(57)【要約】本発明は、概して、１以上の熱に不安定な保護基を含む化合物、該化合物を含む組成物、前記化合物および組成物を作製する方法、並びに、前記化合物および組成物の使用方法に関する。一態様では、本発明は、構造ＸＯ−ＣＨ２−ＳＭ−Ｂ−Ａを有する化合物に関する。前記置換基Ｘは、Ｈ、酸に不安定な保護基、固相担体、−Ｐ（Ｏ−Ｒ１）ＮＲ２Ｒ３、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１）Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２またはそれらの塩である。前記置換基Ｒ１は、ＣＮＥ（つまり、シアノエチル）、アルキル、またはヘテロアルキルであり、Ｒ２およびＲ３は、独立して、アルキルである。前記置換基ＳＭは、天然フラノシルでない糖部位またはそれらの類縁体であり、Ｂは、塩基部位またはその類縁体であり、Ａは、構造−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４の塩基部位上または該部位内にある窒素に結合される部位であり、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルである。【選択図】図１
2017514802.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造がＸＯ−ＣＨ２−ＳＭ−Ｂ−Ａである化合物であって、
ここで、ＸはＨ、酸に不安定な保護基、固相担体、−Ｐ（Ｏ−Ｒ１）ＮＲ２Ｒ３、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１）Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、またはそれらの塩であり、Ｒ１は、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールであり、Ｒ２およびＲ３は、独立して、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールであり、あるいは、Ｒ２およびＲ３は、結合して、環状体、縮合環、縮合環状体、または複素環を形成し、ＳＭは、天然フラノシルでない糖部位またはその類縁体であり、Ｂは、塩基部位またはその類縁体であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４の塩基部位上または該塩基部位内にある窒素に結合される部位であり、Ｒ４がｔｅｒｔ−アルキルである、化合物。
【請求項２】
ＳＭが以下の部位、すなわち、
【化１】
2017514802.tif 000289
【化２】
2017514802.tif 000290
【化３】
2017514802.tif 000291
【化４】
2017514802.tif 000292
【化５】
2017514802.tif 000293
【化６】
2017514802.tif 000294
【化７】
2017514802.tif 000295
【化８】
2017514802.tif 000296
【化９】
2017514802.tif 000297
【化１０】
2017514802.tif 000298
【化１１】
2017514802.tif 000299
【化１２】
2017514802.tif 000300
【化１３】
2017514802.tif 000301
【化１４】
2017514802.tif 000302
【化１５】
2017514802.tif 000303
【化１６】
2017514802.tif 000304
【化１７】
2017514802.tif 000305
【化１８】
2017514802.tif 000306
【化１９】
2017514802.tif 000307
【化２０】
2017514802.tif 000308
【化２１】
2017514802.tif 000309
【化２２】
2017514802.tif 000310
【化２３】
2017514802.tif 000311
【化２４】
2017514802.tif 000312
【化２５】
2017514802.tif 000313
【化２６】
2017514802.tif 000314
【化２７】
2017514802.tif 000315
【化２８】
2017514802.tif 000316
【化２９】
2017514802.tif 000317
【化３０】
2017514802.tif 000318
【化３１】
2017514802.tif 000319
【化３２】
2017514802.tif 000320
【化３３】
2017514802.tif 000321
【化３４】
2017514802.tif 000322
【化３５】
2017514802.tif 000323
【化３６】
2017514802.tif 000324
【化３７】
2017514802.tif 000325
【化３８】
2017514802.tif 000326
【化３９】
2017514802.tif 000327
から選ばれる請求項１に記載の化合物であって、
ここで、「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間のリンカーを任意的に含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩であり、「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体であり、「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１であり、Ｒ１はｔｅｒｔ−アルキル基であり、「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間のリンカーを任意的に含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩であり、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２であり、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールであり、Ｚは、Ｈ、ＯＨまたはＯＲ３であり、Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールであり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールであり、「ｍ」および「ｏ」は、独立して、０、１、または２であり、「Ｒ」は、アルキル、置換アルキル、アリール、または置換アリールであり、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールであり、Ｒ７は、ＯＨ、ハライド、ＯＲ８、ＮＲ９Ｒ１０であり、Ｒ８は、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールであり、Ｒ９およびＲ１０は、独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである、化合物。
【請求項３】
「Ｂ」が以下の部位、すなわち、
【化４０】
2017514802.tif 000328
【化４１】
2017514802.tif 000329
【化４２】
2017514802.tif 000330
【化４３】
2017514802.tif 000331
【化４４】
2017514802.tif 000332
【化４５】
2017514802.tif 000333
【化４６】
2017514802.tif 000334
【化４７】
2017514802.tif 000335
【化４８】
2017514802.tif 000336
【化４９】
2017514802.tif 000337
【化５０】
2017514802.tif 000338
【化５１】
2017514802.tif 000339
【化５２】
2017514802.tif 000340
【化５３】
2017514802.tif 000341
【化５４】
2017514802.tif 000342
【化５５】
2017514802.tif 000343
【化５６】
2017514802.tif 000344
【化５７】
2017514802.tif 000345
【化５８】
2017514802.tif 000346
【化５９】
2017514802.tif 000347
から選ばれる請求項１に記載の化合物であって、
ここで、「Ａ」は、構造が、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１であり、Ｒ１は、ｔｅｒｔ―アルキル基であり、「Ｍ」は、窒素またはＣＲ３であり、Ｒ３は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈまたはアルキルであり、Ｒ１２は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈまたはアルキルであり、「Ｄ」および「Ｅ」は、独立して、ＮまたはＣＲ３であり、Ｒ３は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈまたはアルキルである、化合物。
【請求項４】
「Ａ」が以下の部位、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ３）２（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（Ｒ１４）（Ｒ１５）−リンカー−ラベル、および−Ｃ（Ｒ１４）（Ｒ１５）−リンカー−［固相担体］から選ばれ、Ｒ１４およびＲ１５が、独立して、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、およびＣＨ（ＣＨ３）２から選ばれる、
請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが、Ｈ、−Ｐ（Ｏ−Ｒ１）ＮＲ２Ｒ３、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２またはそれらの塩であり、Ｒ１が、アルキル、置換アルキル、アリール、または置換アリールであり、Ｒ２およびＲ３は、独立して、アルキル、置換アルキル、アリール、または置換アリールであるか、あるいはＲ２およびＲ３は、結合して、環状体、縮合環、縮合環状体、または複素環を形成する、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
構造がＸＯ−ＣＨ２−ＳＭ−Ｂ−Ａである化合物であって、
ここで、ＸはＨ、酸に不安定な保護基、固相担体、−Ｐ（Ｏ−Ｒ１）ＮＲ２Ｒ３、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１）Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、またはそれらの塩であり、Ｒ１は、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールであり、Ｒ２およびＲ３は、独立して、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールであり、あるいは、Ｒ２およびＲ３は、結合して、環状体、縮合環、縮合環状体、または複素環を形成し、ＳＭは、以下の構造のフラノシル部位である糖部位またはその類縁体であり、
【化６０】
2017514802.tif 000348
Ｂは、核酸塩基またはその類縁体であり、Ａは、前記核酸塩基上または前記核酸塩基内にある窒素に結合される部位であって、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
Ｙが、−ＯＰ（Ｏ−ＣＮＥ）ＮＲ１Ｒ２若しくは−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｈまたはそれらの塩である場合、Ｘは、酸に不安定な保護基または固相担体であり、Ｚは、ＨまたはＯＲ５であり、Ｒ５は、ヒドロキシ保護基であり、
Ｘが、−Ｐ（Ｏ−ＣＮＥ）（ＮＲ１Ｒ２）若しくは−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ３）Ｈまたはそれらの塩である場合、Ｙは、酸に不安定なヒドロキシ保護基または固相担体であり、ＺはＨであり、
Ｘが、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ３）Ｈ若しくは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ［Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（Ｏ−）］ｎＨまたはそれらの塩であり、ｎ＝０、１または２である場合、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ６であり、Ｒ６は、熱に不安定なヒドロキシ保護基であり、Ｚは、Ｈ、−ＯＨ、またはＯＲ６である、化合物。
【請求項７】
「Ｂ」が、以下の部位、すなわち、
【化６１】
2017514802.tif 000349
【化６２】
2017514802.tif 000350
【化６３】
2017514802.tif 000351
【化６４】
2017514802.tif 000352
【化６５】
2017514802.tif 000353
【化６６】
2017514802.tif 000354
【化６７】
2017514802.tif 000355
【化６８】
2017514802.tif 000356
【化６９】
2017514802.tif 000357
【化７０】
2017514802.tif 000358
【化７１】
2017514802.tif 000359
【化７２】
2017514802.tif 000360
【化７３】
2017514802.tif 000361
【化７４】
2017514802.tif 000362
【化７５】
2017514802.tif 000363
【化７６】
2017514802.tif 000364
【化７７】
2017514802.tif 000365
【化７８】
2017514802.tif 000366
【化７９】
2017514802.tif 000367
【化８０】
2017514802.tif 000368
から選ばれる請求項６に記載の化合物であって、
ここで、「Ａ」は、構造が、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１であり、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基であり、「Ｍ」は、窒素またはＣＲ３であり、Ｒ３は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈまたはアルキルであり、Ｒ１２は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈまたはアルキルであり、「Ｄ」および「Ｅ」は、独立して、ＮまたはＣＲ３であり、Ｒ３は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ４Ｒ５であり、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈまたはアルキルである、化合物。
【請求項８】
「Ａ」が、以下の部位、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ３）２（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（Ｒ１４）（Ｒ１５）−リンカー−ラベル、および−Ｃ（Ｒ１４）（Ｒ１５）−リンカー−［固相担体］から選ばれ、Ｒ１４およびＲ１５が、独立して、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、およびＣＨ（ＣＨ３）２から選ばれる、
請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、以下の群、すなわち、
【化８１】
2017514802.tif 000369
【化８２】
2017514802.tif 000370
【化８３】
2017514802.tif 000371
【化８４】
2017514802.tif 000372
【化８５】
2017514802.tif 000373
【化８６】
2017514802.tif 000374
【化８７】
2017514802.tif 000375
【化８８】
2017514802.tif 000376
から選ばれる請求項６に記載の化合物であって、
ここで、「Ｘ」は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２またはそれらの塩であり、「Ｚ」は、−Ｈまたは−ＯＨである、化合物。
【請求項１０】
構造が−Ｏ−ＣＨ２−ＳＭ（−Ｏ−）Ｂ−Ａであるヌクレオシドまたは修飾されたヌクレオシド類縁体を１個以上含む、オリゴヌクレオチドであって、
ここで、ＳＭは、糖部位またはその類縁体であり、Ｂは、核酸塩基部位またはその類縁体であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４である塩基部位上または塩基部位内にある窒素原子に結合される部位であり、Ｒ４が、ｔｅｒｔ−アルキルである、オリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
前記オリゴヌクレオチドは、以下の構造であり、
【化８９】
2017514802.tif 000377
ここで、ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体のいずれかであり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチドである、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】
前記オリゴヌクレオチドは、以下の構造のうちの一つであり、
【化９０】
2017514802.tif 000378
【化９１】
2017514802.tif 000379
ここで、ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体のいずれかであり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチドである、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１３】
前記オリゴヌクレオチドは、以下のオリゴヌクレオチドの群、すなわち、
【化９２】
2017514802.tif 000380
【化９３】
2017514802.tif 000381
【化９４】
2017514802.tif 000382
【化９５】
2017514802.tif 000383
【化９６】
2017514802.tif 000384
【化９７】
2017514802.tif 000385
【化９８】
2017514802.tif 000386
【化９９】
2017514802.tif 000387
【化１００】
2017514802.tif 000388
【化１０１】
2017514802.tif 000389
【化１０２】
2017514802.tif 000390
【化１０３】
2017514802.tif 000391
【化１０４】
2017514802.tif 000392
【化１０５】
2017514802.tif 000393
から選ばれ、
ここで、ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ―若しくはその類縁体のいずれかであり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチドである、オリゴヌクレオチド、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチド。
【請求項１４】
治療活性があるヌクレオシド、治療活性があるヌクレオシド類縁体、治療活性があるヌクレオチド、治療活性があるヌクレオチド類縁体、または治療活性があるオリゴヌクレオチドであって、
構造−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４の少なくとも１個以上の部位が、前記ヌクレオシド、前記ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、またはオリゴヌクレオチド上の核酸塩基に結合されていて、Ｒ４がｔｅｒｔ−アルキルである、
治療活性があるヌクレオシド、治療活性があるヌクレオシド類縁体、治療活性があるヌクレオチド、治療活性があるヌクレオチド類縁体、または治療活性があるオリゴヌクレオチド。
【請求項１５】
以下の群、すなわち、
【化１０６】
2017514802.tif 000394
【化１０７】
2017514802.tif 000395
【化１０８】
2017514802.tif 000396
【化１０９】
2017514802.tif 000397
【化１１０】
2017514802.tif 000398
【化１１１】
2017514802.tif 000399
【化１１２】
2017514802.tif 000400
【化１１３】
2017514802.tif 000401
【化１１４】
2017514802.tif 000402
【化１１５】
2017514802.tif 000403
【化１１６】
2017514802.tif 000404
【化１１７】
2017514802.tif 000405
【化１１８】
2017514802.tif 000406
【化１１９】
2017514802.tif 000407
【化１２０】
2017514802.tif 000408
【化１２１】
2017514802.tif 000409
から選ばれ、
ここで、Ａ１、Ａ２、およびＡ３は、独立して、Ｈまたは熱に不安定な保護基であり、前記熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８であり、Ｒ８は、ｔｅｒｔ−アルキル基であり、Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体である、請求項１４に記載の治療活性があるヌクレオシド、治療活性があるヌクレオシド類縁体、治療活性があるヌクレオチド、治療活性があるヌクレオチド類縁体、または治療活性があるオリゴヌクレオチド。
【請求項１６】
以下の群、すわなち、
【化１２２】
2017514802.tif 000410
【化１２３】
2017514802.tif 000411
【化１２４】
2017514802.tif 000412
【化１２５】
2017514802.tif 000413
【化１２６】
2017514802.tif 000414
【化１２７】
2017514802.tif 000415
から選ばれる請求項１４に記載の治療活性があるヌクレオシド、治療活性があるヌクレオシド類縁体、治療活性があるヌクレオチド、治療活性があるヌクレオチド類縁体、または治療活性があるオリゴヌクレオチド。
【請求項１７】
以下の群、すなわち、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８である少なくとも１つの熱に不安定な保護基を含み、Ｒ８がｔｅｒｔ−アルキルであるホミビルセン、および構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８である少なくとも１つの熱に不安定な保護基を含み、Ｒ８がｔｅｒｔ−アルキルであるミポメルセンから選ばれる、
請求項１４に記載の治療活性があるヌクレオシド、治療活性があるヌクレオシド類縁体、治療活性があるヌクレオチド、治療活性があるヌクレオチド類縁体、または治療活性があるオリゴヌクレオチド。
【請求項１８】
以下の構造のヌクレオチドまたはヌクレオチド類縁体を１個以上含み、
【化１２８】
2017514802.tif 000416
上記の構造１１７の置換基は以下の通り、すなわち、Ｌ１およびＬ２が、独立して、Ｈ、ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、およびラベルであって、前記ヌクレオチドまたは前記ヌクレオチド類縁体の結合位置に前記ラベルを結合する結合基があってもよいラベルであり、Ｌ３が、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０、または、ラベルであって、前記ヌクレオチドまたは前記ヌクレオチド類縁体の結合位置に前記ラベルを結合する結合基があってもよいラベルであり、Ｒ６０がｔｅｒｔ−アルキルであり、前記ラベルがＬ１、Ｌ２またはＬ３でない場合、該ラベルは、前記オリゴヌクレオチドの別のヌクレオチドに結合され、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である、オリゴヌクレオチド結合体。
【請求項１９】
オリゴヌクレオチドを合成する方法であって、該方法は、以下のステップ、すなわち、
１）直接的に、またはリンカーによって、化合物を固相担体に結合するステップであって、
ここで、前記化合物は、以下の構造のうちの１つであり、
【化１２９】
2017514802.tif 000417
【化１３０】
2017514802.tif 000418
ここで、「Ｐ１」は保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
以下の構造のうちの１つの固相担体を提供するステップと、
【化１３１】
2017514802.tif 000419
【化１３２】
2017514802.tif 000420
ここで、Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、
２）前記固相担体を脱保護して、以下の構造のうちの１つの脱保護された化合物を提供するステップと、
【化１３３】
2017514802.tif 000421
【化１３４】
2017514802.tif 000422
ここで、Ｌ１は、リンカーがあるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、
３）前記脱保護された化合物とリン原子を含む部位を含んでいる化合物とを反応させるステップであって、
ここで、前記化合物は、以下の構造のうちの１つであり、
【化１３５】
2017514802.tif 000423
【化１３６】
2017514802.tif 000424
ここで、「ＰＭ」は、リン含有部位であり、「Ｐ１」は、保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、
以下の構造のうちの１つのジヌクレオチドを提供するステップと、
【化１３７】
2017514802.tif 000425
【化１３８】
2017514802.tif 000426
ここで、「ＰＭ＊」は、前記反応後のリン含有部位であり、Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は、固相担体であり、「Ｐ１」は、保護基であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、
４）前記リン含有部位を化学修飾して、以下の構造のうちの１つの修飾されたダイマーを提供するステップと、
【化１３９】
2017514802.tif 000427
【化１４０】
2017514802.tif 000428
ここで、「ＰＭ＊＊」は、化学修飾されたリン含有部位であり、Ｌ１は、リンカーがあるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、「Ｐ１」は、保護基であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、
５）前記ダイマーまたは修飾されたダイマーを脱保護して、以下の構造のうちの１つの脱保護されたダイマーまたは修飾されたダイマーを提供するステップと、
【化１４１】
2017514802.tif 000429
【化１４２】
2017514802.tif 000430
【化１４３】
2017514802.tif 000431
【化１４４】
2017514802.tif 000432
ここで、「ＰＭ＊」は、ダイマーを提供するための反応後のリン含有部位であり、「ＰＭ＊＊」は、化学修飾されたリン含有部位であり、Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は、固相担体であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
６）ステップ「３」および「４」を繰り返して、以下の構造のうちの１つのオリゴマーまたは修飾されたオリゴマーを提供するステップと、
【化１４５】
2017514802.tif 000433
【化１４６】
2017514802.tif 000434
【化１４７】
2017514802.tif 000435
【化１４８】
2017514802.tif 000436
ここで、「Ｐ１」は保護基であり、「ＰＭ＊」はオリゴマーを提供するための反応後のリン含有部位であり、「ＰＭ＊＊」は、化学修飾されたリン含有部位であり、「Ｌ１」は、リンカーであるか、または化学物質がなく、「Ｓ１」は、固相担体であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、ｎは１〜２００の範囲の整数であり、
７）前記ダイマー、修飾されたダイマー、オリゴヌクレオチドまたは修飾されたオリゴヌクレオチドを脱保護し、前記固相担体からそれを除去し、前記ＰＭ＊またはＰＭ＊＊部位を化学修飾して、以下の構造の化合物を提供するステップと、
【化１４９】
2017514802.tif 000437
ここで、「Ｑ」は、ＯまたはＳであり、ｎは、１〜２００の範囲にある整数であり、少なくとも１つの「Ａ１」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体である、を備えるオリゴヌクレオチドの合成方法。
【請求項２０】
前記固相担体に結合される化合物は、以下の構造のうちの１つであり、
【化１５０】
2017514802.tif 000438
【化１５１】
2017514802.tif 000439
ここで、「Ｐ１」は保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は−ｔｅｒｔアルキルである、請求項１９に記載の合成方法。
【請求項２１】
