(57)【要約】本開示は、ヒトグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連受容体（ＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体及びかかる抗体を含む組成物を提供する。具体的な一態様では、本抗体は、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合し、かかる抗体を利用してＧＩＴＲ活性を調節する、例えば、ＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を増強もしくは誘導する。本開示は、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合し、かつＧＩＴＲ活性を調節する、例えば、ＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を増強もしくは誘導する抗体を投与することによって、癌及び感染症等の障害を治療するための方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号１）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、またはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、またはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＳＧＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＸ８ＱＫＦＸ９Ｘ１０（配列番号２）を含むＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＴであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、またはＡであり、
Ｘ３が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、またはＰであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、またはＡであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、またはＡであり、
Ｘ６が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＴであり、
Ｘ７が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、またはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ９が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｑ、またはＡであり、
Ｘ１０が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、またはＡである、ＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号３）を含むＶＨ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｆ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｍ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、またはＳであり、
Ｘ２が、ＡまたはＤであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、またはＶである、ＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＫＸ８ＹＬＸ９（配列番号４）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、またはＭであり、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＳであり、
Ｘ３が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ５が、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ６が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ７が、Ｑ、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ９が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、またはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＴＲＸ２Ｘ３（配列番号５）を含むＶＬ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｗ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＡであり、
Ｘ２が、Ｅ、Ｄ、またはＡであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２ＹＸ３Ｘ４ＰＹＴ（配列番号６）を含むＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、またはＹであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ｅ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、またはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む、ヒトグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）に特異的に結合する単離された抗体。
【請求項２】
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号７）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、またはＧであり、
Ｘ２が、ＡまたはＶであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２ＴＸ３ＳＧＸ４Ｘ５Ｘ６ＹＮＱＫＦＸ７Ｘ８（配列番号８）を含むＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、ＶまたはＬであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、またはＱであり、
Ｘ３が、ＹまたはＦであり、
Ｘ４が、Ｄ、Ｅ、またはＧであり、
Ｘ５が、ＶまたはＬであり、
Ｘ６が、ＴまたはＳであり、
Ｘ７が、Ｋ、Ｒ、またはＱであり、
Ｘ８が、Ｄ、Ｅ、またはＧである、ＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号９）を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＸ１ＮＱＫＮＹＬＸ２（配列番号１０）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、ＧまたはＳであり、
Ｘ２が、ＴまたはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１１）を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）アミノ酸配列ＱＮＸ１ＹＳＸ２ＰＹＴ（配列番号１２）を含むＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、ＤまたはＥであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、またはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項３】
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号１３、１９〜２３、及び１１７〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４】
前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、配列番号３５及び配列番号１１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項５】
前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号１４、２４〜３３、及び１２０〜１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項６】
前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、配列番号１１４、１１５、及び１９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項７】
前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、配列番号１５、３４、及び１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項８】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、配列番号１６及び１０１〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項９】
前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、配列番号１７及び１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項１０】
前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、配列番号１８、１０６〜１０９、１９２、及び１９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項１１】
前記ＶＨ  ＣＤＲ１、前記ＶＨ  ＣＤＲ２、及び前記ＶＨ  ＣＤＲ３が各々、表２の抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項１２】
前記ＶＨ  ＣＤＲ１、前記ＶＨ  ＣＤＲ２、及び前記ＶＨ  ＣＤＲ３が各々、表６の抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項１３】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、前記ＶＬ  ＣＤＲ２、及び前記ＶＬ  ＣＤＲ３が各々、表１の抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項１４】
前記ＶＬ  ＣＤＲ１、前記ＶＬ  ＣＤＲ２、及び前記ＶＬ  ＣＤＲ３が各々、表５の抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項１５】
（ａ）アミノ酸配列ＤＹＡＭＹ（配列番号１３）を含むＶＨ  ＣＤＲ１、
アミノ酸配列ＶＩＲＴＹＳＧＤＶＴＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号１４）を含むＶＨ  ＣＤＲ２、及び
アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号１５）を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、
（ｂ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴ（配列番号１６）を含むＶＬ  ＣＤＲ１、
アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１７）を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び
アミノ酸配列ＱＮＤＹＳＹＰＹＴ（配列番号１８）を含むＶＬ  ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項１６】
表１及び表２に示される抗体２２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項１７】
前記抗体が、ヒトＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）のヒトＧＩＴＲへの結合を部分的に阻害する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１８】
１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の前記抗体が、懸濁アレイアッセイにおいて、前記抗ＧＩＴＲ抗体の不在下での０．５ｎＭのＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのヒトＧＩＴＲＬの、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲへの結合を８０％未満阻害する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１９】
以下のステップ、
（ａ）ヒトＧＩＴＲを５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングするステップと、
（ｂ）４０ビーズ／μＬの濃度の前記ヒトＧＩＴＲカップリングビーズをウェル中で１０００ｎｇ／ｍＬの前記抗体とインキュベートするか、または前記抗体なしでインキュベートするステップと、
（ｃ）標識ヒトＧＩＴＲＬを前記ウェルに添加して、最終濃度０．５ｎＭの前記ヒトＧＩＴＲＬ及び最終濃度２０ビーズ／μＬの前記ＧＩＴＲカップリングビーズを得るステップと、
（ｄ）前記ヒトＧＩＴＲカップリングビーズに結合した前記標識ヒトＧＩＴＲＬを検出するステップと、を含むアッセイにおいて、前記抗体の不在下でヒトＧＩＴＲに結合するヒトＧＩＴＲＬの量の少なくとも２０％が、前記抗体の存在下でヒトＧＩＴＲに結合する、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体が、ヒトＧＩＴＲＬのヒトＧＩＴＲへの結合を５０％〜７０％阻害する、請求項１７または１８に記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体の不在下でヒトＧＩＴＲに結合するヒトＧＩＴＲＬの量の３０％〜５０％が、前記抗体の存在下でヒトＧＩＴＲに結合する、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２２】
ヒトＧＩＴＲに特異的に結合し、かつヒトＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）のヒトＧＩＴＲへの結合を部分的に阻害する、単離された抗体。
【請求項２３】
１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の前記抗体が、懸濁アレイアッセイにおいて、前記抗ＧＩＴＲ抗体の不在下での５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度の０．５ｎＭのＧＩＴＲＬのＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのヒトＧＩＴＲＬの、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲへの結合を８０％未満阻害する、請求項２２に記載の抗体。
【請求項２４】
以下のステップ、
（ａ）ヒトＧＩＴＲを５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングするステップと、
（ｂ）４０ビーズ／μＬの濃度の前記ヒトＧＩＴＲカップリングビーズをウェル中で１０００ｎｇ／ｍＬの前記抗体とインキュベートするか、または前記抗体なしでインキュベートするステップと、
（ｃ）標識ヒトＧＩＴＲＬを前記ウェルに添加して、最終濃度０．５ｎＭの前記ヒトＧＩＴＲＬ及び最終濃度２０ビーズ／μＬの前記ＧＩＴＲカップリングビーズを得るステップと、
（ｄ）前記ヒトＧＩＴＲカップリングビーズに結合した前記標識ヒトＧＩＴＲＬを検出するステップと、を含むアッセイにおいて査定される、前記抗体の不在下でヒトＧＩＴＲに結合するヒトＧＩＴＲＬの量の少なくとも２０％が、前記抗体の存在下でヒトＧＩＴＲに結合する、請求項２２に記載の抗体。
【請求項２５】
前記抗体が、ヒトＧＩＴＲＬのヒトＧＩＴＲへの結合を５０％〜７０％阻害する、請求項２２または２３に記載の抗体。
【請求項２６】
前記抗体の不在下でヒトＧＩＴＲに結合するヒトＧＩＴＲＬの量の３０％〜５０％が、前記抗体の存在下でヒトＧＩＴＲに結合する、請求項２４に記載の抗体。
【請求項２７】
前記抗体がアゴニストである、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２８】
前記抗体が、配列番号２０３の重鎖可変領域配列のフレームワーク領域を含む重鎖可変領域配列をさらに含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項２９】
前記抗体が、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、請求項１〜１５または１７〜２８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３０】
前記抗体が、配列番号２０１、配列番号２０６、及び配列番号２１５〜３８９からなる群から選択される重鎖可変領域配列のフレームワーク領域と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の重鎖可変領域配列のフレームワーク領域を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３１】
前記抗体が、配列番号２０１、２０６、及び配列番号２１５〜３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３２】
前記抗体が、配列番号２０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、請求項３１に記載の抗体。
【請求項３３】
前記抗体が、配列番号５５３、５５４、及び５６７〜５７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖配列を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３４】
前記抗体が、配列番号５８１及び５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖配列を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３５】
前記抗体が、ヒト由来のフレームワーク領域を有する重鎖可変領域を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３６】
前記抗体が、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列であるか、またはそれ由来の重鎖可変フレームワーク領域をさらに含み、前記アミノ酸配列が、ＩＧＨＶ１−２＊０２（配列番号６０１）、ＩＧＨＶ１−３＊０１（配列番号６０２）、ＩＧＨＶ１−４６＊０１（配列番号６０３）、ＩＧＨＶ１−１８＊０１（配列番号６０４）、ＩＧＨＶ１−６９＊０１（配列番号６０５）、及びＩＧＨＶ７−４−１＊０２（配列番号６０６）からなる群から選択される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項３７】
前記抗体が、アミノ酸配列配列番号６０１由来の重鎖可変フレームワーク領域を含み、アミノ酸配列配列番号６０１の少なくとも１つのアミノ酸が、対応する非ヒト重鎖可変フレームワーク領域内の類似位置におけるアミノ酸で置換される、請求項３６に記載の抗体。
【請求項３８】
前記アミノ酸置換が、２４、４８、６７、７１、７３、及び９４からなる群から選択されるアミノ酸位置においてであり、各群メンバーのアミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される、請求項３７に記載の抗体。
【請求項３９】
前記アミノ酸置換が、２４Ｇ、４８Ｉ、６７Ａ、７１Ｖ、７３Ｋ、及び９４Ｋからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される、請求項３８に記載の抗体。
【請求項４０】
前記抗体が、配列番号２０４または配列番号２０５の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域配列をさらに含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４１】
前記抗体が、配列番号２０４または配列番号２０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、請求項１〜１５または１７〜３９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４２】
前記抗体が、配列番号２０２、配列番号２０７、配列番号２０８、及び配列番号４００〜５１８からなる群から選択される軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域をさらに含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４３】
前記抗体が、配列番号５１９の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域をさらに含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４４】
前記抗体が、配列番号２０２、配列番号２０７、配列番号２０８、及び配列番号４００〜５１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４５】
前記抗体が、配列番号５１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、請求項４２に記載の抗体。
【請求項４６】
前記抗体が、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、請求項４４に記載の抗体。
【請求項４７】
前記抗体が、配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、請求項４４に記載の抗体。
【請求項４８】
前記抗体が、配列番号５５５、５５６、及び５７１〜５７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項４９】
前記抗体が、ヒト由来のフレームワーク領域を有する軽鎖可変配列を含む、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５０】
前記抗体が、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列であるか、またはそれ由来の軽鎖可変フレームワーク領域を含み、前記アミノ酸配列が、ＩＧＫＶ４−１＊０１（配列番号６０７）及びＩＧＫＶ３−７＊０２（配列番号６０８）からなる群から選択される、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５１】
前記抗体が、ＩＧＫＶ４−１＊０１（配列番号６０７）及びＩＧＫＶ３−７＊０２（配列番号６０８）からなる群から選択されるアミノ酸配列由来の軽鎖可変フレームワーク領域を含み、アミノ酸配列配列番号６０７または配列番号６０８の少なくとも１つのアミノ酸が、対応する非ヒト軽鎖可変フレームワーク領域内の類似位置におけるアミノ酸で置換される、請求項５０に記載の抗体。
【請求項５２】
前記アミノ酸置換が、アミノ酸位置８７においてであり、前記アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される、請求項５１に記載の抗体。
【請求項５３】
前記アミノ酸置換が８７Ｈであり、前記アミノ酸位置が、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される、請求項５２に記載の抗体。
【請求項５４】
前記抗体が、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つの表の抗体のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５５】
前記抗体が、表１７の抗体のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項５６】
（ａ）配列番号２０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項５７】
（ａ）配列番号２０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、
（ｂ）配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域と、を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項５８】
ヒト免疫グロブリン由来のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、及びフレームワーク領域を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、前記ＶＨ  ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＤＹＡＭＹ（配列番号１３）を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＶＩＲＴＹＳＧＤＶＴＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号１４）を含み、前記ＶＨ  ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号１５）を含む、前記抗体。
【請求項５９】
ヒト免疫グロブリン由来のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、及びフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、前記ＶＬ  ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴ（配列番号１６）を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１７）を含み、前記ＶＬ  ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＮＤＹＳＹＰＹＴ（配列番号１８）を含む、前記抗体。
【請求項６０】
配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項６１】
配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、及び４００〜５１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項６２】
配列番号５１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項６３】
前記抗体が、ヒトＧＩＴＲＬのヒトＧＩＴＲへの結合を部分的に阻害する、請求項５８〜６２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６４】
１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の前記抗体が、懸濁アレイアッセイにおいて、前記抗ＧＩＴＲ抗体の不在下での０．５ｎＭのＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのヒトＧＩＴＲＬの、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲへの結合を８０％未満阻害する、請求項５８〜６２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６５】
以下のステップ、
（ａ）ヒトＧＩＴＲを５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングするステップと、
（ｂ）４０ビーズ／μＬの濃度の前記ヒトＧＩＴＲカップリングビーズをウェル中で１０００ｎｇ／ｍＬの前記抗体とインキュベートするか、または前記抗体なしでインキュベートするステップと、
（ｃ）標識ヒトＧＩＴＲＬを前記ウェルに添加して、最終濃度０．５ｎＭの前記ヒトＧＩＴＲＬ及び最終濃度２０ビーズ／μＬの前記ＧＩＴＲカップリングビーズを得るステップと、
（ｄ）前記ヒトＧＩＴＲカップリングビーズに結合した前記標識ヒトＧＩＴＲＬを検出するステップと、を含むアッセイにおいて査定される、前記抗体の不在下でヒトＧＩＴＲに結合するヒトＧＩＴＲＬの量の少なくとも２０％が、前記抗体の存在下でヒトＧＩＴＲに結合する、請求項５８〜６２のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項６６】
前記抗体が、ヒトＧＩＴＲＬのヒトＧＩＴＲへの結合を５０％〜７０％阻害する、請求項６３または６４に記載の抗体。
【請求項６７】
前記抗体の不在下でヒトＧＩＴＲに結合するヒトＧＩＴＲＬの量の３０％〜５０％が、前記抗体の存在下でヒトＧＩＴＲに結合する、請求項６５に記載の抗体。
【請求項６８】
重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、前記ＶＨ及び前記ＶＬのアミノ酸配列が、図２３の１行または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つに列記されるアミノ酸配列を含む、前記抗体。
【請求項６９】
重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、前記ＶＨ及び前記ＶＬのアミノ酸配列が、表１７の１行に列記されるアミノ酸配列を含む、前記抗体。
【請求項７０】
重鎖及び／または軽鎖定常領域をさらに含む、請求項１〜３２、３５〜４７、または４９〜６９のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項７１】
前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２からなるヒト免疫グロブリンの群から選択される、請求項７０に記載の抗体。
【請求項７２】
前記軽鎖定常領域が、ＩｇＧκ及びＩｇＧλからなるヒト免疫グロブリンの群から選択される、請求項７０または７１に記載の抗体。
【請求項７３】
前記ＩｇＧ１が非フコシル化ＩｇＧ１である、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７４】
前記ＩｇＧ１のアミノ酸配列がＮ２９７Ａ変異を含む、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７５】
前記ＩｇＧ１のアミノ酸配列がＮ２９７Ｑ変異を含む、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７６】
前記ＩｇＧ４のアミノ酸配列がＳ２２８Ｐ変異を含む、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７７】
前記ＩｇＧ２のアミノ酸配列がＣ１２７Ｓ変異を含む、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７８】
前記重鎖定常領域が、配列番号５５７〜５６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７２に記載の抗体。
【請求項７９】
前記重鎖定常領域が、配列番号５８３〜５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項７２に記載の抗体。
【請求項８０】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５５３、５５４、及び５６７〜５７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５５５、５５６、及び５７１〜５７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８１】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５８１及び５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５５５、５５６、及び５７１〜５７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項８２】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項８３】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項８４】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８１に記載の抗体。
【請求項８５】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８１に記載の抗体。
【請求項８６】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５５５のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項８７】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５５５のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項８８】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５６７のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５７３のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項８９】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５６７のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項９０】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８０に記載の抗体。
【請求項９１】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８１に記載の抗体。
【請求項９２】
前記抗体が、
（ａ）配列番号５８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、請求項８１に記載の抗体。
【請求項９３】
（ａ）配列番号５６７のアミノ酸配列を含む重鎖と、
（ｂ）配列番号５８７のアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含む、ＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項９４】
請求項１〜９３のいずれか一項に記載の抗体と同じヒトＧＩＴＲのエピトープに結合する単離された抗体。
【請求項９５】
前記抗体が、配列番号７０１の残基２６〜２４１を含むヒトＧＩＴＲに結合し、前記抗体と変異型ＧＩＴＲとの間の結合が、前記抗体と前記ヒトＧＩＴＲとの間の結合に対して実質的に弱められ、前記変異型ＧＩＴＲが、Ｄ６０Ａ及びＧ６３Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を除く配列番号７０１の残基２６〜２４１を含む、請求項１〜９４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９６】
前記抗体が、配列番号７０１の残基６０〜６３を含むエピトープに結合する、請求項１〜９４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９７】
前記抗体が、配列番号７０１の残基６０〜６３によって示されるアミノ酸配列内の少なくとも１つの残基に結合する、請求項１〜９４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９８】
前記抗体が、配列番号７０１の残基６０または６３のうちの少なくとも一方を含む前記ヒトＧＩＴＲのエピトープに結合する、請求項１〜９４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９９】
前記抗体が、ｉ）配列番号７０１の残基２６〜２４１を含むヒトＧＩＴＲ、及びｉｉ）配列番号６９９の残基２６〜２３４を含むカニクイザルＧＩＴＲ変異型の各々に特異的に結合し、前記抗体が、配列番号７０４の残基２６〜２３４を含むカニクイザルＧＩＴＲに特異的に結合しない、請求項１〜９４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１００】
前記抗体が、ヒトＧＩＴＲへの結合と比較して、Ｄ６０ＡまたはＧ６３Ａアミノ酸置換の存在を除いてヒトＧＩＴＲと同一のタンパク質への結合の減少または不在を呈する、請求項１〜９４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０１】
ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、前記ヒトＧＩＴＲが、配列番号７０１の残基２６〜２４１を含み、前記抗体と変異型ＧＩＴＲとの間の結合が、前記抗体と前記ヒトＧＩＴＲとの間の結合に対して実質的に弱められ、前記変異型ＧＩＴＲが、Ｄ６０Ａ及びＧ６３Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を除く配列番号７０１の残基２６〜２４１を含む、前記抗体。
【請求項１０２】
前記アミノ酸置換がＤ６０Ａである、請求項９５または１０１に記載の抗体。
【請求項１０３】
前記アミノ酸置換がＧ６３Ａである、請求項９５または１０１に記載の抗体。
【請求項１０４】
ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、前記ヒトＧＩＴＲが、配列番号７０１の残基２６〜２４１を含み、前記抗体が、配列番号７０１の残基６０〜６３を含むエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項１０５】
ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、前記ヒトＧＩＴＲが、配列番号７０１の残基２６〜２４１を含み、前記抗体が、配列番号７０１の残基６０〜６３によって示されるアミノ酸配列内の少なくとも１つの残基に結合する、前記抗体。
【請求項１０６】
前記抗体が、配列番号７０１の残基６０、６２、及び６３からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する、請求項９７または１０５に記載の抗体。
【請求項１０７】
前記抗体が、配列番号７０１の残基６２及び６３からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する、請求項９７または１０５に記載の抗体。
【請求項１０８】
ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、前記ヒトＧＩＴＲが、配列番号７０１の残基２６〜２４１を含み、前記抗体が、配列番号７０１の残基６０または６３のうちの少なくとも一方を含む前記ヒトＧＩＴＲのエピトープに結合する、前記抗体。
【請求項１０９】
ｉ）配列番号７０１の残基２６〜２４１を含むヒトＧＩＴＲ、及びｉｉ）配列番号６９９の残基２６〜２３４を含むカニクイザルＧＩＴＲ変異型の各々に特異的に結合する単離された抗体であって、配列番号７０４の残基２６〜２３４を含むカニクイザルＧＩＴＲに特異的に結合しない、前記抗体。
【請求項１１０】
ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、ヒトＧＩＴＲへの結合と比較して、Ｄ６０ＡまたはＧ６３Ａアミノ酸置換の存在を除いてヒトＧＩＴＲと同一のタンパク質への結合の減少または不在を呈する、前記抗体。
【請求項１１１】
前記抗体が、ヒトＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する、請求項９４〜１１０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１２】
請求項１〜１１１のいずれか一項に記載の抗体がヒトＧＩＴＲへの結合において自己競合する程度まで、ヒトＧＩＴＲへの結合において請求項１〜１１１のいずれか一項に記載の抗体と競合する、単離された抗体。
【請求項１１３】
ヒトＧＩＴＲへの結合において請求項１〜１１１のいずれか一項に記載の抗体と競合する単離された第１の抗体であって、前記第１の抗体が、以下のステップ、
（ａ）ＧＩＴＲトランスフェクト細胞を非標識形態の前記第１の抗体と容器内でインキュベートするステップと、
（ｂ）標識形態の請求項１〜１１１のいずれか一項に記載の抗体を前記容器内の前記細胞に添加し、前記細胞を前記容器内でインキュベートするステップと、
（ｃ）標識形態の請求項１〜１１１のいずれか一項に記載の抗体の前記細胞への結合を検出するステップと、を含むアッセイにおいて、結合において競合する、前記第１の抗体。
【請求項１１４】
ヒトＧＩＴＲへの結合において請求項１〜１１１のいずれか一項に記載の抗体と競合する単離された第１の抗体であって、前記競合が、前記第１の抗体のヒトＧＩＴＲへの結合の８０％超の減少として呈される、前記第１の抗体。
【請求項１１５】
前記抗体が、ヒトＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する、請求項１〜１１４のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１６】
前記抗体が、ＴＣＲ誘発非依存性の細胞におけるヒトＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する、請求項１〜１１５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１７】
前記抗体が、ＴＣＲ誘発非依存性の細胞におけるＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する、請求項１〜１１６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１１８】
前記細胞がＴ細胞である、請求項１１６または１１７に記載の抗体。
【請求項１１９】
前記細胞がＴ細胞ではない、請求項１１６または１１７に記載の抗体。
【請求項１２０】
前記細胞が、Ｂ細胞、形質細胞、記憶細胞、ナチュラルキラー細胞、顆粒球、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、単球、樹状細胞、形質細胞様樹状細胞、ＮＫＴ細胞、及びマクロファージからなる群から選択される、請求項１１６または１１７に記載の抗体。
【請求項１２１】
前記抗体が、多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合を増加させる、請求項１〜１２０のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２２】
前記抗体が、活性化されたエフェクターＴ細胞に結合しているときに、ＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ６４からなる群から選択される活性化Ｆｃガンマ受容体に結合する程度を超えて、前記抗体が、活性化された制御性Ｔ細胞に結合しているときに、ＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ６４からなる群から選択される前記活性化Ｆｃガンマ受容体に結合する、請求項１〜１２１のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２３】
前記活性化Ｆｃガンマ受容体が、骨髄由来のエフェクター細胞及びリンパ球由来のエフェクター細胞からなる群から選択される細胞上で発現する、請求項１２２に記載の抗体。
【請求項１２４】
前記抗体が、活性化されたＴ細胞におけるＯＸ４０、ＰＤ−１、またはそれらの組み合わせの表面発現を増加させる、請求項１〜１２３のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２５】
前記抗体が、ヒト化抗体、マウス抗体、またはキメラ抗体である、請求項１〜６８のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２６】
前記抗体が、約０．５ｎＭ〜５ｎＭの範囲のＫＤを有するヒトＧＩＴＲに結合する、請求項１〜１２５のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２７】
検出可能な標識をさらに含む、請求項１〜１２６のいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１２８】
請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体の重鎖可変領域及び／もしくは軽鎖可変領域、または軽鎖及び／もしくは重鎖をコードする、単離された核酸分子。
【請求項１２９】
前記核酸分子が、配列番号２０９の核酸配列を含む重鎖可変領域をコードする、請求項１２８に記載の単離された核酸分子。
【請求項１３０】
前記核酸分子が、配列番号２１０または配列番号２１１の核酸配列を含む軽鎖可変領域をコードする、請求項１２８または１２９に記載の単離された核酸分子。
【請求項１３１】
請求項１２８、１２９、または１３０に記載の核酸分子を含む、単離されたベクター。
【請求項１３２】
１２８、１２９、もしくは１３０に記載の単離された核酸分子、または請求項１３１に記載の単離されたベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１３３】
組織培養における大腸菌、シュードモナス、バシラス、ストレプトマイセス、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ−Ｃ６、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＮＩＨ−３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、Ｈｅｐ  Ｇ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＣＯＳ  １、ＣＯＳ  ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及びヒト細胞からなる群から選択される、請求項１３２に記載の宿主細胞。
【請求項１３４】
ヒトＧＩＴＲに結合する抗体を産生する方法であって、前記核酸分子が発現し、前記抗体が産生されるように、請求項１３２または１３３に記載の宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項１３５】
ヒトＧＩＴＲに特異的に結合し、かつ請求項１２８〜１３０のいずれか一項に記載の単離された核酸分子によってコードされる、単離された抗体。
【請求項１３６】
請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体、請求項１２８〜１３０のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項１３１に記載のベクター、または請求項１３２もしくは１３３に記載の宿主細胞と、薬学的に許容される担体または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１３７】
請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的担体または賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
【請求項１３８】
対象における免疫応答を調節する方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体または請求項１３６もしくは１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１３９】
前記対象の前記免疫応答を増強または誘導するための方法である、請求項１３８に記載の方法。
【請求項１４０】
対象におけるＴ細胞の拡張及びＴ細胞エフェクター機能を増強するための方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体または請求項１３６もしくは１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１４１】
対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の拡張を増強するための方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体または請求項１３６もしくは１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１４２】
対象におけるＴＣＲ誘発非依存性のＴ細胞を活性化するための方法であって、前記対象に有効量の請求項１３６または１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１４３】
対象におけるＴＣＲ誘発非依存性のＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強するための方法であって、前記対象に有効量の請求項１３６または１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１４４】
対象における多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合を増加させるための方法であって、前記対象に有効量の請求項１３６または１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１４５】
対象における活性化されたＴ細胞におけるＯＸ４０、ＰＤ−１、またはそれらの組み合わせの表面発現を増加させるための方法であって、前記対象に有効量の請求項１３６または１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１４６】
対象における癌を治療する方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体または請求項１３６もしくは１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１４７】
前記癌が、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、消化管癌、ホジキンリンパ腫もしくは非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、膠芽腫、膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫、唾液腺癌、腎臓癌、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、睾丸癌、食道癌、またはある種の頭部癌もしくは頸部癌である、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１４８】
前記癌が、線維形成性黒色腫、炎症性乳癌、胸腺腫、直腸癌、肛門癌、または外科的に治療可能もしくは外科的に治療不可能な脳幹膠腫である、請求項１４７に記載の方法。
【請求項１４９】
前記対象にインドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を投与することをさらに含む、請求項１４６に記載の方法。
【請求項１５０】
前記阻害剤が、ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔ、Ｆ００１２８７、ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ、及びＮＬＧ９１９からなる群から選択される、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５１】
前記阻害剤がｅｐａｃａｄｏｓｔａｔである、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５２】
前記阻害剤がＦ００１２８７である、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５３】
前記阻害剤がｉｎｄｏｘｉｍｏｄである、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５４】
前記阻害剤がＮＬＧ９１９である、請求項１４９に記載の方法。
【請求項１５５】
対象におけるウイルス感染を治療する方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体または請求項１３６もしくは１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１５６】
前記ウイルス感染が、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、単純ヘルペスもしくは他のヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、もしくは他の肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、ＨＩＶ、またはエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）によって引き起こされるウイルス感染である、請求項１５５に記載の方法。
【請求項１５７】
対象における癌を治療する方法であって、それを必要とする前記対象に有効量の請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体を別の治療薬と組み合わせて投与することを含む、前記方法。
【請求項１５８】
前記別の治療薬が、インドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤であり、前記抗体及び前記ＩＤＯ阻害剤が、異なる薬学的組成物で、かつ別個の剤形として投与される、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１５９】
前記阻害剤が、ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔ、Ｆ００１２８７、ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ、及びＮＬＧ９１９から選択される、請求項１５８に記載の方法。
【請求項１６０】
前記別の治療薬が、チェックポイント標的薬である、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６１】
前記チェックポイント標的薬が、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、及びＯＸ４０アゴニストからなる群から選択される、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６２】
前記チェックポイント標的薬が、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体、及びアゴニスト抗ＯＸ４０抗体からなる群から選択される、請求項１６０に記載の方法。
【請求項１６３】
前記別の治療薬が、ＰＤ−１アンタゴニストまたはＯＸ４０アゴニストである、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６４】
前記ＰＤ−１アンタゴニストまたは前記ＯＸ４０アゴニストが、前記抗ＧＩＴＲ抗体の投与後に投与される、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６５】
前記ＰＤ−１アンタゴニストまたは前記ＯＸ４０アゴニストが、前記抗ＧＩＴＲ抗体と同時に、または前記抗ＧＩＴＲ抗体の投与前に投与される、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６６】
前記別の治療薬が抗ＣＤ２５抗体である、請求項１５７に記載の方法。
【請求項１６７】
前記抗ＣＤ２５抗体が、前記抗ＧＩＴＲ抗体の投与後に投与される、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６８】
前記抗ＣＤ２５抗体が、前記抗ＧＩＴＲ抗体と同時に、または前記抗ＧＩＴＲ抗体の投与前に投与される、請求項１６６に記載の方法。
【請求項１６９】
対象における癌を治療する方法であって、抗ＧＩＴＲ抗体を受けている対象に抗ＰＤ−１抗体を投与することを含み、前記抗ＧＩＴＲ抗体が、前記投与時の前記対象におけるＰＤ−１の発現に対して、前記対象におけるＰＤ−１の発現を増加させたときに、前記抗ＰＤ−１抗体が投与される、前記方法。
【請求項１７０】
対象における癌を治療する方法であって、抗ＧＩＴＲ抗体を受けている対象に抗ＯＸ４０抗体を投与することを含み、前記抗ＧＩＴＲ抗体が、前記投与時の前記対象におけるＯＸ４０の発現に対して、前記対象におけるＯＸ４０の発現を増加させたときに、前記抗ＯＸ４０抗体が投与される、前記方法。
【請求項１７１】
対象における癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に抗ＧＩＴＲ抗体を投与することであって、前記抗ＧＩＴＲ抗体が、前記投与時の前記対象におけるＰＤ−１の発現に対して、前記対象におけるＰＤ−１の発現を増加させる、投与することと、ＰＤ−１の発現が増加したときに、前記対象に抗ＰＤ−１抗体を投与することと、を含む、前記方法。
【請求項１７２】
対象における癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に抗ＧＩＴＲ抗体を投与することであって、前記抗ＧＩＴＲ抗体が、前記投与時の前記対象におけるＯＸ４０の発現に対して、前記対象におけるＯＸ４０の発現を増加させる、投与することと、ＯＸ４０の発現が増加したときに、前記対象に抗ＯＸ４０抗体を投与することと、を含む、前記方法。
【請求項１７３】
前記抗ＧＩＴＲ抗体が、ＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する、請求項１６９〜１７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７４】
第１の対象における癌またはウイルス感染を治療する方法であって、
（ａ）Ｔ細胞をエクスビボで請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体とインキュベートするステップと、
（ｂ）前記Ｔ細胞を前記第１の対象に注入するステップと、を含む、前記方法。
【請求項１７５】
ステップ（ａ）の前に、前記Ｔ細胞を第２の対象から単離することをさらに含み、前記Ｔ細胞が、前記第１の対象に対して自家性または同種である、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７６】
ステップ（ａ）の前に、
（１）ＧＩＴＲの細胞表面発現について前記Ｔ細胞をアッセイすることと、
（２）ステップ（１）が閾値を超えるＧＩＴＲの検出をもたらさない場合、前記Ｔ細胞をＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体刺激剤とインキュベートすることによって、前記Ｔ細胞の前記表面上でのＧＩＴＲの発現を誘導することと、をさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７７】
ステップ（ａ）の前に、それと同時に、またはその後に、前記Ｔ細胞をＴＣＲ複合体刺激剤とインキュベートすることをさらに含む、請求項１７４に記載の方法。
【請求項１７８】
前記第１の対象に抗癌剤を投与することをさらに含む、請求項１７４、１７５、１７６、または１７７に記載の方法。
【請求項１７９】
前記抗癌剤がワクチンである、請求項１７８に記載の方法。
【請求項１８０】
前記ワクチンが、抗原ペプチドと複合体形成された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含む、請求項１７９に記載の方法。
【請求項１８１】
前記熱ショックタンパク質がｇｐ９６タンパク質であり、腫瘍関連抗原ペプチドと複合体形成され、前記ＨＳＰＰＣが、対象から得られた腫瘍由来である、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８２】
Ｔ細胞の拡張及びＴ細胞エフェクター機能を増強するためのエクスビボ方法であって、Ｔ細胞をエクスビボで請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体とインキュベートすることを含む、前記方法。
【請求項１８３】
前記Ｔ細胞が第１の対象から単離されている、請求項１８２に記載の方法。
【請求項１８４】
前記Ｔ細胞の前記抗体とのインキュベーション前に、それと同時に、またはその後に、前記Ｔ細胞をＴＣＲ複合体刺激剤とインキュベートすることをさらに含む、請求項１８２または１８３に記載の方法。
【請求項１８５】
前記抗体とインキュベートされた前記Ｔ細胞を第２の対象に注入することをさらに含み、前記Ｔ細胞が、前記第２の対象に対して自家性または同種である、請求項１８２、１８３、または１８４に記載の方法。
【請求項１８６】
Ｔ細胞の刺激を増強するための方法であって、ＴＣＲ複合体刺激剤で刺激されたＴ細胞をエクスビボで請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体とインキュベートすることを含む、前記方法。
【請求項１８７】
Ｔ細胞を活性化するための方法であって、Ｔ細胞をエクスビボでＴＣＲ複合体刺激剤及び請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体とインキュベートすることを含む、前記方法。
【請求項１８８】
前記Ｔ細胞が、第１の対象から単離された、請求項１８６または１８７に記載の方法。
【請求項１８９】
前記抗体とインキュベートされた前記Ｔ細胞を第２の対象に注入することをさらに含み、前記Ｔ細胞が、前記第２の対象に対して自家性または同種である、請求項１８６、１８７、または１８８に記載の方法。
【請求項１９０】
前記対象がヒトである、請求項１３８〜１７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９１】
前記第１の対象がヒトである、請求項１７４、１７６、１７７、１８３、１８４、または１８８に記載の方法。
【請求項１９２】
前記第１の対象及び前記第２の対象がヒトである、請求項１７５、１７８、１７９、１８０、１８１、１８５、または１８９に記載の方法。
【請求項１９３】
対象におけるＴ制御性細胞の拡張よりもエフェクターＴ細胞を優先的に拡張させるための方法であって、前記対象に有効量の請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体または請求項１３６もしくは１３７に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項１９４】
前記対象がヒトである、請求項１９３に記載の方法。
【請求項１９５】
ＴＣＲアゴニストの不在下でＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強することができる抗ＧＩＴＲ抗体を特定する方法であって、ＴＣＲアゴニストの不在下でＧＩＴＲを発現する細胞を抗ＧＩＴＲ抗体と接触させることと、ＧＩＴＲ活性を測定することと、を含み、前記抗ＧＩＴＲ抗体の不在下でのＧＩＴＲ活性と比較して増加したＧＩＴＲ活性が、前記抗ＧＩＴＲ抗体が、ＴＣＲアゴニストの不在下でＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強することができることを示す、前記方法。
【請求項１９６】
前記ＧＩＴＲ活性が、ＮＦ−κＢ活性を測定することによって査定される、請求項１９５に記載の方法。
【請求項１９７】
前記ＧＩＴＲ活性が、正準及び非正準ＮＦ−κＢ経路の活性化を測定することによって査定される、請求項１９５に記載の方法。
【請求項１９８】
前記ＧＩＴＲ活性が、ＴＲＡＦアダプター媒介シグナル伝達経路の活性化を測定することによって査定され、前記ＴＲＡＦアダプターが、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、及びＴＲＡＦ５からなる群から選択される、請求項１９５に記載の方法。
【請求項１９９】
前記ＧＩＴＲ活性が、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路の活性化を測定することによって査定される、請求項１９５に記載の方法。
【請求項２００】
前記抗ＧＩＴＲ抗体が、前記抗ＧＩＴＲ抗体の不在下での前記ＧＩＴＲ活性と比較して前記ＧＩＴＲ活性を少なくとも２倍増加させる、請求項１９５〜１９９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０１】
前記細胞がＴ細胞である、請求項１９５〜２００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０２】
前記細胞がＴ細胞ではない、請求項１９５〜２００のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０３】
ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、ＴＣＲ誘発の不在下で細胞におけるＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強することができる、前記単離された抗体。
【請求項２０４】
ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体であって、ＴＣＲ誘発の不在下で細胞におけるＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強することができる、前記単離された抗体。
【請求項２０５】
対象における癌を治療する方法であって、前記対象に有効量の請求項２０３または２０４に記載の抗体を投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されており、かつ参照により全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０１５年５月２７日に作成されたこのＡＳＣＩＩの複写は、３６１７．００９ＰＣ０２＿ＳＬ＿ＰａｔｅｎｔＩｎ＿ＳＴ２５．ｔｘｔという名前であり、７４７，１２９バイトのサイズである。
【０００２】
１．  分野
本開示は、ヒトグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連受容体（ＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体及びかかる抗体を含む組成物を提供する。具体的な一態様では、本抗体は、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合し、かかる抗体を利用してＧＩＴＲ活性を調節する、例えば、ＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を増強もしくは誘導する。本開示は、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合し、かつＧＩＴＲ活性を調節する、例えば、ＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を増強もしくは誘導する抗体を投与することによって、癌及び感染症等の障害を治療するための方法も提供する。
【背景技術】
【０００３】
２．  背景
ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーであるグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）は、先天性及び適応性免疫系の多くの成分において発現し、後天性及び先天性免疫の両方を刺激する（Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ  ９４：６２１６−６２２１、Ｈａｎａｂｕｃｈｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｂｌｏｏｄ  １０７：３６１７−３６２３、Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ＆  Ｒｉｃｃａｒｄｉ  Ｃ（２００５）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３５：１０１６−１０２２、Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３７：１１６５−１１６９）。それは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状（ＤＣ）細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含むいくつかの細胞及び組織において発現し、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、内皮細胞、かつ腫瘍細胞においても発現するそのリガンドであるＧＩＴＲＬによって活性化される。ＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ系は、自己免疫／炎症応答の発症に関与し、感染及び腫瘍への応答を強化する。例えば、動物をＧＩＴＲ−Ｆｃ融合タンパク質で治療することにより、自己免疫／炎症性疾患が改善される一方で、ＧＩＴＲ誘発は、ウイルス感染、細菌感染、及び寄生虫感染を治療するのに有効であり、腫瘍に対する免疫応答を高めるのにも有効である（Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １６５：２０８９−９９）。これらの効果は、エフェクターＴ細胞の同時活性化、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞の阻害、ＮＫ細胞の同時活性化、マクロファージの活性化、樹状細胞機能の調節、及び血管外遊出プロセスの制御を含む、いくつかの同時発生機構に起因する。ＧＩＴＲの膜発現は、Ｔ細胞の活性化後に増加する（Ｈａｎａｂｕｃｈｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）（上記参照）、Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ＆  Ｒｉｃｃａｒｄｉ  Ｃ（上記参照））。その誘発は、エフェクターＴリンパ球を同時活性化する（ＭｃＨｕｇｈ  ＲＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １６：３１１−３２３、Ｓｈｉｍｉｚｕ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３：１３５−１４２、Ｒｏｎｃｈｅｔｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４：６１３−６２２、Ｔｏｎｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）ＰＮＡＳ  １００：１５０５９−１５０６４）。ＧＩＴＲ活性化は、腫瘍及びウイルス感染への耐性を増加させ、自己免疫／炎症プロセスに関与し、白血球の血管外遊出を制御する（Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ＆  Ｒｉｃｃａｒｄｉ  Ｃ（２００５）（上記参照）、Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  ７６：９３３−９４０、Ｓｈｅｖａｃｈ  ＥＭ  ＆  Ｓｔｅｐｈｅｎｓ  ＧＬ（２００６）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：６１３−６１８、Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７７：６３１−６４１、Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２１：１１７−１２９）。
【０００４】
ヒトＧＩＴＲは、末梢（非活性化）Ｔ細胞において非常に低いレベルで発現する。Ｔ細胞の活性化後、ＧＩＴＲは、数日間、ＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞の両方において強力に上方制御される（Ｋｗｏｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：６０５６−６０６１、Ｇｕｒｎｅｙ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ  ９：２１５−２１８、Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）（上記参照）、Ｓｈｉｍｉｚｕ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）（上記参照）、Ｊｉ  ＨＢ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）（上記参照）、Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｂｌｏｏｄ  １００：３５０−３５２、Ｌｉ  Ｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  ２１：８３−９２）、ＣＤ４＋細胞は、ＣＤ８＋細胞よりも高いＧＩＴＲ発現を有する（Ｋｏｂｅｒ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３８（１０）：２６７８−８８；  Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４１（８）：２２６９−７８）。
免疫応答を調節するヒトＧＩＴＲの役割を考慮して、ＧＩＴＲに特異的に結合する抗体及びＧＩＴＲ活性を調節するためのそれらの抗体の使用が本明細書に提供される。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ  ９４：６２１６−６２２１
【非特許文献２】Ｈａｎａｂｕｃｈｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｂｌｏｏｄ  １０７：３６１７−３６２３
【非特許文献３】Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ＆  Ｒｉｃｃａｒｄｉ  Ｃ（２００５）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３５：１０１６−１０２２
【非特許文献４】Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３７：１１６５−１１６９
【非特許文献５】Ｎｏｃｅｎｔｉｎｉ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １６５：２０８９−９９
【非特許文献６】ＭｃＨｕｇｈ  ＲＳ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １６：３１１−３２３
【非特許文献７】Ｓｈｉｍｉｚｕ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｎａｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３：１３５−１４２
【非特許文献８】Ｒｏｎｃｈｅｔｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４：６１３−６２２
【非特許文献９】Ｔｏｎｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）ＰＮＡＳ  １００：１５０５９−１５０６４
【非特許文献１０】Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  ７６：９３３−９４０
【非特許文献１１】Ｓｈｅｖａｃｈ  ＥＭ  ＆  Ｓｔｅｐｈｅｎｓ  ＧＬ（２００６）Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６：６１３−６１８
【非特許文献１２】Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １７７：６３１−６４１
【非特許文献１３】Ｃｕｚｚｏｃｒｅａ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ２１：１１７−１２９
【非特許文献１４】Ｋｗｏｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７４：６０５６−６０６１
【非特許文献１５】Ｇｕｒｎｅｙ  ＡＬ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｃｕｒｒ  Ｂｉｏｌ  ９：２１５−２１８
【非特許文献１６】Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｂｌｏｏｄ  １００：３５０−３５２
【非特許文献１７】Ｌｉ  Ｚ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｊ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ  ２１：８３−９２
【非特許文献１８】Ｋｏｂｅｒ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００８）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３８（１０）：２６７８−８８
【非特許文献１９】Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１１）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ４１（８）：２２６９−７８
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
３．  概要
一態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体及びそれらの断片が本明細書に提供される。一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片は、当業者に既知の方法または本明細書に記載の方法（例えば、以下の項６．２．５．２及び６．２．５．４を参照されたい）によって査定される、ＧＩＴＲリガンド（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲへの結合を部分的に阻害する。具体的な一実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本抗体またはその抗原結合断片は、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭのＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を８０％未満阻害する。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を４０％〜７０％、５０％〜７０％、５０％〜８０％、または４０％〜８０％阻害する。別の具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の少なくとも２０％は、あるアッセイにおいて、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合し、このアッセイは、（ａ）ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングすること、（ｂ）４０ビーズ／μＬの濃度のこのＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズをウェル中で本抗体とインキュベートするか、または本抗体なしでインキュベートすること、（ｃ）標識ＧＩＴＲＬ（例えば、標識ヒトＧＩＴＲＬ）をこのウェルに添加して、最終濃度０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）及び最終濃度２０ビーズ／μＬのＧＩＴＲカップリングビーズを得ること、及び（ｄ）例えば、懸濁アレイアッセイにより、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）を検出することである。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の２０％〜６０％、２０％〜５０％、３０％〜６０％または３０％〜５０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。
【０００７】
ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、またはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、またはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＳＧＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＸ８ＱＫＦＸ９Ｘ１０（配列番号２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＴであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、またはＡであり、
Ｘ３が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、またはＰであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、またはＡであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、またはＡであり、
Ｘ６が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＴであり、
Ｘ７が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、またはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ９が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｑ、またはＡであり、
Ｘ１０が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、またはＡである、ＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号３）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｆ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｍ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、またはＳであり、
Ｘ２が、ＡまたはＤであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、またはＶである、ＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＫＸ８ＹＬＸ９（配列番号４）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、またはＭであり、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＳであり、
Ｘ３が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ５が、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ６が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ７が、Ｑ、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ９が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、またはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＴＲＸ２Ｘ３（配列番号５）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｗ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＡであり、
Ｘ２が、Ｅ、Ｄ、またはＡであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２ＹＸ３Ｘ４ＰＹＴ（配列番号６）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、またはＹであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ｅ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、またはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む。
他の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号７）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、またはＧであり、
Ｘ２が、ＡまたはＶであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２ＴＸ３ＳＧＸ４Ｘ５Ｘ６ＹＮＱＫＦＸ７Ｘ８（配列番号８）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、ＶまたはＬであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、またはＱであり、
Ｘ３が、ＹまたはＦであり、
Ｘ４が、Ｄ、Ｅ、またはＧであり、
Ｘ５が、ＶまたはＬであり、
Ｘ６が、ＴまたはＳであり、
Ｘ７が、Ｋ、Ｒ、またはＱであり、
Ｘ８が、Ｄ、Ｅ、またはＧである、ＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号９）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＸ１ＮＱＫＮＹＬＸ２（配列番号１０）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、ＧまたはＳであり、
Ｘ２が、ＴまたはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）アミノ酸配列ＱＮＸ１ＹＳＸ２ＰＹＴ（配列番号１２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、ＤまたはＥであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、またはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む。
【０００８】
いくつかの実施形態では、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、またはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、またはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＳＧＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＸ８ＱＫＦＸ９Ｘ１０（配列番号２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＴであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、またはＡであり、
Ｘ３が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、またはＰであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、またはＡであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、またはＡであり、
Ｘ６が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＴであり、
Ｘ７が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、またはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ９が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｑ、またはＡであり、
Ｘ１０が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、またはＡである、ＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号３）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｆ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｍ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、またはＳであり、
Ｘ２が、ＡまたはＤであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、またはＶである、ＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＫＸ８ＹＬＸ９（配列番号４）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、またはＭであり、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、またはＳであり、
Ｘ３が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ５が、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ６が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ７が、Ｑ、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ９が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、またはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＴＲＸ２Ｘ３（配列番号５）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｗ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｈ、またはＡであり、
Ｘ２が、Ｅ、Ｄ、またはＡであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２ＹＸ３Ｘ４ＰＹＴ（配列番号６）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、またはＹであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ｅ、またはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、またはＡであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、またはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３、１９〜２３、及び１１７〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５及び配列番号１１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４、２４〜３３、及び１２０〜１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１４、１１５、及び１９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５、３４及び１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６及び１０１〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１７及び１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１８、１０６〜１０９、１９２、及び１９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３を含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表６の抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表５の抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、当業者に既知の方法または本明細書に記載の方法（例えば、以下の項６．２．５．２及び６．２．５．４を参照されたい）によって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を部分的に阻害する。ある特定の実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本抗体またはその抗原結合断片は、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭのＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度で０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を８０％未満阻害する。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を４０％〜７０％、５０％〜７０％、５０％〜８０％、または４０％〜８０％阻害する。具体的な実施形態では、以下のステップ、（ａ）ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングするステップと、（ｂ）４０ビーズ／μＬの濃度のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズをウェル中で本抗体とインキュベートするか、または本抗体なしでインキュベートするステップと、（ｃ）標識ＧＩＴＲＬ（例えば、標識ヒトＧＩＴＲＬ）をこのウェルに添加して、最終濃度０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）、最終濃度２０ビーズ／μＬのＧＩＴＲカップリングビーズを得るステップと、（ｄ）例えば、懸濁アレイアッセイにより、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）を検出するステップと、を含むアッセイにおいて、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の少なくとも２０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の２０％〜６０％、２０％〜５０％、３０％〜６０％または３０％〜５０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。
【０００９】
別の実施形態では、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号７）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、またはＧであり、
Ｘ２が、ＡまたはＶであり、
Ｘ３が、ＹまたはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１と、
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２ＴＸ３ＳＧＸ４Ｘ５Ｘ６ＹＮＱＫＦＸ７Ｘ８（配列番号８）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、ＶまたはＬであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、またはＱであり、
Ｘ３が、ＹまたはＦであり、
Ｘ４が、Ｄ、Ｅ、またはＧであり、
Ｘ５が、ＶまたはＬであり、
Ｘ６が、ＴまたはＳであり、
Ｘ７が、Ｋ、Ｒ、またはＱであり、
Ｘ８が、Ｄ、Ｅ、またはＧである、ＶＨ  ＣＤＲ２と、
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号９）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３と、
（ｄ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＸ１ＮＱＫＮＹＬＸ２（配列番号１０）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、ＧまたはＳであり、
Ｘ２が、ＴまたはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ１と、
（ｅ）アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２と、
（ｆ）アミノ酸配列ＱＮＸ１ＹＳＸ２ＰＹＴ（配列番号１２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、ＤまたはＥであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、またはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が本明細書に提供される。
ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３、１９〜２３、及び１１７〜１１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、３５及び１１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１４、２４〜３３、及び１２０〜１８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１１４、１１５、及び１９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１５、３４及び１８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１６及び１０１〜１０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１７及び１０５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１８、１０６〜１０９、１９２、及び１９３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３を含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、当業者に既知の方法または本明細書に記載の方法（例えば、以下の項６．２．５．２及び６．２．５．４を参照されたい）によって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を阻止しない。ある特定の実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本抗体またはその抗原結合断片は、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭのＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を８０％未満阻害する。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒ��ＧＩＴＲ）への結合を４０％〜７０％、５０％〜７０％、５０％〜８０％、または４０％〜８０％阻害する。具体的な実施形態では、以下のステップ、（ａ）ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングするステップと、（ｂ）４０ビーズ／μＬの濃度のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズをウェル中で本抗体とインキュベートするか、または本抗体なしでインキュベートするステップと、（ｃ）標識ＧＩＴＲＬ（例えば、標識ヒトＧＩＴＲＬ）をこのウェルに添加して、最終濃度０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）及び最終濃度２０ビーズ／μＬのＧＩＴＲカップリングビーズを得るステップと、（ｄ）例えば、懸濁アレイアッセイにより、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）を検出するステップと、を含むアッセイにおいて、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の少なくとも２０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の２０％〜６０％、２０％〜５０％、３０％〜６０％または３０％〜５０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。
【００１０】
具体的な一実施形態では、（ａ）アミノ酸配列ＤＹＡＭＹ（配列番号１３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲ１と、（ｂ）アミノ酸配列ＶＩＲＴＹＳＧＤＶＴＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号１４）を含むＶＨ  ＣＤＲ２と、（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号１５）を含むＶＨ  ＣＤＲ３と、（ｄ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴ（配列番号１６）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ１と、（ｅ）アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１７）を含むＶＬ  ＣＤＲ２と、（ｆ）アミノ酸配列ＱＮＤＹＳＹＰＹＴ（配列番号１８）を含むＶＬ  ＣＤＲ３と、を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の実施形態では、表１及び表２の抗体２２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含む、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、当業者に既知の方法または本明細書に記載の方法（例えば、以下の項６．２．５．２及び６．２．５．４を参照されたい）によって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を部分的に阻害する。ある特定の実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本抗体またはその抗原結合断片は、懸濁アレイアッセイにおいて、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合に対して、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）の８０％未満を阻害する。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＧＩＴＲＬのヒトＧＩＴＲへの結合を５０％〜７０％阻害する。具体的な実施形態では、以下のステップ、（ａ）ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングするステップと、（ｂ）４０ビーズ／μＬの濃度のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズをウェル中で本抗体とインキュベートするか、または本抗体なしでインキュベートするステップと、（ｃ）標識ＧＩＴＲＬ（例えば、標識ヒトＧＩＴＲＬ）をこのウェルに添加して、最終濃度０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）及び最終濃度２０ビーズ／μＬのＧＩＴＲカップリングビーズを得るステップと、（ｄ）例えば、懸濁アレイアッセイにより、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）を検出するステップと、を含むアッセイにおいて、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の少なくとも２０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の２０％〜６０％、２０％〜５０％、３０％〜６０％または３０％〜５０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でヒトＧＩＴＲに結合するヒトＧＩＴＲＬの量の３０％〜５０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でヒトＧＩＴＲに結合する。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストである。
【００１１】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、配列番号２０３の重鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つを含む重鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、配列番号２０１、配列番号２０６、及び配列番号２１５〜３８９からなる群から選択される重鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の重鎖可変領域配列の１、２、３、または４つのフレームワーク領域を含む。別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、ヒト由来のフレームワーク領域を有する重鎖可変領域を含む。別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその抗原結合断片は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列であるか、またはそれ由来の重鎖可変フレームワーク領域を含み、このアミノ酸配列は、ＩＧＨＶ１−２＊０２（配列番号６０１）、ＩＧＨＶ１−３＊０１（配列番号６０２）、ＩＧＨＶ１−４６＊０１（配列番号６０３）、ＩＧＨＶ１−１８＊０１（配列番号６０４）、ＩＧＨＶ１−６９＊０１（配列番号６０５）、及びＩＧＨＶ７−４−１＊０２（配列番号６０６）からなる群から選択される。具体的な実施形態では、前記アミノ酸配列由来の重鎖可変フレームワーク領域は、最大１０個のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入、好ましくは最大１０個のアミノ酸置換を有する前記アミノ酸配列からなる。特定の一実施形態では、前記アミノ酸配列由来の重鎖可変フレームワーク領域は、対応する非ヒト重鎖可変フレームワーク領域内の類似位置に見られるアミノ酸で置換される１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する前記アミノ酸配列からなる。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、アミノ酸配列配列番号６０１由来の重鎖可変フレームワーク領域を含み、アミノ酸配列配列番号６０１の少なくとも１、２、３、４、または５個（ある特定の実施形態では、最大１０個）のアミノ酸は、対応する非ヒト重鎖可変フレームワーク領域内の類似位置に見られるアミノ酸で置換される。ある特定の実施形態では、このアミノ酸置換は、２４、４８、６７、７１、７３、及び９４からなる群から選択されるアミノ酸位置においてであり、各群メンバーのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。具体的な実施形態では、このアミノ酸置換は、２４Ｇ、４８Ｉ、６７Ａ、７１Ｖ、７３Ｋ、及び９４Ｋからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。
【００１２】
別の実施形態では、配列番号２０１、２０６、及び配列番号２１５〜３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、配列番号２０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の具体的な実施形態では、配列番号２０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。
【００１３】
別の実施形態では、配列番号５５３、５５４、及び５６７〜５７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の実施形態では、配列番号５８１及び５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。
【００１４】
別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、配列番号２０４または配列番号２０５の軽鎖可変領域配列の１、２、３、または４つのフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域配列を含む。別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、配列番号２０２、配列番号２０７、配列番号２０８、及び配列番号４００〜５１８からなる群から選択される軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の軽鎖可変領域配列の１、２、３、または４つのフレームワーク領域を含む。別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、配列番号５１９の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の軽鎖可変領域配列の１、２、３、または４つのフレームワーク領域を含む。別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、ヒト由来のフレームワーク領域を有する軽鎖可変配列を含む。別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列であるか、またはそれ由来の軽鎖可変フレームワーク領域を含み、このアミノ酸配列は、ＩＧＫＶ４−１＊０１（配列番号６０７）及びＩＧＫＶ３−７＊０２（配列番号６０８）からなる群から選択される。具体的な実施形態では、前記アミノ酸配列由来の軽鎖可変フレームワーク領域は、最大１０個のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入、好ましくは最大１０個のアミノ酸置換の存在を除く前記アミノ酸配列からなる。特定の一実施形態では、前記アミノ酸配列由来の軽鎖可変フレームワーク領域は、対応する非ヒト軽鎖可変フレームワーク領域内の類似位置に見られるアミノ酸で置換される１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する前記アミノ酸配列からなる。別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、アミノ酸配列配列番号６０７または配列番号６０８であるか、またはそれ由来の軽鎖可変フレームワーク領域を含み、アミノ酸配列配列番号６０７または配列番号６０８の少なくとも１、２、３、４、または５個（ある特定の実施形態では、最大１０）個のアミノ酸が、対応する非ヒト軽鎖可変フレームワーク領域内の類似位置に見られるアミノ酸で置換される。ある特定の実施形態では、このアミノ酸置換は、アミノ酸位置８７においてであり、このアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。具体的な実施形態では、このアミノ酸置換は、８７Ｈのアミノ酸置換であり、このアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。
【００１５】
別の実施形態では、配列番号２０２、配列番号２０７、配列番号２０８、及び配列番号４００〜５１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の実施形態では、配列番号５１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、配列番号２０４または配列番号２０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の具体的な実施形態では、配列番号２０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の具体的な実施形態では、配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。
【００１６】
別の実施形態では、配列番号５５５、５５６、及び５７１〜５７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖配列を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。
【００１７】
別の実施形態では、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つの表のある抗体のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の実施形態では、表１７のある抗体のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、（ａ）配列番号２０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域及び（ｂ）配列番号２０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の具体的な実施形態では、（ａ）配列番号２０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、（ｂ）配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。
【００１８】
