(57)【要約】  組成物及びその使用には、関節炎、老化、身体的または運動的傷害を含む様々な健康問題の根底にある症状を軽減するための、個体の幹細胞及び炎症プロセスに影響を及ぼすことができるプロバイオティック及び天然の植物化学物質の混合物が含まれ、それにより組織の治癒及び修復が促進される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、
ショウガ、及び
ビタミンＤを含む、栄養補助食品。
【請求項２】
前記ラクトバチルス・ラムノサスが、約１００億ＣＦＵのラクトバチルス・ラムノサスを含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項３】
前記ショウガが、約５００ｍｇのショウガを含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項４】
前記ショウガが、ショウガ根の約８：１濃縮物を含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項５】
前記ビタミンＤが、約１，０００ＩＵのビタミンＤを含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項６】
クルクミンをさらに含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項７】
前記クルクミンが、約３５０ｍｇのウコン根抽出物を含む、請求項６に記載の栄養補助食品。
【請求項８】
ボスウェリア（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ）抽出物をさらに含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項９】
前記ボスウェリア抽出物が、約５００ｍｇのボスウェリア・セラータ抽出物を含む、請求項８に記載の栄養補助食品。
【請求項１０】
クルクミン及びボスウェリア抽出物をさらに含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項１１】
緑茶抽出物をさらに含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項１２】
前記緑茶抽出物が、約９８％のポリフェノール、８０％のカテキン、及び５０％のエピガロカテキンガレートに標準化されたカメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の約５００ｍｇの緑茶葉抽出物を含む、請求項１１に記載の栄養補助食品。
【請求項１３】
ボスウェリア抽出物及び緑茶抽出物をさらに含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項１４】
エピムジウム（Ｅｐｉｄｍｅｄｉｕｍ）抽出物をさらに含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項１５】
前記エピムジウム抽出物が、約１０％のイカリインに標準化された約５００ｍｇのエピムジウム・サギッタツム（Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ  ｓａｇｉｔｔａｔｕｍ）抽出物を含む、請求項１４に記載の栄養補助食品。
【請求項１６】
クルクミン及びエピムジウム抽出物をさらに含む、請求項１に記載の栄養補助食品。
【請求項１７】
請求項１に記載の栄養補助食品を投与することを含む、関節支持、老化、及びスポーツ医学のうちの１つに関連する健康問題を支援する方法。
【請求項１８】
請求項１０に記載の栄養補助食品を投与することを含む、関節支持を提供し、関節炎の影響を緩和する方法。
【請求項１９】
請求項１３に記載の栄養補助食品を投与することを含む、老化の影響を緩和する方法。
【請求項２０】
請求項１６に記載の栄養補助食品を投与することを含む、身体活動及び運動活動のうちの１つから生じる問題を緩和する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本技術は、ラクトバチルス・ラムノサスを含む、関節の支持、老化、ならびにスポーツ医学の回復及び性能を助けるための組成物及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
この節は、必ずしも先行技術ではない本開示に関連する背景情報を提供する。
【０００３】
様々な筋骨格障害及び傷害の治療は、進行中の問題である。身体の関節、靭帯、筋肉、神経、腱、及び手、足、首、背を支える構造体は、痛みを引き起こし正常な活動を損なう変性疾患や炎症状態に悩まされ得る。身体は、激しい活動、反復活動、または擦過傷、挫傷、及び骨折などの事故で怪我をすることもあり得る。ある筋骨格の問題は、関節炎、老化、及び様々な身体的または運動的活動への参加から生じる。
【０００４】
例えば、関節炎は、関節及び軟骨の内層を破壊する炎症をもたらす一般的な疾患である。変形性関節症は関節炎の最も一般的な形態である。これは、スポーツ傷害や骨折などの関節への老化「摩耗と引き裂き」及び精神的外傷の結果である。関節炎患者の主な不満は、関節痛、腫れ、熱っぽさ、衰弱、関節の道を与える、不安定、キャッチング、ポッピング、剛性、貧しい睡眠、筋肉痛及び疲労を含む。慢性関節リウマチなどの自己免疫性関節炎は、体の免疫系が自己を攻撃するときに起こる。変形性関節症及び関節リウマチは、関節炎及び軟骨の劣化によって特徴付けられる。間葉系幹細胞は軟骨を再建することができ、幹細胞は関節軟骨の表面領域に存在する。関節炎の治療は、運動、ブレース、体重減少、投薬、及び総関節置換を含む手術による症状緩和に依存してきた。非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）などの医薬品には、胃、心臓血管系及び腎臓に潰瘍、心臓発作及び腎不全を引き起こすリスクがある。変形性関節症の治療法はない。変形性関節症は、増加した関節反力のために肥満／体重増加で加速される。
【０００５】
老化は、多くの疾患の発症に関連する変性過程である。人々の年齢とともに、肥満などの全身性炎症に関連する状態の蔓延は、老化の共通の症状である。間葉系幹細胞を含む新生骨髄細胞を刺激する身体の能力は、老化中に減少し、その結果、免疫系が弱まり、組織を再生する能力が低下する。現在のところ、年齢及び増加した炎症の有病率の増加が確認されている病気には、変形性関節症、関節リウマチ、心血管疾患、糖尿病、肥満、アルツハイマー病、慢性腎臓病、自己免疫疾患、がん、及び他の疾患が含まれる。老化の症状は、根本的な酸化ストレス、炎症の増加、免疫系の弱化、及び身体の新しい細胞及び組織の形成能力の低下と関連している。老化の主な症状には、疲労、無気力、睡眠パターンの変化、貧しい記憶、貧しい視野、しわ、貧しい歯列、性機能障害、リビドーの減少、ＩＩ型糖尿病、増大した体重増加、骨折、便秘、茶色の斑点を含む皮膚の変化、肌の弾力性の低下、閉経、難聴、骨折の増加、関節炎などがいくつか挙げられる。
【０００６】
身体的及び運動的活動から生じる傷害には、筋肉の緊張、関節の捻挫、靭帯の傷害、軟骨の損傷、骨折及び過度の使用が含まれる。整形外科医によるスポーツ傷害に頻繁に関与する関節には、肩、膝、足首、肘、及び手首が含まれる。スポーツ傷害には、痛み、こわばり、腫れ、不安感、衰弱、発赤、しびれ、挫傷、及び／または関節のロッキングまたはキャッチングなどの機械的症状を含む症状が伴うことがある。スポーツ医学は、靭帯、筋肉、腱及び骨に生じるスポーツ関連傷害の予防及び治療に特化して発展してきた。スポーツ傷害の従来の治療には、休息、アイス、圧迫、仰臥が含まれる。追加の治療には、物理療法及びスポーツ医学のリハビリテーション、傷害を悪化させ手術につながる炎症を軽減するためのＮＳＡＩＤなどの薬物療法が含まれる。傷害後の治癒過程を加速するための薬物療法または現在の治療法は知られていない。高齢の選手はスポーツ傷害のリスクが高い。太りすぎの肥満アスリートは、身体的にはあまりフィットしておらず、関節反力の増加による関節炎を含む怪我の危険性が高い。
【０００７】
関節障害、老化及びスポーツに関連する傷害から生じる１つまたは複数の症状または問題の軽減は、しばしば、様々な抗炎症治療の使用を含む。現在の抗炎症治療には一定の制限がある。例えば、最も一般的に処方される炎症性／関節炎薬は、様々なＮＳＡＩＤ薬である。ＮＳＡＩＤには、イブプロフェン、アセトアミノフェン、ナプロキセン、アスピリンなどのカウンター製品が含まれ、ナプロキセンとセレコキシブの処方製剤も含まれる。これらの薬剤のいくつかは、１つまたは複数の副作用と関連しており、そのうちのいくつかは重篤であり得る。特に、アセトアミノフェン関連の過剰摂取は、約５６，０００の救急室訪問と、年間約２６，０００件の入院と、肝不全による４５０人以上の死亡を占める。アセトアミノフェンは急性肝不全の第１の原因でもあり、腎毒性を引き起こす可能性がある。ＮＳＡＩＤｓは、吐き気、胸やけ、摂取、腹痛、出血性潰瘍（ＧＩ不満）をさらに誘発し得、ＮＳＡＩＤに関連する消化管合併症の結果として年間約１６，５００人が死亡し、ＮＳＡＩＤ関連のＧＩ合併症のために推定１０７，０００人の患者が毎年入院している。ＮＳＡＩＤは、心臓発作、脳卒中（心血管事象）、うっ血性心不全、心房細動及び腎臓損傷に関連する合併症をさらに示し得る。
