(57)【要約】  本発明は、癌細胞および癌幹細胞を標的化しうる治療用化合物に関する。本発明は更に、これらの治療用化合物を含む組成物、およびこれらの治療用化合物を投与することを含む癌の治療方法に関する。式Ａ−Ｂ−Ｄ［式中、Ａは式（Ｉ）の少なくとも１つの化合物である］を含む治療用化合物。
2017535608.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ａ−Ｂ−Ｄ
［式中、
Ａは、少なくとも１つの式（Ｉ）
【化１】
2017535608.tif 000057
の化合物、少なくとも１つの式（ＩＩ）
【化２】
2017535608.tif 000058
の化合物、少なくとも１つの式（ＩＩＩ）
【化３】
2017535608.tif 000059
の化合物、またはそれらの組合せであり、
Ｗは、アリール、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アルケニル、場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキルおよび場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６ヘテロシクロアルキルからなる群から選択され、Ｒは、Ｈまたはアルキルであり、ｍは１２から２４の整数であり；
Ｂは、リンカー化合物であり；ならびに
Ｄは抗癌薬であり、
Ａ：Ｄの比は１：２から２：１である］
を含む治療用化合物。
【請求項２】
リンカー化合物が結合、または式（ＩＶ）：Ｙ−（ＣＨ２）ｎ−Ｚ  （ＩＶ）の化合物であり、
ＹはＡに結合しており、
ＺはＤに結合しており、
Ｙは、結合、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、ＮＨＳＯ２ＯおよびＯＣ（＝Ｏ）Ｏからなる群から選択され、
Ｚは、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、ＳＯ２、ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ２および−Ｓ−Ｓ−からなる群から選択され、
ｎは０から６の整数である、請求項１記載の治療用化合物。
【請求項３】
Ａが式（Ｉ）の化合物であり、Ｗは、Ｃ１アルキル、
【化４】
2017535608.tif 000060
からなる群から選択され、ｍは１８であり、
Ｂが、結合、および式（ＩＩＩ）：Ｙ−（ＣＨ２）ｎ−Ｚ（ＩＩＩ）の化合物から選択されるリンカー化合物であり、ｎは０から６の整数であり、ＹはＡに結合しており、ＺはＤに結合しており、Ｙは、結合およびＣ＝Ｏからなる群から選択され、Ｚは、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨおよびＣ（＝Ｏ）Ｏからなる群から選択され、
Ｄが、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）およびメルタンシン（ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）からなる群から選択される、請求項１記載の治療用化合物。
【請求項４】
Ａが式（Ｉ）の化合物であり、Ｗは
【化５】
2017535608.tif 000061
であり、ｍは１８であり、
Ｂが式（ＩＩＩ）の化合物であり、ＹはＣ＝Ｏであり、ＺはＣ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨまたはＣ（＝Ｏ）Ｏであり、ｎは３または４であり、
Ｄがパクリタキセルであり、
Ａ：Ｄの比が１：１である、請求項３記載の治療用化合物。
【請求項５】
Ａが式（Ｉ）の化合物であり、Ｗは
【化６】
2017535608.tif 000062
であり、ｍは１８であり、
Ｂが結合または式（ＩＶ）の化合物であり、ＹはＣ＝Ｏであり、ＺはＮＨであり、ｎは１または３であり、
Ｄがゲルダナマイシンであり、
Ａ：Ｄの比が１：１である、請求項３記載の治療用化合物。
【請求項６】
Ａが式（Ｉ）の化合物であり、Ｗは
【化７】
2017535608.tif 000063
であり、ｍは１８であり、
Ｂが結合であり、
Ｄがメルタンシンであり、
Ａ：Ｄの比が１：１である、請求項３記載の治療用化合物。
【請求項７】
【化８】
2017535608.tif 000064
2017535608.tif 000065
2017535608.tif 000066
2017535608.tif 000067
2017535608.tif 000068
2017535608.tif 000069
（式中、ｎは０から６の整数であり、ＸはＯまたはＮＨである）からなる群から選択される治療用化合物。
【請求項８】
式（Ｖ）
【化９】
2017535608.tif 000070
の治療用化合物。
【請求項９】
請求項１、７または８の治療用化合物と１以上の医薬上許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項１０】
癌を有する対象に請求項１、７または８記載の治療用化合物の有効量を投与することを含む、癌の治療方法。
【請求項１１】
癌が癌幹細胞を含む、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
癌が再発性である、請求項１０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
２０１２年に、世界中で１，４１０万人が癌と診断され、８２０万人が癌で死亡した。米国では、全人口の約４０％が生涯の間に癌と診断されるであろう。利用可能な最良の治療を受けたとしても、それらの米国人のうちの４４％が癌で死亡するであろう。
【０００２】
癌は、細胞が無制限に分裂することにより生じる。健常細胞は、無制限な細胞分裂を防ぐチェックポイントを有する。これらのチェックポイントの少数の例として、栄養素利用性、ＤＮＡ損傷および接触阻害（すなわち、細胞が別の細胞と接触する）が挙げられる。また、ほとんどの細胞は有限回数しか複製できず、したがって、特定の回数の細胞分裂の後で死亡するようにプログラムされている。
【０００３】
癌は、これらの固有のチェックポイントを乗り越え無制御に増殖する細胞から生じる。この無制御増殖が腫瘍の形成を招く。良性および悪性の２つのタイプの腫瘍が存在する。良性腫瘍は組織型間の自然境界を越えることができない。一方、悪性腫瘍は近傍組織に浸潤し又は血流に進入し、異なる部位へ転移しうる。悪性腫瘍のみが癌とみなされる。癌をそのような致命的疾患にするのは、浸潤し転移するこの能力である。
【０００４】
癌との闘いを更に複雑にするのは、悪性腫瘍が特有の細胞型を有することである。１つの特に厄介な型は癌幹細胞（「ＣＳＣ」）である。ＣＳＣは自己再生能を有し、悪性腫瘍において見出される癌細胞の特有の型へと分化しうる。したがって、ＣＳＣは腫瘍の転移能における主要因である。ＣＳＣは、しばしば、放射線および化学療法に対しても生存する。放射線および化学療法後の癌の再発は、放射線および化学療法が全てのＣＳＣを殺しうるわけではないことに加えて、ＣＳＣが新たな腫瘍を形成しうることによるものである、と仮定されている。
【０００５】
特に厄介な型の癌は脳癌である。高悪性度のグリオーマのような脳癌は、しばしば、手術およびそれに続く放射線療法で治療される。脳腫瘍の手術は、しばしば、非常に困難である。外科医は、身体的または認知的障害をもたらしうる近傍脳組織への損傷を与えることなく、腫瘍を除去しなければならない。しばしば、外科医は、健康な組織と接触している腫瘍の境界を除去することができない。これらの残存癌細胞を殺すためには、放射線療法が用いられることが多い。しかし、放射線量は、健康な脳組織への損傷の可能性があるため、制限される。残念ながら、脳癌は、通常、化学療法に抵抗性である。この抵抗性は主として血液脳関門（「ＢＢＢ」）に起因する。ＢＢＢは、脳を包囲する流体を血液細胞および血流中の他の成分から分離する物理的障壁である。
【０００６】
脳癌を治療する１つの方法は、腫瘍サイズの増大に必要な新たな血管の成長を抑制することである。商標Ａｖａｓｔｉｎ（Ｒ）（ＡｖａｓｔｉｎはＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．の登録商標である）として販売されているベバシズマブは、腫瘍血管形成を停止させるため、そして更には逆転させるために使用される。しかし、Ｒｉｃｈ  Ｊ．ら，Ｃａｎｃ  Ｒｅｓ，２００６，６６，７８４３は、グリオーマ幹細胞由来脳腫瘍を治療するためにＡｖａｓｔｉｎ（Ｒ）を使用したところ、それが低酸素症およびｐＨ低下を引き起こすことを見出した。Ｓａｔｈｏｒｎｓｕｍｅｔｅｅ  Ｓ．，Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ａｎｄ  ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｇｌｉｏｍａ，Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃｏｌ，２０１０，Ｄｅｃ，１２（１２），１３００−１３１０。低酸素症および低ｐＨは共にＣＳＣ増殖を引き起こすことが知られており、ＣＳＣ駆動性腫瘍再発を促進しうる。
【０００７】
化学療法は、細胞毒性抗癌薬の使用を含む特定のタイプの癌治療を示すために用いられる語である。化学療法中に使用される細胞毒性薬は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼインヒビターおよび有糸分裂インヒビターを含む幾つかの主要カテゴリーに分類されうる。細胞毒性抗癌薬は、典型的には、細胞分裂を停止させ、したがって、癌組織だけでなく健常組織にも影響を及ぼす。アルキル化剤は、癌細胞のＤＮＡを損傷することにより、癌細胞分裂を停止させる。癌を治療するために使用される幾つかの一般的なアルキル化剤としては、ナイトロジェンマスタード（例えば、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（Ｒ）；ＣｙｔｏｘａｎはＢａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの登録商標である）、ニトロソウレア、アルキルスルホナート、トリアゼインおよびエチレンイミンが挙げられる。白金薬、例えばシスプラチンおよびカルボプラチンはアルキル化剤と同様に作用する。代謝拮抗剤は、ＤＮＡおよびＲＮＡ合成を抑制することにより、癌細胞分裂を停止させる。癌を治療するために使用される幾つかの一般的な代謝拮抗剤としては、６−メルカプトプリン、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（Ｒ）；ＧｅｍｚａｒはＥｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙの登録商標である）、メトトレキセートおよびペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（Ｒ）；ＡｌｉｍｔａはＥｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙの登録商標である）が挙げられる。トポイソメラーゼインヒビターは、複製のためにＤＮＡをトポイソメラーゼ酵素が分離するのを阻害することにより、癌細胞の分裂を停止させる。幾つかの一般的なトポイソメラーゼインヒビターとしては、トポテカン、イリノテカン、エトポシドおよびテンポシドが挙げられる。有糸分裂インヒビターは、重要な細胞分裂酵素を阻害することにより、癌細胞分裂を停止させる。幾つかの一般的な有糸分裂インヒビターとしては、タキサン（例えば、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（Ｒ）；ＴａｘｏｌはＢｖｅｎｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙの登録商標である）およびドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（Ｒ）；ＴａｘｏｔｅｒｅはＡｖｅｎｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡの登録商標）である）、エポチロンおよびビンカアルカロイドが挙げられる。
【０００８】
これらの抗癌薬の全ての欠点の１つは、それらが健康な組織に与える損傷である。該薬物は正常な細胞機能を抑制することにより癌を治療するため、血液細胞、粘膜表面および皮膚のような一定の細胞分裂に同様に依存する健康な組織も深刻な損傷を受けうる。この損傷は有意な罹患をもたらし、安全に運搬されうる化学療法剤の量を制限しうる。化学療法治療中に生じる副作用の例には、血球数の減少、脱毛、筋肉および関節痛、吐き気、嘔吐、下痢、口内炎、発熱および悪寒が含まれる。この問題を克服するために、癌細胞でのみ生じるタンパク質および細胞機能に影響を及ぼす薬物が開発されつつある。これらの特定の抗癌薬の幾つかとしては、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（Ｒ）；ＧｌｅｅｖｅｃはＮｏｖａｒｔｉｓ  ＡＧの登録商標である）、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（Ｒ）；ＩｒｅｓｓａはＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  ＵＫ  Ｌｉｍｉｔｅｄの登録商標である）、スニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（Ｒ）；ＳｕｔｅｎｔはＣ．Ｐ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃ．Ｖ．の登録商標である）およびボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（Ｒ）；ＶｅｌｃａｄｅはＭｉｌｌｅｎｎｉｕｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．の登録商標である）が挙げられる。しかし、これらの薬物は全ての癌型の治療に関して承認されているわけではなく、治療抵抗性の発生に一般に関連している。したがって、健常細胞による薬物の実質的な取り込みを回避する一方で、強力で有効な広域スペクトルの抗癌薬を癌細胞（ＣＳＣを含む）に運搬しうる抗癌薬運搬ビヒクルが当技術分野において必要とされている。更に、抗癌薬運搬ビヒクルはＢＢＢを通過し、抗癌薬を脳の癌細胞へ運搬しうるものであるべきである。
【０００９】
現在のところ、癌細胞を優先的に標的とする化合物はほとんど存在しない。１つのそのような化合物はＣＬＲ１４０４である。一般に、ＣＬＲ１４０４は、幾つかの腫瘍治療法の治療応答をモニターするために使用される有望な新規腫瘍選択的診断イメージング剤である。以下の構造
【００１０】
【化１】
2017535608.tif 000003
を有する第２世代のリン脂質エーテル（「ＰＬＥ」）類似体である放射性ヨウ素化ＣＬＲ１４０４は、５５／６０個の異種移植、同所性およびトランスジェニック癌および癌幹細胞由来動物モデルにおいて顕著な腫瘍選択性を示し、このことは該コア分子を抗癌薬運搬ビヒクルの理想的なプラットフォームとする。米国特許第８５３５６４１号；米国特許出願公開第２０１４／００３０１８７号およびＷｅｉｃｈｅｒｔ，Ｊ．Ｐ．ら，Ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｆｏｒ  ｂｒｏａｄ−ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ，２０１４，Ｊｕｎ  １１，６（２４０），２４０ｒａ７５（それらのそれぞれの全体を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】米国特許第８５３５６４１号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１４／００３０１８７号明細書
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｒｉｃｈ  Ｊ．ら，Ｃａｎｃ  Ｒｅｓ，２００６，６６，７８４３
【非特許文献２】Ｓａｔｈｏｒｎｓｕｍｅｔｅｅ  Ｓ．，Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ａｎｄ  ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｇｌｉｏｍａ，Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃｏｌ，２０１０，Ｄｅｃ，１２（１２），１３００−１３１０
【非特許文献３】Ｗｅｉｃｈｅｒｔ，Ｊ．Ｐ．ら，Ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｃｈｏｌｉｎｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｆｏｒ  ｂｒｏａｄ−ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｃａｎｃｅｒ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｎｄ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ｓｃｉ  Ｔｒａｎｓｌ  Ｍｅｄ，２０１４，Ｊｕｎ  １１，６（２４０），２４０ｒａ７５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
