(57)【要約】  本開示は、抗血管新生抗体及び医薬製剤を用いて眼障害を治療する方法を提供する。
2017532342.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２と結合し、これらを中和する抗体を対象に投与することを含む対象の血管新生に関連した眼障害の治療方法。
【請求項２】
抗体が、Ａｎｇ１及びＡｎｇ２と結合し、これらを中和する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
投与が眼内である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
投与が硝子体内である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
投与静脈内である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
抗体が、完全長インタクト免疫グロブリンである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
抗体が抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
抗体がＦａｂ抗体フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
抗体がＭａｂ−１である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
抗体が、１つの眼当たり５０〜５００μｇの用量で投与される、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
抗体が、１つの眼当たり５０μｇの用量で投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
抗体が、少なくとも７日間、１日に１回、投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
抗体が、９日間、１日に１回、投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２と結合し、これらを中和する抗体、酢酸ナトリウム、スクロース及びポリソルベート−２０を含む眼内投与に好適な医薬製剤。
【請求項１５】
ｐＨが、５．０〜６．０である、請求項１４に記載の製剤。
【請求項１６】
ｐＨが、５．２または５．５である、請求項１５に記載の製剤。
【請求項１７】
酢酸ナトリウム濃度が１０ｍＭであり、前記スクロース濃度が９％であり、ポリソルベート−２０濃度が０．０００４％である、請求項１６に記載の製剤。
【請求項１８】
抗体が、Ａｎｇ１及びＡｎｇ２と結合し、これらを中和する、請求項１４に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
電子提出されたテキストファイルの説明
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子提出した配列表を含有し、参照により全体が本明細書に組み込まれる。２０１６年１０月１６日に作成された配列表のコンピューター可読フォーマットコピーは、Ａ−１９２８−ＷＯ−ＰＣＴ＿ＳＴ２５と名付けられ、サイズが１１ＫＢである。
【０００２】
本発明の分野は、アンジオポエチン−１及びアンジオポエチン−２と結合する抗体を用いて、血管新生に関連した眼障害を治療することに関連した方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
既存の血管からの新しい血管の形成である血管新生は、多くの生理的及び病理的プロセスに不可欠である。通常、血管新生は、血管新生促進因子及び抗血管新生因子によってしっかりと調節されるが、癌、眼内血管新生性疾患、関節炎、及び乾癬などの疾患の場合では、プロセスがうまくいかない可能性がある。Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｊ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１：２７−３１（１９９５）。
【０００４】
多くのシグナル伝達系が血管新生の調節に関与しているが、最も特徴がわかっている細胞選択系の１つ、及びほとんどの内皮細胞選択系が、Ｔｉｅ−２受容体型チロシンキナーゼ（「Ｔｉｅ−２」または「Ｔｉｅ−２Ｒ」と称される（「ＯＲＫ」とも称される）；マウスＴｉｅ−２は、また、「ｔｅｋ」と称される）及びそのリガンド、アンジオポエチンに関係している（Ｇａｌｅ，Ｎ．Ｗ．  ａｎｄ  Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓ，Ｇ．Ｄ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１３：１０５５−１０６６［１９９９］）。４つの知られたアンジオポエチン；アンジオポエチン−１（「Ａｎｇ−１」）からアンジオポエチン−４（「Ａｎｇ−４」）がある。これらのアンジオポエチンは、「Ｔｉｅ−２リガンド」とも称される（Ｄａｖｉｓ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８７：１１６１−１１６９［１９９６］；Ｇｒｏｓｉｏｓ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ，８４：１１８−１２０［１９９９］；Ｈｏｌａｓｈ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ＆Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，４２：１６１７−１６２５［１９９９］；Ｋｏｂｌｉｚｅｋ，Ｔ．Ｉ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，８：５２９−５３２［１９９８］；Ｌｉｎ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９５：８８２９−８８３４［１９９８］；Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ，Ｐ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７７：５５−６０［１９９７］；Ｐａｐａｐｅｔｒｏｐｏｕｌｏｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ，７９：２１３−２２３［１９９９］；Ｓａｔｏ，Ｔ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３７５：７０−７４［１９９８］；Ｓｈｙｕ，Ｋ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９８：２０８１−２０８７［１９９８］；Ｓｕｒｉ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８７：１１７１−１１８０［１９９６］；Ｓｕｒｉ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８２：４６８−４７１［１９９８］；Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ，Ｄ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳＡ，９６：１９０４−１９０９［１９９９］；Ｗｉｔｚｅｎｂｉｃｈｌｅｒ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２７３：１８５１４−１８５２１［１９９８］）。Ｔｉｅ−２と結合するＡｎｇ−１が、培養された内皮細胞中で受容体リン酸化を刺激するが、Ａｎｇ−２が、Ｔｉｅ−２受容体リン酸化を悪化させたり、中和したりすることが観察されてきた（Ｄａｖｉｓ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，［１９９６］，上記；Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ，Ｐ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，［１９９７］，上記；Ｋｉｍ，Ｉ．，Ｊ．Ｈ．Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（３９）：４５４９−４５５２（２０００）；Ｔｅｉｃｈｅｒｔ−Ｋｕｌｉｓｚｅｗｓｋａ，Ｋ．，Ｐ．Ｃ．Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４９（３）：６５９−７０（２００１））。
