(57)【要約】【解決手段】本発明は、消化管の放射線誘発性疾患の治療で使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
消化管の放射線誘発性疾患の治療に使用するための配列番号１の核酸配列を含むオリゴヌクレオチドを含むことを特徴とする組成物。
【請求項２】
直腸投与用に処方されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
経口、非経口または局所投与用に処方されることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
粘膜およびまたは出血の治療に使用されることを特徴とする請求項１乃至請求項３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記消化管の放射線誘発性疾患は、放射線誘発性大腸炎、または骨盤内腫瘍、前立腺癌、卵巣癌、皮膚癌、大腸癌ならびに膀胱、骨盤、頚部、結腸直腸、精巣および頭頸部の癌に対する放射線治療後の消化管の他の任意の放射線誘発性疾患であり、
前記癌は原発性およびまたは転移性であることを特徴とする請求項１乃至請求項４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含むことを特徴とする請求項１乃至請求項５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
経口、非経口または局所投薬と組み合わせられることを特徴とする請求項１乃至請求項６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物の投与は、放射線療法の前およびまたはその間およびまたはその後に行われることを特徴とする請求項１乃至請求項７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
配列番号１の核酸配列を含むオリゴヌクレオチドを含む組成物を被験体に投与するステップを含むことを特徴とする、被験体における消化管の放射線誘発疾患の治療方法。
【請求項１０】
前記消化管の放射線誘発性疾患は、放射線誘発性大腸炎、または骨盤内腫瘍、前立腺癌、卵巣癌、皮膚癌、大腸癌ならびに膀胱、骨盤、頚部、結腸直腸、精巣および頭頸部の癌に対する放射線治療後の消化管の他の任意の放射線誘発性疾患であり、
前記癌は原発性およびまたは転移性であることを特徴とする請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物は直腸投与用に処方されることを特徴とする請求項９または請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物は、経口、非経口または局所投与用に処方されることを特徴とする請求項９または請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物は、粘膜およびまたは出血の治療に使用されることを特徴とする請求項９乃至請求項１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含むことを特徴とする請求項９乃至請求項１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物は、経口、非経口または局所投薬と組み合わせて投与されることを特徴とする請求項９乃至請求項１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記組成物は、放射線療法の前およびまたはその間およびまたはその後に投与されることを特徴とする請求項９乃至請求項１５のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、消化管の放射線誘発性疾患の治療で使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
放射線療法は、骨盤腫瘍などの骨盤領域の癌の治療において非常に有効であり得る。現在、骨盤内放射線治療を受けている患者は、英国だけで年間約１７，０００人である。骨盤領域を標的とする放射線療法を受けた人々に対する副作用は、承認された治療法および主要な満たされていない医療ニーズがない放射線誘発性直腸炎である。
【０００３】