【０００８】
筋骨格障害及び傷害を含む様々な健康問題の治療のためのＮＳＡＩＤの代替物を有することは有利であろう。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本開示に一致して、本技術は、筋骨格障害及び傷害を含む様々な健康問題の治療に関する組成物及び方法を含む。
【００１０】
一実施形態では、ラクトバチルス・ラムノサス、ショウガ、及びビタミンＤを含む栄養補助食品が提供され、栄養補助食品は、関節支持、老化、及びスポーツ医学のうちの１つに関連する健康問題を助けるために投与され得る。
【００１１】
別の実施形態では、ラクトバチルス・ラムノサス、ショウガ、ビタミンＤ、クルクミン、及びボスウェリア（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ）抽出物を含む栄養補助食品が提供され、栄養補助食品を投与して関節支持を提供し、関節炎の１つ以上の影響を緩和する。
【００１２】
さらに別の実施形態では、ラクトバチルス・ラムノサス、ショウガ、ビタミンＤ、ボスウェリア抽出物、及び緑茶抽出物を含む栄養補助食品が提供され、栄養補助食品は、老化の１つ以上の影響を緩和するために投与され得る。
【００１３】
さらに別の実施形態では、ラクトバチルス・ラムノサス、ショウガ、ビタミンＤ、クルクミン、及びエピムジウム（Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ）抽出物を含む栄養補助食品が提供され、栄養補助食品は、物理的または運動的活動から生じる１つまたは複数の影響を緩和するために投与され得る。
【００１４】
適用性のさらなる領域は、本明細書で提供される説明から明らかになるであろう。この要約における説明及び特定の例は、説明のみを目的としており、本開示の範囲を限定するものではない。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下の技術の説明は、１つまたは複数の発明の主題、製造及び使用の性質上単なる例示に過ぎず、本願において請求される特定の発明、または本出願に優先権を主張することができる他の出願またはそこから発行される特許の範囲、用途または使用を限定することを意図するものではない。開示された方法に関して、提示されるステップの順序は本質的に例示的なものであり、したがって、ステップの順序は様々な実施形態において異なることができる。特に明記されていない限り、本明細書中の全ての数値は、技術の最も広い範囲を説明する際に「約」という語によって修飾されるものと理解されるべきである。
【００１６】
本明細書では、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）、または有する（ｈａｖｉｎｇ）などの非限定的な用語の同義語としての「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、本技術の実施形態を説明及び請求するために使用されるが、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」または「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」などのより限定的な用語を用いて実施形態を代替的に説明することができる。したがって、材料、構成要素、またはプロセスステップを記載した任意の所与の実施形態について、本技術はまた、さらなる材料、構成要素またはプロセス（からなるための）を含まない及び実施形態の重要な特性に影響を及ぼすさらなる材料、構成要素またはプロセス（本質的にからなるための）を含まないそのような材料、構成要素、またはプロセスステップからなる実施形態を特に含み、たとえ、そのようなさらなる材料、構成要素またはプロセスが、本出願において明示的に列挙されていない場合であってもである。例えば、構成要素Ａ、Ｂ及びＣを引用する組成物またはプロセスの記載は、具体的には、当技術分野で列挙され得る構成要素Ｄを除いて、Ａ、Ｂ及びＣからなる、及びから本質的になる実施形態を目論み、たとえ、構成要素Ｄが本明細書では除外されているとして明示的に記載されていない場合であってもである。さらに、本明細書に開示される全ての天然サプリメントは、合成形態で提供され、本開示の範囲内で使用され得ることを理解されたい。
【００１７】
本明細書で言及されるように、全ての組成百分率は、特に明記しない限り、全組成物の重量による。範囲の開示は、別段の指定がない限り、終点を含み、全ての異なる値及び全範囲内のさらに分割された範囲を含む。したがって、例えば、「ＡからＢ」または「約Ａから約Ｂまで」の範囲は、Ａ及びＢを含む。特定のパラメータ（例えば、量、重量パーセントなど）についての値及び値の範囲の開示は、本明細書で有用な他の値及び値の範囲を排除するものではない。所与のパラメータについて２つ以上の具体的に例示された値は、そのパラメータに対して請求され得る値の範囲に対する終点を定義し得ることが想定される。例えば、パラメータＸが値Ａを有するように本明細書で例示され、また値Ｚを有するように例示される場合、パラメータＸは約Ａから約Ｚまでの値の範囲を有することが想定される。同様に、パラメータの２つ以上の値の範囲（そのような範囲が入れ子になっているか、重複しているかまたは別個であるかに関わらず）は、開示された範囲の終点を使用して請求される可能性のある値の範囲の可能な組み合わせを全て包含する。例えば、パラメータＸが１〜１０、または２〜９、または３〜８の範囲内の値を有すると本明細書で例示されている場合、パラメータＸは１〜９、１〜８、１〜３、１〜２、２〜１０、２〜８、２〜３、３〜１０、３〜９などを含む値の他の範囲を有し得ることも想定される。
【００１８】
本技術は、関節支持、老化、スポーツ医学の回復及びパフォーマンスを含む、プロバイオティック生物ラクトバチルス・ラムノサスを含む組成物、及び様々な健康問題を助けるためのそのような組成物の投与方法に関する。ラクトバチルス・ラムノサスに加えて、組成物は、クルクミン、ボスウェリア抽出物、ショウガ、ビタミンＤ、緑茶抽出物、エピムジウム抽出物、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるメンバーを含み得る。クルクミンは、ターメリックまたはそれから抽出することによって提供され得る。さらに、クルクミンは、合成形態で提供され、本開示の範囲内で使用され得ることを理解されたい。ボスウェリア抽出物は、ボスウェリア・セラータ（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ  ｓｅｒｒａｔａ）（すなわち、インディアン・フランキンセンス（Ｉｎｄｉａｎ  Ｆｒａｎｋｉｎｃｅｎｓｅ））から得ることができる。ショウガは、ジンギベル・オフィシナーレ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ）の根から得ることができる。ビタミンＤは、コレカルシフェロールを含むことができる。緑茶抽出物はカメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ）から得ることができる。エピムジウム抽出物は、エピムジウム・サギッタツム（Ｅｐｉｍｅｄｉｕｍ  ｓａｇｉｔｔａｔｕｍ）（すなわち、ホーニー・ゴート（Ｈｏｒｎｙ  Ｇｏａｔ）抽出物）から得ることができる。組成物は、１つ以上の錠剤またはカプセル、液体またはスラリー形態、または粉末もしくは顆粒を含む経口投与用に製剤化することができる。１つ以上の非接着剤、結合剤、コーティング剤、崩壊剤、風味剤、着色剤、潤滑剤、流動促進剤、吸着剤、防腐剤、及び甘味剤を含む、様々な賦形剤のような他の成分を含めることができる。特定の賦形剤の例には、１つ以上のヒプロメロース、米粉、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、イヌリン、及び二酸化ケイ素が含まれる。
【００１９】
