(57)【要約】本発明は抗ＬｇＲ５抗体及びその使用方法を提供する。【選択図】図５Ａ
2017526618.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬｇＲ５に結合する単離抗体であって、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、前記抗体。
【請求項２】
（ａ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、もしくは（ｉｉｉ）（ｉ）のＶＨ配列及び（ｉｉ）のＶＬ配列、または
（ｂ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、もしくは（ｉｉｉ）（ｉ）のＶＨ配列と（ｉｉ）のＶＬ配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
配列番号６または配列番号８のＶＨ配列を含む請求項１または請求項２に記載の抗体。
【請求項４】
配列番号７または配列番号９のＶＬ配列を含む先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項５】
配列番号６のＶＨ配列及び配列番号５のＶＬ配列を含む、抗体。
【請求項６】
配列番号８のＶＨ配列及び配列番号７のＶＬ配列を含む抗体。
【請求項７】
モノクローナル抗体である先行請求項のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項８】
マウス抗体、ウサギ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である請求項７に記載の抗体。
【請求項９】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択されるＩｇＧである請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１０】
先行請求項のいずれか１項に記載の抗体をコードする単離核酸。
【請求項１１】
請求項１０に記載の核酸を含む宿主細胞。
【請求項１２】
前記抗体が産生されるように請求項１１に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体作製方法。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体及び細胞傷害性薬剤を含む、免疫複合体。
【請求項１４】
請求項１３に記載の免疫複合体及び薬学的に許容可能な担体を含む医薬製剤。
【請求項１５】
標識に結合した請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗体。
【請求項１６】
前記標識が陽電子放出体である、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
前記陽電子放出体が８９Ｚｒである、請求項１６に記載の抗体。
【請求項１８】
生体試料中のヒトＬｇＲ５の検出方法であって、前記抗ＬｇＲ５抗体が前記ヒトＬｇＲ５に結合するのを許容する条件下で、前記生体試料前記生体試料と請求項１〜９及び請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の抗ＬｇＲ５抗体とを接触させることと、前記抗ＬｇＲ５抗体と前記生体試料の中のヒトＬｇＲ５との間で複合体が形成されるかどうかを検出することと、を含む、前記方法。
【請求項１９】
前記抗ＬｇＲ５抗体が請求項４または請求項５に記載の抗体である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記生体試料が結腸癌試料、大腸癌試料、小腸癌試料、子宮内膜癌試料、膵臓癌試料、または卵巣癌試料である、請求項１８または請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
ＬｇＲ５陽性癌の検出方法であって、（ｉ）ＬｇＲ５陽性癌を有する、または有することが疑われる対象に、請求項１〜９のいずれか１項に記載の抗ＬｇＲ５抗体を含む標識抗ＬｇＲ５抗体を投与することと、（ｉｉ）前記対象中の前記標識抗ＬｇＲ５抗体を検出することと、を含み、前記標識抗ＬｇＲ５抗体の検出が前記対象におけるＬｇＲ５陽性癌を識別する、前記方法。
【請求項２２】
前記標識抗ＬｇＲ５抗体が、標識されている請求項４または請求項５に記載の抗体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記標識抗ＬｇＲ５抗体が陽電子放出体に結合した抗ＬｇＲ５抗体を含む、請求項２１または請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記陽電子放出体が８９Ｚｒである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
癌患者がＬｇＲ５陽性癌を有していることを特定する方法であって、前記抗ＬｇＲ５抗体がヒトＬｇＲ５に結合するのを許容する条件下で、前記患者由来の癌試料と、請求項１〜９及び請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の前記抗ＬｇＲ５抗体とを接触させることと、前記抗ＬｇＲ５抗体と前記癌試料中のヒトＬｇＲ５との間で複合体が形成されるかどうかを検出することと、を含む、前記方法。
【請求項２６】
前記抗ＬｇＲ５抗体と前記癌試料中のヒトＬｇＲ５との間の複合体が検出される場合に、前記癌患者がＬｇＲ５陽性癌を有していると特定される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
抗ＬｇＲ５抗体を含む免疫複合体を用いる治療に適した癌患者の選択方法であって、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて前記患者由来の癌試料中のＬｇＲ５発現レベルを決定することを含み、ＬｇＲ５発現レベルの上昇が、前記癌患者が抗ＬｇＲ５抗体を含む免疫複合体（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕａｇｅ）を用いる治療から利益を得る可能性が高いことを示す、前記方法。
【請求項２８】
上昇したＬｇＲ５発現レベルがＩＨＣによる２＋または３＋の染色である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
上昇したＬｇＲ５発現レベルがＩＨＣによる３＋の染色である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
請求項１〜９及び請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の抗体を使用してＩＨＣが実施される、請求項２７〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
抗ＬｇＲ５抗体を含む免疫複合体を用いる治療に適した癌患者の選択方法であって、前記抗ＬｇＲ５抗体がヒトＬｇＲ５に結合するのを許容する条件下で、前記患者由来の癌試料と、請求項１〜９及び請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の抗ＬｇＲ５抗体とを接触させることと、前記抗ＬｇＲ５抗体と前記癌試料中のヒトＬｇＲ５との間で複合体が形成されるかどうかを検出することを含む、前記方法。
【請求項３２】
前記抗ＬｇＲ５抗体と前記癌試料中のヒトＬｇＲ５との間の複合体が検出される場合に前記癌患者が選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
癌患者の治療方法であって、前記患者に抗ＬｇＲ５抗体を含む治療有効量の免疫複合体を投与することを含み、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて、前記患者に由来する癌試料が高いレベルのＬｇＲ５発現を有していると判定する、前記方法。
【請求項３４】
上昇したＬｇＲ５発現レベルが、ＩＨＣによる２＋または３＋の染色である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
上昇したＬｇＲ５発現レベルがＩＨＣによる３＋の染色である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
請求項１〜９及び請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の抗体を使用してＩＨＣが実施される、請求項３３〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
前記免疫複合体が、
（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または
（ｄ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
を含む抗ＬｇＲ５抗体を含む、請求項２７〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗ＬｇＲ５抗体が、
（ａ）配列番号３３のＶＨ配列及び配列番号３２のＶＬ配列、または
（ｂ）配列番号５１のＶＨ配列及び配列番号５０のＶＬ配列を含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記免疫複合体が細胞傷害性薬剤に結合した抗ＬｇＲ５抗体を含む、請求項２７〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記癌試料が結腸癌試料、大腸癌試料、小腸癌試料、子宮内膜癌試料、膵臓癌試料、または卵巣癌試料である、請求項２５〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、あらゆる目的のために全体が参照により本明細書に援用される２０１４年６月１１日に出願された米国仮出願番号第６２／０１０６３７号の利益を主張する。
【０００２】
本発明は抗ＬｇＲ５抗体及び同抗体の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
癌幹細胞仮説では、正常組織と同様に特殊細胞の個別の小集団が自己複製能を有し、かつ、絶えず腫瘍に存在すると仮定する。癌幹細胞（ＣＳＣ）は腫瘍の発生、進行、転移及び再発に関連するとされており、そのことがそれらの細胞を治療介入の望ましい標的とする。
【０００４】
最もよく特徴付けられた組織幹細胞集団のうちの１つは、恒常的腸管上皮内に全ての分化細胞型を生じさせる胃腸管中のロイシンリッチリピート含有Ｇタンパク質共役受容体５（Ｌｇｒ５）陰窩細胞である。ＬｇＲ５は活発に循環する腸幹細胞（ＩＳＣ）の表面に見られる７回膜貫通タンパク質である。ヒトＬｇＲ５は９０７アミノ酸のタンパク質であり、そのうちの約５４０個のアミノ酸がアミノ末端シグナル配列の切断後に細胞外空間に存在すると予測される。ＬｇＲ５は外部ドメイン中に１７の不完全なロイシンリッチリピートモチーフを含み、かつ、それらロイシンリッチリピートと１番目の膜貫通ドメインとの間に位置する高システイン領域を含む。
【０００５】
ＬｇＲ５発現ＩＳＣはＷｎｔ調節に対して敏感であり、腸上皮の恒常的再生に主に関与する。しかしながらマウスにおけるＬｇＲ５発現細胞の除去は腸上皮の恒常性に影響せず、このことは他の細胞型がこの細胞集団の喪失を補償し得ることを示唆している。Ｔｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４７８：２５５−２５９（２０１１）。Ｒ−スポンジンはＷＮＴ３ＡによるＷＮＴシグナル伝達を強化し、ＲＳＰＯ１、ＲＳＰＯ２、ＲＳＰＯ３、及びＲＳＰＯ４の４種全てのＲ−スポンジンがＬｇＲ５に結合可能である。Ｌａｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ４７６：２９３−２９７（２０１１）。
【０００６】
ＬｇＲ５＋細胞は腸癌の起源細胞として機能し、かつ、ＣＳＣとしても作用することも主張されており、このことからＬｇＲ５＋細胞の除去が腫瘍増殖と腫瘍維持に対して顕著な影響を与えている場合があることが示唆されている。
【０００７】
ＬｇＲ５＋細胞に由来するＡＰＣ突然変異体腫瘍の系譜追跡により、腸腫瘍中の複数の細胞種がＬｇＲ５＋前駆細胞に由来することが示される。また、ＬｇＲ５＋細胞は腫瘍塊を発生させ、絶えず子孫細胞をその腫瘍塊に提供すると主張されており、このことからＬｇＲ５＋細胞の除去が腫瘍増殖と腫瘍維持に対して顕著な影響を与えている場合があることが示唆されている。しかしながら、長年にわたって、ＬｇＲ５の発現の決定の問題点は、高品質の免疫組織化学（ＩＨＣ）反応性抗体を欠くことであるとされている。
【０００８】
当該技術分野では、癌などのＬｇＲ５関連症状の診断及び治療のためのＬｇＲ５を標的とする薬剤が必要とされている。本発明はその要求を満たして他の利益を提供するものである。
【発明の概要】
【０００９】
抗ＬｇＲ５抗体及び免疫複合体ならびにそれらの使用方法を提供する。免疫組織化学に有用な抗ＬｇＲ５抗体を提供する。
【００１０】
いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５に結合する単離抗体が提供される。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、または（ｂ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、または（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１１】
いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または（ｂ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態において、本抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、もしくは（ｉｉｉ）（ｉ）のＶＨ配列及び（ｉｉ）のＶＬ配列、または（ｂ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、もしくは（ｉｉｉ）（ｉ）のＶＨ配列及び（ｉｉ）のＶＬ配列を含む。
【００１３】
いくつかの実施形態において、本抗体は配列番号６または配列番号８のＶＨ配列を含む。いくつかの実施形態において、本抗体は配列番号７または配列番号９のＶＬ配列を含む。
【００１４】
いくつかの実施形態において、本抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体はマウス抗体、ウサギ抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態において、本抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４から選択されるＩｇＧである。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体をコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含む抗体作製方法が提供される。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体及び細胞傷害性薬剤を含む免疫複合体が提供される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体及び細胞傷害性薬剤を含む免疫複合体と薬学的に許容可能な担体とを含む医薬製剤が提供される。
【００１７】
いくつかの実施形態において、標識に結合した本明細書に記載される抗体が提供される。いくつかの実施形態において、標識は陽電子放出体である。いくつかの実施形態において、陽電子放出体は８９Ｚｒである。
【００１８】
いくつかの実施形態において、生体試料中のヒトＬｇＲ５の検出方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、本明細書に記載される抗ＬｇＲ５抗体がヒトＬｇＲ５に結合するのを許容する条件下で、前記生体試料と本明細書に記載の抗ＬｇＲ５抗体とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、抗ＬｇＲ５抗体と生体試料の中のヒトＬｇＲ５との間で複合体が形成されるかどうかを検出することをさらに含む。いくつかの実施形態において、生体試料は結腸癌試料、大腸癌試料、小腸癌試料、子宮内膜癌試料、膵臓癌試料、または卵巣癌試料である。
【００１９】
いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌の検出方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、（ｉ）ＬｇＲ５陽性癌を有する、または有することが疑われる対象に、本明細書に記載される抗ＬｇＲ５抗体を含む標識抗ＬｇＲ５抗体を投与することと、（ｉｉ）その対象中の標識抗ＬｇＲ５抗体を検出することと、を含み、標識抗ＬｇＲ５抗体の検出がその対象におけるＬｇＲ５陽性癌を識別する。いくつかの実施形態において、標識抗ＬｇＲ５抗体は、陽電子放出体に結合した抗ＬｇＲ５抗体を含む。いくつかの実施形態において、陽電子放出体は８９Ｚｒである。
【００２０】
いくつかの実施形態において、癌患者がＬｇＲ５陽性癌を有していると特定する方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、抗ＬｇＲ５抗体がヒトＬｇＲ５に結合するのを許容する条件下で、患者に由来する癌試料と本明細書に記載の抗ＬｇＲ５抗体とを接触させることを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、抗ＬｇＲ５抗体と癌試料中のヒトＬｇＲ５との間で複合体が形成されるかどうかを検出することをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体と癌試料中のヒトＬｇＲ５との間の複合体が検出される場合に、癌患者がＬｇＲ５陽性癌を有していると特定される。いくつかの実施形態において、前記癌試料は結腸癌試料、大腸癌試料、小腸癌試料、子宮内膜癌試料、膵臓癌試料、または卵巣癌試料である。
【００２１】
いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体を含む免疫複合体（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕａｇｅ）を用いる治療に適した癌患者の選択方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて患者由来の癌試料中のＬｇＲ５発現レベルを決定することを含む。いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５発現レベルの上昇は、癌患者が抗ＬｇＲ５抗体を含む免疫複合体（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕａｇｅ）を用いる治療から利益を得る可能性が高いことを示す。いくつかの実施形態において、上昇したＬｇＲ５発現レベルはＩＨＣによる２＋または３＋の染色である。いくつかの実施形態において、上昇したＬｇＲ５発現レベルはＩＨＣによる３＋の染色である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体を使用してＩＨＣが実施される。いくつかの実施形態において、前記癌試料は結腸癌試料、大腸癌試料、小腸癌試料、子宮内膜癌試料、膵臓癌試料、または卵巣癌試料である。
【００２２】
いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体を含む免疫複合体を用いる治療に適した癌患者の選択方法であって、抗ＬｇＲ５抗体がヒトＬｇＲ５に結合するのを許容する条件下で患者に由来する癌試料と本明細書に記載される抗ＬｇＲ５抗体とを接触させることと、抗ＬｇＲ５抗体とその癌試料中のヒトＬｇＲ５との間で複合体が形成されるかどうかを検出することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体と癌試料中のヒトＬｇＲ５との間の複合体が検出される場合にその癌患者が選択される。いくつかの実施形態において、癌試料は結腸癌試料、大腸癌試料、小腸癌試料、子宮内膜癌試料、膵臓癌試料、または卵巣癌試料である。
【００２３】
いくつかの実施形態において、癌患者の治療方法であって、抗ＬｇＲ５抗体を含む治療有効量の免疫複合体を患者に投与することを含み、免疫組織化学（ＩＨＣ）を用いて、患者に由来する癌試料が高いレベルのＬｇＲ５発現を有していると判定する、方法が提供される。いくつかの実施形態において、上昇したＬｇＲ５発現レベルはＩＨＣによる２＋または３＋の染色である。いくつかの実施形態において、上昇したＬｇＲ５発現レベルはＩＨＣによる３＋の染色である。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体を使用してＩＨＣが実施される。いくつかの実施形態において、癌試料は結腸癌試料、大腸癌試料、小腸癌試料、子宮内膜癌試料、膵臓癌試料、または卵巣癌試料である。
【００２４】
いくつかの実施形態において、本免疫複合体は、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または（ｂ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または（ｃ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、または（ｄ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＬｇＲ５抗体を含む。いくつかの実施形態において、本免疫複合体は、（ａ）配列番号３３のＶＨ配列及び配列番号３２のＶＬ配列、または（ｂ）配列番号５１のＶＨ配列及び配列番号５０のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体を含む。いくつかの実施形態において、本免疫複合体は、細胞傷害性薬剤に結合した抗ＬｇＲ５抗体を含む。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】実施例Ａにおいて説明される様々な組織におけるヒトＬｇＲ５遺伝子発現のレベルを示しているグラフを示す。図１中の挿入図は、実施例Ａにおいて説明される正常結腸組織及び結腸腫瘍におけるヒトＬｇＲ５遺伝子発現のレベルを示すグラフを示している。
【図２】実施例Ｂにおいて説明されるインサイチュハイブリダイゼーションによる結腸癌中のＬｇＲ５の発現を示す。
【図３Ａ】（Ａ）結腸腫瘍組織マイクロアレイにおける様々なレベルのＬｇＲ５発現の出現率、及び（Ｂ）各大腸腺癌試料由来の３つのコアにおけるＬｇＲ５発現の不均質性を示す。両方とも実施例Ｂにおいて説明されるインサイチュハイブリダイゼーションによって決定されている。
【図３Ｂ】（Ａ）結腸腫瘍組織マイクロアレイにおける様々なレベルのＬｇＲ５発現の出現率、及び（Ｂ）各大腸腺癌試料由来の３つのコアにおけるＬｇＲ５発現の不均質性を示す。両方とも実施例Ｂにおいて説明されるインサイチュハイブリダイゼーションによって決定されている。
【図４Ａ】抗体ＬＧＲ５．１−１２及び抗体ＬＧＲ５．２６−１の（Ａ）軽鎖と（Ｂ）重鎖のアラインメントを示す。接触領域、Ｃｈｏｔｈｉａ相補性決定領域、及びＫａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ（超可変領域またはＨＶＲとも呼ばれる））が示されている。Ｋａｂａｔ  ＨＶＲに下線が引かれている。
【図４Ｂ】抗体ＬＧＲ５．１−１２及び抗体ＬＧＲ５．２６−１の（Ａ）軽鎖と（Ｂ）重鎖のアラインメントを示す。接触領域、Ｃｈｏｔｈｉａ相補性決定領域、及びＫａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ（超可変領域またはＨＶＲとも呼ばれる））が示されている。Ｋａｂａｔ  ＨＶＲに下線が引かれている。
【図５Ａ】実施例Ｅにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２による（Ａ）結腸組織、（Ｂ）毛包、及び（Ｃ）脊髄の染色を示す。
【図５Ｂ】実施例Ｅにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２による（Ａ）結腸組織、（Ｂ）毛包、及び（Ｃ）脊髄の染色を示す。
【図５Ｃ】実施例Ｅにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２による（Ａ）結腸組織、（Ｂ）毛包、及び（Ｃ）脊髄の染色を示す。
【図６Ａ】抗体ＹＷ３５３を使用するＦＡＣＳによる（Ａ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍細胞及び（Ｂ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍細胞の表面上のＬｇＲ５の検出、ならびに実施例Ｆにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用する免疫組織化学による（Ｃ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍及び（Ｄ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍の染色を示す。
【図６Ｂ】抗体ＹＷ３５３を使用するＦＡＣＳによる（Ａ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍細胞及び（Ｂ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍細胞の表面上のＬｇＲ５の検出、ならびに実施例Ｆにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用する免疫組織化学による（Ｃ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍及び（Ｄ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍の染色を示す。
