(57)【要約】  本発明は、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の予防又は治療のための、新規の（３Ｒ，５Ｓ，５ａＳ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−８−クロロ−８ａ−ヒドロキシ−５−（２−ヒドロキシアセトキシ）ヘキサヒドロ−１Ｈ−３，６−メタノシクロペンタ［ｅ］［１，３］ジオキセピン−７−イル  ３，４−ジヒドロキシベンゾエート（ＫＳ５３４）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩又は溶媒和物、有効成分としてそれらを含む組成物及びその使用に関する。【選択図】なし
2017523171.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化学式（１）：
【化１】
2017523171.tif 000010
により表される（３Ｒ，５Ｓ，５ａＳ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−８−クロロ−８ａ−ヒドロキシ−５−（２−ヒドロキシアセトキシ）ヘキサヒドロ−１Ｈ−３，６−メタノシクロペンタ［ｅ］［１，３］ジオキセピン−７−イル  ３，４−ジヒドロキシベンゾエート（ＫＳ５３４）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩又は溶媒和物。
【請求項２】
シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムから単離された請求項１に記載の前記化合物（ＫＳ５３４）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩又は溶媒和物を含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療又は予防用医薬組成物。
【請求項３】
請求項１に記載のシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された前記化合物（ＫＳ５３４）及びその薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療又は予防用医薬組成物。
【請求項４】
哺乳動物におけるアレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療又は予防する方法であって、治療有効量の請求項１に記載の前記新規の化合物（ＫＳ５３４）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩又は溶媒和物をアレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に罹患した前記哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項５】
アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療又は予防するために使用される医薬の製造のための、請求項１に記載の前記化合物（ＫＳ５３４）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩又は溶媒和物及びその薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む組成物の使用。
【請求項６】
治療有効量の請求項１に記載の前記化合物（ＫＳ５３４）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩又は溶媒和物を有効成分として含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の予防又は軽減用健康機能食品。
【請求項７】
治療有効量の請求項１に記載の前記化合物（ＫＳ５３４）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩又は溶媒和物を食品学的に許容可能な添加物とともに含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の予防又は軽減用健康管理食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患を予防又は治療する、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルム（Pseudolysimachion rotundum var. subintegrum）から単離された新規の化合物、該化合物を含む組成物及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
一般に、炎症応答は、組織又は細胞がその内部において一部の器質的な変化を生じる何らかの侵入を受けた場合の、浮腫、疼痛等を伴う人体の正常な応答である。最近では種々の型のサイトカインが炎症性疾患に関与することがわかっている。
【０００３】
アレルギー応答を、応答の種類による４つのカテゴリー、すなわちＩ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型及びＩＶ型に、又はアレルゲンによって生じる再感作から応答の開始時間までの期間の種類による２つのカテゴリー、すなわちＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型等の即時型アレルギー応答及びＩＶ型等の遅延型アレルギー応答に分類することができる。
【０００４】
これらのうち、Ｉ型アレルギーは、ＩｇＥ抗体に関与し、アナフィラキシー型アレルギーと呼ばれているが、気管支喘息、皮膚炎又は胃腸炎等のアトピー性疾患、花粉症等のアレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、食物アレルギー等を引き起こす。
【０００５】
喘息は、種々の臨床症状、例えば咳、気道閉塞、急性又は慢性の気道炎症、気道過敏性（ＡＨＲ）及び構造的リモデリングにより引き起こされる呼吸困難を特徴とする気道の複合症候群と考えられ、回復の可能性は可逆的又は不可逆的であり得る。喘息のほとんどがアレルギー性疾患であり、慢性気道炎症及び気管支過敏性を特徴とする（非特許文献１）。
【０００６】
喘息を、２つの型、すなわち外因性喘息及び内因性喘息に分類することができる。外因性喘息は抗原に曝露することにより引き起こされ、皮膚検査又は抗原に対する気管支誘発検査において陽性反応を示す。通常、発症する年齢は若年になりつつある。喘息は主に、イエダニのダーマトファゴイデス（Dermatophagoides）及び花粉、動物の上皮組織、真菌等により引き起こされる。内因性喘息は上気道感染、運動、情緒不安定、気候の湿度変化により引き起こされ、成人患者が一般的である。また、外因性喘息のＩｇＥ抗原を血清中のＩｇＥの増加に基づく皮膚検査によって検出することができる。
【０００７】
病態生理学において、喘息はＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞誘導性の慢性炎症及び種々の炎症性メディエーター、例えば免疫細胞由来のサイトカイン、ケモカイン、シグナル伝達分子、接着分子及び成長因子により認識され、気道の細胞構造は喘息の種々の病期にわたり関与する（非特許文献２）。喘息に罹患した患者の気管支内の炎症細胞、例えば好酸球、肥満細胞、肺胞マクロファージ等が活性化して、種々の炎症性メディエーター、例えばシステインロイコトリエン、プロスタグランジン等が放出され、強力な気管支収縮に関与する（非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５）。
【０００８】
それに応じて、例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３等の炎症細胞活性化に関与する種々のサイトカイン及びＩｇＥの再生並びに炎症細胞から放出されるシステインロイコトリエンの再生が炎症、アレルギー応答及び喘息の主な原因であることから、現在までこれらの再生を阻害する物質を開発する研究が多く為されてきた。
【０００９】
一般に、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、気道の閉塞を生じる肺の異常炎症性疾患によって引き起こされる肺疾患の１つである。ＣＯＰＤは、気流排出の障害に起因する呼吸困難を生じ、様々な特徴、例えば喘息の一般的な特徴の、気道制限又は気道閉塞の可逆性不良、経時による進行性の発現等を示し、肺気腫及び慢性閉塞性気管支炎に分類されることができる（非特許文献６）。
【００１０】
ＣＯＰＤは、心血管系疾患の罹患率及び死亡率の危険因子の１つとして、並びに２００１年の世界規模での死亡原因の第５位として報告されている。慢性閉塞性肺疾患に対するグローバルイニシアチブ（Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease）（ＧＯＬＤ）基準（ＦＥＶ１とＦＶＣとの比が０．７未満）に基づく慢性閉塞性肺疾患の有病率は、４５歳を超える韓国人のうち１７．２％（男性２５．８％、女性９．６％）であった（非特許文献７、非特許文献８、非特許文献９）。
【００１１】
ほとんどのＣＯＰＤ患者は、３つの病理学的メカニズム（慢性閉塞性気管支炎、気腫及び粘液栓）全てを有し、気腫及び閉塞性気管支炎の割合に違いがあるかもしれないが、その全てが喫煙により誘発される。先進諸国において、タバコによる喫煙は、ＣＯＰＤの圧倒的に最も一般的な原因であるが、大気汚染（特に、燃料燃焼による室内大気汚染）、偏った食事及び職業上の曝露を含む他のいくつかの危険因子がある。ＣＯＰＤは、加齢に認められる肺機能の正常な低下を加速させる特徴がある。ゆっくりと進行する気流制限が身体障害及び早死をまねくが、稀に重症化する可変性気道閉塞及び喘息の症状とは全く異なる。
【００１２】
ＣＯＰＤの病態生理学的作用及び症候群が基本的に喘息のものと異なることが報告されている。ＣＯＰＤ及び喘息はともに、気道の炎症が関与するが、炎症プロセスの性質が著しく異なり、炎症細胞、メディエーター、炎症反応、解剖学的分布及び抗炎症療法に対する反応が異なり、例えば（ａ）炎症細胞において、肥満細胞、好酸球、ＣＤ４＋細胞（Ｔｈ２）、マクロファージ等は主に喘息の発症時に作用するが、好中球、ＣＤ８＋（Ｔｃ）等は主にＣＯＰＤの発症時に作用する、（ｂ）炎症性メディエーターにおいて、ロイコトリエンＢ、ヒスタミン、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、エオタキシン、ＲＥＮＴＥＳ、酸化ストレス等は主に喘息の発症に関与するが、ＴＮＦ−α、ＩＬ−８、ＧＲＯ−α等は主にＣＯＰＤの発症に関与する、（ｃ）炎症性症候群において、成人の末梢気道に作用することにより生じ、種々の現象、例えば上皮化生、実質破壊、相対的不可逆性気道閉塞、慢性気管支炎、気腫等を示すＣＯＰＤに比べ、喘息は若年時に肺気道全体に作用することによる様々な炎症性症候群、例えばＡＨＲ（気道過敏性）、上皮細胞の剥落、線維症、実質性病変の非含有、粘液分泌、相対的可逆性気道閉塞、咳、くしゃみ、呼吸困難等を示す（非特許文献１０、非特許文献１１）。
【００１３】
ＣＯＰＤにおける組織病理学的研究では、主に末梢気道（細気管支）及び肺実質に関与し、喘息は気道全ての炎症に関与するが肺実質に関与しないことが示されている。細気管支の閉塞があり、線維症並びにマクロファージ及びＴリンパ球による浸潤を含む。肺実質が破壊され、マクロファージ及びＣＤ８（細胞毒性）Ｔリンパ球数が増加する（非特許文献１２）。重度ＣＯＰＤ患者における気管支生検では、マクロファージ及びＣＤ８細胞の浸潤と好中球数の増加とを伴う同様の変化が示されている（非特許文献１３）。
【００１４】
喘息と対照的に、好酸球は憎悪又は患者が同時に喘息を併発した時を除いて顕著ではなかった（非特許文献１４、非特許文献１５）。
【００１５】
