(57)【要約】本発明は、新規な低置換度ポリミキシン及びその組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）によって表されるポリミキシンであって、
【化１】
2017523953.tif 000016
式中、
Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基、又は
【化２】
2017523953.tif 000017
であり、
Ｒ５は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、又は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、
Ｒ６は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、又は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−（ＣＨ２）ｘＣＨ２ＮＨ２又は−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、
ｘは０又は１であり、
Ｍはカチオンであり、かつ
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つのみが−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である、ポリミキシン。
【請求項２】
Ｒ１が脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基である、請求項１に記載のポリミキシン。
【請求項３】
Ｒ１がヘプタノイル、６−メチルヘプタノイル、オクタノイル、（Ｓ）−６−メチルオクタノイル、３−ヒドロキシ−６−メチルオクタノイル、７−メチルオクタノイル、ノナノイル、８−メチルノナノイル又はデカノイルである、請求項２に記載のポリミキシン。
【請求項４】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々が−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、Ｍがカチオンであり、かつＲ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つのみが−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリミキシン。
【請求項５】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々が−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、Ｍが薬学的に許容される一価のカチオンであり、かつＲ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つのみが−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリミキシン。
【請求項６】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々が−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、ＭがＮａ＋であり、かつＲ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つのみが−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である、請求項１〜３のいずれか一項に記載のポリミキシン。
【請求項７】
ＨＰＬＣで測定して５０％を超える請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリミキシンを含む組成物。
【請求項８】
ＨＰＬＣで測定して８０％を超える請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリミキシンを含む組成物。
【請求項９】
ＨＰＬＣで測定して９０％を超える請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリミキシンを含む組成物。
【請求項１０】
グラム陰性菌に起因する感染症の治療に用いるための、請求項７〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な低置換度ポリミキシン及びその組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリミキシンは、バチルス・ポリミクサ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｏｌｙｍｙｘａ）によって産生される抗生物質として１９４７年に発見された。ポリミキシンは、ヘプタペプチド環及びＮ−末端アミド結合脂肪酸を含む抗菌性のデカペプチドである。今日、ポリミキシンＢ及びポリミキシンＥ（コリスチン）という２種類の市販ポリミキシン混合物が臨床で使用されている。どちらの混合物も、Ｇｏｅｖａｅｒｔｓらによって非特許文献１に説明されているような、及びＶａｎ  ｄｅｎ  Ｂｏｓｓｃｈｅらによって非特許文献２に説明されているような種々の成分を含む。欧州薬局方によれば、コリスチンは７７％を超えるポリミキシンＥ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ１−ｉ及びＥ１−７ＭＯＡを含む必要があり、但し副成分のポリミキシンＥ３、Ｅ１−ｉ及びＥ１−７ＭＯＡの各々は１０％未満でなければならない。
【０００３】
コリスチンに付随する毒性のため、上記混合物は１９５０年代にスルホメチル化によって改善された。スルホメチル化されたコリスチンは、コリスチメタン酸ナトリウム（Ｃｏｌｉｓｔｉｍｅｔｈａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ：ＣＭＳ）と呼ばれ、コリスチンのプロドラッグであると考えられてきた。ＣＭＳは、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、アシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、及び他のグラム陰性病原体等の多剤耐性生物に対する最終選択治療として今でも臨床で使用されている。長年にわたり、ＣＭＳの溶液はまた、緑膿菌に起因するコロニー形成や感染症に対処するため、嚢胞性線維症（ＣＦ）の患者の肺に噴霧により投与されてきた。
【０００４】
