(57)【要約】  本発明は、虚血性再灌流障害に対するミトコンドリアを標的とした療法をはじめとする、一般的な疾患および希少疾患の両方に対して使用される有効成分である、Ｄ−アルギニル−２，６−ジメチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニンアミドの液相合成の方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
酢酸塩の形態の、式（Ｉ）のＨ−Ｄ−Ａｒｇ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２
【化１】
2017523956.tif 000015
を、液相において製造するための方法であって、
下記の工程を含む：
−  化合物（II）Ｈ−Ｐｈｅ−ＮＨ２：
【化２】
2017523956.tif 000016
を、化合物（III）Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨ：
【化３】
2017523956.tif 000017
とカップリングさせて、式（IV）、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２：
【化４】
2017523956.tif 000018
の化合物を得る工程；
−  化合物（IV）をメタンスルホン酸（Ｖ）
ＭｅＳＯ３Ｈ（Ｖ）
と反応させて、遊離アミン塩（VI）ＭｅＳＯ３Ｈ・Ｈ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２：
【化５】
2017523956.tif 000019
を得る工程；
−  塩（VI）を、保護されたアミノ酸Ｂｏｃ−Ｄｍｔ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（VII）
【化６】
2017523956.tif 000020
と、反応させて、保護されたトリペプチド（VIII）：
【化７】
2017523956.tif 000021
を得る工程；
−  化合物（VIII）をメタンスルホン酸（Ｖ）で処理して、対応する塩（IX）、ＭｅＳＯ３・Ｈ−Ｄｍｔ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２：
【化８】
2017523956.tif 000022
を得る工程；
−  酸塩（IX）を、Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＮａ（Ｘ）
【化９】
2017523956.tif 000023
とカップリングさせて、保護されたテトラペプチド（XI）、Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２：
【化１０】
2017523956.tif 000024
を形成する工程；
−  水素化分解によって、化合物（XI）を脱保護して、テトラペプチドＨ−Ｄ−Ａｒｇ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（Ｉ）を得、さらに、酢酸でそれを塩化して、対応する塩を形成する工程；
ことを特徴とする、方法。
【請求項２】
（II）と（III）の間のカップリング、および／または
（VI）と（VII）の間のカップリング、および／または
（IX）と（Ｘ）の間のカップリングが、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウム  テトラフルオロボレートの存在下で実施される
ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（II）と（III）の間のカップリング、および／または
（VI）と（VII）の間のカップリング、および／または
（IX）と（Ｘ）の間のカップリングが、
好ましくは、Ｎ−メチルモルホリン、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンから選択される、第三級アミンの存在下で実施される
ことを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
（II）と（III）の間のカップリング、および／または
（VI）と（VII）の間のカップリング、および／または
（IX）と（Ｘ）の間のカップリングが、
好ましくは、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフラン、またはこれらの混合物から選択される、有機極性溶媒中で実施される
ことを特徴とする、請求項１〜３に記載の方法。
【請求項５】
（II）と（III）の間のカップリングが、０℃と６０℃の間、好ましくは、２０℃と３０℃の間の温度範囲で実施される
ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
メタンスルホン酸塩（VI）の形成が、溶媒としての塩化メチレン中で得られ、同じ溶媒から結晶化される
ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
（VI）と（VII）の間のカップリングが、０℃と６０℃の間、好ましくは、２０℃と３０℃の間の温度範囲で実施される
ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
（IX）と（Ｘ）の間のカップリングが、０℃と６０℃の間、好ましくは、２０℃と３０℃の間の温度範囲で実施される
ことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
最終の脱保護が、水素化によって実施される
ことを特徴とする、請求項１〜８に記載の方法。
【請求項１０】
式（IV）の化合物：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２。
【化１１】
2017523956.tif 000025
【請求項１１】
式（XIII）の化合物Ｈ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２  またはその塩：
【化１２】
2017523956.tif 000026
【請求項１２】
式（VIII）の化合物：Ｂｏｃ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２。
【化１３】
2017523956.tif 000027
【請求項１３】
式（XIV）の化合物Ｈ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２  またはその塩：
【化１４】
2017523956.tif 000028
【請求項１４】
メタンスルホン酸塩の形態の、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
式（XI）の化合物Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２。
【化１５】
2017523956.tif 000029
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、虚血性再灌流障害に対するミトコンドリアを標的とした療法をはじめとする、一般的な疾患および希少疾患の両方に対して、治験薬の商標名  Ｂｅｎｄａｖｉａ（登録商標）およびＯｃｕｖｉａ（登録商標）のもとで、Ｓｔｅａｌｔｈ  ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓによって開発された有効成分である、式（Ｉ）のＤ−アルギニル−２，６−ジメチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ２と略称され、開発コード  ＳＳ−３１、ＭＴＰ−１３１、ＲＸ−３１）を液相合成する方法に関する。
【０００２】
【化１】
2017523956.tif 000002
【背景技術】
【０００３】
背景
この生成物は、いわゆる「Ｓｚｅｔｏ−Ｓｃｈｉｌｌｅｒペプチド」型に属する。Ｓｚｅｔｏ−Ｓｃｈｉｌｌｅｒペプチドまたは「ＳＳペプチド」は、細胞膜を容易に貫通することができる、US 6,703,483およびUS 7,576,061に開示されているような、小さい、芳香族-陽イオン性、水溶性、高極性のペプチドである。芳香族-陽イオン性ペプチドは、ペプチド結合により共有結合した、最少で２個のアミノ酸を含み、好ましくは、最少で４個のアミノ酸を含む。アミノ酸の最大数は、ペプチド結合により共有結合した約２０個のアミノ酸である。EP 2012/2436390によって記載されているように、最適には、ＳＳペプチドに存在するアミノ酸の数は、４個である。
【０００４】
Ｂｅｎｄａｖｉａ（登録商標）は、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）を有する患者における虚血性再灌流障害の治療用途、高血圧症における急性腎障害（ＡＫＩ）および腎臓の微小血管機能障害の治療用途、骨格筋の機能障害の治療用途、ミトコンドリア筋症の治療用途、ならびに慢性心不全の治療用途について、試験されている。しばしば若年成人に突然の失明をもたらす、重篤な遺伝性疾患である、レーバー遺伝性視神経萎縮症（ＬＨＯＮ）を治療するために、Ｏｃｕｖｉａの可能性を評価する治験が進行中である。
【０００５】
ミトコンドリアは、細胞の動力室であり、生命を維持し、成長を支えるために我々の体に必要なエネルギーの９０％超を担っている。ミトコンドリアに由来するエネルギー機構は、健康生理機能を維持し、疾患を防止する。多くの一般的な疾患および稀な疾患では、機能不全ミトコンドリアが、疾患の進行の重要な要素である。
【０００６】
