(57)【要約】  本明細書に提供されるのは、親水性ポリマーに共有結合したポリペプチド、及び／又は、親水性ポリマーに共有結合した多糖類を含む医薬組成物を、皮膚に投与することを含む、被検体の皮膚の質を改善する方法である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的有効量の親水性ポリマーに共有結合したケラチンポリペプチドを含む医薬組成物を、皮膚に投与することを含む、被検体の皮膚の質を改善する方法。
【請求項２】
前記親水性ポリマーが、
【化１】
2017516869.tif 000011
から選択される式を有し、
式中、Ｒ１が、ヒドロキシル、カルボキシ、エチルアミン、２−ピロリドン、ヒドロキシエチルメタクリル酸、メチルアミン、ホスホン酸、スルホン酸、ヒドロキシル、又はＳＯ４−であり、Ｒ２が、水素、メチルオキサゾリン、エチルオキサゾリン、又はプロピルオキサゾリンであり、ｎが１〜１，５００である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記親水性ポリマーが直鎖状である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記親水性ポリマーが分枝状である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記医薬組成物が水溶性である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記親水性ポリマーが、
【化２】
2017516869.tif 000012
の式を有し、
式中、ｎが１〜１，５００である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ｎが約１００〜約１２５である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ケラチンポリペプチドが、約５００Ｄａ〜約６０，０００Ｄａの分子量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ケラチンポリペプチドが、約２，０００Ｄａ、約５，０００Ｄａ、約１０，０００Ｄａ、約２０，０００Ｄａ、約３０，０００Ｄａ、約４０，０００Ｄａ、又は約６０，０００Ｄａの分子量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記ケラチンポリペプチドが、約５，０００Ｄａの分子量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記親水性ポリマーが、約２，０００Ｄａ〜約６０，０００Ｄａの分子量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
前記親水性ポリマーが、約２，０００Ｄａ、約５，０００Ｄａ、約１０，０００Ｄａ、約２０，０００Ｄａ、約３０，０００Ｄａ、約４０，０００Ｄａ、又は約６０，０００Ｄａの分子量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
前記親水性ポリマーが、約５，０００Ｄａの分子量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１４】
前記ケラチンポリペプチドが、約５，０００Ｄａの分子量を有し、前記親水性ポリマーが、約５，０００Ｄａの分子量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１５】
前記ケラチンポリペプチドが、約５２，０００Ｄａの分子量を有し、前記親水性ポリマーが、約５，０００Ｄａの分子量を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１６】
前記皮膚の質が乾燥である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記皮膚の質が潮紅である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記皮膚の質が掻痒である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記皮膚の質が創傷治癒能である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記皮膚の質が感染の抵抗又は管理能である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記被検体が哺乳類である、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記被験体がヒトである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記被験体が非ヒト哺乳類である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記哺乳類がイヌ又はネコである、請求項２１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１４年６月４日出願の米国特許仮出願第６２／００７，７６８号の利益を主張するものである。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、皮膚トリートメントの分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
外皮、つまり皮膚は、体内で一番大きい器官であり、体重の１６％を構成し、表面積は１．８ｍ２である。皮膚はいくつかの機能を有しており、最も重要なものは、環境に対する物理的バリアを形成し、水、電解質、及び様々な物質の内向き及び外向きの通過を可能にし、かつ制限する一方で、微生物、紫外放射、毒物、及び機械的傷害から保護していることである。皮膚には、表皮、真皮及び皮下組織の３つの構造層がある。表皮は、角質層、透明層、顆粒層、有棘層、及び基底層の５つの層から構成される。
【０００４】
角質層は、表皮の５つの層のうち最も外側であり、皮膚の重要なバリア機能に大いに関与している。角質層の構造は、「ブロックとモルタル」型構造と表現されている。この例えでは、角質細胞がブロックである。角質細胞は、構造化マトリクス中の細い糸状のケラチンからなるタンパク質複合体である。ケラチンは、線維／糸間に大量の水を保持できる。角質層は、約１２〜１６層の角質細胞を含み、各角質細胞は、およそ１マイクロメートルの平均厚さを有する。
【０００５】
角質細胞間の「モルタル」は、ケラチノサイトが角質層に成熟すると、その中の層状体から放出される遊離の脂肪酸及びセラミドを含有する。２種類の脂質があるため、この層を層状脂質二重層と呼ぶ。この脂質二重層は、皮膚のバリア特性の維持において重要な役割を果たす。角質細胞はまた、水溶性化合物の一群である天然保湿成分（ＮＭＦ）も含有する。これらの化合物は、角質細胞の乾燥重量のおよそ２０〜３０％を構成する。ＮＭＦ成分は、空気から水を吸収して、それを自身の水分含量に加え、様々な要素への曝露にもかかわらす、角質層の最も外側の層を水和したままにできる。
