579.tif 000032
であり、式中、ｒは３であり、ｓは５である。
【０１０５】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化３２】
2017535579.tif 000033
であり、式中、ｒは７であり、ｓは３である。
【０１０６】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化３３】
2017535579.tif 000034
であり、式中、ｔは１であり、
ｒは３であり、かつｓは５であるか、または
ｒは２であり、かつｓは６であるか、または
ｒは７であるか、かつｓは３である。
【０１０７】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化３４】
2017535579.tif 000035
であり、式中、ｖは１であり、ｓは６である。
【０１０８】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化３５】
2017535579.tif 000036
であり、式中、ｖは２であり、ｓは５である。
【０１０９】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化３６】
2017535579.tif 000037
であり、式中、ｖは６であり、ｓは３である。
【０１１０】
特定の実施形態において、Ｚは、Ｒ１およびＲ２が水素である上の実施形態の１つにより定義される。
【０１１１】
式ＩＩＩ
本発明の他の態様は、式ＩＩＩの化合物：
【化３７】
2017535579.tif 000038
またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供し、
式中、
Ｗ１およびＷ２は、独立にＮＲであり；
Ｒは、それぞれ独立に、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、フェニル、ベンジル、−ＣＨ２ＣＯ２Ｒ３、−ＣＨ２ＣＯＮＲ３Ｒ３またはＯＨもしくはハロゲンで置換されていてもよい直鎖もしくは分岐のＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５は、独立に、−Ｈ、−Ｄ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよび−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群から選択され；
ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立に、Ｈ、−Ｄ、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲまたはベンジルであるか、あるいは２個のａ、ｂ、ｃおよびｄが、これらが結合している１個の炭素と一緒になってシクロアルキルまたは複素環を形成していてもよく；
ｎ、ｏ、ｐおよびｑは、それぞれ独立に、０または１であり；
Ｚは、それぞれ独立に：
【化３８】
2017535579.tif 000039
（ｒは、それぞれ独立に、２、３または７であり；
ｓは、それぞれ独立に、３、５または６であり；
ｔは、それぞれ独立に、０または１であり；
ｖは、それぞれ独立に、１、２または６であり；
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｄ、−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ベンジル、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｃ２〜Ｃ３アルケニル、−Ｃ２〜Ｃ３アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｓ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１〜Ｃ３アルキルである）であり；
Ｒ３は、それぞれ独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、あるいは２個のＲ３基が、これらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成していてもよく；但し、Ｚが：
【化３９】
2017535579.tif 000040
である場合、ａ、ｂ、ｃまたはｄの少なくとも１つはＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、あるいは（ｉ）ｎおよびｏの総和または（ｉｉ）ｐおよびｑの総和の少なくとも１つは１または３であるか、あるいはＮ含有複素環は３−ピリジニルではない。
【０１１２】
式ＩＩＩ−Ａ
本発明の他の態様は、式ＩＩＩ−Ａ：
【化４０】
2017535579.tif 000041
の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供し、
式中、
Ｗ１およびＷ２は、独立に、ＮＲであり；
Ｒは、それぞれ独立に、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、フェニル、ベンジル、−ＣＨ２ＣＯ２Ｒ３、−ＣＨ２ＣＯＮＲ３Ｒ３またはＯＨもしくはハロゲンで置換されていてもよい直鎖もしくは分岐のＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５は、独立に、−Ｈ、−Ｄ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよび−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群から選択され；
ａ、ｂ、ｃおよびｄは、それぞれ独立に、Ｈ、−Ｄ、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＲまたはベンジルであるか、あるいは２個のａ、ｂ、ｃおよびｄが、これらが結合している１個の炭素と一緒になって、シクロアルキルまたは複素環を形成していてもよく；
ｎ、ｏ、ｐおよびｑは、それぞれ独立に、０または１であり；
Ｚは、それぞれ独立に：
【化４１】
2017535579.tif 000042
（ｒは、それぞれ独立に、２、３または７であり；
ｓは、それぞれ独立に、３、５または６であり；
ｔは、それぞれ独立に、０または１であり；
ｖは、それぞれ独立に、１、２または６であり；
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｄ、−Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ハロゲン、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｏ−アリール、−Ｏ−ベンジル、−ＯＣ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｃ２〜Ｃ３アルケニル、−Ｃ２〜Ｃ３アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＳＨ、−Ｓ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｓ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１〜Ｃ３アルキルである）であり；
Ｒ３は、それぞれ独立に、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであるか、あるい２個のＲ３基が、これらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成していてもよい。
【０１１３】
上の式ＩＩＩまたは式ＩＩＩ−Ａの置換基記号および変数の定義は複数の化学基を包含する。本出願は、例えば、ｉ）置換基記号および変数の定義が、上に説明した化学基から選択される単一種の化学基である実施形態、ｉｉ）この定義が、上に説明した化学基から選択される２種以上の化学基の集合である実施形態、ならびにｉｉｉ）本発明の化合物が（ｉ）または（ｉｉ）に定義する置換基記号および変数の組合せにより定義される実施形態、を想定している。式ＩＩＩの化合物および式ＩＩＩ−Ａの化合物のそれぞれについて、次に示す実施形態のそれぞれが等しく適用される。
【０１１４】
特定の実施形態において、Ｒ５の少なくとも１つはＣｌまたはＦである。特定の実施形態において、Ｒ５はそれぞれ独立に−Ｈである。
【０１１５】
特定の実施形態において、Ｗ１のＲは、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルである。
【０１１６】
特定の実施形態において、Ｗ２のＲは、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルである。
【０１１７】
特定の実施形態において、ａおよびｃは、それぞれ独立に、Ｈ、ＣＨ３、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３またはＣ（Ｏ）ＯＲである。
【０１１８】
特定の実施形態において、ｎ、ｏ、ｐおよびｑはそれぞれ１である。特定の実施形態において、ｎ、ｏ、ｐおよびｑのうちの２つはそれぞれ１である。特定の実施形態において、ｎ、ｏ、ｐおよびｑのうちの３つはそれぞれ１である。
【０１１９】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化４２】
2017535579.tif 000043
であり、式中、ｒは２であり、ｓは５である。
【０１２０】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化４３】
2017535579.tif 000044
であり、ｒは３であり、ｓは５である。
【０１２１】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化４４】
2017535579.tif 000045
であり、ｒは７であり、ｓは３である。
【０１２２】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化４５】
2017535579.tif 000046
であり、式中、
ｔは１であり、
ｒは３であり、かつｓは５であるか、または
ｒは２であり、かつｓは６であるか、または
ｒは７であり、かつｓは３である。
【０１２３】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化４６】
2017535579.tif 000047
であり、式中、ｖは１であり、ｓは６である。
【０１２４】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化４７】
2017535579.tif 000048
であり、式中、ｖは２であり、ｓは５である。
【０１２５】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化４８】
2017535579.tif 000049
であり、式中、ｖは６であり、ｓは３である。
【０１２６】
式ＩＶ
本発明の他の態様は、式ＩＶ：
【化４９】
2017535579.tif 000050
の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を提供し、
式中、
Ｗ１は、ＮＲであり；
Ｒは、独立に、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、フェニル、ベンジル、−ＣＨ２ＣＯ２Ｒ３、−ＣＨ２ＣＯＮＲ３Ｒ３またはＯＨもしくはハロゲンで置換されていてもよい直鎖もしくは分岐のＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ５は、独立に、−Ｈ、−Ｄ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−ＮＨ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｎ（Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ１〜Ｃ３アルキル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）２、−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｏ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−Ｓ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよび−Ｓ（Ｏ）２Ｃ１〜Ｃ３アルキルからなる群から選択され；
ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはＣ１〜Ｃ３アルキルを表し；
Ｚ＊は：
【化５０】
2017535579.tif 000051
（式中、
Ｒ１およびＲ２は、独立に、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルまたはハロゲンであり；
ｒは２、３または７であり；
ｓは３、５または６であり；
ｔは０または１であり；
ｖは１、２または６である）であり；
ｍ＊は２または３であり；
ｏ＊は１または２であり；
ｐ＊は１または２であり；
ＲＩ−７およびＲＩ−８は、それぞれ独立に、Ｈまたは
【化５１】
2017535579.tif 000052
であり、
但し、任意的に、Ｚが：
【化５２】
2017535579.tif 000053
である場合、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５またはＲＩ−６の少なくとも１種はＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、あるいはＲＩ−７およびＲＩ−８は水素ではないか、あるいは（ｉ）ｍ＊または（ｉｉ）ｏ＊およびｐ＊の総和の少なくとも１つは１または３であるか、あるいはＮ含有複素環は３−ピリジニルではない。特定の状況下、例えば、本明細書において想定されている使用に関しては、上述の条件は必須ではない。
【０１２７】
上の式ＩＶの置換基記号および変数の定義は複数の化学基を包含する。本出願は、例えば、ｉ）置換基記号および変数の定義が、上に説明した化学基から選択される単一種の化学基である実施形態、ｉｉ）この定義が、上に説明した化学基から選択される２種以上の化学基の集合である実施形態、ならびにｉｉｉ）本発明の化合物が（ｉ）または（ｉｉ）に定義する置換基記号および変数の組合せにより定義される実施形態、を想定している。
【０１２８】
特定の実施形態において、Ｒ５の少なくとも１つはＣｌまたはＦである。特定の実施形態において、Ｒ５はそれぞれ独立に−Ｈである。
【０１２９】
特定の実施形態において、Ｗ１のＲは、水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルである。
【０１３０】
特定の実施形態において、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は、それぞれ独立に、それぞれ、水素またはメチルを表す。特定の実施形態において、ＲＩ−２、ＲＩ−３、ＲＩ−４、ＲＩ−５およびＲＩ−６は水素である。
【０１３１】
特定の実施形態において、ｍ＊は２である。特定の実施形態において、ｐ＊は２であり、ｏ＊は０である。特定の実施形態において、ｐ＊は１であり、ｏ＊は１である。
【０１３２】
特定の実施形態において、両方共同一炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３は、それぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。特定の実施形態において、ｐ＊は１または２であり、同一炭素原子に結合しているＲＩ−２およびＲＩ−３の対のうちの少なくとも１対はそれぞれＣ１〜Ｃ３アルキル、例えばメチルである。
【０１３３】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化５３】
2017535579.tif 000054
であり、ｒは２であり、ｓは６である。
【０１３４】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化５４】
2017535579.tif 000055
であり、式中ｒは３であり、ｓは５である。
【０１３５】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化５５】
2017535579.tif 000056
であり、式中、ｒは７であり、ｓは３である。
【０１３６】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化５６】
2017535579.tif 000057
であり、式中、ｔは１であり、
ｒは３であり、かつｓは５であるか、または
ｒは２であり、かつｓは６であるか、または
ｒは７であり、かつｓは３である。
【０１３７】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化５７】
2017535579.tif 000058
であり、式中、ｖは１であり、ｓは６である。
【０１３８】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化５８】
2017535579.tif 000059
であり、式中、ｖは２であり、ｓは５である。
【０１３９】
特定の実施形態において、Ｚは：
【化５９】
2017535579.tif 000060
であり、式中、ｖは６であり、ｓは３である。
【０１４０】
式Ｉ、式ＩＡ、式ＩＢ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ−Ａまたは式ＩＶのそれぞれにおいて、Ｈ原子の任意の１個または２個以上が重水素に置換されていてもよい。
【０１４１】
具体的な化合物の例示
特定の実施形態において、本発明の化合物は、次に示す化合物のうちの１種またはその医薬上許容される塩である：
【化６０】
2017535579.tif 000061
Ｎ−（２−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−２）、
【化６１】
2017535579.tif 000062
Ｎ−（２−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミド（ＩＩ−３）、
【化６２】
2017535579.tif 000063
Ｎ−（２−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミド（ＩＩ−４）、
【化６３】
2017535579.tif 000064
Ｎ−（２−（（１−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−５）、
【化６４】
2017535579.tif 000065
Ｎ−（２−（（１−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−６）、
【化６５】
2017535579.tif 000066
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１）、
【化６６】
2017535579.tif 000067
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−２）、
【化６７】
2017535579.tif 000068
（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロピル（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル）カルバメート（ＩＶ−３）、
【化６８】
2017535579.tif 000069
１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル）カルバメート（ＩＶ−４）、
【化６９】
2017535579.tif 000070
（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）カルバメート（ＩＶ−５）、
【化７０】
2017535579.tif 000071
