(57)【要約】  括約筋不全障害（例えば、失禁、胃腸障害）を処置する方法が、対象の尿道または消化管括約筋（例えば、直腸括約筋）などの括約筋または括約筋複合体に間質細胞由来因子１（ＳＤＦ−１）を処置有効量で投与することによって行われる。
2017514875.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
括約筋不全障害を患う対象を処置する方法であって、前記対象の括約筋に間質細胞由来因子１（ＳＤＦ−１）を処置有効量で投与するステップを含む方法。
【請求項２】
前記障害が尿失禁であり、前記括約筋が尿道括約筋である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記障害が胃腸障害であり、前記括約筋が消化管括約筋である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記障害が腸失禁であり、前記括約筋が直腸括約筋である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記括約筋が平滑筋を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記括約筋が骨格筋を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記括約筋が平滑筋および骨格筋の複合体を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記対象がオスである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記対象がメスである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記障害が持続性失禁である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記障害が切迫性失禁またはラッチキー失禁である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記投与するステップが、前記括約筋にＳＤＦ−１を注射することによって行われる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記注射が、経管腔的（例えば経尿道または経直腸）注射による、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記注射が、前記括約筋または括約筋複合体内の複数の部位において（例えば、前記複合体の骨格筋層と平滑筋層との境界またはその近傍に対して）行われる、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＳＤＦ−１が哺乳類ＳＤＦ−１アルファまたは哺乳類ＳＤＦ−１ベータである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記投与ステップが、前記筋肉に、ＳＤＦ−１をコードする核酸ベクターを注射することによって行われ、前記ベクターが、前記コードされたＳＤＦ−１を発現する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ベクターがプラスミドベクターであり、前記ＳＤＦ−１が哺乳類ＳＤＦ−１アルファまたは哺乳類ＳＤＦ−１ベータである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
失禁の処置に有用な無菌注射組成物であって、ＳＤＦ−１、水性担体、および場合によっては粘度増強剤を含む無菌注射組成物。
【請求項１９】
前記粘度増強剤が存在しコラーゲンを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
本特許請求の範囲に記載した方法を行う上で使用するための、または本特許請求の範囲に記載した方法を行うための医薬の調製に使用するための、本特許請求の範囲に記載したＳＤＦ−１またはＳＤＦ−１をコードするベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願］
本出願は、参照により開示全体が本明細書の一部をなす２０１４年５月８日に申請された米国特許仮出願第６１／９９０，１９０号の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
持続性の尿および腸失禁を含めた、失禁などの括約筋不全障害には、生活の質の著しい悪化、社会的孤立化、およびうつ症状が伴う。その基礎病理は常によく理解されているわけではないが、一般に、筋肉の神経支配の傷害、および／または老化に関係した、括約筋細胞の減少が関連している。
【０００３】