放射線誘発性直腸炎は、直腸分泌および下痢を伴う持続性およびまたは重度の出血と、手術を必要としすべて生活の質に影響を与える長期間の線維症および狭窄関連の合併症と、を引き起こすことがある。温熱療法は、出血および炎症を止めるために使用され得る。温熱療法は、熱プローブ、電流、またはレーザーを用い、直腸内膜を標的とする。多くの場合、いくつかの治療が必要である。こうした療法は侵襲的であり、一般に、患者のコンプライアンスに関する懸念を伴って、患者にとって不快であると考えられている。スクラルファート（ｓｕｃｒａｌｆａｔｅ）、５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）あるいはコルチコステロイド浣腸は、疼痛を緩和し、放射線の直腸炎による炎症を軽減するためにも使用できるが、その有効性は限られている。
【発明の概要】
【０００４】
配列番号１の核酸配列を含むＩＣＡＭ−１アンチセンスオリゴヌクレオチドは、自己免疫疾患である潰瘍性大腸炎（ＵＣ）および回腸嚢炎の治療に以前から使用されている。放射線誘発性直腸炎は自己免疫疾患ではない。
【０００５】
免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーであるＩＣＡＭ−１は、血管内皮細胞および白血球のサブセット上に低レベルで構成的に発現される誘導性膜貫通糖タンパク質である（Ｄｕｓｔｉｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３７：２４５−５４（１９８６）；Ｒｏｔｈｌｅｉｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３７：１２７０−４（１９８６）；Ｓｉｍｍｏｎｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３３１：６２４−７（１９８８））。配列番号１は、ヒトＩＣＡＭ−１  ｍＲＮＡの３’非翻訳領域の配列に特異的にハイブリダイズするように設計された２０塩基ホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドである。
【０００６】
配列番号１を含む配列を有するオリゴヌクレオチドを含む組成物は、放射線誘発性直腸炎の治療に非常に有効であるとされてきた。放射線誘発性直腸炎の治療には、直腸出血、血便の排便、直腸の充満感およびまたは直腸痛、痙攣性腹痛、粘液または膿の直腸分泌、およびまたは下痢あるいはゆるいまたは液体の便の頻繁な通過を含む放射線誘発性直腸炎の任意の症状の遅延、軽減およびまたは改善が含まれる。
【０００７】
本発明の第１の態様によれば、消化管の放射線誘発性疾患に使用される配列番号１の核酸配列を含むオリゴヌクレオチドを含む組成物が提供される。
【０００８】
配列番号１は次の通りである：５’ｇｃｃｃａａｇｃｔｇ  ｇｃａｔｃｃｇｔｃａ３’。
【０００９】
一実施形態では、組成物は、配列番号１の核酸配列から構成されるオリゴヌクレオチドを含む。
【００１０】
本発明によるオリゴヌクレオチドは、好適には約２０〜約８０個の核酸塩基単位を含む。このようなオリゴヌクレオチドは、約２０〜５０個の核酸塩基単位、さらにより好ましくは約２０〜３０個の核酸塩基単位、最も好ましくは約２０〜２２個の核酸塩基単位を有することがより好ましい。理解されるように、核酸塩基単位は、ホスホジエステルまたは他の結合を介して隣接する核酸塩基単位に適切に結合した塩基−糖の組み合わせである。当業者であれば、約２０〜約８０個の核酸塩基単位には、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９あるいは８０個の核酸塩基単位が含まれることは理解するであろう。
【００１１】
さらなる実施形態では、組成物は、配列番号１のフラグメントを含み、そのフラグメントは、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８または１９ヌクレオチド長である。フラグメントは、ヒトＩＣＡＭ−１  ｍＲＮＡの３’非翻訳領域の配列にハイブリダイズできる。フラグメントは、中程度またはストリンジェントな条件下で、ヌクレオチド「ｃｃｔｇａｃｇ  ｇａｔｇｃｃａｇｃｔ  ｔｇｇ」（配列番号２）とハイブリダイズできる。フラグメントは、「ｃｃｃａａｇｃｔｇ  ｇｃａｔｃｃｇｔｃａ」（配列番号３）、「ｇｃｃｃａａｇｃｔｇ  ｇｃａｔｃｃｇｔｃ」（配列番号４）および「ｇｃｃｃａａｇｃｔｇ  ｇｃａ」（配列番号５）を含む。
【００１２】