それゆえ、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療アプローチは、喘息のものと異なるはずであるが、現在の治療法は、両疾患を非特異的に治療することに集中している。それゆえ、ＣＯＰＤに特に認可された抗炎症治療法はなく、利用可能な抗炎症治療法は元々喘息用に開発されていた。ＣＯＰＤの研究が直面している課題は多面的であり、この疾患の複雑さ及び異種病因を基礎とする機構の解明が求められ、疾患の進行における炎症の役割を確認する必要がある（非特許文献１６、非特許文献１７）。
【００１６】
長時間作用性βアゴニスト、安全なステロイド及び併用療法の形態での喘息の治療に利用可能な現在の治療法の改善が進められ、ＣＯＰＤでは、抗コリン作動薬が症状を緩和させる。憎悪を治療するためにステロイドが利用されているが、未だにＣＯＰＤの肺機能における進行性の低下に対して又は喘息の発症に対して顕著な影響を与える治療は示されていない。
【００１７】
それに応じて、これまでにアレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又はＣＯＰＤの治療に成功し、特化する可能性のある新たな薬剤を開発する研究が多く為されている。
【００１８】
本発明者らは、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又はＣＯＰＤに対する強力な治療効果を有する、植物、動物等の天然資源由来の安全かつ有効で強力な治療剤を開発することに注力しており、最終的に、予期せぬ驚くべき結果、例えばシュードリシマキオン・ロンギフォリウム（Pseudolysimachion longifolium：セイヨウトラノオ）の抽出物の強力な抗炎症活性、抗アレルギー活性及び抗喘息活性（特許文献１及び特許文献２）及びその抽出物から単離された種々の化合物、例えばベルプロシド（６−Ｏ−３，４−ジヒドロキシベンゾイルカタルポール）、ピクロシドＩＩ（６−Ｏ−４−ヒドロキシ−３−メトキシベンゾイルカタルポール）、ベルミノシド（６−Ｏ−３，４−ジヒドロキシシンナモイルカタルポール）、６−Ｏ−ベラトロイルカタルポール（６−Ｏ−３，４−ジメトキシベンゾイルカタルポール）、ミネコシド（６−Ｏ−３−ヒドロキシ−４−メトキシシンナモイルカタルポール）、カタルポール等の強力な抗炎症活性、抗アレルギー活性及び抗喘息活性（特許文献３）；シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物由来のカタルポール派生物等の有効成分を十分に含有する新規の精製抽出物の強力な抗炎症活性、抗アレルギー活性及び抗喘息活性（ＡＴＣ２：特許文献４、ＡＴＣ１：特許文献５）；並びにこれらの抽出物の抗ＣＯＰＤ活性（特許文献６）を現在までに続けて見出している。
【００１９】
シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムは、韓国、中国、日本、サハリン島、及びロシアに分布する多年生草本である。
【００２０】
シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物の抗炎症活性、抗アレルギー活性及び抗喘息活性におけるこれまでの研究に基づき、本発明者らは、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された、抗炎症活性、抗アレルギー活性、抗喘息活性及び抗ＣＯＰＤ活性を示す新規の化合物を開発しようとした。
【００２１】
しかし、それらの開示が引用することにより本明細書の一部をなす、上記の引用文献ではシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された抗炎症活性、抗アレルギー活性、抗喘息活性及び抗ＣＯＰＤ活性を示す新規の化合物について報告又は開示されていなかった。
【００２２】
それに応じて、本発明者らは、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された抗炎症活性、抗アレルギー活性、抗喘息活性及び抗ＣＯＰＤ活性を示す新規の化合物を見出し、また本発明の化合物は、例えば（１）ＨＴ１０８０、Ｈ２９２及びＥＬ４の細胞株を用いた細胞毒性試験、（２）ＴＮＦ−αにより誘導されたＭＵＣ５ＡＣ（オリゴマー粘性物質（oligomeric muscus：オリゴマー粘膜）／ゲル形成）の発現に対する阻害試験、（３）ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターアッセイ、（４）ＮＦ−κＢ転写因子の活性に対する阻害試験、（５）ＮＦ−κＢ活性の阻害によるＭＭＰ−９、ＭＵＣ５ＡＣ及びＩＬ−４等の標的遺伝子のｍＲＮＡ発現に対する阻害、（６）ＭＵＣ５ＡＣタンパク質再生アッセイによるＭＵＣ５ＡＣ再生に対する用量依存的阻害作用の種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験、並びに例えば（７）ＯＶＡ感作／抗原投与マウスモデルを用いた好酸球等の炎症性細胞数の減少作用、（８）ＢＡＬＦ液におけるＩｇＥ、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３等の放出及び炎症を起こした細胞の浸潤に対する阻害試験並びに気道過敏反応性及び杯細胞の過形成の抑制、（９）ＣＯＰＤ動物モデル（Ｃ５７Ｂ／６Ｎマウス）を用いたＢＡＬＦ液中の炎症性細胞の増殖に対する阻害試験、ＲＯＳ（活性酸素種）の再生及び好中球エラスターゼ活性に対する阻害、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α及び浸潤した炎症性細胞等のレベルに対する低下作用のｉｎ  ｖｉｖｏ試験から強力な抗炎症活性、抗アレルギー活性、抗喘息活性及び抗ＣＯＰＤ活性を示すことを見出した。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２３】
【特許文献１】韓国特許第１０−８６００８０号
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１２／０１８３６３２号
【特許文献３】韓国特許出願公開第１０−２００６−１２５４９９号
【特許文献４】韓国特許第１４７６０４５号
【特許文献５】韓国特許第１５０４６５１号
【特許文献６】韓国特許第１４７６０９５号
【非特許文献】
【００２４】
【非特許文献１】Minoguchi K and Adachi M., Pathophysiology of asthma. In: Cherniack NS, Altose MD, Homma I. editors. Rehabilitation of the patient with respiratory disease. New York: McGraw-Hill, 1999, pp97-104
【非特許文献２】Elias JA et al., J Clin Invest. 2003, 111, pp291-297
【非特許文献３】Maggi E. et al., Immunotechnology 1998, 3, 233-244.
【非特許文献４】Pawankar R. et al., Curr. Opin. Allergy Clin. Immunol. 2001, 1, 3-6.
【非特許文献５】Barnes PJ et al., Phamacol. Rev. 1998, 50, 515-596
【非特許文献６】Barnes P. J., Pharmacol. Rev. 2004, 56, 515-548
【非特許文献７】Kim, D. S. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2005, 172, 842-847
【非特許文献８】Sin, D. D. et al., Proc. Am. Thorac. Soc. 2005, 2, 8-11
【非特許文献９】Buist A. S. et al., Lancet, 2007, 370, 741-750
【非特許文献１０】Barnes PJ., Chest 2000, 117, 10S-14S.
【非特許文献１１】Saetta M. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2001, 163, 1304-1309
【非特許文献１２】Saetta M. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998, 157, 822-826
【非特許文献１３】Di Stefano A. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998, 158, 1277-1285
【非特許文献１４】Fabbri L. et al., Thorax 1998, 53, 803-808.
【非特許文献１５】Fabbri LM. et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2003, 167, 418-424
【非特許文献１６】Hele D. et al., Expert. Opino. Invest. Drug, 2003, 12, 5-18.
【非特許文献１７】Fox, J C. et al., Curr. Opin. Pharmacol. 2009, 9, 231-242
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
本発明は、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された新規の化合物（ＫＳ５３４）を提供する。
【００２６】
本発明はまた、有効な量のシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された新規の化合物（ＫＳ５３４）を有効成分として含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又はＣＯＰＤ疾患の治療及び予防用の医薬組成物及び健康食品を提供する。
【００２７】
本発明はまた、炎症性疾患、アレルギー性疾患、喘息又はＣＯＰＤの治療又は予防に使用される医薬の製造のための、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された新規の化合物（ＫＳ５３４）の使用を提供する。
【００２８】
本発明はまた、哺乳動物又はヒトにおける炎症性疾患、アレルギー性疾患、喘息又はＣＯＰＤを治療又は予防する方法であって、上記哺乳動物又はヒトにシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された、有効量の新規の化合物（ＫＳ５３４）をその薬学的に許容可能な担体とともに投与することを含む、方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００２９】
本発明は、以下の化学式（１）：
【化１】
2017523171.tif 000003
により表される（３Ｒ，５Ｓ，５ａＳ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−８−クロロ−８ａ−ヒドロキシ−５−（２−ヒドロキシアセトキシ）ヘキサヒドロ−１Ｈ−３，６−メタノシクロペンタ［ｅ］［１，３］ジオキセピン−７−イル  ３，４−ジヒドロキシベンゾエート（ＫＳ５３４）、その異性体、その薬学的に許容可能な塩又は溶媒和物を提供する。
【００３０】
本発明の新規の化合物を、当該技術分野において既知の従来の方法により薬学的に許容可能な塩及び溶媒和物に変換することができる。その塩において、その薬学的に許容可能な遊離酸により形成されるその酸付加塩は有用であり、従来の方法により調製することができる。例えば、過剰量の酸溶液にこの化合物を溶解させた後、その塩を水混和性の有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、アセトン又はアセトニトリルによって析出してその酸付加塩を調製し、更に等量の化合物及び希釈した酸と、水又はグリコールモノメチルエーテル等のアルコールとの混合物を加熱した後、蒸発乾固させるか又は減圧下において濾過し、その乾燥塩形態を得ることができる。
【００３１】