具体的な一実施形態では、ヒト免疫グロブリン由来のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、ＶＨ  ＣＤＲ３、及びフレームワーク領域を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供され、ＶＨ  ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＤＹＡＭＹ（配列番号１３）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨ  ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＶＩＲＴＹＳＧＤＶＴＹＮＱＫＦＫＤ（配列番号１４）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨ  ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号１５）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる。別の実施形態では、ヒト免疫グロブリン由来のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、及びフレームワーク領域を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供され、ＶＬ  ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴ（配列番号１６）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になり、ＶＬ  ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１７）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になり、ＶＬ  ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＮＤＹＳＹＰＹＴ（配列番号１８）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる。別の実施形態では、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の実施形態では、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、及び４００〜５１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の実施形態では、配列番号５１９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、当業者に既知の方法または本明細書に記載の方法（例えば、以下の項６．２．５．２及び６．２．５．４を参照されたい）によって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を部分的に阻害する。ある特定の実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本抗体またはその抗原結合断片は、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭのＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度で０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を８０％未満阻害する。具体的な実施形態では、以下のステップ、（ａ）ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングするステップと、（ｂ）４０ビーズ／μＬの濃度のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズをウェル中で本抗体とインキュベートするか、または本抗体なしでインキュベートするステップと、（ｃ）標識ＧＩＴＲＬ（例えば、標識ヒトＧＩＴＲＬ）をこのウェルに添加して、最終濃度０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）及び最終濃度２０ビーズ／μＬのＧＩＴＲカップリングビーズを得るステップと、（ｄ）例えば、懸濁アレイアッセイにより、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）カップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）を検出するステップと、を含むアッセイにおいて、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の少なくとも２０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の量の２０％〜６０％、２０％〜５０％、３０％〜６０％または３０％〜５０％が、本抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。
【００１９】
具体的な一実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供され、これらのＶＨ及びＶＬは、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つのある抗体のアミノ酸配列を含む。具体的な一実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供され、これらのＶＨ及びＶＬは、表１７のある抗体のアミノ酸配列を含む。
【００２０】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、重鎖及び／または軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、この重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２からなるヒト免疫グロブリンの群から選択される。ある特定の実施形態では、この軽鎖定常領域は、ＩｇＧκ及びＩｇＧλからなるヒト免疫グロブリンの群から選択される。具体的な一実施形態では、ＩｇＧ１は、非フコシル化ＩｇＧ１である。別の具体的な実施形態では、本抗体は、Ｎ２９７ＡまたはＮ２９７Ｑ変異を含むＩｇＧ１である。別の具体的な実施形態では、本抗体は、Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４である。別の具体的な実施形態では、本抗体は、Ｃ１２７Ｓ変異を含むＩｇＧ２である。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、配列番号５５７〜５６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、配列番号５８３及び５８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、アミノ酸位置１８０でのＮからＡまたはＱへのアミノ酸置換を有する配列番号５５７〜５６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、配列番号５８８〜５９１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、配列番号５６３〜５６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。
【００２１】
具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５３、５５４、及び５６７〜５７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５、５５６、及び５７１〜５７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５６７のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５６７のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００２２】
別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２９８でのＮからＡまたはＱへのアミノ酸置換を有する配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５、５５６、及び５７１〜５７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２９８でのＮからＡまたはＱへのアミノ酸置換を有する配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２９８でのＮからＡまたはＱへのアミノ酸置換を有する配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【００２３】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗体と同じＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）のエピトープに結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。別の実施形態では、ｉ）配列番号７０１の残基２６〜２４１を含むヒトＧＩＴＲ、及びｉｉ）配列番号６９９の残基２６〜２３４を含むカニクイザルＧＩＴＲの変異型の各々に特異的に結合する単離された抗体が本明細書に提供され、この抗体は、配列番号７０４の残基２６〜２３４を含むカニクイザルＧＩＴＲに特異的に結合しない。別の実施形態では、ｉ）配列番号７０１の残基２６〜２４１を含むヒトＧＩＴＲ、及びｉｉ）配列番号６９９の残基２６〜２３４を含むカニクイザルＧＩＴＲの変異型の各々に特異的に結合する単離された抗体が本明細書に提供され、この抗体は、配列番号７０４の残基２６〜２３４を含むカニクイザルＧＩＴＲへの実質的な結合を呈しない。別の実施形態では、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体が本明細書に提供され、このヒトＧＩＴＲは、配列番号７０１の残基２６〜２４１を含み、本抗体と変異型ＧＩＴＲとの間の結合は、本抗体とこのヒトＧＩＴＲとの間の結合に対して実質的に弱められ、この変異型ＧＩＴＲは、Ｄ６０Ａ及びＧ６３Ａからなる群から選択されるアミノ酸置換を除く配列番号７０１の残基２６〜２４１を含む。一実施形態では、この置換は、Ｄ６０Ａである。別の実施形態では、この置換は、Ｇ６３Ａである。別の実施形態では、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体が本明細書に提供され、このヒトＧＩＴＲは、配列番号７０１の残基２６〜２４１を含み、本抗体は、配列番号７０１の残基６０〜６３を含むエピトープに結合する。別の実施形態では、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体が本明細書に提供され、このヒトＧＩＴＲは、配列番号７０１の残基２６〜２４１を含み、本抗体は、配列番号７０１の残基６０〜６３によって示されるアミノ酸配列内の少なくとも１つの残基に結合する。一実施形態では、本抗体は、配列番号７０１の残基６０、６２、及び６３からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。一実施形態では、本抗体は、配列番号７０１の残基６２及び６３からなる群から選択される少なくとも１つの残基に結合する。一実施形態では、本抗体は、ヒトＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を増強する。別の実施形態では、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体が本明細書に提供され、このヒトＧＩＴＲは、配列番号７０１の残基２６〜２４１を含み、本抗体は、配列番号７０１の残基６０または６３のうちの少なくとも一方を含むヒトＧＩＴＲのエピトープに結合する。別の実施形態では、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する単離された抗体が本明細書に提供され、本抗体は、ヒトＧＩＴＲへの結合と比較して、Ｄ６０ＡまたはＧ６３Ａアミノ酸置換の存在を除いてヒトＧＩＴＲと同一のタンパク質への結合の減少または不在を呈する。一実施形態では、本抗体は、ヒトＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と競合する抗体またはその抗原結合断片が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片がＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において自己競合する程度まで、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と競合する抗体またはその抗原結合断片が本明細書に提供される。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と競合する第１の抗体またはその抗原結合断片が本明細書に提供され、この第１の抗体またはその抗原結合断片は、以下のステップ、（ａ）ＧＩＴＲトランスフェクト細胞を非標識形態の第１の抗体またはその抗原結合断片と容器内でインキュベートするステップと、（ｂ）標識形態の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片をこの容器内の細胞に添加し、この細胞をこの容器内でインキュベートするステップと、（ｃ）標識形態の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片のこの細胞への結合を検出ステップと、を含むアッセイにおいて、結合において競合する。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と競合する第１の抗体またはその抗原結合断片が本明細書に提供され、この競合は、第１の抗体またはその抗原結合断片のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合の８０％超（例えば、８５％、９０％、９５％、もしくは９８％、または８０％〜８５％、８０％〜９０％、８５％〜９０％、もしくは８５％〜９５％）の減少として呈される。
【００２４】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体またはその断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、ヒト化抗体、マウス抗体、またはキメラ抗体である。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、約０．５ｎＭ〜５ｎＭの範囲のＫＤを有するＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、検出可能な標識を含む。具体的な実施形態では、本明細書に提供される抗体は単離されている。
【００２５】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体または断片は、ＴＣＲ誘発非依存性の細胞におけるヒトＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。具体的な実施形態では、この細胞は、Ｔ細胞である。具体的な実施形態では、この細胞は、Ｔ細胞ではない。具体的な実施形態では、この細胞は、Ｂ細胞、形質細胞、記憶細胞、ナチュラルキラー細胞、顆粒球、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、単球、樹状細胞、形質細胞様樹状細胞、ＮＫＴ細胞、及びマクロファージからなる群から選択される。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、ＴＣＲ誘発非依存性のＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。ある特定の実施形態では、ＮＦ−κＢの活性は、例えば、以下のステップ、（ａ）抗ＣＤ３抗体の不在下でＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物（例えば、ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ  ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ２Ｐ構築物）及びＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を発現するＴ細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞）を、例えば、１２．５、１０、５、２．５、１．２５、または０．６２５μｇ／ｍＬの抗体濃度の本明細書に記載の抗体またはアイソタイプ対照抗体とインキュベートするステップと、（ｂ）例えばインキュベーションの２、５、６、８、または１８時間後に、例えばＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダー２１００を使用してルシフェラーゼシグナルを読み取るステップであって、アイソタイプ対照抗体に対する陽性ルシフェラーゼシグナルがＮＦ−κＢの活性を示す、読み取るステップと、を含むアッセイにおいて査定され得る。特定の一実施形態では、ルシフェラーゼシグナルは、インキュベーションの５時間後に読み取られる。
【００２６】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体または断片は、多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合を増加させる。具体的な実施形態では、多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合の増加は、例えば、以下のステップ、（ａ）例えばヒトＰＢＭＣを、例えば様々な準最適濃度（例えば、０．３〜５μｇ／ｍＬ）の抗ＣＤ３抗体、及び例えば５μｇ／ｍＬの例えばＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはアイソタイプ対照抗体と、例えば３７℃及び５％ＣＯ２で３〜４日間インキュベートするステップと、（ｂ）細胞を、例えばブレフェルジンＡで、例えば３７℃及び５％ＣＯ２で６時間処理するステップと、（ｃ）例えば抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、及び抗ＣＤ８α抗体を使用して、この細胞の表面を染色するステップと、（ｄ）例えば抗ＩＦＮγ抗体及び抗ＴＮＦα抗体を使用して、細胞内染色するステップと、（ｅ）アイソタイプ対照抗体に対する多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合を決定するステップと、を含むアッセイにおいて査定され得る。具体的な実施形態では、この多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞は、多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）ＣＤ４＋Ｔ細胞及び多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）ＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群から選択される。
【００２７】
具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、活性化されたエフェクターＴ細胞に結合しているときに、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（ＣＤ１６）レポーターアッセイまたは以下の実施例に記載のアッセイ）によって査定される、ＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ６４からなる群から選択される活性化Ｆｃガンマ受容体に結合する程度を超えて（例えば、その１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍）、活性化された制御性Ｔ細胞に結合しているときに、ＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ６４からなる群から選択される活性化Ｆｃガンマ受容体に結合する。具体的な実施形態では、この活性化Ｆｃガンマ受容体は、骨髄由来のエフェクター細胞及びリンパ球由来のエフェクター細胞からなる群から選択される細胞上で発現する。特定の一実施形態では、この活性化Ｆｃガンマ受容体は、ＣＤ１６である。
【００２８】
具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、活性化されたエフェクターＴ細胞に結合しているときに、ＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ６４からなる群から選択される活性化Ｆｃガンマ受容体の活性化を引き起こすよりも強力に、活性化された制御性Ｔ細胞に結合しているときに、ＣＤ１６、ＣＤ３２Ａ、及びＣＤ６４からなる群から選択される活性化Ｆｃガンマ受容体の活性化を引き起こす。特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体が活性化された制御性Ｔ細胞に結合しているときの活性化Ｆｃガンマ受容体の活性化は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体が活性化されたエフェクターＴ細胞に結合しているときの活性化Ｆｃガンマ受容体の活性化よりも、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（ＣＤ１６）レポーターアッセイまたは以下の実施例に記載のアッセイ）によって査定される、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍強力である。具体的な実施形態では、この活性化Ｆｃガンマ受容体は、骨髄由来のエフェクター細胞及びリンパ球由来のエフェクター細胞からなる群から選択される細胞上で発現する。特定の一実施形態では、この活性化Ｆｃガンマ受容体は、ＣＤ１６である。
【００２９】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体または断片は、活性化されたＴ細胞におけるＯＸ４０及び／またはＰＤ−１の表面発現を、本明細書に記載の抗体なしの活性化されたＴ細胞におけるＯＸ４０及び／またはＰＤ−１の表面発現に対して、本明細書に記載の方法及び／または当業者に既知の方法によって査定される、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、または１０００倍増加させる。
【００３０】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖可変領域及び／もしくは軽鎖可変領域、または軽鎖及び／もしくは重鎖をコードする核酸分子が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、この核酸分子は、配列番号２０９の核酸配列を含む重鎖可変領域をコードする。別の具体的な実施形態では、この核酸分子は、配列番号２１０または配列番号２１１の核酸配列を含む軽鎖可変領域をコードする。具体的な実施形態では、この核酸分子は単離されている。ある特定の実施形態では、ベクター（例えば、単離されたベクター）は、本明細書に記載の抗体の重鎖可変領域及び／もしくは軽鎖可変領域、または軽鎖及び／もしくは重鎖をコードする核酸分子を含む。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、この核酸分子またはベクターを含む。宿主細胞の例としては、組織培養における大腸菌、シュードモナス、バシラス、ストレプトマイセス、酵母、ＣＨＯ、ＹＢ／２０、ＮＳ０、ＰＥＲ−Ｃ６、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＮＩＨ−３Ｔ３、ＨｅＬａ、ＢＨＫ、Ｈｅｐ  Ｇ２、ＳＰ２／０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＣＯＳ  １、ＣＯＳ  ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＢＭＴ１０細胞、植物細胞、昆虫細胞、及びヒト細胞が挙げられる。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を産生する方法であって、この核酸分子が発現し、この抗体が産生されるように宿主細胞を培養することを含む、方法が本明細書に提供される。
【００３１】
別の実施形態では、Ｔ細胞の共刺激を増強するための方法であって、エクスビボで、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞を、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートすることを含む、方法が本明細書に提供される。別の実施形態では、Ｔ細胞を活性化するための方法であって、エクスビボでＴ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートすることを含む、方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とのインキュベーション前に、それと同時に、またはその後に、エクスビボでＴ細胞をＴＣＲ複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートすることをさらに含む。いくつかの実施形態では、このＴ細胞は、対象から単離されたものである。ある特定の実施形態では、この刺激及び／または活性化されたＴ細胞は、対象に注入される。いくつかの実施形態では、対象に注入されるＴ細胞は、自家性または同種である。具体的な一実施形態では、この対象は、ヒトである。別の実施形態では、対象におけるＴ制御性細胞の拡張よりもエフェクターＴ細胞を優先的に拡張させるための方法であって、対象に有効量の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、この対象は、ヒトである。
【００３２】
別の実施形態では、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞）の拡張ならびに／またはＴ細胞エフェクター機能を増強するための方法であって、エクスビボでＴ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートすることを含む、方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、Ｔ細胞の本抗体またはその抗原結合断片とのインキュベーション前に、それと同時に、またはその後に、Ｔ細胞をＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートすることをさらに含む。ある特定の実施形態では、このＴ細胞は、対象から単離されたものである。いくつかの実施形態では、この方法は、これらのＴ細胞を、それらの拡張及び／またはそれらのエフェクター機能が増強された後に、対象に注入することをさらに含む。ある特定の実施形態では、対象に注入されるＴ細胞は、自家性または同種である。具体的な一実施形態では、この対象は、ヒトである。
【００３３】
別の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞の拡張を増強するための方法であって、エクスビボでこのＴ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートすることを含む、方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、Ｔ細胞の本抗体またはその抗原結合断片とのインキュベーション前に、それと同時に、またはその後に、Ｔ細胞をＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートすることをさらに含む。ある特定の実施形態では、このＴ細胞は、対象から単離されたものである。いくつかの実施形態では、この方法は、これらのＴ細胞を、それらの拡張及び／またはそれらのエフェクター機能が増強された後に、対象に注入することをさらに含む。ある特定の実施形態では、対象に注入されるＴ細胞は、自家性または同種である。具体的な一実施形態では、この対象は、ヒトである。
【００３４】
別の実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞の拡張を増強するための方法であって、エクスビボでこのＴ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートすることを含む、方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、Ｔ細胞の本抗体またはその抗原結合断片とのインキュベーション前に、それと同時に、またはその後に、Ｔ細胞をＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートすることをさらに含む。ある特定の実施形態では、このＴ細胞は、対象から単離されたものである。いくつかの実施形態では、この方法は、これらのＴ細胞を、それらの拡張及び／またはそれらのエフェクター機能が増強された後に、対象に注入することをさらに含む。ある特定の実施形態では、対象に注入されるＴ細胞は、自家性または同種である。具体的な一実施形態では、この対象は、ヒトである。
【００３５】
別の実施形態では、ＧＩＴＲを活性化するか、またはＮＦ−κＢを活性化する方法であって、エクスビボで、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されていないＴ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートすることを含む、方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、このＴ細胞は、対象から単離されたものである。ある特定の実施形態では、この活性化されたＴ細胞は、対象に注入される。いくつかの実施形態では、対象に注入されるＴ細胞は、自家性または同種である。具体的な一実施形態では、この対象は、ヒトである。
【００３６】
別の実施形態では、ＴＣＲ誘発非依存性のＴ細胞を活性化する方法であって、Ｔ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、方法が本明細書に提供される。
【００３７】
別の実施形態では、ＴＣＲ誘発非依存性のＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する方法であって、Ｔ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、方法が本明細書に提供される。
【００３８】
別の実施形態では、多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合を増加させる方法であって、Ｔ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、方法が本明細書に提供される。
【００３９】
別の実施形態では、活性化されたＴ細胞におけるＯＸ４０及び／またはＰＤ−１の表面発現を増加させる方法であって、Ｔ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、方法が本明細書に提供される。
【００４０】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、核酸分子、ベクター、または宿主細胞、及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物が本明細書に提供される。この薬学的組成物を使用して、免疫応答を調節し、かつ／または癌もしくは感染症等の障害を治療及び／または予増することができる。具体的な一実施形態では、対象における免疫応答を調節する方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。特定の一実施形態では、この免疫応答は、増強または誘導される。別の具体的な実施形態では、対象におけるＴ細胞の拡張及び／またはＴ細胞エフェクター機能を増強するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。別の具体的な実施形態では、対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の拡張を増強するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本開示は、癌治療用の薬剤の製造における本明細書に記載の抗体の使用を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、癌治療における使用のための本明細書に記載の抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、癌治療用の薬剤の製造における本明細書に記載の薬学的組成物の使用を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、癌治療における使用のための本明細書に記載の薬学的組成物を提供する。別の具体的な実施形態では、対象における癌を治療する方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、この癌を治療する方法は、対象に抗癌剤を投与することをさらに含む。本明細書に記載の薬学的組成物と組み合わせて対象に投与され得る抗癌剤の例は、以下の項５．４（例えば、項５．４．１及び５．４．１．１）に記載される。具体的な一実施形態では、この抗癌剤は、ワクチンである。特定の一実施形態では、このワクチンは、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）を含み、このＨＳＰＰＣは、１つ以上の抗原ペプチド（例えば、腫瘍関連抗原ペプチド）と複合体形成された熱ショックタンパク質（例えば、ｇｐ９６タンパク質）を含む。ある特定の実施形態では、治療される癌は、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、消化管癌、ホジキンリンパ腫もしくは非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、膠芽腫、膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、骨髄腫、唾液腺癌、腎臓癌、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、睾丸癌、食道癌、またはある種の頭部癌もしくは頸部癌である。ある特定の実施形態では、治療される癌は、線維形成性黒色腫、炎症性乳癌、胸腺腫、直腸癌、肛門癌、または外科的に治療可能もしくは外科的に治療不可能な脳幹膠腫である。具体的な一実施形態では、治療される対象は、ヒトである。
【００４１】
別の実施形態では、対象におけるＴＣＲ誘発非依存性のＴ細胞を活性化するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。
【００４２】
別の実施形態では、対象におけるＴＣＲ誘発非依存性のＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。
【００４３】
別の実施形態では、対象における多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合を増加させるための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。
【００４４】
別の実施形態では、対象における活性化されたＴ細胞におけるＯＸ４０及び／またはＰＤ−１の表面発現を増加させるための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。
【００４５】
本明細書に記載の抗体をＩＤＯ阻害剤と組み合わせて使用して、癌を治療することができる。一実施形態では、対象における癌を治療する方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供され、この方法は、対象にインドールアミン−２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤を投与することをさらに含む。癌治療における使用のための本明細書に記載のＩＤＯ阻害剤は、錠剤、丸剤、またはカプセル剤等の薬学的組成物の固体剤形で存在し、この薬学的組成物は、ＩＤＯ阻害剤及び薬学的に許容される賦形剤を含む。したがって、本明細書に記載の抗体及び本明細書に記載のＩＤＯ阻害剤は、別個の剤形と別個に、連続して、または同時に投与され得る。一実施形態では、この抗体は、非経口投与され、このＩＤＯ阻害剤は、経口投与される。特定の実施形態では、この阻害剤は、ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔ（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、及びＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔは、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１０／００５９５８号に記載されている。一実施形態では、この阻害剤は、ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔである。別の実施形態では、この阻害剤は、Ｆ００１２８７である。別の実施形態では、この阻害剤は、ｉｎｄｏｘｉｍｏｄである。別の実施形態では、この阻害剤は、ＮＬＧ９１９である。
【００４６】
本明細書に記載の抗体をチェックポイント標的薬と組み合わせて使用して、癌を治療することができる。一実施形態では、対象における癌を治療する方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供され、この方法は、対象にチェックポイント標的薬を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、このチェックポイント標的薬は、ＰＤ−１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体）、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ１抗体）、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−Ｌ２抗体）、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ−４抗体）、ＴＩＭ−３アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＴＩＭ−３抗体）、ＬＡＧ−３アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＬＡＧ−３抗体）、及びＯＸ４０アゴニスト（例えば、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、チェックポイント標的薬、例えば、ＰＤ−１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体）またはＯＸ４０アゴニスト（例えば、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体）は、抗ＧＩＴＲ抗体と同時に投与される。いくつかの実施形態では、チェックポイント標的薬、例えば、ＰＤ−１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体）またはＯＸ４０アゴニスト（例えば、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体）は、抗ＧＩＴＲ抗体の投与前に投与される。いくつかの実施形態では、チェックポイント標的薬、例えば、ＰＤ−１アンタゴニスト（例えば、アンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体）またはＯＸ４０アゴニスト（例えば、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体）は、抗ＧＩＴＲ抗体の投与後に投与される。
【００４７】
本明細書に記載の抗体を抗ＣＤ２５抗体と組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２５抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体と同時に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２５抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体の投与前に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２５抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体の投与後に投与される。
【００４８】
別の具体的な実施形態では、対象における癌を治療する方法であって、抗ＧＩＴＲ抗体を受けているそれを必要とする対象にアンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体を投与することを含む、方法が本明細書に提供され、このＰＤ−１抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体が、投与時の対象におけるＰＤ−１の発現に対して、対象におけるＰＤ−１の発現を増加させたときに投与される。別の具体的な実施形態では、対象における癌を治療する方法であって、抗ＧＩＴＲ抗体を受けているそれを必要とする対象にアゴニスト抗ＯＸ４０抗体を投与することを含む、方法が本明細書に提供され、このＯＸ４０抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体が、投与時の対象におけるＯＸ４０の発現に対して、対象におけるＯＸ４０の発現を増加させたときに投与される。ある特定の実施形態では、この抗ＧＩＴＲ抗体は、ＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。
【００４９】
別の具体的な実施形態では、対象における癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に抗ＧＩＴＲ抗体を投与することであって、この抗ＧＩＴＲ抗体が、投与時の対象におけるＰＤ−１の発現に対して、対象におけるＰＤ−１の発現を増加させる、投与することと、ＰＤ−１の発現が増加したときに対象にアンタゴニスト抗ＰＤ−１抗体を投与することと、を含む、方法が本明細書に提供される。別の具体的な実施形態では、対象における癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に抗ＧＩＴＲ抗体を投与することであって、この抗ＧＩＴＲ抗体が、投与時の対象におけるＯＸ４０の発現に対して、対象におけるＯＸ４０の発現を増加させる、投与することと、ＯＸ４０の発現が増加したときに対象にアゴニストＯＸ４０抗体を投与することと、を含む、方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、この抗ＧＩＴＲ抗体は、ＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。
【００５０】
別の具体的な実施形態では、対象における癌またはウイルス感染を治療する方法であって、（ａ）Ｔ細胞をエクスビボで本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートするステップと、（ｂ）このＴ細胞を対象に注入するステップと、を含む、方法が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、対象に注入されるＴ細胞は、自家性または同種である。ある特定の実施形態では、このＴ細胞は、対象から単離されたものである。いくつかの実施形態では、このＴ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートされない。ある特定の実施形態では、この方法は、ステップ（ａ）の前に、（１）Ｔ細胞をＧＩＴＲの細胞表面発現についてアッセイすることと、（２）ステップ（１）が閾値を超えるＧＩＴＲの検出をもたらさない場合、このＴ細胞をＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートすることによって、このＴ細胞の表面上でＧＩＴＲの発現を誘導することと、をさらに含む。いくつかの実施形態では、この方法は、ステップ（ａ）の前に、それと同時に、またはその後に、Ｔ細胞をＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体刺激剤フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートすることをさらに含む。具体的な一実施形態では、治療される対象は、ヒトである。
【００５１】
別の実施形態では、対象における感染症を治療及び／または予防する方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。感染症の例については、以下の項５．４．１．２を参照されたい。別の具体的な実施形態では、対象におけるウイルス感染を治療する方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、治療されるウイルス感染は、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、単純ヘルペスもしくは他のヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、もしくは他の肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、ＨＩＶ、またはエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）によって引き起こされる。ある特定の実施形態では、このウイルス感染を治療する方法は、対象に抗ウイルス薬を投与することをさらに含む。具体的な一実施形態では、治療される対象は、ヒトである。
【００５２】
別の具体的な実施形態では、ＴＣＲアゴニストの不在下でＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強することができる抗ＧＩＴＲ抗体を特定する方法であって、ＧＩＴＲを発現する細胞をＴＣＲアゴニストの不在下で抗ＧＩＴＲ抗体と接触させることと、ＧＩＴＲ活性を測定することと、を含む、方法が本明細書に提供され、抗ＧＩＴＲ抗体の不在下でのＧＩＴＲ活性と比較して増加したＧＩＴＲ活性は、この抗ＧＩＴＲ抗体が、ＴＣＲアゴニストの不在下でＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強することができることを示す。ある特定の実施形態では、このＧＩＴＲ活性は、ＮＦ−κＢ活性を測定することによって査定される。ある特定の実施形態では、このＧＩＴＲ活性は、ＴＲＡＦアダプター媒介シグナル伝達経路の活性化を測定することによって査定され、このＴＲＡＦアダプターは、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、及びＴＲＡＦ５からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、このＧＩＴＲ活性は、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路の活性化を測定することによって査定される。ある特定の実施形態では、この抗ＧＩＴＲ抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体の不在下でのＧＩＴＲ活性と比較して、ＧＩＴＲ活性を少なくとも２倍増加させる。ある特定の実施形態では、この抗ＧＩＴＲ抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体の不在下でのＧＩＴＲ活性と比較して、ＧＩＴＲ活性を２倍〜２０倍増加させる。ある特定の実施形態では、この抗ＧＩＴＲ抗体は、抗ＧＩＴＲ抗体の不在下でのＧＩＴＲ活性と比較して、ＧＩＴＲ活性を２倍〜１０倍増加させる。ある特定の実施形態では、この細胞は、Ｔ細胞である。ある特定の実施形態では、この細胞は、Ｔ細胞ではない。
【００５３】
別の具体的な実施形態では、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する抗ＧＩＴＲ抗体が本明細書に提供され、前記抗体は、ＴＣＲ誘発の不在下で細胞におけるＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強することができる。別の具体的な実施形態では、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する抗ＧＩＴＲ抗体が本明細書に提供され、前記抗体は、ＴＣＲ誘発の不在下で細胞におけるＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。別の具体的な実施形態では、癌を治療する方法であって、それを必要とする対象に、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合する抗ＧＩＴＲ抗体を投与することを含む、方法が本明細書に提供され、前記抗体は、ＴＣＲ誘発の不在下でＧＩＴＲ及び／もしくはＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強することができる。
３．１用語
【００５４】
本明細書で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修飾するために使用されるとき、５％〜１０％上回り、かつ５％〜１０％下回るその値または範囲の偏差が、列挙される値または範囲の意図される意味に留まることを示す。
【００５５】
本明細書で使用される場合、試験抗体と第１の抗原との間の結合は、例えば所与の実験において、または例えば以下のステップ、（ａ）細胞（例えば、１６２４−５細胞）の表面上で第１の抗原または第２の抗原を発現させるステップと、（ｂ）例えばフローサイトメトリー分析において２μｇ／ｍＬの試験抗体またはポリクローナル抗体を使用して、第１の抗原または第２の抗原を発現する細胞を染色し、例えば２つ以上の測定値の平均として平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を記録するステップであって、このポリクローナル抗体が第１の抗原及び第２の抗原の両方を認識する、ステップと、（ｃ）第２の抗原を発現する細胞の試験抗体のＭＦＩを、第２の抗原を発現する細胞のポリクローナル抗体のＭＦＩ値で除する（ＭＦＩ比２）ステップと、（ｄ）第１の抗原を発現する細胞の試験抗体のＭＦＩ値を、第１の抗原を発現する細胞のポリクローナル抗体のＭＦＩ値で除する（ＭＦＩ比１）ステップと、（ｅ）１００％×（１−（ＭＦＩ比１／ＭＦＩ比２））を計算することにより、結合の減少の割合を決定するステップと、を含むアッセイによって査定される、複数の実験の平均値を使用して、試験抗体と第１の抗原との間の結合が、試験抗体と第２の抗原との間の結合に対して、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、または８０％減少した場合、試験抗体と第２の抗原との間の結合に対して「実質的に弱められる」。
【００５６】
本明細書で使用される場合、抗体は、フローサイトメトリー分析で測定されたときに、抗原への「実質的な結合」を呈さず、抗原に対する抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）値は、抗原に対するアイソタイプ対照抗体のＭＦＩ値またはいずれの抗体の不在下でのＭＦＩ値よりも著しく高くはない。
【００５７】
本明細書で使用される場合、「抗体」及び「抗体」という用語は、当該技術分野の用語であり、本明細書で同義に使用することができ、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を有する分子を指す。
【００５８】
抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、組換え産生された抗体、単一特異的抗体、多特異的抗体（二重特異的抗体を含む）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖分子及び２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖単量体、抗体重鎖単量体、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖−抗体重鎖対、細胞内抗体、ヘテロ共役抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体または一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗Ｉｄ抗体を含む）、及び上述のうちのいずれかの抗原結合断片が挙げられ得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体は、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａもしくはＩｇＧ２ｂ）であり得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４）もしくはサブクラスである。具体的な一実施形態では、本抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。別の具体的な実施形態では、本抗体は、ヒトモノクローナル抗体であり、好ましくは、それは、免疫グロブリンである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ１抗体またはＩｇＧ４抗体である。
【００５９】
本明細書で使用される場合、「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合断片」という用語、及び同様の用語は、抗体分子上で抗原にその特異性を授与するアミノ酸残基（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を含む抗体分子の一部を指す。この抗原結合領域は、齧歯類（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）及びヒト等の任意の動物種由来であり得る。
【００６０】
本明細書で使用される場合、「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、同義に使用することができ、当該技術分野において共通のものである。可変領域は、典型的には、抗体の一部、一般的には、軽鎖または重鎖の一部、典型的には、抗体間の配列が広範に異なり、かつその特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性において使用されるアミノ末端から成熟重鎖の約１１０〜１２０個のアミノ酸及び成熟軽鎖の約９０〜１１５個のアミノ酸を指す。配列の可変性が相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域において凝縮される一方で、可変ドメインにおけるより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。いかなる特定の機構または理論に束縛されることを望むものではないが、軽鎖及び重鎖のＣＤＲが、抗原に対する抗体の相互作用及び特異性に主に関与すると考えられる。ある特定の実施形態では、この可変領域は、ヒト可変領域である。ある特定の実施形態では、この可変領域は、齧歯類またはマウスＣＤＲ及びヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の実施形態では、この可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。ある特定の実施形態では、この可変領域は、齧歯類またはマウスＣＤＲ及び霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
【００６１】
「ＶＬ」及び「ＶＬドメイン」という用語は、抗体の軽鎖可変領域を指すために同義に使用される。
【００６２】
「ＶＨ」及び「ＶＨドメイン」という用語は、抗体の重鎖可変領域を指すために同義に使用される。
【００６３】
「Ｋａｂａｔ番号付け」という用語及び同様の用語は、当該技術分野で認識されており、抗体またはその抗原結合部分の重鎖及び軽鎖可変領域におけるアミノ酸残基の番号付けシステムを指す。ある特定の態様では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムに従って決定することができる（例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ＆  Ｗｕ  ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １９０：３８２−３９１  ａｎｄ  Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照されたい）。Ｋａｂａｔ番号付けシステムを使用して、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸位置３１〜３５に存在し、これらは、１つまたは２つのさらなるアミノ酸を任意に含んでもよく、続いて、３５（Ｋａｂａｔ番号付けスキームにおいて３５Ａ及び３５Ｂと称される）（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０〜６５（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置９５〜１０２（ＣＤＲ３）に存在する。Ｋａｂａｔ番号付けシステムを使用して、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸位置２４〜３４（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０〜５６（ＣＤＲ２）、及びアミノ酸位置８９〜９７（ＣＤＲ３）に存在する。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームに従って決定されている。
【００６４】
本明細書で使用される場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、同義に使用され、当該技術分野においてその共通の意味を有する。この定常領域は、抗体部分、例えば、抗原への抗体の結合に直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用等の様々なエフェクター機能を呈することができる軽鎖及び／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリンの可変ドメインに対して、より保存されたアミノ酸配列を有する。
【００６５】
本明細書で使用される場合、「重鎖」という用語は、抗体の参照において使用されるとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意のはっきりと異なる種類、例えば、それぞれ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭクラスの抗体（ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む）をもたらす、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ）を指し得る。
【００６６】
本明細書で使用される場合、「軽鎖」という用語は、抗体の参照において使用されるとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、任意のはっきりと異なる種類、例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ）を指し得る。軽鎖アミノ酸配列は、当該技術分野で周知である。具体的な実施形態では、この軽鎖は、ヒト軽鎖である。
【００６７】
「結合親和性」とは、概して、分子の単一の結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対（例えば、抗体及び抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する内因性の結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、平衡解離定数（ＫＤ）及び平衡会合定数（ＫＡ）を含むが、これらに限定されない当該技術分野で既知のいくつかの方法で測定及び／または表現することができる。ＫＤが、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商から計算される一方で、ＫＡは、ｋｏｎ／ｋｏｆｆの商から計算される。ｋｏｎとは、例えば、抗体の抗原への会合速度定数を指し、ｋｏｆｆとは、例えば、抗体の抗原への解離速度定数を指す。ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡ等の当業者に既知の技法によって決定することができる。
【００６８】
本明細書で使用される場合、「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当該技術分野で定義されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、無極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β分岐側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、抗体もしくはその抗原結合断片のＣＤＲ（複数可）内またはフレームワーク領域（複数可）内の１つ以上のアミノ酸残基は、同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられ得る。
【００６９】
本明細書で使用される場合、「エピトープ」とは、当該技術分野における用語であり、抗体が特異的に結合することができる抗原の局在化領域を指す。エピトープは、例えば、ポリペプチドの隣接アミノ酸（線形もしくは隣接エピトープ）であり得るか、またはエピトープは、例えば、１つのポリペプチドもしくは複数のポリペプチドの２つ以上の非隣接領域由来（立体構造、非線形、非連続、もしくは非隣接エピトープ）であり得る。ある特定の実施形態では、抗体が結合するエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析を伴う水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴ−ペプチド走査アッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学について、結晶化は、当該技術分野で既知の方法のうちのいずれかを使用して達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ’  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ  ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を使用して研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、販売元Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４  ＆  １１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，、米国第２００４／００１４１９４号を参照されたい）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ  １０）：１３１６−１３２３）等のコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができる。変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を使用して達成することができる。アラニン走査変異誘発技法を含む変異誘発技法の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０：１３８８−１３９４及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１０８１−１０８５を参照されたい。具体的な一実施形態では、抗体のエピトープまたはその抗原結合断片は、以下の項６に記載のもの等のアラニン走査変異誘発研を使用して決定される。
【００７０】
本明細書で使用される場合、「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的認識する」、「特異的に結合する」、及び「特異的に認識する」という用語は、抗体の文脈において類似の用語であり、かかる結合が当業者に理解されるように、抗原（例えば、エピトープまたは免疫複合体）に結合する分子を指す。例えば、抗原に特異的に結合する分子は、例えば、免疫アッセイ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＫｉｎＥｘＡ  ３０００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）、または当該技術分野で既知の他のアッセイによって決定される、一般により低い親和性を有する他のペプチドまたはポリペプチドに結合することができる。具体的な一実施形態では、抗原に免疫特異的に結合する分子は、少なくとも２対数、２．５対数、３対数、４対数であるか、またはこの分子が別の抗原に結合するときのＫＡを超えるＫＡを有する抗原に結合する。
【００７１】
別の具体的な実施形態では、抗原に免疫特異的に結合する分子は、同様の結合条件下で他のタンパク質と交差反応しない。別の具体的な実施形態では、抗原に免疫特異的に結合する分子は、他の非ＧＩＴＲタンパク質と交差反応しない。具体的な一実施形態では、別の非関連抗原よりも高い親和性を有するＧＩＴＲに結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、例えば、放射免疫アッセイ、表面プラズモン共鳴、または動態排除アッセイによって決定される、別の非関連抗原よりも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上高い親和性を有するＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の非関連非ＧＩＴＲタンパク質への結合の程度は、例えば、放射免疫アッセイによって測定される、この抗体のＧＩＴＲタンパク質への結合の１０％、１５％、または２０％未満である。
【００７２】
具体的な一実施形態では、別のＧＩＴＲ種よりも高い親和性を有するヒトＧＩＴＲに結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、例えば、放射免疫アッセイ、表面プラズモン共鳴、または動態排除アッセイによって測定される、別のＧＩＴＲ種よりも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、またはそれ以上高い親和性を有するヒトＧＩＴＲに結合する抗体またはその断片が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、ヒトＧＩＴＲに結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、例えば、放射免疫アッセイ、表面プラズモン共鳴、または動態排除アッセイによって測定される、抗体またはその断片のヒトＧＩＴＲタンパク質への結合の１０％、１５％、または２０％未満で、別のＧＩＴＲタンパク質種に結合するであろう。
【００７３】
本明細書で使用される場合、「グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲファミリー関連受容体」または「ＧＩＴＲ」または「ＧＩＴＲポリペプチド」という用語は、天然ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲのアイソフォーム、またはＧＩＴＲの種間ＧＩＴＲ相同体を含むが、これらに限定されないＧＩＴＲを指す。ＧＩＴＲは、２６ｋＤａのＩ型膜貫通タンパク質である。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＢＣ１５２３８１及びＢＣ１５２３８６は、例示のヒトＧＩＴＲ核酸配列を提供する。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｑ９Ｙ５Ｕ５−１（ＴＮＲ１８＿ヒト、配列番号７０１）及びＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＮＰ＿００４１８６は、アイソフォーム１の例示のヒトＧＩＴＲアミノ酸配列を提供する。このアミノ酸配列は、２４１アミノ酸長であり、最初の２５個のアミノ酸残基がシグナル配列をコードする。アイソフォーム１は、Ｉ型膜タンパク質である。例示のヒトＧＩＴＲの成熟アミノ酸配列が配列番号７００として提供される。対照的に、アイソフォーム２は、ヒトＧＩＴＲの分泌形態であり、およそ２５５アミノ酸長である。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｑ９Ｙ５Ｕ５−２及びＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＮＰ＿６８３６９９は、アイソフォーム２の例示のヒトＧＩＴＲアミノ酸配列を提供する。ヒトＧＩＴＲのアイソフォーム３は、およそ２３４アミノ酸長である。Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｑ９Ｙ５Ｕ５−３及びＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＮＰ＿６８３７００（アイソフォーム３前駆体）は、アイソフォーム３の例示のヒトＧＩＴＲアミノ酸配列を提供する。具体的な一実施形態では、このＧＩＴＲは、ヒトＧＩＴＲである。別の具体的な実施形態では、このＧＩＴＲは、ヒトＧＩＴＲアイソフォーム１（配列番号７０１）である。ある特定の実施形態では、このＧＩＴＲは、ヒトアイソフォーム２（配列番号７０２）またはアイソフォーム３（配列番号７０３）である。ＧＩＴＲは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１８（ＴＮＦＲＳＦ１８）、活性化誘導性ＴＮＦＲファミリー受容体（ＡＩＴＲ）、ＧＩＴＲ−Ｄ、及びＣＤ３５７としても知られている。ヒトＧＩＴＲは、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅによって遺伝子ＩＤ：８７８４と指定される。
【００７４】
カニクイザル由来の例示のＧＩＴＲタンパク質の未成熟形態のアミノ酸配列が配列番号７０４に提供される。この例示のタンパク質の未成熟形態は、配列番号７０４のアミノ酸２６〜２３４である。
【００７５】
本明細書で使用される場合、「ＧＩＴＲリガンド」及び「ＧＩＴＲＬ」という用語は、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質リガンドを指す。ＧＩＴＲＬは、別名、活性化誘導性ＴＮＦ関連リガンド（ＡＩＴＲＬ）及び腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１８（ＴＮＦＳＦ１８）として知られている。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＡＦ１２５３０３は、例示のヒトＧＩＴＲＬ核酸配列を提供する。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）受託番号ＮＰ＿００５０８３及びＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受託番号Ｑ９ＵＮＧ２は、例示のヒトＧＩＴＲＬアミノ酸配列を提供する。特定の一実施形態では、このＧＩＴＲＬは、配列番号７１６のヒトＧＩＴＲＬである。
【００７６】
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、任意の種類の細胞、例えば、初代細胞、培養細胞、または細胞株由来の細胞であり得る。具体的な実施形態では、「宿主細胞」という用語は、核酸分子でトランスフェクトされた細胞及びかかる細胞の子孫または潜在的子孫を指す。かかる細胞の子孫は、例えば、核酸分子の生成またはその宿主細胞のゲノムへの組み込みが成功したときに生じ得る変異または環境の影響により、核酸分子でトランスフェクトされた親細胞と同一でないこともある。
【００７７】
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、対象への治療の投与の文脈において、所望の予防または治療効果を達成する治療の量を指す。有効量の例は、以下の項５．４．１．３に提供される。
【００７８】
本明細書で使用される場合、「対象」及び「患者」という用語は、同義に使用される。この対象は、動物であり得る。いくつかの実施形態では、この対象は、非霊長類（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット等）または霊長類（例えば、サルもしくはヒト）等の哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。ある特定の実施形態では、かかる用語は、非ヒト動物（例えば、ブタ、ウマ、ウシ、ネコ、またはイヌ等の非ヒト動物）を指す。いくつかの実施形態では、かかる用語は、ペットまたは家畜動物を指す。具体的な実施形態では、かかる用語は、ヒトを指す。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】図１は、アイソタイプ対照に対する抗ＧＩＴＲ抗体２３１−３２−１５の特異性を示す非還元条件下でのウエスタンブロットである。抗体を、ヒトＧＩＴＲ組換えタンパク質（Ｈｕ  ＧＩＴＲ組換えタンパク質）、マウスＧＩＴＲ組換えタンパク質（Ｍｕ  ＧＩＴＲ組換えタンパク質）、組換えヒトＧＩＴＲを発現するＣＭＳ５Ａ細胞（ＣＭＳ５Ａ−ｈｕＧＩＴＲ）、野生型ＣＭＳ５Ａ細胞（ＣＭＳ５Ａ−ｗｔ）、ＣＤ４＋活性化細胞由来のタンパク質（ＣＤ４＋活性化）、及びＣＤ４＋未処理細胞由来のタンパク質（ＣＤ４＋未処理）に対してプロットする。ヒトＧＩＴＲ、ＣＭＳ５Ａ細胞における組換えヒトＧＩＴＲ、及びＣＤ４＋活性化細胞における天然ヒトＧＩＴＲに対する２３１−３２−１５の反応性が見られた。
【図２Ａ】図２Ａ及び２Ｂは、市販の（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）抗ＧＩＴＲ  ｍＡｂに対する抗ＧＩＴＲ抗体の競合的結合のＦＡＣＳ分析を示す。図２Ａでは、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｍＡｂの遮断を、この図に示されるようにＲ＆Ｄ  ｍＡｂ及び試験抗体（抗体１０４２−７、抗体１０３９−４５、抗体１３３３−２１、及び抗体３２−１５）を使用して試験する。「抗体なし」条件は、試験抗体の不在下でのＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｍＡｂのみの結合を示す。図２Ｂは、この図に示されるようにｍＡｂなし、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｍＡｂ及び試験抗体（抗体１０４２−７、抗体１０３９−４５、抗体１３３３−２１、及び抗体３２−１４）を使用した抗ＧＩＴＲ抗体２３１−１０３９−４５の遮断を示す。「抗体なし」条件は、試験抗体の不在下での抗体２３１−１０３９−４５のみの結合を示す。
【図２Ｂ】図２Ａ及び２Ｂは、市販の（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）抗ＧＩＴＲ  ｍＡｂに対する抗ＧＩＴＲ抗体の競合的結合のＦＡＣＳ分析を示す。図２Ａでは、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｍＡｂの遮断を、この図に示されるようにＲ＆Ｄ  ｍＡｂ及び試験抗体（抗体１０４２−７、抗体１０３９−４５、抗体１３３３−２１、及び抗体３２−１５）を使用して試験する。「抗体なし」条件は、試験抗体の不在下でのＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｍＡｂのみの結合を示す。図２Ｂは、この図に示されるようにｍＡｂなし、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｍＡｂ及び試験抗体（抗体１０４２−７、抗体１０３９−４５、抗体１３３３−２１、及び抗体３２−１４）を使用した抗ＧＩＴＲ抗体２３１−１０３９−４５の遮断を示す。「抗体なし」条件は、試験抗体の不在下での抗体２３１−１０３９−４５のみの結合を示す。
【図３Ａ】図３Ａ、３Ｂ、及び３Ｃ：図３Ａは、様々な抗体濃度での抗体１３３３−２１バッチ１、１３３３−２１バッチ２、及びＲ＆Ｄ抗体によるＣＭＳ５Ａ−ＧＩＴＲの染色を示す。図３Ｂは、抗体１０４２−７、３２−１５、１０３９−４５、１３３３−２１、及びＲ＆Ｄ抗体での染色に対するエクスビボでのＰＢＭＣ  ＣＤ３−ＣＤ１９−ＧＩＴＲ＋細胞及びＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＧＩＴＲ＋細胞の蛍光強度をグラフにする。図３Ｃは、抗体１３３３−２１及びＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ抗体によるＣＤ３−ＣＤ１９−ＧＩＴＲ＋細胞及びＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＧＩＴＲ＋細胞のＦＡＣＳ分析を提供する。
【図３Ｂ】図３Ａ、３Ｂ、及び３Ｃ：図３Ａは、様々な抗体濃度での抗体１３３３−２１バッチ１、１３３３−２１バッチ２、及びＲ＆Ｄ抗体によるＣＭＳ５Ａ−ＧＩＴＲの染色を示す。図３Ｂは、抗体１０４２−７、３２−１５、１０３９−４５、１３３３−２１、及びＲ＆Ｄ抗体での染色に対するエクスビボでのＰＢＭＣ  ＣＤ３−ＣＤ１９−ＧＩＴＲ＋細胞及びＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＧＩＴＲ＋細胞の蛍光強度をグラフにする。図３Ｃは、抗体１３３３−２１及びＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ抗体によるＣＤ３−ＣＤ１９−ＧＩＴＲ＋細胞及びＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＧＩＴＲ＋細胞のＦＡＣＳ分析を提供する。
【図３Ｃ】図３Ａ、３Ｂ、及び３Ｃ：図３Ａは、様々な抗体濃度での抗体１３３３−２１バッチ１、１３３３−２１バッチ２、及びＲ＆Ｄ抗体によるＣＭＳ５Ａ−ＧＩＴＲの染色を示す。図３Ｂは、抗体１０４２−７、３２−１５、１０３９−４５、１３３３−２１、及びＲ＆Ｄ抗体での染色に対するエクスビボでのＰＢＭＣ  ＣＤ３−ＣＤ１９−ＧＩＴＲ＋細胞及びＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＧＩＴＲ＋細胞の蛍光強度をグラフにする。図３Ｃは、抗体１３３３−２１及びＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ抗体によるＣＤ３−ＣＤ１９−ＧＩＴＲ＋細胞及びＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＧＩＴＲ＋細胞のＦＡＣＳ分析を提供する。
【図４】図４は、様々な抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体濃度と組み合わせたＣＤ４＋Ｔ細胞への抗ＧＩＴＲ抗体の共刺激効果の査定を示す。上のパネルでは、ＣＦＳＥ低細胞％を、低減するＯＫＴ３抗体濃度（５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、０．２μｇ／ｍＬ、０．０４μｇ／ｍＬ、及び０μｇ／ｍＬ）と組み合わせて試験した各抗体（ＰＢＳ対照、Ｒ＆Ｄ、１０４２−７、３２−１５、１０３９−４５、及び１３３３−２１）についてプロットする。下のパネルでは、ＩＦＮγの濃度（ｐｇ／ｍＬ）を、低減するＯＫＴ３抗体濃度（５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、０．２μｇ／ｍＬ、０．０４μｇ／ｍＬ、及び０μｇ／ｍＬ）と組み合わせて試験した各抗体（ＰＢＳ対照、Ｒ＆Ｄ、１０４２−７、３２−１５、１０３９−４５、及び１３３３−２１）についてプロットする。
【図５】図５は、抗ＧＩＴＲ抗体キメラ親２３１−３２−１５及びｍ６Ｃ８の存在下でのＧＩＴＲＬ−ＰＥのＧＩＴＲへの結合を示す。ＩＬ−１βを認識するさらなる抗体ＳＫ４８Ｅ２６を陰性対照として使用した。ＧＩＴＲＬ−ＰＥの結合の割合を、増加する抗体濃度（１２、３７、１１１、３３３、１０００、３０００、及び９０００ｎｇ／ｍＬ）の存在下で懸濁アレイ技術（Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）によって測定した。図５は、二連で行われたこのアッセイの４つの独立した繰り返しの結果を示し、標準偏差をｎ＝８から決定した。
【図６】図６は、ＧＩＴＲＬ−ＰＥの結合の割合を増加する抗体濃度（１２、３７、１１１、３３３、１０００、３０００、及び９０００ｎｇ／ｍＬ）の存在下で懸濁アレイ技術（Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）によって測定した図５に示されるグラフと同様のグラフである。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびに２つのヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２であった。この図は、二連で行われた１つの実験の結果を示す。
【図７】図７は、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００／２００）によって測定されたｍＡｂの存在下でのＧＩＴＲリガンドのＧＩＴＲへの結合を示す。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、キメラ親２３１−３２−１５、ヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２、ならびにｍ６Ｃ８であった。陰性対照は、抗ＩＬ−１β抗体ＳＫ４８Ｅ２６であった。
【図８Ａ】図８Ａ及び８Ｂは、２つの異なるバフィーコート由来のＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞への抗ＧＩＴＲ抗体の刺激効果を査定するための準最適ＣＤ３刺激アッセイの結果のＦＡＣＳプロットを示す。図８Ａが、刺激に対する応答が高い者（バフィーコート６）由来のＣＤ４Ｔ細胞の細胞数及び増殖のＦＡＣＳ分析を示す一方で、図８Ｂは、応答が低い者（バフィーコート８）のＦＡＣＳ分析を示す。１０μｇ／ｍＬの抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２）の細胞増殖（ＣＦＳＥ、ｘ軸）を示す。使用した対照は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体のみまたは刺激なしのいずれかであった。このアッセイを三連で行った。
【図８Ｂ】図８Ａ及び８Ｂは、２つの異なるバフィーコート由来のＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞への抗ＧＩＴＲ抗体の刺激効果を査定するための準最適ＣＤ３刺激アッセイの結果のＦＡＣＳプロットを示す。図８Ａが、刺激に対する応答が高い者（バフィーコート６）由来のＣＤ４Ｔ細胞の細胞数及び増殖のＦＡＣＳ分析を示す一方で、図８Ｂは、応答が低い者（バフィーコート８）のＦＡＣＳ分析を示す。１０μｇ／ｍＬの抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２）の細胞増殖（ＣＦＳＥ、ｘ軸）を示す。使用した対照は、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体のみまたは刺激なしのいずれかであった。このアッセイを三連で行った。
【図９Ａ】図９Ａ及び９Ｂは、準最適ＣＤ３刺激アッセイにおける抗体ｍ６Ｃ８と比較したヒト化変異型抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２のＣＤ４濃縮Ｔ細胞増殖への影響（図９Ａ）及び細胞数への影響（図９Ｂ）を示すヒストグラムである。これらの抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用した。最後の列（黒色で塗りつぶされたもの、図９Ａ及び９Ｂ）は、いずれの抗ＧＩＴＲ抗体の添加なしでの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激を示す。
【図９Ｂ】図９Ａ及び９Ｂは、準最適ＣＤ３刺激アッセイにおける抗体ｍ６Ｃ８と比較したヒト化変異型抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２のＣＤ４濃縮Ｔ細胞増殖への影響（図９Ａ）及び細胞数への影響（図９Ｂ）を示すヒストグラムである。これらの抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用した。最後の列（黒色で塗りつぶされたもの、図９Ａ及び９Ｂ）は、いずれの抗ＧＩＴＲ抗体の添加なしでの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激を示す。
【図１０Ａ】図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、及び１０Ｄは、準最適ＣＤ３刺激アッセイにおける抗ＧＩＴＲ抗体の投与によってそれぞれ誘導された、ＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＴＮＦαのサイトカイン産生の分析を示す。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、１０μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬの濃度のキメラ親２３１−３２−１５ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２であった。
【図１０Ｂ】図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、及び１０Ｄは、準最適ＣＤ３刺激アッセイにおける抗ＧＩＴＲ抗体の投与によってそれぞれ誘導された、ＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＴＮＦαのサイトカイン産生の分析を示す。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、１０μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬの濃度のキメラ親２３１−３２−１５ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２であった。
【図１０Ｃ】図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、及び１０Ｄは、準最適ＣＤ３刺激アッセイにおける抗ＧＩＴＲ抗体の投与によってそれぞれ誘導された、ＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＴＮＦαのサイトカイン産生の分析を示す。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、１０μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬの濃度のキメラ親２３１−３２−１５ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２であった。
【図１０Ｄ】図１０Ａ、１０Ｂ、１０Ｃ、及び１０Ｄは、準最適ＣＤ３刺激アッセイにおける抗ＧＩＴＲ抗体の投与によってそれぞれ誘導された、ＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、及びＴＮＦαのサイトカイン産生の分析を示す。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、１０μｇ／ｍＬ及び５μｇ／ｍＬの濃度のキメラ親２３１−３２−１５ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２であった。
【図１１】図１１は、準最適ＣＤ３刺激アッセイにおける抗ＧＩＴＲ抗体のさらなる滴定及びそれらの細胞増殖への影響を示すヒストグラムである。キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２を１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、及び２．５μｇ／ｍＬの濃度で使用した。
【図１２Ａ】図１２Ａ及び１２Ｂ準最適ＣＤ３刺激アッセイにおける抗ＧＩＴＲ抗体のさらなる滴定及びそれらのＩＦＮγ産生への影響を示す。キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２を、プレート結合として１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、及び２．５μｇ／ｍＬの濃度で（図１２Ａ）、または可溶性抗体として２０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、及び５μｇ／ｍＬの濃度で（図１２Ｂ）使用した。
【図１２Ｂ】図１２Ａ及び１２Ｂ準最適ＣＤ３刺激アッセイにおける抗ＧＩＴＲ抗体のさらなる滴定及びそれらのＩＦＮγ産生への影響を示す。キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２を、プレート結合として１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、及び２．５μｇ／ｍＬの濃度で（図１２Ａ）、または可溶性抗体として２０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、及び５μｇ／ｍＬの濃度で（図１２Ｂ）使用した。
【図１３】図１３は、準最適ＣＤ３刺激アッセイにおけるＰＢＭＣによるサイトカイン分泌への５μｇ／ｍＬのプレート結合Ｈｕｍ２３１＃２との共刺激の結果を示す一組の棒グラフである。図１３に示されるデータは、刺激後２日目及び４日目に試験した２名のドナーのものである。アイソタイプ対照に対する最大誘導倍率を、６つの異なるサイトカイン（ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、及びＩＬ−４）についてプロットした。エラーバーは、各サイトカインの２つの複製物の標準偏差を表す。各ドナーを少なくとも３つの個別の実験で試験した。
【図１４Ａ】図１４Ａ、１４Ｂ、及び１４Ｃは、準最適ＣＤ３刺激下でプレート結合Ｈｕｍ２３１＃２、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、またはｐａｂ１９８９（Ｈｕｍ２３１＃２ｗのＩｇＧ４対応物）によって誘導されたＩＦＮγ及びＴＮＦαの産生を測定する細胞内サイトカイン染色アッセイの結果である。図１４Ａは、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞についてのＩＦＮγ及びＴＮＦαの共染色を示す一組のフローサイトメトリープロットである。ＩＦＮγ＋単機能性Ｔ細胞、ＴＮＦα＋単機能性Ｔ細胞、またはＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性Ｔ細胞の割合を、準最適抗ＣＤ３抗体濃度の範囲にわたって、Ｈｕｍ２３１＃２、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ｐａｂ１９８９、またはアイソタイプ対照についてプロットした（図１４Ｂ及び１４Ｃ）。図１４Ｂ及び１４Ｃの各ドットは、試験した条件の２つの複製物を表す。エラーバーは、標準偏差を表す。抗ＧＩＴＲ抗体を５μｇ／ｍＬの濃度で使用した。これらのグラフは、それぞれ、６名（図１４Ａ及び１４Ｂ）及び４名（図１４Ｃ）の異なるドナー由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【図１４Ｂ】図１４Ａ、１４Ｂ、及び１４Ｃは、準最適ＣＤ３刺激下でプレート結合Ｈｕｍ２３１＃２、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、またはｐａｂ１９８９（Ｈｕｍ２３１＃２ｗのＩｇＧ４対応物）によって誘導されたＩＦＮγ及びＴＮＦαの産生を測定する細胞内サイトカイン染色アッセイの結果である。図１４Ａは、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞についてのＩＦＮγ及びＴＮＦαの共染色を示す一組のフローサイトメトリープロットである。ＩＦＮγ＋単機能性Ｔ細胞、ＴＮＦα＋単機能性Ｔ細胞、またはＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性Ｔ細胞の割合を、準最適抗ＣＤ３抗体濃度の範囲にわたって、Ｈｕｍ２３１＃２、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ｐａｂ１９８９、またはアイソタイプ対照についてプロットした（図１４Ｂ及び１４Ｃ）。図１４Ｂ及び１４Ｃの各ドットは、試験した条件の２つの複製物を表す。エラーバーは、標準偏差を表す。抗ＧＩＴＲ抗体を５μｇ／ｍＬの濃度で使用した。これらのグラフは、それぞれ、６名（図１４Ａ及び１４Ｂ）及び４名（図１４Ｃ）の異なるドナー由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【図１４Ｃ】図１４Ａ、１４Ｂ、及び１４Ｃは、準最適ＣＤ３刺激下でプレート結合Ｈｕｍ２３１＃２、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、またはｐａｂ１９８９（Ｈｕｍ２３１＃２ｗのＩｇＧ４対応物）によって誘導されたＩＦＮγ及びＴＮＦαの産生を測定する細胞内サイトカイン染色アッセイの結果である。図１４Ａは、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞についてのＩＦＮγ及びＴＮＦαの共染色を示す一組のフローサイトメトリープロットである。ＩＦＮγ＋単機能性Ｔ細胞、ＴＮＦα＋単機能性Ｔ細胞、またはＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性Ｔ細胞の割合を、準最適抗ＣＤ３抗体濃度の範囲にわたって、Ｈｕｍ２３１＃２、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ｐａｂ１９８９、またはアイソタイプ対照についてプロットした（図１４Ｂ及び１４Ｃ）。図１４Ｂ及び１４Ｃの各ドットは、試験した条件の２つの複製物を表す。エラーバーは、標準偏差を表す。抗ＧＩＴＲ抗体を５μｇ／ｍＬの濃度で使用した。これらのグラフは、それぞれ、６名（図１４Ａ及び１４Ｂ）及び４名（図１４Ｃ）の異なるドナー由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【図１５Ａ】図１５Ａ、１５Ｂ、及び１５Ｃは、異なる架橋条件下での抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２を比較した実験の結果を示す一組の棒グラフである。図１５Ａは、５μｇ／ｍＬのプレート結合（ＰＢ）もしくは可溶性Ｈｕｍ２３１＃２またはアイソタイプ対照により共刺激されたＰＢＭＣを使用したＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合に対するアイソタイプ対照の最大誘導倍率を示す棒グラフである。エラーバーは、標準偏差を表す。＊は、ｐ＜０．０５を表し、＊＊は、ｐ＜０．００５を表す（対応のないＴ検定）。図１５Ｂ及び１５Ｃでは、６つの異なるサイトカインのアイソタイプ対照に対する最大誘導倍率を、プレート結合Ｈｕｍ２３１＃２（図１５Ｂ）または抗Ｆｃ架橋Ｈｕｍ２３１＃２（図１５Ｃ）のいずれかについてプロットした。エラーバーは、各サイトカインの２つの複製物の標準偏差を表す。
【図１５Ｂ】図１５Ａ、１５Ｂ、及び１５Ｃは、異なる架橋条件下での抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２を比較した実験の結果を示す一組の棒グラフである。図１５Ａは、５μｇ／ｍＬのプレート結合（ＰＢ）もしくは可溶性Ｈｕｍ２３１＃２またはアイソタイプ対照により共刺激されたＰＢＭＣを使用したＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合に対するアイソタイプ対照の最大誘導倍率を示す棒グラフである。エラーバーは、標準偏差を表す。＊は、ｐ＜０．０５を表し、＊＊は、ｐ＜０．００５を表す（対応のないＴ検定）。図１５Ｂ及び１５Ｃでは、６つの異なるサイトカインのアイソタイプ対照に対する最大誘導倍率を、プレート結合Ｈｕｍ２３１＃２（図１５Ｂ）または抗Ｆｃ架橋Ｈｕｍ２３１＃２（図１５Ｃ）のいずれかについてプロットした。エラーバーは、各サイトカインの２つの複製物の標準偏差を表す。
【図１５Ｃ】図１５Ａ、１５Ｂ、及び１５Ｃは、異なる架橋条件下での抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２を比較した実験の結果を示す一組の棒グラフである。図１５Ａは、５μｇ／ｍＬのプレート結合（ＰＢ）もしくは可溶性Ｈｕｍ２３１＃２またはアイソタイプ対照により共刺激されたＰＢＭＣを使用したＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合に対するアイソタイプ対照の最大誘導倍率を示す棒グラフである。エラーバーは、標準偏差を表す。＊は、ｐ＜０．０５を表し、＊＊は、ｐ＜０．００５を表す（対応のないＴ検定）。図１５Ｂ及び１５Ｃでは、６つの異なるサイトカインのアイソタイプ対照に対する最大誘導倍率を、プレート結合Ｈｕｍ２３１＃２（図１５Ｂ）または抗Ｆｃ架橋Ｈｕｍ２３１＃２（図１５Ｃ）のいずれかについてプロットした。エラーバーは、各サイトカインの２つの複製物の標準偏差を表す。
【図１６Ａ】図１６Ａ及び１６Ｂは、エフェクターＴ細胞（Ｔ−ｅｆｆ）及びＴ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）上での抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８及び抗ＧＩＴＲ抗体刺激の結果を示す。図１６Ａは、活性化されたエフェクターＴ細胞及びＴ制御性細胞が、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８のみで、または抗ＧＩＴＲ抗体とともに刺激した後に、それらの細胞表面上でＧＩＴＲを発現することを示す。しかしながら、図１６Ｂに示されるように、抗ＧＩＴＲ抗体との共刺激は、Ｔ制御性細胞よりもエフェクターＴ細胞を優先的に拡張させる。バフィーコート８由来の１０μｇ／ｍＬの抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２）の細胞拡張／増殖（ＣＦＳＥ、ｙ軸）を示す。使用した対照は、１２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体のみまたは刺激なしのいずれかであった。
【図１６Ｂ】図１６Ａ及び１６Ｂは、エフェクターＴ細胞（Ｔ−ｅｆｆ）及びＴ制御性細胞（Ｔｒｅｇ）上での抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８及び抗ＧＩＴＲ抗体刺激の結果を示す。図１６Ａは、活性化されたエフェクターＴ細胞及びＴ制御性細胞が、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８のみで、または抗ＧＩＴＲ抗体とともに刺激した後に、それらの細胞表面上でＧＩＴＲを発現することを示す。しかしながら、図１６Ｂに示されるように、抗ＧＩＴＲ抗体との共刺激は、Ｔ制御性細胞よりもエフェクターＴ細胞を優先的に拡張させる。バフィーコート８由来の１０μｇ／ｍＬの抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２）の細胞拡張／増殖（ＣＦＳＥ、ｙ軸）を示す。使用した対照は、１２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８抗体のみまたは刺激なしのいずれかであった。
【図１７Ａ】図１７Ａ及び１７Ｂは、試験した抗ＧＩＴＲ抗体によるＴ細胞増殖の結果を示す。図１７Ａは、３１．２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体で刺激した全ＰＢＭＣにおけるＣＤ４細胞の増殖を示し、図１７Ｂは、ＣＤ８細胞の増殖を示す。キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２を１０μｇ／ｍＬの濃度で試験した。
【図１７Ｂ】図１７Ａ及び１７Ｂは、試験した抗ＧＩＴＲ抗体によるＴ細胞増殖の結果を示す。図１７Ａは、３１．２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体で刺激した全ＰＢＭＣにおけるＣＤ４細胞の増殖を示し、図１７Ｂは、ＣＤ８細胞の増殖を示す。キメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２を１０μｇ／ｍＬの濃度で試験した。
【図１８Ａ】図１８Ａ、１８Ｂ、及び１８Ｃは、０．３μｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４）の不在下または存在下でのＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。図１８Ａは、抗ＣＤ３抗体の存在下での刺激後１８時間時点のある範囲の抗ＧＩＴＲ抗体濃度でのルシフェラーゼ相対光単位（ＲＬＵ）を示すグラフである。図１８Ｂは、抗ＣＤ３抗体の不在下での刺激後５時間時点の異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度でのルシフェラーゼＲＬＵを示すグラフである。図１８Ｃは、刺激後０、２、５、６、８、及び１８時間時点のルシフェラーゼ発現の最大比（ＧＩＴＲ  Ａｂ／アイソタイプ対照）を示すグラフである。エラーバーは、複製物の標準偏差を表す。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ及びｍ６Ｃ８であった。示されるデータは、抗ＣＤ３抗体ありの４つの実験または抗ＣＤ３抗体なしの２つの実験を代表するものである。
【図１８Ｂ】図１８Ａ、１８Ｂ、及び１８Ｃは、０．３μｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４）の不在下または存在下でのＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。図１８Ａは、抗ＣＤ３抗体の存在下での刺激後１８時間時点のある範囲の抗ＧＩＴＲ抗体濃度でのルシフェラーゼ相対光単位（ＲＬＵ）を示すグラフである。図１８Ｂは、抗ＣＤ３抗体の不在下での刺激後５時間時点の異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度でのルシフェラーゼＲＬＵを示すグラフである。図１８Ｃは、刺激後０、２、５、６、８、及び１８時間時点のルシフェラーゼ発現の最大比（ＧＩＴＲ  Ａｂ／アイソタイプ対照）を示すグラフである。エラーバーは、複製物の標準偏差を表す。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ及びｍ６Ｃ８であった。示されるデータは、抗ＣＤ３抗体ありの４つの実験または抗ＣＤ３抗体なしの２つの実験を代表するものである。
【図１８Ｃ】図１８Ａ、１８Ｂ、及び１８Ｃは、０．３μｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４）の不在下または存在下でのＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。図１８Ａは、抗ＣＤ３抗体の存在下での刺激後１８時間時点のある範囲の抗ＧＩＴＲ抗体濃度でのルシフェラーゼ相対光単位（ＲＬＵ）を示すグラフである。図１８Ｂは、抗ＣＤ３抗体の不在下での刺激後５時間時点の異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度でのルシフェラーゼＲＬＵを示すグラフである。図１８Ｃは、刺激後０、２、５、６、８、及び１８時間時点のルシフェラーゼ発現の最大比（ＧＩＴＲ  Ａｂ／アイソタイプ対照）を示すグラフである。エラーバーは、複製物の標準偏差を表す。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ及びｍ６Ｃ８であった。示されるデータは、抗ＣＤ３抗体ありの４つの実験または抗ＣＤ３抗体なしの２つの実験を代表するものである。
【図１９Ａ】図１９Ａは、フローサイトメトリーで測定した、活性化されたｎＴｒｅｇ、ＣＤ４＋Ｔ細胞、またはＣＤ８＋Ｔ細胞におけるヒトＧＩＴＲの正規化受容体密度を示す棒グラフである。使用した抗ＧＩＴＲ抗体は、ＰＥ共役マウス抗ヒトＧＩＴＲ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ：６２１、３１１６０４／Ｂ１７１０７２）であった。エラーバーは、標準偏差を表す。
【図１９Ｂ】図１９Ｂは、Ｆｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（ＣＤ１６）レポーター細胞株を使用して抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２ｗを試験したグラフである。高親和性１５８Ｖ／Ｖ多型を有するＣＤ１６Ａを過剰発現するＪｕｒｋａｔ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーター細胞を、Ｈｕｍ２３１＃２ｗまたはアイソタイプ対照の存在下で、活性化された初代ｎＴｒｅｇ及びエフェクターＴ細胞と３７℃で２０時間共培養した。２０時間後に相対光単位（ＲＬＵ）を記録し、ＣＤ１６Ａ結合を表した。ΔＲＬＵは、アイソタイプ対照のＲＬＵを差し引いた抗ＧＩＴＲ抗体のＲＬＵを表す。エラーバーは、標準偏差（ｎ＝２）を表す。示されるデータは、３名のドナー由来の細胞を使用した実験を代表するものである。
【図１９Ｃ】図１９Ｃは、フローサイトメトリーで測定したＧＩＴＲの表面発現を示す一組のヒストグラムである。健常なヒトドナー（ａ〜ｃ、ｎ＝３）の血液から、または非小細胞肺癌患者（ＮＳＣＬＣ）（ｄ〜ｆ、ｎ＝３）の腫瘍組織から試料を採取した。細胞集団を、Ｔｃｏｎｖ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ−、ＣＤ２５低、ＦＯＸＰ３−）またはＴｒｅｇ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ−、ＣＤ２５高、ＦＯＸＰ３＋）と定義した。
【図２０Ａ】図２０Ａ、２０Ｂ、及び２０Ｃは、アフリカミドリザル（ＡＧＭ）由来のＰＢＭＣを使用した実験の結果である。図２０Ａは、抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２及び抗ＰＤ−１抗体を使用したアフリカミドリザル（ＡＧＭ）由来の活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の染色の一組のフローサイトメトリープロットである。健常なＡＧＭ  ＰＢＭＣを、抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４．２）またはＣｏｎＡ＋ＩＬ−２（２０Ｕ／ｍＬ）で３日間活性化した。これらのフローサイトメトリープロットは、３匹の異なるＡＧＭ由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。図２０Ｂ及び２０Ｃは、ＡＧＭ  ＰＢＭＣを使用したＣＤ３副刺激アッセイの結果である。図２０Ｂは、Ｈｕｍ２３１＃２ｗまたはアイソタイプ対照により共刺激された細胞についてのＣＤ８及びＩＦＮγの共染色を示す一対のフローサイトメトリープロットである。図２０Ｃでは、ＩＦＮγ＋ＡＧＭ  ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を、異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度についてプロットした。各ドットは、２つのウェルの複製物を表し、エラーバーは、標準偏差を表す。図２０Ｂ及び２０Ｃに示されるデータは、２匹のＡＧＭ由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【図２０Ｂ】図２０Ａ、２０Ｂ、及び２０Ｃは、アフリカミドリザル（ＡＧＭ）由来のＰＢＭＣを使用した実験の結果である。図２０Ａは、抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２及び抗ＰＤ−１抗体を使用したアフリカミドリザル（ＡＧＭ）由来の活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の染色の一組のフローサイトメトリープロットである。健常なＡＧＭ  ＰＢＭＣを、抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４．２）またはＣｏｎＡ＋ＩＬ−２（２０Ｕ／ｍＬ）で３日間活性化した。これらのフローサイトメトリープロットは、３匹の異なるＡＧＭ由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。図２０Ｂ及び２０Ｃは、ＡＧＭ  ＰＢＭＣを使用したＣＤ３副刺激アッセイの結果である。図２０Ｂは、Ｈｕｍ２３１＃２ｗまたはアイソタイプ対照により共刺激された細胞についてのＣＤ８及びＩＦＮγの共染色を示す一対のフローサイトメトリープロットである。図２０Ｃでは、ＩＦＮγ＋ＡＧＭ  ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を、異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度についてプロットした。各ドットは、２つのウェルの複製物を表し、エラーバーは、標準偏差を表す。図２０Ｂ及び２０Ｃに示されるデータは、２匹のＡＧＭ由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【図２０Ｃ】図２０Ａ、２０Ｂ、及び２０Ｃは、アフリカミドリザル（ＡＧＭ）由来のＰＢＭＣを使用した実験の結果である。図２０Ａは、抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２及び抗ＰＤ−１抗体を使用したアフリカミドリザル（ＡＧＭ）由来の活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞の染色の一組のフローサイトメトリープロットである。健常なＡＧＭ  ＰＢＭＣを、抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４．２）またはＣｏｎＡ＋ＩＬ−２（２０Ｕ／ｍＬ）で３日間活性化した。これらのフローサイトメトリープロットは、３匹の異なるＡＧＭ由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。図２０Ｂ及び２０Ｃは、ＡＧＭ  ＰＢＭＣを使用したＣＤ３副刺激アッセイの結果である。図２０Ｂは、Ｈｕｍ２３１＃２ｗまたはアイソタイプ対照により共刺激された細胞についてのＣＤ８及びＩＦＮγの共染色を示す一対のフローサイトメトリープロットである。図２０Ｃでは、ＩＦＮγ＋ＡＧＭ  ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を、異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度についてプロットした。各ドットは、２つのウェルの複製物を表し、エラーバーは、標準偏差を表す。図２０Ｂ及び２０Ｃに示されるデータは、２匹のＡＧＭ由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【図２１Ａ】図２１Ａ及び２１Ｂは、プレート結合された０．８μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体及び５μｇ／ｍＬの抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２で刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞上での表面ＯＸ４０及びＰＤ−１の染色の結果である。図２１Ａは、ＯＸ４０及びＰＤ−１の共染色を示す一組のフローサイトメトリープロット及びヒストグラムである。図２１Ｂでは、各バーは、Ｈｕｍ２３１＃２（黒色のバー）、アイソタイプ対照（灰色のバー）、または培地のみ（白色のバー）で刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１及びＯＸ４０のＭＦＩ値を表す。エラーバーは、標準偏差を表す。これらのフローサイトメトリープロット及びグラフは、１名のドナー由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【図２１Ｂ】図２１Ａ及び２１Ｂは、プレート結合された０．８μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体及び５μｇ／ｍＬの抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２で刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞上での表面ＯＸ４０及びＰＤ−１の染色の結果である。図２１Ａは、ＯＸ４０及びＰＤ−１の共染色を示す一組のフローサイトメトリープロット及びヒストグラムである。図２１Ｂでは、各バーは、Ｈｕｍ２３１＃２（黒色のバー）、アイソタイプ対照（灰色のバー）、または培地のみ（白色のバー）で刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＤ−１及びＯＸ４０のＭＦＩ値を表す。エラーバーは、標準偏差を表す。これらのフローサイトメトリープロット及びグラフは、１名のドナー由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【図２２Ａ】図２２Ａ及び２２Ｂは、生殖系列化抗体変異型の生成のための変異ライブラリの設計を示す。ＩＧＨＶ１−２＊０２  ＶＨヒト生殖系列に基づくライブラリに含まれる異なるフレームワーク及びＣＤＲ位置を図２２Ａに示し（出現順に、それぞれ、配列番号３７〜５３）、ＩＧＫＶ４−１＊０１  ＶＬヒト生殖系列に基づくライブラリについては、図２２Ｂに示す（出現順に、それぞれ、配列番号５４〜７１）。
【図２２Ｂ】図２２Ａ及び２２Ｂは、生殖系列化抗体変異型の生成のための変異ライブラリの設計を示す。ＩＧＨＶ１−２＊０２  ＶＨヒト生殖系列に基づくライブラリに含まれる異なるフレームワーク及びＣＤＲ位置を図２２Ａに示し（出現順に、それぞれ、配列番号３７〜５３）、ＩＧＫＶ４−１＊０１  ＶＬヒト生殖系列に基づくライブラリについては、図２２Ｂに示す（出現順に、それぞれ、配列番号５４〜７１）。
【図２３】図２３は、１７個の生殖系列化抗体変異型を列記し、かつそれらの重鎖及び軽鎖可変領域を対応する配列番号で詳述する表である。この表は、キメラ親２３１−３２−１５抗体と比較した、余分な生殖系列アミノ酸の数及び変異型抗体の平均相対親和性を示す。
【図２４Ａ】図２４Ａ〜Ｃは、１０７個の生殖系列化抗体変異型を列記し、かつそれらの重鎖及び軽鎖可変領域を対応する配列番号で詳述する表である。
【図２４Ｂ】図２４Ａ〜Ｃは、１０７個の生殖系列化抗体変異型を列記し、かつそれらの重鎖及び軽鎖可変領域を対応する配列番号で詳述する表である。
【図２４Ｃ】図２４Ａ〜Ｃは、１０７個の生殖系列化抗体変異型を列記し、かつそれらの重鎖及び軽鎖可変領域を対応する配列番号で詳述する表である。
【図２５Ａ】図２５Ａ及び２５Ｂは、抗ＧＩＴＲ生殖系列化抗体変異型の選択の存在下でのＧＩＴＲＬ−ＰＥのＧＩＴＲへの結合を示す。ＧＩＴＲＬ−ＰＥ結合の割合を、増加する抗体濃度（１２、３７、１１１、３３３、１０００、３０００、及び９０００ｎｇ／ｍＬ）の存在下で、懸濁アレイ技術（Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）によって測定した。