【図６Ｃ】抗体ＹＷ３５３を使用するＦＡＣＳによる（Ａ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍細胞及び（Ｂ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍細胞の表面上のＬｇＲ５の検出、ならびに実施例Ｆにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用する免疫組織化学による（Ｃ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍及び（Ｄ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍の染色を示す。
【図６Ｄ】抗体ＹＷ３５３を使用するＦＡＣＳによる（Ａ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍細胞及び（Ｂ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍細胞の表面上のＬｇＲ５の検出、ならびに実施例Ｆにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用する免疫組織化学による（Ｃ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍及び（Ｄ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍の染色を示す。
【図７Ａ】実施例Ｇにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用する結腸腫瘍の例示的な０、１＋、２＋、及び３＋の染色を示す。
【図７Ｂ】実施例Ｇにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用する結腸腫瘍の例示的な０、１＋、２＋、及び３＋の染色を示す。
【図７Ｃ】実施例Ｇにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用する結腸腫瘍の例示的な０、１＋、２＋、及び３＋の染色を示す。
【図７Ｄ】実施例Ｇにおいて説明される抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用する結腸腫瘍の例示的な０、１＋、２＋、及び３＋の染色を示す。
【図８Ａ】実施例Ｈにおいて説明される（Ａ）抗体ＬＧＲ５．１−１２及び（Ｂ）抗体ＬＧＲ５．２６−１を使用するＣＸＦ２３３異種移植腫瘍試料の染色を示す。
【図８Ｂ】実施例Ｈにおいて説明される（Ａ）抗体ＬＧＲ５．１−１２及び（Ｂ）抗体ＬＧＲ５．２６−１を使用するＣＸＦ２３３異種移植腫瘍試料の染色を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
Ｉ．定義
本明細書における「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に記載されるようにヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに「由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでも良く、またはアミノ酸配列変化を含んでも良い。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化の数は１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列に関してＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である。
【００２７】
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の合計の強度を指す。別途指定されない限り、本明細書において使用される場合、「結合親和性」は結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は一般的に解離定数（Ｋｄ）によって表され得る。親和性は、本明細書に記載される方法をはじめとする当技術分野において知られている一般的方法によって測定され得る。結合親和性測定の具体的な例示的実施形態及び模範的実施形態が以下に記載される。
【００２８】
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して１つまたは複数の超可変領域（ＨＶＲ）に１つまたは複数の変化を有する抗体であって、そのような変化によって抗原への親和性が改善された抗体を指す。
【００２９】
「抗ＬｇＲ５抗体」及び「ＬｇＲ５結合抗体」という用語は、抗体がＬｇＲ５を標的とする際に診断薬及び／または治療薬として有用となるように、十分な親和性でＬｇＲ５に結合可能である抗体を指す。一実施形態において、無関係の非ＬｇＲ５タンパク質に抗ＬｇＲ５抗体が結合する度合いは、例えば、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）またはスキャッチャード解析、または例えばＢｉａｃｏｒｅなどの表面プラズモン共鳴によって測定される、抗体がＬｇＲ５に結合する度合いの約１０％未満である。ある特定の実施形態において、ＬｇＲ５に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５Ｎｍ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、様々な種のＬｇＲ５の間で保存されているＬｇＲ５のエピトープに結合する。
【００３０】
「抗体」という用語は、最も広い意味で本明細書において使用され、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、及び抗体断片を含むがこれらに限定されない様々な抗体構造体を包含する。
【００３１】
本明細書において使用される「抗体薬品複合体」（ＡＤＣ）という用語は「免疫複合体」という用語と同等である。
【００３２】
「抗体断片」は、完全抗体の一部を含み、かつ、その完全抗体が結合する抗原に結合する完全抗体以外の分子を指す。抗体断片の例にはＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、二重特異性抗体、直鎖状抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３３】
基準抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて基準抗体のその抗原への結合を５０％以上阻害する抗体を指す。逆に基準抗体は、抗体のその抗原への結合を競合アッセイにおいて５０％以上阻害する。例示的な競合アッセイが本明細書において提示される。
【００３４】
「癌」及び「癌性」という用語は、典型的に無制御の細胞成長／増殖を特徴とする哺乳類動物における生理的状態を指すか、またはそのような状態を説明する。癌の例には、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。そのような癌のより具体的な例には、鱗状細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞性肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸部癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、ヘパトーマ、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、陰門癌、甲状腺癌、肝癌、白血病及び他のリンパ増殖性障害、ならびに様々な種類の頭頸部癌が挙げられる。
【００３５】
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／または軽鎖の一部が特定の起源または種に由来し、一方でその重鎖及び／または軽鎖の残りの部分が異なる起源または種に由来する抗体を指す。
【００３６】
抗体の「クラス」は、その重鎖が有する定常ドメインまたは定常領域の種類を指す。５つの主要な抗体クラス、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらの抗体クラスのうちのいくつかはサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。免疫グロブリンの様々なクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
【００３７】
本明細書において使用される「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を抑制するかもしくは阻害する、かつ／または細胞死もしくは細胞破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体）、化学療法剤または化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他のインターカレート剤）、増殖抑制剤、核酸分解酵素などの酵素及びそれらの断片、抗生物質、細菌起源、真菌起源、植物起源、または動物起源の小分子毒素または酵素活性型毒素などの毒素であってそれらの断片及び／または変異体を含む毒素、ならびに以下で開示される様々な抗腫瘍剤または抗癌剤が含まれるが、これらに限定されない。
【００３８】
「エフェクター機能」は抗体のＦｃ領域に起因する生物活性を指し、エフェクター機能は抗体のアイソタイプによって変化する。抗体エフェクター機能の例には、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の発現低下、及びＢ細胞活性化が含まれる。
【００３９】
薬剤、例えば医薬製剤の「有効量」は、投薬時における及び必要期間における所望の治療成果または予防成果を達成するために有効な量を指す。
【００４０】
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。
【００４１】
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。その用語には、天然配列Ｆｃ領域及び変異Ｆｃ領域が含まれる。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端にまで延在する。しかしながら、そのＦｃ領域のＣ末端リシン（Ｌｙｓ４４７）は存在しても存在しなくても良い。本明細書において別途明示されない限り、Ｆｃ領域または定常領域中のアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されるＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ付番システムに従うものである。
【００４２】
「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に４つのＦＲドメイン、すなわち、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ配列及びＦＲ配列は、一般的にＶＨ（またはＶＬ）において次の配列、すなわち、ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４で現れる。
【００４３】
「完全長抗体」、「完全抗体」、及び「全抗体」という用語は、天然抗体構造と実質的に類似する構造を有する抗体、または本明細書において規定されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すために本明細書において互換的に使用される。
【００４４】
「グリコシル化形態のＬｇＲ５」という用語は、炭水化物残基の付加により翻訳後修飾されている天然発生のＬｇＲ５を指す。
【００４５】
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、かつ、外来性核酸が導入されている細胞を指し、そのような細胞の子孫を含む。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、それらには初代形質転換細胞及び継代数と無関係にその細胞に由来する子孫が含まれる。子孫は核酸内容が親細胞と完全に同一でなくても良いが、突然変異を含んでも良い。元の形質転換細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する突然変異子孫が本明細書に含まれる。
【００４６】
「ヒト抗体」は、ヒトまたはヒト細胞によって産生される抗体のアミノ酸配列、またはヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト起源由来の抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外している。
【００４７】
「ウサギ抗体」は、ウサギまたはウサギ細胞によって産生される抗体のアミノ酸配列、またはウサギ抗体レパートリーもしくは他のウサギ抗体コード配列を利用する非ウサギ起源由来の抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有するものである。
【００４８】
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬフレームワーク配列またはヒト免疫グロブリンＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に現れるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的に、ヒト免疫グロブリンＶＬ配列またはヒト免疫グロブリンＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからの選択である。一般的に、その配列サブグループは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３のサブグループである。ＶＬの一実施形態において、サブグループは、上記ＫａｂａｔらのサブグループカッパＩである。ＶＨの一実施形態において、サブグループは、上記ＫａｂａｔらのサブグループＩＩＩである。
【００４９】
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、及び典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、その可変ドメインでは、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、かつＦＲの全てまたは実質的に全てが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は任意選択で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでも良い。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化された抗体を指す。
【００５０】
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書において使用される場合、配列に関して超可変的であり、かつ／または構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般的に、天然四重鎖抗体は、ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは一般的に、超可変ループに由来するアミノ酸残基、及び／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）に由来するアミノ酸残基を含み、後者は配列可変性が最も高く、かつ／または抗原認識に関与するものである。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ，Ｊ．  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４〜３４、Ｌ２のアミノ酸残基５０〜５６、Ｌ３のアミノ酸残基８９〜９７、Ｈ１のアミノ酸残基３１〜３５Ｂ、Ｈ２のアミノ酸残基５０〜６５、及びＨ３のアミノ酸残基９５〜１０２において生じる。（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。ＶＨ中のＣＤＲ１を例外として、ＣＤＲは一般的に、超可変ループを形成する前記アミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、「特異性決定残基」または「ＳＤＲ」も含み、それらは抗原と接触する残基である。ＳＤＲは、短縮型ＣＤＲまたはａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基３１〜３４、Ｌ２のアミノ酸残基５０〜５５、Ｌ３のアミノ酸残基８９〜９６、Ｈ１のアミノ酸残基３１〜３５Ｂ、Ｈ２のアミノ酸残基５０〜５８、及びＨ３のアミノ酸残基９５〜１０２において生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，  Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい。）別途指定されない限り、ＨＶＲ残基及び可変ドメイン中の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、上記Ｋａｂａｔらのものに従って本明細書において付番される。
【００５１】
「免疫複合体」は、細胞傷害性薬剤を含むがこれらに限定されない１つまたは複数の異種性分子（複数可）に結合した抗体である。免疫複合体は、「抗体薬品複合体」（ＡＤＣ）という用語のものと同等のものである。
【００５２】
「個体」または「患者」または「対象」は哺乳類動物である。哺乳類動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類動物（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類動物）、ウサギ、及びげっ歯類動物（例えば、マウス及びラット）が含まれるがこれらに限定されない。ある特定の実施形態において、個体または対象はヒトである。
【００５３】
「単離抗体」は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば電気泳動法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）によって測定される９５％または９９％を超える純度にまで精製される。抗体純度の評価方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
【００５４】
「単離核酸」は、その天然環境の構成成分から分離されている核酸分子を指す。単離核酸には、核酸分子を通常含有する細胞に含有される核酸分子が含まれるが、その核酸分子は、染色体外に存在するか、またはその天然の染色体の位置とは異なる染色体の位置に存在する。
【００５５】
「抗ＬｇＲ５抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖及び抗体軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つまたは複数の核酸分子を指し、それには、単一のベクターまたは別個のベクター内のそのような核酸分子（複数可）、及び宿主細胞内の１つまたは複数の位置に存在するそのような核酸分子（複数可）が含まれる。
【００５６】
本明細書において使用される場合、「ＬｇＲ５」という用語は、細胞内でのＬｇＲ５前駆タンパク質のプロセシングから生じる任意の天然成熟ＬｇＲ５を指す。その用語には、別途指定されない限り、霊長類動物（例えば、ヒト及びカニクイザルまたはアカゲザル）及びげっ歯類動物（例えば、マウス及びラット）などの哺乳類動物を含む任意の脊椎動物起源のＬｇＲ５が含まれる。その用語にはまた、ＬｇＲ５の天然変異体、例えばスプライシング変異体または対立遺伝子変異体も含まれる。シグナル配列（アミノ酸１〜２１）を含む例示的なヒトＬｇＲ５前駆タンパク質のアミノ酸配列が配列番号２１に示される。例示的な成熟ヒトＬｇＲ５のアミノ酸配列が配列番号２２に示される。例示的なカニクイザルＬｇＲ５のアミノ酸３３〜９０７の予測配列が配列番号２３に示される。例示的なラットＬｇＲ５前駆体のアミノ酸配列（シグナル配列であるアミノ酸１〜２１を含む）及び成熟配列が、それぞれ配列番号２４及び２５に示される。例示的なマウスＬｇＲ５前駆体のアミノ酸配列（シグナル配列であるアミノ酸１〜２１を含む）及び成熟配列が、それぞれ配列番号２６及び２７に示される。
【００５７】
「ＬｇＲ５陽性癌」という用語は、その表面にＬｇＲ５を発現する細胞を含む癌を指す。細胞が表面にＬｇＲ５を発現するかどうかの判定では、ＬｇＲ５  ｍＲＮＡ発現が細胞表面上でのＬｇＲ５発現に相関すると考える。いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５  ｍＲＮＡの発現は、インサイチュハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲ（定量的ＲＴ−ＰＣＲを含む）から選択される方法によって判定される。あるいは、細胞表面上でのＬｇＲ５の発現は、例えば、免疫組織化学、ＦＡＣＳ等のような方法においてＬｇＲ５に対する抗体を使用して判定され得る。
【００５８】
「ＬｇＲ５陽性癌細胞」という用語は、その表面にＬｇＲ５を発現する癌細胞を指す。
【００５９】
本明細書において使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体を指す。すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、想定される変異抗体、例えば天然発生の突然変異を含む変異抗体、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる変異抗体であって、一般的に少量で存在する変異体を除いて同一であり、かつ／または同じエピトープに結合する。典型的には様々な決定基（エピトープ）に対する様々な抗体を含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体の集団から得られることをその抗体の特徴として示し、任意の具体的な方法による抗体の産生が必要であるものと解釈されてはならない。例えば、本発明に準じて使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全体または一部を含む遺伝子導入動物を利用する方法を含むがそれらに限定されない様々な技術によって作製されて良く、モノクローナル抗体を作製するためのそのような方法及び他の例示的な方法は本明細書で説明されている。
【００６０】
「裸抗体」は、異種性部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射性標識に結合されていない抗体を指す。その裸抗体は医薬製剤中に存在し得る。
【００６１】
「天然抗体」は、様々な構造を有する天然発生の免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合によって結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端にかけて、各重鎖は、可変重鎖ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）及びそれに続く３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端にかけて、各軽鎖は、可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）及びそれに続く軽鎖定常（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの種類のうちの１つに割り当てられ得る。
【００６２】
「添付文書」という用語は、市販の治療用製品パッケージに習慣的に含まれており、かつそのような治療用製品の使用に関する適応症、使用法、服用量、投与、併用療法、禁忌、及び／または注意についての情報を含む指示書を指すために使用される。
【００６３】
基準ポリペプチド配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、基準ポリペプチド配列と候補配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要であればギャップを導入した後の基準ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基のパーセンテージであって、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮していないパーセンテージとして定義される。当技術分野の範囲内にある様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴソフトウェア、ＢＬＡＳＴ−２ソフトウェア、ＡＬＩＧＮソフトウェアまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの入手可能なコンピューターソフトウェアを使用してパーセントアミノ酸配列同一性の決定を目的とした整列を行うことができる。当業者は、比較されている配列の全長にわたる最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列させるための適切なパラメーターを決定することができる。しかしながら、本明細書では、配列比較コンピュータープログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して％アミノ酸配列同一性の値を作成する。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータープログラムはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，によって作成された。そのソースコードは、ユーザー文書提出によって米国２０５５９ワシントンＤＣの米国著作権局に提出されており、米国著作権登録番号第ＴＸＵ５１００８７号として登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、カリフォルニア州サウス・サンフランシスコのＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，から入手することができるか、またはソースコードからそのプラグラムをコンパイルすることができる。デジタルＵＮＩＸ  Ｖ４．０ＤをはじめとするＵＮＩＸオペレーティングシステム上で使用するには、ＡＬＩＧＮ−２プログラムをコンパイルする必要がある。全ての配列比較パラメーターはＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変化しない。