上記方法の遊離酸として、有機酸又は無機酸を使用することができる。例えば、有機酸、例えばメタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、コハク酸、シュウ酸、安息香酸、乳酸、グリコール酸、グルコン酸、ガラクツロン酸、グルタミン酸、グルタル酸、グルクロン酸、アスパラギン酸、アスコルビン酸、カルボン酸、バニリン酸、ヨウ化水素酸等及び無機酸、例えば塩酸、リン酸、硫酸、硝酸、酒石酸等を本明細書において使用することができる。
【００３２】
さらに、本発明の化合物の薬学的に許容可能な金属塩を、塩基を使用することで調製することができる。そのアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩を、従来の方法、例えば過剰量のアルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物の溶液に化合物を溶解させた後、不溶性の塩を濾過し、残った濾液を蒸発乾固させ、その金属塩を得ることにより調製することができる。本発明の金属塩として、ナトリウム、カリウム又はカルシウム塩は薬学的に好適であり、対応する銀塩は、アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩を硝酸銀等の好適な銀塩と反応させることにより調製することができる。
【００３３】
本化合物の薬学的に許容可能な塩は、本明細書において特に明示されない場合、本化合物に存在し得る酸性塩又は塩基性塩を全て含む。例えば、本発明の薬学的に許容可能な塩には、ヒドロキシル基の塩、例えばそのナトリウム塩、カルシウム塩及びカリウム塩、アミノ基の塩、例えば臭化水素塩、硫酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、リン酸水素塩、ジヒドロリン酸塩、酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸（メシル酸）塩及びｐ−トルエンスルホン酸（トシル酸）塩等が含まれ、これらを当該技術分野において既知の従来の方法により作製することができる。
【００３４】
本化合物が非対称的な中心を有することから、光学的に異なるジアステレオマーの形態において存在することができ、したがって本発明の化合物は、光学的に活性な異性体、Ｒ型又はＳ型立体異性体及びそれらの混合物を全て含む。本発明はまた、ラセミ混合物、２つ以上の光学的に活性な異性体又はそれらの混合物の使用全て及び当該技術分野において既知のジアステレオマーの調製又は単離の方法全てを含む。
【００３５】
本発明の化合物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー又は再結晶方法等の当該技術分野において既知の単離方法若しくは精製方法、例えば特許文献３に開示の方法から単離することができ、又は単なる例示の、本発明を限定しない当該技術分野において既知の方法により化学的に合成することができる。
【００３６】
本発明の新規の化合物（ＫＳ５３４）を以下の手順によりシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムから調製することができる。
【００３７】
例えば、新規の化合物（ＫＳ５３４）は、以下のプロセス：第１の工程において、水、メタノール、エタノール、ブタノール等のＣ１〜Ｃ４低級アルコール又はそれらの混合物、好ましくは水とメタノールとの混合物、より好ましくは１０％（ｗ／ｗ）〜１００％（ｗ／ｗ）メタノール水溶液から選択される少なくとも１つの抽出溶剤を、乾燥させたシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムに添加することと；第２の工程において、１０℃〜１５０℃、好ましくは２０℃〜７０℃の温度にて、３０分〜７２時間、好ましくは１時間〜４８時間の範囲の期間において熱水抽出、冷水抽出、超音波処理又は従来の抽出、好ましくは冷水抽出を用いた還流抽出、より好ましくは、１０℃〜６０℃、好ましくは２０℃〜５０℃の温度にて３０分〜７２時間、好ましくは６時間〜４８時間の範囲の期間にて繰り返される冷水抽出の後に、４０℃〜１２０℃、好ましくは６０℃〜９０℃の範囲の温度にて３０分〜７２時間、好ましくは６時間〜４８時間の範囲の期間にて繰り返される還流抽出から選択された少なくとも１つの抽出方法を行い、第１の抽出物を得ることと；第３の工程にて、濾過、真空濃縮及び乾燥方法を行い、粗製乾燥抽出物を得ることと；（ｉ）逆相分配クロマトグラフィー、（ｉｉ）フラッシュカラムクロマトグラフィー、（ｉｉｉ）ＲＰ  Ｃ１８カラムクロマトグラフィー、（ｉｖ）シリカゲルカラムクロマトグラフィー、（ｖ）イオン交換クロマトグラフィー又は（ｉｖ）サイズ排除クロマトグラフィーから選択される少なくとも１つの精製プロセスを繰り返し行い、本発明の新規の化合物（ＫＳ５３４）を得ることによって調製されることにより特徴付けられる。
【００３８】
本明細書で定義される「薬学的に許容可能な担体又は賦形剤」の用語は、「薬学的添加物」、すなわち、医薬品を製造するのに使用される不活性な原料を含む。薬学的添加物として、色素、香味料、結合剤、軟化剤、充填剤、滑剤、防腐剤、及び他にも多くの分類が挙げられる。一般的な賦形剤として、当該技術分野（食品医薬品局のホームページ：www.fda.gov又は医薬品情報オンライン：www.drugs.comを参照されたい）又は以前の文献（例えば、Rowe, Raymond C et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, Pharmaceutical Press, 7th Edition, 2012）でよく知られている、コーンスターチ、乳糖、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ショ糖、ゼラチン、ステアリン酸カルシウム、二酸化ケイ素、シェラック及びグレーズが挙げられる。
【００３９】
本明細書で開示される「予防」の用語は、本発明の組成物を投与することによって、本明細書で開示される或る特定の疾患又は障害の発症を阻害又は遅延する任意の作用を含み、また、本明細書で開示される「治療」の用語は、本発明の組成物を投与することによって、本明細書で開示される或る特定の疾患又は障害と関連する症状を緩和又は有利に変化させる任意の作用を含む。
【００４０】
本発明者らは、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムから調製することができる新規の化合物（ＫＳ５３４）が、例えば（１）ＨＴ１０８０、Ｈ２９２及びＥＬ４の細胞株を用いた細胞毒性試験、（２）ＴＮＦ−αにより誘導されたＭＵＣ５ＡＣ（オリゴマー粘性物質／ゲル形成）の発現に対する阻害試験、（３）ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターアッセイ、（４）ＮＦ−κＢ転写因子の活性に対する阻害試験、（５）ＮＦ−κＢ活性の阻害によるＭＭＰ−９、ＭＵＣ５ＡＣ及びＩＬ−４等の標的遺伝子のｍＲＮＡ発現に対する阻害、（６）ＭＵＣ５ＡＣタンパク質再生アッセイによるＭＵＣ５ＡＣ再生に対する用量依存的阻害作用の種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験、並びに例えば（７）ＯＶＡ感作／抗原投与マウスモデルを用いた好酸球等の炎症性細胞数の減少作用、（８）ＢＡＬＦ液におけるＩｇＥ、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３等の放出及び炎症を起こした細胞の浸潤に対する阻害試験並びに気道過敏反応性及び杯細胞の過形成の抑制、（９）ＣＯＰＤ動物モデル（Ｃ５７Ｂ／６Ｎマウス）を用いたＢＡＬＦ液中の炎症性細胞の増殖に対する阻害試験、ＲＯＳ（活性酸素種）の再生及び好中球エラスターゼ活性に対する阻害、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α及び浸潤した炎症性細胞等のレベルに対する低下作用のｉｎ  ｖｉｖｏ試験から強力な抗炎症活性、抗アレルギー活性、抗喘息活性及び抗ＣＯＰＤ活性を示すことを見出した。
【００４１】
それに応じて、本発明の他の態様によれば、本発明は、有効量のシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された新規の化合物（ＫＳ５３４）を有効成分として含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又はＣＯＰＤ疾患の治療及び予防用の医薬組成物又は健康機能食品を提供する。
【００４２】
本発明は、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された新規の化合物（ＫＳ５３４）及び薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療又は予防用の医薬組成物又は健康機能食品を提供する。
【００４３】
本発明の別の態様によれば、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療又は予防するために使用される医薬の製造のための、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された新規の化合物（ＫＳ５３４）の使用も提供する。
【００４４】
本発明の別の態様によれば、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療又は予防するために使用される医薬の製造のための、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離される新規の化合物（ＫＳ５３４）及び薬学的に許容可能な担体又は賦形剤の使用も提供される。
【００４５】
本発明の別の態様によれば、哺乳動物におけるアレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療又は予防する方法であって、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された、治療有効量の新規の化合物（ＫＳ５３４）を、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に罹患した哺乳動物に投与することを含む、方法も提供する。
【００４６】
本発明の別の態様によれば、哺乳動物におけるアレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療又は予防する方法であって、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された、治療有効量の新規の化合物（ＫＳ５３４）及び薬学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む組成物をアレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）に罹患した哺乳動物に投与することを含む、方法も提供する。
【００４７】
アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療及び予防するための本発明の組成物は、組成物の総重量に対して０．１重量％〜９９重量％、好ましくは０．１重量％〜５０重量％の上記化合物を含むことができる。
【００４８】
本発明による組成物を薬学的に許容可能な担体、アジュバント又は希釈剤、例えば、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱物油を含有する医薬組成物として提供することができる。上記製剤は、追加的に、充填剤、抗凝集剤、滑剤、湿潤剤、香味剤、乳化剤、防腐剤等を含んでもよい。本発明の組成物は、当該技術分野でよく知られている任意の手順を採用することにより、患者に投与した後の上記有効成分の即時放出、持続放出又は遅延放出を提供するように製剤化されてもよい。
【００４９】
例えば、本発明の組成物を、油、プロピレングリコール又は注射剤を製造するのに通常使用される他の溶媒に溶解することができる。担体の好適な例として、生理学的食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物油、ミリスチン酸イソプロピル等が挙げられるが、それらに限定されない。局所投与に対しては、本発明の抽出物を軟膏及びクリームの形態に製剤化することができる。