（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）カルバメート（ＩＶ−６）、
【化７１】
2017535579.tif 000072
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−７）、
【化７２】
2017535579.tif 000073
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−８）、
【化７３】
2017535579.tif 000074
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロポキシ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−９）、
【化７４】
2017535579.tif 000075
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）オキシ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１０）、
【化７５】
2017535579.tif 000076
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−３−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１１）、
【化７６】
2017535579.tif 000077
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−３−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１２）、
【化７７】
2017535579.tif 000078
（Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロピル（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミドメチル）ブチル）カルバメート（ＩＶ−１３）、
【化７８】
2017535579.tif 000079
１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミドメチル）ブチル）カルバメート（ＩＶ−１４）、
【化７９】
2017535579.tif 000080
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−４−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−４−メチル−１−オキソペンタン−３−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１５）、
【化８０】
2017535579.tif 000081
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−４−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−４−メチル−１−オキソペンタン−３−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１６）、
【化８１】
2017535579.tif 000082
Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１７）、
【化８２】
2017535579.tif 000083
Ｎ−（（Ｓ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１８）、
【化８３】
2017535579.tif 000084
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（Ｉ−１）および
【化８４】
2017535579.tif 000085
（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド（Ｉ−２）。
【０１４２】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、次に示す化合物またはその医薬上許容される塩である：
【化８５】
2017535579.tif 000086
Ｎ−（２−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−１）。
【０１４３】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、次に示す化合物またはその医薬上許容される塩である：
【化８６】
2017535579.tif 000087
Ｎ−（２−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−２）。
【０１４４】
特定の実施形態において、本発明の化合物は次に示す化合物またはその医薬上許容される塩である：
【化８７】
2017535579.tif 000088
Ｎ−（２−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミド（ＩＩ−３）。
【０１４５】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、次に示す化合物またはその医薬上許容される塩である：
【化８８】
2017535579.tif 000089
Ｎ−（２−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミド（ＩＩ−４）。
【０１４６】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、次に示す化合物またはその医薬上許容される塩である：
【化８９】
2017535579.tif 000090
Ｎ−（２−（（１−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−５）。
【０１４７】
特定の実施形態において、本発明の化合物は、次に示す化合物またはその医薬上許容される塩である：
【化９０】
2017535579.tif 000091
Ｎ−（２−（（１−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−６）。
【０１４８】
特定の実施形態において、本発明の化合物は：
【化９１】
2017535579.tif 000092
Ｎ−（２−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−１）である。
【０１４９】
特定の実施形態において、本発明の化合物は：
【化９２】
2017535579.tif 000093
Ｎ−（２−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−２）である。
【０１５０】
特定の実施形態において、本発明の化合物は：
【化９３】
2017535579.tif 000094
Ｎ−（２−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミド（ＩＩ−３）である。
【０１５１】
特定の実施形態において、本発明の化合物は：
【化９４】
2017535579.tif 000095
Ｎ−（２−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミド（ＩＩ−４）である。
【０１５２】
特定の実施形態において、本発明の化合物は：
【化９５】
2017535579.tif 000096
Ｎ−（２−（（１−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−５）である。
【０１５３】
特定の実施形態において、本発明の化合物は：
【化９６】
2017535579.tif 000097
Ｎ−（２−（（１−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−６）である。
【０１５４】
上に示したように、本発明は、本明細書に記載した化合物と医薬上許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【０１５５】
本発明の脂肪酸システアミン複合体は、実施例に記載する手順等の一般的な手順で合成できることが理解されよう。
【０１５６】
ＩＩＩ．脂肪酸システアミン複合体の治療応用
上述したように、本発明は、脂肪酸システアミン複合体がオートファジーの活性化に有用であることの発見に一部基づいている。本発明の脂肪酸システアミン複合体は、システアミンまたは脂肪酸を別々に投与するかまたは組み合わせて投与することでは達成できない治療効果をもたらすと共に、個々の成分の投与または個々の成分の組合せの投与に置き換えることができない形で、ＣＦを治療または予防するためにオートファジーを活性化する優れた方法を提供する。システアミンおよびオメガ−３脂肪酸を共有結合させることにより両成分を所定の位置に同時に送達することが可能になり、そこで、個々の成分は、切断（例えば、酵素的切断）されることによってその位置で同時に放出される。例示的な治療方法および治療応用の他の特徴を以下に記載する。
【０１５７】
例示的な治療方法
本発明の一態様は、本明細書に記載する疾患（例えば、ＣＦ、神経変性疾患、炎症性疾患、肝疾患、筋疾患、感染症および免疫疾患からなる群から選択される疾患）の治療方法を提供する。この方法は、それを必要とする被験体に、疾患を治療するために、治療有効量の本明細書に記載する脂肪酸システアミン複合体（式Ｉ、式ＩＡ、式ＩＢ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ−Ａまたは式ＩＶの化合物等）を投与することを含む。
【０１５８】
特定の実施形態において、疾患はＣＦである。特定の実施形態において、疾患は神経変性疾患（例えば、ハンチントン病、アルツハイマー病またはパーキンソン病）である。特定の実施形態において、疾患は炎症性疾患である。特定の実施形態において、疾患は、神経変性疾患、肝疾患、筋疾患、感染症、免疫疾患または炎症性疾患である。神経変性疾患としては、ハンチントン病、パーキンソン病、アルツハイマー病および伝達性海綿状脳症が挙げられる。特定の実施形態において、疾患は特発性肺線維症である。特定の実施形態において、疾患は加齢黄斑変性である。さらなる他の実施形態において、疾患は心疾患である。
【０１５９】
特定の実施形態において、本発明の疾患の治療方法においては、式Ｉの化合物を投与することにより被験体におけるオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または１００％亢進する。特定の実施形態において、本発明の疾患の治療方法においては、式Ｉ−Ａの化合物を投与することにより被験体のオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または１００％亢進する。特定の実施形態において、本発明の疾患の治療方法においては、式Ｉ−Ｂの化合物を投与することにより被験体のオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または１００％亢進する。特定の実施形態において、本発明の疾患の治療方法においては、式ＩＩＩの化合物を投与することにより被験体のオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または１００％亢進する。特定の実施形態において、本発明の疾患の治療方法においては、式ＩＩＩ−Ａの化合物を投与することにより被験体のオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または１００％亢進する。特定の実施形態において、本発明の疾患の治療方法においては、式ＩＶの化合物を投与することにより被験体のオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または１００％亢進する。
【０１６０】
本明細書に記載する方法を用いて治療されることが想定されているさらなる疾患としては、例えば、オートファジーに不具合があると考えられている次に示す疾患が挙げられるが、これらに限定されるものではない：ダノン病、Ｘ連鎖性ミオパチー、乳児型自己貪食空胞性ミオパチー、成人発症型空胞性ミオパチー（ａｄｕｌｔ  ｏｎｓｅｔ  ｖａｃｕｏｌａｒ  ｍｙｏｐａｔｈｙ）、ポンペ病、封入体筋炎、肢帯型筋ジストロフィー２Ｂ型、および三好型ミオパチー。
【０１６１】
本明細書に記載する脂肪酸システアミン複合体はまた、ミトコンドリア病の治療に有用な可能性もある。ミトコンドリア病としては、これらに限定されるものではないが、リー症候群、難聴を伴う糖尿病（ＤＡＤ）、レーベル遺伝性視神経症、神経障害性運動失調症網膜色素変性症および眼瞼下垂（ＮＡＲＰ）、筋神経胃腸管性脳症（ＭＮＧＩＥ）、赤色ぼろ線維を伴うミオクローヌスてんかん（ＭＥＲＲＦ）およびミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群（ＭＥＬＡＳ）、キーム・セイアー症候群（Ｋｅａｍ−Ｓａｙｒｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、亜急性壊死性脳症（リー症候群）およびミトコンドリア心筋症ならびにミトコンドリアＤＮＡの多重欠失に起因する他の症候群が挙げられる。他のミトコンドリア病としては、これらに限定されるものではないが、神経性筋力低下（ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ  ｍｕｓｃｌｅ  ｗｅａｋｎｅｓｓ）、進行性エクスターナルオプタルモプレジア（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｏｐｔｈａｌｍｏｐｌｅｇｉａ）（ＰＥＯ）、ならびにＯＸＰＨＯＳ複合体の機能不全が関与する複合体Ｉ欠損症（Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｉ  ｄｉｓｅａｓｅ）、複合体ＩＩ欠損症、複合体ＩＩＩ欠損症、複合体ＩＶ欠損症および複合体Ｖ欠損症、ならびにＭＥＧＤＥＬ症候群（感音性難聴、脳症およびリー様症候群を呈する３−メチルグルタコン酸尿症ＩＶ型）が挙げられる。
【０１６２】
特定の実施形態において、患者はヒトである。
【０１６３】
本発明の他の態様は、被験体のオートファジーを活性化する方法を提供する。この方法は、それを必要とする被験体に、本明細書に記載する式Ｉ−Ａの化合物、式ＩＩＩの化合物、式ＩＩＩ−Ａの化合物、式ＩＶの化合物等の脂肪酸システアミン複合体を被験体のオートファジーを活性化するために有効な量で投与することを含む。特定の実施形態において、被験体は、ＣＦ、神経変性疾患または炎症性疾患に罹患している。特定の実施形態において、被験体はヒトである。
【０１６４】
疾患を治療する方法の特定の実施形態において、例えば、式ＩＡの化合物を投与することにより、被験体のオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または少なくとも１００％亢進する。疾患を治療する方法の特定の実施形態において、例えば、式ＩＩＩの化合物を投与することにより、被験体のオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または少なくとも１００％亢進する。疾患を治療する方法の特定の実施形態において、例えば、式ＩＩＩ−Ａの化合物を投与することにより、被験体のオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または少なくとも１００％亢進する。疾患を治療する方法の特定の実施形態において、例えば、式ＩＶの化合物を投与することにより、被験体のオートファジーが少なくとも５％、１０％、２５％、５０％または少なくとも１００％亢進する。
【０１６５】
特定の実施形態において、オートファジーの活性化は、特定のバイオマーカーの量の変化により特徴づけることができる。例示的な１種のバイオマーカーは微小管結合タンパク質１Ａ／１Ｂ軽鎖３（ＬＣ３）であり、これは、多くの哺乳動物の組織および培養細胞に広く存在する、分子量が約１７ｋＤａの可溶性タンパク質である。細胞内においてＬＣ３（ＬＣ３−Ｉ）のサイトゾルがホスファチジルエタノールアミンと結合することによりＬＣ３−ホスファチジルエタノールアミン結合体（ＬＣ３−ＩＩ）が形成される。例えば、Ｔａｎｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．（２００８）ＭＥＴＨＯＤＳ  ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．，ｖｏｌ  ４４５，ｐ．７７−８８を参照されたい。ＬＣ３−Ｉの量に対するＬＣ３−ＩＩの量はオートファジーレベルの変化の解析に使用することができる。したがって、特定の実施形態において、１種または２種以上の上述の化合物を投与することにより、被験体におけるＬＣ３−ＩＩ対ＬＣ３−Ｉ比が増加し、例えば、被験体のＬＣ３−ＩＩ対ＬＣ３−Ｉ比が少なくとも約１０％、２５％、５０％、７５％または１００％増加する。
【０１６６】
他のバイオマーカーの例は、セクエストソーム（ｓｅｑｕｅｓｔｏｓｏｍｅ）１（ＳＱＳＴＭ１）とも称されるｐ６２タンパク質であり、これは、ユビキチンに結合する足場タンパク質であり、ユビキチン化タンパク質凝集体と共局在していることが報告されている。例えば、Ｂｊｏｒｋｏｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００９）ＭＥＴＨＯＤＳ  ＥＮＺＹＭＯＬ．，ｖｏｌ．４５２，ｐ．１８１−１９７を参照されたい。したがって、特定の実施形態において、上述の１種または２種以上の化合物を投与することにより、被験体におけるｐ６２タンパク質の量が低下し、例えば、被験体におけるｐ６２タンパク質の量が少なくとも約１％ｗ／ｗ、５％ｗ／ｗ、１０％ｗ／ｗ、１５％ｗ／ｗ、２５％ｗ／ｗ、５０％ｗ／ｗ、７５％ｗ／ｗまたは９０％ｗ／ｗ低下する。
【０１６７】
特定の実施形態において、オートファジーを亢進するための本発明の方法における被験体は、ＣＦと診断されている。特定の実施形態において、オートファジーを亢進するための本発明の方法における被験体は、神経変性疾患を有すると診断されている。
【０１６８】
さらに、かつより一般的に、本発明の他の態様は、オートファジーを亢進する方法を提供し、その方法は、それを必要とする被験体に、結合基を介して脂肪酸と共有結合しているシステアミンを含む分子複合体を有効量投与することを含み、この脂肪酸は、オメガ−３脂肪酸および生体内で代謝されることによりオメガ−３脂肪酸となる脂肪酸からなる群から選択される。
【０１６９】
さらに本発明は、患者の特発性肺線維症、ミトコンドリア病、リー症候群、難聴を伴う糖尿病（ＤＡＤ）、レーベル遺伝性視神経症、神経障害性運動失調症網膜色素変性症および眼瞼下垂（ＮＡＲＰ）、筋神経胃腸管性脳症（ＭＮＧＩＥ）、赤色ぼろ線維を伴うミオクローヌスてんかん（ＭＥＲＲＦ）およびミトコンドリア脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様発作症候群（ＭＥＬＡＳ）からなる群から選択される疾患を治療する方法を提供する。この方法は、それを必要とする患者に、治療有効量の：
（ｉ）
【化９７】
2017535579.tif 000098
の化合物、すなわち（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（Ｉ−１）；
（ｉｉ）
【化９８】
2017535579.tif 000099
の化合物、すなわち（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド（Ｉ−２）；または
（ｉｉｉ）化合物（ｉ）および（ｉｉ）の組合せ
を投与し、それによって該疾患を治療することを含む。一実施形態において、疾患は特発性肺線維症である。
【０１７０】
オートファジー、システアミンおよび複合体のさらなる特徴