様々な実施形態は、特定の筋骨格障害及び／または傷害に合わせて調整された組成物及びその使用を提供することができる。一実施形態では、関節支持を提供し、関節炎の１つ以上の影響を緩和するための組成物は、ラクトバチルス・ラムノサス、ビタミンＤ、クルクミン、ボスウェリア抽出物、及びショウガを含む。組成物は、関節炎の症状及び痛みを軽減し、内因性幹細胞からの軟骨組織の生成を刺激し、身体の抗酸化活性を増加させるために使用することができる。別の実施形態において、老化の影響を緩和するための組成物は、ラクトバチルス・ラムノサス、ボスウェリア抽出物、ショウガ、緑茶抽出物、及びビタミンＤを含む。組成物は、酸化ストレスに対して細胞及び組織に保護効果を提供し、炎症を軽減し、免疫系を調節するために使用することができる。さらに別の実施形態において、身体活動及び運動活動から生じる問題を緩和するための組成物は、ラクトバチルス・ラムノサス、クルクミン、ショウガ、ビタミンＤ及びエピムジウム抽出物を含む。この組成物は、酸化ストレス、抗炎症作用、及び免疫調節影響に対する保護を提供するために使用することができる。組成物に使用される様々な成分は、食品及び食事補助剤としてヒトの使用のために米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認され、胃潰瘍、胃潰瘍、高血圧、心臓血管疾患、及び腎機能障害などの限られた副作用が存在するか、または全くないことがある。
【００２０】
ラクトバチルス・ラムノサスは、ヒトの使用のためにＦＤＡの承認を受けており、筋骨格の問題を含む様々な健康問題に関わる１つ以上の活動を提供することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、ヒトの関節リウマチの炎症症状を軽減することができる。ラクトバチルスの経口摂取は、健康アセスメントアンケート（Ｈｅａｌｔｈ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ：ＨＡＱ）スコアを改善し、血漿炎症性サイトカインのレベルを低下させることができる。ラクトバチルス・ラムノサスは動物の関節炎を改善することができる。ラクトバチルス・ラムノサスの主要成分であるエキソポリサッカライド（ＥＰＳ）は、抗関節炎特性を有する。ＥＰＳまたはＥＰＳを産生するプロバイオティクスは、活性型関節炎を抑制することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは動物の炎症を抑制することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、動物の未成熟腸における炎症性シグナル伝達を減少させることができる。したがって、壊死性腸炎（ＮＥＣ）、特発性炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、または感染性腸炎などの新生児または小児に存在する腸炎症性症候群を抑制することが期待できる。ラクトバチルス・ラムノサスは、消化管及び呼吸器感染症を軽減することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、小児患者の消化管及び気道感染のリスクを低減することができる。ラクトバチルス・ラムノサスで治療したマウスは、ＰＢＳ（Ｐ）を有するものと比較して、高脂肪食（ＨＤ）（通常食事［ＮＤ］ではない）で減量した体重増加を示した。ラクトバチルス・ラムノサスを投与されたマウスは、ＨＤにおいてより速いグルコースクリアランス（より高いインスリン感受性）を示した。ラクトバチルス・ラムノサスは、ヒト結腸筋を保護することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、より高いＩＬ−６、より低いＩＬ−１０（抗炎症性）を産生するリポ多糖（ＬＰＳ）に起因する炎症を減弱させ、炎症下の筋肉組織及び細胞の収縮性を回復させることができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、インスリン感受性を高めることができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、激しい運動中のアスリートの酸化ストレスを軽減することができる。ラクトバチルス・ラムノサスによる治療は、激しい運動訓練を受けたアスリートの反応性酸素代謝物（ｄＲｏｍ）及び生物学的抗酸化能（ＢＡＰ）の血漿レベルを低下させる可能性がある。ラクトバチルス・ラムノサスは、ＵＶ誘発腫瘍形成の発生率を減少させることができる。ラクトバチルス・ラムノサスで治療した毛のないマウスは、数及びサイズの両方において腫瘍増殖の遅延を示した。ラクトバチルス・ラムノサスは、自然免疫及び後天性免疫の両方を増強することができる。ラクトバチルス・ラムノサスによる治療は、末梢白血球及び腹腔マクロファージ（貪食活性）及び抗体の血漿レベルを上昇させる可能性があり、ラクトバチルス・ラムノサスが自然免疫及び後天性免疫の両方を増加させることが示唆される。
【００２１】
したがって、ラクトバチルス・ラムノサスは、以下を含むいくつかの利点を提供する。ラクトバチルス・ラムノサスは、独特のプロバイオティック株である。ラクトバチルス・ラムノサスは、様々なタイプの関節炎を弱めることができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、健康な軟骨細胞を作り得る抗酸化剤として機能する。ラクトバチルス・ラムノサスは、軟骨及び関節を損傷する炎症性サイトカインを減少させることができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、関節炎を伴う疼痛及び硬直を引き起こす炎症性遺伝子の発現を抑制することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、関節リウマチを改善することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、酸化ストレスを軽減し、ワームモデル、Ｃ・エレガン（Ｃ．ｅｌｅｇａｎ）の寿命を延ばすことができる。ラクトバチルス・ラムノサスは炎症を減少させることができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、インスリン感受性を改善し、脂肪蓄積を減少させることができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、紫外線に対する光保護を提供することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、激しい運動トレーニング中のアスリートに抗酸化効果を示す。ラクトバチルス・ラムノサスは、胃腸及び呼吸器感染症のリスクを低下させることができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、高脂肪食で動物の肥満を軽減することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、ＵＶ誘導性発癌に対して保護することができる。ラクトバチルス・ラムノサスは、抗炎症性で免疫調節性である。
【００２２】
ラクトバチルス・ラムノサスを含む組成物及びその使用は、様々な物理量のラクトバチルス・ラムノサス及び様々な量のコロニー形成単位（ＣＦＵ）のラクトバチルス・ラムノサスを有することができる。例には、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０ｍｇ〜５００ｍｇ、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、及び６７ｍｇの範囲の物理量が含まれる。例には、さらに、１億〜１兆、１０億〜１，０００億、５０億〜５００億、及び１００億のＣＦＵ値が含まれる。ラクトバチルス・ラムノサスについての他の量もまた、所望されるように、当業者によって選択され得る。これらの量は、単回投与または複数回投与を含む組成物として提供及び投与することができ、単一のカプセルまたは複数のカプセルとして提供することができ、例えば他の成分と混合することができる。
【００２３】