【００５０】
本組成物を含有する医薬製剤は、経口剤形（粉末、錠剤、カプセル、軟カプセル、水性薬剤、シロップ、エリキシル、丸剤、粉末、サシェ、粒剤）、又は局所用調製物（クリーム、軟膏、ローション、ジェル、香膏、パッチ、ペースト、スプレー溶液、エアロゾル等）、又は注射用調製物（溶液、懸濁液、エマルション）等の任意の形態で調製することができる。
【００５１】
医薬剤形の本発明の組成物は、それらの薬学的に許容可能な塩の形態で使用されてもよく、さらに、単独で又は他の薬学的活性化合物と適当な関連のもと、また同じく、それらと組合せて使用されてもよい。
【００５２】
本発明の化合物の望ましい用量は、被験体の状態及び体重、重症度、薬剤の形態、投与経路及び期間に応じて変化し、当業者により選択され得る。しかしながら、所望の効果を得るため、一般的には、１日当たり体重１ｋｇ当たり本発明の抽出物を０．０００１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは０．００１ｍｇ〜１００ｍｇの範囲の量で投与することが推奨される。上記用量は、１日１回投与されてもよく、１日に数回に分けて投与されてもよい。
【００５３】
本発明の医薬組成物を、様々な経路で哺乳動物（ラット、マウス、家畜又はヒト）等の被験動物に投与することができる。全ての投与様式を考慮する。例えば、投与は経口で、経直腸で、又は静脈内、筋肉内、皮下、皮内、髄腔内、硬膜外若しくは脳室内の注射により行うことができる。
【００５４】
本発明はまた、有効量のシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された新規の化合物（ＫＳ５３４）を有効成分として含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又はＣＯＰＤ疾患の治療及び予防用の医薬組成物及び健康食品を提供する。
【００５５】
本発明はまた、炎症性疾患、アレルギー性疾患、喘息又はＣＯＰＤを治療又は予防するために使用される医薬の製造のための、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離される新規の化合物（ＫＳ５３４）の使用を提供する。
【００５６】
本発明はまた、哺乳動物又はヒトにおける炎症性疾患、アレルギー性疾患、喘息又はＣＯＰＤを治療又は予防する方法であって、上記哺乳動物又はヒトにシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された、有効量の新規の化合物（ＫＳ５３４）をその薬学的に許容可能な担体とともに投与することを含む、方法を提供する。
【００５７】
本発明の抽出物はまた、種々の機能性健康食品及び健康管理食品の作製に主成分又は添加物及び補助剤として使用することができる。
【００５８】
それに応じて、本発明の他の目的は、有効成分として含有するシュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された、治療有効量の新規の化合物（ＫＳ５３４）を含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の予防又は軽減用の健康機能食品を提供することである。
【００５９】
「機能性健康食品」の用語は、本明細書では「ヒト又は哺乳動物において目的とする疾患を予防又は改善するため本発明の抽出物を従来の食品に添加することにより物理的機能性又は生理学的機能性等の増強された機能性を有する機能性食品」と定義される。
【００６０】
本発明の他の目的は、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された、治療有効量の新規の化合物（ＫＳ５３４）を食品学的に許容可能な添加物とともに含む、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の予防又は軽減用の健康管理食品を提供することである。
【００６１】
「健康管理食品」の用語は、本明細書では「添加物の形態として少量で、又は粉末、顆粒、カプセル剤、丸剤、錠剤等の形態として全量で、特定の意図した効果を示さないが、全体的な意図した効果を示す本発明の抽出物又は化合物（複数の場合もある）を含有する食品」と定義される。
【００６２】
本明細書で定義される「食品学的に許容可能な添加物」は、「直接又は間接に、任意の食品の成分となる、又はそうでなければ任意の食品の特徴に影響を及ぼす、又は合理的にそれが予想される用途の任意の物質」を含み、その起源に応じて３つの群、すなわち、（１）ケトン、グリシン、クエン酸カリウム、ニコチン酸等の化学合成添加物；（２）カキ色素、カンゾウ抽出物、結晶セルロース、グアーガム等の天然添加物；（３）Ｌ−グルタミン酸ナトリウム、防腐剤、タール色素等のそれらとの混合添加物等、又は当該技術分野若しくは以前の文献（GSFA Online：www.codexalimentarius.net/gsfaonline/index.htmlのホームページの"Codex General Standard for Food Additives"（GSFA, Codex STAN 192-1995）を参照されたい）でよく知られている、食品におけるその機能による様々なカテゴリー、例えば、増粘剤、熟成剤、漂白剤、捕捉剤、湿潤剤、固化防止剤、清澄剤、硬化剤、乳化剤、安定剤、増ちょう剤、塩基及び酸、気泡剤、栄養素、着色剤、香味剤、甘味料、保存剤、抗酸化剤等に分類され得る。
【００６３】
或る物質がその食品における特定の目的のために食品に添加される場合、それは直接添加物と呼ばれ、間接食品添加物は、その包装、保存又は他の取り扱いによって微量でその食品の一部となるものである。
【００６４】
本明細書に開示される「健康管理食品又は健康機能食品」の用語は、食品、健康飲料、栄養補助食品等に含めることができ、目的とする疾患を予防又は改善するために、粉末、顆粒、錠剤、懸濁液、エマルション、シロップ、チューイングタブレット、カプセル、飲料等の薬学的な投与形態；又は食品形態、例えばパン、餅、ドライフルーツ、キャンディー、チョコレート、チューイングガム、アイスクリーム、低脂肪乳等の牛乳、乳糖加水分解済みの牛乳、山羊乳、加工乳、発酵乳、バター、濃縮乳、ミルククリーム、バターオイル、ナチュラルチーズ、プロセスチーズ、粉ミルク、乳清等の乳製品、ハンバーグ、ハム、ソーセージ、ベーコン等の加工肉製品、加工卵製品、魚粕等の魚肉製品、即席麺、乾麺、生麺（wet noodles）、フライドヌードル、ノンフライ麺、ゼラチン化乾麺、加熱調理済み麺、凍結乾燥麺、パスタ等の麺製品、ティーバッグ、浸出茶等の茶製品、フルーツ飲料、野菜飲料、炭酸清涼飲料水、豆乳飲料、乳酸飲料配合飲料等の健康飲料、醤油、味噌、唐辛子ペースト、チュンジャン（カラメルで色付けした発酵大豆製品の一種）、チョングッチャン（バチルス・サブチリスによる自然発酵大豆）、混合ペースト、酢、ソース、ケチャップ、カレー粉、ドレッシング等の調味料、マーガリン、ショートニング、ピザ等へと配合することができるが、本明細書ではこれらに限定されることを意図するものではない。
【００６５】
また、上述の抽出物又は化合物を目的の障害を予防及び改善する食品又は飲料に添加することができる。機能性健康食品又は健康管理食品としての食品又は飲料における上述の抽出物又は化合物（複数の場合もある）の量は、一般的には、機能性健康食品組成物用の食品の総重量の約０．０１ｗ／ｗ％〜１００ｗ／ｗ％の範囲であってもよい。特に、機能性健康食品、健康管理食品又は特殊な栄養食品における本発明の抽出物の好ましい量は各食品の意図される目的に応じて変化し得るが、一般的に、上記食品組成物１００％に対して麺類等の食品において約０．０１％〜５％、健康管理食品において４０％〜１００％の範囲の割合の量で本発明の抽出物又は化合物（複数の場合もある）を添加物としての用途に使用することが好ましい。
【００６６】
本発明の健康飲料組成物が指定される割合で必須の成分として上記抽出物又は化合物（複数の場合もある）を含有する場合、他の液体成分については特に何ら制限もなく、他の成分は、従来の飲料等の様々な消臭剤（deodorant）又は天然の糖質であってもよい。上述の天然の糖質の例は、ブドウ糖、果糖等の単糖、マルトース、ショ糖等の二糖、デキストリン、シクロデキストリン等の従来の糖、並びにキシリトール及びエリスリトール等の糖アルコール等である。上述のもの以外の消臭剤として、有利には、タウマチン、レバウジオシドＡ、グリチルリチン等のステビア抽出物等の天然の消臭剤、及びサッカリン、アスパルテーム等の合成消臭剤等が有用な場合がある。上述の天然の糖質の量は、一般的には、本発明の飲料組成物１００ｍｌ当たり約１ｇ〜２０ｇ、好ましくは５ｇ〜１２ｇの範囲の割合である。
【００６７】
上述の組成以外の成分は、様々な栄養素、ビタミン、ミネラル、又は電解質、合成香味剤、着色剤、及びチーズ、チョコレート等の場合の品質改良剤、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護コロイド接着剤、ｐＨ調整剤、安定剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料等に使用される炭化剤である。上述のもの以外の成分は、天然果汁ジュース、果汁飲料、及び野菜飲料を調製するための果汁であってもよく、上記成分は独立して又は組合せて使用され得る。上記成分の比率はさほど重要ではないが、一般的には、本発明の組成物１００ｗ／ｗ％当たり約０ｗ／ｗ％〜２０ｗ／ｗ％の範囲である。上記抽出物又は化合物を含む追加可能な食品の例は、様々な食品、飲料、ガム、ビタミン複合体、健康増進食品等である。
【００６８】
本発明の抽出物又は化合物（複数の場合もある）は、毒性及びそれに対する有害作用がなく、安全に使用することができる。
【００６９】
本発明の組成物、使用及び調製物において、本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、様々な修飾及び変更を行うことができることが当業者に明らかであろう。
【００７０】
本発明は、以下の実施例によってより具体的に説明される。しかしながら、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではないことが理解されるべきである。
【発明の効果】
【００７１】
本発明に記載のように、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物から単離された本発明の新規の化合物（ＫＳ５３４）は、例えば（１）ＨＴ１０８０、Ｈ２９２及びＥＬ４の細胞株を用いた細胞毒性試験、（２）ＴＮＦ−αにより誘導されたＭＵＣ５ＡＣ（オリゴマー粘性物質／ゲル形成）の発現に対する阻害試験、（３）ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターアッセイ、（４）ＮＦ−κＢ転写因子の活性に対する阻害試験、（５）ＮＦ−κＢ活性の阻害によるＭＭＰ−９、ＭＵＣ５ＡＣ及びＩＬ−４等の標的遺伝子のｍＲＮＡ発現に対する阻害、（６）ＭＵＣ５ＡＣタンパク質再生アッセイによるＭＵＣ５ＡＣ再生に対する用量依存的阻害作用の種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験、並びに例えば（７）ＯＶＡ感作／抗原投与マウスモデルを用いた好酸球等の炎症性細胞数の減少作用、（８）ＢＡＬＦ液におけるＩｇＥ、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３等の放出及び炎症を起こした細胞の浸潤に対する阻害試験並びに気道過敏反応性及び杯細胞の過形成の抑制、（９）ＣＯＰＤ動物モデル（Ｃ５７Ｂ／６Ｎマウス）を用いたＢＡＬＦ液中の炎症性細胞の増殖に対する阻害試験、ＲＯＳ（活性酸素種）の再生及び好中球エラスターゼ活性に対する阻害、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α及び浸潤した炎症性細胞等のレベルに対する低下作用のｉｎ  ｖｉｖｏ試験から強力な抗炎症活性、抗アレルギー活性、抗喘息活性及び抗ＣＯＰＤ活性を示した。
【００７２】
最良の形態
本発明の上記及び他の目的、特徴及び他の利点は、添付の図面と併せて以下の詳細な説明によって更に明確に理解される。
【図面の簡単な説明】
【００７３】