このような括約筋不全に対する処置は十分ではなく、代替的処置が必要とされている。そのため、傷害を受けた筋肉の再生を支持し、神経支配および血管形成を支持する組織を再建するために細胞治療が考慮されることとなった。前臨床および臨床研究から、この治療が短期的には効果があることが支持されている。しかし自己細胞治療には、生検、および時間がかかる細胞増殖プロトコールが必要とされる。加えて、細胞が、再生組織の塊を構成するのに十分な数だけ注射部位に留まるのか否かも不明である。したがって、失禁および他の括約筋不全障害の処置に対する新たなアプローチが必要とされている。
【発明の概要】
【０００４】
本発明の第１の態様は、それを必要とする対象の括約筋不全障害（例えば、失禁、胃腸障害）を処置する方法であって、対象の尿道または消化管括約筋（例えば、直腸括約筋）などの括約筋または括約筋複合体に間質細胞由来因子１（ＳＤＦ−１）を処置有効量で投与するステップを含む方法である。
【０００５】
一部の実施形態では、障害は胃腸障害であり、括約筋は消化管括約筋である
【０００６】
一部の実施形態では、障害は尿失禁であり、前記括約筋は尿道括約筋であり；他の実施形態では、障害は腸失禁（「便失禁」とも称する）であり、前記括約筋は直腸括約筋である。
【０００７】
一部の実施形態では、括約筋は平滑筋を含み；一部の実施形態では、括約筋は骨格筋を含む。一部の実施形態では、括約筋は、平滑筋および骨格筋の両方の複合体を含む（例えば、尿道括約筋、食道括約筋、幽門括約筋、回盲括約筋）。一部の実施形態では、投与ステップは、括約筋または括約筋複合体に、例えば、括約筋または括約筋複合体内の複数の部位において（例えば、括約筋複合体の骨格筋層と平滑筋層との境界またはその近傍に対して）、ＳＤＦ−１を注射することによって行われる。
【０００８】
本発明のさらなる態様は、括約筋不全障害の処置に有用な無菌注射組成物であって、ＳＤＦ−１を処置有効量、場合によっては、コラーゲンなどの粘度増強剤（例えば、組成物が注射部位から流れ去ってしまうのを防ぐのに十分な量）、および水性担体（例えば生理食塩液）を含む無菌注射組成物である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１Ａ】非受傷対照、受傷（細胞なし）、細胞により処置、ＳＤＦ−１（ＣＸＣＬ−１２）またはコラーゲン処置のサルでの、注射後６カ月における最大尿道圧（ＭＵＰ）値（べースラインからの％変化）を示す図である。
【図１Ｂ】図１Ａとの関連で記述したのと同じ動物での括約筋の筋肉およびコラーゲン含量（括約筋領域（ａｒｅａ）における割合（％））を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は主にヒト対象の処置に関するが、獣医学的用途で、動物対象、特に、イヌ、ネコ、家畜およびウマなどの哺乳動物対象に対して本発明を行ってもよい。対象はオスであってもメスであってもよい。対象は、適切ないかなる年齢であってもよいが、一部の実施形態では、新生期、乳仔期、若年期、思春期、成体期または老年期の対象である。
【００１１】
本明細書で使用される「処置」とは、患者に利益を与える、特に、本明細書に記述する症状の重症度を低減または改善する、本明細書に記述する症状または障害の進行または悪化を遅延または減速するなどの、任意の種類の処置を指す。
【００１２】
本明細書で使用される「消化管括約筋」には、上部食道括約筋、下部食道括約筋、幽門括約筋、回盲括約筋、オッディ括約筋（またはグリソン括約筋（Ｇｌｉｓｓｏｎ’ｓ  ｓｐｈｉｎｃｔｅｒ））および直腸括約筋（内肛門括約筋および外肛門括約筋を含む）が含まれる。下部食道括約筋は時として「噴門」括約筋と称するが、これはその位置を指しているのであって、下部食道括約筋の形成が由来する筋肉組織の種類を指すのではない。
【００１３】
本明細書で使用される「胃腸障害」には、それだけに限らないが、酸逆流、胃食道逆流（または「ＧＥＲＤ」）、喉頭咽頭逆流（ＬＰＲまたは「静かな逆流」）、オッディ括約筋機能不全、胃腸運動障害（例えば、胃不全麻痺；上記のＧＥＲＤ；以下で考察する便失禁）などが含まれる。
【００１４】
本明細書に記述する「失禁」とは一般に、任意の様々な原因または状態から生じ得るラッチキー失禁もしくは切迫性失禁または持続性失禁である。失禁をもたらす原因または状態（その全てではないがいくつかは括約筋の傷害を引き起こす）であって、本明細書に記載の方法および組成物によって処置され得る原因または状態の例には、それだけに限らないが、
尿失禁については、妊娠および分娩、加齢、子宮摘出術、膀胱痛症候群、前立腺炎、前立腺肥大、前立腺がん、膀胱がん、膀胱結石、がん処置（例えば、骨盤領域のがん化学療法または放射線療法）、多発性硬化症、神経障害（例えばパーキンソン病、脳卒中、脳腫瘍または脊髄損傷など）、特発性筋力低下など、
