(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）のコラン骨格を有する化合物に関するものであり、前記化合物は、ＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するためのものである。
2017516856.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2017516856.tif 000037
[式中、
Ｒ１は、ＯＨ又はＨであり；
Ｒ２は、Ｅｔ、＝ＣＨ−ＣＨ３又はＨであり；
Ｒ３は、ＯＨ又はＨであり；
ｎは、０、１又は３であり；
Ｒは、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＮであり；
ただし、
Ｒ２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ３であり、かつ、Ｒ３がＯＨである場合であって：
ｎが０又は１である場合は、Ｒ１がα−ＯＨの時にRがＣＨ２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ１がβ−ＯＨ若しくはＨの時にＲがＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり；
ｎが３である場合は、Ｒ１及びＲが上記に定義されるものであり；
Ｒ２がＨである場合であって：
Ｒ１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ３がβ−ＯＨである場合は、ｎが０の時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり、或いは、ｎが３である時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ３がα−ＯＨの場合は、ＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり；
Ｒ１及びＲ３がＨである場合は、ｎが０の時にRがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時にＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈである］、
無機及び有機の医薬的に許容されるその塩、溶媒和物又はアミノ酸結合物を含む化合物であり；
ここで、以下の化合物：
【表１】
2017516856.tif 000038
を除く、化合物。
【請求項２】
式中、
Ｒ２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ３であり、Ｒ３がＯＨであり、及び、
ｎが０又は１の場合は、Ｒ１がα−ＯＨの時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ１がβ−ＯＨ又はＨの時にＲがＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＯＯＨであり；
ｎが３の場合は、Ｒ１、Ｒ３及びＲが上記で定義されるものである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式中、
ｎが０又は１であり、ＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＮであり、かつ、Ｒ１がα−ＯＨである、或いは、ｎが０又は１であり、ＲがＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり、かつ、Ｒ１がβ−ＯＨ又はＨである、
請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
式中、
Ｒ２がＥｔであり、ｎが３であり、Ｒ１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ３がα−ＯＨである、
請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
式中、
Ｒ２がＨであり、及び、
Ｒ１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ３がβ−ＯＨである場合に、ｎが０の時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈである、或いは、ｎが３の時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＯＯＨである；
Ｒ１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ３がα−ＯＨである場合に、ＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈである；
Ｒ１及びＲ３がＨである場合に、ｎが０の時にＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＯＯＨである、或いは、ｎが１の時にＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
医薬として使用するための化合物であって、式（Ｉ）の前記化合物：
【化２】
2017516856.tif 000039
[式中、
Ｒ１は、ＯＨ又はＨであり；
Ｒ２は、Ｅｔ、＝ＣＨ−ＣＨ３又はＨであり；
Ｒ３は、ＯＨ又はＨであり；
ｎは、０、１又は３であり；
Ｒは、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＮであり；
ただし、
Ｒ２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ３であり、かつ、Ｒ３がＯＨである場合であって：
ｎが０又は１である場合は、Ｒ１がα−ＯＨの時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ１がβ−ＯＨ若しくはＨの時にＲがＣＨ２ＯＨ、ＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＯＯＨであり；
ｎが３である場合は、Ｒ１及びＲは上記に定義されるものであり；
Ｒ２がＨである場合であって：
Ｒ１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ３がβ−ＯＨの場合は、ｎが０の時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり、或いは、ｎが３である時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ３がα−ＯＨの場合は、ＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり；
Ｒ１及びＲ３がＨである場合は、ｎが０の時にRがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時にＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈである］、
無機及び有機の医薬的に許容されるその塩、溶媒和物又はアミノ酸結合物を含む化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の医薬として使用するための化合物であり、請求項２〜５のいずれか１項に定義される式（Ｉ）の前記化合物。
【請求項８】
請求項６に記載の医薬として使用するための化合物であり、以下：
【化３】
2017516856.tif 000040
からなる群から選択される、式（Ｉ）の前記化合物。
【請求項９】
消化器疾患、肝疾患、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化症、代謝疾患、代謝障害、感染症、癌、腎障害、炎症性疾患、及び神経障害の予防及び／又は治療において、ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１モジュレーターとして使用するための化合物であり、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の前記化合物。
【請求項１０】
式（Ｉ）の化合物と、少なくとも別の医薬成分とを含む医薬組成物であって、前記化合物が請求項６〜８のいずれか１項に定義される式（Ｉ）の前記化合物である、医薬組成物。
【請求項１１】
式中、Ｒ２が＝ＣＨ−ＣＨ３又はＥｔであり、かつ、Ｒ３がHではない、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法が、
式（ＶＩＩＩ）の化合物をアルドール縮合に供し、式（ＶＩＩＩ）の化合物：
【化４】
2017516856.tif 000041
［式中、ｎ＝０、１であり、Ｐはアルコール保護基である］を、アルキルリチウム、例えばｎＢｕＬｉと接触させ、続いてアセトアルデヒドと、好ましくはＢＦ３（ＯＥｔ）２も存在下にて、接触させて、式（ＩＸ）の化合物：
【化５】
2017516856.tif 000042
［式中、ｎ及びＰが上述のものである］を得る、方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法であって、ここで、式（ＩＸ）の化合物を触媒水素化に供し、式（Ｘ）の化合物：
【化６】
2017516856.tif 000043
を得る、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であり、式（Ｘ）の化合物をＮａＢＨ４又はＣａ（ＢＨ４）２と接触させることによって、式（Ｘ）の化合物がＣ７においてカルボニルの還元に供して、Ｃ７においてα−ＯＨ及びβ−ＯＨの混合物を得；続いて、側鎖のメチルエステル官能基を−ＣＨ２ＯＨへ完全に還元するＬｉＢＨ４を用いた処理に供する、方法。
【請求項１４】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、ここで、Ｒ２がα−Ｅｔであり、前記方法が、式（ＸＩＶ）の化合物：
【化７】
2017516856.tif 000044
［式中、ｎが０又は１であり、Ｒ８がβ−ＯＨ、ＯＡｃ又はＨである］をＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨと接触させて、Ｃ６立体中心のエピマー化を得て、式（ＸＩ）の化合物：
【化８】
2017516856.tif 000045
［式中、Ｒ８がＯＡｃである場合、ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨで処理すると、同時にＣ３アセトキシ基の加水分解が生じる］を得ることを含む、方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載の方法であり、ここで、Ｃ７におけるカルボニルの還元が、式（ＸＩ）の化合物又は側鎖にＣＯＯＨを有する対応する化合物をＬｉＢＨ４と接触させて、Ｃ７においてほぼ独占的にα−ＯＨを得ることにより得られ；ここで、ＬｉＢＨ４を用いた処理が、同時に、側鎖上のメチルエステル官能基を、存在する場合は、−ＣＨ２ＯＨに同時に還元し、ＯＡｃを、Ｃ３に存在する場合には、脱保護することである、方法。
【請求項１６】
ｎ＝３である、請求項１〜２及び４〜５のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製する方法であり、前記方法が、対応する式（ＩＶ）の化合物：
【化９】
2017516856.tif 000046
［式中、ｍ＝ｎ−２＝１であり、Ｒ４及びＲ５が、Ｈ以外であれば、ＯＰ（Ｐはアルコール保護基である）であり、かつ、Ｒ２がＨ又はＥｔである］を、ワンポッドのスワーン酸化／ウィッティヒＣ２ホモログ化に供し、式（Ｖ）：
【化１０】
2017516856.tif 000047
［式中、ｍ＝１であり、Ｒ２が請求項１に定義されるものであり、Ｒ４及びＲ５が、Ｈ以外であれば、ＯＰ（Ｐはアルコール保護官能基である）である］の保護されたメチルエステルを得ることを含む、方法。
【請求項１７】
ｎ＝０である、請求項１〜３及び５のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であり、前記方法が、式（ＸＩＩ）の化合物：
【化１１】
2017516856.tif 000048
をＨＣＯＯＨ及びＨＣｌＯ４と接触させ、続いて得られた化合物をＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物及びＮａＮＯ２と接触させて、式（ＶＩＩ）の化合物：
【化１２】
2017516856.tif 000049
を得ることを含む、方法。
【請求項１８】
Ｒ１がβ−ＯＨである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であり、前記方法が式（ＸＩＩＩ）を有する化合物：
【化１３】
2017516856.tif 000050
［式中、Ｒ２がＥｔであり、ｎが０又は１である］から出発すること、及び、塩基の存在下にてトシルクロリドで処理した後にＣＨ３ＣＯＯＫで処理することによりＣ３ヒドロキシル立体配置を反転させることを含む、方法。
【請求項１９】
Ｒ１がＨである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の、又は、請求項６〜８のいずれか１項に定義される、式（Ｉ）の化合物を調製する方法であり、前記方法が、式（ＸＩＩＩ）の化合物：
【化１４】
2017516856.tif 000051
［式中、ｎが０又は１であり、Ｒ２がＥｔ又はＨである］を、Ｃ−３ヒドロキシル基でのトシル化及び脱離に続き、触媒水素化による二重結合還元に供することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、コラン骨格を有する化合物に関するものであり、前記化合物は、ＦＸＢ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１介在性疾患の治療及び／又は予防に使用するためのものである。
【背景技術】
【０００２】
技術水準
胆汁酸（ＢＡｓ）は、２種類の専用細胞受容体である、細胞内核受容体及び細胞表面受容体と相互作用するシグナル伝達分子である。核内受容体には、内因性胆汁酸センサーとして同定されたファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）が含まれる（Ｍａｋｉｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９，２８４，１３６２；Ｐａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９，２８４，１３６５）。
【０００３】
腸肝組織（肝臓及び腸）において高度に発現する、ＦＸＲは胆汁酸ホメオスタシス、脂質及びグルコースホメオスタシスも含む代謝経路を制御する（Ｚｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ２００６，１０３，１００６）。さらに、ＦＸＲアゴニストは、抗炎症性及び抗線維性及び抗癌効果をもたらす（Ｒｅｎｇａ  ｅｔ  ａｌ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２０１２，２６，３０２１−３０３１）。
【０００４】
胆汁酸細胞表面受容体（ＧＰＢＡＲ１、Ｍ−ＢＡＲ１、ＧＰ−ＢＡＲ１、ＴＧＲ５）は、Ｇタンパク質共役型受容体のロドプシン様スーパーファミリーに属する（Ｔａｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２００２，５２０，９７；Ｋａｗａｍａｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００３，２７８，９４３５）。
【０００５】
リガンドがＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１に結合すると、細胞内ｃＡＭＰレベルが上昇し、結果としてシグナル伝達カスケードが活性化される。ＧＰＢＡＲ１は、肝臓及び腸だけでなく、筋肉、脳、脂肪組織、マクロファージ及び内皮細胞においても高度に発現する。筋肉及び褐色脂肪組織において、ＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１は、腸内分泌Ｌ細胞のエネルギー消費と酸素消費を増加させ（Ｗａｔａｎａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ２００６，４３９，４８４）、ＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１の活性化は、グルコース血中レベル、胃腸運動及び食欲を調節する膵臓インスリン放出を改善するインクレチンである、グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ）−１の分泌を刺激する（Ｔｈｏｍａｓら、Ｃｅｌｌ。Ｍｅｔａｂ。２００９、１０、１６７）。
【０００６】
【化１】
2017516856.tif 000003
【０００７】
化学的にＢＡは、切断されたコレステロール側鎖誘導体である。それらの分子レパートリーは、一次胆汁酸、コール酸（ＣＡ）及びケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）の産生を伴い、肝臓で最初に生成される。腸内での微生物変換は、二次胆汁酸、デオキシコール酸（ＤＣＡ）及びリトコール酸（ＬＣＡ）を生成する。人体では、胆汁酸はグリシン及びタウリンに結合する。２つのＢＡ受容体に対する活性は、最も強力な内因性ＦＸＲ活性化因子であるＣＤＣＡ、及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１の最も強力な天然アゴニストであるＬＣＡ及びＴＬＣＡに構造依存性である。
【０００８】
胆汁うっ滞性そう痒症は、ＰＢＣにおけるＦＸＲアゴニストの使用に伴う重篤な副作用として注目されており、最近の研究は、この副作用の発症に関与する分子標的としてＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１を示した（Ａｌｅｍｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２０１３，１２３，１５１３−１５３０）。
【０００９】
国際公開第２０１３／１９２０９７号は、抗胆汁うっ滞性作用を有する強力かつ選択的なＦＸＲアゴニストである６−α−エチル−ケノデオキシコール酸（６−ＥＣＤＣＡ）を記載している。
【００１０】
国際公開第２００８／００２５７３号には、ＦＸＲが介在する疾患又は状態の予防又は治療のためのＦＸＲリガンドとしての胆汁酸誘導体を記載している。
【００１１】
国際公開第２０１０／０１４８３６及びＳａｔｏ  Ｈ．（Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２００８，５１，４８４９）は、ＴＧＲ５モジュレーターを記載している。
