(57)【要約】  本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象においてＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させる治療のための方法であって、ヒトＰＣＳＫ９タンパク質に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の治療有効量を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法に関する。主題の処置は、高コレステロール血症、脂質異常症、高脂血症、アテローム動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、より一般的には、心血管疾患（ＣＶＤ）を含めた、コレステロールおよびリポタンパク質の代謝障害の予防および／または治療において使用することができる。【図１】2017523980.tif 000004
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させる方法であって、配列番号１のヒトプロタンパク質変換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の治療有効量を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２】
抗体が、配列番号１のＰＣＳＫ９に対するＬＤＬＲの結合をブロックする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抗体が、アリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（商標））、エボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ（商標））、ＲＥＧＮ７２８、ＬＧＴ２０９、ＲＧ７６５２、ＬＹ３０１５０１４、Ｌ１Ｌ３、３１Ｈ４、１１Ｆ１、１２Ｈ１１、３００Ｎ、８Ａ１、８Ａ３、３Ｃ４または１Ｄ０５である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
抗体が、配列番号２に示すアミノ酸配列の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号３に示すアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
抗体が、配列番号４、５もしくは６に示すアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号７もしくは８に示すアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、配列番号９に示すアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３中に１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそれらのバリアント；ならびに配列番号１０に示すアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１１に示すアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１２に示すアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３中に１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそれらのバリアントを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
抗体が、配列番号１４のＣ末端のリジンありまたはなしの、配列番号１３を有する軽鎖および配列番号１４を有する重鎖を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
抗体が、Ｈｕｈ７細胞中でのＬＤＬＲ下方制御アッセイを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定される、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）レベルに対するＰＣＳＫ９により媒介される効果の完全アンタゴニストである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
スタチンを投与するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
対象が、脂質異常症、高脂血症、高コレステロール血症、アテローム動脈硬化症、心血管疾患および／または冠状動脈心臓疾患を患っている、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
抗体が、静脈内または皮下投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
抗体が、少なくとも４週間に１回または２週間に１回対象に投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
約１０ｍｇ〜約２０００ｍｇの抗体を対象に投与するステップを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
スタチンが、抗体の初回投与の前に投与されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
１日用量のスタチンが投与される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
安定用量のスタチンが、抗体の初回投与の前に少なくとも約２、３、４、５または６週間投与されている、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
スタチンが、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、またはそれらの薬学的に許容できる任意の塩もしくは立体異性体である、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
抗ウイルス療法が、抗体の初回投与の前に投与されている、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるのに使用するための、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するアンタゴニスト抗体。
【請求項１９】
ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるための医薬品の製造における、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の使用。
【請求項２０】
容器、容器内の、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を含む組成物、およびＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるために治療有効量のＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を投与するための使用説明を含有する添付文書を含む製造品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、全体が参照により本明細書に組み込まれている２０１４年８月６日出願の米国仮特許出願第６２／０３４，０２１号の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象においてＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるための方法または使用であって、ヒトＰＣＳＫ９タンパク質に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の治療有効量を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法または使用に関する。主題の処置は、ＨＣＶに感染している患者の亜集団において、高コレステロール血症、脂質異常症、高脂血症、アテローム動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、より一般的には、心血管疾患（ＣＶＤ）を含めた、コレステロールおよびリポタンパク質の代謝障害を予防および／または治療する際に使用することができる。
【背景技術】
【０００３】
最近、プロタンパク質変換酵素サブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）が、コレステロール代謝の調節における主要なプレーヤーとして認識されるようになり、冠状動脈心臓疾患（ＣＨＤ）の予防および治療のための有望な標的として出現してきた（例えば、Ｓｅｉｄａｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ  １００：９２８〜３３、２００３を参照されたい）。ＰＣＳＫ９中の機能獲得型（ＧＯＦ）突然変異が、常染色体優性高コレステロール血症（ＡＤＨ）（例えば、Ａｂｉｆａｄｅｌら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３４：１５４〜６、２００３を参照されたい）、軽度〜重度の高コレステロール血症およびＣＨＤのリスクの増加（例えば、Ｄａｖｉｇｎｏｎら、Ｃｕｒｒ．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ．Ｒｅｐ．１２：３０８〜１５、２０１０を参照されたい）と関連があることが見出されている。反対に、ＰＣＳＫ９中の機能欠失型（ＬＯＦ）突然変異は、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）の生涯にわたる低下と関連がある（例えば、Ｃｏｈｅｎら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．３７：１６１〜５、２００５；およびＴｉｂｏｌｌａら、Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｄｉｓ．２１：８３５〜４３、２０１１を参照されたい）。さらに、ＰＣＳＫ９中のＬＯＦ突然変異は、アテローム動脈硬化症およびＣＨＤのリスクを低下させることも見出されており（例えば、Ｃｏｈｅｎら、Ｎ  Ｅｎｇ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５４：１２６４〜７２、２０１０；Ｂｅｎｎら、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ５５：２８３３〜４２、２０１０を参照されたい）、一方、ヒト健常対象におけるＰＣＳＫ９の完全な喪失は、２０ｍｇ／ｄｌ未満の低い血清ＬＤＬ−Ｃをもたらす（Ｈｏｏｐｅｒら、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ．１９３：４４５〜８、２００７；およびＺｈａｏら、Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．７９：５１４〜２３、２００６）。
【０００４】
ＰＣＳＫ９がＬＤＬ−Ｃレベルを調節する主要な様式は、細胞内および細胞膜表面の両方におけるＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）との直接的な相互作用によるＬＤＬＲの分解の調節である（例えば、Ｓｅｉｄａｈら、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃｏｖ．１１：３６７〜８３、２０１２；およびＬａｍｂｅｒｔら、Ｊ．Ｌｉｐｉｄ．Ｒｅｓ．５３：２５１５〜２４、２０１２を参照されたい）。ＰＣＳＫ９は、肝臓および腸中で高度に発現し、プロドメインが自己触媒的に切断された後に分泌されると、複合体中でＬＤＬＲに結合することが可能になり、この結合により、ＬＤＬＲの立体構造の改変、ＬＤＬＲの細胞膜への正常な再利用の回避、およびＬＤＬＲのリソソーム分解の増加が引き起こされる（例えば、Ｈｏｒｔｏｎら、Ｊ．Ｌｉｐｉｄ．Ｒｅｓ．５０：Ｓ１７２〜Ｓ１７７、２００９；Ｐｉｐｅｒら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  １５：５４５〜５２、２００７；およびＬｏ  Ｓｕｒｄｏら、ＥＭＢＯ  Ｒｅｐ．１２：１３００〜５、２０１１を参照されたい）。
【０００５】
最近の研究から、ＰＣＳＫ９は、ＬＤＬＲに加えて、主要なＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の受容体であるＣＤ８１の細胞表面の発現も下方制御することができること、および循環型の肝臓のＰＣＳＫ９が、細胞中のＨＣＶに対して抗ウイルス作用を示すことが示されている（例えば、Ｌａｂｏｎｔｅら、Ｈｅｐｔｏｌｏｇｙ  ５０：１７〜２４、２００９を参照されたい）。ＵＳ８，０８８，５７１は、ＰＣＳＫ９感受性ウイルス感染（例えば、ＨＣＶ）を治療および阻害する方法をさらに開示しており、この方法は、細胞表面におけるＣＤ８１の発現を、ＰＣＳＫ９の活性および／または発現を増加させることによって減少させるステップを含む。
【０００６】
本明細書に引用する全ての刊行物、特許および特許出願はそれらの全体が、全ての目的のために、それぞれの個々の刊行物、特許および特許出願が具体的かつ個々に示されて、参照により具体的かつ個々に組み込まれているのと同じ程度に、参照により本明細書に組み込まれている。組み込まれている文献および類似の資料の１つまたは複数が、これらに限定されないが、用語の定義、用語の使用法、記載する技法等を含めた、本出願と異なるまたは矛盾する場合は、本出願が優先する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるための方法であって、ヒトＰＣＳＫ９タンパク質に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の治療有効量を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法に関する。本発明者らは、ＰＣＳＫ９の存在下でＣＤ８１およびＬＤＬＲの用量依存性の喪失が生じるが、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲとの相互作用に拮抗するＰＣＳＫ９抗体の投与は、ＬＤＬＲのレベルを回復させることができ、驚くべきことに、ＰＣＳＫ９媒介型のＣＤ８１の分解に対する作用は示さないことを発見するに至った。このことから、ＰＣＳＫ９は、ＬＤＬＲの結合および分解に関与するエピトープとは明確に異なる特有のエピトープを介してＣＤ８１を分解することが示される。したがって、ＬＤＬＲおよびコレステロールのレベルに対するＰＣＳＫ９の作用を阻害するアンタゴニスト抗体を投与しても、ＣＤ８１レベルの増加およびＨＣＶウイルス感染の増加には必ずしもつながらない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、一態様では、本発明は、ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させる方法であって、配列番号１のヒトプロタンパク質変換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の治療有効量を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【０００９】
いくつかの実施形態では、ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるのに使用するための、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するアンタゴニスト抗体を提供する。
【００１０】
いくつかの実施形態では、ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるための医薬品の製造における、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の使用を提供する。
【００１１】
いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号１のＰＣＳＫ９に対するＬＤＬＲの結合をブロックする。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体は、アリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（商標））、エボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ（商標））、ＲＥＧＮ７２８、ＬＧＴ２０９、ＲＧ７６５２、ＬＹ３０１５０１４、Ｌ１Ｌ３、３１Ｈ４、１１Ｆ１、１２Ｈ１１、８Ａ１、８Ａ３、３Ｃ４または１Ｄ０５である。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体は、Ｈｕｈ７細胞中でのＬＤＬＲ下方制御アッセイを使用してｉｎ  ｖｉｔｒｏで測定される、ＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）レベルに対するＰＣＳＫ９により媒介される効果の完全アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号２に示すアミノ酸配列の相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む重鎖可変領域（ＶＨ）；ならびに配列番号３に示すアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号４、５または６に示すアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ１、配列番号７または８に示すアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、配列番号９に示すアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３、配列番号１０に示すアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１１に示すアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ２、および配列番号１２に示すアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ３を含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体は、配列番号１４のＣ末端のリジンありまたはなしの、配列番号１３を有する軽鎖および配列番号１４を有する重鎖を含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法は、約１０ｍｇ〜約２０００ｍｇの抗ＰＣＳＫ９抗体を対象に、例えば、静脈内または皮下投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体を、少なくとも４週間に１回または２週間に１回対象に投与する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、抗ウイルス療法が、抗体の初回投与の前に投与されている。
【００１４】
いくつかの実施形態では、スタチンを、抗ＰＣＳＫ抗体の初回投与の前に投与することができる。いくつかの実施形態では、１日用量のスタチンが投与される。その他の実施形態では、安定用量のスタチンが、抗ＰＣＳＫ９抗体の初回投与の前に少なくとも約２、３、４、５または６週間投与されている。スタチンの例として、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチン、またはそれらの薬学的に許容できる任意の塩もしくは立体異性体が挙げられる。
【００１５】
本明細書に記載する方法を使用して、ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有し、脂質異常症、高脂血症、高コレステロール血症、アテローム動脈硬化症、心血管疾患および／または冠状動脈心臓疾患を患っている対象を治療するまたは予防的に処置することができる。
【００１６】
いくつかの実施形態では、先行する実施形態のいずれか１つの記載に従う、本発明の方法におけるＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の使用を提供する。
【００１７】
いくつかの実施形態では、先行する実施形態のいずれか１つの記載に従う方法において使用するための医薬品を製造する方法におけるＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の使用を提供する。
【００１８】
いくつかの実施形態では、先行する実施形態のいずれか１つの記載に従って使用するためのＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を提供する。
【００１９】
別の態様では、本発明は、容器、容器内の、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を含む組成物、およびＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるために治療有効量のＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を投与するための使用説明を含有する添付文書を含むキットまたは製造品を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体５Ａ１０および抗体のアイソタイプの対照を用いて処置したマウスから得られた肝臓の溶解液中のＣＤ８１、ＬＤＬＲおよびベータ−アクチンの（ウエスタンブロットによる）タンパク質発現を示す図である。
【図２】ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体５Ａ１０および抗体のアイソタイプの対照を用いて処置したマウスから得られた肝臓の溶解液中のＣＤ８１およびＬＤＬＲの、ウエスタンブロット分析から得られたシグナル強度の定量化（ｎ＝３／群）を示すグラフである。
【図３Ａ】３００ｎＭのＰＣＳＫ９と３００ｎＭのアイソタイプの対照の抗体（ＩＣ）とを一緒に用いた、または３００ｎＭのＰＣＳＫ９と３００ｎＭのＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体Ｌ１Ｌ３とを一緒に用いた各処置から得られた少なくとも５０個の細胞からのＣＤ８１レベルの相対蛍光のパーセント平均を示すグラフである。
【図３Ｂ】３００ｎＭのＰＣＳＫ９と３００ｎＭのアイソタイプの対照の抗体（ＩＣ）とを一緒に用いて、または３００ｎＭのＰＣＳＫ９と３００ｎＭのＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体Ｌ１Ｌ３とを一緒に用いて処置した後の、ＤＡＰＩ染色ＨｅｐＧ２細胞上におけるＬＤＬＲおよびＣＤ８１の表面染色を示す図である。
【図４Ａ】アイソタイプの対照の抗体（ＩＣ）またはＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体Ｌ１Ｌ３の存在下で、ＰＣＳＫ９の濃度を増加させて処置したＨｅｐＧ２細胞中のＬＤＬＲ、ＣＤ８１およびＴＦＮＲのタンパク質発現を示す図である。
【図４Ｂ】ＬＤＬＲおよびＣＤ８１の正規化したシグナル強度の定量化を示すグラフである。各レーンから得られたＣＤ８１またはＬＤＬＲの積分強度を、ＴＦＮＲに対して正規化し、未処理細胞のパーセントとして求めた。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させる方法であって、ヒトＰＣＳＫ９タンパク質に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の治療有効量を対象に投与するステップを含む方法に関する。本発明者らは、ＰＣＳＫ９の存在下でＣＤ８１およびＬＤＬＲの用量依存性の喪失が生じるが、ＰＣＳＫ９とＬＤＬＲとの相互作用に拮抗するＰＣＳＫ９抗体の投与は、ＬＤＬＲのレベルを回復させることができ、驚くべきことに、ＰＣＳＫ９媒介型のＣＤ８１の分解に対しては作用を示さないことを発見するに至った。このことから、ＰＣＳＫ９は、ＬＤＬＲの結合および分解に関与するエピトープとは明確に異なる特有のエピトープを介してＣＤ８１を分解することが示される。したがって、ＬＤＬＲおよびコレステロールのレベルに対するＰＣＳＫ９の作用を阻害するアンタゴニスト抗体を投与しても、ＣＤ８１レベルの増加およびＨＣＶウイルス感染の増加には必ずしもつながらない。本明細書に記載する方法を、ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する患者の亜集団におけるコレステロールおよびリポタンパク質の代謝障害の予防および／または治療において使用することができ、そうした代謝障害には、例として、高コレステロール血症（例えば、ヘテロ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｅｔＦＨ）またはホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ））、脂質異常症（例えば、混合型脂質異常症）、高脂血症（例えば、ヘテロ接合性またはホモ接合性の家族性高脂血症およびヘテロ接合性またはホモ接合性の非家族性高脂血症）、アテローム動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、より一般的には、心血管疾患（ＣＶＤ）がある。
【００２２】
一般的な技法
本発明の実行に際しては、別段の記載がない限り、分子生物学（組換えの技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技法を利用し、これらは、当技術分野の技能に属する。そのような技法は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．ＧｒｉｆｆｉｔｈｓおよびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜１９９８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓ編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）等の文献に十分に説明されている。
【００２３】
定義
「抗体」は、標的、例として、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチド等に特異的に結合することが可能な免疫グロブリン分子であり、この結合は、免疫グロブリン分子の可変領域中に位置する少なくとも１つの抗原認識部位によって生じる。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、完全なままのポリクローナルまたはモノクローナル抗体のみならず、任意の抗原結合性断片（すなわち、「抗原に結合する部分」）もしくはその単鎖、抗体を含む融合タンパク質、さらに、例えば、非限定的に、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（例えば、サメおよびラクダ科の抗体）、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲならびにビス−ｓｃＦｖを含めた、抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意のその他の改変された立体配置も包含する（例えば、ＨｏｌｌｉｎｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、２００５、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２３（９）：１１２６〜１１３６を参照されたい）。抗体は、任意のクラスの抗体、例として、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ（またはそのサブクラス）を含み、抗体は、いずれかの特定のクラスである必要はない。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンを、異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンの５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかはさらに、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域はそれぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は、周知である。
【００２４】
抗体の「抗原に結合する部分」または「抗原結合性断片」という用語は、本明細書で使用する場合、所与の抗原（例えば、ＰＣＳＫ９）に特異的に結合する能力を保持する、完全なままの抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体が抗原に結合する機能は、完全なままの抗体の断片によってもたらされ得る。抗体の「抗原に結合する部分」という用語の範囲内に包含される結合性断片の例として、Ｆａｂ；Ｆａｂ’；Ｆ（ａｂ’）２；ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４〜５４６）、ならびに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
【００２５】
用語「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）は、それを生成する方法ではなく、例えば、任意の真核生物、原核生物またはファージのクローンを含めた、単一のコピーまたはクローンから誘導される抗体を指す。好ましくは、本発明のモノクローナル抗体は、均一または実質的に均一な集団として存在する。
【００２６】
「ヒト化」抗体は、キメラの免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそれらの断片（例として、抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２もしくはその他の抗原に結合するサブ配列）である非ヒト（例えば、マウス）の抗体の形態を指し、それらは、非ヒト免疫グロブリンから誘導した最低限の配列を含有する。好ましくは、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、その中で、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基が、所望の特異性、親和性および処理能力を有する、非ヒトの種（ドナー抗体）、例として、マウス、ラットまたはウサギのＣＤＲに由来する残基によって置き換えられている。
【００２７】
本明細書で使用する場合、「ヒト抗体」は、ヒトが生成することができる抗体および／または当業者に公知であるもしくは本明細書に開示するヒト抗体を作製するための技法のうちのいずれかを使用して作製されている抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義には、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体が含まれる。１つのそのような例が、マウス軽鎖およびヒト重鎖のポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の種々の技法を使用して生成することができる。一実施形態では、ヒト抗体は、ファージライブラリーから選択され、そのファージライブラリーは、ヒト抗体を発現する（Ｖａｕｇｈａｎら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：３０９〜３１４；Ｓｈｅｅｔｓら、１９９８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６１５７〜６１６２；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１）。ヒト抗体はまた、内因性座位の代わりに、ヒト免疫グロブリン座位が遺伝子導入により導入されている動物、例えば、内因性の免疫グロブリン遺伝子の一部または全部が不活性化されているマウスの免疫化によって作製することもできる。このアプローチは、米国特許第５，５４５，８０７号；第５，５４５，８０６号；第５，５６９，８２５号；第５，６２５，１２６号；第５，６３３，４２５号；および第５，６６１，０１６号に記載されている。代替的に、標的の抗原に対して作られた抗体を生成するヒトＢリンパ球（そのようなＢリンパ球は、個体から回収すること、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫化させておくことができる）を不死化することによって、ヒト抗体を調製することもできる。例えば、Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、ｐ．７７、１９８５；Ｂｏｅｒｎｅｒら、１９９１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１）：８６〜９５；および米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい。
【００２８】