【０００５】
マウスＴｉｅ−２及びＡｎｇ−１ノックアウトの表現型は、類似しており、Ａｎｇ−１刺激Ｔｉｅ−２リン酸化が、内皮細胞−支持体の細胞接着のメンテナンスによって子宮内で血管発現の再構築及び安定化を媒介することを示唆している（Ｄｕｍｏｎｔ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，８：１８９７−１９０９［１９９４］；Ｓａｔｏ，Ｔ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３７６：７０−７４［１９９５］；Ｓｕｒｉ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，［１９９６］，上記）。血管安定化でのＡｎｇ−１の役割は、成人では、広く及び構造的に現れ、維持されると考えられている（Ｈａｎａｈａｎ，Ｄ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７７：４８−５０［１９９７］；Ｚａｇｚａｇ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１５９：３９１−４００［１９９９］）。それに反して、Ａｎｇ−２発現は、基本的に血管再構築の部位に限定され、Ａｎｇ−１機能をブロックし、これによって血管新生を促す血管可塑性の状態を誘導すると考えられている（Ｈａｎａｈａｎ，Ｄ．，［１９９７］，上記；Ｈｏｌａｓｈ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８４：１９９４−１９９８［１９９９］；Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ，Ｐ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，［１９９７］，上記）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｊ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１：２７−３１（１９９５）
【非特許文献２】Ｇａｌｅ，Ｎ．Ｗ．  ａｎｄ  Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓ，Ｇ．Ｄ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１３：１０５５−１０６６［１９９９］
【非特許文献３】Ｄａｖｉｓ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８７：１１６１−１１６９［１９９６］
【非特許文献４】Ｇｒｏｓｉｏｓ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ  Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ，８４：１１８−１２０［１９９９］
【非特許文献５】Ｈｏｌａｓｈ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ＆Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，４２：１６１７−１６２５［１９９９］
【非特許文献６】Ｋｏｂｌｉｚｅｋ，Ｔ．Ｉ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，８：５２９−５３２［１９９８］
【非特許文献７】Ｌｉｎ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９５：８８２９−８８３４［１９９８］
【非特許文献８】Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ，Ｐ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７７：５５−６０［１９９７］
【非特許文献９】Ｐａｐａｐｅｔｒｏｐｏｕｌｏｓ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ，７９：２１３−２２３［１９９９］
【非特許文献１０】Ｓａｔｏ，Ｔ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３７５：７０−７４［１９９８］
【非特許文献１１】Ｓｈｙｕ，Ｋ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９８：２０８１−２０８７［１９９８］
【非特許文献１２】Ｓｕｒｉ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８７：１１７１−１１８０［１９９６］
【非特許文献１３】Ｓｕｒｉ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８２：４６８−４７１［１９９８］
【非特許文献１４】Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ，Ｄ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳＡ，９６：１９０４−１９０９［１９９９］
【非特許文献１５】Ｗｉｔｚｅｎｂｉｃｈｌｅｒ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２７３：１８５１４−１８５２１［１９９８］
【非特許文献１６】Ｋｉｍ，Ｉ．，Ｊ．Ｈ．Ｋｉｍ，ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（３９）：４５４９−４５５２（２０００）
【非特許文献１７】Ｔｅｉｃｈｅｒｔ−Ｋｕｌｉｓｚｅｗｓｋａ，Ｋ．，Ｐ．Ｃ．Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４９（３）：６５９−７０（２００１）
【非特許文献１８】Ｄｕｍｏｎｔ，Ｄ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，８：１８９７−１９０９［１９９４］
【非特許文献１９】Ｓａｔｏ，Ｔ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３７６：７０−７４［１９９５］
【非特許文献２０】Ｈａｎａｈａｎ，Ｄ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２７７：４８−５０［１９９７］
【非特許文献２１】Ｚａｇｚａｇ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１５９：３９１−４００［１９９９］
【非特許文献２２】Ｈｏｌａｓｈ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８４：１９９４−１９９８［１９９９］
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
調節されない血管新生または好ましくない血管新生と関係していることが知られている多くの眼疾患がある。血管新生糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢性黄斑変性症を含む眼疾患は、視力喪失の主要原因となっており、アンメットメディカルニーズが高い領域を示している。ＶＥＧＦ及びアンジオポエチンを含むいくつかの成長因子及びそのシグナリング経路が、関与しており、疾患の病理発生過程で重要な役割を演じている。眼疾患での抗ＶＥＧＦ療法の成功に伴い、アンジオポエチンを標的とする薬剤が、既存の療法に対する改善または付加としての新しい見込みを示し、既存のアンメットニーズを満たす可能性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
１つの実施形態では、本発明は、対象に抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体を投与することを含む、対象における血管新生に関連する眼障害を治療するための改善された方法を提供する。
