(57)【要約】  本発明は、高濃度の抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む安定な低粘度抗体配合物に関する。一部の実施形態において、本発明は、一般に、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片、約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；約０．００２％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および配合緩衝液を含む安定な抗体配合物に関する。一部の実施形態において、配合緩衝液は、本質的にリン酸塩を有さない。一部の実施形態において、本発明は、容器、剤形および／またはキットを対象とする。一部の実施形態において、本発明は、安定な抗体配合物を作製し、使用する方法を対象とする。
2017527560.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定な抗体配合物であって：
ａ．ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片：
（Ｉ）前記抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）前記抗体が、ＶＨドメインを含み：
ｉｖ．前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｖ．前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｖｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）前記抗体が、ＶＬドメインを含み：
ｉｖ．前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖ．前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｖｉ．前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）前記抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ｉｖ．前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖ．前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｖｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および
ｂ．約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；
ｃ．約０．００２％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および
ｄ．配合緩衝液
を含む抗体配合物。
【請求項２】
前記配合緩衝液が、本質的にリン酸塩を有さない、請求項１に記載の抗体配合物。
【請求項３】
前記粘度調整剤が、ヒスチジン、アルギニン、リジン、ポリビニルアルコール、ポリアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、グリセリン、ポリエチレングリコール、グルコース、デキストロース、およびスクロースからなる群から選択される、請求項２に記載の抗体配合物。
【請求項４】
前記非イオン性界面活性剤が、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｗｅｅｎ  ８０、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ノノキシノール−９、ポリオキサマー、ステアリルアルコール、またはモノステアリン酸ソルビタンからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項５】
前記配合緩衝液が、酢酸緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、塩酸緩衝液、アルギニン緩衝液、グリシン緩衝液、クエン酸緩衝液、またはＴＥＳ緩衝液である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項６】
前記配合緩衝液が、アルギニン緩衝液である、請求項５に記載の抗体配合物。
【請求項７】
約１００ｍＭから約２００ｍＭのＮａＣｌをさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項８】
約５から約８のｐＨを有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項９】
前記抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有する、請求項１に記載の抗体配合物。
【請求項１０】
前記アミノ酸置換が、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用して前記ＣＤＲ内の以下の残基：
ＨＣＤＲ２中の５３、５７；
ＨＣＤＲ３中の９７、９８、９９、１０１、１０２；
ＬＣＤＲ１中の２７、２７Ａ、２７Ｂ、３１；
ＬＣＤＲ２中の５６；または
ＬＣＤＲ３中の９２、９３、９４、９５、９５Ａ  ９５Ｂ、９５Ｃ、９６、９７
の１つ以上におけるアミノ酸置換を含む、請求項９に記載の抗体配合物。
【請求項１１】
Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用して前記フレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；または
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換をさらに含む、請求項９に記載の抗体配合物。
【請求項１２】
前記抗体またはその断片が、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的結合し：
（Ｉ）
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
または
（ＩＩ）
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有する、
請求項１に記載の抗体配合物。
【請求項１３】
前記抗体またはその断片が、抗体ＶＨドメインおよび抗体ＶＬドメインを含み、前記ＶＨドメインが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３および第１のフレームワークを含み、前記ＶＬドメインが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３および第２のフレームワークを含む、請求項９または１２に記載の抗体配合物。
【請求項１４】
前記抗体またはその断片が、ＶＨドメインを含み：
ａ．前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｂ．前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；または
ｃ．前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用して前記フレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；または
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の抗体配合物。
【請求項１５】
前記抗体またはその断片が、ＶＬドメインを含み：
ａ．前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｂ．前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；または
ｃ．前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用して前記フレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；または
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の抗体配合物。
【請求項１６】
前記抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ａ．前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｂ．前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；または
ｃ．前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用して前記フレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；または
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の抗体配合物。
【請求項１７】
約４０℃における少なくとも１ヵ月間の貯蔵時に安定である、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項１８】
約４０℃における１ヵ月間の貯蔵後に１０００未満の「≧１０μｍの粒子」／ｍＬを有する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項１９】
２３℃において２０ｃＰ未満の粘度を有する、請求項１〜８８のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項２０】
安定な抗体配合物であって：
ａ．ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片：
（Ｉ）前記抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）前記抗体が、ＶＨドメインを含み：
ｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）前記抗体が、ＶＬドメインを含み：
ｖｉｉ．前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖｉｉｉ．前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｘ．前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）前記抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ｖｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖｉｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｘ．前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および
ｂ．約５０ｍＭから約４００ｍＭのアルギニン；
ｃ．約０．００２％から約０．２％のポリソルベート８０；および
ｄ．約１０から約４０ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩
を含む抗体配合物。
【請求項２１】
安定な抗体配合物であって：
ｂ．ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片：
（Ｉ）前記抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）前記抗体が、ＶＨドメインを含み：
ｖｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｖｉｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｘ．前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）前記抗体が、ＶＬドメインを含み：
ｖｉｉ．前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖｉｉｉ．前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｘ．前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）前記抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ｖｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖｉｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｘ．前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および
ｂ．約１９０ｍＭのアルギニン；
ｃ．約０．０４％のポリソルベート８０；および
ｄ．約２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩
を含む抗体配合物。
【請求項２２】
約２５℃における少なくとも３ヵ月間の貯蔵時に安定である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項２３】
約５℃における少なくとも１８ヵ月間の貯蔵時に安定である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項２４】
約４０℃において少なくとも１ヵ月間貯蔵された前記抗体が、貯蔵されなかった参照抗体と比較してｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能の少なくとも８０％を保持する、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項２５】
約５℃において少なくとも６ヵ月間貯蔵された前記抗体が、貯蔵されなかった参照抗体と比較してｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能の少なくとも８０％を保持する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項２６】
約４０℃において少なくとも１ヵ月間貯蔵された前記抗体が、貯蔵されなかった参照抗体と比較してｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能の少なくとも５０％を保持する、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項２７】
約５℃において少なくとも６ヵ月間貯蔵された前記抗体が、貯蔵されなかった参照抗体と比較してｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能の少なくとも５０％を保持する、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の抗体配合物。
【請求項２８】
好適な容器中で請求項１〜２７のいずれか一項に記載の抗体配合物を含むヒトへの非経口投与に好適な医薬単位剤形。
【請求項２９】
安定な水性抗体配合物を産生する方法であって：
ｃ．抗体を、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片に精製すること：
（Ｉ）前記抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
前記ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
前記ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
前記ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）前記抗体が、ＶＨドメインを含み：
前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）前記抗体が、ＶＬドメインを含み：
前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）前記抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．前記ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、
前記ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
前記ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および
ｄ．前記単離された抗体を安定化配合物中に入れて安定な水性抗体配合物を形成することを含み、前記得られる安定な水性抗体配合物が、
ｉ．約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの前記抗体；
ｉｉ．約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；
ｉｉｉ．約０．００２％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および
ｉｖ．配合緩衝液
を含む方法。
【請求項３０】
対象における肺疾患もしくは障害または慢性炎症性皮膚疾患もしくは障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体配合物を投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１４年９月３日に出願された米国仮特許出願第６２／０４５，３３８号明細書の利益を主張し、その開示は参照により全体として本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本出願は、２０１３年５月１３日に作成され、２１４キロバイトのサイズを有する標題「ＩＬ４Ｒ３００Ｐ１」のテストファイルとしてＥＦＳ−Ｗｅｂを介して本出願とともに提出される配列表を参照により取り込む。
【背景技術】
【０００３】
本発明は、高濃度の抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む安定な低粘度抗体配合物に関する。一部の実施形態において、本発明は、一般に、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片、約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；約０．００２％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および配合緩衝液を含む安定な抗体配合物に関する。一部の実施形態において、配合緩衝液は、本質的にリン酸塩を有さない。一部の実施形態において、本発明は、容器、剤形および／またはキットを対象とする。一部の実施形態において、本発明は、安定な抗体配合物を作製し、使用する方法を対象とする。
【０００４】
抗体は、それらの標的認識の特異性、それによる全身投与後の高度な選択的アウトカムの生成に起因して種々の疾患および病態の治療において使用されている。抗体を有効なままにするため、それらは、それらの産生、精製、輸送および貯蔵の間にそれらの生物学的活性を維持しなければならない。産生すべき大量の高度に精製されたモノクローナル抗体を提供するための新たな産生および精製技術が、開発されている。しかしながら、それらの抗体を輸送および貯蔵について安定化することは依然として困難であり、抗体を投与に好適な剤形で提供することはさらにいっそうより困難である。
【０００５】
変性、凝集、汚染、および粒子形成は、抗体の配合および貯蔵における顕著な障害であり得る。広範な抗体に起因して、全ての抗体の貯蔵に好適な普遍的な配合物も条件も存在しない。ある抗体の最適な配合物は、その抗体に特異的であることが多い。さらに、抗体配合物は、抗体の濃度、および／または抗体配合物の所望の物理的特性、例えば、粘度に応じて特異的抗体にさらに調整されることを必要とし得る。抗体貯蔵配合物は、市販の抗体のための研究開発プロセスの顕著な要素であることが多い。したがって、輸送および貯蔵に伴う困難を解消し得る安定な水性抗体配合物を提供することが必要とされる。
【０００６】
本明細書における参照文献の引用も考察も、そのようなものが本発明に対して従来技術であることの容認として解釈すべきでない。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、高濃度の抗ＩＬ４Ｒ抗体を含む安定な低粘度抗体配合物に関する。一部の実施形態において、本発明は、一般に、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片、約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；約０．００２％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および配合緩衝液を含む安定な抗体配合物に関する。
【０００８】
一部の実施形態において、本発明は、安定な抗体配合物であって：ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片：
（Ｉ）抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）抗体が、ＶＨドメインを含み：
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基： 
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）抗体が、ＶＬドメインを含み：
ｉ．ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；約０．００２％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および配合緩衝液を含む抗体配合物を対象とする。
【０００９】
一部の実施形態において、本発明は、安定な抗体配合物であって：ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片：
（Ｉ）抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）抗体が、ＶＨドメインを含み：
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）抗体が、ＶＬドメインを含み：
ｉ．ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および約５０ｍＭから約４００ｍＭのアルギニン；約０．００２％から約０．２％のポリソルベート８０；および約１０から約４０ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩を含む抗体配合物を対象とする。
【００１０】
一部の実施形態において、本発明は、安定な抗体配合物であって：ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片：
（Ｉ）抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）抗体が、ＶＨドメインを含み：
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）抗体が、ＶＬドメインを含み：
ｉ．ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および約１９０ｍＭのアルギニン；約０．０４％のポリソルベート８０；および約２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩を含む抗体配合物を対象とする。
【００１１】
一部の実施形態において、本発明は、好適な容器中で本明細書に記載の抗体配合物のいずれか１つを含むヒトへの非経口投与に好適な医薬単位剤形を対象とする。
【００１２】
一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の任意の抗体配合物、本明細書に記載の容器、本明細書に記載の単位剤形、または本明細書に記載のプレフィルドシリンジを含むキットを対象とする。
【００１３】
一部の実施形態において、本発明は、安定な水性抗体配合物を産生する方法であって：
Ａ．抗体を、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片に精製すること；
（Ｉ）抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）抗体が、ＶＨドメインを含み：
ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）抗体が、ＶＬドメインを含み：
ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、アミノ酸配列の配列番号２３２のを有し、ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および
Ｂ．単離された抗体を安定化配合物中に入れて安定な水性抗体配合物を形成することを含み、得られる安定な水性抗体配合物が、
ｉ．約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体；
ｉｉ．約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；
ｉｉｉ．約０．００２％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および
ｉｖ．配合緩衝液
を含む方法を対象とする。
【００１４】
一部の実施形態において、本発明は、対象における肺疾患もしくは障害、または炎症性皮膚障害を治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載の抗体配合物のいずれか１つを投与することを含む方法を対象とする。
【００１５】
本発明の説明の目的のため、図面において本発明のある実施形態が示される。しかしながら、本発明は、図面に示される実施形態の厳密な配置および手段に限定されない。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】イオン性賦形剤、例えば、アルギニン−ＨＣＬまたは塩化ナトリウムの添加が、抗ＩＬ４Ｒ抗体の粘度を２３℃において＜１０ｃＰに低減させることを実証する。
【図２】２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣＬ、１９０ｍＭのアルギニン−ＨＣＬ、ｐＨ６を含有する配合物中のおよそ１５０ｍｇ／ｍｌにおける撹拌なしの抗ｈＩＬ−４Ｒαの写真である。
【図３】２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣＬ、１９０ｍＭのアルギニン−ＨＣＬ、ｐＨ６を含有する配合物中のおよそ１５０ｍｇ／ｍｌにおける撹拌ありの抗ｈＩＬ−４Ｒαの写真である。
【図４】２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣＬ、１９０ｍＭのアルギニン−ＨＣＬ、ｐＨ６、０．０１％のポリソルベート８０を含有する配合物中のおよそ１５０ｍｇ／ｍｌにおける撹拌ありの抗ｈＩＬ−４Ｒαの写真である。
【図５】２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣＬ、１９０ｍＭのアルギニン−ＨＣＬ、ｐＨ６を含有する配合物中のおよそ１５０ｍｇ／ｍｌにおける抗ｈＩＬ−４Ｒαの写真である。この試料は、凍結融解に供しなかった。
【図６】２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣＬ、１９０ｍＭのアルギニン−ＨＣＬ、ｐＨ６を含有する配合物中のおよそ１５０ｍｇ／ｍｌにおける抗ｈＩＬ−４Ｒαの写真である。この試料は、凍結融解に５回供した。
【図７】２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣＬ、１９０ｍＭのアルギニン−ＨＣＬ、ｐＨ６、０．０１％のポリソルベート８０を含有する配合物中のおよそ１５０ｍｇ／ｍｌにおける抗ｈＩＬ−４Ｒαの写真である。この試料は、凍結融解に５回供した。
【図８】（ｉ）ｐＨ５．５（ｉｉ）ｐＨ６．０、または（ｉｉｉ）ｐＨ６．５における抗ＩＬ４Ｒ抗体配合物についての４０℃における総ピーク面積吸光度（ＨＰＳＥＣ）対時間の散布図である。
【図９】（ｉ）２〜８℃（ｉｉ）２５℃または（ｉｉｉ）４０℃において貯蔵された抗ＩＬ４Ｒ抗体配合物についての総ピーク面積吸光度（ＨＰＳＥＣ）対時間の散布図である。
【図１０】（ｉ）ｐＨ５．５（ｉｉ）ｐＨ６または（ｉｉｉ）ｐＨ６．５における抗ＩＬ４Ｒ抗体配合物についての４０℃における８週間後の総ピーク面積低減パーセント（ＨＰＳＥＣ）対Ｔｍ１の散布図である。
【図１１】（ｉ）２〜８℃（ｉｉ）２５℃または（ｉｉｉ）３５℃または（ｉｖ）４０℃において４週間貯蔵された抗ＩＬ４Ｒ抗体配合物についての≧１０μＭの粒子の数／ｍｌ対希釈剤についてのカラムチャートである。
【図１２】４０℃において４週間貯蔵された抗ＩＬ４Ｒ抗体配合物についての≧１０μＭの粒子の数／ｍｌ対希釈剤についてのカラムチャートである。
【図１３】抗体１に対する抗体２〜４２のＶＨドメインのアラインメントを示す（シートＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤに分割）。
【図１４】抗体１に対する抗体２〜４２のＶＩドメインのアラインメントを示す（シートＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤに分割）。
【図１５】抗体２０に対する抗体１〜１９および２１〜４２のＶＨドメインのアラインメントを示す（シートＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤに分割）。
【図１６】抗体２０に対する抗体１〜１９および２１〜４２のＶＩドメインのアラインメントを示す（シートＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤに分割）。
【図１７】＞０．０１％のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含有する試料が、撹拌後に最小粒子スタンダードよりも可視的でない粒子を含有したことを示す。
【図１８】撹拌試料中の＞０．０２％のＰＳ８０および＜０．７％のＰＳ８０の添加が、≧１０μＭの粒子の濃度を撹拌を受けなかった試料と同等のレベルに低減させるために要求されることを示す。
【図１９】＞０．００５％のＰＳ８０を含有する試料が、凍結融解サイクリング後に最小粒子スタンダードに対して可視的でない粒子を含有したことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
定義
本発明を詳細に記載する前、本発明は規定の組成物またはプロセスステップに限定されず、したがって、変動し得ることを理解すべきである。本明細書および付属の特許請求の範囲において使用される単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が特に明確に示さない限り、複数の指示対象を含むことに留意すべきである。用語「ａ」（または「ａｎ」）、ならびに用語「１つ以上」、および「少なくとも１つ」は、本明細書において同義的に使用することができる。
【００１８】
さらに、「および／または」は、本明細書において使用される場合、２つの具体的な特徴または構成要素のそれぞれの、他方を伴うまたは伴わない具体的な開示として意図される。したがって、本明細書における「Ａおよび／またはＢ」などの語句において使用される用語「および／または」は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むものとする。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句において使用される用語「および／または」は、以下の実施形態のそれぞれを包含するものとする：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。
【００１９】
本開示を通して、割合、比などの全ての表現は、特に他の記載がない限り「重量基準」である。本明細書において使用される「重量基準」は、用語「質量基準」と同義であり、本明細書に定義の比または割合が容量でも、厚さでも、他の何らかの尺度でもなく重量に従って算出されることを示す。
【００２０】
用語「約」は、およそ、その辺り、ほぼ、または前後を意味するために、本明細書において使用される。用語「約」が、数値範囲と同時に使用される場合、それは、記載された数値の上下に境界を延長することにより、その範囲を修正する。一般に、用語「約」は、数値を、例えば、記述値の上下に１０％の相違だけ修正するために本明細書において使用される。
【００２１】
特に定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、本発明が関する分野の当業者により一般に理解される意味と同一の意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ−Ｓｈｏｗ，２ｎｄ  ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；およびＯｘｆｏｒｄ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  Ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓが、当業者に、本発明において使用される用語の多くの一般辞書を提供する。
【００２２】
単位、接頭語、および記号は、それらの国際単位系（ＳＩ）が容認する形式で示される。数値範囲は、範囲を定義する数を含む。特に記載のない限り、アミノ酸配列は、アミノからカルボキシの方向に左から右へ記載される。本明細書に提供される見出しは、全体として本明細書を参照することにより得ることができる本開示の種々の態様も実施形態も限定するものではない。したがって、直後に定義される用語は、本明細書を参照することにより全体としてさらに十分に定義される。
【００２３】
本明細書において、実施形態が「を含む」という言葉を用いて記載される場合、そうでなければ、「からなる」および／または「本質的に〜からなる」という用語に関して記載される類似する実施形態も提供されることを理解される。
【００２４】
アミノ酸は、本明細書において、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ生化学命名委員会（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）により推奨されるそれらの一般に公知の三文字記号または一文字記号により参照される。ヌクレオチドも同様に、一般に認められるそれらの一文字コードにより参照される。
【００２５】
本明細書において使用される用語「エピトープ」は、本発明の足場に結合し得るタンパク質決定基を指す。エピトープは、一般に、分子の化学的活性表面基（ｇｒｏｕｐｉｎｇ）、例えば、アミノ酸および／または糖側鎖からなり、通常、特異的な三次元構造的特徴、および特異的電荷特徴を有する。立体構造および非立体構造エピトープは、変性溶媒の存在下で前者への結合は損失されるが、後者への結合は損失されない点で区別される。
【００２６】
用語「ＤＮＡ」は、２つ以上の共有結合している天然存在または改変デオキシリボヌクレオチドの配列を指す。
【００２７】
「タンパク質配列」または「アミノ酸配列」は、表示中の互いに隣接する残基がポリペプチドの一次構造中で連続するアミノ末端からカルボキシル末端方向でのポリペプチド中のアミノ酸構成要素の直鎖表示を意味する。
【００２８】
用語「核酸」は、任意の２つ以上の共有結合しているヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体または誘導体を指す。本明細書において使用されるこの用語としては、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびＰＮＡが挙げられる。「核酸」および「ポリヌクレオチド」は、本明細書において同義的に使用される。
【００２９】
用語「ポリヌクレオチド」は、単一の核酸および複数の核酸を包含するものとし、単離核酸分子または構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。用語「単離」核酸またはポリヌクレオチドは、その天然の環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡまたはＲＮＡを指す。例えば、ベクター中に含有される、例えば、本発明の足場をコードする組換えポリヌクレオチドは、本発明の目的のために単離されたとみなされる。単離ポリヌクレオチドのさらなる例としては、異種宿主細胞中で維持される組換えポリヌクレオチドまたは溶液中で精製（部分的にまたは実質的に）されたポリヌクレオチドが挙げられる。単離ＲＮＡ分子としては、本発明のポリヌクレオチドのインビボまたはインビトロＲＮＡ転写物が挙げられる。本発明による単離ポリヌクレオチドまたは核酸としては、合成により産生されたそのような分子がさらに挙げられる。さらに、ポリヌクレオチドまたは核酸は、調節エレメント、例えば、プロモーター、リボソーム結合部位、または転写ターミネーターであり得、またはそれらを含み得る。
【００３０】
「ポリペプチド」は、長さ、翻訳後修飾、または機能にかかわらず、アミド結合（ペプチド結合）により直鎖結合している２つ以上のアミノ酸の任意の配列を意味する。「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、本明細書において同義的に使用される。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、またはオリゴペプチドは、「ポリペプチド」の定義内に含まれ、用語「ポリペプチド」は、それらの用語のいずれかに代えて、またはそれらと同義的に使用することができる。用語「ポリペプチド」は、ポリペプチドの発現後修飾、例として、限定されるものではないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護／遮断基による誘導体化、タンパク質分解開裂、または非天然存在アミノ酸による修飾の産物も指すものとする。ポリペプチドは、天然の生物学的資源から誘導し、または組換え技術により産生することができるが、必ずしも指定の核酸配列から翻訳されない。ポリペプチドは、任意の様式で、例として、化学合成により生成することができる。
【００３１】
本発明のポリペプチドとして、上記ポリペプチドの断片、誘導体、類似体、または変異体、およびそれらの任意の組合せも含まれる。変異体は、天然または非天然存在であり得る。非天然存在変異体は、当技術分野において公知の突然変異導入技術を使用して産生することができる。変異体ポリペプチドは、保存または非保存アミノ酸置換、欠失、または付加を含み得る。「誘導体」としては、２０個の標準アミノ酸の１つ以上の天然存在アミノ酸誘導体を含有するそれらのペプチドも含まれる。
【００３２】
「ランダム化された」または「突然変異した」は、テンプレート配列に対して１つ以上のアミノ酸変化、例として、欠失、置換または付加を含むことを意味する。「ランダム化すること」または「突然変異させること」は、このようなアミノ酸変化を配列中に導入するプロセスを意味する。ランダム化または突然変異は、一般に、核酸コード配列の意図的、ブラインド、または自然配列変異を介して達成することができ、任意の技術、例えば、ＰＣＲ、エラープローンＰＣＲ、または化学的ＤＮＡ合成により生じ得る。用語「ランダム化すること」、「ランダム化された」、「突然変異させること」、「突然変異した」などは、本明細書において同義的に使用される。