【図１】ＫＳ５３４化合物の１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹとＨＭＢＣとの相関を示す図である。
【図２】ｑＲＴ−ＰＣＲを用いたＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡ発現に対する試験サンプルの作用を示すグラフである。
【図３】ルシフェラーゼレポーターアッセイを用いたＴＮＦ−α誘発性ＮＦ−κＢ活性に対する試験サンプルの阻害作用を示すグラフである（スチューデントのｔ検定によって統計分析を行い、Ｐ値（＊＊、＜０．０１）が統計的に有意であるとみなされた）。
【図４】改変ＥＬＩＳＡ法を用いたＭＵＣ５ＡＣタンパク質の発現レベルに対する試験サンプルの阻害作用を示すグラフである（スチューデントのｔ検定によって統計分析を行い、Ｐ値（＊＊、＜０．０１及び＊＊＊、＜０．００１）が統計的に有意であるとみなされた）。
【図５】ＢＡＬＦ中の炎症性細胞数に対する本発明の化合物の作用を示すグラフである。
【図６】ＢＡＬＦ中の炎症性サイトカイン数に対する本発明の化合物の作用を示すグラフである。
【図７】血清中の総ＩｇＥ数及びＯＶＡ特異的ＩｇＥのレベルに対する本発明の化合物の作用を示すグラフである。
【図８】組織学的検査を用いた肺組織細胞の炎症応答に対する本発明の化合物の作用を示す図である。
【図９】組織学的検査を用いた肺組織細胞の粘性物質分泌過多に対する本発明の化合物の作用を示す図である。
【図１０】ＢＡＬＦ中の炎症性細胞数に対する本発明の化合物の作用を示すグラフである。
【図１１】ＢＡＬＦ中のＲＯＳの再生に対する本発明の化合物の作用を示すグラフである。
【図１２】ＢＡＬＦ含量及びＢＡＬＦ中のエラスターゼ活性のレベルに対する本発明の化合物の作用を示すグラフである。
【図１３】ＢＡＬＦ中のＩＬ−６及びＴＮＦ−αのレベルに対する本発明の化合物の作用を示すグラフである。
【図１４】組織学的検査を用いた肺組織細胞の炎症応答に対する本発明の化合物の作用を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００７４】
本発明の組成物、使用及び調製物において、本発明の趣旨又は範囲から逸脱することなく、様々な修飾及び変更を行うことができることが当業者に明らかであろう。
【００７５】
本発明を、以下の実施例においてより具体的に説明する。しかしながら、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではないと理解されるべきである。
【実施例】
【００７６】
以下の参照例、実施例及び実験例は、その範囲を限定することなく本発明を更に説明することを意図するものである。
【００７７】
参照例１．分析装置
実験において、融点を融点測定装置（Ｋｏｆｌｅｒ  ｍｉｃｒｏｈｏｓｔａｇｅ）により求め、補正は行わず、旋光度をＪａｓｃｏ  Ｐ−１０２０旋光計により、ＵＶデータをＵＶ−ＶＩＳ  ２４５０分光計により、ＦＴ−ＩＲスペクトルをＪａｓｃｏ  ＦＴ／ＩＲ−４２００により、ＮＭＲスペクトルを内部標準としてＴＭＳを用いたＶａｒｉａｎ  ＵＮＩＴＹ  ４００ＭＨｚ  ＦＴ−ＮＭＲ分光計により、ＨＲＥＳＩＭＳをＷａｔｅｒｓ  Ｑ−ＴＯＦ  Ｐｒｅｍｉｅｒ分光計により、並びにＨＰＬＣ分析をＵＶ／ＶＩＳ−１５５検出器及びポンプ３０５を用いたＧｉｌｓｏｎ  ＨＰＬＣにより求めた。
【００７８】
実施例１．シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルム由来の新規の化合物（ＫＳ５３４）の調製
１−１．粗製抽出物の調製
２．０ｋｇの乾燥シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルム（韓国、大田、ＫＲＩＢＢの植物抽出物バンクのＧＡＰ、ＫＲＩＢＢ  ００２０６９７に従い、韓国、チュンチョンブクド、ウムソングン、ソイミョン２４４にて栽培）を小片に細分し、１０Ｌの４０％エタノールと混合した。混合物を２４時間、室温にて撹拌し、１２時間、７８℃にて還流抽出により抽出し、濾液を３度回収した。抽出物を濾紙により濾過し、残屑を除去した。回収した濾液を、ロータリーエバポレーター（ＥＹＥＬＡ、Ｎ−２１００、日本）により５５℃〜６５℃にて減圧下において濃縮し、凍結乾燥器を用いて乾燥させ、１９８．７ｇの粗製乾燥抽出物を得た。
【００７９】
１−２．精製抽出物の調製
２０ｇの粗製乾燥抽出物を混合溶媒（２５％ＭｅＯＨ水溶液）に溶解させ、分取逆相クロマトグラフィー（Ｚｅｏｐｒｅｐ  Ｃ１８、７５μｍ、２００×２５０ｍｍ、Zeochem、米国、ルイビル）を用いて更に精製した。溶出画分（ｆ１〜ｆ４）を回収し、真空において濃縮した。５．０ｇの画分ｆ２をカラム：ＲＰ  Ｃ−１８（Ｚｅｏｐｒｅｐ  Ｃ１８、２０×２５０ｍｍ、１０μｍ、Zeochem、米国、ルイビル）及び溶出溶媒（ＭｅＯＨ水溶液＝２：８、３：７、４：６、１０：０）を用いた中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）に充填し、５つの部分画分、すなわちｆ２ａ、ｆ２ｂ、ｆ２ｃ、ｆ２ｄ及びｆ２ｅを得た。
【００８０】
１−３．新規の化合物ＫＳ５３４の調製
０．８ｇの部分画分（ｆ２ｃ）に半分取ＨＰＬＣ（Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｐｏｌａｒ−ＲＰ  ４μｍ、２１．２×２５０ｍｍ、Phenomenex、米国、カリフォルニア州トーランス、Ｈ２Ｏ中２２％ＭｅＣＮ）を行い、物理化学特性を示す、明褐色粉末状の新規のイリドイド化合物（３Ｒ，５Ｓ，５ａＳ，６Ｒ，７Ｓ，８Ｒ，８ａＳ）−８−クロロ−８ａ−ヒドロキシ−５−（２−ヒドロキシアセトキシ）ヘキサヒドロ−１Ｈ−３，６−メタノシクロペンタ［ｅ］［１，３］ジオキセピン−７−イル  ３，４−ジヒドロキシベンゾエート（ＫＳ５３４；Ｃ２２Ｈ２６ＣｌＯ１３）を得た。
［α］２０Ｄ−３０．０°（ｃ  ０．２、ＭｅＯＨ）。
ＨＲＥＳＩＭＳ（ｍ／ｚ  ５３３．１０３５［Ｍ−Ｈ］−を観測）：準分子３：１イオンクラスタ
ＩＲスペクトル：３４１２ｃｍ−１（ヒドロキシル基）；１６９２ｃｍ−１。（不飽和エステルカルボニル）
１Ｈ及び１３Ｃ  ＮＭＲスペクトル：表１
１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル（図１）
ＮＯＥＳＹスペクトル（図１）
【００８１】
【表１】
2017523171.tif 000004
【００８２】
実験例１．細胞毒性の予備測定
本発明の化合物の細胞毒性を求めるため、以下の予備試験を文献（Shiyama et al., Talanta, 1997, 44, 1299-1305.、Tominaga et al., Anal. Commun., 1999, 36, 47-50）に開示の方法により行った。
【００８３】
１−１．細胞株及び細胞培養物の作製
ＨＴ１０８０（ＣＲＬ−１２０１２）、Ｈ２９２（ＣＲＬ−１８４８）及びマウスＥＬ４細胞（ＴＩＢ−３９）を業者（American Type Culture Collection）から購入した。
【００８４】
ＨＴ１０８０（ＣＲＬ−１２０１２）及びマウスＥＬ４細胞を、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清、Gibco）及び抗生物質（１００単位／ｍｌのペニシリン＋１００単位／ｍｌのストレプトマイシン）を補充したＤＭＥＭ培地（ＳＢ３０２４３．０１、ダルベッコ改変イーグル培地；ＤＭＥＭ、HyClone）において培養した。Ｈ２９２細胞を１０％ＦＢＳ及び抗生物質を補充したＲＰＭＩ培地（ＳＨ３００２７．０１、ＲＰＭＩ１６４０、Gibco）において培養した。細胞を３７℃にて加湿された５％ＣＯ２雰囲気の条件下において培養した。ＰＭＡ（Ｐ８１３９、ホルボール１２−ミリステート１３−アセテート）を業者（Sigma Chemical Co.、ミズーリ州セントルイス）から購入し、ＴＮＦ−αを業者（３００−０１Ａ、PeproTech, Inc.、米国、ニュージャージー州）から購入し、実験に使用した。
【００８５】
１−２．Ｈ２９２細胞の細胞毒性の評価
ヒト肺粘膜癌細胞株であるＨ２９２細胞株を、５×１０４細胞／ｍｌの濃度の１０％ＦＢＳ補充ＲＰＭＩ培地に懸濁させ、１００μＬの懸濁液を９６ウェルプレートに接種し、細胞をプレートに１２時間接着させた。上記細胞を種々の濃度の試験サンプル（ＫＳ５３４化合物）で処理し、２４時間培養した。１０μＬのＣＣＫ−８溶液を９０μＬの培地と混合し、１００μＬの溶液を各ウェルに添加した。３０分〜４時間反応させた後、溶液の吸光度を５７０ｎｍにて求めた。細胞生存率を０．２％  ＤＭＳＯで処理した陰性対照群に対する以下の数式１に従い算出し、結果を表２に示した。
［数式１］
細胞生存率（％）＝ＯＤ５７０ｎｍ（試験群）／ＯＤ５７０ｎｍ（陰性対照群）×１００
【００８６】
その結果、表２に示すように、ＫＳ５３４化合物は２０μＭ未満ではＨ２９２細胞において細胞毒性を示さないことを確認した。
【００８７】
【表２】
2017523171.tif 000005
【００８８】
実験例２．ＭＵＣ５ＡＣ発現の阻害
Ｈ２９２細胞株において、ＴＮＦ−αにより誘導されたＭＵＣ５ＡＣ発現に対する阻害作用を求めるため、以下の試験を行った。
【００８９】
２−１．ｍＲＮＡ発現のレベルの測定
総ＲＮＡの単離、ｃＤＮＡ合成及び定量的リアルタイムＰＣＲを文献（Kim et al., J. Cell. Biochem. 2008, 104, 1906-1917）に開示の方法により行った。
【００９０】
要約すると、総ＲＮＡをＴＲＩｚｏｌ試薬（１５５５９６−０２６、Life Technologies）を用いて単離し、酵素（Ｏｍｎｉｓｃｒｉｐｔ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ、２０５１１３、Qiagen、カリフォルニア州）を用いて一本鎖ｃＤＮＡを合成した。定量的リアルタイムＰＣＲ増幅を装置１（Ｓ１０００サーマルサイクラー、Bio-rad、米国）及び装置２（２×Ｇｒｅｅｎｓｔａｒマスターミックス、Bioneer、韓国）を用いて製造業者のマニュアルに従い行った。
【００９１】
２−２．ＭＵＣ５ＡＣ発現に対する作用
Ｈ２９２細胞株において、ＴＮＦ−αによって誘導されたＭＵＣ５ＡＣの発現に対する阻害作用を求めるため、以下の試験を行った。
【００９２】
ＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡ発現に対するＫＳ５３４化合物の阻害作用を求め、ＣＯＰＤ等の炎症性疾患の活動性の治療又は予防を実証した。
【００９３】
特に、ＴＮＦ−α誘導性ＭＵＣ５ＡＣの再生量を、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイムＰＣＲ）、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）及びＭＵＣ５ＡＣ免疫アッセイにより求めた。Ｈ２９２細胞を４８ウェルプレートに２×１０４細胞／ウェルの濃度にて接種し、２４時間接着させ、培養培地を新しい０．１％ＦＢＳ含有培地と交換し、２４時間培養した。上記細胞を１０μＭのＫＳ−５３４で２時間処理し、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αで処理し、１２時間培養した。
【００９４】
総ＲＮＡを抽出するため、ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ  Ｂ（Invitrogen）を用いて抽出し、定量後にＯｍｎｉｓｃｒｉｐｔ  ＲＴキット（Qiagen GmbH、ドイツ、ヒルデン）を用いてｃＤＮＡを合成した。合成したｃＤＮＡをそれぞれ鋳型、表３に示すＭＵＣ５ＡＣプライマー及びＧＡＰＤＨプライマーと混合し、ＰＣＲミックス（ＰＣＲマスターミックス、Bioneer、韓国）を用いたＰＣＲを以下のように行った：前変性処理１サイクル、９４℃、５分；変性３０サイクル、９５℃、３０秒、６０℃、４５秒及び７２℃、４５秒；最終伸長１サイクル、７２℃、１０分。
【００９５】
【表３】
2017523171.tif 000006
【００９６】