【０００６】
結果的に、表皮、及び特に角質層は、感染から体を守り、皮膚を通した過剰な水分損失を防ぐ、大きな役割を果たす。表皮バリアが破られると感染及び水分損失の危険性が劇的に増加するため、その破損部をできるだけ素早く修復するための創傷治癒に対する天然のプロセスが存在し、体を守っている。また、小さく目立たない表皮の破損も問題であることが、明らかになっている。アトピー性皮膚炎の研究では、少なくとも一部の症例において、その疾患は表皮バリアにおける遺伝子異常を伴い、刺激物質、微生物、及びアレルゲンの皮膚の透過を可能にして、アトピー性皮膚炎に通常見られる有害反応の原因となることを示している。
【０００７】
表皮の破損を修復するための体内の天然プロセスの能力低下は、犠牲が大きい場合がある。治癒されない創傷は、米国において約３〜６百万人に影響を及ぼしており、うち、６５歳以上がこれらの事象の８５％以上を占める。治癒されない創傷は、莫大な医療費をもたらし、その総費用は３０億ドル／年を超えると見込まれている。更に、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔａｌ  ａｎｄ  Ｓｋｉｎ  Ｄｉｓｅａｓｅによると、現在米国の小児の１０〜２０％がアトピー性皮膚炎に罹患しており、２０１３年の直接医療費は３０億ドル／年を超えた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、皮膚を保護し、乾燥、潮紅、鱗屑、掻痒、発疹、感染の抵抗若しくは管理能、又は創傷治癒能などの皮膚の質を改善するための組成物及び方法を開発するニーズが存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本明細書に提供されるのは、従来技術の問題又は欠点を解決する組成物及び方法である。具体的には、本明細書に提供されるのは、親水性ポリマーに共有結合したポリペプチド、及び／又は、親水性ポリマーに共有結合した多糖類を含む医薬組成物を、皮膚に投与することを含む、被検体の皮膚の質を改善する方法である。ケラチンポリペプチド及び親水性ポリマーを含有する組成物が皮膚に投与されると、１つ又は２つ以上の皮膚の質を改善することが、本発明の驚くべき発見である。皮膚の質として、乾燥、潮紅、鱗屑、掻痒、発疹、感染の抵抗又は管理能、及び創傷治癒能が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１０】
いくつかの実施形態では、親水性ポリマーは、以下から選択される式を有し、
【００１１】
【化１】
2017516869.tif 000002
式中、Ｒ１は、ヒドロキシル、カルボキシル、エチルアミン、２−ピロリドン、ヒドロキシエチルメタクリル酸、メチルアミン、ホスホン酸、スルホン酸、ヒドロキシル、又はＳＯ４−であり、式中、Ｒ２は、水素、メチルオキサゾリン、エチルオキサゾリン、又はプロピルオキサゾリンであり、式中、「ｎ」は１〜１，５００である。いくつかの実施形態では、式Ｉａ、Ｉｂ又はＩｃ中の「ｎ」は、１〜１０００、１〜５００、１〜２５０、又は１〜１２５である。いくつかの実施形態では、式Ｉａ、Ｉｂ又はＩｃ中の「ｎ」は、約１００〜約１２５である。更に別の実施形態では、「ｎ」は約１１４である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】ポリエチレングリコールポリマーの末端位置にある、機能的反応性サクシニミジルバレレートの化学構造である。
【図２】培地のみに対する、初代ヒト成人ケラチノサイトにおける１００μｇ／ｍＬのケラチン−ポリエチレングリコールＤＰＢＳ組成物の影響を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
本出願全体で使用される用語は、当業者にとって一般的かつ典型的な意味と解釈されるものとする。しかしながら、出願者らは、以下の用語に以下で定める特定の定義を与えることを希望する。
【００１４】
本明細書及び特許請求の範囲において使用されるとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、その内容について別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を包含する。例えば、用語「１つの（ａ）細胞」は、これらの混合物を含む、複数の細胞を含む。
【００１５】
用語「約」及び「およそ」は、当業者に理解されるように、「近似」していると定義される。１つの非限定実施形態では、この用語は１０％以内であると定義される。別の非限定実施形態では、この用語は５％以内であると定義される。更に別の非限定実施形態では、この用語は１％以内であると定義される。
【００１６】
用語「アトピー性皮膚炎」は、乾燥、発疹、潮紅、掻痒、及び水疱のうち１つ又は２つ以上を備え得る、又はこれらの原因となり得る、皮膚疾患（湿疹としても知られる）を指すために本明細書において使用される。
【００１７】
「組成物」は、有効成分、及び、不活性（例えば、検出可能剤、つまりラベル）又は補助剤などの活性な、別の化合物又は組成物の組み合わせを含むことを意図する。
【００１８】
本明細書において使用されるとき、用語「含む」は、組成物及び方法が示される要素を含むが、他のものを除外しないことを意味することを意図する。組成物及び方法の定義に使用されるとき、「から本質的になる」は、組み合わせにとって何らかの本質的に意義のある別の要素を除外することを意味するものとする。したがって、本明細書に定義される要素から本質的になる組成物は、単離及び精製法からの微量の混入物質、並びに、リン酸緩衝生理食塩液などの医薬的に許容される担体、防腐剤、及びその他同種のものを除外しない。「からなる」は、微量を超える他の成分の要素、及び、本発明の組成物を投与するための実質的な方法工程を除外することを意味するものとする。これらの各移行用語（transition term）によって定義される実施形態は、本発明の範囲内にある。
【００１９】
用語「共有結合した」は、親水性ポリマーの一部とポリペプチド、又はその逆との間に、共有結合が存在することを意味する。したがって、用語「共有結合した」は、直接的共有結合（親水性ポリマーとポリペプチドとの原子間の電子対の共有）及び間接的共有結合（親水性ポリマーとポリペプチドを含む組成物、又はその逆との原子間の電子対の共有）の両方を指す。
【００２０】
用語「表皮の破損」は、皮膚の少なくとも角質層における、バリア特性の損失又は低下を指す。「バリア特性」は、皮膚を通した化合物又は微生物の侵入又は存在を妨げる能力を指す。いくつかの実施形態では、表皮の破損は創傷を含む。別の実施形態では、表皮の破損は、アトピー性皮膚炎によるものである。用語「表皮の破損」は、火傷、口内炎などの口のびらんを含むただれ、並びに、美容外科的切創及び口腔外科的切創を含む外科的切創を更に含む。