【図２５Ｂ】図２５Ａ及び２５Ｂは、抗ＧＩＴＲ生殖系列化抗体変異型の選択の存在下でのＧＩＴＲＬ−ＰＥのＧＩＴＲへの結合を示す。ＧＩＴＲＬ−ＰＥ結合の割合を、増加する抗体濃度（１２、３７、１１１、３３３、１０００、３０００、及び９０００ｎｇ／ｍＬ）の存在下で、懸濁アレイ技術（Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）によって測定した。
【図２６Ａ】図２６Ａ及び２６Ｂは、２つのバフィーコートＢＣ４（図２６Ａ）及びＢＣ９（図２６Ｂ）由来のＣＤ４濃縮Ｔ細胞上のキメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と比較した、生殖系列化抗体変異型の細胞増殖（％ＣＦＳＥ低）への影響を示す。１２５ｎｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体を使用して、プレート結合アイソタイプ対照または可溶性アイソタイプ対照のいずれかでの準最適ＣＤ３刺激アッセイを行った。抗ＧＩＴＲ抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用した。
【図２６Ｂ】図２６Ａ及び２６Ｂは、２つのバフィーコートＢＣ４（図２６Ａ）及びＢＣ９（図２６Ｂ）由来のＣＤ４濃縮Ｔ細胞上のキメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と比較した、生殖系列化抗体変異型の細胞増殖（％ＣＦＳＥ低）への影響を示す。１２５ｎｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体を使用して、プレート結合アイソタイプ対照または可溶性アイソタイプ対照のいずれかでの準最適ＣＤ３刺激アッセイを行った。抗ＧＩＴＲ抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用した。
【図２７Ａ】図２７Ａ及び２７Ｂは、それぞれ、バフィーコートＢＣ４由来のＣＤ４濃縮Ｔ細胞へのキメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と比較した、生殖系列化抗体変異型のＩＦＮγ及びＩＬ−１０のサイトカイン放出への影響を示す。１２５ｎｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体を使用して、プレート結合アイソタイプ対照または可溶性アイソタイプ対照のいずれかでの準最適ＣＤ３刺激アッセイを行った。抗ＧＩＴＲ抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用し、サイトカインレベルを培養上清中で測定した。
【図２７Ｂ】図２７Ａ及び２７Ｂは、それぞれ、バフィーコートＢＣ４由来のＣＤ４濃縮Ｔ細胞へのキメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と比較した、生殖系列化抗体変異型のＩＦＮγ及びＩＬ−１０のサイトカイン放出への影響を示す。１２５ｎｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体を使用して、プレート結合アイソタイプ対照または可溶性アイソタイプ対照のいずれかでの準最適ＣＤ３刺激アッセイを行った。抗ＧＩＴＲ抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用し、サイトカインレベルを培養上清中で測定した。
【図２８Ａ】図２８Ａ及び２８Ｂは、それぞれ、バフィーコートＢＣ９由来のＣＤ４濃縮Ｔ細胞上のキメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と比較した、生殖系列化抗体変異型のＩＦＮγ及びＩＬ−１０のサイトカイン放出への影響を示す。１２５ｎｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体を使用して、プレート結合アイソタイプ対照または可溶性アイソタイプ対照のいずれかでの準最適ＣＤ３刺激アッセイを行った。抗ＧＩＴＲ抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用し、サイトカインレベルを培養上清中で測定した。
【図２８Ｂ】図２８Ａ及び２８Ｂは、それぞれ、バフィーコートＢＣ９由来のＣＤ４濃縮Ｔ細胞上のキメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と比較した、生殖系列化抗体変異型のＩＦＮγ及びＩＬ−１０のサイトカイン放出への影響を示す。１２５ｎｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体を使用して、プレート結合アイソタイプ対照または可溶性アイソタイプ対照のいずれかでの準最適ＣＤ３刺激アッセイを行った。抗ＧＩＴＲ抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用し、サイトカインレベルを培養上清中で測定した。
【図２９Ａ】図２９Ａ及び２９Ｂは、２つのバフィーコート由来のＣＤ４濃縮Ｔ細胞上のキメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と比較した、生殖系列化抗体変異型のＩＦＮγ陽性ＣＤ４＋Ｔ細胞（細胞内染色で測定）の割合を示す。図２９Ａは、バフィーコート１３（ＢＣ１３）の結果を示す。図２９Ｂは、バフィーコート１８（ＢＣ１８）の結果を示す。
【図２９Ｂ】図２９Ａ及び２９Ｂは、２つのバフィーコート由来のＣＤ４濃縮Ｔ細胞上のキメラ親２３１−３２−１５抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と比較した、生殖系列化抗体変異型のＩＦＮγ陽性ＣＤ４＋Ｔ細胞（細胞内染色で測定）の割合を示す。図２９Ａは、バフィーコート１３（ＢＣ１３）の結果を示す。図２９Ｂは、バフィーコート１８（ＢＣ１８）の結果を示す。
【図３０Ａ】図３０Ａ〜Ｃは、０．３μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体の存在下でのＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示す一組のグラフである。このアッセイで試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ならびに２０個の生殖系列変異型、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、及びｐａｂ２１６１であった。図３０Ａ〜Ｃでは、刺激後１８時間時点のルシフェラーゼＲＬＵを、試験した異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度についてプロットした。エラーバーは、標準偏差を表す。
【図３０Ｂ】図３０Ａ〜Ｃは、０．３μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体の存在下でのＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示す一組のグラフである。このアッセイで試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ならびに２０個の生殖系列変異型、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、及びｐａｂ２１６１であった。図３０Ａ〜Ｃでは、刺激後１８時間時点のルシフェラーゼＲＬＵを、試験した異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度についてプロットした。エラーバーは、標準偏差を表す。
【図３０Ｃ】図３０Ａ〜Ｃは、０．３μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３抗体の存在下でのＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示す一組のグラフである。このアッセイで試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ならびに２０個の生殖系列変異型、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、及びｐａｂ２１６１であった。図３０Ａ〜Ｃでは、刺激後１８時間時点のルシフェラーゼＲＬＵを、試験した異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度についてプロットした。エラーバーは、標準偏差を表す。
【図３０Ｄ】図３０Ｄ〜Ｆは、抗ＣＤ３抗体の不在下でのＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示す一組のグラフである。このアッセイで試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、ｍ６Ｃ８、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ならびに２０個の生殖系列変異型、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、及びｐａｂ２１６１であった。図３０Ｄ〜Ｆ、刺激後６時間時点のルシフェラーゼＲＬＵを、試験した異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度についてプロットした。エラーバーは、標準偏差を表す。これらのグラフ及びプロットは、２つの実験（図３０Ａ〜Ｃ）または１つの実験（図３０Ｄ〜Ｆ）からのデータを代表するものである。
【図３０Ｅ】図３０Ｄ〜Ｆは、抗ＣＤ３抗体の不在下でのＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示す一組のグラフである。このアッセイで試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、ｍ６Ｃ８、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ならびに２０個の生殖系列変異型、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、及びｐａｂ２１６１であった。図３０Ｄ〜Ｆ、刺激後６時間時点のルシフェラーゼＲＬＵを、試験した異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度についてプロットした。エラーバーは、標準偏差を表す。これらのグラフ及びプロットは、２つの実験（図３０Ａ〜Ｃ）または１つの実験（図３０Ｄ〜Ｆ）からのデータを代表するものである。
【図３０Ｆ】図３０Ｄ〜Ｆは、抗ＣＤ３抗体の不在下でのＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示す一組のグラフである。このアッセイで試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、ｍ６Ｃ８、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ならびに２０個の生殖系列変異型、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、及びｐａｂ２１６１であった。図３０Ｄ〜Ｆ、刺激後６時間時点のルシフェラーゼＲＬＵを、試験した異なる抗ＧＩＴＲ抗体濃度についてプロットした。エラーバーは、標準偏差を表す。これらのグラフ及びプロットは、２つの実験（図３０Ａ〜Ｃ）または１つの実験（図３０Ｄ〜Ｆ）からのデータを代表するものである。
【図３１】図３１は、ビオチン化ＧＩＴＲ（ＧＩＴＲ−ｂｉｏ）をキメラ親２３１−３２−１５抗体、Ｈｕｍ２３１＃１抗体、またはＨｕｍ２３１＃２抗体とプレインキュベートしたときの、キメラ親２３１−３２−１５抗体を発現する１６２４−５プレＢ細胞のＧＩＴＲ−ｂｉｏへの結合の損失を示す。図３１の右側のプロファイルは、キメラ親２３１−３２−１５抗体を発現する１６２４−５プレＢ細胞のＧＩＴＲ−ｂｉｏへの結合を示す。しかしながら、左側のプロファイルでは、キメラ親２３１−３２−１５抗体、Ｈｕｍ２３１＃１抗体、またはＨｕｍ２３１＃２抗体とのＧＩＴＲ−ｂｉｏのプレインキュベーション後に、キメラ親２３１−３２−１５抗体を発現する１６２４−５細胞のＧＩＴＲ−ｂｉｏへの結合の損失が存在する。
【図３２】図３２は、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００／２００）で測定してエピトープ競合アッセイの結果を示す。ＧＩＴＲ抗原をＣＭ５センサーチップ上で固定化し、抗ＧＩＴＲ抗体を３００ｎＭの濃度で適用した。キメラ親２３１−３２−１５抗体を最初に適用し、続いてマウス抗体６Ｃ８を適用した。
【図３３Ａ】図３３Ａ及び３３Ｂは、エラープローンＰＣＲによって生成されたＧＩＴＲ変異型を発現する細胞ライブラリを使用したエピトープマッピング実験の結果である。ポリクローナル抗ＧＩＴＲ抗体に結合するが、抗ＧＩＴＲキメラ親２３１−３２−１５抗体には結合しないＧＩＴＲ変異型由来の配列のアライメントが図３３Ａ及び３３Ｂに示される。
【図３３Ｂ】図３３Ａ及び３３Ｂは、エラープローンＰＣＲによって生成されたＧＩＴＲ変異型を発現する細胞ライブラリを使用したエピトープマッピング実験の結果である。ポリクローナル抗ＧＩＴＲ抗体に結合するが、抗ＧＩＴＲキメラ親２３１−３２−１５抗体には結合しないＧＩＴＲ変異型由来の配列のアライメントが図３３Ａ及び３３Ｂに示される。
【図３４Ａ】図３４Ａ及びＢは、アラニン走査を使用したエピトープマッピング実験の結果である。ヒトＧＩＴＲにおける以下の位置（配列番号７０１に従って番号付けされたもの）、Ｐ２８Ａ、Ｔ２９Ａ、Ｇ３０Ａ、Ｇ３１Ａ、Ｐ３２Ａ、Ｔ５４Ａ、Ｔ５５Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｃ５７Ａ、Ｃ５８Ａ、Ｒ５９Ａ、Ｄ６０Ａ、Ｙ６１Ａ、Ｐ６２Ａ、Ｇ６３Ａ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６５Ａ、Ｃ６６Ａ、Ｃ６７Ａ、Ｓ６８Ａ、Ｅ６９Ａ、Ｗ７０Ａ、Ｄ７１Ａ、Ｃ７２Ａ、Ｍ７３Ａ、Ｃ７４Ａ、Ｖ７５Ａ、及びＱ７６Ａを、アラニンに別個に変異させた。図３４Ａに示されるこの実験で試験した抗体は、モノクローナル抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２、３つの生殖系列変異型（ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５、及びｐａｂ１９７９）、ならびにｍ６Ｃ８抗体、ならびにポリクローナル抗ＧＩＴＲ抗体（ＡＦ６８９、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を含んだ。図３４Ａは、ヒトＧＩＴＲアラニン変異体を発現する１６２４−５細胞への、Ｈｕｍ２３１＃２、３つの生殖系列変異型（ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５、及びｐａｂ１９７９）、ならびに基準抗体ｍ６Ｃ８の結合を要約する表である。図３４Ｂは、モノクローナル抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃２、もしくはｍ６Ｃ８、またはポリクローナル抗体を使用した、野生型ヒトＧＩＴＲ、Ｄ６０Ａ変異体、またはＧ６３Ａ変異体を発現する１６２４−５細胞の染色を示す一組のフローサイトメトリープロットである。ＧＩＴＲ陽性細胞の割合を各プロットに示す。
【図３４Ｂ】図３４Ａ及びＢは、アラニン走査を使用したエピトープマッピング実験の結果である。ヒトＧＩＴＲにおける以下の位置（配列番号７０１に従って番号付けされたもの）、Ｐ２８Ａ、Ｔ２９Ａ、Ｇ３０Ａ、Ｇ３１Ａ、Ｐ３２Ａ、Ｔ５４Ａ、Ｔ５５Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｃ５７Ａ、Ｃ５８Ａ、Ｒ５９Ａ、Ｄ６０Ａ、Ｙ６１Ａ、Ｐ６２Ａ、Ｇ６３Ａ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６５Ａ、Ｃ６６Ａ、Ｃ６７Ａ、Ｓ６８Ａ、Ｅ６９Ａ、Ｗ７０Ａ、Ｄ７１Ａ、Ｃ７２Ａ、Ｍ７３Ａ、Ｃ７４Ａ、Ｖ７５Ａ、及びＱ７６Ａを、アラニンに別個に変異させた。図３４Ａに示されるこの実験で試験した抗体は、モノクローナル抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２、３つの生殖系列変異型（ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５、及びｐａｂ１９７９）、ならびにｍ６Ｃ８抗体、ならびにポリクローナル抗ＧＩＴＲ抗体（ＡＦ６８９、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）を含んだ。図３４Ａは、ヒトＧＩＴＲアラニン変異体を発現する１６２４−５細胞への、Ｈｕｍ２３１＃２、３つの生殖系列変異型（ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５、及びｐａｂ１９７９）、ならびに基準抗体ｍ６Ｃ８の結合を要約する表である。図３４Ｂは、モノクローナル抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃２、もしくはｍ６Ｃ８、またはポリクローナル抗体を使用した、野生型ヒトＧＩＴＲ、Ｄ６０Ａ変異体、またはＧ６３Ａ変異体を発現する１６２４−５細胞の染色を示す一組のフローサイトメトリープロットである。ＧＩＴＲ陽性細胞の割合を各プロットに示す。
【図３５Ａ】図３５Ａは、カニクイザルＧＩＴＲ由来の２つのアミノ酸（ＧｌｎＳｅｒ）をヒトＧＩＴＲにおける対応する残基（ＰｒｏＧｌｙ）で置き換えた位置６２及び６３を強調する、ヒトＧＩＴＲ、Ｖ１ＭカニクイザルＧＩＴＲ、及びＶ１Ｍ／Ｑ６２Ｐ／Ｓ６３ＧカニクイザルＧＩＴＲの配列アライメントである。
【図３５Ｂ】図３５Ｂは、モノクローナル抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃２、もしくはｍ６Ｃ８、またはポリクローナル抗ＧＩＴＲ抗体を使用した、ヒトＧＩＴＲ、Ｖ１ＭカニクイザルＧＩＴＲ、またはＶ１Ｍ／Ｑ６２Ｐ／Ｓ６３ＧカニクイザルＧＩＴＲを発現する１６２４−５細胞の染色を示す一組のフローサイトメトリープロットである。
【発明を実施するための形態】
【００８０】
ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつＧＩＴＲ活性を調節する抗体（例えば、モノクローナル抗体）及びその抗原結合断片が本明細書に提供される。例えば、一態様では、ＧＩＴＲに特異的に結合し、かつ１つ以上のＧＩＴＲ活性を増強するか、誘導するか、または増加させる抗体（複数可）またはその断片（複数可）が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、この抗体（複数可）または抗原結合断片（複数）は単離されている。
【００８１】
かかる抗体及びその抗原結合断片をコードする相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）等の単離された核酸（ポリヌクレオチド）も提供される。かかる抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸（ポリヌクレオチド）を含むベクター（例えば、発現ベクター）及び細胞（例えば、宿主細胞）がさらに提供される。かかる抗体を作製する方法も提供される。他の態様では、ＧＩＴＲ活性を誘導するか、増加させるか、または増強し、かつ癌及び感染症等のある特定の状態を治療するための方法及び使用が本明細書に提供される。関連組成物（例えば、薬学的組成物）、キット、及び検出方法も提供される。
５．１  抗体
【００８２】
具体的な一態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体（例えば、キメラまたはヒト化抗体等のモノクローナル抗体）及びそれらの断片が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を部分的に阻害する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、当業者に既知のアッセイまたは本明細書に記載のアッセイによって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１０％未満阻害する。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、以下の実施例２（例えば、以下の項６．２．５．２または６．２．５．４）に記載のアッセイによって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１０％未満阻害する。別の具体的な実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬ、９５０ｎｇ／ｍＬ、９００ｎｇ／ｍＬ、８５０ｎｇ／ｍＬ、８００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、７００ｎｇ／ｍＬ、６５０ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ、５５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３３３ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、または１０ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ＧＩＴＲＬ−ＰＥ）の、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１０％未満阻害する。別の具体的な実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬ〜７５０ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、８５０ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ〜４００ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬ、または３００ｎｇ／ｍＬ〜２００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ＧＩＴＲＬ−ＰＥ）の、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１０％未満阻害する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の抗体またはその抗原結合断片は、０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を８０％未満（いくつかの実施形態では、４０％〜７０％、５０％〜８０％、または４０％〜８０％）阻害する。
【００８３】
別の具体的な実施形態では、３５００ｎｇ／ｍＬ、３４００ｎｇ／ｍＬ、３３００ｎｇ／ｍＬ、３２００ｎｇ／ｍＬ、３１００ｎｇ／ｍＬ、３０００ｎｇ／ｍＬ、２９００ｎｇ／ｍＬ、２８００ｎｇ／ｍＬ、２７００ｎｇ／ｍＬ、２６００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ、２４００ｎｇ／ｍＬ、２３００ｎｇ／ｍＬ、２２００ｎｇ／ｍＬ、２１００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ、１９００ｎｇ／ｍＬ、１８００ｎｇ／ｍＬ、１７００ｎｇ／ｍＬ、１６００ｎｇ／ｍＬ、１５００ｎｇ／ｍＬ、１４００ｎｇ／ｍＬ、１３００ｎｇ／ｍＬ、１２００ｎｇ／ｍＬ、または１１００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ＧＩＴＲＬ−ＰＥ）の、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１０％未満阻害する。別の具体的な実施形態では、３５００ｎｇ／ｍＬ〜３２００ｎｇ／ｍＬ、３５００ｎｇ／ｍＬ〜３０００ｎｇ／ｍＬ、３２００ｎｇ／ｍＬ〜２５００ｎｇ／ｍＬ、３０００〜２２００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ〜１８００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ〜１５００ｎｇ／ｍＬ、１７００ｎｇ／ｍＬ〜１２００ｎｇ／ｍＬ、または１５００ｎｇ／ｍＬ〜１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ＧＩＴＲＬ−ＰＥ）の、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１０％未満阻害する。
【００８４】
ある特定の一実施形態では、３０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％未満または８０％未満（いくつかの実施形態では、６０％〜８５％、６０％〜８０％、７０％〜８５％、または７０％〜８０％）阻害する。ある特定の一実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％未満、８０％未満、または７５％未満（いくつかの実施形態では、６０％〜８５％、６０％〜８０％、７０％〜８５％、または７０％〜８０％）阻害する。ある特定の一実施形態では、３３３ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、７０％未満または６５％未満（いくつかの実施形態では、５０％〜７０％、５５％〜７０％、５０％〜６５％または５０％〜６０％）阻害する。ある特定の一実施形態では、１１１ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、６５％未満、６０％未満、または５５％未満（いくつかの実施形態では、４０％〜６５％、４０％〜６０％、４０％〜５５％または３０％〜６０％）阻害する。ある特定の一実施形態では、３７ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、４０％未満（いくつかの実施形態では、２０％〜４０％、２０％〜３０％、または１５％〜３５％）阻害する。ある特定の一実施形態では、１２ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、２０％未満（いくつかの実施形態では、１０％〜２０％）阻害する。
【００８５】
ある特定の実施形態では、当業者に既知のアッセイまたは本明細書に記載のアッセイによって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の存在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。具体的な一実施形態では、以下の実施例２（例えば、以下の項６．２．５．２または６．２．５．４）に記載のアッセイによって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の存在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭまたは０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、１０００ｎｇ／ｍＬ、９５０ｎｇ／ｍＬ、９００ｎｇ／ｍＬ、８５０ｎｇ／ｍＬ、８００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、７００ｎｇ／ｍＬ、６５０ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ、５５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３３３ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、または２００ｎｇ／ｍＬの本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の存在下で、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭまたは０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、１０００ｎｇ／ｍＬ〜９００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ〜８５０ｎｇ／ｍＬ、９００ｎｇ／ｍＬ〜８００ｎｇ／ｍＬ、または８５０ｎｇ／ｍＬ〜７５０ｎｇ／ｍＬ、または８００〜７５０ｎｇ／ｍＬの存在下で、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも２０％、少なくとも２５％、または少なくとも３０％が、１０００ｎｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片の存在下で、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。
【００８６】
別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、３５００ｎｇ／ｍＬ、３４００ｎｇ／ｍＬ、３３００ｎｇ／ｍＬ、３２００ｎｇ／ｍＬ、３１００ｎｇ／ｍＬ、３０００ｎｇ／ｍＬ、２９００ｎｇ／ｍＬ、２８００ｎｇ／ｍＬ、２７００ｎｇ／ｍＬ、２６００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ、２４００ｎｇ／ｍＬ、２３００ｎｇ／ｍＬ、２２００ｎｇ／ｍＬ、２１００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ、１９００ｎｇ／ｍＬ、１８００ｎｇ／ｍＬ、１７００ｎｇ／ｍＬ、１６００ｎｇ／ｍＬ、１５００ｎｇ／ｍＬ、１４００ｎｇ／ｍＬ、１３００ｎｇ／ｍＬ、１２００ｎｇ／ｍＬ、１１００ｎｇ／ｍＬ、または１０００ｎｇ／ｍＬの本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の存在下で、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、３５００ｎｇ／ｍＬ〜３２００ｎｇ／ｍＬ、３５００ｎｇ／ｍＬ〜３０００ｎｇ／ｍＬ、３２００ｎｇ／ｍＬ〜２５００ｎｇ／ｍＬ、３０００〜２２００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ〜１８００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ〜１５００ｎｇ／ｍＬ、１７００ｎｇ／ｍＬ〜１２００ｎｇ／ｍＬ、または１５００ｎｇ／ｍＬ〜１０００ｎｇ／ｍＬの本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の存在下で、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。
【００８７】
別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも２０％、少なくとも２５％、または少なくとも３０％が、３０００ｎｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片の存在下で、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％（いくつかの実施形態では、２５％〜６０％、４０％〜６０％、４０％〜７０％、または２５％〜５０％）が、１０００ｎｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片の存在下で、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、または少なくとも６０％（いくつかの実施形態では、３０％〜６０％、４０％〜６０％、４０％〜７０％、または３０％〜５０％）が、３３３ｎｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片の存在下で、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、または少なくとも６５％（いくつかの実施形態では、４０％〜７０％、４０％〜６０％、４０％〜６５％、または４０％〜５０％）が、１１１ｎｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片の存在下で、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも６０％、少なくとも７０％、または少なくとも８０％（いくつかの実施形態では、６０％〜８０％、７０％〜８０％、または７５％〜８５％）が、３７ｎｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片の存在下で、５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイにおいて、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも８０％、少なくとも８５％、または少なくとも９０％（いくつかの実施形態では、８０％〜９０％または８５％〜９５％）が、１２ｎｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片の存在下で５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。
【００８８】
ある特定の一実施形態では、３０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、１５％を超えて、または２０％を超えて阻害しない。ある特定の一実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、１５％を超えて、２０％を超えて、または２５％を超えて阻害しない。ある特定の一実施形態では、３３３ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、３０％を超えて、または３５％を超えて阻害しない。ある特定の一実施形態では、１１１ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、３５％を超えて、４０％を超えて、または４５％を超えて阻害しない。ある特定の一実施形態では、３７ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、６０％を超えて阻害しない。ある特定の一実施形態では、１２ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、８０％を超えて阻害しない。
【００８９】
別の実施形態では、標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ−ＰＥ）のある特定の量が、（ａ）ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）をおよそ９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングすることと、（ｂ）およそ３０ビーズ／μＬ、４０ビーズ／μＬ、または５０ビーズ／μＬの濃度のこのＧＩＴＲカップリングビーズをウェル中で３０００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ、１５００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、２５ｎｇ／ｍＬ、または１０ｎｇ／ｍＬの本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と第１の期間（例えば、３０分間、６０分間、１．５時間、２時間、２．５時間、または３時間）インキュベートすることと、（ｃ）標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ−ＰＥ）をこのウェルに添加して、最終濃度およそ１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ、及びおよそ１５ビーズ／μＬ、２０ビーズ／μＬ、または２５ビーズ／μＬを得て、かつ第２の期間（例えば、３０分間、１時間、１．５時間、２時間、２．５時間または３時間）インキュベートすることと、（ｄ）例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム等の懸濁アレイアッセイにおいてＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬを検出することと、を含む方法において、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の存在下で、ビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。具体的な実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬのその量は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬの量に対して決定される。ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在は、抗体またはその抗原結合断片がウェル中に存在しないことを意味する。他の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在は、ＧＩＴＲに結合しないアイソタイプ対照抗体がウェル中に存在することを意味する。これらの実施形態によると、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬの量は、いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬの量の少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、もしくは６０％、または１５％〜６０％、２０％〜６０％、３０％〜７０％、もしくは２０％〜５０％であると決定される。
【００９０】
別の実施形態では、標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ−ＰＥ）のある特定の量が、（ａ）ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）をおよそ５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングすることと、（ｂ）およそ４０ビーズ／μＬの濃度のこのＧＩＴＲカップリングビーズをウェル中で３０００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ、１５００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、または１０ｎｇ／ｍＬの本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と第１の期間（例えば、３０分間、６０分間、１．５時間、２時間、２．５時間、または３時間）インキュベートすることと、（ｃ）標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ−ＰＥ）をこのウェルに添加して、最終濃度０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ及びおよそ２０ビーズ／μＬを得て、第２の期間（例えば、３０分間、１時間、１．５時間、２時間、２．５時間、または３時間）インキュベートすることと、（ｄ）例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム等の懸濁アレイアッセイにおいてＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬを検出することと、を含む方法において、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片の存在下でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。具体的な実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬのその量は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬの量に対して決定される。ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在は、抗体またはその抗原結合断片がウェル中に存在しないことを意味する。他の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在は、ＧＩＴＲに結合しないアイソタイプ対照抗体がウェル中に存在することを意味する。これらの実施形態によると、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の存在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬは、いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬの量の少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、もしくは６０％、または２０〜７０％、２０％〜６０％、３０％〜７０％、もしくは２０％〜５０％であると決定される。
【００９１】
ある特定の実施形態では、チップ（例えば、ＣＭ５センサーチップ）上に固定化されたＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合した１５０ｎＭ、１４５ｎＭ、１４０ｎＭ、１３５ｎＭ、１３０ｎＭ、１２５ｎＭ、１２０ｎＭ、１１５ｎＭ、１１０ｎＭ、１０５ｎＭ、または１００ｎＭの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、１５０ｎＭ、１４５ｎＭ、１４０ｎＭ、１３５ｎＭ、１３０ｎＭ、１２５ｎＭ、１２０ｎＭ、１１５ｎＭ、１１０ｎＭ、１０５ｎＭ、または１００ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬの非共有結合三量体）の、チップ上に固定化されたＧＩＴＲへの結合を、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、または１５％未満阻害する。ある特定の実施形態では、チップ（例えば、ＣＭ５センサーチップ）上に固定化されたＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合した１２５ｎＭの濃度の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、１２５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬの非共有結合三量体）の、チップ上に固定化されたＧＩＴＲへの結合を、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、または１５％未満阻害する。
【００９２】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、８．５×１０−３ｓ−１以下、３．５×１０−３ｓ−１以下、５×１０−３ｓ−１以下、２．５×１０−３ｓ−１以下、１×１０−３ｓ−１以下、８．５×１０−４ｓ−１以下、５×１０−４ｓ−１以下、３．５×１０−４ｓ−１以下、２．５×１０−４ｓ−１以下、１×１０−４ｓ−１以下、８．５×１０−５−ｓ−１以下、３．５×１０−５−ｓ−１以下、５×１０−５−ｓ−１以下、２．５×１０−５−ｓ−１以下、１×１０−５−ｓ−１以下、８．５×１０−６−ｓ−１以下、５×１０−６−ｓ−１以下、３．５×１０−６−ｓ−１以下、２．５×１０−６−ｓ−１以下、１×１０−６−ｓ−１以下、８．５×１０−７−ｓ−１以下、５×１０−７−ｓ−１以下、２．５×１０−７−ｓ−１以下、１×１０−７−ｓ−１以下、８．５×１０−８−ｓ−１以下、５×１０−８−ｓ−１以下、２．５×１０−８−ｓ−１以下、１×１０−８−ｓ−１以下、８．５×１０−９−ｓ−１以下、５×１０−９ｓ−１以下、２．５×１０−９−ｓ−１以下、または１×１０−９−ｓ−１以下の解離速度定数（ｋｏｆｆ）でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、９．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−９−ｓ−１、８．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−９−ｓ−１、５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−９−ｓ−１、９．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−８−ｓ−１、５×１０−５ｓ−１〜１×１０−８−ｓ−１、９．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−７−ｓ−１、５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−７−ｓ−１、９．５×１０−５−ｓ−１〜５×１０−６−ｓ−１、９．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−５−ｓ−１、８．５×１０−３ｓ−１〜１×１０−４ｓ−１、５×１０−３ｓ−１〜２．５×１０−４ｓ−１、８．５×１０−３ｓ−１〜１×１０−５ｓ−１、８．５×１０−５−ｓ−１〜５×１０−５−ｓ−１のｋｏｆｆでＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。ある特定の実施形態では、ｋｏｆｆ￥は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂ断片等の一価抗体を使用して決定される。他の実施形態では、このｋｏｆｆは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、二価抗体を使用して決定される。アッセイ特定の一実施形態では、このｋｏｆｆは、以下の項６に記載されるアッセイを使用して決定される。
【００９３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、少なくとも１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも２．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも３．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも２．５×１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも３．５×１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０７Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０７Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０８Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５  １０８Ｍ−１ｓ−１、または少なくとも１０９Ｍ−１ｓ−１の会合速度定数（ｋｏｎ）でＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜５×１０５Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜１×１０６Ｍ−１ｓ−１、３．５×１０５Ｍ−１ｓ−１〜２．５×１０６Ｍ−１ｓ−１、３．５×１０５Ｍ−１ｓ−１〜３．５×１０６Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜５×１０６Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−〜１×１０７Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜５×１０７Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜１０８Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜１×１０９Ｍ−１ｓ−１、１×１０６Ｍ−１ｓ−〜１×１０７Ｍ−１ｓ−１、１×１０６Ｍ−１ｓ−１〜１×１０８Ｍ−１ｓ−１、１×１０６Ｍ−１ｓ−１〜１×１０９Ｍ−１ｓ−１、１×１０７Ｍ−１ｓ−１〜１×１０８Ｍ−１ｓ−１、１×１０７Ｍ−１ｓ−１〜１×１０９Ｍ−１ｓ−１、１×１０８Ｍ−１ｓ−１〜１×１０９Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎでＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。ある特定の実施形態では、このｋｏｎは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂ断片等の一価抗体を使用して決定される。他の実施形態では、このｋｏｎは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、二価抗体を使用して決定される。特定の一実施形態では、このｋｏｎは、以下の項６に記載されるアッセイを使用して決定される。
【００９４】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、または０．１ｎＭ未満のＫＤでＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、約７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、または０．１ｎＭのＫＤでＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその断片は、７ｎＭ〜２ｎＭ、５ｎＭ〜３ｎＭ、５ｎＭ〜１ｎＭ、４ｎＭ〜３ｎＭ、４ｎＭ〜２ｎＭ、３ｎＭ〜２ｎＭ、３ｎＭ〜１ｎＭ、２ｎＭ〜１ｎＭ、３ｎＭ〜０．１ｎＭ、２ｎＭ〜０．１ｎＭ、１ｎＭ〜０．１ｎＭ、または０．５ｎＭ〜０．１ｎＭのＫＤでＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。ある特定の実施形態では、ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商として計算され、ｋｏｎ及びｋｏｆｆは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂ断片等の一価抗体を使用して決定される。他の実施形態では、このＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商として計算され、このｋｏｎ及びｋｏｆｆは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂ断片等の二価抗体を使用して決定される。具体的な一実施形態では、このＫＤは、以下の項６の実施例（例えば、実施例２）に示されるように決定される。
【００９５】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＫＸ８ＹＬＸ９（配列番号４）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、もしくはＭであり、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＳであり、
Ｘ３が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ７が、Ｑ、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＴＲＸ２Ｘ３（配列番号５）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｗ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ｅ、Ｄ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２ＹＸ３Ｘ４ＰＹＴ（配列番号６）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、もしくはＹであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ｅ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、上記のＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ、例えば、それらのＶＬ  ＣＤＲのすべてが抗体２３１−３２−１５由来である）。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載のＶＬフレームワーク領域を含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、表３の一行のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ）を含む。
【００９６】
別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、もしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＳＧＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＸ８ＱＫＦＸ９Ｘ１０（配列番号２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＰであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ７が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ１０が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号３）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｆ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｍ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、もしくはＳであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＤであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＶである、ＶＨ  ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、上記のＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ、例えば、それらのＶＨ  ＣＤＲのすべてが抗体２３１−３２−１５由来である）。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載のＶＨフレームワークを含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、表４の一行のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ）を含む。
【００９７】
【表１−１】
2017526615.tif 000002
【表１−２】
2017526615.tif 000003
【表１−３】
2017526615.tif 000004
【表１−４】
2017526615.tif 000005
【表１−５】
2017526615.tif 000006
１表１のＶＬ  ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定されたものである。
【００９８】
【表２−１】
2017526615.tif 000007
【表２−２】
2017526615.tif 000008
【表２−３】
2017526615.tif 000009
【表２−４】
2017526615.tif 000010
２表２のＶＨ  ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定されたものである。
【００９９】
【表３−１】
2017526615.tif 000011
【表３−２】
2017526615.tif 000012
【表３−３】
2017526615.tif 000013
【表３−４】
2017526615.tif 000014
【表３−５】
2017526615.tif 000015
【表３−６】
2017526615.tif 000016
【表３−７】
2017526615.tif 000017
【表３−８】
2017526615.tif 000018
３表３に記載のＶＬフレームワーク領域は、ＣＤＲのＫａｂａｔ番号付けシステムの境界に基づいて決定されたものである。言い換えれば、ＶＬ  ＣＤＲは、Ｋａｂａｔによって決定されたものであり、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の形式で可変領域内のＣＤＲを取り囲むアミノ酸残基である。
【０１００】
【表４−１】
2017526615.tif 000019
【表４−２】
2017526615.tif 000020
【表４−３】
2017526615.tif 000021
【表４−４】
2017526615.tif 000022
【表４−５】
2017526615.tif 000023
４表４に記載のＶＨフレームワーク領域は、ＣＤＲのＫａｂａｔ番号付けシステムの境界に基づいて決定されたものである。言い換えれば、ＶＨ  ＣＤＲ、Ｋａｂａｔによって決定されたものであり、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の形式で可変領域内のＣＤＲを取り囲むアミノ酸残基である。
【０１０１】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＫＸ８ＹＬＸ９（配列番号４）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、もしくはＭであり、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＳであり、
Ｘ３が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ７が、Ｑ、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＴＲＸ２Ｘ３（配列番号５）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｗ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ｅ、Ｄ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２ＹＸ３Ｘ４ＰＹＴ（配列番号６）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、もしくはＹであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ｅ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、上記のＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表５の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表５の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表５の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表５の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む（例えば、表５の一行のＶＬ  ＣＤＲ、例えば、それらのＶＬ  ＣＤＲのすべてが抗体２３１−３２−１５に由来する）。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載のＶＬフレームワーク領域を含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表７に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、表７の一行のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ）を含む。
【０１０２】
別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、もしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＳＧＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＸ８ＱＫＦＸ９Ｘ１０（配列番号２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＰであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ７が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ１０が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号３）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｆ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｍ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、もしくはＳであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＤであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＶである、ＶＨ  ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、上記のＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表６の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表６の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表６の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表６の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む（例えば、表６の一行のＶＨ  ＣＤＲ、例えば、それらのＶＨ  ＣＤＲのすべてが抗体２３１−３２−１５由来である）。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載のＶＨフレームワークを含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表８に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、表８の一行のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つ）を含む。
【０１０３】
【表５−１】
2017526615.tif 000024
【表５−２】
2017526615.tif 000025
【表５−３】
2017526615.tif 000026
１表５のＶＬ  ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定されたものである。
【０１０４】
【表６−１】
2017526615.tif 000027
【表６−２】
2017526615.tif 000028
【表６−３】
2017526615.tif 000029
２表６のＶＨ  ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って決定されたものである。
【０１０５】
【表７−１】
2017526615.tif 000030
【表７−２】
2017526615.tif 000031
【表７−３】
2017526615.tif 000032
【表７−４】
2017526615.tif 000033
【表７−５】
2017526615.tif 000034
３表７に記載のＶＬフレームワーク領域は、ＣＤＲのＫａｂａｔ番号付けシステムの境界に基づいて決定されたものである。言い換えれば、ＶＬ  ＣＤＲは、Ｋａｂａｔによって決定されたものであり、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の形式で可変領域内のＣＤＲを取り囲むアミノ酸残基である。
【０１０６】
【表８−１】
2017526615.tif 000035
【表８−２】
2017526615.tif 000036
【表８−３】
2017526615.tif 000037
【表８−４】
2017526615.tif 000038
【表８−５】
2017526615.tif 000039
４表８に記載のＶＨフレームワーク領域は、ＣＤＲのＫａｂａｔ番号付けシステムの境界に基づいて決定されたものである。言い換えれば、ＶＨ  ＣＤＲ、Ｋａｂａｔによって決定されたものであり、フレームワーク領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の形式で可変領域内のＣＤＲを取り囲むアミノ酸残基である。
【０１０７】
別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＫＸ８ＹＬＸ９（配列番号４）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、もしくはＭであり、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＳであり、
Ｘ３が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ７が、Ｑ、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＴＲＸ２Ｘ３（配列番号５）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｗ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ｅ、Ｄ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２ＹＸ３Ｘ４ＰＹＴ（配列番号６）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、もしくはＹであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ｅ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ３、及び／または
（ｄ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、もしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＳＧＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＸ８ＱＫＦＸ９Ｘ１０（配列番号２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＰであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ７が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ１０が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号３）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｆ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｍ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、もしくはＳであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＤであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＶである、ＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ、例えば、それらのＶＨ  ＣＤＲのすべてが抗体２３１−３２−１５由来である）。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ、例えば、それらのＶＬ  ＣＤＲのすべてが抗体２３１−３２−１５由来である）。
【０１０８】
別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、
（ｉ）このＶＬが、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＫＸ８ＹＬＸ９（配列番号４）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１であって、
Ｘ１が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、もしくはＭであり、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＳであり、
Ｘ３が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ７が、Ｑ、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＴＲＸ２Ｘ３（配列番号５）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｗ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ｅ、Ｄ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２ＹＸ３Ｘ４ＰＹＴ（配列番号６）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、もしくはＹであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ｅ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ３を含み、
（ｉｉ）このＶＨが、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、もしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＳＧＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＸ８ＱＫＦＸ９Ｘ１０（配列番号２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＰであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ７が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ１０が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号３）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｆ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｍ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、もしくはＳであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＤであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＶである、ＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
具体的な実施形態では、ＶＬは、上記のＶＬ  ＣＤＲのうちの２つまたは３つすべてを含み、かつ／またはＶＨは、上記のＶＨ  ＣＤＲのうちの２つまたは３つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ）を含む。
【０１０９】
別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＸ１ＮＱＫＮＹＬＸ２（配列番号１０）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、ＧもしくはＳであり、
Ｘ２が、ＴもしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＮＸ１ＹＳＸ２ＰＹＴ（配列番号１２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、ＤもしくはＥであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、もしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ３を含む、ＶＬを含む。
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、上記のＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ３を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載のＶＬフレームワーク領域を含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）（例えば、表３の一行のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ）を含む。
【０１１０】
別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）であって、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号７）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＶであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２ＴＸ３ＳＧＸ４Ｘ５Ｘ６ＹＮＱＫＦＸ７Ｘ８（配列番号８）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、もしくはＱであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＦであり、
Ｘ４が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ５が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ６が、ＴもしくはＳであり、
Ｘ７が、Ｋ、Ｒ、もしくはＱであり、
Ｘ８が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号９）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３を含む、ＶＨを含む。
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、上記のＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべてを含むいくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載のＶＨフレームワークを含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、表４の一行のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ）を含む。
【０１１１】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＸ１ＮＱＫＮＹＬＸ２（配列番号１０）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、ＧもしくはＳであり、
Ｘ２が、ＴもしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＮＸ１ＹＳＸ２ＰＹＴ（配列番号１２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、ＤもしくはＥであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、もしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ３。
（ｄ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号７）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＶであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｅ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２ＴＸ３ＳＧＸ４Ｘ５Ｘ６ＹＮＱＫＦＸ７Ｘ８（配列番号８）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、もしくはＱであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＦであり、
Ｘ４が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ５が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ６が、ＴもしくはＳであり、
Ｘ７が、Ｋ、Ｒ、もしくはＱであり、
Ｘ８が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｆ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号９）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、上記のＣＤＲのうちの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ）を含む。
【０１１２】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、
（ｉ）このＶＬが、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＸ１ＮＱＫＮＹＬＸ２（配列番号１０）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、ＧもしくはＳであり、
Ｘ２が、ＴもしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＮＸ１ＹＳＸ２ＰＹＴ（配列番号１２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、ＤもしくはＥであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、もしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ３を含み、
（ｉｉ）このＶＨが、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号７）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＶであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２ＴＸ３ＳＧＸ４Ｘ５Ｘ６ＹＮＱＫＦＸ７Ｘ８（配列番号８）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、もしくはＱであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＦであり、
Ｘ４が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ５が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ６が、ＴもしくはＳであり、
Ｘ７が、Ｋ、Ｒ、もしくはＱであり、
Ｘ８が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号９）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
具体的な実施形態では、ＶＬは、上記のＶＬ  ＣＤＲのうちの２つまたは３つすべてを含み、かつ／またはＶＨは、上記のＶＨ  ＣＤＲのうちの２つまたは３つすべてを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ１を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ２を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表２の抗体のうちの１つのＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表１の抗体のうちの１つのＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ）を含む。
【０１１３】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、
（ｉ）このＶＬが、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＸ１ＮＱＫＮＹＬＸ２（配列番号１０）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、ＧもしくはＳであり、
Ｘ２が、ＴもしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１１）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＮＸ１ＹＳＸ２ＰＹＴ（配列番号１２）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、ＤもしくはＥであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、もしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ３を含み、
（ｉｉ）このＶＨが、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号７）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＶであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２ＴＸ３ＳＧＸ４Ｘ５Ｘ６ＹＮＱＫＦＸ７Ｘ８（配列番号８）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、もしくはＱであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＦであり、
Ｘ４が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ５が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ６が、ＴもしくはＳであり、
Ｘ７が、Ｋ、Ｒ、もしくはＱであり、
Ｘ８が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号３）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になるＶＨ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｆ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｍ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、もしくはＳであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＤであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＶである、ＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０１１４】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ表１の抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）相補性決定領域（ＣＤＲ）のうちの１つ、２つ、または３つ（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ）を含む抗体またはその断片が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ表２の抗体のうちのいずれか１つの重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つ（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）を含む抗体またはその断片が本明細書に提供される。
【０１１５】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ表１の抗体のＶＬ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗体またはその断片が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載のＶＬフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つすべてを含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示されるＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ（例えば、表３の一行のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ）を含む。
【０１１６】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ表２の抗体のＶＨ  ＣＤＲのうちの１つ、２つ、または３つすべて（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗体またはその断片が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載のＶＨフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つすべてを含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示されるＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ（例えば、表４の一行のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ）を含む。
【０１１７】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ例えば表１及び２に示される抗体Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つの軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ及び重鎖可変領域（ＶＨ）ＣＤＲを含む抗体またはその断片が本明細書に提供される（例えば、同じ行のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲは、表１及び２第１の列の抗体の名称で指定される同じ抗体由来であり、例えば、表１及び２の第１の行のＶＬ  ＣＤＲ及びＶＨ  ＣＤＲはすべて、それぞれ、抗体２３１−３２−１５由来である）。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワークを含む。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３及び４に示されるＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）及びＶＨフレームワーク領域を含む（例えば、ＶＬ  ＦＲ及びＶＨ  ＦＲはすべて、同じ抗体由来である）。
【０１１８】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、表１に示されるＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）、例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（例えば、ＶＬ  ＣＤＲは、表１の一行のものである）を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、表３の一行のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０４または配列番号２０５の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つを含む軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０２、配列番号２０７、配列番号２０８、及び配列番号４００〜５１８からなる群から選択される軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つを含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５１９の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つを含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列であるか、またはそれ由来の軽鎖可変フレームワーク領域を含み、このアミノ酸配列は、ＩＧＫＶ４−１＊０１（配列番号６０７）及びＩＧＫＶ３−７＊０２（配列番号６０８）からなる群から選択される。具体的な実施形態では、前記アミノ酸配列由来の軽鎖可変フレームワーク領域は、最大１０個のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入、好ましくは最大１０個のアミノ酸置換の存在を除く前記アミノ酸配列からなる。特定の一実施形態では、前記アミノ酸配列由来の軽鎖可変フレームワーク領域は、対応する非ヒト軽鎖可変フレームワーク領域内の類似位置に見られるアミノ酸で置換される１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する前記アミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列配列番号６０７または配列番号６０８由来の軽鎖可変フレームワーク領域を含み、アミノ酸配列配列番号６０７または配列番号６０８における少なくとも１つのアミノ���は、対応する非ヒト軽鎖可変フレームワーク領域内の類似位置におけるアミノ酸で置換される。具体的な一実施形態では、このアミノ酸置換は、アミノ酸位置８７においてであり、このアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。特定の実施形態では、このアミノ酸置換は、８７Ｈにおいてであり、このアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。
【０１１９】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、Ｈｕｍ２３１＃１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるＨｕｍ２３１＃１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１６、１７、及び１８）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１のフレームワーク領域）を含む。
【０１２０】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、Ｈｕｍ２３１＃２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるＨｕｍ２３１＃２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１６、１７、及び１８）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、Ｈｕｍ２３１＃２のフレームワーク領域）を含む。
【０１２１】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９６４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、及び１０６）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６４のフレームワーク領域）を含む。
【０１２２】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９６５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６５のフレームワーク領域）を含む。
【０１２３】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９６６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６６のフレームワーク領域）を含む。
【０１２４】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６７のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９６７のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、及び１０８）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６７のフレームワーク領域）を含む。
【０１２５】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６８のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９６８のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６８のフレームワーク領域）を含む。
【０１２６】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９６９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、及び１０９）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６９のフレームワーク領域）を含む。
【０１２７】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９７０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、及び１０９）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７０のフレームワーク領域）を含む。
【０１２８】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９７１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７１のフレームワーク領域）を含む。
【０１２９】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９７２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０４、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７２のフレームワーク領域）を含む。
【０１３０】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９７３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７３のフレームワーク領域）を含む。
【０１３１】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９７５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７５のフレームワーク領域）を含む。
【０１３２】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９７６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７６のフレームワーク領域）を含む。
【０１３３】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７７のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９７７のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７７のフレームワーク領域）を含む。
【０１３４】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９７９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７９のフレームワーク領域）を含む。
【０１３５】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９８０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９８０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９８０のフレームワーク領域）を含む。
【０１３６】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９８１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９８１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９８１のフレームワーク領域）を含む。
【０１３７】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９８３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ１９８３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９８３のフレームワーク領域）を含む。
【０１３８】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ２１５９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ２１５９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、及び１０９）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ２１５９のフレームワーク領域）を含む。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ２１６０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ２１６０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、及び１０７）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ２１６０のフレームワーク領域）を含む。
【０１３９】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ２１６１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、表１に示されるｐａｂ２１６１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、及び１０９）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト軽鎖可変カッパサブファミリー由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ２１６１のフレームワーク領域）を含む。
【０１４０】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、表２に示されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、表４の一行のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つ）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０３の重鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つすべてを含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０１、配列番号２０６、及び配列番号２１５〜３８９からなる群から選択される重鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の重鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１つ、２つ、３つ、または４つを含む。ある特定の実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列であるか、またはそれ由来の重鎖可変フレームワーク領域を含み、このアミノ酸配列は、ＩＧＨＶ１−２＊０２（配列番号６０１）、ＩＧＨＶ１−３＊０１（配列番号６０２）、ＩＧＨＶ１−４６＊０１（配列番号６０３）、ＩＧＨＶ１−１８＊０１（配列番号６０４）、ＩＧＨＶ１−６９＊０１（配列番号６０５）、及びＩＧＨＶ７−４−１＊０２（配列番号６０６）からなる群から選択される。具体的な実施形態では、前記アミノ酸配列由来の重鎖可変フレームワーク領域は、最大１０個のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入、好ましくは最大１０個のアミノ酸置換の存在を除く前記アミノ酸配列からなる。特定の一実施形態では、前記アミノ酸配列由来の重鎖可変フレームワーク領域は、対応する非ヒト重鎖可変フレームワーク領域内の類似位置に見られるアミノ酸で置換される１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する前記アミノ酸配列からなる。具体的な実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列配列番号６０１由来の重鎖可変フレームワーク領域を含み、アミノ酸配列配列番号６０１の少なくとも１つのアミノ酸が、対応する非ヒト重鎖可変フレームワーク領域内の類似位置におけるアミノ酸で置換される。ある特定の実施形態では、このアミノ酸置換は、２４、４８、６７、７１、７３、及び９４からなる群から選択されるアミノ酸位置にお���てであり、各群メンバーのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。具体的な実施形態では、このアミノ酸置換は２４Ｇ、４８Ｉ、６７Ａ、７１Ｖ、７３Ｋ、及び９４Ｋからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。
【０１４１】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、Ｈｕｍ２３１＃１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるＨｕｍ２３１＃１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１３、１４、及び１５）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１のフレームワーク領域）を含む。
【０１４２】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、Ｈｕｍ２３１＃２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるＨｕｍ２３１＃２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１３、１４、及び１５）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、Ｈｕｍ２３１＃２のフレームワーク領域）を含む。
【０１４３】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９６４のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１９、２４、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６４のフレームワーク領域）を含む。
【０１４４】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９６５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１９、２５、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６５のフレームワーク領域）を含む。
【０１４５】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９６６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１９、２６、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６６のフレームワーク領域）を含む。
【０１４６】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６７のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９６７のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２０、２７、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６７のフレームワーク領域）を含む。
【０１４７】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６８のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９６８のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２１、２８、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６８のフレームワーク領域）を含む。
【０１４８】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６９のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９６９のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２２、２９、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６９のフレームワーク領域）を含む。
【０１４９】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９７０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２１、２４、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７０のフレームワーク領域）を含む。
【０１５０】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９７１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２１、１７７、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７１のフレームワーク領域）を含む。
【０１５１】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９７２のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２３、３１、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７２のフレームワーク領域）を含む。
【０１５２】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９７３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１９、３２、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７３のフレームワーク領域）を含む。
【０１５３】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９７５のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２２、２９、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７５のフレームワーク領域）を含む。
【０１５４】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９７６のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２２、２９、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７６のフレームワーク領域）を含む。
【０１５５】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７７のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９７７のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２２、２９、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７７のフレームワーク領域）を含む。
【０１５６】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７９のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９７９のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２２、３３、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７９のフレームワーク領域）を含む。
【０１５７】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９８０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９８０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２２、３３、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９８０のフレームワーク領域）を含む。
【０１５８】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９８１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９８１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２２、３３、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９８１のフレームワーク領域）を含む。
【０１５９】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９８３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ１９８３のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１９、２４、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９８３のフレームワーク領域）を含む。
【０１６０】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ２１５９のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ２１５９のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１９、１４４、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ２１５９のフレームワーク領域）を含む。
【０１６１】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ２１６０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ２１６０のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１１９、１６２、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ２１６０のフレームワーク領域）を含む。
【０１６２】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ２１６１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表２に示されるｐａｂ２１６１のＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号２２、１２１、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。具体的な実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒト重鎖可変サブファミリー（例えば、サブファミリー１〜７のうちの１つ）由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、表４に示される抗体のＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ２１６１のフレームワーク領域）を含む。
【０１６３】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）表２に示されるＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）、ならびに（ｉｉ）表１に示されるＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３、例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、その名称で指定される単一の抗体のフレームワーク領域（例えば、それらのＦＲのすべてがＨｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２由来である））を含む。