【００３３】
「コグネイト」または「コグネイト非突然変異タンパク質」は、ランダム化され、または突然変異した変異体タンパク質中に導入されたアミノ酸突然変異を除き、変異体タンパク質と配列が同一であるタンパク質を意味する。
【００３４】
「ＲＮＡ」は、２つ以上の共有結合している天然存在または改変リボヌクレオチドの配列を意味する。この用語に含まれる改変ＲＮＡの一例は、ホスホロチオエートＲＮＡである。
【００３５】
本明細書において使用される用語「発現」は、遺伝子が生化学物質、例えば、本発明の足場またはその断片を産生するプロセスを指す。このプロセスは細胞内の遺伝子の機能的存在の任意の顕在化、例として、限定されるものではないが、遺伝子ノックダウンならびに一過的発現および安定的発現の両方を含む。限定されるものではないが、それは遺伝子の１つ以上のｍＲＮＡへの転写、およびこのようなｍＲＮＡの１つ以上のポリペプチドへの翻訳を含む。最終所望産物が生化学物質である場合、発現は、その生化学物質および任意の前駆体の作出を含む。
【００３６】
「発現産物」は、核酸、例えば、遺伝子の転写により産生されるメッセンジャーＲＮＡ、またはポリペプチドのいずれかであり得る。本明細書に記載の発現産物は、転写後修飾、例えば、ポリアデニル化を有する核酸、または翻訳後修飾、例えば、メチル化、グリコシル化、脂質付加、他のタンパク質サブユニットとの会合、タンパク質分解開裂などを有するポリペプチドをさらに含む。
【００３７】
用語「ベクター」または「発現ベクター」は、本明細書において宿主細胞中に導入し、その中で所望発現産物を発現させるためのビヒクルとして本発明により使用されるベクターを意味するために使用される。当業者に公知であるとおり、このようなベクターは、プラスミド、ファージ、ウイルスおよびレトロウイルスからなる群から容易に選択することができる。一般に、本発明と適合性のベクターは、選択マーカー、所望核酸のクローニングを容易にするための適切な制限部位、ならびに真核または原核細胞中への流入能および／またはその中での複製能を含む。
【００３８】
用語「宿主細胞」は、組換えＤＮＡ技術を使用して構築され、少なくとも１つの発現産物をコードするベクターを保有する細胞を指す。組換え宿主から発現産物を単離するプロセスの記載において、特に明記のない限り、用語「細胞」および「細胞培養物」は、発現産物の資源を示すために同義的に使用され、すなわち、「細胞」からの発現産物の回収は、遠心沈殿全細胞からの回収、または培地および懸濁細胞の両方を含有する細胞培養物からの回収のいずれかを意味する。
【００３９】
本明細書において使用される用語「治療する」または「治療」は、治療法上の治療および防止または予防措置の両方を指し、その目的は、対象における不所望な生理学的変化または障害、例えば、炎症性疾患または病態の進行を予防し、または減速させる（弱める）ことである。有益または所望臨床的結果としては、限定されるものではないが、検出可能か検出不可能かにかかわらず、症状の軽減、疾患の程度の縮小、病状の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患進行の遅滞化または遅延、病状の改善または緩和、および寛解（部分または完全を問わない）が挙げられる。
【００４０】
用語「治療」は、治療を受けていない場合に予期される生存と比較した生存の延長も意味する。治療が必要とされる者としては、既に病態もしくは障害を有する者および病態もしくは障害を有する傾向がある者、または病態もしくは障害を予防すべき者が挙げられる。
【００４１】
用語「対象」、「個体」、「動物」、「患者」、または「哺乳動物」は、診断、予後診断、または治療が望まれる任意の個体、患者または動物、特に、哺乳動物の対象を指す。哺乳動物の対象としては、ヒト、ドメスティックアニマル、家畜、および動物園の動物、競技用動物または愛玩動物、例えば、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、雌ウシなどが挙げられる。
【００４２】
用語「標的」は、本発明の特異的抗体により認識される化合物を指す。用語「標的」および「抗原」は、本明細書において同義的に使用される。例えば、本明細書において使用される用語「特異的に結合する」または「特異的結合」中の用語「特異的」は、本発明の抗体が１つ以上の抗原結合ドメインを介して１つ以上の抗原に結合する相対的親和性を指し、その結合は１つ以上の抗原結合ドメインと１つ以上の抗原との間のいくらかの相補性を必要とする。この定義によれば、本発明の抗体は、それがランダムな非関連エピトープに結合するよりも容易にエピトープに結合する場合、そのエピトープに「特異的に結合する」と言われる。
【００４３】
本明細書において使用される用語「親和性」は、本発明のある抗体の個々のエピトープへの結合の強度の尺度を指す。
【００４４】
本明細書において使用される用語「アビディティー」は、本発明の抗体集団とあるエピトープとの間の複合体の全体的安定性、すなわち、機能的に組み合わされた複数の抗体の抗原との結合強度を指す。アビディティーは、個々の抗原結合ドメインの特異的エピトープとの親和性、およびさらには本発明の抗体の価数の両方に関連する。
【００４５】
用語「標的に対する作用」は、本発明の抗体の１つ以上の標的への結合、およびそのような結合から得られる生物学的効果を指す。
【００４６】
用語「免疫グロブリン」および「抗体」は、生化学的に区別することができる種々の広範なクラスのポリペプチドを含む。当業者は、重鎖がガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはイプシロンに分類されることを認識する。抗体の「クラス」をそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ、またはＩｇＥとして決定するのは、この鎖の性質である。これらのクラスのそれぞれの改変形は、当業者には容易に識別可能である。本明細書において使用される用語「抗体」としては、限定されるものではないが、インタクト抗体、改変抗体、抗体ＶＬまたはＶＬドメイン、ＣＨ１ドメイン、Ｃカッパドメイン、Ｃラムダドメイン、Ｆｃドメイン（以下参照）、ＣＨ２、またはＣＨ３ドメインが挙げられる。
【００４７】
本明細書において使用される用語「改変抗体」としては、非天然存在の、例えば、少なくとも２つの重鎖部分を含むが、２つの完全な重鎖を含まない抗体（例えば、ドメイン欠失抗体またはミニボディーのような）となるように変化させた合成形態の抗体；２つ以上の抗原または単一抗原の異なるエピトープに結合するように変化させた多重特異的形態の抗体（例えば、二重特異性、三重特異性など）が挙げられる）。さらに、用語「改変抗体」としては、多価形態の抗体（例えば、三価、四価など、同一抗原の３つ以上のコピーに対する抗体）が挙げられる（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ＆Ｄｕｂｅｌ，ｅｄｓ．，２０１０，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ参照）。
【００４８】
本発明の抗体は、任意の動物起源、例として、鳥類および哺乳動物からのものであり得る。一部の実施形態において、本発明の方法の抗体は、ヒト、ネズミ（例えば、マウスおよびラット）、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。本明細書において使用される「ヒト」抗体としては、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体が挙げられ、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、または１つ以上のヒト免疫グロブリンにトランスジェニックな動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しない抗体が挙げられる。例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ  ｅｔ  ａｌ．による米国特許第５，９３９，５９８号明細書参照。
【００４９】
本発明の抗体としては、例えば、天然抗体、インタクトモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つのインタクト抗体から形成される多重特異的抗体（例えば、二重特異的抗体）、抗体断片（例えば、１つ以上の抗原に結合し、および／またはそれを認識する抗体断片）、ヒト化抗体、ヒト抗体（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）；米国特許第５，５９１，６６９号明細書および同第５，５４５，８０７号明細書）、抗体ファージライブラリーから単離された抗体および抗体断片（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）；Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）；Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３（１９９２）；Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３））を挙げることができる。本発明の方法により精製された抗体は、異種ポリペプチドにＮもしくはＣ末端において組換え融合し、またはポリペプチドもしくは他の組成物に化学的にコンジュゲート（共有および非共有コンジュゲーションを含む）することができる。例えば、本発明の方法により精製された抗体は、検出アッセイにおける標識として有用な分子およびエフェクター分子、例えば、異種ポリペプチド、薬物、または毒素に組換え融合またはコンジュゲートすることができる。例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第９２／０８４９５号パンフレット；国際公開第９１／１４４３８号パンフレット；国際公開第８９／１２６２４号パンフレット；米国特許第５，３１４，９９５号明細書；および欧州特許第３９６，３８７号明細書参照。
【００５０】
ＩＬ−４Ｒα
ＩＬ−４Ｒαは、インターロイキン−４受容体アルファである。ＩＬ−４Ｒαへの言及は、通常、特に記載のない限り、ヒトＩＬ−４Ｒαに対するものである。野生型成熟ヒトＩＬ−４Ｒαの配列は、シグナルペプチドを含む全長ＩＬ−４Ｒαを示すアクセッション番号Ｐ２４３９４（Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ）のもと寄託されている。
【００５１】
カニクイザルＩＬ−４Ｒαをインハウスで配列決定し、カニクイザルＩＬ−４ＲαのｃＤＮＡ配列を配列番号４５５として示す。
【００５２】
本明細書の他箇所に記載されるとおり、ＩＬ−４Ｒαは、組換え体であり得、および／またはグリコシル化もしくは非グリコシル化のいずれでもよい。ＩＬ−４Ｒαは、Ｎ結合グリコシル化形態でインビボで天然に発現される。グリコシル化ＩＬ−４Ｒαは、組換え系中で、例えば、ＨＥＫ−ＥＢＮＡ細胞中で発現させることもできる。ＩＬ−４Ｒαは、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞中で非グリコシル化形態で発現させることもできる。
【００５３】
抗体分子
これは、天然または部分的もしくは完全に合成により産生される免疫グロブリンを説明する。この用語はまた、抗体抗原結合部位を含む任意のポリペプチドまたはタンパク質を包含する。ここで、本発明は天然形態の抗体に関するものではなく、すなわちそれらはその天然環境中に存在しないが、それらは天然源から単離することができたか、または精製により得ることができたか、またはそうでなければ遺伝子組換え、もしくは化学合成により得ることができたものであり、その場合、下記のとおりそれらは非天然アミノ酸を含有し得ることが理解されなければならない。抗体抗原結合部位を含む抗体断片には、限定されるものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄＡｂ、Ｆｄおよびダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）などの分子が含まれる。
【００５４】
本発明の抗体分子は、ＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＧ２またはグリコシルＩｇＧ２であり得る。
【００５５】
モノクローナルおよび他の抗体を採用し、組換えＤＮＡ技術の技術を使用して標的抗原に結合する他の抗体またはキメラ分子を産生することが可能である。そのような技術は、異なる免疫グロブリンの定常領域とフレームワーク領域に対する抗体の免疫グロブリン可変領域、またはＣＤＲをコードするＤＮＡを導入することを必要とし得る。例えば欧州特許出願公開第Ａ−１８４１８７号明細書、英国特許第２１８８６３８Ａ号明細書または欧州特許出願公開第Ａ−２３９４００号明細書、および大多数の後続の文献を参照。ハイブリドーマまたは抗体を産生する他の細胞を遺伝子突然変異または他の変化に供することができ、それらは、産生される抗体の結合特異性を変化させてもさせなくてもよい。
【００５６】
抗体は多数の手法で改変することができるため、用語「抗体分子」は、要求される特異性を有する抗体抗原結合部位を有し、および／または抗原と結合する、任意の結合メンバーまたは物質を包含すると解釈すべきである。したがって、この用語は抗体の断片および誘導体を包含し、それには、天然であるか完全にまたは部分的に合成されたものであるかにかからわず、抗体抗原結合部位を含む任意のポリペプチドが含まれる。したがって、別のポリペプチド（例えば別の種由来または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属するポリペプチド）に融合された抗体抗原結合部位または等価物を含むキメラ分子が含まれる。キメラ抗体のクローニングおよび発現は欧州特許出願公開第Ａ−０１２０６９４号明細書および欧州特許出願公開第Ａ−０１２５０２３号明細書、および大多数の後続文献に記載されている。
【００５７】
抗体工学分野で利用可能なさらなる技術によりヒト抗体およびヒト化抗体を単離することが可能になる。例えば、ヒトハイブリドーマはＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ＆Ｄｕｂｅｌ（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＬＬＣ；２００１，ＩＳＢＮ：３５４０４１３５４５）により記載のとおり作製することができる。抗体を生成する別の確立技術であるファージディスプレイは、多数の刊行物、例えば国際公開第９２／０１０４７号パンフレット（さらに以下で考察される）、および米国特許５，９６９，１０８号明細書、米国特許第５，５６５，３３２号明細書、米国特許第５，７３３，７４３号明細書、米国特許第５，８５８，６５７号明細書、米国特許第５，８７１，９０７号明細書、米国特許第５，８７２，２１５号明細書、米国特許第５，８８５，７９３号明細書、米国特許第５，９６２，２５５号明細書、米国特許第６，１４０，４７１号明細書、米国特許第６，１７２，１９７号明細書、米国特許第６，２２５，４４７号明細書、米国特許第６，２９１，６５０号明細書、米国特許第６，４９２，１６０号明細書、米国特許第６，５２１，４０４号明細書およびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ＆Ｄｕｂｅｌ［前掲］に詳細に記載されている。マウス抗体遺伝子が不活性化され、ヒト抗体遺伝子により機能的に置き換えられている一方、マウス免疫系のインタクトな他の構成要素を残すトランスジェニックマウスを、ヒト抗体の単離に使用することができる（Ｍｅｎｄｅｚ，Ｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ，１５（２）：１４６−１５６，１９９７）。
【００５８】
合成抗体分子は、例えばＫｎａｐｐｉｋ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６，５７−８６，２０００）またはＫｒｅｂｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２５４  ６７−８４，２００１）により記載されるとおり、合成され、好適な発現ベクター内でアセンブルされたオリゴヌクレオチドにより生成された遺伝子から発現させることにより作出することができる。
【００５９】
全抗体の断片は抗原に結合する機能を達成し得ることが示されている。結合断片の例は（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片；（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｉｖ）ＶＨまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１，５４４−５４６，１９８９；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４，１９９０；Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１，４８４−４９０，２００３）；（ｖ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、２つの連結されたＦａｂ断片を含む二価断片（ｖｉｉ）ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、２つのドメインが会合して抗原結合部位を形成することを可能にするペプチドリンカーによって連結されている一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３−４２６，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎ  ＰＮＡＳ  ＵＳＡ，８５，５８７９−５８８３，１９８８）；（ｖｉｉｉ）二重特異性一本鎖Ｆｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５）および（ｉｘ）遺伝子融合により構築された「ダイアボディ」、多価または多重特異性断片（国際公開第９４／１３８０４号パンフレット；（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８，１９９３ａ）である。ＶＨおよびＶＬドメインを連結するジスルフィド架橋を取り込むことによりＦｖ、ｓｃＦｖまたはダイアボディ分子を安定化することができる（Ｒｅｉｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，１４：１２３９−１２４５，１９９６）。ＣＨ３ドメインに連結されたｓｃＦｖを含むミニボディーを作製することもできる（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５６，３０５５−３０６１，１９９６）。結合断片の他の例は、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に少数の残基、例として抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインの付加によりＦａｂ断片と異なるＦａｂ’、および定常ドメインのシステイン残基が遊離のチオール基を担持するＦａｂ’断片であるＦａｂ’−ＳＨである。
【００６０】
本発明の抗体断片は、本明細書に記載の抗体分子、例えば、抗体１から４２のいずれかのＶＨおよび／もしくはＶＬドメインまたはＣＤＲを含む抗体分子のいずれかから出発して、酵素、例えば、ペプシンもしくはパパインによる消化などの方法により、および／または化学的還元によるジスルフィド架橋の開裂により得ることができる。別の様式において、本発明に含まれる抗体断片は、同様に当業者に周知の遺伝子組換え技術により、またはそうでければ、例えば、自動ペプチドシンセサイザー、例えばＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社などにより供給されるものによるペプチド合成により、または核酸合成および発現により得ることができる。
【００６１】
本発明の機能的抗体断片には、化学修飾、特にＰＥＧ化、またはリポソームへの取り込みにより半減期が増加した任意の機能的断片が含まれる。
【００６２】
ｄＡｂ（ドメイン抗体）は抗体の単量体の抗原結合性小断片であり、すなわち抗体重鎖または軽鎖の可変領域である（Ｈｏｌｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２１，４８４−４９０，２００３）。ＶＨｄＡｂはラクダ科動物（例えばラクダ、ラマ）に天然に生じ、ラクダ科動物を標的抗原により免疫化し、抗原特異的Ｂ細胞を単離し、個々のＢ細胞からｄＡｂ遺伝子を直接クローニングすることにより産生することができる。ｄＡｂは細胞培養物中で産生可能でもある。それらの小さいサイズ、良好な溶解度および温度安定性により、それらは特に生理学的に有用であり、選択および親和性成熟に好適である。本発明の抗体は、実質的に本明細書に記載されるＶＨもしくはＶＬドメイン、または実質的に本明細書に記載されるＣＤＲセットを含むＶＨもしくはＶＬドメインを含むｄＡｂであり得る。
【００６３】
本明細書において使用される語句「実質的に記載される」は、本明細書に記載の抗体のＶＨまたはＶＬドメインの関連ＣＤＲの特徴が、配列が本明細書に記載される規定の領域と同一であり、または高度に類似することを指す。本明細書に記載の、１つ以上の可変ドメインの規定の領域に関する語句「高度に類似する」は、１から約１２、例えば、１から８、例として、１から７、１から６、１から５、１から４、１から３、または１または２つのアミノ酸置換がＶＨおよび／またはＶＬドメインのＣＤＲ中で作製されていてよいことを企図する。
【００６４】
本発明の抗体は、二重特異的抗体を含む。二重特異性または二機能性抗体は、２つの異なる可変領域が同一分子中で組み合わされている第二世代のモノクローナル抗体を形成する［Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．１９９９  Ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｒｅｖ．１８：４１１−４１９，１９９９）。それらの使用は、新規エフェクター機能をリクリートするかまたは腫瘍細胞表面上のいくつかの分子を標的化するそれらの能力から、診断分野および治療分野の両方で実証されている。二重特異性抗体を使用すべき場合、これらの二重特異性抗体は種々の手法で製造することができる慣用の二重特異性抗体であり得（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９０：６４４４―６４４８，１９９３）、例えば化学的にまたはハイブリッドハイブリドーマから調製し、または上記の二重特異性抗体断片のいずれかであり得る。これらの抗体は、化学的方法（Ｇｌｅｎｎｉｅ  ｅｔ  ａｌ，１９８７  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９，２３６７−２３７５；Ｒｅｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｈｅｍａｔ．３７７−３８２，１９９５）または体細胞法（Ｓｔａｅｒｚ  Ｕ．Ｄ．ａｎｄ  Ｂｅｖａｎ  Ｍ．Ｊ．ＰＮＡＳ  ８３，１９８６；ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２１：２１０−２２８，１９８６）によって得ることができるが、ヘテロ二量体化を強制することが可能で、したがって目的の抗体の精製プロセスを促進する遺伝子工学技術により得ることができる（Ｍｅｒｃｈａｎｄ  ｅｔ  ａｌ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６：６７７−６８１，１９９８）。二重特異性抗体の例には、異なる特異性を有する２つの抗体の結合ドメインを使用し、短いフレキシブルペプチドを介して直接連結することができるＢｉＴＥ（商標）技術の二重特異性抗体が含まれる。これは短い単一ポリペプチド鎖上で２つの抗体を組み合わせる。ダイアボディおよびｓｃＦｖは、可変ドメインのみを使用して、Ｆｃ領域を用いずに構築することができ、潜在的に抗イディオタイプ反応の効果を低減する。
【００６５】
二重特異性抗体は、完全ＩｇＧとして、二重特異性Ｆａｂ’２として、Ｆａｂ’ＰＥＧとして、ダイアボディとして、またはそうでなければ二重特異性ｓｃＦｖとして構築することができる。さらに、当技術分野において公知の定型的な方法を使用して２つの二重特異性抗体を連結し、四価抗体を形成することができる。
【００６６】
二重特異性完全抗体とは対照的に二重特異性ダイアボディが特に有用であることがある。それというのも、それらは容易に構築することができ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で発現させることができるためである。適切な結合特異性のダイアボディ（および多数の他のポリペプチド、例えば抗体断片）は、ファージディスプレイ（国際公開第９４／１３８０４号パンフレット）を使用してライブラリーから容易に選択することができる。ダイアボディの一方のアームが一定に保持され、例えばＩＬ−４Ｒαに対して指向される特異性を有する場合、他方のアームが変動するライブラリーを作製することができ、適切な特異性の抗体を選択することができる。Ｒｉｄｇｅｗａｙ  ｅｔ  ａｌ，（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，９：６１６−６２１，１９９６）に記載の代替の遺伝子操作方法により二重特異性完全抗体を作製することができる。
【００６７】
当技術分野においてＩＬ−４Ｒαに対する抗体を得るための種々の方法が利用可能である。抗体は、当業者に周知の標準的方法にしたがって得ることができる、特にヒト、マウス、キメラまたはヒト化起源のモノクローナル抗体であり得る。
【００６８】
一般に、特にマウス起源のモノクローナル抗体またはそれらの機能的断片の調製について、特に手引き「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｎ．Ｙ．，ｐｐ．７２６，１９８８）に記載の技術またはＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７，１９７５）により記載されたハイブリドーマからの調製の技術を参照することが可能である。
【００６９】
モノクローナル抗体は、例えば、ＩＬ−４Ｒα、または前記モノクローナル抗体により認識されるエピトープを含有するその断片の１つに対して免疫化された動物細胞から得ることができる。前記ＩＬ−４Ｒα、またはその断片の１つは、特に、ＩＬ−４Ｒαまたはその断片をコードするｃＤＮＡ配列に含有される核酸配列から出発する遺伝子組換えにより、ＩＬ−４Ｒαおよび／またはその断片のペプチド配列に含まれるアミノ酸の配列から出発するペプチド合成により、通常の作業方法に従って産生することができる。モノクローナル抗体は、例えば、ＩＬ−４Ｒα、または前記モノクローナル抗体により認識されるエピトープを含有するその断片の１つが事前に固定化された親和性カラム上で精製することができる。より具体的には、モノクローナル抗体は、プロテインＡおよび／またはＧ上でのクロマトグラフィーにより精製し、次いで残留するタンパク質汚染物質ならびにＤＮＡおよびＬＰＳ自体を排除する目的のイオン交換クロマトグラフィーを行うかまたは行わずに、次いで二量体または他の多量体の存在に起因する潜在的凝集物を排除するためのセファロースゲル上での排除クロマトグラフィーを行うかまたは行わずに達成することができる。一実施形態において、これらの技術の全部を同時にまたは連続的に使用することができる。
【００７０】
抗原結合部位は、非抗体タンパク質足場、例えば、フィブロネクチンまたはシトクロムＢなどの上のＣＤＲの配置により（Ｈａａｎ＆Ｍａｇｇｏｓ，ＢｉｏＣｅｎｔｕｒｙ，１２（５）：Ａ１−Ａ６，２００４；Ｋｏｉｄｅ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２８４：１１４１−１１５１，１９９８；Ｎｙｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，７：４６３−４６９，１９９７）、またはタンパク質足場内のループのアミノ酸残基をランダム化し、もしくは突然変異させて所望の標的についての結合特異性を付与することにより提供することができる。タンパク質中の新規結合部位の遺伝子操作のための足場は、Ｎｙｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．（前掲）により詳細に記載されている。抗体模倣体のためのタンパク質足場は、参照により全体として本明細書に組み込まれる国際公開第００３４７８４号パンフレットに開示されており、発明者らは、少なくとも１つのランダム化ループを有するフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインを含むタンパク質（抗体模倣体）を記載している。１つ以上のＣＤＲ、例えば、ＨＣＤＲのセットまたはＨＣＤＲ３および／もしくはＬＣＤＲ３をグラフトする好適な足場は、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーの任意のドメインメンバーにより提供することができる。足場は、ヒトまたは非ヒトタンパク質であり得る。
【００７１】
抗体配列および／または抗原結合部位に加えて、本発明による抗体は、例えば、ペプチドもしくはポリペプチド、例えば、折り畳みドメインを形成する、または分子に抗原結合能に加えた別の機能的特徴を付与するための他のアミノ酸を含み得る。本発明の抗体は、検出可能な標識を担持し得、または毒素もしくは標的化部分もしくは酵素（例えば、ペプチジル結合またはリンカーを介して）にコンジュゲートすることができる。例えば、抗体は、触媒部位（例えば、酵素ドメイン中）および抗原結合部位を含み得、抗原結合部位が抗原に結合し、したがって触媒部位を抗原に標的化する。触媒部位は、抗原の生物学的機能を例えば開裂により阻害し得る。
【００７２】
本発明のＣＤＲ、例えばＣＤＲ３、またはＣＤＲのセットを担持するための構造は、一般に、ＣＤＲまたはＣＤＲのセットが、再編成される免疫グロブリン遺伝子によりコードされる天然存在のＶＨおよびＶＬ抗体可変ドメインのＣＤＲまたはＣＤＲのセットに対応する局在において局在する抗体重鎖または軽鎖配列またはその実質的な部分である。免疫グロブリン可変ドメインの構造および局在は、Ｋａｂａｔ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，４ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｄｅｖｉｃｅｓ，１９８７）およびその更新情報、例えば、５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，１９９１）を参照して決定することができる。
【００７３】
特に記載のない限り、本明細書に言及される特定の残基の局在、ならびにＣＤＲおよびフレームワーク領域は、Ｋａｂａｔナンバリング系を使用する。
【００７４】
ＣＤＲ領域またはＣＤＲは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（前掲）により定義される免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変領域を示すものとする。抗体は、典型的には、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含有する。ＣＤＲという用語は、本明細書において、場合に応じて、抗体が認識する抗原またはエピトープについての抗体の親和性による結合を担う大部分のアミノ酸残基を含有するそれらの領域の１つまたはそれらの領域のいくつか、またはさらに全体を示すために使用される。
【００７５】
６つの短いＣＤＲ配列のうち、重鎖の第３のＣＤＲ（ＨＣＤＲ３）は、より大きいサイズ可変性を有する（本質的には、それを生じさせる遺伝子の配置の機序に起因するより大きい多様性）。それは、２アミノ酸ほど短いこともあるが、公知の最長サイズは２６である。機能的には、ＨＣＤＲ３は、部分的に、抗体の特異性の決定において役割を担う（Ｓｅｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ，７１：４２９８−４３０２，１９７４；Ａｍｉｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３：７４７−７５３，１９８６；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７，１９８７；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８８３，１９８９；ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４４：１９６５−１９６８，１９９０；Ｓｈａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．ＰＮＡＳ，８７：４８１４−４８１７，１９９０（ａ）；Ｓｈａｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４４：４８６３−４８６９，１９９０；Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：１７０９−１７１９，１９９１ｂ）。
ＨＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ残基３１〜３５からなる５アミノ酸長であり得る。
ＨＣＤＲ２は、Ｋａｂａｔ残基５０〜６５からなる１７アミノ酸長であり得る。
ＨＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ残基９５〜１０２からなる７アミノ酸長であり得る。
ＬＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ残基２４〜３４からなる１３アミノ酸長であり得る。
ＬＣＤＲ２は、Ｋａｂａｔ残基５０〜５６からなる７アミノ酸長であり得る。
ＬＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ残基８９〜９７からなる１２アミノ酸長であり得る。
【００７６】
抗原結合部位
抗原結合部位は、標的抗原の全体または部分と結合し、それと相補的な分子の部分を説明する。抗体分子において、それは抗体抗原結合部位と称され、標的抗原の全体または部分と結合し、それと相補的な抗体の部分を含む。抗原が大きい場合、抗体は抗原の特定部分にのみ結合し得、その部分はエピトープと称される。抗体抗原結合部位は１つ以上の抗体可変ドメインにより提供することができる。抗体抗原結合部位は、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み得る。
【００７７】
単離
「単離された」は、本発明の抗体、またはそのような抗体をコードする核酸が、一般に本発明による状態を指す。したがって、本発明によるＶＨおよび／またはＶＬドメイン、ならびにコード核酸分子およびベクターを含む抗体は、実質的に純粋または均質な形態で、例えばそれらの天然環境から単離および／または精製されている状態、または核酸の場合、要求される機能を有するポリペプチドをコードする配列以外の起源の核酸または遺伝子を含まないかまたは実質的に含まない状態で提供することができる。単離されたメンバーおよび単離された核酸は、それらが天然に付随する材料、例えばその天然環境、またはそれらが調製される環境（例えば細胞培養物）中で（そのような調製がインビトロもしくはインビボで実施される組換えＤＮＡ技術によるものである場合）、それらが見出される他のポリペプチドまたは核酸を含まないかまたは実質的に含まない。メンバーおよび核酸は希釈剤またはアジュバントとともに製剤化することができ、実際的な目的のために依然として単離されており、例えば、メンバーは、イムノアッセイで使用するためのマイクロタイタープレートをコーティングするために使用する場合、通常ゼラチンまたは他の担体と混合し、または診断もしくは治療において使用する場合、薬学的に許容可能な担体または希釈剤と混合する。抗体は、天然にまたは異種真核細胞（例えばＣＨＯまたはＮＳ０（ＥＣＡＣＣ８５１１０５０３）細胞）の系によってグリコシル化されているか、または（例えば原核細胞中の発現により産生される場合）非グリコシル化状態であり得る。
【００７８】
抗ＩＬ−４Ｒα抗体分子を含む不均一調製物もまた、本発明の部分を構成する。例えば、そのような調製物は、完全長重鎖およびＣ末端リジンを欠く重鎖を有し、種々の程度のグリコシル化を有し、ならびに／または誘導体化アミノ酸、例えばピログルタミン酸残基を形成するＮ末端グルタミン酸の環化物を有する抗体の混合物であり得る。
【００７９】
上記のとおり、本発明による抗体は、ＩＬ−４Ｒαの生物学的活性をモジュレートし、中和し得る。本明細書に記載のとおり、本発明のＩＬ−４Ｒα抗体は、その中和効力について最適化することができる。一般に、効力の最適化は、選択された抗体の配列（通常は抗体の可変ドメイン配列）を突然変異させて抗体のライブラリーを生成することを含み、次いでそのライブラリーを効力についてアッセイし、より強力な抗体を選択する。こうして選択された「効力最適化」抗体は、ライブラリーを生成した抗体よりも高い効力を有する傾向がある。これにもかかわらず、最適化なしで高い効力の抗体を得ることもでき、例えば、初期スクリーン、例えば、生化学的中和アッセイから高い効力の抗体を直接得ることができる。「効力最適化」抗体は、結合またはＩＬ−４Ｒαの特定の活性もしくは下流機能の中和の効力が最適化されている抗体を指す。アッセイおよび効力は本明細書の他箇所により詳細に記載される。本発明は、効力最適化および／または非最適化抗体の両方、ならびに選択された抗体から効力を最適化する方法を提供する。したがって、本発明は、当業者が、高い効力を有する抗体を有する組成物を生成することを可能にする。
【００８０】
効力最適化を使用して所与の結合メンバーからより高い効力の抗体を生成することができるが、高い効力の抗体を効力最適化なしでも得ることができることにも留意される。
【００８１】
前記選択された結合メンバーの抗体ＶＨ可変ドメインのアミノ酸配列を有する抗体ＶＨ可変ドメインは、そのようなＶＨドメインを含む抗体と同様に、単離された形態で提供することができる。
【００８２】
ＩＬ−４Ｒαへの結合能および／または例えば、親抗体分子（例えば、抗体１）もしくは最適化抗体分子、抗体２から４２（例えば、ｓｃＦｖフォーマットおよび／またはＩｇＧフォーマット、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４）とのＩＬ−４Ｒαへの結合についての競合能を、さらに試験することができる。本明細書の他箇所にさらに考察されるとおり、ＩＬ−４Ｒαを中和する能力を試験することができる。
【００８３】
本発明による抗体は、例えば、ｓｃＦｖもしくはＩｇＧ１もしくはＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４フォーマットの抗体１から４２の１つの親和性で、またはより良好な親和性でＩＬ−４Ｒαに結合し得る。
【００８４】
本発明による抗体は、例えば、ｓｃＦｖもしくはＩｇＧ１もしくはＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４フォーマットの抗体１から４２の１つの効力で、またはより良好な効力でＩＬ−４Ｒαの生物学的活性を中和し得る。
【００８５】
異なる抗体の結合親和性および中和効力を適切な条件下で比較することができる。
【００８６】