ハイブリッド形成反応の「ストリンジェンシー」は、当業者によって容易に決定可能であり、一般に、プローブの長さ、洗浄温度および塩濃度に依存する経験的な計算値である。一般に、プローブが長くなるほど、適切なアニーリングには高い温度が必要であり、プローブが短くなるほど、低い温度が必要である。ハイブリッド形成は、一般に、相補鎖がそれらの融点未満の環境に存在する場合は変性ＤＮＡのリアニール能力に依存する。プローブとハイブリッド可能な配列間の所望の相同性の程度が高いほど、使用可能な相対温度は高くなる。その結果、相対温度が高くなるほど反応条件はよりストリンジェントになり、相対温度が低くなるほどストリンジェントではなくなる傾向があることになる。ハイブリッド形成反応のストリンジェンシーに関するさらなる詳細と説明については、ＡｕｓｕｂｅｌらのＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９５））を参照のこと。
【００１３】
本明細書では、「ストリンジェントな条件」あるいは「高度にストリンジェントな条件」は、以下のように識別できる：（１）洗浄条件として、例えば、５０℃にて０．０１５Ｍ塩化ナトリウム／０．００１５Ｍクエン酸ナトリウム／０．１％ドデシル硫酸ナトリウムなどの、低イオン強度および高温条件を採用する；（２）ハイブリッド形成中に、ホルムアミドなどの変性剤、例えば、４２℃にて０．１％ウシ血清アルブミン／０．１％フィコール／０．１％ポリビニルピロリドン／５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ６．５）と、塩化ナトリウム７５０ｍＭと、クエン酸ナトリウム７５ｍＭと、を含む５０％（ｖ／ｖ）ホルムアミドを使用する；あるいは、（３）０．２×ＳＳＣ（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム）中４２℃で、および５５℃の５０％ホルムアミド中で洗浄した、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（０．７５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０７５Ｍクエン酸ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、０．１％ピロリン酸ナトリウム、５×デンハルト溶液、超音波処理したサケ精子ＤＮＡ（５０［ｍｕ］ｇ／ｍｌ）、０．１％ＳＤＳおよび１０％硫酸デキストランを使用し、その後、５５℃で、ＥＤＴＡを含む０．１×ＳＳＣからなる高ストリンジェンシー洗浄する。
【００１４】
「中程度にストリンジェントな条件」は、ＳａｍｂｒｏｏｋらのＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９））に記載されているように識別でき、上記よりもよりストリンジェントでない洗浄液とハイブリッド形成条件（例えば、温度、イオン強度および％ＳＤＳ）の使用が含まれる。中程度にストリンジェントな条件の例としては、２０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫酸デキストランおよび２０ｍｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡを含む液中、３７℃で一晩インキュベーション後、約３７〜５０℃の１×ＳＳＣ中でフィルターを洗浄する条件が挙げられる。当業者であれば、プローブ長さなどの因子を適応させるために必要となる温度、イオン強度などを調節する方法はわかるであろう。
【００１５】
本明細書での中程度または高ストリンジェンシーの条件は、例えばＤＮＡの長さに基づき当業者によって容易に決定され得る。基本的な条件は、ＳａｍｂｒｏｏｋらのＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版、第１巻ページ１および１０１〜１０４、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９））に記載されている。
【００１６】
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含むように修飾できる。オリゴヌクレオチドのホスホロチオエート修飾は、各ホスホジエステル結合における非架橋酸素分子を硫黄分子で置換することにより、未修飾のＤＮＡと比較してエキソヌクレアーゼ耐性を有意に増大させ、薬物の半減期を延長する（Ｇｅａｒｙら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、１２：３８３−９４（１９９７））。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、抗原性が低く、非細胞毒性であり、耐容性が良好であり、その薬物動態学的および薬力学的特性が十分に特徴付けられている（例えば、Ｂｕｔｌｅｒら、Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ、７７：３７９−８８（１９９７）；Ｍｉｒａｂｅｌｌｉら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．、６：６４７−６１（１９９１）参照）。