【０１６４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０１、配列番号２０６、及び配列番号２１５〜３８９からなる群から選択される重鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の重鎖可変領域配列の１、２、３、または４つのフレームワーク領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列であるか、またはそれ由来の重鎖可変フレームワーク領域を含み、このアミノ酸配列は、ＩＧＨＶ１−２＊０２（配列番号６０１）、ＩＧＨＶ１−３＊０１（配列番号６０２）、ＩＧＨＶ１−４６＊０１（配列番号６０３）、ＩＧＨＶ１−１８＊０１（配列番号６０４）、ＩＧＨＶ１−６９＊０１（配列番号６０５）、及びＩＧＨＶ７−４−１＊０２（配列番号６０６）からなる群から選択される。具体的な実施形態では、前記アミノ酸配列由来の重鎖可変フレームワーク領域は、最大１０個のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入、好ましくは最大１０個のアミノ酸置換の存在を除く前記アミノ酸配列からなる。特定の一実施形態では、前記アミノ酸配列由来の重鎖可変フレームワーク領域は、対応する非ヒト重鎖可変フレームワーク領域内の類似位置に見られるアミノ酸で置換される１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する前記アミノ酸配列からなる。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列配列番号６０１由来の重鎖可変フレームワーク領域を含み、アミノ酸配列配列番号６０１における少なくとも１つのアミノ酸が、対応する非ヒト軽鎖可変フレームワーク領域内の類似位置におけるアミノ酸で置換される。ある特定の実施形態では、このアミノ酸置換は、２４、４８、６７、７１、７３、及び９４からなる群から選択されるアミノ酸位置においてであり、各群メンバーのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。具体的な実施形態では、このアミノ酸置換は、２４Ｇ、４８Ｉ、６７Ａ、７１Ｖ、７３Ｋ、及び９４Ｋからなる群から選択され、各群メンバーのアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。
【０１６５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、表３に示される抗体のＶＬフレームワーク領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０４または配列番号２０５の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つを含む軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０２、配列番号２０７、配列番号２０８、及び配列番号４００〜５１８からなる群から選択される軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の軽鎖可変領域配列の１、２、３、または４つのフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５１９の軽鎖可変領域配列のフレームワーク領域のうちの１、２、３、または４つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％同一の軽鎖可変領域配列の１、２、３、または４つのフレームワーク領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ヒト遺伝子によってコードされるアミノ酸配列であるか、またはそれ由来の軽鎖可変フレームワーク領域を含み、このアミノ酸配列は、ＩＧＫＶ４−１＊０１（配列番号６０７）及びＩＧＫＶ３−７＊０２（配列番号６０８）からなる群から選択される。具体的な実施形態では、前記アミノ酸配列由来の軽鎖可変フレームワーク領域は、最大１０個のアミノ酸置換、欠失、及び／または挿入、好ましくは最大１０個のアミノ酸置換の存在を除く前記アミノ酸配列からなる。特定の一実施形態では、前記アミノ酸配列由来の軽鎖可変フレームワーク領域は、対応する非ヒト軽鎖可変フレームワーク領域内の類似位置に見られるアミノ酸で置換される１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する前記アミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列配列番号６０７または配列番号６０８由来の軽鎖可変フレームワーク領域を含み、対応する非ヒト軽鎖可変フレームワーク領域内の類似位置におけるアミノ酸を有するアミノ酸配列配列番号６０７または配列番号６０８の少なくとも１つのアミノ酸。具体的な一実施形態では、このアミノ酸置換は、アミノ酸位置８７においてであり、このアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。特定の実施形態では、このアミノ酸置換は、８７Ｈにおいてであり、このアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ番号付けに従って示される。
【０１６６】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、Ｈｕｍ２３１＃１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるＨｕｍ２３１＃１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１６、１７、１８、１３、１４、及び１５）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１のフレームワーク領域）を含む。
【０１６７】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、Ｈｕｍ２３１＃２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるＨｕｍ２３１＃２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１６、１７、１８、１３、１４、及び１５）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、その名称で指定される単一の抗体のフレームワーク、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２のフレームワーク領域）を含む。
【０１６８】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９６４のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、１０６、１９、２４、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６４のフレームワーク領域）を含む。
【０１６９】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９６５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、１０７、１９、２５、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６５のフレームワーク領域）を含む。
【０１７０】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９６６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、１０７、１９、２６、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６６のフレームワーク領域）を含む。
【０１７１】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６７のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９６７のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、１０８、２０、２７、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６７のフレームワーク領域）を含む。
【０１７２】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６８のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９６８のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、１０７、２１、２８、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６８のフレームワーク領域）を含む。
【０１７３】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９６９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９６９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、１０９、２２、２９、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９６９のフレームワーク領域）を含む。
【０１７４】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９７０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、１０９、２１、２４、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７０のフレームワーク領域）を含む。
【０１７５】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９７１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、１０７、２１、１７７、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７１のフレームワーク領域）を含む。
【０１７６】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９７２のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０４、１０５、１０７、２３、３１、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７２のフレームワーク領域）を含む。
【０１７７】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９７３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、１０７、１９、３２、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７３のフレームワーク領域）を含む。
【０１７８】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９７５のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、１０７、２２、２９、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７５のフレームワーク領域）を含む。
【０１７９】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９７６のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、１０７、２２、２９、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７６のフレームワーク領域）を含む。
【０１８０】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７７のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９７７のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、１０７、２２、２９、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７７のフレームワーク領域）を含む。
【０１８１】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９７９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９７９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、１０７、２２、３３、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９７９のフレームワーク領域）を含む。
【０１８２】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９８０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９８０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０１、１０５、１０７、２２、３３、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９８０のフレームワーク領域）を含む。
【０１８３】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９８１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９８１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、１０７、２２、３３、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９８１のフレームワーク領域）を含む。
【０１８４】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ１９８３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ１９８３のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、１０７、１９、２４、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ１９８３のフレームワーク領域）を含む。
【０１８５】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ２１５９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ２１５９のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、１０９、１９、１４４、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ２１５９のフレームワーク領域）を含む。
【０１８６】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ２１６０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ２１６０のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０２、１０５、１０７、１１９、１６２、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ２１６０のフレームワーク領域）を含む。
【０１８７】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ｐａｂ２１６１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３、例えば、表１及び２に示されるｐａｂ２１６１のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（それぞれ、配列番号１０３、１０５、１０９、２２、１２１、及び３４）を含む。ある特定の実施形態では、本抗体または抗原結合断片は、ヒトまたは霊長類抗体のＶＬ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＬフレームワーク領域、及びヒトまたは霊長類抗体のＶＨ由来の１つ、２つ、３つ、または４つすべてのＶＨフレームワーク領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、本抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ、表３及び４に示される抗体のＶＬフレームワーク領域及びＶＨフレームワーク領域（例えば、ｐａｂ２１６１のフレームワーク領域）を含む。
【０１８８】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つに列挙される抗体のＶＬドメイン（例えば、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つの一行のＶＬドメイン）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、表１７中に列挙される抗体のＶＬドメイン（例えば、表１７の一行のＶＬドメイン）のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０７（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０８（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃２）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４３５（例えば、抗体ｐａｂ１９６４）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４３７（例えば、抗体ｐａｂ１９６５）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０（例えば、抗体ｐａｂ１９６６）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４１（例えば、抗体ｐａｂ１９６７）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４４（例えば、抗体ｐａｂ１９６８）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５８を含むＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５９（例えば、抗体ｐａｂ１９７０）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５３（例えば、抗体ｐａｂ１９７１）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４６３（例えば、抗体ｐａｂ１９７２）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号５１９（例えば、抗体ｐａｂ１９７３）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０（例えば、抗体ｐａｂ１９７５）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４４（例えば、抗体ｐａｂ１９７６）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５３（例えば、抗体ｐａｂ１９７７）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０（例えば、抗体ｐａｂ１９７９）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４４（例えば、抗体ｐａｂ１９８０）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５３（例えば、抗体ｐａｂ１９８１）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０（例えば、抗体ｐａｂ１９８３）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４０８（例えば、抗体ｐａｂ２１５９）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４２３（例えば、抗体ｐａｂ２１６０）を含むＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４８６（例えば、抗体ｐａｂ２１６１）を含むＶＬドメインを含む。
【０１８９】
いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つに列挙される抗体のＶＬドメイン（例えば、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つの一行のＶＬドメイン）のアミノ酸配列からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、表１７中に列挙される抗体のＶＬドメイン（例えば、表１７の一行のＶＬドメイン）のアミノ酸配列からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０７（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１）からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０８からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃２）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４３５からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６４）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４３７からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６５）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６６）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４１からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６７）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４４からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６８）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５８を含むＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５９からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７０）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５３からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７１）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４６３からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７２）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号５１９からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７３）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７５）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４４からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７６）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５３からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７７）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４４からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９８０）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５３からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９８１）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９８３）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４０８からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ２１５９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４２３からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ２１６０）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４８６からなるか、またはそれから本質的になるＶＬドメイン（例えば、抗体ｐａｂ２１６１）を含む。
【０１９０】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つに列挙される抗体のＶＨドメイン（例えば、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つの一行のＶＨドメイン）のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、表１７中に列挙される抗体のＶＨドメイン（例えば、表１７の一行のＶＨドメイン）のアミノ酸配列を含むＶＨドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０６を含むＶＨドメイン（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は配列番号２０６を含むＶＨドメイン（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃２）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２４９を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６４）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２５１を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６５）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２５４を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６６）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２５５を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６７）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２５９を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６８）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７６を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７７を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７０）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２８０を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７１）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２８４を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７２）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３０４を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７３）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７６を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７５）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７６を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７６）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７６を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７７）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３４５を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３４５を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９８０）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３４５を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９８１）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２４９を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９８３）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２２４を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ２１５９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２３７を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ２１６０）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３１５を含むＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ２１６１）を含む。
【０１９１】
いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つに列挙される抗体のＶＨドメイン（例えば、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つの一行のＶＨドメイン）のアミノ酸配列からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、表１７に列挙される抗体の表１７中に列挙される抗体のＶＨドメイン（例えば、表１７の一行のＶＨドメイン）のアミノ酸配列からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメインを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０６からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０６からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃２）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２４９からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６４）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２５１からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６５）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２５４からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６６）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２５５からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６７）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２５９からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６８）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７６からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９６９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７７からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７０）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２８０からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７１）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２８４からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７２）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３０４からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７３）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７６からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７５）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７６からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７６）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２７６からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７７）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３４５からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９７９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３４５からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９８０）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３４５からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９８１）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２４９からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ１９８３）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２２４からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ２１５９）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２３７からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ２１６０）を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号３１５からなるか、またはそれから本質的になるＶＨドメイン（例えば、抗体ｐａｂ２１６１）を含む。
【０１９２】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、これらのＶＨドメイン及びＶＬドメインは、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つに列挙される抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメイン（例えば、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つの一行のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、これらのＶＨドメイン及びＶＬドメインは、表１７中に列挙される抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメイン（例えば、表１７の一行のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）のアミノ酸配列を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０７を含むＶＬドメイン及び配列番号２０６を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０８を含むＶＬドメイン及び配列番号２０６を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃２）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４３５を含むＶＬドメイン及び配列番号２４９を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６４）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４３７を含むＶＬドメイン及び配列番号２５１を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６５）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０を含むＶＬドメイン及び配列番号２５４を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６６）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４１を含むＶＬドメイン及び配列番号２５５を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６７）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４４を含むＶＬドメイン及び配列番号２５９を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６８）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５８を含むＶＬドメイン及び配列番号２７６を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６９）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５９を含むＶＬドメイン及び配列番号２７７を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７０）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５３を含むＶＬドメイン及び配列番号２８０を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７１）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４６３を含むＶＬドメイン及び配列番号２８４を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７２）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号５１９を含むＶＬドメイン及び配列番号３０４を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７３）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０を含むＶＬドメイン及び配列番号２７６を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７５）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４４を含むＶＬドメイン及び配列番号２７６を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７６）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５３を含むＶＬドメイン及び配列番号２７６を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７７）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０を含むＶＬドメイン及び配列番号３４５を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７９）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４４を含むＶＬドメイン及び配列番号３４５を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９８０）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４５３を含むＶＬドメイン及び配列番号３４５を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９８１）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４４０を含むＶＬドメイン及び配列番号２４９を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９８３）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４０８を含むＶＬドメイン及び配列番号２２４を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ２１５９）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４２３を含むＶＬドメイン及び配列番号２３７を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ２１６０）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号４８６を含むＶＬドメイン及び配列番号３１５を含むＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ２１６１）。
【０１９３】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、これらのＶＨドメイン及びＶＬドメインは、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つに列挙される抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメイン（例えば、図２３または図２４Ａ〜２４Ｃのうちのいずれか１つの一行のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）のアミノ酸配列からなるか、またはそれから本質的になる。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、これらのＶＨドメイン及びＶＬドメインは、表１７中に列挙される抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメイン（例えば、表１７の一行のＶＨドメイン及びＶＬドメイン）のアミノ酸配列からなるか、またはそれから本質的になる。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号２０７からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２０６からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号２０８からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２０６からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃２）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４３５からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２４９からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６４）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４３７からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２５１からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６５）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４４０からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２５４からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６６）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４４１からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２５５からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６７）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４４４からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２５９からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６８）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４５８からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２７６からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９６９）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４５９からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２７７からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７０）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４５３からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２８０からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７１）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４６３からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２８４からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７２）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号５１９からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号３０４からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７３）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４４０からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２７６からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７５）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４４４からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２７６からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７６）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４５３からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２７６からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７７）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４４０からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号３４５からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９７９）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４４４からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号３４５からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９８０）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４５３からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号３４５からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９８１）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４４０からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２４９からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ１９８３）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４０８からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２２４からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ２１５９）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４２３からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号２３７からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ２１６０）。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、ＶＬドメインが配列番号４８６からなるか、またはそれから本質的になり、ＶＨドメインが配列番号３１５からなるか、またはそれから本質的になる、ＶＬドメイン及びＶＨドメインを含む（例えば、抗体ｐａｂ２１６１）。
【０１９４】
ある特定の態様では、本明細書に記載の抗体は、そのＶＬドメインのみ、またはそのＶＨドメインのみ、またはその３つのＶＬ  ＣＤＲのみ、またはその３つのＶＨ  ＣＤＲのみによって記載されてもよい。例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｒａｄｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９８）ＰＮＡＳ  ９５：８９１０−８９１５を参照されたく、これは、ヒト軽鎖または重鎖ライブラリから、それぞれ、相補的軽鎖または重鎖を特定することによって、元の抗体の親和性と同じまたはそれより高い親和性を有するヒト化抗体変異型をもたらす、マウス抗αｖβ３抗体のヒト化を説明する。参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８も参照されたく、これは、特異的なＶＬドメイン（またはＶＨドメイン）を使用し、相補的可変ドメインにおついてライブラリをスクリーニングすることによって特異的抗原に結合する抗体の産生方法を説明する。このスクリーニングは、特異的なＶＨドメインの場合は１４の新たなパートナー及び特異的なＶＬドメインの場合は１３の新たなパートナーを生成し、これらは、ＥＬＩＳＡによって決定されるように、強力な結合剤であった。参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｉｍ  ＳＪ  ＆  Ｈｏｎｇ  ＨＪ，（２００７）Ｊ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ４５：５７２−５７７も参照されたく、これは、特異的なＶＨドメインを使用し、相補的ＶＬドメインについてライブラリ（例えば、ヒトＶＬライブラリ）をスクリーニングすることによって、特異的抗原に結合する抗体の産生方法を説明し、次いで、選択されたＶＬドメインを、さらなる相補的（例えば、ヒト）ＶＨドメインの選択を誘導するために使用することができた。
【０１９５】
ある特定の態様では、抗体のＣＤＲは、免疫グロブリンの構造ループの位置を指すＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームに従って決定され得る（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ  ＆  Ｌｅｓｋ  ＡＭ，（１９８７），Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １９６：９０１−９１７、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２７３：９２７−９４８、Ｃｈｏｔｈｉａ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２７：７９９−８１７、Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５（１）：１７５−８２、及び米国特許第７，７０９，２２６号を参照されたい）。典型的には、Ｋａｂａｔ番号付け規約を使用する場合、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ１ループは、重鎖アミノ酸２６〜３２、３３、または３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ２ループは、重鎖アミノ酸５２〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｈ３ループは、重鎖アミノ酸９５〜１０２に存在するが、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ１ループは、軽鎖アミノ酸２４〜３４に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ２ループは、軽鎖アミノ酸５０〜５６に存在し、Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−Ｌ３ループは、軽鎖アミノ酸８９〜９７に存在する。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲ−ＨＩループの末端は、Ｋａｂａｔ番号付け規約を使用して番号付けされる場合、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４との間で異なる（これは、Ｋａｂａｔ番号付けスキームがＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を置くためであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、このループは３２で終わり、３５Ａのみが存在する場合には、このループは３３で終わり、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合には、このループは３４で終わる）。
【０１９６】
ある特定の態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の抗体のうちのいずれか１つ（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つ）のＶＬの１つ以上のＣｈｏｔｈｉａ  ＶＬ  ＣＤＲ、及び／または本明細書に記載の抗体のうちのいずれか１つ（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つ）のＶＨの１つ以上のＣｈｏｔｈｉａ  ＶＨ  ＣＤＲを含む抗体またはその断片が、本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、１つ以上のＣＤＲを含み、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔ  ＣＤＲは同じアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつＫａｂａｔ  ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲの組み合わせを含む抗体またはその断片が、本明細書に提供される。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の抗体（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１）のうちのいずれかのＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲを含む抗体またはその断片が、本明細書に提供される。
【０１９７】
ある特定の態様では、抗体のＣＤＲは、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ，（１９９９）Ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ  ７：１３２−１３６及びＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７：２０９−２１２に記載される、ＩＭＧＴ番号付けシステムに従って決定され得る。ＩＭＧＴ番号付けスキームに従って、ＶＨ−ＣＤＲ１は、位置２６〜３５にあり、ＶＨ−ＣＤＲ２は、位置５１〜５７にあり、ＶＨ−ＣＤＲ３は、位置９３〜１０２にあり、ＶＬ−ＣＤＲ１は、位置２７〜３２にあり、ＶＬ−ＣＤＲ２は、位置５０〜５２にあり、ＶＬ−ＣＤＲ３は、位置８９〜９７にある。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の抗体のうちのいずれか１つ（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つ）のＣＤＲを含む抗体またはその断片が、本明細書に提供され、これは、例えば、Ｌｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ（１９９９）（上記参照）及びＬｅｆｒａｎｃ  Ｍ−Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）上記参照）に記載されるように、ＩＭＧＴ番号付けシステムによって決定される。
【０１９８】
ある特定の態様では、抗体のＣＤＲは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２６２：７３２−７４５に従って決定され得る。例えば、Ｍａｒｔｉｎ  Ａ．  “Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ，”  ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｅｂｅｌ，ｅｄｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  ３１，ｐｐ．４２２−４３９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ（２００１）も参照されたい。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の抗体のうちのいずれか１つ（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つ）のＣＤＲを含む抗体またはその断片が、本明細書に提供され、これらは、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ＲＭらの方法によって決定される。
【０１９９】
ある特定の態様では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協を示し、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェア（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）によって使用されているＡｂＭ超可変領域を指すＡｂＭ番号付けスキームに従って決定され得る。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ本明細書に記載の抗体のうちのいずれか１つ（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つ）のＣＤＲを含む抗体またはその断片が、本明細書に提供され、これらは、ＡｂＭ番号付けスキームに従って決定される。
【０２００】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体のＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３）領域及び／またはＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３）領域に沿った１つ以上のＣＤＲの位置は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、例えば、実質的に維持される）限り、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのアミノ酸位置だけ異なり得る。例えば、一実施形態では、本明細書に記載の抗体（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１−１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１）のうちのいずれかのＣＤＲを定義する位置は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、例えば、実質的に維持される）限り、ＣＤＲのＮ末端及び／またはＣ末端境界を移動させることによって、本明細書に記載の抗体（例えば、表１中に特定される、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１）のうちのいずれか１つのＣＤＲ位置と比較して、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのアミノ酸だけ異なり得る。別の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＶＨ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３）領域及び／またはＶＬ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３）領域に沿った１つ以上のＣＤＲの長さは、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、例えば、実質的に維持される）限り、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれ以上のアミノ酸だけ異なり（例えば、より短くなるか、または長くなり）得る。
【０２０１】
一実施形態では、本明細書に記載のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＨ  ＣＤＲ３は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、例えば、実質的に維持される）限り、本明細書に記載のＣＤＲ（例えば、配列番号１〜３４、１０１〜１０９、または１１４〜１８９または配列番号３５または１９１〜１９４）のうちの１つ以上よりも短い１、２、３、４、５つ、またはそれ以上のアミノ酸であり得る。別の実施形態では、本明細書に記載のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＨ  ＣＤＲ３は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、例えば、実質的に維持される）限り、本明細書に記載のＣＤＲ（例えば、配列番号１〜３４、１０１〜１０９、または１１４〜１８９または配列番号３５または１９１〜１９４）のうちの１つ以上よりも長い１、２、３、４、５つ、またはそれ以上のアミノ酸であり得る。別の実施形態では、本明細書に記載のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ末端は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、例えば、実質的に維持される）限り、本明細書に記載のＣＤＲ（例えば、配列番号１〜３４、１０１〜１０９、または１１４〜１８９または配列番号３５または１９１〜１９４）のうちの１つ以上と比較して、１、２、３、４、５つ、またはそれ以上のアミノ酸だけ延長され得る。別の実施形態では、本明細書に記載のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＨ  ＣＤＲ３のカルボキシ末端は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、例えば、実質的に維持される）限り、本明細書に記載のＣＤＲ（例えば、配列番号１〜３４、１０１〜１０９、または１１４〜１８９または配列番号３５または１９１〜１９４）のうちの１つ以上と比較して、１、２、３、４、５つ、またはそれ以上のアミノ酸だけ延長され得る。別の実施形態では、本明細書に記載のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＨ  ＣＤＲ３のアミノ末端は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、例えば、実質的に維持される）限り、本明細書に記載のＣＤＲ（例えば、配列番号１〜３４、１０１〜１０９、または１１４〜１８９または配列番号３５または１９１〜１９４）のうちの１つ以上と比較して、１、２、３、４、５つ、またはそれ以上のアミノ酸だけ短くなり得る。一実施形態では、本明細書に記載のＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、ＶＬ  ＣＤＲ３、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／またはＶＨ  ＣＤＲ３のカルボキシ末端は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持される（例えば、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、例えば、実質的に維持される）限り、本明細書に記載のＣＤＲ（例えば、配列番号１〜３４、１０１〜１０９、または１１４〜１８９または配列番号３５または１９１〜１９４）のうちの１つ以上と比較して、１、２、３、４、５つ、またはそれ以上のアミノ酸だけ短くなり得る。当該技術分野で既知の任意の方法は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への免疫特異的な結合が維持されるかを確認するために使用することができ、例えば、「実施例」の項（項６）に記載の結合アッセイ及び条件が本明細書に提供される。
【０２０２】
具体的な態様では、抗体軽鎖及び重鎖、例えば、別々の軽鎖及び重鎖を含む抗体が本明細書に提供される。軽鎖に関して、具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、カッパ軽鎖である。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、ラムダ軽鎖である。さらに別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体の軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖である。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲポリペプチド（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、または４００〜５１８）を含むみ、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲポリペプチド（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列（例えば、配列番号５１９）を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、または４００〜５１８）を含むことができ、軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列（例えば、配列番号５１９）を含むことができ、軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸は、（配列番号２０７または２０８）を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパまたはラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当該技術分野に記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）（上記参照）を参照されたい。
【０２０３】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、配列番号５５５、５５６、５７１〜５７６、及び５８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、配列番号５７１〜５７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【０２０４】
重鎖に関して、具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体の重鎖は、アルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）、またはミュー（μ）重鎖であり得る。別の具体的な実施形態では、記載される抗体の重鎖は、ヒトアルファ（α）、デルタ（δ）、エプシロン（ε）、ガンマ（γ）、またはミュー（μ）重鎖であり得る。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列が本明細書に記載の任意のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０１、２０３、２０６、または２１５〜３８９のうちのいずれか）を含む重鎖を含み、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、配列番号５５３、５５４、５６７〜５７０、及び５７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含み、重鎖の定常領域は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、配列番号５８１及び５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含み、重鎖の定常領域は、本明細書に記載のまたは当該技術分野で既知のヒト重鎖のアミノ酸を含む。ヒト定常領域配列の非限定的な例は、当該技術分野に記載されており、例えば、米国特許第５，６９３，７８０号及びＫａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）（上記参照）を参照されたい。
【０２０５】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、配列番号５５３、５５４、５６７〜５７０、及び５７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、配列番号５８１及び５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する抗体またはその断片は、配列番号５６７〜５７０のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０２０６】
具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、この定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、またはヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子の定常領域のアミノ酸配列を含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、この定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ、及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の一実施形態では、この定常領域は、ヒトＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ免疫グロブリン分子、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂ）の定常領域のアミノ酸配列を含む。
【０２０７】
別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、この定常領域は、ヒトＩｇＧ１（例えば、アロタイプＧ１ｍ３、Ｇ１ｍ１７，１、もしくはＧ１ｍ１７，１，２）またはヒトＩｇＧ４の定常領域のアミノ酸配列を含む。特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、この定常領域は、ヒトＩｇＧ１（アロタイプＧｌｍ３）の定常領域のアミノ酸配列を含む。ヒト定常領域の非限定的な例は、当該技術分野に記載されており、例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）（上記参照）を参照されたい。
【０２０８】
別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、配列番号５５５、５５６、５７１〜５７６、及び５８０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ならびに配列番号５５３、５５４、５６７〜５７０、及び５７９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。別の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖ならびに配列番号５８１及び５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号５５５または５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖ならびに配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【０２０９】
ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）は、血中半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、及び／または抗原依存性細胞毒性等の抗体の１つ以上の機能的特性を変化させるために、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（例えば、ＫａｂａｔのＥＵ指数）に従って番号付けされた、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）及び／もしくはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７）、ならびに／またはヒンジ領域）のＦｃ領域に導入される。
【０２１０】
ある特定の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）は、例えば、米国特許第５，６７７，４２５号に記載されるように、ヒンジ領域内のシステイン残基の数を変化させる（例えば、増加または減少させる）ために、Ｆｃ領域（ＣＨ１ドメイン）のヒンジ領域に導入される。ＣＨ１ドメインのヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖及び重鎖のアセンブリを促進する、または抗体の安定性を変化させる（例えば、増加させるもしくは減少させる）ために、変化させてもよい。
【０２１１】
いくつかの実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上の変異（例えば、アミノ酸置換）は、エフェクター細胞の表面上のＦｃ受容体（例えば、活性化されたＦｃ受容体）における抗体の親和性を増加させるもしくは減少させるために、本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、Ｋａｂａｔ番号付けシステム（例えば、ＫａｂａｔのＥＵ指数）に従って番号付けされた、ＣＨ２ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）及び／またはＣＨ３ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７）、ならびに／またはヒンジ領域）のＦｃ領域に導入される。Ｆｃ受容体における抗体の親和性を増加または減少させる抗体またはその断片のＦｃ領域内の変異、及びかかる変異をＦｃ受容体またはその断片に導入するための技法は、当業者に既知である。Ｆｃ受容体における抗体の親和性を変化させ得る抗体のＦｃ受容体の変異の例は、例えば、Ｓｍｉｔｈ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）ＰＮＡＳ  １０９：６１８１−６１８６、米国特許第６，７３７，０５６号、及び国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、同第ＷＯ９８／２３２８９号、及び同第ＷＯ９７／３４６３１号に記載されており、これらは、参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１２】
具体的な一実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（すなわち、置換、挿入、または欠失）は、インビボで抗体の半減期を変化させる（例えば、減少または増加させる）ために、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ−結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に導入される。例えば、インビボで抗体の半減期を変化させる（例えば、減少または増加させる）であろう変異の例については、国際公開第ＷＯ０２／０６０９１９号、同第ＷＯ９８／２３２８９号、及び同第ＷＯ９７／３４６３１号、ならびに米国特許第５，８６９，０４６号、同第６，１２１，０２２号、同第６，２７７，３７５号、及び同第６，１６５，７４５号を参照されたい。いくつかの実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（すなわち、置換、挿入、または欠失）は、インビボで抗体の半減期を減少させるために、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ−結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に導入される。他の実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（すなわち、置換、挿入、または欠失）は、インビボで抗体の半減期を増加させるために、ＩｇＧ定常ドメイン、またはそのＦｃＲｎ−結合断片（好ましくはＦｃまたはヒンジ−Ｆｃドメイン断片）に導入される。具体的な一実施形態では、抗体は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）（上記参照））のＥＵ指数に従って番号付けされた、第２の定常（ＣＨ２）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基２３１〜３４０）及び／または第３の定常（ＣＨ３）ドメイン（ヒトＩｇＧ１の残基３４１〜４４７）中の１つ以上のアミノ酸変異（例えば、置換）を有してもよい。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片のＩｇＧ１の定常領域は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数に従って番号付けされた、２５４位のメチオニン（Ｍ）からトレオニン（Ｔ）への置換、及び２５６位のトレオニン（Ｔ）からグルタミン酸（Ｅ）への置換を含む。米国特許第７，６５８，９２１号を参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる。このタイプの変異体ＩｇＧは、同じ抗体の野生型バージョンと比較して、４倍増加した半減期を示すことが知られている「ＹＴＥ変異体」と称される（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ＷＦ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８１：２３５１４−２４を参照されたい）。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数に従って番号付けされた、２５１〜２５７、２８５〜２９０、３０８〜３１４、３８５〜３８９、及び４２８〜４３６位のアミノ酸残基の１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のアミノ酸置換を含むＩｇＧ定常ドメインを含む。
【０２１３】
さらなる実施形態では、１つ、２つ、またはそれ以上のアミノ酸置換は、抗体のエフェクター機能（複数可）を変化させるために、ＩｇＧ定常ドメインのＦｃ領域に導入される。例えば、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数に従って番号付けされた、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がエフェクターリガンドに対して変化した親和性を有するが、親抗体の抗原結合能は保持するように、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。親和性を変化させるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣ１成分であり得る。このアプローチは、米国特許第５，６２４，８２１号及び同第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されている。いくつかの実施形態では、定常領域ドメインの欠失または不活性化（点変異または他の手段を通して）は、循環抗体のＦｃ受容体結合を低減させ、それにより腫瘍の局在化を増加させ得る。例えば、定常領域ドメインを欠失または不活性化させ、それにより腫瘍の局在化を増加させる変異の説明については、米国特許第５，５８５，０９７号及び同第８，５９１，８８６号を参照されたい。ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｆｃ受容体結合を減少し得るＦｃ領域上の潜在的なグリコシル化部位を除去するために、本明細書に記載の抗体のＦｃ領域に導入され得る（例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６：６５９１−６０４を参照されたい）。様々な実施形態では、本明細書に記載の抗体の定常領域における、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数に従って番号付けされた、Ｎ２９７Ａの置換、Ｎ２９７Ｑの置換、Ｌ２３５Ａの置換及びＬ２３７Ａの置換、Ｌ２３４Ａの置換及びＬ２３５Ａの置換、Ｅ２３３Ｐの置換、Ｌ２３４Ｖの置換、Ｌ２３５Ａの置換、Ｃ２３６の欠失、Ｐ２３８Ａの置換、Ｄ２６５Ａの置換、Ａ３２７Ｑの置換、またはＰ３２９Ａの置換の変異のうちの１つ以上がなされ得る。
【０２１４】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ａのアミノ酸置換を有するＩｇＧ１の定常ドメインを含む。
【０２１５】
ある特定の実施形態では、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数に従って番号付けされた、本明細書に記載の抗体の定常領域におけるアミノ酸残基３２９、３３１、及び３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がＣ１ｑ結合を変化させる及び／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を低減させるもしくは停止するように、異なるアミノ酸残基で置き換えることができる。このアプローチは、米国特許第６，１９４，５５１号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ）にさらに詳細に記載されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体のＣＨ２ドメインのＮ末端領域におけるアミノ酸位置２３１〜２３８内の１つ以上のアミノ酸残基を変化させ、それにより補体を固定する抗体の能力を変化させる。このアプローチは、国際公開第ＷＯ９４／２９３５１号にさらに記載されている。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＦｃ領域は、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数に従って番号付けされた、２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９位で１つ以上のアミノ酸を変異させる（例えば、アミノ酸置換を導入する）ことによって、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増加させる、及び／またはＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を増加させるために改変される。このアプローチは、国際公開第ＷＯ００／４２０７２号にさらに記載されている。
【０２１６】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＩｇＧ４抗体の定常領域を含み、ＫａｂａｔにあるようなＥＵ指数に従って番号付けされた、重鎖のアミノ酸残基２２８でのセリンが、プロリンに置換される。
【０２１７】
低減したフコース含量を有する抗体は、例えば、ＦｃγＲＩＩＩａ等のＦｃ受容体に対して増加した親和性を有することが報告されている。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、低減したフコース含量を有するか、またはフコース含量を有さない。かかる抗体は、当業者に既知の技法を使用して産生され得る。例えば、抗体は、フコシル化の能力が欠損または欠如している細胞において発現され得る。具体的な一例では、α１，６−フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株は、低減したフコース含量を有する抗体を産生するために使用することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、低減したフコース含量を有する抗体を産生するために使用することができるようなシステムの一例である。あるいは、低減したフコース含量を有するか、またはフコース含量を有さない抗体または抗原結合断片は、例えば、（ｉ）フコシル化を防ぐまたは低減させる条件下での細胞の培養、（ｉｉ）（例えば、フコシダーゼ酵素を用いた）フコースの翻訳後の除去、（ｉｉｉ）例えば、非グリコシル化糖タンパク質の組換え発現後の所望の炭水化物の翻訳後の添加、あるいは（ｉｖ）フコシル化されていない抗体またはその抗原結合断片のために選択するための糖タンパク質の精製化によって産生され得る。例えば、フコース含量を有さないまたは低減したフコース含量を有する抗体またはその抗原結合断片を産生するための方法については、Ｌｏｎｇｍｏｒｅ  ＧＤ  ＆  Ｓｃｈａｃｈｔｅｒ  Ｈ（１９８２）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ  １００：３６５−９２及びＩｍａｉ−Ｎｉｓｈｉｙａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）ＢＭＣ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７：８４を参照されたい。
【０２１８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、例えば、野生型Ｆｃ領域、例えば、ＩｇＧ１  Ｆｃを有する抗体と比較して、ＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢまたはＦＣＧＲ２Ｂとしても知られている）に対して増加した親和性を有する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ３２Ａ（ＦｃγＲＩＩＡ）及びＣＤ１６（ＦｃγＲＩＩＩＡ）の両方を上回るＣＤ３２Ｂ（ＦｃγＲＩＩＢ）に対して選択的に増加した親和性を有するＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性をもたらす配列変異は、例えば、Ｍｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  １０：５８９−５９８（２０１３）、Ｃｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４５：３９２６−３９３３（２００８）、及びＳｔｒｏｈｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２０：６８５−６９１（２００９）に提供され、これらの各々は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性を有する抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えば、ＥＵ指数（Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ（１９９１））に従って番号付けされた、Ｇ２３６Ｄ、Ｐ２３８Ｄ、Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ｌ３２８Ｅ、２３６位後に挿入されたアルギニン、及びその組み合わせからなる群から選択される変異を含む、ＩｇＧ１定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性を有する抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えば、Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆの置換を含む、ＩｇＧ１定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性を有する抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えば、Ｐ２３８Ｄ及びＬ３２８Ｅの置換を含む、ＩｇＧ１定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性を有する抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えば、Ｐ２３８Ｄの置換、及びＥ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、Ａ３３０Ｒ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される置換を含む、ＩｇＧ１定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性を有する抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えば、Ｐ２３８Ｄ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ、及びＡ３３０Ｒの置換を含む、ＩｇＧ１定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性を有する抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えば、Ｇ２３６Ｄ及びＳ２６７Ｅを含む、ＩｇＧ１定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性を有する抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えば、Ｓ２３９Ｄ及びＳ２６７Ｅを含む、Ｉｇ���１定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性を有する抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えば、Ｓ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆを含む、ＩｇＧ１定常領域またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３２Ｂに対して増加した親和性を有する抗体または抗原結合断片は、重鎖定常領域、例えば、２３６位後に挿入されたアルギニン及びＬ３２８Ｒを含む、ＩｇＧ１定常領域またはその断片を含む。
【０２１９】
別の特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１（例えば、表１中に列挙されるもの）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉ）重鎖は、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１（例えば、表２中に列挙されるもの）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み、（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインをさらに含み、（ｉｖ）重鎖は、ヒトＩｇＧ１（任意にＩｇＧ１（アロタイプＧｌｍ３））重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインをさらに含む。
【０２２０】
別の特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、（ｉ）軽鎖が、抗体Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、または４００〜５１８、または配列番号５１９）を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉ）重鎖が、抗体Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のアミノ酸配列及びそれらのうちの１つ（例えば、配列番号２０１、２０３、２０６、または２１５〜３８９）を含むＶＨドメインを含み、（ｉｉｉ）軽鎖が、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常ドメインをさらに含み、（ｉｖ）重鎖が、ヒトＩｇＧ１（任意にＩｇＧ１（アロタイプＧｌｍ３））重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常ドメインをさらに含む、軽鎖及び重鎖を含む。
【０２２１】
別の特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は、Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０７または２０８）を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉ）重鎖は、Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０６）を含むＶＨドメインを含み、（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常ドメインをさらに含み、（ｉｖ）重鎖は、ヒトＩｇＧ１（任意にＩｇＧ１（アロタイプＧｌｍ３））重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常ドメインをさらに含む。
【０２２２】
別の特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は、本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、表１中に列挙されるもの）を有するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉ）重鎖は、本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、表２中に列挙されるもの）を有するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み、（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトＩｇＧ４の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常軽鎖ドメインをさらに含み、（ｉｖ）重鎖は、ヒトＩｇＧ４重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常重鎖ドメインをさらに含む。
【０２２３】
別の特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は、本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、または４００〜５１８または配列番号５１９）を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉ）重鎖は、本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０１、２０３、２０６、または２１５〜３８９）を含むＶＨドメインを含み、（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトＩｇＧ４軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常ドメインをさらに含み、（ｉｖ）重鎖は、ヒトＩｇＧ４重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常ドメインをさらに含む。
【０２２４】
別の特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、（ｉ）軽鎖は、Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２のいずれかのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０７または２０８）を含むＶＬドメインを含み、（ｉｉ）重鎖は、Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２のいずれかのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０６）を含むＶＨドメインを含み、（ｉｉｉ）軽鎖は、ヒトＩｇＧ４軽鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常ドメインをさらに含み、（ｉｖ）重鎖は、ヒトＩｇＧ４重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列を含む定常ドメインをさらに含む。
【０２２５】
具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５３、５５４、及び５６７〜５７０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５、５５６、及び５７１〜５７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５８１または５８２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５６７のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７３のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５６７のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５５４のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５８１のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）配列番号５８２のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５７６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０２２６】
別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２９８でのＮからＡまたはＱへのアミノ酸置換を有する配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５、５５６、及び５７１〜５７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２９８でのＮからＡまたはＱへのアミノ酸置換を有する配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に提供される抗体は、（ａ）アミノ酸位置２９８でのＮからＡまたはＱへのアミノ酸置換を有する配列番号５５３のアミノ酸配列を含む重鎖と、（ｂ）配列番号５５５のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。
【０２２７】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１（例えば、表３を参照）のうちのいずれか１つに対して本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１、２、３、または４つのＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１（例えば、表４を参照）のうちのいずれか１つに対して本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１、２、３、または４つのＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、本明細書に記載の抗体（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１）のうちの１つの１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つのＦＲを含む。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ヒトフレームワーク領域またはヒトフレームワーク領域由来であるフレームワーク領域（例えば、ＶＬドメイン及び／またはＶＨドメインのフレームワーク領域）を含む。ヒトフレームワーク領域の非限定的な例は、当該技術分野に記載されており、例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９１）（上記参照））を参照されたい。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）フレームワーク領域または霊長類（例えば、非ヒト霊長類）由来のフレームワーク領域であるフレームワーク領域（例えば、ＶＬドメイン及び／またはＶＨドメインのフレームワーク領域）を含む。
【０２２８】
例えば、典型的には、齧歯類起源（例えば、マウスまたはラット）の抗原特異的な非ヒト抗体由来のＣＤＲは、同種のヒトまたは非ヒト霊長類受容体フレームワークにグラフトされる。一実施形態では、非ヒト霊長類受容体フレームワークは、旧世界サル由来のものである。具体的な一実施形態では、旧世界サル受容体フレームワークは、チンパンジー、ピグミーチンパンジー、またはゴリラ由来のものである。特定の一実施形態では、非ヒト霊長類受容体フレームワークは、チンパンジー（ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅ）チンパンジー（Ｐａｎ  ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）由来のものである。特定の一実施形態では、非ヒト霊長類受容体フレームワークは、旧世界サル受容体フレームワークである。具体的な一実施形態では、旧世界サル受容体フレームワークは、マカク属由来のものである。ある特定の一実施形態では、非ヒト霊長類受容体フレームワークは、カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ）カニクイザル（ｍｏｎｋｅｙ  Ｍａｃａｃａ  ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ）由来であるである。非ヒト霊長類フレームワーク配列は、米国特許出願公開第ＵＳ２００５／０２０８６２５号に記載されている。
【０２２９】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、表３に示される抗体（上記参照）のうちのいずれか１つに対して本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１つ、２つ、またはそれ以上のＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、表４に示される抗体（上記参照）のうちのいずれか１つに対して本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１つ、２つ、またはそれ以上のＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、表３に示される抗体（上記参照）のうちのいずれか１つに対して本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１つ、２つ、またはそれ以上のＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）と、表４に示される抗体（上記参照）のうちのいずれか１つに対して本明細書に記載のアミノ酸配列を有する１つ、２つ、またはそれ以上のＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）とを含む。
【０２３０】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４５２、４５４〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、もしくは５１５〜５１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインのフレームワーク領域及び／または配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７１〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３４５、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、３６２〜３６８、３８０、３８４、もしくは３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインのフレームワーク領域を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、もしくは５１５〜５１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインのフレームワーク領域及び／または配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７０〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３４５、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、もしくは３６２〜３６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインのフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、保存的アミノ酸置換等のアミノ酸置換）を有する本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４５２、４５４〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、もしくは５１５〜５１８）を有するＶＬドメインのうちの１、２、３、もしくは４つのフレームワーク領域及び／または本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７１〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３４５、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、３６２〜３６８、３８０、３８４、もしくは３８７）を有するＶＨドメインのフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、保存的アミノ酸置換等のアミノ酸置換）を有する本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、もしくは５１５〜５１９）を有するＶＬドメインのうちの１、２、３、もしくは４つのフレームワーク領域及び／または本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７０〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３４５、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、もしくは３６２〜３６８）を有するＶＨドメインのフレームワーク領域を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、保存的アミノ酸置換等のアミノ酸置換）を有する本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０１、２０３、２０６、もしくは２１５〜３８９）を有するＶＨドメインのうちの１、２、３、もしくは４つのフレームワーク領域及び／または本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０１、２０３、２０６、もしくは２１５〜３８９）を有するＶＬドメインのフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、保存的アミノ酸置換等のアミノ酸置換）を有する本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４５２、４５４〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、もしくは５１５〜５１８）を有するＶＬドメインのうちの１、２、３、もしくは４つのフレームワーク領域及び／または１、２、３、４、５、６、７、８、９つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、保存的アミノ酸置換等のアミノ酸置換）を有する配列番号２０１、２０３、２０６、または２１５〜３８９のアミノ酸配列を有するＶＨドメインのうちの  １、２、３、もしくは４つのフレームワーク領域を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、１、２、３、４、５、６、７、８、９つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、保存的アミノ酸置換等のアミノ酸置換）を有する本明細書に記載の抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、もしくは５１５〜５１９）を有するＶＬドメインのうちの１、２、３、もしくは４つのフレームワーク領域及び／または１、２、３、４、５、６、７、８、９つ、またはそれ以上のアミノ酸変異（例えば、保存的アミノ酸置換等のアミノ酸置換）を有する配列番号２０１、２０３、２０６、もしくは２１５〜３８９のアミノ酸配列を有するＶＨドメインのうちの１、２、３、もしくは４つのフレームワーク領域を含む。