公知でないのは、癌細胞および癌幹細胞によって選択的に捕捉され保持される化合物がこれらの同じ細胞に抗癌薬を運搬しうるかどうかということである。更に、この化合物がまた、脳癌を治療するためにＢＢＢを越えて抗癌薬を輸送しうるかどうかは公知でない。最後に、この化合物または類似化合物が、腫瘍を根絶し更なる増殖および転移を予防するために十分な期間にわたって十分な量の抗癌薬を癌細胞に保持させうるかどうかは公知でない。本発明は、脳癌細胞を含む癌細胞および癌幹細胞に抗癌薬を標的化しうる抗癌薬運搬ビヒクルとしての使用にＣＬＲ１４０４コア分子を応用するものである。更に、本発明の化合物は癌細胞内に保持される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
発明の概括
本発明は、脳腫瘍細胞を含む癌細胞および癌幹細胞を標的化しうる治療用化合物に関する。本発明はまた、癌を治療し転移および再発を予防するために十分な持続期間にわたって十分な量で、脳腫瘍細胞を含む癌細胞および癌幹細胞により捕捉され保持されうる治療用化合物に関する。
【００１５】
１つの実施形態においては、本発明は、式Ａ−Ｂ−Ｄ
［式中、
Ａは、少なくとも１つの式（Ｉ）
【００１６】
【化２】
2017535608.tif 000004
の化合物、少なくとも１つの式（ＩＩ）
【００１７】
【化３】
2017535608.tif 000005
の化合物、少なくとも１つの式（ＩＩＩ）
【００１８】
【化４】
2017535608.tif 000006
の化合物、またはそれらの組合せであり、
Ｗは、アリール、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アルケニル、場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキルおよび場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６ヘテロシクロアルキルからなる群から選択され、ＲはＨまたはアルキルであり、ｍは１２から２４の整数であり；
Ｂは、リンカー化合物、好ましくは、結合、または式（ＩＶ）、Ｙ−（ＣＨ２）ｎ−Ｚ  （ＩＶ）の化合物であり、
ＹはＡに結合しており、
ＺはＤに結合しており、
Ｙは、結合、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、ＮＨＳＯ２ＯおよびＯＣ（＝Ｏ）Ｏからなる群から選択され、
Ｚは、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、ＳＯ２、ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ２および−Ｓ−Ｓ−からなる群から選択され、
ｎは０から６の整数であり；ならびに
Ｄは抗癌薬であり、
Ａ：Ｄの比は１：２から２：１である］
の治療用化合物に関する。
【００１９】
もう１つの実施形態においては、本発明は、
【００２０】
【化５】
2017535608.tif 000007
2017535608.tif 000008
［式中、
Ｗは、アリール、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アルケニル、場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキルおよび場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６ヘテロシクロアルキルからなる群から選択され；
ＲはＨまたはアルキルであり；
ｍは１２から２４の整数である；
Ｙは、結合、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、ＮＨＳＯ２ＯおよびＯＣ（＝Ｏ）Ｏからなる群から選択され；
Ｚは、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、ＳＯ２、ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ２および−Ｓ−Ｓ−からなる群から選択され；
ｎは０から６の整数であり；
Ｄは抗癌薬であり；
Ｂは、場合により、ＡとＤと間の結合であってもよい］
およびそれらの組合せからなる群から選択される、式Ａ−Ｂ−Ｄの治療用化合物に関する。
【００２１】
好ましい実施形態においては、本発明は、式Ａ−Ｂ−Ｄ
［式中、
Ａは式（Ｉ）の化合物であり、Ｗは、Ｃ１アルキル、
【００２２】
【化６】
2017535608.tif 000009
からなる群から選択され、ｍは１８であり；
Ｂは、結合、および式（ＩＶ）、Ｙ−（ＣＨ２）ｎ−Ｚ  （ＩＶ）の化合物から選択されるリンカー化合物であり、ｎは０から６の整数であり、ＹはＡに結合しており、ＺはＤに結合しており、Ｙは、結合およびＣ＝Ｏからなる群から選択され、Ｚは、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨおよびＣ（＝Ｏ）Ｏからなる群から選択され；
Ｄは、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）およびメルタンシン（ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）からなる群から選択される］
の治療用化合物に関する。
【００２３】
より好ましい実施形態においては、本発明は、式Ａ−Ｂ−Ｄ
［式中、
Ａは式（Ｉ）の化合物であり、Ｗは
【００２４】
【化７】
2017535608.tif 000010
であり、ｍは１８であり；
Ｂは式（ＩＶ）の化合物であり、ＹはＣ＝Ｏであり、ＺはＣ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨまたはＣ（＝Ｏ）Ｏであり、ｎは３または４であり；
Ｄはパクリタキセルであり；
Ａ：Ｄの比は１：１である］
の治療用化合物に関する。
【００２５】
もう１つのより好ましい実施形態においては、本発明は、式Ａ−Ｂ−Ｄ
［式中、
Ａは式（Ｉ）の化合物であり、Ｗは
【００２６】
【化８】
2017535608.tif 000011
であり、ｍは１８であり；
Ｂは結合または式（ＩＶ）の化合物であり、ＹはＣ＝Ｏであり、ＺはＮＨであり、ｎは１または３であり；
Ｄはゲルダナマイシンであり；
Ａ：Ｄの比は１：１である］
の治療用化合物に関する。
【００２７】
もう１つのより好ましい実施形態においては、本発明は、式Ａ−Ｂ−Ｄ
［式中、
Ａは式（Ｉ）の化合物であり、Ｗは
【００２８】
【化９】
2017535608.tif 000012
であり、ｍは１８であり；
Ｂは結合であり；
Ｄはメルタンシンであり；
Ａ：Ｄの比は１：１である］の治療用化合物に関する。
【００２９】
もう１つの態様においては、本発明は、本発明の化合物と１以上の医薬上許容される担体とを含有する医薬組成物を提供する。
【００３０】
もう１つの態様においては、本発明は、癌を有する対象に本発明の治療用化合物の有効量を投与することを含む、癌の治療方法を提供する。
【００３１】
１つの実施形態においては、本発明は、癌幹細胞を含む癌を有する対象に本発明の治療用化合物の有効量を投与することを含む、癌の治療方法を提供する。
【００３２】
もう１つの実施形態においては、本発明は、再発性である癌を有する対象に本発明の治療用化合物の有効量を投与することを含む、癌の治療方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】リン脂質エーテル（「ＰＬＥ」）類似体は脂質ラフトを介して捕捉される。
【図２】癌細胞によるＣＬＲ１５０１の優先的取り込み。（Ａ）および（Ｃ）〜（Ｆ）における癌細胞系によるＣＬＲ１５０１の取り込みを（Ｂ）における正常細胞の場合と比較されたい。（Ａ）腎（Ｃａｋｉ−２）。（Ｂ）正常ヒト皮膚線維芽細胞。（Ｃ）卵巣（ＯＶｃａｒ−３）。（Ｄ）膵臓（Ｐａｎｃ−１）。（Ｅ）メラノーマ（Ａ−３７５）。（Ｆ）前立腺（ＰＣ−３）。
【図３】ＳＣＩＤマウスにおけるヒトＲＬ−２５１腫瘍異種移植片による１３１Ｉ−ＣＬＲ１４０４の持続的保持。
【図４】１２５Ｉ−ＮＭ４０４を使用するラット脳におけるＣ６−グリオーマの検出。（Ａ）疑似対照ラット脳のバイオスキャン。（Ｂ）正常脳組織における１２５Ｉ−ＮＭ４０４のバックグラウンドレベルを示すデジタル写真上に重ね合わされた（Ａ）からのラット脳のバイオスキャンイメージ。（Ａ’）１２５Ｉ−ＮＭ４０４注射の４日後のＣ６グリオーマ含有ラット脳のデジタル写真。（Ｂ’）（Ａ’）からのラット脳のバイオスキャンイメージ。（Ｃ’）腫瘍におけるＮＭ４０４の強い局在化を示すために重ね合わされた（Ａ’）および（Ｂ’）の、位置および大きさを適合させた（ｍａｔｃｈｅｄ）イメージ。（Ｄ’）腫瘍の存在を証明するＨ＆Ｅ染色サンプル。
【図５】広範囲の悪性腫瘍における１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４の取り込み。（Ａ）〜（Ｉ）は、ヒト癌異種移植片を有するげっ歯類モデルである。（Ｊ）〜（Ｍ）はげっ歯類癌モデルである。（Ａ）同所性グリオーマＵ８７（ラット）。（Ｂ）結腸ＨＣＴ−１１６。（Ｃ）結腸ＨＴ−２９。矢印は腫瘍の位置を示す。（Ｄ）乳房ＭＤＡ−ＭＢ−２３１。矢印は腫瘍の位置を示す。（Ｅ）前立腺ＰＣ−３。（Ｆ）転移性ＰＣ−３。（Ｇ）ＰＣ−３脛骨異種移植片。（Ｈ）膵臓ＢｘＰＣ３。下の矢印は腫瘍の位置を示す。上の矢印は肝転移を示す。（Ｉ）ユーイング肉腫。矢印は腫瘍の位置を示す。（Ｊ）マウスＳＶ４０膀胱。（Ｋ）マウス乳房４Ｔ１。（Ｌ）マウス膵臓ｃ−ｍｙｃ。（Ｍ）ラット脳ＣＮＳ−１。
【図６】１３１Ｉ−ＣＬＲ１４０４を使用するヒト患者における非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）腫瘍の検出。（Ａ）は１３１Ｉ−ＣＬＲ１４０４注射後第４日および第１１日の患者１のガンマカメライメージを示す。ＮＳＣＬＣ腫瘍（矢印）におけるＣＬＲ１４０４の強力かつ持続的な保持に注目されたい。（ＢおよびＣ）は左肺（Ａ）における限局性の３ｃｍの病変および右肺（Ｂ）における大きな浸潤塊（矢印）の位置およびサイズを示す。（ＤおよびＥ）は１３１Ｉ−ＣＬＲ１４０４  ＩＶ投与の１、２および４日後の患者２の全身平面核医学イメージを示す。（ＦおよびＧ）は、大きな６ｃｍのＮＳＣＬＣ腫瘍（矢印）の位置を示す軸（Ｆ）および冠状（Ｇ）ＣＴスキャンを示す。
【図７】１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４を使用する、ＮＳＣＬＣ患者におけるそれ以前には未知であった３つの脳腫瘍転移の検出。矢印は、癌細胞による１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４の取り込み後にＰＥＴ／ＣＴを使用してイメージングされた腫瘍の位置を示す。
【図８】１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４を使用する、右前頭部転移の腫瘍再発の検出。（Ａ）放射線手術後の脳のＭＲＩ。矢印は、放射線壊死と解釈された病変を示す。（Ｂ）１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４を使用したＰＥＴイメージは、病変による１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４の取り込みを示している。（Ｃ）定位放射線手術の８カ月後の脳のＭＲＩは病変のサイズの増加を示しており、これは再発の可能性を示している。
【図９】ＭＤＡ−ＭＢ−４６８に関するＰＬＥ−パクリタキセルコンジュゲートのＩＣ５０。（Ａ）遊離パクリタキセル、（Ｂ）ＣＬＲ１６０１および（Ｃ）ＣＬＲ１６０３。
【図１０】ＮＣＩ−Ｈ１２９９に関するＰＬＥ−パクリタキセルコンジュゲートのＩＣ５０。（Ａ）遊離パクリタキセル、（Ｂ）ＣＬＲ１６０１および（Ｃ）ＣＬＲ１６０３。
【図１１】ＮＣＩ−Ｈ４６０に関するＰＬＥ−パクリタキセルコンジュゲートのＩＣ５０。（Ａ）遊離パクリタキセル、（Ｂ）ＣＬＲ１６０１および（Ｃ）ＣＬＲ１６０３。
【図１２】Ｃａｐａｎ−２に関するＰＬＥ−パクリタキセルコンジュゲートのＩＣ５０。（Ａ）遊離パクリタキセル、（Ｂ）ＣＬＲ１６０１および（Ｃ）ＣＬＲ１６０３。
【図１３】ＭｉａＰａＣａ−１に関するＰＬＥ−パクリタキセルコンジュゲートのＩＣ５０。（Ａ）遊離パクリタキセル、（Ｂ）ＣＬＲ１６０１および（Ｃ）ＣＬＲ１６０３。
【図１４】ＨＴ２９に関するＰＬＥ−パクリタキセルコンジュゲートのＩＣ５０。（Ａ）遊離パクリタキセル、（Ｂ）ＣＬＲ１６０１および（Ｃ）ＣＬＲ１６０３。
【図１５】ＨＣＴ１１６に関するＰＬＥ−パクリタキセルコンジュゲートのＩＣ５０。（Ａ）遊離パクリタキセル、（Ｂ）ＣＬＲ１６０１および（Ｃ）ＣＬＲ１６０３。
【図１６】ＰＣ−３に関するＰＬＥ−パクリタキセルコンジュゲートのＩＣ５０。（Ａ）遊離パクリタキセル、（Ｂ）ＣＬＲ１６０１および（Ｃ）ＣＬＲ１６０３。
【図１７】５μＭのＣＬＲ１６０１で７２時間処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞に関する代表的な散布図。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
発明の詳細な説明
定義
本明細書中で用いる「治療」なる語は、癌の進行または再発を低減、抑制および阻害することを含む予防的および障害弛張性（ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ｒｅｍｉｔｔｅｎｔ）治療を含む。本明細書中で用いる「低減」、「抑制」および「阻害」なる語は、低下または減少の、それらの一般的に理解されている意味を有する。本明細書中で用いる「進行」なる語は範囲または重症度における増加、増進、成長または悪化を意味する。本明細書中で用いる「再発」および「再発性」なる語は寛解後の疾患の戻りを意味する。
【００３５】
本明細書中で用いる「投与」なる語は、患者、組織、器官または細胞を本発明の抗癌化合物と接触させることを意味する。本明細書中で用いる投与は、インビトロ（すなわち、試験管内）またはインビボ（すなわち、生きた生物、例えばヒトの細胞または組織内）で達成され得る。ある実施形態においては、本発明は、本発明において有用な化合物を患者または対象に投与することを含む。「患者」または「対象」は本明細書においては同等に用いられ、（１）ＰＬＥ化合物を使用する抗癌物質の投与により治癒可能または治療可能な障害を有する、あるいは（２）本発明の抗癌化合物を投与することにより予防可能な障害に感受性である哺乳動物、好ましくはヒトを意味する。
【００３６】
本明細書中で用いる「有効量」なる語は、所望の生物学的効果、例えば、有益な結果、例えば、疾患または障害の徴候または症状の予防、軽減、改善または排除（これらに限定されるものではない）に影響を及ぼすのに十分な量を意味する。したがって、該医薬組成物または方法の各有効成分の全量は、有意義な対象の利益を示すのに十分なものである。したがって、「有効量」は、それが投与される状況に左右されるであろう。有効量は１以上の予防的または治療的投与において投与されうる。
【００３７】
本明細書中で用いる「治療用化合物」なる語は、癌の治療をもたらしうる任意の化合物を意味する。
【００３８】
本明細書中で用いる「癌」なる語は、転移しうる細胞の無制御分裂から生じる任意の疾患を意味する。
【００３９】
「化学療法薬」、「抗癌薬」および「抗腫瘍薬」なる語は本明細書の全体において互換的に用いられる。
【００４０】
「悪性腫瘍細胞」および「癌細胞」なる語は本明細書の全体において互換的に用いられる。「悪性腫瘍幹細胞」および「癌幹細胞」なる語は本明細書の全体において互換的に用いられる。
【００４１】
本明細書中で用いる「組成物」は、特定された量の特定された成分を含む産物、および特定された量の特定された成分の組合せから直接的または間接的に生じる任意の産物を含むと意図される。
【００４２】
本明細書中で用いる「Ａ」なる語は、式
【００４３】
【化１０】
2017535608.tif 000013
のリン脂質エーテルを意味する。
【００４４】
本明細書中で用いる「Ｗ」なる語は、アリール、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アルケニル、場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキルおよび場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６ヘテロシクロアルキルを意味する。
【００４５】
本明細書中で用いる「アリール」なる語は、フェニル基を含む芳香環を意味する。
【００４６】
本明細書中で用いる「アルキル」なる語は、特に示されていない限り、１から２４個の炭素原子（Ｃ１−Ｃ２４）の飽和炭化水素基からなる分枝状または直鎖状アルキルを意味する。アルキル基は環状または非環状でありうる。
【００４７】
本明細書中で用いる「アルケニル」なる語は炭素−炭素二重結合を意味する。
【００４８】
本明細書中で用いる「シクロアルキル」なる語は３から２４個の炭素原子（Ｃ３−Ｃ２４）の環状アルキル基を意味する。
【００４９】