【００１７】
ホスホロチオエート骨格修飾に加えて、多くの他の可能な骨格および糖などの修飾は当業者に周知である。
【００１８】
この組成物は、放射線誘発性大腸炎および消化管の他の放射線誘発性疾患をもたらし得る任意の放射線療法に付随して使用されるものである。消化管の放射線誘発性疾患には、放射線誘発性大腸炎、または骨盤内腫瘍、前立腺癌、卵巣癌、皮膚癌、大腸癌ならびに膀胱、骨盤、頚部、結腸直腸、精巣および頭頸部の癌に対する放射線治療後の消化管の他の任意の放射線誘発性疾患が含まれ、ここで癌は原発性およびまたは転移性である。
【００１９】
本発明の組成物の使用とは、具体的には、放射線療法によって引き起こされる直腸炎の副作用に対処することである。
【００２０】
本組成物は、放射線療法に付随していつ使用してもよい。本組成物は、例えば、放射線療法の前およびまたはその間およびまたはその後に投与してもよい。
【００２１】
本組成物は、直腸投与、経口投与および非経口投与用に処方できる。直腸投与用の組成物には、浣腸剤や坐薬などの溶液、およびエマルジョンまたは泡が含まれる。吸収促進アジュバントを組成物に含めることができる。経口投与用の組成物には、錠剤、全ての液体、ゲル、シロップ、腸溶性カプセルおよび結腸腸溶性カプセルが含まれる。
【００２２】
医薬組成物の直腸送達のための処方は当業者に周知である。特定の処方は、当業者に周知の考察に基づいて選択される。詳細な処方は、参照により本明細書に援用される米国特許第６，０９６，７２２号および同第６，７４７，０１４号に提示されている。
【００２３】
配列番号１の核酸配列を含むオリゴヌクレオチドを含む組成物は、単独で投与できるが、別の医薬品と組み合わせることもできる。
【００２４】
本発明の組成物は、好適には、ＩＳＩＳ２３０２、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルパラベンナトリウム、プロピルパラベンナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム一水和物およびまたは水を含む。
【００２５】
本発明の組成物は、好適には、ＩＳＩＳ２３０２、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、水酸化ナトリウム、塩酸およびまたは水を含む。
【００２６】
好適な実施形態では、被験体はヒトである。
【００２７】
オリゴヌクレオチドの正確な用量は、炎症の重症度、疼痛およびまたは分泌を含む多くの因子に依存する。本組成物は、好ましくは、個体に恩恵をもたらすに十分な「治療有効量」で個体に投与される。
【００２８】
投与される実際の量、および投与の線量率および時間経過は、治療される対象の性質および重症度に依存する。治療の処方、例えば、投薬量の決定などは、最終的に一般開業医および他の医師の責任および裁量の範囲内であり、典型的には、治療される障害、個々の患者の状態、送達部位、投与方法および開業者に既知の他の要因が考慮される。
【００２９】
例えば、一実施形態では、適切な用量は、１回の投与量当たり、例えば浣腸当たり、６０ｍｌ／２４０ｍｇ、７０ｍｌ／２４０ｍｇ、８０ｍｌ／２４０ｍｇ、９０ｍｌ／２４０ｍｇ、１００ｍｌ／２４０ｍｇ、３０ｍｌ／１２０ｍｇ、６０ｍｌ／１２０ｍｇ、７０ｍｌ／１２０ｍｇ、８０ｍｌ／１２０ｍｇ、９０ｍｌ／１２０ｍｇ、１００ｍｌ／１２０ｍｇであってもよい。
【００３０】
本組成物は、１日１回、２回、３回または４回または定期的に投与されてもよい。
【００３１】
組成物は、３、４、５、６、７、８週間またはそれ以上投与できる。治療開始後８、９、１０、１１、１２週またはそれ以上でピーク応答が達成される。
【００３２】
患者は、治療後４−１２、６−１２、６−１８ヶ月間またはそれ以上の期間（１６−３６ヶ月を含む）で症状が寛解し得る。
【００３３】
放射線療法と組み合わせた投与レジームは、放射線療法の前、その間、またはその後であってもよい。放射線治療には、従来の２次元放射線療法、３次元コンフォーマル放射線療法、強度変調放射線療法、近接照射療法（低または高ダイナミックレンジ）、定位体放射線療法および陽子線療法が含まれる。
【００３４】
治療には、治癒、緩和または予防効果が含まれ得る。
【００３５】
より具体的には、治療には「治療的」および「予防的」が含まれ、これらのタイプの治療は最も広い意味で考慮されるべきである。「治療的」という用語は、必ずしも被験体が完全回復まで治療されることを意味するものではない。同様に、「予防的」は、必ずしも被験体が最終的に疾患状態に罹患しないことを意味するものではない。