【００６４】
アミノ酸配列比較のためにＡＬＩＧＮ−２が使用される状況において、所与のアミノ酸配列Ａの所与のアミノ酸配列Ｂに対する％アミノ酸配列同一性、その配列との％アミノ酸配列同一性、またはその配列に対しての％アミノ酸配列同一性（代替として、所与のアミノ酸配列Ｂに対するある特定の％アミノ酸配列同一性、その配列とのある特定の％アミノ酸配列同一性、またはその配列に対してのある特定の％アミノ酸配列同一性を有する、または含む所与のアミノ酸配列Ａと言い換えることができる）は、次のように計算する：
１００×分数Ｘ／Ｙ。
【００６５】
式中、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によってそのプログラムのＡとＢとのアラインメントの中の完全な一致としてスコアされたアミノ酸残基数であり、ＹはＢのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの％アミノ酸配列同一性はＡに対するＢの％アミノ酸配列同一性と同じではないことが理解される。別途具体的に明言されない限り、本明細書において使用される全ての％アミノ酸配列同一性の値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータープログラムを使用して直前の段落において説明されているように得られる。
【００６６】
「医薬製剤」という用語は、中に含まれる有効成分の生物活性を効果的なものにする形態の調製物であって、その製剤が投与される対象に許容されないほど有毒な追加成分を含まない調製物を指す。
【００６７】
「薬学的に許容可能な担体」は、有効成分以外の対象にとって無毒である医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容可能な担体には、緩衝剤、賦形剤、安定化剤、または保存剤が含まれるがこれらに限定されない。
【００６８】
本明細書において使用される「プラチナ配位体」は、例えば、限定されないが、ＤＮＡへ共有結合する能力に基づいて腫瘍に対する効力を発揮する、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、イプロプラチン、サトラプラチン、ＣＩ−９７３、ＡＺ０４７３、ＤＷＡ２１１４Ｒ、ネダプラチン、及びスピロプラチンなどの抗癌化学療法薬を指す。
【００６９】
本明細書において使用される場合、「ｔｒｅａｔｍｅｎｔ（治療）」（及び「ｔｒｅａｔ（治療する）」または「ｔｒｅａｔｉｎｇ（治療すること）」のような文法上のその変形体）は、治療を受けている個体の自然経過を変えようと試みる臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理過程の間に実施され得る。治療の望ましい効果には、疾患の発症または再発の防止、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的帰結の消失、転移の防止、疾患の進行速度の低下、疾患状態の改善または緩和、及び寛解または予後改善が含まれるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は疾患の発症を遅らせるため、または疾患の進行を緩徐にするために使用される。
【００７０】
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または抗体軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般的に類似する構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｋｕｂｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ  ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，ｐａｇｅ  ９１（２００７）を参照されたい）。単一のＶＨドメインまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分なものであり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、その抗原に結合する抗体のＶＨドメインまたはＶＬドメインを使用して、相補的なＶＬドメインまたはＶＨドメインのライブラリーをそれぞれスクリーニングして単離され得る。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
【００７１】
本明細書において使用される場合、「ベクター」という用語は、それが結合している別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。その用語には自己複製性核酸構造体としてのベクター及び導入される宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、それらのベクターが機能的に結合する核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは本明細書において「発現ベクター」と呼ばれる。
【００７２】
ＩＩ．組成物及び方法
一態様において、本発明は、ＬｇＲ５に結合する抗体及びそのような抗体を含む免疫複合体に部分的に基づく。本発明の抗体及び免疫複合体は、例えば、ＬｇＲ５陽性癌の診断または治療に有用である。
【００７３】
Ａ．例示的な抗ＬｇＲ５抗体
いくつかの実施形態において、本発明はＬｇＲ５に結合する単離抗体を提供する。ＬｇＲ５は、例えば活発に循環する腸幹細胞の表面に見られる７回膜貫通タンパク質である。ＬｇＲ５は調査した結腸腫瘍切片の約７７％において発現する。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／１４９１５９号を参照されたい。シグナル配列（アミノ酸１〜２１）を含む例示的な天然発生ヒトＬｇＲ５前駆タンパク質配列が配列番号２１に提示され、対応する成熟ＬｇＲ５タンパク質配列が配列番号２２（配列番号２１のアミノ酸２２〜９０７に対応する）に示される。
【００７４】
いくつかの実施形態において、本発明は、ヒトＬｇＲ５のアミノ酸２２〜３２２内のエピトープに結合する単離抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、アミノ酸２２〜３２２の外側にあるヒトＬｇＲ５細胞外ドメイン内のエピトープに結合する単離抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本発明はヒトＬｇＲ５のアミノ酸３２３〜５５８内のエピトープに結合する単離抗体を提供する。
【００７５】
αＬｇＲ５．１−１２抗体及び他の実施形態
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＬｇＲ５抗体を提供する。
【００７６】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、抗体は配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。追加の実施形態において、抗体は配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。追加の実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【００７７】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００７８】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインと、を含む。
【００７９】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【００８０】
上記実施形態のいずれにおいても、抗ＬｇＲ５抗体はヒト化されている。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、上記実施形態のいずれかのＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、上記ＨＶＲ及びウサギフレームワーク領域を含む。
【００８１】
別の態様において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸が配列番号６の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。任意選択により、抗ＬｇＲ５抗体は配列番号６のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【００８２】
別の態様において、配列番号５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は配列番号５の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失はＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。任意選択により、抗ＬｇＲ５抗体は配列番号５のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【００８３】
別の態様において、上記実施形態のいずれかのＶＨ及び上記実施形態のいずれかのＶＬを含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。一実施形態において、抗体は、配列番号６及び配列番号５にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【００８４】
追加の態様において、本発明は本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号６のＶＨ配列及び配列番号５のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、ヒトＬｇＲ５への結合について配列番号６のＶＨ配列及び配列番号５のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と競合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、ヒトＬｇＲ５への結合について配列番号６のＶＨ配列及び配列番号５のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と競合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、アミノ酸２２〜３２２の外側にあるＬｇＲ５細胞外ドメイン内のエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、ｈｕＹＷ３５３抗体または８Ｅ１１抗体のどちらかとヒトＬｇＲ５への結合について競合しない抗体。いくつかの実施形態において、ヒトＬｇＲ５のアミノ酸３２３〜５５８内のエピトープに結合する抗体が提供される。
【００８５】
本発明の追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば本明細書において定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【００８６】
追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、以下の第１〜７節に記載される特徴のいずれかを単独で、または組み合わせて組み込んで良い。
【００８７】
αＬｇＲ５．２６−１抗体及び他の実施形態
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＬｇＲ５抗体を提供する。
【００８８】
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施形態において、抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を備える。追加の実施形態において、抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を備える。追加の実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
【００８９】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
【００９０】
別の態様において、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＨ  ＨＶＲ配列を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、または３つ全てのＶＬ  ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
【００９１】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【００９２】
上記実施形態のいずれにおいても、抗ＬｇＲ５抗体はヒト化されている。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、上記実施形態のいずれかのＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、上記ＨＶＲ及びウサギフレームワーク領域を含む。
【００９３】
別の態様において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は、配列番号８の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失がＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。任意選択により、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号８のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【００９４】
別の態様において、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。ある特定の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は、配列番号７の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。任意選択により、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号７のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【００９５】
別の態様において、上記実施形態のいずれかのＶＨ及び上記実施形態のいずれかのＶＬを含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。一実施形態において、抗体は、配列番号８及び配列番号７にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【００９６】
追加の態様において、本発明は、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号８のＶＨ配列及び配列番号７のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、ヒトＬｇＲ５への結合について配列番号８のＶＨ配列及び配列番号７のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と競合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、ヒトＬｇＲ５のアミノ酸２２〜３２２内のエピトープへの結合について配列番号８のＶＨ配列及び配列番号７のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と競合する抗体が提供される。
【００９７】
本発明の追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば本明細書において定義されるＩｇＧ２ａ抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【００９８】
追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、以下の第１〜７節に記載される特徴のいずれかを単独で、または組み合わせて組み込んで良い。
【００９９】
８Ｅ１１抗体及び他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＬｇＲ５抗体を提供する。
【０１００】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を備える抗体を提供する。
【０１０１】
上記実施形態のいずれにおいても、抗ＬｇＲ５抗体はヒト化されている。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は上記実施形態のいずれかのＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩＶコンセンサス（ＶＬＫＩＶ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。ある特定の実施形態において、そのヒトアクセプターフレームワークは、重鎖フレームワーク領域ＦＲ３中にＲ７１Ｓ突然変異及びＡ７８Ｖ突然変異を含むヒトＶＬカッパＩＶコンセンサス（ＶＬＫＩＶ）フレームワーク及び／またはＶＨフレームワークＶＨ１である。
【０１０２】
いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、上記実施形態のいずれかのＨＶＲを含み、配列番号６５〜６８から選択される重鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、上記実施形態のいずれかのＨＶＲを含み、配列番号６６の重鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む。いくつかのそのような実施形態において、重鎖可変ドメインフレームワークは、配列番号６５〜６８から選択されるＦＲ３配列を有する改変ヒトＶＨ１フレームワークである。いくつかのそのような実施形態において、重鎖可変ドメインフレームワークは、配列番号６６のＦＲ３配列を有する改変ヒトＶＨ１フレームワークである。
【０１０３】
いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、上記実施形態のいずれかのＨＶＲを含み、配列番号６１の軽鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む。いくつかのそのような実施形態において、重鎖可変ドメインフレームワークは、配列番号６１のＦＲ３配列を有する改変ＶＬカッパＩＶコンセンサス（ＶＬＫＩＶ）フレームワークである。
【０１０４】
別の態様において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、及び４５から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、及び４５から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、及び４５から選択される配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、合計で１〜５個のアミノ酸は、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、及び４５から選択される配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失がＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。
【０１０５】
いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。
【０１０６】
任意選択により、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、及び４５から選択されるＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、そのＶＨは、（ａ）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１０７】
別の態様において、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、及び４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、及び４４から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、及び４４から選択されるアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、合計で１〜５個のアミノ酸は、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、及び４４から選択されるアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失がＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。
【０１０８】
いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。いくつかの実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）配列を含む。
【０１０９】
任意選択により、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、及び４４から選択されるアミノ酸配列のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１１０】
別の態様において、上記実施形態のいずれかのＶＨ及び上記実施形態のいずれかのＶＬを含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。一実施形態において、抗体は、配列番号３１及び配列番号３０にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、抗体は、配列番号３３及び配列番号３２にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、抗体は、配列番号３５及び配列番号３４にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、抗体は、配列番号３７及び配列番号３６にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、抗体は、配列番号３９及び配列番号３９にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、抗体は、それぞれ配列番号４１及び配列番号４０のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、抗体は、配列番号４３及び配列番号４２にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。一実施形態において、抗体は、配列番号４５及び配列番号４４にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１１１】
追加の態様において、本発明は、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号３３のＶＨ配列及び配列番号３２のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸２２〜３２３由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２１のエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、アミノ酸１〜３１２由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２２のエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１１２】
本発明の追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば本明細書において定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１１３】
追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、以下の第１〜７節に記載される特徴のいずれかを単独で、または組み合わせて組み込んで良い。
【０１１４】
ＹＷ３５３抗体及び他の実施形態
一態様において、本発明は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＬｇＲ５抗体を提供する。
【０１１５】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号８４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１１６】
上記実施形態のいずれかにおいても、抗ＬｇＲ５抗体はヒト抗体である。
【０１１７】
別の態様において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は、配列番号５１の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、合計で１〜５個のアミノ酸は、配列番号５１の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失がＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。任意選択により抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号５１のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１１８】