クルクミンは、ヒトの使用のためにＦＤＡによって承認され、筋骨格の問題を含む様々な健康問題に関わる１つ以上の活動を提供することができる。示されるように、クルクミンは、ターメリックまたはそれから抽出することによって提供され得る。さらに、クルクミンは、合成形態で提供され、本開示の範囲内で使用され得ることを理解されたい。クルクミンは、変形性関節症患者においてイブプロフェンと同じ鎮痛効果を有し得る。クルクミンは、イブプロフェンよりも副作用が少ないが、変形性膝関節症の治療にイブプロフェンと同じくらい有効である可能性がある。クルクミンは、関節リウマチを引き起こすヒト滑膜細胞の活性を抑制することができる。クルクミンは、患者において関節リウマチを引き起こす滑膜細胞からの炎症性サイトカインの産生を抑制することができる。それはまた、ヒト滑膜細胞の増殖を抑制することもできる。クルクミンは動物の炎症や関節炎を抑制することができる。クルクミンは、炎症性サイトカインの産生だけでなく、動物におけるコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）の抑制も可能である。クルクミンは、外傷後の筋肉再生を促進することができる。クルクミンによる全身治療は、２つの異なる損傷筋肉部位（脊髄前脛骨筋／前脛骨筋［ＴＡ］）における筋肉量（胚ミオシン重鎖［ＥＭＨＣ］）及び筋細胞を増加させることができる。クルクミンは心筋の修復を増加させ、心不全を改善することができる。クルクミンは、心筋梗塞の動物モデルにおいて、心筋に損傷を与えるマロンジアルデヒド（ＭＤＡ［Ａ］）、脂質過酸化物、及びマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の産生を抑制することができる。クルクミンは、筋肉の損傷を引き起こす酸化ストレスを抑制することができる。クルクミンは、広範囲の運動を行った動物の筋肉において、酸化体（過酸化水素＆ＮＡＤＰＨ−オキシダーゼ）及び筋肉損傷マーカー（ＭＣＰ−１＆ＣＸＣＬ１４）の産生を抑制することができる。
【００２４】
したがって、クルクミンは、以下を含むいくつかの利点を提供する。クルクミンは、変形性膝関節症の治療においてＮＳＡＩＤほど安全で効果的であり得る。クルクミンは、抗炎症性であり得る。クルクミンは軟骨の炎症性サイトカインを減少させることができる。クルクミンは、動物において抗関節炎作用を示すことができる。クルクミンは、間葉系幹細胞からの軟骨形成を促進することができる。クルクミンは、ヒトの関節の滑膜内層における炎症を軽減することができる。クルクミンは動物のコラーゲン誘導性関節炎を抑制することができる。クルクミンは、変形性関節症の治療のための治療作用を示すことができる。クルクミンは筋肉修復を促進することができる。クルクミンは、外傷性損傷後に筋肉量の損失を防ぎ、筋肉再生を刺激し得る。クルクミンは炎症を減少させることができ、偏心運動誘発筋損傷を増強することができる。クルクミンは心臓の修復を促進することができる。クルクミンは、下り坂の走行によって引き起こされる筋肉損傷に続く酸化ストレスを減少させることができる。クルクミンは、変形性関節症の治療のための治療作用を有することができる。
【００２５】
クルクミンを含む組成物及びその使用は、様々な量を使用することができる。例には、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０ｍｇ〜７００ｍｇ、１００ｍｇ〜５００ｍｇ、及び３５０ｍｇの範囲の量が含まれる。クルクミンの他の量は、所望される場合、当業者によって選択されてもよい。これらの量は、単回投与または複数回投与を含む組成物として提供及び投与することができ、単一のカプセルまたは複数のカプセルとして提供することができ、例えば他の成分と混合することができる。
【００２６】
ボスウェリア抽出物は、ヒトの使用のためにＦＤＡによって承認され、筋骨格の問題を含む様々な健康問題に関わる１つ以上の活動を提供することができる。示されるように、ボスウェリア抽出物はボスウェリア・セラータ抽出物を含むことができる。ボスウェリア抽出物は、変形性関節症の症状を軽減することができる。ボスウェリア植物抽出物を受けた変形性関節症患者は、膝の痛み及び腫脹の減少、膝の屈曲の増加、ならびに歩行距離の増加を報告した。ボスウェリア植物抽出物は、変形性関節症に関連する痛み及び身体機能（視覚的アナログスケール）、Ｌｅｑｕｅｓｎｅの機能指数、ならびにＷＯＭＡＣの痛み及び凝りを減少させた。ボスウェリア抽出物は、動物の関節炎及び炎症を軽減することができる。ボスウェリア抽出物は、Ｌｅｗｉｓラットアジュバント関節炎動物モデルにおいて、関節炎スコア、足浮腫、ならびに局所組織炎症誘発性サイトカイン腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）及びインターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）を減少させることができる。ボスウェリア抽出物は動物の記憶を回復させることができる。経口摂取したボスウェリア抽出物は、脱出潜時及び移動距離を減少させることができるが、Ｍｏｒｒｉｓ水迷路の遊泳速度に影響を与えず、動物における空間的記憶を増強することを示唆している。ボスウェリア抽出物は、動物において抗腫瘍及び抗高脂血症効果を有することができる。経口摂取したボスウェリア植物抽出物は、ＴＰＡ誘発皮膚炎症及び浮腫形成を減少させることができる。
【００２７】
したがって、スウェリア抽出物は、以下を含むいくつかの利点を提供する。ボスウェリア抽出物は、変形性関節症患者の疼痛スコア及び身体機能を有意に改善する。ボスウェリア抽出物は、炎症性免疫系の活性化を抑制することができる。ボスウェリア抽出物は、軟骨マトリックスの破壊をブロックし、ヒト変形性関節症軟骨細胞におけるＩＩ型コラーゲン及びアグリカンを増加させることができる。ボスウェリア抽出物は、変形性関節症患者における軟骨分解酵素及び炎症を軽減することができる。ボスウェリア抽出物は、抗炎症性、抗関節炎性及び鎮痛性であり得る。ボスウェリア抽出物は膝の痛みを軽減し、膝屈曲及び歩行距離を増加させることができる。ボスウェリア抽出物は、関節の炎症及び脊髄関節炎を減少させることができる。ボスウェリア抽出物は、加齢動物モデルにおける記憶を改善することができる。ボスウェリア抽出物は、抗酸化作用及び抗血栓作用を有することができる。ボスウェリア抽出物は、光老化した皮膚の弾力性を高めることができる。ボスウェリア抽出物は、抗腫瘍作用及び抗高脂血作用を発揮することができる。
【００２８】
ボスウェリア抽出物を含む組成物及びその使用は、様々な物理量のボスウェリア抽出物及び様々な量のボスウェリア酸を有することができる。例には、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜６００ｍｇ、及び５００ｍｇの範囲の物理量が含まれる。さらに、ボスウェリア抽出物は、合成形態で提供され得、本開示の範囲内で使用され得ることが理解されるべきである。ボスウェリア抽出物についての他の量もまた、所望されるように、当業者によって選択され得る。物理的量が、１％〜１００％、１０％〜９０％、２５％〜７５％、及び６５％を含む様々なパーセンテージのボスウェリア酸を含む場合の例がさらに含まれる。これらの物理量及びパーセンテージは、単回投与または複数回投与を含む組成物として提供及び投与することができ、単一のカプセルまたは複数のカプセルとして提供することができ、例えば他の成分と混合することができる。
【００２９】
ショウガは、ヒトの使用のためにＦＤＡによって承認され、筋骨格の問題を含む様々な健康問題に関わる１つ以上の活動を提供することができる。示されるように、ショウガは、ジンジャー・オフィシナーレの根から得ることができる。ショウガは、患者に胃炎を伴わない関節炎の痛みを軽減するのにＮＳＡＩＤほど効果的であり得る。ショウガ含有サプリメント（ジニンシン（Ｚｉｎａｘｉｎ））は、ＮＳＡＩＤであるジクロフェナクと同程度に関節炎痛（視覚的アナログスケール（ＶＡＳ））を軽減した。さらに、ジナキシンはＮＳＡＩＤに伴う胃炎を引き起こさない。ショウガは、変形性関節症の症状を緩和することができる。ショウガで治療された変形性関節症患者は、健康アセスメントアンケートに基づいて骨関節炎症状の顕著な軽減を示し、悪影響の兆候を示さずに改善を進行させた。ジンジャーは、患者の運動によって引き起こされる炎症及び筋肉痛を軽減することができる。ショウガで６週間治療した９８人の患者において、筋肉痛及び炎症の有意な減少があった。
【００３０】
したがって、ショウガは、以下を含むいくつかの利点を提供する。ショウガ療法は、副作用がほとんどない骨関節炎症状の顕著な軽減を実証することができる。ショウガは、関節リウマチの炎症性サイトカインを減少させることによって関節の炎症を抑制することができる。ショウガは、変形性関節症及びリウマチ様関節炎の軽減において、強力なステロイド、ベタメタゾンと同じくらい効果的であり得る。ショウガは、患者のジクロフェナク（ＮＳＡＩＤ）ほど関節炎の痛みを軽減することができる。ショウガは、動物のアセトアミノフェンに対して抗酸化作用及び保護作用を有し得る。ショウガは、抗酸化作用、抗炎症作用、抗癌作用、及び抗糖尿作用を有し得る。ショウガは、運動による筋肉の痛みを軽減することができる。ショウガは、運動による筋肉の痛みを軽減することができる。ショウガでの長期間の治療は、骨関節炎の症状を軽減し、副作用はほとんどない。
【００３１】