【０００９】
もう１つの実施形態では、本発明が、眼内投与に好適な医薬製剤を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１Ａ】図１ａは、酸素誘発性網膜症（ＯＩＲ）モデルのＭａｂ−１の投与の結果を示し、新生血管形成の抑制を示している。
【図１Ｂ】図１ｂは、酸素誘発性網膜症（ＯＩＲ）モデルのＭａｂ−１の投与の結果を示し、新生血管形成の抑制を示している。
【図１Ｃ】図１ｃは、酸素誘発性網膜症（ＯＩＲ）モデルのＭａｂ−１の投与の結果を示し、新生血管形成の抑制を示している。
【図２】１ｍｇＩＶ（静脈内）ならびに眼ＩＶＴ（硝子体内）当たり５００μｇ及び５０μｇ投与後のカニクイザルのＭａｂ−１の全身ＰＫプロファイルを示す。
【図３】硝子体液及び眼房水への５００及び５０μｇ投与後のカニクイザルのＭａｂ−１の硝子体液及び眼房水ＰＫプロファイルを示す。
【図４】５００μｇ及び５０μｇＩＶＴ投与後のカニクイザル眼組織のＭａｂ−１のＰＫプロファイルを示す。
【図５】０．５ｍｇ／眼ＩＶＴ投与後のＭａｂ−１のヒト眼ＰＫの予測を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
血管新生は、新しい血管の形成及び成長を含む生物学的プロセスである。通常、プロセスのよい調節が、適切な発達、適応及び傷修復に必要であるが、疾患状態及び障害を変えることに関係している血管新生のうまく文書化された例がある。例えば、異常な血管新生が腫瘍成長及び生存で役割を演じることが明確に立証されている。さらに、血管新生は、ある特定の網膜症及び他の眼障害、リウマチ関節炎、及び乾癬と関係している（例えば、Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（１９９２）  １０９３１−１０９３４；Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３（１９９１）  ２１７−２３９；及びＧａｒｎｅｒ，Ａ．，Ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｉｎ：Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｏｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ａ  ｄｙｎａｍｉｃ  ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｇａｒｎｅｒ，Ａ．，ａｎｄ  Ｋｌｉｎｔｗｏｒｔｈ，Ｇ．Ｋ．（ｅｄｓ．），２ｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９４），ｐｐ  １６２５−１７１０を参照）。
【００１２】
したがって、本発明は、血管新生に関連した眼障害を治療するための方法及びこれらの障害を治療するためのＡｎｇ１及び／またはＡｎｇ２と特異的に結合する抗体の使用に関する。
【００１３】
定義
本明細書で特に定義されない限り、本発明に関連して使用される科学用語及び専門用語は、当業者によって一般に理解される意味を持たなければならない。更に、文脈により特に要求されない限り、単数の用語は、複数を含み、複数の用語は、単数を含まなければならない。一般に、細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学の技術及び本明細書に記載されたタンパク質及び核酸化学及びハイブリダイゼーションに関連して使用される名称は、当該技術分野でよく知られており、通常使用されている。
【００１４】
アンジオポエチン−１及びアンジオポエチン−２（「Ａｎｇ−１」、「Ａｎｇ−２」、「Ａｎｇ１／２」）は、Ｔｉｅ−２リガンドとしても知られるポリペプチドを意味する（例えば、Ｇａｌｅ，Ｎ．Ｗ．  ａｎｄ  Ｙａｎｃｏｐｏｕｌｏｓ，Ｇ．Ｄ．，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１３：１０５５−１０６６［１９９９］を参照）。Ａｎｇ−２は、特に米国特許第６，１６６，１８５号の図６に記載されたポリペプチドを意味する（「Ｔｉｅ−２リガンド−２」）。
【００１５】
「免疫グロブリン」は、四量体分子である。自然免疫グロブリンでは、各テトラマーは、２つの同一対のポリペプチド鎖からなり、それぞれの対が、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う約１００〜１１０以上のアミノ酸の可変部領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う不変部領域を定義する。ヒト軽鎖は、κ及びλ軽鎖に分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンに分類され、当該抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥと定義する。軽鎖及び重鎖内では、可変及び不変部領域が、約１２以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって結合され、重鎖は、また、約１０以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照（全目的のためにその全体が参照により組み入れられる）。各軽／重鎖対の可変部領域は、抗体結合部位を形成し、インタクト免疫グロブリンが、２つの結合部位を有する。
【００１６】
自然免疫グロブリン鎖は、相補性決定領域またはＣＤＲとも称される、３つの超可変領域によって結合される比較的保存フレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を示す。Ｎ−末端からＣ−末端まで、軽鎖及び重鎖の双方ともドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸のアサインメントは、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２，１９９１のＫａｂａｔらの定義に従う。代わりに、ＣＤＲを同定するためにＣｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義及び接触定義を用いることができる。
【００１７】
Ｋａｂａｔ定義は、抗体中の残基をナンバリングするための標準であり、ＣＤＲ領域を同定するために通常用いられる。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｗｕ，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．，２８：２１４−８（２０００）を参照。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、Ｋａｂａｔ定義と類似しているが、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、ある特定の構造的ループ領域の位置を考慮に入れる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−１７（１９８６）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８３（１９８９）を参照。ＡｂＭ定義は、抗体構造のモデルを作るＯｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｒｏｕｐによって作製されたコンピュータープログラムの統合スイートを用いる。例えば、Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（ＵＳＡ），８６：９２６８−９２７２（１９８９）；”ＡｂＭ．ＴＭ．，Ａ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，”  Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ；Ｏｘｆｏｒｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，Ｌｔｄ．を参照。ＡｂＭ定義は、知識データベース及びａｂ  ｉｎｉｔｉｏ法の組み合わせ、例えば、ＳａｍｕｄｒａｌａらによってＰＲＯＴＥＩＮＳ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｕｐｐｌ．，３：１９４−１９８（１９９９）の「Ａｂ  Ｉｎｉｔｉｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」に記載されたものを用いて一次配列から抗体の三次構造のモデルを作る。接触定義は、利用可能な複合結晶構造の分析に基づいている。例えば、ＭａｃＣａｌｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，５：７３２−４５（１９９６）を参照。