【０２３１】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、表３中の本明細書に記載のＶＬフレームワーク領域（上記参照）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、表４中の本明細書に記載のＶＨフレームワーク領域（上記参照）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、表４中の本明細書に記載のＶＨフレームワーク領域（上記参照）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）と、表３中の本明細書に記載のＶＬフレームワーク領域（上記参照）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）とを含む。
【０２３２】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１（例えば、表３に示される）の本明細書に記載のＶＬフレームワーク領域に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１（例えば、表４に示される）の本明細書に記載のＶＨフレームワーク領域に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、（ｉ）Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１（例えば、表３に示される）の本明細書に記載のＶＬフレームワーク領域に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域（ＦＲ）と、（ｉｉ）Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１（例えば、表４に示される）の本明細書に記載のＶＨフレームワーク領域に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）とを含む。
【０２３３】
２つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）間のパーセント同一性の決定はまた、数学アルゴリズムを用いて達成され得る。２つの配列の比較に利用される数学アルゴリズムの具体的な非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ  Ｓ  ＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ（１９９３）ＰＮＡＳ  ９０：５８７３−５８７７にあるように修正されたＫａｒｌｉｎ  Ｓ  ＆  Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ（１９９０）ＰＮＡＳ  ８７：２２６４−２２６８のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴプログラム及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、本明細書に記載の核酸分子と相同なヌクレオチド配列を得るために、例えば、スコア＝１００、文字長＝１２のＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムパラメータセットで行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、本明細書に記載のタンパク質分子と相同なアミノ酸配列を得るために、例えば、スコア＝５０、文字長＝３のＮＢＬＡＳＴプログラムパラメータセットで行うことができる。比較目的のためにギャップ有りの（ｇａｐｐｅｄ）アラインメントを得るには、ギャップＢＬＡＳＴを、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２５：３３８９  ３４０２に記載されるように利用することができる。あるいは、ＰＳＩ  ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の距離関係（Ｉｄ．）を検出する反復サーチを行うことができる。ＢＬＡＳＴ、ギャップ有りのＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ  Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムの（例えばＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴの）デフォルトパラメータを使用することができる（例えば、ワールドウェブｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖにあるＮａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）を参照されたい）。配列比較のために利用される数学的アルゴリズムの別の具体的な非限定的例は、Ｍｙｅｒｓ  ａｎｄ  Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ  ４：１１  １７のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを使用することができる。
【０２３４】
２つの配列間のパーセント同一性は、ギャップを許容して、または許容することなく、上述のものと同様の技法を使用して測定することができる。パーセント同一性の計算では、典型的には、正確な一致のみを計数する。
【０２３５】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、抗体Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、もしくは４００〜５１８もしくは配列番号５１９）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、抗体Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、Ｈｕｍ２３１＃１、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＶＬドメインのアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、または４００〜５１８または配列番号５１９）に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインを含み、この抗体または抗原結合断片は、表１及び／または表２に示される抗体のＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）と同一の（例えば、ＣＤＲは、表１及び／または２に名称別に言及される特定の抗体のＣＤＲと同一の）ＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）を含む。
【０２３６】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、及び４００〜５１８からなる群から選択されるフレームワーク領域のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域を含むＶＬドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号５１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域を含むＶＬドメインを含む。特定の一実施形態では、抗体は、表１に示される抗体のＶＬ  ＣＤＲ（例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲ）と同一のＶＬ  ＣＤＲを含む。
【０２３７】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０１、２０３、２０６、または２１５〜３８９のＶＨドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９のＶＨドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインを含み、この抗体または抗原結合断片は、表１及び／または表２に示される抗体のＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）と同一の（例えば、ＣＤＲは、表１及び／または２に名称別に言及される特定の命名された抗体のＣＤＲと同一の）ＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）を含む。
【０２３８】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９からなる群から選択されるフレームワーク領域のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域を含むＶＨドメインを含む。特定の一実施形態では、この抗体は、表２に示される抗体のＶＨ  ＣＤＲ（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）と同一のＶＨ  ＣＤＲを含む。
【０２３９】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、（ｉ）配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、及び４００〜５１８からなる群から選択されるＶＬドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインと、（ｉｉ）配列番号２０１、２０３、２０６、または２１５〜３８９のＶＨドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインとを含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、（ｉ）配列番号５１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインと、（ｉｉ）配列番号３０４のＶＨドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインとを含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、（ｉ）配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、及び４００〜５１８からなる群から選択されるＶＬドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインと、（ｉｉ）配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９の群から選択されるＶＨドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体またはその断片は、表１及び／または表２に示される抗体のＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）と同一のＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）を含む（例えば、これらのＣＤＲは、表１及び／または２に名称別に言及される特定の抗体のＣＤＲと同一である）。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、（ｉ）配列番号５１９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬドメインと、（ｉｉ）配列番号３０４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインとを含み、この抗体または抗原結合断片は、表１及び／または表２に示される抗体のＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）と同一のＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）を含む（例えば、これらのＣＤＲは、表１及び／または２に名称別に言及される特定の抗体のＣＤＲと同一である）。
【０２４０】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、（ｉ）配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、及び２０８からなる群から選択されるフレームワーク領域のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＬフレームワーク領域を含むＶＬドメインと、（ｉｉ）配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９からなる群から選択されるフレームワーク領域のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域を含むＶＨドメインとを含む。特定の一実施形態では、この抗体は、表３に示される抗体のＶＬ  ＣＤＲと同一のＶＬ  ＣＤＲ及び／または表４に示される抗体のＶＨ  ＣＤＲと同一のＶＨ  ＣＤＲを含む。
【０２４１】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９の群から選択されるＶＨドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインを含む。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９の群から選択されるＶＨドメインのアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨドメインを含み、この抗体または抗原結合断片は、表１及び／または表２に示される抗体のＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）と同一のＣＤＲ（例えば、ＶＬ  ＣＤＲ）を含む（例えば、ＣＤＲは、表１及び／または２で言及される特定の抗体のＣＤＲと同一である）。
【０２４２】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９からなる群から選択されるフレームワーク領域のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するＶＨフレームワーク領域を含むＶＨドメインを含む。特定の一実施形態では、この抗体は、表２に示される抗体のＶＨ  ＣＤＲ（例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲ）と同一のＶＨ  ＣＤＲを含む。
【０２４３】
別の態様では、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７）、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗと同じまたはＧＩＴＲの重複するエピトープ（例えば、ヒトＧＩＴＲのエピトープ）に結合する抗体が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、抗体のエピトープは、例えば、ＮＭＲ分光法、Ｘ線回折結晶学研究、ＥＬＩＳＡアッセイ、質量分析を伴う水素／重水素交換（例えば、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析）、アレイベースのオリゴ−ペプチド走査アッセイ、及び／または変異誘発マッピング（例えば、部位特異的変異誘発マッピング）によって決定することができる。Ｘ線結晶学について、結晶化は、当該技術分野で既知の方法のうちのいずれかを使用して達成することができる（例えば、Ｇｉｅｇｅ’  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５０（Ｐｔ  ４）：３３９−３５０、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９９０）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １８９：１−２３、Ｃｈａｙｅｎ  ＮＥ（１９９７）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５：１２６９−１２７４、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ  Ａ（１９７６）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２５１：６３００−６３０３）。抗体：抗原結晶は、周知のＸ線回折技法を使用して研究することができ、Ｘ−ＰＬＯＲ（Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１９９２、販売元Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、例えば、Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ（１９８５）ｖｏｌｕｍｅｓ  １１４  ＆  １１５，ｅｄｓ  Ｗｙｃｋｏｆｆ  ＨＷ  ｅｔ  ａｌ．，、米国特許公開第２００４／００１４１９４号を参照されたい）、及びＢＵＳＴＥＲ（Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９３）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ４９（Ｐｔ  １）：３７−６０、Ｂｒｉｃｏｇｎｅ  Ｇ（１９９７）Ｍｅｔｈ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２７６Ａ：３６１−４２３，ｅｄ  Ｃａｒｔｅｒ  ＣＷ、Ｒｏｖｅｒｓｉ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ｄ  Ｂｉｏｌ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  ５６（Ｐｔ  １０）：１３１６−１３２３）等のコンピュータソフトウェアを使用して精密化することができる。変異誘発マッピング研究は、当業者に既知の任意の方法を使用して達成することができる。アラニン走査変異誘発技法を含む変異誘発技法の説明については、例えば、Ｃｈａｍｐｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）（上記参照）及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ＢＣ  ＆  Ｗｅｌｌｓ  ＪＡ（１９８９）（上記参照）を参照されたい。具体的な一実施形態では、抗体のエピトープまたはその抗原結合断片は、以下の項６に記載のもの等のアラニン走査変異誘発研を使用して決定される。さらに、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）と同じまたは重複するエピトープを認識及び結合する抗体は、例えば、標的抗原への別の抗体の結合を遮断する１つの抗体の能力を示すことによる免疫アッセイ、すなわち、競合的結合アッセイ等の日常的な技法を使用して特定することができる。競合結合アッセイはまた、２つの抗体がエピトープに対して同様の結合特異性を有するかを決定するために使用することもできる。競合的結合は、試験用の免疫グロブリンがＧＩＴＲ等の共通抗原への参照抗体の特異的結合を阻害するアッセイにおいて決定することができる。多数のタイプの競合的結合アッセイが知られている、例えば：固相直接または間接放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ９：２４２−２５３を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ  ＴＮ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８６）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３７：３６１４−９を参照されたい）；固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ、（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい）；Ｉ−１２５標識を用いた固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２５（１）：７−１５を参照されたい）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ  ＲＣ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７６：５４６−５２）；及び直接標識ＲＩＡ。（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：７７−８２）。典型的には、かかるアッセイは、これらの未標識試験免疫グロブリン及び標識参照免疫グロブリンのいずれかを持つ固体表面または細胞に結合された精製された抗原（例えば、ヒトＧＩＴＲ等のＧＩＴＲ）の使用を伴う。競合的阻害は、試験免疫グロブリンの存在下で、固体表面または細胞に結合された標的の量を決定することによって測定することができる。通常、試験免疫グロブリンは、過剰に存在している。通常、競合抗体が過剰に存在している場合、それは、共通抗原への参照抗体の特異的結合を少なくとも５０〜５５％、５５〜６０％、６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、またはそれ以上阻害するであろう。競合結合アッセイは、標識抗原または標識抗体のいずれかを用いて非常に多数の異なる形式で構成することができる。このアッセイの一般的なバージョンでは、抗原を９６ウェルプレート上に固定する。次いで、抗原への標識抗体の結合を遮断する非標識抗体の能力を、放射性標識または酵素標識を用いて測定する。さらなる詳細については、例えば、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３０：２３０８−２３１５、Ｗａｇｅｎｅｒ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６８：２６９−２７４，Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５０：４８７２−４８７９、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔ  ２１：５２３−５３８、Ｋｕｒｏｋｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １１：３９１−４０７  ａｎｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅｄ  Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ  ｅｄｉｔｏｒｓ（上記参照）、ｐｐ．３８６−３８９を参照されたい。
【０２４４】
一実施形態では、競合アッセイは、例えば、Ａｂｄｉｃｈｅ  ＹＮ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３８６：１７２−１８０によって記載されるもの等の「直列アプローチ（ｉｎ  ｔａｎｄｅｍ  ａｐｐｒｏａｃｈ）」によって、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標））を用いて行われ、それにより、ＧＩＴＲ抗原がチップ表面、例えば、ＣＭ５センサーチップ上に固定され、抗ＧＩＴＲ抗体がそのチップ上で泳動する。抗体が本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片と競合するかを決定するために、まず、抗ＧＩＴＲ抗体をチップ表面上で泳動させて、飽和を達成し、潜在的な競合抗体を添加する。次いで、競合抗体の結合は、非競合対照と比較して、決定され、定量化され得る。
【０２４５】
ある特定の態様では、競合結合アッセイは、例えば、用量依存的様式で、別の抗体によって抗体が競合的に遮断されるかを決定するために使用することができ、例えば、２つの抗体が、標識抗原または標識抗体のいずれかを用いて多くの異なる形式で構成され得る競合ＥＬＩＳＡアッセイ等の競合結合アッセイにおいて同一のまたは立体的に重複するエピトープを認識する場合に、抗体は、参照抗体として、同じエピトープ、または重複するエピトープに本質的に結合する。特定の一実施形態では、抗体は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗ）、またはキメラもしくはそのＦａｂ抗体、または本明細書に記載の抗体（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗ）のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＬ  ＣＤＲを含む抗体を用いて、競合結合アッセイにおいて試験することができる。
【０２４６】
別の態様では、当業者に既知のまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ競合的アッセイまたは表面プラズモン共鳴）を使用して決定されるように、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５もしくは抗体１〜１０７）、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗと（例えば、用量依存的様式で）競合する抗体が本明細書に提供される。別の態様では、当業者に既知のまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、以下の実施例６に記載のＥＬＩＳＡ競合的アッセイ、または懸濁アレイアッセイもしくは表面プラズモン共鳴アッセイ）を使用して決定されるように、本明細書に記載の抗体（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗ）の、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的に阻害する抗体が本明細書に提供される。特定の実施形態では、かかる競合的に遮断する抗体は、１つ以上のＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。具体的な態様では、当業者に既知のまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、以下の実施例６に記載のＥＬＩＳＡ競合的アッセイ、または懸濁アレイアッセイもしくは表面プラズモン共鳴アッセイ）を使用して決定されるように、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合において本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗのＶＬ及び／またはＶＨ  アミノ酸配列）を含む抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合する抗体が本明細書に提供される。
【０２４７】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体がＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において自己競合するのと同じ程度まで、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合する抗体が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合する第１の抗体が本明細書に提供され、この第１の抗体は、以下のステップ、（ａ）ＧＩＴＲトランスフェクト細胞を非標識形態の第１の抗体と容器内でインキュベートするステップと、（ｂ）標識形態の本明細書に記載の抗体をこの容器内に添加し、この細胞をこの容器内でインキュベートするステップと、（ｃ）標識形態の本明細書に記載の抗体のこの細胞への結合を検出するステップと、を含むアッセイにおいて、結合において競合する。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合する第１の抗体が本明細書に提供され、この競合は、第１の抗体の結合の８０％超（例えば、８５％、９０％、９５％、または９８％、または８０％〜８５％、８０％〜９０％、８５％〜９０％、または８５％〜９５％）のＧＩＴＲへの減少として呈される。
【０２４８】
具体的な態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合において、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４５２、４５４〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、及び５１５〜５１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７１〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、３６２〜３６８、３８０、３８４及び３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインとを含む抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合する抗体が本明細書に提供される。具体的な態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合において、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４５２、４５４〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、及び５１５〜５１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７０〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３４５、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、及び３６２〜３６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインとを含む抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合する抗体が本明細書に提供される。
【０２４９】
具体的な態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合において、（ｉ）表１中に列挙される抗体のＶＬ  ＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含むＶＬドメインと、（ｉｉ）表２中に列挙される抗体のアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（例えば、２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２等の表１に名称別に言及される特定の抗体のＶＨ  ＣＤＲ）を含むＶＨドメインとを含む抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合する抗体が本明細書に提供される。
【０２５０】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合において、２３１−３２−１５のＶＨ及びＶＬ  ＣＤＲ（配列番号２０１及び２０２）を含む抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合する抗体が本明細書に提供される。
【０２５１】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合において、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４５２、４５４〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、及び５１５〜５１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７１〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３４５、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、３６２〜３６８、３８０、３８４、及び３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインとを含む抗体によって、（例えば、用量依存的様式で）競合的に遮断される抗体である。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合において、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、及び５１５〜５１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７０〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３４５、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、及び３６２〜３６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメインとを含む抗体によって、（例えば、用量依存的様式で）競合的に遮断される抗体である。
【０２５２】
一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合において、配列番号２０７または２０８のアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、配列番号２０６のアミノ酸配列を有するＶＨドメインとを含む抗体によって、競合的に遮断される抗体である。
【０２５３】
別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体は、（ｉ）表１中に列挙される抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（例えば、表１に名称別に言及される特定の抗体のＶＨ  ＣＤＲ）を含むＶＬドメインと、（ｉｉ）表２中に列挙された抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含むＶＨドメインとを含む抗体によって、（例えば、用量依存的様式で）競合的に遮断される抗体である。
【０２５４】
具体的な態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合において、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、表１〜４を参照されたい）を含む抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗのうちのいずれか１つ）のエピトープと同じエピトープに免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片が本明細書に提供される。当業者に既知のまたは本明細書に記載のアッセイ（例えば、Ｘ線結晶学、ＥＬＩＳＡアッセイ等）は、２つの抗体が同じエピトープに結合するかを決定するために使用することができる。
【０２５５】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４５２、４５４〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、及び５１５〜５１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７１〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３４５、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、３６２〜３６８、３８０、３８４、及び３８７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン）とを含む抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７のうちのいずれか１つ）のエピトープと同じエピトープに免疫特異的に結合する。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２０２、２０７、２０８、４００〜４１１、４１３〜４１６、４１８〜４２１、４２３〜４４８、４５０〜４６４、４６７〜４７７、４８１〜４８６、４８８〜５１３、及び５１５〜５１９からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬドメインと、配列番号２０１、２０６、２１５、２１７〜２３４、２３６〜２５６、２５８、２５９、２６１〜２６５、２６７、２６８、２７０〜２７３、２７６、２７７、２８０、２８１、２８３〜２８５、２８７、２８８、２９０、２９１、２９４、２９６〜２９９、３０１、３０４〜３０６、３０８、３１３〜３１６、３１９、３２０、３２２〜３２５、３２７、３２８、３３３、３３６、３３８〜３４０、３４２、３４３、３４５、３５０、３５４〜３５６、３５８〜３６０、及び３６２〜３６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨドメイン）とを含む抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、またはＨｕｍ２３１＃２ｗのうちのいずれか１つ）のエピトープと同じエピトープに免疫特異的に結合する。
【０２５６】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、抗体Ｈｕｍ２３１＃１もしくはＨｕｍ２３１＃２のＶＨドメイン及びＶＬドメイン（それぞれ、配列番号２０６及び２０７もしくは配列番号２０６及び２０８）を含む抗体によって結合したエピトープと同じエピトープ、または抗体Ｈｕｍ２３１＃１もしくはＨｕｍ２３１＃２のＶＨドメイン及びＶＬドメイン（それぞれ、配列番号２０６及び２０７もしくは配列番号２０６及び２０８）を含む抗体のエピトープに重複するエピトープに免疫特異的に結合する。
【０２５７】
別の具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）表１中に列挙される抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３（例えば、表１で名称別で言及される特定の抗体のＶＬ  ＣＤＲ）を含むＶＬドメインと、（ｉｉ）表２中に列挙される抗体のＣＤＲのアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３（例えば、表２で名称別で言及される特定の抗体のＶＨ  ＣＤＲ）を含むＶＨドメインとを含む抗体のエピトープと同じエピトープに免疫特異的に結合する。
【０２５８】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２またはＨｕｍ２３１＃２ｗのＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的に遮断する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、
（ｉ）このＶＬが、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＫＸ８ＹＬＸ９（配列番号４）を含むＶＬ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、もしくはＭであり、
Ｘ２が、Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＳであり、
Ｘ３が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ７が、Ｑ、Ｇ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＡＳＴＲＸ２Ｘ３（配列番号５）を含むＶＬ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｗ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ｅ、Ｄ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＸ１Ｘ２ＹＸ３Ｘ４ＰＹＴ（配列番号６）を含むＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、もしくはＹであり、
Ｘ２が、Ｄ、Ｅ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、Ｌ、もしくはＡである、ＶＬ  ＣＤＲ３を含み、（ｉｉ）このＶＨが、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号１）を含むＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ２が、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＹであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、もしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４ＳＧＸ５Ｘ６Ｘ７ＹＸ８ＱＫＦＸ９Ｘ１０（配列番号２）を含むＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ３が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、もしくはＰであり、
Ｘ４が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＡであり、
Ｘ５が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡであり、
Ｘ６が、Ｖ、Ａ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｍ、もしくはＴであり、
Ｘ７が、Ｔ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｉ、Ｐ、もしくはＡであり、
Ｘ８が、Ｎ、Ｇ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｙ、もしくはＡであり、
Ｘ９が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｑ、もしくはＡであり、
Ｘ１０が、Ｄ、Ｅ、Ｇ、もしくはＡである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＸ１Ｘ２Ｘ３（配列番号３）を含む、ＶＨ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、Ｆ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｍ、Ｙ、Ｗ、Ｈ、もしくはＳであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＤであり、
Ｘ３が、Ｙ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｗ、Ｆ、Ｈ、もしくはＶである、ＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０２５９】
特定の一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合し、かつ抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、またはＨｕｍ２３１＃２ｗのＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的に遮断する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）を含み、式中、
（ｉ）このＶＬが、
（ａ）アミノ酸配列ＫＳＳＱＳＬＬＮＳＸ１ＮＱＫＮＹＬＸ２（配列番号１０）を含むＶＬ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、ＧもしくはＳであり、
Ｘ２が、ＴもしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列ＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号１１）を含むＶＬ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＱＮＸ１ＹＳＸ２ＰＹＴ（配列番号１２）を含むＶＬ  ＣＤＲ３であって、
式中、
Ｘ１が、ＤもしくはＥであり、
Ｘ２が、Ｙ、Ｆ、もしくはＳである、ＶＬ  ＣＤＲ３を含み、（ｉｉ）このＶＨが、
（ａ）アミノ酸配列Ｘ１ＹＸ２ＭＸ３（配列番号７）を含むＶＨ  ＣＤＲ１であって、
式中、
Ｘ１が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ２が、ＡもしくはＶであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＨである、ＶＨ  ＣＤＲ１、及び／または
（ｂ）アミノ酸配列Ｘ１ＩＸ２ＴＸ３ＳＧＸ４Ｘ５Ｘ６ＹＮＱＫＦＸ７Ｘ８（配列番号８）を含むＶＨ  ＣＤＲ２であって、
式中、
Ｘ１が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ２が、Ｒ、Ｋ、もしくはＱであり、
Ｘ３が、ＹもしくはＦであり、
Ｘ４が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧであり、
Ｘ５が、ＶもしくはＬであり、
Ｘ６が、ＴもしくはＳであり、
Ｘ７が、Ｋ、Ｒ、もしくはＱであり、
Ｘ８が、Ｄ、Ｅ、もしくはＧである、ＶＨ  ＣＤＲ２、及び／または
（ｃ）アミノ酸配列ＳＧＴＶＲＧＦＡＹ（配列番号９）を含むＶＨ  ＣＤＲ３を含む。
【０２６０】
いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗ）と同じまたは重複するエピトープに結合する抗体は、当業者に既知のアッセイまたは本明細書に記載のアッセイによって査定される、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）へのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の結合を、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１０％未満阻止する。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片は、以下の実施例２（例えば、以下の項６．２．５．２または６．２．５．４）に記載のアッセイによって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１０％未満阻害する。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または１０００ｎｇ／ｍＬ、９５０ｎｇ／ｍＬ、９００ｎｇ／ｍＬ、８５０ｎｇ／ｍＬ、８００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、７００ｎｇ／ｍＬ、６５０ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ、５５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３３３ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、または１０ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片は、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ＧＩＴＲＬ−ＰＥ）の、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１０％未満阻害する。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または１０００ｎｇ／ｍＬ〜７５０ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、８５０ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ〜５００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ〜４００ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ〜３００ｎｇ／ｍＬ、または３００ｎｇ／ｍＬ〜２００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片は、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ＧＩＴＲＬ−ＰＥ）の、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭまたは０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、または１０％未満阻害する。
【０２６１】
別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または３５００ｎｇ／ｍＬ、３４００ｎｇ／ｍＬ、３３００ｎｇ／ｍＬ、３２００ｎｇ／ｍＬ、３１００ｎｇ／ｍＬ、３０００ｎｇ／ｍＬ、２９００ｎｇ／ｍＬ、２８００ｎｇ／ｍＬ、２７００ｎｇ／ｍＬ、２６００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ、２４００ｎｇ／ｍＬ、２３００ｎｇ／ｍＬ、２２００ｎｇ／ｍＬ、２１００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ、１９００ｎｇ／ｍＬ、１８００ｎｇ／ｍＬ、１７００ｎｇ／ｍＬ、１６００ｎｇ／ｍＬ、１５００ｎｇ／ｍＬ、１４００ｎｇ／ｍＬ、１３００ｎｇ／ｍＬ、１２００ｎｇ／ｍＬ、または１１００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片は、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭまたは０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１０％未満阻害する。別の具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または３５００ｎｇ／ｍＬ〜３２００ｎｇ／ｍＬ、３５００ｎｇ／ｍＬ〜３０００ｎｇ／ｍＬ、３２００ｎｇ／ｍＬ〜２５００ｎｇ／ｍＬ、３０００〜２２００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ〜１８００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ〜１５００ｎｇ／ｍＬ、１７００ｎｇ／ｍＬ〜１２００ｎｇ／ｍＬ、または１５００ｎｇ／ｍＬ〜１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片は、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ＧＩＴＲＬ−ＰＥ）の、ビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１０％未満阻害する。
【０２６２】
ある特定の実施形態では、３０００ｎｇ／ｍＬの濃度の、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％未満または８０％未満阻止する。ある特定の実施形態では、１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％未満、８０％未満、または７５％未満阻止する。ある特定の実施形態では、３３３ｎｇ／ｍＬの濃度の、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、７０％未満または６５％未満阻止する。ある特定の実施形態では、１１１ｎｇ／ｍＬの濃度の、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、６５％未満、６０％未満、または５５％未満阻止する。ある特定の実施形態では、３７ｎｇ／ｍＬの濃度の、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、４０％未満阻止する。ある特定の実施形態では、１２ｎｇ／ｍＬの濃度の、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、２０％未満阻止する。
【０２６３】
別の実施形態では、ある方法において、標的ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ−ＰＥ）のある特定の量が、ＧＩＴＲと結合させるために本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体の存在下で、ビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合し、この方法は、（ａ）ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングすることと、（ｂ）４０ビーズ／μＬの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズをウェル中で３０００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ、１５００ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、または１０ｎｇ／ｍＬの競合抗体または同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体と、第１の期間にわたって（例えば、３０分間、６０分間、１．５時間、２時間、２．５時間、または３時間）インキュベートすることであって、このウェルは、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、１０００、１１００、１２００、１３００、１４００、または１５００個のビーズを含有する、インキュベートすることと、（ｃ）標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ−ＰＥ）をこのウェルに添加して、最終濃度の１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭ（具体的な実施形態では、０．５ｎＭ）の標識ＧＩＴＲＬ及び２０ビーズ／μＬのＧＩＴＲカップリングビーズを得て、第２の期間にわたって（例えば、３０分間、１時間、１．５時間、２時間、２．５時間、または３時間）インキュベートすることと、（ｄ）例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム等の懸濁アレイアッセイにおいて、ＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬを検出することと、を含む。具体的な実施形態では、競合抗体または同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体の存在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬの量は、競合抗体または同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体の不在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬの量に対して決定される。ある特定の実施形態では、競合抗体または同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体の不在とは、抗体またはその抗原結合断片がウェル中に存在しないことを意味する。他の実施形態では、競合抗体または同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体の不在とは、ＧＩＴＲに結合しないアイソタイプ対照抗体がウェル中に存在することを意味する。これらの実施形態に従って、競合抗体または同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体の存在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合した標識ＧＩＴＲＬの量は、いくつかの実施形態では、競合抗体または同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体の不在下でＧＩＴＲカップリングビーズに結合し��標識ＧＩＴＲＬの量の少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％または６０％、または２０％〜６０％、３０％〜５０％、または２０％〜７０％であると決定される。
【０２６４】
ある特定の実施形態では、当業者に既知のアッセイまたは本明細書に記載のアッセイによって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体もしくはその抗原結合断片の存在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。具体的な一実施形態では、以下の実施例２（例えば、以下の項６．２．５．２または６．２．５．４）に記載のアッセイによって査定される、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体もしくはその抗原結合断片の存在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、１０００ｎｇ／ｍＬ、９５０ｎｇ／ｍＬ、９００ｎｇ／ｍＬ、８５０ｎｇ／ｍＬ、８００ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、７００ｎｇ／ｍＬ、６５０ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ、５５０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３３３ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、または１０ｎｇ／ｍＬの、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片の存在下で、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。別の具体的な実施形態では、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、１．５ｎＭ、１．４ｎＭ、１．３ｎＭ、１．２ｎＭ、１．１ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、または０．１ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ｈＧＩＴＲＬ−ＰＥ等の標識ヒトＧＩＴＲＬ）の少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、または７５％が、３５００ｎｇ／ｍＬ、３４００ｎｇ／ｍＬ、３３００ｎｇ／ｍＬ、３２００ｎｇ／ｍＬ、３１００ｎｇ／ｍＬ、３０００ｎｇ／ｍＬ、２９００ｎｇ／ｍＬ、２８００ｎｇ／ｍＬ、２７００ｎｇ／ｍＬ、２６００ｎｇ／ｍＬ、２５００ｎｇ／ｍＬ、２４００ｎｇ／ｍＬ、２３００ｎｇ／ｍＬ、２２００ｎｇ／ｍＬ、２１００ｎｇ／ｍＬ、２０００ｎｇ／ｍＬ、１９００ｎｇ／ｍＬ、１８００ｎｇ／ｍＬ、１７００ｎｇ／ｍＬ、１６００ｎｇ／ｍＬ、１５００ｎｇ／ｍＬ、１４００ｎｇ／ｍＬ、１３００ｎｇ／ｍＬ、１２００ｎｇ／ｍＬ、または１１００ｎｇ／ｍＬの、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープもしくは重複するエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片の存在下で、９ｐｇ／ｍＬ、８ｐｇ／ｍＬ、７ｐｇ／ｍＬ、６ｐｇ／ｍＬ、５ｐｇ／ｍＬ、４ｐｇ／ｍＬ、または３ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズにカップリングされたＧＩＴＲ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズにカップリングされたヒトＧＩＴＲ）に結合する。
【０２６５】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための３０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、１５％超または２０％超阻止しない。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための１０００ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、１５％超、２０％超、または２５％超阻止しない。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための３３３ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、３０％超または３５％超阻止しない。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための１１１ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、３５％超、４０％超、または４５％超阻止しない。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための３７ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、６０％超阻止しない。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための１２ｎｇ／ｍＬの濃度の本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じもしくは重複するエピトープに結合する抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）が５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度でビーズ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ）にカップリングされたときに、０．５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を、懸濁アレイアッセイ（例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム）において、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の不在下での０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の５ｐｇ／ｍＬ／ビーズの濃度のＧＩＴＲカップリングビーズへの結合に対して、８５％超阻止しない。
【０２６６】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための本明細書に記載の抗体と結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じまたは重複するエピトープに結合し、チップ（例えば、ＣＭ５センサーチップ）上で固定化したＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合した１５０ｎＭ、１４５ｎＭ、１４０ｎＭ、１３５ｎＭ、１３０ｎＭ、１２５ｎＭ、１２０ｎＭ、１１５ｎＭ、１１０ｎＭ、１０５ｎＭ、または１００ｎＭの濃度で、１５０ｎＭ、１４５ｎＭ、１４０ｎＭ、１３５ｎＭ、１３０ｎＭ、１２５ｎＭ、１２０ｎＭ、１１５ｎＭ、１１０ｎＭ、１０５ｎＭまたは１００ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、非共有結合した三量体のヒトＧＩＴＲＬ）のこのチップ上で固定化したＧＩＴＲへの結合を、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、または１５％未満阻害する抗体が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合するための本明細書に記載の抗体への結合において競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じまたは重複するエピトープに結合する、抗体が本明細書に提供され、この競合抗体またはチップ（例えば、ＣＭ５センサーチップ）上で固定化したＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合した１２５ｎＭの濃度の同じまたは重複するエピトープに結合する抗体は、１２５ｎＭのＧＩＴＲＬ（例えば、非共有結合した三量体のヒトＧＩＴＲＬ）のチップ上で固定化したＧＩＴＲへの結合を、６０％未満、５５％未満、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、または１５％未満阻害する抗体が本明細書に提供される。
【０２６７】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその断片は、８．５×１０−３ｓ−１以下、３．５×１０−３ｓ−１以下、５×１０−３ｓ−１以下、２．５×１０−３ｓ−１以下、１×１０−３ｓ−１以下、８．５×１０−４ｓ−１以下、５×１０−４ｓ−１以下、３．５×１０−４ｓ−１以下、２．５×１０−４ｓ−１以下、１×１０−４ｓ−１以下、８．５×１０−５−ｓ−１以下、３．５×１０−５−ｓ−１以下、５×１０−５−ｓ−１以下、２．５×１０−５−ｓ−１以下、１×１０−５−ｓ−１以下、８．５×１０−６−ｓ−１以下、５×１０−６−ｓ−１以下、３．５×１０−６−ｓ−１以下、２．５×１０−６−ｓ−１以下、１×１０−６−ｓ−１以下、８．５×１０−７−ｓ−１以下、５×１０−７−ｓ−１以下、２．５×１０−７−ｓ−１以下、１×１０−７−ｓ−１以下、８．５×１０−８−ｓ−１以下、５×１０−８−ｓ−１以下、２．５×１０−８−ｓ−１以下、１×１０−８−ｓ−１以下、８．５×１０−９−ｓ−１以下、５×１０−９ｓ−１以下、２．５×１０−９−ｓ−１以下、または１×１０−９−ｓ−１以下の解離速度定数（ｋｏｆｆ）を有するＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその断片は、９．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−９−ｓ−１、８．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−９−ｓ−１、５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−９−ｓ−１、９．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−８−ｓ−１、５×１０−５ｓ−１〜１×１０−８−ｓ−１、９．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−７−ｓ−１、５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−７−ｓ−１、９．５×１０−５−ｓ−１〜５×１０−６−ｓ−１、９．５×１０−５−ｓ−１〜１×１０−５−ｓ−１、８．５×１０−３ｓ−１〜１×１０−４ｓ−１、５×１０−３ｓ−１〜２．５×１０−４ｓ−１、８．５×１０−３ｓ−１、〜１×１０−５ｓ−１、８．５×１０−５−ｓ−１〜５×１０−５−ｓ−１のｋｏｆｆを有するＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。ある特定の実施形態では、このｋｏｆｆは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂ断片等の一価抗体を使用して決定される。他の実施形態では、このｋｏｆｆは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、二価抗体を使用して決定される。アッセイ特定の一実施形態では、このｋｏｆｆは、以下の項６に記載されるアッセイを使用して決定される。
【０２６８】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその断片は、少なくとも１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも２．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも３．５×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも２．５×１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも３．５×１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０７Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０７Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０８Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５  １０８Ｍ−１ｓ−１または少なくとも１０９Ｍ−１ｓ−１の会合速度定数（ｋｏｎ）を有するＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその断片は、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜５×１０５Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜１×１０６Ｍ−１ｓ−１、３．５×１０５Ｍ−１ｓ−１〜２．５×１０６Ｍ−１ｓ−１、３．５×１０５Ｍ−１ｓ−１〜３．５×１０６Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜５×１０６Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−〜１×１０７Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜５×１０７Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜１０８Ｍ−１ｓ−１、１×１０５Ｍ−１ｓ−１〜１×１０９Ｍ−１ｓ−１、１×１０６Ｍ−１ｓ−〜１×１０７Ｍ−１ｓ−１、１×１０６Ｍ−１ｓ−１〜１×１０８Ｍ−１ｓ−１、１×１０６Ｍ−１ｓ−１〜１×１０９Ｍ−１ｓ−１、１×１０７Ｍ−１ｓ−１〜１×１０８Ｍ−１ｓ−１、１×１０７Ｍ−１ｓ−１〜１×１０９Ｍ−１ｓ−１、１×１０８Ｍ−１ｓ−１〜１×１０９Ｍ−１ｓ−１のｋｏｎＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。ある特定の実施形態では、このｋｏｎは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂ断片等の一価抗体を使用して決定される。他の実施形態では、このｋｏｎは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、二価抗体を使用して決定される。特定の一実施形態では、このｋｏｎは、以下の項６に記載されるアッセイを使用して決定される。
【０２６９】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその断片は、７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、または０．１ｎＭ未満のＫＤを有するＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する抗体またはその断片は、約７ｎＭ、６ｎＭ、５ｎＭ、４．５ｎＭ、４ｎＭ、３．５ｎＭ、３ｎＭ、２．５ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．７５ｎＭ、０．５ｎＭ、０．２５ｎＭ、または０．１ｎＭのＫＤを有するＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合において本明細書に記載の抗体と競合するか、または本明細書に記載の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、７ｎＭ〜４ｎＭ、７ｎＭ〜５ｎＭ、６ｎＭ〜４ｎＭ、５ｎＭ〜３ｎＭ、５ｎＭ〜１ｎＭ、５ｎＭ〜０．５ｎＭ、４ｎＭ〜３ｎＭ、４ｎＭ〜２ｎＭ、４ｎＭ〜１ｎＭ、４ｎＭ〜０．５ｎＭ、３ｎＭ〜２ｎＭ、３ｎＭ〜１ｎＭ、３ｎＭ〜０．５ｎＭ、２ｎＭ〜１ｎＭ、２ｎＭ〜０．５ｎＭ、３ｎＭ〜０．１ｎＭ、２ｎＭ〜０．１ｎＭ、１ｎＭ〜０．１ｎＭ、または０．５ｎＭ〜０．１ｎＭのＫＤを有するＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。ある特定の実施形態では、このＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商として計算され、このｋｏｎ及びｋｏｆｆは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂ断片等の一価抗体を使用して決定される。他の実施形態では、このＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの商として計算され、このｋｏｎ及びｋｏｆｆは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴技術によって測定される、Ｆａｂ断片等の二価抗体を使用して決定される。具体的な一実施形態では、このＫＤは、以下の項６の実施例（例えば、実施例２）に示されるように決定される。
【０２７０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のエピトープは、抗体を産生するための免疫原として使用される。例えば、抗体を産生するための方法については、以下の項５．２を参照されたい。
【０２７１】
具体的な態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する抗体またはその断片は、当業者に既知のアッセイまたは本明細書に記載のアッセイにおいて、マウス抗体６Ｃ８のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を（例えば、用量依存的様式で）阻害しない。例えば、マウス抗体６Ｃ８の説明については、米国特許第７，８１２，１３５号を参照されたい。ある特定の実施形態では、当業者に既知のアッセイまたは本明細書に記載のアッセイによって査定される、マウス抗体６Ｃ８の少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上が、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する記載される抗体またはその断片の存在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する記載される抗体またはその断片は、以下の実施例６に記載されるアッセイにおいて査定される、マウス抗体６Ｃ８のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を（例えば、用量依存的様式で）阻害しない。ある特定の実施形態では、以下の実施例６に記載されるアッセイにおいて査定される、マウス抗体６Ｃ８の少なくとも２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％またはそれ以上が、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する記載される抗体またはその断片の存在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する。
【０２７２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体は、多特異的抗体、例えば、二重特異的抗体であってもよい。特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体は、抗体が少なくとも２つの異なる、典型的には、重複しないエピトープに対して特異性を有する二重特異的抗体である。特定の一実施形態では、二重特異的抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に対して特異性を有する本明細書に記載の抗体からなる一方のアームと、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）において異なるエピトープまたは異なる分子、例えば、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＣＴＬＡ−４、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、またはＯＸ４０におけるエピトープに対して特異性を有する抗体を含む第２のアームとを含む。例えば、二重特異的抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に対して特異性を有する本明細書に記載の抗体を含む一方のアームと、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）等のＣＴＬＡ−４に対して特異性を有する抗体、トレメリムマブと同じエピトープもしくはそれに重複するエピトープに結合する抗体、またはイピリムマブと同じエピトープもしくはそれに重複するエピトープに結合する抗体を含む第２のアームとを含む。
【０２７３】
具体的な態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、アゴニストとして機能する。
【０２７４】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、本明細書に記載の及び／または当業者に既知の方法によって査定される、いかなる抗体も用いずにまたは非関連抗体（例えば、ＧＩＴＲに免疫特異的に結合しない抗体）を用いたＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の刺激の存在または不在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）の活性に対して、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）の活性を、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、本明細書に記載の及び／または当業者に既知の方法によって査定される、いかなる抗体も用いずにまたは非関連抗体（例えば、ＧＩＴＲに免疫特異的に結合しない抗体）を用いたＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の刺激の存在または不在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）の活性に対して、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）の活性を、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる。ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）の活性の非限定的な例は、細胞増殖、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）のシグナル伝達、細胞生存、及びサイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、及びＩＦＮ−γ）を含むことができる。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）とともにＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）の活性を誘導するか、または増加させる。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の不在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）の活性を誘導するか、増強するか、または増加させる。具体的な実施形態では、この抗体または抗体−結合断片は、ＧＩＴＲの活性を誘導するか、増強するか、または増加させ、ＧＩＴＲＬのＧＩＴＲへの結合を阻害しない（例えば、完全に阻害しない、または部分的にのみ阻害する）。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲの活性の増加は、以下の実施例に記載されるように査定される。
【０２７５】
ある特定の態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、ＧＩＴＲを発現し、ＧＩＴＲシグナル伝達に応答する細胞（例えば、Ｔ細胞等のＧＩＴＲ刺激及びＧＩＴＲシグナル伝達に応じて急速に増殖させる細胞）の細胞増殖を誘導する、増強するか、または増加させる。細胞増殖アッセイは、実施例３に記載されるアッセイ等の、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイ、ＢｒｄＵ取り込みアッセイ、またはＣＦＳＥアッセイ等の当該技術分野に記載されており、当業者によって容易に実行され得る。具体的な実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞に対してのみ細胞増殖を増加させる。ＧＩＴＲに免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体の存在下で、Ｔ細胞増殖の増加を示す、以下の実施例３を参照されたい。
【０２７６】
一実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞に対してのみ細胞増殖を増加させる。別の実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞に対してのみ細胞増殖を増加させる。別の実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞に対してのみ細胞増殖を増加させる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されていないＴ細胞は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の非存在下でＴ細胞に対して、ＧＩＴＲ活性を増加させる、及び／またはＮＦ−κＢ活性を増加させる。
【０２７７】
具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、以下の実施例３に記載されるアッセイ等の、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイ、ＢｒｄＵ取り込みアッセイ、またはＣＦＳＥアッセイ）によって査定される、いかなる抗体も用いずにまたは非関連抗体（例えば、ＧＩＴＲに免疫特異的に結合しない抗体）を用いたＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の刺激の存在または不在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）の活性に対して、細胞増殖（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞等のＴ細胞）を、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、以下の実施例３に記載されるアッセイ等の、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイ、ＢｒｄＵ取り込みアッセイ、またはＣＦＳＥアッセイ）によって査定される、いかなる抗体も用いずにまたは非関連抗体（例えば、ＧＩＴＲに免疫特異的に結合しない抗体）を用いたＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の刺激の存在または不在下で、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）の活性に対して、細胞増殖（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞等のＴ細胞）を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる。
【０２７８】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マイトジェン（例えば、抗ＣＤ３抗体またはホルボールエステル）で刺激されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）は、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、以下の実施例３に記載されるアッセイ等の、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイ、ＢｒｄＵ取り込みアッセイ、またはＣＦＳＥアッセイ）によって査定される、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、Ｔ細胞マイトジェンで刺激されたＴ細胞に対してのみ、細胞増殖を、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、以下の実施例３に記載されるアッセイ等の、３Ｈ−チミジン取り込みアッセイ、ＢｒｄＵ取り込みアッセイ、またはＣＦＳＥアッセイ）によって査定される、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞に対してのみ、細胞増殖を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる。具体的な一実施形態では、細胞増殖は、以下の実施例３に記載されるように査定される。
【０２７９】
ある特定の態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、細胞（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞等のＴ細胞）の生存を増加させる。具体的な一実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、Ｔ細胞マイトジェンで刺激されたＴ細胞に対してのみ、生存を増加させる。細胞生存アッセイは、当該技術分野（例えば、トリパンブルー排除アッセイ）に記載されており、当業者によって容易に実行され得る。
【０２８０】
具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、トリパンブルー排除アッセイ）によって査定される、いかなる抗体も用いずにまたは非関連抗体（例えば、ＧＩＴＲに免疫特異的に結合しない抗体）を用いたＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の刺激の存在または不在下で、細胞生存に対して、細胞生存（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞等のＴ細胞）を、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、トリパンブルー排除アッセイ）によって査定される、いかなる抗体も用いずにまたは非関連抗体（例えば、ＧＩＴＲに免疫特異的に結合しない抗体）を用いたＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の刺激の存在または不在下で、細胞生存に対して、細胞生存（例えば、ＣＤ４及びＣＤ８エフェクターＴ細胞等のＴ細胞）を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる。
【０２８１】
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マイトジェン（例えば、抗ＣＤ３抗体またはホルボールエステル）で刺激されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、トリパンブルー排除アッセイ）によって査定される、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞に対してのみ、細胞生存を、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、トリパンブルー排除アッセイ）によって査定される、Ｔ細胞マイトジェンで刺激されたＴ細胞に対してのみ、細胞生存を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる。
【０２８２】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、活性化誘導細胞死からエフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）を保護する。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、Ｔｒｅｇ媒介性抑制に対してエフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）の耐性を誘導する。
【０２８３】
具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、本明細書に記載の方法（実施例３等の以下の実施例を参照されたい）または当業者に既知の方法によって査定される、いかなる抗体も用いずにまたは非関連抗体（例えば、ＧＩＴＲに免疫特異的に結合しない抗体）を用いたＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の刺激の存在または不在下で、サイトカイン産生に対して、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、及びＩＦＮ−γ）を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％誘導するか、増強するか、または増加させる。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片は、本明細書に記載の方法（実施例３等の以下の実施例を参照されたい）または当業者に既知の方法によって査定される、いかなる抗体も用いずにまたは非関連抗体（例えば、ＧＩＴＲに免疫特異的に結合しない抗体）を用いたＧＩＴＲＬ（例えば、ヒトＧＩＴＲＬ）の刺激の存在または不在下で、サイトカイン産生に対して、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、及びＩＦＮ−γ）を、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍誘導するか、または増強する。
【０２８４】
ある特定の実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイまたは以下の実施例に記載される）によって査定される、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞に対してのみ、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、及びＩＦＮ−γ）を、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％増加させる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞）は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片の存在下で、本明細書に記載の方法または当業者に既知の方法（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイまたは以下の実施例に記載される）によって査定される、Ｔ細胞マイトジェンまたはＴ細胞受容体複合体刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）で刺激されたＴ細胞に対してのみ、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＮＦ−α、及びＩＦＮ−γ）を、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍増加させる。
【０２８５】
ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ＴＣＲアゴニスト（例えば、抗ＣＤ３抗体）の不在下で、ＧＩＴＲの活性を誘導するか、増強するか、または活性化する。ＧＩＴＲ活性は、正準及び非正準ＮＦ−κＢ経路の活性化を測定することによって査定され得る。ＧＩＴＲ活性は、ＴＲＡＦアダプター媒介シグナル伝達経路の活性化を測定することによって査定され得る。ＴＲＡＦアダプターは、ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ４、及びＴＲＡＦ５からなる群から選択される。ＧＩＴＲ活性は、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路（Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＥＲＫ経路とも称される）の活性化を測定することによって査定され得る。「ＴＣＲアゴニスト」の例としては、Ｔ細胞受容体複合体を標的にする抗体（例えば、抗ＣＤ３抗体）、及びヒト白血球抗原、例えば、ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩに結合したペプチドが挙げられるが、これらに限定されず、このペプチドが、自己、突然変異する自己、または病原体関連タンパク質（例えば、ウイルスまたは細菌性）に由来する。
【０２８６】
抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、検出可能な標識または物質に融合または共役し（例えば、共有結合または非共有結合し）得る。検出可能な標識または物質の例としては、グルコース酸化酵素等の酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）等の放射性同位体；ルミノール等の発光標識；ならびにフルオレセイン及びローダミン、及びビオチン等の蛍光標識が挙げられる。かかる標識抗体または抗原結合断片は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）タンパク質を検出するために使用することができる。例えば、以下の項５．４．２を参照されたい。
５．２  抗体産生
【０２８７】
ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその断片は、抗体の合成のための当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、化学合成によってまたは組換え発現技法によって産生することができる。本明細書に記載の方法は、特に明記しない限り、分子生物学、微生物学、遺伝分析、組換えＤＮＡ、有機化学、生化学、ＰＣＲ、オリゴヌクレオチド合成及び修飾、核酸ハイブリダイゼーション、及び当該技術分野の範囲内である関連分野における従来の技法を用いる。これらの技法は、本明細書で引用される参照内に記載され、その文献で詳細に説明されている。例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７年及び年次更新）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７年及び年次更新）Ｇａｉｔ（ｅｄ．）（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ（ｅｄ．）（１９９１）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｉｒｒｅｎ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．）（１９９９）Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓを参照されたい。
【０２８８】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、例えば、合成を介した作製、ＤＮＡ配列の遺伝子操作を含む任意の手段によって調製されるか、発現されるか、作製されるか、または単離された抗体（例えば、組換え抗体）である。ある特定の実施形態では、かかる抗体は、インビボで動物または哺乳動物（例えば、ヒト）の抗体生殖系列レパートリー内で天然に存在しない配列（例えば、ＤＮＡ配列またはアミノ酸配列）を含む。
【０２８９】
ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞または宿主細胞を培養することを含むＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を作製する方法が本明細書に提供される。ある特定の態様では、本明細書に記載の細胞または宿主細胞（例えば、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む細胞または宿主細胞）を用いて本抗体またはその抗原結合断片を発現すること（例えば、組換え技術によって発現すること）を含むＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を作製する方法が本明細書に提供される。特定の一実施形態では、細胞は、単離された細胞である。特定の一実施形態では、外因性ポリヌクレオチドは、細胞に導入されている。特定の一実施形態では、本方法は、細胞または宿主細胞から得られた本抗体またはその抗原結合断片を精製するステップをさらに含む。
【０２９０】
ポリクローナル抗体を産生するための方法は、当該技術分野で既知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの第１１章を参照されたい）。
【０２９１】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え、及びファージディスプレイ技術、またはそれらの組み合わせの使用を含む当該技術分野で既知の多種多様の技法を使用して調製され得る。例えば、モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知のもの及び例えば、Ｈａｒｌｏｗ  Ｅ  ＆  Ｌａｎｅ  Ｄ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌに教示されるものを含むハイブリドーマ技術を使用して産生され得る（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ  ＧＪ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−Ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ５６３  ６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）。本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術を通して産生される抗体に限定されない。例えば、モノクローナル抗体は、本明細書に記載の抗体またはその断片、例えば、かかる抗体の軽鎖及び／または重鎖を外因的に発現する宿主細胞から組換え技術によって産生され得る。
【０２９２】
具体的な実施形態では、本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」は、単細胞（例えば、組換え抗体を産生するハイブリドーマまたは宿主細胞）によって産生される抗体であり、例えば、ＥＬＩＳＡ、または当該技術分野で既知のまたは本明細書に提供される実施例における他の抗原結合もしくは競合的結合アッセイによって決定されるように、抗体が、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。ある特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、一価抗体または多価（例えば、二価）抗体である。特定の実施形態では、モノクローナル抗体は、単一特異的または多特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）である。本明細書に記載のモノクローナル抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ  Ｇ  ＆  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  Ｃ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に記載のハイブリドーマ方法によって作製され得るか、または、例えば、本明細書に記載の技法を使用して、例えば、ファージライブラリから単離され得る。クローナル細胞株及びそれによって発現されるモノクローナル抗体の調製のための他の方法は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，（２００２）５ｔｈ  Ｅｄ．，  Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，（上記参照）の第１１章を参照されたい）。
【０２９３】
ハイブリドーマ技術を使用した特異抗体を産生及びスクリーニングするための方法は、当該技術分野で慣用的かつ公知である。例えば、ハイブリドーマ方法では、マウス、またはヒツジ、ヤギ、ウサギ、ラット、ハムスター、もしくはマカクザル等の他の適切な宿主動物は、免疫化のために使用されるタンパク質（例えば、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ））に特異的に結合するであろう抗体を産生するか、または産生することができるリンパ球を誘発するように免疫化される。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫化されてもよい。次いで、リンパ球は、ポリエチレングリコール等の好適な融合剤を用いて骨髄腫細胞と融合して、ハイブリドーマ細胞（Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））を形成する。さらに、ＲＩＭＭＳ（反復免疫化多重部位）技法を使用して、動物を免疫化することができる（参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｉｌｐａｔｒｉｃｋ  ＫＥ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １６：３８１−９）。
【０２９４】
いくつかの実施形態では、マウス（またはラット、サル、ロバ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、もしくはイヌ等の他の動物）を抗原（例えば、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ））で免疫化することができ、免疫応答が検出されると、例えば、マウス血清中に抗原に特異的な抗体が検出されると、マウス膵臓が回収され、膵細胞が単離される。次いで、膵細胞は、公知の技法によって、任意の好適な骨髄腫細胞、例えば、ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ（登録商標））（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）から入手可能な細胞株ＳＰ２０由来の細胞と融合して、ハイブリドーマを形成する。ハイブリドーマは、限界希釈により選択及びクローニングされる。ある特定の実施形態では、免疫化されたマウスのリンパ節が回収され、ＮＳ０骨髄腫細胞と融合する。
【０２９５】
このようにして調製されたハイブリドーマ細胞は、好ましくは、非融合の親骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を含有する好適な培養培地中で播種し、成長させる。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチン・グアニン・ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合、ハイブリドーマのための培養培地は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を阻止するであろう。
【０２９６】
具体的な実施形態は、効果的に融合し、選択された抗体を産生する細胞によって安定した高レベルの抗体の産生を支援し、ＨＡＴ培地等の培地に対して感受性がある骨髄腫細胞を用いる。これらのうちで、骨髄腫細胞株は、ＮＳ０細胞株またはｔｈｅ  Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から入手可能なＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍に由来するもの、ならびにｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳＡ）から入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８．６５３細胞等のマウス骨髄腫である。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体（Ｋｏｚｂｏｒ  Ｄ（１９８４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３３：３００１−５、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））の産生についても記載されている。
【０２９７】
ハイブリドーマ細胞が成長している培養培地は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に対して誘導されたモノクローナル抗体の産生についてアッセイされる。ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、当該技術分野で既知の方法によって、例えば、免疫沈降、または放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等のインビトロの結合アッセイによって決定される。
【０２９８】
所望の特異性、親和性、及び／または活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞を特定した後、そのクローンを、限界希釈法によってサブクローニングし、標準の方法によって成長させ得る（Ｇｏｄｉｎｇ  ＪＷ（Ｅｄ），Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（上記参照））。この目的のために好適な培養培地は、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＭＩ  １６４０培地を含む。さらに、ハイブリドーマ細胞は、動物において腹水腫瘍としてインビボで成長させ得る。
【０２９９】
サブクローンにより分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、または親和性クロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製方法によって培養培地、腹水、または血清から適切に分離される。
【０３００】
本明細書に記載の抗体は、特異的なＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を認識する抗体断片を含み、当業者に既知の任意の技法によって生成され得る。例えば、本明細書に記載のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片は、パパイン（Ｆａｂ断片を産生するため）またはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生するため）等の酵素を用いて、免疫グロブリン分子のタンパク質切断によって産生され得る。Ｆａｂ断片は、抗体分子の２つの同一のアームのうちの一方に対応し、重鎖のＶＨ及びＣＨ１ドメインと対になった完全な軽鎖を含有する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域内のジスルフィド結合によって結合される抗体分子の２つの抗原結合アームを含有する。
【０３０１】
さらに、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、当該技術分野で既知の様々なファージディスプレイ方法を使用して生成することもできる。ファージディスプレイ方法では、機能的抗体ドメインは、それをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面上に露出される。具体的には、ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列は、動物ｃＤＮＡライブラリ（例えば、感染組織のヒトまたはマウスｃＤＮＡライブラリ）から増幅される。ＶＨ及びＶＬドメインをコードするＤＮＡは、ＰＣＲによりｓｃＦｖリンカーと一緒に組換えられ、ファージミドベクターにクローニングされる。ベクターは、大腸菌に電気穿孔処理され、大腸菌はヘルパーファージに感染する。これらの方法で用いられるファージは、典型的には、ｆｄ及びＭ１３を含む繊維状ファージであり、ＶＨ及びＶＬドメインは、通常、ファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩのいずれかに組換えにより融合する。特定の抗原に結合する抗原結合ドメインを発現しているファージは、抗原で、例えば、標識化した抗原あるいは固体表面もしくはビーズに結合または捕捉された抗原を用いて、選択または特定することができる。本明細書に記載の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の例は、Ｂｒｉｎｋｍａｎ  Ｕ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８２：４１−５０、Ａｍｅｓ  ＲＳ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １８４：１７７−１８６、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ  ＣＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２４：９５２−９５８、Ｐｅｒｓｉｃ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｇｅｎｅ  １８７：９−１８、Ｂｕｒｔｏｎ  ＤＲ  ＆  Ｂａｒｂａｓ  ＣＦ（１９９４）Ａｄｖａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５７：１９１−２８０、ＰＣＴ公開第ＰＣＴ／ＧＢ９１／００１１３４号、同第ＷＯ９０／０２８０９号、同第ＷＯ９１／１０７３７号、同第ＷＯ９２／０１０４７号、同第ＷＯ９２／１８６１９号、同第ＷＯ９３／１１２３６号、同第ＷＯ９５／１５９８２号、同第ＷＯ９５／２０４０１号、及び同第ＷＯ９７／１３８４４号、ならびに米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号、及び同第５，９６９，１０８号に開示されるものを含む。
【０３０２】
上記文献に記載されているように、ファージ選択後、このファージ由来の抗体コード領域は、単離され、ヒト抗体を含む全抗体、または任意の他の所望の抗原結合断片を生成するために使用され、例えば、以下に記載の、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、及び細菌を含む任意の所望の宿主で発現され得る。ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／２２３２４号、Ｍｕｌｌｉｎａｘ  ＲＬ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １２（６）：８６４−９、Ｓａｗａｉ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３４：２６−３４、及びＢｅｔｔｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３に開示されるもの等の当該技術分野で既知の方法を使用して、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）２断片等の抗体断片を組換えによって産生する技法を用いることもできる。
【０３０３】
一態様では、全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び制限部位を保護するために隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、テンプレート、例えば、ｓｃＦｖクローンからＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に既知のクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅したＶＨドメインは、ＶＨ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅されたＶＬドメインは、ＶＬ定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ＶＨ及びＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることができる。次いで、重鎖転換ベクター及び軽鎖転換ベクターは、当業者に既知の技法を使用して、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定または一過性型の細胞株を作製するために細胞株に同時導入される。
【０３０４】
キメラ抗体は、抗体の異なる部分が異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。例えば、キメラ抗体は、ヒト抗体の定常領域に融合したマウスまたはラットモノクローナル抗体の可変領域を含有することができる。キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−７、Ｏｉ  ＶＴ  ＆  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ  ＳＬ（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４−２２１、Ｇｉｌｌｉｅｓ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  １２５：１９１−２０２、及び米国特許第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、同第４，８１６，３９７号、及び同第６，３３１，４１５号を参照されたい。