Ｄ−アルギニル−２，６−ジメチル−Ｌ−チロシル−Ｌ−リシル−Ｌ−フェニルアラニンアミドは、抗酸化作用を示し、ミトコンドリアの内膜中に集中される、細胞透過性のミトコンドリア標的のペプチドである。化合物（＜１ｎＭ）は、細胞内の活性酸素種を著しく減少させ、ミトコンドリアの活力を高め、Ｎ２ＡとＳＨ−ＳＹ５Ｙの両方の神経細胞系において、ｔＢＨＰ誘導アポトーシスを防止した。ラットでは、片側尿管閉塞の１日前、およびその後１４日間毎日の腹腔内処置（１および３ｍｇ／ｋｇ）によって、尿細管損傷、マクロファージの浸潤および間質性線維症が著しく減少した。化合物（３ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．、２週間ｑｄ）は、ストレプトゾトシンにより引き起こされるマウスの膵島におけるアポトーシスおよびインスリンの減少も防止した。
【０００７】
筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）のＧ９３Ａマウスモデルにおいて実施された、さらなる研究によって、化合物（５ｍｇ／ｋｇ／日  ｉ．ｐ．  ３０日齢で開始）が、疾患の発症を著しく遅延させたことが実証された。ＡＬＳの治療に対して、潜在的に有用であり、加齢および酸化ストレスに伴う疾患の治療において有益でありうる。
【０００８】
ここ数年、式Iに示される、ペプチド  Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−（２，６−ジメチル）Ｔｙｒ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｌ−Ｐｈｅ−ＮＨ２と、その治療活性が、いくつかの特許出願中に開示され、また、特許請求されている。
【０００９】
EP 2436390、US 2011/0245182およびUS 2011/0245183は、Ｓｚｅｔｏ−Ｓｃｈｉｌｌｅｒペプチドを含む、それぞれ疼痛管理または皮膚老化防止剤のために皮膚に適用するための局所麻酔組成物を特許請求しており、ＳＳ−３１は、有効成分として具体的に特許請求されている。一連の固相合成が、好ましい調製方法として示されている。
【００１０】
US 7,718,620は、有効量の芳香族陽イオン性ペプチドを投与することによって、哺乳動物における腎臓の虚血再灌流傷害を治療または防止する方法を特許請求している。ＳＳ−３１は、有効成分として具体的に特許請求されている。
【００１１】
WO 2005/001023は、分子を細胞に送達するための一般的方法、ならびに、分子およびＤ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２タイプの芳香族-陽イオン性ペプチドを含む、担体複合体を開示している。請求項１８には、テトラペプチドＳＳ−３１が、前記方法に有用な物質として、具体的に特許請求されている。
【００１２】
WO 2012/174117およびWO 2014/210056は、ＳＳペプチドに基づく治療用組成物および、その活性剤として、芳香族-陽イオン性ペプチドであるＤ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を特許請求している。
【００１３】
WO 2013/086020、WO 2004/070054およびWO 2005/072295は、それを必要とする、哺乳動物、摘出臓器、または細胞において、ミトコンドリア透過性遷移を防止し、また、酸化損傷を低減する方法を提供しており、そして、ペプチドが、μオピオイド受容体アゴニスト活性を有さない、すなわち、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２である方法を具体的に特許請求している。
【００１４】
WO 2009/108695は、対象の腎臓における血流の減少もしくは阻害、あるいは、造影剤色素等の腎毒性の薬剤への曝露が関連しているであろう、腎損傷から、腎臓を保護する方法を開示している。この方法は、それを必要とする対象に対する有効量の芳香族-陽イオン性ペプチドを、対象に投与することを含み、そして、選択されたペプチドの１つは、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２である。
【００１５】
US 6,703,483は、発明者の実験室で広範に使用されてきたプロトコルおよびｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、ならびに固相技術を使用して、ＤＡＬＤＡ［Ｈ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２］の新規な類似体、すなわちＨ−Ｄｍｔ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２を調製するための詳細な手順を開示している。
【００１６】
化合物を調製するための、ほとんどの従来の方法は、通常、治療用途に求められる純度を得るために、クロマトグラフィーによるさらなる精製を具えた、従来から実施されているペプチド固相合成を含んでいる。
【００１７】
クロマトグラフィーによる精製を伴ている固相合成は、時間がかかり、非常に費用がかさみ、そして、工業的規模にスケールアップするのが非常に困難であることがよく知られており、したがって、大規模生産のための方法の開発の必要性は明らかである。化合物は、有機酸塩、例えば、酢酸塩またはトリフルオロ酢酸塩として単離される。