ショウガ及びその使用を含む組成物は、物理的量が様々な濃度比を含み得る様々な物理的量のショウガを有することができる。例には、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜６００ｍｇ、及び５００ｍｇの範囲の物理量が含まれる。例には、１．５：１〜２０：１、２：１〜１５：１、５：１〜１０：１及び８：１を含むショウガ濃縮物の範囲に関する物理量が含まれる場合もさらに含まれる。同等の濃度のジンゲロール（ショウガの有効成分）を使用することもできる。さらに、ショウガは、合成形態で提供され、本開示の範囲内で使用され得ることを理解されたい。ショウガについての他の量もまた、所望されるように、当業者によって選択され得る。これらの量は、単回投与または複数回投与を含む組成物として提供及び投与することができ、単一のカプセルまたは複数のカプセルとして提供することができ、例えば他の成分と混合することができる。
【００３２】
ビタミンＤは、ヒトの使用のためにＦＤＡによって承認され、筋骨格の問題を含む様々な健康問題に関わる１つ以上の活動を提供することができる。示されるように、ビタミンＤは、コレカルシフェロールを含むことができる。ビタミンＤは、ヒトの変形性関節症の影響を減少させることができる。日光暴露及び血清ビタミンＤ（２５［ＯＨ］Ｄ）レベルは、膝軟骨欠損の減少と正の相関がある。したがって、ビタミンＤの充足を達成すると、変形性膝関節症の軟骨欠損を予防及び／または遅延させることができる。ビタミンＤ（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）は、ヒト関節軟骨細胞におけるマトリックスメタロプロテイナーゼ−９及びプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の関節炎産生を減少させることができる。ビタミンＤは、適切な骨形成を増加させることができ、高リン酸塩食で望ましくない大動脈石灰化を減少させることができる。慢性腎疾患では、患者は適切な骨形成因子の産生を失い、不要な大動脈石灰化を得る。ビタミンＤを含有するパリカルシトールは、両方を逆転させることができる。ビタミンＤは骨形成を増加させることができる。ビタミンＤ（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）は、骨形成を促進するタンパク質因子（Ｉ型コラーゲン、オステオポンチン、シアロタンパク質、オステオカルシン、アルカリホスファターゼ、及びＢＭＰ−２）の発現を増加させることができる。
【００３３】
したがって、ビタミンＤは、以下を含むいくつかの利点を提供する。ビタミンＤレベルは、膝軟骨体積の改善と正の関連がある。ビタミンＤは、変形性関節症及び関節リウマチにおける炎症を抑制することができる。ビタミンＤは、滑膜細胞に抗炎症作用を及ぼすことができる。ビタミンＤレベルは、骨関節炎の膝の軟骨の骨密度及び保護に関連し得る。ビタミンＤ不足アスリートは、より小さい心臓サイズを有し得る。ビタミンＤ欠乏症は、プロサッカー選手の体重減少と関連し得る。ビタミンＤは、骨格筋の構造と機能に直接影響を与える。ビタミンＤは、骨折などの過剰使用による損傷を防ぐことができる。ビタミンＤは、年齢に関連した筋肉機能の低下を調節し、老齢アスリートに利益をもたらす。ビタミンＤは、ＤＮＡ修復に使用することができ、したがって老化防止効果を発揮する。ビタミンＤは、心臓血管疾患、糖尿病、自己免疫疾患及び癌に対して防御効果を有し得る。ビタミンＤは、骨の抗老化にとって重要であり得る。ビタミンＤは、抗老化遺伝子の発現を増加させることができる。ビタミンＤは、間葉系幹細胞に骨形成を誘導することができる。
【００３４】
ビタミンＤを含む組成物及びその使用は、様々な範囲の国際単位（ＩＵ）を含む様々な量のビタミンＤを有し得る。例には、１ＩＵ〜１０，０００ＩＵ、１０ＩＵ〜７，５００ＩＵ、１００ＩＵ〜５，０００ＩＵ、５００ＩＵ〜２，０００ＩＵ、及び１，０００ＩＵの範囲のＩＵ値が含まれる。さらに、ビタミンＤは、合成形態で提供され、本開示の範囲内で使用され得ることを理解されたい。ビタミンＤについての他の量もまた、所望されるように、当業者によって選択され得る。これらの量は、単回投与または複数回投与を含む組成物として提供及び投与することができ、単一のカプセルまたは複数のカプセルとして提供することができ、例えば他の成分と混合することができる。
【００３５】
緑茶抽出物は、ヒトの使用のためにＦＤＡによって承認され、筋骨格の問題を含む様々な健康問題に関わる１つ以上の活動を提供することができる。上記のように、緑茶抽出物は、カメリア・シネンシスから得ることができ、様々な重量パーセントのポリフェノール、カテキン及びエピガロカテキンガレート（ＥＧＣＧ）を含み得る。緑茶抽出物は、紫外光による皮膚のダメージや老化を抑えることができる。緑茶抽出物を含有するクリームは、ＵＶ誘発光老化及びそれに続く免疫抑制を減少させることができる。緑茶抽出物は、老齢ラットの学習と記憶とを増加させることができる。緑茶抽出物で処理した若年ラット及び老齢ラットはいずれも、安全な場所（閉鎖した［暗い］アーム）を見つけて、痛みを誘発する状態に適切な回避行動をとるのにより短い時間を示した。緑茶抽出物は、骨形成及び抗脂肪作用を有し得る。緑茶抽出物は、骨形成アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の活性を増加させ、脂肪細胞（脂肪細胞）の増殖を抑制することができる。
【００３６】
したがって、緑茶抽出物は、以下を含むいくつかの利点を提供する。緑茶抽出物は学習及び記憶の強化に有効である。緑茶抽出物は、骨形成及び抗肥満作用を有し得る。緑茶抽出物は、抗酸化及び抗老化作用を有し得る。緑茶抽出物は、ＵＶ保護作用を有し得る。緑茶抽出物は、加齢による酸化ストレスから血液細胞を保護することができる。
【００３７】
緑茶抽出物を含む組成物及びその使用は、様々な物理量の緑茶抽出物、ならびに様々な量のポリフェノール、カテキン及びエピガロカテキンガレートを有し得る。例には、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜６００ｍｇ、及び５００ｍｇの範囲の物理量が含まれる。例には、物理量が１％〜１００％、１０％〜１００％、５０％〜１００％、及び９８％のポリフェノールを含む場合がさらに含まれる。例には、物理量が１％〜１００％、１０％〜１００％、５０％〜１００％、及び８０％のカテキンを含む場合がさらに含まれる。例には、物理量が１％〜１００％、１０％〜９０％、２５％〜７５％、及び５０％のエピガロカテキンガレートを含む場合がさらに含まれる。さらに、緑茶抽出物は、合成形態で提供され、本開示の範囲内で使用され得ることを理解されたい。緑茶抽出物についての他の量もまた、所望されるように、当業者によって選択され得る。これらの量は、単回投与または複数回投与を含む組成物として提供及び投与することができ、単一のカプセルまたは複数のカプセルとして提供することができ、例えば他の成分と混合することができる。
【００３８】
エピムジウム抽出物は、ヒトの使用のためにＦＤＡによって承認され、筋骨格の問題を含む様々な健康問題に関わる１つ以上の活動を提供することができる。示されるように、エピムジウム抽出物は、エピムジウム・サギッタツム（すなわち、ホーニー・ゴート抽出物）から得ることができ、様々な重量パーセントのイカリインを有し得る。エピムジウム抽出物は、骨細胞の形成を増加させることができる。エピムジウム抽出物で処理すると、間葉系幹細胞からの骨細胞の形成が増加した。エピムジウム抽出物は、動物において血管弛緩効果を有する。エピムジウム抽出物の主要成分であるイカリインは、冠状動脈血管を弛緩させ、血管内の抗酸化酵素ｅＮＯＳの活性を増加させることによって血圧を低下させることができる。エピムジウム抽出物は、末梢神経の再生を促進することができる。エピムジウム抽出物（イカリイン：主要成分）は、挫傷傷害動物モデルにおいて末梢神経再生を促進し、損傷した神経の機能を改善することができる。エピムジウム抽出物は、テストステロンの１つ以上の作用を模倣することができる。イカリイン（ＩＣＡ−エピムジウム抽出物の主要成分）は、循環する血清テストステロン及び骨成長のマーカーである血清骨Ｇｌａタンパク質（ＢＧＰ）のレベルを増加させることができる。
【００３９】
したがって、エピムジウム抽出物は、以下を含むいくつかの利点を提供する。エピムジウム抽出物は、テストステロン模倣物であり得る。エピムジウム抽出物は、抗酸化酵素、ｅＮＯＳ及びＮＯの活性を増強することができる。エピムジウム抽出物は、間葉系幹細胞からの骨細胞の形成を促進することができる。エピムジウム抽出物は、骨形成を改善し、骨吸収を減少させることができる。エピムジウム抽出物は、心血管治療作用を有することができる。エピムジウム抽出物は、損傷した神経の機能を回復させ、末梢神経の再生を促進することができる。
【００４０】