「二特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）」、「二重特性（ｄｕａｌ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」または「二機能性」の抗体は、抗原に結合する２つの異なる部位を有するハイブリッド抗体である。二特異性抗体の、抗原に結合する２つの部位は、２つの異なるエピトープに結合し、これらのエピトープは、同じまたは異なるタンパク質標的（例えば、ＰＣＳＫ９タンパク質）上に存在し得る。
【００２９】
抗体の「可変領域」は、単独の場合または組み合わせた場合の、抗体の軽鎖の可変領域または抗体の重鎖の可変領域を指す。当技術分野では公知であるように、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）、およびそれらを繋ぐ、超可変領域としてもまた公知である３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）からそれぞれなる、重鎖および軽鎖の可変領域は、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。主題の可変領域のバリアント、特に、ＣＤＲ領域の外側（すなわち、フレームワーク領域の中）のアミノ酸残基における置換を有するバリアントが所望される場合には、主題の可変領域を、主題の可変領域と同じ標準的なクラスのＣＤＲ１配列およびＣＤＲ２配列を含有する、その他の抗体の可変領域と比較することによって、適切なアミノ酸置換、好ましくは、保存的アミノ酸置換を同定することができる（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６（４）：９０１〜９１７、１９８７）。主題のＣＤＲに隣接させるためのＦＲを選ぶ場合、例えば、抗体をヒト化または最適化する場合には、同じ標準的なクラスのＣＤＲ１配列およびＣＤＲ２配列を含有する抗体に由来するＦＲが好ましい。
【００３０】
可変ドメインの「ＣＤＲ」は、可変領域内のアミノ酸残基であり、これらのアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの両方を合わせた定義、ＡｂＭ、接触および／もしくは立体構造による定義、または当技術分野で周知である、ＣＤＲを決定する任意の方法に従って同定される。Ｋａｂａｔらが当初定義した超可変領域として、抗体のＣＤＲを同定することができる。例えば、Ｋａｂａｔら、１９９２、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  ｅｄ．、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、ＮＩＨ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｄ．Ｃ．を参照されたい。ＣＤＲの位置はまた、Ｃｈｏｔｈｉａらが当初記載した構造的ループ構造として同定することもできる。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７〜８８３を参照されたい。ＣＤＲを同定するためのその他のアプローチには、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの間の妥協案であり、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデル化ソフトウエア（現在、ＡＣＣＥＬＲＹＳ（登録商標））を使用して求められる「ＡｂＭの定義」、またはＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２〜７４５に記載されている、抗原の接触の観察に基づく、ＣＤＲの「接触の定義」がある。本明細書でＣＤＲの「立体構造による定義」と呼ぶ別のアプローチにおいては、ＣＤＲの位置を、抗原結合に対してエンタルピー的に寄与する残基と同定することができる。例えば、Ｍａｋａｂｅら、２００８、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８３：１１５６〜１１６６を参照されたい。さらなるその他の、ＣＤＲ境界の定義は、上記のアプローチのうちのいずれにも厳格には従わない場合があるが、にもかかわらず、ＫａｂａｔのＣＤＲの少なくとも一部とは重複する。しかし、そうしたＣＤＲは、特定の残基もしくは残基の群が、またはＣＤＲ全体でさえ、抗原結合に顕著には影響しないという予測または実験的知見に照らして短縮または延長され得る。本明細書で使用する場合、ＣＤＲは、アプローチの組合せを含めた、当技術分野で公知の任意のアプローチにより定義されるＣＤＲを指すことができる。本明細書で使用する方法は、これらのアプローチのうちのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができる。２つ以上のＣＤＲを含有する所与の実施形態の場合はいずれも、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、延長、ＡｂＭ、接触および／もしくは立体構造の定義うちのいずれかに従って、ＣＤＲを定義することができる。
【００３１】
当技術分野では公知であるように、抗体の「定常領域」は、単独の場合または組み合わせた場合の、抗体の軽鎖の定常領域または抗体の重鎖の定常領域を指す。
【００３２】
本明細書で使用する場合、用語「ＰＣＳＫ９」は、ＰＣＳＫ９の活性の少なくとも一部を保持する任意の形態のＰＣＳＫ９およびそのバリアントを指す。ヒトＰＣＳＫ９と具体的に言及することによる等、異なった指定がない限り、ＰＣＳＫ９は、全ての哺乳動物種、例えば、ヒト、イヌ、ネコ、ウマおよびウシの、ネイティブの配列のＰＣＳＫ９を含む。１つの例示的なヒトＰＣＳＫ９として、Ｕｎｉｐｒｏｔの受託番号：Ｑ８ＮＢＰ７（配列番号１）が見出される。
【００３３】
本明細書で使用する場合、「抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体」または「ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体」は、ＰＣＳＫ９の生物学的活性、ならびに／またはＬＤＬＲのＰＣＳＫ９媒介型の下方制御およびＬＤＬの血中クリアランスのＰＣＳＫ９媒介型の減少を含めた、ＰＣＳＫ９のシグナル伝達が媒介する下流の経路を阻害することが可能である抗ＰＣＳＫ９抗体を指す。ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、ＰＣＳＫ９のシグナル伝達が媒介する下流の経路を含めた、ＰＣＳＫ９の生物学的活性、例として、ＬＤＬＲとの相互作用、またはＰＣＳＫ９に対する細胞応答の惹起を、（顕著な程度を含めた、任意の程度で）ブロックする、拮抗する、抑制する、または低下させる抗体を包含する。本発明の目的では、用語「ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体」は、すでに同定した用語、表題ならびに機能上の状態および特徴を全て包含し、それによって、ＰＣＳＫ９自体、ＰＣＳＫ９の生物学的活性（これらに限定されないが、ＬＤＬＲとの相互作用、ＬＤＬＲの下方制御およびＬＤＬの血中クリアランスの減少のうちのいずれかの局面を媒介するその能力を含む）、または生物学的活性の結果が、実質的に無効になる、減少する、または意味のある任意の程度まで中和されることが明確に理解されるであろう。いくつかの実施形態では、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、ＰＣＳＫ９に結合し、ＬＤＬＲとの相互作用を阻止する。ＰＣＳＫ９のアンタゴニスト抗体の例が、例えば、米国特許出願公開第２０１０００６８１９９号、およびＤｅｖａｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８：１０８０５〜１０８１８（２０１３）に提供されており、これらは全体が、参照により本明細書に組み込まれている。
【００３４】
本明細書で使用する場合、「完全アンタゴニスト」は、有効濃度において、ＰＣＳＫ９の測定可能な効果を、本質的に完全にブロックするアンタゴニストである。部分アゴニストとは、測定可能な効果を部分的にブロックすることが可能であるが、最も高い濃度においてさえ、完全アンタゴニストにはならないアンタゴニストを意味する。本質的に完全にとは、測定可能な効果の少なくとも約８０％、好ましくは、少なくとも約９０％、より好ましくは、少なくとも約９５％、最も好ましくは、少なくとも約９８％または９９％をブロックすることを意味する。関連する「測定可能な効果」は、本明細書に記載されており、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるＨｕｈ７細胞中でアッセイされる、ＰＣＳＫ９のアンタゴニストによるＬＤＬＲの下方制御、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける総コレステロールの血中（または血漿）レベルの減少、およびｉｎ  ｖｉｖｏにおけるＬＤＬの血中（または血漿）レベルの減少を含む。
【００３５】
用語「エピトープ」は、抗体の抗原に結合する領域の１つまたは複数において、抗体により認識され、抗体により結合されることが可能な分子の部分を指す。エピトープはしばしば、表面にある分子、例として、アミノ酸または糖側鎖の集まりからなり、特異的な三次元構造の特徴および特異的な電荷の特徴を有する。いくつかの実施形態では、エピトープは、タンパク質エピトープであり得る。タンパク質エピトープは、線状である場合または立体構造をもつ場合がある。線状のエピトープの場合、タンパク質と相互作用分子（例として、抗体）との間で相互作用する点が全て、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って線状に存在する。「非線状のエピトープ」または「立体構造エピトープ」は、抗原タンパク質内に、近接しないポリペプチド（またはアミノ酸）を含み、それらに、そのエピトープに特異的な抗体が結合する。用語「抗原性エピトープ」は、本明細書で使用する場合、当技術分野で周知の任意の方法、例えば、従来のイムノアッセイにより決定する場合に、抗体が特異的に結合することができる抗原の部分と定義する。抗原上の所望のエピトープを決定したら、そのエピトープに対する抗体を、例えば、本明細書に記載する技法を使用して生成することが可能になる。代替的に、発見のプロセスの間に、抗体の生成および特徴付けから、望ましいエピトープについての情報を解明することもできる。次いで、こうした情報から、抗体を、同じエピトープに対する結合性について競合的にスクリーンすることが可能になる。このことを達成するためのアプローチでは、ＰＣＳＫ９に対する結合性について、相互に競合またはクロス競合する抗体を見出すために、競合研究およびクロス競合研究を実施する；例えば、抗体を、抗原に対する結合性について競合させる。
【００３６】
本明細書で使用する場合、用語「臨床的に意味のある」は、ヒトにおける血中ＬＤＬ−コレステロールレベルの少なくとも１５％の低下、またはマウスにおける血中総コレステロールの少なくとも１５％の低下を意味する。血漿または血清中での測定は、血中レベルの測定の代用として役立ち得ることは明らかである。
【００３７】
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、本明細書では交換可能に使用して、任意の長さのアミノ酸の鎖、好ましくは、比較的短い（例えば、１０〜１００個のアミノ酸の）鎖を指す。鎖は、直鎖であってもまたは分枝していてもよく；鎖は、改変されたアミノ酸を含む場合および／または非アミノ酸を介在させる場合がある。この用語はまた、天然にまたは介入により改変されているアミノ酸の鎖も包含し；改変は、例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質付加、アセチル化、リン酸化、または任意のその他の操作もしくは改変、例として、標識構成成分とのコンジュゲーションである。また例えば、アミノ酸の類似体（例えば、非天然のアミノ酸等が含まれる）の１つまたは複数および当技術分野で公知のその他の改変を含有するポリペプチドも、この定義の範囲に含まれる。ポリペプチドは、単鎖、または会合しあった鎖として存在し得ることを理解されたい。
【００３８】
当技術分野では公知であるように、「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、本明細書では交換可能に使用し、任意の長さのヌクレオチドの鎖を指し、ＤＮＡおよびＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変されたヌクレオチドもしくは塩基、および／またはそれらの類似体であってもよく、そうでなければ、ＤＮＡポリメラーゼまたはＲＮＡポリメラーゼにより鎖内に組み込まれ得る任意の基質であってもよい。ポリヌクレオチドは、改変されたヌクレオチド、例として、メチル化ヌクレオチドおよびそれらの類似体を含むことができる。ヌクレオチド構造への改変が存在する場合には、そうした改変は、鎖の組立ての前または後にもたらすことができる。ヌクレオチド配列に、非ヌクレオチド構成成分を介在させることができる。ポリヌクレオチドは、重合の後で、標識構成成分とのコンジュゲーション等によりさらに改変することができる。未改変の形態のポリヌクレオチドに加えて、改変のその他のタイプとして、例えば、「キャップ」、１つまたは複数の天然に存在するヌクレオチドの、類似体による置換、ヌクレオチド間の改変、例えば、荷電していない連結（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホロアミデート、カルバメート等）を有するものおよび荷電した連結（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等）を有するもの等、懸垂部分、例えば、タンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジン等）を含有するもの、インターカレーター（例えば、アクリジン、ソラレン等）を有するもの、キレート化剤（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化性の金属等）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、改変された連結（例えば、アルファアノマー核酸等）を有するもの等が挙げられる。さらに、糖中に通常存在するヒドロキシル基のうちのいずれかを、例えば、ホスホネート基、ホスフェート基で置き換えても、標準的な保護基により保護しても、もしくは活性化させて、追加のヌクレオチドへの追加の連結を調製してもよく、または固体の支持体にコンジュゲートしてもよい。５’末端および３’末端のＯＨを、リン酸化しても、または１〜２０個の炭素原子のアミンもしくは有機キャッピング基部分で置換してもよい。その他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化することができる。ポリヌクレオチドはまた、一般に当技術分野で公知である、リボース糖またはデオキシリボース糖の類似の形態も含有することができ、それらとして、例えば、２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環糖類似体、アルファ−アノマーまたはベータ−アノマーの糖、エピマー糖、例として、アラビノース、キシロースまたはリキソース、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体、および脱塩基ヌクレオシド類似体、例として、メチルリボシドが挙げられる。１つまたは複数のホスホジエステル連結を、代替の連結基で置き換えることができる。これらの代替の連結基として、ホスフェートを、Ｐ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール」）で置き換える実施形態が挙げられるが、これらに限定されない；式中、ＲまたはＲ’はそれぞれ独立に、Ｈ、またはエーテル（−Ｏ−）連結、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニルもしくはアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）を含有していてもよい置換もしくは未置換の（１〜２０個のＣの）アルキルである。ポリヌクレオチド中の全ての連結が、必ずしも同一である必要はない。前記の記載は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含めた、本明細書で言及する全てのポリヌクレオチドに適用される。
【００３９】