ならびに腸または便失禁については、筋損傷（例えば、慢性便秘、分娩中（特に会陰切開がもとで生じる）、外科手術（例えば、痔の外科手術）、直腸脱、骨盤領域の化学療法または放射線療法などによって引き起こされる）、神経傷害（例えば、分娩、慢性便秘、もしくは便通の間の絶え間ないしぶり腹、脊髄損傷、脳卒中、糖尿病、多発性硬化症、外科手術（例えば、痔の外科手術）、直腸脱、骨盤領域のがん化学療法または放射線療法によって引き起こされる）、直腸の収容能力の減少（例えば、外科手術、放射線、処置、炎症性腸疾患などでの瘢痕形成による）など
が含まれる。
【００１５】
本明細書で使用される「薬学的に許容される」とは、化合物または組成物が、対象に投与して、疾患の重症度および処置の必要性と照らしあわせた場合に過度に有害な副作用を伴わずに、本明細書に記述する処置を達成するのに適していることを意味する。
【００１６】
本明細書で使用される「同時に」とは、併用効果を生ずるのに十分なほど時間的に近いことを意味する（つまり、同時にとは、時を同じくして、のことであっても、２つ以上の事象が互いに他の前または後の短い時間枠内に生じることであってもよい）。
【００１７】
１．活性化合物
本明細書で使用される活性化合物は、ケモカインタンパク質の間質細胞由来因子１（ＳＤＦ−１）である。この化合物は、ヒトではＣＸＣＬ１２遺伝子によってコードされるのでＣ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１２（ＣＸＣＬ１２）としても知られる。ＳＤＦ−１は既知で、例えばＭ．Ｄ’Ａｐｕｚｚｏら、Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ＳＤＦ−１，  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆａｃｔｏｒ  １，  ａｔｔｒａｃｔｓ  ｅａｒｌｙ  ｓｔａｇｅ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ  ｖｉａ  ｔｈｅ  ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ＣＸＣＲ４、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７、１７８８〜１７９３ページ（１９９７）；Ｙ．Ｔａｂａｔａ、米国特許第８，４３５，９５３号、およびＰｅｎｎら、米国特許第８，５１３，２１３号および第８，５１３，００７号；ならびにＳ．Ｉｔｅｓｃｕ、米国特許第７，６６２，３９２号に報告されており、その開示全体が参照により本明細書の一部をなすものとする。
【００１８】
本明細書で使用されるＳＤＦ−１には、ＳＤＦ−１アルファもしくはその成熟型に加えてＳＤＦ−１ベータ、ＳＤＦ−１ガンマ、ＳＤＦ−１デルタ、ＳＤＦ−１イプシロンおよびＳＤＦ−１ファイなどのアイソフォームおよびその成熟型、または任意の比のそれらの混合物などが含まれ得る。本発明において好ましいＳＤＦ−１には、ＳＤＦ−１アルファ、ＳＤＦ−１ベータ、または任意の比のそれらの混合物などが含まれる。米国特許第８，４３５，９５３号を参照されたい。
【００１９】
本発明では、ＳＤＦ−１は、ケモカインとしての活性がある限り、アミノ酸配列中に１つまたは複数のアミノ酸が置換、欠失および／または付加されていてもよい。同様に、ＳＤＦ−１は、糖鎖が置換、欠失および／または付加されていてもよい。ＳＤＦ−１は、生理的に許容される酸（例えば無機酸または有機酸）または塩基（例えばアルカリ金属塩）と塩（好ましくは酸付加塩）を形成していてもよい。塩の例には、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸または硫酸）との塩、および有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、シュウ酸、安息香酸、メタンスルホン酸またはベンゼンスルホン酸）との塩が含まれる。同文献を参照されたい。
【００２０】
本発明では、ＳＤＦ−１の種類に制限はない。本発明で使用されるＳＤＦ−１は、ヒト、またはサル、ヒツジ、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラットもしくはマウスなどの非ヒト動物などの哺乳動物由来であってよい。通常、本発明に開示される「（１）ＳＤＦ−１と、（２）カルボキシル基および／またはスルホ基を有する改変ゼラチンを含有するハイドロゲルとを含有する徐放性組成物」（以降、時として「本発明の組成物」と略すことがある）の適用のために標的種を選択することができる。例えば、本発明の組成物は、ヒトに適用する場合、ヒトＳＤＦ−１（例えば、ＳＤＦ−１アルファ（ＧｅｎｅＢａｎｋ登録番号ＮＰ９５４６３７）またはＳＤＦ−１ベータ（ＧｅｎｅＢａｎｋ登録番号ＮＰ０００６００））を使用して作製することができる。同文献を参照されたい。
【００２１】