その結果、ＭＵＣ５ＡＣの量がＴＮＦ−αで処理した対照群において増加し、１０μＭで処理した試験群のＭＵＣ５ＡＣのｍＲＮＡの発現量は、表４及び図２に見られるように、５８．４７％（ＭＵＣ５ＡＣ発現に対するＫＳ−５３４の阻害比：４１．５２％）に低下したことを確認した。
【００９７】
それに応じて、ＫＳ−５３４化合物がＭＵＣ５ＡＣの遺伝子発現を阻害し、ＣＯＰＤの治療時に有用であることが実証された。
【００９８】
【表４】
2017523171.tif 000007
【００９９】
実験例３．ＮＦ−κＢ活性に対する阻害
ＮＦ−κＢの活性に対する阻害作用を求めるため、以下の試験を行った。
【０１００】
３−１．ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターアッセイ
ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターアッセイを、文献（Pulin Che et al., Assay Drug Dev. Technol., 2012, 10, 61-68）に開示の以下の手法により行った。
【０１０１】
ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターアッセイに対して安定した細胞を株化させるため、ＮＦ−κＢ応答要素を、製造業者のプロトコールに従いベクター（ｐＧＬ４．３２ベクター、Ｅ８４９Ａ、Promega）にクローニングし、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（１１６６８−０１９、Invitrogen）を用いて細胞（Ｈ２９２細胞、ＣＲＬ−１８４８、ＡＴＣＣ）に感染させた。感染させた細胞を、ハイグロマイシン（４００μｇ／ｍＬ）を２週間用いて選抜し、コロニーを個々にクローニングし、増殖させた。細胞を９６ウェルプレートに５×１０３細胞／ウェルの濃度にて播種し、２４時間静置した。試験サンプルを予め決定した濃度において前処理し、２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αで１２時間処理した。ルシフェラーゼ酵素の活性をＥ６１１０キット（ＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼアッセイキット、Promega）により求め、ＤＭＳＯをベヒクル対照として使用した。
【０１０２】
３−２．ＮＦ−κＢ転写因子の活性化に対する阻害作用
ＴＮＦ−αがＮＦ−κＢ転写因子を活性化させ、ＭＵＣ５ＡＣ発現を誘導させることが報告されている（Busse, P. J. et al., J. Allergy Clin. Immun., 2005, 116, 1256-1263.、Smirnova, M. G. et al., Cytokine. 2000, 12, 1732-1736）。
【０１０３】
ＭＵＣ５ＡＣ発現に対するＫＳ−５３４化合物の阻害作用に対して、本発明者らはＭＵＣ５ＡＣプロモータにて提示されたＮＦ−κＢ転写因子の活性がＫＳ−５３４化合物により阻害されるかについて確認するため試験した。
【０１０４】
正常なヒト気管支上皮細胞にルシフェラーゼレポーターベクターｐＧＬ４．３２（ｌｕｃ２Ｐ／ＮＦ−κＢ−ＲＥ／Ｈｙｇｒｏ、Promega Company）を用いて安定して発現させたＨ２９２細胞を以下の実験の前に株化した。細胞を１０％含有ＤＭＥＭ培地（Hyclone Company）に５×１０４細胞／ｍＬの濃度にて懸濁させ、各１００μＬの細胞を９６ウェルプレートに播種し、１２時間プレートに接着させた。培地を新しい０．１％ＦＢＳ含有培地と交換し、１２時間培養し、１０μＭのＫＳ−５３４で２時間処理した。２０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αで上記細胞を処理し、１２時間培養した。ルシフェラーゼの活性化度をＯｎｅ−ｇｌｏｗルシフェラーゼアッセイシステム（Promega Company）により求めた。ウェルプレート内の培養培地を全て取り除いた後、プレートをＰＢＳ溶液で２回洗浄し、６０μＬの受動的溶解緩衝液（ＰＬＢ）を各ウェルに添加し、細胞を３０分間溶解させた。５０μＬの溶解した細胞溶液を新しい９６ウェルプレートに移し、ホタルのルシフェラーゼ基質を含有する５０μＬのＬＡＲ  ＩＩ試薬を添加した。発光度をＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ  Ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ  ＬＢ  ９６Ｖ（EG&G Berthold company）により０．５秒間測定し、結果を表５及び図３に示した。
【０１０５】
【表５】
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【０１０６】
その結果、１０μＭのＫＳ−５３４で処理した試験群は、ＴＮＦ−αによって誘導されたＮＦ−κＢ活性（１００％）に対して６３．３５％の強力な阻害作用（ＫＳ−５３４の阻害比；３６．６５％）を示したことを確認した。
【０１０７】
それに応じて、ＫＳ−５３４化合物はＮＦ−κＢ転写因子の活性を著しく阻害したことを実証した。
【０１０８】
実験例４．ＭＵＣ５ＡＣタンパク質の再生に対する阻害
ＭＵＣ５ＡＣタンパク質の再生に対する阻害作用を求めるため、以下の試験を文献（Sikder, MA. et al., Phytother. Res., 2014, 28, 62-68）に開示の方法により行った。
【０１０９】
４−１．ＭＵＣ５ＡＣタンパク質の再生に対する阻害作用
ＣＯＰＤ等の炎症性疾患の治療作用を求めるため、ＭＵＣ５ＡＣの放出に対する阻害作用を以下のように求めた。
【０１１０】
再生されたＭＵＣ５ＡＣに対する免疫アッセイにおいて、実験例３において採取した５０μＬの上清を９６ウェルプレートに分配し、５０℃のサーモスタットにて乾燥させた。
【０１１１】
１％ＢＳＡを添加したＰＢＳ溶液で洗浄後、ＭＵＣ５ＡＣ抗体（ａｂ３６４９、abcam Co.）を添加し、室温にて１時間一緒に反応させた後、二次抗体を添加し、１時間一緒に反応させた。再び洗浄後、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンパーオキシド溶液（５４８２７−１７−７、Sigma-aldrich）を添加し、２０分間一緒に反応させた。硫酸溶液を添加することによって反応を停止させた後、吸光度をＶＥＲＳＡｍａｘマイクロプレートリーダー（ＳＭＰ５００−１４９１５、Molecular Devices、米国）により４５０ｎｍにて測定した（Sikder, M. A. et al., Phytother. Res., 2014, 28, 62-68、Takeyama, K. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1999, 96, 3081-3086）。結果を表６及び図４に示した。
【０１１２】
その結果、ＴＮＦ−αで処理した群のＭＵＣ５ＡＣの分泌量は著しく増加し、２．５μＭ、５μＭ及び１０μＭのＫＳ−５３４で処理した試験群は、ＴＮＦ−αで処理した群のＭＵＣ５ＡＣの分泌量（１００％）に対してＭＵＣ５ＡＣの再生において９３．３８％、７８．２７％及び６４．７７％（ＫＳ−５３４の阻害比；６．６２％、２１．７３％及び３５．２３％）の強力な阻害作用を示したことを確認した。
【０１１３】
【表６】
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【０１１４】
実験例５．喘息誘発性動物モデルにおける抗喘息作用
喘息誘発性動物モデルにおける試験サンプルの抗喘息作用を求めるため、以下の試験を文献（Shin, I. S. et al., Food Chem. Toxicol., 2013, 62, 506-513）に開示の方法により行った。
【０１１５】
５−１．動物感作及び気道抗原投与
定期的に、関連する呼吸器病原体を血清学的にスクリーニングした、特定病原体が除去された雌の６週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（約２０ｇ）を、Samtako Co.（韓国、ソウル）から購入し、温度２２±２℃及び相対湿度５５±１５℃、明サイクル／暗サイクルを制御した条件下の実験環境に実験の１週間前から馴化させた。
【０１１６】
すなわち、マウスに２０μｇのＯＶＡ（オボアルブミン；Ａ５５０３、Sigma、ミズーリ州セントルイス）を、２ｍｇの水酸化アルミニウム（Ａ８２２２、Sigma-Aldrich、米国、ミズーリ州）の２００μｌのＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）で乳化させたものを２週間毎に腹腔内注射により感作させた。最初の感作から２１日目〜２３日目に、マウスにＯＶＡ（ＰＢＳ中１％）を超音波ネブライザー（ＮＥ−Ｕ１２；Omron Corp.、日本、東京）を用いて３０分間気道を介して抗原投与した。抗原処理の２４時間後に、気道過敏反応性を求め、マウスを最後の抗原投与の４８時間後に屠殺した。最後の抗原投与の４８時間後に、マウスにペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ、Ｅｎｔｏｂａｌ（商標）、Hanil、韓国）を過量投与させることにより屠殺し、気管切開術を行った。１．４ｍｌの生理食塩溶液（ＰＢＳ）を肺に注入した後、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を、気管挿管を介して３回の吸引により得た。
【０１１７】
群をいくつかの群、すなわち（ａ）正常対照群（ＮＣ）：ＯＶＡを処置又は処置していない群；（ｂ）喘息誘発群（ＯＶＡ）：ＯＶＡを処置し、喘息を誘発させた群；及び（ｃ）比較群：陽性対照群として処置した群（Ｍ３０、モンテルカスト；３０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、Sigma-Aldrich Co. Ltd.、ＳＭＬ−０１０１＋ＯＶＡ）及び（ｄ）試験サンプル群：ＫＳ５３４化合物（３０ｍｇ／ｋｇ、ＰＯ、Sigma-Aldrich Co. Ltd.、ＳＭＬ−０１０１＋ＯＶＡ）を処置した群に分けた。
【０１１８】
試験群は各群７匹のマウスからなり、種々の濃度の試験サンプルを１回目のＯＶＡ処理から２１日目〜２３日目にマウスに経口投与した。
【０１１９】
種々の実験から得られた結果は全て平均値±ＳＤ（標準偏差）として記録され、各群間の比較は、ＳＰＳＳ１０．０プログラムを用いた一元配置ＡＮＯＶＡを用いて求められた。事後検定としてダネットの多重比較検定に従い各群間の統計的有意性を求めた。結果の統計的有意はＰ値：＜０．０５（＊）として表した。
【０１２０】
５−２．ＢＡＬＦの単離及び免疫細胞の測定
炎症性細胞のレベルを求めるため、各マウスから回収した気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）の上清を、遠心分離器を用いて単離し、冷凍室に保存した。
【０１２１】
ＢＡＬＦをスライドに載せ、遠心分離し、Ｃｅｌｌｓｐｉｎ装置（Ｃｙｔｏ１２．５＋ｃｌｉｐ５、Hanil Science Industrial、韓国）を用いてスライドに細胞を固定させた。細胞を製造業者の説明書に従い、Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ（商標）染色試薬（Sysmex、品番３８７２１、スイス）で染色し、各サンプルの炎症性細胞数を顕微鏡（×４００）により計数した。
【０１２２】
図５に示されるように、喘息誘発群（ＯＶＡ）としてＯＶＡを処置し、吸入させた対照群の好酸球及び炎症性細胞の総数は、正常対照群（ＮＣ）としてＯＶＡを処置していない群のものに比べ著しく増加した。
【０１２３】
種々の濃度の試験サンプルを経口投与した試験サンプル群の好酸球及び炎症性細胞の総数は著しく減少した。
【０１２４】
５−３．ＢＡＬＦ中のサイトカインレベルに対する分析
気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）中のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１３）のレベルに対する試験サンプルの阻害作用を確認するため、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１３）のレベルを製造業者のマニュアルに従い、ＥＬＩＳＡキット（ＶｅｒｓａＭａｘ、Molecular Devices、米国）を用い、各サイトカインと特異的に反応させて求めた。