エピトープに（本明細書では交換可能に使用する）「優先的に結合する」または「特異的に結合する」抗体は、当技術分野で十分に理解されている用語であり、そのような特異的または優先的な結合性を決定する方法もまた、当技術分野で周知である。分子が、特定の細胞または物質と、代替の細胞または物質との場合と比べて、より頻繁に、より迅速に、より長い期間にわたり、かつ／またはより大きな親和性で反応するまたは会合するならば、その分子は、「特異的結合性」または「優先的結合性」を示すといわれる。抗体が、標的に、その他の物質に結合する場合と比べて、より大きな親和性、アビディティーで、より容易に、かつ／またはより長い期間にわたり結合するならば、その抗体は、標的に「特異的に結合する」または「優先的に結合する」。例えば、あるＰＣＳＫ９エピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、このエピトープに、その他のＰＣＳＫ９エピトープまたはＰＣＳＫ９エピトープではないエピトープに結合する場合に比べて、より大きな親和性、アビディティーで、より容易に、かつ／またはより長い期間にわたり結合する抗体である。また、この定義を読み取ることによって、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（もしくは部分またはエピトープ）が、第２の標的に特異的または優先的に結合にする場合またはそうでない場合があることも理解される。したがって、「特異的結合性」または「優先的結合性」は、排他的な結合を必ずしも必要としない（しかし、排他的な結合を含むことはできる）。必然的ではないが、一般的に、結合性について言及する場合は、優先的結合性を意味する。
【００４０】
本明細書で使用する場合、「実質的に純粋な」は、少なくとも５０％純粋（、すなわち、汚染物質を含有しない）、より好ましくは、少なくとも９０％純粋、より好ましくは、少なくとも９５％純粋、さらにより好ましくは、少なくとも９８％純粋、最も好ましくは、少なくとも９９％純粋である材料を指す。
【００４１】
「宿主細胞」は、ポリヌクレオチド挿入部を組み込むためのベクターにとってのレシピエントになり得るまたはそうしたレシピエントになっている個々の細胞または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一の宿主細胞の子孫を含み、子孫は、天然の、偶発的なまたは意図的な突然変異に起因して、元々の親細胞とは（形態の点でもゲノムＤＮＡの相補体の点でも）必ずしも完全に同一でなくてもよい。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドをｉｎ  ｖｉｖｏでトランスフェクトした細胞を含む。
【００４２】
当技術分野では公知であるように、用語「Ｆｃ領域」を、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用する。「Ｆｃ領域」は、ネイティブの配列のＦｃ領域であっても、またはバリアントのＦｃ領域であってもよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化し得るであろうが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。本出願における残基の呼称は、定常ドメインのＥＵ番号付けスキームに基づく（Ｅｄｅｌｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、６３（１）：７８〜８５（１９６９））。
【００４３】
当技術分野で使用する場合、「Ｆｃ受容体」および「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載する。好ましいＦｃＲは、ネイティブ配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するＦｃＲ（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩのサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的にスプライスされた形態も含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「抑制性受容体」）を含み、これらは、主としてその細胞質ドメインにおいて異なる、類似のアミノ酸配列を有する。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、１９９１、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７〜９２；Ｃａｐｅｌら、１９９４、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４：２５〜３４；ならびにｄｅ  Ｈａａｓら、１９９５、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０〜４１で総説されている。「ＦｃＲ」はまた、新生児型受容体ＦｃＲｎも含み、この受容体は、母体のＩｇＧの胎児への移動に関与する（Ｇｕｙｅｒら、１９７６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７；およびＫｉｍら、１９９４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９）。
【００４４】
エピトープが、別の（第２の）エピトープ、またはＬＤＬＲのＥＧＦ様ドメインと相互作用するＰＣＳＫ９上の表面と「オーバーラップする」抗体とは、相互作用を受けるＰＣＳＫ９の残基という形で空間が共有されることを意味する。オーバーラップのパーセントを計算するためには、例えば、特許請求する抗体のＰＣＳＫ９エピトープが、ＬＤＬＲのＥＧＦ様ドメインと相互作用するＰＣＳＫ９の表面、すなわち、ＬＤＬＲとの複合体形成時に複合体中に埋没するＰＣＳＫ９の表面積とオーバーラップするパーセントを、残基ベースで計算する。また、埋没する面積は、ＰＣＳＫ９：抗体の複合体中のこれらの残基についても計算する。オーバーラップが１００％を超える可能性を阻止するために、ＬＤＬＲ：ＰＣＳＫ９の複合体中に埋没する表面積に比して、ＰＣＳＫ９：抗体の複合体中に埋没する表面積がより大きくなる残基については、表面積を、ＬＤＬＲ：ＰＣＳＫ９の複合体から得られた値（１００％）に設定する。パーセント表面オーバーラップは、ＬＤＬＲ：ＰＣＳＫ９の相互作用する残基の全てにわたる合計によって計算され、相互作用面積により加重される。
【００４５】
「機能性のＦｃ領域」は、ネイティブ配列のＦｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保有する。例示的な「エフェクター機能」として、Ｃ１ｑ結合性；補体依存性の細胞傷害性；Ｆｃ受容体結合性；抗体依存性の細胞媒介型細胞傷害性；貪食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御等が挙げられる。そのようなエフェクター機能は一般に、Ｆｃ領域が結合性ドメイン（例えば、抗体の可変ドメイン）と組み合わさることが必要になり、そのような抗体のエフェクター機能を評価するための当技術分野で公知の種々のアッセイを使用して評価することができる。
【００４６】
「ネイティブ配列のＦｃ領域」は、自然界において見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「バリアントのＦｃ領域」は、ネイティブ配列のＦｃ領域のアミノ酸配列とは、少なくとも１つのアミノ酸の改変によって異なるが、ネイティブ配列のＦｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持するアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントのＦｃ領域は、ネイティブ配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有し、例えば、ネイティブ配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域中に、約１つ〜約１０個のアミノ酸置換、好ましくは、約１つ〜約５つのアミノ酸置換を有する。本明細書のバリアントのＦｃ領域は、好ましくは、ネイティブ配列のＦｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列同一性を、最も好ましくは、それと少なくとも約９０％の配列同一性を、より好ましくは、それと少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性を保有する。
【００４７】
本明細書で使用する場合、用語「アトルバスタチン」、「セリバスタチン」、「フルバスタチン」、「ロバスタチン」、「メバスタチン」、「ピタバスタチン」、「プラバスタチン」、「ロスバスタチン」および「シンバスタチン」は、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンそれぞれ、ならびにそれらの任意の薬学的に許容できる塩または立体異性体を含む。本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容できる塩」は、患者が生理的に耐容性を示す塩を含む。そのような塩は典型的には、無機の酸もしくは塩基および／または有機の酸もしくは塩基から調製される。これらの酸および塩基の例は、当業者に周知である。
【００４８】
本明細書で使用する場合、「治療」は、有益なまたは所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的では、有益なまたは所望の臨床結果は、これらに限定されないが、ＬＤＬクリアランスの増強、ならびに代謝障害および／または摂食障害の結果生じるコレステロールおよび／またはリポタンパク質の異常なレベルの発生の低下または軽減のうちの１つまたは複数を含み、これらの障害には、高コレステロール血症（例えば、ＨｅｔＦＨまたはＨｏＦＨ）、脂質異常症（例えば、混合型脂質異常症）、高脂血症（例えば、ヘテロ接合性またはホモ接合性の家族性高脂血症およびヘテロ接合性またはホモ接合性の非家族性高脂血症）、アテローム動脈硬化症、ＡＣＳ、より一般的には、心血管疾患（ＣＶＤ）が含まれる。
【００４９】
「発生の低下」は、任意の重症度の低下を意味する（これには、この状態のために一般に使用されるその他の薬物および／または療法の必要性および／または（例えば、それらに対する暴露の）量の低下を含めることができる）。当業者であれば理解するように、治療に対する個体の応答が異なる場合があり、したがって、例えば、「発生を低下させる方法」は、合理的な予想に基づいて、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を本明細書の記載に従って投与することを示し、合理的な予想では、そのような投与は、そうした特定の個体（例えば、ＨＣＶに感染している個体）において、そのような発生の低下を引き起こす可能性が高い。
【００５０】
「軽減」は、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を投与しない場合と比較した、１つまたは複数の症状の低減または改善を意味する。「軽減」はまた、症状の持続期間の短縮または低下も含む。
【００５１】
本明細書で使用する場合、薬物、化合物または医薬組成物の「有効投与量」、「治療有効量」または「有効量」は、任意の１つまたは複数の、有益なまたは所望される結果をもたらすのに十分な量である。予防的に使用する場合、有益なまたは所望される結果は、疾患の生化学的、組織学的および／または行動的な症状、疾患の合併症、ならびに疾患が発達する間に提示される中間の病理学的表現型を含めた、疾患のリスクの排除もしくは低下、疾患の重症度の低減、または疾患の発症の遅延を含む。治療的に使用する場合、有益なまたは所望される結果は、高コレステロール血症（例えば、ＨｅｔＦＨもしくはＨｏＦＨ）を低下させる；脂質異常症（例えば、混合型脂質異常症）、高脂血症（例えば、ヘテロ接合性もしくはホモ接合性の家族性高脂血症およびヘテロ接合性もしくはホモ接合性の非家族性高脂血症）、アテローム動脈硬化症、心血管疾患もしくは冠状動脈心臓疾患のうちの１つもしくは複数の症状を低下させる；疾患を治療するのに必要なその他の医薬品の用量を減少させる；別の医薬品の効果を増強する；および／または患者の疾患の進行を遅延させる等の臨床結果を含む。有効投与量を、１回または複数回投与することができる。本発明の目的では、薬物、化合物または医薬組成物の有効投与量は、処置を予防的または治療的に、直接的または間接的のいずれかで行うのに十分な量である。臨床状況において理解されているように、薬物、化合物または医薬組成物の有効投与は、別の薬物、化合物または医薬組成物と併せて達成する場合またはそうでない場合がある。したがって、「有効投与量」は、１つまたは複数の治療剤を投与する状況で検討することができ、１つまたは複数のその他の薬剤と併せて、望ましい結果が達成され得るまたは達成される場合、単一の薬剤は、有効量で投与されるとみなされ得る。
【００５２】
「個体」または「対象」は、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。また、哺乳動物は、これらに限定されないが、家畜、競技用動物、ペット、霊長類（例えば、サル）、ウマ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットも含む。
【００５３】
本明細書で使用する場合、「ベクター」は、１つまたは複数の目的の遺伝子または配列を、宿主細胞中に送達し、好ましくは、そこで発現することが可能なコンストラクトを意味する。ベクターの例として、これらに限定されないが、ウイルスベクター、裸のＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミドベクター、コスミドベクターまたはファージベクター、カチオン性縮合剤と会合したＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソーム中に封入されているＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、および特定の真核生物細胞、例として、プロデューサー細胞が挙げられる。
【００５４】
本明細書で使用する場合、「発現制御配列」は、核酸の転写を導く核酸配列を意味する。発現制御配列は、プロモーター、例として、構成性もしくは誘導性のプロモーター、またはエンハンサーであり得る。発現制御配列は、転写されるべき核酸配列に作動可能に連結される。
【００５５】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容できる担体」または「薬学的に許容できる賦形剤」は、活性成分と組み合わせた場合、活性成分が生物学的活性を保持するのを可能にし、対象の免疫系とは反応しない任意の材料を含む。例には、これらに限定されないが、リン酸緩衝溶液、水、エマルジョン、例として、水中油型エマルジョン、および種々のタイプの湿潤剤等の標準的な薬学的担体のうちのいずれかがある。エアロゾルまたは非経口投与のための好ましい希釈剤は、リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）または（０．９％）生理食塩水である。そのような担体を含む組成物は、周知の従来法により製剤化される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ  Ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００を参照されたい）。
【００５６】
用語「ｋｏｎ」は、本明細書で使用する場合、抗体が抗原に会合する場合の速度定数を指す。具体的には、速度定数（ｋｏｎおよびｋｏｆｆ）ならびに平衡解離定数を、Ｆａｂ抗体断片（すなわち、一価）およびＰＣＳＫ９を使用して測定する。
【００５７】
用語「ｋｏｆｆ」は、本明細書で使用する場合、抗体／抗原の複合体から抗体が解離する場合の速度定数を指す。
【００５８】
用語「ＫＤ」は、本明細書で使用する場合、抗体−抗原間の相互作用の平衡解離定数を指す。
【００５９】
本明細書では、値またはパラメータの前に「約」を付けて言及する場合、その値またはパラメータ自体を指す具体的表現を含む（かつ記載する）。例えば、「約Ｘ」という記載は、「Ｘ」の記載も含む。数値範囲は、その範囲を定義する数を含む。
【００６０】
本明細書において、実施形態を用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を用いて記載する場合は常に、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」および／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」の観点から記載される、その他の類似の実施形態もまた提供されていることを理解されたい。
【００６１】
本発明の態様または実施形態を、マーカッシュの群としてまたはその他の一連の選択肢として記載する場合、本発明は、列挙する群全体を全て包含するのみならず、群の各メンバーを個々に包含し、主たる群の全ての可能なサブグループも包含し、また、群のメンバーのうちの１つまたは複数が存在しない主たる群も包含する。本発明はまた、特許請求する発明の群のメンバーのうちの任意の１つまたは複数が明確に排除される場合も想定する。
【００６２】