前記固相担体に結合される化合物は、以下の構造のうちの１つであり、
【化１５２】
2017514802.tif 000440
【化１５３】
2017514802.tif 000441
ここで、「Ｐ１」は保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ａ１」は、−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、
【化１５４】
2017514802.tif 000442
【化１５５】
2017514802.tif 000443
ここで、「Ｐ１」は保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は、ｔｅｒｔ−アルキルである、Ｒ４は−ｔｅｒｔアルキルである、請求項１９に記載の合成方法。
【請求項２２】
ステップ「２」において脱保護される構造は、以下の構造のうちの１つであり、
【化１５６】
2017514802.tif 000444
【化１５７】
2017514802.tif 000445
ここで、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である、請求項１９に記載の合成方法。
【請求項２３】
ステップ「７」のオリゴマーは、以下の構造のうちの１つである、
【化１５８】
2017514802.tif 000446
請求項１９に記載の合成方法。
ここで、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ｑ」はＯまたはＳである。
【請求項２４】
オリゴヌクレオチドを合成する方法であって、該方法は、以下のステップ、すなわち、
１）直接的に、またはリンカーによって、化合物を固相担体に結合するステップであって、
ここで、前記化合物は、以下の構造のうちの１つであり、
【化１５９】
2017514802.tif 000447
【化１６０】
2017514802.tif 000448
ここで、「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
以下の構造のうちの１つの化合物に結合される固相担体を提供するステップと、
【化１６１】
2017514802.tif 000449
【化１６２】
2017514802.tif 000450
ここで、「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は、固相担体であり、
２）前記固相担体を脱保護して、以下の構造のうちの１つの脱保護された化合物を提供するステップと、
【化１６３】
2017514802.tif 000451
【化１６４】
2017514802.tif 000452
ここで、「Ｐ２」は保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、
３）前記脱保護された化合物を、リン原子を含む部位を含む化合物と反応させるステップであって、
ここで、前記化合物は、以下の構造のうちの１つであり、
【化１６５】
2017514802.tif 000453
【化１６６】
2017514802.tif 000454
ここで、「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
以下の構造のうちの１つのジヌクレオチドを提供するステップと、
【化１６７】
2017514802.tif 000455
【化１６８】
2017514802.tif 000456
ここで、「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１は、リンカーがあるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、
４）リン含有部位を化学修飾して、以下の構造のうちの１つの修飾されたダイマーを提供するステップと、
【化１６９】
2017514802.tif 000457
【化１７０】
2017514802.tif 000458
ここで、「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、
５）前記ダイマーまたは修飾されたダイマーを脱保護して、以下の構造のうちの１つの脱保護されたダイマーまたは修飾されたダイマーを提供するステップと、
【化１７１】
2017514802.tif 000459
【化１７２】
2017514802.tif 000460
【化１７３】
2017514802.tif 000461
【化１７４】
2017514802.tif 000462
ここで、「Ｐ２」は、保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、「ＰＭ＊」は、前記結合反応後のリン含有部位であり、「ＰＭ＊＊」は、化学修飾されたリン含有部位であり、
６）ステップ「３」および「４」を繰り返して、以下の構造のうちの１つのオリゴマーまたは修飾されたオリゴマーを提供するステップと、
【化１７５】
2017514802.tif 000463
【化１７６】
2017514802.tif 000464
【化１７７】
2017514802.tif 000465
【化１７８】
2017514802.tif 000466
ここで、「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」は、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は、固相担体であり、「ＰＭ＊」は、前記結合反応後のリン含有部位であり、「ＰＭ＊＊」は、化学修飾されたリン含有部位であり、「ｎ」は１〜２００の範囲にある整数であり、
７）前記ダイマー、修飾されたダイマー、オリゴヌクレオチドまたは修飾されたオリゴヌクレオチドを脱保護し、前記固相担体から、それを除去し、前記ＰＭ＊またはＰＭ＊＊部位を化学修飾して、以下の構造のうちの１つの化合物を提供するステップと、
【化１７９】
2017514802.tif 000467
ここで、「ｎ」は、１〜２００の範囲にある整数であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、少なくとも１つの「Ａ１」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｑ」はＯまたはＳである、を備えるオリゴヌクレオチドの合成方法。
【請求項２５】
前記方法のステップ「７」におけるオリゴマーは、以下の構造であり、
【化１８０】
2017514802.tif 000468
ここで、「Ａ１」は、−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ｑ」は、ＯまたはＳである、請求項２４に記載のオリゴヌクレオチドの合成方法。
【請求項２６】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、ＤＮＡを増幅する方法であって、
該方法は、
核酸塩基の環構造上または該環構造内にある窒素原子上に少なくとも１つの熱に不安定な保護基を有する、１以上のデオキシヌクレオチド三リン酸を使用することを備え、前記保護基は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４は、ｔｅｒｔ−アルキルである、
ＤＮＡの増幅方法。
【請求項２７】
前記方法は、以下のステップ、すなわち、
１）ターゲットＤＮＡと、ＤＭＡポリメラーゼと、プライマーと、デオキシヌクレオチド三リン酸（ｄＮＴＰ）とを含む反応混合物を提供するステップと、ここで、１以上のｄＮＴＰは、以下の構造のうちの１つであり、
【化１８１】
2017514802.tif 000469
【化１８２】
2017514802.tif 000470
ここで、「ＴＰ」は、三リン酸であり、「Ａ１」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
【化１８３】
2017514802.tif 000471
【化１８４】
2017514802.tif 000472
ここで、「ＴＰ」は、三リン酸であり、「Ａ１」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
【化１８５】
2017514802.tif 000473
【化１８６】
2017514802.tif 000474
ここで、「ＴＰ」は、三リン酸であり、「Ａ１」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
【化１８７】
2017514802.tif 000475
ここで、「ＴＰ」は、三リン酸であり、「Ａ１」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
２）所定時間前記反応混合物を加熱し、前記ターゲットＤＮＡを変性させ、これにより、一本鎖ＤＮＡ鋳型を提供するステップと、
３）所定時間前記反応混合物の温度を下げて、これにより、プライマーを前記一本鎖ＤＮＡ鋳型にアニールすることを可能にして、プライマー−鋳型複合物を提供し、前記プライマー−鋳型複合物への前記ＤＮＡポリメラーゼの結合を可能にするステップと、
４）前記反応混合物を加熱して、５’から３’の方向に前記ｄＮＴＰを前記ＤＮＡ鋳型に添加することによって、前記ＤＮＡポリメラーゼが、前記ターゲットＤＮＡと相補的となるＤＮＡ鎖を合成することを可能にするステップと、を備え、
これにより、ＤＮＡを増幅する、
請求項２６に記載のＤＮＡの増幅方法。
【請求項２８】
ポリメラーゼ連鎖反応を用いてＤＮＡを増幅する方法であって、
前記方法は、
１個以上のプライマーであって、前記プライマーの核酸塩基の環構造上または前記環構造内にある窒素原子上の１以上の熱に不安定な保護基を有する１個以上のプライマーを用いることを備え、
前記保護基は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルである、
ＤＮＡの増幅方法。
【請求項２９】
前記方法は、以下のステップ、すなわち、
１）ターゲットＤＮＡと、ＤＮＡポリメラーゼと、プライマーと、デオキシヌクレオチド三リン酸とを含む反応混合物を提供するステップと、ここで、１以上のプライマーは、以下の構造であり、
【化１８８】
2017514802.tif 000476
ここで、「ｎ」は１〜５０の間の整数であり、「Ｂ」は核酸塩基であり、「Ａ」は、Ｈまたは構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基のいずれかであり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであるが、少なくとも１つの「Ａ」は熱に不安定な保護基であり、
２）所定時間前記反応混合物を加熱し、前記ターゲットＤＮＡを変性させ、これにより、一本鎖ＤＮＡ鋳型を提供するステップと、
３）所定時間前記反応混合物の温度を下げて、これにより、プライマーを前記一本鎖ＤＮＡ鋳型にアニールすることを可能にして、プライマー−鋳型複合物を提供し、前記プライマー−鋳型複合物への前記ＤＮＡポリメラーゼの結合を可能にするステップと、
４）前記反応混合物を加熱して、５’から３’の方向に前記ｄＮＴＰを前記ＤＮＡ鋳型に添加することによって、前記ＤＮＡポリメラーゼが、前記ターゲットＤＮＡと相補的となるＤＮＡ鎖を合成することを可能にするステップと、を備え、
これにより、ＤＮＡを増幅する、
請求項２８に記載のＤＮＡの増幅方法。
【請求項３０】
患者の病気を治療する方法であって、
前記方法は、以下のステップ、すなわち、
１）化合物を、それを必要とする患者に塗布するステップと、ここで、前記化合物は、ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体と、１以上の熱に不安定な保護基とを含み、少なくとも１つの熱に不安定な保護基は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８であり、Ｒ８はｔｅｒｔ−アルキル基であり、
２）前記患者の１以上の領域に熱エネルギーを与えて、その結果、前記ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシド、またはヌクレオシド類縁体を熱的に脱保護するステップと、を備え、
これにより、前記病気を治療する、
患者の病気の治療方法。
【請求項３１】
塗布される化合物は、以下の構造のうちの１であり、
【化１８９】
2017514802.tif 000477
【化１９０】
2017514802.tif 000478
ここで、「Ａ１」、「Ａ２」、および「Ａ３」は、独立して、−Ｈまたは熱に不安定な保護基であるが、Ａ１、Ａ２、またはＡ３の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体である、請求項３０に記載の患者の病気の治療方法。
【請求項３２】
患者の病気を治療する方法であって、
前記方法は、以下のステップ、すなわち、
１）化合物を、それを必要とする患者に塗布するステップと、ここで、前記化合物は、オリゴヌクレオチドと１以上の熱に不安定な保護基とを含み、前記熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８であり、Ｒ８は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
２）前記患者の１以上の領域に熱エネルギーを与えて、その結果、前記オリゴヌクレオチドを熱により脱保護するステップと、を備え、
これにより、前記病気を治療する、
患者の病気の治療方法。
【請求項３３】
前記オリゴヌクレオチドは、ホミビルセンまたはミポメルセンである、
請求項３２に記載の患者の病気の治療方法。
【請求項３４】
ヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体の三リン酸を製造する方法であって、
前記方法は、以下のステップ、すなわち、
１）以下の構造のヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体を含む反応混合物にモノリン薬剤を加えるステップであって、
【化１９１】
2017514802.tif 000479
ここで、ＹはＯＰ１であり、Ｐ１は保護基であり、ＺはＨまたはＯＰ２であり、Ｐ２は保護基であり、Ｂは核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである、
以下の構造のモノリン酸化された中間体を提供するステップと、
【化１９２】
2017514802.tif 000480
ここで、ＹはＯＰ１であり、Ｐ１は保護基であり、ＺはＨまたはＯＰ２であり、Ｐ２は保護基であり、Ｂは核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、Ａは、その構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、「ＰＭ」は、単一のリン原子を含む部位であり、
２）前記リン酸化された中間体にポリリン薬剤を加えて、以下の構造のポリリン酸化された中間体を提供するステップと、
【化１９３】
2017514802.tif 000481
ここで、ＹはＯＰ１であり、Ｐ１は保護基であり、ＺはＨまたはＯＰ２であり、Ｐ２は保護基であり、Ｂは核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、「ＰＰ」は、複数のリン原子を含む部位であり、
３）ポリリン酸化された中間体を加水分解し、Ｐ１を除去して、以下の構造のヌクレオシド酸リン酸またはヌクレオシド類縁体の三リン酸を提供するステップと、
【化１９４】
2017514802.tif 000482
ここで、ＹはＯＰ１であり、Ｐ１は保護基であり、ＺはＨまたはＯＰ２であり、Ｐ２は保護基であり、Ｂは核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである、を備えるヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体の三リン酸の製造方法。
【請求項３５】
ヌクレオシド、ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド、およびヌクレオチド類縁体を脱保護する方法であって、
保護される化合物は、構造がＸＯ−ＳＭ−Ｂ−Ａであり、「Ｘ」はＨ、保護基、固相担体、リン含有部位またはその塩であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ｂ」は塩基部位または塩基部位の類縁体であり、「Ａ」は、前記塩基部位上または該部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）Ｒ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基であり、
前記方法は、以下のステップ、すなわち、
ｐＨが７．０より大きい溶媒の存在下において、９０℃〜１００℃の範囲の温度で、４５分未満の間、前記化合物を加熱するステップを備え、
これにより、前記脱保護された化合物を提供する、
脱保護方法。
【請求項３６】
以下の構造のオリゴヌクレオチドを脱保護する方法であって、
【化１９５】
2017514802.tif 000483
ここで、「ＰＬ１」および「ＰＬ２」は、独立して、Ｈまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体のいずれかであり、「Ｎｕ１」および「Ｎｕ２」は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体、またはオリゴヌクレオチドであり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ」は、前記核酸塩基部位上または該部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基であり、
前記方法は、以下のステップ、
ｐＨが７．０より大きい溶媒の存在下において、９０℃〜１００℃の範囲の温度で、４５分未満の間、前記化合物を加熱するステップを備え、
これにより、前記脱保護された化合物を提供する、
脱保護方法。
【請求項３７】
オリゴヌクレオチド合成のための装置であって、
該装置は、
ａ）前記オリゴヌクレオチドの合成のために用いられる化学薬剤を含む１以上の貯槽であって、合成室に種々の薬剤を流入させることができるシステム内に動作可能に接続される貯槽と、
ｂ）オリゴヌクレオチド合成を伴う種々の化学反応が実行される合成室への薬剤流れを誘発する機構と、
前記合成室は、その温度を制御するための内部または外部の手段を備える、
オリゴヌクレオチド合成のための装置。
【請求項３８】
前記合成室は、固相担体を含む合成カラムを備え、前記合成室の温度を制御する手段は、前記合成室内の前記薬剤の温度を制御する、
請求項３７に記載の装置。
【請求項３９】
前記合成室内の前記薬剤を加熱することは、構造−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０を有する基、ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基である、を除去することによって、前記オリゴヌクレオチドの脱保護を誘発する、
請求項３８に記載の装置。
ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル基である。
【請求項４０】
前記オリゴヌクレオチドを加熱することは、前記固相担体からの前記オリゴヌクレオチドの開裂を誘発させる、
請求項３９に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、概して、１または複数の熱に不安定な部位を含む化合物、該化合物を含んでいる組成物、前記化合物および組成物の製造方法、および前記化合物および組成物の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
温和な条件下で除去され得る分子部位は、広範な化合物の合成および作用に関して重要である。そのため、科学者は、このような化合物の発見および使用に関する鋭意研究を行っている。この研究には、複雑な合成方法において用いられる保護基に関する研究が含まれる。
【０００３】
例えば、名称が「ヌクレオシドアミノ保護基としての５−ペンテノイル部位、４−ペンテノイル保護型のヌクレオチドシントン、および関連するオリゴヌクレオチドシントン」であるＵＳＰ  ５,６１４,６２２が、１９９７年３月２５日に発行された。前記特許で論じられている発明は、報告されているところでは、以下に関する。要すれば、「本発明は、既存の方法よりも温和な条件下において、オリゴヌクレオチドの脱保護を可能にするオリゴヌクレオチドを合成するための新たな方法を提供する。本発明は、さらに、オリゴヌクレオチド合成条件下においては安定であるが、既存の保護基よりも温和な条件下において除去され得るヌクレオシドの塩基の保護基、並びにそのような塩基の保護基を有するヌクレオシド・シントン類を提供する。」
【０００４】
名称が「熱に不安定なリンの保護基、それに関連する中間体、およびその使用方法」であるＵＳＰ６,７６２,２９８の別の例が、２００４年７月１３日に発行された。前記特許で論じられている発明は、報告されているところでは、以下に関する。要すれば、「本発明は、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間のリン結合を熱により脱保護する方法を提供する。該方法は、前記オリゴヌクレオチドを保護するために、実質的に中性のｐＨの流体媒体中において、保護されたヌクレオチドを加熱することを備える。本発明は、さらに、上述のような熱による脱保護法を用いてオリゴヌクレオチドを合成する方法、および新規なオリゴヌクレオチド並びに本発明に従って使用される熱に不安定な保護基を含む中間体を提供する。
【０００５】
名称が「熱不安定性の水酸基の保護基およびその使用方法」であるＵＳＰ７,３５５,０３７の別の例が、２００８年４月８日に発行された。前記特許で論じられている発明は、報告されているところでは、以下に関する。要すれば、「式Ｒ--Ｏ--Ｐｇで表される水酸基が保護されたアルコールであって、Ｐｇが以下の式で表される保護基であるアルコールが提供される。
【０００６】
【化１】
2017514802.tif 000003
【０００７】
【化２】
2017514802.tif 000004
ここで、Ｙ,Ｚ,Ｗ,Ｒ１,Ｒ１ａ,Ｒ２,Ｒ２ａ,Ｒ３,Ｒ３ａ,Ｒ４,Ｒ４ａ,ａ,ｂ,ｃ,ｄ,ｅおよびｆは、本明細書において定義され、Ｒは、ヌクレオシジル基、２〜約３００のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオシジル基、または２〜約３００のヌクレオシドを有するオリゴマーである。また、脱保護方法も提供される。該脱保護方法は、水酸基が保護されたアルコールを、水酸基を保護している基を該アルコールから熱により開裂するのに有効な温度で、加熱することを含む。」
【０００８】
名称が「熱により開始される核酸の増幅のための化学修飾されたヌクレオシド５’−ヌクレオシド三リン酸」であるＵＳＰ８,１３３,６６９の別の例が、２０１２年３月１３日に発行された。前記特許で論じられている発明は、以下に関する。要すれば、「本明細書では核酸複製のための方法および組成物が提供される。これらの方法は、核酸の複製反応における、３’置換されたヌクレオシド５’三リン酸または３’置換された末端プライマーの使用を伴う。ある態様では、前記方法は、核酸複製において有用である３’置換されたＮＴＰおよび／または３’置換された末端プライマーの使用によって実現される。好ましい実施形態では、ＮＴＰおよび／またはプライマーは、３’位においてエーテル、エステルまたは炭酸エステルのような特に熱に不安定な化学基で置換される。」
【０００９】
このように、温和な条件下で除去され得る分子部位について行われてきた研究が行われてきたが、当該技術分野において、新規な分子部位、並びにそれに関連する組成物およびそれに関連する方法に対する要求がなお存在する。
【発明の概要】
【００１０】
一態様では、本発明は、構造がＸＯ−ＣＨ２−ＳＭ−Ｂ−Ａである化合物に関する。置換基ＸはＨ、酸に不安定な保護基、固相担体、−Ｐ（Ｏ−Ｒ1）ＮＲ２Ｒ３、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１）Ｈ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２またはそれらの塩である。置換基Ｒ１は、ＣＮＥ、アルキルまたはヘテロアルキルであり、Ｒ２およびＲ３は、独立して、アルキルである。置換基ＳＭは、天然フラノシルでない糖部位またはその類縁体であり、Ｂは、塩基部位、またはその類縁体であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４である塩基部位の窒素上または窒素中に結合される部位であり、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルである。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、ポリマー（例えば、ＤＮＡオリゴマー）を合成するために使用される装置の概略図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、概して、１または複数の熱に不安定な保護基を含む化合物、該化合物を含んでいる組成物、前記化合物および組成物の製造方法、並びに前記化合物および組成物の使用方法に関する。
【００１３】
「リンカー」は、典型的には、求電子性または求核性の官能基のいずれかを有する両末端で終結する、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールである。そのような官能基の非限定的な例には、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）−、Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ２１）−、Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｎ（Ｒ２２）−、−Ｏ−、−Ｓ−が含まれる。ここで、Ｒ２１およびＲ２２は、独立して、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。リンカーの非限定的な例には、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣ６Ｈ５ＯＣＨ２Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）であって、ｎが０、１、２、３、４または５であるもの、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｈ）−であって、ｎが１、２、３、４または５であるもの、―Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−であって、ｎが１、２、３、４または５であるもの、および−Ｎ（Ｈ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｈ）−であって、ｎが１、２、３、４または５であるものが含まれる。
【００１４】
「ラベル」は、（例えば、光学的に、電子的に、磁気的に、および化学的に）検出されることが可能な部位である。ラベルの部類の非限定的な例には、蛍光色素、蛍光消光分子、金属配位のためのキレート剤、膜溶解剤（例えば、コレステロール）、挿入剤（例えば、アクリジン）、ＤＮＡ小溝結合剤、並びに、アジドおよびアルキン（例えば、クリックケミストリー）が含まれる。
【００１５】
蛍光色素の種類の非限定的な例には、アクリジン色素、シアニン色素（例えば、サイバーグリーン）、フルオレン色素（例えば、フルオレセイン）、オキサジン色素（例えば、ナイルブルー、ナイルレッド）、フェナントリジン色素、ローダミン色素（例えば、テキサスレッド）が含まれる。蛍光色素の非限定的な例には、ＦＡＭ、ＴＥＴ、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ  Ｇｏｌｄ  ５４０、ＨＥＸ、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ  Ｏｒａｎｇｅ  ５６０、Ｑｕａｓａｒ  ４７０、５−ＴＡＭＲＡ、ＣＡ  Ｌ  Ｆｌｕｏｒ  Ｒｅｄ  ５９０、Ｃｙ３、Ｔ（Ｒｏｘ）、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ  Ｒｅｄ  ６１０、ＣＡＬ  Ｆｌｕｏｒ  Ｒｅｄ  ６３５、Ｔ（ＪＯＥ）、Ｃｙ５、Ｑｕａｓａｒ  ６７０、Ｑｕａｓａｒ  ７０５が含まれる。
【００１６】
蛍光消光分子の非限定的な例には、ＢＨＱ−１、ＢＨＱ−２、ＤＡＢＣＹＬ、Ｐｕｌｓａｒ  ６５０が含まれる。
【００１７】
「固相担体」は、固相ポリマー合成において使用される材料である。典型的には、モノマーは、直接的またはリンカーによってのいずれかで、前記固相担体に共有結合され、続いて、他のモノマーを添加することによって、ポリマー鎖が、前記固相担体上で成長される。オリゴヌクレオチドの合成は、非膨潤性または低膨潤性の固相担体上で最適に進行する。オリゴヌクレオチド合成のために頻繁に使用される固相担体は、細孔性ガラス（ＧＰＣ）およびポリスチレン（マクロ多孔性ポリスチレン）である。
【００１８】
「リン含有部位」は、少なくとも１つのリン原子を含んでいる化学基である。リン含有部位の非限定的な例には、−Ｐ（ＯＲ２３）ＮＲ２４Ｒ２５−、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ２３）ＮＲ２４Ｒ２５、−Ｐ（ＯＨ）２、−Ｐ（ＯＲ２３）ＯＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ２３）、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）２、および先述の化合物の塩が含まれる。Ｒ２３はアルキル（例えば、−ＣＨ３）、置換アルキル（例えば、−ＣＨ２ＣＨ２−ＥＷＧ、ここで「ＥＷＧ」は−ＣＮまたは−Ｐｈ−ＮＯ２のような電子吸引基である）、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリールである。Ｒ２４およびＲ２５は、独立に、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリールであり、あるいは、結合して、環状体、縮合環、縮合環状体、または複素環を形成する。