【００１８】
Reddyら、Adv. Exp. Med. Biol.、2009、611、473は、アミノ酸構成要素に対する常用される側鎖保護基を必要とする、式Iの抗酸化ペプチド、ならびにその他の類似物（ＳＳ−０２、ＳＳ−２０）の液相合成について、一般的に記載している。グアニジン基は、ＮＯ２で保護され、また、Ｌｙｓのε−ＮＨ２は、Ｃｂｚまたは２−Ｃｌ−Ｃｂｚによって保護された。これらのペプチドは、Ｂｏｃ／Ｃｂｚの化学的性質およびＢＯＰ試薬カップリングを使用して合成された。Ｃ末端から開始して、Ｌｙｓ残基は、（文献の手順［Ueyamaら、Biopolymers、1992、32、1535、PubMed:1457730］に従って、市販のＢｏｃ−Ｌｙｓ（２−Ｃｌ−Ｃｂｚ）−ＯＨから、ＤＣＣ／ＨＯＢｔの存在下、ＮＨ４ＨＣＯ３を用いたアミド化、続くＴＦＡへの曝露による、二段階で調製される）Ｈ−Ｌｙｓ（２−Ｃｌ−Ｃｂｚ）−ＮＨ２として保護した。ＮＯ２基の存在下での２−Ｃｌ−Ｃｂｚの選択的な除去は、触媒移動水素化分解（ＣＴＨ）を使用して達成された［Gowdaら、Lett. Pept. Sci.、2002、9、153］。
【００１９】
有効なμアゴニスト［Ｄｍｔ］ＤＡＬＤＡの調製と、δオピオイドアゴニスト活性を増強するため、Ｄ−ＡｒｇをＴｉｃで置換して、有効なδアンタゴニストＨ−Ｄｍｔ−Ｔｉｃ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨへの変換のための、標準的溶液ペプチド合成による段階的な手順が、Balboniら、J. Med. Chem.、2005、48、5608によって記載されている。同様のテトラペプチド［Ｄｍｔ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ２］のための一般的な合成手順は、Balletら、J. Med. Chem. 2011、54、2467によって記載されている。
【００２０】
同様のＤＡＬＤＡ類似体テトラペプチドは、αアミノ基に対するＢｏｃ保護、ならびに、カップリング剤として、ＤＩＣ／ＨＯＢｔまたはＨＢＴＵ／ＤＩＥＡを使用する、手動の固相技術によって調製された［Berezowskaら、J. Med. Chem.、2009、52、6941；Olmaら、Acta Biochim. Polonica、 2001、48、4、1121；Schillerら、Eur. J. Med. Chem.、2000、35、895］。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
固相手法における高い総合的な収量にもかかわらず、プロセスのスケールアップについて、例えば、下記のようないくつかの障害を有している。
【００２２】
ａ．樹脂からペプチドを切断するための、毒性が高く、腐食性の高いフッ化水素の適用、
ｂ．最終工程の成功のために必要であると検証されている、低い積載率（樹脂１ｇ当たり０．３〜０．３５ｍｍｏｌ）、および
ｃ．各工程における過剰量の試薬の使用（３倍量のＤＩＣ、２．４倍量のＨＯＢｔなど）［Ryakhovskyら、Beilstein J. Org. Chem.、2008、4(39)、1、doi：10.376/bjoc.4.39］
【課題を解決するための手段】
【００２３】
概要
本発明は、固相合成またはクロマトグラフィーによる精製のいずれかを回避して、大規模生産により適する、より効率的な方法に関する。本発明の方法は、スキームＡに記載される。
【００２４】
以下の略語が使用される。
【００２５】
Ｄｍｔ＝２，６−ジメチルチロシン；
Ｚ＝ベンジルオキシカルボニル；
ＭｅＳＯ３Ｈ＝メタンスルホン酸；
Ｂｏｃ＝Ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル；
ＮＭＭ＝Ｎ−メチルモルホリン；
ＴＢＴＵ＝Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウム  テトラフルオロボレート；
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド；
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
スキームＡは、アミノ酸のＮ末端に対する一時的な保護として、それぞれ、Ｏ−ベンジル（Ｂｚｌ）基およびベンジルオキシカルボニル（Ｚ）基を使用している、テトラペプチドの主鎖の組み立て（反応スキーム）、それに続く、最終の触媒による水素化分解のための、ペプチド１の液相合成のためのプロセスを示す。最終生成物は、有機酸塩、例えば、酢酸塩として単離される。
【００２６】
【化２】
2017523956.tif 000003
【発明の効果】
【００２７】
この方法は、先行技術に対して注目に値する改善であり、その利点は以下のように要約することができる：
・  合成は液相で行われ、特別な装置を必要とせずに、工業規模にスケールアップすることが可能である；
・  構築単位中の保護基を選択することにより、各工程で非常に簡単な脱保護を伴う平易な合成を可能にし、望ましくない副生物の形成を最小化する；