別の態様において、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体は、ＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜５個のアミノ酸は、配列番号５０の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸が配列番号５０の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。任意選択により前記抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号５０のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、そのＶＬは、（ａ）配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１１９】
別の態様において、上記実施形態のいずれかのＶＨ及び上記実施形態のいずれかのＶＬを含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。一実施形態において、抗体は、配列番号５１及び配列番号５０にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１２０】
追加の態様において、本発明は、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号５１のＶＨ配列及び配列番号５０のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸２２〜１２３由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２１のエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸１〜１０２由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２２のエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１２１】
本発明の追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば本明細書において定義されるＩｇＧ２ａ抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１２２】
追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、以下の第１〜７節に記載される特徴のいずれかを単独で、または組み合わせて組み込んで良い。
【０１２３】
３Ｇ１２抗体及び他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＬｇＲ５抗体を提供する。
【０１２４】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１２５】
上記実施形態のいずれにおいても、抗ＬｇＲ５抗体はヒト化されている。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、上記実施形態のいずれかのＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパコンセンサス（ＶＬＫ）フレームワーク及び／またはヒトＶＨサブグループ３コンセンサス（ＶＨ３）フレームワークである。
【０１２６】
別の態様において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は、配列番号４７のアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、合計で１〜５個のアミノ酸は、配列番号４７のアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。
【０１２７】
任意選択により、抗ＬｇＲ５、抗体は配列番号４７のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１２８】
別の態様において、配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体は、ＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は、配列番号４６のアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、合計で１〜５個のアミノ酸は、配列番号４６のアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。
【０１２９】
任意選択により、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４６のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、そのＶＬは、（ａ）配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１３０】
別の態様において、上記実施形態のいずれかのＶＨ及び上記実施形態のいずれかのＶＬを含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。一実施形態において、抗体は、配列番号４７と配列番号４６にそれぞれＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１３１】
追加の態様において、本発明は、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号４７のＶＨ配列及び配列番号４６のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸３２４〜４２３由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２１のエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、アミノ酸３０３〜４０２由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２２のエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸３２４〜５５５由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２１のエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、アミノ酸３０３〜５３４由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２２のエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１３２】
本発明の追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば本明細書において定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１３３】
追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、以下の第１〜７節に記載される特徴のいずれかを単独で、または組み合わせて組み込んで良い。
【０１３４】
２Ｈ６抗体及び他の実施形態
いくつかの実施形態において、本発明は、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＨＶＲを含む抗ＬｇＲ５抗体を提供する。
【０１３５】
別の態様において、本発明は、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
【０１３６】
上記実施形態のいずれにおいても、抗ＬｇＲ５抗体はヒト化されている。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、上記実施形態のいずれかのＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある特定の実施形態において、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパコンセンサス（ＶＬＫ）フレームワーク及び／またはヒトＶＨサブグループ３（ＶＨ３）フレームワークである。
【０１３７】
別の態様において、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある特定の実施形態において、配列番号４９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は、配列番号４９のアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、合計で１〜５個のアミノ酸は、配列番号４９のアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。
【０１３８】
任意選択により、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４９のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＨは、（ａ）配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１３９】
別の態様において、配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。ある特定の実施形態において、配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含む抗ＬｇＲ５抗体はＬｇＲ５への結合能を保持する。ある特定の実施形態において、合計で１〜１０個のアミノ酸は、配列番号４８のアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、合計で１〜５個のアミノ酸は、配列番号４８のアミノ酸配列の中で置換、挿入、かつ／または欠失されている。ある特定の実施形態において、置換、挿入、または欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ内）で起こる。
【０１４０】
任意選択により、抗ＬｇＲ５抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態において、ＶＬは、（ａ）配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ、または３つのＨＶＲを含む。
【０１４１】
別の態様において、上記実施形態のいずれかのＶＨ及び上記実施形態のいずれかのＶＬを含む抗ＬｇＲ５抗体が提供される。一実施形態において、抗体は、配列番号４９及び配列番号４８にそれぞれＶＨ配列とＶＬ配列を含み、それらの配列の翻訳後修飾を含む。
【０１４２】
追加の態様において、本発明は、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態において、配列番号４９のＶＨ配列及び配列番号４８のＶＬ配列を含む抗ＬｇＲ５抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸３２４〜４２３由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２１のエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、アミノ酸３０３〜４０２由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２２のエピトープに結合する抗体が提供される。ある特定の実施形態において、アミノ酸３２４〜５５５由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２１のエピトープに結合する抗体が提供される。いくつかの実施形態において、アミノ酸３０３〜５３４由来の、その中の、またはそれと重なる配列番号２２のエピトープに結合する抗体が提供される。
【０１４３】
本発明の追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、二重特異性抗体、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば本明細書において定義されるＩｇＧ１抗体または他の抗体クラスもしくはアイソタイプである。
【０１４４】
追加の態様において、上記実施形態のいずれかによる抗ＬｇＲ５抗体は、以下の第１〜７節に記載される特徴のいずれかを単独で、または組み合わせて組み込んで良い。
【０１４５】
１．抗体親和性
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）を有し、任意選択により１０−１３Ｍ以上（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）である。
【０１４６】
一実施形態において、Ｋｄは、以下のアッセイ法によって説明されるようにＦａｂ型の目的の抗体及びその抗原を用いて実施される放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、段階希釈シリーズの非標識抗原の存在下で最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原でＦａｂを平衡化し、次に抗Ｆａｂ抗体被覆プレートを用いて結合抗原を捕捉することにより測定される（例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するため、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍｌの抗Ｆａｂ補足抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩にわたって被覆し、その後で２％（重量／体積）ウシ血清アルブミンのＰＢＳを用いて室温（約２３℃）で２〜５時間にわたってブロッキングする。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）の中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］標識抗原を目的のＦａｂの段階希釈物と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）内の抗ＶＥＧＦ抗体であるＦａｂ−１２の評価と一致する）。その後、目的のＦａｂを一晩にわたってインキュベートするが、そのインキュベーションは平衡に達することを確実にするためにより長い時間（例えば、約６５時間）にわたって継続しても良い。その後、混合物を（例えば、１時間にわたる）室温でのインキュベーションのために捕捉プレートに移す。その後、その溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中の０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。それらのプレートが乾いたら、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）上でそれらのプレートを１０分間にわたって計測する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイに使用するために選択する。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、Ｋｄは、約１０応答単位（ＲＵ）の固定化抗原ＣＭ５チップと共に２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用する表面プラズモン共鳴アッセイを用いて測定される。簡単に説明すると、供給業者の指示に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて、カルボキシメチル化デキストラン・バイオセンサーチップ（ＣＭ５，ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を活性化する。１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８を用いて抗原を５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈した後に、５μｌ／分の流速で注入して約１０応答単位（ＲＵ）の結合タンパク質を達成する。抗原の注入の後に、１Ｍエタノールアミンを注入して未反応基をブロックする。動態測定のために０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）の中にＦａｂの２倍段階希釈物（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を２５℃において約２５μｌ／分の流速で注入する。単純一対一Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して結合センサーグラム及び解離センサーグラムを同時に適合させることにより結合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記表面プラズモン共鳴アッセイによって結合速度が１０６Ｍ−１秒−１を超える場合、その結合速度は、撹拌キュベットと共にストップフロー装備分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計において測定される抗原濃度が上昇する中での２５℃におけるｐＨ７．２のＰＢＳ中の２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放射強度（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）の増加または減少を測定する蛍光消光技術を用いることによって測定され得る。
【０１４８】
２．抗体断片
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体は抗体断片である。抗体断片には、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載される他の断片が含まれるがこれらに限定されない。ある特定の抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｌｏ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照し、ＷＯ９３／１６１８５及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージレセプター結合エピトープ残基を含み、かつ増加したインビボ半減期を有するＦａｂ断片及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
【０１４９】
二重特異性抗体は、２つの抗原結合部位を有する二価または二特異性であり得る抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。三重特異性抗体及び四重特異性抗体もＨｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載される。
【０１５０】
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体もしくは一部または軽鎖可変ドメインの全体もしくは一部を含む抗体断片である。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ、例えば、米国特許第６２４８５１６（Ｂ１）号を参照されたい）。
【０１５１】
抗体断片は、本明細書に記載されるように完全抗体のタンパク質分解消化及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製され得る。
【０１５２】
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体はキメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載される。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）とヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体にはそれらの抗原結合断片が含まれる。
【０１５３】
ある特定の実施形態において、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。一般的に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する１つまたは複数の可変ドメインを含む。また、ヒト化抗体は、任意選択で、ヒト定常領域の少なくとも一部を含むことになる。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）の対応する残基で置換される。
【０１５４】
ヒト化抗体及びその作製方法は、例えばＡｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）において論評されており、例えばＲｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植について記載している）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「再表面化」について記載している）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」について記載している）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチについて記載している）においてさらに説明されている。
【０１５５】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を用いて選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、特定のサブグループの軽鎖可変領域または重鎖可変領域のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、及びＦＲライブラリーのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）、及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が含まれるがこれらに限定されない。
【０１５６】
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体はヒト抗体である。当技術分野において知られている様々な技術を用いてヒト抗体を作製することができる。ヒト抗体は、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）、及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）において概ね説明されている。
【０１５７】
ヒト抗体は、抗原刺激に応答して完全ヒト抗体またはヒト可変領域を含む完全抗体を産生するように改変されている遺伝子導入動物に免疫原を投与することにより調製され得る。そのような動物は、典型的にはヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含んでおり、それらヒト免疫グロブリン遺伝子座は、内在性免疫グロブリン遺伝子座に置き換わっているか、または染色体外に存在するか、またはその動物の染色体中に無作為に組み込まれている。そのような遺伝子導入マウスでは、内在性免疫グロブリン遺伝子座は概ね不活化されている。遺伝子導入動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）テクノロジーについて記載している米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）テクノロジーについて記載している米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ−ＭＭＯＵＳＥ（登録商標）テクノロジーについて記載している米国特許第７，０４１，８７０号、ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）テクノロジーについて記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい）。そのような動物によって生成される完全抗体のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに改変されても良い。
【０１５８】
ヒト抗体はハイブリドーマベースの方法によっても作製され得る。ヒトモノクローナル抗体の産生用のヒト骨髄腫株及びマウス−ヒト異種骨髄腫細胞株が説明されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＰＰ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されるヒト抗体も、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載される。追加の方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について記載している）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマについて記載している）において記載されている方法が含まれる。ヒトハイブリドーマテクノロジー（トリオーマ・テクノロジー）も、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０１５９】