【００１９】
リン薬剤の議論については、以下を参照されたい。Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．；Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ  Ｍ．Ｈ．（１９８１）.“Ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ−Ａ  ｎｅｗ  ｃｌａｓｓ  ｏｆ  ｋｅｙ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｄｅｏｘｙｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２２：１８５９−１８６２；Ｌｉｎ，Ｋ．−Ｙ．，Ｍａｔｔｅｕｃｃｉ，Ｍ．Ｄ．（１９９８）．“Ａ  ｃｙｔｏｓｉｎｅ  ａｎａｌｏｇ  ｃａｐａｂｌｅ  ｏｆ  ｃｌａｍｐ−ｌｉｋｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ａ  ｇｕａｎｉｎｅ  ｉｎ  ｈｅｌｉｃａｌ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ”．Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２０（３３）：８５３１−８５３２；Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｊ．；Ｍａｒｕｇｇ，Ｊ．Ｅ．；Ｔａａｇａａｒｄ，Ｍ．；Ｖａｎ  Ｂｏｏｍ，Ｊ．Ｈ．；Ｄａｈｌ，Ｏ．（１９８６）．“Ｐｏｌｙｍｅｒ−ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｄｅｏｘｙｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｐｒｅｐａｒｅｄ  ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅｓ”．Ｒｅｃ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ．Ｐａｙｓ−Ｂａｓ  １０５（１）：３３−３４；Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｊ；Ｔａａｇａａｒｄ，Ｍ．；Ｍａｒｕｇｇ，Ｊ．Ｅ．；Ｖａｎ  Ｂｏｏｍ，Ｊ．Ｈ．；Ｄａｈｌ，Ｏ．（１９８６）．“Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ  Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ｔｅｔｒａｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉａｍｉｄｉｔｅ  ｆｏｒ  ｉｎ  ｓｉｔｕ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ”．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４（１８）：７３９１−７４０３；Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｊ．；Ｍａｒｕｇｇ，Ｊ．Ｅ．；Ｖａｎ  Ｂｏｏｍ，Ｊ．Ｈ．；Ｈｏｎｎｅｎｓ，Ｊ．；Ｔａａｇａａｒｄ，Ｍ．；Ｄａｈｌ，Ｏ．（１９８６）．“Ｔｈｅｒｍａｌ  ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｓｏｍｅ  ａｌｋｙｌ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｓｉａｍｉｄｉｔｅｓ”．Ｊ．Ｃｈｅｍ  Ｒｅｓ．Ｓｙｎｏｐｓｅｓ（１）：２６−２７；Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｊ；Ｄａｈｌ．Ｏ．（１９８７）．“Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ  Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−ｔｅｔｒａｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉａｍｉｄｉｔｅ（ｉＰｒ２Ｎ）２ＰＯＣＨ２ＣＨ２ＣＮ）”．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５（８）：３６２６；Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．（２００１）．“２−Ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ  Ｔｅｔｒａｉｓｏｐｒｏｐｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｏｄｉａｍｉｄｉｔｅ”．ｅ−ＥＲＯＳ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｓｉｎｈａ，Ｎ．Ｄ．；Ｂｉｅｒｎａｔ，Ｊ．；Ｋｏｅｓｔｅｒ，Ｈ．（１９８３）．“β−Ｃｙａｎｏｅｈｙｌ  Ｎ，Ｎ−ｄｉａｌｋｙｌａｍｉｎｏ／Ｎ−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｍｏｎｏｃｈｌｏｒｏ  ｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄｉｔｅｓ，ｎｅｗ  ｐｈｏｓｐｈｉｔｙｌａｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ  ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｎｇ  ｅａｓｅ  ｏｆ  ｄｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｗｏｒｋ��ｕｐ  ｏｆ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ”．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２４（５２）：５８４３−５８４６；Ｍａｒｕｇｇ，Ｊ．Ｅ；Ｂｕｒｉｋ，Ａ．；Ｔｒｏｍｐ，Ｍ．；Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｍａｒｅｌ，Ｇ．Ａ．；Ｖａｎ  Ｂｏｏｍ，Ｊ．Ｈ．（１９８６）．“Ａ  ｎｅｗ  ａｎｄ  ｖｅｒｓａｔｉｌｅ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖａｌｕａｂｌｅ  ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ３’−ｐｈｏｓｐｈｉｔｅ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ”．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２４（２０）：２２７１−２２２７４；Ｇｕｚａｅｖ，Ａ．Ｐ．；Ｍａｎｏｈａｒａｎ，Ｍ．（２００１）．“２−Ｂｅｎｚａｍｉｄｏｅｔｈｙｌ  ｇｒｏｕｐ−ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｙｐｅ  ｏｆ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ  ｆｏｒ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”．Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２３（５）：７８３−７９３；Ｓｐｒｏａｔ，Ｂ．；Ｃｏｌｏｎｎａ，Ｆ．；Ｍｕｌｌａｈ，Ｂ．；Ｔｓｏｕ，Ｄ．；Ａｎｄｒｕｓ，Ａ．；Ｈａｍｐｅｌ，Ａ．；Ｖｉｎａｙａｋ，Ｒ．（Ｆｅｂ  １９９５）．“Ａｎ  ｅｆｆｃｉｅｎｔ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ”．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １４（１＆２）：２５５−２７３；Ｓｔｕｔｚ，Ａ．；Ｈｏｂａｒｔｎｅｒ，Ｃ．；Ｐｉｔｓｃｈ，Ｓ．（Ｓｅｐ  ２０００）.“Ｎｏｖｅｌ  ｆｌｕｏｒｉｄｅ−ｌａｂｉｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｂａｓｅ−ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ３’（２’）−Ｏ−ａｍｉｎｏ−ａｃｙｌａｔｅｄ  ＲＮＡ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ”．Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ  ８３（９）：２４７７−２５０３；Ｗｅｌｚ，Ｒ．；Ｍｕｌｌｅｒ，Ｓ（Ｊａｎ  ２００２）．“５−（Ｂｅｎｚｙｌｍｅｒｃａｐｔｏ）−１Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｅ  ａｓ  ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｆｏｒ  ２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ  ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｉｔｅ  ｂｕｉｌｄｉｎｇ  ｂｌｏｃｋｓ  ｉｎ  ＲＮＡ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒ  ４３（５）：７９５−７９７；Ｖａｒｇｅｅｓｅ，Ｃ．；Ｃａｒｔｅｒ，Ｊ．；Ｙｅｇｇｅ，Ｊ．；Ｋｒｉｖｊａｎｓｋｙ，Ｓ．；Ｓｅｔｔｌｅ，Ａ．；Ｋｒｏｐｐ，Ｅ．；Ｅｇｙｅｄ，Ｏ．；Ｓａｇｉ，Ｇ．（２００９）．“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｓｔｒｕｃｔｕａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｖａｒｉｏｕｓｌｙ  ｏｘｉｄｉｚｅｄ  ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｉｃ  ５’−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｔｒｉｔｙｌ−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ−３’−Ｏ−［Ｏ−（２−ｃｙａｎｏｅｔｈｙｌ）−Ｎ，Ｎ−ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ］―ｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄｉｔｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ.Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐ＝Ｏ，Ｐ＝Ｓ，ａｎｄ  Ｐ＝Ｓｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ＮＭＲ  ｓｐｅｃｔｒａｌ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｒｏｇｒａｐｈｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．”．Ｃｈｉｒａｌｉｔｙ  ２１（７）：６６３−６６７；Ｍ．Ｊ．；Ｏｇｌｖｉｅ，Ｋ．Ｋ．（１９８０）．“Ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄａｔｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｏｆ  ｄｉｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅｓ．”．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２１（４３）：４１５３−４１５４；Ｗｉｌｋ，Ａ．；Ｕｚｎａｎｓｋｉ，Ｂ．；Ｓｔｅｃ，Ｗ．Ｊ．（１９９１）．“Ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｂｓｏｌｕｔｅ  ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ  ａｔ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ  ｉｎ  ｄｉｔｈｙｍｉｄｙｌｙｌ（３’，５’）ｐｈｏｓｐｈｏｒｍｏｒｐｈｏｌｉｄａｔｅｓ  ａｎｄ  −ｐｈｏｓｐｈｏｍｏｒｐｈｏｌｉｄｏｔｈｉｏａｔｅｓ．”．Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ＆  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １０（１−３）：３１９−３２２．先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【００２０】
「保護基」は、合成操作の間に反応性の官能基を保護するために一般的に使用される化学部位である。保護基の非限定的な種類には、酸に不安定な保護基、塩基に不安定な保護基、還元に不安定な保護基、光に不安定な保護基、および熱に不安定な保護基が含まれる。
【００２１】
酸に不安定な保護基の非限定的な例には、トリチル、モノメトキシトリチル、４,４’
−ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）、β−メトキシエトキシメチルエーテル（ＭＥＭ）、メトキシメチルエーテル（ＭＯＭ）、メチルチオメチルエーテル、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロピラン−４−イル、テトラヒドロフラニル（ＴＨＦ）、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、シリルエーテル（例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリルオキシメチル（ＴＯＭ）が含まれる。前記シリルエーテルはまた、フッ化物イオンに不安定である。
【００２２】
塩基に不安定な保護基の非限定的な例には、ベンゾイルおよび他のアリールカルボン酸誘導体、アセチルおよび他のアルキルカルボン酸誘導体、アルキルまたはアリールオキシアセテート、トリハロアセテート、ジハロアセテート、アシルオキシメチルエーテル、フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、シアノエチル、−ＣＨ２ＣＨ２−ＥＷＧ（ここで、「ＥＷＧ」は、−ＰｈＮＯ２または−Ｃ（Ｏ）−のような電子吸引性基である）のような置換アルキル基、シアノエチルオキシカルボニルが含まれる。還元に不安定な保護基の非限定的な例には、ベンジルおよび置換された類縁体、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、アリルオキシカルボニルが含まれる。光に不安定な保護基の非限定的な例には、ｏ−ニトロベンジルエーテルおよび置換された誘導体、ｏ−ニトロベンジルカルバメートが含まれる。熱に不安定な保護基の非限定的な例には、ｔｅｒｔ−ブチルオキシエチルエーテル（ヒドロキシ基）、４−オキソアルキルエステル、３−アシルアミノプロピルエステル、４−カルボキシプロピルエステルのアミドおよびエステル、５−アルキルチオアルキルエステルが含まれる。
【００２３】
「アルキル」は、一般式ＣｎＨ２ｎ＋１を有する化学部位である。アルキル基は、典型的には、以下の種類のものである。すなわち、低級アルキル、高級アルキル、環状アルキル、および分岐アルキルである。低級アルキル基は、６個以下の炭素原子を有する。非限定的な例には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、およびペンチルが含まれる。高級アルキルは、７個以上の炭素原子を有する。非限定的な例には、ヘプチル、オクチル、ノニルが含まれる。環状アルキルは、環構造を形成しているアルキルであり、式ＣｎＨ２ｎ−１で表される。非限定的な例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが含まれる。分岐アルキルは、Ｈ原子の１個以上がアルキル基で置換されたアルキル鎖（換言すれば、直鎖）である。非限定的な例には、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルが含まれる。
【００２４】
「ヘテロアルキル」は、１個以上の炭素原子がヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、ＮＨ）で置き換えられたアルキルである。非限定的な例には、−ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、−ＮＣ４Ｈ８Ｏ（モルフォリノ）が含まれる。
【００２５】
「置換アルキル」は、１個以上のＨ原子が官能基で置き換えられたアルキルである。官能基の非限定的な例には、以下のものが含まれる。ここで、Ｒ２６、Ｒ２７、およびＲ２８は、独立して、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールである。以下のものとは、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−ＮＨＲ２６、−ＮＲ２７Ｒ２８、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２９、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ２９、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ２６、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２６Ｒ２７、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ２６、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２６Ｒ２７、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ２６、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ２６Ｒ２７（ここで、Ｒ２６、Ｒ２７、Ｒ２８、およびＲ２９は、独立して、アルキル、アリール、または置換アリールである）であり、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ａｒ（ここで、「Ａｒ」はアリール基である）であり、−Ａｒ−Ｘ（ここで、「Ａｒ−Ｘ」は置換アリール基である）であり、−ＨＡｒ（ここで、「−ＨＡｒ」はヘテロアリール基である）であり、−ＨＡｒ−Ｘ（ここで、「−ＨＡｒ−Ｘ」は、置換ヘテロアリール基である）である。
【００２６】
「置換ヘテロアルキル」は、１個以上のＨ原子が官能基で置き換えらえたヘテロアルキルである。ここで、Ｒ３０、Ｒ３１、Ｒ３２およびＲ３３は、独立して、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールである。官能基は、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、―ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−ＮＨＲ３０、−ＮＲ３１Ｒ３２、−ＮＯ２、−ＣＮ、―ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３３、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ３３、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３１Ｒ３２、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ３１、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３１Ｒ３２、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ３１、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ３１Ｒ３２、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉである。
【００２７】
「アリール」基は以下の構造である。
【００２８】
【化３】
2017514802.tif 000005
【００２９】
「置換アリール」基は以下の構造である。
【００３０】
【化４】
2017514802.tif 000006
【００３１】
ここで、Ｒ３４、Ｒ３５、Ｒ３６、Ｒ３７およびＲ３８は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−ＮＨＲ３９、−ＮＲ４０Ｒ４１、―ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、―Ｃ（Ｏ）ＯＲ４２、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ４２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ３９、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４０Ｒ４１、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ３９、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４０Ｒ４１、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ３９、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４０Ｒ４１、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉから独立して選ばれる。ここで、Ｒ３９、Ｒ４０、Ｒ４１、およびＲ４２は、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリールから独立して選ばれる。ただし、Ｒ３４、Ｒ３５、Ｒ３６、Ｒ３７およびＲ３８の少なくとも一つはＨでない。
【００３２】
「ヘテロアリール」基は、芳香族ヘテロ環である。ヘテロアリール基の非限定的な例には、以下のものが含まれる。
【００３３】
【化５】
2017514802.tif 000007
【００３４】
【化６】
2017514802.tif 000008
【００３５】
【化７】
2017514802.tif 000009
【００３６】
【化８】
2017514802.tif 000010
【００３７】
【化９】
2017514802.tif 000011
【００３８】
【化１０】
2017514802.tif 000012
【００３９】
【化１１】
2017514802.tif 000013
【００４０】
【化１２】
2017514802.tif 000014
【００４１】
【化１３】
2017514802.tif 000015
【００４２】
ここでＲ３９は、アルキル、置換アルキル、アリール、および置換アリールから選ばれる。
【００４３】
「置換ヘテロアリール」は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ２、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＳＣＨ３、−ＮＨＲ４３、−ＮＲ４４Ｒ４５、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４６、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ４６、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ４３、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４４Ｒ４５、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨＲ４３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４４Ｒ４５、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ４３、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ４４Ｒ４５、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉから選ばれる１以上の置換基を有するヘテロアリール基である。ここで、Ｒ４３、Ｒ４４、Ｒ４５およびＲ４６は、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、または置換ヘテロアリールから独立して選ばれる。
【００４４】
本発明の化合物の構造は、ＸＯ−ＣＨ２−ＳＭ−Ｂ−Ａである。置換基「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間にリンカーを任意的に含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基である。
【００４５】
ヌクレオシドの合成の議論については、以下を参照されたい。Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ,Ｈ.；Ｒｕｓｈ−Ｐｏｌｅｎｚ，Ｃ．Ｏｒｇ．Ｒｅａｃｔ．２０００，５５，１；Ｄｉｅｋｍａｎｎ，Ｅ．；Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ，Ｋ．；Ｆｒｉｔｚ，Ｈ．−Ｇ．Ｊ．Ｐｒａｋｔ．Ｃｈｅｍ．１９９３，３３５，４１５；Ｆｉｓｈｅｒ，Ｅ．；Ｈｅｌｆｅｒｉｃｈ，Ｂ．Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．１９１４，４７，２１０；Ｍｉｙａｋｉ，Ｍ．；Ｓｈｉｍｉｚｕ，Ｂ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９７０，１８，１４４６；Ｋａｚｉｍｉｅｒｃｚｕｋ，Ｚ．；Ｃｏｔｔａｍ，Ｈ．Ｂ．；Ｒｅｖａｎｋａｒ，Ｇ．Ｒ．；Ｒｏｂｉｎｓ，Ｒ．Ｋ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９８４，１０６，６３７９；Ｗｉｔｔｅｎｂｕｒｇ，Ｅ．Ｚ．Ｃｈｅｍ．１９６４，４，３０３；Ｃｈｏｉ，Ｗ−Ｂ．；Ｗｉｌｓｏｎ，Ｌ．Ｊ．；Ｙｅｏｌａ，Ｓ．；Ｌｉｏｔｔａ，Ｄ．Ｃ．；Ｓｃｈｉｎａｚｉ，Ｒ．Ｆ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９１，１１３，９３７７；Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．；Ｎｉｅｂｂａｌｌａ，Ｕ．；Ｋｒｏｌｉｋｉｅｗｉｃｚ，Ｋ．；Ｂｅｎｎｕａ，Ｂ．；Ｈｏｅｆｌｅ，Ｇ．Ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ；Ｈａｒｍｏｎ，Ｒ．Ｅ．，Ｒｏｂｉｎｓ，Ｒ．Ｋ．，Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｌ．Ｂ．，Ｅｄｓ．；Ａｃａｄｅｍｉｃ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８；ｐ．２５１；Ｐｒｙｓｔａｓ，Ｍ．；Ｓｏｒｍ，Ｆ．Ｃｏｌｌｅｃｔ．Ｃｚｅｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９６４，２９，１２１；Ｎｉｅｄｂａｌｌａ，Ｕ．；Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９７４，３９，３６６８；Ｉｔｏｈ，Ｔ．；Ｍｅｌｉｋ−Ｏｈａｎｊａｎｉａｎ，Ｒ．Ｇ．；Ｉｓｈｉｋａｗａ，Ｉ．；Ｋａｗａｈａｒａ，Ｎ．；Ｍｉｚｕｎｏ，Ｙ．；Ｈｏｎｍａ，Ｙ．；Ｈｏｚｕｍｉ，Ｍ．；Ｏｇｕｒａ，Ｈ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９８９，３７，３１８４；Ｖｏｒｂｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．；Ｂｅｎｎｕａ，Ｂ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９７８，１３３９；Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．；Ｂｅｎｎｕａ，Ｂ．Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．１９８１，１１４，１２７９；Ｓｕｇｉｕｒａ，Ｙ．；Ｆｕｒｕｙａ，Ｓ．；Ｆｕｒｕｋａｗａ，Ｙ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９８８，３６，３２５３；Ｋａｗａｓａｋｉ，Ａ．Ｍ．；Ｗｏｔｒｉｎｇ，Ｌ．Ｌ．；Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｌ．Ｂ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９０,３３,３１７０；Ｎａｉｒ，Ｖ．；Ｐｕｒｄｙ，Ｄ．Ｆ．Ｈｅｔｒｏｃｙｃｌｅｓ  １９９３，３６，４２１；Ｈａｎｒａｈａｎ，Ｊ．Ｒ．；Ｄ．Ｗ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９２，２３，１９３；Ｍａｒｔｉｎ，Ｏ．Ｒ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．１９８５，２６，２０５５；Ｌａｎｇｅｒ，Ｓ．Ｈ．；Ｃｏｎｎｅｌｌ,Ｓ．；Ｗｅｎｄｅｒ，Ｉ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９５８，２３，５０；Ｐａｔｉｌ，Ｖ．Ｄ.;Ｗｉｓｅ，Ｄ．Ｓ．；Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｌ．Ｂ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．ｌ  １９８０，１８５３；Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．；Ｋｒｏｌｉｋｉｅｗｉｃｚ，Ｋ．；Ｂｅｎｎｕａ，Ｂ．Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．１９８１，１１４，１２３４．先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【００４６】