・  各中間体は結晶化することができ、次の工程に移行しない不純物の除去を可能とする；
・  各中間体の純度は、非常に高く、通常、９９％近い。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
詳細な説明
第１の形態において、本発明は、工業規模に適合しており、かつ、所望の生成物を高収率で提供する、ＳＳ−３１の塩、特には、酢酸塩をもたらす、新規かつ効率的なプロセスを提供する。特に、本発明者らは、全ての脱保護工程がプロセスのｎ−１工程となる、プロセスを用いて、ＳＳ−３１の酢酸塩が、都合よく得られることを見出した。
【００２９】
したがって、本発明の目的は、下記の工程を含む、式（Ｉ）のＨ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を、酢酸塩として調製する方法の提供することである。
【００３０】
【化３】
2017523956.tif 000004
【００３１】
−  化合物（II）：Ｈ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を、
【００３２】
【化４】
2017523956.tif 000005
【００３３】
化合物（III）：Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨと、
【００３４】
【化５】
2017523956.tif 000006
【００３５】
カップリングさせて、式（IV）の化合物、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２：
【００３６】
【化６】
2017523956.tif 000007
【００３７】
を得る工程；および
−  化合物（IV）をメタンスルホン酸（Ｖ）
ＭｅＳＯ３Ｈ（Ｖ）
と反応させて、遊離アミン塩（VI）ＭｅＳＯ３Ｈ・Ｈ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２：
【００３８】
【化７】
2017523956.tif 000008
【００３９】
を得る工程。
【００４０】
塩（VI）に、保護されたアミノ酸  Ｂｏｃ−Ｄｍｔ（Ｂｚｌ）−ＯＨ  （VII）
【００４１】
【化８】
2017523956.tif 000009
【００４２】
を反応させて、保護されたトリペプチド（VIII）：
【００４３】
【化９】
2017523956.tif 000010
【００４４】
を得て、これをメタンスルホン酸（Ｖ）で処理して、対応する塩（IX）、ＭｅＳＯ３・Ｈ−Ｄｍｔ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２：
【００４５】
【化１０】
2017523956.tif 000011
【００４６】
を得る。
【００４７】
酸塩（IX）を、Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＮａ（Ｘ）
【００４８】
【化１１】
2017523956.tif 000012
【００４９】
とカップリングさせて、保護されたテトラペプチド（XI）、Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２
【００５０】
【化１２】
2017523956.tif 000013
【００５１】
を形成する。
【００５２】
テトラペプチド（Ｉ）は、（XI）の水素化分解によって得られ、さらに、酢酸と反応させて、対応する塩を形成する。
【００５３】
該方法の一実施形態において、（II）と（III）の間のカップリングは、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウム  テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵとして知られている）、ならびにＮＭＭ、トリエチルアミンおよびジイソプロピルエチルアミン等の、第三級アミンの分類に属する有機塩基、ならびにＤＭＦ、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、２−メチル−テトラヒドロフラン（ＭＥ−ＴＨＦ）等の、極性溶媒の存在下で実施される。
【００５４】
一実施形態において、（II）と（III）の間のカップリングは、０℃と６０℃の間、好ましくは、２０℃と３０℃の間の温度範囲で実施される。
【００５５】
別の実施形態において、メタンスルホン酸塩（VI）の形成は、溶媒としての塩化メチレン中で得られ、同じ溶媒から結晶化される。結晶化に適する他の溶媒は、ＴＨＦ、酢酸エチルおよびアセトニトリルである。
【００５６】
該方法の一実施形態において、化合物（VI）と化合物（VII）の間のカップリング反応は、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウム  テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵとして知られている）、ならびにＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、トリエチルアミンおよびジイソプロピルエチルアミン等の、第三級アミン型の塩基、ならびにＤＭＦ、アセトニトリル、ＴＨＦ、２−ＭＥ−ＴＨＦ等の、極性溶媒の存在下で実施される。