本明細書に開示される抗体分子の変異体を産生し、本発明において使用することができる。多変量データ分析技術を構造／特性−活性関係に対して適用する場合の計算化学の手引き（Ｗｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ  Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ  ｄａｔａ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ−Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｅｄ．：Ｂ．Ｋｏｗａｌｓｋｉ），Ｄ．Ｒｅｉｄｅｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ，Ｈｏｌｌａｎｄ，１９８４（ＩＳＢＮ９０−２７７−１８４６−６））に従って、周知の数学的技術、例えば統計回帰、パターン認識および分類（Ｎｏｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９８年４月）ＩＳＢＮ：０４７１１７０８２８；Ｋａｎｄｅｌ，Ａｂｒａｈａｍ＆Ｂａｃｋｅｒ，Ｃｏｍｐｕｔｅｒ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ  Ｒｅａｓｏｎｉｎｇ  ｉｎ  Ｃｌｕｓｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｅｎｔｉｃｅ  Ｈａｌｌ  ＰＴＲ，（１９９５年５月１１日），ＩＳＢＮ：０１３３４１８８４７；Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｕｓｅｒ’ｓ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｅｒｉｅｓ，Ｎｏ  ２２（Ｐａｐｅｒ））．Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；（２０００年１２月），ＩＳＢＮ：０１９８５０７０８９；Ｗｉｔｔｅｎ＆Ｆｒａｎｋ，Ｄａｔａ  Ｍｉｎｉｎｇ：Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｍａｃｈｉｎｅ  Ｌｅａｒｎｉｎｇ  Ｔｏｏｌｓ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｗｉｔｈ  Ｊａｖａ  Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ．Ｍｏｒｇａｎ  Ｋａｕｆｍａｎｎ；（１９９９年１０月１１日），ＩＳＢＮ：１５５８６０５５２５；Ｄｅｎｉｓｏｎ  ＤＧＴ．（Ｅｄｉｔｏｒ）Ｈｏｌｍｅｓ，Ｃ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ  Ｂａｙｅｓｉａｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｎｏｎｌｉｎｅａｒ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  （Ｗｉｌｅｙ  Ｓｅｒｉｅｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）．Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ；（２００２年７月），ＩＳＢＮ：０４７１４９０３６９；Ｇｈｏｓｅ，Ａ  Ｋ．＆Ｖｉｓｗａｎａｄｈａｎ，ＶＮ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｔｏｏｌｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．ＩＳＢＮ：０−８２４７−０４８７−８）を使用して抗体の定量的活性−特性関係を導き出すことができる。抗体の特性は、抗体配列、機能的および３次元構造の経験的および理論的モデル（例えば、接触候補残基の分析または算出上の物理化学的特性）から導き出すことができ、これらの特性は個々におよび組み合わせて考慮することができる。
【００８７】
ＣＤＲ、抗体ＶＨまたはＶＬドメインおよび抗体のアミノ酸配列内で置換を作製するために必要とされる技術は、一般に当技術分野において利用可能である。活性に対して最小または有益な影響を有すると予測されてもされなくてもよい置換を有する変異体配列を作製し、ＩＬ−４Ｒαに結合し、および／またはそれらを中和する能力および／または任意の他の所望の特性について試験することができる。
【００８８】
本明細書に配列が具体的に開示されている任意のＶＨおよびＶＬドメインのいずれかの可変ドメインアミノ酸配列変異体を、考察されるとおり本発明により用いることができる。特定の変異体は、１つ以上のアミノ酸配列変化（アミノ酸残基の付加、欠失、置換、および／または挿入）を含み得、約２０未満の変化、約１５未満の変化、約１２未満の変化、約１０未満の変化、または約６未満の変化であり得、５、４、３、２または１つであり得る。変化は、１つ以上のフレームワーク領域および／または１つ以上のＣＤＲ中で作製することができる。変化は、通常、機能の損失をもたらさず、したがって、こうして変化したアミノ酸配列を含む抗体はＩＬ−４Ｒαに結合し、および／またはそれを中和する能力を保持し得る。それは、例えば、本明細書に記載のアッセイにおいて計測して変化が作製されていない抗体と同一の定量的結合および／または中和能力を保持し得る。こうして変化したアミノ酸配列を含む結合メンバーは、ＩＬ−４Ｒαに結合し、および／またはそれを中和する能力の改善を有し得る。実際、抗体２０のランダム突然変異導入から生成された抗体２１から４２は、抗体２０に対して置換を、ほとんど種々のフレームワーク領域内で示し、それらのそれぞれが、依然としてＩＬ−４Ｒαに結合し、および／またはそれを中和し、実際に、一部は、ＩＬ−４Ｒαに結合し、および／またはそれを中和する能力の改善を示す。
【００８９】
変更形態は、１つ以上のアミノ酸残基を、天然に存在しないかもしくは非標準アミノ酸により置き換えること、１つ以上のアミノ酸残基を、天然に存在しないかもしくは非標準形態に改変すること、または１つ以上の天然に存在しないかもしくは非標準アミノ酸を配列内に挿入することを含み得る。本発明の配列中の変更の数および位置の例は、本明細書の他箇所に記載されている。天然に存在するアミノ酸には、２０種の「標準」Ｌ−アミノ酸が含まれ、それらの標準一文字コードによりＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｐ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、Ｃ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｄ、Ｅとして同定される。非標準アミノ酸には、ポリペプチド骨格中に取り込むことができるかまたは既存のアミノ酸残基の改変から生じ得る任意の他の残基が含まれる。非標準アミノ酸は天然に存在しても天然に存在しなくてもよい。いくつかの天然に存在する非標準アミノ酸が当技術分野において公知であり、例えば４−ヒドロキシプロリン、５−ヒドロキシリジン、３−メチルヒスチジン、Ｎ−アセチルセリンなどである（Ｖｏｅｔ＆Ｖｏｅｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｗｉｌｅｙ）１９９５）。Ｎ−アルファ位置において誘導体化されているアミノ酸残基はアミノ酸配列のＮ末端に局在するにすぎない。本発明においては通常、アミノ酸はＬ−アミノ酸であるが、一部の実施形態ではＤ−アミノ酸であってもよい。したがって、変更形態は、Ｌ−アミノ酸をＤ−アミノ酸に改変するかまたはＬ−アミノ酸をＤ−アミノ酸により置き換えることを含む。アミノ酸のメチル化、アセチル化および／またはリン酸化形態も既知であり、本発明におけるアミノ酸をそのような改変に供することができる。
【００９０】
本発明の抗体ドメインおよび抗体中のアミノ酸配列は、上記の非天然または非標準アミノ酸を含み得る。一部の実施形態において、非標準アミノ酸（例えば、Ｄ−アミノ酸）は、合成中にアミノ酸配列中に取り込むことができる一方、他の実施形態において、非標準アミノ酸をアミノ酸配列の合成後に「元の」標準アミノ酸の改変または置き換えにより取り込むことができる。
【００９１】
非標準および／または非天然存在アミノ酸の使用により、構造的および機能的多様性を増加させ、したがって本発明の抗体における所望のＩＬ−４Ｒα結合および中和特性を達成するための潜在性を増加させることができる。さらに、Ｄ−アミノ酸および類似体は、動物、例えばヒトへの投与後のＬ−アミノ酸を有するポリペプチドのインビボ分解により標準Ｌ−アミノ酸と比較して良好な薬物動態学的プロファイルを有することが示されている。
【００９２】
本発明のＣＤＲ由来配列を担持する新規ＶＨまたはＶＬ領域は、全可変ドメイン内の突然変異を生成するための１つ以上の選択ＶＨおよび／またはＶＬ遺伝子のランダム突然変異導入を使用して生成することができる。このような技術はエラープローンＰＣＲを使用したＧｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８９：３５７６−３５８０，１９９２）により記載されている。一部の実施形態において、全可変ドメインまたはＣＤＲのセット内で１または２つのアミノ酸置換を作製する。使用することができる別の方法は、ＶＨまたはＶＬ遺伝子のＣＤＲ領域に対する直接突然変異導入である。このような技術は、Ｂａｒｂａｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９１：３８０９−３８１３，１９９４）およびＳｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１−５６７，１９９６）により開示されている。
【００９３】
全ての上記技術は、当技術分野においてそれ自体公知であり、当業者は、そのような技術を使用して当技術分野における定型的な方法論を使用して本発明の結合メンバーを提供することができる。
【００９４】
本発明のさらなる態様は、ＩＬ−４Ｒαについての抗体抗原結合部位を得る方法であって、本明細書に記載のＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸の追加、欠失、置換、または挿入を用いて、ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＨドメインを提供し、場合により、こうして提供されたＶＨドメインを１つ以上のＶＬドメインと組み合わせること、およびＶＨドメインまたはＶＨ／ＶＬ組合せを試験して、ＩＬ−４Ｒαについての抗体または抗体抗原結合部位（場合により１つ以上の機能的特性、例えばＩＬ−４Ｒα活性を中和する能力を有する）を同定することを含む方法を提供する。前記ＶＬドメインは本明細書に実質的に記載されるアミノ酸配列を有し得る。本明細書に開示されるＶＬドメインの１つ以上の配列変異体を１つ以上のＶＨドメインと組み合わせる類似の方法を用いることができる。
【００９５】
上記のとおり、本明細書に実質的に記載されるＣＤＲアミノ酸配列は、ヒト抗体可変ドメインまたはその実質的部分中のＣＤＲとして有することができる。本明細書中に実質的に記載されるＨＣＤＲ３配列は本発明の実施形態を表し、例えばこれらのそれぞれはヒト重鎖可変ドメインまたはその実質的部分中のＨＣＤＲ３として有することができる。
【００９６】
本発明において用いられる可変ドメインは、任意の生殖細胞系列もしくは再編成ヒト可変ドメインから得ることができ、もしくはそれに由来し得、または既知のヒト可変ドメインのコンセンサスまたは実際の配列に基づく合成可変ドメインであり得る。可変ドメインは非ヒト抗体に由来するものであり得る。組換えＤＮＡ技術を使用してＣＤＲ（例えばＣＤＲ３）を欠く可変ドメインのレパートリー中に本発明のＣＤＲ配列（例えばＣＤＲ３）を導入することができる。例えば、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３，１９９２）は、抗体可変ドメインのレパートリーを産生する方法であって、可変ドメイン領域の５’末端に指向されるかまたはそれに隣接するコンセンサスプライマーを、ヒトＶＨ遺伝子の第３フレームワーク領域に対するコンセンサスプライマーとともに使用してＣＤＲ３を欠くＶＨ可変ドメインのレパートリーを提供する方法を記載している。Ｍａｒｋｓ他は、このレパートリーを特定の抗体のＣＤＲ３とどのように組み合わせることができるかをさらに記載している。類似の技術を使用して、本発明のＣＤＲ３由来配列を、ＣＤＲ３を欠くＶＨまたはＶＬドメインのレパートリーとシャッフリングし、シャッフリングされた完全ＶＨまたはＶＬドメインをコグネイトＶＬまたはＶＨドメインと組み合わせて本発明の抗体を提供することができる。次いで、好適な抗体を選択することができるように、レパートリーを好適な宿主系、例えば国際公開第９２／０１０４７号パンフレット（参照により全体として本明細書に組み込まれる）、または後続の多数の文献のいずれか、例としてＫａｙ，Ｗｉｎｔｅｒ＆ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ（Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６）のファージディスプレイ系中でディスプレイすることができる。レパートリーは、１０４個の個々のメンバー以上、例えば少なくとも１０５個、少なくとも１０６個、少なくとも１０７個、少なくとも１０８個、少なくとも１０９個または少なくとも１０１０個のメンバーのいずれかから構成され得る。他の好適な宿主系には、限定されるものではないが、酵母ディスプレイ、細菌ディスプレイ、Ｔ７ディスプレイ、ウイルスディスプレイ、細胞ディスプレイ、リボソームディスプレイおよび共有結合ディスプレイが含まれる。
【００９７】
類似のシャッフリングまたはコンビナトリアル技術も、β−ラクタマーゼ遺伝子に関連する技術を記載するが、アプローチが抗体の生成に使用することができることを観察するＳｔｅｍｍｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ，３７０：３８９−３９１，１９９４）により開示されている。
【００９８】
ここでも、置き換えるべきＣＤＲ３を含むかまたはＣＤＲ３コード領域を欠くＶＬドメインをコードする核酸のレパートリーと本発明のＶＬＣＤＲ３を組み合わせる類似の方法を用いることができる。
【００９９】
同様に、本明細書に開示の他のＶＨおよびＶＬドメイン、ＣＤＲのセットならびにＨＣＤＲのセットおよび／またはＬＣＤＲのセットを用いることができる。
【０１００】
同様に、１つ以上の、または３つ全てのＣＤＲを、ＶＨまたはＶＬドメインのレパートリー中にグラフトし、次いでＩＬ−４Ｒαについての１つまたは複数の抗体についてスクリーニングすることができる。
【０１０１】
あるいは、本発明の抗体、例えば、抗体１〜４２のいずれかのＶＨおよび／またはＶＬドメインをコードする核酸を、突然変異導入（例えば、標的化またはランダム）に供して１つ以上の突然変異核酸を生成することができる。次いで、これらの配列によりコードされる抗体を生成することができる。
【０１０２】
一実施形態において、抗体１から４２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の１つ以上、もしくは抗体１から４２のＨＣＤＲセットを用いることができ、ならびに／または抗体１から４２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の１つ以上もしくは抗体１から４２のＬＣＤＲセットを用いることができる。
【０１０３】
特定の実施形態において、ドナー核酸は、ＶＨもしくはＶＬドメインまたはその中の任意のＣＤＲ領域の標的化またはランダム突然変異導入により産生される。
【０１０４】
別の実施形態において、産物ＶＨまたはＶＬドメインは、抗体定常領域に付着している。
【０１０５】
別の実施形態において、産物ＶＨまたはＶＬドメインおよび同伴ＶＬまたはＶＨドメインはそれぞれ、ＩｇＧ、ｓｃＦＶまたはＦａｂ抗体分子中に含まれる。
【０１０６】
別の実施形態において、回収された結合メンバーまたは抗体分子を、ＩＬ−４Ｒαの中和能について試験する。
【０１０７】
一部の実施形態において、免疫グロブリン可変ドメインの実質的部分は少なくとも３つのＣＤＲ領域をそれらの介在フレームワーク領域と一緒に含み得る。部分は第１および第４フレームワーク領域の一方または両方の少なくとも約５０％を含んでもよく、５０％は第１フレームワーク領域のＣ末端の５０％であり、第４フレームワーク領域のＮ末端の５０％である。可変ドメインの実質的部分のＮ末端またはＣ末端における追加の残基は、天然に存在する可変ドメイン領域に通常付随しない残基であり得る。例えば、本発明の抗体の構築を組換えＤＮＡ技術により行ってクローニングまたは他の操作ステップを促進するために導入されるリンカーによりコードされるＮまたはＣ末端残基の導入をもたらすことができる。他の操作ステップには、本発明の可変ドメインをさらなるタンパク質配列に連結させるためのリンカーの導入が含まれ、そのタンパク質配列には、本明細書の他箇所にさらに詳細に考察される抗体定常領域、他の可変ドメイン（例えばダイアボディの産生における場合）または検出可能／機能的標識が含まれる。
【０１０８】
本発明の一部の態様において、抗体はＶＨおよびＶＬドメインのペアを含むが、ＶＨまたはＶＬドメイン配列のいずれかに基づく単一の結合ドメインは本発明のさらなる態様を形成する。単一の免疫グロブリンドメイン、特にＶＨドメインは特異的様式で標的抗原に結合し得ることが公知である。例えば、上記ｄＡｂについての考察を参照のこと。
【０１０９】
いずれの単一結合ドメインの場合でも、これらのドメインを使用して、ＩＬ−４Ｒαに結合し得る２ドメイン結合メンバーを形成し得る相補的ドメインについてスクリーニングすることができる。これは、国際公開第９２／０１０４７号パンフレット（参照により全体として本明細書に組み込まれる）に開示されるいわゆる階層的二重コンビナトリアルアプローチ（ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ  ｄｕａｌ  ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ）を使用するファージディスプレイスクリーニング法により達成することができ、その方法において、ＨまたはＬ鎖クローンのいずれかを含有する個々のコロニーを使用して、他方の鎖（ＬまたはＨ）をコードするクローンの完全ライブラリーを感染させ、得られた２鎖結合メンバーを例えば参考文献に記載のファージディスプレイ技術に従って選択する。この技術もＭａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３，１９９２）に開示されている。
【０１１０】
本発明の抗体は、抗体定常領域またはその部分、例えばヒト抗体定常領域またはその部分をさらに含み得る。例えば、ＶＬドメインをそのＣ末端において、例えばＣλ鎖である、ヒトＣκまたはＣλ鎖を含む抗体軽鎖定常ドメインに付着させることができる。同様に、ＶＨドメインに基づく抗体をそのＣ末端で、任意の抗体アイソタイプ、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＹ、ＩｇＥおよびＩｇＭならびに任意のアイソタイプサブクラスのいずれか（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２；特にＩｇＧ１およびＩｇＧ４）由来の免疫グロブリン重鎖の全体または部分（例えばＣＨ１ドメイン）に付着させることができる。ＩｇＧ１は、そのエフェクター機能および製造容易性により有利であり得る。これらの特性を有し、可変領域を安定化する任意の合成または他の定常領域変異体も本発明の実施形態において有用である。
【０１１１】
用語「アイソタイプ」は、抗体の重鎖または軽鎖定常領域の分類を指す。抗体の定常ドメインは、抗原への結合に関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。重鎖定常領域のアミノ酸配列に応じて、所与のヒト抗体または免疫グロブリンは、免疫グロブリンの５つの主なクラスであるＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのうちの１つに割り当てることができる。これらのクラスのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１（ガンマ１）、ＩｇＧ２（ガンマ２）、ＩｇＧ３（ガンマ３）、およびＩｇＧ４（ガンマ４）、ならびにＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分類される。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスの構造および三次元構造は周知である。種々のヒト免疫グロブリンクラスのうち、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、およびＩｇＭのみが、補体を活性化させることが公知である。ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、ヒトにおいてＡＤＣＣを媒介することが公知である。ヒト軽鎖定常領域は、カッパおよびラムダの２つの主なクラスに分類することができる。
【０１１２】
抗体フォーマット
本発明は、本発明の抗体、特に、改変されたＩｇＧ定常ドメインを有する本発明の抗体も含む。機能的特徴、例えば、長い血清半減期および種々のエフェクター機能を媒介する能力を有するヒトＩｇＧクラスの抗体が、本発明のある実施形態において使用される（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｐｔｅｒ  １（１９９５））。ヒトＩｇＧクラス抗体は、以下の４つのサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４にさらに分類される。多数の研究が、これまで、ＩｇＧクラス抗体のエフェクター機能としてのＡＤＣＣおよびＣＤＣについて実施されており、ヒトＩｇＧクラスの抗体のうち、ＩｇＧ１サブクラスがヒトにおける最大のＡＤＣＣ活性およびＣＤＣ活性を有することが報告されている（Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５，８８（１９９７））。
【０１１３】
したがって、本発明のさらなる態様によれば、抗体、特に、抗体の生物学的エフェクター機能を変化させる、すなわち、増加させ、減少させ、または排除するように改変された抗体、例えば、改変Ｆｃ領域を有する抗体が提供される。一部の実施形態において、本明細書に開示の抗体は、補体を固定し、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するそれらの能力を向上させるように改変することができる。他の実施形態において、抗体は、エフェクター細胞を活性化させ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するそれらの能力を向上させるように改変することができる。さらに他の実施形態において、本明細書に開示の抗体は、エフェクター細胞を活性化させ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するそれらの能力および補体を固定し、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するそれらの能力の両方を向上させるように改変することができる。
【０１１４】
一部の実施形態において、本明細書に開示の抗体は、補体を固定し、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するそれらの能力を低減させるように改変することができる。他の実施形態において、抗体は、エフェクター細胞を活性化させ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するそれらの能力を低減させるように改変することができる。さらに他の実施形態において、本明細書に開示の抗体は、エフェクター細胞を活性化させ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与するそれらの能力および補体を固定し、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に関与するそれらの能力の両方を低減させるように改変することができる。
【０１１５】
一実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する抗体は、同等の分子に対して向上したＡＤＣＣ活性を有する。具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する抗体は、同等の分子よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍または少なくとも１０倍または少なくとも５０倍または少なくとも１００倍大きいＡＤＣＣ活性を有する。別の具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する抗体は、同等の分子に対して向上したＦｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの結合を有し、向上したＡＤＣＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子に対して向上したＡＤＣＣ活性および向上した血清半減期の両方を有する。
【０１１６】
一実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する抗体は、同等の分子に対して低減したＡＤＣＣ活性を有する。具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する抗体は、同等の分子よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍または少なくとも１０倍または少なくとも５０倍または少なくとも１００倍低いＡＤＣＣ活性を有する。別の具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子に対して低減したＦｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの結合を有し、低減したＡＤＣＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子に対して低減したＡＤＣＣ活性および向上した血清半減期の両方を有する。
【０１１７】
一実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子に対して向上したＣＤＣ活性を有する。具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍または少なくとも１０倍または少なくとも５０倍または少なくとも１００倍大きいＣＤＣ活性を有する。他の実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子に対して向上したＣＤＣ活性および向上した血清半減期の両方を有する。
【０１１８】
一実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子に対して低減した１つ以上のＦｃリガンドへの結合を有する。別の実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍低いＦｃリガンドについての親和性を有する。具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、Ｆｃ受容体への低減した結合を有する。別の具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの低減した結合を有する。さらなる具体的な実施形態において、本明細書に記載のＦｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子よりも少なくとも約５倍小さいＦｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡについての親和性を有し、Ｆｃ変異体は、同等の分子の約２倍以内のＦｃ受容体ＦｃγＲＩＩＢについての親和性を有する。さらに別の具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、Ｆｃ受容体ＦｃＲｎへの低減した結合を有する。さらに別の具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子に対して低減したＣ１ｑへの結合を有する。
【０１１９】
一実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子に対して向上した１つ以上のＦｃリガンドへの結合を有する。別の実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍大きいＦｃリガンドについての親和性を有する。具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、Ｆｃ受容体への向上した結合を有する。別の具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＩＡへの向上した結合を有する。さらなる具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、Ｆｃ受容体ＦｃγＲＩＩＢへの向上した結合を有する。さらに別の具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、Ｆｃ受容体ＦｃＲｎへの向上した結合を有する。さらに別の具体的な実施形態において、Ｆｃ変異体領域を有する結合メンバーは、同等の分子に対して向上したＣ１ｑへの結合を有する。
【０１２０】
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−４Ｒα抗体は、変異体Ｆｃドメインを含み、前記変異体Ｆｃドメインは、同等の非変異体Ｆｃドメインに対して向上したＦｃガンマ受容体ＩＩＢへの結合親和性を有する。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−４Ｒα抗体は、変異体Ｆｃドメインを含み、前記変異体Ｆｃドメインは、同等の非変異体Ｆｃドメインよりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍大きいＦｃガンマ受容体ＩＩＢについての親和性を有する。
【０１２１】
一実施形態において、本発明は、Ｆｃ変異体領域を有する抗体またはそれらを含む配合物であって、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２２８、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２５１、２５２、２５４、２５５、２５６、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７９、２８０、２８４、２９２、２９６、２９７、２９８、２９９、３０５、３１３、３１６、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３９、３４１、３４３、３７０、３７３、３７８、３９２、４１６、４１９、４２１、４４０および４４３からなる群から選択される１つ以上の位置における非天然アミノ酸残基を含む配合物を提供する。場合により、Ｆｃ領域は、当業者に公知の追加および／または代替位置における非天然アミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号明細書；同第６，２７７，３７５号明細書；同第６，７３７，０５６号明細書；ＰＣＴ特許公開の国際公開第０１／５８９５７号パンフレット；国際公開第０２／０６９１９号パンフレット；国際公開第０４／０１６７５０号パンフレット；国際公開第０４／０２９２０７号パンフレット；国際公開第０４／０３５７５２号パンフレット；国際公開第０４／０７４４５５号パンフレット；国際公開第０４／０９９２４９号パンフレット；国際公開第０４／０６３３５１号パンフレット；国際公開第０５／０７０９６３号パンフレット；国際公開第０５／０４０２１７号パンフレット、国際公開第０５／０９２９２５号パンフレットおよび国際公開第０６／０２０１１４号パンフレット参照）。
【０１２２】
「非天然アミノ酸残基」は、天然存在タンパク質中の記載位置において存在しないアミノ酸残基を意味する。典型的には、これは、そのまたは天然／天然存在アミノ酸残基が、他の２０種の天然存在（一般）アミノ酸または非古典アミノ酸または化学アミノ酸類似体の１つを含み得る１つ以上の他の残基に置換されたことを意味する。非古典アミノ酸としては、限定されるものではないが、一般アミノ酸のＤ異性体、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ酪酸、Ａｂｕ、２−アミノ酪酸、γ−Ａｂｕ、ε−Ａｈｘ、６−アミノヘキサン酸、Ａｉｂ、２−アミノイソ酪酸、３−アミノプロピオン酸、オルニチン、ノルロイシン、ノルバリン、ヒドロキシプロリン、サルコシン、シトルリン、システイン酸、ｔ−ブチルグリシン、ｔ−ブチルアラニン、フェニルグリシン、シクロヘキシルアラニン、β−アラニン、フルオロ−アミノ酸、デザイナーアミノ酸、例えば、β−メチルアミノ酸、Ｃα−メチルアミノ酸、Ｎα−メチルアミノ酸、およびアミノ酸類似体が一般に挙げられる。
【０１２３】
具体的な実施形態において、本発明は、変異体Ｆｃ領域を有する抗体または変異体Ｆｃ領域を有するそのような結合メンバーを含む配合物であって、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｎ、２３４Ｑ、２３４Ｔ、２３４Ｈ、２３４Ｙ、２３４１、２３４Ｖ、２３４Ｆ、２３５Ａ、２３５Ｄ、２３５Ｒ、２３５Ｗ、２３５Ｐ、２３５Ｓ、２３５Ｎ、２３５Ｑ、２３５Ｔ、２３５Ｈ、２３５Ｙ、２３５１、２３５Ｖ、２３５Ｆ、２３６Ｅ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｎ、２３９Ｑ、２３９Ｆ、２３９Ｔ、２３９Ｈ、２３９Ｙ、２４０１、２４０Ａ、２４０Ｔ、２４０Ｍ、２４１Ｗ、２４１Ｌ、２４１Ｙ、２４１Ｅ、２４１Ｒ、２４３Ｗ、２４３Ｌ  ２４３Ｙ、２４３Ｒ、２４３Ｑ、２４４Ｈ、２４５Ａ、２４７Ｌ、２４７Ｖ、２４７Ｇ、２５１Ｆ、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５５Ｌ、２５６Ｅ、２５６Ｍ、２６２１、２６２Ａ、２６２Ｔ、２６２Ｅ、２６３１、２６３Ａ、２６３Ｔ、２６３Ｍ、２６４Ｌ、２６４１、２６４Ｗ、２６４Ｔ、２６４Ｒ、２６４Ｆ、２６４Ｍ、２６４Ｙ、２６４Ｅ、２６５Ｇ、２６５Ｎ、２６５Ｑ、２６５Ｙ、２６５Ｆ、２６５Ｖ、２６５１、２６５Ｌ、２６５Ｈ、２６５Ｔ、２６６１、２６６Ａ、２６６Ｔ、２６６Ｍ、２６７Ｑ、２６７Ｌ、２６８Ｅ、２６９Ｈ、２６９Ｙ、２６９Ｆ、２６９Ｒ、２７０Ｅ、２８０Ａ、２８４Ｍ、２９２Ｐ、２９２Ｌ、２９６Ｅ、２９６Ｑ、２９６Ｄ、２９６Ｎ、２９６Ｓ、２９６Ｔ、２９６Ｌ、２９６１、２９６Ｈ、２６９Ｇ、２９７Ｓ、２９７Ｄ、２９７Ｅ、２９８Ｈ、２９８１、２９８Ｔ、２９８Ｆ、２９９１、２９９Ｌ、２９９Ａ、２９９Ｓ、２９９Ｖ、２９９Ｈ、２９９Ｆ、２９９Ｅ、３０５１、３１３Ｆ、３１６Ｄ、３２５Ｑ、３２５Ｌ、３２５１、３２５Ｄ、３２５Ｅ、３２５Ａ、３２５Ｔ、３２５Ｖ、３２５Ｈ、３２７Ｇ、３２７Ｗ、３２７Ｎ、３２７Ｌ、３２８Ｓ、３２８Ｍ、３２８Ｄ、３２８Ｅ、３２８Ｎ、３２８Ｑ、３２８Ｆ、３２８１、３２８Ｖ、３２８Ｔ、３２８Ｈ、３２８Ａ、３２９Ｆ、３２９Ｈ、３２９Ｑ、３３０Ｋ、３３０Ｇ、３３０Ｔ、３３０Ｃ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３０Ｖ、３３０１、３３０Ｆ、３３０Ｒ、３３０Ｈ、３３１Ｇ、３３１Ａ、３３１Ｌ、３３１Ｍ、３３１Ｆ、３３１Ｗ、３３１Ｋ、３３１Ｑ、３３１Ｅ、３３１Ｓ、３３１Ｖ、３３１Ｉ、３３１Ｃ、３３１Ｙ、３３１Ｈ、３３１Ｒ、３３１Ｎ、３３１Ｄ、３３１Ｔ、３３２Ｄ、３３２Ｓ、３３２Ｗ、３３２Ｆ、３３２Ｅ、３３２Ｎ、３３２Ｑ、３３２Ｔ、３３２Ｈ、３３２Ｙ、３３２Ａ、３３９Ｔ、３７０Ｅ、３７０Ｎ、３７８Ｄ、３９２Ｔ、３９６Ｌ、４１６Ｇ、４１９Ｈ、４２１Ｋ、４４０Ｙおよび４３４Ｗからなる群から選択される少なくとも１つの非天然アミノ酸残基を含む配合物を提供する。場合により、Ｆｃ領域は、当業者に公知の追加および／または代替非天然アミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号明細書；同第６，２７７，３７５号明細書；同第６，７３７，０５６号明細書；ＰＣＴ特許公開の国際公開第０１／５８９５７号パンフレット；国際公開第０２／０６９１９号パンフレット；国際公開第０４／０１６７５０号パンフレット；国際公開���０４／０２９２０７号パンフレット；国際公開第０４／０３５７５２号パンフレットおよび国際公開第０５／０４０２１７号パンフレット参照）。
【０１２４】
本明細書において使用されるＦｃ領域は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除く抗体の定常領域を含むポリペプチドを含むことが理解される。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびにそれらのドメインへのフレキシブルヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭについて、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。ＩｇＧについて、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃγ２およびＣγ３）ならびにＣガンマ１（Ｃγ１）とＣガンマ２（Ｃγ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、残基Ｃ２２６またはＰ２３０からそのカルボキシル末端を含むように定義され、そのナンバリングは、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，Ｖａ．）におけるＥＵインデックスによる。「Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックス」は、Ｋａｂａｔ  ｅｔ  ａｌ．（前掲）に記載のヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。Ｆｃは、単独のこの領域、または抗体、抗体断片、もしくはＦｃ融合タンパク質に関するこの領域を指し得る。変異体Ｆｃタンパク質は、抗体、Ｆｃ融合物、またはＦｃ領域を含む任意のタンパク質もしくはタンパク質ドメイン、例として、限定されるものではないが、Ｆｃの非天然存在変異体である変異体Ｆｃ領域を含むタンパク質であり得る。
【０１２５】
本発明は、同等の分子（例えば、野生型Ｆｃ領域を有することを除き同一のアミノ酸配列を有するタンパク質）に対して変化したＦｃリガンド（例えば、Ｆｃ受容体、Ｃ１ｑ）についての結合特性を有する変異体Ｆｃ領域を有する抗体を包含する。結合特性の例としては、限定されるものではないが、結合特異性、平衡解離定数（ＫＤ）、解離および会合速度（それぞれｋｏｆｆおよびｋｏｎ）、結合親和性および／またはアビディティーが挙げられる。低いＫＤを有する結合分子（例えば、変異体Ｆｃタンパク質、例えば、抗体）が、高いＫＤを有する結合分子よりも好ましいことがあることが一般に理解される。しかしながら、一部の例において、ｋｏｎまたはｋｏｆｆの値がＫＤの値よりも関連性を示し得る。当業者は、その運動パラメータが所与の抗体用途に最も重要かを決定することができる。
【０１２６】