オートファジーは細胞成分の一部を基本的に自己消化するための進化的に保存されたリソソーム分解経路である(Ｌｅｖｉｎｅ  ａｎｄ  Ｋｒｏｅｍｅｒ（２００８）ＣＥＬＬ，１３２，ｐ．２７−４２参照）。この自己消化過程は、外来性または損傷した細胞小器官、不良なタンパク質または折り畳み異常タンパク質に加えて、侵入微生物さえも細胞から排除するのに役立っている。オートファジーはＣＦ患者においてダウンレギュレートされていることが知られている（Ｌｕｃｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＡＵＴＯＰＨＡＧＹ，７，ｐ．１０４−１０６）。オートファジーはシュードモナス・エグリノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｇｕｒｉｎｏｓａ）等の病原体を肺等の感染組織から除去するための重要な細胞内機構でもある。オートファジーを活性化させることにより、ＣＦ患者の肺に慢性感染しているシュードモナス・エグリノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｇｕｒｉｎｏｓａ）の除去を促すことができる可能性がある（Ｊｕｎｋｉｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（２０１３）ＰＬＯＳ  ＯＮＥ，８，ｅ７２２６３）。
【０１７１】
ＣＦにおいて、欠陥のあるＣＦＴＲは活性酸素種の産生をアップレギュレートさせ、それによって、タンパク質間の架橋を促進する酵素である組織トランスグルタミナーゼの（ＴＧ２）の活性が増大する。ＴＧ２活性が増大すると、オートファジーの調節に重要なタンパク質であるＢｅｃｌｉｎ−１の架橋が誘導される。Ｂｅｃｌｉｎ−１が架橋する過程でＢｅｃｌｉｎ−１は小胞体から離れ、オートファジーがダウンレギュレートされ、その結果としてｐ６２（ＳＱＳＴＭ１とも称される）が蓄積する。増加したｐ６２は、折り畳み異常のＣＦＴＲを隔離してアグリソームを形成することができ、これはプロテアソームによる分解の標的となる。ΔＦ５０８変異ホモ接合型ＣＦ患者のヒト上皮細胞を高濃度のシスタミン（２５０μＭ）で処理するとオートファジーがアップレギュレートされ、ＣＦＴＲが形質膜で回復することが観察されている（Ｌｕｃｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１２）ＡＵＴＯＰＨＡＧＹ，８，ｐ．１６５７−１６７２；Ｌｕｃｉａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．（２０１０）ＮＡＴ．ＣＥＬＬ  ＢＩＯＬ．，１２，ｐ．８６３−８７５）。その基本原理は、シスタミンがＴＧ２活性を阻害することができ、それによってＢＥＣＮ１の架橋が低下することにあった。この過程によりｐ６２の量が低下し、今度はそれによって、折り畳み異常ＣＦＴＲがアグリソームとなって隔離されることを回避すると共に、膜への輸送を行うゴルジ体に局在化させることが可能になる。この欠陥ＣＦＴＲの活性を回復する方法は有望ではあるものの、大きな欠点が１つある。すなわち、様々な上皮細胞株にオートファジーを誘導するためには高いシスタミン濃度（２５０μＭ）が必要となる。高用量のシスタミン／システアミンは強い胃腸不快感を誘発し得ることが分かっているため、このような高濃度のシスタミンはヒトには非現実的な用量となる上に、患者が服薬指示を遵守しない可能性も予想される（Ｋａｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９８４）ＢＲＩＴ．Ｊ．ＥＸＰ．ＰＡＴＨＯＬＯＧＹ，６５，ｐ．７５９−７６５）。
【０１７２】
脂肪酸システアミン複合体は、システアミン類縁体およびオメガ−３脂肪酸を一緒にして単一の分子複合体にするように設計されたものである。脂肪酸システアミン複合体の活性は、分子複合体の個々の成分の活性の和よりも実質的に高く、脂肪酸シスタミン複合体により誘発される活性が相乗的であることを示唆している。本発明の脂肪酸システアミン複合体の他の利点は、非常に低い末梢神経毒性を示すかまたは全く示さないことにある。
【０１７３】
ＩＶ．医薬組成物
本発明は、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式ＩＩ、式ＩＩＩ、式ＩＩＩ−Ａまたは式ＩＶの化合物等の脂肪酸システアミン複合体を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態において、本発明の医薬組成物は、好ましくは、治療有効量の１種または２種以上の上述の脂肪酸システアミン複合体と、それと一緒に配合される１種または２種以上の医薬上許容される担体とを含む。以下に詳述するが、本発明の医薬組成物は、次に示す投与：（１）経口投与、例えば、ドレンチ剤（水溶液または非水溶液または懸濁液）、錠剤（例えば、頬側、舌下および／または全身吸収させることを標的とするもの）、ボーラス剤、散剤、顆粒剤、舌に塗布するペースト剤；（２）非経口投与、例えば、無菌溶液剤もしくは懸濁剤または徐放性処方として、例えば、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射または硬膜外注射するもの；（３）外用、例えば、皮膚に適用するクリーム剤、軟膏剤、放出制御型パッチ剤またはスプレー剤として；（４）膣内投与または直腸内投与、例えば、膣坐剤、クリーム剤またはフォーム剤として；（５）舌下投与；（６）眼内投与；（７)経皮投与；または（８）経鼻投与、に適した剤形等の、固体または液体形態で投与するように特別に処方することができる。
【０１７４】
本明細書における「医薬上許容される」という句は、妥当なベネフィット／リスク比に見合う、過度な毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症を伴わない、適切な医学的判断の範囲内でヒトおよび動物の組織に接触させて使用するのに適した化合物、材料、組成物および／または剤形を指す場合に用いられる。
【０１７５】
本発明の処方としては、経口投与、経鼻投与、局所投与（頬側および舌下投与を含む）、直腸投与、経膣投与および／または静脈内投与に適した処方が挙げられる。本発明の処方は、単位投与形態で好都合に提供することができ、薬学の当業者に知られている任意の方法で調製することができる。単回投与形態を製造するために担体材料と組み合わせることができる有効成分の量は、治療される宿主、特に投与方式に応じて変化することになる。
【０１７６】
本発明の医薬組成物の錠剤および他の固形製剤、例えば、糖衣剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤は、任意的に、割線を付与することも、コーティング（腸溶性コーティングや、医薬品製剤技術において知られている他のコーティング等）やシェルで被覆することもできる。これらはまた、含有される有効成分が徐放または放出制御されるような所望の放出プロファイルを得るために、例えば、様々な比率のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソームおよび／またはマイクロスフェアを使用して製剤化することもできる。これらは、速放性が得られるように、例えば凍結乾燥することにより製剤化することもできる。これらはまた、例えば、細菌捕捉フィルタ（ｂａｃｔｅｒｉａ−ｒｅｔａｉｎｉｎｇ  ｆｉｌｔｅｒ）で濾過するか、あるいは使用直前に滅菌水または他の注射可能な滅菌媒体に溶解することができる滅菌固体組成物の形態にある滅菌剤を混合することによって、滅菌することもできる。これらの組成物は、任意的に不透明化剤も含むことができ、また、消化管の特定の部位で、有効成分のみを、または有効成分を優先的に、任意的に遅れて放出させる組成物とすることもできる。使用可能な埋め込み剤用組成物としては、ポリマー物質およびロウが挙げられる。有効成分を、適切であれば１種または２種以上の上述の賦形剤と一緒に、マイクロカプセル化形態とすることもできる。
【０１７７】
本発明の化合物を経口投与するための液状製剤としては、医薬上許容される乳剤、マイクロエマルション製剤（ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ）、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が挙げられる。この液状製剤は、有効成分に加えて、当該技術分野において一般に使用されている不活性希釈剤（例えば、水または他の溶媒等）、可溶化剤および乳化剤（エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等）、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタン脂肪酸エステルならびにこれらの混合物を含むことができる。
【０１７８】
脂肪酸システアミン複合体の投与は治療薬の投与に適した任意の方式で行うことができる。このような方式としては、全身投与または局所投与（経口投与、経鼻投与、静脈投与、経皮投与、皮下投与、経膣投与、頬側投与、直腸投与、外用等の方式）が挙げられる。
【０１７９】
意図された投与方式に応じて、本発明の組成物は、場合により単位用量で、従来の製薬上の慣習に従い、固形剤、半固形剤または液状製剤、例えば、注射剤、錠剤、坐剤、丸剤、持続放出型カプセル剤、エリキシル剤、チンキ剤、乳剤、シロップ剤、散剤、液剤、懸濁剤等とすることができる。同様に、これらは静脈内投与（ボーラスおよび輸液（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）の両方）、腹腔内投与、皮下投与または筋肉内投与形態で投与することができ、いずれも医薬技術分野の当業者に知られている形態を使用する。
【０１８０】
例示的な医薬組成物は、脂肪酸システアミン複合体および医薬上許容される担体、例えば：ａ）希釈剤：例えば、精製水、トリグリセリド油（硬化植物油もしくは部分硬化植物油またはこれらの混合物、トウモロコシ油、オリーブ油、ヒマワリ油、紅花油、魚油（ＥＰＡやＤＨＡ等））またはこれらのエステルまたはトリグリセリドまたは混合物等；ｂ）滑沢剤：例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、そのマグネシウム塩またはカルシウム塩、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムおよび／またはポリエチレングリコール；錠剤用としても使用される、ｃ）結合剤：例えば、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、デンプンペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、炭酸マグネシウム、天然糖（グルコース、β−ラクトース等）、コーン由来甘味料（ｃｏｒｎ  ｓｗｅｅｔｅｎｅｒ）、天然および合成ガム（アカシア、トラガカント）、アルギン酸ナトリウム、ロウおよび／またはポリビニルピロリドン；必要に応じて、ｄ）崩壊剤：例えば、デンプン、寒天、メチルセルロース、ベントナイト、キサンタンガム、アルギン酸もしくはそのナトリウム塩、または発泡性混合物（ｅｆｆｅｒｖｅｓｃｅｎｔ  ｍｉｘｔｕｒｅ）；ｅ）吸収剤、着色剤、風味剤および甘味剤；ｆ）乳化剤または分散剤；例えば、Ｔｗｅｅｎ  ８０、Ｌａｂｒａｓｏｌ、ＨＰＭＣ、ＤＯＳＳ、ｃａｐｒｏｙｌ  ９０９、ｌａｂｒａｆａｃ、ｌａｂｒａｆｉｌ、ｐｅｃｅｏｌ、ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ、ｃａｐｍｕｌ  ＭＣＭ、ｃａｐｍｕｌ  ＰＧ−１２、ｃａｐｔｅｘ  ３５５、ｇｅｌｕｃｉｒｅ、ｖｉｔａｍｉｎ  Ｅ  ＴＧＰＳまたは他の許容される乳化剤；および／またはｇ）本発明化合物の吸収を高める薬剤：例えば、シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−シクロデキストリン、ＰＥＧ  ４００、ＰＥＧ  ２００；を含む錠剤およびゼラチンカプセル剤である。
【０１８１】
液体組成物、特に注射可能な組成物は、例えば、溶解、分散等により調製することができる。例えば、脂肪酸システアミン複合体を、医薬上許容される溶媒、例えば、水、生理飽和食塩水、デキストロース水溶液、グリセロール、エタノール等に溶解するかまたは混合し、それによって注射可能な等張性溶液または懸濁液を生成する。脂肪酸システアミン複合体を可溶化させるためにアルブミン、カイロミクロン粒子または血清タンパク等のタンパク質を使用することができる。
【０１８２】
脂肪酸システアミン複合体は坐剤として処方することもでき、この坐剤は、脂肪性乳化液または懸濁液（プロピレングリコール等のポリアルキレングリコールを担体として使用）から調製することができる。
【０１８３】
脂肪酸システアミン複合体はまた、小さい一枚膜リポソーム（ｓｍａｌｌ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）、大きい一枚膜リポソーム（ｌａｒｇｅ  ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）、多重層膜からなるリポソーム（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  ｖｅｓｉｃｌｅｓ）等のリポソーム送達系形態で投与することもできる。リポソームはコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンを含む様々なリン脂質から形成することができる。幾つかの実施形態においては、脂質成分の膜が薬物の水溶液で水和し、米国特許第５，２６２，５６４号明細書に記載されているように、薬物を封入する脂質層を形成する。
【０１８４】
非経口注射剤の投与は、一般に、皮下、筋肉内または静脈内注射および輸液によって行われる。注射剤は従来の剤形で、液剤もしくは懸濁剤のいずれか、または液体に用時溶解するのに適した固形剤として調製することができる。
【０１８５】
組成物は、それぞれ、従来の混合、造粒または被覆方法に従い調製することができ、本発明の医薬組成物は、脂肪酸システアミン複合体を、重量または体積基準で約０．１％〜約８０％、約５％〜約６０％または約１％〜約２０％含むことができる。
【０１８６】
本発明の脂肪酸システアミン複合体を利用する用法は、患者のタイプ、種、年齢、体重、性別および病状を含む様々な因子；治療すべき状態の重傷度；投与経路；患者の腎機能および肝機能；ならびに使用される具体的な脂肪酸システアミン複合体に応じて選択される。当業者すなわち医師または獣医師であれば、その状態の進行を予防、対抗または阻止するのに必要な薬物の有効量の決定および処方を容易に行うことができる。
【０１８７】
本発明の有効な投与量は、上述の効果を得るために使用する場合は、脂肪酸システアミン複合体を１日約２０ｍｇ〜約５，０００ｍｇの範囲である。ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで使用するための本発明の組成物は、脂肪酸システアミン複合体を約２０、５０、７５、１００、１５０、２５０、５００、７５０、１，０００、１，２５０、２，５００、３，５００または５，０００ｍｇ含むことができる。脂肪酸システアミン複合体の有効な血中濃度は１日当たり約５ｎｇ／ｍＬ〜５０００ｎｇ／ｍＬとすることができる。脂肪酸システアミンの適切な投与量は、Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｌ．Ｓ．；Ｇｉｌｍａｎ，Ａ．（１９７５）ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＢＡＳＩＳ  ＯＦ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ，５ｔｈ  ｅｄ．；ＭａｃＭｉｌｌａｎ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２０１−２２６の記載に従い決定することができる。脂肪酸システアミン複合体は、１日１回投与または１日量を１日２、３または４分割投与することができる。
【０１８８】
併用療法
脂肪酸システアミン複合体は、ＣＦＴＲ調節剤、上皮性ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）阻害剤、抗炎症剤、抗線維化剤、抗菌剤等の他の治療薬と一緒に投与することもできる。幾つかの実施形態において、他の治療薬は、ＣＦＴＲ調節剤である。ＣＦＴＲ調節剤の非限定的な例として、アイバカフトール（ＶＸ−７７０）、ルマカフトール（ＶＸ−８０９）、ＶＸ−６６１、オルカンビ（Ｏｒｋａｍｂｉ）（ＶＸ−７７０およびＶＸ−８０９の混合薬）、ＶＸ−１５２、ＶＸ−４４０、ＶＸ−６６１およびＶＸ−７７０の組合せ、ＶＸ−１５２／ＶＸ−８０９およびＶＸ−７７０の組合せ、ＶＸ−４４０／ＶＸ−８０９およびＶＸ−７７０の組合せ、Ｐ−１０３７、リオシグアト（Ｒｉｏｃｉｇｕａｔ）、Ｎ９１１１５、ＱＢＷ２５１、ＱＲ−０１０、ＧＬＰＧ１８３７、ＧＬＰＧ２２２２、ＧＬＰ２６６５、ゲニステイン、バイカレイン、エピガロカテキンガラート（ＥＧＣＧ）、トリメチルアンゲリシンおよびアタルレン（Ａｔａｌｕｒｅｎ）が挙げられる。
【０１８９】
幾つかの実施形態において、他の治療薬は抗炎症剤である。抗炎症剤の非限定的な例としては、イブプロフェン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、ベクロメタゾン、ブデソニド、フルチカゾン、モメタゾン、セレタイド（Ｓｅｒｅｔｉｄｅ）(フルチカゾン／サロメテロール配合剤)、シムビコート（Ｓｙｍｂｉｃｏｒｔ）（ブデソニド／ホルモテロール配合剤）およびＮ９１１１５が挙げられる。
【０１９０】
幾つかの実施形態において、他の治療薬は抗菌剤である。抗菌剤の非限定的な例として、アジスロマイシン、トブラマイシン、アズトレオナムリシン、コリスチン、アミノグリコシド、バンコマイシン、シプロフロサキシン、レボフロキサシンおよびスルホンアミドが挙げられる。
【０１９１】
幾つかの実施形態において、他の治療薬は上皮性ナトリウムチャネル（ＥＮａＣ）阻害剤である。ＥＮａＣ阻害剤の非限定的な例として、アミロリド、ＢＡ−３９−９４３７、ＧＳ−９４１１およびＰ−１０３７が挙げられる。
【０１９２】
幾つかの実施形態において、他の治療薬は抗線維化剤である。抗線維化剤の非限定的な例としては、ピルフェニドン、ニンテダニブ、ＩＮＴ−７６７、ＳＴＸ−１００、ＡＭ１５２、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｙｐｈｉｌｌｉｎｅ）、ＦＧ−３０１９、ＣＮＴＯ  ８８８、トラロキヌマブ（Ｔｒａｌｏｋｉｎｕｍａｂ）、ＳＡＲ１５６５９７、ＧＳ−６６２４、ＢＭＳ−９８６０２０、レブリキズマブ（Ｌｅｂｒｉｋｉｚｕｍａｂ）、ＧＳＫ２１２６４５８、ＡＣＴ−０６４９９２、ビスモデギブ、ＰＲＭ−１５１、ＩＷ００１およびフレソリムマブ（Ｆｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ）が挙げられる。
【０１９３】
Ｖ．医療用として使用するためのキット
本発明の他の態様は、障害を治療するためのキットを提供する。このキットは、ＣＦ等の内科的疾患を治療するための説明書、およびｉｉ）本明細書に記載する脂肪酸システアミン複合体を含む。このキットは、ある量の本明細書に記載する脂肪酸システアミン複合体を含む１または２以上の単位投与剤形を含むことができる。
【０１９４】
上述の説明は、脂肪酸システアミン複合体、脂肪酸システアミン複合体を含む組成物、脂肪酸システアミン複合体の使用方法およびキットを含む、本発明の複数の態様および実施形態を説明するものである。本特許出願は、あらゆる組合せおよび変形を具体的に意図している。
【実施例】
【０１９５】
本開示を以下に示す実施例によりさらに例示するが、これらは本開示の範囲および主旨を本明細書に記載する特定の手順に限定することを意図するものと解釈すべきではない。実施例は特定の実施形態を例示するために提供されるものであり、それによって本開示の範囲を制限するものではないと理解すべきである。
【０１９６】
実施例１
Ｎ−（２−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−２）の調製：
【化９９】
2017535579.tif 000100
典型的な実施においては、（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−Ｎ−（２−（（２−アミノエチル）ジスルファニル）エチル）イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド（１ｍｍｏｌ、国際公開第２０１２／１１５６９５号パンフレットに概説されている手順に従い調製）をＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）に、ニコチン酸（１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．１ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１．５ｍｍｏｌ）と一緒に加えた。得られた反応混合物を室温で８時間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水で希釈した。２層を分離した後、有機層を飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（９５％  ＣＨ２Ｃｌ２、５％  ＭｅＯＨ）で精製することによりＮ−（２−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミドを得た。ＭＳ（ＥＩ）  Ｃ３０Ｈ４３Ｎ３Ｏ２Ｓ２としての計算値：５４１．２８；実測値：５４２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１９７】