今日、抗生物質耐性病原体に起因する感染症の問題が増してきており、その結果、コリスチン等の製品の使用が増加している。
市販のＣＭＳ製品が様々なポリミキシンの誘導体の複雑な混合物を含有するという事実は、いくつかの不幸な結果を招く。その最たるものは、市販品の治療効果に関係する。ＣＭＳはひとたび体内に注入又は吸入されると、抗生物質のリザーバとみなされ得るため、腎クリアランスや代謝クリアランスの前に活性化化合物の治療レベルが達成されることが重要である。したがって、２つのスルホメチル置換基のみを有するスルホメチル化ポリミキシンは、分子量及び電荷に関して明確な製品をもたらす。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｊ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ａ．２００２  Ｎｏｖ  ８；９７６（１−２）：６５−７８
【非特許文献２】Ｔａｌａｎｔａ  ２０１１  Ｆｅｂ  １５；８３（５）：１５２１−９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そのため、本発明の目的は、抗菌薬として有用な、改善されたポリミキシン化合物を提供すること、及び、従来技術の製品の不都合な点を克服するか、又は少なくとも軽減することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ポリミキシンのポリペプチド部分におけるＤＡＢ残基又はＤＡＰ残基のγ−アミノ基に結合した合計２つのスルホメチル基を有するポリミキシンに関する。これらの化合物及びその組成物は細菌感染症の治療に用いることができる。
【０００８】
一態様において、本発明は、ポリミキシンＥ及びポリミキシンＢよりも水溶性が高い新規なポリミキシンを提供する。更に別の態様において、本発明は市販ＣＭＳよりも水溶液中での安定性が高いスルホメチル化ポリミキシンを提供する。更に別の態様において、本発明は市販のＣＭＳよりも均質なスルホメチル化ポリミキシンの混合物を提供する。最後に、本化合物、又は混合物あるいはそれらの組成物は、従来技術の、これまでのところ明確に定義されていないポリミキシン組成物よりも、改善されたポリミキシン投薬及び療法を提供する。
【０００９】
したがって、本発明は式（Ｉ）によって表される新規なポリミキシンを提供し、
【００１０】
【化１】
2017523953.tif 000002
【００１１】
式中、
Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基、又は
【００１２】
【化２】
2017523953.tif 000003
【００１３】
であり、
Ｒ５は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、又は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、
Ｒ６は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、又は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−（ＣＨ２）ｘＣＨ２ＮＨ２又は−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、
ｘは０又は１であり、
Ｍはカチオンであり、かつ
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つが−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００１４】
本発明の一実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、２つのスルホメチル基は同じγ−アミノ基に結合している。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００１５】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００１６】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ４は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００１７】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ７は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００１８】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ８は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００１９】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２又はＣＨ２Ｃ６Ｈ５のいずれかであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ２は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００２０】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２又はＣＨ２Ｃ６Ｈ５のいずれかであり、
Ｒ２、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ３は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００２１】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２又はＣＨ２Ｃ６Ｈ５のいずれかであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ４は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００２２】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２又はＣＨ２Ｃ６Ｈ５のいずれかであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ７は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００２３】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）で表されるポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５及びＲ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２又はＣＨ２Ｃ６Ｈ５のいずれかであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、かつ