【００２１】
治療目的の「哺乳類」は、ヒト、家畜、非ヒト霊長類、及び動物園、スポーツ用、又はペット用動物、例えばイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどを含む、哺乳類に分類される任意の動物を指す。
【００２２】
「医薬組成物」は、有効成分と、不活性又は活性の医薬的に許容される担体、つまり賦形剤との組み合わせを含み、その組成物を、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏでの診断上又は治療上の利用に好適にすることを意図する。
【００２３】
用語「医薬的に許容される担体」は、一般的に安全かつ非毒性である、医薬組成物の調製に有用な担体、つまり賦形剤を意味し、動物及び／又はヒトの医薬的用途に許容可能な担体を含む。本明細書において使用されるとき、用語「医薬的に許容される担体」は、標準的な医薬担体のうち任意のもの、例えば、リン酸緩衝生理食塩溶液、水、及び油／水又は水／油エマルションなどのエマルション、及び様々な種類の湿潤剤を包含する。本明細書において使用されるとき、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤、脂質、安定化剤、又は製剤処方中での使用に対して当該技術分野において周知であり、以下で更に説明されるようなその他の材料を包含する。医薬組成物は、防腐剤も含んでよい。本明細書及び特許請求の範囲において使用されるとき、「医薬的に許容される担体」は、かかる担体のうち１つ、及び２つ以上の両方を含む。
【００２４】
用語「治療的有効量」又は「治療的有効用量」は、全般的期間にわたって研究者、獣医師、医師、又はその他臨床家によって求められている、組織、系、動物、又はヒトの生物学的又は医学的反応を誘発する、ケラチン−親水性ポリマー組成物などの化合物の量を指す。いくつかの実施形態では、所望の反応は皮膚の質の改善である。場合によっては、所望の生物学的又は医学的反応は、数日間、数週間、又は数年間にわたって、被検体に組成物の複数用量を投与することによって達成される。
【００２５】
用語「被検体」は、本明細書で動物を含むと定義される。いくつかの実施形態では、動物は、爬虫類又は鳥類などの非ほ乳類である。いくつかの実施形態では、動物は、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウスなどを含むがこれらに限定されない、哺乳類である。いくつかの実施形態では、被検体はヒトである。いくつかの実施形態では、被検体は小児である。
【００２６】
用語「創傷」は、本明細書では、皮膚の表皮層のうち少なくとも一部が損傷を受けている、皮膚の傷を指す。用語「創傷」として、第１度擦過傷、第２度擦過傷、第３度擦過傷、裂創、切創、刺創、及び穿通創が挙げられる。
【００２７】
本明細書に提供されるのは、親水性ポリマーに共有結合したポリペプチド、及び／又は、親水性ポリマーに共有結合した多糖類を含む医薬組成物を、皮膚に投与することを含む、被検体の皮膚の質を改善する方法である。親水性ポリマーに結合したポリペプチドとして、ケラチン、コラーゲン、エラスチン、フィブロイン、カゼインなどの乳由来タンパク質、β−ラクトグロブリン及びα−ラクトアルブミン、並びに、小麦タンパク質などの穀物タンパク質のポリペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。ケラチンなどの疎水性ポリペプチドが、特定の実施形態において好ましい場合がある。更に本明細書に提供されるのは、多糖類に共有結合した親水性ポリマー、例えばキトサン、キチン、又はキチングルカンを含む、組成物である。
【００２８】
ケラチンポリペプチド及び親水性ポリマーを含有する組成物が皮膚に投与されると、１つ又は２つ以上の皮膚の質を改善することが、本発明の驚くべき発見である。皮膚の質として、乾燥、潮紅、鱗屑、掻痒、発疹、感染の抵抗又は管理能、及び創傷を含む表皮の破損の治癒能が挙げられるが、これらに限定されない。用語「ケラチン」は、哺乳類の毛髪、皮膚、爪、鉤爪及び蹄（α−ケラチン）、並びに、爬虫類の鱗、鉤爪及び殻、鳥類の羽毛、嘴、及び鉤爪、並びに、ヤマアラシの針（β−ケラチン）に見られる、線維構造タンパク質ファミリーを指す。α−ケラチンは、サイトケラチンとしても知られ、軟α−ケラチン（上皮サイトケラチン）及び硬α−ケラチン（毛包ケラチン）に更に細分化される。全てのケラチンは、タイプＩ及びタイプＩＩケラチンのヘテロポリマーである。ＨＵＧＯ  Ｇｅｎｅ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅでは、既知のケラチンポリペプチドをコードする遺伝子として、ＫＲＴ１、ＫＲＴ２、ＫＲＴ３、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ６Ａ、ＫＲＴ６Ｂ、ＫＲＴ６Ｃ、ＫＲＴ７、ＫＲＴ８、ＫＲＴ９、ＫＲＴ１０、ＫＲＴ１２、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１４、ＫＲＴ１５、ＫＲＴ１６、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ２０、ＫＲＴ２３、ＫＲＴ２４、ＫＲＴ２５、ＫＲＴ２６、ＫＲＴ２７、ＫＲＴ２８、ＫＲＴ３１、ＫＲＴ３２、ＫＲＴ３３Ａ、ＫＲＴ３３Ｂ、ＫＲＴ３４、ＫＲＴ３５、ＫＲＴ３６、ＫＲＴ３７、ＫＲＴ３８、ＫＲＴ３９、ＫＲＴ４０、ＫＲＴ７１、ＫＲＴ７２、ＫＲＴ７３、ＫＲＴ７４、ＫＲＴ７５、ＫＲＴ７６、ＫＲＴ７７、ＫＲＴ７８、ＫＲＴ７９、ＫＲＴ８０、ＫＲＴ８１、ＫＲＴ８２、ＫＲＴ８３、ＫＲＴ８４、ＫＲＴ８５、ＫＲＴ８６、ＫＲＴ２２２を同定している。したがって、本発明のケラチンポリペプチドは、ＫＲＴ１、ＫＲＴ２、ＫＲＴ３、ＫＲＴ４、ＫＲＴ５、ＫＲＴ６Ａ、ＫＲＴ６Ｂ、ＫＲＴ６Ｃ、ＫＲＴ７、ＫＲＴ８、ＫＲＴ９、ＫＲＴ１０、ＫＲＴ１２、ＫＲＴ１３、ＫＲＴ１４、ＫＲＴ１５、ＫＲＴ１６、ＫＲＴ１７、ＫＲＴ１８、ＫＲＴ１９、ＫＲＴ２０、ＫＲＴ２３、ＫＲＴ２４、ＫＲＴ２５、ＫＲＴ２６、ＫＲＴ２７、ＫＲＴ２８、ＫＲＴ３１、ＫＲＴ３２、ＫＲＴ３３Ａ、ＫＲＴ３３Ｂ、ＫＲＴ３４、ＫＲＴ３５、ＫＲＴ３６、ＫＲＴ３７、ＫＲＴ３８、ＫＲＴ３９、ＫＲＴ４０、ＫＲＴ７１、ＫＲＴ７２、ＫＲＴ７３、ＫＲＴ７４、ＫＲＴ７５、ＫＲＴ７６、ＫＲＴ７７、ＫＲＴ７８、ＫＲＴ７９、ＫＲＴ８０、ＫＲＴ８１、ＫＲＴ８２、ＫＲＴ８３、ＫＲＴ８４、ＫＲＴ８５、ＫＲＴ８６、及びＫＲＴ２２２から選択される１つ又は２つ以上の遺伝子によってコードされてよい。
【００２９】