本明細書中で用いる「ヘテロシクロアルキル」なる語は、炭素、窒素、硫黄、ホスファートおよび酸素から選択される３から２４個の原子（Ｃ３−Ｃ２４）の環状基を意味し、少なくとも１つの原子は炭素である。
【００５０】
一般に、「置換」なる語は、「場合により」なる語が先行しているか否かにかかわらず、示されている部分の水素の１以上が適当な置換基で置換されることを意味する。特に示されていない限り、「場合により置換されていてもよい」基は該基の置換可能な各位置に適当な置換基を有していてもよく、任意の与えられた構造における２以上の位置が、特定されている基から選択される２以上の置換基で置換されうる場合には、該置換基は各位置において同じであっても異なっていてもよい。本発明で想定される置換基の組合せは、好ましくは、安定な又は化学的に可能な化合物の形成をもたらすものである。
【００５１】
本明細書中で用いる「Ｒ」なる語は水素（Ｈ）またはアルキルを意味する。
【００５２】
本明細書中で用いる「ｍ」なる語は１２から２４の整数を意味する。
【００５３】
本明細書中で用いる「ｎ」なる語は０から６の整数を意味する。
【００５４】
本明細書で用いる「Ｂ」なる語はリンカー化合物を意味する。本明細書中で用いる「リンカー化合物」なる語は、全ての化合物が、より大きな単一の化合物を形成するように、２以上の他の異なる化合物と化学的結合を形成しうる任意の化合物を意味する。１つの実施形態においては、リンカー化合物は結合である。より大きな化合物の形成においては、複数のリンカー化合物が使用されうる。特定の実施形態においては、リンカー化合物なる語は結合または式Ｙ−（ＣＨ２）ｎ−Ｚの化合物である。
【００５５】
本明細書中で用いる「Ｙ」なる語は結合、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、ＮＨＳＯ２ＯまたはＯＣ（＝Ｏ）Ｏを意味する。
【００５６】
本明細書中で用いる「Ｚ」なる語はＯ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、ＳＯ２、ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ２および−Ｓ−Ｓ−を意味する。
【００５７】
本明細書中で用いる「Ｄ」なる語は現在公知または開発中の任意の抗癌薬を意味する。
【００５８】
本明細書中で定められている「異性体」なる語は、光学異性体および類似体、構造異性体および類似体、コンホメーション異性体および類似体などを含むが、これらに限定されるものではない。１つの実施形態においては、本発明は本発明の種々の光学異性体の使用を含む。本発明において有用な抗癌化合物は少なくとも１つの立体中心を含有しうると当業者に理解されるであろう。したがって、本発明の方法において使用される化合物は光学活性体またはラセミ体で存在し、または単離されうる。幾つかの化合物は多形性をも示しうる。
【００５９】
本発明は、本明細書に記載され特許請求されている癌関連状態の治療において有用な特性を有する任意のラセミ体、光学活性体、多形体もしくは立体異性体またはそれらの混合物の使用を含みうると理解されるべきである。１つの実施形態においては、該抗癌化合物は純粋な（Ｒ）異性体を含みうる。もう１つの実施形態においては、該抗腫瘍化合物は純粋な（Ｓ）異性体を含みうる。もう１つの実施形態においては、該化合物は（Ｒ）異性体と（Ｓ）異性体の混合物を含みうる。もう１つの実施形態において、該化合物は（Ｒ）異性体と（Ｓ）異性体との両方を含むラセミ混合物を含みうる。光学活性体の製造方法（例えば、再結晶技術によるラセミ形態の分割、光学活性出発物質からの合成、キラル合成、またはキラル固定相を使用するクロマトグラフィー分離によるもの）は当技術分野でよく知られている。
【００６０】
本発明は、有機酸および無機酸、例えばクエン酸および塩酸とのアミノ置換化合物の医薬上許容される塩の使用を含む。本発明はまた、本明細書に記載されている化合物のアミノ置換基のＮ−オキシドを含む。医薬上許容される塩はまた、無機塩基、例えば水酸化ナトリウムでの処理よりフェノール化合物から製造されうる。また、フェノール化合物のエステルは、脂肪族カルボン酸および芳香族カルボン酸、例えば酢酸および安息香酸エステルを使用して製造されうる。本明細書中で用いる「医薬上許容される塩」なる語は、基本化合物と実質的に同じ薬学的効果を達成する、基本化合物から調製された化合物を意味する。
【００６１】
本発明は更に、抗癌化合物の誘導体を含む。「誘導体」なる語は、エーテル誘導体、酸誘導体、アミド誘導体、エステル誘導体などを含むが、これらに限定されるものではない。また、本発明は更に、抗腫瘍化合物の水和物を使用する方法を含む。「水和物」なる語は、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物などを含むが、これらに限定されるものではない。
【００６２】
本発明は更に、抗癌化合物の代謝産物を含む。「代謝産物」なる語は、代謝または代謝プロセスによって別の物質から産生される任意の物質を意味する。
【００６３】
本発明の化合物で治療されうる癌には以下にものが含まれるが、それらに限定されるものではない：男性乳癌を含む乳癌；肛門癌を含む消化器／胃腸癌；虫垂癌；肝外胆管癌、胃腸カルチノイド腫瘍；結腸癌、食道癌、胆嚢癌、胃癌、胃腸間質腫瘍（「ｇｉｓｔ」）、膵島細胞腫瘍、成人原発性肝癌、小児肝癌、膵臓癌、直腸癌、小腸癌および胃癌；内分泌および神経内分泌癌、例えば膵臓腺癌、副腎皮質癌、膵臓神経内分泌腫瘍、メルケル細胞癌、非小細胞肺神経内分泌腫瘍、小細胞肺神経内分泌腫瘍、副甲状腺癌、褐色細胞腫、下垂体腫瘍および甲状腺癌；眼癌、例えば眼内黒色腫および網膜芽細胞腫；泌尿生殖器癌、例えば膀胱癌、腎（腎細胞）癌、陰茎癌、前立腺癌、移行細胞腎盂および尿管癌、精巣癌、尿道癌およびウィルムス腫瘍；胚細胞癌、例えば小児中枢神経系癌、小児頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍および精巣癌；婦人科癌、例えば子宮頸癌、子宮内膜癌、妊娠性絨毛腫瘍、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、子宮肉腫、膣癌および外陰癌；頭頸部癌、例えば下咽頭癌、喉頭癌、唇および口腔癌、原発不明の転移性頸部扁平上皮癌、口腔癌、鼻咽頭癌、口腔咽頭癌、副鼻腔および鼻腔癌、副甲状腺癌、咽頭癌、唾液腺癌および咽頭癌；白血病、例えば成人急性リンパ芽球性白血病、小児急性リンパ芽球性白血病、成人急性骨髄性白血病、小児急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病および毛状細胞白血病；リンパ腫、例えばエイズ関連リンパ腫、皮膚ｔ細胞リンパ腫、成人ホジキンリンパ腫、小児ホジキンリンパ腫、妊娠中のホジキンリンパ腫、菌状息肉腫、成人非ホジキンリンパ腫、小児非ホジキンリンパ腫、妊娠中の非ホジキンリンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、セザリー症候群およびワルデンスレームマクログロブリン血症；筋骨格癌、例えばユーイング肉腫、骨肉腫および骨の悪性線維性組織球腫、小児横紋筋肉腫および軟部組織肉腫；神経癌、例えば成人脳腫瘍、小児脳腫瘍、星状細胞腫、脳幹グリオーマ、中枢神経系非定型奇形腫／ラブドイド腫瘍、中枢神経系胎児腫瘍、頭蓋咽頭腫、上衣腫、神経芽細胞腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫；呼吸器／胸部癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、悪性中皮腫、胸腺腫および胸腺癌；ならびに皮膚癌、例えばカポジ肉腫、黒色腫および扁平上皮癌。
【００６４】
本発明の式（Ｉ）の化合物は癌幹細胞により捕捉されることが示されている。Ｗｅｉｃｈｅｒｔ  Ｊ．Ｐ．ら（２０１４），２，図２（ＣＬＲ１４０４蛍光類似体であるＣＬＲ−１５０１が、正常ヒト星状細胞および胎児ヒト神経幹細胞と比較して、ヒト膠芽腫幹様細胞および血清培養ヒト膠芽腫細胞による取り込みを増強したことを示している）を参照されたい。幹細胞は全てではなくともほとんどの癌型に関連している。腫瘍低酸素症は癌幹細胞増殖を刺激して、抵抗性および転移能の増強をもたらす。したがって、癌幹細胞は化学療法および放射線療法後の化学療法抵抗性、腫瘍再増殖および転移に関連している。したがって、本発明の化合物は、伝統的な治療レジメンに抵抗性であることが判明している種々の形態の癌を治療する可能性を有する。
【００６５】
本発明の化合物
本発明に有用な薬物運搬ビヒクルには、式
式（Ｉ）
【００６６】
【化１１】
2017535608.tif 000014
もしくは式（ＩＩ）
【００６７】
【化１２】
2017535608.tif 000015
もしくは式（ＩＩＩ）
【００６８】
【化１３】
2017535608.tif 000016
［式中、Ｗは、アリール、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アルケニル、場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキルおよび場合により置換されていてもよいＣ３−Ｃ６ヘテロシクロアルキルからなる群から選択され、ＲはＨまたはアルキルであり、ｍは１２から２４の整数である］
の化合物、あるいはそれらの組合せが含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００６９】
本発明の化合物の選択的腫瘍標的化の基礎は、ほとんどの正常細胞のものと比較した場合の、癌細胞の原形質膜間の差異にある。特に、癌細胞膜は「脂質ラフト」に非常に富む。癌細胞は、健常細胞より５から１０倍多い脂質ラフトを有する。脂質ラフトは、高濃度のコレステロールおよびスフィンゴ脂質を含有する膜リン脂質二重層の特殊領域であり、細胞表面および細胞内シグナル伝達分子（例えば、増殖因子およびサイトカイン受容体、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／Ａｋｔ生存経路）を編成するように働く。データは、脂質ラフトがＰＬＥの進入口として働くことを示唆している。非癌細胞と癌細胞との間のこれらの化合物の顕著な選択性は、コレステロールに対するＰＬＥの高いアフィニティおよび癌細胞におけるコレステロールに富む脂質ラフトの豊富さに起因する。脂質ラフトにより果たされる重要な役割は、脂質ラフト構造の破壊が癌細胞内へのＰＬＥの取り込みを抑制することによって明確に示される。脂質ラフトの形成が阻止される場合には、ＰＬＥの取り込みが６０％低下することが示されている（実施例２および図１を参照されたい）。
【００７０】
５５個を超える異種移植片および自然発生腫瘍モデルにおいて得られた予備的結果は、ＣＬＲ１４０４が腫瘍における選択的取り込みおよび持続的保持を受けることを一般に示している。該物質は肝臓内で或る程度は代謝されるため、本発明者らは、高い肝バックグラウンド放射能レベルゆえに、肝腫瘍モデルにおける、より早期の化合物評価を回避した。
【００７１】
ＣＬＲ１４０４はＰＬＥである。種々の腫瘍モデルで得られた結果は、ＣＬＲ１４０４が癌細胞および癌幹細胞により捕捉され選択的に保持されることを示している。実際、ＣＬＲ１４０４は２０日間まで癌細胞内に残存することが示されている。図３を参照されたい。ＣＬＲ１４０４は、リンパ節内で見出されるものを含み解剖学的位置には無関係に原発性病変および転移性病変の両方に局在する。実施例３〜８を参照されたい。ＣＬＲ１４０４の高い腫瘍対バックグラウンドのアビディティおよび腫瘍選択性は、該コア分子が抗癌薬運搬ビヒクルとしての使用に十分に適していることを示唆している。
【００７２】
本発明に有用なリンカー化合物には、本発明の薬物運搬ビヒクルを本発明の抗癌薬に結合させうる任意の化学的リンカーが含まれる。本発明に有用なリンカー化合物には、切断可能なリンカーおよび切断不可能なリンカーの両方が含まれる。１つの実施形態においては、本発明に有用なリンカー化合物には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：アミノブチルアミド、アミノ酸、グルタラミン酸、ジカルボン酸、カルバミン酸、カルボニル、９，１０−アントラセンジカルボン酸、ビフェニル−３，３’，５，５’−テトラカルボン酸、ビフェニル−３，４’，５−トリカルボン酸、５−ブロモイソフタル酸、５−シアノ−１，３−ベンゼンジカルボン酸、２，２’−ジアミノ−４，４’−スチルベンジカルボン酸、２，５−ジアミノテレフタル酸、２，５−ジヒドロキシテレフタル酸、５−エチニル−１，３−ベンゼンジカルボン酸、２−ヒドロキシテレフタル酸、イミダゾール、２−メチルイミダゾール、２，６−ナフタレンジカルボン酸、シュウ酸無水物、テレフタル酸、［１，１’：４’，１’’］テルフェニル−３，３’’，５，５’’−テトラカルボン酸、３，３’，５，５’−テトラカルボキシジフェニルメタン、１，２，４，５−テトラキス（４−カルボキシフェニル）ベンゼン、４，４’，４’’−ｓ−トリアジン−２，４，６−トリイル−トリ安息香酸、トリメシン酸、１，３，５−トリス（４’−カルボキシ［１，１’−ビフェニル］−４−イル）ベンゼン、１，３，５−トリス（４−カルボキシフェニル）ベンゼンおよび１，３，５−トリスカルボキシフェニルエチニルベンゼン。
【００７３】
もう１つの実施形態においては、本発明に有用なリンカー化合物には、アニリンに基づく自壊性断片を有する又は有さないリソソームプロテアーゼ感受性リンカーも含まれるが、これに限定されるものではない。リソソームプロテアーゼ感受性リンカーの非限定的な例としては、
【００７４】
【化１４】
2017535608.tif 000017
が挙げられ、これらは、血漿安定性と細胞内プロテアーゼ切断との間の最適なバランスを示すように設計されたバリン−シトルリンジペプチドリンカーを含有する。Ｔｒａｎｏｙ−Ｏｐａｌｉｎｓｋｉ  Ｉ．，Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ  ｌｉｎｋｅｒｓ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｕｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｄｒｕｇ  ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２００８  Ａｕｇ，８（６）：６１８−６３７（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。
【００７５】
もう１つの実施形態においては、本発明に有用なリンカー化合物には、β−グルクロニダーゼにより切断される自壊性リンカーも含まれるが、これに限定されるものではない。β−グルクロニダーゼは、癌細胞の周囲の壊死領域に高濃度で存在する。Ｔｒａｎｏｙ−Ｏｐａｌｉｎｓｋｉ  Ｉ．，β−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ−  ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ：Ａｎ  ｕｐｄａｔｅ，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ，２０１４  Ｍａｒ  ３，７４，３０２−３１３（その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）を参照されたい。β−グルクロニダーゼ切断性自壊性リンカーの非限定的な例としては、
【００７６】
【化１５】
2017535608.tif 000018
（式中、ＸはＮＨ２またはＮＯ２であり、ＹはＯまたはＮＣＨ３である）が挙げられる。
【００７７】
本発明の好ましいリンカー化合物は結合または式（ＩＶ）
Ｙ−（ＣＨ２）ｎ−Ｚ      （ＩＶ）
［式中、
ＹはＡに結合しており、
ＺはＤに結合しており、
Ｙは、結合、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、ＮＨＳＯ２ＯおよびＯＣ（＝Ｏ）Ｏからなる群から選択され、
Ｚは、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、ＳＯ２、ＯＣ（＝Ｏ）ＯＣＨ２および−Ｓ−Ｓ−からなる群から選択され、
ｎは０から６の整数である］
の化合物である。
【００７８】
本発明の、より好ましいリンカー化合物は、結合、またはｎが０から６の整数であり、ＹがＡに結合しており、ＺがＤに結合しており、Ｙが、結合およびＣ＝Ｏからなる群から選択され、Ｚが、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨおよびＣ（＝Ｏ）Ｏからなる群から選択される式（ＩＶ）の化合物である。
【００７９】