Ｒ８は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００２４】
ここで、Ｍは一価のカチオンである。
本発明の上記実施形態の別の態様によれば、Ｒ１は６−メチルオクタノイルである。
本発明の上記実施形態の別の態様によれば、Ｒ１は６−メチル−ヘプタノイルである。
【００２５】
本発明の更に別の実施形態によれば、式（Ｉ）のポリミキシンが提供され、式中、Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であるか、又は
【００２６】
【化３】
2017523953.tif 000004
【００２７】
であり、
Ｒ５は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、又は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、
Ｒ６は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、又は−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＮＨ２又は−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、
Ｍはカチオンであり、かつ
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つが−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００２８】
本発明は更に、本発明による１種又は複数種のポリミキシンを含む医薬組成物を提供する。
本発明による組成物は、１種又は複数種の薬学的に許容される賦形剤を更に含んでもよい。
【００２９】
一実施形態によれば、本発明による医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える本発明によるポリミキシンを含む。
更に別の実施形態によれば、本発明による医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含む。
【００３０】
更に別の実施形態によれば、本発明による医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して８０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含む。
更に別の実施形態によれば、本発明による医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して９０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含む。
【００３１】
更に別の実施形態によれば、本組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える図１〜５の式で表される１種又は複数種のポリミキシンを含む。
更に別の実施形態によれば、本組成物は、ＨＰＬＣで測定して８０％を超える図１〜５の式で表される１種又は複数種のポリミキシンを含む。
【００３２】
更に別の実施形態によれば、本組成物は、ＨＰＬＣで測定して９０％を超える図１〜５の式で表される１種又は複数種のポリミキシンを含む。
第１実施形態は、式（Ｉ）で表されるポリミキシンを対象とし、
【００３３】
【化４】
2017523953.tif 000005
【００３４】
式中、
Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基、又は
【００３５】
【化５】
2017523953.tif 000006
【００３６】
であり、
Ｒ５は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、又は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、
Ｒ６は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３又は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−（ＣＨ２）ｘＣＨ２ＮＨ２又は−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、
ｘは０又は１であり、
Ｍはカチオンであり、かつ
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つが−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００３７】
第１実施形態の第１の態様において、Ｒ１はヘプタノイル、メチルヘプタノイル、オクタノイル、メチルオクタノイル、ノナノイル、メチルノナノイル又はデカノイルである。
第１実施形態の第２の態様において、Ｒ１はヘプタノイル、６−メチルヘプタノイル、オクタノイル、（Ｓ）−６−メチルオクタノイル、７−メチルオクタノイル、３−ヒドロキシ−６−メチルオクタノイル、ノナノイル、（８−メチルノナノイル又はデカノイルである。
【００３８】
第１実施形態の第３の態様において、上述したポリミキシンは、ＭがＮａ＋、Ｋ＋、１／２Ｍｇ２＋、ＨｍＮ（Ｃ１−４アルキル）ｎ＋、及びそれらの組合せからなる群から選択され、ここで、ｍは０〜４であり、ｎは０〜４であり、但しｍ＋ｎ＝４であることを特徴とする。
【００３９】
第１実施形態の第４の態様において、ｘは１であり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋又はＫ＋である。
第１実施形態の第５の態様において、ｘは１であり、ＭはＮａ＋又はＫ＋である。
【００４０】
第２実施形態は、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンを含む組成物を対象とし、
【００４１】
【化６】
2017523953.tif 000007
【００４２】
式中、
Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基、又は