【０３０５】
ヒト化抗体は、所定の抗原に結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク領域及び非ヒト免疫グロブリン（例えば、マウス免疫グロブリン）のアミノ酸配列を実質的に有するＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ヒト化抗体はまた、少なくとも免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の一部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンの一部分を含む。この抗体はまた、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４領域を含み得る。ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン、ならびにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフト（欧州特許第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、及び米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、及び同第５，５８５，０８９号）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）またはリサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第ＥＰ５９２１０６号及び同第ＥＰ５１９５９６号、Ｐａｄｌａｎ  ＥＡ（１９９１）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ＧＭ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｐｒｏｔ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７（６）：８０５−８１４、及びＲｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ  ９１：９６９−９７３）、チェインシャフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、米国特許第５，７６６，８８６号、国際公開第ＷＯ９３／１７１０５号、Ｔａｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：１１１９−２５、Ｃａｌｄａｓ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１３（５）：３５３−６０、Ｍｏｒｅａ  Ｖ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０（３）：２６７−７９、Ｂａｃａ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７２（１６）：１０６７８−８４、Ｒｏｇｕｓｋａ  ＭＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ  ９（１０）：８９５  ９０４、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５（２３  Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ  ＪＲ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５５（８）：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ  ＪＳ（１９９４）Ｇｅｎｅ  １５０（２）：４０９−１０、及びＰｅｄｅｒｓｅｎ  ＪＴ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２３５（３）：９５９−７３に開示されている技法を含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の種々の技法を使用して産生することができる。参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国出願公開第ＵＳ２００５／００４２６６４号Ａ１（２００５年２月２４日）も参照されたい。
【０３０６】
多重特異的（例えば、二重特異的抗体）を作製するための方法が記載されており、例えば、米国特許第７，９５１，９１７号、同第７，１８３，０７６号、同第８，２２７，５７７号、同第５，８３７，２４２号、同第５，９８９，８３０号、同第５，８６９，６２０号、同第６，１３２，９９２号、及び同第８，５８６，７１３号を参照されたい。
【０３０７】
単一ドメイン抗体、例えば、軽鎖を欠いている抗体は、当該技術分野で公知の方法によって産生することができる。Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  Ｌ  ＆  Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２３１：２５−３８、Ｎｕｔｔａｌｌ  ＳＤ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １（３）：２５３−２６３、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ  Ｓ，（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ７４（４）：２７７−３０２、米国特許第６，００５，０７９号、ならびに国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号、同第ＷＯ９４／２５５９１号、及び同第ＷＯ０１／４４３０１号を参照されたい。
【０３０８】
さらに、ＧＩＴＲ抗原に免疫特異的に結合する抗体は、次いで、当業者に公知の技法を使用して、抗原を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成するために利用することができる。（例えば、Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ  ＮＳ  ＆  Ｂｏｎａ  ＣＡ（１９８９）ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ７（５）：４３７−４４４、及びＮｉｓｓｉｎｏｆｆ  Ａ（１９９１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７（８）：２４２９−２４３８を参照されたい）。
【０３０９】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体と同じエピトープのＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に結合する本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体またはその抗原結合断片である。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗ）のうちのいずれか１つのＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への結合を（例えば、用量依存的様式で）競合的に阻害する本明細書に記載の抗体は、ヒト抗体またはその抗原結合断片である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の任意の方法を用いて産生することができる。例えば、機能的な内在性免疫グロブリンを発現することができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを使用することができる。具体的には、ヒト重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、ランダムに、または相同的組換えによりマウス胚幹細胞内に導入することができる。あるいは、ヒト重鎖及び軽鎖遺伝子に加えて、ヒト可変領域、定常領域、及び多様性領域をマウス胚幹細胞に導入することができる。マウス重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同的組換えによって、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入で別々にまたは同時に非機能性を与えられ得る。特に、ＪＨ領域のホモ接合性欠失は、内在性抗体の産生を妨げる。改変した胚幹細胞を拡張し、胚盤胞内に微量注入し、キメラマウスを産生する。次いで、キメラマウスを繁殖させて、ヒト抗体を発現するホモ接合性子孫を作出する。トランスジェニックマウスは、選択された抗原、例えば、抗原（例えば、ＧＩＴＲ）のすべてまたは一部分で通常の様式で免疫化される。抗原に対して誘導されたモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して免疫化したトランスジェニックマウスから得ることができる。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリントランス遺伝子は、Ｂ細胞分化の間に再編成し、引き続いてクラススイッチ及び体細胞変異を起こす。このように、かかる技法を使用して、治療に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、及びＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ  Ｎ  ＆  Ｈｕｓｚａｒ  Ｄ（１９９５）Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５−９３を参照されたい。ヒト抗体及びヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術ならびにかかる抗体を産生するためのプロトコルの詳細な考察については、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、及び同第ＷＯ９６／３３７３５号、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８���６号、同第５，８１４，３１８号、及び同第５，９３９，５９８号を参照されたい。ヒト抗体を産生することができるマウスの例は、ゼノマウス（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．、米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，１８４号）、ＨｕＡｂ−マウス（商標）（Ｍｅｄｅｒｅｘ，Ｉｎｃ．／Ｇｅｎ  Ｐｈａｒｍ、米国特許第５，５４５，８０６号及び同第５，５６９，８２５号）、トランスクロモマウス（商標）（Ｋｉｒｉｎ）、及びＫＭマウス（商標）（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｋｉｒｉｎ）を含む
【０３１０】
ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合するヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを用いた上記のファージディスプレイ方法を含む当該技術分野で既知の様々な方法によって作製することができる。米国特許第４，４４４，８８７号、同第４，７１６，１１１号、及び同第５，８８５，７９３号、ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、同第ＷＯ９８／５０４３３号、同第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９８／１６６５４号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第ＷＯ９６／３３７３５号、及び同第ＷＯ９１／１０７４１号も参照されたい。
【０３１１】
いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、マウス−ヒトハイブリドーマを用いて産生することができる。例えば、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）で形質転換されたヒト末梢血リンパ球は、マウス骨髄腫細胞と融合して、ヒトモノクローナル抗体を分泌するマウス−ヒトハイブリドーマを産生することができ、これらのマウス−ヒトハイブリドーマをスクリーニングして、標的抗原（例えば、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ））に免疫特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を分泌するものを決定することができる。かかる方法は、当該技術分野で既知であり、記載されており、例えば、Ｓｈｉｎｍｏｔｏ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４６：１９−２３、Ｎａｇａｎａｗａ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  １４：２７−３１を参照されたい。
５．２．１  ポリヌクレオチド
【０３１２】
ある特定の態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）抗原に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはその断片（例えば、可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域）をコードするヌクレオチド配列、ならびにベクター、例えば、宿主細胞（例えば、大腸菌及び哺乳動物細胞）において組換え発現のためのかかるポリヌクレオチドを含むベクターを含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。本明細書に提供される抗体のうちのいずれかをコードするヌクレオチド配列、ならびにかかるポリヌクレオチド配列を含むベクター、例えば、宿主細胞、例えば、哺乳動物細胞においてそれらの効率的な発現のための発現ベクターを含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。
【０３１３】
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリヌクレオチドまたは核酸分子は、核酸分子の天然源（例えば、マウスまたはヒト）に存在する他の核酸分子から分離されたものである。さらに、ｃＤＮＡ分子等の「単離された」核酸分子は、組換え技術によって産生されるとき、他の細胞物質または培養培地を実質的に含み得ないか、または化学的に合成されるとき、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含み得ない。例えば、「実質的に含まない」という用語は、他の物質、例えば、細胞物質、培養培地、他の核酸分子、化学的前駆体、及び／または他の化学物質の約１５％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（特に約１０％未満）を有するポリヌクレオチドまたは核酸分子の調製を含む。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする核酸分子（複数可）は、単離されるか、または精製される。
【０３１４】
特定の態様では、抗体またはその抗原結合断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供され、これらは、ＧＩＴＲポリペプチド（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合し、本明細書に記載のアミノ酸配列、ならびにＧＩＴＲポリペプチドへの結合においてかかる抗体と（例えば、用量依存的様式で）競合するか、またはかかる抗体のエピトープと同じエピトープに結合する抗体を含む。
【０３１５】
ある特定の態様では、本明細書に記載の抗体の軽鎖または重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＬ  ＦＲ及びＣＤＲを含む軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含むことができる（例えば、表１及び３を参照されたい）。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗体のＶＨ  ＦＲ及びＣＤＲを含む重鎖をコードするヌクレオチド配列を含むことができる（例えば、表２及び４を参照されたい）。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、及び４００〜５１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインをコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号５１９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインをコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインをコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２（例えば、配列番号２０２、２０７、または２０８）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメインをコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２（例えば、配列番号２０１または２０６）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＨドメインをコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２（例えば、配列番号２０１〜２０２及び／または２０６〜２０８）のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインをコードする。
【０３１６】
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体（例えば、表１、例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲを参照されたい）のうちのいずれか１つの、例えば、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含有する３つのＶＬ鎖ＣＤＲを含む抗ＧＩＴＲ抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体（例えば、表２、例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲを参照されたい）のうちのいずれか１つの、例えば、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含有する３つのＶＨ鎖ＣＤＲを含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体（例えば、表１、例えば、表１の一行のＶＬ  ＣＤＲを参照されたい）のうちのいずれか１つの、例えば、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３を含有する３つのＶＨ鎖ＣＤＲと、本明細書に記載の抗体（例えば、表２、例えば、表２の一行のＶＨ  ＣＤＲを参照されたい）のうちのいずれか１つの、例えば、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３を含有する３つのＶＨ鎖ＣＤＲとを含む抗ＧＩＴＲ抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２（例えば、配列番号１６、１７、または１８）のうちのいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲをコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２（例えば、配列番号１３、１４、または１５）のうちのいずれか１つのＶＨ  ＣＤＲをコードする。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２（例えば、配列番号１３〜１８）のうちのいずれか１つのＶＬ  ＣＤＲ及びＶＨ  ＣＤＲをコードする。
【０３１７】
特定の実施形態では、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、表１及び３、例えば、表に名称別に特定される特定の抗体のＶＬ  ＣＤＲ及びＶＬＦＲを参照されたい）を含む、例えば、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４を含有するＶＬドメインを含む抗ＧＩＴＲ抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、表２及び４、例えば、表に名称別に特定される特定の抗体のＶＨ  ＣＤＲ及びＶＨ  ＦＲを参照されたい）を含む、例えば、ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４を含有するＶＨドメインを含む抗ＧＩＴＲ抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。
【０３１８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、及び４００〜５１８または配列番号５１９）を含む軽鎖可変領域を含む本明細書に提供される抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する。ある特定の一実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０７または２０８）を含む軽鎖可変領域を含む本明細書に提供される抗体Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２またはＨｕｍ２３１＃２ｗをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３１９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９）を含む重鎖可変領域を含む本明細書に提供される抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する。ある特定の一実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０６）を含む重鎖可変領域を含む本明細書に提供される抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、またはＨｕｍ２３１＃２ｗをコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３２０】
ある特定の態様では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、表３、例えば、表の一行のフレームワーク領域を参照されたい）を有する１つ以上のＶＬ  ＦＲを含むＶＬドメインを含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する。ある特定の態様では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のアミノ酸配列（例えば、表４、例えば、表の一行のフレームワーク領域を参照されたい）を有する１つ以上のＶＨ  ＦＲを含むＶＨドメインを含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する。
【０３２１】
具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ヒトフレームワーク領域であるフレームワーク領域（例えば、ＶＬドメイン及びＶＨドメインのフレームワーク領域）を含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体は、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、上の項５．１に記載される抗体またはその断片（例えば、ＣＤＲまたは可変ドメイン）をコードするヌクレオチド配列を含む。
【０３２２】
具体的な態様では、軽鎖及び重鎖、例えば、別々の軽鎖及び重鎖を含む抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供される。軽鎖に関して、具体的な一実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、カッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ラムダ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む。さらに別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ヒトカッパ軽鎖またはヒトラムダ軽鎖を含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の一実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体を−コードするヌクレオチド配列を含み、この抗体は、軽鎖を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、及び４００〜５１８または配列番号５１９）を含むことができ、軽鎖の定常領域は、ヒトカッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合し、軽鎖を含む本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、ＶＬドメインのアミノ酸配列は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０２、２０４、２０５、２０７、２０８及び４００〜５１８または配列番号５１９）を含み、軽鎖の定常領域は、ヒトラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。例えば、ヒト定常領域配列は、米国特許第５，６９３，７８０号に記載されるものであり得る。
【０３２３】
特定の一実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体は、重鎖を含み、ＶＨドメインのアミノ酸配列は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列（例えば、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９）を含むことができ、重鎖の定常領域は、ヒトガンマ（γ）重鎖定常領域のアミノ酸配列を含む。
【０３２４】
ある特定の一実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、ＶＨドメインの場合は配列番号２０９もしくは８００〜９７４、またはＶＬドメインの場合は配列番号２１０、２１１、もしくは１００１〜１１２６等のＨｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７）のＶＨドメイン及び／またはＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む。ある特定の一実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、ＶＨドメインの場合は配列番号２０９もしくは８００〜９７４またはＶＬドメインの場合は配列番号２１０、２１１、もしくは１０００〜１１１８等のＨｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１）のＶＨドメイン及び／またはＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む。ある特定の一実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、抗体Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃（例えば、配列番号２０９〜２１１）のＶＨドメイン及び／またはＶＬドメインをコードするヌクレオチド配列（複数可）を含む。
【０３２５】
さらに別の具体的な実施形態では、本明細書に提供されるポリヌクレオチドは、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体（またはその抗原結合断片）をコードするヌクレオチド配列を含み、この抗体は、本明細書に記載の任意のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン及びＶＨドメインを含み、この定常領域は、ヒトＩｇＧ１（例えば、アロタイプ１、１７、もしくは３）またはヒトＩｇＧ４の定常領域のアミノ酸配列を含む。
【０３２６】
具体的な一実施形態では、本明細書に指定される、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片もしくはドメインをコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドが本明細書に提供され、例えば、表１〜４、例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、ｐａｂ２１６１、もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗを参照されたい。
【０３２７】
また、例えば、コドン／ＲＮＡ最適化、異種シグナル配列での置換、及びｍＲＮＡ不安定性要素の排除によって最適化された抗ＧＩＴＲ抗体またはその断片をコードするポリヌクレオチドも本明細書に提供される。したがって、ｍＲＮＡにおいてコドン変化を導入すること及び／または阻害領域を排除することによって、組換え発現のために抗ＧＩＴＲ抗体またはその断片（例えば、軽鎖、重鎖、ＶＨドメイン、またはＶＬドメイン）をコードする最適化された核酸を生成する方法は、例えば、米国特許第５，９６５，７２６号、同第６，１７４，６６６号、同第６，２９１，６６４号、同第６，４１４，１３２号、及び同第６，７９４，４９８号に記載される最適化方法を採用することによって実施され得る。例えば、ＲＮＡ内の潜在的なスプライス部位及び不安定性要素（例えば、Ａ／ＴまたはＡ／Ｕの豊富な要素）は、組換え発現のためのＲＮＡの安定性を増大させるために核酸配列によってコードされるアミノ酸を変化させずに変異することができる。変化は、例えば、同一のアミノ酸についての代替的なコドンを用いて、遺伝子コードの縮重を利用する。いくつかの実施形態では、１つ以上のコドンを変化させて、例えば、元のアミノ酸と同様のアミノ酸と同様の化学構造及び特性ならびに／または機能との保存的変異をコードすることが望ましくあり得る。かかる方法は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその断片の発現を、最適化されていないポリヌクレオチドによってコードされる抗ＧＩＴＲ抗体の発現と比較して、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、または１００倍またはそれ以上増加させることができる。
【０３２８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその断片（例えば、ＶＬドメイン及び／またはＶＨドメイン）をコードする最適化されたポリヌクレオチドは、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその断片（例えば、ＶＬドメイン及び／またはＶＨドメイン）をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンス（例えば、相補的）ポリヌクレオチドとハイブリダイズすることができる。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体または断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその断片をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドと高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその断片をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその断片をコードする最適化されていないポリヌクレオチド配列のアンチセンスポリヌクレオチドと高ストリンジェンシー、中間、または低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション条件に関する情報が記載されており、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００４８５４９号（例えば、段落７２〜７３）を参照されたい。
【０３２９】
当該技術分野で既知の任意の方法によって、ポリヌクレオチドが得られ、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が決定され得る。本明細書に記載の抗体、例えば、表１〜４に記載される抗体及びこれらの抗体の改変バージョンをコードするヌクレオチド配列は、当該技術分野で公知の方法を使用して決定され得る、すなわち、特定のアミノ酸をコードすることが知られているヌクレオチドコドンは、抗体をコードする核酸を生成するような方法でアセンブリされる。抗体をコードするようなポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドからアセンブリすることができ（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９４），ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２−６に記載される）、これは、簡潔に言えば、抗体をコードする配列の一部を含む重複ポリヌクレオチドの合成、これらのオリゴヌクレオチドのアニーリング及びライゲーション、次いで、ＰＣＲによるライゲーションされたオリゴヌクレオチドの増幅を含む。
【０３３０】
あるいは、本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドは、当該技術分野で公知の方法（例えば、ＰＣＲ及び他の分子クローニング方法）を用いて好適な源（例えば、ハイブリドーマ）由来の核酸から生成され得る。例えば、既知の配列の３’及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いたＰＣＲ増幅は、対象となる抗体を産生するハイブリドーマ細胞から得られたゲノムＤＮＡを用いて行われ得る。かかるＰＣＲ増幅方法は、抗体の軽鎖及び／または重鎖をコードする配列を含む核酸を得るために使用することができる。かかるＰＣＲ増幅方法は、抗体の可変軽鎖領域及び／または可変重鎖領域をコードする配列を含む核酸を得るために使用することができる。増幅核酸は、例えば、キメラ及びヒト化抗体を生成するために、宿主細胞における発現のために及びさらなるクローニングのためにベクターにクローニングされ得る。
【０３３１】
特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンは入手不可能であるが、その抗体分子の配列が既知である場合、免疫グロブリンをコードする核酸は、化学的に合成され得るか、あるいは好適な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリ、または抗体を発現する任意の組織もしくは細胞（例えば、本明細書に記載の抗体を発現するように選択されたハイブリドーマ細胞）から生成されたｃＤＮＡライブラリ、またはそれから単離された核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ）から、例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリ由来のｃＤＮＡクローンを特定するために、その配列の３’及び５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いたＰＣＲ増幅によって、またはその特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いたクローニングによって得ることができる。次いで、ＰＣＲによって生成された増幅核酸は、当該技術分野で公知の任意の方法を用いて、複製可能なクローニングベクターにクリーニングされ得る。
【０３３２】
本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離及び配列決定され得る。ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの供給源としての機能を果たし得る。単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター中に配置され、次いで、これを、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ細胞）、または免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞等の宿主細胞にトランスフェクトさせ、組換え宿主細胞中で抗ＧＩＴＲ抗体の合成を得ることができる。
【０３３３】
全抗体を生成するために、ＶＨまたはＶＬヌクレオチド配列、制限部位、及び制限部位を保護するために隣接配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ｓｃＦｖクローンにおいてＶＨまたはＶＬ配列を増幅することができる。当業者に既知のクローニング技術を利用して、ＰＣＲ増幅したＶＨドメインは、重鎖定常領域、例えば、ヒトガンマ４定常領域を発現するベクターにクローニングすることができ、ＰＣＲ増幅されたＶＬドメインは、軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパまたはラムダ定常領域を発現するベクターにクローニングすることができる。ある特定の実施形態では、ＶＨまたはＶＬドメインを発現するためのベクターは、ＥＦ−１αプロモーター、分泌シグナル、可変ドメインに対するクローニング部位、定常ドメイン、及びネオマイシン等の選択マーカーを含む。ＶＨ及びＶＬドメインはまた、必要な定常領域を発現する１つのベクターにクローニングすることができる。次いで、重鎖転換ベクター及び軽鎖転換ベクターは、当業者に既知の技法を使用して、完全長抗体、例えば、ＩｇＧを発現する安定したまたは一過性型の細胞株を生成するために細胞株に同時導入される。
【０３３４】
また、このＤＮＡを、例えば、マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常ドメインについてのコード配列で置換することによって、または免疫グロブリンコード配列に、非免疫グロブリンポリペプチドのためのコード配列のすべてまたは部分を共有結合させることによって改変し得る。
【０３３５】
本明細書に記載の抗体をコードするポリヌクレオチドと高ストリンジェンシー、中間、または低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドも提供される。具体的な実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、本明細書に提供されるＶＨドメイン（例えば、配列番号２０１、２０３、２０６、及び２１５〜３８９）及び／またはＶＬドメイン（例えば、２０２、２０４、２０５、２０７、２０８、及び４００〜５１８、または配列番号５１９）をコードするポリヌクレオチドと高ストリンジェンシー、中間、または低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドも提供される。
【０３３６】
ハイブリダイゼーション条件は、当該技術分野に記載されており、当業者に既知である。例えば、ストリンジェント条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのフィルター結合ＤＮＡとのハイブリダイゼーション、続いて、約５０〜６５℃で０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中の１回以上の洗浄を含むことができ、高ストリンジェント条件下でのハイブリダイゼーションは、約４５℃で６×ＳＳＣ中でのフィルター結合核酸とのハイブリダイゼーション、続いて、約６８℃で０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中の１回以上の洗浄を含むことができる。他のストリンジェントハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションは、当業者に既知であり、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄｓ．，（１９８９）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，Ｇｒｅｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．及びＪｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋの６．３．１−６．３．６及び２．１０．３頁に記載されており、これを参照されたい。
５．２．２  細胞及びベクター
【０３３７】
ある特定の態様では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）及び関連ポリヌクレオチド及び発現ベクターに特異的に結合する本明細書に記載の抗体（またはその抗原結合断片）を（例えば、組換えによって）発現する細胞（例えば、宿主細胞）が本明細書に提供される。宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞における組換え発現のための抗ＧＩＴＲ抗体または断片をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含むベクター（例えば、発現ベクター）が本明細書に提供される。また、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、ヒトまたはヒト化抗体）を組換えに発現するためにかかるベクターを含む宿主細胞も本明細書に提供される。特定の一態様では、宿主細胞からかかる抗体を発現することを含む、本明細書に記載の抗体を産生するための方法が本明細書に提供される。
【０３３８】
ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体（例えば、完全長抗体、抗体の重鎖及び／もしくは軽鎖、または本明細書に記載の単鎖抗体）の組換え発現は、その抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの構築を含む。抗体分子をコードするポリヌクレオチド、本明細書に記載の抗体の重鎖及び／もしくは軽鎖、またはその断片（例えば、重鎖及び／または軽鎖可変ドメイン）が得られると、抗体分子の産生のためのベクターは、当該技術分野で公知の技法を使用して組換えＤＮＡ技術によって産生され得る。このようにして、ヌクレオチド配列をコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖または重鎖）を含有するポリヌクレオチドを発現することによってタンパク質を調製するための方法が本明細書に記載されている。当業者に公知の方法は、配列をコードする抗体または抗体断片（例えば、軽鎖または重鎖）ならびに適切な転写及び翻訳対照シグナルを含有する発現ベクターを構築するために使用することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、及びインビボ遺伝子組換えが挙げられる。プロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載の抗体分子、抗体の重鎖もしくは軽鎖、抗体もしくはその断片の重鎖もしくは軽鎖可変ドメイン、または重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲをコードするヌクレオチド配列を含む複製可能なベクターも提供される。かかるベクターは、例えば、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含むことができ（例えば、国際公開第ＷＯ８６／０５８０７号及び同第ＷＯ８９／０１０３６号、ならびに米国特許第５，１２２，４６４号を参照されたい）、その抗体の可変ドメインは、全重鎖、全軽鎖、または全重鎖及び軽鎖の両方の発現のためのかかるベクターにクローニングされ得る。
【０３３９】
発現ベクターは、従来の技法によって細胞（例えば、宿主細胞）に形質転換され、結果として生じる細胞は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）またはその断片を産生するために、従来の技法によって培養され得る。このようにして、宿主細胞におけるかかる配列の発現のためのプロモーターに作動可能に連結された、本明細書に記載の抗体もしくはその断片、またはその重鎖もしくは軽鎖、またはその断片、または本明細書に記載の単鎖抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）をコードするポリヌクレオチドを含有する宿主細胞が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、二重鎖抗体の発現のために、重鎖及び軽鎖の両方をコードするベクターは、個別に、以下に詳述されるように、全免疫グロブリン分子の発現のために宿主細胞中に同時発現され得る。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）、またはその断片の重鎖及び軽鎖の両方をコードするポリヌクレオチドを含むベクターを含有する。具体的な実施形態では、宿主細胞は、２つの異なるベクターを含有し、第１のベクターは、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）またはその断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）またはその断片の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む。他の実施形態では、第１の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）またはその断片の重鎖または重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターを含み、第２の宿主細胞は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）の軽鎖または軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターを含む。具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）またはその抗原結合断片を形成するために第２の細胞の軽鎖／軽鎖可変領域と会合した第１の細胞によって発現された重鎖／重鎖可変領域。ある特定の実施形態では、かかる第１の宿主細胞及びかかる第２の宿主細胞を含む宿主細胞の一集団が本明細書に提供される。
【０３４０】
特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）の軽鎖／軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第１のベクターと、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）の重鎖／重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む第２のベクターとを含むベクターの一集団が本明細書に提供される。
【０３４１】
様々な宿主発現ベクター系は、本明細書に記載の抗体分子（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体を発現するために利用することができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。かかる宿主発現システムは、対象となるコード配列が産生され、続いて、精製することができるビヒクルを表すが、適切なヌクレオチドコード配列で形質転換するか、またはそれでトランスフェクトされた場合に、原位置で本明細書に記載の抗体分子を発現し得る細胞も表す。これらには、抗体コード配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、またはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌等の微生物（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）及び枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ））、抗体コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、サッカロマイセス・ピキア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ））、抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系、抗体コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）に感染したまたは組換えプラスミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞株（例えば、緑藻クラミドモナス等の緑藻類）、あるいは哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター（例えば、メタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルス由来のプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター、ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含む組換え発現構築物を有する哺乳動物細胞株（例えば、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１もしくはＣＯＳ）、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ  ２９３、ＮＳ０、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨｅＬａ、及びＮＩＨ  ３Ｔ３、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、及びＢＭＴ１０細胞）が含まれるが、これらに限定されない。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）またはその抗原結合断片を発現するための細胞は、ＣＨＯ細胞、例えば、ＣＨＯ  ＧＳ  Ｓｙｓｔｅｍ（商標）（Ｌｏｎｚａ）のＣＨＯ細胞である。特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗体を発現するための細胞は、ヒト細胞、例えば、ヒト細胞株である。具体的な一実施形態では、哺乳動物発現ベクターは、ｐＯｐｔｉＶＥＣ（商標）またはｐｃＤＮＡ３．３である。特定の一実施形態では、大腸菌等の細菌細胞、または特に全組換え抗体分子の発現のための真核細胞（例えば、哺乳動物細胞）は、組換え抗体分子の発現に用いられる。例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期遺伝子プロモーターエレメント等のベクターと組み合わせたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞等の哺乳動物細胞は、抗体の効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ＭＫ  ＆  Ｈｏｆｓｔｅｔｔｅｒ  Ｈ（１９８６）Ｇｅｎｅ  ４５：１０１−５、及びＣｏｃｋｅｔｔ  ＭＩ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８（７）：６６２−７）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ＣＨＯ細胞またはＮＳ０細胞によって産生される。具体的な一実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に特異的に結合する本明細書に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列の発現は、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、または組織特異的プロモーターにより調節されている。
【０３４２】
細菌系では、抗体分子を発現させることを目的とした使用に応じて、いくつかの発現ベクターが有利に選択され得る。例えば、抗体分子の薬学的組成物の生成のために、大量のかかる抗体が産生される場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を誘導するベクターが望ましくあり得る。かかるベクターは、融合タンパク質が産生されるように抗体コード配列がｌａｃ  Ｚコード領域とインフレームでベクターに個々にライゲーションされ得る、大腸菌発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｅｔｈｅｒ  Ｕ  ＆  Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｌｌ  Ｂ（１９８３）ＥＭＢＯ  Ｊ  ２：１７９１−１７９４）、ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ  Ｓ  ＆  Ｉｎｏｕｙｅ  Ｍ（１９８５）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １３：３１０１−３１０９、Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ  Ｇ  ＆  Ｓｃｈｕｓｔｅｒ  ＳＭ（１９８９）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２４：５５０３−５５０９）等を含むが、これらに限定されない。例えば、ｐＧＥＸベクターはまた、グルタチオン５−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合タンパク質として外来性ポリペプチドを発現するために使用することができる。一般に、かかる融合タンパク質は、可溶性であり、マトリックスグルタチオンアガロースビーズへの吸着及び結合、続いて遊離グルタチオンの存在下での溶出により、溶解した細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターは、クローニングされた標的遺伝子産物がＧＳＴ部分から放出され得るように、トロンビンまたはＸａ因子プロテアーゼ切断部位を含むように設計されている。
【０３４３】
昆虫系では、オートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）が、外来遺伝子を発現するためのベクターとして使用することができる。ウイルスは、ヨトウガ細胞中で成長する。抗体コード配列は、ウイルスの非必須領域（例えばポリヘドリン遺伝子）内に個々にクローニングされ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下に置かれ得る。
【０３４４】
哺乳動物宿主細胞では、いくつかのウイルスベースの発現系を利用することができる。アデノウイルスが発現ベクターとして用いられる場合には、対象となる抗体コード配列は、アデノウイルス転写／翻訳調節複合体、例えば、後期プロモーター及び三分裂（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ）リーダー配列にライゲーションされ得る。次いで、このキメラ遺伝子は、インビトロまたはインビボ組換えによってアデノウイルスゲノムに挿入され得る。ウイルスゲノムの非必須領域（例えば、領域ＥｌまたはＥ３）中への挿入により、感染した宿主で生存可能であり、抗体分子を発現することができる組換えウイルスが得られるであろう（例えば、Ｌｏｇａｎ  Ｊ  ＆  Ｓｈｅｎｋ  Ｔ（１９８４）ＰＮＡＳ  ８１（１２）：３６５５−９を参照されたい）。特異的開始シグナルはまた、挿入した抗体コード配列の効率的な翻訳に必要とされ得る。これらのシグナルは、ＡＴＧ開始コドン及び隣接配列を含む。さらに、開始コドンは、全挿入の翻訳を確実にするように、所望のコード配列のリーディングフレームと一致しなければならない。これらの外因性の翻訳調節シグナル及び開始コドンは、天然及び合成の両方の、種々の起源のものであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサーエレメント、転写ターミネーター等の包含により増強され得る（例えば、Ｂｉｔｔｅｒ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１６−５４４を参照されたい）。
【０３４５】
さらに、挿入された配列の発現を調節するか、または所望の特異的な形で遺伝子産物を修飾及びプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク質産物のかかる修飾（例えば、グリコシル化）及びプロセシング（例えば、切断）は、タンパク質の機能に重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後のプロセシング及び修飾に対する独特かつ特異的なメカニズムを有する。適切な細胞株または宿主系を、発現した外来タンパク質の正しい修飾及びプロセシングを確実にするために選択することができる。この目的を達成するために、遺伝子産物の一次転写物の適当なプロセシング、グリコシル化、及びリン酸化のための細胞のメカニズムを有する真核生物の宿主細胞を使用することができる。かかる哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＭＤＣＫ、ＨＥＫ  ２９３、ＮＩＨ  ３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０（いかなる免疫グロブリン鎖も内在性に産生しないマウス骨髄腫細胞株）、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ１またはＣＯＳ）、ＰＥＲ．Ｃ６、ＶＥＲＯ、ＨｓＳ７８Ｂｓｔ、ＨＥＫ−２９３Ｔ、ＨｅｐＧ２、ＳＰ２１０、Ｒ１．１、Ｂ−Ｗ、Ｌ−Ｍ、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、ＹＢ／２０、ＢＭＴ１０、及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、または抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、またはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）は、ＣＨＯ細胞等の哺乳動物細胞において産生される。
【０３４６】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、低減したフコース含量を有するか、またはフコース含量を有さない。かかる抗体は、当業者に既知の技法を使用して産生され得る。例えば、抗体は、フコシル化の能力が欠損または欠如している細胞において発現され得る。具体的な一例では、α１，６−フコシルトランスフェラーゼの両方の対立遺伝子のノックアウトを有する細胞株は、低減したフコース含量を有する抗体またはその抗原結合断片を産生するために使用することができる。Ｐｏｔｅｌｌｉｇｅｎｔ（登録商標）システム（Ｌｏｎｚａ）は、低減したフコース含量を有する抗体またはその抗原結合断片を産生するために使用することができるようなシステムの一例である。
【０３４７】
組換えタンパク質の長期間、高収率産生のために、安定的発現が用いられ得る。例えば、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５、もしくは抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）またはその抗原結合断片を安定に発現する細胞株が操作され得る。具体的な実施形態では、本明細書に提供される細胞は、本明細書に記載の抗体（例えば、抗体Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、２３１−３２−１５または抗体１〜１０７、もしくは抗体ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、もしくはｐａｂ２１６１のうちのいずれか１つのＣＤＲを含む抗体）またはその抗原結合断片を形成するように会合する軽鎖／軽鎖可変ドメイン及び重鎖／重鎖可変ドメインを安定に発現する。
【０３４８】
ある特定の態様では、ウイルスの複製起源を含む発現ベクターを用いるよりむしろ、宿主細胞を、適切な発現調節エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）により制御されたＤＮＡ、及び選択可能なマーカーで形質転換することができる。外来ＤＮＡ／ポリヌクレオチドの導入後、操作された細胞は、富栄養培地中で１〜２日間成長させることができ、次いで選択培地に交換される。組換えプラスミド内の選択可能なマーカーは、選択への耐性を付与し、細胞が、その染色体中にプラスミドを安定に組み込み、焦点（これは、クローニングし、細胞株に拡張することができる）を形成するように成長することを可能にする。この方法は、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその断片を発現する細胞株を操作するのに有利に使用することができる。かかる操作された細胞株は、抗体分子と直接または間接的に相互作用する組成物のスクリーニング及び評価で特に有用となり得る。
【０３４９】
それぞれ、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−、またはａｐｒｔ−細胞で用いることができる単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９７７）Ｃｅｌｌ  １１（１）：２２３−３２）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ  ＥＨ  ＆  Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ  Ｗ（１９６２）ＰＮＡＳ  ４８（１２）：２０２６−２０３４）、及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）Ｃｅｌｌ  ２２（３）：８１７−２３）遺伝子を含むが、これらに限定されない、いくつかの選択系を使用することができる。また、以下の遺伝子に対する選択に基づいて代謝拮抗剤耐性を使用することができる：メトレキサートへの耐性を与えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８０）ＰＮＡＳ  ７７（６）：３５６７−７０、Ｏ’Ｈａｒｅ  Ｋ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８：１５２７−３１）；ミコフェノール酸への耐性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ  ＆  Ｂｅｒｇ  Ｐ（１９８１）ＰＮＡＳ  ７８（４）：２０７２−６）；アミノグリコシドＧ−４１８への耐性を与えるｎｅｏ（Ｗｕ  ＧＹ  ＆  Ｗｕ  ＣＨ（１９９１）Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５、Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ  Ｐ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３２：５７３−５９６、Ｍｕｌｌｉｇａｎ  ＲＣ（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２、及びＭｏｒｇａｎ  ＲＡ  ＆  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＷＦ（１９９３）Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６２：１９１−２１７、Ｎａｂｅｌ  ＧＪ  ＆  Ｆｅｌｇｎｅｒ  ＰＬ（１９９３）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １１（５）：２１１−５）、及びハイグロマイシンへの耐性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅ  ＲＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８４）Ｇｅｎｅ  ３０（１−３）：１４７−５６）。組換えＤＮＡ技術の当該技術分野で一般に知られている方法は、所望の組換えクローンを選択するために日常的に適用することができ、かかる方法は、例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ａｕｓｕｂｅｌ  ＦＭ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９３）、Ｋｒｉｅｇｌｅｒ  Ｍ，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（１９９０）、ならびにＤｒａｃｏｐｏｌｉ  ＮＣ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ．），Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４）の第１２章及び第１３章、Ｃｏｌｂｅ’ｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎ  Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １５０：１−１４に記載されている。
【０３５０】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅により増大させることができる（概説としては、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ  ＣＲ  ＆  Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ  ＣＣＧ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７）を参照されたい）。抗体を発現するベクター系のマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養中に存在する阻害剤のレベルの増加は、マーカー遺伝子のコピーの数を増やすであろう。増幅した領域が抗体遺伝子と関連するため、抗体の産生も増加するであろう（Ｃｒｏｕｓｅ  ＧＦ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８３）Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ３：２５７−６６）。
【０３５１】
宿主細胞に、本明細書に記載の２つ以上の発現ベクター、重鎖由来ポリペプチドをコードする第１のベクター及び軽鎖由来ポリペプチドをコードする第２のベクターを同時導入することができる。２つのベクターは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能とする同一の選択可能なマーカーを含み得る。宿主細胞は、異なる量の２つ以上の発現ベクターを同時導入することができる。例えば、宿主細胞は、第１の発現ベクターと第２の発現ベクターの比率が１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１２、１：１５、１：２０、１：２５、１：３０、１：３５、１：４０、１：４５、または１：５０のうちのいずれか１つでトランスフェクトされ得る。
【０３５２】
あるいは、重鎖及び軽鎖ポリペプチドの両方をコードし、発現することができる単一ベクターが使用することができる。かかる状況において、軽鎖は、重鎖の前に配置され、過剰量の毒性のない重鎖を回避するべきである（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ  ＮＪ（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：５６２−５６５、及びＫｏｅｈｌｅｒ  Ｇ（１９８０）ＰＮＡＳ  ７７：２１９７−２１９９）。重鎖及び軽鎖についてのコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含むことができる。発現ベクターは、モノシストロン性またはマルチシストロン性であり得る。マルチシストロン性核酸構築物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、もしくはそれ以上、または２〜５、５〜１０、もしくは１０〜２０個の遺伝子／ヌクレオチド配列の範囲内でコードすることができる。例えば、２シストロン性核酸構築物は、以下の順序で、プロモーター、第１の遺伝子（例えば、本明細書に記載の抗体の重鎖）、及び第２の遺伝子、及び（例えば、本明細書に記載の抗体の軽鎖）を含むことができる。かかる発現ベクターでは、両方の遺伝子の転写がプロモーターによって駆動され得る一方で、第１の遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳は、キャップ依存的走査機構によるものであり得、第２の遺伝子由来のｍＲＮＡの翻訳は、例えば、ＩＲＥＳによるキャップ非依存的機構によるものであり得る。
【０３５３】
本明細書に記載の抗体分子が組換え発現によって産生されると、免疫グロブリン分子の精製のために当該技術分野で既知の任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にタンパク質Ａ後の特異抗原に対する親和性による親和性、及びサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、吸収率較差溶解度によって、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準の技法によって精製することができる。さらに、本明細書に記載の抗体は、精製を促進するために、本明細書に記載のまたはさもなければ当該技術分野で既知の異種ポリペプチド配列に融合し得る。
【０３５４】
具体的な実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、単離されるか、または精製される。一般に、単離された抗体は、単離された抗体よりも異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まないものである。例えば、特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗体の調製物は、細胞物質及び／または化学的前駆体を実質的に含まない。「細胞物質を実質的に含まない」という語句は、単離されるか、または組換え産生される、抗体が細胞の細胞成分から分離される抗体の調製物を含む。このようにして、細胞物質を実質的に含まない抗体は、約３０％、２０％、１０％、５％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満（乾燥重量で）の抗体の異種タンパク質（本明細書では「汚染タンパク質」とも称される）及び／または変異型、例えば、抗体または抗体（例えば、抗体断片）の他の異なるバージョンの異なる翻訳後の修飾型を有する抗体の調製物を含む。抗体が組換え産生されるとき、それはまた、一般に、培養培地を実質的に含まない、すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の体積の約２０％、１０％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満を表す。この抗体が化学的合成によって産生されるとき、それは、一般に、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない、すなわち、それは、タンパク質の合成に含まれる化学的前駆体または他の化学物質から分離される。したがって、抗体のかかる調製物は、約３０％、２０％、１０％、または５％（乾燥重量で）未満の化学的前駆体または対象となる抗体以外の化合物を有する。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体は、単離されるか、または精製される。
５．３  薬学的組成物
【０３５５】
生理的に許容される担体、賦形剤または安定剤において所望の精製度を有する本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物が本明細書に提供される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投与量及び濃度で受容者に対して非毒性であり、これらには、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０未満の残基）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン界面活性剤が含まれる。
【０３５６】
具体的な一実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体において、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片、及び任意に１つ以上のさらなる予防または治療薬を含む。具体的な一実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される担体において、有効量の本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片、及び任意に１つ以上の治療薬のさらなる予防を含む。予防または治療薬の例については、以下の項５．４を参照されたい。いくつかの実施形態では、本抗体は、薬学的組成物中に含まれる唯一の活性成分である。本明細書に記載の薬学的組成物は、ＧＩＴＲ活性を増強、誘導、または活性化する、及び感染症等の状態を治療するのに有用であり得る。
【０３５７】
非経口調製物に使用される薬学的に許容される担体としては、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗菌剤、等張剤、緩衝液、抗酸化剤、局所麻酔剤、懸濁化剤及び分散剤、乳化剤、金属イオン封鎖剤またはキレート化剤、ならびに他の薬学的に許容される物質が挙げられる。水性ビヒクルの例としては、塩化ナトリウム注射剤、リンガー注射剤、等張デキストロース注射剤、滅菌水注射剤、デキストロース及び乳酸化リンガー注射剤が挙げられる。非水性非経口ビヒクルとしては、植物由来の固定油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、及びピーナツ油が挙げられる。静菌性または静真菌性の濃度の抗菌剤は、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチル、及びプロピルｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、ベンズアルコニウムクロリド、及びベンゼトニウムクロリドを含む、多回投与容器中にパッケージされた非経口調製物に添加され得る。等張剤としては、塩化ナトリウム及びデキストロースが挙げられる。緩衝液としては、フォスフェート及びシトレートが挙げられる。抗酸化剤としては、重硫酸ナトリウムが挙げられる。局所麻酔剤としては、塩酸プロカインが挙げられる。懸濁化剤及び分散剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、及びポリビニルピロリドンが挙げられる。乳化剤としては、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）が挙げられる。金属イオンの金属イオン封鎖剤またはキレート化剤としては、ＥＤＴＡが挙げられる。薬学的担体としてはまた、水混和性ビヒクルのためのエチルアルコール、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコール、ならびにｐＨ調節のための水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸が挙げられる。
【０３５８】
薬学的組成物は、対象への任意の投与経路のために配合してもよい。投与経路の具体的な例としては、鼻腔内、経口、肺、経皮、皮内、及び非経口が挙げられる。皮下、筋肉内、または静脈内注射のいずれかを特徴とする非経口投与も本明細書で企図される。注射物質は、従来の形態、液体溶液または懸濁液のいずれか、注射前の液体中の溶液または懸濁液に適した固体形態、またはエマルジョンとして調製することができる。注射物質、溶液、及びエマルジョンはまた、１つ以上の賦形剤を含む。好適な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、またはエタノールである。さらに、所望であれば、投与すべき薬学的組成物はまた、少量の非毒性補助物質、例えば湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、溶解度増強剤、及び他のかかる薬剤、例えば、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレアート、及びシクロデキストリンを含むことができる。
【０３５９】
抗体の非経口投与の調製物としては、注射可能な滅菌溶液、使用直前に溶媒と混合することができる、皮下注射錠剤を含む凍結乾燥粉末等の滅菌乾燥溶解性生成物、注射可能な滅菌懸濁液、使用直前に溶媒と混合することができる滅菌乾燥不溶性生成物、及び滅菌エマルジョンが挙げられる。溶液は、水性であっても、非水性であってもよい。
【０３６０】
静脈内に投与される場合、好適な担体としては、生理食塩水またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ならびに増粘剤及び可溶化剤、例えば、グルコース、ポリエチレングリコール、及びポリプロピレングリコール、ならびにそれらの混合物を含む溶液が挙げられる。
【０３６１】
抗体を含む局所混合物は、局所及び全身投与について記載されるように調製される。結果として生じる混合物は、溶液、懸濁液、エマルジョン等であり得、クリーム、ゲル、軟膏、エマルジョン、溶液、エリキシル、ローション、懸濁液、チンキ剤、ペースト、泡沫、エアロゾル、潅注、スプレー、坐薬、包帯、皮膚パッチ、または局所投与用に適した任意の他の製剤として配合され得る。
【０３６２】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、局所適用、例えば吸入による、エアロゾルとして配合され得る（例えば、米国特許第４，０４４，１２６号、同第４，４１４，２０９号、及び同第４，３６４，９２３号を参照されたい、これらは炎症性疾患、特に喘息の治療に有用なステロイドの送達のためのエアロゾルを記述している）。気道への投与用のこれらの製剤は、噴霧器用のエアロゾルまたは溶液の形態で、または吸入のための超微粒粉末として、単独で、またはラクトース等の不活性担体と組み合わせることができる。そのような場合、製剤の粒子は、一実施形態では、５０ミクロン未満、一実施形態では、１０ミクロン未満の直径を有するであろう。
【０３６３】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片は、局所または局部適用のために、例えば、皮膚及び目の中等の粘膜への局部適用のために、ゲル、クリーム、及びローションの形態で、ならびに目への適用のためにまたは嚢内もしくは髄腔内への適用のために配合され得る。局所投与は、経皮送達のために、また、目もしくは粘膜への投与のために、または吸入治療のためにも企図される。単独でまたは他の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせたこの抗体の点鼻薬も投与することができる。
【０３６４】
イオン泳動及び電気泳動装置を含む、経皮パッチは、当業者に公知であり、抗体を投与するために使用することができる。例えば、かかるパッチは、米国特許第６，２６７，９８３号、同第６，２６１，５９５号、同第６，２５６，５３３号、同第６，１６７，３０１号、同第６，０２４，９７５号、同第６，０１０７１５号、同第５，９８５，３１７号、同第５，９８３，１３４号、同第５，９４８，４３３号、及び同第５，８６０，９５７号に開示されている。
【０３６５】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む薬学的組成物は、凍結乾燥粉末であり、これは、投与のために溶液、エマルジョン、及び他の混合物として再構成させることができる。それはまた、固体またはゲルとして再構成及び配合してもよい。凍結乾燥粉末は、好適な溶媒中に本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片、またはその薬学的に許容される誘導体を溶解することによって調製される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥粉末は、滅菌である。溶媒は、粉末または粉末から調製した再構成溶液の安定性または他の薬理学的要素を改善する賦形剤を含有してもよい。使用してもよい賦形剤としては、デキストロース、ソルビタール、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、または他の好適な薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。溶媒はまた、緩衝液、例えば、シトレート、ナトリウム、もしくはリン酸カリウムまたは当業者に公知の他のかかる緩衝液、一実施形態では、約中性ｐＨで含有してもよい。その後溶液を滅菌濾過し、続いて当業者に既知の標準の条件下で凍結乾燥させることにより、所望の製剤が得られる。一実施形態では、結果として生じる溶液は、凍結乾燥用バイアルに分配されるであろう。各バイアルは、単回用量または多回用量の化合物を含むであろう。凍結乾燥は、適切な条件下、例えば約４℃〜室温で保存することができる。
【０３６６】
この凍結乾燥粉末の注射用水による再構成は、非経口投与で使用するための製剤を提供する。再構成のために、この凍結乾燥粉末を滅菌水または他の好適な担体に添加する。この正確な量は、選択された化合物に応じて異なる。かかる量は、実験的に決定され得る。
【０３６７】
本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片及び本明細書に提供される他の組成物はまた、特定の組織、受容体、または治療されるべき対象の体の他の部分に標的されるように配合され得る。多くのかかる標的方法は、当業者に公知である。すべてのかかる標的方法は、本組成物で使用するために本明細書で企図される。標的方法の非限定的な例については、例えば、米国特許第６，３１６，６５２号、同第６，２７４，５５２号、同第６，２７１，３５９号、同第６，２５３，８７２号、同第６，１３９，８６５号、同第６，１３１，５７０号、同第６，１２０，７５１号、同第６，０７１，４９５号、同第６，０６０，０８２号、同第６，０４８，７３６号、同第６，０３９，９７５号、同第６，００４，５３４号、同第５，９８５，３０７号、同第５，９７２，３６６号、同第５，９００，２５２号、同第５，８４０，６７４号、同第５，７５９，５４２号、及び同第５，７０９，８７４号を参照されたい。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片が腫瘍に標的される。
【０３６８】
インビボでの投与のために使用される組成物は、滅菌であり得る。これは、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成される。
５．４  使用及び方法
５．４．１  治療上の使用及び方法
【０３６９】
一態様では、対象における１つ以上の免疫機能または応答を調節するための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片、またはその組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提示される。具体的な一態様では、対象における１つ以上の免疫機能または応答を活性化、増強、または誘導するための方法であって、それを必要とする対象に、抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片、またはその組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提示される。具体的な一実施形態では、１つ以上の免疫機能または応答を活性化または増強することが望ましい、疾患を予防及び／または治療するための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提示される。他の具体的な実施形態では、本方法は、併用療法を含み、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片を、以下に記載されるもの等の別の療法と組み合わせて対象に投与して、１つ以上の免疫機能または応答を活性化または増強する。ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、抗原組成物と組み合わせてアジュバントとして投与される。ある特定の実施形態では、抗原組成物は、癌または腫瘍抗原（例えば、白血病においてｂｃｒ／ａｂｌ抗原、子宮頸癌と関連する発癌ウイルスのＨＰＶＥ６及びＥ７抗原、黒色腫におけるもしくはそれと関連するＭＡＧＥ１及びＭＺ２−Ｅ抗原、または乳癌におけるもしくはそれと関連するＭＶＣ−１及びＨＥＲ−２抗原）を含む。いくつかの実施形態では、抗原組成物は、病原体由来の抗原（例えば、ウイルス抗原、寄生虫抗原、細菌性抗原、または真菌抗原）を含む。ウイルス抗原の例としては、インフルエンザウイルスの核タンパク質（ＮＰ）、ＨＩＶ抗原（例えば、ＨＩＶのｇａｇタンパク質、ＨＩＶ  ｅｎｖタンパク質（例えば、ｇｐ１２０及び／またはｇｐ４１）、ＨＩＶ  Ｎｅｆタンパク質、ＨＩＶ  Ｐｏｌタンパク質、ＨＩＶ逆転写酵素、またはＨＩＶプロテアーゼ）、エボラウイルス（ＥＢＯＶ）抗原（例えば、ＥＢＯＶ  ＮＰまたはｇｌｙｃｏタンパク質）、天然痘抗原、Ａ、Ｂ、またはＣ型肝炎ウイルス抗原、ヒトライノウイルス抗原、単純ヘルペスウイルス抗原、ポリオウイルス抗原、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）抗原、狂犬病ウイルス抗原、ロタウイルス抗原、コクサッキーウイルス抗原、及びヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）抗原が挙げられる。細菌性抗原の例としては、百日咳菌（例えば、Ｐ６９タンパク質及び線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）抗原）、コレラ菌、炭疽菌、ならびに大腸菌熱不安定毒素Ｂサブユニット（ＬＴ−Ｂ）、大腸菌Ｋ８８抗原、及び腸毒素産生性大腸菌抗原等の大腸菌抗原が挙げられる。
【０３７０】
本明細書で使用される場合、「組み合わせ」という用語は、２つ以上の治療法（例えば、１つ以上の予防及び／または治療薬）の使用を指す。「組み合わせ」という用語の使用は、治療法が疾患または障害を有する対象に投与される順序、または投与の経路を制限しない。第１の治療法（例えば、予防または治療薬）は、疾患または障害またはその症状を有する対象に対する第２の治療法（例えば、予防または治療薬）の投与前（例えば、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間前）、それと同時に、あるいは投与後（例えば、５分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間、または１２週間後）に投与することができる。ある特定の実施形態では、対象に、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて投与される治療法（例えば、薬剤）は、同じ組成物（例えば、薬学的組成物）において投与される。他の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて投与される治療法（例えば、薬剤）は、対象に、異なる組成物（例えば、２つ以上の薬学的組成物）において投与される。２つの組成物は、同じまたは異なる回数で及び／または同じまたは異なる投与経路によって投与されてもよい。特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ワクチン組成物によって引き起こされた免疫応答を誘導、活性化、または増強するために、対象にワクチン組成物と組み合わせて投与される。一実施形態では、ワクチン組成物は、癌ワクチンである。癌ワクチンは、個体または対象における１つ以上の癌抗原に対する免疫応答を刺激または引き起こす、薬剤、分子、または免疫原である。癌抗原は、腫瘍関連ペプチド、または免疫応答を誘導もしくは増強し、及び腫瘍関連遺伝子由来であり、タンパク質をコードするタンパク質であり得、これには、例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ａ１３、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＢＡＧＥ−１、ＲＡＧＥ−１、ＬＢ３３／ＭＵＭ−１、ＰＲＡＭＥ、ＮＡＧ、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥＸｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＡＧＥ−Ｂ４）、チロシナーゼ、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、Ｍｅｌａｎ−Ａ、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＬＡＧＥ−１、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１、ＣＴ−７、アルファ−アクチニン−４、Ｂｃｒ−Ａｂｌ融合タンパク質、Ｃａｓｐ−８、ベータ−カテニン、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ｃｏａ−１、ｄｅｋ−ｃａｎ融合タンパク質、ＥＦ２、ＥＴＶ６−ＡＭＬ１融合タンパク質、ＬＤＬＲ−フコシル転移酵素ＡＳ融合タンパク質、ＨＬＡ−Ａ２、ＨＬＡ−Ａ１１、ｈｓｐ７０−２、ＫＩＡＡＯ２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ−２、及び３、ｎｅｏ−ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ−９、ｐｍｌ−ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラス（Ｔｒｉｏｓｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｉｓｏｍｅｒａｓ）、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ−Ｋ−ｍｅｌ、Ｌａｇｅ−１、Ｍａｇｅ−Ｃ２、ＮＡ−８８、／Ｌａｇｅ−２、ＳＰ１７、及びＴＲＰ２−Ｉｎｔ２、（ＭＡＲＴ−Ｉ）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ  １７）、ＴＲＰ−１、ＴＲＰ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−３、ｐ１５（５８）、ＣＥＡ、ＮＹ−ＥＳＯ（ＬＡＧＥ）、ＳＣＰ−１、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、ｐ５３、Ｈ−Ｒａｓ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタイン・バーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６及びＥ７、ＴＳＰ−１８０、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｎｍ−２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ  １９−９、ＣＡ  ７２−４、ＣＡＭ  １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、ベータ−カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ−１、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、アルファ−フェトタンパク質、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ  １２５、ＣＡ  １５−３（ＣＡ  ２７．２９￥ＢＣＡＡ）、ＣＡ  １９５、ＣＡ  ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８￥ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ￥１７０Ｋ、ＮＹＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質￥シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、及びＴＰＳが挙げられる。癌ワクチンは、免疫系によって癌細胞の認識を増加させるか、またはリンパ球の活性化を通して抗腫瘍応答を増強するのに有用である。エフェクターＴ細胞は、無傷腫瘍細胞もしくは抽出物による免疫化、精製抗原、ＭＨＣ及びＴｃＲの両方への結合に最適化されたペプチドの使用、免疫優性ペプチド、腫瘍抗原をコードするＤＮＡ、腫瘍抗原または抗原パルス抗原提示細胞をコードする組換えウイルスによってうまく生成されている。いくつかの実施形態では、免疫認識の増強及び細胞拡張は、共刺激剤及びサイトカインの使用、サイトカインを発現するためのベクターの注入、インビトロ抗原パルス及び活性化した自家性樹状細胞、陰性調節剤を遮断することによって（例えば、免疫チェックポイント標的薬を用いて）、ならびにＴ制御性細胞を枯渇させることによって改善され得る。
【０３７１】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、熱ショックタンパク質ベースの腫瘍ワクチンまたは熱ショックタンパク質ベースの病原体ワクチンと組み合わせて対象に投与される。本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて使用するための熱ショックタンパク質ベースの腫瘍ワクチンまたは熱ショックタンパク質ベースの病原体ワクチンに関しては、以下の項５．４．１．１及び５．４．１．２を参照されたい。
【０３７２】
特定の一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、抗ＧＩＴＲ抗体のアゴニスト効果を誘導、活性化、または増強するためのアジュバントと組み合わせて投与される。様々なアジュバントを、治療状況に応じて使用することができる。適切なアジュバントの非限定的な例としては、例えば、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、モンタニドＩＳＡ（不完全セピックアジュバント）、Ｒｉｂｉアジュバント系（ＲＡＳ）、Ｔｉｔｅｒ  Ｍａｘ、ムラミルペプチド、Ｓｙｎｔｅｘアジュバント製剤（ＳＡＦ）、ａｌｕｍ（水酸化アルミニウム及び／またはリン酸アルミニウム）、アルミニウム塩アジュバント、Ｇｅｒｂｕ（登録商標）アジュバント、ニトロセルロースを吸収した抗原、カプセル化または封入された抗原、例えば、サポニン、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＱＳ−２１等の免疫刺激複合体が挙げられる。他のアジュバントとしては、ＣｐＧオリゴヌクレオチド及び二本鎖ＲＮＡ分子、例えば、ポリ（Ａ）、ポリ（Ｕ）が挙げられる。また、上記のアジュバントの組み合わせも使用してもよい。いくつかの実施形態では、１つ以上のアジュバントは、それぞれ、米国特許第６，６４５，４９５号、同第７，０２９，６７８号、及び同第７，８５８，５８９号に開示される、サポニン、例えば、ＱＳ−２１、ＱＳ−２１、及び３  Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３  Ｄ−ＭＰＬ）、ならびに免疫刺激オリゴヌクレオチド及びサポニンアジュバントである。
【０３７３】
ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞（例えば、エフェクターＴ細胞等のＴ細胞）の刺激を増強するための方法であって、エクスビボでＧＩＴＲ応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートすることを含む、方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞を、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とインキュベーション前に、それと同時に、またはその後に、刺激剤（例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートする。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）は、対象（例えば、ヒト）から単離された。いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片で刺激した後のＧＩＴＲ応答性細胞は、対象（例えば、ヒト）に投与される。ＧＩＴＲ応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）は、これらの細胞が最初に単離された対象と同じまたは異なる対象に投与してもよい。
【０３７４】
いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を活性化するための方法であって、ＧＩＴＲ応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートすることを含む、方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とインキュベーション前に、それと同時にまたはその後に、刺激剤（例えば、Ｔ細胞受容体複合体刺激剤、例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）等、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートする。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）は、対象（例えば、ヒト）から単離された。ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片を活性化した後のＧＩＴＲ応答性細胞は、対象（例えば、ヒト）に投与される。ＧＩＴＲ応答性細胞（例えば、Ｔ細胞）は、これらの細胞が最初に単離された対象と同じまたは異なる対象に投与してもよい。
【０３７５】
いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲに応答する細胞（すなわち、ＧＩＴＲ応答性細胞）は、細胞培養中で本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とインキュベートされ、対象に、免疫機能を増強する（例えば、Ｔ細胞等のＧＩＴＲ応答性細胞の拡張／増殖を増強する、及び／またはＴ細胞エフェクター機能を増強する）、及び／または癌を治療する、及び／または感染症を予防もしくは治療するために投与される。癌及び感染症の例は、本明細書に提供される。例えば、例示の方法については、以下の実施例７を参照されたい。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞は、エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋）である。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞は、対象から単離される。いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞は、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とインキュベーション前に、ＧＩＴＲの発現について査定される。ある特定の実施形態では、ＧＩＴＲ応答性細胞は、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とインキュベーション前に、それと同時にまたはその後に、マイトジェン（例えば、Ｔ細胞マイトジェン、例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）等、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体）とインキュベートする。ＧＩＴＲ応答性細胞は、例えば、５分間、１０分間、１５分間、３０分間、４５分間、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８時間、１２時間、１８時間、２４時間またはそれ以上、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とインキュベートしてもよい。ある特定の実施形態では、対象に投与されるＧＩＴＲ応答性細胞は、この対象に由来した（すなわち、ＧＩＴＲ応答性細胞は自家性である）。他の実施形態では、対象に投与されるＧＩＴＲ応答性細胞は、異なる対象に由来した。抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とのインキュベーション後に、ＧＩＴＲ応答性細胞は、当業者に既知の任意の経路を介して対象に局所または全身に投与してもよい（例えば、皮下、静脈内、もしくは筋肉内投与、または腫瘍内投与等の非経口投与）。ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とのインキュベーション後に、対象に投与されるＧＩＴＲ応答性細胞の好適な用量は、少なくとも１００、２００、３００、４００、５００、７００、１，０００、５，０００、１０，０００、２５，０００、５０，０００、１００，０００、１×１０６、１×１０７、または１×１０８個の細胞であってもよい。抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とのインキュベーション後に、ＧＩＴＲ応答性細胞は、１、２、３、４、５、６、７、８回またはそれ以上投与してもよい。抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片とのインキュベーション後に、対象に投与されるＧＩＴＲ応答性細胞の頻度及び用量は、例えば、患者の状態を含む、いくつかの要因によって異なるであろう。別の実施形態では、対象におけるＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）の拡張を増強するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。別の実施形態では、対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の拡張を増強するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。別の実施形態では、対象におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の拡張を増強するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、この対象は、ヒトである。
【０３７６】
別の実施形態では、対象におけるＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）及び／またはＴ細胞エフェクター機能を増強するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。別の実施形態では、対象におけるＣＤ８＋Ｔ細胞及び／またはＴ細胞エフェクター機能を増強するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。別の実施形態では、対象におけるＣＤ４＋Ｔ細胞及び／またはＴ細胞エフェクター機能を増強するための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、この対象は、ヒトである。
【０３７７】
別の実施形態では、Ｔ制御性細胞の拡張よりもエフェクターＴ細胞を優先的に拡張させるための方法であって、エクスビボでＴ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片とインキュベートすることを含む、方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ制御性細胞よりもエフェクターＴ細胞を１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％またはそれ以上拡張させる。いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ制御性細胞よりもエフェクターＴ細胞を１０％〜２０％、１５％〜２５％、２５％〜５０％、３０％〜６０％、５０％〜７５％または６５％〜８５％拡張させる。エフェクターＴ細胞及びＴ制御性細胞は、以下の実施例に開示されるもの等の細胞表面マーカーによって互いに区別することができる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、対象（例えば、ヒト）から単離された。ある特定の実施形態では、拡張後のＴ細胞を対象（例えば、ヒト）に投与する。
【０３７８】
別の実施形態では、対象におけるＴ制御性細胞の拡張よりもエフェクターＴ細胞を優先的に拡張させるための方法であって、その対象に有効量の本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、またはその組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ制御性細胞よりもエフェクターＴ細胞を１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％またはそれ以上拡張させる。いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、Ｔ制御性細胞よりもエフェクターＴ細胞を１０％〜２０％、１５％〜２５％、２５％〜５０％、３０％〜６０％、５０％〜７５％または６５％〜８５％拡張させる。エフェクターＴ細胞及びＴ制御性細胞は、以下の実施例に開示されるもの等の細胞表面マーカー及び／または細胞内マーカーによって互いに区別することができる。具体的な一実施形態では、この対象は、ヒトである。
【０３７９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体または抗原結合断片、またはその組成物による対象の治療により、以下の効果、（ｉ）疾患またはそれに関連する症状の重症度の減少または改善、（ｉｉ）疾患に関連する症状の持続時間の減少、（ｉｉｉ）疾患またはそれに関連する症状の進行の抑制、（ｉｖ）疾患またはそれに関連する症状の退行、（ｖ）患者に存在する疾患に関連する症状の発症または発病の防止、（ｖｉ）疾患に関連する症状の再発の抑制、（ｖｉｉ）対象の入院の減少、（ｖｉｉｉ）入院期間の長さの減少、（ｉｘ）疾患を有する対象の生存率の増加、（ｘ）疾患に関連する症状の数の減少、ならびに（ｘｉ）別の療法の治療効果（複数可）の増強、改善、補充、相補、または増大、のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上が得られる。代替の一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、感染症等の疾患を予防するために使用される。
【０３８０】
いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片、またはその組成物は、対象に、免疫治療薬と組み合わせて投与される。本明細書に開示される治療剤と組み合わせて使用するための免疫治療薬としては、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標）として販売されている）等のＨｅｒ２／ｎｅｕ受容体抗体、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標）ＭａｂＣａｍｐａｔｈ（登録商標）またはＣａｍｐａｔｈ−１Ｈとして販売されている）等の抗ＣＤ５２抗体、カリケアマイシンに結合したゲムツズマブ（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標）として販売されている）等の抗ＣＤ３３抗体、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）及びＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）として販売されている）等の抗ＣＤ２０抗体、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）として販売されている）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）として販売されている）またはアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）として販売されている）等の抗ＴＮＦα抗体、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）として販売されている）等の可溶性ＴＮＦＲ２分子、バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）として販売されている）等のＩＬ−２受容体のＣＤ２５鎖に対する抗体、ヒト化ＩｇＧ１抗ヒトＣＤ４０抗体（ＳＧＮ−４０）等の抗ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ抗体、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ（登録商標））等のＴｏｌｌ様受容体アゴニスト、ＣｐＧ、一本鎖ＲＮＡ、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、ＣＬ０８７（ＴＬＲ７特異的リガンド）、ロクソリビン、ポリイノシンポリシチジル酸、フラジェリン、レシキモド、イミキモド、ガーディキモド、ムラミルジペプチド、ムラブチド、ペプチドグリカン、及びムラミルジペプチド等のＮＯＤリガンド、α−ガラクトシルセラミド（α−ＧａｌＣｅｒ）及びトレイトールセラミド（ＴｈｒＣｅｒ）等のＣＤ１ｄアゴニスト、フレソリムマブ（登録商標）（ＧＣ１００８）等の抗体、阻害性ＴＧＦ−ベータアイソフォーム１、２、もしくは３を標的とする抗体、Ｆｃ融合、ダランテルセプト（Ａｌｋ−Ｆｃ）、及び低分子ＬＹ２１５７２９９（受容体キナーゼ阻害剤）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３８１】
免疫機能の増強によって治療され得る疾患は、癌及び感染症を含む。様々な癌及び感染症が、以下に記載されている。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、癌に関連する状態または抗癌療法（例えば、化学療法または放射線療法等）の投与から生じた状態を治療するために使用することができる。特定の一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、リンパ球減少症を治療または管理するために使用することができる。別の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、患者における１つ以上の免疫細胞集団（例えば、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞等のＴ細胞のエフェクター細胞）の増殖及び／またはエフェクター機能を増加するために、癌と診断された患者に投与される。
【０３８２】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、当該技術分野で公知のアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＰＯＴ、ＥＬＩＳＡ、及び細胞増殖アッセイを用いて、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片を投与しない対象における免疫機能に対して、対象における１つ以上の免疫機能または応答を、少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、もしくは少なくとも１０％、または１０％〜２５％、２５％〜５０％、５０％〜７５％、もしくは７５％〜９５％の範囲内で活性化または増強または誘導する。具体的な一実施形態では、この免疫機能は、サイトカインの産生（例えば、インターフェロン−ガンマ、ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、または形質転換成長因子（ＴＧＦ）−アルファの産生）である。別の実施形態では、この免疫機能は、Ｔ細胞の増殖／拡張であり、これは、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３、ＣＤ４、またはＣＤ８）の細胞発現マーカーの数を検出するために、例えば、フローサイトメトリーによってアッセイされ得る。別の実施形態では、この免疫機能は、抗体の産生であり、これは、例えば、ＥＬＩＳＡによってアッセイされ得る。いくつかの実施形態では、この免疫機能は、エフェクター機能であり、これは、例えば、アッセイまたは当該技術分野で公知の他のアッセイによってアッセイされ得る。別の実施形態では、この免疫機能は、Ｔｈ１応答である。別の実施形態では、この免疫機能は、Ｔｈ２応答である。別の実施形態では、この免疫機能は、メモリー応答である。
【０３８３】
具体的な実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片によって増強または誘導され得る免疫応答の非限定的な例は、エフェクターリンパ球の増殖／拡張（例えば、エフェクターＴリンパ球の数の増加）、エフェクターリンパ球（例えば、エフェクターＴリンパ球）のアポトーシスの阻害、及びＴｒｅｇの抑制である。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片によって増強または誘導された免疫機能は、ＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１及びＴｈ２ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞毒性Ｔリンパ球、アルファ／ベータＴ細胞、及びガンマ／デルタＴ細胞）、Ｂ細胞（例えば、形質細胞）、メモリーＴ細胞、メモリーＢ細胞、腫瘍耐性Ｔ細胞、ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、マクロファージ、単球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、または多形核白血球の数の増殖／拡張またはその活性化である。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、リンパ球の前駆細胞の増殖／拡張を活性化するか、またはその数を増強する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、陰性対照（例えば、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片で処理されない、培養されない、またはそれと接触させない、それぞれの細胞の数）に対して、ＣＤ４＋Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１及びＴｈ２ヘルパーＴ細胞）、ＣＤ８＋Ｔ細胞（例えば、細胞毒性Ｔリンパ球、アルファ／ベータＴ細胞、及びガンマ／デルタ）、Ｂ細胞（例えば、形質細胞）、メモリーＴ細胞、メモリーＢ細胞、腫瘍耐性Ｔ細胞、ＣＤ１２２＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロファージ、単球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、または多形核白血球の数を、およそ少なくとも９９％、少なくとも９８％、少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、少なくとも４５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも３５％、少なくとも３０％、少なくとも２５％、少なくとも２０％、もしくは少なくとも１０％、または１０％〜２５％、２５％〜５０％、５０％〜７５％、もしくは７５％〜９５％の範囲内で増加する。