実施例２
Ｎ−（２−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミド（ＩＩ−３）の調製：
【化１００】
2017535579.tif 000101
１，２−ジ（ピリジン−２−イル）ジスルファン（２６ｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）溶液をシステアミン（５０ｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２００ｍＬ）溶液に室温で滴下した。得られた反応混合物を窒素の不活性雰囲気中、室温で２時間撹拌した後、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝１０／１）で精製することにより２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタン−１−アミン（３９ｇ、収率９２％）を得た。２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタン−１−アミン（５ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）、ＤＨＡ（９．２ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１０．２ｇ、２６．８ｍｍｏｌ）を含む混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）に加え、室温で撹拌した。次いでトリエチルアミン（１８ｍＬ、４０．３ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。得られた反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を合一し、水（３×１００ｍＬ）、飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ペンタン／ＥｔＯＡｃ）で精製することにより（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（１０ｇ、収率７５％）を淡褐色油状物として得た。
【０１９８】
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（４ｇ、８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ／ＤＭＦの１：１混合物（１０ｍＬ）に溶解した溶液に、１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール（１．１４ｇ、８ｍｍｏｌ）を室温で滴下した。得られた反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を合一し、水（２×５０ｍＬ）、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ペンタン／ＥｔＯＡｃ）で精製することにより（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（（１−アミノ−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（３．２ｇ、収率８１％）を淡褐色油状物として得た。
【０１９９】
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（（１−アミノ−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（３．２ｇ、６．５ｍｍｏｌ）および塩化ニコチノイル（１．８ｇ、１３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）に加えた。トリエチルアミン（３ｍＬ、１９．５ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。得られた混合物を室温で１８時間撹拌した後、水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を合一して水（２×５０ｍＬ）、飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた混合物をシリカゲルクロマトグラフィー（ペンタン／ＥｔＯＡｃ）で精製することにより、Ｎ−（２−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミド（２．２ｇ、収率５７％）を淡褐色油状物として得た。ＭＳ  Ｃ３４Ｈ４９Ｎ３Ｏ２Ｓ２としての計算値：５９５．３；実測値：５９６．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２００】
実施例３
Ｎ−（２−（（２−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミド（ＩＩ−４）の調製：
【化１０１】
2017535579.tif 000102
実施例２のＮ−（２−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−２−メチルプロピル）ニコチンアミドの調製に関し概説した手順を用いて、ＤＨＡをＥＰＡに替えることにより本化合物を調製した。ＭＳ  Ｃ３２Ｈ４７Ｎ３Ｏ２Ｓ２としての計算値：５６９．３；実測値：５７０［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０１】
実施例４
Ｎ−（２−（（１−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（ＩＩ−６）の調製：
【化１０２】
2017535579.tif 000103
２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタン−１−アミン（８ｇ、４０ｍｍｏｌ、１ｅｑ）およびニコチン酸（５．３ｇ、４０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１００ｍＬ）中に含む混合物を室温で撹拌した。次いでＨＡＴＵ（１８．３ｇ、４８ｍｍｏｌ、１．２ｅｑ）およびＥｔ３Ｎ（４．５８ｇ、４８ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、ＥｔＯＡｃで希釈し、水および飽和食塩水で洗浄した。有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で精製することによりＮ−（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（５．５ｇ、収率４５％）を黄色油状物として得た。Ｎ−（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（５．５ｇ、０．０１９ｍｏｌ）をＮａＯＨ／Ｈ２Ｏ（１．５ｇ／１５ｍＬ）中に含む混合物を材料が溶解するまで室温で撹拌した。次いで１−アミノ−２−メチルプロパン−２−チオール（２．１ｇ、０．０１９ｍｏｌ）を加え、次いでさらにＮａＯＨ／Ｈ２Ｏ（１．５ｇ／１５ｍＬ）を加えた。得られた反応混合物を室温で２時間撹拌した後、ＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた粗製固体をさらに精製することなくそのまま次の段階に使用した。Ｎ−（２−（（１−アミノ−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（２．５ｇ、８．７７ｍｍｏｌ）およびＥＰＡ（２．６５ｇ、８．７７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）中に含む混合物を室温で撹拌した。次いでＨＡＴＵ（４ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（１．０６５ｍｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、ＥｔＯＡｃで希釈した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣ををシリカゲルクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２＝１５／１）で精製することによりＮ−（２−（（１−（（５Ｚ，８Ｚ，１１Ｚ，１４Ｚ，１７Ｚ）−イコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエンアミド）−２−メチルプロパン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ニコチンアミド（１．６ｇ、収率３３％）を黄色油状物として得た。ＭＳ  Ｃ３２Ｈ４７Ｎ３Ｏ２Ｓ２としての計算値：５６９．３；実測値：５７０．３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０２】
実施例５
Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１７）の調製：
【化１０３】
2017535579.tif 000104
システアミン塩酸塩（７．８７ｇ、６９．３ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍＬ）溶液を２，２’−ジチオピリジン（２５．０ｇ、１１３．６ｍｍｏｌ）のメタノール（３００ｍＬ）溶液に滴下した。得られた反応混合物を室温で１８時間撹拌した。ジ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１５．１ｇ、６９．３ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム水溶液（５Ｍ、３０ｍＬ）をゆっくりと加えた。反応混合物を室温でさらに４時間撹拌した。次いで混合物を酢酸エチル（３００ｍＬ×２）で抽出した。有機層を合一して飽和食塩水（３００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝１０：１→５：１）で精製することにより２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８．３ｇ、収率４２．３％）を黄色油状物として得た。
【０２０３】
２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．８ｇ、２５．６ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した。次いでＨＣｌの１，４−ジオキサン溶液（５Ｍ、２０ｍＬ）を滴下した。得られた反応混合物を２時間撹拌した後、減圧下に濃縮することにより、２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタンアミン（５．６ｇ、収率１００％、ＨＣｌ塩）を得た。
【０２０４】
２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタンアミン（１２．０ｇ、６４．５ｍｍｏｌ）、ＤＨＡ（５１．６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２９．３ｇ、７７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５０ｍＬ）中に含む混合物を０℃に冷却し、ヒューニッヒ塩基（２５ｇ、１９０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を室温に戻し１８時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２００ｍＬ）を加えて反応を停止し、得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ×２）で抽出した。有機層を合一して飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２＝０．５％→２．０％）で精製することにより（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミドを黄色油状物として得た。
【０２０５】
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（４．８ｇ、９．６ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−アミノ−３−メルカプト−３−メチルブタン酸（１．４４ｇ、９．６ｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中に含む混合物を室温で１８時間撹拌した。次いでジ炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（２．１ｇ、９．６ｍｍｏｌ）を加え、次いで３Ｍの水酸化ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）をゆっくりと加えた。得られた反応混合物を室温で４時間撹拌した後、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層を合一して飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２＝０％→１．５％）で精製することにより（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン酸（５．４ｇ、収率８８．２％）を黄色油状物として得た。
【０２０６】
（Ｒ）−３−アミノプロパン−１，２−ジオール（０．１７ｇ、１．９ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン酸（１．２ｇ、１．９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（０．８６ｇ、２．２ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に含む混合物を０℃に冷却し、ヒューニッヒ塩基（０．７３ｇ、５．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に戻して１８時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）を加え、得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を合一して飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（メタノール／ＤＣＭ＝０．５％→２．５％）で精製することにより（（Ｒ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．９ｇ、収率６７．７％）を黄色油状物として得た。
【０２０７】
（（Ｒ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．０５ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（５ｍＬ）中に含む混合物を０℃に冷却し、５ＭのＨＣｌの１，４−ジオキサン（８ｍＬ）溶液を滴下した。得られた反応物を２時間撹拌した後、減圧下に濃縮することにより、（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（（（Ｒ）−３−アミノ−４−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−２−メチル−４−オキソブタン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミドのＨＣｌ塩を得た。
【０２０８】
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（（（Ｒ）−３−アミノ−４−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−２−メチル−４−オキソブタン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（ＨＣｌ塩、０．９５ｇ、１．４７ｍｍｏｌ）、ナイアシン（０．１８ｇ、１．５ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（０．６７ｇ、１．７６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に含む混合物を０℃に冷却し、ヒューニッヒ塩基（０．７６ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温に戻し１８時間撹拌した。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（３０ｍＬ）を加え、得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を合一して飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２＝１．０％→３．５％）で精製することによりＮ−（（Ｓ）−１−（（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（０．２８ｇ、収率２６．９％）を黄色油状物として得た。ＭＳ（ＥＩ）  Ｃ３８Ｈ５６Ｎ４Ｏ５Ｓ２としての計算値：７１２．３７；実測値：７１３．１５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２０９】
実施例６
Ｎ−（（Ｓ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−１８）の調製：
【化１０４】
2017535579.tif 000105
（Ｒ）−３−アミノプロパン−１，２−ジオールを２−アミノプロパン−１，３−ジオールに替えたことを除いて、化合物ＩＶ−１７（実施例５）の調製に関し概説した手順と同じ実験手順を用いた。ＭＳ（ＥＩ）  Ｃ３８Ｈ５６Ｎ４Ｏ５Ｓ２としての計算値：７１２．３７；実測値：７１３．１５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０２１０】
実施例７
（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）カルバメート（ＩＶ−６）の調製：
【化１０５】
2017535579.tif 000106