糖部位は、典型的には、ペントフラノシル部位である。このような部位の非限定的な例には、以下のものが含まれる（ここでは、前記化合物の、ＸＯＣＨ２−、ＢおよびＡが示される）。
【００４７】
【化１４】
2017514802.tif 000016
【００４８】
【化１５】
2017514802.tif 000017
【００４９】
ここで、上記構造１および構造２の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩であり、「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体であり、「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって任意的に前記Ｏと前記固相担体との間にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールであり、Ｚは、Ｈ、ＯＨまたはＯＲ３である。ここで、Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００５０】
糖部位の類縁体は、典型的には、天然フラノシル部位の類縁体である。このような部位の非限定的な例には以下のものが含まれる。
【００５１】
【化１６】
2017514802.tif 000018
【００５２】
【化１７】
2017514802.tif 000019
【００５３】
ここで、上記の構造３および構造４の置換基は、以下の通りである。「Ｘ」は、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここでＲ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールであり、Ｚは、Ｈ、ＯＨまたはＯＲ３である。ここで、Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。
【００５４】
【化１８】
2017514802.tif 000020
【００５５】
【化１９】
2017514802.tif 000021
【００５６】
ここで、上記の構造５および構造６の置換基は、以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。そして、Ｚは、Ｈ、ＯＨまたはＯＲ３である。ここで、Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。
【００５７】
【化２０】
2017514802.tif 000022
【００５８】
【化２１】
2017514802.tif 000023
【００５９】
構造７および構造８の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはその塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。そして、Ｚは、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲ３である。ここで、Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００６０】
【化２２】
2017514802.tif 000024
【００６１】
【化２３】
2017514802.tif 000025
【００６２】
上記の構造９および構造１０の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。そして、Ｚは、Ｈ、ＯＨまたはＯＲ３である。ここで、Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００６３】
【化２４】
2017514802.tif 000026
【００６４】
【化２５】
2017514802.tif 000027
【００６５】
上記の構造１１および構造１２の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、保護アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。そして、Ｚは、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲ３である。Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００６６】
【化２６】
2017514802.tif 000028
【００６７】
【化２７】
2017514802.tif 000029
【００６８】
構造１３および構造１４の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。そして、Ｚは、Ｈ、ＯＨ、またはＯＲ３である。Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００６９】
【化２８】
2017514802.tif 000030
【００７０】
【化２９】
2017514802.tif 000031
【００７１】
構造１５および構造１６の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体その間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。そして、Ｚは、Ｈ、ＯＨまたはＯＲ３である。Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００７２】
【化３０】
2017514802.tif 000032
【００７３】
【化３１】
2017514802.tif 000033
【００７４】
構造１７および構造１８の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体の間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的に含まれる固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。そして、Ｒ４およびＲ５は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。
【００７５】
【化３２】
2017514802.tif 000034
【００７６】
【化３３】
2017514802.tif 000035
【００７７】
構造１９および構造２０の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。そして、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。
【００７８】
【化３４】
2017514802.tif 000036
【００７９】
【化３５】
2017514802.tif 000037
【００８０】
構造２１および構造２２の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。そして、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００８１】
【化３６】
2017514802.tif 000038
【００８２】
【化３７】
2017514802.tif 000039
【００８３】
構造２３および構造２４の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。そして、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここでＲ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。
【００８４】
【化３８】
2017514802.tif 000040
【００８５】
【化３９】
2017514802.tif 000041
【００８６】
構造２５および構造２６の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、その構造は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位またはその塩である。そして、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。
【００８７】
【化４０】
2017514802.tif 000042
【００８８】
【化４１】
2017514802.tif 000043
【００８９】
構造２７および構造２８の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。そして、Ｚは、Ｈ、ＯＨまたはＯＲ３である。ここで、Ｒ３は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００９０】
【化４２】
2017514802.tif 000044
【００９１】
【化４３】
2017514802.tif 000045
【００９２】
構造２９および構造３０の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。そして、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００９３】
【化４４】
2017514802.tif 000046
【００９４】
【化４５】
2017514802.tif 000047
【００９５】
構造３１および構造３２の置換基は、以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。そして、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００９６】
【化４６】
2017514802.tif 000048
【００９７】
【化４７】
2017514802.tif 000049
【００９８】
構造３１および構造３２の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。そして、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【００９９】
【化４８】
2017514802.tif 000050
【０１００】
【化４９】
2017514802.tif 000051
【０１０１】
構造３３および構造３４は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。「Ｒ６」は、アルキル、置換アルキル、アリール、または置換アリールである。「ｍ」および「ｏ」は、独立して、０、１、または２である。
【０１０２】
【化５０】
2017514802.tif 000052
【０１０３】
【化５１】
2017514802.tif 000053
【０１０４】
構造３５および構造３６の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリールまたは置換アリールである。「Ｒ６」は、アルキル、置換アルキル、アリール、または置換アリールである。
【０１０５】
【化５２】
2017514802.tif 000054
【０１０６】
【化５３】
2017514802.tif 000055
【０１０７】
構造３７および構造３８の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「Ｘ１」は、Ｈ、保護基、固相担体であって前記Ｏと前記固相担体との間に任意的にリンカーを含む固相担体、リン含有部位、またはそれらの塩である。Ｙは、ＯＨまたはＯＲ２である。ここで、Ｒ２は、保護基、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。「Ｒ６」は、アルキル、置換アルキル、アリール、または置換アリールである。
【０１０８】
【化５４】
2017514802.tif 000056
【０１０９】
構造３９の置換基は以下の通りである。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｒ７は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリール、または保護基である。Ｒ８は、ＯＨ、ハライド、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１である。ここで、Ｒ９は、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、置換アリールであり、Ｒ１０およびＲ１１は、独立して、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アリール、または置換アリールである。
【０１１０】
核酸塩基部位の非限定的な例には、以下のものが含まれる。
【０１１１】
【化５５】
2017514802.tif 000057
【０１１２】
【化５６】
2017514802.tif 000058
【０１１３】
ここで、上記の構造４０および構造４１中の置換基「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０１１４】
【化５７】
2017514802.tif 000059
【０１１５】
【化５８】
2017514802.tif 000060
【０１１６】
上記の構造４２および構造４３中の置換基「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０１１７】
【化５９】
2017514802.tif 000061
【０１１８】
【化６０】
2017514802.tif 000062
【０１１９】
ここで、上記の構造４４および構造４５の置換基「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０１２０】
【化６１】
2017514802.tif 000063
【０１２１】
【化６２】
2017514802.tif 000064
【０１２２】
ここで、上記の構造４６および構造４７の置換基「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０１２３】
核酸塩基の類縁体の部位の非限定的な例には、以下のものが含まれる。
【０１２４】
【化６３】
2017514802.tif 000065
【０１２５】
【化６４】
2017514802.tif 000066
【０１２６】
ここで、「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。ここで、「Ｍ」は、ＮまたはＣＲ１３である。ここで、Ｒ１３は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ１４Ｒ１５である。ここで、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、Ｈまたはアルキルである。ここで、Ｒ１２は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ１４Ｒ１５である。ここで、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、Ｈまたはアルキルである。
【０１２７】
【化６５】
2017514802.tif 000067
【０１２８】
【化６６】
2017514802.tif 000068
【０１２９】
ここで、上記の構造５０および構造５１の置換基は以下の通りである。「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。ここで、「Ｍ」は、ＮまたはＣＲ１３である。ここで、Ｒ１３は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ１４Ｒ１５である。ここで、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、Ｈまたはアルキルである。ここで、Ｒ１２は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ１４Ｒ１５である。ここで、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、Ｈまたはアルキルである。
【０１３０】
【化６７】
2017514802.tif 000069
【０１３１】
【化６８】
2017514802.tif 000070
【０１３２】
上記の構造５２および構造５３の置換基は以下の通りである。「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ１２は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ１４Ｒ１５である。ここで、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、Ｈまたはアルキルである。
【０１３３】
【化６９】
2017514802.tif 000071
【０１３４】
【化７０】
2017514802.tif 000072
【０１３５】
上記の構造５４および構造５５の置換基は以下の通りである。「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ１２は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ１４Ｒ１５である。ここで、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、Ｈまたはアルキルである。
【０１３６】
【化７１】
2017514802.tif 000073
【０１３７】
【化７２】
2017514802.tif 000074
【０１３８】
上記の構造５６および構造５７の置換基は以下の通りである。「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。そして、「Ｍ」、「Ｄ」および「Ｅ」は、独立して、ＮまたはＣＲ１３である。ここで、Ｒ１３は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ１４Ｒ１５である。ここで、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、Ｈまたはアルキルである。
【０１３９】
【化７３】
2017514802.tif 000075
【０１４０】
【化７４】
2017514802.tif 000076
【０１４１】
構造５８および構造５９の置換基は以下の通りである。「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。そして、「Ｍ」、「Ｄ」、および「Ｅ」は、独立して、ＮまたはＣＲ１３である。ここで、Ｒ１３は、Ｈ、ハロ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、フェニル、置換フェニル、アルケニル、アルキニル、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＲ１４Ｒ１５である。ここで、Ｒ１４およびＲ１５は、独立して、Ｈまたはアルキルである。
【０１４２】
ヌクレオシド類縁体の議論については、以下を参照されたい。Ｍｅｒｉｎｏ，Ｐ．（Ｅｄ．）（２０１３）Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ，Ｐｅｄｒｏ  Ｍａｒｉｎｏ，Ｗｉｌｅｙ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ；ＵＳＰ７，４２７，６７２；Ｐｒａｋａｓｈ，Ｔ．ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１０，５３，１６３６−１６５０．先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【０１４３】
部位「Ａ」は、構造が−Ｃ（Ｏ）Ｒ１である。ここで、Ｒ１はｔｅｒｔ−アルキルである。ｔｅｒｔ−アルキルは、炭素原子が３つの基に共有結合されたもの（すなわち、−ＣＲ１６Ｒ１７Ｒ１８）である。ここで、Ｒ１６、Ｒ１７、およびＲ１８は、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、および置換ヘテロアルキルから独立して選ばれる。典型的には、置換基Ｒ１６、Ｒ１７、およびＲ１８は、中心炭素原子に直接的に結合されるＣＨ２またはＣＨ３で終結する（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）２（ＣＨ２ＣＨ３））。ｔｅｒｔ−アルキル基の非限定的な例には、以下のものが含まれる。すなわち、−Ｃ（ＣＨ３）３、−Ｃ（ＣＨ３）２（ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、−Ｃ（Ｒ１９）（Ｒ２０）−リンカー−ラベル、および−Ｃ（Ｒ１９）（Ｒ２０）−リンカー−［固相担体］が含まれる。ここで、Ｒ１９およびＲ２０は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、およびＣＨ（ＣＨ３）２から、独立して選ばれる。
【０１４４】
−Ｃ（Ｒ１９）（Ｒ２０）−リンカー−ラベルの非限定的な例には、以下のものが含まれる。
【０１４５】
【化７５】
2017514802.tif 000077
【０１４６】
上記の構造６０の置換基は以下の通りである。Ｒ１９およびＲ２０は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、およびＣＨ（ＣＨ３）３から、独立して選ばれる。
【０１４７】
【化７６】
2017514802.tif 000078
【０１４８】
上記の構造６１の置換基は以下の通りである。Ｒ１９およびＲ２０は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、およびＣＨ（ＣＨ３）２から、独立して選ばれる。
【０１４９】
【化７７】
2017514802.tif 000079
【０１５０】
上記の構造６２の置換基は以下の通りである。Ｒ１９およびＲ２０は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、およびＣＨ（ＣＨ３）２から、独立して選ばれる。
【０１５１】
【化７８】
2017514802.tif 000080
【０１５２】
上記の構造６３の置換基は以下の通りである。Ｒ１９およびＲ２０は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、およびＣＨ（ＣＨ３）２から、独立して選ばれる。
【０１５３】
−Ｃ（Ｒ１９）（Ｒ２０）−リンカー−［固相担体］の非限定的な例には、以下のものが含まれる。
【０１５４】
【化７９】
2017514802.tif 000081
【０１５５】
【化８０】
2017514802.tif 000082
【０１５６】
上記の構造６４および構造６５の置換基は以下の通りである。Ｒ１９およびＲ２０は、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、およびＣＨ（ＣＨ３）２から、独立して選ばれる。ＣＰＧは、細孔性ガラスであり、ＰＳはポリスチレンである。
【０１５７】
一事例においては、ＳＭは、構造が以下の通りとなる場合がある。
【０１５８】
【化８１】
2017514802.tif 000083
【０１５９】
上記の構造６６の置換基は以下の通りである。Ｙは、−ＯＰ（Ｏ−ＣＮＥ）ＯＮＲ５１Ｒ５２若しくは−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｈ、またはそれらの塩である。ここで、Ｒ５１およびＲ５２は、アルキル、置換アルキル、アリール、または置換アリールから、独立して選ばれるか、あるいは、Ｒ５１およびＲ５２は、共同して複素環（例えば、ピロリジン）を形成する。そして、Ｘは、酸に不安定な保護基または固相担体であり、Ｚは、ＨまたはＯＲ５３であり、Ｒ５３は、ヒドロキシ保護基である。
【０１６０】
別の事例では、ＳＭは、構造が以下の通りとなる場合がある。
【０１６１】
【化８２】
2017514802.tif 000084
【０１６２】
上記の構造６７の置換基は以下の通りである。Ｘは、−Ｐ（Ｏ−ＣＮＥ）（ＮＲ５１Ｒ５２）若しくは−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ５３）Ｈ、またはそれらの塩である。ここで、Ｒ５１およびＲ５２は、アルキル、置換アルキル、アリール、または置換アリールから、独立して選ばれるか、あるいは、Ｒ５１およびＲ５２は、共同して複素環（例えば、ピロリジン）を形成する。ここで、Ｒ５３は、アルキル、置換アルキル、アリール、または置換アルキルである。そして、Ｙは、酸に不安定なヒドロキシ保護基または固相担体であり、ＺはＨである。
【０１６３】
別の事例では、ＳＭは、構造が以下の通りとなる場合がある。
【０１６４】
【化８３】
2017514802.tif 000085
【０１６５】
上記の構造６８の置換基は以下の通りである。Ｘは、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ５３）Ｈ若しくは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ［Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）（Ｏ−）］ｎＨ、またはそれらの塩である。ここで、Ｒ５３は、アルキル、置換アルキル、アリールまたは置換アリールであり、ｎ＝０、１または２である。そして、Ｙは、ＯＨまたはＯＲ５４であり、Ｒ５４は、熱に不安定なヒドロキシ保護基であり、Ｚは、Ｈ、−ＯＨ、またはＯＲ５４である。
【０１６６】
本発明の化合物の非限定的な例には、以下のものが含まれる。
【０１６７】
【化８４】
2017514802.tif 000086
【０１６８】
【化８５】
2017514802.tif 000087
【０１６９】
上記の構造６９および構造７０の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２またはそれらの塩である。ここで、「Ｚ」は、−Ｈまたは−ＯＨである。
【０１７０】
【化８６】
2017514802.tif 000088
【０１７１】
【化８７】
2017514802.tif 000089
【０１７２】
上記の構造７１および構造７２の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２またはそれらの塩である。ここで、「Ｚ」は、−Ｈまたは−ＯＨである。
【０１７３】
【化８８】
2017514802.tif 000090
【０１７４】
【化８９】
2017514802.tif 000091
【０１７５】
上記の構造７３および構造７４の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、またはそれらの塩である。ここで、「Ｚ」は、−Ｈまたは−ＯＨである。
【０１７６】
【化９０】
2017514802.tif 000092
【０１７７】
【化９１】
2017514802.tif 000093
【０１７８】
上記の構造７５および構造７６の置換基は以下の通りである。「Ｘ」は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、またはそれらの塩である。ここで、「Ｚ」は、−Ｈまたは−ＯＨである。
【０１７９】
本発明は、さらに、オリゴヌクレオチドおよびそれらの塩に関する。それらには、構造が−Ｏ−ＣＨ２−ＳＭ（−Ｏ−）Ｂ−Ａである１個以上のヌクレオチドまたはヌクレオチド類縁体が含まれる。ここで、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基である。
【０１８０】
オリゴヌクレオチド合成についての議論は以下を参照されたい。Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ａ．ａｎｄ  Ｐｏｌｌａｒｄ，Ｊ．Ｄ．２００１．Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ.Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．００：Ａ．３Ｃ．１−Ａ．３Ｃ．２２；Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ａｎｄ  Ｒｅｅｓｅ，Ｃ．Ｂ．２００９．Ｒｅｃｅｎｔ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｙｓ  ｏｆ  ＲＮＡ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．３８：２．１６．１−２．１６．３１；Ｔｓｕｋａｍｏｔｏ，Ｍ．ａｎｄ  Ｈａｙａｋａｗａ，Ｙ．２００５．“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｕｓｅｆｕｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ．”Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｅｎｔｈａｍ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒ，Ｖｏｌ．１。先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【０１８１】