【００５７】
別の実施形態において、メタンスルホン酸塩（IX）の形成は、溶媒としての塩化メチレン中で得られ、同じ溶媒から結晶化される。結晶化に適する他の溶媒は、ＴＨＦ、酢酸エチルおよびアセトニトリルである。
【００５８】
該方法の一実施形態において、化合物（IX）と化合物（Ｘ）の間のカップリング反応は、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）ウロニウム  テトラフルオロボレート（ＴＢＴＵとして知られている）、ならびにＮＭＭ、トリエチルアミンおよびジイソプロピルエチルアミン等の、第三級アミン型の塩基、ならびにＤＭＦ、アセトニトリル、ＴＨＦ、２−ＭＥ−ＴＨＦ等の、極性溶媒の存在下で実施される。
【００５９】
一実施形態において、（XI）の水素化分解は、不均一系触媒  Ｐｄ／Ｃ、および溶媒として酢酸を用いて実施される。他の適合する触媒は、Ｐｄ（ＯＨ）２／炭素、Ｐｄ（および／またはＰｄＣｌ２）／ＳｉＯ２、Ａｌ２Ｏ３またはポリマー、および、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ＤＭＦ、ＴＨＦおよびアセトニトリル等の溶媒である。
【００６０】
中間体は、反応混合物から単離されても、単離されなくてもよい。
【００６１】
該方法の一形態において、中間体（IV）、（VI）、（VIII）、（IX）および（XI）は、単離され、結晶化される。該中間体が単離される際、それらの純度は９８％を超える。
【００６２】
一つの好ましい形態において、中間体（VIII）、Ｂｏｃ−Ｄｍｔ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２の結晶化により、重大な不純物が、それ以降のプロセス工程に移行するのを回避することができる。
【００６３】
一つの好ましい形態において、重大な不純物は、化合物（XII）、Ｈ−Ｄ−Ｄｍｔ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２である。
【００６４】
【化１３】
2017523956.tif 000014
【００６５】
別の好ましい形態において、保護されたテトラペプチド（XI）、Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−Ｄｍｔ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２に対する結晶化プロセスにより、該生成物を９９％に近い純度を有する固形物として得ることができる。
【００６６】
別の好ましい形態において、最終の脱保護は、簡単な水素化によって実施され、そして、きわめて高価であるが薬物としてのペプチドの製造に通常使用される、精製および単離プロセスであるＨＰＬＣ精製あるいは凍結乾燥を必要とすることなく、簡単な結晶化後に、酢酸塩の固形物形態で、最終生成物を得ることが可能としている。
【００６７】
好ましい形態において、この方法は、そのまま製剤に使用することができる、あるいは、必要であれば任意の他の塩に容易に変換することができる、固形物として、該ペプチドを得るために、効率的なプロセスをスケールアップすることが可能である。得られる最終化合物の純度は、９８．５％超、通常９９％であり、そして、各不純物は、０．２％またはそれ以下程度である。
【実施例】
【００６８】
例
例１:Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２の調製
２００ｍＬのＤＭＦ、４４ｇのＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨおよび１５．６ｇのＨ−Ｐｈｅ−ＮＨ２を、フラスコ中に投入する。該混合物を、室温で１０分間撹拌する。１９．２ｇのＮ−メチルモルホリンと３２．１ｇのＴＢＴＵを、順次、室温で添加する。該混合物を室温で１時間撹拌する。該反応混合液中に５００ｍＬの水を添加して、室温で、生成物を沈殿させる。該混合物をろ過して、固形生成物を単離し、そして、該濾塊を水で洗浄する。該濾塊を、３６０ｍＬの酢酸エチルが入っているフラスコ中に移し、そして、全ての固形物が溶解するまで、該混合液を５０℃で加熱する。生成物の有機相を相分離し、そして、少量の水性相を捨てる。真空下で４０〜４５℃にて有機相を濃縮し、固形物の塊が形成されるまで、溶媒を除去する。残留物をろ過して、固形生成物を単離する。該濾塊を、２０００ｍＬのＭＴＢＥが入っているフラスコ中に移し、そして、該混合物を２０分間還流温度で加熱する。次いで、該混合物を室温まで冷却する。混合物をろ過して、固形生成物を単離する。該濾塊を真空下で３０℃にて乾燥して、３５ｇの固形生成物を得る。
【００６９】