別段の定義がない限り、本明細書で使用する全ての科学技術用語は、本発明が属する分野の当業者が通常理解するのと同じ意味を有する。例示的な方法および材料を本明細書に記載するが、本明細書に記載するものに類似するまたはそれらに均等な方法および材料もまた、本発明を実行または試験する際に使用することができる。本明細書で言及する刊行物およびその他の参考文献は全て、それらの全体が参照により組み込まれている。矛盾が生じる場合には、定義を含めた、本明細書が優先する。本明細書ではいくつかの文献を引用しているが、こうした引用により、任意のこれらの文献が当技術分野における共通一般知識の一部をなすと認めることにはならない。本明細書および特許請求の範囲を通して、単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」等の変化形は、記述する整数または整数の群を包含することを意味するのであって、任意のその他の整数または整数の群を排除することを意味するのではないことを理解されたい。文脈上別段の必要性がない限り、単数形の用語は複数形を含むものとし、複数形の用語は単数形を含むものとする。材料、方法および実施例は、例示に過ぎず、それらには制限する意図はない。
【００６３】
当技術分野で周知の技法、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成の技術もしくはそのような技術の組合せ、または当技術分野で容易に理解されるその他の技術を使用して、本発明の抗体を生成することができる（例えば、Ｊａｙａｓｅｎａ，Ｓ．Ｄ．、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４５：１６２８〜５０、１９９９、およびＦｅｌｌｏｕｓｅ，Ｆ．Ａ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７３（４）：９２４〜４０、２００７を参照されたい）。
【００６４】
抗ＰＣＳＫ９抗体に関して公開されている情報は、以下の刊行物：２０１０年３月１８日にＷＯ２０１０／０２９５１３として公開されたＰＣＴ／ＩＢ２００９／０５３９９０、２０１１年１２月２０日にＵＳ８，０８０，２４３として公開された米国特許出願第１２／５５８３１２号、ＤｅＶａｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８：１０８０５〜１０８１８（２０１３）を含み、それらのそれぞれの全体が、参照により本明細書に組み込まれている。
【００６５】
例示的な方法および材料を本明細書に記載するが、本明細書に記載するものに類似するまたはそれらに均等な方法および材料もまた、本発明を実行または試験する際に使用することができる。材料、方法および実施例は、例示に過ぎず、それらには制限する意図はない。
【００６６】
高いＬＤＬ−コレステロールと関連がある障害を予防または治療するための方法
一態様では、本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に感染している対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させる方法であって、配列番号１のヒトプロタンパク質変換酵素サブチリシンケキシン９型（ＰＣＳＫ９）に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の治療有効量を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。
【００６７】
いくつかの実施形態では、ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるのに使用するための、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するアンタゴニスト抗体を提供する。
【００６８】
いくつかの実施形態では、ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるための医薬品の製造における、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合するアンタゴニスト抗体の使用を提供する。
【００６９】
本明細書に記載する方法または使用は、ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する患者の亜集団において、ＬＤＬ−コレステロールの高いレベルと関連がある状態を予防および／または治療するのに使用することができる。一変更形態では、ＨＣＶに感染している患者またはＨＣＶの高いリスクの患者のこの亜集団は、スタチンに不耐容であり、またはそうした亜集団にとって、スタチンは禁忌である。
【００７０】
ＨＣＶは、フラビウイルス科のへパシウイルス属に属する。ＨＣＶは、これらに限定されないが、肝硬変および肝細胞癌を含めた、急性および慢性の両方のＣ型肝炎感染症の主要な原因である。ＨＣＶに感染している患者の大半が、進行を示して、これらの肝臓に関連する疾患を発症する。
【００７１】
本明細書で使用する場合、「ＨＣＶに罹患する高いリスクを有する」対象は、ＨＣＶ感染症を発症するリスクがある対象を指し、それらの対象として、これらに限定されないが、静脈内（ＩＶ）薬物使用者（例えば、汚れた針の使用者（過去および現在））、医療従事者（例えば、針刺し事故）、１９９２年（例えば、ウイルススクリーニングが開始された時期）以前に血液／血液製品の輸血を受けた対象、胎児にウイルスを渡している母親、透析を長期にわたり受けている対象、ならびにヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染するリスクがあるまたは感染している対象が挙げられる。
【００７２】
コレステロールおよびリポタンパク質の代謝に関連する障害として、これらに限定されないが、高コレステロール血症（例えば、ＨｅｔＦＨまたはＨｏＦＨ）、脂質異常症（例えば、混合型脂質異常症）、高脂血症（例えば、ヘテロ接合性またはホモ接合性の家族性高脂血症およびヘテロ接合性またはホモ接合性の非家族性高脂血症）、アテローム動脈硬化症、急性冠状動脈症候群、より一般的には、心血管疾患（ＣＶＤ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＶＤまたは心血管事象として、これらに限定されないが、心筋梗塞、心不全のための入院（ＨＦ）、不安定狭心症のための入院、脳卒中、心血管（ＣＶ）死、および血管再建のための入院が挙げられる。
【００７３】
いくつかの実施形態では、方法または使用は、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの初回用量で投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に対するＬＤＬＲの結合をブロックする。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、ＬＤＬＲのＥＧＦ様ドメイン（例えば、配列番号１５、または配列番号１６のアミノ酸残基３１４〜３５３）と相互作用する。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、アリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（商標））；エボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ（商標））；ＲＥＧＮ７２８；ＬＧＴ２０９；ＲＧ７６５２；ＬＹ３０１５０１４；Ｌ１Ｌ３（例えば、ＵＳ８，０８０，２４３を参照されたい）；３１Ｈ４、１１Ｆ１、８Ａ１、８Ａ３、または３Ｃ４（例えば、ＵＳ８，０３０，４５７を参照されたい）；３００Ｎ（例えば、ＵＳ８，０６２，６４０を参照されたい）；または１Ｄ０５（例えば、ＵＳ８，１８８，２３４を参照されたい）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体は、ボコシズマブ、エボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ（商標））またはアリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（商標））である。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、配列番号１のＰＣＳＫ９のアミノ酸配列のアミノ酸残基１５３〜１５５、１９４、１９５、１９７、２３７〜２３９、３６７、３６９、３７４〜３７９および／または３８１を含む、ヒトＰＣＳＫ９上のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、配列番号１のＰＣＳＫ９のアミノ酸配列のアミノ酸残基１５３、１５４、１９４、２３８、３６９、３７４、３７７および／または３７９を含む、ヒトＰＣＳＫ９上のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体についての初回用量は、約０．０２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約１７ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、約１９ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇのうちのいずれかである。いくつかの実施形態では、維持用量を、少なくとも週１回、少なくとも２週間に１回、少なくとも３週間に１回、少なくとも４週間に１回、少なくとも５週間に１回、少なくとも６週間に１回、少なくとも７週間に１回、少なくとも８週間に１回、少なくとも９週間に１回、少なくとも１０週間に１回、少なくとも１１週間に１回、または少なくとも１２週間に１回のうちのいずれかで投与する。いくつかの実施形態では、初回用量および最初に続く用量およびさらに続く用量は相互に、少なくとも約２週間または約４週間だけ時間間隔を置く。
【００７４】
いくつかの実施形態では、方法または使用は、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、約０．２５ｍｇ〜約２０００ｍｇの一定の用量で投与するステップを含む。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、配列番号１のヒトＰＣＳＫ９に対するＬＤＬＲの結合をブロックする。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、ＬＤＬＲのＥＧＦ様ドメイン（例えば、配列番号１５、または配列番号１６のアミノ酸残基３１４〜３５３）と相互作用する。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、アリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（商標））；エボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ（商標））；ＲＥＧＮ７２８；ＬＧＴ２０９；ＲＧ７６５２；ＬＹ３０１５０１４；Ｌ１Ｌ３（例えば、ＵＳ８，０８０，２４３を参照されたい）；３１Ｈ４、１１Ｆ１、１２Ｈ１１、８Ａ１、８Ａ３、もしくは３Ｃ４（例えば、ＵＳ８，０３０，４５７を参照されたい）；３００Ｎ（例えば、ＵＳ８，０６２，６４０を参照されたい）；または１Ｄ０５（例えば、ＵＳ８，１８８，２３４を参照されたい）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、配列番号１のＰＣＳＫ９のアミノ酸配列のアミノ酸残基１５３〜１５５、１９４、１９５、１９７、２３７〜２３９、３６７、３６９、３７４〜３７９および／または３８１を含む、ヒトＰＣＳＫ９上のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、配列番号１のＰＣＳＫ９のアミノ酸配列のアミノ酸残基１５３、１５４、１９４、２３８、３６９、３７４、３７７および／または３７９を含む、ヒトＰＣＳＫ９上のエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体についての一定の用量は、約０．２５ｍｇ、約０．２５ｍｇ、０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ、約６１ｍｇ、約６２ｍｇ、約６３ｍｇ、約６４ｍｇ、約６５ｍｇ、約６６ｍｇ、約６７ｍｇ、約６８ｍｇ、約６９ｍｇ、約７０ｍｇ、約７１ｍｇ、約７２ｍｇ、約７３ｍｇ、約７４ｍｇ、約７５ｍｇ、約７６ｍｇ、約７７ｍｇ、約７８ｍｇ、約７９ｍｇ、約８０ｍｇ、約８１ｍｇ、約８２ｍｇ、約８３ｍｇ、約８４ｍｇ、約８５ｍｇ、約８６ｍｇ、約８７ｍｇ、約８８ｍｇ、約８９ｍｇ、約９０ｍｇ、約９１ｍｇ、約９２ｍｇ、約９３ｍｇ、約９４ｍｇ、約９５ｍｇ、約９６ｍｇ、約９７ｍｇ、約９８ｍｇ、約９９ｍｇ、約１００ｍｇ、約１０１ｍｇ、約１０２ｍｇ、約１０３ｍｇ、約１０４ｍｇ、約１０５ｍｇ、約１０６ｍｇ、約１０７ｍｇ、約１０８ｍｇ、約１０９ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１１１ｍｇ、約１１２ｍｇ、約１１３ｍｇ、約１１４ｍｇ、約１１５ｍｇ、約１１６ｍｇ、約１１７ｍｇ、約１１８ｍｇ、約１１９ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１２１ｍｇ、約１２２ｍｇ、約１２３ｍｇ、約１２４ｍｇ、約１２５ｍｇ、約１２６ｍｇ、約１２７ｍｇ、約１２８ｍｇ、約１２９ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１３１ｍｇ、約１３２ｍｇ、約１３３ｍｇ、約１３４ｍｇ、約１３５ｍｇ、約１３６ｍｇ、約１３７ｍｇ、約１３８ｍｇ、約１３９ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１４１ｍｇ、約１４２ｍｇ、約１４３ｍｇ、約１４４ｍｇ、約１４５ｍｇ、約１４６ｍｇ、約１４７ｍｇ、約１４８ｍｇ、約１４９ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１５１ｍｇ、約１５２ｍｇ、約１５３ｍｇ、約１５４ｍｇ、約１５５ｍｇ、約１５６ｍｇ、約１５７ｍｇ、約１５８ｍｇ、約１５９ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１６１ｍｇ、約１６２ｍｇ、約１６３ｍｇ、約１６４ｍｇ、約１６５ｍｇ、約１６６ｍｇ、約１６７ｍｇ、約１６８ｍｇ、約１６９ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１７１ｍｇ、約１７２ｍｇ、約１７３ｍｇ、約１７４ｍｇ、約１７５ｍｇ、約１７６ｍｇ、約１７７ｍｇ、約１７８ｍｇ、約１７９ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１８１ｍｇ、約１８２ｍｇ、約１８３ｍｇ、約１８４ｍｇ、約１８５ｍｇ、約１８６ｍｇ、約１８７ｍｇ、約１８８ｍｇ、約１８９ｍｇ、約１９０ｍｇ、約１９１ｍｇ、約１９２ｍｇ、約１９３ｍｇ、約１９４ｍｇ、約１９５ｍｇ、約１９６ｍｇ、約１９９ｍｇ、約１９８ｍｇ、約１９９ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３５０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４５０ｍｇ、約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇまたは約２０００ｍｇのうちのいずれかである。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、週１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、１１週間に１回、または１２週間に１回投与する。いくつかの実施形態では、両方の抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、２週間に１回または４週間に１回投与する。
【００７５】
安定用量のスタチンを投与している個体にＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、本明細書に開示する１つまたは複数の投与レジメンに従ってさらに投与することができる。安定用量とは、例えば、非限定的に、スタチンを１日に１回または２日に１回投用することであり得る。多様なスタチンが、当業者に公知であり、それらとして、例えば、非限定的に、アトルバスタチン、シンバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、およびスタチンとの組合せ療法が挙げられる。スタチンとの組合せ療法の非限定的な例として、アトルバスタチンとアムロジピン（ＣＡＤＵＥＴ（商標））、シンバスタチンとエゼチミブ（ＶＹＴＯＲＩＮ（商標））、ロバスタチンとナイアシン（ＡＤＶＩＣＯＲ（商標））、およびシンバスタチンとナイアシン（ＳＩＭＣＯＲ（商標））が挙げられる。
【００７６】