【００１８】
「抗体」は、特に指示がない限り、インタクト免疫グロブリンまたは特異的結合のために、インタクト免疫抗体と競合するその抗原結合部分を意味する。抗原結合部分は、遺伝子組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクト抗体の酵素的もしくは化学的開裂によって生成される可能性がある。抗原結合部分としては、ポリペプチドに特異的抗原結合を与えるのに十分である免疫グロブリンの少なくとも１つの部分を含有する相補性決定領域（ＣＤＲ）、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、及びポリペプチドを含む、特に、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、フラグメントが挙げられる。
【００１９】
Ｆａｂフラグメントは、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインを有する一価フラグメントである；Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂフラグメントを有する二価フラグメントである；Ｆｄフラグメントは、ＶＨ及びＣＨ１ドメインを有する；Ｆｖフラグメントは、抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインを有する；及びｄＡｂフラグメントは、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原−結合フラグメントを有する（米国特許第６，８４６，６３４号、６，６９６，２４５号、米国出願公開第０５／０２０２５１２号、０４／０２０２９９５号、０４／００３８２９１号、０４／０００９５０７号、０３／００３９９５８号、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６（１９８９））。
【００２０】
単鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、ＶＬ及びＶＨ領域が、リンカー（例えば、アミノ酸残基の合成配列）を介して結合され、連続するタンパク質鎖を形成し（リンカーは、タンパク質鎖をそれ自体の上で折り返すのに十分な長さである）、一価抗原結合部位を形成する抗体である（例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−２６（１９８８）及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−８３（１９８８）を参照）。二重特異性抗体は、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体であり、各ポリペプチド鎖が、同じ鎖上の２つのドメイン間で対になるには短すぎ、このため、各ドメインが、もう１つのポリペプチド鎖上で相補的ドメインと対になるリンカーによって結合されるＶＨ及びＶＬドメインを含む（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−４８（１９９３）、及びＰｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−２３（１９９４）を参照）。二重特異性抗体の２つのポリペプチド鎖が、同一である場合、その対から得られた二重特異性抗体は、２つの同一の抗原結合部位を有する。異なる配列を有するポリペプチド鎖を用いて、２つの異なる抗原結合部位を有する二重特異性抗体を生成することができる。同様に、三重特異性抗体及び四重特異性抗体は、それぞれ３つ及び４つのポリペプチド鎖を含む抗体であり、それぞれ、同じまたは異なるとすることができる３つ及び４つの抗原結合部位を形成する。
【００２１】
所与の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びフレームワーク領域（ＦＲ）は、Ｋａｂａｔらによって、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．，ＵＳ  Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＰＨＳ，ＮＩＨ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｎｏ．９１−３２４２，１９９１に記載されたシステムを用いて同定してよい。抗体を生成するために共有的にまたは非共有的に分子に１つ以上のＣＤＲを組み入れてよい。抗体は、より長いポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲ（複数可）を組み入れてよく、共有的にＣＤＲ（複数可）をもう１つのポリペプチド鎖に結合させてよく、または非共有的にＣＤＲ（複数可）を組み入れてよい。ＣＤＲは、抗体が対象の特定の抗原と特異的に結合することを可能にする。
【００２２】
抗体は、１つ以上の結合部位を有してよい。１つ超の結合部位がある場合、結合部位は、互いに同一としてよい、または異なってよい。例えば、自然ヒト免疫グロブリンは、通常、２つの同一結合部位を有するが、「二特異性」または「二重特異性」抗体は、２つの異なる結合部位を有する。
【００２３】
用語「ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリン配列の１つ以上の可変及び不変部領域特性を有する、または、ヒト免疫グロブリン配列に由来する全抗体を含む。１つの実施形態では、可変及び不変部ドメインのすべてが、ヒト免疫グロブリン配列に由来する（完全ヒト抗体）。これらの抗体は、当該技術分野で知られる種々の方法で調製してよく、本明細書に記載されている非限定例は、遺伝子組み換えされ、ヒト重及び／または軽鎖コード化遺伝子に由来する抗体を発現するマウスの対象の抗原による免疫処置によるものを含む。
【００２４】
ヒト化抗体は、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、及び／または付加による非ヒト種に由来する抗体の配列と異なる配列を有し、その結果、ヒト化抗体は、ヒト対象に投与される場合、非ヒト種抗体と比較して、免疫反応を誘発しにくい、及び／または強くない免疫反応を誘発する。１つの実施形態では、非ヒト種抗体の重及び／または軽鎖のフレームワーク及び不変部ドメイン中のある特定のアミノ酸が、変異され、ヒト化抗体が生成される。もう１つの実施形態では、ヒト抗体からの不変部ドメイン（複数可）が、非ヒト種の可変部ドメイン（複数可）に融合される。もう１つの実施形態では、非ヒト抗体の１つ以上のＣＤＲ配列中の１つ以上のアミノ酸残基が、変化され、非ヒト抗体の免疫原性である可能性を減少させ、ヒト対象に投与される場合、変化されたアミノ酸残基は、抗体のその抗原への免疫特異的結合にとって重要でなく、またはなされているアミノ酸配列への変化は、保存的変化であり、その結果、ヒト化抗体の抗原への結合は、非ヒト抗体の抗原への結合より有意に悪くない。ヒト化抗体を生成する方法の例は、米国特許第６，０５４，２９７号、５，８８６，１５２号及び５，８７７，２９３号にみられる。
【００２５】