本明細書において使用されるとき、用語「ポリペプチド」は、サブユニットであるアミノ酸、アミノ酸アナログ、又はペプチド模倣体の２つ以上の化合物を指す、広義で使用される。サブユニットは、ペプチド結合によって結合されてよい。別の実施形態では、サブユニットは、例えば、エステル、エーテルなどの他の結合によって結合されてよい。本明細書において使用されるとき、用語「アミノ酸」は、天然及び／又は非天然、つまり合成アミノ酸のいずれか、例えばグリシン及びＤ又はＬ光学異性体の両方、並びに、アミノ酸アナログ及びペプチド模倣体を指す。３つ以上のアミノ酸のペプチドは、ペプチド鎖が短い、例えば、約２５個未満のアミノ酸である場合、オリゴペプチドと称することができる。用語「ポリペプチド」には、全長の天然に存在するタンパク質、並びにそれらのタンパク質の機能性フラグメントを含んでよい。タンパク質フラグメントは、本発明の文脈において、全長タンパク質の所望の結果を達成するとき、機能性である。例えば、親水性ポリマーに共有結合したケラチンフラグメントは、ケラチン−親水性ポリマーが本発明の方法を用いて皮膚に投与されると、皮膚改善効果をもたらすとき、本発明に包含される。ポリペプチドは、天然源由来であっても、大規模タンパク質発現機構の使用によるものなど、合成的に調製されてもよい。ポリペプチドは、加水分解型でも非加水分解型でもよく、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは非加水分解型である。
【００３０】
ケラチンポリペプチドが天然由来であっても、合成的に調製されてもよいことを理解されたい。ケラチンポリペプチドは、様々な天然源から精製でき、又は市販のものを入手できる。ケラチンポリペプチドは、約０．５ｋＤａ〜約６０ｋＤａ、又は約２ｋＤａ〜約６ｋＤａ、又は約２０ｋＤａ〜約４０ｋＤａの分子量を有してよい。いくつかの実施形態では、ケラチンポリペプチドは約５ｋＤａである。いくつかの実施形態では、ケラチンポリペプチドは約４５ｋＤａ〜約５５ｋＤａである。更に別の実施形態では、ケラチンポリペプチドは約５２ｋＤａである。
【００３１】
本明細書において使用されるとき、用語「親水性ポリマー」として、ポリペプチド、炭水化物、核酸、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（オキサゾリン）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（アクリルアミド）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（アリルアミン）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（ビニルホスホン酸）、ポリ（ビニルサルフェート）、ポリ（ビニルスルホン酸）、ポリ（ビニルアルコール）、グリセロールプロポキシレート、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）が挙げられる。一実施形態では、親水性ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（オキサゾリン）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（アクリルアミド）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（アリルアミン）、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（エチレンイミン）、ポリ（ビニルホスホン酸）、ポリ（ビニルサルフェート）、ポリ（ビニルスルホン酸）、ポリ（ビニルアルコール）、グリセロールプロポキシレート、及びヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）からなる群から選択される、合成親水性ポリマーである。いくつかの実施形態では、親水性ポリマーの分子量は、約０．５〜約８０ｋＤａ、約０．５〜約４０ｋＤａ、又は約０．５〜約１０ｋＤａである。いくつかの実施形態では、親水性ポリマーの分子量は、約２〜約１０ｋＤａである。いくつかの実施形態では、親水性ポリマーの分子量は、約２０〜約４０ｋＤａである。一実施形態では、親水性ポリマーの分子量は約５ｋＤａである。別の実施形態では、親水性ポリマーの分子量は約３０ｋＤａである。
【００３２】
別の又は更なる実施形態では、親水性ポリマーは、以下から選択される式を有し、
【００３３】
【化２】
2017516869.tif 000003
式中、Ｒ１は、ヒドロキシル、カルボキシル、エチルアミン、２−ピロリドン、ヒドロキシエチルメタクリル酸、メチルアミン、ホスホン酸、スルホン酸、ヒドロキシル、又はＳＯ４−であり、式中、Ｒ２は、水素、メチルオキサゾリン、エチルオキサゾリン、又はプロピルオキサゾリンであり、式中、「ｎ」は１〜１，５００である。いくつかの実施形態では、式Ｉａ、Ｉｂ又はＩｃ中の「ｎ」は、１〜１０００、１〜５００、１〜２５０、又は１〜１２５である。いくつかの実施形態では、式Ｉａ、Ｉｂ又はＩｃ中の「ｎ」は、約１００〜約１２５である。更に別の実施形態では、「ｎ」は約１１４である。更に別の実施形態では、式Ｉａ、Ｉｂ又はＩｃ中の「ｎ」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３及び２４から選択されてよい。
【００３４】
なお別の実施形態では、親水性ポリマーは、ケラチンポリペプチドに共有結合しており、親水性ポリマーは以下の式を有し、
【００３５】
【化３】
2017516869.tif 000004
式中、ｎは、１〜１，５００である。いくつかの実施形態では、式Ｉａ、Ｉｂ又はＩｃ中の「ｎ」は、１〜１０００、１〜５００、１〜２５０、又は１〜１２５である。いくつかの実施形態では、式Ｉａ、Ｉｂ又はＩｃ中の「ｎ」は、１００〜１２５である。更に別の実施形態では、「ｎ」は約１１４である。更に別の実施形態では、式Ｉａ、Ｉｂ又はＩｃ中の「ｎ」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３及び２４から選択されてよい。
【００３６】
式Ｉａの化合物は、当業者にはポリエチレングリコール（又はＰＥＧ）化合物として知られている。使用可能なＰＥＧ化合物は様々なものがあり、これらの化合物は、直鎖状又は分枝状であってよく、一方又は両方の末端が反応性（単又は二官能性）であってよく、又は従来の意味で非反応性であってよい。本発明に包含されるＰＥＧ化合物は、ポリペプチド上の反応性部分においてポリペプチドに、又はかかる反応性部分を含むように修飾されたポリペプチドに共有結合することができるが、本発明は、共有結合方法によって限定されない。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ化合物を官能化し、ポリペプチドとの反応を可能にする。いくつかの実施形態では、親水性ポリマーは、第一級アミン（例えばリシン残基）においてポリペプチドに共有結合するＰＥＧ化合物である。別の実施形態では、親水性ポリマーは、スルフヒドリル（例えばシステイン残基）においてポリペプチドに共有結合するＰＥＧ化合物である。