Ｆｃドメインのそのリガンドについての親和性および結合特性は、Ｆｃ−ＦｃγＲ相互作用、すなわち、ＦｃγＲへのＦｃ領域の特異的結合を決定するための当技術分野において公知の種々のインビトロアッセイ法（生化学または免疫学ベースアッセイ）、例として、限定されるものではないが、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））、またはキネティクス（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析）、ならびに他の方法、例えば、間接結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過）などにより決定することができる。これらのおよび他の方法は、試験される構成要素の１つ以上の標識を利用し、および／または種々の検出法、例として、限定されるものではないが、発色物質、蛍光物質、発光物質または同位体標識を用い得る。結合親和性およびキネティクスの詳細な説明は、抗体−免疫原相互作用にフォーカスするＰａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）に見出すことができる。Ｆｃ領域を含むタンパク質の血清半減期は、ＦｃＲｎについてのＦｃ領域の結合親和性の増加により増加させることができる。一実施形態において、Ｆｃ変異体タンパク質は、同等の分子に対して向上した血清半減期を有する。
【０１２７】
コンジュゲーションおよび半減期
本明細書において使用される、用語「抗体半減期」は、抗体分子のそれらの投与後の平均生存時間の尺度である抗体の薬物動態特性を意味する。抗体半減期は、例えば、血清もしくは血漿中（すなわち、循環半減期）、または他の組織中で計測して既知の免疫グロブリン量の５０パーセントを患者の身体またはその規定のコンパートメントから排除するために要求される時間として表現することができる。半減期は、ある免疫グロブリンもしくは免疫グロブリンのクラスから別のもので変動し得る。一般に、抗体半減期の増加は、投与された抗体の循環における平均滞留時間（ＭＲＴ）の増加をもたらす。
【０１２８】
ある実施形態において、本発明の抗ＩＬ−４Ｒα抗体または組成物および方法の半減期は、少なくとも約４から７日間である。ある実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＩＬ−４Ｒα抗体の平均半減期は、少なくとも約２から５日間、３から６日間、４から７日間、５から８日間、６から９日間、７から１０日間、８から１１日間、８から１２、９から１３、１０から１４、１１から１５、１２から１６、１３から１７、１４から１８、１５から１９、または１６から２０日間である。他の実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＩＬ−４Ｒα抗体の平均半減期は、少なくとも約１７から２１日間、１８から２２日間、１９から２３日間、２０から２４日間、２１から２５日間、２２から２６日間、２３から２７日間、２４から２８日間、２５から２９日間、または２６から３０日間である。いっそうさらなる実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＩＬ−４Ｒα抗体の半減期は、最大約５０日間であり得る。ある実施形態において、本発明の組成物および方法の抗体の半減期は、当技術分野において公知の方法により延長させることができる。このような延長は、次に抗体組成物の投与の量および／または頻度を低減させ得る。改善されたインビボ半減期を有する抗体およびそれらを調製する方法は、米国特許第６，２７７，３７５号明細書、米国特許第７，０８３，７８４号明細書；ならびに国際公開第９８／２３２８９号パンフレットおよび国際公開第９７／３４６１号パンフレットに開示されている。
【０１２９】
インビボ抗ＩＬ−４Ｒα抗体の血清循環は、不活性ポリマー分子、例えば、高分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を抗体に、多官能性リンカーを用いてまたは用いずに、抗体のＮまたはＣ末端へのＰＥＧの部位特異的コンジュゲーションを介して、またはリジル残基上に存在するイプシロンアミノ基を介して付着させることにより延長させることもできる。生物学的活性の最小の損失をもたらす直鎖または分枝鎖ポリマー誘導体化が使用される。コンジュゲーションの程度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析により厳密にモニタリングして抗体へのＰＥＧ分子の適切なコンジュゲーションを確保することができる。未反応ＰＥＧは、抗体−ＰＥＧコンジュゲートから、サイズ排除またはイオン交換クロマトグラフィーにより分離することができる。ＰＥＧ誘導体化抗体は、結合活性について、およびインビボ効力について、当業者に公知の方法を使用して、例えば、本明細書に記載のイムノアッセイにより試験することができる。
【０１３０】
さらに、本発明の組成物および方法の抗体は、アルブミンにコンジュゲートして抗体をインビボでより安定にし、またはより長いインビボ半減期を持たせることができる。この技術は、当技術分野において周知であり、例えば、全て参照により本明細書に組み込まれる国際公開第９３／１５１９９号パンフレット、国際公開第９３／１５２００号パンフレット、および国際公開第０１／７７１３７号パンフレット；ならびに欧州特許第４１３，６２２号明細書参照。
【０１３１】
ある実施形態において、本明細書に開示の、および本発明の組成物の抗体の半減期は、少なくとも約４から７日間である。ある実施形態において、本明細書に開示の、および本発明の組成物の抗体の平均半減期は、少なくとも約２から５日間、３から６日間、４から７日間、５から８日間、６から９日間、７から１０日間、８から１１日間、８から１２、９から１３、１０から１４、１１から１５、１２から１６、１３から１７、１４から１８、１５から１９、または１６から２０日間である。他の実施形態において、本明細書に開示の、および本発明の組成物の抗体の平均半減期は、少なくとも約１７から２１日間、１８から２２日間、１９から２３日間、２０から２４日間、２１から２５日間、２２から２６日間、２３から２７日間、２４から２８日間、２５から２９日間、または２６から３０日間である。いっそうさらなる実施形態において、本明細書に開示の、および本発明の組成物の抗体の半減期は、最大約５０日間であり得る。ある実施形態において、本発明の抗体および組成物の半減期は、当技術分野において公知の方法により延長させることができる。このような延長は、次に抗体組成物の投与の量および／または頻度を低減させ得る。改善されたインビボ半減期を有する抗体およびそれらを調製する方法は、米国特許第６，２７７，３７５号明細書；米国特許第７，０８３，７８４号明細書；ならびに国際公開第１９９８／２３２８９号パンフレットおよび国際公開第１９９７／３４３６１号パンフレットに開示されている。
【０１３２】
突然変異および改変
別の実施形態において、本発明は、変異体Ｆｃ領域を有する抗体、またはそれらを含む配合物であって、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３９、３３０および３３２からなる群から選択される１つ以上の位置における少なくとも１つの非天然改変を含む配合物を提供する。具体的な実施形態において、本発明は、Ｆｃ変異体であって、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３９Ｄ、３３０Ｌおよび３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの非天然アミノ酸を含むＦｃ変異体を提供する。場合により、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される１つ以上の位置における追加の非天然アミノ酸をさらに含み得る。具体的な実施形態において、本発明は、Ｆｃ変異体であって、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３９Ｄ、３３０Ｌおよび３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの非天然アミノ酸ならびにＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅからなる群から選択される１つ以上の位置における少なくともつの非天然アミノ酸を含むＦｃ変異体を提供する。
【０１３３】
別の実施形態において、本発明は、変異体Ｆｃ領域を有する抗体、またはそれらを含む配合物であって、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３４、２３５および３３１からなる群から選択される１つ以上の位置における少なくとも１つの非天然アミノ酸を含む抗体、またはそれらを含む配合物を提供する。具体的な実施形態において、本発明は、Ｆｃ変異体であって、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの非天然アミノ酸を含むＦｃ変異体を提供する。さらなる具体的な実施形態において、本発明のＦｃ変異体は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３４Ｆ、２３５Ｆ、および３３１Ｓアミノ酸残基を含む。別の具体的な実施形態において、本発明のＦｃ変異体は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３４Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓアミノ酸残基を含む。場合により、Ｆｃ領域は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される１つ以上の位置における追加の非天然アミノ酸残基をさらに含み得る。具体的な実施形態において、本発明は、Ｆｃ変異体であって、Ｆｃ領域が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３４Ｆ、２３５Ｆ、２３５Ｙ、および３３１Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの非天然アミノ酸；ならびにＫａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅからなる群から選択される１つ以上の位置における少なくとも１つの非天然アミノ酸を含むＦｃ変異体を提供する。
【０１３４】
特定の実施形態において、本発明は、変異体Ｆｃ領域を有する本発明の抗体であって、変異体が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２５２位におけるチロシン（Ｙ）残基、２５４位におけるトレオニン（Ｔ）残基および２５６位におけるグルタミン酸（Ｅ）残基を含む抗体を提供する。
【０１３５】
Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされたＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ突然変異（以下、ＹＴＥ突然変異と称する）は、特定のＩｇＧ１抗体分子の血清半減期を増加させることが報告されている（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（３３）：２３５１４−２３５２４，２００６）。
【０１３６】
さらなる実施形態において、本発明は、変異体Ｆｃ領域を有する本発明の抗体であって、変異体が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２５２位におけるチロシン（Ｙ）残基、２５４位におけるトレオニン（Ｔ）残基、２５６位におけるグルタミン酸（Ｅ）残基および２４１位におけるプロリン（Ｐ）残基を含む抗体を提供する。
【０１３７】
Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされたセリン２２８プロリン突然変異（Ｓ２２８Ｐ）（以下、Ｐ突然変異と称する）は、特定のＩｇＧ４分子の安定性を増加させることが報告されている（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ９７（２）：９６０−９６９，２００８）。注釈：Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．において、それは２４１位と称される。それというのも、その中で、Ｋａｂａｔに記載の「ＥＵインデックス」ではなくＫａｂａｔナンバリング系が使用されるためである。
【０１３８】
このＰ突然変異は、Ｌ２３５Ｅと組み合わせてＡＤＣＣをさらにノックアウトすることができる。この突然変異の組合せは、以下、二重突然変異（ＤＭ）と称する。
【０１３９】
特定の実施形態において、本発明は、変異体Ｆｃ領域を有する本発明の抗体であって、変異体が、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスによりナンバリングされた２３４位におけるフェニルアラニン（Ｆ）残基、２３５位におけるフェニルアラニン（Ｆ）残基またはグルタミン酸（Ｅ）残基および３３１位におけるセリン（Ｓ）残基を含む抗体を提供する。このような突然変異組合せは、以下、三重突然変異体（ＴＭ）と称する。
【０１４０】
さらなる実施形態によれば、本発明は、Ｆｃ領域中のＹＴＥ突然変異を有するＩｇＧ１フォーマットの本発明の抗体を提供する。
【０１４１】
さらなる実施形態によれば、本発明は、Ｆｃ領域中のＴＭ突然変異を有するＩｇＧ１フォーマットの本発明の抗体を提供する。
【０１４２】
さらなる実施形態によれば、本発明は、Ｆｃ領域中のＹＴＥ突然変異およびＴＭ突然変異を有するＩｇＧ１フォーマットの本発明の抗体を提供する。
【０１４３】
実施形態によれば、本発明は、Ｆｃ領域中のＹＴＥおよびＰ突然変異を有するＩｇＧ４フォーマットの本発明の抗体を提供する。
【０１４４】
実施形態によれば、本発明は、Ｆｃ領域中のＹＴＥおよびＤＭ突然変異を有するＩｇＧ４フォーマットの本発明の抗体を提供する。
【０１４５】
本発明の特定の実施形態によれば、ＩｇＧ１  ＹＴＥ、ＩｇＧ１  ＴＭ、ＩｇＧ１  ＴＭ＋ＹＴＥ、ＩｇＧ４  Ｐ、ＩｇＧ４  ＤＭ、ＩｇＧ４  ＹＴＥ、ＩｇＧ４  Ｐ＋ＹＴＥおよびＩｇＧ４  ＤＭ＋ＹＴＥから選択されるフォーマットの本発明の抗体が提供される。
【０１４６】
使用される命名法に関して、ＤＭ＋ＹＴＥは、定常ドメインＦｃ領域は、二重突然変異（Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ）およびＹＴＥ突然変異（Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）の両方を有することを意味することが認識される。
【０１４７】
非天然存在Ｆｃ領域を生成する方法は、当技術分野において公知である。例えば、アミノ酸置換および／または欠失を、突然変異導入法、例として、限定されるものではないが、部位特異的突然変異導入（Ｋｕｎｋｅｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２，１９８５）、ＰＣＲ突然変異導入（Ｈｉｇｕｃｈｉ，“ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ｐｐ．１７７−１８３，１９９０）、およびカセット突然変異導入（Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ３４：３１５−３２３，１９８５）により生成することができる。好ましくは、部位特異的突然変異導入が、オーバーラップ伸長ＰＣＲ法（Ｈｉｇｕｃｈｉ，“ＰＣＲ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ＤＮＡ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．６１−７０，１９８９）により実施される。オーバーラップ伸長ＰＣＲ（Ｈｉｇｕｃｈｉ、同箇所）の技術を使用して任意の所望の突然変異を標的配列（出発ＤＮＡ）中に導入することもできる。例えば、オーバーラップ伸長法におけるＰＣＲの第１ラウンドは、外側プライマー（プライマー１）および内部突然変異導入プライマー（プライマー３）を用い、別に第２の外側プライマー（プライマー４）および内部プライマー（プライマー２）を用いて標的配列を増幅し、２つのＰＣＲセグメント（セグメントＡおよびＢ）を得ることを含む。内部変異誘発プライマー（プライマー３）は、所望の突然変異を規定する標的配列に対するミスマッチを含有するように設計される。ＰＣＲの第２ラウンドにおいて、ＰＣＲの第１ラウンドの産物（セグメントＡおよびＢ）は、２つの外側プライマー（プライマー１および４）を使用して、ＰＣＲにより増幅される。得られた完全長ＰＣＲセグメント（セグメントＣ）は、制限酵素により消化され、得られた制限断片は、適切なベクター中にクローニングされる。突然変異導入の第１ステップとして、出発ＤＮＡ（例えば、Ｆｃ融合タンパク質、抗体、または単にＦｃ領域をコードする）は、操作可能に、突然変異導入ベクター中にクローニングされる。プライマーは、所望のアミノ酸置換を反映するように設計される。変異体Ｆｃ領域の生成に有用な他の方法は、当技術分野において公知である（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号明細書；同第５，８８５，５７３号明細書；同第５，６７７，４２５号明細書；同第６，１６５，７４５号明細書；同第６，２７７，３７５号明細書；同第５，８６９，０４６号明細書；同第６，１２１，０２２号明細書；同第５，６２４，８２１号明細書；同第５，６４８，２６０号明細書；同第６，５２８，６２４号明細書；同第６，１９４，５５１号明細書；同第６，７３７，０５６号明細書；同第６，８２１，５０５号明細書；同第６，２７７，３７５号明細書；米国特許出願公開第２００４／０００２５８７号明細書およびＰＣＴ公開の国際公開第９４／２９３５１号パンフレット；国際公開第９９／５８５７２号パンフレット；国際公開第００／４２０７２��パンフレット；国際公開第０２／０６０９１９号パンフレット；国際公開第０４／０２９２０７号パンフレット；国際公開第０４／０９９２４９号パンフレット；国際公開第０４／０６３３５１号パンフレット；国際公開第０６／２３４０３号パンフレット参照）。
【０１４８】
本発明の一部の実施形態において、本明細書に提供される抗体のグリコシル化パターンは、ＡＤＣＣおよびＣＤＣエフェクター機能を向上させるように改変される（Ｓｈｉｅｌｄｓ  Ｒ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，参照（ＪＢＣ．２７７：２６７３３−２６７４０，２００２；Ｓｈｉｎｋａｗａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＢＣ．２７８：３４６６−３４７３，２００３；およびＯｋａｚａｋｉ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３３６：１２３９，２００４）。一部の実施形態において、Ｆｃ変異体タンパク質は、１つ以上の遺伝子操作されたグリコフォーム、すなわち、Ｆｃ領域を含む分子に共有結合している炭水化物組成物を含む。遺伝子操作されたグリコフォームは、種々の目的、例として、限定されるものではないが、エフェクター機能の向上または低減に有用であり得る。遺伝子操作されたグリコフォームは、当業者に公知の任意の方法により、例えば、遺伝子操作された、もしくは変異体発現株を使用することにより、１つ以上の酵素、例えば、ＤＩ  Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩ１１）との同時発現により、種々の生物もしくは種々の生物からの細胞系中のＦｃ領域を含む分子を発現させることにより、またはＦｃ領域を含む分子が発現された後に炭水化物を改変することにより生成することができる。遺伝子操作されたグリコフォームを生成する方法は、当技術分野において公知であり、それとしては、限定されるものではないが、Ｕｍａｎａ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １７：１７６−１８０，１９９９；Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｅｎｇ  ７４：２８８−２９４，２００７；Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７：２６７３３−２６７４０，２００２；Ｓｈｉｎｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７８：３４６６−３４７３，２００３）米国特許第６，６０２，６８４号明細書；米国特許出願第１０／２７７，３７０号明細書；米国特許出願第１０／１１３，９２９号明細書；ＰＣＴ国際公開第００／６１７３９Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０１／２９２２４６Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／３１１１４０Ａ１号パンフレット；ＰＣＴ国際公開第０２／３０９５４Ａ１号パンフレット；Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（商標）技術（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）；ＧｌｙｃｏＭＡｂ（商標）グリコシル化遺伝子操作技術（Ｇｌｙｃａｒｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に記載のものが挙げられる。例えば、国際公開第００／０６１７３９号パンフレット；欧州特許第０１２２９１２５号明細書；米国特許出願公開第２００３０１１５６１４号明細書；Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＭＢ．３３６：１２３９−４９，２００４参照。
【０１４９】
標識
本発明の抗体配合物の抗体は、検出可能または機能的標識により標識することができる。標識は、シグナルを産生し、またはシグナルを産生するように誘導することができる任意の分子であり得、それとしては、限定されるものではないが、蛍光剤、放射性標識、酵素、化学発光剤または光増感剤が挙げられる。したがって、蛍光または発光、放射能、酵素活性または吸光度を検出することにより結合を検出および／または計測することができる。
【０１５０】
好適な標識としては、例として、限定されるものではないが、酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（「Ｇ６ＰＤＨ」）およびセイヨウワサビペルオキシダーゼ；色素；蛍光剤、例えば、フルオレセイン、ローダミン化合物、フィコエリスリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド（ｏ−ｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）、フルオレスカミン、フルオロフォア、例えば、ランタニドクリプテートおよびキレート（Ｐｅｒｋｉｎ  ＥｌｍｅｒおよびＣｉｓ  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、化学発光剤、例えば、イソルミノール、増感剤、補酵素、酵素基質、放射性標識、例として、限定されるものではないが、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３２Ｐ、１４Ｃ、３Ｈ、５７Ｃｏ、９９Ｔｃおよび７５Ｓｅおよび本明細書に記載の他の放射性標識；粒子、例えば、ラテックスまたは炭素粒子：金属ゾル；クリスタリット；リポソーム；細胞などが挙げられ、それらは色素、触媒または他の検出可能な基によりさらに標識することができる。好適な酵素および補酵素は、それぞれが参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第４２７５１４９号明細書および米国特許第４３１８９８０号明細書に開示されている。好適な蛍光剤および化学発光剤も、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第４２７５１４９号明細書に開示されている。標識としては、特異的なコグネイト検出可能部分、例えば、標識アビジンまたはストレプトアビジンへの結合を介して検出することができる化学的部分、例えばビオチンがさらに挙げられる。検出可能な標識は、当技術分野において公知の慣用化学反応を使用して本発明の抗体に付着させることができる。
【０１５１】
標識が、外部手段、例えば視覚的試験、電磁放射線、熱、および化学試薬により検出可能なシグナルを産生し得る多数の方法が存在する。本発明の抗体に結合する別の結合メンバー、または担体に標識を結合させることもできる。
【０１５２】
標識は、シグナルを直接産生し得、したがってシグナルの産生に追加の構成要素は要求されない。多数の有機分子、例えば蛍光剤は紫外光および可視光を吸収し得、光吸収はこれらの分子にエネルギーを移動させ、それらを励起エネルギー状態に上昇させる。次いで、この吸収エネルギーは第２の波長における発光により消散する。この第２の波長での発光も、標識アクセプター分子にエネルギーを移動させ得、得られるエネルギーは、発光、例えば蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）によりアクセプター分子から消散する。シグナルを直接産生する他の標識には、放射性同位体および色素が含まれる。
【０１５３】
あるいは、標識は、シグナルを産生するために他の構成要素を必要とし得、そしてシグナル産生系は計測可能なシグナルを産生するために要求される全ての構成要素を含み、その場合それには、基質、補酵素、エンハンサー、追加の酵素、酵素産物と反応する物質、触媒、アクチベーター、補因子、インヒビター、スカベンジャー、金属イオン、およびシグナル生成物質の結合に要求される特異的結合物質が含まれ得る。好適なシグナル産生系についての詳細な考察は、参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第５，１８５，２４３号明細書に見出すことができる。
【０１５４】
結合メンバー、抗体、またはその機能的断片の１つは、検出可能および／または定量可能なシグナルを得るためにイムノコンジュゲートの形態で存在し得る。イムノコンジュゲートは、例えば、酵素、例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アルファ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコースアミラーゼ、カルボニックアンヒドラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、マレートデヒドロゲナーゼもしくはグルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼと、または分子、例えば、ビオチン、ジゴキシゲニンもしくは５−ブロモデオキシウリジンによりコンジュゲートすることができる。同様に、蛍光標識は、本発明によるイムノコンジュゲートに、またはそれらの機能的断片にコンジュゲートすることができ、それとしては、特に、フルオレセインおよびその誘導体、蛍光色素、ローダミンおよびその誘導体、ＧＦＰ（ＧＦＰは「緑色蛍光タンパク質」を表す）、ダンシル、ウンベリフェロン、ランタニドキレートおよびクリプテート、例えばユーロピウムなどが挙げられる。
【０１５５】
イムノコンジュゲートまたはそれらの機能的断片は、当業者に公知の方法により調製することができる。これらは、直接またはスペーサー基もしくは連結基、例えば、ポリアルデヒド、例えば、グルタルアルデヒド、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレン−トリアミン五酢酸（ＤＰＴＡ）の仲介により、またはカップリング剤、例えば治療コンジュゲートについて上記のものの存在下で、酵素または蛍光標識にカップリングすることができる。フルオレセインタイプの標識を含有するコンジュゲートは、イソチオシアネートと反応させることにより調製することができる。同様に、他のイムノコンジュゲートとしては、化学発光標識、例えば、ルミノールおよびジオキセタン、生物発光標識、例えば、ルシフェラーゼおよびルシフェリン、またはそうでなければ放射性標識、例えば、ヨウ素１２３、ヨウ素１２５、ヨウ素１２６、ヨウ素１３１、ヨウ素１３３、臭素７７、テクネチウム９９ｍ、インジウム１１１、インジウム１１３ｍ、ガリウム６７、ガリウム６８、硫黄３５、リン３２、炭素ｌ４、トリチウム（水素３）、コバルト５７、セレン７５、ルテニウム９５、ルテニウム９７、ルテニウム１０３、ルテニウム１０５、水銀１０７、水銀２０３、レニウム９９ｍ、レニウム１０１、レニウム１０５、スカンジウム４７、テルル１２１ｍ、テルル１２２ｍ、テルル１２５ｍ、ツリウム１６５、ツリウム１６７、ツリウム１６８、フッ素８、イットリウム１９９を挙げることができる。直接または上記キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡを介して治療放射性同位体を抗体にカップリングする既存の当業者に公知の方法を、診断において使用することができる放射性元素に使用することができる。同様に、クロラミンＴ法（Ｈｕｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ  Ｎａｔｕｒｅ  １９４：４９５，１９６２）によるＮａ［Ｉ  １２５］による、もしくはそうでなければＣｒｏｃｋｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．（参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第４４２４２００号明細書）の技術によるテクネチウム９９ｍによる標識化、またはＨｎａｔｏｗｉｃｈ（参照により全体として本明細書に組み込まれる米国特許第４４７９９３０号明細書）により記載されるとおりＤＴＰＡを介する付着を挙げることもできる。さらなるイムノコンジュゲートとしては、毒素部分、例えば、シュードモナス外毒素（ＰＥまたはその細胞傷害性断片もしくは突然変異体）、ジフテリア毒素またはその細胞傷害性断片もしくは突然変異体、ボツリヌス毒素ＡからＦ、リシンまたはその細胞傷害性断片、アブリンまたはその細胞傷害性断片、サポリンまたはその細胞傷害性断片、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルス毒素またはその細胞傷害性断片およびブリオジン１（ｂｒｙｏｄｉｎ  １）またはその細胞傷害性断片などの群から選択される毒素部分を挙げることができる。
【０１５６】
本発明は、ＩＬ−４Ｒαへの本明細書に提供される抗体の結合を引き起こし、または可能にすることを含む方法を提供する。上記のとおり、そのような結合はインビボで、例えば、抗体、もしくは抗体をコードする核酸の投与後に生じ得、またはそれはインビトロで、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング、免疫細胞化学、免疫沈降、親和性クロマトグラフィー、および生化学的もしくは細胞ベースアッセイ、例えば本明細書に記載のものにおいて生じ得る。本発明はまた、本発明による抗体を例えば、バイオセンサ系中で用いることにより抗原のレベルを直接計測することを提供する。
【０１５７】
ＩＬ−４Ｒαへの結合メンバーの結合の量を測定することができる。定量化は、診断目的である得る試験試料中の抗原の量に関連し得る。ＩＬ−４Ｒα結合についてのスクリーニングおよび／またはその定量化は、例えば本明細書のいずれかに言及されるような、ＩＬ−４Ｒαに関連する疾患または障害についての患者のスクリーニングにおいて有用であり得る。とりわけ、一実施形態では、本発明の診断方法は、（ｉ）対象から組織または体液試料を得ること、（ｉｉ）前記組織または体液試料を１つ以上の本発明の抗体に曝露すること；および（ｉｉｉ）対照試料と比較して結合したＩＬ−４Ｒαを検出することを含み、対照と比較したＩＬ−４Ｒα結合の量の増加が、異常なレベルのＩＬ−４Ｒαの発現または活性を示し得る。試験すべき組織または体液試料には、血液、血清、尿、生検材料、腫瘍、または異常なＩＬ−４Ｒαレベルを含有すると疑われる任意の組織が含まれる。異常なＩＬ−４Ｒαレベルまたは活性について陽性であると試験された対象はさらに、本明細書に以下に開示される治療方法によって恩恵を受け得る。
【０１５８】
当業者は、本明細書に開示される方法に照らして、その優先性および一般的知識に従って、抗原への結合メンバーの結合を測定する好適な様式を選択することができる。
【０１５９】
ＩＬ−４Ｒα抗体
本発明は、インターロイキン（ＩＬ）−４受容体アルファ（ＩＬ−４Ｒα、ＣＤ１２４とも称される）についての抗体、ならびに例えば、ＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３に関連する障害、例えば、喘息、ＣＯＰＤおよび炎症性皮膚障害、例えば、アトピー性皮膚炎の治療または予防におけるそれらの治療的使用に関する。例えば、参照により全体が組み込まれる米国特許第８，０９２，８０４号明細書参照。
【０１６０】
ヒトＩＬ−４Ｒαサブユニット（Ｓｗｉｓｓ  Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ２４３９４）は、高い親和性でヒトＩＬ−４に結合する１４０ｋＤａの１型膜タンパク質である（Ａｎｄｒｅｗｓ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００２）２７７：４６０７３−４６０７８）。ＩＬ−４／ＩＬ−４Ｒα複合体は、共通のガンマ鎖（γｃ、ＣＤ１３２）またはＩＬ−１３Ｒアルファ１（ＩＬ−１３Ｒα１）サブユニットと、ＩＬ−４上のドメインを介してダイマー化し、それぞれ一般にＩ型およびＩＩ型受容体と称される２つの異なるシグナリング複合体を作出し得る。あるいは、ＩＬ−１３はＩＬ−１３Ｒα１に結合してＩＬ−１３／ＩＬ−１３Ｒα１複合体を形成し得、それがＩＬ−４ＲαサブユニットをリクルートしてＩＩ型受容体複合体を形成する。したがって、ＩＬ−４Ｒαは、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の両方の生物学的活性を媒介する（Ｇｅｓｓｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１：２８５，２０００により概説）。インビトロ試験は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３が多数の細胞型、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好酸球、マスト細胞、好塩基球、気道平滑筋細胞、呼吸上皮細胞、肺線維芽細胞、および内皮細胞においてエフェクター機能を活性化させることを示している（Ｓｔｅｉｎｋｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｒｅｓｐ  Ｒｅｓ，２：６６，２００１、およびＷｉｌｌｉｓ−Ｋａｒｐ，Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ，２０２：１７５，２００４により概説）。
【０１６１】
ＩＬ−４Ｒαは、種々の細胞型、例えば、末梢血Ｔ細胞、単球、気道上皮細胞、Ｂ細胞および肺線維芽細胞上で少数（１００〜５０００分子／細胞）で発現される（Ｌｏｗｅｎｔｈａｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４０：４５６，１９８８）。Ｉ型受容体は、造血細胞において優勢である一方、ＩＩ型受容体は、造血細胞および非造血細胞上の両方で発現される。
【０１６２】
ＩＬ−４Ｒαに対する抗体が記載されている。２つの例は、中和ネズミ抗ＩＬ−４Ｒαモノクローナル抗体ＭＡＢ２３０（クローン２５４６３）および１６１４６（クローン２５４６３．１１）であり、それぞれＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ．）およびＳｉｇｍａ（Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）により供給される。これらの抗体は、ＩｇＧ２ａサブタイプのものであり、精製組換えヒトＩＬ−４Ｒα（バキュロウイルス由来）により免疫化されたマウスから発達させたマウスハイブリドーマから開発された。２つのさらなる中和ネズミ抗ＩＬ−４Ｒα抗体Ｍ５７およびＸ２／４５−１２が、それぞれＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，Ｎ．Ｊ．）およびｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）により供給される。これらはＩｇＧ１抗体であり、組換え可溶性ＩＬ−４Ｒαにより免疫化されたマウスから発達させたマウスハイブリドーマによっても産生される。
【０１６３】
完全ヒト抗体は、ネズミまたはキメラ抗体よりも良好に臨床有用である可能性が高い。これは、マウス免疫グロブリンのＦＣ部分に対して指向されるヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）が産生されることが多く、急速なクリアランスおよび予想されるアナフィラキシー反応をもたらすためである（Ｂｒｏｃｈｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍ．，１７：４１−４８，１９９５）。キメラ抗体（マウス可変領域およびヒト定常領域）は、ネズミｍＡｂよりも免疫原性でないが、ヒト抗キメラ抗体（ＨＡＣＡ）応答が報告されている（Ｂｅｌｌ  ａｎｄ  Ｋａｍｍ，Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１４：５０１−５１４，２０００）。
【０１６４】
国際公開第０１／９２３４０号パンフレット（Ｉｍｍｕｎｅｘ）は、可溶性ＩＬ−４Ｒペプチドによるトランスジェニックマウスの免疫化およびにＩＬ−４Ｒに対する抗体を分泌するハイブリドーマ細胞系の作出を含む手順により生成されるＩＬ−４受容体に対するヒトモノクローナル抗体を記載し、主要抗体１２Ｂ５が、ＩｇＧ１抗体および完全ヒトであるとして開示される。国際公開第０５／０４７３３１号パンフレット（Ｉｍｍｕｎｅｘ）は、ＶＨ領域のオリゴヌクレオチド突然変異導入を介して１２Ｂ５に由来するさらなる抗体（Ｈ１Ｌ１と改名）を開示する。それぞれの突然変異ＶＨ鎖は、６つの区別されるＶＬ鎖の１つとペア形成されて抗体分子の小レパートリーを作出した。
【０１６５】
国際公開第０７／０８２，０６８号パンフレット（Ａｅｒｏｖａｎｃｅ）は、Ｒ１２１ＤおよびＹ１２４Ｄの置換を有する突然変異ヒトＩＬ−４タンパク質を投与することを含む、喘息を治療する方法を開示する。この明細書は、医薬組成物中で投与されるそのようなＩＬ４突然変異体が、野生型ｈｕＩＬ−４および野生型ｈｕＩＬ−１３の受容体への結合をアンタゴナイズし得ることを教示する。
【０１６６】
国際公開第０８／０５４，６０６号パンフレット（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）は、ヒト抗体を産生し得るトランスジェニックマウス中で産生されたヒトＩＬ−４Ｒに対する特定の抗体を開示する。
【０１６７】
別の種、例えば、カニクイザルからのオルソロガスタンパク質に対する交差反応性も示すヒトＩＬ−４Ｒαに対する抗体の発見および開発において、利点および利益が存在する。このような抗体は、薬理学およびインビボ安全性に関するそのような抗体の特徴決定を容易にする。別の種に対する効力または親和性は、例えば、ヒト活性と１０倍未満で異なり、そのような評価に適切であり得る。しかしながら、ヒトＩＬ−４Ｒαタンパク質は、チンパンジーを除き、他の種からのオルソロガスＩＬ−４Ｒαタンパク質との相対的に小さい類似性を示す。したがって、臨床開発のための安全性および毒性学的評価に好適であると広く考えられる種に対する交差反応性を有する臨床使用に適切な高い親和性および効力の抗体の発見は、極めて困難である。
【０１６８】
適切に設計された選択技術およびアッセイを介して、本発明者らは、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−４Ｒαの生物学的活性を阻害するＩＬ−４Ｒαについての安定な抗体組成物を開発した。
【０１６９】