いくつかの実施形態では、個体に、安定用量のスタチンを、本明細書に記載する抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の初回用量を投与する前に少なくとも１、２、３、４、５または６週間投与している。好ましくは、安定用量のスタチンを投与している個体は、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の初回用量を投与する前は、約７０ｍｇ／ｄＬ以上の絶食時ＬＤＬ−Ｃを示す。いくつかの実施形態では、安定用量のスタチンを投与している個体は、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の初回用量を投与する前は、約８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０または２００ｍｇ／ｄＬ以上の絶食時ＬＤＬ−Ｃを示す。
【００７７】
いくつかの実施形態では、個体には、本明細書に記載するＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の初回用量を投与する前に、（例えば、１日前、１４日前、１カ月前、２カ月前、３カ月前、１年前、２年前等から）安定用量のスタチンを投与しており、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の投与レジメンとのスタチンの同時投与を開始する。
【００７８】
本発明の目的では、典型的なスタチンの用量は、上記で言及した要因に応じて、約１ｍｇ〜約８０ｍｇの範囲に及び得るであろう。例えば、約０．３ｍｇ、約０．５ｍｇ、約１ｍｇ、約２．５ｍｇ、約３ｍｇ、約４ｍｇ、約５ｍｇ、約６ｍｇ、約７ｍｇ、約８ｍｇ、約９ｍｇ、約１０ｍｇ、約１１ｍｇ、約１２ｍｇ、約１３ｍｇ、約１４ｍｇ、約１５ｍｇ、約１６ｍｇ、約１７ｍｇ、約１８ｍｇ、約１９ｍｇ、約２０ｍｇ、約２１ｍｇ、約２２ｍｇ、約２３ｍｇ、約２４ｍｇ、約２５ｍｇ、約２６ｍｇ、約２７ｍｇ、約２８ｍｇ、約２９ｍｇ、約３０ｍｇ、約３０ｍｇ、約３１ｍｇ、約３２ｍｇ、約３３ｍｇ、約３４ｍｇ、約３５ｍｇ、約３６ｍｇ、約３７ｍｇ、約３８ｍｇ、約３９ｍｇ、約４０ｍｇ、約４１ｍｇ、約４２ｍｇ、約４３ｍｇ、約４４ｍｇ、約４５ｍｇ、約４６ｍｇ、約４７ｍｇ、約４８ｍｇ、約４９ｍｇ、約５０ｍｇ、約５１ｍｇ、約５２ｍｇ、約５３ｍｇ、約５４ｍｇ、約５５ｍｇ、約５６ｍｇ、約５７ｍｇ、約５８ｍｇ、約５９ｍｇ、約６０ｍｇ、約６１ｍｇ、約６２ｍｇ、約６３ｍｇ、約６４ｍｇ、約６５ｍｇ、約６６ｍｇ、約６７ｍｇ、約６８ｍｇ、約６９ｍｇ、約７０ｍｇ、約７１ｍｇ、約７２ｍｇ、約７３ｍｇ、約７４ｍｇ、約７５ｍｇ、約７６ｍｇ、約７７ｍｇ、約７８ｍｇ、約７９ｍｇまたは約８０ｍｇのうちのいずれかのスタチンの用量を使用することができる。
【００７９】
好ましい実施形態では、４０ｍｇまたは８０ｍｇの用量のアトルバスタチンを使用する。その他の実施形態では、２０ｍｇまたは４０ｍｇの用量のロスバスタチンを使用する。その他の実施形態では、４０ｍｇまたは８０ｍｇの用量のシンバスタチンを使用する。
【００８０】
いくつかの実施形態では、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、抗ＨＣＶ薬を投与している個体に、本明細書に開示する１つまたは複数の投与レジメンに従って投与することもできる。例えば、対象には、本明細書に記載する抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の初回用量を投与する前に、抗ＨＣＶ薬、すなわち、インターフェロンアルファ（例えば、ペグ化インターフェロンアルファ２ａもしくは２ｂ；非ペグ化インターフェロン）、リバビリン、ボセプレビル、テラプレビル、ソホスブビル、レジパスビルおよび／もしくはシメプレビル、ならびに／またはそれらの任意の組合せを（例えば、少なくとも１週間）投与している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する抗ＨＣＶ薬（例えば、インターフェロンアルファおよびリバビリン等を用いる抗ウイルス組合せ療法）を対象に投与する前に、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の初回用量を投与することもできる。
【００８１】
好都合なことに、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の投与の結果、ＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の亜集団において、血中ＬＤＬ−コレステロールの低下が得られる。好ましくは、血中ＬＤＬ−コレステロールは、投与の前と比して、少なくとも約１０％または１５％低下する。より好ましくは、血中ＬＤＬ−コレステロールは、抗体の投与の前と比して、少なくとも約２０％低下する。さらにより好ましくは、血中ＬＤＬ−コレステロールは、抗体の投与の前と比して、少なくとも３０％低下する。好都合なことに、血中ＬＤＬ−コレステロールは、抗体の投与の前と比して、少なくとも４０％低下する。より好都合なことに、血中ＬＤＬ−コレステロールは、抗体の投与の前と比して、少なくとも５０％低下する。非常に好ましくは、血中ＬＤＬ−コレステロールは、抗体の投与の前と比して、少なくとも６０％低下する。最も好ましくは、血中ＬＤＬ−コレステロールは、抗体の投与の前と比して、少なくとも７０％低下する。
【００８２】
本明細書に記載する抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、対象に任意の適切な経路を介して投与することができる。本明細書に記載する実施例は、制限することを意図するのではなく、利用可能な技法を例示することを意図することが当業者には明らかであるはずである。したがって、いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、公知の方法に従って個体に投与し、投与経路には、例として、静脈内投与、例えば、ボーラスとしてもしくは一定期間にわたる連続注入による投与、皮下、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、経皮、関節内、舌下、骨膜内、送気による、くも膜下腔内、経口、吸入、または外用がある。投与は、全身投与、例えば、静脈内投与、または局所投与であり得る。ジェットネブライザーおよび超音波ネブライザーを含めた、液体製剤のために市販されているネブライザーが、投与に有用である。液体製剤は、直接噴霧することができ、凍結乾燥散剤は、再構成してから噴霧することができる。代替的に、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、フッ化炭素製剤および用量計量型吸入器を使用してエアロゾル化しても、または凍結乾燥散剤および粉砕散剤として吸入させてもよい。
【００８３】
いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、部位特異的なまたは標的に送る局所送達の技法により投与する。部位特異的なまたは標的に送る局所送達の技法の例として、種々の埋込み型のデポーの形での、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の供給源、または局所送達用カテーテル、例として、注入カテーテル、留置カテーテルもしくは針カテーテル、合成グラフト、外膜ラップ（ａｄｖｅｎｔｉｔｉａｌ  ｗｒａｐ）、シャントおよびステントもしくはその他の埋込み型装置、部位特異的担体、直接注入または直接適用が挙げられる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／５３２１１号、および米国特許第５，９８１，５６８号を参照されたい。
【００８４】
また、本明細書に記載する全ての方法に関して、任意の抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体について言及する場合は、１つまたは複数の追加の薬剤を含む組成物も含む。これらの組成物は、適切な賦形剤、例として、緩衝剤を含めた、薬学的に許容できる賦形剤をさらに含むことができ、それらは、当技術分野で周知である。本発明は、単独で使用しても、またはその他の従来からの治療法と組み合わせて使用してもよい。
【００８５】
組合せ投与のために、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の種々の製剤を使用することができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を、そのまま投与することができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体はまた、吸入により投与することができる。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体および薬学的に許容できる賦形剤を、種々の製剤となすことができる。薬学的に許容できる賦形剤は、当技術分野で公知であり、薬理学的に有効な物質の投与を促進する、比較的不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形もしくは堅牢性をもたらすこと、または希釈剤として作用することができる。適切な賦形剤として、これらに限定されないが、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、容積モル浸透圧濃度を変化させるための塩、カプセル化剤、緩衝剤、ならびに皮膚浸透増強剤が挙げられる。賦形剤、ならびに非経口および経口の薬物送達のための製剤については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００５）に記載がある。
【００８６】
これらの薬剤を、薬学的に許容できるビヒクル、例として、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液等と組み合わせることができる。特定の投与レジメン、すなわち、用量、タイミングおよび反復は、特定の個体およびその個体の病歴によって異なる。
【００８７】
許容できる担体、賦形剤または安定化剤は、利用する投与量および濃度においてレシピエントにとって無毒性であり、緩衝剤、例として、リン酸塩、クエン酸塩およびその他の有機酸；塩、例として、塩化ナトリウム；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた、抗酸化剤；保存剤（例として、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例として、メチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；ならびにｍ−クレゾール）；低分子量（約１０個未満の残基）のポリペプチド；タンパク質、例として、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例として、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例として、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含めた、単糖、二糖およびその他の炭水化物；キレート化剤、例として、ＥＤＴＡ；糖、例として、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成対イオン、例として、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質の複合体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例として、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含むことができる。
【００８８】
抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を含有するリポソームを、当技術分野で公知の方法、例として、Ｅｐｓｔｅｉｎら、１９８５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：３６８８；Ｈｗａｎｇら、１９８０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号に記載されている方法により調製する。循環時間の延長をもたらすリポソームが、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームを、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いる逆相蒸発法によって生成することができる。所望の直径を有するリポソームを得るように定義された孔径のフィルターを通して、リポソームを押し出す。
【００８９】
また、例えば、コアセルベーションの技法もしくは界面重合によって調製したマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース−もしくはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に、コロイドによる薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に、活性成分を捕捉することもできる。そのような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２００５）に開示されている。
【００９０】
持続放出性調製物を調製することができる。持続放出性調製物の適切な例には、抗体を含有する、固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリックスがあり、こうしたマトリックスは、成形した物品、例えば、フィルムの形態またはマイクロカプセルの形態をなす。持続放出性マトリックスの例として、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸と７  エチル−Ｌ−グルタミン酸とのコポリマー、非分解性エチレン−ビニルアセテート、分解性の乳酸−グリコール酸のコポリマー、例として、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸の酸性コポリマーおよび酢酸ロイプロリドで構成される注射用マイクロスフェア）、スクロースアセテートイソブチレート、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【００９１】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの投与のために使用しようとする製剤は、無菌でなければならない。このことは、例えば、無菌のろ過用メンブランを通してろ過することによって容易に達成される。治療用の抗ＰＣＳＫ９のアンタゴニスト抗体は一般に、無菌のアクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液用バッグまたは皮下注射針を突き通すことが可能な栓を有するバイアル内に供される。
【００９２】
市販されている脂肪エマルジョン、例として、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）を使用して、適切なエマルジョンを調製することができる。活性成分を、あらかじめ混合したエマルジョン組成物中に溶解させること、または代替的に、活性成分を油（例えば、大豆油、紅花油、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油もしくは扁桃油）中に溶解させ、リン脂質（例えば、卵リン脂質、大豆リン脂質もしくは大豆レシチン）および水と混合して、エマルジョンを形成させることのいずれかが可能である。エマルジョンの浸透圧を調節するために、その他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコースを添加することもできることが理解されるであろう。適切なエマルジョンは典型的には、最高２０％、例えば、５〜２０％の油を含有する。脂肪エマルジョンは、０．１〜１．０μｍ、特に、０．１〜０．５μｍの脂肪の小滴を含むことができ、５．５〜８．０の範囲のｐＨを有し得る。
【００９３】
エマルジョン組成物は、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体をＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはその構成成分（大豆油、卵リン脂質、グリセロールおよび水）と混合することによって調製した組成物であり得る。
【００９４】