【００４３】
【化７】
2017523953.tif 000008
【００４４】
であり、
Ｒ５は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、又は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、
Ｒ６は−ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３又は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−（ＣＨ２）ｘＣＨ２ＮＨ２又は−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、
ｘは０又は１であり、
Ｍはカチオンであり、かつ
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つが−（ＣＨ２）ｘＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００４５】
第２実施形態の第１の態様において、Ｒ１はヘプタノイル、メチルヘプタノイル、オクタノイル、メチルオクタノイル、３−ヒドロキシ−６−メチルオクタノイル、ノナノイル、メチルノナノイル又はデカノイルである。
【００４６】
第２実施形態の第２の態様において、Ｒ１はヘプタノイル、６−メチルヘプタノイル、オクタノイル、（Ｓ）−６−メチルオクタノイル、３−ヒドロキシ−６−メチルオクタノイル、７−メチルオクタノイル、ノナノイル、８−メチルノナノイル又はデカノイルである。
【００４７】
第２実施形態の第３の態様において、上述したポリミキシンは、ＭがＮａ＋、Ｋ＋、ＨｍＮ（Ｃ１−４アルキル）ｎ＋、１／２Ｍｇ２＋及びそれらの組合せからなる群から選択され、ここで、ｍは０〜４であり、ｎは０〜４であり、但しｍ＋ｎ＝４であることを特徴とする。
【００４８】
第２実施形態の第４の態様において、ｘは１であり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋又はＫ＋である。
第２実施形態の第５の態様において、ｘは１であり、ＭはＮａ＋又はＫ＋である。
【００４９】
第２実施形態の第６の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含む。
第２実施形態の第７の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含み、ｘは１であり、ＭはＮａ＋又はＫ＋である。
【００５０】
第３実施形態は、式（Ｉ）で表されるポリミキシンを対象とし、
【００５１】
【化８】
2017523953.tif 000009
【００５２】
式中、
Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２又は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、
Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、
Ｍはカチオンであり、かつ
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つのみが−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００５３】
第３実施形態の第１の態様において、脂肪族Ｃ６〜Ｃ１０アシル基又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基は、任意にヒドロキシ基を含む。
第４実施形態は、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンを含む組成物を対象とし、
【００５４】
【化９】
2017523953.tif 000010
【００５５】
式中、
Ｒ１は脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基であり、
Ｒ５は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２又は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、
Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２のいずれかであり、
Ｍはカチオンであり、かつ
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つのみが−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２である。
【００５６】
第４実施形態の第１の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含む。
第４実施形態の第２の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して８０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含む。
【００５７】
第４実施形態の第３の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含み、グラム陰性菌に起因する感染症の治療に用いられる。
【００５８】
第４実施形態の第４の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含み、Ｍは薬学的に許容されるカチオンから選択される。
【００５９】
第４実施形態の第５の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含み、Ｍは薬学的に許容される一価のカチオンから選択される。
【００６０】
第４実施形態の第６の態様において、脂肪族Ｃ６〜Ｃ１０アシル基又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基は、任意にヒドロキシ基を含む。
第５実施形態は、式（Ｉ）で表される少なくとも１種のポリミキシンを含む組成物を対象とし、
【００６１】
【化１０】
2017523953.tif 000011
【００６２】
式中、
Ｒ１は６−メチルオクタノイル、６−メチルヘプタノイル又はオクタノイルであり、
Ｒ５は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、又は−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５であり、