【００３７】
本発明の範囲内の親水性ＰＥＧポリマーの非限定例は、ＭＳ（ＰＥＧ）４（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ））、ＭＳ（ＰＥＧ）８（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ））、ＭＳ（ＰＥＧ）１２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ））、ＭＳ（ＰＥＧ）２４（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ））、ＴＭＳ（ＰＥＧ）１２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ））、ＴＭＭ（ＰＥＧ）１２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ））、ＭＭ（ＰＥＧ）１２（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ））、ＭＭ（ＰＥＧ）２４（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ））、及び、別のＮ−ヒドロキシスクシンイミド官能化ＰＥＧ、ｍＰＥＧ−サクシニミジル−スクシネート（２、５、１０、２０又は３０ｋＤａの分子量）（Ｌａｙｓａｎ  Ｂｉｏ．，Ｉｎｃ．（Ａｒａｂ，ＡＬ，ＵＳＡ））、ｍＰＥＧ−ニトロフェニルカーボネート（２、５、１０、２０又は３０ｋＤａの分子量）（Ｌａｙｓａｎ  Ｂｉｏ．，Ｉｎｃ．（Ａｒａｂ，ＡＬ，ＵＳＡ））、ｍＰＥＧ−サクシニミジルバレレート（２、５、１０、２０、３０、４０、又は６０ｋＤａの分子量）（Ｌａｙｓａｎ  Ｂｉｏ．，Ｉｎｃ．（Ａｒａｂ，ＡＬ，ＵＳＡ））、及びｍＰＥＧ−サクシニミジルグルタレート（２、５、１０、２０又は３０ｋＤａの分子量）（Ｌａｙｓａｎ  Ｂｉｏ．，Ｉｎｃ．（Ａｒａｂ，ＡＬ，ＵＳＡ））である。「分枝状」ポリエチレングリコール組成物として、ＴＭＳ（ＰＥＧ）１２、ＴＭＭ（ＰＥＧ）１２、及び任意のその他多枝ポリエチレングリコール組成物が挙げられる。一実施形態では、親水性ポリマーは、約５ｋＤａであり、式中、「ｎ」が約１１４である、ｍＰＥＧ−サクシニミジル−スクシネートポリマーである。
【００３８】
本発明のポリペプチド又は多糖類内に存在する、又は導入された機能的反応性部分は、本発明の親水性ポリマー内に存在する、又は導入された機能的反応性部分と反応し、ポリペプチドと親水性ポリマーとの間に共有結合を形成できる。例えば、本発明で有用な機能的反応性部分として、とりわけ、クリックケミストリー、マレイミドケミストリー、及びＮＨＳ−エステルで使用されるものが挙げられる。クリックケミストリーに関与する機能的反応性部分として、Ｈｕｉｓｇｅｎ環付加プロセスによってトリアゾール環を形成する（その全体が本明細書に組み込まれる、米国特許題７，３７５，２３４号参照）、アジド及びアルキンが挙げられるが、これらに限定されない。マレイミドケミストリーは、安定結合を形成する、マレイミドオレフィンと、−ＯＨ、−ＳＨ又は−ＮＨ２などの求核基との反応が関与する。別の機能的反応性部分として、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｇｒｅｇ  Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  ｅｄ．，２００８（その全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるものが挙げられる。親水性ポリマーのポリエチレングリコールの場合、非限定例として、機能的活性部分は典型的に、図１に示されるように（ここでは、機能的反応性サクシニミジルバレレートがポリエチレングリコールポリマーの末端位置に示される）、ポリエチレングリコールポリマーの一方又は両方の末端部に導入される。
【００３９】
親水性ポリマーに存在する又は導入される機能的反応性部分、及びポリペプチド又は多糖類に典型的に見られる又は導入されるいくつかの機能的反応性部分の反応のいくつかの非限定例を、表１に示す。
【００４０】
【表１−１】
2017516869.tif 000005
【００４１】
【表１−２】
2017516869.tif 000006
【００４２】
【表１−３】
2017516869.tif 000007
【００４３】
【表１−４】
2017516869.tif 000008
【００４４】
【表１−５】
2017516869.tif 000009
【００４５】
【表１−６】
2017516869.tif 000010
【００４６】
Ｒ’は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、又は５〜８個の環内原子を有するアリール基であり、
Ｒ’’は、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、又は５〜８個の環内原子を有するアリール基であり、
Ｒ’’’は、カルボニル誘導体である、＊−（Ｃ＝Ｏ）−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ２）１〜８−＊−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ２）１〜８−Ｓ−Ｓ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ２）１〜８−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ２）１〜８−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ２）１〜８−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、若しくは＊−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨ２）１〜８−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−、又は、Ｒ’’’は、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）１〜８−Ｓ−Ｓ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）１〜８−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）１〜８−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）１〜８−＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）１〜８−Ｏ−（Ｃ＝Ｏ）−、＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）１〜８−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−、若しくは＊−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）１〜８−ＮＨ−（Ｃ＝Ｏ）−の形態のカルボニル誘導体であり、このとき「＊」は、サクシニミジル又はベンゾトリアゾリル基が結合する点を意味し、