吸入または送気のための組成物は、薬学的に許容できる水性溶媒もしくは有機溶媒またはそれらの混合物中の溶液および懸濁剤、ならびに散剤を含む。液体または固体の組成物は、上記に記載した適切な薬学的に許容できる賦形剤を含有することができる。いくつかの実施形態では、組成物を口または鼻の呼吸経路により投与して、局所作用または全身作用を得る。好ましくは無菌の薬学的に許容できる溶媒中の組成物を、ガスの使用により噴霧することができる。噴霧した溶液を、噴霧装置から直接呼吸させてもよく、または噴霧装置を、顔面マスク、テント、もしくは断続的に陽圧になる人工呼吸器につないでもよい。製剤を適切な様式で送達する装置から、溶液、懸濁剤または散剤の組成物を、好ましくは、口または鼻から投与することができる。
【００９５】
ＰＣＳＫ９のアンタゴニスト抗体
以下に、本発明に従って使用する抗体を生成するための例示的な技法について記載する。抗体を生成するために使用しようとするＰＣＳＫ９抗原は、例えば、完全長ヒトＰＣＳＫ９、完全長マウスＰＣＳＫ９、およびＰＣＳＫ９の種々のペプチド断片であり得る。当業者にとっては、抗体を生成するのに有用なＰＣＳＫ９のその他の形態も明らかであろう。
【００９６】
理解されるように、本発明において使用するための抗体は、ハイブリドーマから得ることができるが、ハイブリドーマ以外の細胞株中で発現させることもできる。特定の抗体についてのｃＤＮＡまたはゲノムのクローンをコードする配列を使用して、適切な哺乳動物または非哺乳動物の宿主細胞の形質転換を行うことができる。発現のための宿主として利用可能な哺乳動物の細胞株が、当技術分野で周知であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化細胞株を含み、それらとして、これらに限定されないが、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳＯ、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）およびヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ  Ｇ６）が挙げられる。細菌、酵母、昆虫および植物の細胞を含めた、非哺乳動物細胞もまた利用することができる。非ヒトグリコシル化から生じる免疫原性、薬物動態学的機能および／またはエフェクター機能のいずれかの変化を阻止するために、抗体のＣＨ６ドメインの部位特異的突然変異誘発を行って、グリコシル化を排除することが好ましい場合がある。グルタミンシンターゼ発現系が、その全部または一部について、欧州特許第６１６８４６号、第６５６０５５号および第３６３９９７号、ならびに欧州特許出願第８９３０３９６４．４号に関連して論じられている。さらに、抗体を生成するために、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）発現系を、当技術分野で公知のものを含めて、使用することもできる。
【００９７】
いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を使用して、本発明を実行し、この抗体は、ヒトＰＣＳＫ９（例えば、配列番号１）のＬＤＬＲへの結合をブロックする。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、ＬＤＬＲのＥＧＦ様ドメイン（例えば、配列番号１５、または配列番号１６のアミノ酸残基３１４〜３５３）と相互作用する。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、アリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（商標））；エボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ（商標））；ＲＥＧＮ７２８；ＬＧＴ２０９；ＲＧ７６５２；ＬＹ３０１５０１４；Ｌ１Ｌ３（例えば、ＵＳ８，０８０，２４３を参照されたい）；３１Ｈ４、１１Ｆ１、１２Ｈ１１、８Ａ１、８Ａ３、もしくは３Ｃ４（例えば、ＵＳ８，０３０，４５７を参照されたい）；３００Ｎ（例えば、ＵＳ８，０６２，６４０を参照されたい）；または１Ｄ０５（例えば、ＵＳ８，１８８，２３４を参照されたい）である。いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９抗体は、ボコシズマブ、エボロクマブ（ＲＥＰＡＴＨＡ（商標））またはアリロクマブ（ＰＲＡＬＵＥＮＴ（商標））である。
【００９８】
いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を使用して、本発明を実行し、この抗体は、ヒトＰＣＳＫ９（例えば、配列番号１）のアミノ酸残基１５３〜１５５、１９４、１９５、１９７、２３７〜２３９、３６７、３６９、３７４〜３７９および／または３８１を含む、ヒトＰＣＳＫ９のエピトープを認識する。
【００９９】
いくつかの実施形態では、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を使用して、本発明を実行し、この抗体は、ヒトＰＣＳＫ９（例えば、配列番号１）のアミノ酸残基１５３、１５４、１９４、２３８、３６９、３７４、３７７および／または３７９を含む、ヒトＰＣＳＫ９のエピトープを認識する。
【０１００】
いくつかの実施形態では、抗体を使用して、本発明を実行し、この抗体は、配列番号２に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域に由来する３つのＣＤＲおよび配列番号３に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域に由来する３つのＣＤＲを含む。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、ＰＣＳＫ９に特異的に結合する抗体を使用して、本発明を実行し、この抗体は、配列番号４（ＳＹＹＭＨ）、配列番号５（ＧＹＴＦＴＳＹ）もしくは配列番号６（ＧＹＴＦＴＳＹＹＭＨ）に示すアミノ酸配列を有するＶＨの相補性決定領域１（ＣＤＲ１）；配列番号７（ＥＩＳＰＦＧＧＲＴＮＹＮＥＫＦＫＳ）もしくは配列番号８（ＳＰＦＧＧＲ）に示すアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ２、ならびに／または配列番号９（ＥＲＰＬＹＡＳＤＬ）に示すアミノ酸配列を有するＶＨ  ＣＤＲ３、または、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３の前記配列中に１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそれらのバリアントを含み、このバリアントは、前記配列が定義するＣＤＲと同じ結合特異性を本質的に保持する。好ましくは、バリアントは、最高約１０個のアミノ酸置換を含み、より好ましくは、最高約４つのアミノ酸置換を含む。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、抗体を使用して、本発明を実行し、この抗体は、配列番号１０（ＲＡＳＱＧＩＳＳＡＬＡ）に示すアミノ酸配列を有するＶＬ  ＣＤＲ１、配列番号１１（ＳＡＳＹＲＹＴ）に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、ならびに／もしくは配列番号１２（ＱＱＲＹＳＬＷＲＴ）に示すアミノ酸配列を有するＣＤＲ３、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２および／もしくはＣＤＲ３の前記配列中に１つもしくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそれらのバリアントを含み、このバリアントは、前記配列が定義するＣＤＲ１と同じ結合特異性を本質的に保持する。好ましくは、バリアントは、最高約１０個のアミノ酸置換を含み、より好ましくは、最高約４つのアミノ酸置換を含む。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、抗体を使用して、本発明を実行し、この抗体は、配列番号１４のＣ末端のリジンありまたはなしの、配列番号１４を含むまたはそれからなる重鎖配列および配列番号１３を含むまたはそれからなる軽鎖配列を有する。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、抗体を使用して、本発明を実行し、この抗体は、配列番号１１に示すアミノ酸配列を含むまたはそれからなる重鎖可変領域および配列番号１２に示すアミノ酸配列を含むまたはそれからなる軽鎖可変領域を有する。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、抗体を使用して、本発明を実行し、この抗体は、５Ａ１０、４Ａ５、６Ｆ６および７Ｄ４からなる群から選択されるモノクローナル抗体が認識する第２のエピトープと同じである、またはそうした第２のエピトープとオーバーラップするＰＣＳＫ９の第１のエピトープを認識し；５Ａ１０は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され、受託番号：ＰＴＡ−８９８６が割り当てられているハイブリドーマ細胞株によって生成され；４Ａ５は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され、受託番号：ＰＴＡ−８９８５が割り当てられているハイブリドーマ細胞株によって生成され；６Ｆ６は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され、受託番号：ＰＴＡ−８９８４が割り当てられているハイブリドーマ細胞株によって生成され、７Ｄ４は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され、受託番号：ＰＴＡ−８９８３が割り当てられているハイブリドーマ細胞株によって生成される。好ましい実施形態では、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体Ｌ１Ｌ３を使用して、本発明を実行する（２０１０年３月１８日にＷＯ２０１０／０２９５１３として公開されたＰＣＴ／ＩＢ２００９／０５３９９０、および２０１０年３月１８日にＵＳ２０１０／００６８１９９として公開された米国特許出願第１２／５５８３１２号を参照されたい）。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体のバリアントは、最高約２０個のアミノ酸置換、より好ましくは、最高約８個のアミノ酸置換を含む。好ましくは、抗体は、免疫学的に不活性な定常領域をさらに含み、かつ／または抗体は、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４、ＩｇＧ２Δａ、ＩｇＧ４Δｂ、ＩｇＧ４Δｃ、ＩｇＧ４  Ｓ２２８Ｐ、ＩｇＧ４Δｂ  Ｓ２２８Ｐ、およびＩｇＧ４Δｃ  Ｓ２２８Ｐからなる群から選択されるアイソタイプを有する。別の好ましい実施形態では、定常領域は、脱グリコシル化Ｆｃである。
【０１０７】
本発明において有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ等）、キメラ抗体、二特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、単鎖（ｓｃＦｖ）、それらの突然変異体、抗体の一部を含む融合タンパク質（例えば、ドメイン抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ならびに免疫グロブリン分子の任意のその他の改変された立体配置を包含することができ、そうした立体配置は、必要とされる特異性を示す抗原を認識する部位を含み、これらには、抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアントおよび共有結合性に改変された抗体が含まれる。抗体は、（キメラ抗体もしくはヒト化抗体を含めて）マウス、ラット、ヒトまたは任意のその他を起源とし得る。
【０１０８】
いくつかの実施形態では、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、モノクローナル抗体である。ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体はまた、ヒト化抗体であってもよい。その他の実施形態では、抗体はヒト抗体である。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、抗体は、改変された定常領域、例として、免疫学的に不活性である、すなわち、免疫応答を引き起こす可能性を低下させた定常領域を含む。いくつかの実施形態では、定常領域を、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９、２９：２６１３〜２６２４；ＰＣＴ公開第ＷＯ９９／５８５７２号；および／または英国特許出願第９８０９９５１．８号の記載に従って改変する。Ｆｃは、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４であり得る。Ｆｃは、Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１への突然変異を含有するヒトＩｇＧ２であり得（ＩｇＧ２Δａ）、この場合、アミノ酸残基の番号付けは、野生型ＩｇＧ２の配列を参照している。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９、２９：２６１３〜２６２４。いくつかの実施形態では、抗体は、以下の突然変異：Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５への突然変異を含むＩｇＧ４の定常領域を含み（ＩｇＧ４Δｃ）（Ａｒｍｏｕｒら、２００３、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０  ５８５〜５９３）、この場合、番号付けは、野生型ＩｇＧ４を参照している。さらに別の実施形態では、Ｆｃは、Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５への突然変異、および欠失Ｇ２３６を有するヒトＩｇＧ４である（ＩｇＧ４Δｂ）。別の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８からＰ２２８への、ヒンジを安定化させる突然変異を含有するヒトＩｇＧ４のＦｃのいずれかである（ＩｇＧ４、ＩｇＧ４ΔｂまたはＩｇＧ４Δｃ）（Ａａｌｂｅｒｓｅら、２００２、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １０５、９〜１９）。別の実施形態では、Ｆｃは、脱グリコシル化Ｆｃであり得る。
【０１１０】
いくつかの実施形態では、定常領域中のグリコシル化認識配列の一部であるオリゴ糖につながる残基（例として、Ａｓｎ２９７）および／またはオリゴ糖に隣接する残基を突然変異させることによって、定常領域を脱グリコシル化する。いくつかの実施形態では、Ｎ連結型グリコシル化について、定常領域を酵素により脱グリコシル化する。Ｎ連結型グリコシル化について、定常領域を、酵素により、またはグリコシル化欠損宿主細胞中で発現させることによって脱グリコシル化することができる。
【０１１１】
また、本明細書に記載する抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体は、その他のＰＣＳＫ９のアンタゴニスト、またはＰＣＳＫ９受容体アンタゴニストと併せて使用することもできる。例えば、以下のＰＣＳＫ９のアンタゴニスト：ＰＣＳＫ９に対するアンチセンス分子（ＰＣＳＫ９をコードする核酸に対するアンチセンス分子を含む）、ＰＣＳＫ９を阻害する化合物およびＰＣＳＫ９の構造類似体のうちの１つまたは複数を使用することができる。ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体はまた、薬剤の有効性を増強および／または補足するのに役立つその他の薬剤と併せて使用することもできる。
【０１１２】
キット
本発明はまた、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体および使用説明を含むキットまたは製造品も提供する。したがって、いくつかの実施形態では、容器、容器内の、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を含む組成物、およびＨＣＶに感染しているまたはＨＣＶに罹患する高いリスクを有する対象の血液中のＬＤＬ−コレステロールのレベルを低下させるために治療有効量のＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体を投与するための使用説明を含有する添付文書を含むキットまたは製造品を提供する。
【０１１３】