（Ｒ）−２−アミノ−３−メルカプト−３−メチルブタン酸を適切な出発物質として使用し、実施例５に概説した手順に従い（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン酸を調製した。（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン酸（８．０ｇ、１２．６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、次いでこの溶液を−１５℃に冷却しながらＮ−メチルモルホリン（１．３ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加えた後、クロロギ酸イソブチル（１．８ｇ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。得られた反応混合物を３０分間撹拌した。次いでこれを室温に加温し濾過した。濾液を−２０℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム（０．９６ｇ、２５ｍｍｏｌ）の水（２ｍＬ）中懸濁液を慎重に加えた。得られた反応混合物を２時間撹拌した後、水（２００ｍＬ）を加えて反応を停止した。得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ×４）で抽出した。有機層を合一して飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２＝０．５％→１．２％）で精製することにより（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−１−ヒドロキシ−３−メチルブタン−２−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（５．６ｇ、収率７１．８％）を黄色油状物として得た。この物質（５．６ｇ、９．０３ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却しながら５ＭのＨＣｌ／１，４−ジオキサン（１５ｍＬ）を滴下した。得られた反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、減圧下に濃縮することにより（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（（（Ｒ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチルブタン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミドのＨＣｌ塩を得た。
【０２１１】
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−（（（Ｒ）−３−アミノ−４−ヒドロキシ−２−メチルブタン−２−イル）ジスルファニル）エチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミドのＨＣｌ塩（１ｍｍｏｌ）を、ニコチン酸（１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１．１ｍｍｏｌ）およびヒューニッヒ塩基（１．５ｍｍｏｌ）と一緒にＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に加える。得られた反応混合物を室温で４時間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で希釈する。２層を分離して有機層を飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮する。クロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝９：１）で精製することにより、Ｎ−（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−１−ヒドロキシ−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミドを得る。この物質（０．５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍＬ）に加え、次いでこの溶液を０℃に冷却しながらピリジン（１．５ｍｍｏｌ、３ｅｑ）およびクロロギ酸４−ニトロフェニル（０．６ｍｍｏｌ）を加える。得られた反応混合物を室温に戻し１８時間撹拌する。次いで飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。有機層を合一して飽和食塩水で洗浄し、（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させ、減圧下に濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２＝０．５％→１．２％）で精製することにより（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）カルバメートを得る。２−アミノプロパン−１，３−ジオール（０．５ｍｍｏｌ）、（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）カルバメート（０．５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中で混合した混合物を０℃に冷却し、ヒューニッヒ塩基（１ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温に戻し１８時間撹拌する。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）を加え、得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。有機層を合一し、飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２＝１．０％→３．５％）で精製することにより、（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）カルバメートを得る。
【０２１２】
実施例８
Ｎ−（（Ｒ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミド（ＩＶ−８）の調製：
【化１０６】
2017535579.tif 000107
Ｎ−（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−１−ヒドロキシ−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミド（３．０ｍｍｏｌ；実施例７に従い調製することができる）をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）に溶解した後、溶液を０℃に冷却しながらデス・マーチン・ペルヨージナン（１．９ｇ、４．５ｍｍｏｌ）を加える。得られた反応混合物を室温に戻し、２時間撹拌する。次いでこれを飽和食塩水で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×８０ｍＬ）で抽出する。有機層を合一し、飽和食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）させ、減圧下に濃縮することにより、Ｎ−（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）ニコチンアミドを得る。得られた物質（１ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）に２−アミノプロパン−１，３−ジオール（１．２ｍｍｏｌ）と一緒に加えた後、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１．５ｍｍｏｌ）を加える。得られた反応混合物を室温で１８時間撹拌した後、減圧下に濃縮する。Ｎ−（（Ｒ）−１−（（１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル）アミノ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミドをシリカゲルクロマトグラフィーで精製することができる。
【０２１３】
実施例９
１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル）カルバメート（ＩＶ−１４）の調製：
【化１０７】
2017535579.tif 000108
Ｎ−（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−１−ヒドロキシ−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミド（３．６ｍｍｏｌ；実施例７に従い調製することができる）、フタルイミド（５．３ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（５．３ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）中に含む混合物を０℃に冷却し、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（ＤＩＡＤ、１７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を室温に戻し２時間撹拌する。飽和ＮＨ４Ｃｌ（２０ｍＬ）を加え、得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合一して飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で精製することにより対応するフタルイミドを得る。
【０２１４】
このフタルイミド（２．５ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍＬ）に溶解し、ＮＨ２−ＮＨ２・Ｈ２Ｏ（８５％、６ｍＬ）を加える。得られた反応混合物を３０分間撹拌する。得られた反応混合物を水（６０ｍＬ）で反応停止し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合一して飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮する。得られた残渣をシリカゲル（メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製することによりＮ−（（Ｒ）−１−アミノ−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミドを得る。
【０２１５】
２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−オール（０．５ｇ、２．７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却しながらピリジン（０．４４ｇ、５．４ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸４−ニトロフェニル（０．８４ｇ、４．１ｍｍｏｌ）を加える。得られた反応混合物を室温に戻して２時間撹拌する。得られた混合物をＥｔＯＡｃ（２×３０ｍＬ）で抽出する。有機層を合一して飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製することにより４−ニトロフェニル（２−フェニル−１，３−ジオキサン−５−イル）カーボネートを得る。この物質（１．０ｍｍｏｌ）およびＮ−（（Ｒ）−１−アミノ−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチルブタン−２−イル）ニコチンアミド）（１．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に加える。この混合物を０℃に冷却し、ヒューニッヒ塩基（２．０ｍｍｏｌ）を加える。得られた反応混合物を室温に戻し１８時間撹拌する。飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）を加え、得られた混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出する。有機層を合一し、飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下に濃縮する。得られた残渣を室温下で３ＮのＨＣｌ−ジオキサン（５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１ｍＬ）で２時間処理した後、減圧下に濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製することにより１，３−ジヒドロキシプロパン−２−イル（（Ｒ）−３−（（２−（（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド）エチル）ジスルファニル）−３−メチル−２−（ニコチンアミド）ブチル）カルバメートを得る。
【０２１６】
実施例１０
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミド（Ｉ−１）の調製：
【化１０８】
2017535579.tif 000109
（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミドは容易に酸化して対応するジスルフィド形態に変化しやすいため、アッセイ用として新たに調製した。国際公開第２０１２／１１５６９５号パンフレットに概説されている手順に従い、４Ｚ，４’Ｚ，７Ｚ，７’Ｚ，１０Ｚ，１０’Ｚ，１３Ｚ，１３’Ｚ，１６Ｚ，１６’Ｚ，１９Ｚ，１９’Ｚ）−Ｎ，Ｎ’−（ジスルファンジイルビス（エタン−２，１−ジイル））ビス（ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサンアミドを調製した。この物質（１２５ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（１．７５ｍＬ）に溶解した。次いでジチオトレイトールラセミ体（３０ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）をこのエタノール性溶液に加え、次いで１ＮのＮａＯＨ（２５０μＬ）で反応混合物のｐＨを約８．５〜９．０とした。得られた反応混合物を室温で４０分間撹拌した。この時点で、ＬＣ／ＭＳ分析により、所望の生成物、すなわち（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミドに完全に還元されたことが示された。その後、ＤＭＳＯ（４．５ｍＬ）をこの溶液に加えて、（４Ｚ，７Ｚ，１０Ｚ，１３Ｚ，１６Ｚ，１９Ｚ）−Ｎ−（２−メルカプトエチル）ドコサ−４，７，１０，１３，１６，１９−ヘキサエンアミドのＤＭＳＯ原液（５０ｍＭ）とした。この５０ｍＭのＤＭＳＯ原液を２４時間以内に使用する場合は−２０℃で保存した。より長期間（５日以内）保存する場合は原液を−８０℃で保存することが必要である。
【０２１７】
実施例１１
脂肪酸システアミン複合体がＨｕｈ−７細胞またはＨＴ−２９細胞におけるオートファジーおよび細胞膜表面ＣＦＴＲに及ぼす影響
化合物の調製：まず試験化合物を１００％ＤＭＳＯに溶解することにより５０ｍＭ溶液とし、次いでＦＢＳで１００倍に希釈することにより５００μＭの１０×原液を得た。
【０２１８】
イムノブロット：Ｈｕｈ−７細胞を１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭに播種し一晩培養した。培地を、ＤＭＥＭで１０倍希釈した薬物（最終濃度５０μｍ、１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ中）に交換した。薬物添加から４時間後、細胞をＲＩＰＡバッファーで溶解した。細胞溶解液を抗ＬＣ３Ａ／Ｂ抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  １２７４１）を用いたイムノブロッティングにより解析した。データをＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比として表し、溶媒処理した試料と比較した。
【０２１９】
共焦点顕微鏡：Ｈｕｈ−７細胞をカバーガラス上に播種して一晩培養した。細胞にＧＦＰ−ＬＣ３  ＢａｃＭａｎ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を２４時間感染させ、化合物ＩＩ−２で処理した。４時間後、細胞を２％パラホルムアルデヒドで固定し、ＤＡＰＩ含有退色防止封入剤（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）で封入した。４０×レンズを取り付けたＺｅｉｓｓ  ＬＳＭ  ５１０を用いて画像を取得した。ＧＦＰ−ＬＣ３（緑色蛍光）の斑点状蛍光像の強度の増大がオートファジーの活性化に特徴的であることは当業者によく知られている。
【０２２０】
細胞表面のビオチン標識：ＨＴ−２９細胞を１０ｍｍ２プレート上で１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ中２．０×１０６個となるように播種し一晩培養した。培地をＤＭＥＭで１０倍希釈した薬物（最終濃度５０μｍ、１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ中）に交換した。薬物添加から２４時間後、細胞表面をビオチニアルション（ｂｉｏｔｉｎｙａｌｔｉｏｎ）するためにＰｉｅｒｃｅ  Ｃｅｌｌ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ８９８８１）を用いて細胞を処理した。簡潔に説明すると、細胞を冷ＰＢＳで１回洗浄し、スルホ−ＮＨＳ−ＳＳ−ビオチンを添加して４℃で３０分間インキュベートした後、反応停止液を添加して反応を停止した。細胞を掻き取り、溶解し、１０，０００×ｇで遠心した。細胞懸濁液にＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ  Ａｇａｒｏｓｅを添加し室温で６０分間インキュベートした。細胞ペレット（細胞内）をＲＩＰＡバッファーで溶解した。ＮｅｕｔｒＡｖｉｄｉｎ  Ａｇａｒｏｓｅ（細胞表面）に結合したタンパク質をＤＴＴ（５０ｍＭ）を含有するＳＤＳ−ＰＡＧＥ用サンプルバッファーで溶出した。細胞表面部分および細胞内部分を両方共、抗ＣＦＴＲ抗体を用いたイムノブロッティングにより解析した。
【０２２１】
結果
Ｈｕｈ細胞においては、化合物ＩＩ−２で処理することにより、試験を行った両方の濃度（すなわち脂肪酸システアミン誘導体ＩＩ−２を２５μＭおよび５０μＭ）において、オートファジーマーカーであるＬＣ３−ＩＩ（下側のバンド）量が増加した（図１Ａ参照）。濃度が低い方の２５μＭに関し定量解析を行ったところ、化合物ＩＩ−２で処理することによりＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比（図１Ｂ）が増大することが判明した。このことは、オートファジー形成の分子マーカーであるＬＣ３−ＩからＬＣ３−ＩＩへの変換が促進されたことを示唆している。Ｌｅｖｉｎｅ  ａｎｄ  Ｋｒｏｅｍｅｒ（２００８）ＣＥＬＬ，１３２，ｐ．２７−４２において言及されているように、ＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比の増大はオートファジーが活性化されたことを示唆している。同様に、ＨＴ−２９細胞および化合物ＩＩ−３を用いてインキュベーションを行う実験を行った。図２Ｃに示すように、ＨＴ−２９細胞を化合物ＩＩ−３（５０μＭ）と一緒にインキュベートすると、溶媒対照群と比較してＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比が増大したことから分かるように、オートファジーが活性化された。これらのＨＴ−２９細胞においてオートファジーが活性化されていることは、細胞膜上のＣＦＴＲが溶媒対照群と比較して増加していることに対応する（図２Ｄ）。図２Ｅに、ＨＴ−２９細胞を５０μＭの化合物ＩＶ−１１およびＩＶ−１２とインキュベートした結果をまとめる。化合物ＩＶ−１１またはＩＶ−１２のいずれかを含む処理群はオートファジーが活性化されており、これは細胞膜上のＣＦＴＲが増加したことに対応する。
【０２２２】
実施例１２
Ｈｕｈ−７細胞またはＨＴ−２９細胞における脂肪酸システアミン複合体の相乗作用
実施例１１に詳述した手順と同一の実験手順を用いた。但し、上に述べたように薬物添加から４時間後に細胞をＲＩＰＡバッファーに溶解したことに替えて、２時間後に溶解した。細胞溶解物を同様に抗ＬＣ３Ａ／Ｂ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２７４１）でイムノブロッティングすることにより解析した。データをＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比として表し、溶媒処理した試料と比較した。図２Ａに示すように、化合物ＩＩ−２（５０μＭ）で処理することにより、オートファジーマーカーであるＬＣ３−ＩＩ（下側のバンド）が、シスタミン（５０μＭ）、ＥＰＡ（５０μＭ）またはシスタミン（５０μＭ）およびＥＰＡ（５０μＭ）の組合せのいずれかで同様に処理した場合と比較して相乗的に増加した。定量解析から、ＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比が溶媒対照群と比較して２倍増加することが分かった（図２Ｂ）。これは、オートファジー活性化の公知の分子マーカーであるＬＣ３−ＩからＬＣ３−ＩＩへの変換が増加したことを示している。化合物ＩＩ−２を用いることによってオートファジーが相乗的に活性化された、すなわち、個々の成分（すなわち、シスタミンおよびＥＰＡ）または個々の成分の組合せを使用した場合に達成される活性化効果が相乗的に増大した。