例２：Ｈ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＭｅＳＯ３Ｈの調製
２６．３ｇのＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２、２００ｍＬの塩化メチレンおよび９．６ｇのメタンスルホン酸を、容器に投入する。該混合物を１５〜２０℃で１８時間撹拌する。該混合物中に、１００ｍＬのＭＴＢＥを添加し、そして、１５〜２０℃で１時間撹拌する。混合物をろ過して、固形生成物を単離する。湿った濾塊を、大気中、室温で乾燥させ、２６．４ｇの白色の固形生成物を得る。
【００７０】
例３：Ｂｏｃ−ＤＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２の調製
８．４ｇのＢｏｃ−ＤＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ、１１ｇのＨ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＭｅＳＯ３Ｈ、７．４ｇのＴＢＴＵおよび８０ｍＬのＴＨＦを、フラスコ中に投入する。該混合物を室温で１５分間撹拌し、次いで、１０℃まで冷却する。６．３６ｇのＮ−メチルモルホリンを添加し、そして、混合物を２０〜２５℃で３時間撹拌する。該反応混合物を、２４０ｍＬの水が入っているフラスコ中に加える。前の操作で得られた混合物に、３２ｍＬの塩化メチレンを添加する。得られた混合物を室温で２０分間撹拌する。該混合物をろ過して、固形生成物を単離し、そして、該濾塊をアセトン（３００ｍＬ×２）で洗浄する。該濾塊を、大気中、室温にて乾燥させ、１４．３ｇの白色の固形生成物を得る。
【００７１】
例４：Ｈ−ＤＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＭｅＳＯ３Ｈの調製
１４ｇのＢｏｃ−ＢＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２、２８０ｍＬの塩化メチレンおよび３．３ｇのメタンスルホン酸を、フラスコ中に投入する。該混合物を、１８〜２２℃で１０時間撹拌する。混合物中に、５６０ｍＬのヘプタンを添加し、そして、混合物を室温で３０分間撹拌する。混合物をろ過して、固形生成物を単離する。湿った濾塊を、大気中、室温にて乾燥させ、１４ｇの白色の固形生成物を得る。
【００７２】
例５：Ｚ−Ｄ−Ａｒｇ−ＤＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２の調製
６．３４ｇのＺ−Ｄ−Ａｒｇ−ＯＮａ、１００ｍＬのＤＭＦおよび２．０ｇのメタンスルホン酸を、フラスコ中に投入する。透明の溶液が形成されるまで、該混合物を室温で撹拌する。１４ｇのＨ−ＤＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＭｅＳＯ３Ｈを添加し、該混合物を１０℃まで冷却する。６．１５ｇのＴＢＴＵと９．６７ｇのＮ−メチルモルホリンを、順次添加する。該混合物を室温で４時間撹拌する。２．９ｇのＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏを８ｍＬの水に溶解させることによって調製された、ＬｉＯＨの水溶液を添加する。該混合物を３０分間撹拌する。得られた混合液を、４２０ｍＬの水が入っているフラスコ中に、撹拌しながらゆっくりと添加する。該混合物に、５６ｍＬの塩化メチレンを添加する。該混合物をろ過して、固形生成物を単離する。該濾塊を、１５０ｍＬの酢酸が入っているフラスコ中に移し、ほとんどの固形物が溶解するまで、該混合物を３５〜４０℃で加熱する。該混合物に、４５０ｍＬのＭＴＢＥを添加し、そして、撹拌しながら、該混合物を室温まで冷却する。混合物をろ過し、固形生成物を単離する。該濾塊を、大気中、室温にて乾燥させ、１７．３ｇの白色の固形生成物を得る。
【００７３】
例６：Ｈ−Ｄ−Ａｒｇ−ＤＭｅＴｙｒ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＮＨ２・３ＡｃＯＨの調製
２．０ｇのＺ−Ｄ−Ａｒｇ−ＤＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｈｅ−ＮＨ２、２０ｍＬの酢酸および５％のＰｄ／Ｃ触媒（６０％の水を含有する、５．０ｇの５％Ｐｄ／Ｃを、３０ｍＬの酢酸で洗浄することによって得られる）を、フラスコ中に投入する。フラスコの雰囲気を、水素で置換する。該混合物を、１ａｔｍの水素圧下、室温において、２時間撹拌する。混合物をろ過し、Ｐｄ／Ｃ触媒を除去し、そして、該濾塊を１０ｍＬの酢酸で洗浄する。ろ液と洗浄液を合わせて、溶液を、真空下、２０℃にて濃縮し、ほとんどの溶媒を除去する。１００ｍＬのアセトニトリルを、残渣に加え、該混合物を室温で２０分間撹拌する。該混合物をろ過し、固形生成物を単離する。該濾塊を、真空下、室温にて乾燥させ、０．７ｇの白色の生成物を得る。
【国際調査報告】
2017523956.tif 000030
2017523956.tif 000031
2017523956.tif 000032