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することでも作製され得る。そのような可変ドメイン配列を所望のヒト定常ドメインと組み合わせて良い。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技法は下に記載される。
【０１６０】
５．ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性または所望の複数の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製して、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野において知られている。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：  ６２４−６２８  （１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：  ５８１−５９７  （１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）においてさらに説明されている。
【０１６１】
ある特定のファージディスプレイ方法では、ＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローン化され、ファージライブラリー内で無作為に組み換えられ、次にそれらの遺伝子をＷｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように抗原結合性ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片として抗体断片を提示する。免疫を受けた起源に由来するライブラリーは、ハイブリドーマの構築を必要とせずにその免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、ナイーブレパートリーを（例えばヒトから）クローン化して、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されるように免疫化を全く行うことなく、単一起源の抗体を広範囲の非自己抗原に対して提供することができ、かつ自己抗原に対しても提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）によって記載されるように再構成前のＶ遺伝子断片を幹細胞からクローン化し、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して超可変ＣＤＲ３領域をコード化し、かつ再構成をインビトロで達成することでナイーブライブラリーを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーについて記載している特許刊行物には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
【０１６２】
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
【０１６３】
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば二特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、それらの結合特異性のうちの１つは、ＬｇＲ５に対するものであり、他の結合特異性は他の任意の抗原に対するものである。ある特定の実施形態において、二特異性抗体は、ＬｇＲ５の２つの異なるエピトープに結合し得る。二特異性抗体は、ＬｇＲ５を発現する細胞に細胞傷害性薬剤を局在化するためにも使用されても良い。二特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。
【０１６４】
多重特異性抗体の作製技術には、異なる特異性を有する２種類の免疫グロブリン重鎖軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３））、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、及び「ノブ・イン・ホール」エンジニアリング（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照されたい）が含まれるがこれらに限定されない。多重特異性抗体は、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための工学的静電ステアリング作用（ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ  ｓｔｅｅｒｉｎｇ  ｅｆｆｅｃｔ）（ＷＯ２００９／０８９００４（Ａ１）号パンフレット）、２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４６７６９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、二特異性抗体を作製するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７〜１５５３（１９９２）を参照されたい）、二特異性抗体断片を作製するための「二重特異性抗体」テクノロジーの使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４〜６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用（例えばＧｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、及び例えばＴｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているような三特異性抗体の調製によっても作製され得る。
【０１６５】
「オクトパス抗体」をはじめとする３つ以上の機能性抗原結合部位を有する改変抗体も本明細書に含まれる（例えば、米国第２００６／００２５５７６（Ａ１）号を参照されたい）。
【０１６６】
本明細書中の抗体または断片には、ＬｇＲ５及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用性ＦＡｂ」または「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、米国第２００８／００６９８２０号をされたい）。
【０１６７】
７．抗体変異体
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。そのような修飾には、例えば、その抗体のアミノ酸配列からの欠失、及び／またはその抗体のアミノ酸配列への挿入、及び／またはその抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。その最終的な構築物に到達するために欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行うことができるが、但し、最終的な構築物は所望の特性、例えば抗原結合性を有することを条件とする。
【０１６８】
ａ）置換変異体、挿入変異体、及び欠失変異体
ある特定の実施形態において、１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異誘発のための目的部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。表１において「好ましい置換」という項目の下に保存的置換が示されている。より実質的な変化は、表１において「例示的な置換」という項目の下に提供されており、アミノ酸側鎖クラスに関連して以下でさらに説明されているものである。目的の抗体にアミノ酸置換を導入することができ、その生成物は、所望の活性について、例えば、抗原結合性の保持／改善、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善についてスクリーニングされる。
2017526618.tif 000003
【０１６９】
アミノ酸は、側鎖の共通する特性に応じてグループ分けされ得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１７０】
非保存的置換には、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを伴うことになる。
【０１７１】
一種類の置換変異体は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基の置換を伴う。それにより生じた変異体（複数可）は一般的に、選択されて研究されるが、その親抗体と比較してある特定の生物学的特性が改変され（例えば、改善され）（例えば、親和性が上昇する、免疫原性が低下する）、かつ／またはその親抗体の特定の生物学的特性を実質的に保持することになる。例示的な置換変異体は親和性成熟抗体であり、親和性成熟抗体は、例えば本明細書に記載される技術のようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用いて簡便に生成され得る。簡単に説明すると、１つまたは複数のＨＶＲ残基を突然変異させて、変異体抗体をファージ上に提示させ、特定の生物活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングする。
【０１７２】
例えば、抗体親和性を改善するためにＨＶＲに改変（例えば置換）を行って良い。そのような改変をＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程の間に高頻度で突然変異を起こすコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９〜１９６（２００８）を参照されたい）及び／またはＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）に行って良く、それにより生じる変異体ＶＨまたはＶＬが結合親和性について検査される。二次ライブラリーを構築し、その二次ライブラリーから再選択することによる親和性成熟が、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １７８：１〜３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態において、様々な方法のうちのいずれか（例えば、エラープローンＰＣＲ、チェーン・シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指定突然変異）によって、成熟させるために選択した可変遺伝子に多様性を導入する。次に二次ライブラリーを作製する。その後、そのライブラリーをスクリーニングして所望の親和性を有する任意の抗体変異体を特定する。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４〜６残基）が無作為選択されるＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関わるＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング突然変異誘発またはアラニンスキャニングモデリングを用いて具体的に特定され得る。ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が特に標的とされることが多い。
【０１７３】
ある特定の実施形態において、抗体が抗原に結合する能力が置換、挿入、または欠失によって実質的に低下しない限り、そのような改変が１つまたは複数のＨＶＲ内に生じて良い。例えば、結合親和性を実質的に低下させることがない保存的改変（例えば、本明細書において規定された保存的置換）をＨＶＲ内に行って良い。そのような改変はＨＶＲ「ホットスポット」またはＳＤＲの外側のものであって良い。上記変異ＶＨ配列及び変異ＶＬ配列のある特定の実施形態において、各ＨＶＲは改変されていないか、または１つ以下、２つ以下、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含んでいるかのどちらかである。
【０１７４】
突然変異誘発の標的とされ得る抗体残基または抗体領域の特定に有用な方法は、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれ、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  （１９８９）  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２４４：１０８１−１０８５によって記載される。この方法では、標的残基の１つの残基または一群（例えば、アルギニン、アスパラギン酸、ヒスチジン、リシン、及びグルタミン酸などの荷電性残基）は特定され、中性アミノ酸または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置換されて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかが判定される。最初の置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置に追加の置換を導入しても良い。代替としてまたは追加として、抗原抗体複合体の結晶構造を用いて、抗体と抗原との間の接触点を特定する。そのような接触残基及び隣接する残基は、置換の候補として標的されても除外されても良い。変異体をスクリーニングして、所望の特性を有しているかどうかを判定して良い。
【０１７５】
長さが１残基〜１００以上の残基を含むポリペプチドまでにわたるアミノ末端融合体及び／またはカルボキシル末端融合体、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入体がアミノ酸配列挿入体に含まれる。末端挿入体の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体には、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ用）、またはその抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドに対する抗体のＮ末端融合体またはＣ末端融合体が含まれる。
【０１７６】
ｂ）グリコシル化変異体
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増大または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を改変することによって簡便に達成され得る。
【０１７７】
抗体がＦｃ領域を含む場合、その領域に結合している炭水化物が改変され得る。概して、哺乳類細胞によって産生される天然抗体は、典型的にはＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合によって結合している分岐型二分岐オリゴ糖を含んでいる。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６〜３２（１９９７）を参照されたい。そのオリゴ糖には、様々な炭水化物、例えばマンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐型オリゴ糖構造の「幹」にあるＧｌｃＮＡｃに結合しているフコースが含まれ得る。いくつかの実施形態において、本発明の抗体中のオリゴ糖の修飾は、ある特定の特性が改善された抗体変異体を作製するために行われ得る。
【０１７８】
一実施形態において、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合するフコースを欠いている炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、そのような抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％の量であり得る。フコースの量は、例えば、ＷＯ２００８／０７７５４６号に記載されているＭＡＬＤＩ−ＴＯＦマススペクトロメトリーによって測定される、Ａｓｎ２９７に結合している全ての糖構造体（例えば、複雑な混成及び高マンノース構造体）の総量に対する、Ａｓｎ２９７にある糖鎖内のフコースの平均量を計算することで決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の位置約２９７（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）に位置するアスパラギン残基を指すが、しかしながら、Ａｓｎ２９７は、抗体のわずかな配列の変化のために位置２９７の約±３アミノ酸上流または下流、すなわち位置２９４〜位置３００に位置しても良い。そのようなフコシル化変異体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照されたい。「脱フコシル化」抗体変異体または「フコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例には、米国第２００３／０１５７１０８号、ＷＯ２０００／６１７３９号、ＷＯ２００１／２９２４６号、米国第２００３／０１１５６１４号、米国第２００２／０１６４３２８号、米国第２００４／００９３６２１号、米国第２００４／０１３２１４０号、米国第２００４／０１１０７０４号、米国第２００４／０１１０２８２号、米国第２００４／０１０９８６５号、ＷＯ２００３／０８５１１９号、ＷＯ２００３／０８４５７０号、ＷＯ２００５／０３５５８６号、ＷＯ２００５／０３５７７８号、ＷＯ２００５／０５３７４２号、ＷＯ２００２／０３１１４０号、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が含まれる。脱フコシル化抗体を産生することが可能である細胞株の例には、タンパク質フコシル化を欠損するＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．  Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．  ２４９：５３３−５４５（１９８６）、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌの米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８（Ａ１）号、及びＡｄａｍｓらのＷＯ２００４／０５６３１２（Ａ１）号、特に実施例１１）、ならびにアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子であるＦＵＴ８のノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７号を参照されたい）が含まれる。
【０１７９】
抗体変異体はバイセクト型オリゴ糖をさらに含んでおり、例えば、それらの変異体では抗体のＦｃ領域に結合している二分岐型オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによってバイセクト化される。そのような抗体変異体では、フコシル化が低下し、かつ／またはＡＤＣＣ機能が改善し得る。そのような抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔ  ｅｔ  ａｌ．）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）、及び米国第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。Ｆｃ領域に結合しているオリゴ糖の中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。そのような抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体変異体は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．）、ＷＯ１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，  Ｓ．）に記載されている。
【０１８０】
ｃ）Ｆｃ領域変異体
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体のＦｃ領域に１つまたは複数のアミノ酸修飾を導入することによって、Ｆｃ領域変異体が生成され得る。そのＦｃ領域変異体は、１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域、ＩｇＧ２  Ｆｃ領域、ＩｇＧ３  Ｆｃ領域、またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含んで良い。
【０１８１】
ある特定の実施形態において、抗体変異体は、全てのエフェクター機能ではなくいくつかのエフェクター機能を有し、それによってその抗体変異体は、インビボでの抗体半減期が重要であるがある特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）が不要または有害になる用途にとって望ましい候補になる。インビトロ細胞傷害アッセイ及び／またはインビボ細胞傷害アッセイを実施してＣＤＣ活性及び／またはＡＤＣＣ活性の低下／除去を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体はＦｃγＲ結合を欠いている（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性がある）がＦｃＲｎ結合能を保持していることを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介する一次細胞であるＮＫ細胞はＦｃ（ＲＩＩＩのみを発現し、一方で単球はＦｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７〜４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的分子のＡＤＣＣ活性を評価するインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５５００３６２号明細書（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）、及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、第５８２１３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法（例えば、フローサイトメトリー用ＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，  ＣＡ）、及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい）を用いることができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。代替としてまたは追加として、目的分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２〜６５６（１９９８）において開示されているモデルのような動物モデルにおいてインビボで評価され得る。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、抗体がＣ１ｑに結合することができず、したがってＣＤＣ活性を欠いていることを確認しても良い。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９号及びＷＯ２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合性ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施して良い（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．１０１：１０４５〜１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ  Ｂｌｏｏｄ．１０３：２７３８〜２７４３（２００４）を参照されたい）。��ｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定も、当技術分野において知られている方法を用いて実施され得る（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９〜１７６９（２００６）を参照されたい）。
【０１８２】
低下したエフェクター機能を有する抗体には、Ｆｃ領域の残基２３８、残基２６５、残基２６９、残基２７０、残基２９７、残基３２７及び残基３２９のうちの１つまたは複数の置換を有する抗体が含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ突然変異体には、残基２６５及び残基２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体（米国特許第７３３２５８１号明細書）をはじめとしてアミノ酸位置２６５、位置２６９、位置２７０、位置２９７及び位置３２７のうちの２つ以上に置換を有するＦｃ突然変異体が含まれる。
【０１８３】
ＦｃＲへの結合が改善された、または減少したある特定の抗体変異体が記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２号、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたい）。
【０１８４】
ある特定の実施形態において、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えばＦｃ領域の位置２９８、位置３３３、及び／または位置３３４（残基のＥＵ付番）における置換を有するＦｃ領域を含む。
【０１８５】
いくつかの実施形態において、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるような、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変させる（すなわち、改善する、または低下させるかのいずれか）改変がＦｃ領域に行われる。
【０１８６】