【０１２５】
図６に示されるように、喘息誘発群（ＯＶＡ）としてＯＶＡを処置した対照群のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１３）のレベルは、正常な対照群（ＮＣ）としてＯＶＡを処置していない群のものと比べ著しく増加した。
【０１２６】
モンテルカスト（ＭＯ、３０ｍｇ／ｋｇ）を処置した陽性対照群及び種々の濃度の試験サンプル（ＫＳ５３４）を経口投与した試験サンプル群のＴｈ２サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１３）のレベルの上昇は著しく減少した。
【０１２７】
５−４．血清中のＩｇＥ及びＯＶＡ特異的ＩｇＥのレベルに対する作用
血清中のＩｇＥ及びＯＶＡ特異的ＩｇＥのレベルに対する、実施例で調製した試験サンプルの阻害作用を確認するため、以下のＥＬＩＳＡ試験を文献（Kay, A.B., N. Engl. J. Med., 2001, 344, 30-37）に開示の方法により行った。
【０１２８】
上記で作製した後大静脈から単離した血清を回収し、血清中のＩｇＥ及びＯＶＡ特異的ＩｇＥのレベルを求めた。
【０１２９】
血清を９６ウェルプレート（ＥＬＩＳＡプレート、２５９２、Costa、米国）に添加し、２０μｇ／ｍｌのＯＶＡ（Sigma、米国、ミズーリ州）を含有する０．１Ｍ  ＮａＨＣＯ３緩衝溶液（ｐＨ８．３）を用いて４にて１６時間コーティングした。１％ウシ血清アルブミン（Ｐ２００７、Biosesang、韓国）を含有するＰＢＳを用いて非特異的な反応を阻害した後、試験用の血清を１：４００に希釈し、室温にて２時間一緒に反応させた。０．０５％のｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳで洗浄した後、血清を、希釈した（×３００）抗マウスＩｇＥモノクローナル抗体（ＭＣＡ４１９、Serotec、英国、オックスフォード）と２時間反応させて、希釈した（×４０００）ＨＲＰ結合ヤギ抗ラットＩｇＧポリクローナルＡ（４３２４０２、Biolegend、米国）を用いて室温にて１時間反応させた。洗浄後、溶液を３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（４３２４０２、Biolegend Ins、米国）基質を用いて染色し、反応を２ＮのＨ２ＳＯ４により停止させ、分光法（Ｖｅｒｓａｍａｘ、Molecular Devices、米国）を用いて４５０ｎｍでの吸光度を求めた。
【０１３０】
図７に示されるように、喘息誘発群（ＯＶＡ）としてＯＶＡを処置した対照群の血清中のＩｇＥ及びＯＶＡ特異的ＩｇＥのレベルは著しく増加した一方、モンテルカスト（ＭＯ）を処置した陽性対照群及び種々の濃度の試験サンプル（ＫＳ−５３４）を経口投与した試験サンプル群のものは著しく減少した。
【０１３１】
５−５．肺組織学的検査
実施例において調製した試験サンプルの抗喘息作用を確認するため、気管支肺胞組織に対する以下の組織病理学的分析を文献（Kwak YG. et al., J. Clin. Invest., 2003, 111, 1083-1092）に開示の方法により行った。
【０１３２】
気管支肺胞洗浄を行っていなかったＢＡＬＢ／ｃマウスから摘出した肺組織を１０％中性緩衝ホルマリンで２４時間固定させた。エポキシで包埋後、４μｍの厚さの切片を作製し、肺組織の炎症を観察するため、その組織をＨ＆Ｅ溶液（ヘマトキシリン；Ｓｉｇｍａ  ＭＨＳ−１６及びエオジン、Ｓｉｇｍａ  ＨＴ１１０−Ｉ−３２）で染色し、また肺組織の粘性物質分泌を観察するため、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ、IMEB Inc.、米国）で染色した。肺組織の病理学的変化を光学顕微鏡検査により測定した。
【０１３３】
図８に示されるように、好酸球を含む多くの炎症性細胞が気管支周辺に認められ、上皮細胞の過形成及び気管の筋肉の肥大も喘息誘発群（ＯＶＡ）としてＯＶＡを処置した対照群において認められた一方、炎症を起こした細胞の浸潤は、モンテルカスト（ＭＯ、３０ｍｇ／ｋｇ）を処置した陽性対照群及び種々の濃度の試験サンプル（ＫＳ５３４）を経口投与した試験サンプル群において著しく減少した。
【０１３４】
図９に示されるように、肺組織内の気管支上皮細胞の杯細胞からの粘性物質分泌は、喘息誘発群（ＯＶＡ）としてＯＶＡを処置した対照群において急激に増加した一方、肺組織の気管支上皮細胞の杯細胞からの粘性物質分泌は、モンテルカスト（ＭＯ、３０ｍｇ／ｋｇ）を処置した陽性対照群及び種々の濃度の試験サンプル（ＫＳ５３４）を経口投与した試験サンプル群において著しく減少した。
【０１３５】
要約すると、本発明のＫＳ５３４化合物は、ＯＶＡにより生じた喘息等の種々の疾患を予防又は治療することができた。本発明のＫＳ５３４化合物は、効果的に、好酸球増多症を含む炎症細胞の浸潤、Ｔｈ２型ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３の再生を阻害し、またＩｇＥレベル及びＯＶＡ特異的ＩｇＥの再生を減少させた（これは気管支肺胞組織における組織病理学的分析により確認された）。
【０１３６】
結論として、本発明のＫＳ５３４化合物が効果的に、好酸球増多症、肺の炎症、粘性物質分泌過多等の喘息の主な症候群を軽減し、また免疫応答を阻害したことが確認され、それゆえ、従来の利用可能な化学薬剤であるモンテルカストと同様又は同等の有効性を有することから喘息の強力な天然の治療剤として有用であり得る。
【０１３７】
実験例６．動物モデル試験
ＣＯＰＤ動物モデルにおける、本発明の化合物の抗ＣＯＰＤ作用を求めるため、以下の試験を文献（Bhavsar, T. et al., J. Chronic Obstr. Pulm. Dis., 2008, 3, 477-481）に開示されたように、ＣＯＰＤ誘発型マウスを用いて行った。
【０１３８】
６−１．実験動物
定期的に、関連する呼吸器病原体を血清学的にスクリーングした、特定病原体が除去された雄の６週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス（約２２ｇ〜２４ｇ）を、Koatech Co.（www.koatech.co.kr、韓国、ソウル）から購入し、温度２２±２℃及び湿度５５±１５％、１２時間の明暗サイクルで制御された飼育室にて飼料（抗生物質非含有、Samyang Oil & Feed Corp.、韓国）及び水を自由摂取にて飼育し、１週間にわたって実験環境に馴化させた。
【０１３９】
６−２．薬物及び投与
（１）試験サンプル
２種類の試験サンプル、すなわちＫＳ５３４（１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇ）、Ｄａｘａｓ（主要成分：ロフルミラスト、１０ｍｇ／ｋｇ）を０．５％カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ｃ９４８１、Sigma-Aldrich、米国）に溶解させ、試験サンプルとして使用した。
【０１４０】
（２）投与
ＫＳ５３４及びロフルミラスト（ＲＯＦ  ＩＩ−４９２、HETERO、インド）を、気管内注入（ｉ．ｔ．）の１時間前にマウスに経口投与した。
【０１４１】
６−３．ＣＯＰＤマウスモデルの調製
（１）標準的なタバコ
３Ｒ４Ｆケンタッキー標準タバコ（カルフォルニア大学、米国）をタバコの煙を生成するための標準的なタバコとして使用した。１本当たりタール９．４ｍｇ、ＴＰＭ（総粒子状物質）１１ｍｇ及び１２ｍｇの一酸化炭素を含有するタバコを、温度２２±１℃及び湿度６０±２％、開封後４８時間〜７２時間で調整した後に使用した。
【０１４２】
（２）手順
タバコ煙への曝露はタバコ煙生成装置（DBL Co. Ltd.、www.dhbiolink.com、韓国）を用いて行われた。マウスを５つの群：正常（ＮＣ）、ＣＯＰＤ（タバコ煙及びＬＰＳの鼻腔内注入）、Ｒｏｆ（１０ｍｇ／ｋｇのロフルミラスト、ｐ．ｏ．＋タバコ煙及びＬＰＳの鼻腔内注入）及びＫＳ５３４−１５及び３０（それぞれ１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのＫＳ５３４、ｐ．ｏ．＋タバコ煙及びＬＰＳ注入）に分けた。タバコ煙の曝露（１回の吐出し／分、２秒間にわたる３５ｍＬの吐出し容量、６０秒毎、１日当たり８本のタバコ）はタバコ煙生成装置を用いて行われた。マウスに１時間のタバコ煙への曝露を曝露用チャンバー（５０ｃｍ×３０ｃｍ×３０ｃｍ）において３日間行った。ロフルミラスト及びピスクロシドＣをマウスに、３日間タバコ煙に曝露させる１時間前に強制経口投与した。ＬＰＳ（５０μＬの蒸留水に１０μｇを溶解）をタバコ煙の最後の曝露の１時間後に麻酔下において鼻腔内注入した。実験の終わりに、各ラットの血液、ＢＡＬＦ及び肺胞細胞を試験用に単離し、回収した。
【０１４３】
６−４．ＢＡＬＦの単離及び免疫細胞数の決定
実験を終了した後、ラットをＺｏｌｅｔｉｌ５０（３ＶＸ９、Virbac、フランス、ｐ．ｏ）で麻酔し、尾静脈より採血した。肺からＢＡＬＦを単離するため、右肺の気管支を縫合糸で結紮した後、気管切開を行った。静脈用カテーテル（１６ＧＡ、３Ｓ−Ｃａｔｈ、Dukwoo、韓国）を気管支に入れ、気管支とカテーテル（１６ＧＡ、３Ｓ−Ｃａｔｈ、Dukwoo、韓国）との両方を縫合糸で固定した。ＤＰＢＳ  ０．７（ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水、Invitrogen、米国）を１ｍＬ含有する注射器をカテーテルにつなげ、ＤＰＢＳを強制的に３回循環させ、ＢＡＬＦを単離した。縫合糸で結紮した右肺を単離し、１０％中性ホルマリン溶液で固定し、残りの肺組織を−７０℃で冷凍庫に保存した。単離したＢＡＬＦを１５００ｒｐｍにて１５分間遠心分離し、細胞ペレットを調製し、上清をサイトカイン分析用に−７０℃で冷凍庫に保存した。細胞ペレットをＤＰＢＳに懸濁させ、細胞をサイトスピン遠心分離器（ＣＳ０３２７００４７、Hanil、韓国）を用いてスライドガラスに付着させた。ディフクイック染色（ＺＳ１００３、Sysmex、日本）を行い、細胞を光学顕微鏡検査（ＤＭ１０００、Leica、ドイツ）で観察し、各試験サンプルの免疫細胞数を計数した。
【０１４４】
図１０に示されるように、ＢＡＬＦ中の好中球のレベルの特徴的な増加がＣＯＰＤ誘発群において観察された。ロフルミラストを処置した薬物対照群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べて好中球のレベルが約２１．１％減少したことを示した。一方で、１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのＫＳ５３４を処置した群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べて、好中球のレベルがそれぞれ２６．３％及び２５．７％と顕著な減少を示した。
【０１４５】
６−５．ＢＡＬＦ中のＲＯＳ及び好中球のエラスターゼ活性に対する作用
マウスから単離されたＢＡＬＦ中のＲＯＳレベルをＤＣＦ−ＤＡ（ジヒドロクロロフルオレセインジアセテート、３５８５４、Sigma-Aldrich、米国）により求め、ＤＣＦ−ＤＡの最終濃度を２００μＬ中２０μＭに調整し、３０分間インキュベーションした。蛍光性を装置（Ｆｌｅｘｓｔａｔｉｏｎ３、Molecular Device、米国）により求めた。ＢＡＬＦ中の好中球のエラスターゼ活性は、Ｎ−スクシニル−（Ａｌａ）３−ｐ−ニトロアニリド（Ｓ４７６０、Sigma-Aldrich）を基質として用い、９０分間インキュベーションすることによって求められた。得られた吸光度は４０５ｎｍにて求められた。
【０１４６】
図１１に示されるように、ＢＡＬＦ中のＲＯＳ（活性酸素種）の再生は、ＣＯＰＤ誘発群において急激に増加した。しかし、ロフルミラストを処置した薬物対照群は、ＣＯＰＤ誘発群と比べ、ＲＯＳのレベルが約２２．２％の減少を示し、１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのＫＳ５３４を処置した群では、ＣＯＰＤ誘発群に比べ、ＲＯＳのレベルが１９．５％及び２７．５％と顕著な減少を示した。