Ｒ６は−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８の各々は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２のいずれかであり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７及びＲ８のうちの１つのみが−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｎａ）２である。
【００６３】
第５実施形態の第１の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含む。
第５実施形態の第２の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して８０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含む。
【００６４】
第５実施形態の第３の態様において、上記医薬組成物は、ＨＰＬＣで測定して５０％を超える式（Ｉ）で表されるポリミキシンを含み、グラム陰性菌に起因する感染症の治療に用いられる。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】ＰＥ１−（ＳＭ）２１の二ナトリウム塩の構造を示す。
【図２】ＰＥ１−（ＳＭ）２３の二ナトリウム塩の構造を示す。
【図３】ＰＥ１−（ＳＭ）２５の二ナトリウム塩の構造を示す。
【図４】ＰＥ１−（ＳＭ）２８の二ナトリウム塩の構造を示す。
【図５】ＰＥ１−（ＳＭ）２９の二ナトリウム塩の構造を示す。
【図６】ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９のクラマトグラムを示す。
【図７】９０分後、ｐＨ９の非平衡条件下におけるＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の分解を示す。
【図８】３日後、ｐＨ８．０の非平衡条件下におけるＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の分解を示す。
【図９】３日後、ｐＨ７．０の非平衡条件下におけるＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の分解を示す。
【図１０】３日後、ｐＨ６．５の非平衡条件下におけるＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の分解を示す。
【図１１】３日後、ｐＨ６．０の非平衡条件下におけるＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の分解を示す。
【図１２】二置換ポリミキシンＥ１について得られたＭＳスペクトルを示す。ｍ／ｚ６７７．３［−２］及び１３５５．５［−１］がネガティブモードで得られた。
【図１３】（上）２つのスルホメチル基を有する５つの個々のポリミキシン成分の存在を示すクロマトグラムを示す（２１５ｎｍのＵＶシグナル）。（下）モノ（ビス−スルホメチル化）ポリミキシンＥ１に一致する質量に対する抽出イオン電流（ｅｘｔｒａｃｔｅｄ  ｉｏｎ  ｃｕｒｒｅｎｔ：ＥＩＣ）を示す（６７７．６２、１３５６．２、１３７８．０６のｍ／ｚ）。
【図１４】モノ（ビス−スルホメチル化）ポリミキシンＥ１の質量スペクトルを示す。
【発明を実施するための形態】
【００６６】
定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲全体にわたり用いられる下記の用語は、下記の意味を有する：
本願で記述される用語「ポリミキシン」は、脂肪酸部分にアミド結合したペプチド部分を含む抗菌性化合物を指す。
【００６７】
本願で記述される用語「Ｄａｂ残基」は、少なくとも１つのアミノ酸にアミド結合した２，４−ジアミノ酪酸化合物を指す。天然のポリミキシンは通常、６つのＤａｂ残基を含み、そのうち５つは遊離γ−アミノ基を含む。
【００６８】
本願で記述される用語「Ｄａｂ」は、２，４−ジアミノブタン酸に由来するラジカルを指す。ここで、カルボニル炭素（すなわちα−炭素）に隣接する炭素原子はＬ体として表される立体化学を有する。Ｌ−Ｄａｂは、文献ではＬ−Ｄｂｕとも称される。
【００６９】
式（Ｉ）で表されるポリミキシンの６位にあるアミノ酸はＤ体を有する。すなわち、Ｒ５が結合するアミノ酸残基である。
本願で記述される用語「ＤＡＰ残基」は、少なくとも１つのアミノ酸にアミド結合した２，３−ジアミノプロピオン酸化合物を指す。
【００７０】
本願で記述される用語「ＤＡＰ」は、２，３−ジアミノプロピオン酸化合物を指す。
本願で記述される用語「スルホメチル」は、−ＣＨ２ＳＯ３Ｍ部分を指し、ここで、Ｍは下記に定義されるとおりである。スルホン酸（−ＳＯ３）部分は酸性形態にあり得るが、生理環境（ｉｎ  ｖｉｖｏ）では負の電荷を有することになり、Ｍ等の結合カチオンを有することになる。
【００７１】
本願で記述される用語「ＣＭＳ」は、スルホメチル化コリスチンを含む組成物を指す。ケミカル・アブストラクツはそのような組成物に、ＣＭＳの番号８０６８−２８−８を割り当てている。
【００７２】
本願で記述される用語「ＣＭＳ  Ｅ１」は、比較的純粋なポリミキシンＥ１（ＨＰＬＣで８０％超の純度）のスルホメチル化により形成された組成物を指す。
本願で記述される用語「コリスチン」は、ポリミキシンＥ１及びポリミキシンＥ２を含む組成物を指す。ケミカル・アブストラクツは、コリスチン用に番号１０６６−１７−７を割り当てている。欧州薬局方によれば、コリスチンは７７％を超えるポリミキシンＥ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ１ｉ及びＥ１−７ＭＯＡを含む必要があり、但し副成分のポリミキシンＥ３、Ｅ１−ｉ及びＥ１−７ＭＯＡの各々は１０％未満でなければならない。
【００７３】
本願で記述される用語「ポリミキシンＥ」は、「コリスチン」と互換的に使用される。
本願で記述される用語「ポリミキシンＥ１」は、ＣＡＳ番号７７２２−４４−３を有する化合物を指す。ポリミキシンＥ１はコリスチンＡと互換的に使用される。
【００７４】
本願で記述される用語「ポリミキシンＥ２」は、ＣＡＳ番号７２３９−４８−７を有する化合物を指す。ポリミキシンＥ２はコリスチンＢと互換的に使用される。
本願で記述される用語「スルホメチル化ポリミキシン」は、Ｌ−ＤＡＢ残基のγ−アミノ基に結合した少なくとも１つのスルホメチル基を有するポリミキシンを指す。
【００７５】