半減期が増加し、かつ母体ＩｇＧの胎児への移行を担う新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））抗体は、米国第２００５／００１４９３４（Ａ１）号（Ｈｉｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する１つまたは複数の置換を有するＦｃ領域を中に含む。そのようなＦｃ変異体には、Ｆｃ領域残基、すなわち、残基２３８、残基２５６、残基２６５、残基２７２、残基２８６、残基３０３、残基３０５、残基３０７、残基３１１、残基３１２、残基３１７、残基３４０、残基３５６、残基３６０、残基３６２、残基３７６、残基３７８、残基３８０、残基３８２、残基４１３、残基４２４または残基４３４のうちの１つまたは複数における置換、例えばＦｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号明細書）を有する変異体が含まれる。
【０１８７】
Ｆｃ領域変異体の他の例に関してはＤｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８〜４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１号も参照されたい。
【０１８８】
ｄ）システイン改変抗体変異体
ある特定の実施形態において、抗体の１つまたは複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン改変抗体、例えば「チオＭＡｂ」を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、置換残基は、抗体の接触可能な部位に生じる。それらの残基をシステインで置換することで、反応性チオール基は、抗体の接触可能な部位に配置され、本明細書においてさらに説明されるように、それらの反応性チオール基を使用してその抗体を薬品部分またはリンカー−薬品部分などの他の部分に結合させて、免疫複合体を作製することができる。ある特定の実施形態において、次の残基、すなわち、軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ付番）のうちのいずれか１つまたは複数がシステインで置換され得る。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように作製され得る。
【０１８９】
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗体は、当技術分野において知られている、かつ容易に利用可能である追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変され得る。抗体の誘導体化に適切な部分には、水溶性重合体が含まれるがこれらに限定されない。水溶性重合体の非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコール共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（ホモ重合体かランダム共重合体のどちらか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモ重合体、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が含まれるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中で安定しているため、製造上の利点を有し得る。重合体は、任意の子量のものでも良く、分岐していても分岐していなくても良い。抗体に結合している重合体の数は変化しても良く、１超の重合体が結合している場合には、それらの重合体は同一の分子または異なる分子であり得る。一般的に、誘導体化に使用される重合体の数及び／または種類は、改善される抗体の特定の特性または機能、その抗体誘導体が規定の条件下で治療に使用されることになるかどうか等を含むがそれに限定されない考慮事項に基づいて決定され得る。
【０１９０】
別の実施形態において、抗体と放射線への曝露によって選択的に加熱され得る非タンパク質性部分との複合体が提供されて良い。一実施形態において、非タンパク質性部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００〜１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長のもので良く、その放射線には普通の細胞を傷つけることはないが、抗体−非タンパク質性部分の近くにある細胞を殺滅する温度までその非タンパク質性部分を加熱する波長が含まれるがこれらに限定されない。
【０１９１】
Ｂ．組換え方法及び組成物
抗体は、例えば米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組換え方法及び組成物を用いて作製され得る。一実施形態において、本明細書に記載される抗ＬｇＲ５抗体をコードする単離核酸が提供される。そのような核酸は、本抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／または本抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、本抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。追加の実施形態において、そのような核酸を含む１つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。追加の実施形態において、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。一つのそのような実施形態において、宿主細胞は、（１）本抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び本抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）本抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１ベクター及び本抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２ベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態において、宿主細胞は、真核細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０細胞、ＮＳ０細胞、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体の作製方法であって、上記抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を抗体の発現に適切な条件下で培養することと、任意選択で宿主細胞（または宿主細胞培地）から抗体を回収することと、を含む、方法が提供される。
【０１９２】
抗ＬｇＲ５抗体の組換え産生のため、抗体をコードする核酸、例えば上記のものを単離し、さらなるクローニング及び／または宿主細胞中での発現のために１つまたは複数のベクターに挿入させる。そのような核酸は、従来の技法を用いて（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離かつ配列決定され得る。
【０１９３】
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に適切な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、特にグリコシル化とＦｃエフェクター機能が必要ではないときには細菌内で抗体を作製して良い。細菌内での抗体断片及びポリペプチドの発現について、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい（大腸菌内での抗体断片の発現について説明しているＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．  Ｌｏ，ｅｄ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４頁も参照されたい）。発現後、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから本抗体を単離させて良く、本抗体をさらに精製することができる。
【０１９４】
原核生物に加えて、糸状菌または酵母のような真核微生物は、抗体をコードするベクターにとって適切なクローニング宿主または発現宿主であり、それらの真核微生物には真菌株及び酵母株が含まれ、それらのグリコシル化経路は「ヒト化」されており、それによって部分的または完全にヒト型のグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
【０１９５】
グリコシル化抗体の発現に適切な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞と併用して、特にヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞の形質移入に使用することができる多数のバキュロウイルス株が特定されている。
【０１９６】
植物細胞培養物も宿主として利用可能である。例えば、（遺伝子導入植物内で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）テクノロジーについて記載している）米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号を参照されたい。
【０１９７】
脊椎動物細胞も宿主として使用可能である。例えば、懸濁状態で増殖するように適応されている哺乳類細胞株が有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）、ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３〜２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（ＨｅｐＧ２）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えばＭａｔｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４〜６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６（１９８０））をはじめとするチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に適切なある特定の哺乳類宿主細胞株に関する総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ  ａｎｄ  Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８頁（２００３）を参照されたい。
【０１９８】
Ｃ．アッセイ
本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体は、当技術分野において知られている様々なアッセイによってそれらの物理的／化学的特性及び／または生物活性について特定され、スクリーニングされるか、または特性付けられ得る。
【０１９９】
一態様において、本発明の抗体は、例えばＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、またはウエスタンブロットなどの公知の方法によってその抗原結合活性について検査される。
【０２００】
別の態様において、競合アッセイは、ＬｇＲ５への結合について本明細書に記載される抗体のいずれかと競合する抗体を特定するために用いられ得る。ある特定の実施形態において、そのような競合抗体は、本明細書に記載される抗体が結合するのと同じエピトープ（例えば、直鎖状エピトープまたは立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法が、Ｍｏｒｒｉｓ  （１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供されている。
【０２０１】
例示的な競合アッセイでは、ＬｇＲ５に結合する第１標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか）及びＬｇＲ５への結合についてその第１抗体と競合する能力について検査されている第２非標識抗体を含む溶液の中で、固定化ＬｇＲ５がインキュベートされる。第２抗体はハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、第２非標識抗体を含まないが第１標識抗体を含む溶液の中で、固定化ＬｇＲ５がインキュベートされる。第１抗体がＬｇＲ５に結合するのを許容する条件下でインキュベートした後に、過剰な未結合抗体を除去して、固定化ＬｇＲ５と結合した標識の量を測定する。検査試料中の固定化ＬｇＲ５と結合した標識の量が対照試料と比較して実質的に減少している場合、そのことは、第２抗体がＬｇＲ５への結合について第１抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照されたい。
【０２０２】
Ｄ．免疫複合体
本発明は、化学療法剤または化学療法薬、増殖抑制剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌起源、真菌起源、植物起源、もしくは動物起源の酵素活性型毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体（すなわち、放射性複合体）などの１つまたは複数の細胞傷害性薬剤に結合した本明細書における抗ＬｇＲ５抗体を含む免疫複合体も提供する。
【０２０３】
免疫複合体は、薬品部分の腫瘍への標的化送達を可能にし、いくつかの実施形態においては、非複合化薬品の全身投与により正常細胞にとって許容できないレベルの毒性が生じ得る場合には、腫瘍中での細胞内蓄積を可能にする（Ｐｏｌａｋｉｓ  Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５：３８２−３８７）。
【０２０４】
抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、抗原発現性腫瘍細胞に対する強力な細胞傷害薬（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ９：９８２−１００４）を標的とし、それによって効力を最大限に高めてオフターゲット毒性を最小限に抑えることで、治療指数を向上させすることにより抗体及び細胞傷害薬の両方の特性を併せ持つ標的化化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．ａｎｄ  Ｓｅｎｔｅｒ  Ｐ．Ｄ．（２００８）Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４−１６９；Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．（２００８）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１：９８−１０７）。
【０２０５】
本発明のＡＤＣ化合物には、抗癌活性を有するものが含まれる。いくつかの実施形態において、ＡＤＣ化合物には、その薬品部分に結合した、すなわち共有結合した抗体が含まれる。いくつかの実施形態において、抗体は、リンカーを介してその薬品部分に共有結合している。本発明の抗体薬品複合体（ＡＤＣ）は、腫瘍組織に有効用量の薬品を選択的に送達し、それによって治療指数（「治療濃度域」）が向上させながらより高い選択性、すなわちより少ない有効用量が達成され得る。
【０２０６】
抗体薬品複合体（ＡＤＣ）の薬品部分（Ｄ）には、細胞傷害性効果または細胞増殖抑制効果を有する任意の化合物、部分、または基が含まれ得る。薬品部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合、またはインターカレーション、及びＲＮＡポリメラーゼの阻害、タンパク質合成の阻害、及び／またはトポイソメラーゼの阻害を含むがこれらに限定されない機構によって、それらの細胞傷害性効果及び細胞増殖抑制効果を与え得る。例示的な薬品部分には、メイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシン及びその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、ならびに細胞傷害活性を有するそれらの立体異性体、同配体、類似体、及び誘導体が含まれるがこれらに限定されない。
【０２０７】
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体のいずれも、生体試料中のＬｇＲ５の存在の検出に有用である。本明細書において使用される「検出すること」という用語は、定量的検出または定性的検出を包含する。「生体試料」は、例えば、細胞または組織（例えば、癌性の、または癌性の可能性がある結腸組織、大腸組織、小腸組織、子宮内膜組織、膵臓組織、または卵巣組織をはじめとする生検材料）を含む。
【０２０８】
一実施形態において、診断または検出の方法に使用される抗ＬｇＲ５抗体が提供される。追加の態様において、生体試料中のＬｇＲ５の検出方法が提供される。ある特定の実施形態において、本方法は、抗ＬｇＲ５抗体がＬｇＲ５に結合するのを許容する条件下で、生体試料と本明細書に記載される抗ＬｇＲ５抗体とを接触させることと、抗ＬｇＲ５抗体と生体試料中のＬｇＲ５との間で複合体が形成されるかどうかを検出することを含む。そのような方法は、インビトロ方法またはインビボ方法であって良い。一実施形態において、ＬｇＲ５が患者選択のためのバイオマーカーである場合、抗ＬｇＲ５抗体は、抗ＬｇＲ５抗体を用いる治療に適格である対象を選択するために使用される。追加の実施形態において、生体試料は細胞または組織（例えば、癌性の、または癌性の可能性がある結腸組織、大腸組織、小腸組織、子宮内膜組織、膵臓組織、または卵巣組織をはじめとする生検材料）である。
【０２０９】
追加の実施形態において、抗ＬｇＲ５抗体は、例えば癌の診断、癌の予後予測、もしくは癌の病期分類、適切な治療過程の決定、または治療に対する癌の反応のモニタリングの目的で、例えばインビボイメージング法によって対象におけるＬｇＲ５陽性癌を検出するためにインビボで使用される。インビボ検出のための当技術分野において知られている一方法は、例えばｖａｎ  Ｄｏｎｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  １２：１３７９−１３８９（２００７）及びＶｅｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載される免疫陽電子放射断層撮影法（免疫ＰＥＴ）である。そのような実施形態において、対象におけるＬｇＲ５陽性癌の検出のための方法であって、ＬｇＲ５陽性癌を有するか、または有することが疑われる対象に標識抗ＬｇＲ５抗体を投与することと、対象中の標識抗ＬｇＲ５抗体を検出することを含み、標識抗ＬｇＲ５抗体の検出によって対象内のＬｇＲ５陽性癌が識別される、方法が提供される。そのような実施形態のうちのある特定の実施形態において、標識抗ＬｇＲ５抗体は、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉなどの陽電子放出体に結合した抗ＬｇＲ５抗体を含む。特定の実施形態において、陽電子放出体は８９Ｚｒである。８９Ｚｒ標識抗体の非限定的な例示的作製方法及び使用方法は、例えばＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０１１／０５６９８３号に記載されている。いくつかの実施形態において、標識抗ＬｇＲ５抗体は、１つまたは複数のジルコニウム錯体に結合したシステイン改変抗体である。例えば、ＷＯ２０１１／０５６９８３号を参照されたい。
【０２１０】
追加の実施形態において、診断または検出の方法は、基材に固定化された第１抗ＬｇＲ５抗体とＬｇＲ５の存在について検査される生体試料とを接触させることと、その基材を第２抗ＬｇＲ５抗体に曝露することと、第２抗ＬｇＲ５が第１抗ＬｇＲ５抗体と生体試料中のＬｇＲ５との間の複合体に結合しているかどうかを検出することと、を含む。基材は、任意の支持媒体、例えばガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ、及び他の基材であり得る。ある特定の実施形態において、生体試料は、細胞または組織（例えば、癌性の、または癌性の可能性がある結腸組織、大腸組織、小腸組織、子宮内膜組織、膵臓組織、または卵巣組織をはじめとする生検材料）を含む。ある特定の実施形態において、第１または第２抗ＬｇＲ５抗体は、本明細書に記載される抗体のいずれかのものである。そのような実施形態において、第２抗ＬｇＲ５抗体は、本明細書に記載されるαＬｇＲ５．１−１２抗体、またはαＬｇＲ５．１−１２抗体に由来する抗体であり得る。そのような実施形態において、第２抗ＬｇＲ５抗体は、本明細書に記載されるαＬｇＲ５．２６−１抗体、またはαＬｇＲ５．２６−１抗体に由来する抗体であり得る。
【０２１１】
上記実施形態のいずれかに従って診断または検出され得る例示的障害には、ＬｇＲ５陽性大腸癌（腺癌を含む）、ＬｇＲ５陽性小腸癌（腺癌、肉腫（例えば、平滑筋肉腫）、カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、及びリンパ腫を含む）、ＬｇＲ５陽性卵巣癌（卵巣漿液性腺癌を含む）、ＬｇＲ５陽性膵臓癌（膵管腺癌を含む）、及びＬｇＲ５陽性子宮内膜癌などのＬｇＲ５陽性癌が含まれる。
【０２１２】
いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、本明細書の実施例に記載される条件下（例えば、実施例Ｆ、Ｈ、及びＩを参照されたい）で、非常に弱い染色または無染色に対応するスコア「０」を超えるＬｇＲ５免疫組織化学（ＩＨＣ）スコアを受ける癌である。別の実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、本明細書の実施例に記載される条件下（例えば、実施例Ｆ、Ｈ、及びＩを参照されたい）で規定される１＋、２＋、または３＋のレベルのＬｇＲ５を発現する。いくつかの実施形態において、１種類または複数種の細胞株が、染色レベルの対照として使用され得る。例えば、いくつかの実施形態において、実施例Ｉの中の表４に示されている細胞株は、染色レベルの対照として使用して良い。例えば、いくつかの実施形態において、細胞株ＳＷ４８０、ＲＫＯ、ＣＯＬＯ７４１、ＨＣＴ−１５、ＣＸ−１、ＨＴ−２９、ＳＷ１１１６、ＨＣＡ−７、及び／またはＣＯＬＯ−２０５は０染色の対照として使用して良く、細胞株ＳＷ９４８、ＣＡＣＯ−２、及び／またはＣ２ＢＢｅｌは１＋染色の対照として使用して良く、かつ／または細胞株Ｔ８４、ＳＷ１４６３、ＳＫ−ＣＯ−１、及び／またはＬＯＶＯは２＋染色の対照として使用して良い。いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、本明細書の実施例Ｈに記載される条件下で規定される５０以上のＨスコア（５０％＋基準を用いる１＋、２＋、または３＋の全体的スコアに対応する）を受ける癌である。いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、本明細書の実施例Ｈに記載される条件下で規定される１０以上のＨスコア（１０％＋基準を用いる１＋、２＋、または３＋の全体的スコアに対応する）を受ける癌である。
【０２１３】
いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、ＬｇＲ５  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイによると、ＬｇＲ５を発現している癌である。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは定量的ＲＴ−ＰＣＲである。
【０２１４】
ある特定の実施形態において、標識抗ＬｇＲ５抗体が提供される。標識には、直接的に検出される標識または部分（蛍光標識、クロモフォア標識、電子密度標識、化学発光標識、及び放射活性標識など）、及び例えば酵素反応または分子間相互作用を介して間接的に検出される酵素またはリガンドなどの部分が含まれるがこれらに限定されない。例示的な標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、レアアースキレート剤またはフルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなどのフルオロフォア、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅ）、例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌性ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２、３−ジヒドロフタラジンジオン類、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカリドオキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、ＨＲＰなどの色素前駆体を酸化するために過酸化水素を使用する酵素と共役するウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどのヘテロ環オキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、またはミクロペルオキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定性フリーラジカルなどが含まれるがこれらに限定されない。別の実施形態において、標識は陽電子放出体である。陽電子放出体には、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉが含まれるがこれらに限定されない。特定の実施形態において、陽電子放出体は８９Ｚｒである。
【０２１５】
Ｆ．医薬製剤