【０３８４】
特定の実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、ＴＣＲ誘発非依存性のヒトＧＩＴＲを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。具体的な実施形態では、ＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体は、ＴＣＲ誘発非依存性のＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する。ある特定の実施形態では、ＮＦ−κＢの活性は、例えば、以下のステップ、（ａ）抗ＣＤ３抗体の不在下でＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物（例えば、ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ  ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ２Ｐ構築物）及びＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を発現するＴ細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞）を、例えば、１２．５、１０、５、２．５、１．２５、または０．６２５μｇ／ｍＬの抗体濃度の本明細書に記載の抗体またはアイソタイプ対照抗体とインキュベートするステップと、（ｂ）例えばインキュベーションの２、５、６、８、または１８時間後に、例えばＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダー２１００を使用してルシフェラーゼシグナルを読み取るステップであって、アイソタイプ対照抗体に対する陽性ルシフェラーゼシグナルがＮＦ−κＢの活性を示す、読み取るステップと、を含むアッセイにおいて査定され得る。特定の一実施形態では、ルシフェラーゼシグナルは、インキュベーションの５時間後に読み取られる。
【０３８５】
別の実施形態では、ＴＣＲ誘発非依存性のＴ細胞を活性化する方法であって、Ｔ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、方法が本明細書に提供される。特定の実施形態では、ＴＣＲ誘発非依存性のＮＦ−κＢを活性化するか、またはその活性を誘導もしくは増強する方法であって、Ｔ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、方法が本明細書に提供される。ある特定の実施形態では、ＮＦ−κＢの活性は、例えば、以下のステップ、（ａ）抗ＣＤ３抗体の不在下でＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター構築物（例えば、ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ  ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ２Ｐ構築物）及びＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を発現するＴ細胞（例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞）を、例えば、１２．５、１０、５、２．５、１．２５、または０．６２５μｇ／ｍＬの抗体濃度の本明細書に記載の抗体またはアイソタイプ対照抗体とインキュベートするステップと、（ｂ）例えばインキュベーションの２、５、６、８、または１８時間後に、例えばＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダー２１００を使用してルシフェラーゼシグナルを読み取るステップであって、アイソタイプ対照抗体に対する陽性ルシフェラーゼシグナルがＮＦ−κＢの活性を示す、読み取るステップと、を含むアッセイにおいて査定され得る。特定の一実施形態では、ルシフェラーゼシグナルは、インキュベーションの５時間後に読み取られる。
【０３８６】
特定の実施形態では、多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合を増加させる方法であって、Ｔ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、方法が本明細書に提供される。多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合の増加は、例えば、以下のステップ、（ａ）例えばヒトＰＢＭＣを、例えば様々な準最適濃度（例えば、０．３〜５μｇ／ｍＬ）の抗ＣＤ３抗体、及び例えば５μｇ／ｍＬの例えばＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）に免疫特異的に結合する本明細書に記載の抗体またはアイソタイプ対照抗体と、例えば３７℃及び５％ＣＯ２で３〜４日間インキュベートするステップと、（ｂ）細胞を、例えばブレフェルジンＡで、例えば３７℃及び５％ＣＯ２で６時間処理するステップと、（ｃ）例えば抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、及び抗ＣＤ８α抗体を使用して、この細胞の表面を染色するステップと、（ｄ）例えば抗ＩＦＮγ抗体及び抗ＴＮＦα抗体を使用して、細胞内染色するステップと、（ｅ）アイソタイプ対照抗体に対する多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞の割合を決定するステップと、を含むアッセイにおいて査定され得る。具体的な実施形態では、この多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）Ｔ細胞は、多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）ＣＤ４＋Ｔ細胞及び多機能性（ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋）ＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群から選択される。
【０３８７】
特定の実施形態では、活性化されたＴ細胞におけるＯＸ４０及びＰＤ−１の表面発現を増加させる方法であって、Ｔ細胞を本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、方法が本明細書に提供される。活性化されたＴ細胞におけるＯＸ４０及びＰＤ−１の表面発現を、本明細書に記載の抗体なしの活性化されたＴ細胞のＯＸ４０及びＰＤ−１の表面発現に対して、本明細書に記載の方法及び／または当業者に既知の方法によって査定される、少なくとも約１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、３．５倍、４倍、４．５倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、または１０００倍増加させ得る。
５．４．１．１  癌
【０３８８】
具体的な一態様では、癌を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提示される。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片またはその組成物は、対象に投与される唯一の活性剤である。
【０３８９】
本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の癌細胞の増殖への影響は、放射性標識チミジンの取り込みを測定するアッセイ等による日常的なアッセイによって検出され得る。あるいは、細胞生存は、細胞溶解時に放出される安定な細胞質内酵素である乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）を測定するアッセイによって、または細胞溶解時の［５１Ｃｒ］の放出によって測定され得る。一実施形態では、ニュートラルレッド、トリパンブルー、またはＡＬＡＭＡＲ（商標）ブルー等の染色を取り込む細胞の能力または不能によって測定される壊死（Ｐａｇｅ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９３）Ｉｎｔｌ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ３：４７３−６）。かかるアッセイでは、細胞を、染色を含有する培地中でインキュベートし、これらの細胞を洗浄し、染色の細胞取り込みを反映する残りの染色を分光光度法で測定する。
【０３９０】
別の実施形態では、この染色は、タンパク質への結合が細胞毒性の尺度として使用され得るスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）である（Ｓｋｅｈａｎ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９０）Ｊ  Ｎａｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ  ８２：１１０７−１２）。さらに別の実施形態では、ＭＴＴ等のテトラゾリウム塩は、生存している細胞を検出するが、死滅細胞を検出しないことによって、哺乳動物の細胞生存及び増殖に関する定量的比色分析アッセイにおいて使用される（例えば、Ｍｏｓｍａｎｎ  Ｔ（１９８３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６５：５５−６３を参照されたい）。
【０３９１】
他の実施形態では、アポトーシスを起こした細胞は、培養物の付着した及び「浮遊している」分画の両方において測定される。両方の分画は、上清を除去し、付着した細胞をトリプシン処理し、遠心分離洗浄ステップ（１０分間、２０００ｒｐｍ）後に、両方の調製物を合わせることによって回収される。有意な量のアポトーシスを得るために腫瘍細胞培養をスリンダク及び関連化合物で処理するプロトコルは、文献に記載されている（例えば、Ｐｉａｚｚａ  ＧＡ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５５：３１１０−６を参照されたい）。この方法の特徴は、浮遊している細胞及び付着した細胞の両方の回収、アポトーシスを観察するための最適処理時間及び用量範囲の特定、ならびに最適な細胞培養条件の特定を含む。
【０３９２】
別の実施形態では、アポトーシスは、ＤＮＡ断片化を測定することによって定量化される。ＤＮＡ断片化の定量的なインビトロ決定のための市販の測光法が利用可能である。ＴＵＮＥＬ（断片化されたＤＮＡにおける標識されたヌクレオチドの組み込みを検出する）及びＥＬＩＳＡベースのアッセイを包含する、かかるアッセイの例がＢｉｏｃｈｅｍｉｃａ，（１９９９）２：３４  ３７（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）において記載されている。さらに別の実施形態では、アポトーシスは、形質学的に観察され得る。
【０３９３】
かかるアッセイが行われ得る癌細胞株は、当業者に公知である。アポトーシス、壊死、及び増殖アッセイも、初代細胞、例えば、組織外植片において行われ得る。
【０３９４】
具体的な実施形態では、癌を有する対象（いくつかの実施形態では、癌の動物モデル）への本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物の投与により、以下の効果、（ｉ）癌の１つ以上の症状の重症度の減少もしくは改善、（ｉｉ）癌に関連する１つ以上の症状の持続時間の減少、（ｉｉｉ）癌に関連する症状の再発の阻止、（ｉｖ）対象の入院の減少、（ｖ）入院期間の長さの減少、（ｖｉ）対象の生存率の増加、（ｖｉｉ）別の療法の治療効果の増強もしくは改善、（ｖｉｉｉ）癌に関連する１つ以上の症状の発症もしくは発病の抑制、（ｉｘ）癌に関連する症状の数の減少、（ｘ）当該技術分野で公知の方法によって査定される生活の質の改善、（ｘ）腫瘍の再発の抑制、（ｘｉ）腫瘍及び／もしくはそれに関連する１つ以上の症状の退行、（ｘｉｉ）腫瘍及び／もしくはそれに関連する１つ以上の症状の進行の抑制、（ｘｉｉｉ）腫瘍の成長の減少、（ｘｉｖ）腫瘍サイズ（例えば、体積もしくは直径）の低下、（ｘｖ）新たに形成された腫瘍の形成の減少、（ｘｖｉ）初期、局所、及び／もしくは転移性腫瘍の根絶、除去、もしくは制御、（ｘｖｉｉ）転移の数もしくはサイズの低下、（ｘｖｉｉｉ）死亡率の減少、（ｘｉｘ）無再発生存率の増加、（ｘｘ）腫瘍のサイズが、当業者が利用可能な従来の方法、例えば、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、動的造影ＭＲＩ（ＤＣＥ−ＭＲＩ）、Ｘ線、及びコンピュータ断層撮影法（ＣＴ）走査、またはポジトロン放出断層撮影法（ＰＥＴ）走査によって測定される、標準の療法の投与後に、維持され、かつ増加しないか、または腫瘍の増加未満しか増加しない、ならびに／または（ｘｘｉ）患者における寛解の長さの増加、のうちの少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上が得られる。
【０３９５】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の２つ以上の異なる抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片が、対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、癌を治療するために、１つ以上の他の治療薬、例えば、抗癌剤、サイトカイン、細胞ワクチン、または抗ホルモン剤と組み合わせて対象に投与される。
【０３９６】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、癌細胞を破壊するために、例えば、ｘ線、ガンマ線、及び放射線療法の他の源を含む、放射線療法と組み合わせて投与される。具体的な実施形態では、放射線処置を、外部ビーム放射線または遠隔療法として投与し、放射線を遠隔光源から向ける。他の実施形態では、放射線処置を内部治療または近接照射療法として投与し、放射能源を癌細胞または腫瘍量の近くの体内に配置する。一態様では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、抗癌療法のため、免疫不全を有する癌患者における免疫機能または応答を活性化または増強し得る。
【０３９７】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、化学療法と組み合わせて対象に投与される。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、放射線療法または化学療法の前に、その間、またはその後に、使用することができる。化学療法剤の例としては、シクロホスファミド、メトトレキサート、シクロスポリンＡ、レフルノミド、シスプラチン、イホスファミド、タキソール及びパクリタキセル等のタキサン、トポイソメラーゼＩ抑制剤（例えば、ＣＰＴ  １１、トポテカン、９  ＡＣ、及びＧＧ  ２１１）、ゲムシタビン、ビノレルビン、オキサリプラチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、ロイコボリン、ビノレルビン、テモダール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１  デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン類似体、及びシトキサンが挙げられる。
【０３９８】
一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、シクロホスファミド、例えば、低用量のシクロホスファミドと組み合わせて対象に投与される。シクロホスファミド（Ｅｌｏｓｔａｎ、Ｃｙｔｏｘａｎ）は、低用量（例えば、静脈内投与される場合に、最大３００ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、または約３００ｍｇ／ｍ２）で使用される場合、免疫調節機能を有する化学療法剤である。具体的には、低用量のシクロホスファミドは、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋細胞、またはあるいは、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ８−ＦＯＸＰ３＋ＣＤ２５ｈｉＣＤ１２７１ｏｗ細胞）の数及び増殖能を低下させ、免疫抑制ネットワークを調節することができる。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド投与の投与量は、約５０ｍｇ／ｍ２、１００ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、３００ｍｇ／ｍ２、５００ｍｇ／ｍ２またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド投与の投与量は、１０ｍｇ／ｍ２〜１００ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２〜２００ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２〜３００ｍｇ／ｍ２、５０ｍｇ／ｍ２〜５００ｍｇ／ｍ２の範囲内である。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、対象に、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の初期投与前に、またはその後に、１時間、２時間、３時間、４時間、８時間、１２時間、１日間、５日間またはそれ以上の間で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、転移性腎細胞癌（ＲＣＣ）の治療のために、シクロホスファミド、例えば、低用量のシクロホスファミドと組み合わせて使用される。
【０３９９】
一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、Ｔｒｅｇ阻害剤と組み合わせて対象に投与される。Ｔｒｅｇ阻害剤の例は、例えば、臓器移植術において免疫抑制を誘導するために使用されるヒト抗ＣＤ２５モノクローナル抗体であるＺｅｎａｐａｘ（登録商標）（ダクリズマブ）（Ｒｏｃｈｅ）を含む。ダクリズマブは、Ｔｒｅｇ細胞の維持のためのシグナルでもあるＣＤ２５へのＩＬ−２結合を遮断する。Ｔｒｅｇ細胞を阻害する別の薬剤は、腎細胞癌（ＲＣＣ）及び他の癌の治療のために承認された低分子の多標的チロシンキナーゼ阻害剤であるＳｕｔｅｎｔ（登録商標）（スニチニブ）（Ｐｆｉｚｅｒ）である。Ｔｒｅｇを阻害し得る別の薬剤は、インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）の競合的阻害剤である１−メチル−Ｄ−トリプトファン（１−ＭＴ）である。ＩＤＯは、ある特定の正常及び腫瘍性細胞において発現された免疫抑制剤であり、癌患者におけるＴｒｅｇの増加と関連し得る。さらなるＴｒｅｇ阻害剤は、腫瘍微環境に対するＴｒｅｇのトラフィッキングを遮断する薬剤を含む。かかる薬剤は、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２２、及びＣＣＲ４等のある特定のケモカイン及びケモカイン受容体に対する抗体を含み得る。
【０４００】
本明細書に記載の方法に従って使用され得るＴｒｅｇ阻害剤のさらなる例は、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許出願、米国特許出願第ＵＳ２００９／０２１４５３３号、同第ＵＳ２０１２／０１４２７５０号、同第ＵＳ２０１１／０３０５７１３号、同第ＵＳ２００９／０００４２１３号、同第ＵＳ２０１２／０２１９５５９号、同第ＵＳ２０１０／０２７８８４４号、同第ＵＳ２０１３／０３２３２８３号、及び同第ＵＳ２００８／０１５２６６５号に開示されている。
【０４０１】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、手術前に、その間に、またはその後に、対象に投与され得る。
【０４０２】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、免疫調節剤または抗体と組み合わせて対象に投与される。免疫調節剤または抗体は、アジュバント、抗原、抗ＣＤ３（例えば、ＯＫＴ３）、チェックポイント標的薬、または調節剤、またはインターロイキンであり得るが、これらに限定されない。「チェックポイント標的薬」または「チェックポイント調節剤」という用語は、同義に使用することができ、免疫系チェックポイントの制御性分子（例えば、受容体またはリガンドであり得る、例えば、共阻害チェックポイント分子（例えば、タンパク質）または共刺激チェックポイント分子（例えば、タンパク質））の発現または活性を選択的に調節する薬剤を指す。チェックポイント標的薬は、チェックポイント分子のアゴニスト、チェックポイント分子のアンタゴニスト、チェックポイント分子を選択的に標的とするポリペプチド（例えば、ペプチドリガンド、抗体、抗体断片）、チェックポイント分子を選択的に標的とする低分子、ならびにチェックポイント分子の発現または活性を選択的に調節する制御性核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）からなる群から選択され得る。一実施形態では、チェックポイント標的薬は、ＰＤ−１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ１アンタゴニスト、ＰＤ−Ｌ２アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＴＩＭ−３アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＧＩＴＲアゴニスト、及びＯＸ４０アゴニストからなる群から選択され得る。したがって、いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲアゴニスト抗体（例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２もしくはＨｕｍ２３１＃２ｗ）またはその抗原結合断片は、単一の薬学的組成物、または一緒にもしくは別々に投与される別々の薬学的組成物のいずれかにおいて、例えば、抗ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト抗体もしくはその抗原結合断片、または別のチェックポイント標的薬と組み合わせて投与され得る。
【０４０３】
いくつかの実施形態では、対象における癌を治療するための方法であって、その対象に、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片及びＯＸ４０アゴニスト及び／またはＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、ＰＤ−１、及び／もしくはＣＴＬＡ−４アンタゴニスト（複数可）を投与することを含む、方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、癌は、多形性膠芽腫、転移性黒色腫、耐性転移性黒色腫、転移性卵巣癌、転移性腎細胞癌、頭頸部癌、胃癌、食道癌、非小細胞肺癌、小児脳腫瘍、低悪性度星細胞腫、上衣腫、及び髄芽腫から選択される。
【０４０４】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＴＬＡ−４（例えば、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ））、またはＣＴＬＡ−４−Ｉｇ融合タンパク質に特異的に結合する抗体等のＣＴＬＡ−４シグナル変換を（部分的にまたは完全に）阻害する薬剤と組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、転移性卵巣癌の治療のために、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、トレメリムマブまたはイピリムマブ）と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、トレメリムマブまたはイピリムマブ）に耐性を示す転移性卵巣癌の治療のために、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、トレメリムマブまたはイピリムマブ）と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ−４アンタゴニスト（例えば、トレメリムマブまたはイピリムマブ）は、多形性膠芽腫の治療のために使用される。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は再発性である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は新たに診断される。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、非メチル化ＭＧＭＴプロモーターを有する対象における多形性膠芽腫である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、ベバシズマブ治療法が無効である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、ベバシズマブ治療法を受けていない対象における多形性膠芽腫である。本明細書に開示される治療方法に使用され得る抗ＣＴＬＡ−４抗体の例は、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許及び特許出願、国際公開第ＷＯ００／０３７５０４号、同第ＷＯ０１／０１４４２４号、及び同第ＷＯ０９／１００１４０号、米国特許第６，２０７，１５６号及び同第７，０３４，１２１号に開示されている。本明細書に記載の方法に従って使用され得る抗ＣＴＬＡ−４抗体のさらなる例は、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許及び特許出願、米国特許第７，４６５，４４６号、同第８，２６３，０７３号、同第８，１４２，７７８号、及び同第８，２２６，９４６号、ならびに米国特許出願第ＵＳ２００３／０８６９３０号、同第ＵＳ２００５／２２６８７５号、同第ＵＳ２００７／２４３１８４号、同第ＵＳ２００９／１２３４７７号、及び同第ＵＳ２０１１／０４４９５３号に開示されている。
【０４０５】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＬＡＧ−３に特異的に結合する抗体等のＬＡＧ−３シグナル変換を（部分的にまたは完全に）阻害する薬剤と組み合わせて投与される。本明細書に記載の治療方法に使用され得る抗ＬＡＧ−３抗体またはその抗体断片の例は、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許及び特許出願、米国特許第６，１４３，２７３号及び同第６，１９７，５２４号、米国特許公開第ＵＳ２０１１／０１５０８９２号、同第ＵＳ２０１０／０２３３１８３号、及び同第ＵＳ２０１０／１９６３９４号に開示されている。
【０４０６】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＴＩＭ−３に特異的に結合する抗体等のＴＩＭ−３シグナル変換を（部分的にまたは完全に）阻害する薬剤と組み合わせて投与される。本明細書に記載の治療方法に使用され得る抗ＴＩＭ−３抗体または抗体断片の例は、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許及び特許出願、米国特許第７，４７０，４２８号及び同第８，１０１，１７６号、米国特許公開第ＵＳ２０１３／００２２６２３号、同第ＵＳ２０１０／０１００１３１号、同第ＵＳ２０１０／０１００１３１号、及び同第ＵＳ２０１０／０６１９９２号に開示されている。
【０４０７】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＰＤ−１に特異的に結合する抗体等のＰＤ−１シグナル変換を（部分的にまたは完全に）阻害する薬剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体またはその抗体断片は、本明細書に記載の対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１抗体は、ニボルマブ（ＢＭＳ−９３６５５８もしくはＭＤＸ１１０６）またはランブロリズマブ（ＭＫ−３４７５）またはピジリズマブ（ＣＴ−０１１）である。本明細書に開示される治療方法に使用され得る抗ＰＤ−１抗体のさらなる非限定的な例は、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許及び特許出願、米国特許第６，８０８，７１０号、同第７，４８８，８０２号、同第８，００８，４４９号、同第８，１１４，８４５号、及び同第８，１６８，７５７号、米国特許公開第ＵＳ２０１３／０２０２６２３号、及びＰＣＴ公開第ＷＯ２０１３／０３３０９１号に開示されている。
【０４０８】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＰＤ−Ｌ１に特異的に結合する抗体等のＰＤ−１の活性を（部分的にまたは完全に）阻害する薬剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＢＭＳ−９３６５５９、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、ＭＥＤＩ４７３６、またはＭＳＢ００１０７１８Ｃである。本明細書に開示される治療方法に使用され得る抗ＰＤ−Ｌ１抗体のさらなる非限定的な例は、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許及び特許出願、米国特許第８，１６８，１７９号及び米国特許公開第ＵＳ２０１０／０２０３０５６号及び同第ＵＳ２００３／０２３２３２３号に開示されている。別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＰＤ−Ｌ２に特異的に結合する抗体等のＰＤ−Ｌ２の活性を（部分的にまたは完全に）阻害する薬剤と組み合わせて投与される。
【０４０９】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＯＸ−４０に特異的に結合する抗体等のＯＸ−４０シグナル変換を活性化または増強する薬剤と組み合わせて投与される。本明細書に記載の治療方法に使用され得る抗ＯＸ４０抗体またはその抗体断片の例は、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許及び特許出願、米国特許第７，５５０，１４０号、同第７，８０７，１５６号、同第８，２８３，４５０号、同第８，６１４，２９５号、及び同第７，５３１，１７０号、米国特許公開第ＵＳ２０１０／０１９６３５９号、同第ＵＳ２０１０／０１３６０３０号、及び同第ＵＳ２０１３／０１８３３１５号に開示されている。
【０４１０】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、上の項５．４．１を含む本明細書に記載されるワクチン等のワクチンと組み合わせて対象に投与される。具体的な一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、熱ショックタンパク質ベースの腫瘍−ワクチンと組み合わせて対象に投与される。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）は、すべての種にわたって遍在的に見出される高度に保存されたタンパク質のファミリーである。それらの発現は、熱ショック、または毒素への曝露、酸化的ストレス、もしくはグルコース除去を含む、他のストレス形態の結果としてさらに高いレベルまで強力に誘導され得る。分子量に従って、ＨＳＰ−１１０、−９０、−７０、−６０、及び−２８の５つのファミリーに分類されている。ＨＳＰは、Ｔ細胞の活性化をもたらす、マクロファージ及び樹状細胞（ＤＣ）等の抗原提示細胞（ＡＰＣ）中の交差提示経路を通して、免疫原性ペプチドを送達する。ＨＳＰは、腫瘍特異的な免疫力を誘導することが可能な複合体を形成する腫瘍関連抗原ペプチドのシャペロン担体としての機能を果たす。瀕死の状態である腫瘍細胞からの放出時、ＨＳＰ抗原複合体は、抗原が抗腫瘍ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化をもたらすＭＨＣクラスＩ及びクラスＩＩ分子に結合するペプチドへと処理される、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によって取り込まれる。腫瘍調製物に由来のＨＳＰ複合体によって誘発される免疫力は、各対象の癌によって発現される独自の抗原ペプチドレパートリーに対して特異的に誘導される。
【０４１１】
熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）は、抗原ペプチドと非共有結合的に複合体形成された熱ショックタンパク質からなるタンパク質ペプチド複合体である。ＨＳＰＰＣは、先天性免疫応答及び適応性免疫応答の両方を誘発する。具体的な一実施形態では、抗原ペプチド（複数可）は、治療される癌に対して抗原性を示す。ＨＳＰＰＣは、膜受容体（主にＣＤ９１）を介するＡＰＣによってまたはＴｏｌｌ様受容体への結合によって効率よく獲得される。ＨＳＰＰＣの内在性は、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）、単球、ならびにＴｈ１及びＴｈ２媒介性免疫応答の活性化を引き起こすケモカイン及びサイトカイン産生によるＡＰＣの機能的成熟をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法で使用されるＨＳＰＰＣは、抗原ペプチドと複合体形成されたストレスタンパク質のｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、またはｈｓｐ９０ファミリーからの１つ以上の熱ショックタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、ＨＳＰＰＣは、ｈｓｃ７０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｒｐ１７０、ｇｐ９６、カルレティキュリン、またはその２つ以上の組み合わせを含む。
【０４１２】
具体的な一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、癌、例えば、多形性膠芽腫を治療するために、熱ショックタンパク質ペプチド複合体（ＨＳＰＰＣ）、例えば、熱ショックタンパク質ペプチド複合体−９６（ＨＳＰＰＣ−９６）と組み合わせて対象に投与される。ＨＳＰＰＣ−９６は、抗原ペプチドと複合体形成された９６ｋＤａ熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）、ｇｐ９６を含む。ＨＳＰＰＣ−９６は、対象の腫瘍から制作された癌免疫療法剤であり、癌の抗原性の「はっきりした特徴」を含む。いくつかの実施形態では、このはっきりした特徴は、その特定の対象の特異的癌細胞にのみ存在する独自の抗原を含有し、ワクチンの注入は、特異的な癌のはっきりした特徴を有するあらゆる細胞を認識し、攻撃するために、対象の免疫系を刺激するよう意図されている。
【０４１３】
いくつかの実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６は、対象の腫瘍組織から産生される。具体的な一実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ−９６）は、治療される癌の種類の腫瘍またはその転移から産生される。別の具体的な実施形態では、ＨＳＰＰＣ（例えば、ＨＳＰＰＣ−９６）は、治療される対象に対して自家性である。いくつかの実施形態では、この腫瘍組織は、非壊死腫瘍組織である。いくつかの実施形態では、少なくとも１グラム（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、または少なくとも１０グラム）の非壊死腫瘍組織が、ワクチンレジメンを作成するために使用される。いくつかの実施形態では、外科的切除後、非壊死腫瘍組織は、ワクチン調製物で使用する前に冷凍される。いくつかの実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６は、精製技法によって腫瘍組織から単離され、濾過され、注入可能なワクチン用に調製される。いくつかの実施形態では、対象は、６〜１２用量のＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＣＣ−９６を投与される。かかる実施形態では、ＨＳＰＰＣ、例えば、ＨＳＰＰＣ−９６用量は、最初の４回の用量が週１回投与され得、次いで、２〜８回の追加用量が週２回投与され得る。
【０４１４】
いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、転移性黒色腫（例えば、耐性転移性黒色腫）、転移性卵巣癌、または転移性腎細胞癌の治療のために、ＨＳＰＰＣ−９６と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、多形性膠芽腫の治療のために、ＨＳＰＰＣ−９６と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片及びＣＴＬＡ−４アンタゴニストは、多形性膠芽腫の治療のために、ＨＳＰＰＣ−９６と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、治療される対象は、ＨＳＰＰＣの投与前に、（例えば、感染症、例えば、ＨＩＶのため、または抗癌療法（例えば、化学療法放射線）を受けたことがあるという理由により免疫抑制される。
【０４１５】
本明細書に記載の方法に従って使用され得るＨＳＰＰＣのさらなる例は、すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる、以下の特許及び特許出願、米国特許第６，３９１，３０６号、同第６，３８３，４９２号、同第６，４０３，０９５号、同第６，４１０，０２６号、同第６，４３６，４０４号、同第６，４４７，７８０号、同第６，４４７，７８１号、及び同第６，６１０，６５９号を参照されたい。
【０４１６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ＩＤＯ（インドールアミン−（２，３）−ジオキシゲナーゼ）及びＴＤＯ（トリプトファン２，３−ジオキシゲナーゼ）等の免疫調節酵素（複数可）を標的とする化合物と組み合わせて対象に投与される。特定の実施形態では、かかる化合物は、ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔ（Ｉｎｃｙｔｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｆ００１２８７（Ｆｌｅｘｕｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ｉｎｄｏｘｉｍｏｄ（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、及びＮＬＧ９１９（ＮｅｗＬｉｎｋ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）からなる群から選択される。一実施形態では、この化合物は、ｅｐａｃａｄｏｓｔａｔである。別の実施形態では、この化合物は、Ｆ００１２８７である。別の実施形態では、この化合物は、ｉｎｄｏｘｉｍｏｄである。別の実施形態では、この化合物は、ＮＬＧ９１９である。
【０４１７】
癌患者におけるＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇの数の上昇は、宿主有効な抗腫瘍免疫応答を増大させることを防ぐ。さらに、高いＴｒｅｇの頻度は、低減した患者の生存率と関連する（Ｃｕｒｉｅｌ  ＴＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００４）Ｎａｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １０（９）：９４２−９、Ｗｏｏ  ＥＹ  ｅｔ  ａｌ．，（２００２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６８：４２７２−６）。しかしながら、癌患者のＰＢＭＣにおける免疫活性の増強は、制御性Ｔ細胞の枯渇後に観察された（Ｄａｎｎｕｌｌ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １１５（１２）：３６２３−３３）。それらの表面上に高レベルのＧＩＴＲを発現するＴｒｅｇは、抗ＧＩＴＲ抗体であるＤＴＡ−１により枯渇され得る（Ｃｏｅ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ  ５９：１３６７−７７）。一実施形態では、免疫に基づいた戦略は、ＧＩＴＲ陽性のＴｒｅｇ細胞の枯渇を引き起こす、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片によるエクスビボまたはインビボでのＴｒｅｇの枯渇を包含し得る。
【０４１８】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、Ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ  ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ（ＯｎｃｏＶＥＸ  ＧＭ−ＣＳＦ）及びＣＧＴＧ−１０２（Ａｄ５／３−Ｄ２４−ＧＭＣＳＦ）等の腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて対象に投与される。
【０４１９】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、腫瘍成長／転移を阻害するのに有効であるサイトカイン（複数可）と組み合わせて対象に投与される。かかるサイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子としては、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＦＮ、ＴＮＦα、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍｅｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、トロンボポチエン、幹細胞因子、及びエリスロポエチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４２０】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）またはＧｌｉｖａｃ（登録商標）として販売されている）、Ｔａｒｖｅｃａとして現在販売されているエルロチニブ（ＥＧＦ受容体阻害剤）、またはスニチニブ（Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）として販売されている）等の受容体チロシンキナーゼ阻害剤（複数可）と組み合わせて対象に投与される。
【０４２１】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ＴＧＦ−ベータ１、２、または３アイソフォームを標的とし、阻害する抗体であるＦｒｅｓｏｌｉｍｕｍａｂ（登録商標）（ＧＣ１００８）等のアンタゴニストＴＧＦ−ベータ抗体と組み合わせて対象に投与される。
【０４２２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物は、癌を患っているか、または癌と診断された対象に投与される。具体的な一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその組成物は、多形性膠芽腫を患っているか、または多形性膠芽腫と診断された対象に投与される。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は再発性である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は新たに診断される。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、非メチル化ＭＧＭＴプロモーターを有する対象における多形性膠芽腫である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は再発性である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は新たに診断される。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、非メチル化ＭＧＭＴプロモーターを有する対象における多形性膠芽腫である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、ベバシズマブ治療法が無効である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、ベバシズマブ治療法を受けていない対象における多形性膠芽腫である。
【０４２３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される患者は、抗生物質、抗癌剤、または他の生物学的療法／免疫療法で既に治療された患者である。これらの患者の中には、難治性患者、従来の治療法には若年すぎる患者、及び既存の治療法による管理または治療にもかかわらずウイルス感染を再発する患者が存在する。
【０４２４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物を投与される対象は、抗体またはその組成物の投与前に、治療法を受けていない。他の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物は、抗体またはその組成物の投与前に、治療法を受けていない対象に投与される。
【０４２５】
ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物は、免疫抑制療法を受けているか、またはそれから回復している対象に投与される。ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその組成物は、癌及びＧＩＴＲＬを発現する癌細胞を有する対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法に従って治療される対象は、（例えば、感染症、例えば、ＨＩＶのため、または抗癌療法（例えば、化学療法放射線）を受けたことがあるという理由により免疫抑制される。
【０４２６】
本明細書に記載されるように、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＯＸ４０、ＣＤ２５、及びＰＤ−１を含むタンパク質の表面発現に影響を及ぼす。したがって、ある特定の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物は、ＯＸ４０、ＣＤ２５、またはＰＤ−１に結合する抗体またはその抗原結合断片の投与前に投与される。
【０４２７】
アンタゴニストＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、投与時に対象におけるＰＤ−１の発現に対して、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片が対象におけるＰＤ−１の表面発現を増加させたときに投与され得る。例えば、アンタゴニストＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体の投与から少なくとも１２時間、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、または少なくとも７日間後に投与され得る。アンタゴニストＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の投与から１２時間〜２週間、１日間〜２週間、２日間〜２週間、または３日間〜２週間後に投与され得る。アンタゴニストＰＤ−１抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の投与から１２時間〜１週間、１日間〜１週間、２日間〜１週間、または３日間〜１週間後に投与され得る。
【０４２８】
アゴニストＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片は、投与時に対象におけるＯＸ４０の発現に対して、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片が対象におけるＯＸ４０の表面発現を増加させたときに投与され得る。例えば、アゴニストＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体の投与から少なくとも１２時間、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、または少なくとも７日間後に投与され得る。アゴニストＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の投与から１２時間〜２週間、１日間〜２週間、２日間〜２週間、または３日間〜２週間後に投与され得る。アゴニストＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の投与から１２時間〜１週間、１日間〜１週間、２日間〜１週間、または３日間〜１週間後に投与され得る。
【０４２９】
抗ＣＤ２５抗体またはその抗原結合断片は、投与時に対象におけるＣＤ２５の発現に対して、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片が対象におけるＣＤ２５の表面発現を増加させたときに投与され得る。例えば、抗ＣＤ２５抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体の投与から少なくとも１２時間、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、または少なくとも７日間後に投与され得る。抗ＣＤ２５抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の投与から１２時間〜２週間、１日間〜２週間、２日間〜２週間、または３日間〜２週間後に投与され得る。抗ＣＤ２５抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の投与から１２時間〜１週間、１日間〜１週間、２日間〜１週間、または３日間〜１週間後に投与され得る。
【０４３０】
アンタゴニストＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体または抗原結合断片の投与後に投与され得る。例えば、アンタゴニストＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体の投与から少なくとも１２時間、少なくとも１日間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、または少なくとも７日間後に投与され得る。アンタゴニストＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の投与から１２時間〜２週間、１日間〜２週間、２日間〜２週間、または３日間〜２週間後に投与され得る。アンタゴニストＣＴＬＡ−４抗体またはその抗原結合断片は、アゴニストＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片の投与から１２時間〜１週間、１日間〜１週間、２日間〜１週間、または３日間〜１週間後に投与され得る。
【０４３１】
本明細書に記載の方法に従って治療され得る癌の例としては、Ｂ細胞リンパ腫（例えば、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫）、基底細胞癌、膀胱癌、芽細胞腫、脳転移、乳癌、バーキットリンパ腫、癌腫（例えば、（例えば、胃食道接合部の）腺癌）、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌（結腸癌及び直腸癌）、子宮内膜癌、食道癌、ユーイング肉腫、濾胞性リンパ腫、胃癌、胃食道接合部の癌腫、消化管癌、膠芽腫（例えば、多形性膠芽腫、例えば、新たに診断されたか、または再発性のもの）、膠腫、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮細胞癌）、肝転移、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫、腎臓癌（例えば、腎細胞癌及びウィルムス腫瘍）、喉頭癌、白血病（例えば、慢性骨髄球性白血病、有毛細胞性白血病）、肝癌（例えば、肝癌及び肝臓癌）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌及び小細胞肺癌）、リンパ芽球性リンパ腫、リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、転移性脳腫瘍、転移性癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、神経芽細胞腫、眼黒色腫、口腔咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌（例えば、膵管腺癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン抵抗性（例えば、去勢抵抗性）、転移性、転移性ホルモン抵抗性（例えば、去勢抵抗性、アンドロゲン非依存性））、腎細胞癌（例えば、転移性）、唾液腺癌、肉腫（例えば、横紋筋肉腫）、皮膚癌（例えば、黒色腫（例えば、転移性黒色腫））、軟部組織肉腫、固形腫瘍、扁平上皮細胞癌、滑膜肉腫、睾丸癌、甲状腺癌、移行細胞癌（尿路上皮細胞癌）、ブドウ膜黒色腫（例えば、転移性）、疣状癌、外陰癌、及びヴァルデンストレームマクログロブリン血症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４３２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、ヒト肉腫または癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌（例えば、転移性）、肝臓癌、胆管癌、絨毛腫、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、睾丸腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、膠腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、急性リンパ球性白血病または急性骨髄球性白血病（例えば、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、及び赤白血病）、慢性白血病（慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病または慢性リンパ球性白血病）、ホジキン病、非ホジキン病、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、眼内リンパ腫、濾胞性リンパ腫、小腸リンパ腫、または脾臓辺縁帯リンパ腫である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、消化管間質腫瘍、頭及び／または頸部癌（例えば、下咽頭の扁平上皮細胞癌、喉頭の扁平上皮細胞癌、中喉頭の細胞癌、または喉頭の疣状癌）、子宮内膜間質肉腫、マスト細胞肉腫、成人軟部肉腫、子宮肉腫、メルケル細胞癌、尿路上皮癌、脳転移を伴う黒色腫、ブドウ膜黒色腫、肝臓転移を伴うブドウ膜黒色腫、非小細胞肺癌、直腸癌、または骨髄異形成症候群であり、いくつかの実施形態では、本方法に従って治療される癌は、転移性である。
【０４３３】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸直腸癌、黒色腫、気管支癌、膀胱癌、脳もしくは中枢神経系癌、末梢神経系癌、子宮または子宮内膜癌、口腔もしくは咽頭の癌、非ホジキンリンパ腫、甲状腺癌、腎臓癌、胆道癌、小腸もしくは虫垂癌、唾液腺癌、甲状腺癌、副腎癌、扁平上皮細胞癌、中皮腫、骨癌、胸腺腫／胸腺癌、膠芽腫、膠芽腫、骨髄異形成症候群、軟部組織肉腫、ＤＩＰＧ、腺癌、骨肉腫、軟骨肉腫、白血病、または膵臓癌を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、癌腫（例えば、腺癌）、リンパ腫、芽細胞腫、黒色腫、肉腫、または白血病を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、扁平上皮細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、消化管癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、膵臓癌、膠芽腫、膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌（例えば、肝癌及び肝臓癌）、膀胱癌、乳癌、炎症性乳癌、メルケル細胞癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、膀胱癌、子宮内膜癌、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、唾液腺、癌腫、腎臓癌（例えば、腎細胞癌及びウィルムス腫瘍）、基底細胞癌、黒色腫、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、睾丸癌、食道癌、漿液性腺癌、または様々な種類の頭及び頸部癌を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、線維形成性黒色腫、炎症性乳癌、胸腺腫、直腸癌、肛門癌、または外科的に治療可能もしくは外科的に治療不可能な脳幹膠腫を含む。具体的な一実施形態では、この癌は、固形腫瘍である。別の具体的な実施形態では、この癌は、多形性膠芽腫である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は再発性である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は新たに診断される。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、非メチル化ＭＧＭＴプロモーターを有する対象における多形性膠芽腫である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、ベバシズマブ治療法が無効である。いくつかの実施形態では、多形性膠芽腫は、ベバシズマブ治療法を受けていない対象における多形性膠芽腫である。
【０４３４】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、転移性黒色腫（例えば、耐性転移性黒色腫）、転移性卵巣癌、または転移性腎細胞癌である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、イピリムマブに耐性を示す黒色腫である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、ニボルマブに耐性を示す黒色腫である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される癌は、イピリムマブ及びニボルマブに耐性を示す黒色腫である。
５．４．１．２  感染症
【０４３５】
具体的な一態様では、感染症を予防及び／または治療するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物を投与することを含む、方法が本明細書に提示される。一実施形態では、感染症（例えば、ウイルス感染症、細菌感染症、真菌感染症、原虫感染症、または寄生虫感染症）を予防及び／または治療するための方法が本明細書に提供される。本方法に従って予防及び／または治療された感染症は、本明細書に特定された感染性因子によって引き起こされ得る。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片またはその組成物は、対象に投与される唯一の活性剤である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物は、感染症の治療のために、抗感染性介入物（例えば、抗ウイルス性、抗菌性、抗真菌性、または抗寄生虫性）と組み合わせて使用される。
【０４３６】
本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片によって治療及び／または予防され得る感染症は、細菌、寄生虫、真菌、原虫、及びウイルスが挙げられるが、これらに限定されない、感染性因子によって引き起こされる。具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片によって治療及び／または予防される感染症は、ウイルスによって引き起こされる。本明細書に記載の方法に従って予防及び／または治療され得るウイルス疾患またはウイルス感染としては、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ（例えば、Ａ型インフルエンザまたはＢ型インフルエンザ）、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスＩ型（ＨＳＶ−Ｉ）、単純ヘルペスＩＩ型（ＨＳＶ−ＩＩ）、牛疫、ライノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス（ｅｃｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、痘瘡、エプスタイン・バーウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−Ｉ）、ヒト免疫不全ウイルスＩＩ型（ＨＩＶ−ＩＩ）によって引き起こされるもの、及びウイルス性髄膜炎、脳炎、デング熱、または痘瘡等のウイルス疾患の病原因子が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４３７】
予防及び／または治療され得る細菌感染症は、大腸菌、肺炎桿菌、黄色ブドウ球菌、大便連鎖球菌、プロテウス・ブルガリス、連鎖球菌、及び緑膿菌によって引き起こされる感染症を含む。本明細書に記載の方法に従って予防及び／または治療され得る細菌（例えば、大腸菌、肺炎桿菌、黄色ブドウ球菌、大便連鎖球菌、プロテウス・ブルガリス、連鎖球菌、及び緑膿菌）によって引き起こされる細菌性疾患としては、マイコバクテリアリケッチア、マイコプラズマ、ナイセリア、肺炎連鎖球菌性肺炎、ボレリア−ブルグドルフェリ（ライム病）、炭疽菌（炭疽病）、破傷風、連鎖球菌属、ブドウ球菌属、マイコバクテリウム属、百日咳、コレラ、疫病、ジフテリア、クラミジア属、黄色ブドウ球菌、及びレジオネラ菌が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４３８】
本明細書に記載の方法に従って予防及び／または治療され得る原虫によって引き起こされる原虫疾患または原虫感染症としては、リーシュマニア、コクシジウム症、トリパノソーマ住血吸虫属、またはマラリアが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の方法に従って予防及び／または治療され得る寄生虫によって引き起こされる寄生虫疾患または寄生虫感染症としては、クラミジア感染症及びリケッチアが挙げられるが、これらに限定されない。
【０４３９】
本明細書に記載の方法に従って予防及び／または治療され得る真菌性疾患または真菌感染症としては、カンジダ感染症、接合菌症、カンジダ性髄膜炎、潜在性トリコスポロン血症を伴う進行性播種性トリコスポロン症、播種性カンジダ症、肺パラコクシジオイデス症、肺アスペルギルス症、ニューモシスチスカリニ肺炎、クリプトコッカス髄膜炎、コクシジオイデス髄膜脳炎、及び脳脊髄脈管炎、アスペルギルスニガー感染症、フザリウム角膜炎、副鼻腔ミコース、アスペルギルス・フミガーツス心内膜炎、脛骨の軟骨発育不全症、カンジダグラブラタ膣炎、口腔咽頭カンジダ症、Ｘ連鎖慢性肉芽腫性疾患、足白癬、皮膚カンジダ症、真菌性胎盤炎、播種性トリコスポロン症、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、真菌性角膜炎、クリプトコックス・ネオフォルマンス感染症、真菌性腹膜炎、クルブラリアゲニクラータ感染症、ブドウ球菌性眼内炎、スポロトリクム症、及び皮膚糸状菌症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０４４０】
ある特定の実施形態では、対象（いくつかの実施形態では、動物モデル）への本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物の投与により、以下の効果、（ｉ）感染性疾患、感染症、もしくはそれに関連する症状の重症度の減少もしくは改善、（ｉｉ）感染性疾患、感染症、もしくはそれに関連する症状の持続時間の減少、（ｉｉｉ）感染性疾患、感染症、もしくはそれに関連する症状の進行の抑制、（ｉｖ）感染性疾患、感染症、もしくはそれに関連する症状の退行、（ｖ）感染性疾患、感染症、もしくはそれに関連する症状の発症もしくは発病の抑制、（ｖｉ）感染症もしくはそれに関連する症状の再発の抑制、（ｖｉｉ）ある細胞から別の細胞、ある組織から別の組織、もしくはある臓器から別の臓器への感染性因子の蔓延の減少もしくは阻害、（ｖｉｉｉ）ある対象から別の対象への感染性因子の蔓延／伝染の阻害もしくは減少、（ｉｘ）感染症に関連する臓器不全の減少、（ｘ）対象の入院の減少、（ｘｉ）入院期間の長さの減少、（ｘｉｉ）感染性疾患もしくは感染症を有する対象の生存率の増加、（ｘｉｉｉ）感染性因子もしくは感染症の排除、（ｘｉｉｉ）感染性因子もしくは感染症の複製の阻害または減少、（ｘｉｖ）感染性因子の細胞（複数可）への侵入の阻害もしくは減少、（ｘｖ）感染性因子のゲノムの複製の阻害もしくは減少、（ｘｖｉ）感染性因子のタンパク質の合成の阻害もしくは減少、（ｘｖｉｉ）感染性因子のアセンブリの阻害もしくは減少、（ｘｖｉｉｉ）細胞（複数可）からの感染性因子の放出の阻害もしくは減少、（ｘｖｉｉｉ）感染性因子の数もしくは力価の減少、（ｘｉｘ）感染性疾患もしくは感染症に関連する症状の数の減少、（ｘｘ）別の治療法の予防もしくは治療効果（複数可）の増強、改善、補充、相補、もしくは増大、及び／または（ｘｘｉ）感染症に関連する二次感染の発病もしくは進行の防止、のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上が得られる。
【０４４１】
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の２つ以上の異なる抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片が、対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上の他の治療法と組み合わせて対象に投与される。一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上の抗真菌剤と組み合わせて投与される。
【０４４２】
具体的な一実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上の抗生物質と組み合わせて対象に投与される。本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて使用され得る抗生物質の例としては、アミノグリコシド抗生物質、グリコペプチド、アンフェノール抗生物質、アンサマイシン抗生物質、セファロスポリン、セファマイシン、オキサゾリジノン、ペニシリン、キノロン、ストレプトグラミン、テトラサイクリン、及びその類似体が挙げられる。
【０４４３】
別の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、１つ以上の抗ウイルス剤と組み合わせて投与される。本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて使用され得る抗ウイルス剤の例としては、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、及び融合阻害剤が挙げられる。一実施形態では、抗ウイルス剤は、アマンタジン、リン酸オセルタミビル、リマンタジン、及びザナミビルである。別の実施形態では、抗ウイルス剤は、デラビルジン、エファビレンツ、またはネビラピン等の非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤である。別の実施形態では、抗ウイルス剤は、アバカビル、ディダノシン、エムトリシタビン、エムトリシタビン、ラミブジン、スタブジン、テノホビルＤＦ、ザルシタビン、またはジドブジン等のヌクレオシド逆転写酵素阻害剤である。別の実施形態では、抗ウイルス剤は、アンプレナビル、アタザナビル、ホスアンプレナビル、インジナビル、ロピナビル、ネルフィナビル、リトナビル、またはサキナビル等のプロテアーゼ阻害剤である。別の実施形態では、抗ウイルス剤は、エンフビルチド等の融合阻害剤である。別の実施形態では、抗ウイルス剤は、リン酸オセルタミビル、アンフォテリシンＢ、またはパリビズマブである。
【０４４４】
具体的な一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、病原体（例えば、ウイルス、細菌、真菌等）由来の抗原を含む抗原ペプチドと複合体形成された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質調製物であるワクチンと組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ウイルス抗原（例えば、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２の抗原）を含む抗原ペプチドと複合体形成された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質調製物であるワクチンと組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態では、ウイルス抗原（例えば、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２の抗原）を含む抗原ペプチドと複合体形成された熱ショックタンパク質を含む熱ショックタンパク質調製物は、ＱＳ−２１等のアジュバントと組み合わせられる。いくつかの実施形態では、このワクチンは、ヘルペス感染症の治療のためのワクチンであるＨｅｒｐＶ（Ａｇｅｎｕｓ  Ｉｎｃ．）である。好適なワクチンの非限定的な例は、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Ｍｏ  Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，（２０１１），Ｖａｃｃｉｎｅ  ２９：８５３０−８５４１に開示されている。さらなる非限定的な例は、米国特許第８，５４１，００２号に開示されており、これらの内容が参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【０４４５】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物は、細菌、真菌、原虫、及びウイルスが含まれるが、これらに限定されない、感染性因子によって引き起こされる感染性疾患を患っている対象に投与される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物は、細菌、真菌、原虫、及びウイルスが含まれるが、これらに限定されない、感染性因子によって引き起こされる感染性疾患を有すると診断された対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体もしくはその抗原結合断片またはその組成物は、感染症を患っている対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、免疫不全または免疫抑制される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、別の治療薬（例えば、抗ウイルス薬、抗生物質、または抗真菌剤）を有するか、それであるか、またはさもなければそれを受容するであろう。
５．４．１．３  投与経路及び投与量
【０４４６】
本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または組成物は、様々な経路によって対象に送達され得る。これらには、非経口、鼻腔内、気管内、経口、皮内、局所、筋肉内、腹腔内、経皮、静脈内、腫瘍内、結膜、及び皮下経路が含まれるが、これらに限定されない。肺内投与は、例えば、吸入器または噴霧器、及びスプレー用としてエアロゾル化剤を含む製剤の使用によっても用いられ得る。
【０４４７】
状態の治療及び／または予防に有効であろう抗体もしくはその抗原結合断片または組成物の量は、疾患の性質に依存するであろう、そして、標準の臨床技術によって決定され得る。
【０４４８】
組成物中で用いられるべき正確な用量は、投与経路、及びそれによって引き起こされる感染症または疾患の重症度にも依存し、臨床医の判断及び各対象の状況に従って決定されるべきである。例えば、有効な用量はまた、投与手段、標的部位、患者の生理的状態（年齢、体重、及び健康を含む）、患者がヒトであるかまたは動物であるかということ、投与される他の医薬品、または治療が予防的であるかまたは治療的であるかということによって異なってもよい。通常、この患者は、ヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物を治療することもできる。治療投与量は、安全性及び有効性を最適化するために最適に滴定される。
【０４４９】
ある特定の実施形態では、最適な投与量範囲を特定する助けとなるように、インビトロアッセイが用いられる。有効な用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から得られる用量応答曲線から推定してもよい。
【０４５０】
抗体（またはその抗原結合断片）による受動免疫について、投与量は、患者の体重１ｋｇあたり、約０．０００１〜１００ｍｇ、及びより一般的には０．０１〜１５ｍｇの範囲に及ぶ。例えば、投与量は、体重１ｋｇあたり１ｍｇ、体重１ｋｇあたり１０ｍｇ、または１〜１０ｍｇの範囲内、言い換えれば、７０ｋｇの患者の場合、それぞれ、７０ｍｇもしくは７００ｍｇ、または７０〜７００ｍｇの範囲内であり得る。いくつかの実施形態では、患者に投与された投与量は、患者の体重１ｋｇあたり約１ｍｇ〜約２０ｍｇである。一般的には、ヒト抗体は、外来ポリペプチドに対する免疫応答に起因して他の種由来の抗体よりも長い半減期を有する。それ故に、より少ない投与量のヒト抗体及びよる低い頻度の投与が可能であることが多い。
【０４５１】
例示の治療レジメンは、１年もしくは数年の間、または数年間隔で、２週間毎に１回、または月に１回、または３〜６カ月毎に１回投与を必要とする。いくつかの方法では、異なる結合特異性を有する２つ以上の抗体またはその抗原結合断片は、対象に同時に投与される。抗体またはその抗原結合断片は、通常、多様な機会で投与される。単一投与量間の間隔は、週１回、月１回、３カ月毎、６カ月毎、または年１回であり得る。
５．４．２  検出及び診断用途
【０４５２】
本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片（例えば、項５．１を参照されたい）は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、またはウエスタンブロット法等の免疫アッセイを含む、当業者に既知の古典的な免疫組織学的方法を用いて生物試料中のＧＩＴＲタンパク質レベルをアッセイするために使用することができる。好適な抗体アッセイ標識は、当該技術分野で既知であり、ブドウ糖酸化酵素等の酵素標識；ヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１２１Ｉｎ）、及びテクネチウム（９９Ｔｃ）等の放射性同位体；ルミノール等の発光標識；ならびにフルオレセイン及びローダミン等の蛍光標識、ならびにビオチンを含む。かかる標識は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片を標識するために使用することができる。あるいは、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片を認識する第２の抗体は、標識し、ＧＩＴＲタンパク質レベルを検出するために、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて使用することができる。
【０４５３】
ＧＩＴＲタンパク質の発現レベルについてのアッセイは、直接（例えば、絶対タンパク質レベルを決定または推定することによって）または相対的に（例えば、第２の生物試料中の疾患関連タンパク質レベルと比較することによって）のいずれかで第１の生物試料中のＧＩＴＲタンパク質のレベルを定性的または定量的に測定または推定することを含むよう意図されている。第１の生物試料中のＧＩＴＲポリペプチドの発現レベルは、測定または推定することができ、標準のＧＩＴＲタンパク質レベルと比較することができ、この標準物は、障害を有さない個体から得た第２の生物試料から採取されるか、または障害を有さない個体の集団からのレベルを平均することによって決定される。当該技術分野で理解されているように、「標準の」ＧＩＴＲポリペプチドレベルが知られると、それを比較のための標準物として繰り返し使用することができる。
【０４５４】
本明細書で使用される場合、「生物試料」という用語は、対象から得た任意の生物試料、細胞株、組織、またはＧＩＴＲを潜在的に発現する細胞の他の源を指す。動物（例えば、ヒト）由来の組織生検及び体液を得るための方法は、当該技術分野で公知である。生物試料は、末梢血単核細胞を含む。
【０４５５】
本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、当業者に公知の及び標準の、本記述に基づいたインビトロで及びインビボでの適用を含む、予後、診断的、モニタリング、及びスクリーニング適用のために使用することができる。免疫系状態及び／または免疫応答のインビトロ査定及び評価のための予後、診断的、モニタリング、及びスクリーニングアッセイならびにキットは、免疫系機能不全を有するか、または有する疑いがあることが知られているもの、または予想されるもしく所望の免疫系応答、抗原応答、もしくはワクチン応答に関しては、患者試料を評価するために、予測、診断、及びモニタリングするために使用され得る。免疫系状態及び／または免疫応答の査定及び評価はまた、異なる薬剤または抗体もしくはその抗原結合断片に対して、薬物の臨床試験のため、あるいは特定の化学療法薬または抗体またはその抗原結合断片（その組み合わせを含む）の投与のために、患者の適合性を決定するのに有用である。この種類の予後及び診断的モニタリング及び査定は既に、乳癌におけるＨＥＲ２タンパク質（ＨｅｒｃｅｐＴｅｓｔ（商標）、Ｄａｋｏ）に対して抗体が実際に使用されており、このアッセイはまた、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）を用いた抗体治療法のための患者を評価するためにも使用される。インビボ適用は、有向細胞療法及び免疫系調節及び免疫応答の放射線画像を含む。
【０４５６】
一実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、生検試料の免疫組織化学において使用することができる。
【０４５７】
別の実施形態では、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、ＧＩＴＲレベル、またはそれらの膜表面上にＧＩＴＲを含有する細胞レベルを検出するために使用することができ、このレベルは、ある疾患の症状と関連し得る。本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、検出可能なまたは機能的標識を保有し得る。蛍光標識が使用される場合、現在入手可能な顕微鏡及び蛍光活性化細胞選別装置分析（ＦＡＣＳ）または当該技術分野で既知の方法手順の両方の組み合わせを、特異的結合メンバーを特定及び定量化するために利用してもよい。本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、蛍光標識を保有し得る。例示の蛍光標識は、例えば、反応性及び共役プローブ、例えば、アミノクマリン、フルオレセイン、及びテキサスレッド、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ色素、Ｃｙ色素及びＤｙＬｉｇｈｔ色素を含む。抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片は、同位体３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、５１Ｃｒ、５７Ｃｏ、５８Ｃｏ、５９Ｆｅ、６７Ｃｕ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１１７Ｌｕ、１２１Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１９８Ａｕ、２１１Ａｔ、２１３Ｂｉ、２２５Ａｃ、及び１８６Ｒｅ等の放射性標識を保有し得る。放射性標識が使用される場合、当該技術分野で既知の現在入手可能な計数手順は、抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片のＧＩＴＲ（例えば、ヒトＧＩＴＲ）への特異的結合を特定及び定量化するために利用してもよい。標識が酵素である場合では、検出は、当該技術分野で既知の現在利用される比色分析法、分光光度法、蛍光分光法、電流測定、または気体定量技法のうちのいずれかによって達成され得る。これは、本抗体またはその抗原結合断片とＧＩＴＲとの間での複合体の形成を可能にする条件下で、試料または対照試料を抗ＧＩＴＲ抗体またはその抗原結合断片と接触させることによって達成され得る。本抗体またはその抗原結合断片とＧＩＴＲとの間で形成された任意の複合体が、試料及び対照において検出され、比較される。ＧＩＴＲへの本明細書に記載の抗体の特異的結合を考慮して、本抗体またはその抗原結合断片は、細胞の表面上でのＧＩＴＲ発現を特異的に検出するために使用することができる。本明細書に記載の抗体またはその抗原結合断片はまた、免疫親和性精製を介してＧＩＴＲを精製するために使用することができる。
【０４５８】
例えば、ＧＩＴＲまたはＧＩＴＲ／ＧＩＴＲＬ複合体の存在の程度の定量的分析のための試験キットの形態で調製され得るアッセイシステムも本明細書に含まれる。このシステムまたは試験キットは、標識成分、例えば、標識抗体、及び１つ以上のさらなる免疫化学的試薬を含み得る。例えば、キットについてさらに詳しくは、以下の項５．５を参照されたい。
５．５  キット
【０４５９】
１つ以上の本明細書に記載の抗体もしくはその抗原結合断片またはその共役体を含むキットが本明細書に提供される。具体的な一実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の抗体またはその抗原結合断片等の本明細書に記載の薬学的組成物の成分のうちの１つ以上で充填された１つ以上の容器を含む薬学的パックまたはキットが本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、これらのキットは、本明細書に記載の薬学的組成物及び本明細書に記載のもの等の任意の予防または治療薬を含有する。ある特定の実施形態では、これらのキットは、例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体等のＴ細胞マイトジェンを含有し得る。任意に、かかる容器（複数可）とともに、調合薬または生物学的製剤の製造、使用、または販売を規制する行政機関によって規定された様式の注意書きを含むことができ、この注意書きは、ヒトへの投与のための製造、使用、または販売の機関による承認を反映する。
【０４６０】
上記の方法で使用され得るキットも本明細書に提供される。一実施形態では、キットは、１つ以上の容器中に、本明細書に記載の抗体、好ましくは精製抗体を含む。具体的な一実施形態では、本明細書に記載のキットは、対照として、実質的に単離されたＧＩＴＲ抗原（例えば、ヒトＧＩＴＲ）を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、ＧＩＴＲ抗原と反応しない対照抗体をさらに含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、抗体のＧＩＴＲ抗原への結合を検出するための１つ以上の要素を含む（例えば、抗体は、蛍光化合物、酵素基質、放射性化合物、もしくは発光化合物等の検出可能な基質と共役され得るか、または第１の抗体を認識する第２の抗体は、検出可能な基質と共役され得る）。具体的な実施形態では、本明細書に記載のキットは、組換え産生されたまたは化学的に合成したＧＩＴＲ抗原を含むことができる。キットに提供されたＧＩＴＲ抗原はまた、固体支持体に付着され得る。さらに具体的な一実施形態では、上述のキットの検出手段は、ＧＩＴＲ抗原が付着される固体支持体を含む。かかるキットはまた、非付着レポーター標識抗ヒト抗体または抗マウス／ラット抗体を含むことができる。この実施形態では、抗体のＧＩＴＲ抗原への結合は、前記レポーター標識抗体の結合によって検出され得る。
【０４６１】
以下の実施例は、例証として提供されており、限定するものではない。
【実施例】
【０４６２】
６．  実施例
この項（すなわち、項６）における実施例は、例証として提供されており、限定するものではない。
６．１  実施例１：ヒトＧＩＴＲに対する新規の抗体の生成
【０４６３】
この実施例は、ヒトＧＩＴＲに結合するマウス抗体の生成及び特徴付けを説明する。具体的には、ヒトＧＩＴＲに特異的に結合し、ＣＤ４＋Ｔ細胞における共刺激効果を示すマウス抗体の生成を説明する。
【０４６４】
新規のＧＩＴＲ抗体を生成するために、ヒトＧＩＴＲでトランスフェクトされたマウスＣＭＳ５ａ細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）、及びフロイントアジュバント（ＦＡ））と組み合わせて免疫原として使用した。免疫化マウス由来の脾臓細胞を、マウス骨髄腫細胞株ＳＰ２／０と融合させた。新たに生成したクローンの上清を、ｈＧＩＴＲでトランスフェクトされたＣＭＳ５ａ細胞及び野生型ＣＭＳ５ａ細胞において混合血球吸着アッセイでスクリーニングした。組換えｈＧＩＴＲタンパク質（ＨＧＩＴＲ−Ｆｃ、Ｓｉｇｍａ）において選択された上清を、ＥＬＩＳＡによってさらに試験した。融合＃２３１は、ＭＨＡ及びＥＬＩＳＡによって、ヒトＧＩＴＲ（本明細書では、ｈＧＩＴＲまたはｈｕＧＩＴＲと称される場合がある）に対して選択反応性を有する４つのハイブリドーマ（２３１−３２−１５、２３１−１０３９−４５、２３１−１０４２−７、及び２３１−１３３３−２１）を生じた。抗体（すべてＩｇＧ１）を、さらなる試験のために、タンパク質Ｇ親和性クロマトグラフィーによって精製した。
【０４６５】
抗ＧＩＴＲ抗体の特異性を、精製した組換えヒトＧＩＴＲ、組換えマウスＧＩＴＲ、ヒトＧＩＴＲでトランスフェクトされたＣＭＳ５ａ細胞、野生型ＣＭＳ５ａ細胞、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞、及び未処理ＣＤ４＋Ｔ細胞に対してウエスタンブロットによって試験した。非還元条件下でのウエスタンブロットを図１に示す。抗ＧＩＴＲ抗体は、ＣＭＳ５ａ細胞において、精製した組換えヒトＧＩＴＲとは反応し、組換えマウスＧＩＴＲとは反応せず、組換えヒトＧＩＴＲとは反応し、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞において、天然ヒトＧＩＴＲとは反応した。
【０４６６】
固定化したｈｕＧＩＴＲへのリガンド（ＧＩＴＲ−Ｌ）及びモノクローナル抗体の結合の分析は、表面プラズモン共鳴によって行われ、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）において測定された。ＧＩＴＲ（約１１００ＲＵ）を、標準のアミンカップリング法を用いてＣＭ５センサーチップ上に固定化した。固定化したＧＩＴＲの上に、５μＬ／分の流量で１５分間検体を注入し、続いて、１０分間の解離期間を経た。動態泳動を行った後に、親和性及び解離定数を、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎ（登録商標）ソフトウェア（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）によって同時に計算した。ヒトＧＩＴＲ−Ｌの結合を、１２．５〜２００ｎＭの濃度範囲にわたって分析し、マウス抗ＧＩＴＲモノクローナル抗体を６．２５〜１００ｎＭの濃度にわたって分析した。この抗体は、固定化したマウスＧＩＴＲに結合しなかった。これらの抗体に対する親和性及び解離定数を以下の表９に示す。
【０４６７】
【表９】
2017526615.tif 000040
【０４６８】
ハイブリドーマ２３１−３２−１５、２３１−１０３９−４５、２３１−１０４２−７、及び２３１−１３３３−２１は、配列決定され、同じｃＤＮＡ及びタンパク質配列を有することが見出された。ＶＨ及びＶＬのタンパク質配列は、トリプシン消化物のＮ末端タンパク質決定及び質量分析（ＭＳ）によって確認された。抗ＧＩＴＲ抗体の可変重鎖配列は配列番号２０１であり、抗ＧＩＴＲ抗体の可変軽鎖配列は配列番号２０２である。重鎖可変領域（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ＶＨ  ＣＤＲ１、ＶＨ  ＣＤＲ２、及びＶＨ  ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１３、１４、及び１５を有し、軽鎖可変領域（ＶＬ）ＣＤＲ配列ＶＬ  ＣＤＲ１、ＶＬ  ＣＤＲ２、及びＶＬ  ＣＤＲ３は、それぞれ、配列番号１６、１７、及び１８を有する。
【０４６９】
新たな２３１−ＧＩＴＲ抗体の競合的結合を、市販の抗ＧＩＴＲモノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ｍＡｂ６８９クローン１１０４１６）と比較した。ＧＩＴＲトランスフェクトＣＭＳ５ａ細胞を使用し、非標識抗ＧＩＴＲ  ｍＡｂとインキュベートし、次いで、ＰＥ共役Ｒ＆Ｄ  ｍＡｂまたはＡｌｅｘａ  ４８８共役２３１−１０３９−４５または２１３−１３３３−２１抗体（Ａｌｅｘａ  ４４８共役２１３−１３３３−２１抗体についてはデータ示さず）を添加し、結果をＦＡＣＳ分析によって査定した。Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  抗ＧＩＴＲ  ｍＡｂの遮断研究を図２Ａに示し、２３１抗体（１０３９−４５）の遮断研究を図２Ｂに示す。これらの研究では、抗体なし、非標識Ｒ＆Ｄ抗体、または非標識試験抗体（抗体１０４２−７、１０３９−４５、１３３１−２１、または３２−１５）のいずれかを最初に添加し、Ｍ５Ｓａ−ＧＩＴＲトランスフェクト細胞でインキュベートした。次いで、これに、標識Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ抗体（図２Ａ）または標識２３１−抗ＧＩＴＲ抗体１０３９−４５（図２Ｂ）を添加した。新規の２３１抗体（１０４２−７、１０３９−４５、１３３３−２１、または３２−１５）は、Ｒ＆Ｄ抗体の結合を部分的にのみ遮断した、場合により、立体障害に起因する（図２Ａ）。図２Ｂは、Ｒ＆Ｄ抗体が２３１−１０３９−４５抗体の結合を遮断しなかったことを示す。１０３９−４５の結合は、２３１抗体のうちのいずれかによって（すなわち、１０４２−７、１０３９−４５、１３３３−２１、または３２−１５によって）阻害された。
【０４７０】
２３１−ＧＩＴＲ抗体の結合特徴付けをＦＡＣＳによって分析し、これらの結果を図３Ａ〜Ｃに示す。図３Ａは、２つの異なるバッチ（１及び２）及びＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ抗体から抗ヒトＧＩＴＲ  ＩｇＧ１１３３３−２１抗体によるＣＭＳ５ａ−ＧＩＴＲ細胞の染色を示す。図３Ｂでは、１０４２−７、３２−１５、１０３９−４５、１３３３−２１、及びＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ抗体で染色したときの、エクスビボでのＰＭＢＣ由来のＣＤ３−ＣＤ１９−ＧＩＴＲ＋及びＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＧＩＴＲ＋の蛍光強度を示す。１３３３−２１またはＲ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ抗体（ｍＡｂ６８９クローン１１０４１６）の結合後のこれらのインビボでのＰＢＭＣ由来の細胞のＦＡＣＳ分析を図３Ｃに示す。
【０４７１】
次に、研究は、抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）抗体と組み合わせてＣＤ４＋Ｔ細胞における抗ＧＩＴＲ抗体の共刺激効果を査定するために行われた。最も有意な相対的な共刺激効果は、抗ＧＩＴＲ抗体（２３１−１０４２−７、２３１−３２−１５、２３１−１０３９−４５、２３１−１３３３−２１）を準最適濃度（０．２μｇ／ｍＬ）のＯＫＴ３と組み合わせることによって観察された。様々な濃度で抗ＧＩＴＲ抗体（５μｇ／ｍＬ）及びＯＫＴ−３抗体を組織培養プレートに結合し、次いで、ＣＳＦＥ標識ＣＤ４＋細胞でインキュベートした。ＩＬ−２（１０Ｕ／ｍＬ）を培地に添加し、細胞及び抗体をさらに５日間インキュベートした。５日後に、ＣＦＳＥ強度を低いＣＦＳＥ強度を有する分裂細胞で評価した。ＩＦＮγも測定した。抗ＧＩＴＲ抗体についての結果を図４に示す。ＯＫＴ３抗体の準最適濃度（０．２μｇ／ｍＬ）で、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＣＤ４＋細胞の増殖に有意な相対的影響を及ぼした。対照と比較したＩＦＮγの増加は、試験したすべてのレベルのＯＫＴ３と組み合わせた抗ＧＩＴＲ抗体の存在下で見られ、最も顕著な結果は、０．２μｇ／ｍＬ及び０．０４μｇ／ｍＬで観察された。試験した抗体間の変動は、アッセイ内変動及び各抗体調製物（例えば分離調製物）間の自然変動に起因し得る。とりわけ、ＯＫＴ３の不在下で、抗ＧＩＴＲ抗体による刺激はない。ＯＫＴ３との抗ＧＩＴＲ抗体の共刺激効果は、抗ＧＩＴＲ抗体の量に用量依存的であった（データ示さず）。
【０４７２】
結論として、ヒトＧＩＴＲに特異的であり、組換え及び自然ＧＩＴＲを認識する新規の抗ＧＩＴＲ抗体が、単離された。これらの抗体は、２．５〜５ｎｇ／ｍＬでｈＧＩＴＲトランスフェクトＣＭＳ５ａ細胞に発現したｈＧＩＴＲに結合し、ＦＡＣＳ分析による良好な結合を示す。抗体はまた、自然ｈＧＩＴＲを発現するＴ細胞を含むヒトＰＢＭＣに結合した。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）によるＧＩＴＲに対するそれらの親和性は、ＫＡ（１／ｍ）がおよそ４．２×１０８であり、ＫＤ（ｍ）が２．４×１０−９である（ＫＡが１．８×１０８であり、５．５×１０−９のＫＤであるＧＩＴＲＬ（リガンド）に対して）。この抗体は、市販のＧＩＴＲ  ｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ）に対してｈＧＩＴＲにおいて異なる部位に結合する。
【０４７３】
ＣＤ４＋Ｔ細胞における準最適濃度（０．２μｇ／ｍＬ及び０．０４μｇ／ｍＬ）の抗ＣＤ３  ｍＡｂ（ＯＫＴ３）との抗ＧＩＴＲモノクローナル抗体の共刺激効果を示している。濃縮したＣＤ４＋Ｔ細胞の集団におけるＴ制御性細胞の存在にもかかわらず、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＣＤ４  Ｔ細胞の活性を増強した。
６．２  実施例２：マウスモノクローナル抗体２３１−３２−１５のヒト化
【０４７４】
この実施例は、マウス抗体２３１−３２−１５のヒト化及びヒト化抗体の特徴付けを説明する。
６．２．１  マウス抗体２３１−３２−１５のヒト化
【０４７５】
ヒト受容体フレームワークの選択を含む抗ヒトＧＩＴＲマウス抗体２３１−３２−１５のヒト化は、本明細書に記載されている。
６．２．２  マウス抗体２３１−３２−１５の特徴付け
【０４７６】
配列番号２０１及び２０２を有するマウス２３１−３２−１５由来のマウスＶＨ及びＶＬ（カッパ）可変領域を、それぞれ、ＧｅｎｅＡｒｔ（登録商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標））によって合成した。元のマウス可変ドメイン由来の自然リーダー配列を、マウスＶｈまたはＶｋを有するキメラ遺伝子を作製するために標準の社内ヒトＩｇＧ１Ｖｈベクター（ＣＨ１−２−３ドメイン）及びＶｋベクター（Ｃｋ１）へのこれらの可変領域の直接クローニングを可能にするための制限部位を有するアダプター及びヒト定常領域とともに含んだ。次いで、キメラ重鎖及び軽鎖の発現ベクターを、以下で行われたアッセイで用いるためのキメラ抗体タンパク質を産生するために、懸濁液中のＣＨＯ細胞に同時にトランスフェクトした。このキメラ抗体は、実施例の項６では、「キメラ親２３１−３２−１５抗体」と称される。このキメラ親２３１−３２−１５抗体は、軽鎖定常ドメインにおいて、Ｋａｂａｔに従って番号付けされた、Ｔ１０９Ｓ置換（すなわち、野生型Ｆｃ配列に対して１０９位でのトレオニンのセリンとの置換）を含み、これは、インフレームでの可変領域の定常領域へのクローニングを促進する。この変異は、抗体の結合または機能に影響を及ぼさない保存的修飾である。
【０４７７】
相同性マッチングを使用して、抗体２３１−３２−１５のＣＤＲをグラフトするためのヒト受容体フレームワークを選択した。データベース、例えば、ヒト及びマウスの免疫グロブリン遺伝子座由来の生殖系列可変遺伝子のデータベース（ＩＭＧＴデータベース（ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ  ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）、Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２７（１）：２０９−１２、Ｒｕｉｚ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２８（１）：２１９−２１、Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ（２００１）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２９（１）：２０７−９、Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ（２００３）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３１（１）：３０７−１０、Ｌｅｆｒａｎｃ  ＭＰ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｄｅｖ  Ｃｏｍｐｏ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９（３）：１８５−２０３、Ｋａａｓ  Ｑ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ  ｉｎ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ＆  Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ  ６（４）：２５３−６４）またはＶＢＡＳＥ２（Ｒｅｔｔｅｒ  Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ３３，Ｄａｔａｂａｓｅ  ｉｓｓｕｅ  Ｄ６７１−Ｄ６７４）またはＫａｂａｔデータベース（Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｇ  ｅｔ  ａｌ．，（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２８：２１４−２１８））または出版物（例えば、Ｋａｂａｔ  ＥＡ  ｅｔ  ａｌ．，（上記参照））は、マウス重鎖及び軽鎖可変領域が属するヒトサブファミリーを特定し、受容体分子として用いるのに最良適合のヒト生殖系列フレームワークを決定するために使用され得る。受容体として使用されるべきこれらのサブファミリー内の重鎖及び軽鎖可変領域配列（ＶＨ及びＶＬ）の選択は、グラフト後の６つのＣＤＲの適切な相対提示の保存に役立つように、配列相同性ならびに／またはＣＤＲ１及びＣＤＲ２領域の構造の一致に基づき得る。
【０４７８】
ＩｇＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩウェブサイト上で入手可能）を用いたＩＭＧＴデータベースの検索は、２３１−３２−１５の重鎖可変領域フレームワークとヒト重鎖可変領域サブファミリー１及び７のメンバーとの間で良好な相同性を示した。ＣＤＲ配列及びフレームワーク配列の両方の最高相同性及び同一性は、生殖系列配列、ＩＧＨＶ１−２＊０２（ＤＰ７５としても知られている、配列番号６０１）（５９．２％の同一性、９８のうちの５８のアミノ酸残基）、ＩＧＨＶ１−３＊０１（配列番号６０２）（５８．２％の同一性、５７／９８）、ＩＧＨＶ１−４６＊０１（配列番号６０３）（５７．１％の同一性、５６／９８）、ＩＧＨＶ１−１８＊０１（配列番号６０４）及びＩＧＨＶ１−６９＊０１（配列番号６０５）（両方ともに５６．１％の同一性、５５／９８）及びＩＧＨＶ７−４−１＊０２（配列番号６０６）（５４．１％の同一性、５３／９８）において観察された。
【０４７９】
同じアプローチを用いて、２３１−３２−１５の軽鎖可変ドメイン配列は、ヒト軽鎖可変ドメインのカッパサブファミリー３及び４のメンバーに対して良好な相同性を示した。ＣＤＲ配列及びフレームワーク配列の両方の最高相同性及び同一性は、生殖系列配列、ＩＧＫＶ４−１＊０１（配列番号６０７）（７９．２％の同一性、１０１のうちの８０のアミノ酸残基）及びＩＧＫＶ３−７＊０２（配列番号６０８）（６４．４％の同一性、６５／１０１）において観察された。
【０４８０】
ヒト化プロセスにおける出発点として、マウス２３１−３２−１５  ＶＨのＣＤＲグラフトバージョンが、ヒトフレームワーク受容体としてヒトＩＧＨＶ１−２＊０２を使用して生成された。ＣＤＲまたは可変内ドメインパッキングの構造に影響を及ぼし得、それ故に、抗体の完全活性を維持するのに構造的に重要であり得る残基位置で、多くの復帰変異が行われた。フレームワーク１では、残基Ｋａｂａｔ  Ｈ２４は、ＣＤＲ１（Ｋａｂａｔによって定義される、５個のアミノ酸残基長のループ）に対して正準残基であるため、マウスとして保持された。それは、マウス配列ではＧｌｙであり、ヒト生殖系列ではＡｌａである。フレームワーク２では、残基Ｋａｂａｔ  Ｈ４８は、バーニア残基（すなわち、ＣＤＲに近接近して）として知られているため、マウスとして保持された。それは、マウス配列ではＩｌｅであり、ヒト生殖系列ではＭｅｔである。フレームワーク３では、バーニア残基である残基Ｋａｂａｔ  Ｈ６７及び７３は、マウスとして保持された。Ｈ６７は、マウス配列ではＡｌａであり、ヒトＩＧＨＶ１−２＊０２生殖系列ではＶａｌである。Ｈ７３は、マウス配列ではＬｙｓであり、ヒトＩＧＨＶ１−２＊０２生殖系列ではＴｈｒである。ＣＤＲ２に対する正準残基である残基Ｈ７１は、マウスとして保持されている（ヒト生殖系列ではＡｒｇであり、マウス配列ではＶａｌである）。ＣＤＲ１に対する正準残基である残基Ｋａｂａｔ  Ｈ９４は、マウスとして保持されている（ヒト生殖系列ではＡｒｇであり、マウス配列ではＬｙｓである）。最後のヒト化配列は、バージョンＶＨ  Ａ（配列番号２０６）と称され、及びＩＧＨＶ１−２＊０２ヒト生殖系列を含む７９．６％の同一性（９８のうちの７８のアミノ酸残基）を有した。
【０４８１】
マウス２３１−３２−１５  ＶＬの第１のＣＤＲグラフトバージョンは、ヒトフレームワーク受容体としてヒトＩＧＫＶ３−７＊０２を使用して生成された。復帰変異は、様々な残基位置で、フレームワーク３の結果として見なされ、残基Ｋａｂａｔ  Ｌ８７は、ＶＨ／ＶＬ接合部分の重要な役割を果たし得るため、マウスとして保持された。Ｌ８７は、マウス配列ではＨｉｓであり、ＩＧＫＶ３−７＊０２ヒト生殖系列ではＴｙｒである。最後のヒト化配列は、バージョンＶＫ  Ａ１（配列番号２０７）と称され、ＩＧＫＶ３−７＊０２ヒト生殖系列を含む８１．２％の同一性（１０１のうちの８２のアミノ酸残基）を有した。
【０４８２】
マウス２３１−３２−１５  ＶＬの第２のＣＤＲグラフトバージョンは、ヒトフレームワーク受容体としてヒトＩＧＫＶ４−１＊０１を使用して生成された。復帰変異は、様々な残基位置で、フレームワーク３の結果として見なされ、残基Ｋａｂａｔ  Ｌ８７は、ＶＨ／ＶＬ接合部分の重要な役割を果たし得るため、マウスとして保持された。Ｌ８７は、マウス配列ではＨｉｓであり、ＩＧＫＶ４−１＊０１ヒト生殖系列ではＴｙｒである。最後のヒト化配列は、バージョンＶＫ  Ａ２（配列番号２０８）と称され、ＩＧＫＶ４−１＊０１ヒト生殖系列を含む９１．１％の同一性（１０１のうちの９２のアミノ酸残基）を有した。
【０４８３】
表１０は、上述のマウス２３１−３２−１５  ＶＨ及びＶＬのＣＤＲグラフトバージョンのマウス抗体フレームワークとヒト抗体フレームワークで異なる残基（Ｋａｂａｔ番号付け）を示す。
【０４８４】
【表１０】
2017526615.tif 000041
６．２．３  ヒト化変異型の発現
【０４８５】
ＩＧＨＶ１−２＊０２、ＩＧＫ４−１＊０１、及びＩＧＫ３−７＊０２の可変領域は、以下に記載されるように、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（商標）によって合成され、標準の発現ベクター（ｐＰＥＰ）においてクローニングされた。その後、これらの構築物を使用してＣＨＯ細胞をトランスフェクトし、発現した抗体を、以下に記載されるように、懸濁アレイ技術（Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）及び表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて試験した。「可変領域」という用語は、この実施例では、重鎖ＩＧＨＶ１−２＊０２の場合はＶＤＪ再配列遺伝子及び軽鎖ＩＧＫ４−１＊０１及びＩＧＫ３−７＊０２の場合はＶＪ再配列遺伝子を意味する。この発現ベクターは、ＣＭＶプロモーター、免疫グロブリン定常領域、ＷＰＲＥ要素（転写後の応答要素）、及びＢＧＨポリアデニル化シグナルを含んだ。３つの異なる発現ベクターの変異型は、可変領域ＩＧＨＶ１−２＊０２のクローニングのために使用した。２つの発現ベクターの変異型は、異なる免疫グロブリン定常領域であるＩＧＨＧ１及びＩＧＨＧ４を含み、第３の発現ベクターの変異型は、抗体Ｆａｂ断片を産生するために、ＩＧＨＧ１の断片を含んだ。軽鎖ＩＧＫ４−１＊０１及びＩＧＫ３−７＊０２の可変領域は、ＩＧＫＣ免疫グロブリン定常領域を含む発現ベクターにおいてクローニングされた。
６．２．３．１  ＣＨＯ細胞トランスフェクトにおける発現ベクターのクローニング
【０４８６】
合成した可変領域は、適切な免疫グロブリン定常領域を含むｐＰＥＰ発現ベクターにクローニングされた。ＩＧＨＶ１−２＊０２の重鎖可変領域のクローニングのために、構築物３５９２（ｐＰＥＰ−ＩｎｓＸ−Ｃｇ（ｉｓｏ３）、４１９２（ｐＰＥＰ−ＩｎｓＸ−ＩｇＧ４）、及び４２１５（ｐＰＥＰ−ＩｎｓＸ−Ｆａｂ−Ｘａ−６ｘＨｉｓ）（配列番号３６として開示される「６ｘＨｉｓ」）を、３７℃で４時間、ＨｉｎｄＩＩＩ／Ｅｃｏ４７ＩＩＩで消化した。消化後、４９５２ｂｐ、４９５２ｂｐ及び４３１３ｂｐのサイズを有するバンドをゲル精製した（Ｍａｃｈｅｒｅｙ  ＆  Ｎａｇｅｌ、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎゲル及びＰＣＲクリーンアップ）。ＩＧＫ４−１＊０１及びＩＧＫ３−７＊０２のカッパ軽鎖可変領域のクローニングのために、構築物３５９３（ｐＰＥＰ−Ｉｎｓ−Ｃｋ）を、３７℃で４時間、ＨｉｎｄＩＩＩ／Ｅｃｏ４７ＩＩＩで消化し、４４７４ｂｐのサイズを有するバンドをゲル精製した。合成した抗体の可変領域を、３７℃で４時間、ＨｉｎｄＩＩＩ／Ｅｃｏ４７ＩＩＩで消化し、４２２ｂｐ（ＩＧＨＶ１−２＊０２）ならびに４１１ｂｐ（ＩＧＫ４−１＊０１及びＩＧＫ３−７＊０２）のサイズを有するバンドをゲル精製した。
【０４８７】
消化し、精製した可変抗体領域（ＩＧＨＶ１−２＊０２、ＩＧＫ４−１＊０１、ＩＧＫ３−７＊０２）を、適切な免疫グロブリン定常領域を含むｐＰＥＰベクター（５０ｎｇ）にインフレームでライゲーションした。ライゲーションを、１：３のベクター挿入物比で、１６℃で一晩行った。その後、１μＬのライゲーション反応物をＤＨ１０Ｂ細胞（大腸菌ＥｌｅｃｔｒｏＭａｘ  ＤＨ１０Ｂエレクトロコンピテント細胞、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（１９００Ｖ／５ミリ秒）に電気穿孔した。次いで、５〜５０μＬの電気穿孔した細菌を、ＬＢ寒天＋１００μｇ／ｍＬのアンピシリンプレート上に播種した。各構築物から約２〜３個のコロニーを選定し、一晩成長させた。
【０４８８】
各クローンからＤＮＡプラスミド調製物を小規模に行った（Ｍａｃｈｅｒｅｙ  ＆  Ｎａｇｅｌ、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ  Ｐｌａｓｍｉｄ）。クローニングされた挿入物の存在及び正確なサイズを検証するために、ＨｉｎｄＩＩＩ／Ｅｃｏ４７ＩＩＩ（Ｈ／Ｅ）で消化を行い、ＡｐａＬＩ（Ａ）での消化を使用して、正確なベクター骨格を検証した。ベクターの完全性を、未切断プラスミドＤＮＡの分離によって試験した。各陽性クローン及びＤＮＡから、調製物は、アップスケーリングされ、制御消化され、プライマー８９２−Ｊｅ（配列：５’  ｇａｃｃａａｔａｇａａａｃｔｇｇｇｃｔｔｇｔｃ  ３’、配列番号７０５）を用いて配列決定した。各構築物は、独自の識別子として構築物番号を受容し、グリセロールストックを調製した。
【０４８９】
【表１１】
2017526615.tif 000042
６．２．３．２  レトロウイルス発現ベクターのクローニング
【０４９０】
ＩＧＨＶ１−２＊０２、ＩＧＫ３−７＊０２、及びＩＧＫ４−１＊０１の可変領域は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｅｉｓ（商標）によって合成され、レトロウイルス発現ベクター（ｐＣＭＡ）においてクローニングされた。続いて、これらの構築物は、プレＢ細胞を形質導入し、Ｒｅｔｒｏｃｙｔｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ（登録商標）技術を用いて表面上に抗体を発現するために使用した。レトロウイルス発現ベクターは、膜アンカー画分（ＩＧＨＧ１）及びＣＤ８表面マーカー遺伝子を含む、ＭＳＣＶベースの５’及び３’ＬＴＲの免疫グロブリン定常領域（ＩＧＨＧ１またはＩＧＫＣ）を含んだ。
【０４９１】
合成した可変領域は、適切な免疫グロブリン定常領域を含むレトロウイルス発現ベクターにクローニングされた。重鎖可変領域のクローニングのために、構築物３９５６（ｐＣＭＡ−ＩｎｓＸ  Ｃｇ（ｉｓｏ３）ｌｏｘＰ２−Ｉ−ｔｒ＿ｈｕＣＤ８−ｌｏｘＰ）を、３７℃で４時間、ＨｉｎｄＩＩＩ／Ｅｃｏ４７ＩＩＩで消化し、７６１６ｂｐのサイズを有するバンドをゲル精製した。カッパ軽鎖可変領域のクローニングのために、構築物３９５７（ｐＣＭＡ−ＩｎｓＸ  Ｃｋ−Ｉ−ｔｒ＿ｈｕＣＤ８）を、３７℃で４時間、ＨｉｎｄＩＩＩ／Ｅｃｏ４７ＩＩＩで消化し、６７１８ｂｐのサイズを有するバンドをゲル精製した。合成した抗体の可変領域を、上の項６．２．１に記載されるように消化した。
【０４９２】
消化し、精製した可変抗体領域を、適切な免疫グロブリン定常領域を含むレトロウイルス発現ベクター（５０ｎｇ）にインフレームでライゲーションした。上の項６．２．３．１に記載されるように、ライゲーション、形質転換、及びクローンの確認を行った。アップスケーリングされたＤＮＡプラスミド調製物を、プライマー３２７−Ｊｅ（配列：５’  ｃｔｃｇａｔｃｃｔｃｃｃｔｔｔａｔｃｃａｇ  ３’、配列番号７０６）を用いて配列決定した。各構築物は、独自の識別子として構築物番号を受容し、グリセロールストックを調製した。
【０４９３】
【表１２】
2017526615.tif 000043
６．２．４  組換え抗体の発現
【０４９４】
組換え抗体を、懸濁液中のＦｒｅｅＳｔｙｌｅＣＨＯ−Ｓ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｒ８００−０７）の一過性トランスフェクションによって発現した。簡潔に言えば、細胞密度を、４ｍＭのＬ−グルタミン（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ、Ｋ  ０２８３）及び１Ｘ  ＨＴの補完剤（ＧＩＢＣＯ、１１０６７−０３０）が追加されたＰｏｗｅｒＣＨＯ２培地（Ｌｏｎｚａ、１２−７７１Ｑ）中で８×１０６細胞／ｍＬになるまで調節した。抗体軽鎖（２．５μｇ／ｍＬ）及び重鎖（２．５μｇ／ｍＬ）に対応するＤＮＡを、軽くかき混ぜながら、細胞懸濁液に添加した。ＤＮＡの添加後、この細胞懸濁液に、１０μＬ／ｍＬのＴｒａｎｓＩＴ−Ｐｒｏトランスフェクション試薬（ＭＩＲＵＳ、ＭＩＲ５７００）及び０．５ｍＭ（最終濃度）のバルプロ酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｐ４５４３）が追加された。この細胞懸濁液を、振盪させながら、３１℃、８％ＣＯ２で６日間インキュベート（２００ｒｐｍ）した。
【０４９５】
培養上清を遠心分離（９０００ｇ、１０℃で１０分間）によって回収し、０．４５μｍのフィルターを通して濾過した。Ｖｉｖａｓｐｉｎ  ２０限外濾過装置（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ、ＶＳ２０３２、ＭＷＣＯ  ５０ｋＤａ）は、１０００ｇ、１０℃で、およそ６０分間、０．６ｍＬの最終容積になるまで上清を濃縮するために使用した。組換え抗体の精製のために、タンパク質Ａ  ＨＰスピントラップカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、２８−９０３１−３２）を、結合緩衝液（２０ｍＭのリン酸緩衝液ｐＨ７．０）で平衡し、０．６ｍＬの濃縮物を装填した。カラムを蓋で密閉し、回転ミキサー上で、室温でインキュベートした。３０分後、このカラムを、６００μＬの結合緩衝液の適用によって２回洗浄し、続いて、１００ｇで１分間遠心分離した。結合した組換え抗体を、４００μＬの溶出緩衝液（１００ｍＭグリシン、ｐＨ２．０）を添加することによってスピンカラムから溶出し、１００ｇで１分間遠心分離した。溶出物を、４０μＬの中和緩衝液（１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ９．０）で直ちに中和させた。精製した組換え抗体を、特徴付け研究のためにさらに処理するまで、４℃でタンパク質ＬｏＢｉｎｄ管（エッペンドルフ、００３０  １０８．１１６）中に保存した。
【０４９６】