本発明に有用な抗癌薬には以下のものが含まれるが、それらに限定されるものではない：パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、イリノテカン（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）、トポテカン（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、ゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、メルタンシン（ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ）、アビラテロン（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ）、アファチニブ（ａｆａｔｉｎｉｂ）、アミノレブリン酸、アプレピタント（ａｐｒｅｐｉｔａｎｔ）、アキシチニブ（ａｘｉｔｉｎｉｂ）、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、ベリノスタット（ｂｅｌｉｎｏｓｔａｔ）、ベンダムスチン（ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ）、ベキサロテン（ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）、ブレオマイシン（ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ）、ボルテゾミブ（ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）、ボスチニブ（ｂｏｓｕｔｉｎｉｂ）、ブスルファン（ｂｕｓｕｌｆａｎ）、カバジタキセル（ｃａｂａｚｉｔａｘｅｌ）、カボザンチニブ（ｃａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ）、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、カルボプラチン（ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、カーフィルゾミブ（ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ）、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、セリチニブ（ｃｅｒｉｔｉｎｉｂ）、セツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、クロラムブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロファラビン（ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ）、クリゾチニブ（ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ）、シクロホスファミド（ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、シタラビン（ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、ダブラフェニブ（ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ）、ダカルバジン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダサチニブ（ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、ダウノルビシン（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、デノスマブ（ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、デクスラゾキサン（ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）（例えば、モノメチルアウリスタチン（ｍｏｎｏｍｅｔｈｙｌ  ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）Ｅ）、ドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）、エンザルタミド（ｅｎｚａｌｕｔａｍｉｄｅ）、エピルビシン（ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ）、メシル酸エリブリン（ｅｒｉｂｕｌｉｎ）、エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、エトポシド（ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ）、エベロリムス（ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、リン酸フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、フルオロウラシル（ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ）、ガネテスピブ（ｇａｎｅｔｅｓｐｉｂ）、ゲフィチニブ（ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、ゲムツズマブオゾガマイシン（ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、ヘキサメチルメラミン（ｈｅｘａｍｅｔｈｙｌｍｅｌａｍｉｎｅ）、ヒドロキシウレア（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）、イブリツモマブチウキセタン（ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ  ｔｉｕｘｅｔａｎ）、イブルチニブ（ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ）、イデラリシブ（ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ）、イホスファミド（ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、イマチニブ（ｉｍａｔｉｎｉｂ）、イピリムマブ（ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、イクサベピロン（ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）、ラパチニブ（ｌａｐａｔｉｎｉｂ）、ロイコボリン（ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ）カルシウム、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メルファラン（ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、メルカプトプリン（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、メスナ（ｍｅｓｎａ）、メトトレキセート（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、マイトマイシン（ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ）Ｃ、ミトタン（ｍｉｔｏｔａｎｅ）、ミトキサントロン（ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ネララビン（ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）、ネルフィナビル（ｎｅｌｆｉｎａｖｉｒ）、ニロチニブ（ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）、オビヌツズマブ（ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、オファツムマブ（ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、オマセタキシンメペスクシナート（ｏｍａｃｅｔａｘｉｎｅ  ｍｅｐｅｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、オキサリプラチン（ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、パニツムマブ（ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、パゾパニブ（ｐａｚｏｐａｎｉｂ）、ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）、ペンブロリズマブ（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、ペメトレキセド（ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ）、ペントスタチン（ｐｅｎｔｏｓｔａｔｉｎ）、ペルツズマブ（ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、プリカナイシン（ｐｌｉｃａｎｙｃｉｎ）、ポマリドマイド（ｐｏｍａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、塩酸ポナチニブ（ｐｏｎａｔｉｎｉｂ）、プララトレキセート（ｐｒａｌａｔｒｅｘａｔｅ）、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ）、ラジウム２２３ジクロリド、ラムシルマブ（ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、レゴラフェニブ（ｒｅｇｏｒａｆｅｎｉｂ）、レタスピマイシン（ｒｅｔａｓｐｉｍｙｃｉｎ）、ルキソリチニブ（ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂ）、セムスチン（ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）、シルツキシマブ（ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、リンゴ酸スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）、タネスピマイシン（ｔａｎｅｓｐｉｍｙｃｉｎ）、テモゾロマイド（ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、テムシロリムス（ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、テニポシド（ｔｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、サリドマイド（ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、チオグアニン（ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）、チオテパ（ｔｈｉｏｔｅｐａ）、トレミフェン（ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、トラメチニブ（ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ）、トラスツズマブ（ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、バンデタニブ（ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ）、ベムラフェニブ（ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ）、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ）、ビンクリスチン（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）、ビノレルビン（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）、ビスモデギブ（ｖｉｓｍｏｄｅｇｉｂ）、ボリノスタット（ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）およびｚｉｖ−アフリベルセプト（ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）。抗癌薬として作用することが現在公知である又は抗癌薬として作用しうる任意の化合物も本発明に有用である。
【００８０】
本発明のＰＬＥ薬物運搬ビヒクルは、単一または複数で、リンカー化合物を介して又は直接的に、任意の数の可能な安定な結合部位において抗癌薬に結合しうる。
【００８１】
本発明の組成物
もう１つの態様において、本発明は、本発明の化合物と１以上の医薬上許容される担体とを含有する医薬組成物を提供する。好ましい態様においては、該医薬組成物はＫｏｌｌｉｐｈｏｒ（Ｒ）ＥＬ（ＫｏｌｌｉｐｈｏｒはＢＡＳＦ  ＳＥの登録商標である）を含有しない。Ｋｏｌｌｉｐｈｏｒ（Ｒ）ＥＬは以前はＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（Ｒ）ＥＬ（ＣｒｅｍｏｐｈｏｒはＢＡＳＦ  ＳＥの登録商標である）として公知であった。
【００８２】
本発明の治療用組成物中の有効成分の実際の投与量レベルは、個々の患者、組成物および投与様式に関する所望の治療応答を達成するのに有効な有効成分の量が得られるように変動しうる。選択される投与量レベルは、個々の化合物の活性、投与経路、治療される状態の重症度ならびに治療される患者の状態および過去の病歴に左右されるであろう。しかし、所望の治療効果を達成するのに必要なレベルより低いレベルで該化合物の投与を開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることは、当技術分野の技量の範囲内である。
【００８３】
本発明の化合物の「治療的有効量」なる語は、いずれかの医学的治療に適用されうる合理的な利益／リスク比で障害を治療するのに十分な該化合物の量を意味する。しかしながら、本発明の化合物および組成物の１日の合計使用量は妥当な医学的判断の範囲内で担当医師により決定されると理解されるであろう。いずれかの個々の患者に対する具体的な治療的有効用量レベルは、治療される障害および障害の重症度；使用される具体的な化合物の活性；使用される具体的な組成物；患者の年齢、体重、全身健康状態、性別および食事；使用される具体的な化合物の投与時間、投与経路および排泄速度；治療の継続期間；使用される具体的な化合物と組合されて又は同時に使用される薬物；医学分野でよく知られている同様の要因を含む種々の要因に左右されるであろう。例えば、所望の治療効果を達成するのに必要なレベルより低いレベルで該化合物の投与を開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることは、当技術分野の技量の範囲内である。
【００８４】
ヒトまたは下等動物に投与される本発明の化合物の１日合計用量は約０．０００１ｍｇから約１０００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲でありうる。経口投与の目的には、より好ましい用量は約０．００１から約５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内でありうる。所望により、有効１日用量は投与目的で複数の用量に分割されうる。したがって、単一用量の組成物は、該１日用量を構成するそのような量またはその約数を含有しうる。
【００８５】
本発明はまた、１以上の医薬上許容される担体と共に処方された本発明の化合物を含む医薬組成物を提供する。該医薬組成物は、固体または液体形態で経口投与用に、非経口投与用に、または直腸投与用に特別に製剤化されうる。
【００８６】
本発明の医薬組成物は、経口的、直腸、非経口的、槽内、膣内、経皮的（例えば、パッチを使用して）、経粘膜的、舌下、肺、腹腔内、局所（散剤、軟膏剤または滴剤により）、頬側投与により、または経口もしくは鼻スプレーとして、ヒトおよび他の哺乳動物に投与されうる。本明細書中で用いる「非経口」または「非経口的」なる語は、静脈内、筋肉内、腹腔内、槽内、皮下および関節内注射および注入を含む投与方法を意味する。
【００８７】
もう１つの態様においては、本発明は、本発明の成分と生理的に許容される希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。本発明は、とりわけ非経口注射、鼻腔内運搬、固体または液体形態での経口投与、直腸または局所投与のための、本明細書中で希釈剤と総称される１以上の生理的に許容または耐容される希釈剤、担体、補助剤またはビヒクルと共に組成物へと製剤化される前記の１以上の化合物を含む。
【００８８】
非経口注射に適した組成物は、生理的に許容される無菌の水性または非水性の溶液、分散液、懸濁液またはエマルション、および無菌の注射可能な溶液または分散液へと再構成（還元）される無菌散剤を含みうる。適当な水性および非水性の担体、希釈剤、溶媒またはビヒクルの例には、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、植物油（例えば、オリーブ油）、注射可能な有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）およびそれらの適当な混合物が含まれる。
【００８９】