一態様では、前記オリゴヌクレオチドは、構造が以下の通りである。
【０１８２】
【化９２】
2017514802.tif 000094
【０１８３】
上記の構造７７は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体の何れかであり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチドである。「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基である。
【０１８４】
別の態様では、前記オリゴヌクレオチドは、以下の構造（またはそれらの塩）のうちの一つである。
【０１８５】
【化９３】
2017514802.tif 000095
【０１８６】
【化９４】
2017514802.tif 000096
【０１８７】
上記の構造７８および構造７９の置換基は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体の何れかであり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチドである。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１である。ここで、Ｒ１は、ｔｅｒｔ−アルキル基である。
【０１８８】
別の態様では、前記オリゴヌクレオチドは、以下の構造（またはそれらの塩）のうちの一つである。
【０１８９】
【化９５】
2017514802.tif 000097
【０１９０】
【化９６】
2017514802.tif 000098
【０１９１】
上記の構造８０および構造８１の置換基は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体であり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体、またはオリゴヌクレオチド（若しくはそれらの塩）である。
【０１９２】
【化９７】
2017514802.tif 000099
【０１９３】
【化９８】
2017514802.tif 000100
【０１９４】
上記の構造８２および構造８３は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体であり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチド（若しくはそれらの塩）である。
【０１９５】
【化９９】
2017514802.tif 000101
【０１９６】
【化１００】
2017514802.tif 000102
【０１９７】
上記の構造８４および構造８５の置換基は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ―若しくはその類縁体であり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチド（若しくはそれらの塩）である。
【０１９８】
【化１０１】
2017514802.tif 000103
【０１９９】
上記の構造８６の置換基は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体であり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチド（若しくはそれらの塩）である。
【０２００】
【化１０２】
2017514802.tif 000104
【０２０１】
【化１０３】
2017514802.tif 000105
【０２０２】
上記の構造８７および構造８８の置換基は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体であり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチド（若しくはそれらの塩）である。
【０２０３】
【化１０４】
2017514802.tif 000106
【０２０４】
【化１０５】
2017514802.tif 000107
【０２０５】
上記の構造８９および構造９０の置換基は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体であり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチド（若しくはそれらの塩）である。
【０２０６】
【化１０６】
2017514802.tif 000108
【０２０７】
【化１０７】
2017514802.tif 000109
【０２０８】
上記の構造９１および構造９２は以下の通りである。ＰＬ1およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ―若しくはその類縁体であり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチド（若しくはそれらの塩）である。
【０２０９】
【化１０８】
2017514802.tif 000110
【０２１０】
上記の構造９３の置換基は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体であり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはヌクレオチド（若しくはそれらの塩）である。
【０２１１】
別の態様では、前記オリゴヌクレオチドは、上に示した構造のヌクレオチドまたはヌクレオチド類縁体を、２個以上、３個以上、４個以上、５個以上、または６個以上含む。
【０２１２】
本発明は、さらに、特定の、治療用ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシド、およびヌクレオシド類縁体に関する。治療用ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体は、病気（例えば、ＨＣＶ）を治療するために使用され得るものである。ここで、前記化合物は、ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシド、またはヌクレオシド類縁体、および１個以上の熱に不安定な保護基を含む。ここで、前記熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）Ｒ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０２１３】
治療用ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシド、およびヌクレオシド類縁体についての議論は、以下を参照されたい。Ｌａｒｓ  Ｐｅｔｔｅｒ  Ｊｏｒｄｈｅｉｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，４４７−４６４（２０１３）、Ｓｑｕｉｒｅｓ，Ｋ．Ａｎｔｉｖｉｒ．Ｔｈｅｒ．２００１、６  Ｓｕｐｐｌ  ３：１−１４、ＵＳＰ８，６６４，３８６、ＵＳＰ８，６５８，６７１、ＵＳＰ８，６４２，７５６、ＵＳＰ８，６３３，３０９、ＵＳＰ８，６２９，２６３、ＵＳＰ８，６１８，０７６、ＵＳＰ８，５８０，７６５、ＵＳＰ８，５６９，４７８、ＵＳＰ８，５６３，５３０、ＵＳＰ８，５５１，９７３．先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【０２１４】
一態様では、治療用ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体は、以下の構造のうちの１つである。
【０２１５】
【化１０９】
2017514802.tif 000111
【０２１６】
【化１１０】
2017514802.tif 000112
【０２１７】
上記の構造９４および構造９５の置換基は以下の通りである。Ａ１、Ａ２およびＡ３は、独立して、Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ここで、熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０２１８】
【化１１１】
2017514802.tif 000113
【０２１９】
【化１１２】
2017514802.tif 000114
【０２２０】
上記の構造９６および構造９７の置換基は以下の通りである。Ａ１、Ａ２およびＡ３は、独立して、Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ここで、熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０２２１】
【化１１３】
2017514802.tif 000115
【０２２２】
【化１１４】
2017514802.tif 000116
【０２２３】
上記の構造９８および構造９９の置換基は以下の通りである。Ａ１、Ａ２、およびＡ３は、独立して、Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ここで、熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｂは核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０２２４】
【化１１５】
2017514802.tif 000117
【０２２５】
【化１１６】
2017514802.tif 000118
【０２２６】
上記の構造１００および構造１０１の置換基は以下の通りである。Ａ１およびＡ３は、独立して、Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ここで、前記熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０２２７】
【化１１７】
2017514802.tif 000119
【０２２８】
【化１１８】
2017514802.tif 000120
【０２２９】
上記の構造１０２および構造１０３の置換基は以下の通りである。Ａ１、Ａ２およびＡ３は、独立して、Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ここで、前記熱に不安定な保護基の１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０２３０】
【化１１９】
2017514802.tif 000121
【０２３１】
【化１２０】
2017514802.tif 000122
【０２３２】
上記の構造１０４および構造１０５の置換基は以下の通りである。Ａ１、Ａ２およびＡ３は、独立して、Ｈ、または熱に不安定な保護基である。ここで、前記熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０２３３】
【化１２１】
2017514802.tif 000123
【０２３４】
【化１２２】
2017514802.tif 000124
【０２３５】
上記の構造１０６および構造１０７の置換基は以下の通りである。Ａ３は、Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ここで、前記熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０２３６】
【化１２３】
2017514802.tif 000125
【０２３７】
【化１２４】
2017514802.tif 000126
【０２３８】
上記の構造１０８および構造１０９の置換基は以下の通りである。Ａ１、Ａ２、およびＡ３は、独立して、Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ここで、前記熱に不安定な保護基は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０２３９】
別の態様では、前記治療用ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシド、またはヌクレオシド類縁体は、以下の構造のうちの１つである。
【０２４０】
【化１２５】
2017514802.tif 000127
【０２４１】
【化１２６】
2017514802.tif 000128
【０２４２】
【化１２７】
2017514802.tif 000129
【０２４３】
【化１２８】
2017514802.tif 000130
【０２４４】
【化１２９】
2017514802.tif 000131
【０２４５】
【化１３０】
2017514802.tif 000132
【０２４６】
本発明は、さらに、治療用オリゴヌクレオチド（またはそれらの塩）に関する。治療用オリゴヌクレオチドは、病気（例えば、ＣＭＶ）を治療するために用いられ得るものである。前記化合物は、１個以上の熱に不安定な保護基を含むオリゴヌクレオチド（例えば、ホミビルセン、ミポメルセン）を含む。前記熱に不安定な保護基の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０２４７】
治療用オリゴヌクレオチド（またはそれらの塩）は、典型的には、以下の構造である。
【０２４８】
【化１３１】
2017514802.tif 000133
【０２４９】
上記の構造１１６の置換基は以下の通りである。ＰＬ１およびＰＬ２は、独立して、Ｈ、または−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体であり、Ｎｕ１およびＮｕ２は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体、またはオリゴヌクレオチド（若しくはそれらの塩）である。「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、その構造は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基である。
【０２５０】
治療用オリゴヌクレオチドについての議論については、以下を参照されたい。Ｙｏｇｅｓｈ  Ｓ．Ｓａｎｇｈｖｉ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｙ，４．１．１−４．１．２２，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２０１１、Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１１；７６４：１−１５、ＵＳＰ８，６９７，６７５。先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に、参照により包含される。
【０２５１】
別の態様では、本発明は、オリゴヌクレオチド−ラベル共役体（またはその塩）を目的とする。前記オリゴヌクレオチド−ラベル共役体（またはそれらの塩）は、以下の構造の１個以上のヌクレオチドまたはヌクレオチド類縁体を含む。
【０２５２】
【化１３２】
2017514802.tif 000134
【０２５３】
上記の構造１１７の置換基は以下の通りである。Ｌ１およびＬ２は、独立して、Ｈ、ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、およびラベルである。ここで、前記ヌクレオチドまたはヌクレオチド類縁体の結合位置に前記ラベルを結合する結合基があってもよい。Ｌ３は、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３、またはラベルであり、前記ヌクレオチドまたはヌクレオチド類縁体の結合位置に前記ラベルを結合する結合基があってよい。前記ラベルがＬ１、Ｌ２またはＬ３でない場合、該ラベルは、前記オリゴヌクレオチドの別のヌクレオチドに結合される。「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体である。「Ｂ」は、核酸塩基部位または核酸塩基部位の類縁体である。
【０２５４】
オリゴヌクレオチド−ラベル共役体の議論については以下を参照されたい。ＵＳＰ５，５８３，２３６、ＵＳＰ８，５３０，６３４、Ｄｕｒｒａｎｔ，Ｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３１（１９９４），１６３−１７５。先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【０２５５】
別の態様では、本発明は、オリゴヌクレオチド（またはそれらの塩）を合成する方法に関する。前記方法は、以下のステップを含む。
【０２５６】
１）直接的に、またはリンカーによって、化合物を固相担体に結合するステップであって、ここで、前記化合物は以下の構造のうちの１つであり、
【０２５７】
【化１３３】
2017514802.tif 000135
【０２５８】
【化１３４】
2017514802.tif 000136
【０２５９】
上記の構造１１８および構造１１９の置換基は以下の通り、すなわち、「Ｐ１」が保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「ＳＭ」が糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ｂ」が核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ」がＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０が、ｔｅｒｔ−アルキル基であり、
以下の構造のうちの１つの固相担体化合物を提供するステップ。
【０２６０】
【化１３５】
2017514802.tif 000137
【０２６１】
【化１３６】
2017514802.tif 000138
【０２６２】
上記の構造１２０および構造１２１の置換基は以下の通り、すなわち、Ｌ１が、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は、固相担体であり、「Ｐ１」は保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。
【０２６３】
２）前記固相担体化合物を脱保護して、以下の化合物のうちの１つの脱保護された化合物を提供するステップ。
【０２６４】
【化１３７】
2017514802.tif 000139
【０２６５】
【化１３８】
2017514802.tif 000140
【０２６６】
上記の構造１２２および構造１２３の置換基は以下の通り、すなわち、Ｌ１が、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１が固相担体であり、「Ｂ」が核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」が糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。
【０２６７】
３）前記脱保護された化合物を、リン原子を含む部位を含んでいる化合物と反応させるステップであって、ここで、前記化合物は、以下の構造のうちの１つであり、
【０２６８】
【化１３９】
2017514802.tif 000141
【０２６９】
【化１４０】
2017514802.tif 000142
【０２７０】
上記の構造１２４および構造１２５の置換基は以下の通り、すなわち、「ＰＭ」がリン含有部位であり、「Ｐ１」が保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ｂ」が核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」が糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ」がＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、
以下の構造のうちの１つのジヌクレオチドを提供するステップ。
【０２７１】
【化１４１】
2017514802.tif 000143
【０２７２】
【化１４２】
2017514802.tif 000144
【０２７３】
上記の構造１２６および構造１２７の置換基は以下の通り、すなわち、「ＰＭ*」が、反応後のリン含有部位であり、Ｌ１が、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１が固相担体であり、「Ｐ１」が保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ｂ」が核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」が糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」がＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０が、ｔｅｒｔ−アルキルである。
【０２７４】
４）任意的に、前記リン含有部位を化学修飾して、以下の構造のうちの１つの修飾されたダイマーを提供するステップ。
【０２７５】
【化１４３】
2017514802.tif 000145
【０２７６】
【化１４４】
2017514802.tif 000146
【０２７７】
上記の構造１２８および構造１２９の置換基は以下の通り、すなわち、「ＰＭ＊＊」が化学修飾されたリン含有部位であり、Ｌ１が、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１が固相担体であり、「Ｐ１」が保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ｂ」が核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」が糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」がＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０がｔｅｒｔ−アルキルである。
【０２７８】
５）任意的に、前記ダイマーまたは前記修飾されたダイマーを脱保護して、以下の構造のうちの１つの脱保護されたダイマーまたは修飾されたダイマーを提供するステップ。
【０２７９】
【化１４５】
2017514802.tif 000147
【０２８０】
【化１４６】
2017514802.tif 000148
【０２８１】
【化１４７】
2017514802.tif 000149
【０２８２】
【化１４８】
2017514802.tif 000150
【０２８３】
上記の構造１３０、構造１３１、構造１３２、および構造１３３の置換基は以下の通り、すなわち、「ＰＭ*」が、ダイマーを提供するための反応後のリン含有部位であり、「ＰＭ**」が、化学修飾されたリン含有部位であり、Ｌ１が、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１が、固相担体であり、「Ｂ」が、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ」が、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０が、ｔｅｒｔ−アルキルである。
【０２８４】
６）任意的に、ステップ「３」および「４」を繰り返して、以下の構造のうちの１つのオリゴマーまたは修飾されたオリゴマーを提供するステップ。
【０２８５】
【化１４９】
2017514802.tif 000151
【０２８６】
【化１５０】
2017514802.tif 000152
【０２８７】
【化１５１】
2017514802.tif 000153
【０２８８】
【化１５２】
2017514802.tif 000154
【０２８９】
上記の構造１３４、構造１３５、構造１３６、および構造１３７の置換基は以下の通り、すなわち、「Ｐ１」が保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「ＰＭ*」が、オリゴマーを提供するための反応後のリン含有部位であり、「ＰＭ**」が、化学修飾されたリン含有部位であり、「Ｌ１」が、リンカーであるか、または化学物質がなく、「Ｓ１」が固相担体であり、「Ｂ」が核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」が糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」が、Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０がｔｅｒｔ−アルキルであり、「ｎ」が、１〜２００までの整数（例えば、１〜２５、１〜５０、１〜７５、１〜１００など）である。
【０２９０】
７）前記ダイマー、修飾ダイマー、オリゴヌクレオチド、または修飾オリゴヌクレオチドを脱保護し、前記固相担体から前記ダイマー、修飾ダイマー、オリゴヌクレオチド、または修飾オリゴヌクレオチドを除去し、前記ＰＭ*またはＰＭ**部位を化学修飾して、以下の構造の化合物を提供するステップ。
【０２９１】
【化１５３】
2017514802.tif 000155
【０２９２】
上記の構造１３８の置換基は以下の通り、すなわち、「Ｑ」はＯまたはＳであり、ここで、ｎは、１〜２００までの整数（例えば、１〜２５、１〜５０、１〜７５、１〜１００など）であり、少なくとも１つの「Ａ１」は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体である。
【０２９３】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「１」において前記固相担体に結合される化合物は、以下の構造のうちの１つである。
【０２９４】
【化１５４】
2017514802.tif 000156
【０２９５】
【化１５５】
2017514802.tif 000157
【０２９６】
上記の構造１３９および構造１４０の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」は保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルである。
【０２９７】
別の事例では、先に挙げられた方法のステップ「１」において前記固相担体に結合される化合物は、以下の構造のうちの１つである。
【０２９８】
【化１５６】
2017514802.tif 000158
【０２９９】
【化１５７】
2017514802.tif 000159
【０３００】
上記の構造１３９および構造１４０の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」は保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルである。あるいは、
【０３０１】
【化１５８】
2017514802.tif 000160
【０３０２】
【化１５９】
2017514802.tif 000161
【０３０３】
上記の構造１４１および構造１４２の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」は保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルである。
【０３０４】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「２」での脱保護構造は以下の構造のうちの１つである。
【０３０５】
【化１６０】
2017514802.tif 000162
【０３０６】
【化１６１】
2017514802.tif 000163
【０３０７】
上記の構造１４３および構造１４４の置換基は以下の通りである。「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１はリンカーがあるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。
【０３０８】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「２」での脱保護構造は以下の構造のうちの１つである。
【０３０９】
【化１６２】
2017514802.tif 000164
【０３１０】
【化１６３】
2017514802.tif 000165
【０３１１】
上記の構造１４５および構造１４６の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」は保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここでＲ４はｔｅｒｔ−アルキルである。ここで、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。あるいは、
【０３１２】
【化１６４】
2017514802.tif 000166
【０３１３】
【化１６５】
2017514802.tif 000167
【０３１４】
上記の構造１４７および構造１４８の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」は保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルである。ここで、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。
【０３１５】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「３」でのリン原子を備える部位を含む化合物は以下の構造のうちの１つである。
【０３１６】
【化１６６】
2017514802.tif 000168
【０３１７】
【化１６７】
2017514802.tif 000169
【０３１８】
上記の構造１４９および構造１５０の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」は保護基（例えば、ＤＭＴ）であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＰＭ」は、以下の部位のうちの１つから選ばれるリン含有部位である。
【０３１９】
【化１６８】
2017514802.tif 000170
【０３２０】
【化１６９】
2017514802.tif 000171
【０３２１】
【化１７０】
2017514802.tif 000172
【０３２２】
【化１７１】
2017514802.tif 000173
【０３２３】