エピムジウム抽出物を含む組成物及びその使用は、種々の物理量のエピムジウム抽出物を様々な重量パーセントのイカリインとともに有することができる。例には、１ｍｇ〜１０００ｍｇ、１０ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜６００ｍｇ、及び５００ｍｇの範囲の物理量が含まれる。例には、物理量が、０．１％〜１００％、１％〜９０％、１％〜５０％、５％〜２０％、及び１０％を含む様々な重量パーセントのイカリインを含む場合がさらに含まれる。さらに、エピムジウム抽出物は、合成形態で提供され、本開示の範囲内で使用され得ることを理解されたい。エピムジウム抽出物についての他の量もまた、所望されるように、当業者によって選択され得る。これらの量は、単回投与または複数回投与を含む組成物として提供及び投与することができ、単一のカプセルまたは複数のカプセルとして提供することができ、例えば他の成分と混合することができる。
【００４１】
組成物は、様々な方法で、典型的には経口投与用に処方することができる。例は、組成物を様々な錠剤もしくはカプセルに形成すること、液体もしくはスラリーの形態で組成物を提供すること、または粉末もしくは顆粒として組成物を提供することを含む。組成物成分は、完全に一緒に混合されて、それぞれが別個の部分として提供される単一の部分になり得、または組成物全体が１つ以上の部分によって提供されるが、部分の総数が構成要素の数より少ない場合、様々な構成要素を混合することができる。経口投与に適した他の剤形を使用することができる。
【００４２】
本発明の組成物には、他の成分、結合剤（例えば、糖類、ゼラチン、ポリマー）、コーティング剤（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ワックスのような腸溶物、プラスチック、繊維など）、崩壊剤（例えば、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、変性デンプン）、風味剤、着色剤、潤滑剤（例えば、タルク、シリカ、脂肪）、流動促進剤（例えば、ヒュームドシリカ、タルク、炭酸マグネシウム）、吸着剤、防腐剤（例えば、ビタミンＡ、Ｅ、及びＣなどの抗酸化剤）、甘味料を含む、例えば、様々な賦形剤を有し得る。特定の賦形剤の例には、１つ以上のヒプロメロース、米粉、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、イヌリン、及び二酸化ケイ素が含まれる。
【００４３】
本発明の組成物及びそのような組成物を投与する方法は、筋骨格の問題を含む様々な健康問題に身体の幹細胞が反応する方法に影響を及ぼし得る。幹細胞は、多くの異なる細胞型を発達させる顕著な可能性を有する独特のタイプの細胞を含む。幹細胞は、脂肪、筋肉、骨、軟骨、神経、血管などを含む他の細胞タイプに分化することができる。これらは、成長及び修復／補充組織の間の初期の生活において重要である。幹細胞は、脂肪細胞などの特定の細胞に発生すると、通常、骨、軟骨、筋肉などの他の組織を形成することができない。本発明の組成物は、幹細胞に影響を与え、それによって炎症過程を減少させ、根底にある症状を改善することができる。組織を健康に保つことは、疾患の改変の可能性をもたらし、健康状態の症状／進行を減少させる。
【００４４】
細胞や組織は、ストレス、睡眠不足、旅行、特定の投薬、喫煙、傷害、老化、貧しい食生活、毒素、自己免疫疾患及び他の多くの原因で損傷することがある。幹細胞は、これらの損傷した細胞及び組織の治癒及び修復に関与し得る。幹細胞は、複数の疾患、ならびに関節炎、老化及びスポーツ医学的傷害を含む状態を治療するための細胞及び組織の再生可能な供給源を提供する。損傷した細胞や組織は、スポーツ傷害を含む老化やけがを加速させ得る。現在のところ、肥満は幹細胞がより多くの脂肪を形成し、骨、軟骨、及び血管が不足し、糖尿病、高血圧、骨粗鬆症、関節炎、老化促進及びスポーツ医学的傷害をもたらす傾向にある。
【００４５】
本組成物及びその使用は、老化プロセスに対処するという考え方においてパラダイムシフトを伴う。老化プロセスを遅くするためには、組織（例えば、間葉系及び造血幹細胞）を補充する細胞を健康に保つことが重要であると考えられている。老化は幹細胞の数を減少させる。複数の科学的研究は、本組成物中の個々のサプリメントがこのような細胞を保護できることを実証している。しかしながら、本組成物で使用される組み合わせは、関節の健康、老化防止、スポーツ医学のパフォーマンス／回復を支援する現在の考え方及びアプローチに革命を起こす。例えば、理論に束縛されることなく、本発明の組成物及びそのような組成物を使用する方法は、ヒトの幹細胞に脂肪を超えて、筋肉、骨、軟骨、神経、血管を形成させることができると考えられる。試験研究において、本組成物の個々のサプリメントは、抗酸化機能の顕著な改善、ならびに炎症性化学物質及び疾患プロセスに寄与する遺伝子をダウンレギュレートする能力を実証している。これらの影響は、様々な状態の患者を含む臨床研究を含む広範な研究を通じて実証されている。本組成物中の個々の成分は、細胞を保護し、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の軟骨分化を促進する能力を実証している。
【実施例】
【００４６】
関節支持を提供し、関節炎の１つ以上の影響を緩和するための組成物の実施形態は、ラクトバチルス・ラムノサス、ビタミンＤ、クルクミン、ボスウェリア抽出物、及びショウガを含む。組成物は、以下の表１に示す材料または成分を含有する２つのカプセルの提供サイズを有するカプセルとして処方される。
【表１】
2017535289.tif 000002
【００４７】
表１の組成物による脂肪生成試験：
【００４８】
ヒト骨髄由来間葉系幹細胞（ＭＳＣ）による脂肪細胞への分化。
【００４９】
凍結した骨髄単核細胞をＡｌｌｃｅｌｌｓ（Ａｌｌｃｅｌｌｓ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）から購入した。解凍後、単核細胞を１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）及び１％抗生物質及び抗真菌剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を補充したα−最小必須培地α−ＭＥＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）に懸濁させた。細胞を、１００ｃｍ２ディッシュあたり１〜５×１０６細胞の密度で播種した。培養物を３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で維持し、４８時間後及び３〜４日毎に培地を交換した。ＭＳＣがコンフルエントである場合、０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）の添加により細胞を回収したＭＳＣ（継代２−３）を７５ｃｍ２フラスコまたは２４ウェルプレートのいずれかに播種し、２０％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ中で２．０×１０４細胞／ｃｍ２の密度まで培養した。培地を脂肪生成培地と交換し、細胞をさらに１４日間培養した。脂肪生成培地は、２０−ＨＥＴＥ、２０−ＨＥＴＥアゴニスト（２０−５，１４−ＨＥＤＥ）または２０−ＯＨ−ＰＧＥ２の有無でのＣＯＸ−１阻害剤（２−バレリルオキシ安息香酸、Ｃａｙｍａｎ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ  ＭＩ）及びＣＯＸ−２阻害剤（３−（４−メチルスルホニルフェニル）−４−フェニル−５−トリフルオロメチルイソオキサゾール、Ｃａｙｍａｎ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ  ＭＩ）の存在及び不存在下で、ＤＭＥＭ−高グルコース、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１０μｇ／ｍｌインスリン、０．５ｍＭデキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、ならびに１％抗生物質及び抗真菌剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に懸濁させた完全培養培地からなる。２０−ＨＥＴＥ、２０−ＨＥＴＥアゴニストまたは２０−ＯＨ−ＰＧＥ２を０．１及び１μＭの濃度で週３回添加した。ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２の阻害剤を、週に３回、１００μＭ及び５μＭの用量でそれぞれ添加した。
【００５０】
オイルレッド（Ｏｉｌ  ｒｅｄ）Ｏ染色。
【００５１】