米国特許第８，０９２，８０４号明細書に詳述されるとおり、初期リード同定プログラムから、カニクイザルＩＬ−４Ｒαへのいくらかの、しかし弱い結合、およびその機能的中和も示すヒトＩＬ−４Ｒαに対する単一抗体分子が選択された。標的化およびランダム突然変異導入の計画および規定プロセスならびにこの親抗体分子からの突然変異体のさらなる選択後、大幅に改善された特性を有するより大きいパネルの抗体分子が開発された。親抗体（抗体１）の、および最適化抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むＶＨおよびＶＬ領域を、図１３、１４、１５、および１６に示す。これらの抗体分子、ＶＨ、ＶＬ、およびＣＤＲは、本発明の態様を形成する。
【０１７０】
野生型ＩＬ−４Ｒαに加え、本発明の抗体は、一般のヒト変異体１７５Ｖ  ＩＬ−４Ｒαに結合することも見出された。
【０１７１】
高い効力でＩＬ−４Ｒαの生物学的効果を中和し、高い親和性でＩＬ−４Ｒαに結合し、ＩＬ−４およびＩＬ−１３により誘導されるシグナリングを阻害する抗体が本明細書に記載される。特に、抗体は、高親和性複合体、例えば、ＩＬ−４：ＩＬ−４Ｒα：γｃ、ＩＬ−４：ＩＬ−４Ｒα：ＩＬ−１３Ｒα１、ＩＬ−１３  ＩＬ−１３Ｒα１：ＩＬ−４Ｒαからのシグナリングを阻害する。このような作用は、ＩＬ−４およびＩＬ−１３の両方のシグナリングを防止する。さらに、データは、抗体がＩＬ−４Ｒα１型および２型複合体の相互作用およびシグナリングを阻害することを示す。抗体のこれらのおよび他の特性および効果は、以下にさらに詳細に記載される。
【０１７２】
抗体は、ＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−４またはＩＬ−１３が発現される障害、例えば、本明細書の他箇所で言及されるＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−４、またはＩＬ−１３関連障害の１つ以上、例えば、喘息、ＣＯＰＤ、または炎症性皮膚障害、例えば、アトピー性皮膚炎の治療に有用である。
【０１７３】
本明細書の他箇所に記載のとおり、ＩＬ−４Ｒαへの抗体の結合は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅを使用して測定することができる。
【０１７４】
表面プラズモン共鳴データは、１：１ラングミュア結合モデル（同時ｋａ  ｋｄ）にフィットさせ、親和性定数ＫＤを速度定数の比ｋｄ１／ｋａ１から計算することができる。本発明の抗体は、２０ｎＭ未満であるヒトＩＬ−４Ｒαへの結合についての一価親和性を有し得る。他の実施形態において、１０ｎＭ未満、例えば、８未満、５ｎＭ未満であるヒトＩＬ−４Ｒαへの結合についての一価親和性。他の実施形態において、結合メンバーは、カニクイザルＩＬ−４Ｒαにも結合する。一実施形態において、本発明の抗体は、０．０５から１２ｎＭの範囲内のヒトＩＬ−４Ｒαへの結合についての一価親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体は、０．１から５ｎＭの範囲内のヒトＩＬ−４Ｒαへの結合についての一価親和性を有する。一実施形態において、本発明の抗体は、０．１から２ｎＭの範囲内のヒトＩＬ−４Ｒαへの結合についての一価親和性を有する。
【０１７５】
一実施形態において、本発明の抗体は、ヒトＩＬ−４Ｒαに免疫特異的に結合し得、本明細書に記載の、または当業者に公知の方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、ＥＬＩＳＡ）（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して評価して５０００ｐＭ未満、４０００ｐＭ未満、３０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、２０００ｐＭ未満、１５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、７５０ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、７５ｐＭ未満の親和性（ＫＤ）を有し得る。
【０１７６】
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−４Ｒα抗体は、ヒトＩＬ−４Ｒαに免疫特異的に結合し、結合し得、本明細書に記載の、または当業者に公知の方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、ＥＬＩＳＡ）を使用して評価して５００ｐＭ、１００ｐＭ、７５ｐＭまたは５０ｐＭの親和性（ＫＤ）を有し得る。
【０１７７】
一部の実施形態において、本発明による抗体は、高い効力でＩＬ−４Ｒαを中和し得る。中和は、ＩＬ−４Ｒαにより媒介される生物学的活性の阻害を意味する。本発明の抗体は、ＩＬ−４Ｒαにより媒介される１つ以上の活性を中和し得る。生物学的活性の阻害は、ＩＬ−４Ｒαがガンマ鎖（またはＩＬ−１３Ｒα）および関連可溶性リガンド、例えば、ＩＬ−４またはＩＬ−１３のいずれかとのシグナリング複合体を形成することの防止により媒介される可能性が高い。
【０１７８】
ＩＬ−４またはＩＬ−１３シグナリングの、受容体複合体を含有するそのＩＬ−４Ｒαを介する中和は、ＩＬ−４またはＩＬ−１３刺激ＴＦ−１細胞増殖の阻害により計測することができる。
【０１７９】
本発明の抗体が結合するヒトＩＬ４Ｒαのエピトープは、突然変異導入およびドメインスワッピングの組合せにより局在させた。全ドメインスワップキメラは、エピトープをヒトＩＬ４Ｒαのドメイン１（Ｄ１）（残基Ｍ１〜Ｅ１１９）に局在させた。ヒトＩＬ−４Ｒαは、結晶構造中でＩＬ４に近接する５つのループ領域を含有する（Ｈａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ９７：２７１−２８１，１９９９）。ループスワップキメラは、ループ３中の主要構成要素（残基Ｌ８９〜Ｎ９８）およびループ２中の非主要構成要素（残基Ｖ６５〜Ｈ７２）への、本発明の抗体により結合されるヒトＩＬ−４Ｒαエピトープのさらなる局在化を可能とした。ヒトループ３を有さないキメラは、抗体へのヒトＩＬ−４Ｒα結合を阻害し得ず、ループ２を有さないキメラは、ヒトＩＬ−４Ｒαよりも１００倍大きいＩＣ５０を生じさせた（表５）。ドメインスワップデータと一致して、ループ２およびループ３の両方は、ドメイン１（Ｄ１）中に局在する（Ｈａｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ９７：２７１−２８１，１９９９）。
【０１８０】
抗体エピトープは、ヒトＩＬ−４Ｒαの２つのループ領域；Ｖ６５〜Ｈ７２およびＬ８９〜Ｎ９８中の１８アミノ酸の不連続エピトープに局在させた。エピトープは、ループ２のアミノ酸残基Ｌ６７およびＬ６８ならびにループ３のＤ９２およびＶ９３にさらに局在させることができる（残基６７、６８、９２および９３の局在について配列番号４５４または４６０参照）。Ｄ９２残基は最も重要であり、それにＶ９３が続く。それというのも、試験抗体は、ループ２中のＬ６７および／またはＬ６８残基を欠くキメラＩＬ−４Ｒαに依然として結合し得たためである。無論、本発明の抗体は、Ｌ６７、Ｌ６８、Ｄ９２およびＶ９３の１つの他のヒトＩＬ−４Ｒαタンパク質の残基にも結合する可能性が高い。
【０１８１】
本発明の一態様によれば、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に、配列番号４６０中の位置による６７、６８、９２および９３位におけるアミノ酸から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基において結合し得る抗体を含む抗体配合物が提供される。本発明の一態様によれば、天然ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）の配列番号４６０中の位置によるアミノ酸残基６７、６８、９２および９３の少なくとも１つに結合し得る単離結合メンバー、例えば、抗体を含む抗体配合物が提供される。特定の実施形態において、単離結合メンバー、例えば、抗体は、配列番号４６０中の位置によるｈＩＬ−４Ｒαの９２位におけるアミノ酸に結合し得る。別の実施形態において、単離結合メンバー、例えば、抗体は、Ｄ９２ならびにＬ６７、Ｌ６８およびＶ９３から選択される少なくとも１つの他の残基に結合し得る。別の実施形態において、単離結合メンバー、例えば、抗体は、Ｄ９２およびＶ９３に結合し得る。別の実施形態において、単離結合メンバー、例えば、抗体は、Ｄ９２、Ｖ９３およびＬ６７またはＬ６８のいずれかに結合し得る。別の実施形態において、抗体は、Ｌ６７、Ｌ６８、Ｄ９２およびＶ９３のそれぞれに結合し得る。これらの実施形態のそれぞれは、局在を配列番号４６０中に示されるｈＩＬ−４Ｒαアミノ酸配列（１〜２２９位）により同定することができるｈＩＬ−４Ｒα中のアミノ酸位置を指す。一実施形態において、結合メンバー、例えば、抗体は、全長ｈＩＬ−４Ｒαの記載のエピトープ残基（すなわち、６７、６８、９２および９３位の少なくとも１つ）に結合し得る。一実施形態において、結合メンバー、例えば、抗体は、細胞表面上で発現される天然ｈＩＬ−４Ｒαの記載のエピトープ残基（すなわち、６７、６８、９２および９３位の少なくとも１つ）に結合し得る。一実施形態において、結合メンバー、例えば、抗体は、組換え発現全長（２２９アミノ酸）ｈＩＬ−４Ｒαの記載のエピトープ残基（すなわち、６７、６８、９２および９３位の少なくとも１つ）に結合し得る。
【０１８２】
本発明のさらなる態様によれば、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に結合し得る単離結合メンバー、例えば、抗体を含む抗体配合物が提供される。特定の実施形態において、結合メンバーはヒト抗体である。さらなる実施形態において、結合メンバーは、カニクイザルインターロイキン−４受容体アルファ（ｃｙＩＬ−４Ｒα）にも結合し得る。
【０１８３】
本発明の別の態様によれば、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーを含む抗体配合物であって、結合メンバーが、１８ｐＭの可溶性ヒトＩＬ−４タンパク質を使用するＴＦ−１増殖アッセイにおける５０ｐＭ未満のヒトＩＬ−４（ｈＩＬ−４）誘導細胞増殖の阻害についてのＩＣ５０幾何平均を有し、結合メンバーが、ｃｙＩＬ−４Ｒαにも結合し得る抗体配合物を提供する。
【０１８４】
本発明のこの態様の特定の実施形態において、結合メンバーは、１８ｐＭの可溶性ヒトＩＬ−４を使用するＴＦ−１増殖アッセイにおける５０ｐＭ未満、３５ｐＭ未満、２５ｐＭ未満、または２０ｐＭ未満、のヒトＩＬ−４（ｈＩＬ−４）誘導細胞増殖の阻害についてのＩＣ５０幾何平均を有する。特定の実施形態において、本発明の結合メンバーは、本明細書に記載（例えば、実施例３．２．１）または当業者に公知の方法における１８ｐＭの可溶性ヒトＩＬ−４を使用して１から５０ｐＭ、１から３５ｐＭ、２から３０ｐＭ、２から２５ｐＭ、２から１２ｐＭの間のヒトＩＬ−４（ｈＩＬ−４）誘導細胞増殖の阻害についてのＩＣ５０幾何平均を有する。ｃｙＩＬ−４Ｒαへの結合は、任意の好適な手段により計測することができる。
【０１８５】
同様に、本発明の範囲内の抗体は、４００ｐＭの可溶性ヒトＩＬ−１３（ｈＩＬ−１３）を使用して２００ｐＭ未満のヒトＩＬ−１３（ｈＩＬ−１３）媒介ＴＦ−１増殖（ｈＩＬ−４Ｒαの中和を介する）の阻害についてのＩＣ５０幾何平均を有する。特定の実施形態において、４００ｐＭの可溶性ヒトＩＬ−１３（ｈＩＬ−１３）を使用してヒトＩＬ−１３（ｈＩＬ−１３）媒介ＴＦ−１増殖（ｈＩＬ−４Ｒαの中和を介する）の阻害についてのＩＣ５０幾何平均は、５から７５ｐＭの間または５から４５ｐＭの間である。
【０１８６】
特定の実施形態において、本発明の抗体配合物は、ネズミＩＬ−４Ｒαに実質的に結合し得ない抗体を含む。これは、本発明の抗体が、ネズミＩＬ−４Ｒαよりも少なくとも５００倍（例えば、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、少なくとも１５００倍、少なくとも２０００倍、少なくとも３０００倍、少なくとも４０００倍）強く、ヒトインターロイキン−４受容体アルファに結合し得ることを意味する（すなわち、ネズミＩＬ−４Ｒαへの結合は、ヒトＩＬ−４Ｒαへの結合よりも少なくとも５００倍弱い）。これは、例えば、ＨＴＲＦ競合アッセイにより計測することができる。
【０１８７】
生物学的活性の阻害は、一部または完全であり得る。具体的な実施形態において、ＩＬ−４Ｒα生物学的活性を、結合メンバーの不存在下で活性の少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％だけ阻害する抗体が提供される。抗体がＩＬ−４Ｒαを中和する程度は、その中和効力と称される。効力は、当業者に公知の、および／または本明細書に記載の、もしくは言及される１つ以上のアッセイを使用して決定または測定することができる。例えば、効力は、以下においてアッセイすることができる：
−−  蛍光（例えば、ＨＴＲＦまたはＤＥＬＦＩＡ）または放射性フォーマットにおける受容体−リガンド結合アッセイ
−−  蛍光（例えば、ＨＴＲＦまたはＤＥＬＦＩＡ）エピトープ競合アッセイ
−−  細胞ベース機能アッセイ、例として、ヒトもしくはカニクイザルＰＢＭＣのＳＴＡＴ６リン酸化、ＴＦ−１細胞の増殖、ヒトもしくはカニクイザル線維芽細胞系からのエオタキシン放出、ヒト内皮静脈細胞に対するＶＣＡＭ１上方調節またはヒトＴ細胞の増殖。
【０１８８】
これらのアッセイ法の一部は、米国特許第８，０９２，８０４号明細書の実施例にも記載されている。
【０１８９】
第１の種（例えば、ヒト）からのＩＬ−４Ｒαを使用するアッセイにおいて計算される抗体の中和効力は、第２の種（例えば、カニクイザル）からのＩＬ−４Ｒαを使用する同一アッセイにおいて結合メンバーの中和効力と比較して２つの種のＩＬ−４Ｒαについての結合メンバーの交差反応性の程度を評価することができる。ヒト標的および別の種からのオルソロガス標的の両方に結合する抗体を有する大きい利点が存在する。結合メンバーが治療産物として進歩中であり、安全性試験（例えば、毒性）を別の種において実施することが必要である場合、重要な利点が生まれる。別の種に対する効力または親和性は、例えば、ヒト活性よりも１０倍未満で異なり、そのような評価に適切であり得る。
【０１９０】
本発明の特定の実施形態によれば、結合メンバー、例えば、抗体の結合の比は、受容体−リガンド結合アッセイを使用してｓｃＦｖとｈＩＬ−４ＲαおよびｃｙＩＬ−４Ｒαとの比として計測する場合、少なくとも６：１である。本明細書において使用される「少なくとも」６：１は、２：１、１：１ではなく、８：１、１０：１などを含む。
【０１９１】
本発明の抗体は、ヒトＩＬ−４ＲαおよびカニクイザルＩＬ−４Ｒαに結合し、受容体−リガンド結合アッセイにおいて決定してヒトおよびカニクイザルＩＬ−４Ｒαの中和についての効力における２５０倍未満、例えば、１５０、１００、７５、５０、２５、２０、１５、１０倍未満の差を有し得、結合メンバーは、例えば、米国特許第８，０９２，８０４号明細書におけるようなｓｃＦｖフォーマットである。
【０１９２】
一部の実施形態において、受容体−リガンド結合アッセイを使用して計測されるヒトおよびカニクイザルＩＬ−４Ｒαについての本発明の抗体（ｓｃＦｖフォーマットの場合）の中和効力は、２５倍以内である。一実施形態において、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−４Ｒαについての本発明の抗体の中和効力は、２１０倍以内であり；すなわち、ヒトＩＬ−４Ｒαへの結合は、カニクイザルＩＬ−４Ｒαへの結合に対して２１０倍以下である。別の実施形態において、前記中和効力は、５：１から２１０：１の間、例えば、５：１から１００：１の間である。
【０１９３】
機能細胞ベースアッセイについて、効力は、通常、特に記載のない限り、ｎＭでＩＣ５０値として表現される。機能アッセイにおいて、ＩＣ５０は、生物学的（または生化学的）応答をその最大値の５０％だけ低減させる結合メンバーのモル濃度である。ＩＣ５０は、最大生物学的応答の％を、結合メンバー濃度のｌｏｇの関数としてプロットすることにより、ソフトウェアプログラム、例えば、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）またはＯｒｉｇｉｎ（Ｏｒｉｇｉｎ  Ｌａｂｓ）を使用して計算してシグモイド関数をデータにフィットさせてＩＣ５０値を生成することができる。
【０１９４】
受容体−リガンド結合アッセイについて、効力は、通常、標識リガンドが存在しない場合、受容体の５０％を占有する結合メンバーの濃度のＫｉ（阻害定数）として表現される。ＩＣ５０がリガンド濃度に応じて実験間で変動し得る一方、Ｋｉは、Ｃｈｅｎｇ  Ｐｒｕｓｏｆｆ式から計算される絶対値である。
【０１９５】
本発明の抗体は、本明細書に記載のヒトＩＬ−４ＲαＨＴＲＦ（登録商標）アッセイにおいて最大５ｎＭの中和効力またはＫｉを有し得る。このアッセイを使用してｓｃＦｖフォーマットの抗体についてのＫｉを決定することができる。Ｋｉは、例えば、最大５．０、４．０、３．０、２．０、１．０、０．５、０．２、０．１、０．０５、または０．０２ｎＭであり得る。
【０１９６】
さらに、ＩＬ−４ＲαについてのＩＬ−４Ｒα抗体の結合キネティクスおよび親和性（平衡解離定数、ＫＤとして表現される）は、例えば、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）を使用して決定することができ、またはＫｄは、ｐＡ２分析から推定することができる。
【０１９７】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、グリコシル化ｈＩＬ−４Ｒαに結合し得る。
【０１９８】
一部の実施形態において、本発明の抗体は、場合により、他の構造的に関連する分子（例えば、他のインターロイキン受容体）と比べてＩＬ−４Ｒαに特異的であり、したがって、選択的にＩＬ−４Ｒαに結合し得る。例えば、本発明の抗体は、ＩＬ−１３Ｒα１またはＩＬ−１３Ｒα２および共通ガンマ鎖（γｃ）のいずれとも交差反応し得ない。
【０１９９】
本発明の抗体は、抗体分子、例えば、ヒト抗体分子を含み得る。結合メンバーは、抗体ＶＨおよび／またはＶＬドメインを含む。抗体のＶＨドメインは、本発明の一部としても提供される。相補性決定領域（「ＣＤＲ」）、およびフレームワーク領域（「ＦＲ」）は、ＶＨおよびＶＬドメインのそれぞれの範囲内である。ＶＨドメインは、ＨＣＤＲのセットを含み、ＶＬドメインは、ＬＣＤＲのセットを含む。抗体分子は、ＶＨ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにフレームワークを含む抗体ＶＨドメインを含み得る。これは、あるいは、またはさらに、ＶＬ  ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３ならびにフレームワークを含む抗体ＶＬドメインを含み得る。ＶＨまたはＶＬドメインフレームワークは、以下の構造中でＣＤＲが散在する４つのフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４を含む：
ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。
【０２００】
本発明による抗体ＶＨおよびＶＬドメイン、ＦＲならびにＣＤＲの例は、本開示の一部を形成する付属の配列表に列記されるとおりである。本明細書に開示の全てのＶＨおよびＶＬ配列、ＣＤＲ配列、ＣＤＲのセットならびにＨＣＤＲのセットおよびＬＣＤＲのセットは、本発明の態様および実施形態を表す。本明細書に記載の「ＣＤＲのセット」は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。したがって、ＨＣＤＲのセットは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を指し、ＬＣＤＲのセットは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を指す。特に記載のない限り、「ＣＤＲの完全セット」は、ＨＣＤＲおよびＬＣＤＲを含む。典型的には、本発明の抗体は、モノクローナル抗体である。
【０２０１】
本発明のさらなる態様は、付属の配列表に示される抗体１から４２のいずれかのＶＨドメインと少なくとも７５、８０、８５、９０、９５、９８もしくは９９％のアミノ酸配列同一性を有するＶＨドメインを含み、および／または付属の配列表に示される抗体１から４２のいずれかのＶＬドメインと少なくとも７５、８０、８５、９０、９５、９８または９９％のアミノ酸配列同一性を有するＶＬドメインを含む抗体分子である。Ａｃｃｅｌｅｒｙの「ＭａｃＶｅｃｔｏｒ（商標）」プログラムを使用して２つのアミノ酸配列の同一性％を計算することができる。
【０２０２】
本発明の抗体は、通常、さらに以下に考察される非抗体タンパク質足場中の１つ以上のＣＤＲ、例えば、ＨＣＤＲ３および／もしくはＬＣＤＲ３、またはＣＤＲのセットにより提供される非抗体分子内の抗原結合部位を含み得る。
【０２０３】
本発明者らは、図１３（ＶＨドメイン）および１４（ＶＬドメイン）に示されるＣＤＲ配列のセットを有する親抗体分子（抗体１）を単離した。最適化する方法を介して、それらは、親ＣＤＲ３配列に由来するＣＤＲ３配列を有し、図１３（ＶＨドメイン）および図１４（ＶＬドメイン）に示される位置における置換を有する２から２０にナンバリングされたものを含む抗体クローンのパネルを生成した。したがって、例えば、図１３（ＡからＤ）から、抗体２が、親ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＬＣＤＲ１およびＬＣＤＲ２配列を有し、Ｋａｂａｔ残基９５がＱにより置き換えられており、Ｋａｂａｔ残基９５Ａ、９５Ｂおよび９６がＰによりそれぞれ置き換えられており、Ｋａｂａｔ残基９７がＬにより置き換えられている親ＬＣＤＲ３配列を有し、Ｋａｂａｔ残基１０１がＹにより置き換えられており、Ｋａｂａｔ残基１０２がＮにより置き換えられている親ＨＣＤＲ３配列を有することが把握することができる。
【０２０４】
本明細書に記載の親抗体分子、および抗体分子２から２０は、それぞれ、親抗体分子のＣＤＲを有する抗体分子を、および抗体分子２から２０のＣＤＲを有する抗体分子を指す。最適化のさらなるプロセスを介して、本発明者らは、ＶＨおよびＶＬドメイン全体にわたる追加の置換を有する２１〜４２にナンバリングされた抗体クローンのパネルを生成した。したがって、例えば、抗体２１は、抗体２０と同一のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ１、およびＨＣＤＲ３を有し；それは、抗体２０の親ＨＣＤＲ２配列を有するが、Ｋａｂａｔ残基５７はＡにより置き換えられており；それは、ＶおよびＦによりそれぞれ置き換えられているＫａｂａｔ残基８５および８７（ＬＦＷ３中）を有する。
【０２０５】
図１５（ＶＨ）および１６（ＶＬ）に示される抗体２０のＣＤＲのセットを含む参照結合メンバーが本明細書に記載され、ＨＣＤＲ１は、配列番号１９３（Ｋａｂａｔ残基３１〜３５）であり、ＨＣＤＲ２は、配列番号１９４（Ｋａｂａｔ残基５０〜６５）であり、ＨＣＤＲ３は、配列番号１９５（Ｋａｂａｔ残基９５〜１０２）であり、ＬＣＤＲ１は、配列番号１９８（Ｋａｂａｔ残基２４〜３４）であり、ＬＣＤＲ２は、配列番号１９９（Ｋａｂａｔ残基５０〜５６）であり、ＬＣＤＲ３は、配列番号２００（Ｋａｂａｔ残基８９〜９７）である。さらなる抗体は、参照結合メンバー中の配列を参照して記載することができる。
【０２０６】
抗体を含む抗体配合物は、本明細書に記載の１つ以上のＣＤＲ（すなわち、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つおよび少なくとも６つ）、例えば、ＣＤＲ３、および場合により、さらにはＣＤＲ１およびＣＤＲ２を含んでＣＤＲのセットを形成し得る。ＣＤＲまたはＣＤＲのセットは、親ＣＤＲもしくはＣＤＲの親セットであり得、または抗体２から４２いずれかのＣＤＲもしくはＣＤＲのセットであり得、または本明細書に記載のその変異体であり得る。
【０２０７】
例えば、本発明による抗体またはＶＬドメインは、別のアミノ酸に置換されているＫａｂａｔ残基９２〜９７の１つ以上を有する参照ＬＣＤＲ３を含み得る。例示的な置換としては、以下が挙げられる：
Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｖａｌ（Ｖ）またはＡｌａ（Ａ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９２；
Ｇｌｙ（Ｇ）またはＳｅｒ（Ｓ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９３；
Ｔｈｒ（Ｔ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９４
Ｌｅｕ（Ｌ）、ＧＬｎ（Ｑ）、Ｐｒｏ（Ｐ）またはＳｅｒ（Ｓ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９５；
Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｐｒｏｌ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｈｉｓ（Ｈ）またはＧｌｙ（Ｇ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９５ａ；
Ａｌａ（Ａ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ａｒｇ（Ｒ）またはＡｓｐ（Ｄ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９５ｂ；
Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）またはＭｅｔ（Ｍ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９５ｃ；
Ｔｙｒ（Ｙ）またはＰｒｏ（Ｐ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９６；
Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）またはＩｌｅ（Ｉ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９７。
【０２０８】
抗体またはＶＨドメインは、別のアミノ酸に置換されているＫａｂａｔ残基９７〜１０２の１つ以上を有する参照ＨＣＤＲ３を含み得る。例示的な置換としては、以下が挙げられる：
Ｔｒｐ（Ｗ）またはＬｅｕ（Ｌ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９７；
Ｌｅｕ（Ｌ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９８；
Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｌｙｓ（Ｋ）、Ｐｈｅ（Ｆ）またはＴｒｐ（Ｗ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基９９；
Ａｓｐ（Ｄ）、Ａｓｎ（Ｎ）またはＧｌｎ（Ｑ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基１０１；
Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｐｒｏ（Ｐ）またはＨｉｓ（Ｈ）により置き換えられているＫａｂａｔ残基１０２。
【０２０９】
本発明の抗体は、抗体１から４２のいずれかのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／もしくはＨＣＤＲ３ならびに／または抗体１から４２のいずれかのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／もしくはＬＣＤＲ３を含み得る。抗体は、それらの抗体の１つのＶＨ  ＣＤＲのセットを含み得る。場合により、それは、それらの抗体の１つのＶＬ  ＣＤＲのセットも含み得、ＶＬ  ＣＤＲは、ＶＨ  ＣＤＲと同一または異なる抗体からのものであり得る。抗体１から４２のいずれかのＨＣＤＲのセットを含むＶＨドメイン、および／または抗体１から４２のいずれかのＬＣＤＲのセットを含むＶＬドメインも、本発明の個々の実施形態である。
【０２１０】
以下にさらに考察されるとおり、ＶＨまたはＶＬドメイン単独を使用して抗原に結合させることができるが、典型的には、ＶＨドメインは、ＶＬドメインとペア形成して抗体抗原結合部位を提供する。一実施形態において、抗体１ＶＨドメインは、抗体１ＶＬドメインとペア形成し、その結果、抗体１ＶＨおよびＶＬドメインの両方を含む抗体抗原結合部位が形成される。類似の実施形態が、本明細書に開示の他のＶＨおよびＶＬドメインについて提供される。他の実施形態において、抗体１ＶＨは、抗体１ＶＬ以外のＶＬドメインとペア形成する。軽鎖無差別性は、当技術分野において十分確立されている。ここでも、類似の実施形態が、本明細書に開示の他のＶＨおよびＶＬドメインについて本発明により提供される。したがって、親（抗体１）の、または抗体２から４２のいずれかのＶＨは、親の、または抗体２から４２のいずれかのＶＬとペア形成させることができる。
【０２１１】
本発明の一態様は、ＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体であって、ＶＨドメインが、図１３または１５に開示の配列を含む抗体である。
【０２１２】
本発明の別の態様は、ＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体であって、ＶＬドメインが、図１４または１６に開示の配列を含む抗体である。
【０２１３】
本発明の別の態様は、配列番号３６２、４４２、２３２、４２２または４３２に示されるＶＨドメインアミノ酸配列を有するＶＨドメインおよび配列番号３６７、２３７、４４７、４３７または４２７に示されるＶＬドメインアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む単離抗体分子である。
【０２１４】
抗体は、Ｈおよび／またはＬＣＤＲの開示セット内の１２または１０または９以下の、例えば、１、２、３、４または５つの置換を有する親抗体または抗体２から４２のいずれかのＨおよび／またはＬＣＤＲのセットを含み得る。例えば、本発明の抗体は、１２以下の置換、例えば、７つ以下の置換、例えば、０、１、２、３、４、５、または６つの置換を有する抗体１６または抗体２０のＨおよび／またはＬＣＤＲのセットを含み得る。置換は、ＣＤＲのセット内の任意の残基において潜在的に作製することができ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／またはＣＤＲ３内に存在し得る。
【０２１５】
したがって、本発明の一態様によれば、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーであって、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１５３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１５４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１５５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１５８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１５９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号１６０のアミノ酸配列を有するもの
からの１２以下のアミノ酸変化を有する単離結合メンバーが提供される。
【０２１６】
この例における参照抗体は、抗体１６である。
【０２１７】
単離結合メンバーは、ＣＤＲの参照セットからの１０以下、８つ以下、７つ以下、例えば、６、５、４、３、２、１つまたは０のアミノ酸変化を有し得る。特定の変化は、アミノ酸置換である。
【０２１８】
本発明の別の態様によれば、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーであって、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１２以下のアミノ酸変化を有する単離結合メンバーが提供される。
【０２１９】
この例における参照抗体は、抗体２０である。
【０２２０】
単離結合メンバーは、ＣＤＲの参照セットからの１０以下、８つ以下、７つ以下、例えば、６、５、４、３、２、１つまたは０のアミノ酸変化を有し得る。特定の変化は、アミノ酸置換である。特定の実施形態において、単離結合メンバーは、上記ＣＤＲの参照セットからの４つ以下のアミノ酸置換を有する。
【０２２１】
本発明の別の態様によれば、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーであって、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有するもの
からの６つ以下のアミノ酸変化を有する単離結合メンバーが提供される。
【０２２２】
この例における参照抗体は、抗体３７である。
【０２２３】
置換は、ＣＤＲ３内に、例えば、図１３または１５（ＶＨドメイン）および１４または１６（ＶＬドメイン）に示される抗体２から４２のいずれかで置換されている位置において存在し得る。したがって、１つ以上の置換は、以下の残基における１つ以上の置換を含み得る：
ＨＣＤＲ３中のＫａｂａｔ残基９７、９８、９９、１０１もしくは１０２；または
ＬＣＤＲ３中のＫａｂａｔ残基９２、９３、９４、９５、９５Ａ、９５Ｂ、９５Ｃ、９６もしくは９７。
【０２２４】
したがって、ＣＤＲ３は、例えば、Ｋａｂａｔ残基９２、９３、９４、９５、９５Ａ、９５Ｂ、９５Ｃ、９６または９７における１つ以上の置換を有する参照ＬＣＤＲ３であり得る。
【０２２５】
親／参照ＣＤＲ中の置換の例は、本明細書の他箇所に記載されている。記載のとおり、置換は、図１３から１６に示される１つ以上の置換を含み得る。
【０２２６】
本発明の抗体は、参照抗体２０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２および／もしくはＨＣＤＲ３を含み得、または以下の置換の１つ以上：
Ｋａｂａｔ残基５３がＡｒｇ（Ｒ）であるＨＣＤＲ２；
Ｋａｂａｔ残基５７がＡｌａ（Ａ）であるＨＣＤＲ２；
Ｋａｂａｔ残基９７がＴｒｐ（Ｗ）もしくはＬｅｕ（Ｌ）であり；Ｋａｂａｔ残基９８がＬｅｕであり；Ｋａｂａｔ残基９９がＬｅｕ（Ｌ）、Ｌｙｓ（Ｋ）もしくはＴｒｐ（Ｗ）であり；Ｋａｂａｔ残基１０１がＡｓｎ（Ｎ）もしくはＧｌｎ（Ｑ）であり；および／またはＫａｂａｔ残基１０２がＴｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｐｒｏ（Ｐ）もしくはＨｉｓ（Ｈ）であるＨＣＤＲ３
を有する。
【０２２７】
本発明の抗体は、参照抗体２０のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２および／もしくはＬＣＤＲ３を含み得、以下の置換の１つ以上：
Ｋａｂａｔ残基２７がＧｌｙ（Ｇ）であり；
Ｋａｂａｔ残基２７ＡがＴｈｒ（Ｔ）であり；
Ｋａｂａｔ残基２７ＢがＳｅｒ（Ｓ）であり；
Ｋａｂａｔ残基３１がＡｓｎ（Ｎ）であるＬＣＤＲ１；
Ｋａｂａｔ残基５６がＰｒｏ（Ｐ）であるＬＣＤＲ２；
Ｋａｂａｔ残基９２がＰｈｅ（Ｆ）、Ｖａｌ（Ｖ）もしくはＡｌａ（Ａ）であり；
Ｋａｂａｔ残基９３がＧｌｙ（Ｇ）もしくはＳｅｒ（Ｓ）であり；
Ｋａｂａｔ残基９４がＴｈｒ（Ｔ）であり；
Ｋａｂａｔ残基９５がＬｅｕ（Ｌ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｐｒｏ（Ｐ）もしくはＳｅｒ（Ｓ）であり；
Ｋａｂａｔ残基９５ＡがＳｅｒ（Ｓ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ａｌａ（Ａ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｈｉｓ（Ｈ）もしくはＧｌｙ（Ｇ）であり；
Ｋａｂａｔ残基９５ＢがＡｌａ（Ａ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ｍｅｔ（Ｍ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ａｓｐ（Ｄ）もしくはＡｒｇ（Ｒ）であり；
Ｋａｂａｔ残基９５ＣがＡｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｈｉｓ（Ｈ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｔｈｒ（Ｔ）もしくはＭｅｔ（Ｍ）であり；
Ｋａｂａｔ残基９６がＴｙｒ（Ｙ）もしくはＰｒｏ（Ｐ）であり；
および／またはＫａｂａｔ残基９７がＶａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）もしくはＩｌｅ（Ｉ）であるＬＣＤＲ３
を有する。
【０２２８】
特定の実施形態において、抗体２０配列を参照すると、ＨＣＤＲ２中のＫａｂａｔ残基５３は、Ａｒｇ（Ｒ）により置き換えられており；および／またはＨＣＤＲ２中のＫａｂａｔ残基５７は、Ａｌａ（Ａ）により置き換えられており；および／またはＬＣＤＲ１中のＫａｂａｔ残基２７は、Ｇｌｙ（Ｇ）により置き換えられており；および／またはＬＣＤＲ１中のＫａｂａｔ残基２７Ｂは、Ｓｅｒ（Ｓ）により置き換えられており；および／またはＬＣＤＲ３中のＫａｂａｔ残基９５は、Ｐｒｏ（Ｐ）により置き換えられている。
【０２２９】
本発明の特定の態様によれば、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーであって、
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有する
単離結合メンバーが提供される。
【０２３０】
本発明の別の特定の態様によれば、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーであって、
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有する
単離結合メンバーが提供される。
【０２３１】
本発明の抗体において：
ＨＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ残基３１〜３５からなる５アミノ酸長であり得；
ＨＣＤＲ２は、Ｋａｂａｔ残基５０〜６５からなる１７アミノ酸長であり得；
ＨＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ残基９５〜１０２からなる９アミノ酸長であり得；
ＬＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ残基２４〜３４からなる１３アミノ酸長であり得；
ＬＣＤＲ２は、Ｋａｂａｔ残基５０〜５６からなる７アミノ酸長であり得；および／または
ＬＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ残基８９〜９７からなる９アミノ酸長であり得る。
ＨＣＤＲおよびＬＣＤＲのセットのＫａｂａｔナンバリングにおいて、ＨＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ残基３１〜３５であり、ＨＣＤＲ２は、Ｋａｂａｔ残基５０〜６５であり、ＨＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ残基９５〜１０２であり、図１３および１５に示し；ＬＣＤＲ１は、Ｋａｂａｔ残基２４〜３４であり、ＬＣＤＲ２は、Ｋａｂａｔ残基５０〜５６であり、ＬＣＤＲ３は、Ｋａｂａｔ残基８９〜９７であり、図１４および１６に示す。
【０２３２】