また、これらの組成物は、補助剤、例えば保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤を含有しうる。種々の抗細菌および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などにより微生物の作用の予防が保証されうる。また、等張化剤、例えば糖、塩化ナトリウムなどを含有させることも望ましいかもしれない。注射用医薬形態の持続的吸収は、吸収遅延物質、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用により達成されうる。
【００９０】
懸濁剤は、活性化合物に加えて、懸濁化剤、例えばエトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天およびトラガカントまたはこれらの物質の混合物などを含有しうる。
【００９１】
注射可能なデポ形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドのような生分解性重合体中で該薬物のマイクロカプセルマトリックスを形成させることにより製造される。薬物と重合体との比および使用する個々の重合体の性質に応じて、薬物放出の速度が制御されうる。他の生分解性重合体の例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が含まれる。デポ注射剤は、身体組織に適合性であるリポソームまたはマイクロエマルション中に該薬物を取り込ませることによっても製造される。
【００９２】
注射剤は、例えば、細菌保持フィルターでの濾過により、または使用直前に無菌水もしくは他の無菌注射用媒体に溶解もしくは分散されうる無菌固体組成物の形態の滅菌剤を含有させることにより滅菌されうる。
【００９３】
経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形の場合、少なくとも１つの不活性な医薬上許容される賦形剤または担体、例えばクエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、および／またはａ）充填剤または増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸；ｂ）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギナート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアカシア；ｃ）湿潤剤、例えばグリセロール；ｄ）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のシリカートおよび炭酸ナトリウム；ｅ）溶解遅延剤、例えばパラフィン；ｆ）吸収促進剤、例えば第四級アンモニウム化合物；ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアラート；ｈ）吸収剤、例えばカオリンおよびベントナイトクレー；およびｉ）滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物と、該活性化合物とを混合することが可能である。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、該剤形は緩衝剤をも含みうる。
【００９４】
また、ラクトースまたは乳糖、および高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用して、軟および硬充填ゼラチンカプセル中の充填剤として、同様のタイプの固体組成物が使用されうる。
【００９５】
錠剤、糖剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固体剤形は、コーティングおよび外皮（例えば、腸溶性コーティングおよび医薬製剤化の技術分野でよく知られている他のコーティング）を施して製造されうる。それらは、場合により、混濁化剤を含有することが可能であり、専ら又は優先的に腸管の或る部分において、場合によっては遅延様態で、有効成分を放出するような組成物の剤形でありうる。使用されうる包埋組成物の例には、高分子物質およびロウが含まれる。
【００９６】
また、該活性化合物は、適当な場合には、前記の担体の１以上を含有するマイクロカプセル形態でありうる。
【００９７】
経口投与用の液体剤形には、医薬上許容される乳剤、溶液（水剤）、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。該液体剤形は、該活性化合物の他に、当技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、アメリカホドイモ油、トウモロコシ油、胚油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含有しうる。
【００９８】
該経口組成物は、不活性希釈剤の他に、補助物質、例えば湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤および香料を含みうる。
【００９９】
直腸または膣への投与のための組成物は、好ましくは、室温では固体であるが体温では液体であるため直腸または膣腔内で溶融し該活性化合物を放出する適当な無刺激性の賦形剤または担体、例えばカカオ脂、ポリエチレングリコールまたは坐剤用ロウと本発明の化合物とを混合することにより製造されうる坐剤である。
【０１００】
また、本発明の化合物は、リポソームの形態で投与されうる。当技術分野においては公知のとおり、リポソームは、一般に、リン脂質または他の脂質物質に由来する。リポソームは、水性媒体中に分散した単膜または多重膜の水和化液体結晶により形成される。リポソームを形成しうる生理的に許容される代謝可能な任意の無毒性脂質が使用されうる。リポソーム形態の本組成物は、本発明の化合物の他に、安定化剤、保存剤、賦形剤などを含有しうる。好ましい脂質としては、別々に又は一緒に使用される天然および合成リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）が挙げられる。リポソームを形成させるための方法は、当技術分野で公知である。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ編，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ＸＩＶ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，（１９７６），ｐ３３以下を参照されたい。そのような組成物は物理的状態、溶解度、安定性、インビボ放出速度およびインビボクリアランス速度に影響を及ぼす。
【０１０１】
本発明の１つの方法においては、医薬組成物は制御放出（コントロールリリース）系において運搬されうる。例えば、該物質は、静脈内注入、移植可能な浸透ポンプ、経皮パッチ、リポソームまたは他の投与方法を用いて投与されうる。１つの実施形態においては、ポンプが使用されうる（Ｌａｎｇｅｒ，前掲；Ｓｅｆｔｏｎ，  ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１（１９８７）；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７（１９８０）；Ｓａｕｄｅｋら，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４（１９８９）を参照されたい）。もう１つの実施形態においては、高分子材料が使用されうる。更にもう１つの実施形態においては、制御放出系は治療標的、例えば肝臓に接近して配置可能であり、これにより、全身用量の一部のみで十分となる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，前掲，ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）を参照されたい）。他の制御放出系はＬａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）による総説において考察されている。
【０１０２】
もう１つの態様においては、本発明は、本発明の化合物の有効量を対象に投与することを含む、対象における疾患または状態の治療方法に関する。
【０１０３】
一般に、本発明はいずれの特定の疾患または状態の治療にも限定されず、本発明の化合物によってメカニズムが影響を受けうる任意の疾患または状態の治療を含む。
【０１０４】
代表的実施形態
パクリタキセル−ＣＬＲ１４０４コンジュゲート
本発明の１つの実施形態においては、治療用化合物は、ジカルボン酸リンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたパクリタキセルであり、該ジカルボン酸リンカーはアミド結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、および２’−ＯＨ基におけるエステル結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１０５】
【化１６】
2017535608.tif 000019
【０１０６】
本発明の好ましい実施形態においては、治療用化合物は、グルタラミン酸リンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたパクリタキセルであり、該グルタラミン酸リンカーはアミド結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、および２’−ＯＨ基におけるエステル結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１０７】
【化１７】
2017535608.tif 000020
ＣＬＲ１６０１コンジュゲート
【０１０８】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、ジカルボン酸リンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたパクリタキセルであり、該ジカルボン酸リンカーはアミド結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、および７−ＯＨ基におけるエステル結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１０９】
【化１８】
2017535608.tif 000021
【０１１０】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、カルバミン酸リンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたパクリタキセルであり、該カルバミン酸リンカーはアミド結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、および７−ＯＨ基におけるエステル結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１１１】
【化１９】
2017535608.tif 000022
ＣＬＲ１６０２コンジュゲート
【０１１２】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、カルボニック−カルボン酸リンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたパクリタキセルであり、該カルボニック−カルボン酸リンカーはアミド結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、および７−ＯＨ基におけるエステル結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１１３】
【化２０】
2017535608.tif 000023
ＣＬＲ１６０３コンジュゲート
【０１１４】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、ジカルボン酸リンカーにより２つのＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたパクリタキセルであり、該ジカルボン酸リンカーはアミド結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、ならびに２’−ＯＨ基および７−ＯＨ基の両方におけるエステル結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１１５】
【化２１】
2017535608.tif 000024
【０１１６】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、ジカルボン酸リンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたパクリタキセルであり、該ジカルボン酸リンカーはアミド結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、および２’−ＯＨ基におけるカルボナートまたはカルバマート結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１１７】
【化２２】
2017535608.tif 000025
【０１１８】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、ジカルボン酸リンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたパクリタキセルであり、該ジカルボン酸リンカーはアミド結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、および７−ＯＨ基におけるカルボナートまたはカルバマート結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１１９】
【化２３】
2017535608.tif 000026
【０１２０】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、ジカルボン酸リンカーにより２つのＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたパクリタキセルであり、該ジカルボン酸リンカーはアミド結合を介して２つのＣＬＲ１４０４コア分子に、ならびに２’−ＯＨ基および７−ＯＨ基の両方におけるカルボナートまたはカルバマート結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１２１】
【化２４】
2017535608.tif 000027
【０１２２】
本発明の１つの実施形態においては、治療用化合物は、カルボン酸リンカーによりＣ１８アルキルホスホコリン化合物に連結されたパクリタキセルであり、該カルボン酸リンカーはアミドまたはカルボナート結合を介してＣ１８アルキルホスホコリン化合物に、および２’−ＯＨ基におけるカルボナートまたはカルバマート結合を介してパクリタキセルに結合している。
【０１２３】
【化２５】
2017535608.tif 000028
【０１２４】
イリノテカン−ＣＬＲ１４０４コンジュゲート
本発明の１つの実施形態においては、治療用化合物は、ジカルボン酸リンカーによりＣＬＲ１４０４化合物に連結されたイリノテカンであり、該ジカルボン酸リンカーはカルボナートまたはカルバマート結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、およびエステル結合を介してイリノテカンに結合している。
【０１２５】
【化２６】
2017535608.tif 000029
【０１２６】
イリノテカン−Ｃ１８アルキルホスホコリンコンジュゲート
本発明の１つの実施形態においては、治療用化合物は、カルボニルリンカーによりＣ１８アルキルホスホコリン化合物に連結されたイリノテカンであり、該カルボニルリンカーは炭素−炭素結合を介してＣ１８アルキルホスホコリン化合物に、およびエステル結合を介してイリノテカンに結合している。
【０１２７】
【化２７】
2017535608.tif 000030
【０１２８】
トポテカン−ＣＬＲ１４０４コンジュゲート
本発明の１つの実施形態においては、治療用化合物は、非加水分解性フェニルエーテルによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたトポテカンである。
【０１２９】
【化２８】
2017535608.tif 000031
【０１３０】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、ジカルボン酸リンカーによりＣＬＲ１４０４化合物に連結されたトポテカンであり、該ジカルボン酸リンカーはカルボナートまたはカルバマート結合を介してＣＬＲ１４０４化合物に、およびエステル結合を介してトポテカンに結合している。
【０１３１】
【化２９】
2017535608.tif 000032
【０１３２】
ゲムシタビン−Ｃ１８アルキルホスホコリンコンジュゲート
本発明の１つの実施形態においては、治療用化合物は、カルボニルリンカーにより２つのＣ１８アルキルホスホコリン化合物に連結されたゲムシタビンであり、該カルボニルリンカーは炭素−炭素結合を介してＣ１８アルキルホスホコリン化合物に、およびエステル結合を介してゲムシタビンに結合している。