用語「Ｍ」はカチオンであり、１又は２の正の荷電を含むカチオン種を指す。その例には、限定するものではないが、Ｌｉ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、１／２Ｍｇ２＋、ＨｍＮ（Ｃ１−４アルキル）ｎ＋が挙げられ、ここで、ｍは０〜４であり、ｎは０〜４であり、但しｍ＋ｎ＝４である。
【００７６】
本願で記述される表現「脂肪族直鎖又は分岐鎖Ｃ６〜Ｃ１０アシル基」は、合計で６〜１０個の炭素原子を含む、カルボニル部分及び非カルボニル部分を有する置換基を指す。これは既知のポリミキシン化合物に見られるアシル基を含む。また、これはヘプタノイル、メチルヘプタノイル（（Ｓ）−６−メチルヘプタノイルを含む）、オクタノイル、メチルオクタノイル（（Ｓ）−６−メチルオクタノイル、７−メチルオクタノイルを含む）、ノナノイル、メチルノナノイル及びデカノイルを含むがこれらに限定するものではない。
【００７７】
本願で記述される用語「塩」又は「その塩」は、当業者に知られている任意の工程、例えばプロトン受容部分のプロトン化及び／又はプロトン供与部分の脱プロトン化によって調製可能な、カチオン及びアニオンを有する化合物を指す。あるいは、塩はカチオン／アニオンメタセシス又はカチオン／アニオン交換反応のいずれかによって調製可能である。
【００７８】
本願で記述される用語「ＨＰＬＣで測定してＸ％を超える」は、本願の実施例に記載されているか、あるいはＷＯ２０１４１９５４０５Ａ１に記載されているＨＰＬＣ法により得られるクロマトグラムにおける、関連するピークの相対積分面積として理解されるものとする。
【００７９】
本発明によれば、遊離γ−アミンを有する上記の構造のＤａｂ残基のいずれか、すなわちＤａｂ残基Ｄａｂ１、Ｄａｂ３、Ｄａｂ５、Ｄａｂ８又はＤａｂ９のいずれかに結合した２つのスルホメチル基を有する新規なポリミキシンが提供される。よって、式（Ｉ）はモノ（ビス−スルホメチル化）ポリミキシンを包含するが、トリ−、テトラ−又はペンタ（ビス−スルホメチル化）ポリミキシンは包含しないことが意図される。
【００８０】
新規なポリミキシンの一例は、本願ではモノ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）Ｄａｂ９ポリミキシンＥ１と称される。すなわち、式Ｉの置換基が６−メチルオクタノイルであるＲ１で表され、Ｒ５及びＲ６が−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ７の各々が−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２であり、Ｒ８が−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ２ＳＯ３Ｍ）２であり、ＭがＮａ＋である。そのような化合物の一例が図５に示されている。この化合物の略称はＰＥ１−（ＳＭ）２９である。
【００８１】
モノビス−スルホメチル化ポリミキシンの他の例は、モノ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）Ｄａｂ１ポリミキシンＥ１、モノ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）Ｄａｂ３ポリミキシンＥ１、モノ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）Ｄａｂ５ポリミキシンＥ１、モノ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）Ｄａｂ８ポリミキシンＥ１であり、それぞれ、その二ナトリウム構造が図１〜４に示されている。
【００８２】
「−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２」という表現は、媒体のｐＨに応じて−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２又は−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ３＋を包含するものとして理解される。
「−ＣＨ２ＮＨ２」という表現は、媒体のｐＨに応じて−ＣＨ２ＮＨ２又は−ＣＨ２ＮＨ３＋を包含するものとして理解される。
【００８３】
本願に記載のポリミキシンは、多くの分子種を包含する。例えば水溶液中では、電荷はｐＨに依存する。本願に記載のポリミキシン化合物は全ての薬学的に許容される塩及びそのイオンを包含する。それらのポリミキシンの中にはもちろん二ナトリウム塩がある。他の薬学的に許容される塩には、例えばカリウム塩、リチウム塩、及びアンモニウム塩（例えばＨｍＮ（Ｃ１−４アルキル）ｎ＋、ここでｍは０〜４であり、ｎは０〜４であり、但しｍ＋ｎ＝４である）、又はそれらの組合せも含まれる。
【００８４】
本願に記載のポリミキシンは、感染性疾患の、特にグラム陰性菌に起因する感染症の治療又は予防に用いられてもよく、上記グラム陰性菌は、限定するものではないが、緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、クレムシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｍｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、及びアシネトバクター・バウマニ（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｉａ  ｃｏｌｉ）、及びエンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）等である。一態様によれば、本発明はグラム陰性菌感染症の治療における、有効量の本願に記載の任意の組成物を含む医薬組成物の使用を含む。
【００８５】
本化合物は、治療上有効量で投与され得る。「治療上有効量」は、その化合物が感染症を治療するのに十分な量を意味する。当業者は、特定の患者の適切な１日投与量は、治療される疾患及びその重症度、採用する組成物、その患者の年齢、体重、性別及び食事、ならびに関与する医師の好みや経験などの要因によって変動し得ることを認識するであろう。
【００８６】
本発明による組成物は、ヒトでの使用のために投与されてもよいし、動物薬として投与されてもよい。本願に記載の組成物は、それを必要とする患者に、皮下、吸入、経口、非経口又は局所経路などの様々な経路で投与することができる。組成物は当業者に周知の任意の形態とすることができ、これらには例えば錠剤、カプセル、粉末、顆粒、トローチ剤、クリーム、又は滅菌注射液や懸濁液などの液体製剤が含まれる。
【００８７】