本明細書に記載される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体の医薬製剤は、所望の程度の純度を有するそのような抗体または免疫複合体と１種類または複数種の任意選択の薬学的に許容可能な担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））とを混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容可能な担体は、採用される投薬量及び濃度では受容者にとって概ね無毒であり、それらには、リン酸、クエン酸及び他の有機酸などの緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンをはじめとする抗酸化剤、保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノールアルコール、ブチルアルコール、またはベンジルアルコオール、メチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、及びｍ−クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性重合体、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸、グルコース、マンノース、もしくはデキストリンをはじめとする単糖類、二糖類、及び他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、ショ糖、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖類、ナトリウムなどの塩形成性対イオン、金属配位体（例えばＺｎタンパク質配位体）、ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれるがこれらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容可能な担体には、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）のような間質薬物分散剤、例えばｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，  Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０をはじめとするある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰはコンドロイチナーゼなどの１種または複数種の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせられる。
【０２１６】
例示的な凍結乾燥抗体製剤または凍結乾燥免疫複合体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤または水性免疫複合体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者は酢酸ヒスチジン緩衝液を含む。
【０２１７】
本明細書における製剤には、治療されている特定の適応症に必要なものとして１種類を超える有効成分、好ましくは相互に悪影響を与えない相補的活性を有する有効成分が含有されても良い。例えば、いくつかの例では、アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）を、例えばＬｇＲ５陽性結腸癌またはＬｇＲ５陽性大腸癌などのＬｇＲ５陽性癌の治療のためにさらに提供することが望ましい場合がある。
【０２１８】
有効成分は、例えばコアセルベーション技術または界面重合によって調製されたミクロカプセル、例えばヒドロキシメチルセルロースミクロカプセルまたはゼラチンミクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）ミクロカプセルによって、コロイド状薬品送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフィア、ミクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に封入され得る。そのような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０２１９】
持続放出性調製物が調製され得る。持続放出性調製物の適切な例には、抗体または免疫複合体を含有する固形疎水性重合体の半透過性マトリックスが挙げられ、それらのマトリックスは、成形物品、例えばフィルムまたはミクロカプセルの形態である。
【０２２０】
インビボ投与に使用される製剤は一般的に無菌性である。無菌性は、例えば、無菌濾過膜を通じた濾過によって容易に達成され得る。
【０２２１】
Ｇ．治療の方法及び組成物
本明細書において提供される前記抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体のいずれも、方法、例えば治療方法に使用され得る。
【０２２２】
一態様において、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体は、ＬｇＲ５陽性細胞の増殖の抑制方法であって、抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体が細胞の表面上のＬｇＲ５に結合するのを許容する条件下で、細胞を抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体に曝露し、それによってその細胞の増殖を抑制することを含む、方法に使用される。ある特定の実施形態において、本方法は、インビトロ方法またはインビボ方法である。追加の実施形態において、細胞は結腸細胞、大腸細胞、小腸細胞、卵巣細胞、膵臓細胞、または子宮内膜細胞である。
【０２２３】
いくつかの実施形態において、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体は、癌の細胞の少なくとも一部においてＫｒａｓ遺伝子に突然変異を含み、かつ／または大腸腺腫性ポリポーシス症（ＡＰＣ）遺伝子に突然変異を含む癌の治療方法に使用される。様々な実施形態において、癌は、結腸癌、大腸癌、小腸癌、卵巣癌、膵臓癌、及び子宮内膜癌から選択される。いくつかの実施形態において、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体は、癌の細胞の少なくとも一部においてＫｒａｓ遺伝子に突然変異を含み、かつ／またはＡＰＣ遺伝子に突然変異を含む結腸癌または大腸癌の治療方法に使用される。癌（結腸癌及び大腸癌を含む）に見られる非限定的な例示的Ｋｒａｓ突然変異には、Ｋｒａｓのコドン１２（例えば、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ｓ、及びＧ１２Ａ）、コドン１３（例えば、Ｇ１３Ｄ及びＧ１３Ｃ）、コドン６１（例えば、Ｇ６１Ｈ、Ｇ６１Ｌ、Ｇ６１Ｅ、及びＧ６１Ｋ）、及びコドン１４６における突然変異が含まれる。例えば、Ｙｏｋｏｔａ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１２：１６３−１７１（２０１２）、Ｗｉｃｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｗｉｓｓ  Ｍｅｄ．Ｗｋｌｙ，１４０：ｗ１３１１２（２０１０）を参照されたい。癌に見られる非限定的な例示的ＡＰＣ突然変異には、終止コドンなどの突然変異クラスター領域（ＭＣＲ）中の突然変異、及び短縮型ＡＰＣ遺伝子産物を生じることになるフレームシフト突然変異が含まれる。例えば、Ｃｈａｎｄｒａ  ｅｔ  ａｌ．，ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，７：ｅ３４４７９（２０１２）、及びＫｏｈｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，１７：１９７８−１９８７（２００８）を参照されたい。
【０２２４】
いくつかの実施形態において、癌の治療方法は、癌細胞の少なくとも一部にＫｒａｓ突然変異及び／またはＡＰＣ突然変異を含む癌を有する対象に抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体を投与することを含む。いくつかの実施形態において、癌は、結腸癌、大腸癌、小腸癌、卵巣癌、膵臓癌、及び子宮内膜癌から選択される。いくつかの実施形態において、癌は、結腸癌及び／または大腸癌である。いくつかの実施形態において、対象は、癌細胞の少なくとも一部にＫｒａｓ突然変異及び／またはＡＰＣ突然変異を含む癌を有すると以前に判定されている。いくつかの実施形態において、癌はＬｇＲ５陽性である。
【０２２５】
試料中の様々なバイオマーカーの存在は多数の方法によって分析することができ、それらの方法の多くは当技術分野において知られており、かつ当業者に理解されており、それらの方法には、免疫組織化学（「ＩＨＣ」）、ウエスタンブロット分析、免疫沈降、分子結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＦＡ、蛍光活性化細胞選別（「ＦＡＣＳ」）、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ、プロテオミクス、（例えば血清ＥＬＩＳＡ等の）定量的血液ベースアッセイ、生化学的酵素活性アッセイ、インサイチュハイブリダイゼーション、サザン分析、ノーザン分析、全ゲノムシーケンシング、定量的リアルタイムＰＣＲ（「ｑＲＴ−ＰＣＲ」）及び、例えば、分岐ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡなどの他の増幅型検出方法を含むポリメラーゼ連鎖反応（「ＰＣＲ」）、ＲＮＡ−Ｓｅｑ、ＦＩＳＨ、マイクロアレイ分析、遺伝子発現プロファイリング、及び／または遺伝子発現シリアル分析（「ＳＡＧＥ」）、ならびにタンパク質アレイ分析、遺伝子アレイ分析、及び／または組織アレイ分析によって実施され得る多種多様なアッセイのうちのいずれか１つが含まれるがこれらに限定されない。遺伝子及び遺伝子産物の状況を評価するための典型的なプロトコルが、例えばＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９５，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｔｓ  ２（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ），４  （Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｌｏｔｔｉｎｇ），１５（Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ）  ａｎｄ  １８（ＰＣＲ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）に見出される。Ｒｕｌｅｓ  Ｂａｓｅｄ  ＭｅｄｉｃｉｎｅまたはＭｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（「ＭＳＤ」）等から入手可能な多重免疫アッセイを使用しても良い。
【０２２６】
インビトロ細胞増殖阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）から市販されているＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙを使用してアッセイされ得る。そのアッセイは、代謝活性細胞の指標である存在するＡＴＰの定量に基づいて培養物中の生存細胞の数を測定する。Ｃｒｏｕｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７号を参照されたい。そのアッセイは、９６ウェル形式または３８４ウェル形式で実施されて良く、それによってそのアッセイが自動化ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適用可能になる。Ｃｒｅｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ法は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを含む。これにより、細胞溶解及びルシフェラーゼ反応により生じる発光シグナルの生成が起こる。発光シグナルは、存在するＡＴＰの量に比例し、そのＡＴＰ量は培養物中の生存細胞の数に正比例する。ルミノメーターまたはＣＣＤカメラ撮像装置によってデータを記録することができる。発光出力は相対発光単位（ＲＬＵ）として表される。
【０２２７】
別の態様において、医薬として使用される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体が提供される。追加の態様において、治療方法に使用される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌の治療に使用される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体が提供される。ある特定の実施形態において、本発明は、ＬｇＲ５陽性癌を有する個体の治療方法であって、個体に有効量の抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体を投与することを含む、方法に使用される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体を提供する。一つのそのような実施形態において、本方法は、例えば以下に記載されるような少なくとも１種類の追加治療薬の有効量を個体に投与することをさらに含む。
【０２２８】
追加の態様において、本発明は、医薬の製造または調製における抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体の使用を提供する。一実施形態において、医薬は、ＬｇＲ５陽性癌の治療のためのものである。追加の実施形態において、医薬は、ＬｇＲ５陽性癌の治療方法であって、ＬｇＲ５陽性癌を有する個体に有効量の医薬を投与することを含む、方法に使用するためのものである。一つのそのような実施形態において、本方法は、例えば以下に記載されるような少なくとも１種類の追加治療薬の有効量を個体に投与することをさらに含む。
【０２２９】
追加の態様において、本発明は、ＬｇＲ５陽性癌を治療するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、そのようなＬｇＲ５陽性癌を有する個体に有効量の抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体を投与することを含む。一つのそのような実施形態において、本方法は、以下に記載されるような少なくとも１種類の追加治療薬の有効量を個体に投与することをさらに含む。
【０２３０】
上記実施形態のいずれかによるＬｇＲ５陽性癌は、例えば、ＬｇＲ５陽性結腸癌または大腸癌（腺癌を含む）、ＬｇＲ５陽性小腸癌（腺癌、肉腫（例えば、平滑筋肉腫）、カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍、及びリンパ腫を含む）、ＬｇＲ５陽性卵巣癌（卵巣漿液性腺癌を含む）、ＬｇＲ５陽性膵臓癌（膵管腺癌を含む）、及びＬｇＲ５陽性子宮内膜癌であり得る。
【０２３１】
いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、本明細書の実施例に記載される条件下（例えば、実施例Ｆ、Ｈ、及びＩを参照されたい）で非常に弱い染色か、または無染色に対応するスコア「０」を超えるＬｇＲ５免疫組織化学（ＩＨＣ）スコアを受ける癌である。別の実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、本明細書の実施例に記載される条件下（例えば、実施例Ｆ、Ｈ、及びＩを参照されたい）で規定される１＋、２＋、または３＋のレベルのＬｇＲ５を発現する。いくつかの実施形態において、１種類または複数種の細胞株は、染色レベルの対照として使用され得る。例えば、いくつかの実施形態において、実施例Ｉの中の表４に示されている細胞株は染色レベルの対照として使用して良い。例えば、いくつかの実施形態において、細胞株ＳＷ４８０、ＲＫＯ、ＣＯＬＯ７４１、ＨＣＴ−１５、ＣＸ−１、ＨＴ−２９、ＳＷ１１１６、ＨＣＡ−７、及び／またはＣＯＬＯ−２０５は０染色の対照として使用して良く、細胞株ＳＷ９４８、ＣＡＣＯ−２、及び／またはＣ２ＢＢｅｌは１＋染色の対照として使用して良く、かつ／または細胞株Ｔ８４、ＳＷ１４６３、ＳＫ−ＣＯ−１、及び／またはＬＯＶＯは２＋染色の対照として使用して良い。いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、本明細書の実施例Ｈに記載される条件下で規定される５０以上のＨスコア（５０％＋基準を用いる１＋、２＋、または３＋の全体的スコアに対応する）を受ける癌である。いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、本明細書の実施例Ｈに記載される条件下で規定される１０以上のＨスコア（１０％＋基準を用いる１＋、２＋、または３＋の全体的スコアに対応する）を受ける癌である。
【０２３２】
いくつかの実施形態において、ＬｇＲ５陽性癌は、ＬｇＲ５  ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイによると、ＬｇＲ５を発現している癌である。いくつかの実施形態において、ＲＴ−ＰＣＲは定量的ＲＴ−ＰＣＲである。
【０２３３】
上記実施形態のいずれかによる「個体」はヒトであり得る。
【０２３４】
追加の態様において、本発明は、例えば上記治療方法のいずれかに使用される本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体のいずれかを含む医薬製剤を提供する。一実施形態において、医薬製剤は、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体のいずれか、及び薬学的に許容可能な担体を含む。別の実施形態において、医薬製剤は、本明細書において提供される抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体のいずれか、及び例えば以下に記載される少なくとも１種類の追加治療薬を含む。
【０２３５】
本発明の抗体または免疫複合体は、治療法において単独で、または他の薬剤と組み合わせるかのどちらかで使用され得る。例えば、本発明の抗体または免疫複合体は、少なくとも１種類の追加治療薬と共投与され得る。ある特定の実施形態において、追加治療薬は、例えば、ＬｇＲ５陽性結腸癌またはＬｇＲ５陽性大腸癌などのＬｇＲ５陽性癌の治療用のアバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）である。
【０２３６】
上述のそのような併用療法は、併用投与（同一の製剤または別々の製剤に二種類以上の治療薬が含まれる場合）及び分離投与を包含し、この場合、本発明の抗体または免疫複合体の投与は、追加治療薬及び／またはアジュバントの投与の前、投与と同時、及び／または投与の後に起こり得る。本発明の抗体または免疫複合体は放射線療法と併用され得る。
【０２３７】
抗体または免疫複合体（及び任意の追加治療薬）は、非経口投与、肺内投与、及び鼻腔内投与、ならびに局所的治療に望まれる場合は傷害内投与を含む任意の適切な手段によって投与され得る。非経口注入には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または皮下投与が含まれる。投薬は、部分的には投与が短時間のものであるか長時間にわたるものであるかに応じて、任意の適切な経路によるもの、例えば静脈内注射または皮下注射などの注射よるものであって良い。単回投与または様々な時点での複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない様々な投与スケジュールが本明細書において企図される。
【０２３８】
抗体または免疫複合体は、良好な医療行為と一致するように製剤され、投薬され、投与されることになる。この状況で考慮する因子には、治療されている特定の障害、治療されている特定の哺乳類動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジューリング、及び医師に知られている他の因子が含まれる。抗体または免疫複合体は、問題の障害を予防または治療するために現在使用されている１種類または複数種の薬剤と共に製剤される必要はないが、任意選択でそのように製剤されても良い。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または免疫複合体の量、障害または治療の種類、及び以上で考察した他の因子によって決定する。これらは一般的に、本明細書に記載されたものと同じ投薬量及び投与経路で使用されるか、または本明細書に記載される投薬量の約１％〜９９％の投薬量で使用されるか、または適切であると経験的／臨床的に判断される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
【０２３９】
疾患の予防または治療では、（単独で、または１種類以上の他の追加治療薬と組み合わせて使用されるときの）抗体または免疫複合体の適切な投薬量は、治療される疾患の種類、抗体または免疫複合体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体または免疫複合体が予防目的で投与されるのかまたは治療目的で投与されるのかということ、これまでの治療法、患者の病歴及び抗体または免疫複合体に対する応答、ならびに主治医の判断によって決定することになる。抗体または免疫複合体は、患者に一度に、または一連の治療を通して適切に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体または免疫複合体は、例えば１回または複数回分割投与されるものであっても、または連続注入されるものであっても、患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。１つの典型的な一日投薬量は、上述の因子に応じて約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上範囲であり得る。病状に応じて数日以上にわたって投与を繰り返す場合、一般的には、疾患症状が所望の通りに抑制されるまで治療が持続されることになる。抗体または免疫複合体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲となる。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）の用量が、１回または複数回にわたって患者に投与され得る。そのような用量は（例えば、患者が約２回〜約２０回、例えば、約６回の用量のその抗体を受容するように）断続的に、例えば毎週または３週間毎に投与され得る。初回の高めの負荷用量、及びそれに続く１回または複数回の低めの用量が投与され得る。しかしながら、他の投薬計画が有用な場合がある。この治療法の進捗は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。
【０２４０】
上記製剤または治療方法のいずれも免疫複合体及び抗ＬｇＲ５抗体の両方を使用して実施され得ることが理解される。
【０２４１】
Ｈ．製品
別の態様において、上記の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な物質を含有する製品が提供される。その製品は、容器、その容器上のまたはその容器と関連付けられるラベルまたは添付文書を備える。適切な容器には、例えば、瓶、バイアル、注射器、静脈内投与用溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、組成物を、単独で、または障害の治療、予防、及び／または診断に有効である別の組成物と組み合わせて保持し、かつ無菌アクセスポートを有しても良い（例えば、容器は皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内投与用溶液バッグまたはバイアルであり得る）。組成物中の少なくも１種類の活性薬剤は、抗ＬｇＲ５抗体または免疫複合体である。ラベルまたは添付文書は、選択された病状の治療にその組成物が使用されることを示す。また、製品は、（ａ）抗体または免疫複合体を含む組成物を中に含む第１容器、及び（ｂ）さらに細胞傷害性薬剤、さもなければ治療薬を含む組成物を中に含む第２容器を備え得る。この実施形態の製品は、特定の病状を治療するために組成物が使用可能であることを示している添付文書をさらに備えても良い。代替として、または追加として、製品は、静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液またはブドウ糖溶液などの薬学的に許容可能な緩衝液を含む第２（または第３）容器をさらに備えて良い。その製品には、商業的な立場及び使用者の立場から望ましい他の材料をさらに含んで良く、それらには、他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、及び注射器が含まれる。
【実施例】
【０２４２】
以下は本発明の方法及び組成物の実施例である。上記概要を考慮すると、様々な他の実施形態が実施され得ることを理解されたい。
【０２４３】
Ａ．ヒトＬｇＲ５遺伝子発現
遺伝子発現情報を含む独占的データベース（ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標），Ｇｅｎｅ  Ｌｏｇｉｃ  Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を使用してヒトＬｇＲ５遺伝子発現を分析した。マイクロアレイプロファイルビューアーを使用してＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）データベースのグラフ分析を実施した。図１は、様々な組織におけるヒトＬｇＲ５遺伝子発現のグラフ表示である。ｙ軸上のスケールは、ハイブリダイゼーションシグナル強度に基づいた遺伝子発現レベルを表す。列挙されている各組織の名前から伸びている列の左と右の両方にドットが現れている。その列の左に現れているドットは、正常組織における遺伝子発現を表し、その列の右に現れているドットは腫瘍組織及び疾患組織における遺伝子発現を表す。図１は、ある特定の腫瘍組織または疾患組織のＬｇＲ５遺伝子発現が、それらの正常な対応物と比較して上昇しているのを示している。特に、大腸腫瘍、子宮内膜腫瘍、及び卵巣腫瘍ではＬｇＲ５は実質的に過剰発現している。図１の挿入図は、ＬｇＲ５は少なくとも次の結腸腫瘍、すなわち腺癌、良性腫瘍、及び転移性結腸腫瘍において過剰発現し、かつ５０％未満の結腸腫瘍量を有する組織（図１の挿入図内の「低腫瘍」）においても過剰発現するが、正常結腸、クローン病、または潰瘍性大腸炎では過剰発現しないことを示している。ヒトＬｇＲ５発現は正常組織ではかなり低く、正常な脳組織、筋肉組織、卵巣組織、及び胎盤組織において発現が低レベルである。