【０１３３】
【化３０】
2017535608.tif 000033
【０１３４】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、カルボニルリンカーによりＣ１８アルキルホスホコリン化合物に連結されたゲムシタビンであり、該カルボニルリンカーは炭素−炭素結合を介してＣ１８アルキルホスホコリン化合物に、およびエステル結合を介してゲムシタビンに結合している。
【０１３５】
【化３１】
2017535608.tif 000034
【０１３６】
シスプラチン−ＣＬＲ１４０４コアコンジュゲート
本発明の１つの実施形態においては、治療用化合物は、ＣＬＲ１４０４コア化合物に直接連結されたシスプラチンである。
【０１３７】
【化３２】
2017535608.tif 000035
【０１３８】
ゲルダナマイシン−ＣＬＲ１４０４コンジュゲート
本発明の１つの実施形態においては、治療用化合物は、ＣＬＲ１４０４コア化合物に直接連結されたゲルダナマイシンである。
【０１３９】
【化３３】
2017535608.tif 000036
【０１４０】
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、短いアミノ酸リンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたゲルダナマイシンであり、該アミノ酸リンカーはカルボナートまたはカルバマート結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、およびアミド結合を介してゲルダナマイシンに結合している。
【０１４１】
【化３４】
2017535608.tif 000037
【０１４２】
本発明の好ましい実施形態においては、治療用化合物は、アミノブチルアミドリンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたゲルダナマイシンであり、該アミノブチルアミドリンカーはカルバマート結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、およびアミド結合を介してゲルダナマイシンに結合している。
【０１４３】
【化３５】
2017535608.tif 000038
ＣＬＲ１６０６コンジュゲートおよび
【０１４４】
【化３６】
2017535608.tif 000039
ＣＬＲ１６０７コンジュゲート。
【０１４５】
メルタンシン−ＣＬＲ１４０４コンジュゲート
本発明のもう１つの実施形態においては、治療用化合物は、マレイミドリンカーによりＣＬＲ１４０４コア化合物に連結されたメルタンシンであり、該マレイミドリンカーはアミド結合を介してＣＬＲ１４０４コア化合物に、および炭素−硫黄結合を介してメルタンシンに結合している。
【０１４６】
【化３７】
2017535608.tif 000040
ＣＬＲ１６０８コンジュゲート。
【０１４７】
全ての代表的実施形態に関して、ｎは２から６の整数であり、ＸはＯまたはＮＨである。
【実施例】
【０１４８】
実施例１−コンジュゲートの合成
【０１４９】
【化３８】
2017535608.tif 000041
【０１５０】
Ｉ．ＣＬＲ１６０１の合成
Ａ．ＣＬＲ１４０１アジドの合成
１８−（ｐ−ヨードフェニル）オクタデシルホスホコリン（４．０１ｇ，６．３ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（８１８ｍｇ，１２．６ｍｍｏｌ）およびアスコルビン酸ナトリウム（１４０ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）を反応容器内の脱気エタノール（２８ｍｌ）および水（１２ｍｌ）の混合物に溶解した。ヨウ化銅（Ｉ）（１２０ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（０．１ｍｌ，０．９４ｍｍｏｌ）を反応混合物に加えた。反応容器を密閉し、混合物を８０℃で４５分間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、水（６０ｍｌ）を加え、混合物を空気に開放し、３０分間撹拌した。混合物を分液漏斗に移し、クロロホルム（８０ｍｌ）およびメタノール（５２ｍｌ）を加え、振とうにより抽出を行った。クロロホルム層を除去し、抽出を繰返した（２×８０ｍＬのクロロホルム）。合わせたクロロホルム抽出物を０．０１Ｎ  ＨＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。残留物をクロロホルム（４ｍｌ）に溶解し、アセトン（１７０ｍｌ）を撹拌しながらゆっくりと加えた。混合物を３０分間撹拌し、濾過した。生成物をフィルター上でアセトンで濯ぎ、高真空下で乾燥させて、３．３１ｇ（９５％）の１８−（ｐ−アジドフェニル）オクタデシルホスホコリンを得た。
【０１５１】
Ｂ．ＣＬＲ１４０１アミンの合成
１８−（ｐ−アジドフェニル）オクタデシルホスホコリン（３．１１６ｇ）をパール（Ｐａｒｒ）圧力ボトルに入れ、メタノール（３０ｍｌ）および触媒の１０％  Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）を加えた。水素化反応を２４時間、振とうしながら水素圧（５５ｐｓｉ）下で行った。ボトルを減圧し、クロロホルムおよびメタノールを加えて、幾らかの沈殿反応生成物を溶解し、混合物を濾過して触媒を除去した。濾液を蒸発乾固し、残留物を加温クロロホルム−メタノール（１：１）混合物（１０ｍｌ）に溶解した。加熱アセトン（１５０ｍｌ）を撹拌しながらゆっくりと加え、混合物を撹拌しながら室温に冷却し、濾過した。生成物をフィルター上でアセトンで濯ぎ、高真空下で乾燥させた。１８−（ｐ−アミノフェニル）オクタデシルホスホコリンの収量：２．５９７ｇ（８７％）。
【０１５２】
Ｃ．パクリタキセル−２’−ヘミグルタラートの合成
パクリタキセル（４０４ｍｇ，０．４３７ｍｍｏｌ）およびグルタル酸無水物（６７ｍｇ，０．５８８ｍｍｏｌ）をクロロホルム（８ｍｌ）に溶解し、ピリジン（０．５ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、蒸発乾固した。残留物を高真空下で１．５時間維持して、残留ピリジンを除去した。粗生成物を、クロロホルム−メタノール（９８：２から９５：５の勾配）中のシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、４５２ｍｇ（９９％）のパクリタキセル−２’−ヘミグルタラートを得た。
【０１５３】
Ｄ．ＣＬＲ１６０１の合成
パクリタキセル−２’−ヘミグルタラート（９４７ｍｇ，０．９７８ｍｍｏｌ）および１８−（ｐ−アミノフェニル）オクタデシルホスホコリン（４９２ｍｇ，０．９３４ｍｍｏｌ）をクロロホルム（４０ｍｌ）およびイソプロパノール（１．２ｍｌ）混合物に懸濁させた。この懸濁液に、トリエチルアミン（０．２７ｍｌ，１．９５７ｍｍｏｌ）およびＣＯＭＵ（４１９ｍｇ，０．９７８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌し、その時点までに、それは透明で均質になった。反応混合物を分離漏斗に移し、クロロホルム（４０ｍｌ）、メタノール（８０ｍｌ）および冷水（７２ｍｌ）と混合した。クロロホルム層を除去し、抽出を繰返した（２×８０ｍｌのクロロホルム）で繰り返した。合わせたクロロホルム抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。残った残留物を、クロロホルム−メタノール（９：１から５：５の勾配）を使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーおよびそれに続くクロロホルム−メタノール（６５：２５：４）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発後、生成物を高真空下で乾燥させて、１．１６７ｇ（８５％）のＣＬＲ１６０１を得た。
【０１５４】
ＩＩ．ＣＬＲ１６０２の合成
【０１５５】
【化３９】
2017535608.tif 000042
【０１５６】
Ａ．１８−［ｐ−（４−Ｎ−ＢＯＣ−アミノブチルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリンの合成
１８−（ｐ−アミノフェニル）オクタデシルホスホコリン（７６ｍｇ，０．１４４ｍｍｏｌ）および４−Ｎ−ＢＯＣ−アミノ酪酸（３８ｍｇ，０．１８８ｍｍｏｌ）をクロロホルム（５ｍｌ）およびイソプロパノール（０．１５ｍｌ）に懸濁させ、ついでトリエチルアミン（０．０５ｍｌ，０．３８ｍｍｏｌ）を加え、ついでＣＯＭＵ（８０ｍｇ、０．１８８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間攪拌し、２ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。クエンチした反応混合物を分離漏斗に移し、クロロホルム（３６ｍｌ）、メタノール（４０ｍｌ）および冷水（３６ｍｌ）と混合した。クロロホルム層を除去し、抽出を繰返した（２×４０ｍｌのクロロホルム）。合わせたクロロホルム抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。残留物を、クロロホルム−メタノール（９：１から５：５の勾配）を使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーおよびそれに続くクロロホルム−メタノール−水（６５：２５：４）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発後、生成物を加温クロロホルム−メタノール混合物（１．５ｍｌ）に溶解し、アセトンで沈殿させた。生成物を濾過により集め、高真空下で乾燥させて白色粉末（１００ｍｇ，９７％）を得た。
【０１５７】
Ｂ．１８−［ｐ−（４−アミノブチルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリンの合成
１８−［（４−Ｎ−ＢＯＣ−アミノブチルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリン（９８ｍｇ，０．１３８ｍｍｏｌ）をクロロホルム（４ｍｌ）、メタノール（２ｍｌ）および濃ＨＣｌ（０．２ｍｌ）の混合物に溶解した。反応混合物を室温で一晩撹拌し、ついで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３ｍｌ）のゆっくりした添加によりクエンチした。クエンチした反応混合物を分離漏斗に移し、クロロホルム（４０ｍｌ）、メタノール（４０ｍｌ）および冷水（３６ｍｌ）と混合した。クロロホルム層を除去し、抽出を繰返した（２×４０ｍｌのクロロホルム）。合わせたクロロホルム抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。生成物を、クロロホルム−メタノール（１００：６５）を使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーおよびそれに続くクロロホルム−メタノール−濃ＮＨ４ＯＨ（水性）（１００：６５：１５）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発後、生成物を高真空下で乾燥させて５０ｍｇ（６０％）の１８−［ｐ−（４−アミノブチルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリンを得た。
【０１５８】
Ｃ．７−（ｐ−ニトロフェニルカルボナート）パクリタキセルの合成
パクリタキセル（１００ｍｇ，０．１１７ｍｍｏｌ）をクロロホルム（４．５ｍｌ）に溶解し、８滴のピリジンを加え、溶液を氷浴内で冷却した。固体ｐ−ニトロフェニルクロロホルマート（２００ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を一度に加えた。反応混合物を室温に加温し、２４時間撹拌し、ついで水（１ｍｌ）でクエンチし、１５分間撹拌した。混合物をクロロホルムで抽出し、抽出物を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗製ビス−２’，７−（ｐ−ニトロフェニルカルボナート）パクリタキセルをクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラム上にローディングした。粗生成物をカラム内に７２時間残して、２’位におけるｐ−ニトロフェニルカルボナートの加水分解を完了させた。カラムをジクロロメタン−酢酸エチル（９８：２から９０：１０の勾配）で溶出した。溶媒の蒸発後、生成物をヘキサンで沈殿させ、高真空下で乾燥させて、６３ｍｇ（５３％）の７−（ｐ−ニトロフェニルカルボナート）パクリタキセルを得た。Ａｒｐｉｃｃｏ  Ｓ．ら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ，２０１３，４５４，６５３−６５９を参照されたい。
【０１５９】
Ｄ．ＣＬＲ１６０２の合成
７−（ｐ−ニトロフェニルカルボナート）パクリタキセル（５３ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）および１８−［ｐ−（４−アミノブチルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリン（４７ｍｇ，０．０７７ｍｍｏｌ）をクロロホルム（２ｍｌ）およびピリジン（０．５ｍｌ）に懸濁させ、４０℃で５時間撹拌した。反応混合物を蒸発乾固し、残留物を、クロロホルム−メタノール（９：１から５：５の勾配）を使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーおよびそれに続くクロロホルム−メタノール−水（６５：２５：４）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発後、化合物を高真空下で乾燥させて６７ｍｇ（８６％）の固体ＣＬＲ１６０２を得た。
【０１６０】
ＩＩＩ．ＣＬＲ１６０３の合成
【０１６１】
【化４０】
2017535608.tif 000043
2017535608.tif 000044
【０１６２】
Ａ．１８−［ｐ−（５−ベンジルオキシ−バレルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリン
１８−（ｐ−アミノフェニル）オクタデシルホスホコリン（７６０ｍｇ，１．４４３ｍｍｏｌ）および５−ベンジルオキシ吉草酸（３６１ｍｇ，１．７３２ｍｍｏｌ；Ｃａｎ  Ｊ  Ｃｈｅｍ，１９９２，７０，１４７２−１４４５およびＯｒｇ  Ｌｅｔｔ，２０１４，１６，５１６−５１９に従い合成）をクロロホルム（２５ｍｌ）に懸濁させ、トリエチルアミン（０．３ｍｌ，２．１６４ｍｍｏｌ）を加え、ついで固体ＣＯＭＵ（７４１ｍｇ，１．７３２ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、完了後、それを分液漏斗内に移し、クロロホルム（５４ｍｌ）、メタノール（８０ｍｌ）および冷水（７２ｍｌ）と混合した。クロロホルム層を除去し、抽出を繰返した（２×８０ｍｌのクロロホルム）。合わせたクロロホルム抽出物を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。残留物を、クロロホルム−メタノール（９：１から５：５の勾配）を使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーおよびそれに続くクロロホルム−メタノール−水（６５：２５：３）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発および高真空下の乾燥の後、生成物を加温クロロホルム−メタノール混合物（３ｍｌ）に溶解し、加熱アセトン（７５ｍｌ）を、撹拌しながらゆっくり加えた。混合物を、撹拌しながら室温に冷却し、濾過した。集めた生成物を高真空下で乾燥させて、１８−［ｐ−（５−ベンジルオキシ−バレルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリン（８８７ｍｇ，８６％）を白色粉末として得た。
【０１６３】
Ｂ．１８−［ｐ−（ヒドロキシ−バレルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリンの合成
１８−［ｐ−（５−ベンジルオキシ−バレルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリン（８６８ｇ）をメタノール（１５ｍｌ）に溶解し、パール（Ｐａｒｒ）圧力ボトル内に移し、１０％  Ｐｄ／Ｃ（７５ｍｇ）触媒を加えた。水素化反応を２４時間、振とうしながら水素圧（５５ｐｓｉ）下で行った。ボトルを減圧し、混合物を濾過して触媒を除去した。濾液を蒸発乾固し、残留物を加温クロロホルム−メタノール混合物（３〜４ｍｌ）に溶解した。加熱アセトン（７５ｍｌ）を、攪拌しながらゆっくりと加えた。混合物を、撹拌しながら室温に冷却し、濾過した。集めた生成物を高真空下で乾燥させて、１８−［ｐ−（５−ヒドロキシ−バレルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリン（７１８ｍｇ，９５％）を白色粉末として得た。