【００３６】
したがって、治療的および予防的治療には、特定の状態の症状の改善、または特定の状態を発症するリスクの予防またはそうでなければ低下が含まれる。用語「予防的」は、特定の状態の重篤度または発症を軽減させると考えられ得る。「予防的」には、以前にその状態で診断された患者における特定の状態の再発の予防も含まれる。「治療的」はまた、既存の状態の重症度を軽減させ得る。
【００３７】
本発明の第２の態様によれば、配列番号１の核酸配列を含むオリゴヌクレオチドを含む組成物を被験体に投与するステップを含む、消化管の放射線誘発性疾患の治療方法が提供される。
【００３８】
一実施形態では、被験体は、そのような治療を必要とするか、またはそのような治療から恩恵を得られる。
【００３９】
治療有効量のオリゴヌクレオチドが被験体に投与される。
【００４０】
本明細書で使用される、消化管の放射線誘発性疾患の治療の文脈における用語「治療上有効量」とは、炎症、疼痛およびまたは分泌を、本発明の組成物が投与される前に被験体が経験した炎症、疼痛およびまたは分泌よりも軽減できる量を意味する。
【００４１】
用語「治療」は、本明細書では、ヒトに恩恵をもたらし得る任意のレジメンを指すものとして使用される。
【００４２】
本発明の第２およびそれ以降の態様の好適な特徴は、第１の態様の場合と同様である。
【００４３】
以下の実施例を参照して本発明をさらに説明するが、これは説明のためのみに提供されるものであり、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００４４】
［実施例］
（実施例１）
ラットにおける単回高線量放射線療法およびＩＳＩＳ２３０２治療の分析。
ラットに直腸炎を誘発するために、放射線をラットの腹部に投与する。ラットは３ｃｍ×４ｃｍの下部骨盤の領域を除いて鉛で遮蔽される。照射は、１Ｇｙ／分の線量率で直腸を標的とする。１日目に、１回の２０Ｇｙ放射線量をラットに投与する。照射前に、ラットを麻酔し（ケタミン１００ｍｇ／ｋｇ、キシラジン５ｍｇ／ｋｇ腹腔内）、頭部を穏やかに下にし、重力によって他の腹部器官を放射線経路の外に移動させて動物を処置する。ラットを、０．１ｍｌ／１００ｇ体重のＩＳＩＳ２３０２またはビヒクル対照の直腸内投与によって１０日間連続して処置する。表１に治療群の概要を示す。
【００４５】
【表１】
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【００４６】
臨床評価および内視鏡検査を毎日行って記録し、体重、生存、下痢および便中の血液を評価する。７日目および１０日目に、各動物をイソフルオリン麻酔下でビデオ内視鏡検査し、静止画を撮影する。直腸炎をスコア化し、ラットの死後に組織学的検査を行う。
【００４７】
（実施例２）
ラットにおける多発性放射線およびＩＳＩＳ２３０２治療の変化量の分析。
実施例１と同様の研究を、１−４日および７−１０日にそれぞれ６Ｇｙの８つの画分で照射し、延長された反復投与および追跡／観察段階で実施する。連続投薬の１−２４日の間、潜在的に１１，１８および２５日目に３回の内視鏡検査を行う。
【００４８】
（実施例３）
ヒトの放射線誘発性直腸炎治療におけるＩＳＩＳ２３０２浣腸の安全性と有効性の分析。
骨盤に根治的な放射線療法を受けているがん患者をフェーズ１／２臨床試験に採用する。患者は、手術後（該当する場合）および放射線療法前にＩＳＩＳ２３０２で治療されるが、この治療は、放射線療法の間継続される。放射線療法は研究１日目に開始される．ＩＳＩＳ２３０２は２４０ｍｇの薬物を含む浣腸として１日１回投与される。安全性は無作為化から第８週まで継続的に評価される。有効性の評価は８週間後に行われる（急性期、放射線療法後）。長期の研究後フォローアップを１年間行って、慢性／遅延症状の発症を評価する。
【００４９】
第一次結果指標：
放射線性直腸炎を発症する患者の割合（８週間で測定）。
評価：内視鏡検査；症状（疼痛、直腸出血など）；放射線療法コンプライアンス（直腸炎に起因する用量の除外／調整の要件）；救急薬の要件。
【００５０】
第二次結果指標：
急性放射線直腸炎発症までの時間（８週間の「急性」設定内で測定）。
慢性放射線直腸炎発症までの時間（１年間の時点で評価）。
有害事象（８週間の「急性」設定内で測定）。
【配列表】
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【国際調査報告】
2017514872.tif 000003
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