【０２４４】
Ｂ．結腸腫瘍におけるヒトＬｇＲ５の出現率
大腸癌におけるＬｇＲ５の発現を評価するために、複数の供給源（Ａｓｔｅｒａｎｄ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ；Ｂｉｏ−Ｏｐｔｉｏｎｓ，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ；Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｈｉｇａｎ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ；Ｃｙｔｏｍｙｘ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ；Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ，Ｎａｓｈｖｉｌｌｅ，ＴＮ；Ｉｎｄｉｖｕｍｅｄ，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ；ＰｒｏｔｅｏＧｅｎｅｘ，Ｃｕｌｖｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）から５７の原発性大腸腺癌を入手した。４４パーセントの試料は男性からのものであり、患者の平均年齢は６６歳（３１歳〜９３歳の範囲）であった。Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．２００１  Ｓｅｐ；１９５（１）：７２−９に記載されるように二重コアを使用して組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）を組み立てて、それらの組織マイクロアレイは適合症例に由来する５つの正常大腸粘膜試料を含ませた。
【０２４５】
表２に示されているオリゴヌクレオチドプローブを使用するインサイチュハイブリダイゼーションによってＬｇＲ５発現を決定した。例えば、Ｊｕｂｂ  ＡＭ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２００６；３２６：２５５−６４を参照されたい。β−アクチンのＩＳＨを用いて分析前の大腸癌組織におけるｍＲＮＡの完全性を確認した。
2017526618.tif 000004
【０２４６】
熟練した病理学者が、染色強度（銀粒子）及び染色幅を考慮して下のスキームに従ってＬｇＲ５ハイブリダイゼーション強度をスコア化した。
０（陰性）：腫瘍細胞の９０％超において非常に弱いハイブリダイゼーションであるか、またはハイブリダイゼーションがない
１＋（軽度）：主要なハイブリダイゼーションパターンが弱い
２＋（中程度）：主要なハイブリダイゼーションパターンが腫瘍性細胞の過半数（５０％超）においてやや強い
３＋（重度）：主要なハイブリダイゼーションパターンが腫瘍性細胞の過半数（５０％超）において強い
ハイブリダイゼーションの特異性の対照にセンスプローブを使用した。
【０２４７】
図２は、１＋レベル、２＋レベル、及び３＋レベルの染色を有する例示的な結腸腫瘍切片を示している。上のパネルは暗視野像を示し、下のパネルは明視野像を示している。暗視野像における銀粒子の沈着はプローブのハイブリダイゼーション及びＬｇＲ５  ｍＲＮＡの発現を意味する。分析された結腸腫瘍切片の約７７％（４１／５３）がＬｇＲ５陽性であり、１＋レベル、２＋レベル、または３＋レベルの染色を示し、３４％（１８／５３）が２＋または３＋の染色を示した。分析された５７試料のうちの４試料ではＬｇＲ５発現についての情報がなかった。
【０２４８】
結腸腫瘍におけるＬｇｒ５発現の有意性を評価するため、大腸腺癌の外科的切除を受けたことがある集団ベースの一連の患者の記録を１９８８年から２００３年までのＳｔ  Ｊａｍｅｓ’Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ（Ｌｅｅｄｓ，ＵＫ）の病理学記録保管所から遡及的に集めた。Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ  Ｌ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．２００１  Ｓｅｐ；１９５（１）：７２−９に記載されるように患者当たり１つの正常粘膜のコア及び３つの腺癌のコアを使用して組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）を構成した。上記のようにＩＳＨを実施してスコア化を行った。同じ腫瘍に由来する３つのコアでの発現の不均質性も決定された。それは、３つのコアのうちの１つにおいて特定のレベルの不一致を示した腫瘍の割合として表される。例えば、３つのコアが＋１、＋３、及び＋３のスコアを有した場合、その腫瘍に由来するそれら３つのコアのうちの１つが２つと異なる。
【０２４９】
図３Ａは、インサイチュハイブリダイゼーションによって測定された結腸腫瘍組織マイクロアレイにおける０レベル、１＋レベル、２＋レベル、及び３＋レベルのＬｇＲ５染色の出現率を示している。結腸腫瘍組織の７５％が、１＋レベル、２＋レベル、または３＋レベルの染色を示し、３７％が２＋または３＋の染色を示した。図３ＢはＬｇＲ５発現の不均質性を示している。腫瘍の６７％が３つのコアで不均質性を示さなかった。３２％がそれら３つのコアのうちの１つの不一致を示し、１％だけが１を超える不一致を示した。
【０２５０】
Ｃ．免疫組織化学に適切ではない市販の抗体
高品質の免疫組織化学（ＩＨＣ）反応性抗体がないことがＬｇｒ５の発現の決定における長年の問題である。これまでは、限られた方法でＬｇｒ５のＲＮＡ発現が調査されてきた。しかしながら、胃、結腸、及び毛包を除くヒトにおける正常組織発現パターンについてのデータがほとんどない。
【０２５１】
ＩＨＣ抗体として市販されている６種類の異なる商用抗体を免疫組織化学用の抗体としての安定性について検査した。２９３細胞の表面上で発現するＬｇＲ５への結合について、ウサギポリクローナル抗体ＭＣ−１２３５（ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）を検査したところ、ＬｇＲ５検出が観察されなかった。ウサギポリクローナル抗体ＭＣ−１２３６（ＭＢＬ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）は、ＬｇＲ５が２９３細胞上で過剰発現するときに、それを染色することができたが、ＬｏＶｏ結腸癌細胞上ではベクターのみで形質移入された２９３細胞と比較して特異的ＬｇＲ５染色は観察されなかった。さらに、ＭＣ−１２３６で染色された脳組織は血管内で高レベルの染色を示し、血清のバックグラウンド染色の可能性が示唆された。
【０２５２】
ウサギモノクローナル抗体２４９５−１（Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）は、２９３細胞の表面上で発現するＬｇＲ５を特異的に染色することが分かった。ＬｏＶｏ結腸癌細胞及びＤ５１２４結腸癌細胞は弱い細胞質染色を示し、いくつかのＳＷ１１６結腸癌細胞は非常に弱い染色を示した。ヒトの結腸組織及び小腸組織は上皮区画において弱い染色を示し、腸陰窩を通して広範囲に拡散した細胞質染色を特徴とした。しかしながら、その陰窩の基底部分では特異的な染色は認められず、かつ検査された細胞株または組織のいずれにおいても膜特異的な染色は観察されなかった。
【０２５３】
さらに３種類の商用抗体、すなわちウサギポリクローナル抗体ＨＰＡ０１２５３０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、ウサギモノクローナル抗体ＬＳ−Ｃ１０５４５５（ＬｉｆｅＳｐａｎ  ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）、及びマウスモノクローナル抗体ＴＡ５０３３１６（ＯｒｉＧｅｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を特異的ＬｇＲ５染色について検査した。それらの抗体の中で正常なヒト小腸組織試料及び／またはヒト結腸組織試料の特異的膜染色を示す抗体もなければ、それらの組織内の陰窩底部で検出されるＬｇＲ５もなかった。
【０２５４】
Ｄ．ウサギモノクローナル抗体の生成
マウスにおけるＩＨＣ反応性抗体を開発する試みが何度か失敗した後、ウサギにおいてＩＨＣ反応性抗体を生成した。ＣＨＯ細胞中で産生されるＬｇＲ５細胞外ドメイン（ＥＣＤ）ｈｕＦｃ（配列番号９６）融合タンパク質でウサギを免疫化した。標準的プロトコルを用い、試験血液を使用してＬｇＲ５に対する血清抗体価を評価した。２匹のウサギが良好な免疫応答を有することが分かり、それらのウサギを脾臓摘出術及びモノクローナル融合の候補として選んだ。
【０２５５】
脾臓摘出術を実施し、脾臓細胞を単離し、２００×１０６個のリンパ球細胞を１００×１０６個の融合パートナー細胞と融合させて、９６ウェルプレート（Ｅｐｉｔｏｍｉｃｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）上に播種させた。標準的条件下でそれらのプレートを培養した。
【０２５６】
標準的ＥＬＩＳＡプロトコルを用いて、プレートをＬｇＲ５細胞外ドメイン（ＥＣＤ）ｈｕＦｃ融合体で被膜させて、プレートをスクリーニングした。３つのクローンを選択し、２４ウェルプレート中に拡張させた。それら拡張されたクローンのうちの３６クローンをＥＬＩＳＡ及びヒトまたはマウスのＬｇＲ５を発現する２９３細胞を使用する免疫組織化学（ＩＨＣ）によって検査した。
【０２５７】
ヒト腸陰窩底部円柱細胞上のＬｇＲ５を認識する抗体がクローンによって産生されたかを判定することを含む追加の検査の後、抗体１−１２及び２６−１をクローニング用に選択した。簡単に説明すると、製造業者の指示に従ってＴｕｂｏＣａｐｔｕｒｅキット（Ｑｉａｇｅｎ：カタログ番号７２２３２）を使用してハイブリドーマ細胞由来のｍＲＮＡを単離し、次にオリゴｄＴプライマーを使用してｃＤＮＡ内に逆転写させた。重鎖（ＶＨ）の可変領域をＰＣＲ増幅させた。軽鎖（ＬＣ）全体をＰＣＲさせた。制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ及びＫｐｎｌを使用してＰＣＲ増幅されたＶＨ領域を消化した。制限酵素ＨｉｎｄＩＩＩ及びＮｏｔＩを使用してＰＣＲ増幅されたＬＣを消化した。Ｑｉａｇｅｎ  ＱＩＡｑｕｉｃｋ  ＰＣＲ精製キット（カタログ番号２８０１４）を使用して消化産物を精製した。精製後にＶＨ及びＬＣを重鎖または軽鎖発現ベクターにライゲーションさせ、ＤＨ５α細胞（ＭＣ  Ｌａｂ、カタログ番号ＤＡ−１００）に形質転換させた。形質転換されたコロニーを選択し、対応する制限酵素を使用して予期されるサイズによって挿入物を確認した。予期されるサイズの挿入物を含むプラスミドを、ＴＴ５プライマーを使用して配列決定した。重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の配列が、抗体１−１２については図４ならびに配列番号６及び５にそれぞれ示されており、抗体２６−１については図４ならびに配列番号８及び７にそれぞれ示されている。
【０２５８】
軽鎖重鎖発現ベクター及び重鎖発現ベクターをＣＨＯ細胞に共形質移入して、プロテインＡを使用して細胞培養上清から精製した。
【０２５９】
Ｅ．抗体エピトープの決定
ＦＡＣＳ競合アッセイを用いて抗体１−１２及び２６−１によって認識されるエピトープをマッピングした。簡単に説明すると、２９３細胞内においてヒトＬｇＲ５を発現させ、アミノ酸２２〜１２２を含むＬｇＲ５上のエピトープに結合することが以前から示されている抗体ｈｕＹＷ３５３（配列番号９８及び８８にそれぞれ示されている重鎖配列及び軽鎖配列）、及びアミノ酸２２〜３２２を含むＬｇＲ５上のエピトープに結合することが以前から示されている抗体８Ｅ１１（配列番号２９及び２８にそれぞれ示されている重鎖可変領域及び軽鎖可変領域）を使用して競合アッセイを実施した。
【０２６０】
抗体２６−１はＬｇＲ５結合についてｈｕＹＷ３５３及び８Ｅ１１と競合することが分かり、一方で抗体１−１２はＬｇＲ５結合についてｈｕＹＷ３５３または８Ｅ１１のどちらとも競合しないことが分かった（データを示さず）。したがって、抗体２６−１はヒトＬｇＲ５のアミノ酸２２〜３２２の領域内のエピトープに結合し、一方で抗体１−１２はその領域外のエピトープに結合することは明らかである。
【０２６１】
Ｆ．正常組織でのＬｇＲ５の検出
抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用して正常ヒト組織上でのＬｇＲ５の発現を検出した。Ｄａｋｏ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ（Ｄａｋｏ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）上でＬｇｒ５の免疫組織化学（ＩＨＣ）を実施した。簡単に説明すると、ホルマリン固定パラフィン包埋した全組織及び組織マイクロアレイ切片を脱パラフィンし、Ｔａｒｇｅｔ  Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ  ｐＨ６（Ｄａｋｏ）を使用してＰＴ  Ｍｏｄｕｌｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｋａｌａｍａｚｏｏ，ＭＩ）中で２０分間にわたって９９℃で抗原アンマスキングを実施した。内在性ペルオキシダーゼを４分間にわたる３％Ｈ２Ｏ２のＰＢＳの処理によって阻害し、アビジン／ビオチンブロッキングキット（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用して内在性ビオチンをブロックした。１０％ロバ血清の３％ＢＳＡ／ＰＢＳを使用して内在性ＩｇＧをブロックし、Ｌｇｒ５に対する一次抗体（ＬＧＲ５．１−１２）を４μｇ／ｍｌで６０分間にわたって室温でインキュベートした。ビオチン化ロバ抗ウサギＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を３０分間にわたって室温でインキュベートし、続いてＶｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  Ｅｌｉｔｅ−ＨＲＰ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）で３０分間にわたって室温で処理した。Ｍｅｔａｌ−Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ＤＡＢ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を室温で５分間にわたって用いて抗体結合を検出し、Ｍａｙｅｒ’ｓ  Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ（Ｒｏｗｌｅｙ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）により切片を対比染色した。
【０２６２】
抗体ＬＧＲ５．１−１２は予期されるパターンで正常腸陰窩を染色した。図５Ａを参照されたい。中程度の染色も毛包において観察され（図５Ｂ）、弱い染色が卵管、子宮内膜、副腎、及び脊髄において観察された（図５Ｃ）。
【０２６３】
Ｇ．異種移植腫瘍でのＬｇＲ５の検出
ＬｏＶｏＸ１．１異種移植モデルマウス及びＤ５１２４異種移植モデルマウスから単離された腫瘍をフローサイトメトリーにより分析して抗体ＹＷ３５３を使用してＬｇＲ５の表面発現を判定した。簡単に説明すると、Ｌｏｖｏ１．１腫瘍またはＤ５１２４腫瘍を採取し、コラゲナーゼ酵素混合物を含む、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）でそれらの腫瘍を処理した。腫瘍を３７℃で１５分間にわたってインキュベートし、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ中で細胞を洗浄した。細胞を遠沈させて、塩化アンモニウム−カリウム溶解緩衝液中に再懸濁させ、赤血球を溶解させた。１％ＢＳＡを含むＰＢＳ及び１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＲＲＭＩ１６４０培地で細胞を洗浄した。細胞を蛍光活性化細胞選別緩衝液（１％ＢＳＡを含むＰＢＳ）に再懸濁させて、抗ＬｇＲ５抗体と共に４５分間にわたってインキュベートし、続いてＰＥ結合抗ヒト二次抗体と共に３０分間にわたってインキュベートした。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により分析を実施した。
【０２６４】
図６はその実験の結果を示している。（Ａ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍細胞及び（Ｂ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍細胞の表面上のＬｇＲ５は、抗体ＹＷ３５３を使用するＦＡＣＳによって検出可能であった。免疫組織化学により、ＬｇＲ５の発現は、抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用すると、（Ｃ）ＬｏＶｏ  Ｘ  １．１異種移植腫瘍及び（Ｄ）Ｄ５１２４異種移植腫瘍の両方では２＋となった。それぞれの染色レベルを示す視野の細胞のパーセンテージが（Ｃ）に示されているパネルの上部にある。
【０２６５】
Ｈ．免疫組織化学による結腸腫瘍でのＬｇＲ５の出現率
結腸腫瘍におけるＬｇＲ５の出現率を決定するため、上記実施例（Ｅ）に記載されたように、抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用して１４３試料の様々な結腸腫瘍に由来するコアを含む組織マイクロアレイに対して、免疫組織化学を実施した。
【０２６６】
それらの結腸腫瘍の４０パーセントはＬｇＲ５に対して陽性であり、以下の基準を用いると、２９％（４１／１４３）のスコアは１＋であり、９％（１３／１４３）のスコアは２＋であり、２％（３／１４３）のスコアは３＋であった。
０＝無染色、
１＋＝弱い染色、
２＋＝中程度の染色、及び
３＋＝強い染色。
【０２６７】
残りの結腸腫瘍（８６／１４３）のスコアは、抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用するＩＨＣによって、０となった。図７Ａ〜Ｄは、抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用する結腸腫瘍の例示的な０、１＋、２＋、及び３＋の染色を示している。
【０２６８】
ＩＨＣ染色におけるかなりの不均質性が観察された。したがって、抗体ＬＧＲ５．１−１２を使用して１９の結腸癌腫瘍切片に対してＩＨＣを実施した。それらの切片のうちの３つの切片がＬｇＲ５発現に対して陰性であり、２つの切片において細胞の５０％超がＬｇＲ５に対して陽性であり、残りの切片は、０％〜５０％の染色を示した。表３は、各レベルで染色された各切片の中の細胞のパーセンテージ、及び５０％基準（すなわち、細胞のうちの５０％以上がＬｇＲ５に対して陽性）または１０％基準（すなわち、細胞のうちの１０％がＬｇＲ５に対して陽性）を使用する全体的スコアを示している。上記のＤ５１２４異種移植腫瘍及びＬｏＶｏ異種移植腫瘍で観察された染色も比較のために含まれている。Ｈスコアは、（１＋の細胞染色の％）＋（２＋の細胞染色の％）×２＋（３＋の細胞染色の％）×３に等しい。Ｈスコアは、各染色強度の細胞のパーセンテージを考慮するものである。
2017526618.tif 000005
2017526618.tif 000006
【０２６９】
これらの結果は、結腸腫瘍におけるＬｇＲ５発現が抗体ＬＧＲ５．１−１２によって検出され得ることを示している。要約すると、Ｌｇｒ５  ＲＮＡ及びタンパク質の発現は複数の正常組織区画内において観察され、Ｌｇｒ５は、不均質ではあるが結腸腫瘍において発現する。
【０２７０】
Ｉ．抗体ＬＧＲ５．２６−１を使用する免疫組織化学
ＣＸＦ２３３（ヒト結腸腫瘍モデル；Ｏｎｃｏｔｅｓｔ）異種移植腫瘍及び様々な結腸癌細胞株において抗体ＬＧＲ５．２６−１による染色と抗体ＬＧＲ５．１−１２による染色とを比較した。Ｄａｋｏ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ（Ｄａｋｏ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）でＬｇｒ５の免疫組織化学（ＩＨＣ）を実施した。簡単に説明すると、ホルマリン固定パラフィン包埋した腫瘍組織を脱パラフィンし、Ｔａｒｇｅｔ  Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ  ｐＨ６（Ｄａｋｏ）を使用してＰＴ  Ｍｏｄｕｌｅ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｋａｌａｍａｚｏｏ，ＭＩ）中で２０分間にわたって９９℃で抗原アンマスキングを実施した。内在性ペルオキシダーゼを４分間にわたる３％Ｈ２Ｏ２のＰＢＳの処理によって阻害し、アビジン／ビオチンブロッキングキット（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）を使用して内在性ビオチンをブロックした。１０％ロバ血清の３％ＢＳＡ／ＰＢＳを使用して内在性ＩｇＧをブロックし、Ｌｇｒ５に対する一次抗体（ＬＧＲ５．１−１２または２６−１）を４μｇ／ｍｌで６０分間にわたって室温でインキュベートした。ビオチン化ロバ抗ウサギＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を３０分間にわたって室温でインキュベートし、続いてＶｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ  Ｅｌｉｔｅ−ＨＲＰ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）で３０分間にわたって室温で処理した。Ｍｅｔａｌ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ＤＡＢ（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を室温で５分間にわたって用いて抗体結合を検出し、Ｍａｙｅｒ’ｓ  Ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ（Ｒｏｗｌｅｙ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）により切片を対比染色した。
【０２７１】
図８に示されるように、抗体ＬＧＲ５．１−１２（Ａ）及び抗体ＬＧＲ５．２６−１（Ｂ）は、ＣＸＦ２３３異種移植腫瘍試料において類似の染色パターンを示す。
【０２７２】
また、ＲＮＡ配列データを使用するｌｇｒ５遺伝子発現によって、各細胞株を次のレベルの発現、すなわち発現無し、非常に低い発現、低い発現、中程度の発現、及び高い発現として特徴付けた。加えて、実質的に上記のように、ＩＨＣによってそれらの細胞株においてＬｇＲ５レベルを判定した。その実験の結果が表４に示されている。
2017526618.tif 000007
【０２７３】
抗体ＬＧＲ５．１−１２及び抗体ＬＧＲ５．２６−１の両方は、多種多様な結腸癌細胞株の表面上のＬｇＲ５を検出することができた。
【０２７４】
上述の発明は、明確な理解を目的とした図解及び例証によって幾らか詳細に記載されているが、説明及び例証は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書において引用されている全ての特許文献及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に援用される。
【０２７５】
2017526618.tif 000008
2017526618.tif 000009
2017526618.tif 000010
2017526618.tif 000011
2017526618.tif 000012
2017526618.tif 000013
2017526618.tif 000014
2017526618.tif 000015
2017526618.tif 000016
2017526618.tif 000017
2017526618.tif 000018
2017526618.tif 000019
2017526618.tif 000020
2017526618.tif 000021
2017526618.tif 000022
2017526618.tif 000023
2017526618.tif 000024
2017526618.tif 000025
【図１】
2017526618.tif 000026
【図２】
2017526618.tif 000027
【図３Ａ】
2017526618.tif 000028
【図３Ｂ】
2017526618.tif 000029
【図４Ａ】
2017526618.tif 000030
【図４Ｂ】
2017526618.tif 000031
【図５Ａ】
2017526618.tif 000032
【図５Ｂ】
2017526618.tif 000033
【図５Ｃ】
2017526618.tif 000034
【図６Ａ】
2017526618.tif 000035
【図６Ｂ】
2017526618.tif 000036
【図６Ｃ】
2017526618.tif 000037
【図６Ｄ】
2017526618.tif 000038
【図７Ａ】
2017526618.tif 000039
【図７Ｂ】
2017526618.tif 000040
【図７Ｃ】
2017526618.tif 000041
【図７Ｄ】
2017526618.tif 000042
【図８Ａ】
2017526618.tif 000043
【図８Ｂ】
2017526618.tif 000044
【配列表】
2017526618000001.app
【国際調査報告】
2017526618.tif 000045
2017526618.tif 000046
2017526618.tif 000047
2017526618.tif 000048
2017526618.tif 000049