【化１７２】
2017514802.tif 000174
【０３２４】
上記の構造１５１、構造１５２、構造１５３、構造１５４および構造１５５の置換基は以下の通りである。「Ｐ２」および「Ｐ３」は、独立して、保護基（例えば、Ｂｎ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（Ｏ）Ｐｈ）である。ここで、「ＥＷＧ」は、電子吸引基（例えば、−ＣＮ、−ＮＯ２）であり、Ｒ６１およびＲ６２は、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリールであり、または、リン原子に結合される窒素原子を有する複素環（例えば、ピロリジン、ピペリジン）を共同で形成する。
【０３２５】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「５」で脱保護され、修飾されたダイマーは、以下の構造のうちの１つである。
【０３２６】
【化１７３】
2017514802.tif 000175
【０３２７】
【化１７４】
2017514802.tif 000176
【０３２８】
「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキルである。ここで、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＰＭ**」はリン含有部位、例えば、以下の部位、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）、−Ｐ（Ｓ）（Ｏ−）、−Ｐ（Ｏ）（−ＣＨ２ＣＨ２−ＥＷＧ）−、−Ｐ（Ｓ）（−ＣＨ２ＣＨ２−ＥＷＧ）−のうちの１つから選ばれる部位である。ここで、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。
【０３２９】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「７」でのオリゴマーは以下の構造である。
【０３３０】
【化１７５】
2017514802.tif 000177
【０３３１】
上記の構造１５８の置換基は以下の通りである。「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ｑ」はＯまたはＳである。
【０３３２】
別の態様では、本発明は、オリゴヌクレオチド（またはその塩）を合成する方法に関する。該方法は以下のステップを備える。
【０３３３】
１）直接的に、またはリンカーによって、化合物を固相担体に結合して、ここで、前記化合物は以下の構造のうちの１つであり、
【０３３４】
【化１７６】
2017514802.tif 000178
【０３３５】
【化１７７】
2017514802.tif 000179
【０３３６】
上記の構造１５９および構造１６０の置換基は以下の通り、すなわち、「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、
以下の構造のうちの１つの化合物が結合される固相担体を提供するステップ。
【０３３７】
【化１７８】
2017514802.tif 000180
【０３３８】
【化１７９】
2017514802.tif 000181
【０３３９】
上記の構造１６１および構造１６２の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。
【０３４０】
２）化合物に結合された前記固相担体を脱保護して、以下の構造のうちの１つの脱保護された化合物を提供するステップ。
【０３４１】
【化１８０】
2017514802.tif 000182
【０３４２】
【化１８１】
2017514802.tif 000183
【０３４３】
上記の構造１６３および構造１６４の置換基は以下の通りである。「Ｐ２」は保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。
【０３４４】
３）リン原子を備える部位を含む化合物と前記脱保護された化合物を反応させるステップであって、ここで、前記化合物は以下の構造のうちの１つであり、
【０３４５】
【化１８２】
2017514802.tif 000184
【０３４６】
【化１８３】
2017514802.tif 000185
【０３４７】
上記の構造１６５および構造１６６の置換基は以下の通り、すなわち、「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）であり、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、「ＰＭ」はリン含有部位であり、
以下の構造のうちの１つのジヌクレオチドを提供するステップ。
【０３４８】
【化１８４】
2017514802.tif 000186
【０３４９】
【化１８５】
2017514802.tif 000187
【０３５０】
上記の構造１６７および構造１６８の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、「ＰＭ**」は前記反応後のリン含有部位である。
【０３５１】
４）任意的に、前記リン含有部位を化学修飾して、以下の構造のうちの１つの修飾されたダイマーを提供するステップ。
【０３５２】
【化１８６】
2017514802.tif 000188
【０３５３】
【化１８７】
2017514802.tif 000189
【０３５４】
上記の構造１６９および構造１７０の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、「ＰＭ**」は化学修飾されたリン含有部位である。
【０３５５】
５）任意的に、前記ダイマーまたは修飾されたダイマーを脱保護して、以下の構造のうちの１つの脱保護されたダイマーまたは修飾されたダイマーを提供するステップ。
【０３５６】
【化１８８】
2017514802.tif 000190
【０３５７】
【化１８９】
2017514802.tif 000191
【０３５８】
【化１９０】
2017514802.tif 000192
【０３５９】
【化１９１】
2017514802.tif 000193
【０３６０】
上記の構造１７１、構造１７２、構造１７３および構造１７４の置換基は以下の通りである。「Ｐ２」は保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、Ｌ１はリンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、「ＰＭ*」は前記結合反応後の前記リン含有部位であり、「ＰＭ**」は、化学修飾されたリン含有部位である。
【０３６１】
６）任意的に、ステップ「３」および「４」を繰り返して、以下の構造のうちの１つの修飾されたオリゴマーを提供するステップ。
【０３６２】
【化１９２】
2017514802.tif 000194
【０３６３】
【化１９３】
2017514802.tif 000195
【０３６４】
【化１９４】
2017514802.tif 000196
【０３６５】
【化１９５】
2017514802.tif 000197
【０３６６】
上記の構造１７５、構造１７６、構造１７７および構造１７８は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ａ１」はＨまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここでＲ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体であり、「ＰＭ*」は、前記結合反応後のリン含有部位であり、「ＰＭ**」は、化学修飾されたリン含有部位であり、「ｎ」は、１〜２００（例えば、１〜２５、１〜５０、１〜７５など）の範囲の整数である。
【０３６７】
７）前記ダイマー、修飾されたダイマー、オリゴヌクレオチド、または修飾されたオリゴヌクレオチドを脱保護し、前記固相担体から、それを除去し、前記「ＰＭ*」または「ＰＭ**」を化学修飾して、以下の構造の化合物を提供するステップ。
【０３６８】
【化１９６】
2017514802.tif 000198
【０３６９】
「ｎ」は１〜２００（例えば、１〜２５、１〜５０、１〜７５など）の範囲の整数であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、少なくとも１つの「Ａ１」は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｑ」は、ＯまたはＳである。
【０３７０】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「１」での前記固相担体に結合される化合物は以下の構造のうちの１つである。
【０３７１】
【化１９７】
2017514802.tif 000199
【０３７２】
【化１９８】
2017514802.tif 000200
【０３７３】
上記の構造１８０および構造１８１の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ１」は、−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０例えば、（−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。
【０３７４】
別の事例では、先に挙げられた方法のステップ「１」での前記固相担体に結合される化合物は、以下の構造のうちの１つである。
【０３７５】
【化１９９】
2017514802.tif 000201
【０３７６】
【化２００】
2017514802.tif 000202
【０３７７】
上記の構造１８２および構造１８３の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、あるいは、
【０３７８】
【化２０１】
2017514802.tif 000203
【０３７９】
【化２０２】
2017514802.tif 000204
【０３８０】
上記の構造１８４および構造１８５の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ａ１」は、−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。あるいは、
【０３８１】
【化２０３】
2017514802.tif 000205
【０３８２】
【化２０４】
2017514802.tif 000206
【０３８３】
上記の構造１８６および構造１８７の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。あるいは、
【０３８４】
【化２０５】
2017514802.tif 000207
【０３８５】
上記の構造１８８の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。
【０３８６】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「２」での脱保護される構造は以下の構造のうちの１つである。
【０３８７】
【化２０６】
2017514802.tif 000208
【０３８８】
【化２０７】
2017514802.tif 000209
【０３８９】
上記の構造１８９および構造１９０の置換基は以下の通りである。「Ｐ２」は保護基であり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。
【０３９０】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「２」での脱保護された構造は、以下の構造のうちの１つである。
【０３９１】
【化２０８】
2017514802.tif 000210
【０３９２】
【化２０９】
2017514802.tif 000211
【０３９３】
上記の構造１９１および構造１９２の置換基は以下の通りである。「Ｐ２」は保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。あるいは、
【０３９４】
【化２１０】
2017514802.tif 000212
【０３９５】
【化２１１】
2017514802.tif 000213
【０３９６】
上記の構造１９３および構造１９４の置換基は以下の通りである。「Ｐ２」は保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。あるいは、
【０３９７】
【化２１２】
2017514802.tif 000214
【０３９８】
【化２１３】
2017514802.tif 000215
【０３９９】
上記の構造１９５および構造１９６の置換基は以下の通りである。「Ｐ２」は保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。あるいは、
【０４００】
【化２１４】
2017514802.tif 000216
【０４０１】
上記の構造１９７の置換基は以下の通りである。「Ｐ２」は保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。Ｌ１は、リンカーであるか、または化学物質がなく、Ｓ１は固相担体である。
【０４０２】
一事例では、先で挙げられた方法のステップ「３」でのリン原子を含む部位を含んでいる化合物は以下の構造のうちの１つである。
【０４０３】
【化２１５】
2017514802.tif 000217
【０４０４】
【化２１６】
2017514802.tif 000218
【０４０５】
上記の構造１９８および構造１９９の置換基は以下の通りである。「Ｐ１」および「Ｐ２」は、独立して、保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＰＭ」は、以下の部位のうちの１つから選ばれるリン含有部位である。
【０４０６】
【化２１７】
2017514802.tif 000219
【０４０７】
【化２１８】
2017514802.tif 000220
【０４０８】
【化２１９】
2017514802.tif 000221
【０４０９】
【化２２０】
2017514802.tif 000222
【０４１０】
【化２２１】
2017514802.tif 000223
【０４１１】
上記の構造２００、構造２０１、構造２０２、構造２０３および構造２０４は以下の通りである。「Ｐ３」および「Ｐ４」は、独立して、保護基（例えば、Ｂｎ、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣ（Ｏ）Ｐｈ）であり、「ＥＷＧ」は電子吸引基（例えば、−ＣＮ、−ＰｈＮＯ２）である。ここで、Ｒ７０およびＲ７１は、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリールであるか、あるいは前記リン原子に結合された窒素原子を有する複素環（例えば、ピロリジン、ピペリジン）を共同で形成する。
【０４１２】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「５」での、脱保護され、修飾されたダイマーは以下の構造のうちの１つである。
【０４１３】
【化２２２】
2017514802.tif 000224
【０４１４】
【化２２３】
2017514802.tif 000225
【０４１５】
上記の構造２０５および構造２０６の置換基は以下の通りである。「Ｐ２」は保護基であり、「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルであり、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「ＰＭ**」は、例えば、以下の部位、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）、−Ｐ（Ｓ）（Ｏ−）、−Ｐ（Ｏ）（−ＣＨ２ＣＨ２−ＥＷＧ）−、−Ｐ（Ｓ）（−ＣＨ２ＣＨ２−ＥＷＧ）−のうちの１つから選ばれるリン含有部位であり、「ＥＷＧ」は電子吸引基（例えば、−ＣＮ、−ＮＯ２）である。
【０４１６】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「７」でのオリゴマーは、以下の構造である。
【０４１７】
【化２２４】
2017514802.tif 000226
【０４１８】
上記の構造２０７の置換基は以下の通りである。「Ａ１」は−Ｈまたは−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ｑ」はＯまたはＳである。
【０４１９】
別の態様では、本発明は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、ＤＮＡを増幅する方法に関する。前記方法は、核酸塩基の環構造上または該環構造内にある窒素原子上に、少なくとも１つの熱に不安定な保護基を有する１以上のデオキシヌクレオチド三リン酸を使用することを伴う。前記保護基は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４２０】
ＰＣＲの議論については以下を参照されたい。ＵＳＰ８，１３３，６６９、ＵＳＰ４，６８３，１９５、ＵＳＰ４，６８３，２０２、ＵＳＰ４，８００，１５９、ＵＳＰ４，９６５，１８８、ＵＳＰ５，００８，１８２、ＵＳＰ５，１７６，９９５、ＵＳＰ６，０４０，１６６、ＵＳＰ６，１９７，５６３。先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に、参照により包含される。
【０４２１】
別の態様では、本発明は、ＰＣＲを用いてＤＮＡを増幅する方法に関する。該方法は、以下のステップを備える。
【０４２２】
１）ターゲットＤＮＡ（つまり、増幅されるＤＮＡ）と、ＤＮＡポリメラーゼと、プライマーと、デオキシヌクレオチド三リン酸（ｄＮＴＰ）とを含む反応混合物を提供するステップ。ここで、１個以上のｄＮＴＰは、以下の構造のうちの１つである。
【０４２３】
【化２２５】
2017514802.tif 000227
【０４２４】
【化２２６】
2017514802.tif 000228
【０４２５】
上記の構造２０８および構造２０９の置換基は以下の通りである。「ＴＰ」は三リン酸であり、「Ａ１」は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。
【０４２６】
【化２２７】
2017514802.tif 000229
【０４２７】
【化２２８】
2017514802.tif 000230
【０４２８】
上記の構造２１０および構造２１１の置換基は以下の通りである。「ＴＰ」は三リン酸であり、「Ａ１」は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。
【０４２９】
【化２２９】
2017514802.tif 000231
【０４３０】
【化２３０】
2017514802.tif 000232
【０４３１】
上記の構造２１２および構造２１３の置換基は以下の通りである。「ＴＰ」は三リン酸であり、「Ａ１」は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。
【０４３２】
【化２３１】
2017514802.tif 000233
【０４３３】
上記の構造２１４の置換基は以下の通りである。「ＴＰ」は三リン酸であり、「Ａ１」は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキルである。
【０４３４】
２）所定時間（例えば、１分）前記反応混合物を（例えば、９４℃〜９８℃で）加熱し、前記ターゲットＤＮＡを変性させ、これにより、一本鎖ＤＮＡ鋳型を提供するステップ。
【０４３５】
３）所定時間（例えば、２０〜４０秒）前記反応混合物の温度を（例えば、５０℃〜６５℃に）下げて、これにより、プライマーを前記一本鎖ＤＮＡ鋳型にアニールすることを可能にして、プライマー−鋳型複合物を提供し、前記プライマー−鋳型複合物への前記ＤＮＡポリメラーゼの結合を可能にするステップ。
【０４３６】
４）前記反応混合物を（例えば、７５℃〜８０℃で）加熱して、５’から３’の方向に前記ｄＮＴＰを前記ＤＮＡ鋳型に添加することによって、前記ＤＮＡポリメラーゼが、前記ターゲットＤＮＡと相補的となるＤＮＡ鎖を合成することを可能にするステップ。
【０４３７】
５）任意的に、前記反応混合物の温度を７０℃〜７４℃に保持して、全ての残った一本鎖ＤＮＡの伸長を保証するステップ。
【０４３８】
別の態様では、本発明は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、ＤＮＡを増幅する方法に関する。該方法は、１個以上のプライマーであって、前記プライマーの核酸塩基の環構造上または該環構造内にある窒素原子上の１個以上の熱に不安定な保護基を有する１個以上のプライマー（つまり、特定のＤＮＡシーケンスに対してターゲットとされるオリゴヌクレオチド）を用いることを伴う。ここで、前記保護基は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４であり、Ｒ４はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４３９】
別の態様では、本発明は、ＰＣＲを用いてＤＮＡを増幅する方法に関する。ここで、該方法は、以下のステップを備える。
【０４４０】
１）ターゲットＤＮＡ（つまり、増幅されるＤＮＡ）と、ＤＮＡポリメラーゼと、プライマーと、デオキシヌクレオチド三リン酸（ｄＮＴＰ）とを含む反応混合物を提供するステップ。ここで、１以上のｄＮＴＰは、以下の構造のうちの１つである。
【０４４１】
【化２３２】
2017514802.tif 000234
【０４４２】
上記の構造２１５の置換基は以下の通りである。「ｎ」は１〜５０の間の整数であり、「Ｂ」は核酸塩基であり、「Ａ」はＨまたは構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基のいずれかである。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。ただし、少なくとも１つの「Ａ」は、熱に不安定な保護基である。
【０４４３】
２）所定時間（例えば、１分）前記反応混合物を（例えば、９４℃〜９８℃で）加熱し、前記ターゲットＤＮＡを変性させ、これにより、一本鎖ＤＮＡ鋳型を提供するステップ。
【０４４４】
３）所定時間（例えば、２０〜４０秒）前記反応混合物の温度を（例えば、５０℃〜６５℃に）下げて、これにより、プライマーを前記一本鎖ＤＮＡ鋳型にアニールすることを可能にして、プライマー−鋳型複合物を提供し、前記プライマー−鋳型複合物への前記ＤＮＡポリメラーゼの結合を可能にするステップ。
【０４４５】
４）前記反応混合物を（例えば、７５℃〜８０℃で）加熱して、５’から３’の方向に前記ｄＮＴＰを前記ＤＮＡ鋳型に添加することによって、前記ＤＮＡポリメラーゼが、前記ターゲットＤＮＡと相補的となるＤＮＡ鎖を合成することを可能にするステップ。
【０４４６】
５）任意的に、前記反応混合物の温度を７０℃〜７４℃に保持して、全ての残った一本鎖ＤＮＡの伸長を保証するステップ。
【０４４７】
別の態様では、本発明は、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体の三リン酸を製造する方法に関する。ここで、前記ヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体の三リン酸は、少なくとも１個の熱に不安定な保護基を含む。前記方法は以下のステップを備える。
【０４４８】
１）ヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体を備える反応混合物にモノリン薬剤と、任意的に縮合剤（例えば、カルボニルジイミダゾール）とを、ヌクレオシドまたはヌクレオシド類縁体を含む反応混合物に加えるステップであって、ここで、前記類縁体は、構造が以下の通りであり、
【０４４９】
【化２３３】
2017514802.tif 000235
【０４５０】
上記の構造２１６の置換基は以下の通り、すなわち、Ｙが、ＯＰ１であり、Ｐ１が、保護基または−Ｈであり、ＺはＨまたはＯＰ２であり、Ｐ２は、保護基または−Ｈであり、Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、Ａは、熱に不安定な保護基であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０であり、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）であり、
以下の構造のモノリン酸化された中間体を提供するステップ。
【０４５１】
【化２３４】
2017514802.tif 000236
【０４５２】
上記の構造２１７の置換基は以下の通りである。ＹはＯＰ１である。ここで、Ｐ１は保護基である。ＺはＨまたはＯＰ２である。ここで、Ｐ２は保護基である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、Ａは、熱に不安定な保護基であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。「ＰＭ」は、単一のリン原子を含む部位である。
【０４５３】
２）前記リン酸化された中間体にポリリン薬剤を加えて、以下の構造のポリリン酸化された中間体を提供するステップ。
【０４５４】
【化２３５】
2017514802.tif 000237
【０４５５】
上記の構造２１８の置換基は以下の通りである。ＹはＯＰ１である。ここで、Ｐ１は、保護基である。Ｚは、ＨまたはＯＰ２である。ここで、Ｐ２は保護基である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）であり、「ＰＰ」は、複数のリン原子を含む部位である。
【０４５６】
３）ポリリン酸化された中間体を加水分解し、Ｐ１を除去して、以下の構造のヌクレオシド三リン酸またはヌクレオシド類縁体の三リン酸を提供するステップ。
【０４５７】
【化２３６】
2017514802.tif 000238
【０４５８】
上記の構造２１９の置換基は以下の通りである。ＹはＯＰ１である。ここで、Ｐ１は保護基である。ＺはＨまたはＯＰ２である。ここで、Ｐ２は保護基である。Ｂは、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４５９】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「１」で使用されるモノリン薬剤は、以下、すなわち、ＰＯＣｌ３および以下の構造２２０から選ばれる。
【０４６０】
【化２３７】
2017514802.tif 000239
【０４６１】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「１」の核酸塩基または核酸塩基類縁体は、以下の構造のうちの１つである。
【０４６２】
【化２３８】
2017514802.tif 000240
【０４６３】
【化２３９】
2017514802.tif 000241
【０４６４】
上記の構造２２１および構造２２２の置換基は以下の通りである。Ｐ１は保護基であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４６５】
【化２４０】
2017514802.tif 000242
【０４６６】
【化２４１】
2017514802.tif 000243
【０４６７】
上記の構造２２３および構造２２４の置換基は以下の通りである。Ｐ１は保護基であり、Ａは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４６８】
【化２４２】
2017514802.tif 000244
【０４６９】
【化２４３】
2017514802.tif 000245
【０４７０】
上記の構造２２５および構造２２６の置換基は以下の通りである。Ｐ１は保護基であり、Ａは、構造は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４７１】
【化２４４】
2017514802.tif 000246
【０４７２】
上記の構造２２７の置換基は以下の通りである。Ｐ１は保護基であり、Ａは熱に不安定な保護基であり、その構造は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４７３】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「２」のポリリン薬剤は以下の構造、すなわち、（ｎ−Ｂｕ３ＮＨ）２Ｈ２Ｐ２Ｏ７およびＰ２Ｏ７４−のうちの１つである。
【０４７４】
一事例では、先に挙げられた方法のステップ「２」のポリリン酸化された中間体は以下の構造である。
【０４７５】
【化２４５】
2017514802.tif 000247
【０４７６】
上記の構造２２８の置換基は以下の通りである。Ｐ１は保護基であり、Ｂは核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、Ａ１は、構造は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４７７】
【化２４６】
2017514802.tif 000248
【０４７８】
【化２４７】
2017514802.tif 000249
【０４７９】
【化２４８】
2017514802.tif 000250
【０４８０】
【化２４９】
2017514802.tif 000251
【０４８１】
上記の構造２２９、構造２３０、構造２３１、および構造２３２の置換基は以下の通りである。Ａ１は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４８２】