用語「キメラ抗体」は、１つの抗体からの１つ以上の領域及び１つ以上の他の抗体からの１つ以上の領域を含有する抗体を意味する。１つの実施形態では、１つ以上のＣＤＲが、ヒト抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体に由来する。もう１つの実施形態では、ＣＤＲのすべてが、ヒト抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体に由来する。もう１つの実施形態では、１つ超のヒト抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体からのＣＤＲが、キメラ抗体中で混合され、適合される。例えば、キメラ抗体が、第１のヒト抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体の軽鎖からのＣＤＲ１、第２のヒト抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体の軽鎖からのＣＤＲ２及びＣＤＲ３、及び第３の抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体の重鎖からのＣＤＲを含んでよい。さらに、フレームワーク領域は、１つ以上の異なる抗体、例えば、ヒト抗体から、またはヒト化抗体からの同じ抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体の１つに由来してよい。キメラ抗体の１つの例では、重及び／または軽鎖の一部分が、特定の種からの抗体、または特定の抗体クラスまたはサブクラスに属する抗体と同一であり、相同性があり、またはこれらに由来し、一方、鎖（複数可）の残りは、もう１つの種からの１つの抗体または抗体、またはもう１つの抗体クラスまたはサブクラスに属する１つの抗体または抗体と同一である、相同性がある、またはこれらに由来する。また、所望の生物学的活性（すなわち、ヒトＡｎｇ１及び／またはＡｎｇ２と特異的に結合する能力）を示すかかる抗体のフラグメントが含まれる。
【００２６】
「中和抗体」または「抑制抗体」は、リガンドの受容体への結合を抑制する、及び／または受容体シグナリングを抑制する、もしくは減少させる抗体を意味する。抑制は、完全である必要はなく、ある特定の実施形態では、結合またはシグナリングを少なくとも２０％減少させてよい。さらなる実施形態では、結合またはシグナリングの減少が、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％及び９９．９％である。Ａｎｇ２及び／またはＡｎｇ１への結合またはシグナリングの減少は、限定されないが、イムノアッセイを含む従来の技術を用いて、当業者によって容易に測定することができる。
【００２７】
特定の実施形態では、本発明を実施するのに有用な抗体が、Ｍａｂ−１である。さらに、米国特許第７，５２１，０５３号；８，０３０，０２５号及び８，２２１，７４９号を参照。さらなる特定の実施形態では，本発明を実施するのに有用な抗体が、米国特許第８，５０７，６５６号；８，１３３，９７９号；８，３６１，７４７号；８，３９９，６２６号；８，４８６，４０４号；及びＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｐａｔｅｎｔ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏｓ．ＷＯ  ２０１１／０１４４６９Ａ１；ＷＯ  ２０１３／１１２４３８Ａ１；ＷＯ  ２０１２／１３７９９３Ａ１；ＷＯ  ２０１３／１４４２６６Ａ１で同定された抗体のいずれかである。
【００２８】
抗体生成
本発明で用いられる抗体は、抗体の合成のための当該技術分野で知られる任意の方法によって、特に、化学的合成、ハイブリドーマ培養、または好ましくは、組み替え発現技術によって生成することができる。
【００２９】
本発明の抗体、またはこれらのフラグメント、誘導体もしくは類似体、（例えば、本発明の抗体の重または軽鎖、または本発明の単鎖抗体）の組み替え発現は、抗体または抗体のフラグメントをコードするポリヌクレオチドを含有する発現ベクターの形成を必要とする。いったん抗体分子をコードするポリヌクレオチドが得られたら、組み替えＤＮＡテクノロジーによって抗体の生成のためのベクターを生成してよい。抗体コード配列及び好適な転写及び翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターが形成される。これらの方法としては、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ組み替えＤＮＡ技術、合成技術、及びｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子組み換えが挙げられる。
【００３０】
発現ベクターは、従来の技術によって宿主細胞に移され、その後、従来の技術によってトランスフェクトされた細胞を培養し、本発明の抗体が生成される。本発明の１つの態様では、以下に記載したとおり、免疫グロブリン分子全体の発現のために宿主細胞中で重及び軽鎖の双方ともをコードするベクターを共発現させてよい。
【００３１】
上記に記載されたとおり、種々の宿主−発現ベクター系を用いて、本発明の抗体分子を発現させてよい。かかる宿主−発現系は、対象のコード配列が生成され、のちに精製してよいビヒクルを表すが、また、好適なヌクレオチドコード配列で変換された場合、またはトランスフェクトされた場合、ｉｎ  ｓｉｔｕで、本発明の抗体分子を発現する細胞を表す。細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、及び真核細胞が、組み替え抗体分子の発現のために、特に、全体組み替え抗体分子の発現のために一般に用いられる。例えば、ヒトサイトメガロウイルスからの主要な前初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターとともに、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）などの哺乳動物細胞が、抗体のための効果的な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ４５：１０１（１９８６）；Ｃｏｃｋｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：２（１９９０））。
【００３２】
さらに、挿入された配列の発現を調節する、または、所望の特定の方法で遺伝子生成物を改変し、プロセスする宿主細胞株を選択してよい。タンパク質生成物のかかる改変（例えば、グリコシル化）及びプロセッシング（例えば、開裂）が、タンパク質の機能のために重要である可能性がある。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子生成物の翻訳後プロセッシング及び改変のための特徴的で特定の機序を有する。発現した異種タンパク質の正しい改変及びプロセッシングを確実にするように、好適な細胞株または宿主系を選択することができる。この目的のために、遺伝子生成物の一次転写、グリコシル化、及びリン酸化の適切なプロセッシングのために細胞機構をプロセスする真核宿主細胞を用いてよい。かかる哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＣＯＳ、２９３、３Ｔ３、または骨髄腫細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３３】
いったん本発明の抗体分子が、動物によって生成、化学的に合成、または組み換え発現されたら、免疫グロブリン分子の精製のために、当該技術分野で知られる任意の方法によって、例えば、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換、親和性、特にプロテインＡ及びサイズ排除クロマトグラフィ後の特定の抗原に対する親和性によって）、遠心分離、溶解度差、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準技術によって精製してよい。さらに、精製を容易にするために、本明細書に記載された異種ポリペプチド配列に、または当該技術分野で知られる他の方法で、本発明の抗体またはそのフラグメントを融合することができる。
【００３４】
治療方法
もう１つの態様では、治療用量の本発明の抗体を投与することを含む対象を治療する方法が提供される。本明細書に用いる場合、用語「対象」は、ヒトを含む哺乳動物を意味し、用語「患者」と交換可能で用いられる。抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体は、対象の好ましくない血管新生によって特徴付けられる障害または状態、例えば、眼障害を治療、制御、または予防するために用いられることができる。本発明の方法及び組成物によって治療、予防、または管理することができるこれらの眼障害としては、眼新生血管形成によって特徴付けられる眼内血管新生疾患が挙げられるが、これらに限定されない。眼内血管新生疾患の例としては、増殖性網膜症、脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）、加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）、糖尿病性及び他の虚血性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、病的近視、フォンヒッペルリンダウ病、眼のヒストプラズマ症、網膜中心静脈閉塞症（ＣＲＶＯ）、角膜新生血管形成、及び網膜新生血管形成が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３５】