一態様において、上記組成物は静脈内点滴又は注射による投与に有用である。静脈内用又は注射用製剤は、当業者に周知の方法に従って調製され得る。例えば、本願に記載の化合物を注射用水に溶解し、次に濾過滅菌し、さらに上記濾過済み組成物を適切なバイアルに移すことができる。
【００８８】
一態様によれば、上記組成物は凍結乾燥される。凍結乾燥粉末は、使用前に、例えば注射による投与前に、又は（例えばネブライザーや他の適切な吸入器を用いた）吸入による投与前に、例えば注射用水で再構成される。そのため、別の態様によれば、上記組成物は吸入による投与用に製剤化される。本願に記載の化合物は、保存剤、緩衝剤、及び抗酸化剤、又は希釈剤を含むがこれらに限定されない１種又は複数種の薬学的に許容される賦形剤を含んでいてもよい。好適な希釈剤には、例えば注射用水、０．９％ＮａＣｌ、０．９％ＮａＣｌ中５％のデキストロース、水中５％のデキストロース、０．４５％ＮａＣｌ中５％のデキストロース、０．２２５％ＮａＣｌ中５％のデキストロース、及び乳酸加リンガー液が挙げられる。
【００８９】
本願に記載の化合物はさらに、１種又は複数種の追加の抗菌薬と共に投与されてもよい。本願に記載の化合物は、別の抗菌薬と併用される時、その１種又は複数種の他の抗菌薬と同時に、別々に、又は連続的に投与されてもよい。
【００９０】
本発明は、例示の目的で下記において更に説明される。本発明の範囲は下記の実施例の範囲によって何らかの形で限定されることが理解されるものとする。
実施例
本開示は下記の実験の部によりサポートされ、裏付けられるが、それらに限定されるものではない。
【００９１】
実施例１：
出発材料。
単離ポリミキシンＥ１硫酸塩（３．５ｇ）及びヒドロキシメタンスルホン酸ナトリウム（１１．３ｇ）の４５％ｗ／ｗ水溶液を混合し、撹拌しながら６０℃に加温した。続いて、２Ｍ  ＮａＯＨを何度か添加することによりｐＨを７．０〜７．５に維持した。１８時間後、混合物を周囲温度まで冷却し、２００ｍＬのメタノール／アセトニトリル  １／１  ｖ／ｖ中での沈殿により、粗生成物を白色固体として得た。
【００９２】
上記生成物を脱塩し、下記の手順により精製した：Ｃ１８カラム６μ  例えばＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（登録商標）Ｘ  Ｂｒｉｄｇｅ  Ｐｒｅｐ  Ｓｈｉｅｌｄ  １０×２５０ｍｍ又は同様のものを洗浄し、５％ＭｅＣＮ（無塩）で平衡化した。そのカラムをＷａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ  Ｐｒｅｐ  ＨＰＬＣシステム、１５０ｍＬ／分最大流に装着した。検出器は、２８０ｎｍに調整された５ａ  Ｗａｔｅｒｓ２４８７であった。２３０ｍｇ  ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９の９ｍＬ  ５％ＭｅＣＮ溶液と１ｍＬ  ２Ｍ  ＮａＣｌの混合物をカラムに装填し、流量は６〜８ｍＬ／分とした。
【００９３】
カラムを溶出させ、６〜８ｍＬ／分の５％ＭｅＣＮで脱塩させて、ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９画分を回収した。この手順の間、いくらかの分解がカラム上で生じたが、最初と最後を除外することで高純度が維持される。最初の画分（Ｈｅａｄ  Ｆｒａｃｔｉｏｎ）、約（ｃａ．）３５ｍＬを、４５０ｍＬの１００％ＭｅＣＮ中に直接回収し、更に５５０ｍＬの１００％ＭｅＣＮを加えてから、２Ｌ洋梨型蒸発フラスコ内で９７：３のＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏの溶液を真空蒸発させた。
【００９４】
蒸留プロセスはビュッヒ（Ｂｕｅｃｈｉ）１５Ｒｏｔａｖａｐｏｒ（登録商標）で実施した。９４：６共沸混合物が蒸留除去され、２Ｌ真空蒸留フラスコ内に水非含有ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９残留物が形成された。この残留物を３×８ｍＬ  １００％ＭｅＯＨ（無水）で取り出し、５０ｍＬ真空蒸発フラスコに注いで１〜２ｍＬのＭｅＯＨ−ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９懸濁液となるまで真空蒸発させた。１５ｍＬの１００％ＭｅＣＮを加え、２０溶液／懸濁液を３５℃のウォーターバスで真空蒸発させて更に乾燥させた。この手順の間、圧力は７０〜６０Ｔｏｒｒ（９３３０〜８０００Ｐａ）から２０〜１５Ｔｏｒｒ（２６７０〜２０００Ｐａ）まで低下させた。真空を維持したまま、３５℃ウォーターバス中でゆっくりと回転させながら、更なる真空乾燥を３０分間行った。ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９物質の収量は１５０ｍｇであった。
【００９５】
実施例２
モノ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ポリミキシンＥ１を含む混合物の製造。
スルホメチル化ポリミキシンがコリスチンに分解すると、ヒドロキシメタンスルホン酸塩が遊離する。ヒドロキシメタンスルホン酸塩は容易に元のスルホメチル化分子を再生成するため、この工程は可逆性である。
【００９６】
この研究の目的は、ナノ濾過を用いてヒドロキシメタンスルホン酸塩を継続的に除去することによる非平衡条件下でのスルホメチル化ポリミキシンの分解を調べることであった。
【００９７】
実験は、２ＬのＲＯ水中１０ｍＭ  ＰＥ１−（ＳＭ）１０１，３，５，８，９で設定し、この溶液の体積は、ＲＯ水を頻繁に添加することにより濾過ユニット内で一定に保った。ナノ濾過ユニットは３ｂａｒ（３００ｋＰａ）の圧力下、４０Ｃで毎日のキャンペーンで運転し、毎回約５ｌの廃液を除去した。ｐＨは０．１Ｍ  ＨＣｌで８．０、７．０、６．５及び６．０に安定するまで調整した。結果を図６〜１１に示す。
【００９８】
ポリミキシンのジ−スルホメチル化はＭＳデータで確認される。図１２は、ネガティブモードで得られたＭＳスペクトル、ｍ／ｚ６７７．３［−２］及び１３５５．５［−１］を示す。
【００９９】
実施例３：低置換度コリスチンの合成。
硫酸コリスチン（１．０ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を２０ｍｌの水に溶解させた。４５％ヒドロキシメタンスルホン酸ナトリウム（０．８４７ｇ、２．８４１ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（０．１２ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）を加えた。この透明な溶液を２５℃で１２時間撹拌した。１００ｍｌのアセトニトリル及びメタノール（５０：５０）をゆっくり添加することにより生成物を沈殿させた。生成物を白色粉末として単離した。