【０１４７】
図１２に示されるように、ＣＯＰＤ誘発群において、タンパク質のレベルは、ＢＡＬＦにおいて急激に増加した。ロフルミラストを処置した薬物対照群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べ、タンパク質のレベルの著しい減少を示した。１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのＫＳ５３４を処置した群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べ、タンパク質のレベルが２０．８％及び２８．５％と顕著な減少を示した。
【０１４８】
図１２に示されるように、ＣＯＰＤ誘発群において、好中球のエラスターゼ酵素の活性は、ＢＡＬＦにおいて急激に増加した。ロフルミラストを処置した薬物対照群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べ、好中球のエラスターゼ酵素の活性の著しい減少を示した。１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのＫＳ５３４を処置した群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べて、好中球のエラスターゼ酵素の活性の顕著な減少を示した。
【０１４９】
６−６．ＢＡＬＦ中のサイトカイン分析
マウスから単離されたＢＡＬＦ中のＩＬ−６（ＳＭ６０００Ｂ、R&D System、米国）及びＴＮＦ−α（５５５２６８、BD Bioscience、米国））のレベルを、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）により求めた。各サイトカインの分析を製造業者のマニュアルに従って行い、吸光度をＥＬＩＳＡリーダー（ＶｅｒｓａＭａｘ、Molecular Devices、米国）により４５０ｎｍにて求めた。
【０１５０】
図１３に示されるように、ＣＯＰＤ誘発群において、ＩＬ−６のレベルはＢＡＬＦにおいて急激に増加した。ロフルミラストを処置した薬物対照群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べ、ＩＬ−６のレベルの著しい減少を示し、１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのＫＳ５３４を処置した群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べ、ＩＬ−６のレベルが３５．８％及び５０．６％の減少を示した。ＢＡＬＦ中のＴＮＦ−αのレベルはＣＯＰＤ誘発群において急激に増加した。ロフルミラストを処置した薬物対照群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べてＴＮＦ−αのレベルの著しい減少を示し、１５ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇのＫＳ５３４を処置した群では、ＣＯＰＤ誘発群と比べ、ＴＮＦ−αのレベルが１８．３％及び２７．６％の減少を示した。
【０１５１】
図１４に示されるように、炎症を起こした細胞の浸潤が気管支周辺に著しく増大し、上皮細胞の過形成及び気管の筋肥大もＣＯＰＤ誘発群において認められたが、炎症を起こした細胞の浸潤は、ロフルミラストを処置した陽性対照群及び種々の濃度の試験サンプル（ＫＳ５３４）を経口投与した試験サンプル群（３０ｍｇ／ｋｇ、ＫＳ５３４）において著しく減少した。
【０１５２】
要約すると、ＢＡＬＦ中のＩＬ−６及びＴＮＦ−αのレベル並びに炎症性細胞の数は、ＣＯＰＤ誘発群において顕著に増加し、ＲＯＳの再生及びエラスターゼ活性はＣＯＰＤ誘発群において急激に増加した。一方、本発明のＫＳ５３４化合物は、好中球等の炎症性メディエーター及びＩＬ−６及びＴＮＦ−α等の炎症性サイトカインの数を効果的に減少させた（これは気管支肺胞組織における組織病理学的分析によって確認された）。
【０１５３】
結論として、エラスターゼ活性において著しい減少を示さず、陽性対照群として使用した従来の利用可能な薬物（ロフルミラスト）と比べて、本発明のＫＳ５３４化合物はＣＯＰＤの病理学的症候群のほとんどを効果的に阻害したことが確認された。それに応じて、本発明のＫＳ５３４化合物は、ＣＯＰＤの強力な天然の治療剤として有用であり得る。
【０１５４】
６−７．統計
種々の実験から得られた結果は全て、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を用いて求められ、各群間の統計的有意性は事後比較結果としてダネットの多重比較検定に従い実証された。
【０１５５】
実験例７．ラットにおける経口投与による急性毒性試験
６週齢のＳＰＦ  Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに本発明の化合物を投与することにより、急性毒性試験を行った。
【０１５６】
２５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、５０００ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物を、２匹のラットからなる各群に経口投与し、ラットの症状を１４日間にわたり観察した。抽出物又は化合物の投与の後、全ての臨床上の変化、すなわち、死亡率、臨床兆候、体重の変化を観察し、血液学検査及び血液生化学検査等の血液検査を行った。検視により腹部臓器及び胸部臓器の異常な変化を観察した。
【０１５７】
いずれの群又はいずれの性別においても、死亡率の変化、臨床兆候、体重変化及び重大な知見を全く示さなかった。さらに、５０００ｍｇ／ｋｇの本発明の抽出物又は化合物で処理した試験群において何らの毒性も示さなかった。
【０１５８】
したがって、本発明で調製した本発明の化合物が経口投与においてＬＤ５０（５０００ｍｇ／ｋｇ超）を示す強力で安全な物質であったことが確認された。
【０１５９】
発明の形態
以下に製剤化方法及び賦形剤の種類を記載するが、本発明はそれらに限定されない。代表的な調製例を以下に記載する。
【０１６０】
注射用調製物
ＫＳ５３４−−−−−１００ｍｇ
メタ重亜硫酸ナトリウム−−−−−３．０ｍｇ
メチルパラベン−−−−−０．８ｍｇ
プロピルパラベン−−−−−０．１ｍｇ
注射用蒸留水−−−−−適量
【０１６１】
有効成分を溶解し、ｐＨを約７．５に制御し、その後、全ての成分を２ｍＬアンプルに充填して、従来の注射用調製物の方法により滅菌することにより注射用調製物を調製した。
【０１６２】
粉末調製物
ＫＳ５３４−−−−−５００ｍｇ
コーンスターチ−−−−−１００ｍｇ
乳糖−−−−−１００ｍｇ
タルク−−−−−１０ｍｇ
【０１６３】
上記成分を混合し、密封パッケージに充填することにより粉末調製物を調製した。
【０１６４】
錠剤調製物
ＫＳ５３４−−−−−２００ｍｇ
コーンスターチ−−−−−１００ｍｇ
乳糖−−−−−１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム−−−−−適量
【０１６５】
上記成分を混合し、打錠することにより錠剤調製物を調製した。
【０１６６】
カプセル調製物
ＫＳ５３４−−−−−１００ｍｇ
乳糖−−−−−５０ｍｇ
コーンスターチ−−−−−５０ｍｇ
タルク−−−−−２ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム−−−−−適量
【０１６７】
上記成分を混合し、従来のゼラチン調製物の方法によりゼラチンカプセルに充填することにより錠剤調製物を調製した。
【０１６８】
液体調製物
ＫＳ５３４−−−−−１０００ｍｇ
糖−−−−−２０ｇ
多糖類−−−−−２０ｇ
レモンフレバー−−−−−２０ｇ
【０１６９】
有効成分を溶解した後、全ての成分を１０００ｍＬのアンプルに充填し、従来の液体調製物の方法により滅菌することによって液体調製物を調製した。
【０１７０】
健康食品調製物
ＫＳ５３４−−−−−１０００ｍｇ
混合ビタミン−−−−−適量
ビタミンＡアセテート−−−−−７０ｇ
ビタミンＥ−−−−−１．０ｍｇ
ビタミンＢ１０−−−−−１３ｍｇ
ビタミンＢ２−−−−−０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６−−−−−０．５ｍｇ
ビタミンＢ１−−−−−２０．２ｇ
ビタミンＣ−−−−−１０ｍｇ
ビオチン−−−−−１０ｇ
ニコチン酸アミド−−−−−１．７ｍｇ
葉酸−−−−−５０ｇ
パントテン酸カルシウム−−−−−０．５ｍｇ
混合ミネラル−−−−−適量
硫酸第一鉄−−−−−１．７５ｍｇ
酸化亜鉛−−−−−０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム−−−−−２５．３ｍｇ
リン酸一カリウム−−−−−１５ｍｇ
リン酸二カルシウム−−−−−５５ｍｇ
クエン酸カリウム−−−−−９０ｍｇ
炭酸カルシウム−−−−−１００ｍｇ
塩化マグネシウム−−−−−２４．８ｍｇ
【０１７１】
上述のビタミン及びミネラルの混合物は、様々に変化し得る。かかる変化は、本発明の趣旨及び範囲から逸脱するものではないものとする。
【０１７２】
健康飲料調製物
ＫＳ５３４−−−−−１０００ｍｇ
クエン酸−−−−−１０００ｍｇ
オリゴ糖−−−−−１００ｇ
濃縮アンズ−−−−−２ｇ
タウリン−−−−−１ｇ
蒸留水−−−−−９００ｍＬ
【０１７３】
有効成分を溶解し、混合し、８５℃で１時間撹拌し、濾過した後、全ての成分を１０００ｍＬのアンプルに充填し、従来の健康飲料調製物の方法により滅菌することによって健康飲料調製物を調製した。
【０１７４】
上述の本発明について、該発明が様々に変化し得ることが明らかであろう。かかる変化は本発明の趣旨及び範囲から逸脱するものとされず、当業者に自明であろう全てのかかる修飾が添付の特許請求の範囲内に包含されることが意図される。
【産業上の利用可能性】
【０１７５】
本発明に記載のように、シュードリシマキオン・ロツンダム変種スブインテグルムの抽出物由来の本発明のＫＳ５３４化合物は、例えば（１）ＨＴ１０８０、Ｈ２９２及びＥＬ４の細胞株を用いた細胞毒性試験、（２）ＴＮＦ−αにより誘導されたＭＵＣ５ＡＣ（オリゴマー粘性物質／ゲル形成）の発現に対する阻害試験、（３）ＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーターアッセイ、（４）ＮＦ−κＢ転写因子の活性に対する阻害試験、（５）ＮＦ−κＢ活性の阻害によるＭＭＰ−９、ＭＵＣ５ＡＣ及びＩＬ−４等の標的遺伝子のｍＲＮＡ発現に対する阻害、（６）ＭＵＣ５ＡＣタンパク質再生アッセイによるＭＵＣ５ＡＣ再生に対する用量依存的阻害作用の種々のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験、並びに例えば（７）ＯＶＡ感作／抗原投与マウスモデルを用いた好酸球等の炎症性細胞数の減少作用、（８）ＢＡＬＦ液におけるＩｇＥ、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３等の放出及び炎症を起こした細胞の浸潤に対する阻害試験並びに気道過敏反応性及び杯細胞の過形成の抑制、（９）ＣＯＰＤ動物モデル（Ｃ５７Ｂ／６Ｎマウス）を用いたＢＡＬＦ液中の炎症性細胞の増殖に対する阻害試験、ＲＯＳ（活性酸素種）の再生及び好中球エラスターゼ活性に対する阻害、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α及び浸潤した炎症性細胞等のレベルに対する低下作用のｉｎ  ｖｉｖｏ試験から確認された強力な抗炎症活性、抗アレルギー活性、抗喘息活性及び抗ＣＯＰＤ活性を示した。それゆえ、本発明のＫＳ５３４化合物は、アレルギー性疾患、炎症性疾患、喘息又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の治療及び予防用治療剤又は機能性健康食品として使用することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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