三リン酸合成の議論については以下を参照されたい。Ｇｒｅｇｏｒ  Ｓ．Ｃｒｅｍｏｓｎｉｋ，Ａｌｅｘａｎｄｒｅ  Ｈｏｆｅｒ  ａｎｄ  Ｈｅｍｍｉｎｇ  Ｊ．Ｊｅｓｓｅｎ  Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２０１４，５３，２８６、Ｍａｌｗｉｎａ  Ｓｔｒｅｎｋｏｗｓｋａ，Ｐｒｅｍｙｓｌａｗ  Ｗａｎａｔ，Ｍａｒｃｉｎ  Ｚｉｅｍｎｉａｋ，Ｊａｃｅｋ  Ｊｅｍｉｅｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｊｏａｎｎａ  Ｋｏｗａｌｓｋａ  Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２０１２，１４，４７８２、Ｔｏｂｉａｓ  Ｓａｎｔｎｅｒ，Ｖａｎｅｓｓａ  Ｓｉｅｇｍｕｎｄ，Ａｎｄｒｅａｓ  Ｍａｒｘ  ａｎｄ  Ｒｏｎａｌｄ  Ｍｉｃｕｒａ  Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，２０，２４１６、Ｊｕｌｉａｎｎｅ  Ｃａｒｔｏｎ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｂｉｌａｌ  Ｆｉａｚ，Ｒｕｄｉｏｎａ  Ｈｏｘｈａｊ，Ｍａｔｔｈｅｗ  Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｚｈｅｎ  Ｈｕａｎｇ  Ｓｃｉ．Ｃｈｉｎａ  Ｃｈｅｍ．，２０１５，５５，８０、Ｇｒｅｇｏｒ  Ｓ．Ｃｒｅｍｏｎｓｎｉｋ，Ａｌｅｘａｎｄｒｅ  Ｈｏｆｅｒ  ａｎｄ  Ｈｅｎｎｉｎｇ  Ｊ．Ｊｅｓｓｅｎ  Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，２０１４，１２６，２９０、Ｑｉ  Ｓｕｎ，Ｓｈａｎｓｈａｎ  Ｇｏｎｇ，Ｊｉａｎ  Ｓｕｎ，Ｓｉ  Ｌｉｕ，Ｑｉａｎｇ  Ｘｉａｏ  ａｎｄ  Ｓｈｏｕｚｈｉ  Ｐｕ  Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１３，７８，８４１７、Ｊｕｌｉａｎｎｅ  Ｃａｔｏｎ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ｍａｔｔｈｅｗ  Ｓｍｉｔｈ、Ｎｉｃｏｌａｓ  Ｃａｒｒａｓｃｏ  ａｎｄ  Ｚｈｅｎ  Ｈｕａｎｇ  Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２０１１，１３，４１５６、Ｊｕｌｉａｎｎｅ  ｃａｔｏｎ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｌｉｎａ  Ｌｉｎ，Ｍａｔｔｈｅｗ  Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｚｈｅｎ  Ｈｕａｎｇ  Ｃｈｅｍ  Ｃｏｍｍｕｎ．，２０１１，４７，８１４２−８１４４。先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【０４８３】
別の態様では、本発明は、病気を治療する方法に関する。該方法は、以下のステップを備える。
【０４８４】
１）治療量の化合物を、それを必要とする患者に塗布すること。ここで、前記化合物は、ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシド、またはヌクレオシド類縁体と、１以上の熱に不安定な保護基とを備える。ここで、少なくとも１つの熱に不安定な保護基は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８である。ここで、Ｒ８は、ｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０４８５】
２）前記患者の１以上の領域にエネルギーを与えて、その結果、前記１以上の領域の温度を上昇させ、続いて前記ヌクレオチド、ヌクレオチド類縁体、ヌクレオシド、またはヌクレオシド類縁体を熱により脱保護すること。
【０４８６】
これにより、前記病気を治療する。
【０４８７】
特定の熱に不安定な保護基についての議論は以下を参照されたい。Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．Ｎｅｗ  Ｊ．Ｃｈｅｍ．，２０１２，３６，６０３−１２、ＵＳＰ８，１３３，６６９、ＵＳＰ７，３５５，０３７、ＵＳＰ６，７６２，２９８。先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【０４８８】
一事例では、治療用化合物は、以下の構造のうちの１つである。
【０４８９】
【化２５０】
2017514802.tif 000252
【０４９０】
【化２５１】
2017514802.tif 000253
【０４９１】
上記の構造２３３および構造２３４の置換基は以下の通りである。「Ａ１」、「Ａ２」および「Ａ３」は、独立して、−Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ただし、Ａ１、Ａ２、またはＡ３の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０４９２】
【化２５２】
2017514802.tif 000254
【０４９３】
【化２５３】
2017514802.tif 000255
【０４９４】
上記の構造２３５および構造２３６の置換基は以下の通りである。「Ａ１」、「Ａ２」および「Ａ３」は、独立して、−Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ただし、Ａ１、Ａ２またはＡ３の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。ここで、「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０４９５】
【化２５４】
2017514802.tif 000256
【０４９６】
【化２５５】
2017514802.tif 000257
【０４９７】
上記の構造２３７および構造２３８の置換基は以下の通りである。「Ａ１」、「Ａ２」および「Ａ３」は、独立して、−Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ただし、Ａ１、Ａ２またはＡ３の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である。「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０４９８】
【化２５６】
2017514802.tif 000258
【０４９９】
【化２５７】
2017514802.tif 000259
【０５００】
上記の構造２３９および構造２４０の置換基は以下の通りである。Ａ１、Ａ２またはＡ３の少なくとも１つは、「Ａ１」、「Ａ２」および「Ａ３」は、独立して、−Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ただし、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０５０１】
【化２５８】
2017514802.tif 000260
【０５０２】
【化２５９】
2017514802.tif 000261
【０５０３】
上記の構造２４１および構造２４２の置換基は以下の通りである。「Ａ１」、「Ａ２」および「Ａ３」は、独立して、−Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ただし、Ａ１、Ａ２またはＡ３の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０５０４】
【化２６０】
2017514802.tif 000262
【０５０５】
【化２６１】
2017514802.tif 000263
【０５０６】
上記の構造２４３および構造２４４の置換基は以下の通りである。「Ａ１」、「Ａ２」および「Ａ３」は、独立して、−Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ただし、Ａ１、Ａ２またはＡ３の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ４（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ４は、ｔｅｒｔ−アルキルである。「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０５０７】
【化２６２】
2017514802.tif 000264
【０５０８】
【化２６３】
2017514802.tif 000265
【０５０９】
上記の構造２４５および構造２４６の置換基は以下の通りである。「Ａ３」は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０５１０】
【化２６４】
2017514802.tif 000266
【０５１１】
【化２６５】
2017514802.tif 000267
【０５１２】
上記の構造２４７および構造２４８の置換基は以下の通りである。「Ａ１」、「Ａ２」および「Ａ３」は、独立して、−Ｈまたは熱に不安定な保護基である。ただし、Ａ１、Ａ２またはＡ３の少なくとも１つは、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ（ＣＨ３）３）である熱に不安定な保護基である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキルである。「Ｂ」は核酸塩基または核酸塩基類縁体である。
【０５１３】
【化２６６】
2017514802.tif 000268
【０５１４】
【化２６７】
2017514802.tif 000269
【０５１５】
【化２６８】
2017514802.tif 000270
【０５１６】
【化２６９】
2017514802.tif 000271
【０５１７】
【化２７０】
2017514802.tif 000272
【０５１８】
【化２７１】
2017514802.tif 000273
【０５１９】
一事例では、前記熱エネルギーは、以下の方法の１以上を用いて、前記患者の１以上の領域に与えられる。すなわち、ＵＳＰ６，７２５，０９５、ＵＳＰ６，８０７，４４６およびＵＳＰ６，７６８，９２５で論じられたようなマイクロ波フェーズドアレイまたは単回塗布加温療法を用いて付与される。これらは、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【０５２０】
別の態様では、本発明は、病気を治療する方法に関する。ここで、該方法は、以下のステップを備える。
【０５２１】
１）治療量の化合物を、それを必要とする患者に塗布するステップ。ここで、前記化合物は、オリゴヌクレオチド（またはその塩）と、１個以上の熱に不安定な保護基とを含む。ここで、１個以上の熱に不安定な保護基は、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０はｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０５２２】
２）前記患者の１以上の領域にエネルギーを与えて、その結果、前記１以上の領域の温度を上昇させ、続いて前記オリゴヌクレオチドを熱により脱保護するステップ。
【０５２３】
これにより、前記病気を治療する。
【０５２４】
一事例では、治療用化合物は、ホミビルセンまたはミポメルセンのいずれかである。該ホミビルセンまたはミポメルセンには、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８である１以上の熱に不安定な保護基が結合されている。ここで、Ｒ８は、ｔｅｒｔ−アルキル（例えば、−Ｃ（ＣＨ３）３）である。
【０５２５】
一事例では、前記熱エネルギーは、１以上の以下の方法を用いて、前記患者の１以上の領域に与えられる。すなわち、ＵＳＰ６，７２５，０９５、ＵＳＰ６，８０７，４４６およびＵＳＰ６，７６８，９２５で論じられたようなマイクロ波フェーズドアレイまたは一回塗布加温療法を用いて与えられる。これらは、全ての目的のために、本文献中に参照により包含される。
【０５２６】
本発明は、さらに、ヌクレオシド、ヌクレオシド類縁体、ヌクレオチド、およびヌクレオチド類縁体を脱保護する方法に関する。保護された化合物は、以下の構造、すなわち、ＸＯ−ＳＭ−Ｂ―Ａである。置換基「Ｘ」は、Ｈ、保護基、固相担体、リン含有部位またはそれらの塩である。「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体である。「Ｂ」は、塩基部位または塩基部位の類縁体である。「Ａ」は、前記塩基部位上または前記塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基である。
【０５２７】
前記脱保護方法は、溶媒（例えば、水）の存在下で、前記化合物を加熱することを備える。特定の事例では、前記溶媒のｐＨは、６．０〜９．０であり、例えば、６．５〜７．５、６．７５〜７．２５、６．９０〜７．１０、または約７．０である。他の事例では、前記溶媒のｐＨは、７．０を上回り、例えば、７．０〜１０．０、７．０〜９．０または７．０〜８．０である。前記化合物が加熱される温度は、９０℃〜１００℃の範囲にある。多くの場合、前記温度は、９１℃〜９９℃、９２℃〜９７℃、９３℃〜９５℃の範囲にある。特定の事例では、前記温度は９４℃である。前記温度は、１時間未満の期間保持される。多くの場合、前記温度は、４５分間未満または３０分間未満保持される。特定の事例では、前記温度は、２０分間未満保持される。
【０５２８】
前記脱保護方法の結果、保護基−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０の９０％以上が除去される。多くの場合、前記脱保護方法の結果、前記保護基の９２．５％以上または９５％以上が除去される。特定の事例では、前記脱保護法の結果、前記保護基の９７．５％以上または９９％以上が除去される。
【０５２９】
前記脱保護方法の結果、前記化合物の分解は５％未満となる。多くの場合、前記脱保護方法の結果、前記化合物の分解は４％未満または３％未満となる。特定の事例では、前記脱保護方法の結果、前記化合物の分解は２％未満または１％未満となる。
【０５３０】
別の方法では、前記化合物ＸＯ−ＳＭ−Ｂ−Ａは、マイクロ波技術を使用することによって、溶媒の存在下で脱保護される。例えば、Ｃｕｌｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １８：８１−９２（２００８）、およびＫｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２４，ｐｐ．５１２７−５１２９を参照されたい。これらの両方は、本文献中に、参照により包含される。前記溶媒のｐＨは、典型的には、６．０より大きく、または７．０以上であり、例えば、７．０〜７．５、７．５〜８．０、８．０〜８．５、８．５〜９．０である。前記マイクロ波温度における前記溶媒の温度は、多くの場合、５５℃未満であり、例えば、５０℃未満であり、４５℃未満であり、４０℃未満であり、３５℃未満であり、３０℃未満である。特定の事例では、アンモニアまたはアミンのいずれかが、前記脱保護の前記反応混合物中に含まれる。アミン類の非限定的な例には、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、エタノールアミンのようなモノアルキルアミン、およびジメチルアミン、ジエチルアミンのようなジアルキルアミン、並びにＤＢＵのような他のアミンが含まれる。特定の事例では、前記脱保護ステップを３０分未満行うことにより、９０パーセントより多くが完遂する。多くの場合、前記脱保護ステップを、２５分、２０分、１５分、１０分または５分未満行うことにより、９０％より多くが完遂する。
【０５３１】
別の方法では、前記化合物ＸＯ−ＳＭ−Ｂ−Ａは、溶媒の不存在下で脱保護される。前記化合物は、９０℃〜１００℃の範囲の温度に加熱される。多くの場合、前記温度の範囲は、９１℃〜９７℃、９２℃〜９６℃、９３℃〜９５℃である。特定の事例では、前記温度は９４℃である。前記温度は、１時間未満の期間保持される。多くの場合、前記温度は、４５分間未満または３０分間未満保持される。特定の事例では、前記温度は、２０分間未満保持される。
【０５３２】
前記溶媒がない脱保護方法の結果、前記脱保護基−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１の９０％より多くが除去される。多くの場合、前記溶媒がない脱保護方法の結果、前記脱保護基の９２．５％より多く、または９５％よりも多くが除去される。特定の事例では、前記溶媒がない脱保護法方法の結果、前記脱保護基の９７．５％よりも多く、または９９％よりも多くが除去される。
【０５３３】
さらに、前記溶媒がない脱保護方法の結果、前記化合物の分解は５％未満となる。多くの場合、前記溶媒がない脱保護方法の結果、前記化合物の分解は４％未満または３％未満となる。特定の事例では、前記溶媒がない脱保護方法の結果、前記化合物の分解は２％未満または１％未満となる。
【０５３４】
本発明は、さらに、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類縁体を脱保護する方法に関する。保護される化合物は以下の構造である。
【０５３５】
【化２７２】
2017514802.tif 000274
【０５３６】
上記の構造２５５の置換基は以下の通りである。「ＰＬ１」および「ＰＬ２」は、独立して、Ｈまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体のいずれかであり、「Ｎｕ１」および「Ｎｕ２」は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチド（またはそれらの塩）であり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ」は、前記核酸塩基部位上または前記核酸塩基部位内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基である。
【０５３７】
前記オリゴヌクレオチド、または前記オリゴヌクレオチド類縁体の脱保護方法は、溶媒（例えば、水）の存在下で前記化合物を加熱することを備える。ある事例では、前記溶媒のｐＨは、６．０〜９．０であり、例えば、６．５〜７．５、６．７５〜７．２５、６．９０〜７．１０、または約７．０である。他の事例では、前記溶媒のｐＨは、７．０を上回り、例えば、７．０〜１０．０、７．０〜９．０または７．０〜８．０である。前記化合物が加熱される温度は、９０℃〜１００℃の範囲にある。多くの場合、前記温度は、９１℃〜９９℃、９２℃〜９７℃、９３℃〜９５℃の範囲にある。特定の事例では、前記温度は９４℃である。特定の事例では、前記温度は９４℃である。前記温度は、１時間未満の間保持される。多くの場合、前記温度は、４５分間未満または３０分間未満保持される。特定の事例では、前記温度は、２０分間未満保持される。
【０５３８】
前記脱保護方法の結果、前記オリゴヌクレオチド／類縁体の脱保護基−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１の９０％より多くが除去される。多くの場合、前記脱保護方法の結果、前記脱保護基の９２．５％より多く、または９５％よりも多くが除去される。特定の事例では、前記脱保護方法の結果、前記脱保護基の９７．５％よりも多く、または９９％よりも多くが除去される。
【０５３９】
さらに、前記脱保護方法の結果、前記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類縁体の分解は５％未満となる。多くの場合、前記脱保護方法の結果、前記化合物の分解は４％未満または３％未満となる。特定の事例では、前記脱保護方法の結果、前記化合物の分解は２％未満または１％未満となる。
【０５４０】
別の方法では、構造が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である保護基を含むオリゴヌクレオチドは、溶媒の存在下で、マイクロ波技術を使用することによって脱保護される。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル（例えば、Ｃ（ＣＨ３）３）である。例えば、Ｃｕｌｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  １８：８１−９２（２００８）、およびＫｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．２４，ｐｐ．５１２７−５１２９を参照されたい。これらの両者は、本文献中に、参照により包含される。前記溶媒のｐＨは、典型的には、６．０以上であるか、または７．０よりも大きく、例えば、７．０〜７．５、７．５〜８．０、８．０〜８．５、８．５〜９．０である。前記マイクロ波温度における前記溶媒の温度は、多くの場合、５５℃未満であり、例えば、５０℃未満であり、４５℃未満であり、４０℃未満であり、３５℃未満であり、または３０℃未満である。特定の事例では、アンモニアまたはアミンのいずれかが、前記脱保護の反応混合物中に含まれる。アミン類の非限定的な例には、メチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、エタノールアミンのようなモノアルキルアミン、およびジメチルアミン、ジエチルアミンのようなジアルキルアミン、並びにＤＢＵのような他のアミンが含まれる。特定の事例では、前記脱保護ステップを３０分未満行うことにより、９０パーセントより多くが完遂する。多くの場合、前記脱保護ステップを、２５分、２０分、１５分、１０分、または５分未満行うことにより、９０％より多く完遂する。
【０５４１】
別の方法では、以下の化合物は、溶媒の不存在下で、脱保護される。
【０５４２】
【化２７３】
2017514802.tif 000275
【０５４３】
上記の構造２５６の置換基は以下の通りである。「ＰＬ１」および「ＰＬ２」は、独立して、Ｈまたは−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｏ−若しくはその類縁体のいずれかであり、「Ｎｕ１」および「Ｎｕ２」は、独立して、置換基がないか、ヌクレオシド若しくはヌクレオシド類縁体であるか、またはオリゴヌクレオチドであり、「ＳＭ」は、糖部位または糖部位の類縁体であり、「Ｂ」は、核酸塩基または核酸塩基類縁体であり、「Ａ」は、前記核酸塩基上または前記核酸塩基内にある１個以上の窒素原子に結合される１個以上の部位であり、構造はが−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６０である。ここで、Ｒ６０は、ｔｅｒｔ−アルキル基である。前記化合物は、９０℃〜１００℃の範囲の温度で加熱される。多くの場合、前記温度は、９１℃〜９７℃、９２℃〜９６℃、９３℃〜９５℃である。特定の事例では、前記温度は９４℃である。前記温度は、１時間未満の期間保持される。多くの場合、前記温度は、４５分間未満または３０分間未満保持される。特定の事例では、前記温度は、２０分間未満保持される。
【０５４４】
オリゴヌクレオチドまたは類縁体の溶媒がない脱保護方法の結果、保護基−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１の９０％より多くが除去される。多くの場合、前記脱保護方法の結果、前記保護基の９２．５％より多く、または９５％よりも多くが除去される。特定の事例では、前記脱保護方法の結果、前記保護基の９７．５％より多く、または９９％よりも多くが除去される。
【０５４５】
さらに、前記溶媒がない脱保護方法の結果、前記オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類縁体の分解は５％未満となる。多くの場合、前記脱保護方法の結果、前記化合物の分解は４％未満または３％未満となる。特定の事例では、前記脱保護方法の結果、前記化合物の分解は２％未満または１％未満となる。
【０５４６】
本発明は、さらに、ポリマー（例えば、ＤＮＡオリゴヌクレオチド）合成のための装置に関する。ＤＮＡ合成機についての議論は以下を参照されたい。ＵＳＰ５，３６８，８２３、ＵＳＰ５，４７２，６７２、ＵＳＰ５，５２９，７５６、ＵＳＰ５，８３７，８５８。先の参考文献は、全ての目的のために、本文献中に、参照により包含される。
【０５４７】
本発明の装置は、典型的には、目的とするポリマーの合成のために用いられる化合物を含む１以上の貯槽を含む。ここで、前記貯槽は、合成室（例えば、固相担体を含むカラム）への（例えば、液体媒体内での）種々の薬剤の流入を可能にするシステム内に動作可能に接続される。前記合成室への薬剤流を誘発する前記装置における機構（例えば、ガス圧）が存在する。前記合成室では、ポリマー合成に伴う種々の化学反応が実行される。前記合成室は、その温度を制御するための内部手段または外部手段（例えば、マイクロ波装置または加熱ジャケット）のいずれかを含む。合成されたポリマーは、液体の流れを制御するバルブによって、前記合成室内から排出される。前記貯槽からの化合物の流れ、前記合成室の温度、および前記装置からの前記ポリマーの排出を制御するために、典型的には、コンピュータ制御部が用いられる。
【０５４８】
図１を参照すると、コンピュータ制御部は、導管のネットワーク化されたシステム内のガス圧を制御する。前記ガス圧は、ＤＮＡオリゴヌクレオチド合成において用いられる種々の化合物、要するに、「ヌクレオシドＡ、貯槽１」、「ヌクレオシドＣ、貯槽２」、「ヌクレオシドＧ、貯槽３」、「ヌクレオシドＴ、貯槽４」、「洗浄」、「薬剤１、貯槽」、「薬剤２、貯槽」、「薬剤３、貯槽」、「薬剤４、貯槽」、「脱保護、薬剤１」、および「脱保護、薬剤２」の流れを、固相担体を含む合成カラムに案内する。保護され、固相担体結合されたＤＮＡオリゴマーを製造するために、前記合成カラム内への化学物質の導入の正確な順序は、前記コンピュータ制御部によって命じられる。前記合成カラムに動作可能に接続される温度制御ユニットは、前記オリゴヌクレオチドから１個以上の種類の保護基を除去することを容易にするように、または前記オリゴヌクレオチドから１以上の種類の保護基の除去をもたらすように、前記カラムの温度を調節する。特定の事例では、前記温度制御ユニットによって、前記固相担体からの前記オリゴヌクレオチドの除去がさらに容易になって、目的とするオリゴヌクレオチドが提供され、または、前記固相担体からの前記オリゴヌクレオチドの除去がさらにもたらされて、目的とするオリゴヌクレオチドが提供される。
【０５４９】
特定の事例では、前記合成カラムおよびこれに関連する温度制御部は、中性条件下（つまり、オリゴヌクレオチド合成に使用される液体媒体のｐＨは約７．０である）で、オリゴヌクレオチドからの１個以上のＢＯＣ基の除去をもたらすように設計される。これは、前記合成カラムの固相担体に結合されたオリゴヌクレオチドを、５分〜２０分の範囲の間、９１℃〜９９℃（または、約９４℃）まで加熱することによって行われる。
【０５５０】
他の事例では、前記合成カラムおよびこれに関連する温度制御部は、固相担体からのオリゴヌクレオチドの除去をもたらすように設計される。このことは、前記固相担体に前記オリゴヌクレオチドを結合するために、ｔｅｒｔ−アルキル基が使用される場所、または前記ｔｅｒｔ−アルキル基が、前記オリゴヌクレオチドと前記固相担体との間のリンカーの一部である場所において起こり得る。ＢＯＣ除去と同様に、中性条件下において、前記固相担体からの前記オリゴマーの開裂が生じ、該開裂は、前記固相担体化合物を、５分〜２０分の範囲の間。９１℃〜９９℃に加熱することを伴う。
【実施例】
【０５５１】
ＤＮＡ合成を、クルアケム（Ｃｒｕａｃｈｅｍ）のＤＮＡアミダイトを用いて、バイオサーチ（Ｂｉｏｓｅｒｃｈ）８７５０合成機で実行した。
【０５５２】
アニオン交換ＨＰＬＣ分析を以下のように実行した。２〜２０ｍＬの液体サンプルを、濃度に応じて、ダイオネックス（Ｄｉｏｎｅｘ）アニオン交換カラム（４．６×２５０ｍｍ）に注入した。０．０２５ＭのＴＲＩＳ  ＨＣｌおよび０．０１ＭのＴＲＩＳ（Ａ）と、０．０２５ＭのＴＲＩＳ  ＨＣｌ、０．０１ＭのＴＲＩＳ、および１．０ＭのＮａＣｌ（Ｂ）との水性緩衝液により、２６０ｎｍのＵＶ検出で、２０分に渡って、１：０〜０：１までの直線勾配を用いて、サンプルを２ｍＬ／ｍｉｎで溶出した。。
【０５５３】
塩基組成物分析のためのサンプルを先に記載したように処理し、逆相ＨＰＬＣによって以下のように分析した。２０μＬの水性サンプルをＨＡＩＳＩＬ  ＨＬ  Ｃ１８  ５ｍ  カラム（４．６×１５０ｍｍ）に注入した。０．１ＭのＴＥＡＡ、５％アセトニトリル（Ａ）と、アセトニトリル（Ｂ）との緩衝液により、２６０ｎｍのＵＶ検出で、２０分に渡って、１：０〜０：１までの直線勾配を用いて、サンプルを１ｍＬ／ｍｉｎで溶出した。
【０５５４】
【化２７４】
2017514802.tif 000276
【０５５５】
【化２７５】
2017514802.tif 000277
【０５５６】
【化２７６】
2017514802.tif 000278
【０５５７】
【化２７７】
2017514802.tif 000279
【０５５８】
［５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ６，Ｎ６−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）デオキシアデノシン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルシアノエチルホスホロアミダイト（構造２５７）］
５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ６−（ベンゾイル）デオキシアデノシン（５０ｇ、７６ｍＭ）およびイミダゾール（２０ｇ、０．２９４Ｍ）に対して、７００ｍＬの乾燥ピリジンおよび５０ｇ（０．３３３Ｍ）の塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルを加えた。この溶液を１８時間撹拌した。前記ピリジンを回転蒸発によって除去し、残渣を７００ｍＬの酢酸エチルに溶解した。有機相を、０．５ＭのＫ２ＨＰＯ４５００ｍｌで洗浄した後５００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。前記溶液を蒸発させて、５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ６−（ベンゾイル）−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−デオキシアデノシン６２ｇを生成物として得た。この生成物を含む９００ｍＬのメタノール溶液に対して、１００ｍＬの濃アンモニア水を加えた。短時間攪拌させた後、前記溶液を一晩静置させた。溶媒を回転蒸発によって除去し、固形分を７００ｍＬの乾燥ピリジンおよび２０ｍＬのＴＥＡ中に再溶解させ、５０ｇのジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカーボネートを加えた。この溶液を１８時間撹拌した。溶媒を回転蒸発によって除去し、残渣を５００ｍＬのＤＣＭに溶解して、この溶液を０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４５００ｍＬで洗浄した。有機相を、２％メタノールおよび２％ピリジンを含むＤＭＦを用いて充填した１０×３５ｃｍのシリカカラムに添加した。溶媒１０Ｌにわたってメタノールが６％となるまでカラムに勾配をかけて、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリル−Ｎ６，Ｎ６−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシアデノシンを含む画分を貯めて、回転蒸発によって濃縮した。収量は４２ｇ（５５ｍＭ、ＤＭＴ  ｄＡ（Ｂｚ）から７２％）であった。