【０１００】
実施例４ａ：低置換度ポリミキシンＥ１の合成。
ポリミキシンＥ１（１．０ｇ、０．７１ｍｍｏｌ）を２０ｍｌの水に溶解させた。４５％ヒドロキシメタンスルホン酸ナトリウム（０．８４７ｇ、２．８４１ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（０．１２ｇ、１．４０ｍｍｏｌ）を加えた。この透明な溶液を２５℃で１２時間撹拌した。１００ｍｌのアセトニトリル及びメタノール（５０：５０）をゆっくり添加することにより生成物を沈殿させた。生成物を白色粉末として単離した。
【０１０１】
実施例４ｂ：低置換度ポリミキシンＥ１のクロマトグラフィー及びＭＳ。
実施例４ａで製造したモノ（ビス−スルホメチル化）ポリミキシンＥ１を質量分析（ネガティブモードのＭＳ）及びＵＶコンパチブル法で分析した。ここで、分離はｐＨ６．６で行った。図１３の上は、２つのスルホメチル基を有する５つの個々のポリミキシン成分の存在を示すクロマトグラムを示す（２１５ｎｍのＵＶシグナル）。図１３の下は、モノ（ビス−スルホメチル化）ポリミキシンＥ１に一致する質量に対する抽出イオン電流（ＥＩＣ）を示す（６７７．６２、１３５６．２、１３７８．０６のｍ／ｚ）。
【０１０２】
図１４は、モノ（ビス−スルホメチル化）ポリミキシンＥ１の個々の質量スペクトルを示す。６７７のｍ／ｚはモノ（ビス−スルホメチル化）ポリミキシンＥ１の［Ｍ＋２Ｈ］２＋に一致し、１３５６は［Ｍ＋Ｈ］＋に一致し、１３７８は［Ｍ＋Ｎａ］＋に一致する。
【０１０３】
実施例５：ＭＩＣ
約９３％のモノ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ポリミキシンＥ１を含む試料を、気管支敗血症菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、ＡＴＣＣ４６１７に対するＭＩＣ分析に供した。微生物力価は６１１μｇ／ｇであることが測定された。
【０１０４】
ＭＩＣアッセイ
試験生物を振とうフラスコ内で約１６時間、２５０ｒｐｍで、緑膿菌については３４℃、クレブシエラ・バウマニ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｂａｕｍａｎｎｉｉ）及びアシネトバクター・バウマニについては３７℃で培養した。これらを後期対数まで再培養し、使用濃度に希釈し、グリセロールと共に−７５℃で凍結させた。使用した培地はミューラー・ヒントンブロスであった。
【０１０５】
試料は、５ｍｇの化合物を１ｍｌのミューラー・ヒントンブロスに溶解させることにより調製した。試料を希釈してウェルに添加し、試験生物を添加して、クレブシエラ・バウマニ及びアシネトバクター・バウマニについては振とうしながら３７℃で、緑膿菌については振とうせずに３４℃で、約１６時間インキュベーションした後、増殖の阻害をＯＤ６００によって測定した。結果を表１に示す。
【０１０６】
【表１】
2017523953.tif 000012
【０１０７】
実施例６：本発明の化合物の毒性
ＫＩＭ−１（腎臓損傷分子−１）を急性尿細管壊死のバイオマーカーとして用いて、腎臓毒性を測定した。
【０１０８】
９３％モノ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ポリミキシンＥ１又はＣＭＳを含む混合物でマウスを５日間処置し、毒性の臨床兆候及びＫＩＭ−１の尿中濃度をモニタリングした。５日間の処置中にマウスは毒性の臨床兆候を示さなかった。尿中のＫＩＭ−１レベルはビヒクル処置と比較して僅かな増加を示した。マウスの尿中のＫＩＭ−１の正常な範囲は４５６〜８０４８ｐｇ／ｍｌであることが、ＥＬＩＳＡキットの説明書に記載されている。
【０１０９】
この混合物を乾燥粉末として受け取り、注射直前にバイアル中で滅菌生理食塩水に溶解させ、表１に記載の濃度にした。
５日間にわたって１日１回、表１に示す用量に一致する０．２ｍｌ量でマウスを頸部において皮下処置した。投薬は２８ｇの平均体重を基準とした。
【０１１０】
２回目の投薬から２４時間後及び５回目の投薬から４時間後に尿試料を採取した。試料は、ＫＩＭ−１濃度について解析されるまで−８０℃で保管された。
尿試料を解凍し、２０００ｇで５分間遠心し、５０倍に希釈してから、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡマウスＴＩＭ−１／ＫＩＭ−１／ＨＡＶＣＲイムノアッセイキットの説明書に従ってＥＬＩＳＡを行った。
【０１１１】
【表２】
2017523953.tif 000013
【０１１２】
試験した混合物は全て、体重及び臨床スコアで決定したように、マウスでの忍容性が良好であった。９３％モノ（Ｎγ−ビス−スルホメチル）ポリミキシンＥ１を含む混合物を注射したマウスの群では、注射部位の皮膚で厚化が見られた。しかし、観察された尿中ＫＩＭ−１レベルの増加は極僅かであり、有意ではなかった。
【０１１３】
【表３】
2017523953.tif 000014
【０１１４】
実施例６：モノビス−スルホメチル化ポリミキシンＥ１のｉｎ  ｖｉｖｏ活性
緑膿菌（ＰＡＸ１１０４５株）の肺感染のマウスモデルを、ポリミキシンＥ１、ＣＭＳ  Ｅ１及びモノビス−スルホメチル化ポリミキシンＥ１の腹膜投与で処置した。ＣＦＵは、非処置群のマウスを除く２２時間後の肺組織におけるコロニー形成単位の算出数である。臨床スコアは表３に示すように、各時点での観察に基づく。
【０１１５】
【表４】
2017523953.tif 000015
【図１】
2017523953.tif 000018
【図２】
2017523953.tif 000019
【図３】
2017523953.tif 000020
【図４】
2017523953.tif 000021
【図５】
2017523953.tif 000022
【図６】
2017523953.tif 000023
【図７】
2017523953.tif 000024
【図８】
2017523953.tif 000025
【図９】
2017523953.tif 000026
【図１０】
2017523953.tif 000027
【図１１】
2017523953.tif 000028
【図１２】
2017523953.tif 000029
【図１３】
2017523953.tif 000030
【図１４】
2017523953.tif 000031
【国際調査報告】
2017523953.tif 000032
2017523953.tif 000033
2017523953.tif 000034