本発明の別の態様によれば、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーであって、ＣＤＲのセットが、ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に存在するＣＤＲの参照セットからの６つ以下のアミノ酸変化を有する単離結合メンバーが提供される。
【０２３３】
本発明の別の態様によれば、ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に見出されるＶＨ配列を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーが提供される。
【０２３４】
本発明の別の態様によれば、ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に見出されるＶＬ配列を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーが提供される。
【０２３５】
本発明の別の態様によれば、ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に見出されるＶＨおよびＶＬ配列を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーが提供される。
【０２３６】
本発明の別の態様によれば、単離抗体または抗体の断片であって、ヒトインターロイキン−４受容体アルファに免疫特異的に結合し、以下を含む単離抗体または抗体の断片が提供される：
（ａ）ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に存在するＶＨ  ＣＤＲ１と同一のアミノ酸配列またはそれに対する１、２、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１；
（ｂ）ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に存在するＶＨ  ＣＤＲ２と同一のアミノ酸配列またはそれに対する１、２、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２；
（ｃ）ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に存在するＶＨ  ＣＤＲ３と同一のアミノ酸配列またはそれに対する１、２、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３；
（ｄ）ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に存在するＶＬ  ＣＤＲ１と同一のアミノ酸配列またはそれに対する１、２、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１；
（ｅ）ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に存在するＶＬ  ＣＤＲ２と同一のアミノ酸配列またはそれに対する１、２、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２；ならびに
（ｆ）ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００により寄託されたクローン中に存在するＶＬ  ＣＤＲ３と同一のアミノ酸配列またはそれに対する１、２、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３。
【０２３７】
本発明の別の態様によれば、単離抗体または抗体の断片であって、ヒトインターロイキン−４受容体アルファに免疫特異的に結合し、以下を含む単離抗体または抗体の断片が提供される：
（ａ）ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００において寄託されたクローン中に存在するＶＨ配列と同一のアミノ酸配列またはそれに対する１、２、３、４、５、もしくは６つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有するＶＨ配列；
（ｂ）ＮＣＩＭＢに２００８年１２月９日にアクセッション番号：ＮＣＩＭＢ４１６００において寄託されたクローン中に存在するＶＬ配列と同一のアミノ酸配列またはそれに対する１、２、３、４、５、もしくは６つのアミノ酸残基置換を含むアミノ酸配列を有するＶＬ配列。
【０２３８】
抗体は、抗体フレームワーク内の１つ以上のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲのセットを有する抗体分子を含み得る。例えば、抗体の１つ以上のＣＤＲまたはＣＤＲのセットは、フレームワーク（例えば、ヒトフレームワーク）中にグラフトして抗体分子を提供することができる。フレームワーク領域は、ヒト生殖系列遺伝子セグメント配列を含み得る。したがって、フレームワークは、生殖系列化し、それによりフレームワーク内の１つ以上の残基を最も類似するヒト生殖系列フレームワーク中の同等位置における残基と一致するように変化させることができる。当業者は、生殖系列化前に抗体のフレームワーク配列に配列が最も近縁である生殖系列セグメントを選択し、抗体の親和性または活性を試験して生殖系列化が本明細書に記載のアッセイにおいて抗原結合も効力も顕著に低減させないことを確認することができる。ヒト生殖系列遺伝子セグメント配列は、当業者に公知であり、例えば、ＶＢａｓｅコンパイレーション（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ．２２４．４８７−４９９，１９９７参照）からアクセスすることができる。
【０２３９】
一実施形態において、本発明の抗体は、ヒト生殖系列フレームワーク、例えば、Ｖｈ１＿ＤＰ−７＿（１〜４６）中でＨＣＤＲのセットを含むＶＨドメインを有する単離ヒト抗体分子である。したがって、ＶＨドメインフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２および／またはＦＲ３は、ヒト生殖系列遺伝子セグメントＶｈ１＿ＤＰ−７＿（１〜４６）のフレームワーク領域を含み得る。ＦＲ４は、ヒト生殖系列ｊセグメントＪＨ１、ＪＨ４もしくはＪＨ５（これらのｊセグメントは、同一のアミノ酸配列を有する）のフレームワーク領域を含み得、またはそれは、ヒト生殖系列ｊセグメントＪＨ３のフレームワーク領域を含み得る。ＶＨ  ＦＲ１のアミノ酸配列は、配列番号４４２（残基１〜３０）であり得る。ＶＨ  ＦＲ２のアミノ酸配列は、配列番号４４２（残基３６〜４９）であり得る。ＶＨ  ＦＲ３のアミノ酸配列は、配列番号４４２（残基６６〜９４）であり得る。ＶＨ  ＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号４４２（１０３〜１１３）であり得る。通常、結合メンバーは、例えば、ヒト生殖系列フレームワーク、例えば、Ｖλ１＿ＤＰＬ５中でＬＣＤＲのセットを含むＶＬドメインも有する。したがって、ＶＬドメインフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２および／またはＦＲ３は、ヒト生殖系列遺伝子セグメントＶλ１＿ＤＰＬ５のフレームワーク領域を含み得る。ＦＲ４は、ヒト生殖系列ｊセグメントＪＬ２またはＪＬ３（これらのｊセグメントは、同一のアミノ酸配列を有する）のフレームワーク領域を含み得る。ＶＬ  ＦＲ１のアミノ酸配列は、配列番号４４７（残基１〜２３）であり得る。ＶＬ  ＦＲ２のアミノ酸配列は、配列番号４４７（残基３５〜４９）であり得る。ＶＬ  ＦＲ３のアミノ酸配列は、配列番号４４７（残基５７〜８８）であり得る。ＶＬ  ＦＲ４のアミノ酸配列は、配列番号４４７（残基９８〜１０７）であり得る。生殖系列化ＶＨまたはＶＬドメインは、１つ以上のＶｅｒｎｉｅｒ残基において生殖系列化されていてもいなくてもよいが、通常は、生殖系列化されていない。
【０２４０】
本発明の抗体分子またはＶＨドメインは、重鎖フレームワーク領域の以下のセット：
ＦＲ１配列番号４４２（残基１〜３０）；
ＦＲ２配列番号４４２（残基３６〜４９）；
ＦＲ３配列番号４４２（残基６６〜９４）；
ＦＲ４配列番号４４２（残基１０３〜１１３）
を含み得；
または１、２、３、４、５、もしくは６つのアミノ酸変化、例えば、置換を有する前記重鎖フレームワーク領域のセットを含み得る。
【０２４１】
本発明の抗体分子またはＶＬドメインは、軽鎖フレームワーク領域の以下のセット：
ＦＲ１配列番号４４７（残基１〜２３）；
ＦＲ２配列番号４４７（残基３５〜４９）；
ＦＲ３配列番号４４７（残基５７〜８８）；
ＦＲ４配列番号４４７（残基９８〜１０７）
を含み得；
または１、２、３、４、５、もしくは６つのアミノ酸変化、例えば、置換を有する前記重鎖フレームワーク領域のセットを含み得る。
【０２４２】
アミノ酸変化は、置換、挿入（付加）または欠失であり得る。最も一般的な変化は、置換である可能性が高い。例えば、本発明の抗体分子は、重鎖および軽鎖フレームワーク領域のセットを含み得：
重鎖ＦＲ１は、配列番号１９２（残基１〜３０）であり；
重鎖ＦＲ２は、配列番号１９２（残基３６〜４９）であり；
重鎖ＦＲ３は、配列番号１９２（残基６６〜９４）であり；
重鎖ＦＲ４は、配列番号１９２（残基１０３〜１１３）であり；
軽鎖ＦＲ１は、配列番号１９７（残基１〜２３）であり；
軽鎖ＦＲ２は、配列番号１９７（残基３５〜４９）であり；
軽鎖ＦＲ３は、配列番号１９７（残基５７〜８８）であり；
軽鎖ＦＲ４は、配列番号１９７（残基９８〜１０７）であり；または
７つ以下、例えば、６つ以下のアミノ酸変化、例えば、置換を有する前記重鎖および軽鎖フレームワーク領域のセットを含み得る。例えば、重鎖および軽鎖フレームワーク領域のセット中で１または２つのアミノ酸置換が存在し得る。
【０２４３】
抗体２１〜４２は、抗体２０をベースとするが、ＣＤＲおよびフレームワーク領域内のある追加の変化を有する。抗体２０と同様に、抗体２１〜４２はｈＩＬ−４ＲαおよびｃｙＩＬ−４Ｒαに結合する。したがって、このようなＣＤＲおよび／またはフレームワーク置換は、潜在的により大きい結合を有する抗体を生成する任意選択または追加の置換とみなすことができる。
【０２４４】
したがって、ＶＨおよびＶＬドメインの６つのＣＤＲ領域内のいずれかの置換に加え、抗体は、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；または
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換も含み得る。
【０２４５】
好適なフレームワーク置換は、図１３から１６に示される。本発明の抗体は、図１３から１６に示される規定の置換の１つ以上を含み得る。
【０２４６】
本発明の抗体分子またはＶＨドメインは、ＶＨ  ＦＲ１を含み得、Ｋａｂａｔ残基１１は、ＶａｌもしくはＧｌｕであり、および／またはＫａｂａｔ残基１２は、ＬｙｓもしくはＡｒｇであり；本発明の抗体分子またはＶＨドメインは、ＶＨ  ＦＲ２を含み得、Ｋａｂａｔ残基３７は、ＡｌａもしくはＶａｌであり、および／またはＫａｂａｔ残基４８は、ＭｅｔもしくはＶａｌであり；本発明の抗体分子またはＶＨドメインは、ＶＨ  ＦＲ３を含み得、Ｋａｂａｔ残基６８は、Ｓｅｒ、ＡｌａもしくはＴｈｒであり、および／またはＫａｂａｔ残基８４は、ＳｅｒもしくはＰｒｏであり、および／またはＫａｂａｔ残基８５は、ＧｌｕもしくはＧｌｙであり；本発明の抗体分子またはＶＨドメインは、ＶＨ  ＦＲ４を含み得、Ｋａｂａｔ残基１０５は、ＬｙｓもしくはＡｓｎであり、および／またはＫａｂａｔ残基１０８は、Ｇｌｎ、ＡｒｇもしくはＬｅｕであり、および／またはＫａｂａｔ残基１１３は、ＳｅｒもしくはＧｌｙである。
【０２４７】
本発明の抗体分子またはＶＬドメインは、ＶＬ  ＦＲ１を含み得、Ｋａｂａｔ残基１は、ＧｌｎもしくはＬｅｕであり、および／またはＫａｂａｔ残基２は、ＳｅｒもしくはＰｒｏもしくはＡｌａであり、および／またはＫａｂａｔ残基３は、ＶａｌもしくはＡｌａであり、および／またはＫａｂａｔ残基９は、ＳｅｒもしくはＬｅｕであり；本発明の抗体分子またはＶＬドメインは、ＶＬ  ＦＲ２を含み得、Ｋａｂａｔ残基３８は、ＧｌｎもしくはＡｒｇであり、および／またはＫａｂａｔ残基４２は、ＴｈｒもしくはＡｌａであり；本発明の抗体分子またはＶＬドメインは、ＶＬ  ＦＲ３を含み得、Ｋａｂａｔ残基５８は、ＩｌｅもしくはＶａｌであり、および／またはＫａｂａｔ残基６５は、ＳｅｒもしくはＰｈｅであり、および／またはＫａｂａｔ残基６６は、ＬｙｓもしくはＡｒｇであり、および／またはＫａｂａｔ残基７０は、ＳｅｒもしくはＴｈｒであり、および／またはＫａｂａｔ残基７４は、ＡｌａもしくはＧｌｙであり、および／またはＫａｂａｔ残基８５は、ＡｓｐもしくはＶａｌであり、および／またはＫａｂａｔ残基８７は、ＴｙｒもしくはＰｈｅである。
【０２４８】
非生殖系列化抗体は、生殖系列化抗体と比較して同一のＣＤＲを有するが、異なるフレームワークを有する。本明細書に示される抗体配列のうち、抗体２４ＰＧＬおよび３７ＧＬのＶＨおよびＶＬドメインは、生殖系列化されている。
【０２４９】
本発明のさらなる態様によれば、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーであって、抗体１〜４２のいずれかのいかなる介在フレームワーク配列も有さないＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の整列した配列の複合配列と少なくとも７３％のアミノ酸配列同一性を有する単離結合メンバーが提供される。特定の実施形態において、単離結合メンバーは、抗体１〜４２のいずれかの複合スコアと少なくとも７８％のアミノ酸配列同一性を有する。
【０２５０】
本発明のさらなる実施形態によれば、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーであって、抗体１〜４２のいずれかのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の複合配列と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有する単離結合メンバーが提供される。
【０２５１】
本発明のさらなる態様によれば、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含むヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）についての単離結合メンバーであって、抗体１〜４２のいずれかのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の複合配列と少なくとも６５％のアミノ酸配列同一性を有する単離結合メンバーが提供される。
【０２５２】
本発明の抗体は、ＩＬ−４Ｒαに結合し、本明細書に開示の抗体、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン、ＣＤＲ、例えば、ＨＣＤＲ３、および／またはＣＤＲのセットを含む、任意の結合メンバーとＩＬ−４Ｒαへの結合について競合するものであり得る。抗体間の競合は、例えば、ＥＬＩＳＡを使用してインビトロで、および／または規定のレポーター分子を、１つ以上の他のタグなし抗体の存在下で検出することができるある結合メンバーにタグ付けすることにより容易にアッセイして同一エピトープまたは重複エピトープに結合する抗体の同定を可能とすることができる。競合は、例えば、ＩＬ−４Ｒαをプレートに固定化し、第１のタグ付き結合メンバーを、１つ以上の他のタグなし抗体とともにプレートに添加するＥＬＩＳＡを使用して決定することができる。タグ付き結合メンバーと競合するタグなし結合メンバーの存在は、タグ付き結合メンバーにより放出されるシグナルの減少により観察される。このような方法は、当業者に容易に公知であり、本明細書により詳細に記載される。一実施形態において、競合結合は、本明細書に記載のエピトープ競合アッセイを使用してアッセイする。本発明の抗体は、抗体分子、例えば、特に、親抗体の、または抗体２から４２のいずれかのＶＨおよび／またはＶＬドメイン、ＣＤＲ、例えば、ＨＣＤＲ３またはＣＤＲのセットを含む抗体分子と、ＩＬ−４Ｒαへの結合について競合する抗体抗原結合部位を含み得る。
【０２５３】
本発明の態様は、本明細書に定義の任意の結合メンバーと、ＩＬ−４Ｒαへの結合について競合する、例えば、親抗体または抗体２から４２のいずれかと例えば、ｓｃＦｖまたはＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４フォーマットで競合する抗体を提供する。本明細書に定義の任意の結合メンバーとＩＬ−４Ｒαへの結合について競合する抗体は、本発明の抗体について本明細書に開示の構造および／または機能特性のいずれか１つ以上を有し得る。
【０２５４】
治療の方法
本発明による抗体は、ヒトまたは動物体の治療または診断の方法、例えば、前記患者に有効量の本発明の抗体を投与することを含む、ヒト患者における疾患または障害の治療の方法（予防的治療を含み得る）において使用することができる。本発明により治療可能な病態としては、本明細書の他箇所に詳細に考察されるＩＬ−４Ｒα、ＩＬ−４および／またはＩＬ−１３が役割を担う任意のものが挙げられる。
【０２５５】
本発明のこれらのおよび他の態様は、さらに以下に詳細に記載される。
【０２５６】
本発明の抗体は、ヒトまたは動物対象、例えば、ヒトにおいて診断または治療の方法において使用することができる。例えば、抗体は、例えば、例が本明細書の他箇所に言及されるＩＬ−４Ｒα関連疾患または障害の診断または治療において使用することができる。
【０２５７】
本発明の抗体を治療または診断において使用することができる特定の病態としては、喘息、ＣＯＰＤ（例として、慢性気管支炎、末梢気道疾患および肺気腫）、炎症性腸疾患、線維性病態（例として、全身性硬化症、肺線維症、寄生虫誘導肝線維症、および嚢胞性線維症、アレルギー（例として、例えば、アトピー性皮膚炎および食物アレルギー）、移植片拒絶を予防するための移植療法、ならびに遅延型過敏症または接触過敏反応の抑制（アレルギー免疫療法に対するアジュバントとして、およびワクチンアジュバントとして）が挙げられる。一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の抗体配合物を投与することにより炎症性皮膚障害を治療する方法を対象とする。一部の実施形態において、炎症性皮膚障害は、アトピー性皮膚炎である。
【０２５８】
ある態様において、本開示は、本明細書に記載の抗体配合物を投与することを含む、肺疾患もしくは障害（例えば、喘息、特発性肺疾患（ＩＰＦ）またはＣＯＰＤ）または慢性炎症性皮膚疾患もしくは障害（例えば、またはアトピー性皮膚炎）と診断された患者を治療する方法を提供する。一部の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の抗体配合物を投与することを含む、慢性炎症性皮膚疾患または障害を治療する方法を対象とする。一部の実施形態において、慢性炎症性皮膚疾患は、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、湿疹または乾癬からなる群から選択される。
【０２５９】
用語「特発性肺線維症」（ＩＰＦ）は、肺の進行性瘢痕、または線維症を特徴とする疾患を指す。これは、肺胞が徐々に線維性組織により置き換えられる規定のタイプの間質性肺疾患である。ＩＰＦを罹患すると、進行性瘢痕が、通常、薄く柔軟な組織を肥大化させ、それが硬直し、肺が膨らみにくくなり、酸素が血流中に容易に流入することが妨げられる。例えば、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．２０００．１６１：６４６−６６４参照。
【０２６０】
アトピー性皮膚炎は、他のアトピー性障害、例えば、アレルギー性鼻炎および喘息に伴うことが多い一般的な慢性炎症性皮膚疾患である（Ｂｉｅｂｅｒ，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８，３５８：１４８３−１４９４）。ＩＬ−１３  ｍＲＮＡの上方調節は、アトピー性皮膚炎の亜急性および慢性病変において観察されている（Ｔａｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．，２００４，２９５：４５９−４６４；Ｐｕｒｗａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍ．，２００６，１２６，１０４３−１０５１；Ｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１１，１８６：７２３２−４２）。
【０２６１】
本明細書において使用される用語「アトピー性皮膚炎」は、他のアトピー性障害、例えば、アレルギー性鼻炎および喘息に伴うことが多い慢性炎症、再発性、非感染性および掻痒性皮膚障害を指す（Ｂｉｅｂｅｒ，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００８，３５８：１４８３−１４９４）。用語「アトピー性皮膚炎」は、「神経皮膚炎」、「アトピー性湿疹」、「内因性湿疹」と同義である。生じる場所に、または外観から、または誘発するストレス因子から名称が由来するアトピー性皮膚炎の特定の形態も、本開示により用語「アトピー性皮膚炎」に含まれる。これらとしては、限定されるものではないが、屈面性湿疹、軟属腫性湿疹（ｅｃｚｅｍａ  ｍｕｌｌｕｓｃａｔｕｍ）、いぼ状湿疹（ｅｃｚｅｍａ  ｖｅｒｒｕｃａｔｕｍ）、種痘性湿疹、円盤状湿疹（ｅｃｚｅｍａ  ｄｙｓｋｏｉｄｅｓ）、汗疱状湿疹、微生物湿疹、貨幣状湿疹、脂漏性湿疹および湿疹の他の形態；口囲皮膚炎および眼囲皮膚炎が挙げられる。本明細書において使用される、アトピー性皮膚炎という用語は、高頻度で生じる細菌二次感染、例えば、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）感染、膿皮症、例えば、伝染性膿痂疹およびそれに由来する疾患、ならびに鬚髯毛嚢炎（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｉｓ  ｂａｒｂａｅ）またはウイルス二次感染に起因するものも含む。ＩＬ−１３は、疾患の病因に関与し、重要なインビボ誘導因子である。例えば、Ｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８６：７２３２−４２（２０１１）；Ｔａｚａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２９５：４５９−４６４（２００４）；Ｍｅｔｗａｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｇｙｐｔ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１７１−７（２００４）参照。
【０２６２】
したがって、本発明の抗体は、ＩＬ−４、ＩＬ−１３またはＩＬ−４Ｒα発現および／または活性が関与する病態の治療における治療剤として有用である。とりわけ、一実施形態は、有効量の本発明の抗体を、それが必要される患者に投与することを含む治療の方法であって、ＩＬ−４Ｒα活性化の機能的結果を減少させる方法である。とりわけ、別の実施形態は、（ｉ）例えば、上記の診断方法を使用してＩＬ−４、ＩＬ−１３またはＩＬ−４Ｒα発現または活性を呈する患者を同定すること、および（ｉｉ）有効量の本発明の抗体を患者に投与することを含む治療の方法であって、ＩＬ−４Ｒα活性化の機能的結果を減衰させる方法である。本発明による有効量は、ＩＬ−４Ｒα活性化の機能的結果をモジュレートして（例えば、減少させて）治療される特定の疾患または障害の少なくとも１つの症状の重症度をモジュレートする（例えば、減少または低下させる）が、疾患も障害も必ずしも治癒しない量である。したがって、本発明の一実施形態は、本明細書に言及される障害のいずれかの少なくとも１つの症状の重症度を治療し、または低減させる方法であって、障害のいずれかの少なくとも１つの症状の重症度が低減されるように、必要とされる患者に有効量の本発明の１つ以上の抗体を単独で、または当技術分野において公知のもしくは本明細書に記載の別の適切な医薬品との併用治療レジメンで投与することを含む方法である。とりわけ、本発明の別の実施形態は、ＩＬ−４Ｒαの少なくとも１つの効果をアンタゴナイズする方法であって、ＩＬ−４Ｒαの前記少なくとも１つの効果、例えば、ＩＬ−４との複合体（シグナリングを活性化させるための前駆体）を形成するＩＬ−４Ｒαの能力がアンタゴナイズされるように、有効量の本発明の１つ以上の抗体と接触させ、またはそれを投与することを含む方法である。
【０２６３】
したがって、本発明のさらなる態様は、提供される結合メンバーを投与することを含む治療方法、またはそのような抗体を含む医薬組成物、および／または投与用医薬品の製造における、例えば抗体を薬学的に許容可能な賦形剤とともに製剤化することを含む医薬品または医薬組成物の作製方法におけるそのような抗体の使用を提供する。薬学的に許容可能な賦形剤は、医薬組成物に入るが二次反応を引き起こさず、例えば活性化合物の投与を容易にし、体内でのその寿命および／またはその効力を増加させ、溶液中のその溶解度を増加させ、またはそうでなければその保存を改善する化合物または化合物の組合せであり得る。これらの薬学的に許容可能なビヒクルは周知であり、選択される活性化合物の性質および投与様式に応じて、当業者により適合させる。
【０２６４】
抗体配合物
本発明のさらなる態様は、本発明の抗体を含有する抗体配合物、ならびにＩＬ−４Ｒαを阻害および／または中和する方法、例として、治療法によりヒトまたは動物体を治療する方法におけるその使用を提供する。
【０２６５】
一部の実施形態において、抗体配合物は、薬学的に許容可能である。用語「薬学的に許容可能」は、顕著な有害な医学的結果なしで動物（例えば、哺乳動物）に投与することができる化合物またはタンパク質を指す。
【０２６６】
一部の実施形態において、抗体配合物は、生理学的に許容可能な担体を含む。用語「生理学的に許容可能な担体」は、治療される宿主に対して顕著な有害な影響を有さず、一緒に投与される化合物の治療特性を保持する担体を指す。１つの例示的な生理学的に許容可能な担体は、生理食塩水である。他の生理学的に許容可能な担体およびその配合物は、当業者に公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，（１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ），ｅｄ．Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．に記載される。
【０２６７】
本発明の抗体は、通常、抗体に加えて少なくとも１つの構成要素を含み得る医薬組成物の形態で投与される。したがって、本発明による医薬組成物、本発明により使用される医薬組成物は、抗体に加え、粘度調整剤、非イオン性界面活性剤、配合緩衝液、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、緩衝液、安定剤または当業者に公知の他の材料の１つ以上を含み得る。このような材料は、非毒性であるべきであり、抗体の効力を干渉すべきでない。担体または他の材料の正確な性質は、経口、吸入または注射、例えば、静脈内注射であり得る投与経路に依存する。一実施形態において、組成物は、無菌である。
【０２６８】
静脈内注射、または罹患部位における注射について、活性成分は、パイロジェンフリーの、好適なｐＨ、等張性および安定性を有する、非経口的に許容可能な水溶液の形態である。当業者は、例えば等張性ビヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンガー注射液、乳酸化リンガー注射液を使用して、好適な溶液を調製することが十分に可能である。保存剤、安定剤、緩衝液、酸化防止剤および／または他の添加物を必要に応じて用いることができ、それには、緩衝液、例えばリン酸、クエン酸、ヒスチジンおよび他の有機酸；酸化防止剤、例えばアスコルビン酸およびメチオニン；保存剤（例えばオクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルまたはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３’−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン；単糖、二糖および他の炭水化物、例としてグルコース、マンノースまたはデキストリン；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばスクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール；塩形成カウンターイオン、例えばナトリウム；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質錯体）；および／または非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。
【０２６９】
本発明の抗体は、分子の物理化学的特性および送達経路に応じて、液体、半固体または固体形態で製剤化することができる。製剤は、賦形剤、または賦形剤の組合せ、例えば：糖、アミノ酸および界面活性剤を含み得る。液体製剤は、広範囲の抗体濃度およびｐＨを含み得る。固体製剤は、例えば、凍結乾燥、噴霧乾燥、または超臨界流体技術による乾燥により産生することができる。抗ＩＬ−４Ｒαの製剤は、意図される送達経路に依存し：例えば、肺送達用製剤は、吸入時に肺に深く浸透することを保証する物性を有する粒子からなり得；局所製剤（例えば瘢痕、例えば真皮瘢痕治療用の局所製剤）は、薬物が作用部位に留まる時間を延長する粘性改変剤を含み得る。ある実施形態において、結合メンバーは、結合メンバーを急速な放出から保護する担体とともに調製することができ、例えば制御放出製剤であり、それには、移植片、経皮貼付剤、およびマイクロカプセル化送達系が含まれる。生分解性、生体適合性ポリマー、例えばエチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸を使用することができる。そのような製剤を調製するための多数の方法が当業者に公知である。例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，１９７８を参照のこと。
【０２７０】
本発明の抗体による抗ＩＬ−４Ｒα治療は、経口で（例えば、ナノボディ）、注射により（例えば、皮下、関節内、静脈内、腹膜内、動脈内または筋肉内注射により）、吸入により、膀胱内経路により（膀胱内への点滴注入）、または局所的（例えば、眼内、鼻腔内、経直腸、創傷内、皮膚上）に施すことができる。治療は、パルス注入により、特に結合メンバーの用量を減らして施行することができる。投与経路は、治療の物理化学的特性により、疾患に関する特別な配慮により、または効力を最適化し、もしくは副作用を最小化する必要性により決定することができる。１つの特定の投与経路は静脈内経路である。本発明の医薬組成物を投与する別の経路は皮下経路である。抗ＩＬ−４Ｒα治療は病院または診療所における使用に制限されず、自宅および職場も含まれ得ることが想定される。したがって、無針デバイスを使用する皮下注射も有利である。
【０２７１】
本発明の一部の実施形態において、抗体配合物は、高濃度の抗体を含有する。一部の実施形態において、抗体配合物中の抗体濃度は、１００ｍｇ／ｍＬの抗体よりも大きい。一部の実施形態において、抗体濃度は、約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬから約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬから約１６０ｍｇ／ｍＬ、または約１５０ｍｇ／ｍＬである。
【０２７２】
一部の実施形態において、抗体配合物は、より低濃度の抗体、例えば、約１０ｍｇ／ｍＬから約１００ｍｇ／ｍＬを含有する。一部の実施形態において、抗体配合物中の抗体濃度は、約２０ｍｇ／ｍＬから約８０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬから約７０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬから約６０ｍｇ／ｍＬ、または約５０ｍｇ／ｍＬである。一部の実施形態において、より低濃度の抗体を含む抗体配合物は、賦形剤をさらに含む。賦形剤という用語は、本明細書に記載の抗体と配合される薬理学的に不活性な物質を指す。一部の実施形態において、賦形剤は、変性の防止を支援し、またはそうでなければより低濃度における抗体の安定化を支援し得る。
【０２７３】
医薬組成物中で使用することができる好適な賦形剤は、当技術分野において公知である。例は、例えば、手引き：Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．：“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９９０から確認することができる。一部の実施形態において、賦形剤は、「非荷電」賦形剤であり、すなわち、賦形剤は、正「＋」電荷も負「−」電荷も担持しない。一部の実施形態において、賦形剤は、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、ラクトース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、シクロデキストリン、可溶性デンプン、トレハロース、ソルビトール、エリスリトール、イソマルト、ラクチトール、マルチトール、キシリトール、グリセロール、ラクチトール、ヒドロキシエチルデンプン、水溶性グルカンからなる群から選択される。一部の実施形態において、賦形剤は、トレハロースである。
【０２７４】
一部の実施形態において、トレハロースは、抗体配合物中の約５０ｍＭから約８００ｍＭ、約１００ｍＭから約５００ｍＭ、約１５０ｍＭから約４００ｍＭ、約２００ｍＭ、約４００ｍＭ、約２００ｍＭ、約３００ｍＭ、または約２５０ｍＭ、例えば、２０から１００ｍｇ／ｍＬの抗体を含む抗体配合物である。一実施形態において、トレハロースは、抗体配合物中で約２５０ｍＭである。
【０２７５】
一部の実施形態において、配合緩衝液は、本質的にリン酸塩を有さない。用語「本質的にリン酸塩を有さない」は、配合緩衝液を指す場合、リン酸イオンを使用せずにｐＨを緩衝する緩衝液系を指す。したがって、本質的にリン酸塩を有さない緩衝液は、作業ｐＨにおいて化合物上で存在する（すなわち、共有結合している）リン酸塩部分を有し得るが、リン酸イオンは存在しない。一部の実施形態において、抗体配合物は、本質的には、リン酸塩を有さない。用語「本質的にリン酸塩を有さない」は、抗体配合物を指す場合、リン酸イオンを使用せずに抗体配合物のｐＨを緩衝する緩衝液系を指す。
【０２７６】
一部の実施形態において、抗体配合物は、粘度調整剤を含む。一部の例において、抗体配合物は、高濃度の抗体に起因する高粘度を有する。種々の粘度調整剤は、当技術分野において公知である。一部の実施形態において、粘度調整剤は、ヒスチジン、アルギニン、リジン、ポリビニルアルコール、ポリアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、グリセリン、ポリエチレングリコール、グルコース、デキストロース、およびスクロースからなる群から選択される。一部の実施形態において、粘度調整剤は、リジン、アルギニン、またはヒスチジンである。一部の実施形態において、粘度調整剤は、アルギニンである。一部の実施形態において、粘度調整剤は、塩形態、例えば、アルギニン、リジンまたはヒスチジンの塩を含む。一部の実施形態において、粘度調整剤は、アミノ酸、例えば、Ｌ型アミノ酸、例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リジン、またはＬ−ヒスチジンである。一部の実施形態において、粘度調整剤は、約５０ｍＭから約４００ｍＭ、または約１００ｍＭから約２５０ｍＭの濃度である。一部の実施形態において、粘度調整剤は、約１９０ｍＭの濃度である。一部の実施形態において、粘度調整剤は、約１００ｍＭから約２５０ｍＭの濃度のアルギニンである。一部の実施形態において、粘度調整剤は、約１００ｍＭから約２５０ｍＭの濃度のアルギニン−ＨＣｌである。一部の実施形態において、粘度調整剤は、約１９０ｍＭの濃度のアルギニンである。一部の実施形態において、粘度調整剤は、約１９０ｍＭの濃度のアルギニン−ＨＣｌである。
【０２７７】
一部の実施形態において、粘度調整剤は、２３℃における約４０ｃＰ未満、２３℃における約３０ｃＰ未満、２３℃における約２５ｃＰ未満、または２３℃における約２０ｃＰ未満の粘度を得るための量で添加される。一部の実施形態において、粘度調整剤は、２３℃における約１ｃＰから約４０ｃＰ、２３℃における約２ｃＰから約３０ｃＰ、２３℃における約５ｃＰから約２５ｃＰ、または２３℃における約１０ｃＰから約２０ｃＰの粘度を得るための量で添加される。
【０２７８】
一部の実施形態において、界面活性剤が抗体配合物中に存在する。種々の界面活性剤が当業者に公知である。一部の実施形態において、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。一部の実施形態において、非イオン性界面活性剤は、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｗｅｅｎ  ８０、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ノノキシノール−９、ポリオキサマー、ステアリルアルコール、またはモノステアリン酸ソルビタンからなる群から選択される。一部の実施形態において、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート８０である。本発明者らは、ＩＬ−４Ｒα抗体を配合する場合、一部の実施形態において、配合物が、約０．００２％から約０．４％、０．００５％から約０．１５％、約０．００２％から約０．２％、約０．０１％から約０．１％、または約０．０２％から約０．０８％の非イオン性界面活性剤を含むことを見出した。一部の実施形態において、配合物は、約０．０４％の非イオン性界面活性剤を含む。一部の実施形態において、配合物は、約０．００２％から約０．４％、約０．００２％から約０．２％、約０．００５％から約０．１５％、約０．０１％から約０．１％、または約０．０２％から約０．０８％のポリソルベート８０を含む。一部の実施形態において、配合物は、約０．０４％のポリソルベート８０を含む。一部の実施形態において、非イオン性界面活性剤は、ＣＭＣ値以上、最大０．５％である。一部の実施形態において、非イオン性界面活性剤の濃度は、凝集を防止または阻害するために十分である。一部の実施形態において、凝集は、可視的分析により決定される。
【０２７９】
一部の実施形態において、抗体配合物は、配合緩衝液を含む。一部の実施形態において、配合緩衝液は、酢酸緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、塩酸緩衝液、アルギニン緩衝液、グリシン緩衝液、クエン酸緩衝液、またはＴＥＳ緩衝液である。一部の実施形態において、配合緩衝液は、アルギニン緩衝液である。一部の実施形態において、アルギニン緩衝液は、アルギニン塩酸塩を含む。一部の実施形態において、アルギニン緩衝液は、ヒスチジンをさらに含む。一部の実施形態において、ヒスチジンは、Ｌ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩である。
【０２８０】
配合緩衝液は、種々の濃度のアルギニンを含み得る。一部の実施形態において、配合緩衝液は、約１０ｍＭから約４０ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩を含む。一部の実施形態において、配合緩衝液は、約２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩を含む。
【０２８１】
種々の追加の賦形剤を抗体配合物中に見出すことができる。一部の実施形態において、配合物は、塩、例えば、ＮａＣｌ、またはＫＣｌ塩をさらに含む。一部の実施形態において、塩は、約１００ｍＭから約２００ｍＭのＮａＣｌである。