用語「治療」は、少なくとも１つの症状もしくは他の態様の障害の軽減または予防、または疾患重症度の減少などを包含する。生治療薬の一部をなす本発明に従った抗体が、完全治癒をもたらす、またはあらゆる症状もしくは疾患の発現を除去する必要はない。関連する分野で認識されるとおり、治療薬として用いられる薬剤が、所与の疾患状態の重症度を減少させる可能性があるが、有用な治療薬としてみなされるのに疾患のあらゆる発現を止める必要はない。同様に、予防的に行われる治療が、生予防薬を構成するために状態の発現を阻止するのに完全に効果的である必要はない。単に疾患の影響を減少させること（例えば、その症状の数または重症度を減少させることによって、またはもう１つの治療の効果を増大させることによって、またはもう１つの有益な効果を生じさせることによって）、または対象の疾患が生じるまたは悪化する可能性を低減させることで十分である。本発明の１つの実施形態では、特定の障害の重症度を反映する指示薬のベースラインを越えた持続的改善を誘発するのに十分な量及び時間で患者に抗体を投与することを含む方法を対象とする。
【００３６】
用量
治療有効量及び用量、ならびに投与の頻度は、投与の経路、用いられる特定の抗体、治療される疾患の性質及び重症度（状態が急性または慢性かどうか、及びサイズ及び対象の一般的状態）のような因子に応じて変えてよい。好適な用量は、関連する技術分野で知られる方法、例えば、投与量増量試験を含んでよい臨床治験によって測定することができる。
【００３７】
本発明の抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体は、例えば、１回または１回超、例えば、一定の期間に規則的間隔で投与してよい。特定の実施形態では、ヒト抗体が、１ヶ月もしくはそれ以上、例えば、１、２、もしくは３ヶ月に少なくとも１回の期間にわたって、または不定期で投与される。慢性状態を治療するためには、長期治療が一般に最も効果的である。しかし、急性状態を治療するためには、短期間、例えば、１〜６週間の投与で十分である可能性がある。一般に、患者に選択した指示薬または指示薬のベースラインを越えた医学的に適切な程度の改善が現れるまで、ヒト抗体が投与される。
【００３８】
眼障害と関係した異常な血管新生が眼内で生じた場合、眼中で治療有効用量を実現及び維持することが、困難である可能性があり、これらの困難を伴って治療効果を実現することは、極めて予期しないことであった。ある特定の実施形態では、これは、眼内投与によって実現することができる。眼に直接投与することによって、治療用抗体が血管新生が抑制される部位にきわめて接近してもたらされること、眼の性質が区分化され、局所濃度が高く効果的な用量の抗体が実現されること、及び身体の他の部分への副作用の可能性が最小化されることを含むいくつかの利益が得られる。
【００３９】
ある特定の実施形態では、眼内投与が、抗体が硝子体腔で後方眼に直接デリバリーされる投与の特殊経路である硝子体内に与えられる。これらの実施形態では、眼内投与の用量が、１つの眼当たり１〜１０００μｇの範囲としてよい。特定の実施形態では、用量が、１つの眼当たり１０〜１０００μｇ、１０〜５００、１０〜１００または１０〜５０μｇの範囲である。他の実施形態では、用量が、１つの眼当たり１〜５００、１〜１００、１〜５０、または１〜１０μｇの範囲である。さらなる特定の実施形態では、用量が、１つの眼当たり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、または１０００μｇである。
【００４０】
眼内投与が、抗体をデリバリーする効果的な方法である可能性があるが、対象の観点から理想的でない可能性がある。したがって、他の実施形態では、皮下、静脈内、または腹腔内経路を介して治療用量を投与してよい。眼がいくぶん分離コンパートメントである場合、抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体の治療有効量を実現すること及び必要な眼濃度には、例えば、腫瘍適用に用いられるものと比較して予測される濃度より高い必要がある可能性がある。したがって、これらの実施形態では、用量が、約０．１ｍｇ〜約１０、０００ｍｇ、例えば、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約４００ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約２０００、約３０００ｍｇ、約４０００ｍｇ、約５０００ｍｇ、または約１００００ｍｇの範囲としてよい。
【００４１】
代わりに、個々の用量内に含有される抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体の量は、対象の体重１キログラム当たりの抗体のミリグラムによって表してよい（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）。例えば、患者の体重の約０．０００１〜約１００ｍｇ／ｋｇの用量で対象に抗体を投与してよい。ある特定の実施形態では、体重の約１０〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量で抗体を投与してよい。ある特定の実施形態では、対象の体重の約１、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００ｍｇ／ｋｇの用量で抗体を投与してよい。
【００４２】
投与頻度は、時間ごと投与（例えば、１時間ごと、６時間ごと、１２時間ごとなどの投与）から１日、１週間もしくは１ヶ月に１回またはさらに長い間隔の投与の範囲とすることができる。この投与頻度は、療法への対象の反応及び実現される所望の結果、例えば、対象の症状の沈静化に基づいて当業者によって決定される。治療は、必要に応じて再開してよく、または、代わりに、必要に応じて用量を維持して投与してよい。
【００４３】
組み合わせ療法
本発明の方法及び組成物の特定の実施形態では、他の適切な治療薬と組み合わせた本発明の抗Ａｎｇ１／２抗体の使用を含む。かかる薬剤の例としては、タンパク性及び非タンパク性薬剤の双方が挙げられる。複数の治療薬が共投与される場合、それに応じて、関連する技術分野で認識されるとおり、用量を調節してよい。「共投与」及び組み合わせ療法は、同時投与に限定されないが、また、患者に少なくとも１つの他の治療薬を投与することを含む抗体が治療経過中に少なくとも１回投与される治療計画を含む。ある特定の実施形態では、血管新生に関連した眼障害のためのＶＥＧＦ抑制剤の治療的使用が試験ずみである場合、ＶＥＧＦ抑制剤と組み合わせて、本発明に使用される抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体を用いることができる。組み合わせ療法に意図される追加の治療薬の非限定例としては、Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）もしくはＬｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）、もしくはＥｙｌｅａ（登録商標）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）、またはこれらのバイオシミラーバージョンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４４】
有効性読み取り及び分析