【００１２】
Ｄ’Ａｍｏｒｅ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，５７，９３７）は、ＧＰ−ＢＡＲ１／ＦＸＲデュアルアゴニストの設計、合成、及び生物学的評価を記載している。Ｄ’Ａｍｏｒｅ  Ｃ．ｅｔ  ａｌ．は、合成中間体として、化合物ＢＡＢ５０２及びＢＡＢ５０４を記載している。
【００１３】
Ｉｇｕｃｈｉ  Ｙ．ｅｔ  ａｌ．（Ｊ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．２０１０，５１，１４３２）は、胆汁アルコールがＴＧＲ５のリガンドとして機能することを記載している。
【００１４】
化合物ＢＡＢ１０７は、Ｋｉｈｉｒａ  Ｋ．ｅｔ  ａｌ．による合成中間体として開示されている（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  １９９２，５７（４），１９３−１９８）。
【００１５】
Ｓｗａａｎ  Ｐ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｃｏｍｐ．−Ａｉｄ．Ｍｏｌ．Ｄｅｓ．１９９７，１１，５８１−５８８）は、腸内胆汁酸担体の分子モデリングにおいて、胆汁酸結合体のセット中のウルソコレート（ｕｒｓｏｃｈｏｌａｔｅ）（その文献では化合物１５、本明細書ではＢＡＲｎ４０６）を試験した。ＢＡＲｎ４０６は、ＣａＣｏ−２細胞においてタウロコール酸輸送を阻害する検出できない能力を有する結果となった。
【００１６】
Ｂｕｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．（Ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ２０１１，７６（３），２９１−３００）は、ウミシイタケ（Ｐｅｔｒｏｍｙｚｏｎ  ｍａｒｉｎｕｓ）において、非天然の硫酸化５−胆汁酸誘導体の合成及び嗅覚活動を記載している。そこに開示された化合物９ｅ（本明細書では化合物ＢＡＲ４０７）は嗅覚応答を誘発しなかった。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、コラン化学骨格を含有し、ＦＸＲ及び／又はＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１を調節する新規な化合物を同定することである。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
発明の概要
本発明の主題は、式（Ｉ）の化合物であり、
【００１９】
【化２】
2017516856.tif 000004
［式中、
Ｒ１は、ＯＨ又はＨであり；
Ｒ２は、Ｅｔ、＝ＣＨ−ＣＨ３又はＨであり；
Ｒ３は、ＯＨ又はＨであり；
ｎは、０、１又は３であり；
Ｒは、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＮであり；
ただし、
Ｒ２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ３であり、かつ、Ｒ３がＯＨである場合であって：
ｎが０又は１である場合は、Ｒ１がα−ＯＨの時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ１がβ−ＯＨ若しくはＨの時にＲがＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり；
ｎが３である場合は、Ｒ１及びＲが上記に定義されるものであり；
Ｒ２がＨである場合であって：
Ｒ１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ３がβ−ＯＨである場合は、ｎが０の時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり、或いは、ｎが３である時にＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ３がα−ＯＨの場合は、ＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり；
Ｒ１及びＲ３がＨである場合は、ｎが０の時にＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時にＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈである］
無機及び有機の医薬的に許容されるその塩、溶媒和物及びアミノ酸結合物を含んでおり；
ここで、以下の化合物を除く。
【００２０】
【表１】
2017516856.tif 000005
【００２１】
上記のような化合物は、ＦＸＲ及び／またはＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１モジュレーターであることが判明しており、従って、ＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１介在性疾患の治療に有用である。
【００２２】
従って、一態様では、本発明は、医薬として使用するための化合物に関するものであり、式（Ｉ）の前記化合物
［式中、
Ｒ１は、ＯＨ又はＨであり；
Ｒ２は、Ｅｔ、＝ＣＨ−ＣＨ３又はＨであり；
Ｒ３は、ＯＨ又はＨであり；
ｎは、０、１又は３であり；
Ｒは、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＮであり；
ただし、
Ｒ２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ３であり、かつ、Ｒ３がＯＨである場合に：
ｎが０又は１である場合、Ｒ１がα−ＯＨの時はRがＣＨ２ＯＨ又はＣＮであり、或いは、Ｒ１がβ−ＯＨ若しくはＨの時はＲがＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり；
ｎが３である場合、Ｒ１及びＲは上記に定義されるものであり；
Ｒ２がＨである場合に：
Ｒ１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ３がβ−ＯＨの場合、ｎが０の時はＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり、或いは、ｎが３である時はＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ３がα−ＯＨの場合、ＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり；
Ｒ１及びＲ３がＨである場合、ｎが０の時はＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時はＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈである］
であり、無機及び有機の医薬的に許容されるその塩、溶媒和物及びアミノ酸結合物を含んでいる。
【００２３】
更なる態様では、本発明は、胃腸障害、肝臓疾患、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化症、代謝疾患、感染症、癌、腎障害、炎症性疾患、及び神経障害（例えば脳卒中）の予防及び／又は治療に使用するための、化合物ＢＡＲ１０７、ＢＡＲｎ４０６、ＢＡＲ５０４、ＢＡＲ４０７及びＢＡＲ５０２を含む、上述の式（Ｉ）の化合物に関するものであり、式（Ｉ）の前記化合物は、上記のものである。
【００２４】
本発明はまた、上記の化合物を調製する方法に関する。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
発明の詳細な説明
本発明によれば、Ｒ２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ３であり、かつ、Ｒ３がＯＨである化合物が好ましく；より好ましくは、ｎが０又は１であり、ＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＮであり、かつＲ１がα−ＯＨであり、或いは、ｎが０又は１であり、ＲがＣＯＯＨ、ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり、かつ、Ｒ１がβ−ＯＨ又はＨである化合物である。
【００２６】
Ｒ２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ３であり、かつ、Ｒ３がＯＨである場合、好ましくは、以下、
【化３】
2017516856.tif 000006
からなる群から選択される化合物である。
【００２７】
本発明によれば、Ｒ２がＥｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ３であり、Ｒ３がＯＨであり、ｎが３であり、Ｒ１及びＲが上記で定義したものである化合物も好ましく；より好ましくは、Ｒ２がＥｔであり、Ｒ３がα−ＯＨであり、ｎが３であり、かつ、Ｒ１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒが上記で定義したものである。
【００２８】
好ましくは、
【化４】
2017516856.tif 000007
からなる群から選択される化合物である。
【００２９】
本発明によれば、ここで、Ｒ２がＨであり、かつ、
Ｒ１がα−ＯＨであり、かつ、Ｒ３がβ−ＯＨの場合、ｎが０の時はＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり、或いは、ｎが３の時はＲがＣＨ２ＯＨ又はＣＯＯＨであり；
Ｒ１がＨであり、ｎが１であり、かつ、Ｒ３がα−ＯＨの場合、ＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈであり；
Ｒ１及びＲ３がＨである場合、ｎが０の時はＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈ又はＣＯＯＨであり、或いは、ｎが１の時はＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈである、
これらの化合物がこのましく、
これらの中でも、以下、
【００３０】
【化５】
2017516856.tif 000008
からなる群から選択される化合物が好ましい。
【００３１】
特に好ましくは、以下：
【化６】
2017516856.tif 000009
からなる群から選択される本発明の化合物である。
【００３２】
化合物ＢＡＲ１０７、ＢＡＲｎ４０６、ＢＡＲ５０４、ＢＡＲ４０７及びＢＡＲ５０２を含む本発明の化合物は、高度に選択的なＦＸＲ又はＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１モジュレーター又はデュアルＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１モジュレーターであることが判明しており、従って、特に、消化器疾患、肝疾患、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化症、代謝疾患、代謝障害、感染症、癌、腎障害、炎症性疾患、及び脳卒中などの神経障害の予防及び／又は治療において有用である。
【００３３】
特定の実施形態では、肝疾患は、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、脳腱黄色腫症（ＣＴＸ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、薬物誘発性胆汁うっ滞、妊娠性肝内胆汁うっ滞、非経口栄養関連胆汁うっ滞、細菌異常増殖及び敗血症関連胆汁うっ滞、自己免疫性肝炎、慢性ウイルス性肝炎、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝臓移植関連移植片対宿主病、生体ドナー移植、肝再生、先天性肝線維症、肉芽腫性肝疾患、肝臓内又は肝臓外悪性腫瘍、ウィルソン病、ヘモクロマトーシス及びα１−抗トリプシン欠乏症からなる群から選択される。
【００３４】
特定の実施形態では、消化器疾患は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン病、潰瘍性大腸炎及び未知の大腸炎を含む）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、細菌過増殖、急性及び慢性膵炎、吸収障害、放射線照射後大腸炎（ｐｏｓｔ−ｒａｄｉａｔｉｏｎ  ｃｏｌｉｔｉｓ）、及び顕微鏡的大腸炎からなる群から選択される。
【００３５】
特定の実施形態において、腎疾患は、糖尿病性腎症、高血圧性腎症、慢性糸球体腎炎及び慢性移植糸球体症を含む慢性糸球体疾患、慢性尿細管間質性疾患及び腎臓血管障害からなる群から選択される。
【００３６】
特定の実施形態では、心血管疾患は、アテローム性動脈硬化症、異脂肪血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、動脈性高血圧としても知られる高血圧、心筋炎及び心内膜炎を含む炎症性心疾患、虚血性心疾患安定性狭心症（ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｓｔａｂｌｅ  ａｎｇｉｎａ）、不安定狭心症、心筋梗塞、肺高血圧症を含む肺心疾患、末梢血管疾患（ＰＶＤ）末梢動脈閉塞症としても知られている末梢動脈疾患（ＰＡＤ）、及び末梢性閉塞動脈症（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｏｂｌｉｔｅｒａｔｉｖｅ  ａｒｔｅｒｉｏｐａｔｈｙ）からなる群から選択される。
【００３７】
特定の実施形態では、代謝性疾患は、インスリン抵抗性、メタボリックシンドローム、I型及びII型糖尿病、低血糖症、副腎皮質機能不全を含む副腎皮質障害からなる群から選択される。
【００３８】
特定の実施形態では、代謝障害は、肥満及び肥満外科手術に関連する状態からなる群から選択される。
【００３９】
特定の実施形態において、癌は、肝臓癌、胆管癌、膵臓癌、胃癌、結腸直腸癌、乳癌、卵巣癌及び化学療法抵抗性に関連する状態の群において選択される。
【００４０】
特定の実施形態において、感染症は、ヒト免疫不全関連疾患（ＡＩＤＳ）及び関連障害、ウイルスＢ及びウイルスＣ感染の群において選択される。
【００４１】
特定の実施形態において、炎症性障害は、関節リウマチ、線維筋痛、ショーグレン症候群、強皮症、ベーチェット症候群、血管炎及び全身性エリテマトーデスの群において選択される。
【００４２】
ＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１に対する本発明の特定の化合物の活性に関するデータを以下の表に記載する。この表において、ＦＸＲ及びＧＰＢＡＲ１に対する本発明の化合物の活性を参照化合物の活性、すなわちＦＸＲに対するＣＤＣＡ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１に対するＴＬＣＡを比較した。各化合物を１０μＭの濃度で試験し、ＦＸＲに対するＣＤＣＡ及びＣＲＥ（すなわちＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１）に対するＴＬＣＡのトランスアクチベーション活性を１００％とみなした。
【００４３】
【表２】
2017516856.tif 000010
【００４４】
一態様では、本発明は、化合物がＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１デュアルアゴニストである式（Ｉ）の化合物に関する。この群の選択例はＢＡＲ５０２である。驚くべきことに、ＢＡＲ５０２は、ＡＮＩＴ又はエストロゲンの投与によって胆汁うっ滞したた動物に投与された場合に掻痒を誘発しない。コレステロール症候群では、胆汁酸の体内蓄積が掻痒を引き起こすと考えられている。最近、ＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１は、ＤＣＡ及びＬＣＡの皮内投与によって引き起こされる掻痒を媒介することが示された（Ａｌｅｍｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．２０１３，１２３，１５１３−１５３０）。臨床試験では、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）を罹患した患者にオベチコール酸を投与すると、約８０％の患者で重度の掻痒が生じた。ＢＡＲ５０２の具体的かつ驚くべき利点の１つは、この薬剤が、ｄ−ナフチル−イソチオシアネート（ＡＮＩＴ）又は１７ｏｃ−エチニルエストラジオール（胆汁うっ滞の２つの有効なモデル）の投与によって胆汁うっ滞した動物に投与された場合に、掻痒を誘導しない点である。これらの実験設定において、ＢＡＲ５０２投与は生存を増加させ、血清アルカリホスファターゼレベルを減弱させ、掻痒症を誘導することなく、ＯＳＴα、ＢＳＥＰ、ＳＨＰ及びＭＤＲ１を含むカノニカルＦＸＲ標的遺伝子の肝臓発現を強力に調節する。１７ｏｃ−エチニルエストラジオールモデルでは、ＢＡＲ５０２は胆汁うっ滞を軽減し、掻痒を誘発することなく、胆汁酸プールを再形成し、非閉塞性胆汁うっ滞のモデルでは、ＢＡＲ５０２が掻痒を引き起こすことなく肝臓の損傷を減弱させることが示される。
【００４５】
１つの局面において、本発明は、化合物が単独で投与される場合にＧＰＢＡＲ１に対して影響を与えないが、ＴＬＣＡ（１０μＭ）に起因するＧＰＢＡＲ１活性化の阻害に有効であり、ＧＰＢＡＲ１アンタゴニストとして振る舞う、高選択性ＦＸＲアゴニストである式（Ｉ）の化合物に関する。一態様では、本発明は、化合物がＦＸＲに影響を与えない高選択性ＧＰＢＡＲ１アゴニストである式（Ｉ）の化合物に関する。一態様では、本発明は、化合物がＦＸＲに影響を与えない高選択性ＧＰＢＡＲ１アンタゴニストである式（Ｉ）の化合物に関する。
【００４６】
本発明はまた、上記のような式（Ｉ）の化合物の製造方法に関する。
【００４７】
一態様では、本発明は、ＲがＣＨ２ＯＨである上述の式（Ｉ）の化合物を製造する方法（ｐｒｏｃｅｓｓ）に関するものであって、前記方法が、ＲがＣＯＯＭｅである式（Ｉ）の対応する化合物をＬｉＢＨ４と接触させることを含む方法に関する。
【００４８】
一態様では、本発明は、ＲがＣＯＯＨである上述の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法は、ＲがＣＯＯＭｅである式（Ｉ）の対応する化合物をアルカリ加水分解すること；好ましくはＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ中の５％ＮａＯＨで処理すること、を含んでいる。
【００４９】
一態様では、本発明は、ＲがＣＨ２ＯＳＯ３Ｈである上記の式（Ｉ）の化合物及びその塩を調製する方法であって、前記方法が、式（ＩＩ）の対応する化合物：