【０２８２】
抗体配合物は、種々のｐＨレベルを有し得る。一部の実施形態において、配合物は、約５から約８、約５．５から約８、約６から約８、約６．５から約８、約７から約８のｐＨを有する。一部の実施形態において、配合物は、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８または約７．９のｐＨを有する。一部の実施形態において、配合物は、約７．２から約７．６、または約７．４のｐＨを有する。一部の実施形態において、配合物は、約５．５から約６．５のｐＨを有する。一部の実施形態において、配合物は、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、または約６．４のｐＨを有する。一部の実施形態において、配合物は、約６．０のｐＨを有する。
【０２８３】
一部の実施形態において、抗体配合物は、皮下投与に好適な液体配合物である。一部の実施形態において、抗体配合物は、凍結乾燥配合物である。一部の実施形態において、凍結乾燥配合物は、投与前に液体（例えば、水性）形態に再構成される。一部の実施形態において、抗体は、凍結乾燥に供されていない。
【０２８４】
本発明の抗体配合物は、長期間の貯蔵に好適であり得る。一部の実施形態において、配合物は、約４０℃における少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約１ヵ月間、少なくとも約２ヵ月間、少なくとも約３ヵ月間、少なくとも約６ヵ月間、少なくとも約１年間、または少なくとも約１８ヵ月間の貯蔵時に安定である。一部の実施形態において、抗体配合物は、約４０℃における約２週間から約１年間、約１ヵ月から約１年間、約２ヵ月から約１年間、または約３ヵ月から約１年間の貯蔵時に安定である。一部の実施形態において、抗体配合物は、約４０℃における約２週間から約６ヵ月間、約１ヵ月から約６ヵ月間、約２ヵ月間から約６ヵ月間、または約３ヵ月間から約６ヵ月間の貯蔵時に安定である。
【０２８５】
一部の実施形態において、本明細書に記載の抗体配合物は、撹拌の間に低減した粒子形成を有する。粒子配合物分析は、実施例５に本明細書に記載される。一部の実施形態において、抗体配合物は、実施例５の撹拌実験に供される場合、１，０００未満の「≧１０μｍの粒子」／ｍＬを有する。一部の実施形態において、抗体配合物は、実施例５の撹拌実験に供される場合、５００未満の「≧１０μｍの粒子」／ｍＬを有する。一部の実施形態において、抗体配合物は、実施例５の撹拌実験に供される場合、１００未満の「≧１０μｍの粒子」／ｍＬを有する。一部の実施形態において、抗体配合物は、実施例５の撹拌実験に供される場合、１，０００未満の「≧１０μｍの粒子」／ｍＬを有する。一部の実施形態において、抗体配合物は、実施例５の撹拌実験に供される場合、５００未満の「≧１０μｍの粒子」／ｍＬを有する。一部の実施形態において、抗体配合物は、実施例５の撹拌実験に供される場合、１００未満の「≧１０μｍの粒子」／ｍＬを有する。
【０２８６】
一部の実施形態において、配合物は、約２５℃における少なくとも３ヵ月間、少なくとも６ヵ月間、少なくとも９ヵ月間、または少なくとも１年間の貯蔵時に安定である。一部の実施形態において、配合物は、約５℃における少なくとも１８ヵ月間、少なくとも２４ヵ月間、または少なくとも３６ヵ月間の貯蔵時に安定である。
【０２８７】
一部の実施形態において、約４０℃において少なくとも１ヵ月間貯蔵された抗体は、貯蔵されなかった参照抗体と比較して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能を保持する。一部の実施形態において、約５℃において少なくとも６ヵ月間貯蔵された抗体は、貯蔵されなかった参照抗体と比較して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能を保持する。一部の実施形態において、約４０℃において少なくとも１ヵ月間貯蔵された抗体は、貯蔵されなかった参照抗体と比較して少なくとも５０％または少なくとも９５％のｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能を保持する。一部の実施形態において、約５℃において少なくとも６ヵ月間貯蔵された抗体は、貯蔵されなかった参照抗体と比較して少なくとも５０％または少なくとも９５％のｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能を保持する。
【０２８８】
一部の実施形態において、配合物は、注射可能な配合物である。一部の実施形態において、配合物は、静脈内、皮下、または筋肉内投与に好適である。
【０２８９】
本発明の抗体配合物は、輸送、貯蔵および／または投与のための密封容器中に入れることができる。一部の実施形態において、密封容器は、密封バイアルまたは密封シリンジである。一部の実施形態において、容器は、プレフィルドシリンジである。一部の実施形態において、容器は、１回投与量の抗体を含有する使い捨て容器である。一部の実施形態において、本発明は、好適な容器中で抗体配合物を含むヒトへの非経口投与に好適な医薬単位剤形を対象とする。
【０２９０】
本発明はまた、本明細書に記載の抗体配合物、本明細書に記載の容器、本明細書に記載の単位剤形、および／または本明細書に記載のプレフィルドシリンジを含むキットを対象とし得る。
【０２９１】
組成物は、治療すべき病態に応じて単独または他の治療との組合せで、同時もしくは連続的に、または１つまたは複数の別の治療剤との併用製剤として投与することができる。
【０２９２】
ＩＬ−４Ｒαについての抗体は、追加の医薬構成要素と組み合わせた併用療法の部分として使用することができる。併用治療、特に抗ＩＬ−４Ｒα結合メンバーおよび１つ以上の他の薬物の組合せを使用して顕著な相乗効果を提供することができる。ＩＬ−４Ｒαについての抗体は、本明細書に列記される病態の１つ以上の治療のために、別の１つまたは複数の治療剤と同時にまたは連続してまたは組合せ調製物として投与することができる。
【０２９３】
一部の実施形態において、本発明の抗体組成物は、以下の薬剤の１つ以上との組合せの、またはそれに添加した本明細書に記載の抗体を含み得る。
【０２９４】
・サイトカインまたはサイトカイン機能のアゴニストもしくはアンタゴニスト（例えばサイトカインシグナリング経路に作用する薬剤、例えばＳＯＣＳ系のモジュレーター）、例えばアルファ−、ベータ−および／またはガンマ−インターフェロン；インシュリン様成長因子Ｉ型（ＩＧＦ−１）、その受容体および関連結合タンパク質；インターロイキン（ＩＬ）、例えばＩＬ−１から−３３の１つ以上、および／またはインターロイキンアンタゴニストまたはインヒビター、例えばアナキンラ；インターロイキンファミリーメンバーの受容体のインヒビターまたはそのような受容体の特定サブユニットのインヒビター、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）インヒビター、例えば抗ＴＮＦモノクローナル抗体（例えばインフリキシマブ、アダリムマブおよび／またはＣＤＰ−８７０）および／またはＴＮＦ受容体アンタゴニスト、例えば免疫グロブリン分子（例えばエタネルセプト）および／または低分子量薬剤、例えばペントキシフィリン；
・Ｂ細胞のモジュレーター、例えばＢリンパ球を標的化するモノクローナル抗体（例えばＣＤ２０（リツキシマブ）またはＭＲＡ−ａＩＬｌ６Ｒ）またはＴリンパ球を標的化するにするもの（例えばＣＴＬＡ４−Ｉｇまたはアバタセプト）；
・破骨細胞活性を阻害するモジュレーター、例えばＲＡＮＫＬに対する抗体；
・ケモカインまたはケモカイン受容体機能のモジュレーター、例えばＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ２Ａ、ＣＣＲ２Ｂ、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０またはＣＣＲ１１（Ｃ−Ｃファミリーについて）；ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６またはＣＸＣＬ１３（Ｃ−Ｘ−Ｃファミリーについて）またはＣＸ３ＣＲ１（Ｃ−Ｘ３−Ｃファミリーについて）のアンタゴニスト；
・マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、すなわちストロメライシン、コラゲナーゼおよびゼラチナーゼならびにアグリカナーゼ、特にコラゲナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、コラゲナーゼ−２（ＭＭＰ−８）、コラゲナーゼ−３（ＭＭＰ−１３）、ストロメライシン−１（ＭＭＰ−３）、ストロメライシン−２（ＭＭＰ−１０）および／またはストロメライシン−３（ＭＭＰ−１１）および／またはＭＭＰ−９および／またはＭＭＰ−１２の１つ以上のインヒビター、例えばドキシサイクリンなどの薬剤；
・ロイコトリエン生合成インヒビター、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）インヒビターまたは５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）アンタゴニスト、例えばジレウトン；ＡＢＴ−７６１；フェンレウトン；テポキサリン；Ａｂｂｏｔｔ−７９１７５；Ａｂｂｏｔｔ−８５７６１；Ｎ−（５−置換）−チオフェン−２−アルキルスルホンアミド；２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノールヒドラゾン；メトキシテトラヒドロピラン、例えばＺｅｎｅｃａ  ＺＤ−２１３８；化合物ＳＢ−２１０６６１；ピリジニル置換２−シアノナフタレン化合物、例えばＬ−７３９，０１０；２−シアノキノリン化合物、例えばＬ−７４６，５３０；インドールおよび／またはキノリン化合物、例えばＭＫ−５９１、ＭＫ−８８６および／またはＢＡＹｘ１００５；
・フェノチアジン−３−１、例えばＬ−６５１，３９２；アミジノ化合物、例えばＣＧＳ−２５０１９ｃ；ベンゾキサラミン（ｂｅｎｚｏｘａｌａｍｉｎｅｓ）、例えばオンタゾラスト；ベンゼンカルボキシミドアミド、例えばＢＩＩＬ２８４／２６０；および化合物、例えばザフィルルカスト、アブルカスト、モンテルカスト、プランルカスト、ベルルカスト（ＭＫ−６７９）、ＲＧ−１２５２５、Ｒｏ−２４５９１３、イラルカスト（ＣＧＰ４５７１５Ａ）およびＢＡＹｘ７１９５からなる群から選択されるロイコトリエン（ＬＴ）Ｂ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、およびＬＴＥ４の受容体アンタゴニスト；
・ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）インヒビター、例えばメチルキサンタニン（ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈａｎｉｎｅ）、例えばテオフィリンおよび／またはアミノフィリン；および／または選択的ＰＤＥアイソザイムインヒビター、例えばＰＤＥ４インヒビターおよび／またはアイソフォームＰＤＥ４Ｄのインヒビターおよび／またはＰＤＥ５のインヒビター；
・ヒスタミン１型受容体アンタゴニスト、例えばセチリジン、ロラタジン、デスロラタジン、フェキソフェナジン、アクリバスチン、テルフェナジン、アステミゾール、アゼラスチン、レボカバスチン、クロルフェニラミン、プロメタジン、シクリジン、および／またはミゾラスチン（一般に、経口、局所または非経口で適用される）；
・プロトンポンプインヒビター（例えばオメプラゾール）または胃保護性ヒスタミン２型受容体アンタゴニスト；
・ヒスタミン４型受容体のアンタゴニスト；
・アルファ−１／アルファ−２アドレナリン受容体アゴニスト血管収縮性交感神経様作用剤、例えばプロピルヘキセドリン、フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、エフェドリン、シュードエフェドリン、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸テトラヒドロゾリン、塩酸キシロメタゾリン、塩酸トラマゾリンおよび塩酸エチルノルエピネフリン；
・抗コリン作動剤、例えばムスカリン受容体（例えば、Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４またはＭ５）アンタゴニスト、例えばアトロピン、ヒヨスチン、グリコピロレート、臭化イプラトロピウム、臭化チオトロピウム、臭化オキシトロピウム、ピレンゼピンおよびテレンゼピン；
・ベータ−アドレナリン受容体アゴニスト（例としてベータ受容体サブタイプ１〜４）、例えばイソプレナリン、サルブタモール、ホルモテロール、サルメテロール、テルブタリン、オルシプレナリン、メシル酸ビトルテロールおよび／またはピルブテロール、例えばそのキラルエナンチオマー；
・クロモン、例えばクロモグリク酸ナトリウムおよび／またはネドクロミルナトリウム；
・グルココルチコイド、例えばフルニソリド、トリアムシノロンアセトニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸フルチカゾン、シクレソニド、および／またはフランカルボン酸モメタゾン；
・核ホルモン受容体、例えばＰＰＡＲをモジュレートする薬剤；
・免疫グロブリン（Ｉｇ）もしくはＩｇ調製物またはＩｇ機能をモジュレートするアンタゴニストもしくは抗体、例えば抗ＩｇＥ（例えばオマリズマブ）；
・他の全身または局所適用の抗炎症剤、例えばサリドマイドもしくはその誘導体、レチノイド、ジトラノールおよび／またはカルシポトリオール；
・アミノサリチル酸およびスルファピリジンの組合せ、例えばスルファサラジン、メサラジン、バルサラジド、およびオルサラジン；ならびに免疫調節剤、例えばチオプリン；およびコルチコステロイド、例えばブデソニド；
・抗菌剤、例えばペニシリン誘導体、テトラサイクリン、マクロライド、ベータ−ラクタム、フルオロキノロン、メトロニダゾールおよび／もしくは吸入アミノグリコシド；ならびに／または抗ウイルス剤、例えばアシクロビル、ファムシクロビル、バラシクロビル、ガンシクロビル、シドフォビル；アマンタジン、リマンタジン；リバビリン；ザナマビル（ｚａｎａｍａｖｉｒ）および／またはオセルタマビル（ｏｓｅｌｔａｍａｖｉｒ）；プロテアーゼインヒビター、例えばインジナビル、ネルフィナビル、リトナビルおよび／またはサキナビル；ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、例えばジダノシン、ラミブジン、スタブジン、ザルシタビン、ジドブジン；非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター、例えばネビラピン、エファビレンツ；
・心血管作動剤、例えば、カルシウムチャネルブロッカー、ベータ−アドレナリン受容体ブロッカー、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター、アンギオテンシン−２受容体アンタゴニスト；脂質低下剤、例えばスタチン、および／またはフィブレート；血液細胞形態のモジュレーター、例えばペントキシフィリン；血栓溶解剤および／または抗凝血剤、例えば血小板凝集インヒビター；
・ＣＮＳ作動剤、例えば抗うつ剤（例えばセルトラリン）、抗パーキンソン薬（例えばデプレニル、Ｌ−ドーパ、ロピニロール、プラミペキソール；ＭＡＯＢインヒビター、例えばセレギンおよびラサギリン；ｃｏｍＰインヒビター、例えばｔａｓｍａｒ；Ａ−２インヒビター、ドーパミン再取り込みインヒビター、ＮＭＤＡアンタゴニスト、ニコチンアゴニスト、ドーパミンアゴニストおよび／またはニューロン一酸化窒素シンターゼのインヒビター）および抗アルツハイマー薬、例えばドネペジル、リバスチグミン、タクリン、ＣＯＸ−２インヒビター、プロペントフィリンまたはメトリホネート；
・急性および慢性疼痛を治療するための薬剤、例えば中枢または末梢作用鎮痛薬、例えばオピオイド類似体または誘導体、カルバマゼピン、フェニトイン、バルプロ酸ナトリウム、アミトリプチリンまたは他の抗うつ剤、パラセタモール、または非ステロイド性抗炎症剤；
・非経口または局所適用（吸入を含む）局所麻酔剤、例えばリグノカインまたはその類似体；
・抗骨粗鬆症剤、例えばホルモン剤、例えばラロキシフェン、またはビホスホネート、例えばアレンドロネート；
・（ｉ）トリプターゼインヒビター；（ｉｉ）血小板活性化因子（ＰＡＦ）アンタゴニスト；（ｉｉｉ）インターロイキン変換酵素（ＩＣＥ）インヒビター；（ｉｖ）ＩＭＰＤＨインヒビター；（ｖ）接着分子インヒビター、例としてＶＬＡ−４アンタゴニスト；（ｖｉ）カテプシン；（ｖｉｉ）キナーゼインヒビター、例えばチロシンキナーゼのインヒビター（例えばＢｔｋ、Ｉｔｋ、Ｊａｋ３ＭＡＰ  インヒビターの例にはゲフィチニブ、メシル酸イマチニブが含まれる）、セリン／スレオニンキナーゼ（例えばＭＡＰキナーゼ、例えばｐ３８、ＪＮＫ、プロテインキナーゼＡ、ＢおよびＣならびにＩＫＫのインヒビター）、または細胞周期調節に関与するキナーゼ（例えばサイクリン依存性キナーゼ）；（ｖｉｉｉ）グルコース−６リン酸デヒドロゲナーゼインヒビター；（ｉｘ）キニン−Ｂ．ｓｕｂ１．−および／またはＢ．ｓｕｂ２．−受容体アンタゴニスト；（ｘ）抗痛風剤、例えばコルヒチン；（ｘｉ）キサンチンオキシダーゼインヒビター、例えばアロプリノール；（ｘｉｉ）尿酸排泄剤、例えばプロベネシド、スルフィンピラゾン、および／またはベンズブロマロン；（ｘｉｉｉ）成長ホルモン分泌促進剤；（ｘｉｖ）トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦβ）；（ｘｖ）血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）；（ｘｖｉ）線維芽細胞成長因子、例えば塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；（ｘｖｉｉ）顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；（ｘｖｉｉｉ）カプサイシンクリーム；（ｘｉｘ）タキキニンＮＫ．ｓｕｂ１．および／またはＮＫ．ｓｕｂ３．受容体アンタゴニスト、例えばＮＫＰ−６０８Ｃ、ＳＢ−２３３４１２（タルネタント）および／またはＤ−４４１８；（ｘｘ）エラスターゼインヒビター、例えばＵＴ−７７および／またはＺＤ−０８９２；（ｘｘｉ）ＴＮＦ−アルファ変換酵素インヒビター（ＴＡＣＥ）；（ｘｘｉｉ）誘導性一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）インヒビターまたは（ｘｘｉｉｉ）ＴＨ２細胞上で発現される化学誘引物質受容体相同分子（例えばＣＲＴＨ２アンタゴニスト）；（ｘｘｉｖ）Ｐ３８のインヒビター（ｘｘｖ）Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）の機能をモジュレートする薬剤および（ｘｘｖｉ）プリン受容体の活性をモジュレートする薬剤、例えばＰ２×７；（ｘｘｖｉｉ）転写因子活性化、例えばＮＦｋＢ、ＡＰＩ、および／またはＳＴＡＴＳのインヒビター。
【０２９５】
インヒビターは特異的であるか、または混合インヒビター、例えば上記の分子（例えば受容体）または分子クラスの２つ以上を標的化するインヒビターであり得る。
【０２９６】
結合メンバーは、化学療法剤または別のチロシンキナーゼインヒビターと会合させて同時投与でまたはイムノコンジュゲートの形態で使用することもできる。前記抗体の断片は、組換え機構または生化学的カップリングおよび次いで上記抗体の特異性を、ＩＬ−４Ｒαが関連する活性に関与する他の分子を認識し得る他の抗体の特異性と会合させることにより得られる二重特異性抗体において使用することもできる。
【０２９７】
炎症性疾患、例えば、関節リウマチ、骨関節炎、喘息、アレルギー性鼻炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アトピー性皮膚炎などの炎症性皮膚疾患、または乾癬の治療について、本発明の抗体を、１つ以上の薬剤、例えば局所適用であるか全身適用であるかにかかわらず非ステロイド性抗炎症剤（以後ＮＳＡＩＤ）、例として非選択的シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−１／ＣＯＸ−２インヒビター、例えばピロキシカム、ジクロフェナク、プロピオン酸、例えばナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンおよびイブプロフェン、フェナメート、例えばメフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アザプロパゾン、ピラゾロン、例えばフェニルブタゾン、サリチレート、例えばアスピリン）；選択的ＣＯＸ−２インヒビター（例えばメロキシカム、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、ルマロコキシブ（ｌｕｍａｒｏｃｏｘｉｂ）、パレコキシブおよびエトリコキシブ）；シクロオキシゲナーゼ阻害一酸化窒素ドナー（ＣＩＮＯＤ）；グルココルチコステロイド（局所、経口、筋肉内、静脈内または関節内経路による投与のいずれでもよい）；メトトレキセート、レフルノミド；ヒドロキシクロロキン、ｄ−ペニシラミン、オーラノフィンまたは他の非経口もしくは経口金製剤；鎮痛薬；ジアセレイン；関節内治療薬、例えばヒアルロン酸誘導体；および栄養補助食品、例えばグルコサミンと組み合わせることができる。
【０２９８】
本発明の抗体は、癌を治療するための既存の治療剤と組み合わせて使用することもできる。組み合わせて使用するために好適な薬剤には、以下のものが含まれる：
（ｉ）内科的腫瘍学において使用される抗増殖性／抗悪性腫瘍薬およびその組合せ、例えばＧｌｅｅｖｅｃ（メシル酸イマチニブ）、アルキル化剤（例えばシスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロランブシル、ブスルファンおよびニトロソウレア）；代謝拮抗剤（例えば葉酸拮抗剤、例えばフルオロピリミジン、例えば５−フルオロウラシルおよびテガフール、ラルチトレキセド、メトトレキセート、シトシンアラビノシド、ヒドロキシウレア、ゲムシタビンおよびパクリタキセル）；抗腫瘍性抗生物質（例えばアントラサイクリン、例えばアドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシンおよびミトラマイシン）；有糸分裂阻害剤（例えばビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびビノレルビンおよびタキソイド、例えばタキソールおよびタキソテール）；およびトポイソメラーゼインヒビター（例えばエピポドフィロトキシン、例えばエトポシドおよびテニポシド、アムサクリン、トポテカンおよびカンプトセシン）；
（ｉｉ）細胞増殖抑制剤、例えば抗エストロゲン剤（例えばタモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェンおよびヨードキシフェン（ｉｏｄｏｘｙｆｅｎｅ））、エストロゲン受容体下方調節因子（例えばフルベストラント）、抗アンドロゲン剤（例えばビカルタミド、フルタミド、ニルタミドおよび酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアンタゴニストまたはＬＨＲＨアゴニスト（例えばゴセレリン、ロイプロレリンおよびブセレリン）、プロゲストゲン（例えば酢酸メゲストロール）、アロマターゼインヒビター（例えばアナストロゾール、レトロゾール、ボラゾール（ｖｏｒａｚｏｌｅ）およびエキセメスタンとして）および５α−レダクターゼのインヒビター、例えばフィナステリド；
（ｉｉｉ）癌細胞侵襲を阻害する薬剤（例えばメタロプロテイナーゼインヒビター、例えばマリマスタットおよびウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター受容体機能のインヒビター）；
（ｉｖ）成長因子機能のインヒビター、例えば、そのようなインヒビターには、成長因子抗体、成長因子受容体抗体（例えば抗ｅｒｂｂ２抗体トラスツズマブおよび抗ｅｒｂｂ１抗体セツキシマブ［Ｃ２２５］）、ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター、チロシンキナーゼインヒビターおよびセリン／スレオニンキナーゼインヒビター、例えば上皮細胞成長因子ファミリーのインヒビター（例えばＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼインヒビター、例えばＮ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ、ＡＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ−７７４）および６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ  １０３３））、例えば血小板由来成長因子ファミリーのインヒビターおよび例えば肝細胞成長因子ファミリーのインヒビターが含まれ；
（ｖ）血管新生阻害剤、例えば血管内皮成長因子の効果を阻害するもの（例えば抗血管内皮細胞成長因子抗体ベバシズマブ、国際公開第９７／２２５９６号パンフレット、国際公開第９７／３００３５号パンフレット、国際公開第９７／３２８５６号パンフレットおよび国際公開第９８／１３３５４号パンフレット（いずれも参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている化合物等の化合物および他の機構により作用する化合物（例えばリノマイド、インテグリンαｖβ３機能のインヒビターおよびアンギオスタチン）；
（ｖｉ）血管損傷剤、例えばコンブレタスタチンＡ４および国際公開第９９／０２１６６号パンフレット、国際公開第００／４０５２９号パンフレット、国際公開第００／４１６６９号パンフレット、国際公開第０１／９２２２４号パンフレット、国際公開第０２／０４４３４号パンフレットおよび国際公開第０２／０８２１３号パンフレット（そのそれぞれは、全体として本明細書に組み込まれる）に開示されている化合物；
（ｖｉｉ）アンチセンス治療薬、例えば上記列挙される標的に指向されるもの、例えばＩＳＩＳ２５０３、抗ｒａｓアンチセンス；
（ｖｉｉｉ）遺伝子治療アプローチ、例として例えば異常遺伝子、例えば異常ｐ５３または異常ＢＲＣＡ１もしくはＢＲＣＡ２を置き換えるアプローチ、ＧＤＥＰＴ（遺伝子指向性酵素プロドラッグ治療）アプローチ、例えばシトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌性ニトロレダクターゼ酵素を使用するアプローチおよび化学療法または放射線療法に対する患者の耐容性を増加させるアプローチ、例えば多剤耐性遺伝子治療；ならびに
（ｉｘ）免疫療法アプローチ、例として例えば患者腫瘍細胞の免疫原性を高めるエクスビボおよびインビボアプローチ、例えばサイトカイン、例えばインターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子による形質移入、Ｔ細胞不応答を減少させるアプローチ、形質移入された免疫細胞、例えばサイトカインにより形質移入された樹状細胞を使用するアプローチ、サイトカインにより形質移入された腫瘍細胞系を使用するアプローチおよび抗イディオタイプ抗体を使用するアプローチ。
【０２９９】
本発明の抗体および上記の追加医薬構成要素の１つ以上を医薬品の製造において使用することができる。医薬品は個体に対する別個または組合せ投与用であり得、したがって結合メンバーおよび追加の構成要素を組合せ調製物または別個の調製物として含み得る。別個の調製物を使用して、別個の連続する投与または同時投与を促進し、異なる経路、例えば経口および非経口投与による構成要素の投与を可能にする。
【０３００】
本発明によれば、提供される組成物は、哺乳動物に投与することができる。投与は「治療有効量」で行われ、それは患者に利益を示すために十分な量であり得る。そのような利益は少なくとも１つの症状の少なくとも改善であり得る。実際の投与量、ならびに投与の割合および時間経過は、治療されるものの性質および重症度、治療対象の具体的な哺乳動物、個々の患者の臨床的状態、疾患の原因、組成物の送達部位、結合メンバーのタイプ、投与方法、投与計画および医師に公知の他の要因に依存する。治療の処方、例えば用量などの決定は一般開業医および他の医師の責任の範囲内であり、症状の重症度および／または治療される疾患の進行に依存し得る。抗体の適切な用量は当技術分野において周知である（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４７：６５９−６６４，１９９１；Ｂａｇｓｈａｗｅ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｎｄ  Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  ４：９１５−９２２，１９９１）。投与される医薬品のタイプに応じて本明細書またはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（２００５）に記載の具体的用量を適宜使用することができる。本発明の抗体の治療有効量または好適な用量は、そのインビトロ活性および動物モデルにおけるインビボ活性を比較することにより決定することができる。マウスおよび他の試験動物における有効投与量をヒトに対して外挿する方法が公知である。厳密な用量は、多数の要因、例として抗体が診断用であるか、予防用であるかまたは治療用であるか、治療すべき領域のサイズおよび位置、抗体の厳密な性質（例えば完全抗体、断片またはダイアボディ）および抗体に付着している任意の検出可能な標識または他の分子の性質に依存する。典型的な抗体用量は、全身適用について１００μｇから１ｇの範囲であり、局所適用について１μｇから１ｍｇの範囲である。最初に高負荷用量を投与し、次いで１回以上の低用量を投与することができる。典型的には、抗体は完全抗体であり、例えばＩｇＧ１アイソタイプである。これは成体患者の単回治療についての用量であり、小児および乳児に関して比例的に調節することができ、分子量に比例して他の抗体フォーマットについて調節することもできる。治療は、医師の裁量において毎日、週２回、毎週または毎月の間隔で繰り返すことができる。治療は、皮下投与について２から４週毎であり得、静脈内投与について４から８週毎であり得る。本発明の一部の実施形態において、治療は定期的であり、投与間の期間は約２週間以上、例えば約３週間以上、約４週間以上、または約月１回である。本発明の他の実施形態において、治療は、外科手術前および／もしくは後に施すことができ、ならびに外科治療の解剖部位に直接投与または適用することができる。
【０３０１】
本発明はまた、安定な水性抗体配合物を産生する方法であって、抗体を、本明細書に記載のヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片に精製し、次いで単離された抗体を安定化配合物中に入れて安定な水性抗体配合物を形成することを含み、得られる安定な水性抗体配合物が、（１）約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体；（２）約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；（３）約０．０１％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および（４）配合緩衝液を含む方法を対象とする。一部の実施形態において、抗体は、トレハロース、アルギニン、またはそれらの組合せの存在下で濃縮される。一部の実施形態において、トレハロース、アルギニン、またはそれらの組合せを添加してタンジェンシャルフロー濾過プロセスを支援する。
【０３０２】
ある実施形態において、本発明は、以下のものを対象とする：
１．安定な抗体配合物であって：
ａ．本明細書に記載のヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片：
（Ｉ）抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）抗体が、ＶＨドメインを含み：
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）抗体が、ＶＬドメインを含み：
ｉ．ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および
ｂ．約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；
ｃ．約０．００２％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および
ｄ．配合緩衝液
を含む抗体配合物。
２．配合緩衝液が、本質的にリン酸塩を有さない、請求項１に記載の抗体配合物。
３．粘度調整剤が、ヒスチジン、アルギニン、リジン、ポリビニルアルコール、ポリアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、グリセリン、ポリエチレングリコール、グルコース、デキストロース、およびスクロースからなる群から選択される、請求項２に記載の抗体配合物。
４．粘度調整剤が、リジン、アルギニン、またはヒスチジンである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体配合物。
５．粘度調整剤が、アルギニンである、請求項４に記載の抗体配合物。
６．粘度調整剤が、約１００ｍＭから約２５０ｍＭの濃度である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体配合物。
７．粘度調整剤が、約１９０ｍＭの濃度である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の抗体配合物。
８．非イオン性界面活性剤が、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、Ｔｗｅｅｎ  ８０、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ノノキシノール−９、ポリオキサマー、ステアリルアルコール、またはモノステアリン酸ソルビタンからなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の抗体配合物。
９．非イオン性界面活性剤が、ポリソルベート８０である、請求項８に記載の抗体配合物。
１０．約０．０２％から約０．０８％の非イオン性界面活性剤を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の抗体配合物。
１１．約０．０４％の非イオン性界面活性剤を含む、請求項１０に記載の抗体配合物。
１２．配合緩衝液が、酢酸緩衝液、ＴＲＩＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、塩酸緩衝液、アルギニン緩衝液、グリシン緩衝液、クエン酸緩衝液、またはＴＥＳ緩衝液である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体配合物。
１３．配合緩衝液が、アルギニン緩衝液である、請求項１２に記載の抗体配合物。
１４．アルギニン緩衝液が、アルギニン塩酸塩を含む、請求項１３に記載の抗体配合物。
１５．アルギニン緩衝液が、ヒスチジンをさらに含む、請求項１４に記載の抗体配合物。
１６．ヒスチジンが、Ｌ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩である、請求項１５に記載の抗体配合物。
１７．アルギニン緩衝液が、約１０ｍＭから約４０ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩を含む、請求項１６に記載の抗体配合物。
１８．アルギニン緩衝液が、約２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩を含む、請求項１７に記載の抗体配合物。
１９．約１００ｍＭから約２００ｍＭのＮａＣｌをさらに含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の抗体配合物。
２０．約５から約８のｐＨを有する、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の抗体配合物。
２１．約６のｐＨを有する、請求項２０に記載の抗体配合物。
２２．抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有する、請求項１に記載の抗体配合物。
２３．アミノ酸置換が、図１５および１６に示される１つ以上の置換を含む、請求項２２に記載の抗体配合物。
２４．アミノ酸置換が、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してＣＤＲ内の以下の残基：
ＨＣＤＲ２中の５３、５７；
ＨＣＤＲ３中の９７、９８、９９、１０１、１０２；
ＬＣＤＲ１中の２７、２７Ａ、２７Ｂ、３１；
ＬＣＤＲ２中の５６；または
ＬＣＤＲ３中の９２、９３、９４、９５、９５Ａ  ９５Ｂ、９５Ｃ、９６、９７
の１つ以上におけるアミノ酸置換を含む、請求項２２に記載の抗体配合物。
２５．Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；または
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換をさらに含む、請求項２２に記載の抗体配合物。
２６．フレームワーク領域中のアミノ酸置換が、図１５および１６に示される１つ以上の置換を含む、請求項２５に記載の抗体配合物。
２７．抗体またはその断片が、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合し、
（Ｉ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
または
（ＩＩ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有する、
請求項１に記載の抗体配合物。
２８．抗体またはその断片が、抗体ＶＨドメインおよび抗体ＶＬドメインを含み、ＶＨドメインが、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３および第１のフレームワークを含み、ＶＬドメインが、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３および第２のフレームワークを含む、請求項２２または２７に記載の抗体配合物。
２９．抗体が、ｓｃＦｖである、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の抗体配合物。
３０．抗体が、抗体定常領域を含む、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の抗体配合物。
３１．抗体分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４分子である、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の抗体配合物。
３２．抗体またはその断片が、ＶＨドメインを含み：
ａ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｂ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；または
ｃ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；または
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の抗体配合物。
３３．フレームワーク領域中のアミノ酸置換が、図１５および１６に示される１つ以上の置換を含む、請求項３２に記載の抗体配合物。
３４．抗体が、ｓｃＦｖである、請求項３２に記載の抗体配合物。
３５．抗体が、抗体定常領域を含む、請求項３２に記載の抗体配合物。