本発明では、ＳＤＦ−１を、その活性が他の夾雑物によって阻害されないレベルにまで精製することがある。好ましくは、ＳＤＦ−１は、医薬調製物として使用可能なように精製することができる。同文献を参照されたい。
【００２２】
本発明では、ＳＤＦ−１は、天然の供給源から得るか、または遺伝子工学の手法によって作製することができる。天然の供給源から得る場合、ＳＤＦ−１は、それが存在することが既に知られているヒトまたは非ヒト動物（例えばサル、ヒツジ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラットまたはマウス）などの哺乳動物の脾臓など様々な臓器から抽出することができる。ＳＤＦ−１が存在することが知られている臓器の特定の例を挙げると、例えば、ＳＤＦ−１は、ＳＤＦ−１受容体であるＣＸＣＲ４を発現する腫瘍細胞が高頻度で転移している臓器において大量に存在することが知られている。一方、遺伝子工学の手法によって作製される場合、ヒトまたは非ヒト動物（例えばサル、ヒツジ、ウシ、ウマ、ブタ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラットまたはマウス）などの哺乳動物由来のＳＤＦ−１をコードする遺伝子を適切なベクターに組み込み、このベクターを、形質転換に適した宿主細胞に導入する。こうすることによって、形質転換体の培養上清から目的の組換えＳＤＦ−１を得ることができるようになる。本明細書における宿主細胞に制限はなく、遺伝子工学の手法で通常使用されてきた大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、酵母細胞、カイコ細胞などの様々な昆虫細胞および様々な動物細胞などの様々な宿主細胞を使用することができる。同文献を参照されたい。
【００２３】
本明細書に開示される活性化合物は、上記の通り、その薬学的に許容される塩の形態で調製できる。薬学的に許容される塩は、親化合物の所望の生物活性を保持し、望ましくない中毒作用はもたらさない塩である。このような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および硝酸などと形成された酸付加塩；および例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸およびポリガラクツロン酸などの有機酸と形成された塩；（ｂ）塩素、臭素およびヨウ素などの元素の陰イオンから形成された塩ならびに（ｃ）アンモニウム塩、ナトリウムおよびカリウムの塩などのアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウムの塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンなどの有機塩基との塩などの、塩基に由来する塩である。
【００２４】
ＳＤＦ−１は直接、例えば注射によって、またはＳＤＦ−１をコードし、患者の組織でＳＤＦ−１を発現する（例えば一過的または構成的に発現する）核酸ベクター（例えば、組み込まれる、または組み込まれないウイルスベクター、レトロウイルスベクター、プラスミドベクター、直鎖状ＤＮＡベクターなど）を（例えば注射によって）投与することによって投与することができる。一般にこのようなベクターは、対象の組織で作動可能なプロモーター（例えばＣＭＶプロモーター）と、作動するように連結された、上記のＳＤＦ−１をコードする核酸セグメントを含む。プラスミドベクターを含めた適切なベクターは既知であるか、または本開示を踏まえれば当業者には明らかなはずであり、適切なベクターには、それだけに限らないが、登録番号ＰＴＡ−１３３２０の下でアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関に寄託されているプラスミドであって、例えば、参照により本明細書に開示全体が組み込まれているＰｅｎｎら、米国特許第８，５１３，２１３号および第８，５１３，００７号に記載されているプラスミドが含まれる。
【００２５】
対象が、Ｓ．Ｒａｇｈａｖａｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １４１、３１０〜３１９ページ（２０１１）に報告されている内肛門括約筋移植片などの内括約筋移植片を受けている場合、本発明は、移植前に生体外で組織構築物にＳＤＦ−１を投与し、次いで組織構築物を移植して、好ましくは括約筋複合体の内側（平滑筋）および外側（骨格筋）部分の両方に関して、本明細書に記述する結果を達成するのに有効な量でＳＤＦ−１を患者体内に持ち込むことによって行うことができる。
【００２６】
２．医薬製剤．