【００５０】
【化７】
2017516856.tif 000011
［式中ｎ及びＲ２が上述のものであり、かつ、Ｒ４及びＲ５がＨと異なる場合、ＯＰ（式中、Ｐはアルコール保護基である）］と、トリアルキルアミン−三酸化硫黄（ｔｒｉａｌｋｙｌａｍｉｎｅ−ｓｕｌｆｕｒ  ｔｒｉｏｘｉｄｅ）とを接触させ、式（ＩＩＩ）の化合物：
【化８】
2017516856.tif 000012
［式中、ｎ、Ｒ２、Ｒ４及びＲ５が上述のものである］を得ることを含む、方法である。
【００５１】
次いで、上記の式（ＩＩＩ）の化合物から、対応する式（Ｉ）の化合物は、Ｃ３及びＣ７におけるヒドロキシル官能基の脱保護によって得ることができる。
【００５２】
一態様では、本発明は、ｎ＝３である上記の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法が、式（ＩＶ）の対応する化合物：
【化９】
2017516856.tif 000013
［式中、ｍ＝ｎ−２＝１であり、Ｒ４及びＲ５が、Ｈ以外の場合、ＯＰ（式中、Ｐはアルコール保護基である）であり、かつ、Ｒ２が上述のものである（好ましくは、Ｒ２はＨ又はα−Ｅｔ）］を、ワンポットのスワーン酸化／ウィッティヒＣ２ホモログ化（Ｓｗｅｒｎ  ｏｘｉｄａｔｉｏｎ／Ｗｉｔｔｉｇ  Ｃ２  ｈｏｍｏｌｏｇａｔｉｏｎ）に供し、式（Ｖ）：
【化１０】
2017516856.tif 000014
［式中、ｍ＝１であり、Ｒ２は上述のものであり（好ましくはＲ２はＨ又はα−Ｅｔ）、Ｒ４及びＲ５が、Ｈ以外であれば、ＯＰ（式中、Ｐはアルコール保護基である）である］の保護されたメチルエステルを得ることを含む、方法である。
【００５３】
スワーン酸化は、塩化オキサリル、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びトリエチルアミンのような有機塩基を用いて、第一級又は第二級アルコールをアルデヒド又はケトンに酸化する化学反応である。
【００５４】
ウィッティヒ反応、又はウィッティヒオレフィン化は、アルデヒド又はケトンと、トリフェニルホスホニウムイリド（しばしばウィッティヒ試薬と呼ばれる）との化学反応であり、アルケン及びトリフェニルホスフィンオキシドを生成する。トリフェニルホスホニウムイリドは、好ましくはメチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテートである。
【００５５】
好ましくは、上記の方法は、さらに、上記の式（Ｖ）の化合物を触媒水素化に供することを含むものであり、従って、式（ＶＩ）の化合物：
【化１１】
2017516856.tif 000015
［式中、ｎ＝ｍ＋２＝３、Ｒ２は上述のものであり、Ｒ４及びＲ５が、Ｈ以外の場合、ＯＰ（式中、Ｐはアルコール保護基である）である］を提供する方法である。
【００５６】
好ましくは、ＯＰはシリルエーテル、より好ましくはｔ−ブチルジメチルシリルエーテルである。従って、脱保護は、好ましくは酸性加水分解によって、好ましくはＨＣｌで処理することによって実施される。
【００５７】
一態様では、本発明は、ｎ＝０である上記の式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法は、式（ＸＩＩ）の化合物：
【化１２】
2017516856.tif 000016
を、ＨＣＯＯＨ及びＨＣｌＯ４と接触させ、続いて、ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物及びＮａＮＯ２と接触させ、式（ＶＩＩ）の化合物：
【化１３】
2017516856.tif 000017
を得ることを含む方法である。
【００５８】
次いで、簡単でよく知られている化学変換は、−ＣＮ基がＣＯＯＨに加水分解され得、同様にＯＣＨＯ基がヒドロキシル基へと加水分解され得、又は、＝Ｏ基がヒドロキシル基へと還元することができるように、式（ＶＩＩ）の化合物から上記の式（Ｉ）の化合物をもたらすことができる。
【００５９】
一態様では、本発明は、Ｒ２が＝ＣＨ−ＣＨ３又はＥｔであり、かつＲ３がHではない、上記の式（Ｉ）の化合物を調製する方法に関するものであり、前記方法は、式（ＶＩＩＩ）の化合物をアルドール縮合に供し、式（ＶＩＩＩ）の化合物：
【化１４】
2017516856.tif 000018
［式中、ｎ＝０、１であり、Ｐはアルコール保護基であり、好ましくは、ＯＡｃである］を、アルキルリチウム、例えばＢｕＬｉと接触させ、続いてアセトアルデヒドと、好ましくはＢＦ３（ＯＥｔ）２も存在の下で、接触させ、式（ＩＸ）の化合物：
【化１５】
2017516856.tif 000019
［式中、ｎ及びＰが上述のものである］を得ることを含む、方法である。
【００６０】
アルドール縮合は、アルデヒドへのケトンエノラートの求核付加を含むアルドール付加反応であり、一旦形成されると、アルドール生成物は水分子を失って、α，β−不飽和カルボニル化合物を形成する。
【００６１】
式（ＩＸ）の化合物を触媒水素添加、好ましくはＰｄ（ＯＨ）２／Ｃの存在下Ｈ２で処理することにより、式（Ｘ）の化合物を得ることができる。
【化１６】
2017516856.tif 000020
【００６２】
一態様では、本発明は、Ｒ２がα−Ｅｔである式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法が、式（ＸＩＶ）の化合物：
【化１７】
2017516856.tif 000021
［式中、ｎは０又は１であり、Ｒ８がβ−ＯＨ、ＯＡｃ又はＨである］をＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨと接触させ、Ｃ６立体中心のエピマー化（ｅｐｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を得て、化合物（ＸＩ）の化合物：
【化１８】
2017516856.tif 000022
［式中、ｎが０又は１であり、Ｒ８が上述のものである］を得ることを含む方法である。Ｒ８がＯＡｃである場合、ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨを用いた処理は、Ｃ３アセトキシ基の加水分解が同時に起こり、従ってＲ８がＯＨである式（ＸＩ）の化合物が得られる。
【００６３】
Ｃ７におけるカルボニルの還元は、β−ＯＨ（化合物ＢＡＲ５０１及びＢＡＲｎ５０１の場合は７０％まで）及びα−ＯＨの混合物を得るために、式（Ｘ）の化合物をＮａＢＨ４又はＣａ（ＢＨ４）２と接触させることにより、得ることができる。その後、ＬｉＢＨ４での処理は、存在する場合、側鎖のメチルエステル官能基を−ＣＨ２ＯＨに還元し、Ｃ３のＯＡｃ保護基をＯＨに還元する。
【００６４】
Ｃ７におけるカルボニルの還元は、式（ＸＩ）の化合物又は側鎖にＣＯＯＨを有する対応する化合物を、ＬｉＢＨ４と接触させることで得ることができ、Ｃ７にてほとんど独占的にα−ＯＨを得る。同時に、ＬｉＢＨ４での処理は、存在する場合、側鎖のメチルエステル官能基を−ＣＨ２ＯＨに還元し、ＯＡｃ保護基をＣ３からＯＨに還元する。式（Ｉ）（式中、Ｒ１はα−ＯＨであり、Ｒ２は＝ＣＨ−ＣＨ３であり、Ｒ３はβ−ＯＨであり、ｎ＝０、１であり、ＲはＣＨ２ＯＨである）の化合物を得るために、式（ＩＸ）の化合物をＮａＢＨ４還元に供した後、ＬｉＢＨ４で処理して、Ｃ３での同時脱保護、特に脱アセチル化を伴うＣ７及び側鎖での還元を生成した。
【００６５】
式中のＲ１がα−ＯＨであり、Ｒ２が＝ＣＨ−ＣＨ３であり、Ｒ３がβ−ＯＨであり、ｎ＝０、１であり、ＲがＣＨ２ＯＨである上記式（Ｉ）の化合物を触媒水素化、好ましくはＨ２及びＰｄ（ＯＨ）２／Ｃと共に供し、式中のＲ１がα−ＯＨであり、Ｒ２がα−Ｅｔであり、Ｒ３がβ−ＯＨであり、ｎ＝０、１であり、ＲがＣＨ２ＯＨである式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００６６】
一態様では、本発明は、Ｒ１がβ−ＯＨである式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、該方法が、式（ＸＩＩＩ）の化合物：
【化１９】
2017516856.tif 000023
［式中、Ｒ２はＥｔ又はＨ、好ましくはＥｔである］から出発すること、及び、塩基の存在下にてトシルクロリドで処理した後、その後ＣＨ３ＣＯＯＫで処理することによってＣ３ヒドロキシ立体配置を反転すること、を含む方法である。
【００６７】
一態様では、本発明は、Ｒ１がＨである式（Ｉ）の化合物を調製する方法であって、前記方法が、上述の式（ＸＩＩＩ）の化合物をトシル化に供すること、及びＣ−３ヒドロキシル基の脱離に続く二重結合を還元することを含む方法である。
【００６８】
トシル化は、好ましくは、ＴｓＣｌ及びピリジンを用いて行われる。
【００６９】
脱離は、還流温度にてＤＭＦ中、ＬｉＢｒ及びＬｉ２ＣＯ３を用いて実施するのが好ましい。
【００７０】
二重結合還元は、好ましくは、接触水素添加、好ましくはＨ２及びＰｄ（ＯＨ）２／Ｃを用いて行われる。
【００７１】
本発明は、以下の実施例及び実験の項に照らしてよりよく理解することができるであろう。
【実施例】
【００７２】
実験セクション
化学
実施例１．Ｒ２＝Ｈの式（Ｉ）の化合物の調製
実施例１Ａ．ビス−ホモウルソデオキシコール酸誘導体の合成
【００７３】
Ｃ３及びＣ７におけるアルコール官能基の保護、側鎖メチルエステルの還元、及びその後のワンポットのスワーン酸化／ウィッティヒＣ２ホモログ化を含む、１の４段階反応シーケンスが、Δ２４，２５−ビスホモＵＤＣＡの保護メチルエステルが得られた。側鎖二重結合水素化及びアルコール官能基脱保護により、ビスホモＵＤＣＡメチルエステル４が得られ、出発物質としてＢＡＲ３０５及びそれに対応するアルコール、ＢＡＲ３０４の調製においてそれぞれＬｉＯＨ及びＬｉＢＨ４で処理して使用した。
【化２０】
2017516856.tif 000024
ａ）２，６−ルチジン、ｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃；  ｂ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２段階にわたる定量的収率；  ｃ）ＤＭＳＯ、塩化オキサリル、ＴＥＡ乾燥、、ＣＨ２Ｃｌ２、−７８℃、次いでメチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテート、７６％；ｄ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ  Ｄｅｇｕｓｓａ型、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ  １：１、定量的収率；  ｅ）ＨＣｌ  ３７％、ＭｅＯＨ、定量的収率；ｆ）ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ、６０％中のＮａＯＨ  ５％；  ｇ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７７％。
【００７４】
工程ａ，ｂ）３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５β−コラン−２４−オール（２）の調製
【００７５】
化合物１（１．２ｇ、３ｍｍｏｌ）をＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、２つのアルコール保護基にて保護し、１．９ｇの無色の針状のメチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５β−コラン−２４−オエート（定量的収率）を得て、精製することなく次の工程に付した。
【００７６】
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、０℃で乾燥ＴＨＦ（３０ｍＬ）中のメチルエステル（１．９ｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液に、メタノール（８５０μＬ、２１ｍｍｏｌ）及びＬｉＢＨ４（１０．５ｍＬ、ＴＨＦ中２Ｍ、２１ｍｍｏｌ）を添加した。シリカゲルによる精製により（ヘキサン／酢酸エチル９９：１及び０．５％ＴＥＡ）、白色固体として２を得た（１．８ｇ、定量的収率）。
【００７７】
工程ｃ）メチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２５，２６−ビスホモ−５８−ｃｈｏｌ−２４−エン−２６−オエート（３）のワンポッド調製。
【００７８】
乾燥ジクロロメタン（３０ｍＬ）中の塩化オキサリル（７．５ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）の溶液に−７８℃でアルゴン雰囲気下にてＤＭＳＯ（２．１ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を１５分間かけて滴下した。３０分後、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中の２の溶液（１．８ｇ、３ｍｍｏｌ）をカニューレで加え、混合物を−７８℃で３０分間撹拌した。Ｅｔ３Ｎ（２．５ｍＬ、１８ｍｍｏｌ）を滴下した。１時間後、メチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテート（２．０ｇ、６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温に温めた。ＮａＣｌ飽和溶液を加え、水相をジエチルエーテル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。シリカゲルによる精製により（ヘキサン−酢酸エチル９５：５及び０．５％ＴＥＡ）、化合物３を無色の油状物（１．５ｇ、７６％）として得た。
【００７９】
工程ｄ）メチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オエートの調製。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、ＴＨＦ乾燥／ＭｅＯＨ乾燥（２５ｍＬ／２５ｍＬ、ｖ／ｖ）中の化合物３（１．５ｇ、２．３ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｐｄ（ＯＨ）２  ５重量％の存在下、活性炭Ｄｅｇｕｓｓａ型（２０ｍｇ）上で水素付加し、３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オエート（１．５ｇ、定量的収率）を得て、精製することなく、工程ｅ）に付した。
【００８０】
工程ｅ）メチル３α，７β−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オエート（４）の調製
【００８１】
メチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オエート（１．５ｇ）をメタノール（７０ｍＬ）に溶解した。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、この溶液に、ＨＣｌ（２ｍＬ、３７％ｖ／ｖ）を添加し、無色アモルファス固体として４を得た（１．０ｇ、定量的収率）。
【００８２】
工程ｆ）３α，７β−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オイック酸（ＢＡＲ３０５）の調製。化合物４の一部（４３０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ（２０ｍＬ）の溶液中、ＮａＯＨ（４００ｍｇ、１０ｍｍｏｌ）で４時間還流にて加水分解した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（９５：５）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；４．６ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）にてＨＰＬＣによって精製した（流速１ｍＬ／分）（ｔＲ＝５分）。
【００８３】
ＢＡＲ３０５：Ｃ２６Ｈ４４Ｏ４
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：
δ 3.47 (2H, m, H-3及びH-7), 2.27 (2H, t, J= 7.2 Hz, H2-25), 0.96 (3H, s, H3-19), 0.94(3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.70 (3H, s, H3-18)
【００８４】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：
δ 178.2, 72.1, 71.9, 57.6, 56.7, 44.8, 44.5, 44.0, 41.6, 40.7, 38.6, 38.0, 36.9, 36.8, 36.1, 35.3, 35.2, 30.9, 29.8, 27.9, 26.7, 26.6, 23.9, 22.4, 19.3, 12.7.
【００８５】
工程ｇ）２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−３α，７β，２６−トリオール（ＢＡＲ３０４）。化合物４（５００ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を、工程ｂ）に記載したのと同じ操作条件下で還元した。シリカゲルによる精製により（ＣＨ２Ｃｌ２  ／メタノール９：１）、ＢＡＲ３０４を無色の油状物として得た（３７５ｍｇ、７７％）。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８５：１５）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；４．６ｍｍ  ｉ．ｄ．ｘ２５０ｍｍ）で分析サンプルをＨＰＬＣにより精製した（流速１ｍＬ／分）（ｔＲ＝９分）。
【００８６】
ＢＡＲ  ３０４：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：
δ 3.53 (2H, t, J= 6.5 Hz, H2-26), 3.48 (2H, m, H-3及びH-7), 0.95 (3H, s, H3-19), 0.93 (3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.70 (3H, s, H3-18).
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：
δ 72.1, 71.9, 63.0, 57.5, 56.7, 44.7, 44.4, 44.0, 41.6, 40.7, 38.5, 37.9, 37.2, 37.0, 36.1, 35.2, 33.7, 30.9, 29.8, 27.9, 27.4, 27.1, 23.9, 22.4, 19.4, 12.7.