ある特定の実施形態では、抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体による治療の有効性を測定することが必要である可能性がある。抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体による治療中及び治療後に眼血管新生の低減または停止があるかどうかを測定するために当業者が用いることができるいくつかの既存のアッセイがある。例示的アッセイは、血管核のカウントである。ある特定の実施形態では、本発明に使用される抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体による治療の結果、適切な対照または治療を実施しない眼と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％血管核が減少する。
【００４５】
しかし、臨床的状況では、頻繁に信頼されるｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイの使用が、通常、最適でない。これらには、内部被覆膜の硝子体側上の血管核（例えば、内皮及び周細胞核）をカウントすることができるように、眼組織の固定、切断及び染色、続く拡大しての試験が必要であることが多いためである。対象のインタクト免疫眼上で用いることができる代わりのアッセイとしては、網膜を目視で検査するために検眼鏡を用いるものが挙げられる。これは、任意で眼血管系の視覚化を向上させる色素の注入を用いてよい。他の例としては、眼血管系の視覚化を向上させる色素注入を利用するもう１つの技術である血管造影の使用が挙げられる。さらに、細隙灯顕微鏡検査、光干渉断層計（ＯＣＴ）、及び走査型レーザー検眼鏡を用いたマイクロペリメトリーを用いることができる。
【００４６】
ある特定の実施形態では、相対性求心性瞳孔反応欠損について眼が検査され、その後、２．５％フェニレフリン塩酸塩及び０．８％トロピカミドで拡張される。抗体注入前、注入後に、細隙灯顕微鏡検査及び間接眼底検査を用いて両眼が検査され、その後、治療有効性を評価するために結果が比較される。
【００４７】
他の実施形態では、眼検査と同じ日に眼底撮影が実施される。眼底カメラ（Ｃａｎｏｎ  Ｆｕｎｄｕｓ  ＣＦ−６０Ｚ；Ｃａｎｏｎ  ＵＳＡ  Ｉｎｃ、Ｌａｋｅ  Ｓｕｃｃｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．）及び３５−ｍｍフィルムで写真を得てよいが、任意の撮影器具を用いてよく、また、デジタルイメージング及び分析を用いてよい。
【００４８】
フルオレセイン血管造影のために、Ｉｍａｇｅｎｅｔ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｏｐｃｏｎ  ５０１  Ａ及びＩｍａｇｅｎｅｔ  ｓｙｓｔｅｍ；Ｔｏｐｃｏｎ  Ａｍｅｒｉｃａ  Ｃｏｒｐ、Ｐａｒａｍｕｓ、Ｎ．Ｊ．）を用いてよい。通常、１ｍＬ／ｓの速度で体重の０．１ｍＬ／ｋｇの１０％フルオレセインナトリウム（Ａｋｏｒｎ  Ｉｎｃ、Ａｂｉｔａ  Ｓｐｒｉｎｇｓ、Ｌａ．）を用いたフルオレセイン血管造影によって、両眼のレッドフリー写真が得られる。フルオレセイン注入後に、第１の右眼の眼底後極部の第１の微小断片で、高速連続イメージが得られ、その後、左眼の高速連続画像が得られる。より遅い間隔で、通常、さらに対の画像が得られる。有効性を測定するために治療前の眼からの画像を治療後に間隔を変えて得られた眼の画像と比較することができる。
【００４９】
過度もしくは好ましくない血管新生、血管造影リーケイジ、出血、または他の異常の証拠用に写真及び血管造影図が評価される。眼底出血は、グレード評価システムに基づいてグレード評価され、３未満の円板領域を含む網膜出血をグレード１と定義し、３〜６の円板領域含む出血をグレード２と定義し、６を越える円板領域を含む出血をグレード３と定義する。また、ＣＮＶ膜またはレーザー誘導部位と出血の相関が評価される。臨床的に有意な出血は、６以上の円板領域の眼底出血と定義される。
【００５０】
一般化推定方程式及び罹患率比（ＩＲＲ）とＰｏｐｕｌａｔｉｏｎ−Ａｇｇｒｅｇａｔｅｄ  Ｐａｎｅｌ  Ｄａｔａを用いて統計的分析を実施してよい。罹患率は、通常、所与の間隔中に生じるグレード４病変の数を誘導された病変の総数で割ったものと定義される。フェーズ１では、ＩＲＲは、予防眼のグレード４病変の罹患率の対照眼の罹患率との比を意味する。ＩＲＲ１は、罹患率間に差がないことを示す。１より格段に小さな数は、対照群に対する予防群のグレード４病変の罹患の減少を示す。フェーズ２では、治療眼に対する対照眼のグレード４病変の罹患が比較される。
【００５１】
したがって、ある特定の実施形態では、本発明が容易に利用可能な技術を用いて当業者によって評価されるとおり、眼血管新生の減少を意図する。特定の実施形態では、治療後の眼が、治療前と比較してグレード評価された病変の罹患及び／または病変のグレードが減少する。例えば、対象が治療前に単一のグレード４病変を有するとしたら、治療後に対象の病変がグレード１病変に低減する。あるいは、対象が治療前に複数のグレード４病変を有するとしたら、治療後に病変がない。
【００５２】
医薬製剤
関連する分野で理解されるとおり、本発明の抗体を含む医薬製剤が、適応症及び製剤に好適な方法で対象に投与される。非経口投与を含む任意の好適な技術によって医薬製剤を投与してよい。注入される場合、医薬製剤は、例えば、眼内、関節内、静脈内、筋肉内、病変内、腹腔内または皮下経路を介して、ボーラス注入、または持続注入によって投与することができる。
【００５３】
本発明に使用される抗体は、１つ以上の追加成分、例えば、生理学的に許容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤を含む製剤の形態で、投与することができる。任意で、製剤は、追加で１つ以上の生理学的活性薬剤、例えば、以下に記載されたとおりのものを含む。
【００５４】
ある特定の実施形態では、抗Ａｎｇ１及び／またはＡｎｇ２抗体が、眼内に投与される。このタイプの投与の性質の場合、眼へこの注入を受ける対象の不快への感受性が高まる。したがって、製剤は、治療経過中に投与時及び投与後の眼の刺激が最少となるようにしなければならない。このため、特定の実施形態では、製剤は、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％（ｗ／ｖ）スクロース、０．００４％ポリソルベート２０からなり、２つの異なるｐＨｓ、５．２または５．５で製剤化される。
【００５５】
さらなる実施形態では、酢酸ナトリウムの濃度は、１〜２０ｍＭの範囲とすることができる。さらなる実施形態では、スクロースの濃度は、１〜２０％の範囲とすることができる。さらなる実施形態では、ポリソルベート２０の濃度は、０．０００１〜０．００１％の範囲とすることができる。他の実施形態では、ｐＨは、５．０〜６．０の範囲とすることができる。
【００５６】
また、好適な産業標準に従って、防腐剤を添加してよい。組成物は、希釈剤のような好適な賦形剤溶液を用いて凍結乾燥物として製剤化してよい。好適な成分は、用いられる用量及び濃度でレシピエントに対して毒性がない。医薬製剤に用いてよい成分のさらなる例が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ  Ｅｄ．（１９８０）及び２０ｔｈ  Ｅｄ．（２０００），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに示されている。
【００５７】
本発明の１つ以上の抗体及び本明細書に記載された状態のいずれかを治療するのに使用するためのラベルまたは他の指示書を含む医師によって使用されるキットが、提供される。１つの実施形態では、キットが、上記に開示したとおりの組成物の形態としてよく、１つ以上のバイアル中としてよい１つ以上の抗体の無菌調製物を含む。
【００５８】
記載された本発明、以下の実施例は、例示によって提供され、限定されない。
【実施例】
【００５９】
実施例１
ＯＩＲモデルの新生血管形成の抑制
各実験では、マウス（１群当たり９マウス）に、生後第８日〜第１６日の９日間、１日に１回、Ｍａｂ−１が、特定された用量で（図１ａ：５０μｇ、１６．７μｇ、５．６μｇ、１．９μｇ、０．６μｇ、及び０．２μｇ；図１ｂ及び１ｃ：０μｇ、０．３μｇ、１μｇ、３μｇ、１０μｇ、１００μｇ）皮下に注入される。対照ＩｇＧ２抗体が、また、第１の実験で５０μｇ用量で投与される（図１ａ）。各動物からの網膜切片を用いて、新生血管形成の程度を評価した。グラフ上の右側ｙ−軸及びブルーダイヤモンドは、Ｍａｂ−１の血清濃度（μｇ／ｍｌ）を示す。５０μｇ、１６．７μｇ、５．６μｇ、及び１．９μｇ用量は、血管核の著しく驚くべき減少を示し、抗Ａｎｇ１／２抗体が、血管新生に関連した眼疾患に利益を提供することができることを示している。少ない用量の試験血清濃度が最低となり、これは、特に驚くべきことである。図１ａ〜ｃは、これらの実験の結果をまとめている。