上記の活性化合物は、既知の手法に従い、医薬担体中にて投与用に製剤してもよい。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（第９版、１９９５年）を参照されたい。本発明の医薬製剤の製造では、活性化合物（その生理的に許容される塩を含め）を、特に、許容される担体と通常混合する。担体は当然、製剤中の他のあらゆる原料と適合性があるという意味で許容されるものでなければならず、患者にとって有害であってはならない。担体は固体もしくは液体またはその両方であってもよく、好ましくは、化合物と共に、単位用量製剤、例えば、０．０１または０．５重量％〜９５重量％または９９重量％の活性化合物を含有し得る錠剤として製剤する。１つまたは複数の活性化合物を、本発明の製剤に組み込むことができ、この製剤は、１つまたは複数の補助原料を場合によっては含む諸成分を混合することを含む任意のよく知られた製薬手法によって調製することができる。
【００２７】
非経口投与に適した本発明の製剤は、活性化合物（複数でもよい）の無菌水性および非水性注射液を含み、この調製物は、好ましくは対象とする受容者の血液と等張である。これらの調製物は、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、および対象とする受容者の血液と製剤を等張にする溶質を含有し得る。水性および非水性無菌懸濁液は、懸濁剤および増粘剤を含み得る。製剤は、単位用量または複数回用量の容器、例えば、封入アンプルおよびバイアルとして提示することができ、使用直前に無菌液体担体、例えば生理食塩水または注射用水の添加のみを必要とする冷凍乾燥（凍結乾燥）条件で保存することができる。即時注射液および懸濁液は、上記の種類の無菌散剤、顆粒剤および錠剤から調製してもよい。例えば、本発明の一態様では、活性化合物（複数でもよい）またはその塩を含む注射可能で安定な無菌組成物を、封入容器中の単位剤形として提供する。化合物または塩は、適切な薬学的に許容される担体で復元して、対象にそれを注射するのに適した液体組成物を形成することができる凍結乾燥物の形態で提供する。単位剤形は通常、約１０ｍｇ〜約１０グラムの化合物または塩を含む。化合物または塩が実質的に非水溶性な場合、十分量の生理的に許容される乳化剤を、化合物または塩を水性担体に乳化するのに十分な量利用してもよい。このような有用な乳化剤の１つはホスファチジルコリンである。
【００２８】
活性化合物（複数でもよい）に加えて、医薬組成物は、ｐＨ調整する添加剤などの他の添加剤を含有していてもよい。特に、有用なｐＨ調整剤には、塩酸などの酸、乳酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウムまたはグルコン酸ナトリウムなどの塩基または緩衝液が含まれる。さらに、組成物は、抗微生物防腐剤を含有していてもよい。有用な、抗微生物防腐剤には、メチルパラベン、プロピルパラベンおよびベンジルアルコールが含まれる。抗微生物防腐剤は通常、製剤を、多回用量での使用のために設計されたバイアルに入れる場合に利用される。当然ながら、指摘したように、本発明の医薬組成物は、当技術分野でよく知られた手法を用いて凍結乾燥してもよい。
【００２９】
３．投与量および投与経路
上記のように、本発明は、活性化合物（その薬学的に許容される塩を含め）を、非経口投与（特に、筋肉内または括約筋複合体内への注射、例えば経管腔的注射による）用の薬学的に許容される担体中に含む医薬製剤を提供する。
【００３０】
経管腔的注射（例えば経尿道または経直腸注射）は、それだけに限らないが、米国特許第７，０１５，２５３号；第５，９２５，６２９号；第５，５８８，９６０号；および第５，３８５，５６１号、ならびにＴｏｂｉａｓら（ＭＩＴ）による米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／０００３２９７Ａ１号に記載の手法を含めた任意の適切な手法によって行うことができ、これらの開示全体は、参照により本明細書の一部をなすものとする。
【００３１】
注射用医薬担体は、場合によっては粘度増強剤（例えば、セルロース誘導体、アルギン酸誘導体、デキストラン、ゼラチン、コラーゲン、ヒアルロン酸など）、好ましくは１型コラーゲン（例えば、ＣＯＮＴＩＧＥＮ（登録商標）コラーゲン）を含むことがあり、粘度増強剤は、（ａ）注射部位からの製剤の潜在的漏洩を低減し、および／または（ｂ）失禁をさらに処置するのに十分な量で含まれる。
【００３２】
その使用が本発明の範囲内であるどの特定の化合物の治療有効投与量も、化合物毎に、および患者毎にある程度変動し、患者の状態および送達経路によって決まる。一般に、ＳＤＦ−１の筋肉内注射の場合、注射１回当たり約１０または５０マイクログラム〜４００、８００または１０００マイクログラムの量が適切であり、ここで各対象は、１回の処置セッション当たり１回、括約筋組織に注射を受けるか、または各処置セッション当たり複数回（例えば、２、３、４、５、６回）、括約筋組織内の様々な部位において（例えば、括約筋または括約筋複合体の周囲に円周状に分布する部位において、患者体内への挿入は実質的に同じ深さで）括約筋組織に注射を受ける。注射は、括約筋複合体内の、平滑筋と骨格筋との間の境界またはその近傍に対してであってもよい。