【００８７】
実施例１Ｂ．３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−イル−２３−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ１０６）及び３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲ１０７）の合成
【００８８】
ＢＡＲ１０６は、ＵＤＣＡから出発して、ヒドロキシル基でのパラホルミル化、Ｃ２４のベックマン（Ｂｅｃｋｍａｎｎ）一炭素分解、及び対応するメチルエステル中間体へのＣ２３カルボキシル基の変換を含む反応順序によって調製された。シリルエーテルとしてのＣ−３及びＣ−７のヒドロキシル基の保護、Ｃ２３メチルエステルの還元、Ｃ２３第一級アルコール官能基の硫酸化、及び最後に脱保護してアンモニウム塩として粗製ＢＡＲ１０６を得た。アンバーライトで精製し、次にＨＰＬＣによりナトリウム塩として表題のＢＡＲ１０６を得た。
【００８９】
【化２１】
2017516856.tif 000025
ａ）ＨＣＯＯＨ、ＨＣｌＯ４、９６％；  ｂ）ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物、ＮａＮＯ２、９６％；  ｃ）ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ、９７％中のＫＯＨ３０％；  ｄ）ｐ−ＴＳＯＨ、ＭｅＯＨ乾燥、９８％；  ｅ）２，６−ルチジン、ｔ−ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃、８８％；  ｆ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、定量的収率；  ｇ）Ｅｔ３Ｎ．ＳＯ３、ＤＭＦ、９５℃；  ｈ）ＨＣｌ  ３７％、ＭｅＯＨ、次いでアンバーライトＣＧ−１２０、ＭｅＯＨ、２工程で８６％；  ｉ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、定量的収率
【００９０】
工程ａ，ｄ）メチル３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（６）の調製。
【００９１】
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、ウルソデオキシコール酸（２．０ｇ、５．１ｍｍｏｌ）をメチル３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（６、１．６ｇ、８７％）に変換した。
【００９２】
工程ｅ）メチル３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５β−コラン−２４−オエートの調製。
【００９３】
化合物６（１．２ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を、実施例１Ａの工程ａ）に記載したものと同じ操作条件下で、ヒドロキシル基で保護した。溶出液としてヘキサン／酢酸エチル９：１及び０．５％トリエチルアミンを使用してシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、保護されたメチルエステルを得た（１．６ｇ、８８％）。
【００９４】
工程ｆ）３α，７β−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）−５β−コラン−２４−オール（７）の調製
【００９５】
側鎖メチルエステル（８１８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を実施例１Ａの工程ｂ）に記載の同じ操作条件下で還元した。ヘキサン／酢酸エチル９８：２及び０．５％トリエチルアミンを溶出液として用いたシリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、７を得た（７７０ｍｇ、定量的収率）。
【００９６】
工程ｇ、ｈ）３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−イル−２３−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ１０６）の調製
【００９７】
Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、５７，９３７に記載された同一の合成手順に従って、トリエチルアミン−硫黄三酸化物複合体（２．０ｇ、１１ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（２５ｍＬ）中の７（６６０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。溶出液（流速３ｍＬ／分）としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（６５：３５）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ内×２５０ｍｍ）上のＨＰＬＣによりＢＡＲ１０６（ｔＲ＝８．４分）４４２ｍｇ（２段階で８６％）を得た。
ＢＡＲ１０６：Ｃ２３Ｈ３９ＮａＯ６Ｓ
【００９８】
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ4.04 (2H, m, H2-23), 3.48 (2H, m, H-3及びH-7), 1.00 (3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.97(3Ｈ, ｓ, H3-19), 0.72 (3H, s, H3-18)
【００９９】
工程ｉ）３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲ１０７）の調製
【０１００】
化合物6を工程fに記載したのと同じ操作条件下にてＢＡＲ１０７中で変換した。
【０１０１】
ＢＡＲ１０７：Ｃ２３Ｈ４０Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ3.60 (1H, m, H-7), 3.51 (1H, m, H-3), 3.50 (2H, m, H2-23), 0.97 (3H, d, ovl, H３-21), 0.96 (3H, s, H3-19), 0.72 (3H, s, H3-18)
【０１０２】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：
δ72.1, 71.9, 60.8, 57.5, 57.1, 44.8, 44.5, 44.0, 41.6, 40.7, 39.9, 38.6, 38.0, 36.1, 35.2, 34.1, 31.0, 29.8, 27.9, 23.9, 22.4, 19.5, 12.6;
【０１０３】
実施例１Ｃ．７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル−２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ４０２）の合成
【０１０４】
メチルエステル８上のＣ−３ヒドロキシル基でのトシル化及び脱離の後の二重結合還元、その後のＬｉＢＨ４処理及びＣ−２４第一級ヒドロキシル基の位置選択的な硫酸化によりＢＡＲ４０２が得られた。
【化２２】
2017516856.tif 000026
ａ）ｐ−ＴｓＣｌ、ピリジン、定量的収率；  ｂ）ＬｉＢｒ、Ｌｉ２ＣＯ３、ＤＭＦ、灌流、  ｃ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ  １：１、室温、定量的収率；  ｄ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７９％；  ｅ）Ｅｔ３Ｎ．ＳＯ３、ＤＭＦ、９５℃
【０１０５】
工程ａ−ｃ）メチル７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（９）の調製
【０１０６】
乾燥ピリジン（１００ｍＬ）中の８（９６５ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、トシルクロリド（４．７ｇ、２５．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で４時間撹拌した。それを冷水（１５０ｍＬ）に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ２溶液（１５０ｍＬ）、及び水（１５０ｍＬ）で洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で蒸発させて１．４ｇのメチル３α−トシルオキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（定量的収率）を得た。乾燥ＤＭＦ（３０ｍＬ）中の３α−トシルオキシ−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１．４ｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、臭化リチウム（４３４ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）及び炭酸リチウム（３７０ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を２時間還流した。室温に冷却後、混合物を１０％ＨＣｌ溶液（２０ｍＬ）にゆっくり注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水、飽和ＮａＨＣＯ３溶液及び水で連続して洗浄し、次いで無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発乾固してオレオ残留物（ｏｌｅｏｓ  ｒｅｓｉｄｕｅ）９６５ｍｇを得た（定量的収率）。
【０１０７】
実施例１Ａの工程ｄに記載したのと同じ操作条件下にてＰｄ（ＯＨ）２上での水素化が９７５ｍｇの９（定量的収率）を与え、これを精製することなく次の工程に付した。
【０１０８】
工程ｄ）５β−コラン−７α，２４−ジオール
【０１０９】
実施例１Ａの工程ｂに記載したのと同じ操作条件にて、化合物９をＬｉＢＨ４処理し、シリカゲルで精製する（酢酸エチル−ヘキサン、８５：１５）と、５β−コラン−７α，２４−ジオールが白色固体として得られた（７１４ｍｇ、７９％）。
【０１１０】
工程ｅ）７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル−２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ４０２）の調製。Ｃ２４上での硫酸化は、実施例１Ｂの工程ｇ）に記載したのと同じ操作条件下で行い、アンモニウム塩として未精製のＢＡＲ４０２を得た。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（９０：１０）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ内×２５０ｍｍ）上でＲＰ１８／ＨＰＬＣにより（流速３ｍＬ／分）、ナトリウム塩としてＢＡＲ４０２（ｔＲ＝６．６分）を得た。
【０１１１】
ＢＡＲ４０２：Ｃ２４Ｈ４１ＮａＯ５Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.96 (2H, t, J= 6.6 Hz, H2-24), 3.78 (1H, br s, H-7), 0.96 (3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.92 (3H, s, H3-19), 0.69 (3H, s, H3-18);
【０１１２】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 69.7, 69.4, 57.7, 51.6, 45.0, 43.8, 41.2, 41.0, 39.0, 37.1, 37.0 36.3, 34.2, 33.3, 31.7, 29.5, 29.0, 27.3, 24.8, 24.3, 22.7, 21.9, 19.2, 12.3.
【０１１３】
実施例２．Ｒ２＝Ｅｔ又は＝ＣＨ−ＣＨ３である式（Ｉ）の化合物の調製
実施例２Ａ．６β−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０１）の合成
【０１１４】
７−ＫＬＣＡ上のＣ−３ヒドロキシル基のメチルエステル形成とアセチル化により、中間体１０を２工程にわたって収率８４％で得た。シリルエノールエーテル中間体へのアルドール付加は、環外二重結合（Ｐｄ（ＯＨ）２上のＨ２）で水素化された１１を生成し、３工程にわたって収率８０％で１２を生じた。メタノール中でのＮａＢＨ４処理に続いて、粗反応生成物のＬｉＢＨ４還元により、そのＨＰＬＣ精製（８８％  ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）がそのＣ７エピマー、ＢＡＲ５０４−６ｂに対して７９％収率で純粋なＢＡＲ５０１を与えた混合物を得た。
【化２３】
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ａ）ｐ−ＴｓＯＨ、ＭｅＯＨ乾燥；  ｂ）無水酢酸、ピリジン、２工程で収率８４％；  ｃ）ＤＩＰＡ、ｎ−ＢｕＬｉ、ＴＭＳＣｌ、ＴＥＡ乾燥、ＴＨＦ乾燥  −７８℃、；  ｄ）アセトアルデヒド、ＢＦ３（ＯＥｔ）２、ＣＨ２Ｃｌ２、−６０℃、２工程で８０％；  ｅ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ  １：１、定量的収率；  ｆ）ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ；  ｇ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で７９％。
【０１１５】
工程ａ−ｄ）．メチル３α−アセトキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１１）の調製
【０１１６】
１００ｍＬの乾燥メタノールに溶解した７−ケトリトコール酸（５ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（１１ｇ、６４．１ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で２時間静置した。ＮａＨＣＯ３飽和溶液を加えて混合物を反応停止（ｑｕｅｎｃｈ）した。メタノールの蒸発後、残留物をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を鹹水（ｂｒｉｎｅ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて無定形固体としてメチルエステルを得た（５．１３ｇ、定量的収率）。
【０１１７】
乾燥ピリジン（１００ｍＬ）中のメチルエステル（５．１３ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の溶液に、過剰の無水酢酸（８．４ｍＬ、８９ｍｍｏｌ）を添加した。反応が完了したら、ピリジンを真空下で濃縮した。残留物を冷水（１００ｍＬ）に注ぎ、ＡｃＯＥｔ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して、さらに溶出液としてヘキサン／酢酸エチル８：２及び０．５％トリエチルアミンを使用してシリカゲル上にてフラッシュクロマトグラフィーで生成して、残留物を得た（白色固体として４．８ｇの１０、２工程で収率８４％）。
【０１１８】
乾燥ＴＨＦ（５０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（２３ｍＬ、０．１６ｍｏｌ）の溶液に、ｎ−ブチルリチウム（６０ｍＬ、ヘキサン中２．５Ｍ、０．１５ｍｏｌ）の溶液を−７８℃で滴下した。３０分後、トリメチルクロロシラン（２７．１ｍＬ、０．２１ｍｏｌ）を添加した。さらに３０分後、乾燥ＴＨＦ（７０ｍＬ）中の化合物１０（４．８ｇ、１０．７ｍｍｏｌ）溶液を添加した。反応物を−７８℃でさらに４５分間撹拌し、次いでトリエチルアミン（５４ｍＬ、０．３８ｍｏｌ）を添加した。１時間後、反応混合物を−２０℃まで加熱し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１００ｍＬ）で処理し、２時間で室温まで上げた。水相を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を次にＮａＨＣＯ３飽和溶液、水及び鹹水で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した後、残留物を真空下で蒸発させて、黄色残留物６ｇを得、これを乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、−７８℃で冷却した。この攪拌溶液に、アセトアルデヒド（３ｍＬ、５３ｍｍｏｌ）及びＢＦ３・ＯＥｔ２（１３．５ｍＬ、０．１０７ｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を−６０℃で２時間撹拌し、室温まで加熱した。混合物をＮａＨＣＯ３の飽和水溶液で反応停止し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。合わせた有機相を鹹水で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。
【０１１９】
シリカゲルによる精製（ヘキサン−酢酸エチル９：１及び０．５％ＴＥＡ）により、化合物１１（４．１ｇ、８０％）を得た。ＮＭＲ分析は、ジアステレオマー比Ｅ／Ｚ＞９５％を示した。環外二重結合におけるE配置は、Ｎｏｅｓｙスペクトル（４００ＭＨｚ、混合時間４００ｍｓ）でＨ３−２６（δ１．６７）／Ｈ−５（δ２．６２）の双極子カップリングによって確立された。
【０１２０】
（Ｅ）−３α−アセトキシ−６−エチリデン−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１１）：Ｃ２９Ｈ４４Ｏ５
【０１２１】
1H NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ３を使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 6.16 (1H, q, J= 7.0 Hz, H-25), 4.74 (1H, m, H-3), 3.64 (3H, s, COOCH3), 2.62 (1H, dd, J= 13.0, 3.6 Hz, H-5), 1.98 (3H, s, COCH3), 1.67 (3H, d, J= 7.0 Hz, H3-26), 1.00 (3H, s, H3-19), 0.92 (3H, d, J= 6.0 Hz, H3-21), 0.67 (3H, s, H3-18)
【０１２２】
13C NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ３を使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：
δ 204.5, 174.6, 170.7, 143.1, 130.2, 72.5, 54.5, 51.4, 50.7, 48.6, 45.2, 43.5, 39.1, 38.9, 35.1, 34.9, 34.1, 33.4, 31.0, 30.9, 28.4, 25.9 (2C), 22.8, 21.4, 21.2, 18.4, 12.7, 12.2.