脂肪生成の１４日目に、０．２１％オイルレッドＯの１００％イソプロパノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）溶液を使用した。簡単に説明すると、脂肪細胞を１０％ホルムアルデヒドに固定し、オイルレッドＯで１０分間洗浄し、６０％イソプロパノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）ですすぎ、オイルレッドＯを、１００％イソプロパノールを１０分間添加して溶出し、４９０ｎｍ、０．５秒の読み取りでＯＤを測定した。ＭＳＣ由来脂肪細胞を１４日後にオイルレッドＯ染色（ＯＤ＝４９０ｎｍ）により測定した。オイルレッドＯ染色の各値は、細胞数（ＯＤ＝４９０ｎｍでの値）によって標準化した。
【００５２】
試験において、オイルレッドＯ染色試験における表１の製剤は、未処理のヒトＭＳＣと比較して脂肪生成において統計的に有意な減少をもたらしたことが観察される。さらに、試験は、表１の製剤の他の材料を添加しても、ラクトバチルス・ラムノサスの存在がなければ、脂肪生成に統計的に有意な減少はなかったことを示した。ラクトバチルス・ラムノサスの添加は、脂肪生成の減少において、他の成分と組み合わせて相乗効果に寄与すると考えられる。
【００５３】
抗酸化ストレス。
【００５４】
ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ／Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、細胞内エステラーゼ活性及び細胞膜の完全性を測定することによって、生存細胞及び死亡細胞の割合を同時に測定した。手短に言えば、ヒトＭＳＣを２４ウェルプレートに播種した。次の日に、細胞を材料及び１００μＭのＨ２Ｏ２で１２時間処理した。各ウェルからの上清培地をマイクロチューブに集め、細胞を１×ＰＢＳで洗浄し、続いて浮遊細胞または死んだ細胞を集めるためにそれぞれのマイクロチューブに洗浄液を集めた。プレートの底に付着した細胞を３７℃のインキュベーター内の１ＸＰＢＳ中でインキュベートした。マイクロチューブを２０００ｒｐｍで３分間遠心分離して細胞ペレットを得た。上清を除去した後、細胞ペレットを２μＭカルセインＡＭ及び４μＭエチジウム／ホモダイマーを含む１ＸＰＢＳに再懸濁した。再懸濁した細胞をそれぞれのウェルに再び注ぎ、プレートを３７℃で１５分間インキュベートした。次いで、細胞を、蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ７１）を用いて１０Ｘ対物レンズ下で画像化した。
【００５５】
抗酸化ストレス試験は、表１の製剤の他の材料が単独で試験された場合に、Ｈ２Ｏ２に１２時間暴露した後の細胞生存度において視覚的に有意な改善をもたらさないことを示した。しかし、表１の製剤は、Ｈ２Ｏ２への１２時間の曝露後の細胞生存度において視覚的に有意な改善をもたらした。これらの試験結果は、材料の組み合わせが酸化的ストレス及び最終的な細胞死から細胞を保護する上で相乗効果を有するという考えをさらに支持する。
【００５６】
また、表１の製剤は、ヒトＭＳＣの軟骨形成及び骨形成分化に有益な効果を有すると考えられる。炎症は、ヒトＭＳＣからの軟骨形成及び軟骨細胞形成に有害である。表１の製剤は、上記の実験における脂肪生成の有意な減少によって推測される抗炎症効果を実証する。
【００５７】
老化の影響を緩和するための組成物の実施形態は、ラクトバチルス・ラムノサス、ボスウェリア抽出物、ショウガ、緑茶抽出物、及びビタミンＤを含む。この組成物は、以下の表２に示す材料または成分を含む２つのカプセルの提供サイズを有するカプセルとして処方される。
【表２】
2017535289.tif 000003
【００５８】
表２の組成物による脂肪生成試験：
【００５９】
ヒト骨髄由来ＭＳＣは脂肪細胞に分化している。
【００６０】
凍結した骨髄単核細胞をＡｌｌｃｅｌｌｓ（Ａｌｌｃｅｌｌｓ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）から購入した。解凍後、単核細胞を１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）及び１％抗生物質及び抗真菌剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を補充したα−最小必須培地α−ＭＥＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）に懸濁させた。細胞を、１００ｃｍ２ディッシュあたり１〜５×１０６細胞の密度で播種した。培養物を３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で維持し、４８時間後及び３〜４日毎に培地を交換した。ＭＳＣがコンフルエントである場合、０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）の添加により細胞を回収した。ＭＳＣ（継代２−３）を７５ｃｍ２フラスコまたは２４ウェルプレートのいずれかに播種し、２０％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ中で２．０×１０４細胞／ｃｍ２の密度まで培養した。培地を脂肪生成培地と交換し、細胞をさらに１４日間培養した。脂肪生成培地は、２０−ＨＥＴＥ、２０−ＨＥＴＥアゴニスト（２０−５，１４−ＨＥＤＥ）または２０−ＯＨ−ＰＧＥ２の有無でのＣＯＸ−１阻害剤（２−バレリルオキシ安息香酸、Ｃａｙｍａｎ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ  ＭＩ）及びＣＯＸ−２阻害剤（３−（４−メチルスルホニルフェニル）−４−フェニル−５−トリフルオロメチルイソオキサゾール、Ｃａｙｍａｎ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ  ＭＩ）の存在及び不存在下で、ＤＭＥＭ−高グルコース、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１０μｇ／ｍｌインスリン、０．５ｍＭデキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、ならびに１％抗生物質及び抗真菌剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に懸濁させた完全培養培地からなる。２０−ＨＥＴＥ、２０−ＨＥＴＥアゴニストまたは２０−ＯＨ−ＰＧＥ２を０．１及び１μＭの濃度で週３回添加した。ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２の阻害剤を、週に３回、１００μＭ及び５μＭの用量でそれぞれ添加した。
【００６１】
オイルレッドＯ染色。
【００６２】
脂肪生成の１４日目に、０．２１％オイルレッドＯの１００％イソプロパノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）溶液を使用した。簡単に説明すると、脂肪細胞を１０％ホルムアルデヒドに固定し、オイルレッドＯで１０分間洗浄し、６０％イソプロパノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）ですすぎ、オイルレッドＯを、１００％イソプロパノールを１０分間添加して溶出し、４９０ｎｍ、０．５秒の読み取りでＯＤを測定した。ＭＳＣ由来脂肪細胞を１４日後にオイルレッドＯ染色（ＯＤ＝４９０ｎｍ）により測定した。オイルレッドＯ染色の各値は、細胞数（ＯＤ＝４９０ｎｍでの値）によって標準化した。
【００６３】
試験において、オイルレッドＯ染色試験における表２の製剤は、未処理のヒトＭＳＣと比較して脂肪生成において統計的に有意な減少をもたらしたことが観察される。さらに、試験は、表２の製剤の他の材料を添加しても、ラクトバチルス・ラムノサスの存在がなければ、脂肪生成に統計的に有意な減少はなかったことを示した。ラクトバチルス・ラムノサスの添加は、脂肪生成の減少において、他の成分と組み合わせて相乗効果に寄与すると考えられる。
【００６４】
抗酸化ストレス。
【００６５】
ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ／Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、細胞内エステラーゼ活性及び細胞膜の完全性を測定することによって、生存細胞及び死亡細胞の割合を同時に測定した。手短に言えば、ヒトＭＳＣを２４ウェルプレートに播種した。次の日に、細胞を材料及び１００μＭのＨ２Ｏ２で１２時間処理した。各ウェルからの上清培地をマイクロチューブに集め、細胞を１×ＰＢＳで洗浄し、続いて浮遊細胞または死んだ細胞を集めるためにそれぞれのマイクロチューブに洗浄液を集めた。プレートの底に付着した細胞を３７℃のインキュベーター内の１ＸＰＢＳ中でインキュベートした。マイクロチューブを２０００ｒｐｍで３分間遠心分離して細胞ペレットを得た。上清を除去した後、細胞ペレットを２μＭカルセインＡＭ及び４μＭエチジウム／ホモダイマーを含む１ＸＰＢＳに再懸濁した。再懸濁した細胞をそれぞれのウェルに再び注ぎ、プレートを３７℃で１５分間インキュベートした。次いで、細胞を、蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ７１）を用いて１０Ｘ対物レンズ下で画像化した。