３６．抗体分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４分子である、請求項３２に記載の抗体配合物。
３７．抗体またはその断片が、ＶＬドメインを含み： 
ａ．ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｂ．ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；または
ｃ．ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；または
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の抗体配合物。
３８．抗体分子が、ｓｃＦｖである、請求項３７に記載の抗体配合物。
３９．抗体分子が、抗体定常領域を含む、請求項３７に記載の抗体配合物。
４０．抗体分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４分子である、請求項３７に記載の抗体配合物。
４１．抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み：
ａ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｂ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；または
ｃ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；または
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む、請求項１に記載の抗体配合物。
４２．フレームワーク領域中のアミノ酸置換が、図１５および１６に示される１つ以上の置換を含む、請求項４１に記載の抗体配合物。
４３．抗体分子が、ｓｃＦｖである、請求項４１に記載の抗体配合物。
４４．抗体分子が、抗体定常領域を含む、請求項４１に記載の抗体配合物。
４５．抗体分子が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４分子である、請求項４１に記載の抗体配合物。
４６．前記抗体が、凍結乾燥に供されなかった、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の抗体配合物。
４７．約４０℃における少なくとも１ヵ月間の貯蔵時に安定である、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の抗体配合物。
４８．約４０℃における１ヵ月間の貯蔵後に１０００未満の「≧１０μｍの粒子」／ｍＬを有する、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の抗体配合物。
４９．２３℃において２０ｃＰ未満の粘度を有する、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の抗体配合物。
５０．安定な抗体配合物であって：
ａ．ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片：
（Ｉ）抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）抗体が、ＶＨドメインを含み、
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）抗体が、ＶＬドメインを含み、
ｉｖ．ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖ．ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｖｉ．ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み、
ｉｖ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｖｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および
ｂ．約５０ｍＭから約４００ｍＭのアルギニン；
ｃ．約０．００２％から約０．２％のポリソルベート８０；および
ｄ．約１０から約４０ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩
を有する抗体配合物。
５１．安定な抗体配合物であって：
ａ．ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片：
（Ｉ）抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）抗体が、ＶＨドメインを含み、
ｉｖ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ｖ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｖｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）抗体が、ＶＬドメインを含み、
ｉｖ．ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖ．ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｖｉ．ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み、
ｉｖ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、
ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｖ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、
ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｖｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、
ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および
ｂ．約１９０ｍＭのアルギニン；
ｃ．約０．０４％のポリソルベート８０；および
ｄ．約２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩
を含む抗体配合物。
５２．約２５℃における少なくとも３ヵ月間の貯蔵時に安定である、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の抗体配合物。
５３．約５℃における少なくとも１８ヵ月間の貯蔵時に安定である、請求項１〜５２のいずれか一項に記載の抗体配合物。
５４．約４０℃において少なくとも１ヵ月間貯蔵された抗体が、貯蔵されなかった参照抗体と比較して少なくとも８０％のｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能を保持する、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の抗体配合物。
５５．約５℃において少なくとも６ヵ月間貯蔵された抗体が、貯蔵されなかった参照抗体と比較して少なくとも８０％のｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能を保持する、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の抗体配合物。
５６．約４０℃において少なくとも１ヵ月間貯蔵された抗体が、貯蔵されなかった参照抗体と比較して少なくとも５０％のｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能を保持する、請求項１〜５５のいずれか一項に記載の抗体配合物。
５７．約５℃において少なくとも６ヵ月間貯蔵された抗体が、貯蔵されなかった参照抗体と比較して少なくとも５０％のｈＩＬ−４Ｒαポリペプチドへの結合能を保持する、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の抗体配合物。
５８．注射可能な配合物である、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の抗体配合物。
５９．静脈内、皮下、または筋肉内投与に好適である、請求項１〜５８のいずれか一項に記載の抗体配合物。
６０．請求項１〜５９のいずれか一項に記載の抗体配合物を含有する密封容器。
６１．好適な容器中で請求項１〜５９のいずれか一項に記載の抗体配合物を含むヒトへの非経口投与に好適な医薬単位剤形。
６２．抗体配合物が、静脈内投与、皮下投与、または筋肉内投与される、請求項６１に記載の医薬単位剤形。
６３．好適な容器が、プレフィルドシリンジである、請求項６１または６２に記載の医薬単位剤形。
６４．請求項１〜５９のいずれか一項に記載の配合物、請求項６０に記載の容器、請求項６１または６２に記載の単位剤形、または請求項６３に記載のプレフィルドシリンジを含むキット。
６５．安定な水性抗体配合物を産生する方法であって：
ａ．抗体を、ヒトインターロイキン−４受容体アルファ（ｈＩＬ−４Ｒα）に特異的に結合する約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体またはその断片に精製すること：
（Ｉ）抗体が、ＣＤＲのセット：ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含み、ＣＤＲのセットが、以下のＣＤＲの参照セット：
ＨＣＤＲ１が、配列番号１９３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号１９４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号１９５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号１９８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号１９９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２００のアミノ酸配列を有するもの
からの１０以下のアミノ酸置換を有し；
（ＩＩ）
ＨＣＤＲ１が、配列番号３６３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号３６４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号３６５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号３６８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号３６９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号３７０のアミノ酸配列を有し；
もしくは
ＨＣＤＲ１が、配列番号２３３のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ２が、配列番号２３４のアミノ酸配列を有し；
ＨＣＤＲ３が、配列番号２３５のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ１が、配列番号２３８のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ２が、配列番号２３９のアミノ酸配列を有し；
ＬＣＤＲ３が、配列番号２４０のアミノ酸配列を有し；
（ＩＩＩ）抗体が、ＶＨドメインを含み、
ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し；もしくは
ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；もしくは
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
（ＩＶ）抗体が、ＶＬドメインを含み、
ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含み；
または
（Ｖ）抗体またはその断片が、ＶＨおよびＶＬドメインを含み、
ｉ．ＶＨドメインが、配列番号１９２のアミノ酸配列を有し、
ＶＬドメインが、配列番号１９７のアミノ酸配列を有し；
ｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号３６２のアミノ酸配列を有し、
ＶＬドメインが、配列番号３６７のアミノ酸配列を有し；もしくは
ｉｉｉ．ＶＨドメインが、配列番号２３２のアミノ酸配列を有し、
ＶＬドメインが、配列番号２３７のアミノ酸配列を有し；
ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、Ｋａｂａｔの標準ナンバリングを使用してフレームワーク領域内の以下の残基：
ＨＦＷ１中の１１、１２；
ＨＦＷ２中の３７、４８；
ＨＦＷ３中の６８、８４、８５；
ＨＦＷ４中の１０５、１０８、１１３；
ＬＦＷ１中の１、２、３、９；
ＬＦＷ２中の３８、４２；もしくは
ＬＦＷ３中の５８、６５、６６、７０、７４、８５、８７
における１つ以上のアミノ酸置換を含む；
または（Ｉ）〜（Ｖ）の任意の組合せ；および
ｂ．単離された抗体を安定化配合物中に入れて安定な水性抗体配合物を形成することを含み、得られる安定な水性抗体配合物が、
ｉ．約１００ｍｇ／ｍＬから約２００ｍｇ／ｍＬの抗体；
ｉｉ．約５０ｍＭから約４００ｍＭの粘度調整剤；
ｉｉｉ．約０．００２％から約０．２％の非イオン性界面活性剤；および
ｉｖ．配合緩衝液
を含む方法。
６６．抗体を、トレハロース、アルギニン、またはそれら組合せの存在下で濃縮させる、請求項６５に記載の方法。
６７．対象における肺疾患もしくは障害または慢性炎症性皮膚疾患もしくは障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項１〜６０のいずれか一項に記載の抗体配合物を投与することを含む方法。
６８．疾患または障害が、喘息、ＣＯＰＤ（例として、慢性気管支炎、末梢気道疾患および肺気腫）、炎症性腸疾患、線維性病態（例として、全身性硬化症、肺線維症、寄生虫誘導肝線維症、および嚢胞性線維症、アレルギー（例として、例えば、アトピー性皮膚炎および食物アレルギー）、移植片拒絶を予防するための移植療法、ならびに遅延型過敏症または接触過敏反応の抑制（アレルギー免疫療法に対するアジュバントとして、およびワクチンアジュバントとして）からなる群から選択される、請求項６７に記載の方法。
６９．肺疾患または障害が、喘息、ＣＯＰＤ、好酸球性喘息、好酸球性および好中球性喘息の併発、アスピリン感受性喘息、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、急性および慢性好酸球性気管支炎、急性および慢性好酸球性肺炎、チャーグ・ストラウス症候群、好酸球増加症候群、薬物、刺激物質および放射線誘導肺好酸球増加症、感染誘導肺好酸球増加症（真菌、結核、寄生虫）、自己免疫関連肺好酸球増加症、好酸球性食道炎、クローン病、またはそれらの組合せである、請求項６７に記載の方法。
７０．肺疾患または障害が、喘息である、請求項６９に記載の方法。
７１．慢性炎症性皮膚障害が、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、湿疹または乾癬からなる群から選択される、請求項６７に記載の方法。
７２．炎症性皮膚障害が、アトピー性皮膚炎である、請求項７１に記載の方法。
【０３０３】
均等物
当業者は、ただ定型的な実験を使用して本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識し、または確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲により包含されるものとする。
【０３０４】
本明細書に挙げた全ての刊行物、特許および特許出願は、それぞれの個々の刊行物、特許または特許出願が参照により本明細書に組み込まれることが個別具体的に示される同程度に本明細書への参照により本明細書に取り込まれる。
【実施例】
【０３０５】
本発明は、目下、以下の実施例を参照して記載される。これらの実施例は説明にすぎず、本発明は、それらの実施例に限定されるものと解釈すべきでなく、本明細書に提供される教示の結果として明らかになる任意および全てのバリエーションを包含すると解釈すべきである。
【０３０６】
実施例１
材料および方法
材料
全ての使用材料は、ＵＳＰまたは三極薬局方適合（Ｍｕｌｔｉｃｏｍｐｅｎｄｉａｌ）グレードのものであった。全ての溶液および緩衝液は、ＵＳＰまたはＨＰＬＣ水を使用して調製し、さらなる使用前に０．２μｍＰＶＤＦフィルタ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に通して濾過した。精製抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体は、表１にまとめるとおり精製した。安定性試験のための精製抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体試料は、バイオセーフティキャビネットフード（ＢＳＣ）において無菌条件下で精製した。バルク材料は、２〜８℃において貯蔵した。
【０３０７】
【表１】
2017527560.tif 000003
【０３０８】
タンパク質濃度測定
抗ｈＩＬ−４Ｒαタンパク質濃度を、現行の配合科学ガイドラインに従ってＡｇｉｌｅｎｔ  ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計より２８０ｎｍにおける吸光度の計測により測定した。希釈物を、ＰＢＳまたは配合緩衝液により作製した。全ての試験について１．７７（ｍｇ／ｍＬ）−１ｃｍ−１の吸光係数を使用してタンパク質濃度を計算した。この数字は、その分子について決定された理論吸光係数に対応する。材料が制約される場合、Ｎａｎｏｄｒｏｐ  ２０００（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して２８０ｎｍにおける吸光度を計測した。
【０３０９】
サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）の純度決定
ＳＥＣ分析を、現行の配合科学ガイドラインに従ってＴＳＫ−Ｇｅｌ  Ｇ３０００を有するＡｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣシステムにより実施した。注入容量は、１０ｍｇ／ｍＬ未満であるが、２．５ｍｇ／ｍＬよりも大きい濃度について２５０μｇの一定の質量を維持するように調整した。ＨＰＳＥＣに使用した希釈剤は、リン酸緩衝生理食塩水（Ｓｉｇｍａ）または配合緩衝液であった。
【０３１０】
可視外観
試料の目視調査は、試料をそれらのそれぞれの容器中で、欧州薬局方（セクション２．９．２０）から適合された手順に従って粒子スタンダードを使用して粒子について試験することにより実施した。
【０３１１】
非可視粒子分析
非可視粒子の分析は、現行の配合科学ガイドラインを使用して光遮蔽フローマイクロスコピー（Ｂｒｉｇｈｔｗｅｌｌ  Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ，ＭＦＩ）を使用して実施した。
【０３１２】
オスモル濃度
オスモル濃度は、Ｇｏｎｏｔｅｃ  Ｏｓｍｏｍａｔ  ０３０−Ｄ浸透計の凝固点降下浸透計により計測した。系の好適性は、参照標準をランすることにより評価した。
【０３１３】
粘度評価
種々の濃度における抗ｈＩＬ−４Ｒα配合物の粘度は、コーンプレートアクセサリ（４０ｍｍ）を有するＡｎｔｏｎ  Ｐａａｒ  ＭＣＲ３０１粘度計を使用して計測した。粘度は、１秒当たり１０００の剪断速度の高剪断限界において報告した。
【０３１４】
配合物安定性試験
異なる賦形剤と配合された抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体を、透明３ｃｃ、１３ｍｍガラスバイアル中に充填した。スクリーニングの加速のため、試料を、４０℃／７５％のＲＨにおける安定性で入れた。リード配合物のより長期の安定性試験のため、加速４０℃条件に加え、試験を２５℃／６０％のＲＨおよび５℃においても実施した。試料をＳＥＣ  ＨＰＬＣおよびＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒにより分析し、バイアルを粒子について目視調査した。さらに、選択された時点を、効力、オスモル濃度、ｐＨ、およびマイクロフローイメージング（ＭＦＩ）について適宜分析した。
【０３１５】
示差走査熱量測定を使用する熱安定性
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）実験は、ＶＰ−ＤＳＣ超高感度示差走査熱量計（Ｍｉｃｒｏｃａｌ，Ｎｏｒｔｈａｍｐｔｏｎ，ＭＡ）により５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度において９６ウェルプレートを使用して実施した。試料を、１時間当たり９５℃の速度において２５〜１００℃に加熱した。正規化熱容量（Ｃｐ）データを緩衝液ベースライン補正した。
【０３１６】
実施例２
安定性５０ｍｇ／ｍｌスクリーニング評価
複数の抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体配合物の安定性を評価し、安定性の観点から類似することを見出した。４０℃のストレス温度における構造（熱）安定性および凝集速度が、本試験において調査されるメインパラメータであった。
【０３１７】
表２は、およそ５０ｍｇ／ｍＬの濃度における抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体配合物の４０℃における構造安定性（Ｔｍ１）および凝集速度／月に対する緩衝液タイプ、糖タイプ、糖レベルおよびアルギニン−ＨＣＬレベルの影響に関する調査をまとめる。
【０３１８】
【表２】
2017527560.tif 000004
【０３１９】
表２は、全ての抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体配合物が、４０℃における１ヵ月のインキュベーション後に同等の構造安定性（Ｔｍ１）および凝集速度を有することを示す。試料２および３は、アルギニン−ＨＣＬの添加が構造安定性にも凝集速度にも影響しないことを示す。試料４および５は、アルギニン−ＨＣＬの濃度の増加が、４０℃における構造安定性も凝集速度も改善しないことを示す。
【０３２０】
実施例３
粘度スクリーニング評価
複数の配合物中の１０９．８ｍｇ／ｍｌ±５．８ｍｇ／ｍｌの濃度における抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体の粘度を評価した。図１は、ヒスチジンベース緩衝配合物およびスクロース含有配合物中の抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体の粘度が、２３℃において＞５０ｃＰであることを示す。このデータは、イオン性賦形剤が、高濃度における抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体の粘度を皮下送達に適切なレベルに低減させるために必要であることを示す。予備データは、このレベルが２３℃において＜２０ｃＰであることを示唆する。
【０３２１】
実施例４
安定性高濃度スクリーニング評価
抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体の安定性および粘度を、ヒスチジン／アルギニン−ＨＣＬ配合物中で狭いｐＨ範囲にわたり評価した。この実験は、製造限界を考慮するための産物規格中にカバーされるｐＨ範囲にわたり安定性および粘度の堅牢性を示すように設計した。表３は、安定性および粘度が、許容可能な限界内であり、ｐＨ６．０±０．５の範囲にわたり堅牢であることを示す。
【０３２２】
純度損失は、２〜８℃における１０ヵ月データに基づき、外挿してＨＰＳＥＣ（高速サイズ排除クロマトグラフィー）により計測して純度の年間損失を計算した。
【０３２３】
【表３】
2017527560.tif 000005
【０３２４】
実施例５
撹拌に対するＩＬ４Ｒ抗体の感受性
材料
抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体は、２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣＬ、１９０ｍＭのアルギニン−ＨＣＬ、ｐＨ６中の１４０ｍｇ／ｍｌで濃度において配合した。使用ポリソルベート８０（植物由来）は、三極薬局方適合Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒブランドであった。水は、インハウスＵＳＰ水系から得た。全て他の使用試薬は、薬局方収載グレードであった。
【０３２５】
試料調製
抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体試料を０．２２ｕＭのＰＶＤＦシリンジフィルタに通して濾過し、ポリプロピレンチューブ中に分注した。ポリソルベート８０を、それぞれの試料に表４に示される変動濃度において添加した。ポリソルベート８０を含有しない対照試料も調製した（試料１〜３、表４）。それぞれの試料を、０．２２μＭのシリンジフィルタに通して再度濾過し、３ｃｃガラスバイアル中に無菌的に充填し、栓をし、アルミニウムオーバーシールにより密封した。バイアルを６００ｒｐｍにおける撹拌に、オービタルシェーカー（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ）を使用して４時間供し、または実験の継続時間にわたりベンチ上で直立のままにした。撹拌時間の終了時、試料を可溶性凝集物含有率について高速サイズ排除クロマトグラフィーにより、非可視粒子特徴決定についてフローイメージングにより分析し、大きな粒子または繊維の存在について目視調査した。
【０３２６】
【表４】
2017527560.tif 000006
【０３２７】
純度および可溶性凝集物
高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）は、ＴＳＫ−ＧＥＬ  Ｇ３０００ＳＷＸＬカラムおよびＳＷガードカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ））を２８０ｎｍにおけるＵＶ検出で使用して実施した。０．１Ｍのリン酸ナトリウム、０．１Ｍの硫酸ナトリウム、および０．０５％（ｗ／ｖ）のアジ化ナトリウムを含有するｐＨ６．８移動相を使用する２０分間の１．０ｍＬ／分の流速を使用して試料をアッセイした。約２５０μｇのタンパク質を注入した。可溶性凝集物、モノマー、および断片の溶出は、およそ６から８分、８．６分、および９から１０分においてそれぞれ生じた。
【０３２８】
目視調査
試料中の粒子レベルを、一連のインハウス硫酸バリウム可視粒子スタンダードに対して比較した。３ｃｃガラスバイアル中の試料を、暗および明バックグラウンドを有するライトボックスを使用して粒子状および繊維状物質の存在について調査した。試料を、可視粒子を有さないもの、可視粒子をほとんど有さないものまたは多くの粒子に割り当てた。
【０３２９】
非可視粒子分析
非可視粒子分析は、現行の配合科学ガイドラインを使用するフローマイクロスコピー（Ｂｒｉｇｈｔｗｅｌｌ  Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ，ＭＦＩ）を使用して実施した。試料を無希釈で分析し、フローセルをそれぞれの試料間で超純水により完全に清浄した。
【０３３０】
結果および考察
抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体は、ポリソルベート８０の不存在下で撹拌誘導凝集に対して極めて感受性であることが見出された。表５は、この実験からのデータのまとめである。表５の試料２および３は、ポリソルベート８０の不存在下の撹拌が可溶性凝集物パーセントを２．５倍だけ増加させ、可視粒子および繊維の数の大きな増加を引き起こすことを示す；図２および図３。試料３は、試料内の高レベルの沈殿物の存在に起因してマイクロフローイメージングにより分析することができなかった。これらの粒子は、１００μｍの最大直径を有するフローセルを遮断し得た。表５の試料４〜１０は、＞０．００５％のＰＳ８０の存在が、撹拌時の大きな可視粒子の形成から抗体を保護したことを示す；図４。＞０．０２％のＰＳ８０（試料６〜１０）のレベルにおいて、撹拌ありの試料は、撹拌なしの試料と同等レベルの非可視粒子、可溶性凝集物および可視外観を有する（試料２）。これらのデータは、最大レベルの＞０．０２％のＰＳ８０が、撹拌誘導凝集から抗体を完全に保護するために抗ｈＩＬ−４Ｒα配合物中で要求されることを示す。
【０３３１】
【表５】
2017527560.tif 000007
【０３３２】
実施例６
凍結融解に対するｈＩＬ４Ｒ抗体感受性
材料
抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体を、２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣＬ、１９０ｍＭのアルギニン−ＨＣＬ、ｐＨ６中で１４０ｍｇ／ｍｌの濃度において配合した。使用したポリソルベート８０（植物由来）は、三極薬局方適合Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒブランドであった。水は、インハウスＵＳＰ水系から得た。全ての他の使用試薬は、薬局方収載グレードのものであった。
【０３３３】
試料調製
抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体試料を０．２２ｕＭのＰＶＤＦシリンジフィルタに通して濾過し、ポリプロピレンチューブ中に分注した。ポリソルベート８０をそれぞれの試料に表６に示される変動濃度において添加した。ポリソルベート８０を含有しない対照試料も調製した（試料１〜３、表６）。それぞれの試料は、０．２２μＭのシリンジフィルタに通して再度濾過し、３ｃｃガラスバイアル中に無菌的に充填し、栓をし、アルミニウムオーバーシールにより密封した。バイアルを５回の緩慢凍結融解（ＦＴ）サイクリング（１サイクルは、−４０℃において１時間、続いて室温において１時間からなる）に供し、または実験の継続時間にわたりベンチ上で直立のままにした。凍結融解サイクリングの終了時、試料を可溶性凝集物含有率について高速サイズ排除クロマトグラフィーにより、非可視粒子特性決定についてフローイメージングにより分析し、大きな粒子または繊維の存在について目視調査した。
【０３３４】
【表６】
2017527560.tif 000008
【０３３５】
純度および可溶性凝集物
高速サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）を、ＴＳＫ−ＧＥＬ  Ｇ３０００ＳＷＸＬカラムおよびＳＷガードカラム（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を２８０ｎｍにおけるＵＶ検出で使用して実施した。０．１Ｍのリン酸ナトリウム、０．１Ｍの硫酸ナトリウム、および０．０５％（ｗ／ｖ）のアジ化ナトリウムを含有するｐＨ６．８移動相を使用する２０分間の１．０ｍＬ／分の流速を使用して試料をアッセイした。約２５０μｇのタンパク質を注入した。可溶性凝集物、モノマー、および断片の溶出は、およそ６から８分、８．６分、および９から１０分においてそれぞれ生じた。
【０３３６】
目視調査
試料中の粒子レベルを、一連のインハウス硫酸バリウム可視粒子スタンダードに対して比較した。３ｃｃガラスバイアル中の試料を、暗および明バックグラウンドを有するライトボックスを使用して粒子状および繊維状物質の存在について調査した。試料を、可視粒子を有さないもの、可視粒子をほとんど有さないものまたは多くの粒子に割り当てた。
【０３３７】
非可視粒子分析
非可視粒子分析は、現行の配合科学ガイドラインを使用するフローマイクロスコピー（Ｂｒｉｇｈｔｗｅｌｌ  Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ，ＭＦＩ）を使用して実施した。試料を無希釈で分析し、フローセルをそれぞれの試料間で超純水により完全に清浄した。
【０３３８】
結果および考察
抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体は、ポリソルベート８０の不存在下で凍結融解誘導凝集に対して極めて感受性であることが見出された。表７は、この実験からのデータのまとめである。表７の試料２および３は、ポリソルベート８０の不存在下の凍結融解サイクリングが可視粒子および繊維の数の大きな増加を引き起こすことを示す；図５および図６。しかしながら、非可視粒子カウント数は、ポリソルベート８０（試料２および３）の不存在下で凍結融解サイクリングにより減少した。これは、試料３中の高レベルの大きな可視粒子の存在に起因し得た。これは、１００μｍの最大直径を有するフローセルを遮断し、イメージングに利用可能なより少数の粒子をもたらし得た。表７の試料４〜１０は、＞０．００５％のＰＳ８０の存在が、凍結融解サイクリングによる大きな可視粒子の形成から抗体を保護したことを示す；図７。可溶性凝集物形成（ＨＰＳＥＣ）に対する凍結融解サイクリングの影響は、この実験において見られなかった。
【０３３９】
【表７】
2017527560.tif 000009
【０３４０】
実施例７
ｈＩＬ４抗体構造安定性および凝集評価
抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体を、２５ｍＭのヒスチジン／ヒスチジン−ＨＣＬ、１９０ｍＭのアルギニン−ＨＣＬ、０．０２％のＰＳ８０、変動ｐＨ（５．５〜６．５）中で１４９±４．６ｍｇ／ｍｌにおいて調製した。薬剤を、３ｃｃガラスバイアル中に無菌的に充填し、栓をし、アルミニウムオーバーシールにより密封した。スクリーニングの加速のため、試料を、４０℃における安定性で入れた。より長期の安定性試験のため、加速４０℃の条件に加え、試験を５℃においても実施した。試料をＳＥＣ  ＨＰＬＣ、Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒにより分析し、バイアルを粒子について目視調査した。さらに、初期時点をオスモル濃度、ｐＨ、ＨＩＡＣ、およびＤＳＣについて分析した。
【０３４１】
図７は、ｐＨの増加に伴う構造安定性（Ｔｍ１）の増加を示す（ｐＨ６．５＞ｐＨ６＞ｐＨ５．５）。
【０３４２】
図８は、４０℃において貯蔵された試料のＨＰＳＥＣ分析間の総ピーク面積のＵＶ吸光度の時間依存損失を示す。図９に示されるとおり、総ピーク面積のこの損失は、試料を２〜８℃または２５℃において１ヵ月間貯蔵した場合、明らかでない。総ピーク面積のＵＶ吸光度は、分析される全タンパク質の濃度の間接的尺度である。可溶性タンパク質の損失は、一般に、直接分析されない不溶性凝集物に起因すると想定される。
【０３４３】
図１０は、それぞれの配合物のＴｍ１に対する４０℃における８週間後の総面積吸光度低減パーセントのグラフを示す。これらのデータは、４０℃における経時的な不溶性凝集物形成が分子の構造安定性に依存的であることを示す。
【０３４４】
実施例８
ｈＩＬ４Ｒ抗体不溶性凝集物形成に対する希釈剤の影響の試験
予備データは、４０℃において１ヵ月間貯蔵された試料が、分析前またはその間の不溶性凝集物の形成に潜在的に起因する高速サイズ排除クロマトグラフィーによる分析の間の全ピーク吸光度の時間依存的損失を示すことを示した。試料を、リン酸緩衝生理食塩水中に希釈し、ＨＰＳＥＣ分析前に０．２μＭのフィルタに通して濾過する。以下の試験は、非可視粒子形成に対する希釈の影響を評価することであった。
【０３４５】
２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物、１９０ｍＭのアルギニン塩酸塩、０．０４％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、ｐＨ６．０中で１４８．２ｍｇ／ｍＬにおいて抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体を含有する抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体配合物を作製した。
【０３４６】
薬剤を３ｃｃガラスバイアル中に無菌的に充填し、栓をし、アルミニウムオーバーシールにより密封した。試料を、２〜８℃、２５℃、３５℃または４０℃において１ヵ月間貯蔵した。試料を、配合緩衝液（２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物、１９０ｍＭのアルギニン塩酸塩、ｐＨ６）リン酸緩衝生理食塩水中のいずれかで１／１６に希釈した。さらに、４０℃において貯蔵された試料も、２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物、１９０ｍＭのアルギニン塩酸塩、ｐＨ７．４、２５ｍＭのＬ−ヒスチジン／Ｌ−ヒスチジン塩酸塩一水和物、１４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４または１０ｍＭのリン酸塩、１９０ｍＭのアルギニン、ｐＨ７．４中に１／１６に希釈した。
【０３４７】
それぞれの温度条件からの希釈試料および未希釈試料を、マイクロフローイメージングにより非可視粒子数について分析した。
【０３４８】
非可視粒子分析
非可視粒子分析は、現行の配合科学ガイドラインを使用するフローマイクロスコピー（Ｂｒｉｇｈｔｗｅｌｌ  Ｍｉｃｒｏｆｌｏｗ  Ｉｍａｇｅｒ，ＭＦＩ）を使用して実施した。試料を無希釈で、またはリン酸緩衝生理食塩水もしくは配合緩衝液中への希釈後に分析した。フローセルをそれぞれの試料間で超純水により完全に清浄した。
【０３４９】
結果および考察
図１１は、適宜、希釈係数を考慮する絶対≧１０μｍの粒子数を示す。４０℃において４週間インキュベートされた試料は、リン酸緩衝生理食塩水および配合緩衝液中の両方の希釈後に高レベルの≧１０μｍの粒子を形成する。リン酸緩衝生理食塩水中への抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体の希釈は、配合緩衝液中への抗体の希釈よりも大きな非可視粒子形成に対する影響を有する。熱ストレスを与えた抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体における非可視粒子形成に対するｐＨ、イオン強度およびイオンタイプの影響も調査した。図１２は、熱ストレスを与えた抗ｈＩＬ−４Ｒα抗体における非可視粒子形成が、リン酸イオンの存在により悪化することを示す。
【０３５０】
上記実施例は、本発明の種々の態様および本発明の方法の実施を説明する。これらの実施例は、本発明の多くの異なる実施形態の排他的記載を提供するものではない。したがって、本発明をより明確な理解の目的のために説明および例としていくぶん詳細に記載してきたが、当業者は、多くの変化および改変を付属の特許請求の範囲の趣旨からも範囲からも逸脱せずに作製することができることを容易に実現する。
【０３５１】
本明細書に挙げた全ての刊行物、特許および特許出願は、それぞれの個々の刊行物、特許または特許出願が参照により本明細書に組み込まれることが個別具体的に示される同程度に本明細書への参照により本明細書に取り込まれる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１４Ｃ】
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【図１４Ｄ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１５Ｄ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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