【０１２３】
工程ｅ）メチル３α−アセトキシ−６β−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１２）の調製
【０１２４】
ＴＨＦ乾燥／ＭｅＯＨ乾燥（１００ｍＬ、１：１  ｖ／ｖ）中の１１（４．０ｇ、８．５ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｐｄ（ＯＨ）２  ２０ｗｔ％の存在下、活性炭（１００ｍｇ）ｄｅｇｕｓｓａ型で水素化した。混合物を標準ＰＡＲＲ装置に移し、窒素、及び、次に水素にて数回フラッシュした。装置を５０ｐｓｉのＨ２下でゆっくりと動かした（ｓｈａｃｋｅｄ）。反応物を室温で８時間撹拌した。触媒をセライト（Ｃｅｌｉｔｅ）で濾過し、回収した濾液を減圧下で濃縮して１２（４．０ｇ、定量的収率）を得た。
【０１２５】
メチル３α−アセトキシ−６β−エチル−７−ケト−５β−コラン−２４−オエート（１２）：Ｃ２９Ｈ４６Ｏ５
【０１２６】
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 4.65 (1H, m, H-3), 3.66 (3H, s, COOCH3), 2.56 (1H, t, J= 11.5 Hz, H-8), 2.35 (1H, m, H-23a), 2.22 (1H, m, H-23b), 1.99 (3H, s, COCH3), 1.22 (3H, s, H3-19), 0.92 (3H, d, J= 6.3 Hz, H3-21), 0.83 (3H, t, J= 7.2 Hz, H3-26), 0.67 (3H, s, H3-18)
【０１２７】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 214.7, 174.3, 170.2, 72.6, 61.7, 54.8, 51.3, 49.0, 48.5, 45.3, 42.7, 42.3 (2C), 38.6, 35.4, 35.1, 35.0, 31.0, 30.8, 28.0 (2C), 26.4, 25.7, 24.7, 21.3, 21.1, 18.2, 12.9, 11.9
【０１２８】
Ｃ６のエチル基のβ立体配置はＮｏｅｓｙスペクトル（４００ＭＨｚ、混合時間４００ｍｓ）で双極性カップリングＨ３−２６（δ０．８３）／Ｈ３−１９（δ１．２２）及びＨ−８（δ２．５６）／Ｈ−２５（δ１．８３）で決定した。
【０１２９】
工程ｆ，ｇ）６β−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０１）の調製
【０１３０】
化合物１２（１．１８ｇ、２．５ｍｍｏｌ）のメタノール溶液に、大過剰のＮａＢＨ４を０℃にて添加した。混合物を室温で２時間放置した後、水及びＭｅＯＨを１５分間０℃で滴加して、沸騰を観察した。溶媒を蒸発させた後、残留物を水で希釈し、ＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を鹹水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて１．３ｇの粗残留物を得、これをさらに精製することなく次の工程に付した。粗残留物を実施例１Ａの工程ｂ）に記載したのと同じ操作条件下にて、ＬｉＢＨ４（ＴＨＦ中２Ｍ）で処理した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８８：１２）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ内×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、８０２ｍｇのＢＡＲ５０１（７９％、ｔＲ＝１１分）を得た。
【０１３１】
あるいは、工程ｆは、その場で生成されたＣａ（ＢＨ４）２を用いて実施した。
【０１３２】
０℃で、化合物１２（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）及び無水エタノール（４ｍＬ）の溶液に、ＣａＣｌ２（４６６ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）を加えた。同じ溶液に、無水エタノール（４ｍＬ）中のＮａＢＨ４（１５９ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。−５℃で４時間後、ＭｅＯＨを滴下した。次いで、溶媒を蒸発させた後、残留物を水で希釈し、ＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を鹹水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて粗残留物５００ｍｇを得、これをさらに精製することなく工程ｇに付した。
【０１３３】
ＢＡＲ５０１：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した：δ 3.74 (1H, dd, J= 10.3, 6.0 Hz, H-7), 3.51 (1H, ovl, H-3), 3.49 (2H, ovl, H2-24), 1.00 (3H, s, H3-19), 0.97 (3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.96 (3H, t, J= 7.6 Hz, H3-26), 0.72 (3H, s, H3-18)
【０１３４】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した：δ 75.3 71.9, 63.6, 57.5, 56.5, 51.6, 45.7, 44.9, 42.1, 41.5, 40.4, 40.3, 37.1, 35.8, 32.4, 30.7, 30.3, 29.7, 29.6, 28.3, 26.2, 23.4, 22.1, 19.4, 14.8, 12.7
【０１３５】
実施例２Ｂ．６β−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０４−６ｂ）
【０１３６】
ＢＡＲ５０４−６ｂを、実施例２Ａに記載のように調製した（ｔＲ＝２０．４分）。
【０１３７】
ＢＡＲ５０４−６ｂ：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した：δ 3.60 (1H, s, H-7), 3.51 (2H, m, H2-24), 3.35 (1H, ovl, H-3), 2.30 (1H, q, J=13.5 Hz,H-4a), 0.97 (3H, d, J= 6.8 Hz, H3-21), 0.95 (3H, t, J= 7.3 Hz, H3-26), 0.94 (3H, s, H3-19), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０１３８】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した：δ 71.9, 71.8, 62.7, 56.8, 51.7, 50.5, 46.7, 42.5, 41.4, 40.1, 36.6, 36.4, 36.2, 36.0, 33.2, 32.4, 30.1, 29.5, 28.8, 28.5, 25.3, 23.9, 20.7, 18.4, 13.7, 11.4.
【０１３９】
実施例２Ｃ．６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲ５０２）、６β−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０１）及び６β−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０４−６ｂ）
【０１４０】
７−ＫＬＣＡ（１ｇ、２．５６ｍｍｏｌ）をＣ２４でベックマン分解し、Ｃ−２３でメチル化して、収率６６％で１３を得た。Ｃ−３にてアセチル化して、アルキル化により１４を得て、それを水素化して１５を得た。ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨ処理により、Ｃ−３にて加水分解及びＣ−６にてエピマー化を同時に与えた。Ｃ−２３メチルエステル官能基及びＣ−７カルボニル基の同時還元により、ＢＡＲ５０２を収率８９％にて提供した。ＢＡＲｎ５０１及びＢＡＲｎ５０４−６ｂの調製において、出発物質として中間体１５（２５０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）も使用した。
【化２４】
2017516856.tif 000028
ａ）ＨＣＯＯＨ、ＨＣｌＯ４；  ｂ）ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物、ＮａＮＯ２；  ｃ）ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ中のＫＯＨ３０％、３工程で８８％；  ｄ）ｐ−ＴｓＯＨ、ＭｅＯＨ乾燥；  ｅ）無水酢酸、ピリジン；  ｆ）ＤＩＰＡ、ｎ−ＢｕＬｉ、ＴＭＳＣｌ、ＴＥＡ乾燥、ＴＨＦ乾燥−７８℃；  ｇ）アセトアルデヒド、ＢＦ３（ＯＥｔ）２、ＣＨ２Ｃｌ２、−６０℃、４工程で６０％；  ｈ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ  １：１、定量的収率；  ｉ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ；  ｊ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ乾燥、０℃、２工程で７０％；  ｋ）ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、０℃；  ｌ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ乾燥、０℃、２工程で７７％
【０１４１】
工程ａ−ｄ）メチル７−ケト−２４−ノル−ＬＣＡ（１３）の調製
実施例１Ｂ、工程ａ−ｄ）に記載したものと同じ操作条件下で、７−ＫＬＣＡから化合物１３（６６０ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ、４工程で６６％）を調製した。
【０１４２】
工程ｅ−ｈ）メチル３α−アセトキシ−６β−エチル−７−ケト−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（１５）の調製。化合物１３（６６０ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を、実施例２Ａ、工程ｂ〜ｄに記載したのと同じ操作条件に付して、６０３ｍｇの１４（３工程で７８％）を得た。ＮＭＲ分析は、ジアステレオマー比Ｅ／Ｚ＞９５％を示した。環外二重結合におけるＥ配置は、Ｎｏｅｓｙスペクトル（４００ＭＨｚ、混合時間４００ｍｓ）における双極子カップリングＨ３−２５（δ１．６７）／Ｈ−５（δ２．６１）により確立された。
【０１４３】
（Ｅ）−３α−アセトキシ−６−エチリデン−７−ケト−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（１４）：Ｃ２８Ｈ４２Ｏ５
【０１４４】
1H NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ３を使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 6.17 (1H, q, J= 7.2 Hz, H-24), 4.75 (1H, m, H-3), 3.04 (3H, s, COOCH3), 2.61 (1 H, dd, J= 13.1, 4.0 Hz, H-5), 1.98 (3H, s, COCH3), 1.67 (3H, d, J= 7.2 Hz, H3-25), 1.00 (3H, s, H3-19), 0.97 (3H, d, J= 6.8 Hz, H3-21), 0.67 (3H, s, H3-18)
【０１４５】
13C NMRは、溶媒としてCDCl3を使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 204.5, 174.2, 170.5, 143.0, 130.6, 72.5, 54.7, 51.4, 50.7, 48.6, 45.3, 43.7, 41.5, 39.1, 38.8, 34.6, 34.2, 33.6, 33.4, 28.5, 25.9 (2C), 22.8, 21.3 (2C), 19.7, 12.7, 12.1
【０１４６】
実施例２Ａ、工程ｅに記載したものと同じ操作条件下で、Ｐｄ（ＯＨ）２上の水素化により、６００ｍｇの１５（定量的収率）を得た。
【０１４７】
Ｃ−６におけるエチル基のβ配置は、Ｎｏｅｓｙスペクトル（４００ＭＨｚ、混合時間４００ｍｓ）における双極子カップリングＨ３−２５（δ０．８３）／Ｈ３−１９（δ１．２２）によって決定した。
【０１４８】
３α−アセトキシ−６β−エチル−７−ケト−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（１５）：Ｃ２８Ｈ４４Ｏ５
1H NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ３を使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 4.65 (1H, m, H-3), 3.67 (3H, s, COOCH3), 2.60 (1H, t, J= 11.2 Hz, H-8), 2.43 (1H, dd, J= 14.2, 2.6 Hz, H-22a), 1.98 (3H, s, COCH3), 1.88 (1H, m ovl, H-6), 1.22 (3H, s, H3-19), 0.98 (3H, d, J= 6.4 Hz, H3-21), 0.83 (3H, t, J= 7.0 Hz, H3-25), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０１４９】
13C NMRは、溶媒としてCDCl3を使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 215.3, 174.0, 170.5, 72.8, 61.9, 55.0, 51.4, 49.2, 48.7, 45.5, 42.9, 42.6, 41.4, 38.7 (2C), 35.6, 35.3, 34.9, 28.3 (2C), 26.5, 25.9, 24.8, 21.4, 21.3, 19.6, 13.0, 12.1
【０１５０】
工程ｉ、ｊ）６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲ５０２）の調製
【０１５１】
化合物１５（４５０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及び乾燥メタノール（４ｍＬ）の溶液にＭｅＯＮａ（２０ｍＬ、ＭｅＯＨ中０．５Ｍ、１０ｍｍｏｌ）を加えた。２４時間後、Ｈ２Ｏを滴下した。次いで、溶媒を蒸発させた後、残留物を水で希釈し、ＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて１６を得、これをさらに精製することなく工程ｇに付した。
【０１５２】
メチル６α−エチル−３α−ヒドロキシ−７−ケト−２４−ノル−５β−コラン−２３−オエート（１６）：Ｃ２６Ｈ４２Ｏ４
【０１５３】
1H NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ３を使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.64 (3H, s, COOCH3), 3.45 (1H, m, H-3), 2.83 (1H, q, J= 7.3 Hz, H-6), 2.51 (1H, t, J=11.2 Hz, H-8), 2.45 (1H, dd, J= 14.5, 3.2 Hz, H-22a), 1.26 (3H, s, H3-19), 0.98 (3H, d, J= 6.6 Hz, H3-21), 0.81 (3H, t, J= 7.0 Hz, H3-25), 0.73 (3H, s, H3-18)
【０１５４】
13C NMRは、溶媒としてＣＤＣｌ３を使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 214.9, 175.4, 71.6, 56.2, 53.2, 52.0, 51.9, 51.0, 50.5, 45.2, 43.8, 42.2, 40.2, 36.7, 35.3, 34.8, 32.5, 30.5, 29.4, 25.6, 24.0, 22.9, 20.1, 20.0, 12.6, 12.4
【０１５５】
化合物１６を、実施例１Ａの工程ｇに記載の同じ操作条件下でＬｉＢＨ４還元に供した。ヘキサン／ＥｔＯＡｃ  ６：４で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより、ＢＡＲ５０２（２７４ｍｇ、２工程で７０％）を得た。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８８：１２）を用いて、Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；４．６ｍｍ  ｉ．ｄ．ｘ２５０ｍｍ）でＨＰＬＣにより分析サンプルを得た（流速１ｍＬ／分、ｔＲ＝１０．８分）。
【０１５６】
ＢＡＲ５０２：Ｃ２５Ｈ４４Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.65 (1H, s, H-7), 3.61 (1H, m, H-23a), 3.53 (1H, m, H-23b) 3.31 (1H, m, H-3), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H3-21), 0.92 (3H, s, H3-19), 0.91 (3H, t, J= 7.0 Hz, H3-25), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０１５７】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 73.2, 71.1, 60.7, 57.7, 51.4, 46.9, 43.8, 42.9, 41.3, 40.9, 39.8, 36.7, 36.5, 34.6, 34.5, 34.2, 31.2, 29.4, 24.5, 23.7, 23.4, 21.8, 19.3, 12.1, 11.9
【０１５８】
工程ｋ、ｌ）．６β−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０１）及び６β−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０４−６ｂ）。化合物１５（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を、実施例２Ａの工程ｆ〜ｇに記載のものと同じ操作条件に付した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８６：１４）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ i.d.×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、４７ｍｇのＢＡＲｎ５０１（５４％、ｔＲ＝１１分）及び２０ｍｇのＢＡＲｎ５０４−６ｂ（２３％、ｔＲ＝１５分）を得た。
【０１５９】
ＢＡＲｎ５０１：Ｃ２５Ｈ４４Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.73 (1H, dd, J= 10.5, 5.5 Hz, H-7), 3.61 (1H, m, H-23a), 3.51 (1H, m, ovl, H-23b), 3.51 (1H, m, ovl, H-3), 0.98 (3H, d, ovl, H3-21), 0.97 (3H, s, H3-19), 0.96 (3H, t, ovl, H3-25), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０１６０】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 75.2, 71.8, 60.8, 57.5, 56.6, 51.5, 45.5, 44.8, 42.0, 41.4, 40.7, 40.3, 39.9, 36.9, 36.0, 34.2, 30.5, 29.6, 28.3, 26.2, 23.4, 22.0, 19.4, 14.7, 12.9
【０１６１】
ＢＡＲｎ５０４−６ｂ：Ｃ２５Ｈ４４Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ3.63 (1H, m, H-23a), 3.60 (1H, m, H-7), 3.55 (1H, m, H-23b), 3.37 (1H, m, H-3), 2.30 (1H, q, J= 12.5 Hz, H-4a), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H3-21), 0.95 (3H, s, H3-19), 0.95 (3H, t, J= 7.0 Hz, H3-25), 0.72 (3H, s, H3-18)
【０１６２】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 72.8, 72.7, 60.8, 57.9, 52.7, 51.4, 47.5, 43.7, 42.3, 41.0, 39.9, 37.5, 37.3, 36.7, 34.2, 33.3, 31.0, 29.6, 29.4, 26.2, 24.8, 21.6, 19.3, 14.5, 12.1
【０１６３】
実施例２Ｄ．６−エチリデン−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０３）、６α−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０１−６ａ）、６−エチリデン−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０３）及び６α−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０１−６ａ）
【０１６４】