本発明のキットは、本明細書に記載する抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体および本明細書に記載する本発明の方法に従って使用するための使用説明を含む１つまたは複数の容器を含む。一般に、これらの使用説明は、上記に記載した治療処置のための抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の投与についての記載を含む。いくつかの実施形態では、単回投与のための投与単位を作製するためのキットを提供する。特定の実施形態では、キットは、乾燥タンパク質を有する第１の容器および水性製剤を有する第２の容器の両方を含有することができる。特定の実施形態では、単一チャンバー型および複数チャンバー型のプレフィルドシリンジ（例えば、液剤用シリンジおよびリオシリンジ）を含有するキットを含む。
【０１１４】
抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体の使用に関する使用説明は一般に、意図する治療のための投与量、投与スケジュールおよび投与経路についての情報を含む。容器は、単位用量、バルク包装（例えば、多回用量包装）またはサブユニット用量であってよい。本発明のキット中に供給する使用説明は、典型的には、ラベルもしくは添付文書（例えば、キット中に含まれる紙シート）上の書面による使用説明であるが、コンピュータが読み取れる使用説明（例えば、磁気的もしくは光学的な保存ディスク上に存在する使用説明）も許容される。
【０１１５】
本発明のキットは、適切な包装中にある。適切な包装として、これらに限定されないが、バイアル、ボトル、瓶、フレキシブル包装（例えば、Ｍｙｌａｒ製またはプラスチック製の密封されたバッグ）等が挙げられる。また、特定の装置、例として、吸入器、鼻からの投与のための装置（例えば、アトマイザー）、またはミニポンプ等の注入のための装置と組み合わせて使用するための包装も企図される。キットは、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内投与液剤用バッグ、または皮下注射針を突き通すことが可能な栓を有するバイアルであり得る）。また、容器が、無菌のアクセスポートを有してもよい（例えば、容器が、静脈内投与液剤用バッグ、または皮下注射針を突き通すことが可能な栓を有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤が、抗ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体である。容器が、第２の薬学的に活性な薬剤をさらに含む場合がある。
【０１１６】
キットは、追加の構成成分、例として、緩衝剤および説明のための情報を任意選択により提供してもよい。通例、キットは、容器、および容器上のまたは容器に付随するラベルまたは添付文書を含む。
【０１１７】
以下の実施例を提供する目的は、例示のために限られ、これらの実施例には、いかなる場合であっても本発明の範囲を制限する意図はない。実際に、本明細書に示し、記載したものに加えて、本発明の種々の改変形態が、上記の記載から当業者に明らかになり、それらは、添付の特許請求の範囲に属する。
【実施例】
【０１１８】
本発明を、以下の非限定的な実施例によりさらに詳細に例示する。ここで提供する一般的な記載を考慮すれば、その他の実施形態も実行することができることを理解されたい。
【０１１９】
（実施例１）
抗ＰＣＳＫ９抗体５Ａ１０は、肝臓におけるＣＤ８１の発現に対して作用しない
この実施例は、ＰＣＳＫ９への拮抗作用は、マウス肝臓におけるＣＤ８１の発現レベルに影響を及ぼさないことを示している。
【０１２０】
６匹のＣ５７Ｂ１６雄マウス、１２週齢を、それぞれ３匹のマウス（ｎ＝３）の２つの群にランダムに割り当てた。各群に、５Ａ１０（Ｌ１Ｌ３ためのマウス前駆体）またはアイソタイプの対照の抗体を、２０ｍｇ／ｋｇでＩＶ投与により与えた。処置後の第７日に、マウスを屠殺し、肝臓の左葉からのおよそ０．２ｇの小片を、各動物から収集し、急速凍結して、ＣＤ８１の発現レベルの決定を行った。
【０１２１】
収集した肝臓組織を、挽き、氷上の溶解用緩衝液中に溶解させた。ＢＣＡアッセイのキットを使用して、肝臓の総タンパク質濃度を測定した。ウエスタンブロットを使用して、収集した肝臓組織試料からＣＤ８１タンパク質の発現レベルを決定した。ウエル１つ当たり計０．０４ｍｇのタンパク質を、４〜１２％のＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ  Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ  Ｇｅｌ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）上に充填し、２００ボルトで４０分間流した。ｉＢｌｏｔ（登録商標）Ｇｅｌ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｓｔａｃｋ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、タンパク質をニトロセルロース製メンブランに転写した。次いで、メンブランを、Ｏｄｙｓｓｅｙ（登録商標）ブロック用緩衝液（ＬＩ−ＣＯＲ、Ｐ／Ｎ９２７−４００００）中、室温で１時間ブロックした。抗ＣＤ８１（ウサギ抗ＰＣＳＫ９；Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ）、抗ＬＤＬＲ（ヤギ抗ヒト；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）、または抗ベータ−アクチンの一次抗体をそれぞれ、Ｏｄｙｓｓｅｙブロック用緩衝液中で１：１０００、１：２０００および１：２０００に希釈した。続いて、転写したメンブランを、一次抗体と共に、４℃で一晩（抗ＣＤ８１の場合）または室温で１時間（抗ＬＤＬＲおよび抗ベータ−アクチンの場合）穏やかに振とうしながらインキュベートした。メンブランを、異なる一次抗体と共にインキュベートした後、洗浄し、蛍光標識した二次抗体（Ｏｄｙｓｓｅｙブロック用緩衝液中で１：１０，０００に希釈したヤギ抗マウスＩＲＤｙｅ（登録商標）８００ＣＷ）と共に、室温で１時間穏やかに振とうしながらインキュベートした。最後に、メンブランを、洗浄し、Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｍａｇｅｒ（ＬＩ−ＣＯＲ）を用いて、８００ｎｍのチャネルでスキャンした。その上、Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｍａｇｅｒを使用して、各バンドのシグナル強度も定量化した。
【０１２２】
図１に示すように、５Ａ１０を用いて処置したマウスにおいては、誘発された肝臓中のＬＤＬＲタンパク質レベルは、ウエスタンにより検出すると、対照マウスの肝臓試料と比較する場合、およそ２倍であり、一方、これらの動物において、ＣＤ８１レベルは、顕著には改変されなかった。図２は、各群のウエスタンブロットのバンドのシグナル強度の量を、棒グラフを用いて示した。結論として、マウスの肝臓ＣＤ８１タンパク質レベルは、抗体処置によるＰＣＳＫ９への拮抗作用の影響を受けなかった。
【０１２３】
（実施例２）
ＰＣＳＫ９媒介型のＣＤ８１の分解
この実施例は、ＰＣＳＫ９は、表面暴露ＣＤ８１の分解をＬＤＬＲに対する場合に類似する様式で媒介すること、およびＰＣＳＫ９への拮抗作用は、ＣＤ８１の発現レベルに影響を及ぼさないことを示している。
【０１２４】
ＨｅｐＧ２細胞を、１０％ＦＢＳ、Ｌ−グルタミンおよびｐｅｎ−ｓｔｒｅｐを補充したＤＭＥＭ中で培養した。ＨｅｐＧ２細胞を、処置の２４時間前に、カバーガラス上または１２ウエルの組織培養プレート上に蒔いた。次いで、ＨｅｐＧ２細胞に、３００ｎＭ中のＰＣＳＫ９を添加し、続いて、３００ｎＭのＩＣまたは３００ｎＭのＬ１Ｌ３による処置を行った。６時間後、細胞を処理して、免疫蛍光法分析を行った。
【０１２５】
処置した細胞を、４％ホルムアルデヒドを用いて固定し、透過性処理し、ＰＢＳ中の２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ、１０％ロバ血清および３００ｎＭグリシンを用いてブロックした。ブロックした後に、カバーガラスを、３μｇ／ｍｌのマウス抗ＣＤ８１（ＢｉｏＲａｄ）またはヤギ抗ＬＤＬＲ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）と共に４度で一晩インキュベートした。カバーガラスを、洗浄の後、２μｇ／ｍｌのロバ抗マウス６４７またはロバ抗ヤギ５４６の二次抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と共に１時間インキュベートし、ＤＡＰＩを有するＰｒｏｌｏｎｇ  ｇｏｌｄ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してマウントした。
【０１２６】
Ｌｅｉｃａ  ＳＰ３レーザー走査共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ、Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を使用して、処置した細胞の画像を獲得した。共焦点顕微鏡上で、６３×、１．４ＮＡ対物レンズを使用して、０．５μｍの刻みを有するｚスタックから得られた顕微鏡法の画像を室温で収集した。示される全ての画像は、光学切片の投影である。Ｌｅｉｃａ  ＬＡＳ  ＡＦソフトウエアを使用して、データ解析を行った。少なくとも４５個（または５０個）の細胞から、内部移行を、細胞１つ当たりの蛍光シグナルの強度として定量化した。
【０１２７】
図３Ａおよび図３Ｂは、ＰＣＳＫ９で処理した細胞は、未処理の細胞と比して、ＣＤ８１レベルの顕著な低下を示したことを示し、このことは、ＰＣＳＫ９が、ＬＤＬＲを調節する場合ほどには有効でないが、ＣＤ８１レベルを調節することを意味している。さらに、Ｌ１Ｌ３は、ＰＣＳＫ９のこの機能をブロックしない。というのは、Ｌ１Ｌ３が結合しているＰＣＳＫ９は、表面ＣＤ８１に対して、アイソタイプの対照と組み合わせたＰＣＳＫ９と同じ作用を示したからである。
【０１２８】
（実施例３）
ＣＤ８１およびＬＤＬＲのＰＣＳＫ９用量依存性の喪失
この実施例は、ＣＤ８１およびＬＤＬＲの分解は、ＰＣＳＫ９の用量に依存すること、ならびにＰＣＳＫ９の作用に拮抗をもたらしても、ＰＣＳＫ９媒介型のＣＤ８１の分解は回復しないことを示している。
【０１２９】
異なる濃度のＰＣＳＫ９（例えば、３．１ｎＭ、６．３ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、２００ｎＭ）を用いて、またはＰＣＳＫ９とＬ１Ｌ３とを一緒にもしくはＰＣＳＫ９とアイソタイプの対照の抗体とを一緒に用いて、ＨｅｐＧ２細胞を数時間かけて処置した。細胞を６時間後に収集して、ウエスタンブロット分析を行った。
【０１３０】
ウエスタンブロットのために、最初に、溶解液を、収集し、４〜１２％のＢｉｓ−Ｔｒｉｓ  ｇｅｌ上で流し、ニトロセルロース製メンブランに転写した。ニトロセルロース製メンブランを、Ｏｄｙｓｓｅｙブロック用緩衝液を用いてブロックし、一次抗体（ＬＤＬＲ、ＴＦＮＲ（マウス抗ヒト；Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、またはＣＤ８１）と共に少なくとも１時間インキュベートし、洗浄し、二次抗体（ロバ抗マウス６８０、ロバ抗ヤギ８００、ヤギ抗ウサギ６８０またはヤギ抗マウス８００（Ｌｉｃｏｒ））と共にインキュベートしてから、Ｌｉｃｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙ撮像システム上で撮像を行った。積分強度シグナルを、Ｏｄｙｓｓｅｙソフトウエアを使用して測定し、トランスフェリン受容体（ＴＦＮＲ；図の凡例に示す）に対して正規化した。
【０１３１】
図４のウエスタンブロット分析から、ＰＣＳＫ９の存在下の、ＣＤ８１およびＬＤＬＲの用量依存性の喪失が示された。抗ＰＣＳＫ９抗体Ｌ１Ｌ３は、ＬＤＬＲのレベルを回復させたが、ＰＣＳＫ９媒介型のＣＤ８１の分解は回復させなかった。さらに、Ｌ１Ｌ３またはＩＣの存在下でも非存在下でも、ＰＣＳＫ９の最も高い濃度において、総ＣＤ８１のおよそ２５％が分解した。総合すると、この実施例は、ＰＣＳＫ９が、ＣＤ８１を、Ｌ１Ｌ３の結合によっては阻害されない特有のエピトープを介して分解することを示している。
【０１３２】
（実施例４）
Ｌ１Ｌ３をスタチンと組み合わせて複数回投与した後の薬物動態および薬物動力学
この実施例は、臨床治験研究を示しており、この研究では、スタチンを投与している、ＨＣＶ感染を有するヒト対象において、ＰＣＳＫ９アンタゴニスト抗体（Ｌ１Ｌ３）を複数回皮下投与した後に、ＬＤＬ−Ｃレベルを評価する。
【０１３３】
この研究は、無作為化、多施設、二重盲検プラセボ対照並行群間用量設定試験を行うように設計された治験であって、スタチンを投与している高コレステロール血症の対象において、Ｌ１Ｌ３を月１回および月２回６カ月間皮下投与した後の、Ｌ１Ｌ３の効能、安全性および耐容性を評価するための治験である。総数１４の投与群（ＨＣＶ感染あり：７群；ＨＣＶ感染なし：７群）を設け、これらを、２つの投与スケジュール（Ｑ２８ｄまたはＱ１４ｄ）に分け、各投与群に５０人の対象を割付けた。プロトコールの設計を、表１に記載する。
【０１３４】
【表１】
2017523980.tif 000003
【０１３５】
適格性：年齢１８歳以上。
組入れ基準：対象には、いずれかのスタチンの安定用量を（少なくとも６週間）投与しており、同じ用量のスタチンをこの治験の間投与し続けなければならない。スクリーニング時および第１日における無作為化の少なくとも７日前に行われる、２回のスクリーニング検査の際に、脂質の値は、スタチンを用いる基礎治療についての以下の基準を満たさなければならない：絶食時ＬＤＬ−Ｃが８０ｍｇ／ｄＬ（２．３１ミリモル／Ｌ）以上；絶食時ＴＧが４００ｍｇ／ｄＬ（４．５２ミリモル／Ｌ）以下。この治験についての適格性の基準を満たすためには、対象の絶食時ＬＤＬ−Ｃは、最初のスクリーン検査において、８０ｍｇ／ｄＬ（２．３１ミリモル／Ｌ）以上でなければならず、無作為化の前の７日以内の２回目の検査における値は、この最初の値の２０％未満であってはならない。
【０１３６】
主要転帰の測定項目は、無作為化後の第１２週の終わりの、ＬＤＬ−Ｃのベースラインからの絶対変化である。副次的転帰の測定項目は、以下を含む：無作為化後の第１２週の終わりに、ベースラインからの％変化として評価する、ＬＤＬ−Ｃ；血漿濃度から得る、定常状態のＬ１Ｌ３の薬物動態学的パラメータ；特定の限度未満（１００ｍｇ／ｄＬ未満、７０ｍｇ／ｄＬ未満、４０ｍｇ／ｄＬ未満、２５ｍｇ／ｄＬ未満）のＬＤＬ−Ｃを示す、対象の比率；無作為化後の第１２週の終わりに、ベースラインからの変化および％変化として評価する、総コレステロール；無作為化後の第１２週の終わりに、ベースラインからの変化および％変化として評価する、ＡｐｏＢ；無作為化後の第１２週の終わりに、ベースラインからの変化および％変化として評価する、ＡｐｏＡ１；無作為化後の第１２週の終わりに、ベースラインからの変化および％変化として評価する、リポタンパク質（ａ）；無作為化後の第１２週の終わりに、ベースラインからの変化および％変化として評価する、ＨＤＬ−コレステロール；無作為化後の第１２週の終わりに、ベースラインからの変化および％変化として評価する、超低密度リポタンパク質−コレステロール；無作為化後の第１２週の終わりに、ベースラインからの変化および％変化として評価する、トリグリセリド；ならびに無作為化後の第１２週の終わりに、ベースラインからの変化および％変化として評価する、非ＨＤＬ−コレステロール。
【０１３７】
開示する教示を、種々の適用例、方法、キットおよび組成物を参照しながら記載してきたが、本明細書の教示および下記に特許請求する発明から逸脱することなく、種々の変化形態および改変形態を作製することができることが理解されるであろう。上記の実施例は、開示する教示をより良好に例示するために提供し、これらの実施例には、本明細書に提示する教示の範囲を制限する意図はない。提示する教示を、これらの例示的な実施形態に関して記載してきたが、当業者であれば、これらの例示的な実施形態の多数の変更形態および改変形態が、過度の実験をせずとも可能であることを容易に理解するであろう。そのような変更形態および改変形態は全て、現在の教示の範囲に属する。
【０１３８】
特許、特許出願、論文、教科書等を含めた、本明細書に引用する全ての参考文献、およびまだ引用されていない場合の、それらの中で引用される参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。組み込まれている文献および類似の資料の１つまたは複数が、これらに限定されないが、用語の定義、用語の使用法、記載する技法等を含めた、本出願と異なるまたは矛盾する場合は、本出願が優先する。
【０１３９】
上記の記載および実施例により、本発明の特定の具体的な実施形態を詳述し、本発明者らが企図する最良のモードを記載している。しかし、上記が文書としてどんなに詳細に記載されているように見えようと、多くの様式で本発明を実行することができ、本発明は添付の特許請求の範囲に従って解釈すべきであり、それらの均等物はいずれも本発明に属するはずであることが理解されるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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