Ｘ及びＹは、それぞれポリペプチド及び親水性ポリマーである。
【００４７】
本明細書に記載されるケラチン−親水性ポリマー化合物を、医薬組成物中に提供できる。医薬組成物は、治療的有効量の本明細書に記載されるケラチン−親水性ポリマー化合物を、医薬的に許容される担体と組み合わせて含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、抗菌性を有する。
【００４８】
本明細書において使用されるとき、用語「担体」は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤、脂質、安定化剤、又は製剤処方中での使用に対して当該技術分野において周知であるその他の材料を包含する。組成物中で使用するための担体の選択は、組成物の意図する投与経路によって決まる。医薬的に許容される担体の調製、及びこれらの物質を含有する製剤は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  Ｐａ．，２００５に記載されている。生理学的に許容される担体の例として、生理食塩液、グリセロール、ＤＭＳＯ、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、及びその他の有機酸の緩衝剤などの緩衝剤；アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン若しくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、若しくはデキストリンなどの単糖類、二糖類、及びその他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトール若しくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；並びに／又は、ＴＷＥＥＮ（ＩＣＩ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（ＢＡＳＦ；Ｆｌｏｒｈａｍ  Ｐａｒｋ，ＮＪ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられる。所望の治療のためにかかる用量の投与をもたらすため、本明細書に開示される組成物は、有利には、担体又は希釈剤を含む組成物の総重量に基づき、合計量約０．１％〜９９重量％の１つ又は２つ以上のケラチン−親水性ポリマー組成物を含んでよい。
【００４９】
上記及び本明細書の他の場所に記載されるポリペプチド−親水性ポリマー及び多糖類−親水性ポリマー医薬組成物は、皮膚の質の改善のために被検体の皮膚に投与される。いくつかの実施形態では、用語「皮膚」は爪を含む。用語「投与」は、経口、局所、静脈内、皮下、経皮（transcutaneous）、経皮（transdermal）、筋肉内、関節内、非経口、細動脈内、皮内、心室内、頭蓋内、腹腔内、病巣内、経鼻、直腸、経膣、吸入による、又は埋め込みリザーバによる投与を指す。用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、くも膜下腔内、肝内、病巣内、及び頭蓋内注射又は注入を含む。
【００５０】
本明細書に記載される医薬組成物の局所投与用剤形として、軟膏、ゲル、ペースト、液、溶液、クリーム、油、フォーム、ムース、粉末、エアロゾル、及びスプレーが挙げられる。医薬組成物は、パッチ、絆創膏、及びガーゼ材料などの創傷被覆材に塗布してもよい。増粘剤、皮膚軟化剤、及び安定化剤を用いて、本発明の局所医薬組成物を調製してもよい。増粘剤の例として、ワセリン、ミツロウ、キサンタンガム、又はポリエチレングリコール、ソルビトールなどの保湿剤、鉱油、ラノリン及びその誘導体、又はスクワレンなどの皮膚軟化剤が挙げられる。本明細書に記載される医薬組成物を、無菌条件下で、医薬的に許容される担体、及び、必要とされるような任意の防腐剤、緩衝剤、増粘剤、化粧用剤、日焼け止め剤、又は噴射剤と混合する。
【００５１】
ポリペプチド−親水性ポリマー及び多糖類−親水性ポリマー医薬組成物を、治療的有効量で皮膚に投与してよい。当業者は、任意の特定の被検体に対する特定の用量レベル及び投与頻度は、可変であり、使用した特定の化合物の活性、代謝安定性、及び化合物の作用持続時間、被検体の種、年齢、体重、健康状態、性別、及び食事、投与方法及び時間、排出速度、併用薬、並びに、特定の病状の重篤度などの、様々な因子に依存することを理解するであろう。いくつかの実施形態では、ケラチン−親水性ポリマー医薬組成物は、１日１回、２回、３回、４回、５回、６回又はそれ以上、皮膚に塗布される。ケラチン−親水性ポリマー医薬組成物を、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間又はそれ以上が挙げられるが、これらに限定されない、任意の期間皮膚に投与してよい。
【００５２】
治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物の皮膚への投与により、皮膚の質を改善できる。皮膚の質として、乾燥、潮紅、鱗屑、掻痒、発疹、感染の抵抗又は管理能、及び創傷治癒能を含む表皮の破損の治癒能が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物の、乾燥を呈している皮膚領域への投与により、乾燥部の大きさ又は重篤度が減少する。いくつかの実施形態では、治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物の、潮紅を呈している皮膚領域への投与により、潮紅部の大きさ又は重篤度が減少する。いくつかの実施形態では、治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物の、発疹を呈している皮膚領域への投与により、発疹部の大きさ又は重篤度が減少する。いくつかの実施形態では、治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物の、掻痒を呈している皮膚領域への投与により、掻痒部の大きさ又は重篤度が減少する。いくつかの実施形態では、治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物の、感染の兆候を呈している皮膚領域への投与により、感染部の大きさ又は重篤度が減少する。いくつかの実施形態では、治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物の、皮膚への投与により、対照と比較して、皮膚の感染発現の可能性が減少する。いくつかの実施形態では、治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物の、創傷を含む皮膚領域への投与により、対照と比較して、創傷の大きさがより早くより完全に低下する。いくつかの実施形態では、治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物の、創傷を含む皮膚領域への投与により、創傷部位における瘢痕が減少する。