中間体１１をＮａＢＨ４還元に供し、続いてＬｉＢＨ４で処理した。あるいは、直接的方法で進行させたＬｉＡｌＨ４処理は、Ｃ−２４及びＣ−７同時還元をもたらす。ＢＡＲ５０３はまた、Ｐｄ（ＯＨ）２触媒上での水素化によって、ＢＡＲ５０１−６ａの出発物質として使用した。同じ合成プロトコルを、対応する２３−誘導体、ＢＡＲｎ５０３及びＢＡＲｎ５０１−６ａを生成する中間体１４で実施した。
【０１６５】
【化２５】
2017516856.tif 000029
ａ）ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ；  ｂ）ＬｉＢＨ４，ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で８５％；  ｃ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２、ＴＨＦ：ＭｅＯＨ  １：１  ｖ／ｖ
【０１６６】
工程ａ，ｂ）．６−エチリデン−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール  （ＢＡＲ５０３）及び６−エチリデン−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０３）の調製
【０１６７】
化合物１１（１ｇ、２．１１ｍｍｏｌ）を実施例２Ａ、工程ｆ、ｇに記載の同じ操作条件に付した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８８：１２）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ i.d.×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、７２７ｍｇのＢＡＲ５０３(２工程で８５％、ｔＲ＝９．２分）を得た。代替的に、１１のＬｉＡｌＨ４処理により、ＢＡＲ５０３を得た。
【０１６８】
ＢＡＲ５０３：Ｃ２６Ｈ４４Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 5.66 (1H, q, J= 6.9 Hz, H-25), 3.90 (1H, d, J= 9.8 Hz, H-7), 3.55 (1H, m, H-3), 3.50 (2H, m, H2-24), 2.50 (1H, dd, J= 4.0, 13.1 Hz, H-5), 1.62 (3H, d, J= 6.9 Hz, H3-26), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H3-21), 0.81 (3H, s, H3-19), 0.70 (3H, S, H3-18)
【０１６９】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 142.7, 114.5, 73.4, 71.1, 63.6, 57.1, 56.1, 45.2, 44.9, 44.2, 40.7, 40.2, 36.3, 36.2, 35.9, 34.7, 32.4, 30.2, 29.5, 28.8, 27.4, 22.6, 21.5, 18.5, 11.8, 11.7
【０１７０】
同様の合成プロトコルを中間体１４で実施した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８６：１４）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ１００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、ＢＡＲｎ５０３（ｔＲ＝８分）を得た。
【０１７１】
ＢＡＲｎ５０３：Ｃ２５Ｈ４２Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 5.66 (1H, q, J= 6.8 Hz, H-24), 3.92 (1H, d, J= 9.9 Hz, H-7), 3.60 (1H, m, H-23a), 3.56 (1H, m, H-3), 3.55 (1H, m, H-23b), 2.52 (1H, dd, J= 3.7, 13.2 Hz, H-5), 1.63 (3H, d, J= 6.8 Hz, H3-25), 0.98 (3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.95 (3H, s, H3-19), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０１７２】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 143.7, 115.4, 74.1, 71.8, 60.8, 58.0, 57.1, 46.1, 45.9, 45.1, 41.6, 41.1, 39.9, 37.0, 36.4, 35.8, 34.1, 30.9, 29.8, 28.1, 23.5, 22.5, 19.5, 12.7, 12.6
【０１７３】
工程ｃ）．６α−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ５０１−６ａ）及び６α−エチル−３α，７β−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ５０１−６ａ）
【０１７４】
ＢＡＲ５０３（３５０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）を実施例２Ａの工程ｅに記載したのと同じ操作条件に付し、ＢＡＲ５０１−６ａを定量的収率で得た。
【０１７５】
ＢＡＲ５０１−６ａ：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.50 (2H, t, J= 6.8 Hz, H3-24), 3.44 (1 H, m, H-3), 3.07 (1H, t, J= 9.8 Hz, H-7), 0.96 (3H, d, J= 6.6 Hz, H3-21), 0.95 (3H, s, H3-19), 0.66 (3H, t, J= 7.4 Hz, H3-26), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０１７６】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 76.5, 72.3, 63.6, 57.9, 57.3, 46.3, 45.0, 44.8, 41.8, 41.0, 39.9, 37.0, 36.4, 35.5, 33.3, 31.3, 31.0, 30.3, 29.8, 27.8, 24.3, 22.5, 22.0, 19.3, 12.8, 11.8
【０１７７】
ＢＡＲｎ５０３を、実施例２Ａの工程ｅに記載したのと同じ操作条件に付し、定量的収率でＢＡＲｎ５０１−６ａを得た。
【０１７８】
ＢＡＲｎ５０１−６ａ：Ｃ２５Ｈ４４Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した：δ 3.62 (1H, m, H-23a), 3.54 (1H, m, H-23b), 3.45 (1H, m, H-3), 3.08 (1H, t, J= 9.8 Hz, H-7), 0.97 (3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.95 (3H, s, H3-19), 0.66 (3H, t, J= 7.4 Hz, H3-25), 0.73 (3H, s, H3-18)
【０１７９】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 76.4, 72.5, 60.8, 57.9, 57.2, 46.2, 45.1, 44.7, 41.8, 41.2, 40.0, 39.8, 36.5, 35.6, 34.2, 31.2, 30.9, 29.9, 27.9, 24.1, 22.7, 22.0, 19.5, 12.7, 11.7
【０１８０】
実施例２Ｅ  ６α−エチル−３α，７ａ−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−ニトリル（ＢＡＲ５０６）
【０１８１】
７−ＫＬＣＡを、実施例１Ｂの工程ａ〜ｂに記載したものと同じ合成手順に従ってニトリル１７に変換した。アルキル化に続き、実施例２Ａの工程ｃ〜ｄ及び実施例２Ｃの工程ｉに記載と同じ操作条件下で、二重結合還元及びＣ−６でのエピマー化それぞれにより、１８を得た。実施例２Ｃの工程ｊのように、ＬｉＢＨ４処理により、ＢＡＲ５０６に所望の７αヒドロキシル基が得られた。
【化２６】
2017516856.tif 000030
ａ）ＨＣＯＯＨ、ＨＣｌＯ４；  ｂ）ＴＦＡ、トリフルオロ酢酸無水物、ＮａＮＯ２；  ｃ）ＤＩＰＡ、ｎ−ＢｕＬｉ、ＴＭＳＣｌ、ＴＥＡ乾燥、ＴＨＦ乾燥−７８℃；  ｄ）アセトアルデヒド、ＢＦ３（ＯＥｔ）２、ＣＨ２Ｃｌ２、−６０℃；  ｅ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ  １：１；  ｆ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ；  ｇ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ乾燥、０℃
【０１８２】
ＢＡＲ５０６：Ｃ２５Ｈ４１ＮＯ２
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.66 (1H, br s, H-7), 3.31 (1H, ovl, H-3), 2.46 (1H, dd, J= 3.8,16.9 Hz, H-22a), 2.34 (1H, dd, J= 7.4, 16.9 Hz, H-22b), 1.16 (3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.91 (3H, t, J= 7.5 Hz, H3-25), 0.92 (3H, s, H3-19), 0.73 (3H, s, H3-18)
【０１８３】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 120.3, 72.9, 70.9, 56.1, 51.5, 46.7, 43.4, 42.9, 41.4, 40.2, 36.5, 36.2, 34.3 (2C), 34.2, 30.7, 29.2, 24.9, 24.4, 23.4, 23.3, 21.9, 18.5, 12.1, 11.6
【０１８４】
実施例２Ｆ．６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０１）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル  ２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆ）、６β−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０２）、６α−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０３）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７０４）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイル  タウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴ７０４）、６β−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０５）及び６α−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１１）
【０１８５】
化合物１２をメタノール中のＭｅＯＮａで処理して、Ｃ−３で脱アセチル化及びＣ−６では逆を得た。環Ａ上の二重結合のトシル化、脱離及び水素化は、２０を与えた。メチルエステル官能基での加水分解及びその後のＬｉＢＨ４処理は、高い化学収率でＢＡＲ７０４をもたらした。中間体２０をＢＡＲ７０１の出発物質として使用した。ＢＡＲ７０１の少量のアリコートのＣ−２４上での硫酸化により、ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆが得られた。
【化２７】
2017516856.tif 000031
ａ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ；  ｂ）ｐ−ＴｓＣｌ、ピリジン、２工程にわたる定量的収率；  ｃ）ＬｉＢｒ，Ｌｉ２ＣＯ３、ＤＭＦ、灌流、ｄ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ  １：１、室温、２工程で８８％。  ｅ）ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ、８２％；  ｆ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、８３％；  ｇ）ＤＭＴ−ＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、タウリン、ＤＭＦ乾燥；  ｈ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７７％；  ｉ）Ｅｔ３Ｎ．ＳＯ３、ＤＭＦ、９５℃
【０１８６】
工程ａ〜ｆ）６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７０４）の調製。
【０１８７】
化合物１２（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）中のＭｅＯＮａ（２．１ｍＬ、ＭｅＯＨ中０．５Ｍ、１．０５ｍｍｏｌ）ので、実施例２Ｃの工程ｉと同じ操作条件で一晩処理した。実施例１Ｃの工程ａと同じ操作条件で、粗反応生成物のトシル化により１９（６２０ｍｇ、２工程にわたる定量的収率）を得た。中間体１９（５００ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を実施例１Ｃの工程ｂ、ｃと同じ操作条件に付して、３１２ｍｇの２０（２工程にわたって８８％）を得た。
【０１８８】
実施例１Ａの工程ｆと同じ操作条件下で、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ（１０ｍＬ）の溶液中で、化合物２０（２００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（９６ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）で加水分解した。粗乾燥カルボン酸中間体（１９０ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）をＴＨＦ乾燥（５ｍＬ）中のＬｉＢＨ４（１．６５ｍＬ、ＴＨＦ中２Ｍ、３．３ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（１３３μＬ、３．３ｍｍｏｌ）で処理した。シリカゲル（ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ  ９９：１）で精製すると１５７ｍｇのＢＡＲ７０４（８３％）が得られた。同様の実施形態において、アルカリ加水分解後のＬｉＢＨ４処理は、少量（約１０％）の６α−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１１）を産生し、これを、溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８８：１２）で、Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣ精製によって単離した。
【０１８９】
ＢＡＲ７０４：Ｃ２６Ｈ４４Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.65 (1H, br s, H-7), 2.34 (1H, m, H-23a), 2.20 (1H, m, H-23b), 0.96 (3H, d, J= 6.3 Hz, H3-21), 0.92 (3H, s, H3-19), 0.89 (3H, t, J= 7.4 Hz, H3-26), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０１９０】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 178.0, 71.6, 57.4, 51.7, 48.7, 43.8, 43.3, 41.5, 41.1, 39.3, 37.4, 36.8, 34.6, 32.5 (2C), 29.3, 28.8, 25.1, 24.6 (2C), 23.5, 22.5, 22.0, 18.8, 12.2, 12.1
【０１９１】
ＢＡＲ７１１：Ｃ２６Ｈ４４Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.08 (1H, t, J= 9.6 Hz, H-7), 2.32 (1H, m, H-23a), 2.20 (1H, m, H-23b), 0.96 (3H, d, J= 6.2 Hz, H3-21), 0.95 (3H, s, H3-19), 0.85 (3H, t, J= 7.0 Hz, H3-26), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０１９２】
工程ｇ）６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴ７０４）の調製
【０１９３】
ＤＭＦ乾燥（５ｍＬ）中のＢＡＲ７０４（１０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ）のアリコートを、ＤＭＴ−ＭＭ（２０．５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（８３μＬ、０．６ｍｍｏｌ）で処理し、混合物を室温で１０分間攪拌した。次いで、混合物にタウリン（１８ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加した。３時間後、反応混合物を真空下で濃縮し、水（５ｍＬ）に溶解した。Ｃ１８シリカゲルカラムで精製し、次いで、溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８３：１７）を用いて次いでＮｕｃｌｅｏｄｕｒ１００−５  Ｃ１８（５μｍ；  １０ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）のＨＰＬＣにより（流速３ｍＬ／分）、４．５ｍｇのＢＡＲＴ７０４（ｔＲ＝１０分）を得た。
【０１９４】
ＢＡＲＴ７０４：Ｃ２８Ｈ４８ＮＮａＯ５Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.65 (1H, br s, H-7), 3.58 (2H, t, J= 7.0 Hz, CH2-N), 2.96 (2H, t, J= 9.6 Hz, CH2-S), 2.25 (1H, m, H-23a), 2.10 (1H, m, H-23b), 0.97 (3H, d, J= 6.4 Hz, H3-21), 0.92 (3H, s, H3-19), 0.89 (3H, t, J= 7.1 Hz, H3-26), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０１９５】
工程ｈ）６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０１）の調製
【０１９６】
化合物２０（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を実施例２Ｃの工程ｊと同じ操作条件下で処理した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（９２：８）を用いてＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ、１０ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でＨＰＬＣ精製して（流速３ｍＬ／分）、６４ｍｇのＢＡＲ７０１（ｔＲ＝３１分）と、少量の６α−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０３）（８ｍｇ、ｔＲ＝２４．８分）を得た。
【０１９７】
ＢＡＲ７０１：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ２
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.65 (1H, br s, H-7), 3.51 (2H, m, H2-24), 0.97 (3H, d, J= 6.3 Hz, H3-21), 0.92 (3H, s, H3-19), 0.89 (3H, t, J= 7.3 Hz, H3-26), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０１９８】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 71.6, 63.6, 57.6, 51.8, 48.7, 43.7, 43.3, 41.5, 41.1, 39.3, 37.5, 37.0, 34.6, 33.2, 30.3, 29.4, 28.8, 25.1, 24.6 (2C), 23.5, 22.5, 22.0, 19.2, 12.3, 12.1
【０１９９】
ＢＡＲ７０３  Ｃ２６Ｈ４６Ｏ２
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.51 (2H, m, H2-24), 3.07 (1 H, t, J= 10.0 Hz, H-7), 0.96 (3H, d, J= 6.6 Hz, H3-21), 0.84 (3H, t, J= 7.0 Hz, H3-26), 0.95 (3H, s, H3-19), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０２００】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 76.3, 63.6, 57.9, 56.8, 46.3, 45.3, 45.0, 44.7, 41.7, 41.1, 38.8, 37.0, 36.3, 33.3, 30.3, 28.1, 27.9 (2c), 25.0 (2c), 22.0, 21.9 (2c), 19.4, 12.7, 11.6