【０１６４】
Ｃ．１８−［ｐ−（５−（ｐ−ニトロ−フェノキシカルボニルオキシ）バレルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリンの合成
１８−［ｐ−（５−ヒドロキシ−バレルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリン（４０ｍｇ，０．０６４ｍｍｏｌ）およびｐ−ニトロフェニルクロロホルマート（２５ｍｇ，０．１２４ｍｍｏｌ）をクロロホルム（３ｍｌ）に懸濁させ、ピリジン（０．２ｍｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ｐ−ニトロフェニルクロロホルマート（１５ｍｇ）を追加分を加え、撹拌を更に１．５時間継続した。ＴＬＣ分析によると反応は完了していた。反応混合物を１ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌでクエンチし、クロロホルム（２０ｍｌ）、メタノール（２０ｍｌ）および冷水（１５ｍｌ）で分液漏斗内に移した。抽出を繰返した（３×２０ｍｌのクロロホルム）。合わせたクロロホルム抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。残留物を、クロロホルム−メタノール（９：１から５：５の勾配）を使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーおよびそれに続くクロロホルム−メタノール−水（６５：２５：４）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発およびアセトンでの沈殿の後、残留物を高真空下で乾燥させて、４８ｍｇ（９５％）の固体物質を得た。
【０１６５】
Ｄ．ＣＬＲ１６０３の合成
パクリタキセル（４６ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ）および１８−［ｐ−（５−（ｐ−ニトロ−フェノキシカルボニルオキシ）バレルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリン（４３ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ）を反応バイアル内のクロロホルム（２ｍｌ）およびピリジン（０．５ｍｌ）に懸濁させた。ＤＭＡＰ（８ｍｇ，０．０６５ｍｍｏｌ）を加え、バイアルを密閉し、内容物を６０℃で４８時間攪拌した。パクリタキセルの追加量（２０ｍｇ）を加え、反応物を６０℃で更に４８時間継続した。反応混合物を濃縮し、残留物を、クロロホルム−メタノール（９：１から５：５の勾配）を使用するシリカゲルクロマトグラフィーおよびそれに続くクロロホルム−メタノール−水（６５：２５：２）および（６５：２５：４）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発および高真空下の乾燥はＣＬＲ１６０３（５０ｍｇ，６２％）を与えた。
【０１６６】
ＩＶ．ＣＬＲ１６０７の合成
【０１６７】
【化４１】
2017535608.tif 000045
【０１６８】
ゲルダナマイシン（１１１ｍｇ，０．１９８ｍｍｏｌ）および１８−［ｐ−（４−アミノブチルアミド）フェニル］オクタデシルホスホコリン（１１０ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）をクロロホルム（３．５ｍｌ）およびメタノール（１ｍｌ）に溶解した。トリエチルアミンの１滴を加え、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ＴＬＣは反応の約８０％の完了を示した。追加のゲルダナマイシン（１０ｍｇ）を加え、撹拌を更に２４時間継続した。反応混合物を濃縮し、残留物を、クロロホルム−メタノールを使用するシリカゲルクロマトグラフィー（９：１から５：５の勾配）およびそれに続くクロロホルム−メタノール−水（６５：２５：２）、（６５：２５：３）および（６５：２５：４）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発および高真空下の乾燥の後、アセトンを加え、混合物を蒸発させた。ＣＬＲ１６０７を紫色固体（１７４ｍｇ，８５％）として得た。
【０１６９】
各単離生成物の同一性を１Ｈ−ＮＭＲおよび質量スペクトル分析により確認した。
【０１７０】
実施例２から８は、ＣＬＲ１４０４および関連分子が種々の癌型により捕捉され保持されうる一方で、同時に健常組織からは排除されうることを示している。
【０１７１】
Ｖ．ＣＬＲ１６０８の合成
【０１７２】
【化４２】
2017535608.tif 000046
【０１７３】
Ａ．ＣＬＲ１４０１マレアミン酸の合成
ＣＬＲ１４０１アミン（３００ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）を９０℃でＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１２ｍｌ）に溶解し、無水マレイン酸（６１ｍｇ，０．６２７ｍｍｏｌ）を一度に添加した。反応混合物を９０℃で１時間撹拌し、室温に冷却し、２４時間撹拌した。アセトン（２５ｍｌ）を、撹拌しながらゆっくりと加え、混合物を室温で１時間撹拌した。沈殿した生成物を濾過し、フィルター上でアセトンで濯ぎ、ついで高真空下で乾燥させた。収量：３２７ｍｇ（９２％）。
【０１７４】
Ｂ．ＣＬＲ１４０１マレイミドの合成
ＣＬＲ１４０１マレアミン酸（１００ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）をエタノール非含有クロロホルム（５ｍｌ）に懸濁させ、トリエチルアミン（０．０５ｍｌ，０．３５２ｍｍｏｌ）およびＣＯＭＵ（７５ｍｇ，０．１７６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２４時間撹拌し、ついで分離漏斗に移し、クロロホルム（４０ｍｌ）、メタノール（４０ｍｌ）および冷水（３６ｍｌ）と混合した。クロロホルム層を除去し、抽出を繰返した（２×４０ｍｌのクロロホルム）。合わせたクロロホルム抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。残った残留物を、クロロホルム−メタノール（９：１から５：５の勾配）を使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーおよびそれに続くクロロホルム−メタノール−水（６５：２５：４）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発後、生成物をアセトンで沈殿させ、集め、高真空下で乾燥させて、８７ｍｇ（９０％）のＣＬＲ１４０１マレイミドを得た。
【０１７５】
Ｃ．ＣＬＲ１６０８の合成
ＣＬＲ１４０１マレイミド（４０ｍｇ，０．０６６ｍｍｏｌ）およびメルタンシン（５３ｍｇ，０．０７２ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１．７ｍｌ）とメタノール（０．４ｍｌ）との混合物に溶解した。トリエチルアミン（０．０８ｍｌ）を加え、混合物を３７℃で２４時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、残留物を、クロロホルム−メタノール（９：１から５：５の勾配）を使用するシリカゲル上のクロマトグラフィーおよびそれに続くクロロホルム−メタノール−水（６５：２５：３）での最終溶出により精製した。溶媒の蒸発後、生成物を高真空下で乾燥させて、６２ｍｇ（７０％）のＣＬＲ１６０８を得た。
【０１７６】
実施例２−ＣＬＲ１５０１は脂質ラフトを介して癌細胞によって優先的に捕捉される
材料および方法：
ＰＣ−３細胞を２μｇ／ｍｌ  フィリピンＩＩＩまたはビヒクルで１５分間、前処理し、ついで洗浄し、２μＣｉの１２５Ｉ−ＣＬＲ１４０４と共に１時間インキュベートした。培地を除去し、細胞を、０．１％  ウシ血清アルブミンを含有するリン酸緩衝食塩水で洗浄し、トリプシン処理し、ついで２つのサンプルに分割し、ＤＮＡ含量（細胞系特異的標準曲線と比較した場合のＡ２８０）およびガンマカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を使用する計数毎分の測定により細胞数を決定した。
【０１７７】
結果：
コレステロールを捕捉し脂質ラフトを破壊する物質であるフィリピンＩＩＩでのＰＣ−３細胞の前処理は、未処理対照細胞と比較して約４０％低い、１２５Ｉ−ＣＬＲ１４０４の取り込みをもたらした（図１）。これは、ＣＬＲ１４０４が癌細胞内への進入口として脂質ラフトを用いるという仮説を支持している。注目すべきことには、より高いフィリピンＩＩＩ濃度は細胞毒性であり、したがって、完全な脂質ラフト除去（そしておそらくはＣＬＲ１４０４類似体の取り込みの完全な抑制）を実証することはできなかった。
【０１７８】
実施例３−健常細胞と比較した場合の癌細胞によるＣＬＲ−１５０１の優先的取り込み
材料および方法：
ヒト癌細胞系をＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から購入した。それらは以下のものを包含していた：Ｃａｋｉ−２（腎臓；明細胞癌）、ＨＣＴ−１１６（結腸直腸癌）；ＭＥＳ−ＳＡ／Ｄｘ５（子宮肉腫）［全ては、１０％  ウシ胎児血清（ＦＢＳ）で補足されたＭｃＣｏｙ  ５ａ培地内で維持される］、Ｏｖｃａｒ−３（卵巣腺癌）［２０％  ＦＢＳで補足されたＲＰＭＩ培地で維持される］、Ｕ８７−ＭＧ（グリオーマ）［１０％  ＦＢＳで補足された最少必須培地内で維持される］、Ｍｉａ  Ｐａｃａ−２（膵臓癌）（１０％  ＦＢＳで補足されたダルベッコ改変イーグル培地内で維持される）、ＰＣ−３（前立腺癌）（１０％  ＦＢＳで補足されたＦ−１２Ｋ培地内で維持される）、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１（三重陰性乳腺腺癌）（１０％  ＦＢＳで補足されたリーボビッツ培地内で維持される）、およびＡ５４９（非小細胞肺癌）（１０％  ＦＢＳで補足されたＦ−１２培地内で維持される）。正常ヒト皮膚線維芽細胞をＡＴＣＣから購入し、無血清キット（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｋｉｔ−Ｓｅｒｕｍ−Ｆｒｅｅ  ＰＣＳ−２０１−０４０）で補足された線維芽細胞基礎培地ＰＣＳ−２０１−０３０内で増殖させた。全ての培地（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞系以外）はペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）をも含有し、空気中、５％  ＣＯ２で３７℃で維持した。
【０１７９】
全ての細胞を、５％  ＣＯ２および１０％  ＦＢＳで補足された適当な培地内で３７℃で維持した。イメージング前に、細胞を、０．２５％  トリプシンを使用してフラスコから取り出し、マイクロスライドＶＩ（Ｉｂｉｄｉ）上で一晩増殖させた。翌日、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、適当な無血清培地内で５または７．５μＭ（示されているとおり）のＣＬＲ１５０１と共に２４時間インキュベートした。ＣＬＲ１５０１は蛍光標識ＣＬＲ１４０４類似体である。ＣＬＲ１５０１を０．４％  ポリソルベート２０、２％  エタノールおよび食塩水と共に製剤化した。ＰＢＳで十分に洗浄した後、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｒａｄｉａｎｃｅ  ２１００  ＭＰ  Ｒａｉｎｂｏｗレーザ走査／多光子共焦点顕微鏡を使用して、１秒の露光時間を用いて、細胞をイメージングした。あるいは、Ｎｉｋｏｎ  Ａ１Ｒ共焦点顕微鏡（Ｋｅｃｋ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ−Ｍａｄｉｓｏｎ）を使用して、細胞を可視化した。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８フィルター（励起／発光  ４８０／５２０ｎｍ）を使用して、ＣＬＲ１５０１の発光シグナルを検出した。
【０１８０】
異なる５つの癌細胞系（腎臓、卵巣、膵臓、黒色腫および前立腺）および正常ヒト皮膚線維芽細胞系にインビトロでＣＬＲ１５０１を投与した。２４時間後、ＣＬＲ１５０１は、これらの癌細胞系においては、正常線維芽細胞と比較して５から９倍の優先的取り込みをインビトロで示した（図２）。保持されたＣＬＲ１５０１は細胞膜およびオルガネラ膜に結合している。
【０１８１】
実施例４−ラットグリオーマモデル
材料および方法：
全ての動物を、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ  Ｃｅｎｔｅｒガイドラインに従い収容し、取り扱った。ラットＣ６グリオーマ細胞を、１０％  熱不活性化ＦＢＳ（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、１００Ｕ／ｍｌ  ペニシリンＧ、１００ｍｇ／ｍｌ  ストレプトマイシンおよび０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）で補足されたＤＭＥＭ培地（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）内で増殖させた。既に記載されているとおりに（Ｃｏｈｅｎ  ＪＤら，Ｉｎｔｒａｃｒａｎｉａｌ  Ｃ６  ｇｌｉｏｍａ  ｍｏｄｅｌ  ｉｎ  ａｄｕｌｔ  Ｗｉｓｔａｒ−Ｆｕｒｔｈ  ｒａｔｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏ  Ｏｎｃｏｌ  １９９０  ８（１）：９５−６）、頭蓋内腫瘍移植を行った。簡潔に説明すると、１×１０６個のＣ６細胞を５ｍｌの１．２％  メチルセルロースに再懸濁させ、麻酔された雌Ｗｉｓｔａｒラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）の前頭葉に注射した。疑似手術動物には、腫瘍細胞を含有しない同等体積のメチルセルロースの頭蓋内注射を行った。
【０１８２】
イメージング研究：
移植の１０日後、頭蓋内腫瘍の存在をＭＲＩにより確認した。簡潔に説明すると、麻酔されたラット（６匹）に２ｍｌのガドジアミド（Ｇａｄｏｄｉａｍｉｄｅ）（Ｇｄ，Ｏｍｎｉｓｃａｎ  ２８７ｍｇ／ｍｌ，Ｎｙｃｏｍｅｄ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を腹腔内投与し、１０分後、１．５テスラ臨床ＭＲシステム（ＧＥ  Ｓｉｇｎａ  ＬＸ）とＧＥフェーズドアレイ四肢コイルを使用して、該ラットをイメージングした。ＮＭ４０４注射のために種々の腫瘍サイズを有する腫瘍含有ラットおよび疑似手術ラットを選択するために、各ラットの脳全体をカバーするＴ１加重（ＴＲ＝５００ｍｓ、ＴＥ＝１６．５ｍｓ）マルチスライスシーケンスを調べた。
【０１８３】
ＮＭ４０４［１８−（４−ヨードフェニル）−オクタデシルホスホコリン］（１００ｍｇ）を、ピバル酸の溶融物におけるＮａ１２５Ｉとの同位体交換により１２５Ｉで放射性ヨウ素化した。Ｗｅｉｃｈｅｒｔら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｒａｄ  Ｉｓｏｔｏｐｅｓ．１９８６；３７：９０７−９１３。ＮＭ４０４は、それが１２４Ｉまたは１３１Ｉの代わりに１２５Ｉで放射性ヨウ素化されている以外はＣＬＲ１４０４と同じ化学構造を有する。ＨＰＬＣ精製後、ＮＭ４０４を２％  ポリソルベート２０水溶液に溶解した後、４匹の腫瘍含有ラットおよび３匹の疑似手術ラットに尾静脈内注射（５〜２０μＣｉ／２００ｇ  ラット）した。ＮＭ４０４注射後の第１日（ｎ＝１）、第２日（ｎ＝１）および第４日（ｎ＝２）に、動物を安楽死（ＣＯ２）させ、脳を摘出し、改変Ｂｉｏｓｃａｎ  ＡＲ２０００ラジオ−ＴＬＣスキャナー（１レーン当たり２分の収集で１ｍｍの増加および１ｍｍの高分解能コリメータ）でイメージングした。また、正常な脳、血液、腎臓、肝臓、脾臓、甲状腺および腫瘍組織を秤量し、放射能をガンマカウンターで計数した。ついで放射能の組織分布を脳組織学と相関させた。
【０１８４】
結果および考察：
ＮＭ４０４での初期イメージングの結果は直径３〜５ｍｍの範囲の全てのグリオーマにおける顕著な取り込みおよび持続的保持を示した。正常脳組織における放射能は疑似手術対照動物においては最小であり（図４Ａおよび４Ｂ）、一方、ＮＭ４０４はグリオーマにおいて強度に濃縮されていた。Ｃ６グリオーマ含有ラットにおける腫瘍対脳比（％注射用量／ｇ）は、２４、４８および９６時間において、それぞれ、１０．５、１２．２および６．７であった。これまでの細胞培養およびインビトロ動物モデル研究において観察されているとおり、ＮＭ４０１は代謝され、正常細胞からは排除されるらしいが、腫瘍細胞膜において代謝的に捕捉される。他の腫瘍モデルにおけるこれまでのオートラジオグラフィー実験は、正常組織または壊死組織ではなく生存可能な腫瘍細胞のみがＮＭ４０４を蓄積しうることを示唆している。興味深いことに、数ｍｍの直径を有する小さな腫瘍でさえもＮＭ４０４投与後に検出された。これらの予備的知見は、ＣＬＲ１４０４が小さな浸潤性腫瘍病巣の可視化にも有用でありうることを示唆している。
【０１８５】
結論：