【００５３】
いくつかの実施形態では、治療的有効量のポリペプチド−親水性ポリマー及び／又は多糖類−親水性ポリマー医薬組成物は、投与された皮膚領域において、表皮の破損を修復又は被覆する。修復又は被覆は全体又は一部であってよいが、その効果は、投与された皮膚のバリア特性を増加するものである。いくつかの実施形態では、バリア特性は、水の含有又は保持に関する。別の又は更なる実施形態では、バリア特性は、アレルゲン又は刺激物質の排除に関する。アレルゲンとして、アトピー性皮膚炎の原因であるものが挙げられる。更に別の又は更なる実施形態では、バリア特性は、微生物の排除に関する。用語「微生物」として、細菌、ウイルス、及び真菌が挙げられるが、これらに限定されない。細菌として、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ種（例えばＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ種、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ  ｃａｎｉｍｏｒｓｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｖｕｌｎｉｆｉｃｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ、及びＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種などの、一般に皮膚の破損部を通って入り込むものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５４】
上記は本発明の好ましい実施形態に関するものであり、本発明の範囲から逸脱することなく、本発明の範囲内で様々な変更ができることも理解されたい。本発明は、以下の実施例によって更に例示されるが、本発明の範囲を限定するものとして決して解釈されない。それとは逆に、本明細書の記述を読んだ後、本発明の趣旨及び／又は添付の特許請求の範囲から逸脱することなく、それら自体を当業者に示唆できる種々の他の実施形態、修正及びその等価物に対して手段を有してもよいことが明瞭に理解される。本明細書で引用された全ての文献、特許、及び特許出願は、あらゆる目的において、その全体を参照することにより本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【００５５】
（実施例１）
ケラチン−ポリエチレングリコール組成物の調製
ケラチン−ポリエチレングリコール組成物を、以下の器具及び材料を用いて調製した。
ボルテックスミキサー
振盪器
ピペット（１０００マイクロリットル）
シリンジ（１ｃｃ）
１．５０ｍＬチューブ
計量秤Ｍｅｔｔｌｅｒ  Ｍａｌａｎｉ  Ｓｅｒ＃１７２４４７
ドラフト
ＤＰＢＳ−ダルベッコリン酸緩衝生理食塩液（１×）Ｃａｔ＃  １４１９０−１４４、ロット＃  ９０１６８１、Ｇｉｂｃｏ  Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｃａｔ＃  Ｄ１１９−５００、ロット＃  ９６３７６０
ＭＳ（ＰＥＧ）４；［ＭＳ４］Ｃａｔ＃  ２２３４１、ロット＃  ＭＩ１６２２１７、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｅｒｃｅ）
ＭＳ（ＰＥＧ）１２；［ＭＳ１２］Ｃａｔ＃２２６８５、ロット＃ＭＩ１６２２１８、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｅｒｃｅ）
ＭＳ（ＰＥＧ）２４；［ＭＳ２４］Ｃａｔ＃２２６８７、ロット＃ＭＨ１６１８６９、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｅｒｃｅ）
ＴＭＳ（ＰＥＧ）１２；［ＴＭＳ１２］Ｃａｔ＃２２４２１、ロット＃ＭＤ１５７１０６、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｉｅｒｃｅ）
ケラチン［Ｋ］Ｃａｔ＃Ｋ３０３０、ロット＃１ＡＧ０１８５、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ
【００５６】
上記材料及び器具を用いて、１０ｍｇのケラチン粉末を１．５ｍＬの遠心チューブ（合計５本）に入れた。５本のサンプルを、Ｋ、Ｋ＋ＭＳ４、Ｋ＋ＭＳ１２、Ｋ＋ＭＳ２４、及びＫ＋ＴＭＳ１２と表示した。各１０ｍｇのケラチンサンプルに１ミリリットルのリン酸緩衝生理食塩液（ＰＢＳ）を加え、４５分間振盪させた。続いて、各ケラチンサンプルチューブに１５μＬの約２５０ｍＭ  ＭＳ４、ＭＳ１２、ＭＳ２４及びＴＭＳ１２のＰＥＧ原液を加え、振盪器に３０分間置いた。ＰＥＧ原液は、以下の計算を用いて調製した。
ケラチンＭ．Ｗ．＝５２．５ｋＤａ
１ｍＬ複合タンパク質×１０ｍｇ／１ｍＬ×１／５２５００×２０／１＝０．００３８０９ミリモルのＰＥＧ試薬。したがって、０．００３８０９×１，０００，０００μＬ／Ｌ×Ｌ／２５０ミリモル＝１５．２３。
約１５μＬの２５０ｍＭ  ＰＥＧ試薬原液。材料を室温で平衡化した。
ＭＳ４  １．１ｍＬのＤＭＦを１００ｍｇの原液ＭＳ４へ
ＭＳ１２  ４８５μＬのＤＭＦを１００ｍｇの原液ＭＳ１２へ
ＭＳ２４  ２３０μＬのＤＭＦを１００ｍｇの原液ＭＳ２４へ
ＴＭＳ１２  ６５μＬのＤＭＦを１００ｍｇの原液ＴＭＳ１２へ
【００５７】
得られた溶液を乾燥剤と共に冷凍ボックスに入れ、使用するまで−２０℃の冷凍庫に戻した。
【００５８】
（実施例２）
ケラチン−ポリエチレングリコール（ＳＶＡ）組成物の調製
ケラチン−ポリエチレングリコール組成物を、以下の材料及び器具を用いて調製した。
１．ピペット
２．シリンジ
３．１．５ｍＬ遠心チューブ
４．計量秤Ｍｅｔｔｌｅｒ
５．メトキシ−ポリ（エチレングリコール）−サクシニミジルバレレートロット＃  １２０〜１７６；Ｌａｙｓａｎ  Ｂｉｏ  Ｉｎｃ．５０００ＭＷ（ＳＶＡ  ＰＥＧ）（５ｋ  ＳＶＡ  ＰＥＧ）
６．ＤＰＢＳ−ダルベッコリン酸緩衝生理食塩液ｃａｔ＃  １４１９０、ロット＃  １０４８４２７、Ｇｉｂｃｏ