【０５５９】
１ＭのＴＢＡＦを含むＴＨＦ６０ｍＬおよび１０ｍＬのＨＯＡｃを含むＴＨＦ５００ｍＬの溶液を加えて、ＴＢＤＭＳ基を除去した。１８時間後、５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３を加えて、回転蒸発によってＴＨＦを除去した。残渣を６００ｍＬのＤＣＭに溶解し、４００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。有機相を、２％メタノールおよび２％ピリジンを含むＤＣＭを用いて充填した１０×３５ｃｍのシリカカラムに添加した。溶媒１４Ｌにわたってメタノールが１０％となるまでカラムに勾配をかけて、５’−Ｏ−ＤＭＴ−Ｎ６，Ｎ６−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシアデノシンを含む画分を貯めて、回転蒸発によって濃縮した。収量は３２ｇ（４２．５ｍＭ、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリル−Ｎ６，Ｎ６−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシアデノシンから８９％）であった。１Ｈ  ＮＨＲ（４００ｍＨｚ、ＣＤＣｌ３、ＰＰＭ）８．７８（ｓ，１Ｈ）、８．２２（ｓ，１Ｈ）、７．３−７．６（ｍ，９Ｈ）、６．８（ｄ，４Ｈ）、６．５（ｔ，１Ｈ）、４．７（ｓ，１Ｈ）、３．８（ｓ，６Ｈ）、３．４２（ｄ，２Ｈ）、２．８（ｍ，１Ｈ）、２．５５（ｍ，１Ｈ）、１．４６（ｓ，１８Ｈ）。
【０５６０】
８００ｍＬの乾燥アセトニトリル中に２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（１５ｇ、５０ｍＭ）および１Ｈ−テトラゾール（１ｇ、１４ｍＭ）を含む溶液を調製し、１分混合した後、これを３２ｇ（４９ｍＭ）の乾燥５’−Ｏ−ＤＭＴ−Ｎ６，Ｎ６−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシアデノシンを含むフラスコに加えた。２時間攪拌している状態で、ヌクレオシドをゆっくりと溶かした。回転蒸発によって溶媒を除去し、残渣を、３００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３を含む７００ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解させた。混合物を振って分離させ、有機相を、２％ピリジンを含むＥｔＯＡｃを用いて充填した１０×２５ｃｍのシリカカラムに添加した。前記カラムを均一溶媒で溶出し、ピュアな２５７を含む画分を貯めて、回転蒸発によって３３．９ｇ（３５．６ｍＭ、保護されたヌクレオシドから８４％の収率）まで濃縮した。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６１ｍＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＰＰＭ）：１４９．６１７、１４９．４１０。元素分析  Ｃ５０Ｈ６４Ｎ７Ｏ１０Ｐの計算値：Ｃ６２．９５、Ｈ６．７６、Ｎ１０．２８。実測値：Ｃ６３．２０、Ｈ６．７９、Ｎ１０．２１。
【０５６１】
［５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）デオキシシトシン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルシアノエチルホスホロアミダイト（構造２５８）］
乾燥５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ４−（アセチル）デオキシシトシン（５０ｇ、８７．４ｍＭ）に、イミダゾール（２０ｇ、０．２９４Ｍ）、７００ｍＬの乾燥ピリジン、および５０ｇ（０．３３３Ｍ）の塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルを加えた。該溶液を１８時間撹拌し、回転蒸発によって前記ピリジンを除去し、残渣を７００ｍＬの酢酸エチルで溶解した。有機相を０．５ＭのＫ２ＨＰＯ４５００ｍＬで洗浄した後、５００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。蒸発によって、５６ｇ（８１ｍＭ）の５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ４−（アセチル）−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメトキシシリル−デオキシシトシンを得た。９００ｍＬのメタノールにこの生成物を含む溶液を調製し、１００ｍＬの濃アンモニア水をこれに加えた。短時間攪拌させた後、前記溶液を一晩静置させた。乾燥後、固形分を７００ｍＬの乾燥ピリジンに再溶解し、溶媒を回転蒸発によって高真空で一晩除去した。固形分を７００ｍＬの乾燥ＴＨＦに再溶解し、２０ｇの乾燥Ｋ２ＣＯ３を加えた。１０分後、５０ｇ（２２９ｍＭ）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカーボネートを加えた。溶媒を１８時間撹拌した。濾過によって、前記Ｋ２ＣＯ３を除去し、０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４２００ｍＬを加えた。蒸発によって、前記ＴＨＦを除去した。残渣を５００ｍＬのＤＭＣに溶解し、０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４５００ｍＬで洗浄した。有機相を、１％メタノールおよび１％ピリジンを含むＤＣＭを用いて充填した１０×３５ｃｍのシリカカラムに添加した。バンドを含む第１ＤＭＴが溶出された後、２％メタノールまでの勾配を前記カラムに採用し、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシシトシンを貯めて、回転蒸発によって濃縮した。収量は２８ｇ（３７．６ｍＭ、ＤＭＴ  ｄＣ（Ａｃ）からの収率は４３％）であった。１ＭのＴＢＡＦを含むＴＨＦ６０ｍＬおよび１０ｍＬのＨＯＡｃを含む５００ｍＬのＴＨＦの溶液を加えて、ＴＢＤＭＳ基を除去した。１８時間後、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）を加え、回転蒸発によって前記ＴＨＦを除去した。残渣を６００ｍＬのＤＣＭに溶解して、４００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。有機相を２％メタノールおよび２％ピリジンを含むＤＣＭを用いて充填した１０×３５ｃｍのシリカカラムに添加した。溶媒１０Ｌにわたって、１０％メタノールまでの勾配をカラムにかけて、ピュアな５’−Ｏ−ＤＭＴ−Ｎ４−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシシトシンを貯めて、回転蒸発によって濃縮した。収量は２０ｇ（３１．７ｍＭ、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ４−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシシトシンから８４％）であった。１Ｈ  ＮＨＲ（４００ｍＨｚ、ＣＤＣｌ３、ＰＰＭ）：８．２（ｄ，１Ｈ）、７．３（ｍ，９Ｈ）、７．０（ｄ，１Ｈ）、６．８５（ｄ，４Ｈ）、６．３（ｔ，１Ｈ）、４．５（ｄｄ，１Ｈ）、４．１５（ｄｄ，１Ｈ）、３．８（ｓ，６Ｈ）、３．５（ｄｄ，２Ｈ）、３．４（ｄｄ，１Ｈ）、２．７５（ｍ，１Ｈ）、２．３５（ｍ，１Ｈ）、１．５（ｓ，１８Ｈ）。
【０５６２】
５００ｍＬの乾燥アセトニトリル中に２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト９ｇ（３０ｍＭ）および１Ｈ−テトラゾール６５０ｍｇ（９ｍＭ）を含む溶液を調製し、１分混合した後、これを２０ｇ（３１．７ｍＭ）の乾燥５’−Ｏ−ＤＭＴ−Ｎ４−（−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシアデノシンに加えた。攪拌している状態で、ヌクレオシドをゆっくりと溶かし、２時間後、回転蒸発によって、溶媒を除去した。残渣を５００ｍｌのＥｔＯＡｃに溶解した後、２００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３を用いて振とうした。分離された有機相を、２％ピリジンを含むＥｔＯＡｃを用いて充填した５×２５ｃｍのシリカカラムに添加した。前記カラムを均一溶媒で溶出し、ピュアな２５８を含む画分を貯めて、回転蒸発によって１９．５ｇ（２３．５ｍＭ）、前記ヌクレオシドから７４％の収率まで濃縮した。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６１ｍＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＰＰＭ）：１４９．９９７、１４９．３３９。元素分析  Ｃ４４Ｈ５６Ｎ５Ｏ９Ｐの計算値：Ｃ６３．６８、Ｈ６．８０、Ｎ８．４４。実測値：Ｃ６３．５９、Ｈ６．６９、Ｎ８．５２。
【０５６３】
［５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）デオキシグアノシン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルシアノエチルホスホロアミダイト（構造２５９）］
５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ２−（イソブチリル）デオキシグアノシン（１００ｇ、１５６ｍＭ）に、イミダゾール（４０ｇ、０．５８８Ｍ）を含む１２００ｍＬの乾燥ピリジンおよび１００ｇ（０．６６６Ｍ）の塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルを加えた。前記溶液を１８時間撹拌し、前記ピリジンを乾燥蒸発によって除去し、残渣を７００ｍＬの酢酸エチルに溶解した。有機相を、０．５ＭのＫ２ＨＰＯ４５００ｍｌで洗浄した後５００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。乾燥することによって、１１０ｇ（１４５ｍｍ）の生成物５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ２−（イソブチリル）−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−デオキシグアノシンを生成した。該生成物を含む１５００ｍＬのメタノール溶液を調製し、これに対して１５０ｍＬの濃アンモニア水を加えた。短時間攪拌させた後、前記溶液を一晩静置させた。溶媒を回転蒸発によって除去し、乾燥固形分を１４００ｍＬのＴＨＦに再溶解し、４０ｇの乾燥Ｋ２ＣＯ３を加えた。１０分撹拌した後、１００ｇのジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカーボネートを加えた。前記溶液を３時間撹拌した。ＴＬＣは、部分的な変化を示した（シリカ、２％ＭｅＯＨ、２％ピリジンを含むＤＭＣ、ｒｆ開始物質０．３、ｒｆ生成物０．７、１０％のＨ２ＳＯ４を用い加熱して可視化された）。反応時間が長いと、所望の生成物が少なくなり、副反応物が多くなった。前記Ｋ２ＣＯ３を濾過によって除去し、０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４４００ｍＬを加えた。前記ＴＨＦを回転蒸発によって除去し、残渣を７００ｍＬのＤＭＣと混合した。有機相を、２％メタノールおよび２％ピリジンを含むＤＭＦを用いて充填した１０×３５ｃｍのシリカカラムに添加した。溶媒１４Ｌにわたって、メタノールが１０％となるまでカラムに勾配をかけて、ピュアな５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルメチルシリル−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシグアノシンを含む画分を貯めて、回転蒸発によって濃縮した。収量は２５ｇ（３４ｍＭ、ＤＭＴ  ｄＧ（ｉＢｕ）から２２％の収率）であった。１ＭのＴＢＡＦを含むＴＨＦ６０ｍＬおよび１０ｍＬのＨＯＡｃを含むＴＨＦの５００ｍＬの溶液を加えて、ＴＢＤＭＳ基を除去した。１８時間後、５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３を加えて、回転蒸発によってＴＨＦを除去した。残渣を６００ｍＬのＤＣＭに溶解し、４００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。有機相を、回転蒸発によって泡にまで濃縮し、５’−Ｏ−ＤＭＴ−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシグアノシン（１９．５ｇ、２９．１ｍＭ、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシグアノシンから８６％）を得た。前記材料は、次ステップのために十分にピュアであった。分析サンプルを、上述のように２％メタノールおよび２％ピリジンを含むＤＭＦを用いて充填した１０×３５ｃＭのシリカカラム上でカラムクロマトグラフィによって調製した。溶媒１０Ｌにわたって、メタノールが１０％となるまでカラムに勾配をかけて、ピュアな生成物を含む画分を貯めて、蒸発させた。１Ｈ  ＮＨＲ（４００ｍＨｚ���ＣＤＣｌ３、ＰＰＭ）７．７（ｍ，１Ｈ）、７．２−７．４（ｍ，１０Ｈ）、６．８（ｄ，４Ｈ）、６．２（ｔ，１Ｈ）、５．７（ｓ，２Ｈ）、４．６５（ｍ，１Ｈ）、４．１５（ｍ，１Ｈ）、３．８（ｓ，６Ｈ）、３．３５（ｍ，２Ｈ）、２．７（ｍ，１Ｈ）、２．４５（ｍ，１Ｈ）、１．６（ｓ，１８Ｈ）。
【０５６４】
４００ｍＬの乾燥アセトニトリル中に２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピル−ホスホロジアミダイト（１２ｇ、４０ｍＭ）および１Ｈ−テトラゾール（１ｇ、１４ｍＭ）を含む溶液を調製し、１分混合した後、これを１９．５ｇ（２９．１ｍＭ）の乾燥５’−Ｏ−ＤＭＴ−Ｎ２−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−デオキシグアノシンを含むフラスコに加えた。攪拌している状態で、ヌクレオシドをゆっくりと溶かし、２時間後、回転蒸発によって溶媒を除去し、残渣を、１００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３を含むＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に溶解させた。混合物を振って分離させ、有機相を、２％ピリジンを含むＥｔＯＡｃを用いて充填した６×２５ｃＭのシリカカラムに添加した。前記カラムを均一溶媒で溶出し、ピュアな２５９を含む画分を貯めて、回転蒸発によって１２ｇ（１４ｍＭ、前記ヌクレオシドから４５％の収率）まで濃縮した。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６１ｍＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＰＰＭ）：１４９．２１３、１４９．１７５。元素分析  Ｃ４５Ｈ５６Ｎ７Ｏ９Ｐの計算値：Ｃ６２．１３、Ｈ６．４９、Ｎ１１．２７。実測値：Ｃ６２．２２、Ｈ６．６９、Ｎ１１．０２。
【０５６５】
［５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−Ｎ３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）チミジン−３’−Ｏ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルシアノエチルホスホロアミダイト（構造２６０）］
５’−Ｏ−（４，４’ジメトキシトリチル）−チミジン５０ｇ（９１．５ｍＭ）を７００ｍＬの乾燥ピリジンから高真空で一晩回転蒸発させることにより乾燥した。イミダゾール２０ｇ（０．２９４Ｍ）を７００ｍＬの乾燥ピリジンおよび５０ｇ（０．３３３Ｍ）の塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルとともに加えた。前記溶液を１８時間撹拌すると、ＴＬＣは完全な変化（シリカ、１０％ＭｅＯＨ、２％ピリジンを含むＤＣＭ、ｒｆ開始物質０．５、ｒｆ生成物０．９、１０％のＨ２ＳＯ４を用い加熱して可視化された）を示した。前記ピリジンを回転蒸発によって除去し、生成物をＤＣＭ７００ｍＬに溶解した。前記溶液を０．５ＭのＫＨ２ＰＯ４５００ｍＬで洗浄した後、５００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄した。前記溶液を蒸発させ、高真空に一晩曝した。収量は６０ｇで、９０．８％であった。この生成物５０ｇを１ＬのＴＨＦに溶解し、２５ｇの無水Ｋ２ＣＯ３をアルゴン下で加えた。混合物を３０分間撹拌し、５０ｇのジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカーボネートを加えた。これを完全に溶解させた後、１２ｇのＤＭＡＰを加えた。一晩撹拌した後、ＴＬＣは完全な反応を示した（１：１  石油エーテル：酢酸エチル、２％ピリジン、ｒｆ開始物質、０．４、ｒｆ生成物０．８）。前記ＴＨＦを回転蒸発により除去し、残渣を７００ｍＬの酢酸エチルに溶解した。有機相を０．５ＭのＫ２ＨＰＯ４５００ｍＬで洗浄した後、５００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。有機相を、４９％の酢酸エチル、４９％の石油エーテル、および２％のピリジンを用いて充填した１０×３５ｃＭのシリカカラムに添加した。前記カラムを均一溶媒で溶出し、ピュアな５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−チミジンを貯めて、回転蒸発で濃縮した。収量は４９．３ｇであり、収率は８６％であった。１ＭのＴＢＡＦを含むＴＨＦ６０ｍＬおよび１０ｍＬのＨＯＡｃを含むＴＨＦの５００ｍＬの溶液を加えて、ＴＢＤＭＳ基を除去した。１８時間後、ＴＬＣは、完全な変化を示した（シリカ、２％ＭｅＯＨ、２％ピリジンを含むＤＭＣ、ｒｆ開始物質０．６０、ｒｆ生成物０．２、１０％のＨ２ＳＯ４を用い加熱して可視化された）。飽和ＮａＨＣＯ３５０ｍＬを加え、前記ＴＨＦを回転蒸発によって除去した。残渣を６００ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解し、４００ｍＬの水で洗浄した後、４００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３で洗浄した。回転蒸発によって、有機相をタールにまで濃縮した後、２００ｍＬのＤＣＭに溶解し、２％メタノールおよび２％ピリジンを含むＤＭＦを用いて充填した１０×３５ｃＭのシリカカラムに添加した。溶媒１０Ｌにわたって、メタノールが１０％となるまでカラムに勾配をかけて、５’−Ｏ−ＤＭＴ−Ｎ３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−チミジンを貯めて、回転蒸発によって濃縮した。収量は３５ｇ（５４．３ｍＭ）、５’−Ｏ−ＤＭＴ−３’−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−Ｎ３−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−チミジンからは８４％であった。１Ｈ  ＮＨＲ（４００ｍＨｚ、ＣＤＣｌ３、ＰＰＭ）８．６（ｄ，２Ｈ）、７．４−７．２（ｍ，９Ｈ）、６．７（ｄｄ，４Ｈ）、６．３７（ｔ，���Ｈ）、４．６（ｄｄ，１Ｈ）、４．１５（ｄｄ，１Ｈ）、３．８（ｓ，６Ｈ）、３．５（ｄｄ，１Ｈ）、３．４（ｄｄ，１Ｈ）、２．７（ｄ，１Ｈ）、２．３５（ｍ，２Ｈ）、１．６（ｓ，９Ｈ）、１．４５（ｓ，３Ｈ）。２５ｇ（４５ｍＭ）の生成物を乾燥ピリジン溶液５００ｍＬによって乾燥し、溶媒を回転蒸発によって除去した後、一晩高真空にした。５００ｍＬの乾燥アセトニトリル中に２−シアノエチル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト１５ｇ（５０ｍＭ）および１Ｈ−テトラゾール６５０ｍ（９ｍＭ）を含む溶液を調製し、１分混合した後、これを２５ｇ（４５ｍＭ）の乾燥５’−Ｏ−ＤＭＴ−Ｎ３−（−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−チミジンを含むフラスコに加えた。攪拌している状態で、ヌクレオシドをゆっくりと溶かすと、２時間後、ＴＬＣは完全な変化を示した（シリカ、ＥｔＯＡｃ中２％ピリジン、ｒｆ開始物質０．３０、２つのジアステレオマースポットとしてのｒｔ生成物０．７５、０．５％のＡｇＮＯ３を用い加熱で可視化された）。溶媒を回転蒸発で除去し、残渣を、２００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３溶液を含むＥｔＯＡｃ５００ｍｌに溶解した。混合物を振って分離させ、有機相を、４９％の酢酸エチル、４９％の石油エーテル、および２％のピリジンを用いて充填した５×２５ｃＭのシリカカラムに添加した。前記カラムを均一溶媒で溶出し、ピュアな２６０を含む画分を貯めて、回転蒸発により２５．５ｇ（２９．６ｍＭ）まで濃縮した。前記ヌクレオシドからの収率は７６．３％であった。３１Ｐ  ＮＭＲ（１６１ｍＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＰＰＭ）：１４９．７１１、１４９．１０５。元素分析  Ｃ４５Ｈ５７Ｎ４Ｏ１０Ｐの計算値：Ｃ６３．９７、Ｈ６．８０、Ｎ６．６３。実測値：Ｃ６３．７４、Ｈ６．６４、Ｎ６．７８。
【０５６６】
（Ｂｏｃ保護されたリボヌクレオシドホスホアミダイトの一般的な合成）
市販の塩基保護された５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳリボヌクレオシド３’−ホスホロアミダイトをアンモニアで処理して、核酸塩基上の保護基を取り除くことによって、これらのＲＮＡ合成用試薬を調製した。これをジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカルボネートで処理することにより、所望のＲＮＡ合成用のＢｏｃ保護された試薬を得た。
【０５６７】
例えば、リボＣ試薬の調製を示す。
【０５６８】
【化２７８】
2017514802.tif 000280
【０５６９】
５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−Ｏ−ＴＢＤＭＳ−Ｎ４−アセチルシトシン３’−Ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルシアノエチルホスホロアミダイト）は、メタノール中でアンモニア水を用いてＮ脱保護された。生成物を十分に乾燥し、ＴＨＦ中において、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカーボネートおよび炭酸カリウムで処理した。生成物たるＢｏｃＲＮＡアミダイトをカラムクロマトグラフィにより単離した。同様に、完全に保護されたＮ６−ジＢｏｃ−アデノシン、Ｎ２−Ｂｏｃ−グアノシン、およびＮ−１−Ｂｏｃ−ウリジンホスホロアミダイトを調製した。
【０５７０】
（ＣＰＧ−Ｂｏｃ−ヌクレオシドの一般的な合成）
乾燥ピリジン中で、前記５’−ＤＭＴ−Ｎ−（Ｂｏｃ）ヌクレオシドをジグリコール酸無水物およびＮ−メチルイミダゾール触媒で処理して、得られた３’−エステルをカラムクロマトグラフィによって精製した。１０ｇの１０００ＡアミノプロピルＣＰＧを、アセトニトリル中で、４００ｍｇのグリコレート、４００ｍｇのＢＯＰ、および４００マイクロリットルのＮ−メチルモルフォリンで十分に処理して、前記ＣＰＧを備えた濃厚スラリーを形成した。一晩静置した後、洗浄し、キャッピングし、乾燥することにより、３０マイクロモル／ｇのロードで、誘導体化されたＣＰＧを得た。
【０５７１】
（Ｔ１０オリゴヌクレオチド上の単一のＢｏｃ残渣の脱保護の経時変化）
［Ｂｏｃ−ｄＣ−Ｔ１０の調製および脱保護］
前記ｄＣアミダイトをＴ−１０と結合させ、２５％の２−メトキシエチルアミンを含むメタノール（１ｍＬ）中において、室温で３時間ＤＮＡを開裂させて脱保護し、ＣＰＧを除去して、乾燥状態まで蒸発させ、脱イオン水（１ｍＬ）中に再溶解した。ＥＳＭＳは、ｔ−ブチル基（Ｍ＋１００）が依然として結合されているＤＮＡの正確な重さを示した。Ｎ−４−Ｂｏｃ−ｄＣの脱保護で生じる熱を追跡するために、ＲＰ  ＨＰＬＣを用いた。Ｂｏｃ保護されたｄＣ−Ｔ−１０の保持時間は、それがない前記オリゴからのベースライン分離の条件において、長かった。積分によって、溶液中の各種の相対量を得た。３時間の時間経過において、１５分での完全な脱保護が見られた。１２分の時間経過において（以下を参照）、規則的な脱保護が見られ、Ｔ１／２は約６分であった。
【０５７２】
2017514802.tif 000281
【０５７３】
［（Ｂｏｃ）２−ｄＡ−Ｔ１０の脱保護］
前記ＢｉｓＢｏｃ−ｄＡアミダイトをＴ−１０に結合させ、２５％の２−メトキシエチルアミンを含むメタノール（１ｍＬ）中において、室温で３時間ＤＮＡを開裂させて脱保護し、ＣＰＧを除去して、乾燥状態まで蒸発させ、脱イオン水（１ｍＬ）中に再溶解した。ＥＳＭＳは、ｔ−ブチル基（Ｍ＋１００）が依然として結合されているＤＮＡの正確な重さを示した。Ｂｏｃの脱保護で生じる熱に追跡するために、ＲＰ  ＨＰＬＣを用いた。１５分の時間経過において、１５分で８０％の脱保護が見られ、Ｔ１／２は約７分であった。ＮＭＲおよびＥＳＭＳデータによれば、ｔ−ブチルカーボネートの１つが、前記ＣＰＧから前記オリゴヌクレオチドを除去する間の塩基処理によって除去され、アデニン残基上の単一のＢｏｃが残ることが示される。
【０５７４】
2017514802.tif 000282
【０５７５】
［Ｂｏｃ保護されたＲＮＡ］
前記リボヌクレオシドアミダイトを、１０〜１５分の結合時間で、少なくとも９０％の効率でＴ１０に結合させた。各リボヌクレオシドアミダイトをＴ−１０に結合させ、ＲＰ  ＨＰＬＣによって検査した。リンＮＭＲによると、それらは９８％の純度であった。サンプルを９４℃で１時間加熱すると、全ての場合において、加熱中に、Ｂｏｃ基の完全な除去が観察された。該結果は、ＥＳＭＳによって確認された。転換率の測定のための時間経過には、存在する各種の量の簡単な測定のためにＨＰＬＣを使用した。ｒＣ−およびｒＡ−Ｔ１０オリゴヌクレオチドの結果を以下に示した。
【０５７６】
2017514802.tif 000283
【０５７７】
2017514802.tif 000284
【０５７８】
［Ｂｏｃ保護されたＰＣＲプライマーの脱保護］
リボヌクレアーゼＰフォワードプライマー１９−ｍｅｒ［ＡＧＡＴＴＴＧＧＡＣＣＴＧＣＧＡＧＣＧ］を、Ｂｏｃ  ｄＡ、ｄＣ、およびｄＧアミダイトを用いて、Ｂｏｃ−ｄＧ  ＣＰＧ（１μｍｏｌ）上で合成した。このプライマーの完全に脱保護された質量は、５８６８ｇ／ｍｏｌであり、期待されるＢｏｃ保護の質量は、７３６９ｇ／ｍｏｌ［１５Ｂｏｃ残基・１００ａｍｕ／Ｂｏｃ＝１５００が足されている］である。２５％の２−メトキシエチルアミンを含むメタノール（１ｍＬ）を用いて、室温で３時間、側鎖保護基の脱保護を行って、ＣＰＧを除去し、乾燥状態まで蒸発させ、脱イオン水（１ｍＬ）に再溶解した。前記Ｂｏｃ基は疎水性処理として使用され得るので、開裂前に、前記ＤＭＴを除去した。１ｍＬカートリッジ中に充填された２０〜５０ミクロンのポリスチレンビーズを用いて、生成物を脱塩し、生成物を２０％のＡＣＮ／Ｈ２Ｏ中で溶出した。
【０５７９】
前記脱塩されたＢｏｃプライマーを３本の１００μＬのマイクロチューブ内にそれぞれ等分した。前記サンプルを完全に乾燥して、１μＬの家庭用脱イオン水中に採取した。第１チューブには、水だけを加えた。第２チューブには、ＭｇＣｌ２とともにｐＨ８．５の１Ｘ  ＰＣＲ緩衝液１ｍＬを最終濃度６ｍＭ（標準ＰＣＲ濃度）となるまで加えた。第３チューブには、ＴＥＡＡを加えて、最終濃度を０．０２５Ｎとした。３つのサンプルのそれぞれを１０本の２００μＬの薄壁のＰＣＲチューブ内に等分して、合計３０本のチューブとした。全てのプライマー調製は、室温で行った。
【０５８０】
ＡＢＩ９７００熱サイクル装置を９４℃まで予め加熱した。各サンプルをヒートブロック内に配置し、その配置した時点で除去し、前記反応を停止するために、ドライアイスを配置した。ネガティブコントロールとして、実験の開始時点で、Ｔ＝０サンプルを加熱せずに、氷中に直接配置した。ＨＰＬＣ分析および質量分析法の分析のために、前記サンプルを室温で解かし、９６ウェルプレートに移動させた。
【０５８１】
各時点について、逆相および質量分析法データを取得して、前記Ｂｏｃ保護基の除去を追跡した。前記Ｂｏｃ保護されたプライマーは、単一種ではなく、むしろ、保護の様々な段階における集合である。Ｔ＝０サンプルにおいて、１００質量単位ごとに異なる一連の種は、マスススペクトロメータの高温の入口ポートに曝されることによって、Ｂｏｃ基の幾つかが既に外れていたことを示している。
【０５８２】
加熱前のＨＰＬＣ
2017514802.tif 000285
【０５８３】
加熱前のＥＳＭＳ
2017514802.tif 000286
【０５８４】
１０分後、殆ど全てのＢｏｃ基が脱離した。しかしながら、幾つかは、ＴＥＡＡサンプル中に残っていた。１５分後、ＴＥＡＡにおいて、全てが除去された。重要なことは、前記プライマーが、通常のＰＣＲ緩衝液の条件下で、１０分後に脱保護されることである。
【０５８５】
加熱後のＨＰＬＣ
2017514802.tif 000287
【０５８６】
加熱後のＥＳＭＳ
2017514802.tif 000288
【図１】
2017514802.tif 000484
【国際調査報告】
2017514802.tif 000485
2017514802.tif 000486
2017514802.tif 000487