【００６６】
抗酸化ストレス試験は、表２の製剤の他の材料が単独で試験された場合に、Ｈ２Ｏ２に１２時間暴露した後の細胞生存度において視覚的に有意な改善をもたらさないことを示した。しかし、表２の製剤は、Ｈ２Ｏ２への１２時間の曝露後の細胞生存度において視覚的に有意な改善をもたらした。これらの試験結果は、材料の組み合わせが酸化的ストレス及び最終的な細胞死から細胞を保護する上で相乗効果を有するという考えをさらに支持する。
【００６７】
また、表２の製剤は、ヒトＭＳＣの軟骨形成及び骨形成分化に有益な効果を有すると考えられる。炎症は、ヒトＭＳＣからの軟骨形成及び軟骨細胞形成に有害である。表２の製剤は、上記の実験における脂肪生成の有意な減少によって推測される抗炎症効果を実証する。
【００６８】
身体活動及び運動活動から生じる問題を緩和するための組成物の実施形態は、ラクトバチルス・ラムノサス、クルクミン、ショウガ、ビタミンＤ及びエピムジウム抽出物を含む。組成物は、以下の表３に示す材料または成分を含有する２つのカプセルの提供サイズを有するカプセルとして処方される。
【表３】
2017535289.tif 000004
【００６９】
表３の組成物による脂肪生成試験：
【００７０】
ヒト骨髄由来ＭＳＣは脂肪細胞に分化している。
【００７１】
凍結した骨髄単核細胞をＡｌｌｃｅｌｌｓ（Ａｌｌｃｅｌｌｓ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）から購入した。解凍後、単核細胞を１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）及び１％抗生物質及び抗真菌剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を補充したα−最小必須培地α−ＭＥＭ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）に再懸濁させた。細胞を、１００ｃｍ２ディッシュあたり１〜５×１０６細胞の密度で播種した。培養物を３７℃、５％ＣＯ２インキュベーター中で維持し、４８時間後及び３〜４日毎に培地を交換した。ＭＳＣがコンフルエントである場合、０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）の添加により細胞を回収した。ＭＳＣ（継代２−３）を７５ｃｍ２フラスコまたは２４ウェルプレートのいずれかに播種し、２０％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ中で２．０×１０４細胞／ｃｍ２の密度まで培養した。培地を脂肪生成培地と交換し、細胞をさらに１４日間培養した。脂肪生成培地は、２０−ＨＥＴＥ、２０−ＨＥＴＥアゴニスト（２０−５，１４−ＨＥＤＥ）または２０−ＯＨ−ＰＧＥ２の有無でのＣＯＸ−１阻害剤（２−バレリルオキシ安息香酸、Ｃａｙｍａｎ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ  ＭＩ）及びＣＯＸ−２阻害剤（３−（４−メチルスルホニルフェニル）−４−フェニル−５−トリフルオロメチルイソオキサゾール、Ｃａｙｍａｎ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ  ＭＩ）の存在及び不存在下で、ＤＭＥＭ−高グルコース、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ、１０μｇ／ｍｌインスリン、０．５ｍＭデキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、ならびに１％抗生物質及び抗真菌剤（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に懸濁させた完全培養培地からなる。２０−ＨＥＴＥ、２０−ＨＥＴＥアゴニストまたは２０−ＯＨ−ＰＧＥ２を０．１及び１μＭの濃度で週３回添加した。ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２の阻害剤を、週に３回、１００μＭ及び５μＭの用量でそれぞれ添加した。
【００７２】
オイルレッドＯ染色。
【００７３】
脂肪生成の１４日目に、０．２１％オイルレッドＯの１００％イソプロパノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）溶液を使用した。簡単に説明すると、脂肪細胞を１０％ホルムアルデヒドに固定し、オイルレッドＯで１０分間洗浄し、６０％イソプロパノール（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）ですすぎ、オイルレッドＯを、１００％イソプロパノールを１０分間添加して溶出し、４９０ｎｍ、０．５秒の読み取りでＯＤを測定した。ＭＳＣ由来脂肪細胞を１４日後にオイルレッドＯ染色（ＯＤ＝４９０ｎｍ）により測定した。オイルレッドＯ染色の各値は、細胞数（ＯＤ＝４９０ｎｍでの値）によって標準化した。
【００７４】
試験において、オイルレッドＯ染色試験における表３の製剤は、未処理のヒトＭＳＣと比較して脂肪生成において統計的に有意な減少をもたらしたことが観察される。さらに、試験は、表３の製剤の他の材料を添加しても、ラクトバチルス・ラムノサスの存在がなければ、脂肪生成に統計的に有意な減少はなかったことを示した。ラクトバチルス・ラムノサスの添加は、脂肪生成の減少において、他の成分と組み合わせて相乗効果に寄与すると考えられる。
【００７５】
抗酸化ストレス。
【００７６】
ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ／Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、細胞内エステラーゼ活性及び細胞膜の完全性を測定することによって、生存細胞及び死亡細胞の割合を同時に測定した。手短に言えば、ヒトＭＳＣを２４ウェルプレートに播種した。次の日に、細胞を材料及び１００μＭのＨ２Ｏ２で１２時間処理した。各ウェルからの上清培地をマイクロチューブに集め、細胞を１×ＰＢＳで洗浄し、続いて浮遊細胞または死んだ細胞を集めるためにそれぞれのマイクロチューブに洗浄液を集めた。プレートの底に付着した細胞を３７℃のインキュベーター内の１ＸＰＢＳ中でインキュベートした。マイクロチューブを２０００ｒｐｍで３分間遠心分離して細胞ペレットを得た。上清を除去した後、細胞ペレットを２μＭカルセインＡＭ及び４μＭエチジウム／ホモダイマーを含む１ＸＰＢＳに再懸濁した。再懸濁した細胞をそれぞれのウェルに再び注ぎ、プレートを３７℃で１５分間インキュベートした。次いで、細胞を、蛍光顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＩＸ７１）を用いて１０Ｘ対物レンズ下で画像化した。
【００７７】
抗酸化ストレス試験は、表３の製剤の他の材料が単独で試験された場合に、Ｈ２Ｏ２に１２時間暴露した後の細胞生存度において視覚的に有意な改善をもたらさないことを示した。しかし、表３の製剤は、Ｈ２Ｏ２への１２時間の曝露後の細胞生存度において視覚的に有意な改善をもたらした。これらの試験結果は、材料の組み合わせが酸化的ストレス及び最終的な細胞死から細胞を保護する上で相乗効果を有するという考えをさらに支持する。
【００７８】
また、表３の製剤は、ヒトＭＳＣの軟骨形成及び骨形成分化に有益な効果を有すると考えられる。炎症は、ヒトＭＳＣからの軟骨形成及び軟骨細胞形成に有害である。表３の製剤は、上記の実験における脂肪生成の有意な減少によって推測される抗炎症効果を実証する。
【００７９】
例示的な実施形態は、この開示が徹底されるように提供され、その範囲を当業者に完全に伝える。本開示の実施形態の完全な理解を提供するために、特定の構成要素、デバイス、及び方法の例など、多くの具体的な詳細が示されている。特定の詳細を採用する必要はなく、例示的な実施形態は多くの異なる形態で実施することができ、いずれも本開示の範囲を限定するものと解釈すべきでないことは、当業者には明らかであろう。いくつかの例示的な実施形態では、周知のプロセス、周知のデバイス構造、及び周知の技術は詳細には記載されていない。いくつかの実施形態、材料、組成物及び方法の同等の変更、改変及び変形は、本技術の範囲内で実質的に同様の結果を伴いながら行うことができる。
【国際調査報告】
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