定量化のために、細胞培養上清及びヒトＩｇＧを含む精製試料をアッセイ緩衝液（Ｒｏｃｈｅ、１１１１２５８９００１）中に希釈し、希釈を、９６ハーフウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３８８４）中で二重に査定を行った。簡潔に言えば、２５μＬの試料を、ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆ（ａｂ’）２断片特異的）（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１０９−００６−０９）とのアミンカップリングによって装填された１２００  Ｌｕｍｉｎｅｘ−ＣＯＯＨ−ビーズ５μＬと暗室で１時間インキュベート（２０℃、６５０ｒｐｍ）した。標準曲線を、ＣｈｒｏｍＰｕｒｅヒトＩｇＧ全分子（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、００９−０００−００３）の二重の２５μＬの１：３の希釈系列（０．０８〜６０ｎｇ／ｍＬ）を使用して生成された。３０μＬの抗ヒトＩｇＧを添加し、Ｒ−ＰＥ（５μｇ／ｍＬ、Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、１０９−１１６−０９８）によりＦｃ特異的に標識し、１時間、さらにインキュベーションすることによって、検出を行った。プレートを読み出し、１００ビーズ、５０μＬの試料サイズの設定を使用するＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００機器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して分析した。
【０４９７】
精製試料の品質管理は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる分析、及びＨＰＬＣにおけるサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を含んだ。Ｌａｅｍｍｌｉ（Ｌａｅｍｍｌｉ  ＵＫ（１９７０）Ｎａｔｕｒｅ，２２７（５２５９）：６８０−５）のプロトコル後、１２％及び８％のポリアクリルアミドゲルにおいて、それぞれ、還元条件及び非還元条件下で、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析を行った。ポリアクリルアミドゲルを、可視化のために、クマシーブリリアントブルー溶液で染色した。バイナリポンプ、脱気ユニット、自動サンプリングユニット、及び紫外線ダイオードアレイ検出器を装備したＡｇｉｌｅｎｔ  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  １２６０システム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において、ＳＥＣを行った。分離のために、Ｚｅｎｉｘ−Ｃ  ３００カラム（粒径３μｍ、４．５×３００ｍｍ、Ｓｅｐａｘ、２３３３００−４６３０）を使用した。３μｇの各試料を、装填し、１００ｍＭのリン酸緩衝液ｐＨ７．０（１５０ｍＭ  ＮａＣｌが追加された）中で０．３５ｍＬ／分で１５分間分離し、２２０ｎｍで検出された。
６．２．５  ヒト化変異型の特徴付け
【０４９８】
ヒト化変異型（Ｈｕｍ２３１＃１：ＩＧＨＶ１−２＊０２及びＩＧＫ３−７＊０２、Ｈｕｍ２３１＃２：ＩＧＨＶ１−２＊０２及びＩＧＫ４−１＊０１）及びキメラ親抗体２３１−３２−１５の両方の結合特性を、以下に記載されるいくつかのアッセイにおいて特徴付けした。
６．２．５．１  懸濁アレイ技術による定量化及び結合分析
【０４９９】
ヒト化変異型及びキメラ親抗体２３１−３２−１５の両方の精製材料を、１：１０，０００及び１：１００，０００のアッセイ緩衝液（Ｒｏｃｈｅ  １１１１２５８９００１）中に希釈した。簡潔に言えば、２５μＬの各希釈物を、９６ハーフウェルフィルタプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭＡＢＶＮ１２５０）中で１５００  Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ（５μＬのアッセイ緩衝液中）を用いて、暗室で１時間インキュベート（２０℃、６５０ｒｐｍ）した。Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ、＃５  ＬＣ１０００５−０１及び＃１４  ＬＣ１００１４−０１）を、ＣＯＯＨのビーズ表面とのアミンカップリングを介して、抗ヒトＩｇＧ（Ｆ（ａｂ）２特異的、ＪＩＲ、１０５−００６−０９７）またはＧＩＴＲ抗原（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ジスルフィド結合ホモ二量体、６８９−ＧＲ）のいずれかとカップリングした。標準曲線を、ＩｇＧ１バージョンの場合、１：３の希釈系列（０．０８〜５４０ｎｇ／ｍＬ）を用いた二重の２５μＬのＣｈｒｏｍＰｕｒｅ  ＩｇＧ全分子（ＪＩＲ、００９−０００−００３）を使用して生成された。ＩｇＧ４形式の抗体の場合、異なる標準を使用し、免疫グロブリン精製した（Ｓｉｇｍａ、Ｉ４６３９）。Ｒ−ＰＥ（２．５μｇ／ｍＬ、ＪＩＲ  １０９−１１６−０９８、ＡｂＤＳｅｒｏｔｅｃ  Ｒａｐｉｄ  ＲＰＥ抗体共役キット、ＬＮＫ０２２ＲＰＥ）でＦ（ａｂ）２を標識した６０μＬのヤギ抗ヒトＩｇＧを使用して検出を行い、１時間インキュベート（２０℃、６５０ｒｐｍ）した。Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用してプレートを分析した。多くの１００ビーズを、４８μＬの試料容積で１ウェル当たり計数した。相対的親和性を、試料中に存在するＩｇＧ値に従って、キメラ親２３１−３２−１５抗体のＭＦＩ値（１００％の結合に設定）に対して計算した。ヒト化変異型は両方ともに、１００％に近い相対的親和性を示した。
６．２．５．２  懸濁アレイ技術を使用したリガンド遮断活性
【０５００】
抗ＧＩＴＲ抗体がＧＩＴＲへのリガンド（ＧＩＴＲＬ）の結合を遮断するかを決定するために、順位付けアッセイの設定を、懸濁アレイ技術を用いて行った。５μＬのアッセイ緩衝液（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ、＃１４  ＬＣ１００１４−０１）中の１２００  Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズを、９６ウェルハーフエリアプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｉｎｃ．、３８８４）の各ウェルに添加した。ビーズを、ＣＯＯＨビーズ表面でのアミンカップリングを介して、ＧＩＴＲ抗原（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ジスルフィド結合ホモ二量体、６８９−ＧＲ）とカップリングした。５０μｇ／ｍＬのＧＩＴＲ抗原及び１ｍＬ当たり１×１０７のＬｕｍｉｎｅｘビーズを用いて、カップリング反応を行った。標準のＮＨＳエステル化学は、ビーズ表面（Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｘｍａｐ  ｃｏｏｋｂｏｏｋ第３章）上で抗原の第１級アミン基とカルボキシル基との間でカルボジイミド結合を形成するために使用した。
【０５０１】
タンパク質の抗原カップリングは、ミクロスフェアのカルボキシル基が、まず、スルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホスキシンイミド）の存在下で、ＥＤＣ（１−エチル−３−［３−ジメチルアミノプロピル］カルボジイミド塩酸塩）試薬で活性化して、スルホ−ＮＨＳ−エステル中間体を得る、単純な２つのステップのカルボジイミド手順である。次いで、反応性中間体を、標的分子（抗体、タンパク質、またはペプチド）の第１級アミンと反応させることによって置き換えて、共有アミノ結合を形成する。カップリングしたビーズを、異なる濃度の抗ＧＩＴＲ抗体（１ウェル当たり２５μＬのアッセイ緩衝液中の９０００ｎｇ／ｍＬ〜１２ｎｇ／ｍＬの濃度）で、２０℃及び６５０ｒｐｍで１時間インキュベートした。その後、３０μＬのＲ−ＰＥ標識ＧＩＴＲ−リガンド（濃度１ｎＭ、単量体、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ６９４−ＧＦ／ＣＦ）を各ウェルに添加し、６０μＬの総ウェル容積を得た（１ウェル当たり１２００個のビーズ及び０．５ｎＭの標識ＧＩＴＲＬの最終濃度）。リガンドの標識化を、Ｒ−ＰＥ標識キット（ＡｂＤＳｅｒｏｔｅｃ、ＬＹＮＸ  Ｒａｐｉｄ  ＲＰＥ抗体共役キット、ＬＮＫ０２３ＲＰＥ）を使用して、製造業者のプロトコルに従って社内で行った。Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて、プレートを分析した。多くの１００ビーズを、５０μＬの試料容積で１ウェル当たり計数した。リガンドを遮断する潜在性を、対照のみのリガンドの非競合シグナルのＭＦＩ値（１００％の結合）を用いて計算した。ＰＥ検出可能なシグナルは、抗原へのリガンドの結合を示した。
【０５０２】
第１のアッセイでは、抗ＧＩＴＲ抗体キメラ親２３１−３２−１５及びｍ６Ｃ８（第ＷＯ０６／１０５０２１号）ならびにＩＬ−１β（ＳＫ４８Ｅ２６、国際公開第ＷＯ９５／００１９９７号）を認識する対照抗体を試験した。抗体ｍ６Ｃ８は、第ＷＯ０６／１０５０２１号（参照により本明細書に組み込まれる）において提供された抗体６Ｃ８の可変領域に基づいて生成されたＩｇＧ１抗体であった。ｍ６Ｃ８の重鎖は、配列番号５８５のアミノ酸配列を含む。ｍ６Ｃ８の軽鎖は、配列番号５８６のアミノ酸配列を含む。このアッセイの結果を図５に示し、３３３ｎｇ／ｍＬを上回る６Ｃ８抗体の濃度では、ＰＥシグナルを検出せず、それ故に、ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合は生じなかったことが観察され得る。対照的に、キメラ親２３１−３２−１５抗体の場合、試験したすべての濃度で、ＰＥシグナルが検出され、このことは、キメラ親２３１−３２−１５抗体もＧＩＴＲに結合された場合に、ＧＩＴＲＬが、依然としてＧＩＴＲに結合可能であることを示した。図５に示したデータは、このアッセイの４回の繰り返しからのものであり、二重に行い、ｎ＝８に対して標準偏差を計算した。
【０５０３】
第２のアッセイでは、ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬ−ＰＥの結合を、キメラ親２３１−３２−１５抗ＧＩＴＲ抗体ならびにヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２の存在下で試験した。図６は、ＧＩＴＲに結合された場合に、これらの３つの抗ＧＩＴＲ抗体が、依然として、ＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬの結合を可能にすることを示し、３つの抗体はすべて、同等のリガンド遮断活性を示す。
６．２．５．３  表面プラズモン共鳴による動態分析
【０５０４】
表面プラズモン共鳴を、ヒト化変異型及びキメラ親２３１−３２−１５抗体の親和性を決定するために使用した（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００／Ｔ２００感度増強システム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及びＦａｂ捕捉アッセイ）。すべての相互作用を、泳動緩衝液として１×ＤＰＢＳ（ＰＡＡ、Ｈ１５−００２）及びＰ２０（０．０５％、Ｐｉｅｒｃｅ、２８３２０）を用いて２５℃で分析した。抗ＧＩＴＲ抗体（泳動緩衝液中の８μｇ／ｍＬ）を、固定化した抗ヒトＦａｂ抗体（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｆａｂ  Ｃａｐｔｕｒｅ  Ｋｉｔ、２８９５８３２５）を介して、ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｅｒｉｅｓ  Ｓ  ＣＭ５、ＢＲ−１００５−３０）のチップ表面に捕捉した。ＧＩＴＲ抗原の非特異的相互作用を検出するために、フローセル２においてのみ抗体捕捉を行った一方で、フローセル１のみにおいて、捕捉する抗体を固定化した。さらに、非関連抗体（抗ＩＬ−１β、ＳＫ４８Ｅ２６、国際公開第ＷＯ９５／００１９９７号）を、ＧＩＴＲの結合の特性を査定するために使用した。抗ＧＩＴＲ抗体の捕捉後、ＧＩＴＲ抗原（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ジスルフィド結合ホモ二量体、６８９−ＧＲ）を、各抗体に対して異なる量（４０ｎＭ、１０ｎＭ、及び２．５ｎＭ）で両方のフローセルを通して泳動させた。また、ブランク曲線（泳動緩衝液のみ）も、各泳動に含んだ。会合を１０μＬ／分の流量で９０秒間行い、解離を６００秒間行った。各泳動後、再生ステップを、１０ｍＭのグリシンｐＨ２．０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ−１００３−５５）で、３０μＬ／分で６０秒間行った。結合曲線を、Ｒｍａｘの全体的適合を有するＬａｎｇｍｕｉｒ  １：１のモデルを適用するＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０．１を用いて評価した。
【０５０５】
これらの値から親和性値（ＫＤ（Ｍ））を計算し、これらの値を以下の表１３に示す。ヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ１２３＃２は、ｏｎ速度の改善を示したが、ｏｆｆ速度の低減も示し、それぞれ、０．７ｎＭ及び０．６ｎＭのＫＤ値をもたらした。キメラ親２３１−３２−１５抗体は、２ｎＭの親和性を有した。
【０５０６】
【表１３】
2017526615.tif 000044
６．２．５．４  表面プラズモン共鳴によるリガンド遮断分析
【０５０７】
ヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２の両方がキメラ親２３１−３２−１５抗体と同じリガンド遮断動態を示すことが予想された。表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ１００／Ｔ２００感度強化システム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ））によって測定されるリガンド遮断アッセイを使用して、このことを確認した。
【０５０８】
第１の実験では、固定化されたＧＩＴＲ抗原へのＧＩＴＲリガンドの結合を評価した。ＧＩＴＲ抗原（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ジスルフィド結合ホモ二量体、６８９−ＧＲ）を高密度（４３７１ＲＵ）でＣＭ５センサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｅｒｉｅｓ  Ｓ  ＣＭ５、ＢＲ−１００５−３０）上に固定化した。別のフローセル内で、オボアルブミン（１２８９  ＲＵ、Ｐｉｅｒｃｅ  ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  ７７１２０）を基準用に固定化した。アミンカップリング（０．４Ｍ  ＥＤＣ及び０．１Ｍ  ＮＨＳでの表面活性化、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅアミンカップリングキット、ＢＲ−１０００−５０）について製造業者（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の標準のプロトコルに従って固定化を行った。未反応基を１Ｍエタノール−アミン−ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で不活性化した。その後、２つのＧＩＴＲリガンド（単量体Ｒ＆Ｄ、６９４−ＧＬ、及び非共有結合ホモ三量体Ｒ＆Ｄ、６９８７）を、異なる量（５００ｎＭ、２５０ｎＭ、及び１２５ｎＭ）でチップ表面を通して泳動させ、飽和条件を決定した。２４０秒間の会合時間及び３００秒間の解離時間を５μＬ／分の流量で使用した。１０ｍＭグリシン（ｐＨ２．０）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ−１００３−５５）を１０μＬ／分で６０秒間使用して、チップ表面の再生を行った。最も好ましい飽和条件を１２５ｎＭのＧＩＴＲ三量体リガンドで達成し、それ故に、この設定を同じ量の抗ＧＩＴＲ抗体で使用した。別の実験では、抗ＧＩＴＲ抗体（１２５ｎＭ）が最初にチップ上のＧＩＴＲ抗原に結合するように逆設定を使用し、その後、ＧＩＴＲリガンド（１２５ｎＭの非共有結合三量体）を添加した。
【０５０９】
図７に示されるように、ＧＩＴＲ抗原をチップ上に固定化し、かつＧＩＴＲＬを抗ＧＩＴＲ抗体、キメラ２３１−３２−１５抗体Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２の存在下で添加したときに、ＧＩＴＲＬの結合が観察された。対照的に、ＧＩＴＲＬの結合は抗ＧＩＴＲ抗体ｍ６Ｃ８の存在下では観察されなかった。これらのデータは、キメラ２３１−３２−１５抗体Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２がヒトＧＩＴＲのＧＩＴＲＬへの結合を阻害しないことを示した。
６．３  実施例３：ヒト化抗体の機能的特徴付け
【０５１０】
この実施例は、ＧＩＴＲのアゴニストとして機能する上述の方法によって生成されたヒト化抗ＧＩＴＲ抗体の能力を実証する。抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２は、配列番号５６７のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号５８７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。抗体Ｈｕｍ２３１＃２は、軽鎖定常ドメインにおけるＫａｂａｔに従って番号付けされたＴ１０９Ｓ置換（すなわち、野生型Ｆｃ配列に対する１０９位でのトレオニンのセリンでの置換）を含むヒトＩｇＧ１抗体であり、インフレームでの可変領域の定常領域へのクローニングを促進する。この変異は、抗体の結合または機能に影響を及ぼさない保存的修飾である。Ｋａｂａｔに従って番号付けされた１０９位にトレオニンを含むＨｕｍ２３１＃２ｗと命名した野生型対応物も生成した。抗体Ｈｕｍ２３１＃２ｗは、配列番号５６７の重鎖及び配列番号５７６の軽鎖を含むヒトＩｇＧ１抗体である。
【０５１１】
これらの抗ＧＩＴＲ抗体をアッセイして、初代ヒトＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞を共刺激するそれらの能力を決定した。以下の項６．３．１〜６．３．３及び６．３．７に記載の作業を、複数のドナー由来の材料で行った。候補抗体のスクリーニング及び試験に使用されるヒト白血球をＮｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ｃｉｔｙ）から入手した。
【０５１２】
抗ＧＩＴＲ抗体の機能的活性が、ＣＤ４濃縮陽性（別名、ＣＤ４＋）Ｔ細胞、ＣＤ８陽性（別名、ＣＤ８＋）Ｔ細胞、及びＰＢＭＣ上で実証された。ヒトＴ細胞増殖研究について、新たに調製したドナー濃厚白血球を収集し、滅菌組織培養技法を使用して処理した。白血球を処理して、単核免疫細胞（ＰＢＭＣ）を密度勾配（リンパ球分離培地、Ｃｏｒｎｉｎｇ）により回収した。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌ密度勾配のバフィーコート層に位置する。
【０５１３】
ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞濃縮カクテル（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ  Ｃａｎａｄａ）を使用して、ＣＤ４濃縮細胞を陰性選択によりＰＢＭＣから調製した。リンパ球分離培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ）にわたる密度遠心分離により、ＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞調製物を赤血球から分離した。収集した細胞を洗浄し、一定分割して、液体窒素中に保管した。ドナーの刺激への応答の可変性を説明するために、様々な濃度の抗ＣＤ３を使用して、ドナー特異的応答能力を調節した。したがって、抗ＧＩＴＲ抗体をスクリーニングする前に、バフィーコートを、基準抗ＧＩＴＲキメラ親２３１−３２−１５抗体ありまたはなしで、滴定レベルの抗ＣＤ３（クローンＳＰ３４、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、３１．５ｎｇ／ｍＬ〜２５０ｎｇ／ｍＬの濃度）でのＣＤ３刺激に応答したそれらのサイトカイン放出及び増殖能力について査定して、Ｔ細胞増殖及びそれらのサイトカイン産生ベースラインを確立し、各ドナーバフィーコートに適切な刺激条件を決定した。
６．３．１  アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体の抗ＣＤ３刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖への影響
【０５１４】
抗ＧＩＴＲ抗体を、ＣＤ４＋Ｔ細胞のそれらの共刺激によるアゴニスト活性について査定した。キメラ親２３１−３２−１５抗体のアゴニスト活性を２つのヒト化バージョン、Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と比較した。共刺激アッセイを以下のように行った：プレート結合刺激条件の場合、抗ＣＤ３抗体、抗ＧＩＴＲ抗体、及びアイソタイプ対照を示す場所を平底または丸底滅菌組織培養プレート上に２時間コーティングし、過剰な抗体を洗浄により除去した。可溶性共刺激条件の場合、抗ＣＤ３抗体をプレート上にコーティングしながら、抗ＧＩＴＲ抗体との共刺激を溶液中に提供した。試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２、キメラ親２３１−３２−１５抗体（別名、基準２３１）、または陰性アイソタイプ対照（ｐＡＢ１９１５）であった。さらに、プレート結合及び可溶性共刺激条件の場合、抗ＣＤ２８抗体（１２５ｎｇ／ｍＬ、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）及び１０ＵのＩＬ−２も溶液中に提供した。
【０５１５】
細胞増殖を、分裂細胞内のカルボキシフルオレセイン二酢酸スシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）染料の希釈を監視することによって決定した（Ｑｕａｈ  ＢＪ  ｅｔ  ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ  Ｐｒｏｔｏｃ，２（９）：２０４９−５６）。ＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞を１−２μＭのＣＦＳＥで標識した。ＣＦＳＥで標識したＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞を洗浄し、その後、５μｇ／ｍＬもしくは１０μｇ／ｍＬのプレート結合抗ＧＩＴＲ抗体と一緒に、または抗体なしで、プレート結合抗ＣＤ３（１２５ｎｇ／ｍＬ）、可溶性抗ＣＤ２８（１２５ｎｇ／ｍＬ）、及び１０ＵのＩＬ−２で刺激した。これらの細胞を、各ドナー細胞の最適活性化に応じて３７℃の培養で３〜６日間分裂させ、その時点で、培養上清及び細胞をプレートから収集した。
【０５１６】
図８Ａ及び８Ｂは、それぞれ、バフィーコート６及びバフィーコート８上で三連で行われた、抗ＧＩＴＲ抗体との共刺激により誘導されたＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の代表的なＦＡＣＳ分析を示す。これらの図は、細胞の数（Ｙ軸）及びＣＦＳＥで標識したＣＤ４＋Ｔ細胞によって放出された蛍光のレベル（Ｘ軸）を示す。１０μｇ／ｍＬの抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５（基準２３１−３２−１５）、Ｈｕｍ２３１＃１、及びＨｕｍ２３１＃２）を使用した。ＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞増殖が、ＣＦＳＥによって放出された蛍光の低下レベル（ＣＦＳＥ低）を有する細胞の割合の増加によって示される。図８Ａ及び８Ｂは、抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５（基準２３１−３２−１５）、Ｈｕｍ２３１＃１、及びＨｕｍ２３１＃２）が、高応答細胞（バフィーコート６、図８Ａ）のみならず、低応答細胞（バフィーコート８、図８Ｂ）においても、準最適濃度の抗ＣＤ３抗体で活性化された細胞に添加したときに、アゴニスト活性を実証したことを図解する。
【０５１７】
図９Ａ及び９Ｂは、１０μｇ／ｍＬの濃度での上記のプレート結合抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５抗体、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、及びｍ６Ｃ８）についての研究からの代表的な結果のヒストグラムプロットである。図９Ａに示される実施例では、Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２との共刺激が、１０μｇ／ｍＬでＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を誘導した。１０μｇ／ｍＬのＨｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２と共刺激したときに、ＣＤ４＋Ｔ細胞のおよそ５０％超が増殖した（ＣＦＳＥ低細胞）。対照的に、抗ＧＩＴＲ抗体媒介共刺激なしでの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激下で、ＣＤ４＋Ｔ細胞のおよそ３５％のみが増殖した（ＣＦＳＥ低細胞）。図９Ｂは、抗ＧＩＴＲ共刺激の抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８媒介刺激への付加が、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８のみでの刺激と比較して、５日間にわたる培養でのＣＤ４＋Ｔ細胞の絶対数の増加も引き起こしたことを図解する。例えば、１０μｇ／ｍＬの抗体キメラ親２３１−３２−１５抗体（基準２３１）と併せた抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８での刺激が、ＧＩＴＲ共刺激を引き起こし、ＣＤ４＋Ｔ細胞の数の７．５×１０４から１２．０×１０４への拡張をもたらした。
【０５１８】
さらに、１０μｇ／ｍＬでのＨｕｍ２３１＃１媒介共刺激も、ＣＤ４＋Ｔ細胞の７．５×１０４から１１．５×１０４への拡張をもたらした。１０μｇ／ｍＬの抗体濃度で、Ｈｕｍ２３１＃２との共刺激も、ＣＤ４＋Ｔ細胞の７．５×１０４から１０．６×ｌ０４への増殖をもたらした。顕著に、ＣＤ４＋Ｔ細胞と１０μｇ／ｍＬのｍ６Ｃ８（国際公開第ＷＯ０６／１０５０２１号）の共刺激は、５日間の培養後に抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激のみで見られる増加を超える細胞の絶対数のさらなる増加を引き起こさなかった。
６．３．２  アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体の抗ＣＤ３誘導性ＣＤ４＋Ｔ細胞サイトカイン産生への影響
【０５１９】
Ａ抗ＧＩＴＲ抗体のアゴニスト共刺激活性のさらなる証拠として、ＣＤ４＋Ｔ細胞によって放出されたサイトカイン（ＩＦＮγ、ＩＬ−６、ＴＮＦα、及びＩＬ−１０）を、多重ＥＬＩＳＡ（Ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｉｘ、ＦＡＣＳビーズベースのサイトカインＥＬＩＳＡ、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で測定した。増殖アッセイから回収した上清を収集し、サイトカイン分析に使用した。図１０Ａ〜１０Ｄは、１０μｇ／ｍＬまたは５μｇ／ｍＬのキメラ親２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２抗ＧＩＴＲ抗体のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞によるサイトカイン産生への影響を示す。１０μｇ／ｍＬまたは５μｇ／ｍＬのキメラ親２３１−３２−１５抗体、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２のいずれかを抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激Ｔ細胞に添加することにより、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激のみと比較して、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＩＬ−１０、及びＩＬ−６の産生が著しく増加した。抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激の不在下ではアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体の共刺激活性は観察されなかった。
６．３．３  ヒト化２３１−３２−１５クローンの滴定
【０５２０】
Ｔ細胞増殖及びサイトカイン産生を誘導する抗ＧＩＴＲ抗体濃度の範囲を評価するために、ＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞を、１２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激し、滴定プレート結合キメラ親２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１または、Ｈｕｍ２３１＃２抗ＧＩＴＲ抗体と共刺激した。図１１に示される結果は、１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、または２．５μｇ／ｍＬの濃度でのキメラ親２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、及びＨｕｍ２３１＃２との共刺激が、ＣＦＳＥ希釈によって監視されるＴ細胞増殖を誘導したことを示す。さらに、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激の不在下で、抗ＧＩＴＲ抗体は、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を刺激しなかった。
【０５２１】
図１２Ａは、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激及びある濃度範囲（１０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、または２．５μｇ／ｍＬ）にわたる抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２）との共刺激が、ＩＦＮγのＣＤ４＋Ｔ細胞産生を増強したことを示す。顕著に、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激の不在下で、抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２）は、ＩＦＮγ産生を誘導しなかった。
【０５２２】
溶液中でのキメラ親２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２抗ＧＩＴＲ抗体の機能的活性をさらに試験するために、ＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞を１２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８で刺激し、滴定可溶性抗ＧＩＴＲ抗体と共刺激した。可溶性Ｈｕｍ２３１＃１またはＨｕｍ２３１＃２抗ＧＩＴＲ抗体は、図１２Ｂに示されるように、ＩＦＮγのＣＤ４＋Ｔ細胞産生も共刺激した。
６．３．４  アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体の抗ＣＤ３誘導ＰＢＭＣサイトカイン産生への影響
【０５２３】
この実施例では、ＰＢＭＣを使用して、抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２との共刺激によって誘導されたサイトカイン産生を試験した。Ｆｉｃｏｌｌ勾配により健常なドナーのバフィーコート（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）から単離したＰＢＭＣを液体窒素中に保存し、実験日に解凍した。これらの細胞を細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋２０Ｕ／ｍＬのＩＬ−２）に再懸濁し、様々な準最適濃度（０．３〜５μｇ／ｍＬ）のプレート結合抗ＣＤ３抗体及び５μｇ／ｍＬのプレート結合抗ＧＩＴＲ抗体またはアイソタイプ対照ＩｇＧ１抗体を含有する９６ウェル培養プレートに添加した。これらの試料を３７℃及び５％ＣＯ２で４日間インキュベートし、細胞培養上清を２日目及び４日目に収集した。製造業者の指示に従ってＶ−ＰＬＥＸ  Ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｎｅｌ  １（ヒト）Ｋｉｔ（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用してこれらの試料を試験して、分泌型サイトカイン（ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、及びＩＬ−４）を測定した。
【０５２４】
図１３に示されるように、プレート結合抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２との共刺激により、２名の異なるドナー由来のＰＢＭＣにおける複数のサイトカインの分泌が誘導された。
６．３．５  アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体の細胞内サイトカイン染色により測定されたサイトカイン産生への影響
【０５２５】
サイトカイン産生におけるＨｕｍ２３１＃２のアゴニスト活性を細胞内サイトカイン染色によりさらに分析した。Ｆｉｃｏｌｌ勾配により健常なドナーのバフィーコート（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）から単離したＰＢＭＣを液体窒素中に保存し、実験日に解凍した。これらの細胞を細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋２０Ｕ／ｍＬのＩＬ−２）に再懸濁し、様々な準最適濃度（０．３〜５μｇ／ｍＬ）のプレート結合抗ＣＤ３抗体及び５μｇ／ｍＬのプレート結合抗ＧＩＴＲ抗体またはアイソタイプ対照ＩｇＧ１抗体を含有する９６ウェル培養プレートに添加した。これらの試料を３７℃及び５％ＣＯ２で３〜４日間インキュベートした。活性化後、細胞内タンパク質輸送を阻害するために、それらの細胞を製造業者の指示に従ってブレフェルジンＡ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で処理し、これらの試料を３７℃及び５％ＣＯ２で６時間インキュベートした。インキュベーション後、これらの細胞をＦＩＴＣ生存能力アミン染料（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色して、死細胞を染色した。冷ＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、ｐＨ７．２）で洗浄した後、冷ＦＡＣＳ緩衝液中に希釈したＣＤ３（ＡＰＣ  Ｃｙ７、ＳＰ３４．２）、ＣＤ４（ＰｅｒｃＰ  Ｃｙ５．５、Ｌ２００）、及びＣＤ８ａ（ＰＥ  Ｃｙ７、ＳＫ１）に対する抗体を含有する抗体カクテルを各試料に添加し、４℃で１０分間インキュベートした。これらの細胞を固定し、製造業者の指示に従ってＣｙｔｏｆｉｘ−Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で透過処理して、細胞内染色した。これらのＰＢＭＣをＩＦＮγ（Ａｌｅｘａ６４７、Ｂ２７）及びＴＮＦα（ＰＥ、Ｍａｂ１１）に対する抗体で染色し、室温で１０分間インキュベートした。これらの試料を、１×Ｐｅｒｍ−洗浄緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して洗浄し、ＦＡＣＳｃａｎｔｏフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して取得した。Ｆｌｏｊｏソフトウェアを使用してフローサイトメトリープロットを分析した。フローサイトメトリープロット及びグラフは、６名の異なるドナー由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【０５２６】
ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２は、ヒトＴ細胞上での共刺激活性を実証し、準最適抗ＣＤ３抗体濃度範囲にわたってＩＦＮγ＋単機能性Ｔ細胞、ＴＮＦα＋単機能性Ｔ細胞、ならびにＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性Ｔ細胞を誘導した（図１４Ａ及び１４Ｂ）。
【０５２７】
次に、ヒトＩｇＧ１抗体であるＨｕｍ２３１＃２ｗを、ｐａｂ１９８９と命名したヒトＩｇＧ４抗体に変換した。抗体ｐａｂ１９８９は、Ｈｕｍ２３１＃２ｗと同じ重鎖可変領域及び同じ軽鎖を共有するが、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。抗体ｐａｂ１９８９は、配列番号５５４の重鎖配列及び配列番号５７６の軽鎖配列を含む。
【０５２８】
上述の細胞内サイトカイン染色実験において、ＩｇＧ４抗体ｐａｂ１９８９をＩｇＧ１抗体Ｈｕｍ２３１＃２ｗと並行して試験した。抗ＣＤ３抗体を０．７、０．８、及び０．９μｇ／ｍＬで使用し、抗ＧＩＴＲ抗体を５μｇ／ｍＬで使用した。これらの試料を３７℃及び５％ＣＯ２で３〜４日間インキュベートした。図１４Ｃに示されるように、ｐａｂ１９８９は、Ｈｕｍ２３１＃２ｗと同様のアゴニスト活性を呈し、ＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＴＮＦα＋単機能性ＣＤ４＋Ｔ細胞を誘導した。これらのグラフは、４名の異なるドナー由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
６．３．６  架橋の抗ＧＩＴＲ抗体のアゴニスト活性への影響
【０５２９】
抗ＣＤ３刺激ＰＢＭＣを使用して、架橋の抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２の機能性活性への影響を試験した。
【０５３０】
項６．３．５に記載の準最適ＣＤ３刺激アッセイにおいて、プレート結合Ｈｕｍ２３１＃２または可溶性Ｈｕｍ２３１＃２をＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性Ｔ細胞の誘導について試験した。図１５Ａに示されるように、アイソタイプ対照と比較して、プレート結合Ｈｕｍ２３１＃２のみがＩＦＮγ＋ＴＮＦα＋多機能性ＣＤ８＋Ｔ細胞の割合を増加させ、可溶性Ｈｕｍ２３１＃２は増加させなかった。
【０５３１】
項６．３．４に記載のＰＢＭＣサイトカイン分泌アッセイを、プレート結合Ｈｕｍ２３１＃２または抗Ｆｃ抗体と架橋したＨｕｍ２３１＃２で繰り返した。培養上清を４日目に収集して、分泌型サイトカイン（ＩＦＮγ、ＩＬ−２、ＴＮＦα、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、及びＩＬ−４）を測定した。プレート結合Ｈｕｍ２３１＃２（図１５Ｂ）または抗Ｆｃ架橋Ｈｕｍ２３１＃２（図１５Ｃ）との共刺激がサイトカイン分泌を誘導した。
６．３．７  バフィーコート８（ＢＣ８）上でのヒト化２３１−３２−１５クローンの活性及びエフェクターＴ細胞またはＴ制御性細胞の測定
【０５３２】
この実施例では、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体のＣＤ４＋エフェクターＴ細胞またはＣＤ４＋Ｔ制御性細胞への影響を、それらの増殖を監視することにより測定した。ＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識し、１２５ｎｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体で刺激した。ＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞の増殖が、培養５日後にＣＦＳＥ希釈により監視された。
【０５３３】
図１６Ａ及び１６Ｂに示されるＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞集団内のＣＤ４＋エフェクターＴまたはＴ制御性細胞集団を、それらの細胞表面マーカーによるフローサイトメトリー染色により特定した。活性化ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞を、ＣＤ２５＋、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ１２７Ｍｅｄ／Ｌｏｗ、及びＦｏｘｐ３Ｎｅｇ／Ｌｏｗと特徴付けた。ＣＤ４＋Ｔ制御性細胞を、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ１２７Ｌｏｗ、及びＦｏｘｐ３Ｈｉｇｈと特定した。以下の表１４に従ってＦＡＣＳ染色を行った。
【０５３４】
【表１４】
2017526615.tif 000045
【０５３５】
刺激アッセイの結果を図１６Ａ及び１６ＢのＦＡＣＳプロットに示す。ＣＤ４＋Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ１２７Ｌｏｗ、及びＦｏｘｐ３Ｈｉｇｈ）または活性化ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞（ＣＤ２５＋、ＣＤ４５ＲＡ−、ＣＤ１２７Ｍｅｄ／Ｌｏｗ、及びＦｏｘｐ３Ｎｅｇ／Ｌｏｗ）に対するゲーティングは、１２５ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激が、単独で、かつ抗ＧＩＴＲ共刺激と併せて、エフェクターＴ細胞及びＴ制御性細胞の両方におけるＧＩＴＲ発現を上方制御したことを示す。
【０５３６】
図１６Ａは、エフェクターＴ細胞及びＴ制御性細胞の両方のＦＡＣＳ分析を示す。抗ＣＤ３単独で、または抗ＧＩＴＲ抗体と併せて刺激した後に、両方の細胞型がそれらの細胞表面上にＧＩＴＲを発現した。しかしながら、抗ＧＩＴＲ抗体との共刺激は、Ｔ制御性細胞よりもエフェクターＴ細胞を優先的に拡張し、Ｔｅｆｆ／Ｔｒｅｇ比の増加をもたらす（図１６Ｂ）。
【０５３７】
細胞免疫の文脈におけるＴ細胞上での抗ＧＩＴＲ抗体のアゴニスト活性のさらなる証拠として、ＰＢＭＣ刺激後のＴ細胞応答を評価した。
【０５３８】
ＰＢＭＣ刺激を、ＰＢＭＣ上での抗ＣＤ３誘導増殖を調節することによって滴定した。プレート結合抗ＧＩＴＲ抗体またはアイソタイプ対照のいずれかと併せて３１．２５ｎｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８と刺激したＣＦＳＥ標識ＰＢＭＣを図１７Ａ及び１７Ｂに図解する。抗ＧＩＴＲ抗体活性の陽性対照として、同じ刺激条件を使用して、ＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞を刺激した（データ示さず）。
【０５３９】
ＰＢＭＣ集団におけるＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞を抗ＣＤ３及び抗ＣＤ４または抗ＣＤ３及び抗ＣＤ８で染色することにより、それらを特定した。ＣＤ４＋ＣＤ３＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋ＣＤ３＋Ｔ細胞に対してゲーティングした取得したＦＡＣＳ試料のＦｌｏＪｏ（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）分析により、抗ＧＩＴＲキメラ親２３１−３２−１５（基準２３１）、Ｈｕｍ２３１＃１、及びＨｕｍ２３１＃２抗体刺激Ｔ細胞増殖（％ＣＦＳＥ低）が示された。具体的には、図１７Ｂに示される実験は、抗ＧＩＴＲキメラ親２３１−３２−１５（基準２３１）、Ｈｕｍ２３１＃１、及びＨｕｍ２３１＃２抗体が、ＣＤ８＋Ｔ細胞上で活性を有することを明らかにした。
６．３．８  アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体のＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞株への影響
【０５４０】
ヒトＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞株（Ｐｒｏｍｅｇａ）を、抗ＧＩＴＲアゴニスト抗体の共刺激活性をプローブするように設計した。抗ＧＩＴＲアゴニスト抗体またはＧＩＴＲリガンドによるＧＩＴＲの活性がＮＦ−κＢを活性化することが報告されている（Ｓｎｅｌｌ  ＬＭ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１０）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １８５：７２２３−７２３４、Ｂｕｌｌｉａｒｄ  Ｙ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１３）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  ２１０：１６８５−１６９３、Ｙｕ  ＫＹ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３１０：４３３−４３８）。したがって、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ  ＮＦ−κＢ−ｌｕｃ２Ｐ構築物及びヒトＧＩＴＲを安定に発現するように遺伝子改変した。レポーター細胞をアッセイ培地（ＲＰＭＩ＋１％ＦＢＳ）中に再懸濁し、０．３μｇ／ｍＬのプレート結合抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４）の不在下または存在下で、様々な濃度（１２．５、１０、５、２．５、１．２５、及び０．６２５μｇ／ｍＬ）のプレート結合抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ｍ６Ｃ８、またはＩｇＧ１アイソタイプ対照とインキュベートした。抗ＣＤ３抗体とインキュベートしたプレートを、インキュベーションの６時間後または１８時間後に読み取った。抗ＣＤ３抗体なしのプレートを、インキュベーションの２時間後、５時間後、６時間後、８時間後、または１８時間後に読み取った。インキュベーション後、これらのプレートを室温で平衡化し、その後、等体積の室温のＢｉｏ−Ｇｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加した。ＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダー２１００を使用して発光を読み取った。
【０５４１】
抗ＣＤ３抗体ありのアッセイの場合、刺激後１８時間時点でのルシフェラーゼＲＬＵを、試験した各抗体濃度についてプロットした（図１８Ａ）。同様に、抗ＣＤ３抗体なしのアッセイの場合、図１８Ｂは、試験した様々な抗体濃度での刺激後５時間時点のルシフェラーゼ相対光単位（ＲＬＵ）を示すグラフである。図１８Ｃでは、刺激後０時間、２時間、５時間、６時間、８時間、及び１８時間時点での試験したいくつかの抗体濃度間の抗ＣＤ３抗体なしのルシフェラーゼ発現の最も高い比率（ＧＩＴＲ  Ａｂ／アイソタイプ対照）を示す。示されるデータは、抗ＣＤ３抗体ありの４つの実験または抗ＣＤ３抗体なしの２つの実験を代表するものである。
【０５４２】
抗ＣＤ３抗体の存在下では、ｍ６Ｃ８が６時間時点でより強力なアゴニスト活性を示した（データ示さず）が、刺激後１８時間までに、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ及びｍ６Ｃ８は、ＧＩＴＲレポーター細胞株の同様の活性化を誘導した（図１８Ａ）。しかしながら、抗ＣＤ３抗体の不在下では、ｍ６Ｃ８ではなくＨｕｍ２３１＃２ｗのみがＧＩＴＲレポーター細胞株の活性化を誘導した（図１８Ｂ）。
６．３．９  アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体のＦｃガンマ受容体ＩＩＩＡ（ＣＤ１６）レポーター細胞株への影響
【０５４３】
この実施例では、活性化ｎＴｒｅｇ細胞及びエフェクターＴ細胞によるヒトＧＩＴＲの発現を試験した。磁気に基づく分離技法を使用して、健常なドナーから単離したＰＢＭＣをＣＤ３＋Ｔ細胞（Ｔｅｆｆ）またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ４５ＲＡ＋Ｔ細胞（ｎＴｒｅｇ）に対して濃縮した。その後、Ｔリンパ球を、ＣＤ３−ＣＤ２８拡張ビーズを用いて５００ＵのｒＩＬ−２で４日間活性化し、５０ＵのｒＩＬ−２でさらに５日間活性化した。ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔｅｆｆ対ｎＴｒｅｇに対するゲーティングによるフローサイトメトリーにより、ＧＩＴＲ受容体定量を決定した。Ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅビーズ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を同時に泳動させ、それを使用してＧＩＴＲ受容体の表面密度を定量した。
【０５４４】
図１９Ａに示されるように、９日目の活性化ｎＴｒｅｇ細胞上でのヒトＧＩＴＲの表面発現（及び評価したすべての時点）は、活性化ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞上での表面発現よりも高かった。
【０５４５】
次に、ＦｃガンマレポーターＩＩＩＡ（ＣＤ１６）を発現する受容体細胞株を説明されるように生成した活性化エフェクターＴ（Ｔｅｆｆ）またはｎＴｒｅｇ細胞とともに使用して、活性化Ｆｃガンマ受容体によりＧＩＴＲとシグナルを共結合する抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２ｗの能力を評価した。拡張したＴｅｆｆまたはｎＴｒｅｇ細胞を異なる用量のＨｕｍ２３１＃２ｗまたはＩｇＧ１アイソタイプ対照とインキュベートした。ＣＤ１６を過剰発現するＪｕｒｋａｔ  ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーター細胞（１５８Ｖ／Ｖ多型）をこれらの試料に添加した。抗原が細胞表面上に位置する抗体／抗原複合体のＣＤ１６への結合は、プロモーター／レポーター構築物にシグナル伝達し、ルシフェラーゼ遺伝子転写をもたらす。プレートを３７℃及び５％ＣＯ２で２０時間インキュベートした。このインキュベーション後、Ｂｉｏ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を室温で解凍し、７５μＬを９６ウェル白色アッセイプレートの各ウェルに添加した。５〜１０分以内に発光を測定した。バックグラウンド発光を各試料読取値から差し引き、調節された相対光単位（ＲＬＵ）を記録した。ΔＲＬＵは、アイソタイプ対照のＲＬＵを差し引いた抗ＧＩＴＲ抗体のＲＬＵを表す。
【０５４６】
活性化ｎＴｒｅｇと活性化ＣＤ４＋またはＣＤ８＋エフェクターＴ細胞との間の差次的表面ＧＩＴＲ発現と一致して（図１９Ａ）、抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２ｗは、活性化ｎＴｒｅｇ細胞に結合しているときに、ＣＤ１６を優先的に活性化した（図１９Ｂ）。
【０５４７】
ＧＩＴＲ過剰発現が腫瘍微小環境内に位置する制御性Ｔ細胞の特徴であるかを評価するために、ＧＩＴＲ発現を、健常なヒトドナーの血液から単離されたＴ細胞（図１９Ｃ、ａ〜ｃ、ｎ＝３）または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者の腫瘍組織から単離されたＴ細胞（図１９Ｃ、ｄ〜ｆ、ｎ＝３）上で比較した。免疫集団への抗体のバックグラウンド結合を排除するために、すべての細胞を精製されたＣＤ１６／３２抗体（１０μｇ／ｍＬ、室温で２０分間）とインキュベートし、その後、細胞表面及び細胞内抗体を添加した。ＦｃＲ遮断後、すべての試料をＡＰＣ共役抗ＧＩＴＲ抗体（クローン１１０４１６、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）またはアイソタイプ対照及び細胞表面抗体系列カクテル（ＣＤ３−ＦＩＴＣ、ＣＤ２５−ＰＥＣｙ７、ＣＤ４−ＢＶ６５０、及びＣＤ８ａ−ＰＥ）と氷（各々１μｇ／ｍＬ）上で４５分間インキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、ＥＤＴＡ、及び０．５％ＢＳＡ）で３回洗浄し、その後、固定／透過処理し、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ共役ＦＯＸＰ３とインキュベートした（固定／透過処理し、各々氷（１μｇ／ｍＬ）上で４５分間インキュベートした）。その後、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、染色試料を分析した。図１９Ｃの細胞集団を、Ｔｃｏｎｖ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ−、ＣＤ２５ｌｏｗ、ＦＯＸＰ３−）またはＴｒｅｇ（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８ａ−、ＣＤ２５ｈｉｇｈ、ＦＯＸＰ３＋）と定義した。
【０５４８】
図１９Ｃで実証されるように、ＧＩＴＲ表面発現は、ＮＳＣＬＣ患者の腫瘍組織から単離した制御性Ｔ細胞で最も高く、健常なドナー由来のＴｒｅｇまたは従来のＴ細胞では検出可能なレベルがほとんどまたは全くなかった。
６．３．１０  アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体のアフリカミドリザル由来のＴ細胞のサイトカイン産生への影響
【０５４９】
種交差反応性を試験するために、Ｈｕｍ２３１＃２を、アフリカミドリザル（ＡＧＭ）由来のＧＩＴＲへのその結合について評価した。簡潔に言えば、ＡＧＭ  ＰＢＭＣ（Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  Ｐｒｉｍａｔｅｓ）を解凍し、計数した。ＰＢＭＣを細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ）中に再懸濁し、抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４．２、ＢＤ）またはＣｏｎＡ（Ｓｉｇｍａ）＋ＩＬ−２（２０Ｕ／ｍＬ）と３７℃及び５％ＣＯ２で３日間刺激した。活性化後、これらの細胞をアミン染料ＦＩＴＣ（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で、室温で１５分間染色した。これらの細胞を冷ＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、ｐＨ７．２）で洗浄し、冷ＦＡＣＳ緩衝液中に希釈したＣＤ３（ＡＰＣ  Ｃｙ７、ＳＰ３４．２）、ＣＤ４（ＰｅｒｃＰ、Ｌ２００）、ＣＤ８（ＰＥ  Ｃｙ７、ＳＫ１）、及びＰＤ−１（ＰＥ、ＥＨ１２．２Ｈ７）に対する抗体を含有する抗体カクテルを添加し、４℃で１０分間インキュベートした。これらの細胞を洗浄し、２．５μｇ／ウェルのＨｕｍ２３１＃２またはＩｇＧ１アイソタイプ対照と４℃で１０分間インキュベートした。これらの細胞を洗浄し、その後、Ａｌｅｘａ６４７と共役した二次抗Ｆｃ  Ｆ（ａｂ’）２抗体で、４℃で１０分間染色した。これらの細胞を洗浄し、１．６％パラホルムアルデヒドで固定し、その後、ＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して取得した。ＦＡＣＳ  ＤＩＶＡソフトウェアを使用してＦＡＣＳファイルを分析した。
【０５５０】
図２０Ａに示されるように、抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２は、活性化ＡＧＭ  ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞に結合する。ＡＧＭ由来の刺激されていないＴ細胞はベースラインレベルのＧＩＴＲを発現せず、細胞表面上でのＧＩＴＲレベルをＴ細胞活性化時に上方制御する。図２０Ａに示されるプロットは、３匹の異なるＡＧＭ由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【０５５１】
次に、アフリカミドリザル（ＡＧＭ）由来のＰＢＭＣを使用してＣＤ３副刺激アッセイを行い、Ｈｕｍ２３１＃２ｗのアゴニスト活性を試験した。ヒトＰＢＭＣ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）またはＡＧＭ  ＰＢＭＣ（Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ  Ｐｒｉｍａｔｅｓ）をｆｉｃｏｌｌ勾配により健常なドナーから単離し、液体窒素中に保存し、実験日に解凍した。これらの細胞を細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋２０Ｕ／ｍＬのＩＬ−２）中に再懸濁し、プレート結合抗ＣＤ３抗体（０．８μｇ／ｍＬ）及び様々な濃度（２、４、５、６、及び９μｇ／ｍＬ）のプレート結合抗ＧＩＴＲ抗体またはアイソタイプ対照ＩｇＧ１抗体を含有する９６ウェル培養プレートに添加した。これらの試料を３７℃及び５％ＣＯ２で４日間インキュベートした。活性化後、細胞内タンパク質輸送を阻害するために、それらの細胞を製造業者の指示に従ってブレフェルジンＡ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で処理し、これらの試料を３７℃及び５％ＣＯ２で６時間インキュベートした。インキュベーション後、これらの細胞をＦＩＴＣ生存能力アミン染料（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色して、死細胞を染色した。冷ＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、ｐＨ７．２）で洗浄した後、冷ＦＡＣＳ緩衝液中に希釈したＣＤ３（ＡＰＣ  Ｃｙ７、ＳＰ３４．２）、ＣＤ４（ＰｅｒｃＰ  Ｃｙ５．５、Ｌ２００）、及びＣＤ８ａ（ＰＥ  Ｃｙ７、ＳＫ１）に対する抗体を含有する抗体カクテルを各試料に添加し、４℃で１０分間インキュベートした。これらの細胞を固定し、製造業者の指示に従ってＣｙｔｏｆｉｘ−Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で透過処理して、細胞内染色した。これらのＰＢＭＣをＩＦＮγ（Ａｌｅｘａ６４７、Ｂ２７）及びＴＮＦα（ＰＥ、Ｍａｂ１１、ヒトＰＢＭＣの場合のみ）に対する抗体で染色し、室温で１０分間インキュベートした。これらの試料を、１×Ｐｅｒｍ−洗浄緩衝液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して洗浄し、ＦＡＣＳｃａｎｔｏフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して取得した。Ｆｌｏｊｏソフトウェアを使用してフローサイトメトリープロットを分析した。
【０５５２】
図２０Ｂ及び２０Ｃに示されるように、抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２ｗとの共刺激は、ＣＤ８＋ＡＧＭ  Ｔ細胞によるＩＦＮγ産生を誘導した。これらのフローサイトメトリープロット及びグラフは、２匹のＡＧＭ由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
６．３．１１  組換えヒトＧＩＴＲリガンドとヒト化２３１−３２−１５クローンの同時結合の抗ＣＤ３刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞への影響
【０５５３】
ＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）へのＧＩＴＲの結合を阻止しないアゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体は、エフェクターＴ細胞の増殖及び／もしくはエフェクター機能の増強、ならびに／またはＴ制御性細胞の抑制機能の下方制御を特徴とする免疫応答の増強をもたらし得る。
【０５５４】
抗ＧＩＴＲ抗体を、単独でまたは組換えヒトＧＩＴＲＬと組み合わせて、ＣＤ４＋Ｔ細胞上でのそれらのアゴニスト活性について試験する。ＣＤ４＋濃縮Ｔ細胞を１〜２μＭのＣＦＳＥで標識し、洗浄し、その後、１０μｇ／ｍＬのキメラ親２３１−３２−１５抗体、１０μｇ／ｍＬのＨｕｍ２３１＃１、１０μｇ／ｍＬのＨｕｍ２３１＃２、１０μｇ／ｍＬのＧＩＴＲＬ、１０μｇ／ｍＬのキメラ親２３１−３２−１５抗体と１０μｇ／ｍＬのＧＩＴＲＬの組み合わせ、１０μｇ／ｍＬのＨｕｍ２３１＃１と１０μｇ／ｍＬのＧＩＴＲＬの組み合わせ、または１０μｇ／ｍＬのＨｕｍ２３１＃２と１０μｇ／ｍＬのＧＩＴＲＬの組み合わせと一緒に、プレート結合抗ＣＤ３（１２５ｎｇ／ｍＬ）、可溶性抗ＣＤ２８（１２５ｎｇ／ｍＬ）、及び１０ＵのＩＬ−２で、３７℃で３〜６日間刺激する。その後、培養上清及び細胞をプレートから収集する。細胞増殖及びサイトカイン放出を、それぞれ、項６．３．１及び項６．３．２に記載されるように試験する。抗ＧＩＴＲ抗体とＧＩＴＲＬの同時結合のＣＤ４＋エフェクターＴ細胞またはＣＤ４＋Ｔ制御性細胞への影響を、項６．３．７に記載されるようにさらに試験する。この研究は、免疫応答の増強においてＧＩＴＲＬと抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、及びＨｕｍ２３１＃２）との間の相乗効果または相加効果を示し得る。
【０５５５】
本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体と組み合わせた共アゴニスト活性を試験するために可溶性組換えヒトＧＩＴＲＬを使用する代替案として、ＧＩＴＲＬを発現するように誘導された抗原提示細胞を使用することも可能である。かかる誘導されたＡＰＣを、上述のように、抗ＧＩＴＲ抗体及び査定されるＴ細胞の機能の存在下または不在下で、ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞またはＣＤ４＋Ｔ制御性細胞で培養してもよい。ＧＩＴＲＬ発現を誘導するために、マクロファージまたは樹状細胞等の抗原提示細胞を、例えば、Ｔｏｎｅ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．，（２００３）ＰＮＡＳ  １００：１５０５９−１５０６４に記載されるように、ＴＬＲ４リガンド（例えば、ＬＰＳ）と１、２、４、６、もしくは１２時間インキュベートするか、または例えば、Ｔｉａｎ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，（２０１２）ＰＬｏＳ  Ｏｎｅ，７（１０）：ｅ４６９３６に記載されるように、サッカロマイセスセレヴィシエの細胞壁から精製された全β−グリカン粒子（ＷＧＰ）と６、１２、２４、４８、または７２時間インキュベートする。
６．３．１２  アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体のＴ細胞上でのＯＸ４０及びＰＤ−１表面発現への影響
【０５５６】
この実施例では、アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体を、そのＴ細胞上でのＯＸ４０及びＰＤ−１の表面発現への影響について評価した。Ｆｉｃｏｌｌ勾配により健常なドナーのバフィーコート（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ，ＬＬＣ）から単離したＰＢＭＣを液体窒素中に保存し、実験日に解凍した。これらの細胞を細胞培養培地（ＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ＋２０Ｕ／ｍＬのＩＬ−２）中に再懸濁し、様々な準最適濃度（０、０．７、０．８、及び０．９μｇ／ｍＬ）のプレート結合抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４）及び５μｇ／ｍＬのプレート結合抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２またはアイソタイプ対照ＩｇＧ１抗体を含有する９６ウェル培養プレートに添加した。これらの試料を３７℃及び５％ＣＯ２で４日間インキュベートした。インキュベーション後、これらの細胞をＦＩＴＣ生存能力アミン染料（Ｌｉｆｅ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色して、死細胞を染色した。冷ＦＡＣＳ緩衝液（１×ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ、ｐＨ７．２）で洗浄した後、抗ＯＸ４０抗体を添加し、４℃で１０分間インキュベートした。これらの細胞を洗浄し、抗ヒトＦｃ  Ｆ（ａｂ’）２Ａｌｅｘａ６４７を添加し、４℃で１０分間インキュベートした。遠心分離及び洗浄ステップ後、冷ＦＡＣＳ緩衝液中に希釈したＣＤ３（ＡＰＣ  Ｃｙ７、ＳＰ３４．２）、ＣＤ４（ＰｅｒｃＰ  Ｃｙ５．５、Ｌ２００）、ＣＤ８ａ（ＰＥ  Ｃｙ７、ＳＫ１）、及びＰＤ−１（ＰＥ、ＥＨ１２．２Ｈ７）に対する抗体を含有する抗体カクテルを各試料に添加し、４℃で１０分間インキュベートした。これらの試料を洗浄し、２００μＬの１．６％パラホルムアルデヒド中に再懸濁し、その後、ＦＡＣＳｃａｎｔｏフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して取得した。Ｆｌｏｊｏソフトウェアを使用してＦＡＣＳプロットを分析した。これらのフローサイトメトリープロット及びグラフは、１名のドナー由来のＰＢＭＣを使用した実験を代表するものである。
【０５５７】
図２１に示されるように、抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２との共刺激は、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞上でのＯＸ４０及びＰＤ−１表面発現を増加させる。
６．４  実施例４：ヒト化変異型の生殖系列化
【０５５８】
この実施例は、生殖系列ヒト化変異型の生成について説明する。
６．４．１  ライブラリ設計
【０５５９】
ライブラリアプローチを使用して、部位特異的変異を縮重コドンにより重鎖及び軽鎖可変領域に導入することにより、増加したヒト生殖系列含有量を有するヒト化変異型を生成した。１７個のアミノ酸位置を２〜４個のアミノ酸で置き換えることによりＶＨ鎖の可変領域を変異させ、１．３Ｅ＋０６の最終多様性を得た。軽鎖の可変領域を９個のアミノ酸位置（１つの位置当たり２〜３個のアミノ酸）で変異させ、７．７Ｅ＋０２の最終多様性を得た。このライブラリに含まれる異なるフレームワーク及びＣＤＲ位置を図２２に示す。ＩＧＨＶ１−２＊０２ＶＨヒト生殖系列（図２２Ａ）及びＩＧＫＶ４−１＊０１ＶＬヒト生殖系列（図２２Ｂ）を使用してライブラリを設計した。
６．４．２  ライブラリ生成
【０５６０】
変異したヒト化可変領域をレトロウイルス発現ベクター（ｐＣＭＡ）にクローニングした。その後、これらの構築物を使用してｐｒｅＢ細胞を形質導入し、Ｒｅｔｒｏｃｙｔｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ（登録商標）技術を使用して表面上で抗体を発現した。レトロウイルス発現ベクターは、ＭＳＣＶに基づく５’及び３’ＬＴＲ、膜アンカー画分（ＩＧＨＧ１）を含む免疫グロブリン定常領域（ＩＧＨＧ１またはＩＧＫＣ）、及びＣＤ４表面マーカー遺伝子を含有した。この表面マーカー及び免疫グロブリンはＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）でカップリングされている。「可変領域」という用語は、この実施例では、重鎖の場合はＶＤＪ再配列遺伝子及び軽鎖の場合はＶＪ再配列遺伝子を意味する。
６．４．２．１  ヒト化重鎖ライブラリの生成
【０５６１】
合成したヒト化可変重鎖領域（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  ＭＷＧ  ＧｍｂＨ）を、膜アンカー画分を含む免疫グロブリン定常領域（ＩＧＨＧ１）を含有するレトロウイルス発現ベクターにクローニングした。ＩＩＳ型制限酵素ＬｇｕＩ及びＴ４−ＤＮＡリガーゼを使用して、消化及びライゲーションを単一ステップ及び単一管内で、３７℃で１時間行った。合成したヒト化重鎖ライブラリ材料（１２８．７ｎｇ）を、１：３のベクター挿入物比で、ｐＣＭＡレトロウイルス発現ベクター（１μｇ）にインフレームでライゲーションした。その後、ライゲーション反応物を沈殿させ、濃縮（８．３倍）して、９４ｎｇ／μＬの最終ＤＮＡ濃度にした。
【０５６２】
全（３×４μＬ）濃縮ライゲーション反応物を８０μＬのＤＨ１０Ｂ細胞（大腸菌ＥｌｅｃｔｒｏＭａｘ  ＤＨ１０Ｂエレクトロコンピテント細胞、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１２０３３−０１５）（１９００Ｖ／５ミリ秒）に電気穿孔した。１０００μＬのＳＯＣ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１５５４４−０３４）を添加し、形質転換したＤＨ１０Ｂ細胞を３７℃で１時間回復させた。１：１０００希釈を行って、ライブラリ複雑性を決定した。全形質転換反応物をＬＢ−寒天＋１００μｇ／ｍＬアンピシリンプレート上にプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした。ヒト化ＶＨ鎖ライブラリの複雑性が７．３Ｅ＋０７であると決定され、それ故に、全ライブラリ多様性を回復させた。
【０５６３】
すべての電気穿孔した細菌をプレートからスクラッチし、−８０℃で長期間保存するために２つのグリセロールストックを調製した。大規模ＤＮＡプラスミド調製（Ｍａｃｈｅｒｅｙ  ＆  Ｎａｇｅｌ、ＮｕｃｌｅｏＢｏｎｄ  Ｘｔｒａ  Ｍａｘｉ  Ｐｌｕｓ  Ｋｉｔ）を行った。クローニングされた挿入ヒト化ＶＨ鎖ライブラリ材料の存在及びその正確なサイズを検証するために、ＨｉｎｄＩＩＩ／Ｅｃｏ４７ＩＩＩ（Ｈ／Ｅ）で消化を行った。正確なベクター骨格を検証するために、ＫｐｎＩ／ＢｓｒＧＩ（Ｋ／Ｂ）消化を使用した。対照として、ヒト化ＶＨ鎖ライブラリプラスミドＤＮＡもＬｇｕＩで消化して、ヒト化ＶＨ鎖の挿入なしのベクターの量を検証し、未切断プラスミドＤＮＡの分離によりベクターの完全性を試験した。
【０５６４】
９６個の単一クローンを選定し、配列決定のために送り、プライマー８９−ＡＬ（配列：５’  ｇｃｃｔｃｃｇｃｃｔｃｃｔｃｔｔｃｃｔｃｃａｔｃｃ  ３’、配列番号７０７）を使用して最終ライブラリ多様性を決定した。品質管理においていかなる重複配列も特定されなかった。理論的多様性は、異なる変異型では１．３Ｅ＋０６であり、それ故に、各ユニーク配列の被覆範囲は約５０倍である。ライブラリクローンの３５％が所望の変異パターン（＝２．５Ｅ＋０７）を有し、すべての所望の変異型がライブラリに存在した。
６．４．２．２  ヒト化軽鎖ライブラリの生成
【０５６５】
合成したヒト化可変軽鎖領域（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ  ＭＷＧ  ＧｍｂＨ）を、免疫グロブリン定常領域（ＩＧＫＣ）を含有するレトロウイルス発現ベクターにクローニングした。項６．４．２．１に記載されるように、消化及びライゲーションを行った。合成したヒト化軽鎖ライブラリ材料（２２７．９ｎｇ）を、１：１０のベクター挿入物比で、ｐＣＭＡレトロウイルス発現ベクター（０．５μｇ）にインフレームでライゲーションした。その後、ライゲーション反応物を沈殿させ、３．６倍に濃縮して、５２ｎｇ／μＬの最終ＤＮＡ濃度にした。
【０５６６】
上の項６．４．２．１に記載されるように、形質転換を行った。２×４μＬの濃縮ライゲーション反応物を８０μＬのＤＨ１０Ｂ細胞（大腸菌ＥｌｅｃｔｒｏＭａｘ  ＤＨ１０Ｂエレクトロコンピテント細胞、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１２０３３−０１５）（１９００Ｖ／５ミリ秒）に電気穿孔した。ヒト化ＶＬ鎖ライブラリの複雑性が４．６Ｅ＋０７であると決定され、それ故に、全ライブラリ多様性を回復させた。項６．４．２．１に記載されるように、ライブラリプラスミドＤＮＡの調製及びプラスミドＤＮＡの検証を行った。品質管理において１つの重複配列しか特定されなかった。理論的多様性は、異なる変異型では７．７Ｅ＋０２であり、それ故に、各ユニーク配列の被覆範囲は約６００００倍である。ライブラリクローンの６５％が所望の変異パターンを有し、すべての所望の変異型がライブラリに存在した。
６．４．３  事前選択されたｐｒｅＢ細胞クローンからの生殖系列化重鎖及び軽鎖の回収
【０５６７】
上述（項６．４．２．１及び６．４．２．２）されるように生成したヒト化ライブラリ材料を親和性成熟Ｒｅｔｒｏｃｙｔｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ（登録商標）スクリーニングで使用して、高生殖系列遺伝子含有量ならびに改善された生物学的特性及び生化学的特性を有する抗体を特定した。８０個及び９６個の事前選択されたｐｒｅＢ細胞クローンを含有する２つの９６ウェルプレートから、重鎖及び軽鎖を回収した。これらの細胞を溶解させ（Ｐｈｕｓｉｏｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｐｅｃｉｍｅｎ  Ｄｉｒｅｃｔ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ／Ｆｉｎｎｚｙｍｅｓ、カタログ番号Ｆ−１５０）、可変領域をＰＣＲによって直接増幅した（表１５を参照されたい）。このＰＣＲを、特異的５’順方向プライマー及び３’逆方向プライマーを用いて行った。（表１６を参照されたい）。ＰＣＲの鋳型として、２μＬのｐｒｅＢ細胞溶解物を使用した。増幅した可変領域を精製し（ＮｕｃｌｅｏＦａｓｔ  ９６  ＰＣＲ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ））、免疫グロブリン定常領域（ＩＧＨＧ１、ＩＧＫＣ）を含有するＣＨＯ発現ベクター（ｐＰＥＰ）にクローニングした。
【０５６８】
【表１５】
2017526615.tif 000046
【０５６９】
【表１６】
2017526615.tif 000047
【０５７０】
事前選択された生殖系列化重鎖及び軽鎖可変領域をクローニングするために、ＩＩＳ型制限酵素ＬｇｕＩ及びＴ４−ＤＮＡリガーゼを使用して、消化及びライゲーションを単一ステップ及び単一管内で、３７℃で１時間行い、最終ステップを８０℃で１０分行い、事前選択された生殖系列化重鎖または軽鎖可変領域（約６０ｎｇ）をｐＰＥＰ発現ベクター（５０μｇ）にインフレームでライゲーションした。１：１２のベクター挿入物比を使用した。
【０５７１】
２μＬの事前選択された生殖系列化重鎖ライゲーション反応物及び６μＬの事前選択された生殖系列化カッパ軽鎖ライゲーション反応物を、熱ショック形質転換により化学コンピテントＤＨ１０Ｂ細胞（３０μＬ）に同時形質転換した。１０００μＬのＳＯＣ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１５５４４−０３４）を添加し、形質転換したＤＨ１０Ｂ細胞を３７℃で１時間回復させた。最後に、１０００μＬのＬＢ培地＋アンピシリン（最終濃度：１００μｇ／ｍＬ）を添加し、形質転換した大腸菌細胞を３７℃で一晩インキュベートした。小規模のＤＮＡプラスミド調製（Ｍａｃｈｅｒｅｙ  ＆  Ｎａｇｅｌ、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ  ９６  Ｐｌａｓｍｉｄ）を実行し、クローニングされた可変領域の存在及び正確なサイズを検証するために、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＮｏｔＩ（ＶＨ鎖）及びＮｃｏＩ（ＶＫ鎖）で消化を行った。ベクターの完全性を、未切断プラスミドＤＮＡの分離によって試験した。その後、これらのＤＮＡプラスミド調製物を使用してＣＨＯ細胞をトランスフェクトし、発現した抗体を、懸濁アレイ技術を使用して、かつＯｃｔｅｔによる動態分析において試験した。抗体配列をＰＣＲにより検証した。
６．４．４  生殖系列変異型の選択
【０５７２】
数百個の生殖系列化抗体を、Ｏｃｔｅｔ測定（Ｏｃｔｅｔ  ＲＥＤ  ９６システム、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（商標）Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ  Ｐａｒｋ，ＣＡ）によって測定される結合動態に基づいて選択した。その機器の取扱説明書に従って実験手順を構成した。ビオチン−ＧＩＴＲをストレプトアビジンバイオセンサー（ＳＡ）に結合させ、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）をブランク対照として使用した。簡潔に言えば、相互作用分析を３０℃の泳動緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ、ｐＨ７．４）中で行った。使用直前にセンサー先端を泳動緩衝液中で１０分間予湿潤させ、Ｏｃｔｅｔで使用したマイクロプレートに１ウェル当たり２００μＬの試料または緩衝液を充填し、８００ｒｐｍで撹拌した。これらの実験では、市販の事前コーティングされたＳＡ先端を使用した。ビオチン化ＧＩＴＲをＰＢＳ（ｐＨ７．４）中のＦｏｒｔｅＢｉｏ  ＳＡ繊維上に１０分間装填し、４分間洗浄した。会合相の場合、リガンドコーティングＳＡ先端を、泳動緩衝液中に１：１０で希釈した細胞培養上清中に５分間浸漬させ、その後、測定した。抗体−抗原複合体の解離を、Ｏｃｔｅｔ緩衝液のみを含有するウェル中で５分間測定した。各泳動後、これらの先端をグリシン（１０ｍＭ、ｐＨ２．０）で再生した。親和性、Ｋｏｎ及びＫｏｆｆを、局部的完全適合を有する１：１の結合モデルを使用するＯｃｔｅｔ評価ソフトウェアｖ６．３で決定した。表１７は、５６個の選択された生殖系列変異型の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の組成、ならびにＯｃｔｅｔによって測定されるそれらの親和性、Ｋｏｎ値及びＫｏｆｆ値を列記する。
【０５７３】
【表１７−１】
2017526615.tif 000048
【表１７−２】
2017526615.tif 000049
【表１７−３】
2017526615.tif 000050
【０５７４】
これらの抗体のうちのいくつかを、さらなるＯｃｔｅｔ値及びそれらの生殖系列相同性に基づいてその後の分析のために選択した。これらから、Ｔ細胞アッセイにおいてすべてアゴニストであった（データ示さず）抗体の試料を、以下に記載されるようにより詳細に特徴付けた。図２３は、これらの選択された生殖系列変異型の重鎖及び軽鎖可変領域の組成について詳述する。図２４Ａ、２４Ｂ、及び２４Ｃは、他の選択された実際のまたは予言的生殖系列変異型の重鎖及び軽鎖領域の組成について詳述する。
６．４．５  生殖系列変異型の動態分析
【０５７５】
抗ＧＩＴＲ生殖系列変異型抗体の定量及び結合分析を、項６．２．５．１に記載の方法に従って懸濁アレイ技術を使用して決定した。キメラ親２３１−３２−１５抗体と比較した生殖系列変異型の平均相対親和性を図２３に示す。
【０５７６】
加えて、懸濁アレイ技術を使用したリガンド遮断活性の査定も、実施例６．２．５．２に記載の方法に従って実行した。図２５Ａ及び２５Ｂに見られるように、生殖系列変異型抗体の選択の存在下でのＧＩＴＲへのＧＩＴＲＬ−ＰＥの結合は、試験した抗体の非常に類似したパターンに従った。
【０５７７】
これらの生殖系列変異型抗体を、以下の実施例５に記載の機能的アッセイにおいてさらに特徴付けた。
６．５  実施例５：生殖系列変異型の機能的活性
６．５．１  生殖系列変異型の抗ＣＤ３刺激ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖及びサイトカイン産生への影響
【０５７８】
実施例４に記載されるように生成した新たな生殖系列変異型の活性を査定するために、これらの変異型を、４つのバフィーコート調製物、ＢＣ４、ＢＣ９、ＢＣ１３、及びＢＣ１８由来のＣＤ４濃縮Ｔ細胞上のヒト化抗体Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２ならびにキメラ親２３１−３２−１５抗体と比較した。
【０５７９】
上の項６．３．１に記載されるように準最適ＣＤ３刺激アッセイを行い、刺激アッセイを行った５日後に、細胞内サイトカイン染色（ＢＣ１３及びＢＣ１８）、サイトカイン放出（ＢＣ４及びＢＣ９）、及びＣＦＳＥ希釈（ＢＣ４及びＢＣ９）測定した。プレート結合抗ＣＤ３及び可溶性抗ＣＤ２８抗体を、プレート結合抗ＧＩＴＲ抗体、抗体なし（ＣＤ３のみ）、及びアイソタイプ対照（抗体ＭＳＣ８）で使用した。抗ＧＩＴＲ抗体を１０μｇ／ｍＬの濃度で使用した。バフィーコート４及び９の場合、抗ＣＤ３抗体を１２５ｎｇ／ｍＬの濃度で使用し、抗ＣＤ２８抗体を１２５ｎｇ／ｍＬの濃度で使用し、１０ＵのＩＬ−２を使用した。バフィーコート１３の場合、抗ＣＤ３抗体を５００ｎｇ／ｍＬの濃度で使用し、抗ＣＤ２８抗体を１００ｎｇ／ｍＬの濃度で使用した。バフィーコート１８の場合、抗ＣＤ３抗体を３１．２５ｎｇ／ｍＬの濃度で使用し、抗ＣＤ２８抗体を１００ｎｇ／ｍＬの濃度で使用した。
【０５８０】
バフィーコート調製物ＢＣ４及びＢＣ９について、上清及び細胞を培養５日後にプレートから収集した。細胞増殖を決定し、ＣＦＳＥ低の割合として示し（図２６Ａ及び２６Ｂ）、上清をサイトカイン分析（ＩＦＮγ及びＩＬ−１０）のために使用した。図２７Ａ及び２７Ｂは、ＢＣ４のサイトカイン放出を示し、図２８Ａ及び２８Ｂは、ＢＣ９のサイトカイン放出を示す。
【０５８１】
バフィーコート調製物ＢＣ１３及びＢＣ１８について、培養５日後、モネンシン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）をすべての試料に６時間にわたって添加して、ＩＦＮγの細胞内保持を可能にした。その後、これらの試料を、ＩＦＮγ−ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して細胞内染色し、その後、ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａ  Ｉ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でフローサイトメトリーにより検出し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ）を使用して分析した。生殖系列化変異型のＢＣ１３及びＢＣ１８由来のＩＦＮγ陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合への影響の結果を、それぞれ、図２９Ａ及び２９Ｂに示す。生殖系列変異型、キメラ親２３１−３２−１５抗体またはヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃１及びＨｕｍ２３１＃２と接触させた後、これらの抗ＧＩＴＲ抗体によって誘導されたＩＦＮγ陽性ＣＤ４Ｔ細胞の割合は同等であった。しかしながら、予想通り、ドナー間に多少の変化が存在する。
６．５．２  生殖系列変異型のＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞株への影響
【０５８２】
この実施例では、実施例４に記載されるように生成した生殖系列変異型を、項６．３．８に記載のＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞株（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して試験した。
【０５８３】
レポーター細胞株（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者の指示に従って培養下で保持した。実験日に、これらの細胞をアッセイ培地（ＲＰＭＩ＋１％ＦＢＳ）中に再懸濁した。これらの細胞（１ウェル当たり１００，０００個の細胞）を、プレート結合抗ＣＤ３抗体（クローンＳＰ３４、０．３μｇ／ｍＬ）及び様々な濃度（１２．５、１０、５、２．５、１．２５、０．６２５及び０μｇ／ｍＬ）のプレート結合抗ＧＩＴＲ抗体を含有する９６ウェルプレートに添加した。これらのレポーター細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で１８時間インキュベートした。インキュベーション後、Ｂｉｏ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）及びＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダー２１００を使用してルシフェラーゼ発現を検出した。
【０５８４】
このアッセイで試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ならびに２０の生殖系列変異型、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、及びｐａｂ２１６１であった。図３０Ａ〜Ｃに示されるように、すべての生殖系列変異型が、ＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいてアゴニスト活性を示した。
【０５８５】
これらの生殖系列変異型を、抗ＣＤ３抗体の不在下でのアゴニスト活性についても試験した。実験日に、ＧＩＴＲ  ＮＦ−κＢ−ルシフェラーゼレポーター細胞（Ｐｒｏｍｅｇａ）をアッセイ培地（ＲＰＭＩ＋１％ＦＢＳ）中に再懸濁した。これらの細胞（１ウェル当たり１００，０００個の細胞）を、様々な濃度（１２．５、１０、５、２．５、１．２５、及び０．６２５μｇ／ｍＬ）のプレート結合抗ＧＩＴＲ抗体を含有する９６ウェルプレートに添加した。これらのレポーター細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で６時間インキュベートした。インキュベーション後、Ｂｉｏ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）及びＥｎＶｉｓｉｏｎマルチラベルリーダー２１００を使用してルシフェラーゼ発現を検出した。
【０５８６】
このアッセイで試験した抗ＧＩＴＲ抗体は、ｍ６Ｃ８、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、ならびに２０の生殖系列変異型、ｐａｂ１９６４、ｐａｂ１９６５、ｐａｂ１９６６、ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９６８、ｐａｂ１９６９、ｐａｂ１９７０、ｐａｂ１９７１、ｐａｂ１９７２、ｐａｂ１９７３、ｐａｂ１９７５、ｐａｂ１９７６、ｐａｂ１９７７、ｐａｂ１９７９、ｐａｂ１９８０、ｐａｂ１９８１、ｐａｂ１９８３、ｐａｂ２１５９、ｐａｂ２１６０、及びｐａｂ２１６１であった。すべての生殖系列変異型が、抗ＣＤ３抗体の不在下でレポーター細胞株の用量依存的活性化を誘導した（図３０Ｄ〜Ｆ）。
６．６  実施例６：抗ＧＩＴＲ抗体のエピトープ特徴付け
【０５８７】
キメラ親２３１−３２−１５抗体及びヒト化抗ＧＩＴＲ抗体が認識するヒトＧＩＴＲ上のエピトープを特徴付けるために、以下に記載されるようにさらなる研究を行った。
６．６．１  エピトープ競合−細胞結合アッセイ
【０５８８】
ヒト化変異型抗体が親キメラ２３１−３２−１５抗体のエピトープ特異性を保持したことを確認するために、細胞結合アッセイを行った。キメラ親２３１−３２−１５抗体を発現する１６２４−５プレＢ細胞を回収し、１×１０６個の細胞を、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液＋ｉ）２μｇのキメラ親２３１−３２−１５抗体と１５分間プレインキュベートしたビオチン化ＧＩＴＲ（ＧＩＴＲ−ｂｉｏ）（１：１０００）、ｉｉ）２μｇのＨｕｍ２３１＃１と１５分間プレインキュベートしたＧＩＴＲ−ｂｉｏ（１：１０００）、ｉｉｉ）２μｇのＨｕｍ２３１＃２と１５分間プレインキュベートしたＧＩＴＲ−ｂｉｏ（１：１０００）、またはｉｖ）ＧＩＴＲ−ｂｉｏ（１：１０００）中に再懸濁した。これらの細胞を４℃で２０分間インキュベートし、その後、４ｍＬのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、３００ｇ及び４℃で５分間遠心分離した。細胞ペレットを２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液＋ストレプトアビジン−ＰＥ（１：１０００）中に再懸濁し、その後、インキュベートし、前述のように洗浄した。その後、これらの細胞を２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁し、ＦＡＣＳ−ＡｒｉａＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して分析した。
【０５８９】
図３１は、ヒト化変異型抗体がキメラ親２３１−３２−１５抗体のエピトープ特異性を保持したことを示す。右側のプロファイルは、キメラ親２３１−３２−２５抗体を発現する１６２４−５プレＢ細胞へのＧＩＴＲ−ｂｉｏの結合を示す。しかしながら、ＧＩＴＲ−ｂｉｏをキメラ親２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃１、またはＨｕｍ２３１＃２抗体のいずれかとプレインキュベートしたときに、１６２４−５細胞へのＧＩＴＲ−ｂｉｏの結合の損失が存在した（左側のプロファイル）。重複するＦＡＣＳプロファイルは、ヒト化変異型が、互いに、かつキメラ親２３１−３２−１５抗体と非常に類似したＧＩＴＲ結合特性も示すことを示す。
６．６．２  エピトープ競合−懸濁アレイ技術
【０５９０】
抗ＧＩＴＲ抗体（２５μＬ）をアッセイ緩衝液（Ｒｏｃｈｅ  １１１１２５８９００１）中に希釈して２μｇ／ｍＬにし、抗ヒトＩｇＧ（Ｆ（ａｂ）２特異的、ＪＩＲ、１０５−００６−０９７）とカップリングした１５００  Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）ビーズ（５μＬ、Ｌｕｍｉｎｅｘ  Ｃｏｒｐ、ｎｏ  ５  ＬＣ１０００５−０１）と振盪条件下で、暗所で、０．５ｍＬのＬｏＢｉｎｄ管（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、００３０１０８．１１６）内で一晩インキュベートした。その後、この混合物を予湿潤させた９６ウェルフィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＭＡＢＶＮ１２５０）に移した。プレートを２００μＬ／ウェルのＰＢＳで２回洗浄して、非結合抗体を除去した。同時に、２０μｇ／ｍＬの同じ抗ＧＩＴＲ抗体、異なる抗ＧＩＴＲ抗体、またはアッセイ緩衝液のいずれかを、２０μＬ（１μｇ／ｍＬ）のＲ−ＰＥ標識ＧＩＴＲ抗原（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ジスルフィド結合ホモ二量体、６８９−ＧＲ、ＡｂＤＳｅｒｏｔｅｃ  ＬＹＮＸ  Ｋｉｔで社内標識したもの、ＬＮＫ０２２ＲＰＥ）と暗所で１時間、６５０ｒｐｍでインキュベートした。このビーズ混合物及び抗原／抗体混合物を１：１（各々から２０μＬ）で混合し、振盪条件下でさらに１時間インキュベート（２０℃、６５０ｒｐｍ）した。測定直前に、４０μＬのアッセイ緩衝液を各ウェルに添加し、Ｌｕｍｉｎｅｘ（登録商標）２００システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して分析を行い、４８μＬの試料体積中１００個のビーズを読み取った。非競合対照（１００％結合、競合化合物としてアッセイ緩衝液のみ）のＭＦＩ値を使用して、結合を決定した。
【０５９１】
キメラ親２３１−３２−１５抗体を捕捉抗体として使用したときに、全結合競合が両方のヒト化変異型で観察された。抗ＧＩＴＲ抗体ｍ６Ｃ８を捕捉抗体として使用したときに、結合競合がキメラ親２３１−３２−１５抗体でも２つのヒト化変異型でも観察されなかった（データ示さず）。これらの結果は、ｍ６Ｃ８及び本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体がヒトＧＩＴＲ上の異なるエピトープを認識することを示す。
６．６．３  エピトープ競合−表面プラズモン共鳴
【０５９２】
表面プラズモン共鳴を使用したエピトープビニングのために、「直列アプローチ」を使用した（Ａｂｄｉｃｈｅ  ＹＮ  ｅｔ  ａｌ．，（２００９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３８６：１７２−１８０）。その目的のために、異なる密度のＧＩＴＲ抗原（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ、ジスルフィド結合ホモ二量体、６８９−ＧＲ）の固定化を使用して、異なるチップ表面をＣＭ５センサーチップ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｅｒｉｅｓ  Ｓ  ＣＭ５、ＢＲ−１００５−３０）上に生成した。フローセル２が低密度のＧＩＴＲ抗原を含有し（６６７ＲＵ）、中程度の密度をフローセル３（１５９５ＲＵ）及びフローセル４で査定し、高密度を達成した（４３７１ＲＵ）。フローセル１内で、オボアルブミン（１２８９ＲＵ、Ｐｉｅｒｃｅ  ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ  ７７１２０）を基準用に固定化した。アミンカップリング（０．４Ｍ  ＥＤＣ及び０．１Ｍ  ＮＨＳでの表面活性化、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅアミンカップリングキット、ＢＲ−１０００−５０）について製造業者（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の標準のプロトコルに従って固定化を行った。未反応基を１Ｍエタノール−アミン−ＨＣｌ（ｐＨ８．５）で不活性化した。その後、抗ＧＩＴＲ抗体を、３００ｎＭ（４５μｇ／ｍＬ）の濃度の異なる表面を通して５μＬ／分で２４０秒間泳動させた。これらの条件を使用して、ＧＩＴＲ表面飽和が達成されるべきであった。６０秒間の解離時間を含め、その後、競合抗体を添加した（３００ｎＭ、５μＬ／分）。１０ｍＭのグリシンｐＨ２．０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ−１００３−５５）を１０μＬ／分で６０秒間使用して、チップ表面の再生を行った。非競合対照（１００％結合、飽和条件）の応答単位（ＲＵ）を使用して、ビニングを行った。
【０５９３】
図３２に示されるように、キメラ親２３１−３２−１５抗体が最初にＧＩＴＲに結合すると、この抗体のさらなる結合は生じない。しかしながら、キメラ親２３１−３２−１５抗体が最初にＧＩＴＲに結合し、抗体ｍ６Ｃ８が適用されると、この抗体は、依然としてＧＩＴＲに結合することができる。
６．６．４  抗ＧＩＴＲ抗体のエピトープマッピング
【０５９４】
本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体が結合するＧＩＴＲ上のエピトープをマッピングするために、エラープローンＰＣＲを使用して、ヒトＧＩＴＲ抗原の変異型を生成した。変異型ＧＩＴＲタンパク質が細胞ライブラリにおける細胞の表面上で発現し、これらの細胞を抗ＧＩＴＲ抗体の結合についてスクリーニングした。陽性対照として、ポリクローナル抗ＧＩＴＲ抗体を使用して、ＧＩＴＲタンパク質の適切な折り畳みを確認した。低減した抗体結合が生じるか、または抗体結合が生じないヒトＧＩＴＲ抗原の変異型について、アラニン走査変異誘発を行って、本明細書に記載の抗ＧＩＴＲ抗体による結合に必要な正確なエピトープ残基を決定した。
６．６．４．１  ヒトＧＩＴＲ変異型の生成
【０５９５】
エラープローンＰＣＲ変異誘発を使用して、細胞外ドメイン内にランダム変異を有するヒトＧＩＴＲの変異型を生成した。エラープローンＰＣＲについて、ＧｅｎｅＭｏｒｐｈＩＩランダム変異誘発キット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を製造業者の指示に従って使用した。手短に、鋳型として社内構築物（１３ｎｇ、構築物番号４３７７  ｐＭＡ−Ｔ−ｈｕＧＩＴＲ）、０．０５Ｕ／μＬのＭｕｔａｚｙｍｅ  ＩＩ  ＤＮＡポリメラーゼ、１×Ｍｕｔａｚｙｍｅ  ＩＩ反応緩衝液、０．２μＭの各プライマー（１１５２−Ｊｅ（配列５’  ｇａｇｃｔｃｃｔｃｇａｇｇｃｃａｃｃａｔｇ  ３’、配列番号７１２）及び１２０４−Ｊｅ（配列５’  ｃｇｃｇｇｃｃｇｃｇａａｔｔｃｔｔａ  ３’、配列番号７１３））、ならびに０．２ｍＭの各デオキシヌクレオシド三リン酸（ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、及びｄＴＴＰ）を使用して、２０ＰＣＲサイクルを５０μＬの体積で行った。以下のプログラムを使用して、これらの試料をＰＣＲ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ、Ｇｅｒｍａｎｙ）によって増幅した：９５℃で２分間、２０サイクルを９５℃で３０秒間、５６℃で３０秒間、７２℃で１分間、及び最終伸張ステップを７２℃で１０分間。１％アガロースゲルを使用してＰＣＲ産物をゲル精製し、７２０ｂｐの予想サイズに対応するＤＮＡバンドを切り取り、Ｍａｃｈｅｒｅｙ  ＆  ＮａｇｅｌのＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎゲル及びＰＣＲクリーンアップキットを使用して、製品取扱説明書に従ってゲル抽出を行った。Ｔ４  ＤＮＡリガーゼ及び１：３（ベクター：挿入物）の比率を使用して、精製したＤＮＡを、ＸｈｏＩ／ＥｃｏＲＩ部位を通して社内発現ベクターにライゲーションした。２時間後にライゲーション（２５℃）を停止し、６５℃で１０分間の熱変性ステップを行った。酵母ｔ−ＲＮＡを使用してライゲーション反応由来のＤＮＡをＥｔＯＨ沈殿させた。標準の消化及びライゲーション技法を使用した。ライゲーション反応物をＤＨ１０Ｂ細胞（大腸菌ＥｌｅｃｔｒｏＭａｘ  ＤＨ１０Ｂエレクトロコンピテント細胞、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１９００Ｖ／５ミリ秒）に電気穿孔した。電気穿孔細菌をＬＢ−寒天＋１００μｇ／ｍＬアンピシリンプレート上にプレーティングし、およそ１．９×１０８個のコロニーを得た。
【０５９６】
その後、すべての電気穿孔細菌をプレートからスクラッチし、製造業者の指示に従って大規模ＤＮＡプラスミド調製（Ｍａｃｈｅｒｅｙ＆Ｎａｇｅｌ、ＮｕｃｌｅｏＢｏｎｄ  Ｘｔｒａ  Ｍａｘｉ  Ｐｌｕｓ  Ｋｉｔ）のために使用して、ＤＮＡライブラリを生成した。ＸｈｏＩ／ＥｃｏＲＩ及びＢｓｒＧＩ／ＥｃｏＲＩでの制限酵素消化を行って、ライブラリを品質管理した。単一クローンを選定し、配列決定のために送り、プライマー１１５５−Ｊｅ（順方向、配列５’  ｃｃｔｔｇａａｃｃｔｃｃｔｃｇｔｔｃｇ  ３’、配列番号７１４）を使用して最終ライブラリ多様性を決定した。
６．６．４．２  ヒトＧＩＴＲ変異型を有する細胞ライブラリの生成
【０５９７】
トランスフェクションに続く形質導入の標準の技法を使用して、１６２４−５細胞の表面上にヒトＧＩＴＲ変異体を発現した。レトロウイルス粒子を生成するために、Ｘ−ｔｒｅｍｅＧＥＮＥ  ９  ＤＮＡトランスフェクション試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、ＤＮＡライブラリ、ならびにレトロウイルスタンパク質Ｇａｇ、Ｐｏｌ、及びＥｎｖを発現するベクターを、レトロウイルスパッケージング細胞株（ＨＥＫ細胞）にトランスフェクトした。結果として生じたレトロウイルス粒子がレトロウイルスパッケージング細胞の細胞培養上清中に蓄積した。トランスフェクトした２日後に無細胞ウイルスベクター粒子含有上清を回収し、１６２４−５細胞のスピン感染に供した。約４％の形質導入効率（％ヒトＧＩＴＲ発現細胞）を得た。少なくともさらに１日連続培養した後に、ピューロマイシン（１．５μｇ／ｍＬ）を使用して細胞を選択した。非形質導入細胞を陰性対照（ＮＣ）とした。抗生物質選択後、ほとんどの細胞が細胞表面上にヒトＧＩＴＲ抗原ライブラリを安定に発現した。生存不能な細胞をＦｉｃｏｌｌ分離ステップにより除去した。
【０５９８】
ポリクローナル抗ＧＩＴＲ抗体を使用して正しく折り畳まれたヒトＧＩＴＲ変異体を発現する細胞を選択し、その後、抗ＧＩＴＲキメラ親２３１−３２−１５抗体に結合しなかったヒトＧＩＴＲ変異型を発現する個別の細胞を選択するために、ＦＡＣＳを使用した。手短に、抗体結合細胞をＦＡＣＳにより分析し、特異的抗体結合を呈した細胞を分取高速ＦＡＣＳ（ＦＡＣＳＡｒｉａＩＩ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により非結合細胞集団から分離した。抗体反応性または非反応性細胞プールを組織培養で再度拡張し、レトロウイルスによって形質導入された細胞の安定した発現の表現型のため、明らかに検出可能な抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５）非反応性細胞集団が得られるまで、抗体指向性細胞選別及び組織培養拡張のサイクルを繰り返した。この抗ＧＩＴＲ抗体（キメラ親２３１−３２−１５）非反応性細胞集団を最終の単細胞選別ステップに供した。細胞拡張の数日後、単細胞選別された細胞を、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で９６ウェルプレート分析を使用して、抗ＧＩＴＲキメラ親２３１−３２−１５抗体への非結合及びポリクローナル抗ＧＩＴＲ抗体への結合について再度試験した。
６．６．４．３  エピトープ分析
【０５９９】
表現型（ポリクローナル抗ＧＩＴＲ＋、キメラ親２３１−３２−１５−）を遺伝子型と連結するために、単細胞選別されたｈｕＧＩＴＲ変異型の配列決定を行った。図３３は、これらの変異型由来の配列のアライメントを示す。図３３のアミノ酸残基は、ヒトＧＩＴＲの未成熟アミノ酸配列（配列番号７０１）に従って番号付けされたものである。配列決定により変異の増加または「ホットスポット」（例えば、Ｐ６２及びＧ６３）を有する領域が特定され、抗ＧＩＴＲキメラ親２３１−３２−１５抗体によって認識されたヒトＧＩＴＲ上のエピトープを示した。
【０６００】
抗ＧＩＴＲ抗体への結合に関与するヒトＧＩＴＲの正確なアミノ酸を確認するために、ホットスポットアミノ酸のアラニン置換を行った。以下の位置（配列番号７０１に従って番号付けされたもの）：Ｐ２８Ａ、Ｔ２９Ａ、Ｇ３０Ａ、Ｇ３１Ａ、Ｐ３２Ａ、Ｔ５４Ａ、Ｔ５５Ａ、Ｒ５６Ａ、Ｃ５７Ａ、Ｃ５８Ａ、Ｒ５９Ａ、Ｄ６０Ａ、Ｙ６１Ａ、Ｐ６２Ａ、Ｇ６３Ａ、Ｅ６４Ａ、Ｅ６５Ａ、Ｃ６６Ａ、Ｃ６７Ａ、Ｓ６８Ａ、Ｅ６９Ａ、Ｗ７０Ａ、Ｄ７１Ａ、Ｃ７２Ａ、Ｍ７３Ａ、Ｃ７４Ａ、Ｖ７５Ａ、及びＱ７６Ａを別々にアラニンに変異させた。トランスフェクションに続く形質導入の標準の技法を使用して、１６２４−５細胞の表面上にこれらのヒトＧＩＴＲアラニン変異体を発現した。
【０６０１】
最後に、１６２４−５細胞上で発現したアラニン変異体を、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で、抗ＧＩＴＲヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃２、３つの生殖系列変異型（ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５、及びｐａｂ１９７９）、ならびに基準抗体ｍ６Ｃ８の結合について試験した。簡潔に言えば、個別のヒトＧＩＴＲアラニン変異体を発現する１６２４−５細胞を、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＣＳ）中に希釈した２μｇ／ｍＬのモノクローナル抗ＧＩＴＲ抗体Ｈｕｍ２３１＃２、３つの生殖系列変異型（ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５、及びｐａｂ１９７９）、もしくはｍ６Ｃ８抗体、またはＡＰＣと共役したポリクローナル抗ＧＩＴＲ抗体（ＡＦ６８９、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）、及びＦｃ受容体遮断（１：２００、ＢＤカタログ番号５５３１４２）と４℃で２０分間インキュベートした。洗浄後、検出に必要な場合、これらの細胞を、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＣＳ）中に希釈した二次抗ＩｇＧ抗体（ＡＰＣ共役、ＢＤカタログ番号１０９−１３６−０９７）と４℃で２０分間インキュベートした。その後、これらの細胞を洗浄し、フローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して取得した。試験したモノクローナル抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）値をポリクローナル抗体のＭＦＩ値で割り、個別のＧＩＴＲアラニン変異体のＭＦＩ比（モノクローナル抗体／ポリクローナル抗体）を得た。平均ＭＦＩ比（「ＡＭＦＩ比」）をすべての変異体の個別のＭＦＩ比に基づいて計算した。図３４Ａは、ヒトＧＩＴＲアラニン変異体を発現する１６２４−５細胞への、Ｈｕｍ２３１＃２、３つの生殖系列変異型（ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５、及びｐａｂ１９７９）、ならびに基準抗体ｍ６Ｃ８の結合を要約する表である。正規化後、ＡＭＦＩ比の６０％を超える個別のＭＦＩ比を、ポリクローナル抗体のその同様の結合を示すものと見なし、図３４Ａで「＋」で表す。ＡＭＦＩ比の３０％〜６０％の個別のＭＦＩ比を図３４Ａで「＋／−」で表す。ＡＭＦＩ比の３０％未満の個別のＭＦＩ比を図３４Ａで「−」で表す。
【０６０２】
図３４Ａに示されるように、配列番号７０１に従って番号付けされたＤ６０Ａ変異体及びＧ６３Ａ変異体は、抗ＧＩＴＲヒト化変異型Ｈｕｍ２３１＃２、ならびに３つの生殖系列変異型（ｐａｂ１９６７、ｐａｂ１９７５、及びｐａｂ１９７９）の結合を特異的に破壊または弱化したが、基準抗体ｍ６Ｃ８の結合は破壊または弱化しなかった。Ｃ５８Ａ変異体は５つすべての抗体の結合を破壊し、エピトープ特異的なものではなく構造変異である可能性が高い。Ｃ７４Ａ変異体は弱い発現を有し、結合比較に使用することができなかった。
【０６０３】
さらに、抗ＧＩＴＲ抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃２、及びｍ６Ｃ８を、野生型対変異体ヒトＧＩＴＲへのそれらの結合について比較した。簡潔に言えば、野生型ヒトＧＩＴＲ及び２つのＧＩＴＲアラニン変異体（配列番号７０１に従って番号付けされたＤ６０Ａ変異体及びＧ６３Ａ変異体）を上述のように１６２４−５細胞の表面上で発現し、上述のようにフローサイトメトリー分析で試験し、そこで、細胞を最初に２μｇ／ｍＬのモノクローナル抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃２、及びｍ６Ｃ８、またはＡＰＣと共役したポリクローナル抗体を使用して染色し、その後、検出に必要な場合、二次抗ＩｇＧ抗体（ＡＰＣ共役、１：１０００、ＢＤカタログ番号１０９−１３６−０９７）を使用して染色した。すべての平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を２つの測定値の平均として計算した。特定の細胞型の試験したモノクローナル抗体のＭＦＩ値を同じ細胞型のポリクローナル抗体のＭＦＩ値で割り、合計９つのＭＦＩ比（モノクローナル抗体／ポリクローナル抗体）：ＭＦＩ比２３１−３２−１５、野生型、ＭＦＩ比Ｈｕｍ２３１＃２、野生型、ＭＦＩ比ｍ６Ｃ８、野生型、ＭＦＩ比２３１−３２−１５、Ｄ６０Ａ、ＭＦＩ比Ｈｕｍ２３１＃２、Ｄ６０Ａ、ＭＦＩ比ｍ６Ｃ８、Ｄ６０Ａ、ＭＦＩ比２３１−３２−１５、Ｇ６３Ａ、ＭＦＩ比Ｈｕｍ２３１＃２、Ｇ６３Ａ、及びＭＦＩ比ｍ６Ｃ８、Ｇ６３Ａを得た。ＧＩＴＲアラニン変異体の特定のＭＦＩ比を野生型の対応するＭＦＩ比で割ることにより（例えば、ＭＦＩ比Ｈｕｍ２３１＃２、Ｄ６０ＡをＭＦＩ比Ｈｕｍ２３１＃２、野生型で割ることにより）、野生型ＧＩＴＲに対するＧＩＴＲアラニン変異体への抗体の結合の割合を計算した。例えば、１００％×（１−（ＭＦＩ比Ｈｕｍ２３１＃２、Ｄ６０Ａ／ＭＦＩ比Ｈｕｍ２３１＃２、野生型））を計算することにより、結合の減少の割合を決定した。
【０６０４】
図３４Ｂに示されるように、Ｄ６０Ａ変異体及びＧ６３Ａ変異体は、２３１−３２−１５及びＨｕｍ２３１＃２の結合を特異的に破壊または弱化したが、ｍ６Ｃ８の結合は破壊または弱化しなかった。図３４Ｂに示される割合は、各プロットにおけるＧＩＴＲ陽性細胞の割合である。ＧＩＴＲ  Ｄ６０Ａを発現する細胞を使用して試験したときに、２３１−３２−１５及びＨｕｍ２３１＃２の抗体結合は、ｍ６Ｃ８の１０％減少と比較して、それぞれ、８２％及び８８％減少した。同様に、ＧＩＴＲ  Ｇ６３Ａを発現する細胞を使用して試験したときに、２３１−３２−１５及びＨｕｍ２３１＃２の結合は、それぞれ、３７％及び５９％減少し、ｍ６Ｃ８の結合は、６２％減少した。
【０６０５】
抗ＧＩＴＲ抗体の結合特性のさらなる証拠として、カニクイザルＧＩＴＲへのこれらの抗体の結合を比較した。カニクイザルＧＩＴＲの未成熟タンパク質は、列配列番号７０４のアミノ酸配を含む。タンパク質発現を増加させるために、カニクイザルＧＩＴＲのシグナルペプチドの第１の残基をメチオニンで置き換え、Ｖ１ＭカニクイザルＧＩＴＲを生成した。その後、配列番号７０４に従って番号付けされた６２位及び６３位のアミノ酸残基（ＧｌｎＳｅｒ）をヒトＧＩＴＲ（ＰｒｏＧｌｙ）において対応する残基で置き換えた変異体カニクイザルＧＩＴＲ  Ｖ１Ｍ／Ｑ６２Ｐ／Ｓ６３Ｇを生成した。図３５Ａは、ヒトＧＩＴＲとＶ１ＭカニクイザルＧＩＴＲとＶ１Ｍ／Ｑ６２Ｐ／Ｓ６３ＧカニクイザルＧＩＴＲとの間の配列アライメントである。図３５Ａに示される３つのタンパク質を上述のように１６２４−５細胞の表面上で発現し、上述のようにフローサイトメトリー分析で試験し、そこで、細胞を最初に２μｇ／ｍＬのモノクローナル抗体２３１−３２−１５、Ｈｕｍ２３１＃２、及びｍ６Ｃ８、またはＡＰＣと共役したポリクローナル抗体を使用して染色し、その後、二次抗ＩｇＧ抗体（ＡＰＣ共役、１：１０００、ＢＤカタログ番号１０９−１３６−０９７）を使用して染色した。
【０６０６】
図３５Ｂに示されるように、抗ＧＩＴＲ抗体２３１−３２−１５及びＨｕｍ２３１＃２は、Ｖ１ＭカニクイザルＧＩＴＲを発現する細胞ではなく、Ｖ１Ｍ／Ｑ６２Ｐ／Ｓ６３ＧカニクイザルＧＩＴＲを発現する細胞への結合のみを示した。
６．７  実施例７：アゴニスト抗ＧＩＴＲ抗体でのＴ細胞のインビトロ処理に続くＴ細胞注入
【０６０７】
ＧＩＴＲアゴニスト抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、または本明細書に記載の別のＧＩＴＲアゴニスト抗体で培養した場合に、癌を有する対象、例えば、ヒト対象に注入する前に、活性化状態を示すＧＩＴＲを発現するＴ細胞をさらに活性化して、腫瘍細胞等の標的細胞を死滅させることができる。
【０６０８】
対象、例えば、ヒト対象から単離したＴ細胞上でのＧＩＴＲの発現レベルを、標準の技法、例えば、ＦＡＣＳ分析によって査定する。Ｔ細胞源は、例えば、末梢血、腫瘍部位を排出するリンパ節の生検／外科標本、またはＴ細胞が浸潤しているかもしれない腫瘍自体の生検／外科標本である。Ｔ細胞を、標準の技法により、例えば、全ＰＢＭＣ、リンパ組織、または腫瘍組織から単離する。ＧＩＴＲのＴ細胞表面上での発現が観察された場合、これらの細胞を、ＧＩＴＲアゴニスト抗体、例えば、Ｈｕｍ２３１＃１、Ｈｕｍ２３１＃２、Ｈｕｍ２３１＃２ｗ、または本明細書に記載の別のＧＩＴＲアゴニスト抗体と、例えば、１μｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で、例えば、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、または７２時間インキュベートし、その後、例えば、Ｔ細胞を対象に静脈内注入してもよい。
【０６０９】
ＧＩＴＲの対象から単離したＴ細胞上での発現が観察されない場合、その発現を、Ｔ細胞と、例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）及び／もしくはホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）等のＴＣＲ複合体刺激剤、または抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体等のＴＣＲ複合体刺激抗体との共インキュベーション（例えば、１μｇ／ｍＬ〜１ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で、例えば、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、または７２時間）によって誘導することができる。あるいは、最初にＴ細胞を抗ＣＤ３抗体のみとインキュベートし、その後、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、または７２時間後に、アゴニストＧＩＴＲ抗体を添加することが好ましい場合がある。Ｔ細胞を、抗原提示細胞の存在下で、例えばペプチドまたはタンパク質の形態の腫瘍抗原で刺激して、腫瘍特異的Ｔ細胞を活性化し、それらの数を拡大することが望ましい場合もある。抗原で刺激した後、注入前に、Ｔ細胞をＧＩＴＲアゴニスト抗体で培養して、それらの活性化状態を増強することができる。
【０６１０】
これらのＴ細胞を、対象に、例えば、３０分間、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、１２時間、または２４時間の期間にわたって注入してもよく、対象に、例えば、１、２、３、もしくは４週間、または１、２、３、４、５、もしくは６ヶ月間隔で、１回、２回、３回、４回、またはそれ以上の回数注入してもよい。注入するＴ細胞の数を、標準の実験方法によって決定することができ、例えば、１×１０６個の細胞、１×１０７個の細胞、１×１０８個の細胞、１×１０９個の細胞、またはそれ以上の個数の細胞を含み得る。
【０６１１】
いくつかの実施形態では、ＧＩＴＲアゴニスト抗体での処理前、処理中、または処理後に、これらのＴ細胞をマイトジェン（例えば、ＰＨＡ）またはサイトカイン（例えば、ＩＬ−２）等の薬剤と接触させて、Ｔ細胞集団を非特異的に拡張することができる。
【０６１２】
いくつかの実施形態では、これらのＴ細胞を、ＧＩＴＲアゴニスト抗体に加えてＯＸ４０アゴニスト抗体等のさらなるアゴニストと接触させてもよい。
【０６１３】
本発明の範囲は、本明細書に記載の特定の実施形態に限定されるものではない。実際には、記載される修正に加えて本発明の様々な修正が、前述の説明及び添付の図面から当業者に明らかになるであろう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲内に収まるよう意図されている。
【０６１４】
本明細書に引用されるすべての参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）は、各々の個別の参考文献（例えば、出版物または特許または特許出願）がすべての目的のために参照によりその全体が組み込まれると具体的かつ個別に示される場合と同じ程度に、すべての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。他の実施形態は、以下の特許請求の範囲内である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１０Ｄ】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１８Ｃ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４Ｂ】
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【図２４Ｃ】
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【図２５Ａ】
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【図２５Ｂ】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７Ａ】
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【図２７Ｂ】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図３０Ａ】
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【図３０Ｂ】
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【図３０Ｃ】
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【図３０Ｄ】
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【図３０Ｅ】
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【図３０Ｆ】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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