【０２２３】
これと同じ相乗効果に関する実験を、Ｈｕｈ−７細胞に関し、化合物ＩＩ−２で４時間処理した後に実施した。個々の成分をより高い濃度で用いる実験も同時に行った（シスタミン、ＥＰＡまたはシスタミンおよびＥＰＡを各２５０μＭ）。結果を図３Ａおよび図３Ｂにまとめる。この場合もやはり、ＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比がより高いことから分かるように、細胞を化合物ＩＩ−２（５０μＭ）で処理することにより、オートファジーが相乗的に、より高度に活性化された。このオートファジー活性化レベルは、はるかに高い濃度のシスタミン（２５０μＭ）、ＥＰＡ（２５０μＭ）またはシスタミンおよびＥＰＡ（各２５０μＭ）の組合せを用いてさえも達成されなかった。
【０２２４】
これと同じ相乗効果に関する実験を、化合物ＩＩ−３およびＨＴ−２９細胞を用いて行った。この実験においては、ＨＴ−２９細胞を次に示す各群と一緒に２４時間インキュベートした：１）溶媒対照群；２）シスタミン（２５μＭ）；３）ＤＨＡ（２５μＭ）；４）シスタミン（２５μＭ）およびＤＨＡ併用；５）シスタミン（２５０μＭ）；６）ＤＨＡ（２５０μＭ）；７）シスタミン（２５０μＭ）およびＤＨＡ（２５０μＭ）併用；８）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）。結果を図４にまとめる。ここに示す結果は３回の別々の測定の平均値である。化合物ＩＩ−３（２５μＭ）で処理したＨＴ−２９細胞は、ＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比が溶媒対照群よりも高いことから分かるように、オートファジーが相乗的に、より高度に活性化された。このオートファジー活性化レベルは、次に示すどの処理群を用いても達成できなかった：１）溶媒対照群；２）シスタミン（２５μＭ）；３）ＤＨＡ（２５μＭ）；４）シスタミン（２５μＭ）およびＤＨＡ併用；５）シスタミン（２５０μＭ）；６）ＤＨＡ（２５０μＭ）；７）シスタミン（２５０μＭ）およびＤＨＡ（２５０μＭ）併用。図４に示すように、化合物ＩＩ−３に伴うオートファジー活性化作用は、初代ＣＦ細胞を個々の成分（すなわち、２５μＭまたは２５０μＭシのスタミンおよびＤＨＡ）または個々の成分の組合せで処理することでは再現することができなかった。
【０２２５】
実施例１３
脂肪酸システアミン複合体がΔＦ５０８欠損ＣＦＴＲ変異体ホモ接合型ＣＦ患者由来の初代ヒト気管支上皮細胞に及ぼす効果：イムノブロット解析および免疫沈降
本発明の化合物はオートファジーを活性化する能力を有することから、ＣＦの治療に有用となり得ると考えられている。本発明の化合物を、次に示す細胞アッセイにより、欠陥を持つＣＦＴＲ変異体を救出して細胞膜へ輸送する能力を測定することにより評価を行った。
【０２２６】
ΔＦ５０８ホモ接合型ＣＦ患者由来の初代細胞をＡｓｔｅｒａｎｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）またはＣｈａｎＴｅｓｔ，ａ  Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）のいずれかより入手した。次いで本発明の化合物が欠陥ＣＦＴＲを救出する能力を求めるために細胞を様々な濃度で処理した。Ｄｅｒｉｃｈｓ（２０１３）ＥＵＲ．ＲＥＳＰ．ＲＥＶ．，２２，ｐ．５８−６５に概説されているように、イムノブロットにより変異ＣＦＴＲのバンドＣがうまく検出できれば、欠陥ＣＦＴＲを救出して細胞膜に輸送できたことを示唆している。
【０２２７】
化合物の調製
本発明の化合物をまず１００％ＤＭＳＯに溶解して５０ｍＭ溶液とし、次いでＦＢＳで１００倍に希釈することにより５００μＭの１０×原液を得た。
【０２２８】
イムノブロット
初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８ホモ接合体、供給元：ＣｈａｎＴｅｓｔ、ＫＫＣＦＦＴ００４Ｉ）を準備し、Ａｍａｒａｌ，Ｍ．Ｄ．  ａｎｄ  Ｋｕｎｚｅｌｍａｎｎ，Ｋ．（Ｅｄｓ）ＣＹＳＴＩＣ  ＦＩＢＲＯＳＩＳ，ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，７４１，ＤＯＩ  １０．１００７／９７８−１−６１７７９−１１７−８＿４  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＋Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ，ＬＬＣ  ２０１１）に概説された手順に従い、ＳｎａｐｗｅｌｌＴＭ細胞培養インサート（ｆｉｌｔｅｒ  ｉｎｓｅｒｔ）上で培養した。初代ＣＦ細胞を、ダルベッコＭＥＭ（ＤＭＥＭ）／Ｆ１２、Ｕｌｔｒｏｓｅｒ−Ｇ（２．０％；Ｐａｌｌ、カタログ番号１５９５０−０１７）、ｆｅｔａｌ  ｃｌｏｎｅ  ＩＩ（２％）、インスリン（２．５μｇ／ｍＬ）、ウシ脳抽出物（０．２５％；Ｌｏｎｚａ、キット番号ＣＣ−４１３３、成分番号ＣＣ−４０９２Ｃ）、ヒドロコルチゾン（２０ｎＭ）、トリヨードサイロニン（５００ｎＭ）、トランスフェリン（２．５μｇ／ｍＬ：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号００３０１２４ＳＡ）、エタノールアミン（２５０ｎＭ）、エピネフリン（１．５μＭ）、ホスホエタノールアミン（２５０ｎＭ）およびレチノイン酸（１０ｎＭ）からなる分化培地で培養した。試験化合物は、上に概説した手順に従いＦＢＳに溶解し、所望の濃度に希釈した後、３７℃の分化培地に挿入した各ＳｎａｐｗｅｌｌＴＭ細胞培養インサートに添加した。薬物添加から２４時間後、細胞を急速凍結した後、ＲＩＰＡバッファーで溶解した。タンパク質濃度をバイオ・ラッド・プロテイン・アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ）により測定した。ｔｏｔａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｙｓａｔｅ（５０μｇ）を抗ＣＦＴＲ抗体、抗Ｂｅｃｌｉｎ−１抗体、抗ｐ６２抗体および抗ＬＣ３抗体でイムノブロットを行うことにより分析した。免疫活性をローディングコントロールであるアクチンで標準化した。ＣＦＴＲ−バンド−Ｃ／アクチン、Ｂｅｃｌｉｎ−１／アクチン、ｐ６２／アクチンおよびＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉの各比を、溶媒処理した試料と比較したデータで表した。ＣＦＴＲクローンＭ３Ａ７（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２２６９）、ＬＣ３Ａ／Ｂ抗体（Ｃｅｌｌ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，１２７４１）、Ｂｅｃｌｉｎ−１（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，３４９５）、ｐ６２（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５１１４）およびβ−アクチン（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，４９７０）に対する抗体を一次抗体として使用した。
【０２２９】
化合物ＩＩ−３を初代ＣＦ細胞と一緒に２４時間インキュベートすることにより機能回復した（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ  ｒｅｓｃｕｅｄ）ＣＦＴＲバンドＣの量をイムノブロットで定量化した。図５Ａに、初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体、ＣｈａｎＴｅｓｔ、ＫＫＣＦＦＴ００４Ｉ）を次に示す処理群と２４時間インキュベートした結果をまとめる：１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；２）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）併用；３）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）併用；４）化合物ＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）併用。初代ＣＦ細胞をＶＸ−８０９およびＶＸ−７７０の組合せで処理することにより、ＣＦＴＲバンドＣの量が増加した。図５Ａに示すように、化合物ＩＩ−３をＶＸ−８０９およびＶＸ−７７０と併用することにより、ＣＦＴＲバンドＣの量がより顕著に増加した。この効果は用量依存的でもあった。ここに示した結果は３回の別々の測定の平均値である。
【０２３０】
化合物Ｉ−１についても同様に、初代ＣＦ細胞と一緒に２４時間インキュベートし、機能回復したＣＦＴＲバンドＣの量をイムノブロットにより定量化した。図５Ｂに、初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体、ＣｈａｎＴｅｓｔ、ＫＫＣＦＦＴ００４１）を次に示す処理群と一緒に２４時間インキュベートした結果をまとめる：１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；２）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）併用；３）化合物Ｉ−１（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）併用；４）化合物Ｉ−１（１０μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）併用。図５Ｂに示すように、化合物Ｉ−１をＶＸ−８０９およびＶＸ−７７０と併用することにより、ＣＦＴＲバンドＣの量がより顕著に増加した。この効果は用量依存的でもあった。ここに示した結果は３回の別々の測定の平均値である。
【０２３１】
実施例１２に記載した実験と同じ相乗効果に関する実験を同じ初代ＣＦ細胞を用いて行った。図５Ｃに、初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体、供給元、ＣｈａｎＴｅｓｔ、ＫＫＣＦＦＴ００４Ｉ）を次に示す処理群と一緒に２４時間インキュベートした結果をまとめる：１）溶媒対照群；２）シスタミン（２５μＭ）；３）ＤＨＡ（２５μＭ）；４）シスタミン（２５μＭ）およびＤＨＡ（２５μＭ）併用；５）シスタミン（２５０μＭ）；６）ＤＨＡ（２５０μＭ）；７）シスタミン（２５０μＭ）およびＤＨＡ（２５０μＭ）併用；８）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）。図５Ｃに示すように、化合物ＩＩ−３（２５μＭ）は、溶媒対照群よりもＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比が増加していることから分かるように、初代ＣＦ細胞のオートファジーを活性化させた。このオートファジー活性化レベルは、上記初代ＣＦ細胞を個々の成分（すなわち、２５μＭまたは２５０μＭのシスタミンおよびＤＨＡ）または個々の成分の組合せで処理しても再現することができなかった。ここに示した結果は３回の別々の測定の平均値である。
【０２３２】
初代ＣＦ細胞における相乗効果に関する実験は、機能回復させることができたＣＦＴＲ、すなわちバンドＣの量の評価に使用することも可能であった。図５Ｄに、初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８のホモ接合体、供給元、ＣｈａｎＴｅｓｔ、ＫＫＣＦＦＴ００４Ｉ）を次に示す処理群と一緒に２４時間インキュベートした結果をまとめる：１）溶媒対照群；２）シスタミン（２５μＭ）；３）ＤＨＡ（２５μＭ）；４）シスタミン（２５μＭ）およびＤＨＡ（２５μＭ）併用；５）シスタミン（２５０μＭ）；６）ＤＨＡ（２５０μＭ）；７）シスタミン（２５０μＭ）およびＤＨＡ（２５０μＭ）；８）化合物Ｉ−１（２５μＭ）。図５Ｄに示すように、初代ＣＦ細胞を化合物Ｉ−１（２５μＭ）で処理することによりＣＦＴＲのバンドＣの量が大幅に増加した。この効果は、上記初代ＣＦ細胞を個々の成分（すなわち、２５μＭまたは２５０μＭのシスタミンおよびＤＨＡ）または個々の成分の組合せで処理しても再現することはできなかった。ここに示した結果は３回の別々の測定の平均値である。
【０２３３】
図５Ｅ、５Ｆ、５Ｇおよび５Ｈに初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８接合体）を用いた化合物ＩＩ−３の作用機序研究の結果をまとめる。ここに示した結果は３回の別々の測定の平均値である。ＣＦにおいてオートファジーは機能低下している（ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ）。オートファジーは、オートファジー活性化剤である化合物ＩＩ−３により回復するので、それに対応してＢｅｃｌｉｎ−１の上昇、ｐ６２量の低下、そして最終的にはＣＦＴＲバンドＣの量の増加が観測されるはずである。初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８接合体）を次に示す処理群で２４時間処理した：１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；２）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；３）ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；４）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）。オートファジーが回復したことから、図５Ｅにおいて、化合物ＩＩ−３を含む２つの処理群はＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比が期待された通り増加を示した。オートファジーが亢進したことから、それに対応して、化合物ＩＩ−３を含む２つの処理群はＢｅｃｌｉｎ−１の発現量が増加（図５Ｆ）すると共に、ｐ６２の発現量が低下（図５Ｇ）した。ｐ６２の発現量が低下することにより、折り畳み異常のΔＦ５０８ＣＦＴＲの一部が小胞体における隔離から逃れ、細胞表面に輸送された。このことはＣＦＴＲバンドＣの増加として現れた。図５Ｈに示すように、化合物ＩＩ−３（２５μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）を併用することによって、ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）を併用した場合よりも顕著な相加作用が得られた。
【０２３４】
実施例１４
フィッシャー・ラット甲状腺上皮細胞のＣＦＴＲイオンチャネル活性を機能回復する化合物に関する、ウッシング・チャンバを用いた評価
ＣＦ膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）のＣｌ−チャネルにおいて最も高頻度に発生する、疾患を引き起こす変異が、ＣＦＴＲ一次配列の５０８番目に位置するフェニルアラニンの欠失である（ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ）。この変異はトラフィッキング障害を引き起こし、その結果として細胞表面のΔＦ５０８−ＣＦＴＲタンパク質の量が深刻なほど低下する。トラフィッキング障害は、低温培養（２７℃で一晩）するかまたは低分子およびＣＦＴＲ矯正剤によって薬物により矯正（ｃｏｒｒｅｃｔ）することができる。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを過剰発現させたフィッシャー・ラット甲状腺（ＦＲＴ）上皮細胞をＳｎａｐｗｅｌｌＴＭ細胞培養インサートで単層培養し、そのＣｌ−イオン輸送機能を、ＣＦＴＲ作動薬（ａｇｏｎｉｓｔ）により惹起されたウッシング上皮膜電位固定装置（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｖｏｌｔａｇｅ  ｃｌａｍｐ  ａｐｐａｒａｔｕｓ）の出力短絡電流（ＩＳＣ）としてモニターする。本研究の目的は、ＦＲＴ上皮細胞の単層において、欠陥を持つΔＦ５０８−ＣＦＴＲの機能を試験化合物が回復する能力を測定することにある。
【０２３５】
矯正剤の効力の測定は２段階に分けて行う。最初の段階においては、上皮を試験化合物と一緒に一定期間（２時間〜１または２日間の範囲とすることができる）、３７℃のインキュベーターでインキュベートし、第２段階においては、上皮のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ  Ｃｌ−チャネルの電流を上皮膜電位固定（ウッシング・アッセイ）により測定する。短絡条件（経上皮電位差（ｔｒａｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）０ｍＶ）下で短絡電流（ＩＳＣ）を測定する。ＩＳＣの大きさは矯正剤の効力の指標であり、溶媒および陽性対照と比較する。
【０２３６】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ  ｃＤＮＡを安定的にトランスフェクトした低温保存ＦＲＴ細胞（Ｐｅｄｅｍｏｎｔｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｊ．ＣＬＩＮ．ＩＮＶＥＳＴ．，１１５，ｐ．２５６４−２５７１）を増幅培養させ、ウッシング装置（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎｄ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で短絡電流を測定するためにＳｎａｐｗｅｌｌＴＭ細胞培養インサートに播種した。細胞をゼオシンおよびＧ−４１８を添加したＣｏｏｎ’ｓ変法Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２培地で培養した。
【０２３７】
アッセイを実施するために本発明の化合物を次に示すように溶解した：
１）１００％ＤＭＳＯに溶解し２５ｍＭ原液を調製する。
２）２５ｍＭ原液（１２μＬ）をＦＢＳ（１．２０ｍＬ）で希釈することにより、中間希釈液である２５０μＭの１０×原液（１％ＤＭＳＯ、９９％ＦＢＳ）を調製。溶液が透明になるまで全ての溶液を穏やかにｖｏｒｔｅｘする。
３）１０×原液（４００μＬ）および１０×培地（ｃａｒｒｉｅｒ）（１％  ＤＭＳＯ、９９％  ＦＢＳ）（６００μＬ）をＣｏｏｎ’ｓ培地（９０００μＬ）に添加することにより、１条件当たり（ｐｅｒ  ｗｅｌｌ）１０ｍＬ（４ウェル  ×  ボトムウェル（各２ｍＬ）＋インサート（１個当たり０．２ｍＬ）＝８．８ｍＬに加えて、補充用１．２ｍＬ）とし、Ｃｏｏｎ’ｓ培地中濃度１０μＭの最終希釈液を調製する。
【０２３８】
本実施例を実施するために、試験化合物を溶解し、ウッシング・チャンバ用の適切なインサートに添加した（各試験化合物につきｎ＝４、最終試験濃度１０μＭ）。同時に、ＤＭＳＯ溶媒対照および陽性対照（ＶＸ−８０９（３μＭ））も使用した。この特定の実施例においては、全ての試験物質（陽性対照を含む）を細胞と一緒に４時間インキュベートした。ＳｎａｐｗｅｌｌＴＭ細胞培養インサート上で培養したＦＲＴ細胞の単層をＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓウッシング型記録用チャンバ（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に移し、側底側（ｂａｓｏｌａｔｅｒａｌ  ｓｉｄｅ）にＨＢ−ＰＳを、頂端側（ａｐｉｃａｌ  ｓｉｄｅ）に７８ＣＦ−ＰＳを潅流させた。次いで、６チャンネルまたは８チャンネルのＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製ＶＣＣ  ＭＣ６またはＶＣＣ  ＭＣ８上皮電位固定装置を１台または２台以上取り付け、試験全体を通して短絡電流（ＩＳＣ）を記録した。ＩＳＣ測定を開始するためにＳｎａｐｗｅｌｌＴＭ細胞培養インサートの側底側にアンフォテリシン（１００μＭ）を加え、上皮細胞を１５分間膜透過処理した。フォルスコリン（１０μＭ）、ＩＢＭＸ（１００μＭ）、ゲニステイン（２０μＭ）およびＣＦＴＲｉｎｈ−１７２（２０μＭ）を、次に示す時間インキュベートした後、順次添加した：それぞれ、１５分間、２０分間、１０分間、１５分間および１５分間。データの取得および解析はｉＷｏｒｘ社製データ取得装置およびＬａｂｓｃｒｉｂｅ  ２  ソフトウェア（ｉＷｏｒｘ，Ｄｏｖｅｒ，ＮＨ）を用いて行った。陽性対照である矯正剤、陰性対照の両方および試験物質で処理したそれぞれの上皮間で、アゴニストにより惹起されたＩＳＣを一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）により比較し、次いでダネットの多重比較検定および適切であればスチューデントのｔ検定を行った。Ｐ＜０．０５であれば矯正効果が有意であると判断する。