【０２０１】
工程ｉ）６α−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆ）
【０２０２】
ＢＡＲ７０１の少量のアリコート上のＣ−２４上の硫酸化を、実施例１Ｂの工程ｇ）に記載したものと同じ操作条件下で行い、アンモニウム塩として粗製のＢＡＲ７０１ｓｏｌｆを得た。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８２：１８）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）上のＲＰ１８／ＨＰＬＣにより（流速３ｍＬ／分）、ナトリウム塩として、ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆ（ｔＲ＝１４．２分）を得た。
【０２０３】
ＢＡＲ７０１ｓｏｌｆ：Ｃ２６Ｈ４５ＮａＯ５Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.96 (2H, t, J= 6.3 Hz, H2-24), 3.64 (1H, br s, H-7), 0.96 (3H, d, J= 6.6 Hz, H3-21), 0.91 (3H, s, H3-19), 0.88 (3H, t, J= 7.4 Hz, H3-26), 0.69 (3H, s, H3-18)
【０２０４】
６β−エチル−７β−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０２）及び６β−エチル−７α−ヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０５）の調製
【０２０５】
化合物１２（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を、反応時間（２時間）を除いて、実施例２Ｃの工程ｉと同じ操作条件下で、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のＭｅＯＮａ（２．１ｍＬ、ＭｅＯＨ中０．５Ｍ、１．０５ｍｍｏｌ）で処理した。実施例１Ｃの工程ａと同じ操作条件にて粗反応生成物のトシル化により、２１（６２０ｍｇ、２工程にわたる定量的収率）を与えた。中間体２１（６００ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を実施例１Ｃの工程ｂ、ｃと同じ操作条件に付して、４００ｍｇの２２（９４％）を得た。化合物２２（３５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を、実施例２Ａの工程ｆ、ｇと同じ操作条件下でＮａＢＨ４／ＬｉＢＨ４で還元した。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（９２：８）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ i.d.×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、１８０ｍｇのＢＡＲ７０２（ｔＲ＝２５分）及び７５．４ｍｇのＢＡＲ７０５（ｔＲ＝１３分）を得た。あるいは、工程ｅを、その場で生成されたＣａ（ＢＨ４）２を用いて実施した。
【化２８】
2017516856.tif 000032
ａ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ；  ｂ）ｐ−ＴｓＣｌ、ピリジン、２工程の定量的収率；  ｃ）ＬｉＢｒ、Ｌｉ２ＣＯ３、ＤＭＦ、灌流；ｄ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ  １：１、室温、２工程で９４％；  ｅ）ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ；  ｆ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で７８％
【０２０６】
ＢＡＲ７０２：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ２
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.67 (1H, dd, J= 8.7, 4.7 Hz, H-7), 3.51 (2H, m, H2-24), 0.98 (3H, s, H3-19), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H3-21), 0.96 (3H, t, J= 7.4 Hz, H3-26), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０２０７】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 75.5, 63.8, 57.6, 56.5, 44.2, 43.7, 42.8, 41.0, 40.9, 40.8, 38.2 (2C), 36.9, 34.4, 32.8, 29.7, 28.9, 27.0, 26.1, 24.7, 22.2, 22.0 (2C), 19.2, 13.9, 12.3
【０２０８】
ＢＡＲ７０５：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ２
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.59 (1H, br s, H-7), 3.51 (2H, m, H2-24), 2.23 (1H, dq, J= 13.9, 4.0 Hz, H-4a), 0.97 (3H, d, J= 6.6, H3-21), 0.95 (3H, t, J= 7.1 Hz, H3-26), 0.94 (3H, s, H3-19), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２０９】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ  73.1, 63.2, 57.3, 52.8, 51.4, 49.4, 43.8, 41.3, 39.7, 37.4 (2C), 37.2, 34.2, 32.6 (2C), 29.9, 29.5, 28.9, 28.3, 27.3, 24.5, 21.7, 21.2, 18.8, 14.3, 12.3
【０２１０】
実施例２Ｇ．６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１０）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴ７１０）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０６）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル  ２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ７０６ｓｏｌｆ）、６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０７）、６β−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０８）及び６β−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０９）及び６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１２）の合成
【０２１１】
誘導体１９のＣ−３において収束プロトコル逆転（convergent protocol inversion）に続き、ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨの処理により、ＢＡＲ７０６、ＢＡＲ７０６ｓｏｌｆ、ＢＡＲ７１０及びＢＡＲＴ７１０の合成の出発物質として使用した２３が得られた。Ｃ−３での反転、それに続くＣ−７及びＣ−２４での還元が、ＢＡＲ７０８及びＢＡＲ７０９を産生した。
【０２１２】
【化２９】
2017516856.tif 000033
ａ）ＣＨ３ＣＯＯＫ、ＤＭＦ：Ｈ２Ｏ  ５：１  ｖ／ｖ；  ｂ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ、２工程で７４％；  ｃ）ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ；  ｄ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で６５％；  ｅ）ＤＭＴ−ＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、タウリン、ＤＭＦ乾燥；  ｆ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、５８％；  ｇ）Ｅｔ３Ｎ．ＳＯ３、ＤＭＦ、９５℃；  ｈ）ＣＨ３ＣＯＯＫ、ＤＭＦ：Ｈ２Ｏ  ５：１；  ｉ）ＮａＢＨ４、ＭｅＯＨ；  ｊ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、３工程にわたり７４％
【０２１３】
工程ａ−ｄ）６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１０）の調製
【０２１４】
水（２ｍＬ）及びＮ、Ｎ’−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１０ｍＬ）に溶解した２１（６００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）及びＣＨ３ＣＯＯＫ（９８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を２時間還流した。溶液を室温で冷却し、次いで酢酸エチル及び水を加えた。分離した水相を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水で洗浄し、乾燥させ（Na2SO4）、蒸発乾固して６００ｍｇの混合物を得た。シリカゲルで精製して（ヘキサン−酢酸エチル８：２及び０．５％ＴＥＡ）、オレオ油３５０ｍｇを得た。実施例２Ｃの工程ｉに記載したのと同じ操作条件下でＣ−６反転により、２３（３２０ｍｇ、２工程にわたって７４％）が得られ、それを加水分解に付し、続いて、実施例２Ｆの工程ｅ、ｆの記載のようにＬｉＢＨ４処理を行った。溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８８：１２）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、２０８ｍｇのＢＡＲ７１０（６５％、ｔＲ＝１１分）を得た。代替的に、２１に対してＣ−３で反転し、その後、アルカリ加水分解し、次いでＬｉＢＨ４処理により、ＢＡＲ７１０が直接的に得られた。
【０２１５】
同一の実施形態では、アルカリ加水分解後のＬｉＢＨ４処理により、少量（約１０％）の６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイック酸（ＢＡＲ７１２）が産生され、溶出液としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８８：１２）を用いて、Ｎｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）にてＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分、ｔＲ＝８分）単離した。
【０２１６】
ＢＡＲ７１０：Ｃ２６Ｈ４４Ｏ４
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3), 3.67 (1H, br s, H-7), 2.33 (1H, m, H-23a), 2.21 (1H, m, H-23b), 0.96 (3H, d, J= 6.5 Hz, H3-21), 0.94 (3H, s, H3-19), 0.91 (3H, t, J= 7.6 Hz, H3-26), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２１７】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 178.3, 71.3, 67.5, 57.4, 51.7, 43.8, 42.8, 41.5, 41.2, 41.0, 37.0, 36.7, 33.8, 32.4, 32.0, 31.1 (2C), 29.3, 28.3, 24.6, 24.2, 23.3, 22.2, 18.8, 12.3, 12.2
【０２１８】
ＢＡＲ７１２：Ｃ２６Ｈ４４Ｏ４
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 4.01 (1H, br s, H-3), 3.06 (1H, t, J= 9.7 Hz, H-7), 2.32 (1H, m, H-23a), 2.19 (1H, m, H-23b), 0.97 (3H, s, H3-19), 0.96 (3H, d, ovl, H3-21), 0.87 (3H, t, J= 7.7 Hz, H3-26), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０２１９】
工程ｅ）６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴ７１０）の調製
【０２２０】
ＢＡＲ７１０（１０ｍｇ）のアリコートを実施例２Ｆの工程ｇと同じ操作条件下で処理した。
【０２２１】
ＢＡＲＴ７１０：Ｃ２８Ｈ４８ＮＮａＯ６Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3), 3.67 (1H, br s, H-7), 3.59 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH2-N), 2,96 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH2-S), 0.97 (3H, d, J= 6.4 Hz, H3-21), 0.95 (3H, s, H3-19), 0.91 (3H, t, J= 7.1 Hz, H3-26), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２２２】
工程ｆ）６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０６）及び６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０７）の調製
【０２２３】
中間体２３（５００ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を、実施例２Ｃの工程ｊに記載のように乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＬｉＢＨ４（４ｍＬ、８．１ｍｍｏｌ）及びＭｅＯＨ（３２７μＬ、８．１ｍｍｏｌ）で処理した。溶出液（としてＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８８：１２）を用いたＮｕｃｌｅｏｄｕｒ  １００−５  Ｃ１８（５μｍ；１０ｍｍ  ｉ．ｄ．×２５０ｍｍ）でのＨＰＬＣ精製により（流速３ｍＬ／分）、ＢＡＲ７０６（２５０ｍｇ、ｔＲ＝１２．６分）及び少量の６α−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０７）（２３ｍｇ、ｔＲ＝８．２分）を得た。
【０２２４】
ＢＡＲ７０６：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3) ,3.66 (1H, br s, H-7), 3.51 (2H, m, H2-24), 0.96 (3H, d, J= 6.6Hz, H3-21), 0.94 (3H, s, H3-19), 0.91 (3H, t, J= 7.5 Hz, H3-26), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２２５】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 135 MHzにて記録した： δ  71.4, 67.4, 63.6, 57.6, 51.7, 43.7, 42.8, 41.5, 41.2, 41.1, 37.1 (2C), 33.8, 33.2, 31.3 (2C), 30.3, 29.4, 28.3, 24.6, 24.2, 23.3, 22.3, 19.2, 12.7, 12.1
【０２２６】
ＢＡＲ７０７：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 4.01 (1H, br s, H-3), 3.51 (2H, m, H2-24), 3.05 (1H, t, J= 9.7 Hz, H-7), 0.97 (3H, s, H3-19), 0.96 (3H, d, J= 6.4 Hz, H3-21), 0.88 (3H, t, J= 7.6 Hz, H3-26), 0.72 (3H, s, H3-18)
【０２２７】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 76.3, 67.1, 63.6, 57.8, 56.8, 45.0, 44.8, 44.5, 41.7, 40.3, 39.1, 37.0, 35.9, 33.0, 31.2, 30.2, 29.8, 28.4, 28.0, 27.9, 24.8, 22.9, 21.8, 19.3, 12.8, 11.6
【０２２８】
工程ｇ）６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−イル  ２４−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ７０６ｓｏｌｆ）
【０２２９】
ＢＡＲ７０６の少量のアリコートにおけるＣ−２４上の硫酸化を、実施例１Ｂの段階ｇに記載の同じ操作条件下で行った。
【０２３０】
ＢＡＲ７０６ｓｏｌｆ：Ｃ２６Ｈ４５ＮａＯ６Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 500 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s ovl, H-3), 3.96 (2H, t ovl, H2-24), 3.65 (1H, br s, H-7), 0.96 (3H, d, J=6.6 Hz, H3-21), 0.94 (3H, s, H3-19), 0.90 (3H, t, J= 7.5 Hz, H3-26), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２３１】
工程ｈ、ｉ、ｊ）６β−エチル−３β，７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０８）及び６β−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０９）の調製
【０２３２】
化合物１９を工程ａと同じ操作条件下で処理した。実施例２Ａの工程ｆ、ｇの同じ操作条件で１００ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）のＮａＢＨ４／ＬｉＢＨ４還元により、そのＨＰＬＣ精製（８８％  ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ）により、純粋な６β−エチル−３β,７β−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０８）（４８．３ｍｇ、ｔＲ＝１１分）及び６β−エチル−３β,７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−オール（ＢＡＲ７０９）（２０．７ｍｇ、ｔＲ＝１３分）の混合物を得た。あるいは、工程ｉを、その場で生成されたＣａ（ＢＨ４）２を用いて実施した。
【０２３３】
ＢＡＲ７０８：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.59 (1H, br s, H-3), 3.57 (1H, dd, J=12.6, 2.3 Hz, H-7), 3.51 (2H, m, H2-24), 0.98 (3H, s, H3-19), 0.96 (3H, ovl, H3-21), 0.96 (3H, t, ovl, H3-26), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２３４】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 75.2, 68.3, 63.6, 58.3, 57.1, 45.7 (2C), 44.2, 41.8 (2C), 41.2, 40.0, 37.0, 35.9, 33.3, 31.1, 30.3, 29.4 (2C), 26.6 (2C), 23.2 (2C), 19.3, 13.0, 12.3
【０２３５】
ＢＡＲ７０９：Ｃ２６Ｈ４６Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 700 MHzにて記録した： δ 3.91 (1H, br s, H-3), 3.60 (1H, br s, H-7), 3.51 (2H, m, H2-24), 2.45 (1H, t, J= 13.3 Hz, H-4a), 0.97 (3H, s, H3-19), 0.97 (3H, ovl, H3-21), 0.95 (3H, t, J= 7.4 Hz, H3-26), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０２３６】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 72.8, 67.4, 63.4, 57.2, 51.3, 51.2, 43.2, 41.6, 40.5, 37.3, 37.1 (2C), 36.9, 34.0, 33.3, 32.1, 30.3, 29.3, 28.9, 28.6, 26.3, 24.9, 22.0, 19.3, 13.8, 12.1
【０２３７】