７．ケラチンＣａｔ＃Ｋ３０３０、ロット＃１ＡＧ０１８５、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ
【００５９】
上記材料及び器具を用いて、ケラチンポリペプチドとＳＶＡ  ＰＥＧポリマー（１：１）の比率を有する反応サンプルを調製した。サンプルを以下のように調製した。
【００６０】
１．５ｍＬの遠心チューブに、１ｍＬのＤＰＢＳを加えた。サンプルチューブを以下のように表示した。
１．Ｋ：Ｐ；１：１＝５０ｍｇのＳＶＡ  ＰＥＧを秤量し、１ｍＬのＤ−ＰＢＳ＋５ｍｇケラチンに加えた
【００６１】
続いて、ケラチン量［５ｍｇ］を１ｍＬのＤ−ＰＢＳに加え、溶解するまで手で振盪した。ＳＶＡ  ＰＥＧの量を秤量し、ＰＢＳ−ケラチン溶液に加えた。ＳＶＡ  ＰＥＧ量は５０ｍｇとした。次に、チューブを手で振盪し、パラフィルムで封をした。
【００６２】
（実施例３）
ケラチン−ポリエチレングリコール組成物の皮膚への投与
実施例１に記載されるケラチン−ポリエチレングリコール組成物を、１０〜６７歳、男性及び女性の両方を含む様々なヒトの皮膚に、数日間、数週間、又は数ヶ月間にわたって投与した。この投与により、皮膚乾燥の低下、皮膚柔軟性の増加、及びその他皮膚改善が見られた。
【００６３】
（実施例４）
増殖及び遊走−細胞培養アッセイ
図２は、培地のみに対する、初代ヒト成人ケラチノサイトにおける、実施例１及び実施例２に記載の１００μｇ／ｍＬのケラチン−ポリエチレングリコール組成物の影響を示すグラフである。ケラチン−ポリエチレングリコール組成物は、Ｏｒｉｓ  Ｃｅｌｌ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙにおいて、ヒトケラチノサイトの遊走を増加させた。初代ケラチノサイトを、ヒトケラチノサイト増殖用サプリメント（ＨＫＧＳ）及びペニシリン／ストレプトマイシンを含む適切な増殖培地で、アッセイの播種に先立って細胞がコンフルエンスに達するまで、培養した。
【００６４】
Ｐｌａｔｙｐｕｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによって提供される９６ウェルプレートである、各ウェルの中央部に細胞接着を阻害するためのＯｒｉｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｅｄｉｎｇ  Ｓｔｏｐｐｅｒを備えたＯｒｉｓ  Ｃｅｌｌ  Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙに、２５，０００個の初代ヒトケラチノサイトを播種した。細胞を、ＨＫＳＧを加えた増殖培地で２４時間、その後、培地ＨＫＳＧに変更して１６時間インキュベートした。細胞がコンフルエンスに達すると、Ｏｒｉｓ  Ｃｅｌｌ  Ｓｅｅｄｉｎｇ  Ｓｔｏｐｐｅｒを取り除き、各ウェル内に均一な円形の「創傷」を露出した。各Ｓｔｏｐｐｅｒ除去後すぐに、示した濃度の試験化合物を加えた。１００、５０、２５、１０μｇ／ｍＬのＳＬＰ００１及びＳＬＰ００２。
【００６５】
明視野顕微鏡を用いて、処理後０時間（Ｓｔｏｐｐｅｒ除去後すぐ）、２４時間、４８時間、７２時間、及び９６時間における細胞遊走（進行性の創傷間隙閉鎖）を記録した。遊走を、時間、及び、創傷間隙内に遊走し、塞いだ細胞により覆われた創傷間隙の割合によって測定し、ＣｅｌｌＰｒｏｆｉｌｅｒ  Ｃｅｌｌ  Ｉｍａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ＳｏｆｔｗａｒｅをＣｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓの最適化アドオンと共に用いて定量した。
【００６６】
ケラチノサイトをケラチン−ポリエチレングリコール組成物処理で増殖させたとき、培地のみで増殖させた対照細胞と比較して、２４時間以内に、かつ９６時間まで継続する遊走の増加が観察された。
【００６７】
（実施例５）
内反趾爪感染歴を有する１２歳の女性、感染を発症している爪を、実施例２に記載されるケラチン−ポリエチレングリコール組成物を用いて治療した。まず足指を洗浄し、その後乾燥した。次に、ケラチン−ポリエチレングリコール組成物を塗布し、覆わずに２４〜４８時間放置した。８時間以内に顕著な改善があり、創傷の疼痛がなくなった。４８時間後、足指の下部又は周囲に創傷の顕著な兆候はなかった。１年間にわたって、各事象中にケラチン−ポリエチレングリコール組成物の塗布を施したところ、その事象は徐々に少なくなり、今ではその女性の内反趾爪感染は極まれである。
【００６８】
（実施例６）
薄くなりつつある細く成熟した毛髪を有する７０代の女性、不安性むしり症により頭皮病変を有していた。実施例２に記載のケラチン−ポリエチレングリコールを、塗布用の一般的な賦形剤である、局所用溶液に処方したものを塗布した。毎洗髪後、２ヶ月にわたって溶液を頭皮に塗布した。この女性では、以前頭皮上にあった病変部に新たな毛髪の成長が見られ、ほぼ全ての病変が完全に治癒された。
【００６９】
(実施例７）
７３歳女性、テーブルの角で指関節を打ち付けたと訴え、外傷部が大きく開き、皮膚の傷が出血していた。実施例２に記載されるケラチン−ポリエチレングリコール組成物を塗布すると、裂創が治癒され／２４時間安定化され、関節／皮膚を動かしても出血は再発しなかった。１ヶ月後、瘢痕を有さずに皮膚が治癒された。同じ週、治療されていない２つ目の傷を指に有していた。２つ目の部位には瘢痕が依然として見ることができる。したがって、本発明の組成物が、瘢痕を予防した。
【００７０】
（実施例８）
当初、獣医により経口抗生物質及び局所軟膏を用いてイヌの前肢の創傷を２週間治療したが、改善は見られなかった。残念ながらこのイヌは、抗生物質治療により、下痢と、創傷部位を過度に舐めることの両方に苦しんでいた。１週間の「ウォッシュアウト期間」後、実施例２に記載されるケラチン−ポリエチレングリコール組成物を、１日１回３日間塗布する前に、毎日創傷を洗浄した。創傷は被覆されなかった。このイヌは、治療を苦にしなかった。１ヶ月後までに、創傷は消え、再度発毛した。
【００７１】
（実施例９）
アトピー性皮膚炎の症状に類似する継続した皮膚乾燥に苦しみ、絶えず自身を引っ掻いている雌イヌを、洗浄液と、その後、実施例１に記載の局所処方化溶液のケラチンポリエチレングリコール組成物を用いて入浴させた。イヌの飼い主は、イヌの引っ掻き行動が顕著に減少し、更に、毛の状態が柔らかく、滑らかで、かつフワフワになったことに気づいた。このイヌを、３ヶ月間にわたり、実施例１に記載の局所処方のケラチン−ポリエチレングリコール組成物のサンプルで、２又は３週間毎に入浴させ、処理していた。有害事象は見られず、引っ掻き行動が治まった。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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