【０２３９】
本アッセイにおいて、陽性対照であるＶＸ−８０９は、上記試験条件下で細胞をフォルスコリン、ＩＢＭＸで順次処理し、次いでＣＦＴＲ賦活薬であるゲニステインで処理することにより、欠陥ＣＦＴＲを機能回復させることができた。ＣＦＴＲ特異性を試験するために、市販の阻害剤であるＣＦＴＲｉｎｈ−１７２（化学名（Ｅ）−４−（（４−オキソ−２−チオキソ−３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）チアゾリジン−５−イリデン）メチル）安息香酸（ＣＡＳｎｏ．３０７５１０−９２−５））を試験終了間際に加えて短絡電流をベースラインに戻した。このアッセイプロトコールを用いて、ウッシング・チャンバを使用し、ＦＲＴ細胞内で化合物ＩＩ−２（１０μＭ）の評価を行った。次いで、これらの実験から短絡電流（ＩＳＣ）の経時変化（分）を記録した。結果を図６に示す。短絡電流が溶媒対照群と比較して増大していた。つまり、化合物ＩＩ−２によってＣＦＴＲの機能を回復することができた。
【０２４０】
このアッセイの別のプロトコールは、本発明の化合物をＶＸ−７７０またはＶＸ−８０９およびＶＸ−７７０の組合せと一緒に長時間（ｃｈｒｏｎｉｃ）プレインキュベートすることを含むものとした。このプロトコールを用いて、本発明の化合物を、ＶＸ−７７０またはＶＸ−７７０およびＶＸ−８０９の組合せのいずれかと一緒に、上に概説したプロトコールと同様にして２４時間プレインキュベートした。まずアンフォテリシン（１００μＭ）を添加して細胞膜を透過処理した。アンフォテリシン添加から１５分後、フォルスコリン（２０μＭ）を添加した。フォルスコリン添加から２０分後、市販の阻害剤であるＣＦＴＲｉｎｈ−１７２を添加した。次いでＣＦＴＲｉｎｈ−１７２添加から１５分後、反応を停止した。次いでこの実験から短絡電流の典型的な波形を取得した。本発明の化合物の機能的活性（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）を溶媒群および陽性対照群と比較することにより評価した。ウッシング・チャンバを用いた全ての実験においては、陽性対照として、ＣＦＴＲ矯正剤ＶＸ−８０９（３μＭ）およびＣＦＴＲ賦活剤ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）の組合せを用いた。２つの時点、すなわち、最初のフォルスコリン添加後と、その後のＣＦＴＲｉｎｈ−１７２の添加後とのΔＩＳＣを求めるために短絡電流の定量化を行った（このアッセイのより包括的な説明は、Ｖａｎ  Ｇｏｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＰＮＡＳ，１０８，ｎｏ．４６，ｐ．１８８４３−１８８４８を参照されたい）。図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄおよび７Ｅは、ＦＲＴ細胞を次に示す処理群と２４時間インキュベートした後のデータをまとめたものである：１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；２）化合物ＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；３）陽性対照群、ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；４）化合物ＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）。各処理群につき４個の別々のインサートを用いて評価した。図７Ａに示すように、本アッセイにおいて、化合物ＩＩ−３は、短絡電流が増大したことから分かるように機能的活性を示した。この効果はＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０の組合せで最も顕著であった。図７Ｂは、フォルスコリン添加後の定常状態の反応（ｓｔｅａｄｙ  ｓｔａｔｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）をΔＩＳＣ（μＡ／ｃｍ２）の測定値として定量化したものである。図７Ｃは、同じ反応を、対照に対する％として表したものである（陽性対照であるＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０を１００％とした）。ＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−７７０の組合せは、溶媒＋ＶＸ−７７０群よりも若干強い反応を示した。ＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０からなる組合せは陽性対照と比較して１４３．６％という顕著な増大を示した。図７Ｄは、ＣＦＴＲｉｎｈ−１７２添加後の定常状態の反応をΔＩＳＣ（μＡ／ｃｍ２）として測定して定量化したものである。図７Ｅは、同じ反応を対照に対する％として表したものである（陽性対照ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０を１００％とした）。この場合も同様に、上記時点において、ＩＩ−３（１０μＭ）＋ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０からなる組成物は陽性対照に対���１４４．０％という大幅な上昇を示した。
【０２４１】
実施例１５
初代ＣＦ気管支上皮細胞（ΔＦ５０８ホモ接合体）のＣＦＴＲイオンチャネル活性を機能回復する化合物に関する、ウッシング・チャンバを用いた評価
初代ＣＦ細胞（ΔＦ５０８ホモ接合体、供給元：ＣｈａｎＴｅｓｔ、ＫＫＣＦＦＴ００４Ｉ）を準備し、Ａｍａｒａｌ，Ｍ．Ｄ．  ａｎｄ  Ｋｕｎｚｅｌｍａｎｎ，Ｋ．（Ｅｄｓ）Ｃｙｓｔｉｃ  Ｆｉｂｒｏｓｉｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ７４１，ＤＯＩ  １０．１００７／９７８−１−６１７７９−１１７−８＿４  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ＋Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｍｅｄｉａ，ＬＬＣ  ２０１１に概説されている手順に従い、ＳｎａｐｗｅｌｌＴＭ細胞培養インサート上で培養した。初代ＣＦ細胞を、ダルベッコＭＥＭ（ＤＭＥＭ）／Ｆ１２、Ｕｌｔｒｏｓｅｒ−Ｇ（２．０％；Ｐａｌｌ、カタログ番号１５９５０−０１７）、ｆｅｔａｌ  ｃｌｏｎｅ  ＩＩ（２％）、インスリン（２．５μｇ／ｍＬ）、ウシ脳抽出物（０．２５％；Ｌｏｎｚａ、キット番号ＣＣ−４１３３、成分番号ＣＣ−４０９２Ｃ）、ヒドロコルチゾン（２０ｎＭ）、トリヨードチロニン（５００ｎＭ）、トランスフェリン（２．５μｇ／ｍＬ：Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号００３０１２４ＳＡ）、エタノールアミン（２５０ｎＭ）、エピネフリン（１．５μＭ）、ホスホエタノールアミン（２５０ｎＭ）およびレチノイン酸（１０ｎＭ）からなる分化培地で培養した。
【０２４２】
試験化合物を次に示すようにＦＢＳに溶解した：試験化合物の２５ｍＭ  ＤＭＳＯ原液（１００μＬ）を遠心管内においてＦＢＳ（１０．０ｍＬ）で希釈することにより、中間希釈液である２５０μＭの１０×原液（１％  ＤＭＳＯ、９９％  ＦＢＳ）を調製した。この溶液を遠心管内で室温下に１時間静置した後、廃棄した。次いでこの状態調整した遠心管内で新たに２５０μＭの１０×原液を調製した。この１０×原液を使用して次の濃度の試験物質を調製した。例えば、この１０×原液１０００μＬを分化培地９０００μＬに加えることにより、濃度２５μＭの分化培地（１０ｍＬ）を調製した。この２５μＭ溶液を遠心管内において室温で１時間静置した後、廃棄した。次いでこの状態調整した遠心管内で新たに２５μＭ溶液を調製した。１０×原液（４００μＬ）を分化培地（９０００μＬ）および１％ＤＭＳＯ、９９％ＦＢＳ溶液（６００μＬ）に加えることにより、濃度１０μＭの分化培地１０ｍＬを調製した。これに続く、分化培地１０ｍＬ中３μＭおよび１μＭの濃度の調製も、同様にして、適切な量の１０×原液を分化培地および１％ＤＭＳＯ、９９％ＦＢＳ溶液に加えることにより行った。希釈工程には全て上に述べた状態調整工程と同じ工程を用いた。
【０２４３】
次いでウッシング・チャンバ・アッセイを実施するために、上に概説した手順に従いＦＢＳに溶解して所望の濃度に希釈した試験化合物を、個々のＳｎａｐｗｅｌｌＴＭ細胞培養インサートの分化培地に３７℃で添加した。薬物添加から２４時間後、インサートをＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓウッシング型記録用チャンバ（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）に装着し、頂端側チャンバおよび側底側チャンバ中に維持した。両チャンバは、組成が：ＮａＣｌ（１３７ｍＭ）；ＫＣｌ（４．０ｍＭ）；ＣａＣｌ２（１．８ｍＭ）；ＭｇＣｌ２（１ｍＭ）；ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）；グルコース（１０ｍＭ）であり；ＮａＯＨでｐＨを７．４に調整したＨＥＰＥＳ緩衝生理飽和食塩水（ＨＢ−ＰＳ）を含むものとした。次いで、６チャンネルまたは８チャンネルのＰｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製ＶＣＣ  ＭＣ６またはＶＣＣ  ＭＣ８上皮電圧固定装置を１台または２台以上取り付け、試験全体を通して短絡電流（ＩＳＣ）を記録した。短絡ＩＳＣ測定は２７℃で行った。試験を開始するために、アミロリド（３０μＭ）をＳｎａｐｗｅｌｌＴＭ細胞培養インサートの頂端側に添加することにより、上皮Ｎａチャネル（ＥＮａＣ）を閉塞させた。１５分後、フォルスコリン（１０μＭ）を添加することによりＣＦＴＲを活性化させた。６０分後、ＣＦＴＲｉｎｈ−１７２（２０μＭ）を添加することにより実験を終了した。データの取得および解析はｉＷｏｒｘデータの取得装置およびＬａｂｓｃｒｉｂｅ  ２ソフトウェア（ｉＷｏｒｘ，Ｄｏｖｅｒ，ＮＨ）を用いて行った。陽性対照である矯正剤、陰性対照の両方および試験物質で処理した各上皮の、アゴニストにより惹起されたＩＳＣを、一元配置分散分析（ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）により比較し、次いでダネットの多重比較検定および適切であればスチューデントのｔ検定を行った。Ｐ＜０．０５であれば矯正効果が有意であると判断する。
【０２４４】
図８Ａ、８Ｂおよび８Ｃに、次に示す処理群と一緒に２４時間インキュベートした初代ＣＦ細胞に関するデータをまとめる：１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；２）陽性対照群：ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；３）化合物ＩＩ−３（１μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）。図８Ａに、アッセイ中に測定された短絡電流（ＩＳＣ）を示す。当業者であれば、図８Ａに示す波形から、化合物ＩＩ−３（１μＭ）＋ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０からなる組合せが、陽性対照であるＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０からなる組合せよりも機能的活性が高かったことが分かる。図８Ｂは、フォルスコリン添加後の定常状態の反応を、ΔＩＳＣ（μＡ／ｃｍ２）を測定することにより定量化したものである。ＩＩ−３（１μＭ）＋ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０からなる組合せは、陽性対照（すなわち、ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０）よりもΔＩＳＣの増分が大きかったことから分かるように、機能的活性が高かった。図８Ｃは、曲線下側面積（ＡＵＣ）を測定することにより反応全体を定量化し、対照の％として表したものである（陽性対照を１００％とする）。図８Ｃに示すように、ＩＩ−３（１μＭ）＋ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０からなる組合せは、陽性対照（すなわち、ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０）と比較してＡＵＣが１３７．８％増加していた。
【０２４５】
図９Ａ、９Ｂおよび９Ｃに、次に示す処理群と一緒に２４時間インキュベートした初代ＣＦ細胞に関するデータをまとめる：１）溶媒＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；２）陽性対照群：ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）；３）化合物Ｉ−１（１μＭ）＋ＶＸ−８０９（３μＭ）＋ＶＸ−７７０（１００ｎＭ）。図９Ａに、アッセイ中に測定された短絡電流（ＩＳＣ）の波形を示す。当業者であれば、図９Ａに示す波形から、化合物Ｉ−１（１μＭ）＋ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０からなる組合せが、陽性対照であるＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０からなる組合せよりも機能的活性が高かったことが分かる。図９Ｂは、フォルスコリン添加後の定常状態の反応をΔＩＳＣ（μＡ／ｃｍ２）を測定することにより定量化したものである。Ｉ−１（１μＭ）＋ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０の組合せは、陽性対照（すなわち、ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０）よりもΔＩＳＣの増分が大きかったことから分かるように、機能的活性が高かった。図９Ｃは、曲線下側面積（ＡＵＣ）を測定することにより反応全体を定量化し、対照の％として表したものである（陽性対照を１００％とする）。図９Ｃに示すように、Ｉ−１（１μＭ）＋ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０からなる組合せは、陽性対照（すなわち、ＶＸ−８０９＋ＶＸ−７７０）と比較してＡＵＣが１３０．８％増加していた。
【０２４６】
実施例１６
ヒト気管支上皮細胞を用いたＩｎ  Ｖｉｔｒｏ菌クリアランス試験
本アッセイにおいては、正常１６ＨＢＥ細胞を培養し、４８ウェルプレートに１ウェル当たり２×１０５個播種した。このプレートを５％ＣＯ２下、３７℃で、約９０％コンフルエントな状態になるまでインキュベートした。次いで細胞を化合物ＩＩ−３で２４時間処理し、次いでシュードモナ・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）菌株Ｘｅｎ０５に、感染多重度（ＭＯＩ）が１：５０（すなわち細胞：細菌比）となるようにして２時間感染させた。次いで細胞を非透過性抗菌剤（ｎｏｎ−ｐｅｒｍｅａｂｌｅ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ）からなる混合物（ペニシリンおよびストレプトマイシン各５０Ｕ／ｍＬをゲンタマイシン２００μｇ／ｍＬと混合）５００μＬと一緒に３時間インキュベートすることにより細胞外細菌を除去した。その後、細胞を溶解し、菌数を計測することにより、残存していた細胞内菌数を求めた。図１０に示すように、化合物ＩＩ−３は、試験濃度である２５μＭにおいて細胞内シュードモナ・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）のクリアランスを誘導するのに有効であった。細胞内細菌の殺菌効果は陽性対照（細胞透過性抗菌剤であるサイトカラシンＤ（Ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ−Ｄ））で観測された効果に匹敵するものであった。
【０２４７】
実施例１７
脂肪酸システアミン複合体の血漿中安定性を評価するためのアッセイ
試験化合物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ安定性をヒト、マウス、ビーグル犬およびラットの各血漿中で調査した（血漿はＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎより購入）。血漿をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で５０％に希釈した。試験化合物をＤＭＳＯに溶解することにより最終濃度を１０ｍＭとし、次いでＭｅＯＨで１ｍＭに希釈した。インキュベーションは、試験化合物の濃度が５μＭとなり、最終ＤＭＳＯ濃度が２．５％となるように実施した。血漿（１９８μＬ）を９６ウェルプレートに添加し、３７℃で３０分間インキュベートした後、試験化合物２μＬを添加した。次いで、この混合物を３７℃で２時間インキュベートした。適切な時間が経過した後（０、３０、６０および１２０分）、一定量（５０μＬ）を分取し、内部標準としてアセトニトリル２００μＬを添加することにより反応停止した。同時に、ベンフルオレックス（Ｂｅｎｆｌｏｕｒｅｘ）またはプロカイン（Ｐｒｏｃａｉｎｅ）（対照化合物）を含む血漿試料に内部標準であるアセトニトリル２００μＬを添加することにより反応停止した。試料プレートを３５００ｒｐｍで、４５分間４℃で遠心し、上清をＬＣ／ＭＳ−ＭＳで分析するために新しいプレートに移し替えた（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｍｏｄｅｌ  Ｎｏ：ＨＰＬＣ：１２００，ＭＳ：６４１０）。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ６−フェニル（５ｕ）カラムでクロマトグラフィーを行うことにより分離した。分析物を溶出させるために、０．１％水中ギ酸および０．１％メタノール中ギ酸からなるバイナリー・グラジエントを用いた。
【０２４８】
このアッセイにより化合物ＩＩ−２および化合物ＩＩ−３を評価した。図１１Ａおよび１１Ｂに２種類の化合物のマウスおよびラットの血漿中における安定性をまとめる。化合物ＩＩ−２は、親化合物が０．５時間後、１時間後および２時間後の時点で失われていたことから分かるように（図１１Ａ）、マウス血漿およびラット血漿の両方において不安定であった。これとは対照的に、かつ予期せぬことに、ジスルフィド結合に隣接するジェミナルメチル基を有する化合物ＩＩ−３は、０．５時間後、１時間後および２時間後の時点で申し分ない血漿安定性を示した（図１１Ｂ）。
【０２４９】
実施例１８
脂肪酸システアミン複合体の経口カニューレ挿入ラット（Ｏｒａｌ  Ｃａｎｎｕｌａｔｅｄ  Ｒａｔ）のＰＫ研究