これまで調べられた全ての腫瘍モデルの場合と同様に、ＮＭ４０４は、この研究において評価されたＣ６−グリオーマによる選択的かつ持続的な保持を示した。
【０１８６】
実施例５  −  種々の悪性腫瘍における１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４の取り込み
材料および方法：
全ての記載されている動物研究は、施設内動物管理使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された動物プロトコルに従い行った。約４から５週齢で１６から１８ｇ（ｎ＝６）の雌無胸腺ヌードマウス（Ｈｓｄ：Ａｔｈｙｍｉｃ  Ｎｕｄｅ−Ｆｏｘｎ１ｎｕまたはＣｒｌ：ＮＵ−Ｆｏｘｎ１ｎｕ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）をヒト腫瘍異種移植研究に使用した。マウスをイソフランで麻酔し、１００μｌのダルベッコＰＢＳ（または、グリオーマ細胞の場合には、５０ｍｌのＰＢＳ）中の生存可能な腫瘍細胞を該マウスの右脇腹に皮下注射した。接種物のサイズは１×１０６（腎臓、卵巣、グリオーマ、膵臓、前立腺およびＮＳＣＬＣモデルの場合）、２×１０６（結腸直腸および子宮モデルの場合）または３×１０６（乳房）であった。
【０１８７】
結果：
６０個の異なる自然発生、トランスジェニック、ヒトおよびげっ歯類悪性細胞系および腫瘍型の皮下および同所性異種移植片において放射性ヨウ素化１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４を試験した。静脈内投与後、１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４は、解剖学的位置には無関係にほとんど全ての原発性および転移性悪性腫瘍に局在していた。代表例はヒト（図５Ａ〜５Ｉ）およびげっ歯類（図５Ｊ〜Ｍ）の両方の腫瘍のものである。
【０１８８】
【表１】
2017535608.tif 000047
2017535608.tif 000048
【０１８９】
実施例６−ＣＬＲ１４０４を使用して非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）を有する患者を評価する臨床試験
ＣＬＲ１４０４は５５／６０個の異種移植片および自然発生げっ歯類モデルにおいては選択的かつ持続的な腫瘍保持を示しているが、それがヒトにおいて類似した腫瘍取り込みおよび保持特性を示すか否かを判定するために、医師支援ＩＮＤがステージ４のヒトＮＳＣＬＣ患者における該物質の臨床評価を開始した。現在ｍでに、進行ＮＳＣＬＣを有する２名の患者を１ｍＣｉ未満の１３１Ｉ−ＣＬＲ１４０４の注射の後でイメージングした。血液および尿サンプルを所定時に集め、ガンマイメージングを投与後の幾つかの時点で行った。図６において見られるとおり、どちらの患者においても、ＣＬＲ１４０４の有意な腫瘍取り込みおよび保持が原発性肺腫瘍において示された。その第１世代の先行体であるＮＭ３２４で既に見出されている高い肝臓取り込み値と比較して、ＣＬＲ１４０４では肝臓および腹部活性が遥かに低く、このことは、膵臓、結腸および前立腺を含む他の腹部の癌におけるこの物質の評価の実施可能性を示唆している。
【０１９０】
材料および方法：
ヨウ素−１３１標識ＣＬＲ１４０４（１ｍＣｉ／２０μｇ）の静脈内注射の後、進行ＮＳＣＬＣを有する患者をＧＥ  ＭａｘｘｕｓデュアルヘッドＳＰＥＣＴスキャナーで３、６、２４、４８、９６時間ならびに７および１１日の時点でスキャンした。薬物動態分析ならびに臨床血液額的、腎臓および肝臓生物分析のために血液および尿サンプルを集めた。
【０１９１】
結果：
初期定性的イメージング結果は、ヨウ素−１３１標識ＣＬＲ１４０４が、早くも注射の２４時間後に、両側性肺腫瘤に明らかに局在し、１１日間より長く、これらの腫瘍において選択的に保持されることを示している。更に、肝臓ならびに膀胱、腎臓および腸を含む下腹部におけるバックグラウンド放射能は、その先行体であるＮＭ３２４で既に観察されているものより有意に低かった。いずれの患者においても有害反応は観察されなかった。
【０１９２】
結論：
これらの予備的知見は、ＣＬＲ１４０４が、げっ歯類モデルにおいて既に見出されているものに類似した腫瘍取り込みおよび保持特性をヒトＮＳＣＬＣにおいて示すことを示唆している。この時点では僅か２名の患者に基づくものであるに過ぎないが、ＣＬＲ１４０４は実際にヒト非小細胞肺癌に局在し、ヒト非小細胞肺癌において選択的かつ持続的な腫瘍保持を受けるようである。
【０１９３】
患者１：両側性３ｃｍ左葉および浸潤性右葉ＮＳＣＬＣならびに脳転移ならびに小さな右副腎腫瘤を有する５５歳の男性。彼は多数の標準的および実験的治療レジメンに参加している。イメージを図６Ａ〜Ｃに示す。
【０１９４】
患者２：６ｃｍの上葉非小細胞肺癌、５ｃｍの肝臓腫瘤、腸骨転移および非常に小さな脳転移を有すると最近診断された７０歳の男性。彼は最近、低用量のカルボプラチン／タキソール化学療法ならびに腸骨および脳転移に対する緩和的放射線療法をＣＬＲ１４０４治験の開始の前の週に完了した。図６Ｄ〜Ｇにイメージが示されている。
【０１９５】
実施例７  −  １２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４を使用する、ＮＳＣＬＣ患者におけるこれまでに未知であった３個の脳腫瘍転移の検出
材料および方法：
ヒトＰＥＴ脳スキャンを、９０分の動的収集シーケンス（２Ｄ、１０分ごとに９フレーム、ＶＩＰリストモード・オン）を用いて約５ｍＣｉの１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４の注射の後の複数の時点で６４スライスＰＥＴ／ＣＴスキャナー（Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ＶＣＴ，Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ）で収集し、再構築した［Ａｄｖａｎｔａｇｅ  ＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎバージョンＡＷ４．４，Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ，３０ｃｍ  ＤＦＯＶ（表示視野），１２８×１２８，ＯＳＥＭ  ＶＵＥ  Ｐｏｉｎｔ，２回の反復、標準的なｚ軸、減衰補正および不感時間、散乱、および減衰補正を伴う１０サブセット］。
【０１９６】
結果：
１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４  ＰＥＴ／ＣＴを使用して、神経症状を伴わないＮＳＣＬＣ患者において予備的結果を得た。イメージングは、転移が強く疑われるこれまで未知であった３つの脳病変を示し、これらは後にガドリニウム増強ＭＲＩによって確認された（図７）。
【０１９７】
実施例８  −  １２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４を使用する右前頭鎌の腫瘍再発の検出
悪性黒色腫を有する６０歳女性における再発性脳転移。磁気共鳴（「ＭＲ」）（図８Ａ）および１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４  ＰＥＴイメージ（図８Ｂ）ならびに右前頭鎌転移の腫瘍再発に関する定位放射線手術の８カ月後のイメージ（図８Ｃ）はＣＬＲ１４０４での異常活性の病巣を示している（矢印）。初期ＭＲイメージング上の対応増強病巣は、考えられうる再発に対する放射線壊死と解釈された。後続のＭＲイメージングは、非特異的増強病変のサイズの更なる増加、およびそれに伴う、病変周囲の浮腫の増加を示しており、これは悪性腫瘍の再発を示す。これらの結果は、放射線手術に対して抵抗性であった癌細胞により１２４Ｉ−ＣＬＲ１４０４が捕捉され、最終的に再発性腫瘍を確証したことを示している。
【０１９８】
本発明の化合物は、ＣＬＲ１４０４コア分子に連結された抗癌薬を含む。これらの化合物は、該抗癌薬が癌細胞により捕捉され保持されるように、脳癌細胞を含む癌細胞および癌幹細胞を標的化しうる。これらの化合物は、癌の治療ならびに転移および再発の予防の両方のために広範な抗癌薬を癌細胞に特異的に投与することに応用される、癌の最初の標的化治療を提供する。
【０１９９】
実施例９  −  パクリタキセル−コンジュゲートおよび種々の癌細胞系に対するＩＣ５０
方法
ＭＤＡ−ＭＢ−４６８（乳房）、ＮＣＩ−Ｈ１２９９（肺）、ＮＣＩ−Ｈ４６０（肺）、Ｃａｐａｎ−２（膵臓）、ＭｉａＰａＣａ−１（膵臓）、ＨＴ２９（結腸直腸）、ＨＣＴ１１６（結腸直腸）およびＰＣ−３（前立腺）を含む癌細胞系を連続濃度のパクリタキセルおよびＣＬＲ１４０４−パクリタキセルコンジュゲート（すなわち、ＣＬＲ１６０１、ＣＬＲ１６０２およびＣＬＲ１６０３）で処理した。ついで該細胞系を細胞生存度に関して測定し、各処理に関するＩＣ５０として表した。
【０２００】
結果
ＣＬＲ１６０１およびＣＬＲ１６０３は、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８（乳房）、ＮＣＩ−Ｈ１２９９（肺）、ＮＣＩ−Ｈ４６０（肺）、Ｃａｐａｎ−２（膵臓）、ＭｉａＰａＣａ−１（膵臓）、ＨＴ２９（結腸直腸）、ＨＣＴ１１６（結腸直腸）およびＰＣ−３（前立腺）癌細胞系のそれぞれの細胞生存度を低下させることが可能であった。それぞれ図９〜１６を参照されたい。各パクリタキセル−１４０４コンジュゲート（すなわち、ＣＬＲ１６０１およびＣＬＲ１６０３）およびパクリタキセルのＩＣ５０を表２に示す。ＣＬＲ１６０２のＩＣ５０は示されていないが、ＣＬＲ１６０２は非加水分解性であるため、ＣＬＲ１６０２は癌細胞系の生存度を有意に低下させることができなかった。インビボにおいて、遊離パクリタキセルは、パクリタキセル取り込みの非特異的性質ゆえに、遥かに低い率で癌腫瘍細胞により取り込まれる。したがって、インビボにおいて、癌細胞死に必要なＰＬＥ−パクリタキセルコンジュゲートの量はパクリタキセルの場合と同等以下であるはずであり、非癌細胞に対する毒性の著しい低下をもたらしうる。
【０２０１】
【表２】
2017535608.tif 000049
【０２０２】
実施例１０−フローサイトメトリーアッセイ
方法
フローサイトメトリーによるアネキシンＶおよびＰＩ（ホスファチジルイノシチド）染色を用いて、生細胞、初期アポトーシス細胞、後期アポトーシス細胞および壊死細胞の比率を決定した。簡潔に説明すると、細胞を細胞毒性物質で処理し、アネキシンＶ／ＰＩ標識キット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色した。細胞をＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。表３〜９に示されているとおり、細胞を以下のものとして分類した：生（アネキシンＶ陰性、ＰＩ陰性）、初期アポトーシス（アネキシンＶ陽性、ＰＩ陰性）、後期アポトーシス（アネキシンＶ陽性、ＰＩ陽性）および壊死（アネキシンＶ陰性、ＰＩ陽性）。５μＭのＣＬＲ１６０１で７２時間処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞に関する代表的な散布図を図１７に示す。アネキシンＶ（ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ４８８に結合）がｘ軸上に示されており、ＰＩがｙ軸上に示されている。左下の象限は生細胞を示し、左上の象限は壊死細胞を示し、右上の象限は後期アポトーシス細胞を示し、右下の象限は初期アポトーシス細胞を示す。この分析からはデブリが排除された。
【０２０３】
結果
三重陰性乳癌細胞系であるＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞をＣＬＲコンジュゲート（ＣＬＲ１６０１およびＣＬＲ１６０３）で７２時間、そしてパクリタキセル（「ＰＴＸ」）で２４時間処理した。表３を参照されたい。ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞をまた、ＣＬＲコンジュゲート（ＣＬＲ１６０６およびＣＬＲ１６０７）で７２時間、そしてゲルダナマイシン（「ＧＥＬ」）で４８時間処理した。表４を参照されたい。ＰＴＸコンジュゲートの場合、細胞生存度は６１．１％（薬物処理無し）から、１μＭ  ＣＬＲ１６０１、５μＭ  ＣＬＲ１６０１、１μＭ  ＣＬＲ１６０３、５μＭ  ＣＬＲ１６０３、１００ｎＭ  ＰＴＸおよび１μＭ  ＰＴＸでの処理の後に、それぞれ１７．０％、１７．８％、２２．２％、１９．７％、５３．８％および４８．９％に低下した。表３を参照されたい。ＧＥＬコンジュゲートの場合、細胞生存度は６１．１％から、１μＭ  ＣＬＲ１６０６、１０μＭ  ＣＬＲ１６０６、１μＭ  ＣＬＲ１６０７、１０μＭ  ＣＬＲ１６０７および１μＭ  ＧＥＬでの処理の後に、それぞれ５８．８％、４２．７％、５２．７％、５６．９％および２６．２％に低下した。表４を参照されたい。
【０２０４】
【表３】
2017535608.tif 000050
【０２０５】
【表４】
2017535608.tif 000051
【０２０６】
黒色腫細胞系であるＣＯＬＯ  ８２９細胞をＧＥＬコンジュゲート（ＣＬＲ１６０６およびＣＬＲ１６０７）で７２時間、そしてＧＥＬで４８時間処理した。表５を参照されたい。細胞生存度は８０．８％（薬物処理無し）から、１μＭ  ＣＬＲ１６０６、１０μＭ  ＣＬＲ１６０６、１μＭ  ＣＬＲ１６０７、１０μＭ  ＣＬＲ１６０７、１００ｎＭ  ＧＥＬおよび１μＭ  ＧＥＬでの処理の後に、それぞれ７０．４％、２１．１％、６７．９％、５４．３％、３２．４％および１８．６％に低下した。表５を参照されたい。
【０２０７】
【表５】
2017535608.tif 000052
【０２０８】
膵臓癌細胞系であるＰＡＮＣ−１細胞をＧＥＬコンジュゲート（ＣＬＲ１６０６およびＣＬＲ１６０７）で７２時間、そしてＧＥＬで４８時間処理した。表６を参照されたい。細胞生存度は４４．２％（薬物処理無し）から、１μＭ  ＣＬＲ１６０６、１０μＭ  ＣＬＲ１６０６、１μＭ  ＣＬＲ１６０７、１０μＭ  ＣＬＲ１６０７、１００ｎＭ  ＧＥＬおよび１μＭ  ＧＥＬでの処理の後に、それぞれ４２．０％、２１．５％、４４．０％、３３．０％、２３．３％および１８．９％に低下した。表６を参照されたい。
【０２０９】
【表６】
2017535608.tif 000053
【０２１０】
前立腺癌細胞系である２２ＲＶ１細胞をＧＥＬコンジュゲート（ＣＬＲ１６０６およびＣＬＲ１６０７）で７２時間、そしてＧＥＬで４８時間処理した。表７を参照されたい。細胞生存度は薬物無し、１μＭ  ＣＬＲ１６０６、１０μＭ  ＣＬＲ１６０６、１μＭ  ＣＬＲ１６０７、１０μＭ  ＣＬＲ１６０７、１００ｎＭ  ＧＥＬおよび１μＭ  ＧＥＬでの処理の後に、それぞれ２０．３％、２１．３％、１６．０％、２１．９％、１５．７％、１９．４％および２８．１％であった。表７を参照されたい。この細胞系では基礎細胞死が高かった。該細胞は細胞収集の方法に良好には応答しなかった。
【０２１１】
【表７】
2017535608.tif 000054
【０２１２】
ＣＬＲコンジュゲートは、細胞死を誘発するためには、細胞に対する、より長い処理時間を要するようである。１μＭ  ＣＬＲ１６０１および１μＭ  ＣＬＲ１６０３でのＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞の４８時間の処理は８６．２％（薬物処理無し）からそれぞれ７９．４％および８１．４％への細胞生存度の低下をもたらした。表８を参照されたい。１μＭ  ＣＬＲ１６０６および１μＭ  ＣＬＲ１６０７でのＣＯＬＯ  ８２９細胞の４８時間の処理は９１．７％（薬物処理無し）からそれぞれ９０．１％および８２．７％への細胞生存度の低下をもたらした。表９を参照されたい。
【０２１３】
【表８】
2017535608.tif 000055
【０２１４】
【表９】
2017535608.tif 000056
【０２１５】
総合すると、ＰＬＥ−パクリタキセルおよびＰＬＥ−ゲルダナマイシンコンジュゲートは、種々の腫瘍型に対する細胞死の誘導を含む腫瘍細胞生存度の低下をもたらしうることが示された。
【図１】
2017535608.tif 000071
【図２】
2017535608.tif 000072
【図３】
2017535608.tif 000073
【図４】
2017535608.tif 000074
【図５】
2017535608.tif 000075
【図６】
2017535608.tif 000076
【図７】
2017535608.tif 000077
【図８】
2017535608.tif 000078
【図９】
2017535608.tif 000079
【図１０】
2017535608.tif 000080
【図１１】
2017535608.tif 000081
【図１２】
2017535608.tif 000082
【図１３】
2017535608.tif 000083
【図１４】
2017535608.tif 000084
【図１５】
2017535608.tif 000085
【図１６】
2017535608.tif 000086
【図１７】
2017535608.tif 000087
【国際調査報告】
2017535608.tif 000088
2017535608.tif 000089
2017535608.tif 000090
2017535608.tif 000091