【００３３】
尿道括約筋（または尿道括約筋複合体）の場合、注射は、外尿道括約筋における１つもしくは複数の部位に、および／または内尿道括約筋におけるもしくは複数の部位に対してであってもよい（メスの内尿道括約筋は、膀胱頸部と近位尿道との間の境界として規定される）。投与は、注射によるなど、任意の適切な手法であってよく、注射による場合、経尿道注射によって行うことができる。
【００３４】
肛門括約筋（または肛門括約筋複合体）の場合、注射は、外肛門括約筋の深層および／または表層における１つもしくは複数の部位に、ならびに／または内肛門括約筋における１つもしくは複数の部位に対してであってもよい。投与はやはり、注射によるなど、任意の適切な手法によるものであってよく、注射による場合、経直腸注射によるものであってよい。
【００３５】
処置セッションは、必要に応じて周期的に繰り返すことができる（例えば、２カ月または４カ月毎に１回）。核酸ベクターを投与する場合、注射部位において対応するレベルのＳＤＦ−１の発現を実現するのに有効な量で投与することができる。
【００３６】
本発明を、以下の非限定的な実施例でより詳細に説明する。
【実施例１】
【００３７】
＜霊長類失禁モデルにおけるＳＤＦ−１投与のインビボ評価＞
［方法］
成体メスのカニクイザル４５匹において、選択的に陰部神経支配を焼灼し、続いて切断することによって尿括約筋不全を生じさせた。括約筋複合体における骨格筋の随意神経支配である陰部神経の切断により、この複合体に対する随意神経支配が失われるだけでなく、括約筋複合体における骨格筋が損なわれ、括約筋複合体における平滑筋が損なわれ、括約筋複合体における血管形成が損なわれ、括約筋複合体における平滑筋の自律神経支配が損なわれた。
【００３８】
これらのサルの半数において損傷後６週間以内に、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）標識された自家の骨格筋前駆細胞５百万個を括約筋複合体に注射した。加えて６匹のサルには、細胞の代わりに、ケモカインである間質細胞由来因子１α（ＳＤＦ−１；ＣＸＣＬ−１２とも称する）（注射した合計２ミリリットル当たり、生理食塩水中にて２．３４ｍｇのコラーゲン１型と共に１００μｇのＳＤＦ−１）またはコラーゲン溶液を括約筋注射した。ベースライン、ならびに括約筋注射の３および６カ月後に全ての動物で最大尿道圧（ＭＵＰ）を測定した。注射の３または６カ月後に尿括約筋を、組織学的に筋肉およびコラーゲン含量、生来の細胞に対する注射した（ＧＦＰ＋）細胞の存在および分布、血管構造の存在、体性およびアドレナリン性神経支配、ならびに細胞の免疫組織化学的表現型について検査した。
【００３９】
［結果］
陰部神経の切断によって、細胞／ＣＸＣＬ−１２のいずれによる処置もしていないサルでは、ＭＵＰ、括約筋筋肉含量、血管分布および神経支配が６カ月にわたって持続的に減少した。細胞注射およびＣＸＣＬ−１２注射のいずれも、これらの測定値を、ベースライン、または非受傷対照サルの測定値にまで回復させた（図１Ａ〜１Ｂ）。処置した動物の、再生している括約筋複合体内の全ての細胞は、括約筋複合体の骨格および平滑筋層において適切な筋肉特異的タンパク質（骨格筋アクチン、スムーセリン（ｓｍｏｏｔｈｅｌｉｎ））、ならびに尿路上皮細胞マーカー（ウロプラキン、サイトケラチン）を発現していた。標識された（ＧＦＰ＋）細胞は、骨格および平滑筋層、脈管構造ならびに尿路上皮に組み込まれていることが、少数のみ（総数の５〜１０％）ではあるが見出すことができた。ＣＸＣＬ−１２は、括約筋複合体内の注射した細胞および生来の細胞で顕著に発現していた。
【００４０】
これらのデータから、注射した細胞およびケモカインのいずれも同程度に、この括約筋不全モデルにおける構造および機能を改善したことが示される。
【００４１】
より詳細には、ＳＤＦ−１注射によって、骨格筋構造および機能の改善、ならびに平滑筋構造および機能の改善の両方がもたらされ、いずれも、対象の括約筋複合体内で解剖学的に正しく組織されたかたちで起きていたことが観察された。加えて、ＳＤＦ−１注射によって、対象の括約筋複合体内の血管形成の改善、括約筋複合体における随意神経支配（骨格筋に対し特異性を有する）の改善、および括約筋複合体における不随意／自律神経支配（平滑筋に対し特異性を有する）の改善がもたらされた。
【００４２】
上記は本発明を例示しているのであって、本発明を限定するものと解釈してはならない。本発明は以下の特許請求の範囲によって規定され、その均等物も本発明に含まれる。
【図１Ａ】
2017514875.tif 000003
【図１Ｂ】
2017514875.tif 000004
【国際調査報告】
2017514875.tif 000005
2017514875.tif 000006