【００６０】
実施例２
カニクイザルの硝子体内及び静脈内投与後のＭａｂ−１の全身及び眼分布
【００６１】
動物：オスカニクイザル
【００６２】
眼の検査：認定獣医眼科医が、間接的方法及び細隙灯によって、投与前及び投与後第４日及び第１５日に、利用可能な全動物に眼の検査を実施した。
【００６３】
硝子体内注入：認定獣医眼科医が硝子体内注入を実施した。
【００６４】
試験デザイン：
耐容性試験（フェーズ１）：２つの動物（両眼）にｐＨ５．２（Ａ５２Ｓｕ）及びまた、ｐＨ５．５（Ａ５５Ｓｕ）で製剤化されたＭａｂ−１を投与した。
【表１】
2017532342.tif 000003
【００６５】
群１〜２：投与前及び投与後０．０８３、０．５、２、４、８、２４、９６、１６８、３３４、及び５０４時間に動物から血液を採集した。投与後４、２４、９６、１６８、３３４、及び５０４時間に、時点ごと群ごとに、１つの動物から両眼を採集した。殺処分後に、眼球を切除し、以下の組織を採集した。各試料の重量を測定した。
【表２】
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【００６６】
群３：投与前及び投与後０．０８３、０．５、１、２、４、８、２４、９６、１６８、３３４、及び５０４時間に、各動物から血液（およそ１．５ｍＬ）を採集した。最後の血液採集後に、動物を殺処分し、眼球を切除し、以下の組織を採集した。各試料の重量を測定した。
【表３】
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【００６７】
試料分析：血液を処理し血清を得た。
【表４】
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【００６８】
Ａ５２Ｓｕ中のＭａｂ−１製剤は、カニクイザル硝子体内注入で優れた耐容性を示した。Ａ５２Ｓｕの方が、Ａ５５Ｓｕよりわずかに優れた耐容性を示した。
【００６９】
実施例３
１ｍｇＩＶ（静脈内）及びＩＶＴ（硝子体内）投与後のカニクイザル血清のＭａｂ−１のＰＫプロファイル
【００７０】
ＰＫプロファイルを評価するこの次の実験では、実施例２に記載されたとおりの方法で実施例２に記載された投与プランに従ってカニクイザルに投与した。以下の表は、３つの異なる投与群のＭａｂ−１の全身ＰＫ属性を示す。
化合物
【表５】
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【００７１】
図２は、結果をまとめている。ＡＤＡ反応により２週間後に５００μｇＩＶＴ群中のＭａｂ−１全身クリアランスが促進した。５００μｇＩＶＴ群と比較して５０μｇＩＶＴ群の方が、Ｍａｂ−１の全身終末Ｔ１／２が長い。５０μｇＩＶＴ群ではＡＤＡがない。
【００７２】
実施例４
５００＆５０μｇ／眼ＩＶＴ投与後のカニクイザル硝子体及び眼房水中のＭａｂ−１のＰＫプロファイル
実施例２に記載された方法のとおり、カニクイザルに投与した。以下の表は、３つの異なる投与群のＭａｂ−１の硝子体及び眼房水ＰＫ属性を示す。
【表６】
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【００７３】
図３は、結果をまとめている。５００μｇＩＶＴ群と比較して５０μｇＩＶＴ群の方が、硝子体及び眼房水（ＡＱ）終末Ｔ１／２が長い。また、ＩＶＴ注入（Ｔｍａｘ＜４時間）後に眼房水にＭａｂ−１を急速に分散させた。
【００７４】
実施例５
５００＆５０μｇ／眼ＩＶＴ投与後のカニクイザルのＭａｂ−１の眼組織暴露
実施例２に記載された方法のとおり、カニクイザルに投与した。以下の表は、３つの異なる投与群のＭａｂ−１の眼組織（網膜、脈絡膜、及び強膜）ＰＫ属性を示す。
【表７】
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【００７５】
図４は、結果をまとめている。網膜中のＭａｂ−１の暴露は、脈絡膜中の暴露と類似しているようにみえ、網膜及び脈絡膜の双方中のＭａｂ−１の暴露は、強膜中の暴露より大きかった。ＩＶＴ注入（Ｔｍａｘ〜２４時間）後に網膜及び脈絡膜にＭａｂ−１を急速に分散させた。
【００７６】
実施例６
ヒトのＭａｂ−１の眼ＰＫプロファイルの予測
カニクイザル硝子体クリアランス（０．０１９ｍＬ／ｈ）及びヒト生理的硝子体容積（４．５ｍＬ）に基づいてヒトのＭａｂ−１の眼ＰＫプロファイルの予測を実施した。図５は、０．５ｍｇ／眼ＩＶＴ投与後のヒト眼ＰＫの予測をまとめている。
【００７７】
Ｍａｂ−１抗体配列
Ｍａｂ−１軽鎖ＣＤＲアミノ酸配列：
ＣＤＲ−１：ＲＳＳＱＳＬＬＨＳＨＧＹＮＹＬＤ（配列番号：１）
ＣＤＲ−２：ＬＧＳＮＲＡＳ（配列番号：２）
ＣＤＲ−３：ＭＱＧＴＨＷＰＰＴ（配列番号：３）
【００７８】
Ｍａｂ−１重鎖ＣＤＲアミノ酸配列：
ＣＤＲ−１：ＳＹＧＭＨ（配列番号：４）
ＣＤＲ−２：ＹＩＳＳＳＧＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号：５）
ＣＤＲ−３：ＤＬＬＤＹＤＬＬＴＧＹＧＹ（配列番号：６）
【００７９】
Ｍａｂ−１可変部軽鎖アミノ酸配列（配列番号：７）：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＨＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＧＴＨＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ
【００８０】
Ｍａｂ−１可変部重鎖アミノ酸配列（配列番号：８）：
ＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＳＧＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＬＤＹＤＬＬＴＧＹＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
【００８１】
Ｍａｂ−１軽鎖アミノ酸配列（配列番号：９）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣＤＩＶＭＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＨＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＧＴＨＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
【００８２】
Ｍａｂ−１重鎖アミノ酸配列（配列番号：１０）：
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＬＲＧＡＲＣＥＶＱＬＶＱＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＳＧＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＬＤＹＤＬＬＴＧＹＧＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
【００８３】
本明細書に引用した各参考文献は、それが教示するすべてについて、及び全目的のために、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００８４】
本発明は、本発明の個々の態様の単なる例示として意図される本明細書に記載された特定の実施形態によって範囲に限定するべきではなく、機能的に均等である方法及び成分が発明である。実際のところ、本明細書に示し、記載したものに加えて、上記の説明及び添付の図から本発明のさまざまな変更が当業者に明らかとなる。かかる変更が、添付したクレームの範囲内であることを意図する。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
2017532342.tif 000015
【図５】
2017532342.tif 000016
【配列表】
2017532342000001.app
【国際調査報告】
2017532342.tif 000017
2017532342.tif 000018
2017532342.tif 000019
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