実施例２Ｈ．６α−エチル−７α−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイック酸（ＢＡＲｎ７０４）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴｎ７０４）、６α−エチル−７α−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ７０１）及び６α−エチル−７α−ヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−イル２３−硫酸ナトリウム（ＢＡＲｎ７０１ｓｏｌｆ）
【０２３８】
ＢＡＲｎ７０４、ＢＡＲＴｎ７０４、ＢＡＲｎ７０１及びＢＡＲｎ７０１ｓｏｌｆを、１５から出発して、それらのＣ２４相同体について記載したのと同じ合成プロトコルに従って調製した（実施例２Ｆ、工程ａ〜ｉ）。
【０２３９】
【化３０】
2017516856.tif 000034
ａ）ＭｅＯＮａ、ＭｅＯＨ；  ｂ）ｐ−ＴｓＣｌ、ピリジン、２工程で７３％；  ｃ）ＬｉＢｒ、Ｌｉ２ＣＯ３、ＤＭＦ、灌流、ｄ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ  １：１、室温、２工程にわたる定量的収率；  ｅ）ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ、８０％；  ｆ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、９２％；  ｇ）ＤＭＴ−ＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、タウリン、ＤＭＦ乾燥；  ｈ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７０％；  ｉ）Ｅｔ３Ｎ．ＳＯ３、ＤＭＦ、９５℃
【０２４０】
ＢＡＦｎ７０４：Ｃ２５Ｈ４２Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.64 (1H, br s, H-7), 2.41 (1H, dd, J= 11.0, 2.6 Hz, H-22a), 1.00 (3H, d, J= 6.0 Hz, H3-21), 0.90 (3H, s, H3-19), 0.87 (3H, t, J= 7.4 Hz, H3-25), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０２４１】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 178.9, 71.6, 57.5, 51.7, 48.6, 43.8, 43.4, 43.3, 41.5, 40.9, 39.1, 37.4, 35.2, 34.6, 29.4, 28.8, 25.0, 24.6 (2C), 23.5, 22.4, 22.0, 20.1, 12.2, 12.1
【０２４２】
ＢＡＲＴｎ７０４：Ｃ２７Ｈ４６ＮＮａＯ５Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.64 (1H, br s, H-7), 3.59 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH2-N), 2.96 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH2-S), 2.40 (1H, dd, J= 11.0, 2.8 Hz, H-22a), 1.00 (3H, d, J= 6.0 Hz, H3-21), 0.89 (3H, s, H3-19), 0.86 (3H, t, J= 7.4 Hz, H3-25), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２４３】
ＢＡＲｎ７０１：Ｃ２５Ｈ４４Ｏ２
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.66 (1H, br s, H-7), 3.61 (1H, m, H-23a), 3.54 (1H, m, H-23b), 0.96 (3H, d, J= 6.7 Hz, H3-21), 0.91 (3H, s, H3-19), 0.89 (3H, t, J= 7.3 Hz, H3-25), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２４４】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 71.5, 60.8, 57.8, 51.7, 48.6, 43.8, 43.3, 41.5, 41.1, 39.9, 39.2, 37.4, 34.5, 34.2, 29.4, 28.8, 25.0, 24.6 (2C), 23.5, 22.5, 22.0, 19.4, 12.2, 12.1
【０２４５】
ＢＡＲｎ７０１ｓｏｌｆ：Ｃ２５Ｈ４３ＮａＯ５Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 4.02 (2H, m, H2-23), 3.65 (1H, br s, H-7), 0.97 (3H, d, J= 6.7 Hz, H3-21), 0.91 (3H, s, H3-19), 0.88 (3H, t, J= 7.5 Hz, H3-25), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２４６】
実施例２Ｉ．６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイック酸（ＢＡＲｎ７１０）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オイルタウリン硫酸ナトリウム（ＢＡＲＴｎ７１０）、６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−オール（ＢＡＲｎ７０６）、及び６α−エチル−３β，７α−ジヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−イル２３−硫酸ナトリウム（ＢＡＲｎ７０６ｓｏｌｆ）
【０２４７】
【化３１】
2017516856.tif 000035
ａ）ＣＨ３ＣＯＯＫ、ＤＭＦ：Ｈ２Ｏ  ５：１  ｖ／ｖ；  ｂ）ＮａＯＨ、ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ；  ｃ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、２工程で５８％；  ｄ）ＤＭＴ−ＭＭ、Ｅｔ３Ｎ、タウリン、ＤＭＦ乾燥；  ｅ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、５７％；  ｆ）Ｅｔ３Ｎ．ＳＯ３、ＤＭＦ、９５℃
【０２４８】
ＢＡＲｎ７１０、ＢＡＲＴｎ７１０、ＢＡＲｎ７０６及びＢＡＲｎ７０６ｓｏｌｆを、２４から出発して、それらのＣ２４同族体について記載したものと同じ合成プロトコルに従って調製した（実施例２Ｇ、工程ｃ〜ｇ）。
【０２４９】
ＢＡＲｎ７１０：Ｃ２５Ｈ４２Ｏ４
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3), 3.66 (1H, br s, H-7), 2.42 (1H, dd, J= 11.3, 3.3 Hz, H-22a), 1.02 (3H, d, J= 6.0 Hz, H3-21), 0.94 (3H, s, H3-19), 0.91 (3H, t, J= 7.3 Hz, H3-25), 0.73 (3H, s, H3-18)
【０２５０】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した：δ 177.7, 71.3, 67.4, 57.4, 51.8, 43.8 (2C), 42.8, 41.5, 41.2, 41.0, 37.0, 35.1, 33.8, 31.3, 31.2, 29.4, 28.3, 24.6, 24.2, 23.3, 22.2, 20.0, 12.2, 12.1
【０２５１】
ＢＡＲＴｎ７１０：Ｃ２７Ｈ４６ＮＮａＯ６Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.97 (1 H, br s, H-3), 3.66 (1 H, br s, H-7), 3.59 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH2-N), 2.96 (2H, t, J= 6.8 Hz, CH2-S), 2.42 (1H, dd, J= 11.3, 3.3 Hz, H-22a), 1.00 (3H, d, J= 6.3 Hz, H3-21), 0.94 (3H, s, H3-19), 0.90 (3H, t, J= 7.0 Hz, H3-25), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２５２】
ＢＡＲｎ７０６：Ｃ２５Ｈ４４Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.97 (1H, br s, H-3), 3.67 (1H, br s, H-7), 3.61 (1H, m, H-23a), 3.55 (1H, m, H-23b), 0.97 (3H, d, J= 6.6 Hz, H3-21), 0.95 (3H, s, H3-19), 0.91 (3H, t, J= 7.4 Hz, H3-25), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０２５３】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 100 MHzにて記録した： δ 71.4, 67.4, 60.8, 57.9, 51 .8, 43.8, 42.8, 41.5, 41 .2, 41.1 , 39.9, 37.0, 34.2, 33.8, 31.3, 31.2, 29.4, 28.3, 24.6, 24.2, 23.3, 22.3, 19.4, 12.2, 12.1
【０２５４】
ＢＡＲｎ７０６ｓｏｌｆ：Ｃ２５Ｈ４３ＮａＯ６Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 4.05 (2H, m, H2-23), 3.97 (1H, br s, H-3), 3.66 (1H, br s, H-7), 1.00 (3H, d, J= 6.0 Hz, H3-21), 0.94 (3H, s, H3-19), 0.91 (3H, t, J= 6.9 Hz, H3-25), 0.71 (3H, s, H3-18)
【０２５５】
実施例２Ｊ．６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オイック酸（ＢＡＲ８０２）、６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−オール（ＢＡＲ８０３）及び６α−エチル−３α，７α−ジヒドロキシ−２５，２６−ビスホモ−５β−コラン−２６−イル−２６−硫酸ナトリウム（ＢＡＲ８０４）
【０２５６】
【化３２】
2017516856.tif 000036
ａ）２，６−ルチジン，ｔ−ブチルジメチルシリル  トリフルオロメタンスルホネート、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃；  ｂ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＥ、０℃、２工程で６８％；  ｃ）ＤＭＳＯ、塩化オキサリル、ＴＥＡ乾燥、ＣＨ２Ｃｌ２、−７８℃、次にメチル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテート、７９％；  ｄ）Ｈ２、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ  Ｄｅｇｕｓｓａ型、ＴＨＥ／ＭｅＯＨ  １：１、定量的収率；  ｅ）ＨＣｌ  ３７％、ＭｅＯＨ  ８７％；  ｆ）ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ  １：１  ｖ／ｖ中のＮａＯＨ  ５％、８９％；  ｇ）ＬｉＢＨ４、ＭｅＯＨ乾燥、ＴＨＦ、０℃、７８％；  ｈ）Ｅｔ３Ｎ．ＳＯ３、ＤＭＦ、９５℃、２５％
【０２５７】
ＢＡＲ８０２−８０４は、実施例１Ａの工程ａ〜ｇと同じ合成プロトコルに従って調製した。実施例１Ｂの工程ｇと同じ操作条件下でＢＡＲ８０３の少量のアリコートを硫酸化してＢＡＲ８０４を得た。
【０２５８】
ＢＡＲ８０２：Ｃ２８Ｈ４８Ｏ４
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.66 (1H, br s, H-7), 3.31 (1H, m ovl, H-3), 2.24 (2H, t, J= 7.3 Hz, H2-25), 0.95 (3H, d, J= 6.4 Hz, H3-21), 0.92 (3H, s, H3-19), 0.91 (3H, t, J= 6.9 Hz, H3-28), 0.70 (3H, s, H3-18)
【０２５９】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 186.7, 73.3, 71.3, 57.7, 51.7, 47.0, 43.7, 43.1, 41.6, 41.1, 37.1, 36.9, 36.8, 36.6, 34.5, 34.4 (2C), 31.3, 29.4, 27.0 (2C), 24.6, 23.8, 23.5, 22.0, 19.2, 12.2, 12.0
【０２６０】
ＢＡＲ８０３：Ｃ２８Ｈ５０Ｏ３
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.64 (1H, br s, H-7), 3.53 (2H, t, J= 6.6 Hz, H2-26), 3.30 (1H, m ovl, H-3), 0.94 (3H, d, J= 6.7 Hz, H3-21), 0.91 (3H, s, H3-19), 0.90 (3H, t, J= 7.0 Hz, H3-28), 0.68 (3H, s, H3-18)
【０２６１】
13C NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 175 MHzにて記録した： δ 73.3, 71.3, 63.1, 57.7, 51.7, 47.0, 43.7, 43.1 , 41.6, 41.1, 37.1, 36.8 (2C), 36.6, 34.5, 34.4, 33.7, 31.3, 29.5, 27.4, 27.0, 24.6, 23.8, 23.5, 22.0, 19.3, 12.3, 12.0.
【０２６２】
ＢＡＲ８０４：Ｃ２８Ｈ４９ＮａＯ６Ｓ
1H NMRは、溶媒としてCD3ODを使用してVarian Inova 400 MHzにて記録した： δ 3.99 (2H, t, J= 6.6 Hz, H2-26), 3.65 (1 H, br s, H-7), 3.31 (1 H, m ovl, H-3), 0.94 (3H, d, J= 6.2 Hz, H3-21), 0.91 (3H, s, H3-19), 0.90 (3H, t, J= 7.0 Hz, H3-28), 0.69 (3H, s, H3-18)
【０２６３】
生物学的活性。選択された化合物の活性を、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）及びＴＬＣＡと比較してＦＸＲ及びＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１に対し、表１に示す化合物の選択性を確立するためにレポーター遺伝子でトランスフェクトした全細胞モデルを用いてインビトロで試験した。ＣＤＣＡはＦＸＲの内因性リガンドとして機能する一次胆汁酸であり、ＴＬＣＡはＴＧＲ５／ＧＰＢＡＲ１の生理学的リガンドである。このアッセイにおいて、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％Ｌ−グルタミン、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するアールス塩（Ｅａｒｌ’ｓ  ｓａｌｔｓ）を用いてＨｅｐＧ２細胞（肝臓由来細胞株）を３７℃にて最小必須培地で培養した。ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％Ｌ−グルタミン、及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するＤ−ＭＥＭ中で３７℃にて培養した。トランスフェクション実験は、製造仕様に従ってＦｕｇｅｎｅ  ＨＤを用いて行った。細胞を２４ウェルプレートに５×１０４細胞／ウェルで播種した。ＦＸＲが介在するトランス活性化のために、１００ｎｇのｐＳＧ５−ＦＸＲ、１００ｎｇのｐＳＧ５−ＲＸＲ、１００ｎｇのｐＧＬ４．７０ヒトレニラ（Ｒｅｎｉｌｌａ）遺伝子をコードするベクター及び２５０ｎｇの、熱ショックタンパク質２７（ｈｓｐ２７）のプロモーターからクローニングされたＦＸＲ応答エレメントＩＲ１を含むレポーターベクターｐ（ｈｓｐ２７）−ＴＫ−ＬＵＣをＨｅｐＧ２へトランスフェクトした。
【０２６４】
ＧＰＢＡＲ１を介在するトランス活性化のために、ルシフェラーゼレポーター遺伝子ｌｕｃ２Ｐの転写を駆動するｃＡＭＰ応答エレメント（ＣＲＥ）を含むレポーターベクターである２００ｎｇのｐＧＬ４．２９、１００ｎｇのｐＣＭＶＳＰＯＲＴ６−ヒトＧＰＢＡＲ１、及びヒトレニラ遺伝子をコードするベクターである１００ｎｇのｐＧＬ４．７０をＨＥＫ−２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。対照実験では、化合物がＧＰＢＡＲ１非依存的にＣＲＥを活性化する可能性を排除するために、ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞にベクターｐＧＬ４．２９及びｐＧＬ４．７０のみをトランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後、細胞を、対照薬剤として１０μＭ  ＴＬＣＡ又は同じ濃度で、推定ＧＰＢＡＲ１アゴニストにて１８時間刺激した。処理後、１００μＬの溶解緩衝液（２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−リン酸、ｐＨ７．８；２ｍＭ  ＤＴＴ；１０％グリセロール；１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）中で細胞を溶解し、２０μＬの細胞溶解物についてルシフェラーゼアッセイシステムを用いて、ルシフェラーゼ活性をアッセイした。発光は、Ｇｌｏｍａｘ  ２０／２０ルミノメーターを用いて測定した。ルシフェラーゼ活性はレニラ活性に対して標準化された。ＧＰＢＡＲ１／ＴＧＲ５のＦＸＲに対する拮抗作用は、アゴニズムの例としてＴＬＣＡの活性を示すトランス活性化アッセイにおける活性のパーセントとして測定した。
【０２６５】
動物及びプロトコル。ＧＰＢＡＲ１ヌルマウス（ＧＰＢＡＲ１−Ｂ６＝ＧＰＢＡＲ１２／２マウス、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌバックグラウンドに直接作製）、及びＣ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌの同系同腹仔を、制御された温度（２２℃）及び光周期（１２時間：１２時間  明／暗サイクル）で飼育し、標準的なマウス飼料及び水道水への無制限のアクセスを可能にし、実験を行う前にこれらの状態に少なくとも５日間順応させた。
【０２６６】
スクラッチテスト。この研究には、雄のＧＰＢＡＲ１−／−マウス及びその同系同腹子（８〜１２週齢）を用いた。頚部の基部の毛皮を剃り、マウスをガラス棚の個々のシリンダーに入れた。直径約０．５ｃｍの円周を頚部に描き、この領域に試験剤を注射した。実験前の２日間連続して２時間にわたって、マウスを、実験室、拘束装置及び研究者に順応させた。スクラッチング行動は、試験した薬剤又は遺伝子型を知らない２人の観察者によって定量化した。スクラッチは、注射部位に後肢を持ち上げた後、ストローク数にかかわらず、足を床に置くこととして定義された。カウントが３０分の間に５回以上のスクラッチが異なった場合、両方の観察者は記録を再評価した。結果は、観察の３０分又は６０分の間のすくラッチング事象の数として表された。試験された薬剤は：ＤＣＡ（２５μｇ）、ＴＬＣＡ（２５μｇ）、ＵＤＣＡ（２５μｇ）及びＢＡＲ５０２（２５μｇ）、又はベツリン酸（５０μｇ）、オレアノール酸（５０μｇ）であった。ＬＣＡ及びＤＣＡをＤＭＳＯに溶解し、他の薬剤を０．９％ＮａＣｌ（１０μＬ）に溶解した。別の実験設定において、ＧＰＢＡＲ１−／−マウス及びそれらの同系同腹子に、オリーブ油に溶解したα−ナフチルイソチオシアネート（ＡＮＩＴ）（２５ｍｇ／ｋｇ、経口）又はオリーブ油単独（対照マウス）又は、ＡＮＩＴ＋ＢＡＲ５０２の組み合わせ（１５ｍｇ／ｋｇ、１日１回、経口）を１０日間投与した。５日目に、自発的引っ掻きをＤＣＡ２５μｇの皮下注射後、６０分間評価した。Ｈｉｔａｃｈｉ７１７自動分析装置で行われる日常の臨床化学試験により、総ビリルビン、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアルカリホスファターゼの血清レベルを測定した。エストロゲンモデルでは、腹腔内に１０ｍｇ／ＫｇにてＰＥＧに溶解した１７α−エチニルエストラジオール（１７αＥ２）又はＰＥＧ単独（対照マウス）又は１７αＥ２及びＢＡＲ５０２（１５ｍｇ／Ｋｇ、毎日、経口）の組合せを、８日間投与した。研究の終わりに、25μgのＤＣＡの皮下注射によって誘発された自発的なスクラッチング及びスクラッチングを記録した。胆嚢重量並びにビリルビン及びアルカリホスファターゼの血清レベルもまた測定した。研究を通して、動物は、月曜日から金曜日まで少なくとも１日２回、週末は１回、調査員及び動物施設の獣医師を含む高度に訓練された動物施設職員によって視覚的に評価された。動物を毎日秤量し、指示された時点、又は、７日間で基礎体重の２５％を超える体重の減少によって評価されるような臨床状態が重大になる場合に屠殺した。さらに、毎日の評価で、彼らが立ち上がり又は歩行不能であることが示された場合に動物を屠殺した。ペントバルビタールナトリウムの過剰投与（＞１００ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）によりマウスを安楽死させた。
【国際調査報告】
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