本発明の化合物を、Ｔｗｅｅｎ（４０％）、Ｐｅｃｅｏｌ（５０％）、ＰＥＧ４００（１０％）からなる賦形剤の混合物に溶解し、水で希釈することにより動物経口投与用自己乳化型水性混合物を生成した。この研究においては、留置手術で頸静脈カニューレ（ＪＶＣ）および門脈カニューレ（ＰＶＣ）を挿入したＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットを使用した（Ａｇｉｌｕｘ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ）。この２本のカニューレを挿入したラットを使用する手法により、門脈に送達された薬物濃度に加えて、末梢血中の薬物濃度も測定することが可能になる。ＰＫ研究においては、次に示す時点：投与から１０分後、２０分後、４０分後および１時間後、２時間後、４時間後および６時間後において門脈および頸静脈の両方から一連の採血を行った。ＰＫ研究の生物学的分析はＬＣ／ＭＳ／ＭＳシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｍｏｄｅｌ  Ｎｏ：ＨＰＬＣ：１２００，ＭＳ：６４１０）を用いて行い、適切なソフトウェアで解析した（ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  Ｐｈｏｅｎｉｘ  ６４  ６．３．０  ３９５）。
【０２５０】
この経口カニューレ挿入ラットのＰＫ実験により、化合物ＩＩ−２およびＩＩ−３の評価を行った。化合物ＩＩ−２は、血漿中で安定ではなかったため、親化合物の相当量が経口投与後に分解した。化合物ＩＩ−２の門脈のＣｍａｘは２０．８±９．４５ｎｇ／ｍＬであり、ＡＵＣｌａｓｔは１２．５±６．５Ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬであった。体循環による化合物ＩＩ−２の末梢血中Ｃｍａｘは０．８８９±０．３３ｎｇ／ｍＬであり、ＡＵＣｌａｓｔは０．４４３±０．２２１Ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬであった。化合物ＩＩ−３に関しては、門脈のＣｍａｘは３３１±１２０ｎｇ／ｍＬであり、ＡＵＣｌａｓｔは６７９±２２６Ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬであった。さらに、化合物ＩＩ−３に存在するジェミナルメチル基により、初回通過代謝耐性がより高くなる。化合物ＩＩ−２と比較して親化合物の割合がはるかに高いＩＩ−３は、体循環における経口バイオアベイラビリティが高かった。これに対応する化合物ＩＩ−３の末梢血中Ｃｍａｘは１０２±１６．９ｎｇ／ｍＬであり、ＡＵＣｌａｓｔは３００±１０３Ｈｒ＊ｎｇ／ｍＬであった。親化合物ＩＩ−３の末梢血中Ｃｍａｘは、対応する親化合物ＩＩ−２の末梢血中Ｃｍａｘの１００倍であった。
【０２５１】
実施例１９
オートファジー活性化のＩｎ  Ｖｉｖｏ測定
生体内におけるオートファジー活性化を評価するために、雄性ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスに化合物ＩＩ−３を経口投与した（１００ｍｇ／ｋｇ、ＢＩＤ、３．５日間）。最終投与から１時間後、薬物濃度およびオートファジーバイオマーカーを分析するために肺組織および血漿を採取した。先の実施例に述べたように、ＬＣ３−Ｉに対するＬＣ３−ＩＩの比をオートファジーバイオマーカーとして使用した。化合物ＩＩ−３を経口投与すると、親化合物（すなわちＩＩ−３）および主要な代謝産物（すなわち化合物Ｉ−１）が血漿および肺組織の両方から検出された。最終投与から１時間後、親化合物ＩＩ−３の血漿中濃度は１４３．０±５２．３５ｎｇ／ｍＬであり、対応する代謝産物Ｉ−１は７４１．３７±１７０．２ｎｇ／ｍＬであった。この時点におけるマウス肺組織の親化合物ＩＩ−３の濃度は５３６．４８±２４．０１ｎｇ／ｇであった。代謝産物Ｉ−１も肺組織で検出され、濃度は４１１．４８±１６４．０ｎｇ／ｇであった。化合物ＩＩ−３は所与の投与量である１００ｍｇ／ｋｇでオートファジーを誘導することが可能であり、単離した肺組織のＬＣ３−ＩＩ／ＬＣ３−Ｉ比の２２％の増大は統計的に有意である（ｐ＝０．０４、図１２）。
【０２５２】
実施例２０
シュードモマ・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｍａ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）肺感染マウスモデルにおける脂肪酸システアミン複合体の評価
シュードモナ・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）肺感染マウスモデルは、６〜７週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスを使用し、１ケージ当たり１０匹ずつ５群に分け、１週間順化した。感染３．５日前に動物を化合物ＩＩ−３（１００ｍｇ／ｋｇ、ｐｏ、ＢＩＤ、上述の通りに配合）で処理した。その後、研究期間中はこの動物に同様のＩＩ−３処理を行った。本研究には溶媒対照群および陽性対照群を含む他の４つの処理群を使用した：１群）溶媒、ｐｏ（ＢＩＤ、−３．５日目以降）およびｓ．ｃ．（ＢＩＤ感染８時間後以降）；２群）化合物ＩＩ−３、ｐｏ（ＢＩＤ、１００ｍｇ／ｋｇ、−３．５日目以降）＋溶媒、ｓ．ｃ．（ＢＩＤ感染８時間以降）；３群）シプロフロキサシン、陽性対照、有効量未満（ｓｕｂ−ｅｆｆｉｃａｃｉｏｕｓ）の用量、１ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．（ＢＩＤ、感染８時間後以降）＋溶媒、ｐ．ｏ．（ＢＩＤ、−３．５日目以降）；４群）シプロフロキサシン、１ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．（ＢＩＤ、感染８時間後以降）＋化合物ＩＩ−３、ｐｏ（ＢＩＤ、１００ｍｇ／ｋｇ、−３．５日目以降）；５群）シプロフロキサシン、陽性対照、２０ｍｇ／ｋｇ、ｓ．ｃ．（ＢＩＤ、感染８時間後以降）。
【０２５３】
動物の体重を処理前および研究終了まで毎日測定した。シュードモナ・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に感染させた後は、体調不良の徴候を定期的に観察すると共に体温をモニターした。人道的エンドポイントに達した動物は安楽死させ、死亡時点を記録した。死亡時、感染２４／４８時間後に肺を摘出し、肉眼的病変の所見を記録すると共に写真を撮影した。肺、脾臓および腎臓を摘出し、重量を計測した後、ＰＢＳを加えてホモジナイズし、系列希釈した後、プレーティングして菌数を計測した。
【０２５４】
実施例２１
細胞アッセイにおける抗線維化作用および抗炎症作用の評価
細胞調製
正常ヒト肺線維芽細胞（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ３４２０）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）患者由来肺線維芽細胞ＬＬ２９（ＡｎＨａ）（ＡＴＣＣ）およびＬＬ９７Ａ（ＡＬＭｙ）（ＡＴＣＣ）を１５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ  １０４３７−０２８）およびＰｅｎ−Ｓｔｒｅｐ（１％）（Ｇｉｂｃｏ  １５１４０−１２２）を添加したＤＭＥＭ  Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ  １０５６５）で培養した。細胞を３〜４日毎に、毎回継代密度＝１：２／１：３で希釈することにより継代した。実験前日に細胞をトリプシン−ＥＤＴＡ（０．０５％）（Ｇｉｂｃｏ  ２５３００−０５４）でトリプシン処理し、２４ウェルフィッシュに１×１０５個／ウェルの播種密度で細胞を播種した。
【０２５５】
ＴＨＰ−１細胞をＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ２０２より入手した。ＴＨＰ−１細胞を、１０％ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）ＲＰＭＩ  １６４０）で培養した。ＤＭＥＭ（＃１１０９５）およびウシ胎児血清（低エンドトキシン）（＃１０４３７）はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎより入手した。
【０２５６】
薬物処理
化合物ＩＩ−３および化合物Ｉ−１をまず１００％ＤＭＳＯに溶解して５０ｍＭ溶液とし、次いで１％ＢＳＡで２００倍に希釈し２５０μｍの１０×原液とし、必要に応じて原液の系列希釈（２倍希釈）を行った。この１０×原液を培地に添加し、細胞を３７℃で２４時間インキュベートした。ＴＨＰ−１細胞をＬＰＳ刺激する場合は、化合物を培地に６時間添加し、４時間経過後にＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｌ３０２４）を最終濃度５０μｇ／ｍＬとなるように添加し、細胞を２時間インキュベートした。正常ヒト肺線維芽細胞（ＮＬＦ）または特発性肺線維症細胞（ＬＬ２９およびＬＬ７９Ａ細胞、ＡＴＣＣ）を、ＴＧＦβ（Ａｂｃａｍ  ａｂ５００３６、５０ｎｇ／ｍＬ）の存在下またはＴＧＦβの非存在下（ＰＢＳ処理群と称する）に、化合物ＩＩ−３（２５μＭ）および化合物Ｉ−１（２５μＭ）と一緒に２４時間インキュベートした。試験化合物はＴＧＦβを添加する３０分前に細胞に添加した。全ＲＮＡを回収し、ＲＴ−ＰＣＲによりｈ  ＨＰＲＴを内部標準として用いて測定することにより、相対的なｍＲＮＡ発現量を評価した。データを平均ΔｍＲＮＡ／ＨＰＲＴで表す。エラーバーは標準誤差（ＳＥＭ）を表す。対照に対する有意性はスチューデントのｔ検定により判断した。
【０２５７】
ＥＬＩＳＡ
実験終了後に条件培地を回収した。マトリックスメタロプロテアーゼ２（ＭＭＰ−２）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＭＭＰ２００）およびヒト組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ−２）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ  ＤＴＭ２００）の量を製造業者の指示に従い測定した。これらのアッセイには１００倍希釈した条件培地を使用した。本ＥＬＩＳＡにおいては、Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ５マルチラベルプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で４５０ｎｍの吸光度を測定した（５５０ｎｍでバックグラウンド補正）。標準曲線を作成し、この標準曲線に従いＴＩＭＰ−２およびＭＭＰ−２の量を求めた。条件培地を回収し、マトリックスメタロプロテアーゼ２（ＭＭＰ−２）およびヒト組織メタロプロテアーゼ阻害物質２（ＴＩＭＰ−２）の量を測定した。データは対照に対する平均倍率変化として表す。エラーバーは標準誤差（ＳＥＭ）を表す。対照に対する有意性はスチューデントのｔ検定により判断した。
【０２５８】
ＲＴ−ＰＣＲ
ＲＮｅａｓｙ  Ｐｌｕｓ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ  ＃７４１３６）を用いて全ＲＮＡを回収し、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ＃１８０８０−０４４）を使用し、ランダムヘキサマーを加えて製造業者のプロトコールに従い、ｃＤＮＡを作製した。相対的なｍＲＮＡ発現量を、ＴａｑＭａｎプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、推奨される最適なプライマー対を使用）を使用し、ＨＰＲＴ（ヒポキサンチンホスホリルトランスフェラーゼ）を内部標準として求めた。ＰＣＲプローブは全てＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入した。ＴＮＦα（ＨＳ  ０１１１３６２４）、ＩＬ１β（ＨＳ  ０１５５５４１０）、ＣＣＬ２（ＨＳ  ００２３４１４０）、Ｃｏｌｌａｇｅｎ  １ａ１（ＨＳ  ００１６４００４）、ＦＮ１（フィブロネクチン１、ＨＳ  ００３６５０５２）、ＴＩＭＰ−２（ＨＳ  ００２３４２７８）、ＭＭＰ−２（ＨＳ  ０１５４８７２７）。Ｃｏｌｌａｇｅｎ  １ａ１（ＣＯＬ１ａ１）、ＦＮ１、ＴＩＭＰ−２、およびＭＭＰ−２は線維化のマーカーとして知られている（Ｓｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）ＡＭ．Ｊ．ＰＨＹＳ．ＬＵＮＧ  ＣＥＬＬ  ＭＯＬ．ＰＨＹＳＩＯＬ．，２７９，Ｌ５６２−Ｌ５７４参照）。
【０２５９】
結果：
化合物ＩＩ−３および化合物Ｉ−１を、正常ヒト肺線維芽細胞（ＮＬＦ）および特発性肺線維症（ＩＰＦ）患者由来肺線維芽細胞（ＬＬ２９およびＬＬ９７Ａ）の両方で評価した。結果を図１３Ａ〜Ｃ、１４Ａ〜Ｄ、および１５Ａ〜Ｄにまとめる。図１３Ａは、この３種の異なる細胞を化合物ＩＩ−３または化合物Ｉ−１のいずれかで処理した場合の、ＰＢＳ処理またはＴＧＦβ刺激下におけるＣｏｌｌａｇｅｎ  １ａ１（ＣＯＬ１ａ１）ｍＲＮＡの発現量を示すものである。ＴＧＦβ処理した細胞は、正常肺線維芽細胞（ＮＬＦ）またはＩＰＦ細胞（ＬＬ２９または  ＬＬ９７Ａ）のいずれにおいてもＣｏｌｌａｇｅｎ  １ａ１の発現量が顕著に増大しており、これは化合物ＩＩ−３（２５μＭ）または化合物Ｉ−１（２５μＭ）のいずれかで処理することにより抑制された。図１３Ｂおよび１３Ｃは、この３種の異なる細胞を化合物ＩＩ−３（２５μＭ）または化合物Ｉ−１（２５μＭ）で処理した場合の、ＰＢＳ処理またはＴＧＦβ刺激下におけるフィブロネクチン１（ＦＮ１）およびＴＩＭＰ−２の対応するｍＲＮＡ発現量を示すものである。ＴＧＦβ処理されたＮＬＦ、ＬＬ２９またはＬＬ９７Ａ細胞はＦＮ１およびＴＩＭＰ−２の発現量が顕著に増大しており、これは化合物ＩＩ−３（２５μＭ）または化合物Ｉ−１（２５μＭ）のいずれかで処理することにより抑制された。ＣＯＬ１ａ１、ＦＮ１およびＴＩＭＰ−２は線維化のマーカーとしてよく知られており、これらのマーカーが抑制されていたことは、化合物ＩＩ−３および化合物Ｉ−１が抗線維化活性を有することを示唆している。
【０２６０】
マトリックス分解のメディエーターとして知られるＭＭＰ−２の発現量に加えて、その天然の阻害物質であるＴＩＭＰ−２の発現量を条件培地で評価した。図１４Ａ〜Ｂおよび図１５Ａ〜Ｂに示すように、疾患肺線維芽細胞のＭＭＰ−２およびＴＩＭＰ−２発現量はいずれも正常肺と比較して増加していた。このＭＭＰ−２およびＴＩＭＰ−２の不均衡により線維化過程において細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の蓄積が起こることが報告されている（Ｓｅｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）ＡＭ．Ｊ．ＰＨＹＳ．ＬＵＮＧ  ＣＥＬＬ  ＭＯＬ．ＰＨＹＳＩＯＬ．，２７９，Ｌ５６２−Ｌ５７４参照）。したがって、ＩＰＦの肺組織において、ＴＩＭＰ−２の発現量がＭＭＰ−２の発現量よりも大幅に増加していることが報告されており、こうした不均衡がＥＣＭタンパク質の沈着を促進することになる。図１４Ａに、ＮＬＦ細胞、ＬＬ２９細胞またはＬＬ９７Ａ細胞を溶媒または化合物ＩＩ−３（２５μＭ）のいずれかで処理した場合のＴＩＭＰ−２の基底量（ＰＢＳ処理）を示す。図１４Ｂは、ＴＧＦβ刺激下でＮＬＦ細胞、ＬＬ２９細胞またはＬＬ９７Ａ細胞を溶媒または化合物ＩＩ−３（２５μＭ）のいずれかで処理した場合のＴＩＭＰ−２発現量を示すものである。化合物ＩＩ−３で処理することにより、ＴＧＦβ存在下におけるＴＩＭＰ−２の発現量が大幅に低下した。図１５Ａおよび１５Ｂに、溶媒または化合物ＩＩ−３で処理したＮＬＦ細胞、ＬＬ２９細胞およびＬＬ９７Ａ細胞の対応するＭＭＰ−２の基底量（ＰＢＳ処理）およびＴＧＦβ刺激下における発現量を示す。この場合も同様に、化合物ＩＩ−３で処理することによりＴＧＦβの存在下におけるＭＭＰ−２の発現量が大幅に低下した。
【０２６１】
ＴＨＰ−１細胞における化合物ＩＩ−３の抗炎症作用について評価した。図１６Ａ、１６Ｂおよび１６Ｂは、一般的な炎症マーカーであるＴＮＦ−α、ＩＬ−１βおよびＣＣＬ２に関するデータをまとめたものである。ＬＰＳで刺激することにより、ＣＣＬ２、ＩＬ−１βおよびＴＮＦ−αのｍＲＮＡ発現が通常通り増加した。図１６Ａ〜Ｃに示すように、化合物ＩＩ−３（２５μＭ）で処理することにより、ＬＰＳ刺激下において全ての炎症マーカーが大幅に減少した。
【０２６２】
実施例２２
ブレオマイシン誘発線維症マウスモデルにおける脂肪酸システアミン複合体の評価
本実験には、７週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６Ｊ  ＳＰＦマウスを使用した。０日目に４０匹のマウスに、生理飽和食塩水に溶解した硫酸ブレオマイシン（ＢＬＭ）（３ｍｇ／ｋｇ）を、Ｍｉｃｒｏｓｐｒａｙｅｒ（登録商標）（Ｐｅｎｎ−Ｃｅｎｔｕｒｙ，ＵＳＡ）を使用して単回気管内投与することにより肺線維症を誘発させる。次いで、処理を開始する前日に動物を体重に基づき無作為に４群（各群１０匹）に割り付ける。研究期間が終了するまで個々の体重を１日１回測定する。マウスの生死、臨床徴候および行動を毎日観察する。本発明の化合物を先の実施例に記載した配合で経口投与する。研究に用いた４つの処理群を次に示す：第１群）溶媒；第２群）試験化合物、経口投与、ＢＩＤ、３０ｍｇ／ｋｇ、０日目から２０日目の間、毎日；第３群）試験化合物、経口投与、ＢＩＤ、１００ｍｇ／ｋｇ、０日目から２０日目の間、毎日；第４群）デキサメタゾン対照群、経口投与、０．２５ｍｇ／ｋｇ。２１日目に全ての群のマウスを安楽死させる。生化学分析においては、肺のヒドロキシプロリンを加水分解法により定量化することができる。肺切片を組織分析するために、マッソン・トリコーム（Ｔｒｉｃｈｏｍｅ）染色を行い、公知の手順を用いてＡｓｈｃｒｏｆｔスコアによる評価を行う（Ｓｃｈａｅｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（２０１１）ＥＵＲ．ＲＥＳＰ．ＲＥＶ．，２０：１２０，ｐ．８５−９７参照）。ボンフェローニの多重比較検定（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  Ｔｅｓｔ）により統計的検定を行うことができる。Ｐ値が＜０．０５であれば統計的に有意であると判断する。
【０２６３】
実施例２３
化合物ＩＩ−２および化合物ＩＩ−３の比較
化合物ＩＩ−３に存在する２個のジェミナルメチル基が、２個のジェミナルメチル基を有しない類縁体である化合物ＩＩ−２と比較して幾つかの利点をもたらす。例えば、化合物ＩＩ−３は化合物ＩＩ−２よりも血漿中安定性が高い（実施例１７参照）。化合物ＩＩ−３はまた、実施例１８に例示するように、ラットへの経口投与性に優れている。親化合物ＩＩ−２の末梢ＡＵＣｌａｓｔは０．８８９ｎｇ／ｍＬであった。一方、化合物ＩＩ−３の末梢ＡＵＣｌａｓｔは１０２ｎｇ／ｍＬであり、ラットに経口投与した場合のＡＵＣは１００倍高かった。化合物ＩＩ−３は細胞アッセイにおいても化合物ＩＩ−２よりも有効性が高く、これは２個のジェミナルメチル基に起因して安定性がより高くなっていることと矛盾しなかった。先の実施例１１においては、ＨＴ−２９細胞を化合物ＩＩ−２（５０μＭ）と短時間（４時間）インキュベートした後に評価を行った。より直接的な比較を行うために、２種の化合物をより低い濃度である２５μＭでより長い時間である２４時間インキュベートして評価した。２４時間というインキュベーション時間はウッシング・チャンバ・アッセイにおいてＶＸ−８０９等のＣＦＴＲ矯正剤から最大活性を引き出すために必要であった時間でもある。実施例１３においては、初代ＣＦ細胞（ホモ接合体ΔＦ５０８）を先に概説した手順と同一手順を用いて次の群で２４時間処理した：１）溶媒；２）化合物ＩＩ−２（２５μＭ）；３）化合物ＩＩ−３（２５μＭ）。図１７に示すように、より低い濃度である２５μＭで２４時間インキュベートした後の折り畳み異常のΔＦ５０８ＣＦＴＲのトラフィッキングに関し、化合物ＩＩ−３の有効性は化合物ＩＩ−２よりも高かった。
【０２６４】
参照による援用
本明細書において参照した特許および科学文献のそれぞれの開示内容全体を、あらゆる目的のために、本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
【０２６５】
均等物
本発明の主旨および本質的特徴から逸脱することなく、本発明を他の特定の形態で具体化することができる。したがって上述の実施形態は、あらゆる点において、本明細書に記載した本発明を制限するものではなく、例示と解釈すべきである。したがって本発明の範囲は、上述の記載内容ではなく添付の特許請求の範囲により示され、主旨の範囲内および特許請求の範囲の均等範囲内のあらゆる変更を本発明に包含することが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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